(57)【要約】医薬希釈剤と、式ＩＸ［式中、Ｒ２９が、Ｈ、またはＣ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、＝ＣＨＲ３１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ３１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ３１、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ３１、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ３１であり、ここで、Ｒ３１はＨまたはＣ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、またはアルケニルであり、Ｒ３０が、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、Ｘ５が、−ＯＲ３２またはＮＨＲ３２であり、ここで、Ｒ３２が、Ｈ、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、Ｒ３２基は、場合により、カルボニル基、カルボキシル基、カルボキシアミド基、アルコール基、またはエーテル基を含有し、Ｒ３２基は、さらに場合により、１個もしくはそれ以上のハロゲン原子を含有し、ただし、Ｒ２９が＝ＣＨ２である場合、Ｘ５はＯＨではないことを条件とする］の化合物と、を含む医薬組成物を提供する。式ＩＸの範囲内の化合物のほか、減量、抗菌および抗癌用途、脂肪酸合成酵素および神経ペプチド−Ｙの阻害およびカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ−１の活性の刺激のための医薬組成物の使用も開示する。 2005533107.tif 000052
2005533107.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2005533107.tif 000029
［式中
Ｒ１が、Ｈ、またはＣ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリール、＝ＣＨＲ３、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ３、−Ｃ（Ｏ）Ｒ３、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ３、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ３であり、ここで、Ｒ３が、ＨまたはＣ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、またはアルケニルであり、
Ｒ２が、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、
Ｘ１が、ＮＨＲ４であり、ここで、Ｒ４が、Ｈ、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、Ｒ４基が、場合により、カルボニル基、カルボキシル基、カルボキシアミド基、アルコール基、またはエーテル基を含有し、Ｒ４基が、さらに場合により、１個もしくはそれ以上のハロゲン原子を含有する］の化合物。
【請求項２】
前記Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、もしくはアルキルアリール、または＝ＣＨ２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記Ｒ１は、−ＣＨ３または＝ＣＨ２である、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
前記化合物は、
【表１】
2005533107.tif 000030
からなる群から選択される、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
前記Ｒ４は、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、または−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ５であり、ここで、Ｒ５がＨ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
前記化合物は、
【表２】
2005533107.tif 000031
からなる群から選択される、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
式ＩＩ：
【化２】
2005533107.tif 000032
［式中
Ｒ６が、Ｈ、またはＣ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリール、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ８であり、ここで、Ｒ８がＨまたはＣ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、またはアルケニルであり、
Ｒ７が、Ｃｌ−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、
Ｘ２が、ＮＨＲ９であり、ここで、Ｒ９がＨ、Ｃｌ−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、Ｒ９基が、場合により、カルボニル基、カルボキシル基、カルボキシアミド基、アルコール基、またはエーテル基を含有し、Ｒ９基が、さらに場合により、１個もしくはそれ以上のハロゲン原子を含有し、
ただし、前記Ｒ６が、−ＣＨ３であり、前記Ｒ７が、ｎ−Ｃ１３Ｈ２７である場合、前記Ｘ２が、−ＮＨＣ２Ｈ５ではないことを条件とする］の化合物。
【請求項８】
前記Ｒ６は、Ｃｌ−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールである、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
前記Ｒ６は、−ＣＨ３である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
前記Ｒ９は、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０または−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ１０であり、ここで、Ｒ１０が、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールである、請求項７に記載の化合物。
【請求項１１】
式ＩＶ：
【化３】
2005533107.tif 000033
［式中
Ｒ１６が、Ｈ、またはＣ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリール、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１８、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１８、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ１８、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ１８であり、ここで、Ｒ１８が、ＨまたはＣ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、またはアルケニルであり、
Ｒｌ７がＣ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、
Ｘ４が、ＯＲ１９であり、ここで、Ｒ１９がＣ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、Ｒ１９基が、場合により、カルボニル基、カルボキシル基、カルボキシアミド基、アルコール基、またはエーテル基を含有し、Ｒ１９基が、さらに場合により、１個もしくはそれ以上のハロゲン原子を含有し、
ただし、前記Ｒ１６が−ＣＨ３であり、前記Ｒ１９が−ＣＨ３である場合、Ｒ１７が置換または非置換のフェニル、−ｎＣ３Ｈ７、−ｎＣ５Ｈ１１、−ｎＣ１３Ｈ２７ではないことを条件とし、
さらに、ただし、前記Ｒ１６がＨであり、前記Ｒ１９が−ＣＨ３である場合、Ｒ１７が置換または非置換のフェニルまたは−ＣＨ３ではなく、かつ前記Ｒ１６がＨであり、前記Ｒ１９が−ＣＨ２ＣＨ３である場合、前記Ｒ１７が−ｉＣ３Ｈ７、もしくは置換または非置換のフェニルではないことを条件とする］の化合物。
【請求項１２】
前記Ｒ１６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
前記Ｒ１６は、−ＣＨ３である、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
前記Ｒ１９は、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ２０または−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２０であり、ここで、Ｒ２０がＣ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１５】
式Ｖ：
【化４】
2005533107.tif 000034
［式中
Ｒ２１が、Ｃ２−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリール、＝ＣＨＲ２３、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２３、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２３、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ２３、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２３であり、ここで、Ｒ２３がＨまたはＣ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、またはアルケニルであり、前記Ｒ２１が＝ＣＨＲ２３である場合を除き、前記Ｒ２３がＨではなく、
Ｒ２２が、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、
ただし、前記Ｒ２１が−ＣＯＯＨである場合、前記Ｒ２２が−ＣＨ３、−ｎＣ５Ｈ１１、またはＣ１３Ｈ２７ではなく、かつ、さらに、ただし、前記Ｒ２１が−ＣＨ２ＣＯＯＨである場合、前記Ｒ２２が−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、またはｉＣ５Ｈ１１ではないことを条件とする］の化合物。
【請求項１６】
前記Ｒ２１は、Ｃ２−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールである、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
前記Ｒ２１は、＝ＣＨ２である、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
式ＶＩ：
【化５】
2005533107.tif 000035
［式中
Ｒ２４が、Ｃ２−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリール、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２６、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２６、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ２６、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２６であり、ここで、Ｒ２６がＨまたはＣ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、またはアルケニルであり、
Ｒ２５が、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、
ただし、前記Ｒ２４が−ＣＯＯＨである場合、前記Ｒ２５が−ＣＨ３、−ｎＣ５Ｈ１１、またはＣ１３Ｈ２７ではなく、かつ、さらに、ただし、前記Ｒ２４が−ＣＨ２ＣＯＯＨである場合、前記Ｒ２５が−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、または−ｉＣ５Ｈ１１ではないことを条件とする］の化合物。
【請求項１９】
前記Ｒ２１は、Ｃ２−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールである、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
式ＶＩＩ：
【化６】
2005533107.tif 000036
［式中、Ｒ２７がＣ３−Ｃ４アルキル、Ｃ６−Ｃ１０アルキル、Ｃ１２アルキル、Ｃ１４アルキル、Ｃ１６−Ｃ２０アルキルである］の化合物。
【請求項２１】
請求項２０に記載の化合物であって、
【化７】
2005533107.tif 000037
よりなる群から選択される化合物。
【請求項２２】
式ＶＩＩＩ：
【化８】
2005533107.tif 000038
［式中、Ｒ２８がＣｌ−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、ただし、前記Ｒ２８が−ＣＨ３、−ｎＣ３Ｈ７、−ｎＣ１１Ｈ２３、または−ｎＣ１３Ｈ２７ではないことを条件とする］の化合物。
【請求項２３】
医薬希釈剤と、
式ＩＸ：
【化９】
2005533107.tif 000039
