(57)【要約】α４インテグリン（好ましくは、ＶＬＡ−４）を結合する化合物が開示されている。これらの化合物の特定のものはまた、白血球接着、特に、α４インテグリン（好ましくは、ＶＬＡ−４）が媒介する白血球接着を阻止する。このような化合物は、哺乳動物（例えば、ヒト）患者の炎症疾患（例えば、喘息、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、エイズ痴呆、糖尿病、炎症性腸疾患、慢性関節リウマチ、組織移植、腫瘍転移および心筋虚血）の処置で有用である。これらの化合物はまた、炎症性脳疾患（例えば、多発性硬化症）を処置するために、投与できる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物およびそれらの薬学的に受容可能な塩：
【化１】
2005527628.tif 000036
ここで、各Ｘは、別個に、フルオロ、クロロまたはブロモである；
ｐは、０〜３の整数である；
Ｒ１およびＲ３は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、アゼチジニル、ピロリジニル、ピロリル、２，５−ジヒドロピロール−１−イル、ピペリジニルまたは１，２，３，６−テトラヒドロ−ピリジン−１−イルを形成する；
Ｒ２は、低級アルキル、低級アルケニルおよび低級アルキレンシクロアルキルからなる群から選択される、
化合物。
【請求項２】
式（ＩＩ）の化合物およびそれらの薬学的に受容可能な塩：
【化２】
2005527628.tif 000037
ここで、各Ｘは、別個に、フルオロおよびクロロからなる群から選択される；
ｍは、１または２に等しい整数である；
Ｒ２は、低級アルキル、低級アルケニルおよび低級アルキレンシクロアルキルからなる群から選択される；
Ｒ１およびＲ３は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、アゼチジニル基、ピロリジニル基またはピペリジニル基を形成する、
化合物。
【請求項３】
式（ＩＩＩ）の化合物およびそれらの薬学的に受容可能な塩：
【化３】
2005527628.tif 000038
ここで、各Ｘは、別個に、フルオロまたはクロロである；
ｎは、０または１である；
Ｒ２は、−ＣＨ２−Ｒ’であり、ここで、Ｒ’は、水素、メチルまたは−ＣＨ＝ＣＨ２からなる群から選択される；
Ｒ１およびＲ３は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、アゼチジニル基、ピロリジニル基またはピペリジニル基を形成する、
化合物。
【請求項４】
Ｒ１およびＲ３が、それらが結合する窒素原子と一緒になって、アゼチジニル基、ピロリジニル基またはピペリジニル基を形成する、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２が、ＣＨ３である、請求項１、２または３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｘが、ＦまたはＣｌであり、そしてｎが、０である、請求項３に記載の化合物。
【請求項７】
以下からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物およびそれらの薬学的に受容可能な塩：
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン  ＥＬＮ；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピペリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピペリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン。
【請求項８】
薬学的に受容可能な担体および請求項１〜４、６または７のいずれか１項に記載の化合物の治療有効量を含有する、医薬組成物。
【請求項９】
患者においてα４インテグリンにより媒介される疾患を処置する方法であって、薬学的に受容可能な担体および請求項１〜４、６または７のいずれか１項に記載の化合物の治療有効量を含有する医薬組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１０】
前記疾患が、ＶＬＡ−４により媒介される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記疾患が、炎症疾患である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
式（ＩＶ）の化合物およびそれらの薬学的に受容可能な塩：
【化４】
2005527628.tif 000039
ここで、各Ｘは、別個に、フルオロ、クロロまたはブロモである；
ｐは、０〜３の整数である；
Ｒ１およびＲ３は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、アゼチジニル、ピロリジニル、ピロリル、２，５−ジヒドロピロール−１−イル、ピペリジニルまたは１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−１−イルを形成する；
Ｒ２は、低級アルキニルである、
化合物。
【請求項１３】
式（Ｖ）の化合物およびそれらの薬学的に受容可能な塩：
【化５】
2005527628.tif 000040
ここで、各Ｘは、別個に、フルオロおよびクロロからなる群から選択される；
ｍは、１または２に等しい整数である；
Ｒ２は、低級アルキニルである；
Ｒ１およびＲ３は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、アゼチジニル基、ピロリジニル基またはピペリジニル基を形成する、
化合物。
【請求項１４】
式（ＶＩ）の化合物およびそれらの薬学的に受容可能な塩：
【化６】
2005527628.tif 000041
ここで、各Ｘは、別個に、フルオロまたはクロロである；
ｎは、０または１である；
Ｒ２は、低級アルキニルである；
Ｒ１およびＲ３は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、アゼチジニル基、ピロリジニル基またはピペリジニル基を形成する、
化合物。
【請求項１５】
Ｒ１およびＲ３は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、アゼチジニル基、ピロリジニル基またはピペリジニル基を形成する、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ２が、プロパルギルである、請求項１２、１３または１４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｘが、ＦまたはＣｌであり、そしてｎが、０である、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１８】
以下からなる群から選択される、請求項１２に記載の化合物およびそれらの薬学的に受容可能な塩：
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン。
【請求項１９】
薬学的に受容可能な担体および請求項１２〜１５、１７または１８のいずれか１項に記載の化合物の治療有効量を含有する、医薬組成物。
【請求項２０】
患者においてα４インテグリンにより媒介される疾患を処置する方法であって、薬学的に受容可能な担体および請求項１２〜１５、１７または１８のいずれか１項に記載の化合物の治療有効量を含有する医薬組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項２１】
前記疾患が、ＶＬＡ−４により媒介される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記疾患が、炎症疾患である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記疾患が、慢性関節リウマチである、請求項２０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
（発明の背景）
（発明の分野）
本発明は、白血球接着を阻害する化合物、特に、α４インテグリンにより媒介される白血球接着を阻害する化合物に関し、ここで、このα４インテグリンは、好ましくは、ＶＬＡ−４である。
【０００２】
（参考文献）
以下の刊行物、特許および特許出願は、本願において、上付き番号で引用されている。
【０００３】
１  Ｈｅｍｌｅｒ  ａｎｄ  Ｔａｋａｄａ、ヨーロッパ特許出願公報第３３０，５０６号（これは、１９８９年８月３０日に公開された）
２  Ｅｌｉｃｅｓら、Ｃｅｌｌ，６０：５７７−５８４（１９９０）
３  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ，３４６：４２５−４３４（１９９０）
４  Ｏｓｂｏｒｎｅ，Ｃｅｌｌ，６２：３−６（１９９０）
５  Ｖｅｄｄｅｒら、Ｓｕｒｇｅｒｙ，１０６：５０９（１９８９）
６  Ｐｒｅｔｏｌａｎｉら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８０：７９５（１９９４）
７  Ａｂｒａｈａｍら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９３：７７６（１９９４）
８  Ｍｕｌｌｉｇａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１５０：２４０７（１９９３）
９  Ｃｙｂｕｌｓｋｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５１：７８８（１９９１）
１０  Ｌｉら、Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．，１３：１９７（１９９３）
１１  Ｓａｓｓｅｖｉｌｌｅら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．，１４４：２７（１９９４）
１２  Ｙａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉｅｎｃｅ（ＵＳＡ），９０：１０４９４（１９９３）
１３  Ｂｕｒｋｌｙら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ，４３：５２９（１９９４）
１４  Ｂａｒｏｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９３：１７００（１９９４）
１５  Ｈａｍａｎｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１５２：３２８３（１９９４）
１６  Ｙｅｄｎｏｃｋら、Ｎａｔｕｒｅ，３５６：６３（１９９２）
１７  Ｂａｒｏｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７７：５７（１９９３）
１８  ｖａｎ  Ｄｉｎｔｈｅｒ−Ｊａｎｓｓｅｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１４７：４２０７（１９９１）
１９  ｖａｎ  Ｄｉｎｔｈｅｒ−Ｊａｎｓｓｅｎら、Ａｎｎａｌｓ．Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ  Ｄｉｓ．，５２：６７２（１９９３）
２０  Ｅｌｉｃｅｓら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９３：４０５（１９９４）
２１  Ｐｏｓｔｉｇｏら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８９：１４４５（１９９１）
２２  Ｐａｕｌら、Ｔｒａｎｓｐｌ．Ｐｒｏｃｅｅｄ．，２５：８１３（１９９３）
２３  Ｏｋａｒｈａｒａら、Ｃａｎ．Ｒｅｓ．，５４：３２３３（１９９４）
２４  Ｐａａｖｏｎｅｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎ．，５８：２９８（１９９４）
２５  Ｓｃｈａｄｅｎｄｏｒｆら、Ｊ．Ｐａｔｈ．，１７０：４２９（１９９３）
２６  Ｂａｏら、Ｄｉｆｆ．，５２：２３９（１９９３）
２７  Ｌａｕｒｉら、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，６８：８６２（１９９３）
