(57)【要約】本発明は、固有の生理学的特性を有する抗ＣＤ２２モノクローナル抗体を使用した治療方法に関する。特に、本発明は、有効量の天然のヒトＣＤ２２（ｈＣＤ２２）の第１の２つのＩｇ様ドメインまたは第１の２つのＩｇ様ドメイン内のエピトープに特異的に結合する遮断抗ＣＤ２２モノクローナル抗体の投与によるＢ細胞性腫瘍および自己免疫疾患の治療方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
自己免疫疾患と診断されたヒト患者の治療方法であって、（１）有効量の遮断抗ＣＤ２２モノクローナル抗体をヒト患者に投与するステップと、ここで、前記抗体は、配列番号９（ＨＢ２２−５  ＶH配列）の１〜１００のアミノ酸、配列番号１１（ＨＢ２２−７  ＶH配列）の１〜９７のアミノ酸、配列番号１３（ＨＢ２２−１３  ＶH配列）の１〜１００のアミノ酸、配列番号１５（ＨＢ２２−２３  ＶH配列）の１〜１００のアミノ酸、配列番号１７（ＨＢ２２−３３  ＶH配列）の１〜９８のアミノ酸、または配列番号１９（ＨＢ２２−１９６  ＶH配列）の１〜１００のアミノ酸の配列と少なくとも約９５％の配列同一性を有するＶH配列を含む重鎖を含み、（２）前記治療に対する前記自己免疫疾患の応答をモニタリングするステップとを含む、方法。
【請求項２】
前記抗体が、配列番号１１（ＨＢ２２−７  ＶH配列）の１〜９７のアミノ酸、配列番号１５（ＨＢ２２−２３  ＶH配列）の１〜１００のアミノ酸、または配列番号１７（ＨＢ２２−３３  ＶｚH配列）の１〜９８のアミノ酸の配列と少なくとも約９５％の配列同一性を有するＶH配列を含む重鎖を含む、請求項１の方法。
【請求項３】
前記抗体が、配列番号１１（ＨＢ２２−７  ＶH配列）の１〜９７のアミノ酸、配列番号１５（ＨＢ２２−２３  ＶH配列）の１〜１００のアミノ酸、および配列番号１７（ＨＢ２２−３３  ＶH配列）の１〜９８のアミノ酸の配列からなる群から選択されるＶH配列を含む、請求項２の方法。
【請求項４】
自己免疫疾患と診断されたヒト患者の治療方法であって、（１）有効量の遮断抗ＣＤ２２モノクローナル抗体をヒト患者に投与するステップと、ここで、前記抗体は、配列番号２１（ＨＢ２２−５  Ｖκ配列）、配列番号２３（ＨＢ２２−７  Ｖκ配列）、配列番号２５（ＨＢ２２−１３  Ｖκ配列）、配列番号２７（ＨＢ２２−２３  Ｖκ配列）、配列番号２９（ＨＢ２２−３３  Ｖκ配列）、または配列番号３１（ＨＢ２２−１９６  Ｖκ配列）のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の配列同一性を有するＶκ配列を含む軽鎖を含み、（２）前記治療に対する前記自己免疫疾患の応答をモニタリングするステップとを含む、方法。
【請求項５】
前記抗体が、配列番号２３（ＨＢ２２−７  Ｖκ配列）、配列番号２７（ＨＢ２２−２３  Ｖκ配列）、または配列番号２９（ＨＢ２２−３３  Ｖκ配列）のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の配列同一性を有するＶκ配列を含む軽鎖を含む、請求項４の方法。
【請求項６】
前記抗体が配列番号２３（ＨＢ２２−７  Ｖκ配列）、配列番号２７（ＨＢ２２−２３  Ｖκ配列）、および配列番号２９（ＨＢ２２−３３  Ｖκ配列）のアミノ酸配列からなる群から選択されるＶκ配列を含む、請求項５の方法。
【請求項７】
前記抗体が、配列番号１１（ＨＢ２２−７  ＶH配列）の１〜９７のアミノ酸と配列番号２３（ＨＢ２２−７  Ｖκ配列）のアミノ酸配列、配列番号１５（ＨＢ２２−２３  ＶH配列）の１〜１００のアミノ酸と配列番号２７（ＨＢ２２−２３  Ｖκ配列）のアミノ酸配列、配列番号１７（ＨＢ２２−３３  ＶH配列）の１〜９８のアミノ酸と配列番号２９（ＨＢ２２−３３  Ｖκ配列）のアミノ酸配列からなる群から選択される、ＶH配列およびＶκ配列を含む、請求項１の方法。
【請求項８】
前記治療が、いかなる他の自己免疫疾患治療とも併用しない、請求項１の方法。
【請求項９】
前記抗体が、完全な抗体のフラグメントである、請求項１の方法。
【請求項１０】
前記抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2、およびＦｖフラグメント、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、線状抗体、一本鎖抗体分子、および抗体フラグメントから形成された多特異性抗体からなる群から選択される、請求項９の方法。
【請求項１１】
前記抗体が、抗原特異性を含み、ＣＤ２２分子の第１の２つのＩｇ様ドメインへの結合または配列番号１の天然のヒトＣＤ２２（ｈＣＤ２２）の第１の２つのＩｇ様ドメイン内のエピトープへの結合に有効であり、さらなる抗原特異性をさらに有する、請求項１の方法。
【請求項１２】
前記抗体が二重特異性抗体である、請求項１０の方法。
【請求項１３】
前記抗体がＣＤ２２の別のエピトープにさらに結合する、請求項１２の方法。
【請求項１４】
前記抗体がキメラである、請求項１の方法。
【請求項１５】
前記抗体がヒト化されている、請求項１の方法。
【請求項１６】
前記抗体がヒトである、請求項１の方法。
【請求項１７】
前記抗体を静脈内投与する、請求項１の方法。
【請求項１８】
前記抗体を毎週静脈注射によって投与する、請求項１７の方法。
【請求項１９】
前記ヒト患者に抗ＣＤ２０抗体をさらに投与する、請求項１の方法。
【請求項２０】
前記抗体がキメラである、請求項７の方法。
【請求項２１】
前記抗体がヒト化されている、請求項７の方法。
【請求項２２】
前記抗体がヒトである、請求項７の方法。
【請求項２３】
前記治療が、いかなる他の自己免疫疾患治療とも併用しない、請求項４の方法。
【請求項２４】
前記抗体が、完全な抗体のフラグメントである、請求項４の方法。
【請求項２５】
前記抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2、およびＦｖフラグメント、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、線状抗体、一本鎖抗体分子、および抗体フラグメントから形成された多特異性抗体からなる群から選択される、請求項２４の方法。
【請求項２６】
前記抗体が抗原特異性を含み、ＣＤ２２分子の第１の２つのＩｇ様ドメインへの結合または配列番号１の天然のヒトＣＤ２２（ｈＣＤ２２）の第１の２つのＩｇ様ドメイン内のエピトープへの結合に有効であり、さらなる抗原特異性をさらに有する、請求項４の方法。
【請求項２７】
前記抗体が二重特異性抗体である、請求項２５の方法。
【請求項２８】
前記抗体がＣＤ２２の別のエピトープにさらに結合する、請求項２７の方法。
【請求項２９】
前記抗体がキメラである、請求項４の方法。
【請求項３０】
前記抗体がヒト化されている、請求項４の方法。
【請求項３１】
前記抗体がヒトである、請求項４の方法。
【請求項３２】
前記抗体を静脈内投与する、請求項４の方法。
【請求項３３】
前記抗体を毎週静脈注射によって投与する、請求項３２の方法。
【請求項３４】
前記ヒト患者に抗ＣＤ２０抗体をさらに投与する、請求項４の方法。
【請求項３５】
配列番号９（ＨＢ２２−５  ＶH配列）の１〜１００のアミノ酸、配列番号１１（ＨＢ２２−７  ＶH配列）の１〜９７のアミノ酸、配列番号１３（ＨＢ２２−１３  ＶH配列）の１〜１００のアミノ酸、配列番号１５（ＨＢ２２−２３  ＶH配列）の１〜１００のアミノ酸、配列番号１７（ＨＢ２２−３３  ＶH配列）の１〜９８のアミノ酸、または配列番号１９（ＨＢ２２−１９６  ＶH配列）の１〜１００のアミノ酸の配列と少なくとも約９５％の配列同一性を有するＶH配列を含む抗体重鎖可変領域をコードする核酸を含む単離核酸分子。
【請求項３６】
配列番号２１（ＨＢ２２−５  Ｖκ配列）、配列番号２３（ＨＢ２２−７  Ｖκ配列）、配列番号２５（ＨＢ２２−１３  Ｖκ配列）、配列番号２７（ＨＢ２２−２３  Ｖκ配列）、配列番号２９（ＨＢ２２−３３  Ｖκ配列）、または配列番号３１（ＨＢ２２−１９６  Ｖκ配列）のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の配列同一性を有するＶκ配列を含む抗体軽鎖可変領域をコードする核酸を含む単離核酸分子。
【請求項３７】
配列番号１１（ＨＢ２２−７  ＶH配列）の１〜９７のアミノ酸、配列番号１５（ＨＢ２２−２３  ＶH配列）の１〜１００のアミノ酸、および配列番号１７（ＨＢ２２−３３  ＶH配列）の１〜９８のアミノ酸の配列からなる群から選択されるＶH配列をコードする核酸を含む単離核酸分子。
【請求項３８】
配列番号２３（ＨＢ２２−７  Ｖκ配列）、配列番号２７（ＨＢ２２−２３  Ｖκ配列）、および配列番号２９（ＨＢ２２−３３  Ｖκ配列）のアミノ酸配列からなる群から選択されるＶκ配列をコードする核酸を含む単離核酸分子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００２年２月２１日提出の米国特許仮出願第６０／３５９，４１９号および２００２年１０月２１日提出の米国特許仮出願第６０／４２０，４７２号（その両出願全体が参照することにより本明細書中に組み込まれる）の優先権を主張する。本発明は、国立衛生研究所の助成金番号ＣＡ８１７７６の援助を利用した。合衆国政府は、本発明に一定の権利を有する。
【０００２】
［発明の分野］
本発明は、固有の生理学的特性を有する抗ＣＤ２２モノクローナル抗体の治療上の使用に関する。より詳細には、本発明は、固有のプロアポトーシス性を有する遮断抗ＣＤ２２抗体を使用したリンパ腫および白血病などのＢ細胞性腫瘍ならびに自己免疫疾患の治療方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＣＤ２２は、ほぼ全てのＢリンパ球およびほとんどのＢ細胞リンパ腫で見出される膜糖リンタンパク質である。ＣＤの架橋によりＣＤ２２チロシンリン酸化が誘発され、ストレス活性化タンパク質キナーゼ（ＳＡＰＫ）経路を活性化するエフェクタータンパク質の複合体が構築される。ＣＤ２２架橋により、初代Ｂ細胞で強力な同時刺激シグナルおよび新生物Ｂ細胞でプロアポトーシスシグナルが得られる。構造的に、ＣＤ２２は、１つのアミノ末端ＶセットＩｇドメインおよび６つのＣ−２セットＩｇドメインを有する７つの細胞外Ｉｇドメインを有する免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子スーパーファミリーの「シアロアドヘシン」サブクラスのメンバーである。Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１３７−１４６（１９９１）；Ｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８１：１５８１−１５８６（１９９５）；およびＴｏｒｒｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：２６４１−２６４９（１９９２）。ＣＤ２２は生理学的に適切な部位へのシグナル伝達エフェクター分子の漸増によってＢリンパ球抗原受容体（ＢＣＲ）シグナル伝達を負および正に制御する重要なリンパ球特異性シグナル伝達分子であることが示されている。Ｔｅｄｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：４８１−５０４（１９９７）；Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １０：２８７−２９７（１９９８）。
【０００４】
抗ＣＤ２２抗体は、例えば、米国特許第５，４８４，８９２号、同第６，１８３，７４４号、同第６，１８７，２８７号、同第６，２５４，８６８号、およびＴｕｓｃａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ９４（４）：１３８２−９２（１９９９）に記載されている。非ホジキンリンパ腫の治療におけるモノクローナル抗体（抗ＣＤ２２抗体が含まれる）の使用は、例えば、Ｒｅｎｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉｎａ  １１（Ｓｕｐｐｌ．２）：Ｓ５５−９（１９９７）に概説されている。ヒト化抗ＣＤ２２抗体であるＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ（商標）（ｅｍｐａｔｕｚｕｍａｂ，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．）は、非ホジキンリンパ腫の不活性および急速進行性（ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ）形態の治療についての第三相試験中である。この抗体のイットリウム−９０標識バージョンは、現在、同一の適応症についての第一相試験中である。
【０００５】
癌治療における現在の利点にもかかわらず、非ホジキンリンパ腫のＢ細胞サブタイプおよび慢性リンパ性白血病などのＢ細胞性腫瘍は、癌関連死の最も大きな一因となる。したがって、Ｂ細胞性腫瘍治療のためのさらに改良された治療計画が非常に必要である。自己免疫疾患は、概して、重大な病的状態および障害を引き起こす。１９６５年から１９９５年までに収集した罹患率データに基づいて、今後５年間に約１，１８６，０１５人が新たに自己免疫疾患を発症すると見積もられている。Ｊａｃｏｂｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．８４：２２３（１９９７））は、１３０の公開された研究を評価し、１９９６年では、合衆国の８５０万人（全人口の３．２％）がこれらの研究で試験された２４種の自己免疫疾患の少なくとも１つを有すると見積もった。公衆衛生に対する自己免疫疾患の主要な影響を考慮して、これらの障害の苦しみに取り組むための有効且つ安全な治療が必要である。したがって、自己免疫疾患の治療のための試薬および方法の改良が当分野で必要である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、一定の遮断抗ＣＤ２２モノクローナル抗体の固有の特性を利用したヒト患者におけるＢ細胞性腫瘍および自己免疫疾患の改良された臨床治療アプローチに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
１つの態様では、本発明は、（１）有効量の配列番号１の天然のヒトＣＤ２２（ｈＣＤ２２）の第１の２つのＩｇ様ドメインへまたは第１の２つのＩｇ様ドメインに結合したエピトープに特異的に結合する遮断抗ＣＤ２２モノクローナル抗体を患者に投与するステップと、（２）治療に対する悪性疾患の応答をモニタリングするステップとを含む、Ｂ細胞性腫瘍と診断されたヒト患者の治療方法に関する。
【０００８】
さらなる態様では、本発明は、有効量の遮断抗ＣＤ２２モノクローナル抗体を被験体に投与するステップと、任意選択的に（２）治療に対する自己免疫疾患の応答をモニタリングするステップとを含む、自己免疫疾患と診断された被験体（例えば、ヒト患者）の治療方法に関する。
【０００９】
さらなる態様として、本発明は、有効量の遮断抗ＣＤ２２モノクローナル抗体の被験体（例えば、ヒト被験体）への投与および任意選択的に（２）治療に対する応答のモニタリングによる、Ｂ細胞活性の減少、Ｂ細胞もしくはＢ細胞サブセット数の減少、Ｂ細胞もしくは特定のＢ細胞サブセットのさらに本質的な排除、Ｂ細胞の代謝回転の増大、および／またはＢ細胞による抗体産生の減少方法を提供する。「減少」は、少なくとも約２５％、３５％、５０％、もしくは７５％またはそれ以上の減少を意味する。「本質的な排除」は、少なくとも約９０％、９５％、９８％、またはそれ以上の減少を意味する。「代謝回転の増大」は、少なくとも約２５％、３５％、５０％、７５％、１００％、１５０％またはそれ以上の代謝回転率の上昇を意味する。
【００１０】
