(57)【要約】  本発明は、下記式（ＩＩ）で示される新規な結晶性のジ塩酸塩・モノ水和物、および呼吸性シンシチウムウイルス感染の処置に用いる該ジ塩酸塩・モノ水和物の医薬投与製剤を提供する。【化１】2005511714.tif 000007
2005511714.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2005511714.tif 000006
で示されるジ塩酸塩・モノ水和物。
【請求項２】
請求項１に記載のジ塩酸塩・モノ水和物および医薬的に許容しうる担体から成る医薬投与製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、式：
【化１】
2005511714.tif 000003
で示されるイミダゾピリジンＲＳＶ（すなわち、呼吸性シンシチウム（ＲＳ）ウイルス）融合インヒビターの、新規な結晶性のジ塩酸塩・モノ水和物を提供し、該ジ塩酸塩・モノ水和物は、他の塩に対し優れた物理的安定性、並びに遊離塩基と比較して意味ありげに改善された水性溶解度／溶解挙動および嵩特性（bulk  characteristics）を示す。このように該ジ塩酸塩・モノ水和物は、上記ＲＳＶ融合インヒビターの医薬投与製剤、特に経口投与製剤に用いられる。
【背景技術】
【０００２】
Ｕ．Ｓ．特許出願Ｎo．０９／８４０２７９（２００１年４月３日出願）に、一連のイミダゾピリジンおよびイミダゾピリミジン抗ウイルス剤が開示され、ＲＳＶウイルスに対し高度の抑制活性を有すると報告されている。該Ｕ．Ｓ．特許出願の技術的範囲に含まれる抗ウイルス剤の１つは、式：
【化２】
2005511714.tif 000004
で示される化合物である。
【０００３】
このＵ．Ｓ．特許出願には、上記化合物Ｉなどのイミダゾピリジン誘導体の遊離塩基形状と、各種医薬的に許容しうる酸付加塩も開示されている。可能な塩形成剤として、塩酸を含む幾つかの有機および無機塩が言及されているが、本発明の主題である特定のジ塩酸塩・モノ水和物についての言及は全くない。
【０００４】
（発明の概要）
本発明は、上記化合物Ｉの、式：
【化３】
2005511714.tif 000005
で示されるジ塩酸塩・モノ水和物を提供する。
【０００５】
図１は、ジ塩酸塩・モノ水和物の物理的安定性を示す、示差走査熱量測定を表わす（ＴＡインストルメンツＤＳＣ２９２０）。実線は初期状態を表わし、短ダッシュは４０℃／７５％ＲＨ×６週間を表わし、長ダッシュは５０℃×６週間を表わす。〜１００℃で脱水後、融解／分解が〜１８０℃で開始する。初期とストレス（stress、応力）をかけたサンプル間に、重大な差異を検知することができない。
【０００６】
図２は、ジ塩酸塩・モノ水和物の物理的安定性を示す、熱重量分析を表わす（ＴＡインストルメンツＴＧＡ２０５０）。実線は初期状態を表わし、短ダッシュは４０℃／７５％ＲＨ×６週間を表わし、長ダッシュは５０℃×６週間を表わす。全てのサンプルにおける〜１００℃での〜３．８％の重量損失は、該モノ水和物体の安定性を示す。
【０００７】
図３は、ジ塩酸塩・モノ水和物の物理的安定性を示す、粉末Ｘ線回折分析を表わす（Ｒigaku  Ｍiniflex  Ｐowder  Ｘ線回折計）。図中、６ｗｋ  ４０／７５は４０℃／７５％ＲＨ×６週間；および６ｗｋ  ５０Ｃは５０℃×６週間である。初期とストレスをかけたサンプルの図形は一致し、このことは、結晶構造に変化が全く起こらなかったことを示す。
【０００８】
図４は、モノリン酸塩・モノ水和物の物理的安定性の欠如を示す、熱重量分析を表わす（ＴＡインストルメンツＴＧＡ２０５０）。６５℃以下の温度で、完全な脱水が起こる。
【０００９】
図５は、モノリン酸塩・モノ水和物の物理的安定性の欠如を示す、示差走査熱量測定を表わす（ＴＡインストルメンツＤＳＣ２９２０）。融点以下の多様な吸熱および発熱固相転移は、該塩の物理的不安定性を示す。
【００１０】
（発明の詳細）
医薬投与製剤の発展のため、活性成分は、許容しうる嵩特性、たとえば嵩密度、圧縮性および流動性を有しなければならない。遊離塩基形状のイミダゾピリジンＩの無水形状Ｐ１は、望ましくない嵩特性、たとえば非常に低い嵩密度を示した。ばら材料は、軽量でふわふわし、取扱いが困難である。無水形状Ｐ１のほかに、２種の水和形状Ｐ２およびＰ３を生成することができたが、再現性がない。
【００１１】