２８  Ｋａｗａｇｕｃｈｉら、Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，８３：１３０４（１９９２）
２９  Ｋｏｎｒａｄｉら、ＰＣＴ／ＵＳ００／０１６８６（２０００年１月２１日に出願された）。
【０００４】
上記刊行物の全ては、各個々の刊行物の内容が具体的かつ個別に本明細書中で参考として援用されている同じ範囲まで、本明細書中で参考として援用されている。
【０００５】
（技術水準）
ＨｅｍｌｅｒおよびＴａｋａｄａ１によって最初に同定されたＶＬＡ−４（α４β１インテグリンおよびＣＤ４９ｄ／ＣＤ２９ともいわれる）は、細胞表面レセプターのβ１インテグリンファミリーのメンバーである。その各々は、２つのサブユニット（α鎖およびβ鎖）を含む。ＶＬＡ−４は、α４鎖およびβ１鎖を含む。少なくとも９つのβ１インテグリンが存在し、これらは全て、同じβ１鎖を共有し、各々、異なるα鎖を有する。これらの９つのレセプターは全て、種々の細胞マトリクス分子の異なる相補物（例えば、フィブロネクチン、ラミニン、およびコラーゲン）を結合する。例えば、ＶＬＡ−４は、フィブロネクチンに結合する。ＶＬＡ−４はまた、内皮細胞および他の細胞によって発現される非マトリクス分子を結合する。これらの非マトリクス分子としては、ＶＣＡＭ−１が挙げられ、これは、培養物中のサイトカイン活性化ヒト臍静脈内皮細胞上で発現される。ＶＬＡ−４の別のエピトープは、フィブロネクチン結合活性およびＶＣＡＭ−１結合活性を担っており、各活性は、独立して阻害されることが示された２。
【０００６】
ＶＬＡ−４および他の細胞表面レセプターによって媒介される細胞間接着は、多くの炎症応答と関連する。傷害または他の炎症性刺激の部位において、活性化された血管内皮細胞は、白血球に接着性の分子を発現する。白血球が内皮細胞に接着する機構は、一部、白血球上の細胞表面レセプターの認識およびこのレセプターの内皮細胞上の対応する細胞表面分子への結合を包含する。一旦結合すると、その白血球は、血管壁を横切って移動して、傷害部位へ入り、化学メディエーターを放出して、感染と戦う。免疫系の接着レセプターの総説については、例えば、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ３およびＯｓｂｏｒｎ４を参照のこと。
【０００７】
炎症性脳障害（例えば、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、多発性硬化症（ＭＳ）、および髄膜炎）は、内皮／白血球接着機構がそうでなければ健常な脳組織を破壊する中枢神経系障害の例である。多くの白血球は、これらの炎症疾患に罹患した被験体において、脳血液関門（ＢＢＢ）を越えて移動する。白血球は、大規模な組織損傷を引き起こす毒性のメディエーターを放出し、神経伝達の損傷および神経麻痺を引き起こす。
【０００８】
他の器官系において、組織損傷はまた、白血球の移動または活性化の要因となる接着機構を介して起こる。例えば、心臓組織に対する心筋虚血後の初期の発作は、損傷組織への白血球の侵入によりさらに複雑化し得、なおさらなる発作を引き起こすことが知られている（Ｖｅｄｄｅｒら）５。接着機構により媒介される他の炎症状態または医学的状態としては、例えば、ぜん息６〜８、アルツハイマー病、アテローム硬化９〜１０、ＡＩＤＳ痴呆１１、糖尿病１２〜１４（急性若年性糖尿病を含む）、炎症性腸疾患１５（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む）、多発性硬化症１６〜１７、慢性関節リウマチ１８〜２１、組織移植２２、腫瘍転移２３〜２８、髄膜炎、脳炎、発作、および他の大脳外傷、腎炎、網膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、心筋虚血、および急性白血病媒介性肺損傷（成人呼吸窮迫症候群において生じる肺損傷）が挙げられる。
【０００９】
一分類としての置換アミノピリミジンは、ＶＣＡＭ−１へのＶＬＡ−４の結合を阻害することが開示されており、従って、抗炎症特性２９を示す。これらの化合物は、このような結合に対してアンタゴニスト特性を有し、これらの化合物の増加したバイオアベイラビリティーはそれらの効果を増大させる。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
（発明の要旨）
本発明は、ある種のＮ−［２−Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ−５−アミノスルホニルフェニルピリミジン−４−イル］−ｐ−カルボニルオキシ−フェニルアラニン化合物が、それらのＡＵＣを測定したとき、先に開示した他の置換アミノピリミジン化合物と比較して、予想外に優れたバイオアベイラビリティーを有するという発見に関する。
【００１１】
その組成の局面の一方では、本発明は、式（Ｉ）の化合物およびそれらの薬学的に受容可能な塩に関する：
【００１２】
【化７】
2005527628.tif 000002
ここで、各Ｘは、別個に、フルオロ、クロロまたはブロモである；
ｐは、０〜３の整数である；
Ｒ１およびＲ３は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、アゼチジニル、ピロリジニル、ピロリル、２，５−ジヒドロピロール−１−イル、ピペリジニルまたは１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−１−イルを形成する；
Ｒ２は、低級アルキル、低級アルケニルおよび低級アルキレンシクロアルキルからなる群から選択される。
【００１３】
好ましい実施態様では、Ｒ１およびＲ３は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、アゼチジニル基、ピロリジニル基またはピペリジニル基を形成する。
【００１４】
好ましい実施態様では、本発明は、式（ＩＩ）の化合物およびそれらの薬学的に受容可能な塩を提供する：
【００１５】
【化８】
2005527628.tif 000003
ここで、各Ｘは、別個に、フルオロおよびクロロからなる群から選択される；
ｍは、１または２に等しい整数である；
Ｒ２は、低級アルキル、低級アルケニルおよび低級アルキレンシクロアルキルからなる群から選択される；
Ｒ１およびＲ３は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、アゼチジニル基、ピロリジニル基またはピペリジニル基を形成する。
【００１６】
特に好ましい実施態様では、本発明は、式（ＩＩＩ）の化合物およびそれらの薬学的に受容可能な塩を提供する：
【００１７】
【化９】
2005527628.tif 000004
ここで、各Ｘは、別個に、フルオロまたはクロロである；
ｎは、０または１である；
Ｒ２は、−ＣＨ２−Ｒ’であり、ここで、Ｒ’は、水素、メチルまたは−ＣＨ＝ＣＨ２からなる群から選択される；
Ｒ１およびＲ３は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、アゼチジニル基、ピロリジニル基またはピペリジニル基を形成する。
【００１８】
その組成の別の局面では、本発明は、式（ＩＶ）の化合物およびそれらの薬学的に受容可能な塩に関する：
【００１９】
【化１０】
2005527628.tif 000005
ここで、各Ｘは、別個に、フルオロ、クロロまたはブロモである；
ｐは、０〜３の整数である；
Ｒ１およびＲ３は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、アゼチジニル、ピロリジニル、ピロリル、２，５−ジヒドロピロール−１−イル、ピペリジニルまたは１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−１−イルを形成する；
Ｒ２は、低級アルキニルである。
【００２０】
好ましい実施態様では、Ｒ１およびＲ３は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、アゼチジニル基、ピロリジニル基またはピペリジニル基を形成し、そしてＲ２は、プロパルギルである。
【００２１】
好ましい実施態様では、本発明は、式（Ｖ）の化合物およびそれらの薬学的に受容可能な塩を提供する：
【００２２】
【化１１】
2005527628.tif 000006
ここで、各Ｘは、別個に、フルオロおよびクロロからなる群から選択される；
ｍは、１または２に等しい整数である；
Ｒ２は、低級アルキニルである；
Ｒ１およびＲ３は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、アゼチジニル基、ピロリジニル基またはピペリジニル基を形成する。
【００２３】
特に好ましい実施態様では、本発明は、式（ＶＩ）の化合物およびそれらの薬学的に受容可能な塩を提供する：
【００２４】
【化１２】
2005527628.tif 000007
ここで、各Ｘは、別個に、フルオロまたはクロロである；
ｎは、０または１である；
Ｒ２は、低級アルキニルである；
Ｒ１およびＲ３は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、アゼチジニル基、ピロリジニル基またはピペリジニル基を形成する。
【００２５】
本発明の範囲内のＮ−［２−Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ−５−アミノスルホニルフェニルピリミジン−４−イル］−ｐ−カルボニルオキシ−フェニルアラニン化合物には、以下の表Ｉで示したものが挙げられる：
【００２６】
【表１−１】
2005527628.tif 000008
【００２７】
【表１−２】
2005527628.tif 000009
本発明の範囲内の特定の化合物には、以下の化合物が挙げられる。以下で使用するように、これらの化合物は、フェニルアラニン誘導体に基づいて命名されているが、代替的には、これらの化合物は、Ｎ−［２−Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ−５−アミノスルホニルフェニル−ピリミジン−４−イル］−ｐ−カルボニルオキシフェニルアラニン誘導体または２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（ベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−ｐ−カルボニルオキシ−フェニル）プロピオン酸誘導体に基づいて、命名できる。
【００２８】
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピペリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピペリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン；およびそれらの薬学的に受容可能な塩。
【００２９】
他の局面では、本発明は、医薬組成物を提供し、該医薬組成物は、薬学的に受容可能な担体および本明細書中で規定した化合物の治療有効量を含有する。
【００３０】
その方法局面の１つでは、本発明は、患者において少なくとも部分的にα４インテグリン（好ましくはＶＬＡ−４）により媒介される疾患を処置する方法に関し、該方法は、薬学的に受容可能な担体および本発明の化合物の治療有効量を含有する医薬組成物を投与する工程を包含する。
【００３１】
本発明の化合物および医薬組成物は、少なくとも部分的にα４インテグリン（好ましくは、ＶＬＡ−４）、または白血球接着により媒介される疾患を処置するのに有用である。これらの疾患状態には、例として、喘息、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、エイズ痴呆、糖尿病（急性若年性開始糖尿病を含めて）、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含めて）、多発性硬化症、慢性関節リウマチ、組織移植、腫瘍転移、髄膜炎、脳炎、脳卒中および他の大脳外傷、腎炎、網膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、心筋虚血および急性白血球媒介肺傷害（例えば、成人呼吸困難症候群で起こるもの）が挙げられる。
【００３２】
