(57)【要約】本発明は、式Ｉの化合物を提供する。ここで、Ａは、ＮまたはＣＲであり、そしてＲ１、Ｒ２およびＧは、本明細書中で記述されるとおりである。これらの化合物は、細胞増殖、細胞死および細胞外刺激に対する応答で関与しているプロテインキナーゼ（特に、Ｓｒｃ哺乳動物プロテインキナーゼ）のインヒビターである。本発明はまた、これらのインヒビターを生成する方法に関する。本発明はまた、本発明のインヒビターを含有する薬学的に受容可能な組成物および種々の障害の治療および予防でこれらの組成物を利用する方法を提供する。
2005500261.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式：
【化１】
2005500261.tif 000022
を有する化合物またはその薬学的に受容可能な誘導体であって、ここで、
Ｇは、−ＸＲまたは−ＸＡｒである；
各Ｘは、独立して、Ｃ１〜６アルキリデン鎖から選択され、ここで、Ｘの１個または２個の非隣接メチレン単位は、必要に応じて、および独立して、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＲＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＲ−または−ＮＲＳＯ２ＮＲ−で置き換えられ；
Ａは、ＮまたはＣＲであり；
各Ｒは、独立して、水素または必要に応じて置換したＣ１〜８脂肪族基から選択されるか、同じ窒素に結合した２個のＲ基は、該窒素と一緒になって、３員〜７員の複素環環を形成し、該複素環は、該窒素に加えて、０個〜２個のヘテロ原子を有し、該ヘテロ原子は、独立して、窒素、酸素またはイオウから選択され；但し、Ｇが−Ｎ（Ｒ）２であるとき、該２個のＲ基は、一緒になって環を形成せず；
Ａｒは、必要に応じて置換した５員〜６員の飽和、部分不飽和またはアリール単環式環、または必要に応じて置換した８員〜１０員の飽和、部分不飽和またはアリール二環式環であり、該単環式環は、０個〜３個のヘテロ原子を有し、該ヘテロ原子は、独立して、窒素、イオウまたは酸素から選択され、また、該二環式環は、０個〜４個のヘテロ原子を有し、該ヘテロ原子は、独立して、窒素、イオウまたは酸素から選択され；
Ｒ１は、Ｔ（ｎ）−ＲまたはＴ（ｎ）−Ａｒであり；
ｎは、０または１であり；
Ｔは、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＯ２−、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）−、−ＣＯＮＲ−、−Ｓ（Ｏ）２−または−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ−から選択され；そして
各Ｒ２は、独立して、−Ｒ、−ＣＨ２ＯＲ、−ＣＨ（Ｏ）、−ＣＨ２ＳＲ、−ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＨ２ＣＯ２Ｒ、−ＣＨ２ＣＮ、−ＣＨ２Ｎ（Ｒ）２、−ＣＨ＝Ｎ−ＯＲ、−ＣＨ＝ＮＮ（Ｒ）２、−ＣＨ＝ＮＮＨＣＯＲ、−ＣＨ＝ＮＮＨＣＯ２Ｒ、−ＣＨ＝ＮＮＨＳＯ２Ｒ、Ａｒ、−ＣＨ２Ａｒ、−ＣＨ２ＮＲＣＯＮ（Ｒ）２、−ＣＨ２ＮＲＣＯＲ、−ＣＨ２ＮＲＣＯ２Ｒ、−ＣＨ２ＣＯＮ（Ｒ）２、−ＣＨ２ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２または−ＣＨ２ＮＲＳＯ２Ｎ（Ｒ）２から選択される、
化合物。
【請求項２】
Ｇが、−Ｘ−Ｒまたは−Ｘ−Ａｒであり、ここで、
各Ｘが、独立して、Ｃ１〜４アルキリデン鎖から選択され、ここで、Ｘの１個または２個の非隣接メチレン単位が、独立して、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−Ｏ−または−ＮＨ−で置き換えられ、
Ｒが、必要に応じて置換したＣ１〜６脂肪族基であり、そして
Ａｒが、必要に応じて置換した５員〜６員の飽和環もしくはアリール環、または必要に応じて置換した９員〜１０員の二環式アリール環もしくはヘテロアリール環であり、該飽和環もしくはアリール環が、０個〜２個のヘテロ原子を有し、該ヘテロ原子が、独立して、窒素、酸素またはイオウから選択され、また、該二環式アリール環もしくはテロアリール環が、０個〜２個のヘテロ原子を有し、該ヘテロ原子が、独立して、窒素、酸素、もしくはイオウから選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒが、Ｃ１〜４脂肪族基であり、該脂肪族基が、必要に応じて、ハロ、ＣＮ、オキソ、Ｎ（Ｒ０）２、ＯＨ、ＯＲ０、ＣＯ２Ｒ０、Ｃ（Ｏ）Ｒ０、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ０）２、ＮＲ０ＣＯ２Ｒ０、ＳＲ０、ＮＲ０ＳＯ２Ｒ０、ＳＯ２Ｒ０、ＮＲ０Ｃ（Ｏ）Ｒ０、ＯＣ（Ｏ）Ｒ０またはＮＲ０Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ０）２で置換されており、ここで、各Ｒ０基が、独立して、水素またはＣ１〜４脂肪族から選択され、そして
Ａｒが、必要に応じて置換した環であり、該環が、フェニル、ピリジル、イミダゾリル、チエニル、チアゾリル、［１，３］ジオキサニル、ピペリジニル、モルホリニル、ピロリル、ピロリジニル、フラニル、テトラヒドロフラニル、ピラニル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、ピロリル、ピペラジニル、チオモルホリニル、ナフチル、オキサゾリル、トリアジニル、テトラゾリル、ジチオラニル、ジオキサラニル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニルまたはインドリルから選択される、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２が、Ｒ、ＣＨ２Ｎ（Ｒ）２またはＣＨ２Ａｒから選択され、ここで、
各Ｒが、独立して、水素または必要に応じて置換したＣ１〜４脂肪族から選択され、そして
Ａｒが、必要に応じて置換した６員の飽和環または不飽和環であり、該飽和環または不飽和環が、０個〜２個のヘテロ原子を有し、該ヘテロ原子が、独立して、窒素、酸素またはイオウから選択される、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１が、Ｔ（ｎ）−Ａｒであり、ここで、ｎが、０であり、そして
Ａｒが、必要に応じて置換した６員の飽和環またはアリール環、または必要に応じて置換した９員〜１０員の部分不飽和または完全不飽和二環式環から選択され、該飽和環またはアリール環が、０個〜２個の窒素を有し、そして該二環式環が、０個〜２個のヘテロ原子を有し、該ヘテロ原子が、独立して、窒素、酸素またはイオウから選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１が、フェニル、シクロヘキシル、ピリジル、ナフチル、キノリニル、イソキノリニルまたはインダニルであり、ここで、
Ｒ１が、必要に応じて、１個〜３個の基で置換されており、該基が、独立して、Ｒ０、ハロゲン、ＮＯ２、ＣＮ、ＯＲ０、ＳＲ０、Ｎ（Ｒ０）２、ＣＯ２Ｒ０、Ｃ（Ｏ）Ｒ０、ＣＯＮ（Ｒ０）２、フェニル、ＳＯ２Ｒ０またはＮＲ０Ｃ（Ｏ）Ｒ０から選択され、ここで、各Ｒ０が、独立して、水素または必要に応じて置換したＣ１〜４脂肪族から選択される、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１が、必要に応じて、１個〜３個の基で置換されており、該基が、独立して、メチル、エチル、オキソ、ＣＦ３、ＯＭｅ、Ｃ（Ｏ）Ｍｅ、Ｃ（Ｏ）フェニル、ＣＨ≡ＣＨ、ＣＯ２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、ＳＭｅ、ＣＯ２Ｍｅ、フルオロ、ＳＯ２Ｍｅ、ＮＯ２、ＣＮ、クロロ、Ｎ（Ｍｅ）２、ＮＨＣ（Ｏ）Ｍｅ、ＮＨ２、シアノフェニル、ＣＯ２Ｅｔ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＯＭｅ、３−ＣＨ２ＣＯ２Ｈ−フェニルまたは３−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈ−フェニルから選択される、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ２が、Ｒ、ＣＨ２Ｎ（Ｒ）２またはＣＨ２Ａｒから選択され、ここで、
各Ｒが、独立して、水素または必要に応じて置換したＣ１〜４脂肪族から選択され、そして
Ａｒが、必要に応じて置換した６員の飽和環または不飽和環であり、該飽和環または不飽和環が、０個〜２個のヘテロ原子を有し、該ヘテロ原子が、独立して、窒素、酸素またはイオウから選択される、請求項５に記載の化合物。
【請求項９】
以下の化合物番号からなる群から選択される、化合物：
ＩＩＡ−１、ＩＩＡ−２、ＩＩＡ−３、ＩＩＡ−４、ＩＩＡ−５、ＩＩＡ−６、ＩＩＡ−７、ＩＩＡ−８、ＩＩＡ−９、ＩＩＡ−１０、ＩＩＡ−１１、ＩＩＡ−１２、ＩＩＡ−１３、ＩＩＡ−１４、ＩＩＡ−１５、ＩＩＡ−１６、ＩＩＡ−１７、ＩＩＡ−１８、ＩＩＡ−１９、ＩＩＡ−２０、ＩＩＡ−２１、ＩＩＡ−２２、ＩＩＡ−２３、ＩＩＡ−２４、ＩＩＡ−２５、ＩＩＡ−２６、ＩＩＡ−２７、ＩＩＡ−２８、ＩＩＡ−２９、ＩＩＡ−３０、ＩＩＡ−３１、ＩＩＡ−３２、ＩＩＡ−３３、ＩＩＡ−３４、ＩＩＡ−３５、ＩＩＡ−３６、ＩＩＡ−３７、ＩＩＡ−３８、ＩＩＡ−３９、ＩＩＡ−４０、ＩＩＡ−４１、ＩＩＡ−４２、ＩＩＡ−４３、ＩＩＡ−４４、ＩＩＡ−４５、ＩＩＡ−４６、ＩＩＡ−４７、ＩＩＡ−４８、ＩＩＡ−４９、ＩＩＡ−５０、ＩＩＡ−５１、ＩＩＡ−５２、ＩＩＡ−５３、ＩＩＡ−５４、ＩＩＡ−５５、ＩＩＡ−５６、ＩＩＡ−５７、ＩＩＡ−５８、ＩＩＡ−５９、ＩＩＡ−６０、ＩＩＡ−６１、ＩＩＡ−６２、ＩＩＡ−６３、ＩＩＡ−６４、ＩＩＡ−６５、ＩＩＡ−６６、ＩＩＡ−６７、ＩＩＡ−６８、ＩＩＡ−６９、ＩＩＡ−７０、ＩＩＡ−７１、ＩＩＡ−７２、ＩＩＡ−７３、ＩＩＡ−７４、ＩＩＡ−７５、ＩＩＡ−７６、ＩＩＡ−７７、ＩＩＡ−７８、ＩＩＡ−７９、ＩＩＡ−８０、ＩＩＡ−８１、ＩＩＡ−８２、ＩＩＡ−８３、ＩＩＡ−８４、ＩＩＡ−８５、ＩＩＡ−８６、ＩＩＡ−８７、ＩＩＡ−８８、ＩＩＡ−８９、ＩＩＡ−９０、ＩＩＡ−９１、ＩＩＡ−９２、ＩＩＡ−９３、ＩＩＡ−９４、ＩＩＡ−９５、ＩＩＡ−９６、ＩＩＡ−９７、ＩＩＡ−９８、ＩＩＡ−９９、ＩＩＡ−１００、ＩＩＡ−１０１、ＩＩＡ−１０２、ＩＩＡ−１０３、ＩＩＡ−１０５、ＩＩＡ−１０６、ＩＩＡ−１０７、ＩＩＡ−１０８、ＩＩＡ−１０９、ＩＩＡ−１１０、ＩＩＡ−１１１、ＩＩＡ−１１２、ＩＩＡ−１１３、ＩＩＡ−１１４、ＩＩＡ−１１５、ＩＩＡ−１１６、ＩＩＡ−１１７、ＩＩＡ−１１８、ＩＩＡ−１１９、ＩＩＡ−１２０、ＩＩＡ−１２１、ＩＩＡ−１２２、ＩＩＡ−１２３、ＩＩＡ−１２４、ＩＩＡ−１２５、ＩＩＡ−１２６、ＩＩＡ−１２７、ＩＩＡ−１２８、ＩＩＡ−１２９、ＩＩＡ−１３０、ＩＩＡ−１３１、ＩＩＡ−１３２、ＩＩＡ−１３３、ＩＩＡ−１３４、ＩＩＡ−１３５、ＩＩＡ−１３６、ＩＩＡ−１３７、ＩＩＡ−１３８、ＩＩＡ−１３９、ＩＩＡ−１４０、ＩＩＡ−１４１、ＩＩＡ−１４２、ＩＩＡ−１４３、ＩＩＡ−１４４、ＩＩＡ−１４５、ＩＩＡ−１４６、ＩＩＡ−１４７、ＩＢ−１、ＩＢ−２、ＩＢ−３、ＩＢ−４、ＩＢ−４、ＩＢ−５、ＩＢ−６、ＩＢ−７、ＩＢ−８、ＩＢ−９、ＩＢ−１０、ＩＢ−１１、ＩＢ−１３、ＩＢ’−１、ＩＢ’−２、ＩＢ’−３、ＩＢ’−４、ＩＣ−１、ＩＣ−２、ＩＣ−３、ＩＣ−４、ＩＣ−５、ＩＤ−１、ＩＤ−２、ＩＤ−３、ＩＤ−４、ＩＤ−５、ＩＤ−６、ＩＤ−７、ＩＤ−８、ＩＤ−９、ＩＥ−１、ＩＥ−２、ＩＦ−１、ＩＧ−１、ＩＧ−２、ＩＨ−１、ＩＨ−２、ＩＨ−２、ＩＪ−１およびＩＫ−１。
【請求項１０】
ＪＮＫ３、ＬｃｋまたはＳｒｃキナーゼ活性を検出可能に阻害する量の請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物、および薬学的に受容可能なキャリア、アジュバントまたはビヒクルを含有する、組成物。
【請求項１１】
さらに、抗増殖薬、抗炎症薬、免疫調節薬、神経栄養因子、循環器病の治療薬、肝臓病の治療薬、抗ウイルス薬、血液疾患の治療薬、糖尿病の治療薬または免疫不全障害の治療薬から選択されるさらなる治療薬を含有する、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
生物学的サンプルにおいて、ＪＮＫ３、ＬｃｋまたはＳｒｃキナーゼ活性を阻害する方法であって、該方法は、該生物学的サンプルを、以下のａ）またはｂ）と接触させる工程を包含する：
ａ）請求項１に記載の化合物；または
ｂ）請求項１０に記載の組成物。
【請求項１３】
患者において、ＪＮＫ３、ＬｃｋまたはＳｒｃが媒介する疾患または病気を治療するかその症状を軽減する方法であって、該患者に、請求項１０に記載の組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１４】
炎症疾患、自己免疫疾患、破壊性骨障害、増殖性障害、感染症、神経変性疾患、アレルギー、発作での再灌流／虚血、心臓麻痺、血管原性障害、臓器低酸素、血管過形成、心臓肥大、トロンビン誘発血小板凝集、または炎症誘発性サイトカインに関連した状態を治療するかその症状を軽減する方法であって、該患者に、請求項１０に記載の組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１５】
