(57)【要約】本発明は、システイン・プロテアーゼ活性に関係する疾患を処置するための式(Ｉ)：【化１】2005533804.tif 000013の化合物および組成物を提供する。本化合物は、システイン・プロテアーゼ Ｓ、Ｋ、Ｆ、Ｌ、およびＢの可逆な阻害剤である。カテプシン Ｓに関連する疾患が特に興味深い。さらに、本発明はまた、該阻害剤の製造方法を開示している。
2005533804.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(Ｉ)：
【化１】
2005533804.tif 000012
[式中、
Ｘは、Ｎ、ＮＨ、：ＣＨ、またはＣＨ２であり；
Ｙは、Ｎ、：ＣＨ、ＣＯ、ＣＨ２、または：ＣＮＲ２Ｒ３｛ここで、Ｒ２とＲ３は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルである｝であり；
Ｒは、アリールまたはヘテロアリール｛所望により、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、カルボキシ、ＣＯＮＲ５Ｒ６、ＳＯ２ＮＲ５Ｒ６、ＳＯ２Ｒ４、ＮＨＳＯ２Ｒ４、ＮＨＣＯＲ４、エチレンジオキシ、メチレンジオキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ＳＲ４、またはＮＲ５Ｒ６によって置換されており、
ここで、Ｒ４は、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ｒ５とＲ６は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキルであるか、またはそれらが結合している窒素原子と一緒になって、５員環もしくは６員環の飽和環を形成し、該環は、所望により、さらにＯ、Ｓ、またはＮＲ４を含む｝であるか、または
Ｒは、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、
それらは共に、所望により、１個以上のＯ、Ｓ、またはＮＲ４を含み得；
Ｒ１は、Ｙ(ＣＨ２)ｐＲ７
｛ここで、ｐは、０、１、または２であり、そしてＹは、ＯまたはＮＲ８(ここでＲ８は水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルである)であり；そして
Ｒ７は、１個以上のＯ、Ｓ、またはＮ原子を含む５員環もしくは６員環の飽和環、アリール、または Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される１から４個のヘテロ原子を含むヘテロアリール、飽和環、アリールおよびヘテロアリールであって、
これらは全て、所望によりハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、カルボキシ、ＣＯＮＲ５Ｒ６、ＳＯ２ＮＲ５Ｒ６、ＳＯ２Ｒ４、ＮＨＳＯ２Ｒ４、ＮＨＣＯＲ４、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ＳＲ４、またはＮＲ５Ｒ６(ここで、Ｒ４は、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、Ｒ５とＲ６は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキルであるか、またはそれらが結合している窒素原子と一緒になって、所望によりＯ、Ｓ、またはＮＲ４をさらに含む５員環もしくは６員環の飽和環を形成する)によって置換されている｝であるか、
または
Ｒ１は、ＮＲ９Ｒ１０
｛ここで、Ｒ９とＲ１０は、独立して、水素、または所望により１個以上のＯ、Ｓ、またはＮＲ４を含むＣ１−６アルキルであるか、またはＲ９とＲ１０は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、所望によりＯ、Ｓ、またはＮ原子をさらに含み、かつ所望によりＮＲ９Ｒ１０、ＣＯ２Ｃ１−６アルキル、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２(ここで、Ｒ１１とＲ１２は、独立して、水素またはＣ１−６アルキル、所望によりハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、カルボキシ、ＣＯＮＲ５Ｒ６、ＳＯ２ＮＲ５Ｒ６、ＳＯ２Ｒ４、ＮＨＳＯ２Ｒ４、ＮＨＣＯＲ４、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ＳＲ４、またはＮＲ５Ｒ６(ここで、Ｒ４は、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、Ｒ５とＲ６は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキルであるか、またはそれらが結合している窒素原子と一緒になって、所望によりＯ、Ｓ、またはＮＲ４をさらに含む５員環もしくは６員環の飽和環を形成する)によって置換されているアリールまたはヘテロアリールである)によって置換されている５員環もしくは６員環の飽和環を形成する｝である]の化合物、およびその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
【請求項２】
ＸはＮであり、かつＹは：ＣＨであるか、ＸとＹは：ＣＨであるか、またはＸとＹはＣＨ２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒは、Ｃ１−４アルキル、またはフェニル｛ハロゲン、ＳＯ２Ｍｅ、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−４アルキルによって置換されている｝である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１は、Ｙ(ＣＨ２)ｐＲ７｛ここで、ｐは０であり、そしてＹはＮＲ８(ここで、Ｒ８は水素であり、そしてＲ７は置換フェニルである)である｝である、請求項１から３の何れか１項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１は、ＮＲ９Ｒ１０｛ここで、Ｒ９とＲ１０は、水素もしくはＣ１−３アルキルであるか、またはそれらが結合している窒素原子と一緒になって、所望によりＯ、Ｓ、またはＮＲ４を含む５員環もしくは６員環の飽和環を形成する｝である、請求項１から３の何れか１項に記載の化合物。
【請求項６】
１−[９−(４−クロロフェニル)−２−シアノ−９Ｈ−プリン−６−イル]−Ｌ−プロリンアミド；
９−(４−クロロフェニル)−６−(４−ピロリジン−１−イルピペリジン−１−イル)−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(４−クロロフェニル)−６−[(３−ピロリジン−１−イルプロピル)アミノ]−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
６−(４−アミノピペリジン−１−イル)−９−(４−クロロフェニル)−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
６−[(２−アミノエチル)アミノ]−９−(４−クロロフェニル)−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(４−クロロフェニル)−６−(ジメチルアミノ)−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(４−メチルフェニル)−６−ピロリジン−１−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(４−メトキシフェニル)−６−ピロリジン−１−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(４−クロロフェニル)−６−ピロリジン−１−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(４−クロロフェニル)−６−(エチルアミノ)−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
ｔｅｒｔ−ブチル ４−[９−(４−クロロフェニル)−２−シアノ−９Ｈ−プリン−６−イル]ピペラジン−１−カルボン酸エステル；
９−(４−クロロフェニル)−６−ピペラジン−１−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(２−クロロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(３,４−ジフルオロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(４−イソプロピルフェニル)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(４−メトキシフェニル)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(３−クロロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−[４−(メチルスルホニル)フェニル]−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
６−[(４−クロロフェニル)アミノ]−９−エチル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(４−クロロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
８−アミノ−６−[(４−クロロフェニル)アミノ]−９−エチル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
８−アミノ−９−(４−クロロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(４−クロロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−８−オキソ−８,９−ジヒドロ−７Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(４−クロロフェニル)−８−(ジメチルアミノ)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
７−(４−クロロフェニル)−４−モルホリン−４−イル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−カルボニトリル；
