(57)【要約】  本発明は、ＩＦＮ−γ、サイトカインアンタゴニスト及び／又は抗エストロゲン剤の投与を含む子宮内膜症のための女性の治療に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
子宮内膜症に罹患しているか又は罹患しやすい女性を治療する方法であって、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）の有効量を前記女性に投与することを含む方法。
【請求項２】
子宮内膜症に罹患しているか又は罹患しやすい女性を治療する方法であって、サイトカインアンタゴニストの有効量を前記女性に投与することを含む方法。
【請求項３】
子宮内膜症に罹患しているか又は罹患しやすい女性を治療する方法であって、ＩＦＮ−γとサイトカインアンタゴニストとの組み合わせの治療有効量を投与することを含む方法。
【請求項４】
子宮内膜症に罹患しているか又は罹患しやすい女性を治療する方法であって、抗エストロゲン剤と組み合わせてＩＦＮ−γの治療有効量を投与することを含む方法。
【請求項５】
子宮内膜症に罹患しているか又は罹患しやすい女性を治療する方法であって、抗エストロゲン剤と組み合わせてサイトカインアンタゴニストの治療有効量を投与することを含む方法。
【請求項６】
子宮内膜症に罹患しているか又は罹患しやすい女性を治療する方法であって、抗エストロゲン剤と組み合わせてＩＦＮ−γ及びサイトカインアンタゴニストの治療有効量を投与することを含む方法。
【請求項７】
抗エストロゲン剤が、アロマターゼ阻害剤である、請求項４、５又は６いずれか１項記載の方法。
【請求項８】
子宮内膜症の治療又は予防のための医薬組成物の調製における、薬学的に許容される担体と一緒のＩＦＮ−γの使用。
【請求項９】
子宮内膜症の治療又は予防のための医薬組成物の調製における、薬学的に許容される担体と一緒のサイトカインアンタゴニストの使用。
【請求項１０】
子宮内膜症の治療又は予防のための医薬組成物の調製における、薬学的に許容される担体と一緒のＩＦＮ−γとサイトカインアンタゴニストとの組み合わせの使用。
【請求項１１】
抗エストロゲン剤をさらに含む、請求項７、８、９又は１０のいずれか１項記載の使用。
【請求項１２】
抗エストロゲン剤が、アロマターゼ阻害剤である、請求項１１記載の使用。
【請求項１３】
ｉ）医薬が、女性における子宮内膜症の治療又は予防のため、有効な用量で、十分な期間にわたり投与され得ることを示すラベルを含む包装材料、及び
ii）前記包装材料中に含有される薬剤であって、その薬剤が、薬学的に許容される担体と一緒にＩＦＮ−γを含む薬剤、
を含む製品。
【請求項１４】
ｉ）医薬が、女性における子宮内膜症の治療又は予防のため、有効な用量で、十分な期間にわたり投与され得ることを示すラベルを含む包装材料、及び
ii）前記包装材料中に含有される薬剤であって、その薬剤が、薬学的に許容される担体と一緒にサイトカインアンタゴニストを含む薬剤、
を含む製品。
【請求項１５】
ｉ）医薬が、女性における子宮内膜症の治療又は予防のため、有効な用量で、十分な期間にわたり投与され得ることを示すラベルを含む包装材料、及び
ii）前記包装材料中に含有される薬剤であって、その薬剤が、薬学的に許容される担体と一緒にＩＦＮ−γとサイトカインアンタゴニストとの組み合わせを含む薬剤、
を含む製品。
【請求項１６】
サイトカインアンタゴニストが、腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド、ＯＸ４０リガンド、リンホトキシンアルファ、インターロイキン１アルファ、インターロイキン−１ベータ、インターロイキン−６、インターロイキン−８、インターロイキン−１１、白血病阻害因子、Ｆａｓリガンド、オンコスタチンＭ、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インスリン成長因子−１、幹細胞因子及びヒト成長ホルモンに対するアンタゴニストからなる群より選択される、請求項２、３、５、６、１９、１０、１４又は１５のいずれか１項記載の方法。
【請求項１７】
サイトカインアンタゴニストが腫瘍壊死因子に対するアンタゴニストである、請求項３、５又は６のいずれか１項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の背景：
子宮内膜症とは、生殖年齢の女性に影響を与える疾患である。その名称は、子宮の内部を裏打ちしており、月経周期で毎月、肥厚し剥脱する組織である「子宮内膜」という語に由来する。子宮内膜症においては、子宮内膜様組織が、子宮外に、体内の他の場所に見い出される。これらの子宮外の位置において、子宮内膜組織は、「小結節」、「腫瘍」、「病変」、「移植物」又は「増殖物」と呼ばれるものへと進展する。これらの増殖は、疼痛、不妊及びその他の問題を引き起こし得る。
【０００２】
子宮内膜増殖の最も一般的な位置は、卵巣、卵管、子宮を支持している靱帯、膣と直腸との間の領域、子宮の外表面及び骨盤腔の内面を含む腹部である。腹部手術瘢痕、腸又は直腸、膀胱、膣、頚部及び外陰部（外性器）に、増殖が見い出される場合もある。
【０００３】
