(57)【要約】本発明は、特にウイルス、腫瘍細胞、細菌、腫瘍組織に対する光線力学療法における標的の生物学的材料の機能を破壊しまたは損なうのに用いるポルフィリン化合物に関する。本発明は、前記化合物を含む組成物、および前記標的の生物学的材料の機能をイン・ビトロにて増感し、破壊しまたは損なう方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Iのポルフィリン化合物およびその金属化および／または標識化および／または共役化形態の化合物：
【化１】
2005500335.tif 000032
（上記式中、
a) R1=X1-R5、R2=X1-R6、R3=X1-R7、R4=X1-R8
（ここで、X1は
【化２】
2005500335.tif 000033
である）であり、かつ、
a.1) R5、R6、R7、R8の中の少なくとも１つの基は、A=S-D-糖OH基であり、他の基はF原子であり、前記糖は、マルトース、ラクトース、マンノース、キシロース、グルコースからなる群から有利に選択される単糖、二糖または多糖類であり、
a.2) R5、R6、R7、R8の中の少なくとも１つの基は、A'=O-糖であり、他の基はF原子であり、前記糖は、ガラクトース、マンノース、キシロース、グルコースからなる群から有利に選択される単糖もしくは多糖類であり、または
b) R2=-Y1-HおよびR1=R3=R4=Y1-R9
（ここで、Y1は
【化３】
2005500335.tif 000034
であり、かつオルト、メタまたはパラ位で置換されている）であり、かつ、
b.1) R9=O-CH2-CH2-CH2-S-糖であり、該糖は、グルコースおよびマンノースからなる群から有利に選択される単糖もしくは多糖類であり、または
b.2) R9=O-CH2-CH2-Y-CH2-CH2-X-糖であるか、もしくはR9=O-CH2-CH2-Y-CH2-CH2-Y-CH2-CH2-X-糖（式中、X=O、S、-CH2-であり、かつ、Y=-O-、-CH2-である）であり、または
b.3) R9=CH2-X-糖（式中、X=O、S、CH2であり、該糖は、マルトース、ラクトース、マンノース、キシロース、グルコース、ガラクトースからなる群から有利に選択される単糖、二糖もしくは多糖類である）であり、または
c) R1=R2=R3=R4=-Y1-B（ここで、Y1は
【化４】
2005500335.tif 000035
であり、かつ、パラ位で置換されており、かつ、B=(CH2)n-S-糖であり、該糖はマンノース、およびキシロース、グルコースからなる群から選択され、かつ、n=1または2である）であり、または
d) R1=C-A4、R2=C-A3、R3=C-A2、R4=C-A1（ここで、それぞれの置換基Cは
【化５】
2005500335.tif 000036
であり、かつ、m-ヒドロキシフェニルまたはp-ヒドロキシフェニルである）であり、かつ、
d.1) A1、A2、A3、A4の中の少なくとも２つの基は、O-グルコースOH基であり、他のものはH原子であり、または
d.2) A1、A2、A3、A4の中の少なくとも２つの基は、O-CH2CH2CH2-O-D-グルコースOH基であり、他のものはH原子である）であり、
ここで、a)、b)、c)、d)においてR=R'1=R'2=Hであり、または
e) R1=R2=R3=H、R=R'1=R'2=CH2CH3、およびR4=D-糖（ここで、Dは
【化６】
2005500335.tif 000037
である）であり、該糖はグルコース、マルトース、マンノース、キシロースからなる群から有利に選択される単糖もしくは多糖類であり、または
R1=R2=R3=R4=H、R=CH3、R'1=D-H、R'2=D-糖であり、該糖はマルトース、マンノース、キシロース、ラクトースおよび更に大きな多糖類からなる群から有利に選択される単糖もしくは多糖類である）。
【請求項２】
a) R5=R6=R7=R8=S-糖OH、
b) R5=R7=R8=S-糖OH、およびR6=F、
c) R6=R8=S-糖OH、およびR5=R7=F、
d) R7=R8=S-糖OH、およびR5=R6=F
（ここで、糖はグルコースまたはマンノースまたはキシロースである)
からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
a) R5=R6=R7=R8=S-糖OH、
b) R5=R7=R8=S-糖OH、およびR6=F
（ここで、糖はキシロースである）
からなる群から選択されることを特徴とする、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
a) R5=R7=R8=S-糖OH、およびR6=F、
b) R6=R8=S-糖OH、およびR5=R7=F、
c) R7=R8=S-糖OH、およびR5=R6=F
（ここで、糖はα−マンノースである）
からなる群から選択されることを特徴とする、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
a) A1=A2=A3=A4=O-グルコースOH、
b) A1=A2=A3=O-グルコースOH、A4=H、
c) A1=A2=O-グルコースOH、A3=A4=H、
d) A1=A2=A3=A4=O-グルコースOH
からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
式Iのポルフィリン化合物およびその金属化および／または標識化および／または共役化形態の化合物：
【化７】
2005500335.tif 000038
（上記式中、
a) R1=X1-R5、R2=X1-R6、R3=X1-R7、R4=X1-R8
（ここで、X1は
【化８】
2005500335.tif 000039
である）であり、かつ、
a.1) R5、R6、R7、R8の中の２または３個の基は、A=S-D-糖OH基であり、他の基はF原子であり、該糖は、マルトース、ラクトース、マンノース、キシロース、グルコースからなる群から有利に選択される単糖、二糖もしくは多糖類であり、
a.2) R5、R6、R7、R8の中の２または３個の基は、A'=O-糖であり、他の基はF原子であり、該糖は、ガラクトース、マンノース、キシロース、グルコースからなる群から有利に選択される単糖もしくは多糖類であり、または
b) R2=-Y1-HおよびR1=R3=R4=Y1-R9
（ここで、Y1は
【化９】
2005500335.tif 000040
であり、かつ、オルト、メタまたはパラ位で置換されている）であり、かつ、
b.1) R9=O-CH2-CH2-CH2-S-糖であり、該糖は、グルコースおよびマンノースからなる群から有利に選択される単糖もしくは多糖類であり、または
b.2) R9=O-CH2-CH2-Y-CH2-CH2-X-糖であるか、もしくはR9=O-CH2-CH2-Y-CH2-CH2-Y-CH2-CH2-X-糖であり（ここで、X=O、S、-CH2-であり、およびY=-O-、-CH2-である）、または
b.3) R9=CH2-X-糖であり（ここで、X=O、S、CH2であり、前記糖は、マルトース、ラクトース、マンノース、キシロース、グルコース、ガラクトースからなる群から有利に選択される単糖、二糖または多糖類である）、または
c) R1=R2=R3=R4=-Y1-Bの中の２または３個の基（ここで、Y1は
【化１０】
2005500335.tif 000041
であり、かつ、パラ位で置換されており、かつ、B=(CH2)n-S-糖であり、該糖は、マンノース、およびキシロース、グルコースからなる群から選択され、かつ、n=1または2である）であり、または
d) R1=C-A4、R2=C-A3、R3=C-A2、R4=C-A1（ここで、それぞれの置換基Cは、
【化１１】
2005500335.tif 000042
であり、かつ、m-ヒドロキシフェニルまたはp-ヒドロキシフェニルである）であり、かつ、
d.1) A1、A2、A3、A4の中の２または３個の基は、O-CH2CH2CH2-O-D-グルコースOH基であり、他のものはH原子である）であり、
ここで、a)、b)、c)、d)においてR=R'1=R'2=Hである）。
【請求項７】
TPP(p-OC3-S-α-MannOH)3（化合物２４）、TPP(p-O-DEG-O-α-Mann)3（化合物６７）、TPP(p-O-DEG-S-α-Mann)3（化合物６８）、TPP(p-O-TEG-S-α-Mann)3（化合物７４）、TPP(p-O-DEG-OH)3（化合物７５）から選択されるポリエチレングリコールであることを特徴とする、ポルフィリン化合物。
【請求項８】
フッ素を含有し、かつ、酸素化した化合物TPPF4(p-O-β-GluOH)4（化合物６３）であることを特徴とする、ポルフィリン化合物。
【請求項９】
TPP F4(p-S-β-GluOH)3（化合物２６）、TPP F4(p-S-β-XイルOH)4（化合物２７）、TPP F4(p-S-β-XイルOH)3（化合物２８）、TPP F4(p-S-α-MannOH)4（化合物２９）、およびTPP F4(p-S-α-MannOH)3（化合物３３）から選択され、フッ素かつ硫黄を含有する化合物であることを特徴とする、ポルフィリン化合物。
【請求項１０】
TPP(p-CH2-S-β-GluOH)4（化合物６５）、TPP(p-CH2-S-β-XイルOH)4（化合物６４）、およびTPP(p-CH2-S-α-MannOH)4（化合物６６）から選択される硫化ベンジル化合物であることを特徴とする、ポルフィリン化合物。
【請求項１１】
TPC(m-O-β-GluOH)4（化合物５４）、TPC(m-O-β-GluOH)3（化合物５５）、TPC(m-OH)3（化合物７７〜７８）から選択されるクロリン化合物であることを特徴とする、ポルフィリン化合物。
【請求項１２】
TPP(p-OC3-S-β-GluOH)3（化合物２３）であることを特徴とする、ポルフィリン化合物。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物の有効量を少なくとも一種類の薬学上許容可能な賦形剤と混合して含んでなる、医薬組成物。
【請求項１４】
医薬として用いられる、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
光力学療法において、標的の生物学的材料の機能を破壊しまたは損なうのに用いられる、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
光力学療法において有用な薬剤を製造するための、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１７】
網膜芽細胞腫に対する薬剤を製造するための、化合物PhotofrinまたはFoscanの新たな使用。
【請求項１８】
標的の生物学的材料の機能を、イン・ビトロまたはイン・ビボにて増感し、破壊し、または損なう方法であって、前記標的と請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物の有効量とを接触させ、前記標的に、前記化合物によって吸収される波長の光線を照射することを含んでなる、方法。
【請求項１９】
生物学的材料が、ウイルス、腫瘍細胞、細菌、腫瘍状組織である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
試験化合物を不活性化する細胞に添加して、前記化合物を光活性化し、さらに細胞の不活性化を測定することを含んでなる、光力学療法において有用な請求項１〜６のいずれか一項に記載のポルフィリン化合物のスクリーニング方法。
【請求項２１】
光線力学療法において有用な薬剤を製造するための、請求項２０に記載の方法によって得られる化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
本発明は、新規なポルフィリン誘導体それらの製造方法、それらの光線力学療法における使用に関する。
【０００２】
光線力学療法は、光増感剤と呼ばれるある種の化学物質に対する光の作用に基づいている。これらの光感受性分子は、十分には理解されていない吸収機構により腫瘍に蓄積する。光照射されると、光増感剤は癌細胞を殺すことができる反応性種を放出する。
【０００３】
一般に受け容れられている作用機構によれば、ほとんどの光増感剤に適切な波長および照度の光を照射すると、光増感剤はエネルギーを吸収し、次いで、通常は三重項電子状態で存在している酸素に移行する。光増感剤によって移されたエネルギーは、三重項酸素を、細胞にとって破壊的な反応性の極めて高い種である一重項酸素に転換する。