他の疾患状態には、炎症状態（例えば、結節性紅斑、アレルギー性結膜炎、視覚性神経炎、ブドウ膜炎、アレルギー性鼻炎、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、血管炎、ライター症候群、全身性エリテマトーデス、汎発性強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、ヴェグナー肉芽腫症、大動脈炎、サルコイドーシス、リンパ球減少症、側頭動脈炎、心外膜炎、心筋炎、鬱血性心不全、結節性多発性動脈炎、過感受性症候群、アレルギー、過好酸性症候群、チャーグ・ストラウス症候群、慢性閉塞性肺疾患、過感受性間質性肺炎、慢性活動性肝炎、間質性膀胱炎、自己免疫性内分泌不全、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性再生不良性貧血、慢性持続性肝炎および甲状腺炎）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３３】
好ましい実施態様では、この疾患状態は、炎症疾患である。
【００３４】
（発明の詳細な説明）
上記のように、本発明は、白血球接着（特に、少なくとも部分的にα４インテグリン（好ましくは、ＶＬＡ−４）により媒介される白血球接着）を阻止する化合物に関する。しかしながら、本発明をさらに詳細に記述する前に、まず、以下の用語を定義する。
【００３５】
（定義）
特に明記しない限り、本明細書および請求の範囲の以下の用語は、以下で示した意味を有する：
本明細書中で使用する「低級アルキル」とは、１個〜５個の炭素原子を有する一価アルキル基（直鎖および分枝鎖アルキル基を含めて）を意味する。この用語は、メチル、エチル、イソプロピル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチルなどのような基により、例示される。
【００３６】
「低級アルキレン」との用語は、１個〜４個の炭素原子を有する二価アルキレン基（直鎖および分枝鎖アルキレン基を含めて）を意味する。この用語は、メチレン、エチレン、ｎ−プロピレン、イソプロピレン（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−および−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−）などのような基により、例示される。
【００３７】
「低級アルケニル」との用語は、好ましくは、２個〜６個の炭素原子および少なくとも１部位、好ましくは、１部位のみのアルケニル不飽和（すなわち、＞Ｃ＝Ｃ＜）を有するアルケニル基を意味する。この用語は、アリル、エテニル、プロペニル、ブテニルなどのような基により、例示される。
【００３８】
「低級アルキニル」との用語は、好ましくは、２個〜６個の炭素原子および少なくとも１部位、好ましくは、１部位のみのアルキニル不飽和（すなわち、−Ｃ≡Ｃ−）を有するアルキニル基を意味する。この用語は、アセチル（−Ｃ≡ＣＨ）、プロパルギル（−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ）、３−ブチニル（−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ３）などのような基により、例示される。
【００３９】
「低級シクロアルキル」との用語は、単一環を有する３個〜６個の炭素原子の環状アルキル基を意味し、これには、例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが挙げられる。
【００４０】
「低級アルキレンシクロアルキル」との用語は、本明細書中で定義された低級アルキレン−低級シクロアルキルからなる基を意味する。このような基は、メチレンシクロプロピル（−ＣＨ２−シクロプロピル）、エチレンシクロプロピルなどにより、例示される。
【００４１】
「薬学的に受容可能な担体」とは、一般に、安全かつ非毒性であり、生物学的に望ましくないわけでもそれ以外で望ましくないわけでもない医薬組成物を調製する際に有用な担体を意味し、これには、ヒトの医薬品用途だけでなく獣医学用途にも許容できる担体が挙げられる。本明細書および特許請求の範囲で使用される「薬学的に受容可能な担体」には、１種および１種より多くのこのような担体が含まれる。
【００４２】
疾患を「処置する」または「処置」とは、以下が挙げられる：
（１）その疾患を予防すること、すなわち、その疾患に曝され得るか感染し易いが未だその疾患の症状を経験しないか示さない哺乳動物において、その疾患の臨床症状を発症させないようにすること；
（２）その疾患を阻止すること、すなわち、その疾患またはその臨床症状の発症を抑えるか少なくすること；または
（３）その疾患を軽減すること、すなわち、その疾患またはその臨床症状の退行を引き起こすこと。
【００４３】
「治療有効量」とは、疾患を処置するために哺乳動物に投与したときに、その疾患に対してこのような処置を達成するのに十分な化合物の量を意味する。この「治療有効量」は、その化合物、疾患およびその重症度、および処置する哺乳動物の年齢、体重などに依存して、変わる。
【００４４】
「薬学的に受容可能な塩」とは、当該分野で周知の種々の有機対イオンおよび無機対イオンから塩が誘導される式Ｉの化合物の薬学的に受容可能な塩を意味し、これには、例としてのみ、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウムなどが挙げられる；その分子が塩基性官能基を含有するとき、有機酸または無機酸の塩（例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、酒石酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩など）である。
【００４５】
インテグリンは、相同性膜貫通リンカータンパク質の大きなファミリーであり、これらは、ほとんどの細胞外マトリックスタンパク質（例えば、コラーゲン、フィブロネクチンおよびラミニン）を結合する動物細胞上の主要なレセプターである。これらのインテグリンは、α鎖およびβ鎖から構成されるヘテロダイマーである。現在まで、２０種の異なるインテグリンヘテロダイマー（これらは、９種の異なるαサブユニットおよび１４種の異なるβサブユニットから作られている）が同定されている。「α４インテグリン」との用語は、ヘテロダイマーのクラス、すなわち、βサブユニットのいずれかと対になったα４サブユニットを含有する酵素結合細胞表面レセプターを意味する。ＶＬＡ−４は、α４インテグリンの一例であり、α４サブユニットおよびβ１サブユニットのヘテロダイマーであり、また、α４β１インテグリンとも呼ばれている。
【００４６】
（化合物の調製）
本発明の化合物は、以下の実施例で示した方法および手順を使用して、容易に入手できる出発物質から調製できる。これらの方法および手順は、Ｎ−［２−Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ−５−アミノスルホニルフェニルピリミジン−４−イル］−ｐ−カルボニルオキシ−フェニルアラニン化合物を調製するための特定の反応プロトコルを概説する。これらの実施例および方法で例示していない本発明の範囲内にある化合物は、市販されているかまたは当該分野で周知であるかのいずれかである出発物質で適当に置き換えることにより、容易に調製される。
【００４７】
本発明の化合物を調製する他の手順および反応条件は、以下で示した実施例で記述されている。さらに、本発明のある局面で有用な化合物を調製する他の手順は、米国特許第６，４９２，３７２号（これは、２００２年１２月１０日に発行された）で開示されている；その開示内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【００４８】
（医薬品処方物）
医薬品として使用するとき、本発明の化合物は、通常、医薬組成物の形態で投与される。これらの組成物は、種々の経路（経口経路、直腸経路、経皮経路、皮下経路、静脈内経路、筋肉内経路および鼻内経路を含めて）により、投与できる。これらの組成物は、注射可能送達および経口送達の両方により、有効である。このような組成物は、医薬品分野で周知の様式で調製され、そして少なくとも１種の活性化合物を含有する。
【００４９】
本発明はまた、医薬組成物を包含し、これは、その活性成分として、薬学的に受容可能な担体と会合した上記式Ｉの化合物のうちの１種またはそれ以上を含有する。本発明の組成物を製造する際には、この活性成分は、通常、賦形剤と混合されるか、賦形剤で希釈されるか、またはカプセル、におい袋（ｓａｃｈｅｔ）、紙または他の容器の形状であり得るこのような担体内に封入される。使用される賦形剤は、典型的には、ヒト被験体または他の動物に投与するのに適当な賦形剤である。この賦形剤は、希釈剤として働くとき、固形物質、半固形物質または液状物質であり得、それは、活性成分用のビヒクル、担体または媒体として作用する。それゆえ、これらの組成物は、錠剤、丸薬、散剤、ロゼンジ、香粉（ｓａｃｈｅｔ）、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁液、乳濁液、溶液、シロップ剤、エアロゾル（固形物として、または液状媒体中で）、軟膏（これは、例えば、１０重量％までの活性化合物を含有する）、軟質ゼラチンカプセルおよび硬質ゼラチンカプセル、坐剤、無菌注射可能溶液、および無菌包装散剤の形状であり得る。
【００５０】
処方物を調製する際に、他の成分と配合する前に、この活性化合物を粉砕して適当な粒径にする必要があり得る。もし、この活性化合物が実質的に不溶であるなら、それは、通常、２００メッシュ未満の粒径まで粉砕される。もし、この活性化合物が実質的に水溶性であるなら、その粒径は、通常、その処方で実質的に均一な分布（例えば、約４０メッシュ）が得られるように粉砕することにより、調節される。
【００５１】
適当な賦形剤の一部の例には、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップおよびメチルセルロースが挙げられる。これらの処方は、さらに、以下を含有する：滑沢剤（例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウムおよび鉱油）；湿潤剤；乳化剤および懸濁剤；防腐剤（例えば、ヒドロキシ安息香酸メチルおよびプロピル）；甘味料；および香味料。本発明の組成物は、当該技術分野で公知の手段を使用することにより患者に投与した後、その活性成分の迅速放出、持続放出または遅延放出を生じるように、処方できる。
【００５２】
これらの組成物は、好ましくは、単位剤形で処方され、各投薬量は、約５〜約１００ｍｇ、さらに普通には、約１０〜約３０ｍｇの活性成分を含有する。「単位剤形」との用語は、ヒト被験体および他の哺乳動物に単一の投薬量として適当な物理的に別個の単位を意味し、各単位は、適当な医薬賦形剤と会合して、所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性物質を含有する。
【００５３】
この活性化合物は、広い投薬量範囲にわたって有効であり、一般に、薬学的に有効な量で投与される。しかしながら、実際に投与される化合物の量は、関連した状況（処置する病気、選択した投与経路、実際に投与する化合物、個々の患者の年齢、体重および応答、患者の症状の重症度などを含めて）に照らして、医師により決定されることが分かる。
【００５４】
固形組成物（例えば、錠剤）を調製するために、主要な活性成分は、医薬賦形剤と混合されて、固形プレ処方組成物（これは、本発明の化合物の均一混合物を含有する）を形成する。これらのプレ処方組成物を均一であると呼ぶとき、それは、この組成物が同等に有効な単位剤形（例えば、錠剤、丸薬およびカプセル剤）に容易に細分され得るように、この活性成分が組成物全体にわたって一様に分散されていることを意味する。この固形プレ処方は、次いで、上記種類の単位剤形（これは、例えば、０．１〜約５００ｍｇの本発明の活性成分を含有する）に細分される。
【００５５】
本発明の錠剤または丸薬は、長期にわたる作用の利点を生じる剤形を提供するために、被覆され得るか、そうでなければ、配合され得る。例えば、この錠剤または丸薬は、内部投薬成分および外部投薬成分を含有でき、後者は、前者の上を覆うエンベロープの形態である。これらの２種の成分は、腸溶層（これは、胃内での崩壊に抵抗するように働き、その内部成分が無傷で十二指腸の中に入れるか、放出を遅らせる）により、分離できる。このような腸溶層または被覆には、種々の物質が使用でき、これには、多数の高分子酸、および高分子酸と、セラック、セチルアルコールおよび酢酸セルロースのような物質との混合物が挙げられる。
【００５６】
本発明の新規組成物が経口投与または注射による投与のために取り込まれ得る液体形状には、水溶液、適当に風味を加えたシロップ、水性または油性懸濁液、および食用油（例えば、綿実油、ゴマ油、やし油または落花生油）で風味を加えた乳濁液だけでなく、エリキシル剤および類似の医薬ビヒクルが挙げられる。
【００５７】