特定の実施形態では、使用した抗体は、ＨＢ２２−７（ＨＢ１１３４７）、ＨＢ２２−２３（ＨＢ１１３４９）、ＨＢ２２−３３、ＨＢ２２−５、ＨＢ２２−１３、およびＨＢ２２−１９６、好ましくはＨＢ２２−７、ＨＢ２２−２３、またはＨＢ２２−３３、より好ましくはＨＢ２２−７またはＨＢ２２−３３からなる群から選択される抗体と同一のエピトープと本質的に結合する。
【００１１】
さらなる実施形態では、抗体は、そのリガンドとのＣＤ２２結合を少なくとも７０％まで、好ましくは少なくとも８０％まで遮断する。
【００１２】
別の実施形態では、抗体は、配列番号９（ＨＢ２２−５  ＶH配列）の１〜１００のアミノ酸、配列番号１１（ＨＢ２２−７  ＶH配列）の１〜９７のアミノ酸、配列番号１３（ＨＢ２２−１３  ＶH配列）の１〜１００のアミノ酸、配列番号１５（ＨＢ２２−２３  ＶH配列）の１〜１００のアミノ酸、配列番号１７（ＨＢ２２−３３  ＶH配列）の１〜９８のアミノ酸、または配列番号１９（ＨＢ２２−１９６  ＶH配列）の１〜１００のアミノ酸の配列と少なくとも約９５％の配列同一性を有するＶH配列を含む重鎖を含む。
【００１３】
さらに別の実施形態では、抗体は、配列番号１１（ＨＢ２２−７  ＶH配列）の１〜９７のアミノ酸、配列番号１５（ＨＢ２２−２３  ＶH配列）の１〜１００のアミノ酸、または配列番号１７（ＨＢ２２−３３  ＶH配列）の１〜９８のアミノ酸の配列と少なくとも約９５％の配列同一性を有するＶH配列を含む重鎖を含む。
【００１４】
なおさらなる実施形態では、抗体は、配列番号１１（ＨＢ２２−７  ＶH配列）の１〜９７のアミノ酸、配列番号１５（ＨＢ２２−２３  ＶH配列）の１〜１００のアミノ酸、および配列番号１７（ＨＢ２２−３３  ＶH配列）の１〜９８のアミノ酸の配列からなる群から選択されるＶH配列を含む。
【００１５】
異なる実施形態では、抗体は、配列番号２１（ＨＢ２２−５  Ｖκ配列）、配列番号２３（ＨＢ２２−７  Ｖκ配列）、配列番号２５（ＨＢ２２−１３  Ｖκ配列）、配列番号２７（ＨＢ２２−２３  Ｖκ配列）、配列番号２９（ＨＢ２２−３３  Ｖκ配列）、または配列番号３１（ＨＢ２２−１９６  Ｖκ配列）のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の配列同一性を有するＶκ配列を含む軽鎖を含む。
【００１６】
特定の実施形態では、抗体は、配列番号２３（ＨＢ２２−７  Ｖκ配列）、配列番号２７（ＨＢ２２−２３  Ｖκ配列）、または配列番号２９（ＨＢ２２−３３  Ｖκ配列）のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の配列同一性を有するＶκ配列を含む軽鎖を含む。
【００１７】
さらなる実施形態では、抗体は、配列番号２３（ＨＢ２２−７  Ｖκ配列）、配列番号２７（ＨＢ２２−２３  Ｖκ配列）、および配列番号２９（ＨＢ２２−３３  Ｖκ配列）のアミノ酸配列からなる群から選択されるＶκ配列を含む。
【００１８】
好ましい実施形態では、抗体は、配列番号１１（ＨＢ２２−７  ＶH配列）の１〜９７のアミノ酸、配列番号２３（ＨＢ２２−７  Ｖκ配列）のアミノ酸配列、配列番号１５（ＨＢ２２−２３  ＶH配列）の１〜１００のアミノ酸、配列番号２７（ＨＢ２２−２３  Ｖκ配列）のアミノ酸配列、配列番号１７（ＨＢ２２−３３  ＶH配列）の１〜９８のアミノ酸、および配列番号２９（ＨＢ２２−３３  Ｖκ配列）のアミノ酸配列からなる群から選択されるＶH配列およびＶκ配列を含む。
【００１９】
異なる態様では、本発明は、上記で考察した任意の抗体の重鎖または軽鎖可変領域またはその任意の一部をコードする核酸に関する。
【００２０】
さらなる態様のように、本発明は、上記で考察した重鎖または軽鎖可変領域またはその一部を含むポリペプチドを提供する。
【００２１】
ターゲティングされる病態は、任意の型の自己免疫疾患またはＢ細胞性腫瘍（局在化Ｂ細胞性腫瘍が含まれるが、これに限定されない）またはＢ細胞または抗体が関与する任意の他の病態であり得る。Ｂ細胞性腫瘍の典型的な例は、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病、毛様細胞白血病、および前リンパ性白血病のＢ細胞サブタイプである。
【００２２】
本発明の治療方法を、悪性Ｂ細胞または自己免疫疾患の任意のさらなる治療を行うことなく実施することができる。Ｂ細胞性腫瘍に関して、本発明の治療方法は、典型的には、治療なし、この抗体と放射線療法との組み合わせ、または放射線療法のみと比較した場合、治癒率の改善および／または生存率の増大および／または優れた腫瘍体積の減少を提供する。
【００２３】
抗体は、完全な抗体または抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2、およびＦｖフラグメント、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、線状抗体、一本鎖抗体分子、および抗体フラグメントから形成された多特異性抗体が含まれる）であり得る。したがって、抗体は、さらなる抗原特異性を有し得る（例えば、二重特異性抗体であり得る）。二重特異性抗体は、例えば、ＣＤ２２の別のエピトープにさらに結合することができる。さらに、二重特異性抗体は、他の抗原（ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ５２、ＣＤ３、ＣＤ２８、またはＨＬＡ−ＤＲ１０（Ｌｙｍ−１）など）またはＦｃ受容体（例えば、ＣＤ１６、ＣＤ６４、およびＣＤ８９）に対する結合特異性を有し得る。
【００２４】
抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、またはヒト抗体であり得る。
【００２５】
反復静脈内注射による静脈内（ｉ．ｖ．）投与などの任意の従来の経路によって抗体を投与することができる。
【００２６】
治療に対する応答を、当業者に周知の方法（例えば、当業者に公知の磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）または自己免疫疾患の臨床指標の改善もしくは安定性の測定による固形腫瘍の縮小のモニタリングが含まれる）によってモニタリングすることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
他で定義しない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明に属する分野の当業者によって一般に理解される意味と同一の意味を有する。本明細書中に記載の本発明の説明で使用する用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的とし、本発明を限定することを意図しない。
【００２８】
本明細書中に記載の全ての刊行物、特許出願、特許、および他の引例は、参照することによりその全体が本明細書中に組み込まれる。
【００２９】
Ａ．定義
他で定義しない限り、本明細書中で使用される技術用語および科学用語は、本発明に属する分野の当業者によって一般に理解される意味と同一の意味を有する。
【００３０】
当業者は、本発明の実施において使用することができる本明細書中に記載のものと類似または等価の多数の方法および材料を認識する。実際、本発明は、記載の方法および材料に決して限定されない。本発明の目的のために、以下の用語を以下のように定義する。
【００３１】
用語「免疫グロブリン」（Ｉｇ）を、血清のグロブリンタンパク質の免疫付与部分および天然に存在得しないが同一の機能的特徴を有し得る他の糖タンパク質をいうために使用する。用語「免疫グロブリン」または「Ｉｇ」には、特に、「抗体」（Ａｂ）が含まれる。抗体は特定の抗原に対して結合特異性を示し、免疫グロブリンには、抗体および抗原特異性を欠く他の抗体様分子が含まれる。天然の免疫グロブリンは、血漿細胞と呼ばれる分化Ｂ細胞によって分泌され、いかなる抗原特異性も有さない免疫グロブリンはリンパ系にて低レベルで産生され、骨髄腫によってそのレベルが増大する。本明細書中で使用される、用語「免疫グロブリン」、「Ｉｇ」、およびその文法上の変形形態を、抗体（上記定義）および抗原特異性を有さないＩｇ分子を含めるために使用する。
【００３２】
天然の免疫グロブリンは、通常、２つの同一の軽（Ｌ）鎖および２つの同一の重（Ｈ）鎖から構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖は、１つの共有ジスルフィド結合によって重鎖と連結し、ジスルフィド結合数は異なる免疫グロブリンイソ型の重鎖によって変化する。各重鎖および軽鎖はまた、規則正しい間隔の鎖内ジスルフィド結合を有する。各重鎖は、一方の末端に可変ドメイン（ＶH）を有し、その後に多数の定常ドメインを有する。各軽鎖は、一方の末端に可変ドメイン（ＶL）を有し、他方の末端に定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインは重鎖の第１の定常ドメインと共に整列し、軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインと共に整列している。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖の可変ドメインの間に境界を形成すると考えられる。
【００３３】
血清中で見出される主なＩｇイソ型（クラス）および括弧内に示す対応Ｉｇ重鎖を以下に列挙する。
【００３４】
ＩｇＧ（γ鎖）：血清中の主なＩｇであり、抗原に応答して惹起される主な抗体であり、この抗体は胎盤を通過する。
【００３５】
ＩｇＥ（ε鎖）：このＩｇは肥満細胞および好塩基球と強固に結合し、さらに抗原と結合した場合、ヒスタミンおよび直接的過敏性の他のメディエーターを放出させ、主にアレルギー反応（花粉症、喘息、および過敏症が含まれる）で中心的な役割を果たし、寄生虫に対して防御的役割を果たし得る。
【００３６】
ＩｇＡ（α鎖）：このＩｇは、唾液、涙、粘液、および初乳などの外分泌物中に存在する。
【００３７】
ＩｇＭ（μ鎖）：抗原に応答して最初に誘導されるＩｇであり、典型的にはその後に産生される他の抗体イソ型より親和性が低く、典型的には５量体である。
【００３８】
ＩｇＤ（δ鎖）：このＩｇは臍帯血中に比較的高濃度で見出され、抗原の初期細胞受容体であり、主なリンパ球細胞表面分子である。
【００３９】
用語「抗体」を、本明細書中で最も広い意味で使用し、特にモノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体が含まれるが、これらに限定されない）、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体フラグメント（所望の生物活性を示す限り）を対象とする。
【００４０】
「抗体フラグメント」は、全長抗体の一部（一般に、抗原結合ドメインまたは可変（Ｖ）ドメイン）を含む。抗体フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2、およびＦｖフラグメント、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、線状抗体、一本鎖抗体分子、および抗体フラグメントから形成された多特異性抗体が含まれる。
【００４１】
本明細書中で使用される、用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一の抗体集団から得られた抗体をいう（すなわち、少量で存在し得る可能な天然に存在する変異体以外の集団を含む各抗体が同一である）。モノクローナル抗体は、特異性が高く、１つの抗原部位に指向する。さらに、従来の（ポリクローナル）抗体調製物（典型的には、異なる決定基（エピトープ）に対して指向する異なる抗体が含まれる）と対照的に、各モノクローナル抗体は抗原上の１つの決定基に指向する。
【００４２】
本明細書中のモノクローナル抗体には、特に、「キメラ」抗体（免疫グロブリン）およびこのような抗体のフラグメント（所望の生物活性を示す限り）が含まれる（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１−６８５５（１９８４）；Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ４（４）：２１４−２２１（１９８６）；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：３４３９−４３（１９８７））。
【００４３】
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」または「ＣＤＲ移植」形態は、レシピエントの超可変領域の残基が所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）由来の超可変領域の残基に置換されているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）の残基もまた対応する非ヒト残基に置換する（いわゆる、「復帰変異（ｂａｃｋ  ｍｕｔａｔｉｏｎ）」）。さらに、ヒト化抗体を、抗体の性質（親和性など）をさらに改良するためのレシピエント抗体またはドナー抗体で見出されない残基を含むように修飾することができる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、全てまたは実質的に全ての超可変領域が非ヒト免疫グロブリンの超可変領域に対応し、且つ全てまたは実質的に全てのＦＲがヒト免疫グロブリン配列のＦＲである。ヒト化抗体は、任意選択的に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの少なくとも定常領域の一部も含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；およびＲｅｉｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）を参照のこと。
【００４４】
「一本鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」抗体フラグメントは、抗体のＶHドメインおよびＶLドメインを含み、これらのドメインは１つのポリペプチド鎖中に存在する。一般に、ＦVポリペプチドは、抗原結合のためにｓＦｖを所望の構造に形成することができるＶHドメインとＶLドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ  ｅｄｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照のこと。
【００４５】
用語「ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）」は、同一のポリペプチド鎖（ＶH−ＶL）中に軽鎖可変ドメイン（ＶL）に連結した重鎖可変ドメイン（ＶH）を含む２つの抗原結合部位を有する小抗体フラグメントをいう。同一鎖上で２つのドメイン間の対合には短すぎるリンカーの使用によって、ドメインは別の鎖の相補性ドメインとの対合を強いられ、２つの抗原結合部位が作製される。ダイアボディは、例えば、欧州特許第４０４，０９７号；ＷＯ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）にさらに完全に記載されている。
【００４６】
表現「線状抗体」は、本出願全体で使用される場合、Ｚａｐａｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２（１９９５）中に記載の抗体をいう。簡単に述べれば、これらの抗体は、抗原結合領域対を形成する縦列Ｆｄセグメント対（ＶH−ＣH１−ＶH−ＣH１）を含む。線状抗体は、二重特異性または単一特異性であり得る。
【００４７】
ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、およびＩｇＤイソ型の抗体は、これらがその重鎖の定常領域が異なる場合でさえも、同一の可変領域（すなわち、同一の抗原結合溝）を有し得る。免疫グロブリン（例えば、抗体）の定常領域は、抗原への抗体の結合に直接関与しないが、種々のエフェクター機能（抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）における抗体の関与など）を示す。
【００４８】
いくつかの主な抗体イソ型（クラス）は、さらなるサブクラスに分類される。ＩｇＧは、４つの公知のサブクラス：ＩｇＧ１（γ１）、ＩｇＧ２（γ２）、ＩｇＧ３（γ３）、およびＩｇＧ４（γ４）を有し、ＩｇＡは、２つの公知のサブクラス：ＩｇＡ１（α１）およびＩｇＡ２（α２）を有する。
【００４９】
用語「エピトープ」を、タンパク質抗原に対する（モノクローナルまたはポリクローナル）抗体の結合部位をいうために使用する。
【００５０】
天然配列のヒトＣＤ２２のアミノ酸配列内のドメイン１および／または２または特に本明細書中に開示の任意のモノクローナル抗体によって結合した本質的に同一のエピトープ（ＨＢ２２−７、ＨＢ２２−２３、およびＨＢ２２−３３など）に結合する抗体を、「エピトープマッピング」によって同定することができる。タンパク質上のエピトープの位置のマッピングおよび特徴づけについては当分野で公知の方法が多数存在する（例えば、Ｃｈａｐｔｅｒ  １１  ｏｆ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９に記載の抗体−抗原複合体の結晶構造の解明、競合アッセイ、遺伝子フラグメント発現アッセイ、および合成ペプチドベースのアッセイが含まれる）。遺伝子フラグメント発現アッセイによれば、タンパク質をコードする読み取り枠を無作為または特定の遺伝子構造によって断片化し、試験されるべき抗体内のタンパク質の発現フラグメントの反応性を決定する。遺伝子フラグメントを、例えば、ＰＣＲによって産生し、転写し、放射性アミノ酸の存在下でｉｎ  ｖｉｔｒｏでタンパク質に翻訳することができる。次いで、放射性標識タンパク質フラグメントへの抗体の結合を、免疫沈降およびゲル電気泳動によって決定する。ファージ粒子の表面上にディスプレイされたランダムペプチド配列の巨大ライブラリー（ファージライブラリー）の使用によって、一定のエピトープを同定することもできる。あるいは、所定の重複ペプチドフラグメントライブラリーを、簡単な結合アッセイにおいて試験抗体への結合について試験することができる。後者のアプローチは、約５〜１５アミノ酸の線状エピトープの定義に適切である。
【００５１】
抗体は、２つの抗体が同一または立体的に重複するエピトープを認識する場合、基準抗体と「本質的に同一のエピトープ」に結合する。２つのエピトープが同一または立体的に重複するエピトープに結合するかどうかを決定する最も広範に使用され且つ迅速な方法は、標識抗原または標識抗体のいずれかを使用して全ての異なる形式数で構成することができる競合アッセイ（例えば、競合ＥＬＩＳＡアッセイ）である。通常、抗原を９６ウェルプレートに固定し、非標識抗体が標識抗体の結合を遮断する能力を放射性標識または酵素標識を使用して測定する。
【００５２】
本明細書中で使用される、用語「アミノ酸またはアミノ酸残基」は、変異型に関して以下にさらに記載の天然に存在するＬ型アミノ酸またはＤ型アミノ酸をいう。一般的に使用されているアミノ酸の一文字表記および酸文字表記を本明細書中で使用する（Ｂｒｕｃｅ  Ａｌｂｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（３ｄ  ｅｄ．１９９４））。
【００５３】
本明細書中で使用される、用語「ポリペプチド」は、ペプチドおよびタンパク質（融合タンパク質が含まれる）を含む。
【００５４】
「配列同一性」は、配列を整列させ、必要に応じて配列同一率を最大にするためにギャップを導入し、配列同一性の一部としていかなる保存的置換を考慮せずに天然のポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一な候補配列中のアミノ酸残基の比率として定義する。配列同一率を、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７），‘‘Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴ  ａｎｄ  ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ：ａ  ｎｅｗ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄａｔａｂａｓｅ  ｓｅａｒｃｈ  ｐｒｏｇｒａｍｓ’’，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２５：３３８９−３４０２によって定義されたＮＣＢＩ  ＢＬＡＳＴ２．０ソフトウェアによって得ることができる。ミスマッチのペナルティを−１に設定する以外はパラメーターをデフォルト値に設定する。
【００５５】
本明細書中で使用される、「治療」または「治療すること」は、有利か所望の臨床結果を得るためのアプローチである。本発明の目的のために、有利か所望の臨床結果には、症状の緩和、疾患範囲の縮小、疾患の安定化（すなわち、悪化しない）状態、疾患の進行の遅延もしくは減速、疾患状態の改善もしくは緩和、および検出可能または検出不可能な沈静（部分的または全体）が含まれるが、これらに限定されない。「治療」または「治療すること」はまた、治療を受けていない場合の推定生存度と比較した生存の延長を意味し得る。「治療」または「治療すること」は、障害の発症を予防するか病態を変化させるために行う介入であえる。したがって、「治療」または「治療すること」は、治療上の処置および予防または防止手段をいう。治療が必要な者には、既に障害を有する者および障害を防止すべき者が含まれる。自己免疫疾患に関して、治療により、被験体の自己免疫疾患の少なくとも１つの臨床症状がいくらか改善、改善、安定化、および／または遅延する。Ｂ細胞性腫瘍では、治療により、悪性細胞数が減少し、腫瘍サイズが減少し、悪性細胞の拡大（周辺器官（例えば、柔組織または骨）への浸潤が含まれる）が阻害され（減速または停止）、転移が阻害され（減速または停止）、腫瘍成長が阻害され、Ｂ細胞性腫瘍に関連する症状から救済され、死亡率が減少し、生活の質を改良することなどができる。本明細書中の抗体を使用した治療により、細胞成長抑制効果および／または細胞傷害効果を得ることができる。
【００５６】
用語「Ｂ細胞性腫瘍」およびその文法上の変形形態を、典型的には、リンパ系組織（骨髄またはリンパ節など）で惹起するが、非リンパ系組織（甲状腺、胃腸管、唾液腺、および結膜など）でも惹起し得るＢ細胞の悪性疾患または新生物をいうために最も広い意味で使用する。本発明の治療方法は、特に、ＣＤ２２陽性Ｂ細胞悪性腫瘍（非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病、毛様細胞白血病、および前リンパ性白血病のＢ細胞サブタイプが含まれるが、これらに限定されない）に関する。
【００５７】
用語「自己免疫疾患」は、正常な生体組織と反応する抗体集団に起因するかこれらによって悪化する病態をいう。これは、免疫系が身体自体の器官および組織を誤って攻撃する病態である。
【００５８】
Ｂ．詳細な説明
１．抗体
ＨＢ２２−７、ＨＢ２２−２３、ＨＢ２２−３３、ＨＢ２２−５、ＨＢ２２−１３、およびＨＢ２２−１９６と呼ばれる遮断抗ＣＤ２２モノクローナル抗体が公知であり、米国特許第５，４８４，８９２号、Ｔｕｓｃａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：１２４６（１９９６），およびＴｕｓｃａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ９４（４），１３８２−１３９２（１９９９）で開示されている。ＨＢ２２−７およびＨＢ２２−２３は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ），１２３０２  Ｐａｒｋｌａｗｎ  Ｄｒｉｖｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍｄ．２０８５２からそれぞれアクセッション番号ＨＢ２２３４７およびＨＢ１１３４９で利用可能である。これらの抗体の調製物は、以下の実施例１にも記載されている。ＣＤ２２のエピトープマッピングは、遮断モノクローナル抗体がヒトＣＤ２２の第１の２つのＩｇ様ドメインまたは第１の２つのＩｇ様ドメインに結合するエピトープに結合することが示されている（米国特許第５，４８４，８９２号およびＴｅｄｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：４８１−５０４（１９９７））。抗体の重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列もまた、本出願で開示されている。
【００５９】
本発明は、Ｂ細胞型非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の異種移植片モデルで得られた結果に基づいたＢ細胞性腫瘍の治療におけるＨＢ２２−７、ＨＢ２２−２３、ＨＢ２２−３３、ＨＢ２２−５、ＨＢ２２−１３、およびＨＢ２２−１９６の全特徴を有する遮断抗ＣＤ２２抗体の予想外の優れた特性に一部基づく。本発明は、さらに、自己免疫疾患の治療におけるＨＢ２２−７、ＨＢ２２−２３、ＨＢ２２−３３、ＨＢ２２−５、ＨＢ２２−１３、およびＨＢ２２−１９６の全特徴を有する遮断抗ＣＤ２２抗体の使用に基づく。
【００６０】
抗ＣＤ２２モノクローナル抗体を、当分野で公知の任意の標準的方法（例えば、ハイブリドーマ法（Ｋｏｅｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７（１９７５）；およびＧｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））など）または組換え技術（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号およびＷｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４４６−９（１９８５）に開示）によって作製することができる。
【００６１】
現在、免疫化時に内因性免疫グロブリンを産生しないでヒト抗体レパートリーを産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を産生することも可能である。例えば、キメラマウスおよび生殖系列変異マウス中の抗体重鎖連結領域（ＪH）遺伝子のホモ接合性欠失により内因性抗体産生が完全に阻害されることが記載されている。このような生殖系列変異マウス中へのヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの導入により、抗原攻撃誘発時にヒト抗体が産生される。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０，２５５１−２５５（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６２，２５５−２５８（１９９３）を参照のこと。
【００６２】
Ｍｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６（１９９７））は、テクノロジーをさらに改良し、抗原で攻撃誘発した場合に高親和性の完全なヒト抗体を産生する「キセノマウスＩＩ」と命名されたトランスジェニックマウス系列を作製した。上記のように内因性ＪHセグメントが欠失したマウスへの巨大塩基（ｍｅｇａｂａｓｅ）高親和性重鎖および軽鎖遺伝子座の生殖系列組み込みによってこれを行った。キセノマウスＩＩは、約６６個のＶH遺伝子、完全なＤH領域およびＪH領域ならびに３つの異なる定常領域（μ、δ、およびχ）を含む１，０２０ｋｂのヒト重鎖遺伝子座を保有し、３２個のＶκ遺伝子、Ｊκセグメント、およびＣκ遺伝子を含む８００ｋｂのヒトκ遺伝子座も保有する。これらのマウスで産生された抗体は、あらゆる点で（遺伝子再配列、アセンブリ、およびレパートリーが含まれる）ヒトで認められる抗体と酷似している。ヒト抗体は、マウス遺伝子座中の遺伝子の再整列を防止する内因性ＪHセグメント中の欠失による内因性生抗体よりも優先して発現される。
【００６３】
あるいは、ファージディスプレイテクノロジー（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８，５５２−５５３（１９９０））を使用して、非免疫化ドナー由来の免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーからｉｎ  ｖｉｔｒｏでヒト抗体および抗体フラグメントを産生することができる。この技術によれば、抗体Ｖドメイン遺伝子をインフレームで繊維状バクテリオファージの主要または副外殻タンパク質遺伝子（Ｍ１３またはｆｄなど）のいずれかにクローン化し、ファージ粒子の表面上に機能的抗体フラグメントとしてディスプレイする。繊維状粒子はファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含むので、抗体の機能的特性に基づいた選択により、これらの特性を示す抗体をコードする遺伝子もまた選択される。したがって、ファージはＢ細胞のいくつかの特性を模倣する。種々の形式でファージディスプレイを行うことができる；概説については、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ  Ｓ．ａｎｄ  Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ  Ｊ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３，５６４−５７１（１９９３）を参照のこと。Ｖ遺伝子セグメントのいくつかの供給源をファージディスプレイのために使用することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２，６２４−６２８（１９９１）は、免疫化マウスの脾臓由来のＶ遺伝子のタンデム組み合わせ小ライブラリーから種々の抗オキサゾロン抗体アレイを単離した。非免疫化ヒトドナー由来のＶ遺伝子のレパートリーを構築し、種々の抗原アレイ（自己抗原を含む）に対する抗体を、本質的に、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２，５８１−５９７（１９９１）またはＧｒｉｆｆｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１２，７２５−７３４（１９９３）に記載の技術にしたがって単離することができる。天然の免疫応答では、抗体遺伝子が高い比率で蓄積される（体細胞超変異）。導入されたいくつかの変化により高親和性が扶養され、高親和性表面免疫グロブリンをディスプレイするＢ細胞が優先的に複製され、その後の抗原攻撃誘発時に分化する。この天然のプロセスを、「鎖シャフリング」（Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．１０，７７９−７８３［００７７］）として公知の技術の使用によって模倣することができる。この方法では、ファージディスプレイによって得られた「一次」ヒト抗体の親和性を、重鎖および軽鎖のＶ領域遺伝子の非免疫化ドナーから得られたＶドメイン遺伝子の天然に存在する変異型のレパートリー（レパートリー）への連続的置換によって改良することができる。この技術により、ｎＭ範囲で親和性を有する抗体および抗体フラグメントを産生可能である。非常に巨大なファージ抗体レパートリーの作製ストラテジーは、Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２１，２２６５−２２６６（１９９３）に記載されている。
