(57)【要約】  セファロスポリン化合物の抗菌性アルカリ金属塩を含有する処方物、およびイヌおよびネコの細菌感染を治療または予防する方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
組成物が５.０〜８.０の範囲のｐＨを有する、式Ｉ：
【化１】
2005511642.tif 000023
（式中、Ｍ+はＮａ+、Ｋ+またはＬｉ+である）の化合物および水性希釈剤を含む、医薬組成物。
【請求項２】
Ｍ+がＮａ+であり、そしてｐＨが６.０〜７.５である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
選択自由な製薬上許容される緩衝剤、選択自由な製薬上許容される保存剤、選択自由な製薬上許容される増量剤、および水性希釈剤をさらに含む、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
式Ｉ：
【化２】
2005511642.tif 000024
（式中、Ｍ+はＮａ+、Ｋ+またはＬｉ+である）の化合物、水性希釈剤および製薬上許容される増量剤を含み、そして組成物が１.０を超えて１００未満の増量剤／式Ｉの化合物の比を有する、医薬組成物。
【請求項５】
組成物が１を超えて１０未満の増量剤／式Ｉの化合物の比を有する、請求項１〜４の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項６】
増量剤がショ糖であり、そして組成物が３のショ糖／式Ｉの化合物の比を有する、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
選択自由な製薬上許容される緩衝剤、選択自由な製薬上許容される保存剤、および水性希釈剤をさらに含む、請求項４、５または６の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項８】
保存剤がメチルパラベン、プロピルパラベン、ｍ−クレゾール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウムまたはベンジルアルコール、またはその２種またはそれ以上の組み合わせである、請求項１〜７の何れかに記載の医薬組成物。
【請求項９】
保存剤が、（ａ）メチルパラベン、プロピルパラベンおよびベンジルアルコール；または（ｂ）メチルパラベンおよびｍ−クレゾールの何れか一方の組み合わせである、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
請求項１〜９の何れかに記載の医薬組成物の凍結乾燥により製造された式Ｉの化合物を含む医薬組成物。
【請求項１１】
イヌおよびネコにおける細菌感染に起因する状態の治療または予防に有効である式Ｉ：
【化３】
2005511642.tif 000025
（式中、Ｍ+はＮａ+、Ｋ+またはＬｉ+である）の化合物の治療有効量をイヌまたはネコに投与することを含む、上記状態を治療または予防する方法。
【請求項１２】
Ｍ+がＮａ+である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１〜１０に記載の医薬組成物の治療有効量をイヌまたはネコに投与することを含む、イヌおよびネコにおける細菌感染に起因する状態を治療または予防する方法。
【請求項１４】
状態が皮膚、軟組織または尿路の細菌感染である、請求項１１〜１３に記載の方法。
【請求項１５】
状態または感染がグラム陽性菌またはグラム陰性菌に起因するか、またはそれらが合併したものである、請求項１１〜１４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、セファロスポリン化合物の抗菌性アルカリ金属塩、すなわちＭ+がカチオンＮａ+、Ｋ+またはＬｉ+である化合物Ｉ（以下、「化合物Ｉ」という）を含有する安定な凍結乾燥した処方物に関する。特に、本発明は、Ｍ+がＮａ+である化合物Ｉ、すなわち（６Ｒ,７Ｒ）−７−［［（２Ｚ）−（２−アミノ−４−チアゾリル）（メトキシイミノ）アセチル］アミノ］−８−オキソ−３−［（２Ｓ）−テトラヒドロ−２−フラニル］−５−チア−１−アザビシクロ［４.２.０］オクタ−２−エン−２−カルボン酸の一ナトリウム塩の、安定な凍結乾燥した処方物に関する。本発明はまた化合物Ｉの水性の処方物に関する。
【化１】
2005511642.tif 000002
【０００２】
本発明はまた、式Ｉの化合物を投与することによる、イヌおよびネコの細菌感染の治療方法に向けられる。
【背景技術】
【０００３】
セファロスポリンは広く用いられており、そして治療上重要な抗生物質である。式Ｉの化合物は広域スペクトルのセファロスポリン抗菌剤であり、従って動物の細菌感染の治療に有用である。（米国特許第６,０２０,３２９号、第１欄、第１３〜１４行）。特に、化合物Ｉは、皮膚、軟組織、歯周膜および尿路の細菌感染の治療に対する適応症を有するイヌおよびネコを標的としている。
【０００４】
Ｍ+がＮａ+である化合物Ｉおよびその調製物は、米国特許第６,００１,９９７号、６,０２０,３２９号および６,０７７,９５２号に開示されている。上記特許の本文および本明細書で引用する他の全ての文献は、それらの全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０００５】
しかしながら、セファロスポリン処方物は一般的に不安定であり、そして特にｐＨの調節、結晶化、凍結乾燥、および糖のような安定剤の添加を包含し、安定性を高めるための種々の異なる方法がある。
【０００６】
セファロスポリンは一定のｐＨ範囲内で幾分安定化できる。最適ｐＨ範囲は広く変動し、そして異なるクラスのセファロスポリンについては予測できず、実験および安定性試験を必要とする。例えば、Ｎａｓｓａｒら、米国特許第５,４０１,８４２号は、オルトリン酸三ナトリウム、重炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、Ｎ−メチル−グルカミンおよびＬ(＋)アルギニンを用いてｐＨ３.５〜７.０に緩衝した結晶性セフェピム（ｃｅｆｅｐｉｍｅ）塩の処方物を開示した。
【０００７】
Ｋ.Ａ.Ｃｏｎｎｅｒｓらは、セファロンチンがｐＨ２〜８の広い安定性範囲を有することを開示した。しかしながら、セファラジンはもっと酸性のｐＨ１〜５で安定化する。セホタキシムの安定性はｐＨ３〜７の範囲で得られる（K. A. Connersら，Chemical Stability of Pharmaceuticals, John Wiley & Sons, New York, 1986, p305）。
【０００８】
