(57)【要約】α４インテグリンまたはα４インテグリンを含む二量体に特異的に結合する薬剤の投与により、患者の病的炎症を長期的に低減する方法を開示する。提供する薬剤は投与により病的炎症が十分に抑制されるような結合親和力を有するものでなければならず、該薬剤を、病的炎症を長期に抑制するために長期間投与する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
病的炎症を長期的に低減することを必要とする患者における病的炎症を低減する方法であって、
α４インテグリンを阻害する、または、α４インテグリンを含む二量体を阻害する、患者に治療上有効な量の薬剤を、長期投与する工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
前記長期投与が少なくとも６か月間にわたることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記長期投与が少なくとも１２か月間にわたることを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項４】
α４インテグリンまたはα４インテグリンを含む二量体に結合するように前記薬剤が繰り返して投与され、前記投与により患者における病的炎症を長期的に抑制するのに十分なレベルのα４インテグリン受容体飽和が維持されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記患者におけるα４インテグリン受容体飽和が少なくとも約６５％〜約１００％となるように前記薬剤が繰り返して投与されることを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記飽和が少なくとも７５％であることを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記飽和が少なくとも８０％であることを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記薬剤がα４インテグリン二量体に結合することを特徴とする請求項１乃至請求項４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記薬剤がモノクローナル抗体またはその免疫活性な断片であることを特徴とする請求項１乃至請求項４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記モノクローナル抗体がナタリズマブであることを特徴とする請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記α４インテグリン二量体がα４β１であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記薬剤が少なくとも１つのα４インテグリン二量体受容体を飽和させるのに十分な量で投与され、それにより、病的炎症を抑制することを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項１３】
前記二量体受容体がα４β１またはα４β７であり、前記病的炎症が多発硬化症によって引き起こされることを特徴とする請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記二量体受容体がα４β１またはα４β７であり、前記病的炎症が胃腸管の炎症性疾患によって引き起こされることを特徴とする請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記胃腸管の炎症性疾患がクローン病、潰瘍性大腸炎または炎症性腸疾患であることを特徴とする請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記病的炎症が胃腸管の炎症性疾患により引き起こされることを特徴とする請求項１乃至請求項１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記胃腸管の炎症性疾患がクローン病、潰瘍性大腸炎または炎症性腸疾患であることを特徴とする請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記病的炎症が多発硬化症によって引き起こされることを特徴とする請求項１乃至請求項１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
対象における病的炎症を治療するための長期投与の有効性を判定する方法であって、
前記病的炎症がα４インテグリンによって調節され（modulate）、前記α４インテグリンまたはα４インテグリンを含む二量体の飽和度を測定する工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項２０】
前記α４インテグリン二量体がα４β１またはα４β７であることを特徴とする請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記病的炎症がクローン病によって引き起こされ、患者におけるＣ反応性タンパク質および／またはＣＤＡＩの測定によりα４インテグリンの飽和度を測定することを特徴とする請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記病的炎症が多発硬化症によって引き起こされることを特徴とする請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記病的炎症が胃腸管の炎症性疾患であり、前記患者における胃腸管の炎症性疾患を治療または改善するのに十分な治療上有効な量のナタリズマブまたはその免疫活性な断片を、前記治療または改善を必要とする患者に長期的に投与することを含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記胃腸管の疾患が炎症性腸疾患、クローン病または潰瘍性大腸炎であることを特徴とする請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
ナタリズマブを約１ｍｇ／ｋｇ患者〜約２０ｍｇ／ｋｇ患者の量で少なくとも６か月間に渡り４週間ごとに注入により投与することを特徴とする、請求項２３または２４のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
前記注入による投与を少なくとも１２か月間にわたり行うことを特徴とする請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記病的炎症が多発硬化症であり、多発硬化症の症状を軽減するのに十分な治療上有効な量のナタリズマブまたはその免疫活性な断片を、前記多発硬化症の症状の軽減を必要とする患者に長期的に投与することを含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
ナタリズマブを約１ｍｇ／ｋｇ患者〜約２０ｍｇ／ｋｇ患者の量で、少なくとも６か月間に渡り４週間ごとに注入により投与することを特徴とする請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記注入による投与を少なくとも１２か月間に渡り行うことを特徴とする請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
患者における病的炎症の長期治療用の組成物であって、
前記病的炎症の長期治療を必要とする患者における前記病的炎症の症状を軽減するのに十分な量の薬剤を含むことを特徴とする組成物。
【請求項３１】
前記薬剤がα４インテグリン活性および／またはα４インテグリン二量体活性を阻害することを特徴とする請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記組成物がさらに安定化剤、担体および／または添加剤を含むことを特徴とする請求項３０または３１のいずれかに記載の組成物。
【請求項３３】
前記薬剤がナタリズマブであることを特徴とする請求項３０または３１のいずれかに記載の組成物。
【請求項３４】
ナタリズマブが、少なくとも６か月間にわたる４週間ごとの投与で約１ｍｇ／ｋｇ患者〜約２０ｍｇ／ｋｇ患者の量で静脈内注入するために、処方されることを特徴とする請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記病的炎症が多発硬化症によって引き起こされることを特徴とする請求項３３に記載の組成物。
【請求項３６】
前記病的炎症が胃腸管の炎症性疾患によって引き起こされることを特徴とする請求項３３に記載の組成物。
【請求項３７】
前記胃腸管の炎症性疾患がクローン病、潰瘍性大腸炎または炎症性腸疾患であることを特徴とする請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
患者における病的炎症の長期治療のための併用治療であって、
請求項３０乃至請求項３３のいずれか１項に記載の組成物と前記病的炎症を改善する化合物とを用いることを特徴とする併用治療。
【請求項３９】
前記病的炎症が胃腸管の炎症性疾患によって引き起こされることを特徴とする請求項３８に記載の併用治療。
【請求項４０】
前記胃腸管の炎症性疾患が潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患またはクローン病であり、前記化合物が５−アミノサリチル酸、グルココルチコイド、チオグアニン誘導体、メトトレキサート、シクロスポリン、ＴＮＦに結合するモノクローナル抗体または抗生物質であることを特徴とする請求項３９に記載の併用治療。
【請求項４１】
前記病的炎症が多発硬化症によって引き起こされることを特徴とする請求項３８に記載の併用治療。
【請求項４２】
病的炎症の長期治療を必要とする患者に対する病的炎症の長期治療用薬剤を調製するための、α４インテグリン阻害物質の使用。
【請求項４３】
前記病的の状態が多発硬化症によって引き起こされることを特徴とする請求項４２に記載のα４インテグリン阻害物質の使用。
【請求項４４】
前記病的の状態が胃腸管の炎症性疾患によって引き起こされることを特徴とする請求項４２に記載のα４インテグリン阻害物質の使用。
【請求項４５】
前記α４インテグリン阻害物質がナタリズマブであり、前記胃腸管の炎症性疾患がクローン病、炎症性腸疾患または潰瘍性大腸炎であることを特徴とする請求項４４に記載のα４インテグリン阻害物質の使用。
【請求項４６】
前記患者に投与されたとき前記α４インテグリン受容体が病的炎症を抑制するのに十分なレベルに飽和されるように、前記薬剤を処方することを特徴とする請求項４２に記載のα４インテグリン阻害物質の使用。
【請求項４７】
前記患者に投与されたとき前記薬剤が少なくとも約６５％から約１００％のα４インテグリン受容体飽和をもたらすことを特徴とする、請求項４６に記載のα４インテグリン阻害物質の使用。
【請求項４８】
前記飽和が少なくとも７５％であることを特徴とする請求項４７に記載のα４インテグリン阻害物質の使用。
【請求項４９】
前記飽和が少なくとも８０％であることを特徴とする請求項４７に記載のα４インテグリン阻害物質の使用。
【請求項５０】
前記阻害物質がα４インテグリン二量体に結合することを特徴とする、請求項４２乃至請求項４７のいずれか１項に記載のα４インテグリン阻害物質の使用。
【請求項５１】
前記阻害物質がモノクローナル抗体であることを特徴とする、請求項４２乃至請求項４７のいずれか１項に記載のα４インテグリン阻害物質の使用。
【請求項５２】
前記モノクローナル抗体がナタリズマブまたはその免疫活性な断片であることを特徴とする請求項５１に記載のα４インテグリン阻害物質の使用。
【請求項５３】
前記阻害物質がα４β１に結合することを特徴とする請求項５０に記載のα４インテグリン阻害物質の使用。
【請求項５４】
前記薬剤が１つまたは複数の二量体受容体を飽和させるのに十分な量で投与され、それにより、病的炎症を抑制することを特徴とする請求項４２に記載のα４インテグリン阻害物質の使用。
【請求項５５】
前記薬剤がさらに胃腸管の炎症性疾患を改善する化合物を含むことを特徴とする、請求項４４に記載のα４インテグリン阻害物質の使用。
【請求項５６】
前記化合物が５−アミノサリチル酸、グルココルチコイド、チオグアニン誘導体、メトトレキサート、シクロスポリン、ＴＮＦに結合するモノクローナル抗体、抗生物質、鎮痛薬、下痢止め薬または抗コリン薬であることを特徴とする、請求項５５に記載のα４インテグリン阻害物質の使用。
【請求項５７】
前記阻害物質がナタリズマブであり、少なくとも６か月間にわたり４週間ごとに前記ナタリズマブを必要とする患者へ静脈内注入をするために、約１ｍｇ／ｋｇ患者〜約２０ｍｇ／ｋｇ患者の量で処方することを特徴とする、請求項４２乃至請求項５６のいずれか１項に記載のα４インテグリン阻害物質の使用。
【請求項５８】
前記阻害物質を少なくとも１２か月間にわたる前記患者への静脈内注入のために処方することを特徴とする、請求項５７に記載のα４インテグリン阻害物質の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的に、アルファ−４（α４）サブユニットを含むインテグリン受容体に特異的に結合し、阻害する薬剤およびその治療上の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症は、感染または損傷に対する血管化組織の反応であり、血管の内皮細胞への白血球の接着と周囲組織へのそれらの浸潤による影響を受ける。通常の炎症では、浸潤白血球は、有毒なメディエータを放出して侵入生物を殺滅し、壊死組織片および死細胞を貪食し、組織修復および免疫応答に役割を果たす。しかしながら、病的炎症では、浸潤白血球は、過剰反応性で、重篤または致命的な障害を引き起こし得る。例えば、Ｈｉｃｋｅｙ、Ｐｓｙｃｈｏｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ＩＩ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９９０）（非特許文献１）を参照のこと。
【０００３】
インテグリンは、細胞接着、免疫細胞の移動および活性化に関与する細胞表面糖タンパク質のファミリーである。α４インテグリンは、好中球を除くすべての循環白血球によって発現され、ベータ１またはベータ７インテグリンサブユニットとともにヘテロ二量体受容体を形成する。アルファ−４ベータ−１（α４β１）およびアルファ−４ベータ−７（α４β７）二量体は、血管内皮を横切る白血球の移動に役割を果たし（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ等、１９９４、Ｃｅｌｌ、７６、３０１〜１４頁（非特許文献２）、およびＢｕｔｃｈｅｒ等、１９９６、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７２、６０〜６頁（非特許文献３）、実質における細胞の活性化および生存に寄与する（Ｄａｍｌｅ等、、１９９３、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１、２３６８〜７９頁（非特許文献４）、Ｋｏｏｐｍａｎ等、１９９４、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５２、３７６０〜７頁（非特許文献５）、およびＬｅｕｓｓｉｎｋ等、、２００２、Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．、１０３、１３１〜１３６頁）（非特許文献６）。
【０００４】
特に、α４β１（超後発抗原−４［ＶＬＡ−４］としても知られている）は、慢性炎症の多くの部位で血管内皮により発現される（Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａ等、１９９３  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１１、７６７〜８０４頁（非特許文献７）、およびＰｏｓｔｉｇｏ等、１９９３  Ｒｅｓ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４４、７２３〜３５頁（非特許文献８））血管細胞接着分子−１（ＶＣＡＭ−１）に結合する（Ｌｏｂｂ等、１９９４  Ｊ．Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．、９４、１７２２〜８頁（非特許文献９））。α４β７二量体は、粘膜アドレッシン細胞接着分子（ＭＡｄＣＡＭ−１）と相互作用し、リンパ球の腸へのホーミングを媒介する（Ｆａｒｓｔａｄ等、、１９９７  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐａｔｈｏｌ．  １５０、１８７〜９９頁（非特許文献１０）、Ｉｓｓｅｋｕｔｚ等、、１９９１  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４７、４１７８〜８４頁（非特許文献１１））。血管内皮上のＭＡｄＣＡＭ−１の発現も炎症性腸疾患（ＩＢＤ）患者の腸管における炎症の部位で増加している（Ｂｒｉｓｋｉｎ等、．、１９９７  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐａｔｈｏｌ．  １５１、９７〜１１０頁（非特許文献１２））。
【０００５】
α４インテグリンのような接着分子は、治療薬の潜在的標的である。例えば、α４インテグリンがサブユニットであるＶＬＡ−４受容体は、脳内皮細胞にあるリガンドと相互作用するので、重要な標的である。脳における炎症に起因した疾患および状態は、特に重度な結果を有する。他の例において、α４β７インテグリン二量体は、胃腸管におけるリンパ球のホーミングおよび病的炎症に関与するため、重要な標的である。
【０００６】
α４β１インテグリンは、活性化リンパ球および単球の細胞表面上に発現する。これは、急性炎症性脳病変および多発硬化症（ＭＳ）に随伴する血液脳関門（ＢＢＢ）の崩壊の病因に関連付けられた（Ｃｏｌｅｓ等、１９９９  Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  ４６（３）、２９６〜３０４頁（非特許文献１３））。α４インテグリンに対する薬剤が、動物モデルにおいてｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでそれらの抗炎症能について試験された。Ｙｅｄｎｏｃｋ等、１９９２  Ｎａｔｕｒｅ  ３５６、６３〜６６頁（非特許文献１４）、１９９８年１１月２４日にＢｅｎｄｉｇ等に対して発行された米国特許第５８４０２９９号（特許文献１）、および１９９９年１２月１４日にＴｈｏｒｓｅｔｔ等に対して発行された米国特許第６００１８０９号（特許文献２）を参照のこと。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験で、α４インテグリン抗体が脳内皮細胞へのリンパ球の付着を阻害することが示されている。多発硬化症を模擬した人工的に誘発された状態である実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）を有する動物に対するα４インテグリン抗体の効果を試験した実験で、抗α４インテグリン抗体の投与により動物における脳の炎症と後続の麻痺が予防されることが示された。ひとまとめにすると、これらの実験により、抗α４インテグリン抗体は多発硬化症ならびに他の炎症性疾患および障害を治療するための潜在的に有用な治療薬であることが確認されている。
【非特許文献１】Ｈｉｃｋｅｙ、Ｐｓｙｃｈｏｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ＩＩ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９９０
【非特許文献２】Ｓｐｒｉｎｇｅｒ等、１９９４、Ｃｅｌｌ、７６、３０１〜１４頁
【非特許文献３】Ｂｕｔｃｈｅｒ等、１９９６、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７２、６０〜６頁
【非特許文献４】Ｄａｍｌｅ等、１９９３、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１、２３６８〜７９頁
【非特許文献５】Ｋｏｏｐｍａｎ等、１９９４、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５２、３７６０〜７頁
【非特許文献６】Ｌｅｕｓｓｉｎｋ等、２００２、Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．、１０３、１３１〜１３６頁
【非特許文献７】Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａ等、１９９３  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１１、７６７〜８０４頁
【非特許文献８】Ｐｏｓｔｉｇｏ等、１９９３  Ｒｅｓ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４４、７２３〜３５頁
【非特許文献９】Ｌｏｂｂ等、１９９４  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ９４、１７７２〜８頁
【非特許文献１０】Ｆａｒｓｔａｄ等、１９９７Ａｍ．  Ｊ．  Ｐａｔｈｏｌ．  １５０、１８７〜９９頁
【非特許文献１１】Ｉｓｓｅｋｕｔｚ等、１９９１  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４７、４１７８〜８４頁
【非特許文献１２】Ｂｒｉｓｋｉｎ等、１９９７  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐａｔｈｏｌ．  ９７〜１１０頁
【非特許文献１３】Ｃｏｌｅｓ等、１９９９  Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  ４６（３）、２９６〜３０４頁
【非特許文献１４】Ｙｅｄｎｏｃｋ等、１９９２  Ｎａｔｕｒｅ  ３５６、６３〜６６頁
【特許文献１】米国特許第５８４０２９９号
【特許文献２】米国特許第６００１８０９号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
