(57)【要約】本発明は高分子の試料を分別する方法、とくに電気泳動法でタンパク質を分離する方法であって、分離法を行う前に、試料中の少なくとも１つの高分子を少なくとも１つの基で改質させ、それを温和な条件でもう一度部分的にまたは完全に除くことができることを特徴とする方法に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
高分子の１つの試料を分別する方法であって、該分離法に先立って、該試料中の少なくとも１つの高分子を少なくとも１つの改質基に共有結合させ、該基を温和な条件でもう一度部分的にまたは完全に除くことができることを特徴とする方法。
【請求項２】
該少なくとも１つの改質基を、該高分子中の少なくとも１つの反応基との反応によって該少なくとも１つの高分子に結合させることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３】
該反応基が第一、第二もしくは第三アミノ基、ＳＨ基またはアルデヒド基であることを特徴とする請求項２記載の方法。
【請求項４】
該反応基がアミノ酸残基または糖残基の一部であることを特徴とする請求項２記載の方法。
【請求項５】
該少なくとも１つの高分子がタンパク質、糖もしくは核酸であるか、またはこの高分子が前記化合物の少なくとも１つを含み、さらに該高分子を改質させることも可能であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項６】
該高分子が少なくとも１つの疎水性タンパク質を含むことを特徴とする請求項５記載の方法。
【請求項７】
該疎水性タンパク質が膜タンパク質であることを特徴とする請求項６記載の方法。
【請求項８】
該高分子試料が完全にまたは部分的に細胞、オルガネラ、細胞膜またはオルガネラ膜のプロテオ−ムを含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項９】
該改質基がＤＮＡ、ＲＮＡおよび／またはＰＮＡを含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１０】
該改質基がチオール基、アシルハライド、ヒドラジド、アミノ基、ハロアセチル誘導体、マレイミド、ビニルスルホン、活性エステル、アルデヒド、イソチオシアナート、イソシアナート、アシルアジド、スルホニルクロリド、活性カルボナート、イミドエステルおよび酸無水物からなる群から選ばれる少なくとも１種の官能基を含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１１】
温和な条件で開裂させることができる結合を該高分子と該改質基との間に形成させることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１２】
該高分子と該改質基との間に安定な化学結合を形成させ、かつ温和な条件で開裂させることができる少なくとも１つの結合を該改質基が含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１３】
温和な条件で開裂させることができる結合がジスルフィド橋、光で開裂可能な基またはビシナルジオール基であることを特徴とする請求項１１または１２記載の方法。
【請求項１４】
該分離方法がクロマトグラフ法または電気泳動法であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１５】
該方法がポリアクリルアミドゲル電気泳動法であることを特徴とする請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
その方法が多次元法であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１７】
下記の、
ａ）  高分子試料を少なくとも１つの改質基と反応させ、
ｂ）  （ａ）による試料を用いて少なくとも１つの分離工程を行わせ、
ｃ）  該改質されたた高分子から該少なくとも１つの改質基を完全にまたは部分的に除
き、
ｄ）  （ｃ）による試料を用いて少なくとも１つの更なる分離工程を行わせる
工程を含む請求項１記載の方法。
【請求項１８】
（ｂ）および（ｄ）による少なくとも１つの分離工程がＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動法であることを特徴とする請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
（ｃ）による該改質基を温和な条件で除くことを特徴とする請求項１７記載の方法。
【請求項２０】
