(57)【要約】硫酸デキストリンの局所投与を含む性感染症の治療、緩和、またはその感染を予防する方法を記載する。ゲル形態の硫酸デキストリンを含む性感染症の治療、緩和、または予防用の組成物もまた記載する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
性感染症（ＳＴＤ）を、治療、緩和、またはその感染を予防する方法であって、該性感染症がＨＩＶに起因する疾患でなく、硫酸デキストリンを局所投与するステップを含む方法。
【請求項２】
前記方法が、実質的に非殺精子性であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記方法が、ＳＴＤの予防を含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記方法が、性器、尿生殖路および／または直腸の中に、その周囲に、またはそれに接触して硫酸デキストリンを投与するステップを含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記方法が、硫酸デキストリンを膣内投与、陰茎投与、または直腸投与するステップを含むことを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ＳＴＤが、ウイルス性疾患、細菌性疾患、原虫性疾患または真菌性疾患から選択されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記ＳＴＤが、ＨＩＶ以外のウイルス性疾患であることを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ウイルス性疾患が、陰部ヘルペスまたはＨＰＶであることを特徴とする請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記陰部ヘルペスが、アシクロビル耐性陰部ヘルペスであることを特徴とする請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＳＴＤが、細菌性疾患であることを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
前記細菌性疾患が、クラミジアであることを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＳＴＤが、真菌性疾患であることを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項１３】
前記真菌性疾患が、カンジダであることを特徴とする請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＳＴＤが、細菌性膣症、クラミジア、陰部ヘルペス、陰部疣贅、淋病、梅毒およびトリコモナス症から選択されることを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項１５】
前記硫酸デキストリンの投与濃度が、少なくとも１μｇ／ｍｌであることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記硫酸デキストリンの投与濃度が、１μｇ／ｍｌから１０5μｇ／ｍｌまでであることを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記硫酸デキストリンの投与濃度が、５００μｇ／ｍｌから１０5μｇ／ｍｌまでであることを特徴とする請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記硫酸デキストリンの投与濃度が、４μｇ／ｍｌ、１×１０4μｇ／ｍｌ、２×１０4μｇ／ｍｌ、および４×１０4μｇ／ｍｌからなる群から選択されることを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
前記硫酸デキストリンの投与濃度が、４μｇ／ｍｌであることを特徴とする請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記硫酸デキストリンの投与濃度が、１×１０4μｇ／ｍｌであることを特徴とする請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記硫酸デキストリンの投与濃度が、２×１０4μｇ／ｍｌであることを特徴とする請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記硫酸デキストリンの投与濃度が、４×１０4μｇ／ｍｌであることを特徴とする請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
前記硫酸デキストリンの投与容量が、１から１０ｍｌまでであることを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項２４】
前記硫酸デキストリンの投与容量が、２から４ｍｌまでであることを特徴とする請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記硫酸デキストリンを膣内投与するステップを含む請求項５に記載の方法。
【請求項２６】
前記硫酸デキストリンを陰茎投与するステップを含む請求項５に記載の方法。
【請求項２７】
前記硫酸デキストリンを直腸投与するステップを含む請求項５に記載の方法。
【請求項２８】
前記硫酸デキストリンを、性感染症の治療、緩和または予防に有効であることが公知の薬物と共に供することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
前記薬物が、ＳＴＤの予防に有効であることを特徴とする請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
グルコース単位あたり多くて２個の硫酸基が存在する請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
グルコース単位あたり０．５個と１．５個との間の硫酸基が存在する請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
グルコース単位あたり１．２個までの硫酸基が存在する請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記薬剤が、デキストリン２−硫酸、デキストリン６−硫酸、またはその混合物である請求項１〜３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