前記方法が、急性膵炎、慢性膵炎、喘息、アレルギーまたは成人呼吸窮迫症候群からなる群から選択される炎症性疾患を治療または予防するのに使用される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記方法が、糸球体腎炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、慢性甲状腺炎、グレーブス病、自己免疫性胃炎、糖尿病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性好中球減少症、血小板減少症、アトピー性皮膚炎、慢性活性肝炎、重症筋無力症、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、乾癬または移植片対宿主病から選択される自己免疫疾患を治療または予防するのに使用される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記方法が、骨関節炎、骨粗鬆症または多発性骨髄腫関連骨疾患から選択される破壊性骨障害を治療または予防するのに使用される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記方法が、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、転移性メラノーマ、カポジ肉腫または多発性骨髄腫から選択される増殖性障害を治療または予防するのに使用される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
前記方法が、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン舞踏症、脳虚血、または外傷で引き起こされる神経変性疾患、グルタミン酸塩神経毒性または低酸素から選択される神経変性疾患を治療または予防するのに使用される、請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
前記方法が、発作または心筋虚血、腎虚血、心臓麻痺、臓器低酸素またはトロンビン誘発血小板凝集における虚血／再灌流を治療または予防するのに使用される、請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
前記方法が、Ｔ細胞活性化または病的免疫応答に関連した状態を治療または予防するのに使用される、請求項１４に記載の方法。
【請求項２２】
前記方法が、固形腫瘍、眼球新血管形成または小児血管腫から選択される血管原性障害を治療または予防するのに使用される、請求項１４に記載の方法。
【請求項２３】
前記疾患が、高カルシウム血症、再狭窄、骨粗鬆症、骨関節炎骨転移の対症療法、関節リウマチ、炎症性腸疾患、多発性硬化症、乾癬、狼瘡、移植片対宿主病、Ｔ細胞媒介過敏症、橋本甲状腺炎、ギランバレー症候群、慢性閉塞性肺障害、接触性皮膚炎、癌、パジェット病、喘息、虚血または再灌流傷害、アレルギー疾患、アトピー性皮膚炎またはアレルギー性鼻炎から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項２４】
前記疾患が、高カルシウム血症、骨減少性、骨関節炎、または骨転移の対症療法から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記疾患が、自己免疫疾患、アレルギー、関節リウマチおよび白血病から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項２６】
前記患者に、抗増殖薬、抗炎症薬、免疫調節薬、神経栄養因子、循環器病の治療薬、肝臓病の治療薬、抗ウイルス薬、血液疾患の治療薬、糖尿病の治療薬、または免疫不全障害の治療薬から選択される追加治療薬を投与するさらなる工程を包含し、ここで、
該さらなる治療薬が、治療する疾患に適当であり、そして
該追加治療薬が、単回投与形態として、前記組成物と共に投与されるか、または複数回投与形態の一部として、該組成物とは別に投与される、請求項１３に記載の方法。
【請求項２７】
移植可能装置を被覆するための組成物であって、該組成物は、請求項１に記載の化合物と、該移植可能装置を被覆するのに適当なキャリアとを含有する、組成物。
【請求項２８】
請求項２７に記載の組成物で被覆される、移植可能装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の技術分野）
本発明は、ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ−末端キナーゼ（ＪＮＫ）およびＳｒｃファミリープロテインキナーゼに属するキナーゼ（特に、ＳｒｃおよびＬｃｋプロテインキナーゼ）のインヒビターに関する。Ｓｒｃキナーゼは、癌、免疫障害および骨疾患に関係している。本発明はまた、本発明のインヒビターを含有する組成物および種々の障害を治療し予防するのにこれらの組成物を利用する方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
（関連出願の相互参照）
本発明は、２００１年４月１０日に出願された米国仮特許出願第６０／２８２，９３５号から優先権を主張しており、その内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【０００３】
（発明の背景）
哺乳動物の細胞は、マイトジェン活性化タンパク質（ＭＡＰ）キナーゼファミリー（これには、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）、ｐ３８  ＭＡＰキナーゼおおよびｃ−Ｊｕｎ  Ｎ−末端キナーゼ（ＪＮＫ）が挙げられる）により媒介されるシグナル伝達カスケードを活性化することにより、細胞外刺激に応答する。ＭＡＰキナーゼ（ＭＡＰＫ）は、種々の信号により活性化され、これには、成長因子、サイトカイン、紫外線およびストレス誘発剤が含まれる。ＭＡＰＫは、セリン／スレオニンキナーゼであり、その活性化は、その活性化ループのＴｈｒ−Ｘ−Ｔｙｒセグメントにおけるスレオニンおよびチロシンの二重リン酸化により、起こる。ＭＡＰＫは、転写因子を含めた種々の基質をリン酸化し、これらは、順に、特定セットの遺伝子の発現を調節し、それゆえ、刺激に対する特定の応答を媒介する。
【０００４】
特に重要なキナーゼファミリーの１つには、Ｓｒｃファミリーのキナーゼがある。これらのキナーゼは、癌、免疫系の機能不全および骨再造形疾患に関係している。一般的な概説については、Ｔｈｏｍａｓ  ａｎｄ  Ｂｒｕｇｇｅ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ  Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．（１９９７）  １３，５１３；Ｌａｗｒｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｎｉｕ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．（１９９８）  ７７，８１；Ｔａｔｏｓｙａｎ  ａｎｄ  Ｍｉｚｅｎｉｎａ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｍｏｓｃｏｗ）（２０００）  ６５，４９；Ｂｏｓｃｈｅｌｌｉら、Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  ２０００，２５（７），７１７，（２０００）を参照。
【０００５】
Ｓｒｃファミリーのメンバーには、哺乳動物において、以下の８つのキナーゼが挙げられる：Ｓｒｃ、Ｆｙｎ、Ｙｅｓ、Ｆｇｒ、Ｌｙｎ、Ｈｃｋ、ＬｃｋおよびＢｌｋ。これらは、５２〜６２ｋＤの分子量範囲の非受容体プロテインキナーゼである。全ては、共通の構造組織に特徴があり、これは、６個の異なる機能的ドメインから構成される：Ｓｒｃ相同性ドメイン４（ＳＨ４）、独特ドメイン、ＳＨ３ドメイン、ＳＨ２ドメイン、触媒ドメイン（ＳＨ１）およびＣ末端調節領域。Ｔａｔｏｓｙａｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｍｏｓｃｏｗ）  ６５，４９〜５８（２０００）。
【０００６】
公開された研究に基づいて、Ｓｒｃキナーゼは、種々のヒトの疾患に対する潜在的な治療標的と考えられている。Ｓｒｃを欠損したマウスは、大理石骨病に罹るか、破骨細胞によって骨吸収が抑制されるために、骨が構築される。このことは、異常に高い骨吸収から生じる骨粗鬆症がＳｒｃを阻害することにより治療できることを示唆している。Ｓｏｒｉａｎｏら、Ｃｅｌｌ，６９，５５１（１９９２）およびＳｏｒｉａｎｏら、Ｃｅｌｌ，６４，６９３（１９９１）。
【０００７】
関節炎による骨の破壊の抑制は、リウマチ様滑膜細胞および破骨細胞における、ＣＳＫの過剰発現により達成された。Ｔａｋａｙａｎａｇｉら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０４，１３７（１９９９）。ＣＳＫ（すなわち、Ｃ末端Ｓｒｃキナーゼ）は、リン酸化をし、それによりＳｒｃの触媒活性を阻害する。このことは、Ｓｒｃを抑制すると、関節破壊（これは、関節リウマチに罹っている患者に特徴的である）を防止し得ることを暗示している。Ｂｏｓｃｈｅｌｌｉら、Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  ２０００，２５（７），７１７，（２０００）。
【０００８】
Ｓｒｃはまた、Ｂ型肝炎ウイルスの複製において、一定の役割を果たす。ウイルス性コード化転写因子ＨＢｘは、ウイルスの増殖に必要な工程において、Ｓｒｃを活性化する。Ｋｌｅｉｎら、ＥＭＢＯ  Ｊ．，１８，５０１９，（１９９９）およびＫｌｅｉｎら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１７，６４２７（１９９７）。
【０００９】
多数の研究は、Ｓｒｃ発現と癌（例えば、結腸癌、乳癌、肝臓癌および膵臓癌、ある種のＢ細胞白血病およびリンパ腫）とを結び付けている。Ｔａｌａｍｏｎｔｉら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９１，５３（１９９３）；Ｌｕｔｚら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．２４３，５０３（１９９８）；Ｒｏｓｅｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６１，１３７５４（１９８６）；Ｂｏｌｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４，２２５１（１９８７）；Ｍａｓａｋｉら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２７，１２５７（１９９８）；Ｂｉｓｃａｒｄｉら、Ａｄｖ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，７６，６１（１９９９）；Ｌｙｎｃｈら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ，７，１４１６（１９９３）。さらに、卵巣および結腸の腫瘍細胞で発現されたアンチセンスＳｒｃは、腫瘍の成長を阻害することが明らかとなっている。Ｗｉｅｎｅｒら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５，２１６４（１９９９）；Ｓｔａｌｅｙら、Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｄｉｆｆ．，８，２６９（１９９７）．
他のＳｒｃファミリーキナーゼもまた、潜在的な治療標的である。Ｌｃｋは、Ｔ細胞シグナル伝達において、一定の役割を果たす。Ｌｃｋ遺伝子を欠いたマウスは、胸腺細胞を発生する能力に乏しい。Ｔ細胞シグナル伝達の正のアクチベーターとしてのＬｃｋの機能は、Ｌｃｋインヒビターが自己免疫疾患（例えば、関節リウマチ）を治療するのに有用であり得ることを示唆している。Ｍｏｌｉｎａら、Ｎａｔｕｒｅ，３５７，１６１（１９９２）。Ｈｃｋ、ＦｇｒおよびＬｙｎは、骨髄白血球におけるインテグリンシグナル伝達の重要な媒介物として、同定されている。Ｌｏｗｅｌｌら、Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．，６５，３１３（１９９９）。従って、これらのキナーゼ媒介物を阻害することは、炎症を治療するのに有用であり得る。Ｂｏｓｃｈｅｌｌｉら、Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  ２０００，２５（７），７１７，（２０００）。
【００１０】
ｃ−Ｊｕｎ  ＮＨ２末端プロテインキナーゼ（これはまた、ＪＮＫとして知られている）では、３つの異なる遺伝子であるＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ＪＮＫ３が同定されており、哺乳動物細胞では、ＪＮＫｓの少なくとも１０種の異なるスプライシングアイソフォームが存在している。［Ｇｕｐｔａら、ＥＭＢＯ  Ｊ．，１５，２７６０−７０（１９９６）］。このＪＮＫファミリーのメンバーは、炎症誘発性サイトカイン（例えば、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）およびインターロイキン−１β（ＩＬ−１β））だけでなく、環境ストレス（アニソマイシン、紫外線照射、低酸素および浸透圧衝撃を含めて）により、活性化される［Ｍｉｎｄｅｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ，１３３３，Ｆ８５〜Ｆ１０４（１９９７）］。
【００１１】