【００６４】
モノクローナル抗体の産生に関するさらなる情報については、Ｇｏｄｉｎｇ，Ｊ  Ｗ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｌｏｎｄｏｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，１９９６；Ｌｉｄｄｅｌｌ  ａｎｄ  Ｗｅｅｋｓ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｖｅｒｖｉｅｗ，Ｂｉｏｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ：Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ，１９９５；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ：Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９；ａｎｄ  Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｉｔｏｒｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇｓ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，２００１も参照のこと。
【００６５】
抗体フラグメント産生のための種々の技術が開発されている。伝統的には、これらのフラグメントは、インタクトな抗体のタンパク分解消化に由来していた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７−１１７（１９９２）およびＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１（１９８５）を参照のこと）。しかし、現在、これらのフラグメントを、組換え宿主細胞によって直接産生することができる。例えば、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントを、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収し、化学的に結合させてＦ（ａｂ’）2フラグメントを形成することができる（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７（１９９２））。別の実施形態によれば、Ｆ（ａｂ’）2分子の構造を促進するためにロイシンジッパーＧＣＮ４を使用してＦ（ａｂ’）2を形成する。別のアプローチでは、Ｆｖ、Ｆａｂ、またはＦ（ａｂ’）2フラグメントを、組換え宿主細胞培養物から直接単離することができる。他の抗体フラグメント産生技術は、当業者に明らかである。
【００６６】
２つの共有結合された抗体から構成されるヘテロコンジュゲート体抗体も本発明の範囲内である。このような抗体は、例えば、免疫系細胞を望ましくない細胞にターゲティングするため（米国特許第４，６７６，９８０号）およびＨＩＶ感染の治療のため（ＰＣＴ出願公開ＷＯ９１／００３６０号およびＷＯ９２／２００３７３号）に提案されている。ヘテロコンジュゲート体抗体を、周知の市販の架橋剤を使用した任意の従来の架橋方法を使用して作製することができる。
【００６７】
げっ歯類、ヒト、またはヒト化されている本発明の抗体はまた、二重特異性抗体を形成するためのさらなる抗原特異性を有し得る。例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ５２、およびＢ細胞上で発現する他のＣＤ抗原などのさらなるＢ細胞抗原、特にターゲティングされたＢ細胞性腫瘍に結合する抗原に対する第２の結合特異性を指示することができる。例えば、ＣＤ２０は９０％を超える非ホジキンリンパ腫で発現することが公知である。抗ＣＤ２０抗体（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）は、非ホジキンリンパ腫の治療で臨床的に使用されている。ＣＡＭＰＡＴＨ−１Ｈ（抗ＣＤ５２ｗ）は、Ｂ細胞性腫瘍治療のために開発された別の抗体である。ＣＤ２０またはＣＤ５２抗原に対する結合特異性を含む二重特異性抗体は、特に本発明の範囲内に含まれる。本発明の二重特異性抗体が結合することができる別のＢ細胞抗原は、ＨＬＡ−ＤＲ１０（Ｌｙｍ−１）（非ホジキンリンパ腫の公知のマーカー）である。腫瘍局在化の増強ならびに腫瘍特異性免疫応答の漸増および／または増大のために二重特異性抗体を作製することができる。他の抗原標的の例には、ＣＤ３、ＣＤ２８、およびＦｃ受容体（ＣＤ１６、ＣＤ６４、およびＣＤ８９）が含まれる。二重特異性抗体は、細胞傷害性を増強し、その結果沈静率および生存率が改善されると予想される。
【００６８】
ＨＢ２２−７、ＨＢ２２−２３、ＨＢ２２−３３、ＨＢ２２−５、ＨＢ２２−１３、および／またはＨＢ２２−１９６と本質的に同一のエピトープに結合する抗体を、エピトープ対合によって同定することができる。２つの異なる抗体が同一のエピトープを認識するかどうかの最も簡単な決定方法は、競合結合アッセイである。この方法は、抗体が抗原への互いの他の結合を遮断できるかどうかを決定し、高次構造および線状のエピトープの両方について調査する。競合結合アッセイを、標識抗原または標識抗体のいずれかを使用して非常に多数の異なる形式で構成することができる。このアッセイの最も一般的なバージョンでは、抗原を９６ウェルプレートに固定する。次いで、抗原への標識抗体の結合を遮断する非標識抗体の能力を、放射性標識または酵素標識を使用して測定する。さらなる詳細については、例えば、Ｗａｇｅｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３０：２３０８−２３１５（１９８３）；Ｗａｇｅｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，６８：２６９−２７４（１９８４）；Ｋｕｒｏｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５０：４８７２−４８７９（１９９０）；Ｋｕｒｏｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｎｖｅｓｔ．２１：５２３−５３８（１９９２）；Ｋｕｒｏｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １１：３９１−４０７（１９９２）およびＵｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｎｕａｌ，Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ  ｅｄｉｔｏｒｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇｓ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｔｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９，ｐｐ．３８６−３８９を参照のこと。
【００６９】
あるいは、またはさらに、抗体が結合する抗原の断片化に基づいた技術の使用または無作為もしくは特異的遺伝子構築の使用および抗体を使用して得られたフラグメントの反応性の決定によってエピトープマッピングを行うことができる。例えば、ＰＣＲ技術およびその後の転写および放射性アミノ酸の存在下でのｉｎ  ｖｉｔｒｏでのタンパク質の翻訳によって核酸レベルで断片化することもできる。さらなる詳細については、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，ｓｕｐｒａ，ｐｐ．３９０−３９２を参照のこと。
【００７０】
さらなるエピトープマッピング方法によれば、１組の重複ペプチドを合成し（それぞれタンパク質抗原の小線状セグメントに対応）、固相上に整列させる。次いで、ペプチドパネルを、試験抗体で探索し、結合した抗体を酵素標識二次抗体を使用して検出する（Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，ｓｕｐｒａ，ｐｐ．３９３−３９６）。
【００７１】
当分野で周知のさらなるエピトープマッピング方法は、ランダム合成またはファージディスプレイペプチドライブラリーからの抗体選択である。ｆ１型ｓｓＤＮＡファージの副外殻タンパク質遺伝子のアミノ末端へのペプチドコードオリゴヌクレオチドの複合体混合物のクローニングによって、ファージディスプレイライブラリーを構築する。このようなファージディスプレイライブラリーは、例えば、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓから市販されている。ストックとしてライブラリーを増幅し、次いで、それぞれ独立したクローンの多コピーを得るのに十分なアリコートを、目的の抗体と混合する。抗体結合ファージを「バイオパニング」と呼ばれる手順によって回収し、非結合ファージを除去する。結合したファージを溶離し、これを使用して細菌に感染させ、選択されたストックを増幅する。最終的に選択されたストックの各プラークを成長させ、例えば、ＥＬＩＳＡによって特異的抗体反応性についてチェックし、インサート部位周囲のＤＮＡを配列決定する。抗体が結合するペプチドをコードする配列の分析により、抗体の特異性が定義される。さらなる詳細については、例えば、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｓｃｏｔｔ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：２２８−２５７（１９９３）およびＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，ｓｕｐｒａ，ｐｐ．３９７−３９８を参照のこと。
【００７２】
非ヒト（げっ歯類）抗体を、ヒト臨床適用により適切になるようにさらに修飾することができる。ヒト定常ドメイン遺伝子セグメントにスプライシングされる所望の特異性のマウス可変領域遺伝子を有するキメラ抗体を産生する（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）。
【００７３】
ヒト治療において抗体を使用した場合の抗原性の問題を回避するために非ヒト（げっ歯類）抗体をヒト化することもできる。一般に、ヒト化抗体は、非ヒト供給源由来の抗体に移入された１つまたは複数のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、「インポート」残基といわれ、典型的には、「インポート」可変ドメインから得られる。ヒト抗体の対応する配列のげっ歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列への置換による、Ｗｉｎｔｅｒ  ａｎｄ  ｃｏ−ｗｏｒｋｅｒの方法（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８））に従って本質的にヒト化することができる。抗体のヒト化が比較的単純な性質であるにもかかわらず、ヒトフレームワーク（ＦＲ）へのげっ歯類ＣＤＲの簡単な移植では常に元のげっ歯類モノクローナル抗体の結合親和性および特異性が再構成されるわけではない。ヒト化抗体の特性を、適切なデザイン（例えば、ヒトフレームワークへのげっ歯類抗体由来の残基の置換（復帰突然変異）が含まれる）によって改良することができる。配列および構造分析または可変領域の三次元構造モデルの分析によってこのような復帰突然変異の位置を決定することができる。さらに、ファージディスプレイライブラリーを使用して、抗体配列内の選択された位置のアミノ酸を変化させることができる。ヒト化抗体の特性は、ヒトフレームワークの選択にも影響を受ける。初期の実験では、げっ歯類モノクローナル抗体に対する配列同一性と無関係に使用される十分に特徴付けられたヒトモノクローナル抗体のサブセットは限られていた（いわゆる固定化フレームワークアプローチ）。より最近では、いくつかのグループがげっ歯類可変領域に対するアミノ酸配列同一性が高い可変領域を使用している（相同性マッチングまたはベストフィット法）。別のアプローチによれば、コンセンサス配列または生殖系列配列を使用するか、軽鎖または重鎖の各可変領域内のフレームワーク配列のフラグメントを、いくつかの異なるヒトモノクローナル抗体から選択する。
【００７４】
上記で考察した任意の技術または他の利用可能な技術によって調製された抗体のアミノ酸変異型を、抗ＣＤ２２  ＤＮＡへの適切なヌクレオチド変化の導入または例えばペプチド合成によって調製することができる。このアミノ酸の変化もまた、ヒト化抗体または変異抗ＣＤ２２抗体の翻訳後プロセシングを変化させることができる（グリコシル化部位の数または位置の変化など）。
【００７５】
抗体を、その定常領域中の保存された位置でグリコシル化する（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ａｎｄ  Ｌｕｎｄ，Ｃｈｅｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６５：１１１−１２８（１９９７）；Ｗｒｉｇｈｔ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，ＴｉｂＴＥＣＨ  １５：２６−３２  （１９９７））。免疫グロブリンのオリゴ糖部位の鎖は、タンパク質機能（Ｂｏｙｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：１３１１−１３１８  （１９９６）；Ｗｉｔｔｗｅ  ａｎｄ  Ｈｏｗａｒｄ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．２９：４１７５−４１８０  （１９９０））および高次構造に影響を与えることができる糖タンパク質の一部と提示された糖タンパク質の三次元表面との間の分子内相互作用（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ａｎｄ  Ｌｕｎｄ，ｓｕｐｒａ；Ｗｙｓｓ  ａｎｄ  Ｗａｇｎｅｒ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．７：４０９−４１６  （１９９６））に影響を与え得る。オリゴ糖はまた、特異的認識構造に基づいた一定の分子への所与の糖タンパク質のターゲティングに役立ち得る。例えば、アガラクトシル化ＩｇＧでは、オリゴ糖部分がＣＨ２内部空間から「反転し（ｆｌｉｐ）」、末端Ｎ−アセチルグルコサミン残基がマンノース結合タンパク質の結合に利用可能になることが報告されている（Ｍａｌｈｏｔｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．１：２３７−２４３  （１９９５））。糖ペプチドによるＣＡＭＰＡＴＨ−１Ｈ（ヒトリンパ球のＣＤｗ５２抗原を認識する組換えヒト化マウスモノクローナルＩｇＧ１抗体）からのオリゴ糖の除去により、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞で補体媒介溶解（ＣＭＣＬ）が完全に減少し（Ｂｏｙｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：１３１１−１３１８（１９９６））、ノイラミニダーゼを使用したシアリン酸残基の選択的除去によりＣＭＣＬが同様に減少した。抗体のグリコシル化により、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）に影響があることも報告されている。特に、β（１，４−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））（二等分されたＧｌｃＮＡｃの形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼ）のテトラサイクリン調製発現を有するＣＨＯ細胞は、ＡＤＣＣ活性が改良されることが報告された（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１８０（１９９９））。