前記硫酸デキストリンが、重合度１２を超えるグルコースポリマーを少なくとも５０％含む請求項１〜３３のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
前記硫酸デキストリンが、重合度１２未満のグルコースポリマーを１０重量％より少なく含む請求項１〜３４のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
前記硫酸デキストリンが、重合度１２未満のグルコースポリマーを５重量％より少なく含む請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記硫酸デキストリンの重量平均分子量が、１５，０００から２５，０００までである請求項１〜３６のいずれかに記載の方法。
【請求項３８】
前記硫酸デキストリンが、分子量４０，０００を超えるポリマーを実質的に含まない請求項１〜３７のいずれかに記載の方法。
【請求項３９】
前記薬剤が、不活性のキャリアまたは希釈剤と組み合わされている請求項１〜３８のいずれかに記載の方法。
【請求項４０】
前記硫酸デキストリンが、ゲルの形態であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４１】
前記ゲルが、膣、直腸または陰茎に直接投与されることを特徴とする請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記硫酸デキストリンゲルが、予防手段に投与されることを特徴とする請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記予防手段が、コンドームであることを特徴とする請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
性感染症（ＳＴＤ）を治療、緩和、またはその感染を予防する方法であって、実質的に非殺精子性のゲルを局所投与するステップを含む方法。
【請求項４５】
性感染症の治療、緩和または予防用の組成物であって、該性感染症がＨＩＶに起因する疾患でなく、ゲル形態の硫酸デキストリンを含む組成物。
【請求項４６】
前記硫酸デキストリンの濃度が、少なくとも１μｇ／ｍｌであることを特徴とする請求項４５に記載の組成物。
【請求項４７】
前記硫酸デキストリンの濃度が、１μｇ／ｍｌから１０5μｇ／ｍｌまでであることを特徴とする請求項４６に記載の組成物。
【請求項４８】
前記硫酸デキストリンの濃度が、５００μｇ／ｍｌから１０5μｇ／ｍｌまでであることを特徴とする請求項４７に記載の組成物。
【請求項４９】
前記硫酸デキストリンの投与濃度が、４μｇ／ｍｌ、１×１０4μｇ／ｍｌ、２×１０4μｇ／ｍｌ、および４×１０4μｇ／ｍｌからなる群から選択されることを特徴とする請求項４６に記載の組成物。
【請求項５０】
前記硫酸デキストリンの投与濃度が、４μｇ／ｍｌであることを特徴とする請求項４９に記載の組成物。
【請求項５１】
前記硫酸デキストリンの濃度が、１×１０4μｇ／ｍｌであることを特徴とする請求項４９に記載の組成物。
【請求項５２】
前記硫酸デキストリンの濃度が、２×１０4μｇ／ｍｌであることを特徴とする請求項４９に記載の組成物。
【請求項５３】
前記硫酸デキストリンの濃度が、４×１０4μｇ／ｍｌであることを特徴とする請求項４９に記載の組成物。
【請求項５４】
前記硫酸デキストリンの投薬量が、１から１０ｍｌまでであることを特徴とする請求項４６に記載の組成物。
【請求項５５】
前記硫酸デキストリンの投薬量が、２から４ｍｌまでであることを特徴とする請求項５４に記載の組成物。
【請求項５６】
前記組成物が、性感染症の治療、緩和または予防に有効であることが公知の１つまたは複数の薬物も含むことを特徴とする請求項４５に記載の組成物。
【請求項５７】
前記薬物が、防カビ剤であることを特徴とする請求項５６に記載の組成物。
【請求項５８】
前記防カビ剤が、アゾール誘導体であることを特徴とする請求項５７に記載の組成物。
【請求項５９】
前記アゾール誘導体が、クロトリマゾール、ミコナゾール、フルコナゾール、エコナゾール、フェンチコナゾール、イトラコナゾール、チンダゾール、メトロニダゾールおよびケトコナゾールからなる群から選択されることを特徴とする請求項５８に記載の組成物。
【請求項６０】
前記薬物が、抗生物質であることを特徴とする請求項５６に記載の組成物。
【請求項６１】
前記薬物が、スルホンアミドまたはナイスタチンから選択されることを特徴とする請求項６０に記載の組成物。
【請求項６２】
前記薬物が、抗ウイルス薬、免疫応答調整薬、および細胞傷害薬からなる群から選択されることを特徴とする請求項５６に記載の組成物。
【請求項６３】
前記硫酸デキストリンが、グルコース単位あたり多くて２個の硫酸基を含み、重合度１２を超えるポリマーを少なくとも５０％含む請求項４５に記載の組成物。
【請求項６４】
グルコース単位あたり０．５個と１．５個との間の硫酸基が存在する請求項６３に記載の組成物。
【請求項６５】
グルコース単位あたり１．２個までの硫酸基が存在する請求項６４に記載の組成物。
【請求項６６】
デキストリン２−硫酸、デキストリン６−硫酸、またはその混合物である請求項６５に記載の組成物。
【請求項６７】
前記硫酸デキストリンが、重合度１２未満のグルコースポリマーを１０重量％より少なく含む請求項６５に記載の組成物。
【請求項６８】
前記硫酸デキストリンが、重合度１２未満のグルコースポリマーを５重量％より少なく含む請求項６７に記載の組成物。
【請求項６９】
前記硫酸デキストリンの重量平均分子量が、１５，０００から２５，０００までである請求項４５に記載の組成物。
【請求項７０】
前記硫酸デキストリンが、分子量４０，０００を超えるポリマーを実質的に含まない請求項６９に記載の組成物。
【請求項７１】
前記硫酸デキストリンゲルが、予防手段に投与されることを特徴とする請求項４５に記載の組成物。
【請求項７２】
前記硫酸デキストリンが、不活性のキャリアまたは希釈剤との混合物である請求項４５に記載の組成物。
【請求項７３】
前記硫酸デキストリンが、粉末形態であり、該粉末を適切な溶媒または希釈剤と混合してゲルを形成することができる請求項４５に記載の組成物。
【請求項７４】
前記組成物が、粘度調整剤を含む請求項４５に記載の組成物。
【請求項７５】
前記粘度調整剤が、減粘剤である請求項７４に記載の組成物。
【請求項７６】
前記粘度調整剤が、ポリマー材料である請求項７４に記載の組成物。
【請求項７７】