【０００４】
光線力学療法では、破壊しようとする組織に選択的に照射し、損傷はその部分だけに抑制される。他の部位は影響を受けず、その理由は、光増感剤は光の非存在下では毒性を持たず、かつ、それらは標的組織に蓄積する傾向を有するからである。
【０００５】
これまでは、Photofrin（商品名）(porfimer sodium；ポルフィマーナトリウム)と呼ばれている一つ光増感剤が、任意の種類の光線力学療法について法律による認可を受けている。
【０００６】
今日までのところ、Photofrin（商品名）は、食道癌、肺癌、膀胱(bladder)癌、胃および子宮頸癌の治療に用いられている。さらに、これについては、幾つかの国々において、頭部および頸部癌並びにバレット食道の治療のための臨床試験が行われている。この後者の疾病は、食道癌を生じる可能性のある前癌状態である。これは、酸の逆流によって引き起こされ、ストレスが引き金となることがある。
【０００７】
Photofrin（商品名）による癌性腫瘍の典型的治療では、患者は外来患者として光増感剤の静脈注射を受けた後、24〜48時間待つ。この待機時間中に薬剤が腫瘍に蓄積して、正常組織から除去することができる。患者はこの待機時間の後に診療所に戻り、多くの場合はファイバー光学装置を用いて10〜30分間腫瘍に光照射を行う。患者は、同日に帰宅する。しかしながら、一つの副作用があり、Photofrin（商品名）は治療の後、約30日間皮膚に留まり、患者は強い光に対して感受性になる。
【０００８】
一つの進歩がなされている。改良が求められているのは、光の透過である。光は、その波長が増加すると、より深く組織に浸透する。現在用いられている用途では、Photofrin（商品名）は630nmで活性化される。
【０００９】
例えば、腫瘍については、Photofrin（商品名）の効果は、数ミリメートルしか浸透しない。より長波長で励起することができる光増感剤であれば、より深く浸透し、さらに腫瘍中に到達するであろう。
【００１０】
WO98/50386号明細書に記載されている第二世代の化合物である、ベンゾポルフィリン誘導体一酸A環（benzoporphyirin derivative monoacid ring A)またはVerteporfinは、Photofrin（商品名）に比較して、幾つかの利点を有している。これらは、690nmにて活性化されるので、Photofrin（商品名）において可能であるよりも、さらに深い位置にあるまたはより大きな腫瘍の治療に用いることができる。これらは標的組織に速やかに蓄積され、かつ、正常組織から迅速に消失し、Photofrin（商品名）についての2日間の待機期間と比較して、薬剤を導入した後に5分以内に光治療を開始することができる。また、速やかな吸収とクリアランスによって、光感受性は、Photofrin（商品名）についての数週間と比較してより短い期間である1日間、保持することとなる。しかし、腫瘍細胞に対する選択性、生物学的組織において最も透過しやすい光線である赤色光線の吸収が低いこと、および正常組織からの化合物の除去の問題があり、新たな誘導体が求められている。
【００１１】
可視スペクトルの赤色部分にて光活性化することができ(例えば、フタロシアニン、クロリン(chlorin)、ベンゾポルフィリン)、腫瘍組織に一層選択的であり、または（および）正常組織によって一層速やかに除去される新たな光増感剤を見出すために、大きな努力が払われてきた。しかし、これらの問題は解決していない。
【００１２】
光線力学療法は、短期間に腫瘍学から眼科学、心臓病学、および皮膚科学へと進歩してきた。泌尿器科学(前立腺肥大および前立腺癌)および婦人科学(機能障害による子宮出血)での応用も、検討されている。
【００１３】
WO99/26947号明細書は、少なくとも1つの窒素原子を与えるものである1つ以上の環外環を含んでなる構造をクロリン環に結合することによって酸化に対して安定化されたクロリン環系に基づき、光線力学療法において有用な治療用大環状化合物を開示している。
【００１４】
また、仏国特許第2,709,491号明細書は、親水性を与える少なくとも1個のフェニル-O-グリコシル化基によってメソ位が置換され、疎水性を有する1、2または3個の基によって他のメソ位は占められているテトラピロール核を含んでなる、ポルフィリン誘導体について記載している。これらの化合物は両親媒性を示し、細胞の脂質膜を通って一層良好な輸送を可能にするものである。
【００１５】
近年、水溶性であり、かつ、様々な疎水性を示す一層効率的な化合物を得て、
血液循環におけるそれらの輸送、腫瘍細胞の膜系とのそれらの相互作用、およびそれらの細胞局在化を調節し、
レクチン受容体を包含する活性な細胞の組込み機構を得るために、テトラピロール型複合糖質の中性光増感剤の合成法が開発されている(Momenteau et al. , 1999)。
【００１６】
本発明の目的は、ヘマトポルフィリン誘導体(HpDまたはPhotofrin（商品名）)について知られているよりも高い高光毒性活性の、複合糖質化合物を見定めることにある。
【００１７】
本発明の他の目的は、ヒト腫瘍細胞系に対して光細胞毒性作用を示す化合物を見定めることにある。
【００１８】
他の目的は、前記化合物を用いる光線力学療法によって、癌性組織を治療および／または検出することを可能とする方法を提供することにある。
【００１９】
上記の目的に従い、本発明は、第一の態様によれば、式Iを有する新規なポルフィリン化合物およびその金属化および／または標識化および／または共役化形態の化合物に関する：
【化１】
2005500335.tif 000002
（上記式中、
a) R1=X1-R5、R2=X1-R6、R3=X1-R7、R4=X1-R8
（ここで、X1は
【化２】
2005500335.tif 000003
である）であり、および
a.1) R5、R6、R7、R8の中の少なくとも１つの基は、A=S-糖OH基であり、他の基はF原子であり、該糖は、マルトース、ラクトース、マンノース、およびキシロース、グルコースからなる群から有利に選択される単糖、二糖もしくは多糖類であり、または
a.2) R5、R6、R7、R8の中の少なくとも１つの基は、A'=O-糖であり、他の基はF原子であり、該糖は、ガラクトース、マンノース、キシロース、グルコースからなる群から有利に選択される単糖もしくは多糖類であり、または
b) R2=-Y1-HおよびR1=R3=R4=Y1-R9
（ここで、Y1は
【化３】
2005500335.tif 000004
であり、かつ、オルト、メタまたはパラ位で置換されている）であり、かつ、
b.1) R9=OCH2CH2CH2-S-糖であり、該糖は、ラクトース、マンノース、グルコースおよびマンノースからなる群から有利に選択される単糖、二糖もしくは多糖類であり、または
b.2) R9=O-CH2-CH2-Y-CH2-CH2-X-糖であるか、もしくはR9=O-CH2-CH2-Y-CH2-CH2-Y-CH2-CH2-X-糖（ここで、X=O、S、-CH2-であり、かつ、Y=-O-、-CH2-である）であり、または
b.3) R9=CH2-X-糖（ここで、X=O、S、CH2であり、該糖は、マンノース、キシロース、グルコース、ガラクトース、ラクトース、マルトースからなる群から有利に選択される単糖、二糖または多糖類である）であり、または
c) R1=R2=R3=R4=-Y1-B（ここで、Y1は
【化４】
2005500335.tif 000005
であり、かつ、パラ位で置換されており、B=(CH2)n-S-糖であり、該糖は単糖または多糖類であり、有利には、マンノース、キシロース、グルコースであり、かつ、n=1もしくは2である）であり、または
d) R1=C-A4、R2=C-A3、R3=C-A2、R4=C-A1（ここで、それぞれの置換基Cは
【化５】
2005500335.tif 000006
であり、かつ、m-ヒドロキシフェニルまたはp-ヒドロキシフェニルである）であり、
d.1) A1、A2、A3、A4の中の少なくとも２つの基は、O-グルコースOH基であり、他のものはH原子であり、または
d.2) A1、A2、A3、A4の中の少なくとも２つの基は、O-CH2CH2CH2-O-グルコースOH基であり、他のものはH原子である）であり、
ここで、a)、b)、c)、d)においてR=R'1=R'2=Hであり、または
e) R1=R2=R3=H、R=R'1=R'2=CH2CH3、およびR4=D-糖（ここで、Dは
【化６】
2005500335.tif 000007
である）であり、該糖は、グルコース、マルトース、マンノース、キシロースからなる群から有利に選択される単糖もしくは多糖類であり、または
R1=R2=R3=R4=H、R=CH3、R'1=D-H、R'2=D-糖であり、該糖は、マルトース、マンノース、キシロース、ラクトースおよびさらに大きな多糖類からなる群から有利に選択される単糖もしくは多糖類である）。
【００２０】
有利には、本発明は、上記ポルフィリン誘導体であって、
a) R5=R6=R7=R8=S-糖OH、
b) R5=R7=R8=S-糖OHおよびR6=F、
c) R6=R8=S-糖OHおよびR5=R7=F、
d) R7=R8=S-糖OHおよびR5=R6=F
（ここで、糖は単糖または多糖類であり、有利にはグルコースまたはマンノースまたはキシロースである）であるものからなる群から選択される化合物に関する。
【００２１】
有利には、本発明は、上記ポルフィリン誘導体であって、
a) R5=R6=R7=R8=S-糖OH、
b) R5=R7=R8=S-糖OHおよびR6=F
（ここで、糖はキシロースである）であるものからなる群から選択される化合物に関する。
【００２２】
有利には、本発明は、上記ポルフィリン誘導体であって、
a) R5=R7=R8=S-糖OHおよびR6=F、または
b) R6=R8=S-糖OHおよびR5=R7=F、または
c) R7=R8=S-糖OHおよびR5=R6=F
（ここで、糖はマンノースである）であるものからなる群から選択される化合物に関する。
【００２３】
有利には、本発明は、上記ポルフィリン誘導体であって、
a) A1=A2=A3=A4=O-D-グルコースOH、
b) A1=A2=A3=O-D-グルコースOH、A4=H、
c) A1=A2=O-D-グルコースOH、A3=A4=H
であるものからなる群から選択される化合物に関する。
【００２４】
有利には、本発明は、A1=A2=A3=A4=O-D-グルコースOHである化合物に関する。
上記の総ての化合物の中で、本発明は、最も好ましくはC2〜C7の化合物に関する。
【００２５】
もう一つの態様によれば、本発明は、薬剤として用いられる上記化合物に関する。病理学は、固形癌、すなわち非小細胞肺癌、前立腺、食道、皮膚、胸部、膀胱、および膵臓癌、カポージ肉腫、網膜芽細胞腫のような眼科疾患、加齢に伴う斑の変性(AMD)、感染、関節炎、および末梢動脈疾患の光血管形成のような他の疾病に集中している。
【００２６】
もう一つの態様によれば、本発明は、光線力学療法における標的の生物学的材料の機能を破壊し、損なうのに用いるこのような化合物に関する。
【００２７】
もう一つの態様によれば、本発明は、上記化合物の有効量と少なくとも1種類の薬学上許容可能な賦形剤とを混合して含んでなる医薬組成物に関する。
【００２８】
もう一つの態様によれば、本発明は、光線力学療法において有用な組成物を製造するためのこのような化合物の使用に関する。もう一つの態様によれば、本発明は、上記化合物の少なくとも1つを用いる光線力学治療の方法に関する。
【００２９】
もう一つの態様によれば、本発明は、標的の生物学的材料の機能を光増感し、破壊し、損ない、またはイン・ビボで腫瘍を検出する方法であって、
組成物をヒトに0.1〜20mg/Kg体重、有利には1〜5mg/Kgの濃度にて投与し、
イン・ビボにおいて、生物学的標的または腫瘍に、前記化合物によって吸収される波長にて照射を行うこと
を含んでなる、方法における前記化合物の使用に関する。
【００３０】
もう一つの態様によれば、本発明は、エキソ・ビボまたはイン・ビボにて標的の生物学的材料の機能を光増感し、破壊しまたは損なう方法であって、上記標的と、このような化合物の有効量とを接触させ、さらに、前記標的に、前記化合物によって吸収される波長の光線を照射することを含んでなる、方法に関する。生物学的材料は、典型的にはウイルス、腫瘍細胞、細菌、腫瘍状組織である。
【００３１】
