(57)【要約】悪性ガン疾患の予防、阻害、及び治療用の、ナチュラルキラー細胞（ＮＫＣ）に結合する抗ＡＧＭ１抗体及び／または抗ＧＭ１抗体に結合するまたはそれらをブロックするための薬剤の調製のための、ガングリオシドアシアロ−ＧＭ１（ＡＧＭ１）及び／またはＧＭ１、並びに抗ＡＧＭ１抗体及び／または抗ＧＭ１抗体に対する結合に関してこれらのガングリオシドの糖部分をシミュレートする物質の使用。
2005533243.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
悪性ガン疾患の予防、阻害、及び治療用の、ナチュラルキラー細胞（ＮＫＣ）に結合する抗ＡＧＭ１抗体及び／または抗ＧＭ１抗体に結合するまたはそれらをブロックするための薬剤の調製のための、ガングリオシドアシアロ−ＧＭ１（ＡＧＭ１）及び／またはＧＭ１、並びに抗ＡＧＭ１抗体及び／または抗ＧＭ１抗体に対する結合に関してこれらのガングリオシドの糖部分をシミュレートする物質の使用。
【請求項２】
抗原提示細胞をブロックすることによるガンの予防、ガンの阻害、及びガンの治療用の、またはＴ細胞アネルギーの誘導用の薬剤の調製のための、ガングリオシドアシアロＡＧＭ１及び／またはＧＭ１、並びに抗ＡＧＭ１抗体及び／または抗ＧＭ１抗体に対する結合に関してこれらのガングリオシドの糖部分をシミュレートする物質の使用。
【請求項３】
患者の血液循環からナチュラルキラー細胞に結合する抗ＡＧＭ１抗体及び／または抗ＧＭ１抗体の生体外の除去のためのアフィニティー物質の調製のための、ガングリオシドアシアロＡＧＭ１及び／またはＧＭ１、並びに抗ＡＧＭ１抗体及び／または抗ＧＭ１抗体に対する結合に関してこれらのガングリオシドの糖部分をシミュレートする物質の使用。
【請求項４】
抗ＡＧＭ１抗体及び／または抗ＧＭ１抗体に対する結合に関してこれらのガングリオシドの糖部分をシミュレートする物質が、試験物質を高いガングリオシド抗体力価を有する血清に添加する工程、特異的な結合パターンに対するサンプル由来の抗体の結合挙動を測定する工程、物質を含まないサンプルと比較して減少した結合挙動をガングリオシドのシミュレーションと相関させる工程を含むスクリーニング方法を活用して検出可能である特徴を有することを特徴とする、請求項１から３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
抗原提示細胞をブロックするまたはＴ細胞アネルギーを導くための、注射による投与または経口投与用の薬剤の調製のための、請求項２に記載の使用。
【請求項６】
前記試薬で治療的または予防的に治療されるガン疾患が、大腸のカルシノーマ、乳房のカルシノーマ、卵巣カルシノーマ、胃のカルシノーマ、膵臓のカルシノーマ、食道のカルシノーマ、胆嚢のカルシノーマ、肝臓カルシノーマ、Ｃ細胞カルシノーマ、甲状腺カルシノーマ、前立腺のカルシノーマ、肺のカルシノーマ、虫垂のカルシノーマ、膀胱のカルシノーマ、心臓カルシノーマ、食道下部のカルシノーマ、口床のカルシノーマ、腎臓のカルシノーマ、または上腹部カルシノーマであることを特徴とする、請求項１から５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
前記薬剤で予防的または治療的に治療される患者が炎症性腸疾患に罹患しており、ＡＧＭ１及び／またはＧＭ１に結合する有意に増大した量の抗体の検出のため、腸のガンの増大した危険を有することを特徴とする、請求項１から４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
製薬学的に許容可能な賦形剤に加えて、ＡＧＭ１及び／またはＧＭ１抗体に結合する活性成分を含み、ナチュラルキラー細胞（ＫＮＣ）に対するこれらの抗体の結合が完全にまたは部分的に妨げられる、ガン疾患の予防及び治療用薬剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ガンの予防またはガンの治療のための新規な治療上の方法、及びそのような治療上の方法で使用できる薬剤に関する。本発明は、非常に広範囲の組織及び器官のガン疾患に罹患している実質的に全ての患者において、「ナチュラルキラー細胞」（ＮＫ細胞）と称されるものの阻害特性を有する抗体（自己抗体）の出現を初めて検出したことに基づき、これらの抗体は、そのＮＫ細胞の阻害特性のため、ガンの発達において役割を果たしている。
【背景技術】
【０００２】