ＪＮＫの下流基質には、転写因子ｃ−Ｊｕｎ、ＡＴＦ−２、Ｅｌｋ１、ｐ５３および細胞死ドメインタンパク質（ＤＥＮＮ）が挙げられる［Ｚｈａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９５，２５８６−９１（１９９８）］。各ＪＮＫアイソフォームは、異なる親和性でこれらの基質と結合し、このことは、インビボでの異なるＪＮＫの基質特異性によるシグナル伝達経路の調節を示唆している（Ｇｕｐｔａら、上記）。
【００１２】
ＪＮＫは、他のＭＡＰＫと共に、癌、トロンビン誘発血小板凝集、免疫不全障害、自己免疫疾患、細胞死、アレルギー、骨粗鬆症および心臓病に対する細胞応答の媒介に関係している。このＪＮＫ経路の活性化に関連した治療条件には、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性関節リウマチ、喘息、骨関節炎、虚血、癌および神経変性疾患が挙げられる。
【００１３】
肝臓病または肝虚血発症に関連したＪＮＫ活性化の重要性を詳述している報告がいくつか見られる［Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２１，３２６−９（１９９９）；ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．４２０，２０１−４（１９９７）；Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０２，１９４２−５０（１９９８）；Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２８，１０２２−３０（１９９８）］。
【００１４】
循環器病（例えば、心筋梗塞または鬱血性心不全）でのＪＮＫの役割もまた、ＪＮＫが種々の形態の心臓ストレスに対する肥大応答を媒介するので、報告されている［Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．８３，１６７−７８（１９９８）；Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９７，１７３１−７（１９９８）；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，２８０５０−６（１９９７）；Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．７９，１６２−７３（１９９６）；Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．７８，９４７−５３（１９９６）；Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９７，５０８−１４（１９９６）］。
【００１５】
そのＪＮＫカスケードもまた、Ｔ細胞活性化（ＩＬ−２プロモーターの活性化を含めて）において、一定の役割を果たすことが立証されている。それゆえ、ＪＮＫのインヒビターは、病的免疫応答において、強力な治療的価値を有する［Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２，３１７６−８７（１９９９）；Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８，３８６７−７７（１９９８）；Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８６，９４１−５３（１９９７）；Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６，９８９−９４（１９９６）］。
【００１６】
種々の癌におけるＪＮＫ活性化の役割もまた、確立されており、このことは、癌においてＪＮＫインヒビターが使用できる可能性を示唆している。例えば、構造的に活性化したＪＮＫは、ＨＴＬＶ−１媒介腫瘍形成に関連している［Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １３，１３５−４２（１９９６）］。カポジ肉腫（ＫＳ）細胞に対するｂＦＧＦおよびＯＳＭの増殖効果は、それらがＪＮＫシグナル伝達経路を活性化することにより、媒介される［Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９９，１７９８−８０４（１９９７）］。ＫＳ増殖に関係している他のサイトカイン（例えば、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、ＩＬ−６およびＴＮＦα）の他の増殖効果もまた、ＪＮＫにより媒介される。それに加えて、ｐ２１０  ＢＣＲ−ＡＢＬ形質変換細胞におけるｃ−ｊｕｎ遺伝子の調節は、ＪＮＫの活性と対応しており、このことは、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）の治療におけるＪＮＫインヒビターの役割を示唆している［Ｂｌｏｏｄ  ９２，２４５０−６０（１９９８）］。
【００１７】
ＪＮＫ１およびＪＮＫ２は、種々の組織において、広く発現される。対照的に、ＪＮＫ３は、脳、ならびに心臓および精巣（脳より程度が低いが）で、選択的に発現される［Ｇｕｐｔａら、上記；Ｍｏｈｉｔら、Ｎｅｕｒｏｎ  １４，６７〜７８（１９９５）；Ｍａｒｔｉｎら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．Ｍｏｌ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．３５，４７〜５７（１９９６）］。ＪＮＫ３は、カイニン酸により誘発されるニューロンアポトーシスと結び付いており、このことは、グルタミン酸塩神経毒性の病原性におけるＪＮＫの役割を示している。成人の脳では、ＪＮＫ３発現は、海馬のＣＡ１、ＣＡ４および海馬台領域ならびに新皮質の層３および５において、錐体ニューロンの亜集団に局在化されている［Ｍｏｈｉｔら、上記］。急性低酸素症に罹った患者のＣＡ１ニューロンは、正常な患者の脳組織に由来の海馬ニューロンの最小拡散細胞質染色に比較して、強力な核ＪＮＫ３免疫反応性を示した［Ｚｈａｎｇら、上記］。それゆえ、ＪＮＫ３は、海馬でのＣＡ１ニューロンの低酸素および虚血損傷に関与している。
【００１８】
それに加えて、ＪＮＫ３は、アルツハイマー病で脆弱なニューロンと共に、免疫化学的に共局在化する［Ｍｏｈｉｔら、上記］。このＪＮＫ３遺伝子が破壊されると、興奮毒性グルタミン酸塩レセプタアゴニストカイニン酸に対するマウスの耐性（海馬ニューロンの発作活性、ＡＰ−１転写活性およびアポトーシスに対する効果を含めて）を引き起こし、このことは、ＪＮＫ３シグナル伝達経路が、グルタミン酸塩神経毒性の病原性における重要な要素であることを示している［Ｙａｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ，３８９，８６５−８７０（１９９７）］。
【００１９】
これらの知見に基づいて、ＪＮＫシグナル伝達（特に、ＪＮＫ３のシグナル伝達）は、アポトーシスが駆動する神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ＡＬＳ（筋萎縮性側索硬化症）、癲癇および発作、ハンティングトン病、外傷性脳傷害だけでなく、虚血性および出血性発作）の領域に関係している。
【００２０】
従って、依然として、ＪＮＫ３、ＳｒｃおよびＬｃｋ活性化に関連した種々の疾患または状態を治療する際に有用なＪＮＫ３、ＳｒｃおよびＬｃｋプロテインキナーゼの強力なインヒビターを開発する必要性が高い。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００２１】
（発明の要旨）
現在、本発明の化合物およびそれらの薬学的に受容可能な組成物は、Ｓｒｃ、ＬｃｋおよびＪＮＫ３プロテインキナーゼのインヒビターとして有効であることが発見された。これらの化合物またはそれらの薬学的に受容可能な誘導体は、式Ｉまたはその薬学的に受容可能な誘導体を有する：
【００２２】
【化２】
2005500261.tif 000003
ここで、Ａは、窒素またはＣＨであり、そしてＲ１、Ｒ２およびＧは、以下で記述されている。
【００２３】
これらの化合物およびそれらを含有する薬学的に受容可能な組成物は、種々の障害（例えば、癌、自己免疫疾患、骨粗鬆症および炎症疾患）を処置するかそれらのリスクを少なくするのに有用である。
【００２４】
（発明の詳細な説明）
本発明は、式Ｉの化合物またはその薬学的に受容可能な誘導体を提供する：
【００２５】
【化３】
2005500261.tif 000004
ここで、
Ｇは、−ＸＲまたは−ＸＡｒである；
各Ｘは、独立して、Ｃ１〜６アルキリデン鎖から選択され、ここで、Ｘの１個または２個の非隣接メチレン単位は、必要に応じて、独立して、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＲＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＲ−または−ＮＲＳＯ２ＮＲ−で置換される；
Ａは、ＮまたはＣＲである；
各Ｒは、独立して、水素または必要に応じて置換されたＣ１〜８脂肪族基から選択されるか、または同じ窒素に結合した２個のＲ基は、該窒素と一緒になって、３員〜７員の複素環式環を形成し、該複素環は、該窒素に加えて、０個〜２個のヘテロ原子を有し、該ヘテロ原子は、独立して、窒素、酸素またはイオウから選択される；但し、Ｇが−Ｎ（Ｒ）２であるとき、該２個のＲ基は、一緒になって環を形成しない；
Ａｒは、必要に応じて置換した５員〜６員の飽和か、部分不飽和かもしくはアリール単環式の環、または必要に応じて置換した８員〜１０員の飽和か、部分不飽和かもしくはアリール二環式の環であり、この単環式環は、０個〜３個のヘテロ原子を有し、これらのヘテロ原子は、独立して、窒素、イオウまたは酸素から選択され、また、この二環式環は、０個〜４個のヘテロ原子を有し、これらのヘテロ原子は、独立して、窒素、イオウまたは酸素から選択される；
Ｒ１は、Ｔ（ｎ）−ＲまたはＴ（ｎ）−Ａｒである；
ｎは、０または１である；
Ｔは、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＯ２−、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）−、−ＣＯＮＲ−、−Ｓ（Ｏ）２−または−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ−から選択される；そして
各Ｒ２は、独立して、−Ｒ、−ＣＨ２ＯＲ、−ＣＨ（Ｏ）、−ＣＨ２ＳＲ、−ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＨ２ＣＯ２Ｒ、−ＣＨ２ＣＮ、−ＣＨ２Ｎ（Ｒ）２、−ＣＨ＝Ｎ−ＯＲ、−ＣＨ＝ＮＮ（Ｒ）２、−ＣＨ＝ＮＮＨＣＯＲ、−ＣＨ＝ＮＮＨＣＯ２Ｒ、−ＣＨ＝ＮＮＨＳＯ２Ｒ、Ａｒ、−ＣＨ２Ａｒ、−ＣＨ２ＮＲＣＯＮ（Ｒ）２、−ＣＨ２ＮＲＣＯＲ、−ＣＨ２ＮＲＣＯ２Ｒ、−ＣＨ２ＣＯＮ（Ｒ）２、−ＣＨ２ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２または−ＣＨ２ＮＲＳＯ２Ｎ（Ｒ）２から選択される。
【００２６】
特に明記しない限り、本明細書中で使用する以下の定義を適用する。
【００２７】
句、「必要に応じて置換した」とは、「置換または非置換」との句と互換可能に使用される。特に明記しない限り、必要に応じて置換された基は、その基の各置換可能部分にて、置換基を有し得、各置換は、他のものと無関係である。
【００２８】
本明細書中で使用する「脂肪族」または「脂肪族基」との用語は、直鎖または分枝Ｃ１〜Ｃ８炭化水素鎖（これは、完全に飽和されているか、または１個以上の不飽和単位を含有する）または単環式Ｃ３〜Ｃ８炭化水素または二環式Ｃ８〜Ｃ１２炭化水素（これは、完全に飽和されているか、または１個以上の不飽和単位を含有する）であるが、芳香族ではなく（これはまた、本明細書中にて、「炭素環式」または「シクロアルキル」とも呼ぶ）、これは、分子の残りと単一の結合点を有し、ここで、該二環式の環系にある任意の個々の環は、３員〜７員を有する。例えば、適当な脂肪族基には、直鎖または分枝のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、およびそれらのハイブリッド（例えば、（シクロアルキル）アルキル、（シクロアルケニル）アルキルまたは（シクロアルキル）アルケニル）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２９】
「アルキル」、「アルコキシ」、「ヒドロキシアルキル」および「アルコキシカルボニル」との用語は、単独で、またはそれより大きい部分の一部として使用されるが、１個〜１２個の炭素原子を含有する直鎖および分枝鎖の両方を含む。「アルケニル」および「アルキニル」との用語は、単独で、またはそれより大きい部分の一部として使用されるが、１個〜１２個の炭素原子を含有する直鎖および分枝鎖の両方を含む。
【００３０】
「ヘテロ原子」との用語は、窒素、酸素またはイオウを意味し、そして窒素およびイオウの任意の酸化形状、および任意の塩基性窒素の四級化形状を含む。「窒素」との用語は、複素環式環の置換可能窒素を含む。一例として、酸素、イオウまたは窒素から選択される０個〜３個のヘテロ原子を有する飽和環または部分不飽和環では、その窒素は、Ｎ（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロリルにおけるように）、ＮＨ（ピロリジニルにおけるように）またはＮＲ＋（Ｎ−置換ピロリジニルにおけるように）であり得る。
【００３１】
