(57)【要約】  本発明は、アテローム性動脈硬化症と同様の病原性機構の調節を用いた加齢性黄斑変性の処置に取り組む。さらなる特定の実施形態では、コレステロール逆行輸送成分（例えば、輸送体およびＨＤＬ画分）が、加齢性黄斑変性についての診断標的および治療標的として利用される。特定の実施形態では、網膜色素上皮および／またはブルーフ膜の脂質含量を低下させる。特定の実施形態では、本発明の方法は、眼の組織からの脂質流出を増加させる方法であって、該組織に核ホルモンレセプターリガンドを送達する工程を包含する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
眼の組織からの脂質流出を増加させる方法であって、該組織に核ホルモンレセプターリガンドを送達する工程を包含する、方法。
【請求項２】
前記眼の組織が、網膜色素上皮（ＲＰＥ）、ブルーフ膜、またはその両方である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
核ホルモンレセプターが、甲状腺ホルモンレセプターである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記甲状腺ホルモンレセプターのリガンドが、３，５，３’−Ｌ−トリヨードチロニン（Ｔ３）、ＴＲＩＡＣ（３−トリヨードチロ酢酸）、ＧＣ−１、ＫＢ１４１、３，５ジメチル−３−イソプロピルチロニン、またはそれらの混合物である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記核ホルモンレセプターが、肝臓Ｘレセプターである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記肝臓Ｘレセプターのリガンドが、２２（Ｒ）ヒドロキシコレステロール、アセチル−ポドカルピン酸ダイマー、Ｔ０９０１３１７、ＧＷ３９６５（１２）、２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、２４（Ｒ），２５−エポキシコレステロール、２２（Ｒ）−オール−２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、２２（Ｓ）−オール，２４（Ｒ），２５−エポキシコレステロール、２４（Ｓ），２５−イミノコレステロール、メチル−Ｈ−コレネート、ジメチル−ヒドロキシコレナミド、２４（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール、２４（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール、２２（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール、２２（Ｒ），２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロール、２５−ヒドロキシコレステロール、２４（Ｓ），２５−ジヒドロキシコレステロール、２４（Ｒ），２５−ジヒドロキシコレステロール、２４，２５−デヒドロコレステロール、７（α）−オール，２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、７（β）−オール，２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、７ｋ，２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、７（α）−ヒドロキシコレステロール、７−ケトコレステロール、コレステロール、５，６−２４（Ｓ），２５−ジエポキシコレステロール、またはそれらの混合物である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記核ホルモンレセプターが、レチノイドＸレセプターである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記レチノイドＸレセプターのリガンドが、９シス−レチノイン酸、ＡＧＮ  １９１６５９［（Ｅ）−５−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３，５，５，８，８−ペンタメチル−２−ナフチル）プロペン−１−イル］−２−チオフェンカルボン酸］、ＡＧＮ  １９１７０１［（Ｅ）２−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３，５，５，８，８−ペンタメチル−２−ナフチル）プロペン−１−イル］−４−チオフェン−カルボン酸］、ＡＧＮ  １９２８４９［（３，５，５，８，８，−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）（５カルボキシピリド−２−イル）スルフィド］、ＬＧＤ３４６、ＬＧ１００２６８、ＬＧ１００７５４、ＢＭＳ６４９、ベクサロテンＲ（４−［１−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３，５，５，８，８−ペンタメチル−２−ナフタレニル）エテニル］安息香酸）、またはそれらの混合物である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記眼の組織が、個体内に含まれる、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記個体が、黄斑変性に罹患している、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記黄斑変性が、加齢性黄斑変性である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記個体が、シュタルガルト病（黄色斑眼底）に罹患している、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
眼の組織におけるコレステロール逆行輸送を増加させる方法であって、該組織に、核ホルモンレセプターの少なくとも１つのリガンドを送達する工程を包含する、方法。
【請求項１４】
前記眼の組織が、網膜色素上皮（ＲＰＥ）、ブルーフ膜、またはそれらの組み合わせである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記核ホルモンレセプターが、甲状腺ホルモンレセプターである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記甲状腺ホルモンレセプターのリガンドが、Ｔ３、ＴＲＩＡＣ（３−トリヨードチロ酢酸）、ＧＣ−１、ＫＢ１４１、３，５ジメチル−３−イソプロピルチロニン、またはそれらの混合物である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記核ホルモンレセプターが、肝臓Ｘレセプターである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記肝臓Ｘレセプターのリガンドが、２２（Ｒ）ヒドロキシコレステロール、アセチル−ポドカルピン酸ダイマー、Ｔ０９０１３１７、ＧＷ３９６５（１２）、２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、２４（Ｒ），２５−エポキシコレステロール、２２（Ｒ）−オール−２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、２２（Ｓ）−オール，２４（Ｒ），２５−エポキシコレステロール、２４（Ｓ），２５−イミノコレステロール、メチル−Ｈ−コレネート、ジメチル−ヒドロキシコレナミド、２４（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール、２４（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール、２２（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール、２２（Ｒ），２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロール、２５−ヒドロキシコレステロール、２４（Ｓ），２５−ジヒドロキシコレステロール、２４（Ｒ），２５−ジヒドロキシコレステロール、２４，２５−デヒドロコレステロール、７（α）−オール，２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、７（β）−オール，２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、７ｋ，２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、７（α）−ヒドロキシコレステロール、７−ケトコレステロール、コレステロール、５，６−２４（Ｓ），２５−ジエポキシコレステロール、またはそれらの混合物である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記核ホルモンレセプターが、レチノイドＸレセプターである、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
前記レチノイドＸレセプターのリガンドが、９シス−レチノイン酸、ＡＧＮ  １９１６５９［（Ｅ）−５−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３，５，５，８，８−ペンタメチル−２−ナフチル）プロペン−１−イル］−２−チオフェンカルボン酸］、ＡＧＮ  １９１７０１［（Ｅ）２−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３，５，５，８，８−ペンタメチル−２−ナフチル）プロペン−１−イル］−４−チオフェン−カルボン酸］、ＡＧＮ  １９２８４９［（３，５，５，８，８，−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）（５カルボキシピリド−２−イル）スルフィド］、ＬＧＤ３４６、ＬＧ１００２６８、ＬＧ１００７５４、ＢＭＳ６４９、ベクサロテンＲ（４−［１−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３，５，５，８，８−ペンタメチル−２−ナフタレニル）エテニル］安息香酸）、またはそれらの混合物である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記眼の組織が、個体内に含まれる、請求項１３に記載の方法。
【請求項２２】
前記個体が、黄斑変性に罹患している、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記黄斑変性が、加齢性黄斑変性である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記個体が、シュタルガルト病（黄色斑眼底）に罹患している、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
個体における黄斑変性（ＡＭＤ）を処置する方法であって、該個体に、核ホルモンレセプターのリガンドを送達する工程を包含する、方法。
【請求項２６】
前記送達が、コレステロール逆行輸送がアップレギュレートされる条件下で行われる、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記核ホルモンレセプターが、甲状腺ホルモンレセプターである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記甲状腺ホルモンレセプターのリガンドが、Ｔ３、ＴＲＩＡＣ（３−トリヨードチロ酢酸）、ＧＣ−１、ＫＢ１４１、３，５ジメチル−３−イソプロピルチロニン、またはそれらの混合物である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記核ホルモンレセプターが、肝臓Ｘレセプターである、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
