(57)【要約】本発明はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤であるヌクレオシド化合物と所定のその誘導体を提供する。これらの化合物はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤であり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療に有用である。これらはＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤、ＨＣＶ複製の阻害剤として、及び／又はＣ型肝炎感染の治療に特に有用である。本発明はこのようなヌクレオシド化合物を単独で含有するか又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染、特にＨＣＶ感染に対して活性な他の薬剤と共に含有する医薬組成物にも関する。本発明のヌクレオシド化合物を用いてＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼを阻害、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製を阻害、及び／又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染を治療する方法も開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造式Ｉ：
【化１】
2005533108.tif 000032
［式中、Ｒ１はＣ１−４アルキルであり、アルキルは置換されていなくてもよいし、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、又は１〜３個のフッ素原子で置換されていてもよく；
Ｒ２はアミノ、フッ素、ヒドロキシ、Ｃ１−１０アルキルカルボニルオキシ、メルカプト，又はＣ１−４アルコキシであり；
Ｒ３及びＲ４は各々独立して水素、Ｃ１−１６アルキルカルボニル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、ＣＨ２Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、ＣＨ（Ｃ１−４アルキル）Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、又は構造式：
【化２】
2005533108.tif 000033
のアミノアシル残基であり、但し、Ｒ３及びＲ４の少なくとも一方は水素以外のものであり；
Ｒ５及びＲ６は各々独立して水素、メチル、ヒドロキシメチル、又はフルオロメチルであり；
Ｒ７は水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルキニル、ハロゲン、シアノ、カルボキシ、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、アジド、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、Ｃ１−６アルキルスルホニル、又は（Ｃ１−４アルキル）０−２アミノメチルであり；
Ｒ８は水素、シアノ、ニトロ、Ｃ１−３アルキル、ＮＨＣＯＮＨ２、ＣＯＮＲ１１Ｒ１１、ＣＳＮＲ１１Ｒ１１、ＣＯＯＲ１１、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、ヒドロキシ、Ｃ１−３アルコキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、ハロゲン、（１，３−オキサゾール−２−イル）、（１，３−チアゾール−２−イル）、又は（イミダゾール−２−イル）であり；アルキルは置換されていなくてもよいし、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、カルボキシ、及びＣ１−３アルコキシから独立して選択される１〜３個の基で置換されていてもよく；
Ｒ９は水素、ヒドロキシ、メルカプト、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、Ｃ１−８アルキルカルボニルオキシ、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニルオキシ、Ｃ１−８アルキルオキシカルボニルオキシ、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニルオキシ、ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣ（＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、ＯＣＨ２Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、ＯＣＨ（Ｃ１−４アルキル）Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ３−６シクロアルキルアミノ、又はジ（Ｃ３−６シクロアルキル）アミノであり；
Ｒ１０は水素、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ３−６シクロアルキルアミノ、又はジ（Ｃ３−６シクロアルキルアミノ）であり；
各Ｒ１１は独立して水素又はＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１２は水素、Ｃ１−４アルキル、又はフェニルＣ０−２アルキルであり；
Ｒ１３は水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アシル、ベンゾイル、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルオキシカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−４アルキルスルホニル、又はフェニルＣ０−２アルキルスルホニルである。］の化合物又は医薬的に許容可能なその塩。
【請求項２】
構造式ＩＩ：
【化３】
2005533108.tif 000034
［式中、Ｒ１はＣ１−３アルキルであり、アルキルは置換されていなくてもよいし、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−３アルコキシ、Ｃ１−３アルキルチオ、又は１〜３個のフッ素原子で置換されていてもよく；
Ｒ２はヒドロキシ、アミノ、フルオロ、又はＣ１−３アルコキシであり；
Ｒ３及びＲ４は各々独立して水素、Ｃ１−８アルキルカルボニル、又はＣ３−６シクロアルキルカルボニルであり、但し、Ｒ３及びＲ４の少なくとも一方は水素以外のものであり；
Ｒ７は水素、アミノ、又はＣ１−４アルキルアミノであり；
Ｒ８は水素、シアノ、メチル、ハロゲン、又はＣＯＮＨ２であり；
Ｒ９及びＲ１０は各々独立して水素、ハロゲン、ヒドロキシ、又はアミノである。］の請求項１に記載の化合物又は医薬的に許容可能なその塩。
【請求項３】
Ｒ１がメチル、フルオロメチル、ヒドロキシメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、又はアミノメチルであり；
Ｒ２がヒドロキシ、アミノ、フルオロ、又はメトキシであり；
Ｒ３及びＲ４が各々独立して水素又はＣ１−８アルキルカルボニルであり、但し、Ｒ３及びＲ４の少なくとも一方は水素以外のものであり；
Ｒ７が水素又はアミノであり；
Ｒ８が水素、シアノ、メチル、ハロゲン、又はＣＯＮＨ２であり；
Ｒ９及びＲ１０が各々独立して水素、フルオロ，ヒドロキシ、又はアミノである請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
４−アミノ−７−［２−Ｃ−メチル−３，５−ジ−Ｏ−（１−オキソ−オクチル）−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；
４−アミノ−７−［２−Ｃ−メチル−３−Ｏ−（１−オキソ−オクチル）−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；
４−アミノ−７−［２−Ｃ−メチル−５−Ｏ−（１−オキソ−オクチル）−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；及び
４−アミノ−７−［２−Ｃ−メチル−２，３，５−トリ−Ｏ−（１−オキソ−オクチル）−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；又は医薬的に許容可能なその塩から構成される群から選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物と医薬的に許容可能なキャリヤーを含有する医薬組成物。
【請求項６】
ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼを阻害するため、ＲＮＡ依存性ＲＮＡ複製を阻害するため、及び／又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染を治療するために有用な請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼがＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼであり、前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製がＨＣＶ複製であり、前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染がＨＣＶ感染である請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害及び／又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害方法であって、前記阻害を必要とする哺乳動物に有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む、前記阻害方法。
【請求項９】
前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼがＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼであり、前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製がＨＣＶウイルス複製である請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
治療を必要とする哺乳動物に有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含むＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療方法。
【請求項１１】
前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染がＨＣＶ感染である請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ＨＣＶに対して活性な治療有効量の別の薬剤と併用する請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ＨＣＶに対して活性な前記薬剤が２’−Ｃ−Ｍｅ−リボヌクレオシド；リバビリン；レボビリン；チモシンα−１；インターフェロン−β；ＮＳ３セリンプロテアーゼの阻害剤；イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼの阻害剤；単独又はリバビリンもしくはレボビリンとの併用剤としてのインターフェロン−α又はペグ化インターフェロン−αである請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ＨＣＶに対して活性な前記薬剤が単独又はリバビリンとの併用剤としてのインターフェロン−α又はペグ化インターフェロン−αである請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
哺乳動物におけるＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害のための請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項１６】
哺乳動物におけるＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療のための請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項１７】
前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染がＣ型肝炎感染である請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
哺乳動物におけるＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害用医薬の製造における請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項１９】
哺乳動物におけるＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療用医薬の製造における請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項２０】