「アリール」との用語は、単独で、または「アラルキル」、「アラルコキシ」または「アリールオキシアルキル」のようなそれより大きい部分の一部として使用されるが、全部で５員〜１４員を有する単環式、二環式および三環式の環系を意味し、ここで、この環系の少なくとも１つの環は、芳香族である。ここで、この環系内の各環は、３員〜７員を含有する。「アリール」との用語は、「アリール環」との用語と交換可能に使用され得る。「アリール」との用語はまた、以下で定義するヘテロアリール環系を意味する。
【００３２】
本明細書中で使用する「ヘテロサイクル」、「ヘテロシクリル」または「複素環」との用語は、５員〜１４員を有する非芳香族の単環式、二環式または三環式の環系であって、１員またはそれ以上がヘテロ原子であるものを意味し、ここで、この環系内の各環は、３員〜７員を含有する。
【００３３】
「ヘテロアリール」との用語は、単独で、または「ヘテロアラルキル」または「ヘテロアリールアルコキシ」のようなそれより大きい部分の一部として使用されるが、全部で５員〜１４員を有する単環式、二環式および三環式の環系を意味し、ここで、この系内の少なくとも１個の環は、芳香族であり、この系内の少なくとも１個の環は、１個またはそれ以上のヘテロ原子を含有し、ここで、この系内の各環は、３員〜７員環を含有する。「ヘテロアリール」との用語は、「ヘテロアリール環」との用語または「ヘテロ芳香族」との用語と交換可能に使用され得る。
【００３４】
アリール（アラルキル、アラルコキシ、アリールオキシアルキルなどを含めて）基またはヘテロアリール（ヘテロアラルキルおよびヘテロアリールアルコキシなどを含めて）基は、１個またはそれ以上の置換基を含有し得る。アリール基、ヘテロアリール基、アラルキル基またはヘテロアラルキル基の不飽和炭素原子上の適当な置換基は、ハロゲン、−Ｒ０、−ＯＲ０、−ＳＲ０、１，２−メチレンジオキシ、１，２−エチレンジオキシ、必要に応じてＲ０で置換したフェニル（Ｐｈ）、必要に応じてＲ０で置換した−Ｏ（Ｐｈ）、必要に応じてＲ０で置換した−ＣＨ２（Ｐｈ）、必要に応じてＲ０で置換した−ＣＨ２ＣＨ２（Ｐｈ）、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ０）２、−ＮＲ０Ｃ（Ｏ）Ｒ０、−ＮＲ０Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ０）２、−ＮＲ０ＣＯ２Ｒ０、−ＮＲ０ＮＲ０Ｃ（Ｏ）Ｒ０、−ＮＲ０ＮＲ０Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ０）２、−ＮＲ０ＮＲ０ＣＯ２Ｒ０、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ０、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ０、−ＣＯ２Ｒ０、−Ｃ（Ｏ）Ｒ０、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ０）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ０）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ０、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ０）２、−Ｓ（Ｏ）Ｒ０、−ＮＲ０ＳＯ２Ｎ（Ｒ０）２、−ＮＲ０ＳＯ２Ｒ０、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ０）２、−Ｃ（＝ＮＨ）−Ｎ（Ｒ０）２または−（ＣＨ２）ｙＮＨＣ（Ｏ）Ｒ０から選択され、ここで、各Ｒ０は、独立して、水素、必要に応じて置換したＣ１〜６脂肪族基、非置換５員〜６員のヘテロアリール環または複素環、フェニル、−Ｏ（Ｐｈ）または−ＣＨ２（Ｐｈ）から選択される。Ｒ０の脂肪族基上の任意の置換基は、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜４脂肪族）、Ｎ（Ｃ１〜４脂肪族）２、ハロゲン、Ｃ１〜４脂肪族、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜４脂肪族）、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯ２Ｈ、ＣＯ２（Ｃ１〜４脂肪族）、Ｏ（ハロＣ１〜４脂肪族）またはハロＣ１〜４脂肪族から選択される。
【００３５】
脂肪族基または非芳香族複素環は、１個またはそれ以上の置換基を含有し得る。脂肪族基または非芳香族複素環の飽和炭素上の適当な置換基には、アリール基またはヘテロアリール基の不飽和炭素について上で列挙したものおよび以下から選択される：＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＮＨＲ＊、＝ＮＮ（Ｒ＊）２、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）Ｒ＊、＝ＮＮＨＣＯ２（アルキル）、＝ＮＮＨＳＯ２（アルキル）または＝ＮＲ＊であって、ここで、各Ｒ＊は、独立して、水素または必要に応じて置換したＣ１〜６脂肪族基から選択される。Ｒ＊の脂肪族基上の任意の置換基は、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜４脂肪族）、Ｎ（Ｃ１〜４脂肪族）２、ハロゲン、Ｃ１〜４脂肪族、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜４脂肪族）、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯ２Ｈ、ＣＯ２（Ｃ１〜４脂肪族）、Ｏ（ハロＣ１〜４脂肪族）またはハロ（Ｃ１〜４脂肪族）から選択される。
【００３６】
非芳香族複素環の窒素上の任意の置換基は、−Ｒ＋、−Ｎ（Ｒ＋）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ＋、−ＣＯ２Ｒ＋、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ＋、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ＋、−ＳＯ２Ｒ＋、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ＋）２、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ＋）２、−Ｃ（＝ＮＨ）−Ｎ（Ｒ＋）２または−ＮＲ＋ＳＯ２Ｒ＋から選択される；ここで、Ｒ＋は、水素、必要に応じて置換したＣ１〜６脂肪族基、必要に応じて置換したフェニル、必要に応じて置換した−Ｏ（Ｐｈ）、必要に応じて置換した−ＣＨ２（Ｐｈ）、必要に応じて置換した−ＣＨ２ＣＨ２（Ｐｈ）、または非置換５員〜６員ヘテロアリール環または複素環である。Ｒ＋の脂肪族基またはフェニル環上の任意の置換基は、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜４脂肪族）、Ｎ（Ｃ１〜４脂肪族）２、ハロゲン、Ｃ１〜４脂肪族、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜４脂肪族）、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯ２Ｈ、ＣＯ２（Ｃ１〜４脂肪族）、Ｏ（ハロＣ１〜４脂肪族）またはハロ（Ｃ１〜４脂肪族）から選択される。
【００３７】
「アルキリデン鎖」との用語は、直鎖または分枝炭素鎖であって、完全に飽和であり得るか１個またはそれ以上の不飽和単位を有し得かつ分子の残りと２個の結合点を有するものを意味する。
【００３８】
置換基または変数の組合せは、このような組合せが安定な化合物または化学的に実現可能な化合物を生じる場合にのみ、許容できる。安定な化合物または化学的に実現可能な化合物とは、水分または他の化学的に反応性の状態なしで、少なくとも１週間にわたって、４０℃以下の温度で保ったとき、実質的に変化しないものである。
【００３９】
本発明の特定の化合物が互変異性型を示し得、これらの化合物のこのような互変異性型の全てが本発明の範囲内であることは、当業者に明らかである。
【００４０】
特に指定のない限り、本明細書中で描写した構造はまた、これらの構造の全ての立体化学形状（すなわち、各非対称中心に対するＲ形状およびＳ形状）を含むことを意味する。従って、本発明の化合物の単一立体化学異性体だけでなく、鏡像異性体およびジアステレオマーの混合物もまた、本発明の範囲内である。特に指定のない限り、本明細書中で描写した構造はまた、１個またはそれ以上の同位体的に富んだ原子の存在だけが異なる化合物を含むことを意味する。例えば、水素を重水素または三重水素で置換したこと以外または炭素を１３Ｃまたは１４Ｃに富んだ炭素で置換したこと以外は本発明の構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。
【００４１】
式Ｉの好ましいＧ基は、−Ｘ−Ｒおよび−Ｘ−Ａｒであり、ここで、Ｘは、Ｃ１〜４アルキリデン鎖であり、ここで、Ｘの１個または２個の非隣接メチレン単位は、独立して−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−Ｏ−または−ＮＨ−で置き換えられている。式Ｉのより好ましいＸ基は、−Ｓ−、−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＳＯ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２−または−ＮＨＣＨ２ＣＨ２−から選択される。
【００４２】
式Ｉの−Ｘ−Ｒ部分内の好ましいＲ基は、必要に応じて置換したＣ１〜６脂肪族基（より好ましくは、必要に応じて置換したＣ１〜４アルキル）から選択される。式Ｉの−Ｘ−ＲのＲ基上の好ましい置換基は、ハロ、ＣＮ、オキソ、Ｎ（Ｒ０）２、ＯＨ、ＯＲ０、ＣＯ２Ｒ０、Ｃ（Ｏ）Ｒ０、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ０）２、ＮＲ０ＣＯ２Ｒ０、ＳＲ０、ＮＲ０ＳＯ２Ｒ０、ＳＯ２Ｒ０、ＮＲ０Ｃ（Ｏ）Ｒ０、ＯＣ（Ｏ）Ｒ０またはＮＲ０Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ０）２から選択され、ここで、各Ｒ０基は、独立して、水素またはＣ１〜４脂肪族から選択される。式Ｉの−Ｘ−Ｒの最も好ましいＲ基は、メチル、エチル、イソプロピル、イソブチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ＣＨ２ＣＮ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ２ＣＦ３、ＣＨ２シクロプロピル、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｍｅ）２、ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＯ２ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯ２Ｅｔ、ＣＨ２Ｃ≡ＣＣＨ３またはＣＨ２ＣＨ（Ｍｅ）２から選択される。
【００４３】
式Ｉの−Ｘ−Ａｒ部分内の好ましいＡｒ基は、必要に応じて置換した５員〜６員の飽和環またはアリール環、または必要に応じて置換した９員〜１０員の二環式アリール環またはヘテロアリール環から選択され、該飽和環またはアリール環は、０個〜２個のヘテロ原子を有し、該ヘテロ原子は、独立して、窒素、酸素またはイオウから選択され、また、該二環式アリール環またはテロアリール環は、０個〜２個のヘテロ原子を有し、該ヘテロ原子は、独立して、窒素、酸素またはイオウから選択される。式Ｉの−Ｘ−Ａｒ内のより好ましいＡｒ基は、必要に応じて置換した環であり、該環は、フェニル、ピリジル、イミダゾリル、チエニル、チアゾリル、［１，３］ジオキサニル、ピペリジニル、モルホリニル、ピロリル、ピロリジニル、フラニル、テトラヒドロフラニル、ピラニル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、ピロリル、ピペラジニル、チオモルホリニル、ナフチル、オキサゾリル、トリアジニル、テトラゾリル、ジチオラニル、ジオキサラニル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニルまたはインドリルから選択される。
【００４４】
式Ｉの好ましいＲ１基は、Ｔ（ｎ）−Ａｒであり、ここで、ｎは、０である。Ｒ１部分の好ましいＡｒ基は、必要に応じて置換した６員の飽和環またはアリール環、または必要に応じて置換した９員〜１０員の部分不飽和または完全不飽和二環式環から選択され、該飽和環またはアリール環は、０個〜２個の窒素を有し、そして該二環式環は、０個〜２個のヘテロ原子を有し、該ヘテロ原子は、独立して、窒素、酸素またはイオウから選択される。このＲ１部分内のより好ましいＡｒ基は、必要に応じて置換した環であり、該環は、フェニル、シクロヘキシル、ピリジル、ナフチル、キノリニル、イソキノリニルまたはインダニルから選択される。
【００４５】
式ＩのＲ１のＡｒ上の好ましい置換基は、Ｒ０、ハロゲン、ＮＯ２、ＣＮ、ＯＲ０、ＳＲ０、Ｎ（Ｒ０）２、ＣＯ２Ｒ０、Ｃ（Ｏ）Ｒ０、ＣＯＮ（Ｒ０）２、フェニル、ＳＯ２Ｒ０またはＮＲ０Ｃ（Ｏ）Ｒ０から選択され、ここで、各Ｒ０は、独立して、水素または必要に応じて置換したＣ１〜４脂肪族から選択される。式ＩのＲ１のＡｒ上のより好ましい置換基は、メチル、エチル、オキソ、ＣＦ３、ＯＭｅ、Ｃ（Ｏ）Ｍｅ、Ｃ（Ｏ）フェニル、ＣＨ≡ＣＨ、ＣＯ２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、ＳＭｅ、ＣＯ２Ｍｅ、フルオロ、ＳＯ２Ｍｅ、ＮＯ２、ＣＮ、クロロ、Ｎ（Ｍｅ）２、ＮＨＣ（Ｏ）Ｍｅ、ＮＨ２、シアノフェニル、ＣＯ２Ｅｔ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＯＭｅ、３−ＣＨ２ＣＯ２Ｈ−フェニルまたは３−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈ−フェニルから選択される。