本発明の他の特徴および利点は、下記の詳細な説明から明らかになるであろう。
本発明は、さらに具体的には下記の表Aに示される極めて有利な化合物に関する。本文に引用される糖の中で、ガラクトース、キシロース、グルコース、マルトースは有利にはβ型であり、マンノースは有利にはα型である。
【００３２】
表A：ポルフィリン誘導体
【表１】
2005500335.tif 000008
2005500335.tif 000009
2005500335.tif 000010
2005500335.tif 000011
2005500335.tif 000012
2005500335.tif 000013
2005500335.tif 000014
2005500335.tif 000015
2005500335.tif 000016
2005500335.tif 000017
2005500335.tif 000018
2005500335.tif 000019
【００３３】
化合物TPC(m-OH)3は、2つの異性体77、78の等比率での混合物である。
表Aの幾つかの化合物の製造を、次に説明する。
【００３４】
1) 化合物23-24を、工程図1に表されている方法で調製する。
【化７】
2005500335.tif 000020
【００３５】
化合物24 (グリコシル化):
ポルフィリン100mg[5,10,15-トリス(ブロモ-3-プロピルオキシ-4-フェニル)-20-フェニルポルフィリン(9.76  10-5モル)]とα-D-チオ- 2,3,4,6-テトラアセチルマンノース160mg(0.44ミリモル、4.5当量)を、モレキュラーシーブ4Åにて乾燥したアセトン20 mLに溶解したものに、炭酸カリウム60mg(0,44ミリモル、4,5当量)を加えた。この溶液を、暗所にてアルゴン下、周囲温度にて一晩攪拌する。この溶液を真空留去し、ジクロロメタンによって再溶解し、蒸留水にて2回洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムにて乾燥し、濾過して、真空留去する。粗生成物を、プレパラティブ・シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン/エーテル 10/1(v/v)にて溶出する。より極性の高い化合物を選択して、混合物をジクロロメタン/ヘプタンから再結晶した後、紫色粉末93mg (51%)を得る。
【００３６】
化合物24 (脱アセチル化):
前記化合物50mgを、文献１６に記載の一般的手法に従って処理する。化合物は、メタノール／１，２−ジクロロエタンの混合液であってピリジンを微量含有するものにて、２回再結晶して得られる。脱保護したポルフィリンは、定量的に得られる。
【００３７】
2) 化合物26〜33を、工程図2に示される方法にて製造する。
【化８】
2005500335.tif 000021
【００３８】
化合物25および26：トリグリコシル化化合物の最適化
グリコシル化：
保護されたポルフィリン：
Lindsey et al.の方法(Lindsey, J.S.; Schreiman, I.C.; Hsu, H.C.; Kearney, P.C.; Marguerettaz, A.M., J. Org. Chem. 52,827-836 1987)を用いて製造した5,10,15,20-テトラキス(ペンタフルオロフェニル)ポルフィリン100mg(0.103ミリモル)およびβ-D-チオ-2,3,4,6-テトラアセチルグルコース(0.617ミリモル、1.5当量/F)を、蒸留したジメチルホルムアミド25mLに溶解する。この溶液を、アルゴン下、暗所にて3日間攪拌する。この溶液を真空留去し、残渣をジクロロメタンに溶解する。この溶液を、プレパラティブ・シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン/エーテル 10/1(v/v)の混合液にて溶出する。化合物26(保護型)(Rf=0.30)100mg(収率=48%)および化合物25(保護型)(Rf=0.10)66mg(収率=27%)が、ジクロロメタン/ヘプタンの混合液から再結晶することによって得られる。3種類のモノおよびジグリコシル化化合物が、混合物として得られた(収率25%)。
【００３９】
脱アセチル化
前記化合物[25(保護型)または26(保護型)]50mgを、「PDTについてのテトラピロールグリコシル化大環状化合物(Tetrapyrrolic glycosylated macrocycles for PDT)」M. Momenteau, Ph. Maillard, M.A. de Belinay, D. Carrez et A. Croisy, J. Biomeジcal Optics 4 (3), 298-318, 1999に正確に記載されている一般的手法によって処理する。微量のピリジンを含むメタノール-1,2-ジクロロエタンの混合液から2回再結晶した後、化合物を得る。保護されていないポルフィリンが、実質的に定量的に得られる。
【００４０】
保護された化合物29および31: テトラグリコシル化化合物に対する最適化の例
グリコシル化:
5,10,15,20-テトラキス(ペンタフルオロフェニル)ポルフィリン100mg(0.103ミリモル)とα-D-チオ-2,3,4,6-テトラアセチルマンノース225mg(0.617ミリモル, 1.5当量/F)を、蒸留したジメチルホルムアミド25 mlに溶解する。溶液を、アルゴン下にて暗所で4日間攪拌する。溶液を真空留去し、残渣をジクロロメタンに溶解する。溶液をシリカゲルプラーク下でクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン/エーテル5/1(v/v)の混合物で溶出する。化合物31(保護)(Rf=0.75)54mg (収率=26%)および化合物29(保護) (Rf = 0.62)140mg(収率=58%)が、ジクロロメタン/ヘプタンの混合物から再結晶した後に得られる。
【００４１】
脱アセチル化
上記化合物50mgを、Zemplen, G. Gerecs, A. Haracsy, C., Ber. 1936, 69, 1827に正確に記載されている一般的方法に準じて処理する。微量のピリジンを含むメタノール/1,2-ジクロロエタンの混合物から2回再結晶した後、化合物を得る。保護基のないポルフィリンが、実質的に定量的に得られる。
【００４２】
3) 化合物54-59を、工程図3に示される方法で調製する。
【化９】
2005500335.tif 000022
【００４３】
化合物54 :
5,10,15,20-テトラキス(3-O-β-D-2,3,4,6-テトラアセチルグリコシルオキシフェニル)ポルフィリン350mg(0,175ミリモル)と炭酸カリウム220mgを、モレキュラーシーブ4Åで乾燥したピリジン8mlに溶解し、K2CO3220mgを加えた。溶液を、アルゴンを20分間通じて脱酸素化する。パラ-トルエンスルホノヒドラジド65.6mg (0.352ミリモル, 2当量)を、できるだけ少量の乾燥ピリジンに加えて溶解する。溶液を100℃アルゴン下にて6時間30分加熱する。2時間毎に、パラ-トルエンスルホノヒドラジド71mgを乾燥ピリジン0.25 mlに加える。室温まで冷却した溶液に、酢酸エチル55 mlと水22.5 mlを加える。混合物を、100℃で1時間攪拌する。混合物を傾瀉し、水性相を酢酸エチルで抽出する。有機相を2N塩酸、水、重炭酸ナトリウムの飽和溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムにて乾燥する。クロリンとバクテリオクロリン類似体の同時存在およびポルフィリンの消失は、UV可視分光光度法によって実証される。オルトクロラニル121mg(0,5ミリモル)を、少量ずつ有機溶液にバクテリオクロリンの特異的UV可視バンド(735nm)が消失するまで加える。有機溶液を硫酸水素ナトリウム(5%)と、水で洗浄した後、硫酸ナトリウムにて乾燥する。溶液を真空留去する。粗生成物をシリカゲルカラムのクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン/アセトン5/1(v/v)の混合物で溶出する。ジクロロメタン/ヘプタンの混合物から再結晶した後、結晶生成物302mgが得られる(収率89%)。
【００４４】
脱アセチル化 :
上記化合物50mgを、文献「PDTについてのテトラピロールグリコシル化大環状化合物(Tetrapyrrolic glycosyrated macrocycles for PDT)」M. Momenteau, Ph. Maillard, M.A. de Belinay, D. Carrez et A. Croisy, J. Biomedical Optics 4 (3), 298-318, 1999に正確に記載されている一般的方法によって処理する。微量のピリジンを含むメタノール/1,2-ジクロロエタンの混合物から2回再結晶した後、化合物が得られる。保護されていないクロリンが、定量的に得られる。
【００４５】
4) 化合物68を、工程図4に示される方法で調製する。 :
【化１０】
2005500335.tif 000023
【００４６】
化合物II:
5,10,15-トリ(パラ-ヒドロキシフェニル)-20-フェニルポルフィリン(I) 100mg(1.5x10-4モル)とジブロモジエチレングリコール(2.26x10-3モル)(文献: S. De, W.K. Aswal, P.S. Goyal, S. Bhattacharya, J. Phys. Chem. B 102, 6152-6161, 1998)をDMF (20ml)に溶解したものに、K2CO3 0.621g (4.5x10-3モル)を加えた。生成する混合物をアルゴン下にて一晩室温で攪拌し、50℃で更に4時間攪拌した。次に、反応物を真空濃縮し、粗生成物の混合物を塩化メチレンに吸収させ、水(3x)で洗浄し、硫酸ナトリウムにて乾燥し、濾過して、濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー(塩化メチレン)および塩化メチレン/ヘプタンから再結晶した後に、標題化合物(87mg, 51%; 紫色粉末)を純粋な状態で得た。
【００４７】
保護された化合物68 :
化合物II 87mg(7.8x10-5モル)とα-D-チオ-2,3,4,6-テトラアセチル-マンノース135mg(0.37x10-3モル)を乾燥アセトン(モレキュラーシーブ4Å)(25ml)に溶解したものに、K2CO3 100mg(0.725x10-3モル)を加えた。室温で一晩攪拌した後、更に100mgのα-D-チオ-2,3,4,6-テトラアセチル-マンノースを加えた。シリカゲル薄層クロマトグラフィー[塩化メチレン/エーテル (10/1(v/v))]によって化合物IIが最早検出されなくなるまで、攪拌を継続した。次に、反応を真空濃縮し、粗生成物の混合物を塩化メチレンに吸収させ、水(3x)で洗浄し、硫酸ナトリウムにて乾燥し、濾過して、濃縮した。粗製混合物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー[塩化メチレン/エーテル(10/1〜1/1(v/v))]によって部分的に分離した。更に極性画分を、Sephadex LH20排除カラムクロマトグラフィー[塩化メチレン/エタノール(1/1(v/v))]によって更に精製した。塩化メチレン/シクロヘキサンから再結晶した後、標題化合物を赤色粉末として得た(132mg, 86%)。
【００４８】
化合物68 :
保護された化合物68 75mgを、文献16に記載の一般的方法に準じて化合物68に転換した。微量のピリジンを含むメタノール/1,2-ジクロロエタンから再結晶したところ、標題化合物が赤色粉末として定量的収率で得られた。
【００４９】
ポルフィリン化合物は、物理測定(UV可視分光光度法, RMN)により極めて良好に特性決定された構造を示し、それらの幾つかについては下記の通りである。
【００５０】
アセチル化化合物23
収率: 58%。
分析  C95H102N4O30S3についての計算値 C, 60.82;H, 5.48; N, 2.99; S, 5.13. 実測値 C, 59.30;H, 5.66; N, 2.46; S, 4.80. CHCl3中でのUV-可視スペクトル:λmax,nm (ε, L mmol-1cm-1): 420 (410.9); 517(16.9); 554 (11.7); 594 (7.2); 648.5 (7.4).