７−(４−クロロフェニル)−４−(エチルアミノ)−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−カルボニトリル；
４−[(４−クロロフェニル)アミノ]−７−エチル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−カルボニトリル；
１−[７−(４−クロロフェニル)−２−シアノ−６,７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イル]−Ｌ−プロリンアミド；
１−[２−シアノ−７−(４−メトキシフェニル)−６,７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イル]−Ｌ−プロリンアミド；
７−(４−メトキシフェニル)−４−ピロリジン−１−イル−６,７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−カルボニトリル；
７−(４−メトキシフェニル)−４−モルホリン−４−イル−６,７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−カルボニトリル；
１−(４−メチルフェニル)−４−モルホリン−４−イル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−６−カルボニトリル；
から選択される、式(Ｉ)の化合物およびその薬学的に許容される塩。
【請求項７】
治療に使用するための、請求項１から６の何れか１項に定義した通りの式(Ｉ)の化合物。
【請求項８】
疼痛の処置に使用するための、請求項１から６の何れか１項に定義した通りの式(Ｉ)の化合物。
【請求項９】
神経因性疼痛の処置に使用するための、請求項１から６の何れか１項に定義した通りの式(Ｉ)の化合物。
【請求項１０】
請求項１から６の何れか１項に定義した通りの式(Ｉ)の化合物もしくはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される希釈剤もしくは担体を含む医薬組成物。
【請求項１１】
システイン・プロテアーゼを阻害する処置が必要な哺乳動物(例えばヒト)において、システイン・プロテアーゼの阻害を起こす方法であって、該動物に、請求項１から６の何れか１項に定義した通りの化合物もしくはその薬学的に許容される塩を、有効量投与することを含む方法。
【請求項１２】
疼痛の処置が必要な哺乳動物(例えばヒト)において、疼痛、例えば神経因性疼痛を処置する方法であって、該哺乳動物に、請求項１から６の何れか１項に定義した通りの式(Ｉ)の化合物もしくはその薬学的に許容される塩を有効量投与することを含む方法。
【請求項１３】
温血動物(例えばヒト)において、カテプシン Ｓの阻害に使用するための医薬の製造における、請求項１から６の何れか１項に定義した通りの式(Ｉ)の化合物もしくはその薬学的に許容される塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、システイン・プロテアーゼ活性に関連する疾患を処置するための化合物および組成物に関する。該化合物は、システイン・プロテアーゼ Ｓ、Ｋ、Ｆ、Ｌ、およびＢの可逆な阻害剤である。カテプシン Ｓに関連する疾患が、特に興味深い。さらに、本発明はまた、該阻害剤の製造方法を開示している。
【０００２】
本発明の背景
カテプシン Ｓは、カテプシンＢ、Ｈ、Ｌ、Ｏ、およびＫを含むシステイン・プロテアーゼのパパイン・スーパーファミリーのメンバーである。カテプシン Ｓは、抗原ペプチドに複合体が会合することが可能なＭＨＣ クラス II 複合体中の不変鎖のプロセッシングにキーとなる役割を果たす。ＭＨＣ クラス II 複合体は、次に、例えばＴ細胞などのエフェクター細胞に対する提示のために、細胞表面に輸送される。抗原提示のプロセスは、免疫応答の開始における基本的な段階である。この態様において、カテプシン Ｓの阻害剤は、炎症疾患および免疫疾患の、例えば喘息、リウマチ性関節炎、多発性硬化症、およびクローン病(これらに制限されない)の処置に有用な薬剤であり得る。カテプシン Ｓはまた、例えばエラスチンの分解を介したＣＯＰＤにおける肺気腫の進行に伴う、およびアルツハイマー病における、細胞外蛋白質分解を含む様々な他の疾患に関与している。
【０００３】
別のカテプシン、特にＫおよびＬは、骨コラーゲンおよび他の骨マトリックス蛋白質を分解することが示されている。これらのシステイン・プロテアーゼの阻害剤は、骨再吸収、例えば骨粗鬆症に関する疾患の処置に有用であることが期待される。
【０００４】
本発明は、従って、式(Ｉ)：
【化１】
2005533804.tif 000003
[式中、
Ｘは、Ｎ、ＮＨ、：ＣＨ、またはＣＨ２であり；
Ｙは、Ｎ、：ＣＨ、ＣＯ、ＣＨ２、または：ＣＮＲ２Ｒ３｛ここで、Ｒ２とＲ３は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルである｝であり；
Ｒは、アリールまたはヘテロアリール｛所望により、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、カルボキシ、ＣＯＮＲ５Ｒ６、ＳＯ２ＮＲ５Ｒ６、ＳＯ２Ｒ４、ＮＨＳＯ２Ｒ４、ＮＨＣＯＲ４、エチレンジオキシ、メチレンジオキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ＳＲ４、またはＮＲ５Ｒ６によって置換されており、
ここで、Ｒ４は、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ｒ５とＲ６は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキルであるか、またはそれらが結合している窒素原子と一緒になって、５員環もしくは６員環の飽和環を形成し、該環は、所望により、さらにＯ、Ｓ、またはＮＲ４を含む｝であるか、または
Ｒは、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、
それらは共に、所望により、１個以上のＯ、Ｓ、またはＮＲ４を含み得；
Ｒ１は、Ｙ(ＣＨ２)ｐＲ７
｛ここで、ｐは、０、１、または２であり、そしてＹは、ＯまたはＮＲ８(ここでＲ８は水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルである)であり；そして
Ｒ７は、１個以上のＯ、Ｓ、またはＮ原子を含む５員環もしくは６員環の飽和環、アリール、または Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される１から４個のヘテロ原子を含むヘテロアリール、飽和環、アリールおよびヘテロアリールであって、
これらは全て、所望によりハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、カルボキシ、ＣＯＮＲ５Ｒ６、ＳＯ２ＮＲ５Ｒ６、ＳＯ２Ｒ４、ＮＨＳＯ２Ｒ４、ＮＨＣＯＲ４、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ＳＲ４、またはＮＲ５Ｒ６(ここで、Ｒ４は、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、Ｒ５とＲ６は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキルであるか、またはそれらが結合している窒素原子と一緒になって、所望によりＯ、Ｓ、またはＮＲ４をさらに含む５員環もしくは６員環の飽和環を形成する)によって置換されている｝であるか、
または
Ｒ１は、ＮＲ９Ｒ１０
｛ここで、Ｒ９とＲ１０は、独立して、水素、または所望により１個以上のＯ、Ｓ、またはＮＲ４を含むＣ１−６アルキルであるか、またはＲ９とＲ１０は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、所望によりＯ、Ｓ、またはＮ原子をさらに含み、かつ所望によりＮＲ９Ｒ１０、ＣＯ２Ｃ１−６アルキル、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２(ここで、Ｒ１１とＲ１２は、独立して、水素またはＣ１−６アルキル、所望によりハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、カルボキシ、ＣＯＮＲ５Ｒ６、ＳＯ２ＮＲ５Ｒ６、ＳＯ２Ｒ４、ＮＨＳＯ２Ｒ４、ＮＨＣＯＲ４、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ＳＲ４、またはＮＲ５Ｒ６(ここで、Ｒ４は、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、Ｒ５とＲ６は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキルであるか、またはそれらが結合している窒素原子と一緒になって、所望によりＯ、Ｓ、またはＮＲ４をさらに含む５員環もしくは６員環の飽和環を形成する)によって置換されているアリールまたはヘテロアリールである)によって置換されている５員環もしくは６員環の飽和環を形成する｝である]の化合物、およびその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を提供する。
【０００５】
本明細書の記載において、別記しない限り、アルキル基もしくはアルケニル基、または置換基中のアルキル部分もしくはアルケニル部分は、直鎖であっても分枝であってもよい。アリールは、フェニルおよびナフチルを含む。ヘテロアリールは、Ｎ、Ｓ、Ｏから選択される、１個以上のヘテロ原子を含む、５員環もしくは６員環の、５,６−もしくは６,６−縮合芳香環を含む。例は、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ピリダジン、チアゾール、オキサゾール、ピラゾール、イミダゾール、フラン、およびチオフェン、キノリン、イソキノリン、ベンゾイミダゾール、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、インドールを含む。
【０００６】
式(Ｉ)の特定の化合物は、立体異性体の形態で存在し得る。本発明は、式(Ｉ)の化合物の全ての幾何および光学異性体、ラセミ体を含むその混合物を含むと解される。互変異体およびその混合物もまた本発明の態様を形成する。
【０００７】
好ましくは、ＸがＮであって、かつＹが：ＣＨであるか、ＸとＹが：ＣＨであるか、またはＸとＹがＣＨ２である。
好ましくは、Ｒが、Ｃ１−４アルキル、またはフェニル｛ハロゲン(特にクロロ)、ＳＯ２Ｍｅ、Ｃ１−６アルコキシ(特にメトキシ)、Ｃ１−４アルキル(特にメチルもしくはプロピル)によって置換されている｝である。