「新生物」、「ガン」、または「カルシノーマ」のような用語は、腫瘍疾患、特に悪性腫瘍疾患について実質的に同義的に本願の文脈で使用される。ドイツ等の国では、300,000以上の男性及び女性が、毎年悪性新生物、即ちガンに罹患しており、一年間に診断される新たなガンのケースの数及び死亡率はかなりのものである（例えば、http://www.medicine-worldwide.de/krankheiten/krebs/xxx.html参照、ここで/wwwは例えば、/allgemeines；/lungenkrebs；/brustkrebs；/prostatakrebs；/darmkrebs；/luekaemie；/corpuskarzinomで置換されるべきである）。悪性新生物は、実質的にいずれの組織または器官でも生じることができ、影響される器官に依存して、統計的な頻度、予後、及び治療可能性に関して互いにかなり異なり得る数多くのガン疾患の間で識別がなされる。
【０００３】
この意味では、労働中の薬物への曝露、または高い統計学的な頻度で悪性の発達を示す、即ちガンにトランスフォームする以前の疾患とおそらく組み合わせて、ガン疾患を発達する特定の素因を有する特定の患者に対して、ガンの増大した危険が存在することが知られている。特定の危険状態にあるそのような人を検出することができること、及び進化したモニタリング及び／または適切な予防手段によってそのような人を保護できることは、最近のガンの研究の重要な目的である。この目的を有する研究アプローチは、ゲノム研究に関連する。さらに、ガンの特定の危険の認識に対する、並びに生成したガンの予防、ガンの阻害、及びガンの治療に対する免疫学的アプローチは、本願の主題を形成する。
【０００４】
高い可能性で、悪性疾患（大腸ガン）への過程で変性することが知られている前述の以前の疾患には、例えばクローン病（腸カタルと同義語である）及び大腸潰瘍（大腸炎と同義語である）及び上記二つの疾患の組合せ形態である病形不定形大腸炎として知られている慢性炎症性大腸疾患と称されるものが含まれる。高い関連する罹病率（疾患頻度）及び死亡率（死亡頻度）のため、経済学及び内科学にとって特に重要性が存在する。特徴的な症状は腹部の痛み、下痢であり、小腸が罹患している場合、恐らく吸収不良が存在する。腸狭窄、内部及び外部の瘻孔及び膿瘍が、クローン病の合併症として生じ、一方である場合には、重度の失血、及び大部分の腸のカルシノーマの出現の非常に高度の危険（疾患の25年間の過程で約40％）が、大腸潰瘍の場合で観察されている。もし、例えば慢性炎症性大腸疾患に罹患している患者の群内で、特に危険のある人を検出できれば、及び高い度合いでその人を治療的に保護できれば、これはかなりの医療的進歩を構成するであろう。
【０００５】
ここ数年では、数多くの形態のガン疾患の治療可能性に関する非常な進歩をもたらしている非常に多くの治療の開発が観察されている。しかしながら全ての場合で、ガンの早期の診断、即ち臨床上の症状及び有意な臨床上の症状がまだ存在していない場合での新生物の診断は特に重要である。
【０００６】
臨床上の診断におけるできるだけ早期の新生物の検出のため、「腫瘍マーカー」と称されるものが、調査される患者の生物学的サンプル、特に血液サンプルにおいて測定される。腫瘍マーカーは、悪性腫瘍細胞によって直接形成される、または腫瘍細胞が非腫瘍細胞においてそれぞれのマーカーの合成を誘導するという事実のため形成する物質である。もし腫瘍マーカーが、生物学的流体サンプル（体液性組織マーカー）または組織（細胞性腫瘍マーカー）において増大した濃度で局在するのであれば、それらは腫瘍疾患の存在、過程、及び予後について結論を引き出すことが可能である。臨床上の診断的実践において現在導入されている腫瘍マーカーは、腫瘍胎児性抗原、モノクローナル抗体で検出可能な糖エピトープ、酵素、アイソザイム、腫瘍性産物、及びレセプターであって良い。リン症状の診断で現在使用されている腫瘍マーカーのレビューは、例えばLothar Thomas(編集者), Lobor und Diagnose [Laboratory and Diagnosis], 第5版, 第34章: Tumormarker [Tumor markers], 第956-1019頁に見出すことができる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
議論されているガンの治療における進歩にもかかわらず、新規な改良されたガンの治療及びガンの予防手段、または述べられている文脈において有効な新規な薬剤、特にガンの起源及び発達の中心部で攻撃するものに対する高度の必要性がいまだ存在している。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、他の文脈で本質的に既知であり、ＮＫ細胞を阻害する特性を有する特定の抗体または自己抗体のタイプが、現在実験的にチェックできる範囲で、生物学的サンプル中の全ての試験悪性新生物（ガンのタイプ）において、診断的に有意に増大したレベルで見出され、同時に同じ抗体が、健康な正常人では、観察されないか、または実質的により少ない量でのみ観察可能であるという驚くべき発見に基づく。ＮＫ細胞を阻害する特性のため、この細胞タイプはガンの過程に因果的に結びついている。