前記肝臓Ｘレセプターのリガンドが、２２（Ｒ）ヒドロキシコレステロール、アセチル−ポドカルピン酸ダイマー、Ｔ０９０１３１７、ＧＷ３９６５（１２）、２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、２４（Ｒ），２５−エポキシコレステロール、２２（Ｒ）−オール−２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、２２（Ｓ）−オール，２４（Ｒ），２５−エポキシコレステロール、２４（Ｓ），２５−イミノコレステロール、メチル−Ｈ−コレネート、ジメチル−ヒドロキシコレナミド、２４（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール、２４（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール、２２（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール、２２（Ｒ），２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロール、２５−ヒドロキシコレステロール、２４（Ｓ），２５−ジヒドロキシコレステロール、２４（Ｒ），２５−ジヒドロキシコレステロール、２４，２５−デヒドロコレステロール、７（α）−オール，２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、７（β）−オール，２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、７ｋ，２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、７（α）−ヒドロキシコレステロール、７−ケトコレステロール、コレステロール、５，６−２４（Ｓ），２５−ジエポキシコレステロール、またはそれらの混合物である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記核ホルモンレセプターが、レチノイドＸレセプターである、請求項２５に記載の方法。
【請求項３２】
前記レチノイドＸレセプターのリガンドが、９シス−レチノイン酸、ＡＧＮ  １９１６５９［（Ｅ）−５−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３，５，５，８，８−ペンタメチル−２−ナフチル）プロペン−１−イル］−２−チオフェンカルボン酸］、ＡＧＮ  １９１７０１［（Ｅ）２−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３，５，５，８，８−ペンタメチル−２−ナフチル）プロペン−１−イル］−４−チオフェン−カルボン酸］、ＡＧＮ  １９２８４９［（３，５，５，８，８，−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）（５カルボキシピリド−２−イル）スルフィド］、ＬＧＤ３４６、ＬＧ１００２６８、ＬＧ１００７５４、ＢＭＳ６４９、ベクサロテンＲ（４−［１−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３，５，５，８，８−ペンタメチル−２−ナフタレニル）エテニル］安息香酸）、またはそれらの混合物である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記黄斑変性が、加齢性黄斑変性である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３４】
適切な容器中に収容された、黄斑変性を処置するためのキットであって、核ホルモンレセプターのリガンドを備える、キット。
【請求項３５】
前記核ホルモンレセプターが、ＴＲ、ＲＸＲ、ＬＸＲまたはそれらの組み合わせである、請求項３４に記載のキット。
【請求項３６】
前記リガンドが、Ｔ３、９−シスレチノイン酸、（Ｒ）ヒドロキシコレステロール、またはそれらの混合物である、請求項３４に記載のキット。
【請求項３７】
前記リガンドが、ＴＲＩＡＣ（３−トリヨードチロ酢酸、ＧＣ−１、ＫＢ１４１、３，５ジメチル−３−イソプロピルチロニン、アセチル−ポドカルピン酸ダイマー、Ｔ０９０１３１７、ＧＷ３９６５（１２）、２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、２４（Ｒ），２５−エポキシコレステロール、２２（Ｒ）−オール−２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、２２（Ｓ）−オール，２４（Ｒ），２５−エポキシコレステロール、２４（Ｓ），２５−イミノコレステロール、メチル−Ｈ−コレネート、ジメチル−ヒドロキシコレナミド、２４（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール、２４（Ｒ）ヒドロキシコレステロール、２２（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール、２２（Ｒ），２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロール、２５−ヒドロキシコレステロール、２４（Ｓ），２５−ジヒドロキシコレステロール、２４（Ｒ），２５−ジヒドロキシコレステロール、２４，２５−デヒドロコレステロール、７（α）−オール，２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、７（β）−オール，２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、７ｋ，２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、７（α）−ヒドロキシコレステロール、７−ケトコレステロール、コレステロール、５，６−２４（Ｓ），２５−ジエポキシコレステロール、ＡＧＮ  １９１６５９［（Ｅ）−５−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３，５，５，８，８−ペンタメチル−２−ナフチル）プロペン−１−イル］−２−チオフェンカルボン酸］、ＡＧＮ  １９１７０１［（Ｅ）２−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３，５，５，８，８−ペンタメチル−２−ナフチル）プロペン−１−イル］−４−チオフェン−カルボン酸］、ＡＧＮ  １９２８４９［（３，５，５，８，８，−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）（５カルボキシピリド−２−イル）スルフィド］、ＬＧＤ３４６、ＬＧ１００２６８、ＬＧ１００７５４、ＢＭＳ６４９、ベクサロテンＲ（４−［１−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３，５，５，８，８−ペンタメチル−２−ナフタレニル）エテニル］安息香酸）、またはそれらの混合物である、請求項３４に記載のキット。
【請求項３８】
前記キットが、薬学的に受容可能な賦形剤を備える、請求項３４に記載のキット。
【請求項３９】
個体における黄斑変性（ＡＭＤ）を処置する方法であって、以下の工程：
核ホルモンレセプターについてのリガンドを同定する工程；および
該リガンドを該個体へと送達する工程
を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の引用）
本発明は、米国仮特許出願６０／３４０，４９８（２００１年１２月７日出願）および米国仮特許出願６０／４１５，８６４（２００２年１０月３日出願）に対する優先権を主張する。米国仮特許出願６０／３４０，４９８および米国仮特許出願６０／４１５，８６４は、それらの全体が、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、眼科学および細胞生物学の分野に関する。特に、本発明は、コレステロール逆輸送の調節を利用した加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）の処置に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）は、先進世界における重篤な視覚喪失の主な原因である（Ｔａｙｌｏｒら，２００１；ＶａｎＮｅｗｋｉｒｋら，２０００）。この疾患の初期段階では、脈絡膜新生血管から生じる視覚喪失の前に、ブルーフ膜における進行性の脂質蓄積が存在する（Ｐａｕｌｅｉｋｈｏｆｆら，１９９０；Ｈｏｌｚら，１９９４；Ｓｈｅｒａｉｄａｈら，１９９３；Ｓｐａｉｄｅら，１９９９）。ブルーフ膜は、外網膜とその血液供給源である脈絡毛細管板との間の、重要な連結部に存在する。脂質沈着は、ブルーフ膜における水の伝導率および高分子透過性の低下を引き起こし、そして網膜代謝を損なうと考えられる（Ｍｏｏｒｅら，１９９５；Ｐａｕｌｅｉｋｈｏｆｆら，１９９０；Ｓｔａｒｉｔａら，１９９６）。網膜および／またはＲＰＥは、によって脈絡膜新生血管の増殖を促進する血管新生因子（例えば、ＶＥＧＦ、ｖＦＧＦ）の精密化によって応答し得る。
【０００４】
興味深いことに、ブルーフ膜における脂質蓄積は、ＡＭＤにおける脂質蓄積と同様に、アポリポタンパク質Ｅ（ａｐｏ  Ｅ）ヌルマウスにおいて観察されている（Ｄｉｔｈｍａｒら，２０００；Ｋｌｉｆｆｅｎら，２０００）。ａｐｏ  Ｅ対立遺伝子と他の加齢性変性、アルツハイマー病およびアテローム性動脈硬化症との間のさらなる関連に起因して、ＡＭＤにおけるａｐｏ  Ｅの潜在的役割について近年調査が存在する。
【０００５】
ＡＭＤにおけるａｐｏ  Ｅ多型についてのいくつかの研究が行われている（Ｓｉｍｏｎｅｌｌｉら，２００１；Ｋｌａｖｅｒら，１９９８；Ｓｏｕｉｅｄら，１９９８）。アルツハイマー病とは対照的に、ａｐｏ  Ｅ−４対立遺伝子は、ＡＭＤの有病率の低下と関連している。Ａｐｏ  Ｅ−２対立遺伝子は、ＡＭＤを有する患者においてわずかに増加している。ＡＭＤ病因における役割をさらに支持して、ａｐｏ  Ｅは、ＡＭＤの顕著な特徴であるブルーフ膜沈着物である、ドルーゼンにおいて検出されている（Ｋｌａｖｅｒら，１９９８；Ａｎｄｅｒｓｏｎら，２００１）。死後の眼についての免疫組織化学は、網膜色素上皮（ＲＰＥ）の基底面におけるａｐｏ  Ｅを実証した（Ａｎｄｅｒｓｏｎら，２００１）。培養されたＲＰＥ細胞は、脳において見出されるレベルと匹敵する、高レベルのａｐｏ  Ｅ  ｍＲＮＡを合成する（Ａｎｄｅｒｓｏｎら，２００１）。
【０００６】
ＡＭＤにおけるａｐｏ  Ｅの役割は確立されていないが、このアポリポタンパク質は、この疾患の経過に影響を与え得るいくつかの機能を有する。ａｐｏ  Ｅは、抗血管新生効果（Ｂｒｏｗｎｉｎｇら，１９９４）、抗炎症効果（Ｍｉｃｈａｅｌら，１９９４）、および抗酸化効果を有する（Ｔａｎｇｉｒａｌａら，２００１）。これらは、全て、Ａｐｏ  Ｅのアテローム予防性（ａｔｈｅｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ）の性質と考えられるが、これはまた、ＡＭＤの進行を防御する際に重要であり得る。ａｐｏ  Ｅのアテローム予防効果は最初、血漿中脂質レベルに対する効果に由来すると考えられたが、血管マクロファージに対する局所効果がおそらく同等に重要である。従って、動脈壁におけるマクロファージａｐｏ  Ｅの選択的に増強された発現は、高脂血症にもかかわらず、アテローム性動脈硬化症を低下させる（Ｓｈｉｍａｎｏら，１９９５；Ｂｅｌｌｏｓｔａら，１９９５；Ｈａｓｔｙら，１９９９）。逆に、Ｃ５７ＢＬ／６野生型マウスにおけるａｐｏ  Ｅヌルマクロファージの再構築は、アテローム性動脈硬化症を誘導する（Ｆａｚｉｏら，１９９４）。動脈ａｐｏ  Ｅ発現のアテローム予防効果は、コレステロール逆行輸送の促進に部分的に由来すると考えられる（Ｍａｚｚｏｎｅら，１９９２；Ｌｉｎら，１９９９）。ａｐｏ  Ｅがコレステロール逆行輸送を促進する機構は、不完全にしか理解されていない。ａｐｏ  Ｅ発現は、Ｊ７７４マクロファージ（ＭａｚｚｏｎｅおよびＲｅａｒｄｏｎ，１９９４）および脂質を含まないアポリポタンパク質Ａ１（Ｌａｎｇｅｒら，２０００）におけるＨＤＬ３へのコレステロール流出を増加させる。細胞表面ａｐｏ  Ｅもまた、原形質膜からの流出を誘導すると仮定される（Ｌｉｎら，１９９９）。
【０００７】
コレステロール逆行輸送は、ＲＰＥからブルーフ膜への脂質流出に起因して、ＡＭＤの病因において重要であり得る。最初のマクロファージと非常によく似て、ＲＰＥ細胞は、生涯を通じて脂質沈着物を徐々に蓄積する；しかし、血管壁マクロファージとは異なり、ＲＰＥ脂質の供給源は、網膜の光レセプター外部セグメント（ＰＯＳ）であると考えられる（Ｋｅｎｎｅｄｙら，１９９５）。毎日、各ＲＰＥ細胞は、リソソーム酵素を介して、１０００個を超えるＰＯＳを貪食して分解している。これらのＰＯＳは、リン脂質に富んでおり、そして光反応性色素であるロドプシンを含む。不完全に消化されたＰＯＳは、リポフスチンとしてＲＰＥ中に蓄積する。８０歳までには、約２０％のＲＰＥ細胞の容積が、リポフスチンによって占められる（Ｆｅｅｎｅｙ−Ｂｕｒｎｓら，１９８４）。
【０００８】
ブルーフ膜脂質の分析は、リン脂質、トリグリセリド、コレステロール、およびコレステロールエステルの加齢性蓄積を示す（Ｈｏｌｚら，１９９４；Ｃｕｒｃｉｏら，２００１）。これらの脂質の起源はまた、循環というよりむしろＰＯＳに主に由来すると考えられる（Ｈｏｌｚら，１９９４；Ｓｐａｉｄｅら，１９９９）。ＰＯＳ脂質は、ＲＰＥからブルーフ膜へと流出すると仮定される。ブルーフへのコレステロールエステル沈着は、血漿中脂質からの寄与を示唆するが、これらのエステルの生化学的分析は、ＲＰＥ細胞由来のＡＣＡＴによる細胞内コレステロールのエステル化を示唆する（Ｃｕｒｃｉｏら，２００２）。網膜からＲＰＥ細胞への脂質の輸送は広範に研究されているが、ＲＰＥからブルーフ膜への脂質流出機構は、充分には理解されていない。さらに、病原性の観点から、ブルーフ膜への脂質流出の調節は、加齢において生じる脂質誘導肥厚化の速度を決定する際に重要であり得る。