【０００８】
好ましくは、Ｒ１は、Ｙ(ＣＨ２)ｐＲ７
｛ここで、ｐは０であり、そしてＹはＮＲ８(ここで、Ｒ８は水素であり、そしてＲ７は置換フェニルである)である｝である。好ましくは、Ｒ７は、ハロゲン、特にクロロによって置換されているフェニルであるか、
または
Ｒ１は、ＮＲ９Ｒ１０
｛ここで、Ｒ９とＲ１０は水素またはＣ１−３アルキルであるか、またはそれらが結合している窒素原子と一緒になって、所望によりＯ、Ｓ、またはＮＲ４を含む５員環もしくは６員環の飽和環を形成する｝である。
【０００９】
本発明の望ましい化合物は、
１−[９−(４−クロロフェニル)−２−シアノ−９Ｈ−プリン−６−イル]−Ｌ−プロリンアミド；
９−(４−クロロフェニル)−６−(４−ピロリジン−１−イルピペリジン−１−イル)−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(４−クロロフェニル)−６−[(３−ピロリジン−１−イルプロピル)アミノ]−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
６−(４−アミノピペリジン−１−イル)−９−(４−クロロフェニル)−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
６−[(２−アミノエチル)アミノ]−９−(４−クロロフェニル)−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(４−クロロフェニル)−６−(ジメチルアミノ)−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(４−メチルフェニル)−６−ピロリジン−１−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(４−メトキシフェニル)−６−ピロリジン−１−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(４−クロロフェニル)−６−ピロリジン−１−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(４−クロロフェニル)−６−(エチルアミノ)−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
ｔｅｒｔ−ブチル ４−[９−(４−クロロフェニル)−２−シアノ−９Ｈ−プリン−６−イル]ピペラジン−１−カルボン酸エステル；
【００１０】
９−(４−クロロフェニル)−６−ピペラジン−１−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(２−クロロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(３,４−ジフルオロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(４−イソプロピルフェニル)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(４−メトキシフェニル)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(３−クロロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−[４−(メチルスルホニル)フェニル]−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
６−[(４−クロロフェニル)アミノ]−９−エチル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(４−クロロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
８−アミノ−６−[(４−クロロフェニル)アミノ]−９−エチル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
８−アミノ−９−(４−クロロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(４−クロロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−８−オキソ−８,９−ジヒドロ−７Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
９−(４−クロロフェニル)−８−(ジメチルアミノ)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル；
７−(４−クロロフェニル)−４−モルホリン−４−イル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−カルボニトリル；
７−(４−クロロフェニル)−４−(エチルアミノ)−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−カルボニトリル；
４−[(４−クロロフェニル)アミノ]−７−エチル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−カルボニトリル；
１−[７−(４−クロロフェニル)−２−シアノ−６,７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イル]−Ｌ−プロリンアミド；
１−[２−シアノ−７−(４−メトキシフェニル)−６,７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イル]−Ｌ−プロリンアミド；
７−(４−メトキシフェニル)−４−ピロリジン−１−イル−６,７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−カルボニトリル；
７−(４−メトキシフェニル)−４−モルホリン−４−イル−６,７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−カルボニトリル；
１−(４−メチルフェニル)−４−モルホリン−４−イル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−６−カルボニトリル；
およびそれらの薬学的に許容される塩を含む。
【００１１】
本発明は、さらに、式(Ｉ)の化合物を製造する方法であって、以下の反応を含む。
(i) 一般式(II)の化合物の反応
【化２】
2005533804.tif 000004
式中、Ｌ１とＬ２は、脱離基(例えばハライド、スルフィド、スルホキシド、またはスルホン)を表し、好ましくはスルフィドは、置換前にスルホキシドもしくはスルホンに酸化される。過酸などの酸化剤を用い得、例えばジクロロメタン中、室温でメタ−クロロ過安息香酸を用い得る。
Ｌ１は、Ｒ１｛ここで、Ｒ１は式(Ｉ)で定義されている｝によって置換され得、そしてＬ２は、シアニド、好ましくは塩(例えばシアン化リチウム、シアン化ナトリウム、もしくはシアン化カリウム)によって置換され得る。Ｌ１とＬ２の置換の順序を変え得る。
【００１２】
式(II)[式中、Ｘ＝Ｎ、そしてＹ＝：ＣＨまたは：ＣＮＲ２Ｒ３]の化合物を、式(III)の化合物から、例えばジエトキシ酢酸メチル、ＦＭＯＣ−ＮＣＳ、またはＲ３Ｒ２ＮＣＳＣｌを用いて環化することによって製造し得る。式(II)[式中、Ｘ＝ＮＨ、そしてＹ＝ＣＯ]の化合物はまた、式(III)の化合物から、ホスゲンまたはホスゲン均等物と反応させることによって、製造され得る。反応の順序も変え得る。例えば、式(III)の化合物を、環化段階の前に、始めにＬ１および／またはＬ２置換し得る。
【化３】
2005533804.tif 000005
【００１３】
式(II)の化合物も、式(IV)の化合物から、Ｒ−Ｚ｛ここで、Ｒは式(Ｉ)で定義した通りであり、そしてＺは、脱離基(例えばハライド、活性化アルコール)である｝と反応させることによって製造し得る。
【００１４】
式(II)[式中、ＸとＹ＝：ＣＨ]も式(Ｖ)の化合物から製造し得、そして式(II)[式中、ＸとＹ＝ＣＨ２]の化合物も、式(VI)の化合物から形成し得る。
【化４】
2005533804.tif 000006
【００１５】
本発明のさらなる特徴に従って、治療薬として使用するための、式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
本発明のさらなる特徴に従って、システイン・プロテアーゼを阻害する処置が必要な温血動物(例えばヒト)において、システイン・プロテアーゼを阻害する方法であって、該動物に、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む方法を提供する。
【００１６】
本発明はまた、医薬として使用するための式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩；および温血動物(例えばヒト)において、システイン・プロテアーゼの阻害に使用するための医薬の製造における、本発明の式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。特に、本発明の化合物は、炎症疾患および免疫疾患、例えば喘息、リウマチ性関節炎、ＣＯＰＤ、多発性硬化症、クローン病、アルツハイマー病、および疼痛(例えば神経因性疼痛)(これらに制限されない)の処置に有用である。
【００１７】
特に、本発明は、温血動物(例えばヒト)において、カテプシン Ｓの阻害に使用するための医薬の製造における、本発明の式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。ヒトを含む哺乳動物の治療的処置のための、特にシステイン・プロテアーゼの阻害における、式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩を使用するために、通常医薬組成物として標準的な製薬上の常法に従って製剤化される。
【００１８】
従って、別の態様において、本発明は、式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される希釈剤もしくは担体を含む医薬組成物を提供する。
本発明の医薬組成物は、処置が望まれる疾病状態に標準的な方法で、例えば経口投与、直腸投与、または非経腸投与によって投与され得る。これらの目的のために、本発明の化合物は、当業界で既知の方法によって、例えば錠剤、カプセル剤、水性もしくは油性溶液もしくは懸濁液、(脂質)乳液、分散可能な粉剤、座剤、軟膏、クリーム、滴剤、および滅菌処理された注射可能な水性もしくは油性溶液もしくは懸濁液の形態で製剤化され得る。
【００１９】