【０００９】
これらの抗体を測定することによって、本発明によれば、有意な数の健康な正常人を偽の陽性として測定することなく、例えば通常の実験を受けているまたは一連の試験に参加している患者または人において、悪性新生物の測定を高い信頼性で検出することが可能である。もしいくつかの他の敗血性疾患の場合でも、特定の抗体が増大した濃度で存在するのであれば、基本的に主要な困難性なく、更なる臨床上の発見に基づいて、そのような疾患を排除しながら測定の結果を正確に解釈することが可能である。
【００１０】
もしＮＫ細胞を阻害する抗体が患者で検出されれば、それらは治療上の標的となる。ある場合に本質的に実践が既知である測定、または有害な病理的（自己）と戦い、結合し、供給するための本発明に係る薬剤を使用して、及び／または免疫系により抗体形成に特異的に影響する目的を有する測定の使用で、それらは予防的、阻害的、及び／または治療的な測定の標的となることができる。
【００１１】
本発明は、高感度を有するリガンド結合アッセイを活用して本出願人による正常人とガン患者の血清に対する、ガングリオシドＡＧＭ１及びＧＭ１に結合する抗体の測定から、実質的に測定された全てのガンの血清において、ガングリオシド構造、及びガングリオシド構造をシミュレートする抗原構造に対して結合する抗体、特にアシアロ−ＧＭ１−結合抗体（抗ＡＧＭ１抗体）、及び／またはそれと交差反応し、ＩｇＧ及び／またはＩｇＡタイプのモノシアロ−ＧＭ１抗体（抗ＧＭ１抗体）が見出されるという驚くべき発見から特に始まった。アシアロ−ＧＭ１に結合し、かくしてＮＫ細胞を阻害する特性を有する抗体の存在、及び／または正常人と比較して有意に増大したその量は、新生物の存在、及び／または悪性新生物に対する患者の増大した危険と直接相関できる。
【００１２】
ＮＫ細胞を阻害する抗体の出現は、ガンの過程の起源と拡散に因果的に結びつくことができ、そこから特許の保護に接近可能であって、そのような抗体の阻害／除去に関与し、請求項１から８に記載の保護が所望される使用及び薬剤が由来可能である。
【００１３】
ガンの生成またはガンの発達の診断及び治療のための、抗ガングリオシド抗体または自己抗体の診断的測定の重要性は、本願の第二の部分でより詳細に説明される。
【００１４】
本発明は、自己免疫疾患の臨床上の診断の領域において、本出願人による過度の研究の予測できない結果である。この研究は、特定の抗ガングリオシド抗体がまた、自己免疫疾患、特に神経損傷性の神経障害性自己免疫疾患に関連して文献で議論されている抗体の中に存在するという知見から開始された。
【００１５】
ガングリオシドは、動物細胞の細胞膜の細胞外側の構成成分であり、神経組織にも存在するグリコリピドである。それらは分子当たりいくつかのモノサッカリド単位を含むが、リン含有量は存在せず、スフィンゴリピドと分類される。タンパク質と比較すると、それらは低分子量の生体分子である傾向にある。本発明の文脈で議論されている抗体が結合するガングリオシドは、一般的にＧＭ１と称されるモノシアロ−ガングリオシド、特に関連する「アシアロ」化合物ＡＧＭ１である。ＧＭ１は、二つのD-ガラクトース単位、一つのN-アセチルガラクトサミン単位、及び一つのD-グルコース単位を含む４糖モノマー単位のポリサッカリド鎖を有し、後者はセラミド部分に結合している。ガングリオシドＧＭ１においては、シアリン酸フリーのアシアロ−ＧＭ１（ＡＧＭ１）において欠けているN-アセチルノイラミン酸残基（ＮＡＮＡ；シアル酸またはo-シアリン酸残基；「モノシアロ」残基）が、ポリサッカリド鎖の内部の整列したD-ガラクトース単位に結合している。
【００１６】
前記ガングリオシド及び関連化合物は、例えば軸索成長及びニューロン分化を含む人体の数多くの重要な生物学的機能、レセプター機能、並びに身体の各種の免疫応答及びシグナル伝達及び細胞間認識における関与と関連している。
【００１７】
ガングリオシドＧＭ１、特にその糖構造に、及びこれらの類似する（これらをシミュレートする）他の分子の糖構造に結合する抗体または自己抗体が人体に存在し得ることは長く知られている。そのような抗体の生理学的役割、及び臨床上の診断に対してそれらが重要である可能性が、数多くの科学的研究の主題である。抗ＧＭ１抗体の発見は、アシアロ−ＧＭ１に結合する抗体に対して固有に知られている特性と、この文脈において相関していなかった。
【００１８】
