(57)【要約】【課題】  Ｔｒｅｇ細胞中／上においてＴＧＦ−β１の産生および発現を誘導するための効果的な方法を提供することを目的とし、さらにこの方法は、自己免疫疾患、アレルギー、動脈硬化症の予防および／または治療、ならびにヒトまたは動物における移植片拒絶の抑制に好適である。さらなる目的は、上記目的を達成することができる手段で相当する薬学的配合物を提供することである。【解決手段】  本発明は、Ｔｒｅｇ細胞中および／またはＴｒｅｇ細胞上におけるＴＧＦ−β１の産生およびＴＧＦ−β１の発現の誘導のための、アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の１つの阻害剤または数個の阻害剤の使用に関し、自己免疫疾患、アレルギー、動脈硬化症を予防および／または治療するための、ならびに移植片拒絶反応を抑制するための使用に関する。さらに、本発明は、病原性自己抗原のペプチド断片または合成類似体および／または病原性微生物の特異的抗原成分がさらに用いられる使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｔｒｅｇ細胞中および／またはＴｒｅｇ細胞上におけるＴＧＦ−β１の産生およびＴＧＦ−β１の発現の誘導のための、アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の１つの阻害剤または数個の阻害剤の使用。
【請求項２】
アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の前記１つの阻害剤または前記数個の阻害剤は、アクチノニン、ロイヒスチン、フェベスチン（phebestin）、アマスタチン、ベスタチン、プロベスチン（probestin）、アルファメニン（arphamenin）、ＭＲ３８７、β−アミノチオール、α−アミノホスフィン酸およびそのエステルならびに塩、α−アミノホスホン酸塩、α−アミノボロン酸、α−アミノアルデヒド、α−アミノ酸のヒドロキサム酸塩、Ｎ−フェニルフタルイミド、Ｎ−フェニルホモフタルイミド、α−ケトアミド、サリドマイドおよびその誘導体からなる群から選択される少なくとも１つである、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記１つの阻害剤または前記数個の阻害剤として、α−ケトアミド、好ましくは３−アミノ−２−オキソ−４−フェニルブタン酸アミド、α−アミノホスフィン酸、好ましくはＤ−Ｐｈｅ−γ［ＰＯ（ＯＨ）−ＣＨ２］−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｎ−フェニルホモフタルイミド、好ましくはＰＡＱ−２２、α−アミノホスホン酸塩、好ましくはＲＢ３０１４および／またはフェベスチン、特に好ましくはＰＡＱ−２２、ＲＢ３０１４および／またはフェベスチンが用いられる、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
細胞質ゾルのアラニルアミノペプチダーゼが前記類似の基質特異性を有する酵素として機能する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
ＰＡＱ−２２が前記１つの阻害剤として用いられる、または前記数個の阻害剤がＰＡＱ−２２を含む、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
自己免疫疾患を予防および／または治療するための、アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の１つの阻害剤または数個の阻害剤の使用。
【請求項７】
関節リウマチ、紅斑性狼瘡、多発性硬化症、ＩＤＤＭ、クローン病、潰瘍性大腸炎、乾癬、神経皮膚症、糸球体腎炎、間質性腎炎、血管炎、甲状腺の自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血または例えば動脈硬化症のような炎症の発生を有する他の慢性疾患を予防および／または治療するための、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
多発性硬化症または動脈硬化症を予防および／または治療するための、請求項６または７に記載の使用。
【請求項９】
Ｉ型（ＧｅｌｌとＣｏｏｍｂｓによる）のアレルギー、花粉症またはＩＩ、ＩＩＩもしくはＩＶ型のアレルギーを予防および／または治療するための、アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の１つの阻害剤または数個の阻害剤の使用。
【請求項１０】
Ｉ型（ＧｅｌｌとＣｏｏｍｂｓによる）のアレルギーとして気管支喘息または花粉症および／またはＩＩ、ＩＩＩもしくはＩＶ型のアレルギーとして接触アレルギーを予防および／または治療するための、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
移植片拒絶反応を抑制するための、アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の１つの阻害剤または数個の阻害剤の使用。
【請求項１２】
腎臓または骨髄の移植のための、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の前記１つの阻害剤または前記数個の阻害剤は、アクチノニン、ロイヒスチン、フェベスチン、アマスタチン、ベスタチン、プロベスチン、アルファメニン、ＭＲ３８７、β−アミノチオール、α−アミノホスフィン酸およびそのエステルならびに塩、α−アミノホスホン酸塩、α−アミノボロン酸、α−アミノアルデヒド、α−アミノ酸のヒドロキサム酸塩、Ｎ−フェニルフタルイミド、Ｎ−フェニルホモフタルイミド、α−ケトアミド、サリドマイドおよびその誘導体からなる群から選択される少なくとも１つである、請求項６〜１２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