吸入またはガス注入用の組成物には、薬学的に受容可能な水性溶媒または有機溶媒中の溶液および懸濁液、またはそれらの混合物、および粉末が挙げられる。これらの液状または固形組成物は、上記の適当な薬学的に受容可能な賦形剤を含有し得る。好ましくは、これらの組成物は、局所効果または全身効果のために、経口経路または鼻内呼吸経路により、投与される。好ましくは、薬学的に受容可能な溶媒中の組成物は、不活性ガスを使用することにより、霧状にされ得る。霧状にした溶液は、霧化装置から直接的に呼吸され得るか、または霧化装置は、フェースマスクテントまたは断続正圧呼吸装置に装着され得る。溶液、懸濁液または粉末組成物は、好ましくは、この処方を適当な様式で送達する装置から、経口または鼻内で、投与され得る。
【００５８】
以下の処方実施例は、本発明の医薬組成物を例示する。
【００５９】
（処方実施例１）
以下の成分を含有する硬質ゼラチンカプセルを調製する：
成分                                            量
（ｍｇ／カプセル）
活性成分                                        ３０．０
デンプン                                      ３０５．０
ステアリン酸マグネシウム                          ５．０
上記成分を混合し、そして３４０ｍｇの量で、硬質ゼラチンカプセルに充填する。
【００６０】
（処方実施例２）
以下の成分を使用して、錠剤処方を調製する：
成分                                            量
（ｍｇ／錠剤）
活性成分                                        ２５．０
微結晶セルロース                                 ２００．０
コロイド状二酸化ケイ素                          １０．０
ステアリン酸                                      ５．０
これらの成分をブレンドし、そして圧縮して、錠剤（それぞれ、２４０ｍｇの重量）を形成する。
【００６１】
（処方実施例３）
以下の成分を含有する乾燥粉末吸入処方を調製する：
成分                                            重量％
活性成分                                          ５
ラクトース                                      ９５
この活性混合物をラクトースと混合し、その混合物を乾燥粉末吸入器に加える。
【００６２】
（処方実施例４）
以下のようにして、錠剤（各々は、３０ｍｇの活性成分を含有する）を調製する：
成分                                              量
（ｍｇ／錠剤）
活性成分                                        ３０．０ｍｇ
デンプン                                        ４５．０ｍｇ
微結晶セルロース                                   ３５．０ｍｇ
ポリビニルピロリドン                              ４．０ｍｇ
（１０％水溶液として）
カルボキシメチルデンプンナトリウム                ４．５ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム                          ０．５ｍｇ
タルク                                            １．０ｍｇ
全量                                              １２０ｍｇ
この活性成分、デンプンおよびセルロースをＮｏ．２０メッシュＵ．Ｓ．シーブに通し、そして十分に混合する。得られた粉末に、ポリビニルピロリドンの溶液を混合し、これを、次いで、１６メッシュＵ．Ｓ．シーブに通す。そのように製造した顆粒を５０〜６０℃で乾燥し、そして１６メッシュＵ．Ｓ．シーブに通す。次いで、この顆粒に、Ｎｏ．３０メッシュＵ．Ｓ．シーブに予め通したカルボキシメチルデンプンナトリウム、ステアリン酸マグネシウムおよびタルクを加え、これらを、混合後、錠剤機で圧縮して、錠剤（各々は、１２０ｍｇの重量である）を得る。
【００６３】
（処方実施例５）
以下のようにして、カプセル（各々は、４０ｍｇの医薬を含有する）を調製する：
成分                                          量
（ｍｇ／カプセル）
活性成分                                  ４０．０ｍｇ
デンプン                                １０９．０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム                    １．０ｍｇ
全量                                    １５０．０ｍｇ
この活性成分、デンプンおよびステアリン酸マグネシウムをブレンドし、Ｎｏ．２０メッシュＵ．Ｓ．シーブに通し、そして１５０ｍｇの量で、硬質ゼラチンカプセルに充填する。
【００６４】
（処方実施例６）
以下のようにして、坐剤（各々は、２５ｍｇの活性成分を含有する）を製造する：
成分                                          量
活性成分                                      ２５ｍｇ
飽和脂肪酸グリセリド                    ２，０００ｍｇ
この活性成分をＮｏ．６０メッシュＵ．Ｓ．シーブに通し、そして飽和脂肪酸グリセリド（これは、必要な最低限の熱を使用して、予め融解した）に懸濁させる。次いで、その混合物を、名目容量２．０ｇの坐剤金型に注ぎ、そして冷却させる。
【００６５】
（処方実施例７）
以下のようにして、懸濁液（各々は、５．０ｍｌ用量あたり、５０ｍｇの医薬を含有する）を製造する：
成分                                          量
活性成分                                ５０．０ｍｇ
キサンタンガム                            ４．０ｍｇ
カルボキシメチルセルロースナトリウム（１１％）
微結晶セルロース（８９％）              ５０．０ｍｇ
スクロース                                １．７５ｇ
安息香酸ナトリウム                      １０．０ｍｇ
香料および着色料                          ｑ．ｖ．
精製水                                    ５．０ｍｌまで
この医薬、スクロースおよびキサンタンガムをブレンドし、Ｎｏ．１０メッシュＵ．Ｓ．シーブに通し、次いで、微結晶セルロースおよびカルボキシメチルセルロースナトリウムの予め製造した水溶液と混合する。この安息香酸ナトリウム、香料および着色料を一部の水で希釈し、そして攪拌しつつ加える。次いで、十分な水を加えて、必要な容量を製造する。
【００６６】
（処方実施例８）
成分                                          量
（ｍｇ／カプセル）
活性成分                                １５．０ｍｇ
デンプン                              ４０７．０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム                  ３．０ｍｇ
全量                                  ４２５．０ｍｇ
この活性成分、デンプンおよびステアリン酸マグネシウムをブレンドし、Ｎｏ．２０メッシュＵ．Ｓ．シーブに通し、そして４２５ｍｇの量で、硬質ゼラチンに充填する。
【００６７】
（処方実施例９）
以下のようにして、静脈内処方物を調製し得る：
成分                                          量
活性成分                              ２５０．０ｍｇ
等張性生理食塩水                    １０００．０ｍｌ
（処方実施例１０）
以下のようにして、局所処方物を調製し得る：
成分                                          量
活性成分                                  １〜１０ｇ
乳化ワックス                                  ３０ｇ
液状パラフィン                                ２０ｇ
白色軟質パラフィン                          １００ｇまで
この白色軟質パラフィンを、溶融するまで加熱する。この液状パラフィンおよび乳化ワックスを混入し、そして溶解するまで攪拌する。この活性成分を加え、そして分散するまで、攪拌を継続する。次いで、その混合物を、固化するまで、冷却する。
【００６８】
本発明の方法で使用される他の好ましい処方物は、経皮送達装置（「パッチ」）を使用する。このような経皮パッチは、本発明の化合物を制御した量で連続または不連続に注入するために、使用され得る。薬剤を送達するための経皮パッチの構造および使用は、当該技術分野で周知である。例えば、米国特許第５，０２３，２５２号（これは、１９９１年６月１１日に登録され、その内容は、本明細書中で参考として援用されている）を参照。このようなパッチは、薬剤を連続送達、脈動送達または要求即応送達するように構成され得る。
【００６９】
望ましいか必要なとき、この医薬組成物を脳に導入するために、直接配置技術または間接配置技術が使用され得る。直接技術は、通常、血液脳関門を迂回するために、ホストの脳室系に薬剤送達カテーテルを配置することを包含する。身体の特定の解剖学的領域に生体因子を輸送するのに使用されるこのような移植可能送達系の１つは、米国特許第５，０１１，４７２号で記述され、その内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【００７０】
間接技術は、一般に、好ましいが、通常、親水性薬剤を脂質溶解性薬剤に変換することにより薬剤潜在化を与えるように組成物を処方することを包含する。潜在化は、一般に、その薬剤に存在している水酸基、カルボニル基、スルフェート基および第一級アミン基をブロックして、その薬剤をさらに脂質溶解性にするか血液脳関門を横切る輸送ができるようにすることにより、達成される。あるいは、親水性薬剤の輸送は、高張液（これは、血液脳関門を一時的に開くことができる）を動脈内注入することにより、高められ得る。
【００７１】
（用途）
本発明の化合物は、内皮細胞への白血球のインビボ付着（これは、少なくとも一部がα４インテグリン（好ましくは、ＶＬＡ−４）で媒介される）をα４インテグリン（好ましくは、ＶＬＡ−４）に競合結合することにより、阻止する。従って、本発明の化合物は、少なくとも一部がα４インテグリン（好ましくは、ＶＬＡ−４）または白血球の付着で媒介される哺乳動物の疾患を治療する際に使用できる。これらの疾患には、哺乳動物の炎症疾患、例えば、喘息、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、エイズ痴呆、糖尿病（急性若年性開始糖尿病を含めて）、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含めて）、多発性硬化症、関節リウマチ、組織移植、腫瘍転移、髄膜炎、脳炎、脳卒中および他の大脳外傷、腎炎、網膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、心筋虚血および急性白血球媒介肺傷害（例えば、成人呼吸困難症候群で起こるもの）が挙げられる。
【００７２】
哺乳動物に投与する量は、投与するもの、投与の目的（例えば、予防または治療）、患者の状態、投与様式などに依存して、変わる。治療用途では、組成物は、既に疾患に罹っている患者に、この疾患またはその合併症の症状を治癒するか少なくとも部分的に阻止するのに十分な量で、投与される。これを達成するのに十分な量は、「治療有効用量」として、定義される。この用途に有効な量は、治療する疾患、ならびに担当医の判断に依存しており、この判断は、炎症の重症度、患者の年齢、体重および一般的な健康状態などに依存している。