α４インテグリンに関連する病的炎症の他の特定の例において、クローン病（ＣＤ）は、腸管の慢性、不治、再発性、経管性の炎症である。この疾患は、Ｔ細胞、マクロファージおよび好中球に関連する、腸粘膜における不適切な免疫細胞移動および活性化を特徴とする（Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ等、１９９１  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １０１、１０２０〜３０頁（非特許文献１５））。クローン病に対する主要医学治療としては、低い有効性を有する５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）および様々な短および長期副作用を有するコルチコステロイドなどがある（Ｍｕｎｋｈｏｌｍ等、１９９４  Ｇｕｔ  ３５、３６０〜２頁（非特許文献１６））。主要治療に不応性の患者にはアザチオプリン、６−メルカプトプリンおよびメトトレキサートのような免疫抑制薬を投与するが、これらの薬剤は、作用の発現が遅く、重篤な副作用を有する可能性がある（Ｓｔｅｉｎ等、２００１  Ｓｕｒｇ．  Ｃｌｉｎ．  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．  ８１、７１〜１０１頁、ｖｉｉｉ（非特許文献１７））。より最近、作用の発現がより速やかな生物学的薬剤がクローン病の治療用に導入されたが、そのような薬剤も同様に長期有効性や副作用のような問題点がある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、α４インテグリンに選択的に結合する薬剤の長期投与により、患者における病的炎症を長期的に低減する方法を提供する。抗α４薬剤の長期投与法は、（１）薬剤がα４インテグリンまたはα４インテグリンを含む二量体に特異的に結合し、（２）薬剤を繰り返して投与して、α４インテグリン受容体の飽和が病的炎症を抑制するのに十分なレベルに維持されるように設計する。本発明の薬剤は、α４サブユニットを含むすべてのインテグリン二量体の結合と阻害による炎症の抑制に有用であり、あるいは、特異的二量体、例えば、α４β１に結合するように設計することができる。
【０００９】
一実施形態において、長期投与法の有効性は、特異的インテグリン二量体の飽和を測定することにより判定することができる。特定の例において、α４β１インテグリン二量体が多発硬化症に関与すると考えられており、したがって、有効な長期投与法に要求される飽和のレベルは、α４β１二量体受容体の飽和の測定により測定することができる。
【００１０】
複数のインテグリン二量体が病的炎症に関与すると考えられている他の実施形態において、二量体受容体の組み合わせの飽和を測定して、長期投与法の有効性を判定することができる。特定の例において、α４β１およびα４β７二量体は、炎症性腸疾患に伴う病的炎症に関与していると考えられている。したがって、α４β１およびα４β７の飽和レベルの測定は、特定の長期投与法の有効性を判定するうえで有用であると思われる。
【００１１】
一実施形態において、長期投与法の成功は、病的炎症の生理学的マーカーを評価することにより判定することができる。例えば、ＭＳに対して行われる長期投与法において、投与法の成功は、映像技術、例えば、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）を用いた脳病変のレベルの検出により確認することができる。他の例において、ＣＤに対して行われる長期投与法において、投与法の成功は、患者における血清中Ｃ反応性タンパク質のレベルの検出により確認することができる。さらに他の例において、投与法の成功は、良好な状態、例えば、ＣＤ患者におけるＣＤＡＩの低下に関連する一連の基準値を用いて判断することができる。
【００１２】
本発明の他の実施形態は、対象における胃腸管の炎症性疾患を治療または改善するのに十分な治療上有効な量のナタリズマブ（ｎａｔａｌｉｚｕｍａｂ）を含む組成物を投与することを含む、対象の胃腸管の炎症性疾患（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎および炎症性腸疾患）の治療を意図するものである。
【００１３】
特定の実施形態において、本発明は、患者におけるα４インテグリン受容体の飽和のレベルが６５〜１００％となるように薬剤の反復投与を行い、それにより、患者における病的炎症の長期抑制をもたらす投与法を特徴とする。他の特定の実施形態において、患者における少なくとも約７５〜１００％のレベルが得られるように薬剤を繰り返して投与する。さらに他の特定の実施形態において、患者における少なくとも約８０〜１００％のレベルが得られるように薬剤を繰り返して投与する。
【００１４】
本発明の特徴は、患者における病的炎症の望ましくない影響を長期、例えば、６か月間、１年間、２年間またはそれ以上の期間にわたり抑制することができることである。
【００１５】
本発明の方法の態様は、抗α４インテグリン薬の十分なレベルを長期にわたって維持して、病的炎症をそのような期間にわたり抑制することである。
【００１６】
本発明の特徴は、該投与法が単回投与と比較して病的炎症のレベルを長い期間にわたって低くすることである。
【００１７】
本発明の利点は、本発明の方法に用いる薬剤が許容性が良好であり、低い毒性を有することである。
【００１８】
本発明のこれらおよび他の目的、利点ならびに特徴は、下により十分に述べる方法および処方の詳細を読むことにより、当業者に明らかになるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
本発明の方法および治療薬を述べる前に、本発明は、記載する特定の方法および治療薬に限定されるものではなく、もちろん、それ自体変わり得るものであることを理解すべきである。本明細書で用いる用語は、特定の実施形態のみを述べる目的のためのものであり、限定するものではない。
【００２０】
一連の値を記載する場合、当該範囲の上限と下限との間にある、状況から他の状態が明らかでない限り、下限の単位の少数第１位までの各値、および当該範囲における他の指定する、もしくは間にある値は、本発明の範囲内に含まれることが理解される。これらのより小さい範囲の上および下限は、指定する範囲における特に除外される限界までのより小さい実体に独立に含まれていてよい。指定する範囲が限界の１つまたは両方を含む場合、含まれる限度の両方のいずれかを除外した範囲も本発明に含まれる。
【００２１】
特に定義しない限り、本明細書で用いるすべての技術および科学用語は、本発明が属する分野の技術者により一般的に理解されているのと同じ意味をもつ。本明細書に記載するのと類似または同等の方法および材料も本発明の実施または試験に使用することができるが、好ましい方法および材料をここに記載する。本明細書で言及するすべての刊行物は、当該刊行物を引用することに関連して方法および／または材料を開示し、記述するために本明細書で参考として援用する。
【００２２】
本明細書で用いているように、単数形（「ａ」、「ａｎｄ」および「ｔｈｅ」）は、状況から他の状態が明らかでない限り、複数指示物を含むことに注意しなければならない。したがって、例えば、１つの「抗体」と言及すれば、複数のそのような抗体を含み、「当該用量」と言及すれば、１つまたは複数の用量の表示または当業者に知られているその同等物を含む、などである。
【００２３】
本明細書で述べる刊行物は、本願書の提出日前のそれらの開示のためにだけ記載する。本明細書におけるいずれについても、本発明が先行発明によるそのような刊行物に先行する権利を与えられないということを容認されたこととして解釈すべきではない。さらに、記載された発行の日付が独立に確認する必要がある実際の発行の日付と異なることがある。
【００２４】
定義
本明細書で用いている「抗α４薬剤」という用語は、α４サブユニットを含むインテグリンに特異的に結合し、インテグリンの活性を阻害する薬剤を指す。これは、α４インテグリンに特異的に結合する薬剤ならびにα４インテグリンを含むインテグリン二量体、例えば、アルファ−４ベータ−１（α４β１）またはアルファ−４ベータ−７（α４β７）に結合する薬剤を含む。「薬剤」という用語は、合成および組換え分子（例えば、抗体、小分子、ペプチド、または他の合成により生成された分子もしくは化合物、ならびに組換えにより生成された遺伝子産物）ならびに天然に存在する化合物（例えば、ポリペプチド、抗体など）を含むことを意味する。
【００２５】
長期投与法に関連して本明細書で用いている「有効性」という用語は、特定の治療計画の有効性を指す。有効性は、本発明の薬剤に反応しての疾患の経過の変化に基づいて測定することができる。例えば、ＭＳの治療では、有効性は、再発−寛解ＭＳにおける再発の頻度により、およびＭＲＩのような方法を用いて検出されるような中枢神経系における新たな病変の存否により測定することができる。
【００２６】
長期投与法に関連して本明細書で用いている「成功」という用語は、特定の治療計画の有効性を指す。これは、有効性、毒性（例えば、製剤または投与単位の副作用および患者耐性）、患者服薬遵守などのバランスを含む。「成功」とみなされる長期投与法では、最も好ましい患者転帰をもたらすために患者ケアの種々の側面と有効性とのバランスをとらなければならない。
【００２７】
本明細書で用いている「特異的に結合する」という用語は、特異的結合対の１つの構成員がその特異的結合相手以外の分子に対して有意な結合を示さない状況（例えば、その結合相手に対しては約１０００倍以上の親和力を有する）を指す。本発明では、抗α４インテグリン薬剤は、α４インテグリンまたはα４インテグリンを含む受容体以外のポリペプチドに対して有意な結合を示さない。例えば、α４インテグリンに１０７モル／ｌ以上、好ましくは１０８モル／ｌ以上の結合親和力で結合する本発明の方法で用いる抗体は、α４インテグリンに特異的に結合すると言われる。
【００２８】
本明細書で用いている「実質的に相同」という用語は、ポリペプチドにおける１つまたは複数のアミノ酸が機能的に同等なアミノ酸で置換され、それにより該ポリペプチドの結合特性に全くまたはほとんど影響を及ぼさない変化をもたらすような配列中の変化を有するポリペプチドを意味するものである。例えば、配列内の１つまたは複数のアミノ酸残基が同様な極性の他のアミノ酸で置換されていてよい。
【００２９】
本明細書で用いている「免疫応答を誘発する」および「宿主免疫応答を誘発する」という用語は、対象への本発明の薬剤の導入による対象におけるα４インテグリンを含む受容体に対する免疫学的応答の発生を指す。対象における免疫応答は、血清免疫反応性を約１：１００の血清希釈度を用いて測定した場合、無処置対象の少なくとも２倍のα４インテグリン受容体との血清反応性、より好ましくは無処置対象の反応性の３倍、さらに好ましくは無処置対象の反応性の４倍の血清反応性によって特徴付けることができる。
【００３０】
「賦形剤」という用語は、単に担体として作用することを意図された、すなわち、それ自体では生物活性を有することを意図されない製剤の一部をなす化合物を意味する。
【００３１】
本明細書で用いている「アジュバント」という用語は、本発明の薬剤に対する免疫応答を増強するが、それ自体では免疫応答を誘発しない組成物添加剤を指す。アジュバントは、リンパ球リクルートメント、Ｔ細胞刺激、Ｂ細胞刺激およびマクロファージ刺激を含むが、これらに限定されない様々な生物学的機作を用いて免疫応答を増強することができる。
【００３２】
「治療すること」および「治療」などの用語は、本明細書では所望の薬理学的および生理学的効果を得る手段に対して一般的に用いる。効果は、疾患、その症状または状態を予防または部分的に予防するという点での予防効果であってよく、かつ／または疾患、状態、症状またはその疾患による有害な影響の部分的または完全な治癒という点での治療効果であってよい。本明細書で用いている「治療」という用語は、哺乳動物、特にヒトにおける疾患のあらゆる治療を含み、（ａ）疾患の素因を有する可能性があるが、それ（疾患の素因）を有するとまだ診断されていない対象において疾患が起こることを予防すること、（ｂ）疾患を抑制すること、すなわち、その発生を阻止すること、または（ｃ）疾患を軽減すること、すなわち、疾患および／またはその症状もしくは状態の退縮をもたらすことを含む。本発明は、病的炎症に関連する疾患に罹患している患者の治療を対象とする。本発明は、長期間にわたる病的炎症に起因する、かつ／または、長期間にわたり生物系に存在する不適切な炎症に対する生理反応により引き起こされるような有害な影響を予防し、抑制し、または軽減することに関する。
【００３３】
本明細書で用いている「病的炎症」という用語は、喘息、アテローム動脈硬化症、ＡＩＤＳ痴呆、糖尿病、炎症性腸疾患、慢性関節リウマチ、移植拒絶反応、移植片対宿主疾患、多発硬化症（特に、さらなる脱髄を抑制するため）、腫瘍転移、腎炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、心筋虚血、慢性前立腺炎、鎌状赤血球貧血による合併症、紅斑性狼瘡および白血球媒介性急性肺損傷を含むが、これらに限定されない疾患に伴う不適切かつ慢性炎症を指す。そのような炎症は、浸潤性白血球を含む炎症細胞の反応の増大によって特徴付けられる。時間の経過に伴い、そのような病的炎症はしばしば、不適切な炎症の部位における組織の損傷をもたらす。
【００３４】
「Ａｎｔｅｇｒｅｎ（登録商標）」は、ＡＮ１００２２６（抗体コード番号）またはナタリズマブ（ＵＳＡＮ名）としても知られている抗体を含むことを意味する。Ａｎｔｅｇｒｅｎ（登録商標）は、組換えヒト化抗α４インテグリン抗体である。好ましくは、哺乳動物における治療する疾患または状態は、治療上有効な量のＡｎｔｅｇｒｅｎ（登録商標）を投与したとき調節されるものである。
【００３５】
発明の一般的態様
本発明は、選択的接着分子阻害物質（ＳＡＭＩ）として知られている新しく出現しつつあるクラスの新規化合物の長期投与がインテグリン二量体に関連する障害における炎症の長期抑制の維持をもたらすのに十分であるという驚くべき結果に基づいている。反復投与の停止により、炎症の抑制は逆転する（例えば、図２を参照）。炎症抑制薬の以前の投与では、炎症抑制薬の投与が身体自体の応答系の反応を引き起こし、これがひいては、炎症の病的なものとしての認識と結果としての病的炎症の長期軽減をもたらすと信じて、全く異なる投与法がとられていた。本願発明者らが本明細書で示したことは、長期投与法が短期投与法よりも有効であるだけでなく、実際に病的炎症の抑制を維持することが要求されることである。したがって、本発明のいくつかのより重要な利点を認識するためには、抗α４インテグリン薬剤のレベルが何か月間にも、または何年間にもわたり維持される必要がある。
【００３６】
本発明は、再発性ＭＳまたは中等度から重度の活動性ＣＤを有する患者における抗α４インテグリン抗体ナタリズマブの大規模な無作為化プラセボ比較試験の結果に基づいている。ナタリズマブは、α４インテグリンに対する組換えヒト化モノクローナル抗体拮抗薬である。これらの２つの試験の結果は、ナタリズマブの投与によりＭＳおよびＣＤ患者の徴候および症状が改善されることを示すものであった。本発明は、ｐｒｉｍａｔｉｚｅｄ（商標）抗体を含む他のキメラ抗体を含めることも意図している。
【００３７】
投与法は主薬の形態および主薬を投与するために開発された製剤に依存するので、一般的な意味では、本発明の方法は特定の投与法に関係しない。しかし、本明細書に記載した特定の実施例は、ナタリズマブの非経口投与を用いて得られた。本発明は、α４インテグリンに特異的に結合する抗体を用いて記載されているが、例えば、インテグリン二量体（二量体がα４インテグリンを含む場合）の両相手を認識する２価または多価抗体の長期投与を含めることも意図している。
【００３８】
本発明の一般的な概念は、数か月間または数年間にわたり患者の循環系に比較的一定の量の主薬を導入することに関する。α４インテグリンまたはα４インテグリンを含む二量体に選択的に結合する薬剤のこの長期の導入により、病的炎症の抑制が一定の期間にわたり一定のレベルに維持される。主薬の治療レベルを一定の期間にわたり維持することにより、患者における病的炎症を長期的に抑制することができる。
【００３９】
非常に特異的な意味では、本発明は、約６５％〜約１００％、より好ましくは約７５％〜約１００％、さらにより好ましくは約８０％〜約１００％の範囲のα４インテグリンを含む二量体のヒト患者における受容体飽和レベルを得て、維持することを含む。これらの受容体飽和レベルがこれらのレベルに長期的に（例えば、６か月間など）維持されて、病的炎症の継続的抑制が可能となる。
【００４０】
α４インテグリンに選択的に結合する薬剤
α４インテグリンに結合し、その活性を阻害する能力を有する様々なタイプの薬剤を本発明の実施に用いることができる。そのような多くの薬剤が特定され、特性が検討された。特定の薬剤を以下に記載する。本明細書に開示した教示事項から、具体的に記載した薬剤を生物学的に模倣する仕方で、またはそれと同様に、α４を含むインテグリン二量体を阻害することができる他の薬剤を特定することは十分に当業者の技術の範囲内にあり、本発明は、そのような薬剤およびそのような薬剤の組合わせの長期投与を含めることも意図している。
【００４１】
抗体
１つの特定の実施形態において、本発明の薬剤は、α４インテグリンまたはα４β１もしくはα４β７のようなα４を含む二量体に選択的に結合する抗体もしくはその免疫活性な断片である。
【００４２】
本発明の薬剤が抗体である場合、モノクローナル抗体が好ましい。一般的に種々のエピトープに対して誘導された種々の抗体を含むポリクローナル抗体製剤と異なり、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一エピトープに対して誘導される。モノクローナル抗体の第２の利点は、それらが他の免疫グロブリンによる汚染を受けない手段、例えば、ファージディスプレイまたはハイブリドーマからの分離により合成されることである。本発明はポリクローナルおよびモノクローナル抗体を本発明の薬剤として含むことを意図するものであるが、高度に特異的であるのでモノクローナル抗体が好ましく、したがって、本発明は主としてモノクローナル抗体について述べる。
【００４３】
さらに、当技術分野で利用可能な技術を用いて他の抗体を特定することができる。例えば、本発明のモノクローナル抗体をファージディスプレイ技術を用いて生産することができる。次いで、α４インテグリンまたはα４インテグリンを含む二量体に選択的に結合する抗体断片を分離する。ファージディスプレイによりそのような抗体を生産する具体例としての好ましい方法は、米国特許第６２２５４４７号（特許文献３）、第６１８０３３６号（特許文献４）、第６１７２１９７号（特許文献５）、第６１４０４７１号（特許文献６）、第５９６９１０８号（特許文献７）、第５８８５７９３号（特許文献８）、第５８７２２１５号（特許文献９）、第５８７１９０７号（特許文献１０）、第５８５８６５７号（特許文献１１）、第５８３７２４２号（特許文献１２）、第５７３３７４３号（特許文献１３）および第５５６５３３２号（特許文献１４）に開示されている。
【００４４】
モノクローナル抗体は、通常のハイブリドーマ法を用いて生産することもできる。これらの方法は、多くの特異的抗原に対する高レベルのモノクローナル抗体を分泌するハイブリッド細胞系を生産するために広く適用されており、本発明のモノクローナル抗体を生産するためにも用いることができる。例えば、マウス（例えば、Ｂａｌｂ／ｃマウス）を腹腔内注射により抗原性α４インテグリンエピトープで免疫化することができる。免疫応答の発現が可能となるのに十分な時間が経過した後に、マウスを屠殺し、脾臓細胞を摘出し、当技術分野でよく知られている技術を用いて骨髄腫細胞と融合させる。得られた融合細胞、すなわちハイブリドーマを選択培地中で成長させ、生存細胞をそのような培地中で限界希釈条件を用いて成長させる。クローニングおよび再クローニングの後に、標的、すなわち、α４インテグリンまたはα４インテグリンを含む二量体に選択的に結合する抗体（例えば、ＩｇＧもしくはＩｇＭクラスまたはＩｇＧ１サブクラスの）を分泌するハイブリドーマを分離することができる。ヒト使用のための特異的薬剤を生産するために、分離したモノクローナルを用いてキメラおよびヒト化抗体を生産することができる。
【００４５】
本発明の抗体は、ポリクローナル、モノクローナル、多重特異的、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体、単鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆａｂ発現ライブラリーにより生産される断片、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本発明の抗体に対する抗Ｉｄ抗体を含む）および上のいずれかのエピトープ結合断片を含むが、これらに限定されない。より好ましくは、抗体は本発明のヒト抗原結合抗体断片であり、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）およびＶＬまたはＶＨドメインを含む断片を含むが、これらに限定されない。単鎖抗体を含む抗原結合抗体断片は、可変領域単独または次の全部または一部との組合せを含んでいてよい。すなわち、ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３ドメイン。可変領域とヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインとのあらゆる組合せを含むことができる抗原結合断片も本発明に含まれる。本発明の抗体は、鳥および哺乳動物を含むあらゆる動物起源のものであってよい。好ましくは、抗体は、ヒト、ネズミ（例えば、マウスおよびラット）、ロバ、ヒツジ、サル、ウサギ、ヤギ、モルモット、ブタ、ラクダ、ウマまたはニワトリ（または他の鳥）である。本明細書で用いているように、「ヒト」抗体は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、ヒト免疫グロブリンライブラリーから、または１つもしくは複数のヒト免疫グロブリンで形質転換した動物から分離され、以下および例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ等による米国特許第５９３９５９８号（特許文献１５）に記載されているように、内因性免疫グロブリンを発現しない抗体を含む。
【００４６】
キメラおよびヒト化抗体は、非ヒト抗体から生産することができ、それらが生産される元の抗体と同じまたは同様な親和力を有することができる。キメラ抗体を生産する技術（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ等、１９８４  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ８１、６８５１頁（非特許文献１８）、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ等、１９８４  Ｎａｔｕｒｅ  ３１２、６０４頁（非特許文献１９）、Ｔａｋｅｄａ等、１９８５  Ｎａｔｕｒｅ  ３１４、４５２頁（非特許文献２０））は、例えば、適切な抗原特異性のマウス抗体分子の遺伝子を適切な生物活性のヒト抗体分子の遺伝子とともにスプライシングすることを含む。そのような抗体は、本発明の範囲内にある。例えば、マウスモノクローナル抗体の可変（Ｖ）領域をコードする核酸をヒト定常（Ｃ）部、例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４をコードする核酸と結合させることができる。したがって、得られる抗体は、一般的に非ヒト抗体由来の抗原結合ドメインとヒトまたは霊長類動物抗体由来のＣもしくはエフェクタードメインを有する種ハイブリッドである。
【００４７】
ヒト化抗体は、主としてヒト抗体（すなわち、アクセプター抗体）由来であるが、実質的に非ヒト抗体（ドナー抗体）由来の相補性決定領域を有する可変領域を有する抗体である。例えば、Ｑｕｅｅｎ等、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６、１００２９〜１００３３頁（１９８９）（非特許文献２１）、国際公開第９０／０７８６１号（特許文献１６）、米国特許第６０５４２９７号（特許文献１７）、第５６９３７６１号（特許文献１８）、第５５８５０８９号（特許文献１９）、第５５３０１０１号（特許文献２０）および第５２２４５３９号（特許文献２１）を参照のこと。これらの抗体の定常部（１つまたは複数）も一般的にヒト抗体由来である。ヒト可変ドメインは、一般的に所望の非ヒト可変領域結合ドメインと高い相同性を示す配列を有するヒト抗体から選択される。重鎖および軽鎖可変残基は、同じ抗体または異なるヒト抗体から得ることができる。さらに、配列は、国際公開第９２／２２６５３号（特許文献２２）に記載されているように、いくつかのヒト抗体の共通として選択することができる。