前記１つの阻害剤または前記数個の阻害剤として、α−ケトアミド、好ましくは３−アミノ−２−オキソ−４−フェニルブタン酸アミド、α−アミノホスフィン酸、好ましくはＤ−Ｐｈｅ−γ［ＰＯ（ＯＨ）−ＣＨ２］−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｎ−フェニルホモフタルイミド、好ましくはＰＡＱ−２２、α−アミノホスホン酸塩、好ましくはＲＢ３０１４および／またはフェベスチン、特に好ましくはＰＡＱ−２２、ＲＢ３０１４および／またはフェベスチンが用いられる、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
細胞質ゾルのアラニルアミノペプチダーゼが前記類似の基質特異性を有する酵素として機能する、請求項６〜１４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１６】
ＰＡＱ−２２が前記１つの阻害剤として用いられる、または前記数個の阻害剤がＰＡＱ−２２を含む、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
病原性自己抗原のペプチド断片または合成類似体および／または病原性微生物の特異的抗原成分がさらに用いられる、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１８】
ＭＢＰ（ミエリン塩基性タンパク質）、ＭＯＧ（ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質）、ＭＡＧ（ミエリン関連糖タンパク質）および／またはＰＬＰ（プロテオリピドタンパク質）が、病原性自己抗原のペプチド断片として用いられる、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
鞘（sheath）タンパク質または膜糖脂質複合体が、病原性微生物の特異的抗原成分として用いられる、請求項１７または請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
Ｔｒｅｇ細胞中および／またはＴｒｅｇ細胞上におけるＴＧＦ−β１の産生およびＴＧＦ−β１の発現の誘導のための薬物または薬学的配合物の調製のための、アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の１つの阻害剤または数個の阻害剤の使用。
【請求項２１】
アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の前記１つの阻害剤または前記数個の阻害剤は、アクチノニン、ロイヒスチン、フェベスチン、アマスタチン、ベスタチン、プロベスチン、アルファメニン、ＭＲ３８７、β−アミノチオール、α−アミノホスフィン酸およびそのエステルならびに塩、α−アミノホスホン酸塩、α−アミノボロン酸、α−アミノアルデヒド、α−アミノ酸のヒドロキサム酸塩、Ｎ−フェニルフタルイミド、Ｎ−フェニルホモフタルイミド、α−ケトアミド、サリドマイドおよびその誘導体からなる群から選択される少なくとも１つである、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
前記１つの阻害剤または前記数個の阻害剤として、α−ケトアミド、好ましくは３−アミノ−２−オキソ−４−フェニルブタン酸アミド、α−アミノホスフィン酸、好ましくはＤ−Ｐｈｅ−γ［ＰＯ（ＯＨ）−ＣＨ２］−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｎ−フェニルホモフタルイミド、好ましくはＰＡＱ−２２、α−アミノホスホン酸塩、好ましくはＲＢ３０１４および／またはフェベスチン、特に好ましくはＰＡＱ−２２、ＲＢ３０１４および／またはフェベスチンが用いられる、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
細胞質ゾルのアラニルアミノペプチダーゼが類似の基質特異性を有する酵素として機能する、請求項２０〜２２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２４】
ＰＡＱ−２２が前記１つの阻害剤として用いられる、または前記数個の阻害剤がＰＡＱ−２２を含む、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
自己免疫疾患を予防および／または治療するための薬物または薬学的配合物の調製のための、アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の１つの阻害剤または数個の阻害剤の使用。
【請求項２６】
関節リウマチ、紅斑性狼瘡、多発性硬化症、ＩＤＤＭ、クローン病、潰瘍性大腸炎、乾癬、神経皮膚症、糸球体腎炎、間質性腎炎、血管炎、甲状腺の自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血または例えば動脈硬化症のような炎症の発生を有する他の慢性疾患を予防および／または治療するための、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
多発性硬化症または動脈硬化症を予防および／または治療するための、請求項２５または請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
Ｉ型（ＧｅｌｌとＣｏｏｍｂｓによる）のアレルギー、花粉症またはＩＩ、ＩＩＩもしくはＩＶ型のアレルギーを予防および／または治療するための薬物または薬学的組成物の調製のための、アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の１つの阻害剤または数個の阻害剤の使用。
【請求項２９】
Ｉ型（ＧｅｌｌとＣｏｏｍｂｓによる）のアレルギーとして気管支喘息または花粉症および／またはＩＩ、ＩＩＩもしくはＩＶ型のアレルギーとして接触アレルギーを予防および／または治療するための、請求項２８に記載の使用。
【請求項３０】
移植片拒絶反応を抑制するための薬物または薬学的配合物の調製のための、アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の１つの阻害剤または数個の阻害剤の使用。
【請求項３１】
腎臓または骨髄の移植のための、請求項３０に記載の使用。
【請求項３２】
アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の前記１つの阻害剤または前記数個の阻害剤は、アクチノニン、ロイヒスチン、フェベスチン、アマスタチン、ベスタチン、プロベスチン、アルファメニン、ＭＲ３８７、β−アミノチオール、α−アミノホスフィン酸およびそのエステルならびに塩、α−アミノホスホン酸塩、α−アミノボロン酸、α−アミノアルデヒド、α−アミノ酸のヒドロキサム酸塩、Ｎ−フェニルフタルイミド、Ｎ−フェニルホモフタルイミド、α−ケトアミド、サリドマイドおよびその誘導体からなる群から選択される少なくとも１つである、請求項２５〜３１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３３】
前記１つの阻害剤または前記数個の阻害剤として、α−ケトアミド、好ましくは３−アミノ−２−オキソ−４−フェニルブタン酸アミド、α−アミノホスフィン酸、好ましくはＤ−Ｐｈｅ−γ［ＰＯ（ＯＨ）−ＣＨ２］−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｎ−フェニルホモフタルイミド、好ましくはＰＡＱ−２２、α−アミノホスホン酸塩、好ましくはＲＢ３０１４および／またはフェベスチン、特に好ましくはＰＡＱ−２２、ＲＢ３０１４および／またはフェベスチンが用いられる、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
細胞質ゾルのアラニルアミノペプチダーゼが類似の基質特異性を有する酵素として機能する、請求項２５〜３３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３５】
ＰＡＱ−２２が前記１つの阻害剤として用いられる、または前記数個の阻害剤がＰＡＱ−２２を含む、請求項３４に記載の使用。
【請求項３６】
病原性自己抗原のペプチド断片または合成類似体および／または病原性微生物の特異的抗原成分がさらに用いられる、請求項２０〜３５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３７】
ＭＢＰ（ミエリン塩基性タンパク質）、ＭＯＧ（ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質）、ＭＡＧ（ミエリン関連糖タンパク質）およびＰＬＰ（プロテオリピドタンパク質）が、病原性自己抗原のペプチド断片として用いられる、請求項３６に記載の使用。
【請求項３８】
鞘タンパク質または膜糖脂質複合体が、病原性微生物の特異的抗原成分として用いられる、請求項３６または請求項３７に記載の使用。
【請求項３９】
アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の１つの阻害剤または数個の阻害剤、ならびに１つまたは数個の薬理学的に許容可能な（unobjectionable）担体、添加剤および／または補助物質（単数または複数）を含む薬学的配合物。
【請求項４０】
アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の１つの阻害剤または数個の阻害剤および病原性自己抗原のペプチド断片または合成類似体および／または病原性微生物の特異的抗原成分、ならびに１つまたは数個の薬理学的に許容可能な担体、添加剤および／または補助物質（単数または複数）を含む薬学的配合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｔｒｅｇ細胞中および／またはＴｒｅｇ細胞上におけるＴＧＦ−β１の産生およびＴＧＦ−β１の発現を誘導するための、アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の１つの阻害剤または数個の阻害剤の使用に関し、自己免疫疾患、アレルギー、動脈硬化症を予防および／または治療するための、および移植片拒絶反応を抑制するための上記使用に関する。さらに本発明は、病原性自己抗原のペプチド断片または合成類似体および／または病原性微生物の特異的抗原成分がさらに用いられる、上記阻害剤の使用に関する。上記酵素の阻害剤と疾患に対して特異的な抗原との合同投与は、病原性Ｔ細胞クローンに対する上記阻害剤の効果を増進させ、免疫状態によって引き起こされる疾患の特異的治療に好適である。
【背景技術】
【０００２】
例えばＩ型糖尿病または多発性硬化症のような、自己免疫病原を有する疾患の過程は、自己反応性免疫細胞（すなわち、自身の体の抗原に対する免疫細胞）、特に自己反応性Ｔリンパ球の活性化および増殖に基づく、またはそれから成るということが既に知られている。類似のメカニズムが組織移植後の拒絶反応の発生において普通に起こる（prevail）が、後者の場合において、「自己抗原」でなく、ドナーの組織の「外来抗原」が致死的免疫応答の発生を主に担うという違いがある。両者の場合において、すなわち、自己免疫疾患の場合および移植片拒絶反応の場合においてもまた、自身の体の抗原または移植片組織から出現する抗原のいずれかである抗原に対する免疫系の「耐性」の望ましくない破壊がある。アレルギー疾患における過剰免疫反応に関して、類似の説明が妥当である。
【０００３】
可溶性（ａ）または膜配置ＴＧＦ−β１（ｂ）を介した自己反応性Ｔ細胞の阻害を図５に示す。Ｔｒｅｇ上の膜配置ＴＧＦ−β１は、ＴＧＦ−β１レセプターへ結合することによって（細胞−細胞−接触）、自己反応性Ｔ細胞に対して直接的な阻害効果を有する（図５（ｂ）上）。上記細胞接触は、Ｔｒｅｇおよび自己反応性Ｔ細胞と抗原提示細胞（ＡＰＣ、特に樹枝状細胞）との同時結合によって達成され得る。一方、ＡＰＣは、その後自己反応性Ｔ細胞結合が活性化されないように、先行のＴｒｅｇとＡＰＣとの結合（共刺激シグナルの欠如）に変えられ得る（アネルギー）。両者の場合において、Ｔｒｅｇおよび自己反応性Ｔ細胞は、同一の抗原特異性という特徴がある（図５（ｂ）下）。
【０００４】
上記「耐性」は、自己反応性Ｔリンパ球をその機能およびその成長に対して積極的に抑制することによって健康な体で維持される、ということを近年の科学的知見が示す。これは、特異的抑制性Ｔ細胞集団、すなわち、いわゆるナチュラル制御性（natural regulatory）Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞）によって達成される。Ｔｒｅｇ細胞は、胸腺で生成され［K.