【００７６】
基礎をなすヌクレオチド配列中のグリコシル化部位の修飾によって、抗体のグリコシル化変異型を調製することができる。さらに、基礎をなすヌクレオチド配列を変化させることなく抗体のグリコシル化を変化させることもできる。グリコシル化は、抗体の発現に使用した宿主細胞に非常に依存する。潜在的治療法として組換え糖タンパク質（例えば、抗体）の発現のために使用した細胞型がほとんど天然の細胞ではないので、抗体のグリコシル化パターンの有意な変形形態を期待することができる（例えば、Ｈｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：９０６２−９０７０（１９９７）を参照のこと）。宿主細胞の選択に加えて、抗体の組換え産生時のグリコシル化に影響を与える要因には、成長様式、培地処方、培養物の密度、酸化、ｐＨ、および精製スキームなどが含まれる。オリゴ糖産生に関与する一定の酵素の移入または過剰発現を含む特定の宿主生物において達成されるグリコシル化パターンを変化させる種々の方法が提案されている（米国特許第５，０４７，３３５号；同第５，５１０，２６１号および同第５，２７８，２９９号）。例えば、エンドグリコシダーゼＨ（ＥｎｄｏＨ）を使用して、糖タンパク質からグリコシル化または一定型のグリコシル化を酵素的に除去することができる。さらに、組換え宿主細胞を遺伝子操作することができる（例えば、一定の型の多糖のプロセシングを欠損させる）。これらおよび類似の技術は、当分野で周知である。
【００７７】
本発明の抗体を、抗体指向性（ｄｉｒｅｃｔｅｄ）酵素プロドラッグ療法（ＡＤＥＰＴ）によって使用することもできる。ＡＤＥＰＴは、触媒酵素を癌細胞表面にターゲティングするために腫瘍抗原をターゲティングするモノクローナル抗体の特異性を利用するテクノロジーである。酵素は、抗癌薬のプロドラッグ形態（例えば、ペプチジル化学療法薬、ＷＯ８１／０１１４５を参照のこと）をその完全に活性な形態に活性化する位置に存在する。例えば、ＷＯ８８／０７３７８号および米国特許第４，９７５，２７８号を参照のこと。
【００７８】
本発明の方法で有用な酵素には、リン酸含有プロドラッグの遊離の薬物への変換に有用なアルカリホスファターゼ；硫黄含有プロドラッグの遊離の薬物への変換に有用なアリールスルファターゼ；無毒の５−フルオロシトシンの抗癌薬（５−フルオロウラシル）への変換に有用なシトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグの遊離の薬物への変換に有用なセラチアプロテアーゼ、サーモリシン、スブチリシン、カルボキシペプチダーゼ、およびカテプシン（カテプシンＢおよびＬ）などのプロテアーゼ；Ｄ型アミノ酸置換基を含むプロドラッグの変換に有用なＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化プロドラッグの遊離の薬物への変換に有用なβ−ガラクトシダーゼおよびノイラミニダーゼなどの炭水化物切断酵素；β−ラクタムで誘導体化されたプロドラッグの遊離の薬物への変換に有用なβ−ラクタマーゼ；およびアミン窒素でフェノキシアセチル基またはフェニルアセチル基で誘導体化されたプロドラッグの遊離の薬物への変換に有用なペニシンアミダーゼ（ペニシリンＶアミダーゼまたはペニシリンＧアミダーゼなど）が含まれるが、これらに限定されない。あるいは、酵素活性を有する抗体（当分野で「アブザイム」として公知である）を使用して本発明のプロドラッグを遊離の活性薬物に返還することができる（例えば、Ｍａｓｓｅｙ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２８：４５７−４５８  （１９８７）を参照のこと）。アブザイムの腫瘍細胞集団への送達のために、抗体−アブザイムコンジュゲート体を本明細書中に記載のように調製することができる。
【００７９】
本明細書中の抗体の免疫コンジュゲート体も特に本発明に含まれる。免疫コンジュゲート体は、化学療法薬、毒素、または放射性同位体などの細胞傷害薬にコンジュゲートした抗体を含む。
【００８０】
詳細には、本明細書中の抗ＣＤ２２抗体の有効性を、標的部位に放射線治療を特異的にターゲティングする（放射線治療）ための細胞傷害性放射性同位体へのコンジュゲートによってさらに増強することができる。適切な放射性同位体には、例えば、臨床治療で使用されるＩ131およびＹ90が含まれる。他の適切な放射性同位体には、Ｉｎ111、Ｃｕ67、Ｉ131、Ａｓ211、Ｂｉ212、Ｂｉ213、およびＲｅ186が含まれるが、これらに限定されない。
【００８１】
免疫コンジュゲート体の作製に有用な化学療法薬には、例えば、アドリアマイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）、シクロホスファミド、チオテパ、ブスルファン、サイトキシン、タキソイド（例えば、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ−Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｃｅｔｏｎ，ＮＪ）およびドキセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｒｎａｃｅ）など）、トキソテル（ｔｏｘｏｔｅｒｅ）、メトトレキセート、シスプラチン、メルファラン、ビンブラスチン、ブレオマイシン、エトポシド、イフォスファミド、マイトマイシンＣ、マイトキサントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、カルボプラチン、テニポシド、ダウノマイシン、カルミノマイシン、アミノプテリン、ダクチノマイシン、マイトマイシン、エスペラミシン（米国特許第４，６７５，１８７号を参照のこと）、５−ＦＵ、６−チオグアニン、６−メルカプトプリン、アクチノマイシンＤ、ＶＰ−１６、クロラムブシル、メルファラン、および他の関連ナイトロジェンマスタードが含まれる。
【００８２】
本明細書中の免疫コンジュゲート体で使用される毒素には、例えば、ジフテリアＡ鎖、外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、およびトリコテセンが含まれるが、これらに限定されない。特に、抗体−メイタンシノイドコンジュゲート体および抗体−カリケアミシンコンジュゲート体が含まれる。メイタンシノイドを含む免疫コンジュゲート体は、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号；同第５，４１６，０２０号および欧州特許第０４２５２３５号に開示されている。Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：８６１８−８６２３（１９９６）も参照のこと。抗体−カリケアミシンコンジュゲート体は、例えば、米国特許第５，７１２，３７４号；同第５，７１４，５８６；５，７３９，１１６；５，７６７，２８５；５，７７０，７０１；５，７７０，７１０；５，７７３，００１；および５，８７７，２９６号に開示されている。
【００８３】
Ｎ−スクシニミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオレン（ＩＴ）、イミドエステルの二機能性誘導体（ジメチルアジピミデートＨＣｌなど）、活性エステル（ジスクシニミジルスベレートなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビスアジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トリエン２，６−ジイソシアネートなど）、およびビス活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）などの種々の二機能性タンパク質結合剤を使用して、抗体と細胞傷害薬とのコンジュゲート体を作製する。例えば、Ｖｉｔｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３８：１０９８（１９８７）に記載のように、リシン免疫毒素を調製することができる。14Ｃ標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、抗体への放射性ヌクレオチドのコンジュゲートのためのキレート剤の例で合える。ＷＯ９４／１１０２６号を参照のこと。
【００８４】
抗ＣＤ２２抗体の共有結合修飾もまた、本発明の範囲内である。妥当な場合、これらを、化学合成または抗体の酵素または化学的切断によって作製することができる。選択された側鎖またはＮ末端残基もしくはＣ末端残基と反応することができる有機誘導化剤との抗体のターゲティングされたアミノ酸残基との反応によって、抗体の共有結合修飾の他の型を分子に移入することができる。抗体の好ましい共有結合修飾型は、当分野で周知の様式における種々の非タンパク質ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、またはポリオキシアルキレン）の１つへの抗体の連結を含む。
【００８５】
２．薬学的処方物および治療方法
Ｂ細胞型非ホジキンリンパ腫は、悪性（発癌性）Ｂ細胞リンパ球に起因するリンパ腫の巨大な群（２９種の型を超える）を含むために使用し、リンパ腫の公知の型の巨大なサブセットを示す用語である。Ｂ細胞は、その生活環で細胞内シグナル伝達プロセスに依存して多数の変化を受けることが公知であり、見かけ上異なる型のＢ細胞性腫瘍はＢ細胞の生活環の異なる段階で発症し得る。幹細胞段階では、典型的には、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）またはリンパ芽球性リンパ腫／白血病を発症し得る。前駆体Ｂ細胞は、前駆体Ｂ細胞リンパ芽球性リンパ腫／白血病を発症し得る。未熟なＢ細胞の典型的な悪性疾患には、非分裂小細胞リンパ腫（ｓｍａｌｌ  ｎｏｎ−ｃｌｅａｖｅｄ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）およびおそらくバーキット／非ホジキンリンパ腫が含まれる。抗原曝露前のＢ細胞は、典型的には、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）または小リンパ球性リンパ腫を発症し、抗原曝露後では、典型的に濾胞性リンパ腫、大細胞型リンパ腫、および免疫芽細胞性リンパ腫が認められる。成長速度によって急速進行性（急速に成長する）および無痛性（遅く成長する）リンパ腫を区別することによってＢ細胞リンパ腫を特徴付ける分類システムもまた存在する。例えば、バーキット／非バーキットリンパ腫およびＬＣＬリンパ腫は急速進行群に属し、不活性リンパ腫には、濾胞性中心細胞（ｃｅｎｔｅｒ  ｃｅｌｌ）リンパ腫（ＦＣＣＬ）、濾胞性大細胞リンパ腫、および濾胞性分裂小細胞リンパ腫が含まれる。
【００８６】
非ホジキンリンパ腫は病期によっても特徴づけられる。第Ｉ期：たった１つのリンパ節領域またはリンパ節の外側のたった１つの領域もしくは器官で癌が見出される。第ＩＩ期：（１）横隔膜（呼吸を補助する肺の下の薄い筋肉）の同一側面上の２つまたは複数のリンパ節領域中で癌が見出されるか、（２）リンパ節の外側のたった１つの領域もしくは器官およびその領域の周囲のリンパ節で癌が見出されるか、（３）横隔膜の同一側面上の他のリンパ節領域もまた癌を有し得る。第ＩＩＩ期：横隔膜の両方の側面上のリンパ節領域で癌が見出される。リンパ節領域付近の領域もしくは器官および／または脾臓にも癌が広がり得る。第ＩＶ期：（１）リンパ系外の１つまたは複数の器官に癌が広がっている（癌細胞はこれらの器官付近のリンパ節で見出されても見出されなくてもよい）か、（２）リンパ系の外側のたった１つの器官に癌が広がっているが、この器官から離れたリンパ節が含まれる。
【００８７】
非ホジキンリンパ腫が含まれるＢ細胞悪性腫瘍の現在の治療の選択は、悪性疾患の型および病期に依存する。典型的な治療計画には、放射線療法（外部ビーム療法ともいわれる）、化学療法、免疫療法、およびこれらのアプローチの組み合わせが含まれる。１つの有望なアプローチは、放射免疫治療（ＲＩＴ）である。外部ビーム療法を使用して、身体の制限された領域を照射する。化学療法を使用して、全身治療を行うが、これはしばしば正常な細胞にも影響を与え、重篤且つ有毒な副作用をもたらす。標的化ＲＩＴは、Ｂ細胞特異的抗体が有毒物質を腫瘍部位に送達するアプローチである。異なる標的（ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２２、およびＨＬＡ−ＤＲ１０（Ｌｙｍ−１）が含まれる）を使用したＢ細胞ＮＨＬ患者におけるＲＩＴの治療可能性が示された。より最近では、集学的療法（ＣＭＴ）は、固形腫瘍の治療戦略としての頻度が増大しており、これには、薬物による癌細胞の放射線増感および化学療法の直接的細胞傷害効果が含まれる。ＮＨＬの治療のための最も一般的な化学療法治療計画は、シクロホスファミド−ヒドロキシドキソルビシン−オンコビン（ビンクリスチン）−プレドニゾン（ＣＨＯＰ）併用療法である。急速進行性であるが初期ＮＨＬの無作為化研究により、ＣＨＯＰ＋ＣＨＯＰのみで治療しながら関連する領域の照射を使用して優れた結果を示した。その有望性にもかかわらず、外部ビーム照射を含む治療の欠点は、外部ビーム照射が体内の限られた領域にしか高放射線量を送達させることができず、ほとんどのＮＨＬは広範囲に及ぶ点である。したがって、ＣＭＴは、局所的に進行した悪性疾患に臨床的に有用であることが証明されている。
【００８８】
現在の別のアプローチは、全身照射（例えば、90Ｙ−ＤＯＴＡ−ペプチド−Ｌｙｍ−１）のＮＨＬへの特異的送達とさらなる化学療法薬の全身放射線増感効果とを組み合わせた集学的放射線免疫療法（ＣＭＲＩＴ）である。ＣＭＲＩＴ照射では連続的に送達されるので、低酸素の癌細胞を再酸素化するか治療単位時の細胞周期の放射線感受性Ｇ2／Ｍ期を通過して治癒する可能性がより高くすることができる。さらに、ＣＭＲＩＴにより、Ｌｙｍ−１によるＮＨＬの特異的ターゲティングによって最初に特異性が得られ、第２にタイミングが得られる。これにより、ＲＩＴによってターゲティングされた部位のみで潜在的に増感し、有効性を最大にし、そして毒性を最小にする放射線増感剤が得られる。いくつかの以前の異種移植片研究により、放射線増感剤（Ｔａｘｏｌ）がＲＩＴから２４〜４８時間後に投与された場合に相乗効果が改良されることが証明されている。
【００８９】
ＣＭＲＩＴが現在最も進んだＮＨＬ治療の治療アプローチとして概説されているにもかかわらず、十分に許容されたＲａｊｉおよびＲａｍｏｓリンパ腫異種移植モデルで試験した場合に、本発明の抗体のみで、腫瘍体積の減少、治癒率、および全生存率に関してより優れた結果が得られることが証明された。
【００９０】
自己免疫疾患は、自己抗体の産生および罹患組織中の免疫グロブリンの蓄積を含む、自己に対してその後に免疫応答を惹起する自己寛容の破壊によって発症する。自己抗体は、補体およびＦｃ受容体媒介組織炎症および破壊を促進する免疫複合体を形成する。  Ｂ細胞が自己抗体の供給源であるので、Ｂ細胞はこれらの免疫媒介疾患型の治療のための合理的標的を提供する。Ｂ細胞はまた、抗原を提示してエフェクターＴ細胞の発生を制御することができる。これらの疾患の病理学的機構は複雑であり、しばしば体液性免疫機構と細胞性免疫機構との組み合わせを含む。
【００９１】