【００４８】
「ｐｒｉｍａｔｉｚｅｄ（商標）抗体」は、霊長類可変配列または抗原結合部分、およびヒト定常部配列を含む組換え抗体である。Ｎｅｗｍａｎ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１９９２、１０、１４５５〜６０頁（非特許文献２２）を参照のこと。抗体の霊長類化は、サル可変ドメインとヒト定常配列を含む抗体の生成をもたらす。さらなる詳細については、米国特許第６１１３８９８号（特許文献２３）を参照のこと。この技術は、抗原性であるためヒトに投与したとき拒絶されないように抗体を修飾する。この技術は、ヒト抗原または受容体でカニクイザルを免疫化することに依拠している。この技術は、ヒト細胞表面抗原に対する高親和力モノクローナル抗体を生成させるために開発された。
【００４９】
ヒト可変領域内の特定のアミノ酸を、置換のために予測される立体配座と抗原結合特性に基づいて選択する。これは、コンピュータモデル作製、可変領域内の特定の位置におけるアミノ酸の挙動および結合特性の予測、および置換の効果の所見のような手法を用いて決定することができる。例えば、アミノ酸が非ヒト可変領域とヒト可変領域とで異なっている場合、非ヒト可変領域のアミノ酸組成を反映するように、ヒト可変領域を変化させることができる。
【００５０】
特定の実施形態において、本発明の長期投与法に用いる抗体は、本明細書で参考として援用する米国特許第５８４０２９９号（特許文献２４）に開示されているヒト化抗体である。
【００５１】
他の実施形態において、ヒト抗体遺伝子を含む形質転換マウスを抗原性α４インテグリン構造で免疫化することができ、ハイブリドーマ技術を用いて、α４インテグリンに選択的に結合するヒト抗体を生成させることができる。
【００５２】
キメラのヒトおよび／またはヒト化抗体は、組換え発現、例えば、ヒトハイブリドーマ（Ｃｏｌｅ等、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ  Ｒ．  Ｌｉｓｓ、７７頁（１９８５）（非特許文献２３））、骨髄腫細胞またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞における発現を用いて生成させることができる。あるいは、形質転換動物のゲノムへの導入とその後の形質転換動物の乳汁中の発現のために、抗体コード配列を導入遺伝子に組み込むことができる。例えば、米国特許第６１９７９４６号（特許文献２５）、第５８４９９９２号（特許文献２６）、第５５６５３６２号（特許文献２７）、第５３３６８９４号（特許文献２８）および第５３０４４８９号（特許文献２９）を参照のこと。適切な導入遺伝子としては、乳腺特異的遺伝子、例えば、カゼインまたはβ−ラクトグロブリンからのプロモーターおよび／またはエンハンサーを有する導入遺伝子などがある。
【００５３】
小分子
本発明用の小分子は、一般的に有機分子であるが、多数の化学物質クラス、好ましくは、５０ダルトンより大きく、約４０００ダルトンより小さい分子量を有する小有機化合物を含む。候補薬剤は、タンパク質との構造的相互作用に必要な官能基、特に、水素結合を含み、また、一般的に少なくともアミン、カルボニル、ヒドロキシルまたはカルボキシル基、好ましくは、少なくとも２つの官能化学基を含む。候補薬剤は、しばしば、上の官能基の１つまたは複数で置換された、炭素環式または複素環式構造および／または芳香族または多環式芳香族構造を含む。候補薬剤は、ペプチド、糖、脂肪酸、ステロイド、プリン、ピリミジン、その誘導体、構造的類似体または組合せを含むが、これらに限定されない生体分子のうちにも見出される。
【００５４】
小分子は、合成または天然化合物のライブラリーを含む広範囲の源から得ることができる。例えば、無作為化オリゴヌクレオチドおよびオリゴペプチドの発現を含む、広範囲の有機化合物および生体分子のランダムおよび誘導合成の多数の手段が利用可能である。あるいは、細菌、菌類、植物および動物抽出物の形の天然化合物のライブラリーが利用可能または容易に生産される。さらに、天然または合成により生産されるライブラリーおよび化合物は、従来の化学的、物理的および生化学的手段により容易に修飾され、コンビナトリアルライブラリーを生産するのに用いることができる。既知の薬剤は、アシル化、アルキル化、エステル化、アミド化のような誘導または無作為化学修飾に供して、構造的類似体を生成させることができる。
【００５５】
抗α４インテグリンペプチド
本発明の方法は、α４インテグリンまたはα４サブユニットを含む二量体に結合することができるあらゆるペプチドを用いて実施することができる。特異的α４インテグリン受容体または標的とする受容体の細胞外マトリックスの領域または天然リガンドと実質的に相同であるペプチドは、本発明の方法に含まれる。例えば、α４β１受容体の長期阻害のために、フィブロネクチンＩＩＩＣＳ領域の少なくとも一部を含むペプチド（例えば、ＣＳ−１ペプチド配列の少なくとも一部またはＣＳ−１配列と実質的に相同の配列を含むペプチド）を用いて、受容体に結合させ、α４を含むインテグリンの活性を阻害することができる。例えば、その全部を参考として援用する米国特許出願第０８／４５２０９８号（特許文献３０）を参照のこと。
【００５６】
免疫応答を誘発する薬剤
特定の実施形態において、本発明の薬剤は、α４インテグリンの免疫原性断片を含むペプチドまたはペプチド様物質である。免疫原性断片は、α４のエピトープを含む断片であり、一般的に天然に存在する哺乳動物α４タンパク質の少なくとも３、５、７，１０、１５、１７または２０連続アミノ酸を有する。ヒトおよびマウスα４のペプチド配列は、ＧｅｎＢａｎｋ（受入れ番号ＡＡ５９６１３およびＮＰ＿０３４７０６）から入手できる。当業者はα４のアミノ酸配列に基づき、またはそれらをコードする野生型ヌクレオチド（例えば、それぞれＧｅｎＢａｎｋ受入れ番号Ｌ１２００２およびＮＭ＿０１０５６）を用いて本発明のペプチド薬剤を容易に設計することができる。適切なペプチドが設計されたならば、最初に所望の免疫原性活性を有することが知られている抗体、例えば、α４構造に選択的に結合し、α４を含むインテグリンの活性を阻害する能力を特徴とする抗体に対してスクリーニングすることができる。
【００５７】
免疫原性断片は、免疫原性応答を促進するアミノ酸類似体または他の構造要素を有するようにも設計してもよい。特に、ペプチド断片は、免疫応答を誘発するそれらの能力を妨げることなく、該分子の全体的免疫原性を増大させる変異ＣまたはＮ末端を有していてもよい。そのような類似体の例は、α、α−ジ置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸、４−ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、γ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリシン、γ−Ｎ−アセチルリシン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジンおよび５−ヒドロキシリシンを含むが、これらに限定されない。他の有用な類似体は、Ｓｉｇｍａ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ａｎｄ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（２００１）（非特許文献２４）に見出すことができる。断片は、対象への投与後に対象における分子の追跡を可能とするために検出できるように標識してもよい。
【００５８】
ペプチド、類似体構造、ペプチド様物質等は、天然源から分離し、次いで、場合によって処理する（例えば、ペプチド切断により）か、あるいは固相合成または組換え発現のような当技術分野で知られている従来技術により合成することができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ等、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ  １９８９）（非特許文献２５）を参照のこと。自動ペプチド合成は、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）のような製造業者からの市販の装置を用いて実施することができ、実施する方法も確立されている。タンパク質の組換え生産は、ファージもしくは細菌細胞のような原核生物系または酵母、昆虫もしくは哺乳類細胞のような真核生物系を用いてもよい。あるいは、タンパク質は、当技術分野で知られている無細胞ｉｎ  ｖｉｔｒｏ系を用いて生産することができる。
【００５９】
他の例において、α４またはα４インテグリンを含む二量体に特異的に結合するペプチドを特定するためにｉｎ  ｖｉｔｒｏでスクリーニングすることができる多数のペプチドを発現するファージペプチドディスプレイライブラリーを用いることができる。ファージディスプレイ技術は、ランダムまたは選択的に無作為化されたペプチドの多様な集団を発現させる手段を提供する。ファージディスプレイの様々な方法およびペプチドの多様な集団を生成する方法も当技術分野で知られている。例えば、Ｌａｄｎｅｒ等（米国特許第５２２３４０９号（特許文献３１））は、ファージの表面上の結合ドメインの多様な集団を調製する方法を記載している。Ｌａｄｎｅｒ等は、ファージディスプレイライブラリーを生成するのに有用なファージベクターならびに潜在的結合ドメインを選択し、ランダムに、もしくは選択的に変異させた結合ドメインを生成する方法を記載している。ファージディスプレイライブラリーのスクリーニングは、一般的に、精製標的分子を用いるライブラリーのｉｎ  ｖｉｔｒｏパンニングを必要とする。標的分子に結合するファージを回収することができ、個々のファージをクローン化することができ、クローン化ファージによって発現されたペプチドを測定することができる。
【００６０】
同様に、ＳｍｉｔｈおよびＳｃｏｔｔ（Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  ２１７、２２８〜２５７頁（１９９３）（非特許文献２６）およびＳｃｉｅｎｃｅ  ２４９、３８６〜３９０頁（１９９０）（非特許文献２７））は、ベクターおよび発現するペプチドの集団を多様化させる方法を含むファージペプチドディスプレイライブラリーを生成する方法を記載している（国際公開第９１／０７１４１号（特許文献３２）および国際公開第９１／０７１４９号（特許文献３３）も参照）。ファージディスプレイ技術は、例えば、ランダムペプチドまたは所望通りに偏ったペプチドを生産するのに用いることができるコドンによる突然変異誘発法とともに用いるときに特に強力なものとすることができる（例えば、米国特許第５２６４５６３号（特許文献３４）を参照）。これらおよび他のよく知られている方法を用いて、１つまたはいくつかの選択される器官にホーミングするペプチドを特定するために本発明のｉｎ  ｖｉｖｏパンニング法に供することができるファージディスプレイライブラリーを生成することができる。
【００６１】
ペプチドファージディスプレイライブラリーの分子は、問題のペプチドの回収または同定を促進することができる複合体として示すこともできる。本明細書で用いているように、「複合体」という用語は、固体基体、プラスチックミクロビーズ、オリゴヌクレオチドまたはバクテリオファージ等の物理的、化学的または生物学的部分（これらに限定されないが）に結合したライブラリーのペプチドまたはペプチド様物質を意味する。その部分は、薬剤を同定または回収する手段を提供することができる。
【００６２】
免疫応答を誘発するために用いられる一部の薬剤は、α４インテグリンに対する免疫応答を誘導するための適切なエピトープを模倣するが、小さすぎて、それら自体では免疫原性を示すことができない。このような場合、ペプチド薬剤を適切な担体に結合させて、免疫応答を促進することができる。適切な担体としては、血清アルブミン、スカシガイヘモシアニン（ＫＬＨ）、免疫グロブリン分子、サイログロブリン、卵白アルブミン、破傷風トキソイド、またはジフテリア、大腸菌、コレラもしくはピロリ菌（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）のような他の病原性細菌からのトキソイド、または弱毒化トキシン誘導体などがある。他の担体としては、ＭＨＣ複対立遺伝子、例えば、すべてのヒトＭＨＣ対立遺伝子の少なくとも７５％に結合するＴ細胞エピトープなどがある。そのような担体は、当技術分野で時には「普遍的Ｔ細胞エピトープ」として知られている。普遍的Ｔ細胞エピトープの例として以下のものが挙げられる。
【００６３】
インフルエンザヘマグルチニン：ＨＡ３０７−３１９    ＰＫＹＶＫＱＮＴＬＫＬＡＴ（配列番号２）
ＰＡＤＲＥ    ＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ（配列番号３）、Ｘは好ましくはシクロヘキシルアラニン、チロシンまたはフェニルアラニンである。
マラリアＣＳ：Ｔ３エピトープ    ＥＫＫＩＡＫＭＥＫＡＳＳＶＦＮＶ（配列番号４）
Ｂ型肝炎表面抗原：ＨＢｓＡｇ１９−２８  ＦＦＬＬＴＲＩＬＴＩ（配列番号５）
熱ショック蛋白６５：ｈｓｐ６５１５３−１７１    ＤＱＳＩＧＤＬＩＡＥＡＭＤＫＶＧＮＥＧ（配列番号６）
カルメット−ゲラン桿菌    ＱＶＨＦＱＰＬＰＰＡＶＶＫＬ（配列番号７）
破傷風トキソイド：ＴＴ８３０−８４４    ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ（配列番号８）
破傷風トキソイド：ＴＴ９４７−９６７    ＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ（配列番号９）
ＨＩＶ  ｇｐ１２０Ｔ１    ＫＱＩＩＮＭＷＱＥＶＧＫＡＭＹＡ（配列番号１０）
【００６４】
免疫応答を刺激または促進するための他の担体としては、ＩＬ−１、ＩＬ−１αおよびβペプチド、ＩＬ−２、γ−ＩＮＦ、ＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦのようなサイトカインならびにマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）１αおよびβならびにＲＡＮＴＥＳ（すなわち、ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｕｐｏｎ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｎｏｒｍａｌ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ）のようなケモカインなどである。免疫原性薬剤は、国際公開第９７／１７６１３号（特許文献３５）および国際公開第９７／１７６１４号（特許文献３６）に記載されているように、組織にわたる輸送を促進するペプチドに結合させることもできる。
【００６５】
免疫原性薬剤は、化学的架橋により担体に結合させることができる。薬剤を担体に結合させる手法は、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）およびスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシラート（ＳＭＣＣ）を用いるジスルフィド結合の形成（ペプチドがスルフヒドリル基を欠いている場合、システイン残基の付加によりこれが可能となる）を含むが、これらに限定されない。これらの試薬は、それ自体と１つのタンパク質上にあるペプチドシステインとの間のジスルフィド結合およびリシン上のε−アミノまたは他のアミノ酸における他の遊離アミノ基を介してのアミド結合を形成する。様々なそのようなジスルフィド／アミド形成剤は、Ｉｍｍｕｎ．  Ｒｅｖ．  ６２、１８５頁（１９８２）（非特許文献２８）に記載されている。他の二官能性カップリング剤は、ジスルフィド結合ではなく、チオエーテルを形成する。これらのチオエーテル形成剤の多くは市販されており、６−マレイミドカプロン酸、２−ブロモ酢酸、２−ヨード酢酸および４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸の反応性エステルなどである。カルボキシル基は、それらをスクシンイミドまたは１−ヒドロキシル−２−ニトロ−４−スルホン酸ナトリウム塩と組合わせることにより活性化させることができる。
【００６６】
ペプチド薬剤も担体との融合タンパク質（すなわち、異種ペプチド）として発現させることができる。ペプチド薬剤は、そのアミノ末端、そのカルボキシル末端または両方において担体に結合させることができる。場合によって、免疫原性ペプチドの複数の繰返し体を融合タンパク質に存在させることができる。場合によって、免疫原性ペプチドは、例えば、異種ペプチドの複数のコピーに、ペプチドのＮおよびＣ末端で結合させることができる。ある種の担体ペプチドは、担体ペプチドに対するヘルパーＴ細胞応答を誘発させる役割を果たしている。誘発されたヘルパーＴ細胞が次に、担体ペプチドに結合した免疫原性ペプチドに対するＢ細胞応答を誘発する。
【００６７】
薬剤が個人に投与すべき本発明による抗体、ポリペプチド、ペプチド、小分子または他の製薬上有用な化合物であるかどうかにかかわりなく、投与は、長期投与法による。実際の投与量ならびに投与の速度および時間経過は、患者の性質と重症度に依存する。治療の処方、例えば、用量等に関する決定は、一般開業医および他の医師の責任の範囲内にあり、一般的に治療する障害、個々の患者の状態、送達の部位、投与の方法および開業医に知られている他の因子を考慮に入れる。上述の手法およびプロトコルの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｏｓｏｌ、Ａ．（ｅｄ．）、１９９０（非特許文献２９）に見出すことができる。
【００６８】
薬剤組成物
本発明は、病的炎症を伴う障害に罹患しやすい、かつ／または罹患している対象における慢性病的炎症の低減のための薬剤組成物も提供する。
【００６９】
本発明の製剤は、好ましくは製剤の約０．１〜約１０％の濃度の薬剤を含む。それらは、他の製薬上活性な化合物とともに適宜用いることもできる。以下の方法および賦形剤は、単に典型的なものであり、限定的なものではない。
【００７０】
経口剤については、薬剤は、単独または、適切な添加剤、例えば、ラクトース、マンニトール、トウモロコシデンプンもしくはジャガイモデンプンのような通常の添加剤、結晶性セルロース、セルロース誘導体、アラビアゴム、トウモロコシデンプンもしくはゼラチンのような結合剤、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプンもしくはカルボキシメチルセルロースナトリウムのような崩壊剤、タルクもしくはステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤、ならびに所望ならば、希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、保存料および着香料と配合して、錠剤、散剤、粒剤もしくはカプセル剤を調製して用いることができる。
【００７１】
薬剤が抗体である場合、製剤を非経口剤形で投与することが好ましい。好ましい剤形は、意図される投与方式および治療適用に依存する。組成物は、所望の製剤によって、動物またはヒトへの投与用の薬剤組成物を調合するのに一般的に用いられる賦形剤と定義されている製薬上許容できる無毒性の担体または希釈剤を含んでいてもよい。希釈剤は、配合剤の生物活性に影響を及ぼさないように選択する。そのような希釈剤の例は、蒸留水、生理学的リン酸緩衝食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液およびハンクス液である。さらに、薬剤組成物または製剤は、他の担体、アジュバントまたは無毒性、非治療用、非免疫原性安定化剤等を含んでいてもよい。プロテオグリカンのような担体分子も含んでいてよい。そのような担体分子の特定の例は、ヘパリン硫酸、ヒアルロン酸、ケラタン硫酸、コンドロイチン４−硫酸、コンドロイチン６−硫酸、ヘパラン硫酸およびデルマチン硫酸、ペルレカンならびにペントポリ硫酸のようなグリコサミノグリカンを含むが、これらに限定されない。
【００７２】
本発明の抗体は、界面活性剤を添加もしくは添加しない水および油のような滅菌済み液体であってよい薬剤担体を含む生理学的に許容できる希釈剤中該物質の溶液の注射剤または懸濁剤として投与することができる。他の製剤は、石油、動物、植物または合成起源、例えば、落花生油、大豆油および鉱油の製剤である。一般的に、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールのようなグリコールが特に注射液剤用の好ましい液体担体である。本発明の薬剤は、有効成分の持続的放出を可能にするように処方することができる徐放性製剤、例えば、デポー注射剤、インプラント製剤または浸透圧ポンプとして投与することができる。
【００７３】
さらに、抗体である本発明の薬剤は、全または部分抗体（例えば、単鎖Ｆｖ）をコードするポリヌクレオチドを対象に投与することにより提供することができる。このポリヌクレオチドは、対象における治療上有効な量の抗体の発現を可能にするように適切な賦形剤に加えて対象に投与する。
【００７４】
本発明の薬剤は、植物油もしくは他の同様な油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステルまたはプロピレングリコールのような水性または非水性溶媒に溶解、懸濁または乳化することにより、注射用製剤中に配合することができる。製剤は、可溶化剤、等張剤、懸濁化剤、乳化剤、安定化剤および保存料のような通常の添加剤を含んでいてもよい。
【００７５】
薬剤は、吸入または肺送達により投与するためのエアゾール製剤で用いることができる。本発明の薬剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素等の許容できる加圧噴射剤中に配合することができる。
【００７６】
さらに、薬剤は、乳化基剤または水溶性基剤のような様々な基剤と混合することにより坐剤に調剤することができる。本発明の薬剤は、坐剤により直腸に投与することができる。坐剤には、体温で融解するが、室温では固化するココアバター、カーボワックスおよびポリエチレングリコールのような賦形剤を含めることができる。
【００７７】
本発明の薬剤の投与は、非経口的注射を含む都合のよい手段により行うことができ、全身または局所送達であってよい。本発明の薬剤は、治療的投与用の様々な製剤に組み込むことができる。より詳細には、本発明の薬剤は、製薬上許容できる適切な担体または希釈剤との組合せにより薬剤組成物に配合することができ、錠剤、カプセル剤、散剤、粒剤、軟膏剤、液剤、坐剤、注射剤、吸入剤、ゲル剤、ミクロスフェア剤およびエアゾール剤のような固体、半固体、液体または気体状の製剤に配合することができる。そのようなものとして、薬剤の投与は、経口、口内、直腸内、非経口的、腹腔内、皮内、経皮、気管内、鼻腔内、胃、筋肉内、頭蓋内、皮下投与等の様々な方法で実現することができる。主薬は、投与後に全身性であってよく、あるいは、局所投与、壁内投与の使用、もしくは埋め込みの部位の主薬の用量を保持する役割を果たすインプラントの使用により局在化してもよい。