1H NMR (CDCl3) 8.88 (s, 6H, ピロール), 8.84 (s, 2H, ピロール), 8.25 (d, 2H, Ho,フェニル, J = 6.1 Hz), 8.13 (d, 6H, Ho, フェノキシ, J = 6 Hz), 7.77 (m, 3H, HmおよびHp,フェニル), 7.30 (d, 6H, Hm,フェノキシ, J = 8 Hz), 5.30 (t, 3H, H3「オース(ose)」, J = 9.1 Hz), 5.16 (m, 6H, H3, H4「オース」), 4.64 (d, 3H, H1「オース」, J = 8.2 Hz), 4.37-4.33-4.23 (m, 12H, H6「オース」およびO-CH2), 3.79 (d, 3H, H5「オース」), 3.08 (m, 6H, S-CH2), 2.32 (q, 6H, CH2 ), 2.18 (s, 6H,アセチル), 2.14-2.13 (18H,アセチル), 2.08 (12H,アセチル), -2.74 (s, 2H, NH).
【００５１】
化合物23
収率: 100%.
分析  C71H78N4O18S3についての計算値C, 62.17;H, 5.73; N, 4.08; S,7.01. 実測値 C, 38.70;H, 3.79; N, 3.71; S, 43.00.
MeOH/ピリジン(24/1(v/v))中でのUV-可視スペクトル:λmax,nm (相対光学密度) 416 (1), 514 (0.066), 550 (0.054), 591 (0.044), 647 (0.042).
1H NMR (ピリジンd5 ) 9.5 (d, 2H, ピロール, J = 4.85 Hz), 9.18 (s, 4H, ピロール), 9.1 (d, 2 H ピロール, J = 4.85 Hz), 8.37 (m, 2H, Hoフェニル), 8.27 (dd, 6H, Hoフェノキシ, J = 8.6および2.2 Hz), 7.79 (m, 3H, HmおよびHpフェニル), 7.39 (dd, 6H, Hm フェノキシ, J = 8.6ピリジン2.2 Hz), 5.14 (d, 3H, H1「オース」, J = 9.6 Hz), 4.62 (m, 3H, H6a「オース」), 4.41 (m, 3H, H6b「オース」), 4.37 (3, 6H, OCH2), 4.31 (m, 6H, H5およびH3「オース」), 4.15 (m, 3H, H2「オース」), 4.05 (m, 3H, H4「オース」), 3.34 (m, 3H, S-CH2a ), 3.20 (m, 3H, S-CH2b), 2.41 (dd, 6H, CH2), -2.27 (s, 2H, NH).
13C NMR (ピリジンd5 ) 159.5 (パラ-フェノキシ), 142.7 (C1フェニル), 135.6 (オルト-フェノキシ), 134.7 (C1 フェノキシ), 134.2 (オルト-フェニル), 131.8 (ピロール), 127.4-126.4 (メタおよびパラフェニル), 120.7 (Cmeso), 112.9 (メタ-フェノキシ), 87.5 (C1 糖), 82.9 (C4オース」), 80.3 (C3「オース」), 74.7 (C2「オース」), 71.6 (C5「オース」), 67.1 (O-CH2 ), 63 (C6「オース」), 30.5 (-CH2 -), 27.3 (S-CH2).
C71H78N4O18S3についてのMALDI TOFスペクトル: 計算値1370.5; 1371.5 M + 1.
【００５２】
アセチル化化合物24
収率: 51%.
分析  C95H102N4O30S3 についての計算値C, 60.82;H, 5.48; N, 2.99; S, 5.13. 実測値 C, 59.64;H, 5.81; N, 2.34; S, 5.31. CHCl3中でのUV-可視スペクトル: λmax,nm (ε, L mmol-1cm-1): 418.5 (409.6); 515 (17.3); 550 (12.9); 590 (7.2); 646.5 (7.1).
1H NMR (CDCl3) 8.90-8.89-8.86-8.85 (8H, ピロール), 8.24 (d, 2Ho,フェニル, J = 7.5 Hz), 8.15 (d, 6Ho, フェノキシ, J = 8.4 Hz), 7.79 (d, 3HmおよびHp,フェニル, J = 6.5 Hz), 7.30 (d, 6Hm, フェノキシ, J = 7 Hz), 5.40 (m, 9H,「オース」), 4.53 (m, 3H,「オース」), 4.38 (m, 9H,「オース」およびCH2 -O), 4.20 (m, 6H,「オース」), 3.04 (m, 6H, CH2 ), 2.35 (q, 6H, CH2 -S), 2.23 (s, 6H,アセチル), 2.19 (s, 9H,アセチル), 2.14 (s, 3H,アセチル), 2.11 (s, 6H,アセチル), 2.09 (s, 3H,アセチル), 2.05 (s, 6H,アセチル), 2.04 (s, 3H,アセチル), - 2.73 (s, 2H, NH).
【００５３】
化合物24
収率: 90%.
分析  C71H78N4O18S3についての計算値C, 62.17;H, 5.73; N, 4.08; S,7.01. 実測値 C, 38.59;H, 4.10; N, 2.19; S, 4.31. MeOH/ピリジン24/1(v/v)中でのUV-可視スペクトル:λmax,nm (ε, L mmol-1cm-1) 416 (214.9), 514.5 (11), 550.5 (8.3), 589 (5.7), 647.5 (5.6).
1H NMR (ピリジンd5 ) 9.17-9.07 (m, 8H, ピロール), 8.39 (m, 2H, Hoフェニル), 8.29 (d, 6H, Hoフェノキシ, J = 8.6 Hz), 7.86 (m, 3H, HmおよびHpフェニル), 7.45 (d, 6H, Hm フェノキシ, J = 8.6Hz), 5.43 (d, 3H, H1「オース」, J = 1.5 Hz), 5.37 (dd, 3H, H2「オース」), 4.75 (m, 6H, H3およびH4「オース」), 4.61 (dd, 3H, H6a「オース」), 4.43 (brt, 3H, O-CH2), 4.31 (dd, 3H, H6b「オース」), 4.30 (m, 3H, H5「オース」), 3.72 (m, 3H, S-CH2a), 3.39 (m, 3H, S-CH2b ), 2.64 (m, 6H, -CH2-S), -2.31 (s, 2H, NH).
13C NMR (ピリジンd5 ) 159.5 (パラ-フェノキシ), 143 (C1フェニル), 136 (オルト-フェニル), 135.2 (C1フェニル), 131 (CH ピロール),128.5 (メタまたはパラフェニル), 127.6 (パラまたはメタフェニル), 121 (Cmeso), 113.8 (メタフェノキシ), 96.6 (C1「オース」), 82 (C5「オース」), 73.1 (C3「オース」), 68 (C4「オース」), 68.4 (C2「オース」), 67.4 (O-CH2 ), 63 (C6「オース」), 47.3 S-CH2 ), 23.1 (CH2 ).
C17H78N4O18S3についてのMALDI TOFスペクトル: 計算値: 1370.45; 実測値: 1371.43 M + 1.
【００５４】
化合物25 (グリコシル化、保護されたポルフィリン):
分析  C100H86N4O36F16S4 についての計算値: C 51.07; H 3.69; N 2.38; S 5,45%, 実測値: C 51,40 ; H 4,32 ; N 1,98 ; S 5,43%
UV可視 CH2Cl2 λmax,nm, (ε, L mmol-1cm-1): 414.5 (340.5), 507 (24.4,), 538 (shoulder), 585 (4,9), 649 (shoulder).
1H NMR (CDCl3) 9.03 (s, 8H, ピロール), 5.39 (t, 4HC3, 「オース」, J = 8.9 Hz), 5.25 (m, 8H, HC2およびHC4「オース」), 5.18 (d, 4H, HC1「オース」, J = 8.9 Hz), 4.33 (d, 4H, HC6「オース」), 4.32 (m, 4H, HC6「オース」), 3.91 (m, 4H, HC5,「オース」), 2.23 (s, 12H,アセチル), 2.10 (s, 12H, アセチル), 2.09 (s, 12H, アセチル), 2.08 (s, 12H, アセチル), -2.86 (s, 2H, NH).
13C NMR (CDCl3) 170.7, 170.22, 169.53, 169.45 (C=Oアセチル), 147.12 (dd, メタまたはオルソフェニル, JC-F = 256 Hz, JC-C-F = 15 Hz), 146.34 (dd, メタまたはオルソフェニル, JC-F = 254 Hz, JC-C-F = 15 Hz), 131.6 (CHピロール), 122.12 (t, メソCフェニル, JC-C-F = 19 Hz), 111.93 (t, パラ-フェニル, JC-C-F = 20.5 Hz), 104.34 (メソC), 84.5 (C1 「オース」), 76.49 (C5 「オース」), 73.98 (C3 「オース」), 70.67 (C2 「オース」), 68.14 (C4 「オース」), 61.87 (C6 「オース」), 20.71, 20.66 (CH3アセチル).
【００５５】
化合物25 (脱アセチル化):
収率 95%
分析 C68H54F16N4O20S4 3H2Oについての計算値: C, 48.93;H, 3.62; N, 3.36; S, 7.64 実測値: C, 48.75;H, 3.34; N, 3.34. メタノール中でのUV-可視スペクトル:λmax, nm (6, L mmol-1cm-1): 409.5 (257.5), 504 (18), 535 (4.5), 581.5 (7), 639 (2.8).
1H NMR (ピリジンd5) 9.44 (s, 8H, ピロール), 8.31 (d, 4H, HOC2「オース」, J = 4.85 Hz), 7.75 (d, 4H, HOC3「オース」, J = 2.70 Hz), 7.43 (d, 4H, HOC4「オース」, J = 4.75 Hz), 6.81 (t, 4H, HOC6「オース」, J = 5.65 Hz), 5.92 (d, 4H, HC1「オース」, J = 8.6 Hz), 4.72 (dd, 4H, HC6「オース」, J = 8.55および4.7 Hz), 4.4 (m, 8H, HC2およびHC3 「オース」), 4.37 (m, 4H, HC6「オース」), 4.30 (m, 4H, HC4「オース」), 4.19 (m, 4H, HC5「オース」), 3.05 (s, 2H, NH).
13C NMR (ピリジンd5) 148 (dd, オルトまたはメタフェニル, JCF = 250 Hz, JCCF = 15 Hz), 146.78 (dd メタまたはオルトフェニル, JCF = 250 Hz, JCCF = 15 Hz), 132.3 (CH ピロール), 120.72 (Cメソフェニル), 115.26 (パラ-フェニル), 105.04 (メソC), 86.57 (C1「オース」), 83.65 (C5「オース」), 80.39 (C3 「オース」), 76.38 (C2「オース」), 71.96 (C4「オース」), 63.05 (C6「オース」).
C68H54F16N4O20S4についてのMALDI TOFスペクトル: 計算値: 1678.11; 実測値: 1679.16 M +1
【００５６】
アセチル化化合物26
収率: 48%.
分析  C86H67N4O27F17S3 についての計算値: C, 51.45;H, 3.36; N, 2.79; S, 4.79; 実測値 C, 51.16;H,3.98; N, 2.16; S, 4.86.
