(57)【要約】本発明は、放射性金属との金属複合体を形成するのに適する、生体ターゲティング分子との改良キレート剤結合体に関する。特に放射性金属９９ｍＴｃとの、放射性金属複合体は、放射性医薬品として有用である。
2005500325.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2005500325.tif 000020
[式中：
それぞれのＲ１、Ｒ２およびＲ３は、独立してＲ基であり；
Ｙは、−(Ａ)ｎ−Ｘ−Ｚ
[式中：Ｘは−ＮＲ４−、−ＣＯ２−、−Ｎ(Ｃ＝Ｓ)−、−Ｎ(Ｃ＝Ｏ)−、−Ｓ−
もしくは−Ｏ−であり；
Ｚは生体ターゲッティング部分であり、
Ｒ４は独立してＲ基であり；
−(Ａ)ｎ−は、リンカー基[式中、それぞれのＡが独立して、−ＣＲ２−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ＝Ｃ−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＳＯ２ＮＲ−、−ＮＲＳＯ２−、−ＣＲ２ＯＣＲ２−、−ＣＲ２ＳＣＲ２−、−ＣＲ２ＮＲＣＲ２−、Ｃ４〜８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ４〜８シクロアルキレン基、Ｃ５〜１２アリ−レン基、Ｃ３〜１２ヘテロアリ−レン基またはポリアルキレングリコール、ポリ乳酸もしくはポリグリコール酸部分である]であり;
ｎは、０〜１０の値の整数である]であって；
それぞれのＲ基は、独立してＨもしくはＣ１〜１０アルキル、Ｃ３〜１０アルキルアリ−ル、Ｃ２〜１０アルコキシアルキル、Ｃ１〜１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜１０フルオロアルキルであるか、または２もしくはそれ以上のＲ基は、それらが付着しているところの原子と一緒に炭素環式、複素環式、飽和もしくは不飽和の環を形成する]
のキレート剤結合体。
【請求項２】
Ｒ３がＨである、請求項１に記載のキレート剤結合体。
【請求項３】
それぞれのＲ２がＨである、請求項１および２に記載のキレート剤結合体。
【請求項４】
Ｘが−ＮＲ４−もしくは−ＣＯ２−である、請求項１〜３に記載のキレート剤結合体。
【請求項５】
−(Ａ)ｎ−が２〜１０原子の主鎖を含む、請求項１〜４に記載のキレート剤結合体。
【請求項６】
Ｙが−ＣＨ２ＣＨ２−Ｘ−Ｚである、請求項１〜５に記載のキレート剤結合体。
【請求項７】
Ｒ１がＣ１〜３アルキル、Ｃ２〜４アルコキシアルキル、Ｃ１〜３ヒドロキシアルキル、もしくはＣ１〜３フルオロアルキルである、請求項１〜６に記載のキレート剤結合体。
【請求項８】
式：
【化２】
2005500325.tif 000021
[式中、それぞれのＲ１は、独立してＣ１〜３アルキルもしくはＣ１〜３フルオロアルキルである]
の請求項１〜７に記載のキレート剤結合体。
【請求項９】
Ｒ１基が全てＣＨ３である、請求項８に記載のキレート剤結合体。
【請求項１０】
Ｚが３〜２０量体ペプチドである、請求項１〜９に記載のキレート剤結合体。
【請求項１１】
請求項１〜１０に記載のキレート剤結合体の放射性金属複合体。
【請求項１２】
放射性金属複合体が電気的に中性である、請求項１１に記載の放射性金属複合体。
【請求項１３】
放射性金属が９９ｍＴｃである、請求項１１および１２に記載の放射性金属複合体。
【請求項１４】
ヒト投与に適当な形態で、請求項１１〜１３に記載の放射性金属複合体を含む、放射性医薬品。
【請求項１５】
放射性金属が９９ｍＴｃである、請求項１４に記載の放射性医薬品。
【請求項１６】
請求項１５に記載の９９ｍＴｃ放射性医薬品を作製するためのキットであって、
(i)請求項１〜１０に記載のキレート剤結合体；
(ii)生体適合性還元剤
を含むキット。
【請求項１７】
生体適合性還元剤がスズ(ＩＩ)である、請求項１６に記載のキット。
【請求項１８】
式：
【化３】
2005500325.tif 000022
[式中：
それぞれのＲ１、Ｒ２およびＲ３は、独立してＲ基であり；
Ｅは、−(Ａ)ｎ−Ｊ
[式中：ＪはＺに結合するために適当である官能基であり；
−(Ａ)ｎ−は、リンカー基[式中、それぞれのＡが独立して、−ＣＲ２−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ＝Ｃ−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＳＯ２ＮＲ−、−ＮＲＳＯ２−、−ＣＲ２ＯＣＲ２−、−ＣＲ２ＳＣＲ２−、−ＣＲ２ＮＲＣＲ２−、Ｃ４〜８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ４〜８シクロアルキレン基、Ｃ５〜１２アリ−レン基、Ｃ３〜１２ヘテロアリ−レン基またはポリアルキレングリコール、ポリ乳酸もしくはポリグリコール酸部分である]であり;
ｎは、０〜１０の値の整数である]であって；
それぞれのＲ基は、独立してＨもしくはＣ１〜１０アルキル、Ｃ３〜１０アルキルアリ−ル、Ｃ２〜１０アルコキシアルキル、Ｃ１〜１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜１０フルオロアルキルである、または２もしくはそれ以上のＲ基は、それらが付着しているところの原子と一緒に、炭素環式、複素環式、飽和もしくは不飽和の環を形成する]
の化合物。
【請求項１９】
請求項１８に記載の化合物であって、Jが−ＮＲ５Ｒ６、−ＣＯ２Ｍ、−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、−ＳＭ１、−ＯＭ１、マレインイミドもしくはアクリルアミド
[式中、Ｒ５およびＲ６は、独立してＲ基もしくはＰＧであり；
ＭはＨ、陽イオン、ＰＧもしくは活性エステルであり；
Ｍ１はＨもしくはＰＧであり；そして
ＰＧは保護基である]
である化合物。
【請求項２０】
Ｒ３がＨである、請求項１８もしくは１９に記載の化合物。
【請求項２１】
それぞれのＲ２がＨである、請求項１８〜２０に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ１がＣ１〜３アルキル、Ｃ２〜４アルコキシアルキル、Ｃ１〜３ヒドロキシアルキルもしくはＣ１〜３フルオロアルキルである、請求項１８〜２１に記載の化合物。
【請求項２３】
−(Ａ)ｎ−が２〜１０原子の主鎖を含む、請求項１８〜２２に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｅが−ＣＨ２ＣＨ２−Ｊである、請求項１８〜２３に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｊが−ＮＨＲ５であり、Ｒ５がＨもしくはＣ１〜３アルキルである、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２６】
【化４】
2005500325.tif 000023
の化合物。
【請求項２７】
式：ＨＣ(ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ８)３
[式中、Ｒ７およびＲ８は、独立してＨもしくはＰGであるか、またはＲ７およびＲ８は一緒にＰG[そこでは、ＰGは保護基である]を形成する]
の化合物；またはその塩。
【請求項２８】
化合物ＨＣ(ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２)３。
【請求項２９】
請求項１８に記載の化合物を作成するための方法であって、式ＩＶ：
【化５】
2005500325.tif 000024
[式中、Ａ、Ｊ、Ｒ２、Ｒ３およびｎは、請求項１８で定義された通りである]の化合物を、
(i)式Ｃｌ−Ｃ(Ｒ１)２−ＣＨ(ＮＯ)Ｒ１のクロロニトロソ誘導体；または
(ii)式Ｃｌ−Ｃ(Ｒ１)２−Ｃ(＝ＮＯＨ)Ｒ１のアルファ−クロロオキシム；または
(iii)式Ｂｒ−Ｃ(Ｒ１)２−Ｃ(＝Ｏ)Ｒ１のアルファ−ブロモケトン(続いてジアミンジケトン生成物をヒドロキシルアミンによりジアミンジオキシムへ変換)：
のどちらかとアルキル化することから成る、方法。
【請求項３０】
請求項２６に記載の化合物を作成するための方法であって、ＨＣ(ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２)３を
(i)式Ｃｌ−Ｃ(Ｒ１)２−ＣＨ(ＮＯ)Ｒ１のクロロニトロソ誘導体；または
(ii)式Ｃｌ−Ｃ(Ｒ１)２−Ｃ(＝ＮＯＨ)Ｒ１のアルファ−クロロオキシム；または
(iii)式Ｂｒ−Ｃ(Ｒ１)２−Ｃ(＝Ｏ)Ｒ１のアルファ−ブロモケトン(続いてジアミンジケトン生成物をヒドロキシルアミンによりジアミンジオキシムへ変換)：
のどちらかとアルキル化することから成る、方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、放射性金属との金属複合体を形成するのに適する、生体ターゲティング分子との改良キレート剤結合体に関する。特に９９ｍＴｃとの放射性金属複合体は、放射性医薬品として有用である。
【０００２】
背景技術
ジアミンジオキシムは、放射性金属９９ｍＴｃと
【化１】
2005500325.tif 000003
Ｑ＝−(ＣＨ２)３−即ち、プロピレンアミンオキシムもしくはＰｎＡＯ；
Ｑ＝−(ＣＨ２)４−即ち、ブチレンアミンオキシムもしくはＢｎＡＯ；
Ｑ＝−(ＣＨ２)５−即ち、ペンチレンアミンオキシムもしくはＰｅｎｔＡＯ
の複合体を形成することが示されている、公知なクラスのキレート剤である。
【０００３】
リガンドＰｅｎｔＡＯは、S. Jurisson et al [Inorg. Chem., 26, 3576-82 (1987)]により最初に開示され、彼らは、その長寿命放射性金属９９Ｔｃとの金属錯体が、Ｔｃ(Ｖ)ジオキソ中心核(即ち、ＴｃＯ２＋)を持って中性であることを示した。J-M Lo et al [Appl. Rad. Inst, 44, 1139-46 (1993)]は、ＰｅｎｔＡＯの合成およびその９９ｍＴｃとの複合体生成を記載した。
【０００４】
ＵＳ  ５６８８４８７は、低酸素症(Hypoxia)撮像のための、Ｃ２−５アルキレン架橋を有するジアミンジオキシムとニトロイミダゾール生体ターゲッティング分子とのキレート結合体を開示している。Ｃ１(オキシムメチル)位におけるニトロイミダゾールの結合が、記述されている。
【０００５】
ＷＯ  ９５／０４５５２は、ＢｎＡＯおよびＰｅｎｔＡＯのニトロイミダゾール結合体を開示している。実施例は、Ｃ１(オキシムメチル)位における結合を示す。
ＷＯ  ９５／１９１８７は、放射性医薬品として使用するための、直鎖もしくは環状の３〜５０量体合成ペプチドとペプチドカルボキシル末端に付着された多座キレート剤との結合体を開示している。ＰｎＡＯ、ＢｎＡＯおよびＰｅｎｔＡＯのようなジアミンジオキシムが、適当なキレート剤として記載されている。
【０００６】
ＷＯ  ９９／６００１８は、血栓症(Thrombus)撮像のための、ジアミンジオキシムリガンドとペプチドとのジアミンジオキシムキレート結合体を開示している。好ましいそのようなキレート剤は、Ｑ＝−(ＣＨ２)２ＮＲ(ＣＨ２)２−を持つジアミンジオキシムであると言われる。
【０００７】
(本発明)
式Ｉ：
【化２】
2005500325.tif 000004
[式中、Ｔ＝ＮおよびＹ＝−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−[ペプチド]]
の、ＷＯ  ９９／６００１８のジアミンジオキシム−ペプチドキレート剤結合体は、しかしながら、顕著な不利益を蒙る。かくして、９９ｍＴｃとのキレート化において、このアザ−ジアミンジオキシムは、クロマトグラフィーで分離されかつ検出され得るところの、幾つかのテクネチウム種を形成する。環境温度では、初期の放射標識された種(中間体)は、経時的(２〜３時間)に安定な生成物に変換される。この中間体−生成物の変換は、より高いｐＨ(＞ｐＨ８)および加熱の使用により促進され得る。これらの条件は、病院の放射薬局においては理想的ではなく、それ故に、より少ない中間体および／もしくはより迅速な中間体−生成物変換速度を持つキレート剤が望ましい。明らかに、適切な放射化学的純度(ＲＣＰ)の所望の９９ｍＴｃ種を獲得するために加熱および多分比較的高いｐＨの必要性は、そのような加熱が付着される生体ターゲッティング分子もしくはペプチドを分解し得るので、望ましくない。式Ｉのアザ−ジアミンジオキシムキレート剤について更なる問題は、橋頭位の第三級アミン窒素が、比較的塩基性であるということである。このことは、水溶液中での対応する９９ｍＴｃ複合体の形成において、第三級アミンが少なくとも部分的にプロトン附加されて、結合体が荷電されるという結果となることを、意味する。電荷は放射標識された結合体が細胞膜を横断することをより困難にするであろうので、この荷電は標識化された生体ターゲッティング部分の適用を限定するであろう。
【０００８】