Kawahata et al., J. Immunol. 168: 4399-4405, 2002］、末梢血中におけるＴ細胞の５〜１０％の割合を占める。Ｔｒｅｇ細胞は、直接的な細胞接触によって同一の抗原特異性のＣＤ４＋Ｔ細胞に対する抑制効果を有する。上記抑制効果は、Ｔｒｅｇ中／上におけるＴＧＦ−β１の強力な発現によって達成される。ＴＧＦ−β１は、Ｔｒｅｇの表面に存在し、自己反応性Ｔ細胞上のＴＧＦ−β１レセプターに結合する。これは、この強力な免疫抑制性サイトカインの作用の完全に新しいメカニズムである［Nakamura
et al., J. Exp. Med. 194: 629-644, 2001］。
【０００５】
Ｔｒｅｇ細胞は、「外来」抗原に対する免疫応答よりも効果的に自己免疫を阻害する［P. Romagnoli et al., J. Immunol. 168: 1644-1648, 2002］。したがって、Ｔｒｅｇ細胞の機能の制限または損失は、自己免疫疾患の発生に対して特別な病原的意義を有する。Ｔｒｅｇ細胞の数／機能と自己免疫疾患の発現との間の直接的な関連は、Ｉ型糖尿病［S.
Boudali et al., Eur. Cytokine Netw. 13: 29-37, 2002］; S. Gregory et al.,
Diabetes 51: 1367-1374, 2002］、自己免疫脳脊髄炎（多発性硬化症の動物モデル）[G. C. Furtado et al.,
Immunol. Rev. 182, 122-134, 2001; S. Muhallab et al., Scand. J. Immunol. 55,
264-273, 2002; N. H. Hamilton et al., Scand. J. Immunol. 55, 171-177, 2002]、「自己免疫卵巣疾患」（ＡＯＤ）［K.
S. Tung et al., Immunol. Rev. 182: 135-148, 2001］に関して、ならびにクローン病［M. F. Neurath
et al., J. Exp. Med. 195: 1129-1143, 2002］において示された。
【０００６】
さらにＴｒｅｇ細胞は、腸または肺の炎症の抑制も担う［B. Singh
et al., Immunol. Rev. 182, 190-200, 2001; S. Hori et al., Eur. J. Immunol. 32:
1282-1291, 2002］。同様に、同種異系（外来）組織移植後の拒絶反応の抑制におけるＴｒｅｇ細胞の役割が明確に証明される［C. I. Kingsley
et al., J. Immunol. 168: 1080-1086, 2002; P. A. Taylor et al., Blood 99:
3493-3499, 2002; E. Chiffoleau et al., J. Immunol. 168: 5058-5069, 2002］。Ｔｒｅｇ細胞のこれら全ての免疫抑制性機能に共通なのは、高い抗原特異性という特徴があること、すなわち、Ｔｒｅｇ細胞の各クローンは特異的抗原に対するものであり、通常の生理的条件下において同一の抗原特異性の自己反応性Ｔ細胞を抑制することである。免疫疾患の場合において、Ｔｒｅｇ細胞の上記機能が失われ、（Ｉ型糖尿病の場合において）膵臓β細胞のタンパク質に対するクローンのようなＴ細胞の自己反応性クローンは、自己免疫疾患の発症を引き起こす。
【０００７】
一方、上記抗原特異性は、Ｔｒｅｇ細胞の数／機能を増加／増進することによって治療的に用いられ、或いはｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏでＴｒｅｇ細胞（またはＴｒｅｇ細胞を活性化する樹枝状細胞）の目標の「抗原特異的」活性化によってＴｒｅｇ細胞を回収し得る。この目的を達成するために、「抗原」の経口投与も好適である［Zhang et al., J. Immunol. 167: 4245-4253, 2001］。しかしながら、上記抗原の調製は、技術的観点から時間や費用が非常にかかり、抗原特異的Ｔ細胞クローンに制限される。
【０００８】
免疫過敏性の制御に対するＴＧＦ−β１の特別な役割は、遺伝的操作によって引き起こされるＣＤ４＋細胞におけるＴＧＦ−β１の過剰産生がクール（治療単位）を抑制できるということを示す２つの最近の出版物によって強調される。喘息の場合において、Ｔｈ２細胞は病原に明らかに関与するので、したがって、Ｔｈ２細胞の病原性クローンの機能はＴＧＦ−β１の遺伝形質転換性過剰産生によって効果的に阻害され得る［G. Hansen et al., J. Clin. Invest. 105: 61-70, 2000; G. J. Thorbecke
et al., Cytokine Growth Factor Rev. 11: 89-96, 2000］。ＣＤ４＋またはＴｒｅｇ細胞におけるＴＧＦ−β１の産生を誘導するためのこれらのプロセスの欠点は、遺伝的操作を必要とすることであり、これは一方では非常に高価であり、他方ではヒトまたは動物への薬理学的利用に好適でない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、Ｔｒｅｇ細胞中／上においてＴＧＦ−β１の産生および発現を誘導するための効果的な方法を提供することを目的とし、さらにこの方法は、自己免疫疾患、アレルギー、動脈硬化症の予防および／または治療、ならびにヒトまたは動物における移植片拒絶の抑制に好適である。さらなる目的は、上記目的を達成することができる手段で相当する薬学的配合物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