【００７３】
患者に投与する組成物は、上記医薬組成物の形態である。これらの組成物は、通常の滅菌技術により滅菌され得るか、または滅菌濾過され得る。得られた水溶液は、使用のためにそのまま包装され得るか、凍結乾燥され得、凍結乾燥した製剤は、投与前に、無菌水性担体と配合される。この化合物製剤のｐＨは、典型的には、３と１１の間、さらに好ましくは、５〜９、最も好ましくは、７〜８である。前述の賦形剤、担体または安定剤の一部を使用すると、医薬塩が形成されることが分かる。
【００７４】
本発明の化合物の治療投薬量は、例えば、その治療を行う特定の用途、この化合物の投与様式、患者の健康状態、および処方医の判断に従って、変わる。例えば、静脈内投与には、その用量は、典型的には、約２０μｇ〜約５００μｇ／体重１ｋｇ、好ましくは、約１００μｇ〜約３００μｇ／体重１ｋｇの範囲である。鼻内投与に適当な投薬範囲は、一般に、約０．１ｐｇ〜１ｍｇ／体重１ｋｇである。有効用量は、インビトロまたは動物モデル系から誘導した用量−応答曲線から外挿できる。
【実施例】
【００７５】
以下の合成および生物実施例は、本発明を例示するために提供されており、いずれの様式でも、本発明の範囲を限定するとは解釈されない。特に明記しない限り、全ての温度は、摂氏である。
【００７６】
ＡＵＣ＝曲線より下の面積
ｂｄ＝ブロード二重項
ｂｓ＝ブロード一重項
ＢＳＡ＝ウシ血清アルブミン
ｄ＝二重項
ＤＭＡＰ＝４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンエチルカルボジイミド塩酸塩
ＥＤＴＡ＝エチレンジアミン四酢酸
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
ＥｔＯＨ＝エタノール
ｅｑ．＝当量
ＦＡＣＳ＝蛍光標示式細胞分取器
ＦＩＴＣ＝フルオレセインイソチオシアネート
ｇ＝グラム
ｉ．ｐ．＝腹腔内
ｈ＝時間
ＨＢＳＳ＝ハンクス平衡塩類溶液
Ｈｃｔ＝ヘマトクリット値、すなわち、１容量の血液試料中で遠心分離することにより得られた濃縮赤血球の測定値
ＨＢまたはＨｂ＝ヘモグロビン
ＨＥＰＥＳ＝４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジン−エタンスルホン酸
ＩｇＧ  Ｆｃ＝イムノグロブリンの結合ドメイン
ｋｇ＝キログラム
Ｌ＝リットル
ｍ＝多重項（ＮＭＲデータと共に使用するとき）
Ｍ＝モル濃度
ＭＣＨ＝平均赤血球ヘモグロビン；Ｈｂ／ＲＢＣ
ＭＣＨＣ＝パーセントで表した平均赤血球ヘモグロビン数値；Ｈｂ／Ｈｃｔ
ＭＣＶ＝平均赤血球容量；赤血球の平均容量であって、これは、通常、１個の赤血球あたりの立方マイクロメートルで表わされる
ＭｅＯＨ＝メタノール
ｍｇ＝ミリグラム
ｍＬ＝ミリリットル
ｍｍ＝ミリメートル
ｍＭ＝ミリモル濃度
ｍｏｌ＝モル
ｍｍｏｌ＝モリモル
ｍｐｋ＝１キログラムあたりのミリグラム
Ｎ＝規定度
ｎｇ＝ナノグラム
ＰＢＳ＋＋＝リン酸緩衝生理食塩水
ｐｓｉ＝１平方インチあたりのポンド
ｑ．ｓ．またはＱ．Ｓ．＝容量にする
ＲｆｓまたはＲｆ＝保持因子
ｒｐｍ＝１分あたりの回転数
ｒｔまたはＲＴ＝室温
ｓ＝一重項
ｔ＝三重項
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ＴＬＣまたはｔｌｃ＝薄層クロマトグラフィー
μＬ＝マイクロリットル
μｇ＝マイクログラム
μｍ＝ミクロン
Ｖｔ＝全容量
ＷＢＣ＝白血球
ｗ／ｖ＝容量に対する重量
本発明の化合物は、スキーム１で図示し以下の方法で記述のように、調製され得る：
【００７７】
【化１３】
2005527628.tif 000010
（実施例１）
（Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製）
工程１：２，４−ジクロロ−５−ニトロピリミジン（２）の調製。５−ニトロウラシル（１）を、Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ（Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９５１，１５６５）の手順に従って、オキシ塩化リン（ＰＯＣｌ３）およびＮ，Ｎ−ジメチルアニリン（ＰｈＮＭｅ２）で処理して、化合物２を得た。化合物２はまた、Ｃｉｔｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ（Ｗｅｓｔ  Ｈａｖｅｎ，ＣＴ）から入手できる。
【００７８】
工程２：Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−ニトロピリミジン−４−イル）−Ｌ−チロシン第三級ブチルエステル（３）の調製。Ｌ−チロシン第三級ブチルエステル（Ｈ−Ｔｙｒ（ＯＨ）−ＯｔＢｕ）（３０．６ｇ、０．１２９ｍｏｌ）のＴＨＦ（２５０ｍＬ）溶液に、−１０℃で、添加の間に温度を５℃未満で保ちつつ、２，４−ジクロロ−５−ニトロピリミジン（２５ｇ、０．１２９ｍｏｌ）を加えた。一旦、この添加が完了すると、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＥｔｉＰｒ２Ｎ）（３３．７ｍＬ、０．１９４ｍｏｌ）を滴下した。−１０℃で１時間攪拌した後、ジエチルアミン（Ｅｔ２ＮＨ）（６６．７３ｍＬ、０．６４５ｍｏｌ）をゆっくりと加え、次いで、その反応混合物を、一晩にわたって、室温まで温めた。この反応混合物をジエチルエーテル（５００ｍＬ）で希釈し、その有機層を０．２Ｎクエン酸（３×１５０ｍＬ）、水（１×１５０ｍＬ）および１０％Ｋ２ＣＯ３（３×１５０ｍＬ）で洗浄した。この有機相を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして真空中で濃縮して、黄色残留物を得た。その残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル上の２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製して、黄色発泡体として、３７．３９ｇ（６７％）の化合物３を得た。Ｒｆ＝０．２１（シリカゲル上の２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）。
【００７９】
工程３：Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−ニトロピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン第三級ブチルエステル（４）の調製。Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−ニトロピリミジン−４−イル）−Ｌ−チロシン第三級ブチルエステル（３７．３９ｇ、０．０８７ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１５０ｍＬ）溶液に、ＤＭＡＰ（１０．５９ｇ、０．０８７ｍｏｌ）を加えた。５分後、トリエチルアミン（ＴＥＡ）（１８．１９ｍＬ、０．１３１ｍｏｌ）を滴下した。塩化１−ピロリジンカルバモイル（１４．４２ｍＬ、０．１３１ｍｏｌ）を滴下し、その反応物を、一晩にわたって、還流状態（４０℃）まで加熱した。この反応混合物を真空中で濃縮し、そしてＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で吸収した。その有機相を０．２Ｎクエン酸（３×１５０ｍＬ）、水（１×１５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（３×１５０ｍＬ）、ブライン（１×１５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして真空中で濃縮して、黄色固形物として、４３．０７ｇ（９４％）の化合物４を得た。Ｒｆ＝０．５（シリカゲル上の５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）。
【００８０】
工程４：Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−アミノピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン第三級ブチルエステル（５）の調製。ＥｔＯＨ（２００ｍＬ）中のＮ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−ニトロピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン第三級ブチルエステル（４３．０７ｇ、０．０８１ｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（４．３ｇ、１０重量％Ｐｄ）の混合物を、ＴＬＣ（シリカゲル上の５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で生成物に１００％変換されたことが示されるまで（４８時間）、４５ｐｓｉの水素下にて、振盪した。次いで、その反応混合物をセライトプラグで濾過し、そして真空中で濃縮して、紫色発泡体として、４０．２９ｇ（１００％）の化合物５を得た。Ｒｆ＝０．１１（シリカゲル上の６：１のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）。
【００８１】
工程５：Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニル−スルホニル）アミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン第三級ブチルエステル（６）の調製。Ｎ−（２−［Ｎ’、Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−アミノピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン第三級ブチルエステル（４０．２９ｇ、０．０８１ｍｏｌ）のピリジン（１６０ｍＬ）溶液を、ドライアイス／ＣＨ３ＣＮ浴で、−２０℃まで冷却した。その混合物を３０分間攪拌し、次いで、塩化４−クロロベンゼンスルホニル（１７．０６ｇ、０．０８１ｍｏｌ）をゆっくりと加えた。その反応物を、−２０℃〜−１５℃で、４時間攪拌し、次いで、一晩にわたって、室温まで温めた。この反応物をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）で希釈し、その有機相を０．２Ｎクエン酸（３×１５０ｍＬ）、水（１×１５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（３×１５０ｍＬ）、ブライン（１×１５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして真空中で濃縮して、褐色残留物を得た、この残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル上の５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製して、黄色発泡体として、４３．４９ｇ（８０％）の化合物６を得た。Ｒｆ＝０．３５（シリカゲル上の５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）。
【００８２】
工程６：Ｎ−（２−［Ｎ’、Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニル−スルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン第三級ブチルエチル（７）の調製。Ｎ−（２−［Ｎ’、Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニル−スルホニル）アミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン第三級ブチルエステル（４２．９２ｇ、０．０６４ｍｏｌ）のアセトン（Ｍｅ２ＣＯ）（６００ｍＬ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１２．７５ｇ、０．０９６ｍｏｌ）を加え、その混合物を、室温で、１時間攪拌した。次いで、ヨードエタン（ＥｔＩ）（７．７３ｍＬ、０．０９６ｍｏｌ）をゆっくりと加え、この反応混合物を、室温で、一晩攪拌した。この反応混合物を真空中で濃縮し、その残留物をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で吸収した。その有機相を水（２×３００ｍＬ）、ブライン（１×１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして真空中で濃縮した。この残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル上の２：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製して、白色固形物として、３７．３６ｇ（８５％）の化合物７を得た。Ｒｆ＝０．５３（シリカゲル上の５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）。