本発明は、これらの先行技術の問題を克服する、代わりのキレート剤システム(式Ｉ[式中Ｔ＝Ｃ])を提供し、そして放射標識されて、ほぼ中性ｐＨでの水性条件下で室温にて良好なＲＣＰを与え得るところの結合体を提供する。放射性金属複合体は、良好な安定性を有する。先行技術のＮ２Ｓ２およびＮ３Ｓチオール−含有二官能性キレート剤は、チオールが空気感受性であって、空気中、中性から塩基性までの条件下で対応するジスルフィドに迅速に酸化するという不利益を蒙る。それ故に、それらは、使用前には不活性雰囲気中でもしくは保護マトリックス中で保存されなければならない。これに代えて、それらをチオ酢酸エステルもしくはテトラヒドロピラニルヘミチオケタールのような保護された種として使用し得るが、これは酸もしくは塩基および加熱による使用前の保護基の除去を必要する。これら全ての特質は、本発明のキレート剤と比較して、これらのキレート剤の簡便性を減少させる。この故に、本キレート剤は、広範囲の生体ターゲッティング分子の結合および放射性標識にとって有用である。
【０００９】
(発明の詳細な説明)
第一番目の態様において、本発明は、ジアミンジオキシムリガンドと生体ターゲッティング部分とのキレート剤結合体を提供する。用語“キレート剤結合体”とは、金属キレート剤が、生体ターゲッティング部分に共有結合的に結合されている(‘結合されている’)、化合物を意味する。キレート剤結合体は、
式ＩＩ：
【化３】
2005500325.tif 000005
[式中：
それぞれのＲ１、Ｒ２およびＲ３は、独立してＲ基であり；
Ｙは、−(Ａ)ｎ−Ｘ−Ｚ
[式中：Ｘは−ＮＲ４−、−ＣＯ２−、−Ｎ(Ｃ＝Ｓ)−、−Ｎ(Ｃ＝Ｏ)−、−Ｓ−
もしくは−Ｏ−であり；
Ｚは生体ターゲッティング部分であり、
Ｒ４は独立してＲ基であり；
−(Ａ)ｎ−は、リンカー基[式中、それぞれのＡは独立して、−ＣＲ２−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ＝Ｃ−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＳＯ２ＮＲ−、−ＮＲＳＯ２−、−ＣＲ２ＯＣＲ２−、−ＣＲ２ＳＣＲ２−、−ＣＲ２ＮＲＣＲ２−、Ｃ４〜８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ４〜８シクロアルキレン基、Ｃ５〜１２アリ−レン基、Ｃ３〜１２ヘテロアリ−レン基またはポリアルキレングリコール、ポリ乳酸もしくはポリグリコール酸部分である]であり;
ｎは、０〜１０の値の整数である]であって；
それぞれのＲ基は、独立してＨもしくはＣ１〜１０アルキル、Ｃ３〜１０アルキルアリ−ル、Ｃ２〜１０アルコキシアルキル、Ｃ１〜１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜１０フルオロアルキルであるか、または２つもしくはそれ以上のＲ基が、それらが付着しているところの原子と一緒に、炭素環式、複素環式、飽和もしくは不飽和の環を形成する]
を有する。
【００１０】
用語“生体ターゲッティング部分”とは、線形ペプチドもしくは環状ペプチドもしくはそれらの組み合せである得るところの３〜１００量体ペプチドもしくはペプチド類似体；モノクロ−ナル抗体もしくはそれらのフラグメント；または酵素基質もしくは阻害剤；合成的受容体−結合化合物；オリゴヌクレオチド、またはオリゴ−ＤＮＡもしくはオリゴ−ＲＮＡフラグメント、を意味する。生体ターゲッティング部分は、合成的もしくは天然起源のものであり得るが、しかし好ましくは合成的なものである。好ましい生体ターゲッティング部分は、合成的もしくは天然起源のものであり得るところの３〜２０量体であるが、しかし好ましくは合成的なものである。用語“環状ペプチド”とは、その中で二つの末端アミノ酸が、ペプチドまたはジスルフィド結合またはチオエーテル、ホスホジエステル、ジシロキサンもしくはウレタン結合のような合成的非ペプチド結合であり得るところの共有結合によって、一緒に結合されているところの５〜１５個のアミノ酸の配列を意味する。
【００１１】
用語“アミノ酸”とは、天然由来もしくは純粋に合成的な起源のものであり得て、そして光学的に純粋な、即ち単一な鏡像体およびそれ故にキラル、または鏡像体の混合物であり得るところの、Ｌ−もしくはＤ−アミノ酸、アミノ酸類似体またはアミノ酸模倣体を意味する。好ましくは、本発明のアミノ酸は、光学的に純粋である。用語“アミノ酸模倣体”とは、等電子体である、即ち天然化合物の立体的および電子的構造を模倣するようにデザインされているところの、天然由来アミノ酸の合成的類似体を意味する。そのような等電子体は、当業者には周知であって、限定するものではないが、デプシペプチド、レトロ−インベルソペプチド、チオアミド、シクロアルカンもしくは１,５−二置換テトラゾール[M. Goodman, Biopolymers, 24, 137, (1985)、を参照]が含まれる。
【００１２】
本明細書での使用のための適当なペプチドには：
−ソマトスタチン、オクトレオチドおよび類似体、
−ＳＴ受容体[そこでは、ＳＴは、大腸菌および他の微生物によって生産される熱安定性毒素を指す]に結合するところのペプチド；
−ラミニンフラグメント、例えば、ＹＩＧＳＲ、ＰＤＳＧＲ、ＩＫＶＡＶ、ＬＲＥおよびＫＣＱＡＧＴＦＡＬＲＧＤＰＱＧ、
−白血球蓄積の部位をターゲッティングするためのＮ−ホルミルペプチド、
−血小板因子４(ＰＦ４)およびそのフラグメント、
−ＲＤＧ−含有ペプチド、
−α２−アンチプラスミン、フィブロネクチンもしくはベータカゼイン、フィブリノーゲンまたはトロンボスポンジンのペプチドフラグメントが含まれる。α２−アンチプラスミン、フィブロネクチン、ベータカゼイン、フィブリノーゲンおよびトロンボスポンジンのアミノ酸配列は、以下の参照文献：α２−アンチプラスミン[M.Tone et al., J.Biochem, 102, 1033, (1987)]；ベータカゼイン[L.Hansson et al, Gene, 139, 193, (1994)]；フィブロネクチン[A.Gutman et al, FEBS Lett., 207, 145, (1996)]；トロンボスポンジン−１前駆体[V.Dixit et al, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 83, 5449, (1986)]；R.F.Doolittle, Ann. Rev. Biochem., 53, 195, (1984)、中に見出され得る。
【００１３】
好ましくは本発明のペプチドは、
(i)α２−アンチプラスミン、
即ち、ＮＨ２−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＯＨ
またはその中の一つもしくはそれ以上のアミノ酸が：
ＮＨ２−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ＯＨ，
ＮＨ２−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ＯＨ，
ＮＨ２−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ＯＨ、のように交換、附加もしくは除去されているところのこれの変異体、または
(ii)カゼイン
即ち、Ａｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ：
のＮ末端から取られるアミノ酸配列を含む。
【００１４】
本発明の合成的ペプチドは、P. Lloyd-Williams, F. Albericio and E. Girald; “ペプチドおよびタンパク質の合成に向けた化学的アプローチ”CRC Press, 1997、に記載されるように、従来の固相合成によって得られ得る。
【００１５】
本発明での使用のための適当なモノクローナル抗体もしくはそれらのフラグメントには：Ｂ細胞表面上に発現されるＣＤ−２０抗原に対する抗体；抗−白血球もしくは抗−顆粒球抗体；抗−ミオシン抗体または胎児性がん抗原(ＣＥＡ)に対する抗体が含まれる。
適当な酵素基質もしくは阻害剤には、フルオロデオキシグルコースのようなグルコースもしくはグルコース類似体；脂肪酸またはエラスターゼ阻害剤が含まれる。
【００１６】
適当な合成的受容体−結合化合物には、エストラジオール、エストロゲン、プロゲスチン、プロゲステロンおよび他のステロイドホルモン；ドーパミンＤ−１もしくはＤ−２受容体に対するリガンド、またはトロパンのようなドーパミントランスポーター；ならびにセロトニン受容体に対するリガンドが含まれる。
【００１７】
用語“フルオロアルキル”とは、少なくとも一つのフッ素置換基を持つアルキル基を意味する；即ち、用語は、モノフルオロアルキル(例えば、−ＣＨ２Ｆ)からパーフルオロアルキル(例えば、ＣＦ３)までの基を包含する。
本発明のジアミンジオキシムキレート剤では、Ｒ３は好ましくはＨである。少なくとも一つのＲ２基はＨであることがまた好ましく、さらに好ましくはＲ２基は全てＨである。それぞれのＲ１は、好ましくはＣ１〜３アルキル、Ｃ２〜４アルコキシアルキル、Ｃ１〜３ヒドロキシアルキルもしくはＣ１〜３フルオロアルキルであって、最も好ましくはＣ１〜３アルキルもしくはＣ１〜３フルオロアルキルである。全てのＲ１基がＣＨ３であることが、最も特に好ましい。
【００１８】
式ＩＩ[式中、それらが付着しているところの原子と一緒に、二つもしくはそれ以上のＲ基が、炭素環式、複素環式、飽和もしくは不飽和の環を形成する]の好ましいキレート剤結合体は、３−から６−員性、特に５−もしくは６−員性を有するような環を含む。最も好ましいそのような環は、飽和炭素環式の環である。好ましい炭素環式の環は、その中で同一もしくは隣接する炭素原子のどちらかに付着された二つのＲ１基が結合して、３−から６−員性の、特に５−もしくは６−員性の飽和環を形成するところのものである。
【００１９】
リンカー基−(Ａ)ｎの役割は、金属の配位で生じるところの比較的かさ高い放射性金属複合体を、例えば受容体結合が損なわれないように、生体ターゲッティング部分の活性部位から距離を置かせることであると想定される。これは、かさ高い基がそれ自体を活性部位から離れて位置するための自由度および／または金属複合体を活性部位から離れて配向させるところのシクロアルキルもしくはアリールスペーサーのような硬性を有するように、柔軟性 (例えば、単純なアルキル鎖) の組み合せで達成され得る。また、リンカー基の性質を使用して、結合体の得られた放射性金属複合体の生体分布を修飾することができる。かくして、例えば、リンカー中へのエーテル基の導入は、血漿タンパク質結合を最少化することを助けるであろう。好ましいリンカー基−(Ａ)ｎは、(Ａ)ｎ部分を構成する結合された原子の主鎖を有し、２〜１０原子、最も好ましくは２〜５原子、特に好ましいものは２もしくは３原子、を含有する。２原子の最小リンカー基主鎖は、いかなる相互作用も最小化されるように、キレート剤が生体ターゲッティング部分からよく分離されるという利点を付与する。さらなる利点は、ＸおよびＺ基の潜在的なキレート環サイズが非常に大きい(２原子の主鎖に対して少なくとも８)ために、これらの基がキレート剤の放射性金属への配位と効果的に競合することが起こり難いことである。このようにして、生体ターゲッティング部分の生体ターゲッティングの特質およびジアミンジオキシムキレート剤の金属複合体化能力の両方が、このタイプの結合体において保持される。
【００２０】
アルキレン基もしくはアリーレン基のような非ペプチド性リンカー基は、結合された生体ターゲッティング部分との顕著な水素結合相互作用が無いという利点を有し、そのために、リンカーは生体ターゲッティング部分の上に丸く包み込まない。好ましいアルキレンスペーサー基は、−(ＣＨ２)ｎ−[式中、ｎは２〜５である]である。好ましいアリーレンスペーサーは、式：
【化４】
2005500325.tif 000006
[式中：ａおよびｂは、独立して０、１もしくは２である]
を有する。
【００２１】
かくして、好ましいＹ基は、−ＣＨ２ＣＨ２−Ｘ−Ｚ、最も好ましくは−ＣＨ２ＣＨ２−ＮＲ４−Ｚであり、Ｙ＝−ＣＨ２ＣＨ２−ＮＨ−Ｚが特に好ましい。異なる鎖長を有するトリアミンは、種々のアミンを化学的に識別する(例えば保護基を介して)ために合成的戦略の使用を必要とするであろうから、この基は、対称的であることが合成を大幅に容易にするところの中間体Ｒ３Ｃ(ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２)３、好ましくは中間体ＨＣ(ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２)３、から生じるという、さらに別な利点を有する。
【００２２】
基Ｘは、生体ターゲッティング部分Ｚへのキレート剤の容易な結合を許容するところの官能基である。大抵のペプチドおよびタンパク質は、官能化に利用され得るカルボキシルもしくはアミノ部位を有するので、Ｚがペプチドもしくはタンパク質であるときの好ましいＸ基は、それらがアミド結合を介して容易な結合を許容するので、−ＮＲ４−および−ＣＯ２−である。システイン−含有ペプチドおよびタンパク質は、遊離したチオール基を有し得て、Ｚがシステイン−含有ペプチドおよびタンパク質であるときの好ましいＸ基は、それらがチオールエーテル結合を介して容易な結合を許容するので、マレインイミドおよびアクリルアミドのような親チオール基である。