ほとんどの自己免疫疾患は、正常な身体組織と反応する抗体の産生に起因するかこの抗体によって悪化する。抗原の刺激および活性化後にＢ細胞によって抗体が産生される。したがって、ＣＤ２２の遮断機能により、自己反応性抗体を含む抗体の産生を阻害することができる。８０種を超える自己免疫疾患が同定されている。自己免疫疾患、その原因論、および治療は、Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｎｇ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  発行のＡｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｌａｎで広範に議論されている。本発明によって治療することができる自己免疫疾患には、糸球体腎炎、グッドスパチャー症候群、壊死性血管炎、リンパ節炎、結節性動脈周囲炎、および全身性紅斑性狼瘡を発症する免疫複合体病などが含まれるが、これらに限定されない。他の自己免疫疾患の例には、関節リウマチ、乾癬性関節炎、全身性紅斑性狼瘡、乾癬、潰瘍性大腸炎、全身性硬化症、皮膚筋炎／多発性筋炎、抗リン脂質抗体症候群、強皮症、尋常性天疱症、ＡＮＣＡ関連脈管炎（例えば、ワグナー肉芽腫症、顕微鏡的多発性血管炎）、ｕｒｖｅｉｔｉｓ、シェーグレン症候群、クローン病、ライター症候群、強直性脊椎炎、ライム関節炎、ギラン・バーレー症候群、橋本甲状腺炎、および心筋症が含まれるが、これらに限定されない。抗体産生に関連する他の疾患には、多発性硬化症、アトピー性皮膚炎、血小板減少性紫斑病、顆粒球減少症、自己免疫性溶血性貧血、妊娠中の胎児Ａ−Ｂ−Ｏ血液型などの外来抗原に対する免疫反応、重症筋無力症、Ｉ型糖尿病、グレーブス病、およびアレルギー反応が含まれるが、これらに限定されない。本発明の方法を使用して、Ｂ細胞または抗体が関与する任意の他の障害または病態（例えば、移植片拒絶反応）を治療することができる。
【００９２】
本明細書の抗ＣＤ２２抗体を、典型的には、全ての薬剤師に周知の薬学的処方物の形態で投与する。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，（１５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９７５）），ｐａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙ  Ｃｈａｐｔｅｒ  ８７，ｂｙ  Ｂｌａｕｇ，Ｓｅｙｍｏｕｒを参照のこと。これらの処方物には、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、オイル、脂質、無水吸収基剤、水中油滴型または油中水滴型乳濁液、乳濁液カーボワックス（種々の分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、およびカーバワックスを含む半固体混合物が含まれる。典型的な投薬形態は、静脈内（ｉ．ｖ．）経路による投与に有用な滅菌等張水ベース溶液である。薬学的処方物中の本発明の抗体の濃度は、広範に変化することができ（すなわち、約０．１重量％未満（通常、２重量％または少なくとも２重量％）から２０重量％〜５０重量％またはそれ以上まで）、選択された特定の投与様式に従って主に液体の体積、粘度などによって選択される。
【００９３】
本発明の組成物を、リポソームを介して投与することもできる。リポソームには、乳濁液、フォーム、ミセル、不溶性単分子層、液晶、リン脂質分散物、およびラメラ層などが含まれる。これらの調製物では、送達させるべき本発明の組成物を、単独または抗体などの所望の標的に結合する分子または他の治療組成物または免疫原性組成物と組み合わせてリポソームの一部として組み込む。本発明で用いるリポソームを、標準的な小胞形成脂質（一般に、中性および負電荷のリン脂質およびステロール（コレステロールなど）が含まれる）から形成する。脂質の選択は、一般に、検討材料（例えば、リポソームのサイズならびに血流中でのリポソームの酸不安定性および安定性）によって導かれる。例えば、Ｓｚｏｋａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．９：４６７  （１９８０），米国特許第４，２３５，８７１号、同第４，５０１，７２８号、同第４，８３７，０２８号、および同第５，０１９，３６９号に記載のように、種々のリポソーム調製方法が利用可能である。
【００９４】
本発明の抗体を、単独または他の治療の処方計画と組み合わせて投与することができる。例えば、Ｂ細胞性腫瘍の場合、このような治療計画または治療には、化学療法、放射免疫治療（ＲＩＴ）、化学療法および外部ビーム照射（集学的療法（ＣＭＴ））、集学的放射線免疫療法（ＣＭＲＩＴ）、サイトカインのみ、またはその組み合わせなどが含まれる。したがって、本発明の抗ＣＤ２２抗体を、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド−ヒドロキシドキソルビシン−オンコビン（ビンクリスチン）−プレドニゾン）（非ホジキンリンパ腫治療のための最も一般的な化学療法の処方計画）と組み合わせることができる。さらに、本明細書中の抗ＣＤ２２抗体を、他の抗体（抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２０、およびＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ（商標）（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．）またはＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅＹ−９０などの他の抗ＣＤ２２抗体が含まれる）と組み合わせて投与することができる。例えば、Ｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  １８：９９７−１００４  （１９９３）；Ｂｅｈｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５：３３０４ｓ−３３３１４ｓ，１９９９  （ｓｕｐｐｌ．）；Ｊｕｗｅｉｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５：５８９９ｓ−５９０７ｓ，１９９５；Ｂｅｈｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｕｍｏｒ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ３：３２−４０  （１９９８）ならびに米国特許第６，１８３，７４４号、同第６，１８７，２８７号、および同第６，２５４，８６８号を参照のこと。
【００９５】
本発明の治療を、自己免疫障害のための他の療法と組み合わせて使用することもできる。特定の態様では、被験体を、本発明の抗体ならびに抗ＣＤ２０抗体（例えば、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）および／または抗炎症薬（例えば、副腎皮質ステロイド）で治療する。
【００９６】
特定の態様では、本発明にしたがって治療すべき患者はその悪性Ｂ細胞上で発現するＣＤ２２を有する。ＣＤ２２抗原の存在を、免疫組織化学、ＦＡＣＳ、標識（例えば、放射性標識）抗ＣＤ２２抗体を使用した結合アッセイなどの標準的な技術によって確認することができる。
【００９７】
本発明の抗体組成物を、従来の投与様式（静脈内、動脈内、腹腔内、経口、リンパ腺内、筋肉内、経皮、皮下、および鼻腔内投与が含まれるが、これらに限定されない）を使用して投与することができる。特定の実施形態では、投与経路は、ボーラスまたは長期間にわたる連続注入を介する（１週間に１回または２回の連続またはボーラス注入など）。他の特定の実施形態では、投与経路は皮下注射による。投薬量は、ターゲティングされるＢ細胞性腫瘍もしくは自己免疫疾患の性質、形態、および病期、患者の性、年齢、病態、以前の治療歴、他の使用している治療、および典型的には熟練した医師によって考慮される他の要因に依存する。例えば、非ホジキンリンパ腫患者または自己免疫疾患患者に、約５０〜約１５００ｍｇ／ｍ2／週、詳細には約１００〜約１０００ｍｇ／ｍ2／週、より詳細には約１５０〜約５００ｍｇ／ｍ2／週の本明細書中に記載の抗ＣＤ２２抗体を投与することができる。
【００９８】
Ｂ細胞性腫瘍または特定の自己免疫疾患の臨床指標を追跡するために、当分野で公知の標準的技術によって患者をモニタリングすることができる。例えば、Ｂ細胞性腫瘍の場合、腫瘍の後退（例えば、固形腫瘍の場合の腫瘍サイズ）（抗ＣＤ２２抗体を使用した循環Ｂ細胞または生検組織の表現型）をモニタリングすることができる。
【００９９】
本発明をヒト治療に関して考察しているが、本発明の抗体は獣医学でも適用されると理解される。例えば、ネコ悪性リンパ腫は飼い猫で頻繁に発症し、ヒト非ホジキンリンパ腫に類似の特徴を示す（Ｂｅｒｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．１５６：２６８−７３（２００２））。同様に、イヌは種々のリンパ腫を発症することが公知である。したがって、本明細書中の抗体を使用してネコおよびイヌの悪性リンパ腫を治療することができる。自己免疫疾患の動物モデルもまた当分野で公知である。投薬量および投与経路は、治療される動物種に依存し、その決定は十分に通常の技術を有する獣医の技術の範囲内である。
【０１００】
以下の非限定的な実施例にしたがって、本発明のさらなる詳細を提供する。
【０１０１】
実施例で言及した市販の試薬を、他で言及しない限り、製造者の説明書に従って使用した。以下の実施形態に開示の産生に加えて、モノクローナル抗体ＨＢ２２−７を産生するハイブリドーマ（ＡＴＣＣアクセッション番号ＨＢ１１３４９）を、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤから入手することができる。
【実施例１】
【０１０２】
抗ＣＤ２２モノクローナル抗体の産生
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）ＨＢ２２−７（ＩｇＧ２ｂ）、ＨＢ２２−２３（ＩｇＧ２ａ）、ＨＢ２２−３３（ＩｇＭ）、ＨＢ２２−５（ＩｇＧ２ａ）、ＨＢ２２−１３（ＩｇＧ２ａ）、ＨＢ２２−２２（ＩｇＡ）、およびＨＢ２２−１９６を、Ｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５：４７１０（１９９３）および米国特許第５，４８４，８９２号の方法にしたがって産生した。Ｔｕｓｃａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ９４：１３８２−１３９２（１９９９）も参照のこと。しかし、他の方法を使用することができる。簡単に述べれば、免疫原として全長ＣＤ２２  ｃＤＮＡで安定にトランスフェクトしたマウスｐｒｅ−Ｂ細胞株３００．１９を使用したハイブリドーマ技術によってＨＢ２２  ｍＡｂを産生した。より詳細には、ＮＳ−１骨髄腫細胞と全長ＣＤ２２  ｃＤＮＡで安定にトランスフェクトしたマウスｐｒｅ−Ｂ細胞株３００．１９を使用して３回免疫化したＢａｌｂ／ｃマウス由来の脾細胞との融合によってＣＤ２２と反応する３３種のｍＡｂを作製した。ＣＤ２２  ｃＤＮＡでトランスフェクトしたマウスＬ細胞と反応するが非トランスフェクト細胞と反応しないｍＡｂを産生するハイブリドーマを２回クローン化し、これを使用して上清または腹水を作製した。マウスモノクローナル抗体イソ型分類キット（Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ  Ｈｅｉｇｈｔｓ，ＩＩＩ）を使用して、ｍＡｂイソ型を決定した。Ａｆｆｉ−Ｇｅｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  ＭＡＰＳ  ＩＩキット（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，Ｃａｌｉｆ．）を使用して、ＩｇＧｍＡｂを精製した。蒸留水に対する大規模な透析によって腹水の真性グロブリン画分を含むＨＢ２２−２３  ｍＡｂ（ＩｇＭ）を沈殿させ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析によってｍＡｂが本質的に純粋であることが示された。米国特許第５，４８４，８９２号の表ＩＩに開示のように、ｍＡｂであるＨＢ２２−７、ＨＢ２２−２２、ＨＢ２２−２３、およびＨＢ２２−３３は、Ｄａｕｄｉ細胞、Ｒａｊｉ細胞、およびＪｕｒｋａｔ細胞のＣＤ２２トランスフェクトＣＯＳ細胞への結合を完全に遮断した（８０〜１００％）。ｍＡｂであるＨＢ２２−５、ＨＢ２２−１３、ＨＢ２２−２４、およびＨＢ２２−２８は、接着を部分てきに遮断した（２０〜８０％）。
【０１０３】
リガンド結合を媒介するＣＤ２２上の領域を、「ワークショップ」ＣＤ２２遮断ｍＡｂおよびＣＤ２２上の５つの異なるエピトープ（エピトープＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥ）を同定するｍＡｂのパネルを使用したｍＡｂ交差阻害研究によって特徴付けた（Ｓｃｈｗａｒｔｚ−Ａｌｂｉｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，″Ｔｈｅ  ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ｍｏｉｅ
ｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＣＤ２２  ａｎｔｉｇｅｎ  ｃａｎ  ｂｅ  ｍｏｄｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｐａｔｈｗａｙ．″）。ワークショップｍＡｂの結合特異性を、図３に図示する。Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  ＩＶのＷｈｉｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ，Ｋｎａｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，ｐ．６５（１９８９））。本明細書中の３つのモノクローナル抗体（ＨＢ２２−７、ＨＢ２２−２２、およびＨＢ２２−２３）はＣＤ２２上の非常に密接しているか同一のエピトープに結合することが見出された。これらおよび他の遮断抗体のエピトープマッピングの結果は、Ｔｅｄｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：４８１−５０４  （１９９７）に開示されている。治療に提案された他の抗ＣＤ２２抗体と異なり、本発明の遮断抗体はｈＣＤ２２アミノ酸配列の第１の２つのＩｇ様ドメイン内のエピトープに結合する。
【実施例２】
【０１０４】
ＲａｊｉおよびＲａｍｏｓリンパ腫の異種移植試験
本実施例は、本発明者らの独立したＲａｊｉおよびＲａｍｏｓリンパ腫異種移植試験由来の結果を記載する。ヌードマウス異種移植片は、前臨床評価の重要なツールである。リンパ腫細胞株ＲａｊｉおよびＲａｍｏｓを使用したヒト非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）異種移植片を保有するヌードマウスは、ＮＨＬの治療効果の評価に有用であることが証明されている（Ｂｕｃｈｓｂａｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２（２３）：６４７６−６４８１  （１９９２）  ａｎｄ  Ｆｌａｖｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：４８２４−４８２９  （１９９７））。