若干の場合、セファロスポリン処方物は結晶化および凍結乾燥によって安定化された。例えば、Ｇｏｔｓｃｈｉ、米国特許第５,１３８,０６６号は、非経口的投与のための処方物を、水または等張性食塩水のような製薬担体で希釈するための凍結乾燥物または乾燥粉末として記載している。
【０００９】
Ｂｏｒｎｓｔｅｉｎら、米国特許第４,００２,７４８号は、一定の凍結乾燥技術を利用して、本質的に無定形（非晶質）のセファゾリンを製造する方法を開示しており、その一方で、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙ、ＥＰ  ０３２７３６４は、１−カルバセファロスポリンの結晶性溶媒和物の処方物を製造する凍結乾燥方法を記載している。
【００１０】
若干のセファロスポリンは種々の異なる糖の添加によって安定化できる。しかしながら、ある糖が特定のセファロスポリンを安定化するかどうかは予測できない。さらに、最適安定性を得るための糖とセファロスポリンとの比も予測できない。例えば、Ｓｈａｍｂｌｉｎらは、ショ糖と共に凍結乾燥したときに、無定形セフォキシチンナトリウムの安定性が２倍だけ改善されたことを開示している。しかしながら、トレハロースと共に凍結乾燥したときに、セフォキシチンの安定性は影響されなかった。S. L. Shamblin, B. C. Hancock, M. J. Pikal, The Chemical Stability of Amorphous Cefoxitin Sodium in the Presence of Glassy Stabilizers, AAPS Pharm. Sci. Vol. I, Issue 4, 1999。
【００１１】
同様に、Ｓｈｉｍａら、ＥＰ  ０１３４５６８Ｂ１は、糖（グルコース、フルクトースまたはマルトース）または無機酸もしくはカルボン酸のアルカリ金属塩が、特定の凍結乾燥したセファロスポリンを０.０１：１〜０.５：１の安定剤：セファロスポリンの重量比で安定化したことを開示している。しかしながら、マンニトールは記載されたセファロスポン化合物の安定化に有効ではなかった。
【００１２】
同様に、Ａｌｍａｒｓｓｏｎら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ５６（２０００）６８７７−６８５５は、ショ糖がベータ−ラクタム化合物の化学的安定性を０.１：１〜０.５：１のショ糖／薬剤の比で改善したことを開示している。
【００１３】
Ｙｏｓｈｉｏｋａ，Ｙら、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１７（２０００）、９２５−９２９は、２００：１のデキストラン／セファロチンの比でデキストランが存在する場合のセファロチンの安定性を開示している。
【００１４】
逆に、Ｈｉｒａｉら、米国特許第４,４１８,０５８号は、種々の異なる糖または糖アルコールの１：１を超える過剰量が、セファロスポリンの化学的安定性に有害に作用したことを開示している。しかしながら、糖または糖アルコールの添加量が０.１〜１の糖／セファロスポリンであった場合に良好な結果が得られた。
【００１５】
その結果、特定の糖を特定のセファロスポリンに添加すると安定性が得られるかどうかは、当業者であろうとも、一般的に予測することができない。さらに、糖：セファロスポリンの最適比も極めて変動しやすく、かつ実験しないことには予測できない。そのうえ、上記で論じたように、特定のセファロスポリンのための安定性の最適ｐＨ範囲も、予測できない。
【００１６】
化合物Ｉの投与方法は非経口的投与による。他の投与方式は経口および局所投与を包含する。（米国特許第６,０２０,３２９号、第１５欄、第１〜２行）。化合物Ｉは、固体および水溶液の両者として不安定である。さらに、化合物Ｉは吸湿性である。その結果、化合物Ｉを安定化するための処方物および方法は、当技術に有用なものを追加することになるであろう。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１７】
第一の態様において、本発明は、組成物が５.０〜８.０の範囲のｐＨを有する、式Ｉの化合物
【化２】
2005511642.tif 000003
（式中、Ｍ+はＮａ+、Ｋ+またはＬｉ+である）、および水性希釈剤を含む、医薬組成物を提供する。
【００１８】
好ましい実施態様において、式Ｉの化合物は、無定形の（６Ｒ,７Ｒ）−７−［［（２Ｚ）−（２−アミノ−４−チアゾリル）（メトキシイミノ）アセチル］アミノ］−８−オキソ−３−［（２Ｓ）−テトラヒドロ−２−フラニル］−５−チア−１−アザビシクロ［４.２.０］オクタ−２−エン−２−カルボン酸の一ナトリウム塩である。
【００１９】
好ましい実施態様において、Ｍ+はＮａ+であり、そしてｐＨは６.０〜７.５である。
好ましい実施態様において、医薬組成物は製薬上許容される緩衝剤をさらに含む。
【００２０】
より好ましい実施態様において、緩衝剤は炭酸塩、リン酸塩、クエン酸塩または酢酸塩であり、そしてｐＨは６.０〜７.５の範囲内にある。
好ましい実施態様において、医薬組成物は製薬上許容される増量剤をさらに含む。
より好ましい実施態様において、増量剤は糖、多価アルコール、アミノ酸、重合体、多糖または無機塩から選択される。
【００２１】
好ましい実施態様において、糖はグルコース、マルトース、ショ糖およびラクトースから選択され；多価アルコールはソルビトールまたはマンニトールであり；アミノ酸はグリシンであり；重合体はポリビニルピロリドンであり；多糖はデキストランであり；そして無機塩はリン酸ナトリウムもしくはカリウムまたは塩化ナトリウムである。
【００２２】
好ましい実施態様において、組成物は１.０を超えて１００未満の増量剤／式Ｉの化合物の比を有する。
好ましい実施態様において、上記の比が１超えて１０未満である。
より好ましい実施態様において、増量剤はショ糖であり、そして組成物は３のショ糖／式Ｉの化合物の比を有する。
【００２３】
別の態様において、本発明は、式Ｉの化合物
【化３】
2005511642.tif 000004
（式中、Ｍ+はＮａ+、Ｋ+またはＬｉ+である）、水性希釈剤および製薬上許容される増量剤を含む医薬組成物に向けられる。
【００２４】
好ましい実施態様において、増量剤は糖、多価アルコール、アミノ酸、重合体、多糖または無機塩から選択される。
より好ましい実施態様において、糖はグルコース、マルトース、ショ糖またはラクトースから選択され；多価アルコールはソルビトールまたはマンニトールであり；アミノ酸はグリシンであり；重合体はポリビニルピロリドンであり；多糖はデキストランであり；そして無機塩はリン酸ナトリウムもしくはカリウムまたは塩化ナトリウムである。
【００２５】
別の実施態様において、組成物は１を超えて１０未満の増量剤／式Ｉの化合物の比を有する。