【００２３】
本発明の好ましいジアミンジオキシムは対称性である；即ち、ＣＹ(Ｒ３)−部分上の二つの−ＣＲ２２Ｒ２２ＮＨＣＲ１２Ｃ(＝Ｎ−ＯＨ)Ｒ１置換基が同一であるように選択される。これは、キレート剤がキラル中心を含まないという利点を有するが、それは、そのような中心はジアステレオマーの放射性金属複合体を生成し、多分特定の異性体の精製を必要とし得るからである。
【００２４】
式ＩＩのキレート剤結合体は、酸塩の形態[即ち、そこでは、ジアミンジオキシムドナーセットもしくはＹ基のどちらか一つもしくはそれ以上のアミンが、生体適合性酸でプロトン附加されている]で任意に使用され得る。そのような塩は、例えば移動層中でそのような酸(例えば、酢酸もしくはトリフルオロ酢酸)を使用するＨＰＬＣ精製によるか、または生体適合性酸をキレート剤結合体の溶液中へ添加することよって、直接的に得られ得る。塩の形態は、精製を助けるのに有用であり得るし(例えば、沈殿もしくは再結晶を介して)、または水性媒体中での溶解を促進し得る(その後必要ならばｐＨは、容易に調整され得る)。
【００２５】
本発明のキレート剤結合体は、式ＩＩＩ：
【化５】
2005500325.tif 000007
[式中：
それぞれのＲ１、Ｒ２およびＲ３は、独立してＲ基であり；
Ｅは、−(Ａ)ｎ−Ｊ
[式中：ＪはＺに結合するために適当である官能基であり；
−(Ａ)ｎ−は、リンカー基[式中、それぞれのＡが独立して、−ＣＲ２−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ＝Ｃ−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＳＯ２ＮＲ−、−ＮＲＳＯ２−、−ＣＲ２ＯＣＲ２−、−ＣＲ２ＳＣＲ２−、−ＣＲ２ＮＲＣＲ２−、Ｃ４〜８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ４〜８シクロアルキレン基、Ｃ５〜１２アリ−レン基、Ｃ３〜１２ヘテロアリ−レン基またはポリアルキレングリコール、ポリ乳酸もしくはポリグリコール酸部分である]であり;
ｎは、０〜１０の値の整数である]であって；
それぞれのＲ基は、独立してＨもしくはＣ１〜１０アルキル、Ｃ３〜１０アルキルアリ−ル、Ｃ２〜１０アルコキシアルキル、Ｃ１〜１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜１０フルオロアルキルであるか、または２つもしくはそれ以上のＲ基が、それらが付着しているところの原子と一緒に、炭素環式、複素環式、飽和もしくは不飽和の環を形成する]
の二官能性キレ−トと生体ターゲッティング部分との反応によって、作成され得る。
【００２６】
用語“結合に適する官能基”とは、Ｚの対応する官能基(典型的には、アミン、カルボキシルもしくはチオール基)と反応して、ジアミンジオキシムキレート剤をＺに化学的に結合するであろうところの官能基を意味する。結合に適する好ましいそのような官能基は：−ＮＲ５Ｒ６、−ＣＯ２Ｍ、−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、−ＳＭ１、−ＯＭ１、マレインイミドもしくはアクリルアミド[式中、Ｒ５およびＲ６は、独立してＲ基もしくはＰＧであり；ＭはＨ、陽イオン、ＰＧもしくは活性エステルであり；Ｍ１はＨもしくはＰＧであり；そしてＰＧは保護基である]、である。陽イオンは、適当には、金属イオン、アンモニウム(ＮＨ４＋)もしくは第四級アンモニウムまたはホスホニウムイオンのような、正に荷電した対イオンである。好ましくは、陽イオンは生体適合性陽イオンである。用語“生体適合性陽イオン”、“活性エステル”および“保護基”は、以下に定義される通りである。官能基が−ＮＲ５Ｒ６であるときには、Ｒ５およびＲ６の少なくとも一つおよび好ましくは両方が、Ｈである。
【００２７】
用語“保護基”とは、望ましくない化学反応を阻止もしくは抑制するが、しかし分子の残りの部分を修飾しない、十分温和な条件下で、それが問題とする官能基から切断され得るのに十分反応性であるようにデザインされているところの基、を意味する。脱保護後、問題とする基を用いて、式ＩＩＩの二官能性キレートを生体ターゲッティング部分へ結合させ得る。保護基は、当業者には周知であって、Ｊが−ＮＲ５Ｒ６であるとき：Ｂｏｃ(そこでは、Ｂｏｃはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルである)、Ｆｍｏｃ(そこでは、Ｆｍｏｃはフルオレニルメトキシカルボニルである)、トリフルオロアセチル、アリルオキシカルボニル、Ｄｄｅ[即ち、１−(４,４−ジメチル−２,６−ジオキソシクロヘキシリデン)エチル]もしくはＮｐｙｓ(即ち、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル)；ならびにＪが−ＣＯ２ＰＧであるとき：メチルエステル、ｔｅｒｔ−ブチルエステル、ベンジルエステルから適当に選択され、Ｊが−ＯＰＧであるとき、適当な保護基は：アセチル、ベンゾイル、トリチル(Ｔｒｔ)もしくはテトラブチルジメチルシリルである。Ｊが−ＳＰＧであるとき、適当な保護基は：トリチルおよび４−メトキシベンジルである。さらなる保護基の使用は、“有機合成における保護基”、 Theorodora W. Greene and Peter G. M. Wuts, (John Wiley & Sons, 1991)、に記載されている。
【００２８】
用語“生体適合性陽イオン”とは、イオン化して負に荷電した基と塩を形成するところの、正に荷電した対イオンを意味し、そこでは該正に荷電した対イオンはまた、無毒性であって、この故に哺乳動物体、特に人体への投与に適当である。適当な生体適合性陽イオンの例には：アルカリ金属(例えば、ナトリウムもしくはカリウム)；アルカリ土類金属(例えば、カルシウムもしくはマグネシウム)；およびアンモニウムイオンが含まれる。好ましい生体適合性陽イオンは、ナトリウムイオン(Ｎａ＋)である。
【００２９】
用語“活性エステル”とは、よりよい脱離基であって、これゆえにアミンのような生体ターゲッティング部分上に存在する求核剤とさらに容易な反応を許容するようにデザインされているところの、カルボン酸のエステル誘導体を意味する。適当な活性エステルの例は：Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド(ＮＨＳ)、ペンタフルオロフェノール、ペンタフルオロチオフェノール、パラ−ニトロフェノールおよびヒドロキシベンゾトリアゾールである。
【００３０】
かくして、式ＩＩＩのアミン−官能化されたキレート剤(即ち、Ｊ＝−ＮＲ５Ｒ６)は、アミド結合を介して、生体ターゲッティング部分のカルボキシル基(複数を含む)へ結合され得る。このカップリングは、直接的に(例えば、固相ペプチド合成を用いて)、またはＢＯＰ[即ち、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス(ジメチルアミノ)−ホスホニウム]もしくはＮ,Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド(ＤＣＣＩ)のような適当な活性化剤の存在下で行われ得る。カップリングはまた、生体ターゲッティング部分のカルボキシル基の活性エステルのような、当分野において公知である適切な中間体を介して行われ得る。これに代えて、二官能性キレート剤の側鎖アミン基は、最初にイソチオシアネート(−ＮＣＳ)もしくはイソシアネート(−ＮＣＯ)基に変換され得て、それらがそれぞれチオ尿素および尿素結合の形成を介して、アミン−含有の生体ターゲッティング部分への結合を許容する。これに代えて、二官能性キレート剤の側鎖アミン基を、二酸と反応させて、リンカー基を介して末端カルボキシル基を導入し得る。カルボキシル官能基を有する二官能性キレート剤(即ち、Ｊ＝−ＣＯ２Ｍ)を同様に用いて、アミド結合を介してアミン−含有の生体ターゲッティング部分へ直接カップリングし得る。二官能性キレート剤はまた、生体ターゲッティング部分上のチオール基と反応するようにデザインされた基を有して、安定なチオエーテル結合を形成し得る。そのような基の例は、マレインイミド(無水マレイン酸と対応するアミンを反応させ、次いで無水酢酸と加熱することにより作成され得るところの)、およびアクリルアミド(塩化アクリリルとアミンの反応によって作成され得るところの)である。
【００３１】
第二番目の態様において、本発明は、上で説明されたキレート剤結合体の放射性金属複合体を提供する。適当な放射性金属は、６４Ｃｕ、４８Ｖ、５２Ｆｅ、５５Ｃｏ、９４ｍＴｃもしくは６８Ｇａのような陽電子放出体；または９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１１３ｍＩｎもしくは６７Ｇａのようなγ−放出体のどちらかであり得る。診断的撮像に最も好ましい放射性金属は、γ−放出体、特に９９ｍＴｃである。特定の放射性核種の金属複合体は、がん(cancer)のような種々の疾患の放射線治療または血栓症もしくは再狭窄(restenosis)の処置のための放射性医薬品として有用であり得る。そのような放射線治療的な適用に有用な放射性同位元素には：９０Ｙ、８９Ｓｒ、６７Ｃｕ、１０３Ｐｄ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１６９Ｅｒ、１５３Ｓｍおよび１９８Ａｕが含まれる。標識された生体ターゲッティング部分が所望のインビボの標的部位に到達する以前に、切断された金属複合体をもたらすであろうところの、容易な代謝を血中で結合が受けないような方式で、生体ターゲッティング部分Ｚがキレート剤に結合されることが極めて好ましい。それ故に、生体ターゲッティング部分は、好ましくは、容易に代謝されないところの結合(例えば、エステル結合であるような)を介して、本発明の金属複合体に共有結合的に結合される。
【００３２】
本発明の好ましい放射性金属複合体は、対称性である；即ちＣＹ(Ｒ３)−部分上の二つの−ＣＲ２２Ｒ２２ＮＨＣＲ１２Ｃ(＝Ｎ−ＯＨ)Ｒ１置換基が同一であるように選択される。これは、キレート剤がキラル中心を含まないという利点を有するが、それは、そのような中心は、ジアステレオマーの放射性金属複合体を生成し、多分特定の異性体の精製を必要にし得るからである。キレート剤結合体の放射性金属複合体は、電気的に中性であることがまた好ましい。
【００３３】
本発明のキレート剤の９９ｍＴｃ複合体は、
【化６】
2005500325.tif 000008
上に示されるような中性の、Ｔｃ(Ｖ)ジオキソ複合体であると信じられている。
【００３４】
本発明の９９ｍＴｃ−ジアミンジオキシム複合体において、Ｒ３は好ましくはＨである。また、少なくとも一つのＲ２基はＨであることが好ましく、さらに好ましくはＲ２基は全てＨである。それぞれのＲ１は、好ましくはＣ１〜３アルキル、Ｃ２〜４アルコキシアルキル、Ｃ１〜３ヒドロキシアルキルもしくはＣ１〜３フルオロアルキルであり、最も好ましくはＣ１〜３アルキルもしくはＣ１〜３フルオロアルキルである。全てのＲ１基がＣＨ３であることが、最も特に好ましい。９９ｍＴｃ複合体に対して好ましいＹ基は、キレート剤結合体について上で説明した通りである。
【００３５】
二つもしくはそれ以上のＲ基が、それらが付着しているところの原子と一緒に、炭素環式、複素環式、飽和もしくは不飽和の環を形成する、本発明の好ましい複合体は、３−から６−員性、特に５−もしくは６−員性を有するような環を含む。最も好ましいそのような環は、飽和炭素環式の環である。好ましい炭素環式の環は、その中で同一もしくは隣接する炭素原子のどちらかに付着された二つのＲ１基が結合して、３−から６−員性の、特に５−もしくは６−員性飽和環を形成するところのものである。
【００３６】
本発明の放射性金属複合体は、適切な酸化状態にある放射性金属の溶液を、キレート結合体と適切なｐＨにおいて反応させることにより、作成され得る。溶液は、好ましくは金属に対し複合体を弱く形成するところのリガンド(グルコン酸塩もしくはクエン酸塩のような)を含有し得る；即ち、放射性金属複合体は、リガンド交換もしくはキレート変換によって作成される。そのような条件は、金属イオンの加水分解のような望ましくない副反応を抑制するために有用である。放射性金属イオンが９９ｍＴｃであるときは、通常の出発物質は、９９Ｍｏ発生装置からの過テクネチウム酸ナトリウムである。テクネチウムは、比較的非反応性であるＴｃ(ＶＩＩ)酸化状態で９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸塩中に存在する。それ故に、より低い酸化状態、Ｔｃ(Ｉ)からＴｃ(Ｖ)までのテクネチウム複合体の作成は、複合体化を促進するために、亜ジチオン酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、アスコルビン酸、ホルムアミジンスルフィン酸、スズ(ＩＩ)イオン、Ｆｅ(ＩＩ)もしくはＣｕ(Ｉ)のような、適当な薬学的に許容される還元剤の添加を通常必要とする。薬学的に許容される還元剤は、好ましくは、スズ(ＩＩ)塩、最も好ましくは塩化スズ(ＩＩ)、フッ化スズ(ＩＩ)もしくは酒石酸スズ(ＩＩ)である。