［Ｒ２９が、Ｈ、またはＣｌ−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリール、＝ＣＨＲ３１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ３１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ３１、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ３ｌ、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ３１であり、ここで、Ｒ３１がＨまたはＣ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、またはアルケニルであり、
Ｒ３０がＣ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、
Ｘ５が、−ＯＲ３２、または−ＮＨＲ３２であり、ここで、Ｒ３２がＨ、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、Ｒ３２基が、場合により、カルボニル基、カルボキシル基、カルボキシアミド基、アルコール基、またはエーテル基を含有し、Ｒ３２基が、さらに場合により、１個もしくはそれ以上のハロゲン原子を含有し、
ただし、前記Ｒ２９が＝ＣＨ２である場合、前記Ｘ５がＯＨではないことを条件とする］の化合物と、
を含む、医薬組成物。
【請求項２４】
前記Ｒ２９は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、もしくはアルキルアリール、または＝ＣＨ２である、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記Ｒ２９は、−ＣＨ３または＝ＣＨ２である、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記Ｒ３２は、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ３３または−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ３３であり、ここで、Ｒ３３がＣ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールである、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記Ｒ２９は、−Ｃ６Ｈ３または−Ｃ８Ｈ１７である、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
前記化合物は、
【表３】
2005533107.tif 000040
からなる群から選択される、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
医薬希釈剤と、請求項１に記載の化合物と、を含む医薬組成物。
【請求項３０】
医薬希釈剤と、請求項７に記載の化合物と、を含む医薬組成物。
【請求項３１】
医薬希釈剤と、請求項１１に記載の化合物と、を含む医薬組成物。
【請求項３２】
医薬希釈剤と、請求項１５に記載の化合物と、を含む医薬組成物。
【請求項３３】
医薬希釈剤と、請求項１８に記載の化合物と、を含む医薬組成物。
【請求項３４】
医薬希釈剤と、請求項２０に記載の化合物と、を含む医薬組成物。
【請求項３５】
医薬希釈剤と、請求項２２に記載の化合物と、を含む医薬組成物。
【請求項３６】
医薬希釈剤と、式ＩＩＩ
【化１０】
2005533107.tif 000041
［式中、
Ｒ１１が、Ｈ、またはＣ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリール、＝ＣＨＲ１３、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ１３であり、ここで、Ｒ１３がＨまたはＣ１−Ｃｌ０アルキル、シクロアルキル、またはアルケニルであり、
Ｒ１２が、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、
Ｘ３が、ＯＲ１４であり、ここで、Ｒ１４がＣ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、Ｒ１４基が、場合により、カルボニル基、カルボキシル基、カルボキシアミド基、アルコール基、またはエーテル基を含有し、Ｒ１４基が、さらに場合により、１個もしくはそれ以上のハロゲン原子を含有する］の化合物と、
を含む医薬組成物。
【請求項３７】
前記Ｒ１１は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、もしくはアルキルアリール、または＝ＣＨ２である、請求項３６に記載の医薬製剤。
【請求項３８】
前記Ｒ１１は、−ＣＨ３または＝ＣＨ２である、請求項３７に記載の医薬製剤。
【請求項３９】
前記Ｒ１４は、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ１５またはＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲｌ５であり、ここで、Ｒ１５がＣ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールである、請求項３６に記載の医薬製剤。
【請求項４０】
動物またはヒトの対象における請求項２３に記載の医薬組成物の有効量を前記対象に対して投与するステップを含む、減量を誘発する方法。
【請求項４１】
前記対象は、ヒトである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記対象は、動物である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記医薬組成物は、
【表４】
2005533107.tif 000042
からなる群から選択される化合物を含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
前記医薬組成物は、
【表５】
2005533107.tif 000043
からなる群から選択される化合物を含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
動物またはヒトの対象における請求項２３に記載の医薬組成物の有効量を前記対象に対して投与するステップを含む、癌細胞の増殖を阻害する方法。
【請求項４６】
前記対象は、ヒトである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記対象は、動物である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
前記医薬組成物は、
【表６】
2005533107.tif 000044
からなる群から選択される化合物を含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
前記医薬組成物は、
【表７】
2005533107.tif 000045
からなる群から選択される化合物を含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
動物またはヒトの対象における請求項２３に記載の医薬組成物の有効量を前記対象に対して投与するステップを含む、ＣＰＴ−１の活性を刺激する方法。
【請求項５１】
前記対象は、ヒトである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記対象は、動物である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
前記化合物は、
【化１１】
2005533107.tif 000046
である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
前記化合物は、
【化１２】
2005533107.tif 000047
である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
動物またはヒトの対象における請求項２３に記載の医薬組成物の有効量を前記対象に対して投与するステップを含む、神経ペプチド−Ｙの活性を阻害する方法。
【請求項５６】
前記対象は、ヒトである、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記対象は、動物である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
動物またはヒトの対象における請求項２３に記載の医薬組成物の有効量を前記対象に対して投与するステップを含む、脂肪酸合成酵素活性を阻害する方法。
【請求項５９】
前記対象は、ヒトである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記対象は、動物である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
前記化合物は、
【表８】
2005533107.tif 000048
からなる群から選択される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６２】
前記化合物は、
【表９】
2005533107.tif 000049
からなる群から選択される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
動物またはヒトの対象における請求項２３に記載の医薬組成物の有効量の前記対象に対する投与を含む、侵襲性微生物細胞の増殖を阻害する方法。
【請求項６４】
前記対象は、ヒトである、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記対象は、動物である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６６】
前記化合物は、
【表１０】
2005533107.tif 000050
からなる群から選択される、請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
前記化合物は、
【表１１】
2005533107.tif 000051
からなる群から選択される、請求項６５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
発明の背景
脂肪酸合成酵素
脂肪酸は、細胞の生理機能における３つの主要な役割を有する。第一に、脂肪酸は生体膜の基礎（ｂｕｉｌｄｉｎｇ  ｂｏｃｋｓ）である。第二に、脂肪酸誘導体は、ホルモンおよび細胞内メッセンジャーとしての機能を果たす。第三に、本発明にとって特に重要であるが、脂肪酸は、中性脂肪としても知られるトリアシルグリセロールとして脂肪組織中に保存されうる燃料分子である。
【０００２】
脂肪酸合成経路に関与する４つの主要な酵素があり、それらは脂肪酸合成酵素（ＦＡＳ）、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）、リンゴ酸酵素およびクエン酸リアーゼである。主要な酵素である、ＦＡＳは、前駆体マロニル−ＣｏＡおよびアセチル−ＣｏＡのＮＡＤＰＨ依存性縮合を触媒し、脂肪酸を産生する。ＮＡＤＰＨは、一般にＦＡＳの反応サイクルにおける２地点で基本的電子供与体としての機能を果たす還元剤である。他の３つの酵素（すなわち、ＡＣＣ、リンゴ酵素およびクエン酸リアーゼ）は、必須前駆体を産生する。他の酵素、たとえば、ＮＡＤＰＨを産生する酵素も脂肪酸合成に関与する。
【０００３】
ＦＡＳは、酵素委員会（Ｅ．Ｃ．）番号２．３．１．８５であり、脂肪酸合成酵素、脂肪酸リガーゼ、およびその系統名アシル−ＣｏＡ：マロニール−ＣｏＡ−アシルトランスフェラーゼ（脱炭酸化、オキソアシルおよびエノイル還元およびチオエステル加水分解性）としても知られる。脂肪酸のＦＡＳ合成に関係する７つの明確な酵素−または触媒ドメイン−がある。すなわち、アセチルトランスアシラーゼ、マロニルトランスアシラーゼ、ベータ−ケトアシル合成酵素（縮合酵素）、ベータ−ケトアシル還元酵素、ベータ−ヒドロキシアシルデヒドラーゼ、エノイル還元酵素およびチオエステラーゼである。（ワキル（Ｗａｋｉｌ）、Ｓ．Ｊ．、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９８９年（２８）、ｐｐ．４５２３〜４５３０）。これらの酵素７つすべてはともにＦＡＳを形成する。
【０００４】
脂肪酸のＦＡＳ触媒合成は、同様に、下等動物、たとえば、細菌など、高等動物、たとえば、ミコバクテリア、酵母菌、およびヒトなどにおけるものであるが、いくつかの重要な違いがある。細菌においては、７つの酵素反応は、それぞれ関連のない７つの別個のポリペプチドによって行われる。これは、ＩＩ型ＦＡＳとして分類されている。それにひきかえ、ミコバクテリア、酵母菌およびヒトにおける酵素反応は、多機能ポリペプチドによって行われる。たとえば、酵母菌は２つの別個のポリペプチドから成る錯体を有するが、ミコバクテリアおよびヒトにおいては、７つの反応すべてが単一のポリペプチドによって行われる。これらは、Ｉ型ＦＡＳとして分類されている。
【０００５】
ＦＡＳ阻害剤
さまざまな化合物が、脂肪酸合成酵素（ＦＡＳ）を阻害することが証明されている。ＦＡＳ阻害剤は、精製ＦＡＳの酵素活性を阻害する化合物の能力によって確認されうる。ＦＡＳ活性は、放射性標識化前駆体（すなわち、アセチル−ＣｏＡまたはマロニル−ＣｏＡ）の脂肪酸への取込みを測定することによって、またはＮＡＤＰＨの酸化を分光測光法で測定することによってアッセイされうる。（ディルス（Ｄｉｌｓ）ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．、３５、ｐｐ．７４〜８３）。
【０００６】
以下に記載されている表１は、一部のＦＡＳ阻害剤のリストである。
【０００７】
【表１】
2005533107.tif 000003
【０００８】
脂肪酸合成経路における４つの酵素のうち、ＦＡＳは、それは脂肪酸への経路内でのみ作用するが、他の３つの酵素は他の細胞機能にかかわるため、阻害のための好ましい標的である。したがって、他の３つの酵素の１つの阻害は、正常細胞に影響を与える可能性がより大きい。ＦＡＳによって行われる７つの酵素ステップのうち、縮合酵素（すなわち、ベータ−ケトアシル合成酵素）およびエノイル還元酵素は、脂肪酸合成を削減または停止させる阻害剤の最も一般的な候補であり続けている。ＦＡＳ錯体の縮合酵素は、構造および機能に関して十分に特徴づけられている。縮合酵素の活性部位は重要なシステインチオールを含有し、これは抗高脂試薬、たとえば、阻害剤セルレニンなどの標的である