【０１０５】
材料と方法
試薬。希釈ＨＣｌ中の塩化物として無キャリア90Ｙ（Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｒｉｃｈｌａｎｄ，ＷＡ）および111Ｉｎ（Ｎｏｒｄｉｏｎ，Ｋａｎａｔａ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）を購入した。Ｌｙｍ−１（Ｔｅｃｈｎｉｃｌｏｎｅ，Ｉｎｃ  Ｔｕｓｔｉｎ，ＣＡ）は、ヒトバーキットリンパ腫細胞核で免疫化したマウスで作製したＩｇＧ2aｍＡｂである。Ｌｙｍ−１は、悪性Ｂ細胞上の細胞表面の３１〜３５ｋＤの抗原を認識し、８０％を超えるヒトＢ細胞ＮＨＬと反応する。Ｌｙｍ−１の純度を本明細書にしたがって評価し、ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって９５％を超える純度の単量体ＩｇＧが必要であった。以前に記載のように90Ｙ−ＤＯＴＡ−ペプチド−Ｌｙｍ−１を調製した（Ｏ’Ｄｏｎｎｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ．Ｂｉｏｔｈｅｒ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．１３：２５１−３６１  （１９９８））。ＨＰＬＣ、ＴＬＣ、および酢酸セルロース電気泳動による評価により、凝集体含有率が５％未満の放射線化学的に９８％純粋な90Ｙ−ＤＯＴＡ−ペプチド−Ｌｙｍ−１が調製されたことが明らかとなった。
【０１０６】
抗ＣＤ２２ｍＡｂであるＨＢ２２−７を、プロテインＡセファロースＦａｓｔ  Ｆｌｏｗカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を使用して、（Ｔｕｓｃａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ９４：１３８２−１３９２（１９９９））に以前に記載のように調製した。ＨＰＬＣおよびフローサイトメトリーによってＨＢ２２−７の純度を決定し、９５％超であることが見出された。フローサイトメトリーベースのアポトーシス誘導分析（Ａｐｏ−Ｔａｇ，Ｐｈａｒｍａｃｉａ）によって生理学的特性を決定し、以前に発表された結果（Ｔｕｓｃａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ）と一致することが見出された。ＡｃｔｉＣｌｅａｎＥＴＯＸカラム（Ｓｔｅｒｏｇｅｎｅ）を使用して内毒素を除去し、最終内毒素レベルが０．１５内毒素単位（ＥＵ）／ｍｇ  ｍＡｂ未満であると測定された（Ｂｉｏ  Ｗｈｉｔａｋｅｒ）。Ｌｙｍ−１およびＨＢ２２−７  ｍＡｂは、マウス、ウイルス、マイコプラズマ、真菌、および細菌の汚染ならびに内毒素、発熱物質、およびＤＮＡ含有量ならびに動物における一般的な動物試験における安全性についてＭＡＰ（マウス抗体産生）ガイドラインを満たしていた。
【０１０７】
細胞株およびＳｃａｔｃｈａｒｄ分析、ＲａｊｉおよびＲａｍｏｓ  Ｂｕｒｋｉｔｔリンパ腫細胞株を、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  （ＡＴＣＣ，Ｇａｔｈｅｒｓｂｅｒｇ，ＭＤ）から購入した。以前に記載のように（Ｔｕｓｃａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，前出）、両細胞株を、ＨＢ２２−７ｍＡｂを使用したフローサイトメトリー法によるＣＤ２２発現のために染色した。０．５×１０6細胞／ｍｌの細胞株を、１０％ウシ胎児血清を補足したＲＰＭＩ１６４０中に維持した。以前に記載のように（Ｓｃａｔｃｈａｒｄ，Ｇ．，Ａｎｎ．ｏｆ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．５１：６６０（１９４７））、ＲａｊｉおよびＲａｍｏｓ細胞を使用したＳｃｔｃｈａｒｄ分析を行った。簡単に述べれば、ＨＢ２２−７を、クロラミンＴ法によって125Ｉで標識した（比活性１．１μＣｉ／μｇ）。連続希釈した非標識ＨＢ−７を使用して競合結合アッセイを行った。
【０１０８】
マウスを用いた研究。７〜９週齢の雌胸腺欠損ＢＡＬＢ／ｃ  ｎｕ／ｎｕマウス（Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）を、カリフォルニア大学デービス動物実験ガイドラインにしたがって、通常の食餌を自由に与え、且つ無病原体条件下で維持した。ケージあたり５匹のマウスを収容した。ＲａｊｉまたはＲａｍｏｓ細胞を対数成長期に採取し、２．５〜５．０×１０6細胞を各マウスの腹部の両側に皮下注射した。腫瘍が２８〜３２８ｍｍ3になった移植から３週間後に研究を開始した。群は、非処置、１２５μＣｉのＲＩＴのみ、１．４ｍｇのＨＢ２２−７のみ、またはＲＩＴとＨＢ２２−７との組み合わせからなり、ＨＢ２２−７をＲＩＴの２４時間前、同時、または２４時間後に投与した。周囲照射を最小にするために、90Ｙ−ＤＯＴＡ−ペプチド−Ｌｙｍ−１での処理から１週間は毎日床敷きを交換し、その後１週間に２回交換した。
【０１０９】
腫瘍死滅効果。ｈｅｍｉｅｌｌｉｐｓｏｉｄのための処方物によって記載のように腫瘍体積を計算した（ＤｅＮａｒｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．３：７１−７９（１９９７））。初期腫瘍体積を処置前日の体積と定義した。各測定日において各群について平均腫瘍体積を計算した；体積ゼロを腫瘍の完全な後退と見なした。腫瘍応答を、以下のように分類した：Ｃ、治癒（腫瘍が消滅し、８４日間の研究終了時点で再生しない）；ＣＲ、完全な後退（少なくとも７日間腫瘍が消滅するが、その後再生する）；ＰＲ、部分的後退（少なくとも７日間腫瘍体積が５０％またはそれ以上減少し、その後再生する）。
【０１１０】
統計分析。治療群の間の応答の相違を、なし、ＰＲ、ＣＲ、およびＣｕｒｅとして順位付けた応答を使用したクラスカル・ウォリス順位和検定を使用して評価した。クラスカル・ウォリス検定を使用して、生存期間も評価した。腫瘍体積を、３つの測定点で比較した：１ヶ月（２６〜２９日目）、２ヶ月（５４〜５７日目）、および研究終了時（８４日目）。腫瘍関連の原因で動物を屠殺する場合、最終体積を持続させ、その後の測定点の分析で使用した。分散分析を使用して、処置群間の相違を検定した。Ｐ値は、両側であり、正常なｐ値を示す。統計的有意差が見出された群のサブセット内でのみの検定により多数の比較を保護する。
【０１１１】
結果
Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析
Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析を使用して、ＨＢ２２−７の結合親和性およびＲａｍｏｓおよびＲａｊｉ細胞上のＣＤ２２受容体数を評価した。最大結合率（Ｂｍａｘ）、解離定数（Ｋａ）、および１細胞あたりの結合抗体数について細胞をアッセイした。表１に示した結果は、２つの試験の平均である。
【０１１２】
【表１】
2005526501.tif 000002
【０１１３】
Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析（表１）により、１細胞あたり結合するＨＢ２２−７抗体数（Ｂｍａｘ）が約２．５倍に増加し、Ｒａｊｉ細胞のＫａはＲａｍｏｓ細胞のＫａよりも２倍増加する。
【０１１４】
全身オートラジオグラフィ
ＨＢ２２−７特異的腫瘍ターゲティングを評価するために、111Ｉｎ−２ＩＴ−ＢＡＤ−抗ＣＤ２２（ＨＢ２２−７）を注射した腫瘍保有ヌードマウスの全身オートラジオグラフィを行った。注射から４８時間後、マウスを屠殺し、切片にし、以前に記載のように（ＤｅＮａｒｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  ３：７１−７９（１９９７））オートラジオグラフィを行った（図２）。オートラジオグラフィによって、Ｒａｊｉ腫瘍化マウスで強い腫瘍局在化が明らかとなり、Ｒａｍｏｓ腫瘍化マウスで中程度の局在が明らかとなった。このターゲティング研究は、Ｒａｊｉと比較して１Ｒａｍｏｓ細胞に結合したＨＢ２２−７は少ないことが明らかとなったＳｃａｔｃｈａｒｄ分析と一致する。しかし、Ｒａｍｏｓ腫瘍の急速な成長およびおそらく中心壊死もまた、Ｒａｍｏｓの明らかに劣るターゲティングに寄与し得る。
【０１１５】
ＲＩＴおよびＣＭＲＩＴの有効性
最初の試験（０８１５００）は、１２５ｕＣｉの90Ｙ−ＤＯＴＡ−ペプチド−Ｌｙｍ−１のみまたはＲＩＴの２４時間前、同時、または２４時間後に投与したＨＢ２２−７（１．４ｍｇ）との組み合わせを使用した（図３）。この試験では、９匹のマウスを有し、５匹が非処置コントロールであるＲＩＴのみで処置した群以外は群あたり５匹のマウスを有する（マウス数を表２に示す）。
【０１１６】
【表２】
2005526501.tif 000003
【０１１７】
90Ｙ−２ＩＴ−ＢＡＤ−Ｌｙｍ−１を使用した類似のＲａｊｉ異種移植片研究から予想されるように、ＲＩＴのみでは、２１日までに最大平均腫瘍体積が減少し、その後腫瘍体積が増加した。90Ｙ−２ＩＴ−ＢＡＤ−Ｌｙｍ−１（ＲＩＴ）およびＨＢ２２−７（ＣＭＲＩＴ）で処置した異種移植片は、平均腫瘍体積の減少がより大きく且つより長く持続し、ＨＢ２２−７を同時に投与した場合おいびＲＩＴの２４時間後に最も減少した。驚いたことに、ＨＢ２２−７の単独投与により、２〜３週間まで平均腫瘍体積は安定化し、その後徐々に持続して腫瘍体積が減少した。
【０１１８】
何回か反復して試験を行って、高度に再現可能な結果を得た（表２）。全試験由来のデータを集計し、グラフで比較した場合、結果は最初の試験と非常に一致することが明らかとなった（図４）。初期腫瘍体積減少は、ＨＢ２２−７をＲＩＴと同時および２４時間後に投与した場合に約２１日目で再度最大となった。ＨＢ２２−７のみで処置したマウスでは、処置から２週間後に腫瘍成長が安定化し始め、その後の全試験で腫瘍体積の漸減も繰り返された。分散分析を使用して、３０日目に全処置群を試験した場合、有意差は非常に高かった（ｐ＜０．００１）。６０日目の全処置群における体積減少分析では有意差は証明できなかったが（ｐ＝０．３９）、８４日目で再度有意差が得られた（ｐ＝０．００３）。グラフで認められた結果により、ＲＩＴ／ＣＭＲＩＴ群の体積減少の相違は非常に再現性があり、ＨＢ２２−７のみおよび非処置コントロールと異なるが、評価した全ての測定点（３０日目、６０日目、および８４日目）でのＲＩＴ処置群（ＣＭＲＩＴを含む）のみでの体積減少の比較により有意差が明らかではないことが明らかとなった（ｐ≧０．５）。ＲＩＴから４８時間後および７２時間後にＨＢ２２−７を投与するさらなるＣＭＲＩＴ試験を行った。ＲＩＴとＨＢ２２−７の投与間隔の拡大によって、ＨＢ２２−７をＲＩＴと同時および２４時間後に投与した試験と比較して腫瘍体積の減少は改善されなかった（データ示さず）。
【０１１９】
応答率および治癒率は、腫瘍体積に対する治療効果と一致した（図５）。90Ｙ−ＤＯＴＡ−ペプチド−Ｌｙｍ−１のみでの処置により、ＰＲが４８％、ＣＲが１３％、および治癒率が１３％であった。ＣＭＲＩＴ群では、ＨＢ２２−７およびＲＩＴを同時に投与した場合に、ＰＲ４５％、ＣＲ１５％、および治癒率２５％と全体的に応答率が最大になった。しかし、ＣＭＲＩＴ群では、非処置（２９％）、ＲＩＴのみ（１３％）、２４時間前（１０％）、および同時（２５％）の処置群で認められた治癒率と都合よく比較すると、ＲＩＴの２４時間後にＨＢ２２−７を投与した場合治癒率が最も高かった（３９％）。クラスカル・ウォリスの検定を使用して全処置群の応答の程度を試験した場合（ＣＲ、ＰＲより上の順位付け）、統計的有意差が認められた（ｐ＝０．０１）。非処置コントロールとの各比較は、ＲＩＴのみ（ｐ＝０．０６）およびＲＩＴの２４時間前に投与したＨＢ２２−７（ｐ＝０．１６）以外は全て統計的に有意であった（ｐ＜０．０５）。活性治療群（ＲＩＴのみ、ＣＭＲＩＴ、およびＨＢ２２−７）のみの比較では有意差は認められなかったが（ｐ＝０．１８）、同時および２４時間後にＨＢ２２−７で処置したＣＭＲＩＴ群では最も良好な応答パターンが認められた。興味深いことに、ＨＢ２２−７のみで処置した群の治癒率が最も高く（４７％）、非処置コントロールと比較した場合に有意に改善された（ｐ＜０．０５）。
【０１２０】
腫瘍体積の後退および治癒率は、類似の生存パターンになった。８４日間の研究終了時に、非処置およびＲＩＴのみの群のそれぞれ３８％および４２％が生存した（図６）。ＣＭＲＩＴ処置群では、ＲＩＴと同時および２４時間後にＨＢ２２−７を投与した場合、生存率はそれぞれ６７％および５０％に増加した。クラスカル・ウォリスを使用した生存率分析は、全群と比較して有意であった（ｐ＜０．０５）。応答率分析と同様に、ＲＩＴ群の生存率の比較のみで有意差が明らかとならなかったが（ｐ＝０．４１）、ＨＢ２２−７をＲＩＴと同時または２４時間後に投与した場合、これらの群中で最良の生存率が一貫して認められた。
【０１２１】
ＨＢ２２−７のみで処置した群において全生存率において最良の生存率（７６％）で、非処置コントロールと比較した場合に有意差が認められた（ｐ＝０．０２）。
【０１２２】
毒性
血球数およびマウス体重によって血液毒性および非血液毒性をそれぞれ評価した（図７ａ〜ｃ）。ＲＩＴ処置群におけるＷＢＣおよび血小板の最下点はそれぞれ１４〜２０日目および１０〜１４日目であった。ＷＢＣおよび血小板を、それぞれ処置から約２８日後および２１日後に採取した。ＷＢＣおよび血小板の最下点は、１５０ｕＣｉの90Ｙ−２ＩＴ−ＢＡＤ−Ｌｙｍ−１を使用した前の研究での所見に一致した。ＲＩＴの血液毒性は、ＨＢ２２−７の同時投与によって変化しなかった。ＨＢ２２−７のみで処置したマウスでは血液毒性は検出されなかった。全処置群における単核細胞数の分析により、ＨＢ２２−７はＲＩＴ媒介単核細胞の最下点に対して効果がないことが明らかとなった（データ示さず）。マウス体重の変化によって評価した非血液毒性は、全ての処置群で等価であることが見出された（図８）。いかなる処置群においても毒性による死亡は認められなかった。
【０１２３】
90Ｙ−ＤＯＴＡ−ペプチド−Ｌｙｍ−１の薬物動態学
ＨＢ２２−７を使用するか使用しないＲａｊｉ腫瘍化マウスにおける90Ｙ−ＤＯＴＡ−ペプチド−Ｌｙｍ−１の血液および全身クリアランスは類似していた（図９）。血液の生物学的Ｔ1/2αは、ＲＩＴのみについては１．４時間であり、２４時間前、同時、および２４時間後の群ではそれぞれ２．２時間、２．４時間、および２．０時間であった。血液の生物学的Ｔ1/2βは、ＲＩＴのみの群については１２７時間であり、２４時間前、同時、および２４時間後の群ではそれぞれ１３３時間、８７時間、および１０３時間であった。全身のＴ1/2は、ＲＩＴのみについては２４６時間であり、２４時間前、同時、および２４時間後の群ではそれぞれ２０７時間、２０７時間、および１９６時間であった。ＲＩＴへのＨＢ２２−７の添加により、90Ｙ−ＤＯＴＡ−ペプチド−Ｌｙｍ−１の薬物動態学は変化しなかった。
【０１２４】
考察
低線量率の線量で誘導されたアポトーシスおよび／またはＤＮＡ損傷を増強するためにＲＩＴと組み合わせた場合に抗ＣＤ２２ｍＡｂ（ＨＢ２２−７）によってさらなる効果または相乗効果が得られるかどうかを決定するためにＲａｊｉ異種移植片研究をデザインした。Ｒａｊｉ異種移植片ヌードマウスモデルは、90Ｙ−２ＩＴ−ＢＡＤ−Ｌｙｍ−１のみを使用したＲＩＴの毒性および有効性を評価するために使用した場合に有用であることが証明された（Ｏ’Ｄｏｎｎｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  １３：３５１−３６１  （１９９８））。この前臨床モデルにおける応答により、ヒト臨床試験における有意な有効性が得られた（Ｏ’Ｄｏｎｎｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０：３６４７−５５  （２０００）；Ｏ’Ｄｏｎｎｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４０：２１６  （１９９９）  （Ａｂｓｔｒａｃｔ））。