【００３７】
第三番目の態様において、本発明は、上のキレート剤結合体の放射性金属複合体をヒトへの投与に適当な無菌形態で含むところの放射性医薬品を提供する。そのような放射性医薬品は、無菌の完全性を保ちながら、皮下針で単回もしくは複数回刺し通すのに適当なシール(例えば、襞付きセプタムシール栓)が付けられているところの容器に入れて、いずれにせよ、適当に供給される。そのような容器は、単回もしくは複数回の患者用量を含み得る。好ましい複数回用量容器は、複数回の患者用量を含有するところの単一の大量バイアル(例えば、１０〜３０ｃｍ３容積の)から成り、それによって単回の患者容量が、かくして臨床的状況に適合するように、製剤の耐用期間の間で、種々の時間間隔で臨床グレ−ドの注射器の中に引き出され得る。前−充填された注射器は、単回ヒト用量を含有するようにデザインされており、そしてそれ故に、好ましくは臨床的使用に適当な使い捨てもしくは他の注射器である。前−充填された注射器は、操作者を放射活性線量から保護するための注射器遮蔽体を任意に供え得る。適当なそのような放射線医薬品注射器遮蔽体は、当分野において公知であり、好ましくは鉛もしくはタングステンから成る。
【００３８】
診断的撮像放射性医薬品に適する９９ｍＴｃ放射活性含量は、インビボで撮像化されるべき部位、取り込み、標的対バックグランの比率に依存して、１８０〜１５００ＭＢｑの範囲にある。９９ｍＴｃ放射性医薬品による心臓撮像に対しては、約１１１０ＭＢｑ(３０ｍＣｉ)がストレス研究用に使用され、そして約３５０ＭＢｑ(１０ｍＣｉ)が安静研究用に使用され得る。
【００３９】
第四番目の態様において、本発明は、９９ｍＴｃ放射性医薬品組成物を調製するための非−放射活性キットを提供する。そのようなキットは、例えば血流中への直接的な注射を介して、ヒトへの投与に適した無菌の放射性医薬製品を与えるようにデザインされる。９９ｍＴｃについては、キットは好ましくは凍結乾燥されて、さらなる操作なしにヒト投与に適当な溶液を与えるように、９９ｍＴｃ放射性同位元素発生機から出る無菌の９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸塩(ＴｃＯ４−)で再溶解されるようにデザインされる。適当なキットは、遊離の塩基もしくは酸塩のどちらかの形態にある式ＩＩのキレート剤を、亜ジチオン酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、アスコルビン酸、ホルムアミジンスルフィン酸、スズ(ＩＩ)イオン、Ｆｅ(ＩＩ)もしくはＣｕ(Ｉ)のような適当な薬学的に許容される還元剤と一緒に、含有する容器(例えば、セプタム−シールされたバイアル)から成る。薬学的に許容される還元剤は、好ましくは塩化スズ(ＩＩ)もしくは酒石酸スズ(ＩＩ)のようなスズ(ＩＩ)塩である。これに代えて、キットは、放射性金属の添加において、所望の製品を与える金属変換反応(即ち、金属交換)を受けるところの金属複合体を、任意に含有し得る。
【００４０】
非放射性キットは、変換キレート剤、放射保護剤、抗菌性防腐剤、ｐＨ−調整剤もしくは賦形剤のようなさらに別の成分を任意にさらに含み得る。“変換キレート剤”は、迅速に反応してテクネチウムと弱い複合体を形成し、次いでジアミンジオキシムによって置換されるところの化合物である。これは、テクネチウム複合体形成と競合する迅速な過テクネチウム酸塩の還元に起因する、還元されて、加水分解されたテクネチウム(ＲＨＴ)の形成の危険性を最小にする。適当なそのような変換キレート剤は、弱い有機酸即ち３〜７の範囲のｐＫａを有する有機酸と生体適合性陽イオンとの塩である。適当なそのような弱い有機酸は、酢酸、クエン酸、酒石酸、グルコン酸、グルコヘプトン酸、安息香酸、フェノールもしくはホスホン酸である。それ故に、適当な塩は、酢酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩、安息香酸塩、フェノール塩もしくはホスホン酸塩である。好ましいそのような塩は、酒石酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩、安息香酸塩もしくはホスホン酸塩であり、最も好ましくはホスホン酸塩、最も特に好ましくはジホスホン酸塩、である。好ましいそのような変換キレート剤は、ＭＤＰ、即ちメチレンジホスホン酸、と生体適合性陽イオンとの塩である。
【００４１】
用語“放射保護剤”とは、水の放射線分解から起こる酸素−含有フリーラジカルのような、高反応性のフリーラジカルを捕捉することにより、レドックス過程のような分解反応を阻害するところの化合物を意味する。本発明の放射保護剤は、：アスコルビン酸、パラ−アミノ安息香酸(即ち、４−アミノ安息香酸)、ゲンチシン酸(即ち、２,５−ジヒドロキシ安息香酸)および上で説明されたような生体適合性陽イオンとのそれらの塩、から適当に選択される。
【００４２】
用語“抗菌性防腐剤”とは、細菌、酵母もしくはカビのような潜在的に有害な微生物の成長を阻害するところの薬剤を意味する。抗菌性防腐剤はまた、用量に依存して何らかの殺菌作用を示し得る。本発明の抗菌性防腐剤(複数を含む)の主な役割は、再溶解後の放射性医薬品組成物中での、即ち放射活性診断用の製品それ自体中での、いかなるそのような微生物の成長をも阻止することである。しかしながら、抗菌性防腐剤をまた、任意に用いて、本発明の非放射性キットの一つもしくはそれ以上の成分中での潜在的に有害な微生物の成長を、再溶解に先立って阻止し得る。適当な抗菌性防腐剤(複数を含む)には、パラベン類、即ちメチル、エチル、プロピル、ブチルパラベンもしくはそれらの混合物；ベンジルアルコール；フェノール；クレゾール；セトリマイドおよびチオメルサルが含まれる。好ましい抗菌性防腐剤(複数を含む)は、パラベン類である。
【００４３】
用語“ｐＨ−調整剤”とは、再溶解されたキットのｐＨが、ヒトもしくは哺乳動物投与のための許容限度内(およそｐＨ４.０〜１０.５)にあることを確保するために有用な化合物もしくは化合物の混合物を意味する。適当なそのようなｐＨ−調整剤には、トリシン、リン酸塩もしくはＴＲＩＳ[即ち、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン]のような薬学的に許容される緩衝剤、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウムもしくはそれらの混合物のような薬学的に許容される塩基が含まれる。式ＩＩの結合体が酸塩形態で使用されるとき、ｐＨ調整剤は、キットの使用者が、多段階手順の一部としてｐＨを調整し得るように、別個のバイアルもしくは容器に入れて任意に提供され得る。
【００４４】
用語“賦形剤”とは、製造および凍結乾燥中に物質の取り扱いを容易にし得るところの、薬学的に許容される増量剤を意味する。適当な賦形剤には、塩化ナトリウムのような無機塩、および蔗糖、マルトースもしくはトレハロースのような水溶性糖が含まれる。
【００４５】
第五番目の態様において本発明は、キレート剤−生体ターゲッティング部分結合体を作成するために有用な、式ＩＩＩ:
【化７】
2005500325.tif 000009
[式中：
それぞれのＲ１、Ｒ２およびＲ３は、独立してＲ基であり；
Ｅは、−(Ａ)ｎ−Ｊ
[式中：ＪはＺに結合するために適当である官能基であり；
−(Ａ)ｎ−は、リンカー基[式中、それぞれのＡが独立して、−ＣＲ２−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ＝Ｃ−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＳＯ２ＮＲ−、−ＮＲＳＯ２−、−ＣＲ２ＯＣＲ２−、−ＣＲ２ＳＣＲ２−、−ＣＲ２ＮＲＣＲ２−、Ｃ４〜８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ４〜８シクロアルキレン基、Ｃ５〜１２アリ−レン基、Ｃ３〜１２ヘテロアリ−レン基またはポリアルキレングリコール、ポリ乳酸もしくはポリグリコール酸部分である]であり;
ｎは、０〜１０の値の整数である]であって；
それぞれのＲ基は、独立してＨもしくはＣ１〜１０アルキル、Ｃ３〜１０アルキルアリ−ル、Ｃ２〜１０アルコキシアルキル、Ｃ１〜１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１〜１０フルオロアルキルであるか、または２つもしくはそれ以上のＲ基が、それらが付着しているところの原子と一緒に炭素環式、複素環式、飽和もしくは不飽和の環を形成する]
の二官能性ジアミンジオキシムキレート剤を提供する。
【００４６】
用語“結合に適する官能基”とは、Ｚの対応する官能基(典型的には、アミン、カルボキシルもしくはチオール基)と反応して、ジアミンジオキシムキレート剤をＺに化学的に結合するであろうところの官能基を意味する。結合に適する好ましいそのような官能基は：−ＮＲ５Ｒ６、−ＣＯ２Ｍ、−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、−ＳＭ１、−ＯＭ１、マレインイミドもしくはアクリルアミド[式中、Ｒ５およびＲ６は、独立してＲ基もしくはＰＧであり；ＭはＨ、陽イオン、ＰＧもしくは活性エステルであり；Ｍ１はＨもしくはＰＧであり；そしてＰＧは保護基である]、である。陽イオンは、適当には、金属イオン、アンモニウム(ＮＨ４＋)もしくは第四級アンモニウム、またはホスホニウムイオンのような正に荷電した対イオンである。好ましくは、陽イオンは生体適合性陽イオンである。用語“生体適合性陽イオン”、“活性エステル”および“保護基”は、上に定義された通りである。官能基が−ＮＲ５Ｒ６であるときには、Ｒ５およびＲ６の少なくとも一つおよび好ましくは両方がＨである。
【００４７】
本発明の式ＩＩＩの二官能性キレート剤において、Ｒ３は好ましくはＨである。少なくとも一つのＲ２基はＨであることがまた好ましく、さらに好ましくはＲ２基は全てＨである。それぞれのＲ１は、好ましくはＣ１〜３アルキル、Ｃ２〜４アルコキシアルキル、Ｃ１〜３ヒドロキシアルキルもしくはＣ１〜３フルオロアルキルであり、最も好ましくはＣ１〜３アルキルもしくはＣ１〜３フルオロアルキルである。全てのＲ１基がＣＨ３であることが、最も特に好ましい。
【００４８】
好ましい二官能性キレート剤[そこでは、それらが付着しているところの原子と一緒に、二つもしくはそれ以上のＲ基が、炭素環式、複素環式、飽和もしくは不飽和の環を形成する]は、３−から６−員性、特に５−もしくは６−員性を有するような環を含む。最も好ましいそのような環は、飽和炭素環式の環である。好ましい炭素環式の環は、その中で同一もしくは隣接する炭素原子のどちらかに付着された二つのＲ１基が結合して、３−から６−員性の、特に５−もしくは６−員性の飽和環を形成するところのものである。
【００４９】
式(ＩＩＩ)のキレート剤結合体は、任意に酸塩の形態、即ち、そこでは、ジアミンジオキシムドナーセットもしくはＹ基のどちらか一つもしくはそれ以上のアミンが、生体適合性酸でプロトン附加されている、で使用され得る。そのような塩は、例えば移動層中でそのような酸(例えば、酢酸もしくはトリフルオロ酢酸)を用いるＨＰＬＣ精製によって、または生体適合性酸をキレート剤結合体の溶液中へ添加することよって、直接的に得られ得る。塩の形態は、精製を助けるのに有用であり得るし(例えば、沈殿もしくは再結晶を介して)、または水性媒体中での溶解を促進し得る(その後もし必要ならばｐＨは、容易に調整され得る)。
【００５０】
二官能性キレート剤の好ましいリンカー基−(Ａ)ｎは、(Ａ)ｎ部分を構成する結合された原子の主鎖を有し、２〜１０原子、最も好ましくは２〜５原子、特に好ましいものは２もしくは３原子、を含有する。２原子の最小リンカー基主鎖は、いかなる相互作用も最小化されるように、キレート剤が生体ターゲッティング部分からよく分離されるという利点を付与する。さらなる利点は、ＸおよびＺ基の潜在的なキレート環サイズが非常に大きい(２原子の主鎖に対して少なくとも８)ために、これらの基がキレート剤の放射性金属への配位と効果的に競合することが起こり難いことである。
【００５１】
アルキレンもしくはアリーレン基のような非ペプチド性リンカー基は、結合された生体ターゲッティング部分との顕著な水素結合相互作用が無いという利点を有し、そのために、リンカーは生体ターゲッティング部分の上に丸く包み込まない。好ましいアルキレンスペーサー基は、−(ＣＨ２)ｎ−[式中、ｎは２〜５である]である。好ましいアリーレンスペーサーは、式：
【化８】
2005500325.tif 000010
