(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）のナトリウム−水素交換１型（ＮＨＥ−１）阻害物質を製造する方法及びこのようなＮＨＥ−１阻害物質を含む医薬組成物を製造する方法に関する。【化】    【化１】2005511787.tif 000020
2005511787.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ´
【化１】
2005511787.tif 000014
の化合物を製造する方法であって、
アセトニトリルおよび式ＩＸ´
【化２】
2005511787.tif 000015
の化合物の混合物と塩化チオニルを合せて式Ｘ´
【化３】
2005511787.tif 000016
の化合物を含む混合物を形成し；
当該混合物から余分の塩化チオニルを蒸発させて蒸発混合物を形成し；そして
当該蒸発混合物とグアニジンを合せて式Ｉ´の化合物を形成する前記方法［式中、Ｒ１は、メチルスルホニルまたは水素であり、Ｒ２は、水素またはハロゲンであり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４は、水素もしくはハロゲンであるか、または、Ｒ３およびＲ４は、それらが結合している炭素原子と共に、窒素である１個のヘテロ原子を有する６員の完全に不飽和の環を形成する］。
【請求項２】
式ＩＸ´の当該化合物が、５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸であり；
式Ｘ´の当該化合物が、塩化５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニルであり；そして
式Ｉ´の当該化合物が、Ｎ−（５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニル）−グアニジンである、請求項１の方法。
【請求項３】
アセトニトリル中の当該５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸を、約２５℃の温度で少なくとも約半時間、塩化チオニルと合せる、請求項２の方法。
【請求項４】
アセトニトリル中の当該５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸を、約２５℃の温度で少なくとも約１時間、塩化チオニルと合せる、請求項３の方法。
【請求項５】
塩化チオニルの当該蒸発が、当該混合物の容量を約１０％減少させる、請求項２の方法。
【請求項６】
塩化チオニルの当該蒸発が、減圧下で約８５℃の温度で行われる、請求項２の方法。
【請求項７】
アセトニトリル中の当該５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸が、約２５℃の温度で少なくとも約１時間、塩化チオニルと合さり；
塩化チオニルの当該蒸発が、当該混合物の容量を約１０％減少させ；そして
蒸発による当該除去が、減圧下で約８５℃の温度で行われる、請求項２の方法。
【請求項８】
医薬組成物を製造する方法であって、
アセトニトリルおよび式ＩＸ´
【化４】
2005511787.tif 000017
の化合物の混合物と塩化チオニルを合せて式Ｘ´
【化５】
2005511787.tif 000018
の化合物を含む混合物を形成し；
当該混合物から余分の塩化チオニルを蒸発させて蒸発混合物を形成し； 
当該蒸発混合物とグアニジンを合せて式Ｉ´
【化６】
2005511787.tif 000019
の化合物を含む最終混合物を形成し；
当該最終混合物から式Ｉ´の当該化合物を単離し；そして
式Ｉ´の当該化合物または薬剤学的に許容することのできるその塩と薬剤学的に許容することのできる賦形剤、希釈剤または担体を合せることを含む前記方法［式中、Ｒ１は、メチルスルホニルまたは水素であり、Ｒ２は、水素またはハロゲンであり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４は、水素もしくはハロゲンであるか、または、Ｒ３およびＲ４は、それらが結合している炭素原子と共に、窒素である１個のヘテロ原子を有する６員の完全に不飽和の環を形成する］。
【請求項９】
式ＩＸ´の当該化合物が、５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸であり；
式Ｘ´の当該化合物が、塩化５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニルであり；そして
式Ｉ´の当該化合物が、Ｎ−（５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニル）−グアニジンである、請求項８の方法。
【請求項１０】
アセトニトリル中の当該５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸を、約２５℃の温度で少なくとも約１時間、塩化チオニルと合せる、請求項８の方法。
【請求項１１】
塩化チオニルの当該蒸発が、当該混合物の容量を約１０％減少させる、請求項８の方法。
【請求項１２】
蒸発による当該除去が、減圧下で約８５℃の温度で行われる、請求項８の方法。
【請求項１３】
アセトニトリル中の当該５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸が、約２５℃の温度で少なくとも約１時間、塩化チオニルと合さり；そして
塩化チオニルの当該蒸発が、当該混合物の容量を約１０％減少させ、且つ減圧下で約８５℃の温度で行われる、請求項８の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ナトリウム−水素交換１型（ＮＨＥ−１）阻害物質を調製する方法およびＮＨＥ−１阻害物質を含む医薬組成物を調製する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
式Ｉ´
【化７】
2005511787.tif 000003
のナトリウム−水素交換１型（ＮＨＥ−１）阻害物質は、心筋虚血損傷の予防および治療に有用である。心筋虚血損傷は、外来患者および手術時の環境において起こり得、突然死、心筋梗塞またはうっ血性心不全の発症をもたらしかねない。式Ｉ´のＮＨＥ−１阻害物質を用いる治療は、命を救い入院期間を短くし、生活の質を高め、ハイリスクの患者の保健医療コスト全体を減少させると予想される。
【０００３】
普通に譲渡されたＷＯ９９／４３６６３Ａ１は、本発明の方法に関係のあるＮＨＥ−１阻害物質を含む種々のＮＨＥ−１阻害物質を開示する。