CHC13中でのUV-可視スペクトル: λmax,nm, (ε, L mmol-1cm-1): 413.5 (294.1), 507(20.9), 538 (shoulder), 583.5 (8.6), 649 (4.7).
1H NMR (CDCl3 ) 9.0 (s, 2H, ピロール), 8.93 (s, 6H, ピロール), 6.25 (d, 3H, H1 「オース」, J = 5.5 Hz), 5.64 (t, 3H, H3「オース」, J = 8.3 Hz), 5.40-5.09 (m, 6H, H2およびH4「オース」), 4.82 (m, 3H, H5「オース」), 4.42-4.23 (m, 6H, H6「オース」), 2.26, 2.22, 2.13, 2.11, 2.08, 2.06, 2.02, 1.99 (s, 36H, アセチル), -2.91 (s, 2H, NH).
13C NMR (CDCl3) 169.64 (C=O,アセチル),169.17 (C=O,アセチル), 168.47 (C=O,アセチル), 168.39 (C=O,アセチル), 146.14 (dd, Cオルトまたはメタフェニル, JC-F = 250 Hz, Jc-C-F = 15 Hz), 145.39 (dd, Cメタまたはオルトフェニル, JC-F = 250 Hz, JC-C-F = 15 Hz), 130.5 CH ピロール), 121.1 (t, C フェニル, JC-C-F = 19 Hz), 114.64 (t, C C6F5, Jc-c-F = 20 Hz), 110.89 (t, パラフェニル, JC-C-F = 20 Hz), 103.28 (メソC C6F4), 102.61 (メソC C6F5),102.61 (メソC C6F5), 83.43 (C1「オース」), 75.41 (C5「オース」), 72.93 (C3「オース」), 69.61 (C2「オース」), 67.08 (C4「オース」), 60.81 (C6「オース」), 19.65 (CH3アセチル), 19.60 (CH3アセチル).
【００５７】
化合物26
収率: 95%.
分析  C62H43N4FI7O15S3についての計算値: C, 49.54;H, 2.88; N, 3.73; S, 6.40; 実測値 C, 45.99;H, 3.17; N, 4.25; S, 5.23.
メタノール中でのUV-可視スペクトル: λmax,nm, (ε, L mmol-1cm-1): 409 (283.7), 503.5 (19.9), 536 (4.3), 581 (7.2), 647 (2.5).
1H NMR (ピリジンd5) 9.6および9.48 (m, 8H, ピロール), 8.33 (t, 3H OH 「オース」), 7.77 (t, 3H, OH 「オース」), 7.45 (t, 3H, OH 「オース」), 6.81 (t, 3H, OH 「オース」), 5.94 (d, 3H, HC6 「オース」, J = 7.7 Hz), 4.72 (dd, 3H, HC6「オース」), 4.4 (m, 9H, C2, C3およびC4「オース」), 4.35 (dd, 3H, HC6 「オース」), 4.2 (m, 3H, HC5「オース」), -3.05 (s, 2H, NH).
13C NMR (ピリジンd5) 147.9 (d, C2またはC3フェニル, JCF = 250 Hz, JCCF = 15 Hz), 146.78 (d, C3またはC2フェニル, JCF = 250 Hz, JCCF = 15 Hz), 132 (C ピロール), 120.61 (t, C1フェニル, JCCF = 19 Hz), 115.37 (t, C4フェニル, JCCF = 21 Hz), 105.22 (メソC), 86.59 (C1「オース」), 83.65 (C5 「オース」), 80.4 (C2/3 「オース」), 76.39 (C3/2 「オース」), 71.97 (C4「オース」), 63.05 (C6 「オース」).
C62H43N4F17O15S3についてのMALDI TOFスペクトル: 計算値1502.16; 実測値: 1503.15 M +1
【００５８】
アセチル化化合物29
収率: 58%.
分析  C100H86N4O36F16S4についての計算値: C, 51.07;H, 3.69; N, 2.38; S, 5.45; 実測値: C, 51.40;H, 4.27; N, 1.84; S, 4.86.
CHCl3中でのUV-可視スペクトル:λmax,nm (ε, L mmol-1cm-1): 412.5(327.4), 505 (23.6), 537 (shoulder), 582.5 (10), 640 (shoulder).
1H NMR (CDCl3) 8.87 (8H, ピロール), 5.68 (m, 4H, 「オース」), 5.53-5.23 (m, 12H, 「オース」), 4.35-4.10 (m, 8H, 「オース」), 3.55 (m, 4H, 「オース」), 2.20, 2.09, 2.04, 2.00,1.99, 1.94 (48H, アセチル), 97 (s, 2H, NH).
【００５９】
化合物29
収率: 90%.
分析 C68H54F16N4O20S4 3H2Oについての計算値 C, 46.63;H, 3.57; N, 3.20; S, 7.32 実測値: C, 46.36;H, 3.47; N, 3.58; S, 5.95.
メタノール中でのUV-可視スペクトル: λmax,nm, (ε, L mmol-1cm-1): 408.5 (240.9), 503 (20.2), 534 (shoulder), 580.5 (9.9), 640 (shoulder).
1H NMR (ピリジンd5) 9.48 (br, 8H, ピロール), 7.73 (br, 4H, OH 「オース」), 7.4 (br, 4H, OH 「オース」), 7.29 (br, 4H, OH 「オース」), 6.95 (br, 4H, OH 「オース」), 6.83 (s, 4H, HC1 「オース」), 4.95 (m, 8H, HC2およびHC3 「オース」), 4.90 (m, 4H, HC5「オース」), 4.75 (m, 4H, HC4 「オース」), 4.75 (m, 4H, HC6 「オース」), 4.41 (dd, 4H, HC6 「オース」, J = 12.2および7.9 Hz), -3.1 (br, 2H, NH).
13C NMR (ピリジンd,) 148 (dd C3フェニル, JCF = 250および18 Hz), 146.86 (dd, C2フェニル, JCF = 248および15 Hz), 133 (CH ピロール), 121.27 (C1フェニル, JCCF = 19.5 Hz), 114.32 (C4フェニル, JCCF = 20 Hz), 104.98 (メソC, 87. 74 (C1糖), 78.12 (C5 「オース」), 73.4 (C2/3 「オース」), 72.86 (C3/2 「オース」), 69.29 (C14 「オース」), 62.76 (C6 「オース」).
C68H54Fl6N4O20S4についてのMALDI TOFスペクトル: 計算値1678.11; 実測値: 1679.11 M+l, 1485.15 (M+2H-Mann-S-), 1291.17 15 (M+2H-2Mann-S-) 1077.11 (M+2H-3Mann.-S-), 1070.13 (M+2H-3Mann-S-, -1F), 861.16 (M+2H-4Mann-S-, -2F).
【００６０】
アセチル化化合物31
収率: 15%.
分析 C72H48N4O18F18S2についての計算値: C, 51.99;H, 2.91; F, 20.56; N, 3.37; S, 3.86; 実測値: C, 51.34;H, 2.85; N, 3.26; S, 3.75. CH2Cl2中でのUV-可視スペクトル:λmax,nm, (ε, L mmol-1cm-1): 413 (240.4), 507 (14), 537 (shoulder), 584 (6.2), 655 (shoulder).
1H NMR (CDCl3) 8 8.84 (m 8H, ピロール), 5.82 (2H, 「オース」), 5.67 ( m, 2H, 「オース」), 5.46 (m, 4H, 「オース」), 4.68 (m, 2H, H5 「オース」), 4.34 (dd, 2H, H6a 「オース」, J = 5.4および12.4 Hz), 4.20 (dd, 2H, H6b 「オース」, J = 1.7および12.4 Hz), 2.18 (s, 6H アセチル), 2.07 (s, 6H アセチル), 2.02 (s, 6H アセチル), 1.99 (s, 6H アセチル), -2.98 (s, 2H, NH).
【００６１】
化合物31
収率: 90%.
分析 C56H32N4O10F18S4についての計算値: C, 50.69;H, 2.43; N, 4.22; S,4.83. 実測値: C, 47.08;H, 4.91; N, 2.11; S, 2.56. メタノール中でのUV-可視スペクトル: λmax,nm, (ε, L mmol-1cm-1): 408 (152), 503 (8.4), 537 (shoulder), 581 (3.6), 640 (shoulder).
C56H32N4O10F18S4についてのMALDI TOFスペクトル: 計算値1326.13; 実測値: 1327.14 M + 1
【００６２】
化合物54 (保護されている)
収率 89%
分析 C100H104N4O40についての計算値; C 58,94; H 3,54; N 2,76% 実測値 C 58,86 ; H 5,40 ; N 2,73%. UV-可視 CH2Cl2 λmax,nm, (ε, L mmol-1cm-1): 412 (324.3), 505 (24), 537 (shoulder), 581.5 (10.1), 642 (shoulder).
1H NMR (CDCl3): 8.61 (d, 2H, ピロール), 8.45 (d, br, 2H, ピロール), 8.24 (d, 2H, ピロール, J = 3 Hz), 7.80 (br, 4H, パラ-フェニル), 7.63 (br, 8H, オルトフェニル), 7.34 (br, 4H, メタ-フェニル), 5.34 (m, 12H, HC1, HC2, HC3 「オース」), 5.17 (m, 4H, HC4 「オース」), 4.19 (m, 8H, HC6 「オース」), 4.06 (m, 4H, HC2, HC3 ピロール), 3.81 (ru, 4H, HC5 「オース」), 2.09 (s), 2.07 (s), 2.03 (s) (48H, アセチル), 1.54 (s, 2H, NH).
C100H104N4O40についてのMALDI TOFスペクトル: 計算値 2000.62; 実測値: 2001.76 M + 1
【００６３】
化合物54 (脱アセチル化)
収率: 94%
分析 C68H72N4O24 についての計算値C 61.44 ; H 5.46 ; N 4.21%, 実測値 C 48.03; H 4.3 6; N 2.89%. UV可視スペクトル MeOH λmax,nm, (ε, L mmol-1cm-1): 415 (183.9), 515.5 (14.4), 542.5 (10.1), 596 (6.7), 650 (27.7).
1H NMR (ピリジンd5) 8.73 (m, 2H, ピロール), 8.34 (m, 2H, ピロール), 8.22 (m, 2H, ピロール), 8 7.55 (m, 8H,フェニル), 7.50-7.10 (m, 8H, フェニル), 6.65 (br, 4H, OH), 5.92 (br, 4H, OH), 4.40 (m, 22H, 「オース」), 4.08 (m, 8H, 「オース」およびピロール), -1.36 (s, 2H, NH).
C68H72N4O24についてのMALDI TOFスペクトル: 計算値 1327.45; 実測値: 1328.47 M + 1.
【００６４】
化合物II
1H NMR (CDCl3), δ(ppm): 8.85 (m, 8H, ピロール), 8.21 (m, 2H, オルト-フェニル), 8. 1 0 (d, 6H, オルトフェノキシ, J = 8.4 Hz), 7.75 (m, 3H, メタおよびパラフェニル), 7.26 (d, 6H, メタフェノキシ, J = 8.4 Hz), 4.33 (t, 6H, O-CH2), 4.03 (t, 6H, OCH2), 4.0 (t, 6H, O-CH2, J = 6.3 Hz), 3.59 (t, 6H, Br-CH2, J = 6.3 Hz), -2.75 (s, 2H, NH).