【００４６】
式Ｉの好ましいＲ２基は、Ｒ、ＣＨ２Ｎ（Ｒ）２またはＣＨ２Ａｒから選択され、ここで、Ｒは、水素または必要に応じて置換したＣ１〜４脂肪族であり、そしてＡｒは、必要に応じて置換した６員の飽和環または不飽和環であり、該飽和環または不飽和環は、０個〜２個のヘテロ原子を有し、該ヘテロ原子は、独立して、窒素、酸素またはイオウから選択される。式Ｉのより好ましいＲ２基は、メチル、エチル、ＣＨ２（モルホリン−４−イル）、ＣＨ２Ｎ（Ｍｅ）２、ＣＨ２Ｎ（Ｅｔ）２、ＣＨ２Ｎ（Ｍｅ）ＣＨ２ＣＯ２ＣＨ３またはＣＨ２（ピペラジン−１−イル）である。
【００４７】
本発明の好ましい実施形態は、以下の一般式ＩＡで示すように、ＧがＳ−Ｒである式Ｉの化合物またはその薬学的に受容可能な誘導体に関する：
【００４８】
【化４】
2005500261.tif 000005
ここで、Ａ、Ｒ、Ｒ１およびＲ２は、上で定義したとおりである。
【００４９】
式ＩＡの好ましいＲ基、Ｒ１基およびＲ２基は、上記式Ｉについて記述したものである。
【００５０】
より好ましい実施形態によれば、本発明は、式ＩＩＡの化合物またはその薬学的に受容可能な誘導体に関する：
【００５１】
【化５】
2005500261.tif 000006
ここで、Ａ、Ｒ、ＡｒおよびＲ２は、上で定義したとおりである。
【００５２】
式ＩＩＡの好ましいＡｒ基、Ｒ基およびＲ２基は、上記式Ｉについて記述したものである。
【００５３】
以下の表１は、Ａｒが必要に応じて置換したフェニル環であるＩＩＡ化合物の代表的な例を示す。
【００５４】
（表１、式ＩＩＡの化合物の例）
【００５５】
【化６】
2005500261.tif 000007
2005500261.tif 000008
2005500261.tif 000009
2005500261.tif 000010
2005500261.tif 000011
（１６〜２０ページの表；番号、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、シクロプロピル、ビス−Ｎ，Ｎ’−４−シアノフェニル）
Ｒ２がメチルでありＲ１がフェニル以外である式ＩＩＡの化合物の例は、以下の表２で示す。
【００５６】
（表２、式ＩＩＡの化合物の例）
【００５７】
【化７】
2005500261.tif 000012
2005500261.tif 000013
2005500261.tif 000014
Ｒ２がメチル以外である式ＩＩＡの化合物の代表例を、以下の表３に示す。
【００５８】
（表３、化合物ＩＩＡの例）
【００５９】
【化８】
2005500261.tif 000015
本発明の他の実施形態は、式ＩＢまたはＩＢ’の化合物またはその薬学的に受容可能な誘導体に関する：
【００６０】
【化９】
2005500261.tif 000016
ここで、Ｘは、独立して、Ｃ１〜４アルキリデン鎖から選択され、ここで、Ｘの１個または２個の非隣接メチレン単位は、必要に応じて、独立して、−Ｓ−、−Ｏ−または−ＮＨ−で置き換えられ、ここで、Ａ、Ｒ、Ａｒ、Ｒ１およびＲ２は、上で定義したとおりである。
【００６１】
式ＩＢおよびＩＢ’内の好ましいＲ、Ａｒ、Ｒ１およびＲ２の基は、式Ｉについて上で定義したとおりである。
【００６２】
以下の表４は、式ＩＢおよびＩＢ’の化合物の具体的な例を示す。
【００６３】
（表４、ＩＢ化合物の例）
【００６４】
【化１０】
2005500261.tif 000017
2005500261.tif 000018
本発明の他の実施形態は、式Ｉの化合物に関し、この場合、Ｇは、−ＮＨ−Ｒであり（式ＩＣ）、Ｇは、−ＮＨ−Ａｒであり（式ＩＤ）、Ｇは、−Ｏ−Ｒであり（式ＩＥ）、Ｇは、−Ｏ−Ａｒであり（式ＩＦ）、Ｇは、−ＳＯ２−Ｒであり（式ＩＧ）、Ｇは、−ＳＯ２−Ａｒであり（式ＩＨ）、Ｇは、−Ｓ（Ｏ）−Ｒであり（式ＩＪ）、そしてＧは、−Ｓ（Ｏ）−Ａｒである（式ＩＫ）。これらの実施形態の具体的な例は、以下の表５で示す。
【００６５】
（表５）
【００６６】
【化１１】
2005500261.tif 000019
2005500261.tif 000020
本発明の化合物は、一般に、以下の一般スキームおよびそれに続く調製実施例で説明されるように、類似化合物について当業者に公知の方法により、調製され得る。
【００６７】
（スキームＩ）
【００６８】
【化１２】
2005500261.tif 000021
試薬および条件：（ａ）ＣＳ２、Ｋ２ＣＯ３；次いで、Ｒ−Ｉ；（ｂ）Ｈ２ＮＯＨ、Ｅｔ３Ｎ、ＮａＯＥｔ；（ｃ）ジメチルホルムアミド−ジメチルアセタール；（ｄ）Ｒｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２；（ｅ）オキソン；（ｆ）Ｒ−ＮＨ２、ＤＭＳＯ。
【００６９】
上記スキームＩは、式ＩＡ、ＩＣ、ＩＤまたはＩＧの化合物を調製する一般経路を示し、ここで、Ｒ２は、メチルである。工程（ａ）で示すように、ジアセトン１を二硫化炭素で縮合することに続いて、得られたジメルカプトメチレンジアニオンは、ヨードアルカン（例えば、ＣＨ３Ｉ）でクエンチされ得、３−（ビス−アルキルスルファニル−メチレン）−ペンタン−２，４−ジオン（２）が得られる。本発明の種々の化合物を得るために、種々のヨードアルカンが使用され得ることは、当業者に理解できる。２をヒドロキシルアミンで処理すると、イソキサゾール３が得られ、これは、次いで、工程（ｃ）に従って、ジメチルホルムアミド−ジメチルアセタール（ＤＭＦ−ＤＭＡ）で縮合され得、エナミン４が得られる。化合物４は、種々のグアニジン誘導体で環化され得、式ＩＡの化合物が得られる。ＩＡ化合物をオキソンで酸化すると、式ＩＧの対応するスルホニル化合物が得られる。次いで、ＩＧのスルホニル基は、種々のアミンで置き換えられ得、ＩＣまたはＩＤが得られる。あるいは、このスルホニル基または対応するスルホキシド基は、−ＳＡｒ、−ＳＲ、−ＯＡｒまたは−ＯＲで置き換えられ得、本発明の他の化合物が得られる。
【００７０】
ＪＮＫ３、ＬｃｋまたはＳｒｃのインヒビターとして本発明で使用される化合物の活性は、当該技術分野で公知の方法に従って、インビトロ、インビボまたは細胞株において、アッセイされ得る。インビトロアッセイには、活性化したＪＮＫ３、ＬｃｋまたはＳｒｃのリン酸化活性またはＡＴＰ分解酵素活性のいずれかの阻害を決定するアッセイが挙げられる。代替のインビトロアッセイは、そのインヒビターがＪＮＫ３、ＬｃｋまたはＳｒｃに結合する能力を定量化する。インヒビターの結合は、そのインヒビターの結合前に放射標識することにより、インヒビター／ＪＮＫ３、インヒビター／Ｌｃｋまたはインヒビター／Ｓｒｃの複合体を単離すること、および結合した放射標識の量を決定することにより、測定され得る。あるいは、インヒビターの結合は、競争実験を実行することにより決定され得、この場合、新しいインヒビターは、公知の放射性リガンドに結合したＪＮＫ３、ＬｃｋまたはＳｒｃと共にインキュベートされる。ＪＮＫ３、ＬｃｋまたはＳｒｃのキナーゼインヒビターとして本発明で利用される化合物をアッセイする詳細な条件は、以下の実施例で示す。
【００７１】
他の実施形態によれば、本発明は、本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な誘導体と、薬学的に受容可能なキャリア、アジュバントまたはビヒクルとを含有する、組成物を提供する。本発明の組成物中での化合物の量は、生物学的サンプルまたは患者において、プロテインキナーゼ（特に、ＪＮＫ３、ＬｃｋまたはＳｒｃ）を検出可能に阻害するのに有効な量である。好ましくは、本発明の組成物は、このような組成物が必要な患者に投与するように処方される。最も好ましくは、本発明の組成物は、患者に経口投与するように、処方される。
【００７２】
本明細書中で使用する「患者」との用語は、動物、好ましくは、哺乳動物、最も好ましくは、ヒトを意味する。
【００７３】
「薬学的に受容可能なキャリア、アジュバントまたはビヒクル」との用語は、これが処方される化合物の薬理学的な活性を損なわない非毒性のキャリア、アジュバントまたはビヒクルをいう。本発明の組成物で使用され得る薬学的に受容可能なキャリア、アジュバントまたはビヒクルには、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク（例えば、ヒト血清アルブミン）、緩衝物質（例えば、リン酸塩）、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質（例えば、硫酸プロタミン）、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの基質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレンブロック重合体、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７４】
本明細書中で使用する「検出可能に阻害する」との用語は、上記組成物と、ＪＮＫ３、ＬｃｋまたはＳｒｃのキナーゼを含有する試料および上記組成物の非存在下でＪＮＫ３、ＬｃｋまたはＳｒｃのキナーゼを含有する等価試料との間の、ＪＮＫ３、ＬｃｋまたはＳｒｃのキナーゼについての測定可能な変化を意味する。
【００７５】
「薬学的に受容可能な誘導体」とは、本発明の化合物の任意の非毒性の薬学的に受容可能な塩、エステル、エステル塩または他の誘導体であって、レシピエントに投与した際に本発明の化合物またはそれらの阻害性の活性代謝物または残留物を、直接的または間接的のいずれかで提供できるものを、意味する。
【００７６】
本発明の化合物の薬学的に受容可能な塩には、薬学的に受容可能な無機および有機の酸および塩基から誘導したものが挙げられる。適切な酸性塩の例には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、グリコール酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、パルモ酸塩（ｐａｌｍｏａｔｅ）、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシレートおよびウンデカン酸塩が挙げられる。他の酸（例えば、シュウ酸）は、それ自体は薬学的に受容可能ではないものの、本発明の化合物およびそれらの薬学的に受容可能な酸付加塩を得る際の中間体として有用な塩の調製物において、使用できる。
【００７７】
適当な塩基から誘導した塩には、アルカリ金属（例えば、ナトリウム、カリウム）、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）、アンモニウムおよびＮ＋（Ｃ１〜４アルキル）４塩が挙げられる。本発明はまた、本明細書中で開示した化合物の任意の塩基性窒素含有基の四級化を想定している。このような四級化により、水溶性もしくは油溶性、または分散性の生成物を得ることができる。
【００７８】
本発明の組成物は、経口的、非経口的に、吸入噴霧により、局所的に、直腸から、鼻から、頬から、膣から、または移植したレザバを介して、投与され得る。本明細書中で使用する「非経口的」との用語は、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液内、胸骨内、鞘内、肝臓内、病巣内および頭蓋内の注射技術または注入技術を含める。好ましくは、これらの組成物は、経口的、腹膜内または静脈内で投与される。本発明の組成物の無菌の注射可能な形状は、水性懸濁液または油性懸濁液であり得る。これらの懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いて、当該技術分野で公知の技術に従って、処方できる。この無菌の注射可能な調製物はまた、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液として、非毒性の非経口的に適当な希釈剤または溶媒中の無菌の注射可能な溶液または懸濁液であり得る。使用できる受容可能なビヒクルおよび溶媒には、水、リンガー溶液および等張性塩化ナトリウム溶液がある。さらに、従来より、溶媒または懸濁媒体として無菌の非揮発性油が使用されている。
【００７９】
この目的には、いずれかのブランドの非揮発性油が使用でき、これには、合成のモノグリセリドまたはジグリセリドが含まれる。脂肪酸（例えば、オレイン酸）およびそのグリセリド誘導体は、天然の薬学的に受容可能なオイル（例えば、オリーブ油またはひまし油、特に、それらのポリオキシエチレン化した型）と同様に、注射可能物の調製に有用である。これらのオイル溶液または懸濁液はまた、長鎖アルコール希釈剤または分散剤（例えば、カルボキシメチルセルロース）または類似の分散剤（これらは、乳濁液または懸濁液を含めた薬学的に受容可能な剤形を処方する際に、通例、使用される）を含有できる。他の通例使用される界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ、Ｓｐａｎおよび他の乳化剤）または生体利用能向上剤（これらは、薬学的に受容可能な固体、液状または他の剤形を製造する際に、通例使用される）もまた、処方の目的のために、使用できる。
【００８０】
本発明の薬学的に受容可能な組成物は、いずれかの経口的に適当な剤形（これには、カプセル、錠剤、および水性懸濁液および水性溶液が含まれるが、それらに限定されない）で、経口投与できる。経口用途のための錠剤の場合には、通常使用されるキャリアには、ラクトースおよびコーンスターチが挙げられる。潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム）もまた、典型的には、添加される。カプセル形状での経口投与に有用な希釈剤には、ラクトースおよび乾燥コーンスターチが挙げられる。経口用途に水性懸濁液が必要なとき、その活性成分は、乳化剤および懸濁剤と組み合わされる。望ましいなら、ある種の甘味料、香料または着色剤もまた添加してもよい。