子宮内膜は、腹部外、肺、腕、大腿及びその他の位置にも見い出されているが、これらは一般的ではない。子宮内膜増殖は、一般に、悪性又は癌性ではない。しかしながら、ここ数十年で、子宮内膜症と併せて発生するか又は認識される悪性疾患の頻度が増加している。子宮の内面と同様に、子宮内膜増殖は、通常、月経周期のホルモンに応答する。それらは、毎月、組織を肥厚させ、崩壊させ、出血を引き起こす。
【０００４】
しかしながら、子宮の内面とは異なり、子宮外の子宮内膜組織は、体内から排出される手段を有しない。その結果は、内出血、増殖物から剥脱された血液及び組織の変性、周囲の領域の炎症、並びに瘢痕組織形成である。その他の合併症は、増殖の位置に依るが、（新たな場所へと子宮内膜症を拡大させる可能性のある）増殖物の破裂、癒着の形成、腸の出血又は閉塞（増殖物が腸内又は腸の付近にある場合）、膀胱機能の妨害（増殖物が膀胱上又は膀胱内にある場合）、及びその他の問題であり得る。寛解及び再発の周期がパターン化されている症例もあるが、症状は次第に悪化するようである。
【０００５】
症状：
子宮内膜症の最も一般的な症状は、生理前及び生理中の疼痛（通常、「正常な」月経性痙攣より激しい）、性行為中又は後の疼痛、不妊、並びに多量の又は不規則な出血である。その他の症状は、疲労；生理時の痛みを伴う腸運動；生理時の腰痛；生理時の下痢及び／又は便秘並びにその他の腸の不調を含み得る。症状のない子宮内膜症を有する女性も存在する。不妊は、子宮内膜症を有する女性の約３０〜４０％に影響を与えており、疾患の進行による一般的な結果である。
【０００６】
疼痛の量は、増殖物の程度又はサイズと必ずしも関係していない。小さな増殖物（「点状出血」と呼ばれる）は、プロスタグランジン生成活性が比較的高いことが見い出されており、それが、小さな移植物によってしばしば起こるようである著しい症状を説明し得る。プロスタグランジンは、全身で産生されており、多数の機能に関与しており、そして子宮内膜症の症状の多くを引き起こしていると考えられている物質である。
【０００７】
子宮内膜症の原因についての説：
子宮内膜症の原因は不明である。多くの説が提起されているが、あらゆる症例の理由となるものはないようである。一つの説は、月経中に、月経組織の一部が卵管を逆流し、腹部に移植され、そして成長するという逆行性月経説又は経管移動（transtubal migration）説である。もう一つの説は、子宮内膜組織が子宮から身体の他の部分にリンパ系又は血液系を通って分布することを示唆している。遺伝学的な説は、それがある種の家系の遺伝子に保持されていること、又はある種の家系が子宮内膜症の素因を有していることを提唱している。
【０００８】
もう一つの説は、女性が胎児であった時からの組織の残遺物が、後に子宮内膜症へと進展すること、又は胎児期に有していた、ある種の情況下で生殖組織へと変換される能力を、成体組織が保持している場合があることを提唱している。腹部手術瘢痕に子宮内膜症が見い出された症例における原因として外科的移植も引用されているが、直接的な不慮の移植の可能性が低い場合であっても、そのような瘢痕にそれが見出されることはある。
【０００９】
全ての女性が月経組織の逆流を経験しており、子宮内膜症を発症する女性においては、免疫系の問題及び／又はホルモンの問題が、この組織の定着及び増殖を可能にすると考える子宮内膜症の専門家もいる。実際、エストロゲンが正常な子宮内膜の増殖を促進することも知られている。プロゲステロンにより対抗されていない慢性的なエストロゲン曝露は、子宮内膜癌の素因を与える子宮内膜過形成の発生をもたらし得る。子宮内膜癌の罹患率は、閉経後、特に、プロゲスチンによる同時治療なしにエストロゲン療法を受けていた女性において増加する。
【００１０】
治療：
子宮内膜症の治療は、年々変動してきているが、確実な処置は見出されていない。子宮摘出及び卵巣の除去が「最も信頼のおける」処置と考えられているが、研究から、高い継続／再発の率を見い出されている。子宮内膜症の疼痛のためには、通常、鎮痛薬が処方される。
【００１１】
子宮内膜症の最近の薬理学的療法は、不充分なホルモン環境が異所性組織の増殖を阻止するよう、エストロゲン生成をホルモンにより抑制することを必要とする。ホルモン治療は、エストロゲン及びプロゲステロン、プロゲステロン単独、テストステロン誘導体（ダナゾール）、並びに新薬であるＧｎＲＨ、即ちゴナドトロピン放出ホルモンを含む。全てのホルモン治療において、一部の女性にとっては副作用が問題となる。
【００１２】
子宮内膜症の処置のためのより大きな効力を有する治療薬の開発が、現在、必要とされている。
【００１３】
発明の概要：
本発明は、インターフェロン−ガンマ（即ち、ＩＦＮ−γ）が、脂肪細胞におけるアロマターゼ遺伝子の構成的転写及びサイトカイン誘導性転写を阻害し得るという予想外の発見に基づいており、従って、これらの細胞におけるエストロゲン生成を阻害する方法を提供する。従って、本発明は、子宮内膜症を処置するための新規の方法を提供する。
【００１４】
一態様において、本発明は、アロマターゼｍＲＮＡ転写を阻害し、その後の脂肪細胞からのエストラジオール生成を阻害する、治療有効量のＩＦＮ−γを女性に投与することを含む、子宮内膜症の処置を要する女性における子宮内膜症処置の方法を提供する。