該改質基を還元的、酸化的または電気的に除くことを特徴とする請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
該改質基を除いた後該高分子にバーコードが残留することを特徴とする請求項１９記載の方法。
【請求項２２】
該バ−コードが、改質させることもできる少なくとも１種の核酸またはＰＮＡを含むことを特徴とする請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
工程（ｄ）の分離方向が工程（ｄ）の方向とは異なり、好ましくは工程（ｄ）の分離が工程（ｂ）の分離に対して略直角に生じることを特徴とする請求項１７記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
本発明は、高分子の試料を分別する方法であって、該分離法を行う前に、試料中の少なくとも１つの高分子を、少なくとも１つの基で改質させ、該基を温和な条件でもう一度部分的にまたは完全に除くことができることを特徴とする方法に関する。
【０００２】
電気泳動及びクロマトグラフ分離法は、分離する化合物の電荷、サイズまたは分子量のような物理的又は生化学的性質を利用する。これらの方法では、類似の物理的または生化学的性質を有する化合物の場合に分離の問題が生じる。たとえば、二次元ゲル電気泳動法のような標準分離法を用いては分離させることができない疎水性タンパク質、とくに膜タンパク質の分離は、この点に関し特別な問題を生じる。
【０００３】
二次元ゲル電気泳動法の場合には、試料中の種をそのｐＩ値によって分離する等電集束の方式の第１工程は、概して第１工程と直角であって、試料中の種を主にその分子量によって分離するＳＤＳゲル電気泳動方式の分離工程を伴う。
【０００４】
膜タンパク質または疎水性タンパク質の等電集束に関する基本的問題は、概して、この方法では無電荷、すなわち中性または両性イオン洗浄剤が使用できるにすぎず、膜タンパク質を可溶化させるのに最適なＳＤＳのようなイオン洗浄剤を用いることができないという事実である。
【０００５】
したがって、等電集束による膜タンパク質の分離に関する問題点の根拠は、とくに試料中の膜タンパク質の不十分な可溶化、疎水性タンパク質のポリアクリルアミドゲルマトリックスへの吸着および等電点における膜タンパク質の溶解度に関する問題である。
【０００６】
それ故、タンパク質混合物の特性を決定するために通常用いることができる二次元ゲル電気泳動法はとくに膜タンパク質には全く不適当である。
したがって、本発明の目的は、その生化学的または物理的性質のために、通常の分離法を用いる場合には分離できないか、または辛うじて分離できるにすぎない高分子の分離法を提供することであった。
【０００７】
とりわけ、本発明の目的は、疎水性タンパク質、とくに膜タンパク質を分離するために多次元法を利用可能にすることであって、この方法は前記の従来用いられている分離法よりも疎水性タンパク質を分離するのに好適であった。
【０００８】
本発明によれば、この目的は、分離法を行う前に、試料中の高分子を少なくとも１つの基と加温して該基を試料中の少なくとも１つの高分子に共有結合させることができ、そして高分子に結合後に、加温の後試料中の少なくとも１つの高分子を少なくとも１つの基で改質させ、そして分離法を行った後、適切ならば、未改質の出発化合物、またはバーコードを付与しただけの出発化合物をもう一度得ることができるように、温和な条件下で改質基をもう一度部分的にまたは完全に除くことができる方法によって達成される。適切ならば、さらにこのように脱改質させた高分子を用いてさらなる分離工程を行うことも可能である。
【０００９】
先行技術（ＷＯ  ９９／１９５１４）は、分離法を行う前に、いずれの高分子も逆転できないように、すなわち温和な条件下では改質基を除去することができないように、共役的に改質させるか、または共有的に結合しない挿入染料による完全に非特性的なラベリングが行われる今までのところでは記述されているだけの方法しか有していない。いずれの方法も本発明による目的を達成するには不適当である。
【００１０】
したがって、本発明は、高分子の試料を分別する方法に関し、該方法は分離法を行う前に、試料中の少なくとも１つの高分子を少なくとも１つの基で逆転できるように化学的に改質させることを特徴とし、この場合に逆転可能な化学的改質とは挿入された基を温和な条件でもう一度高分子から部分的又は完全に除去できることを意味する。
【００１１】
このようにして試料中の高分子の選択的および特定的改質は、分子量、極性または電荷のような高分子の物理的および／または生化学的性質を選択的および特定的に変えるか、または前記の性質に基づく適当な方法を用いて高分子を分離することが可能なように、磁気または放射性標識のような標識の導入をもたらす。
【００１２】
