(57)【要約】本発明は医薬組成物および炎症性疾患処置のためのかかる組成物の使用法に関する。かかる組成物はスーパーオキシドジスムターゼ酵素（ＳＯＤ）を含むスーパーオキシドの不均化用触媒、および低分子量有機リガンド誘導金属複合体を含み、該複合体は以下の構造：【化１】2005519852.tif 000021を有し、そこでの（Ｚ）ｎがコルチコステロイドとの組合せにおいて、該酵素のミミック（ＳＯＤ類似体またはＳＯＤｍ）として機能する。
2005519852.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症性疾患に罹患しているかまたは罹患する可能性の高い対象者の処置方法であって、スーパーオキシド不均化触媒の治療有効量を、少なくとも１種のコルチコステロイドと共に該対象者に同時投与することを特徴とする方法。
【請求項２】
該コルチコステロイドが、コルチゾール、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、ジヒドロコルチゾン、フルドロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、デフラザコルト、フルニソリド、ベコネース、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロン、ベタメタゾン、およびデキサメタゾンからなる群より選択されるものである請求項１記載の方法。
【請求項３】
該コルチコステロイドがデキサメタゾンである請求項１記載の方法。
【請求項４】
該コルチコステロイドがプレドニゾンである請求項１記載の方法。
【請求項５】
該触媒が非タンパク質性触媒であり、その非タンパク質性触媒が、銅、マンガン（II）、マンガン（III）、鉄（II）および鉄（III）の群から選択されるカチオンにキレート形成した有機リガンドを含んでなる請求項１記載の方法。
【請求項６】
該触媒がペンタアザマクロ環状リガンド複合体または置換ペンタアザマクロ環状リガンド複合体である請求項５記載の方法。
【請求項７】
該ペンタアザマクロ環状リガンド複合体が下記式：
【化１】
2005519852.tif 000009
［ただし、式中、Ｍは遷移金属カチオン、好ましくはマンガンまたは鉄である；
Ｒ、Ｒ'、Ｒ１、Ｒ'１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９はそれぞれ独立して水素、または置換もしくは非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルシクロアルキル、シクロアルケニルアルキル、アルキルシクロアルキル、アルキルシクロアルケニル、アルケニルシクロアルキル、アルケニルシクロアルケニル、へテロ環、アリールおよびアラルキル基を表す；
Ｒ１またはＲ'１およびＲ２またはＲ'２、Ｒ３またはＲ'３およびＲ４またはＲ'４、Ｒ５またはＲ'５およびＲ６またはＲ'６、Ｒ７またはＲ'７およびＲ８またはＲ'８、ならびにＲ９またはＲ'９およびＲまたはＲ'はそれらが結合する炭素原子と共にそれぞれ独立して置換もしくは非置換の、飽和、部分的飽和もしくは不飽和の、３〜２０個の炭素原子を有する環状またはへテロ環状基を形成する；
ＲまたはＲ'およびＲ１またはＲ'１、Ｒ２またはＲ'２およびＲ３またはＲ'３、Ｒ４またはＲ'４およびＲ５またはＲ'５、Ｒ６またはＲ'６およびＲ７またはＲ'７、ならびにＲ８またはＲ'８およびＲ９またはＲ'９はそれらが結合する炭素原子と共にそれぞれ独立して置換もしくは非置換の２〜２０個の炭素原子を有する含窒素ヘテロ環を形成するが、ただし、含窒素ヘテロ環が窒素に結合する水素を含まない芳香族ヘテロ環である場合は、上記の式に示される窒素、すなわち巨大環状リガンドまたは複合体に存在する窒素、その窒素に結合する水素および該マクロ環に含まれる炭素原子に結合するＲ基は存在しないものとする；
ＲおよびＲ'、Ｒ１およびＲ'１、Ｒ２およびＲ'２、Ｒ３およびＲ'３、Ｒ４およびＲ'４、Ｒ５およびＲ'５、Ｒ６およびＲ'６、Ｒ７およびＲ'７、Ｒ８およびＲ'８、ならびにＲ９およびＲ'９はそれらが結合する炭素原子と共にそれぞれ独立して飽和、部分的飽和もしくは不飽和の、３〜２０個の炭素原子を有する環状またはへテロ環状基を形成する；また
Ｒ、Ｒ'、Ｒ１、Ｒ'１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９の１つは、マクロ環状リガンド内の異なる炭素原子に結合しているＲ、Ｒ'、Ｒ１、Ｒ'１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９の異なる１つと共に結合して下記式：
−(ＣＨ２)ｘ−Ｍ−(ＣＨ２)ｗ−Ｌ−(ＣＨ２)ｚ−Ｉ−(ＣＨ２)ｙ−
（ただし、式中、ｗ、ｘ、ｙおよびｚはそれぞれ独立して０ないし１０の整数であり、Ｍ、ＬおよびＩはそれぞれ独立してアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルへテロアリール、アザ、アミド、アンモニウム、オキサ、チア、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、ホスホリル、ホスフィニル、ホスフィノ、ホスホニウム、ケト、エステル、アルコール、カルバミン酸エステル、尿素、チオカルボニル、ホウ酸エステル、ボラン、ボラザ、シリル、シロキシ、シラザおよびその組合せから選択される）
で示されるストラップを形成してもよい；およびそれらの組合せである；
Ｘ、ＹおよびＺはそれぞれ独立してハロゲン化物、アコ、ヒドロキソ、アルコール、フェノール、ジオキシジェン、ペルオキソ、ヒドロペルオキソ、アルキルペルオキソ、アリールペルオキソ、アンモニア、アルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロシクロアルキルアミノ、ヘテロシクロアリールアミノ、アミンオキシド、ヒドラジン、アルキルヒドラジン、アリールヒドラジン、酸化窒素、シアニド、シアネート、チオシアネート、イソシアネート、イソチオシアネート、アルキルニトリル、アリールニトリル、アルキルイソニトリル、アリールイソニトリル、硝酸塩、亜硝酸塩、アジド、アルキルスルホン酸、アリールスルホン酸、アルキルスルホキシド、アリールスルホキシド、アルキルアリールスルホキシド、アルキルスルフェン酸、アリールスルフェン酸、アルキルスルフィン酸、アリールスルフィン酸、アルキルチオールカルボン酸、アリールチオールカルボン酸、アルキルチオールチオカルボン酸、アリールチオールチオカルボン酸、アルキルカルボン酸（酢酸、トリフルオロ酢酸、シュウ酸など）、アリールカルボン酸（安息香酸、フタル酸など）、尿素、アルキル尿素、アリール尿素、アルキルアリール尿素、チオ尿素、アルキルチオ尿素、アリールチオ尿素、アルキルアリールチオ尿素、硫酸塩、亜硫酸塩、重硫酸塩、重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、チオ亜硫酸塩、ヒドロ亜硫酸塩、アルキルホスフィン、アリールホスフィン、アルキルホスフィンオキシド、アリールホスフィンオキシド、アルキルアリールホスフィンオキシド、アルキルホスフィンスルフィド、アリールホスフィンスルフィド、アルキルアリールホスフィンスルフィド、アルキルホスホン酸、アリールホスホン酸、アルキルホスフィン酸、アリールホスフィン酸、アルキル亜ホスフィン酸、アリール亜ホスフィン酸、リン酸塩、チオリン酸塩、亜リン酸塩、ピロ亜リン酸塩、三リン酸塩、水素リン酸塩、二水素リン酸塩、アルキルグアニジノ、アリールグアニジノ、アルキルアリールグアニジノ、アルキルカルバメート、アリールカルバメート、アルキルアリールカルバメート、アルキルチオカルバメート、アリールチオカルバメート、アルキルアリールチオカルバメート、アルキルジチオカルバメート、アリールジチオカルバメート、アルキルアリールジチオカルバメート、重炭酸塩、炭酸塩、過塩素酸塩、塩素酸塩、亜塩素酸塩、次亜塩素酸塩、過臭素酸塩、臭素酸塩、亜臭素酸塩、次亜臭素酸塩、テトラハロマンガン酸塩、テトラフルオロホウ酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヘキサフルオロアンチモン酸塩、次亜リン酸塩、ヨウ素酸塩、過ヨウ素酸塩、メタホウ酸塩、テトラアリールホウ酸塩、テトラアルキルホウ酸塩、酒石酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、サッカリン酸塩、アミノ酸、ヒドロキサム酸、チオトシル酸塩、およびイオン交換樹脂のアニオンからなる群より選択される]
により表される請求項６記載の方法。
【請求項８】
該置換ペンタアザマクロ環状リガンド複合体が下記式：
【化２】
2005519852.tif 000010
［ただし、式中、マクロ環の窒素およびそれが結合する２個の隣接する炭素原子は、それぞれ独立して、飽和または不飽和の、２〜２０個の炭素原子を有する含窒素ヘテロ環Ｗを形成し、該ヘテロ環は芳香族のヘテロ環でもよく、その場合にはヘテロ環とマクロ環の両方の部分となる窒素に結合する水素、およびヘテロ環とマクロ環の両方の部分となる炭素原子に結合するＲ基は存在しない；また、
Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９はそれぞれ独立して水素、または置換もしくは非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルシクロアルキル、シクロアルケニルアルキル、アルキルシクロアルキル、アルキルシクロアルケニル、アルケニルシクロアルキル、アルケニルシクロアルケニル、へテロ環、アリールおよびアラルキル基を表す；
任意に、Ｒ２またはＲ'２およびＲ３またはＲ'３、Ｒ４またはＲ'４およびＲ５またはＲ'５、Ｒ６またはＲ'６およびＲ７またはＲ'７、もしくはＲ８またはＲ'８およびＲ９またはＲ'９の１つまたはそれ以上はそれらが結合する炭素原子と共にそれぞれ独立して置換もしくは非置換の２〜２０個の炭素原子を有する含窒素ヘテロ環を形成し、該ヘテロ環は芳香族のヘテロ環でもよく、その場合にはヘテロ環とマクロ環の両方の部分となる窒素に結合する水素、およびヘテロ環とマクロ環の両方の部分となる炭素原子に結合するＲ基は存在しない；また、
任意に、Ｒ２およびＲ'２、Ｒ３およびＲ'３、Ｒ４およびＲ'４、Ｒ５およびＲ'５、Ｒ６およびＲ'６、Ｒ７およびＲ'７、Ｒ８およびＲ'８、およびＲ９およびＲ'９の１つまたはそれ以上はそれらが結合する炭素原子と共にそれぞれ独立して飽和、部分的飽和もしくは不飽和の３〜２０個の炭素原子を有する環状またはヘテロ環状基を形成してもよい；また、
任意に、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９の１つは、マクロ環状リガンド内の異なる炭素原子に結合しているＲ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９の異なる１つと共に結合して下記式：
−(ＣＨ２)ｘ−Ｍ−(ＣＨ２)ｗ−Ｌ−(ＣＨ２)ｚ−Ｉ−(ＣＨ２)ｙ−
（ただし、式中、ｗ、ｘ、ｙおよびｚはそれぞれ独立して０ないし１０の整数であり、Ｍ、ＬおよびＩはそれぞれ独立してアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルへテロアリール、アザ、アミド、アンモニウム、オキサ、チア、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、ホスホリル、ホスフィニル、ホスフィノ、ホスホニウム、ケト、エステル、アルコール、カルバミン酸エステル、尿素、チオカルボニル、ホウ酸エステル、ボラン、ボラザ、シリル、シロキシ、シラザおよびその組合せから選択される）
で示されるストラップを形成してもよい；および上記のいずれかの組合せである；
Ｍはマンガンおよび鉄からなる群より選択される遷移金属のカチオンである；
Ｘ、ＹおよびＺは単座もしくは多座リガンドまたはリガンド系またはその対応するアニオンから誘導される適切なリガンドまたは電荷中和アニオンを表す]
により表される請求項６記載の方法。
【請求項９】
該置換ペンタアザ−マクロ環状リガンド複合体のＵおよびＶがトランス−シクロヘキサニル融合環である請求項８記載の方法。
【請求項１０】
該置換ペンタアザ−マクロ環状リガンド複合体のＷが置換ピリジノ部分である請求項８記載の方法。
【請求項１１】
該置換ペンタアザ−マクロ環状リガンド複合体のＵおよびＶがトランス−シクロヘキサニル融合環であり、Ｗが置換ピリジノ部分である請求項８記載の方法。
【請求項１２】
該非タンパク質性触媒がポルフィリンリガンド複合体または置換ポルフィリンリガンド複合体である請求項５記載の方法。
【請求項１３】
該ポルフィリンリガンド複合体がマンガン（II）ポルフィリン複合体、マンガン（III）ポルフィリン複合体、鉄（II）ポルフィリン複合体、および鉄（III）ポルフィリン複合体からなる群より選択されるものである請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
該ポルフィリンリガンド複合体が５,１０,１５,２０−テトラキス（２,４,６−トリメチル−３,５−ジスルホナトフェニル）ポルフィリナト鉄（III）（ＦｅＴＭＰＳ）複合体である請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
対象が哺乳動物である請求項１記載の方法。
【請求項１６】
哺乳動物がヒトである請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
該置換ペンタアザ−マクロ環状リガンド複合体が以下の式：
【化３】
2005519852.tif 000011
で示されるものである請求項６記載の方法。
【請求項１８】
該置換ペンタアザ−マクロ環状リガンド複合体が以下の式：
【化４】
2005519852.tif 000012
で示されるものである請求項６記載の方法。
【請求項１９】
当該同時投与コルチコステロイドが、当該治療効果を達成するために単独投与する同じコルチコステロイドよりも少なくとも１％少ない用量で投与される請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
当該同時投与コルチコステロイドが、当該治療効果を達成するために単独投与する同じコルチコステロイドよりも少なくとも１０％少ない用量で投与される請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
当該同時投与コルチコステロイドが、当該治療効果を達成するために単独投与する同じコルチコステロイドよりも少なくとも２５％少ない用量で投与される請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
当該同時投与コルチコステロイドが、当該治療効果を達成するために単独投与する同じコルチコステロイドよりも少なくとも５０％少ない用量で投与される請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
関節炎に罹患しているかまたは罹患する可能性の高い対象者の処置方法であって、スーパーオキシドアニオンを不均化する非タンパク質性触媒と少なくとも１種のコルチコステロイドとを含有してなる組成物の治療有効量を該対象者に同時投与することを特徴とする方法。
【請求項２４】
関節炎が関節リウマチである請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
該コルチコステロイドが、コルチゾール、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、ジヒドロコルチゾン、フルドロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、デフラザコルト、フルニソリド、ベコネース、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロン、ベタメタゾン、およびデキサメタゾンからなる群より選択されるものである請求項２３記載の方法。
【請求項２６】
該コルチコステロイドがデキサメタゾンである請求項２３記載の方法。
【請求項２７】
該コルチコステロイドがプレドニゾンである請求項２３記載の方法。
【請求項２８】
該非タンパク質性触媒が、マンガン（II）、マンガン（III）、鉄（II）および鉄（III）の群から選択される金属イオンにキレート形成した有機リガンドを含んでなる請求項２３記載の方法。
【請求項２９】
該非タンパク質性触媒がペンタアザマクロ環状リガンド複合体または置換ペンタアザマクロ環状リガンド複合体である請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