【０００９】
縮合酵素の好ましい阻害剤としては、アルキル化剤、酸化剤およびジスルフィド交換を受ける能力がある試薬を含む広範囲な化学化合物が挙げられる。酵素の結合ポケットは、長鎖、Ｅ，Ｅ，ジエン類を選好する。
【００１０】
主に、側鎖ジエンを含有する試薬およびチオラート陰イオンとの反応性を示す基は、縮合酵素の優れた阻害剤であるとみられる。下式のセルレニン［（２Ｓ，３Ｒ）−２，３−エポキシ−４−オキソ−７，１０ドデカジエノイルアミド］がその例である。
【化１】
2005533107.tif 000004
セルレニンは、脂肪酸縮合酵素の縮合酵素の活性部位における重要なシステインチオール基に共有結合し、この重要な酵素ステップを不活性化する（フナバシ（Ｆｕｎａｂａｓｈｉ）ら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１９８９年（１０５）、ｐｐ．７５１〜７５５）。セルレニンは他の活性を有することが注目されているが、これらはヒト細胞と関連のないモデルである微生物において生じ（たとえば、菌類におけるコレステロール合成の阻害、オムラ（Ｏｍｕｒａ）、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．Ｒｅｖ．、１９７６年（４０）、ｐｐ．６８１〜６９７、またはウイルスにおけるＲＮＡ合成の減少、ペレス（Ｐｅｒｅｚ）ら、ＦＥＢＳ、１９９１年（２８０）、ｐｐ．１２９〜１３３）、実質的に高い薬剤濃度で生じ（５ｍｇ／ｍｌでのウイルスＨＩＶプロテアーゼの阻害、メリング（Ｍｏｅｌｌｉｎｇ）ら、ＦＥＢＳ、１９９０年（２６１）、ｐｐ．３７３〜３７７）、または内因性脂肪酸合成の阻害の直接的な結果でありうる（Ｂリンパ球およびマクロファージにおける抗原処理の阻害、ファロ（Ｆａｌｏ）ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９８７年（１３９）、ｐｐ．３９１８〜３９２３）のいずれかである。一部のデータは、セルレニンがタンパク質のミリトイル化を特異的に阻害することがないことを示す（シモン（Ｓｉｍｏｎ）ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９９２年（２６７）、ｐｐ．３９２２〜３９３１）。
【００１１】
さらにいくつかのＦＡＳ阻害剤が、米国特許出願第０８／０９６，９０８号および１９９４年１月２４日出願のその一部継続出願において開示されているが、その開示は、参照により本明細書中に含まれる。脂肪酸合成酵素、クエン酸リアーゼ、ＣｏＡカルボキシラーゼ、リンゴ酸酵素の阻害が含まれる。
【００１２】
トモダ（Ｔｏｍｏｄａ）ら（トモダ（Ｔｏｍｏｄａ）ら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔ、１９８７年（９２１）、ｐｐ．５９５〜５９８、オムラ（Ｏｍｕｒａ）ら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、１９８６年（３９）、ｐｐ．１２１１〜１２１８）は、トリアクシン（Ｔｒｉａｃｓｉｎ）Ｃ（時にはＷＳ−１２２８Ａと呼ばれる）を記載しているが、これは放線菌（Ｓｔｒｅｐｔｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）ＳＫ−１８９４の産物である自然発生のアシル−ＣｏＡ合成酵素阻害剤である。トリアクシンＣの化学構造は、１−ヒドロキシ−３−（Ｅ，Ｅ，Ｅ−２’，４’，７’−ウンデカトリエニリジン）トリアゼンである。トリアクシンＣは、８．７μＭでラット肝アシル−ＣｏＡ合成酵素の５０％阻害を誘発し、関連化合物、トリアクシンＡは、長鎖脂肪酸との競合力がある機序によってアシルＣｏＡ−合成酵素を阻害する。アシル−ＣｏＡ合成酵素の阻害は動物細胞に対して毒性である。トモダ（Ｔｏｍｏｄａ）ら（トモダ（Ｔｏｍｏｄａ）ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９９１年（２６６）、ｐｐ．４２１４〜４２１９）は、トリアクシンＣが、１．０μＭでラジ（Ｒａｊｉ）細胞における増殖阻害を誘発し、かつ、ベロ（Ｖｅｒｏ）細胞およびヒーラー（Ｈｅｌａ）細胞の増殖を阻害することが証明されていることも開示している。トモダ（Ｔｏｍｏｄａ）らは、アシル−ＣｏＡ合成酵素が動物細胞において必須であり、この酵素の阻害が致死効果を有することをさらに開示している。
【００１３】
米国特許第５，９８１，５７５号（その開示は、参照により本明細書中に含まれる）において、化合物のファミリー（ガンマ−置換−アルファ−メチレン−ベータ−カルボキシ−ガンマ−ブチロラクトン）が、脂肪酸合成を阻害し、腫瘍細胞の増殖を阻害し、かつ減量を誘発することが証明されている。’５７５号特許に開示された化合物は、治療用に天然物のセルレニンに対していくつかの利点を有する。すなわち、［１］セルレニンの高度に反応性のエポキシド基を含有することがなく、［２］水溶液中で安定かつ可溶性であり、［３］二段階合成反応によって製造され、したがって容易に大量に製造されうるとともに、［４］生化学的および薬理学的分析のために高い特異的活性に容易にトリチウム化される。脂肪酸合成酵素阻害剤であるこの化合物のファミリーの合成は、’５７５号特許において記載されているが、ＦＡＳを発現する腫瘍細胞を治療する手段としてのそれらの使用、かつ、体重を減少させる手段としてのそれらの使用が記載されている。’５７５号特許は、体重を減少させる手段として脂肪細胞質量（脂肪細胞の数またはサイズ）を体系的に減少させる脂肪酸合成酵素阻害剤の使用も開示している。
【００１４】
マウスおよびヒトにおける脂肪酸合成の主要部位は肝臓（ロンカリ（Ｒｏｎｃａｒｉ）、Ｃａｎ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１９７４年（５２）、ｐｐ．２２１〜２３０、トリスカリ（Ｔｒｉｓｃａｒｉ）ら、Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、１９８５年（３４）、ｐｐ．５８０〜５８７、バラカット（Ｂａｒａｋａｔ）ら、Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、１９９１年（４０）、ｐｐ．２８０〜２８５を参照）、授乳中の乳腺（トンプソン（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ）ら、Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｒｅｓ．、１９８５年（１９）、ｐｐ．１３９〜１４３を参照）、および脂肪組織（ゴールドリック（Ｇｏｌｄｒｉｃｋ）ら、Ｃｌｉｎ．Ｓｃｉ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、１９７４年（４６）、ｐｐ．４６９〜４７９）である。
【００１５】
抗菌剤としての脂肪酸合成の阻害剤
セルレニンは、当初、セファロスポリウムカエルレセンス（Ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｃａｅｒｕｌｅｎｓ）の培養ブロスから潜在的な抗真菌性抗生物質として単離された。構造的には、セルレニンは、（２Ｒ，３Ｓ）−エポキシ−４−オキソ−７，１０−トランス，トランス−ドデカン酸アミドとして特徴づけられている。その作用機序は、脂肪酸の生合成に必要な縮合酵素であるベータ−ケトアシル−ＡＣＰ合成酵素の、不可逆的結合による阻害であることが証明されている。セルレニンは、主にカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）およびサッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）に対する抗真菌剤として分類されている。また、一部のインビトロ活性が、一部の細菌、放線菌、およびミコバクテリアに対して証明されているが、ヒト結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）に対する活性は確認されなかった。脂肪酸合成阻害剤、特にセルレニンの活性は、トキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）または他の感染性真核病原体、たとえば、ニューモシスティスカリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ）、ランブリア鞭毛虫（Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｌｉａ）、プラスモディウム属（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐ．）、膣トリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、クリプトスポリジウム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）、トリパノソーマ属（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ）、リーシュマニア属（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）、および住血吸虫属（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ）などの原虫に対して評価されていない。
【００１６】
特に治療を受けやすい感染症は、感染動物の外部からアクセス可能な表面における病変を誘発する疾患である。外部からアクセス可能な表面としては、非侵襲性手段によって（皮膚を切断または穿刺することなく）達せられる皮膚表面そのものを含めて、鼻、口、胃腸、または尿生殖器表面、および肺胞嚢など肺表面を覆うなどの粘膜が挙げられる。かかりやすい疾患として挙げられるのは、（１）特に小胞子菌属（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ）、白癬菌属（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ）、表皮菌属（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ）、または粘膜カンジダ症（Ｍｕｃｏｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ）によって誘発される場合の皮膚真菌症または白癬、（２）特にアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、またはカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）によって誘発される場合の真菌性角膜炎、（３）特にアカントアメーバ属（Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ）によって誘発される場合のアメーバ性角膜炎、（４）特にランブリア鞭毛虫（Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｌｉａ）、エントアメーバ属（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ）、クリプトポリジウム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）微胞子虫（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）、またはカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）（免疫無防備状態動物において最も一般的）によって誘発される場合の胃腸疾患、（５）特にカンジダアルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）または膣トリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ）によって誘発される場合の尿生殖器感染、および（６）特にヒト結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、またはニューモシスティスカリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ）によって誘発される場合の肺疾患である。脂肪酸合成阻害剤による治療を受けやすい感染性微生物としては、ヒト結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、特に多剤耐性菌株、およびトキソプラズマなどの原虫が挙げられる。
【００１７】
脂肪酸合成を阻害する化合物は、微生物細胞の増殖を阻害するために使用されうる。しかし、患者に投与される化合物は、患者および標的微生物細胞の両方に対して等しく毒性であってはならない。したがって、標的微生物細胞のみに、またはこれに主として影響を与える阻害剤を選択することが有利である。
【００１８】
その独自の内因性の合成脂肪酸に依存している真核微生物細胞は、Ｉ型ＦＡＳを発現する。これは、ＦＡＳ阻害剤が増殖抑制性であるということ、かつ外因性に添加された脂肪酸が正常は患者の細胞を保護しうるが、ＦＡＳ阻害剤からのこれら微生物細胞を保護しえないということによって示されている。したがって、細胞によって脂肪酸の合成を阻止する薬剤は、感染を治療するために使用されうる。真核生物においては、脂肪酸は、基質のアセチルＣｏＡ、マロニルＣｏＡ、およびＮＡＤＰＨを用いてＩ型ＦＡＳによって合成される。したがって、基質をこの経路へ供給しうる他の酵素は、脂肪酸合成の速度に影響もし、内因性に合成脂肪酸に依存する微生物において重要でありうる。これら酵素のいずれかの発現または活性の阻害は、内因性に合成脂肪酸に依存する微生物細胞の増殖をもたらす。
【００１９】