前記ポリマー材料が、Carbopol（登録商標）である請求項７６に記載の組成物。
【請求項７８】
前記粘度調整剤が、０．５％ｗ／ｖから５％ｗ／ｖまでの濃度で組成物中に存在する請求項７４に記載の組成物。
【請求項７９】
前記粘度調整剤が、１％ｗ／ｖで存在するCarbopol（登録商標）である請求項７８に記載の組成物。
【請求項８０】
前記粘度調整剤が、４％ｗ／ｖで存在するCarbopol（登録商標）である請求項７８に記載の組成物。
【請求項８１】
硫酸デキストリンでコートされていることを特徴とする予防コンドーム。
【請求項８２】
性感染症（ＳＴＤ）の治療、緩和または予防のための局所投与可能な組成物の製造における硫酸デキストリンの使用であって、ＳＴＤがＨＩＶに起因する疾患でない使用。
【請求項８３】
前記組成物が、ＳＴＤの予防に適切である請求項８２に記載の使用。
【請求項８４】
前記ＳＴＤが、ＨＩＶ以外のウイルス疾患であることを特徴とする請求項８３に記載の使用。
【請求項８５】
前記ウイルス性疾患が、陰部ヘルペスまたはＨＰＶであることを特徴とする請求項８４に記載の使用。
【請求項８６】
前記陰部ヘルペスが、アシクロビル耐性陰部ヘルペスであることを特徴とする請求項８５に記載の使用。
【請求項８７】
前記ＳＴＤが、真菌性疾患であることを特徴とする請求項８２に記載の使用。
【請求項８８】
前記真菌性疾患が、カンジダであることを特徴とする請求項８７に記載の使用。
【請求項８９】
前記ＳＴＤが、細菌性疾患であることを特徴とする請求項８２に記載の使用。
【請求項９０】
前記細菌性疾患が、クラミジアであることを特徴とする請求項８９に記載の使用。
【請求項９１】
前記ＳＴＤが、細菌性膣症、クラミジア、陰部ヘルペス、陰部疣贅、淋病、梅毒、およびトリコモナス症から選択されることを特徴とする請求項８２に記載の使用。
【請求項９２】
添付の説明、実施例および図面を参照して実質的に本明細書に記載の方法または組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬学的に活性な材料および組成物ならびに新規の治療方法に関する。
【０００２】
特に、本発明は、ヒト性感染症（ＳＴＤ:sexually transmitted disease）の局所治療薬としての硫酸デキストリンの新規の処方物ならびにこのような材料の使用および組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
いくつかの硫酸化多糖類は抗ＨＩＶ活性を有することが公知である（例えば、欧州特許明細書番号第0240098号を参照のこと）。この明細書は、比較的低分子量のデキストリンの硫酸化によって得られた高度に硫酸化された少糖を開示している。
【０００４】
硫酸デキストリンが抗高脂血活性を有することが公知である。米国特許第3,017,407号は、分子あたり約１．５個〜３個の硫酸基を含む、分子あたり平均約５個〜１５個、好ましくは約８個〜１２個のグルコース単位を含むトウモロコシデンプンデキストリンおよびコーンシロップソリッド(corn syrup solids)からなる群から選択される硫酸化多糖類を含む抗高脂血剤を開示している。前記特許には硫酸デキストリンのいかなる形態もＳＴＤに対する活性を有することが示唆されていない。
【０００５】
デキストリンはグルコースポリマーの混合物であり、グルコース単位を２、３、および６位の１つまたは複数に硫酸基で置換することができる。本発明で使用される硫酸デキストリンは、グルコース単位あたり２個までの硫酸基を有し得る。
【０００６】
欧州特許第0550532号は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の治療における硫酸デキストリンの使用を記載している。
【０００７】
ＡＩＤＳ患者への硫酸デキストリンの投与により、ＨＩＶ−１のウイルス負荷を減少させることができる。以下の３つの異なる機構を操作することができると考えられる。（ｉ）リンパ球およびＭＤＭ上の細胞表面タンパク質への薬物の結合によるウイルス侵入の遮断、（ii）組織マクロファージからのＭＩＰ−１αおよびＭＩＰ−１βの放出の誘導によるその後のＣＣＲ−５への結合によるＣＤ４＋Ｔリンパ球およびマクロファージへのウイルス侵入の遮断、および（iii）組織マクロファージにおける細胞内機構。
【０００８】
硫酸デキストリンゲルが膣内殺ウイルス剤として潜在的に有用であることも以前から公知である(Stafford et al.,1997.J.Acquired Immune Deficiency Syndrome & Human Retrovirology 14:213-218)。現在、用語「殺菌剤(microbicide)」が好まれているが、殺ウイルス剤および膣殺菌薬と同義語である(McCormack et al.,2001.British Medical J.322:410~413)。
【０００９】
米国特許第6,063,773号は、有効量の硫酸セルロースを投与するステップを含む感染リスクおよび受精リスクの軽減方法を記載している。
【００１０】
米国特許出願第2002/0151521号（介在公開(intervening publication)である）は、性感染症を予防するための有効量の殺菌薬およびヒアルロン酸塩を含む組成物を記載している。組成物および殺菌薬は、特に、殺精子性であることが記載されている。しばしば殺菌薬と殺精子活性とを組み合わせることが望ましいが、非殺精子性の殺菌薬が必要とされている。
【発明の開示】
【００１１】
本発明者らは、驚いたことに、硫酸デキストリンも局所投与した場合にＨＩＶ以外の性感染症の治療、緩和、または予防に有用であることを見出した。さらに、硫酸デキストリンは殺精子活性をほとんどまたは全く示さないので、特に、感染リスクを軽減させながら殺精子効果を回避する代替法を提供する。
【００１２】
したがって、本発明によれば、本発明者らは、性感染症（ＳＴＤ）を、治療、緩和またはその感染を予防する方法であって、性感染症がＨＩＶに起因する疾患でなく、硫酸デキストリンを局所投与するステップを含む方法を提供する。
【００１３】
本発明の方法は、特に、前記の性感染症（ＳＴＤ）を、治療、緩和、またはその感染を予防する方法であって、実質的に非殺精子性である方法を提供する。
【００１４】
本発明の好ましい方法は、ＳＴＤがＨＩＶに起因する疾患でなく、ＳＴＤの感染を防止する方法である。
【００１５】
本発明者らは、特に、性器、尿生殖路および／または直腸の中に、その周囲に、またはそれに接触して硫酸デキストリンを投与するステップを含む方法を提供する。したがって、本発明の方法は、硫酸デキストリンを膣内投与、陰茎投与、または直腸投与するステップを含み得る。