該ペンタアザマクロ環状リガンド複合体が下記式：
【化５】
2005519852.tif 000013
［ただし、式中、Ｍは遷移金属カチオン、好ましくはマンガンまたは鉄である；
Ｒ、Ｒ'、Ｒ１、Ｒ'１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９はそれぞれ独立して水素、または置換もしくは非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルシクロアルキル、シクロアルケニルアルキル、アルキルシクロアルキル、アルキルシクロアルケニル、アルケニルシクロアルキル、アルケニルシクロアルケニル、へテロ環状、アリールおよびアラルキル基を表す；
Ｒ１またはＲ'１およびＲ２またはＲ'２、Ｒ３またはＲ'３およびＲ４またはＲ'４、Ｒ５またはＲ'５およびＲ６またはＲ'６、Ｒ７またはＲ'７およびＲ８またはＲ'８、Ｒ９またはＲ'９およびＲまたはＲ'はそれらが結合する炭素原子と共にそれぞれ独立して置換もしくは非置換の、飽和、部分的飽和もしくは不飽和の、３〜２０個の炭素原子を有する環状またはへテロ環状基を形成する；
ＲまたはＲ'およびＲ１またはＲ'１、Ｒ２またはＲ'２およびＲ３またはＲ'３、Ｒ４またはＲ'４およびＲ５またはＲ'５、Ｒ６またはＲ'６およびＲ７またはＲ'７、Ｒ８またはＲ'８およびＲ９またはＲ'９はそれらが結合する炭素原子と共にそれぞれ独立して置換もしくは非置換の２〜２０個の炭素原子を有する含窒素ヘテロ環を形成するが、ただし、含窒素ヘテロ環が窒素に結合する水素を含まない芳香族ヘテロ環である場合は、上記の式に示される窒素、すなわち巨大環状リガンドまたは複合体に存在する窒素、その窒素に結合する水素および該マクロ環に含まれる炭素原子に結合するＲ基は存在しないものとする；
ＲおよびＲ'、Ｒ１およびＲ'１、Ｒ２およびＲ'２、Ｒ３およびＲ'３、Ｒ４およびＲ'４、Ｒ５およびＲ'５、Ｒ６およびＲ'６、Ｒ７およびＲ'７、Ｒ８およびＲ'８、Ｒ９およびＲ'９はそれらが結合する炭素原子と共にそれぞれ独立して飽和、部分的飽和もしくは不飽和の、３〜２０個の炭素原子を有する環状またはへテロ環状基を形成する；また
Ｒ、Ｒ'、Ｒ１、Ｒ'１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９の１つは、マクロ環状リガンド内の異なる炭素原子に結合しているＲ、Ｒ'、Ｒ１、Ｒ'１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９の異なる１つと共に結合して下記式：
−(ＣＨ２)ｘ−Ｍ−(ＣＨ２)ｗ−Ｌ−(ＣＨ２)ｚ−Ｉ−(ＣＨ２)ｙ−
（ただし、式中、ｗ、ｘ、ｙおよびｚはそれぞれ独立して０ないし１０の整数であり、Ｍ、ＬおよびＩはそれぞれ独立してアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルへテロアリール、アザ、アミド、アンモニウム、オキサ、チア、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、ホスホリル、ホスフィニル、ホスフィノ、ホスホニウム、ケト、エステル、アルコール、カルバミン酸エステル、尿素、チオカルボニル、ホウ酸エステル、ボラン、ボラザ、シリル、シロキシ、シラザおよびその組合せから選択される）
で示されるストラップを形成してもよい；およびそれらの組合せである；
Ｘ、ＹおよびＺはそれぞれ独立してハロゲン化物、アコ、ヒドロキソ、アルコール、フェノール、ジオキシジェン、ペルオキソ、ヒドロペルオキソ、アルキルペルオキソ、アリールペルオキソ、アンモニア、アルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロ環状アルキルアミノ、ヘテロ環状アリールアミノ、アミンオキシド、ヒドラジン、アルキルヒドラジン、アリールヒドラジン、酸化窒素、シアニド、シアネート、チオシアネート、イソシアネート、イソチオシアネート、アルキルニトリル、アリールニトリル、アルキルイソニトリル、アリールイソニトリル、硝酸塩、亜硝酸塩、アジド、アルキルスルホン酸、アリールスルホン酸、アルキルスルホキシド、アリールスルホキシド、アルキルアリールスルホキシド、アルキルスルフェン酸、アリールスルフェン酸、アルキルスルフィン酸、アリールスルフィン酸、アルキルチオールカルボン酸、アリールチオールカルボン酸、アルキルチオールチオカルボン酸、アリールチオールチオカルボン酸、アルキルカルボン酸（酢酸、トリフルオロ酢酸、シュウ酸など）、アリールカルボン酸（安息香酸、フタル酸など）、尿素、アルキル尿素、アリール尿素、アルキルアリール尿素、チオ尿素、アルキルチオ尿素、アリールチオ尿素、アルキルアリールチオ尿素、硫酸塩、亜硫酸塩、重硫酸塩、重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、チオ亜硫酸塩、ヒドロ亜硫酸塩、アルキルホスフィン、アリールホスフィン、アルキルホスフィンオキシド、アリールホスフィンオキシド、アルキルアリールホスフィンオキシド、アルキルホスフィンスルフィド、アリールホスフィンスルフィド、アルキルアリールホスフィンスルフィド、アルキルホスホン酸、アリールホスホン酸、アルキルホスフィン酸、アリールホスフィン酸、アルキル亜ホスフィン酸、アリール亜ホスフィン酸、リン酸塩、チオリン酸塩、亜リン酸塩、ピロ亜リン酸塩、三リン酸塩、水素リン酸塩、ニ水素リン酸塩、アルキルグアニジノ、アリールグアニジノ、アルキルアリールグアニジノ、アルキルカルバメート、アリールカルバメート、アルキルアリールカルバメート、アルキルチオカルバメート、アリールチオカルバメート、アルキルアリールチオカルバメート、アルキルジチオカルバメート、アリールジチオカルバメート、アルキルアリールジチオカルバメート、重炭酸塩、炭酸塩、過塩素酸塩、塩素酸塩、亜塩素酸塩、次亜塩素酸塩、過臭素酸塩、臭素酸塩、亜臭素酸塩、次亜臭素酸塩、テトラハロマンガン酸塩、テトラフルオロホウ酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヘキサフルオロアンチモン酸塩、次亜リン酸塩、ヨウ素酸塩、過ヨウ素酸塩、メタホウ酸塩、テトラアリールホウ酸塩、テトラアルキルホウ酸塩、酒石酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、サッカリン酸塩、アミノ酸、ヒドロキサム酸、チオトシル酸塩、およびイオン交換樹脂のアニオンからなる群より選択される]
により表される請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
該置換ペンタアザマクロ環状リガンド複合体が下記式：
【化６】
2005519852.tif 000014
［ただし、式中、マクロ環の窒素およびそれが結合する２個の隣接する炭素原子は、飽和または不飽和の、２〜２０個の炭素原子を有する含窒素ヘテロ環Ｗを形成し、該ヘテロ環は芳香族のヘテロ環でもよく、その場合にはヘテロ環とマクロ環の両方の部分となる窒素に結合する水素、およびヘテロ環とマクロ環の両方の部分となる炭素原子に結合するＲ基は存在しない；また、
Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９はそれぞれ独立して水素、または置換もしくは非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルシクロアルキル、シクロアルケニルアルキル、アルキルシクロアルキル、アルキルシクロアルケニル、アルケニルシクロアルキル、アルケニルシクロアルケニル、へテロ環状、アリールおよびアラルキル基を表す；
Ｒ２またはＲ'２およびＲ３またはＲ'３、Ｒ４またはＲ'４およびＲ５またはＲ'５、Ｒ６またはＲ'６およびＲ７またはＲ'７、Ｒ８またはＲ'８およびＲ９またはＲ'９の１つ以上はそれらが結合する炭素原子と共にそれぞれ独立して置換もしくは非置換の２〜２０個の炭素原子を有する含窒素ヘテロ環を形成し、該ヘテロ環は芳香族のヘテロ環でもよく、その場合にはヘテロ環とマクロ環の両方の部分となる窒素に結合する水素、およびヘテロ環とマクロ環の両方の部分となる炭素原子に結合するＲ基は存在しない；また、選択肢として
Ｒ２およびＲ'２、Ｒ３およびＲ'３、Ｒ４およびＲ'４、Ｒ５およびＲ'５、Ｒ６およびＲ'６、Ｒ７およびＲ'７、Ｒ８およびＲ'８、およびＲ９およびＲ'９の１つ以上はそれらが結合する炭素原子と共にそれぞれ独立して飽和、部分的飽和もしくは不飽和の３〜２０個の炭素原子を有する環状またはヘテロ環状基を形成する；また、選択肢として、
Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９の１つは、マクロ環状リガンド内の異なる炭素原子に結合しているＲ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９の異なる１つと共に結合して下記式：
−(ＣＨ２)ｘ−Ｍ−(ＣＨ２)ｗ−Ｌ−(ＣＨ２)ｚ−Ｉ−(ＣＨ２)ｙ−
（ただし、式中、ｗ、ｘ、ｙおよびｚはそれぞれ独立して０ないし１０の整数であり、Ｍ、ＬおよびＩはそれぞれ独立してアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルへテロアリール、アザ、アミド、アンモニウム、オキサ、チア、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、ホスホリル、ホスフィニル、ホスフィノ、ホスホニウム、ケト、エステル、アルコール、カルバミン酸エステル、尿素、チオカルボニル、ホウ酸エステル、ボラン、ボラザ、シリル、シロキシ、シラザおよびその組合せから選択される）
で示されるストラップを形成してもよい；および上記のいずれかの組合せである；
Ｍはマンガンおよび鉄からなる群より選択される遷移金属のカチオンである；
Ｘ、ＹおよびＺは単座もしくは多座リガンドまたはリガンド系またはその対応するアニオンから誘導される適切なリガンドまたは電荷中和アニオンを表す]
により表される請求項２９記載の方法。
【請求項３２】
該置換ペンタアザ−マクロ環状リガンド複合体のＵおよびＶがトランス−シクロヘキサニル融合環である請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
該置換ペンタアザ−マクロ環状リガンド複合体のＷが置換ピリジノ部分である請求項３１記載の方法。
【請求項３４】
該置換ペンタアザ−マクロ環状リガンド複合体のＵおよびＶがトランス−シクロヘキサニル融合環であり、Ｗが置換ピリジノ部分である請求項３１記載の方法。
【請求項３５】
該触媒がポルフィリンリガンド複合体または置換ポルフィリンリガンド複合体である請求項２８記載の方法。
【請求項３６】
該ポルフィリンリガンド複合体がマンガン（II）ポルフィリン複合体、マンガン（III）ポルフィリン複合体、鉄（II）ポルフィリン複合体、および鉄（III）ポルフィリン複合体からなる群より選択されるものである請求項３５記載の方法。
【請求項３７】
該ポルフィリンリガンド複合体が５,１０,１５,２０−テトラキス（２,４,６−トリメチル−３,５−ジスルホナトフェニル）ポルフィリナト鉄（III）（ＦｅＴＭＰＳ）である請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
対象が哺乳動物である請求項２３記載の方法。
【請求項３９】
哺乳動物がヒトである請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
該置換ペンタアザ−マクロ環状リガンド複合体が以下の式：
【化７】
2005519852.tif 000015
で示されるものである請求項２９記載の方法。
【請求項４１】
該置換ペンタアザ−マクロ環状リガンド複合体が以下の式：
【化８】
2005519852.tif 000016
で示されるものである請求項２９記載の方法。
【請求項４２】
当該同時投与コルチコステロイドが、当該治療効果を達成するために単独投与する同じコルチコステロイドよりも少なくとも１％少ない用量で投与される請求項２３〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
当該同時投与コルチコステロイドが、当該治療効果を達成するために単独投与する同じコルチコステロイドよりも少なくとも１０％少ない用量で投与される請求項２３〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
当該同時投与コルチコステロイドが、当該治療効果を達成するために単独投与する同じコルチコステロイドよりも少なくとも２５％少ない用量で投与される請求項２３〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
当該同時投与コルチコステロイドが、当該治療効果を達成するために単独投与する同じコルチコステロイドよりも少なくとも５０％少ない用量で投与される請求項２３〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
炎症性疾患処置用の医薬組成物であって、スーパーオキシドアニオンを不均化する非タンパク質性触媒、コルチコステロイド、および医薬的に許容し得る担体とを含有してなる組成物。
【請求項４７】
非タンパク質性触媒およびコルチコステロイドを含有してなる組合せ剤であって、当該非タンパク質性触媒とコルチコステロイドが治療有効量の当該非タンパク質性触媒とコルチコステロイドからなる組合せ剤。
【請求項４８】
該コルチコステロイドが、コルチゾール、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、ジヒドロコルチゾン、フルドロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、デフラザコルト、フルニソリド、ベコネース、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロン、ベタメタゾン、およびデキサメタゾンからなる群より選択されるものである請求項４７記載の組合せ剤。
【請求項４９】
該コルチコステロイドがデキサメタゾンである請求項４７記載の組合せ剤。
【請求項５０】
該コルチコステロイドがプレドニゾンである請求項４７記載の組合せ剤。
【請求項５１】
該触媒が非タンパク質性触媒であり、その非タンパク質性触媒が、銅、マンガン（II）、マンガン（III）、鉄（II）および鉄（III）の群から選択されるカチオンにキレート形成した有機リガンドを含んでなる請求項４７記載の組合せ剤。
【請求項５２】
該触媒がペンタアザマクロ環状リガンド複合体または置換ペンタアザマクロ環状リガンド複合体である請求項５１記載の組合せ剤。
【請求項５３】
該ペンタアザマクロ環状リガンド複合体が下記式：
【化９】
2005519852.tif 000017
［ただし、式中、Ｍは遷移金属カチオン、好ましくはマンガンまたは鉄である；
Ｒ、Ｒ'、Ｒ１、Ｒ'１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９はそれぞれ独立して水素、または置換もしくは非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルシクロアルキル、シクロアルケニルアルキル、アルキルシクロアルキル、アルキルシクロアルケニル、アルケニルシクロアルキル、アルケニルシクロアルケニル、へテロ環状、アリールおよびアラルキル基を表す；
Ｒ１またはＲ'１およびＲ２またはＲ'２、Ｒ３またはＲ'３およびＲ４またはＲ'４、Ｒ５またはＲ'５およびＲ６またはＲ'６、Ｒ７またはＲ'７およびＲ８またはＲ'８、Ｒ９またはＲ'９およびＲまたはＲ'はそれらが結合する炭素原子と共にそれぞれ独立して置換もしくは非置換の、飽和、部分的飽和もしくは不飽和の、３〜２０個の炭素原子を有する環状またはへテロ環状基を形成する；
ＲまたはＲ'およびＲ１またはＲ'１、Ｒ２またはＲ'２およびＲ３またはＲ'３、Ｒ４またはＲ'４およびＲ５またはＲ'５、Ｒ６またはＲ'６およびＲ７またはＲ'７、Ｒ８またはＲ'８およびＲ９またはＲ'９はそれらが結合する炭素原子と共にそれぞれ独立して置換もしくは非置換の２〜２０個の炭素原子を有する含窒素ヘテロ環を形成するが、ただし、含窒素ヘテロ環が窒素に結合する水素を含まない芳香族ヘテロ環である場合は、上記の式に示される窒素、すなわち巨大環状リガンドまたは複合体に存在する窒素、その窒素に結合する水素および該マクロ環に含まれる炭素原子に結合するＲ基は存在しないものとする；