驚くべきことに、アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の阻害剤は、Ｔｒｅｇ細胞中および／またはＴｒｅｇ細胞上におけるＴＧＦ−β１の産生およびＴＧＦ−β１の発現を誘導し、したがって、自己免疫疾患、アレルギーおよび動脈硬化症の予防および治療に好適であり、移植片拒絶の抑制に貢献し得るということが発見された。
【００１１】
したがって、本発明は、Ｔｒｅｇ細胞中および／またはＴｒｅｇ細胞上におけるＴＧＦ−β１の産生およびＴＧＦ−β１の発現の誘導のための、アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の１つの阻害剤または数個の阻害剤の使用に関する。
【００１２】
アラニルアミノペプチダーゼの阻害および／または類似の基質特異性を有する酵素の阻害と、Ｔｒｅｇ細胞中および／またはＴｒｅｇ細胞上におけるＴＧＦ−β１の産生および表面発現の誘導との間の関連は、今まで知られていなかった。
【００１３】
阻害剤としては、アラニルアミノペプチダーゼの全ての阻害剤および類似の基質特異性を有する酵素の全ての阻害剤が可能である。好ましくは、アクチノニン、ロイヒスチン、フェベスチン、アマスタチン、ベスタチン、プロベスチン、アルファメニン、ＭＲ３８７、β−アミノチオール、α−アミノホスフィン酸およびそのエステルならびに塩、α−アミノホスホン酸塩、α−アミノボロン酸、α−アミノアルデヒド、α−アミノ酸のヒドロキサム酸塩、Ｎ−フェニルフタルイミド、Ｎ−フェニルホモフタルイミド、α−ケトアミド、サリドマイドおよびその誘導体が用いられる。上記の化合物の中で特に好ましいのは、α−ケトアミド、α−アミノホスフィン酸、Ｎ−フェニルホモフタルイミド、α−アミノホスホン酸塩およびフェベスチンであり、この場合、α−ケトアミドとしては３−アミノ−２−オキソ−４−フェニルブタン酸アミドが特に好ましく、α−アミノホスフィン酸としてはＤ−Ｐｈｅ−γ［ＰＯ（ＯＨ）−ＣＨ２］−Ｐｈｅ−Ｐｈｅが特に好ましく、Ｎ−フェニルホモフタルイミドとしてはＰＡＱ−２２が特に好ましく、α−アミノホスホン酸塩としてはＲＢ３０１４および／またはフェベスチンが特に好ましく、ＰＡＱ−２２、ＲＢ３０１４および／またはフェベスチンがさらにより好ましく用いられる。
【００１４】
製剤学（galenics）に関してアクセスが容易なこと、低価格であること、および加工性が単純であることは、好ましい阻害剤および特に好ましい阻害剤にとって特に都合が良い。
【００１５】
アラニルアミノペプチダーゼと類似の基質特異性を有する酵素としては、細胞質ゾルのアラニルアミノペプチダーゼが一例として挙げられる。細胞質ゾルのアラニルアミノペプチダーゼにとって、ＰＡＱ−２２が特異的阻害剤である。したがって、細胞質ゾルのアラニルアミノペプチダーゼの好ましい阻害剤として、ＰＡＱ−２２が用いられるか、またはＰＡＱ−２２を含む数個の阻害剤の混合物が用いられる。
【００１６】
膜配置（membrane-located）アラニルアミノペプチダーゼ（ＡＰＮ、ＣＤ１３、Ｅ．Ｃ．３．４．１１．２）の酵素活性の阻害、または類似の基質特異性または阻害剤感度を有する酵素（例えば、細胞質ゾルのアラニルアミノペプチダーゼのような、ｚＡＡＰ、ＰＳＡ、Ｅ．Ｃ．３．４．１１．１４）の阻害は、Ｔｒｅｇ細胞中のＴＧＦ−β１の遺伝子発現ならびに制御性細胞中／上における免疫抑制性サイトカインＴＧＦ−β１（「形質転換成長因子β１」）の発現を増加させる。Ｔｒｅｇ細胞上のＴＧＦ−β１の産生、特に表面発現の上記誘導はＴｒｅｇ細胞の機能の強化および制限を選択的に引き起こし、Ｔｒｅｇ細胞上のＴＧＦ−β１の発現と自己反応性Ｔリンパ球への阻害効果との間の上記関連に起因して、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギーならびに組織移植後の移植片拒絶反応の過程におけるＴｒｅｇ細胞の機能的欠損の存在を克服するのに好適であり、したがって、これらの疾患の予防を可能にする、および／またはこれらの疾患の過程や重篤性を改善する、および／またはこれらの疾患を治療するのに好適である。これら全ての疾患および組織移植後の拒絶反応も、十分に効果的なナチュラル免疫抑制性原理（natural
immunosuppressive principle）の欠乏、すなわち、ＴＧＦ−β１の欠損産生を含む十分に機能的でない免疫制御性細胞という特徴がある。本発明によるＴＧＦ−β１の誘導は、Ｔ細胞の単一の抗原特異性クローンに制限されない。
【００１７】