前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染がＣ型肝炎感染である請求項１９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はヌクレオシド化合物と所定のその誘導体、それらの合成及びＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤としてのその使用に関する。本発明の化合物はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤であり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療に有用である。これらはＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤、ＨＣＶ複製の阻害剤として、及び／又はＣ型肝炎感染の治療に特に有用である。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎（ＨＣＶ）感染は肝硬変や肝細胞癌等の慢性肝疾患に至る主要な健康上の問題であり、感染者は相当数に及び、世界人口の２〜１５％と推定される。米国疾病管理センター（Ｕ．Ｓ．Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ）によると、米国だけで感染患者は４５０万人と推定される。世界保健機構（Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）によると、全世界の感染者は２億人を上回り、年間感染者は少なくとも３００万人〜４００万人である。一旦感染すると、感染者の約２０％はウイルスを一掃するが、それ以外は終生ＨＣＶを保有し続ける。慢性感染個体の１０〜２０％は肝臓を破壊する肝硬変や癌を発症する。ウイルス性疾患は汚染血液及び血液製剤、汚染注射針による非経口感染、性的接触、あるいは感染母体又はキャリヤー母体からその子への垂直感染により伝達される。ＨＣＶ感染の現在の治療法は組換えインターフェロン−αの単独療法又はヌクレオシド類似体リバビリンとの併用療法による免疫療法に限られており、臨床効果は限られている。更に、ＨＣＶのワクチンも確立されていない。従って、慢性ＨＣＶ感染を有効に治療する改良治療薬が緊急に必要とされている。ＨＣＶ感染治療の最新技術は文献に記載されており、その開示内容全体を参考資料として本明細書に組込む以下の刊行物を参照されたい。Ｂ．Ｄｙｍｏｃｋら，”Ｎｏｖｅｌ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，”Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．１１：７９−９６（２０００）；Ｈ．Ｒｏｓｅｎら，”Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ：ｃｕｒｒｅｎｔ  ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ  ｆｏｒ  ｆｕｔｕｒｅ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ，”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｔｏｄａｙ，５：３９３−３９９（１９９９）；Ｄ．Ｍｏｒａｄｐｏｕｒら，”Ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｎｄ  ｅｖｏｌｖｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ，”  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．，１１：１１８９−１２０２（１９９９）；Ｒ．Ｂａｒｔｅｎｓｃｈｌａｇｅｒ，”Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ，４０：３７８−３９３（１９９７）；Ｇ．Ｍ．Ｌａｕｅｒ  ａｎｄ  Ｂ．Ｄ．Ｗａｌｋｅｒ，”Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，”Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３４５：４１−５２（２００１）；Ｂ．Ｗ．Ｄｙｍｏｃｋ，”Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，”Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｄｒｕｇｓ，６：１３−４２（２００１）；及びＣ．Ｃｒａｂｂ，”Ｈａｒｄ−Ｗｏｎ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  Ｓｐａｒｋ  Ｅｘｃｉｔｅｍｅｎｔ  ａｂｏｕｔ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ，”Ｓｃｉｅｎｃｅ：５０６−５０７（２００１）。
【０００３】
ＨＣＶ治療のアプローチとしてはウイルスセリンプロテイナーゼ（ＮＳ３プロテアーゼ）、ヘリカーゼ、及びＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＮＳ５Ｂ）の阻害やワクチンの開発等の各種のアプローチが取られている。
【０００４】
ＨＣＶビリオンは約３，０１０アミノ酸のポリプロテインをコードする約９６００塩基の単一オリゴリボヌクレオチドゲノム配列をもつエンベロープを持つ＋鎖ＲＮＡウイルスである。ＨＣＶ遺伝子の蛋白産物は構造蛋白質Ｃ、Ｅ１、及びＥ２と、非構造蛋白質ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ及びＮＳ４Ｂ、並びにＮＳ５Ａ及びＮＳＳＢから構成される。非構造（ＮＳ）蛋白質はウイルス複製の触媒機構を提供すると考えられている。ＮＳ３プロテアーゼはＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼであるＮＳＳＢをポリプロテイン鎖から遊離させる。ＨＣＶ  ＮＳ５ＢポリメラーゼはＨＣＶの複製サイクルで鋳型として機能する１本鎖ウイルスＲＮＡから２本鎖ＲＮＡを合成するのに必要である。従って、ＮＳ５ＢポリメラーゼはＨＣＶ複製複合体の必須成分であるとみなされる［Ｋ．Ｉｓｈｉら，”Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  ＮＳ５Ｂ  Ｐｒｏｔｅｉｎ：Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｔｓ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ＲＮＡ  Ｂｉｎｄｉｎｇ，”  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇ  ２９：１２２７−１２３５（１９９９）及びＶ．Ｌｏｈｍａｎｎら，”Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔｉｃ  Ａｎａｌｙｓｅｓ  ｏｆ  ＮＳ５Ｂ  ＲＮＡ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ，”  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２４９：１０８−１１８（１９９８）参照］。ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害は２本鎖ＨＣＶ  ＲＮＡの形成を阻止するので、ＨＣＶ特異的抗ウイルス療法の開発に魅力的なアプローチである。
【０００５】
本発明のヌクレオシド化合物と所定のその誘導体はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製、特にＨＣＶ複製の強力な阻害剤であることが今般判明した。これらのヌクレオシド化合物の５’−三リン酸誘導体はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤である。本発明のヌクレオシド化合物とその誘導体はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染、特にＨＣＶ感染を治療するのに有用である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
従って、本発明の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤として有用なヌクレオシド化合物と所定のその誘導体を提供することである。
【０００７】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスの複製の阻害剤、特にＣ型肝炎ウイルスの複製の阻害剤として有用なヌクレオシド化合物と所定のその誘導体を提供することである。
【０００８】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療、特にＨＣＶ感染の治療に有用なヌクレオシド化合物と所定のその誘導体を提供することである。
【０００９】
本発明の別の目的は医薬的に許容可能なキャリヤーと共に本発明のヌクレオシド化合物を含有する医薬組成物を提供することである。
【００１０】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤として使用するための本発明のヌクレオシド化合物とその誘導体を含有する医薬組成物を提供することである。
【００１１】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤、特にＨＣＶ複製の阻害剤として使用するための本発明のヌクレオシド化合物とその誘導体を含有する医薬組成物を提供することである。
【００１２】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療、特にＨＣＶ感染の治療に使用するための本発明のヌクレオシド化合物とその誘導体を含有する医薬組成物を提供することである。
【００１３】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス、特にＨＣＶに対して活性な他の薬剤と共に本発明のヌクレオシド化合物とその誘導体を含有する医薬組成物を提供することである。
【００１４】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼを阻害するため、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼを阻害するための方法を提供することである。
【００１５】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製を阻害するため、特にＨＣＶ複製を阻害するための方法を提供することである。
【００１６】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染を治療するため、特にＨＣＶ感染を治療するための方法を提供することである。
【００１７】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスに対して活性な他の薬剤と併用してＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染を治療するため、特にＨＣＶに対して活性な他の薬剤と併用してＨＣＶ感染を治療するための方法を提供することである。
【００１８】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害及び／又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療用、特にＨＣＶ複製の阻害及び／又はＨＣＶ感染の治療用医薬として使用するためのヌクレオシド化合物と所定のその誘導体及びその医薬組成物を提供することである。
【００１９】
本発明の別の目的はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害及び／又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療用、特にＨＣＶ複製の阻害及び／又はＨＣＶ感染の治療用医薬の製造のための本発明のヌクレオシド化合物と所定のその誘導体及びその医薬組成物の使用を提供することである。
【００２０】
以上及び他の目的は以下の詳細な説明から容易に理解されよう。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
本発明は指定立体化学配置の構造式Ｉ：
【００２２】
【化４】
2005533108.tif 000002
［式中、Ｒ１はＣ１−４アルキルであり、アルキルは置換されていなくてもよいし、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、又は１〜３個のフッ素原子で置換されていてもよく；
Ｒ２はアミノ、フッ素、ヒドロキシ、Ｃ１−１０アルキルカルボニルオキシ、メルカプト，又はＣ１−４アルコキシであり；
Ｒ３及びＲ４は各々独立して水素、Ｃ１−１６アルキルカルボニル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、ＣＨ２Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、ＣＨ（Ｃ１−４アルキル）Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、又は構造式：
【００２３】
【化５】
2005533108.tif 000003
のアミノアシル残基であり、但し、Ｒ３及びＲ４の少なくとも一方は水素以外のものであり；
Ｒ５及びＲ６は各々独立して水素、メチル、ヒドロキシメチル、又はフルオロメチルであり；
Ｒ７は水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルキニル、ハロゲン、シアノ、カルボキシ、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、アジド、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、Ｃ１−６アルキルスルホニル、又は（Ｃ１−４アルキル）０−２アミノメチルであり；
Ｒ８は水素、シアノ、ニトロ、Ｃ１−３アルキル、ＮＨＣＯＮＨ２、ＣＯＮＲ１１Ｒ１１、ＣＳＮＲ１１Ｒ１１、ＣＯＯＲ１１、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、ヒドロキシ、Ｃ１−３アルコキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、ハロゲン、（１，３−オキサゾール−２−イル）、（１，３−チアゾール−２−イル）、又は（イミダゾール−２−イル）であり；アルキルは置換されていなくてもよいし、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、カルボキシ、及びＣ１−３アルコキシから独立して選択される１〜３個の基で置換されていてもよく；
Ｒ９は水素、ヒドロキシ、メルカプト、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、Ｃ１−８アルキルカルボニルオキシ、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニルオキシ、Ｃ１−８アルキルオキシカルボニルオキシ、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニルオキシ、ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣ（＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、ＯＣＨ２Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、ＯＣＨ（Ｃ１−４アルキル）Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ３−６シクロアルキルアミノ、又はジ（Ｃ３−６シクロアルキル）アミノであり；