Ｉ型ＦＡＳの産物は、種々の生物で異なる。例えば、出芽酵母菌（ｆｕｎｇｕｓ  Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）においては、産物は主に補酵素Ａとエステル結合しているパルミテートおよびステアレートである。スメグマ菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）においては、産物は炭素の長さが１６〜２４個である飽和脂肪酸ＣｏＡエステルである。これらの脂質はしばしばさらに加工され、種々の脂質成分に対する細胞の必要を満たす。
【００２０】
ダウンストリームプロセッシングまたは脂肪酸の利用における重要なステップの阻害は、細胞が内因性脂肪酸に依存するか、または細胞外から供給される脂肪酸を利用するかどうかに関係なく、細胞機能を阻害することが予想されうるが、そこでこれらダウンストリームステップの阻害は、内因性脂肪酸に依存する微生物細胞に対して十分に選択性ではありえない。しかし、かかる微生物に対するＩ型脂肪酸合成阻害剤の投与により、ダウンストリーム脂肪酸プロセッシングおよび／または利用の阻害剤による阻害に対して、それらの微生物がより反応しやすくなることが発見されている。この共同作用のため、脂質生合成および／または利用におけるダウンストリームステップの１個もしくはそれ以上の阻害剤との脂肪酸合成阻害剤の併用投与は、内因性に合成脂肪酸に依存する微生物細胞に選択的に影響を与える。好ましい併用としては、ＦＡＳの阻害剤とアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ、またはＦＡＳとＭＡＳの阻害剤が挙げられる。
【００２１】
ある哺乳動物がＩ型ＦＡＳを発現する生物の細胞に感染していることが判定されている場合、またはＦＡＳが患者の生体液中に確認されている場合は、その哺乳動物または患者は、脂肪酸合成阻害剤によって治療されうる（特許第５，６１４，５５１号）。
【００２２】
食欲を抑制し、減量を刺激する神経ペプチド−Ｙの阻害は、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ０１／０５３１６号に記載されており、その開示は参照により本明細書に含まれる。しかし、その出願では、本出願において記載されている化合物のいずれも記載または開示されていない。
【００２３】
減量を刺激するカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ−１（ＣＰＴ−１）の刺激は、米国特許出願第６０／３５４，４８０号に記載されており、その開示は参照により本明細書に含まれる。その出願でも本明細書で開示されている化合物のいずれも記載または開示されていない。
【００２４】
癌細胞の増殖を阻害するＦＡＳ阻害剤の使用は、米国特許第５，７５９，８３７号において記載されており、その開示は参照により本明細書に含まれる。その出願では、本出願において記載されている化合物のいずれも記載または開示されていない。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００２５】
発明の概要
さまざまな治療的に有用な特性、例えば、ＦＡＳ阻害、ＮＰＹ阻害、ＣＰＴ−１刺激、減量誘発能、抗癌および抗菌特性を有する新しいクラスの化合物が発見されている。
【００２６】
本発明の別の目的は、医薬希釈剤と、以下に詳しく述べられる式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、またはＩＸの化合物とを含む医薬組成物を投与することによって、動物およびヒトにおける減量を誘発する方法を提供することである。
【００２７】
本発明の別の目的は、医薬希釈剤と、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、またはＩＸの化合物とを含む医薬組成物をヒトまたは動物に投与することによって、ＣＰＴ−１の活性を刺激する方法を提供することである。
【００２８】
本発明の別の目的は、医薬希釈剤と、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、またはＩＸの化合物とを含む医薬組成物をヒトまたは動物に投与することによって、神経ペプチドＹの合成を阻害する方法を提供することである。
【００２９】
本発明の別の目的は、医薬希釈剤と、以下に詳しく述べられる式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、またはＩＸの化合物とを含む医薬組成物を投与することによって、動物またはヒトにおける脂肪酸合成酵素活性を阻害する方法を提供することである。
【００３０】
本発明の別の目的は、医薬希釈剤と、以下に詳しく述べられる式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、またはＩＸの化合物とを含む医薬組成物を投与することによって、動物およびヒトにおける癌を治療する方法を提供することである。
【００３１】
本発明のさらに別の目的は、医薬希釈剤と、以下に詳しく述べられる式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、またはＩＸの化合物とを含む医薬組成物を投与することによって、動物およびヒトにおける癌細胞の増殖を阻止する方法を提供することである。
【００３２】
本発明の別の目的は、医薬希釈剤と、以下に詳しく述べられる式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、またはＩＸの化合物とを含む医薬組成物を投与することによって、侵襲性微生物細胞の増殖を阻害する方法を提供することである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３３】
発明の詳細な説明
本発明の化合物は、従来の手段によって調製されうる。多くの化合物の合成が実施例に記載されている。これらの化合物は、肥満、癌、または微生物に基づく感染の治療に有用でありうる。
【００３４】
本発明の１つの実施形態は、式Ｉ：
【化２】
2005533107.tif 000005
［式中
Ｒ１が、Ｈ、またはＣ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリール、＝ＣＨＲ３、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ３、−Ｃ（Ｏ）Ｒ３、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ３、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ３であり、ここで、Ｒ３がＨまたはＣ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、またはアルケニルであり、
Ｒ２が、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、
Ｘ１が、ＮＨＲ４であり、ここでＲ４がＨ、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、Ｒ４基が、場合により、カルボニル基、カルボキシル基、カルボキシアミド基、アルコール基、またはエーテル基を含有し、Ｒ４基が、さらに場合により、１個もしくはそれ以上のハロゲン原子を含有する］の化合物である。
【００３５】
好ましい実施形態においては、Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、もしくはアルキルアリール、または＝ＣＨ２である。より好ましい実施形態においては、Ｒ１は、−ＣＨ３または＝ＣＨ２である。
【００３６】
別の好ましい実施形態においては、Ｒ４は、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、または−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ５であり、ここでＲ５は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールである。
【００３７】
本発明の別の実施形態は、式ＩＩ：
【化３】
2005533107.tif 000006
［式中
Ｒ６＝が、ＨまたはＣ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリール、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ８であり、ここで、Ｒ８がＨまたはＣ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、またはアルケニルであり、
Ｒ７が、Ｃｌ−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、
Ｘ２が、ＮＨＲ９であり、ここで、Ｒ９がＨ、Ｃｌ−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、Ｒ９基が、場合により、カルボニル基、カルボキシル基、カルボキシアミド基、アルコール基、またはエーテル基を含有し、Ｒ９基が、さらに場合により、１個もしくはそれ以上のハロゲン原子を含有し、
ただし、Ｒ６が−ＣＨ３であり、Ｒ７がｎ−Ｃ１３Ｈ２７である場合、Ｘ２が−ＮＨＣ２Ｈ５ではないことを条件とする］の化合物である。
【００３８】
好ましい実施形態においては、Ｒ６は、Ｃｌ−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールである。より好ましい実施形態においては、Ｒ６は、−ＣＨ３である。
【００３９】
別の好ましい実施形態においては、Ｒ９は、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０または−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ１０であり、ここで、Ｒ１０は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールである。
【００４０】
本発明の別の実施形態は、式ＩＩＩ：
【化４】
2005533107.tif 000007
［式中
Ｒ１１が、Ｈ、またはＣ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリール、＝ＣＨＲ１３、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ１３であり、ここで、Ｒ１３がＨまたはＣ１−Ｃｌ０アルキル、シクロアルキル、またはアルケニルであり、
Ｒ１２が、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、
Ｘ３が、ＯＲ１４であり、ここで、Ｒ１４がＣ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、Ｒ１４基が、場合により、カルボニル基、カルボキシル基、カルボキシアミド基、アルコール基、またはエーテル基を含有し、Ｒ１４基が、さらに場合により、１個もしくはそれ以上のハロゲン原子を含有する］の化合物である。
【００４１】
好ましい実施形態においては、Ｒ１１は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、または＝ＣＨ２である。より好ましい実施形態においては、Ｒ１１は、−ＣＨ３または＝ＣＨ２である。
【００４２】
別の好ましい実施形態においては、Ｒ１４は、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ１５またはＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲｌ５であり、ここで、Ｒ１５は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールである。
【００４３】
本発明の別の実施形態は、式ＩＶ：
【化５】
2005533107.tif 000008
［式中
Ｒ１６が、Ｈ、またはＣ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリール、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１８、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１８、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ１８、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ１８であり、ここでＲ１８がＨまたはＣ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、またはアルケニルであり、
Ｒｌ７が、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、
Ｘ４が、ＯＲ１９であり、ここで、Ｒ１９がＣ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、Ｒ１９基が、場合により、カルボニル基、カルボキシル基、カルボキシアミド基、アルコール基、またはエーテル基を含有し、Ｒ１９基が、さらに場合により、１個もしくはそれ以上のハロゲン原子を含有し、
ただし、Ｒ１６がは−ＣＨ３であり、Ｒ１９は−ＣＨ３である場合、Ｒ１７が置換または非置換のフェニル、−ｎＣ３Ｈ７、−ｎＣ５Ｈ１１、またはｎＣ１３Ｈ２７ではないことを条件とし、
さらに、ただし、Ｒ１６がＨであり、Ｒ１９が−ＣＨ３である場合、Ｒ１７が置換または非置換のフェニルまたは−ＣＨ３ではなく、かつＲ１６がＨであり、Ｒ１９が−ＣＨ２ＣＨ３である場合、Ｒ１７が−ｉＣ３Ｈ７、もしくは置換または非置換のフェニルではないことを条件とする］の化合物である。
【００４４】
好ましい実施形態においては、Ｒ１６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールである。より好ましい実施形態においては、Ｒ１６は、−ＣＨ３である。
【００４５】
別の好ましい実施形態においては、Ｒ１９は、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ２０または−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２０であり、ここで、Ｒ２０は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールである。