【０００４】
バウムガルス(Baumgarth)等(1997) J. Med. Chem. 40, 2017-2034は、基質が芳香族単環式構造である酸塩化物およびグアニジンに加えエステルおよびグアニジンのカップリングによるアシルグアニジンの合成を開示している。
【０００５】
フェルリン(Ferlin)等(1989) II Famraco
44:12, 1141-1156は、キノリン−５−イルアミンと塩化第一スズおよび亜硝酸ナトリウムとの反応による５−ヒドラジノキノリンを合成する方法を開示する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
式Ｉ´のＮＨＥ−１阻害物質Ｎ−（５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニル）−グアニジンが、前に知られている方法により調製される場合、着色不純物が生成される。例えば、前に知られている方法により製造されたＮ−（５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニル）−グアニジンの水溶液は、明確な黄色を有する。このような着色の原因である不純物は、同定されていない。
【０００７】
商業および規制の見地から、Ｎ−（５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニル）−グアニジンを含有する医薬品の変色は望ましくない。患者に投与される医薬品、特に注射により投与されるものの場合、このような製品が実質的に無色でできるだけ純粋な形態であることが、商業的に有利であると考えられる。例えば、無色の製品は、プラシーボが活性な製品と視覚的に見分けがつかないことを保障することからプラシーボを用いる盲検臨床研究を行うのに役立つ。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、式Ｉ´
【化８】
2005511787.tif 000004
のＮＨＥ−１阻害物質を調製する改良された方法を提供する［式中、Ｒ１は、メチルスルホニルまたは水素であり、Ｒ２は、水素またはハロゲンであり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４は、水素もしくはハロゲンであるか、または、Ｒ３およびＲ４は、それらが結合している炭素原子と共に、窒素である１個のヘテロ原子を有する６員の完全に不飽和の環を形成する］。
【０００９】
一つの態様において、本発明は、式Ｉ´
【化９】
2005511787.tif 000005
の化合物を製造する方法であって、
アセトニトリルおよび式ＩＸ´
【化１０】
2005511787.tif 000006
の化合物の混合物と塩化チオニルを合せて式Ｘ´
【化１１】
2005511787.tif 000007
の化合物を含む混合物を形成し；
この混合物から余分の塩化チオニルを蒸発させて蒸発混合物を形成し；そして
この蒸発混合物とグアニジンを合せて式Ｉ´の化合物を形成する前記方法を提供する［式中、Ｒ１は、メチルスルホニルまたは水素であり、Ｒ２は、水素またはハロゲンであり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４は、水素もしくはハロゲンであるか、または、Ｒ３およびＲ４は、それらが結合している炭素原子と共に、窒素である１個のヘテロ原子を有する６員の完全に不飽和の環を形成する］。
【００１０】
別の態様において、本発明は、医薬組成物を製造する方法であって、
アセトニトリルおよび式ＩＸ´
【化１２】
2005511787.tif 000008
の化合物の混合物と塩化チオニルを合せて式Ｘ´
【化１３】
2005511787.tif 000009
の化合物を含む混合物を形成し；
この混合物から余分の塩化チオニルを蒸発させて蒸発混合物を形成し；
この蒸発混合物とグアニジンを合せて式Ｉ´
【化１４】
2005511787.tif 000010
の化合物を含む最終混合物を形成し；
この最終混合物から式Ｉ´のこの化合物を単離し；そして
式Ｉ´のこの化合物または薬剤学的に許容することのできるその塩と薬剤学的に許容することのできる賦形剤、希釈剤または担体を合せることを含む前記方法を提供する［式中、Ｒ１は、メチルスルホニルまたは水素であり、Ｒ２は、水素またはハロゲンであり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４は、水素もしくはハロゲンであるか、または、Ｒ３およびＲ４は、それらが結合している炭素原子と共に、窒素である１個のヘテロ原子を有する６員の完全に不飽和の環を形成する］。
【００１１】
本発明の好ましい態様において、式ＩＸ´の化合物は、５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸であり、式Ｘ´の化合物は、塩化５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニルであり、そして式Ｉ´の化合物は、Ｎ−（５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニル）−グアニジンである。
【００１２】
より好ましい態様において、アセトニトリル中の５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸を、約２５℃の温度で少なくとも約１時間、そして好ましくは少なくとも約半時間、塩化チオニルと合せる。
【００１３】
別の好ましい態様において、塩化チオニルの蒸発が、混合物の容量を約１０％減少させる。更に好ましくは、この蒸発が、減圧下約８５℃の温度で行われる。
【００１４】
下記で特に定義しない限り、本明細書で用いられる全ての技術および科学用語は、この発明が属する業界の当業者により普通に理解されるのと同じ意味を有する。
【００１５】
゛ハロゲン゛は、元素の周期表の群１７の元素の一つの原子を意味し、好ましくは、フッ素、臭素または塩素である。
【００１６】