【００１６】
本発明の方法は、任意の公知のＳＴＤまたは複数のＳＴＤの治療であって、ＳＴＤがＨＩＶに起因する疾患でないものを含み得る。したがって、ＳＴＤは、ＨＩＶでないウイルス性疾患、細菌性疾患、原虫性疾患、または真菌性疾患を含み得る。本発明の好ましい態様では、ＳＴＤは、ＨＩＶ以外のウイルス性疾患である。本発明者らは、特に、ウイルス性疾患が、陰部ヘルペス、特にアシクロビル耐性陰部ヘルペスである方法を提供する。
【００１７】
本発明の別の好ましい態様では、ＳＴＤは、カンジダ（例えば、カンジダ・アルビカンス）などの真菌性疾患である。本発明のさらに別の好ましい態様では、ＳＴＤは、クラミジアなどの細菌性疾患である。
【００１８】
しかし、言及することができる特異的ＳＴＤは、細菌性膣症、クラミジア、陰部ヘルペス、陰部疣贅、淋病、梅毒、トリコモナス症、およびカンジダである。
【００１９】
本発明がＨＰＶの治療、緩和、または予防を含む場合、これを、陰部疣贅の治療、緩和、または予防と明示することができる。
【００２０】
硫酸デキストリンの投薬量を、特に、障害の性質および重症度によって変化させることができる。しかし、本発明者らは、適切な投薬量が、少なくとも１μｇ／ｍｌの硫酸デキストリン、好ましくは１μｇ／ｍｌから１０5μｇ／ｍｌまで、より好ましくは５００μｇ／ｍｌから１０5μｇ／ｍｌまで、最も好ましくは４μｇ／ｍｌ、１×１０4μｇ／ｍｌ（１％ｗ／ｖ溶液）、２×１０4μｇ／ｍｌ（２％ｗ／ｖ溶液）、または４×１０4μｇ／ｍｌ（４％ｗ／ｖ溶液）を含む１から１０ｍｌまでの処方物を投与するステップを含むことを見出した。好ましくは、本発明の方法は、例えばゲル形態での上記の２から４ｍｌまでの処方物の投与を含む。処方物をいつでも投与することができる。しかし、本発明の処方物は、性的行為の直前またはすぐ前に投与した場合により有効であるが、処方物をより前に投与することができることを理解される。
【００２１】
本発明で使用される硫酸デキストリンは、グルコース単位あたり２個までの硫酸基を有し得る。デキストリンはグルコースポリマーの混合物であり、グルコース単位の２、３、および６位の１つまたは複数を硫酸基で置換することができる。
【００２２】
本発明で使用される硫酸デキストリンは、グルコース単位あたり２個までの硫酸基を有することができ、好ましい硫酸デキストリンは、グルコース単位あたり約１個または０．５個と１．５個との間、好ましくは１．２個までの硫酸基を有するものである。より好ましくは、薬剤は、デキストリンの２−もしくは６−硫酸またはこの混合物である。
【００２３】
デキストリン３−硫酸は、デキストリン２−硫酸および６−硫酸と比較してＳＴＤ治療において比較的低い活性を有し得る。所与の硫酸塩含有率について、硫酸デキストリンの抗ＳＴＤ活性は、３−硫酸化の比率に反比例し得るということになる。ほとんどの反応条件下で、デキストリン中のグルコース残基の３−ＯＨ基は２−ＯＨ基および６−ＯＨ基よりも反応性が低いことが見出された。したがって、硫酸化度を比較的低く保つことによって３硫酸化の程度が減少することにより、硫酸基あたりの抗ＳＴＤ活性を増大させることができる。
【００２４】
しかし、抗ＳＴＤ薬としての特定の硫酸化デキストリンの選択では、矛盾する要因に遭遇する。したがって、一般に、
１．所与の硫酸塩含有量については、
（ａ）分子量が増加するほど毒性が増加する。
（ｂ）分子量が増加するほど抗ＳＴＤ活性が増加する。
２．所与の分子量については、
（ａ）硫酸含有量が増加するほど毒性が増加する。
（ｂ）硫酸含有量が増加するほど抗ＳＴＤ活性が増加する。
【００２５】
分子量が非常に高いか硫酸含有量が非常に高いかのいずれかによって満足な抗ＳＴＤ活性が許容不可能な毒性に連動するようであるので、硫酸デキストリンは抗ＳＴＤ薬として実際に使用できないと思われていた。
【００２６】
本発明は、硫酸度を最大２に制限することによって、適切な抗ＳＴＤ活性を有しながら毒性が許容範囲に保持される硫酸デキストリンを生成することが可能となる。比較的低い置換度で、３−硫酸化の比率を低く維持することができ、その結果３位置換によって硫酸デキストリンに付与された毒性が回避される。デキストリンが完全に置換された場合（すなわち、２，３，６−硫酸が得られる）、１／３の硫酸基が３−硫酸基であり、抗ＳＴＤ活性が増加する程度に対する均衡を失って毒性が増加する。置換度が２未満に維持される場合に３−硫酸化が生じる程度は、硫酸化プロセスの性質によって変化するが、通常、２−硫酸化または６−硫酸化の置換度よりも実質的に低い。現在利用可能な分析技術では３つの利用可能な部位での硫酸化の程度を容易に正確に分析できないが、硫酸デキストリンのｎ．ｍ．ｒ．スペクトル実験により実用的な目的のためにこれの十分な指標が得られる。勿論、総硫酸含有量を、従来の分析方法、通常、硫酸含有量の決定によって評価することができる。
【００２７】
本発明で使用される硫酸デキストリンの分子量を広範に変化させることができる。例として、本発明で使用される硫酸デキストリンの重量平均分子量は、硫酸デキストリンを調製するために使用したデキストリンに基づいて決定したところ、１５，０００から２５，０００までであり得る。デキストリンの分子量決定に使用した技術は、高速液体クロマトグラフィ、特に、Alsop et al.,J.Chromatography 246,227-240(1982)によって示されたデキストラン標準で平衡化したクロマトグラフィカラムを使用したゲル浸透クロマトグラフィ技術（ＧＰＣ）および／またはそれ自体が公知の他の技術である。
【００２８】
最初にデンプンを加水分解してデキストリンを生成し、その後硫酸化することによって硫酸デキストリンを調製することができる。例えば、トリメチルアミン／三酸化硫黄複合体のアルカリ水溶液の使用により、主に２−硫酸物が得られる。シクラミン酸を含むジメチルホルムアミドでの硫酸デキストリンの処理により、６−硫酸物が得られる。デキストリンを最初にアセチル化し、その後トリメチルアミン／三酸化硫黄複合体を含むジメチルホルムアミドで硫酸化し、最後に水酸化ナトリウム水溶液でアセチル基を除去することによって３−硫酸物を作製することができる。
【００２９】