【０００９】
核ホルモンレセプターリガンドは、ＡＢＣＡ−１およびａｐｏ  Ｅの発現に対するそれらの影響を介して、マクロファージにおけるコレステロール逆行輸送を調節する。肝臓Ｘレセプター（ＬＸＲ）リガンドおよび／またはレチノイドＸレセプター（ＲＸＲ）リガンドは、これらの輸送体のレベルを上昇させ、そしてマクロファージにおけるコレステロール逆行輸送を上昇させる（Ｍａｋら，２００２；Ｌａｆｆｉｔｔｅら，２００１）。甲状腺ホルモンもまた、ａｐｏ  Ｅの発現をＨｅｐＧ２細胞において３倍上昇させることが実証されている（Ｌａｆｆｉｔｔｅら，１９９４）。
【００１０】
ＡＳにおいて、ＡＭＤと同様に、脂質は、細胞外マトリクス内および食細胞（主に、マクロファージ）内に蓄積する。ＡＳにおける脂質代謝機構は、詳細に調査されている。ＲＰＥによる脂質プロセシングならびにその後のＢＭおよび循環への脂質流出についての同様の調査は、ＡＳについての深さと同じ深さほどは行われていない。その結果、ＡＭＤを乾燥させる潜在的治療アプローチが習慣付けられている。
【００１１】
Ｍｕｌｌｉｎｓら（２０００）は、ドルーゼンと他の細胞外沈着物（アテローム性動脈硬化斑を含む）との間での組成の類似性を記載する。共通して共有される構成成分の中でも特に、ビトロネクチン、アミロイドＰ、Ａｐｏ  Ｅ、および脂質である。より詳細には、アポリポタンパク質Ｅは、網膜の色素沈着上皮において同定される。
【００１２】
Ｆｒｉｅｄｍａｎ（２０００）は、ＡＭＤの病因におけるアテローム性動脈硬化症の役割を概説する。特に、この概説は、血管新生形態のＡＭＤを処置するために血管新生経路（例えば、メンバーＶＥＧＦ）を標的とすることを言及する。血管新生剤のアップレギュレーションまたは作用を妨害することが、脈絡膜新生血管にとって有用であると証明され得ること、そして代替の実施形態では、ＡＭＤの危険性を低下させるためにスタチンが有用であり得ることが留意される。
【００１３】
Ａｎｄｅｒｓｏｎら（２００１）は、アポリポタンパク質Ｅタンパク質が、おそらく、網膜の色素沈着した上皮から生じるドルーゼンと同じ位置に見出されることを報告する。
【００１４】
米国特許第６，０７１，９２４号は、ＲＰＥ細胞を、レチノイン酸を除くレチノイン酸レセプターアゴニストと接触させ、好ましくは、それにより、ＡＰ−１依存性遺伝子発現を阻害することにより、網膜色素上皮の増殖阻害に関する。特定の実施形態では、ＡＰ１アンタゴニストは、その必要のある被験体へと、網膜色素上皮の増殖またはそれに関連する疾患の阻害のために、送達される。関連した米国特許第６，０７５，０３２号は、ＲＰＥ細胞をＡＰ−１アンタゴニストと接触させることによる、脈絡膜新生血管の阻害に関する。関連した米国特許第５，８２４，６８５号は、ＲＰＥ細胞と、エチル−６−［２−（４，４−ジメチルチオクロマン−６−イル）エチニル］ニコチネート、６−［２−（４，４−ジメチルクロマン−６−イル）エチニル］ニコチン酸、およびｐ−［（Ｅ）−２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフチル）プロペニル］−安息香酸から選択されるレチノイン酸レセプターとを接触させることによる、増殖性硝子体網膜症または牽引網膜剥離の改善に関する。関連する米国特許第６，３７２，７５３号は、レチノイン酸以外の、少なくとも１つのＡＰ−１アンタゴニストおよび少なくとも１つのレチノイン酸レセプター（ＲＡＲ）アゴニストを提供することによって、網膜色素上皮の増殖から生じる眼の疾患の阻害に取り組む。
【００１５】
ＷＯ  ０１／５８４９４は、眼の細胞を、脈管形成および神経栄養因子のインヒビターをコードする核酸配列を含む発現ベクターと接触させることによって、眼の疾患（例えば、加齢性黄斑変性）を処置または予防することに関する。特定の実施形態では、脈管形成および神経栄養因子のインヒビターは、全く同一（例えば、色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ））である。
【００１６】
ＷＯ  ０２／１３８１２は、炎症性疾患（例えば、眼の疾患）の処置のための、インスリン感作因子（好ましくは、ペルオキシソーム増殖因子活性化レセプター−γ（ＰＰＡＲγ）アゴニスト）の使用に関する。
【００１７】
ＷＯ  ００／５２４７９は、ドルーゼン関連障害（ＡＭＤを含め、ドルーゼン形成を含む、任意の障害）を診断、処置および予防することに取り組む。特定の実施形態では、免疫細胞の増殖または分化を阻害する有効量の因子（例えば、ＴＮＦ−αのアンタゴニスト）を提供することに関連する方法が存在する。
【００１８】
従って、本発明は、眼の組織（例えばブルーフ膜）の脂質含有量を低下させる新規のアプローチを提供し、黄斑変性（例えば、ＡＭＤ）の処置のための方法および組成物をさらに提供する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１９】
（発明の簡単な要旨）
本発明は、ＡＭＤを処置することに関連する、系、方法、および／または組成物に関する。乾性ＡＭＤに関する処置は、欠けている。なぜなら、この一般的状態の病因はほとんど理解されていないからである。そして本発明者らは、ヒト網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞と、ＡＭＤおよびアテローム性動脈硬化症の類似の病原性機構の証拠となるマクロファージとの間での類似の生物学的挙動を実証した。特に、コレステロール逆行輸送（ＲＣＴ）は、ＡＭＤの処置のために本発明において活用される。本発明者らは、眼におけるＲＰＥ細胞においてＲＣＴの新たな実証を提供する。より詳細には、ＲＣＴは、核ホルモンレセプターリガンド（例えば、甲状腺ホルモン（ＴＲ）、肝臓Ｘレセプター（ＬＸＲ）、および／またはレチノイドＸレセプター（ＲＸＲ）のアゴニスト）によるコレステロールおよび／またはリン脂質輸送体（ＡＢＣＡ−１、Ａｐｏ  Ｅ、ＳＲＢ−１、ＳＲＢ−２）のレベルの操作を介して調節される。本発明の目的は、視覚機能の改善を促進するため、および／または、いくつかの実施形態では、眼の疾患（例えば、ＡＭＤ）を予防するための、ＲＰＥブルーフ膜の脂質含有量の低下である。ブルーフ膜の脂質含有量の低下は好ましくは、以下のうちの少なくとも１つ以上をもたらす：ＣＮＶの発症の低減；暗順応における改善；夜間視野における改善；視力改善；および／または明るい閃光刺激からの回復の改善。
【００２０】
本発明の特定の実施形態では、ドルーゼンを有し、脈絡膜新生血管形成の証拠の無い患者には、核ホルモンアゴニスト（例えば、甲状腺ホルモン（ＴＲ）アゴニスト（例えば、Ｔ３（３，５，３’−Ｌ−トリヨードチロニン）、ＴＲＩＡＣ（３−トリヨードチロ酢酸；３−ｔｒｉｉｏｄｏｔｈｙｏａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）、ＧＣ１、ＫＢ−０００，１４１および／またはＫＢ１４１（Ｋａｒｏ  Ｂｉｏ；Ｈｕｄｄｉｎｇｅ，Ｓｗｅｄｅｎ））が投与される。投与は、経口であってもよく、当該分野で周知の徐放系によってでもよい。特定の実施形態では、このアゴニストは、ＲＰＥ中の少なくとも１つの核ホルモンレセプターに結合し、そしてＲＣＴのアップレギュレーションを誘導する。ＲＰＥからの脂質の流出は、増加し、そして脈絡膜新生血管形成に由来する視覚喪失の可能性が低下する。ＴＲファミリー、ＲＸＲファミリー、およびＬＸＲファミリーの他の核ホルモンレセプターリガンド（例えば、当業者に周知のリガンド）は、ＲＰＥによるＲＣＴを増強するために、独立して、または互いに組み合わせて用いられる。
【００２１】
本発明の１つの実施形態では、眼の組織からの脂質流出を増大させる方法が存在し、この方法は、この組織に核ホルモンレセプターリガンドを送達する工程を包含する。特定の実施形態では、眼の組織は、網膜色素上皮（ＲＰＥ）、ブルーフ膜、またはそれらの組み合わせである。別の特定の実施形態では、この核ホルモンレセプターは、甲状腺ホルモンレセプターである。さらなる特定の実施形態では、甲状腺ホルモンレセプターのリガンドは、３，５，３’−Ｌ−トリヨードチロニン（Ｔ３）、ＴＲＩＡＣ（３−トリヨードチロ酢酸）；ＫＢ１４１；ＧＣ−１；３，５ジメチル−３−イソプロピルチロニン；またはそれらの混合物である。１つの実施形態では、この核ホルモンレセプターは、肝臓Ｘレセプターである。特定の実施形態では、肝臓Ｘレセプターのリガンドは、２２（Ｒ）ヒドロキシコレステロール；アセチル−ポドカルピック（ａｃｅｔｙｌ−ｐｏｄｏｃａｒｐｉｃ）ダイマー；Ｔ０９０１３１７；ＧＷ３９６５（１２）；２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール；２４（Ｒ），２５−エポキシコレステロール；２２（Ｒ）−オール−２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール；２２（Ｓ）−オール，２４（Ｒ），２５−エポキシコレステロール；２４（Ｓ），２５−イミノコレステロール；メチル−Ｈ−コレネート（ｍｅｔｈｙｌ−Ｈ−ｃｈｏｌｅｎａｔｅ）；ジメチル−ヒドロキシコレナミド（ｄｉｍｅｔｈｙｌ−ｈｙｄｒｏｘｙｃｈｏｌｅｎａｍｉｄｅ）；２４（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール；２４（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール；２２（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール；２２（Ｒ），２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロール；２５−ヒドロキシコレステロール；２４（Ｓ），２５−ジヒドロキシコレステロール；２４（Ｒ），２５−ジヒドロキシコレステロール；２４，２５−デヒドロコレステロール；７（α）−オール，２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール；７（β）−オール、２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール；７ｋ，２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール；７（α）−ヒドロキシコレステロール；７−ケトコレステロール；コレステロール；５，６−２４（Ｓ），２５−ジエポキシコレステロール；またはそれらの混合物である。特定の実施形態では、この核ホルモンレセプターは、レチノイドＸレセプターであり、そのリガンドとしては、以下が挙げられる：９シス−レチノイン酸；ＡＧＮ  １９１６５９［（Ｅ）−５−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３，５，５，８，８−ペンタメチル−２−ナフチル）プロペン−１−イル］−２−チオフェンカルボン酸］；ＡＧＮ  １９１７０１［（Ｅ）２−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３，５，５，８，８−ペンタメチル−２−ナフチル）プロペン−１−イル］−４−チオフェン−カルボン酸］；ＡＧＮ  １９２８４９［（３，５，５，８，８，−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）（５カルボキシピリド−２−イル）スルフィド；ＬＧＤ３４６；ＬＧ１００２６８；ＬＧ１００７５４；ＢＭＳ６４９；ベクサロテンＲ（ｂｅｘａｒｏｔｅｎｅＲ）（４−［１−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３，５，５，８，８−ペンタメチル−２−ナフタレニル）エテニル］安息香酸）；またはそれらの混合物。１つの実施形態では、この眼の組織は、個体（例えば、黄斑変性もしくは別の眼の疾患を発症する危険性がある個体）中に含まれるか、および／またはこの眼の組織は、黄斑変性（例えば、加齢性黄斑変性）に罹患している個体中に含まれる。他の特定の実施形態では、この個体は、シュタルガルト病（黄色斑眼底）に罹患しているか、またはシュタルガルト病を発症する危険性がある。
【００２２】
本発明の別の実施形態では、眼の組織におけるコレステロール逆行輸送を増大させる方法が存在し、この方法は、この組織に、核ホルモンレセプターの少なくとも１つのリガンドを送達する工程を包含する。特定の実施形態では、この眼の組織は、網膜色素上皮（ＲＰＥ）、ブルーフ膜、またはそれらの組み合わせである。
【００２３】