ＲおよびＲ'、Ｒ１およびＲ'１、Ｒ２およびＲ'２、Ｒ３およびＲ'３、Ｒ４およびＲ'４、Ｒ５およびＲ'５、Ｒ６およびＲ'６、Ｒ７およびＲ'７、Ｒ８およびＲ'８、Ｒ９およびＲ'９はそれらが結合する炭素原子と共にそれぞれ独立して飽和、部分的飽和もしくは不飽和の、３〜２０個の炭素原子を有する環状またはへテロ環状基を形成する；また
Ｒ、Ｒ'、Ｒ１、Ｒ'１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９の１つは、マクロ環状リガンド内の異なる炭素原子に結合しているＲ、Ｒ'、Ｒ１、Ｒ'１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９の異なる１つと共に結合して下記式：
−(ＣＨ２)ｘ−Ｍ−(ＣＨ２)ｗ−Ｌ−(ＣＨ２)ｚ−Ｉ−(ＣＨ２)ｙ−
（ただし、式中、ｗ、ｘ、ｙおよびｚはそれぞれ独立して０ないし１０の整数であり、Ｍ、ＬおよびＩはそれぞれ独立してアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルへテロアリール、アザ、アミド、アンモニウム、オキサ、チア、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、ホスホリル、ホスフィニル、ホスフィノ、ホスホニウム、ケト、エステル、アルコール、カルバミン酸エステル、尿素、チオカルボニル、ホウ酸エステル、ボラン、ボラザ、シリル、シロキシ、シラザおよびその組合せから選択される）
で示されるストラップを形成してもよい；およびそれらの組合せである；
Ｘ、ＹおよびＺはそれぞれ独立してハロゲン化物、アコ、ヒドロキソ、アルコール、フェノール、ジオキシジェン、ペルオキソ、ヒドロペルオキソ、アルキルペルオキソ、アリールペルオキソ、アンモニア、アルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロ環状アルキルアミノ、ヘテロ環状アリールアミノ、アミンオキシド、ヒドラジン、アルキルヒドラジン、アリールヒドラジン、酸化窒素、シアニド、シアネート、チオシアネート、イソシアネート、イソチオシアネート、アルキルニトリル、アリールニトリル、アルキルイソニトリル、アリールイソニトリル、硝酸塩、亜硝酸塩、アジド、アルキルスルホン酸、アリールスルホン酸、アルキルスルホキシド、アリールスルホキシド、アルキルアリールスルホキシド、アルキルスルフェン酸、アリールスルフェン酸、アルキルスルフィン酸、アリールスルフィン酸、アルキルチオールカルボン酸、アリールチオールカルボン酸、アルキルチオールチオカルボン酸、アリールチオールチオカルボン酸、アルキルカルボン酸（酢酸、トリフルオロ酢酸、シュウ酸など）、アリールカルボン酸（安息香酸、フタル酸など）、尿素、アルキル尿素、アリール尿素、アルキルアリール尿素、チオ尿素、アルキルチオ尿素、アリールチオ尿素、アルキルアリールチオ尿素、硫酸塩、亜硫酸塩、重硫酸塩、重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、チオ亜硫酸塩、ヒドロ亜硫酸塩、アルキルホスフィン、アリールホスフィン、アルキルホスフィンオキシド、アリールホスフィンオキシド、アルキルアリールホスフィンオキシド、アルキルホスフィンスルフィド、アリールホスフィンスルフィド、アルキルアリールホスフィンスルフィド、アルキルホスホン酸、アリールホスホン酸、アルキルホスフィン酸、アリールホスフィン酸、アルキル亜ホスフィン酸、アリール亜ホスフィン酸、リン酸塩、チオリン酸塩、亜リン酸塩、ピロ亜リン酸塩、三リン酸塩、水素リン酸塩、ニ水素リン酸塩、アルキルグアニジノ、アリールグアニジノ、アルキルアリールグアニジノ、アルキルカルバメート、アリールカルバメート、アルキルアリールカルバメート、アルキルチオカルバメート、アリールチオカルバメート、アルキルアリールチオカルバメート、アルキルジチオカルバメート、アリールジチオカルバメート、アルキルアリールジチオカルバメート、重炭酸塩、炭酸塩、過塩素酸塩、塩素酸塩、亜塩素酸塩、次亜塩素酸塩、過臭素酸塩、臭素酸塩、亜臭素酸塩、次亜臭素酸塩、テトラハロマンガン酸塩、テトラフルオロホウ酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヘキサフルオロアンチモン酸塩、次亜リン酸塩、ヨウ素酸塩、過ヨウ素酸塩、メタホウ酸塩、テトラアリールホウ酸塩、テトラアルキルホウ酸塩、酒石酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、サッカリン酸塩、アミノ酸、ヒドロキサム酸、チオトシル酸塩、およびイオン交換樹脂のアニオンからなる群より選択される]
により表される請求項５２記載の組合せ剤。
【請求項５４】
該置換ペンタアザマクロ環状リガンド複合体が下記式：
【化１０】
2005519852.tif 000018
［ただし、式中、マクロ環の窒素およびそれが結合する２個の隣接する炭素原子は、飽和または不飽和の、２〜２０個の炭素原子を有する含窒素ヘテロ環Ｗを形成し、該ヘテロ環は芳香族のヘテロ環でもよく、その場合にはヘテロ環とマクロ環の両方の部分となる窒素に結合する水素、およびヘテロ環とマクロ環の両方の部分となる炭素原子に結合するＲ基は存在しない；また、
Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９はそれぞれ独立して水素、または置換もしくは非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルシクロアルキル、シクロアルケニルアルキル、アルキルシクロアルキル、アルキルシクロアルケニル、アルケニルシクロアルキル、アルケニルシクロアルケニル、へテロ環状、アリールおよびアラルキル基を表す；
Ｒ２またはＲ'２およびＲ３またはＲ'３、Ｒ４またはＲ'４およびＲ５またはＲ'５、Ｒ６またはＲ'６およびＲ７またはＲ'７、Ｒ８またはＲ'８およびＲ９またはＲ'９の１つ以上はそれらが結合する炭素原子と共にそれぞれ独立して置換もしくは非置換の２〜２０個の炭素原子を有する含窒素ヘテロ環を形成し、該ヘテロ環は芳香族のヘテロ環でもよく、その場合にはヘテロ環とマクロ環の両方の部分となる窒素に結合する水素、およびヘテロ環とマクロ環の両方の部分となる炭素原子に結合するＲ基は存在しない；また、選択肢として
Ｒ２およびＲ'２、Ｒ３およびＲ'３、Ｒ４およびＲ'４、Ｒ５およびＲ'５、Ｒ６およびＲ'６、Ｒ７およびＲ'７、Ｒ８およびＲ'８、およびＲ９およびＲ'９の１つ以上はそれらが結合する炭素原子と共にそれぞれ独立して飽和、部分的飽和もしくは不飽和の３〜２０個の炭素原子を有する環状またはヘテロ環状基を形成する；また、選択肢として、
Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９の１つは、マクロ環状リガンド内の異なる炭素原子に結合しているＲ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９の異なる１つと共に結合して下記式：
−(ＣＨ２)ｘ−Ｍ−(ＣＨ２)ｗ−Ｌ−(ＣＨ２)ｚ−Ｉ−(ＣＨ２)ｙ−
（ただし、式中、ｗ、ｘ、ｙおよびｚはそれぞれ独立して０ないし１０の整数であり、Ｍ、ＬおよびＩはそれぞれ独立してアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルへテロアリール、アザ、アミド、アンモニウム、オキサ、チア、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、ホスホリル、ホスフィニル、ホスフィノ、ホスホニウム、ケト、エステル、アルコール、カルバミン酸エステル、尿素、チオカルボニル、ホウ酸エステル、ボラン、ボラザ、シリル、シロキシ、シラザおよびその組合せから選択される）
で示されるストラップを形成してもよい；および上記のいずれかの組合せである；
Ｍはマンガンおよび鉄からなる群より選択される遷移金属のカチオンである；
Ｘ、ＹおよびＺは単座もしくは多座リガンドまたはリガンド系またはその対応するアニオンから誘導される適切なリガンドまたは電荷中和アニオンを表す]
により表される請求項５２記載の組合せ剤。
【請求項５５】
該置換ペンタアザ−マクロ環状リガンド複合体のＵおよびＶがトランス−シクロヘキサニル融合環である請求項５４記載の組合せ剤。
【請求項５６】
該置換ペンタアザ−マクロ環状リガンド複合体のＷが置換ピリジノ部分である請求項５４記載の組合せ剤。
【請求項５７】
該置換ペンタアザ−マクロ環状リガンド複合体のＵおよびＶがトランス−シクロヘキサニル融合環であり、Ｗが置換ピリジノ部分である請求項５４記載の組合せ剤。
【請求項５８】
該非タンパク質性触媒がポルフィリンリガンド複合体または置換ポルフィリンリガンド複合体である請求項５１記載の組合せ剤。
【請求項５９】
該ポルフィリンリガンド複合体がマンガン（II）ポルフィリン複合体、マンガン（III）ポルフィリン複合体、鉄（II）ポルフィリン複合体、および鉄（III）ポルフィリン複合体からなる群より選択されるものである請求項５８記載の組合せ剤。
【請求項６０】
該ポルフィリンリガンド複合体が５,１０,１５,２０−テトラキス（２,４,６−トリメチル−３,５−ジスルホナトフェニル）ポルフィリナト鉄（III）（ＦｅＴＭＰＳ）複合体である請求項５９記載の方法。
【請求項６１】
該置換ペンタアザ−マクロ環状リガンド複合体が以下の式：
【化１１】
2005519852.tif 000019
で示されるものである請求項５２記載の組合せ剤。
【請求項６２】
該置換ペンタアザ−マクロ環状リガンド複合体が以下の式：
【化１２】
2005519852.tif 000020
で示されるものである請求項５２記載の組合せ剤。
【請求項６３】
少なくとも１種の非タンパク質性触媒と少なくとも１種のコルチコステロイドを含んでなるキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は２００１年６月２６日出願の米国仮出願番号第６０／３０１０８０号の利益を請求し、該出願の全文を参照により本明細書の一部とする。
【０００２】
本発明はステロイドおよびスーパーオキシド不均化触媒として有効な化合物との組合せ剤の使用に関する。より詳しくは、該化合物はスーパーオキシドを触媒的に不均化する置換、非置換のヘテロ環状ペンタアザシクロペンタデカンリガンドのマグネシウムまたは鉄複合体である。
【背景技術】
【０００３】
炎症性疾患とは炎症により特徴づけられる何らかの疾患であって、傷害または組織破壊が誘引となる局部的防御反応であり、傷害の作用因子および損傷した組織の両方を破壊し、希釈し、または分離する働きをする。炎症は疼痛、熱、発赤、腫脹および機能喪失などの典型的な兆候による急性の形状を特徴とする。炎症は傷害を受け、リクルート多形核白血球が酸化バーストにおいて活性酸素種（ＲＯＳ）を放出した場合に起こり、結果として複雑な事象のカスケードに帰着する。組織学的には、細動脈、毛管、および細静脈の拡張とともに、透過性および血流の増大、血漿タンパク質を含む液の滲出、白血球の炎症病巣への移動など、複雑な一連の事象を含む。最も顕著な炎症性疾患の一つは関節炎であり、これは関節の炎症である。他の炎症性疾患は、炎症性腸疾患、喘息、乾癬、狼瘡およびその他の自己免疫疾患などである。炎症性疾患の炎症は刺激となる多くの事象、例えば、放射線、機械的、化学的、感染性、および免疫学的刺激が原因となり得る。
【０００４】
最も顕著な炎症性疾患の一つは関節炎である。関節炎は関節の腫脹、組織損傷、硬直、疼痛（急性および慢性の両方）、および発熱などを引き起こす１００種以上の疾患の一群をいう術語である。関節炎は関節以外の身体の他の部分、例えば、これらに限定されるものではないが、滑膜、関節空隙、コラーゲン、骨、腱、筋肉および軟骨、ならびに一部の内臓にも影響を与え得る。関節炎の２つの最も一般的な形態は骨関節症（ＯＡ）およびリウマチ様関節炎（ＲＡ）である。これら２つの形態の内、ＲＡが疼痛と言う意味で最も深刻であり、一方ＯＡは最も一般的な形態である。リウマチ様関節炎は全身性、炎症性、自己免疫性の疾患であり、一般に、関節に、特に手および足の関節に影響する。自己免疫疾患は正常組織に対し向けられる細胞または抗体の異常免疫反応が引き起こす。数多くの戦略が自己免疫疾患を抑制するために開発されているが、最も顕著なのは薬物で、この薬物は非特異的に免疫応答を抑制する。リウマチ様関節炎の発症は二三週間から二三ヶ月かけてゆっくりと始まるか、または症状が急性期にように急激に表れる。
【０００５】
細胞レベルでの炎症性疾患は、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−９，ＩＬ−１１、ＩＬ−１５、ＩＬ−５およびインターフェロン系統群に属する数種等々、サイトカイン類の蓄積、ならびに炎症性細胞（例えば、好酸球、好中球、およびマクロファージ）を特徴とする。特に関節炎に絞ると、これらのサイトカインは関節炎の発赤拡大に際して滑液に蓄積する。これらサイトカインの多くは炎症性細胞から放出され、それが細胞と組織の損傷の原因となる。加えて、関節炎および他の狼瘡などの疾患と関係のある炎症反応のもう一つの重要な特徴は、自己免疫と呼ばれる過程である。自己免疫は、Ｔ細胞が身体の自己のコラーゲン細胞を外来の抗原と見誤り、一連の事象を始動させて誤って脅威と認識したものを取り除こうとしたときに起こる。その結果、免疫システムが身体の自己細胞を攻撃してしまう。自己免疫性は特にリウマチ様関節炎および狼瘡と関係がある。関節炎の発赤拡大と関連した免疫反応はまた酸化とニトロソ化ストレスおよびポリＡＤＰ−リボース合成酵素（ＰＡＲＳ）活性を特徴とする。
【０００６】
アスピリンは多くの炎症性疾患において疼痛の処置に、また炎症の緩和に広く使用されている。アスピリンの外にも、非ステロイド抗炎症性薬物、コルチコステロイド類、金塩、抗マラリア剤および全身性免疫抑制剤などが、関節炎およびその他の炎症性疾患の中度ないし進行した症例において広く使用されている。コルチコステロイドは関節炎その他の炎症性疾患の処置に、またこれら疾患と関係する疼痛に非常に効果のある薬物であり、これまでに知られた最も強力な抗炎症剤である。
【０００７】
コルチコステロイド類は２１個の炭素原子を有し、糖質コルチコイドと鉱質コルチコイドに分類される。コルチコステロイドの作用は多様かつ広範である。これらの作用の一部は以下のとおりである：炭水化物、タンパク質、および脂質代謝の変化；体液と電解質バランスの維持；および心臓血管系、免疫系、腎臓、骨格筋、内分泌系、および神経系の正常機能の保持。コルチコステロイドのメカニズムはいまなお完全には理解されていないが、コルチコステロイドは有害な刺激および環境変化などのストレスに満ちた環境状況に抵抗するための許容能力を生体に賦与する。コルチコステロイドの主要な医薬用途の一つは抗炎症性剤および免疫抑制剤としてのものである。異なる組織でのコルチコステロイドの薬理作用およびそれらの生理的効果の多くには、同じレセプターが介在しているものと思われる。コルチコステロイドレセプターはスーパーオキシドにより、またペルオキシ亜硝酸塩により不活化される。マッカーサー（Macarthur）らの「スーパーオキシドによるカテコールアミンの不活化は敗血症ショックの病因論に新たな洞察を与える」（PNAS, Vol.97, No.17, 9753-9758; August 15, 2000）。従って、薬理学的薬剤として使用される種々の糖質コルチコイドはその治療有効性と並行する生理的過程に副作用をもたらす。
【０００８】
コルチコステロイドの作用は複雑な様式で他のホルモンの作用に関係している。コルチコステロイドは標的組織において特定のレセプタータンパク質と相互作用してコルチコステロイド応答遺伝子の発現を制御し、それによって様々な標的組織により合成されたタンパク質のレベルと種類を変化させる。コルチコステロイドは身体の抗炎症性および免疫抑制作用に重要な作用を有するリンパ球の免疫応答を大きく変化させる。糖質コルチコイドの免疫抑制と抗炎症性作用は、恐らく両作用が白血球の特定の機能の阻害によるものであることから、解消し得ない状態で繋がっている。
【０００９】
何年もの間、コルチコステロイドは炎症性症状の処置に使用されてきている。一般に、アルコールであるプレドニゾンが経口的に使用され、対応するケトンのプレドニゾロン（またはメチルプレドニゾロン）は非経口注射に使用される。これらの化合物は天然産のコルチゾンの５倍有効であり、結果として毒性の問題を最小化する。後に開発されたコルチコステロイドのフッ素化誘導体（例えば、トリアムシノロン、デキサメタゾン、パラメタゾン、およびベタメタゾン）も使用されてきているが、これらは非フッ素化化合物よりも３〜５倍有効であるものの、さらに毒性が高い。コルチコステロイド類は急性炎症および慢性炎症の両方に最も広く使用されている抗炎症性薬物である。これらは経口で、非経口で、またしばしば関節内および関節周囲に、すなわち、関節内とその周り、および関節空洞にて使用する。それでもコルチコステロイドの使用に関連する副作用は重篤である。