[式中：ａおよびｂは、独立して０、１もしくは２である]
を有する。
【００５２】
かくして、好ましいＥ基は、−ＣＨ２ＣＨ２−Ｊ、最も好ましくは−ＣＨ２ＣＨ２−ＮＲ５もしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈまたはそれらの活性エステルであって、Ｅ＝−ＣＨ２ＣＨ２−ＮＨ２が特に好ましい。酸はまた、例えば塩化ギ酸イソブチルおよび塩基と反応させることによって混合酸無水物に変換され得る。混合酸無水物はまた、アミンのような求核剤と反応する。異なる鎖長を有するトリアミンは、種々のアミンを化学的に識別する(例えば保護基を経由して)ための合成的戦略を用いることを必要とするであろうから、基Ｅ＝−ＣＨ２ＣＨ２−ＮＨ２は、対称的であることが大幅に合成をさらに容易にするところの中間体Ｒ３Ｃ(ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２)３、好ましくは中間体ＨＣ(ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２)３、から生じるという、さらに別な利点を有する。
【００５３】
本発明の好ましい式ＩＩＩの二官能性ジアミンジオキシムキレート剤は、対称性である；即ち、ＣＹ(Ｒ３)−部分上の二つの−Ｃ(Ｒ２)２(Ｒ２)２ＮＨＣＲ１２Ｃ(＝Ｎ−ＯＨ)Ｒ１置換基が同一であるように選択される。これは、キレート剤がキラル中心を含まないという利点を有するが、それは、そのような中心はジアステレオマーの放射性金属複合体を生成し、多分特定の異性体の精製を必要とし得るからである。特に好ましい二官能性ジアミンジオキシムキレート剤は、式：
【化９】
2005500325.tif 000011
を有する。この化合物の酸塩はまた、本発明の範囲内である。
【００５４】
本発明の二官能性ジアミンジオキシムキレート剤は、式ＩＶ：
【化１０】
2005500325.tif 000012
[式中、Ａ、Ｊ、Ｒ２、Ｒ３およびｎは、上の式ＩＩＩについて定義された通りである]の化合物を：
(i)適当なクロロニトロソ誘導体Ｃｌ−Ｃ(Ｒ１)２−ＣＨ(ＮＯ)Ｒ１；
(ii)式Ｃｌ−Ｃ(Ｒ１)２−Ｃ(＝ＮＯＨ)Ｒ１のアルファ−クロロオキシム；
(iii)式Ｂｒ−Ｃ(Ｒ１)２−Ｃ(＝Ｏ)Ｒ１のアルファ−ブロモケトン(続いてジアミンジケトン生成物をヒドロキシルアミンでもってジアミンジオキシムに変換)
のどちらかとアルキル化させるにより適当に作成され得る。
【００５５】
経路(i)は、S. Jurisson et al [Inorg. Chem., 26, 3576-82 (1987)]、によって記載されている。クロロニトロソ化合物は、実施例３で説明されるように、適切なアルケンの塩化ニトロシル(ＮＯＣｌ)との処理により得られ得る。クロロニトロソ化合物のさらなる合成的詳細は：Ramalingam, K. et al Synth. Commun. (1995) 25(5) 743-52；Glaser et al J. Org. Chem. (1996), 61(3), 1047-48；Clapp, Leallyn B.； et al J. Org Chem. (1971), 36(8) 1169-70；Saito, Giulichi et al Shizen Kagaku (1995), 47, 41-9およびSchulz, Manfred Z. Chem (1981), 21(11), 404-5、によって与えられる。経路(iii)は、Nowotnik et al [Tetrahedron, 50(29), p.8617-8632 (1994)]、により広範な言葉で記載されている。アルファ−クロロオキシムは、市販されているところの、対応するアルファ−クロロケトンもしくはアルデヒドのオキシム化によって得られ得る。アルファ−ブロモケトンは、市販されている。
【００５６】
Ｊが−ＮＨ２であるとき、式ＩＶのトリアミンは、Ｊ基の一級アミンが保護されるように、任意に最初にモノ−保護され得る。次いで、ジアミンジオキシムが、上の経路(i)、(ii)もしくは(iii)にしたがって作成されて、次いで、保護基が除去される。適当な保護基は当分野において公知であって、それらには、上で説明されたようなＢＯＣ(即ち、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)もしくはＦｍｏｃが含まれる。
【００５７】
式ＩＶの化合物は、ＨＣ(ＣＨ２ＣＨ２ＯＡｃ)３から一つもしくはそれ以上の酢酸エステルを一級アルコール(複数を含む)に加水分解し、塩化メタンスルホニルおよびピリジンでメタンスルホネートエステルのような脱離基に変換することによって、適当に作成される。次いで、この脱離基は、所望の官能基に変換され得るところの適当な求核剤で置換され得る。カルボン酸(即ち、Ｊ＝−ＣＯ２Ｈ)を生成させるためには、シアン化物陰イオンが用いられるであろう。シアン化物の酸加水分解は、所望のカルボン酸を生成させるであろう。アミンを生成させるためには、アジド求核剤を用いて、アルキルアジドを生成させるであろう。アルキルアジドの水素添加は、アミンを生産するであろう。チオール(即ち、Ｊ＝−ＳＨ)を生成させるためには、脱離基をチオ酢酸陰イオンで置換するとチオ酢酸を与え、それは加水分解でチオールを生産するであろう。
【００５８】
さらなる態様において、本発明は、式Ｖ：
ＨＣ(ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ８)３
式Ｖ
[式中、Ｒ７およびＲ８は、独立してＨもしくはＰGであるか、またはＲ７およびＲ８は、一緒にＰGを形成する]
の化合物；またはその塩、を提供する。
ＰGは、上で定義される通りの保護基である。式Ｖの化合物は、本発明の範囲の二官能性キレート剤に対する有用な前駆体である。式Ｖの好ましい化合物は、ＨＣ(ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２)２(ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ８)、即ち、上で説明されるようなモノー保護されたトリアミン、である。最も好ましくは、全てのＲ７およびＲ８はＨである；即ち、化合物ＨＣ(ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２)３もしくはその酸塩が、本発明の好ましい化合物である。
【００５９】
図１は、化合物１〜６の化学構造を示す。図２は、化合物５の化学構造を全てにおいて示す。図３は、実施例１の１,１,１−トリス(２−アミノエチル)アミンのアジド合成のための反応式を示す。図４は、実施例２の１,１,１−トリス(２−アミノエチル)アミンのこれに代わる合成のための反応式を示す。
【００６０】
本発明は、以下に詳述される、非−限定的な実施例によって説明される。実施例１は、新規化合物１,１,１−トリス(２−アミノエチル)メタンの合成を説明する。実施例２は、潜在的に有害性のアジド中間体の使用を避けるところの１,１,１−トリス(２−アミノエチル)メタンのそれに代わる合成を提供する。実施例３は、種々のクロロニトロソアルカン前駆体の合成を説明する。実施例４は、本発明の好ましいアミン−置換された二官能性ジアミンジオキシム(化合物１)の合成を説明する。実施例５は、化合物１のベンズアミド結合体(化合物２)の合成を説明する。実施例６は、二官能性キレート剤の末端アミン機能を末端カルボキシ機能へ効果的に変換するところのスペーサー基がいかに導入され得るかを示す。実施例７は、血栓症ターゲッティングペプチドの固相合成を説明する。実施例８は、化合物５、即ち化合物１とターゲッティングペプチドとの結合体、を提供する。実施例９は、環状構造を組み込んでいるジアミンジオキシム類似体であるところの、化合物７および８の合成を説明する。
【００６１】
実施例１０は、化合物２の９９ｍＴｃ−放射標識をアザ類似体先行技術キレート剤(化合物３)のそれと比較して、本発明のキレート剤が、より緩和な条件、即ち、室温およびより低いアルカリ性ｐＨで、はるかにより効率的かつ迅速な標識化を与えることを示す。かくして、先行技術キレート剤は、８０％を越えるＲＣＰを与えるためには、ｐＨ１０および室温で少なくとも１２０分の時間を必要とするが、一方化合物３は、１５分以内で９５％を越えるＲＣＰで標識する。実施例１１は、化合物５が９９ｍＴｃで標識して、高度の放射化学的純度の製剤を与えることを示す。実施例１２は、９９ｍＴｃ標識された化合物５が、インビトロで先行技術化合物９９ｍＴｃ−化合物６に匹敵し得る血栓取り込みを示すこと、およびこの故にペプチドの生体ターゲッティングの性質が、本発明のジアミンジオキシムキレート剤へ結合されるときに、保持されることを示す。実施例１３は、化合物１と比較的感受性のジスルフィド結合を有する環状ペプチドとの結合体であるところの、化合物９の緩和な条件下における９９ｍＴｃ放射標識化を示す。
【００６２】
実施例１
１,１,１−トリス(２−アミノエチル)メタンの合成
第１(ａ)工程：３−(メトキシカルボニルメチレン)グルタル酸ジメチルエステル
トルエン(６００ｍｌ)中のカルボメトキシメチレントリフェニルホスホラン(１６７ｇ、０.５ｍｏｌ)を３−オキソグルタル酸ジメチル(８７ｇ、０.５ｍｏｌ)と処理して、反応液を窒素雰囲気下に１２０℃の油浴上で１００℃に３６時間加熱した。次いで、反応液を真空で濃縮して、油性残渣を４０／６０石油エーテル／ジエチルエーテル１：１の６００ｍｌで粉末化した。酸化トリフェニルホスフィンが析出し、上澄み液をデカント／ろ去した。真空で濃縮した残渣を高度真空沸点下に(０.２トールで、オーブン温度１８０〜２００℃)クーゲルロール(Kugelrohr)で蒸留すると、３−(メトキシカルボニルメチレン)グルタル酸ジメチルエステル(８９.０３ｇ、５３％)を与えた。
NMR 1H(CDCl3): δ 3.31 (2H, s, CH2),  3.7(9H, s, 3xOCH3), 3.87  (2H, s, CH2), 5.79 (1H, s, ＝CH, ) ppm.
NMR 13C(CDCl3), δ 36.56,CH3, 48.7, 2xCH3, 52.09 および 52.5 (2xCH2); 122.3 および 146.16 C＝CH; 165.9, 170.0 および 170.5 3xCOO ppm.
【００６３】
第１(ｂ)工程：３−(メトキシカルボニルメチレン)グルタル酸ジメチルエステルの水素化
メタノール(２００ｍｌ)中の３−(メトキシカルボニルメチレン)グルタル酸ジメチルエステル(８９ｇ、２６７ｍｍｏｌ)を水素ガス(３.５バール)の雰囲気下に(炭上の１０％パラジウム、５０％含水)(９ｇ)と(３０時間)の間振り混ぜた。溶液を珪藻土を通してろ過して、真空で濃縮すると、３−(メトキシカルボニルメチル)グルタル酸ジメチルエステルを油として与えた、収量(８４.９ｇ、９４％)。
NMR 1H(CDCl3), d 2.48 (6H, d, J＝8Hz, 3xCH2), 2.78  (1H, hextet, J＝8Hz CH, ) 3.7 (9H, s, 3xCH3).
NMR 13C(CDCl3), （登録商標） 28.6, CH;  37.50, 3xCH3; 51.6, 3xCH2; 172.28,3xCOO.
【００６４】
第１(ｃ)工程：トリメチルエステルの還元およびトリアセテートへのエステル化
窒素雰囲気下に３頚の２−Ｌ丸底フラスコの中で、テトラヒドロフラン(４００ｍｌ)中の水素化アルミニウムリチウム(２０ｇ、５８８ｍｍｏｌ)をテトラヒドロフラン(２００ｍｌ)中のトリス(メチルオキシカルボニルメチル)メタン(４０ｇ、２１２ｍｍｏｌ)と１時間をかけて注意深く処理した。強い発熱反応が起こり、溶媒を激しく還流させた。反応液を９０℃の油浴上で還流下に３日間加熱した。水素の発生が止むまで酢酸(１００ｍｌ)の注意深い滴下により、反応を停止させた。攪拌した反応混合液を、穏やかな還流を起こすような速度で無水酢酸溶液(５００ｍｌ)で注意深く処理した。フラスコに蒸留装置を付けて、攪拌し、次いで、９０℃(油浴温度)で加熱して、テトラヒドロフランを留去した。無水酢酸のさらなる部分(３００ｍｌ)を加え、反応液を還流の位置に戻して、攪拌して、１４０℃の油浴中で５時間加熱した。反応液を冷却させて、ろ過した。酸化アルミニウムの沈殿を酢酸エチルで洗浄して、合併したろ液をロータリーエバポレータ上で５０℃の水浴温度で真空(５ｍｍＨｇ)下に濃縮すると、油を与えた。油を酢酸エチル(５００ｍｌ)中に取り入れて、飽和炭酸カリウム水溶液で洗浄した。酢酸エチル溶液を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥して、真空で濃縮すると、油を与えた。油をクーゲルロール(Kugelrohr)で蒸留すると、トリス(２−アセトキシエチル)メタン(４５.３ｇ、９５.９％)を油として与えた。沸点：０.１ｍｍＨｇで２２０℃。
NMR 1H(CDCl3), δ 1.66(7H, m, 3xCH2, CH), 2.08(1H, s, 3xCH3); 4.1(6H, t, 3xCH2O).