Ｒ１０は水素、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ３−６シクロアルキルアミノ、又はジ（Ｃ３−６シクロアルキルアミノ）であり；
各Ｒ１１は独立して水素又はＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１２は水素、Ｃ１−４アルキル、又はフェニルＣ０−２アルキルであり；
Ｒ１３は水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アシル、ベンゾイル、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルオキシカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−４アルキルスルホニル、又はフェニルＣ０−２アルキルスルホニルである。］の化合物又は医薬的に許容可能なその塩に関する。
【００２４】
式Ｉの化合物はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤として有用である。これらはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製、特にＨＣＶ複製の阻害剤でもあり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療、特にＨＣＶ感染の治療に有用である。
【００２５】
上記化合物を単独又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス、特にＨＣＶに対して活性な他の薬剤と共に含有する医薬組成物と、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害方法及びＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療方法も本発明に含まれる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
本発明は指定立体化学配置の構造式Ｉ：
【００２７】
【化６】
2005533108.tif 000004
［式中、Ｒ１はＣ１−４アルキルであり、アルキルは置換されていなくてもよいし、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、又は１〜３個のフッ素原子で置換されていてもよく；
Ｒ２はアミノ、フッ素、ヒドロキシ、Ｃ１−１０アルキルカルボニルオキシ、メルカプト，又はＣ１−４アルコキシであり；
Ｒ３及びＲ４は各々独立して水素、Ｃ１−１６アルキルカルボニル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、ＣＨ２Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、ＣＨ（Ｃ１−４アルキル）Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、又は構造式：
【００２８】
【化７】
2005533108.tif 000005
のアミノアシル残基であり、但し、Ｒ３及びＲ４の少なくとも一方は水素以外のものであり；
Ｒ５及びＲ６は各々独立して水素、メチル、ヒドロキシメチル、又はフルオロメチルであり；
Ｒ７は水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルキニル、ハロゲン、シアノ、カルボキシ、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、アジド、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、Ｃ１−６アルキルスルホニル、又は（Ｃ１−４アルキル）０−２アミノメチルであり；
Ｒ８は水素、シアノ、ニトロ、Ｃ１−３アルキル、ＮＨＣＯＮＨ２、ＣＯＮＲ１１Ｒ１１、ＣＳＮＲ１１Ｒ１１、ＣＯＯＲ１１、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、ヒドロキシ、Ｃ１−３アルコキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、ハロゲン、（１，３−オキサゾール−２−イル）、（１，３−チアゾール−２−イル）、又は（イミダゾール−２−イル）であり；アルキルは置換されていなくてもよいし、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、カルボキシ、及びＣ１−３アルコキシから独立して選択される１〜３個の基で置換されていてもよく；
Ｒ９は水素、ヒドロキシ、メルカプト、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、Ｃ１−８アルキルカルボニルオキシ、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニルオキシ、Ｃ１−８アルキルオキシカルボニルオキシ、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニルオキシ、ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣ（＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、ＯＣＨ２Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、ＯＣＨ（Ｃ１−４アルキル）Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ１−４アルキル、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ３−６シクロアルキルアミノ、又はジ（Ｃ３−６シクロアルキル）アミノであり；
Ｒ１０は水素、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−４アルコキシ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ３−６シクロアルキルアミノ、又はジ（Ｃ３−６シクロアルキルアミノ）であり；
各Ｒ１１は独立して水素又はＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１２は水素、Ｃ１−４アルキル、又はフェニルＣ０−２アルキルであり；
Ｒ１３は水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アシル、ベンゾイル、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルオキシカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−４アルキルスルホニル、又はフェニルＣ０−２アルキルスルホニルである。］の化合物又は医薬的に許容可能なその塩に関する。
【００２９】
式Ｉの化合物はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤として有用である。これらはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤でもあり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療に有用である。
【００３０】
構造式Ｉの化合物の１態様は構造式ＩＩ：
【００３１】
【化８】
2005533108.tif 000006
［式中、Ｒ１はＣ１−３アルキルであり、アルキルは置換されていなくてもよいし、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−３アルコキシ、Ｃ１−３アルキルチオ、又は１〜３個のフッ素原子で置換されていてもよく；
Ｒ２はヒドロキシ、アミノ、フルオロ、又はＣ１−３アルコキシであり；
Ｒ３及びＲ４は各々独立して水素、Ｃ１−８アルキルカルボニル、又はＣ３−６シクロアルキルカルボニルであり、但し、Ｒ３及びＲ４の少なくとも一方は水素以外のものであり；
Ｒ７は水素、アミノ、又はＣ１−４アルキルアミノであり；
Ｒ８は水素、シアノ、メチル、ハロゲン、又はＣＯＮＨ２であり；
Ｒ９及びＲ１０は各々独立して水素、ハロゲン、ヒドロキシ、又はアミノである。］の化合物又は医薬的に許容可能なその塩である。
【００３２】
構造式Ｉの化合物の第２の態様は、
Ｒ１がメチル、フルオロメチル、ヒドロキシメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、又はアミノメチルであり；
Ｒ２がヒドロキシ、アミノ、フルオロ、又はメトキシであり；
Ｒ３及びＲ４が各々独立して水素又はＣ１−８アルキルカルボニルであり、但し、Ｒ３及びＲ４の少なくとも一方は水素以外のものであり；
Ｒ７が水素又はアミノであり；
Ｒ８が水素、シアノ、メチル、ハロゲン、又はＣＯＮＨ２であり；
Ｒ９及びＲ１０が各々独立して水素、フルオロ，ヒドロキシ、又はアミノである構造式ＩＩの化合物である。
【００３３】
ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤として有用な構造式Ｉの本発明の化合物の具体例としては限定されないが、
４−アミノ−７−［２−Ｃ−メチル−３，５−ジ−Ｏ−（１−オキソ−オクチル）−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；
４−アミノ−７−［２−Ｃ−メチル−３−Ｏ−（１−オキソ−オクチル）−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；
４−アミノ−７−［２−Ｃ−メチル−５−Ｏ−（１−オキソ−オクチル）−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；及び
４−アミノ−７−［２−Ｃ−メチル−２，３，５−トリ−Ｏ−（１−オキソ−オクチル）−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；
又は医薬的に許容可能なその塩が挙げられる。
【００３４】
本発明の１態様では、本発明のヌクレオシド化合物は＋センス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤、＋センス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤として、及び／又は＋センス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療に有用である。この態様の１分類では、＋センス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスはフラビウイルス科ウイルス又はピコルナウイルス科ウイルスである。この分類の１亜分類では、ピコルナウイルス科ウイルスはライノウイルス、ポリオウイルス、又はＡ型肝炎ウイルスである。この分類の第２の亜分類では、フラビウイルス科ウイルスはＣ型肝炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デングウイルス、西ナイルウイルス、日本脳炎ウイルス、Ｂａｎｚｉウイルス、及びウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）から構成される群から選択される。この亜分類の１亜分類では、フラビウイルス科ウイルスはＣ型肝炎ウイルスである。
【００３５】
本発明の別の側面は治療を必要とする哺乳動物におけるＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害方法、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害方法、及び／又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療方法として、治療有効量の構造式Ｉの化合物を哺乳動物に投与する方法に関する。
【００３６】
本発明のこの側面の１態様では、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼは＋センス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼである。この態様の１分類では、＋センス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼはフラビウイルス科ウイルスポリメラーゼ又はピコルナウイルス科ウイルスポリメラーゼである。この分類の１亜分類では、ピコルナウイルス科ウイルスポリメラーゼはライノウイルスポリメラーゼ、ポリオウイルスポリメラーゼ、又はＡ型肝炎ウイルスポリメラーゼである。この分類の第２の亜分類では、フラビウイルス科ウイルスポリメラーゼはＣ型肝炎ウイルスポリメラーゼ、黄熱病ウイルスポリメラーゼ、デングウイルスポリメラーゼ、西ナイルウイルスポリメラーゼ、日本脳炎ウイルスポリメラーゼ、Ｂａｎｚｉウイルスポリメラーゼ、及びウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）ポリメラーゼから構成される群から選択される。この亜分類の１亜分類では、フラビウイルス科ウイルスポリメラーゼはＣ型肝炎ウイルスポリメラーゼである。
【００３７】
本発明のこの側面の第２の態様では、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製は＋センス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製である。この態様の１分類では、＋センス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製はフラビウイルス科ウイルス複製又はピコルナウイルス科ウイルス複製である。この分類の１亜分類では、ピコルナウイルス科ウイルス複製はライノウイルス複製、ポリオウイルス複製、又はＡ型肝炎ウイルス複製である。この分類の第２の亜分類では、フラビウイルス科ウイルス複製はＣ型肝炎ウイルス複製，黄熱病ウイルス複製、デングウイルス複製、西ナイルウイルス複製、日本脳炎ウイルス複製、Ｂａｎｚｉウイルス複製、及びウシウイルス性下痢ウイルス複製から構成される群から選択される。この亜分類の１亜分類では、フラビウイルス科ウイルス複製はＣ型肝炎ウイルス複製である。
【００３８】