低分子量の比率が低い硫酸デキストリンを使用することが好ましい。上記のように、デンプンの加水分解、典型的には、種々のデンプンの希酸または加水分解酵素での処理によってデキストリンを作製する。このような方法により、広範な重合度のグルコースポリマーが生成される。重合度（Ｄ．Ｐ．:degree of polymerisation）は、１もしくは２または比較的多い数まで様々である。デンプンの直接加水分解生成物は、６０重量％までの１２未満の重合度の材料を含み得る。本発明の好ましい態様では、デキストリン誘導体は、１２を超える重合度のグルコースポリマーを比較的高比率で含む。好ましくは、デキストリン誘導体は、少なくとも５０重量％の１２を超える重合度のグルコースポリマーを含む。
【００３０】
より好ましくは、デキストリン誘導体は、１０重量％未満の１２未満の重合度のグルコースポリマーを含む。最も好ましくは、デキストリン誘導体は、５重量％未満の１２未満の重合度のグルコースポリマーを含む。このようなデキストリン誘導体を、低重合度のデキストリンを除去するために分画したデキストリンから調製する。溶媒沈殿および膜分画を含む公知の分画技術を使用することができる。
【００３１】
グルコースポリマー混合物の調製方法は、英国特許第2154469号の実施例２に記載されている。この混合物の重量平均分子量は２３，７００であり、９１．９％の１２を超える重合度のポリマーおよび７．９％の２から１０までの重合度のポリマーを含む。
【００３２】
デキストリン誘導体が高分子量の材料をほとんどまたは全く含まないことも好ましい。より好ましくは、デキストリン誘導体は、分子量４０，０００を超える材料をほとんどまたは全く含まない。
【００３３】
硫酸デキストリンは、比較的低濃度で有効であり得る。硫酸デキストリンは、比較的低い硫酸化度でもＳＴＤに対して有効なようである。例えば、グルコース単位あたり１個またはそれより少ない硫酸基しか有さない硫酸化度が、比較的低濃度で有効であることが見出される。これは、高硫酸化材料で直面し得る副作用および毒性を回避するために硫酸化量をこのような低レベルに維持することができるという利点を有する。
【００３４】
本発明はまた、グルコース単位あたり多くて２個の硫酸基を含み、少なくとも５０％の１２未満の重合度のポリマーを含む硫酸デキストリンであるＳＴＤの治療用の薬剤を提供する。
【００３５】
本発明のさらなる特徴によれば、本発明者らは、性感染症の治療、緩和、または予防用の組成物であって、性感染症がＨＩＶに起因する疾患ではなく、ゲル形態の硫酸デキストリンを含む組成物を提供する。
【００３６】
したがって、上記の組成物は、少なくとも１μｇ／ｍｌの硫酸デキストリン、好ましくは１μｇ／ｍｌから１０5μｇ／ｍｌまで、より好ましくは５００μｇ／ｍｌから１０5μｇ／ｍｌまで、最も好ましくは４μｇ／ｍｌ、１×１０4μｇ／ｍｌ（１％ｗ／ｖ溶液）、２×１０4μｇ／ｍｌ（２％ｗ／ｖ溶液）、または４×１０4μｇ／ｍｌ（４％ｗ／ｖ溶液）を含み得る。組成物を、好ましくは単回用量形態でパッケージングすることができる。したがって、組成物を、例えば、１から１０ｍｌ、好ましくは２から４ｍｌの組成物を含むサシェまたはアンプル中に作製することができる。
【００３７】
本発明の組成物はまた、性感染症の治療、緩和、または予防に有効であることが公知の１つまたは複数の薬物を含み得る。好ましくは、本発明の組成物がこのような薬物を含む場合、薬物はいくらか予防効果または有効性を有するものである。種々の薬物を選択することができる。特に、アゾール誘導体として公知の防カビ薬（抗真菌薬）群は、Candida種およびTrichomonas感染の治療で有効であることが見出されている。主な使用薬物は、クロトリマゾール、ミコナゾール、エコナゾール、フェンチコナゾール、フルコナゾール、イトラコナゾール、チンダゾール、およびケトコナゾールである。これらは、エルゴステロール（真菌の細胞膜中の主なステロール）生成の遮断によって作用する。これは、最終的に膜結合酵素の作用に影響を与え、真菌の複製を阻害する。これはまた、微生物の非病原性形態から侵襲性形態（菌糸）への成長を防止する。薬物は、ペルオキシダーゼ酵素の阻害によって細胞を壊死させる。イミダゾール耐性の進行は稀である。
【００３８】
クロトリマゾールは、細胞膜の攻撃によって生物へのアミノ酸輸送を妨害する。これは、膣のカンジダ症の治療に最適な薬物である。皮膚への適用において副作用を生じる可能性があり、激痛、紅斑、掻痒、剥離が含まれる。しかし、発症率は低い。膣内投与は、灼熱感および下腹部の痙攣を伴い得る。この薬物は、膣内用のクリームまたは錠剤として利用可能であり、局所投与することもできる。
【００３９】
ミコナゾールは毒性の問題により局所的に使用されるが、稀に全身に使用される。全身使用は静脈内注射により、発熱、吐き気、および発疹を伴う。これは、経口抗凝固薬の作用を増大させることもできるが、出血を伴う。約１５％のカンジダ・アルビカンスは、クロトリマゾールおよびミコナゾールに耐性を示す。再発性感染症を、フルコナゾールで治療することができる。
【００４０】
エコナゾールは、局所投与に利用可能である。副作用には灼熱感および痒み感が含まれるが、これらはたった３％の使用者に認められる。１％未満の局所エコナゾールが吸収される。１％ｗ／ｖのクリームを１日２回２週間適用する。
【００４１】
表在性真菌症の治療のためにケトコナゾールを経口投与することができる。この薬物に関する毒性は、局所薬に反応しなかった真菌症のみでの使用と助言していることを意味する。
【００４２】
他の治療には、ナイスタチン（ポリエン抗生物質）が含まれる。局所、膣内、および経口経路によってカンジダ症を治療するために単独で使用される。これらのいかなる経路を用いても有意な吸収は認められていない。薬物の膣内適用は、膣錠の投与による。投薬量は、２週間で毎日１００，０００単位と２００，０００単位との間の範囲である。Lehne et alによって報告された副作用は、経口ナイスタチン（胃腸障害を引き起こす場合がある）および局所適用（局所的炎症を発症し得る）に限られている。
【００４３】
細菌性膣炎の治療は、通常、経口または膣内によるメトロニダゾールまたはクリンダマイシンからなる。メトロニダゾールは、トリコモナス感染にも使用される。局所スルホンアミド抗生物質もまた、細菌性膣炎に用いられる。
【００４４】
ウイルス感染細胞のみでＤＮＡ合成を選択的に阻害するアシクロビルおよびファムシクロビル（およびアシクロビル前駆体であるバラシクロビル）などの抗ウイルス薬を、陰部疣贅の治療および長期抑制で使用する。他の局所適用治療薬には、免疫応答調整薬、イミキモド、および細胞傷害性ポドフィロトキシンが含まれる。
【００４５】
本発明のさらなる態様によれば、本発明者らは、性感染症（ＳＴＤ）を治療、緩和、またはその感染を予防する方法であって、実質的に非殺精子性のゲルを局所投与するステップを含む方法を提供する。本発明のこの態様では、本発明者らは、特に、性感染症がＨＩＶに起因する疾患でない上記の方法を提供する。