NMR 13C(CDCl3), （登録商標）20.9, CH3; 29.34, CH;  32.17, CH2; 62.15, CH2O; 171, CO.
【００６５】
第１(ｄ)工程：トリアセテ−トからアセテート基の除去
メタノール(２００ｍｌ)中のトリス(２−アセトキシエチル)メタン(４５.３ｇ、１６５ｍＭ)および８８０アンモニア(１００ｍｌ)を８０℃の油浴上で２日間加熱した。反応液を８８０アンモニアのさらなる部分(５０ｍｌ)で処理して、油浴中で８０℃にて２４時間加熱した。８８０アンモニアのさらなる部分(５０ｍｌ)を加えて、反応液を８０℃で２４時間加熱した。次いで、反応液を真空で濃縮して、全ての溶媒を除去すると、油を与えた。これを８８０アンモニア(１５０ｍｌ)の中に取り入れて、８０℃で２４時間加熱した。次いで、反応液を真空で濃縮して、全ての溶媒を除去すると、油を与えた。クーゲルロール(Kugelrohr)の蒸留は、アセタミド、沸点：０.２ｍｍＨｇで１７０〜１８０℃、を与えた。アセタミドを含有するバルブをきれいに洗浄して、蒸留を続けた。トリス(２−ヒドロキシエチル)メタン(２２.５３ｇ、９２％)が沸点：０.２ｍｍＨｇで２２０℃で留出した。
NMR 1H(CDCl3), （登録商標） 1.45(6H, q, 3xCH2), 2.2(1H, quintet, CH); 3.7(6H, t 3xCH2OH); 5.5(3H, brs, 3xOH).
NMR 13C(CDCl3), δ  22.13, CH; 33.95, 3xCH2; 57.8, 3xCH2OH.
【００６６】
第１(ｅ)工程：トリオールのトリス(メタンスルホネート)への変換
ジクロロメタン(５０ｍｌ)中のトリス(２−ヒドロキシエチル)メタン(１０ｇ、０.０６７６ｍｏｌ)の攪拌し、氷冷した溶液に、ジクロロメタン(５０ｍｌ)中の塩化メタンスルホニル(４０ｇ、０.３４９ｍｏｌ)の溶液を窒素下に温度が１５℃以上に上がらないような速度でゆっくりと滴下した。次いで、ジクロロメタン(５０ｍｌ)中に溶解したピリジン(２１.４ｇ、０.２７ｍｏｌ、４当量)を発熱反応で温度が１５℃以上に上がらないような速度で滴下した。反応液を室温で２４時間攪拌放置し、次いで、５Ｎ塩酸溶液(８０ｍｌ)で処理して、層を分離した。水層をさらなるジクロロメタン(５０ｍｌ)で抽出して、有機層を合併し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過して、真空で濃縮すると、過剰の塩化メタンスルホニルで汚染されたトリス[２−(メチルスルホニルオキシ)エチル]メタンを与えた。理論的収量は２５.８ｇであった。
NMR 1H(CDCl3), d 4.3 (6H, t, 2xCH2), 3.0 (9H, s, 3xCH3), 2 (1H, hextet, CH), 1.85 (6H, q, 3xCH2).
【００６７】
第１(ｆ)工程：１,１,１−トリス(２−アジドエチル)メタンの作成
乾燥ＤＭＦ(２５０ｍｌ)中のトリス[２−(メチルスルホニルオキシ)エチル]メタン[第１(ｅ)工程から、過剰の塩化メタンスルホニルで汚染された](２５.８ｇ、６７ｍｍｏｌ、理論量)の攪拌した溶液を、窒素下にアジ化ナトリウム(３０.７ｇ、０.４７ｍｏｌ)で部分添加的に１５分かけて処理した。発熱が観測されて、反応液を氷浴上で冷却した。３０分後、反応混合液を５０℃の油浴上で２４時間加熱した。反応液の色は褐色となった。反応液を冷却させ、希炭酸ナトリウム溶液(２００ｍｌ)で処理して、４０／６０石油エーテル／ジエチルエーテル１０：１(３×１５０ｍｌ)で三回抽出した。有機抽出液を水(２×１５０ｍｌ)で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥して、ろ過した。エタノール(２００ｍｌ)を石油／エーテル溶液に加えて、トリアジドを溶液中に保って、容積を真空で２００ｍｌ以上に減少した。エタノール(２００ｍｌ)を加えて、真空で再濃縮して、最後の痕跡の石油を除去して、２００ｍｌ以上のエタノール溶液を残した。トリアジドのエタノール溶液を、第１(ｇ)工程で直接に使用した。
注意：アジドは潜在的に爆発性であるので、全ての溶媒を除去しないで、何時も希薄溶液中に保たねばならない。
０.２ｍｌ以下の溶液を真空で蒸発させて、エタノールを除去して、この少量の試料でＮＭＲを測定した。
NMR 1H(CDCl3), d 3.35 (6H, t, 3xCH2), 1.8 (1H, septet, CH, ), 1.6 (6H, q, 3xCH2).
【００６８】
第１(ｇ)工程：１,１,１−トリス(２−アミノエチル)メタンの作成
エタノール(２００ｍｌ)中のトリス(２−アジドエチル)メタン(１５.０６ｇ、０.０６７６ｍｏｌ)(先の反応からの１００％収率を仮定して)を炭上の１０％パラジウム(２ｇ、５０％含水)と処理して、１２時間水素化した。反応容器を２時間毎に排気して、反応から発生する窒素を除去して、水素で再充填した。試料をＮＭＲ分析用に採取して、トリアジドのトリアミンへの完全な変換を確認した。
警告：未還元のアジドは蒸留で爆発するかもしれない。反応液をセライトパッドを通してろ過して、触媒を除去して、真空で濃縮すると、トリス(２−アミノエチル)メタンを油として与えた。これを０.４ｍｍ／Ｈｇにおいて沸点１８０〜２００℃でクーゲルロール(Kugelrohr)の蒸留によりさらに精製すると、無色の油(８.１ｇ、トリオールから８２.７％通算収率)を与えた。
NMR 1H(CDCl3),  2.72 (6H, t, 3xCH2N), 1.41 (H, septet, CH), 1.39 (6H, q, 3xCH2).
NMR 13C(CDCl3), δ 39.8 (CH2NH2), 38.2 (CH2.), 31.0 (CH).
【００６９】
実施例２
１,１,１−トリス(２−アミノエチル)メタンの代わりの作成
第２(ａ)工程：ｐ−メトキシベンジルアミンによるトリメチルエステルのアミド化
トリス(メチルオキシカルボニルメチル)メタン(２ｇ、８.４ｍｍｏｌ；上の第１(ｂ)工程におけるように作成した)をｐ−メトキシ−ベンジルアミン(２５ｇ、１７８.６ｍｍｏｌ)中に溶解した。装置を蒸留用に設置して、窒素気流下に１２０℃に２４時間加熱した。反応の進行を、収集されるメタノールの量によりモニターした。反応混合液を環境温度に冷却して、酢酸エチル３０ｍｌを加え、次いで、沈殿したトリアミド生成物を３０分間攪拌した。トリアミドをろ過により単離して、ろ過ケーキを十分な量の酢酸エチルで数回洗浄して、過剰のｐ−メトキシ−ベンジルアミンを除去した。乾燥後、４.６ｇ、１００％の白色粉末を得た。この高度に不溶性の生成物を、さらなる精製もしくは特性化無しに次の工程で直接に使用した。
【００７０】
第２(ｂ)工程：１,１,１−トリス[２−(ｐ−メトキシベンジルアミノ)エチル]メタンの作成
氷水浴中に冷却した１０００ｍｌの３頸丸底フラスコの中で、第２(ａ)工程からのトリアミド(１０ｇ、１７.８９ｍｍｏｌ)を２５０ｍｌの１Ｍボラン溶液(ボラン：３.５ｇ、２４４.３ｍｍｏｌ)へ注意深く加えた。添加の完了後に、氷水浴を除去して、反応混合液をゆっくりと６０℃に加熱した。反応混合液を６０℃で２０時間加熱した。反応混合液の試料(１ｍｌ)を抜き取り、０.５ｍｌの５Ｎ  ＨＣｌと混合して、３０分間放置した。試料に、０.５ｍｌの５０  ＮａＯＨに引き続き水２ｍｌを加えて、全ての白色沈殿が溶解するまで、溶液を攪拌した。溶液をエーテル(５ｍｌ)で抽出して、蒸発させた。残渣を１ｍｇ／ｍｌの濃度でアセトニトリル中に溶解して、ＭＳにより分析した。もしもモノ−およびジアミド(Ｍ＋Ｈ／ｚ＝５２０および５３４)がＭＳスペクトルに見られるならば、反応は完了していない。反応を完了するために、１ＭボランのＴＨＦ溶液のさらなる１００ｍｌを加えて、反応混合液を６０℃で６時間以上攪拌し、そして先のサンプリング手順にしたがい新しい試料を抜き取る。トリアミンへの完全な変換があるまで必要により、ＴＨＦ溶液中の１Ｍボランのさらなる添加を続ける。
【００７１】
反応混合液を環境温度に冷却して、５Ｎ  ＨＣｌをゆっくりと加える［注意：激しい泡の形成が起こる！］。ガスの発生がもはや観察されなくなるまで、ＨＣｌを加える。混合液を３０分間攪拌し、次いで蒸発させる。ケーキをＮａＯＨ水溶液(２０〜４０％；１：２ｗ／ｖ)中に懸濁して、３０分間攪拌する。次いで、混合液を水(３容積)で希釈する。次いで、混合液をジエチルエーテル(２×１５０ｍｌ)で抽出した[注意：ハロゲン化溶媒を使用しない]。次いで、合併した有機層を水(１×２００ｍｌ)、食塩水(１５０ｍｌ)で洗浄して、硫酸ナトリウム上で乾燥した。蒸発後の収量：油として７.６ｇ、８４％。
NMR 1H(CDCl3), δ： 1.45, (6H, m, 3xCH2; 1.54, (1H, septet, CH);  2.60 (6H, t, 3xCH2N); 3.68 (6H, s, ArCH2); 3.78 (9H, s, 3xCH3O); 6.94(6H, d, 6xAr). 7.20(6H, d, 6xAr).
NMR 13C(CDCl3), δ:  32.17,CH;  34.44, CH2; 47.00, CH2; 53.56, ArCH2; 55.25, CH3O; 113.78, Ar; 129.29, Ar; 132.61; Ar; 158.60, Ar;
【００７２】
第２(ｃ)工程：１,１,１−トリス(２−アミノエチル)メタンの作成
１,１,１−トリス[２−(ｐ−メトキシベンジルアミノ)エチル]メタン(２０.０グラム、０.０３６ｍｏｌ)をメタノール(１００ｍｌ)中に溶解して、Ｐｄ(ＯＨ)２(５.０グラム)を加えた。混合液を水素化して(オートクレーブ中で、３バール、１００℃)、５時間攪拌した。Ｐｄ(ＯＨ)２を、１０および１５時間後にそれぞれ、二つのさらなる部分(２×５グラム)で加えた。反応混合液をろ過して、ろ液をメタノールで洗浄した。合併した有機層を蒸発して、残渣を真空下で蒸留(１×１０−２，１１０℃)すると、先に説明した実施例１と同一の１,１,１−トリス(２−アミノエチル)メタンの２．６０グラム(５０％)を与えた。
【００７３】
実施例３
３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタンの作成
２−メチルブテ−２−エン(１４７ｍｌ、１.４ｍｏｌ)および亜硝酸イソアミル(１５６ｍｌ、１.１６ｍｏｌ)の混合液をcardiceおよびメタノールの浴の中で−３０℃に冷却して、頭上空気攪拌機で激しく攪拌して、温度を−２０℃以下に保持するような速度で、濃塩酸(１４０ｍｌ、１.６８ｍｏｌ)で滴下処理した。顕著な発熱があり、過熱を防ぐように注意をしなければならないので、これは約１時間を必要とする。エタノール(１００ｍｌ)を加えて、添加の最後に生成したスラリーの粘度を減少させ、そして反応液を−２０℃〜−１０℃でさらに２時間攪拌して、反応を完了させた。沈殿を、真空下でろ過により収集して、冷(−２０℃)エタノール４×３０ｍｌおよび氷冷水１００ｍｌで洗浄して、真空で乾燥すると、３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタンを白色の固体として与えた。エタノールろ液および洗浄液を合併して、水(２００ｍｌ)で希釈し、そして冷却して、−１０℃で１時間放置すると、さらなる収量の３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタンが晶出した。沈殿をろ過により収集して、最少量の水で洗浄して、真空で乾燥すると、合計収量の３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタン(１１５ｇ、０.８５ｍｏｌ、７３％)、ＮＭＲにより＞９８％純度、を与えた。
NMR 1H(CDCl3), 異性体の混合物としての (異性体1, 90%)  1.5 d, (2H, CH3),  1.65 d,  (4H, 2 xCH3),  5.85,q, および 5.95,q, 一緒に1H.  (異性体2, 10%), 1.76 s, (6H, 2x CH3), 2.07(3H, CH3).