13C NMR (CDCl3), 6 (ppm): 158.6 (パラフェノキシ), 142, 135 (C-フェニルメソ-C), 135.5 (オルトフェノキシ),133.9 (パラフェニル), 130.8 (C-ピロール), 127 (メタフェニル), 119.5 (メソ-C), 112.5 (メタフェノキシ), 71.4 (O-CH2-CH2Br), 69.7 (O-CH2-CH2O),67.5 (O-CH2-CH2O),30.1 (O-CH2-CH2Br).
【００６５】
化合物55 (保護されたポルフィリン)
収率: 72%
分析 C68H72N4O24, H2Oについての計算値: C, 60.62;H, 5.54; N, 4.16; 実測値: C, 60.32;H, 5.45; N, 4.20.
MeOH中でのUV-可視スペクトルλmax,nm, (ε, L mmol-1cm-1): 415 (183.9),  515.5 (14.4),  542.5 (10.1),  596 (6.7),  650 (27.7).
1H NMR (ピリジンd5) 8.73 (m, 2H, ピロール), 8.34 (m, 2H, ピロール), 8.22 (m, 2H, ピロール), 8 7.55 (m, 8H,フェニル), 7 7.10 (m, 8H,フェニル), 6.65 (br, 4H, OH), 5.92 (br, 4H, OH), 4.40 (m, 22H, 「オース」), 4.08 (m, 8H, 「オース」およびピロール), 36 (s, 2H, NH).
C68H72N4O24についてのMALDI TOFスペクトル: 計算値1328.45; 実測値: 1329.70 M+1.
【００６６】
化合物55 (脱アセチル化)
5,10,15-トリ(3-O-β-D-グルコシルフェニル)-2,3-クロリンおよび5,10,15-トリ(3-O-β-D-グルコシルフェニル)-7,8-クロリン,
異性体の収率80%.
分析 C62H62N4O18 H2Oについての計算値: C, 63.69; H, 5.52; N, 4.79; 実測値: C, 63.29; H, 5.38; N, 4.90.
MeOH中でのUV-可視スペクトル: λmax,nm, (ε, L mmol-1cm-1): 414.5 (237.9),  515 (17.3),  542 (12),  595.5 (8),  649.5 (32.8).
C62H62N4O18についてのMALDI TOFスペクトル: 計算値1150.40; 実測値: 1151.52 M+1
【００６７】
化合物67 (保護されたポルフィリン)
収率 23%
分析 C98H108N4O36 2H2Oについての計算値: C, 60.24; H, 5.78; N, 2.87; 実測値: C, 60.25; H, 5.92; N 2.66.
CH2Cl2, TEA中でのUV-可視スペクトル: λmax,nm, (ε, L mmol-1cm-1): 419.5 (429.5), 516 (16.8),  553 (10.5), 592.5 (5.5),  647.5 (5.3).
1H NMR, CDCl3, δ(ppm): 8.86 (s, 4H, ピロール), 8.86 (d, 2H, ピロール, J = 4.8 Hz), 8.63 (d, 2H, ピロール, J = 5.8 Hz), 8.22 (dd, 2H, オルト-フェニル, J = 7.6および1.6 Hz), 8.10 (d, 6H, オルト-フェノキシ), 7.75 (m, 3H, メタおよびパラ-フェニル), 7.31 (d, 6H, メタ-フェノキシ), 5.47 (dd, J = 3.4 Hzおよび10.1 Hz), 5.35 (m) (3 H5 HC2, HC3およびHC4 「オース」), 4.99 (s, 3H, HC1 「オース」), 4.42 (m, 3H, HC5 「オース」), 4.42 (m, 6H, CH2-O-フェニル), 4.36 (dd, 3H, HC6a 「オース」, J = 4.8および12 Hz), 4.16 (m, HC6b 「オース」), 4.06 (m, 6H, O-CH2 CH2フェニル), 3.95 (m, 6H, O-CH2), 3.88 (m, 6H, O-CH2CH2-O). 3.60 (m, 6H, CH2), 2.18 (s, 9H, アセチル), 2.14 (s, 9H, アセチル), 2.04 (s, 9H, アセチル), 2.0 (s, 9H, アセチル), -2.76 (s, 2H, NH).
13C NMR (CDCl3), δ(ppm):170.7 (CO アセチル), 170.1 (CO アセチル), 170 (COアセチル), 169.8 (CO アセチル), 158.7 (C4フェノキシ), 142.3 (C1フェニル), 135.7 (C2フェノキシ), 134.9 (C1フェノキシ), 134.65 (C2フェニル), 131 (br, CH ピロール), 127.8 (C4フェニル), 126.8 (C3フェニル), 119.9-119.8 (メソ-C), 112.9 (C3フェノキシ), 97.95 (C1 「オース」), 70.4 (C2 「オース」), 70.1 (CH2CH2-O-フェニル), 69.7 (C4 「オース」), 69.2 (C5 「オース」), 68.6 (CH2),  67.8 (CH2), 67.6 (CH2-O-フェニル), (C3 「オース」), 62.5 (C6 「オース」), 22.7 (CH3, アセチル), 20.85 (CH3, アセチル), 20.78 (CH3, アセチル), 20.75 (CH3, アセチル).
【００６８】
化合物67 (脱アセチル化)
収率 90%
分析 C74H84N4O24 4H2Oについての計算値: C, 59.83; H, 6.24; N, 3.77; 実測値: C, 59.25; H, 5.93; N, 3.58.
MeOH/ピリジン24/1 (v/v)中でのUV-可視スペクトル: λmax,nm, (ε, L mmol-1cm-1): 417.5 (359.5), 515.5 (15.3), 551.5 (10.5), 592 (6.3), 648 (6).
C74H84N4O24についてのMALDI TOFスペクトル: 計算値1412.55; 実測値: 1413.65 M+l.
【００６９】
化合物68 (保護されている)
収率 86%
UV-可視スペクトルCH2Cl2λmax,nm, (ε, L mmol-1cm-1): 421 (380), 517.5 (14.4), 552 (9.2),  593 (4.6),  649.5 (4.6).
1H NMR, CDCl3, δ(ppm): 8.84, (m, 8H, ピロール), 8.22 (dd, 2H, オルト-フェニル, J = 7および2 Hz), 8.11 (d, 6H, オルト-フェノキシ, J = 8.6 Hz), 7.75 (m, 3H, メタおよびパラ-フェニル), 7.29 (d, 6H, メタ-フェノキシ, J = 8.6 Hz), 5.47 (d, 3H, HI 「オース」, J = 1.3 Hz), 5.44 (dd,  3H, H2 「オース」, J = 1.3 Hz), 4.47 (m. 3H,  H5 「オース」), 4.40 (m, 6H, CH2-O-フェニル), 4.37 (dd, 3H, H6a 「オース」, J = 12.4および5.2 Hz), 4.16 (dd, 3H, H6b 「オース」, J = 12.2および2.1 Hz), 4.02 (m, 6H, CH2-CH2-O-フェニル), 3.90 (m, 6H, CH2-CH2-S), 3.03 (m. 3H, CH2-S), 2.89 (m. 3H, CH2-S), 2.18, 2.14, 2.05, 2.00 (s, 4 x 9H, アセチル), -2.76 (s, 2H, NH).
13C NMR, CDCl3, δ(ppm): 170.6,  170,  169.9, 169.7, (C=O, アセチル), 158.5 (C4フェノキシ), 142.2 (C1フェニル), 135.6 (C2フェノキシ), 134.8 (C1フェノキシ), 134.5 (C2-フェニル), 131 (C β-pyr), 127.6 (C4フェニル), 126.6 (C3フェニル), 119.8, 119.7, 119.7 (C-メソ), 112.8 (C3フェノキシ), 82.9 (C1 「オース」), 71.0 (C2 「オース」), 70.8 (CH2-CH2S),  69.7 (CH2-CH2-Ph), 69.4 (C4-「オース」), 69.1 (C5 「オース」), 67.6 (CH2フェニル), 66.3 (C3 「オース」), 62.4 (C6 「オース」), 30.7 (CH2-S), 26.9 (CH2), 20.9, 20.8, 20.7, 20.6 (CH3, アセチル).
【００７０】
化合物68 (脱アセチル化)
収率 100%
UV-可視スペクトル メタノール/ピリジン24/1 λmax,nm, (ε, L mmol-1cm-1): 417 (275.7), 515 (I 1.6),  552.5 (7.7),  592.4 (4),  647.5 (3.9).
1H NMR, ピリジンd5, δ(ppm): 9.17 (s, 4H, ピロール), 9.13 (d, 2H, ピロール, J = 4.8 Hz), 9.06 (d, 2H, ピロール, J = 4.8 Hz), 8.38 (dd, 2H, オルト-フェニル, J = 7.1および2.2 Hz), 8.26 (dd, 6H, メタ-フェノキシ, J = 8.7および2.3 Hz), 7.80 (m, 3H, メタおよびパラ-フェニル), 7.44 (dd, 6H, メタ-フェニル, J = 8.7および2.3 Hz), 6.09 (d, 3H,  H1 「オース」, J = 0.9 Hz), 4.84-4.59 (m, 12H, H2, H3, H4, H5 「オース」), 4.65 (m, 3H, H6a 「オース」), 4.46 (m, 3H, 3H, H6b 「オース」), 4.40 (m, 6H, CH2-O-Ph), 3.99 (m, 6H, CH2CH2-O-Ph),  3.94 (m, 6H, CH2-CH2-S), 3.26 (m. 3H, CH2-S), 3.04 (m, 3H, CH2S), -2.28 (s, 2H, NH).
13C NMR, ピリジンd5, δ(ppm): 159.3 (C-パラ-フェノキシ), 142.6 (C1フェニル), 136 (C2フェノキシ), 135 (C1フェノキシ), 134.7 (C2フェニル), 133 (br, C ピロール ), 128 (C4フェニル), 127.3 (C3フェニル), 120.7-120.6-120.4 (C メソ), 113.5 (C3フェノキシ), 86.8 (C1 「オース」), 75.9 (C4 「オース」), 73.6-73.5 (C2およびC3 「オース」), 71.3 (CH2-CH2-S), 69.6-69.4 (CH2-CH2-フェニルおよびC5 「オース」), 68.0 (CH2-O-フェニル), 63 (C6 「オース」), 30.8 (CH2-S).
C74H84N4O21S3についてのMALDI TOFスペクトル: 計算値 1460.48; 実測値:  for M + 1について1461.40.
【００７１】
化合物77-78
TPC(M-OH)3 5,10,15-トリ(メタ-ヒドロキシフェニル)-20-フェニル)-2,3-クロリンおよび5,10,15-トリ(3-ヒドロキシフェニル)-7,8-クロリン, 2個の異性体の混合物
UV-可視スペクトル アセトン: λmax,nm, (ε, L mmol-1cm-1): 416 (121), 516 (10.2), 542 (7), 597 (4.3),  650.5 (24.4).
1H NMR (アセトン d6), δ(ppm): 5,10,15-トリ(メタ-ヒドロキシフェニル)-20-フェニル) 3-クロリン : 8.65 (s, 3H, OH), [8.70 (d, H ピロール, J = 4.9 Hz), 8.68 (d, H ピロール, J = 5.2 Hz), 8.59 (d, H ピロール, J = 4.9 Hz), 8.31 (m, ピロール), 8.19 (d, H ピロール, J = 4.9 Hz), 6H ], 8.47 (s, 2H, HC12およびHC13 ピロール), 7.89-7.15 (M, 17H,フェニルおよびフェノキシ), 4.23 (m, 2H, CH2 ピロール), 4.17 (m, 2H, CH2 ピロール), -1.44 (s, 2H, NH).