【００７８】
各用量単位、例えば、ティースプーン一杯、テーブルスプーン一杯、錠剤または坐剤が、あらかじめ決定した量の本発明の１つまたは複数の薬剤を含む組成物を含む、シロップ剤、エリキシル剤および懸濁剤のような経口または直腸投与用の単位剤形を提供することができる。同様に、注射または静脈内投与用の単位剤形は、本発明の薬剤を、滅菌水、正常食塩水または他の製薬上許容できる担体中溶液として組成物中に含むことができる。
【００７９】
徐放性製剤用のインプラントは、当技術分野でよく知られている。インプラントは、生分解性または非生分解性ポリマーを用いてミクロスフェア、スラブ等として調剤される。例えば、乳酸および／またはグリコール酸のポリマーは、宿主による許容性が良好である侵食性ポリマーをなす。インプラントは、主薬の局所濃度が身体の残部と比較して当該部位で増加するように、タンパク質沈着の部位（すなわち、神経変性疾患に伴うアミロイド沈着の形成の部位）の近傍に留置する。
【００８０】
対象への投与のための一般的な用量単位は、静脈内投与に適した液剤、１日２〜６回服用する錠剤、または１日１回服用し、比較的に高い含量の有効成分を含む１回放出カプセル剤または錠剤等を含むが、これらに限定されない。時間放出効果は、異なるｐＨ値で溶解するカプセル材料、浸透圧により徐々に放出するカプセルにより、または他の既知の放出制御手段により得ることができる。
【００８１】
抗体およびペプチドを含む本発明の特定の薬剤は、時としてアジュバントとともに投与する。免疫応答を誘発するために、様々なアジュバントを抗α４インテグリン薬剤と併用することができる。好ましいアジュバントは、定性的な応答形態に影響を及ぼす薬剤の立体配座の変化を引き起こすことなく、薬剤に対する固有の応答を増強させる。好ましいアジュバントは、水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウム、３Ｄｅ−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ（商標））（英国特許第２２２０２１１号（ＲＩＢＩ  ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、Ｍｏｎｔａｎａ、現在Ｃｏｒｉｘａの一部）（特許文献３７）を参照）である。Ｓｔｉｍｕｌｏｎ（商標）ＱＳ−２１は、南アフリカに見出されるＱｕｉｌｌａｊａ  Ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａ樹の樹皮から分離されたトリテルペングリコシドまたはサポニンである（Ｋｅｎｓｉｌ等、ｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（編集Ｐｏｗｅｌｌ  ＆  Ｎｅｗｍａｎ、Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ、１９９５（非特許文献３０））、米国特許第５０５７５４０号（特許文献３８）（Ａｑｕｉｌａ  ＢｉｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ、ＭＡ）を参照）。他のアジュバントは、場合によってモノホスホリルリピドＡ（Ｓｔｏｕｔｅ等、１９９７  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３３６、８６〜９１頁）（非特許文献３１）のような免疫増強薬と併用される、水中油型乳剤（スクアレンまたは落花生油）である。他のアジュバントは、ＣｐＧである（国際公開第９８／４０１００号）（特許文献３９）。あるいは、薬剤をアジュバントに結合させることができる。しかし、そのような結合は、宿主免疫応答の性質に影響を及ぼすように所望のα４エピトープの立体配座を実質的に変化させるものであるべきはない。アジュバントは、主薬とともに治療用組成物の成分として投与することができ、あるいは、別個に、治療薬の投与前に、同時に、または投与後に投与することができる。
【００８２】
投与用として好ましいクラスのアジュバントは、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウムおよび硫酸アルミニウムである。そのようなアジュバントは、ＭＰＬまたは３−ＤＭＰ、ＱＳ−２１、ポリグルタミン酸もしくはポリリシンのような多量体もしくは単量体アミノ酸のような他の特異的免疫促進薬とともに、または単独で用いることができる。他のクラスのアジュバントは、水中油型乳剤である。そのようなアジュバントは、ムラミルペプチド（例えば、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）、Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌ−Ｄ−イソグル−Ｌ−アラ−ジパルミトキシプロピルアミド（ＤＴＰ−ＤＰＰ）テラミド（商標）のような他の特異的免疫促進薬または他の細菌細胞壁成分とともに、または単独で用いることができる。水中油型乳剤としては、（ａ）Ｍｏｄｅｌ  １１０Ｙ微量流動化装置（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ、Ｎｅｗｔｏｎ  ＭＡ）のような微量流動化装置を用いてサブミクロン粒子に調剤した５％スクアラン、０．５％トウィーン８０および０．５％スパン８５を含む（場合によって種々の量のＭＴＰ−ＰＥを含む）ＭＦ５９（国際公開第９０／１４８３７号（特許文献４０））、（ｂ）微量流動化処理してサブミクロン乳剤に、またはボルッテックス処理してより大きい粒径の乳剤に調剤した１０％スクアラン、０．４％トウィーン８０、５％プルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）保護ポリマーＬ１２１およびｔｈｒ−ＭＤＰを含むＳＡＦ、（ｃ）２％スクアラン、０．２％トウィーン８０およびモノホスホリル脂質Ａ、トレハロースジミコラート（ＴＤＭ）および細胞壁骨格（ＣＷＳ）、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（Ｄｅｔｏｘ（商標））を含むＲｉｂｉ（商標）アジュバントシステム（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、ＭＴ）などがある。他のクラスの好ましいアジュバントは、Ｓｔｉｍｕｌｏｎ（商標）（ＱＳ−２１、Ａｑｕｉｌａ、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ、ＭＡ）のようなサポニンアジュジュバントまたはＩＳＣＯＭｓ（免疫促進複合体）およびＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸのようなそれから発生した粒子である。他のアジュバントとしては、完全および不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、インターロイキン（ＩＬ−１、ＩＬ−２およびＩＬ−１２）のようなサイトカイン、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）ならびに腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などがある。そのようなアジュバントは一般的に市販されている。
【００８３】
アジュバントは、単一組成物として薬剤とともに投与することができ、あるいは、薬剤の投与前、同時に、もしくは投与後に投与することができる。薬剤とアジュバントは、同じバイアルに包装し、供給することができ、あるいは、別個のバイアルに包装し、使用前に混合することができる。薬剤とアジュバントは、一般的に意図する治療適用を示したラベルとともに包装する。薬剤とアジュバントを別個に包装する場合、包装には一般的に使用前の混合に関する指示書を含む。アジュバントおよび／または担体の選択は、アジュバントを含む製剤の安定性、投与経路、投与計画およびワクチン接種する動物種におけるアジュバントの有効性のような因子に依存する。ヒトでは、製薬上許容できる好ましいアジュバントは、管轄規制機関によりヒトへの投与が承認されたものである。ヒトにおけるそのような好ましいアジュバントの例としては、ミョウバン、ＭＰＬおよびＱＳ−２１などがある。場合によっては、２種以上のアジュバントを同時に用いることができる。好ましい組合せは、ミョウバンとＭＰＬ、ミョウバンとＱＳ−２１、ＭＰＬとＱＳ−２１およびＱＳ−２１とＭＰＬなどである。また、フロイントの不完全アジュバントを、場合によってミョウバン、ＱＳ−２１およびＭＰＬならびにそのすべての組合せのいずれかと併用することができる（Ｃｈａｎｇ等、１９９８  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ３２、１７３〜１８６頁）（非特許文献３２）。
【００８４】
長期投与計画
本発明の長期治療計画は、病的炎症のを抑制を必要とする患者における病的炎症を抑制するのに十分な受容体飽和を維持するレベルの抗α４インテグリン薬剤を提供する。本発明の方法は、２週間に１回、または１か月に１回から２か月に１回の投与を必要とし、少なくとも６か月間、より好ましくは１年間またはそれより長い期間にわたり反復投与を行う。本発明の方法は、約６５％〜約１００％、より好ましくは約７５％〜約１００％、さらにより好ましくは約８０％〜約１００％の範囲のα４インテグリンを含む二量体（例えば、ＶＬＡ−４）のヒト患者における受容体飽和レベルを得て、維持することを含む。これらの受容体飽和レベルがこれらのレベルに長期的に（例えば、６か月間など）維持されて、病的炎症の継続的抑制が可能となる。
【００８５】
特定の実施形態において、抗α４インテグリン薬剤は、抗体、好ましくはヒト化またはヒト抗体（例えば、ナタリズマブ）であり、その投与は１か月ごとである。受容体飽和レベルをモニターして投与法の有効性を判定し、生理学的マーカーを測定して投与法の成功を確認することができる。確認として、抗体の血清中濃度をモニターして、身体のクリアランスを確認し、治療の有効性に対する半減期の影響の可能性を検討することができる。
【００８６】
薬剤の用量単位での投与量は、アジュバントも投与するかどうかに依存し得るものであり、一般的にアジュバントが存在する場合にはより高い用量が必要である。本発明の薬剤による免疫化においては、用量は、約０．０００１〜約１００ｍｇ／ｋｇ、さらに通常、約０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ宿主体重である。例えば、用量は約１ｍｇ／ｋｇ体重または約１０ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。用量および頻度は、患者における薬剤の半減期によって変わり得る。用量および投与頻度は、投与が予防的か治療的かによって変わり得る。抗体投与では、毎回の投与での注射は一般的に約２．０〜８．０ｍｇ／ｋｇである。本明細書に記載した教示によれば、患者から体液試料、一般的に血清または脳脊髄液試料を採取し、当技術分野でよく知られている方法を用いてインテグリン受容体飽和度を測定することにより、有効量をモニターすることができる。理想的には、試料を初回投与前に採取し、その後の試料は毎回の免疫化の前および／または後に採取し、測定する。特に好ましい量は、１か月当たり患者体重１ｋｇ当たりナタリズマブ３ｍｇまたはそれと同等な免疫活性な断片である。
【００８７】
アジュバントを投与する場合、用量は、個々のアジュバントおよび抗α４薬剤の免疫原性のレベルによって増加する。本発明により選択する個々の薬剤の用量は、本明細書に記載した教示事項を考慮して、標準投与法により決定する。
【００８８】
反復個別投与からなる長期投与の代替法として、用量が、炎症を抑制するのに十分な受容体飽和のレベルが維持されるようなものであるならば、抗α４薬剤を徐放性製剤として投与することができる。例えば、放出制御系を用いて本発明の範囲内の抗α４薬剤を長期的に投与することができる。適切な放出制御剤形の考察は、Ｌｅｓｃｚｅｋ  Ｋｒｏｗｃｚｙｎｓｋｉ、Ｅｘｔｅｎｄｅｄ−Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ、１９８７（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）（非特許文献３３）に見出すことができる。
【００８９】
様々な放出制御技術が非常に広いスペクトルの薬物剤形に及んでいる。放出制御技術は、物理的系および化学的系を含むが、これらに限定されない。物理的系は、マイクロカプセル形成、マクロカプセル形成および膜システムのような速度制御膜を含む貯蔵系、中空繊維、超微細孔性三酢酸セルロース、ならびに多孔性重合物質および発泡体のような、速度制御膜を含まない貯蔵系、無孔性重合体または弾性体マトリックス（例えば、非侵食性、侵食性、環境因子移入および分解性）に物理的に溶解したシステムおよび無孔性重合体または弾性体マトリックス（例えば、非侵食性、侵食性、環境因子移入および分解性）に物理的に分散した物質を含む一体系、外側制御層と化学的に類似または類似していない貯蔵層を含む積層構造、ならびに浸透圧ポンプまたはイオン交換樹脂への吸着のような他の物理的方法を含むが、これらに限定されない。
【００９０】
化学的系は、重合体マトリックスの化学的侵食（例えば、不均一または均一侵食）または重合体マトリックスの生物学的侵食（例えば、不均一または均一）を含むが、これらに限定されない。放出制御のためのシステムのカテゴリーのさらなる考察は、Ａｇｉｓ  Ｆ．  Ｋｙｄｏｎｉｅｕｓ、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｔｈｅｏｒｙ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、１９８０（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）（非特許文献３４）に見出すことができる。
【００９１】
本発明の方法は、病的炎症を伴う、もしくはそれに起因する障害に罹患している患者を治療するために、または特定の障害のリスクがある患者を予防的に治療するために用いることができる。予防的に治療するために必要な投与法と治療に必要な投与法は異なる可能性があり、特定の使用目的と治療する障害ごとに投与法を設計することが必要である。
【００９２】
いくつかの方法において、２種以上の薬剤（例えば、異なる結合特異性を有するモノクローナル抗体）を同時に投与する。その場合、投与する各薬剤の用量は、示されている範囲内にある。受容体飽和レベルを測定することにより、あるいは、疾患の経過の他の指標を追跡することにより示されるので、間隔は不規則であってもよい。
【００９３】
当業者は、用量段階は特定の薬剤、症状の重症度および副作用に対する対象の感受性の関数として変わり得ることを容易に認識するであろう。特定の薬剤のあるものは他のものよりも強力である。所与の薬剤の好ましい用量は、当業者によって様々な手段により容易に決定される。好ましい手段は、所与の薬剤の生理学的効力を測定することである。
【００９４】
治療適応
本発明の徐放性製剤は、広範囲の望ましい効果を得るために用いることができる。特に、本発明の製剤は、病的炎症を標的とする抗炎症薬の長期投与により治療可能であるあらゆる疾患状態または症状を本質的に治療するのに有用である。
【００９５】
本発明はまた、α４依存性相互作用を遮断する抗α４インテグリン薬剤の能力を利用する治療の方法を提供する。内皮細胞上のＶＣＡＭ−１リガンドとのα４依存性相互作用は、中枢神経系のそれ（α４依存性相互作用）を含む多くの炎症性反応における初期の事象である。炎症に起因し、急性および／または慢性臨床的増悪を有する望ましくない疾患および状態としては、多発硬化症（Ｙｅｄｎｏｃｋ等、１９９２  Ｎａｔｕｒｅ  ３５６、６３頁（非特許文献３５）、Ｂａｒｏｎ等、１９９３  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １７７、５７頁（非特許文献３６））（非特許文献３５）、髄膜炎、脳炎、脳卒中、他の大脳外傷、潰瘍性大腸炎およびクローン病（ＣＤ）を含む炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（Ｈａｍａｎｎ等、１９９４  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５２，３２３８頁）（非特許文献３７）、（Ｐｏｄｏｌｓｋｙ等、１９９３  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ９２、３７２頁（非特許文献３８））、慢性関節リウマチ（ｖａｎ  Ｄｉｎｔｈｅｒ−Ｊａｎｓｓｅｎ等、１９９１  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４７、４２０７頁（非特許文献３９）、ｖａｎ  Ｄｉｎｔｈｅｒ−Ｊａｎｓｓｅｎ等、１９９３  Ａｎｎａｌｓ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ５２、６７２頁）（非特許文献４０）、Ｅｌｉｃｅｓ等、１９９４  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ９３、４０５頁（非特許文献４１））、Ｐｏｓｔｉｇｏ等、１９９２  Ｊ，  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ８９、１４４５頁（非特許文献４２））、喘息（Ｍｕｌｌｉｇａｎ等、１９９３  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５０、２４０７頁（非特許文献４３））および急性若年発症糖尿病（１型）（Ｙａｎｇ等、１９９３  ＰＮＡＳ  ９０、１０４９４頁（非特許文献４４））、Ｂｕｒｋｌｙ等、１９９４  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ４３、５２９頁（非特許文献４５））、Ｂａｒｏｎ等、１９９４  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ９３、１７００頁（非特許文献４６））、ＡＩＤＳ痴呆（Ｓａｓｓｅｖｉｌｌｅ等、１９９４  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐａｔｈ．  １４４、２７頁（非特許文献４７））、アテローム動脈硬化症（Ｃｙｂｕｌｓｋｙ等、１９９１  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１、７８８〜９１頁（非特許文献４８）、Ｌｉ等、１９９３  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．  Ｔｈｒｏｍｂ．  １３、１９７頁（非特許文献４９））、腎炎（Ｒａｂｂ等、１９９５  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｅｍｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．１６、４１７〜２５頁（非特許文献５０）、鼻炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、心筋虚血、慢性前立腺炎、鎌状赤血球貧血の合併症、紅斑性狼瘡および成人呼吸促迫症候群において発生するような急性白血球媒介性肺損傷などがある。
【００９６】
炎症性腸疾患は、クローン病（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎と称する２つの類似疾患の総称である。ＣＤは、肉芽腫性炎症性反応による腸壁の全層の明確に範囲が定まった、一般的に貫壁性疾患によって特徴付けられる特発性の慢性潰瘍収縮性炎症性疾患である。この疾患は最も一般的には末端回腸および／または結腸を冒すが、口から肛門までの胃腸管のあらゆる部分に及ぶ可能性がある。潰瘍性大腸炎は、主として結腸粘膜および粘膜下に限定される炎症性反応である。リンパ球およびマクロファージは、炎症性腸疾患の病変部に多数存在し、炎症性損傷に寄与している可能性がある。
【００９７】
喘息は、気管支気道の発作性収縮を増強する様々な刺激に対する気管気管支樹の反応性の亢進を特徴とする疾患である。刺激は、ヒスタミン、好酸球性および好中球性走化因子、ロイコトリエン、プロスタグランジンおよび血小板活性化因子などのＩｇＥ被覆マスト細胞からの炎症の様々なメディエータの放出を引き起こす。これらの因子の放出は、炎症性損傷を引き起こす好塩基球、好酸球および好中球を動員する。
【００９８】
アテローム動脈硬化症は、動脈（例えば、冠動脈、頚動脈、大動脈および腸骨動脈）の疾患である。基礎病変であるアテロームは、脂質のコアと線維性被覆キャップを有する内膜内の隆起した限局性プラークからなる。アテロームは、動脈血流障害をもたらし、罹患した動脈を弱くする。心筋および脳梗塞は、この疾患の主要な結果である。マクロファージおよび白血球がアテロームに動員され、炎症性損傷に寄与する。
【００９９】
慢性関節リウマチは、主として関節の障害と破壊をもたらす慢性再発性炎症性疾患である。慢性関節リウマチは、通常は最初に手および足の小関節を冒すが、その後、手首、肘、くるぶしおよび膝に及ぶことがある。関節炎は、滑膜細胞と循環から関節の滑膜裏層中に浸潤する白血球との相互作用に起因する。例えば、Ｐａｕｌ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（３ｄ  ｅｄ．、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、１９９３）（非特許文献５１）を参照のこと。
【０１００】
抗α４薬剤の長期投与の他の適応は、臓器または移植片拒絶の治療である。近年、皮膚、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓および骨髄のような組織および臓器の移植の外科手術手技の有効性の著しい改善があった。たぶん重大な問題は、移植した同種移植片または臓器に対するレシピエントにおける免疫寛容をもたらす十分な薬剤が欠如していることである。同種細胞または臓器を宿主に移植する場合（すなわち、提供者と被提供者が同じ種の異なる個体である）、宿主免疫系が、移植組織の破壊につながる、移植における外来抗原に対する免疫応答（宿主対移植片病）を引き起こす可能性がある。ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４＋細胞および単球はすべて、移植組織の拒絶に関与する。α４インテグリンに対する抗体は、とりわけ、被提供者における同種抗原誘発免疫応答を遮断し、それにより、そのような細胞が移植組織または臓器の破壊に関与することを防止するのに有用である。例えば、Ｐａｕｌ等、１９９６  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ９、４２０〜４２５頁（非特許文献５２）、Ｇｅｏｒｃｚｙｎｓｋｉ等、１９９６  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ８７、５７３〜５８０頁（非特許文献５３）、Ｇｅｏｒｃｚｙｎｓｋｉ等、１９９５  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３、５５〜６１頁（非特許文献５４）、Ｙａｎｇ等、１９９５  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６０、７１〜７６頁（非特許文献５５）、Ａｎｄｅｒｓｏｎ等、１９９４  ＡＰＭＩＳ  １０２、２３〜２７頁（非特許文献５６）を参照のこと。