【００４６】
さらに、本発明は、不活性のキャリアまたは希釈剤と共に上記の硫酸デキストリン組成物を含む組成物を提供する。
【００４７】
粉末形態で提供される硫酸デキストリンであって、適切な溶媒または希釈剤と混合してゲルを形成することができるものは、本発明の範囲内である。
【００４８】
本発明の組成物は、粘度調整剤（例えば、減粘剤）も含み得る。したがって、このような薬剤の使用には、例えば、より高濃度の硫酸デキストリンが使用される一方で材料の粘度が維持される（例えば、ゲル）。種々のこのような薬剤を使用することができるが、このような好ましい薬剤は、Carbopol（登録商標）などのポリマーである。増粘剤の濃度は、特に、使用材料の性質に依存して変化し得る。しかし、好ましい濃度は、０．５から５％ｗ／ｖまでである。最も好ましくは、増粘剤は、１％ｗ／ｖまたは４％ｗ／ｖの組成物として存在するCarbopol（登録商標）である。
【００４９】
硫酸デキストリンをゲルに作製する場合、膣、直腸、または陰茎に直接投与することができる。あるいは、硫酸デキストリンゲルを、従来から公知の予防デバイスを使用して投与することができる。好ましい予防デバイスは、従来から公知のコンドーム（例えば、内部または外部を硫酸デキストリンゲルでコートすることができるコンドーム）である。
【００５０】
本発明者らは、さらに、性感染症（ＳＴＤ）の治療、緩和、または予防のための局所投与可能な組成物の製造における硫酸デキストリンの使用であって、ＳＴＤがＨＩＶに起因する疾患でない使用を提供する。
【００５１】
上記の使用は、ＳＴＤの予防を含むことが好ましい。
【００５２】
本発明のこの態様の使用では、ＳＴＤは、好ましくは、ＨＩＶ以外（例えば、ＨＰＶ）のウイルス性疾患または陰部ヘルペス（特に、アシクロビル耐性陰部ヘルペス）である。
【００５３】
本発明のさらなる態様では、上記の使用は、ＳＴＤが真菌性疾患（例えば、カンジダ・アルビカンスなどのカンジダ）である、性感染症（ＳＴＤ）の治療、緩和、または予防のための局所投与可能な組成物の製造を含み得る。
【００５４】
本発明の別の態様では、上記の使用は、クラミジアなどの細菌性疾患の治療のための局所投与可能な組成物の製造を含み得る。
【００５５】
本発明の方法は、特に、硫酸デキストリンは殺精子活性をほとんどまたは全く示さないが、依然として所望の殺菌活性を有するという点で有利である。
【実施例】
【００５６】
本発明を、以下の実施例および図面を参照して例示する。なお、図１は、ウシ乳頭腫ウイルス１（ＢＰＶ−１:bovine papillomavirus-1）に対する硫酸デキストリンの殺菌活性を示す。
【００５７】
［実施例１］
〔デキストリン３−硫酸の調製〕
英国特許第2,154,469号の実施例２の１６．２の上記硫酸デキストリンを含むジメチルホルムアミド（１５０ｍｌ）を溶解するまで撹拌および加熱し、その後、周囲温度まで冷却した。無水酢酸（２３ｍｌ、０．２４ｍｏｌｅ）を、撹拌しながらゆっくり添加した。これが再溶解したときに一時的に沈殿を生じ、トリエチルアミン（２５ｍｌ、０．１８ｍｏｌｅ）を添加し、混合物を２日間撹拌した。次いで、溶液を、撹拌しながら細い流れ(thin stream)で水（７００ｍｌ）に注ぎ、沈殿を濾過して取り出し、水で洗浄し、乾燥させて２３ｇの白色粉末を得た。
【００５８】
アセチル化デキストリン（１２．３ｇ）を含むジメチルホルムアミド（７５ｍｌ）を溶解するまで撹拌し、その後トリメチルアミン／三酸化硫黄複合体（１５ｇ）を添加し、混合物を周囲温度で一晩撹拌した。さらなるトリメチルアミン／三酸化硫黄（１０ｇ）を添加し、混合物を６０℃で３時間加熱した。溶液を冷却し、アセトン（５００ｍｌ）に注いで粘性残渣を得た。上清をデキャントし、残渣を新鮮なアセトン（５０ｍｌ）で練り、上清をデキャントした。残渣を水（１５０ｍｌ）に溶解し、残存するアセトンを減圧下で除去した。ＮａＯＨ（５ｇ）の水溶液（１０ｍｌ）を添加して、トリメチルアミンガスを得た。強塩基性溶液を２時間保存し、水に対して４時間透析し、凍結乾燥して１０．２ｇを得た。Ｉ．Ｒ．スペクトルは、アセテート（１７５０ＣＭ1）および硫酸塩（１２４０ＣＭ1）のピークを示した。生成物（１０ｇ）を（１５０ｍｌ）水に再溶解し、ＮａＯＨ（１ｇ）水溶液を添加し、混合物を周囲温度で３時間撹拌した。溶液をエタノール（３００ｍｌ）に注ぎ、上清をデキャントし、粘性残渣を新鮮なエタノール（１５０ｍｌ）で練って、固体を得た。固体を濾過して取り出し、メタノールで洗浄し、乾燥して褐色粉末を得た。粉末を、水（２００ｍｌ）に溶解し、脱色炭（５ｇ）を添加した。溶液を加温し、２回濾過し、凍結乾燥して７．２ｇの硫酸塩（４６．９％）を得た。
【００５９】
［実施例２］
〔デキストリン６−硫酸の調製〕
１０ｇの実施例１と同一のデキストリンを含むジメチルホルムアミド（１００ｍｌ）を加熱し、７８℃で撹拌した。全てのデキストリンが溶解した時点で、シクラミン酸（２２．５ｇ）を添加し、反応を１．５時間継続した。ＮａＯＨ（５ｇ）を含む水（５ｍｌ）およびエタノール（５０ｍｌ）の溶液を添加し、混合物を、ジエチルエーテル（４００ｍｌ）に注いだ。固体を濾過して取り出し、エーテルで洗浄し、風乾した。固体を水（１００ｍｌ）に溶解し、酢酸ナトリウム（５０ｇ）を添加し、溶液を水に対して４日間透析し、凍結乾燥して１５．４ｇの硫酸塩（４７．２％）を得た。
【００６０】
［実施例３］
〔デキストリン２−硫酸の調製〕
４０ｇの実施例１と同一のデキストリンを含む蒸留水（１５０ｍｌ）を丸底フラスコ中にて３０℃で撹拌した。全てのデキストリンが溶解した時点で、溶液にトリメチルアミン／三酸化硫黄（５１ｇ）を添加した。反応混合物を３０分間撹拌した。水酸化ナトリウム（６２．５ｍｌ＠４０％ｗ／ｖ）を反応混合物に１時間にわたり滴下した。次いで、反応混合物をさらに２時間撹拌し、減圧下で濾過した。得られた溶液を水道水に対して１日および蒸留水に対して１日透析した。透析溶液を減圧蒸発によって濃縮した。濃縮溶液は、３６％ｗ／ｖ（乾燥固体に関して）の硫酸塩として３０ｇの溶解固体を含んでいた。
【００６１】
実施例１、２、および３の生成物は、これらのｎ．ｍ．ｒ．スペクトル試験によってそれぞれ３−、６−、および２−硫酸塩と同定された。
【００６２】
元のデキストリンの１３Ｃｎ．ｍ．ｒ．スペクトルは６本である。これらはほとんど以下の標準化合物を参照して割り当てることができる。100.3、C-1;77.6、C-4;73.9、C-3;72.2および71.8、C-2およびC-5;61.1、C-6。