【００８１】
あるいは、本発明の薬学的に受容可能な組成物はまた、直腸投与のための坐剤の形状で投与され得る。これらは、適当な非刺激性の賦形剤（これは、室温で固体であるが、直腸温では液体であり、従って、直腸で融けて薬剤を放出する）とこの薬剤を混合することにより、調製され得る。このような物質には、ココアバター、密ろうおよびポリエチレングリコールが挙げられる。
【００８２】
本発明の薬学的に受容可能な組成物はまた、特に、治療の標的が局所的な適用によって容易にアクセスできる領域または器官（目、皮膚または下部腸道の疾患を含めて）を含むとき、局所的に投与され得る。これらの領域または器官のそれぞれに適当な局所処方物は、容易に調製される。
【００８３】
下部腸道に対する局所適用は、直腸坐剤処方（上記）にて、または適当な浣腸処方にて、行うことができる。局所的な経皮的パッチもまた、使用できる。
【００８４】
局所的に適用するためには、この薬学的に受容可能な組成物は、１種またはそれ以上のキャリアに懸濁するかまたは溶解した活性成分を含む適当な軟膏中で、処方できる。本発明の化合物の局所投与用のキャリアには、鉱油、液状石油、ホワイト石油、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックスおよび水が挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、この薬学的に受容可能な組成物は、１種またはそれ以上の薬学的に受容可能なキャリアに懸濁するかまたは溶解した活性成分を含む適当なローションまたはクリーム中で処方され得る。適当なキャリアには、鉱油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリールアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８５】
眼科用途には、この薬学的に受容可能な組成物は、防腐剤（例えば、塩化ベンザルコニウム）と共にまたはそれなしのいずれかで、ｐＨを調整した等張性無菌生理食塩水の微細化懸濁液として、または、好ましくは、ｐＨを調整した等張性無菌生理食塩水の溶液として、処方され得る。あるいは、眼科用途には、この薬学的に受容可能な組成物は、軟膏（例えば、ペトロラタム）に処方され得る。
【００８６】
本発明の薬学的に受容可能な組成物はまた、鼻エアロゾルまたは鼻吸入により投与され得る。このような組成物は、製薬処方の当該技術分野で周知の技術に従って、調製され、生理食塩水中の溶液として、ベンジルアルコールまたは他の適当な防腐剤、生物学的利用能を高めるための吸収促進剤、フルオロカーボン、および／あるいは他の従来の可溶化剤または分散剤を使用して、調製され得る。
【００８７】
最も好ましくは、本発明の薬学的に受容可能な組成物は、経口投与用に処方される。
【００８８】
単回投与形態の組成物を製造するキャリア物質と組み合わされ得る本発明の化合物の量は、治療する宿主および特定の投与様式に依存して、変わる。好ましくは、これらの組成物は、これらの組成物を受ける患者に０．０１〜１００ｍｇ／体重１ｋｇ／日の間の投薬量のインヒビターが投与できるように、処方されるべきである。
【００８９】
任意の特定の患者のための特定の投薬量および処置レジメンは、種々の因子（使用される特定の化合物の活性、年齢、体重、一般的な健康状態、性別、常食、投与時間、排泄率、薬物の組合せ、ならびに処置する医師の判断および処置される特定の疾患の重篤度を含む）に依存することがまた理解されるはずである。この組成物中の本発明の化合物の量はまた、その組成物中の特定の化合物に依存する。
【００９０】
治療または予防される特定の状態または疾患に依存して、本発明の組成物中には、単剤療法でその状態を治療または予防するのに通常投与される追加治療剤もまた、存在し得る。
【００９１】
例えば、増殖性疾患および癌を治療するために、化学療法剤または他の抗増殖剤が本発明の化合物と併用され得る。公知の化学療法剤の例としては、ＧｌｅｅｖｅｃＴＭ、アドリアマイシン、デキサメタゾン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、フルオロウラシル、トポテカン、タキソール、インターフェロンおよび白金誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９２】
本発明の化合物がまた併用され得る薬剤の他の例には、抗炎症剤（例えば、コルチコステロイド、ＴＮＦ遮断薬、ＩＬ−１  ＲＡ、アザチオプリン、シクロホスファミドおよびスルファサラジン）；免疫調節剤または免疫抑制剤（例えば、サイクロスポリン、タクロリムス、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、インターフェロン、コルチコステロイド、シクロホスファミド、アザチオプリンおよびスルファサラジン）；神経栄養因子（例えば、アセチルコリンエステラーゼインヒビター、ＭＡＯインヒビター、インターフェロン、抗痙攣薬、イオンチャンネル遮断薬、リルゾールおよび抗パーキンソン病剤）；循環器病の治療剤（例えば、β−遮断薬、ＡＣＥインヒビター、利尿薬、硝酸塩、カルシウムチャンネル遮断薬およびスタチン）；肝臓疾患の治療剤（例えば、コルチコステロイド、コレスチラミン、インターフェロンおよび抗ウイルス薬）；血液障害の治療剤（例えば、コルチコステロイド、抗白血病剤および成長因子）；糖尿病の治療剤（例えば、インシュリン、インシュリン類似物、α−グリコシダーゼインヒビター、ビグアナイドおよびインシュリン感作物質）；および免疫不全障害の治療剤（例えば、γ−グロブリン）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９３】
本発明の組成物中に存在する追加治療剤の量は、唯一の活性剤としてその治療剤を含有する組成物で通常投与される量以下である。好ましくは、現在開示された組成物中の追加治療剤の量は、唯一の治療活性剤としてその治療剤を含有する組成物中で通常存在する量の約５０％〜１００％の範囲である。
【００９４】
他の実施形態によれば、本発明は、生物学的サンプルにおいて、ＪＮＫ３、ＬｃｋまたはＳｒｃキナーゼ活性を阻害する方法に関し、この方法は、この生物学的サンプルを、本発明の化合物またはこの化合物を含有する組成物と接触させる工程を包含する。
【００９５】
本明細書中で使用する場合、用語「生物学的サンプル」は、細胞培養物またはそれらの抽出物；哺乳動物またはその抽出物から得られる生検材料；および血液、唾液、尿、糞便、精液、涙液、または他の体液もしくはそれらの抽出物が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９６】
生物学的サンプルでのＪＮＫ３、ＬｃｋまたはＳｒｃキナーゼ活性の阻害は、当業者に公知の種々の目的のために有用である。このような目的の例としては、輸血、臓器移植、生物学的サンプルの保存および生物検定が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９７】
他の実施形態によれば、本発明は、患者において、ＪＮＫ３、ＬｃｋまたはＳｒｃが媒介する疾患または状態の重篤度を治療するかまたは軽減する方法を提供し、この方法は、この患者に、本発明の組成物を投与する工程を包含する。
【００９８】
本明細書中で使用する場合、用語「ＪＮＫが媒介する疾患」とは、ＪＮＫが一定の役割を果たすことが知られている任意の疾患または他の有害な状態を意味する。このような状態には、炎症疾患、自己免疫疾患、破壊性骨障害、増殖性障害、癌、感染症、神経変性疾患、アレルギー、発作での再灌流／虚血、心臓発作、血管原性障害、臓器低酸素、血管過形成、心臓肥大、トロンビン誘発血小板凝集、およびプロスタグランジンエンドペルオキシダーゼ合成酵素−２に関連した状態が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９９】
本発明の化合物で治療または予防され得る炎症疾患には、急性膵炎、慢性膵炎、喘息、アレルギーおよび成人呼吸窮迫症候群が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１００】
本発明の化合物で治療または予防され得る自己免疫疾患には、糸球体腎炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、慢性甲状腺炎、グレーブス病、自己免疫性胃炎、糖尿病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性好中球減少症、血小板減少症、アトピー性皮膚炎、慢性活性肝炎、重症筋無力症、多発性硬化症、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、乾癬または移植片対宿主病が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０１】
本発明の化合物で治療または予防され得る破壊性骨障害には、骨粗鬆症、変形性関節症および多発性骨髄腫関連骨障害が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０２】
本発明の化合物で治療または予防され得る増殖性障害には、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、転移性メラノーマ、カポジ肉腫、多発性骨髄腫およびＨＴＬＶ−１媒介性腫瘍形成が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０３】
本発明の化合物で治療または予防され得る血管原性障害には、固形腫瘍、眼球新生血管形成（ｎｅｏｖａｓｃｕｌｉｚａｔｉｏｎ）および小児血管腫が挙げられる。本発明の化合物で治療または予防され得る感染症には、敗血症、敗血ショックおよび細菌性赤痢が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０４】
本発明の化合物で治療または予防され得るウイルス疾患には、急性肝炎感染（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎を含めて）、ＨＩＶ感染およびＣＭＶ網膜炎が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０５】
本発明の化合物で治療または予防され得る神経変性疾患には、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、癲癇、発作、ハンティングトン病、外傷性脳傷害、虚血性および出血性発作、脳虚血または神経変性疾患（外傷性障害、急性低酸素、虚血またはグルタミン酸塩神経毒性により引き起こされるアポトーシスが駆動する神経変性疾患を含めて）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０６】
「ＪＮＫが媒介する疾患」には、また、発作、心臓発作、心筋虚血、臓器低酸素、血管過形成、心臓肥大、肝虚血、肝臓疾患、鬱血性心不全、病的免疫応答（例えば、Ｔ細胞活性化およびトロンビン誘発血小板凝集により引き起こされるもの）における虚血／再灌流が挙げられる。
【０１０７】
それに加えて、本発明の化合物は、誘導性の前炎症タンパク質の発現を阻害でき得る。従って、本発明の化合物で治療され得る他の「ＪＮＫが媒介する状態」としては、浮腫、痛覚脱失、熱および痛み（例えば、神経筋の痛み、頭痛、癌の痛み、歯痛および関節の痛み）が挙げられる。
【０１０８】
本発明の化合物はまた、Ｓｒｃファミリーキナーゼ（特に、ＳｒｃおよびＬｃｋ）のインヒビターとして、有用である。本明細書中で使用する場合、用語「Ｓｒｃが媒介する疾患」または「Ｌｃｋが媒介する疾患」とは、ＳｒｃまたはＬｃｋが一定の役割を果たすことが知られている任意の疾患または他の有害な状態を意味する。従って、これらの化合物は、１種またはそれ以上のＳｒｃファミリーキナーゼの活性により影響されることが知られている疾患または状態を治療するのに有用である。このような疾患または状態には、高カルシウム血症、再狭窄、骨粗鬆症、変形性関節症、骨転移の対症療法、関節リウマチ、炎症性腸疾患、多発性硬化症、乾癬、狼瘡、移植片対宿主病、Ｔ細胞媒介過敏症、橋本甲状腺炎、ギランバレー症候群、慢性閉塞性肺障害、接触性皮膚炎、癌、パジェット病、喘息、虚血または再灌流傷害、アレルギー疾患、アトピー性皮膚炎およびアレルギー性鼻炎が挙げられる。特に、Ｓｒｃ活性により影響される疾患には、高カルシウム血症、骨粗鬆症、変形性関節症、癌、骨転移の対症療法およびパジェット病が挙げられる。特に、Ｌｃｋ活性により影響される疾患には、自己免疫疾患、アレルギー、関節リウマチおよび白血病が挙げられる。
【０１０９】
好ましい実施形態は、炎症疾患、自己免疫疾患、破壊性骨障害、神経変性疾患、アレルギー、発作での再灌流／虚血、心臓発作、血管原性障害、臓器低酸素、血管過形成、心臓肥大、またはトロンビン誘発血小板凝集から選択されるＪＮＫが媒介する疾患を治療または予防するために使用される方法に関する。
【０１１０】
他の好ましい実施形態は、高カルシウム血症、骨粗鬆症、変形性関節症、または骨転移の対症療法から選択されるＳｒｃまたはＬｃｋが媒介する疾患を治療または予防するために使用される方法に関する。
【０１１１】
代替実施形態では、追加治療剤を含有しない組成物を利用する本発明の方法は、前記患者に、追加治療剤を別々に投与する追加工程を包含する。これらの追加治療剤は、別々に投与されるとき、本発明の組成物の投与前、投与と連続して、または投与後、この患者に投与され得る。