【００４６】
本発明の別の実施形態は、式Ｖ：
【化６】
2005533107.tif 000009
［式中
Ｒ２１が、Ｃ２−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリール、＝ＣＨＲ２３、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２３、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２３、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ２３、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２３であり、ここで、Ｒ２３がＨまたはＣ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、またはアルケニルであり、Ｒ２１が＝ＣＨＲ２３である場合を除き、Ｒ２３がＨでななく、
Ｒ２２が、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、
ただし、Ｒ２１が−ＣＯＯＨである場合、Ｒ２２が−ＣＨ３、−ｎＣ５Ｈ１１、またはＣ１３Ｈ２７ではなく、かつ、さらに、ただし、Ｒ２１が−ＣＨ２ＣＯＯＨである場合、Ｒ２２が−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、またはｉＣ５Ｈ１１ではなく、さらにＲ２１が＝ＣＨＣＨ３である場合、Ｒ２２がｎ−Ｃ５Ｈ１１ではないことを条件とする］の化合物である。
【００４７】
好ましい実施形態においては、Ｒ２１は、Ｃ２−Ｃ１０、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールである。
【００４８】
本発明の別の実施形態は、式ＶＩ：
【化７】
2005533107.tif 000010
［式中
Ｒ２４が、Ｃ２−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリール、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２６、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２６、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ２６、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２６であり、ここで、Ｒ２６がＨまたはＣ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、またはアルケニルであり、
Ｒ２５が、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、
ただし、Ｒ２４が−ＣＯＯＨである場合、Ｒ２５が−ＣＨ３、−ｎＣ５Ｈ１１、またはＣ１３Ｈ２７ではなく、かつ、さらに、ただし、Ｒ２４が−ＣＨ２ＣＯＯＨである場合、Ｒ２５が−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、またはｉＣ５Ｈ１１ではないことを条件とする］の化合物である。
【００４９】
好ましい実施形態においては、Ｒ２１は、Ｃ２−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールである。
【００５０】
本発明の別の実施形態は、式ＶＩＩ：
【化８】
2005533107.tif 000011
［式中
Ｒ２７が、Ｃ３−Ｃ４アルキル、Ｃ６−Ｃ１０アルキル、Ｃ１２アルキル、Ｃ１４アルキル、Ｃ１６−Ｃ２０アルキルである］の化合物である。
【００５１】
本発明の別の実施形態は、式ＶＩＩＩ：
【化９】
2005533107.tif 000012
［式中
Ｒ２８が、Ｃｌ−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、ただし、Ｒ２８が−ＣＨ３、−ｎＣ３Ｈ７、−ｎＣ１１Ｈ２３、または−ｎＣ１３Ｈ２７ではないことを条件とする］の化合物である。
【００５２】
本発明の別の実施形態は、医薬希釈剤または医薬担体と、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、またはＩＸ：
【化１０】
2005533107.tif 000013
［式中
Ｒ２９が、Ｈ、またはＣｌ−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、＝ＣＨＲ３１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ３１、Ｃ（Ｏ）Ｒ３１、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ３ｌ、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ３１であり、ここで、Ｒ３１がＨまたはＣ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、またはアルケニルであり、
Ｒ３０が、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、
Ｘ５が、−ＯＲ３２、または−ＮＨＲ３２であり、ここで、Ｒ３２がＨ、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、Ｒ３２基が、場合により、カルボニル基、カルボキシル基、カルボキシアミド基、アルコール基、またはエーテル基を含有し、Ｒ３２基が、さらに場合により、１個もしくはそれ以上のハロゲン原子を含有し、
ただし、Ｒ２９が＝ＣＨ２である場合、Ｘ５が−ＯＨではないことを条件とする］の化合物と、を含む医薬組成物である。
【００５３】
好ましい実施形態においては、Ｒ２９は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、もしくはアルキルアリールであり、または＝ＣＨ２である。より好ましい実施形態においては、Ｒ２９は、−ＣＨ３、または＝ＣＨ２である。
【００５４】
別の好ましい実施形態においては、Ｒ３２は、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＲ３３または−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ３３であり、ここで、Ｒ３３はＣ１−Ｃ１０アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールである。
【００５５】
本発明の組成物は、錠剤、カプセル剤、丸剤、粉剤、顆粒剤、滅菌非経口溶液または懸濁液、経口溶液または懸濁液、適量の化合物を含有する水中油および油中水乳剤、坐剤、および液中懸濁液または溶液などの単位剤形でヒトおよび他の動物に対する投与のために提示されうる。本明細書で用いられる用語「医薬希釈剤」および「医薬担体」は同じ意味を有する。経口投与のために、固体または液体の単位剤形が調製されうる。錠剤などの固体組成物を調製するために、化合物は、タルク、ステアリン酸マグネシウム、第二リン酸カルシウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、硫酸カルシウム、でんぷん、乳糖、アカシア、メチルセルロース、および医薬希釈剤または担体など機能的に類似の材料など従来の成分と混合されうる。カプセル剤は、化合物を不活性医薬希釈剤と混合し、かつその混合物を適切なサイズの硬ゼラチンカプセル剤に充填することによって調製される。軟ゼラチンカプセル剤は、許容される植物油、軽流動パラフィン、または他の不活性油とともに化合物のスラリーの機械カプセル化によって調製される。
【００５６】
液体単位剤形、またはシロップ剤、エリキシル剤、および懸濁液などの経口投与が調製されうる。これらの剤形は、糖、芳香性香料添加剤、防腐剤とともに水性賦形剤中に溶解し、シロップ剤を形成されうる。懸濁液は、アカシア、トラガカント、メチルセルロースなどの懸濁剤を用いて水性賦形剤で調製されうる。
【００５７】
非経口投与のために、化合物および滅菌賦形剤を利用して液体単位剤形が調製されうる。溶液の調製においては、化合物は注射用に水中に溶解され、適切なガラス瓶またはアンプルに充填し密閉する前にろ過滅菌されうる。局所麻酔薬などの佐剤（補助剤）、防腐剤、および緩衝剤が賦形剤中に溶解されうる。組成物はガラス瓶に充填後に凍結され、水は真空下に除去されうる。次いで、凍結乾燥粉剤はガラス瓶中で計量され、使用前に再構成されうる。
【００５８】
本発明の化合物に関して想定される臨床的治療項目として挙げられるのは、（１）ブドウ球菌（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）および腸球菌（ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ）などの侵襲性微生物による感染、（２）その細胞が脂肪酸合成酵素を過剰発現する多くの組織において発生する癌、（３）過剰なカロリーの摂取による肥満である。投与量および治療期間は、さまざまな要因によって決まるが、それらに含まれるのは、（１）患者の年齢、体重、および臓器機能（例えば、肝および腎機能）、（２）治療される疾患過程の性質および程度、ならびに既存の重要な併存疾患、および服用される併用薬、および（３）投与経路、治療を達成するのに必要な投与の頻度および期間、および薬剤の治療指標などの薬剤関連パラメータである。一般に、投与量は、約１μｇ／ｍｌ〜１０μｇ／ｍｌの標的部位での有効濃度を達成することを目的に１ｎｇ／ｍｌ〜１００ｎｇ／ｍｌ血清レベルを達成するように選択される。
【実施例】
【００５９】
実施例
本発明は、以下の実施例によって例示されるが、これによって限定されない。
【００６０】
本発明に係る一連の化合物が、以下に記載されているように合成された。一部の化合物の生物学的活性は、以下のようにプロファイルされた。化合物は、以下について試験された。すなわち、（１）精製ヒトＦＡＳの阻害、（２）全細胞における脂肪酸合成活性の阻害、（３）クリスタルバイオレット（ｃｒｙｓｔａｌ  ｖｉｏｌｅｔ）およびＸＴＴアッセイを用いて、高レベルのＦＡＳおよび脂肪酸合成活性を有することが知られる培養ＭＣＦ−７ヒト乳癌細胞に対する細胞毒性、および（４）抗菌活性であった。次いで、低レベルの細胞毒性を有する選択化合物は、バルブ（Ｂａｌｂ）／Ｃマウスにおける減量について試験した。また、有意な減量および低レベルの細胞毒性を示す群からの代表的化合物は、脂肪酸酸化およびカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ−１（ＣＰＴ−１）活性、ならびにバルブ（Ｂａｌｂ）／Ｃマウスにおけるノーザン分析による視床下部ＮＰＹ発現に対するその効果について試験された。一部の化合物は、グラム陽性および／または陰性菌への活性についても試験した。一部の化合物は、抗腫瘍活性についてインビボ試験も行われた。
【００６１】
化合物の調製
【化１１】
2005533107.tif 000014
（±）−α−メチレン−γ−ブチロラクトン−５−オクチル−４−アリルアミド（１）。ＣＨ３ＣＮ（０．９ｍＬ）中の（±）−α−メチレン−γ−ブチロラクトン−５−オクチル−４−カルボン酸溶液（Ｃ７５）、（４０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）にトリス（２−オキソ−３−オキサゾリニル）ホスフィンオキシド１（９１．７ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）、アリルアミン（１２μｌ、０．２ｍｍｏｌ）、およびＮＥｔ３（０．０４ｍＬ、０．３ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を３０分間室温に攪拌させた。この混合液を飽和ＮＨ４Ｃｌ／１Ｎ  ＨＣｌの溶液（１０ｍＬ、３：１）に注ぎ、Ｅｔ２Ｏ（３×１５ｍＬ）で抽出した。まとめた有機物は乾燥され（ＭｇＳＯ４）、ろ過され、溶媒を蒸発し、クロマトグラフィーにかけ（３５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）、純度のある化合物１（２６．２ｍｇ、５４％）、融点６６〜６８℃を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８４（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，３Ｈ）、１．２３（ｍ，１１Ｈ）、１．３４−１．４７（ｍ，１Ｈ）、１．６０−１．７１（ｍ，２Ｈ）、３．４３−３．４６（ｍ，１Ｈ）、３．８７（ｄｔ，Ｊ＝１．４，５．７Ｈｚ，２Ｈ）、４．７４（ｄｔ，Ｊ＝５，７Ｈｚ，１Ｈ）、５．１２（ｄ，Ｊ＝１０．６Ｈｚ，１Ｈ）、５．１６（ｄ，Ｊ＝１７．３Ｈｚ，１Ｈ）、５．７２−５．８５（ｍ，１Ｈ）、５．７６（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．３４（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．５０（ｂｓ，１Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１４．０、２２．６、２４．９、２９．１、２９．２、２９．４、３１．８、３５．９、４２．３、５２．２、８０．５、１１７．０、１２４．３、１３３．５、１３５．４、１６８．６、１６８．６。ＩＲ（ＮａＣｌ）２９２２、１７７１、１７５６、１６４２  １５５７ｃｍ−１。Ｃ１７Ｈ２７ＮＯ３：Ｃ，６９．５の分析計算値；Ｈ、９．２８；測定値：Ｃ、６９．５；Ｈ、９．０９。
【００６２】
【化１２】
2005533107.tif 000015