【００８３】
工程７：Ｎ−（２−［Ｎ’、Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン塩酸塩（８）の調製。Ｎ−（２−［Ｎ’、Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニル−スルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン第三級ブチルエステル（３６．２１ｇ、０．０５２ｍｏｌ）のギ酸溶液（５００ｍＬ）を、２時間にわたって、７０℃まで加熱し、次いで、真空中で濃縮した。その残留物を、再度、ギ酸（５００ｍＬ）に溶解し、そして７０℃で、再度、２時間加熱した。この溶液を容量を８０％減らし、次いで、少なくとも１当量の１．０Ｎ  ＨＣｌ（５２ｍＬ、０．０５２ｍｏｌ）で処理し、続いて、蒸留水（１００ｍＬ）で処理した。得られた不均一混合物を真空中で濃縮した。蒸留水（１００ｍＬ）を加え、この不均一混合物を真空中で濃縮した。後者の工程を２回繰り返して、濡れた白色生成物を得た。これを、４０℃（７日間）で高真空下に置くことにより乾燥して、自由流動白色固形物として、３２．８ｇ（９３％）の化合物８を得た。Ｒｆ＝０．２５（７／３のＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡ、逆相）。
【００８４】
【化１４】
2005527628.tif 000011
（実施例２）
（Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製）
実施例１と同様に、工程１、２、３、４、６および７を実行した。工程５は、塩化４−クロロベンゼンスルホニルに代えて、塩化４−フルオロベンゼンスルホニルを使用して、実行した。
【００８５】
【化１５】
2005527628.tif 000012
（実施例３）
（Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製）
実施例２と同様に、工程１、２、３、４、５および７を実行した。工程６は、ヨウ化エチルに代えて、硫酸ジメチルを使用して、実行した。
【００８６】
【化１６】
2005527628.tif 000013
（実施例４）
（Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製）
実施例１と同様に、工程１、２、３、４、５および７を実行した。工程６は、ヨウ化エチルに代えて、硫酸ジメチルを使用して、実行した。
【００８７】
【化１７】
2005527628.tif 000014
（実施例５）
（Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピペリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製）
実施例３と同様に、工程１、２、４、５、６および７を実行した。工程３は、塩化１−ピロリジンカルボニルに代えて、塩化１−ピペリジンカルボニルを使用して、実行した。
【００８８】
【化１８】
2005527628.tif 000015
（実施例６）
（Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピペリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製）
実施例２と同様に、工程１、２、４、５、６および７を実行した。工程３は、塩化１−ピロリジンカルボニルに代えて、塩化１−ピペリジンカルボニルを使用して、実行した。
【００８９】
【化１９】
2005527628.tif 000016
（実施例７）
（Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製）
実施例２と同様に、工程１、２、４、５、６および７を実行した。工程３は、以下の手順に従って、実行した。
【００９０】
【化２０】
2005527628.tif 000017
Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−ニトロピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン第三級ブチルエステルの代替調製。化合物３（２４．９ｇ、０．０５７８ｍｏｌ）およびクロロギ酸４−ニトロフェニル（１１．７ｇ、０．０５７８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３００ｍＬ）−１５℃攪拌溶液に、その反応混合物の温度が−１０℃を超えないような速度で、トリエチルアミン（２４．２ｍＬ、０．１７３ｍｏｌ）を加えた。２０分間攪拌した後、アゼチジン（３．３０ｇ、０．０５７８ｍｍｏｌ）を滴下し、この反応混合物を室温まで温め、そして一晩攪拌した。この反応混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）およびヘキサン（１００ｍＬ）で希釈し、次いで、その水相に黄色（４−ニトロフェノール）が見えなくなるまで、１０％Ｋ２ＣＯ３水溶液で繰り返し抽出した。その有機層をブライン（７５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして蒸発させて、２８．５ｇ（９６％）の黄色固形物として、Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−ニトロピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニン第三級ブチルエステルを得、これを、さらに精製することなく、使用した。Ｒｆ＝０．１７（シリカゲル上の２：５のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）。
【００９１】
（実施例８）
（Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製）
実施例７と同様に、工程１、２、３、４、５および７を実行した。工程６は、ヨウ化エチルに代えて、硫酸ジメチルを使用して、実行した。
【００９２】
【化２１】
2005527628.tif 000018
（実施例９）
（Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製）
実施例８と同様に、工程１、２、３、４、６および７を実行した。工程５は、塩化４−フルオロベンゼンスルホニルに代えて、塩化４−クロロベンゼンスルホニルを使用して、実行した。
【００９３】
【化２２】
2005527628.tif 000019
（実施例１０）
（Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製）
実施例７と同様に、工程１、２、３、４、６および７を実行した。工程５は、塩化４−フルオロベンゼンスルホニルに代えて、塩化４−クロロベンゼンスルホニルを使用して、実行した。
【００９４】
【化２３】
2005527628.tif 000020
（実施例１１）
（Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製）
実施例３と同様に、工程１、２、３、４、６および７を実行した。工程５は、塩化４−フルオロベンゼンスルホニルに代えて、塩化２，４−ジフルオロベンゼンスルホニルを使用して、実行した。
【００９５】
【化２４】
2005527628.tif 000021
（実施例１２）
（Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製）
実施例２と同様に、工程１、２、３、４、６および７を実行した。工程５は、塩化４−フルオロベンゼンスルホニルに代えて、塩化２，４−ジフルオロベンゼンスルホニルを使用して、実行した。
【００９６】
【化２５】
2005527628.tif 000022
（実施例１３）
（Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−メチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製）
実施例１１と同様に、工程１、２、４、５、６および７を実行した。工程３は、実施例７と同様に、実行した。
【００９７】
【化２６】
2005527628.tif 000023
（実施例１４）
（Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−エチルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製）
実施例１２と同様に、工程１、２、４、５、６および７を実行した。工程３は、実施例７と同様に、実行した。
【００９８】
【化２７】
2005527628.tif 000024
（実施例１５）
（Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製）
実施例２と同様に、工程１、２、３、４、５および７を実行した。工程６は、ヨウ化エチルに代えて、臭化プロパルギルを使用して、実行した。
【００９９】
【化２８】
2005527628.tif 000025
（実施例１６）
（Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製）
実施例１１と同様に、工程１、２、３、４、５および７を実行した。工程６は、硫酸ジメチルに代えて、臭化プロパルギルを使用して、実行した。
【０１００】
【化２９】
2005527628.tif 000026
（実施例１７）
（Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（２，４−ジフルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製）
実施例１６と同様に、工程１、２、４、５、６および７を実行した。工程３は、実施例７と同様に、実行した。
【０１０１】
【化３０】
2005527628.tif 000027
（実施例１８）
（Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−フルオロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（アゼチジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製）
実施例７と同様に、工程１、２、３、４、５および７を実行した。工程６は、ヨウ化エチルに代えて、臭化プロパルギルを使用して、実行した。
【０１０２】
【化３１】
2005527628.tif 000028
（実施例１９）
（Ｎ−（２−［Ｎ’，Ｎ−ジエチルアミノ］−５−［Ｎ”−（４−クロロフェニルスルホニル）−Ｎ”−プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イル）−４’−（ピロリジン−１−イルカルボニルオキシ）−Ｌ−フェニルアラニンの調製）
実施例１と同様に、工程１、２、３、４、５および７を実行した。工程６は、ヨウ化エチルに代えて、臭化プロパルギルを使用して、実行した。
【０１０３】
【化３２】
2005527628.tif 000029
本発明の化合物を試験するために、以下の方法が使用され得る。
【０１０４】
（実施例Ａ）
（α４β１インテグリン接着アッセイ：ヒト血漿フィブロネクチンに対するＪｕｒｋａｔＴＭ細胞接着）
（手順：）