【００１０】
ＲＯＳはスーパーオキシドアニオン（Ｏ２−）、水酸基（ＯＨ−）、および酸化窒素（ＮＯ−）ならびにその他の種を含む。スーパーオキシドアニオン由来のＲＯＳ代謝産物は、多くの炎症性疾患、例えば、再灌流傷害（取分け、腸、肝臓、心臓および脳での）、炎症性腸疾患、リウマチ様関節炎、骨関節症、アテローム性動脈硬化症、高血圧、癌、皮膚障害（例えば、乾癬、皮膚炎）、臓器移植拒絶反応、化学療法と放射線誘発の副作用、肺障害（例えば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息）、インフルエンザ、発作、火傷、ＡＩＤＳ、マラリア、パーキンソン病および外傷において、組織病理に寄与するとの仮定がある。参照例：「生物学および医学における酸素ラジカル」、Simic, M.G. et al., Basic Life Sciences, Vol.49, Plenum Press, New York and London, 1988; Weiss J. Cell Biochem., 1991 Suppl. 15C, 216 Abstract C110 (1991); Petkau, A., Cancer Treat. Rev. 13, 17 (1986); McCord, J. Free Radicals Biol. Med., 2, 307 (1986); and Bannister, J.V. et al., Crit. Rev. Biochem., 22, 111 (1987)。ＲＯＳはリウマチ様関節炎と他の炎症性疾患において組織障害に有意に寄与する。参照：バオエルローバ（Bauerova）ら「リウマチ様関節炎の発生機序における反応性酸素と窒素種の役割」、Gen Physiol Biophys 1999 Oct.; 18 Spec No.15-20。
【００１１】
ＲＯＳはインビボにおいて正常細胞の呼吸、自然の生物学的シグナル伝達および防御のメカニズムを介して産生される。細胞呼吸は生命の維持に重要であるが、これらの高反応性副産物分子は広範な疾患および症状に関係しているとされる。例えば、炎症に際して、リクルート多形核白血球が酸化バーストに際してＲＯＳを放出する。しかし、慢性および／または全身性炎症に際しては、ＲＯＳ、特にスーパーオキシドアニオンラジカルのレベルを制御する身体能力が圧倒されてしまう。Llesuy et al., Free Radical Biology and Medicine, 16(4), 445-451 (1994); Taylor et al., Journal of Crinical Care, 10(3), 122-136 (1995)。敗血症の段階で起きる激しい酸化によるストレスは、身体本来の抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、ビタミンＥ）のレベルおよび／または活性を低下させ、脂質過酸化物が蓄積し始める。さらに、内因性のカテコールアミンとコルチゾールが不活化されて血圧低下と血管浸透性の増大を招く。参照：マッカーサー（Macarthur）らの「スーパーオキシドによるカテコールアミンの不活化は敗血症ショックの病因論に新たな洞察を与える」（PNAS, Vol.97, No.17, 9753-9758; August 15, 2000）。
【００１２】
生理的に、糖質コルチコイドは副腎皮質により産生されて、炭水化物代謝、胎児期臓器の成長、および免疫抑制を制御する。参照：Waal, R.M.W. Molecular Biology Reports, 1994, 19, 81-88; Schimmer et al., The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th ed., Hardman et al., McGraw-Hill; New York, 1996; Chap.  薬理学的に、これらは最も広く使用されている免疫抑制薬物であり、これまでに知られた最も強力な抗炎症剤である。糖質コルチコイドの薬理作用には、同じレセプターが介在していると思われ、結果としてその治療有効性と並行する副作用を生じる。しかし、糖質コルチコイドの副作用プロフィールは抗炎症作用に必要な用量よりも相当に低い用量で起こる。さらに、一部の糖質コルチコイドは緩和な鉱質コルチコイドの活性、例えば、体液と電解質バランスの維持などの作用を保持する。結果として、コルチコステロイドは一般にその抗炎症（糖質）能力とナトリウム保持（鉱質）能力をランク付けすることで比較される。以下の表は代表的なコルチコステロイド類の相対能力と等価用量を示す。
【００１３】
表１：代表的コルチコステロイドの相対的効力と等価用量
【表１】
2005519852.tif 000003
【００１４】
糖質コルチコイド作用には同じ糖質コルチコイドレセプターが介在するため、ＳＡＲの化学では、体液と電解質の異常性、高血圧、高血糖、感染感受性の増大、骨壊死、骨多孔症、筋障害、行動障害、白内障、成長停止、脂肪再分布、線条症、斑状出血、座そう、および男性型多毛症などから、有効性として抗炎症のみを成功裏に分離するには限界があった。典型的なＳＡＲ理論によると、糖質コルチコイドレセプターの作動には５つの官能基が関係しているとする：３−オキソ、Δ４−エン、１１−ヒドロキシ、１９−メチル、および２０−カルボニル。これらの構造の一つでもなくなると有意にまたは完全に抗炎症活性を失うに至ることを暗示する。しかし、これらの最少の官能基を欠きながら糖質レセプターには結合し、その有する副作用が同等ないし有意に低下している活性な抗炎症性ステロイドについての報告がいくつか存在する。これら二三の例は、新しい糖質コルチコイドとプロドラッグを検討する上でのさらなる意欲をかきたて、さらに／あるいはレセプター介在メカニズムの証拠を疑問視させ得る。
【００１５】
スーパーオキシドアニオンは、正常な生物のシステムにおいて、以下の反応式に示すように、過酸化水素と酸素を形成することにより除去される（以下本明細書では不均化という）：
Ｏ２−＋Ｏ２−＋２Ｈ＋  →  Ｏ２＋Ｈ２Ｏ２
この反応は、インビボでは遍在性スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）酵素が触媒する。この反応が示すメカニズムによると、自然界に存在するＳＯＤまたはＳＯＤ類似体が本発明の目的のためにスーパーオキシドを触媒する。
【００１６】
Ｏ２−はタンパク質、脂質、ＤＮＡ、尿酸、多糖類などの分解に関与することが知られており、ＲＡ患者ではこれらが増大することが示されている。ＳＯＤはこれらのタンパク質、脂質、ＤＮＡ、尿酸、および多糖類が分解するのを防御している。また、反応性酸素種は組織傷害に直接関り、また間接的には、エラスターゼ、セリンプロテアーゼと複合体を形成するα−１−プロテアーゼインヒビターを不活化することにより組織破壊を容易にする。参照：バオエルローバ（Bauerova）ら「リウマチ様関節炎の発生機序における反応性酸素と窒素種の役割」、Gen Physiol Biophys. 18 Focus Issue, No.15-20 (1999)。この研究が示すところによると、軟骨細胞由来のＲＯＳは、軟骨の加齢とＯＡ両方を病因の一部として軟骨マトリックスを損傷し、マトリックスの分解を仲介する。参照：チク（Tiku）ら「軟骨細胞脂質過酸化と軟骨マトリックスタンパク質分解とをつなぐ証拠」、J. Biol. Chem., Vo.275, No.26, 20069-20076 (June 30, 2000); マテイ（Mattey）ら「リウマチ様関節炎における疾患の結果に対するマンガンスーパーオキシドジスムターゼ病巣での多形の影響」、Arthritis & Rheumatism, Vol.43, No.4, 859-864 (April 2000)。
【００１７】
ＲＯＳはまたヒアルロン酸（ＨＡ）の損傷にも関係するとされ、これを脱重合させて滑液の潤滑性を損ない、関節の摩擦の原因となる。片岡ら「非ステロイド抗炎症薬物のヒドロキシルラジカル捕捉活性」、Ree Radical Res. 27, 419-427 (1997)。ＲＯＳの攻撃を受けたヒアルロナンは数種の中間体を生じ、その最終産物がリウマチ患者の滑液と血清に高い濃度で見出される。オルビスキー（Orvisky）ら「高分子量ヒアルロナン、両親媒性薬物ストバジンおよびビンポセチンの抗酸化活性試験用の有用な手段」、J. Pharm. Biomed. Anal. 16, 419-424 (1997); マーテンス（Mertens）ら「好酸球−内皮接着の研究、リウマチ様関節炎患者の末梢血好酸球による酸素ラジカルの産生と好酸球カチオン性タンパク質の放出」、Clinical and Experimental Allergy, Vol.23, 868-873 (1993)。このことは、ＲＡ発生機序においてスーパーオキシド由来の活性化酸素種が中心的役割をもつことを示唆している。参照：バオエルローバ（Bauerova）ら「リウマチ様関節炎の発生機序における反応性酸素と窒素種の役割」、Gen Physiol Biophys 18, 15-20 (1999)。
【００１８】
最近、本来のＳＯＤに匹敵する触媒活性と高い選択性をもつ一群の非ペプチド低分子量化合物が報告されているが、スーパーオキシドの過剰生産が介在する疾患においてより良好な治療方法の評価のために、これらの化合物の使用が示唆されている（Salvemini et al., Science 8, 304-306 (1999)）。このスーパーオキシドジスムターゼ活性に似せた数種の非ペプチド触媒が発見されている。スーパーオキシドの不均化のために特に有効な系統群の非ペプチド触媒は、含窒素１５員環マクロ環状リガンドのマンガン（II）、マンガン（III）、鉄（II）または鉄（III）複合体からなり、該複合体はスーパーオキシドが酸素と過酸化水素に変換するのを触媒する（米国特許第５,８７４,４２１および５,６３７,５７８に記載；これらを参照により本明細書の一部とする）。以下も参照：「マンガン（II）に基づくスーパーオキシドジスムターゼ類似体；人工酵素の合理的なドラッグデザイン」、Weiss, R.H., et al., Drugs of the Future 21: 383-389 (1996); 「合成酵素の合理的な設計とそれらのヒト医薬品としての潜在的用途」、Riley, D.P., et al., Cat Tech, I, 41 (1997)。これらのスーパーオキシドジスムターゼのミミックは抗炎症活性を含む様々な治療効果を有することが示されている。参照：「マンガン（II）に基づくスーパーオキシドジスムターゼミミックの治療上の側面」、Weiss, R.H., et al., Inorganic Chemistry in Medicine, (Farrell, N., Ed.), Royal Society of Chemistry, in press; 「マンガン（II）に基づくスーパーオキシドジスムターゼミミック：設計、発見および薬理学的有効性」、Weiss, R.H., et al., The Oxygen Paradox (Davies, K.J.A., and Ursini, F., Eds.) pp.641-651, CLEUP University Press, Padova, Italy; Weiss, R.H., et al., J. Biol. Chem., 271: 26149 (1996); and Hardy, M.M., et al., J. Biol. Chem. 269: 18535-18540 (1994)。スーパーオキシドジスムターゼ活性を有することが示されている他の非ペプチド性触媒はポルフィリンと鉄およびマンガンカチオンとの複合体である。
【００１９】
天然、組換えおよび修飾ＳＯＤによる臨床試験と動物での研究は完了しているか、または進行中であり、上に示した病状でのスーパーオキシドレベルを減少させる治療的有効性が証明されている。しかし、多くの問題がこれらの酵素を潜在的治療剤として使用したことから、例えば、経口活性の欠如、インビボでの短い半減期、非ヒト由来酵素での免疫原性、および低い組織分布などとして生じている。
【００２０】
従って、ＲＯＳの過剰生産と関連するＲＡなどの炎症性障害の予防および処置のための有効な組成物と方法について現在もその必要性が存在する。さらに、炎症性疾患の処置のためには、フリーラジカルにより不活化される可能性のある糖質コルチコイドの有効性を増大させる必要がある。
【００２１】
本発明の他の特徴は一部当業者にとって明らかであり、一部は下記の詳細な説明に示したとおりである。
本発明は対象者の炎症性疾患の処置方法であって、スーパーオキシド不均化触媒の治療有効量を、少なくとも１種のコルチコステロイドと共に該対象者に同時投与することを特徴とする方法を提供する。
【００２２】
さらに、本発明は関節炎の処置方法であって、スーパーオキシドアニオンを不均化する非タンパク質性触媒と少なくとも１種のコルチコステロイドとを含有してなる組成物の治療有効量を対象者に同時投与することを特徴とする方法を提供する。
【００２３】
さらに、本発明は炎症性疾患処置用の医薬組成物であって、スーパーオキシドアニオンを不均化する非タンパク質性触媒、コルチコステロイド、および医薬的に許容し得る担体とを含有してなる組成物を提供する。
【００２４】
また、本発明は非タンパク質性触媒およびコルチコステロイドを含有してなる組合せ剤であって、当該非タンパク質性触媒とコルチコステロイドが治療有効量の当該非タンパク質性触媒とコルチコステロイドからなるものである組合せ剤を提供する。
さらに、少なくとも１種の非タンパク質性触媒と少なくとも１種のコルチコステロイドを含んでなるキットが提供される。
【００２５】
略号および定義
本発明の理解を容易にするために、本明細書にて使用する多くの術語と略号とを以下に定義する。
本明細書にて使用する場合、“コルチコステロイド”という術語は、副腎皮質から単離した、または合成により製造した副腎コルチコステロイド、およびその誘導体をいい、炎症性疾患、例えば、関節炎、喘息、感染、炎症性腸疾患、狼瘡、その他の処置に使用するものをいう。コルチコステロイドは天然産、合成または半合成起源のものを含み、例えば、コレステロール、ジヒドロキシコレステロール、スチグマステロール、およびラノステロール構造に見られるように、４個の融合した環からなるステロイド核の存在を特徴とする。コルチコステロイド薬はコルチゾン、コルチゾール、ヒドロコルチゾン（１１β,１７−ジヒドキシ、２１−（ホスホノオキシ）−４−プレグネン、３,２０−ジオン・ニナトリウム）、ジヒドロキシコルチゾン、デキサメタゾン（２１−（アセチルオキシ）−９−フルオロ−１１β,１７−ジヒドロキシ−１６α−メチルプレグナン−１,４−ジエン−３,２０−ジオン）、および高度誘導ステロイド剤、例えば、ベコナーゼ（ジプロピオン酸ベクロメタゾン、すなわち、９−クロロ−１１β,１７,２１−トリヒドロキシ−１６β−メチルプレグナン−１,４−ジエン−３,２０−ジオン・１７,２１−ジプロピオン酸エステル）などである。コルチコステロイドの他の例はフルニソリド、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロン、デフラザコルトおよびベタメタゾンなどである。
【００２６】
本明細書にて使用する場合、“反応性酸素種”または“ＲＯＳ”という術語は毒性または反応性スーパーオキシドアニオン（Ｏ２−）をいう。スーパーオキシドアニオンならびに酸化窒素（ＮＯ−）およびヒドロキシラジカル（ＯＨ−）は異なる種類のフリーラジカルである。
【００２７】
本明細書にて使用する場合、“スーパーオキシド不均化用非ペプチド性触媒”または“スーパーオキシド不均化用非タンパク質性触媒”という術語は、スーパーオキシドアニオンを過酸化水素および分子状酸素に変換する低分子量触媒を意味する。これらの触媒は共通して有機リガンドおよびキレート化遷移金属イオン、好ましくは銅、マンガン（II）、マンガン（III）、鉄（II）または鉄（III）からなる。この術語は有機リガンドとして短鎖ポリペプチド（アミノ酸１５個以下）またはアミノ酸由来のマクロ環状構造を含む触媒を意味する。この術語は一部の種から得られるスーパーオキシドジスムターゼ酵素（ＳＯＤ）を当然ながら含まない。
【００２８】
“スーパーオキシド不均化用触媒”とは、スーパーオキシドアニオンを過酸化水素および分子状酸素に変換する触媒を意味する。この用語は一部の種から得られるスーパーオキシドジスムターゼ酵素（ＳＯＤ）を当然ながら包含する。
【００２９】
