(57)【要約】      （修正有）【課題】老化バイオマーカー及びその利用方法を提供すること。【解決手段】被検体から採取された体液の細胞外小胞におけるタンパク質群（A）及びタンパク質群（B）からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質を検出する工程を含む、老化の検査方法。タンパク質群（A）からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質の量又は濃度がカットオフ値以上である場合に、被検体が老化していると判定する工程、並びにタンパク質群（B）からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質の量又は濃度がカットオフ値以下である場合に、被検体が老化していると判定する工程からなる群より選択される少なくとも1種の工程を含む、老化の検査方法。カットオフ値が、非老化被検体から採取された体液の細胞外小胞における対応タンパク質の量又は濃度の値の、3〜5倍の値である、老化の検査方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
老化を検査する方法であって、
（1）被検体から採取された体液の細胞外小胞における、タンパク質群（A）、及びタンパク質群（B）：
（A）Growth factor receptor-bound protein 2、MOB kinase activator 1B、BRCA1-A complex subunit RAP80、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Ig gamma-3 chain C region、Decorin、Complement C1q subcomponent subunit C、Complement C1s-A subcomponent、Complement C1r-A subcomponent、Amyloid beta A4 protein、14-3-3 protein gamma、Programmed cell death protein 6、Protein LAP2、Bridging integrator 2、Golgi membrane protein 1、Paired box protein Pax-7、Calnexin、Condensin-2 complex subunit G2、Myc target protein 1、Complement C1q subcomponent subunit A、Biglycan、Ig kappa chain V-VI region NQ2-6.1、Complement C1q subcomponent subunit B、Hippocalcin-like protein 1、Src kinase-associated phosphoprotein 2、Integrin beta-2、RNA-binding protein MEX3B、Talin-1、Interferon-induced transmembrane protein 2、Polymeric immunoglobulin receptor、Programmed cell death 6-interacting protein、Ig kappa chain C region、Histone H1t、Immunoglobulin J chain、Ig kappa chain V-VI region J539、Lymphocyte antigen 6E、Coronin-1A、Serglycin、Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10、Tetraspanin-9、Interferon-induced transmembrane protein 3、14-3-3 protein theta、Platelet glycoprotein IX、Ig kappa chain V-III region PC 7183、CD5 antigen-like、SLAM family member 5、Synaptosomal-associated protein 23、Fibrinogen alpha chain、Beta-parvin、Ig kappa chain V-V region K2、Vinculin、Trem-like transcript 1 protein、Glucose-6-phosphate isomerase、Platelet glycoprotein Ib beta chain、Filamin-A、Integrin alpha-6、Ig mu chain C region secreted form、Laminin subunit gamma-1、Sorcin、Ras-related protein Rab-27B、Platelet factor 4、Ig kappa chain V-II region 26-10、Apolipoprotein A-IV、Signaling lymphocytic activation molecule、Thrombospondin-1、H-2 class I histocompatibility antigen, K-B alpha chain、Alpha-actinin-1、Collagen alpha-2(VI) chain、Alpha-1-antitrypsin 1-4、Integrin alpha-IIb、Sodium-dependent serotonin transporter、Transforming protein RhoA、14-3-3 protein zeta/delta、14-3-3 protein eta、P-selectin、Platelet glycoprotein Ib alpha chain、Vesicle-associated membrane protein 3、EGF-containing fibulin-like extracellular matrix protein 1、Integrin beta-1、Pituitary tumor-transforming gene 1 protein-interacting protein、Alpha-1-antitrypsin 1-5、Cysteine and glycine-rich protein 1、Alpha-1-antitrypsin 1-2、Tropomyosin alpha-4 chain、Annexin A5、Multimerin-1、CD9 antigen、EMILIN-1、Mucin-13、Vesicle-associated membrane protein 8、Tetraspanin-14、Ig heavy chain V region 6.96、Adenylyl cyclase-associated protein 1、60S acidic ribosomal protein P2、BRCA1-A complex subunit RAP80、Growth factor receptor-bound protein 2、Ig gamma-2B chain C region、MOB kinase activator 1B、Complement C1s-B subcomponent、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate 5-phosphatase 1、Ig kappa chain V-V region MOPC 149、Beta-glucuronidase、Ig heavy chain V region 3-6、Glutathione S-transferase P 1、Fibulin-2、TBC domain-containing protein kinase-like protein、Transmembrane protein 179B、RAC-gamma serine/threonine-protein kinase、Decorin、Programmed cell death protein 6、Cytochrome c oxidase subunit 6B1、Hippocalcin-like protein 1、及びGolgi membrane protein 1からなるタンパク質群、並びに
（B）Secretoglobin family 2B member 2、Transmembrane protein 201、Gamma-tubulin complex component 5、Dedicator of cytokinesis protein 5、Deuterosome protein 1、Tudor domain-containing protein 6、Monofunctional C1-tetrahydrofolate synthase, mitochondrial、Calpain small subunit 2、RB1-inducible coiled-coil protein 1、Prolactin-7C1、Serine/threonine-protein kinase mTOR、Versican core protein、Coiled-coil domain-containing protein R3HCC1L、WD repeat-containing protein 90、Keratin, type I cytoskeletal 16、Lysyl oxidase homolog 1、Cilia- and flagella-associated protein 54、Protein SDA1 homolog、Annexin A2、Apolipoprotein A-II、Complement factor B、Transmembrane protein 169、Secretoglobin family 2B member 2、Calpain small subunit 2、Integrin alpha-5、Transmembrane protein 169、Dedicator of cytokinesis protein 5、Ras-related protein Rab-6B、Keratin, type II cytoskeletal 2 oral、Versican core protein、Hydrocephalus-inducing protein、Chorion-specific transcription factor GCMb、Deuterosome protein 1、Endothelin-converting enzyme 2、Collagen alpha-6(VI) chain、及びCathelin-related antimicrobial peptideからなるタンパク質群
からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質を検出する工程を含む、検査方法。
【請求項２】
さらに、
（2a）前記工程（1）で検出されたタンパク質群（A）からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質の量又は濃度がカットオフ値以上である場合に、前記被検体が老化していると判定する工程、並びに
（2b）前記工程（1）で検出されたタンパク質群（B）からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質の量又は濃度がカットオフ値以下である場合に、前記被検体が老化していると判定する工程
からなる群より選択される少なくとも1種の工程を含む、請求項１に記載の検査方法。
【請求項３】
前記工程（2a）における前記カットオフ値が、非老化被検体から採取された体液の細胞外小胞における対応タンパク質の量又は濃度の値の、3〜5倍の値である、請求項２に記載の検査方法。
【請求項４】
前記工程（2b）における前記カットオフ値が、非老化被検体から採取された体液の細胞外小胞における対応タンパク質の量又は濃度の値の、0.5〜0.8倍の値である、請求項２又は３
【請求項５】
前記体液が全血、血漿、及び血清からなる群より選択される少なくとも1種である、請求項１〜４のいずれかに記載の検査方法。
【請求項６】
前記タンパク質（A）群が（A1）Growth factor receptor-bound protein 2、MOB kinase activator 1B、BRCA1-A complex subunit RAP80、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Ig gamma-3 chain C region、Decorin、Complement C1q subcomponent subunit C、Complement C1s-A subcomponent、Complement C1r-A subcomponent、Amyloid beta A4 protein、Ig heavy chain V region 6.96、Adenylyl cyclase-associated protein 1、60S acidic ribosomal protein P2、BRCA1-A complex subunit RAP80、Growth factor receptor-bound protein 2、Ig gamma-2B chain C region、MOB kinase activator 1B、Complement C1s-B subcomponent、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate 5-phosphatase 1、Ig kappa chain V-V region MOPC 149、Beta-glucuronidase、Ig heavy chain V region 3-6、Glutathione S-transferase P 1、Fibulin-2、TBC domain-containing protein kinase-like protein、Transmembrane protein 179B、RAC-gamma serine/threonine-protein kinase、Decorin、Programmed cell death protein 6、Cytochrome c oxidase subunit 6B1、Hippocalcin-like protein 1、及びGolgi membrane protein 1からなる群である、請求項１〜５のいずれかに記載の検査方法。
【請求項７】
前記タンパク質（A1）群が（A2）Ig gamma-3 chain C region、Decorin、Complement C1q subcomponent subunit C、Complement C1s-A subcomponent、Complement C1r-A subcomponent、及びAmyloid beta A4 proteinからなる群であり、且つ
前記タンパク質（B1）群が（B2）Secretoglobin family 2B member 2、Calpain small subunit 2、Transmembrane protein 169、Gamma-tubulin complex component 5、及びDedicator of cytokinesis protein 5からなる群である、
請求項６に記載の検査方法。
【請求項８】
前記被検体がマウスである、請求項１〜７のいずれかに記載の検査方法。
【請求項９】
タンパク質群（A）、及びタンパク質群（B）：
（A）Growth factor receptor-bound protein 2、MOB kinase activator 1B、BRCA1-A complex subunit RAP80、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Ig gamma-3 chain C region、Decorin、Complement C1q subcomponent subunit C、Complement C1s-A subcomponent、Complement C1r-A subcomponent、Amyloid beta A4 protein、14-3-3 protein gamma、Programmed cell death protein 6、Protein LAP2、Bridging integrator 2、Golgi membrane protein 1、Paired box protein Pax-7、Calnexin、Condensin-2 complex subunit G2、Myc target protein 1、Complement C1q subcomponent subunit A、Biglycan、Ig kappa chain V-VI region NQ2-6.1、Complement C1q subcomponent subunit B、Hippocalcin-like protein 1、Src kinase-associated phosphoprotein 2、Integrin beta-2、RNA-binding protein MEX3B、Talin-1、Interferon-induced transmembrane protein 2、Polymeric immunoglobulin receptor、Programmed cell death 6-interacting protein、Ig kappa chain C region、Histone H1t、Immunoglobulin J chain、Ig kappa chain V-VI region J539、Lymphocyte antigen 6E、Coronin-1A、Serglycin、Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10、Tetraspanin-9、Interferon-induced transmembrane protein 3、14-3-3 protein theta、Platelet glycoprotein IX、Ig kappa chain V-III region PC 7183、CD5 antigen-like、SLAM family member 5、Synaptosomal-associated protein 23、Fibrinogen alpha chain、Beta-parvin、Ig kappa chain V-V region K2、Vinculin、Trem-like transcript 1 protein、Glucose-6-phosphate isomerase、Platelet glycoprotein Ib beta chain、Filamin-A、Integrin alpha-6、Ig mu chain C region secreted form、Laminin subunit gamma-1、Sorcin、Ras-related protein Rab-27B、Platelet factor 4、Ig kappa chain V-II region 26-10、Apolipoprotein A-IV、Signaling lymphocytic activation molecule、Thrombospondin-1、H-2 class I histocompatibility antigen, K-B alpha chain、Alpha-actinin-1、Collagen alpha-2(VI) chain、Alpha-1-antitrypsin 1-4、Integrin alpha-IIb、Sodium-dependent serotonin transporter、Transforming protein RhoA、14-3-3 protein zeta/delta、14-3-3 protein eta、P-selectin、Platelet glycoprotein Ib alpha chain、Vesicle-associated membrane protein 3、EGF-containing fibulin-like extracellular matrix protein 1、Integrin beta-1、Pituitary tumor-transforming gene 1 protein-interacting protein、Alpha-1-antitrypsin 1-5、Cysteine and glycine-rich protein 1、Alpha-1-antitrypsin 1-2、Tropomyosin alpha-4 chain、Annexin A5、Multimerin-1、CD9 antigen、EMILIN-1、Mucin-13、Vesicle-associated membrane protein 8、Tetraspanin-14、Ig heavy chain V region 6.96、Adenylyl cyclase-associated protein 1、60S acidic ribosomal protein P2、BRCA1-A complex subunit RAP80、Growth factor receptor-bound protein 2、Ig gamma-2B chain C region、MOB kinase activator 1B、Complement C1s-B subcomponent、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate 5-phosphatase 1、Ig kappa chain V-V region MOPC 149、Beta-glucuronidase、Ig heavy chain V region 3-6、Glutathione S-transferase P 1、Fibulin-2、TBC domain-containing protein kinase-like protein、Transmembrane protein 179B、RAC-gamma serine/threonine-protein kinase、Decorin、Programmed cell death protein 6、Cytochrome c oxidase subunit 6B1、Hippocalcin-like protein 1、及びGolgi membrane protein 1からなるタンパク質群、並びに
（B）Secretoglobin family 2B member 2、Transmembrane protein 201、Gamma-tubulin complex component 5、Dedicator of cytokinesis protein 5、Deuterosome protein 1、Tudor domain-containing protein 6、Monofunctional C1-tetrahydrofolate synthase, mitochondrial、Calpain small subunit 2、RB1-inducible coiled-coil protein 1、Prolactin-7C1、Serine/threonine-protein kinase mTOR、Versican core protein、Coiled-coil domain-containing protein R3HCC1L、WD repeat-containing protein 90、Keratin, type I cytoskeletal 16、Lysyl oxidase homolog 1、Cilia- and flagella-associated protein 54、Protein SDA1 homolog、Annexin A2、Apolipoprotein A-II、Complement factor B、Transmembrane protein 169、Secretoglobin family 2B member 2、Calpain small subunit 2、Integrin alpha-5、Transmembrane protein 169、Dedicator of cytokinesis protein 5、Ras-related protein Rab-6B、Keratin, type II cytoskeletal 2 oral、Versican core protein、Hydrocephalus-inducing protein、Chorion-specific transcription factor GCMb、Deuterosome protein 1、Endothelin-converting enzyme 2、Collagen alpha-6(VI) chain、及びCathelin-related antimicrobial peptideからなるタンパク質群
からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質の検出剤を含む、老化の検査薬。
【請求項１０】
被検動物から採取された体液の細胞外小胞における、タンパク質群（A）、及びタンパク質群（B）：