【００１５】
本発明の方法において有用なＩＦＮ−γとして、天然型ＩＦＮ−γ、組換えＩＦＮ−γ及び例えば安定性を増大させるため修飾されたＩＦＮ−γなどが挙げられる。
【００１６】
もう一つの態様において、本発明は、サイトカインにより誘導されるアロマターゼｍＲＮＡ転写を阻害し、その後の脂肪細胞からのエストラジオール生成を阻害する、治療的に有効な量のサイトカインアンタゴニストを女性に投与することを含む、その必要がある女性における子宮内膜症を治療する方法を提供する。
【００１７】
本発明の方法において有用なサイトカインアンタゴニストは、可溶性サイトカイン受容体分子、抗サイトカイン抗体、及びサイトカイン受容体シグナル伝達を防止かつ／又は阻害する化合物を含む。脂肪細胞におけるサイトカインによるエストラジオール誘導を阻害するタンパク質、突然変異タンパク質（muteins）、タンパク質由来ペプチド、模倣体及び低分子薬物も、本発明において使用され得る。単独のサイトカインアンタゴニストを使用することも可能であるし、又は他のサイトカインアンタゴニストとの組み合わせを使用することも可能である。
【００１８】
好ましくは、サイトカインアンタゴニストは、腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、ＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０Ｌ）、リンホトキシンアルファ（ＬＴ−α）、インターロイキン−１−アルファ（ＩＬ−ｌ−α）、インターロイキン−１ベータ（ＩＬ−１β）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）、白血病阻害因子（ＬＩＦ）、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、オンコスタチンＭ、インターフェロンアルファ（ＩＦＮ−ａ）、インターフェロンベータ（ＩＦＮ−β）、インスリン成長因子−１（ＩＧＦ−１）、幹細胞因子（ＳＣＦ）及びヒト成長ホルモン（ＧＨ）からなる群より選択されるサイトカインの阻害剤である。インターフェロン−ガンマのアンタゴニストは、本発明の趣旨からして、サイトカインアンタゴニストとして含まれるものとして見なされないことに留意することが重要である。
【００１９】
もう一つの態様において、ＩＦＮ−γは、サイトカインアンタゴニストの前、後又は同時に女性に投与される。
【００２０】
もう一つの態様において、ＩＦＮ−γ及び／又はサイトカインアンタゴニストは、他の何らかの抗エストロゲン治療法の前、後又は同時に女性に投与される。
【００２１】
本発明は、包装材料、及びその中に含有されている、女性における子宮内膜症の治療又は予防のため治療的に有効である薬剤を含む製品も特徴とする。包装材料は、薬剤が、子宮内膜症の治療及び／又は予防のため使用され得ることを示す表示を含み得る。薬剤は、有効量のＩＦＮ−γ又は有効量のサイトカインアンタゴニストを含む。一態様において、薬剤は、有効量のＩＦＮ−γとサイトカインアンタゴニストとの組み合わせを含む。
【００２２】
別態様において、本発明は、ＩＦＮ−γ又はサイトカインアンタゴニストを含む第一の子宮内膜症の治療用又は予防用の薬剤、及び第二の治療剤を含む組成物及びキットに関する。第二の治療剤は、ＩＦＮ−γ又はサイトカインアンタゴニストではない。これらの組成物は、女性における子宮内膜症を治療又は予防するのに有効である。アロマターゼ阻害剤のような抗エストロゲン剤を含む様々なクラスの治療剤が、組成物中に使用され得る。一態様において、第一の子宮内膜症の治療用又は予防用の薬剤は、有効量のＩＦＮ−γとサイトカインアンタゴニストとの組み合わせを含む。
【００２３】
本発明の他の面は、以下に開示される。
【００２４】
図面の説明
図１Ａは、ＩＦＮ−γが、ヒト脂肪細胞におけるＩＬ−１αによるエストラジオール生成の誘導を阻害することを示す図である。
図１Ｂは、ＩＦＮ−γが、ヒト脂肪細胞におけるＩＬ−１βによるエストラジオール生成の誘導を阻害することを示す図である。
図２は、ヒト脂肪細胞における構成性エストラジオール生成に対する組換えヒトＩＦＮ−γの用量依存的な阻害効果を示す図である。
図３は、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）が、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）又は腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）により転写が誘導された際のアロマターゼｍＲＮＡの転写を阻害することを示す図である。下パネルは、ハウスホールド遺伝子グリセロ−アルデヒドリン酸デヒドロゲナーゼ（glcero-aldehyde phosphate dehydrogenase）（ＧＡＰＤＨ）の転写を示している。対照レーンは、脂肪細胞におけるアロマターゼｍＲＮＡ発現の基底レベルを示している。
図４は、サイトカインの混合物により刺激されたヒト脂肪細胞からのエストラジオール生成に対するインターフェロン（ＩＦＮ）α、β及びγのディファレンシャルな効果を示す図である。ＩＦＮ−γは刺激された生成を阻害するが、ＩＦＮ−α又はＩＦＮ−βは刺激されたエストラジオール生成を阻害しない。