これまでのところ、全ての出版された論文の主要な部分は、神経障害、例えばギヤン−バレー症候群神経根ニューロパシー、多発性神経根炎）及び関連する（ミラー−）フィッシャー症候群のような免疫介在性運動神経障害における抗ガングリオシド抗体の役割及び診断上の重要性と関連している。ある患者における抗ＧＭ１自己抗体の増大した出現もまた、アルツハイマー病と関連して報告された。更にそれらは、個々のＨＩＶ患者でも見出された。特定のガンのタイプと関連するその測定のための個々の実験も報告されたが、低感度のいくつかの有益な結果のみが得られた。この文脈では、以下の更なる議論が参照される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される用語の不正に狭められ制限された解釈を避けるために、最も重要な用語のいくつかを、本願の目的のために特に以下に定義する：
【００２０】
「抗体」：この用語は、生成及び形成のための各種の方法を区別することなしに、外的な抗原に対する抗体、及び内因性の構造に対する抗体、即ち自己抗体の両者を含み、後者は外的な抗原に対する抗体から抗原交差反応によって自己抗原となってもよく、外的な抗原に対する結合能力を保存していても良い。
例えば、抗体が、「ガングリオシド構造、及びガングリオシド構造をシミュレートする抗原構造」に結合する、または「ガングリオシドまたは特定のガングリオシドに反応性」であると称される場合（反応性の意味は「特異的な結合の文脈で反応性である」ことを意味する）、例えば更なる他の抗原構造に対する特異的な結合、または試薬を使用する実際の測定（例えば固定化またはマーキングまたは競合因子として）の必要なく、ＡＧＭ１のみ、特にその糖構造のみをシミュレートし、本発明に係る抗体としての定義についての役割を果たすことが、この定義により十分に規定されるべきである。
【００２１】
「ガングリオシド」：本発明の文脈では、用語「ガングリオシド」は主に、測定される抗体の結合挙動の特徴においてガングリオシドＡＧＭ１を表す。しかしならがこの用語はまた、今日まで調査されていない関連するガングリオシド、例えばフコシル化ガングリオシドを含むように企図されるが、これらのガングリオシドに結合し、新生物に対して匹敵する診断重要性を有する抗体が、ガンの血清で見出されることを条件とする。
【００２２】
「シミュレーション」：本明細書の文脈において、特異的なガングリオシド（ＡＧＭ１及びＧＭ１）に加えて、その効果を「シミュレートする」物質または化合物も使用されて良いと称される場合、これによって意味されるものは、糖構造（細菌毒素を含む）を有し、前記ガングリオシドと同様に問題となる抗体に結合する化合物が存在することである。それ故それらは、抗体の特異的な結合のため（例えば血液循環からそれらを除去する目的のため）、またはそれらのブロックのため、ガングリオシド自体と同様に、使用できる可能性が存在し得る。
前述の文脈では、ガングリオシドの結合挙動を「シミュレートする」物質は、高いガングリオシド抗体力価を有し、所定のアッセイで結合挙動が測定された生物学的サンプル（特に血清）が、試験される候補物質と接触され、抗体結合が同じアッセイでもう一度測定されるスクリーニング方法を活用して見出すことができる。抗体結合の引き続く減少または除去は、試験された物質が「ガングリオシドシュミュレーティング物質」であることを示す。この試験もまた、本願に開示され特許請求の範囲に記載されたものに相当する試薬によって、特許侵害を確立するのと関連して実施できる。
【００２３】
前記用語の更なる意味は、本願の前記及び後記開示内容、並びに本願の実施態様から、当業者に明らかである。
【００２４】
以下の記載では、表の内容に加えて、後述する図面が参照される。
【００２５】
アシアロ−ＧＭ１（ＡＧＭ１）に結合し、本発明の文脈で特に重要である抗体について、図１から４に対応する発見は、いくらかより小さい群の血清に利用可能である。同時に出願された本出願人の更なる特許出願における対応する実験結果が参照される。
【００２６】
以下では、本願が基づいている驚くべき分析的発見が、最初に実施例によって説明される。より詳細な記載は、同時に出願された本出願人の更なる出願で見出されるが、それは本願の開示を補うために参考としてここに取り込まれる。
【実施例】
【００２７】
１．ガングリオシドＧＭ１及びＡＧＭ１に結合する（自己）抗体についての、健康な正常人（コントロール）及びガン患者の血清の測定