“置換した”という術語は、記載された部分が少なくとも１個の炭素またはへテロ原子を含んでなる１個以上の置換基、またさらに０ないし２２個の炭素原子、より好ましくは１ないし１５炭素原子を含んでなり、そして０ないし２２へテロ原子、より好ましくは０ないし１５へテロ原子を含んでなる１個以上の置換基を有することを意味する。本明細書にて使用する場合、“ヘテロ原子”とは炭素に結合した炭素または水素以外の原子であって、Ｏ、Ｓ、Ｎ、Ｐ、Ｓｉ、Ｂ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩからなる群より選択される原子をいう。これらの原子は様々なコンフィギュレーションで配置されて、飽和、不飽和または芳香族である置換基を生成し得る。かかる置換基の例は、分枝または非分枝のアルキル、アルケニルまたはアルキニル、環状、ヘテロ環状、アリール、ヘテロアリール、アリル、ポリシクロアルキル、ポリシクロアリール、ポリシクロへテロアリール、イミン、アミノアルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシル、フェノール、アミンオキシド、チオアルキル、カルボアルコキシアルキル、カルボン酸およびその誘導体、ケト、エーテル、アルデヒド、アミン、アミド、ニトリル、ハロ、チオール、スルホキシド、スルホン、スルホン酸、スルフィド、ジスルフィド、ホスホン酸、ホスフィン酸、アクリル酸、スルホンアミド、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、炭水化物、核酸、脂肪酸、脂質、ニトロ、ヒドロキシルアミン、ヒドロキサム酸、チオカルボニル、ホウ酸、ボラン、ボラザ、シリル、シラザ、シロキシ、およびその組合せなどである。
【００３０】
“アルキル”という術語は、単独または組合せで、直鎖または分枝鎖のアルキル基であって、１ないし約２２個の炭素原子、好ましくは約１ないし約１８個の炭素原子、最も好ましくは約１ないし約１２個の炭素原子からなるアルキル基を意味する。かかる基の例はこれらに限定されるものではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、ペンチル、イソアミル、ヘキシル、オクチル、ノニル、デシル、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、オクタデシル、およびエイコシルである。
【００３１】
“アルケニル”という術語は、単独または組合せで、１個以上の二重結合を有するアルキル基を意味する。かかるアルケニル基の例はこれらに限定されるものではないが、エテニル、プロペニル、１−ブテニル、シス−２−ブテニル、トランス−２−ブテニル、イソブテニル、シス−２−ペンテニル、トランス−２−ペンテニル、３−メチル−１−ブテニル、２,３−ジメチル−２−ブテニル、１−ペンテニル、１−ヘキセニル、１−オクテニル、デセニル、ドデセニル、テトラデセニル、ヘキサデセニル、シス−およびトランス−９−オクタデセニル、１,３−ペンタジエニル、２,４−ペンタジエニル、２,３−ペンタジエニル、１,３−ヘキサジエニル、２,４−ヘキサジエニル、５,８,１１,１４−エイコサテトラエニル、および９,１２,１５−オクタデカトリエニルなどである。
【００３２】
“アルキニル”という術語は、単独または組合せで、１個以上の三重結合を有するアルキル基を意味する。かかるアルキニル基の例はこれらに限定されるものではないが、エチニル、プロピニル（プロパルギル）、１−ブチニル、１−オクチニル、９−オクタデシニル、１,３−ペンタジイニル、２,４−ペンタジイニル、１,３−ヘキサジイニル、および２,４−ヘキサジイニルなどである。
【００３３】
“シクロアルキル”という術語は、単独または組合せで、３ないし約１０個の炭素原子、好ましくは３ないし約８個の炭素原子、最も好ましくは３ないし約６個の炭素原子からなるシクロアルキル基を意味する。かかるシクロアルキル基の例はこれらに限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、およびペルヒドロナフチルなどである。
【００３４】
“シクロアルキルアルキル”という術語は、上記定義のアルキル基に上記定義のシクロアルキル基が置換した基を意味する。シクロアルキルアルキル基の例はこれらに限定されるものではないが、シクロヘキシルメチル、シクロペンチルメチル、（４−イソプロピルシクロヘキシル）メチル、（４−ｔ−ブチル−シクロヘキシル）メチル、３−シクロヘキシルプロピル、２−シクロヘキシルメチルペンチル、３−シクロペンチルメチルヘキシル、１−（４−ネオペンチルシクロヘキシル）メチルヘキシル、および１−（４−イソプロピルシクロヘキシル）メチルヘプチルなどである。
【００３５】
“シクロアルキルシクロアルキル”という術語は、上記定義のシクロアルキル基に上記定義のもう１つのシクロアルキル基が置換した基を意味する。シクロアルキルシクロアルキル基の例はこれらに限定されるものではないが、シクロヘキシルシクロペンチルおよびシクロヘキシルシクロヘキシルなどである。
【００３６】
“シクロアルケニル”という術語は、単独または組合せで、１個以上の二重結合を有するシクロアルキル基を意味する。シクロアルケニル基の例はこれらに限定されるものではないが、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロオクテニル、シクロペンタジエニル、シクロヘキサジエニル、およびシクロオクタジエニルなどである。
【００３７】
“シクロアルケニルアルキル”という術語は、上記定義のアルキル基に上記定義のシクロアルケニル基が置換した基を意味する。シクロアルケニルアルキル基の例はこれらに限定されるものではないが、２−シクロヘキセン−１−イルメチル、１−シクロペンテン−１−イルメチル、２−（１−シクロヘキセン−１−イル）エチル、３−（１−シクロペンテン−１−イル）プロピル、１−（１−シクロヘキセン−１−イルメチル）ペンチル、１−（１−シクロペンテン−１−イル）ヘキシル、６−（１−シクロヘキセン−１−イル）ヘキシル、１−（１−シクロペンテン−１−イル）ノニルおよび１−（１−シクロヘキセン−１−イル）ノニルなどである。
【００３８】
“アルキルシクロアルキル”および“アルケニルシクロアルキル”という術語は、上記定義のシクロアルキル基に上記定義のアルキルまたはアルケニル基が置換した基を意味する。アルキルシクロアルキルおよびアルケニルシクロアルキル基の例はこれらに限定されるものではないが、２−エチルシクロブチル、１−メチルシクロペンチル、１−ヘキシルシクロペンチル、１−メチルシクロヘキシル、１−（９−オクタデセニル）シクロペンチルおよび１−（９−オクタデセニル）シクロヘキシルなどである。
【００３９】
“アルキルシクロアルケニル”および“アルケニルシクロアルケニル”という術語は、上記定義のシクロアルケニル基に上記定義のアルキルまたはアルケニル基が置換した基を意味する。アルキルシクロアルケニルおよびアルケニルシクロアルケニル基の例はこれらに限定されるものではないが、１−メチル−２−シクロペンチル、１−ヘキシル−２−シクロペンテニル、１−エチル−２−シクロヘキセニル、１−ブチル−２−シクロヘキセニル、１−（９−オクタデセニル）−２−シクロヘキセニルおよび１−（２−ペンテニル）−２−シクロヘキセニルなどである。
【００４０】
“アリール”という術語は、単独または組合せで、フェニルまたはナフチル基を意味し、これらの基は要すれば、アルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロ環、アルコキシアリール、アルカリール、アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、アミン、シアノ、ニトロ、アルキルチオ、フェノキシ、エーテル、トリフルオロメチルなどから選択される１個以上の置換基を担持しており、具体的には、フェニル、ｐ−トリル、４−メトキシフェニル、４−（tert−ブトキシ）フェニル、４−フルオロフェニル、４−クロロフェニル、４−ヒドロキシフェニル、１−ナフチル、２−ナフチルなどである。
【００４１】
“アラルキル” という術語は、単独または組合せで、上記定義のアルキルまたはシクロアルキル基において、１個の水素原子が上記定義のアリール基と置き換わった基を意味し、例えば、ベンジル、２−フェニルエチルなどである。
【００４２】
“ヘテロ環状” という術語は少なくとも１個のヘテロ原子をその環内に含有する環構造を意味する。本明細書にて使用する場合、“ヘテロ原子”とは炭素に結合した炭素または水素以外の原子をいう。ヘテロ環の例はこれらに限定されるものではないが、ピロリジニル、ピペリジニル、イミダゾリジニル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロチエニル、フリル、チエニル、ピリジル、キノリル、イソキノリル、ピリダジニル、ピラジニル、インドリル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、ピラゾリル、ピリジニル、ベンゾキサジアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、トリアゾリル、およびテトラゾリル基を包含する。
【００４３】
“飽和、部分的飽和もしくは不飽和の環状”という術語は、環の２個の炭素が１５員環マクロ環状リガンドの一部でもある縮合環構造を意味する。該環構造は３〜２０個の炭素原子、好ましくは５〜１０個の炭素原子を含み得るものであって、さらに炭素に加えて１個以上の他の種類の原子をも含み得る。最も一般的な他の種類の原子とは、窒素、酸素およびイオウである。また、該環構造は１個を超えて環を含んでいてもよい。
【００４４】
“飽和、部分的飽和もしくは不飽和の環構造”という術語は、該環の１個の炭素が１５員環マクロ環状リガンドの一部でもある環構造を意味する。該環構造は３〜２０個の炭素原子、好ましくは５〜１０個の炭素原子を含み得るものであって、窒素、酸素および／またはイオウ原子をも含み得る。
【００４５】
“含窒素へテロ環”という術語は、該環の２個の炭素と１個の窒素が１５員環マクロ環状リガンドの一部でもある環構造を意味する。該環構造は２〜２０個、好ましくは４〜１０個の炭素原子を含むことが可能で、置換または非置換、かつ部分的または全部が飽和もしくは不飽和であてもよく、１５員環マクロ環状リガンドの一部ではない環の部分に窒素、酸素および／またはイオウ原子をも含み得る。
【００４６】
“有機酸アニオン”という術語は、約１個ないし約１８個の炭素原子を有するカルボン酸アニオンをいう。
“ハロゲン化物”という術語は、塩化物、フッ化物、ヨウ化物、または臭化物を意味する。
本明細書にて使用する場合、基“Ｒ”とは、マクロ環の炭素原子に結合するＲ基のすべて、すなわち、Ｒ、Ｒ'、Ｒ１、Ｒ'１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９を意味する。
【００４７】
本発明方法における“哺乳動物患者”とは、炎症性疾患または障害に罹患している哺乳動物のことである。コルチコステロイドとの組合せでスーパーオキシド不均化触媒を投与する哺乳動物患者とは、本発明の方法または組成物において、ヒトであることが想定される。しかし、家畜類（例えば、愛玩動物および大型の家畜動物）としての他の哺乳類患者および他の想定可能な関連動物も予測される。
【００４８】
本明細書にて使用する場合、“処置”または“処置する”という術語は炎症性疾患または障害の処置をいい、以下のものを包含する：（１）対象者の炎症性疾患発症を予防すること；（２）炎症性疾患の進行または惹起を阻害すること、すなわち、その進展を阻止または制限すること；または（３）炎症性疾患の症状を改善または寛解すること。
【００４９】
“炎症性疾患”または“炎症性障害”という術語は、炎症が指標となる疾患をいい、多様な誘引、例えば、放射線、機械的、化学的、感染、および免疫学的刺激が原因となる疾患をいう。炎症性疾患の一部としては、これらに限定されるものではないが、関節炎、炎症性腸疾患、喘息、乾癬、臓器移植拒絶反応、放射線誘発障害、癌、狼瘡その他の自己免疫障害、火傷、外傷、発作、リウマチ性障害、腎疾患、アレルギー疾患、感染症、眼疾患、皮膚病、胃腸疾患、肝疾患、脳浮腫、サルコイドーシス、血小板減少症、脊髄損傷、自己免疫障害、またはコルチコステロイドで処置し得るその他の疾患または障害である。
【００５０】
“関節炎”という術語は関節の炎症をいい、関節の腫脹、組織損傷、硬化、疼痛（急性および慢性の両方）、および発熱を引き起こす１００種を超えるリウマチ性疾患の一群をいう。関節炎は関節以外の他の身体部分、例えば、これらに限定されるものではないが、滑膜、関節空隙、コラーゲン、骨、腱、筋肉および軟骨、ならびに一部の内臓にも影響を与える。関節炎の最も一般的な２つの形態は骨関節症（ＯＡ）およびリウマチ様関節炎（ＲＡ）である。ＲＡは疼痛においてこれら２つの形態の内の最も重篤なものである；一方、ＯＡは最も共通の形態である。
【００５１】
“前駆体リガンド”という術語は、キレート化遷移金属カチオンおよび電荷中和アニオンをもたないＳＯＤ類似の有機リガンドを意味する。
【００５２】
“治療有効量”という術語は、特定の対象者に対象者の疾患または症状の性質および重篤度に照らして投与した場合に、所望の治療効果を示す量、例えば、その疾患または症状を治癒するか、または少なくとも部分的に阻止または阻害する量を意味する。
“関節”または“関節類”という用語は、骨格の２つ以上の骨の間の接合または連結をいう。
【００５３】
“同時投与”という術語は少なくとも２種類の薬剤の有益な組合せ効果を得るために両薬剤を対象者に同時にあるいは連続して投与することを意味するものとする。
本明細書に引用したすべての文献は参照により明示して本明細書の一部とする。
【００５４】
好適な態様の説明
本発明は炎症性疾患の予防および処置のための方法および組成物であって、スーパーオキシドの不均化用非タンパク質触媒を含む組成物を、コルチコステロイドと共に、少なくとも２種の製剤として連続的に、または少なくとも１種の製剤として組合わせて投与することからなる方法および組成物を目的とする。スーパーオキシドの不均化用触媒とコルチコステロイドは、別個の製剤形として連続的に、または単一の製剤形として、もしくは別個の製剤形として同時に被験者に投与することができる。本発明の組成物は皮下、静脈内、または筋肉内に被験者に投与し得る。好適な態様において、本発明の組成物は皮下または筋肉内に投与する。
【００５５】
本発明にて有用な一部のコルチコステロイドは、これらに限定されるものではないが、コルチゾール、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、フルドロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、６−メチルプレドニゾロン、トリアムシノロン、ベタメタゾン、およびデキサメタゾンである。しかし、副腎皮質から単離されるか、または合成により製造される副腎コルチコステロイドホルモンおよび炎症の処置に使用されるその誘導体は、いずれもが本発明にとって有用である。
【００５６】
下記の例に示すように、本発明の特に有用な利点は、ＳＯＤミミックをコルチコステロイドと組合わせて使用することが、炎症性疾患の処置においてコルチコステロイドの有効性を高めることにあり、それによってコルチコステロイドの低用量での使用およびコルチコステロイドに関連する副作用のリスク低減を可能とする。糖質コルチコイドおよびそのレセプターは、スーパーオキシドおよびその他のフリーラジカルに接触した場合に不活性となるので、その場合には所望の効果を達成するために糖質コルチコイドの投与量を上げる必要がある。事実、ＬＰＳ処理したＲＡＷ細胞に抗酸化剤を投与すると、実施例２に示すように、デキサメタゾンの不活化が防止される。炎症性疾患の処置に必要なコルチコステロイドの投与量は、本発明のスーパーオキシド不均化用触媒と組合わせて使用した場合、少なくとも約１％、より好ましくは少なくとも１０％、さらにより好ましくは少なくとも２５％、そして最も好ましくは少なくとも５０％まで低下する。ＳＯＤミミックとコルチコステロイドとの組合せ使用による相乗効果は、炎症性疾患の処置に好都合な結果をもたらす。
【００５７】