（±）−α−メチレン−γ−ブチロラクトン−５−ヘキシル−４−アリルアミド（２）。上記の手順にしたがい、（±）−α−メチレン−γ−ブチロラクトン−５−ヘキシル−４−カルボン酸（６０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）およびアリルアミン（３３μＬ、０．２９ｍｍｏｌ）から、フラッシュクロマトグラフィー（３０〜４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）後に、化合物２（５１．８ｍｇ、７４％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８６（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，３Ｈ）、１．２６−１．５２（ｍ，８Ｈ）、１．６３−１．７７（ｍ，２Ｈ）、３．４０−３．４３（ｍ，１Ｈ）、３．９１（ａｐｐ  ｔｔ，Ｊ＝５．７６，１．４４Ｈｚ，２Ｈ）、５．７５−５．８７（ｍ，１Ｈ）、５．７８（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）、５．９３（ｂｔ，１Ｈ）、６．４１（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１３．７、２２．３、２４．７、２８．５、３１．５、３５．９、４２．３、５２．４、８０．３、１１６．９、１２３．９、１３３．５、１３５．６、１６８．４、１６８．５。ＩＲ（ＮａＣｌ）２９２３、１７５５、１６４１、１５５７ｃｍ−１。Ｃ１５Ｈ２３ＮＯ３の分析計算値：Ｃ、６７．９；Ｈ、８．７４；測定値：Ｃ、６７．８；Ｈ，８．６７。
【００６３】
【化１３】
2005533107.tif 000016
（±）−α−メチレン−γ−ブチロラクトン−５−ブチル−４−アリルアミド（３）。上記の手順にしたがい、（±）−α−メチレン−γ−ブチロラクトン−５−ブチル−４−カルボン酸（１００ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）およびアリルアミン（４１μＬ、０．５５ｍｍｏｌ）から、フラッシュクロマトグラフィー（３０〜４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）後に化合物３（６８ｍｇ、５７％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）ｄ０．８７（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，３Ｈ）、１．２８−１．５０（ｍ，４Ｈ）、１．６６−１．７４（ｍ，２Ｈ）、３．４１−３．４５（ｍ，１Ｈ）、３．９０（ａｐｐ  ｔｔ，Ｊ＝５．７，１．４Ｈｚ，２Ｈ）、４．７２−４．７８（ｍ，１Ｈ）、５．１４−５．２０（ｍ，２Ｈ）、５．７４−５．８７（ｍ，１Ｈ）、５．７８（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ）、６．１２（ｂｔ，１Ｈ）、６．３９（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  １３．６、２２．２、２６．８、３５．５、４２．３、５２．５、８０．３、１１７．０、１２３．９、１３３．５、１３５．５、１６８．３、１６８．５。ＩＲ（ＮａＣｌ）２９５８、１７６８、１６５２、１５４８。Ｃ１３Ｈ１９ＮＯ３分析計算値：Ｃ、６５．８；Ｈ、８．０７；測定値：Ｃ、６５．８；Ｈ、８．０７。
【００６４】
【化１４】
2005533107.tif 000017
（±）−α−メチレン−γ−ブチロラクトン−５−オクチル−４−カルボキシ−グリシン酸メチル（４）。上記の手順にしたがい、Ｃ７５（３９ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）および塩酸グリシン酸メチル（２０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）から、フラッシュクロマトグラフィー（３５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）後に化合物４（２８ｍｇ、５６％）、融点９４．５〜９５．５℃を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８５（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）、１．２３（ｓ，１１Ｈ）、１．４１−１．４９（ｍ，１Ｈ）、１．６３−１．７４（ｍ，２Ｈ）、３．４６−３．４９（ｍ，１Ｈ）、３．７５（ｓ，３Ｈ）、３．９７−４．１４（ｄｄ，Ｊ＝５．４，８Ｈｚ，２Ｈ）、４．７５（ｄｔ，Ｊ＝５．７，７Ｈｚ，１Ｈ）、５．８８（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ）、６．４１（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ）、６．５５（ｂｓ，１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１４．１、２２．６、２４．８、２９．２、２９．２、２９．４、３１．８、３５．８、４１．４、５２．０、５２．６、８０．２、１２４．８、１３４．９、１６８．６、１６９．０、１６９．９。ＩＲ（ＮａＣｌ）２９１５、１７６８、１７３７、１６４４ｃｍ−１；Ｃ１７Ｈ２７ＮＯ５：Ｃ，６２．７分析計算値；Ｈ、８．３６；測定値：Ｃ、６２．７；Ｈ、８．２７。
【００６５】
【化１５】
2005533107.tif 000018
（±）−α−メチレン−γ−ブチロラクトン−５−オクチル−４−カルボキシ−ｔｅｒｔ−ブチル−グリシン酸（５）。上記の手順にしたがい、Ｃ７５（１００ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）および塩酸グリシン酸ｔ−ブチル（６６ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）から、フラッシュクロマトグラフィー（３５％Ｅｔ２Ｏ〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）後に、化合物５（１０８ｍｇ、７５％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８４（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）、１．２５（ｓ，１２Ｈ）、１．４４（ｓ，９Ｈ）、１．６５−１．７３（ｍ，２Ｈ）、３．４４−３．４８（ｍ，１Ｈ）、３．９２−３．９５（ｄｄ，Ｊ＝３．６，５Ｈｚ，２Ｈ）、４．７６（ｄｔ，Ｊ＝５．７，７Ｈｚ，１Ｈ）、５．８８（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ）、６．４１（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ）、４．４７（ｂｔ，１Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１３．９、２２．５、２４．８、２８．０、２９．１、２９．２、２９．３、３１．７、３５．８、４２．２、５１．９、８０．２、８２．６、１２４．６、１３５．１、１６８．５、１６８．６、１６８．８。Ｃ２０Ｈ３３ＮＯ６分析計算値：Ｃ、６５．４、Ｈ、９．０５；測定値：Ｃ、６５．３；Ｈ、９．０２。
【００６６】
【化１６】
2005533107.tif 000019
（±）−α−メチレン−γ−ブチロラクトン−５−オクチル−４−カルボキシ−グリシン酸（６）。ＣＨ２Ｃｌ２（２．０ｍＬ）中の５（１００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）からＴＦＡ（１．３ｍＬ）を添加し、溶液を３時間室温に攪拌させた。溶媒の蒸発後、カラムクロマトグラフィー（５０％ＥｔＯＡｃ／２％ＣＨ３ＣＯ２Ｈ／ヘキサン）により純度のある化合物６（６１ｍｇ、７３％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ０．８２（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ）、１．２２（ｓ，１０Ｈ）、１．２８−１．３８（ｍ，２Ｈ）、１．５７−１．６９（ｍ，２Ｈ）、３．５５−３．５９（ｍ，２Ｈ）、３．７８−３．９５（ａｂ−ｑ，Ｊ＝１７Ｈｚ，２Ｈ）、４．６３（ｑａｐｐ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．８８（ｂｓ，１Ｈ）、５．８７（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．１９（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１  Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ１４．６、２３．８、２６．１、３０．５、３０．５、３０．６、３３．２、３６．６、４２．２、５２．８、８１．７、１２４．８、１３７．４、１７０．８、１７２．６、１７２．５。ＩＲ（ＮａＣｌ）２９１５、１７６９、１７３１、１６４４ｃｍ−１。Ｃ１６Ｈ２５ＮＯ５分析計算値：Ｃ、６１．７；Ｈ、８．０９；測定値：Ｃ、６１．７；Ｈ、８．０５。
【００６７】
【化１７】
2005533107.tif 000020
（±）−α−メチレン−γ−ブチロラクトン−５−オクチル−４−カルボン酸エタノールアミド（７）。上記の手順にしたがい、Ｃ７５（３０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）およびエタノールアミン（７．８μｌ、０．１３ｍｍｏｌ）から、フラッシュクロマトグラフィー（５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン〜１００％ＥｔＯＡｃ／２％ＣＨ３ＣＯ２Ｈ）後に、化合物７（３２ｍｇ、９１％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８６（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）、１．２４（ｓ，１０Ｈ）、１．３５−１．４８（ｍ，２Ｈ）、１．６４−１．７５（ｍ，２Ｈ）、３．４０−３．５７（ｍ，３Ｈ）、３．７４（ｔ，Ｊ＝５Ｈｚ，２Ｈ）、４．７３−４．７９（ｄｔ，Ｊ＝５．７，７Ｈｚ，１Ｈ）、５．８２（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ）、６．４２（ｄ，Ｊ＝２Ｈ，１Ｈ）。
【００６８】
【化１８】
2005533107.tif 000021
（８、９）ＥｔＯＡｃ（３．０ｍＬ）中のＣ７５の溶液（１００ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）にＰｄ（炭素上３０ｍｇ、１０％）およびＨ２（５０ｐｓｉ）を２時間添加した。この混合液はセライトを通じてろ過され、蒸発され、ジアステレオマー（トランス９：シス８に対して１．８：１）の混合物を得た。カラムクロマトグラフィー（２０％ＥｔＯＡｃ／２％ＣＨ３ＣＯ２Ｈ／ヘキサン）により分離トランスジステレオマーとともに非分離可能な異性化副産物（９：１０、３．８：１、５９．５ｍｇ）、および純度のあるシス異性体（８、３２．７ｍｇ）を得た（全体的収率９２％）。
【００６９】
（±）−α−メチル−γ−ブチロラクトン−５−オクチル−４−カルボン酸（トランスジアステレオマー）（９）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８５（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ）、１．２３（ｓ，１０Ｈ）、１．３１（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ）、１．４１−１．５０（ｍ，２Ｈ）、１．６４−１．６９（ｍ，２Ｈ）、２．６２−２．６９（ｄｄ，Ｊ＝９．６，１１．３Ｈｚ，１Ｈ）、２．９１−３．０（ｄｑ，Ｊ＝１１．３，７Ｈｚ，１Ｈ）、４．４２−４．４９（ｔｄ，Ｊ＝４，９Ｈｚ，１Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１３．９、１４．５、２２．６、２５．２、２９．１、２９．２、２９．３、３１．８、３２．７、３９．９、５３．９、７９．５、１７６．０、１７６．９。ＨＲＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｆｏｒ  Ｃ１４Ｈ２４０４Ｎａ＋（Ｍ＋Ｎａ＋）２７９．１５６６  測定値。２７９．１５６２。
【００７０】
（±）−α−メチル−γ−ブチロラクトン−５−オクチル−４−カルボン酸（シスジアステレオマー）（８）。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８６（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）、１．２５（ｂｓ，１０Ｈ）、１．２９（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）、１．３６−１．４９（ｍ，２Ｈ）、１．６３−１．７１（ｍ，２Ｈ）、３．１４（ｄｄ，Ｊ＝６，９Ｈｚ，１Ｈ）、３．０２（ｄｑ，Ｊ＝７，９Ｈｚ，１Ｈ）、４．６９（ｑａｐｐ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１１．８、１４．０、２２．６、２５．３、２９．１、２９．２、２９．３、３１．８、３４．７、３７．０、４９．９、７９．５、１７５．４、１７７．３。ＨＲＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ。Ｆｏｒ  Ｃ１４Ｈ２４Ｏ４Ｎａ＋（Ｍ＋Ｎａ＋）２７９．１５６６  測定値。２７９．１５６８。
【００７１】
【化１９】
2005533107.tif 000022