これに関し、該方法は、同一または極めて類似の性質、とくに、たとえば同一または類似の分子量を有するが、その官能基、化学的改質基の数では相互に異なる高分子を分離するのにとくに適当である。たとえば、このようにして、改質基との反応によって、さらに該高分子を分離することができるように、個々の高分子の分子量をその官能基によって異なる程度に増大させることができる。
【００１３】
ちなみに、本発明によれば、該高分子は、たとえば、炭水化物、核酸またはタンパク質、とくに疎水性タンパク質、とりわけ膜タンパク質、または前記化合物の少なくとも１種を含む化合物もしくは錯体である。該化合物は、たとえば糖タンパク質であることができ、該錯体は、たとえば洗浄剤を用いて可溶化させた膜タンパク質であることができる。本発明によれば、これらの高分子は当業者には公知のように改質させることもできる。
【００１４】
したがって高分子試料は、前記の基の少なくとも１つから選ばれる少なくとも２つの高分子を含む試料であって、該試料は、その生化学的もしくは物理的性質により、または技術的理由から、分離法では分離させることができないか、または辛うじて、とくに不十分に分離させることができるだけの少なくとも２つの高分子を含む試料が好ましい。
【００１５】
好ましい態様によれば、該高分子試料は完全にまたは部分的に、細胞および／またはオルガネラのゲノムまたはプロテオーム、とくに細胞膜またはオルガネラ膜のプロテオームのような天然の集合体を含み、ここで「部分的」という言葉は該試料が該集合体中に少なくとも５個、とくに好ましくは少なくとも１０個の高分子、とくには少なくとも２０個の高分子を含むことを意味するのが好ましい。
【００１６】
本発明によれば、試料は改質基で改質させることができる少なくとも１個の高分子を含むけれども、試料中の高分子の数個またはすべてを少なくとも１個、好ましくは数個の改質基で改質させることができるのが好ましい。
【００１７】
本発明によれば、少なくとも１つの改質基による少なくとも１つの高分子の改質がそれぞれ１つの官能基を含む高分子及び改質基によって可能にされ、該官能基は相互に結合、好ましくは共有結合を形成することができる。たとえば、高分子が少なくとも１個の求核基を含み、改質基が少なくとも１個の求電子基を含むか、または逆の場合も同様である。高分子中の少なくとも１個の官能基を、改質基に属する少なくとも１個の官能基と区別するために、以下「反応基」とも呼ぶ。
【００１８】
同様に、改質基は、たとえば、そして高分子によって保持される反応基によって、下記官能基の少なくとも１種を含むことができる：ヒドラジドまたはアミノ基（アルデヒド基との反応用）、チオール基、ハロアセチル誘導体、たとえばＲＣＯＣＨ２Ｉ、マレイミド基またはビニルスルフォン基（チオール基との反応用）、または活性エステル、たとえばＮＨＳ、アルデヒド基、イソチオシアナート、イソシアナート、アシルアジド誘導体、スルホニルクロリド、活性カルボナート誘導体、イミドエステルまたは酸無水物（アミノ基との反応用）。
【００１９】
高分子が含む少なくとも１つの反応基は好ましくは第一、第二もしくは第三アミノ基および／またはチオール基である。特定態様において、これらの基はアミノ酸またはアミノ酸残基中に存在することができる。該反応基は高分子中に生来存在するか、または当業者の公知の方法で高分子中に導入させることができる。好ましくは、改質させるべき高分子中には数個の反応基が存在する。
【００２０】
好ましい態様では、該反応基は、天然のタンパク質中に存在するリシン残基のアミノ基ならびにシステイン残基のＮ−末端アミノ基および／またはチオール基である。
他の好ましい態様では、反応基はケトまたはアルデヒド基、たとえば糖成分又は糖タンパク質中に存在するアルデヒド基である。
【００２１】
また高分子は、たとえば異なる改質基と選択的に反応することができる数個の同一または異なる反応基を含有することもできる。同様に、改質基が数個の同一または異なる官能基を含有することもできる。数個の反応基を有する高分子は数個の改質基で同時かまたは連続的に改質させることができる。
【００２２】
改質基は、試料中の少なくとも１つの高分子と結合を形成し、それを温和な条件下でもう一度開裂させることができるか、または高分子との安定な結合に組み入れることができ、該基を温和な条件下では開裂させることはできないが、この結合を開裂させるときには、改質基の一部、好ましくは大部分をもう一度除くことができるように、改質基を温和な条件下で開裂させることができる結合を含むという事実によって区別される。これは、意図する目的によって、分離法を行った後、改質基を完全にまたは部分的に除くことができ、それによって、完全に脱改質されたかまたは広範囲に脱改質された高分子をもう一度確実に得ることがでできる。
【００２３】