したがって、本発明は、自己免疫疾患の予防および／または治療のための、アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の１つの阻害剤または数個の阻害剤の使用にも関する。本発明によると、関節リウマチ、紅斑性狼瘡、多発性硬化症、ＩＤＤＭ（インシュリン依存型糖尿病）、クローン病、潰瘍性大腸炎、乾癬、神経皮膚症、糸球体腎炎、間質性腎炎、血管炎、甲状腺の自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血または例えば動脈硬化症のような炎症の発生を有する他の慢性疾患の予防および／または治療のための使用が好ましい。特に、多発性硬化症または動脈硬化症を予防および／または治療するための使用が好ましい。
【００１８】
本発明によると、アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の１つの阻害剤または数個の阻害剤も、Ｉ型（ＧｅｌｌとＣｏｏｍｂｓによる）のアレルギー、またはＩＩ、ＩＩＩもしくはＩＶ型のアレルギーの予防および／または治療のために用いられる。これに関連して、Ｉ型（ＧｅｌｌとＣｏｏｍｂｓによる）のアレルギーとして気管支喘息または花粉症および／またはＩＩ、ＩＩＩもしくはＩＶ型のアレルギーとして接触アレルギーの予防および／または治療のための使用が好ましい。
【００１９】
さらに本発明は、移植片拒絶反応の抑制のための、好ましくは腎臓または骨髄の移植手術の過程における、アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の１つの阻害剤または数個の阻害剤の使用に関する。
【００２０】
自己免疫疾患、アレルギーおよび花粉症の予防および／または治療において、ならびに移植片拒絶反応の抑制において、アラニルアミノペプチダーゼの全ての阻害剤および類似の基質特異性を有する酵素の全ての阻害剤が好適な阻害剤であると考えられる。用いられる阻害剤は、アクチノニン、ロイヒスチン、フェベスチン、アマスタチン、ベスタチン、プロベスチン、アルファメニン、ＭＲ３８７、β−アミノチオール、α−アミノホスフィン酸およびそのエステルならびに塩、α−アミノホスホン酸塩、α−アミノボロン酸、α−アミノアルデヒド、α−アミノ酸のヒドロキサム酸塩、Ｎ−フェニルフタルイミド、Ｎ−フェニルホモフタルイミド、α−ケトアミド、サリドマイドおよびその誘導体が好ましい。上記化合物の中で特に好ましいのは、α−ケトアミド、α−アミノホスフィン酸、Ｎ−フェニルホモフタルイミド、α−アミノホスホン酸塩およびフェベスチンであり、この場合、α−ケトアミドとしては３−アミノ−２−オキソ−４−フェニルブタン酸アミドが特に好ましく、α−アミノホスフィン酸としてはＤ−Ｐｈｅ−γ［ＰＯ（ＯＨ）−ＣＨ２］−Ｐｈｅ−Ｐｈｅが特に好ましく、Ｎ−フェニルホモフタルイミドとしてはＰＡＱ−２２が特に好ましく、α−アミノホスホン酸塩としてはＲＢ３０１４および／またはフェベスチンが特に好ましく、ＰＡＱ−２２、ＲＢ３０１４および／またはフェベスチンがさらにより好ましく用いられる。
【００２１】
アラニルアミノペプチダーゼと類似の基質特異性を有する酵素としては、細胞質ゾルのアラニルアミノペプチダーゼが一例として挙げられる。細胞質ゾルのアラニルアミノペプチダーゼにとって、ＰＡＱ−２２が特異的阻害剤である。したがって、細胞質ゾルのアラニルアミノペプチダーゼの好ましい阻害剤として、ＰＡＱ−２２が用いられるか、またはＰＡＱ−２２を含む数個の阻害剤の混合物が用いられる。
【００２２】
Ｔｒｅｇ細胞クローンの高い抗原特異性に起因して、アミノペプチダーゼ阻害剤と疾患を引き起こす各抗原、例えば、多発性硬化症の場合に対する「ミエリン塩基性タンパク質」の抗原ペプチドとの合同投与は、病原性細胞クローンの阻害はこの経路において目標のかつ特異的な方法で引き起こされるため、治療にとって特に好適であるようである。実際に、抗原特異的免疫抑制は副作用がない［Zhang et al., J. Immunol. 167: 4245-4253, 2001］。
【００２３】
したがって、本発明は、Ｔｒｅｇ細胞中および／またはＴｒｅｇ細胞上におけるＴＧＦ−β１の産生およびＴＧＦ−β１の発現の誘導のための、および自己免疫疾患、アレルギー、花粉症、動脈硬化症の予防および／または治療のための、ならびに移植片拒絶反応の抑制のための、アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の阻害剤の使用にも関し、この場合、病原性自己抗原のペプチド断片または合成類似体および／または病原性微生物の特異的抗原化合物がさらに用いられる。上記当該阻害剤および好ましい阻害剤および特に好ましい阻害剤、ならびに好ましい疾患および特に好ましい疾患は、病原性自己抗原のペプチド断片または合成類似体および／または病原性微生物の特異的抗原化合物がさらに用いられる場合の使用においても好ましい。多発性硬化症に対する好ましい病原性自己抗原のペプチド断片は、ＭＢＰ（ミエリン塩基性タンパク質）、ＭＯＧ（ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質）、ＭＡＧ（ミエリン関連糖タンパク質）およびＰＬＰ（プロテオリピドタンパク質）である。好ましい病原性微生物の特異的抗原成分は、鞘タンパク質または膜糖脂質複合体である。
【００２４】
製剤学（galenics）に関してアクセスが容易なこと、低価格であること、および加工性が単純であることは、好ましい阻害剤および特に好ましい阻害剤にとって特に都合が良い。
【００２５】