゛薬剤学的に許容することのできる塩゛は、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、グルコン酸塩、メタンスルホン酸塩および４−トルエン−スルホン酸塩のような（しかし限定される訳ではない）アニオンを有する無毒のアニオン塩を表す。一つより多い塩基性部分が存在する場合、複数塩（例えば、二ー塩）が含まれる。この表現は、やはり、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウムまたはプロトン化ベンザチン（Ｎ，Ｎ´−ジベンジルエチレンジアミン）、コリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグラミン（Ｎ−メチル−グルカミン）、ベネタミン（Ｎ−ベンジルフェネチルアミン）、ピペラジンもしくはトロメタミン（２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロパンジオール）のような（しかし限定される訳ではない）無毒のカチオン塩も表す。
【００１７】
当業者等は、本発明の特定の化合物が、立体異性体および立体配置異性体を生じさせる特定の立体化学または幾何立体配置であってもよい一つ以上の原子を有するということを本説明に基づいて認識するはずである。このような異性体及びその混合物の全てが、本発明に含まれる。
【００１８】
反応模式図Ａは、式ＶＩ´の化合物を調製する方法を具体的に説明する。模式図Ｂは、模式図Ａから得られる式ＶＩ´の化合物を用いる式Ｉ´の化合物を調製する方法を具体的に説明する。これらの方法は、例えば、Ｎ−（５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニル）−グアニジンを含むＮＨＥ−１阻害物質を製造するのに用いられる。
【化１５】
2005511787.tif 000011
【化１６】
2005511787.tif 000012
【００１９】
模式図Ａによれば、式ＩＩ´の化合物のジアゾニウム塩は、Ｌ−アスコルビン酸（式ＩＩＩ）と合わさり過渡的中間体としての式ＩＶ´のラクトン中間化合物を形成し、式Ｖ´のシュウ酸中間化合物へと分解する。高い反応温度、約３５℃超、好ましくは約５０℃超、そして最も好ましくは約８０℃超で、式ＩＶ´の化合物は、ワン−ポット（one-pot）反応として式ＶＩ´化合物に変換される。より低い温度では、式Ｖ´のシュウ酸中間化合物は、式ＶＩ´の化合物に変換されない。式Ｖ´のシュウ酸化合物は、加水分解剤、好ましくは塩酸を用いて式ＶＩ´のヒドラジノ化合物に変換することができる。濃塩酸の使用は、塩酸塩としての式ＶＩ´の化合物の形成に帰する。
【００２０】
上記で指摘したように、式ＩＶ´のラクトン中間体は不安定であり、反応条件下で相当するシュウ酸誘導体へと分解する。しかしながら、式ＩＩ´のジアゾニウム塩が２，５−ジクロロフェニルアニリンから誘導される場合、ラクトン中間体を単離することができる。
【００２１】
模式図Ｂは、式Ｉ´の化合物を調製する方法を具体的に説明する。式ＶＩ´のヒドラジノ化合物は、約２０℃の温度で約１時間、例えば酢酸エチルのような不活性な溶媒中で式ＶＩＩの化合物と混合し、続いて約７５℃の温度に約５時間加熱して式ＶＩＩＩ´のピラゾール化合物を形成する。
【００２２】
式ＶＩＩの化合物は、約６５℃から約７５℃の温度で約４時間、酢酸エチル中のメチル−３−シクロプロピル−３−オキソプロパン酸エステルとＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタールを合せることにより調製することができる。
【００２３】
式ＶＩＩＩ´のピラゾール化合物は、次いで、室温または高温（例えば、還流）で約１時間から約５時間、水および／またはメタノールおよび／またはＴＨＦのような溶媒中で例えば水酸化ナトリウム、水酸化リチウムまたは水酸化カリウムのような塩基で加水分解されて式ＩＸ´の酸が調製される。
【００２４】
式ＩＸ´の酸は、約２５℃の高温で約１時間塩化チオニルのようなカップリング剤で活性化されて式Ｘ´の酸塩化物化合物を形成する。当業者等は、この説明に基づいて、他の適切なカップリング剤を用いることができることが分かる筈である。適切なカップリング剤は、カルボン酸を反応性化学種に変えグアニジンとの反応によりアシルグアニジンを形成するものである。カップリング剤は、カルボン酸を、第一工程で単離および／または形成され第二工程でグアニジンと反応する活性化中間体に変えることができる。このようなカップリング剤および活性化中間体の例としては、酸塩化物を形成する塩化チオニルもしくは塩化オキサリル、酸フッ化物を形成するフッ化シアヌル、またはカルボン酸の混合無水物を形成するクロロギ酸イソブチルもしくはイソプロペニルのようなクロロギ酸アルキルもしくは無水プロパンホスホン酸、またはアシルイミダゾールを形成するカルボニルジイミダゾールが挙げられる。あるいは、カップリング剤は、ワン−ポット法でカップリングを達成する試薬であってもよい。典型的なカップリング剤は、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド  ヒドロクロリド−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＥＤＣ／ＨＯＢＴ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド／ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＤＣＣ／ＨＯＢＴ）、２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）およびジエチルホスホリル−シアニドである。カップリングは、過剰のグアニジンの存在下、不活性溶媒、好ましくは非プロトン性溶媒中で行う。典型的な溶媒としては、アセトニトリル、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミドおよびクロロホルム又はその混合物が挙げられる。これらのカップリング剤の使用法ならびに溶媒および温度の適切な選択は、この説明に基づき当業者等に分かるか、又はこの開示に照らして文献から容易に決定することができる。カルボン酸のカップリングに有用なこれら及び他の典型的な条件は、例えば、ホウベン−ウェイル(Houben-Weyl),ＸＶ巻,パートＩＩ,Ｅ．ヴンシュ(E. Wunsch)編,Ｇ．テイム出版社(G. Theime
Verlag), 1974, シュトゥットガルト(Stuttgart); Ｍ．ボダンスキー(M. Bodansky),プリンシプルズ  オブ  ペプチド  シンセシス（Principles
of Peptide Synthesis),シュプリンガァ(Springer)出版社,ベルリン1984;およびザ  ペプチド、アナリシス、シンセシス  アンド  バイオロジー(The
Peptides, Analysis, Synthesis and Biology)(Ｅ．グロス(E. Gross)およびＪ．マイエンホファー(J.