図５は、ＩＦＮ−γが、１５個のサイトカイン（ＩＬ−１ａ、ＩＬ−１ｂ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１１、ＧＨ、ＩＧＦ−１、ＬＩＦ、ＳＣＦ、ＦＡＳ、ＴＲＡＩＬ、ＯＸ４０Ｌ及びオンコスタチンＭ、各０．０１ug/ml）の混合物によるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の刺激を阻害することを示す図である。
図６は、ＩＦＮ−γが、ＬＰＳによるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の刺激を阻害することを示す図である。
図７は、ＩＦＮ−γが、ＰＭＡ（５ng/ml）、ＬＰＳ（１０ug/ml）及びＰＧＥ２（１０ug/ml）の混合物によるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の刺激を阻害することを示す図である。
図８は、サイトカイン腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、ＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０Ｌ）、インターロイキン−１−ベータ（ＩＬ−１−β）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）及び白血病阻害因子（ＬＩＦ）が、全て、アロマターゼｍＲＮＡ発現を誘導し、これらの全てのサイトカインによるアロマターゼｍＲＮＡ発現の誘導がＩＦＮ−γにより阻害されることを示す図である。
図９は、サイトカイン（ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１１、ＯＳＭ、ＧＨ及びＩＧＦ−１）が、ヒト前脂肪細胞におけるエストラジオール生成を刺激することを示す図である。
図１０は、オンコスタチンＭに対するモノクローナル抗体が、オンコスタチンＭによるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の誘導を阻害することを示す図である。
図１１は、ＩＬ−１１に対するモノクローナル抗体が、ＩＬ−１１によるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の誘導を阻害することを示す図である。
図１２は、インターフェロンアルファ／ベータ受容体（ＩＦＮＡＲ）が、ＩＦＮ−βによるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の誘導を阻害することを示す図である。
図１３Ａは、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ＲＡ）が、ＩＬ−１αによるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の誘導を阻害することを示す図である。
図１３Ｂは、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ＲＡ）が、ＩＬ−１βによるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の誘導を阻害することを示す図である。
【００２５】
以上の一般的な説明及び以下の詳細な説明は、いずれも、本発明を例証するものに過ぎず、請求の範囲に記載されるような本発明の性質及び特徴の理解のための概略又は枠組を提供するためのものである。
【００２６】
発明の詳細な説明
本発明は、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）が脂肪細胞におけるアロマターゼ遺伝子の転写を阻害するという予期せぬ発見に基づく。アロマターゼは、性ホルモン前駆物質アンドロステンジオンをエストロンへと変換するために必要とされる酵素であり、エストロンはその後エストロゲンへと修飾される。アロマターゼ酵素の機能が阻害されると、減少したレベルのエストロゲンが、細胞によってその前駆物質から生成し得るようになる。従って、本発明は、子宮内膜症の処置において有用であるＩＦＮ−γを投与することにより、エストロゲン生成を阻止する方法を提供する。
【００２７】
インターフェロン−ガンマは、非特異的な抗ウイルス効果、抗増殖効果を有し、特に、免疫調節効果を有する。Ｔ−ヘルパー−リンパ球におけるその生成は、分裂促進因子及び抗原により刺激される。発現されたＩＦＮ−γの効果は、まだ正確には解明されていないが、精力的な研究の対象となっている。特に、ＩＦＮ−γは、マクロファージの活性化、及びクラス２の組織適合性抗原の合成をもたらす。in vitroでは、ＩＦＮ−γの活性は、通常、インターフェロン−ガンマによる処理によって生じる、ウイルスにより誘導される細胞変性効果の低下として決定される。抗原非特異的抗ウイルス活性、抗増殖活性及び免疫調節活性のため、それは、例えば腎腫瘍及び慢性肉芽腫症のヒト治療剤として適当である。様々な腫瘍の臨床研究が、現在、実施されている。ＩＦＮ−γが脂肪細胞におけるエストラジオールの構成的生成及び誘導型の生成を阻害するという所見は、極めて予想外のものである。