Ｐ２およびＰ３の嵩特性は、Ｐ１と比較してたいして改善されていなかった。そのため、本発明者は酸付加塩を検討した。イミダゾピリジンＩの２つの塩基性官能基のｐＫａ値（５．７および３．４）に基づき、モノおよびジ塩酸塩に加えて、モノおよびジメタンスルホン酸塩、モノマレイン酸塩およびモノリン酸塩などの、一般に用いられている酸の数多くのモノおよびジプロトン化付加塩を評価した。
【００１２】
固体状態における結晶形状の結晶度および満足な物理的安定性は、医薬塩形状の望ましい性質である。語句“物理的安定性”とは、貯蔵／ストレス条件下で、もしあれば、結晶化の溶剤を含有するその結晶構造を保有しうる、塩形状の能力を示す。Ｘ線分析や示差走査熱量測定などの熱的方法で示される、塩形状の物理的性質における示差的な変化は望ましくない。
【００１３】
本発明の結晶性のジ塩酸塩・モノ水和物は意外にも、図１、２および３で示されるように、５０℃または４０℃／７５％相対湿度（ＲＨ）で６週間もの長期にわたり貯蔵したときに、良好な嵩特性並びに優れた固体状態の物理的安定性を示した。示差走査熱量測定により、当該ジ塩酸塩・モノ水和物のストレスをかけたサンプルを、ストレスをかけなかったサンプル（密閉容器中２〜８℃で貯蔵）と比較した場合、熱的挙動に示差的な変化のないことが明らかであった。
【００１４】
熱重量分析並びにカール・フィッシャー分析により、ジ塩酸塩・モノ水和物の結晶構造は上記の貯蔵／ストレス条件下でその結晶水を保有することが示され、かつストレスをかけたサンプルの元素分析により、ジ塩酸塩・モノ水和物の塩化学量論は変化していないままであることが明らかであった。ジ塩酸塩・モノ水和物を水中に懸濁させたとき、固体状態の転移は見られなかった。
【００１５】
一方、モノマレイン酸塩や、モノリン酸塩・モノ水和物は、固体状態において重大な物理的不安定性を示した。モノマレイン酸塩は、水中に懸濁すると、プロトンＮＭＲ分析で検知されるように、フマル酸塩に変換した。フマル酸（初期ｐＫａ〜３）は、マレイン酸（初期ｐＫａ〜２）より弱い酸であるので、この酸の異性化は、固体状態において遊離塩基への解離をもたらしうる。モノリン酸塩・モノ水和物は、貯蔵／ストレス条件下結晶水を保有しうる能力が欠けていた（図４）。
【００１６】
６５℃以下の温度で完全な脱水が起こり、得られる脱水体は、室温まで冷却すると、元のモノ水和物に変換した。固体状態における物理的不安定性の追加の表示として、モノリン酸塩・モノ水和物は、示差走査熱量測定や可変温度粉末Ｘ線分析によって検知されるように、その融点以下で多様な固相転移を示した（図５）。メチルスルホン酸塩のみが、非晶質状態で生成することができたが、これは医薬塩形状にとって望ましい性質ではない。
【００１７】
さらに、ジ塩酸塩の無水形状は、２５℃、相対湿度６０〜７０％で貯蔵すると、本発明のジ塩酸塩・モノ水和物に急速に変換するのが認められる。モノ塩酸塩は再現しうる方法で生成することができなかったが、それは、モノおよびジ塩酸塩の混合物または純粋なジ塩酸塩・モノ水和物のみが得られるからである。溶媒化合物または結晶変種を形成する個々の塩の性質や、貯蔵／ストレス条件下で結晶化の溶剤を保有しうる能力あるいは結晶変種の物理的安定性を、先天的に予測することはできない。
【００１８】
医薬投与剤形、特に経口投与剤形の発展のため、活性成分は十分な経口生物学的利用能を有しなければならない。イヌにおけるイミダゾピリジンＩの経口生物学的利用能の比較により、該化合物Ｉを本発明のジ塩酸塩・モノ水和物固体としてカプセル剤で投与した場合、遊離塩基固体としてカプセル剤で投与した場合に比し、同様なピーク濃度を有し、しかもピーク濃度までの時間が短く、かつ暴露価値（exposure  values）の大きいことがわかった。これらの薬物動力学データは、該塩の遊離塩基形状と比較して高い溶解度／溶解速度によって説明することができ、さらに、これらのデータから、本発明のジ塩酸塩・モノ水和物は、化合物Ｉの遊離塩基形状に比しかなりの利点を有することが裏付けられる。
【００１９】
ジ塩酸塩・モノ水和物は、アセトン、イソプロパノールまたはメタノールなどの溶剤中の、化合物Ｉの遊離塩基と塩酸の溶液を形成し、次いで生成するジ塩酸塩・モノ水和物の単離によって製造することができる。
【００２０】
ジ塩酸塩・モノ水和物は、その生物学的利用能並びに良好な結晶度および安定性のため、化合物Ｉの経口投与剤形の製造に極めて有用である。
次に一例を挙げて、代表的な経口製剤の調製について説明する。
【００２１】
生物学的活性