本発明方法に採用される化合物は、好ましくはＳＯＤ酵素の本来の形状に対立するものとして、スーパーオキシドアニオン不均化用の非タンパク質性触媒（ＳＯＤミミック）を含んでなる。本明細書にて使用する場合、“ＳＯＤミミック”という術語は、スーパーオキシドアニオンを過酸化水素と分子状酸素に変換するための低分子量触媒を意味する。これらの触媒はペンタアザシクロペンタデカン部分を有する有機リガンドとキレート化遷移金属イオン、好ましくはマンガンまたは鉄とからなる。該術語は、有機リガンドとして短鎖ポリペプチド（アミノ酸１５個以下）、またはアミノ酸由来のマクロ環状構造を有する触媒を包含する。この術語が天然資源から得たＳＯＤ酵素を含まないのは明瞭である。ＳＯＤミミックは本来のＳＯＤに比べて本発明方法においてより有用である；その理由は溶液の不安定性、その大きさ故の細胞への接近の限界、免疫原性、釣鐘型用量応答曲線、短い半減期、製造コスト、およびタンパク分解性消化などの本来のＤＯＤ療法と関連する限界があるからである。参照例：Salvemini et al., Science 286: 304-306 (1999)。例えば、最もよく知られた本来のＳＯＤ、ＣｕＺｎは分子量が３３,０００ｋＤである。それに対して、ＳＯＤミミックはその分子量が約４００〜６００ダルトンである。
【００５８】
取分け好適な態様において、本発明にて利用されるＳＯＤミミックは金属イオンにキレート化した有機リガンドを含んでなる。特に好適な触媒はペンタアザ−マクロ環状リガンド化合物、より具体的には、ペンタアザシクロペンタデカン化合物の銅、マンガン（II）、マンガン（III）、鉄（II）および鉄（III）キレートである。Ｍｎ(II)のペンタアザマクロ環状リガンド複合体は、本発明での使用に特に有利であるが、その理由は、低分子量であることに加えて、それらがスーパーオキシドアニオンの不均化に高度に選択的であり、対応する本来のＳＯＤに同等であるか、それよりも早い触媒速度を有するからである。この分類のＳＯＤミミック、Ｍ４０４０３およびＭ４０４０１の例を以下の例示で述べる。これらのペンタアザシクロペンタデカン化合物は以下の式により表すことができる：
【００５９】
【化１】
2005519852.tif 000004
【００６０】
［ただし、式中、Ｍは遷移金属カチオン、好ましくはマンガンまたは鉄である；
Ｒ、Ｒ'、Ｒ１、Ｒ'１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９はそれぞれ独立して水素、または置換もしくは非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルシクロアルキル、シクロアルケニルアルキル、アルキルシクロアルキル、アルキルシクロアルケニル、アルケニルシクロアルキル、アルケニルシクロアルケニル、へテロ環状、アリールおよびアラルキル基を表す；
Ｒ１またはＲ'１およびＲ２またはＲ'２、Ｒ３またはＲ'３およびＲ４またはＲ'４、Ｒ５またはＲ'５およびＲ６またはＲ'６、Ｒ７またはＲ'７およびＲ８またはＲ'８、Ｒ９またはＲ'９およびＲまたはＲ'はそれらが結合する炭素原子と共にそれぞれ独立して置換もしくは非置換の、飽和、部分的飽和もしくは不飽和の、３〜２０個の炭素原子を有する環状またはへテロ環状基を形成する；
ＲまたはＲ'およびＲ１またはＲ'１、Ｒ２またはＲ'２およびＲ３またはＲ'３、Ｒ４またはＲ'４およびＲ５またはＲ'５、Ｒ６またはＲ'６およびＲ７またはＲ'７、Ｒ８またはＲ'８およびＲ９またはＲ'９はそれらが結合する炭素原子と共にそれぞれ独立して置換もしくは非置換の２〜２０個の炭素原子を有する含窒素ヘテロ環を形成するが、ただし、含窒素ヘテロ環が窒素に結合する水素を含まない芳香族ヘテロ環である場合は、上記の式に示される窒素、すなわち巨大環状リガンドまたは複合体に存在する窒素、その窒素に結合する水素および該マクロ環に含まれる炭素原子に結合するＲ基は存在しないものとする；
ＲおよびＲ'、Ｒ１およびＲ'１、Ｒ２およびＲ'２、Ｒ３およびＲ'３、Ｒ４およびＲ'４、Ｒ５およびＲ'５、Ｒ６およびＲ'６、Ｒ７およびＲ'７、Ｒ８およびＲ'８、Ｒ９およびＲ'９はそれらが結合する炭素原子と共にそれぞれ独立して飽和、部分的飽和もしくは不飽和の、３〜２０個の炭素原子を有する環状またはへテロ環状基を形成する；また
Ｒ、Ｒ'、Ｒ１、Ｒ'１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９の１つは、マクロ環状リガンド内の異なる炭素原子に結合しているＲ、Ｒ'、Ｒ１、Ｒ'１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９の異なる１つと共に結合して下記式：
【００６１】
−(ＣＨ２)ｘ−Ｍ−(ＣＨ２)ｗ−Ｌ−(ＣＨ２)ｚ−Ｉ−(ＣＨ２)ｙ−
（ただし、式中、ｗ、ｘ、ｙおよびｚはそれぞれ独立して０ないし１０の整数であり、Ｍ、ＬおよびＩはそれぞれ独立してアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルへテロアリール、アザ、アミド、アンモニウム、オキサ、チア、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、ホスホリル、ホスフィニル、ホスフィノ、ホスホニウム、ケト、エステル、アルコール、カルバミン酸エステル、尿素、チオカルボニル、ホウ酸エステル、ボラン、ボラザ、シリル、シロキシ、シラザおよびその組合せから選択される）
で示されるストラップを形成してもよい]
【００６２】
この分類のペンタアザ−マクロ環状化合物群の好適な化合物はＭ４０４０１と命名し、以下の式で表される：
【００６３】
【化２】
2005519852.tif 000005
【００６４】
この分類のペンタアザ−マクロ環状化合物群のもう一つの好適な化合物はＭ４０４０３と命名し、以下の式で表される：
【００６５】
【化３】
2005519852.tif 000006
【００６６】
もう一つの態様において、該触媒は置換基を有するペンタアザ−マクロ環状リガンド化合物であり、以下の式で表すことができる：
【００６７】
【化４】
2005519852.tif 000007
【００６８】
［ただし、式中、マクロ環の窒素およびそれが結合する２個の隣接する炭素原子は、飽和または不飽和の、２〜２０個の炭素原子を有する含窒素ヘテロ環Ｗを形成し、該ヘテロ環は芳香族のヘテロ環でもよく、その場合にはヘテロ環とマクロ環の両方の部分となる窒素に結合する水素、およびヘテロ環とマクロ環の両方の部分となる炭素原子に結合するＲ基は存在しない；また、
Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９はそれぞれ独立して水素、または置換もしくは非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルシクロアルキル、シクロアルケニルアルキル、アルキルシクロアルキル、アルキルシクロアルケニル、アルケニルシクロアルキル、アルケニルシクロアルケニル、へテロ環状、アリールおよびアラルキル基を表す；
Ｒ２またはＲ'２およびＲ３またはＲ'３、Ｒ４またはＲ'４およびＲ５またはＲ'５、Ｒ６またはＲ'６およびＲ７またはＲ'７、Ｒ８またはＲ'８およびＲ９またはＲ'９の１つ以上はそれらが結合する炭素原子と共にそれぞれ独立して置換もしくは非置換の２〜２０個の炭素原子を有する含窒素ヘテロ環を形成し、該ヘテロ環は芳香族のヘテロ環でもよく、その場合にはヘテロ環とマクロ環の両方の部分となる窒素に結合する水素、およびヘテロ環とマクロ環の両方の部分となる炭素原子に結合するＲ基は存在しない；また、選択肢として
Ｒ２およびＲ'２、Ｒ３およびＲ'３、Ｒ４およびＲ'４、Ｒ５およびＲ'５、Ｒ６およびＲ'６、Ｒ７およびＲ'７、Ｒ８およびＲ'８、およびＲ９およびＲ'９の１つ以上はそれらが結合する炭素原子と共にそれぞれ独立して飽和、部分的飽和もしくは不飽和の３〜２０個の炭素原子を有する環状またはヘテロ環状基を形成する；また、選択肢として、
Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９の１つは、マクロ環状リガンド内の異なる炭素原子に結合しているＲ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ'２、Ｒ３、Ｒ'３、Ｒ４、Ｒ'４、Ｒ５、Ｒ'５、Ｒ６、Ｒ'６、Ｒ７、Ｒ'７、Ｒ８、Ｒ'８、Ｒ９およびＲ'９の異なる１つと共に結合して下記式：
【００６９】
−(ＣＨ２)ｘ−Ｍ−(ＣＨ２)ｗ−Ｌ−(ＣＨ２)ｚ−Ｉ−(ＣＨ２)ｙ−
（ただし、式中、ｗ、ｘ、ｙおよびｚはそれぞれ独立して０ないし１０の整数であり、Ｍ、ＬおよびＩはそれぞれ独立してアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルへテロアリール、アザ、アミド、アンモニウム、オキサ、チア、スルホニル、スルフィニル、スルホンアミド、ホスホリル、ホスフィニル、ホスフィノ、ホスホニウム、ケト、エステル、アルコール、カルバミン酸エステル、尿素、チオカルボニル、ホウ酸エステル、ボラン、ボラザ、シリル、シロキシ、シラザおよびその組合せから選択される）
で示されるストラップを形成してもよい；および上記のいずれかの組合せである；
Ｍはマンガンおよび鉄からなる群より選択される遷移金属のカチオンである；
Ｘ、ＹおよびＺは単座もしくは多座リガンドまたはリガンド系またはその対応するアニオンから誘導される適切なリガンドまたは電荷中和アニオンを表す]
【００７０】
特に好適な態様において、上述の置換基を有するペンタアザ−マクロ環状リガンドでは、Ｗが置換されたピリジノ部分であり、ＵおよびＶがトランス−シクロヘキサニル融合環である。さらに、本発明において有用なペンタアザ−マクロ環状または置換基を有するペンタアザ−マクロ環状リガンド化合物は、置換または非置換のＲ基、飽和、部分的飽和もしくは不飽和の環状基、環構造、含窒素へテロ環、または上記定義のストラップなどのいずれかの組合せでもよい。
【００７１】
Ｘ、ＹおよびＺは単座もしくは多座配位リガンドもしくはリガンドシステムまたは対応するそのアニオンから誘導される適切なリガンドまたは電荷中和アニオンを表す（例えば、安息香酸または安息香酸アニオン、フェノールまたはフェノキシドアニオン、アルコールまたはアルコキシドアニオン）。Ｘ、ＹおよびＺは、それぞれ独立してハロゲン化物、アコ、ヒドロキソ、アルコール、フェノール、ジオキシジェン、ペルオキソ、ヒドロペルオキソ、アルキルペルオキソ、アリールペルオキソ、アンモニア、アルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロ環状アルキルアミノ、ヘテロ環状アリールアミノ、アミンオキシド、ヒドラジン、アルキルヒドラジン、アリールヒドラジン、酸化窒素、シアニド、シアネート、チオシアネート、イソシアネート、イソチオシアネート、アルキルニトリル、アリールニトリル、アルキルイソニトリル、アリールイソニトリル、硝酸塩、亜硝酸塩、アジド、アルキルスルホン酸、アリールスルホン酸、アルキルスルホキシド、アリールスルホキシド、アルキルアリールスルホキシド、アルキルスルフェン酸、アリールスルフェン酸、アルキルスルフィン酸、アリールスルフィン酸、アルキルチオールカルボン酸、アリールチオールカルボン酸、アルキルチオールチオカルボン酸、アリールチオールチオカルボン酸、アルキルカルボン酸（酢酸、トリフルオロ酢酸、シュウ酸など）、アリールカルボン酸（安息香酸、フタル酸など）、尿素、アルキル尿素、アリール尿素、アルキルアリール尿素、チオ尿素、アルキルチオ尿素、アリールチオ尿素、アルキルアリールチオ尿素、硫酸塩、亜硫酸塩、重硫酸塩、重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、チオ亜硫酸塩、ヒドロ亜硫酸塩、アルキルホスフィン、アリールホスフィン、アルキルホスフィンオキシド、アリールホスフィンオキシド、アルキルアリールホスフィンオキシド、アルキルホスフィンスルフィド、アリールホスフィンスルフィド、アルキルアリールホスフィンスルフィド、アルキルホスホン酸、アリールホスホン酸、アルキルホスフィン酸、アリールホスフィン酸、アルキル亜ホスフィン酸、アリール亜ホスフィン酸、リン酸塩、チオリン酸塩、亜リン酸塩、ピロ亜リン酸塩、三リン酸塩、水素リン酸塩、ニ水素リン酸塩、アルキルグアニジノ、アリールグアニジノ、アルキルアリールグアニジノ、アルキルカルバメート、アリールカルバメート、アルキルアリールカルバメート、アルキルチオカルバメート、アリールチオカルバメート、アルキルアリールチオカルバメート、アルキルジチオカルバメート、アリールジチオカルバメート、アルキルアリールジチオカルバメート、重炭酸塩、炭酸塩、過塩素酸塩、塩素酸塩、亜塩素酸塩、次亜塩素酸塩、過臭素酸塩、臭素酸塩、亜臭素酸塩、次亜臭素酸塩、テトラハロマンガン酸塩、テトラフルオロホウ酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヘキサフルオロアンチモン酸塩、次亜リン酸塩、ヨウ素酸塩、過ヨウ素酸塩、メタホウ酸塩、テトラアリールホウ酸塩、テトラアルキルホウ酸塩、酒石酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、サッカリン酸塩、アミノ酸、ヒドロキサム酸、チオトシル酸塩、およびイオン交換樹脂のアニオンからなる群より選択される。Ｘ、ＹおよびＺが選択される好適なリガンドはハロゲン化物、有機酸、硝酸塩および重炭酸アニオンである。
【００７２】
マクロ環の炭素原子に結合する“Ｒ”基は、マクロ環に対してアキシアルまたはエクアトリアル位置にあり得る。“Ｒ”基が水素以外である場合、または２個の隣接する“Ｒ”基、すなわち、隣り合った炭素原子上の基が、それらの結合する炭素原子と共に、飽和、部分的飽和または不飽和の環状または含窒素へテロ環を形成するか、または同じ炭素原子上の２個のＲ基がそれらの結合する炭素原子と共に、飽和、部分的飽和または不飽和の環構造を形成する場合、少なくとも“Ｒ”基の一部は活性および安定性の改善という理由でエクアトリアル位置にあることが好ましい。このことは該複合体が水素以外の１個を超える“Ｒ”基を含む場合に特に当てはまる。
【００７３】
スーパーオキシド不均化活性を有する多様なペンタアザ−マクロ環状リガンド化合物は合成可能である。該触媒の遷移金属中心は触媒の活性部位に存在すると考えられており、そこにおいてマンガンまたは鉄イオンが（II）状態と（III）状態の間を循環している。
【００７４】
記載したペンタアザ−マクロ環状リガンド化合物触媒はさらに米国特許第５,６３７,５７８、６,２１４,８１７、およびＰＣＴ出願ＷＯ９８／５８６３６に記載されており、これらはすべて参照により本明細書の一部とする。これらのペンタアザ−マクロ環状リガンド触媒は米国特許第５,６１０,２９３に開示された方法により製造することができる。
【００７５】
鉄またはマンガン・ポルフィリンもまた本発明に使用し得る適切な非タンパク質触媒であり、例えば、ＭｎIIIテトラキス（４−Ｎ-メチルピリジル）ポルフィリン、ＭｎIIIテトラキス−ｏ−（４−Ｎ−メチルイソニコチンアミドフェニル）ポルフィリン、ＭｎIIIテトラキス（４−Ｎ,Ｎ,Ｎ−トリメチルアニリニウム）ポルフィリン、ＭｎIIIテトラキス（１-メチル−４−ピリジル）ポルフィリン、ＭｎIIIテトラキス（４−安息香酸）ポルフィリン、ＭｎIIオクタブロモ−メゾ−テトラキス（Ｎ−メチルピリジニウム−４−イル）ポルフィリン、５,１０,１５,２０−テトラキス（２,４,６−トリメチル−３,５−ジスルホナトフェニル）ポルフィリナト鉄（III）（ＦｅＴＭＰＳ）、ＦｅIIIテトラキス（４−Ｎ−メチルピリジル）ポルフィリン、およびＦｅIIIテトラキス−ｏ−（４−Ｎ−メチルイソニコチンアミドフェニル）ポルフィリンなどが例示され、好ましくは置換基を有する鉄ポルフィリン、５,１０,１５,２０−テトラキス（２,４,６−トリメチル−３,５−ジスルホナトフェニル）ポルフィリナト鉄（III）（ＦｅＴＭＰＳ）が本発明の方法と組成物に使用し得る。このものは米国特許第６,１０３,７１４にて閲覧可能であり、その全文を本明細書の一部とする。触媒活性およびこれら非タンパク質触媒の精製または合成法は有機化学技術上周知である。
【００７６】
スーパーオキシド不均化を触媒する本発明のポルフィリン化合物または複合体の活性はライリー記載のストップトフロー速度論的分析法（Riley, D.P. et al., Anal. Biochem., 196: 344-349 (1991)）（参照により本明細書の一部とるす）により証明することができる。ストップトフロー速度論的分析はＳＯＤ活性に対する化合物のスクリーニングに適しており、本発明のポルフィリン化合物または複合体の活性が、ストップトフロー分析が示すように、上記の疾患症状と障害の処置に相関する。しかし、ストップトフロー分析がスーパーオキシドジスムターゼミミックすべての活性を証明するための適切な方法というわけではない。ある種のＳＯＤミミックには他の方法が適しているかまたは好ましい。参照例：“推定スーパーオキシドジスムターゼミミックの活性評価：ストップトフロー速度論による直接分析”、Weiss et al., J. Niol. Chem. 268(31): 23049-54 (Nov. 5, 1993)。