【００６３】
グルコースの３−および６−硫酸塩の両ｎ．ｍ．ｒ．スペクトルが報告されており(S.Honda,Y.Yuki and K.Tahiura,Carbohydrate Research(1973)Volume 28,pages 130 to 150)、これらと遊離の糖を比較した。したがって、３−Ｏ−硫酸化は、Ｃ−３については８．５または９．５ｐｐｍのダウンフィールドシフトとなり、Ｃ−２については１．１ｐｐｍのアップフィールドシフトとなり、Ｃ−４については２．２ｐｐｍのアップフィールドシフトとなることが認められたが、他の位置についてはほとんど変化しない。６−Ｏ−硫酸化について、Ｃ−６については６．２ｐｐｍのダウンフィールドシフトおよびＣ−５については１．７ｐｐｍおよびＣ−４については０．３ｐｐｍのアップフィールドシフトが認められたが、他の位置についてはほとんど変化がなかった。
【００６４】
実施例１の生成物のｎ．ｍ．ｒ．スペクトルは、未修飾Ｃ−６−ＯＨに特徴的な６１．１ｐｐｍの強いシグナルを示す。８２．２および８２．５ｐｐｍに顕著な新規のシグナルが出現した。これらは、Ｄ−グルコース−３−硫酸中のＣ−３について報告された８２．７ｐｐｍのケミカルシフトに近いので、デキストリン−３−硫酸を割り当てる。この割り当ては、Ｃ−４についての元のデキストリンにおける７７．６ｐｐｍでのシグナルの事実上の消滅によって支持される。０−３での置換は、他のシグナルの包絡線下で得られる、Ｃ−４についてのシグナルのアップフィールドシフトに起因すると予想される。７０．２および７０．８ｐｐｍの新規のピークは、元の位置から７２．２または７１．８ｐｐｍへのアップフィールドシフトによる３−硫酸塩中のＣ−２に寄与する。Ｃ−１領域は、元のデキストリン中の位置から１００．１ｐｐｍと９８．３ｐｐｍとの間に僅かにアップフィールドした６つの近接したラインを示す。このデータから、実施例１の生成物は、ほとんど完全に３位で硫酸化されているようである。
【００６５】
実施例２の生成物のｎ．ｍ．ｒ．スペクトルは、６１．１ｐｐｍの元のＣ−６ピークが非常に減少し、Ｃ−６−Ｏ−硫酸（６．４ｐｐｍダウンフィールドシフト）および６−Ｏ−硫酸に隣接するＣ−５（２．５または２．９アップフィールドシフト）についての６７．５ｐｐｍおよび６９．３ｐｐｍの新規のピークがそれぞれ出現したことを示す。このデータは、実施例の生成物２が主に６位で置換されたことを示す。
【００６６】
実施例３の生成物のｎ．ｍ．ｒ．スペクトルは、元のデキストリンのそれと比較して、６１．１ｐｐｍでの非置換Ｃ−６−ＯＨの主なシグナル、７８．１ｐｐｍでの動じない(unperturbed)Ｃ−４シグナルを示し、遊離の３−ＯＨおよび主なＣ−１シグナルが１００．３ｐｐｍのその元の位置から９９．８ｐｐｍにアップフィールドして移動することを示す。このデータから、実施例３の生成物は主に２位で置換されるようである。
【００６７】
［実施例４］
〔ウシ乳頭腫ウイルス（ＢＰＶ−１）病巣形成アッセイにおける硫酸デキストリンのインビトロ活性〕
（緒言）
陰部ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ:human papillomavirus）感染は、最も頻繁な性感染症（ＳＴＤ）の１つである。ほとんどの感染症は、１年以内に自発的に治癒するにもかかわらず、持続感染が侵襲性子宮頚癌に進行し得る。現在、ＨＰＶ感染に対する殺菌活性を有する試薬は非常に少数であると説明されている。これらには、ウイルス中和活性を有するモノクローナル抗体などのＨＰＶを特異的に標的する試薬およびポビドン−ヨード、硫酸アルキル、およびモノカプリンなどのウイルス非特異的薬剤が含まれる。広範なＳＴＤに対する殺菌活性を有するいくつかの試薬は、乳頭腫ウイルスに対して有効でないことが証明されている。いくつかのこれらの薬剤には、高濃度での高い細胞傷害性も含まれる。
【００６８】
硫酸デキストリンの乳頭腫ウイルス殺菌活性を決定するために本実験を行った。硫酸デキストリンは、高濃度でも細胞傷害性を示さない硫酸化グルコースポリマーである。なお、殺ウイルス薬(virucide)よりも用語「殺菌薬(microbicide)」を使用する。
【００６９】
（実験）
通常の条件下では、マウス細胞株Ｃ１２７−Ｄ１０（マウス細胞株Ｃ１２７のクローン）をコンフルエント（接触阻止単層）まで成長させる。
【００７０】
感染性ウシ乳頭腫ウイルス１（ＢＰＶ−１）を、Ｃ１２７−Ｄ１０細胞株に添加した場合、ＢＰＶ−１により細胞の病巣に細胞が輸送されて、形態が変化し、例えば、接触阻止特性が喪失される。病巣数は、培養物に添加したＢＰＶ−１ビリオン数と直接比例し、ＢＰＶ−１効果の定量的アッセイである。
【００７１】
希釈して約１００〜２００病巣形成単位にしたＢＰＶ−１のアリコートを、１ｎｇ／ｍｌから２０ｍｇ／ｍｌの濃度範囲の硫酸デキストリン希釈物と３７℃で１０分間プレインキュベートし、その後マウスＣ１２７−Ｄ１０細胞を添加した。３日から４日毎に培地を交換しながら培養物を２週間インキュベートした。クリスタルバイオレットでの単層染色後に病巣を列挙し、計数した。
【００７２】
（結果）
細胞株に曝露した硫酸デキストリン最高濃度は１ｍｇ／ｍｌであった。毒性は認められなかった。
【００７３】
病巣形成が５０％阻害された用量（ＩＤ５０）は、１０μｇ／ｍｌであった。
【００７４】
前の実験で、ＢＰＶ−１に対する活性とヒト乳頭腫ウイルス１１型（ＨＰＶ−１１）との間の対応が認められた。
【００７５】
結果を図１に示す。ｙ軸＝平均病巣数（±ＳＤ）；ｘ軸＝硫酸デキストリン濃度（μｇ／ｍｌ）；コントロール培養物は全部で約８０個の病巣を有していた。
【００７６】
データは、硫酸デキストリンが、乳頭腫ウイルスを含む種々のＳＴＤ作用因子に対して活性で有用な非毒性殺菌化合物であり得ることを示す。
【００７７】
［実施例５］
〔トラコーマ病原体に対する硫酸デキストリンのインビトロ活性（細胞培養アッセイ）〕
（緒言）
クラミジアは、細菌トラコーマ病原体に起因する一般的な性感染症である。約７５％の女性および５０％の男性に症状がないために、クラミジアに感染したほとんどのヒトはその感染に気づかず、それにより治療を受けないかも知れない。未処置のクラミジアにより女性では骨盤内炎症性疾患を引き起こし、男性では尿道感染を発症し得る。最近の研究により、クラミジアに感染した女性はＨＩＶに曝露された場合にＨＩＶを獲得するリスクが３〜５倍に増加することが示された。
【００７８】