【００２８】
生物学的活性を有することが示されている型のヒトＩＦＮ−γは、全て、本発明に従い使用され得る。これらの型は、天然起源から入手されたものであってもよいし、化学的に合成されたものであってもよいし又は組換えＤＮＡ技術により作製されたものであってもよい、成熟型、プロ（ｐｒｏ）型、メット（ｍｅｔ）型及び／又はデス（ｄｅｓ）（１−３）（ｄｅｓ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ  ＩＦＮ−γとも呼ばれる）を含む。ｃＤＮＡ配列及びアミノ酸配列を含む組換えヒトＩＦＮ−γ（ｒｈｕＩＦＮ−γ）の調製の完全な記載は、例えば、米国特許第４，７２７，１３８号；米国特許第４，７６２，７９１号；米国特許第４，９２５，７９３号；米国特許第４，９２９，５５４号；米国特許第５，５８２，８２４号；米国特許第５，０９６，７０５号；米国特許第４，８５５，２３８号；米国特許第５，５７４，１３７号；及び米国特許第５，５９５，８８８号に開示されている。様々に短縮された誘導体を含むＣｙｓＴｙｒＣｙｓ欠損組換えヒトＩＦＮ−γは、例えば、米国特許第５，５８２，８２４号に開示されている。本発明において有用なＩＦＮ−γは、当分野において既知のものであってもよいし、又は将来利用可能となるものであってもよい、様々にグリコシル化された型及びその他のバリアント（例えば、アミノ酸配列バリアント）並びにそのような天然型（野生型）ＩＦＮ−γの誘導体を含む。そのようなバリアントの例は、対立遺伝子、及び残基が欠失、挿入かつ／又は置換されている部位特異的突然変異誘発の産物である（例えば、先に言及された米国特許第５，５８２，８２４号参照）。本発明において有用なＩＦＮ−γは、極めて多様な商業的供給元より入手可能であり、多数の適応症の治療のため承認されている。
【００２９】
本発明に従い使用されるＩＦＮ−γは、天然起源に由来するものであってもよいが、好ましくは組換え産物である。本発明において有用なＩＦＮ−γは、ＩＦＮ−γ活性を有するポリペプチド又はその断片、並びに、米国特許第５，５９３，６６７号及び第５，５９４，１０７号に開示されたような、生物学的活性の性質に影響を与えることなく、例えば安定性を増強するための配列修飾が導入された、キメラ型又は変異型のＩＦＮ−γも含む。例えば、本発明において有用なＩＦＮ−γは、市販製剤アクティミューン（Actimmune）（登録商標）（InterMune, Inc., Brisbane, CA）の有効成分である組換えヒトＩＦＮ−γ種（１４０アミノ酸を含有している組換えヒトインターフェロンガンマ−ｌｂ、ｒｈＩＦＮ−γ−ｌｂ）であり得る。
【００３０】
本発明は、多くのサイトカインが脂肪細胞におけるアロマターゼ遺伝子の転写を誘導し、続いてエストラジオール生成を増加させるという所見にも基づいている。従って、本発明は、子宮内膜症の処置において有用である１つ以上のサイトカインアンタゴニストを投与することにより脂肪細胞エストロゲン生成を阻止する方法を提供する。
【００３１】
サイトカイン又はイムノサイトカイン（immunocytokine）という用語は、当初は、免疫伝達物質（immunotransmitter）とも呼ばれる一群の免疫調節タンパク質を、非免疫細胞の増殖及び生理活性を調節する他の成長因子から分離するために使用された。しかしながら、最近では、サイトカインという用語は、ナノ〜ピコモル濃度で体液性制御物質として作用し、正常又は病理学的な条件下で、個々の細胞及び組織の、酵素生成のような機能的活性を調節する、可溶性のタンパク質及びペプチドの多様な群に対する総称として使用されている。これらのタンパク質は、細胞間の相互作用も直接媒介し、細胞外環境で起こるプロセスも制御する。免疫応答の調節への関与のため、サイトカインは、可能性のある治療剤と見なされている。しかしながら、異なる腫瘍型に対しては異なる効果を有し得るサイトカインの効果を、他の免疫エフェクター細胞により二次的に媒介される効果と区別することは困難であった。
【００３２】
大部分のサイトカインが、古典的な分泌経路を使用して細胞により分泌される、シグナル配列を含む糖タンパク質である。サイトカインをコードする多くの遺伝子は、オルタナティブスプライシングによって多数のバリアント型のサイトカインを生じ、わずかに異なるが生物学的に重要な生理活性を有する分子を与えることができる。多くの場合、異なる型のサイトカイン又はサイトカインファミリーのメンバーの発現パターンは、部分的にしか重複しておらず、このことは、各因子の特異的な役割を示唆している。サイトカインの発現は、通常一過性であり、遺伝子発現のあらゆるレベルで制御され得るが、構成的発現も観察されている。多くのサイトカインの発現は、細胞型及び発達年齢に依っても、差別的に制御されているようである。
【００３３】