【０１０１】
抗α４薬剤の関連する使用目的は、「宿主対移植片」病（ＧＶＨＤ）に関連する免疫応答の変調である。例えば、Ｓｃｈｌｅｇｅｌ等、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５５、３８５６〜３８６５頁（１９９５）（非特許文献５７）を参照のこと。ＧＶＨＤは、免疫適格細胞が同種被移植者に移行した場合に起こる潜在的に致命的疾患である。このような状況では、提供者の免疫適格細胞が被移植者の組織を攻撃する可能性がある。皮膚、腸上皮および肝臓の組織は、しばしば標的であり、ＧＶＨＤの経過中に破壊される可能性がある。この疾患は、骨髄移植におけるように、免疫組織が移植されている場合に特に重大な問題であるが、心臓および肝臓移植などの他の場合に、さほど重大でないＧＶＨＤも報告された。本発明の治療薬は、とりわけ、提供者のＴ細胞の活性化を阻害し、それにより、宿主における標的細胞を溶解するそれらの能力を妨げるのに用いる。
【０１０２】
本発明の抗α４薬剤のさらなる使用目的は、腫瘍転移を阻害することである。いくつかの腫瘍細胞がα４インテグリンを発現すると報告され、α４インテグリンに対する抗体が内皮細胞へのそのような細胞の接着を阻害すると報告された（Ｓｔｅｉｎｂａｃｋ等、１９９５  Ｕｒｏｌ．  Ｒｅｓ．  ２３、１７５〜８３頁（非特許文献５８）、Ｏｒｏｓｚ等、１９９５  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ６０、８６７〜７１頁（非特許文献５９）、Ｆｒｅｅｄｍａｎ等、１９９４  Ｌｅｕｋ．  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  １３、４７〜５２頁（非特許文献６０）、Ｏｋａｈａｒａ等、１９９４  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５４、３２３３〜６頁）（非特許文献６１）。
【０１０３】
本発明の抗α４薬剤のさらなる使用目的は、多発硬化症を治療することである。多発硬化症（ＭＳ）は、米国において２５００００〜３５００００人が罹患していると推定される進行性の神経学的自己免疫疾患である。多発硬化症は、特定の白血球が神経線維を覆う絶縁鞘であるミエリンを攻撃し、その破壊を開始する、特異的自己免疫反応の結果であると考えられる。多発硬化症の動物モデルにおいて、α４β１インテグリンに対するマウスモノクローナル抗体は、内皮に対する白血球の接着を阻害し、それにより、動物における中枢神経系の炎症とその後の麻痺を予防することが示された。
【０１０４】
ＭＳの発症は、劇的であるか、あるいは患者に医療処置を求めさせないほど温和である。最も一般的な症状は、脱力（１つまたは複数の肢の）、視神経炎に起因する視力障害、感覚障害、複視および運動失調などである。疾患の経過は、（１）再発性ＭＳ、（２）慢性進行性ＭＳ、および（３）非活動性ＭＳの３つの一般的なカテゴリーに層別化することができる。再発性ＭＳは、神経学的機能不全の反復性発作を特徴とする。ＭＳ発作は、一般的に数日から数週間にわたって発生し、完全な回復、部分的な回復、または全く回復しない状態が後続する。まれにはある程度の回復が２年間以上持続することがあるが、発作からの回復は一般的に最大症状から数週間から数か月以内に起こる。
【０１０５】
慢性進行性ＭＳは、緩やかな進行性悪化をもたらし、安定化または寛解の期間はない。この型は、再発性ＭＳの既往歴を有する患者に発生するが、２０％の患者では再発を想起させることができない。進行性経過中に急性再発も起こることがある。
【０１０６】
第３の型は、非活動性ＭＳである。非活動性ＭＳは、程度が可変性の固定した神経学的欠損を特徴とする。非活動性ＭＳを有するほとんどの患者が再発性ＭＳの既往歴を有する。
【０１０７】
ＭＳの経過は、患者の年齢にも依存する。例えば、有望な予後因子としては、早期発症（小児期を除く）、再発性経過、および発症５年後に残存作業不能がほとんどないことなどがある。これに対して、不良な予後は、晩年の発症（すなわち、４０歳以上）および進行性経過に関連する。慢性進行性ＭＳはＭＳを再発させる晩年に始まる傾向があるので、これらの変数は相互に依存する。慢性進行性ＭＳによる作業不能は、通常個々の患者における進行性対麻痺または四肢麻痺に起因する。本発明の１態様において、患者が疾患の再発期でなく、寛解状態にあるときに、患者を治療することが好ましい。
【０１０８】
副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）または経口コルチコステロイド（例えば、経口プレドニゾンまたは静脈内メチルプレドニゾロン）の短期使用がＭＳの急性増悪を有する患者を治療するための唯一の特異的治療処置である。
【０１０９】
ＭＳのより新規の治療としては、患者へのインターフェロンβ１ｂ、インターフェロンβ１ａおよびコパキソン（登録商標）（以前はコポリマー１として知られていた）の投与などがある。これらの３種の薬剤は疾患の再発率を有意に低減することが示された。これらの薬剤は一般的に、筋肉内または皮下に自己投与するものである。
【０１１０】
現在利用可能ないずれの治療も脱髄またはＭＳを抑制しない。本発明の１態様は、本明細書に開示した薬剤で単独または他の標準治療モダリティー（modality）と併用してＭＳを治療することを意図している。標準治療モダリティーは、以下を含むが、それらに限定されない。患者における疾患の状態に依存する本明細書に開示した方法および組成物と併用してＭＳを治療する際に使用する本明細書で述べなかったさらなる治療モダリティーは、熟達した開業医には明らかであろう。ＭＳおよび他の病的炎症に対するそのようなさらなる治療モダリティーは、他の免疫調節薬または免疫抑制薬などであろう。
【０１１１】
上述した薬剤および薬剤組成物は、多発硬化症、炎症性腸疾患、喘息、アテローム動脈硬化症、慢性関節リウマチ、臓器または移植片拒絶および移植片対宿主病を含む前記の炎症性疾患の予防的および／治療的治療のために長期的に投与することができる。治療的適用においては、組成物を、そのような疾患に罹患している疑いのある、もしくは既に罹患している患者に疾患の症状またはその合併症を治癒、もしくは少なくとも部分的に抑制するのに十分な量で投与する。これを達成するのに十分な量は、治療上、または製薬上有効な量と定義する。
【０１１２】
予防的適用においては、薬剤組成物を個々の疾患に罹りやすい、もしくはそのリスクがある患者に疾患のリスクを除去もしくは低減、または発症を遅延させるのに十分な量で長期的に投与する。多発硬化症が寛解した患者では、リスクは、ＮＭＲ画像法により、または場合によって、患者により認められる前兆により評価することができる。
【０１１３】
上述の状態の治療のための本発明の組成物の有効な投与法は、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、および投与した他の薬剤などの多くの種々の因子によって異なる。したがって、治療用量は、安全性および有効性を最適化するように調節する必要がある。一般的に、当該投与法の各投与量は、約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、さらに通常、０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ宿主体重の範囲であろう。１つの好ましい投与法は、３００ｍｇを１か月当たり１回、少なくとも６か月間、より好ましくは１２か月間、また、たぶん数年間にわたり投与することである。好ましい他の投与法は、１か月当たり、患者の体重１ｋｇ当たり３ｍｇである。そのような投与法は、治療を必要とする小児または青年患者に好ましいものであると思われる。
【０１１４】
併用治療
本発明の抗α４薬剤は、急性および慢性炎症に対する有効な量の他の治療薬とともに用いることができる。そのような薬剤としては、接着分子（例えば、他のインテグリン）の他の拮抗薬、セレクチンおよび免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリー構成員などがある（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、１９９０  Ｎａｔｕｒｅ  ３４６、４２５〜４３３頁、Ｏｓｂｏｒｎ、１９９０  Ｃｅｌｌ  ６２、３頁（非特許文献６２）、Ｈｙｎｅｓ、１９９２  Ｃｅｌｌ  ９、１１頁（非特許文献６３））。インテグリンは、一般的に短い細胞質ドメインを有するα鎖（１２０〜１８０ｋＤａ）およびβ鎖（９０〜１１０ｋＤａ）からなる膜貫通糖タンパク質である。例えば、３種の重要なインテグリン（すなわち、ＬＦＡ−１、Ｍａｃ−１およびＰ１５０９５）は、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃと称する異なるαサブユニットとＣＤ１８と称する共通のβサブユニットを有する。ＬＦＡ−１（αＬβ２）は、リンパ球、顆粒球および単球上に発現し、主として、ＩＣＡＭ−１と称するＩｇファミリー構成員のリガンド（ｃｏｕｎｔｅｒ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ）および関連リガンドに結合する。ＩＣＡＭ−１は、白血球および内皮細胞を含む多くの細胞上に発現し、細胞内皮上でＴＮＦおよびＩＬ−１のようなサイトカインによりアップレギュレートされる。Ｍａｃ−１（αＭβ２）は、好中球および単球上に分布し、ＩＣＡＭ−１にも結合する。第３のβ２インテグリンであるＰ１５０９５（αＸβ２）も好中球および単球上に見出される。セレクチンは、Ｌ−セレクチン、Ｅ−セレクチンおよびＰ−セレクチンからなる。
【０１１５】
抗α４薬剤と併用することができる他の抗炎症薬としては、インターロイキンＩＬ−１からＩＬ−１３、腫瘍壊死因子αおよびβ、インターフェロンα、βおよびγ、腫瘍増殖因子β（ＴＧＦ−β）、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）ならびに顆粒球単球コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）のようなサイトカインの抗体および他の拮抗薬などがある。他の抗炎症薬としては、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＲＡＮＴＥＳ、エキソタキシンおよびＩＬ−８のようなケモカインの抗体および他の拮抗薬などがある。他の抗炎症薬としては、ＮＳＡＩＤＳ、ステロイドおよび炎症の小分子抑制薬などがある。併用治療用の薬剤の製剤、投与経路および有効濃度は、α４インテグリンに対するヒト化抗体について上述したとおりである。
【０１１６】
α４インテグリンまたはα４インテグリンを含む二量体を媒介し、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎（ＵＣ）を治療する薬剤と併用するさらなる薬剤は、５−アミノサリチル酸、グルココルチコイド、チオグアニン誘導体、メトトレキサート（ＭＴＸ）、シクロスポリン、抗生物質およびインフリキシマブを含むが、これらに限定されない。
【０１１７】
５−アミノサリチル酸は、ジアゾ結合によりスルファピリジンに結合したメサラミンの複合体であり、通常、５００ｍｇ／日〜約６ｇ／日の量で投与するスルファサラジン（アズルフィジンとしても知られている）を含む。５−アミノサリチル酸は、グルココルチコイドと併用投与することもできる。５−アミノサリチル酸は、潰瘍性大腸炎を治療するために本明細書で述べた他の薬剤のうちの１つとの併用治療に用いるが、クローン病を治療するためにも用いることができる。メサラミンの非スルホンアミド含有製剤は、ＡＳＡＣＯＬ（登録商標）、ＣＬＡＶＥＲＳＡ、ＳＡＬＯＦＡＬＫ、ＰＥＮＴＡＳＡ（登録商標）、ＤＩＰＥＮＴＵＭ（登録商標）、ＣＯＬＡＺＩＤＥおよびＲＯＷＡＳＡ（登録商標）を含むが、これらに限定されない。
【０１１８】
グルココルチコイドは、ＵＣに有効であることが最初に示された１９５５年以来、ＩＢＤの急性重篤増悪の治療の頼みの綱となっている。経口プレドニゾンは、本明細書で開示した薬剤のいずれかと併用投与することができる。一般的に、２０〜４０ｍｇの経口プレドニゾンを１日１回投与する。グルココルチコイドも静脈内に、また浣腸剤により、抗α４インテグリン薬と併用して、または同時に、またはその投与前／後の短時間内に投与することができる。例えば、ヒドロコルチゾンは、停留浣腸剤（１００ｍｇ／６０ｍＬ）として入手可能であり、通常の用量は、２〜３週間にわたり１夜当たりに６０ｍＬ浣腸剤１つである。当業者により理解されるように、本明細書で述べた治療および薬剤と併用する場合には、これを変更することができる。用いることができる他のステロイド剤は、メタスルホ安息香酸プレドニゾロン、ピバル酸チキソコルトール、プロピオン酸フルチカゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾンおよびブデソニドを含むが、これらに限定されない。
【０１１９】
チオグアニン誘導体もＩＢＤ、ＣＤおよびＵＣの治療に有用である。これらは、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）およびアザチオプリン（ＩＭＵＲＡＮ）を含むが、これらに限定されない。これらの２つの薬物は、本明細書で述べるα４インテグリン調節薬のいずれかと同様に併用することができる。
【０１２０】
メトトレキサート（ＭＴＸ）も本明細書で述べるα４インテグリン調節薬との併用が考えられる。好ましくは、ＭＴＸは筋肉内注射（ｉ．ｍ．）により対象に抗α４インテグリン薬剤と併用して投与する。ＭＴＸは、ステロイド依存性ＣＤに有効であるが、ＵＣには有用ではない。ＭＴＸは、対象当たり、１週当たり約１５〜２５ｍｇ、または当業者により必要と判断される量で投与することができる。
【０１２１】
シクロスポリン（例えば、ＳＡＮＤＩＭＭＵＮＥ（登録商標）、ＮＥＯＲＡＬ（登録商標））も腸の病的炎症を治療するために本明細書で述べるα４インテグリン調節薬と併用することができる。これを用いて、グルココルチコイドに応答しない急性の重症ＵＣを治療することができる。
【０１２２】
インフリキシマブ（すなわち、ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））も本明細書に示すα４インテグリン調節薬と併用してＣＤを治療するために用いることができる。インフリキシマブは、ＴＮＦに結合し、それによりその活性を中和する免疫グロブリンである。ＣＤＰ５７１のような他の抗ＴＮＦ抗体も本明細書に開示するα４インテグリン調節薬と併用することができる。
【０１２３】
抗生物質もＵＣ、ＩＢＤおよびＣＤを調節するために本明細書に示すα４インテグリン調節薬と併用することが考えられる。例えば、患者にメトロニダゾールまたはシプロフロキサシン（またはその薬理学的同等物）をα４インテグリン媒介薬と併用して、または混合物の形で投与することができる。
【０１２４】
ＩＢＤ、ＣＤおよびＵＣの支持治療をα４インテグリンまたはα４インテグリンを含む二量体を媒介する薬剤とともに使用して、炎症性腸疾患、クローン病および潰瘍性大腸炎を治療することも考えられる。支持治療は、鎮痛薬、抗コリン薬および下痢止め薬を含むが、これらに限定されない。そのような支持治療を併用することは、患者の症状を低減し、生活の質を改善する支持治療の開始に有用であり得る。支持治療としては、鉄、葉酸塩およびビタミンＢ１２の経口投与などがある。下痢止め薬は、排便の頻度を低減させ、直腸緊急を軽減させるために軽度疾患を有する患者に投与することができるジフェノキシラート、コデイン、ロペラミドおよび抗コリン薬（またはその薬理学的同等物）を含むが、これらに限定されない。コレスチラミンは、本明細書に記載した長期投与法による治療の前に、既に限定回結腸切除を受けていた患者における胆汁塩誘発性結腸分泌を予防するために患者に用いることができる。抗コリン薬は、臭化クリジニウム、塩酸ジシクロミン、ベラドンナのチンキ剤等を含むが、これらに限定されない。これらは、腹部けいれん、疼痛および直腸緊急の低減に有用である。
【０１２５】
ＭＳの治療のために、抗α４インテグリン薬剤（例えば、抗α４インテグリン抗体、小分子α４インテグリン拮抗薬等）は、ＭＳに伴う症状を治療し、改善し、または軽減するために用いられる他の化合物または組成物と併用することができる。
【０１２６】
ＭＳに伴う症状を治療し、改善し、または軽減するために用いられる他の薬剤は、筋弛緩薬（例えば、ジアゼパム、シクロベンザプリン、クロナゼパム、クロニジン、プリミドン等）、抗コリン薬（例えば、プロパンテリン、ジシクロミン等）、中枢神経系興奮薬（例えば、ペモリン）、非ステロイド抗炎症薬（イブプロフェン、ナプロキセンおよびケトプロフェンのようなＮＳ）、インターフェロン、免疫グロブリン、グラチラマー（Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標））、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎ（登録商標））、ミソプロストール、腫瘍壊死因子α阻害薬（例えば、ピルフェニドン、インフリキシマブ等）およびコルチコステロイド（例えば、グルココルチコイドおよびミネラルコルチコイド）を含むが、これらに限定されない。
【０１２７】
多発硬化症の治療用の一般的な薬剤は、インターフェロンβ１ｂ（Ｂｅｔａｓｅｒｏｎｅ（登録商標））、インターフェロンβ１ａ（Ａｖｏｎｅｘ（登録商標））、高用量インターフェロンβ１ａ（Ｒｅｂｉｆ）、グラチラマー（Ｃｏｐａｘｏｎｏｎｅ（登録商標））、免疫グロブリン、ミトザントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（（登録商標））、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン等）などである。他のコルチコステロイドも用いることができ、コルチゾール、コルチゾン、フルドロコルチゾン、プロドニゾロン、６α−メチルプレドニゾロン、トリムシノロンおよびベタメタゾンなどである。
【０１２８】
本明細書に開示する化合物および組成物と併用される薬剤の剤形は、対象および用いる薬剤の組合せによって異なるであろう。例えば、インターフェロンは一般的に次のように投与する。インターフェロンβ１ａ（Ａｖｏｎｅｘ（登録商標））は、３０μｇを１週間に１回投与し、インターフェロンβ１ａは約２２μｇまたは４４μｇを１週間に３回投与し、インターフェロンβ１ｂ、（Ｂｅｔａｓｅｒｏｎｅ（登録商標））は２５０μｇを１日おきに投与する（Ｄｕｒｅｌｌｉ等、Ｌａｎｃｅｔ  ３５９、１４５３〜６０頁、２００２（非特許文献６４））。一般的にインターフェロンは、再発性または寛解性多発硬化症に対して投与する。したがって、本明細書に開示する抗α４インテグリン薬剤との併用に際して、インターフェロンの好ましい範囲は、該薬剤を本明細書に開示する他の抗α４インテグリン化合物および組成物と併用して投与する方法によって約０．１μｇ〜約２５０μｇ、より好ましくは約０．５μｇ〜約５０μｇであると思われる。
【０１２９】
本発明とともに使用することができると考えられるＮＳまたはＮＳＡＩＤｓは、非選択的ＣＯＸ阻害薬および選択的ＣＯＸ−２阻害薬を含むが、これらに限定されない。非選択的ＣＯＸ阻害薬は、サリチル酸誘導体（例えば、アスピリン、サリチル酸ナトリウム、コリントリサリチル酸マグネシウム、サルサラート、ジフルニザル、スルファサラジンおよびオルサラジン）、パラアミノフェノール誘導体（例えば、アセトアミノフェン）、インドールおよびインジン酢酸（例えば、トルメチン、ジクロフェナクおよびケトロラク）、ヘテロアリール酢酸（例えば、アブプロフェン、ナプロキセン、フルルビプロフェン、ケトプロフェン、フェンプロフェンおよびオキサプロジン）、アントラニル酸またはフェナメート（例えば、メフェナム酸およびメクロフェナム酸）、エノール酸（例えば、ピロキシカムおよびメロキシカムのようなオキシカム）およびアルカノン（例えば、ナブメトン）を含むが、これらに限定されない。選択的ＣＯＸ−２阻害薬は、ジアリール置換フラノン（例えば、ロフェコキシブ）、ジアリール置換ピラゾール（例えば、セレコキシブ）、インドール酢酸（例えば、エトドラク）およびスルホンアニリド（例えば、ニメスリド）などである。ＮＳは、例えば、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）を服用している患者が経験するかぜ様症状を軽減するためにしばしばインターフェロンと併用投与する。一般的なＮＳ薬は、ナプロキセン、イブプロフェンおよびケトプロフェンなどである。パラセタモールもしばしば患者に投与される。Ｒｅｅｓｓ等、２００２  Ｍｕｌｔ．  Ｓｃｌｅｒ，  ８、１５〜８頁（非特許文献６５）を参照のこと。
【０１３０】
酢酸グラチラマー（ＧＡ、Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標））は、ミエリン塩基性タンパク質反応性Ｔ細胞の活性化を阻害し、抗炎症作用特徴とするＴ細胞レパートリーを誘導する合成分子である。さらに、酢酸グラチラマーは、中枢神経系（ＣＮＳ）にアクセスできるが、インターフェロンβはできない（Ｄｈｉｂ−Ｊａｌｂｕｔ、２００２  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５８、Ｓ３〜９頁（非特許文献６６）、Ｗｅｉｎｓｔｏｃｋ−Ｇｕｔｔｍａｎ等、２０００  Ｄｒｕｇｓ  ５９、４０１〜１０頁（非特許文献６７））。
【０１３１】
ミトキサントロンは、二次性進行性多発硬化症（ＳＰ−ＭＳ）の治療に有効であることが示されたアントラセンジオン合成薬剤である。しかし、この薬剤の使用は、その心臓毒性により再び制限されている（Ｗｅｉｎｓｔｏｃｋ−Ｇｕｔｔｍａｎ等、２０００）。
【０１３２】
腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）は、脱髄における重要なサイトカインである可能性がある（Ｗａｌｋｅｒ等、２００１  Ｍｕｌｔ．  Ｓｃｌｅｒ．  ７、３０５〜１２頁（非特許文献６８））。したがって、ＴＮＦ−α機能に拮抗する、またはその合成を阻害する薬剤の使用は、本明細書に開示する薬剤および化合物との併用に有用であると思われる。これは、抗ＴＮＦ−α抗体（例えば、インフリキシマブ）ならびにピルフェニドンのような薬剤を含んでいてよい。ピルフェニドンは、ＴＮＦ−αの合成を低減させ、ＴＮＦ−αの受容体を遮断することが示された非ペプチド薬剤である。前出。
【０１３３】
ほとんどの脱髄状態および疾患における長年の頼みの綱は、ＡＣＴＨ、グルココルチコイドおよびコルチコイドステロイドの使用であった。これらの薬剤は、その抗浮腫および抗炎症作用のために用いられている。ＡＣＴＨは、５％デキストロースおよび水５００ｍＬ中８０Ｕで６〜８時間にわたり３日間対象に静脈内投与する。本剤はまた、７日間にわたり１２時間ごとに４０Ｕの用量で４０Ｕ／ｍｌで筋肉内投与し、その後、用量を３日ごとに減量する。Ｓ．  Ｈａｕｓｅｒ、「Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅｓ」、ｉｎ  Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２２８７〜９５頁（１３ｔｈ  ｅｄ．、Ｉｓｓｅｌｂａｃｈｅｒ等、ｅｄ．１９９４（非特許文献６９））を参照のこと。メチルプレドニゾロンは、一般的に好ましくは朝に５００ｍｌ  Ｄ５Ｗで６時間にわたり緩やかに投与する。一般的な用量は、１０００ｍｇ１日１回３日間、５００ｍｇ１日１回３日間および２５０ｍｇ１日１回３日間などである。前出。メチルプレドニゾロン−プレドニゾンも一般的に併用投与する。一般的に、１０００ｍｇの静脈内メチルプレドニゾロンを３日間にわたり投与した後、経口プレドニゾンを１日１ｍｇ／ｋｇで１４日間投与する。したがって、本明細書に開示する化合物および組成物との併用では、ステロイドを必要に応じて、約１〜１４日間にわたり約１〜約１０００ｍｇ／ｋｇの量で投与してもよい。