5,10,15-トリ(メタ-ヒドロキシフェニル)-20-フェニル)-7,8-クロリン: 8.65 (s, 3H, OH), [8.70 (d, H ピロール, J = 4.9 Hz), 8.68 (d, H ピロール, J = 5.2 Hz), 8.59 (d, H ピロール, J = 4.9 Hz), 8.31 (m, ピロール), 8.19 (d, H ピロール, J = 4.9 Hz), 6H], 8.46 (d, 1H, HC17またはHC18 ピロール, J = 4.4 Hz), 8.36 (d, 1H, HC18またはHC17 ピロール, J = 4.4 Hz), 7.89-7.15 (M, 17H,フェニルおよびフェノキシ), 4.23 (s, 4H, CH2 ピロール), - 1.44 (s, 2H,  NH).
13C NMR (アセトン d6), δ(ppm):
5,10,15-トリ(メタ-ヒドロキシフェニル)-20-フェニル)-2,3-クロリン: 168.58 (Cl ピロール), 168.50 (C4 ピロール), 153.13 (br, C11-14 ピロール), 141.32 (C6 ピロール), 141.24 (C19 ピロール), 135.77 (C9 ピロール), 135.67 (C16 ピロール), 132.51 (CH ピロール), 113.27 (メソC), 128.94, 128.4, 124.34, 124.08 (Cフェニルおよびフェノキシ), 36.34 (C3 ピロール), 36.20 (C2 ピロール).
5,10,15-トリ(メタ-ヒドロキシフェニル)-20-フェニル)-7,8-クロリン: 168.50 (C6およびC9 ピロール), 153.13 (br, C16-19 ピロール), 141.32 (Cl1およびC4 ピロール), 135.77 (C14およびC1 ピロール), 132.51 (CH ピロール), 113.27 (メソC), 128.94, 128.4, 124.34, 124.08 (Cフェニルおよびフェノキシ), 36.20 (C7およびC8 ピロール).
【００７２】
化合物75:
TPP(p-O-DEG-OH)3: 5,10,15-トリ(パラジエチレングリコールオキシフェニル)-20-フェニルポルフィリン.
UV-可視スペクトル CH2Cl2: λmax,nm, (ε, L mmol-1cm-1): 420 (436),  517 (16.4),  553 (10),  592 (5.1),  648.5 (5.2).
1H NMR (CDCl3), δ(ppm) : 8.84 (m, 8H, ピロール), 8.2 (dd, 2H, オルト-フェニル, J 7.7および2 Hz), 8.09 (t, 6H, オルト-フェノキシ, J = 8.6 Hz), 7.74 (m, 2H, メタフェニル), 7.25 (t, 3H, メタ-フェノキシ, J = 8.6 Hz), 7.24 (t, 3H, メタ-フェノキシ, J =8.6 Hz), 4.36 (m, 6H, CH2-O-フェニル), 4.01 (m, 6H, CH2-OCH2CH2フェニル), 3.86 (t, 6H, O-CH2-O-CH2CH2OH, J = 4.4 Hz), 3.78 (t, 6H, O-CH2CH2OH, J = 4.4 Hz).
13C NMR (CDCl3), δ(ppm) : 158.47 (C4フェノキシ), 142 (C1フェニル), 135.56 (C2フェノキシ), 134.81 (C2フェニルおよびC,フェノキシ), 131 ( CH ピロール), 127.66 (C4フェニル), 126.57 (C3フェニル), 119 119 119.71 (メソ-C), 112.8 (C3フェノキシ), 72.69 (HOCH2),  69.76 (CH2-OCH2CH2フェニル), 67.63 (CH2フェニル), 61.89 (CH2-OCH2OH).
【００７３】
化合物74 (保護されている):
TPP(p-O-TEG-S-α-MannOAc)3: 5,10,15-トリ[パラ S-(2',3',4',6'-テトラアセチル-α-D-チオマノシルオキシ)-O-トリエチレングリコールオキシフェニル]フェニルポルフィリン.
収率 97%
UV-可視スペクトル CH2Cl2: λmax,nm, (ε, L mmol-1cm-1): 421 (423), 517.5 (16.5),  554 (10.4),  593 (5.3),  650 (6.2).
1H NMR (CDCIA δ(ppm) : 8.86 (m, 8H, ピロール), 8.21 (dd, 2H, オルト-フェニル, J = 6.4および2 Hz), 8.11 (d, 6H, オルト-フェノキシ, J= 8.3 Hz), 7.76 (m, 3H, メタおよびパラ-フェニル), 7.30 (d, 2H, メタ-フェノキシ, J = 8.3 Hz), 5.39 (d5 6H, HC1およびHC2 「オース」), 5.33 (m, 3H, HC3 「オース」), 5.31 (m, 3H, HC4 「オース」), 4.41 (m. 3H, HC5 「オース」), 4.43 (t, 6H, CH2フェニル, J = 4.5 Hz), 4.34 (dd, 3H, HC6a 「オース」, J = 12および5 Hz), 4.12 (dd, 3H, HC6b 「オース」, J = 12および5 Hz), 4.06 (t, 6H, O-CH2-(CH2 -O-フェン), J = 4.5 Hz), 3.86 (t, 6H, CH2-CH2-O, J = 4.5 Hz), 3.71-3.86 (m, 6H, -O-CH2-CH2-S), 3.76 (t,  6H, CH2-CH2-Oまたは-O-CH2CH2-S, J = 4.5 Hz), 2.96 (m. 6H,  S-CH2a),  2.83 (m. 6H,  S-CH2b), 2.18 (s. 9H, アセチル), 2.12 (s, 9H, アセチル), 2.03 (s, 9H, アセチル), 1.98(s, 9H, アセチル), 77 (s, 2H,  NH).
13C NMR (CDCl3), δ(ppm) : 170.6 (CO アセチル), 169.9 (CO アセチル), 169.8 (CO アセチル), 169.7 (CO アセチル), 158.6 (C4フェノキシ), 142.3 (C1フェニル), 136 (C2フェノキシ), 134.8 (C1フェノキシ), 134.5 (C2フェニル), 131 (br, CH ピロール), 129 (C4フェニル), 127 (C3フェニル), 119.9-119.8 (メソ-C), 112.8 (C3フェノキシ), 82.9 (C1 「オース」), 71.05 (C2 「オース」), 70.9 (O-CH2-CH2-O). 70.6 (-O-CH2-CH2-OまたはCH2-CH2-S), 70.5 (-O-CH2-CH2-S), 70 (O-CH2-(CH2 -O-フェン), 69.4 (C4 「オース」), 69.1 (C5 「オース」), 67.7 (CH2-O-フェン), 66.3 (C3 「オース」), 62.45 (C6 「オース」), 30.8 (SCH2), 20.95 (CH3 アセチル), 20.8 (CH3 アセチル), 20.7 (CH3 アセチル), 20.65 (CH3 アセチル).
【００７４】
化合物74 (脱アセチル化):
TPP(p-O-TEG-S-α-MannOH)3: 5,10,15-トリ(パラ-10-S-α-D-チオマノシルオキシ-O-トリエチレングリコールオキシフェニル)-20-フェニルポルフィリン:
収率 96%
UV-可視スペクトル MeOH/ピリジン24/1(v/v): λmax,nm, (ε, L mmol-1cm-1): 417.5 (318.8), 516 (14.5), 552 (19.9), 592 (5.5), 649 (5.8).
1H NMR (ピリジンd5), δ(ppm): 9.16 (s, 4H, ピロール), 9.12 (d, 2H, ピロール, J = 4.8 Hz), 9.06 (d,  2H, ピロール, J = 4.8 Hz), 8.37 (m, 2H, オルト-フェニル), 8.27 (d, 6H, オルトまたはメタフェノキシ, J = 8.5および2.2 Hz), 7.79 (m, 3H, メタおよびパラフェニル), 7.45 (d, 6H, メタまたはオルトフェノキシ, J = 8.5および2.2 Hz), 6.02 (s, 3H, HC1 「オース」), 4.71 (m, 3H, HC2 「オース」), 4.68 (m, 6H, HC4およびHC5 「オース」), 4.60 (dd, 3H, HC6a 「オース」), 4.55 (m, 3H, HC3 「オース」), 4.42 (dd, 3H, HC6b 「オース」), 4.44 (t, 6H, -CH2 フェン, J = 4.5 Hz), 4.03 (t, 6H, O-CH2-(CH2 フェン(phen)), J = 4.5 Hz), 3.95-3.71 (m, 6H, O-CH2-(CH2S), 3.80 (t,  6H, O-CH2CH2-O-, J = 4.5 Hz), 3.73 (t 6H, O-CH2CH2-O- , J = 4.5 Hz), 3.18 (m, 3H, S-CH2a), 2.96 (m, 3H, S-CH2b), -2.3 (s, 2H, NH).
13C NMR (ピリジンd5), 6 (ppm) : 158.6 (C4フェノキシ), 142.8 (C1フェニル), 136.3 (C1フェノキシおよびC2またはC3フェノキシ), 135 (C2フェノキシ), 132 (br, CH ピロール), 128.4 (C4フェニル), 127.5 (C3フェニル), 120.8 (メソ-C), 113.7 (C3またはC2フェノキシ), 86.9 (C1 「オース」), 76.1 (C2 「オース」), 73.7 (C4 「オース」), 71.5 (-O-CH2-CH2-OまたはCH2-CH2-S), 71.2 (-O-CH2-CH2-S), 70.8 (O-CH2-CH2-O), 70.3 (O-CH2-(CH2-O-フェン), 69.6 (C5 「オース」), 68.4 (CH2-O-フェン), 63.2 (C6 「オース」), 30.9 (S-CH2).
C80H96N4O24S3についてのMALDI TOFスペクトル: 計算値 1592.55; 実測値: 1593.50 M+1.