【００７４】
１−クロロ−１−(１−ニトロソエチル)シクロペンタンをエチリデンシクロペンタンから類似の様式で作成した(５５％収率)[J.Org.Chem., 36(8) p.1169-70]。
【００７５】
１−クロロ−１−(１−ニトロソエチル)シクロヘキサンをエチリデンシクロヘキサンから類似の様式で作成した(６３％収率)[J.Org.Chem., 36(8) p.1169-70]。
δＨ(ＣＤＣｌ３；２７０ＭＨｚ)、１.５２(３Ｈ、ｄ、ＪＨＨ  ７Ｈｚ、ＣＨ３)、１.４８−２.２０(１０Ｈ、ｍ、ＣＨ２×５)、５.９６(１Ｈ、ｑ、ＪＨＨ  ７Ｈｚ、ＣＨ)。
【００７６】
１−クロロ−１−メチル−２−ニトロソ−シクロヘキサンを１−メチル−１−クロヘキサンから類似の様式で作成した(５７％収率)[Ind J. Chem Sect B (1978) 16B(10) 917-20,  Z. Chem. (1981), 21(11) 404-5,  J. Pract. Chem. (1978) 320(3) 433-51]。
δＨ(ＣＤＣｌ３；２７０ＭＨｚ)、１.４１−２.２８(１１Ｈ、ｍ、ＣＨ３、ＣＨ２×４)、５.７２−５.７９(１Ｈ、ｍ、ＣＨ)。
【００７７】
実施例４
ビス[Ｎ−(１，１−ジメチル−２−Ｎ−ヒドキシイミンプロピル)２−アミノエチル]−(２−アミノエチル)メタン(化合物１)の合成
乾燥エタノール(３０ｍｌ)中のトリス(２−アミノエチル)メタン(４.０４７ｇ、２７.９ｍｍｏｌ)の溶液に無水炭酸カリウム(７.７ｇ、５５.８ｍｍｏｌ、２当量)を室温で窒素雰囲気下に激しく攪拌しながら加えた。３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタン(７.５６ｇ、５５.８ｍｏｌ、２当量)の溶液を乾燥エタノール(１００ｍｌ)中に溶解して、この溶液の７５ｍｌを反応混合液の中にゆっくりと滴下した。反応をシリカ上のＴＬＣ[プレートをジクロロメタン、メタノール、濃(０.８８ｓｇ)アンモニア；１００／３０／５で展開して、ＴＬＣプレートをニンヒドリンを噴霧して加熱することにより発色させた]により追跡した。モノ−、ジ−およびトリ−アルキル化生成物が、ＲＦがその順番で増加して見られた。分析ＨＰＬＣをＲＲＲ逆相カラムを用い、３％アンモニア水中のアセトニトリルの７.５〜７５％の勾配で実施した。反応液を真空で濃縮して、エタノールを除去して、水(１１０ｍｌ)中に再懸濁した。水性のスラリーをエーテル(１００ｍｌ)で抽出して、トリアルキル化化合物および親油姓不純物のいくらかを除去して、モノおよび望ましいジアルキル化化合物を水層中に残した。水溶液を酢酸アンモニウム(２当量、４.３ｇ、５５.８ｍｍｏｌ)で緩衝化して、良好なクロマトグラフィーを確実にした。自動化分取ＨＰＬＣにより精製する前に水溶液を４℃で一夜保存した。
収量(２.２ｇ、６.４ｍｍｏｌ、２３％)。
質量スペクトル；陽イオン１０Ｖ錐体電圧。実測値：３４４；計算値Ｍ＋Ｈ＝３４４。
NMR 1H(CDCl3), δ 1.24(6H, s, 2xCH3), 1.3(6H, s, 2xCH3), 1.25-1.75(7H, m, 3xCH2,CH),  (3H, s, 2xCH2), 2.58 (4H, m, CH2N), 2.88(2H, t CH2N2), 5.0 (6H, s, NH2 , 2xNH, 2xOH).
NMR 1H ((CD3)2SO) δ 1.1 4xCH; 1.29, 3xCH2; 2.1 (4H, t, 2xCH2);
NMR 13C((CD3)2SO), δ 9.0 (4xCH3), 25.8 (2xCH3), 31.0 2xCH2, 34.6 CH2, 56.8 2xCH2N; 160.3, C＝N.
【００７８】
ＨＰＬＣ条件：
流速：２５ｍｍのＰＲＰカラムを用いて８ｍｌ／分
Ａ＝３％アンモニア溶液(比重＝０.８８)／水
Ｂ＝アセトニトリル
時間          ％B
０            ７.５
１５          ７５.０
２０          ７５.０
２２          ７.５
３０          ７.５
１測定当り水溶液３ｍｌを負荷して、１２.５〜１３.５分の時間帯で採取する。
【００７９】
実施例５
化合物２−化合物１のベンズアミド結合体−の作成
乾燥アセトニトリル(５０ｍｌ)およびトリエチルアミン(１５０ｍｇ、１.４５ｍｍｏｌ)中の化合物１(０.５ｇ、１.４５ｍｍｏｌ)を窒素雰囲気下に氷浴上で０℃に冷却した。無水安息香酸(３３０ｍｇ、１.４５ｍｍｏｌ)を攪拌した反応液に加えて、室温に加温させて、一夜攪拌放置した。アセトニトリルを真空で除去して、残渣をジクロロメタン(５０ｍｌ)中に再溶解し、炭酸ナトリウム水溶液(２×５０ｍｌ)で洗浄し、分離して、硫酸ナトリウム上で乾燥した。炭酸ナトリウム水溶液をジクロロメタン(２×５０ｍｌ)で抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥して、合併したジクロロメタン抽出液を真空でガムに濃縮した。分析ＨＰＬＣは、生成物が必要とするほどには純粋でないこと示し、それ故に、物質を自動化分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物２を与えた。生成物はＴＬＣおよび分析ＨＰＬＣの両方で単一スポットとして分析された。
【００８０】
ＨＰＬＣ条件：
流速：１５０ｍｍ×２５ｍｍのＰＲＰカラムを用いて８ｍｌ／分；
試料を１測定当り３０％水性エタノール２ｍｌ中で負荷した。
Ａ＝３％アンモニア溶液(比重＝０.８８)／水
Ｂ＝アセトニトリル
時間          ％B
０            ７.５
１５          ７５.０
２０          ７５.０
２２          ７.５
３０          ７.５
必要とされた生成物は１５.２５〜１６.５分で留出した。生成物溶液を真空で蒸発すると、無色のガラス状泡、融点５５℃、の(３０４ｍｇ、０.６８ｍｍｏｌ、４８％)を与えた。
NMR 1H(CDCl3), 1.26 (12H, s, 4xCH3),  1.43 ( 2H, m, CH2),  1.57 (4H,  m, CH2),  1.75 (1H, m, CH),  1.823(6H, s, 2xCH3),  2.58, (4H, m, 2xCH2N),  3.56(2H, m, CH2NHCO), 6.95(1H, m, NHCO),  7.42(3H, m, 3xArH) 7.79(2H, d, ArH).
NMR 13C(CDCl3)  10.09, 25.7, 26.1,  28.5,  32.8,  33.3,  37.93,  57.57 127.0 128.4, 131.4,  158.98, 168.15.
M/S C24H41N5O3  M+H ＝ 448  実測448
100:30:5 / CH2Cl2:MeOH: 880 アンモニアにおけるRF 0.8,ニンヒドリン
で可視化した.
【００８１】
実施例６
ビス[(１，１−ジメチル−２−Ｎ−ヒドキシイミンプロピル)２−アミノエチル]−(２−(グルタリルアミド)エチル)メタン[化合物４；化合物１のグルタリルアミド誘導体]の合成
乾燥アセトニトリル(５０ｍｌ)およびトリエチルアミン(１５０ｍｇ、１.４５ｍｍｏｌ)中の化合物１(０.５ｇ、１.４５ｍｍｏｌ)を窒素雰囲気下に氷浴上で０℃に冷却した。無水グルタル酸(１６５ｍｇ、１.４５ｍｍｏｌ)を攪拌した反応液に加えて、室温に加温させて、一夜攪拌放置した。一夜で生成した沈殿をろ過により採取して、真空で乾燥すると、表題化合物の不純な試料(２６７ｍｇ、０.５８３ｍｍｏｌ、４０％)を与えた。ろ液を真空で濃縮すると、無色のガラスを与え、それを採取していた沈殿と一緒に５％０．８８０ｓｇアンモニアおよび水(５０ｍｌ)に再溶解して、自動化分取ＨＰＬＣにより精製した。
【００８２】
ＨＰＬＣ条件：
流速：１５０ｍｍ×２５ｍｍのＰＲＰカラムを用いて８ｍｌ／分；
試料を１測定当り溶液２ｍｌ中で負荷した。
Ａ＝３％アンモニア溶液(比重＝０.８８)／水
Ｂ＝アセトニトリル
時間          ％B
０            ７.５
１５          ７５.０
２０          ７５.０
２２          ７.５
３１          ７.５
必要とされた生成物は１５.２５〜１６.５分で留出した。生成物溶液を真空で蒸発すると、無色のガラス状泡、融点５４.８℃、の(３０４ｍｇ、０.６８ｍｍｏｌ、４７％)を与えた。生成物はＴＬＣおよび分析ＨＰＬＣの両方で単一スポットとして分析された。
NMR 1H(DMSO), 0.7(12H, s, 4xCH3), 0.85(4H, m, 2xCH2), 1.0(1H, m, CH), 1.3(6H, s, 2xCH3), 1.3(4H, m, 2xCH2), 1.6(2H, m, CH2), 1.75 (6, m, 3xCH2),  2.6(2, m, , 2xOH) 3.2 (2H, t, NH) 7.3(1H, t, NH).
NMR 13C(CD3SO)  8.97, 20.51, 20.91, 25.09, 25.60, 31.06, 33.41, 33.86,  56.89, 66.99 160.07, 1712.34, 174.35 174.56
M/S  C22H43N5O5  M+H ＝ 457 実測 457.6
【００８３】
実施例７
保護ペプチドＡｃ‐ＮＱＥＱＶＳＰ(３‐Ｉ)ＹＴＬＬＫＧの合成
保護ペプチドＡｃ‐Ａｓｎ(Ｔｒｔ)‐Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)‐Ｇｌｕ(ＯｔＢｕ)‐Ｇｌｎ(Ｔｒｔ)‐Ｖａｌ‐Ｓｅｒ(ｔＢｕ)‐Ｐｒｏ‐Ｔｙｒ(３Ｉ)‐Ｔｈｒ(ｔＢｕ)‐Ｌｅｕ‐Ｌｅｕ‐Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)‐Ｇｌｙ‐ＯＨを、２−クロロトリチル固相樹脂上で樹脂にＦｍｏｃ−Ｇｌｙを固定すること、および次いで、適切な保護アミノ酸ならびにカップリング試薬のＤＣＣＩおよびＨＯＢｔによる連続的な脱保護／カップリングサイクルにより、アセンブルした。末端のアスパラギンをアセチル化し、０.５％ＴＦＡを用いて樹脂から開裂させて、ぺプチドをさらなる精製無しで使用した。
【００８４】
実施例８
化合物５−化合物１のペプチド結合体−の作成
実施例７の保護Ａｃ‐ＮＱＥＱＶＳＰＹ(３Ｉ)ＴＬＬＫＧペプチドを固相樹脂から開裂させて、次いで、ヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリス−ピロリジノ‐ホスホニウムおよび１−ヒドロキシベンゾトリアゾールをカップリング剤として用いて、溶液中で化合物１とカップリングさせた。化合物５をＫ試薬(Ｋ試薬は、８２.５％ＴＦＡ、５％フェノール、５％加工水、５％チオアニソール、２.５％エタンジチオールである)の中の脱保護により取得した。粗ペプチドを先ずＲＰ−ＨＰＬＣにより精製し、続いて第二の精製および酢酸との塩交換、凍結乾燥、０.２２μフィルターによるろ過ならびに最後の凍結乾燥を行うと、化合物５を与えた。
同じペプチド、即ち、Ａｃ‐ＮＱＥＱＶＳＰＹ(３Ｉ)ＴＬＬＫＧ、の先行技術アザ−ジアミンジオキシムキレート結合体(化合物６−図１を参照)を比較のために同じ様式で作成した。
【００８５】
実施例９
１−(１−{３−(２−アミノエチル)−５−[１−(１−ヒドロキシルイミノエチル)シクロヘキシルアミノ]ペンチルアミノ}シクロヘキシル)エタノンジオキシム[化合物７]の作成
【化１１】
2005500325.tif 000013
乾燥エタノール(７.５ｍｌ)中の１,１,１,−トリス(２−アミノエチル)メタン(０.９６ｇ、６.６ｍｍｏｌ)の溶液に炭酸カリウム(無水)(１.８ｇ、１３ｍｍｏｌ)およびトリエチルアミン(１.３３ｇ、１３ｍｍｏｌ)を室温で窒素雰囲気下に激しく攪拌しながら加えた。ジクロロメタン(３０ｍｌ)中の１−クロロ−１−(１−ニトロソエチル)シクロヘキサン(２.３ｇ、１３ｍｏｌ)の溶液を１時間かけて滴下した。次いで、混合液を室温で１８時間攪拌放置した。次いで、溶媒を減圧下に除去した。次いで、水(３０ｍｌ)およびエーテル(２５ｍｌ)を反応残渣に加えた。次いで、水層および有機層を分離した。
ＨＰＬＣ：
無勾配：９０％Ｂ(ＭｅＯＨ)１０％(ＮＨ３３％)。エーテル抽出物：ＨＰＬＣは二つの主要バンドを示した−第一のバンド：ジオキシム、第二のバンド：トリオキシム。ジオキシム：(０.５５ｇ、２０％)，ＦＡＢ  ｍ／ｚ  ４２４(Ｍ＋Ｈ)、ＨＲＭＳ：実測値：４２４.３６４２、計算値：４２４.３６５２(Ｃ２３Ｈ４５Ｎ５Ｏ２)。
ＮＭＲ：
δＨ (CDCl3; 270 MHz), 1.34-1.72 (33H, m, CH, CH2 x 13, CH3 x 2), 2.18-2.33 (4H, m, NCH2 x 2), 2.56-2.69 (2H, m, NCH2).