本発明のこの側面の第３の態様では、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染は＋センス１本鎖ＲＮＡ依存性ウイルス感染である。この態様の１分類では、＋センス１本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染はフラビウイルス科ウイルス感染又はピコルナウイルス科ウイルス感染である。この分類の１亜分類では、ピコルナウイルス科ウイルス感染はライノウイルス感染、ポリオウイルス感染、又はＡ型肝炎ウイルス感染である。この分類の第２の亜分類では、フラビウイルス科ウイルス感染はＣ型肝炎ウイルス感染、黄熱病ウイルス感染、デングウイルス感染、西ナイルウイルス感染、日本脳炎ウイルス感染、Ｂａｎｚｉウイルス感染、及びウシウイルス性下痢ウイルス感染から構成される群から選択される。この亜分類の１亜分類では、フラビウイルス科ウイルス感染はＣ型肝炎ウイルス感染である。
本明細書を通して以下の用語は以下に記載する意味をもつ。
上記アルキル基は直鎖又は分枝鎖構造の指定長のアルキル基を意味する。このようなアルキル基の例はメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、イソヘキシル等である。
【００３９】
「アルケニル」なる用語は総炭素原子数２〜６、又はこの範囲の任意数の直鎖又は分枝鎖アルケン（例えば、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル等）を意味する。
【００４０】
「アルキニル」なる用語は総炭素原子数２〜６、又はこの範囲の任意数の直鎖又は分枝鎖アルキン（例えば、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル等）を意味する。
【００４１】
「シクロアルキル」なる用語は総炭素原子数３〜８、又はこの範囲の任意数の環状アルカン環（即ち、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、又はシクロオクチル）を意味する。
【００４２】
「シクロヘテロアルキル」なる用語は窒素、酸素及び硫黄から選択される１又は２個のヘテロ原子を含む非芳香族複素環を意味する。４〜６員シクロヘテロアルキルの例としてはアゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、チアモルホリニル、イミダゾリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオフェニル、ピペラジニル等が挙げられる。
【００４３】
「アルコキシ」なる用語は指定炭素原子数（例えば、Ｃ１−４アルコキシ）、又はこの範囲の任意数の直鎖又は分枝鎖アルコキシド［即ち、メトキシ（ＭｅＯ−）、エトキシ、イソプロポキシ等］を意味する。
【００４４】
「アルキルチオ」なる用語は指定炭素原子数（例えば、Ｃ１−４アルキルチオ）、又はこの範囲の任意数の直鎖又は分枝鎖アルキルスルフィド［即ち、メチルチオ（ＭｅＳ−）、エチルチオ、イソプロピルチオ等］を意味する。
【００４５】
「アルキルアミノ」なる用語は指定炭素原子数（例えば、Ｃ１−４アルキルアミノ）、又はこの範囲の任意数の直鎖又は分枝鎖アルキルアミン［即ち、メチルアミノ、エチルアミノ、イソプロピルアミノ、ｔ−ブチルアミノ等］を意味する。
【００４６】
「シクロアルキルアミノ」なる用語は指定炭素原子数（例えば、Ｃ３−６シクロアルキルアミノ）、又はこの範囲の任意数の環１個を含む飽和アミノ炭化水素［即ち、シクロプロピルアミノ、シクロブチルアミノ、シクロペンチルアミノ、及びシクロヘキシルアミノ］を意味する。
【００４７】
「アルキルスルホニル」なる用語は指定炭素原子数（例えば、Ｃ１−６アルキルスルホニル）、又はこの範囲の任意数の直鎖又は分枝鎖アルキルスルホン［即ち、メチルスルホニル（ＭｅＳＯ２−）、エチルスルホニル、イソプロピルスルホニル等］を意味する。
【００４８】
「アルキルオキシカルボニル」なる用語は指定炭素原子数（例えば、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル）、又はこの範囲の任意数の本発明のカルボン酸誘導体の直鎖又は分枝鎖エステル［即ち、メチルオキシカルボニル（ＭｅＯＣＯ−）、エチルオキシカルボニル、又はブチルオキシカルボニル］を意味する。
【００４９】
「アルケニルカルボニル」なる用語は鎖中に１〜３個の二重結合を含む総炭素原子数２〜１６の直鎖又は分枝鎖不飽和アルキルカルボニル基を意味する。
【００５０】
「アリール」なる用語はフェニル、ナフチル及びピリジルを含む。アリール基は場合によりＣ１−４アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、Ｃ１−４アルコキシ、及びＣ１−４アルキルチオから独立して選択される１〜３個の基で置換されている。
【００５１】
「ハロゲン」なる用語はフッ素、塩素、臭素及びヨウ素を意味する。
【００５２】
「置換」なる用語は指定置換基による多重度の置換を含むものとする。多重置換基部分が明細書又は特許請求の範囲に記載されている場合には、置換化合物は明細書又は特許請求の範囲に記載されている置換基部分の１種以上を独立して１個又は複数個もつことができる。
【００５３】
下式：
【００５４】
【化９】
2005533108.tif 000007
に示すアミノアシル残基におけるＲ１２が水素以外のものである場合には、アミノアシル残基は不斉中心を含み、個々のＲ及びＳエナンチオマーとＲＳラセミ混合物を含むものとする。
【００５５】
「医薬組成物」におけるような「組成物」なる用語は活性成分とキャリヤーを構成する不活性成分を含有する製剤と、成分の任意２種以上の配合、錯化もしくは凝集、成分の１種以上の解離、又は成分の１種以上の他の型の反応もしくは相互作用により直接又は間接的に得られる任意製剤を含むものとする。従って、本発明の医薬組成物は本発明の化合物と医薬的に許容可能なキャリヤーを混合することにより製造されるいかなる組成物も含む。
【００５６】
化合物「の投与」及び「を投与する」なる用語は必要とする個体に本発明の化合物又は本発明の化合物のプロドラッグを提供することを意味するものとする。
【００５７】
本発明の別の側面は本発明の化合物とＨＣＶ感染を治療するために有用な１種以上の薬剤を併用してＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼを阻害するか、ＨＣＶ複製を阻害するか、又はＨＣＶ感染を治療する方法に関する。ＨＣＶに対して活性なこのような薬剤としては限定されないが、リバビリン、レボビリン、ビラミジン、チモシンα−１，インターフェロン−β，インターフェロン−α、ペグ化インターフェロン−α（ペグインターフェロン−α）、インターフェロン−αとリバビリンの併用、ペグインターフェロン−αとリバビリンの併用、インターフェロン−αとレボビリンの併用、及びペグインターフェロン−αとレボビリンの併用が挙げられる。インターフェロン−αとしては限定されないが、組換えインターフェロン−α２ａ（例えばＨｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅ，Ｎｕｔｌｅｙ，ＮＪから市販されているＲｏｆｅｒｏｎインターフェロン）、ペグ化インターフェロン−α２ａ（Ｐｅｇａｓｙｓ（登録商標））、インターフェロン−α２ｂ（例えばＳｃｈｅｒｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．，Ｋｅｎｉｌｗｏｒｔｈ，ＮＪから市販されているＩｎｔｒｏｎ−Ａインターフェロン）、ペグ化インターフェロン−α２ｂ（ＰｅｇＩｎｔｒｏｎ（登録商標））、組換えコンセンサスインターフェロン（例えばインターフェロンαｃｏｎ−１）、及び精製インターフェロン−α製剤が挙げられる。Ａｍｇｅｎ社からも商品名Ｉｎｆｅｒｇｅｎ（登録商標）として組換えコンセンサスインターフェロンが市販されている。レボビリンはリバビリンのＬエナンチオマーであり、リバビリンと類似の免疫調節活性を示している。ビラミジンはＷＯ０１／６０３７９（譲受人ＩＣＮ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）に開示されているリバビリンの類似体である。本発明の方法によると、併用剤の個々の成分を治療期間中の各種時点で別々に投与してもよいし、併用剤を２回以上に分けるか又は１回で同時に投与してもよい。従って、本発明はこのような同時又は交互投与の全レジメンを含むものとし、「投与する」なる用語は相応に解釈すべきである。当然のことながら、本発明の化合物とＨＣＶ感染の治療に有用な他の薬剤の併用範囲は原則としてＨＣＶ感染の任意治療用医薬組成物との任意併用を含む。本発明の化合物又は医薬的に許容可能なその塩をＨＣＶに対して活性な第２の治療剤と併用する場合には、各化合物の用量は化合物を単独で使用する場合の用量と同一でもよいし、異なってもよい。
【００５８】
ＨＣＶ感染の治療には、本発明の化合物はＨＣＶ  ＮＳ３セリンプロテアーゼの阻害剤である薬剤と併用投与してもよい。ＨＣＶ  ＮＳ３セリンプロテアーゼは必須ウイルス酵素であり、ＨＣＶ複製の阻害の優れたターゲットであると記載されている。ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤の基質型及び非基質型両者の阻害剤はＷＯ９８／２２４９６、ＷＯ９８／４６６３０、ＷＯ９９／０７７３３、ＷＯ９９／０７７３４、ＷＯ９９／３８８８８、ＷＯ９９／５０２３０、ＷＯ９９／６４４４２、ＷＯ００／０９５４３、ＷＯ００／５９９２９、及びＧＢ−２３３７２６２に開示されている。ＨＣＶ複製の阻害剤の開発とＨＣＶ感染の治療のターゲットとしてのＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼはＢ．Ｗ．Ｄｙｍｏｃｋ，”Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，”Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｄｒｕｇｓ，６：１３−４２（２００１）に記載されている。
【００５９】
リバビリン、レボビリン、及びビラミジンは細胞内酵素イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）の阻害を介してグアニンヌクレオチドの細胞内プールを調節することによりその抗ＨＣＶ効果を発揮すると思われる。ＩＭＰＤＨはｄｅ  ｎｏｖｏグアニンヌクレオチド生合成における生合成経路の律速酵素である。リバビリンは容易に細胞内リン酸化され、一リン酸誘導体はＩＭＰＤＨの阻害剤である。従って、ＩＭＰＤＨの阻害はＨＣＶ複製の阻害剤の発見に有用な別のターゲットである。従って、本発明の化合物はＷＯ９７／４１２１１及びＷＯ０１／００６２２（譲受人Ｖｅｒｔｅｘ）に開示されているＶＸ−４９７等のＩＭＰＤＨ阻害剤；ＷＯ００／２５７８０（譲受人Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）に開示されているような別のＩＭＰＤＨ阻害剤；又はミコフェノール酸モフェチル［Ａ．Ｃ．Ａｌｌｉｓｏｎ  ａｎｄ  Ｅ．Ｍ．Ｅｕｇｕｉ，Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎ，４４（Ｓｕｐｐｌ．）：１６５（１９９３）参照］と併用投与してもよい。
【００６０】
ＨＣＶ感染の治療には、本発明の化合物は抗ウイルス剤アマンタジン（１−アミノアダマンタン）［この薬剤の包括的記載についてはＪ．Ｋｉｒｓｃｈｂａｕｍ，Ａｎａｌ．Ｐｒｏｆｉｌｅｓ  Ｄｒｕｇ  Ｓｕｂｓ．１２：１−３６（１９８３）参照］と併用投与してもよい。
【００６１】
ＨＣＶ感染の治療には、本発明の化合物は各々その開示内容全体を参考資料として本明細書に組込むＲ．Ｅ．Ｈａｒｒｙ−Ｏ’ｋｕｒｕら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６２：１７５４−１７５９（１９９７）；Ｍ．Ｓ．Ｗｏｌｆｅら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，３６：７６１１−７６１４（１９９５）；米国特許第３，４８０，６１３号（１９６９年１１月２５日）；国際公開第ＷＯ０１／９０１２１号（２００１年１１月２９日）；国際公開第ＷＯ０１／９２２８２号（２００１年１２月６日）；及び国際公開第ＷＯ０２／３２９２０号（２００２年４月２５日）に開示されている抗ウイルス２’−Ｃ分枝リボヌクレオシドと併用してもよい。このような２’−Ｃ分枝リボヌクレオシドとしては限定されないが、２’−Ｃ−メチル−シチジン、２’−Ｃ−メチル−ウリジン、２’−Ｃ−メチル−アデノシン、２’−Ｃ−メチル−グアノシン、及び９−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−２，６−ジアミノプリンが挙げられる。
【００６２】
「医薬的に許容可能な」とはキャリヤー、希釈剤、又は賦形剤が製剤の他の成分と適合可能でなければならず且つそのレシピエントに有害であってはならないことを意味する。
【００６３】
医薬的に許容可能なキャリヤーと共に本発明のヌクレオシド化合物及びその誘導体を含有する医薬組成物も本発明に含まれる。本発明の別の例は上記化合物のいずれかと医薬的に許容可能なキャリヤーを併用することにより製造される医薬組成物である。本発明の別の例は上記化合物のいずれかと医薬的に許容可能なキャリヤーを併用することを含む医薬組成物の製造方法である。
【００６４】
ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼを阻害するために有用な医薬組成物として、有効量の本発明の化合物と医薬的に許容可能なキャリヤーを含有する組成物も本発明に含まれる。ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染、特にＨＣＶ感染の治療に有用な医薬組成物と、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ、特にＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害方法及びＲＮＡ依存性ウイルス複製、特にＨＣＶ複製の治療方法も本発明に含まれる。。更に、本発明はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス、特にＨＣＶに対して活性な治療有効量の別の薬剤と共に治療有効量の本発明の化合物を含有する医薬組成物にも関する。ＨＣＶに対して活性な薬剤としては限定されないが、リバビリン、レボビリン、ビラミジン、チモシンα−１、ＨＣＶ  ＮＳ３セリンプロテアーゼの阻害剤、インターフェロン−α、ペグ化インターフェロン−α（ペグインターフェロン−α）、インターフェロン−αとリバビリンの併用、ペグインターフェロン−αとリバビリンの併用、インターフェロン−αとレボビリンの併用、及びペグインターフェロン−αとレボビリンの併用が挙げられる。インターフェロン−αとしては限定されないが、組換えインターフェロン−α２ａ（例えばＨｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅ，Ｎｕｔｌｅｙ，ＮＪから市販されているＲｏｆｅｒｏｎインターフェロン）、インターフェロン−α２ｂ（例えばＳｃｈｅｒｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．，Ｋｅｎｉｌｗｏｒｔｈ，ＮＪから市販されているＩｎｔｒｏｎ−Ａインターフェロン）、コンセンサスインターフェロン、及び精製インターフェロン−α製剤が挙げられる。リバビリンとＨＣＶに対するその活性については、Ｊ．Ｏ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  ａｎｄ  Ｓ．Ａ．Ｒａｙｂｕｃｋ，”Ｉｎｏｓｉｎｅ  Ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ：Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ，”Ａｎｎ．Ｒｅｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３５：２０１−２１０（２０００）参照。