Meienhofer)編,１−５巻（アカデミック出版社,NY 1979-1983)に説明されている。
【００２５】
式Ｘ´の化合物は、好ましくは水、メタノール、テトラヒドロフランおよびアセトニトリルから選ばれる溶媒中で、式Ｘ´の化合物とグアニジン塩酸塩および無機塩基例えば水酸化ナトリウム、水酸化リチウムまたは水酸化カリウムと合せることにより、グアニジンと結合して式Ｉ´のＮＨＥ−１阻害物質を形成する。
【００２６】
模式図Ａおよび模式図Ｂの反応の好ましい態様において、式ＩＩ´の化合物は、５−アミノキノリンのジアゾニウム塩である。５−アミノキノリンのジアゾニウム塩を、アスコルビン酸と合せて５−ヒドラジノキノリンである式ＶＩ´の化合物を形成する。形成される式ＶＩＩＩ´のピラゾール化合物は、５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸メチルエステルである。
【００２７】
グアニジンとのカップリング工程に先立ち、５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸メチルエステルを、好ましくはクエン酸で処理して赤色不純物を除去する。この処理において、５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸メチルエステルを含有する溶媒溶液は、クエン酸の水溶液と合わさり、より暗い赤色水層および赤色有機層を形成する。水層を捨て、クエン酸精製した５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸メチルエステルを含有する有機層を残す。
【００２８】
５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸メチルエステルを、イソプロパノール／水中で水酸化ナトリウムのような塩基で加水分解して式ＩＸ´の酸と類似した５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸を形成する。
【００２９】
５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸を、次いで、塩化チオニルのようなカップリング剤で活性化して式Ｘ´の化合物と類似した塩化物化合物を形成する。活性化反応のために、５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸を、乾燥アセトニトリルと合せてスラリーを形成する。塩化チオニルをスラリーに加え、混合物を、少なくとも約半時間、更に好ましくは少なくとも約１時間約２５℃に加熱する。反応しなかった塩化チオニルおよび溶解したＨＣlガスを、次いで、常圧蒸留により留去する。好ましくは、混合物の容量を、約１０％減少させる。その結果できた式Ｘ´の塩化物活性化化合物を含有するスラリーは、次いで、グアニジンと結合してＮＨＥ−１阻害物質Ｎ−（５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニル）−グアニジンを形成する。カップリング反応には、スラリーを、ｐＨ１４の水性グアニジン溶液に加える。
【００３０】
当業者等は、この開示に基づいて、塩化チオニルとの必要とする反応時間が比較的短い、即ちおよそ半時間から１時間であるという点で、塩化物活性化反応におけるアセトニトリルの使用が商業的製造法にとって特に有利であることを評価するはずである。同様に、塩化物化合物の形成後の蒸留による塩化チオニルの除去は、それが、ＮＨＥ−１阻害物質を形成するグアニジンカップリング反応の前の活性化塩化物化合物を単離するというわずらわしい更なる工程を排除するという点で有利である。更に、蒸留工程は、やはり、グアニジンカップリング反応で使用するための回収した塩化物の再懸濁用第二溶媒を用いる必要性をも排除することは、評価されるだろう。
【００３１】
本発明の方法により調製されたＮ−（５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニル）−グアニジンは、薬剤学的に許容することのできる塩に変換することができる。例えば、Ｎ−（５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニル）−グアニジンは、例えば、約４０℃から約８０℃の温度で、好ましくは適切な極性非プロトン性溶媒中で本化合物とメタンスルホン酸を合せることにより、そのメシラート塩に変換することができる。適切な極性非プロトン性溶媒としては、好ましくはＴＨF／ジメチルスルホキシドの混合物が挙げられる。他の薬学的に許容することのできる塩への変換は、本説明に基づいて、当業界で公知の方法を用いて実施することができる。
【００３２】
Ｎ−（５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニル）−グアニジン  モノメシラートは、上記で説明した化学的処理および方法により調製した場合、非常に小さい青色光吸収を有する１％水溶液を生ずる。例えば、４５０ｎｍで、１％溶液の光吸収は、０．００７−０．００５の範囲にある。上記で指摘したように、以前の手法は、０．０２７−０．０２５の範囲の吸収水準を有する明確な黄色溶液を生ずる。光吸収は、式Ａ＝ｌｏｇ１０（Ｉ０／Ｉ）｛ここで、゛Ｉ０゛は、入射光であり、そして゛Ｉ゛は、透過光である｝により算定される。