【０１３４】
ＭＳのような脱髄状態における副作用は、疲労および認識機能の低下である。塩酸アマンタジンおよびペモロンのような薬剤は、ＭＳに伴う疲労を治療するために頻繁に用いられている（Ｇｅｉｓｌｅｒ等、１９９６  Ａｒｃｈ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  ５３、１８５〜８頁（非特許文献７０））。
【０１３５】
そのような併用治療の利点は、現在一部の薬物で遭遇しているクラス特異的および薬剤特異的副作用を軽減することができる点である。インターフェロンβのクラス特異的副作用としては、注射２〜６時間後に始まり、一般的に注射２４時間後に消失する発熱、悪寒、筋痛、関節痛および他のかぜ様症状などがある。時折、インターフェロンβは先在性ＭＳ症状の一過性の悪化も誘発する。薬剤特異的副作用としては、インターフェロンβ１ｂによる注射部位反応などがある。これらの作用の管理は、用量および投与時間を調整し、アセトアミノフェン、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳまたはＮＳＡＩＤＳ）およびステロイドの適切な配合を処方することにより実現することができる。Ｍｕｎｓｃｈａｕｅｒ等、１９９７  Ｃｌｉｎ，  Ｔｈｅｒ．１９、８８３〜９３頁（非特許文献７１）を参照のこと。
【０１３６】
したがって、投与する特定の薬物の量を少なくすることができる薬物の併用によって、患者が経験する有害な副作用を低減することができる。
【０１３７】
併用投与するとき、小化合物であるα４インテグリン拮抗薬は、他の化合物もしくは組成物と同じ製剤に混入して、または別個の製剤で投与することができる。併用投与するとき、抗α４抗体は、一般に他の化合物および組成物と別個の製剤で投与することができる。併用投与するとき、抗α４薬剤は、症状を治療し、改善し、もしくは軽減するために用いる他の化合物および組成物の前、後、または同時に投与することができる。
【０１３８】
実施例
以下の例は、いかにすれば本発明の実施形態を製造し使用することができるか、その代表例を当業者に完全に開示し説明するために示すものであって、本発明者がその発明と見なすものの範囲を限定することを意図するものではないし、下記の実験のみが、実行したすべてのまたは唯一の実験である、として示すことを意図するものではない。使用する数（例えば、量、温度など）について正確さを保証するために努力は行っているが、若干の実験誤差および偏差は容認されるべきである。特に断らない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏度数であり、圧力は常圧または常圧付近である。
【実施例１】
【０１３９】
再発性多発硬化症におけるナタリズマブの比較臨床試験
患者集団
アメリカ、カナダおよび英国の２６の医療センターが、１９９９年９月から２０００年５月までに２１３名の患者を登録した。機関内審査委員会または中央および地方の倫理委員会がプロトコルを承認した。患者は全員、文書によるインフォームドコンセントを与えた。独立した安全データモニタリング委員会によって試験の監視を行った。
【０１４０】
適格な被験者は、１８〜６５歳の年齢であり、Ｐｏｓｅｒの基準に従って、臨床的または実験室的裏付けにより、再発寛解型であれ二次性進行型であれ、明確なＭＳと規定されること（Ｐｏｓｅｒ等，  １９８３  Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  １３：２２７−３１  （非特許文献７２）；  Ｌｕｂｌｉｎ等，  １９９６  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ４６（非特許文献７３）：  ９０７−１１）、すなわち、過去２年間に少なくとも２回の再発履歴があり、基準値のＫｕｒｔｚｋｅ  拡大障害状態評点（ＥＤＳＳ）（Ｋｕｒｔｚｋｅ，  １９８３  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ３３：１４４４−５２（非特許文献７４））が２と６．５の間であり、Ｔ２強調脳ＭＲＩ上で最低３箇所の病変部があることを必要条件とした。過去３か月以内に免疫抑制的または免疫調節的な治療を受けたか、または過去３０日以内に再発を経験したかコルチコイドの全身投与を受けた患者は除外した。
【０１４１】
試験設計および無作為化
コンピュータで生成したブロック無作為化スケジュールにより、患者を以下の３つの治療群のうちの１つに無作為に割り当てた：  ３ｍｇ／ｋｇナタリズマブ群、６ｍｇ／ｋｇナタリズマブ群または偽薬群。患者は２８日の間隔で６回の静脈注射を受け、次いで、６か月安全性事後観察を行った。治療割り当てに関しては、調査員、他のすべての試験員および患者を盲験化した。
【０１４２】
試験手順および評価項目
非増強陽子密度Ｔ２強調ＭＲＩ脳スキャンおよびＧｄ強化造影Ｔ１強調ＭＲＩ脳スキャンを、各治療（０〜５か月目）直前のスクリーニングフェーズ中（−１か月目）および最後の治療（６か月目）後に得た。事後観察ＭＲＩスキャンを９か月目および１２か月目に得た。脳全体にわたる３ｍｍ厚の４６枚の軸スライス像を得た。ＭＲＩ分析は、患者の治療および履歴について盲験化した単一施設によって行った。病変は経験を積んだ２名の臨床医がハードコピー画像上で一致して識別したものである。
【０１４３】
予期される主要結果の測定は、最初の注入から最後の注入後１か月までの期間として定義される６か月の治療期間中の新たなＧｄ強化造影病変部の数で行った。この他に評価したＭＲＩパラメーターには、持続的なＧｄ強化造影病変部（前月の月毎のスキャンでも強化造影された強化造影病変部）の数；Ｇｄ強化造影病変部（半自動局所的閾値法によって測定した；Ｇｒｉｍａｕｄ等，  １９９６  Ｍａｇｎ．  Ｒｅｓｏｎ．  Ｉｍａｇｉｎｇ  １４：  ４９５−５０５（非特許文献７５））の体積；新たな活発な病変（すなわち、新たなＧｄ強化造影病変部に加えて、新たな、または拡大した、非強化造影Ｔ２病変部）の数；および活性部スキャン（すなわち、１または複数の新たなＧｄ強化造影病変部を含むもの）の数を含めた。
【０１４４】
臨床評価項目には、再発頻度およびＥＤＳＳにおける変化ならびにビジュアルアナログスケール（ＶＡＳ）を使用した自己申告による包括的評価を含めた。有害事象はすべて記録した。患者は、治療神経医と評価神経医（両者とも患者の治療割り当てを知らない）によって、スケジュール化した四半期の間隔で、また、再発が疑われる時にはスケジュール外の訪問で診察した。治療神経医は病歴および検査を担当し、有害事象を記録した。評価神経医は神経状態を評価し患者の病歴や以前のＥＤＳＳ評点についての知識なしでＥＤＳＳ評点を割り当てた。
【０１４５】
客観的再発は、少なくとも３０日の安定期間後に、少なくとも４８時間続く新たなまたは増悪したＭＳの徴候を示す急性発作の発生として規定した。それはまた、評価神経医による決定に従って、基準値と比較して、ＥＤＳＳ評点で少なくとも１点の増加、２つの機能システム評点（ＦＳＳ）において少なくとも１点の増加、または１つのＦＳＳにおいて少なくとも２点の増加を伴うものとした。再発に関する上記基準を満たさないが、治療神経医が再発を構成するとして評価した神経症状も記録した（再発合計）。
【０１４６】
ビジュアルアナログスケール（ＶＡＳ）で、患者は、３および６か月の治療後に、基準値でのその全体的な健康評価を反映する１０ｃｍラインに沿う位置を示した。なお、評点は高い方がより健康な状態を反映する。
【０１４７】
患者は１２か月目まで臨床的に事後観察した。治療を中止したが、終点に達しなかった患者は事後観察評価のために戻るように促した。
【０１４８】
統計分析
ナタリズマブについての以前の臨床試験において第１回注入後最初の１２週間で観察された、新たなＧｄ強化造影病変部の数に基づいて試料サイズ評価を行った（Ｔｕｂｒｉｄｙ等，  １  ９９９  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５３：  ４６６−７２（非特許文献７６））。この前回の試験結果に基づき、５％有意水準での両側２群比較に適した試料サイズ方法論を用いて、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ−Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ統計（Ｎｏｅｔｈｅｒ，  １９８７  Ｊ．  Ａｍｅｒ．  Ｓｔａｔ．Ａｓｓｏｃ．  ８２：  ６４５−７（非特許文献７７））に基づき、検出力８０％のためには各群におよそ７３名の患者が必要であることが推定された。
【０１４９】
６ｍｇ／ｋｇのナタリズマブと偽薬の間のＧｄ強化造影病変部数の１次比較に加え、Ｇｄ強化造影体積もＷｉｌｃｏｘｏｎ−Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ順位和検定で評価した。実行していないため欠けている１または複数のＭＲＩスキャン値は、欠けている値（欠測値）を、その患者について得られているスキャン上の病変の平均数に置き替えることにより代替した。過去３０日以内にコルチコイドの全身投与を受けた患者から得られたＭＲＩスキャンは廃棄し、欠測値として扱った。主要結果変数についての群評点と順位評点には均等割付評点を使用してＣｏｃｈｒａｎ−Ｍａｎｔｅｌ−Ｈａｅｎｓｚｅｌ相関統計、全３群からのデータを使用して、用量反応関係を試験した。
【０１５０】
ピアソンのカイ二乗検定を使用して患者と再発の割合を比較した。ＥＤＳＳとＶＡＳにおける基準値からの変化を、独立変数として試験センター群および治療群を用いた二元配置分散分析法を使用して分析した。
【０１５１】
すべての分析は無作為化された患者をすべて含み、方針遵守原則に従った。すべての報告Ｐ値は両側である。基準値における３群間の個体群特性、ＭＳ病歴、登録ＥＤＳＳ（ｅｎｔｒｙ  ＥＤＳＳ）およびＭＲＩパラメーターに著しい違いはなかった（表１）。
【０１５２】
【表１】
2005526045.tif 000002
【０１５３】
主要結果
偽薬群における患者は６か月の治療期間の間に平均９．６の新たなＧｄ強化造影病変を示した。ナタリズマブ投与を受けた群における対応する値は３ｍｇ／ｋｇ群で０．７（Ｐ＜０．０００１）であり、６ｍｇ／ｋｇ群で１．１  （Ｐ＜０．０００１）であった  （表２を参照）  。この差異は、３ｍｇ／ｋｇ群および６ｍｇ／ｋｇ群でそれぞれ９３％および８８％の新たなＧｄ強化造影病変部の減少となる。偽薬に対する治療群の違いは１回目の注入後に明らかであった（図１）。
【０１５４】
【表２】
2005526045.tif 000003
【０１５５】
二次ＭＲＩ結果
持続的な強化造影病変部の累積数、新たな活性病変部、強化造影病変部の合計体積および１〜６か月目の活性部スキャン割合には有意で顕著な縮小があった（表２；図２）。
【０１５６】
臨床効能結果
６か月の治療期間に、７１名の偽薬患者のうちの２６名で合計３５の再発が報告され；  ３ｍｇ／ｋｇのナタリズマブの投与を受けた６８名の患者のうちの１３名で１８の再発が報告され、また、６ｍｇ／ｋｇの投与を受けた７４名の患者のうちの１４名で１５の再発が報告された（Ｐ＝０．０５、偽薬対ナタリズマブ治療を受けた全患者）。より厳格な客観的再発基準を適用しても効果は同じく強く、１５名の偽薬患者で１８件の再発が、３ｍｇ／ｋｇのナタリズマブの投与を受けた３名の患者で３件の再発が、６ｍｇ／ｋｇのナタリズマブの投与を受けた８名の患者で８件の再発があった（Ｐ＝０．０５）。偽薬群においては、治療群中よりも多くの再発にステロイド治療を必要とした（偽薬群で２２、３ｍｇ／ｋｇナタリズマブ群で５、６ｍｇ／ｋｇナタリズマブ群で７、Ｐ＝０．００７、偽薬対ナタリズマブ治療を受けた全患者）。
【０１５７】
ＶＡＳにおいては、ナタリズマブ群の患者は６か月目までに健康状態の改善を報告したが、偽薬群中の患者は変化を報告せず、この時点での群間の違いは顕著であった（Ｐ＝０．０３３、偽薬対ナタリズマブ治療を受けた全患者）。いずれの群でもＥＤＳＳの著しい変化は治療期間中には観察されなかった。
【０１５８】
抗体濃度および受容体飽和
各訪問で患者から血清試料を集め、酵素免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して、ナタリズマブに対して特異的な抗体を定量的に分析した。各注入の前、１回目の注入および最後の注入の後で２時間、２４時間、１、２および３週目に、治療群当たり１２〜１４名の患者の亜群においてナタリズマブ血清中レベルおよびナタリズマブによる受容体占有率も測定した。
【０１５９】
ＥＬＩＳＡアッセイを使用して血清中の抗体濃度を決定した。簡単に言えば、ナタリズマブに特異的に結合する捕捉抗体の２．０μｇ／ｍＬ溶液を、重炭酸ナトリウム含有溶液でｐＨ８．３に調整した。抗体溶液１００μＬを、Ｃｏｓｔａｒ  ９６ウエルマイクロタイタープレートの各ウエルに加えた。プレートをプレート用シールテープで覆い、１２〜２６時間、常温でインキュベートした。プレートを吸引し、ブロッキングバッファー（ＰＢＳ、ｐＨ  ７．４中０．２５％カゼイン）２００μＬを各ウエルに加え、常温でさらに１時間インキュベートした。次いで、プレートを乾燥し、後の使用のために保存するか、または３００μＬ洗浄バッファー（ＴＢＳ、ｐＨ  ７．５、０．０５％トゥイーン−２０を含む）で１回洗浄した。プレートを乾燥した場合、それらは、使用直前に３００μＬ洗浄バッファーを各ウエルに加え、１〜２分インキュベートすることにより再水和した。プレートを吸引し、ティッシュペーパー上に逆さまに置いて余計な水分を吸収した。
【０１６０】
ＥＬＩＳＡ（０．０５％トゥイーンを含むＰＢＳ中０．２５％カゼイン、ｐＨ  ７．４）に先立ち試験試料をカゼイン希釈剤中で希釈した。典型的には、ナタリズマブ値が正確であることを保証するため、各試料について２または３の希釈液を試験する。残りのステップの正確さをモニターするために、既知量のナタリズマブを使用して希釈対照試料も調製した。
【０１６１】
参照標準、試験試料または希釈対照試料１００μＬを各ウエルに加え、プレートを常温で６０〜７５分間インキュベートした。洗浄バッファーでプレートを３回洗い、さらに、残っている水分を除いた。新たに希釈したマウス抗ヒトＩｇＧ４アルカリフォスファターゼ１００μＬを各ウエルに加え、プレートを常温でさらに６０分間インキュベートした。インキュベーション後、プレートを洗浄バッファーで４回洗浄し、さらに、残っている水分を除いた。１００μＬの蛍光性基質Ａを、較正したマルチチャンネルピペッターを用いて加え、プレートを常温で４５〜６０分インキュベートした。各ウエル中のレベルは、ｆｍａｘ蛍光マイクロプレートリーダーを使用し、ＳＯＦＴｍａｘＰｒｏバージョン１．３１のプロトコルファイルｃｏｎｃ１０２．ｐｐｒを用いて決定した。
【０１６２】
結果を図３および４に示す。これらの図の中で示されるように、ナタリズマブのレベルは、投与の間に減少し、７か月目または８か月目（すなわち、最終投与後２〜３か月）までには、抗体は大多数の患者で検出できなくなった。
【０１６３】
血清中抗体濃度を測定すると共に、ＦＡＣＳ分析を使用して、受容体飽和レベル、特にＶＬＡ−４飽和レベルを投薬試験の間に決定した。ＶＬＡ−４飽和の決定はフローサイトメトリーを使用して、イムノアッセイによって決定した。
【０１６４】
患者から得た血液試料およそ１ｍＬを２本の１５ｍＬポリプロピレンチューブに小分けし、チューブ上の１４ｍＬ目盛まで冷洗浄バッファー（ヒト血清［Ｓｃａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｉｎｃ．  Ｐａｒｔ  ３ＳＨ３４１］ＰＢＳで３％まで希釈）を加えた。チューブを１０〜１５℃で５分間、２，２００ｒｐｍで遠心分離し、液体を吸引して廃棄する。細胞ペレットを合計１  ｍＬの冷バッファー中に再懸濁する。
【０１６５】
ナタリズマブストック参照標準液５００μｇ／ｍＬを洗浄バッファーを用いて調製する。希釈したナタリズマブストック参照液２０μＬを第１のチューブに加え、２０μＬ洗浄バッファーを第２のチューブに加えた。両方のチューブを暗所において３０分間氷上でインキュベートした。インキュベーション後に、チューブを洗浄バッファーで１４ｍＬ目盛まで満たし、冷所中、２，２００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上清を吸引し、洗浄ステップを２回繰り返した。２回目の洗浄後、細胞を１ｍＬ目盛までの洗浄バッファー中に再懸濁した。
【０１６６】
Ｒフィコエリトリン（ＰＥ）−結合抗ヒトＣＤｗ４９ｄ抗体（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，  Ｃａｔ．  ＃３  １４７５Ｘ）１０μＬを各チューブに加え、チューブを穏やかに渦攪拌した。チューブは暗所中２〜８℃で１０〜１５分間インキュベートした。インキュベーション後、ＩＸ溶解液２ｍＬ、ｐＨ  ７．４を加え、各チューブを穏やかに渦攪拌した。チューブを２〜８℃で１０〜１５分間インキュベートし、冷所中、５分間遠心分離し、細胞ペレットから上清を吸引した。細胞ペレットを冷染色バッファー４ｍＬに再懸濁し、冷所中２，２００ｒｐｍでチューブを再び遠心分離した。次いで、上清を非常に注意して除き、定着剤溶液（Ｏｒｔｈｏ定着剤、ｐＨ  ７．６）０．５ｍＬを加え、細胞が定着剤中に確実に再懸濁するように直ちにチューブを渦攪拌した。チューブはＦＡＣＳ分析までアルミホイルで覆った。
【０１６７】
次いで、分析したナタリズマブを含むかまたは含まない試料中のＶＬＡ−４受容体飽和について、各試料をＦＡＣＳ  ＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーターおよびＣｅｌｌＱｕｅｓｔ（商標）ソフトウェアを使用して分析した。ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ（商標）ソフトウェアは、フローサイトメーターからのデータの獲得および分析を可能にする。
【０１６８】
受容体飽和レベルを図５に示す。１〜４か月目の受容体飽和レベルはその月の投与に先立って測定した。１か月の投与間隔によって生じた受容体飽和レベルは一貫してかなり高く、こうした長期レベルは、病理炎症および疾患に付随する生理的特徴の抑制を維持するのに十分であった。平均して、飽和レベルは、平均少なくとも６７％、中央値少なくとも７５％で１か月間維持された。これらのレベルは、治療を受けた患者における脳病変部の抑制に十分なものであった（図１を参照）。２〜５か月目（および５か月目の投与後２１週間）までの注入前試験で決定された飽和の最小レベルは、ナタリズマブに対する抗体反応を有する１名の患者による平均および中央値と比較して、特に低い。
【０１６９】
患者の受容体飽和レベルが低下するにつれ治療効果も低下した。４２％の平均値受容体飽和レベル、および４１％の受容体飽和レベル中央値の被治療集団では、患者集団中での脳病変の抑制につながらず（図２および５を参照）、したがって、α４阻害剤などの薬剤を使用して病理炎症を有効に抑制するには、これ以上の長期受容体飽和レベルが必要である。
【０１７０】
安全性および許容性
ＭＳ患者は、６か月の治療期間にわたって、３または６ｍｇ／ｋｇの服用量で繰り返したナタリズマブ治療を良好に許容するように思われた。各群で同様の数の患者が治療により起こる有害事象を経験した。有意なものではなかったが、ある種の有害事象は、偽薬群と比較してナタリズマブ群でより一般的に生じた（表３）。持続性の軽度のリンパ細胞増加症が、６か月の処理期間中、ナタリズマブ治療群で見られた。
【０１７１】
【表３】
2005526045.tif 000004
【０１７２】
偽薬治療群および治療群における重大な有害事象（ＳＡＥ）の報告数に著しい違いはなかった（すなわち、７名の偽薬処置患者が１１例のＳＡＥを報告し、ナタリズマブ３ｍｇ／ｋｇ投与を受けた５名の患者が５例のＳＡＥを報告し、ナタリズマブを６ｍｇ／ｋｇ投与を受けた３名の患者が４例のＳＡＥを報告した）。これらのうち、４例は、免疫に仲介されたもので、試験薬と関係があると考えられた。血清疾患の報告が、偽薬群を含め３例あった。３ｍｇ／ｋｇ群で蕁麻疹と気管支痙攣を伴うアナフラキシー反応が１例あったが、これは抗ヒスタミン剤およびステロイド処理で速やかに終息した。偽薬群を含む各群で１例ずつ３例の血清病の報告があった。１事象だけが補体レベルの変化を伴い、すべてが同じ調査のサイトで生じた。全体として、これらの事象は、２５０回の注入中１回未満で併発した。
【０１７３】
有害事象のために治療を中止した患者の数に違いはなかった（すなわち、偽薬群で３名、３ｍｇ／ｋｇ群で４名、６ｍｇ／ｋｇ群で３名）。試験中、偽薬患者で血胸を合併した胸膜癌腫症の結果、死亡例が１例あった。
【０１７４】
抗体形成速度も評価した。全体として１５名のナタリズマブ治療を受けた患者（１１％）は抗ナタリズマブ抗体を発生し、うち１３名は処理期間中、２名は治療後の事後観察期間であった。抗ナタリズマブ抗体の存在を示す臨床的関連事象は、（もしあったとしても）現在知られていない。
【０１７５】
ナタリズマブの最大の血清中濃度は服用量に依存し、反復服用で観察される顕著な蓄積はなかった。３ｍｇ／ｋｇナタリズマブ投与を受けた患者は、治療期間中、ＶＬＡ−４受容体の８０％を超える飽和を示し、受容体占有率はより高く（およそ９０％）、６ｍｇ／ｋｇナタリズマブ投与を受けた患者ではより長くなった。
【０１７６】
治療後事後観察：６〜１２か月
新たな強化造影病変部および活性部スキャン（９か月目と１２か月目を合算）の累積数は、３群すべて（表２）において類似していた。９か月目では６ｍｇ／ｋｇ群に、より活性が少ない傾向があった。３群間で報告された臨床的再発の総数に顕著な違いはなく、所定の客観的基準による測定して偽薬群で２４、３ｍｇ／ｋｇ群で２４、および６ｍｇ／ｋｇ群で２６であった。
【０１７７】