第１の場合、すなわち改質基をもう一度完全に除くことができる場合には、反応基と官能基はそれぞれチオール基であることが好ましい。ついで改質基を温和な酸化条件下で導入し、そしてもう一度温和な還元条件下で除くことができる。
【００２４】
第２の場合には、反応基と官能基は、たとえばＣ−Ｃ結合、アミド結合、とくにペプチド結合、またはエステル結合、もしくは他の安定な結合、とくに当業者の公知な共有結合のような、温和な化学的条件下では容易に開裂させることのできない相互に安定な共有結合によって形成させることができる前記の１つの基である。しかし、この場合には、改質基は温和な反応条件下で開裂させることができる結合を含む。
【００２５】
本発明によれば、温和な条件下で開裂させることができる結合とは、たとえば温和な還元又は酸化条件下で開裂させることができる結合、またはｐＨおよび／またはレドックス電位の僅かな上昇または下降で開裂させることができる結合、または、たとえば電気的に開裂させることができる結合を意味する。概して、これは、さらに、改質を行う前に試料中に存在するタンパク質のような高分子において遭遇するような、通常遭遇する共有結合の開裂は起こらない条件を意味する。すなわち、高分子の少なくとも第一構造を変化させない反応条件下では該結合を開裂させることができる。他の好ましい態様では、高分子の第二または第三構造を維持しながら開裂を行うこともできる。
【００２６】
とくに、温和な条件下で開裂させることができる基は、この場合には、たとえば、中位の還元性とすることによって開裂させることができるジスルフィド橋であるか、または、たとえば、過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）もしくは四酢酸鉛（Ｐｂ（ＯＡｃ）４）で開裂させることができるビシナル  シス−ジオール基であるか、または、たとえば１−（２−ニトロフェニル）エチルエステルのような３００−３６０ｎｍの紫外線で開裂させることができる光開裂基であるか、または、たとえば、下記出版物の１つにあるような他の光開裂基であることができる：Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９９５）９２：７５９０−４：Ｐｈｏｔｏｃｌｅａｖａｂｌｅ  ｂｉｏｔｉｎ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ：ａ  ｖｅｒｓａｔｉｌｅ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ；Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（１９９７）６２：２３７０−８０：Ｍｏｄｅｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｎｅｗ  ｏ−ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｙｌ  ｐｈｏｔｏｌａｂｉｌｅ  ｌｉｎｋｅｒｓ：ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｒａｔｅｓ  ｏｆ  ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｌｅａｖａｇｅ。
【００２７】
温和な化学的条件下で開裂させることができる結合は改質基のいかなる領域におくこともできる。しかし、好ましい態様では、該結合を開裂させるときに、ほとんどの改質基をもう一度除くように、該結合を高分子と改質基との間に形成された安定な結合の近傍に置き、このようにして改質基が一旦除かれると、高分子の初期分子量をもう一度大幅に回復させるように、高分子に残留する該基の残基が脱改質高分子の分子量の１０％以下、とくに好ましくは５％以下、とりわけ２％以下になるのが好ましい。
【００２８】
１つの特定態様において、この場合には高分子に残留する改質基の残基はバーコードである。これに関し、バーコードは、好ましくは、たとえば放射性標識化オリゴヌクレオチドおよび／または、処理高分子と対照高分子とを区別して、適切ならば、これらの高分子をゲル上で分離して別々に検知することを可能にする基とのゲル内ハイブリッド形成のための検知用に用いることができる基である。
【００２９】
したがって、この意味において、未処理及び対照分子の識別を可能にする任意の基がバーコードとして用いるのに適当である。しかし、本発明によれば、バーコードは好ましくは少なくとも１つのオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチド、とくに１つのＲＮＡまたはＤＮＡ、もしくはいわゆるペプチド核酸（ＰＮＡ）を含み、これらの化合物は一本鎖または二本鎖状で存在することができる。他の好ましい態様では、少なくとも１つの芳香族基、たとえば複素環式基で核酸を標識化する。