好ましい実施態様において、Ｍ+はＮａ+であり、そして増量剤はショ糖であり、ここで、組成物は３のショ糖／式Ｉの化合物の比を有する。
好ましい実施態様において、医薬組成物は製薬上許容される緩衝剤をさらに含む。
好ましい実施態様において、医薬組成物は製薬上許容される保存剤をさらに含む。
【００２６】
より好ましい実施態様において、保存剤はメチルパラベン、プロピルパラベン、ｍ−クレゾール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウムまたはベンジルアルコール、またはその２種またはそれ以上の組み合わせである。
【００２７】
より好ましい実施態様において、保存剤は、（ａ）メチルパラベン、プロピルパラベンおよびベンジルアルコール；または（ｂ）メチルパラベンおよびｍ−クレゾールの何れか一方の組み合わせである。
【００２８】
別の実施態様において、医薬組成物はクエン酸塩緩衝剤を含む。
別の態様において、本発明は、式Ｉの化合物
【化４】
2005511642.tif 000005
（式中、Ｍ+はＮａ+である）を含み、選択自由な製薬上許容される緩衝剤、選択自由な製薬上許容される保存剤、選択自由な製薬上許容される増量剤、および水性希釈剤をさらに含み、ここで、組成物が６.０〜７.５のｐＨを有する、医薬組成物に向けられる。
【００２９】
好ましい実施態様において、緩衝剤はクエン酸塩であり；保存剤はメチルパラベン、プロピルパラベン、ｍ−クレゾール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウムまたはベンジルアルコール、またはその２種またはそれ以上の組み合わせであり；そして選択自由な増量剤はショ糖である。
【００３０】
好ましい実施態様において、医薬組成物は、上記の医薬組成物の凍結乾燥により製造された式Ｉの化合物を含む。
【００３１】
別の態様において、本発明は、
ａ）式Ｉの化合物
【化５】
2005511642.tif 000006
を含む凍結乾燥した医薬組成物の治療有効量；
ｂ）水性の製薬上許容される希釈剤；および
ｃ）組成物(１)および希釈剤(２)を入れるための第一および第二の容器手段（ここで、第一容器は第二容器から希釈剤を受け入れるために適合している）
を含むキットに向けられる。
【００３２】
別の態様において、本発明は、イヌおよびネコにおける細菌感染に起因する状態の治療または予防に有効である式Ｉの化合物
【化６】
2005511642.tif 000007
の治療有効量を投与することを含む、上記状態を治療または予防する方法に向けられる。
【００３３】
別の態様において、本発明は、上記の組成物の治療有効量を投与することを含む、イヌおよびネコにおける細菌感染に起因する状態を治療または予防する方法に向けられる。
【００３４】
一つの実施態様において、状態は皮膚、軟組織または尿路の感染である。
別の実施態様において、状態または感染はグラム陽性菌またはグラム陰性菌に起因するか、またはそれらが合併したものである。
【００３５】
本明細書で用いられる「約」という用語は、指定した上限および下限のｐＨ単位より０.５だけ上または下のｐＨと定義される。
【００３６】
「水性の製薬上許容される希釈剤」という用語は、水、または本発明の組成物の製造に
用いられる１種または２種以上の製薬上許容される賦形剤を含有する他の製薬上許容される水溶液（例えば、塩化ナトリウムの等張性溶液、エタノールまたはリン酸塩を含む注射用水、酢酸塩またはクエン酸塩を含む緩衝液、およびベンジルアルコールを含む注射用水）を意味する。
【００３７】
本明細書で用いられる「Ｎａ+」という用語は、ナトリウムカチオンと定義される。
【００３８】
本明細書で用いられる［Ｋ+］という用語は、カリウムカチオンと定義される。
【００３９】
本明細書で用いられる［Ｌｉ+］という用語は、リチウムカチオンと定義される。
【００４０】
本明細書で用いられる「組成物」という用語は、特に、(１)化合物Ｉを含有する溶液、または(２)このような溶液を凍結乾燥した乾燥状態の残留物を包含する。溶液は、溶解した化合物Ｉの安定化を補助し、そして／または溶液(１)の凍結乾燥後に生じた凍結乾燥物を再構築する際の再溶解を促進する、１種または２種以上の選択自由な作用物質を含有することができる。このような選択自由な作用物質は、特に、本明細書でさらに開示する増量剤、保存剤および緩衝剤を包含する。
【００４１】
「化合物Ｉ」という用語は、Ｍ+がＮａ+、Ｋ+またはＬｉ+である化合物Ｉの製薬上許容されるアルカリ金属塩に限られ、そして特に、Ｍ+がＮａ+である化合物Ｉ、すなわち（６Ｒ,７Ｒ）−７−［［（２Ｚ）−（２−アミノ−４−チアゾリル）（メトキシイミノ）アセチル］アミノ］−８−オキソ−３−［（２Ｓ）−テトラヒドロ−２−フラニル］−５−チア−１−アザビシクロ［４.２.０］オクタ−２−エン−２−カルボン酸の一ナトリウム塩を包含する。
【００４２】
「凍結乾燥」という用語は、当技術で公知の、組成物をフリーズドライする方法を意味する。「凍結乾燥した」または「フリーズドライした」は、本明細書で同義語として用いられる。
【００４３】
「製薬上の」または「製薬上」などの用語は、ヒトおよび獣医学の分野の両方における適用を指すことを意味する。
【００４４】
化合物Ｉは、哺乳類、特にイヌおよびネコを標的とした広域スペクトルのセファロスポリンである。Ｍ+がＮａ+である（以下、「ナトリウム塩」という）化合物Ｉの製造は、米国特許第６,００１,９９７号、６,０２０,３２９号、６,０７７,９５２号ならびにＥＰ  １１７８０４９Ａ１に記載されており；それらの全体は参照により本明細書に組み入れられる。式Ｉの化合物のＫ+およびＬｉ+塩は、化合物Ｉのナトリウム塩の製造に記載されたようにして、ただし適切のＫ+またはＬｉ+塩に置き換えて、当業者が製造することができる。
【００４５】