【００７５】
本出願人は、本発明によるポルフィリン誘導体の薬理学的検討を行ったが、これは光力学的抗腫瘍治療および抗ウイルス性光力学治療の分野における極めて積極的な特性を示した。抗腫瘍効果の主要な結果を表Bに記載するが、光細胞毒性の割合を示している。比率が高くなれば、抗腫瘍または抗ウイルス性効果が高くなる。
【００７６】
抗腫瘍活性に関しては、本発明者らによって得られた化合物は、これらの誘導体が蓄積することができる腫瘍細胞について示される適当な照射下にて、活性である。
【００７７】
薬理学的研究は、ヒト癌細胞: KB細胞、L-1210細胞、HT-29細胞、MCF-7細胞、FT-1細胞、RBY-79(通常はY-79と呼ばれる)細胞の細胞系についてイン・ビトロで行われている。
【００７８】
さらに正確には、KB細胞 (ヒト頬癌細胞)に関しては、方法は下記の通りであった。ポルフィリン誘導体をDMSOに溶解した。得られた溶液をCa++およMg++およびグルコース0.1%を含むPBSに10μM-0.005μMの濃度で希釈した後、ヒト癌KB細胞系の培養物と3時間インキュベーションした。次に、細胞培養物を培地で濯いだ後、> 550nmの光源で15-30分間照射した。その後、細胞を培地に18時間置き、死亡率をニュートラルレッドでの比色法によって評価した。
【００７９】
HT29細胞に関しては、方法は下記の通りである。複合糖質のテトラピロール性大環状化合物の光力学活性を、この試験化合物と24時間インキュベーションした後に可視光線を照射したヒト結腸腺癌細胞系HT29 (ATCC, HTB 38)の生育力を用いて評価した。HT29細胞は、10%ウシ胎児血清(FCS)を補足したDulbeccoのMEMで培養した。対数増殖器の培養物からの細胞を24穴プレート(1mL 5x104個/ウェル)に播種して、37℃で空気/CO2雰囲気(5%CO2)下にて水ジャケットを取り付けたインキュベーターにて2日間保持した。DMSO溶液中の試験化合物を最小容積(5μL)で加えて、0.1 - 10μg/mLの範囲の濃度になるようにした。コントロール細胞には、色素を含まないDMSO 5μLを加えた。プレートを24時間インキュベーションした後、培地を除き、細胞をリン酸緩衝食塩水(PBS)にて2回洗浄した後、薬剤を含まない新鮮な培地を加え、全可視光線について3.8 mW/cm2のフルエンス（fluence)を生じる自家製「ライトボックス」を用いて可視光線を照射した。赤色光線の照射は、フルエンスが2mW/cm2となるようにオレンジフィルター(520nmにおいて0% Tおよび590nmにおいて80% T)を備えた同じ装置で行った。
【００８０】
プレートを3日間再インキュベーションした後、3-[4,5-ジメチルチアゾール-2-イル]-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド(MTT, Sigma) 100μgウェルとの30分間インキュベーションによるMTT分析法(T.Mosmann,「細胞生長および生存についての迅速比色分析法。増殖分析法への応用(Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival. Application to proliferation assays)」J.Immunol.Methods 65, 55-63, 1983)を用いて、細胞の生存率を評価した。培地を除いた後、ホルマザン結晶をDMSO 100μLに吸収させ、540nmの吸光度を、Bio-Radマイクロプレートレコーダー(450型)で測定し、生存率を未処理コントロールの%として表した。
【００８１】
抗ウイルス性活性に関して、本発明者らは、本発明の細胞性化合物が、ウイルス、特にレトロウイルスに対して約600nmの波長で照射を行うと、活性であることを示した。レトロウイルスは、その複製中に逆転写酵素を用いてmRNAをDNAに転換する、エンベロープ付きウイルスの重要な群である。レトロウイルスとしては、レンチウイルス、スプマウイルス(spumavirus)、オンコルナウイルス(A、B、C、D型、およびRNA腫瘍を有するウイルス)が挙げられる。これらのレトロウイルスは、特にヒトに感染することができる。抗ウイルス光療法は、文献FR 2,709,491号明細書から明らかなように、ここ数年特にターゲッティングレトロウイルスにて開発されてきた。
【００８２】
薬理学的研究は、その後本発明者らによって単純疱疹およびフレンドBのウイルスに対してイン・ビトロにて行われてきた。例えば、この方法は、下記の通りである。新しい試験化合物をDMSOに溶解した後、PBSで希釈する。様々な濃度の化合物の溶液を、培地のウイルスに導入する。ウイルスと化合物を、4℃および暗所にて45分間インキュベーションする。試験ウイルスに、600-650nmの波動を10分間照射する。ウイルスを、ウイルスに感受性の細胞に接種する。
【００８３】
【表２】
2005500335.tif 000024
【００８４】
他の分析を行い、結果を下記の表C2-C7に示す。これらの試験化合物の活性を、表C1のコントロール対照化合物と比較する。
【００８５】
【表３】
2005500335.tif 000025
【００８６】
【表４】
2005500335.tif 000026
【００８７】
【表５】
2005500335.tif 000027
【００８８】
【表６】
2005500335.tif 000028
【００８９】
【表７】
2005500335.tif 000029
【００９０】
【表８】
2005500335.tif 000030
【００９１】
【表９】
2005500335.tif 000031
【００９２】
表Bは、特に、幾つかの化合物が光のない場合に限り細胞毒性であることを示しているが(L1210)、本発明の化合物は、光によって活性化されるときに活性であり、例えば、化合物24および26は化合物25とは反対に活性である。従って、本発明者らは、同様に見える可能性がある化合物が全く異なる活性を示す点を考慮すれば、当業者には明らかでない活性化合物を合成し、同定する努力を行った。
【００９３】
表C1は、当該技術分野において知られており、かつ、本発明の試験化合物のコントロール化合物と考えられている対照化合物の細胞毒性効果を示す。
表C2-C7は、試験化合物の結果を示す。欄HT29およびY79 (=RBY79)(光なし)は、細胞毒性活性に相当する。欄L1210は、細胞増殖抑制活性に相当する。
効率IEff.は、細胞毒性活性下での光細胞毒性活性の比として定義される。
IEff. = 光があるときのIC50/光がないときのIC50
従って、IEff.が小さければ、化合物は一層興味深いものとなる。
【００９４】
本発明者らは、下記の主要な所見を有している。
化合物Photofrin(商品名)は、Y79細胞に対して3.9μMより高濃度にて細胞毒性である。
対照化合物TPP(p-OH)4は、HT29およびY79細胞に対して細胞毒性である。
化合物TPP(p-OH)4、24、26、m-THPC (Foscan(商品名))、およびTPC(m-OH)3は、HT29に対して細胞毒性である。
化合物Photofrin、TPP(p-OH)4、64、65、m-THPC (Foscan(商品名))、54、および55は、Y79に対して細胞毒性である。
表に示した総ての化合物の中で、
化合物67は、HT29に対しては<0.1およびY79に対しては<0.03の比IEff.を示し、有効である。
化合物68は、Y79に対してはIEff. = 0.09であって、化合物67に対するより若干小さな値を有する。化合物68はイン・ビトロでは変更されず、従って、イン・ビボで極めて有効である可能性がある。
TPP(p-O-TEG-S-α-MannOH)3と呼ばれる新規化合物は、Y79に対してIEff.<0.03であり、これは化合物64に対してと同じ程度に良好であり、この化合物が良好な候補であることを示している。
【００９５】
本発明者らは、化合物ポリエチレングリコール、24、67、68、TPP(p-O-TEG-S-α-MannOH)3、およびTPP(p-O-DEG-OH)3の糖およびグリコール鎖の効果を指摘した。
化合物24はHT29およびY79に対して細胞毒性であるが、これらの細胞に対しては光毒性は余り高くない。
モノエチレングリコール(化合物24)を、ジエチレングリコール(化合物67)に代えると、比IEff.が大幅に増加し、細胞毒性が大幅に減少し、光毒性活性が増加する。
さらに、化合物67のグリコシル化されていない類似化合物である化合物TPP(p-O-DEG-OH)3は完全に不活性であり、糖の生物学的活性に対する効果を示している。
さらに、化合物27および28は、Y79に対してIEff.<0.1を示す。
Foscan(商品名)のトリヒドロキシル化した類似化合物であるクロリンTPC(m-OH)3は、Y79に対してIEff.<0.05を示す。
化合物55は、2種類の異性体の50/50の比の混合物である(NMRスペクトルを参照されたい)。
【００９６】
本発明は、光線力学療法に有用なポルフィリン化合物をスクリーニングする方法であって、細胞を不活性化するために試験化合物を細胞に添加して、前記化合物を光活性化し、細胞の不活性化を測定することを含んでなる、方法にも関する。
本発明は、光線力学療法において有用な薬剤の製造を目的とする、前記のスクリーニングの方法によって得られる化合物の使用にも関する。
当業者は、本願明細書を用いることにより、過度の実験を行わなくとも有効な化合物を同定するのに十分なデーター(試験を行う化合物および生物学的活性を測定することができる正確な試験プロトコール)を有している。
本発明は、本願明細書に記載のポルフィリン化合物のいずれかを用いる治療方法にも関する。
【００９７】
本発明の化合物は、少なくとも1個のキラル中心を有しており、従って、様々な立体異性体形態で存在することができることが分かるであろう。所望ならば、鏡像異性体を含むこのような立体異性体は当該技術分野で標準的な手法を用いて分離することができるが、ラセミ体混合物または2個以上のジアステレオ異性体を含む混合物を用いることもできる。幾つかの試験化合物の効果は、炭素5のD/L異性および炭素1におけるα/β異性に関連している。特に有利な異性は、表AおよびBに示されている。本発明は、1個または数個の-OHが保護されている単糖または多糖類にも関する。
【００９８】
所望ならば、本発明の化合物は、テトラピロール型核をマグネシウムイオン、亜鉛イオン、第一スズイオンなどの適当なイオンで処理して、金属複合体を得ることによって金属化形態に調製することができる。金属イオンは、放射能標識であってもよい。一般に、金属イオンは、当該技術分野で標準的な条件下で適当な塩を用いて挿入される。例えば、化合物を1:1  塩化メチレン:メタノール中で酢酸亜鉛で処理することによって、亜鉛イオンを導入することができる。
【００９９】
化合物は、放射性同位体、発色団、および蛍光標識などの標識を含むこともできる。放射性同位体標識は、一般的には化合物をイン・ビボで追跡しまたは特定の残基を標識するときに用いられる。放射性同位体である有用なカチオン性残基としては、テクネチウム、ガリウム、およびインジウムが挙げられる。さらに、分子自身における131Iまたは32Pのようなヘテロ原子の放射性同位体、または14Cの包接を用いて、分子を標識することができる。
【０１００】
本発明の化合物は、所望ならば、分子を特定組織または器官に向けるターゲッティング剤に結合することができる。このようなターゲッティング剤としては、抗体、受容体、受容体-リガンドなどが挙げられる。ターゲッティング剤の化合物への「接合型」での結合は、WO90/15059号明細書に記載の標準的手法を用いて行われる。
【０１０１】
本発明の化合物は、様々な方法で医薬用途に処方することができる。一般的に言えば、このような処方物は、任意の賦形剤、安定剤、乳化剤、浸透剤、可溶化剤などを含むことができ、これらは、静脈内、腹腔内、または筋肉内注射、経粘膜、経口、皮膚パッチ、軟膏およびゲルによる経皮的方法などの任意の方法にて、局部的または内部的に体内に光増感剤化合物を送達するのに有用であると認められている。当該技術分野にて認められているリポソーム処方物は、処方物の有利な形態であり、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルコリンなどを有する処方物などが挙げられる。また、典型的には、官能基を本発明の大環状化合物に加えて、その保管、製造、溶解性、および生理学的有用性を促進する。一般的には、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa.、最新版を参照することができる。一般に許容可能な処方物は、医薬用途の光増感剤に関する米国特許第5,095,030号、第5,171,749号、第5,776,966号、第5,789,433号、第4,512,762号、第4,566,636号、第5,399,583号、第4,920,143号明細書に提供されている。
【０１０２】
本発明の化合物は、一般に例えば、引用された特許明細書に記載されているように、光増感剤化合物が認められている総ての治療用途に用いることができる。医療実施者によって認められているように、投薬量は投与の様式、処方物、患者の状態、治療を行う疾病状態などに基づいてかなり変化する。全身投与には、10μg/kg-100mg/kg、好ましくは100μg/kg-10mg/kgの程度の投薬量が好ましい。局部投与には、当該技術分野で認められているように、適当な組成物を、その用途に従って組成物の約1-10%程度とすることができる。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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