「サイトカインアンタゴニスト」という用語は、本明細書において使用されるように、例えば、実施例３の方法により決定されるようなサイトカインのアロマターゼｍＲＮＡ転写活性を阻害する任意の薬剤を意味し得る。そのような薬剤の例は、サイトカイン又はサイトカインの抗原性断片に対するポリクローナル抗体、モノクローナル抗体及びヒト化抗体を含む中和抗体；サイトカインをコードするｍＲＮＡの配列又は配列の断片に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチド；可溶性サイトカイン受容体又は修飾型可溶性サイトカイン受容体を非限定的に含む。例えば、ＩＬ−６は、ＩＬ−６抗体、ＩＬ−６受容体抗体、又は米国特許第６，０８６，８７４号に開示されたｇｐ１３０抗体を使用して阻害され得；ＬＩＦ、オンコスタチンＭ、及びＩＬ−６は、米国特許第５，８４４，０９９号に記載されたような、可溶性アルファ特異性決定サイトカイン受容体コンポーネントとベータ受容体コンポーネントの細胞外ドメインとを含むヘテロマータンパク質を使用しても阻害され得る。ＩＦＮ−γのアンタゴニストは、本発明の趣旨からして、サイトカインアンタゴニストとして含まれるものとは見なされないことに留意することが重要である。
【００３４】
サイトカインアンタゴニストは、好ましくは、実施例３のようなアッセイにおいてアロマターゼｍＲＮＡ転写を少なくとも５０％阻害する。より好ましくは、アンタゴニストは、アロマターゼｍＲＮＡ転写を７５％、最も好ましくは９５％阻害する。付加的なアンタゴニストは、例えば、実施例３のアッセイを使用して同定され試験され得る。
【００３５】
サイトカインアンタゴニストは、好ましくは、腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、ＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０Ｌ）、リンホトキシンアルファ（ＬＴ−α）、インターロイキン−１アルファ（ＩＬ−１−α）、インターロイキン−１ベータ（ＩＬ−１−β）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）、白血病阻害因子（ＬＩＦ）Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、オンコスタチンＭ、インターフェロンアルファ（ＩＦＮ−α）、インターフェロンベータ（ＩＦＮ−β）、インスリン成長因子−１（ＩＧＦ−１）、幹細胞因子（ＳＣＦ）及びヒト成長ホルモン（ＧＨ）からなる群より選択されるサイトカインの阻害剤である。
【００３６】
本発明のさらなる態様は、女性における子宮内膜症の治療及び／又は予防のための医薬組成物の調製における、医薬的に許容される担体と一緒のＩＦＮ−γ又はサイトカインアンタゴニストの使用である。医薬組成物は、抗エストロゲン剤も含んでもよい。
【００３７】
もう一つの態様において、インターフェロン−ガンマは、サイトカインアンタゴニストの前、後又は同時に女性に投与される。
【００３８】
もう一つの態様において、インターフェロン−ガンマ及び／又はサイトカインアンタゴニストは、抗エストロゲン剤の前、後又は同時に投与される。
【００３９】
サイトカインアンタゴニストをＩＦＮ−γ及び／又は抗エストロゲン剤と組み合わせる本発明の態様において、サイトカインアンタゴニストは、好ましくは、先に挙げたサイトカインの阻害剤、並びに欧州特許出願ＥＰ３０８，３７８；ＥＰ３９８，３２７及びＥＰ４３３，９００、並びに米国特許及び米国特許出願、米国特許第５，３５９，０３７号；米国特許第５，５１２，５４４号；米国特許第５，６９５，９５３号；米国特許第５，８１１，２６１号；米国特許第５，９８１，７０１号；米国特許第６，２３２，４４６号；米国特許第６，２６２，２３９号；及びＵＳ２００１００１９８３３Ａ１に記載されたような組織壊死因子結合タンパク質（ＴＢＰ）のような組織壊死因子（ＴＮＦ）の阻害剤である。
【００４０】
サイトカインアンタゴニストは、二つの様式のうちの一つで活性を発揮し得る。第一に、十分な親和性及び特異性でサイトカイン分子自体と結合して、又はそれを隔絶して、サイトカイン受容体結合を担うサイトカインエピトープを実質的に中和することができるアンタゴニストが存在する（以後、隔絶アンタゴニスト（sequestering antagonist）と呼ぶ）。又は、サイトカインは、サイトカイン結合後に細胞表面受容体により活性化されるサイトカインシグナル伝達経路を阻害することができる（以後、「シグナル伝達アンタゴニスト」と呼ぶ）。いずれの群のアンタゴニストも、単独で、又は一緒に、本発明のエストロゲン応答性乳癌（estrogen response breast cancer）の治療において有用である。
【００４１】
サイトカインアンタゴニストは、サイトカインが増殖及びＩｇ分泌を引き起こすことができるin vitroの感受性細胞系、例えばヒトＢ細胞における、天然型サイトカインの活性に対する効果に関する候補のルーチンスクリーニングにより、容易に同定され測定される。アッセイは、様々な希釈率、例えばアッセイにおいて使用されるサイトカインのモル量の０．１〜１００倍の候補アンタゴニストにおけるサイトカイン製剤、及びサイトカインを含まない対照又はアンタゴニストのみを含む対照を含有している（Ｔｕｃｃｉら、ヒトＢ細胞アッセイにおける１１個のサイトカイン並びにＩＬ−１α及び腫瘍壊死因子の阻害剤の効果（Effects of eleven Cytokines and of IL-1α and tumor necrosis factor inhibitors in a human B cell assay) J Immunol. １９９２年５月１日; 148(9):2778-84）。