本発明の適切な医薬組成物は、１００mgから１ｇの間の本発明の化合物を含む単位投与形で、例えば錠剤もしくはカプセル剤で、経口投与に適切な医薬組成物である。
別の態様において、本発明の医薬組成物は、静脈内、皮下、もしくは筋肉内注射に適切な医薬組成物である。
【００２０】
それぞれの患者は、例えば１mg/kgから１００mg/kgの間の化合物の、好ましくは５mg/kgから２０mg/kgの範囲の本発明の化合物の、静脈内、皮下、もしくは筋肉内投与を行い得る(ここで、該組成物を１日に１から４回投与する)。静脈内、皮下、および筋肉内投与を、ボラス注射によって行い得る。あるいは、静脈内投与を、ある時間連続注入することによって行い得る。あるいは、それぞれの患者は、１日の非経腸投与とほぼ当量の１日の経口投与を行い得る(ここで、該組成物を１日に１から４回投与する)。
【００２１】
下記に、ヒトにおける治療的もしくは予防的使用のための、式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩(以下化合物Ｘとする)を含む、代表的な医薬投与形を例示している。
【００２２】
【表１】
2005533804.tif 000007
【００２３】
【表２】
2005533804.tif 000008
【００２４】
【表３】
2005533804.tif 000009
【００２５】
【表４】
2005533804.tif 000010
【００２６】
【表５】
2005533804.tif 000011
【００２７】
緩衝液、薬学的に許容される共溶媒(例えばポリエチレン グリコール、ポリプロピレン グリコール、グリセロール、またはエタノール)、または複合体形成剤(例えばヒドロキシ プロピル β−シクロデキストリン)を、製剤化を助けるために用い得る。
【００２８】
注
上記の製剤は、当業界で周知の慣用の方法によって得られる。錠剤(ａ)〜(ｃ)は、慣用の方法によって、例えば酢酸 フタル酸 セルロースのコーティングを提供することによって、腸溶性コートされ得る。
下記の実施例は、本発明を説明している。
【実施例】
【００２９】
実施例１
１−[９−(４−クロロフェニル)−２−シアノ−９Ｈ−プリン−６−イル]−Ｌ−プロリンアミド
(i) ６−クロロ−Ｎ〜４〜−(４−クロロフェニル)−２−(プロピルチオ)ピリミジン−４,５−ジアミン
４−クロロアニリン(５.３３ｇ)と、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(７.３ml)と、５−アミノ−４,６−ジクロロ−２−プロピルチオピリミジン(１０ｇ)の混合物を、１００℃で４８時間加熱した。混合物を酢酸エチルと水の層間に分配し、有機層を乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。残さをシリカのクロマトグラフィーによって精製し、イソヘキサン中５０％酢酸エチルで溶出した。収量４.６ｇ。
MS: APCI(+ve)  329(M+1).
【００３０】
(ii) ６−クロロ−９−(４−クロロフェニル)−２−(プロピルチオ)−９Ｈ−プリン
ジエトキシ酢酸メチル(２５ml)中の段階(ｉ)の生成物(４.６ｇ)の溶液を、８０℃で８時間加熱した。混合物を水とイソヘキサンの混合物(４００ml, １：１)に、勢いよく撹拌しながら滴下し、固体を濾過した。固体をシリカのクロマトグラフィーによって精製し、イソヘキサン中２５％酢酸エチルで溶出した。収量２.８ｇ。
MS: APCI(+ve)  339(M+1).
【００３１】
(iii) ６−クロロ−９−(４−クロロフェニル)−２−(プロピルスルホニル)−９Ｈ−プリン
ジクロロエタン(４０ml)中の段階(ii)の生成物(２.８ｇ)と、３−クロロ過安息香酸(３.６ｇ, Aldrich, 最大７７％)の混合物を、室温で２時間撹拌し、メタ重亜硫酸ナトリウム水溶液で、水で、炭酸水素ナトリウム水溶液で、そして水で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。収量２.５ｇ。
MS: APCI(+ve) 371 (M+1).
【００３２】
(iv) １−[９−(４−クロロフェニル)−２−シアノ−９Ｈ−プリン−６−イル]−Ｌ−プロリンアミド
テトラヒドロフラン(１０ml)中の、段階(iii)の生成物(０.２ｇ)と、Ｌ−プロリンアミド(０.０６２ｇ)と、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(０.１９ml)の溶液を、室温で２４時間撹拌した。溶媒を除去し、残さをＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド(１０ml)に溶解し、シアン化ナトリウム(０.０５ｇ)を加え、９０℃で１０時間加熱した。混合物を酢酸エチルと水の層間で分配し、有機層を乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。残さをＲＰＨＰＬＣによって精製した。収量０.０６２ｇ。
MS: APCI(+ve) 368(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 8.67(1H, s), 7.87-7.65(4H, 2xd), 6.95( 2H, m), 4.08(2H, m), 2.97(1H, m), 2.33-1.96(4H, m).
【００３３】
実施例２〜１２
実施例２〜１２を、実施例１の一般的な方法によって、適切なアミンを用いて製造した。
実施例２
９−(４−クロロフェニル)−６−(４−ピロリジン−１−イルピペリジン−１−イル)−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル
MS: APCI(+ve) 408(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 8.79-8.77(1H, s), 7.87-7.70(4H, 2xd), 2.52-2.49(8H, m), 2.38-2.32(1H, m), 2.01-1.43(8H, m).
【００３４】
実施例３
９−(４−クロロフェニル)−６−[(３−ピロリジン−１−イルプロピル)アミノ]−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル, トリフルオロ酢酸塩
MS: APCI(+ve) 382(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 9.46(1H, bs), 8.85-8.58(2H, 2xm), 7.89-7.71(4H, 2xd), 3.59-3.01(8H, m), 2.03-1.84(6H, m).
【００３５】
実施例４
６−(４−アミノピペリジン−１−イル)−９−(４−クロロフェニル)−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル, トリフルオロ酢酸塩
MS: APCI(+ve) 354(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 8.86-8.84(1H, s), 7.98-7.71(6H, 2xd+m), 3.49-3.30(5H, m), 2.12-1.50(4H, m).
【００３６】
実施例５
６−[(２−アミノエチル)アミノ]−９−(４−クロロフェニル)−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル, 酢酸塩
MS: APCI(+ve) 314(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 8.82(1H, s), 8.59(1H, m), 7.89-7.70(4H, 2xd), 3.94(2H, brm), 3.55-3.51(2H, t), 2.83-2.80(2H, t), 1.88(3H, s).
【００３７】
実施例６
９−(４−クロロフェニル)−６−(ジメチルアミノ)−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル
MS: APCI(+ve) 299(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 8.80-8.79(1H, s), 7.88-7.69(4H, 2xd), 3.77(3H, m), 3.12(3H, m).
【００３８】
実施例７
９−(４−メチルフェニル)−６−ピロリジン−１−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル
MS: APCI(+ve) 305(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 8.71(1H, s), 7.68-7.42(4H, 2xd), 4.15-4.12(2H, t), 3.69-3.65(2H, t), 2.40(3H, s), 2.08-1.93(4H, m).
【００３９】
実施例８
９−(４−メトキシフェニル)−６−ピロリジン−１−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル
MS: APCI(+ve) 321(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 8.66(1H, s), 7.69-7.15(4H, 2xd), 4.15-4.12(2H, t), 3.84(3H, s), 3.68-3.65(2H, t), 2.06-1.93(4H, m).
【００４０】
実施例９
９−(４−クロロフェニル)−６−ピロリジン−１−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル
MS: APCI(+ve) 325(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 8.08(1H, s), 7.65(2H, d), 7.54(2H, d), 4.21(2H, t), 3.79(2H, t), 2.16-2.09(2H, m), 2.05-1.99(2H, m).
【００４１】
実施例１０
９−(４−クロロフェニル)−６−(エチルアミノ)−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル
MS: APCI(-ve) 297(M-1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 8.80(1H, s), 8.63(1H, t), 7.88(2H, d), 7.72(2H, d), 3.57-3.50(2H, m), 1.21(3H, t).