ＢＳＡで飽和されている遊離結合部位であるガングリオシド（ＧＭ１及びＡＧＭ１）で被覆された試験チューブ（ＧＡ−ＣＴ）を使用して、コントロール血清及び試験血清で一連の測定を実施した。同時に出願された本出願人の更なる出願により詳細に記載されているように（その内容は本願の内容を補うために参考としてここに取り込まれる）、それぞれの血清（コントロール血清及び試験血清）から得られる抗体は、第一のインキュベーション工程において、コーティングのために使用されたガングリオシドに結合し、次いで、ＩｇＧ及びＩｇＡタイプの抗体の別個の測定のために、結合した抗体は、標識された動物（ヤギ）の抗ヒトＩｇＧまたは抗ヒトＩｇＧイムノグロブリンを使用して検出された。結合した標識イムノグロブリンは、それらの標識（化学発光マーカーとしてアクリジニウムエステル）に基づいて検出されて定量された。
【００２８】
抗体の量を表す測定されたシグナルを得るために、ガングリオシドコーティングを欠いている以外同一である試験チューブを使用して、それぞれの同一の血清について同一の測定条件の下で得られたバックグランドシグナルを差し引く必要がある。
【００２９】
137のコントロール血清（血液ドナーの血清、及び抗体濃度の年齢相関的な影響を避けるために、高齢者の家庭から得た各種の年齢の正常人の血清及び本出願人の雇用者の血清）は、ＧＭ１で被覆されたＧＡ−ＣＴを使用する抗体アッセイのためのコントロール血清として機能した。ＡＧＭ１で被覆されたＧＡ−ＣＴを使用する抗体アッセイについては、30のみの血清を含むこれらの血清の部分集団を測定した。
【００３０】
臨床的に診断された各種の器官／組織の腫瘍を有する患者の147の血清、及び更に慢性炎症性腸疾患（クローン病、大腸潰瘍）を有する患者の20の血清は、ＧＭ１で被覆されたＧＡ−ＣＴを使用する抗体アッセイの試験血清として機能した。各試験血清について、それらだ見出された腫瘍のタイプに従った測定で使用されたガン患者の血清の分類を可能にする正確な臨床上の証拠書類が存在した。ＡＧＭ１で被覆されたＧＡ−ＣＴを使用する抗体アッセイについて、ガン患者の30の血清のみを含むこれらの血清の部分集団を測定した。
【００３１】
ＧＭ１で被覆されたＧＡ−ＣＴを使用するＩｇＧ及びＩｇＡクラスの抗体の測定の結果が、図１及び２において例として示されている。より詳細な測定データは、同日の本出願人の平行した出願で順次見出すことができる。
【００３２】
図３及び４は、臨床上の写真にしたがって、それぞれ図１（ＩｇＧ）及び図２（ＩｇＡ）に係る測定結果の分類を示す。横軸方向にプロットされた参照番号は、以下のリストに示される臨床上の診断を表す：
【００３３】
【表１】
2005533243.tif 000003
【００３４】
「他のカルシノーマ」は、以下のように分けられた：
虫垂のカルシノーマ（ｎ＝１）、膀胱のカルシノーマ（ｎ＝１）、心臓カルシノーマ（ｎ＝１）、食道下部カルシノーマ(distal verophagus carcinoma)（ｎ＝２）、口床のカルシノーマ（ｎ＝１）、腎臓のカルシノーマ（ｎ＝１）、上腹部腫瘍（ｎ＝１）。
【００３５】
以下の表１は、図３および４の結果を数値的に要約している。
【表２】
2005533243.tif 000004
【００３６】
一方で、ＧＭ１被覆試験チューブで得られた測定結果と、他方で同じ血清の部分集団についてＡＧＭ１被覆試験チューブで得られた測定結果（両者とも本願では詳細に示されていない）の定量的相関関係を、更にＩｇＧ測定について実施したのであれば、両者の測定で、少なくともまさに実質的に同一のまたは交差反応する抗体、即ち抗ＡＧＭ１抗体の反応性を有する抗体が測定された。
【００３７】
２．コントロール血清及びガン患者の血清中の抗ガングリオシド抗体の測定の発見の議論
図１から４に例として要約された測定結果及び上記表１によって明白に示されるように、ガングリオシド（ＡＧＭ１及び／またはＧＭ１）に結合する抗体の測定は、コントロール血清とガン患者の血清の間の明白な区別を可能にする。実施された測定の感度は、全ての個々の腫瘍タイプについて75％を越え、ほとんどの場合で100％であった。
【００３８】
ＩｇＧ及びＩｇＡタイプの抗体の測定に対応し、ＩｇＭタイプのものを測定することをも企図する実験では、診断上の関連する結果は得られなかったことも指摘されるべきである（データは示されていない）。
【００３９】
各種のガンのタイプに関連して高い非特異性と組み合わされて測定された高感度は、抗ガングリオシド抗体の測定、特にＩｇＧ及び／またはＩｇＡクラスのものも測定を、一方で新生物の診断、特に早期の診断のための将来性のあるアッセイ方法とする。全てのガンの血清、特に非常に広範囲のガン疾患を有する患者の血清におけるＡＧＭ１またはＧＭ１に結合する抗体の有意に増大した力価は、これらが付随現象の文脈で増大したのではなく、おそらく悪性新生物（腫瘍）を確立する文脈で重要な役割を果たすことを示し、そのことがそれらを医学的にかなり興味ある治療上の標的とする。