【００３３】
別の好ましい態様において、式ＩＩ´の化合物は、２−クロロ−４−メタンスルホニル−フェニルアミンのジアゾニウム塩である。ジアゾニウム塩をアスコルビン酸と合せて、２−クロロ−４−メタンスルホニル−２−フェニルヒドラジンである式ＶＩ´の化合物を形成する。形成された式ＶＩＩＩ´ピラゾールは、５−シクロプロピル−１−（２−クロロ−４−メタンスルホニルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸メチルエステルである。
【００３４】
５−シクロプロピル−１−（２−クロロ−４−メタンスルホニルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸メチルエステルを、水中で水酸化ナトリウムのような塩基で加水分解して式ＩＸ´の酸に類似した５−シクロプロピル−１−（２−クロロ−４−メタンスルホニルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸を形成する。カルボン酸ピラゾールを、次いで、塩化チオニルのようなカップリング剤で活性化して式Ｘ´の化合物に類似した活性化化合物を形成する。活性化化合物は、次いで、グアニジンと結合してＮＨＥ−１阻害物質Ｎ−｛５−シクロプロピル−１−（２−クロロ−４−メタンスルホニルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニル｝−グアニジンを形成する。
【００３５】
上記で説明した化合物のための出発物質および試薬は、商業的に入手可能であるか、または有機合成の従来法を用い当業者等により容易に合成することができる。
【００３６】
本発明の方法により調製した化合物の投与は、本発明の化合物を所望の組織（例えば、肝および／または心組織）に優先的に送達するいずれの方法を経ても良い。これらの方法としては、例えば、経口経路、非経口および十二指腸内経路が挙げられる。通常、本発明の化合物は、１回（例えば、１日に１回）もしくは複数回量で又は持続輸注を通じて投与することができる。
【００３７】
本発明の方法により調製した化合物は、例えば、虚血性事象（例えば、心筋梗塞）の結果として虚血／再灌流障害になりやすいかも知れないいずれかの組織（例えば、心臓、脳、肺、腎臓、肝臓、腸、骨格筋、網膜）に直接もたらされる損傷を軽減または最小にするのに有用である。本化合物を用いて、虚血（例えば、心筋虚血）の危険がある患者の組織損傷（例えば、心筋組織）を予防（即ち、将来的に又は予防的に）、軽減または阻止することができる。
【００３８】
本発明の方法により調製した化合物は、例えば、経口または非経口（例えば、静脈、筋肉内、皮下もしくは髄内）を含むいずれの適切な方法でも投与することができる。この説明に基づき、例えば、患者が胃腸障害に罹患している場合、または医薬が、主治医により決められた通りに組織もしくは臓器の表面に最善に供される場合はいつでも、局所的投与を適用することもできる。
【００３９】
投与量および投与のタイミングは、この説明に基づき、治療される対象者、疾患の重篤度、意図される投与様式および処方する医師の判断に依存する。従って、患者間の変動のため、下記に示す用量は、指針であり、医師が患者にとって適切であると考える治療を達成するように、医師が薬物の量を斟酌することができる。所望する治療の程度を考えるに当たり、医師は、患者の年齢、以前かかった疾患の存在、および他の疾患（例えば、心血管疾患）の存在のような種々の因子の均衡をとらねばならない。
【００４０】
例えば、投与の一様式において、本発明の方法により調製した化合物は、心筋虚血の危険がある場合、手術の直前（例えば、手術、例えば心臓手術前２４時間以内）、手術中または後（例えば、手術後２４時間以内）に投与することができる。本化合物は、また、長期にわたり毎日投与することができる。
【００４１】
虚血保護に効果的である量の本発明の方法により調製した化合物を用いる。好ましい用量は、本化合物約０．００１から１００ｍｇ／ｋｇ／日である。特に好ましい用量は、本化合物約０．０１から５０ｍｇ／ｋｇ／日である。
【００４２】
本発明の化合物は、薬学的に許容することのできる賦形剤、担体または希釈剤と共に本発明の化合物の少なくとも１種を含む医薬組成物の形態で投与することができる。従って、本発明の化合物は、個別に又は共に、いずれの従来の経口、非経口、経直腸または経皮剤形でも投与することができる。
【００４３】
経口投与には、医薬組成物は、液剤、懸濁剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤等の剤形をとることができる。デンプン、好ましくはバレイショまたはタピオカデンプンおよび特定の複合珪酸塩類のような種々の崩壊剤、ならびにポリビニルピロリドン、ショ糖、ゼラチンおよびアラビアゴムのような結合剤と共にクエン酸ナトリウム、炭酸カルシウムおよびリン酸カルシウムのような種々の医薬品添加物を含有する錠剤が、用いられる。更に、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムおよびタルクのような滑沢剤は、錠剤化目的にはしばしば非常に有用である。同様の型の固形組成物も、軟および硬ゼラチンカプセル剤に充填する賦形剤として用いられ、これに関連する好ましい材料としては、やはり、ラクトース即ち乳糖ならびに高分子量ポリエチレングリコール類が挙げられる。経口投与用に水性懸濁剤および／またはエリキシル剤を所望である場合、本発明の化合物を、種々の甘味剤、着香剤、着色剤、乳化剤および／または懸濁化剤、ならびに水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン及びそれらの種々の組み合わせのような希釈剤と組み合わせることができる。