本発明のさらなる実施形態では、個体における黄斑変性（ＡＭＤ）を処置する方法が存在し、この方法は、この個体に、核ホルモンレセプターのリガンドを送達する工程を包含する。特定の実施形態では、この送達する工程は、コレステロール逆行輸送がアップレギュレートされる条件下で行われる。
【００２４】
本発明の別の実施形態では、適切な容器内に収容された、黄斑変性の処置のためのキットが存在し、このキットは、核ホルモンレセプターのリガンドを備える。特定の実施形態では、この核ホルモンレセプターは、ＴＲ、ＲＸＲ、ＬＸＲまたはそれらの混合物である。いくつかの実施形態では、核ホルモンレセプターの組み合わせを含むことが有用である。なぜなら、多くは、ヘテロダイマーである（例えば、ＬＸＲおよびＲＸＲ、またはＲＸＲおよびＴＲ）ことが当該分野で周知であるからである。特定の実施形態では、このキットは、薬学的に受容可能な賦形剤を備える。別の特定の実施形態では、核ホルモンレセプターについてのリガンドは、薬学的に受容可能な賦形剤中に含まれる。
【００２５】
本発明のさらなる実施形態では、個体における黄斑変性（ＡＭＤ）を処置する方法が存在し、この方法は、核ホルモンレセプターについてのリガンドを同定する工程；およびこのリガンドをこの個体に送達する工程を包含する。核ホルモンレセプターについてのリガンドを同定する方法は、当該分野で周知である。
【００２６】
上記は、以下の本発明の詳細な説明がよりよく理解され得るように、本発明の特徴および技術的利点をかなり広範に概説した。本発明のさらなる特徴および利点は、本発明の特許請求の範囲の主題を形成する本明細書中以下に記載される。開示される着想および特定の実施形態が、本発明の同じ目的を実施するために、改変するためまたは他の構造を設計するための基礎として容易に利用され得ることが、当業者によって理解されるべきである。このような等価な構成が、添付の特許請求の範囲に示されるような本発明の趣旨および範囲から逸脱しないこともまた、当業者によって実感されるべきである。（その組織化および操作方法の両方に関して）本発明の特徴であると考えられる新規の特徴は、さらなる目的および利点とともに、以下の説明から、添付の図面に関連して考えられる場合、より良く理解される。しかし、図面の各々は、例示および説明のみの目的で提供され、そして本発明の限定の定義であることを意図しないことが明らかに理解されるべきである。
【００２７】
（発明の詳細な説明）
（Ｉ．定義）
本明細書の明細書において用いられる場合、「ａ」または「ａｎ」は、１以上を意味し得る。本明細書の特許請求の範囲において用いられる場合、用語「を含む」と関連して用いられるならば、用語「ａ」または「ａｎ」は、１または１より多くを意味し得る。本明細書中で用いられる場合、「別の」は、少なくとも２以上を意味し得る。
【００２８】
用語「加齢性黄斑変性」は、本明細書中で用いられる場合、約５０歳を超える個体における黄斑変性をいう。１つの特定の実施形態では、これは、中心視力の低下、そして進行した場合には、法的盲をもたらす、網膜の黄斑領域における光レセプターの破壊および喪失と関連する。
【００２９】
用語「ブルーフ膜」は、本明細書中で用いられる場合、脈絡毛細管板をＲＰＥから隔てる５層構造体をいう。
【００３０】
用語「脂質流出を増大させる」または「脂質流出が増大している」は、本明細書中で用いられる場合、脂質流出のレベルおよび／もしくは速度の上昇、脂質流出の促進、脂質流出の増強、脂質流出の亢進、脂質流出のアップレギュレート、脂質流出の改善、および／または脂質流出の増強をいう。特定の実施形態では、この流出は、リン脂質、トリグリセリド、コレステロール、および／またはコレステロールエステルの流出を包含する。
【００３１】
用語「黄斑」は、本明細書中で用いられる場合、網膜の中心領域の光感知細胞をいう。
【００３２】
用語「黄斑変性」は、本明細書中で用いられる場合、網膜の中心部分である網膜の変質をいう。
【００３３】
用語「核ホルモンレセプター」は、本明細書中で用いられる場合、生理学的プロセス（この例としては、細胞の増殖および分化、発生、およびホメオスタシスが挙げられる）に関与する遺伝子の発現において役割を果たす、細胞内レセプターをいう。特定の実施形態では、これらのレセプターは、そのメンバーが、直接反復または逆方向反復として配置された、２以上のヘキサヌクレオチドＤＮＡ結合半体部分（ｈａｌｆ−ｓｉｔｅ）を含む、同様のＤＮＡ配列を認識する、レセプターのスーパーファミリーのメンバーである。これらのレセプターが、核における遺伝子の発現を調節し得、それにより、それぞれの生理学的プロセスを調節し得るのは、この認識を通してである。核ホルモンレセプターの例としては、甲状腺ホルモンレセプター、肝臓Ｘレセプター、レチノイドＸレセプター、エストロゲンレセプター、アンドロゲンレセプター、ペルオキシソーム増殖因子活性化レセプター（ＰＰＡＲ）、トランス−レチノイン酸レセプター（ＲＡＲ）、ビタミンＤレセプター（ＶＤＲ）、グルココルチコイドレセプター、プロゲステロンレセプター、およびそれらのアイソフォームが挙げられる。
【００３４】
核ホルモンレセプターとしては、いくつかの実施形態では、それらの同族リガンドの不存在下で細胞質中に隔離されたままである核ホルモンレセプター（例えば、ステロイドホルモンレセプター）が挙げられる。このリガンドが結合すると、このステロイドホルモンレセプターは、核へと配置換えされ、ここで、これらは、ホルモン応答性エレメントに（代表的には、ホモダイマーとして）結合する。
【００３５】
他の実施形態では、この核ホルモンレセプターは、それらのリガンドの不存在下で、細胞質中に隔離されず、むしろ、核中にとどまる。これらのレセプターとしては、甲状腺ホルモンレセプター、レチノイドレセプター、脂肪酸レセプター、およびエイコサノイドレセプターが挙げられ、これらのレセプターは代表的に、それらの同族の応答性エレメントに、例えば、９−シス−レチノイン酸レセプター（ＲＸＲ）とのヘテロダイマーとして結合する。しばしば、応答エレメントに対する核レセプターの結合は、同族リガンドの不存在下で生じる。このような核レセプターの例は、ファルネソイド（ｆａｒｎｅｓｏｉｄ）Ｘレセプター（ＦＸＲ）である。
【００３６】
核ホルモンレセプターのリガンドを同定する方法は、当該分野で周知であり、この例は、米国特許第５，８４６，７１１号および米国特許第６，２６６，６２２号（これらは両方とも、その全体が、本明細書中に参考として援用される）に記載される。
【００３７】
用語「コレステロール逆輸送」は、本明細書中で用いられる場合、周辺組織から肝臓へのコレステロールの輸送をいう。特定の実施形態では、これは、ＲＰＥ細胞からの脂質の流出をいう。特定の実施形態では、これは、ＨＤＬへの細胞コレステロールおよび／またはリン脂質の流出を含み、さらなる特定の実施形態では、これは、（例えば、胆汁分泌のための）肝臓へのコレステロールエステルのＨＤＬ送達を含む。
【００３８】
用語「アップレギュレートする」とは、本明細書中で用いられる場合、事象、プロセス、または機構（例えば、コレステロール逆輸送）のレベルおよび／または速度の増大と定義される。
【００３９】
（ＩＩ．本発明）
上記のように、ＡＭＤを有する患者における黄斑の組織病理学は、ブルーフ膜のびまん性の肥厚化を示し、そして重複するＲＰＥは弱められ、そしてリポフスチンは完全に顆粒化する。光レセプターは、短縮化され、そして萎縮し、そして肥厚化したブルーフ膜の多くは、脂質沈着からなる。約５０歳よりも後では、脂質蓄積速度が加速することが公知である（Ｈｏｌｚら，１９９４）。
【００４０】
脂質代謝を研究するために細胞培養方法を用いて、本発明者らは、マクロファージおよびヒトＲＰＥ細胞によって共有される、脂質代謝についての多数の類似の機構を示した。これらの２つの細胞型の共有される生物学は、ＡＭＤの処置のための有用な治療アプローチを示す。特に、本発明者らは、ＲＣＴがＲＰＥ細胞において生じること、およびＲＣＴの増強が、所望でない脂質をＲＰＥ細胞および／またはブルーフ膜から除去して網膜代謝を容易にするために有益であることを初めて示す。特定の実施形態では、ＲＣＴ系における輸送体は、ＲＣＴを改善するように調節される。さらなる特定の実施形態では、本発明のこの調節局面は、ＡＭＤについての新規の処置を提供する。
【００４１】
ＡＭＤ個体の黄斑における脂質蓄積の機構に関する分野において考察が存在しているが、本発明は、循環への脂質の流出に関し、これは、ＲＰＥおよび／またはブルーフ膜における脂質の量を低下させる。この流出の促進は、本発明の１つの局面を含み、そして早期ＡＭＤおよび後期ＡＭＤの両方について有用な治療である。当業者は、早期ＡＭＤが、ドルーゼンの存在を含み、そして後期ＡＭＤが、脈絡膜新生血管または地図状萎縮による視覚喪失を含むことを認識する。
【００４２】
従って、本発明は、コレステロール逆行輸送がＲＰＥ細胞において生じる分野において新規な考えを提供する。特定の実施形態では、本発明は、ＲＰＥ細胞の内側からＲＰＥ細胞の外側への、そしてさらにはブルーフ膜を通した、コレステロールおよび／またはリン脂質の流出を促進することに関連した、方法および組成物を提供する。別の特定の実施形態では、ブルーフ膜からの流出の後、これらのコレステロールおよび／またはリン脂質は、アポリポタンパク質Ｅ、アポリポタンパク質Ａ１、および他の輸送体、またはそれらの組み合わせによって、肝臓への除去のためにＨＤＬへと輸送される。
【００４３】
当業者は、コレステロール逆行輸送（ＲＣＴ）が脂質ホメオスタシスにおいて果たす重要な役割を認識する。ＨＤＬレベルは、冠状動脈疾患（ＣＡＤ）の発生率と逆に相関する。タンジアー病は、ＡＢＣＡ１の変異を含み、細網内皮組織および早発性アテローム性動脈硬化症においてコレステロール沈着をもたらす。さらに、Ａｐｏ  Ｅヌルマウスは、アテローム性動脈硬化症および高脂血症の優れたモデルである。興味深いことに、ＲＣＴにおけるＡｐｏ  Ｅの重要な役割を支持して、Ａｐｏ  Ｅヌルマウスへの骨髄移植を介した、Ａｐｏ  Ｅポジティブマクロファージの再構築は、アテローム性動脈硬化症を予防する。これは、持続した高脂血症にもかかわらず、生じる。
【００４４】
本発明の１つの実施形態では、ＲＰＥ細胞からの脂質の輸送体は、例えば、輸送体のレベルの上昇によって、輸送活性が増強されている。輸送体の例としては、ａｐｏ  Ｅ、ＡＢＣＡ１、ＳＲ−ＢＩ、ＳＲ−ＢＩＩ、ＡＢＣＡ４、ＡＢＣＧ５、ＡＢＣＧ８が挙げられ；関与し得る他のタンパク質は、ＬＣＡＴ、ＣＥＴＰ、ＰＬＴＰ、ＬＲＰレセプター、ＬＤＬレセプター、Ｌｏｘ−１、およびリパーゼである。特定の実施形態では、ｌｏｘ−１およびＰＬＴＰは、ＲＴ＿ＰＣＲによって実証されるように、ＲＰＥにおいて発現される。本発明の特定の実施形態では、ａｐｏ  Ａ１を利用して、ＲＰＥ細胞からのＲＣＴを促進する。さらなる特定の実施形態では、ａｐｏ  Ａ１は、ＲＰＥ細胞によって作製される。
【００４５】
本発明の特定の実施形態では、ＡＢＣＡ１、Ａｐｏ  Ｅ、ＳＲ−ＢＩおよび／またはＳＲ−ＢＩＩの発現をアップレギュレートすることによって、コレステロール逆行輸送がＲＰＥのレベルで増強される、ＡＭＤの処置のための介入ストラテジーが提供される。ＳＲ−Ｂは、１７β−エストラジオールおよびテストステロンによってアップレギュレートされることが報告されている。さらに、または単独で、流出する脂質へＨＤＬ結合が増強され、それにより、ブルーフ膜から循環への脂質の流出が増加し、そしてＡＭＤについての治療を提供する。１つの実施形態では、ＨＤＬレベルの上昇を利用して、ＲＰＥ細胞および／またはブルーフ膜からの脂質流出が促進され、そして特定の実施形態では、ＨＤＬの特定の亜種のレベルを利用して、脂質流出を促進する。例えば、流出された脂質は、プレβ−ＨＤＬ、ＨＤＬ１、ＨＤＬ２またはＨＤＬ３へと結合し得る。流出した脂質はまた、プレβ−１  ＨＤＬ、プレβ−２  ＨＤＬ、プレβ−３  ＨＤＬ、および／またはプレβ−４  ＨＤＬに結合し得る。特定の実施形態では、この流出した脂質は、ａｐｏ  Ｅを含むＨＤＬ２に優先的に結合する。
【００４６】
当業者は、特定のＲＣＴ成分がＲＰＥ細胞中に存在することを認識する（Ｍｕｌｌｉｎｓら，２０００；Ａｎｄｅｒｓｏｎら，２００１）。コレステロール逆行輸送タンパク質の発現を調節することが公知の核ホルモンレセプターもまた、培養ヒトＲＰＥにおいて発現されている。従って、本発明の好ましい実施形態では、核ホルモンレセプターの少なくとも１つに対するリガンドは、ＲＣＴをアップレギュレートする。さらなる実施形態では、ＲＰＥ細胞からの流出に続いて、この脂質は、ＨＤＬを結合し、それゆえ、本発明の１つの実施形態では、ＡＭＤの処置について、例えば、スタチンおよび／またはナイアシンによる、ＨＤＬのアップレギュレーションが存在する。
【００４７】
代替の実施形態では、ＡＭＤに関する処置は、ＲＣＴの低下を含む。例えば、特定の年齢（例えば、約５０歳、約５５歳、約６０歳、約６５歳、約７０歳、約７５歳、約８０歳など）を過ぎた個体では、輸送体が優先的に阻害される。この実施形態の１つの局面では、ＨＤＬは、ブルーフ膜に進入して脂質を除去することができず、そしてＲＰＥは、脂質を流出させ続ける。ＲＰＥ由来の流出した脂質がリポタンパク質アクセプターによって除去され得ない、このような場合、ＲＰＥによる脂質流出が阻害されて、ブルーフ膜をまたがった高分子輸送が維持される。ＡＢＣＡ−１、ａｐｏ  Ｅ、および／もしくはＳＲＢ−１のレベルを低下させることによるＲＣＴの阻害、またはＳＲＢ−２は、ブルーフ膜内の脂質の蓄積を低下させる。