（A）Growth factor receptor-bound protein 2、MOB kinase activator 1B、BRCA1-A complex subunit RAP80、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Ig gamma-3 chain C region、Decorin、Complement C1q subcomponent subunit C、Complement C1s-A subcomponent、Complement C1r-A subcomponent、Amyloid beta A4 protein、14-3-3 protein gamma、Programmed cell death protein 6、Protein LAP2、Bridging integrator 2、Golgi membrane protein 1、Paired box protein Pax-7、Calnexin、Condensin-2 complex subunit G2、Myc target protein 1、Complement C1q subcomponent subunit A、Biglycan、Ig kappa chain V-VI region NQ2-6.1、Complement C1q subcomponent subunit B、Hippocalcin-like protein 1、Src kinase-associated phosphoprotein 2、Integrin beta-2、RNA-binding protein MEX3B、Talin-1、Interferon-induced transmembrane protein 2、Polymeric immunoglobulin receptor、Programmed cell death 6-interacting protein、Ig kappa chain C region、Histone H1t、Immunoglobulin J chain、Ig kappa chain V-VI region J539、Lymphocyte antigen 6E、Coronin-1A、Serglycin、Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10、Tetraspanin-9、Interferon-induced transmembrane protein 3、14-3-3 protein theta、Platelet glycoprotein IX、Ig kappa chain V-III region PC 7183、CD5 antigen-like、SLAM family member 5、Synaptosomal-associated protein 23、Fibrinogen alpha chain、Beta-parvin、Ig kappa chain V-V region K2、Vinculin、Trem-like transcript 1 protein、Glucose-6-phosphate isomerase、Platelet glycoprotein Ib beta chain、Filamin-A、Integrin alpha-6、Ig mu chain C region secreted form、Laminin subunit gamma-1、Sorcin、Ras-related protein Rab-27B、Platelet factor 4、Ig kappa chain V-II region 26-10、Apolipoprotein A-IV、Signaling lymphocytic activation molecule、Thrombospondin-1、H-2 class I histocompatibility antigen, K-B alpha chain、Alpha-actinin-1、Collagen alpha-2(VI) chain、Alpha-1-antitrypsin 1-4、Integrin alpha-IIb、Sodium-dependent serotonin transporter、Transforming protein RhoA、14-3-3 protein zeta/delta、14-3-3 protein eta、P-selectin、Platelet glycoprotein Ib alpha chain、Vesicle-associated membrane protein 3、EGF-containing fibulin-like extracellular matrix protein 1、Integrin beta-1、Pituitary tumor-transforming gene 1 protein-interacting protein、Alpha-1-antitrypsin 1-5、Cysteine and glycine-rich protein 1、Alpha-1-antitrypsin 1-2、Tropomyosin alpha-4 chain、Annexin A5、Multimerin-1、CD9 antigen、EMILIN-1、Mucin-13、Vesicle-associated membrane protein 8、Tetraspanin-14、Ig heavy chain V region 6.96、Adenylyl cyclase-associated protein 1、60S acidic ribosomal protein P2、BRCA1-A complex subunit RAP80、Growth factor receptor-bound protein 2、Ig gamma-2B chain C region、MOB kinase activator 1B、Complement C1s-B subcomponent、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate 5-phosphatase 1、Ig kappa chain V-V region MOPC 149、Beta-glucuronidase、Ig heavy chain V region 3-6、Glutathione S-transferase P 1、Fibulin-2、TBC domain-containing protein kinase-like protein、Transmembrane protein 179B、RAC-gamma serine/threonine-protein kinase、Decorin、Programmed cell death protein 6、Cytochrome c oxidase subunit 6B1、Hippocalcin-like protein 1、及びGolgi membrane protein 1からなるタンパク質群、並びに
（B）Secretoglobin family 2B member 2、Transmembrane protein 201、Gamma-tubulin complex component 5、Dedicator of cytokinesis protein 5、Deuterosome protein 1、Tudor domain-containing protein 6、Monofunctional C1-tetrahydrofolate synthase, mitochondrial、Calpain small subunit 2、RB1-inducible coiled-coil protein 1、Prolactin-7C1、Serine/threonine-protein kinase mTOR、Versican core protein、Coiled-coil domain-containing protein R3HCC1L、WD repeat-containing protein 90、Keratin, type I cytoskeletal 16、Lysyl oxidase homolog 1、Cilia- and flagella-associated protein 54、Protein SDA1 homolog、Annexin A2、Apolipoprotein A-II、Complement factor B、Transmembrane protein 169、Secretoglobin family 2B member 2、Calpain small subunit 2、Integrin alpha-5、Transmembrane protein 169、Dedicator of cytokinesis protein 5、Ras-related protein Rab-6B、Keratin, type II cytoskeletal 2 oral、Versican core protein、Hydrocephalus-inducing protein、Chorion-specific transcription factor GCMb、Deuterosome protein 1、Endothelin-converting enzyme 2、Collagen alpha-6(VI) chain、及びCathelin-related antimicrobial peptideからなるタンパク質群
からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質の量又は濃度を指標とする、老化モデル動物のスクリーニング方法。
【請求項１１】
前記指標の値がカットオフ値以上である場合に、前記動物を老化モデル動物として選択する工程を含む、請求項１０に記載のスクリーニング方法。
【請求項１２】
タンパク質群（A）：
（A）Growth factor receptor-bound protein 2、MOB kinase activator 1B、BRCA1-A complex subunit RAP80、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Ig gamma-3 chain C region、Decorin、Complement C1q subcomponent subunit C、Complement C1s-A subcomponent、Complement C1r-A subcomponent、Amyloid beta A4 protein、14-3-3 protein gamma、Programmed cell death protein 6、Protein LAP2、Bridging integrator 2、Golgi membrane protein 1、Paired box protein Pax-7、Calnexin、Condensin-2 complex subunit G2、Myc target protein 1、Complement C1q subcomponent subunit A、Biglycan、Ig kappa chain V-VI region NQ2-6.1、Complement C1q subcomponent subunit B、Hippocalcin-like protein 1、Src kinase-associated phosphoprotein 2、Integrin beta-2、RNA-binding protein MEX3B、Talin-1、Interferon-induced transmembrane protein 2、Polymeric immunoglobulin receptor、Programmed cell death 6-interacting protein、Ig kappa chain C region、Histone H1t、Immunoglobulin J chain、Ig kappa chain V-VI region J539、Lymphocyte antigen 6E、Coronin-1A、Serglycin、Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10、Tetraspanin-9、Interferon-induced transmembrane protein 3、14-3-3 protein theta、Platelet glycoprotein IX、Ig kappa chain V-III region PC 7183、CD5 antigen-like、SLAM family member 5、Synaptosomal-associated protein 23、Fibrinogen alpha chain、Beta-parvin、Ig kappa chain V-V region K2、Vinculin、Trem-like transcript 1 protein、Glucose-6-phosphate isomerase、Platelet glycoprotein Ib beta chain、Filamin-A、Integrin alpha-6、Ig mu chain C region secreted form、Laminin subunit gamma-1、Sorcin、Ras-related protein Rab-27B、Platelet factor 4、Ig kappa chain V-II region 26-10、Apolipoprotein A-IV、Signaling lymphocytic activation molecule、Thrombospondin-1、H-2 class I histocompatibility antigen, K-B alpha chain、Alpha-actinin-1、Collagen alpha-2(VI) chain、Alpha-1-antitrypsin 1-4、Integrin alpha-IIb、Sodium-dependent serotonin transporter、Transforming protein RhoA、14-3-3 protein zeta/delta、14-3-3 protein eta、P-selectin、Platelet glycoprotein Ib alpha chain、Vesicle-associated membrane protein 3、EGF-containing fibulin-like extracellular matrix protein 1、Integrin beta-1、Pituitary tumor-transforming gene 1 protein-interacting protein、Alpha-1-antitrypsin 1-5、Cysteine and glycine-rich protein 1、Alpha-1-antitrypsin 1-2、Tropomyosin alpha-4 chain、Annexin A5、Multimerin-1、CD9 antigen、EMILIN-1、Mucin-13、Vesicle-associated membrane protein 8、Tetraspanin-14、Ig heavy chain V region 6.96、Adenylyl cyclase-associated protein 1、60S acidic ribosomal protein P2、BRCA1-A complex subunit RAP80、Growth factor receptor-bound protein 2、Ig gamma-2B chain C region、MOB kinase activator 1B、Complement C1s-B subcomponent、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate 5-phosphatase 1、Ig kappa chain V-V region MOPC 149、Beta-glucuronidase、Ig heavy chain V region 3-6、Glutathione S-transferase P 1、Fibulin-2、TBC domain-containing protein kinase-like protein、Transmembrane protein 179B、RAC-gamma serine/threonine-protein kinase、Decorin、Programmed cell death protein 6、Cytochrome c oxidase subunit 6B1、Hippocalcin-like protein 1、及びGolgi membrane protein 1からなるタンパク質群
より選択される少なくとも1種のタンパク質の抑制剤、並びに
タンパク質群（B）： 
（B）Secretoglobin family 2B member 2、Transmembrane protein 201、Gamma-tubulin complex component 5、Dedicator of cytokinesis protein 5、Deuterosome protein 1、Tudor domain-containing protein 6、Monofunctional C1-tetrahydrofolate synthase, mitochondrial、Calpain small subunit 2、RB1-inducible coiled-coil protein 1、Prolactin-7C1、Serine/threonine-protein kinase mTOR、Versican core protein、Coiled-coil domain-containing protein R3HCC1L、WD repeat-containing protein 90、Keratin, type I cytoskeletal 16、Lysyl oxidase homolog 1、Cilia- and flagella-associated protein 54、Protein SDA1 homolog、Annexin A2、Apolipoprotein A-II、Complement factor B、Transmembrane protein 169、Secretoglobin family 2B member 2、Calpain small subunit 2、Integrin alpha-5、Transmembrane protein 169、Dedicator of cytokinesis protein 5、Ras-related protein Rab-6B、Keratin, type II cytoskeletal 2 oral、Versican core protein、Hydrocephalus-inducing protein、Chorion-specific transcription factor GCMb、Deuterosome protein 1、Endothelin-converting enzyme 2、Collagen alpha-6(VI) chain、及びCathelin-related antimicrobial peptideからなるタンパク質群
より選択される少なくとも1種のタンパク質の亢進剤
からなる群より選択される少なくとも1種の剤を含有する、抗老化薬。
【請求項１３】
被検物質で処理された動物から採取された体液の細胞外小胞における、タンパク質群（A）、及びタンパク質群（B）：
（A）Growth factor receptor-bound protein 2、MOB kinase activator 1B、BRCA1-A complex subunit RAP80、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Ig gamma-3 chain C region、Decorin、Complement C1q subcomponent subunit C、Complement C1s-A subcomponent、Complement C1r-A subcomponent、Amyloid beta A4 protein、14-3-3 protein gamma、Programmed cell death protein 6、Protein LAP2、Bridging integrator 2、Golgi membrane protein 1、Paired box protein Pax-7、Calnexin、Condensin-2 complex subunit G2、Myc target protein 1、Complement C1q subcomponent subunit A、Biglycan、Ig kappa chain V-VI region NQ2-6.1、Complement C1q subcomponent subunit B、Hippocalcin-like protein 1、Src kinase-associated phosphoprotein 2、Integrin beta-2、RNA-binding protein MEX3B、Talin-1、Interferon-induced transmembrane protein 2、Polymeric immunoglobulin receptor、Programmed cell death 6-interacting protein、Ig kappa chain C region、Histone H1t、Immunoglobulin J chain、Ig kappa chain V-VI region J539、Lymphocyte antigen 6E、Coronin-1A、Serglycin、Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10、Tetraspanin-9、Interferon-induced transmembrane protein 3、14-3-3 protein theta、Platelet glycoprotein IX、Ig kappa chain V-III region PC 7183、CD5 antigen-like、SLAM family member 5、Synaptosomal-associated protein 23、Fibrinogen alpha chain、Beta-parvin、Ig kappa chain V-V region K2、Vinculin、Trem-like transcript 1 protein、Glucose-6-phosphate isomerase、Platelet glycoprotein Ib beta chain、Filamin-A、Integrin alpha-6、Ig mu chain C region secreted form、Laminin subunit gamma-1、Sorcin、Ras-related protein Rab-27B、Platelet factor 4、Ig kappa chain V-II region 26-10、Apolipoprotein A-IV、Signaling lymphocytic activation molecule、Thrombospondin-1、H-2 class I histocompatibility antigen, K-B alpha chain、Alpha-actinin-1、Collagen alpha-2(VI) chain、Alpha-1-antitrypsin 1-4、Integrin alpha-IIb、Sodium-dependent serotonin transporter、Transforming protein RhoA、14-3-3 protein zeta/delta、14-3-3 protein eta、P-selectin、Platelet glycoprotein Ib alpha chain、Vesicle-associated membrane protein 3、EGF-containing fibulin-like extracellular matrix protein 1、Integrin beta-1、Pituitary tumor-transforming gene 1 protein-interacting protein、Alpha-1-antitrypsin 1-5、Cysteine and glycine-rich protein 1、Alpha-1-antitrypsin 1-2、Tropomyosin alpha-4 chain、Annexin A5、Multimerin-1、CD9 antigen、EMILIN-1、Mucin-13、Vesicle-associated membrane protein 8、Tetraspanin-14、Ig heavy chain V region 6.96、Adenylyl cyclase-associated protein 1、60S acidic ribosomal protein P2、BRCA1-A complex subunit RAP80、Growth factor receptor-bound protein 2、Ig gamma-2B chain C region、MOB kinase activator 1B、Complement C1s-B subcomponent、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate 5-phosphatase 1、Ig kappa chain V-V region MOPC 149、Beta-glucuronidase、Ig heavy chain V region 3-6、Glutathione S-transferase P 1、Fibulin-2、TBC domain-containing protein kinase-like protein、Transmembrane protein 179B、RAC-gamma serine/threonine-protein kinase、Decorin、Programmed cell death protein 6、Cytochrome c oxidase subunit 6B1、Hippocalcin-like protein 1、及びGolgi membrane protein 1からなるタンパク質群、並びに