この試験は、第一に、α４インテグリン媒介白血球接着および流通（ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ）の選択的な阻害がＭＳの長期的治療への有効な手法であるということについてヒトにおける強いＭＲＩおよび臨床的証拠を提供する。α４インテグリン特異的ヒト化単クローン抗体ナタリズマブは、両服用量レベルとも、偽薬と比較して、６か月の治療期間にわたってＭＳ患者における新たなＧｄ強化造影炎症性脳病変の抑制に関し、高度に、統計的に有意な結果を実証した。ナタリズマブ治療した患者におけるこうした病変部の縮小は、１回目の注入の１か月後に観察され、治療期間を通じて保持された。両服用量レベルでも、縮小はおよそ９０％であり、ベータインターフェロンで報告されている５０〜７０の％の縮小（ＭＳ／ＭＲＩ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｇｒｏｕｐ（ＭＳ／ＭＲＩ分析グループ），  １９９５  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ４：  １２７７−１２８５（非特許文献７８）；  Ｊａｃｏｂｓ  ｅｔ  ａｌ，  １９９６  Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．  ３９：  ２８５−２９４（非特許文献７９）；  ａｎｄ  ＰＲＩＳＭＳ  （Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｌａｐｓｅｓ  ａｎｄ  Ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ  ｂｙ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｂｅｔａ−１ａ  Ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ  ｉｎ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ（多発硬化症におけるベータ１ａインターフェロンの皮下投与による再発および障害の予防試験グループ），  １９９８  Ｌａｎｃｅｔ  ３５２：  １４９８−１５０４（非特許文献８０））より大きな効果であった。
【０１７８】
さらに、この試みでのＭＲＩの結果に対するナタリズマブの効果は、臨床的観察によって支持される。臨床的結果に対する効果を示すために、この試験に予定能を加えたものではない。それにもかかわらず、ナタリズマブによる治療では、再発率が顕著に低下し、患者の中で健康状態の増大が観察される結果となった。報告されたすべての臨床再発例を考慮すると、ナタリズマブ群では両方とも、６か月の治療期間中、経験される再発は偽薬群より著しく少なかった。所定の基準（客観的特徴における変化を必要とするという点でより厳密な尺度）を用いて、これらのエピソードにおける顕著な低減も観察された。再発に対するナタリズマブの効果は、ＭＳに対して現在認められている治療（それらはおよそ３０％の効果を示す）（ＭＳ／ＭＲＩ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｇｒｏｕｐ，  ｓｕｐｒａ；  Ｊａｃｏｂｓ等，前掲；  ＰＲＩＳＭＳ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ，前掲；  Ｊｏｈｎｓｏｎ等，  １９９５  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ４５：  １２６８−７６（非特許文献８１））を凌駕する。
【０１７９】
重要なことは、ナタリズマブ群中では、治療終了後に新たなＭＲＩ病変や再発に対するリバウンド効果が観察されなかった点である。さらに、６か月間のナタリズマブの毎月の注入は十分に許容されるもので、偽薬と類似した、ＭＳの長期的治療として許容される安全性プロフィールを伴っていた。
【０１８０】
この試験の結果は、ＭＳ患者における急性炎症性脳病変の病因において、α４インテグリンのおよびそれ（病因）を発現する免疫細胞の役割を一層の支持するものである。新たなＧｄ強化造影病変部の縮小は治療１か月後に明白であった。この観察結果は、新たな病変部の出現を防ぐことにより、病変発生においてナタリズマブが初期に作用することを示唆する。
【０１８１】
要約して言えば、再発性ＭＳ患者におけるこの偽薬比較臨床試験で、ナタリズマブは、臨床的に意味のあるパラメーターに対して強い効果を実証した。この６か月の試験中、治療は良好に許容された。この試験で観察された、新たな炎症性ＣＮＳ病変部の出現、臨床的再発の発生、および患者の健康状態改善に対するナタリズマブの有益な効果は、現在進行中であるより長期的な試験における障害への効果が観察される可能性を示す。
【実施例２】
【０１８２】
クローン病におけるナタリズマブの比較臨床試験
方法
二重盲検偽薬対象臨床試験で、軽症から重篤な活性状態までのクローン病（ＣＤ）患者２４８名を無作為化し、偽薬もしくは３ｍｇ／ｋｇナタリズマブ注入後に偽薬注入を受ける２群；または４週の間隔で３ｍｇ／ｋｇもしくは６ｍｇ／ｋｇのナタリズマブ注入を受ける２群とした。結果測定にはクローン病活性指数（ＣＤＡＩ）、健康関連クオリティーオブライフ（ＱＯＬ）、および血清Ｃ反応性タンパク量を含めた。ナタリズマブは、臨床寛解率および臨床応答率を増加させ、活性なＣＤ患者におけるＱＯＬを改善すると共に、この疾患の治療に許容可能な安全性プロフィールを実証した。
【０１８３】
患者集団
地方の倫理学委員会から承認を得た後に、各センターでは、ＣＤＡＩが少なくとも２２０であるが４５０以下として定義された軽症から活性なＣＤに罹患していることを示す臨床的証拠を有していた１８歳以上の男女の患者をスクリーニングした。スクリーニングされた３１１名の患者のうち、２４８名は１９９９年９月から２０００年８月まで、ベルギー、チェコ共和国、デンマーク、ドイツ、イスラエル、オランダ、スウェーデンおよび英国の３５の試験センターで無作為化された。患者は全員説明を受け、文書による同意を与えた。３か月以内にメトトレキサート、シクロスポリンまたは何らかの試験用薬剤の投与を受けた患者は除外し、アザチオプリンまたは６−メルカプトプリンの投与を受けていた患者は、少なくとも４か月間安定した服用量上であったことを必要条件とした。他に除外したものとしては、以前に抗体治療を受けていた者；２５ｍｇ／日を超える服用量の経口プレドニゾロンを現に使用している者；基本食または腸管外栄養を現に使用している者；腸の感染性または新生物疾患；３か月以内の腸外科手術；結腸瘻造設術、回腸瘻孔設置術または回腸直腸吻合を伴う結腸直腸吻合術の存在；主として繊維症狭窄の存在に起因する症状；および患者が近い将来、緊急の腹部外科手術を必要とする可能性があるという臨床的印象がある場合が挙げられる。
【０１８４】
試験設計および無作為化
コンピュータで生成したブロック無作為化スケジュールにより、適格患者を４つの治療投薬計画のうちの１つに任意に割り当てた。各群は、４週の間隔によって一定間隔で２回の静脈注射を受けた。４つの処理投薬計画は偽薬の２回注入；偽薬注入後３ｍｇ／ｋｇナタリズマブの１回注入；および３または６ｍｇ／ｋｇナタリズマブの２回注入とした。治療割り当てに関しては、調査者、他のすべての試験スタッフおよび患者を盲験化した。
【０１８５】
試験手順および評価項目
主要効能評価項目は６週目における患者の寛解率（ＣＤＡＩ＜１５０）とした。ＣＤＡＩは８つの関連する変数：１日当たりの液便または非常に軟かい便の数、腹部の痛みまたは痙攣の重篤さ、一般的な健康状態、疾患の腸外症状の存在、腹部腫瘤の存在、下痢止め薬の使用、ヘマトクリット値および体重を組み込んだものである（Ｂｅｓｔ  ｅｔ  ａ／．，  １９７６  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ７０：  ４３９−４４１（非特許文献８２）；  およびＳｕｍｍｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ，  １９７９  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ７７：  ８４７−６９（非特許文献８３））。１５０未満の評点は寛解を示し、１５０〜２１９は軽度に活性な疾患、２２０と４５０の間は中程度に活性な疾患、４５０を超える評点は重篤な活性を示した。追加の前向き評価項目は、臨床的反応（すなわち、ＣＤＡＩの少なくとも７０点の低減）を示す患者の割合であった、炎症性腸疾患に特異的アンケート、ＩＢＤＱ（Ｉｒｖｉｎｅ等，  １９９４  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １０６：  ２８７−９６（非特許文献８４））およびＣ反応性タンパクの血清レベルによって測定される、健康と関連するクオリティーオブライフとした。
【０１８６】
試験の全体にわたって、有害事象の記録および臨床的試験室的モニタリングを含む安全性評価を行った。独立した安全データモニタリング委員会が、モニタリングレベルを補足した。血清試料は各訪問で集められ、酵素免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）によってナタリズマブに対する抗体を分析した。
【０１８７】
統計分析
効能分析はすべて、ｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ（ＩＴＴ）で欠測値には直前の観測値を繰り越す（ＬＯＣＦ）集団を利用した。この集団は無作為化された患者全員（ｎ＝２４８）を含んだ。救命用薬物治療を使用した患者は、治療失敗例として分類した。安全集団（ｎ＝２４４）は、無作為化された投薬された者からなるものとした。４名の患者は不適格であったため投薬しなかった。
【０１８８】
統計検定はすべて両側として、５％を有意統計レベルとした。偽薬と比較した個々の活性処理対に対し、３種の一対比較を行った。寛解率と応答率は、階層（ｓｔｒａｔａ）として国を使用して、Ｃｏｃｈｒａｎ  Ｍａｎｔｅｌ−Ｈａｅｎｓｚｅｌのカイ２乗検定（一般的関連）（Ｌａｎｄｉｓ等，  １９７８  Ｉｎｔ’ｌ．  Ｓｔａｔ．  Ｒｅｖ．４６：  ２３７−５４（非特許文献８５））によって分析した。寛解および反応に対する共変量の影響（有無）は、ロジスティックス回帰を使用して、６週目に分析した。
【０１８９】
ナタリズマブ群中で４０％の応答率および偽薬群中で１５％の応答率として５％の有意水準で応答率の差異を検出する８０％の検出力をもたらすように、１群当たりの被験者試料サイズを６０名と計算した。
【０１９０】
国群および治療群の効果を固定した二元配置分散モデルを使用して基準値からの平均ＣＤＡＩ減少を比較した。活性治療群の各々を偽薬群と比較する差異を検定した。
【０１９１】
Ｃ反応性タンパクとＩＢＤＱのデータを、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ−Ｍａｎｎ−Ｗｈｔｔｎｅｙ検定を用いて分析し、３つの活性治療群の各々と偽薬群間の基準値からの変化を比較した。将来を見越して計画された分析ではＣ反応性タンパク量を基準値（０週目）で正常な範囲の上限値である８ｍｇ／ｌ以上の値を有する患者と比較した。
【０１９２】
結果
個体群特性、ＣＤＡＩ評点、疾患部位および薬物治療は、基準値において群中で同程度であった（表４）。０週目の評価時に、ほとんどの患者は、５−ＡＳＡ化合物（４８〜６４％）、経口ステロイド（４６〜６３％）またはアザチオプリン／６−メルカプトプリン（１８〜３７％）を含むＣＤのための他の薬物治療を他の薬剤とももにまたは他の薬剤なしで受けていた。１２週目まで完了する前に２７名の患者が、この試験から離脱した（偽薬群のうちの１０名、３＋０、３＋３および６＋６ｍｇ／ｋｇのナタリズマブ群のそれぞれ、６名、５名および６名）。
【０１９３】
【表４】
2005526045.tif 000005
【０１９４】
臨床応答、寛解、および平均ＣＤＡＩ評点
臨床応答（すなわち、基準値からのＣＤＡＩの少なくとも７０点減少）を達成する患者の割合は、４、６および８週目に３群のナタリズマブ群すべてにおいて偽薬より統計的に有意に大きく（表５および図６）、この結果は、２回のナタリズマブ投与を受けた２群では１２週目まで持続した。臨床的応答率における改善のための傾向は、早くも第１回投与後の２週目で観察され、３＋３ｍｇ／ｋｇナタリズマブ群が、この時点で偽薬との統計的に有意な差を実証した。平均ＣＤＡＩ評点（表６）中の基準値からの減少についての結果は、応答率についての知見に一致している。
【０１９５】
【表５】
2005526045.tif 000006
【０１９６】
【表６】
2005526045.tif 000007
【０１９７】
第１回治療後４週目であって、患者が２回目の治療を受ける前に、ナタリズマブの３群はすべて、偽薬群の患者と比較して統計的に有意に高い寛解率を有していた（表５および図７）。しかし、６週目では、偽薬群と比較して３＋３ｍｇ／ｋｇのナタリズマブ群でのみ、前向きに定義された主要な評価項目（患者の臨床的寛解率）が、統計的に有意に高かった。８週目では、ナタリズマブ（３または６ｍｇ／ｋｇの一方）の２回注入を受けた群は両方とも、偽薬群と比較して、統計的に有意に高い寛解率を実証した。１２週目で、３＋３ｍｇ／ｋｇのナタリズマブ群は、臨床的寛解について偽薬に対し統計的に有意な利点を示し続け、一方、６＋６ｍｇ／ｋｇ群は、この結果について偽薬を上回る利点を有する強い傾向を示した。
【０１９８】
寛解または応答の予測変数
寛解または臨床の反応を予測する基準値変数を識別するため、６週目の結果を使用して分析を行った。検討した変数としては、疾患部位、疾患の継続期間、基準値ＣＤＡＩ評点、経口ステロイドの併用、アザチオプリンまたは６−メルカプトプリンの併用および腸管外の症状を含めた。基準値ＣＤＡＩ評点は寛解の重要な予測変数であった（Ｐ＜０．００１）；より高い基準値ＣＤＡＩを有する患者は寛解を達成する傾向が低かった。しかし、基準値ＣＤＡＩは、応答可能性を予測するものではなかった。分析した他のすべての変数は寛解または応答の有意な予測変数とは限らなかった。
【０１９９】
クオリティーオブライフ
６週目では、偽薬群と比較して、すべてのナタリズマブ治療群において平均評点における統計的に有意な改善が観察された。１２週目までには、ナタリズマブの２回注入を受けた治療群だけが、偽薬群より有意に高いＩＢＤＱ評点を保持し続けた（表７）。
【０２００】
【表７】
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【０２０１】
Ｃ反応性タンパク質
基準値で血清Ｃ反応性タンパク質のレベルが上昇していた患者は、試験期間中、周期的な評価を受けた。ナタリズマブの２回注入を受けた者は、偽薬群の患者と比較してＣ反応性タンパクの平均血清レベルについて基準値から有意な低減を示した（図８）。その改善効果は、３ｍｇ／ｋｇナタリズマブの２回注入を受けた患者では１２週目まで維持された。
【０２０２】
安全性および許容性
すべての服用量レベルにおいて、ナタリズマブ治療は、１２週の試験期間を通じて良好に許容された。有害事象のため、各群で同程度の数の患者が試験から離脱した（すなわち、偽薬群のうちの２名、３ｍｇ／ｋｇナタリズマブ群のうちの１名、３＋３ｍｇ／ｋｇナタリズマブ群の２名および６＋６ｍｇ／ｋｇナタリズマブ群のうちの３名）。全体として、３１名の患者が主要な試験期中に重大な有害事象を報告した（すなわち、偽薬群のうちの９名、３ｍｇ／ｋｇナタリズマブ群のうちの８名、３＋３ｍｇ／ｋｇナタリズマブ群の８名および６＋６ｍｇ／ｋｇナタリズマブ群の６名）。重大な有害事象はいずれも試験薬に関連づけられるものとは評価されず、また、いずれも致命的ではなかった。大多数はＣＤに関連した合併症または徴候のための入院であった。治療により現れた有害事象を経験する患者の数は様々な治療群で同程度であり、偽薬群のうち５２名（８３％）、３ｍｇ／ｋｇナタリズマブ群のうち５１名（７８％）、３＋３ｍｇ／ｋｇのナタリズマブ群のうち５７名（８８％）および６＋６ｍｇ／ｋｇナタリズマブ群のうち４１名（８０％）であった。表８は、偽薬群と比較してナタリズマブ群において少なくとも５％大きな発生率であるＣＤと関係しない有害事象を示す。これらの様々なタイプの有害事象のいずれも、偽薬群とは統計的に有意差はなく、また、いずれも、中程度から重篤なＣＤに罹患している患者においてナタリズマブの使用が許容しがたい安全性プロフィールを提示するものとは認められない。
【０２０３】
【表８】
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【０２０４】
抗ナタリズマブ抗体は１２週目で１３名のナタリズマブ被治療患者（７％）で検出された。全体として、検出可能な抗ナタリズマブ抗体を有する患者は、検出可能な抗ナタリズマブ抗体を有しない人々と同様に、有害事象または重大な有害事象を経験する傾向はなかった。
【０２０５】
２名の患者が注入反応を経験した。両者とも、事象は２回目の注入中に生じた。３＋３ｍｇ／ｋｇナタリズマブ群の患者は、軽度の痒みおよび紅斑症状を経験し、その後、抗ナタリズマブ抗体陽性であることが見つかった。６＋６ｍｇ／ｋｇナタリズマブ群の患者は、軽度の痒みおよび咳症状を経験した。これらの症状は治療することなく解消され、その後、患者には検出可能な抗ナタリズマブ抗体に陰性であることがわかった。
【０２０６】
前向きに定義された主要な効能評価項目（臨床的寛解は６週目でＣＤＡＩ  ＜１５０として定義した）では、３＋３ｍｇ／ｋｇナタリズマブ群についてのみ偽薬より統計的に有意に優っていたが、この結果では、４個の別個の時点で３＋３ｍｇ／ｋｇ群（週４、６、８および１２）および２個の別個の時点で６＋６ｍｇ／ｋｇ群（４週および８週目。１２週目も傾向としては優っている）に、偽薬群に優る利点が観察された。臨床的応答（基準値からのＣＤＡＩの少なくとも７０点の低下として定義される）を経験した患者の割合は、３つのナタリズマブ群すべてについて４、６および８週目の時点で、およびナタリズマブの２回注入を受けた２つの治療群について１２週目の時点で偽薬群より有意に優れていたという知見と組み合わせると、これらのデータは、中程度から重篤な活性ＣＤの治療におけるナタリズマブの効能を立証する強い証拠となる。さらに、ＣＤＡＩにおける改善に基づいた、臨床的反応および寛解率に対するナタリズマブの有益な効果は、ＩＢＤＱによって測定した健康に関連するＱＯＬの有意な改善および血清Ｃ反応性タンパク質（一般的な炎症を定量するために用いられる急性期反応物）における改善によって確証される。
【０２０７】
ＣＤ試験における受容体飽和の投薬レベルはＭＳ試験の投薬と同程度であり、したがって、受容体飽和レベルはＣＤ試験におけるのと同程度であるべきであるＣ反応性タンパク量およびＣＤＡＩによって実証される患者の全面的な健康状態における改善によって実証されるように、ＣＤ試験での受容体飽和レベルはこのように炎症レベルの低減に関係している。
【０２０８】
安全性に関する重大な懸念はナタリズマブ治療群のうちのいずれにも認められなかった。検出可能な抗ナタリズマブ抗体を生成する患者の割合は低く、検出可能な抗ナタリズマブ抗体に関連した重大な有害事象はなかった。
【０２０９】
本試験は、中程度から重篤な活性度のＣＤの臨床的特徴および症状の治療において、ナタリズマブによるα４インテグリンの拮抗作用の有効性および許容性についての説得力のある証拠を提供する。さらに、α４インテグリン拮抗作用がＣＤを治療するための有効な機作であることをこれらのデータがもたらすという事実は、このモダリティーが、長期自己免疫疾患および炎症性疾患の治療に、より広く適用し得る可能性を高めている。
【実施例３】
【０２１０】
活性な炎症性腸疾患における活性化循環白血球に対するナタリズマブの効果
白血球サブセットの輸送は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の病因に関係する。α４インテグリン類は白血球の血管内皮通過の主要なメディエータであり、それらは好中球以外ではすべての白血球で発現されることから、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）患者の基本的な血中白血球サブセット、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞および活性化されたＴ細胞上に、単一の３ｍｇ／ｋｇナタリズマブ（Ａｎｔｅｇｒｅｎ（登録商標））の注入で効果を及ぼす。単一の３ｍｇ／ｋｇナタリズマブの注入は、動物および健康な治験参加者の末梢循環白血球を持続的に高めることも前に示されている（Ａ  ｓｉｘ−ｍｏｎｔｈ  ｗｅｅｋｌｙ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｓｔｕｄｙ  ｗｉｔｈ  Ａｎｔｅｇｒｅｎ（商標）  ｉｎ  ｃｙｎｏｍｏｌｇｏｕｓ  ｍｏｎｋｅｙｓ  ｗｉｔｈ  ａ  ｓｉｘ−ｗｅｅｋ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ，  Ａｔｈｅｎａ  Ｒｅｐｏｒｔ  １９９８，  Ｎｏ．  ７２３−０１３−０９８）。しかし、好中球以外の白血球がすべてα４インテグリンを発現するが、ナタリズマブが白血球サブセットに差次的効果を及ぼし得るか否かは知られていなかった。
【０２１１】
方法
３０名のクローン病（ＣＤ；１８名はナタリズマブ、１２名は偽薬）および１０名の潰瘍性大腸炎（ＵＣ；全員ナタリズマブ投与を受ける。偽薬投与なし）患者の末梢血から抽出された白血球（１、２、４、８および１２週目ならびに注入後）を、蛍光表示式細胞分取器（ＦＡＣＳ）によって分析した。血清ナタリズマブ量および疾患活性評点は各時点で測定した。
【０２１２】
基準値と比較して有意の変化（ｐ＜０．０５）および相関性をＷｉｌｃｏｘｏｎ−Ｓｐｅａｒｍａｎ検定によりそれぞれ検定した。白血球サブセット中の変化を分析するＷｉｌｃｏｘｏｎ符号付順位検定を治療群内でのみ基準値と比較した（ｐ＜０．０５が有意差を表す）。Ｓｐｅａｒｍａｎ順位相関検定を用いて、ナタリズマブの投与を受けた患者における疾患活性パラメーター、ナタリズマブ量、および白血球サブセットの間の相関性を評価した。
【０２１３】
ナタリズマブ／偽薬注入の直前に、および注入後１、２、４、８および１２週目にも静脈血を採取した。Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ法（Ｎｙｃｏｍｅｄ，  Ｄｅｎｍａｒｋ）を用い、コンソート３０ソフトウェア（Ａｍｌｏｔ  ｅｔ  ａｌ，  １９９６  Ｃｌｉｎ．  Ｅｘｐ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０５：１７６−８２）と共に多色蛍光表示式細胞分取器（ＦＡＣＳ；  Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ，  Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ）による分析に先立って末梢血リンパ細胞（ＰＢＬ）を分離した。ＦＡＣＳ分析を使用し、以下のマーカー：ＣＤ１９（Ｂ細胞）、ＴＣＲαβ（Ｔ細胞）、ＣＤ３（全Ｔ細胞）、ＴＣＲγδ（Ｔ細胞）、ＣＤ４（ヘルパー／Ｔｈ−１  Ｔ細胞）、ＣＤ８（細胞傷害性／サプレッサーＴ細胞）およびＣＤ１６（ＮＫ細胞）を発現するＰＢＬの割合を測定した。
【０２１４】
ナイーブ（ＣＤ４５ＲＡ）および免疫記憶（ＣＤ４５ＲＯ）Ｔ細胞サブセットならびに「ＮＫ−Ｔ細胞」（ＣＤ５７＋／ＣＤ３＋）以外に、活性化抗原のＣＤ３８、ＣＤ２５（一連のインターロイキン−２受容体）、ＣＤ２６、ＣＤ６９およびＨＬＡ−ＤＲを発現するＴＣＲαβ細胞の割合を、測定した。活性化抗原ＣＤ２８およびＨＬＡ−ＤＲを発現する細胞傷害性／サプレッサーＴ細胞（ＣＤ８＋）の割合も測定した。
【０２１５】
結果
好酸球、単球、ＢおよびＴ細胞数はすべて、≧１週後のナタリズマブについては有意に増加した。リンパ細胞数、Ｂ細胞およびＴ細胞両方の合計は基準値レベルと比較して有意に増加した。好中球数および好塩基性数は変わらなかった。活性化マーカーＣＤ２５、ＣＤ２６、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ８ＤＲ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ４５ＲＯおよびＣＤ４５ＲＡを発現するＴ細胞は、ＵＣおよびＣＤ患者において、基準値と比較して、≧４週目および１週目でそれぞれ有意に増加した。ＣＤ３８＋およびＣＤ６９＋Ｔ細胞はＵＣ患者についてのみ≧１週で増加した。ＮＫ細胞はすべての患者において注入後変化がなかった。また、ＮＫ型Ｔ細胞（ＣＤ５７＋）はＣＤ患者でのみ１週目で増加した。ガンマデルタ（γδ）Ｔ細胞の有意の変化はＣＤ／ＵＣ患者では見出されなかった。Ｔ細胞サブセットの変化は疾患活性または血清ナタリズマブ量と関連しなかった。ナタリズマブ後に見られる白血球変化は偽薬では検出されなかった。