【００４２】
隔絶アンタゴニストは、本発明における好ましいサイトカインアンタゴニストである。隔絶アンタゴニストのうち、高い親和性でサイトカインと結合し、かつ低い免疫原性を保有しているポリペプチドが好ましい。可溶性サイトカイン受容体分子及びサイトカインに対する中和抗体が、特に好ましい。受容体の細胞外ドメイン又はそれらの機能性部分を含むこれらの受容体の短縮型は、さらに特に好ましい本発明におけるアンタゴニストである。受容体分子の誘導体、断片、領域及び生物学的活性部分は、本発明において使用され得る受容体分子と機能的に似ている。そのような受容体分子の生物学的に活性な等価物又は誘導体とは、十分なサイズを有しており、かつ膜結合型サイトカイン受容体との相互作用が阻害又は阻止されるような親和性でサイトカインと結合することができる、該ポリペプチド又は受容体分子をコードする配列の部分をさす。
【００４３】
サイトカイン受容体多量体分子及びサイトカインイムノレセプター融合分子、並びにそれらの誘導体又は一部は、本発明の方法において有用な受容体分子のさらなる例である。本発明において有用なサイトカイン受容体多量体分子は、１個以上のポリペプチドリンカーを介して連結された２個以上のサイトカイン受容体の細胞外ドメインの全部又は機能性部分を含む。多量体分子は、さらに、多量体分子の発現を指図する分泌型タンパク質のシグナルペプチドを含み得る。
【００４４】
本発明の方法において有用なサイトカインイムノレセプター融合分子は、１個以上の免疫グロブリン分子の少なくとも一部と、１個以上のサイトカイン受容体の全部又は機能性部分とを含む。これらのイムノレセプター融合分子は、単量体、又はヘテロ多量体もしくはホモ多量体として組み立てられ得る。イムノレセプター融合分子は、一価又は多価であり得る。
【００４５】
本発明の方法において有用な隔絶アンタゴニストのもう一つのクラスは、ｉｎ  ｖｉｖｏでのサイトカインとの高親和性結合及び低い毒性を特徴とする、モノクローナル抗体、キメラヒト化抗体及び組換え抗体並びにそれらの断片を含む、抗サイトカイン抗体に代表される。本発明において使用され得る抗体は、良好〜優秀な子宮内膜症病変の寛解、症状の緩和及び低い毒性を有するのに十分な期間で患者を治療する能力を特徴とする。中和抗体は、サイトカインによる免疫感作により、ウサギ又はマウスのような動物において容易に作製される。
【００４６】
免疫感作されたマウスは、ハイブリドーマの製造のためのＢ細胞源を提供するために特に有用であり、そのハイブリドーマは、大量の抗サイトカインモノクローナル抗体を作製するために培養される。キメラ抗体は、異なる動物種に由来する２個以上のセグメント又は部分を特徴とする免疫グロブリン分子である。一般に、キメラ抗体の可変領域は、マウス（murine）モノクローナル抗体のような非ヒト雌抗体に由来し、免疫グロブリン定常領域は、ヒト免疫グロブリン分子に由来する。好ましくは、両方の領域及び組み合わせは、ルーチンに決定されるような低い免疫原性を有する（Elliottら、「関節リウマチにおける腫瘍壊死因子アルファに対するキメラモノクローナル抗体（ｃＡ２）対プラセボの無作為二重盲検比較（Randomised Double-blind Comparison of Chimeric Monoclonal Antibody to Tumor Necrosis Factor.alpha.(cA2) versus Placebo in Rheumatoid Arthritis)」, Lancet, 344: 1105-1110(1994）。ヒト化抗体は、マウス抗原結合領域を保持しつつ、マウス定常領域がヒト対応部分と交換された、遺伝子工学技術により創生された免疫グロブリン分子である。得られたマウス−ヒトキメラ抗体は、ヒトにおいて低下した免疫原性及び改良された薬物動態を有するはずである。
【００４７】
本明細書で使用されるように、「抗エストロゲン剤」は、ゲニステイン、ダイゼイン、ビオカニンＡ、フォルムオノネチン、並びに天然に存在するそれらのグルコシド及びグルコシドコンジュゲートより選択されるイソフラボン少なくとも１つと共に投与される、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、トレミフェン、４'−ヨードタモキシフェン及びイドキシフェンを、これらに限定されずに含む、例えば米国特許第６，３００，３６７号に記載されたようなエストロゲン受容体調節剤を含む。
【００４８】