（±）−α−メチル−γ−ブチロラクトン−５−オクチル−４−カルボン酸アリルアミド（１１）。上記の手順にしたがい、化合物９（５２ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）およびアリルアミン（１６μｌ、０．２２ｍｍｏｌ）から、フラッシュクロマトグラフィー（４０％Ｅｔ２Ｏ／ヘキサン〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）後に、化合物１１（３０ｍｇ、５１％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８６（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ）、１．２３−１．３０（ｍ，１３Ｈ）、１．３８−１．４９（ｍ，２Ｈ）、１．６１−１．６９（ｍ，２Ｈ）、２．２９−２．３６（ｄｄ，Ｊ＝９．３，１１．３Ｈｚ，１Ｈ）、３．００−３．０９（ｄｑ，Ｊ＝７，１１Ｈｚ，１Ｈ）、３．９２（ｔｔ，Ｊ＝１．５，５．７Ｈｚ，２Ｈ）。４．４５−４．５２（ｍ，１Ｈ）、５．１５−５．２２（ｄｄ，Ｊ＝１０，１７Ｈｚ，２Ｈ）、５．７６−５．８８（ｍ，２Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１３．９、１４．０、２２．６、２５．４、２９．１、２９．３、２９．３、３１．８、３４．７、４０．５、４２．２、５７．４、８０．４、１１６．９、１３３．５、１６９．３、１７７．４。ＨＲＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｆｏｒ  Ｃ１７Ｈ２９ＮＯ３Ｎａ＋（Ｍ＋Ｎａ＋）３１８．２０３９；測定値。３１８．２０４０。
【００７２】
【化２０】
2005533107.tif 000023
（±）−α−メチル−γ−ブチロラクトン−５−オクチル−４−カルボン酸アリルアミド（１２）。上記の手順にしたがい、化合物８（３２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）およびアリルアミン（１０μｌ、０．１３ｍｍｏｌ）から、フラッシュクロマトグラフィー（４０％Ｅｔ２Ｏ／ヘキサン〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）後に、化合物１２（２０ｍｇ、５３％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８６（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ）、１．２１−１．２５（ｍ，１３Ｈ）、１．４１−１．４７（ｍ，２Ｈ）、１．５８−１．６７（ｍ，２Ｈ）、２．８１−２．９１（ｍ，２Ｈ）、３．８３−３．９６（ｔｔ，Ｊ＝１．５，５Ｈｚ，２Ｈ）、４．７１−４．７７（ｍ，１Ｈ）、５．１３−５．２１（ｄｄ，Ｊ＝１０，１７Ｈｚ，２Ｈ）、５．７５−５．８７（ｍ，２Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１１．５、１４．０、２２．６、２５．４、２９．１、２９．２、２９．４、３１．８、３４．８、３７．４、４２．０、５１．２、８０．３、１１６．９、１３３．８、１６９．１、１７７．９。ＨＲＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｆｏｒ  Ｃ１７Ｈ２９ＮＯ３Ｎａ＋（Ｍ＋Ｎａ＋）３１８．２０３９；測定値３１８．２０４１。
【００７３】
【化２１】
2005533107.tif 000024
３−メチル−５−オクチル−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−３−カルボン酸アリルアミド（１３）。上記の手順にしたがい、３−メチル−５−オクチル−２−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−４−カルボン酸（４６ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）およびアリルアミン（１４μｌ、０．１９ｍｍｏｌ）から、フラッシュクロマトグラフィー（４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）後に、化合物１３（３０ｍｇ、５５％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８５（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）、１．２２（ｓ，１０Ｈ）、１．４６−１．５５（ｍ，２Ｈ）、１．９０−１．９５（ｍ，２Ｈ）、２．０４（ｓ，３Ｈ）、４．０２（ｔｄ，Ｊ＝１．４，５．７Ｈｚ，２Ｈ）、５．１３−５．１５（ｍ，１Ｈ）、５．１８−５．２５（ｄｄ，Ｊ＝１０．６，１７．３Ｈｚ，２Ｈ）、５．８０−５．９２（ｄｄｔ，Ｊ＝１０．３，１７，５．７Ｈｚ，１Ｈ）。６．０７（ｔ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１０．３、１４．０、２２．６、２４．８、２９．１、２９．２、２９．３、３１．８、３２．７、４２．０、８１．７、１１７．５、１２８．８、１３３．１、１５３．７、１６２．１、１７３．３。ＨＲＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｆｏｒ  Ｃ１７Ｈ２７ＮＯ３Ｎａ＋（Ｍ＋Ｎａ＋）３１６．１８８３；測定値３１６．１８９５。
【００７４】
参考文献：１．クニエダ（Ｋｕｎｉｅｄａ）、Ｔ．、ナガマツ（Ｎａｇａｍａｔｓｕ）、Ｔ．、ヒグチ（Ｈｉｇｕｃｈｉ）、Ｔ．、ヒロベ（Ｈｉｒｏｂｅ）、Ｍ．、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．、１９８８年（２９）、ｐｐ．２２０３〜２２０６。
【００７５】
生物学的および生化学的方法
ＺＲ−７５−１ヒト乳癌細胞からのＦＡＳの精製。
アメリカンタイプカルチャーコレクションから得た培養ＺＲ−７５−１ヒト乳癌細胞からヒトＦＡＳを精製した。リン（Ｌｉｎｎ）ら、１９８１年、およびクハージャ（Ｋｕｈａｊｄａ）ら、１９９４年から改造された手順では、低張性溶解、連続的ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）沈殿、および陰イオン交換クロマトグラフィーが利用される。ＺＲ−７５−１細胞は、１０％ウシ胎仔血清、ペニシリンおよびストレプトマイシンを有するＲＰＭＩ培地中５％ＣＯ２により３７℃に培養される。
【００７６】
融合細胞の１０個のＴ１５０フラスコを１．５ｍｌ溶解緩衝液（２０ｍＭトリス（Ｔｒｉｓ）−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１ｍＭフェニルメタンスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）、０．１％Ｉｇｅｐａｌ  ＣＡ−６３０）で溶解し、氷上で２０ストロークのダンス（ｄｏｕｎｃｅ）ホモジナイズを行った。溶解物をＪＡ−２０ローター（ベックマン（Ｂｅｃｋｍａｎ））において２０，０００ｒｐｍで３０分間４℃に遠心分離し、上清を溶解緩衝液で４２ｍｌにする。溶解緩衝液中５０％ＰＥＧ８０００の溶液をゆっくり上清に添加し、最終濃度を７．５％にする。６０分間４℃に振動後、溶液をＪＡ−２０ローター（ベックマン（Ｂｅｃｋｍａｎ））において１５，０００ｒｐｍで３０分間４℃に遠心分離する。次いで、固体ＰＥＧ８０００を上清に添加し、最終濃度を１５％にする。振動および遠心分離を上記の通り反復後、沈殿物を一夜４℃に１０ｍｌのバッファーＡ（２０ｍＭ  Ｋ２ＨＰＯ４、ｐＨ７．４）中に再懸濁する。０．４５μＭろ過後、タンパク質溶液をモノ（Ｍｏｎｏ）Ｑ５／５陰イオン交換カラム（ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ））に注ぐ。カラムを１５分間、１ｍｌ／分でバッファーＡで洗浄し、結合材料を線形６０ｍｌグラディエントで６０分間にわたり１Ｍ  ＫＣ１に溶離する。ＦＡＳ（ＭＷ〜２７０ｋＤ）は、通常、０．２５Ｍ  ＫＣｌで３つの０．５ｍｌ画分で溶離し、クマシーＧ２５０染料（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）による４〜１５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて確認される。ＦＡＳタンパク質濃度は、基準としてＢＳＡを用いる製品仕様に従いクマシープラスタンパク質アッセイ試薬（ピアス（Ｐｉｅｒｃｅ））を用いて測定される。この手順により、クマシー染色ゲルによって判定される通りＦＡＳの実質的に純粋な調製液（＞９５％）が得られる。
【００７７】
ＦＡＳ酵素活性の測定および化合物のＩＣ５０の決定
ＦＡＳ活性は、ＮＡＤＰＡのマロニル−ＣｏＡ依存酸化を９６ウェルプレート中、
ＯＤ３４０で分光測光法でモニタリングすることによって測定される（ディルス（Ｄｉｌｓ）らとアルスラニアン（Ａｒｓｌａｎｉａｎ）ら、１９７５年）。各ウェルは２μｇ精製ＦＡＳ、１００ｍＭ  Ｋ２ＨＰＯ４、ｐＨ６．５、１ｍＭジチオスレイトール（シグマ（Ｓｉｇｍａ））、および１８７．５μＭ  β−ＮＡＤＰＨ（シグマ（Ｓｉｇｍａ））を含有する。阻害剤の原液を２、１、および０．５ｍｇ／ｍｌでＤＭＳＯ中で調製し、１μｌの原液がウェル毎に添加されると最終濃度は２０、１０、および５μｇ／ｍｌになる。各実験のために、セルレニン（シグマ（Ｓｉｇｍａ））を陽性対照として、すべて２重にしてＤＭＳＯ対照、阻害剤、およびブランク（非ＦＡＳ酵素）とともに実行する。
【００７８】
アッセイはモレキュラーデバイス社スペクトラマックスプラス分光測光器で行われる。ＦＡＳ、緩衝液、阻害剤および対照を含有するプレートを３７℃に加熱した分光測光器に配置する。動的プロトコルを用いることによって、ウェルを１００μｌの１００ｍＭ  
Ｋ２ＨＰＯ４、ｐＨ６．５を含有する２重のウェル上でブランクにし、プレートを１０秒間隔で５分間、ＯＤ３４０で読み、ＮＡＤＰＨのマロニル−ＣｏＡ非依存酸化を測定する。プレートを分光測光器から除去し、マロニル−ＣｏＡ（６７．４μＭ、ウェル当りの最終濃度）およびアセチル−ＣｏＡ（６１．８μＭ、ウェル当りの最終濃度）を、ブランクを除く各ウェルに添加する。プレートを上記の通り動的プロトコルで再び読み、マロニル−ＣｏＡ依存ＮＡＤＰＨ酸化を測定する。マロニル−ＣｏＡ依存および非−マロニル−ＣｏＡ依存ＮＡＤＰＨ酸化のΔＯＤ３４０間の差は、特異的ＦＡＳ活性である。ＦＡＳ調製液の純度のため、非−マロニル−ＣｏＡ依存ＮＡＤＰＨ酸化はごくわずかである。
【００７９】
ＦＡＳに対する化合物のＩＣ５０は、試験した各阻害剤の濃度に対するΔＯＤ３４０をプロットし、線形回帰を行い、かつ最良適合、ｒ２値、および９５％信頼区間を計算することによって決定される。ＦＡＳの５０％阻害をもたらす化合物の濃度が、ＩＣ５０である。ΔＯＤ３４０対時間のグラフは、各化合物の濃度についてソフトマックス（ＳＯＦＴｍａｘ）ＰＲＯソフトウェア（モレキュラーデバイス社（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ））によってプロットされる。線形回帰、最良適合、ｒ２、および９５％信頼区間の計算は、プリズムバージョン３．０（グラフパッドソフトウェア（Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ））を用いて計算される。
【００８０】
クリスタルバイオレット細胞増殖アッセイ
クリスタルバイオレットアッセイでは、細胞増殖は測定されるが細胞毒性は測定されない。このアッセイでは、その後の可溶化および分光測光器でのＯＤ４９０の測定とともに９６ウェルプレートにおける固定細胞のクリスタルバイオレット染色が使用される。
ＯＤ４９０は、測定される単位時間当たりの細胞増殖に対応する。細胞は、関係化合物または賦形剤対照で処理され、各化合物のＩＣ５０が計算される。
【００８１】
癌細胞に対する特定の化合物の細胞毒性を測定するには、アメリカンタイプカルチャーコレクションから得た５×１０４のＭＣＦ−７ヒト乳癌細胞を１０％ウシ胎仔血清、ペニシリンおよびストレプトマイシンを有するＤＭＥＭ培地中の２４ウェルプレートの各ウェル毎に塗布する。３７℃および５％ＣＯ２に一夜培養後、ＤＭＳＯ中に溶解された被試験化合物を、以下の濃度、すなわち３重で５０、４０、３０、２０、および１０μｇ／ｍｌで１μｌ量のウェルに添加する。追加の濃度は、必要に応じて試験される。１μｌのＤＭＳＯを賦形剤対照として３重のウェルに添加する。Ｃ７５は、陽性対照として３重で１０、および５μｇ／ｍｌで実行される。
【００８２】
７２時間のインキュベーション後、細胞を各ウェルにおいてクリスタルバイオレット染料（２５％メタノール中０．５％）０．５ｍｌで染色する。１０分後、ウェルを洗浄し、風乾し、次いで、１０％ドデシル硫酸ナトリウム０．５ｍｌで２時間攪拌しながら可溶化する。各ウェルから９６ウェルプレートへ１００μｌ移した後、プレートをモレキュラーデバイス社スペクトラマックスプラス分光測光器によりＯＤ４９０で読む。平均ＯＤ４９０値はソフトマックス（ＳＯＦＴｍａｘ）ＰＲＯソフトウェア（モレキュラーデバイス社（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ））を用いて計算され、ＩＣ５０値はプリズムバージョン３．０２（グラフパッドソフトウェア（Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）、サンディエゴ）を用いて線形回帰分析によって判定される。
【００８３】
ＸＴＴ細胞毒性アッセイ
ＸＴＴアッセイは、［５１Ｃｒ］放出細胞毒性アッセイの非放射性代替物である。ＸＴＴは、代謝的に活性な生存細胞によってのみホルマザン染料に還元されるテトラゾリウム塩である。ＸＴＴの還元は、ＯＤ４９０−ＯＤ６５０として分光測光器で測定される。
【００８４】
癌細胞に対する特定の化合物の細胞毒性を測定するには、アメリカンタイプカルチャーコレクションから得た９×１０３のＭＣＦ−７ヒト乳癌細胞を１０％ウシ胎仔血清、インシュリン、ペニシリンおよびストレプトマイシンを有するＤＭＥＭ培地中の９６ウェルプレートの各ウェル毎に塗布する。３７℃および５％ＣＯ２に一夜培養後、ＤＭＳＯ中に溶解された被試験化合物を、以下の濃度、すなわち３重で８０、４０、２０、１０、５、２．５、１．２５、および０．６２５μｇ／ｍｌで１μｌ量のウェルに添加する。追加の濃度は、必要に応じて試験される。１μｌのＤＭＳＯを賦形剤対照として３重のウェルに添加する。Ｃ７５は、陽性対照として３重で４０、２０、１０、１５、１２．５、１０、および５μｇ／ｍｌで実行される。
【００８５】