（B）Secretoglobin family 2B member 2、Transmembrane protein 201、Gamma-tubulin complex component 5、Dedicator of cytokinesis protein 5、Deuterosome protein 1、Tudor domain-containing protein 6、Monofunctional C1-tetrahydrofolate synthase, mitochondrial、Calpain small subunit 2、RB1-inducible coiled-coil protein 1、Prolactin-7C1、Serine/threonine-protein kinase mTOR、Versican core protein、Coiled-coil domain-containing protein R3HCC1L、WD repeat-containing protein 90、Keratin, type I cytoskeletal 16、Lysyl oxidase homolog 1、Cilia- and flagella-associated protein 54、Protein SDA1 homolog、Annexin A2、Apolipoprotein A-II、Complement factor B、Transmembrane protein 169、Secretoglobin family 2B member 2、Calpain small subunit 2、Integrin alpha-5、Transmembrane protein 169、Dedicator of cytokinesis protein 5、Ras-related protein Rab-6B、Keratin, type II cytoskeletal 2 oral、Versican core protein、Hydrocephalus-inducing protein、Chorion-specific transcription factor GCMb、Deuterosome protein 1、Endothelin-converting enzyme 2、Collagen alpha-6(VI) chain、及びCathelin-related antimicrobial peptideからなるタンパク質群
からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質の量又は濃度を指標とする、抗老化薬の有効成分のスクリーニング方法。
【請求項１４】
タンパク質群（A）に関する前記指標の値が、被検物質で処理されていない動物から採取された体液の細胞外小胞における対応タンパク質の量又は濃度（対照値）よりも低い場合に、前記被検物質を抗老化薬の有効成分として選択する工程、並びに
タンパク質群（B）に関する前記指標の値が、被検物質で処理されていない動物から採取された体液の細胞外小胞における対応タンパク質の量又は濃度（対照値）よりも高い場合に、前記被検物質を抗老化薬の有効成分として選択する工程
からなる群より選択される少なくとも1種の工程を含む、請求項１３に記載のスクリーニング方法。
【請求項１５】
被検物質で処理された動物から採取された体液の細胞外小胞における、タンパク質群（A）、及びタンパク質群（B）：
（A）Growth factor receptor-bound protein 2、MOB kinase activator 1B、BRCA1-A complex subunit RAP80、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Ig gamma-3 chain C region、Decorin、Complement C1q subcomponent subunit C、Complement C1s-A subcomponent、Complement C1r-A subcomponent、Amyloid beta A4 protein、14-3-3 protein gamma、Programmed cell death protein 6、Protein LAP2、Bridging integrator 2、Golgi membrane protein 1、Paired box protein Pax-7、Calnexin、Condensin-2 complex subunit G2、Myc target protein 1、Complement C1q subcomponent subunit A、Biglycan、Ig kappa chain V-VI region NQ2-6.1、Complement C1q subcomponent subunit B、Hippocalcin-like protein 1、Src kinase-associated phosphoprotein 2、Integrin beta-2、RNA-binding protein MEX3B、Talin-1、Interferon-induced transmembrane protein 2、Polymeric immunoglobulin receptor、Programmed cell death 6-interacting protein、Ig kappa chain C region、Histone H1t、Immunoglobulin J chain、Ig kappa chain V-VI region J539、Lymphocyte antigen 6E、Coronin-1A、Serglycin、Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10、Tetraspanin-9、Interferon-induced transmembrane protein 3、14-3-3 protein theta、Platelet glycoprotein IX、Ig kappa chain V-III region PC 7183、CD5 antigen-like、SLAM family member 5、Synaptosomal-associated protein 23、Fibrinogen alpha chain、Beta-parvin、Ig kappa chain V-V region K2、Vinculin、Trem-like transcript 1 protein、Glucose-6-phosphate isomerase、Platelet glycoprotein Ib beta chain、Filamin-A、Integrin alpha-6、Ig mu chain C region secreted form、Laminin subunit gamma-1、Sorcin、Ras-related protein Rab-27B、Platelet factor 4、Ig kappa chain V-II region 26-10、Apolipoprotein A-IV、Signaling lymphocytic activation molecule、Thrombospondin-1、H-2 class I histocompatibility antigen, K-B alpha chain、Alpha-actinin-1、Collagen alpha-2(VI) chain、Alpha-1-antitrypsin 1-4、Integrin alpha-IIb、Sodium-dependent serotonin transporter、Transforming protein RhoA、14-3-3 protein zeta/delta、14-3-3 protein eta、P-selectin、Platelet glycoprotein Ib alpha chain、Vesicle-associated membrane protein 3、EGF-containing fibulin-like extracellular matrix protein 1、Integrin beta-1、Pituitary tumor-transforming gene 1 protein-interacting protein、Alpha-1-antitrypsin 1-5、Cysteine and glycine-rich protein 1、Alpha-1-antitrypsin 1-2、Tropomyosin alpha-4 chain、Annexin A5、Multimerin-1、CD9 antigen、EMILIN-1、Mucin-13、Vesicle-associated membrane protein 8、Tetraspanin-14、Ig heavy chain V region 6.96、Adenylyl cyclase-associated protein 1、60S acidic ribosomal protein P2、BRCA1-A complex subunit RAP80、Growth factor receptor-bound protein 2、Ig gamma-2B chain C region、MOB kinase activator 1B、Complement C1s-B subcomponent、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate 5-phosphatase 1、Ig kappa chain V-V region MOPC 149、Beta-glucuronidase、Ig heavy chain V region 3-6、Glutathione S-transferase P 1、Fibulin-2、TBC domain-containing protein kinase-like protein、Transmembrane protein 179B、RAC-gamma serine/threonine-protein kinase、Decorin、Programmed cell death protein 6、Cytochrome c oxidase subunit 6B1、Hippocalcin-like protein 1、及びGolgi membrane protein 1からなるタンパク質群、並びに
（B）Secretoglobin family 2B member 2、Transmembrane protein 201、Gamma-tubulin complex component 5、Dedicator of cytokinesis protein 5、Deuterosome protein 1、Tudor domain-containing protein 6、Monofunctional C1-tetrahydrofolate synthase, mitochondrial、Calpain small subunit 2、RB1-inducible coiled-coil protein 1、Prolactin-7C1、Serine/threonine-protein kinase mTOR、Versican core protein、Coiled-coil domain-containing protein R3HCC1L、WD repeat-containing protein 90、Keratin, type I cytoskeletal 16、Lysyl oxidase homolog 1、Cilia- and flagella-associated protein 54、Protein SDA1 homolog、Annexin A2、Apolipoprotein A-II、Complement factor B、Transmembrane protein 169、Secretoglobin family 2B member 2、Calpain small subunit 2、Integrin alpha-5、Transmembrane protein 169、Dedicator of cytokinesis protein 5、Ras-related protein Rab-6B、Keratin, type II cytoskeletal 2 oral、Versican core protein、Hydrocephalus-inducing protein、Chorion-specific transcription factor GCMb、Deuterosome protein 1、Endothelin-converting enzyme 2、Collagen alpha-6(VI) chain、及びCathelin-related antimicrobial peptideからなるタンパク質群
からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質の量又は濃度を指標とする、老化亢進性の評価方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、老化バイオマーカー、その利用等に関する。
【背景技術】
【０００２】
日本は超高齢社会に直面し、高齢者の健康維持が重要な問題となっている。この鍵となるのが老化現象の理解であるが、時間的・遺伝的・環境的要因が複雑に絡み合うため、様々な角度からの総合的アプローチが必要である。老化はすべてのヒトに起こる避けられない現象であるが，老化の進行は高齢になるにつれて個人差が顕著になる．さらに、生活習慣病を始め多くの慢性炎症性疾患に、老化現象がアクセルとして働くことで病態進展に関与することが注目されている。従って、老化をターゲットとする治療は、老化現象のみならず、心血管疾患、COPD、メタボリックシンドロームや慢性腎臓病など多くの疾患にも応用可能である。このような背景を受けて、アンチエイジング研究は飛躍的に進んた。これまでに，エストロゲンやテストステロン、可溶性αKlotho、IGF1、ビタミンDなどが知られている。カロリー制限アカゲザルの研究からdehydroepiandrosterone sulfate，インスリン，体温の変化が長期縦断研究の加齢性変化データと一致することも判明した。しかし、未だに決定的な老化のBMがないのが現状である。従って、老化を客観的・経時的・多角的に評価する老化バイオマーカー（BM）の発見が急務である。
【０００３】
生活習慣病を始め多くの慢性炎症性疾患に、老化現象がアクセルとして働くことで病態進展に関与することが注目されている。従って、老化をターゲットとするアンチエイジングを目指した臨床・および基礎研究における老化バイオマーカー開発が急務であった。さらに、慢性炎症性疾患や老化には個人差があるだけでなく、複雑・多様な表現型を示すことから、1種類のバイオマーカーで評価するよりは、マルチバイオマーカーによる個別化医療が求められている。
【０００４】
また、マウスにおける老化指標としてのBM開発も急務である。なぜなら、創薬の開発にあたる大手製薬企業において、老化を評価するためには一匹ずつ屠殺せざるを得なず、また老化を観察するには、マウスですら2年程度が必要である。
【０００５】
血清は、非侵襲的に繰り返し採取可能であるので理想的な検査試料と考えられるものの、そこに含まれる99%以上のタンパク質はバイオマーカーの観点から夾雑物とされる多量タンパク（アルブミン等）であるため、プロテオミクスの観点からは、検査資料としての有用性は低い。例えば、COPDと喘息を鑑別可能なバイオマーカーに関する最近の論文（非特許文献１）では、患者数十人の解析を試みるも、解析が2次元電気泳動法による古い質量分析(MS)技術によるものであっただけでなく、大量夾雑物を含む血清を用いたものであったため、見出されたバイオマーカーはプロトロンビンを含む血清夾雑物のみで、COPD特異的バイオマーカーとは程遠いものであった。
【０００６】
細胞外小胞は、細胞から分泌される膜小胞であり、細胞内のタンパク質や遺伝情報（mRNA, microRNA等）を細胞外に運搬することにより、局所や全身における細胞間の情報伝達を担っている。近年、がんの検査試料として細胞外小胞が注目を集めているものの、老化の検査試料としての有用性については知られていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Am J Respir Crit Care Med. 2011 Jun 15;183(12):1633-43.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、老化バイオマーカー及びその利用方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は上記課題に鑑みて鋭意研究した結果、被検体から採取された体液の細胞外小胞における特定のタンパク質群が、老化バイオマーカーとして有用であることを見出した。この知見に基づいてさらに研究を進めた結果、本発明が完成した。即ち、本発明は、下記の態様を包含する。
【００１０】
項１．  
老化を検査する方法であって、
（1）被検体から採取された体液の細胞外小胞における、タンパク質群（A）、及びタンパク質群（B）：
（A）Growth factor receptor-bound protein 2、MOB kinase activator 1B、BRCA1-A complex subunit RAP80、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Ig gamma-3 chain C region、Decorin、Complement C1q subcomponent subunit C、Complement C1s-A subcomponent、Complement C1r-A subcomponent、Amyloid beta A4 protein、14-3-3 protein gamma、Programmed cell death protein 6、Protein LAP2、Bridging integrator 2、Golgi membrane protein 1、Paired box protein Pax-7、Calnexin、Condensin-2 complex subunit G2、Myc target protein 1、Complement C1q subcomponent subunit A、Biglycan、Ig kappa chain V-VI region NQ2-6.1、Complement C1q subcomponent subunit B、Hippocalcin-like protein 1、Src kinase-associated phosphoprotein 2、Integrin beta-2、RNA-binding protein MEX3B、Talin-1、Interferon-induced transmembrane protein 2、Polymeric immunoglobulin receptor、Programmed cell death 6-interacting protein、Ig kappa chain C region、Histone H1t、Immunoglobulin J chain、Ig kappa chain V-VI region J539、Lymphocyte antigen 6E、Coronin-1A、Serglycin、Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10、Tetraspanin-9、Interferon-induced transmembrane protein 3、14-3-3 protein theta、Platelet glycoprotein IX、Ig kappa chain V-III region PC 7183、CD5 antigen-like、SLAM family member 5、Synaptosomal-associated protein 23、Fibrinogen alpha chain、Beta-parvin、Ig kappa chain V-V region K2、Vinculin、Trem-like transcript 1 protein、Glucose-6-phosphate isomerase、Platelet glycoprotein Ib beta chain、Filamin-A、Integrin alpha-6、Ig mu chain C region secreted form、Laminin subunit gamma-1、Sorcin、Ras-related protein Rab-27B、Platelet factor 4、Ig kappa chain V-II region 26-10、Apolipoprotein A-IV、Signaling lymphocytic activation molecule、Thrombospondin-1、H-2 class I histocompatibility antigen, K-B alpha chain、Alpha-actinin-1、Collagen alpha-2(VI) chain、Alpha-1-antitrypsin 1-4、Integrin alpha-IIb、Sodium-dependent serotonin transporter、Transforming protein RhoA、14-3-3 protein zeta/delta、14-3-3 protein eta、P-selectin、Platelet glycoprotein Ib alpha chain、Vesicle-associated membrane protein 3、EGF-containing fibulin-like extracellular matrix protein 1、Integrin beta-1、Pituitary tumor-transforming gene 1 protein-interacting protein、Alpha-1-antitrypsin 1-5、Cysteine and glycine-rich protein 1、Alpha-1-antitrypsin 1-2、Tropomyosin alpha-4 chain、Annexin A5、Multimerin-1、CD9 antigen、EMILIN-1、Mucin-13、Vesicle-associated membrane protein 8、Tetraspanin-14、Ig heavy chain V region 6.96、Adenylyl cyclase-associated protein 1、60S acidic ribosomal protein P2、BRCA1-A complex subunit RAP80、Growth factor receptor-bound protein 2、Ig gamma-2B chain C region、MOB kinase activator 1B、Complement C1s-B subcomponent、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate 5-phosphatase 1、Ig kappa chain V-V region MOPC 149、Beta-glucuronidase、Ig heavy chain V region 3-6、Glutathione S-transferase P 1、Fibulin-2、TBC domain-containing protein kinase-like protein、Transmembrane protein 179B、RAC-gamma serine/threonine-protein kinase、Decorin、Programmed cell death protein 6、Cytochrome c oxidase subunit 6B1、Hippocalcin-like protein 1、及びGolgi membrane protein 1からなるタンパク質群、並びに
（B）Secretoglobin family 2B member 2、Transmembrane protein 201、Gamma-tubulin complex component 5、Dedicator of cytokinesis protein 5、Deuterosome protein 1、Tudor domain-containing protein 6、Monofunctional C1-tetrahydrofolate synthase, mitochondrial、Calpain small subunit 2、RB1-inducible coiled-coil protein 1、Prolactin-7C1、Serine/threonine-protein kinase mTOR、Versican core protein、Coiled-coil domain-containing protein R3HCC1L、WD repeat-containing protein 90、Keratin, type I cytoskeletal 16、Lysyl oxidase homolog 1、Cilia- and flagella-associated protein 54、Protein SDA1 homolog、Annexin A2、Apolipoprotein A-II、Complement factor B、Transmembrane protein 169、Secretoglobin family 2B member 2、Calpain small subunit 2、Integrin alpha-5、Transmembrane protein 169、Dedicator of cytokinesis protein 5、Ras-related protein Rab-6B、Keratin, type II cytoskeletal 2 oral、Versican core protein、Hydrocephalus-inducing protein、Chorion-specific transcription factor GCMb、Deuterosome protein 1、Endothelin-converting enzyme 2、Collagen alpha-6(VI) chain、及びCathelin-related antimicrobial peptideからなるタンパク質群
からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質を検出する工程を含む、検査方法。
【００１１】
項２．  
さらに、
（2a）前記工程（1）で検出されたタンパク質群（A）からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質の量又は濃度がカットオフ値以上である場合に、前記被検体が老化していると判定する工程、並びに
（2b）前記工程（1）で検出されたタンパク質群（B）からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質の量又は濃度がカットオフ値以下である場合に、前記被検体が老化していると判定する工程
からなる群より選択される少なくとも1種の工程を含む、項１に記載の検査方法。
【００１２】
項３．  
前記工程（2a）における前記カットオフ値が、非老化被検体から採取された体液の細胞外小胞における対応タンパク質の量又は濃度の値の、3〜5倍の値である、項２に記載の検査方法。
【００１３】
項４．  
前記工程（2b）における前記カットオフ値が、非老化被検体から採取された体液の細胞外小胞における対応タンパク質の量又は濃度の値の、0.5〜0.8倍の値である、項２又は３
項５．  
前記体液が全血、血漿、及び血清からなる群より選択される少なくとも1種である、項１〜４のいずれかに記載の検査方法。
【００１４】
項６．  
前記タンパク質（A）群が（A1）Growth factor receptor-bound protein 2、MOB kinase activator 1B、BRCA1-A complex subunit RAP80、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Ig gamma-3 chain C region、Decorin、Complement C1q subcomponent subunit C、Complement C1s-A subcomponent、Complement C1r-A subcomponent、Amyloid beta A4 protein、Ig heavy chain V region 6.96、Adenylyl cyclase-associated protein 1、60S acidic ribosomal protein P2、BRCA1-A complex subunit RAP80、Growth factor receptor-bound protein 2、Ig gamma-2B chain C region、MOB kinase activator 1B、Complement C1s-B subcomponent、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate 5-phosphatase 1、Ig kappa chain V-V region MOPC 149、Beta-glucuronidase、Ig heavy chain V region 3-6、Glutathione S-transferase P 1、Fibulin-2、TBC domain-containing protein kinase-like protein、Transmembrane protein 179B、RAC-gamma serine/threonine-protein kinase、Decorin、Programmed cell death protein 6、Cytochrome c oxidase subunit 6B1、Hippocalcin-like protein 1、及びGolgi membrane protein 1からなる群である、項１〜５のいずれかに記載の検査方法。
【００１５】
項７．  
前記タンパク質（A1）群が（A2）Ig gamma-3 chain C region、Decorin、Complement C1q subcomponent subunit C、Complement C1s-A subcomponent、Complement C1r-A subcomponent、及びAmyloid beta A4 proteinからなる群であり、且つ
前記タンパク質（B1）群が（B2）Secretoglobin family 2B member 2、Calpain small subunit 2、Transmembrane protein 169、Gamma-tubulin complex component 5、及びDedicator of cytokinesis protein 5からなる群である、
項６に記載の検査方法。
【００１６】
項８．  
前記被検体がマウスである、項１〜７のいずれかに記載の検査方法。
【００１７】
項９．  
タンパク質群（A）、及びタンパク質群（B）：
（A）Growth factor receptor-bound protein 2、MOB kinase activator 1B、BRCA1-A complex subunit RAP80、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Ig gamma-3 chain C region、Decorin、Complement C1q subcomponent subunit C、Complement C1s-A subcomponent、Complement C1r-A subcomponent、Amyloid beta A4 protein、14-3-3 protein gamma、Programmed cell death protein 6、Protein LAP2、Bridging integrator 2、Golgi membrane protein 1、Paired box protein Pax-7、Calnexin、Condensin-2 complex subunit G2、Myc target protein 1、Complement C1q subcomponent subunit A、Biglycan、Ig kappa chain V-VI region NQ2-6.1、Complement C1q subcomponent subunit B、Hippocalcin-like protein 1、Src kinase-associated phosphoprotein 2、Integrin beta-2、RNA-binding protein MEX3B、Talin-1、Interferon-induced transmembrane protein 2、Polymeric immunoglobulin receptor、Programmed cell death 6-interacting protein、Ig kappa chain C region、Histone H1t、Immunoglobulin J chain、Ig kappa chain V-VI region J539、Lymphocyte antigen 6E、Coronin-1A、Serglycin、Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10、Tetraspanin-9、Interferon-induced transmembrane protein 3、14-3-3 protein theta、Platelet glycoprotein IX、Ig kappa chain V-III region PC 7183、CD5 antigen-like、SLAM family member 5、Synaptosomal-associated protein 23、Fibrinogen alpha chain、Beta-parvin、Ig kappa chain V-V region K2、Vinculin、Trem-like transcript 1 protein、Glucose-6-phosphate isomerase、Platelet glycoprotein Ib beta chain、Filamin-A、Integrin alpha-6、Ig mu chain C region secreted form、Laminin subunit gamma-1、Sorcin、Ras-related protein Rab-27B、Platelet factor 4、Ig kappa chain V-II region 26-10、Apolipoprotein A-IV、Signaling lymphocytic activation molecule、Thrombospondin-1、H-2 class I histocompatibility antigen, K-B alpha chain、Alpha-actinin-1、Collagen alpha-2(VI) chain、Alpha-1-antitrypsin 1-4、Integrin alpha-IIb、Sodium-dependent serotonin transporter、Transforming protein RhoA、14-3-3 protein zeta/delta、14-3-3 protein eta、P-selectin、Platelet glycoprotein Ib alpha chain、Vesicle-associated membrane protein 3、EGF-containing fibulin-like extracellular matrix protein 1、Integrin beta-1、Pituitary tumor-transforming gene 1 protein-interacting protein、Alpha-1-antitrypsin 1-5、Cysteine and glycine-rich protein 1、Alpha-1-antitrypsin 1-2、Tropomyosin alpha-4 chain、Annexin A5、Multimerin-1、CD9 antigen、EMILIN-1、Mucin-13、Vesicle-associated membrane protein 8、Tetraspanin-14、Ig heavy chain V region 6.96、Adenylyl cyclase-associated protein 1、60S acidic ribosomal protein P2、BRCA1-A complex subunit RAP80、Growth factor receptor-bound protein 2、Ig gamma-2B chain C region、MOB kinase activator 1B、Complement C1s-B subcomponent、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate 5-phosphatase 1、Ig kappa chain V-V region MOPC 149、Beta-glucuronidase、Ig heavy chain V region 3-6、Glutathione S-transferase P 1、Fibulin-2、TBC domain-containing protein kinase-like protein、Transmembrane protein 179B、RAC-gamma serine/threonine-protein kinase、Decorin、Programmed cell death protein 6、Cytochrome c oxidase subunit 6B1、Hippocalcin-like protein 1、及びGolgi membrane protein 1からなるタンパク質群、並びに
（B）Secretoglobin family 2B member 2、Transmembrane protein 201、Gamma-tubulin complex component 5、Dedicator of cytokinesis protein 5、Deuterosome protein 1、Tudor domain-containing protein 6、Monofunctional C1-tetrahydrofolate synthase, mitochondrial、Calpain small subunit 2、RB1-inducible coiled-coil protein 1、Prolactin-7C1、Serine/threonine-protein kinase mTOR、Versican core protein、Coiled-coil domain-containing protein R3HCC1L、WD repeat-containing protein 90、Keratin, type I cytoskeletal 16、Lysyl oxidase homolog 1、Cilia- and flagella-associated protein 54、Protein SDA1 homolog、Annexin A2、Apolipoprotein A-II、Complement factor B、Transmembrane protein 169、Secretoglobin family 2B member 2、Calpain small subunit 2、Integrin alpha-5、Transmembrane protein 169、Dedicator of cytokinesis protein 5、Ras-related protein Rab-6B、Keratin, type II cytoskeletal 2 oral、Versican core protein、Hydrocephalus-inducing protein、Chorion-specific transcription factor GCMb、Deuterosome protein 1、Endothelin-converting enzyme 2、Collagen alpha-6(VI) chain、及びCathelin-related antimicrobial peptideからなるタンパク質群
からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質の検出剤を含む、老化の検査薬。
【００１８】
項１０．  
被検動物から採取された体液の細胞外小胞における、タンパク質群（A）、及びタンパク質群（B）：
（A）Growth factor receptor-bound protein 2、MOB kinase activator 1B、BRCA1-A complex subunit RAP80、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Ig gamma-3 chain C region、Decorin、Complement C1q subcomponent subunit C、Complement C1s-A subcomponent、Complement C1r-A subcomponent、Amyloid beta A4 protein、14-3-3 protein gamma、Programmed cell death protein 6、Protein LAP2、Bridging integrator 2、Golgi membrane protein 1、Paired box protein Pax-7、Calnexin、Condensin-2 complex subunit G2、Myc target protein 1、Complement C1q subcomponent subunit A、Biglycan、Ig kappa chain V-VI region NQ2-6.1、Complement C1q subcomponent subunit B、Hippocalcin-like protein 1、Src kinase-associated phosphoprotein 2、Integrin beta-2、RNA-binding protein MEX3B、Talin-1、Interferon-induced transmembrane protein 2、Polymeric immunoglobulin receptor、Programmed cell death 6-interacting protein、Ig kappa chain C region、Histone H1t、Immunoglobulin J chain、Ig kappa chain V-VI region J539、Lymphocyte antigen 6E、Coronin-1A、Serglycin、Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10、Tetraspanin-9、Interferon-induced transmembrane protein 3、14-3-3 protein theta、Platelet glycoprotein IX、Ig kappa chain V-III region PC 7183、CD5 antigen-like、SLAM family member 5、Synaptosomal-associated protein 23、Fibrinogen alpha chain、Beta-parvin、Ig kappa chain V-V region K2、Vinculin、Trem-like transcript 1 protein、Glucose-6-phosphate isomerase、Platelet glycoprotein Ib beta chain、Filamin-A、Integrin alpha-6、Ig mu chain C region secreted form、Laminin subunit gamma-1、Sorcin、Ras-related protein Rab-27B、Platelet factor 4、Ig kappa chain V-II region 26-10、Apolipoprotein A-IV、Signaling lymphocytic activation molecule、Thrombospondin-1、H-2 class I histocompatibility antigen, K-B alpha chain、Alpha-actinin-1、Collagen alpha-2(VI) chain、Alpha-1-antitrypsin 1-4、Integrin alpha-IIb、Sodium-dependent serotonin transporter、Transforming protein RhoA、14-3-3 protein zeta/delta、14-3-3 protein eta、P-selectin、Platelet glycoprotein Ib alpha chain、Vesicle-associated membrane protein 3、EGF-containing fibulin-like extracellular matrix protein 1、Integrin beta-1、Pituitary tumor-transforming gene 1 protein-interacting protein、Alpha-1-antitrypsin 1-5、Cysteine and glycine-rich protein 1、Alpha-1-antitrypsin 1-2、Tropomyosin alpha-4 chain、Annexin A5、Multimerin-1、CD9 antigen、EMILIN-1、Mucin-13、Vesicle-associated membrane protein 8、Tetraspanin-14、Ig heavy chain V region 6.96、Adenylyl cyclase-associated protein 1、60S acidic ribosomal protein P2、BRCA1-A complex subunit RAP80、Growth factor receptor-bound protein 2、Ig gamma-2B chain C region、MOB kinase activator 1B、Complement C1s-B subcomponent、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate 5-phosphatase 1、Ig kappa chain V-V region MOPC 149、Beta-glucuronidase、Ig heavy chain V region 3-6、Glutathione S-transferase P 1、Fibulin-2、TBC domain-containing protein kinase-like protein、Transmembrane protein 179B、RAC-gamma serine/threonine-protein kinase、Decorin、Programmed cell death protein 6、Cytochrome c oxidase subunit 6B1、Hippocalcin-like protein 1、及びGolgi membrane protein 1からなるタンパク質群、並びに
（B）Secretoglobin family 2B member 2、Transmembrane protein 201、Gamma-tubulin complex component 5、Dedicator of cytokinesis protein 5、Deuterosome protein 1、Tudor domain-containing protein 6、Monofunctional C1-tetrahydrofolate synthase, mitochondrial、Calpain small subunit 2、RB1-inducible coiled-coil protein 1、Prolactin-7C1、Serine/threonine-protein kinase mTOR、Versican core protein、Coiled-coil domain-containing protein R3HCC1L、WD repeat-containing protein 90、Keratin, type I cytoskeletal 16、Lysyl oxidase homolog 1、Cilia- and flagella-associated protein 54、Protein SDA1 homolog、Annexin A2、Apolipoprotein A-II、Complement factor B、Transmembrane protein 169、Secretoglobin family 2B member 2、Calpain small subunit 2、Integrin alpha-5、Transmembrane protein 169、Dedicator of cytokinesis protein 5、Ras-related protein Rab-6B、Keratin, type II cytoskeletal 2 oral、Versican core protein、Hydrocephalus-inducing protein、Chorion-specific transcription factor GCMb、Deuterosome protein 1、Endothelin-converting enzyme 2、Collagen alpha-6(VI) chain、及びCathelin-related antimicrobial peptideからなるタンパク質群
からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質の量又は濃度を指標とする、老化モデル動物のスクリーニング方法。
【００１９】
項１１．  
前記指標の値がカットオフ値以上である場合に、前記動物を老化モデル動物として選択する工程を含む、項１０に記載のスクリーニング方法。
【００２０】
項１２．  
タンパク質群（A）：