【０２１６】
リンパ細胞数は注入後４週目でクローン病患者（ｐ＝０．００２）と潰瘍性大腸炎（ｐ＝０．  ０２）の両方で増加したままであり、８週目で治療前の値に戻った（Ｇｏｒｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ，  ２００２  Ａｌｉｍｅｎｔ．  Ｐｈａｒｍ．  ＆  Ｔｈｅｒ．  １６：６９９−７０６；  ａｎｄ  Ｇｏｒｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ，  ２００１  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １２１：  ２６８−７４）。
【０２１７】
血中好酸球および単球に対するナタリズマブの影響を図９Ａと９Ｂに示す。好中球数と好塩基球数は、試験した患者群すべてで変わらなかった。図１０と１１は、クローン病および潰瘍性大腸炎患者中の特定の血中Ｔ細胞サブセットおよびナチュラルキラー細胞に対するナタリズマブ投与の効果を示す。エラーバーは、各図表中の標準偏差を表す。
【０２１８】
基礎的な白血球サブセットの有意の変化は偽薬注入では検出されなかった。１１名の偽薬患者への偽薬投与を表９に示す。活性化抗原を発現するリンパ細胞の若干の変化はクローン病患者でのみ個別の時点で検出された（表１０）。
【０２１９】
【表９】
2005526045.tif 000010
【０２２０】
表９は偽薬投与後の白血球サブセット平均値（ＳＤ）；いずれの群でも基準値（０週目）と比較して有意差はない。
【０２２１】
【表１０】
2005526045.tif 000011
【０２２２】
表１０縦欄は、クローン病試験の偽薬群患者のＴ細胞サブセットおよびＮＫタイプ細胞数の平均（ＳＤ）を、基準値と比較して示す（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ符号付順位検定ｐ＜０．０５）。基準値と比較した有意差は太字で示す。各平均に対する標準偏差はイタリック体の数字で示す。クローン病または潰瘍性大腸炎患者のいずれかにおいても、リンパ細胞数と疾患活性評点の合計間との間に有意の相関性はなく（表１１および１２）、また、個々のリンパ細胞サブセットと疾患活性との間にも何らかの有意の相関性は見つからなかった。注入後１、２または４週目に血清ナタリズマブ量と白血球サブセットの変化の間に有意の相関性は検出されなかった。８週目のほとんどすべての患者においてナタリズマブは検出できなかった。したがって、この時点では相関性は計算しなかった。
【０２２３】
【表１１】
2005526045.tif 000012
【０２２４】
表１１  リンパ球サブセット数とＣＤＡＩ評点（クローン病患者）またはＰｏｗｅｌｌ−Ｔｕｃｋ評点（潰瘍性大腸炎）の間には有意の相関は見出されなかった。
【０２２５】
【表１２】
2005526045.tif 000013
【０２２６】
表１２  疾患活性とリンパ球サブセット数との間には、４週目の全リンパ球数を除いて有意の相関は見出されなかった（ｐ＝０．０４）。
【０２２７】
上記のデータに基づいて、単一の３ｍｇ／ｋｇナタリズマブ注入は、活性ＩＢＤに罹患している患者における白血球サブセットのすべてではないが大部分の血中レベルを増加させた。血中の好酸球、単球およびリンパ細胞数は、ほとんどの患者で注入後少なくとも４週間で基準値以上に有意に上昇した。広範囲の血中Ｔ細胞サブセットは、前処理値、特に発現する活性化抗原以上に有意に増加した。しかし、ＮＫ細胞数（ＣＤ１６＋／ＣＤ３−）はナタリズマブによって影響されず、ＣＤ５７＋Ｔ細胞へのナタリズマブによる影響は、他のＴ細胞サブセットより遥かに少なかった。γδＴ細胞受容体を発現するリンパ細胞もナタリズマブによって影響されず、これらの細胞ではα４インテグリンが発現されないか低いレベルでしか発現されないことを示唆している。
【０２２８】
したがって、活性ＩＢＤに罹患している患者では、ナタリズマブは、多くの白血球および活性化されたリンパ細胞サブセットの輸送を制限し、血中に維持するのかもしれない。ＮＫ細胞、γδ細胞、好中球および好塩基球は、ナタリズマブの投与に影響されないようであり、このことは、ナタリズマブがこれらの細胞型の輸送にはそれほど重要でないメディエータであることを示唆しているかもしれない。
【０２２９】
本発明をその特定の実施形態に関して記載してきたが、発明の真の精神および範囲から外れることなく様々な変更が可能であり、等価物への置換が行なわれ得ることを当業者は理解すべきである。さらに、特定の状況、材料、組成物、方法、方法ステップまたはステップを本発明の目的、精神および範囲に適合させるように、多くの修正を行うことが可能である。そのような修正はすべて、本発明の範囲内であることが意図される。
【０２３０】
２００２年２月２５日および２００２年４月２３日にそれぞれ出願された米国仮出願番号第６０／３６０，１３４号および第６０／３７４，５０１号は、参照によってすべての目的についてそれらの全体が本願に組み入れられる。また、本願で引用した参考文献はすべて、参照によってすべての目的についてそれらの全体が本願に組み入れられる。
【非特許文献１５】Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ等、１９９１  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １０１、１０２０〜３０頁
【非特許文献１６】Ｍｕｎｋｈｏｌｍ等、１９９４  Ｇｕｔ  ３５、３６０〜２頁
【非特許文献１７】Ｓｔｅｉｎ等、２００１  Ｓｕｒｇ．  Ｃｌｉｎ．  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．  ８１、７１〜１０１頁、ｖｉｉｉ
【特許文献３】米国特許第６２２５４４７号
【特許文献４】米国特許第６１８０３３６号
【特許文献５】米国特許第６１７２１９７号
【特許文献６】米国特許第６１４０４７１号
【特許文献７】米国特許第５９６９１０８号
【特許文献８】米国特許第５８８５７９３号
【特許文献９】米国特許第５８７２２１５号
【特許文献１０】米国特許第５８７１９０７号
【特許文献１１】米国特許第５８５８６５７号
【特許文献１２】米国特許第５８３７２４２号
【特許文献１３】米国特許第５７３３７４３号
【特許文献１４】米国特許第５５６５３３２号
【特許文献１５】米国特許第５９３９５９８号
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【特許文献１９】米国特許第５５８５０８９号
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【特許文献２１】米国特許第５２２４５３９号
【特許文献２２】国際公開第９２／２２６５３号
【特許文献２３】米国特許第６１１３８９８号
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【特許文献２９】米国特許第５３０４４８９号
【特許文献３０】米国特許出願第０８／４５２０９８号
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【特許文献３１】米国特許第５２２３４０９号
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【特許文献３２】国際公開第９１／０７１４１号
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【特許文献３５】国際公開第９７／１７６１３号
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【非特許文献３４】Ａｇｉｓ  Ｆ．  Ｋｙｄｏｎｉｅｕｓ、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｔｈｅｏｒｙ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、１９８０（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）
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【非特許文献３９】ｖａｎ  Ｄｉｎｔｈｅｒ−Ｊａｎｓｓｅｎ等、１９９１  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４７、４２０７頁
【非特許文献４０】ｖａｎ  Ｄｉｎｔｈｅｒ−Ｊａｎｓｓｅｎ等、１９９３  Ａｎｎａｌｓ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ５２、６７２頁
【非特許文献４１】Ｅｌｉｃｅｓ等、１９９４  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ９３、４０５頁
【非特許文献４２】Ｐｏｓｔｉｇｏ等、１９９２  Ｊ，  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ８９、１４４５頁
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【非特許文献４４】Ｙａｎｇ等、１９９３  ＰＮＡＳ  ９０、１０４９４頁
【非特許文献４５】Ｂｕｒｋｌｙ等、１９９４  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ４３、５２９頁
【非特許文献４６】Ｂａｒｏｎ等、１９９４  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ９３、１７００頁）
【非特許文献４７】Ｓａｓｓｅｖｉｌｌｅ等、１９９４  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐａｔｈ．  １４４、２７頁
【非特許文献４８】Ｃｙｂｕｌｓｋｙ等、１９９１  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１、７８８〜９１頁
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【非特許文献５０】Ｒａｂｂ等、１９９５  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｅｍｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．１６、４１７〜２５頁
【非特許文献５１】Ｐａｕｌ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（３ｄ  ｅｄ．、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、１９９３
【非特許文献５２】Ｐａｕｌ等、１９９６  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ９、４２０〜４２５頁
【非特許文献５３】Ｇｅｏｒｃｚｙｎｓｋｉ等、１９９６  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ８７、５７３〜５８０頁
【非特許文献５４】Ｇｅｏｒｃｚｙｎｓｋｉ等、１９９５  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３、５５〜６１頁
【非特許文献５５】Ｙａｎｇ等、１９９５  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６０、７１〜７６頁
【非特許文献５６】Ａｎｄｅｒｓｏｎ等、１９９４  ＡＰＭＩＳ  １０２、２３〜２７頁
【非特許文献５７】Ｓｃｈｌｅｇｅｌ等、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５５、３８５６〜３８６５頁（１９９５）
【非特許文献５８】Ｓｔｅｉｎｂａｃｋ等、１９９５  Ｕｒｏｌ．  Ｒｅｓ．  ２３、１７５〜８３頁
【非特許文献５９】Ｏｒｏｓｚ等、１９９５  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ６０、８６７〜７１頁
【非特許文献６０】Ｆｒｅｅｄｍａｎ等、１９９４  Ｌｅｕｋ．  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  １３、４７〜５２頁
【非特許文献６１】Ｏｋａｈａｒａ等、１９９４  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５４、３２３３〜６頁
【非特許文献６２】Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、１９９０  Ｎａｔｕｒｅ  ３４６、４２５〜４３３頁、Ｏｓｂｏｒｎ、１９９０  Ｃｅｌｌ  ６２、３頁
【非特許文献６３】Ｈｙｎｅｓ、１９９２  Ｃｅｌｌ  ９、１１頁
【非特許文献６４】Ｄｕｒｅｌｌｉ等、Ｌａｎｃｅｔ  ３５９、１４５３〜６０頁、２００２
【非特許文献６５】Ｒｅｅｓｓ等、２００２  Ｍｕｌｔ．  Ｓｃｌｅｒ，  ８、１５〜８頁
【非特許文献６６】Ｄｈｉｂ−Ｊａｌｂｕｔ、２００２  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５８、Ｓ３〜９頁
【非特許文献６７】Ｗｅｉｎｓｔｏｃｋ−Ｇｕｔｔｍａｎ等、２０００  Ｄｒｕｇｓ  ５９、４０１〜１０頁
【非特許文献６８】Ｗａｌｋｅｒ等、２００１  Ｍｕｌｔ．  Ｓｃｌｅｒ．  ７、３０５〜１２頁
【非特許文献６９】Ｓ．  Ｈａｕｓｅｒ、「Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅｓ」、ｉｎ  Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２２８７〜９５頁（１３ｔｈ  ｅｄ．、Ｉｓｓｅｌｂａｃｈｅｒ等、ｅｄ．１９９４）
【非特許文献７０】Ｇｅｉｓｌｅｒ等、１９９６  Ａｒｃｈ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  ５３、１８５〜８頁
【非特許文献７１】Ｍｕｎｓｃｈａｕｅｒ等、１９９７  Ｃｌｉｎ，  Ｔｈｅｒ．１９、８８３〜９３頁
【非特許文献７２】Ｐｏｓｅｒ等、１９８３  Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  １３、２２７〜３１頁
【非特許文献７３】Ｌｕｂｌｉｎ等、１９９６  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ４６、９０７〜１１頁
【非特許文献７４】Ｋｕｒｔｚｋｅ、１９８３  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ３３、１４４４〜５２頁
【非特許文献７５】Ｇｒｉｍａｕｄ等、１９９６  Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．  Ｉｍａｇｉｎｇ  １４、４９５〜５０５頁
【非特許文献７６】Ｔｕｂｒｉｄｙ等、１９９９  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５３、４６６〜７２頁
【非特許文献７７】Ｎｏｅｔｈｅｒ、１９８７  Ｊ．  Ａｍｅｒ．  Ｓｔａｔ．  Ａｓｓｏｃ．  ８２、６４５〜７頁
【非特許文献７８】ＭＳ／ＭＲＩ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｇｒｏｕｐ、１９９５  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ４、１２７７〜１２８５頁
【非特許文献７９】Ｊａｃｏｂｓ等、１９９６  Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  ３９、２８５〜２９４頁
【非特許文献８０】ＰＲＩＳＭＳ（Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｌａｐｓｅｓ  ａｎｄ  Ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ  ｂｙ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｂｅｔａ−１ａ  Ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ  ｉｎ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ、１９９８  Ｌａｎｃｅｔ  ３５２、１４９８〜１５０４頁
【非特許文献８１】Ｊｏｈｎｓｏｎ等、１９９５  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ４５、１２６８〜７６頁
【非特許文献８２】Ｂｅｓｔ等、１９７６  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ７０、４３９〜４４１頁
【非特許文献８３】Ｓｕｍｍｅｒｓ等、１９７９  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ７７、８４７〜６９頁
【非特許文献８４】Ｉｒｖｉｎｅ等、１９９４  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １０６、２８７〜９６頁
【非特許文献８５】Ｌａｎｄｉｓ等、Ｉｎｔ’ｌ  Ｓｔａｔ．  Ｒｅｖ．  ４６、２３７〜５４頁
【図面の簡単な説明】
【０２３１】
【図１】ナタリズマブの投与後のＭＳ患者における新たなＧｄ促進病変の累積平均数を示す線グラフである。
【図２】ナタリズマブＭＳ試験中の各時点の活性スキャンを示す図である。活性スキャンは、１つまたは複数の新たなＧｄ促進病変を含むものである。
【図３Ａ】，
【図３Ｂ】，
【図３Ｃ】３ｍｇ／ｋｇＭＳ試験における投与開始後の各時点のナタリズマブの血清中濃度を示す図である。
【図４Ａ】，
【図４Ｂ】，
【図４Ｃ】６ｍｇ／ｋｇＭＳ試験における投与開始後の各時点のナタリズマブの血清中濃度を示す図である。
【図５Ａ】，
【図５Ｂ】，
【図５Ｃ】，
【図５Ｄ】，
【図５Ｅ】，
【図５Ｆ】ＭＳ試験において維持されていた受容体飽和のレベルを示す図である。示したレベルは％値である。
【図６】ＣＤ試験における投与後の所定の臨床的応答の基準値を達成した患者の割合を示す図である。
【図７】ＣＤ試験における投与後の所定の寛解の基準値を達成した患者の割合を示す図である。
【図８】ＣＤ試験において、高い基準値のＣ反応性タンパク質を有していた患者サブセットにおける血清中Ｃ反応性タンパク質の平均変化を示す図である。基準値（ｍｇ／ｌ単位）は、偽薬３８．４４（Ｎ＝２６）、３＋０ｍｇ／ｋｇ群３２．３５（Ｎ＝３８）、３＋３ｍｇ／ｋｇ群４１．１６（Ｎ＝３３）および６＋６ｍｇ／ｋｇ群３３３（Ｎ＝２６）であった。
【図９Ａ】活動性クローン病（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎（ＵＣ）を有する患者における循環好酸球に対するナタリズマブの影響を示す図である。ナタリズマブが、３ｍｇ／ｋｇナタリズマブを注入後にクローン病（ｎ＝１８）および潰瘍性大腸炎患者（ｎ＝１２）の循環好酸球数を有意に増加させたことが示されている。
【図９Ｂ】活動性クローン病（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎（ＵＣ）を有する患者における循環好酸球に対するナタリズマブの影響を示す図である。ナタリズマブの投与が３ｍｇ／ｋｇナタリズマブ注入後にクローン病および潰瘍性大腸炎患者の単球数を有意に増加させたことが示されている。
【図１０Ａ】活動性クローン病患者における活性化抗原発現ＴＣＲαβ＋細胞に対するナタリズマブの影響を示す図である。３ｍｇ／ｋｇのナタリズマブ注入後少なくとも４週目までのＴＣＲαβ＋細胞発現ＣＤ２６、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ８ＤＲおよびＣＤ８ＣＤ２８の有意な増加が示されている。
【図１０Ｂ】活動性潰瘍性大腸炎患者における活性化抗原発現ＴＣＲαβ＋細胞に対するナタリズマブの影響を示す図である。３ｍｇ／ｋｇのナタリズマブ注入後少なくとも４週目までのＴＣＲαβ＋細胞発現ＣＤ２６、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ８ＤＲおよびＣＤ８ＣＤ２８の有意な増加が示されている。
【図１０Ｃ】活動性クローン病患者における活性化抗原発現ＴＣＲαβ＋細胞ならびに免疫記憶マーカーおよびナイーブマーカーに対するナタリズマブ投与の影響を示す図である。ナタリズマブ注入後少なくとも４週目までの免疫記憶マーカー（ＣＤ４５ＲＯ）およびナイーブ（ＣＤ４５ＲＡ）ＴＣＲαβ＋細胞の有意な増加が示されている。
【図１０Ｄ】活動性潰瘍性大腸炎病患者における活性化抗原発現ＴＣＲαβ＋細胞ならびに免疫記憶マーカーおよびナイーブマーカーに対するナタリズマブ投与の影響を示す図である。ナタリズマブ投与後１週目の免疫記憶マーカー（ＣＤ４５ＲＯ）、ナイーブ（ＣＤ４５ＲＡ）ＣＤ６９およびＣＤ３８の各ＴＣＲαβ＋細胞の有意な増加が示されている。
【図１１Ａ】活動性クローン病患者における循環ＴＣＲγδ＋およびＮＫ型細胞に対するナタリズマブの影響を示す図である。
【図１１Ｂ】潰瘍性大腸炎患者における循環ＴＣＲγδ＋およびＮＫ型細胞に対するナタリズマブの影響を示す図である。
【図１】
2005526045.tif 000014
【図２】
2005526045.tif 000015
【図３Ａ】
2005526045.tif 000016
【図３Ｂ】
2005526045.tif 000017
【図３Ｃ】
2005526045.tif 000018
【図４Ａ】
2005526045.tif 000019
【図４Ｂ】
2005526045.tif 000020
【図４Ｃ】
2005526045.tif 000021
【図５Ａ】
2005526045.tif 000022
【図５Ｂ】
2005526045.tif 000023
【図５Ｃ】
2005526045.tif 000024
【図５Ｄ】
2005526045.tif 000025
【図５Ｅ】
2005526045.tif 000026
【図５Ｆ】
2005526045.tif 000027
【図６】
2005526045.tif 000028
【図７】
2005526045.tif 000029
【図８】
2005526045.tif 000030
【図９Ａ】
2005526045.tif 000031
【図９Ｂ】
2005526045.tif 000032
【図１０Ａ】
2005526045.tif 000033
【図１０Ｂ】
2005526045.tif 000034
【図１０Ｃ】
2005526045.tif 000035
【図１０Ｄ】
2005526045.tif 000036
【図１１Ａ】
2005526045.tif 000037
【図１１Ｂ】
2005526045.tif 000038
【国際調査報告】
2005526045.tif 000039
2005526045.tif 000040