【００６５】
本発明の別の側面はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製、特にＨＣＶ複製の阻害用、及び／又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染、特にＨＣＶ感染の治療用医薬の製造のためのヌクレオシド化合物とその誘導体及びその医薬組成物の使用を提供する。本発明の更に別の側面はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製、特にＨＣＶ複製の阻害用、及び／又はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染、特にＨＣＶ感染の治療用医薬として使用するためのヌクレオシド化合物とその誘導体及びその医薬組成物を提供する。
【００６６】
本発明の医薬組成物は構造式Ｉの化合物又は医薬的に許容可能なその塩を活性成分として含み、更に医薬的に許容可能なキャリヤーと場合により他の治療成分を含むことができる。
【００６７】
前記組成物としては、経口、直腸、局所、非経口（皮下、筋肉内、及び静脈内を含む）、眼内（眼科）、肺（鼻腔又は口腔吸入）、又は鼻腔内投与に適した組成物が挙げられるが、いずれかの与えられた症例に最適な経路は治療する状態の種類及び重篤度と活性成分の種類によって異なる。この組成物は単位用量形態にすると簡便であり、製薬分野で周知の任意方法により製造することができる。
【００６８】
実際の使用では、構造式Ｉの化合物を活性成分として慣用医薬配合技術により医薬キャリヤーと混和することができる。キャリヤーは例えば経口又は非経口（静脈内を含む）等の投与に所望される製剤形態に応じて多種多様の形態とすることができる。経口剤形用組成物を製造するには、慣用医薬担体の任意のものを使用することができ、例えば、懸濁液剤、エリキシル剤及び溶液剤等の経口液体製剤の場合には、水、グリコール、油類、アルコール類、芳香剤、防腐剤、着色剤等を使用することができる。あるいは、例えば散剤、ハード及びソフトカプセル剤並びにタブレット等の経口固体製剤の場合には、澱粉、糖類、微結晶セルロース、希釈剤、顆粒化剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤等のキャリヤーを使用することができ、固体経口製剤のほうが液体製剤よりも好ましい。
【００６９】
投与し易いという理由から、タブレットとカプセル剤が最も有利な経口用量単位形態であり、その場合には当然固体医薬キャリヤーが使用される。所望により、標準水性又は非水性技術によりタブレットにコーティングしてもよい。このような組成物及び製剤は少なくとも０．１％の活性成分を含有すべきである。これらの組成物中の活性化合物の百分率は当然のことながら変動させることができ、用量単位の重量の約２％〜約６０％にすると簡便である。このような治療に有用な組成物中の活性化合物の量は有効用量が得られるように選択される。活性化合物は例えば滴剤やスプレー等として鼻腔内投与することもできる。
【００７０】
タブレット、ピル、カプセル等には更に結合剤（例えばトラガカントガム、アラビアガム、コーンスターチ又はゼラチン）、賦形剤（例えばリン酸２カルシウム）、崩壊剤（例えばコーンスターチ、ジャガイモ澱粉、アルギン酸）、滑沢剤（例えばステアリン酸マグネシウム）、及び甘味剤（例えばスクロース、ラクトース又はサッカリン）を添加してもよい。用量単位形態がカプセルである場合には、上記種の材料に加えて脂肪油等の液体キャリヤーを添加してもよい。
【００７１】
コーティングとして又は用量単位の物理的形状を変えるために他の各種材料を使用してもよい。例えば、タブレットはシェラック、糖又は両者でコーティングしてもよい。シロップ又はエリキシル剤には活性成分以外に、甘味剤としてスクロース、防腐剤としてメチル及びプロピルパラベン、色素並びにフレーバー（例えばチェリー又はオレンジフレーバー）を添加してもよい。
【００７２】
構造式Ｉの化合物は非経口投与してもよい。ヒドロキシプロピルセルロース等の界面活性剤と適切に混合した水中でこれらの活性化合物の溶液又は懸濁液を製造することができる。グリセロール、液体ポリエチレングリコール及びその油中混合物中で分散液を製造することもできる。通常の保存及び使用条件では、微生物の増殖を防ぐためにこれらの製剤に防腐剤を加える。
【００７３】
注射用に適した医薬形態としては滅菌水溶液又は分散液と、滅菌水溶液又は分散液の即席調製用滅菌粉末が挙げられる。いずれの場合も、剤形は無菌でなければならず、容易に注射針を通過できる程度まで流動性でなければならない。剤形は製造及び保存条件下で安定でなければならず、細菌や真菌等の微生物の汚染作用から保護しなれけばならない。キャリヤーは例えば、水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコール）、適当なその混合物、及び植物油を含む溶媒又は分散媒とすることができる。
【００７４】
哺乳動物、特にヒトに有効用量の本発明の化合物を提供するのに適した任意投与経路を利用することができる。例えば、経口、直腸、局所、非経口、眼内、肺、鼻腔内等の経路を利用できる。剤形としてはタブレット、トローチ、分散液、懸濁液、溶液、カプセル、クリーム、軟膏、エアゾール等が挙げられる。構造式Ｉの化合物は経口投与することが好ましい。
【００７５】
ヒトに経口投与する場合、用量範囲は０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重を複数回に分けて投与する。１態様では、用量範囲は０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重を複数回に分けて投与する。別の態様では、用量範囲は０．５〜２０ｍｇ／ｋｇ体重を複数回に分けて投与する。経口投与では、治療する患者の症状に用量を合わせるように活性成分１．０〜１０００ｍｇ、特に活性成分１、５、１０、１５、２０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００、５００、６００、７５０、８００、９００、及び１０００ｍｇを含有するタブレット又はカプセルの形態で提供することが好ましい。
【００７６】
使用する活性成分の有効用量は使用する特定化合物、治療方法、治療する状態及び治療する状態の重篤度により変えることができる。このような用量は当業者が容易に決定することができる。最適治療応答が得られるようにこの用量レジメンを調節することができる。
【００７７】
本発明の化合物は１個以上の不斉中心を含み、従って、ラセミ化合物及びラセミ混合物、単一エナンチオマー、ジアステレオマー混合物及び個々のジアステレオマーとして存在することができる。本発明は下記構造式に示すような５員フラノース環のβ−Ｄ立体化学配置をもつヌクレオシド化合物、即ち５員フラノース環のＣ−１及びＣ−４の置換基がβ−立体化学配置（太線で示す「上向き」方向）をもつヌクレオシド化合物を含むものとする。
【００７８】
【化１０】
2005533108.tif 000008
【００７９】
本明細書に記載する化合物にはオレフィン二重結合を含むものもあり、特に指定しない限り、Ｅ及びＺ幾何異性体を含むものとする。
【００８０】
本明細書に記載する化合物にはケト−エノール互変体等の互変体として存在するものもある。個々の互変体とその混合物も構造式Ｉの化合物に含まれる。本発明の化合物に含まれるケト−エノール互変体の１例を以下に示す。
【００８１】
【化１１】
2005533108.tif 000009
【００８２】
構造式Ｉの化合物は例えば適切な溶媒（例えばメタノール又は酢酸エチル又はその混合物）から分別結晶、又は光学活性固定相を使用してキラルクロマトグラフィーによりそれらの個々のジアステレオ異性体に分離することができる。
【００８３】
あるいは、公知配置の光学的に純粋な出発材料又は試薬を使用して立体特異的合成により構造式Ｉの化合物の任意立体異性体を得ることもできる。
【００８４】
構造式Ｉの本発明の化合物のフラノース環のＣ−２及びＣ−３位の置換基の立体化学は置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が相互に独立してα（「下向き」置換基）又はβ（「上向き」置換基）配置のどちらでもよいことを意味する波線により表す。フラノース環のＣ−１及びＣ−４等の太線により示す立体化学は置換基がβ配置（「上向き」置換基）であることを意味する。
【００８５】
【化１２】
2005533108.tif 000010
【００８６】
本発明の化合物は医薬的に許容可能な塩の形態で投与することができる。「医薬的に許容可能な塩」なる用語は無機又は有機塩基と無機又は有機酸を含む医薬的に許容可能な非毒性塩基又は酸から製造される塩を意味する。「医薬的に許容可能な塩」なる用語に含まれる塩基性化合物の塩とは遊離塩基を適切な有機又は無機酸と反応させることにより一般に製造される本発明の化合物の非毒性塩を意味する。本発明の塩基性化合物の代表的な塩としては限定されないが、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、重酒石酸塩、硼酸塩、臭化物、カンシル酸塩、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストル酸塩、エシル酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩化水素酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イソチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル臭化物、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、粘液酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミンアンモニウム塩、オレイン酸塩、蓚酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、塩基性酢酸塩、琥珀酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トシル酸塩、トリエチオジド及び吉草酸塩が挙げられる。更に、本発明の化合物が酸性部分をもつ場合には、適切なその医薬的に許容可能な塩としては限定されないが、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅、第二鉄、第一鉄、リチウム、マグネシウム、マンガン、第一マンガン、カリウム、ナトリウム、亜鉛等の無機塩基から誘導される塩が挙げられる。アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、カリウム、及びナトリウム塩が特に好ましい。医薬的に許容可能な非毒性有機塩基から誘導される塩としては第一、第二、及び第三アミン、環状アミン、並びに塩基性イオン交換樹脂（例えばアルギニン、ペタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン。グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミン等）の塩が挙げられる。
【００８７】
更に、本発明の化合物にカルボン酸（−ＣＯＯＨ）基が存在する場合には、カルボン酸誘導体の医薬的に許容可能なエステル（例えばメチル、エチル、又はピバロイルオキシメチル）を使用することができる。徐放又はプロドラッグ製剤として使用するように溶解度又は加水分解特徴を改変するために当分野で公知のエステル基も含まれる。
【００８８】
本発明のヌクレオシド化合物及び誘導体の製造
本発明のヌクレオシド化合物及びその誘導体はヌクレオシド及びヌクレオシド化学の実地で確立されている以下の合成方法に従って製造することができる。本発明の化合物の製造に使用される合成方法の記載については、その開示内容全体を参考資料として本明細書に組込む以下の教科書を参照されたい。”Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，”Ｌ．Ｂ．Ｔｏｗｎｓｅｎｄ，ｅｄ．，Ｖｏｌｓ．１−３，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，１９８８。
【００８９】
以下の実施例は最終化合物又は本発明の最終化合物の製造に使用される中間体の製造について詳細に記載した文献を引用する。本発明のヌクレオシド化合物は以下の実施例に詳細に記載する手順に従って製造した。実施例は本発明の範囲を制限する目的ではなく、そのように解釈すべきではない。本発明のこれら及び他の化合物を製造するために以下の製造手順の条件及び工程の公知変形を使用できることはヌクレオシド及びヌクレオシド合成の当業者に容易に理解されよう。全温度は特に指定しない限り、摂氏である。
【００９０】
【化１３】
2005533108.tif 000011
2005533108.tif 000012
【実施例１】
【００９１】
４−アミノ−７−［２−Ｃ−メチル−３−Ｏ−（１−オキソ−オクチル）−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２．３−ｄ］ピリミジン（１−１２）
ステップＡ：３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロベンジル）−１−Ｏ−メチル−α−Ｄ−リボフラノース（１−２）
２−Ｏ−アセチル−３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロベンジル）−１−Ｏ−メチル−α−Ｄ−リボフラノース（１−１）［製造については、Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ  ７８：４８６（１９９５）参照］（５２．４ｇ，０．１０ｍｏｌ）とＫ２ＣＯ３メタノール溶液（５００ｍＬ，室温で飽和）の混合物を室温で４５分間撹拌した後、減圧濃縮した。油性残渣をＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）に懸濁し、水（３００ｍＬ＋５×２００ｍＬ）とブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過及び濃縮すると、標記化合物（４９．０ｇ）が無色油状物として得られ、それ以上精製せずに下記ステップＢで使用した。