【００３０】
試料中の高分子を改質する場合に、試料中の種を均質に改質させるような条件を選ぶのが好ましい。この点に関し、均質とは、単一高分子が含有する反応基の数によって異なる程度に試料中の高分子を標識化することを意味する。
【００３１】
これに関連し、たとえば、高分子中のすべての反応基を改質基と反応させるか、さもないと、たとえば、比較的低濃度の改質基を用いる結果として、高分子中の反応基の特定パーセントのみを改質基と反応させるように条件を選ぶことができる。
【００３２】
本来の高分子を改質させる場合には、たとえば、特定反応基のみを改質基、たとえばその性質によって他の基よりも高反応性を示す基、または、高分子の第三構造のために、たとえば外部に曝露されるので、他の基よりもさらに容易に接近可能となる基と反応させるように反応条件を選ぶこともできる。
【００３３】
このような選択的標識化は、たとえば異なる反応基および／または官能基の反応性を区別することができるように、少なくとも１つの改質基との加温中に反応条件を選ぶことにより、または、後者の場合には、高分子の第三構造を少なくとも部分的に保持させ、内部に向いているのではなくて外部に曝露する反応基のみを生じさせて、改質に利用可能とすることによって達成することができる。
【００３４】
本発明によれば、分離法は少なくとも１つの電気泳動またはクロマトグラフ分離工程を含む。この場合に、適切に分離法、たとえばポリアクリルアミドゲル電気泳動法を行うために、ゲルに載せる前に当業者が公知のような適当な方法で試料を調製するのが好ましい。本発明によれば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動法を行うために高分離効率を有するポリアクリルアミドゲルを用いるのがとくに好ましい。本発明によれば、該分離法は分析および準備のいずれの目的にも用いることができる。
【００３５】
好ましい態様においては、該分離法は多次元、とくに二次元分離法であり、とくに好ましい態様では、これに関し、高分子の試料を少なくとも１つの改質基と加温し、ついでこのように処理されて少なくとも１つの改質高分子を含有する試料について少なくとも１回の分離工程を行い、その後改質基を完全にまたは部分的に除き、続いてこのように脱改質された高分子について同様に少なくとも１回の分離工程を行うように分離法を行う。
【００３６】
二者択一的または付加的に、高分子が改質された以前でさえも、未処理の高分子について１回以上の分離工程を行うことももちろん可能である。
これに関する分離工程は、それぞれが独立してクロマトグラフ法または電気泳動法であることができる。とくに好ましい態様では、高分子を分離するためにポリアクリルアミドゲル電気泳動法（ＰＡＧＥ）が用いられる。
【００３７】
この点に関し、とりわけ疎水性タンパク質、とくに膜タンパク質を分離する場合に、二次元ゲル−電気泳動法の最初の分離工程として通常用いられる等電集束の代わりに、膜タンパク質を可溶化させるのにとくに適当なイオン洗浄剤を用いることも可能なタンパク質についての分離工程を行うことができるという特別の利点が得られる。
【００３８】
したがって本発明によれば、第１の分離工程は、とくにこの場合に可逆的に化学的に改質されたタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて電気泳動で分離することにあるのが好ましい。次いで第２工程は、改質基が完全にまたは部分的に除かれた後、最初の分離方向に対して略直角に行うのが好ましく、この工程も同様に、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて行われる脱改質タンパク質の電気泳動分離法である。
【００３９】
公知の２Ｄ法に比べて本発明による２Ｄゲル法の特別の利点は、第１分離工程においてはもともとイオン洗浄剤を用いることができるけれども、イオン洗浄剤は、とくに試料調製の際にも使用できることである。これは、とくに、従来の２Ｄゲル電気泳動法の技術を用いることができない疎水性タンパク質、とくに膜タンパク質をいっそう強力に分離させることができる。
【００４０】
（実施例）
モデルタンパク質（可溶性膜タンパク質および内在性膜タンパク質）をそのアミノ末端ＮＨ２およびリシン側鎖において１％ＳＤＳ溶液で変性し、ついでＮＨＳ−ＳＳ−ビオチン（第一アミンに対して選択的）で改質させた。該試薬は３９１  Ｄａ／官能基という質量の増大をもたらす。ＤＴＴを用いる還元によるビオチン基の除去はほぼ本来の分子量であった値をもたらした（３０３  Ｄａ／官能基の減少）。モデル実験において、４種類のタンパク質からなるタンパク質混合物をＮＨＳ−ＳＳ−ビオチンか、または、それぞれ精製Ｒｈｏｄｏｖｕｌｕｍ  ｓｕｌｆｉｄｏｐｈｉｌｕｍ  シトクロム  ｂｓｌ錯体で標識化した。