（A）Growth factor receptor-bound protein 2、MOB kinase activator 1B、BRCA1-A complex subunit RAP80、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Ig gamma-3 chain C region、Decorin、Complement C1q subcomponent subunit C、Complement C1s-A subcomponent、Complement C1r-A subcomponent、Amyloid beta A4 protein、14-3-3 protein gamma、Programmed cell death protein 6、Protein LAP2、Bridging integrator 2、Golgi membrane protein 1、Paired box protein Pax-7、Calnexin、Condensin-2 complex subunit G2、Myc target protein 1、Complement C1q subcomponent subunit A、Biglycan、Ig kappa chain V-VI region NQ2-6.1、Complement C1q subcomponent subunit B、Hippocalcin-like protein 1、Src kinase-associated phosphoprotein 2、Integrin beta-2、RNA-binding protein MEX3B、Talin-1、Interferon-induced transmembrane protein 2、Polymeric immunoglobulin receptor、Programmed cell death 6-interacting protein、Ig kappa chain C region、Histone H1t、Immunoglobulin J chain、Ig kappa chain V-VI region J539、Lymphocyte antigen 6E、Coronin-1A、Serglycin、Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10、Tetraspanin-9、Interferon-induced transmembrane protein 3、14-3-3 protein theta、Platelet glycoprotein IX、Ig kappa chain V-III region PC 7183、CD5 antigen-like、SLAM family member 5、Synaptosomal-associated protein 23、Fibrinogen alpha chain、Beta-parvin、Ig kappa chain V-V region K2、Vinculin、Trem-like transcript 1 protein、Glucose-6-phosphate isomerase、Platelet glycoprotein Ib beta chain、Filamin-A、Integrin alpha-6、Ig mu chain C region secreted form、Laminin subunit gamma-1、Sorcin、Ras-related protein Rab-27B、Platelet factor 4、Ig kappa chain V-II region 26-10、Apolipoprotein A-IV、Signaling lymphocytic activation molecule、Thrombospondin-1、H-2 class I histocompatibility antigen, K-B alpha chain、Alpha-actinin-1、Collagen alpha-2(VI) chain、Alpha-1-antitrypsin 1-4、Integrin alpha-IIb、Sodium-dependent serotonin transporter、Transforming protein RhoA、14-3-3 protein zeta/delta、14-3-3 protein eta、P-selectin、Platelet glycoprotein Ib alpha chain、Vesicle-associated membrane protein 3、EGF-containing fibulin-like extracellular matrix protein 1、Integrin beta-1、Pituitary tumor-transforming gene 1 protein-interacting protein、Alpha-1-antitrypsin 1-5、Cysteine and glycine-rich protein 1、Alpha-1-antitrypsin 1-2、Tropomyosin alpha-4 chain、Annexin A5、Multimerin-1、CD9 antigen、EMILIN-1、Mucin-13、Vesicle-associated membrane protein 8、Tetraspanin-14、Ig heavy chain V region 6.96、Adenylyl cyclase-associated protein 1、60S acidic ribosomal protein P2、BRCA1-A complex subunit RAP80、Growth factor receptor-bound protein 2、Ig gamma-2B chain C region、MOB kinase activator 1B、Complement C1s-B subcomponent、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate 5-phosphatase 1、Ig kappa chain V-V region MOPC 149、Beta-glucuronidase、Ig heavy chain V region 3-6、Glutathione S-transferase P 1、Fibulin-2、TBC domain-containing protein kinase-like protein、Transmembrane protein 179B、RAC-gamma serine/threonine-protein kinase、Decorin、Programmed cell death protein 6、Cytochrome c oxidase subunit 6B1、Hippocalcin-like protein 1、及びGolgi membrane protein 1からなるタンパク質群
より選択される少なくとも1種のタンパク質の抑制剤、並びに
タンパク質群（B）： 
（B）Secretoglobin family 2B member 2、Transmembrane protein 201、Gamma-tubulin complex component 5、Dedicator of cytokinesis protein 5、Deuterosome protein 1、Tudor domain-containing protein 6、Monofunctional C1-tetrahydrofolate synthase, mitochondrial、Calpain small subunit 2、RB1-inducible coiled-coil protein 1、Prolactin-7C1、Serine/threonine-protein kinase mTOR、Versican core protein、Coiled-coil domain-containing protein R3HCC1L、WD repeat-containing protein 90、Keratin, type I cytoskeletal 16、Lysyl oxidase homolog 1、Cilia- and flagella-associated protein 54、Protein SDA1 homolog、Annexin A2、Apolipoprotein A-II、Complement factor B、Transmembrane protein 169、Secretoglobin family 2B member 2、Calpain small subunit 2、Integrin alpha-5、Transmembrane protein 169、Dedicator of cytokinesis protein 5、Ras-related protein Rab-6B、Keratin, type II cytoskeletal 2 oral、Versican core protein、Hydrocephalus-inducing protein、Chorion-specific transcription factor GCMb、Deuterosome protein 1、Endothelin-converting enzyme 2、Collagen alpha-6(VI) chain、及びCathelin-related antimicrobial peptideからなるタンパク質群
より選択される少なくとも1種のタンパク質の亢進剤
からなる群より選択される少なくとも1種の剤を含有する、抗老化薬。
【００２１】
項１３．  
被検物質で処理された動物から採取された体液の細胞外小胞における、タンパク質群（A）、及びタンパク質群（B）：
（A）Growth factor receptor-bound protein 2、MOB kinase activator 1B、BRCA1-A complex subunit RAP80、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Ig gamma-3 chain C region、Decorin、Complement C1q subcomponent subunit C、Complement C1s-A subcomponent、Complement C1r-A subcomponent、Amyloid beta A4 protein、14-3-3 protein gamma、Programmed cell death protein 6、Protein LAP2、Bridging integrator 2、Golgi membrane protein 1、Paired box protein Pax-7、Calnexin、Condensin-2 complex subunit G2、Myc target protein 1、Complement C1q subcomponent subunit A、Biglycan、Ig kappa chain V-VI region NQ2-6.1、Complement C1q subcomponent subunit B、Hippocalcin-like protein 1、Src kinase-associated phosphoprotein 2、Integrin beta-2、RNA-binding protein MEX3B、Talin-1、Interferon-induced transmembrane protein 2、Polymeric immunoglobulin receptor、Programmed cell death 6-interacting protein、Ig kappa chain C region、Histone H1t、Immunoglobulin J chain、Ig kappa chain V-VI region J539、Lymphocyte antigen 6E、Coronin-1A、Serglycin、Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10、Tetraspanin-9、Interferon-induced transmembrane protein 3、14-3-3 protein theta、Platelet glycoprotein IX、Ig kappa chain V-III region PC 7183、CD5 antigen-like、SLAM family member 5、Synaptosomal-associated protein 23、Fibrinogen alpha chain、Beta-parvin、Ig kappa chain V-V region K2、Vinculin、Trem-like transcript 1 protein、Glucose-6-phosphate isomerase、Platelet glycoprotein Ib beta chain、Filamin-A、Integrin alpha-6、Ig mu chain C region secreted form、Laminin subunit gamma-1、Sorcin、Ras-related protein Rab-27B、Platelet factor 4、Ig kappa chain V-II region 26-10、Apolipoprotein A-IV、Signaling lymphocytic activation molecule、Thrombospondin-1、H-2 class I histocompatibility antigen, K-B alpha chain、Alpha-actinin-1、Collagen alpha-2(VI) chain、Alpha-1-antitrypsin 1-4、Integrin alpha-IIb、Sodium-dependent serotonin transporter、Transforming protein RhoA、14-3-3 protein zeta/delta、14-3-3 protein eta、P-selectin、Platelet glycoprotein Ib alpha chain、Vesicle-associated membrane protein 3、EGF-containing fibulin-like extracellular matrix protein 1、Integrin beta-1、Pituitary tumor-transforming gene 1 protein-interacting protein、Alpha-1-antitrypsin 1-5、Cysteine and glycine-rich protein 1、Alpha-1-antitrypsin 1-2、Tropomyosin alpha-4 chain、Annexin A5、Multimerin-1、CD9 antigen、EMILIN-1、Mucin-13、Vesicle-associated membrane protein 8、Tetraspanin-14、Ig heavy chain V region 6.96、Adenylyl cyclase-associated protein 1、60S acidic ribosomal protein P2、BRCA1-A complex subunit RAP80、Growth factor receptor-bound protein 2、Ig gamma-2B chain C region、MOB kinase activator 1B、Complement C1s-B subcomponent、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate 5-phosphatase 1、Ig kappa chain V-V region MOPC 149、Beta-glucuronidase、Ig heavy chain V region 3-6、Glutathione S-transferase P 1、Fibulin-2、TBC domain-containing protein kinase-like protein、Transmembrane protein 179B、RAC-gamma serine/threonine-protein kinase、Decorin、Programmed cell death protein 6、Cytochrome c oxidase subunit 6B1、Hippocalcin-like protein 1、及びGolgi membrane protein 1からなるタンパク質群、並びに
（B）Secretoglobin family 2B member 2、Transmembrane protein 201、Gamma-tubulin complex component 5、Dedicator of cytokinesis protein 5、Deuterosome protein 1、Tudor domain-containing protein 6、Monofunctional C1-tetrahydrofolate synthase, mitochondrial、Calpain small subunit 2、RB1-inducible coiled-coil protein 1、Prolactin-7C1、Serine/threonine-protein kinase mTOR、Versican core protein、Coiled-coil domain-containing protein R3HCC1L、WD repeat-containing protein 90、Keratin, type I cytoskeletal 16、Lysyl oxidase homolog 1、Cilia- and flagella-associated protein 54、Protein SDA1 homolog、Annexin A2、Apolipoprotein A-II、Complement factor B、Transmembrane protein 169、Secretoglobin family 2B member 2、Calpain small subunit 2、Integrin alpha-5、Transmembrane protein 169、Dedicator of cytokinesis protein 5、Ras-related protein Rab-6B、Keratin, type II cytoskeletal 2 oral、Versican core protein、Hydrocephalus-inducing protein、Chorion-specific transcription factor GCMb、Deuterosome protein 1、Endothelin-converting enzyme 2、Collagen alpha-6(VI) chain、及びCathelin-related antimicrobial peptideからなるタンパク質群
からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質の量又は濃度を指標とする、抗老化薬の有効成分のスクリーニング方法。
【００２２】
項１４．  
タンパク質群（A）に関する前記指標の値が、被検物質で処理されていない動物から採取された体液の細胞外小胞における対応タンパク質の量又は濃度（対照値）よりも低い場合に、前記被検物質を抗老化薬の有効成分として選択する工程、並びに
タンパク質群（B）に関する前記指標の値が、被検物質で処理されていない動物から採取された体液の細胞外小胞における対応タンパク質の量又は濃度（対照値）よりも高い場合に、前記被検物質を抗老化薬の有効成分として選択する工程
からなる群より選択される少なくとも1種の工程を含む、項１３に記載のスクリーニング方法。
【００２３】
項１５．  
被検物質で処理された動物から採取された体液の細胞外小胞における、タンパク質群（A）、及びタンパク質群（B）：
（A）Growth factor receptor-bound protein 2、MOB kinase activator 1B、BRCA1-A complex subunit RAP80、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Ig gamma-3 chain C region、Decorin、Complement C1q subcomponent subunit C、Complement C1s-A subcomponent、Complement C1r-A subcomponent、Amyloid beta A4 protein、14-3-3 protein gamma、Programmed cell death protein 6、Protein LAP2、Bridging integrator 2、Golgi membrane protein 1、Paired box protein Pax-7、Calnexin、Condensin-2 complex subunit G2、Myc target protein 1、Complement C1q subcomponent subunit A、Biglycan、Ig kappa chain V-VI region NQ2-6.1、Complement C1q subcomponent subunit B、Hippocalcin-like protein 1、Src kinase-associated phosphoprotein 2、Integrin beta-2、RNA-binding protein MEX3B、Talin-1、Interferon-induced transmembrane protein 2、Polymeric immunoglobulin receptor、Programmed cell death 6-interacting protein、Ig kappa chain C region、Histone H1t、Immunoglobulin J chain、Ig kappa chain V-VI region J539、Lymphocyte antigen 6E、Coronin-1A、Serglycin、Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10、Tetraspanin-9、Interferon-induced transmembrane protein 3、14-3-3 protein theta、Platelet glycoprotein IX、Ig kappa chain V-III region PC 7183、CD5 antigen-like、SLAM family member 5、Synaptosomal-associated protein 23、Fibrinogen alpha chain、Beta-parvin、Ig kappa chain V-V region K2、Vinculin、Trem-like transcript 1 protein、Glucose-6-phosphate isomerase、Platelet glycoprotein Ib beta chain、Filamin-A、Integrin alpha-6、Ig mu chain C region secreted form、Laminin subunit gamma-1、Sorcin、Ras-related protein Rab-27B、Platelet factor 4、Ig kappa chain V-II region 26-10、Apolipoprotein A-IV、Signaling lymphocytic activation molecule、Thrombospondin-1、H-2 class I histocompatibility antigen, K-B alpha chain、Alpha-actinin-1、Collagen alpha-2(VI) chain、Alpha-1-antitrypsin 1-4、Integrin alpha-IIb、Sodium-dependent serotonin transporter、Transforming protein RhoA、14-3-3 protein zeta/delta、14-3-3 protein eta、P-selectin、Platelet glycoprotein Ib alpha chain、Vesicle-associated membrane protein 3、EGF-containing fibulin-like extracellular matrix protein 1、Integrin beta-1、Pituitary tumor-transforming gene 1 protein-interacting protein、Alpha-1-antitrypsin 1-5、Cysteine and glycine-rich protein 1、Alpha-1-antitrypsin 1-2、Tropomyosin alpha-4 chain、Annexin A5、Multimerin-1、CD9 antigen、EMILIN-1、Mucin-13、Vesicle-associated membrane protein 8、Tetraspanin-14、Ig heavy chain V region 6.96、Adenylyl cyclase-associated protein 1、60S acidic ribosomal protein P2、BRCA1-A complex subunit RAP80、Growth factor receptor-bound protein 2、Ig gamma-2B chain C region、MOB kinase activator 1B、Complement C1s-B subcomponent、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate 5-phosphatase 1、Ig kappa chain V-V region MOPC 149、Beta-glucuronidase、Ig heavy chain V region 3-6、Glutathione S-transferase P 1、Fibulin-2、TBC domain-containing protein kinase-like protein、Transmembrane protein 179B、RAC-gamma serine/threonine-protein kinase、Decorin、Programmed cell death protein 6、Cytochrome c oxidase subunit 6B1、Hippocalcin-like protein 1、及びGolgi membrane protein 1からなるタンパク質群、並びに