【０１１２】
本発明の化合物またはそれらの薬学的に受容可能な組成物はまた、移植可能医療デバイス（例えば、人工器官、人工弁、血管移植片、ステントおよびカテーテル）を被覆する組成物に取り込まれ得る。例えば、血管ステントは、再狭窄（傷害後に血管壁が再び狭くなること）を克服するのに使用されている。しかしながら、ステントまたは他の移植可能デバイスを使用している患者は、血餅の形成または血小板の活性化というリスクがある。これらの好ましくない影響は、そのデバイスを、キナーゼインヒビターを含有する薬学的に受容可能な組成物で予め被覆することにより、防止または軽減され得る。適当な被覆および被覆した移植可能デバイスの一般的な調製は、米国特許第６，０９９，５６２号；第５，８８６，０２６号；および第５，３０４，１２１号で記述されている。これらの被覆には、典型的には、生体適合性高分子材料（例えば、ヒドロゲル重合体、ポリメチルジシロキサン、ポリカプロラクトン、ポリエチレングリコール、ポリ乳酸、エチレン−酢酸ビニルおよびそれらの混合物）がある。これらの被覆は、さらに、その組成物において制御された放出特性を与えるために、フルオロシリコーン、多糖類、ポリエチレングリコール、リン脂質またはそれらの組合せの適当なトップコートにより、覆われ得る。本発明の化合物で被覆される移植可能デバイスは、本発明の他の実施形態である。
【０１１３】
本明細書中に記載される本発明をより十分に理解し得るために、以下の実施例を示す。これらの実施例は、例示の目的だけのものであり、いずれの様式でも、本発明の範囲を限定するものとして解釈すべきではないことが理解されるはずである。
【実施例】
【０１１４】
（実施例）
（実施例１）
１−（５−メチル−３−メチルスルファニル−イソキサゾール−４−イル）−エタノン（化合物３）：
３−（ビス−メチルスルファニル−メチレン）−ペンタン−２，４−ジオン（１ｇ、４．８９ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（５０ｍｌ）溶液に、室温で、ヒドロキシルアミン塩酸塩（０．３７４ｇ、５．３８ｍｍｏｌ）を加え、続いて、トリエチルアミン（０．７４７ｍｌ、５．３８ｍｍｏｌ）を加えた。その反応物を一晩攪拌し、次いで、塩化メチレンと水との間で分配した。その有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、そして真空中で濃縮して、０．６４５ｇ（３．７７ｍｍｏｌ）の表題化合物を得た。１ＨＮＭＲおよび質量スペクトルは、その構造に一致していた（ＭＳ  ｍ＋１＝１７２）。
【０１１５】
（実施例２）
３−ジメチルアミノ−１−（５−メチル−３−メチルスルファニル−イソキサゾール−４−イル）−プロパノン（化合物４）：上で調製した化合物３（０．３７５ｇ、２．１９ｍｍｏｌ）のトルエン溶液に、ジメチルホルムアミド−ジメチルアセタール１．５ｍｌを加えた。その反応混合物を、１００℃で、一晩加熱すると、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により、生成物に完全に変換していた。この反応物を、酢酸エチルと水との間で分配した。その水層を新鮮な酢酸エチルで抽出した後、合わせた有機層を濃縮し、その粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（２％ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２）で精製して、０．４２５ｇ（１．８８ｍｍｏｌ）の表題化合物を得た。
【０１１６】
（実施例３）
（３，５−ジメトキシ−フェニル）−［４−（５−メタン−３−メチルスルファニル−イソキサゾール−４−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン（化合物ＩＩＡ−１８）および４−［２−（３，５−ジメトキシ−フェニルアミノ）−ピリミジン−４−イル］−５−メチル−イソキサゾール−３−オール（化合物５）：上で調製した化合物４（２００ｍｇ、０．８８４ｍｍｏｌ）および３，５−ジメトキシフェニルグアニジン（２０７ｍｇ、１．０６１ｍｍｏｌ）のメタノール溶液に、ナトリウムエトキシド（過剰）を加えた。その反応物を、封管中にて、７０℃で、一晩加熱した。ＴＬＣにより、出発物質４の完全な消失および２種の異なる生成物の形成が示された。この反応物を、酢酸エチルと水との間で分配し、その水層を新鮮な酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、そして真空中で濃縮した。その粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（２％ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２）で精製して、４９ｍｇ（０．１３７ｍｍｏｌ）の表題化合物ＩＩＡ−１８および１０ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）の表題化合物５を得た。
【０１１７】
（実施例４）
（３，５−ジメトキシ−フェニル）−［４−（３−メチルスルフィニル−５−メチル−イソキサゾール−４−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン（化合物６）：上で調製した化合物ＩＩＡ−１８（４９ｍｇ、０．１３７ｍｍｏｌ）のメタノール（３ｍｌ）溶液に、室温で、オキソン（２５２ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）の水溶液を加えた。その反応物を一晩攪拌すると、出発物質が変換された。この反応混合物を、酢酸エチルと水との間で分配し、その水層を新鮮な酢酸エチルで抽出し、合わせた有機層を濃縮した。その粗表題化合物（３５ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）を、さらに精製することなく、次の工程で使用した。
【０１１８】
（実施例５）
（３，５−ジメトキシ−フェニル）−［４−（５−メチル−３−ピペリジン−１−イル−イソキサゾール−４−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン（化合物ＩＤ−４）：上で調製した化合物６（７ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）のエタノール（１．５ｍｌ）溶液に、ピペリジン（０．０１ｍｌ、過剰）を加えた。その反応混合物を、７０℃で、一晩加熱すると、ＬＣ／ＭＳにより、生成物に変換された。この混合物を、ピアスブロック蒸発器を使用して蒸発させ、そして逆相分離用ＨＰＬＣにより精製して、表題化合物（１．７ｍｇ、０．００４ｍｍｏｌ）を得た。
【０１１９】
平行して、上記反応を使って、以下を除いて同じ手順を使用して、４つの他の反応を実行した：ピペリジンをモルホリンで置き換えて化合物ＩＤ−５を得、３−ヒドロキシピペリジンで置き換えて、化合物ＩＤ−６を得、４−ヒドロキシピリジンで置き換えて、化合物ＩＤ−７を得、そしてエタノールアミンで置き換えて、化合物ＩＤ−８を得た。これらの生成物の全てを、逆相ＨＰＬＣで精製し、そしてＮＭＲおよびＬＣ／ＭＳの両方で特徴付けた。
【０１２０】
（実施例６、Ｓｒｃ阻害アッセイ）
これらの化合物を、放射能ベースアッセイまたは分光測光アッセイのいずれかを使用して、ヒトｓｒｃキナーゼのインヒビターとして、評価した。
【０１２１】
（Ｉ）放射能ベースアッセイ
これらの化合物を、バキュロウイルス細胞から発現し精製した全長組換えヒトＳｒｃキナーゼ（Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製、ｃａｔ．ｎｏ．１４−１１７）のインヒビターとして、アッセイした。ＡＴＰからＧｌｕ：Ｔｙｒ＝４：１の組成のランダムポリＧｌｕ−Ｔｙｒ重合体基質のチロシンへと３３Ｐを取り込むことに従って、Ｓｒｃキナーゼの活性をモニターした（Ｓｉｇｍａ，ｃａｔ．ｎｏ．Ｐ−０２７５）。以下は、これらのアッセイ成分の最終濃度であった：０．０２５ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．６、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、２ｍＭのＤＴＴ、０．２５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、１０μＭのＡＴＰ（１〜２μＣｉ、１反応あたり３３Ｐ−ＡＴＰ）、５ｍｇ／ｍｌのポリＧｌｕ−Ｔｙｒ、および１〜２単位の組換えヒトＳｒｃキナーゼ。典型的なアッセイでは、ＡＴＰを除いて全ての反応成分を予め混合し、そしてアッセイプレートウェルに等分した。このウェルに、ＤＭＳＯに溶解したインヒビターを加えて、２．５％の最終ＤＭＳＯ濃度を得た。３３Ｐ−ＡＴＰとの反応を開始する前に、このアッセイプレートを、３０℃で、１０分間インキュベートした。反応の２０分後、これらの反応を、１５０μｌの１０％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）（これは、２０ｍＭ  Ｎａ３ＰＯ４を含有する）でクエンチした。次いで、クエンチした試料を、９６ウェルフィルタープレート（Ｗｈａｔｍａｎ，ＵＮＩ−Ｆｉｌｔｅｒ  ＧＦ／Ｆ  Ｇｌａｓｓ  Ｆｉｂｅｒ  Ｆｉｌｔｅｒ，ｃａｔ  ｎｏ．７７００−３３１０；これは、フィルタープレート真空マニホルドに設置した）に移した。フィルタープレートを、１０％ＴＣＡ（これは、２０ｍＭ  Ｎａ３ＰＯ４を含有する）で４回洗浄し、次いで、メタノールで４回洗浄した。次いで、各ウェルに、シンチレーション流体２００μｌを加えた。これらのプレートを密封し、それらのフィルターに結合した放射能の量を、ＴｏｐＣｏｕｎｔシンチレーションカウンタで定量した。取り込まれた放射能を、そのインヒビターの濃度の関数として、プロットした。そのデータを、競合阻害動力学モデルに当てはめて、その化合物のＫｉを得た。
【０１２２】
（ＩＩ）分光測光アッセイ
ポリＧｌｕ−Ｔｙｒ基質のヒト組換えｓｒｃキナーゼで触媒したリン酸化によりＡＴＰから産生したＡＤＰを、共役酵素アッセイを使用して、定量した（Ｆｏｘら、（１９９８）  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ  ７，２２４９）。このアッセイにて、１分子のＮＡＤＨは、このキナーゼ反応で産生されたＡＤＰの各分子に対して、ＮＡＤに酸化される。ＮＡＤＨの消失は、３４０ｎｍで、うまく追跡できる。
【０１２３】
以下は、これらのアッセイ成分の最終濃度であった：０．０２５ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．６、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、２ｍＭのＤＴＴ、０．２５ｍｇ／ｍｌのポリＧｌｕ−Ｔｙｒおよび２５ｎＭの組換えヒトＳｒｃキナーゼ。共役酵素系の成分の最終濃度は、２．５ｍＭのホスホエノールピルベート、２００μＭのＮＡＤＨ、３０μｇ／ｍｌのピルベートキナーゼおよび１０μｇ／ｍｌの乳酸脱水素酵素であった。
【０１２４】
典型的なアッセイでは、ＡＴＰを除いて全ての反応成分を予め混合し、そしてアッセイプレートウェルに等分した。このウェルに、ＤＭＳＯに溶解したインヒビターを加えて、２．５％の最終ＤＭＳＯ濃度を得た。１００μＭのＡＴＰとの反応を開始する前に、このアッセイプレートを、３０℃で、１０分間インキュベートした。その吸光度は、時間と共に、３４０ｎｍで変化し、この反応速度を、分子装置プレート読み取り装置でモニターした。その速度データを、そのインヒビターの濃度の関数として、競合阻害動力学モデルに当てはめて、その化合物のＫｉを得た。
【０１２５】
これらのＳｒｃ阻害アッセイで試験した本発明の化合物の多くは、１マイクロモル未満のＩＣ５０を生じた。
【０１２６】
（実施例７、Ｌｃｋ阻害アッセイ）
これらの化合物を、放射能ベースアッセイまたは分光測光アッセイのいずれかを使用して、ヒトｓｒｃキナーゼのインヒビターとして、評価した。
【０１２７】
（Ｉ）放射能ベースアッセイ
これらの化合物を、バキュロウイルス細胞から発現し精製した全長ウシ胸腺Ｌｃｋキナーゼ（Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製、ｃａｔ．ｎｏ．１４−１０６）のインヒビターとして、アッセイした。ＡＴＰからＧｌｕ：Ｔｙｒ＝４：１の組成のランダムポリＧｌｕ−Ｔｙｒ重合体基質のチロシンへと３３Ｐを取り込むことに従って、キナーゼの活性をモニターした（Ｓｉｇｍａ，ｃａｔ．ｎｏ．Ｐ−０２７５）。以下は、これらのアッセイ成分の最終濃度であった：０．０２５ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．６、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、２ｍＭのＤＴＴ、０．２５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、１０μＭのＡＴＰ（１〜２μＣｉ、１反応あたり３３Ｐ−ＡＴＰ）、５ｍｇ／ｍｌのポリＧｌｕ−Ｔｙｒ、および１〜２単位の組換えヒトＳｒｃキナーゼ。典型的なアッセイでは、ＡＴＰを除いて全ての反応成分を予め混合し、そしてアッセイプレートウェルに等分した。このウェルに、ＤＭＳＯに溶解したインヒビターを加えて、２．５％の最終ＤＭＳＯ濃度を得た。３３Ｐ−ＡＴＰとの反応を開始する前に、このアッセイプレートを、３０℃で、１０分間インキュベートした。反応の２０分後、これらの反応を、１５０μｌの１０％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）（これは、２０ｍＭ  Ｎａ３ＰＯ４を含有する）でクエンチした。次いで、クエンチした試料を、９６ウェルフィルタープレート（Ｗｈａｔｍａｎ，ＵＮＩ−Ｆｉｌｔｅｒ  ＧＦ／Ｆ  Ｇｌａｓｓ  Ｆｉｂｅｒ  Ｆｉｌｔｅｒ，ｃａｔ  ｎｏ．７７００−３３１０；これは、フィルタープレート真空マニホルドに設置した）に移した。フィルタープレートを、１０％ＴＣＡ（これは、２０ｍＭ  Ｎａ３ＰＯ４を含有する）で４回洗浄し、次いで、メタノールで４回洗浄した。次いで、各ウェルに、シンチレーション流体２００μｌを加えた。これらのプレートを密封し、それらのフィルターに関連した放射能の量を、ＴｏｐＣｏｕｎｔシンチレーションカウンタで定量した。取り込まれた放射能を、そのインヒビターの濃度の関数として、プロットした。そのデータを、競合阻害動力学モデルに当てはめて、その化合物のＫｉを得た。