【００７７】
該化合物および誘導体ならびに中間体について上に述べた一般式の想定される等価物は他の点でそれに対応する化合物であって、同じ一般的性質を有する化合物であり、例えば、該化合物の互変異性体、様々なＲ基の１個以上がそこで規定される置換基の単純な変更である化合物、例えば、Ｒが表示したアルキル基よりも長鎖のものである化合物、またはトシル基が他の窒素もしくは酸素保護基である化合物、またはＯ−トシルがハロゲン化物である化合物である。１以外の電荷を有するアニオン、例えば、炭酸塩、リン酸塩、および一水素リン酸塩などは、それらが複合体の全活性に逆の影響を与えない限り、電荷１のアニオンの代わりに使用することができる。しかし、１以外の電荷を有するアニオンを使用することで、上述の複合体の一般式は僅かに変化したものとなる。さらに、置換基が水素と指定されるか、あるいは水素でもよい場合、その位置の水素以外の置換基、例えば、炭化水素基またはハロゲン、ヒドロキシ、アミノなどの官能基の正確な化学的性質は、それらが複合体の全活性および／または合成手法に逆の影響を与えない限り、重要ではない。さらに予測されることは、マンガン（III）複合体が従属するマンガン（II）に等価であることである。
【００７８】
対象者の処置または予防に使用するためには、本発明の化合物を医薬または動物薬の組成物に製剤化するのがよい。処置すべき対象者、投与方式、所望の処理の型（例えば、阻害、防止、予防、治療）などにより、該化合物はこれらのパラメータと一致する様式で製剤化する。本発明の組成物は治療有効量または予防有効量のスーパーオキシド不均化触媒と少なくとも１種のコルチコステロイドとを組合わせてなる。スーパーオキシド不均化触媒は、上に詳細に記載したＳＯＤ類似体が好ましい。本発明のＳＯＤｍならびに本発明のコルチコステロイドは、好ましくは、同一の製剤として、または別個の製剤として、医薬的に許容し得る担体との組合せで使用する。
【００７９】
本発明の組成物は必要とするヒトまたは動物の処置に使用するための簡便な医薬製剤（例えば、注射用溶液）に包含させることもできる。医薬組成物は皮下、静脈内または筋肉内注射により、または大容量の非経口溶液などとして投与することができる。本明細書にて使用する場合の非経口という術語は、皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内注射、または注入技法などである。
【００８０】
例えば、非経口治療用組成物はスーパーオキシド不均化触媒の容量に対して０.１ないし９０重量パーセントを含む無菌等張塩溶液からなる。好適な溶液は約５ないし約２５重量パーセントのスーパーオキシド不均化触媒を溶液中に含有する（単位容積あたりの重量％）。非経口治療用組成物は、等張化塩溶液およびスーパーオキシド不均化触媒に加えて、少なくとも１種のコルチコステロイドを、スーパーオキシド不均化触媒に対するコルチコステロイドの重量比として、１：１００ないし１００：１の比で含有し得る。好適な溶液はスーパーオキシド不均化触媒に対し、約１：１０ないし１０：１の重量比でコルチコステロイドを含有する。
【００８１】
別法として、該コルチコステロイドはスーパーオキシド不均化触媒に引き続いて投与してもよい。使用すべきコルチコステロイドの投与量は多様である。本発明のコルチコステロイドの投与レベルについて第一に考えねばならないことは、個体における既知の副作用のモニターである。
【００８２】
注射用製剤、例えば、無菌注射用水性または油性懸濁液は、既知の技術に従い、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いて製剤とすることができる。無菌の注射用製剤は非毒性の非経口可能な希釈剤または溶媒中の無菌注射用溶液または懸濁液、例えば、１,３−ブタンジオール溶液としてもよい。受容可能なビークルおよび溶媒の中で、採用し得るのは水、リンゲル溶液、および等張塩化ナトリウム溶液である。さらに、無菌固定化油は溶媒または懸濁媒体として常套的に採用される。この目的のためには、どの非刺激性の固定化油を採用してもよく、合成モノ−またはジグリセリドなどを使用し得る。さらに、オレイン酸などの脂肪酸も注射可能な製剤に使用し得る。
【００８３】
該製剤は、要すれば、パッケージまたはディスペンサー器具にて提供可能であり、これらの容器には１単位以上の投与形態でスーパーオキシド不均化触媒を少なくとも１種のコルチコステロイドと組合わせて収容する。パッケージは例えばＰＴＰ包装などの金属またはプラスチックホイルからなる。パッケージまたはディスペンサー器具には投与指示書を付けてもよい。
【００８４】
本発明はまた本発明の治療投薬法を実施するためのキットをも提供する。かかるキットは該触媒とコルチコステロイドの組合せ剤の治療もしくは予防有効量を医薬的に許容し得る形状で収容する１個以上の容器からなる。本発明キットのバイアル中の該触媒とコルチコステロイドの組合せ剤は、医薬的に許容し得る溶液の形状、例えば、無菌塩溶液、デキストロース溶液、または緩衝溶液、あるいは他の医薬的に許容し得る無菌液と組合わせた形状でもよい。あるいは、該複合体は凍結乾燥品または乾燥品でもよい；この場合、該キットはさらに任意に該複合体を再構成して注射目的の溶液を形成するため、容器に容れた医薬的に許容し得る溶液（例えば、塩溶液、デキストロース溶液など）、好ましくは無菌溶液を含む。
【００８５】
もう一つの態様において、本発明のキットは該組合せ剤の注射用として、好ましくは無菌状態で包装した針またはシリンジ、および／またはパッケージとしたアルコールパッドを含んでなる。指示書は医師または患者が該触媒とコルチコステロイドの組合せ剤の投与のために任意に含める。
【００８６】
単一投与形状を製造するための担体材料と組合せ得る有効成分量は、処理を受ける当事者および特定の投与様式によって変わる。各投与形態の個々の用量に含まれる有効成分の単位含量は、それ自体で有効量を構成する必要がなく、必要な有効量は複数の個々の用量を投与することで達成することが可能であればよい。投与量の選択は利用する投与形態、治療すべき症状、および当業者の決定に従って達成すべき特定の目的に左右される。
【００８７】
疾患症状を本発明の化合物および／または組成物により処置するための投薬方法は、多様なファクター、例えば、患者のタイプ、年齢、体重、性別、食事および医学的症状、投与経路、薬理学的考察、例えば、採用する特定化合物の活性、有効性、薬物動態および毒性学プロフィールに従って、また、薬物送達システムを利用するか、あるいは該化合物を薬物組合せ剤の一部として投与するのか、などによって選択する。従って、実際に採用する投薬方法は広く変わり得るものであり、それ故、上述の好適な投薬方法からは逸脱するかもしれない。
【００８８】
本発明の医薬組成物は、好ましくはヒトに投与する。しかし、ヒトの処理に有用である以外にも、これらのエキス剤は愛玩動物、外来動物および畜産動物など、哺乳類、げっ歯類、鳥類などの家畜動物処理にも有用である。より好適な動物はウマ、イヌ、ネコ、ヒツジおよびブタである。
【００８９】
上述の詳細な説明は当業者が本発明を実施するためのものとして提供するものである。例えそうであっても、本明細書にて考察した態様の修飾および変更は、本発明の精神または範囲から逸脱することなく当業者が実施し得るものであり、本発明を不当に制限するような解釈はこの詳細な説明についてなされるべきでない。
【００９０】
本出願に引用したすべての出版物、特許、特許出願およびその他の文献は、、それぞれ個々の出版物、特許、特許出願およびその他の文献が具体的かつ個々に参照により本明細書の一部とする旨、示されていたものとして、その全文を参照により本明細書の一部とする。
【００９１】
さらに詳細に説明せずとも、当業者は前記の説明を使用して、その完全な範囲まで本発明を利用することが可能であると信じる。従って、以下の好適な具体的態様は単なる説明のためのものであって、如何なる方法においてもこの開示の残りの部分を制限するものではないと解釈すべきである。
【実施例１】
【００９２】
コラーゲン誘発関節炎のげっ歯類モデルにおけるデキサメタゾンとＭ４０４０３の作用
目的：これらの研究目的は、コラーゲン誘発関節炎のげっ歯類モデルにおいて、低用量のＭ４０４０３が低用量のデキサメタゾンの作用を増強するか否かを決定することであった。
【００９３】
方法：コラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）はルイスラットの尾部根部に１００μｌのエマルジョン（１００μｇのウシII型コラーゲン含有）（II）および不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）を皮内注射して誘発した。２１日目に不完全フロイントアジュバント中ＣＩIを２回目の注射として投与した。
【００９４】
結果：ルイスラットはＣII／ＩＦＡエマルジョンにて免疫した場合、後肢に侵食性の関節炎を発症した。ＣＩＡの目視による臨床所見は、図１に示すように、２４〜２６日目までに後肢に関節周囲の紅斑および浮腫として先ず現れた。ＣＩＡの発症率はＣII負荷したラットで２７日目までに１００％であった；またＣＩＡの重症度は図１に示すように３５日間にわたり進行した。ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１βの血漿中レベルは図３に示すように、またマロニルアルデヒド（ＭＤＡ、脂質過酸化のマーカー）は図４に示すように、また酸化窒素（ＮＯ）は図７に示すように、それぞれ顕著な増加が３０日目に観察された。ニトロチロシン（ペルオキシ亜硝酸形成のマーカー）およびＰＡＲＳ（ＤＮＡ一本鎖損傷により活性化される核酵素）についての免疫組織化学分析は、コラーゲン処理ラットから炎症を起こした関節で陽性に染色されることを示し、図５に示すようにペルオキシ亜硝酸の形成とＤＮＡの損傷を示唆していた。誘発可能な酸化窒素シンターゼとシクロオキシゲナーゼ（ｉＮＯＳおよびＣＯＸ−２）の免疫組織化学分析は、図８に示すようにコラーゲン処理ラットから炎症を起こした関節に陽性染色を示した。関節炎の発症（２５日目）時に、低用量のＭ４０４０３（２ｍｇ／ｋｇを毎日腹腔内注射）または低用量のデキサメタゾン（０.０１ｍｇ／ｋｇを毎日経口投与）でラットを処置し始めると、関節炎応答の程度（上記パラメータを評価することにより定義）が略１０〜２０％改善された。他方、これら２種の低用量を組合わせると、防御効果の程度は略６０〜９０％に達した。これら低用量の組合せにより観察される防御の度合いは、デキサメタゾン０.１ｍｇ／ｋｇで達成される防御と同様であった。最後に、低用量ＤＥＸ（０.０１ｍｇ／ｋｇ）およびＭ４０４０３（２ｍｇ／ｋｇ）の組合せ、または高用量ＤＥＸ（０.１ｍｇ／ｋｇ）により処置した関節炎ラットは、図１０に示すように正常非関節炎ラットと同じ率かつ同じ程度で体重増加した。
【００９５】
結論：本研究はラットのコラーゲン誘発関節炎において、Ｍ４０４０３がデキサメタゾンの抗炎症性作用を高めるという初めての証拠を提供する。
【００９６】
方  法
オスのルイス・ラット（体重：約１６０〜１８０ｇ；チャールス・リバーから購入；ミラノ；イタリア）を制御環境に収容し、標準的げっ歯類用食餌と水を与えた。
【００９７】
実験プロトコール
動物：
動物は以下のように６群（各群ｎ＝１０）に無作為に分けた：
（１）シャム群：ラットにＭ４０４０３ビークル（２６ｍＭ重炭酸ナトリウムバッファー、ｐＨ８.１〜８.３）を腹腔内（i.p.）投与した。
ＣＩＡ群：ラットを以下のようにＣＩＡに付した。
（２）ＣＩＡ単独：この群において、ラットは化合物ＡまたはＤＥＸでの処置を受けることなくＣＩＡに付された。
（３）ＣＩＡ＋Ｍ４０４０３：この群において、ＣＩＡに付されたラットは２５日目から開始して２４時間ごとにＭ４０４０３の２ｍｇ／ｋｇ（i.p.）で処置した。
（４）ＣＩＡ−ＤＥＸ０.０１：この群において、ＣＩＡに付されたラットは２５日目から開始して、デキサメタゾン０.０１ｍｇ／ｋｇで経口処置した。
（５）ＣＩＡ＋ＤＥＸ０.１：この群において、ＣＩＡに付されたラットは２５日目から開始して、デキサメタゾン０.１ｍｇ／ｋｇで経口処置した。
（６）ＣＩＡ＋ＤＥＸ＋Ｍ４０４０３：この群において、ＣＩＡに付されたラットは２５日目から開始して、デキサメタゾン（０.０１ｍｇ／ｋｇ、経口）およびＭ４０４０３（２ｍｇ／ｋｇ、i.p.）により処置した。
【００９８】
コラーゲン誘発関節炎の誘発
ウシII型コラーゲン（ＣII）を０.０１Ｍ酢酸に２ｍｇ／ｍｌの濃度で加え、４℃で一夜撹拌して溶解させた。溶解したＣIIを使用時まで−７０℃に凍結した。不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）は２ｍｇ／ｍｌ濃度に結核菌Ｈ３７Ｒａの添加により調製した。注射前に、ＣIIを等体積のＩＦＡで乳化した。コラーゲン誘発関節炎は前記どおりに誘発させた。１日目に、ルイス・ラットの尾部根部に１００μｌのエマルジョン（１００μｇのＣIIを含有）を注射した。２１日目に、２回目のＣII／ＩＦＡ注射を実施した。
【００９９】
ＣＩＡの臨床評価
ラットは関節炎について目視による採点システムにより毎日評価した：０＝関節炎の兆候なし；１＝足または１指の腫脹および／または発赤；２＝２ヶ所の関節に影響；３＝２ヶ所を超える関節に影響；および４＝足および指全体に重度の関節炎。各ラットについての関節炎指標は個々の足の４スコアを加えることによって計算した。臨床的重症度も足容積の変化を体積変動測定法により定量し、決定した（モデル７１４０；ウゴ・バシル）。
【０１００】
ニトロチロシン、ＰＡＲＳ、ＣＯＸ−２およびｉＮＯＳの免疫組織化学的局在化
３５日目に、関節器官を切り取り、脱石灰溶液に２４時間入れ、８μｍの切片をパラフィン包埋組織から調製した。脱パラフィン化した後、内在性ペルオキシダーゼを６０％メタノール中０.３％Ｈ２Ｏ２により３０分間失活させた。該切片をＰＢＳ中で０.１％トリトンＸ−１００により２０分間浸透させた。切片をリン酸緩衝塩溶液中２％正常ヤギ血清と２０分間インキュベートし、非特異吸着を最少とした。内在性のビオチンまたはアビジン結合部位をアビジンおよびビオチンと１５分間連続してインキュベーションすることによりブロックした。切片は、１）ｉＮＯＳに対する抗ウサギポリクローナル抗体（ＰＢＳ中１：１０００；ｖ／ｖ）（ＤＢＡ、ミラノ、イタリア）と、または２）抗ＣＯＸ−２ヤギポリクローナル抗体（ＰＢＳ中１：５００、ｖ／ｖ）と、または３）抗ニトロチロシンウサギポリクローナル抗体（ＰＢＳ中１：１０００、ｖ／ｖ）と、または４）抗ポリ（ＡＤＰ−リボース）ヤギポリクローナル抗体ラット（ＰＢＳ中１：５００、ｖ／ｖ）と一夜インキュベートした。対照はバッファーのみ、または非特異的精製ウサギＩｇＧとした。特異的標識はビオチン結合ヤギ抗ウサギＩｇＧ（ニトロチロシンおよびｉＮＯＳ用）により、またはビオチン結合ヤギ抗ウサギＩｇＧ（ＰＡＲＳおよびＣＯＸ−２用）とアビジン−ビオチンペルオキシダーゼ複合体により検出した。ニトロチロシンに対する免疫反応が特異的であることを確認するために、一部の切片を過剰のニトロチロシン（１０ｍＭ）の存在下に一次抗体とインキュベートし、結合の特異性を証明した。ＰＡＲＳ、ＣＯＸ−２およびｉＮＯＳに対しての結合特性を証明するために、一部の切片は一次抗体のみ（二次抗体なし）、または二次抗体のみ（一次抗体なし）でインキュベートした。これらの状況下、切片には陽性の染色が認められず、該免疫反応が、実施した実験すべてにおいて陽性であったことを示した。
【０１０１】
亜硝酸／硝酸（ＮＯｘ）の測定
亜硝酸／硝酸（ＮＯｘ）の血漿レベルはＮＯ合成の指標として測定した。簡単に説明すると、先ず上清中の硝酸塩を硝酸レダクターゼ（６７０ｍＵ／ｍｌ）とＮＡＤＰＨ（１６０μｍ）との室温３時間のインキュベーションにより亜硝酸塩に還元した。次いで、サンプル中の亜硝酸塩濃度をグリース（Griess）反応により、１００μｌのサンプルに１００μｌのグリース試薬（Ｈ２Ｏ中の０.１％ナフチルエチレンジアミドニ塩酸塩および５％濃厚Ｈ３ＰＯ４中の１％スルファニルアミド；１：１）を添加することにより測定した。５５ｎｍでの吸光度（ＯＤ５５０）をＥＬＩＳＡマイクロプレート・リーダー（ＳＬＴ−ラブインスツルーメント、ザルツブルク、オーストリア）で測定した。硝酸塩濃度はＤＭＥＮ標準溶液のＯＤ５５０との比較により計算した。
【０１０２】
マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）測定
血漿マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）レベルを脂質過酸化の指標として定量した。特定時間に採血した血漿部分（１００μｌ）を、２００μｌの８.１％ＳＤＳ、１５００μｌの２０％酢酸（ｐＨ３.５）、１５００μｌの０.８％チオバルビツール酸および７００μｌの蒸留水からなる混合物に加えた。次いで、サンプルを９５℃で１時間沸騰させ、３,０００×ｇにて１０分間遠心分離した。上清の吸光度を分光光度法により６５０ｎｍにて測定した。