【００４０】
学術文献には、ガンの生成におけるガングリオシド（特にＡＧＭ１、それ故交差反応するＧＭ１）に結合する抗体の重要な役割に関する発見について全く明らかにされていない。ガン疾患と関連して抗ガングリオシド抗体を測定する試みがなされたといういくつかの既知の論文が存在するのみである。「小肺細胞ガン」（ＳＣＬＣ）と称されるものにおいて、ガングリオシドの増大した／異常な発現が、前記疾患に罹患している患者の肺組織で見出されたという発見から開始して、二つの論文(Grazyna Adler等, Small cell lung cancer is not associated with the presence of anti-hucosyl-GM1 ganglioside autoantibodies reactive in immunoenzymatic test, Lung Cancer 34 (2001) 383-385；Aleksandra Lewartowska等, Ganglioside reactive antibodies of IgG and IgM class in sera of patients with differentiated thyroid cancer, Immunol. Lett. 80 (2002) 129-132)において、この異常なガングリオシド発現が、ガン患者において抗ガングリオシド抗体が形成できて検出できることを意味するのかどうかが調べられた。前記第一の論文では、主に探索された抗フコシル−ＧＭ１ガングリオシド抗体が見出されず、前記第二の論文では、少量の各種の抗ガングリオシド抗体が、特定数の患者における分化した甲状腺ガン（ＤＴＣ）の場合で検出可能であったが、例えば抗ＧＭ１抗体アッセイの場合で、ガン患者で見出された値は、コントロールのもの未満であった（図１）。わずかに大きな度合いに増大した抗体力価が、フコシル化ガングリオシドＦｕｃＧＭ１に結合する点でのみ見出された。前記論文の結果を明白に否定する本出願人の発見に照らし、強力な血清依存的バックグランドシグナルに対する抗ガングリオシド抗体の測定におけるかなりの実践的な困難性の観点で、著者は彼らによって使用されたＥＬＩＳＡアッセイによる有益な測定結果を生産することが実際にできなかった。測定されるはずで
あった抗体の考え得る病原的な役割は示唆されていない。
【００４１】
Manousos M. Konstandoulakis等, Autoantibodies in the Serum of Patients with Gastric Cancer; Their Prognostic Importance; Hybridoma, Vol. 17, No. 5, 1998, 431-435（同じグループの著者によって同様な論文に継続する）の論文では、それ自体既知の自己抗体が患者において測定され、胃ガンに罹患している患者の血清における各種のタイプの抗体の測定が更にレポートされ、そのような測定の予後上の役割の可能性が議論されている。「予後上」とは、存在する診断されたガン疾患の更なる臨床上の過程に対する予後の文脈でそこで使用されている。ＥＬＩＳＡアッセイが抗体測定のために使用されている。コントロールと比較して増大したレベルで見出された抗体は、抗ＧＭ１抗体と称されるものを含むが、それは疾患に罹患している患者において約35％の感度で見出されたに過ぎなかった（正常人については5％の値と比較して）。前記論文及び同じ著者による他の論文に照らして、抗ガングリオシド抗体は、ガンと関連して調査された自己抗体の数多くのタイプのひとつに過ぎず、悪性新生物の生成及び発達におけるそのような抗体の重要な役割の可能性については全く示されておらず、それ故報告されたデータからは将来性のある治療上のアプローチは絶対に由来できない。測定された抗ＧＭ１抗体がＡＧＭ１結合抗体と交差反応し、それ故そのこのような抗ＡＧＭ１抗体の特性を有するであろうという結論は、この文脈では引き出せなかった。
【００４２】
そのような予想は、アッセイ領域でのかなりの経験を使用して本出願人により得られ、従来の背景技術に対して非常に驚くべきものである測定データ、特に全てのガン患者の血清における、ガングリオシドＡＧＭ１に結合する抗体、それと交差反応するＧＭ１に結合する抗体の有意に増大した出現から、初めて生じたものであった。
【００４３】
本出願人により実施された測定の新規な発見に基づいて、本出願人は、ガン患者で見出される増大した抗ガングリオシド（自己）抗体力価が、ＮＫ細胞を阻害する抗体の力価として考慮することができるという結論を引き出すことができ、この結果これらの力価は、上述の議論された論文に対する開始点であった考慮とは関係を有さない新規で重要な医学上の重要性を有し、新規で将来性のある治療上のアプローチが、抗ＡＧＭ１抗体及びそれと交差反応する抗ＧＭ１抗体の見出された増大した力価から由来できる。