【００９２】
【化１４】
2005533108.tif 000013
【００９３】
ステップＢ：３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロベンジル）−１−Ｏ−メチル−α−Ｄ−エリスロ−ペントフラノース−２−ウロース（１−３）
無水ＣＨ２Ｃｌ２（３５０ｍＬ）中のＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペリオジナン（５０．０ｇ，１１８ｍｍｏｌ）の氷冷懸濁液にアルゴン（Ａｒ）下にステップＡからの化合物（３６．２ｇ，７５ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）溶液を０．５時間かけて滴下した。反応混合物を０℃で０．５時間、次いで室温で３日間撹拌した。混合物を無水Ｅｔ２Ｏ（６００ｍＬ）で希釈し、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３・５Ｈ２Ｏ（１８０ｇ）と飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１４００ｍＬ）の氷冷混合物に注入した。層分離し、有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（６００ｍＬ）、水（８００ｍＬ）及びブライン（６００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過及び蒸発させると、標記化合物（３４．２ｇ）が無色油状物として得られ、それ以上精製せずに下記ステップＣで使用した。
【００９４】
【化１５】
2005533108.tif 000014
2005533108.tif 000015
【００９５】
ステップＣ：３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロベンジル）−２−Ｃ−メチル−１−Ｏ−メチル−α−Ｄ−リボフラノース（１−４）
ＭｅＭｇＢｒの無水Ｅｔ２Ｏ（０．４８Ｍ，３００ｍＬ）溶液に−５５℃でステップＢからの化合物（１７．４０ｇ，３６．２ｍｍｏｌ）の無水Ｅｔ２Ｏ（１２５ｍＬ）溶液を滴下した。反応混合物を−３０℃まで昇温させ、７時間−３０℃〜−１５℃で撹拌した後、氷冷水（５００ｍＬ）に注入し、混合物を室温で０．５時間激しく撹拌した。混合物をセライトパッド（１０×５ｃｍ）で濾過し、Ｅｔ２Ｏで十分に洗浄した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過及び濃縮した。残渣をヘキサン（〜３０ｍＬ）に溶かし、シリカゲルカラム（１０×７ｃｍ，ヘキサンでプレパック）にアプライし、ヘキサンとヘキサン／ＥｔＯＡｃ（９／１）で溶出させると、標記化合物（１６．７ｇ）が無色シロップとして得られた。
【００９６】
【化１６】
2005533108.tif 000016
【００９７】
ステップＤ：４−クロロ−７−［３，５−ビス−Ｏ−（２，４−ジクロロベンジル）−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１−５）
ステップＣからの化合物（９．４２ｇ，１９ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（２８５ｍＬ）溶液に０℃でＨＢｒ（酢酸２０ｍＬ中５．７Ｍ，１１４ｍｍｏｌ）を滴下した。得られた溶液を０℃で１時間、次いで室温で３時間撹拌し、減圧蒸発させ、無水トルエン（３×４０ｍＬ）と共蒸発させた。油性残渣を無水アセトニトリル（５０ｍＬ）に溶かし、４−クロロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン［製造については、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１３１（１９６０）参照］のナトリウム塩のアセトニトリル溶液［無水アセトニトリル（１０００ｍＬ）中の４−クロロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（８．７６ｇ，５７ｍｍｏｌ）とＮａＨ（鉱油中６０％，２．２８ｇ，５７ｍｍｏｌ）から４時間室温で激しく撹拌後にｉｎ  ｓｉｔｕ生成］に加えた。混合物を合わせて室温で２４時間撹拌した後、蒸発乾涸した。残渣を水（２５０ｍＬ）に懸濁し、ＥｔＯＡｃ（２×５００ｍＬ）で抽出した。抽出液を合わせてブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、蒸発させた。酢酸エチル／ヘキサン（１：３及び１：２）を溶離液として粗生成物をシリカゲルカラム（１０ｃｍ×１０ｃｍ）で精製した。生成物を含むフラクションを合わせて減圧蒸発させると、所望生成物（５．０５ｇ）が無色フォームとして得られた。
【００９８】
【化１７】
2005533108.tif 000017
【００９９】
ステップＥ：４−クロロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１−６）
ステップＤからの化合物（５．４２ｇ，８．８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１７５ｍＬ）溶液に−７８℃で三塩化ホウ素（ジクロロメタン８８ｍＬ中１Ｍ，８８ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を−７８℃で２．５時間、次いで−３０℃〜−２０℃で３時間撹拌した。メタノール／ジクロロメタン（１：１）（９０ｍＬ）を添加することにより反応を停止し、得られた混合物を−１５℃で３０分間撹拌した後、アンモニア水で０℃にて中和し、室温で１５分間撹拌した。固形分を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１／１，２５０ｍＬ）で洗浄した。濾液を合わせて蒸発させ、ＣＨ２Ｃｌ２とＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（９９：１，９８：２，９５：５及び９０：１０）勾配を溶離液とし、シリカゲルを担体として残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製すると、所望化合物（１．７３ｇ）が無色フォームとして得られ、ＭｅＣＮで処理後に非晶質固体となった。
【０１００】
【化１８】
2005533108.tif 000018
【０１０１】
ステップＦ：４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１−７）
ステップＥからの化合物（１．５４ｇ，５．１ｍｍｏｌ）にメタノール性アンモニア（０℃で飽和；１５０ｍＬ）を加えた。混合物をステンレス鋼オートクレーブで８５℃に１４時間加熱した後、冷却し、減圧蒸発させた。シリカゲルカラムでＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９／１）を溶離液として粗混合物を精製すると、標記化合物が無色フォーム（０．８ｇ）として得られた、ＭｅＣＮで処理後に非晶質固体として分離した。非晶質固体をメタノール／アセトニトリルから再結晶させた（ｍ．ｐ．２２２℃）。
【０１０２】
【化１９】
2005533108.tif 000019
ＬＣ−ＭＳ：実測値：２７９．１０（Ｍ−Ｈ＋）；Ｃ１２Ｈ１６Ｎ４Ｏ４＋Ｈ＋の計算値：２７９．１１。
【０１０３】
ステップＧ：４−アミノ−７−［５−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１−８）
ステップＦからの化合物（４５７ｍｇ，１．６３ｍｍｏｌ）の無水ピリジン（３．５ｍＬ）溶液に塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（３７０ｍｇ，２．４５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２４時間撹拌した。次に反応混合物を酢酸エチル（４０ｍＬ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、蒸発させると油状物が得られ、ＣＨ２Ｃｌ２中１０％ＭｅＯＨを溶離液としてシリカゲルクロマトグラフィーにかけた。適切なフラクションを集め、蒸発させ、高減圧下に乾燥すると、標記化合物が無色フォーム（５１６ｍｇ）として得られた。
【０１０４】
【化２０】
2005533108.tif 000020
【０１０５】
ステップＨ：４−（ｐ−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）−７−［５−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１−９）
ステップＧからの化合物（３９４ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）の無水ピリジン（５ｍＬ）溶液にｐ−メトキシフェニルクロロジフェニルメタン（９４６ｍｇ，３．０６ｍｍｏｌ）と４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（１２３ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２０時間撹拌した。次に酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（３×１５ｍＬ）、次いで水（２×１５ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、油状物になるまで濃縮した。ＣＨ２Ｃｌ２中５％ＭｅＯＨを溶離液としてシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより粗生成物を精製した。適切なフラクションを集め、蒸発させると、標記化合物（５４０ｍｇ）が得られた。
【０１０６】
【化２１】
2005533108.tif 000021
【０１０７】
ステップＩ：４−（ｐ−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）−７−［５−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−３−Ｏ−（１−オキソ−オクチル）−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１−１０）
ステップＨからの化合物（４００ｍｇ，０．６ｍｍｏｌ）と無水ＤＭＡＰ（７３ｍｇ，０．６ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（７ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（２５０μＬ，１．８ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。撹拌下の溶液に塩化オクタノイル（２００μＬ，１．２ｍｍｏｌ）を１５分間かけて加えた。反応混合物を更に１．５時間撹拌した。次に塩化メチレン（３０ｍＬ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（３×１０ｍＬ）と水（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、蒸発させた。ＣＨ２Ｃｌ２中５％ＭｅＯＨを溶離液として残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけると、標記化合物が薄黄色フォーム（３４０ｍｇ）として得られた。
【０１０８】
【化２２】
2005533108.tif 000022
【０１０９】
ステップＪ：４−アミノ−７−［５−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−３−Ｏ−（１−オキソ−オクチル）−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１−１１）
ステップＩからの化合物（２５０ｍｇ，０．３１ｍｍｏｌ）の６：３：１ＭｅＯＨ：酢酸：Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）溶液を５０℃で１２時間撹拌した。次に反応混合物を濃縮乾涸した。残渣を酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（３×１５ｍＬ）と水（２×１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、蒸発させた。粗生成物（２００ｍｇ）をそれ以上精製せずに下記ステップＫで使用した。ＣＨ２Ｃｌ２中５％ＭｅＯＨを溶離液としてシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより少量を更に精製すると、標記化合物が白色フォームとして得られた。
【０１１０】
【化２３】
2005533108.tif 000023
【０１１１】
ステップＫ：４−アミノ−７−［２−Ｃ−メチル−３−Ｏ−（１−オキソ−オクチル）−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１−１２）
ステップＪからの化合物（２３０ｍｇ，０．４４ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（５ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（３００μＬ，２．１４ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン三弗化水素酸塩（７５０μＬ，４．５ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を一晩室温で撹拌した。次に反応混合物を酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（３×１０ｍＬ）と水（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した後、溶媒を蒸発させた。１：１アセトン／ＣＨ２Ｃｌ２、次いでＣＨ２Ｃｌ２中１０％ＭｅＯＨを溶離液として得られた油状物をシリカゲルカラムで精製した。適切なフラクションを濃縮し、凍結乾燥すると、標記化合物が無色粉末（９０ｍｇ）として得られた。
【０１１２】
【化２４】
2005533108.tif 000024
【０１１３】
【化２５】
2005533108.tif 000025
【実施例２】
【０１１４】
４−アミノ−７−［２−Ｃ−メチル−３，５−ジ−Ｏ−（１−オキソ−オクチル）−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（２−３）
ステップＡ：４−（ｐ−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）−７−［３−Ｏ−（１−オキソ−オクチル）−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（２−１）