クラミジアを抗生物質で処置および治癒することができる。単回用量のアジスロマイシンまたは１週間のドキシサイクリン（１日２回）が最も一般的に使用されている処置である。安全な性行動および感染予防が好ましいが、流行（クラミジアは最も頻繁に報告されている感染症の１つである）および費用のために、処置されない場合に重要な後遺症を残す。
【００７９】
（実験）
ＭｃＣｏｙ細胞の単層を、プラスチック製のBijoux中のスライドガラス上に調製した。細胞にトラコーマ病原体を単独か硫酸デキストリンの存在下で感染させた。トラコーマ病原体のＳａ2ｆ株を使用した。鼠径性病性リンパ肉芽腫を引き起こすＳａ2ｆ株は、トラコーマ病原体に類似する。これは回転(spinning)を必要としないでＭｃＣｏｙ細胞に感染することができる継代数の多い実験株である（トラコーマ病原体のほとんどの株について、単層に感染させるためにシクロヘキサミドの存在下で単層上で細胞を回転させることが必要である）。
【００８０】
インキュベーション後、スライドガラスを固定し、トラコーマ病原体について染色した。スライドガラスあたりの封入体数を、蛍光顕微鏡法によって評価した。
【００８１】
（実験と結果）
詳細を表１に示す。
【００８２】
（結論）
データは、硫酸デキストリンはクラミジアを含む種々のＳＴＤ作用因子に対して活性な有用な殺菌化合物であり得ることを示す。
【００８３】
【表１】
2005519049.tif 000002
【００８４】
［実施例６］
〔単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）に対する硫酸デキストリンのインビトロ活性〕
細胞培養物に硫酸デキストリンを添加し、インキュベーション後に除去した。次いで、ウイルスを添加したが、硫酸デキストリンが細胞受容体を攻撃し、それによってその後のウイルス侵入を遮断すると考えられる。ウイルスとのインキュベーション後、硫酸デキストリンを含むカルボキシメチルセルロースを添加した。この培地を使用して、任意の細胞内ウイルスの他の細胞へのさらなる感染を防止（硫酸デキストリン−細胞受容体遮断相互作用を迂回）するためにゲル層を形成させた。
【００８５】
（アッセイの手順）
（ｉ）２４ウェルの細胞培養プレートにＶｅｒｏ細胞を播種する（２×１０5細胞／ｍｌ／ウェル）。ウイルスあたり１プレートおよびコントロール用に２プレート調製する。
（ii）細胞を、３７℃の５％ＣＯ2下で一晩コンフルエントまで成長させる。
（iii）ウェルあたり約１００プラークが得られるように計算してウイルスを希釈する（プレートあたりの最小体積５ｍｌ）。
【００８６】
プレートのレイアウト。硫酸デキストリン（Ｄ．Ｓ．）濃度を、ｍｇ／ｍｌで示す。
以下の表は、寒天プレート上の「ウェル」の略図である。
【表２】
2005519049.tif 000003
【００８７】
（iv）細胞コントロールウェル以外の全てのウェルの細胞培地をピペットで除去する。
（ｖ）適切なウェルを上記のレイアウトのように最少必須培地中に作製した１ｍｌ硫酸デキストリンと播種する。
（vi）ＣＯ2インキュベーターにて３７℃で１時間プレートをインキュベートする。
（vii）硫酸デキストリンを除去する。
（viii）ウェルあたり２００μｌのウイルス希釈物を播種する。
（ix）ＣＯ2インキュベーターにて３７℃で１時間プレートをインキュベートする。
（ｘ）適切なウェルに１ｍｌの硫酸デキストリンを含むＣＭＣを添加し、ＣＯ2インキュベーターにて３７℃で６０時間プレートをインキュベートする。
（xi）ウェルに１０％ホルマリンのＰＢＳ溶液を満たすことによって固定し、最低１時間放置する。
（xii）ホルマリンをデキャントし、プレートを水でリンスし、クリスタルバイオレットで５〜１０分間染色し、リンスし、排水する。プレートを乾燥させ、計数する。
（xiii）プラークを計数し、GrafitによってＩＣ50を計算する。
【００８８】
【表３】
2005519049.tif 000004
値は２つの測定の平均である。
【００８９】
［実施例７］
〔カンジダに対する硫酸デキストリンのインビトロ活性〕
（材料と方法）
【表４】
2005519049.tif 000005
【００９０】
全ての試験生物は、National Collection of Pathogenic Fungi(NCPF)、American Type Culture Collection(ATCC)、またはMycology Reference Centre culture collection(MRC)に由来した。生物を、酵母を含むSabouraud寒天(Oxoid)にて３７℃で日常的に保存した。
【００９１】
感受性試験方法では、培養培地としてＲＰＭＩ１６４０(Sigma)を使用するマイクロタイタープレート形式を使用した。硫酸デキストリンをＲＰＭＩ１６４０に溶解し、ＲＰＭｉ１６４０中に所定の範囲の二重希釈物を調製し、マイクロタイタープレートに分注した。０．５〜２５０ｍｇ／ｍｌの硫酸デキストリンを試験した。溶解度の問題により、より高濃度を試験することが不可能であった。
【００９２】
試験のための接種物を調製するために、酵母試験単離物を、新たに継代培養し、一晩インキュベートした。酵母接種物は、５３０ｎｍで８５〜９０％の透過率の懸濁液からなる。次いで、これをＲＰＭＩ−１６４０で希釈して、ｍｌあたり２．５×１０3コロニー形成単位の懸濁液を得た。
【００９３】
全ての試験プレートは、多数のコントロールを含んでいた。培地のみのカラムを汚染についてチェックし、培地および接種物のカラムは１００％成長コントロールであった。試験プレートの各バッチについて、アゾール感受性株およびアゾール耐性株を含んでいた。プレートを、３７℃で４８時間インキュベートした。各生物を、硫酸デキストリンの濃度範囲を試験するために二連で試験した。
【００９４】
インキュベーション後、プレートを視覚的に試験した。培地および接種物カラムを１００％成長させ、他のウェルをこれと比較した。最小阻止濃度（ＭＩＣ80）を、最初のウェルでの成長の８０％阻害とした（すなわち、１００％成長ウェルと比較して２０％の成長が残存している）。各プレートを、２人の観察者によって個別に読み取った。
【図面の簡単な説明】
【００９５】
【図１】ウシ乳頭腫ウイルス１（ＢＰＶ−１:bovine papillomavirus-1）に対する硫酸デキストリンの殺菌活性を示す。
【図１】
2005519049.tif 000006
【国際調査報告】
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2005519049.tif 000008
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