【００４４】
「ナチュラルキラー細胞」（ＮＫ細胞；細胞毒性的に活性なリンパ細胞）は、その表面に、抗ＡＧＭ１抗体が特異的に結合できるアシアロ−ＧＭ１構造を有し、これらがその後、その結合を通じてＮＫ細胞を不活性化して破壊することが知られている。しかしながら、活性なＮＫ細胞は、例えば全ての変性した内因性細胞、例えばガン細胞を殺傷することによってヒト免疫防御において非常に重要な役割を果たしているが、前記細胞はその変性のため、それらと接触するＮＫ細胞を阻害する能力を失っている。正常なＮＫ細胞の損傷（阻害、破壊）は、選択的な細胞毒性特性を除去し、それ故自然な生活サイクルの過程で変性してしまった細胞、特に腫瘍細胞タイプの細胞を、もはや正確に除去できない場合を導く。そのような変性した潜在的な腫瘍細胞の改良された生存特性のため、ＮＫ細胞の機能が損傷された場合にそれらは身体で残ることができ、制御不能に分割して実際の腫瘍に発達する。人工的なガンを誘導された実験動物を用いる動物実験の領域で、実験的なガン−動物モデルで所望される−を発達できるために、発癌物質または腫瘍の核と組み合わせて抗ＡＧＭ１抗体の投与によって実験動物の免疫防御をスイッチオフすることはすでに慣例である（例えば、Hugh F. Pross等, Role of Natural Killer Cells iun Cancer, Nat Immun 1993; 12: 279-292；Lewis L. Lanier等, Arousal and inhibition of human NK Cells, Immunological Reviews 1997, Vol. 155: 145-154；Yoichi Fuji等, IgGntibodies to AsialoGM1 Are More Sensitive than IgM Antibodies to Kill in vivo Natural Killer Cells and Prematured Cytotoxic T Lymphocytes of Mouse Spleen, Microbiol. Immunol. vol. 34(6), 533-542, 1990；Carmine M. Volpe等, AsGM1 + NK Cells Prevent Metastatis of Invading LD-MCA-38 Tumor Cells in the Nude Mouse, J Surg Res 84, 157-161 (1999)；Susan D Wilson等, Correlation of Suppressed Natural Killer Cell Activity with Altered Host Resistance Models in B6C3F1 Mice, Toxicology and Applied Pharmacology 177, 208-218 (2001)；H. Yoshino等, Natural killer cell depletion by anti-asialo GM1 antiserum treatment enhances human hematopoietic stem cell engraftment in NOD/Shi-scid mice; Bone Marrow Transplantation (2000) 26, 1211-1216；N. Saijo等, Analysis of Metastatic Spread and Growth of Tumor Cells in Mice with Depressed Natural Killer Activity by Anti-asialo GM1 Antibody or Anticancer Agents, J Cancer Res Clin Oncol (1984) 107: 157-163；Sonoku HABU等, Role of Natural Killer Cells against Tumor growth in Nude Mice - A Brief Review, Tokai J Exp Clin Med., Vol. 8, No. 5, 6: 165-168, 1983；Lewis L. Lanier, NK Cell Receptors, Annu. Rev. Immunol. 1998, 16: 359-93；Theresa L. Whiteside等, The role of natural killer cells in immune surveillance of cancer; Current Opinion in Immunology 1995, 7: 704-710；Tuomo Timonen等, Natural killer cell-target cell interactions, Current Opinion in Cell Biology 1997, 9: 667-673)。