【００４２】
実施例１１
ｔｅｒｔ−ブチル ４−[９−(４−クロロフェニル)−２−シアノ−９Ｈ−プリン−６−イル]ピペラジン−１−カルボン酸エステル
MS: APCI(+ve) 440(M+1).
1H-NMR: (CDCl3) δ 8.10(1H, s), 7.63(2H, d), 7.55(2H, d), 4.50-4.40(4H, brs), 3.62-3.59(4H, m), 1.51(9H, s).
【００４３】
実施例１２
９−(４−クロロフェニル)−６−ピペラジン−１−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル
ジクロロメタン(１０ml)とトリフルオロ酢酸(５ml)中の実施例１１の生成物(０.２７ｇ)の溶液を、室温で０.５時間撹拌し、減圧下で蒸発させた。残さをシリカのクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中０.４％トリエチルアミン／６％メタノールで溶出した。収量０.０６ｇ。
MS: APCI(+ve) 340(M+1).
1H-NMR: (CDCl3) δ 8.08(1H, s), 7.63(2H, d), 7.54(2H, d), 4.60-4.00(4H, brs), 3.03(4H, t).
【００４４】
実施例１３
９−(２−クロロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル
(i) ４−[６−クロロ−５−ニトロ−２−(プロピルチオ)ピリミジン−４−イル]モルホリン
モルホリン(２.６ｇ)を、アセトニトリル(７０ml)中の４,６−ジクロロ−５−ニトロ−２−プロピルチオピリミジン(８ｇ)とＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(３.８５ｇ)の溶液に、撹拌しながら、０℃で滴下した。１時間後、溶媒を蒸発させ、残さを酢酸エチルと水の層間に分配し、有機層を乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。残さをシリカのクロマトグラフィーによって精製し、イソヘキサン中２５％酢酸エチルで溶出した。収量７.１ｇ。
MS: APCI(+ve) 319(M+1).
【００４５】
(ii) Ｎ−(２−クロロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−５−ニトロ−２−(プロピルチオ)ピリミジン−４−アミン
イソプロピルアルコール(１２ml)中の、段階(ｉ)の生成物(１ｇ)と、２−クロロアニリン(０.４ｇ)と、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(０.４０４ｇ)の混合物を５５℃で１４時間加熱した。混合物を冷却し、イソプロピルアルコールをデカンテーションで除いた。収量０.８２ｇ。
MS: APCI(+ve) 410(M+1).
【００４６】
(iii) Ｎ〜４〜−(２−クロロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−２−(プロピルチオ)ピリミジン−４,５−ジアミン
氷酢酸(４０ml)中の、段階(ii)の生成物(０.８２ｇ)と、鉄粉(１.２ｇ)の混合物を、出発物質を消費するまで室温で撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残さを酢酸エチルと炭酸水素ナトリウム水溶液の層間に分配した。有機層を乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。粗生成物の収量０.８２ｇ。
MS: APCI(+ve) 380/2(M+1).
【００４７】
(iv) ９−(２−クロロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−２−(プロピルチオ)−９Ｈ−プリン
ジエトキシ酢酸メチル(８ml)中の段階(ｉ)の生成物(０.８２ｇ)の溶液を、８０℃で１６時間加熱した。混合物を、水とイソヘキサンの混合物(３００ml, １：１)に、勢いよく撹拌しながら滴下し、酢酸エチルを加え、有機層を乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。残さをシリカのクロマトグラフィーによって精製し、イソヘキサン中２５％酢酸エチルで溶出した。収量０.４２ｇ。
MS: APCI(+ve)  390/2(M+1).
【００４８】
(v) ９−(２−クロロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−２−(プロピルスルホニル)−９Ｈ−プリン
ジクロロメタン(１５ml)中の、段階(iv)の生成物(２.８ｇ)と、３−クロロ過安息香酸(０.６３ｇ, Aldrich, 最大７７％)の混合物を、室温で５時間撹拌し、メタ重亜硫酸ナトリウム水溶液で、水で、炭酸水素ナトリウム水溶液で、水で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。粗生成物の収量０.７４ｇ。
MS: APCI(+ve) 422/4 (M+1).
【００４９】
(vi) ９−(２−クロロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル
シアン化ナトリウム(０.０８６ｇ)を、ジメチルスルホキシド(１０ml)中の段階(ｖ)の生成物(０.７４ｇ)の溶液に加え、６０℃で３６時間加熱した。混合物を酢酸エチルと塩水の層間に分配し、有機層を塩水で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。残さをシリカのクロマトグラフィーによって精製し、トルエン中１６％酢酸エチルで溶出した。収量０.１５２ｇ。
MS: APCI(+ve) 341(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 8.69(1H, s), 7.80(1H, d), 7.73-7.60(3H, m), 3.78(4H, t).
【００５０】
実施例１４〜１８
実施例１４−１８を、実施例１３の一般的な方法によって、適切なアミンを用いて製造した。
【００５１】
実施例１４
９−(３,４−ジフルオロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル
MS: APCI(+ve) 343(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ  8.83(1H, s), 8.06-8.01(1H, m), 7.79-7.71(2H, m), 3.77(4H, t).
【００５２】
実施例１５
９−(４−イソプロピルフェニル)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル
MS: APCI(+ve) 349(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ  8.77(1H, s), 7.68(2H, d), 7.50(2H, d), 3.76(4H, t), 3.04-2.97(1H, m), 1.26(6H, d).
【００５３】
実施例１６
９−(４−メトキシフェニル)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル
MS: APCI(+ve) 337(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 8.73(1H, s), 7.67(2H, d), 7.16(2H, d), 4.20(4H, broad S), 3.85(3H, s), 3.76(4H, t).
【００５４】
実施例１７
９−(３−クロロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル
MS: APCI(+ve) 341(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 8.87(1H, s), 7.98(1H, s), 7.85-7.82(1H, m), 7.68(1H, t), 7.62-7.59(1H, m), 4.25(4H, broad S), 3.77(4H, t).
【００５５】
実施例１８
９−[４−(メチルスルホニル)フェニル]−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル
MS: APCI(+ve) 385(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 8.95(1H, s), 8.20(2H, d), 8.13(2H, d),4.80-3.90(4H, brs), 3.77(4H, t).
【００５６】
実施例１９
６−[(４−クロロフェニル)アミノ]−９−エチル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル
(i) ２−クロロ−Ｎ−(４−クロロフェニル)−９Ｈ−プリン−６−アミン
ｎ−ブタノール(１５ml)中の、４−クロロアニリン(１.３５ｇ)と、２,６−ジクロロプリン(１ｇ)の混合物を、１００℃で３時間加熱した。沈殿物を濾過して取り、酢酸エチルと水酸化ナトリウム水溶液の層間に分配し、有機層を乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。残さを酢酸エチルでトリチュレートし、濾過した。収量１.０４ｇ。
MS: APCI(+ve) 280/2(M+1).
【００５７】
(ii) ２−クロロ−Ｎ−(４−クロロフェニル)−９−エチル−９Ｈ−プリン−６−アミン
Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド(１５ml)中の、段階(ｉ)の生成物(１.０４ｇ)と、炭酸カリウム(１.０２５ｇ)と、ヨウ化エチル(０.６３７ｇ)の混合物を、室温で２時間、勢いよく撹拌した。混合物を酢酸エチルと水の層間に分配し、有機層を水で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。残さをシリカのクロマトグラフィーによって精製し、イソヘキサン中酢酸エチル(２：１)で溶出した。収量０.６３ｇ。
MS: APCI(+ve) 308/310(M+1).