【０１０３】
サイトカインの測定
ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１βレベルを関節炎誘発３５日後の血漿中で評価した。アッセイは比色定量市販キット（カルバイオケム−ノババイオケム・コーポレーション（Calbaiochem-Novabiochem Corporation）、ＵＳＡ）によって実施した。ＥＬＩＳＡの低値検出限界は５ｐｇ／ｍｌである。
【０１０４】
材  料
特に断りのない限り、化合物はすべてシグマ−アルドリッチ（Sigma-Aldrich）（株）（プール、ドーセット、ＵＫ）から入手した。チオペントンナトリウム（イントラバル・ソディウム（Intraval Sodium）、登録商標）はローン・メリュー（株）（Rhone Merieux Ltd.）（ハーロー、エセックス、ＵＫ）より入手した。ビオチン・ブロッキングキット、ビオチン結合ヤギ抗ウサギＩｇＧ、一次抗ニトロチロシン、抗ポリ（ＡＤＰ−リボース）シンセターゼ抗体、一次抗ｉＮＯＳ、抗ＣＯＸ−２およびアビジン−ビオチンペルオキシダーゼ複合体はＤＢＡ（ミラノ、イタリア）から入手した。その他の試薬類はすべて入手可能な最高の市販等級のものとした。保存液は非発熱原性塩溶液（０.９％ＮａＣｌ；バクスター・ヘルスケア（株）（Baxter Healthcare Ltd.）（セットフォード、ノースフォールド、ＵＫ）にて調製した。
【０１０５】
データ解析
データ解析：図および本文中の数値はすべて平均±標準誤差（ｎ回観察した平均の誤差、s.e.m.）にて表す。インビボでの検討では、ｎは検討した動物の数を示す。組織学または免疫組織化学に関る実験において示した図は異なる実験日に実施した少なくとも３回の実験の代表例である。データセットは分散のワンウエイおよびツーウエイ解析により試験し、次いで個々の群の平均をスチューデント不対ｔ検定で比較した。関節炎の検討ではマン−ホイットニーの検定（両側検定、独立）を用い、関節炎指標（５１）の中央値を比較した。インビトロでの検討値は発生率（％）または中央値として示す。ｐ値０.０５未満は有意と見なした。
【０１０６】
結  果
コラーゲン誘発関節炎発症における組合せ療法の効果
ＣIIで免疫したラットに急速に発症したＣＩＡおよび疾患の臨床兆候（関節周囲の発赤および浮腫）（図１Ａ）がチャレンジ後の２４日目と２６日目の間に後肢に先ず現れた。さらに、ＣＩＡの１００％発生がＣIIで免疫したラットに２８日目までに観察された。後肢の発赤と腫脹がその頻度と重症度において時間依存的に増大し、約１３を最大指標とする関節炎が免疫の２８〜３５日後に観察された（図１Ｂ）。低用量Ｍ４０４０３（２ｍｇ／ｋｇ、i.p.）またはＤＥＸ（０.０１ｍｇ／ｋｇ、p.o.）を投与した場合、ＣＩＡの発症と関節炎スコアが略１０〜２０％減弱した。高用量のＤＥＸ（０.１ｍｇ／ｋｇ）を投与したラットの最大発生率は４５％（図１Ａ、ｐ＜０.０１）であった。この高用量で、ＤＥＸ（０.１ｍｇ／ｋｇ）はＣII免疫の２６〜３５日後、関節炎指標の有意な抑制（ｐ＜０.０１）を示した（図１Ｂ）。換言すると、低用量０.０１ｍｇ／ｋｇのＤＥＸの有効性は、低用量のＭ４０４０３（２ｍｇ／ｋｇ）と共に投与した場合、０.１ｍｇ／ｋｇのＤＥＸの有効性に匹敵した。同様の結果は足の腫脹の観察においても観察された（図２）。
【０１０７】
サイトカイン産生と脂質過酸化の組合せ療法の効果
３５日目のＴＮＦ−αおよびＩＬ−１βのレベルは、ＣＩＡ処置ラットからの血漿において有意に上昇した（図３）。低用量のＤＥＸとＭ４０４０３（それぞれ、０.０１ｍｇ／ｋｇおよび２ｍｇ／ｋｇ）の組合せ剤で観察されるＴＮＦ−αとＩＬ−１βの阻害の程度は高用量（０.１ｍｇ／ｋｇ）のＤＥＸ単独で観察されたものと同等であった（図３）。同様の結果は脂質過酸化の指標としてＭＤＡの血漿レベルを評価した場合にも観察された（図４）。
【０１０８】
ニトロチロシン形成とＰＡＲＳ活性化
コラーゲンII型で処置したラットから得られた免疫組織化学分析および関節切片では、ニトロチロシンとＰＡＲＳでの陽性染色が明らかとなり、その染色は主として炎症細胞に局在化していた（図５Ｂおよび６Ｂ）。有意な防御作用はＤＥＸ（０.０１ｍｇ／ｋｇ）またはＭ４０４０３（２ｍｇ／ｋｇ）で処置した動物群に観察されなかった。対照的に、予め高用量のＤＥＸ単独（０.１ｍｇ／ｋｇ；図５Ｃおよび６Ｃ）または低用量ＤＥＸとＭ４０４０３との組合せ療法（０.０１ｍｇ／ｋｇ＋２ｍｇ／ｋｇのＭ４０４０３；図５Ｄおよび６Ｄ）でそれぞれ処置したＣＩＡ−処置ラットの関節には陽性のニトロチロシンまたはＰＡＲＳ染色を認めなかった。擬似手術ラットから得た関節でのニトロチロシンまたはＰＡＲＳでは染色がいずれにおいても認められなかった（図５Ａおよび６Ａ）。
【０１０９】
ＮＯ産生に対する組合せ療法の影響
３５日目のＮＯｘのレベルはＣＩＡ処置ラットからの血漿において有意に上昇した（図７）。高用量でのＤＥＸ（０.１ｍｇ／ｋｇ）または低用量のＤＥＸとＭ４０４０３との組合せ療法（それぞれ０.０１ｍｇ／ｋｇおよび２ｍｇ／ｋｇ）（図７）は同じ程度でＮＯｘを阻害した。
【０１１０】
ｉＮＯＳおよびＣＯＸ−２発現
コラーゲンII型で処置したラットから得た関節切片を免疫組織化学分析すると、ｉＮＯＳとＣＯＸ−２に対する陽性の染色が明らかとなり、その染色は主として炎症細胞に局在した（図８Ｂおよび９Ｂ）。対照的に、予め高用量のＤＥＸ単独（０.１ｍｇ／ｋｇ；図８Ｃおよび９Ｃ）または低用量ＤＥＸとＭ４０４０３との組合せ（それぞれ０.０１ｍｇ／ｋｇおよび２ｍｇ／ｋｇ；図８Ｄおよび９Ｄ）でそれぞれ処置したＣＩＡ−処置ラットの関節には陽性のｉＮＯＳまたはＣＯＸ−２染色を認めなかった。擬似手術ラットから得た関節ではｉＮＯＳまたはＣＯＸ−２に対してのの染色を観察しなかった（図８Ａおよび９Ａ）。ＤＥＸ（０.０１ｍｇ／ｋｇ）またはＭ４０４０３（２ｍｇ／ｋｇ）それ自体はｉＮＯＳまたはＣＯＸ−２の染色に影響しなかった。
【０１１１】
体重増加に対する影響
体重増加率と絶対量は、最初の１週間、シャム・ルイスラットおよびＣII免疫ラットに匹敵した（図１０）。２５日目からは、コラーゲン負荷ラットで正常ラットよりも有意に体重増加が少なく、この傾向は３５日目まで続いた。高用量のＤＥＸ（０.１ｍｇ／ｋｇ）または低用量ＤＥＸとＭ４０４０３との組合せ（それぞれ０.０１ｍｇ／ｋｇおよび２ｍｇ／ｋｇのＭ４０４０３）で処置したラットではその体重増加率がシャムラットで観察されたものと同等であった（図１０）。低用量のＤＥＸ（０.０１ｍｇ／ｋｇ）またはＭ４０４０３（２ｍｇ／ｋｇ）で処置したラットは、ＣＩＡラットと同様の様式で体重が増加した（図１０）。
【実施例２】
【０１１２】
反応性酸素種と反応したデキサメタゾンとコルチゾールの脱アセチル化産物の使用の生物学的作用
目的：２種の化合物を研究開始のためのモデル糖質コルチコイド（デキサメタゾンおよびコルチゾール）として選定した。これらはプロトン性溶媒中過剰のカリウムスーパーオキシドと反応して、精製後にそれぞれのＣ−１７脱アセチル化産物を得た。
【０１１３】
方法：次いで、これら産物の生物学的作用をＲＡＷマクロファージ細胞株および全血アッセイ法を用い、インビトロで試験した。ＲＡＷ細胞はＬＰＳに応答してｉＮＯＳとＣＯＸ−２を誘導すること、またＴＮＦ−αの放出を顕著に高めることが知られている。事実、デキサメタゾンは、図１１に示すように、用量依存的にＬＰＳ−刺激ＴＮＦ−αを阻害する。
図１１はＭ４０４０１と命名した抗酸化剤、ＳＯＤミミックをＬＰＳ処置ＲＡＷ細胞に投与したときにデキサメタゾンの効果を高めることを示す。
【０１１４】
顕著なことは、スーパーオキシドジスムターゼ・ミミック（Ｍ４０４０１）がサイトカインを阻害するそれ自体の能力を下回る十分な濃度で存在すると、デキサメタゾンの能力が大きく上昇してＴＮＦ−αを阻害することである。このことはＬＰＳ活性化マクロファージが有意な量のフリーラジカル（例えば、スーパーオキシドと酸化窒素）を放出して、それが次いでデキサメタゾンの能力に影響して抗炎症作用を示すということを示唆する。従って、フリーラジカルにより不活性化された糖質コルチコイドは、インビトロまたはインビボのアッセイにおいて、酸化窒素、プロスタグランジン、またはＴＮＦ−αの産生を低下させるとは期待し得ない。事実、デキサメタゾンとスーパーオキシドとの反応から得られた酸化産物は、ＴＮＦ−αのその産生阻害能力を試験すると、図１２に示すように活性を示さないことが判明した。
【０１１５】
過去二三十年にわたり、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）の分野で相当の努力がなされ、成功を収めている。ＮＳＡＩＤ（酸化窒素シンターゼインヒビターおよびＴＮＦ抗体を含む）はその抗炎症性作用が糖質コルチコイドよりも炎症カスケードをさらに低下させるように働き、また一般にその副作用はより少なく、小さい。しかし、糖質コルチコイドは最も強力な抗炎症性薬であることがすでに判っていた。もし糖質コルチコイドがデキサメタゾンと同等の抗炎症作用を示しながら、その副作用は減少したものとして製造できるならば、その場合、炎症はカスケードの源で影響を受けることとなる。ＳＯＤミミックとコルチコステロイドとの組合せ療法の使用は、炎症において低用量のコルチコステロイドを使用し得るので、副作用の減少したコルチコステロイドの効率的な治療法となる。
【実施例３】
【０１１６】
カラゲニン誘発足浮腫におけるデキサメタゾンとＦｅＴＭＰＳの作用
方  法：
デキサメタゾンはカラゲニン投与の１時間前に洗浄により投与した。ＦｅＴＭＰＳ（１ｍｇ／ｋｇ）はカラゲニン投与の１５分前に静脈内投与した。体重２００〜２１０ｇのオス・スプラグ−ドーリー系ラットを使用した。足の浮腫は６時間モニターした。結果は
基底からのデルタ変化を表す。各数値は１群あたりｎ＝４ラットについての平均±s.e.m.である。
【０１１７】
結  果
図１３および下記の表２から分かるように、低用量ＦｅＴＭＰＳ（１ｍｇ／ｋｇ）は、低用量のデキサメタゾン（０.１ｍｇ／ｋｇ）と組合わせた場合、デキサメタゾンの作用を増強する。該化合物と低用量のデキサメタゾン（０.１ｍｇ／ｋｇ）との組合わせは、デキサメタゾンの３ｍｇ／ｋｇ用量と同様の効果を示す。
【０１１８】
表２：ＦｅＴＭＰＳとデキサメタゾンとの効果
【表２】
2005519852.tif 000008
【０１１９】
上記のように、本発明の幾つかの目的が達成され、他の有利な結果が得られることが分かる。
【図面の簡単な説明】
【０１２０】
本発明のこれらの特徴および他の特徴、側面、および利点は添付の図面からもよりよく理解されよう。
【図１】コラーゲン誘発関節炎の発症に対する組合せ療法（デキサメタゾン（ＤＥＸ）０.０１ｍｇ／ｋｇ＋Ｍ４０４０３ ２ｍｇ／ｋｇ）の影響。関節炎ラットのパーセント（関節炎の臨床スコアを示すラット）をパネル（Ａ）に示す。コラーゲン誘発関節炎の際の５０％関節炎スコアをパネル（Ｂ）に示す。値は各群１０匹の平均値±平均の標準誤差（s.e.m.）である。対照に対し＊ｐ＜０.０１。ＣＩＡに対しｏｐ＜０.０１。
【図２】足膨潤に対する組合せ療法（ＤＥＸ ０.０１ｍｇ／ｋｇ＋Ｍ４０４０３ ２ｍｇ／ｋｇ）の影響。値は各群１０匹の平均値±s.e.m. である。対照に対し＊ｐ＜０.０１。ＣＩＡに対しｏｐ＜０.０１。
【図３】ＴＮＦ−α（Ａ）およびＩＬ−１β（Ｂ）の血漿レベル。ＤＥＸ（０.１ｍｇ／ｋｇ）または組合せ療法（ＤＥＸ０.０１ｍｇ／ｋｇ＋Ｍ４０４０３ ２ｍｇ／ｋｇ）を受けたラットの血漿ではサイトカインレベルが有意に低下した。値は各群１０匹の平均値±平均の標準誤差（s.e.m.）である。シャムに対し＊ｐ＜０.０１。ＣＩＡに対しｏｐ＜０.０１。
【図４】血漿中マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）レベルに対する組合せ療法（ＤＥＸ０.０１ｍｇ／ｋｇ＋Ｍ４０４０３ ２ｍｇ／ｋｇ）の影響：３５日目に殺したＣII−免疫ラットの血漿中ＭＤＡレベル。ＭＤＡレベルはシャムラットに比較してＣII−免疫ラットの血漿中有意に増大した（＊ｐ＜０.０１）。ＤＥＸ（０.１ｍｇ／ｋｇ）または組合せ療法（ＤＥＸ０.０１ｍｇ／ｋｇ＋Ｍ４０４０３ ２ｍｇ／ｋｇ）はＭＤＡレベルにおけるＣＩＡ増加を減少させた。値は各群１０匹の平均値±平均の標準誤差（s.e.m.）である。シャムに対し＊ｐ＜０.０１。ＣＩＡに対しｏｐ＜０.０１。
【図５】対照ラットの足（Ａ）とコラーゲン誘発関節炎の３５日目ラットの足（Ｂ）のニトロチロシン免疫染色。ニトロチロシン染色の顕著な増大が関節炎の足に明瞭である。ＤＥＸ（０.１ｍｇ／ｋｇ）（Ｃ）によりまたは組合せ療法（ＤＥＸ０.０１ｍｇ／ｋｇ＋Ｍ４０４０３ ２ｍｇ／ｋｇ）（Ｄ）により処置したラットの足の免疫染色には顕著な減少があた。当初倍率：×１２５。図は異なる実験日に実施した少なくとも３回の実験の代表である。
【図６】ＰＡＲＳ活性に対する組合せ療法（ＤＥＸ０.０１ｍｇ／ｋｇ＋Ｍ４０４０３ ２ｍｇ／ｋｇ）の影響：染色は対照組織（Ａ）には存在しなかった。コラーゲン誘発関節炎の３５日目、ＰＡＲＳの免疫反応性がＣII−免疫ラットの足（Ｂ）に存在した。ＤＥＸ（０.１ｍｇ／ｋｇ）（Ｃ）により処理したラットの足の免疫染色には顕著な減少があり、組合せ療法（ＤＥＸ０.０１ｍｇ／ｋｇ＋Ｍ４０４０３ ２ｍｇ／ｋｇ）（Ｄ）では陽性の染色を認めなかった。当初倍率：×Ｘ１２５。図は異なる実験日に実施した少なくとも３回の実験の代表である。
【図７】亜硝酸／硝酸（ＮＯｘ）の血漿レベル。ＮＯｘレベルはＤＥＸ（０.１ｍｇ／ｋｇ）または組合せ療法（ＤＥＸ０.０１ｍｇ／ｋｇ＋Ｍ４０４０３ ２ｍｇ／ｋｇ）を受けたラットの血漿において有意に低下した。値は各群１０匹の平均値±s.e.m.である。シャムに対し＊ｐ＜０.０１。ＣＩＡに対しｏｐ＜０.０１。
【図８】対照ラットの足（Ａ）とコラーゲン誘発関節炎３５日目のラットの足（Ｂ）における誘発性一酸化窒素シンターゼ（ｉＮＯＳ）免疫染色。ｉＮＯＳ染色において顕著な増大が関節炎に罹患した足に明瞭である。ＤＥＸ（０.１ｍｇ／ｋｇ）（Ｃ）または組合せ療法（ＤＥＸ０.０１ｍｇ／ｋｇ＋Ｍ４０４０３ ２ｍｇ／ｋｇ）（Ｄ）で処置したラットの足の免疫染色では顕著な減少があった。当初倍率：×１２５。図は異なる実験日に実施した少なくとも３回の実験の代表である。
【図９】ＣＯＸ−２発現に対する組合せ療法（ＤＥＸ０.０１ｍｇ／ｋｇ＋Ｍ４０４０３ ２ｍｇ／ｋｇ）の影響：染色は対照組織（Ａ）には存在しなかった。コラーゲン誘発関節炎の３５日目、ＣＯＸ−２の免疫反応性がＣII−免疫ラットの足（Ｂ）に存在した。ＤＥＸ（０.１ｍｇ／ｋｇ）（Ｃ）または組合せ療法（ＤＥＸ０.０１ｍｇ／ｋｇ＋Ｍ４０４０３ ２ｍｇ／ｋｇ）（Ｄ）を受けたラットの足には陽性の染色を認めなかった。当初倍率：×１２５。図は異なる実験日に実施した少なくとも３回の実験の代表である。
【図１０】体重増加に対する組合せ療法（ＤＥＸ０.０１ｍｇ／ｋｇ＋Ｍ４０４０３ ２ｍｇ／ｋｇ）の影響。２５日目に開始した場合、コラーゲン負荷ラットまたはＤＥＸ（０.１ｍｇ／ｋｇ）もしくはＭ４０４０３（２ｍｇ／ｋｇ）単独低用量で処置したラットは、正常ラットよりも体重増加が有意に少なく、この傾向は３５日目まで続いた。他方、ＤＥＸの高用量で試験（０.１ｍｇ／ｋｇ）した場合、または低用量ＤＥＸとＭ４０４０３（それぞれ、０.０１ｍｇ／ｋｇ＋２ｍｇ／ｋｇ）の組合せの場合、シャム動物と同様に体重が増加した。値は各群１０匹の平均値±s.e.m.である。対照に対し＊ｐ＜０.０１。ＣＩＡに対しｏｐ＜０.０１。
【図１１】この図は、ＬＰＳ処理ＲＡＷ細胞におけるＬＰＳ刺激ＴＮＦ−αに対する組合せ療法（表示μＭのＤＥＸ＋３０μＭのＭ４０４０１）の影響を示す。
【図１２】この図は、ＴＮＦ−α産生を阻害する能力についてインビトロで試験したデキサメタゾンとスーパーオキシドとの反応から得られた酸化産物の影響を示す。図は酸化産物がＴＮＦ−αに活性をもたないことを示す。
【図１３】この図は、カラゲナン誘発足浮腫におけるデキサメタゾンとＦｅＴＭＰＳ（５,１０,１５,２０−テトラキス（２,４,６−トリメチル−３,５−ジスルホナトフェニル）ポルフィリナト鉄（III））の影響を示す。結果は、ＦｅＴＭＰＳが低用量（１ｍｇ／ｋｇ）（注：ｍｇ／ｋｇはｍｐｋとも表す）でデキサメタゾンの低用量（０.１ｍｇ／ｋｇ）と組合わせた場合、デキサメタゾンの作用を上昇させ、その組合せ投与がデキサメタゾン３ｍｇ／ｋｇの高用量投与と等価になる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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