【００４５】
例えば細菌曝露のため（例えばCampylobacter jejuniまたはHelicobacter pyloriでの感染）、一度抗ＧＭ１抗体の生産が、ヒト被験者で開始または著しく増大されると、本出願人により示されているＡＧＭ１エピトープを有するそのような抗体の交差反応性を考慮して（分子模倣性）、ＮＫ細胞、それ故被験者の免疫防御に対する損傷の可能性の素因が存在し、変性した腫瘍細胞が腫瘍に発達できる増大した危険が生ずる。それ故、前述のアッセイで測定された全てのガンの血清における有意に増大したレベルで見出された抗ＡＧＭ１抗体力価は、既知の腫瘍細胞マーカーの意味で新生物（腫瘍）の存在の結果をより小さい度合いで示すが、むしろその生成の素因または将来性のある随伴因子となり得ることが推定されるであろう。腫瘍の発達の過程で、例えば刺激したＮＫ選択性と組み合わせて、そのような抗体の真の自己抗体への変換、及び抗体力価の「ビルドアップ」が、特定の環境で生じ得る。
【００４６】
ガングリオシドと交差反応する抗体、及びその生産のために必要とされる免疫系に対する効果は、腫瘍の発達の前にすでに存在していても良いため、抗ＡＧＭ１抗体の測定は、ガン疾患の発達に対する素因を確立する目的で実施でき、ＡＧＭ１及び／またはＧＭ１に結合する抗体の陽性の検出の場合、ガンの予防及び／またはガンの阻害若しくは治療の文脈で干渉することも可能である。
【００４７】
この関係では、特に図３及び４に示されるように、抗ＡＧＭ１抗体と交差反応する抗ＧＭ１抗体の増大した力価が、慢性炎症性腸疾患（クローン病、大腸潰瘍）に罹患している患者の幾人かで見出されることは、更に非常に興味を有する。例えば大腸潰瘍の場合、患者の後期の段階において大腸ガンの発達の増大した危険が存在することが知られている。その危険は約40％である。このパーセンテージ値は、慢性炎症性腸疾患（参照番号14）を有する患者の血清中の増大した抗ＧＭ１力価について見出される値の大きさのオーダーを有する、即ち、統計学的なガンの危険と抗−（Ａ）ＧＭ１抗体の出現の平行関係が、関連する患者の血清で検出可能であるという発見は、前述の推定を支持する更なる発見である。
【００４８】
記載された発見から生ずるガンの予防、阻害、及び治療のための新規な方法の重要性は以下の通りである。
【００４９】
１．ＡＧＭ１に結合する抗体を飽和させる（「ブロックする」）のに適した薬剤（もちろん必要とされる適合性を有さなければならない）を患者に投与することによる、病原性の抗体の肉体内でのブロックのための測定。ガングリオシドそれ自体がそのような薬剤であり、ヒト患者に対するその良好な適合性は、それらがすでに投与されている他の文脈で既知である（それらはパーキンソン病に罹患している患者に大量に投与されている）。
【００５０】
２．例えば、固体のアフィニティー材料に対する肉体外での結合（「プラスマフェレシス」）による、患者の循環からの抗体の除去。バインダーとして使用されるアフィニティーカラムの生産のために、ガングリオシド自体よりも高いアフィニティーを有する抗体を結合する抗アフィニティー糖構造を使用することも可能である。
【００５１】
３．抗原提示細胞をブロックするための、またはＴ細胞アネルギーを導くための薬剤の投与による、特異的な抗体の内因性の生産の減少。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】図１は、147の腫瘍患者の血清の測定の結果と比較した、137のコントロール被験者の血清における、モノシアロ−ＧＭ１に結合するＩｇＧクラスの抗体の測定の結果のグラフを示す。
【図２】図２は、モノシアロ−ＧＭ１に結合するＩｇＡクラスの抗体に対する、図１と同じ血清の測定の結果を示す。
【図３】図３は、臨床的に診断された腫瘍タイプ／疾患に関連する、図１による腫瘍の血清における抗体の測定の分類が存在するグラフであり、1から14の数字によって特徴づけされているが、その数字は上述の記載で説明されている。
【図４】図４は、図３の分類に対応する図２によるＩｇＡクラスの抗体の測定の分類を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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