【００４８】
本発明の実施形態では、核ホルモンレセプターについてのリガンドは、ＲＰＥおよびブルーフ膜の脂質含有量の低下のために、ＲＣＴを増強するための化合物として利用される。特定の実施形態では、この核ホルモンレセプターリガンドは、ＡＭＤの処置のために利用される。さらなる特定の実施形態では、この核ホルモンレセプターとしては、ＴＲ、ＲＸＲ、および／またはＬＸＲが挙げられる。他の特定の実施形態では、この核ホルモンレセプターのリガンドは、少なくとも１つのＲＰＥ細胞へと送達されて、ＲＰＥ細胞からの脂質の流出を促進するか、および／またはブルーフ膜からの流出のためにブルーフ膜へと送達される。ＴＲのためのリガンドの例としては、Ｔ３（３，５，３’−Ｌ−トリヨードチロニン）が挙げられる。ＴＲリガンドの他の例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ＴＲＩＡＣ（３−トリヨードチロ酢酸）；ＫＢ１４１（Ｋａｒｏ  Ｂｉｏ）；ＧＣ−１；および３，５ジメチル−３−イソプロピルチロニン。ＲＸＲについてのリガンドの例としては、９シス−レチノイン酸が挙げられ、そして他のＲＸＲリガンドとしてはまた、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ＡＧＮ  １９１６５９［（Ｅ）−５−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３，５，５，８，８−ペンタメチル−２−ナフチル）プロペン−１−イル］−２−チオフェンカルボン酸］；ＡＧＮ  １９１７０１［（Ｅ）２−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３，５，５，８，８−ペンタメチル−２−ナフチル）プロペン−１−イル］−４−チオフェン−カルボン酸］；ＡＧＮ  １９２８４９［（３，５，５，８，８，−ペンタメチル−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）（５カルボキシピリド−２−イル）スルフィド］；ＬＧＤ３４６；ＬＧ１００２６８；ＬＧ１００７５４；ＢＭＳ６４９；およびベクサロテンＲ（Ｌｉｇａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）（４−［１−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３，５，５，８，８−ペンタメチル−２−ナフタレニル）エテニル］安息香酸）。ＬＸＲについてのリガンドの例としては、以下が挙げられる：２２（Ｒ）ヒドロキシコレステロール、アセチル−ポドカルピン酸ダイマー（ａｃｅｔｙｌ−ｐｏｄｏｃａｒｐｉｃ  ｄｉｍｅｒ）、Ｔ０９０１３１７、およびＧＷ３９６５。
【００４９】
本発明の１つの実施形態では、配列の発現は、その発現のアップレギュレーターまたはアップレギュレーターである疑いのある化合物の投与後にモニタリングされる。当業者は、これらの配列を（例えば、Ｃｅｌｅｒａ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）またはＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎのＧｅｎＢａｎｋデータベースから商業的に）どのようにして得るかを認識している。例示的なａｐｏ  Ｅポリヌクレオチド配列としては、それらのＧｅｎＢａｎｋ登録番号とともに引用される、以下が挙げられる：配列番号１（Ｋ００３９６）；配列番号２（Ｍ１００６５）；および配列番号３（Ｍ１２５２９）、いくつかの例示的なａｐｏ  Ｅポリペプチド配列としては、それらのＧｅｎＢａｎｋ登録番号とともに、以下が挙げられる：配列番号４（ＡＡＢ５９５４６）；配列番号５（ＡＡＢ５９３９７）；および配列番号６（ＡＡＢ５９５１８）。
【００５０】
他の実施形態では、ＡＢＣＡ−１の配列が利用されて、例えば、本発明の方法に関連するＡＢＣＡ−１発現がモニタリングされる。ＡＢＣＡ１ポリヌクレオチドのいくつかの例としては、配列番号７（ＮＭ＿００５５０２）；および配列番号８（ＡＢ０５５９８２）が挙げられる。ＡＢＣＡ１ポリペプチドのいくつかの例としては、配列番号９（ＮＰ＿００５４９３）；および配列番号１０（ＢＡＢ６３２１０）が挙げられる。
【００５１】
本発明のいくつかの方法では、ＳＲ−ＢＩポリヌクレオチドおよびＳＲ−Ｂ２ポリヌクレオチドの配列の発現レベルは、核ホルモンレセプターリガンドの投与後にモニタリングされる。ＳＲ−ＢＩポリヌクレオチドの例は、配列番号１１（ＮＭ＿００５５０５）であり、ＳＲ−ＢＩポリペプチドの例は、配列番号１２（ＮＰ＿００５４９６）である。
【００５２】
（ＩＩＩ．薬学的組成物および投与経路）
本発明の組成物は、治療投与のための有効量の化合物を有し得、そしていくつかの実施形態では、これもまた抗ＡＭＤ剤である第２化合物の有効量と組み合わされて、治療投与のための有効量の化合物を有し得る。特定の実施形態では、この化合物は、核ホルモンレセプターのリガンド／アゴニストである。他の実施形態では、ＨＤＬの発現をアップレギュレートする化合物は、治療投与のための化合物である。このような組成物は一般に、薬学的に受容可能なキャリアまたは水性媒体中に溶解または分散される。
【００５３】
用語「薬学的または薬理学的に受容可能な」とは、動物またはヒトに、適切に投与された場合に、有害な反応も、アレルギー反応も、他の都合の悪い反応も生じない、分子実体および組成物をいう。本明細書中で用いられる場合、「薬学的に受容可能なキャリア」は、任意のおよび全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを包含する。薬学的に活性な物質についてのこのような媒体および薬剤の使用は、当該分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤がこの活性成分と不適合である場合を除いて、治療組成物におけるその使用が意図される。補助的な活性成分（例えば、他の抗ＡＭＤ剤）もまた、組成物中に組み込まれ得る。
【００５４】
非経口投与（例えば、静脈内注射または筋肉内注射）のために処方される化合物に加えて、他の薬学的に受容可能な形態（例えば、錠剤または経口投与のための他の固体；時間放出カプセル剤；および現在用いられる任意の他の形態（クリーム剤、ローション剤、洗口剤、吸入剤などを含む））が挙げられる
本発明の送達ビヒクルは、古典的薬学的調製物を含み得る。本発明によるこれらの組成物の投与は、標的である眼の組織がその経路を介して利用可能である限り、任意の一般的経路を介してである。これには、経口、鼻腔、頬内、直腸、腟内または局所が挙げられる。あるいは、投与は、同所注射、皮内注射、皮下注射、筋肉内注射、腹腔内注射または静脈内注射によってであり得る。このような組成物は、通常、薬学的に受容可能な組成物として投与される。いくつかの実施形態では、これらの組成物は、徐放性の眼内デバイスまたは眼外でデバイスによって投与される。
【００５５】
本発明のビヒクルおよびその中の治療化合物は、液体の溶液または懸濁液のいずれかとして、注射可能な組成物の形態で有利に投与される；注射前に液体中に溶解または懸濁するに適切な固体形態もまた調製され得る。これらの調製物はまた乳化され得る。このような目的のための代表的組成物は、１ミリリットルのリン酸緩衝化生理食塩水あたり５０ｍｇまたは約１００ｍｇまでのヒト血清アルブミンを含む。他の薬学的に受容可能なキャリアとしては、水溶液、無毒性の賦形剤（塩を含む）、保存剤、緩衝剤などが挙げられる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油および注射可能有機エステル（例えば、オレイン酸エチル（ｔｈｅｙｌｏｌｅａｔｅ））である。水性キャリアとしては、水、アルコール性／水性溶液、生理食塩水溶液、非経口ビヒクル（例えば、塩化ナトリウム）、リンゲルデキストロースなどが挙げられる。静脈内ビヒクルとしては、流体および栄養の補充物が挙げられる。保存剤としては、抗微生物剤、抗酸化剤、キレート剤、および不活性ガスが挙げられる。ｐＨおよび薬剤中の種々の成分の正確な濃度は、周知のパラメーターに従って調整される。
【００５６】
さらなる処方物は、経口投与に適切である。経口処方物としては、例えば、薬剤グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどのような代表的な賦形剤が挙げられる。組成物は、溶液、懸濁剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放処方物または散剤の形態をとる。経路が局所である場合、この形態は、クリーム剤、軟膏剤（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、軟膏（ｓａｌｖｅ）またはスプレー剤であり得る。
【００５７】
有効量の治療剤は、意図される目的に基づいて投与される。用語「単位用量」とは、被験体における使用に適切な物理的に別個の単位であって、各単位が、その投与（すなわち、適切な経路および治療レジメン）に関連して所望の応答を生じるように計算された所定の量の治療組成物を含む、単位をいう。処置数および単位用量の両方による、投与されるべき量は、処置されるべき被験体、その被験体の状態および所望の防御に依存する。治療組成物の正確な量はまた、実施者の判断に依存し、各個体について独特である。
【００５８】
ＡＭＤの処置、診断および／または予防に必要な、必須の物質および試薬の全ては、キット中に一緒に組み立てられ得る。キットの成分が１以上の液体溶液中に提供される場合、この液体溶液は好ましくは、水溶液であり、滅菌水溶液が特に好ましい。
【００５９】
インビボでの使用のために、抗ＡＭＤ剤は、単一または別個の薬学的に受容可能な注射可能組成物中に処方され得る。この場合、容器手段は、それ自体が、吸入器、シリンジ、ピペット、点眼器、またはこのような類似の装置であり得、この容器手段から、処方物が身体の感染領域（例えば、肺）へと適用され得るか、動物に注射され得るか、またはこのキットの他の成分に適用および混合されすらし得る。
【００６０】
このキットの成分はまた、乾燥形態または凍結乾燥形態で提供され得る。試薬または成分が乾燥形態として提供される場合、再構成は一般に、適切な溶媒の添加による。この溶媒がまた別の容器手段中に提供されることもまた想起される。本発明のキットはまた、この抗ＡＭＤ組成物の投与を規定する指示シートを含み得る。
【００６１】
本発明のキットはまた、代表的に、商業的販売のために厳重に閉じ込められたバイアルを含むための手段（例えば、所望のバイアルが保持される、射出成形または吹込み成形のプラスチック容器）を含む。容器の数にも型にもかかわらず、本発明のキットはまた、動物の身体内での最終的な複合組成物の注射／投与または配置を補助するための機器を含み得るかまたはそれで包装され得る。このような機器は、吸入器、シリンジ、ピペット、鉗子、計量スプーン、点眼器または任意のこのような医学的に承認された送達ビヒクルであり得る。
【００６２】
本発明の活性な化合物はしばしば、非経口投与のために処方される（例えば、静脈内経路、筋肉内経路、皮下経路、またはさらには腹腔内経路を介した注射のために処方される）。第２の薬剤を活性な成分として含む水性組成物の調製は、本開示を考慮すれば、当業者に公知である。代表的に、このような組成物は、液体の溶液または懸濁液のいずれかの、注射物として調製され得；注射前の液体の添加の際に溶液または懸濁液を調製するために使用するための適切な固体形態もまた調製され得；そしてこの調製物はまた、乳化され得る。
【００６３】
遊離塩基または薬理学的に受容可能な塩としての活性な化合物の溶液は、界面活性剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース）と適切に混合された水中で調製され得る。分散物はまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびそれらの混合物中で、ならびに油中で調製され得る。通常の貯蔵条件下および使用条件下で、これらの調製物は、微生物の増殖を防ぐために保存剤を含む。
【００６４】
注射可能な使用に適切な薬剤の形態としては、無菌で水性の溶液または分散液；ゴマ油、落花生油または水性プロピレングリコールを含む、処方物；および無菌の注射可能な溶液または分散液の即時調製のための無菌の粉末が挙げられる。全ての場合、この形態は、無菌でなければならず、容易な注射性が存在する程度まで流動性でなければならない。これは、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、そして微生物（例えば、細菌および真菌）の夾雑作用から保護されなければならない。