【００５８】
(iii) Ｎ−(４−クロロフェニル)−９−エチル−２−(メチルチオ)−９Ｈ−プリン−６−アミン
ジメチルスルホキシド(１５ml)中の、段階(ii)の生成物(０.６ｇ)と、ナトリウム チオメトキシド(０.４５ｇ)の混合物を、１１０℃で４時間加熱した。混合物を酢酸エチルと水の層間に分配し、有機層を水で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。収量０.４５ｇ。
MS: APCI(+ve) 320/322(M+1).
【００５９】
(iv) Ｎ−(４−クロロフェニル)−９−エチル−２−(メチルスルホニル)−９Ｈ−プリン−６−アミン
エタノール(２０ml)中の、段階(iii)の生成物(０.４５ｇ)と、３−クロロ過安息香酸(１.２ｇ, Aldrich, 最大７７％)の混合物を、室温で４時間撹拌し、酢酸エチルを加え、混合物を、メタ重亜硫酸ナトリウム水溶液で、水で、炭酸水素ナトリウム水溶液で、水で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。残さをシリカのクロマトグラフィーによって精製し、イソヘキサン中酢酸エチル(４：１)で溶出した。収量０.３９ｇ。
MS: APCI(+ve) 352/4 (M+1).
【００６０】
(v) ６−[(４−クロロフェニル)アミノ]−９−エチル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル
ジメチルスルホキシド(３ml)中の、段階(iv)の生成物(０.１３ｇ)と、シアン化ナトリウム(０.０５４ｇ)の混合物を、室温で７２時間撹拌し、酢酸エチルと水の層間に分配した。有機層を水で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させ、残さをシリカのクロマトグラフィーによって精製し、イソヘキサン中酢酸エチル(２：１)で溶出した。収量０.０３５ｇ。
MS: APCI(-ve) 297(M-1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 10.54(1H, s), 8.62(1H, s), 7.90(2H, d), 7.44(2H, d), 4.28(2H, q), 1.46(3H, t).
【００６１】
実施例２０
９−(４−クロロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル
(i) Ｎ−(４−クロロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−５−ニトロ−２−(プロピルチオ)ピリミジン−４−アミン
モルホリン(１.３１ml)を、ジクロロメタン(５０ml)中の、４,６−ジクロロ−５−ニトロ−２−チオプロピル ピリミジン(４ｇ)と、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(７ml)の溶液に、撹拌しながら、０℃で滴下した。１時間後、４−クロロアニリン(１.９ｇ)を加え、混合物を室温で２４時間撹拌し、２４時間還流した。混合物をジクロロメタンと２Ｍ 塩酸の層間に分配し、有機層を水で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。収量５ｇ。
MS: APCI(+ve) 410/2 (M+1).
【００６２】
(ii) ４−[(４−クロロフェニル)アミノ]−６−モルホリン−４−イル−５−ニトロピリミジン−２−カルボニトリル
ジクロロメタン(２００ml)中の、段階(ｉ)の生成物(５ｇ)と、３−クロロ過安息香酸(１２ｇ, Aldrich, 最大７７％)の混合物を、室温で２時間撹拌し、メタ重亜硫酸ナトリウム水溶液で、水で、炭酸水素ナトリウム水溶液で、水で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。固体をジメチルスルホキシド(３０ml)に溶解し、シアン化ナトリウム(２ｇ)を加え、室温で１時間撹拌した。水(５００ml)を加え、固体を濾過し、水で洗浄し、乾燥し、残さをエーテルでトリチュレートした。収量１.７ｇ。
MS: APCI(+ve) 361/3 (M+1).
【００６３】
(iii) ５−アミノ−４−[(４−クロロフェニル)アミノ]−６−モルホリン−４−イルピリミジン−２−カルボニトリル
酢酸エチル(３００ml)中の、段階(ii)の生成物(１.７ｇ)と、１０％ パラジウム／炭素(０.２ｇ)を、２barで、８時間水素化し、セライトで濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させた。収量１.０５ｇ。
MS: APCI(+ve) 329/331 (M+1).
【００６４】
(iv) ９−(４−クロロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル
ジエトキシ酢酸メチル(１０ml)中の段階(iii)の生成物(０.３５ｇ)の溶液を、８０℃で１２時間加熱し、水を加え、沈殿物を濾過した。固体をシリカのクロマトグラフィーによって精製し、イソヘキサン中３０〜４０％酢酸エチルで溶出した。収量０.２６ｇ。
MS: ESI 341 (M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 8.84(1H, s), 7.86(2H, d), 7.72(2H, d), 3.78-3.75(4H, m), 4.3(4H, brs).
【００６５】
実施例２１
８−アミノ−６−[(４−クロロフェニル)アミノ]−９−エチル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル
アセトニトリル(５ml)中の５−アミノ−４−[(４−クロロフェニル)アミノ]−６−(エチルアミノ)ピリミジン−２−カルボニトリル(０.４１ｇ, 実施例２０の方法を用いて製造)の溶液を、アセトニトリル(１０ml)中のＦＭＯＣ−ＮＣＳ(０.４４ｇ)の溶液に、撹拌しながら、０℃で加えた。１時間後、ジイソプロピルカルボジイミド(０.２５２ｇ)を加え、混合物を４時間還流し、冷却し、ピペラジン(０.１ｇ)を加え、室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残さを酢酸エチルと塩水の層間に分配し、有機層を乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。固体をシリカのクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中２〜４％メタノールで溶出した。収量０.１２ｇ。
MS: APCI(+ve) 314(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 9.62(1H, s), 7.83(2H, d), 7.37(2H, d), 7.14(2H, s), 4.08(2H, q), 1.26(3H, t).
【００６６】
実施例２２
８−アミノ−９−(４−クロロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル
ジクロロメタン中の実施例２０の段階(iii)の生成物(０.６ｇ)と、ＦＭＯＣ−ＮＣＳ(０.６１３ｇ)の混合物を、４０℃で１０時間加熱した。混合物を冷却し、１,４−ジイソプロピルカルボジイミド(０.４２２ml)を加え、５時間加熱し、ピペリジン(１ml)を加え、室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧下で蒸発させ、残さをエーテルでトリチュレートし、水とジメチルスルホキシドから再結晶した。収量０.３４４ｇ。
MS: APCI(+ve) 356/8(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 7.68(2H, d), 7.52(2H, d), 6.97(2H, s), 4.15-4.08(4H, m), 3.73-3.71(4H, m).
【００６７】
実施例２３
９−(４−クロロフェニル)−６−モルホリン−４−イル−８−オキソ−８,９−ジヒドロ−７Ｈ−プリン−２−カルボニトリル
トリホスゲン(０.０９ｇ)を、ジクロロメタン(３０ml)中の実施例２０の段階(iii)の生成物(０.４ｇ)とピリジン(０.４ml)の混合物に加え、混合物を室温で撹拌した。１時間後、さらにトリホスゲン(０.０２ｇ)を加え、さらに１時間撹拌し、水を加え、固体を濾過した。固体を、水で、そしてジエチルエーテルで洗浄し、乾燥した。収量０.１４ｇ。
MS: APCI(-ve) 355/7(M-1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 11.90(1H, s),  7.66-7.61(4H, m), 3.73-3.71(4H, m), 3.62-3.59(4H, m).
【００６８】
実施例２４
９−(４−クロロフェニル)−８−(ジメチルアミノ)−６−モルホリン−４−イル−９Ｈ−プリン−２−カルボニトリル
アセトニトリル(１５ml)中の、実施例２０の段階(iii)の生成物(０.２ｇ)と塩化 ジメチルチオカルバモイル(０.１ｇ)の混合物を、６０℃で６時間加熱した。沈殿物を濾過し、ろ液を減圧下で蒸発させ、残さをシリカのクロマトグラフィーによって精製し、イソヘキサン中４０％酢酸エチルで溶出した。収量０.０３４ｇ。
MS: APCI(+ve) 384(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 7.68(2H, d),  7.58(2H, d), 4.15(4H, brs), 3.75-3.72(4H, m), 2.76(6H, s).