（B）Secretoglobin family 2B member 2、Transmembrane protein 201、Gamma-tubulin complex component 5、Dedicator of cytokinesis protein 5、Deuterosome protein 1、Tudor domain-containing protein 6、Monofunctional C1-tetrahydrofolate synthase, mitochondrial、Calpain small subunit 2、RB1-inducible coiled-coil protein 1、Prolactin-7C1、Serine/threonine-protein kinase mTOR、Versican core protein、Coiled-coil domain-containing protein R3HCC1L、WD repeat-containing protein 90、Keratin, type I cytoskeletal 16、Lysyl oxidase homolog 1、Cilia- and flagella-associated protein 54、Protein SDA1 homolog、Annexin A2、Apolipoprotein A-II、Complement factor B、Transmembrane protein 169、Secretoglobin family 2B member 2、Calpain small subunit 2、Integrin alpha-5、Transmembrane protein 169、Dedicator of cytokinesis protein 5、Ras-related protein Rab-6B、Keratin, type II cytoskeletal 2 oral、Versican core protein、Hydrocephalus-inducing protein、Chorion-specific transcription factor GCMb、Deuterosome protein 1、Endothelin-converting enzyme 2、Collagen alpha-6(VI) chain、及びCathelin-related antimicrobial peptideからなるタンパク質群
からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質の量又は濃度を指標とする、老化亢進性の評価方法。
【発明の効果】
【００２４】
本発明によれば、老化バイオマーカーを提供することができる。該バイオマーカーを利用することにより、老化の検査、老化モデル動物のスクリーニング等を、より簡便、より効率的、且つより低コストで行うことができる。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本明細書中において、「含有」及び「含む」なる表現については、「含有」、「含む」、「実質的にからなる」及び「のみからなる」という概念を含む。
【００２６】
1．老化の検査方法
本発明は、その一態様において、老化を検査する方法であって、
（1）被検体から採取された体液の細胞外小胞における、タンパク質群（A）、及びタンパク質群（B）からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質を検出する工程（工程1）を含む、検査方法（本明細書において、「本発明の老化検査方法」と示すこともある。）に関する。以下、これについて説明する。
【００２７】
1-1．工程（1）
検査対象である「老化」は、特に制限されず、比較対象によっても異なるが、例えば、生後、被検体の生物種の平均寿命（年）の例えば0.5倍以上、好ましくは0.6倍以上の年数が経過した状態、或いは代謝等の生理機能がそれに相当する状態であると定義することができる。
【００２８】
被検体は、本発明の検査方法の対象生物であり、その生物種は特に制限されない。被検体の生物種としては、例えばヒト、サル、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウサギなどの種々の哺乳類動物が挙げられ、好ましくはマウスが挙げられる。
【００２９】
被検体の状態は、特に制限されない。被検体としては、例えば老化しているかどうか不明な検体、老化していると既に別の方法により判定されている検体、老化していないと既に別の方法により判定されている検体、老化現象を伴う疾患に罹患している検体等が挙げられる。
【００３０】
体液は、特に制限されない。体液としては、例えば全血、血清、血漿、髄液、唾液、関節液、尿、組織液（気管支肺胞洗浄液を含む）、汗、涙、喀痰、鼻汁などが挙げられ、好ましくは全血、血清、血漿、髄液が挙げられ、より好ましくは全血、血清、血漿が挙げられる。体液は、1種単独で採用してもよいし、2種以上を組み合わせて採用してもよい。
【００３１】
体液は、当業者に公知の方法で被検体から採取することができる。例えば、全血は、注射器などを用いた採血によって採取することができる。血清は、全血から血球及び特定の血液凝固因子を除去した部分であり、例えば、全血を凝固させた後の上澄みとして得ることができる。血漿は、全血から血球を除去した部分であり、例えば、全血を凝固させない条件下で遠心分離に供した際の上澄みとして得ることができる。
【００３２】
細胞外小胞は、細胞から分泌、放出等される膜小胞である限り特に制限されない。細胞外小胞は、通常は、細胞内のタンパク質や遺伝情報（mRNA, microRNA等）を細胞外に運搬することにより、局所や全身における細胞間の情報伝達を担っている膜小胞として定義される。細胞外小胞としては、例えばエクソソーム、微小小胞体、アポトーシス小体、エクトソーム、マイクロパーティクル、分泌マイクロベシクル等が挙げられる。
【００３３】
細胞外小胞は、体液から、公知の方法に従って又は準じて、精製、分離、濃縮等することができる。細胞外小胞を精製、分離、濃縮等する方法としては、例えば超遠心法（例えばペレットダウン法、スクロースクッション法、密度勾配遠心法等）、イムノアフィニティー担体を用いる方法、ゲルろ過法、フィールド・フロー分画法、FACS法等が挙げられる。また、細胞外小胞の精製、分離、濃縮等は、市販のキットを用いて行うことも可能である。これらの方法は、1種単独で採用してもよいし、2種以上を組み合わせて採用してもよい。
【００３４】
工程（1）の検出対象は、タンパク質群（A）、及びタンパク質群（B）からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質（本明細書において、これらをまとめて「対象タンパク質」と示すこともある。）である。
【００３５】
タンパク質群（A）は、（A）Growth factor receptor-bound protein 2、MOB kinase activator 1B、BRCA1-A complex subunit RAP80、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Ig gamma-3 chain C region、Decorin、Complement C1q subcomponent subunit C、Complement C1s-A subcomponent、Complement C1r-A subcomponent、Amyloid beta A4 protein、14-3-3 protein gamma、Programmed cell death protein 6、Protein LAP2、Bridging integrator 2、Golgi membrane protein 1、Paired box protein Pax-7、Calnexin、Condensin-2 complex subunit G2、Myc target protein 1、Complement C1q subcomponent subunit A、Biglycan、Ig kappa chain V-VI region NQ2-6.1、Complement C1q subcomponent subunit B、Hippocalcin-like protein 1、Src kinase-associated phosphoprotein 2、Integrin beta-2、RNA-binding protein MEX3B、Talin-1、Interferon-induced transmembrane protein 2、Polymeric immunoglobulin receptor、Programmed cell death 6-interacting protein、Ig kappa chain C region、Histone H1t、Immunoglobulin J chain、Ig kappa chain V-VI region J539、Lymphocyte antigen 6E、Coronin-1A、Serglycin、Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10、Tetraspanin-9、Interferon-induced transmembrane protein 3、14-3-3 protein theta、Platelet glycoprotein IX、Ig kappa chain V-III region PC 7183、CD5 antigen-like、SLAM family member 5、Synaptosomal-associated protein 23、Fibrinogen alpha chain、Beta-parvin、Ig kappa chain V-V region K2、Vinculin、Trem-like transcript 1 protein、Glucose-6-phosphate isomerase、Platelet glycoprotein Ib beta chain、Filamin-A、Integrin alpha-6、Ig mu chain C region secreted form、Laminin subunit gamma-1、Sorcin、Ras-related protein Rab-27B、Platelet factor 4、Ig kappa chain V-II region 26-10、Apolipoprotein A-IV、Signaling lymphocytic activation molecule、Thrombospondin-1、H-2 class I histocompatibility antigen, K-B alpha chain、Alpha-actinin-1、Collagen alpha-2(VI) chain、Alpha-1-antitrypsin 1-4、Integrin alpha-IIb、Sodium-dependent serotonin transporter、Transforming protein RhoA、14-3-3 protein zeta/delta、14-3-3 protein eta、P-selectin、Platelet glycoprotein Ib alpha chain、Vesicle-associated membrane protein 3、EGF-containing fibulin-like extracellular matrix protein 1、Integrin beta-1、Pituitary tumor-transforming gene 1 protein-interacting protein、Alpha-1-antitrypsin 1-5、Cysteine and glycine-rich protein 1、Alpha-1-antitrypsin 1-2、Tropomyosin alpha-4 chain、Annexin A5、Multimerin-1、CD9 antigen、EMILIN-1、Mucin-13、Vesicle-associated membrane protein 8、Tetraspanin-14、Ig heavy chain V region 6.96、Adenylyl cyclase-associated protein 1、60S acidic ribosomal protein P2、BRCA1-A complex subunit RAP80、Growth factor receptor-bound protein 2、Ig gamma-2B chain C region、MOB kinase activator 1B、Complement C1s-B subcomponent、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate 5-phosphatase 1、Ig kappa chain V-V region MOPC 149、Beta-glucuronidase、Ig heavy chain V region 3-6、Glutathione S-transferase P 1、Fibulin-2、TBC domain-containing protein kinase-like protein、Transmembrane protein 179B、RAC-gamma serine/threonine-protein kinase、Decorin、Programmed cell death protein 6、Cytochrome c oxidase subunit 6B1、Hippocalcin-like protein 1、及びGolgi membrane protein 1からなるタンパク質群である。
【００３６】
タンパク質群（A）は、老化においてその量が上昇するバイオマーカーであり、これを指標とすることにより老化を検査可能である。
【００３７】
タンパク質群（A）の中でも、正常検体に対する量比がより高い（コントロールの発現量が確認できない場合も包含する）という観点からは、好ましくはGrowth factor receptor-bound protein 2、MOB kinase activator 1B、BRCA1-A complex subunit RAP80、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Ig gamma-3 chain C region、Decorin、Complement C1q subcomponent subunit C、Complement C1s-A subcomponent、Complement C1r-A subcomponent、Amyloid beta A4 protein、Ig heavy chain V region 6.96、Adenylyl cyclase-associated protein 1、60S acidic ribosomal protein P2、BRCA1-A complex subunit RAP80、Growth factor receptor-bound protein 2、Ig gamma-2B chain C region、MOB kinase activator 1B、Complement C1s-B subcomponent、Actin-related protein 2/3 complex subunit 5、Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate 5-phosphatase 1、Ig kappa chain V-V region MOPC 149、Beta-glucuronidase、Ig heavy chain V region 3-6、Glutathione S-transferase P 1、Fibulin-2、TBC domain-containing protein kinase-like protein、Transmembrane protein 179B、RAC-gamma serine/threonine-protein kinase、Decorin、Programmed cell death protein 6、Cytochrome c oxidase subunit 6B1、Hippocalcin-like protein 1、Golgi membrane protein 1等が挙げられる。
【００３８】
タンパク質群（A）の中でも、正常検体に対する量比がより高い（コントロールの発現量が確認できない場合は包含しない）という観点からは、好ましくはIg gamma-3 chain C region、Decorin、Complement C1q subcomponent subunit C、Complement C1s-A subcomponent、Complement C1r-A subcomponent、Amyloid beta A4 protein等が挙げられる。
【００３９】
タンパク質群（B）は、（B）Secretoglobin family 2B member 2、Transmembrane protein 201、Gamma-tubulin complex component 5、Dedicator of cytokinesis protein 5、Deuterosome protein 1、Tudor domain-containing protein 6、Monofunctional C1-tetrahydrofolate synthase, mitochondrial、Calpain small subunit 2、RB1-inducible coiled-coil protein 1、Prolactin-7C1、Serine/threonine-protein kinase mTOR、Versican core protein、Coiled-coil domain-containing protein R3HCC1L、WD repeat-containing protein 90、Keratin, type I cytoskeletal 16、Lysyl oxidase homolog 1、Cilia- and flagella-associated protein 54、Protein SDA1 homolog、Annexin A2、Apolipoprotein A-II、Complement factor B、Transmembrane protein 169、Secretoglobin family 2B member 2、Calpain small subunit 2、Integrin alpha-5、Transmembrane protein 169、Dedicator of cytokinesis protein 5、Ras-related protein Rab-6B、Keratin, type II cytoskeletal 2 oral、Versican core protein、Hydrocephalus-inducing protein、Chorion-specific transcription factor GCMb、Deuterosome protein 1、Endothelin-converting enzyme 2、Collagen alpha-6(VI) chain、及びCathelin-related antimicrobial peptideからなるタンパク質群である。
【００４０】
タンパク質群（B）は、老化においてその量が低下するバイオマーカーであり、これを指標とすることにより老化を検査可能である。
【００４１】
タンパク質群（B）の中でも、正常検体に対する量比がより低い（老化において発現量が確認できない場合も包含する）という観点からは、好ましくはSecretoglobin family 2B member 2、Calpain small subunit 2、Transmembrane protein 169、Gamma-tubulin complex component 5、Dedicator of cytokinesis protein 5、Secretoglobin family 2B member 2、Calpain small subunit 2、Integrin alpha-5、Transmembrane protein 169、Dedicator of cytokinesis protein 5、Ras-related protein Rab-6B、Keratin, type II cytoskeletal 2 oral、Versican core protein、Hydrocephalus-inducing protein、Chorion-specific transcription factor GCMb、Deuterosome protein 1、Endothelin-converting enzyme 2、Collagen alpha-6(VI) chain、Cathelin-related antimicrobial peptide等が挙げられる。
【００４２】
タンパク質群（B）の中でも、正常検体に対する量比がより低い（老化において発現量が確認できない場合は包含しない）という観点からは、好ましくはSecretoglobin family 2B member 2、Calpain small subunit 2、Transmembrane protein 169、Gamma-tubulin complex component 5、Dedicator of cytokinesis protein 5等が挙げられ
る。
【００４３】
タンパク質群（A）及び（B）のタンパク質は、マウスの場合であれば、後述の実施例における表1〜4に示されるUniProtKBアクセッション番号によって特定されるタンパク質である。他の生物種の場合であれば、表1〜4に示されるUniProtKBアクセッション番号によって特定されるタンパク質のオーソログである。
【００４４】
工程（1）における対象タンパク質の数は、1種のみでもよいが、2種以上の組み合わせであってもよい。より多く（例えば2種、5種、10種、20種、40種、80種、120種以上）の検出対象を組み合わせることにより、老化を、より正確に行うことが可能になる。
【００４５】
検出は、通常は、対象タンパク質の量又は濃度を測定することによって行われる。「濃度」とは、絶対濃度に限らず、相対濃度や、単位体積辺りの重量や、絶対濃度を知るために測定した生データなどでもよい。
【００４６】
対象タンパク質を検出する方法としては、対象タンパク質の一部又は全部を特異的に検出できる方法であれば特に制限されない。検出方法としては、具体的には、例えば、対象タンパク質を構成するペプチドを検出する質量分析法、対象タンパク質を特異的に認識する抗体を用いた免疫学的測定法等を挙げることができる。なお、対象タンパク質のアミノ酸配列情報は、UniProtKBアクセッション番号を基に、EBI（http://www.ebi.ac.uk/IPI/IPIhelp.html）のデータベースで検索することにより得ることができる。
【００４７】
免疫学的測定法としては、免疫組織化学染色法、ELISA法、サンドイッチELISA法、EIA法、RIA法、ウェスタンブロッティング法等を好適に例示することができる。
【００４８】
質量分析法とは、ペプチド試料を、イオン源を用いて気体状のイオンとし（イオン化）、分析部において、真空中で運動させ電磁気力を用いて、あるいは飛行時間差によりイオン化したペプチド試料を質量電荷比に応じて分離し、検出できる質量分析計を用いた測定方法のことをいい、イオン源を用いてイオン化する方法としては、EI法、CI法、FD法、FAB法、MALDI法、ESI法などの方法を適宜選択することができ、また、分析部において、イオン化したペプチド試料を分離する方法としては、磁場偏向型、四重極型、イオントラップ型、飛行時間（TOF）型、フーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴型などの分離方法を適宜選択することができる。また、2以上の質量分析法を組み合わせたタンデム型質量分析（MS／MS）やトリプル四重極型質量分析を利用することができる。また、サンプルがリン酸化したペプチドを含む試料の場合、質量分析計へのサンプル導入前に、サンプルを鉄イオン固定化アフィニティークロマトグラフィー（Fe-IMAC）を用いて濃縮することができる。また、液体クロマトグラフ（LC）やHPLCにより、対象タンパク質を構成するペプチドを分離・精製してサンプルとすることができる。また、検出部やデータ処理方法も適宜選択することができる。なお、質量分析法を用いて対象タンパク質を構成するペプチドを質量分析法で検出・定量する場合、かかるペプチドと同一のアミノ酸配列からなる、濃度が既知の安定同位体で標識したペプチドを内部標準とすることができる。かかる安定同位体標識ペプチドとしては、検出する対象タンパク質を構成するペプチドにおけるアミノ酸の1個以上が、15N，13C，18O，及び2Hのいずれか1以上を含む安定同位体標識ペプチドであれば、アミノ酸の種類、位置、数などは適宜選択することができ、かかる安定同位体標識ペプチドは、安定同位元素により標識されたアミノ酸を用いてF-moc法（Amblard., et al. Methods Mol Biol.298:3-24(2005)）等の適当な手段で化学合成することができるが、iTRAQ（登録商標）試薬、ICAT（登録商標）試薬、ICPL（登録商標）試薬、NBS（登録商標）試薬などの標識試薬を用いて作製することもできる。
【００４９】
工程（1）を含む本発明の検査方法によれば、老化の検出指標である対象タンパク質の量及び／又は濃度を提供することができ、これにより老化の検出などを補助することができる。
工程（1）を含む本発明の検査方法による検査結果は、老化の病態解明、老化の関与する各種慢性炎症性疾患（例えばCOPD等）の判定や予後予測、被検体の層別化、治療方法の選択（個別化医療、治療反応性）、健康評価等に利用し得る。
【００５０】
1-2．工程（2）
本発明の検査方法は、一態様として、さらに、
（2a）前記工程（1）で検出されたタンパク質群（A）からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質の量又は濃度がカットオフ値以上である場合に、前記被検体が老化していると判定する工程、並びに
（2b）前記工程（1）で検出されたタンパク質群（B）からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質の量又は濃度がカットオフ値以下である場合に、前記被検体が老化していると判定する工程
からなる群より選択される少なくとも1種の工程（工程2）を含むことが好ましい。該工程2を含む本発明の検査方法によれば、老化を判定することが可能となる。