【００８６】
化合物１−(１−{３−(２−アミノエチル)−５−[１−(１−ヒドロキシルイミノエチル)シクロヘキシルアミノ]ペンチルアミノ}シクロヘキシル)エタノンジオキシム[化合物８]を類似の様式で作成した：
【化１２】
2005500325.tif 000014
ＦＡＢ  ｍ／ｚ  ３９６(Ｍ＋Ｈ)、ＨＲＭＳ：実測値：３９６.３３２２、計算値：３９６.３３３９(Ｃ２１Ｈ４２Ｎ５Ｏ３)。
【００８７】
実施例１０
化合物２に対して対応するアザ類似体(化合物３、先行技術)の比較９９ｍＴｃ放射標識
１０−ｍＬガラスバイアル中で窒素ガス(ＵＳＰ／ＮＦ)下にシールした下記のものを含有する凍結乾燥製剤を調製した：
化合物２(化合物１のベンズアミド誘導体−実施例３を参照)２３μｇ、
塩化スズ(ＩＩ)二水和物３６μｇ、
メドロン酸三ナトリウム９０μｇ、
酢酸ナトリウム４.０ｍｇ。
これを、９９ｍＴｃ発生器からの生理食塩水中の９９ｍＴｃ−テクネチウム酸塩で室温において再溶解して、ＲＣＰをＨＰＬＣおよびＩＴＬＣ(瞬時薄層クロマトグラフィー)により試験した。結果を化合物３のものと比較して、表１および２に示す。
【００８８】
表１：ＩＴＬＣ放射化学的純度の結果(％)：
【表１】
2005500325.tif 000015
【００８９】
表２：化合物２についてＩＴＬＣおよびＨＰＬＣ放射化学的純度の結果(％)
【表２】
2005500325.tif 000016
そこでは、RTC＝減少し、加水分解したテクネチウム
【００９０】
実施例１１
化合物５−化合物１のペプチド結合体−の９９ｍＴｃ標識
下記のものを含有する凍結乾燥製剤を１０−ｍＬガラスバイアル中で窒素ガス下にシールした：
ＰＡＢＡ(パラ−アミノ安息香酸)５０μｇ、
ＳｎＣｌ２  ３６μｇ、
ＭＤＰ(メチレンジリン酸)９０μｇ、
ＮａＨＣＯ３  １.３２ｍｇ、
Ｎａ２ＣＯ３  ９８μｇ、
ＮａＯＡｃ４ｍｇ。
バイアルをフリーザー保存から取り外して、室温に１５分間放置して、次いで、化合物５、即ち、ペプチドーキレーター結合体であるＡｃ‐Ａｓｎ‐Ｇｌｎ‐Ｇｌｕ‐Ｇｌｎ‐Ｖａｌ‐Ｓｅｒ‐Ｐｒｏ‐(Ｉ‐Ｔｙｒ)‐Ｔｈｒ‐Ｌｅｕ‐Ｌｅｕ‐Ｌｙｓ‐Ｇｌｙ‐[化合物１]を含有する溶液(水２ｍｌ中に２ｍｇ)１００μｌおよび、室温でAmertecII９９ｍＴｃ発生器から、０.５ＧＢｑ／ｍｌの放射性濃度を持つ、生理食塩水中の９９ｍＴｃ−テクネチウム酸塩のＸｍｌで再溶解した。活性をイオンチャンバーを用いて測定した。ＲＣＰをＨＰＬＣおよびＩＴＬＣを用いて測定した。結果をＸの異なる値に対して表３に示す。
【００９１】
表３：化合物５についてＩＴＬＣおよびＨＰＬＣ放射化学的純度の結果(％)
【表３】
2005500325.tif 000017
【００９２】
実施例１２
９９ｍＴｃ標識化合物５のインビトロ血餅取り込みに対する９９ｍＴｃ標識化合物６(先行技術)の取り込み
９９ｍＴｃ放射標識は、実施例１０にしたがって行った。
血漿(試験品目当り５ｍｌ)およびトロンビン(１００単位ｍｌ−１)を保存(−２０℃)から取り外して、室温へ解凍させた。使用に先立って血漿を観察して、血餅形成もしくは試料の分解の証拠がないことを確実にした。
９９ｍＴｃ−化合物５もしくは９９ｍＴｃ−化合物６の１０μｌを１個の５−ｍｌバイアルの血漿(ラット、ウサギ、イヌおよびヒト)に加えた。９９ｍＴｃ−ＤＴＰＡの１０μｌを、血漿５ｍｌを含有する第二のバイアルに、負の対照として平行して加えた。血餅形成インキュベーション混合液は、カルシウムトリス緩衝液８００μｌおよびウシトロンビン溶液４０μｌ(カルシウム／トロンビン富化血餅形成緩衝液)の四つのバイアルへの添加により作製した。非−血餅形成インキュベーション、バックグラウンド結合アッセイ混合液は、トリス緩衝生理食塩溶液８００μｌおよびAnalaR水４０μｌ(カルシウム／トロンビン欠損非−血餅形成緩衝液)の添加により作製した。
【００９３】
試験品目(９９ｍＴｃ−化合物５もしくは９９ｍＴｃ−化合物６)または放射標識負の対照(９９ｍＴｃ−ＤＴＰＡ)をスパイクしたヒト血漿４００μｌのそれぞれをカルシウム／トロンビン富化のおよびカルシウム／トロンビン欠損のインキュベーション混合液の両方に四通りに加えた。それぞれのバイアルに単一のフィブリン除去桿状体を加えて、血漿の血餅形成を促進させた。アッセイバイアルを環境温度で１時間インキュベートした。それぞれのＰ７バイアルへの０.４Ｍ  ＥＤＴＡ溶液１ｍｌの添加により、反応を停止した。
【００９４】
個別のガラスシンチレーションバイアルの中に試験品目および負の対照を先にスパイクした血漿の試料４００μｌを加えることにより、存在する合計放射能を測定(四通りに)した。これらの標準に関与する放射能を、ヨウ化ナトリウムシンチグラフィーにより測定した。それぞれのＰ７バイアルの内容物を、真空マニフォールドの上方で個別のＢＳＡでブロックしたニトロセルロースフィルターの上にデカントした。それぞれのＰ７バイアルを、ＴＢＳＴ溶液２ｍｌですすぎ洗った。次いで、それぞれのフィルターを、ＴＢＳＴ溶液の４回の５ｍｌ洗液ですすぎ洗った。血餅を、真空マニフォールドの上方で１時間乾燥した。次いで、ろ紙を個別のシンチレーションバイアルへ移して、存在する放射能を測定した。
【００９５】
試験品目のニトロセルロースフィルターへの非特異的結合は、非−血餅形成混合液中に存在する合計放射能から血餅形成混合液中に存在する合計放射能を引くことにより計算から除外した。血餅単独内への取り込み(特異的および非−特異的な)を、血餅単独中に存在する放射能を血漿標準中に存在する平均放射能により割って、次いで１００を掛けることにより、血漿中の試験品目の取り込み百分率として表した：
％取り込み＝フィルター上で、血餅内への％取り込み−フィルター上の％取り込み
×１００(バックグランド補正)
【００９６】
特異的結合百分率を、フィブリンおよび試験品目との間にＸＩＩＩａ因子で形成したイソペプチド共有結合のみに基づく放射性取り込みとして測定した。特異的結合を、放射標識試験品目のバックグランド(ニトロセルロースフィルター)補正取り込み百分率から，ＦＸＩＩＩａに対して親和性を持たなかったところの放射標識負の対照(９９ｍＴｃ−ＤＴＰＡ) のバックグランド(ニトロセルロースフィルター)補正取り込み百分率を引くことにより計算した。
2005500325.tif 000018
【００９７】
インビトロ有効性への影響
データは、インビトロで形成する血漿血餅の中への９９ｍＴｃ−化合物５および９９ｍＴｃ−化合物６の取り込みを比較した。この凝固モデル中でこれらの二つの分子の有効性に顕著な差(ｐ＞０.０５)はなかった(２９.６９±６.３３と比較して３０.６６±５.０１)。
【００９８】
実施例１３
化合物９の９９ｍＴｃ標識
【化１３】
2005500325.tif 000019
化合物９は、化合物１の示された環状ペプチドとの結合体、即ち、[化合物１]‐Ｃｙｓ‐Ｃｙｓ−Ｇｌｕ‐Ｌｅｕ‐Ｃｙｓ‐Ｃｙｓ‐Ａｓｎ‐Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｃｙｓ‐Ａｌａ‐Ｃｙｓ‐Ｔｙｒ‐ＯＨ、である。
化合物９は、実施例７および８と類似の様式で作成されて、溶液中で(作製１)もしくは実施例１０にしたがって凍結乾燥キット経由で(作製２)９９ｍＴｃで標識した。
【００９９】
作製１については、化合物９の１００μｇをｐＨ８.５のホウ酸緩衝液１ｍｌ中に溶解した。これをＰ６バイアルへ移して、シールした。ＳｎＣｌ２溶液(Ｎ２でパージした生理食塩水１００ｍｌ中のＳｎＣｌ２  １０ｍｇ)０.１ｍｌと一緒に、生理食塩水中の９９ｍＴｃ−テクネチウム酸塩(AmertecII発生器から、１.０ＧＢｑ／ｍｌ)１ｍｌを室温で加えた。活性をイオンチャンバーを用いて測定した。ＲＣＰをＨＰＬＣおよびＩＴＬＣを用いて測定した。
作製１は、ＩＴＬＣにより９６％のＲＣＰを示し、そして作製２は、ＨＰＬＣにより８２％のＲＣＰを示した。
【図面の簡単な説明】
【０１００】
【図１】化合物１ないし６の化学構造。
【図２】化合物５の化学構造。
【図３】１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタンへのアジド経路。
【図４】１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタンの代替的合成。
【図１】
2005500325.tif 000025
【図２】
2005500325.tif 000026
【図３】
2005500325.tif 000027
【図４】
2005500325.tif 000028
【国際公開パンフレット】
2005500325.tif 000029
2005500325.tif 000030
2005500325.tif 000031
2005500325.tif 000032
2005500325.tif 000033
2005500325.tif 000034
2005500325.tif 000035
2005500325.tif 000036
2005500325.tif 000037
2005500325.tif 000038
2005500325.tif 000039
2005500325.tif 000040
2005500325.tif 000041
2005500325.tif 000042
2005500325.tif 000043
2005500325.tif 000044
2005500325.tif 000045
2005500325.tif 000046
2005500325.tif 000047
2005500325.tif 000048
2005500325.tif 000049
2005500325.tif 000050
2005500325.tif 000051
2005500325.tif 000052
2005500325.tif 000053
2005500325.tif 000054
2005500325.tif 000055
2005500325.tif 000056
2005500325.tif 000057
2005500325.tif 000058
2005500325.tif 000059
2005500325.tif 000060
2005500325.tif 000061
2005500325.tif 000062
2005500325.tif 000063
2005500325.tif 000064
2005500325.tif 000065
2005500325.tif 000066
2005500325.tif 000067
2005500325.tif 000068
2005500325.tif 000069
2005500325.tif 000070
2005500325.tif 000071
2005500325.tif 000072
2005500325.tif 000073
2005500325.tif 000074
2005500325.tif 000075
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2005500325.tif 000076
2005500325.tif 000077
【国際調査報告】
2005500325.tif 000078
2005500325.tif 000079