９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ  ３５９０  ＥＩＡプレート）を、１０μｇ／ｍＬの濃度で４℃でのヒトフィブロネクチン（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ、カタログ番号３３０１６−０２３）で一晩、コートした。次いで、このプレートを、生理食塩水中のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ；０．３％）の溶液でブロックした。ＪｕｒｋａｔＴＭ細胞（対数期増殖で維持される）を、製造業者の指示書に従って、Ｃａｌｃｅｉｎ  ＡＭで標識し、Ｈｅｐｅｓ／Ｓａｌｉｎｅ／ＢＳＡ中で２×１０６細胞／ｍＬの濃度に懸濁した。次いで、細胞を、室温で３０分間、試験化合物およびコントロール化合物に曝し、その後、フィブロネクチン被覆プレートの個々のウェルに移した。３７℃で３５分間、吸着させた。次いで、ウェルを、新鮮な生理食塩水を用いて穏やかに吸引およびピペッティングすることによって洗浄した。残存吸着細胞に関する蛍光を、ＥＸ４８５／ＥＭ５３０で蛍光プレートリーダーを使用して定量した。
【０１０５】
細胞培養物を、定常期のＪｕｒｋａｔＴＭ細胞を、第１日に１：１０にまず分割し、そして第２日に１：２に分割することによって調製して、第３日にアッセイを実施した。第１日に１：１０に分割された細胞を、第４日のアッセイのために、第３日に１：４に分割した。
【０１０６】
アッセイプレートを、ＰＢＳ＋＋中にＧｉｂｃｏ／ＢＲＬヒトフィブロネクチン（カタログ番号３３０１６−０２３）の作業溶液を１０μｇ／ｍＬでまず作製することによって、調製した。次いで、Ｃｏｓｔａｒ  ３５９０  ＥＩＡプレートを、室温で２時間、５０μＬ／ウェルでコートした（が、これをまた、４℃で一晩放置し得る）。最終的に、プレートを、ＲＴで１時間、Ｈｅｐｅｓ／生理食塩水緩衝液（１００μＬ／ウェル）を用いて吸引およびブロックし、その後、１５０μＬのＰＢＳ＋＋で３回洗浄した。
【０１０７】
化合物の希釈を、以下のように、化合物の１：３連続希釈物を調製することによって達成した。各プレート（４化合物／プレート）について、６００μＬを、Ｔｉｔｅｒｔｕｂｅラック中の４本のＢｉｏ−Ｒａｄ  Ｔｉｔｅｒｔｕｂｅに添加した。十分な化合物を、各適切なチューブに添加し、当該分野で周知の技術を使用して２×濃度にした。Ｆａｌｃｏｎ  Ｆｌｅｘｉｐｌａｔｅを使用して、１００μＬのＨｅｐｅｓ／生理食塩水緩衝液またはヒト血清を、列Ｂ〜Ｇに添加した。１８０μＬに設定されたマルチチャネルピペッターを、４つのチップが等しく間隔を空けられたピペッターと共に使用した。各４つのチューブのセットを、５回混合し、１８０μＬの２×化合物を、列Ｂ中の各化合物の希釈物の第１の行に移し、列Ａを空のままにした。１８０μＬを、列Ａの他のウェルに添加した。連続希釈を、５０μＬを次の希釈物に移し、そして５回混合し、混合のたびにチップを交換することによって、プレートを下降した。希釈を、列Ｆで停止した。列Ｇには、化合物は存在しなかった。
【０１０８】
Ｈｅｐｅｓ／生理食塩水緩衝液またはヒト血清中の２１／６抗体の２０μｇ／ｍＬ溶液は、ポジティブコントロールであり、細胞懸濁物プレートに添加するために試薬槽に取っておいた。
【０１０９】
細胞染色を、５０ｍＬチューブ中での遠心分離（１１００ｒｐｍ、５分間）によって、対数期ＪｕｒｋａｔＴＭ細胞をまず回収することによって、達成した。細胞を、５０ｍＬ  ＰＢＳ＋＋中に再懸濁し、遠心分離し、そして２０ｍＬ  ＰＢＳ＋＋中に再懸濁した。細胞を、ＲＴで３０分間、２０μＬのＣａｌｃｅｉｎ  ＡＭを添加することによって染色した。容量を、Ｈｅｐｅｓ／生理食塩水緩衝液で５０ｍＬにまでし、細胞を計数し、遠心分離し、Ｈｅｐｅｓ／生理食塩水緩衝液またはヒト血清中に２×１０６細胞／ｍＬまで再懸濁した。
【０１１０】
化合物を、以下の手順を使用してインキュベートした。新規のフレキシプレートにおいて、６５μＬの染色細胞を、列Ｂ〜Ｈに添加した。次いで、６５μＬの２×化合物を、プレートの設定の後、適切な列に添加し、３回混合した。６５μＬの２×−２１／６抗体を、列Ｈに添加し、３回混合した。最後に、プレートを、室温で３０分間インキュベートした。
【０１１１】
フィブロネクチン接着を、以下のワークアップ手順の後に、ＥＸ  ４８５／ＥＭ  ５３０で蛍光プレートリーダーを使用して測定した。インキュベーション後、細胞を３回混合し、１００μＬを、フィブロネクチン被覆プレートに移し、３７℃にて約３５分インキュベートした。各プレートを、１００μＬのＲＴ．ＰＢＳ＋＋をウェルの側面の下で穏やかにピペッティングし、プレートを９０回転させて吸引することにより、一列ずつ洗浄した。この手順を、合計３回の手順につき繰り返した。壁の側面の下でピペッティングすることにより洗浄した後、各ウェルに１００μＬを満たした。
【０１１２】
ＩＣ５０値を、ヒト血清の存在下およびヒト血清の非存在下の両方において、各化合物について計算した。ＩＣ５０は、増殖または活性が５０％まで阻害される濃度である。データを、以下の表に示す。
（ヒト血漿フィブロネクチンに対する細胞接着（ヒト血清なし））
【０１１３】
【表２】
2005527628.tif 000030
2005527628.tif 000031
2005527628.tif 000032
（ヒト血漿フィブロネクチンに対する細胞接着（ヒト血清を含む））
（実施例Ｂ：候補化合物のα４β１への結合を決定するためのインビトロ飽和アッセイ）
以下は、実験的自己免疫脳脊髄炎（「ＥＡＥ」）モデル（次の実施例に記載される）または他のインビボモデルにおいて化合物が活性であるために必要とされる血漿レベルを決定するためのインビトロアッセイを記載する。
【０１１４】
対数増殖期のＪｕｒｋａｔ細胞を洗浄し、通常動物血漿（２０μｇ／ｍＬの１５／７抗体（Ｙｅｄｎｏｃｋら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，（１９９５）２７０（４８）：２８７４０）を含む）中に再懸濁する。
【０１１５】
そのＪｕｒｋａｔ細胞を、６６μＭ〜０．０１μＭの範囲の種々の濃度（標準曲線のために、標準的な１２点の連続希釈を使用する）の、既知の候補化合物量を含む通常血漿サンプルまたは候補化合物処置動物の末梢血から得た血漿サンプルのいずれかへ、２倍希釈する。
【０１１６】
次いで、細胞を室温にて３０分インキュベートし、２％  ウシ胎仔血清および塩化カルシウムおよび塩化マグネシウム各々１ｍＭを含むリン酸緩衝化生理食塩水（「ＰＢＳ」）（アッセイ培地）で２回洗浄して、非結合１５／７抗体を除去する。
【０１１７】
次いで、その細胞を、フィコエリトリン結合体化ヤギＦ（ａｂ’）２抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ，Ｗｅｓｔｂｒｏｏｋ，ＭＥ）（これは、研究している動物種に由来する５％血清と１：２００で同時インキュベートすることによって、任意の非特異的交差反応性を吸着させた）に曝し、４℃にて３０分遮光してインキュベートした。
【０１１８】
細胞をアッセイ培地で２回洗浄し、このアッセイ培地に再懸濁する。次いで、これらを、Ｙｅｄｎｏｃｋら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９５，２７０：２８７４０に記載されるように、標準的な蛍光活性化セルソーター（「ＦＡＣＳ」）分析により分析する。
【０１１９】
次いで、そのデータを、例えば、通常の用量応答様式において、蛍光  対  用量としてグラフにする。その曲線の上のプラトーを生じるその用量レベルは、インビボモデルにおいて効力を得るために必要とされるレベルを示す。
【０１２０】
（実施例Ｃ：バイオアベイラビリティーを決定するためのカセット投薬および血清分析）
経口バイオアベイラビリティーを、ラットにカセット（すなわち、投薬溶液あたり６種の化合物の混合物）を投薬することによりスクリーニングした。このカセットは、合計用量１０ｍｇ／ｋｇにつき５種の試験物質および標準化合物を含んでいた。各化合物／試験物質を、等モル量の１Ｎ  ＮａＯＨでナトリウム塩に変換し、２ｍｇ／ｍＬにて水に溶解した。そのカセットを、等容量の各６つの溶液を混合することによって調製した。カセット投薬溶液を十分に混合し、次いで、そのｐＨを７．５〜９に調節した。その投薬溶液を、研究の前日に調製し、室温にて一晩攪拌した。
【０１２１】
６〜８週齡の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから）を、このスクリーニングに使用した。少なくとも１日、ラットを隔離し、飼料および水を連続して接近させた。カセットの投与前の夜に、そのラットを約１６時間絶食させた。
【０１２２】
４匹のＳＤラットを、各カセットに割り当てた。単一用量の投薬溶液を、各ラットに経口投与した。投薬容量（５ｍＬ／ｋｇ）および時間を記録し、投薬の２時間後に、ラットに給餌した。
【０１２３】
血液サンプルを、以下の時点で心臓穿刺によって回収した：４時間、８時間および１２時間。血液回収直前に、１０〜２０秒以内で、ＣＯ２気体でラットを麻酔した。１２時間のサンプルを回収した後、そのラットを、ＣＯ２窒息により安楽死させ、その後、頚椎脱臼を行った。
【０１２４】
血液サンプルを、処理するまで、周囲より低い温度（ｓｕｂ−ａｍｂｉｅｎｔ  ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）（４℃）下でヘパリン添加した微量試験管（ｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ  ｔｕｂｅ）中に維持した。血液サンプルを遠心分離し（１００００ｒｐｍで５分間）、血漿サンプルを取り出し、薬物レベルについて分析するまで、−２０℃の冷凍庫中で保存した。血漿中の薬物レベルを、直接血漿沈澱のための以下のプロトコルを使用して分析した。
【０１２５】
そのインビボ血漿サンプルを、順に、１００μＬの試験血漿、１５０μＬのメタノールを添加し、その後、１０〜２０秒間ボルテックスすることによって、１．５ｍＬの９６ウェルプレート中に調製した。１５０μＬのアセトニトリル中の内部標準０．０５ｎｇ／μＬを添加し、３０秒間ボルテックスした。
【０１２６】
標準曲線サンプルを、順に、１００μＬのコントロールマウス血清、続いて１５０μＬのメタノールを添加し、１０〜２０秒間ボルテックスすることによって１．５ｍＬの９６ウェルプレート中に調製した。１５０μＬのアセトニトリル中の内部標準０．０５ｎｇ／μＬを添加し、３０秒間ボルテックスした。そのサンプルを、５０％メタノール中の目的の化合物０〜２００ｎｇ（１０の濃度）でスパイクして、０．５ｎｇ／ｍＬ〜２，０００ｎｇ／ｍＬの範囲の標準曲線を得た。再び、そのサンプルを、３０秒間ボルテックスした。
【０１２７】
次いで、サンプルを、エッペンドルフ微量遠心チューブ（ｍｉｃｒｏｆｕｇｅ）中で２０〜３０秒間、３０００ｒｐｍで遠心分離し、その後、８０〜９０％の上清を、清浄な９６ウェルプレート中に移した。次いで、サンプルが乾燥するまで、有機溶媒をエバポレートした（Ｎ２下で、４０℃／３０〜６０分（ＺｙｍａｒｋＴｕｒｂｏｖａｐ））。
【０１２８】
次いで、その残渣を、２００〜６００μＬの移動相（５０％  ＣＨ３ＯＨ／０．１％  ＴＦＡ）中に溶解した。次いで、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを、ＰＥ−Ｓｃｉｅｘ  ＡＰＩ−３０００三連四重極型質量分析機（ＳＮ０７４９７０７）、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ，Ｓｅｒｉｅｓ２００自動サンプラー、および島津１０Ａポンプを使用して実施した。獲得を、ＰＥ−Ｓｃｉｅｘ  Ａｎａｌｙｓｔ（ｖ１．１）で行い、データ分析および定量を、ＰＥ−Ｓｃｉｅｘ  Ａｎａｌｙｓｔ（ｖ１．１）を使用して達成した。５〜５０μＬのサンプル容量を、２５％  ＣＨ３ＯＨ、０．１％  ＴＦＡ〜１００％  ＣＨ３ＯＨ、０．１％  ＴＦＡの移動相を使用して、逆相ＴｈｅｒｍｏＨｙｐｅｒｓｉｌ  ＤＡＳＨ−１８カラム（Ｋｅｙｓｔｏｎｅ  ２．０×２０ｍｍ、５μｍ、ＰＮ：８８２３０２５−７０１）に注入した。実施時間は、約３００μＬ／分の流速で約８分であった。
【０１２９】
曲線下面積（ＡＵＣ）を、ｔ＝０から最後のサンプリング時間ｔｘまで、線形の台形公式を使用して計算した（Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，Ｗｏｌｆｇａｎｇ  Ａ．ＲｉｔｓｃｈｅｌおよびＧｒｅｇｏｒｙ  Ｌ．Ｋｅａｒｎｓ，第５版，１９９９を参照のこと）。
【０１３０】
ＡＵＣ０→ｔｘ＝Ｓ（（Ｃｎ＋Ｃｎ＋１）／２））×（ｔｎ＋１−ｔｎ）［（μｇ／ｍＬ）ｈ］
カセット投薬パラダイム（血管外投薬の４時間後、８時間後、および１２時間後のサンプル）の場合、そのＡＵＣを、ｔ＝０〜ｔ＝１２時間まで計算した。そのＡＵＣ０→１２時間値を、各個々の動物について計算し、平均ＡＵＣ０→１２時間を、以下の表に報告する。
【０１３１】
【表３】
2005527628.tif 000033
（実施例Ｄ：喘息モデル）