【００４４】
非経口投与の目的には、例えば、ゴマもしくは落花生油、または水性プロピレングリコールの液剤および相当する水溶性塩の滅菌水性液剤を用いることができる。このような水性液剤は、必要であれば適切に緩衝化することができ、液体希釈剤は、十分な生理食塩水またはグルコースで初めに等張にすることができる。これらの水性液剤は、静脈、筋肉内、皮下および腹腔内注射目的に特に好適である。これに関連して、用いる滅菌水性媒体は、当業者等に周知の標準技法により全て容易に得ることができる。
【００４５】
経皮（例えば、局所的）投与の目的には、他の点では上記の非経口液剤に類似した、希釈滅菌水性または部分的に水性の液剤（通常、約０．１％から５％濃度）を調製する。
【００４６】
特定の量の有効成分を有する種々の医薬組成物を調製する方法は、当業者等に公知であるか、または本開示物に照らして明白になる。医薬組成物の調製法の例は、レミングトン：ザ
サイエンス アンド プラクティス オブ ファーマシー(Remington: The Science and Practice
of Pharmacy),マック（Mack）出版社,イーストン(Easton), Pa,第１９版(1995)参照。
【００４７】
本発明による医薬組成物は、例えば、０．０００１％−９５％の本発明の方法により調製した化合物を含有することができる。いずれにしろ、投与される組成物または処方物は、本発明により調製した一定量の化合物を、治療される対象者の疾患、症状または障害を治療するのに効果的な量で含有する。
【００４８】
本明細書で引用した全ての特許、出願物、公開物および書類、例えばパンフレットまたは技術公報の開示物は、参照によりそれらの全体を特に本明細書に含めるものとする。
【実施例】
【００４９】
実験手法
ＮＭＲスペクトルは、プロトンには３００または４００ＭＨｚで約２３℃でバリアン(Varian)ＸＬ−３００（バリアン社,パロアルト(Palo Alto),カリフォルニア）、ブルーカー(Bruker)ＡＭ−３００分光計（ブルーカー社,ビレリカ(Billerica),マサチューセツ）またはバリアンユニティ(Varian
Unity)４００により記録した。化学シフトは、トリメチルシランからの下流磁場百万分率で表す。ピークの形状は、次の通りに表す：ｓ＝一重線；ｄ＝二重線；ｔ＝三重線；ｑ＝四重線；ｍ＝多重線；ｂｓ＝幅広一重線。
【００５０】
実施例１
５−ヒドラジノキノリン二塩酸塩
濃塩酸（３００ｍｌ）を、窒素雰囲気下、１リットルの丸底フラスコに加え、機械的攪拌器、温度計および還流冷却器を装備した。反応容器を０±２℃に冷却し、５−アミノキノリン（５０ｇ）を一度に加えた。温度の上昇が、０±２℃から２５−２６℃まで観察されピンク色の懸濁液に帰した。反応混合物を再度０±２℃に冷却し、水（５０ｍｌ）中の亜硝酸ナトリウム（２９ｇ）溶液を、温度を０±２℃で維持しながら３０分にわたり反応容器に加えた。反応物を、０±２℃で１時間攪拌した。次いで、Ｌ−アスコルビン酸（５０ｇ）を、３０分にわたり少しずつ加えた。Ｌ−アスコルビン酸の初めの添加部分（１−２グラム）は、泡立ちをもたらしたが、次からの部分（それぞれ約５グラム）は、泡立ちが顕著ではないことから、より速く加えることができた。反応混合物（茶−赤色懸濁液）を、０±２℃で５−１０分間攪拌し、次いで、約４０分で自然に室温（１８−２２℃）になるに任せた。最後に、３８−４２℃に加熱し、この温度で約３時間攪拌した。３８−４２℃で約３０分後、オレンジ色の懸濁液の形成をもたらす生成物析出が観察された。３８−４０℃で３時間後、反応は、面積パーセント：９０％（シュウ酸中間体および５−ヒドラジノキノリンの合計）により算定されるＨＰＬＣ分析により完了したと考えられた。反応混合物を室温（１８−２２℃）に冷まし、水（１００ｍｌ）を加えた。スラリーを、２０±２℃で１６時間攪拌し、次いで、０−２℃に冷却し、０−２℃で１．５時間攪拌した。生成物を濾過し、メタノール（２ｘ３０ｍｌ）で洗浄し、このようにして１０７ｇのシュウ酸中間体を湿潤生成物として得た。一部の湿潤生成物（９７ｇ）を、窒素雰囲気下、機械的攪拌機、温度計および還流冷却器を装備した１リットルの丸底フラスコに加えた。水（１００ｍｌ）および濃塩酸（３００ｍｌ）を加えた。その結果できた黄色懸濁液を９０±２℃に加熱し、温度を９０±２℃で維持しながら１．５時間攪拌した。混合物を、次いで、室温（２０±２℃）に冷まし、この温度で２時間攪拌した。その結果できた固形物を、濾過し、メタノール（３ｘ３０ｍｌ）で洗浄し、４０℃のエアートレイドライヤー（air tray drier)内で１６時間乾燥して６１．３ｇの５−ヒドラジノキノリン二塩酸塩を黄色結晶固形物として得た。