本発明の抗生化合物は、グラム陰性微生物（例えば大腸菌）およびグラム陽性微生物（例えば黄色ブドウ球菌）の両方を包含する広範囲の微生物に対して活性である（米国特許第６,０２０,３２９号、第１７欄、第２８〜３１行）。化合物Ｉは、特に皮膚、軟組織および尿路の細菌感染の治療に使用できる。例えば、グラム陽性菌および／またはグラム陰性菌に起因するか、またはそれらが合併した状態または感染は、以下のものである：ブドウ球菌属の種（スタフィロコッカス・インターメディウス、黄色ブドウ球菌）、大腸菌、レンサ球菌属の種（ベータ溶血性レンサ球菌属の種）、パスツレラ・ムルトシダ、バクテリオデス属の種、フゾバクテリウム属の種、ポリフィロモナス属の種、プレボテラ属の種、ペプトレンサ球菌属の種およびクロストリジウム属の種による感染に関連するイヌ肺炎、ネコ肺炎、イヌ膿皮症、ネコ膿皮症、パスツレラ症、肺炎、中耳炎、副鼻腔炎、気管支炎、扁桃炎および乳突炎；黄色ブドウ球菌、スタフィロコッカス・インターメディウス、コアグラーゼ陽性ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、溶血性ブドウ球菌、レンサ球菌属の種、Ｃ〜Ｆ群レンサ球菌（微小コロニーレンサ球菌）、ビリダンスレンサ球菌による感染に関連する非合併症の皮膚および軟組織感染、膿瘍、骨髄炎および産褥熱；ブドウ球菌属の種又は大腸菌による感染に関連する非合併症の急性尿路感染；ビリダンスレンサ球菌による感染に関連する歯牙発生感染；大腸菌による感染に関連するイヌおよびネコの尿路感染；表皮ブドウ球菌、スタフィロコッカス・インターメディウス、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌又はパスツレラ・ムルトシダによる感染に関連するイヌおよびネコの皮膚および軟組織感染；アルカリゲネス属の種、バクテロイデス属の種、クロストリジウム属の種、エンテロバクター属の種、ユウバクテリウム属、ペプトレンサ球菌属、ポリフィロモナス属またはプレボテラ属による感染に関連するイヌおよびネコの口腔感染。
【００４６】
式Ｉの化合物、ならびに米国特許第６,００１,９９７号、６,０２０,３２９号および６,０７７,９５２号に記載の化合物は、特に、匹敵する抗生物質を考慮して、イヌおよびネコにおいて予想外に長い半減期を示すことを確認した。例えば、表１に、マウス、ラット、イヌおよびネコのような異なる哺乳類における周知の抗生物質およびそれら個々の半減期をリストする。
【００４７】
【表１】
2005511642.tif 000008
【００４８】
式Ｉの化合物を包含する多数のセファロスポリン誘導体は、国際特許出願公開番号ＷＯ
９２／０１６９６およびＢａｓｔｅｓｏｎらのＴｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、１９９４年２月、第４７巻、２号、２５３−２５６頁に開示された。種々のマウスのデータも後者の論文に開示されている。これらの刊行物の両者はそれらの全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【００４９】
特に、式IIの化合物を投与したのち、マウスおよびラットにおける半減期は、経口投与後にそれぞれ２.２および３.９時間と決定された。しかしながら、意外にも、イヌおよびネコにおける半減期は、両方の場合に、下記の表IIに示すように劇的に増加した。
【化７】
2005511642.tif 000009
【００５０】
【表２】
2005511642.tif 000010
【００５１】
実験の詳細
ａ．薬物動態
実験１：静脈内イヌ
雄イヌに化合物Ｉの水溶液を静脈内に投与した。投与後２８日までの時点で血漿をサンプリングした。血漿サンプルを抽出し、下記のようにバイオアッセイおよびＨＰＬＣの両方によりアッセイして濃度を決定した：
【００５２】
血漿（またはスパイクしたイヌ血漿の標準物）１mLを塩酸で３未満のｐＨに酸性化し、次いで酢酸エチル２６mLと共に振盪した。遠心により層を分離した。有機層２２mLを新しい容器に移し、２.０mLの０.１Ｍリン酸塩緩衝液、ｐＨ７.０を加えた。振盪して遠心したのち、水相を回収し、アッセイした。処理に続いて、サンプル（および標準物）を、Ｍ．ｌｕｔｅｕｓを接種した大きなプレート（２００mLのＭｕｅｌｌｅｒ  Ｈｉｎｔｏｎ寒天）上で、ホール−イン−ザ−プレート微生物学的バイオアッセイによりアッセイした。また、サンプルをＨＰＬＣによりアッセイした（μＢｏｎｄｐａｋ−Ｃ１８カラム、アセトニトリル−０.０５Ｍ酢酸ナトリウムｐＨ５.０、１５：８５で溶出、２５６nmでＵＶ検出）。二つのアッセイ方法間に良好な一致が得られ、標準的薬物動態方法を用いてバイオアッセイ結果から半減期を計算した。
【００５３】
実験２：皮下イヌ
２匹のイヌに式Ｉの化合物を皮下注射により投与した。投与後２８日までの時点で血漿をサンプリングした。血漿サンプルおよび適切な標準物を、等体積のアセトニトリルの添加および遠心（３０００ｒ.ｐ.ｍ．で１０分間）による脱タンパク質によって調製した。上澄み液を特異的ＨＰＬＣ法によりアッセイして濃度を決定した（μＢｏｎｄｐａｋ−Ｃ１８カラム、アセトニトリル−０.０５Ｍ酢酸ナトリウムｐＨ５.０、１５：８５で、１.０mL／分で溶出、２５６nmでＵＶ検出）。プログラムＰＣＮＯＮＬＩＮを用いて薬物動態パラメーターを計算した。
【００５４】
実験３：経口イヌ
６匹のイヌに化合物IIのピバロイルメチル−エステルプロドラッグを経口投与し、生じた血漿濃度をバイオアッセイおよびＨＰＬＣの両方により決定した。投与に続いて、血漿を６９６時間（２９日）までサンプリングした。血漿サンプルおよび適切な標準物（１mL）を、最初に塩酸で３.０未満のｐＨに酸性化し、次いで酢酸エチル３０mLと共に振盪した。遠心により層を分離し、次いで有機層２５mLを除去した。この酢酸エチル層に２mLの０.１Ｍリン酸塩緩衝液ｐＨ７.０を加え、振盪して逆抽出を行った。層を分離させたのち、水相を除去し、アッセイに用いた。処理に続いて、サンプル（および標準物）を、Ｍ．ｌｕｔｅｕｓを接種した大きなプレート（２００mLのＭｕｅｌｌｅｒ  Ｈｉｎｔｏｎ寒天）上で、ホール−イン−ザ−プレート微生物学的バイオアッセイによりアッセイした。また、サンプルをＨＰＬＣによりアッセイした（μＢｏｎｄｐａｋ−Ｃ１８カラム、アセトニトリル−０.０５Ｍ酢酸ナトリウムｐＨ５.０、１５：８５で、１.５mL／分で溶出、２５６ｎｍでＵＶ検出）。二つのアッセイ方法間に良好な一致が存在し（ｒ＝０.９７１６）、バイオアッセイデータから半減期を計算した。
【００５５】
実験４：皮下ネコ
４匹のネコに化合物Ｉの皮下注射により８mg／kgで投与した。投与後３５日まで時間間隔をおいて血液サンプルを採取し、血漿をアッセイしてＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより相当する遊離酸の濃度を決定した。血漿サンプル（１００mL）をリコートに分けて遠心管に入れ、次いでアセトニトリル４００mLを加えた。回転（６０秒間）および遠心（２０,８００×ｇで１０分間）に続いて、上澄み液０.４５０mLを清浄な遠心管に移し、Ｎ2中で約５０℃において蒸発乾固した。乾燥サンプルを移動相（１５／８５v／vのアセトニトリル／１０mM  ＨＣＯ2Ｈ4、ｐＨ３.０）０.１００mL中で再構築し、１分間回転し、３,０００ｒｐｍで２分間遠心し、自動サンプラーバイアルに移した。血漿の単一複製物を、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより化合物の濃度について分析した。サンプル分析は、ＳＣＩＥＸ  ＡＰＩ  ３６５または３０００  ＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳ装置を用いて行った。カラム流出液を４５００Ｖに設定したＴｕｒｂｏ−イオンスプレー源に接続した。衝突ガスを値３に設定した。陽イオンをイオンスプレー源で発生させ、オリフィスを通してサンプリングして４極質量フィルターに入れた。質量分光計を調節して、前駆体および生成物のイオンを次のように監視した：ｍ／ｚ ４５４.４ −＞ ｍ／ｚ ２４１.０。薬物動態プログラムＷＩＮＮＯＮＬＩＮ  バージョン２.１を用いて半減期を計算し、８.３９＋／−０.９７日であると決定した。