したがって、本発明は、Ｔｒｅｇ細胞中および／またはＴｒｅｇ細胞上におけるＴＧＦ−β１の産生およびＴＧＦ−β１の発現の誘導のための薬物または薬学的配合物の製造のための、アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の１つの阻害剤または数個の阻害剤の使用にも関する。
【００２６】
阻害剤としては、アラニルアミノペプチダーゼの全ての阻害剤および類似の基質特異性を有する酵素の全ての阻害剤が可能である。好ましくは、アクチノニン、ロイヒスチン、フェベスチン、アマスタチン、ベスタチン、プロベスチン、アルファメニン、ＭＲ３８７、β−アミノチオール、α−アミノホスフィン酸およびそのエステルならびに塩、α−アミノホスホン酸塩、α−アミノボロン酸、α−アミノアルデヒド、α−アミノ酸のヒドロキサム酸塩、Ｎ−フェニルフタルイミド、Ｎ−フェニルホモフタルイミド、α−ケトアミド、サリドマイドおよびその誘導体が用いられる。上記の化合物の中で特に好ましいのは、α−ケトアミド、α−アミノホスフィン酸、Ｎ−フェニルホモフタルイミド、α−アミノホスホン酸塩およびフェベスチンであり、この場合、α−ケトアミドとしては３−アミノ−２−オキソ−４−フェニルブタン酸アミドが特に好ましく、α−アミノホスフィン酸としてはＤ−Ｐｈｅ−γ［ＰＯ（ＯＨ）−ＣＨ２］−Ｐｈｅ−Ｐｈｅが特に好ましく、Ｎ−フェニルホモフタルイミドとしてはＰＡＱ−２２が特に好ましく、α−アミノホスホン酸塩としてはＲＢ３０１４および／またはフェベスチンが特に好ましく、ＰＡＱ−２２、ＲＢ３０１４および／またはフェベスチンがさらにより好ましく用いられる。
【００２７】
アラニルアミノペプチダーゼと類似の基質特異性を有する酵素としては、細胞質ゾルのアラニルアミノペプチダーゼが一例として挙げられる。細胞質ゾルのアラニルアミノペプチダーゼにとって、ＰＡＱ−２２が特異的阻害剤である。したがって、細胞質ゾルのアラニルアミノペプチダーゼの好ましい阻害剤として、ＰＡＱ−２２が用いられるか、またはＰＡＱ−２２を含む数個の阻害剤の混合物が用いられる。
【００２８】
本発明は、自己免疫疾患、例えば花粉症のようなＩ型（ＧｅｌｌとＣｏｏｍｂｓによる）のアレルギー、ＩＩ、ＩＩＩもしくはＩＶ型のアレルギーの予防および／または治療のための薬物または薬学的配合物の調製のための、アラニルアミノペプチダーゼと類似の基質特異性を有する酵素の１つの阻害剤または数個の阻害剤の使用にも関し、移植片拒絶反応を抑制するための薬物または薬学的配合物の調製のための使用にも関する。移植の好ましい疾患および型は、従属請求項２６、２７、２９および３１に記載されている。アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の好ましい阻害剤は、請求項３２〜３５に記載されている。
【００２９】
アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の１つの阻害剤または数個の阻害剤が、自己免疫疾患、例えば花粉症のようなＩ型（ＧｅｌｌとＣｏｏｍｂｓによる）のアレルギー、ＩＩ、ＩＩＩもしくはＩＶ型のアレルギーの予防および／または治療のための薬物または薬学的配合物を調製するために、および移植片拒絶反応を抑制するための薬物または薬学的配合物を調製するために用いられる場合、多発性硬化症に対する病原性自己抗原のペプチド断片または合成類似体および／または病原性微生物の特異的抗原成分がさらに用いられ得るが、この場合、ＭＢＰ（ミエリン塩基性タンパク質）、ＭＯＧ（ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質）、ＭＡＧ（ミエリン関連糖タンパク質）および／またはＰＬＰ（プロテオリピドタンパク質）が病原性自己抗原のペプチド断片として用いられるのが好ましく、鞘タンパク質または膜糖脂質複合体が病原性微生物の特異的抗原成分として用いられる。
【００３０】
さらに本発明は、アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の１つの阻害剤または数個の阻害剤、ならびに１つまたは複数の薬理学的に許容可能な担体、添加剤および／または補助物質（単数または複数）を含む薬学的配合物に関する。本発明は、アラニルアミノペプチダーゼおよび／または類似の基質特異性を有する酵素の１つの阻害剤または数個の阻害剤、および病原性自己抗原のペプチド断片または合成類似体および／または病原性微生物の特異的抗原成分、ならびに１つまたは複数の薬理学的に許容可能な担体、添加剤および／または補助物質（単数または複数）を含む薬学的配合物にも関する。
【００３１】
本発明は、上記酵素または相当する薬学的配合物の阻害剤の投与ならびにその投与形態は、病原性Ｔ細胞クローンの増殖および活性化が最も重要である発生にとって、炎症性疾患および自己免疫疾患ならびに同種異系拒絶反応およびアレルギーの治療に好適であるということを示す。各疾患に対して特異的な抗原の同時投与は、上記効果をさらに増進させ、病原性関連の過程に対する効果を制限する。
【００３２】
Ｔｒｅｇ細胞中／上におけるＴＧＦ−β１発現の誘導のための、したがって、この病原的に重要な抑制性Ｔ細胞集団の免疫抑制性機能の増進のためのアミノペプチダーゼ阻害剤の投与は、上記疾患に関して中心的な病原的過程と組み合わせた（meshing）新規の方法および治療の補足的形態である。
【００３３】