ペニシリン、ストレプトマイシン、グルタミンおよび１０％ウシ胎児血清を補ったＤＭＥＭ（Ｄulbecco's  Ｍodified  Ｅagle's  Ｍedium）中の９６ウェルのミクロタイター平板に、１．５×１０４細胞／１００μＬ／ウェルで接種したＨＥｐ−２（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ２３）細胞で、呼吸性シンシチウム（ＲＳ）ウイルスに対するこれら化合物の抗ウイルス活性を測定した。細胞を３７℃で一夜培養し、培地を取出し、５０００プラク形成ユニット／ｍＬのＲＳウイルス・ロング（Ｌong）菌株を用い、細胞を感染させた（２％ウシ胎児血清含有の培地中、１００μＬ容量）。感染の１時間後、細胞に適当に希釈した１００μＬの化合物を加えた。
【００２２】
３７℃で４日間の培養後、平板をＭＴＴ溶液（３−［４，５−ジメチルチアゾリル−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウム・ブロミド）で染色し、３７℃で４時間培養する。細胞から培地を吸引し、１００μＬ／ウェルの酸性化したイソプロパノール（１リットル当り、イソプロパノール９００ｍＬ、Ｔriton×１００（１００ｍＬ）、および濃ＨＣｌ（４ｍＬ））を加えた。振とうさせながら、室温で１５分間平板を培養し、５４０ナノメートル（ｎｍ）で読み取った光学濃度（ＯＤ５４０）を得た。
【００２３】
読み取った光学濃度は、生存可能な細胞の数に比例する。生存可能な細胞の数の増加は、化合物の保護する抗ウイルス活性を反映する。化合物含有の感染していない細胞におけるＭＴＴ染色を、化合物のない感染していない細胞と比較するアッセイは、ある程度の細胞毒性を付与する。このアッセイの対照化合物は、リバビリンであって、２．５μｇ／ｍＬ（１０．２μＭに相当）で１００％の細胞保護を示す。
【００２４】
化合物の抗ウイルス活性（ＥＣ５０と称す）は、アッセイにおいて、５０％細胞保護をもたらす濃度で表わす。本発明開示のジＨＣｌ塩・モノ水和物（化合物ＩＩ）は、ＥＣ５０＝０．０６μＭの抗ウイルス活性を示す。リバビリンは、このアッセイでＥＣ５０＝３μＭを有する。
【実施例】
【００２５】
実施例１
機械的攪拌器およびコンデンサーを持つ三ツ首丸底フラスコに、遊離塩基化合物Ｉ（１００．０ｇ、０．２６５モル）を入れる。イソプロパノール（４００．６ｍＬ）および水（７５．０ｍＬ）を加えて、スラリーを得る。混合物に、濃ＨＣｌ溶液（３７％水溶液、４７．８ｍＬ、２．２当量）を加える。混合物を６０℃に加熱して、透明溶液を形成する。次いでアセトン（５５０ｍＬ）をゆっくり加え、その間、温度を６０℃に維持する。混合物を６０℃で１時間攪拌してから、２０〜２５℃にゆっくりと冷却する。
【００２６】
混合物を２０〜２５℃でさらに２時間攪拌する。固体を濾別し、アセトン（３０２．５ｍＬ×２）で洗い、一夜減圧乾燥して、１１９．３ｇ（９６％）のジＨＣｌ塩・モノ水和物（化合物ＩＩ）を得る。
元素分析（Ｃ２１Ｈ２３Ｎ５Ｏ２・２．０ＨＣｌ・１．０Ｈ２Ｏとして）
計算値：Ｃ５３．８５、Ｈ５．８１、Ｎ１４．９５、Ｃｌ１５．１３、Ｈ２Ｏ３．８
実測値：Ｃ５３．７３、Ｈ５．７５、Ｎ１４．９６、Ｃｌ１４．８０、Ｈ２Ｏ３．８（          ＫＦ）
【００２７】
実施例２
ジ塩酸塩・モノ水和物のカプセル製剤の調製：
式ＩＩのジ塩酸塩・モノ水和物を、微結晶セルロース、予めゼラチン化したスターチ、ナトリウム・スターチグリコネート（glyconate）およびステアリン酸マグネシウムと、ドライ粗砕下で配合し、これらをカプセルサイズが＃０の、灰色不透明の硬質ゼラチンカプセルに含有せしめ、経口投与用のカプセル製剤（遊離塩基１０および５０ｍｇに相当）を得る。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】本発明のジ塩酸塩・モノ水和物を示差走査熱量測定した場合のグラフである。
【図２】本発明のジ塩酸塩・モノ水和物を熱重量分析した場合のグラフである。
【図３】本発明のジ塩酸塩・モノ水和物を粉末Ｘ線回折分析した場合のグラフである。
【図４】モノリン酸塩・モノ水和物を熱重量分析した場合のグラフである。
【図５】モノリン酸塩・モノ水和物を示差走査熱量測定した場合のグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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