【００５６】
ｂ．効力
実験で誘導した皮膚感染モデル研究において、６匹のイヌのうち５匹は、８mg／kgの化合物Ｉを１回投与したのち１５日で、スタフィロコッカス・インターメディウスの完全クリアランスを有していた。
【００５７】
別の研究において、健康なイヌに８mg／kgの化合物Ｉを１回投与したのち、未治療のコントロール動物と比較して、４週間に病原性ブドウ球菌の集団が有意に減少した。
【００５８】
実験でネコに誘導した膿瘍モデル研究において、８mg／kgの化合物Ｉを１回投与したのち１４日で、パスツレラ・ムルトシダ、クロストリジウム・パーフリンゲンスおよびバクテリオデス・フラギリスの細菌数が実質的に減少した。
【００５９】
上記の半減期の結果は、式Ｉの化合物の効力と相俟って、注射（筋肉内、皮下または静脈内）で与えて、約４〜１２mg／kgの化合物Ｉ（例えば式Ｉの化合物のＮａ塩）と等価量をネコまたはイヌに１回投与すると、有効濃度を７〜２１日間、有利に与えることを実証している。これは、獣医開業医にとって、そしてネコおよびイヌ所有者にとっても同様に、新規かつ極めて便利な治療方式である。
【００６０】
しかしながら、化合物Ｉは固体および液体の両者として不安定であることが確認されている。可能な処方物を評価する際に、安定性実験を行った。本明細書で用いられるように、「安定な」または「安定化した」は、化合物Ｉの分解が約１０％未満またはそれと等しいことを意味する。
【００６１】
多くのセファロスポリンを結晶化によって安定化することができるが、化合物Ｉは、特に商業的規模での結晶化技術によっては処理できないことが確認されている。その結果、化合物Ｉは無定形状態にあり、かつ吸湿性である。化合物Ｉの最適な長期安定性を、低い残留水分含有量で達成できることを確認した。従って、式Ｉの処方物の凍結乾燥が好ましい安定性を与える。
【００６２】
本発明に関して、これまで長期貯蔵の目標を妨げた固有の安定性の問題を克服して、化合物Ｉの安定な処方物を開発した。化合物Ｉを水性の製薬上許容される希釈剤と共に、ｐＨが約５.０〜約８.０の範囲になるように処方することによって、化合物Ｉを安定化でき、かつ注射可能な調製物に処方できることを確認した。
【００６３】
例えば、化合物Ｉのナトリウム塩の治療有効量を水性の製薬上許容される希釈剤に溶解し、そして必要に応じ、ｐＨを約５.０〜約８.０の範囲内に調節することによって、処方物を調製する。別法として、化合物Ｉの遊離酸形態（すなわち、塩の代わりにカルボキシレート）を出発材料として用いることができる。遊離酸の懸濁液または溶液を、例えば水酸化ナトリウムで滴定し、化合物Ｉのナトリウム塩を形成することができる。ｐＨの調節は上記のように行うことができる。
【００６４】
生成した溶液のアリコート（その量は、最終的に望まれる再構築した化合物Ｉの濃度に依存する）を透明化し、そして滅菌濾過し、そして凍結乾燥にとって適切な容器（例えばバイアル）に無菌的に移し、そしてリオストッパー（lyo-stopper）で部分的に栓をする。以下に記載するように、処方物を冷却して凍結し、当技術で本来普通の方法で凍結乾燥に付し、そして密栓して、安定な乾燥状態の凍結乾燥物の処方物を形成する。好ましい実施態様において、組成物は、凍結乾燥物の重量に基づいて、１重量％未満の低い残留水分含有量を有する。より好ましい実施態様において、組成物は０.５重量％未満の残留水分レベルを有する。
【００６５】
本明細書で用いるように、用量単位のための「治療有効量」は、典型的には、約５０〜約５００mgの活性成分であってよい。（米国特許第６,０２０,３２９号；第１６欄第３行）。しかしながら、用量は、治療すべき動物の種、変種など、感染の重症度および型、および動物の体重に応じて変動しうる。従って、体重に基づいて、活性成分の典型的な用量範囲は、動物の体重１kg当たり約０.０１〜約１００mgであってよい。好ましくは、この範囲は体重１kg当たり約１〜約２０mg、より好ましくは体重１kg当たり約４〜約１２mgである。（ＰＣＳ  １０９６５；第７頁、第７〜１１行）。
【００６６】
獣医開業医または当業者は、特定の個々の患者に適する用量（これは、特定の患者の種、年齢、体重および応答、ならびに関連する細菌の種によって変動しうる）を決定できるであろう。上記の用量は平均的な場合の例示である。従って、上記のファクターに応じて、より高いかまたはより低い用量は正当化でき、そして本発明の範囲内にある。
【００６７】
式Ｉの化合物は、単独で、または疾患の治療もしくは予防または症状の軽減もしくは抑制に用いられる１種または２種以上の作用物質との組み合わせの何れかで投与することができる。このような作用物質の例（これらは説明として提供されるものであって、限定と解釈されてはならない）は、駆虫、例えばフィプロニル、ルフェニュロン、イミダクロプリドのようなアリールピラゾール類、アベルメクチン類（例えばアバメクチン、イベルメクチン、ドラメクチン、セラメクチン）、ミルベマイシン類、有機ホスフェート類、ピレトロイド類；抗ヒスタミン剤、例えばクロルフェニラミン、トリメプラジン、ジフェンヒドラミン、ドキシルアミン；抗真菌剤、例えばフルコナゾール、ケトコナゾール、イトラコナゾール、グリセオフルビン、アンホテリシンＢ；抗菌剤、例えばエンロフラキサシン、マルボフロキサシン、アンピシリン、アモキシシリン；抗炎症剤、例えばプレドニゾロン、ベタメタゾン、デキサメタゾン、カルプロフェン、ケトプロフェン；ステロイドおよび他の止痒剤、；ダイエット用サプリメント、例えばガンマ−リノレン酸；および皮膚軟化剤を包含する。それ故に、本発明はさらに、疾患または状態の本発明に係る疾患または状態の治療に、同時に、別個にまたは逐次に使用するための組み合わせ調製物としての、式(Ｉ)の化合物および上記リストから選択される１種または２種以上の化合物の使用などを提供する。
【００６８】
処方物の組成物は、場合により、その存在が急速溶解性のフリーズドライした生成物を与えるか、または処方物の貯蔵時間を延長するのに役立ちうる当技術で公知の補助成分、例えば緩衝剤、増量剤、希釈剤、補助溶剤、溶剤、保存剤、キレート化剤、酸化防止剤、等張調節剤を含有することができる。
【００６９】