【００６５】
活性な化合物は、中性または塩の形態で、組成物中に処方され得る。薬学的に受容可能な塩としては、酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ基を用いて形成される）および無機酸（例えば、塩酸またはリン酸）を用いて形成される塩、または酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸のような有機酸を用いて形成される塩などが挙げられる。遊離カルボキシル基を用いて形成される塩はまた、無機塩基（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、または水酸化鉄）およびイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなどのような有機塩基から誘導され得る。
【００６６】
キャリアはまた、溶媒または分散媒体（例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、それらの適切な混合物、および植物油が挙げられる）であり得る。適切な流動性が、例えば、コーティング（例えば、レシチン）の使用により、分散物の場合、必要とされる粒子サイズの維持により、および界面活性剤の使用により、維持され得る。微生物作用の予防は、抗微生物剤および／または抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなど）によってもたらされ得る。多くの場合、等張剤（例えば、糖または塩化ナトリウム）を含むことが好ましい。注射可能組成物の長期吸収は、組成物中での吸収遅延剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）の使用によってもたらされ得る。
【００６７】
無菌注射可能溶液は、必要な量の活性化合物を、必要に応じて上記に列挙した種々の他の成分とともに、適切な溶媒中に組み込み、続いて濾過滅菌することにより、調製される。一般に、分散物は、種々の滅菌活性成分を、基本的分散媒体および上記に列挙したものからの必要とされる他の成分を含む無菌ビヒクル中に組み込むことによって調製される。無菌注射可能溶液の調製のための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、予め濾過滅菌されたそれらの溶液からの活性成分＋任意のさらなる所望の成分の粉末を生じる、減圧乾燥技術および凍結乾燥技術である。
【００６８】
特定の場合には、本発明の治療処方物はまた、局所投与に適切な形態（例えば、点眼剤、クリーム剤およびローション剤）で調製され得る。
【００６９】
処方の際、溶液は、投薬処方物と適合する様式で、そして治療に有効であるような量で、投与される。この処方物は、種々の投薬形態で（例えば、上記の注射可能溶液の型で）、容易に投与され、薬物放出カプセルなどでさえも用いられ得る。
【００７０】
水溶液中での非経口投与については、例えば、この溶液は、必要に応じて、適切に緩衝化されるべきであり、そして液体希釈剤は充分な生理食塩水またはグルコースを用いて最初に等張にされるべきである。これらの特定の水溶液は、眼球内投与、静脈内投与、筋肉内投与および皮下投与に特に適切である。これに関連して、用いられ得る無菌水性媒体は、本開示を考慮すれば、当業者に公知である。例えば、１投薬量は、１ｍＬの等張ＮａＣｌ溶液中に溶解され得、そして１０００ｍＬの皮下注射療法流体に添加されるかまたは提案される注入部位に注射されるかのいずれかのいずれかであり得る（例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、第１５版，１０３５頁−１０３８頁および１５７０頁−１５８０頁を参照のこと）。投薬量のいくつかのバリエーションは、処置されるべき被験体の状態に依存して、かならず生じる。投与を担うヒトは、いずれにせよ、その個体被験体について適切な用量を決定する。
【００７１】
眼の組織の標的は、種々の方法のうちの任意の１つにおいて、達成され得る。１つの実施形態では、本発明の化合物を眼へと、そして好ましくはＲＰＥ細胞および／またはブルーフ膜へと標的化するためのリポソームの使用が存在する。例えば、この化合物は、上記の様式で、リポソームと複合体化され得、そしてこの化合物／リポソーム複合体は、この化合物を所望の眼の組織または細胞へと導く静脈内注射を用いて、ＡＭＤを有する患者へと注射され得る。リポソーム複合体をＲＰＥまたはブルーフ膜の近傍へと直接的に注射することによって、いくつかの形態のＡＭＤへのこの複合体の標的化のためにまた提供され得る。特定の実施形態では、この化合物は、眼球内持続送達（例えば、Ｂａｕｃｈ  ａｎｄによるＶｉｔｒａｓｅｒｔ（登録商標）またはＥｎｖｉｓｉｏｎ（登録商標））を介して投与される。特定の実施形態では、この化合物は、後部サブレノン（ｓｕｂｔｅｎｏｎ）注射によって送達される。別の特定の実施形態では、ａｐｏ  Ｅ（例えば、組換え体）を有するマイクロエマルジョン粒子は、ブルーフ膜、ＲＰＥ細胞またはその両方から脂質を取り込むように眼の組織へと送達される。
【００７２】
当業者は、ＡＭＤを処置するために本発明の化合物を用いるための最良の処置レジメンが、直接的に決定され得ることを認識する。これは、実験の問題ではなく、むしろ、最適化の問題であり、これは、医学分野において慣用的に行われる。ヌードマウスにおけるインビボでの研究はしばしば、投薬レジメンおよび送達レジメンを最適化し始める出発点を提供する。注射頻度は、最初は、いくつかのマウスの研究において行われたとおり、１週間に１回である。しかし、この頻度は、最初の臨床試験から得られる結果および特定の患者の必要性に依存して、１日から、２週間〜１ヶ月毎まで最適に調整され得る。ヒトの投薬量は、ヒトについての投薬量を動物モデルと比較して改変することが当該分野では慣用的であると当業者が認識するように、マウスにおいて用いられた化合物の量から外挿することによって、最初に決定され得る。特定の実施形態では、投薬量が、体重１Ｋｇあたり約１ｍｇ化合物〜体重１Ｋｇあたり約５０００ｍｇ化合物；または体重１Ｋｇあたり約５ｍｇ〜体重１Ｋｇあたり約４０００ｍｇまたは体重１Ｋｇあたり約１０ｍｇ〜体重１Ｋｇあたり約３０００ｍｇ；または体重１Ｋｇあたり約５０ｍｇ〜体重１Ｋｇあたり約２０００ｍｇ；または体重１Ｋｇあたり約１００ｍｇ〜体重１Ｋｇあたり約１０００ｍｇ；または体重１Ｋｇあたり約１５０ｍｇ〜体重１Ｋｇあたり約５００ｍｇの間で変動し得ることが想起される。他の実施形態では、この用量は、１Ｋｇ体重あたり、約１ｍｇ、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約２５ｍｇ、約５０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１５０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５５０ｍｇ、約６００ｍｇ、約６５０ｍｇ、約７００ｍｇ、約７５０ｍｇ、約８００ｍｇ、約８５０ｍｇ、約９００ｍｇ、約９５０ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１０５０ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１１５０ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１２５０ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１３５０ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１４５０ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２５００ｍｇ、約３０００ｍｇ、約３５００ｍｇ、約４０００ｍｇ、約４５００ｍｇ、約５０００ｍｇであり得る。他の実施形態では、より高い用量が用いられ得、このような用量が、体重１Ｋｇあたり約５ｍｇ化合物〜体重１Ｋｇあたり約２０ｍｇ化合物の範囲にあり得ることが想起される。他の実施形態では、この用量は、体重１Ｋｇあたり、約８ｍｇ、約１０ｍｇ、約１２ｍｇ、約１４ｍｇ、約１６ｍｇまたは約１８ｍｇであり得る。もちろん、この投薬量は、最初の臨床試験の結果および特定の患者の必要性に依存して、このような処置プロトコルにおいて慣用的に行われるように、上または下に調整され得る。
【００７３】
（ＩＶ．キット）
本明細書中に記載される組成物のいずれかが、キット中に含まれ得る。非限定的な例では、核ホルモンレセプターアゴニストまたはリガンドは、そしていくつかの実施形態では少なくとも１つのさらなる薬剤は、キット中に含まれ得る。
【００７４】
このキットは、適切にアリコートに分けられた核ホルモンレセプターリガンド、および／または黄斑変性（例えば、ＡＭＤ）の処置のために標準曲線を作成するために用いられ得るような、標識されているかまたは標識されていない、本発明のさらなる薬剤の組成物を含み得る。このキットの成分は、水性媒体中でまたは凍結乾燥形態で、包装され得る。試薬および／または成分が乾燥粉末として提供される場合、この粉末は、適切な溶媒の添加によって再構成され得る。この溶媒もまた、別の容器手段において提供され得ることが想起される。
【００７５】
このキットの容器手段としては、一般に、成分が配置され得、そして好ましくは適切にアリコートに分けられ得る、少なくとも１つのバイアル、試験管、フラスコ、ビン、シリンジまたは他の容器手段が挙げられる。１より多くの成分がこのキット中に存在する場合、このキットはまた、一般に、さらなる成分が別個に配置され得る、第２容器、第３容器または他のさらなる容器を含む。しかし、成分の種々の組み合わせが、バイアル中に含まれ得る。本発明のキットはまた、代表的に、この核ホルモンレセプターリガンドを含むための手段、さらなる薬剤を含むための手段、および任意の他の試薬容器を市販のために厳重に閉じ込めて含む。このような容器は、所望のバイアルが保持される、射出成形または吹込み成形のプラスチック容器を備え得る。
【実施例】
【００７６】
以下は、本発明を実施するための好ましい実施形態の例示である。しかし、これらは、限定的実施例ではない。本発明を実施する際に、他の実施例および方法が可能である。
【００７７】
（実施例１）
（材料および方法）
（細胞培養および薬物処理）
５〜１０継代の正常なヒトＲＰＥ細胞の初代培養物を、記載した実験のために用いた。ＲＰＥ細胞を、トップチャンバおよびボトムチャンバ中に１０％ウシ胎仔血清、２ｍＭグルタミン、５０μｇ／ｍｌゲンタマイシンおよび２．５ｍｇ／ｍｌフンギソンを含むＤＭＥＭ−Ｈ２１を有する、ラミニンでコーティングした６ウェルＴｒａｎｓｗｅｌｌ組織培養プレート（Ｃｏｓｔａｒ）上でコンフルエンスになるまで増殖させた。免疫蛍光染色のために、細胞を、同じ培地中で、ラミニンでコーティングしたスライド上で増殖させた。細胞を、薬物処理の前に、コンフルエンスで、少なくとも１週間にわたって増殖させた。薬物で処理されるべき細胞を、薬物の添加前に、無血清ＤＭＥＭ−Ｈ２１中でインキュベートした。薬物処理は、両方のチャンバ中に、１０−７Ｍ甲状腺ホルモン（Ｔ３）、２．５×１０−６Ｍ  ２２（Ｒ）ヒドロキシコレステロール、もしくは１０−７Ｍシスレチノイン酸を含むかまたは含まない、無血清ＤＭＥＭ−Ｈ２１において３６時間にわたってであった。
【００７８】
（ＲＴ−ＰＣＲ）
コンフルエントな細胞培養物を収集し、そして総ＲＮＡを、ＲＮＡｚｏｌ（Ｔｅｌｔｅｓｔ，Ｉｎｃ．，Ｆｒｉｅｎｄｓｗｏｏｄ，ＴＸ）を製造業者の指示に従って用いて精製した。等しい量の精製ＲＮＡを、各反応において、１ｓｔ  Ｓｔｒａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｋｉｔ  ｆｏｒ  ＲＴ−ＰＣＲ（ＡＭＶ）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を用いるｃＤＮＡ合成のためのテンプレートとして用いた。ＲＴ−ＰＣＲを、Ａｍｐｌｉｔａｑ  Ｔａｑポリメラーゼ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ，Ｂｒａｎｃｈｂｕｒｇ，ＮＪ）を用いて、１μｇのｃＤＮＡについて行った。いくつかの実験では、ａｐｏ  Ｅ  ＲＴ−ＰＣＲ産物を、ＱｕａｎｔｕｍＲＮＡアッセイキットを製造業者（Ａｍｂｉｏｎ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）の指示に従って用いて定量した。手短に述べると、１８Ｓ  ｒＲＮＡおよびａｐｏ  Ｅ  ｃＤＮＡを、各反応において同時に増幅する。ＲＴ−ＰＣＲ産物を、１．４％アガロースゲルでの電気泳動によって分離する。ａｐｏ  ＥのｍＲＮＡ発現を、写真撮影したアガロースゲルのデンシトメトリー分析により、内部１８Ｓ  ｒＲＮＡ発現と比較して評価する。
【００７９】