【００５１】
実施例２
５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
窒素下２００リットルのガラス張りの反応容器に、酢酸エチル（５１リットル）、メチル−３−シクロプロピル−３−オキソプロパン酸エステル（４．９０ｋｇ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（４．３１ｋｇ）を充填した。反応容器を、４時間約７５℃に加熱した。α［（ジメチルアミノ）メチレン］−β−オキソ−シクロプロパンプロパン酸，（αＺ）−メチルエステルへの変換の完了は、薄層クロマトグラフィー分析（酢酸エチル／ヘキサン類、１／１）を用いて確認した。反応容器を約２０℃に冷まし、容器に５−ヒドラジノキノリン二塩酸塩（１０．０ｋｇ）を加えた。トリエチルアミン（１５．０リットル）を、約１時間にわたり反応容器に加えた。反応容器を、次いで、窒素下で約７５℃に加熱し、その温度で４時間維持した。５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸メチルエステルの形成の完了は、ＨＰＬＣにより確認した。反応容器を、次いで、約２０℃に冷まし、活性炭（５００ｇ）および濾過助剤（１．６４ｇ）と共に酢酸エチル（１７リットル）を加えた。６６リットルの水およびクエン酸（２０．７ｋｇ）から成る溶液を、次いで、加えた。その結果できた懸濁液を１時間攪拌し、次いで、濾過した。フィルターを、１５リットルの酢酸エチルですすいだ。濾液は、静置により、二つの液層を形成した。下層の暗赤色水層を他へ移して捨てた。上層の赤色有機層を、減圧蒸留用に配置した２００リットルのガラス張り反応容器に移した。赤色有機層の容量を、減圧下蒸留により２５リットルの容量に減少させた。プロパン−２−オール（３１リットル）を、蒸留ポットに加え、容量を減圧蒸留により３１リットルに減らした。蒸留ポットへの２回目のプロパン−２−オール（３１リットル）添加を行い、容量を、再度、減圧蒸留により３４リットルに減らした。蒸留装置を約２０℃に冷まし、還流のため再配置した。水性ＮａＯＨ（５０％溶液、６．９０ｋｇ）を、５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸メチルエステル／イソプロパノール溶液が入っている再配置した装置に加えた。反応容器を、次いで、窒素下で約７５℃に加熱し、その温度で４時間維持した。反応溶液のＨＰＬＣ分析は、５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸への変換が完了したことを示した。反応容器を、次いで、約２０℃に冷まし、内容物のｐＨを、濃塩酸を用いて約ｐＨ４に調整した。ｐＨを調整するにつれ、固形の黄褐色懸濁物を形成した。固形物を濾過により分離し、水ですすぎ、約４５℃で減圧下で乾燥した処、６．１０ｋｇの褐色固形物としての５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸に帰した。
【００５２】
実施例３
５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸の精製
ガラス張りの１００リットルの反応容器に、５６リットルのＨ２Ｏおよび５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（５．６０ｋｇ）を加えた。その結果できたスラリーを、５０％水性水酸化ナトリウムを用いて約ｐＨ１２に調整した。ｐＨを調整するにつれ、濁った赤色溶液を形成した。濾過助剤（５００ｇ）を反応容器に加え、懸濁液を約２０℃で１時間超攪拌した。反応容器の内容物を、次いで、濾過し、フィルターを水（約１５Ｌ）ですすいだ。濾液を１００リットルのガラス張りの反応容器に移し、塩酸（約３７％）を用いて溶液のｐＨを約４に調整した。５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸が、ｐＨ調整中に白色固形物として結晶化した。固形物を濾過により単離し、水ですすぎ、減圧乾燥して５．３０ｋｇの白色５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸に帰した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）ｄ８．９４（ｄｄ，Ｊ＝１．６，４．０，１Ｈ），８．１５（ｄｄ，Ｊ＝０．８，８．４，１Ｈ），７．８７（ｓ，１Ｈ），７．８５−７．８３（ｍ，１Ｈ），７．７１（ｄｄ，Ｊ＝１．２，７．２，１Ｈ），７．５９−７．５１（ｍ，２Ｈ），１．７９（ｍ，１Ｈ），０．６９（ｍ，２Ｈ），０．５１−０．４７（ｍ，２Ｈ）．
【００５３】
実施例４
塩化５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニル
５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（５０ｇ）を、窒素雰囲気下室温で三つ首丸底フラスコ内のアセトニトリル（３５８ｍｌ）中にスラリー状にした。反応温度を２０℃未満に維持しながら、塩化チオニル（２３．４ｇ）を、添加漏斗により滴下した。約６０分後、塩化５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニルへの変換が完了したことを、ジエチルアミンでクエンチしておいた反応混合物の一部のＨＰＬＣ分析により確認した。蒸留ヘッドおよび濃縮器を、次いで、フラスコに取り付け、反応物を、その最初の容量の９０％へと８５℃で常圧蒸留した。反応物を、次いで、０℃に冷却した。混合物が冷えるにつれ、塩化５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニルが溶液から沈殿した。
【００５４】
実施例５
Ｎ−（５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニル）−グアニジン
反応フラスコ内で、グアニジンＨＣｌ（３５．１ｇ）を水（２６８ｍｌ）および５０％ＮａＯＨ（１１４．６ｇ）に溶解した。添加の初めから終わりまで反応温度を１５℃未満に維持しながら、グアニジン溶液を入れたフラスコに、実施例４のアセトニトリル／塩化５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニル混合物を三等分にして加えた。反応混合物を室温にし、窒素雰囲気下で２時間攪拌した。反応は、ＨＰＬＣにより完了したことを確認した。蒸留ヘッドおよび濃縮器を，次いで、反応容器に取り付けた。生成物混合物を８５℃で常圧蒸留して４００−４５０ｍｌの容量を有するスラリーに帰した。テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（７２０ｍｌ）を反応フラスコに加え、全ての内容物が溶解するまで４５分間５０−５５℃に温め、オレンジ色の二相混合物に帰した。混合物を分液漏斗に移し、層が分離するのを可能にした。層を分離し、水層を、更に３００ｍｌのＴＨＦで抽出した。その結果できた有機ＴＨＦ層を合せた。ダルコ(Darco)（登録商標）ＫＢ−Ｂ（５ｇ）（ＮＯＲＩＴアメリカズ社(NORIT Americas Inc.),アトランタ,GA)およびセライト(Celite)（登録商標）（５ｇ）（セライト社(Celite
Corp.),ロムポク(Lompoc), CA)を、ＴＨＦ層に加え、室温で１時間攪拌した。黒色混合物を、＃２ワットマン濾紙（ワットマン社(Whatman
Inc.),クリフトン(Clifton), NJ)を通じて減圧濾過し、炭ケーキをＴＨＦですすいだ。次いで、濾液を集め、清浄なフラスコに移し、４５０ｍｌの容量へと７０℃で常圧蒸留した。エタノール（５００ｍＬ）をフラスコに加え、混合物を、４５０ｍｌへと８５℃で常圧蒸留した。エタノールの添加および続いての蒸留を、更に３回繰り返した。その結果できたスラリーを室温に冷まし、３時間攪拌する間に顆粒化した。スラリーを、次いで、＃２ワットマン濾紙上で濾過し、ＴＨＦですすいだ。その結果できた白色結晶固形物を、４５から５０℃の減圧乾燥器内で約４８時間乾燥して５２．２ｇのＮ−（５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニル）−グアニジンに帰した。
【００５５】
実施例６
Ｎ−（５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニル）−グアニジン  メシラートの注射用処方物の調製
Ｎ−（５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニル）−グアニジン  メシラートを、実質的に、その開示物を参照により本明細書に含めるものとするヨーロッパ特許出願第ＥＰ１１０１７６３Ａ２に従って調製した。下記の表１に提供されるような適切な容量の注射用水（ＷＦＩ）を、２５±５℃の温度で配合容器に加えた。完全に溶解するまで攪拌しながら、適切な量のマンニトール（下記の表１に従い）を加えた。光露出を最小限にし、適切な量のＮ−（５−シクロプロピル−１−キノリン−５−イル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニル）−グアニジン  メシラートおよびメタンスルホン酸（下記の表１に従い）を加え、完全に溶解するまで攪拌した。１０％ＮａＯＨまたは下記の表１により適切であることからメタンスルホン酸を用いて、ｐＨを調整した。
【００５６】
３種の力価に適切な試薬量およびｐＨを、下記の表１に提供する：
【表１】
2005511787.tif 000013
【００５７】
実施例７
凍結乾燥した処方物の調製
上記実施例６により調製した溶液３１ｍＬずつを５０ｍＬのガラスバイアルに詰め、ＦＴＳカイネティックス(Kinetics)凍結乾燥機（ＦＴＳシステムズ(FTS Systems),ストーンリッジ(Stone Ridge),ニューヨーク）を用いて凍結乾燥した。凍結乾燥中、組成物を、一工程冷凍プロトコール（−４５℃）を用いて冷凍した。温度を、アニーリングのため−１０℃に上げ、次いで、−４５℃で冷凍するよう下げ、続いて＋２５℃で約５７時間第一乾燥をし、続いて温度の階段を５０℃に上げながら第二乾燥をした。第一および第二乾燥中の圧力を、８０ミリトールにセットした。
【国際調査報告】
2005511787.tif 000021
2005511787.tif 000022
2005511787.tif 000023