可能な溶剤および補助溶剤の例はエタノールである。キレート化剤の例はエチレンジアミン四酢酸である。酸化防止剤の例はアスコルビン酸である。等張性調節剤の例はデキストロースである。さらに、式Ｉの化合物は本発明の組成物中の単独治療剤であってよく、または他の抗生物質もしくはβ−ラクタマーゼ阻害剤との組み合わせを用いることができる。（米国特許第６,０２０,３２９号、第１６欄、第１５〜１８行）。
【００７０】
典型的な広い安定性ｐＨ範囲を有する大部分のセファロスポリンとは異なり、種々の緩衝剤を含むか含まない化合物Ｉの処方物は、約５.０〜約８.０のｐＨの比較的に狭い安定性範囲を有することを確認した。特に、そして好ましい実施態様において、最適な溶液および固体状態の安定性は、約６.０〜約７.５のｐＨで得られる。ｐＨの調節は、例えば水酸化ナトリウムの１０％溶液または塩酸で所望のｐＨ範囲まで滴定するか、または適切な緩衝剤の使用によって行うことができる。典型的な緩衝剤は、リン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、炭酸塩およびグリシンを包含する。好ましい実施形態において、リン酸塩が緩衝剤として用いられる。より好ましい実施形態において、クエン酸塩が緩衝剤として用いられる。
【００７１】
本発明で使用するのに適する水溶性増量剤は、凍結乾燥に典型的には用いられる製薬上許容される不活性固体材料の何れであってもよい。増量剤は安定性を改善でき、および／またはいっそう急速に溶解するフリーズドライした生成物を与えることができる。このような増量剤は、例えば、グルコース、マルトース、ショ糖およびラクトースのような糖；ソルビトールおよびマンニトールのような多価アルコール；グリシンのようなアミノ酸；ポリビニルピロリドンのような重合体；デキストランのような多糖；リン酸ナトリウムも
しくはカリウムまたは塩化ナトリウムのような一定の無機塩を包含する。
【００７２】
本発明の組成物に用いられる増量剤の重量と化合物Ｉの重量との比は、用いられる増量剤に応じて、一般的に約０.０１〜約１００の範囲内にあるべきである。好ましい実施態様において、ポリヒドロキシ化合物が選択される増量剤である。より好ましい実施態様において、ショ糖が増量剤であり、そしてそれと共に凍結乾燥したときに化合物Ｉのナトリウム塩を安定化することを見出した。
【００７３】
しかしながら、ショ糖／化合物Ｉの最適比は、実験を行わずには予測できなかった。例えば、ショ糖を添加しない処方物と比較して、比較的に少量のショ糖（例えば０.４のショ糖／化合物Ｉのナトリウム塩の比）が、化合物Ｉのナトリウム塩の分解度を増大することを確認した。他方において、１のショ糖／化合物Ｉのナトリウム塩の比は、ショ糖を添加しなかった処方物と同様の安定性を示した。しかしながら、１.０を超える比は化合物Ｉのナトリウム塩の処方物の安定性を増大した。好ましい実施態様において、ショ糖／化合物Ｉのナトリウム塩の比は、１.０を超えて約１０までの範囲にある。よりいっそう好ましい実施態様において、ショ糖／化合物Ｉのナトリウム塩の比は、約３である。
【００７４】
より高いショ糖／化合物の比を用いることができる。しかしながら、高いショ糖濃度は、再構築した溶液のシリンジ処理に大きな影響を与える高度濃縮溶液の粘度に関する実際上の理由によって制限される。さらに、高いショ糖濃度は、注射可能な調製物に対して注射部位の不耐性を生じさせることがある。たいていは、２５〜３０ｍＰａ＊ｓ（ミリパスカル＊秒、ここで、「＊」は「を積算した」と定義される）の粘度は、製薬工業における注射可能な調製物に対する上限と考えることができる。これは、４０℃でおよそ最高６０％ショ糖溶液と言い換えられる。（M. Mathlouthi, J. Genotelle, in：M. Mathlouthi, Sucrose. Properties and Applications, Blackie Academic & Professional, London, 1995, p.137）。例えば、溶液中の化合物Ｉの濃度が６重量％であるならば、許容されるのショ糖／化合物Ｉの比は１０：１であろう。化合物Ｉの濃度が３％であるならば、許容されるのショ糖／化合物Ｉの比は２０：１であろう。これらは多くの可能な比のうち、二つだけの例である。
【００７５】
抗菌性保存剤は、微生物汚染を防止するために医薬処方物にしばしば添加される。本明細書で用いられるように、「保存剤」という語は、感染または医薬生成物の分解の危険性をもたらすであろう微生物の成長を防止または抑制するために添加される化合物または化合物の組み合わせを意味する。一般的に、得られる効力のレベルは、保存剤の化学構造、その濃度、および医薬生成物の物理的および化学的特性（特にｐＨ）によって変動する。パックのデザイン、および生成物を貯蔵する温度もまた、存在する任意の抗菌性保存剤の活性レベルに影響を与えるだろう。有用な保存剤は、ｍ−安息香酸およびその塩、ソルビン酸およびその塩、パラヒドロキシ安息香酸のアルキルエステル、フェノール、クロロブタノール、ベンジルアルコール、チメロサール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化セチルピリジニウム、ｍ−クレゾールおよびクロロクレゾールを包含しうる。上記の保存剤の混合物も使用できる。
【００７６】
本発明において、抗菌性保存剤を含有する化合物Ｉの処方物は、抗菌有効性のための米国薬局方（以下、「ＵＳＰ」という）基準を満たすのに効果的であった。特に、次の保存剤：例えばメチルパラベン、プロピルパラベン、ｍ−クレゾールおよびベンジルアルコールの種々の処方物は、ＵＳＰ基準を満たすことが判った。しかしながら、抗菌有効性のための欧州薬局方（以下、「ＥＰ」という）基準を満たすためには、他の保存剤がより適切であった（例えば、塩化ベンゼトニウム、および幾つかの保存剤の組み合わせ、例えば一つの組み合わせとしては、メチルパラベン、プロピルパラベンおよびベンジルアルコール、そして別の組み合わせとしては、メチルパラベンおよびｍ−クレゾール）。
【００７７】
化合物Ｉの処方物は、乾燥により、好ましくは当技術で公知の凍結乾燥により単離できる。通常、凍結乾燥物の処方物は、アンプル凍結乾燥、バイアル凍結乾燥、トレー凍結乾燥などの従来法を用いて、処方物をゼロ以下の温度で冷却して凍結することによって製造される。次いで凍結した材料を、真空中で、溶液中に溶剤として最初に含まれていた水分の昇華によって乾燥し、こうして、凍結乾燥した固体ケーキが残る。従って、例えば、上記の賦形剤、化合物Ｉ、または化合物Ｉの製薬上許容される塩を、適量の注射用水中に撹拌下に連続的に溶解する。次いで、さらに水を加えて所望の最終体積にする。生成した溶液を透明化し、滅菌濾過し、そして所望容量の滅菌容器（例えばバイアル）中に無菌的に分配する。次いで、溶液をフリーズドライし、そしてバイアルを従来の手順で密栓する。