ヒトのａｐｏ  Ｅに特異的なＲＴ−ＰＣＲプライマー、ヒトのＡＢＣＡ１に特異的なＲＴ−ＰＣＲプライマー、ヒトのＳＲ−ＢＩに特異的なＲＴ−ＰＣＲプライマー、ヒトのＳＲ−ＢＩＩに特異的なＲＴ−ＰＣＲプライマー、およびヒトのｌｘｒαに特異的なＲＴ−ＰＣＲプライマーを用いた。ａｐｏ  ＥのＲＴ−ＰＣＲ産物、ＡＢＣＡ１のＲＴ−ＰＣＲ産物、ＳＲ−ＢＩのＲＴ−ＰＣＲ産物、およびＳＲ−ＢＩＩのＲＴ−ＰＣＲ産物について予測されるサイズのＲＴ−ＰＣＲ産物をゲルから切り出し、そしてそれらの正体を、ＤＮＡ配列決定によって確認した（示さず）。
【００８０】
（免疫蛍光顕微鏡法）
スライド上で増殖させたＲＰＥ細胞を、ＡＢＣＡ１に対する抗血清、またはＳＲ−ＢＩもしくはＳＲ−ＢＩＩに対する精製抗体のいずれかで染色した。細胞を氷冷１００％  ＭｅＯＨ中で２０分間固定した。その後の全ての工程を、室温で行った。細胞をリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中で洗浄し、そしてＰＢＳ中５％のヤギ血清において３０分間インキュベートした。次いで、細胞を、緩衝液Ａ（１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭホスフェート（ｐＨ７．８））中で洗浄し、そして緩衝液Ａ中で一次抗体とともに４５分間インキュベートした。緩衝液Ａで洗浄した後、この細胞を、Ａｖｉｄｉｎ  Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）中で１５分間インキュベートし、緩衝液Ａ中で再度洗浄し、そしてＢｉｏｔｉｎ  Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）中で１５分間インキュベートした。緩衝液Ａ中で洗浄した後、細胞を緩衝液Ａ中１０μｇ／ｍｌのビオチン化ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）において３０分間インキュベートし、緩衝液Ａ中で洗浄し、そして緩衝液Ｂ（１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１００ｍＭ重炭酸ナトリウム（ｐＨ８．５））中２０μｇ／ｍｌのフルオレセイン結合体化アビジンＤ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）において３０分間インキュベートした。この細胞を、緩衝液Ｂ中で洗浄し、そしてカバーガラスを、数滴のＶｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）の上で各スライドに加えた。これらのスライドを、顕微鏡検査の用意ができるまで、暗所に保存した。
【００８１】
（Ａｐｏ  Ｅウェスタンブロッティング）
細胞を、培地で処理し、遠心限外濾過（ＶＩＶＡ  ＳＰＩＮ  ２０，ＭＣＯ  ５，０００，Ｖｉｖａ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈａｎｎｏｖｅｒ，Ｇｅｒｍａｎｙ）によって２０倍濃縮し、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡナトリウム、０．０２５％アジ化ナトリウム（ＳａｌＥＮ）に対して透析した。総タンパク質含有量を、改変Ｌｏｗｒｙアッセイ（ＢｉｏＲａｄ  ＤＣ  ｋｉｔ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＣＡ）によって決定した。濃縮した培地（５０μｇタンパク質）をＳｔａｒｔ  Ｂｕｆｆｅｒ（０．０２５Ｍ  ＮａＣｌ、０．０１０Ｍ  ｔｒｉｓ（ｐＨ８．５）、５ｍＭ  ＭｎＣｌ２）に対して作製し、そしてＨｅｐａｒｉｎ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＣＬ−４Ｂ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を含む０．１ｍｌカラム上に吸着させた。Ｓｔａｒｔ  Ｂｕｆｆｅｒ中での２ｍｌの洗浄後、ａｐｏ  Ｅ含有結合画分を、Ｓｔａｒｔ緩衝液中０．５ＭのＮａＣｌを用いて溶出させた。溶出物を２０μｌまで濃縮し、そして緩衝液を、遠心限外濾過（Ｂｉｏｍａｘ，５ｋ  ＭＣＯ，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）によってＳａｌＥＮに交換した。Ａｐｏ  Ｅをｔｒｉｓ−トリシン緩衝化ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（５％〜２５％の線形アクリルアミド勾配）によって分離し、そしてタンパク質を、ニトロセルロースメンブレンフィルター（ＳｃｈｌｅｉｃｈｅｒおよびＳｈｕｅｌｌ，Ｋｅｅｎ，ＮＨ）に電気泳動によって（ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｅｔｉｃａｌｌｙ）（５５Ｖ，１８時間）転写した。メンブレンを、１０％ウシ血清アルブミンを室温で用いてブロックし、そして０．１５％  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ７．４）、０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（ＳａｌＥＴ）中に調製した１％ヤギ抗ヒトａｐｏ  Ｅ抗血清（１８時間、３℃）を用いてプローブした。一次結合した抗ａｐｏ  Ｅ抗体を、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合体化ウサギ抗ヤギＩｇ（Ｈ＋Ｌ）およびＮｉＣｌ２増強ジアミノベンジン染色を用いて比色検出した。染色したバンドを、デジタル化したスキャン画像（ＮＩＨ  Ｉｍａｇｅ，ｖ．１．６２）から、デンシトメトリーによって比較した。抗ａｐｏ  Ｅ抗体を、精製したａｐｏ  Ｅでのヤギの超免疫によって入手したか、またはＡｓｓａｙ  Ｄｅｓｉｇｎｓ（Ａ２９９，Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）から入手した。
【００８２】
リポタンパク質画分を馴化培地から調製し、これを、固体ＫＢｒを用いて１．２１ｇ／ｍｌの密度まで調整した。サンプルを、Ｂｅｃｋｍａｎ  ４２．２  Ｔｉローターにおいて、４０，０００ｒｐｍにて１８時間にわたり、１０℃にて超遠心分離した。リポタンパク質画分およびリポタンパク質を含まない画分（それぞれ、上部および下部の５０μｌ）を、分析前にＳａｌＥＮに対して透析した。
【００８３】
（［１４Ｃ］ドコサヘキサン酸（ｄｏｃｏｓｏｈｅｘａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）（ＤＨＡ）標識ＰＯＳの取り込みおよび輸送）
ウシ外側光レセプター外側セグメント（ＰＯＳ）を、補酵素Ａ、ＡＴＰ、Ｍｇ２＋、および［１４Ｃ］−ＤＨＡとともにインキュベートすることによって標識した。ラミニンでコーティングしたＴｒａｎｓｗｅｌｌプレート上での細胞増殖を、頂部チャンバ中、１０％リポタンパク質欠損ウシ胎仔血清を含む培地中で３６時間にわたって１２μｇ／ｍｌの標識ＰＯＳとともにインキュベートした。底部の培地を、シンチレーション計数に供して、ＲＰＥ細胞を介して輸送された［１４Ｃ］標識脂質の量を決定した。
【００８４】
（輸送された１４Ｃ脂質についてのアクセプターの同定）
ウシの外側光レセプター外側セグメント（ＰＯＳ）を、補酵素Ａ、ＡＴＰ、Ｍｇ２＋、および［１４Ｃ］−ＤＨＡとともにインキュベートすることによって標識した。ラミニンでコーティングしたＴｒａｎｓｗｅｌｌプレート上で増殖させた細胞を、頂部チャンバ中、１０％リポタンパク質欠損ウシ胎仔血清を含む培地中で３６時間にわたって１２μｇ／ｍｌの標識ＰＯＳとともにインキュベートした。底部チャンバは、１ｍｇ／ｍｌヒトＨＤＬ、１ｍｇ／ｍｌヒトＬＤＬまたは１００％ヒト血漿のいずれかを含んでいた。底部の培地を収集し、そしてリポタンパク質を、ｄ＝１．２１ｇ／ｍｌでの臭化カリウム密度勾配遠心分離（Ｂｅｃｋｍａｎ  ４２．２  Ｔｉローター、４０，０００ｒｐｍ、１８時間、１０℃）によって再精製し、透析し、そして非変性０％〜３５％のＰＡＧＥにおいてサイズによって分離した。ゲルを、クーマシーブルーＲ−２５０で染色した。ゲルのレーンを、３０枚の２ｍｍスライスに分け、これらを消化（ＴＳ−１，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）し、放射能を、液体シンチレーション分光法によって定量した。
【００８５】
（実施例２）
（ＲＰＥ細胞における輸送体の発現）
当業者は、培養ヒトＲＰＥ細胞中の特定のＲＣＴ成分が示されることを認識する（Ｍｕｌｌｉｎｓら．２０００；Ａｎｄｅｒｓｏｎら，２００１）。コレステロール逆行輸送タンパク質の発現を調節することが公知の核ホルモンレセプターもまた、培養ヒトＲＰＥにおいて発現される。
【００８６】
当業者は、培養中のＲＰＥ細胞においてＴＲおよびＲＸＲの発現が存在することを認識する（Ｄｕｎｃａｎら、１９９９）。ヒトＲＰＥ細胞のｃＤＮＡのＲＴ−ＰＣＲは、これらの細胞もまた、ａｐｏ  ＥについてのｍＲＮＡ、ＡＢＣＡ１についてのｍＲＮＡ、ＳＲ−ＢＩについてのｍＲＮＡ、ＳＲ−ＢＩＩについてのｍＲＮＡおよびｌｘｒ  αについてのｍＲＮＡを発現することを示した。図１のレーン１、図１のレーン２および図１のレーン３に示されるように、ＲＰＥ細胞は、それぞれ、ａｐｏ  ＥについてのｍＲＮＡ、ＡＢＣＡ１についてのｍＲＮＡおよびｌｘｒ  αについてのｍＲＮＡを発現する。
【００８７】
図２のレーン１および図２のレーン２に示されるように、ＲＰＥ細胞は、それぞれ、ＳＲ−ＢＩについてのｍＲＮＡおよびＳＲ−ＢＩＩについてのｍＲＮＡを発現する。
【００８８】
さらに、免疫蛍光顕微鏡法実験では、ＲＰＥ細胞は、ＳＲ−ＢＩ（図３Ａ）およびＳＲ−ＢＩＩ（図３Ｂ）について強く染まる。コントロールの非特異的ＩｇＧまたは抗体ビヒクルは、ＲＰＥ細胞を染色しなかった（それぞれ、図３Ｃおよび図３Ｄ）。これらの細胞におけるＳＲ−ＢＩおよびＳＲ−ＢＩＩの発現を、ＰＣＲによって確認した。
【００８９】
ＡＢＣＡ１タンパク質の発現は、ＡＢＣＡ１に対する抗体を用いたＲＰＥ細胞の免疫蛍光染色によって実証された（図４）。細胞核は、ＤＡＰＩで染色された。
【００９０】
（実施例３）
（ＲＰＥ細胞におけるａｐｏ  Ｅ分泌の調節）
頂部（Ａ）に分泌されたａｐｏ  Ｅと底部（Ｂ）に分泌されたａｐｏ  Ｅとを区別するために、ＲＰＥ細胞を、ラミニンでコーティングしたＴｒａｎｓｗｅｌｌプレートで培養した。特に、ヒト培養ＲＰＥ（２〜１０回継代、ドナー３５歳）を、ラミニンでコーティングしたＴｒａｎｓｗｅｌｌプレートに配置し、ここで、上側のウェルおよび下側のウェルは両方とも、無血清培地を有していた。総タンパク質およびａｐｏ  Ｅ特異的タンパク質の濃度を、３〜６個の複製ウェルからプールして濃縮した培地から決定した。ａｐｏ  Ｅ特異的分泌を評価するために、ａｐｏ  Ｅを、ヘパリン−ｓｅｐｈａｒｏｓｅアフィニティークロマトグラフィーによって馴化培地から精製し、そしてウェスタンブロッティングによって可視化した。Ａｐｏ  Ｅの濃度は、底部の外側培地において一貫して高かった（図５、レーン１対レーン２）。これらのデータは、ＲＰＥ細胞が、ａｐｏ  Ｅを含め、細胞タンパク質の偏った分泌を提示することを実証する。従って、このことは、Ａｐｏ  Ｅが底部に優先的に分泌され、ＲＣＴにおけるその役割を支持することを示した。
【００９１】
ＲＰＥ細胞は、ｌｘｒαならびに甲状腺ホルモンレセプター（ＴＲ）およびレチノイド−Ｘ−レセプター（ＲＸＲ）を発現するので、ＲＰＥ細胞からのａｐｏ  Ｅ分泌に対する、１０−７Ｍ  Ｔ３、２．５×１０−６Ｍ  ２２（Ｒ）ヒドロキシコレステロール（ＨＣ）（ｌｘｒ  αアゴニスト）、または１０−７Ｍ  シスレチノイン酸（ｃＲＡ）（ＲＸＲアゴニスト）の影響を試験した。図６は、底部の培地および頂部の培地は両方とも、３６時間のインキュベーションにわたって以下の化合物を含むこと以外は、上記と同じ実験手順を例示する：Ｔ３（１０−７）Ｍ（Ｔ）；９シス−ＲＡ（１０−６）Ｍ（ＲＡ）；および２２（Ｒ）ヒドロキシコレステロール２．５（１０−６）Ｍ（ＨＣ）。底部の培地を、ウェスタンブロットを用いてＡｐｏ  Ｅ発現について分析し、そしてこれらの結果は、化合物処理でのＡｐｏ  Ｅの増大した底部での発現を示した。従って、以前のように、偏ったａｐｏ  Ｅ分泌が観察され、そしてこの場合、Ｔ３、ＨＣまたはｃＲＡの存在下で生じた。このことは、底部に分泌されるａｐｏ  Ｅのレベルの上昇が、ＲＰＥ細胞へのこれらの化合物の投与結果であることを示す。
【００９２】
（実施例４）
（ＲＰＥ細胞からの流出のアッセイ）