【００４１】
反応条件（最終濃度）：
タンパク質、  それぞれ０．１ｍｇ／ｍｌ；１２５ｍＭ  ヘペス、ｐＨ８．５から９．０；１％（ｗ／ｖ）ＳＤＳ、ＮＨＳ−ＳＳ−ビオチン、最終濃度  最大２ｍＭ、ＤＭＳＯ、最終濃度  最大１０％。
【００４２】
タンパク質を３７℃のヘペス／ＳＤＳ緩衝液に溶解し、１ｍＭの濃度までビオチニル化試薬（ＤＭＳＯに溶解）を加えることによって、反応を開始させた。約３０分後、ビオチニル化試薬の残り半分を加えて、最終濃度を２ｍＭとし、この混合物をもう一度３７℃で３０分加温した。反応混合物をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した。このようにして、分子量の増大（１０％の範囲内）を達成させることができ、この増大はＤＴＴを用いる還元により可逆的であった。
【００４３】
下表はビオチンリンカーによる改質前後のモデルタンパク質のＲｆ値を示す。ＤＴＴを用いる還元はほぼ本来のＲｆ値であった値をもたらした。
【００４４】
【表１】
2005502865.tif 000003
【００４５】
Ｒｆ値はタンパク質によって移動した距離をブロモフェノールブルーによって移動した距離で除した値である。高Ｒｆ値を有するタンパク質は先端に近接して動く。精製シトクロム  ｂｃｌ錯体は親切にもＰｒｏｆ．Ｉｒｍｇａｒｄ  Ｓｉｎｎｉｎｇによって提供された。使用した錯体の配列は明らかでなく、このために、この場合には、密接に関連するＲｂ．Ｃａｐｓｕｌａｔｕｓから得たｂｃｌ錯体の組成物を使用した。この錯体のすべてのサブユニットは１膜貫通型ヘリックス（Ｃｙｔ  ｃｌ及びリースク）または８膜貫通型ヘリックス（シトクロム  ｂ）を有する内在性膜タンパク質である。その他のモデルタンパク質はすべて可溶性タンパク質である。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】図１はこの方法の好ましい態様を示した線図である。この態様では、改質高分子を用いて第１の局面における分離工程を行い、そして改質基を除いた後、さらに第２の局面において、好ましくは最初の分離方向に対して直角に分離工程を行う。
【図２】図２は改質高分子を示した線図である。卵形の標識Ｐは高分子、たとえばタンパク質を識別する。残基は改質基の１つの好ましい態様を図式で示す。これに関し、改質基は可変領域（トラクター）及び不変領域（バーコード）を含み、両領域は温和な条件で開裂させることができる基によって相互に分離される。この態様において、温和な条件でバーコードを残しながら改質基を除くことができる。バーコードは、たとえば改質高分子と未改質高分子を識別することができる。
【図３】図３は酵母  Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅから得られる公知の膜タンパク質の場合の本来の分子量とリシン数との相関関係を示した図である。
【図４】図４は本来の分子量とシステイン数との対応する相関関係を示した図である。図示のように、類似の分子量を有する膜タンパク質は、これら反応基の改質が高分子の分子量を種々の程度に変えるように、種々の数のシステインおよび／またはリシン残基を有する。
【図５】図５は実施例１で説明したように、該反応の性能を示した図式である。これに関し、Ｒ−ＮＨ２は反応基を有する高分子を表す。この高分子を試薬ＮＨＳ−ＳＳ−ビオチンと反応させると図示化合物の生成をもたらす。ついで温和な条件でジスルフィド基を開裂させて、該改質基の大部分を除去することができる。
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際公開パンフレット】
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2005502865.tif 000025
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2005502865.tif 000027
2005502865.tif 000028
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2005502865.tif 000029
【国際調査報告】
2005502865.tif 000030
2005502865.tif 000031
2005502865.tif 000032
2005502865.tif 000033
2005502865.tif 000034
2005502865.tif 000035