【００７８】
凍結乾燥した薬剤生成物は、無定形の化合物Ｉ、より好ましくはそのナトリウム塩である。生成物の溶液が必要な場合には、乾燥処方物を注射用水、静菌注射用水または別の製薬上許容される希釈剤（例えば塩化ナトリウムの等張性溶液、エタノールまたはクエン酸塩緩衝剤を含む注射用水、およびベンジルアルコールを含む静菌注射用水）に、患者に非経口的に投与するために必要な濃度の溶液を生じさせるのに十分な量で溶解することによって再構築できる。
【００７９】
化合物Ｉの量は、この化合物が、米国特許第６,００１,９９７号、６,０２０,３２９号および６,０７７,９５２号に記載された所望の治療効果を与えるように投与できる。本発明の注射可能な再構築溶液は、種々の可能な投与計画に従って投与することができる。
【実施例】
【００８０】
本発明の有利な効果を確認するために、化合物Ｉのナトリウム塩を凍結乾燥した注射可能な調製物に処方し、そして処方物の安定性を測定した。
【００８１】
下記の実施例は、本発明の特定の実施態様を説明することを意図するものであって、請求項を含めて、本明細書を限定することを決して意図するものではない。
【００８２】
Ａ．凍結乾燥した注射可能な処方物のｐＨ調節による安定化
表３〜６に記載する処方物は、緩衝した組成物および非緩衝の組成物の双方の不安定性が、約５.０〜約８.０のｐＨ範囲外では増大することを示している。以下の表３および４に示すように、化合物Ｉのナトリウム塩を、脱イオン水またはクエン酸緩衝溶液の何れかに５０mg／mLの濃度で溶解した。
【００８３】
処方物１〜５の場合、化合物Ｉのナトリウム塩を溶解したのち、１０％溶液塩酸でｐＨを調節した(表３)。処方物６〜１３の場合、クエン酸塩を用いて緩衝液を調製し、これに化合物Ｉのナトリウム塩を溶解したときに１０％塩化ナトリウム溶液で調節した(表４)。化合物Ｉのナトリウム塩の溶液の１mLアリコートを１０mLバイアルに充填し、ＦＴＳ動的凍結乾燥機（FTS Systems, Stone Ridge, New York）を用いて凍結乾燥した。凍結乾燥中に、２段階凍結プロトコール（−２５℃および−４０℃で）を用いて組成物を凍結し、続いて、第一乾燥を−２７℃で約２２時間行い、次いで第二乾燥を温度が０℃、２５℃および５０℃に上昇する段階で行った。第一および第二乾燥中の圧力を６０ミリトルに設定した。
溶液調製手順を下記に示す。
【００８４】
【表３】
2005511642.tif 000011
【００８５】
【表４】
2005511642.tif 000012
【００８６】
サンプルを４０℃で１２週間貯蔵した。次いで、逆相高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）により、２５６nmに設定した紫外線（「ＵＶ」）検出器およびＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ４カラム（MetaChem Technologies Inc., Torrance, CA）を備えたＷａｔｅｒｓ（Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）ＨＰＬＣ装置を用いて、化合物Ｉの残留量を測定した。勾配法には、９：１v／v比の０.０２５Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ６.５：アセトニトリルの溶液からなる移動相Ａ、および４：６v／v比の０.０２５Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ６.５：アセトニトリルの溶液からなる移動相Ｂを利用した。
【００８７】
分解の結果を、化合物Ｉの初期純度の百分率（％）として、表５および６に報告する。制御した２５℃の室温（すなわち、典型的な棚貯蔵条件）で１８ヶ月貯蔵したのちの処方物の分解を、１０kcal／molの活性化エネルギーによる擬ゼロ次元モデルおよびＡｒｒｈｅｎｉｕｓの式を用いて計算した（例えば、K. A. Connors, Chemical Kinetics, 1990, VCH Publishers, Inc., New York）。この活性化エネルギーにおいて、４０℃での分解速度定数（ｋ40）は２.２７*ｋ25に等しい（ｋ25は２５℃での分解速度定数である）。当業者は、他の非晶質セファロスポリン化合物についてＰｉｋａｌらが報告したデータ（ｋ40＝２.２*ｋ25）に基づいて、この仮定が合理的であることを理解するであろう（M. J. Pikal, K. M. Dellerman, Stability testing of pharmaceuticals by high-sensitivity isothermal calorimetry at 25℃：cephalosporins in the solid and aqueous solution
states, Int. J. Pharm. 50(1989)233-252）。
【００８８】
表５に示すように、処方物４および５（それぞれｐＨ５.１および６.０、表１から）は、許容される長期安定性を有していた（すなわち、２５℃で１８ヶ月後の分解は１０％未満である）。しかしながら、４.１未満またはそれと等しいｐＨを有する処方物は、製薬工業において医薬生成物にとって典型的に許容されない１０％を超える分解を示した。しかしながら、表４に示すように、クエン酸塩緩衝剤を利用した処方物の最適安定性は、約６.０〜約７.０のｐＨであった。
【００８９】
【表５】
2005511642.tif 000013
【００９０】
【表６】
2005511642.tif 000014
【００９１】
凍結乾燥した処方物の上記の安定性研究のための溶液を調製する例には、下記のとおり特定の濃縮物を用いた：
【００９２】
実施例１
ｐＨを調節しない処方物
化合物Ｉのナトリウム塩１.０４５３ｇを脱イオン水２０.０mLに溶解した。生成した溶液の１mLアリコートを１０mLバイアルに移し、リオストッパーで部分的に栓をし、上記のように凍結乾燥し、そして密栓した。
【００９３】
実施例２
ＨＣｌでｐＨを調節した処方物
化合物Ｉのナトリウム塩０.５０８５ｇを脱イオン水１０.０mLに溶解した。この溶液を０.１Ｎ塩酸でｐＨ３.８７まで滴定した。生成した溶液の１mLアリコートを１０mLバイアルに移し、リオストッパーで部分的に栓をし、上記のように凍結乾燥し、そして密栓した。
【００９４】
実施例３
クエン酸塩緩衝液でｐＨを調節した処方物
化合物Ｉのナトリウム塩０.６ｇをｐＨ６.０の０.０５Ｍクエン酸塩緩衝液１２mLに溶
解した。生成した溶液を濾過し、１mLアリコートを１０mLバイアルに移し、リオストッパーで部分的に栓をし、上記のように凍結乾燥し、そして密栓した。