実施例１のステップＩからの化合物（１−１０）（３００ｍｇ，０．３７ｍｍｏｌ）、無水トリエチルアミン（３００μＬ，２．１４ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン三弗化水素酸塩（７５０μＬ，４．５ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を室温で一晩撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（３×２０ｍＬ）、次いで水（２×１５ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、蒸発させた。ＣＨ２Ｃｌ２中１０−１５％アセトンを溶離液としてシリカゲルカラムで粗生成物を精製した。適切なフラクションを合わせて蒸発させると、標記化合物が無色フォーム（２４０ｍｇ）として得られた。
【０１１５】
【化２６】
2005533108.tif 000026
【０１１６】
ステップＢ：４−（ｐ−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）−７−［３，５−ジ−Ｏ−（１−オキソ−オクチル）−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（２−２）
ステップＢからの化合物（１８ｍｇ，０．０２６ｍｍｏｌ）とＤＭＡＰ（３．５ｍｇ，０．０２８ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（３００μＬ）溶液をアルゴン雰囲気下に氷浴で１０分間冷却した。この溶液にトリエチルアミン（７．５μＬ，０．０５３ｍｍｏｌ）、次いで塩化オクタノイル（６．６μＬ，０．０３８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をこの温度で２時間撹拌し、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２×１０ｍＬ）、次いで水（１０ｍＬ）で洗浄した。蒸発後に得られた粗生成物を、ＣＨ２Ｃｌ２中１０％アセトンを溶離液としてシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。標記化合物が無色フォーム（１３．５ｍｇ）として得られた。
【０１１７】
ステップＣ：４−アミノ−７−［２−Ｃ−メチル−３，５−ジ−Ｏ−（１−オキソ−オクチル）−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（２−３）
ステップＢからの化合物（１３ｍｇ，０．０１６ｍｍｏｌ）の６：３：１ＭｅＯＨ：酢酸：Ｈ２Ｏ（５００μＬ）溶液を５０℃で１５時間撹拌した。次に反応混合物を濃縮乾涸した。残渣を酢酸エチル（１５ｍＬ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（３×５ｍＬ）と水（２×５ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、蒸発させた。ジクロロメタン中１０％アセトンを溶離液として粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製すると、標記化合物が白色フォーム（６．０ｍｇ）として得られた。
【０１１８】
【化２７】
2005533108.tif 000027
【０１１９】
【化２８】
2005533108.tif 000028
2005533108.tif 000029
【実施例３】
【０１２０】
４−アミノ−７−［２−Ｃ−メチル−５−Ｏ−（１−オキソ−オクチル）−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（３−３）
ステップＡ：４−（ｐ−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）−７−［２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（３−１）
実施例１のステップＨからの化合物１−９の無水ＴＨＦ溶液にトリエチルアミン（５当量）とトリエチルアミン三弗化水素酸塩（１０当量）を加える。溶液を一晩室温で撹拌する。次に反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（３ｘ１０ｍＬ）、次いで水で洗浄する。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した後、溶媒を蒸発により除去する。ジクロロメタンとメタノールの混合物を溶離液として得られた油状物をシリカゲルカラムで精製する。適切なフラクションを濃縮し、乾燥すると、標記化合物が無色粉末として得られる。
【０１２１】
ステップＢ：４−（ｐ−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）−７−［２−Ｃ−メチル−５−Ｏ−（１−オキソ−オクチル）−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（３−２）
ステップＡからの化合物とＤＭＡＰ（１．０当量）の無水ＣＨ２Ｃｌ２溶液にトリエチルアミン（２当量）をゆっくりと加える。撹拌下の溶液に塩化オクタノイル（１．１当量）を１５分間かけて加える。反応混合物を更に１．５時間撹拌する。次に塩化メチレンで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液と水で洗浄する。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、蒸発させる。ＣＨ２Ｃｌ２中ＭｅＯＨの混合物を溶離液として残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけると、標記化合物が得られる。
【０１２２】
ステップＣ：４−アミノ−７−［２−Ｃ−メチル−５−Ｏ−（１−オキソ−オクチル）−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（３−３）
ステップＢからの化合物の６：３：１ＭｅＯＨ：酢酸：Ｈ２Ｏ溶液を５０℃で１５時間撹拌する。次に反応混合物を濃縮乾涸する。残渣を酢酸エチルで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液と水で洗浄する。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、蒸発させる。アセトンとジクロロメタンの混合物を溶離液としてシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより粗生成物を精製すると、標記化合物が得られる。
【０１２３】
【化２９】
2005533108.tif 000030
2005533108.tif 000031
【実施例４】
【０１２４】
４−アミノ−７−［２，３，５−トリ−Ｏ−（１−オキソ−オクチル）−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（４−２）
ステップＡ：４−（ｐ−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）−７−［２，３，５−トリ−Ｏ−（１−オキソ−オクチル）−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（４−１）
実施例２のステップＢからの化合物２−２とＤＭＡＰ（１．０当量）の無水ＣＨ２Ｃｌ２溶液にトリエチルアミン（２当量）をゆっくりと加える。撹拌下の溶液に塩化オクタノイル（１．１当量）を１５分間かけて加える。反応混合物を更に４時間撹拌する。次に塩化メチレンで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液と水で洗浄する。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、蒸発させる。ＣＨ２Ｃｌ２中ＭｅＯＨの混合物を溶離液として残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけると、標記化合物が得られる。
【０１２５】
ステップＢ：４−アミノ−７−［２，３，５−トリ−Ｏ−（１−オキソ−オクチル）−２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（４−２）
ステップＡからの化合物の６：３：１ＭｅＯＨ：酢酸：Ｈ２Ｏ溶液を５０℃で１５時間撹拌する。次に反応混合物を濃縮乾涸する。残渣を酢酸エチルで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液と水で洗浄する。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、蒸発させる。アセトンとジクロロメタンの混合物を溶離液としてシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより粗生成物を精製すると、標記化合物が得られる。
【０１２６】
（生物学的アッセイ）
ＨＣＶ  ＮＳ５ＢポリメラーゼとＨＣＶ複製の阻害を測定するために使用したアッセイについて以下に記載する。
【０１２７】
ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂ  ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）の阻害剤としての本発明の化合物の効力を以下のアッセイで測定した。
【０１２８】
Ａ．ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害アッセイ：
本アッセイは本発明のヌクレオシド誘導体がヘテロマーＲＮＡ鋳型でＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）のＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＮＳ５Ｂ）の酵素活性を阻害する能力を測定するために使用した。
【０１２９】
手順：
アッセイ緩衝液条件：（合計５０μＬ／反応）
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ，ｐＨ７．５
５０μＭ  ＥＤＴＡ
５ｍＭ  ＤＴＴ
２ｍＭ  ＭｇＣｌ２
８０ｍＭ  ＫＣｌ
ＲＮＡｓｉｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ，ストックは４０単位／μＬ）０．４Ｕ／μＬ
ｔ５００（Ｃ型肝炎ゲノムのＮＳ２／３領域からの配列でＴ７ランオフ転写を使用して作製した５００−ｎｔ  ＲＮＡ）０．７５μｇ
精製Ｃ型肝炎ＮＳ５Ｂ（２１アミノ酸Ｃ末端短縮形）１．６μｇ
１μＭ  Ａ，Ｃ，Ｕ，ＧＴＰ（ヌクレオシド三リン酸ミックス）
［α−３２Ｐ］−ＧＴＰ又は［α−３３Ｐ］−ＧＴＰ。
【０１３０】
化合物は最終濃度１００μＭまでの各種濃度で試験した。
【０１３１】
酵素と鋳型ｔ５００を含む適当な容量の反応緩衝液を調製した。本発明のヌクレオシド誘導体を９６ウェルプレートのウェルにピペッティングした。放射性標識ＧＴＰを含むヌクレオシド三リン酸（ＮＴＰ）の混合物を調製し、９６ウェルプレートのウェルにピペッティングした。酵素−鋳型反応溶液の添加により反応を開始し、室温で１〜２時間進行させた。
【０１３２】
０．５Ｍ  ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）２０μＬを添加することにより反応をクエンチした。反応緩衝液の添加前にクエンチ溶液をＮＴＰに添加するブランク反応も実施した。
【０１３３】
クエンチした反応液５０μＬをＤＥ８１フィルターディスク（Ｗｈａｔｍａｎ）にスポットし、３０分間風乾した。フィルターを０．３Ｍギ酸アンモニウム，ｐＨ８で洗浄した（洗浄液１ｍＬ中のｃｐｍが１００未満になるまで１５０ｍＬ／回、通常は６回洗浄）。フィルターをシンチレーションカウンターでシンチレーション液５ｍＬ中にてカウントした。
【０１３４】
次式：％阻害＝［１−（試験反応液中のｃｐｍ−ブランク中のｃｐｍ）／（対照反応液中のｃｐｍ−ブランク中のｃｐｍ）］×１００に従って阻害百分率を計算した。
【０１３５】
ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼアッセイで試験した代表的化合物は１００マイクロモル未満のＩＣ５０を示した。
【０１３６】
Ｂ．ＨＣＶ  ＲＮＡ複製の阻害アッセイ：
本発明の化合物がサブゲノムＨＣＶレプリコンを含む培養肝癌（ＨｕＨ−７）細胞中でＣ型肝炎ウイルスＲＮＡの複製に作用する能力も評価した。アッセイの詳細を以下に記載する。このレプリコンアッセイはＶ．Ｌｏｈｍａｎｎ，Ｆ．Ｋｏｒｎｅｒ，Ｊ−Ｏ．Ｋｏｃｈ，Ｕ．Ｈｅｒｉａｎ，Ｌ．Ｔｈｅｉｌｍａｎｎ，ａｎｄ  Ｒ．Ｂａｒｔｅｎｓｃｈｌａｇｅｒ，”Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｓｕｂ−ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  ＲＮＡｓ  ｉｎ  ａ  Ｈｅｐａｔｏｍａ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ，”  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８５：１１０（１９９９）に記載されているアッセイの変法である。
【０１３７】
プロトコール：
アッセイはｉｎ  ｓｉｔｕリボヌクレアーゼ保護シンチレーション近接型プレートアッセイ（ＳＰＡ）とした。９６ウェルＣｙｔｏｓｔａｒプレート（Ａｍｅｒｓｈａｍ）で０．８ｍｇ／ｍＬ  Ｇ４１８を添加した培地１００〜２００μＬに細胞１０，０００〜４０，０００個をプレーティングした。０〜１８時間の時点で１％ＤＭＳＯ中１００μＭまでの各種濃度の化合物を細胞に添加した後、２４〜９６時間培養した。細胞を固定し（２０分，１０％ホルマリン）、透過性を高め（２０分，０．２５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００／ＰＢＳ）、ＲＮＡウイルスゲノムに含まれる（＋）鎖ＮＳ５Ｂ（又は他の遺伝子）に相補的な１本鎖３３Ｐ  ＲＮＡプローブとハイブリダイズさせた（一晩，５０℃）。細胞を洗浄し、ＲＮＡｓｅで処理し、洗浄し、６５℃まで加熱し、Ｔｏｐ−Ｃｏｕｎｔでカウントした。複製の阻害を毎分カウント（ｃｐｍ）の減少として読取った。
【０１３８】
サブゲノムレプリコンを含むものを選択したヒトＨｕＨ−７肝癌細胞はＨＣＶ５’非翻訳領域（ＮＴＲ）、ネオマイシン選択マーカー、ＥＭＣＶ  ＩＲＥＳ（内部リボソーム侵入部位）、ＨＣＶ非構造蛋白質ＮＳ３〜ＮＳ５Ｂ、及び３’ＮＴＲから構成される細胞質ＲＮＡをもつ。
【０１３９】
複製アッセイで試験した代表的化合物は１００マイクロモル未満のＥＣ５０を示した。