【０１２５】
本実施例に記載の研究では、90Ｙ−ＤＯＴＡ−ペプチド−Ｌｙｍ−１（１２５ｕＣｉ）への抗ＣＤ２２ｍＡｂ  ＨＢ２２−７の添加により、毒性にいかなる変化も与えずにＲＩＴの有効性が増強された。１５０および２００μＣｉの90Ｙ−２ＩＴ−ＢＡＤ−Ｌｙｍ−１を使用した前のＲａｊｉ異種移植片研究により、本研究に匹敵する応答および治癒率が得られた（Ｏ’Ｄｏｎｎｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９８），ｓｕｐｒａ）。２ＩＴ−ＢＡＤリンカーを使用したこれらの前の研究に基づいて、１２５μＣｉの90Ｙ−ＤＯＴＡ−ペプチド−Ｌｙｍ−１を選択した。２ＩＴ−ＢＡＤを使用した前の研究では２００μＣｉの線量で最も高い有効性が証明されたが、１２５μＣｉの選択は、ＨＢ２２−７はＲＩＴと相乗効果またはさらなる効果を得られ、より低い線量ではこれらの効果がより良好に評価されるという仮説に基づいた。本実施例の研究は、リンパ腫異種移植片モデルで以前に試験した新規のリンカー（ＤＯＴＡ−ペプチド）を使用した。非結合放射性医薬品の肝臓での分解を増強し、それによりさらに都合よく生体分散されるようにＤＯＴＡ−ペプチドリンカーをデザインした。腫瘍特異的取り込みを本研究で詳細に評価していないが、１２５μＣｉの90Ｙ−ＤＯＴＡ−ペプチド−Ｌｙｍ−１のみを使用して認められた毒性プロフィールは、治療関連死亡率および予想可能な白血球および血小板の最下点において許容不可能である。
【０１２６】
プロアポトーシス効果およびシグナル伝達効果を証明するｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究に基づいてＨＢ２２−７を選択した（Ｔｕｓｃａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ９４：１３８２−１３９２  （１９９９））。ＨＢ２２−７の使用処置用量は経験的であるが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのアポトーシスの誘導に有効であり、且つマウスモデルでこれが推定されることが示されている量に基づいていた。さらに、ＨＢ２２−７の用量を処方する場合、ヒト臨床試験で使用されたＲｉｔｕｘｉｍａｂ（登録商標）の用量と等価な（ヒトとマウスにおける体表面積の相違について調整した場合）用量を考慮した。これがリンパ腫治療に有効であると証明された利用可能な唯一の裸のｍＡｂであり、Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ（登録商標）の許可された至適用量は現在定義されていないという事実に基づいて、Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ（登録商標）の用量の概算を使用した。
【０１２７】
ＨＢ２２−７のみおよびＲＩＴとＨＢ２２−７との組み合わせの有効性ならびに３つの異なる配列組み合わせの効果を評価するために研究をデザインした。90Ｙ−ＤＯＴＡ−ペプチド−Ｌｙｍ−１のみを使用して認められた腫瘍体積の減少は、90Ｙ−２ＩＴ−ＢＡＤ−Ｌｙｍ−１を使用した前の研究と応答のタイミング、規模、および持続時間に関して一致した（Ｏ’Ｄｏｎｎｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９８），ｓｕｐｒａ）。ＲＩＴのみにより、治療から１４日後に腫瘍体積が約５０％減少した。最大体積減少の適切な時点（２１日目〜３０日目）で評価した場合、ＲＩＴへのＨＢ２２−７の添加により、配列特異的様式で応答の規模が有意に増大した。ＨＢ２２−７の添加はＲＩＴと同時またはその２４時間後に投与した場合に最も有効なようである。体積減少の独特のパターンは、再生性が高かった。独立した再現試験により、腫瘍体積減少の類似のパターンおよび規模が証明された。腫瘍体積減少の改良により、優れた応答率および生存率が得られた。ＲＩＴのみにより、１３％のＣＲおよび１３％の治癒率が得られ、ＨＢ２２−７の添加により、ＲＩＴと同時に投与した場合に治癒率は２５％に増加し、ＲＩＴから２４時間後にＨＢ２２−７を投与した場合に３９％に増加した。
【０１２８】
これは第２のモノクローナル抗体をＲＩＴと組み合わせた最初であり、毒性を増加させることなく有効性を増大させることができる十分に定義された生理学的特性を有するモノクローナル抗体または他の薬剤の利用可能性を証明する。
【０１２９】
驚いたことに、ＨＢ２２−７のみで処置したマウスは他の処置群と比較して優れた腫瘍体積の減少ならびにより優れた治癒率および生存率が得られた。また、いくつかの独立した試験により初期腫瘍体積安定化の遅延および治療から約１４日後に開始される腫瘍体積の減少と非常に一致する結果が得られた。これにより、任意の治療群で見出された最良の治癒率および全生存率が得られた。
【０１３０】
結論として、本発明の抗体は、単独で投与した場合、現在最も進んだＮＨＬの治療アプローチとして概説されている他の治療計画（ＣＭＲＩＴが含まれる）と比較して腫瘍体積の減少、治癒率、および全生存率に関してより優れた結果が得られることが証明された。
【実施例３】
【０１３１】
抗ＣＤ２２抗体の配列分析
ＶHおよび軽鎖遺伝子の利用
細胞質ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉキット（Ｑｉａｇｅｎ  Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ）を使用して１〜１０×１０5ハイブリドーマ細胞から抽出した。第１の鎖ＤＮＡを、オリゴ−ｄＴプライマー（ｄＴ18）およびＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔキット（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を使用して細胞質ＲＮＡから合成した。１μｌのｃＤＮＡ溶液を、ＶH遺伝子のＰＣＲ増幅のためのテンプレートとして使用した。１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、５０ｍＭ  ＫＣｌ、１．５ｍＭ  ＭｇＣｌ2、２００μＭ  ｄＮＴＰ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）、５０ｐｍｏｌの各プライマー、および５単位のＴａｑポリメラーゼ（ＩＳＣ  Ｂｉｏｅｘｐｒｅｓｓ，Ｋａｙｓｖｉｌｌｅ，ＵＴ）から構成される体積１００μｌの反応混合物においてＰＣＲ反応を行った。３０サイクル増幅させた（９４℃で１分間、５８℃で１分間、７２℃で１分間、Ｔｈｅｒｍｏｃｙｃｌｅｒ，Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）。以前に記載のように（Ｋａｎｔｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８：１１７５−８６  （１９９６））無差別のセンス５’ＶHプライマー（Ｍｓ  ＶHＥ：  ５’  ＧＧＧ  ＡＡＴ  ＴＣＧ  ＡＧＧ  ＴＧＣ  ＡＧＣ  ＴＧＣ  ＡＧＧ  ＡＧＴ  ＣＴＧ  Ｇ  ３’；配列番号２）およびＣμコード領域に相補的なアンチセンスプライマー（プライマーＣμ−ｉｎ：  ５’  ＧＡＧ  ＧＧＧ  ＧＡＣ  ＡＴＴ  ＴＧＧ  ＧＡＡ  ＧＧＡ  ＣＴＧ  ３’；配列番号３）またはＣγ領域（プライマーＣγ１：５’  ＧＡＧ  ＴＴＣ  ＣＡＧ  ＧＴＣ  ＡＣＴ  ＧＴＣ  ＡＣＴ  ＧＧＣ  ３’；配列番号４）を使用してＶH遺伝子を増幅した。
【０１３２】
センスＶκプライマー（５’  ＡＴＧ  ＧＧＣ  （ＡＴ）ＴＣ  ＡＡＧ  ＡＴＧ  ＧＡＧ  ＴＣＡ  ＣＡ（ＧＴ）  （ＡＴ）（ＣＴ）（ＣＴ）  Ｃ（ＡＴ）Ｇ  Ｇ  ３’；配列番号５）およびＣλアンチセンスプライマー（５’  ＡＣＴ  ＧＧＡ  ＴＧＧ  ＴＧＧ  ＧＡＡ  ＧＡＴ  Ｇ  ３’；配列番号６）を使用して、軽鎖ｃＤＮＡを増幅した。
【０１３３】
異なるセンスＶκプライマー（５’  ＡＴＧ  ＡＡＧ  ＴＴＧ  ＣＣＴ  ＧＴＴ  ＡＧＧ  ＣＴＧ  ＴＴＧ  ＧＴＧ  ＣＴＧ  ３’；配列番号７）を使用して、ＨＢ２２−３３軽鎖配列を増幅した。
【０１３４】
増幅されたＰＣＲ産物を、ＱＩＡｑｕｉｃｋゲル精製キット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用してアガロースゲルから精製し、ＡｍｐｌｉＴａｑ  ＤＮＡポリメラーゼおよび最初のＰＣＲ増幅と同一のプライマーを使用したＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｄｙｅ  Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ配列決定システムを使用した増幅後にＡＢＩ  ３７７  ＰＲＩＳＭ  ＤＮＡシークエンサーを使用して両方向で直接配列決定した。全てのＶHおよび軽鎖領域をセンスおよびアンチセンスＤＮＡ配列に対して完全に配列決定した。
【０１３５】
抗ＣＤ２２モノクローナル抗体であるＨＢ２２−５、ＨＢ２２−７、ＨＢ２２−１３、ＨＢ２２−２３、ＨＢ２２−３３、およびＨＢ２２−１９６のＶHおよびＶκアミノ酸配列のアラインメントをそれぞれ図１０および１７に示す。図１１〜１６は、ハイブリド−マＨＢ２２−５（配列番号８および９）、ＨＢ２２−７（配列番号１０および１１）、ＨＢ２２−１３（配列番号１２および１３）、ＨＢ２２−２３（配列番号１４および１５）、ＨＢ２２−３３（配列番号１６および１７）、およびＨＢ２２−１９６（配列番号１８および１９）由来の抗ＣＤ２２Ａｂの重鎖ＶH−Ｄ−ＪH連結点配列のヌクレオチド配列およびコードされたアミノ酸配列を示す。図１８〜２３は、ハイブリド−マＨＢ２２−５（配列番号２０および２１）、ＨＢ２２−７（配列番号２２および２３）、ＨＢ２２−１３（配列番号２４および２５）、ＨＢ２２−２３（配列番号２６および２７）、ＨＢ２２−３３（配列番号２８および２９）、およびＨＢ２２−１９６（配列番号３０および３１）由来の抗ＣＤ２２Ａｂのκ軽鎖Ｖ−Ｊ定常領域連結点配列のヌクレオチド配列および推定アミノ酸配列を示す。
【図面の簡単な説明】
【０１３６】
【図１】Ｉｇ様ドメイン（ドメイン１〜７）の境界を示したヒトＣＤ２２（ｈＣＤ２２）のアミノ酸配列を示す図である。
【図２】111Ｉｎ−２ＩＴ−ＢＡＤ−抗ＣＤ２２（ＨＢ−２２−７）を注射したＲａｊｉおよびＲａｍｏｓ腫瘍保有ヌードマウスの全身オートラジオグラフィを示す図である。マウスを屠殺し、注射から４８時間後にオートラジオグラフィを行った。上の画像はＲａｊｉ腫瘍保有マウスであり、下の画像はＲａｍｏｓ腫瘍保有マウスである。
【図３】０８１５００試験における１２５ｕＣｉ90Ｙ−ＤＯＴＡ−ペプチド−Ｌｙｍ−１（ＲＩＴ）のみ、抗ＣＤ２２（ＨＢ２２−７）のみ、またはＲＩＴおよびＨＢ−２２−７（ＣＭＲＩＴ）の３つの異なる配列で処理したか未処理のＲａｊｉ異種移植マウスの腫瘍体積の一時的評価を示す図である。１週間に３回腫瘍体積を評価した。各処置群のマウス数を表に示す（表２）。
【図４】全ての独立した異種移植片試験で認められた腫瘍体積分析のまとめを示す図である。図２に記載のように試験を行った。各試験のマウス数を表に示す（表２）。
【図５】図２に記載のように処置したＲａｊｉ異種移植マウスの応答率および治癒率を示す図である。腫瘍応答を以下のように分類した：Ｃ、治癒（腫瘍が消滅し、８４日間の研究終了時点で再生しない）；ＣＲ、完全な後退（少なくとも７日間腫瘍が消滅するが、その後再生する）；ＰＲ、部分的後退（少なくとも７日間腫瘍体積が５０％またはそれ以上減少し、その後再生する）。データは、全ての独立した試験の結果を示す。
【図６】図２に記載のように処置したＲａｊｉ異種移植マウスの全生存を評価した。腫瘍が２０００ｍｇを超えた時点または８４日間の試験終了時点でマウスを安楽死させた。データは、全ての独立した試験の結果を示す。
【図７ａ−ｃ】図２に記載のように処置したＲａｊｉ異種移植マウスにおける１週間に２回の白血球（ＷＢＣ）数（図７ｂ）、赤血球（ＲＢＣ）数（図７ｃ）、および血小板数（図７ａ）の測定によって血液毒性を評価した。ＲＩＴのみと比較した場合、ＣＭＲＩＴ群における血液毒性に相違はなかった。さらに、ＨＢ２２−７のみで処置したマウスでは血液毒性は認められなかった。
【図８】図２に記載のように処置したＲａｊｉ異種移植マウスにおいて１週間に２回に体重の測定によって非血液毒性を評価した。５つ全ての異種移植試験の任意の処置群において体重の有意差は認められなかった。
【図９】ＲＩＴでの処置開始後から５日間毎日全身（ＷＢ）および血液の放射能の測定によってＲＩＴクリアランスを評価した。90ＹのＴ1/2に基づいた衰退の調整後に結果を報告した。任意のＣＭＲＩＴ処置群においてＲＩＴクリアランスの有意差は認められなかった。
【図１０】リガンド結合を遮断する抗ＣＤ２２抗体（Ａｂ）のＶHアミノ酸配列分析を示す図である。各Ａｂのアミノ酸ナンバリングおよびコード配列起源の表示は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．の慣例（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｕ．Ｓ．Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、１９９１）に従い、アミノ酸１〜９４位、ＣＤＲ１および２、ＦＲ１、２、および３はＶH遺伝子にコードされる。５’ＰＣＲプライマーと重複する配列は示さない。点は、類似のアミノ酸配列のアラインメントを最大にするために配列中に挿入したギャップを示す。明確にするために配列中のＶHセグメントと、Ｄセグメントと、Ｊセグメントとの間にギャップを導入した。示した配列の順序は、ＨＢ２２−５配列との関係に基づいた。
【図１１−１６】ハイブリド−マＨＢ２２−５（配列番号８および９）、ＨＢ２２−７（配列番号１０および１１）、ＨＢ２２−１３（配列番号１２および１３）、ＨＢ２２−２３（配列番号１４および１５）、ＨＢ２２−３３（配列番号１６および１７）、およびＨＢ２２−１９６（配列番号１８および１９）由来の抗ＣＤ２２Ａｂの重鎖ＶH−Ｄ−ＪH連結点配列のヌクレオチド配列およびコードされたアミノ酸配列を示す図である。５’ＰＣＲプライマーと重複する配列を、二重下線で示す。Ｄ領域の配列に下線を引く。
【図１７】リガンド結合を遮断する抗ＣＤ２２Ａｂの軽鎖Ｖκアミノ酸配列分析を示す図である。各Ａｂのアミノ酸ナンバリングおよびコード配列起源の表示は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（前出）の慣例に従う。推定シグナル配列切断部位の後ろのアミノ酸を１とする。点は、類似のアミノ酸配列のアラインメントを最大にするために配列中に挿入したギャップを示す。明確にするために配列中のＶκセグメントと、Ｊセグメントと、κ定常領域（二重下線）配列との間にギャップを導入した。
【図１８−２３】ハイブリド−マＨＢ２２−５（配列番号２０および２１）、ＨＢ２２−７（配列番号２２および２３）、ＨＢ２２−１３（配列番号２４および２５）、ＨＢ２２−２３（配列番号２６および２７）、ＨＢ２２−３３（配列番号２８および２９）、およびＨＢ２２−１９６（配列番号３０および３１）由来の抗ＣＤ２２Ａｂのκ軽鎖Ｖ−Ｊ定常領域連結点配列のヌクレオチド配列および推定アミノ酸配列を示す図である。５’ＰＣＲプライマーと重複する配列を、二重下線で示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【国際調査報告】
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