本実施例は、（特に、ＨＤＬへの結合に関する）ＲＰＥ細胞からのＰＯＳ残基の流出を特徴付ける。Ｇｉｕｓｔｏら（１９８６）は、ウシ光レセプター外側セグメント（ＰＯＳ）脂質の１４Ｃドコサヘキサン酸（ｄｅｃｏｓｈｅｘａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）（ＤＨＡ）標識方法を記載する。一般に、ヒトＲＰＥ細胞についての約３６時間のインキュベーション（ここで、底部の培地は、血漿、ＨＤＬ、またはＬＤＬを含む）に続いて、この底部の培地の遠心分離を行って、リポタンパク質画分を収集し、次いでこのリポタンパク質画分を分析して、放射能の分布を決定する。
【００９３】
特に、ウシ光レセプター外側セグメント（ＰＯＳ）を、１４Ｃドコサヘキサン酸（ＤＨＡ）で標識し、そしてリポタンパク質欠損培地中に配置する。この後、これらをＴｒａｎｓｗｅｌｌプレート上の培養ヒトＲＰＥの上に３６時間にわたって配置する。そして底部の培地は、１００％血漿、ＨＤＬ（１ｍｇ／ｃｃ）またはＬＤＬ（１ｍｇ／ｃｃ）のいずれかを含んでいた。３６時間後、底部の培地を遠心分離して、リポタンパク質画分（密度１．２）を収集した。次いで、この画分を非変性ゲルに泳動し、そしてクーマシーブルーで染色した。図７は、血漿（ＰＬ）中の、別個および一緒の両方の、ＬＤＬ画分およびＨＤＬ画分を示す。このＰＬ画分は、分離した画分（ＨＤＬ、ＬＤＬ）の各々と同量のＨＤＬおよびＬＤＬを含む。
【００９４】
ＰＡゲルを約１ｍｍの切片に切断し、そして放射能の分布を決定した（図８）。ＬＤＬまたはＨＤＬのいずれかを単独で用いて、計数を、それぞれのリポタンパク質画分について観察した。血漿中にＬＤＬおよびＨＤＬの両方が存在する場合、計数は優先的にＨＤＬ画分に局在する。このことは、ＲＰＥによるＰＯＳの貪食後、ＰＯＳの残りが流出され、そしてＨＤＬによって優先的に結合されることを示す。これは、ＨＤＬアクセプターに対するＲＣＴがＲＰＥ細胞において生じることを例示する、新規な実証である。
【００９５】
リポタンパク質画分中の脂質を特徴付けるために、薄層クロマトグラフィーを行った。酸チェアリング（ａｃｉｄ  ｃｈａｒｒｉｎｇ）を用いて、脂質含有スポットを同定した。このスポットをプレートから掻き取り、そして１４Ｃを液体シンチレーション計数によって定量した。１７個のうちの６個の１４Ｃ含有スポットが、示された標準を用いて同定された（図９）。ＨＤＬに結合した１１個の１４Ｃ含有スポットは、未同定のままであり、そして初期ＡＭＤを有する患者についての独特な血清マーカーであり得る。
【００９６】
従って、本発明の１つの実施形態では、患者のサンプルを、例えば、採血によって得て、そしてＨＤＬを、結合したＰＯＳ残基について試験する。これにより、ＡＭＤによる視覚喪失の危険性についての決定が行われる。特定の実施形態では、結合したＰＯＳ残基のプロファイルは、眼の疾患に罹患した個体を同定すること、および／または眼の疾患を発症する危険性がある個体を同定することを示す。
【００９７】
（実施例５）
（化合物投与によるＲＣＴの調節）
本実験は、化合物の投与が、ＨＤＬへの標識ＰＯＳ残基の流出をアップレギュレートし得るか否かを、特に、底部の培地への１４Ｃ−ＤＨＡ標識ＰＯＳの流出の調節を示すことによって決定する。実施例４に記載されるアッセイと類似のアッセイを利用する；しかし、本実施例では、細胞を、上記の濃度の、Ｔ３、９シス−レチノイン酸、および２２（Ｒ）ヒドロキシコレステロールで３６時間にわたって処理した。ＨＤＬ精製なしでの総放射能（ｃｐｍ）を、底部の培地の液体シンチレーション計数によって決定した。図１０は、化合物処理が、培養ヒトＲＰＥ細胞によるＲＣＴを増加させることを示す。
【００９８】
特に、細胞を、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌプレート上でコンフルエンスで、１〜２週間にわたって増殖させた。１４Ｃ標識ＰＯＳ（３０ｍｇ／ｍｌ）を頂部の培地に添加した。頂部の培地および底部の培地は、１０−７Ｍ  Ｔ３、２．５×１０−５Ｍ  ２２（Ｒ）ヒドロキシコレステロール、または１０−７Ｍシスレチノイン酸のいずれかを含んでいた。底部の培地は、１ｍｇ／ｍｌ  ＨＤＬを含んでいた。３６時間後、底部の培地を収集し、そして１４Ｃ計数を、シンチレーション計数によって決定した。上記のように、化合物処理は全て、底部の培地への１４Ｃ標識ＰＯＳの輸送を増加させた。
【００９９】
Ａｐｏ  ＥのｍＲＮＡレベルに対するＴ３の影響もまた、ＲＴ−ＰＣＲによって評価した。１０−７Ｍ  Ｔ３での処理は、ａｐｏ  ＥのｍＲＮＡレベルの１．５〜２倍の上昇をもたらした。このことは、Ｔ３が、少なくとも部分的に、ａｐｏ  ＥレベルをｍＲＮＡレベルで上昇させるように作用することを示唆する。特定の実施形態では、９シス−レチノイン酸および２２（Ｒ）ヒドロキシコレステロールの投与は、ａｐｏ  Ｅの発現を同様にアップレギュレートする。
【０１００】
従って、特定の実施形態では、ＲＣＴは、核ホルモンレセプターリガンドを介して調節される。例えば、ＡＢＣＡ１発現は、ＬＸＲアゴニストおよびＲＸＲアゴニストの、それらのそれぞれの核ホルモンレセプターへの結合によってアップレギュレートされる（図１１）。これらのレセプターは、ＡＢＣＡ１プロモーターに結合したヘテロダイマーを形成するので、リガンド結合は、ＡＢＣＡ１の発現を、それゆえ、ＲＣＴを、増大させる。
【０１０１】
（実施例６）
（ＲＰＥ細胞からの脂質アクセプターとしてのＨＤＬの同定）
添加された精製ヒトＬＤＬおよびＨＤＬの存在下では、放射標識脂質流出が増強される（図１２）。グラフに示されるように、流出（グラフの下）は、血漿（グラフにおいてＰＬ）、ＨＤＬまたはＬＤＬの存在によって、下の培地への添加なし（グラフの左側）と比較して、大いに増強された。
【０１０２】
図８に示されるように、ヒトＥＤＴＡ−血漿全体を用い、そしてリポタンパク質が単離される場合、［１４Ｃ］標識脂質は、ＬＤＬおよびＨＤＬ中に組み込まれる。しかし、放射標識は、優先的に、ＨＤＬと会合した。さらに、ＨＤＬにおける放射標識は、より大きなＨＤＬ  ２亜種に局在した。このＨＤＬ  ２亜種は、ａｐｏ  Ｅが豊富なＨＤＬ粒子を含む。この結果は、ＲＰＥからの脂質流出が、ａｐｏ  Ｅ含有ＨＤＬによって増強されることを示唆する。
【０１０３】
（実施例７）
（スカベンジャーレセプター（ＳＲＳ）によるＢＭ脂質の低下）
マクロファージ中のスカベンジャーレセプターは、ｏｘＬＤＬ分子を貪食するように機能する。ＳＲ−Ａ１、ＳＲ−Ａ２、ＳＲ−Ｂ１、ＳＲ−Ｂ２、ＣＤ３６、およびＬＯＸを含め、マクロファージにおいて以前に記載されたＳＲの型が存在する。ＳＲは、ＳＲについての発現レベルがｏｘＬＤＬによってアップレギュレートされるＬＤＬレセプターとは異なる。細胞内ｏｘＬＤＬレベルによるこのアップレギュレーションは、核ホルモンレセプター、ペルオキシソーム増殖因子活性化レセプター（ＰＰＡＲ）およびレチノイン酸Ｘレセプター（ＲＸＲ）によって調節され、これらは、ＣＤ３６発現の転写制御を発揮する。ＡＳの初期損傷である脂肪線条は、過剰なｏｘＬＤＬを飲み込んだマクロファージからなり、そしてＲＰＥ細胞は同様にＡＭＤ中の脂質封入物で充填されるようになるので、ＳＲ発現を、ＲＰＥ細胞において研究した。ＲＰＥ細胞における以下のＳＲの発現が同定された：ＣＤ３６（以前の研究者の確認）、ＳＲ−Ａ１、ＳＲ−Ａ２（両方とも、ＲＰＥにおいて初めて実証された）、ＳＲ−Ｂ１、ＳＲ−Ｂ２（両方とも、ＲＰＥにおいて初めて実証された）。
【０１０４】
本発明者らはまた、マクロファージと同様に、ｏｘＬＤＬが、ＲＰＥ細胞におけるＣＤ３６の発現をアップレギュレートすることを示した（図１３）。さらに、ＲＰＥ細胞は、核ホルモンレセプターであるＰＰＡＲおよびＲＸＲを発現する。このことは、ＳＲ発現についての制御機構が、これらの細胞型の間で類似であることを示す。従って、特定の実施形態では、患者におけるＲＰＥ  ＳＲの発現は、ＰＰＡＲリガンドおよびＲＸＲリガンド（例えば、ＰＧ−Ｊ２、チアゾリジンジオン、シス−レチノイン酸）によって制御される。これは、ＲＰＥ細胞が酸化された光レセプター外側セグメントを貪食する速度を制御し、それゆえ、異常な脂質封入物がＲＰＥおよびＢＭ中に蓄積する速度を遅延させる。他の特定の実施形態では、ＣＤ３６の発現は、組成物（例えば、タモキシフェン、ＴＧＦ−βまたはＩＮＦ−γ）を用いてダウンレギュレートされる。同様に、他のＲＰＥ  ＳＲの発現を調節することにより、ＲＰＥおよびＢＭの両方における脂質のレベルが制御される。例えば、ＳＲ−Ａの調節に関しては、ＩＧＦ−１、ＴＧＦ−β、ＥＧＦ、および／またはＰＤＧＦが用いられ、そしてＳＲ−Ｂの調節に関しては、ｃＡＭＰおよび／もしくはエストラジオール（アップレギュレーションのため）またはＴＮＦ−α、ＬＰＳ、および／もしくはＩＮＦ−γ（ダウンレギュレーションのため）が用いられる。
【０１０５】
（参考文献）
本明細書において言及した全ての特許および刊行物は、本発明が属する分野の当業者の技術水準を示す。全ての特許および刊行物は、各々の個々の刊行物が、参考として援用されると具体的かつ個々に示されたのと同じ程度まで、本明細書中に参考として援用される。これらの参考文献は、これらが、本明細書中に示される例示的手順または他の詳細を補充する例示的手順または他の詳細を提供する程度まで、本明細書中に具体的に参考として援用される。
【０１０６】
（特許）
米国特許第６，０７１，９２４号；
米国特許第５，８４６，７１１号；
ＷＯ  ００／５２４７９；
ＷＯ  ０１／５８４９４；
ＷＯ  ０２／１３８１２。
【０１０７】
（刊行物）
【０１０８】
【表１】
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【０１０９】
【表２】
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【０１１０】
【表３】
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【０１１１】
【表４】
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【０１１２】
【表５】
2005511713.tif 000006
本発明およびその利点が詳細に記載されているが、種々の変化、置換および変更が、添付の特許請求の範囲によって規定されるとおりの本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、本明細書中で行われ得ることが理解されるべきである。さらに、本願の範囲は、本明細書中に記載されるプロセス、機械、製造、組成物、手段、方法および工程の特定の実施形態に限定されることが意図されない。当業者は、本発明の開示から容易に認識するとおり、現在存在するかまたはその後開発され、本明細書中に記載される対応する実施形態と実質的に同じ機能を発揮するかまたは実質的に同じ結果を達成する、プロセス、機械、製造、組成物、手段、方法または工程が、本発明に従って利用され得る。従って、添付の特許請求の範囲は、その範囲内に、このようなプロセス、機会、製造、組成物、手段、方法または工程を含むことが意図される。
【０１１３】
本発明のより完全な理解のために、ここで、以下の説明が、添付の図面とともに参照される。
【図面の簡単な説明】
【０１１４】
【図１】図１は、ＲＰＥ細胞が、Ａｐｏ  Ｅ、ＡＢＣＡ１、およびＬＸＲ  αを発現することを示す。
【図２】図２は、ＳＲ−ＢＩおよびＳＲ−ＢＩＩのＲＰＥ細胞発現を示す。
【図３】図３は、ＲＰＥ細胞におけるＳＲ−ＢＩ免疫蛍光およびＳＲ−ＢＩＩ免疫蛍光を図示する。
【図４】図４は、ＲＰＥ細胞におけるＡＢＣＡ１免疫蛍光を実証する。
【図５】図５は、底部のＡｐｏ  Ｅ発現が、培養ヒトＲＰＥ細胞における頂部のＡｐｏ  Ｅ発現よりも多いことを実証する。
【図６】図６は、核ホルモンレセプターリガンドによるＡｐｏ  Ｅ発現の調節を示す。
【図７】図７は、リポタンパク質画分の非変性ポリアクリルアミドゲルの提供する。
【図８】図８は、図７由来の画分の１４Ｃ分布を示す。
【図９】図９は、ＨＤＬ画分の１７個のスポットのうちの６個の同定を図示する薄層クロマトグラフィーを実証する。注：ＨＤＬは、高密度リポタンパク質画分であり；ＰＯＳは、標識されたＰＯＳ出発物質であり；ＰＣは、ホスファチジルコリンであり；ＰＩは、ホスファチジルイノシトール（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｉｓｏｔｏｌ）であり；ＰＥは、ホスファチジルエタノールアミンであり；Ｃは、コレステロールであり；ＴＲＬは、ＴＧが豊富な脂質（トリグリセリドおよびコレステロールエステルを含む）である。
【図１０】図１０は、１４Ｃ計数が、ＲＣＴを増大させる薬物処置後に増大することを実証する。
【図１１】図１１は、ＲＸＲリガンドおよびＬＸＲリガンドによるＡＢＣＡ１調節を例示する。
【図１２】図１２は、ＲＰＥ細胞からのＨＤＬの同定の１４Ｃ標識脂質輸送のＨＤＬ刺激、ＬＤＬ刺激および血漿刺激を示す。
【図１３】図１３は、酸化された脂質によるＣＤ３６発現の刺激を示す。
【配列表】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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