【００６９】
実施例２５
７−(４−クロロフェニル)−４−モルホリン−４−イル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−カルボニトリル
(i) ５−アリル−２,６−ジクロロ−Ｎ−(４−クロロフェニル)ピリミジン−４−アミン
エタノール(１００ml)中の、５−アリル−２,４,６−トリクロロピリミジン(７ｇ)と、４−クロロアニリン(４ｇ)と、炭酸カリウム(４.２７ｇ)の混合物を、室温で２４時間撹拌した。混合物を酢酸エチルと水の層間で分配し、有機層を乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。残さをシリカのクロマトグラフィーによって精製し、イソヘキサン／ジエチルエーテル(２：１)で溶出した。収量５ｇ。
MS: APCI(+ve) 314 (M+1).
【００７０】
(ii) ｛２,４−ジクロロ−６−[(４−クロロフェニル)アミノ]ピリミジン−５−イル｝アセトアルデヒド
ジクロロメタン(４０ml)中の段階(ｉ)の生成物(２ｇ)の溶液を、ジクロロメタン(１ml)中の、四酸化オスミウム(１ml, イソプロピルアルコール中２.５％(wt))と、４−メチルモルホリン Ｎ−オキシド(１.１２ｇ)の溶液に加えた。室温で２４時間撹拌した後、混合物を、水で、そして亜硫酸ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。残さをメタノール(４０ml)に溶解し、０℃に冷却し、四酢酸鉛(３.８５ｇ)を加えた。１時間後、混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出し、有機層を乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。収量２ｇ。
MS: APCI(+ve) 316 (M+1).
【００７１】
(iii) ２,４−ジクロロ−７−(４−クロロフェニル)−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン
メタノール(３０ml)中の段階(ii)の生成物(２ｇ)とｐ−トルエンスルホン酸(触媒量)の溶液を、室温で２時間撹拌し、減圧下で蒸発させた。残さをシリカのクロマトグラフィーによって精製し、イソヘキサン／ジエチルエーテル(２：１)で溶出した。収量０.５ｇ。
MS: APCI(+ve) 298/300 (M+1).
【００７２】
(iv) ７−(４−クロロフェニル)−２,４−ビス(エチルスルホニル)−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン
ナトリウム エタンチオラート (０.４３７ｇ)を、ジメチルスルホキシド(２０ml)中の段階(iii)の生成物(０.５ｇ)の溶液に加え、室温で３０分間撹拌し、酢酸エチルと水の層間に分配した。有機層を乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。残さをジクロロメタン(２０ml)に溶解し、３−クロロ過安息香酸(１.５ｇ, Aldrich, 最大７７％)を加え、混合物を室温で２時間撹拌し、メタ重亜硫酸ナトリウム水溶液で、水で、炭酸水素ナトリウム水溶液で、水で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。粗生成物の収量１ｇ。
MS: APCI(+ve) 414 (M+1).
【００７３】
(v) ７−(４−クロロフェニル)−４−モルホリン−４−イル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−カルボニトリル
テトラヒドロフラン(１０ml)中の、段階(iv)の生成物(０.３５ｇ)と、モルホリン(０.１１ml)と、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(０.２２ml)の混合物を、室温で２４時間撹拌した。混合物を酢酸エチルと水の層間に分配し、有機層を乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。残さをＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド(１０ml)に溶解し、シアン化ナトリウム(０.０８３ｇ)を加え、混合物を９０℃で１０時間加熱した。水を加え、固体を濾過して取り、次にＲＰＨＰＬＣ(水性トリフルオロ酢酸中２５〜９５％アセトニトリル)によって精製した。収量０.０７５ｇ。
MS: APCI(+ve) 340 (M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 7.94-7.64(5H, m), 7.11(1H, m), 3.94-3.74(8H, m).
【００７４】
実施例２６
７−(４−クロロフェニル)−４−(エチルアミノ)−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−カルボニトリル
上記の例示の化合物を、実施例２５の一般的な方法に従って、適切なアミンを用いて製造した。
MS: APCI(+ve) 298 (M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 8.26(1H, t), 7.81-7.63(5H, m), 6.95-6.94(1H, m), 3.55-3.49(2H, q), 1.25-1.21(3H, t).
【００７５】
実施例２７
４−[(４−クロロフェニル)アミノ]−７−エチル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−カルボニトリル
(i) ４−クロロ−７−エチル−２−(メチルチオ)−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン
水素化ナトリウム(０.４４ｇ, 油中６０％分散)を、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド(３０ml)中の４−クロロ−２−(メチルチオ)−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン(２ｇ)の溶液に、撹拌しながら、０℃で少しずつ加えた。０.７５時間後、ヨウ化エチル(０.８８ml)を加え、混合物を２時間撹拌し、水でクエンチし、酢酸エチルと塩水の層間に分配した。有機層を水で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させ、残さをシリカのクロマトグラフィーによって精製し、イソヘキサン中１５％酢酸エチルで溶出した。収量１.９８ｇ。
MS: APCI(+ve) 228/230 (M+1).
【００７６】
(ii) Ｎ−(４−クロロフェニル)−７−エチル−２−(メチルチオ)−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−アミン
エタノール(１０ml)中の、段階(ｉ)の生成物(０.５ｇ)と、４−クロロアニリン(０.８４ｇ)の溶液を、２４時間還流し、溶媒を減圧下で蒸発させた。残さを酢酸エチルと２Ｍ 塩酸の層間に分配し、有機層を水で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ)、減圧下で蒸発させた。収量０.７ｇ。
MS: APCI(+ve) 319/321 (M+1).
【００７７】
(iii) Ｎ−(４−クロロフェニル)−７−エチル−２−(メチルスルホニル)−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−アミン
ジクロロメタン(３０ml)中の、段階(ii)の生成物(０.７ｇ)と、３−クロロ過安息香酸(１.３８ｇ, Aldrich, 最大７７％)の混合物を、室温で、１時間撹拌し、メタ重亜硫酸ナトリウム水溶液で、水で、炭酸水素ナトリウム水溶液で、そして水で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。残さをシリカのクロマトグラフィーによって精製し、イソヘキサン中５０％酢酸エチルで溶出した。収量０.３７ｇ。
MS: APCI(+ve) 351/3 (M+1).
【００７８】
(iv) ４−[(４−クロロフェニル)アミノ]−７−エチル−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−カルボニトリル
シアン化ナトリウム(０.１０３ｇ)を、ジメチルスルホキシド(１０ml)中の段階(iii)の生成物(０.３７ｇ)の溶液に加え、９０℃で４８時間加熱した。混合物を酢酸エチルと水の層間に分配し、有機層を乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。残さをＲＰＨＰＬＣによって精製し、水性トリフルオロ酢酸中２９〜９５％アセトニトリルで溶出した。収量０.１４ｇ。
MS: APCI(+ve) 298/300(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 9.94(1H, s),  7.83(2H, d), 7.67(1H, d), 7.46(2H, d), 6.93(1H, d), 4.26(2H, q), 1.38(3H, t).
Mpt 183℃.
【００７９】
実施例２８
１−[７−(４−クロロフェニル)−２−シアノ−６,７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イル]−Ｌ−プロリンアミド
(i) ２−オキソテトラヒドロフラン−３−カルボン酸メチル
アセトニトリル(２００ml)中のシクロプロパン−１,１−ジカルボン酸(１０ｇ)
を、トリエチルアミン(４３ml)とヨードメタン(１９ml)で、室温で処理し、溶液を２時間撹拌し、７５℃で１６時間加熱した。溶媒を減圧下で除去し、残さを水に溶解し、酢酸エチルで抽出し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、蒸発させ、褐色の油状物を得た(６.７０ｇ)。
1H-NMR: (CDCl3) δ 4.55-4.30(2H, m), 3.82(3H, s), 3.59-3.55(1H, m), 2.73-2.47(2H, m).