【０１４０】
本発明のヌクレオシド誘導体の細胞毒性と抗ウイルス特異性も以下のカウンタースクリーンで評価した。
【０１４１】
Ｃ．カウンタースクリーン：
本発明のヌクレオシド誘導体がヒトＤＮＡポリメラーゼを阻害する能力を以下のアッセイで測定した。
【０１４２】
ａ．ヒトＤＮＡポリメラーゼα及びβの阻害：
反応条件：
反応容量５０μｌ。
【０１４３】
反応緩衝液成分：
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．５
ウシ血清アルブミン２００μｇ／ｍＬ
１００ｍＭ  ＫＣｌ
２ｍＭ  β−メルカプトエタノール
１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２
１．６μＭ  ｄＡ，ｄＧ，ｄＣ，ｄＴＴＰ
α−３３Ｐ−ｄＡＴＰ。
【０１４４】
酵素と鋳型：
ギャップ付き魚精子ＤＮＡ鋳型０．０５ｍｇ／ｍＬ
ＤＮＡポリメラーゼα又はβ０．０１Ｕ／μＬ。
【０１４５】
ギャップ付き魚精子ＤＮＡ鋳型の作製：
１Ｍ  ＭｇＣｌ２５μＬを活性化魚精子ＤＮＡ（ＵＳＢ  ７００７６）５００μＬに加える；
３７℃まで昇温し、６５Ｕ／μＬエキソヌクレアーゼＩＩＩ（ＧｉｂｃｏＢＲＬ１８０１３−０１１）３０μＬを加える；
５分間３７℃でインキュベートする；
６５℃まで１０分間加熱することにより反応を終了する；
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．５で平衡化したＢｉｏ−ｓｐｉｎ  ６クロマトグラフィーカラム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ７３２−６００２）に５０〜１００μＬアリコートをロードする；
１，０００Ｘｇで４分間遠心により溶出させる；
溶出液をプールし、２６０ｎｍの吸光度を測定して濃度を決定する。
【０１４６】
ＤＮＡ鋳型は適当な容量の２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．５で希釈し、酵素は２ｍＭ  β−メルカプトエタノールと１００ｍＭ  ＫＣｌを添加した適当な容量の２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌで希釈した。鋳型と酵素をマイクロ遠心管又は９６ウェルプレートにピペッティングした。夫々酵素希釈緩衝液と試験化合物溶媒を使用して酵素を含まないブランク反応液と試験化合物を含まない対照反応液も調製した。上記成分からなる反応緩衝液で反応を開始した。反応液を１時間３７℃でインキュベートした。０．５Ｍ  ＥＤＴＡ  ２０μＬを添加することにより反応をクエンチした。クエンチした溶液５０μＬをＷｈａｔｍａｎ  ＤＥ８１フィルターディスクにスポットし、風乾した。洗浄液１ｍＬが＜１００ｃｐｍになるまでフィルターディスクを０．３Ｍギ酸アンモニウム（ｐＨ８）１５０ｍＬで反復洗浄した。ディスクを無水エタノール１５０ｍＬで２回と無水エーテル１５０ｍＬで１回洗浄し、乾燥し、シンチレーション液５ｍＬ中でカウントした。
【０１４７】
次式：％阻害＝［１−（試験反応液中のｃｐｍ−ブランク中のｃｐｍ）／（対照反応液中のｃｐｍ−ブランク中のｃｐｍ）］×１００に従って阻害百分率を計算した。
【０１４８】
ｂ．ヒトＤＮＡポリメラーゼγの阻害：
２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８），２ｍＭ  β−メルカプトエタノール，５０ｍＭ  ＫＣｌ，１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２，及び０．１μｇ／μＬ  ＢＳＡを含有する緩衝液中に０．５ｎｇ／μＬ酵素；１０μＭ  ｄＡＴＰ，ｄＧＴＰ，ｄＣＴＰ，及びＴＴＰ；２μＣｉ／反応液［α−３３Ｐ］−ｄＡＴＰ，並びに０．４μｇ／μＬ活性化魚精子ＤＮＡ（ＵＳ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌから購入）を添加した反応液中でヒトＤＮＡポリメラーゼγの阻害力価を測定した。１時間３７℃で反応を進行させ、最終濃度１４２ｍＭまで０．５Ｍ  ＥＤＴＡを添加することによりクエンチした。アニオン交換フィルター結合とシンチレーションカウントにより生成物形成を定量した。５０μＭまで化合物を試験した。
【０１４９】
次式：％阻害＝［１−（試験反応液中のｃｐｍ−ブランク中のｃｐｍ）／（対照反応液中のｃｐｍ−ブランク中のｃｐｍ）］×１００に従って阻害百分率を計算した。
【０１５０】
本発明のヌクレオシド誘導体がＨＩＶ感染性とＨＩＶ蔓延を阻害する能力を以下のアッセイで測定した。
【０１５１】
ｃ．ＨＩＶ感染性アッセイ
低バックグラウンドβ−ガラクトシダーゼ（β−ｇａｌ）発現について選択したＣＸＣＲ４とＣＣＲ５の両者を発現するＨｅＬａ  Ｍａｇｉ細胞の変異体でアッセイを実施した。細胞に４８時間感染させ、組込まれたＨＩＶ−１  ＬＴＲプロモーターからのβ−ｇａｌ産生を化学発光基質（Ｇａｌａｃｔｏｌｉｇｈｔ  Ｐｌｕｓ，Ｔｒｏｐｉｘ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）で定量した。１００μＭから出発して２倍系列希釈で阻害剤の力価を（２回ずつ）測定し、各濃度の阻害百分率を対照感染と比較計算した。
【０１５２】
ｄ．ＨＩＶ蔓延の阻害
その開示内容全体を参考資料として本明細書に組込む米国特許第５，４１３，９９９号（１９９５年５月９日）と、Ｊ．Ｐ．Ｖａｃｃａら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９１：４０９６−４１００（１９９４）に記載されている方法により本発明の化合物がヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の蔓延を阻害する能力を測定した。
【０１５３】
更に、以下のアッセイに記載するようなＭＴＳ細胞型アッセイでサブゲノムＨＣＶレプリコンを含む培養肝癌（ＨｕＨ−７）細胞に対する細胞毒性について本発明のヌクレオシド誘導体をスクリーニングした。ＨｕＨ−７細胞株はＨ．Ｎａｋａｂａｙａｓｈｉら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，４２：３８５８（１９８２）に記載されている。
【０１５４】
ｅ．細胞毒性アッセイ：
適当な培地で細胞約１．５×１０５個／ｍＬの濃度の３日間懸濁培養液と５．０×１０４個／ｍＬの３日間接着培養液との細胞培養液を調製した。細胞培養液９９μＬを９６ウェル組織培養処理プレートのウェルに移し、ＤＭＳＯ中１００倍最終濃度の試験化合物１μＬを加えた。プレートを３７℃で５％ＣＯ２下に指定時間インキュベートした。インキュベーション時間後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ試薬（ＭＴＳ）（Ｐｒｏｍｅｇａ）２０μＬを各ウェルに加え、プレートを３７℃で５％ＣＯ２下に更に３時間までインキュベートした。プレートを振盪して十分に混合し、プレートリーダーを使用して４９０ｎｍの吸光度を読取った。ＭＴＳ試薬添加の直前に既知細胞数から懸濁培養細胞の標準曲線を作成した。代謝活性細胞はＭＴＳをホルマザンに還元する。ホルマザンは４９０ｎｍで吸収する。化合物の存在下の４９０ｎｍの吸光度と化合物を加えない細胞中の吸光度を比較した。参考文献：Ｃｏｒｙ，Ａ．Ｈ．ら，”Ｕｓｅ  ｏｆ  ａｎ  ａｑｕｅｏｕｓ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ／ｆｏｒｍａｚａｎ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｓｓａｙｓ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅ，”Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｏｍｍｕｎ．３：２０７（１９９１）。
【０１５５】
他のＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスに対する本発明の化合物の活性を測定するために以下のアッセイを使用した。
【０１５６】
ａ．ライノウイルスに対する化合物のＩｎ  Ｖｉｔｒｏ抗ウイルス活性の測定（細胞変性効果阻害アッセイ）：
アッセイ条件はＳｉｄｗｅｌｌとＨｕｆｆｍａｎの論文”Ｕｓｅ  ｏｆ  ｄｉｓｐｏｓａｂｌｅ  ｍｉｃｒｏｔｉｓｓｕｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｐｌａｔｅｓ  ｆｏｒ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ，”Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２２：７９７−８０１（１９７１）に記載されている。
【０１５７】
ウイルス：
２型ライノウイルス（ＲＶ−２）ＨＧＰ株をＫＢ及びＳｉｄｗｅｌｌとＨｕｆｆｍａｎの文献に記載されているような培地（０．１％ＮａＨＣＯ３，抗生物質不含）と共に使用した。ＡＴＣＣから入手したウイルスは軽度急性発熱性上気道疾患の成人男子の咽頭スワブに由来する。
【０１５８】
９型ライノウイルス（ＲＶ−９）２１１株と１４型ライノウイルス（ＲＶ−１４）Ｔｏｗ株をＲｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤに所在のＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手した。ＲＶ−９はヒト咽頭うがい液に由来し、ＲＶ−１４は上気道疾患の若年成人の咽頭スワブに由来する。これらのウイルスはいずれもヒト子宮頸部上皮癌細胞であるＨｅＬａ  Ｏｈｉｏ−１細胞（Ｄｒ．Ｆｒｅｄ  Ｈａｙｄｅｎ，Ｕｎｉｖ．ｏｆ  ＶＡ）と共に使用した。５％胎仔ウシ血清（ＦＢＳ）と０．１％ＮａＨＣＯ３を添加したＭＥＭ（イーグル最少必須培地）を増殖培地として使用した。
【０１５９】
全３種のウイルス型の抗ウイルス試験培地は５％ＦＢＳ，０．１％ＮａＨＣＯ３，ゲンタマイシン５０μｇ／ｍＬ，及び１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２を添加したＭＥＭとした。
【０１６０】
本発明の化合物をアッセイするために使用した最高濃度は２０００μｇ／ｍＬとした。試験化合物の約５分後にウイルスをアッセイプレートに添加した。適正な対照も試験した。アッセイプレートを加湿空気と５％ＣＯ２下に３７℃でインキュベートした。形態変化の顕微鏡試験により対照細胞における細胞毒性をモニターした。ウイルスＣＰＥデータと毒性対照データの回帰分析により、ＥＤ５０（５０％有効用量）とＣＣ５０（５０％細胞毒性濃度）を求めた。式：ＳＩ＝ＣＣ５０÷ＥＤ５０により選択性指数（ＳＩ）を計算した。
【０１６１】
ｂ．デング、Ｂａｎｚｉ及び黄熱病に対する化合物のＩｎ  Ｖｉｔｒｏ  抗ウイルス活性の測定（ＣＰＥ阻害アッセイ）
アッセイの詳細は上記ＳｉｄｗｅｌｌとＨｕｆｆｍａｎの文献に記載されている。
【０１６２】
ウイルス：
２型デングウイルスニューギニア株を疾病管理センターから入手した。２種のアフリカミドリザル腎細胞株を使用してウイルス（Ｖｅｒｏ）を培養し、抗ウイルス試験（ＭＡ−１０４）を実施した。感染マウス脳から作製された黄熱病ウイルス１７Ｄ株と南アフリカの熱病少年の血清から単離されたＢａｎｚｉウイルスＨ３３６株をいずれもＡＴＣＣから入手した。Ｖｅｒｏ細胞をこれらのウイルスの両者と共にアッセイに使用した。
【０１６３】
細胞及び培地：
５％ＦＢＳと０．１％ＮａＨＣＯ３を添加した抗生物質不含培地１９９でＭＡ−１０４細胞（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）とＶｅｒｏ細胞（ＡＴＣＣ）を使用した。
【０１６４】
デング、黄熱病及びＢａｎｚｉウイルスのアッセイ培地は２％ＦＢＳ，０．１８％ＮａＨＣＯ３及びゲンタマイシン５０μｇ／ｍＬを添加したＭＥＭとした。
【０１６５】
ＳｉｄｗｅｌｌとＨｕｆｆｍａｎの文献に従って上記ライノウイルス抗ウイルス試験と同様に本発明の化合物の抗ウイルス試験を実施した。５〜６日後にこれらのウイルスの各々で十分な細胞変性効果（ＣＰＥ）読取値が達成された。
【０１６６】
ｃ．西ナイルウイルスに対する化合物のＩｎ  Ｖｉｔｒｏ抗ウイルス活性の測定（ＣＰＥ阻害アッセイ）
アッセイの詳細は上記ＳｉｄｗｅｌｌとＨｕｆｆｍａｎの文献に記載されている。カラス脳に由来する西ナイルウイルスニューヨーク株を疾病管理センターから入手した。Ｖｅｒｏ細胞を上記のように増殖させ、使用した。試験培地は１％ＦＢＳ，０．１％ＮａＨＣＯ３及びゲンタマイシン５０μｇ／ｍＬを添加したＭＥＭとした。
【０１６７】
ライノウイルス活性をアッセイするために使用したと同様のＳｉｄｗｅｌｌとＨｕｆｆｍａｎの方法に従って本発明の化合物の抗ウイルス試験を実施した。５〜６日後に十分な細胞変性効果（ＣＰＥ）読取値が達成された。
【０１６８】
ｄ．ライノ、黄熱病、デング、Ｂａｎｚｉ及び西ナイルウイルスに対する化合物のＩｎ  Ｖｉｔｒｏ抗ウイルス活性の測定（ニュートラルレッド取込みアッセイ）
上記ＣＰＥ阻害アッセイの実施後に、”Ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒ  Ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ：Ｍｉｃｒｏｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ  Ｅｆｆｅｃｔ，”Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３１：３５−３８（１９７６）に記載されている付加細胞変性検出法を使用した。モデルＥＬ３０９マイクロプレートリーダー（Ｂｉｏ−Ｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．）を使用してアッセイプレートを読取った。上記のようにＥＤ５０とＣＤ５０を計算した。
【０１６９】
（医薬製剤の実施例）
本発明の化合物の経口組成物の１特定態様として、実施例１の化合物５０ｍｇを総量５８０〜５９０ｍｇとするに十分な微粉状ラクトースと配合し、Ｏサイズハードゼラチンカプセルに充填する。
【０１７０】
以上、特定態様に関して本発明を記載及び例証したが、当業者に自明の通り、発明の精神と範囲を逸脱せずに種々の変更、変形、及び置換が可能である。例えば、治療するヒトの応答はＨＣＶ感染の重篤度により異なるので、上記のような好適用量以外の有効用量も適用可能である。同様に、観察される薬理応答は選択する特定活性化合物又は医薬キャリヤーの有無や、製剤の型及び使用する投与方法により変動すると思われ、結果のこのような予想変動又は相違は本発明の目的と実施に従って予測される。従って、本発明は特許請求の範囲のみに限定され、特許請求の範囲は妥当な範囲で広義に解釈すべきである。
【国際調査報告】
2005533108.tif 000035
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