【００５１】
カットオフ値は、感度、特異度、陽性的中率、陰性的中率などの観点から当業者が適宜設定することができ、例えば、老化していない被検体から採取された体液の細胞外小胞における対象タンパク質の量及び／又は濃度に基づいて、その都度定められた値、或いは予め定められた値とすることができる。カットオフ値は、タンパク質群（A）については、例えば、老化していない被検体から採取された体液の細胞外小胞における対象タンパク質の量及び／又は濃度（被検体が複数の場合は、平均値、中央値など）の、例えば1.5〜8倍、好ましくは2〜6倍、より好ましくは3〜5倍の値とすることができる。また、カットオフ値は、タンパク質群（B）については、例えば、老化していない被検体から採取された体液の細胞外小胞における対象タンパク質の量及び／又は濃度（被検体が複数の場合は、平均値、中央値など）の、例えば0.1〜0.9倍、好ましくは0.3〜0.8倍、より好ましくは0.5〜0.8倍の値とすることができる。なお、「老化していない被検体」は、特に制限されず、判定する老化の程度によっても異なるが、例えば、生後、被検体の生物種の平均寿命（年）の例えば0.4倍以下、好ましくは0.2倍以下、より好ましくは0.1倍以下の年数が経過した状態であると定義することができる。
【００５２】
工程（2）の一態様においては、老化バイオマーカーを用いることにより、工程（1）で検出されたタンパク質群（A）からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質の量又は濃度が、対照被検体における対応タンパク質の量又は濃度以上（例えば1.5〜8倍、好ましくは2〜6倍、より好ましくは3〜5倍）である場合に、前記被検体が対照被検体よりも老化していると判定することができる。
【００５３】
工程（2）の別の一態様においては、老化バイオマーカーを用いることにより、工程（1）で検出されたタンパク質群（B）からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質の量又は濃度が、対照被検体における対応タンパク質の量又は濃度以下（例えば0.1〜0.9倍、好ましくは0.3〜0.8倍、より好ましくは0.5〜0.8倍）である場合に、前記被検体が対照被検体よりも老化していると判定することができる。
【００５４】
工程（2）の好ましい一態様においては、被検体が抗老化治療中の検体である場合、カットオフ値を、例えば同一検体についての過去の試料における対象タンパク質の量及び／又は濃度に基づいた値とすることにより、治療効果を判定することができる。
【００５５】
2．老化のより高い精度での判定
工程（2）を含む本発明の検査方法により、被検体が老化していると判定された場合、本発明の検査方法に、さらに老化の医師による判定を適用する工程を組み合わせることによって、より高い精度で老化を判定することができる。また、本発明の検査方法はより正確に老化を検出できるので、本発明の検査方法に上記工程を組み合わせることによって、より効率的且つより正確に「老化している」と判定できる。
【００５６】
3．老化の検査薬
本発明は、その一態様において、タンパク質群（A）、及びタンパク質群（B）からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質の検出剤を含む、老化の検査薬（本明細書において、「本発明の検査薬」と示すこともある。）に関する。以下、これについて説明する。
【００５７】
タンパク質群（A）、タンパク質群（B）、老化等については、上記「1．老化の検査方法」における定義と同様である。
【００５８】
検出剤は、対象タンパク質を特異的に検出できるものである限り特に制限されない。該検出剤としては、例えば対象タンパク質に対する抗体が挙げられる。検出剤は、標識されたものであってもよい。標識としては、例えば蛍光物質、発光物質、色素、酵素、金コロイド、放射性同位体などが挙げられる。また、検出剤（特に抗体）は、基材（例えばマイクロウェルプレート等のプラスチック基材）に吸着した状態であってもよい。
【００５９】
抗体は、対象タンパク質を選択的に（特異的に）認識するものであれば、特に限定されない。ここで、「選択的に（特異的に）認識する」とは、例えばウェスタンブロット法やELISA法において、対象タンパク質が特異的に検出できることを意味するが、それに限定されることなく、当業者が上記検出物が対象タンパク質に由来するものであると判断できるものであればよい。
【００６０】
抗体には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、またはFabフラグメントやFab発現ライブラリーによって生成されるフラグメントなどのように抗原結合性を有する上記抗体の一部が包含される。対象タンパク質のアミノ酸配列のうち少なくとも連続する、通常8アミノ酸、好ましくは15アミノ酸、より好ましくは20アミノ酸からなるポリペプチドに対して抗原結合性を有する抗体も、本発明の抗体に含まれる。
【００６１】
これらの抗体の製造方法は、すでに周知であり、本発明の抗体もこれらの常法に従って製造することができる（Current protocols in Molecular Biology , Chapter 11.12〜11.13(2000)）。具体的には、本発明の抗体がポリクローナル抗体の場合には、常法に従って大腸菌等で発現し精製した対象タンパク質を用いて、あるいは常法に従って当該対象タンパク質の部分アミノ酸配列を有するオリゴペプチドを合成して、家兎等の非ヒト動物に免疫し、該免疫動物の血清から常法に従って得ることが可能である。一方、モノクローナル抗体の場合には、常法に従って大腸菌等で発現し精製した対象タンパク質、あるいは対象タンパク質の部分アミノ酸配列を有するオリゴペプチドをマウス等の非ヒト動物に免疫し、得られた脾臓細胞と骨髄腫細胞とを細胞融合させて調製したハイブリドーマ細胞の中から得ることができる（Current protocols in Molecular Biology edit. Ausubel et al. (1987) Publish. John Wiley and Sons. Section 11.4〜11.11）。
【００６２】
抗体の作製に免疫抗原として使用される対象タンパク質は、公知の遺伝子配列情報に基づいて、DNAクローニング、各プラスミドの構築、宿主へのトランスフェクション、形質転換体の培養および培養物からのタンパク質の回収の操作により得ることができる。これらの操作は、当業者に既知の方法、あるいは文献記載の方法（Molecular Cloning, T.Maniatis et al., CSH Laboratory (1983), DNA Cloning, DM. Glover, IRL PRESS (1985)）などに準じて行うことができる。
【００６３】
具体的には、対象タンパク質をコードする遺伝子が所望の宿主細胞中で発現できる組み換えDNA（発現ベクター）を作製し、これを宿主細胞に導入して形質転換し、該形質転換体を培養して、得られる培養物から、目的タンパク質を回収することによって、本発明抗体の製造のための免疫抗原としてのタンパク質を得ることができる。また対象タンパク質の部分ペプチドは、公知の遺伝子配列情報に従って、一般的な化学合成法（ペプチド合成）によって製造することもできる。
【００６４】
また本発明の抗体は、対象タンパク質の部分アミノ酸配列を有するオリゴペプチドを用いて調製されるものであってよい。かかる抗体の製造のために用いられるオリゴ（ポリ）ペプチドは、機能的な生物活性を有することは要しないが、対象タンパク質と同様な免疫原特性を有するものであることが望ましい。好ましくはこの免疫原特性を有し、且つ対象タンパク質のアミノ酸配列において少なくとも連続する8アミノ酸、好ましくは15アミノ酸、より好ましくは20アミノ酸からなるオリゴ（ポリ）ペプチドを例示することができる。
【００６５】
かかるオリゴ（ポリ）ペプチドに対する抗体の製造は、宿主に応じて種々のアジュバントを用いて免疫学的反応を高めることによって行うこともできる。限定はされないが、そのようなアジュバントには、フロイントアジュバント、水酸化アルミニウムのようなミネラルゲル、並びにリゾレシチン、プルロニックポリオル、ポリアニオン、ペプチド、油乳剤、キーホールリンペットヘモシアニン及びジニトロフェノールのような表面活性物質、BCG（カルメット−ゲラン桿菌）やコリネバクテリウム-パルヴムなどのヒトアジュバントが含まれる。
【００６６】
本発明の検査薬は、組成物の形態であってもよい。該組成物には、必要に応じて他の成分が含まれていてもよい。他の成分としては、例えば基剤、担体、溶剤、分散剤、乳化剤、緩衝剤、安定剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、増粘剤、保湿剤、着色料、香料、キレート剤等が挙げられる。
【００６７】
本発明の検査薬は、キットの形態であってもよい。該キットには、上記検出剤或いはこれを含む上記組成物のほかに、被検体の体液の細胞外小胞における対象タンパク質の検出に使用し得るものを含んでいてもよい。このようなものの具体例としては、各種試薬（例えば二次抗体、緩衝液等）、器具（例えば細胞外小胞の精製、分離、濃縮用器具（例えばカラム等））等が挙げられる。
【００６８】
4．老化モデル動物のスクリーニング方法
本発明は、その一態様において、動物から採取された体液の細胞外小胞における、タンパク質群（A）、及びタンパク質群（B）からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質の量又は濃度を指標とする、老化モデル動物のスクリーニング方法（本明細書において、「本発明のモデル動物スクリーニング方法」と示すこともある。）に関する。以下、これについて説明する。
【００６９】
体液、細胞外小胞、タンパク質群（A）、タンパク質群（B）、老化、対象タンパク質の量又は濃度の測定等については、上記「1．老化の検査方法」における定義と同様である。
【００７０】
動物は、スクリーニング対象動物であり、その生物種はヒト以外の動物である限り特に制限されない。該動物の生物種としては、例えばサル、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウサギなどの種々の哺乳類動物が挙げられ、好ましくはマウスが挙げられる。
【００７１】
動物は、老化誘発処理されたものであってもよい。老化誘発処理としては、例えば遺伝子改変処理；  喫煙曝露、高脂肪食接種等の誘発剤投与（例えば経鼻投与、経口投与、吸入投与、経気管支投与、腹空内投与、静脈投与、経皮投与等）等が挙げられる。
【００７２】
本発明のモデル動物スクリーニング方法は、より具体的には、タンパク質群（A）に関する上記指標の値がカットオフ値以上である場合、及び／又はタンパク質群（B）に関する上記指標の値がカットオフ値以下である場合に、前記動物を老化モデル動物（或いは老化モデル候補動物）として選択する工程を含む。
【００７３】
カットオフ値は、スクリーニングの精度などの観点から当業者が適宜設定することができ、例えば、老化していない被検体から採取された体液の細胞外小胞における対象タンパク質の量及び／又は濃度に基づいて、その都度定められた値、或いは予め定められた値とすることができる。カットオフ値は、タンパク質群（A）については、例えば、老化していない被検体から採取された体液の細胞外小胞における対象タンパク質の量及び／又は濃度（被検体が複数の場合は、平均値、中央値など）の、例えば1.5〜8倍、好ましくは2〜6倍、より好ましくは3〜5倍の値とすることができる。また、カットオフ値は、タンパク質群（B）については、例えば、老化していない被検体から採取された体液の細胞外小胞における対象タンパク質の量及び／又は濃度（被検体が複数の場合は、平均値、中央値など）の、例えば0.1〜0.9倍、好ましくは0.3〜0.8倍、より好ましくは0.5〜0.8倍の値とすることができる。なお、「老化していない被検体」は、特に制限されず、スクリーニングにより選択する動物の老化の程度によっても異なるが、例えば、生後、被検体の生物種の平均寿命（年）の例えば0.4倍以下、好ましくは0.2倍以下、より好ましくは0.1倍以下の年数が経過した状態であると定義することができる。
【００７４】
5．抗老化薬
本発明は、その一態様において、タンパク質群（A）より選択される少なくとも1種のタンパク質の抑制剤、及びタンパク質群（B）より選択される少なくとも1種のタンパク質の亢進剤からなる群より選択される少なくとも1種の剤を含有する、抗老化薬（本明細書において、「本発明の剤」と示すこともある。）に関する。以下、これについて説明する。
【００７５】
タンパク質群（A）、タンパク質群（B）等については、上記「1．老化の検査方法」における定義と同様である。
【００７６】
抑制剤としては、好ましくは対象タンパク質の発現抑制剤が挙げられる。また、亢進剤としては、好ましくは対象タンパク質自身、対象タンパク質の発現促進剤が挙げられる。
【００７７】
対象タンパク質の発現抑制剤としては、対象タンパク質、そのmRNAなどの発現量を抑制し得るものである限り特に制限されず、例えば対象タンパク質の遺伝子特異的small interfering RNA（siRNA）、対象タンパク質の遺伝子特異的microRNA（miRNA）、対象タンパク質の遺伝子特異的アンチセンス核酸、これらの発現ベクター；  対象タンパク質の遺伝子特異的リボザイム；  CRISPR/Casシステムによる対象タンパク質の遺伝子遺伝子編集剤などが挙げられる。
【００７８】
なお、発現抑制とは、対象タンパク質、そのmRNAなどの発現量を、例えば1/2、1/3、1/5、1/10、1/20、1/30、1/50、1/100、1/200、1/300、1/500、1/1000、1/10000以下に抑制することを意味し、これらの発現量を0とすることをも包含する。
【００７９】
対象タンパク質の遺伝子siRNAは、対象タンパク質をコードする遺伝子の発現を特異的に抑制する二本鎖RNA分子である限り特に制限されない。一実施形態において、siRNAは、例えば、18塩基以上、19塩基以上、20塩基以上、又は21塩基以上の長さであることが好ましい。また、siRNAは、例えば、25塩基以下、24塩基以下、23塩基以下、又は22塩基以下の長さであることが好ましい。ここに記載するsiRNAの長さの上限値及び下限値は任意に組み合わせることが想定される。例えば、下限が18塩基であり、上限が25塩基、24塩基、23塩基、又は22塩基である長さ；下限が19塩基であり、上限が25塩基、24塩基、23塩基、又は22塩基である長さ；下限が20塩基であり、上限が25塩基、24塩基、23塩基、又は22塩基である長さ；下限が21塩基であり、上限が25塩基、24塩基、23塩基、又は22塩基である長さの組み合わせが想定される。
【００８０】
siRNAは、shRNA(small hairpin RNA)であっても良い。shRNAは、その一部がステムループ構造を形成するように設計することができる。例えば、shRNAは、ある領域の配列を配列aとし、配列aに対する相補鎖を配列bとすると、配列a、スペーサー、配列bの順になるようにこれらの配列が一本のRNA鎖に存在するようにし、全体で45〜60塩基の長さとなるように設計することができる。配列aは、標的となる対象タンパク質をコードする塩基配列の一部の領域の配列であり、標的領域は特に限定されず、任意の領域を候補にすることが可能である。そして配列aの長さは19〜25塩基、好ましくは19〜21塩基である。
【００８１】
対象タンパク質の遺伝子特異的siRNAは、5’又は3’末端に、付加的な塩基を有していてもよい。該付加的塩基の長さは、通常2〜4塩基程度である。該付加的塩基は、DNAでもRNAでもよいが、DNAを用いると核酸の安定性を向上させることができる場合がある。このような付加的塩基の配列としては、例えばug-3’、uu-3’、tg-3’、tt-3’、ggg-3’、guuu-3’、gttt-3’、ttttt-3’、uuuuu-3’などの配列が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００８２】
siRNAは、3'末端に突出部配列（オーバーハング）を有していてもよく、具体的には、dTdT（dTはデオキシチミジンを表わす）を付加したものが挙げられる。また、末端付加がない平滑末端（ブラントエンド）であってもよい。siRNAは、センス鎖とアンチセンス鎖が異なる塩基数であってもよく、例えば、アンチセンス鎖が3'末端及び5'末端に突出部配列（オーバーハング）を有している「asymmetrical interfering RNA（aiRNA）」を挙げることができる。典型的なaiRNAは、アンチセンス鎖が21塩基からなり、センス鎖が15塩基からなり、アンチセンス鎖の両端で各々3塩基のオーバーハング構造をとる。
【００８３】
対象タンパク質の遺伝子特異的siRNAの標的配列の位置は特に制限されるわけではないが、一実施形態において、5’-UTR及び開始コドンから約50塩基まで、並びに3’-UTR以外の領域から標的配列を選択することが望ましい。選択された標的配列の候補群について、標的以外のmRNAにおいて16-17塩基の連続した配列に相同性がないかどうかを、BLAST（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/）などのホモロジー検索ソフトを用いて調べ、選択した標的配列の特異性を確認することが好ましい。特異性が確認された標的配列について、AA（もしくはNA）以降の19−21塩基にTTもしくはUUの3’末端オーバーハングを有するセンス鎖と、該19−21塩基に相補的な配列及びTTもしくはUUの3’末端オーバーハングを有するアンチセンス鎖とからなる2本鎖RNAをsiRNAとして設計してもよい。また、siRNAの前駆体であるshRNAは、ループ構造を形成しうる任意のリンカー配列（例えば、5-25塩基程度）を適宜選択し、上記センス鎖とアンチセンス鎖とを該リンカー配列を介して連結することにより設計することができる。
【００８４】
siRNA及び／又はshRNAの配列は、種々のwebサイト上に無料で提供される検索ソフトを用いて検索が可能である。このようなサイトとしては、例えば、以下を挙げることができる。
Ambionが提供するsiRNA Target Finder（http://www.ambion.com/jp/techlib/misc/siRNA_finder.html）pSilencer（登録商標）Expression Vector用インサートデザインツール（http://www.ambion.com/jp/techlib/misc/psilencer_converter.html）RNAi Codexが提供するGeneSeer（http://codex.cshl.edu/scripts/newsearchhairpin.cgi）。
【００８５】
siRNAは、mRNA上の標的配列のセンス鎖及びアンチセンス鎖をDNA/RNA自動合成機でそれぞれ合成し、適当なアニーリング緩衝液中、約90〜約95℃で約1分程度変性させた後、約30〜約70℃で約1〜約8時間アニーリングさせることにより調製することができる。また、siRNAの前駆体となるshRNAを合成し、これを、RNA切断タンパク質ダイサー（dicer）を用いて切断することにより調製することもできる。
【００８６】
対象タンパク質の遺伝子特異的miRNAは、対象タンパク質をコードする遺伝子の翻訳を阻害する限り任意である。例えば、miRNAは、siRNAのように標的mRNAを切断するのではなく、標的の3’非翻訳領域（UTR）に対合してその翻訳を阻害してもよい。miRNAは、pri-miRNA（primary miRNA）、pre-miRNA（precursor miRNA）、及び成熟miRNAのいずれでもよい。miRNAの長さは特に制限されず、pri-miRNAの長さは通常数百〜数千塩基であり、pre-miRNAの長さは通常50〜80塩基であり、成熟miRNAの長さは通常18〜30塩基である。一実施形態において、対象タンパク質の遺伝子特異的miRNAは、好ましくはpre-miRNA又は成熟miRNAであり、より好ましくは成熟miRNAである。このような対象タンパク質の遺伝子特異的miRNAは、公知の手法で合成してもよく、合成RNAを提供する会社から購入してもよい。
【００８７】
対象タンパク質の遺伝子特異的アンチセンス核酸とは、対象タンパク質をコードする遺伝子のmRNAの塩基配列と相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列又はその一部を含む核酸であって、該mRNAと特異的かつ安定した二重鎖を形成して結合することにより、対象タンパク質合成を抑制する機能を有する核酸である。アンチセンス核酸はDNA、RNA、DNA/RNAキメラのいずれでもよい。アンチセンス核酸がDNAの場合、標的RNAとアンチセンスDNAとによって形成されるRNA:DNAハイブリッドは、内在性リボヌクレアーゼH（RNase H）に認識されて標的RNAの選択的な分解を引き起こす。したがって、RNase Hによる分解を指向するアンチセンスDNAの場合、標的配列は、mRNA中の配列だけでなく、対象タンパク質の遺伝子の初期翻訳産物におけるイントロン領域の配列であってもよい。イントロン配列は、ゲノム配列と、対象タンパク質の遺伝子のcDNA塩基配列とをBLAST、FASTAなどのホモロジー検索プログラムを用いて比較することにより、決定することができる。
【００８８】
対象タンパク質の遺伝子特異的アンチセンス核酸の標的領域は、該アンチセンス核酸がハイブリダイズすることにより、結果として対象タンパク質への翻訳が阻害されるものであればその長さは制限されない。対象タンパク質の遺伝子特異的アンチセンス核酸は、対象タンパク質をコードするmRNAの全配列であっても部分配列であってもよい。合成の容易さや抗原性、細胞内移行性の問題などを考慮すれば、約10〜約40塩基、特に約15〜約30塩基からなるオリゴヌクレオチドが好ましいが、これらに限定されるものではない。より具体的には、対象タンパク質の遺伝子の5’端ヘアピンループ、5’端非翻訳領域、翻訳開始コドン、タンパク質コード領域、ORF翻訳終止コドン、3’端非翻訳領域、3’端パリンドローム領域又は3’端ヘアピンループなどをアンチセンス核酸の好ましい標的領域として選択しうるが、それらに限定されるものではない。
【００８９】
対象タンパク質の遺伝子特異的アンチセンス核酸は、対象タンパク質の遺伝子のmRNAや初期転写産物とハイブリダイズしてタンパク質への翻訳を阻害するだけでなく、二本鎖DNAであるこれらの遺伝子と結合して三重鎖（トリプレックス）を形成し、RNAへの転写を阻害し得るもの（アンチジーン（antigene））であってもよい。
【００９０】
上記した対象タンパク質の遺伝子特異的siRNA、対象タンパク質の遺伝子特異的miRNA、及び対象タンパク質の遺伝子特異的アンチセンス核酸を構成するヌクレオチド分子は、安定性（化学的及び／又は対酵素）や比活性（RNAとの親和性）を向上させるために、種々の化学修飾を含んでもよい。例えば、ヌクレアーゼなどの加水分解酵素による分解を防ぐために、アンチセンス核酸を構成する各ヌクレオチドのリン酸残基（ホスフェート）を、例えば、ホスホロチオエート（phosphorothioate; PS)、メチルホスホネート（methylphosphonate）、ホスホロジチオネート（phosphorodithioate）などの化学修飾リン酸残基に置換することができる。また、各ヌクレオチドの糖（リボース）の2’位の水酸基を、-OR（R=CH3（2’-O-Me）、CH2CH2OCH3（2’-O-MOE）、CH2CH2NHC(NH)NH2、CH2CONHCH3、又はCH2CH2CNなど）に置換してもよい。さらに、塩基部分（ピリミジン、プリン）に化学修飾を施してもよく、例えば、ピリミジン塩基の5位へのメチル基やカチオン性官能基の導入、あるいは2位のカルボニル基のチオカルボニルへの置換などを施してもよい。また、siRNAやmiRNAを構成するヌクレオチド分子の一部は、天然型のDNAに置換されていてもよい。
【００９１】
対象タンパク質の遺伝子特異的siRNA、対象タンパク質の遺伝子特異的miRNA、及び対象タンパク質の遺伝子特異的アンチセンス核酸などは、対象タンパク質の遺伝子のcDNA配列もしくはゲノミックDNA配列に基づいてmRNAもしくは初期転写産物の標的配列を決定し、市販のDNA/RNA自動合成機を用いて、これに相補的な配列を合成することにより調製することができる。また、上記した各種修飾を含むアンチセンス核酸も、いずれも公知の手法により、化学的に合成することができる。
【００９２】
対象タンパク質の遺伝子特異的siRNA、対象タンパク質の遺伝子特異的miRNA、又は対象タンパク質の遺伝子特異的アンチセンス核酸の発現ベクターについては、対象タンパク質の遺伝子特異的siRNA、対象タンパク質の遺伝子特異的miRNA、又は対象タンパク質の遺伝子特異的アンチセンス核酸が発現可能な状態で組み込まれている限りにおいて特に限定されない。典型的には、該発現ベクターは、プロモーター配列、及び対象タンパク質の遺伝子特異的siRNA、対象タンパク質の遺伝子特異的miRNA、又は対象タンパク質の遺伝子特異的アンチセンス核酸のコード配列（必要に応じて、さらに転写終結シグナル配列）を含むポリヌクレオチド、必要に応じて他の配列を含む。プロモーターは、特に制限されず、例えばCMVプロモーター、EF1プロモーター、SV40プロモーター、MSCVプロモーター、hTERTプロモーター、βアクチンプロモーター、CAGプロモーターなどのRNA polymerase II（polII）系プロモーター；  マウス及びヒトのU6-snRNAプロモーター、ヒトH1-RNase P RNAプロモーター、ヒトバリン-tRNAプロモーターなどのRNA polymerase III（polIII）系プロモーターなどが挙げられ、これらの中でも、短いRNAの転写を正確に行うことができるという観点から、polIII系プロモーターが好ましい。他の配列としては、特に制限されず、発現ベクターが含み得る公知の配列を各種採用することができる。このような配列の一例としては、例えば複製起点、薬剤耐性遺伝子などが挙げられる。また、薬剤耐性遺伝子の種類及びベクターの種類は上述のものを例示できる。