アラニルアミノペプチダーゼの１つの阻害剤または数個の阻害剤は、阻害剤、基質、偽基質、阻害剤有効性（effective）ペプチドおよびペプチド誘導体、ならびに上記酵素に対する抗体として、薬学的に許容可能な製剤複合体において適用され得る。好ましい阻害剤は、ベスタチン、フェベスチン、プロベスチン、アクチノニン、ロイヒスチン、ＲＢ３０１４、ＰＡＱ−２２、およびそれらの誘導体であり、特に好ましいのはフェベスチン、ＲＢ３０１４および／またはＰＡＱ−２２である。
【００３４】
投与は、好適な配合物および好適な製剤学的形態において、例えば、クリーム、軟膏、ペースト、ジェル、溶液、スプレー、リポソーム、ローション（振盪混合物（shaken mixture））、親水コロイドドレッシング、および点滴投与等の他の皮膚科学的基剤／賦形剤の形態での局所投与のような、または経口、経皮、静脈内、皮下、皮内、吸入、筋肉内投与のための全身投与のような全ての好適な形態で、または血液脳関門を通過するために微粒子に結合もしくは微粒子に含まれて行われ得る。同時に、ある疾患に対して「特異的」抗原（ペプチド断片、リポ多糖等）の、相当する投与形態における投与は、治療の成功を改善し得る。
【００３５】
本発明は、以下の実施例においてより詳細に説明されるが、本発明は下記実施例に限定されない。
【００３６】
〔実施例１〕
阻害剤フェベスチンとのインキュベート後のヒト制御性Ｔリンパ球（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋）上におけるＴＧＦ−β１の表面発現の誘導
Ｔ細胞を、何も添加せずに（コントロール）、ＰＨＡとＰＭＡとを添加して、およびＰＨＡ／ＰＭＡとフェベスチンとを同時に添加して、２４時間インキュベートした。ＰＨＡ（フィトヘムアグルチニン）およびＰＭＡ（フォルボールミリステートアセテート）を分裂促進剤および増殖刺激剤として使用した。次いで、市販のポリクローナル抗ＴＧＦ−β１抗体（ニワトリ抗ヒト；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、ＴＧＦ−β１の表面発現をフローサイトメトリーによって測定した。結果を図１に示す。
【００３７】
〔実施例２〕
阻害剤フェベスチンとのインキュベート後のヒト制御性Ｔリンパ球（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋）中におけるＴＧＦ−β１の遺伝子発現の誘導
Ｔ細胞を、何も添加せずに（コントロール）、ＰＨＡとＰＭＡとを添加して、またはＰＨＡ／ＰＭＡとフェベスチンとを同時に添加して、２４時間インキュベートした。ＰＨＡ（フィトヘムアグルチニン）およびＰＭＡ（フォルボールミリステートアセテート）を分裂促進剤および増殖刺激剤として使用した。次いで、ＴＧＦ−β１−ｍＲＮＡ含量を、定量ＲＴ−ＰＣＲによって、ｉサイクラーを用いて定量した。結果を図２に示す。
【００３８】
〔実施例３〕
阻害剤ＰＡＱ−２２とのインキュベート後のヒト制御性Ｔリンパ球（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋）中におけるＴＧＦ−β１の遺伝子発現の誘導
Ｔ細胞を、何も添加せずに（コントロール）、ＰＨＡとＰＭＡとを添加して、またはＰＨＡ／ＰＭＡとＰＡＱ−２２とを同時に添加して、２４時間インキュベートした。ＰＨＡ（フィトヘムアグルチニン）およびＰＭＡ（フォルボールミリステートアセテート）を分裂促進剤および増殖刺激剤として使用した。次いで、ＴＧＦ−β１−ｍＲＮＡ含量を、定量ＲＴ−ＰＣＲによって、ｉサイクラーを用いて定量した。結果を図３に示す。
【００３９】
〔実施例４〕
アミノペプチダーゼ阻害剤ＲＢ３０１４とのインキュベート後のヒト制御性Ｔリンパ球（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋）中におけるＴＧＦ−β１の遺伝子発現の誘導
Ｔ細胞を、何も添加せずに（コントロール）、ＰＨＡとＰＭＡとを添加して、またはＰＨＡ／ＰＭＡとＲＢ３０１４とを同時に添加して、７２時間インキュベートした。ＰＨＡ（フィトヘムアグルチニン）およびＰＭＡ（フォルボールミリステートアセテート）を分裂促進剤および増殖刺激剤として使用した。次いで、ＴＧＦ−β１−ｍＲＮＡ含量を、定量ＲＴ−ＰＣＲによって、ｉサイクラーを用いて定量した。結果を図４に示す。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】ヒト制御性Ｔリンパ球上におけるＴＧＦ−β１の表面発現の誘導を示す図。
【図２】ヒト制御性Ｔリンパ球上におけるＴＧＦ−β１  ｍＲＮＡ発現の誘導を示す図。
【図３】ヒト制御性Ｔリンパ球上におけるＴＧＦ−β１  ｍＲＮＡ発現の誘導を示す図。
【図４】ヒト制御性Ｔリンパ球上におけるＴＧＦ−β１  ｍＲＮＡ発現の誘導を示す図。
【図５】可溶性（ａ）または膜配置ＴＧＦ−β１（ｂ）を介した自己反応性Ｔ細胞の阻害を示す図（図面は「Nature Reviews in Immunology 2: 46-53 (2002)」より）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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