【００８０】
(ii) ５−(２−ヒドロキシエチル)−２−チオキソジヒドロピリミジン−４,６(１Ｈ,５Ｈ)−ジオン
無水エタノール(７０ml)中の段階(ｉ)の生成物(６.７０ｇ)の溶液を、チオ尿素(３.５３ｇ)とトリエチルアミン(１２.８０ml)で処理した。混合物を１６時間還流し、溶媒を減圧下で除去し、固体を水(１００ml)に溶解した。溶液を濃塩酸でｐＨ２まで酸性にし、酢酸エチルで抽出した。水層をジクロロメタンで８０時間連続抽出し、褐色の固体を得た(２.２０ｇ)。
MS: APCI(+ve) 189(M+1).
【００８１】
(iii) ５−(２−ヒドロキシエチル)−２−(メチルチオ)ピリミジン−４,６(１Ｈ,５Ｈ)−ジオン
メタノール(１０ml)中の段階(ii)の生成物(２.２ｇ)の溶液を、メタノール(９０ml)中のナトリウム(０.２７ｇ)の溶液に加えた。ヨードメタン(０.７３ml)を加え、混合物を１時間還流した。溶媒を減圧下で除去し、固体を得た。
MS: APCI(+ve) 203(M+1).
【００８２】
(iv) ４,６−ジクロロ−５−(２−クロロエチル)−２−(メチルチオ)ピリミジン
段階(iii)の生成物と、オキシ塩化リン(３０ml)を、１００℃で３時間加熱した。過剰の試薬を減圧下で除去し、残さを氷−水でクエンチし、酢酸エチルで抽出し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、油状物を蒸発させた。油状物を、シリカのクロマトグラフィーによって精製し、イソヘキサン：ジエチルエーテル(４：１)で溶出し、褐色の油状物を得た(０.３６ｇ)。
MS: APCI(+ve) 257/259(M+1).
【００８３】
(v) ４−クロロ−７−(４−クロロフェニル)−２−(メチルチオ)−６,７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン
アセトニトリル(１０ml)中の段階(iv)の生成物(０.３６ｇ)の溶液を、４−クロロアニリン(０.１８ｇ)とＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(０.２５ml)で処理した。混合物を１５０℃で加熱し、溶媒を蒸発させ、溶融物(melt)を形成し、それを９０分間加熱した後固化させた。固体をカラムクロマトグラフィーにかけ、イソヘキサン：ジクロロメタン(１：１)で溶出し、黄色の固体を得た(０.１１０ｇ)。
MS: APCI(+ve) 312(M+1).
【００８４】
(vi) ４−クロロ−７−(４−クロロフェニル)−２−(メチルスルホニル)−６,７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン
ジクロロメタン(２０ml)中の、段階(ｖ)の生成物(０.１１ｇ)と、３−クロロ過安息香酸(０.１５ｇ)の混合物を、室温で２時間撹拌した。混合物をジクロロメタン(１００ml)で希釈し、メタ重亜硫酸ナトリウム溶液で、次に炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、蒸発させ、橙色の固体を得た(０.１ｇ)。
MS: APCI(+ve) 344(M+1).
【００８５】
(vii) ４−クロロ−７−(４−クロロフェニル)−６,７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−カルボニトリル
ジメチルスルホキシド(１０ml)中の、段階(vi)の生成物(０.１ｇ)と、シアン化ナトリウム(０.０２２ｇ)の混合物を、室温で２時間撹拌した。混合物を酢酸エチルと水の層間に分配し、有機層を分離し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、蒸発させ、黄色の固体を得た(０.１ｇ)。
MS: APCI(+ve) 291(M+1).
【００８６】
(viii) １−[７−(４−クロロフェニル)−２−シアノ−６,７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イル]−Ｌ−プロリンアミド
ジメチルスルホキシド(１０ml)中の、段階(vii)の生成物(０.１ｇ)と、Ｌ−プロリンアミド(０.０３９ｇ)と、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(０.０９ml)の混合物を、１００℃で８時間加熱した。混合物を酢酸エチルと水の層間に分配し、有機層を分離し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、減圧下で蒸発させた。残さを、逆相ＨＰＬＣによって、０.１％ 酢酸アンモニウム緩衝液中５０から９５％ アセトニトリルを用いて精製し、白色の固体を得た(０.０３ｇ)。
MS: APCI(+ve) 369(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 7.72-7.02 (6H, m), 4.52-3.36 (7H, m), 2.14-1.90 (4H, m).
【００８７】
実施例２９〜３２
実施例２９〜３２を、実施例２８の段階(vi)〜(viii)の方法によって製造した。
実施例２９
１−[２−シアノ−７−(４−メトキシフェニル)−６,７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イル]−Ｌ−プロリンアミド
MS: APCI(+ve) 365(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 7.55-6.95 (6H, m), 4.51-3.67 (8H, m), 3.49-3.40 (2H, m), 2.13-1.89 (4H, m).
【００８８】
実施例３０
７−(４−メトキシフェニル)−４−ピロリジン−１−イル−６,７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−カルボニトリル
MS: APCI(+ve) 322(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 7.55-6.94 (4H, m), 3.99-3.38 (11H, m), 1.89-1.85 (4H, m).
【００８９】
実施例３１
７−(４−メトキシフェニル)−４−モルホリン−４−イル−６,７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−２−カルボニトリル
MS: APCI(+ve) 338(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 7.55-7.51 (2H, d), 6.99-6.96 (2H, d), 4.04-3.60 (13H, m), 3.33-3.28 (2H, m). 
【００９０】
実施例３２
１−(４−メチルフェニル)−４−モルホリン−４−イル−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−６−カルボニトリル
MS: APCI(+ve) 321(M+1).
1H-NMR: (DMSO-d6) δ 8.71 (1H, s), 7.89-7.87 (2H, d), 7.42-7.39 (2H, d), 4.04-3.97 (4H, m), 3.80-3.77 (4H, m), 2.39 (3H, s).
【００９１】
カテプシン Ｓ活性の測定
QFRET Technology (Quenched Fluorescent Resonance Energy Transfer)を、合成ペプチド：Z-Val-Val-Arg-AMC のカテプシン Ｓ介在切断の試験化合物による阻害を測定するために用いた。化合物を５つの濃度で２回スクリーニングし、ｐＩＣ５０値を記録した。
【００９２】
リン酸緩衝液中２０μＭ [最終濃度]の合成基質：Z-Val-Val-Arg-AMC を、96 well black Optiplate に加えた。アッセイ・プレートを、化合物の自己蛍光(auto fluorescence)について、SpectraMax Gemini (励起：３５５nm, 放出：４６０nm)で前もって測定した。リン酸緩衝液中２５０ｐＭ [最終濃度]のヒト組換え カテプシン Ｓを加え、室温で２時間 the SpectraMax Gemini でインキュベートし、２０分毎に、励起：３５５nm、放出：４６０nmで測定した。
【００９３】
活性をベースとしたテンプレート(５ＰＴＢ−８)は、自動蛍光補正データを用いて、対応プレート対照により、それぞれの化合物の濃度における％阻害を計算した。このデータを用いて阻害曲線を作成し、ｐＩＣ５０を４パラメーター・ロジスティック・モデルを用いて非線形曲線によって推計した。
【国際調査報告】
2005533804.tif 000014
2005533804.tif 000015
2005533804.tif 000016
2005533804.tif 000017
2005533804.tif 000018
2005533804.tif 000019