【００９３】
対象タンパク質の遺伝子発現抑制剤の別の例としては、対象タンパク質の遺伝子特異的リボザイムなどが挙げられる。「リボザイム」とは、狭義には、核酸を切断する酵素活性を有するRNAを意味するが、本願では配列特異的な核酸切断活性を有する限りDNAをも包含する。リボザイム核酸として最も汎用性の高いものは、ウイロイドやウイルソイドなどの感染性RNAに見られるセルフスプライシングRNAがあり、ハンマーヘッド型やヘアピン型などが知られている。ハンマーヘッド型は約40塩基程度で酵素活性を発揮し、ハンマーヘッド構造をとる部分に隣接する両端の数塩基ずつ（合わせて約10塩基程度）をmRNAの所望の切断部位と相補的な配列にすることにより、標的mRNAのみを特異的に切断することが可能である。このタイプのリボザイム核酸は、RNAのみを基質とするので、ゲノムDNAを攻撃することがないという利点を有する。対象タンパク質の遺伝子のmRNAが自身で二本鎖構造をとる場合には、RNAヘリカーゼと特異的に結合し得るウイルス核酸由来のRNAモチーフを連結したハイブリッドリボザイムを用いることにより、標的配列を一本鎖にすることができる［Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 98(10): 5572-5577 (2001)］。さらに、リボザイムを、それをコードするDNAを含む発現ベクターの形態で使用する場合には、転写産物の細胞質への移行を促進するために、tRNAを改変した配列をさらに連結したハイブリッドリボザイムとすることもできる［Nucleic Acids Res., 29(13): 2780-2788 (2001)］。
【００９４】
対象タンパク質としては、例えばヒト、サル、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウサギ等の種々の哺乳類由来の対象タンパク質を採用することができる。中でも、抗老化薬の適用対象生物に由来するの対象タンパク質が好ましい。種々の生物種由来の対象タンパク質のアミノ酸配列は公知である。対象タンパク質は、その機能が著しく損なわれていない限りにおいて、アミノ酸の置換、欠失、付加、挿入等の変異を有していてもよい。
【００９５】
対象タンパク質は、T-カドヘリン結合能を有する限りにおいて、化学修飾されたものであってもよい。
【００９６】
対象タンパク質は、C末端がカルボキシル基（−COOH）、カルボキシレート（−COO−）、アミド（−CONH2）またはエステル（−COOR）の何れであってもよい。
【００９７】
ここでエステルにおけるRとしては、例えば、メチル、エチル、n−プロピル、イソプロピル、n−ブチルなどのC1−6アルキル基；例えば、シクロペンチル、シクロヘキシルなどのC3−8シクロアルキル基；例えば、フェニル、α−ナフチルなどのC6−12アリール基；例えば、ベンジル、フェネチルなどのフェニル−C1−2アルキル基；α−ナフチルメチルなどのα−ナフチル−C1−2アルキル基などのC7−14アラルキル基；ピバロイルオキシメチル基などが用いられる。
【００９８】
対象タンパク質は、Ｃ末端以外のカルボキシル基（またはカルボキシレート）が、アミド化またはエステル化されていてもよい。この場合のエステルとしては、例えば上記したＣ末端のエステルなどが用いられる。
【００９９】
さらに、対象タンパク質には、N末端のアミノ酸残基のアミノ基が保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基などのC1−6アルカノイルなどのC1−6アシル基など）で保護されているもの、生体内で切断されて生成し得るN末端のグルタミン残基がピログルタミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基（例えば−OH、−SH、アミノ基、イミダゾール基、インドール基、グアニジノ基など）が適当な保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基などのC1−6アルカノイル基などのC1−6アシル基など）で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖蛋白質などの複合蛋白質なども包含される。
【０１００】
対象タンパク質は、公知のタンパク質タグが付加されたものであってもよい。タンパク質タグとしては、例えばヒスチジンタグ、FLAGタグ、GSTタグ等が挙げられる。
【０１０１】
対象タンパク質は、酸または塩基との薬学的に許容される塩の形態であってもよい。塩は、薬学的に許容される塩である限り特に限定されず、酸性塩、塩基性塩のいずれも採用することができる。例えば酸性塩の例としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸塩；  酢酸塩、プロピオン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、パラトルエンスルホン酸塩等の有機酸塩；  アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩等のアミノ酸塩等が挙げられる。また、塩基性塩の例として、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；  カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩等が挙げられる。
【０１０２】
対象タンパク質は、溶媒和物の形態であってもよい。溶媒は、薬学的に許容されるものであれば特に限定されず、例えば水、エタノール、グリセロール、酢酸等が挙げられる。
【０１０３】
対象タンパク質は、公知の方法に従って、例えば化学合成、哺乳動物の細胞又は組織（例えば血清等）からの精製、対象タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含有する形質転換体からの精製等によって得ることができる。形質転換体からの精製により得る場合、形質転換体としては、対象タンパク質をコードするポリヌクレオチドから対象タンパク質を発現させることができる細胞である限り特に限定されず、大腸菌などの細菌、昆虫細胞、哺乳類細胞等の種々の細胞を利用することができる。
【０１０４】
昆虫細胞としては、例えば、Sf細胞、MG1細胞、High FiveTM細胞、BmN細胞などが用いられる。Sf細胞としては、例えば、Sf9細胞（ATCC CRL1711）、Ｓｆ２１細胞などが用いられる。
【０１０５】
動物細胞としては、例えば、サルCOS−7細胞、サルVero細胞、チャイニーズハムスター細胞CHO、マウスL細胞、マウスAtT−20細胞、マウスミエローマ細胞、ラットGH3細胞、ヒトFL細胞などが用いられる。
【０１０６】
対象タンパク質の発現促進剤は、対象タンパク質量を増加させることができる限りにおいて特に制限されない。
【０１０７】
対象タンパク質発現促進剤としては、例えば対象タンパク質の発現ベクターが挙げられる。対象タンパク質の発現ベクターは、対象タンパク質が発現可能な状態で組み込まれている限りにおいて特に限定されない。典型的には、対象タンパク質の発現ベクターは、プロモーター配列、及び対象タンパク質コード配列（必要に応じて、さらに転写終結シグナル配列）を含むポリヌクレオチドを含む。
【０１０８】
発現ベクターは、特に制限されず、例えば動物細胞発現プラスミド等のプラスミドベクター；  レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、センダイウイルス等のウイルスベクター等が挙げられる。
【０１０９】
プロモーターは、特に制限されず、例えばCMVプロモーター、EF1プロモーター、SV40プロモーター、MSCVプロモーター、hTERTプロモーター、βアクチンプロモーター、CAGプロモーター等が挙げられる。
【０１１０】
発現ベクターは、上記以外にも、発現ベクターが含み得る他のエレメントを含んでいてもよい。他のエレメントとしては、例えば複製基点や薬剤耐性遺伝子等が挙げられる。薬剤耐性遺伝子は、特に制限されないが、例えばクロラムフェニコール耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子、ネオマイシン耐性遺伝子、エリスロマイシン耐性遺伝子、スペクチノマイシン耐性遺伝子、カナマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子、ピューロマイシン耐性遺伝子等が挙げられる。
【０１１１】
対象タンパク質の発現ベクターは、公知の遺伝子工学的手法に従って容易に得ることができる。例えば、PCR、制限酵素切断、DNA連結技術等を利用して作製することができる。
【０１１２】
対象タンパク質発現促進剤の別の例としては、対象タンパク質の転写活性化因子及びその発現ベクター、対象タンパク質の転写を活性化できる低分子化合物等が挙げられる。発現ベクターの態様については、上記対象タンパク質の発現ベクターと同様である。
【０１１３】
本発明の剤の適用対象は特に限定されず、例えば、ヒト、サル、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウサギ、ブタ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、シカなどの種々の哺乳類動物などが挙げられる。
【０１１４】
本発明の剤の形態は、特に限定されず、本発明の剤の用途に応じて、各用途において通常使用される形態をとることができる。
【０１１５】
形態としては、用途が医薬、健康増進剤、栄養補助剤（サプリメントなど）などである場合は、例えば錠剤（口腔内側崩壊錠、咀嚼可能錠、発泡錠、トローチ剤、ゼリー状ドロップ剤などを含む）、丸剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、ドライシロップ剤、液剤（ドリンク剤、懸濁剤、シロップ剤を含む）、ゼリー剤などの経口摂取に適した製剤形態（経口製剤形態）、点鼻剤、吸入剤、肛門坐剤、挿入剤、浣腸剤、ゼリー剤、注射剤、貼付剤、ローション剤、クリーム剤などの非経口摂取に適した製剤形態（非経口製剤形態）が挙げられる。
【０１１６】
形態としては、用途が食品組成物の場合は、液状、ゲル状あるいは固形状の食品、例えばジュース、清涼飲料、茶、スープ、豆乳、サラダ油、ドレッシング、ヨーグルト、ゼリー、プリン、ふりかけ、育児用粉乳、ケーキミックス、粉末状または液状の乳製品、パン、クッキーなどが挙げられる。
【０１１７】
形態としては、用途が口腔用組成物である場合は、例えば液体（溶液、乳液、懸濁液など）、半固体（ゲル、クリーム、ペーストなど）、固体（錠剤、粒子状剤、カプセル剤、フィルム剤、混練物、溶融固体、ロウ状固体、弾性固体など）などの任意の形態、より具体的には、歯磨剤（練歯磨、液体歯磨、液状歯磨、粉歯磨など）、洗口剤、塗布剤、貼付剤、口中清涼剤、食品（例えば、チューインガム、錠菓、キャンディ、グミ、フィルム、トローチなど）などが挙げられる。
【０１１８】
本発明の剤は、必要に応じてさらに他の成分を含んでいてもよい。他の成分としては、例えば医薬、食品組成物、口腔用組成物、健康増進剤、栄養補助剤（サプリメントなど）などに配合され得る成分である限り特に限定されるものではないが、例えば基剤、担体、溶剤、分散剤、乳化剤、緩衝剤、安定剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、増粘剤、保湿剤、着色料、香料、キレート剤などが挙げられる。
【０１１９】
本発明の剤の有効成分（タンパク質群（A）より選択される少なくとも1種のタンパク質の抑制剤、及びタンパク質群（B）より選択される少なくとも1種のタンパク質の亢進剤からなる群より選択される少なくとも1種の剤）の含有量は、有効成分の種類、用途、使用態様、適用対象、適用対象の状態などに左右されるものであり、限定はされないが、例えば0.0001〜100重量％、好ましくは0.001〜50重量％とすることができる。
【０１２０】
本発明の組成物の適用（例えば、投与、摂取、接種など）量は、薬効を発現する有効量であれば特に限定されず、通常は、有効成分の重量として、一般に一日あたり0.1〜1000 mg/kg体重である。上記投与量は1日1回又は2〜3回に分けて投与するのが好ましく、年齢、病態、症状により適宜増減することもできる。
【０１２１】
6．抗老化薬の有効成分のスクリーニング方法
本発明は、その一態様において、被検物質で処理された動物から採取された体液の細胞外小胞における、タンパク質群（A）、及びタンパク質群（B）からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質の量又は濃度を指標とする、抗老化薬の有効成分のスクリーニング方法（本明細書において、「本発明の有効成分スクリーニング方法」と示すこともある。）に関する。以下、これについて説明する。
【０１２２】
体液、細胞外小胞、タンパク質群（A）、タンパク質群（B）、老化、対象タンパク質の量又は濃度の測定等については、上記「1．老化の検査方法」における定義と同様である。
【０１２３】
動物の生物種は特に制限されない。動物の生物種としては、例えばヒト、サル、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウサギなどの種々の哺乳類動物が挙げられ、好ましくはマウスが挙げられる。
【０１２４】
被検物質としては、天然に存在する化合物又は人工に作られた化合物を問わず広く使用することができる。また、精製された化合物に限らず、多種の化合物を混合した組成物や、動植物の抽出液も使用することができる。化合物には、低分子化合物に限らず、タンパク質、核酸、多糖類等の高分子化合物も包含される。
【０１２５】
本発明の有効成分スクリーニング方法は、より具体的には、タンパク質群（A）に関する上記指標の値が、被検物質で処理されていない動物から採取された体液の細胞外小胞における対応タンパク質の量又は濃度（対照値）よりも低い場合に、前記被検物質を抗老化薬の有効成分（或いは、抗老化薬の有効成分の候補物質）として選択する工程、並びにタンパク質群（B）に関する上記指標の値が、被検物質で処理されていない動物から採取された体液の細胞外小胞における対応タンパク質の量又は濃度（対照値）よりも高い場合に、前記被検物質を抗老化薬の有効成分（或いは、抗老化薬の有効成分の候補物質）として選択する工程からなる群より選択される少なくとも1種の工程を含む。
【０１２６】
対応タンパク質とは、指標としている対象タンパク質と同じタンパク質を意味する。
【０１２７】
「低い」とは、例えば指標の値が、対照値の1/2、1/5、1/10、1/20、1/50、1/100であることを意味する。
【０１２８】
「高い」とは、例えば指標の値が、対照値の2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍であることを意味する。
【０１２９】
7．老化亢進性の評価方法
本発明は、その一態様において、被検物質で処理された動物から採取された体液の細胞外小胞における、タンパク質群（A）、及びタンパク質群（B）からなる群より選択される少なくとも1種のタンパク質の量又は濃度を指標とする、老化亢進性の評価方法（本明細書において、「本発明の毒性評価方法」と示すこともある。）に関する。以下、これについて説明する。
【０１３０】
体液、細胞外小胞、タンパク質群（A）、タンパク質群（B）、老化、対象タンパク質の量又は濃度の測定、動物の生物種、被検物質等については、上記「1．老化の検査方法」及び「6．抗老化薬の有効成分のスクリーニング方法」における定義と同様である。
【０１３１】
本発明の毒性評価方法は、より具体的には、タンパク質群（A）に関する上記指標の値が、被検物質で処理されていない動物から採取された体液の細胞外小胞における対応タンパク質の量又は濃度（対照値）よりも高い場合に、前記被検物質を老化亢進性があると判定する工程、並びにタンパク質群（B）に関する上記指標の値が、被検物質で処理されていない動物から採取された体液の細胞外小胞における対応タンパク質の量又は濃度（対照値）よりも低い場合に、前記被検物質を老化亢進性があると判定する工程からなる群より選択される少なくとも1種の工程を含む。
【０１３２】
対応タンパク質とは、指標としている対象タンパク質と同じタンパク質を意味する。
【０１３３】
「高い」とは、例えば指標の値が、対照値の2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍であることを意味する。
【０１３４】
「低い」とは、例えば指標の値が、対照値の1/2、1/5、1/10、1/20、1/50、1/100であることを意味する。
【実施例】
【０１３５】
以下に、実施例に基づいて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
【０１３６】
試験例1．細胞外小胞画分の調製
11週齢のC57BL6/J雄マウス（コントロールマウス、n＝8）の血清、又は1.5歳のC57BL6/J雄マウス（老化マウス、n＝8）の血清から、細胞外小胞画分を調製した。の細胞外小胞画分の調製は、細胞外小胞精製カラム（EV-Second、ジーエルサイエンス社製）を用いて行った。
【０１３７】
試験例2．プロテオミクス解析（ノンラベル、LC-MS/MS）
細胞外小胞画分中のタンパク質の定量を、LC-MS/MS分析（ノンラベル法）により行った。具体的には以下のようにして行った。
【０１３８】
（サンプル調製）
細胞外小胞画分を、5mMのTCEPを用いて37℃で30分間還元し、25mMのヨードアセトアミドを用いて室温で45分間アルキル化した。その後、サンプルを50mM重炭酸アンモニウムで7倍希釈し、96ウェルフィルタープレートに入れ、5μLの固定化トリプシン（Thermo Fisher Scientific社製）と共に37℃で6時間振とうして、消化させた。トリプシン消化物を、Oasis HLB 96-well μElution Plate（Waters Corporation社製、米国）を用いて脱塩し、LC-MS/MS分析に供した。
【０１３９】
（LC／MS／MS分析）
乾燥したペプチドサンプルを、0.1％のトリフルオロ酢酸を含む、2％のアセトニトリル溶液に再懸濁し、Ultimate 3000 RSLC nano-flow HPLC system（DIONEX社製、米国）を備えるLTQ-Orbitrap-Velos mass spectrometer（Thermo Fisher Scientific社製）を用いて分析した。75μm × 150 mm C18 tip-column（日京テクノス社製）において、溶媒A（0．1％のギ酸）および溶媒B（アセトニトリル中の0．1％ギ酸）を用い、流速250nL／分において、95分間で溶媒Bを6.4〜30％、その後10分間で溶媒Bを30〜95％とする多段階直線勾配で、サンプルを分離した。
【０１４０】
溶出したペプチドを、2000 Vのスプレー電圧でイオン化し、MSデータをデータ依存型フラグメント法で取得した。測定スキャン（survey scan）は、m／z 400〜1600、分解度60000、AGCターゲット値1.0×106イオンカウントで行った。各測定スキャンにおける上位20の強度の前駆イオンを、リニアイオントラップでAGCターゲット値5000イオンカウントのノーマルCIDスキャンモードを用いた低分解能MS/MS取得に供した。
【０１４１】
Proteome Discoverer 1.3 software（Thermo Fischer Scientific社製）を用いてSEQUESTデータベースサーチを行い、タンパク質の同定を試みた。MS/MSスペクトルをマウスタンパク質データベースUniProtに対して検索した。検索パラメーターは次のとおりである：Enzyme Name = Semitrypsin、Precursor Mass Tolerance = 3 ppm、Fragment Mass Tolerance = 0.8 Da、Dynamic Modification = Oxidation (Met)、Static Modification = Carbamidomethyl (Cys)。SEQUEST Decoy Database SearchにおけるPeptide Validator activityによるFDR（false discovery rate）が1％未満である場合に、そのペプチドと同定した。
【０１４２】
（Expressionistサーバーにおけるラベルフリー定量分析）
LC-MS/MSのデータセットを、Expressionist RefinerMS module（Genedata AG社製、スイス）にロードし、データ処理およびフリー定量分析を行った。RefinerMS softwareの全体的なワークフローを図2に示す。2D MSクロマトグラム面（x = m/z 、y =RT）上の10個のデータポイント毎にSpectrum Gridをセッティングした。次いで、第1および第2のChemical Noise Subtractionにおいて、RT = 2 scansおよびm/z = 6 pointsで、Structure Removalを順次行った。続いて、第3のChemical Noise Subtractionにおいて、RT Window = 500 scansおよびQuantile = 90%でStructure Removalを行った。第4のChemical Noise Subtractionにおいて、RT = 2 scansでStructure Removalを行った。その後、2000未満の強度のシグナルを、Intensity Thresholdingを用いて排除した。最後に、第5および第6のChemical Noise Subtractionにおいて、ぞれぞれRT = 2 scansおよびm/z = 5 pointsでStructure Removal行った。
【０１４３】
次いで、Chromatogram Gridをノイズ減算データ上の10スキャン毎にセットし、次のパラメーターを用いてChromatogram RT Alignmentを行った：m/z Window = 11 points、RT Window = 11 scans、Gap Penalty = 1、RT Search Interval = 2 minutes、Alignment Scheme = pairwise alignment based tree。
【０１４４】
続いて、一時的平均化クロマトグラムにおけるピークを、次のパラメーターを用いて、Summed Peak Detection Activityによって検出した：Summation Window = 20 scans、Overlap = 10、Minimum Peak Size = 6 scans、Maximum Merge Distance = 1 data points、Gap/Peak Ratio = 5、Method = curvature-based peak detection、Peak Refinement Threshold = 5、Consistency Filter Threshold = 1。最後に、Summed Isotope Clustering Activityを用いて、1つの分子に由来する同位体ピークを同位体クラスターにグループ化した。このときのパラメーターは次のとおりである：Minimum Charge = 1、Maximum Charge = 6、Maximum Missing Peaks = 0、First Allowed Gap Position = 10、Ionization =protonation、RT Tolerance = 0.1 minute、m/z Tolerance = 0.01 Da、Minimum Cluster Size Ratio = 0.5。
【０１４５】
（Expressionist Analystにおける統計学的解析）
組織線維化疾患モデルマウス群と正常マウス群とを比較し、t-検定により、2つの群間で有意に（P<0.05）離れた発現レベルを示す候補を抽出した。同様に、慢性閉塞性肺疾患モデルマウス群と正常マウス群とを比較し、t-検定により、2つの群間で有意に（P<0.05）離れた発現レベルを示す候補を抽出した。次に、バイオマーカー候補の最小の組合せを、Expressionist Analyst module （Genedata AG）におけるSupport Vector Machine-Recursive Feature Elimination（SVM-RFE）アルゴリズムまたはSVM-SVMアルゴリズムによって、取扱説明書に従い、見積もった。
【０１４６】
（結果）
各種タンパク質の定量データを得た。老化マウスの細胞外小胞画分における量の平均値（老化群）が、コントロールマウスの細胞外小胞画分における量の平均値（コントロール群）の約4倍以上であったタンパク質、及びコントロール群では発現を確認できないが老化群では発現が確認できたタンパク質を、老化バイオマーカーとして一定程度の有効性があると判定し、選択した（表１〜３）。また、老化マウスの細胞外小胞画分における量の平均値（老化群）が、コントロールマウスの細胞外小胞画分における量の平均値（コントロール群）に対して有意に（p値＜0.05）低下していたタンパク質、及び老化群では発現を確認できないがコントロール群では発現が確認できたタンパク質を、老化バイオマーカーとして一定程度の有効性があると判定し、選択した（表４）。
【０１４７】
【表１】
2018151276.tif 000002
【０１４８】
【表２】
2018151276.tif 000003
【０１４９】
【表３】
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【０１５０】
【表４】
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