【０１２８】
（ＩＩ）分光測光アッセイ
ポリＧｌｕ−Ｔｙｒ基質のヒト組換えＬｃｋキナーゼで触媒したリン酸化によりＡＴＰから産生したＡＤＰを、共役酵素アッセイを使用して、定量した（Ｆｏｘら、（１９９８）  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ  ７，２２４９）。このアッセイにて、１分子のＮＡＤＨは、このキナーゼ反応で産生されたＡＤＰの各分子に対して、ＮＡＤに酸化される。ＮＡＤＨの消失は、３４０ｎｍで、うまく追跡できる。
【０１２９】
以下は、これらのアッセイ成分の最終濃度であった：０．０２５ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．６、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、２ｍＭのＤＴＴ、５ｍｇ／ｍｌのポリＧｌｕ−Ｔｙｒおよび５０ｎＭの組換えヒトＬｃｋキナーゼ。共役酵素系の成分の最終濃度は、２．５ｍＭのホスホエノールピルベート、２００μＭのＮＡＤＨ、３０μｇ／ｍｌのピルベートキナーゼおよび１０μｇ／ｍｌの乳酸脱水素酵素であった。
【０１３０】
典型的なアッセイでは、ＡＴＰを除いて全ての反応成分を予め混合し、そしてアッセイプレートウェルに等分した。このウェルに、ＤＭＳＯに溶解したインヒビターを加えて、２．５％の最終ＤＭＳＯ濃度を得た。１５０μＭのＡＴＰとの反応を開始する前に、このアッセイプレートを、３０℃で、１０分間インキュベートした。その吸光度は、時間と共に、３４０ｎｍで変化し、この反応速度を、分子装置プレート読み取り装置でモニターした。その速度データを、そのインヒビターの濃度の関数として、競合阻害動力学モデルに当てはめて、その化合物のＫｉを得た。これらのＬｃｋ阻害アッセイで試験した本発明の化合物の多くは、１マイクロモル未満のＩＣ５０を生じた。
【０１３１】
（実施例８、ＪＮＫ３タンパク質のクローニング、発現および精製）
公開されたＪＮＫ３α１  ｃＤＮＡをクイアリーとして使用するＥＳＴデータベースのＢＬＡＳＴ検索により、ヒトＪＮＫ３α１用の全コード配列を含むＥＳＴクローン（＃６３２５８８）を同定した。ＮｃｏＩ部位およびＢａｍＨＩ部位にて、ｐＥＴ−１５Ｂ発現ベクターにクローン化するｃＤＮＡに制限部位を導入するために、ｐｆｕポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ）を使うポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用した。そのタンパク質は、Ｅ．ｃｏｌｉで発現する。発現した全長タンパク質（Ｍｅｔ  １−Ｇｌｎ  ４２２）の溶解性が乏しいことから、４０位置（Ｓｅｒ  ４０）でのＳｅｒ残基で開始するＮ−末端短縮型タンパク質を産生する。この短縮型は、ＪＮＫ１およびＪＮＫ２タンパク質のＳｅｒ  ２に対応しており、メチオニン（開始）残基およびグリシン残基に先行している。このグリシン残基を、この発現ベクターにクローン化するＮｃｏＩ部位を導入するために、加える。それに加えて、ＰＣＲにより、組織的Ｃ末端切断を実行して、回折−品質結晶を生じる構築物を同定する。このような構築物の１つは、ＪＮＫ３α１のアミノ酸残基Ｓｅｒ４０−Ｇｌｕ４０２をコードし、Ｍｅｔ残基およびＧｌｙ残基に先行する。
【０１３２】
この構築物は、プライマーとしてデオキシオリゴヌクレオチド：５’ＧＣＴＣＴＡＧＡＧＣＴＣＣＡＴＧＧＧＣＡＧＣＡＡＡＡＧＣＡＡＡＧＴＴＧＡＣＡＡ３’（下線の開始コドンを有する順方向プライマー（配列番号１）および５’ＴＡＧＣＧＧＡＴＣＣＴＣＡＴＴＣＴＧＡＡＴＴＣＡＴＴＡＣＴＴＣＣＴＴＧＴＡ３’（下線の終止コドンを有する逆方向プライマー）（配列番号２）を使用するＰＣＲにより調製し、そしてＤＮＡ配列決定により、確認する。対照実験により、切断したＪＮＫ３は、インビトロで、上流キナーゼＭＫＫ７で活性化したとき、ミエリン塩基性タンパク質に対して、同等のキナーゼ活性を有していることが示された。
【０１３３】
Ｅ．ｃｏｌｉ株ＢＬ２１（ＤＥ３）（Ｎｏｖａｇｅｎ）を、ＪＮＫ３発現構築物で形質変換し、そして細胞が対数期（ＯＤ６００  約０．８）になるまで、振盪フラスコにて、１００μｇ／ｍｌのカルベニシリンを補充したＬＢにて、３０℃で、増殖させる。０．８ｍＭの最終濃度まで、イソプロピルチオ−β−Ｄ−ガラクトシダーゼを加え、それらの細胞を、遠心分離により、２時間後に収穫する。
【０１３４】
ＪＮＫ３を含有するＥ．ｃｏｌｉ細胞ペーストを１０容量／ｇの溶解緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２；これは、１０％のグリセロール（ｖ／ｖ）、１００ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのＤＴＴ、０．１ｍＭのＰＭＳＦ、２μｇ／ｍｌのＰｅｐｓｔａｔｉｎ、各１μｇ／ｍｌのＥ−６４およびＬｅｕｐｅｐｔｉｎを含有する）に再懸濁する。細胞を、マイクロフリューダイザーを使用して、氷上で溶解し、そして１００，０００×ｇで、４℃で、３０分間遠心分離する。その１００，０００×ｇの上澄み液を、Ｂｕｆｆｅｒ  Ａ（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．０、１０％グリセロール（ｖ／ｖ）、２ｍＭ  ＤＴＴ）で１：５に希釈し、そして４℃で、ＳＰ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）カチオン交換クロマトグラフィー（カラム寸法：２．６×２０ｃｍ）により精製する。その樹脂を５カラム容量のＢｕｆｆｅｒ  Ａで洗浄し、続いて、５カラム容量のＢｕｆｆｅｒ  Ａ（これは、５０ｍＭのＮａＣｌを含有する）で洗浄する。結合したＪＮＫ３を、７．５カラム容量の線形勾配の５０〜３００ｍＭ  ＮａＣｌで溶出する。ＪＮＫ３は、１５０〜２００ｍＭのＮａＣｌで溶出した。
【０１３５】
（実施例９、ＪＮＫ３の活性化）
５ｍｇのＪＮＫ３を、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５；これは、１００ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＤＴＴ、２０ｍＭのＭｇＣｌ２および１ｍＭのＡＴＰを含有する）中にて、０．５ｍｇ／ｍｌまで希釈する。１：２．５のＧＳＴ−ＭＫＫ７：ＪＮＫ３のモル比で、ＧＳＴ−ＭＫＫ７（ＤＤ）を加える。２５℃で３０分間インキュベーションした後、その反応混合物を、Ｃｅｎｔｒｉｐｒｅｐ−３０（Ａｍｉｃｏｎ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）での限外濾過により、５倍濃縮し、１０ｍｌまで希釈し、そして１ｍＭの追加ＡＴＰをさらに加える。この手順を３回繰り返して、ＡＤＰを除去し、そしてＡＴＰを補充する。ＡＴＰの最終添加量は、５ｍＭであり、その混合物を、４℃で、一晩インキュベートする。
【０１３６】
活性化したＪＮＫ３／ＧＳＴ−ＭＫＫ７（ＤＤ）反応混合物を、透析または限外濾過により、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５；これは、５ｍＭのＤＤＴおよび５％グリセロール（ｗ／ｖ）を含有する）に交換する。この反応混合物を１．１Ｍリン酸カリウム（ｐＨ７．５）に調整し、そしてＲａｉｎｉｎ  Ｈｙｄｒｏｐｏｒｅカラムを使用して、疎水的相互作用クロマトグラフィー（２５℃）により精製する。ＧＳＴ−ＭＫＫ７および不活性化ＪＮＫ３は、１ｍｌ／分の流速で、６０分間にわたって、１．１〜０．０５Ｍリン酸カリウム勾配で展開したとき、単一のリン酸化ＪＮＫから二重リン酸化ＪＮＫ３が分離されるように、これらの条件下にて、結合しない。活性化ＪＮＫ３（すなわち、二重リン酸化ＪＮＫ３）を、０．２５〜１ｍｇ／ｍｌで、−７０℃で、保存する。
【０１３７】
（実施例１０、ＪＮＫ阻害アッセイ）
分光測光共役酵素アッセイにより、ＪＮＫ３の阻害について、化合物をアッセイする。このアッセイでは、一定濃度の活性化ＪＮＫ３（１０ｎＭ）を、０．１ＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５；これは、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、２．５ｍＭのホスホエノールピルベート、２００μＭのＮＡＤＨ、１５０μｇ／ｍｌのピルベートキナーゼ、５０μｇ／ｍｌの乳酸脱水素酵素および２００μＭのＥＧＦレセプタペプチドを含有する）を含む緩衝液中にて、３０℃で、１０分間にわたって、種々の濃度の潜在的インヒビター（これは、ＤＭＳＯに溶解した）と共にインキュベートする。このＥＧＦレセプタペプチドは、配列ＫＲＥＬＶＥＰＬＴＰＳＧＥＡＰＮＱＡＬＬＲ（配列番号３）を有し、そしてＪＮＫ３で触媒したキナーゼ反応でのホスホリル受容体である。この反応は、１０μＭのＡＴＰを加えることにより開始し、そのアッセイプレートを、分光光度計アッセイプレート隔室（これは、３０℃で維持する）に挿入する。時間の関数として、３４０ｎｍでの吸光度の減少をモニターする。インヒビター濃度の関数として、その速度データを、競合阻害動力学モデルに当てはめて、そのＫｉを決定する。
【０１３８】
本発明者らは、本発明の多数の実施形態を記述しているものの、本発明者らの基本的な例は、他の実施形態（これらは、本発明の化合物および方法を利用する）を提供するように変更できることが明らかである。従って、本発明の範囲は、特定の実施形態（これらは、一例として、表わされている）よりもむしろ、添付の請求の範囲で規定され得ることが理解される。
【国際公開パンフレット】
2005500261.tif 000023
2005500261.tif 000024
2005500261.tif 000025
2005500261.tif 000026
2005500261.tif 000027
2005500261.tif 000028
2005500261.tif 000029
2005500261.tif 000030
2005500261.tif 000031
2005500261.tif 000032
2005500261.tif 000033
2005500261.tif 000034
2005500261.tif 000035
2005500261.tif 000036
2005500261.tif 000037
2005500261.tif 000038
2005500261.tif 000039
2005500261.tif 000040
2005500261.tif 000041
2005500261.tif 000042
2005500261.tif 000043
2005500261.tif 000044
2005500261.tif 000045
2005500261.tif 000046
2005500261.tif 000047
2005500261.tif 000048
2005500261.tif 000049
2005500261.tif 000050
2005500261.tif 000051
2005500261.tif 000052
2005500261.tif 000053
2005500261.tif 000054
2005500261.tif 000055
2005500261.tif 000056
2005500261.tif 000057
2005500261.tif 000058
2005500261.tif 000059
2005500261.tif 000060
2005500261.tif 000061
2005500261.tif 000062
2005500261.tif 000063
2005500261.tif 000064
2005500261.tif 000065
2005500261.tif 000066
2005500261.tif 000067
2005500261.tif 000068
2005500261.tif 000069
2005500261.tif 000070
2005500261.tif 000071
2005500261.tif 000072
2005500261.tif 000073
2005500261.tif 000074
2005500261.tif 000075
2005500261.tif 000076
2005500261.tif 000077
2005500261.tif 000078
2005500261.tif 000079
2005500261.tif 000080
2005500261.tif 000081
2005500261.tif 000082
【国際調査報告】
2005500261.tif 000083
2005500261.tif 000084
2005500261.tif 000085