【００９５】
Ｂ．化合物Ｉのナトリウム塩の凍結乾燥した処方物の増量剤による安定化
各実験において、異なるショ糖／化合物Ｉのナトリウム塩の比（表７）の、化合物Ｉのナトリウム塩およびショ糖の処方物を、上記のように標準的な工業的手順に従って凍結乾燥した。処方物１５〜１８および１９〜２２は、品質管理再現性の目的で独立して調製した。処方物１９〜２２の安定性の測定値は１２週間でだけ得た。
【００９６】
【表７】
2005511642.tif 000015
【００９７】
サンプルを４０℃で１２週間まで貯蔵した。逆相ＨＰＬＣにより、上記のように勾配溶剤法を用いて、化合物Ｉの残留量を測定し、そして残留する化合物Ｉの百分率（％）として報告した。結果は、表８に示すように、ショ糖を３：１（ショ糖／化合物Ｉのナトリウム塩）の比で添加すると、安定性を改善したことを示している。２：５ショ糖のより低いショ糖／化合物Ｉのナトリウム塩の比は、あまり望ましくなかった。１：１の比を有する処方物の安定性は、ショ糖を添加しない処方物と同様であった。
【００９８】
【表８】
2005511642.tif 000016
【００９９】
凍結乾燥した処方物の上記の安定性研究のための溶液を調製する例は、下記のとおりである：
【０１００】
実施例４
ショ糖を含む処方物
化合物Ｉのナトリウム塩０.４８１８ｇおよびショ糖０.１９６４ｇを脱イオン水１０.０mLに溶解した。生成した溶液を１mLアリコートで１０mLバイアルに充填し、リオストッパーで部分的に栓をし、上記のように凍結乾燥した。凍結乾燥サイクルが終了したとき、バイアルを密栓した。
【０１０１】
Ｃ．保存剤
一般的に、化合物Ｉの処方物を含めて、セファロスポリン処方物には、保存剤は必要でない。しかしながら、単一用量容器に対して多用量容器で貯蔵される処方物は、インビトロでの抗菌有効性を満足させるために、保存剤の添加を必要とする。以下の実施例により調製した種々の処方物を、インビトロでの抗菌活性について試験した。抗菌有効性試験（ＡＥＴ）を、欧州薬局方（ＥＰ）手順（European Pharmacopoeia, 3d edition, Supplement 201, Counsil of Europe, Strasbourg）および米国薬局方（ＵＳＰ）手順（U. S. Pharmacopeia, and National Formulary USP24 NF19, 2000, United States Pharmacopeia Convention Inc., Rockville, MD）に従って行った。保存剤および化合物Ｉのナトリウム塩を含有する処方物の有効性を、下記の実施例に示す：
【０１０２】
実施例５
化合物Ｉのナトリウム塩およびメチルパラベン（１.８mg／mL）のＡＥＴ
化合物Ｉのナトリウム塩（８０mg／mL）およびメチルパラベン（１.８mg／mL）を２０mMクエン酸塩緩衝液中に含有する溶液について、ＡＥＴを行った。ＡＥＴの結果を表９に示す。この処方物は、全ての微生物に対してＵＳＰ基準を満たした（許容基準については表１２参照）。さらに、この処方物は、６および２４時間の時点での黄色ブドウ球菌を除き、全ての微生物に対して基準Ａを満たした。
【０１０３】
【表９】
2005511642.tif 000017
【０１０４】
実施例６
化合物Ｉのナトリウム塩、メチルパラベン（１.８mg／mL）およびプロピルパラベン（０.２mg／mL）のＡＥＴ
化合物Ｉのナトリウム塩（８０mg／mL）、メチルパラベン（１.８mg／mL）およびプロピルパラベン（０.２mg／mL）を２０mMクエン酸塩緩衝液中に含有する溶液について、ＥＰおよびＵＳＰ手順に従ってＡＥＴを行った。ＡＥＴの結果を表８に示す。この処方物は、全ての微生物に対してＵＳＰ基準を満たした（許容基準については表１４参照）。さらに、この処方物は、６および２４時間の時点での黄色ブドウ球菌を除き、全ての微生物に対してＥＰ基準Ａを満たした。
【０１０５】
【表１０】
2005511642.tif 000018
【０１０６】
実施例７
化合物Ｉのナトリウム塩およびｍ−クレゾール（３mg／mL）のＡＥＴ
ｍ−クレゾール３mg／mLを含有する静菌水で、化合物Ｉのナトリウム塩の凍結乾燥ケーキを再構築することにより調製した、化合物Ｉのナトリウム塩（８０mg／mL）およびｍ−クレゾール（３mg／mL）の溶液について、ＥＰおよびＵＳＰ手順に従ってＡＥＴを行った。ＡＥＴの結果を表１１に示す。この処方物は、全ての微生物に対してＵＳＰ基準を満たした（許容基準については表１４参照）。さらに、この処方物は、６時間の時点での黄色ブドウ球菌を除き、全ての微生物に対してＥＰ基準Ａを満たした。
【０１０７】
【表１１】
2005511642.tif 000019
【０１０８】
実施例８
化合物Ｉのナトリウム塩、メチルパラベン、プロピルパラベンおよびベンジルアルコールのＡＥＴ
ベンジルアルコール少なくとも９mg／mLを含有する注射用静菌水で、化合物Ｉのナトリウム塩、メチルパラベンおよびプロピルパラベンの凍結乾燥ケーキを再構築することにより調製した、化合物Ｉのナトリウム塩（８０mg／mL）、メチルパラベン（１.８mg／mL）、プロピルパラベン（０.２mg／mL）およびベンジルアルコール（８.６mg／mL）及び２０mMのクエン酸塩緩衝剤の溶液について、ＥＰおよびＵＳＰ手順に従ってＡＥＴを行った。メチルパラベンおよびプロピルパラベンは凍結乾燥ケーキに含ませたが、ベンジルアルコールは注射用静菌水と共に加えた。ＡＥＴの結果を表１２に示す。この処方物は、全ての微生物に対してＵＳＰ基準を満たした（許容基準については表１４参照）。さらに、この処方物は、全ての微生物に対してＥＰ基準Ａを満たした。
【０１０９】
【表１２】
2005511642.tif 000020
【０１１０】
実施例９
化合物Ｉのナトリウム塩、ｍ−クレゾールおよびメチルパラベンのＡＥＰ
メチルパラベンおよびｍ−クレゾールを含有する注射用静菌水で、化合物Ｉのナトリウム塩の凍結乾燥ケーキを再構築することにより調製した、化合物Ｉのナトリウム塩（８０mg／mL）、メチルパラベン（１.８mg／mL）およびｍ−クレゾール（３mg／mL）の溶液について、ＥＰ手順に従ってＡＥＴを行った。ＡＥＴの結果を表１３に示す。この処方物は、黄色ブドウ球菌に対してＥＰ基準Ａを満たした（許容基準については表１４参照）。
【０１１１】
【表１３】
2005511642.tif 000021
【０１１２】
【表１４】
2005511642.tif 000022
【国際調査報告】
2005511642.tif 000026
2005511642.tif 000027
2005511642.tif 000028
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