α４β１インテグリンにより媒介される炎症状態としては、例えば、好酸球流入、気道過剰応答および慢性喘息とともに生じる閉塞が挙げられる。以下は、喘息の処置において使用するための本発明の化合物のインビボ効果を研究するために使用した喘息の動物モデルを記載する。
【０１３２】
（ラット喘息モデル）
このモデルは、ともにそれらの全体が本明細書中に参考として援用されるＣｈａｐｍａｎら，Ａｍ  Ｊ．Ｒｅｓｐ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ，．１５３  ４，Ａ２１９（１９９６）およびＣｈａｐｍａｎら，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐ．Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １５５：４，Ａ８８１（１９９７）によって記載される手順に従う。オボアルブミン（ＯＡ；１０ｍｇ／ｍＬ）を水酸化アルミニウム（１０ｍｇ／ｍＬ）と混合し、０日目にＢｒｏｗｎ  Ｎｏｒｗａｙラットに注射した（ｉ．ｐ．）。アジュバントと一緒のＯＡの注射を、７日目および１４日目に繰り返した。２１日目に、感作した動物を、プラスチックチューブに再拘束し、鼻のみの露出システム中で、ＯＡ（１０ｍｇ／ｋｇ）のエアロゾルに曝した（６０分）。動物を、ペントバルビタール（２５０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）で７２時間後に屠殺する。肺を、３つのアリコート（４ｍＬ）のハンクス溶液（ＨＢＳＳ×１０、１００ｍＬ；ＥＤＴＡ  １００ｍＭ、１００ｍＬ；ＨＥＰＥＳ  １Ｍ、２５ｍＬ；Ｈ２Ｏで１Ｌにした）を使用して、気管カニューレによって洗浄し；回収した細胞をプールし、回収した流体の総容量を、ハンクス溶液を添加することによって１２ｍＬに調節した。総細胞を計数し（ＳｙｓｍｅｘマイクロセルカウンターＦ−５００、ＴＯＡ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ  Ｏｔｄ．，Ｊａｐａｎ）、スメアを、回収した流体を希釈（約１０６細胞／ｍＬに）、遠心管（Ｃｙｔｏｓｐｉｎ，Ｓｈａｎｄｏｎ，  Ｕ．Ｋ．）中でアリコート（１００μＬ）をピペッティングすることによって作製した。スメアを風乾し、メタノール中のファストグリーン溶液（２ｍｇ／ｍＬ）を使用して５秒間固定し、好酸球、好中球、マクロファージおよびリンパ球を区別するために、エオシンＧ（５秒）およびチアジン（５秒）（Ｄｉｆｆ−Ｑｕｉｃｋ，Ｂｒｏｗｎｅ  Ｌｔｄ．Ｕ．Ｋ．）で染色した。１スメアあたり計５００細胞を、油浸下で光学顕微鏡により計数した（×１００）。本発明の化合物を、０．５％カルボキシメチルセルロースおよび２％Ｔｗｅｅｎ８０懸濁液中に処方し、アレルゲンであるオボアルブミンに感作したラットに経口投与した。能動的に感作したＢｒｏｗｎ  Ｎｏｒｗａｙラットの気道におけるアレルゲン誘導性白血球蓄積を阻害した化合物を、このモデルにおいて活性であるとみなした。
【０１３３】
（マウス喘息モデル）
化合物をまた、それらの全体が各々本明細書中に参考として援用されるＫｕｎｇら，Ａｍ  Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１３：３６０−３６５，（１９９５）およびＳｃｈｎｅｉｄｅｒら，（１９９９）、Ａｍ  Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０：４４８−４５７，（１９９９）により記載される手順の後に、急性肺炎症のマウスモデルにおいて評価した。雌性Ｂｌａｃｋ／６マウス（８〜１２週齡）を、２０μｇのｏｖａ（Ｇｒａｄｅ  ４，Ｓｉｇｍａ）および２ｍｇの注射用ミョウバン（Ｐｉｅｒｃｅ）を含む０．２ｍＬ  ｏｖａ／ミョウバン混合物の腹腔内注射（ｉ．ｐ．）により、１日目に感作した。追加免疫注射を、１４日目に投与した。２８日目および２９日目に、２０分間、エアロゾル化１％  ｏｖａ（０．９％生理食塩水中）でマウスをチャレンジした。マウスを安楽死させ、気管支洗浄液サンプル（３ｍＬ）を３０日目（最初のチャレンジの４８時間後）に回収する。好酸球を、ＦＡＣｓ／ＦＩＴＣ染色法により定量した。本発明の化合物を、０．５％カルボキシメチルセルロースおよび２％Ｔｗｅｅｎ８０懸濁液に処方し、アレルゲンであるオボアルブミンに感作したマウスに経口投与した。能動的に感作したＣ５７ＢＬ／６マウスの気道におけるアレルゲン誘導性白血球蓄積を阻害した化合物を、このモデルにおいて活性であるとみなした。
【０１３４】
（ヒツジ喘息モデル）
このモデルは、ともに、それらの全体が本明細書中に参考として援用されるＡｂｒａｈａｍら，Ｊ．Ｃｌｉｎ，Ｉｎｖｅｓｔ，９３：７７６−７８７（１９９４）およびＡｂｒａｈａｍら，Ａｍ  Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １５６：６９６−７０３（１９９７）により記載される手順に従う。本発明の化合物を、Ａｓｃａｒｉｓ  ｓｕｕｍ抗原に過敏性のヒツジへの静脈内投与(生理食塩水溶液)、経口投与（２％Ｔｗｅｅｎ８０、０．５％カルボキシメチルセルロース）、およびエアロゾル投与により評価した。早期の抗原誘導性気管支応答を減少させ、そして／または遅延相の気道応答をブロックする（例えば、抗原誘導性後期応答および気道過剰応答（「ＡＨＲ」）に対する防御効果を有する）化合物を、このモデルにおいて活性であるとみなす。
【０１３５】
吸入したＡｓｃａｒｉｓ  ｓｕｕｍ抗原に対して早期および後期両方の気管支応答を発生することを示すアレルギーのヒツジを使用して、候補化合物の気道に対する効果を研究した。２％リドカインを用いた鼻経路の局所麻酔の後に、バルーンカテーテルを、一方の鼻孔を通して下部食道へと進めた。次いで、その動物を、もう一方の鼻孔を通して、ガイドとして可撓性光ファイバー気管支鏡を用いて、カフを漬けた気管内チューブとともに放置した。
【０１３６】
Ａｂｒａｈａｍ（１９９４）に従って、肺の圧力を予測した。エアロゾル（以下の処方物を参照のこと）を、Ａｎｄｅｒｓｅｎカスケードインパクターで決定されるように、３．２μｍの集団中央値（ｍａｓｓ  ｍｅｄｉａｎ）空力学的直径を有するエアロゾルを提供する使い捨て医療用ネブライザを使用して生成した。そのネブライザを、ソレノイドバルブおよび圧縮空気（２０ｐｓｉ）の供給源からなる線量計システムに接続した。ネブライザの出力を、プラスチックＴ字型部品（Ｔ−ｐｉｅｃｅ）に向けた。このＴ字型部品の一方の端部は、ピストン型人工呼吸装置の吸息ポートに接続した。そのソレノイドバルブを、人工呼吸装置の吸息サイクルの初めに１秒間作動させた。エアロゾルを、５００ｍＬのＶＴおよび２０回呼吸／分の速度で送達した。０．５％重炭酸水素ナトリウム溶液のみを、コントロールとして使用した。
【０１３７】
気管支応答性を評価するために、カルバコールに対する累積濃度応答曲線を、Ａｂｒａｈａｍ（１９９４）に従って作成した。処置開始の前および後、および抗原チャレンジの２４時間後に、気管支生検を行った。気管支生検を、Ａｂｒａｈａｍ（１９９４）に従って行った。
【０１３８】
肺胞のマクロファージのインビトロ接着研究もまた、Ａｂｒａｈａｍ（１９９４）に従って行い、接着細胞の百分率を計算した。
【０１３９】
（エアロゾル処方）
３０．０ｍｇ／ｍＬの濃度にて０．５％重炭酸ナトリウム／生理食塩水（ｗ／ｖ）中の候補化合物の溶液が、以下の手順を用いて調製される：
（Ａ．０．５％重炭酸ナトリウム／生理食塩水保存溶液の調製：１００．０ｍＬ）
【０１４０】
【表４】
2005527628.tif 000034
手順：
１．０．５ｇの重炭酸ナトリウムを１００ｍＬメスフラスコ中に加える。
２．およそ９０．０ｍＬの生理食塩水を加え、溶解するまで超音波処理する。
３．生理食塩水で１００．０ｍＬまで満たし、完全に混合する。
【０１４１】
（Ｂ．３０．０ｍｇ／ｍＬ候補化合物の調製：１０．０ｍＬ）
【０１４２】
【表５】
2005527628.tif 000035
手順：
１．０．３００ｇの候補化合物を１０．０ｍＬのメスフラスコ中に加える。
【０１４３】
２．およそ９．７ｍＬの０．５％重炭酸ナトリウム／生理食塩水保存溶液を加える。
【０１４４】
３．候補化合物が完全に溶解するまで超音波処理する。
【０１４５】
４．０．５％重炭酸ナトリウム／生理食塩水保存溶液で１０．０ｍＬまで満たし、完全に混合する。
【０１４６】
（実施例Ｅ）
（Ｃ５７Ｂ６マウスにおける１０日間の毒性研究）
１０日間の研究を、雌Ｃ５７Ｂ６マウスに対する本発明の化合物の毒性を評価するために行った。この化合物を、５段階の投薬レベル（０（ビヒクルコントロール）、１０、３０、１００、３００および１０００ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ））にて、各々の投薬レベルで５匹のマウスを用いて、胃管栄養法によって投与した。すべてのレベルについての投与容量は、１０ｍＬ／ｋｇであった。投薬溶液または懸濁液を、０．５％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）中２％Ｔｗｅｅｎ８０において調製し、新しい投薬溶液または懸濁液を、２〜３日おきに調製した。生態観察は、体重（研究日：１、２、３、５、７、８および１１日目）、毎日のケージの外からの臨床観察（１〜２回／日）ならびに周期的（研究日：１、２および９日目）機能的観察バッテリーを含んだ。
【０１４７】
末期には、血液サンプルを、臨床の病状（血液および臨床化学）ならびに薬物レベルに対して、心臓穿刺によって集めた。ＥＤＴＡ血液サンプルを、全白血球数、赤血球数、ヘモグロビン、ヘマトクリット値、赤血球指数（ＭＣＶ、ＭＣＨ、ＭＣＨＣ）、血小板および白血球の５要素特異形態（好中球、リンパ球、単核球、好酸球および好塩基球）について分析した。ヘパリン化した血漿サンプルを、アラニンアミナーゼ、アスパラギン酸アミナーゼ、アルカリホスファターゼ、全ビリルビン、アルブミン、タンパク質、カルシウム、グルコース、尿素窒素、クレアチニン、コレステロールおよびトリグリセリドについて分析した。
【０１４８】
血液収集後、死体を剖検し、器官（肝臓、脾臓、腎臓、心臓および胸腺）を重量測定した。組織サンプル；脳、唾液腺、胸腺、心臓、肺、肝臓、腎臓、副腎脾臓、胃、十二指腸、回腸、結腸および子宮／卵巣を収集し、ホルマリン固定した。ビヒクルコントロールならびに３００ｍｐｋおよび１０００ｍｐｋ群の動物由来の組織をＨ＆Ｅ染色スライドガラスに処理し、組織病理学的病巣について評価した。
【０１４９】
体重変化、絶対的器官重量および相対的器官重量ならびに臨床的病状の結果を、Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いるＤｕｎｎｅｔの複数比較検定によってビヒクルコントロールと比較して統計上の有意差について分析した。機能的観察バッテリーの結果を、ＳＡＳソフトウェアを用いるＣｏｃｈｒａｎ−Ｍａｎｔｅｌ−Ｈａｅｎｓｚｅｌ相関検定によって、Ｄｕｎｎｅｔ、Ｆｉｓｈｅｒの正確確率検定および投薬傾向効果を使用して差異について分析した。
【０１５０】
従来の経口処方物を用いると、本発明の化合物は、このモデルにおいて活性である。
【０１５１】
（実施例Ｆ）
（ラットにおけるアジュバント誘導性関節炎）
アジュバント誘導性関節炎（「ＡＩＡ」）は、慢性関節リウマチ（ＲＡ）の研究において有用な動物モデルであり、慢性関節リウマチは、Ｌｅｗｉｓラットの尾の基部においてＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓを注入することにより誘導される。注射の後１０日間〜１５日間の間、動物は、重篤な、進行性のリウマチを発症する。
【０１５２】
一般に、化合物を、ラットにおけるアジュバンド誘導水腫由来の後足腫脹および骨損傷を変化させる能力について試験する。ＡＩＡ由来の後足腫脹の阻害を定量化するために、炎症の２つの相が規定される：（１）第１の注射された後足および第２の注射された後足、ならびに（２）第２の注射されない後足、これは一般に注射された足における炎症の誘導から１１日頃に発症し始める。後者の型の炎症の軽減は、免疫抑制性活性の指標である。Ｃｈａｎｇ，Ａｒｔｈ．Ｒｈｅｕｍ．，２０，１１３５〜１１４１（１９７７）を参照のこと。
【０１５３】
ＡＩＡのようなＲＡの動物モデルを使用することによって、疾患の初期段階に関与する細胞事象を研究することが可能になる。マクロファージおよびリンパ球におけるＣＤ４４発現が、アジュバント関節炎の初期の発症の間にアップレギュレーションされ、一方ＬＦＡ−１発現が、疾患の発症の後期にアップレギュレーションされる。アジュバント関節炎の最も初期の段階にて、接着分子と内皮との間の相互作用を理解することが、ＲＡの処置に用いられる方法において有意な進歩に導き得る。
【国際調査報告】
2005527628.tif 000042