７２時間のインキュベーション後、細胞をメーカーの指示（細胞増殖キットＩＩ（ＸＴＴ）ロシュ（Ｒｏｃｈｅ））の通りＸＴＴ試薬で４時間インキュベートする。プレートをモレキュラーデバイス社スペクトラマックスプラス分光測光器によりＯＤ４９０および
ＯＤ６５０で読む。細胞を有さないＸＴＴ試薬を含有する３つのウェルがプレートブランクとして使用される。ＸＴＴデータは、ＯＤ４９０−ＯＤ６５０として報告されている。平均および平均標準誤差は、ソフトマックス（ＳＯＦＴｍａｘ）Ｐｒｏソフトウェア（モレキュラーダイナミックス社（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ））を用いて、計算される。
【００８６】
化合物のＩＣ５０は、対照と比べＯＤ４９０−ＯＤ６５０の５０％削減をもたらす薬剤の濃度として定義される。ＯＤ４９０−ＯＤ６５０は、各化合物濃度についてソフトマックス（ＳＯＦＴｍａｘ）ＰＲＯソフトウェア（モレキュラーデバイス社（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ））によって計算される。ＩＣ５０は、線形回帰によって、ＦＡＳ活性は対照対薬剤濃度の割合としてプロットすることによって計算される。線形回帰、最良適合、ｒ２および９５％信頼区間の計算は、プリズムバージョン３．０（グラフパッドソフトウェア（Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ））を用いて計算される。
【００８７】
総脂質への［１４Ｃ］酢酸取込みの測定および化合物のＩＣ５０の決定
このアッセイでは、総脂質への［１４Ｃ］酢酸取込みが測定され、これはインビトロでの脂肪酸合成経路活性の尺度である。これを利用してインビトロでの脂肪酸合成の阻害が測定される。
【００８８】
ＭＣＦ−７乳癌細胞を上記の通り培養し、２４ウェルプレートのウェル毎に５×１０４細胞で塗布する。一夜インキュベーション後、ＤＭＳＯ中に溶解された被試験化合物を３重で５、１０および２０μｇ／ｍｌで添加し、必要に応じてより低い濃度で試験する。ＤＭＳＯは賦形剤対照用に３重のウェルに添加される。Ｃ７５は３重で５および１０μｇ／ｍｌで陽性対照として実行される。４時間のインキュベーション後、［１４Ｃ］酢酸（１０μｌ量）０．２５μＣｉを各ウェルに添加する。
【００８９】
２時間の追加のインキュベーション後、培地をウェルから吸引し、クロロホルム：メタノール（２：１）８００μｌおよび４ｍＭ  ＭｇＣｌ２  ７００μｌを各ウェルに添加する。各ウェルの内容物を１．５ｍｌエッペンドルフチューブに移し、高速エッペンドルフ微量高速遠心機５４１５Ｄにおいて２分間全速で回転させる。水性（上部）層の除去後、追加のクロロホルム：メタノール（２：１）７００μｌおよび４ｍＭ  ＭｇＣｌ２  ５００μｌを各ウェルに添加し、次いで上記の通り１分間、遠心分離する。水性層はパスツールピペットで除去され、廃棄される。追加のクロロホルム：メタノール（２：１）４００μｌおよび４ｍＭ  ＭｇＣｌ２  ２００μｌを各チューブに添加し、次いで遠心分離し、水性層は廃棄される。下部（有機）層は、シンチレーションガラス瓶の中へ移され、４０℃でＮ２ガス下に乾燥される。乾燥したら、シンチラント（ＡＰＢ＃ＮＢＣ５１０４）３ｍｌを添加し、ガラス瓶を１４Ｃについてカウントする。ベックマンシンチレーションカウンタにより、３重の平均ｃｐｍ値が計算される。
【００９０】
化合物のＩＣ５０は、対照と比べ脂質への［１４Ｃ］酢酸取込みの５０％削減をもたらす薬剤の濃度として定義される。これは、試験される各阻害剤の濃度に対する平均ｃｐｍをプロットし、線形回帰を行い、線形回帰、最良適合、ｒ２値、および９５％信頼区間を計算することによって決定される。平均ｃｐｍ値は、各化合物の濃度についてベックマンシンチレーションカウンタ（モデルＬＳ６５００）によって計算される。線形回帰、最良適合、ｒ２、および９５％信頼区間の計算は、プリズムバージョン３．０（グラフパッドソフトウェア（Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ））を用いて計算される。
【００９１】
カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ−１（ＣＰＴ−１）アッセイ
ＣＰＴ−１は、マロニル−ＣｏＡによって阻害されるアシル−ＣｏＡからアシル−カルニチンへの長鎖脂肪酸のＡＴＰ依存転移を触媒する。ＣＰＴ−１は活性のためにミトコンドリア膜を必要とするため、酵素活性は膜透過細胞またはミトコンドリアにおいて測定される。このアッセイでは膜透過細胞を使用し、［メチル−１４Ｃ］Ｌ−カルニチンの有機的に可溶性のアシル−カルニチン誘導体への転移を測定する。
【００９２】
ＭＣＦ−７細胞を対照、薬剤、およびマロニル−ＣｏＡの３重で２４ウェルプレートにおいて１０６細胞で１０％ウシ胎仔血清を有するＤＭＥＭ中に塗布する。アッセイを開始する２時間前に、薬剤はＤＭＳＯ中１０ｍｇ／ｍｌで原液から作られた指示濃度で添加され、賦形剤対照は薬剤を有さないＤＭＳＯで構成される。マロニル−ＣｏＡは無傷細胞に入ることができないため、アッセイバッファーにおいてのみ、薬剤で前インキュベートされていない細胞に添加される。一夜３７℃でのインキュベーション後、培地を除去し、５０ｍＭイミダゾール、７０ｍＭ  ＫＣｌ、８０ｍＭショ糖、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＤＴＴ、１ｍＭ  ＫＣＮ、１ｍＭ  ＡＴＰ、０．１％脂肪酸フリーウシ血清アルブミン、７０μＭパルミトイル−ＣｏＡ、０．２５μＣｉ［メチル−１４Ｃ］Ｌ−カルニチン、薬剤を有する４０μｇジギトニン、ＤＭＳＯ賦形剤対照、または２０μＭマロニル−ＣｏＡで構成されるアッセイバッファー７００μｌと交換する。アッセイバッファー中の薬剤およびＤＭＳＯの濃度は、２時間の前インキュベーションで用いられるものと同一である。６分間、３７℃でのインキュベーション後、冷えた４Ｍ過塩素酸５００μｌの添加によって反応を停止する。次いで、細胞を回収し、１３，０００ｘｇで５分間、遠心分離する。沈殿物を氷のように冷えた２ｍＭ過塩素酸５００μｌで洗浄し、再び遠心分離する。結果として生じる沈殿物を８００μｌのｄＨ２Ｏ中に再懸濁し、ブタノール１５０μｌで抽出する。ブタノール相は、液体シンチレーションによってカウントされ、これはアシルカルニチン誘導体を表す。
【００９３】
新規のＦＡＳ阻害剤の減量スクリーン
バルブ／Ｃマウス（ジャクソン研究所（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ））が初期減量スクリーニング用に利用される。動物は温度および１２時間日／夜周期室に収容され、マウス飼料および水を自由に与えられる。マウス３匹を１実験当り３重の賦形剤対照で試験される各化合物用に利用する。実験のために、マウスを個別に試験される各化合物用に３匹ケージに収容する。化合物を３０ｍｇ／ｋｇの用量で与える場合には１０ｍｇ／ｍｌで、６０ｍｇ／ｋｇの用量で与える場合には３０ｍｇ／ｍｌでＤＭＳＯ中に希釈し、マウスに対し約１００μｌのＤＭＳＯ中６０ｍｇ／ｋｇまたは賦形剤のみを腹腔内注射する。マウスを毎日観察し、体重を量り、平均体重および標準誤差をエクセル（マイクロソフト）で計算する。実験は、処置動物がその処置前体重に達するまで継続する。選択化合物を代謝ケージに収容された動物において試験する。
【００９４】
図５は、減量についての一部のインビボ試験の結果を示す。動物の投与は、単一の代謝ケージへの動物３匹によるスクリーニング実験と同一である。動物の体重、水および飼料消費量、かつ尿および糞便の生成量を毎日測定する。マウス飼料で維持した３匹の痩せたバルブ／Ｃマウス（ハーラン（Ｈａｒｌａｎ））に対し、０日に指示用量で化合物、または同等量の賦形剤（ＤＭＳＯ）対照を投与する。化合物６を４０μｌ  ＤＭＳＯ中に可溶化すると同時に、化合物８を６０μｌ  ＤＭＳＯ中に可溶化した。すべて腹腔内注射された。体重は指示日に測定された。エラーバーは平均標準誤差を表す。
【００９５】
抗菌特性
微量液体希釈アッセイを用いて化合物の抗菌活性を評価する。化合物は２倍連続希釈で試験され、可視増殖を阻害する濃度（対照の１０％でＯＤ６００）はＭＩＣと定義される。試験された微生物としては、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）（ＡＴＣＣ＃２９２１３）、エンテロコッカスフェーカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）（ＡＴＣＣ＃２９２１２）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）（ＡＴＣＣ＃２７８５３）、および大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）（ＡＴＣＣ＃２５９２２）が挙げられる。アッセイは、２つの増殖培地、ミューラーヒントンブロスおよびトリプチケースソイ（Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ  Ｓｏｙ）ブロスにおいて行われる。
【００９６】
血液（トリプチケースソイ（Ｔｓｏｙ）／５％ヒツジ血液）寒天プレートを、１０％グリセロール含有トリプチケースソイブロス中に維持された凍結ストックから接種し、一夜３７℃にインキュベートする。濁度が０．５マクファーランド（ＭｃＦａｒｌａｎｄ）標準の濁度に匹敵するようにコロニーを滅菌ブロス中に懸濁する。接種材料を滅菌ブロス（ミューラーヒントンまたはトリプチケースソイ）中で１：１０に希釈し、１９５μｌを９６ウェルプレートのウェルごとに分注する。ＤＭＳＯ中に溶解した被試験化合物を以下の濃度、すなわち２重で２５、１２．５、６．２５、３．１２５、１．５６、および０．７８μｇ／ｍｌで５μｌ量のウェルに添加する。追加の濃度は、必要に応じて試験される。５μｌのＤＭＳＯを賦形剤対照として２重のウェルに添加する。陽性対照化合物、バンコマイシン（腸球菌（Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ）および黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ））およびトブラマイシン（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）および緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ））の連続希釈が各実行に含まれる。
【００９７】
２４時間の３７℃でのインキュベーション後、プレートをモレキュラーデバイス社スペクトラマックスプラス分光測光器によりＯＤ６００で読む。平均ＯＤ６００値はソフトマックス（ＳＯＦＴｍａｘ）ＰＲＯソフトウェア（モレキュラーデバイス社（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ））を用いて計算され、ＭＩＣ値はプリズムバージョン３．０２（グラフパッドソフトウェア（Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）、サンディエゴ）を用いて線形回帰分析によって判定される。ＭＩＣは、賦形剤対照測定値の１０％に相当するＯＤ６００測定値を生じるのに必要な化合物の濃度と定義される。
【００９８】
抗腫瘍活性のインビボ試験
ｎｕ／ｎｕ雌マウス（ハーラン（Ｈａｒｌａｎ））におけるヒト結腸癌細胞系、ＨＣＴ−１１６の皮下側腹異種移植片を用いて化合物１のインビボでの抗腫瘍効果を試験した。全動物実験は所内動物実験委員会のガイドラインを順守した。１０７ＨＣＴ−１１６細胞（約０．１ｍｌ充填細胞）を、１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ中培養物から胸腺欠損マウス２０匹へ異種移植した。投与は、測定可能な腫瘍が接種後約３日で発現した場合に開始した。化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）を４０μｌ  ＤＭＳＯの中へ希釈し、腹腔内（ｉ．ｐ．）投与した。動物１１匹には矢印によって指示された日に１０ｍｇ／ｋｇのＪＭＭ−ＩＩＩ−２３１をｉ．ｐ．投与し、１１匹にはＤＭＳＯ対照を投与した。腫瘍は指示された日に測定された。化合物１を投与されたマウス１匹が反復ｉ．ｐ．注射により１０日目に死亡した。結果は図４に示されている。エラーバーは平均標準誤差を表す。
【００９９】
ｎｕ／ｎｕ雌マウス（ハーラン（Ｈａｒｌａｎ））におけるヒト結腸癌細胞系、ＨＣＴ−１１６の皮下側腹異種移植片を用いて、化合物７および化合物３のインビボでの抗腫瘍効果を試験した。全動物実験は所内動物実験委員会のガイドラインを順守した。１０７ＨＣＴ−１１６細胞（約０．１ｍｌ充填細胞）を、１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ中培養物から胸腺欠損マウス１５匹へ異種移植した。投与は、測定可能な腫瘍が接種後約４日で発現した場合に開始した。化合物７および化合物３の両方（１０ｍｇ／ｋｇ）を２０μｌ  ＤＭＳＯの中へ希釈し、腹腔内（ｉ．ｐ．）投与した。動物５匹には矢印によって指示された日にｉ．ｐ．投与し、５匹にはＤＭＳＯ対照を投与した。腫瘍は指示された日に測定された。結果は図３に示されている。エラーバーは平均標準誤差を表す。
【０１００】
生物学的試験の結果
【０１０１】
【表２】
2005533107.tif 000025
【０１０２】
【表３】
2005533107.tif 000026
【０１０３】
【表４】
2005533107.tif 000027
【０１０４】
【表５】
2005533107.tif 000028
【図面の簡単な説明】
【０１０５】
【図１】本発明に係る特定の化合物を製造するための合成スキームを示す図である。
【図２】本発明に係る特定の化合物を製造するための合成スキームを示す図である。
【図３】本発明に係る特定の化合物の抗腫瘍特性のインビボ試験の結果を示す図である。
【図４】本発明に係る異なる化合物の抗腫瘍特性のインビボ試験の結果を示す図である。
【図５】本発明に係る特定の化合物の減量のためのインビボ試験の結果を示す図である。
【図１】
2005533107.tif 000053
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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