抗エストロゲン剤の例は、ラロキシフェン及びタモキシフェンに代表される２−フェニル−３−ベンゾチオフェン類及び１−（アルキルアミノエトキシフェニル）−１−フェニル−２−フェニルブタ−１−エン類；４−ヒドロキシタモキシフェン；クロミフェン；ナフォキシジン（Upjohn&Co., 700 Portage Road, Kalamazoo, MI）；米国特許第５，５６７，８３１号に記載されたような非ステロイド性スルファターゼ阻害化合物；米国特許第５，５７１，９３３号のようなエストラ１，３，５（１０）−トリエン−１７−オン，３−アミノ化合物の誘導体；米国特許第６，２８８，０５０号に記載されたような抗エストロゲン性ステロイドスルファターゼ阻害剤を含むが、これらに限定されない。本発明において企図されるその他の抗エストロゲン剤は、トレミフェン、ドロロキシフェン、ＴＡＴ−５９、イドキシフェン、ＥＭ１３９、クロミフェン、ＭＥＲ−２５、ＤＥＳ、ナフォキシデン（nafoxidene）、ＣＰ−３３６，１５６、ＧＷ５６３８、ＬＹ１３９４８１、ＬＹ３５３５８１、ズクロミフェン（zuclomiphene）、エンクロミフェン（enclomiphene）、エタモキシトリフェトール（ethamoxytriphetol）、酢酸デルマジノン（delmadinone acetate）、ビスホスホネート等である。
【００４９】
エストロゲン活性を欠いたいくつかのステロイド性抗エストロゲンが合成されている。これらに含まれるのは、ＩＣＩ１６４，３８４、ＩＣＩ１８２，７８０及びＲＵ５８６６８である。例えば、ＩＣＩ１６４，３８４に関するWakelingら J Steroid Biochem.31: 645-653(1988); ICI182,780に関するWakelingら、Cancer Res. 51: 3867-3873(1991)及びWakelingら、J.Steroid Biochem.Molec.Biol.37: 771-774(1990); 並びにRU58668に関するVan De Veldeら、Ann.N.Y.Acad.Sci.761: 164-175(1995)、Van De Veldeら、Pathol.Biol 42: 30(1994)及びNiqueら、Drugs Future 20: 362-366(1995）を参照のこと。
【００５０】
米国特許第６，２８１，２０５号に提供されたような抗エストロゲン剤も、本発明において企図される。本発明において有用な抗エストロゲン剤は、ゲニステイン、ダイゼイン、ビオカニンＡ、フォルムオノネチン、並びに天然に存在するそれらのグルコシド及びグルコシドコンジュゲートより選択されるイソフラボン少なくとも１個と共投与される、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、トレミフェン、４'−ヨードタモキシフェン及びヨードキシフェンを、これらに限定されずに含む、例えば米国特許第６，３００，３６７号に記載されたようなエストロゲン受容体調整剤も含む。
【００５１】
抗エストロゲン剤として含まれるその他の化合物は、アロマターゼ阻害剤である。これらの阻害剤は、アンドロゲンをエストロゲンへと変換する酵素であるアロマターゼの活性を阻止又は阻害する化学的化合物又はポリペプチドをさす。アロマターゼ阻害剤の例は、レトロゾール、アナストロゾール、ボロゾール及びエキセメスタンを含む。（Journal of Endocrinology, 2000年2月: 164(2): 225-238; 及びJournal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology, 1997年4月: 61(3-6): 157-166）。
【００５２】
本発明は、包装材料、及びその中に含有されている、女性における子宮内膜症の治療又は予防に治療的に有効である薬剤を含む製品も特徴とする。包装材料は、薬剤が、子宮内膜症の治療及び／又は予防に使用され得ることを示す表示を含み得る。薬剤は、有効量のＩＦＮ−γ又は有効量のサイトカインアンタゴニストを含む。一態様において、薬剤は、有効量のＩＦＮ−γとサイトカインアンタゴニストとの組み合わせを含む。
【００５３】
別態様において、本発明は、ＩＦＮ−γ又はサイトカインアンタゴニストを含む第一の子宮内膜症の治療用又は予防用の薬剤、及び第二の治療剤を含む組成物及びキットに関する。第二の治療剤は、ＩＦＮ−γ又はサイトカインアンタゴニストではない。これらの組成物は、女性における子宮内膜症の治療又は予防に有効である。様々なクラスの治療剤が、組成物中に使用され得る。一態様において、第一の子宮内膜症の治療用又は予防用の薬剤は、有効量のＩＦＮ−γとサイトカインアンタゴニストとの組み合わせを含む。
【００５４】
医薬組成物
本発明のインターフェロン−ガンマ、サイトカインアンタゴニスト及び抗エストロゲン剤（本明細書で「活性化合物」とも呼ばれる）、並びにその誘導体、断片、類似体及び相同体は、投与に適した医薬組成物に取り込まれ得る。そのような組成物は、典型的には、核酸分子、タンパク質、抗体又は化学物質、及び薬学的に許容される担体を含む。本明細書で使用されるように、「医薬的に許容される担体」とは、医薬的投与と適合性であり、かつ活性化合物の有効性を妨害しない、任意の全ての溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤、抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤等を含むものとする。適当な担体は、参考に本明細書で援用する当領域における標準的な参考書、Remington's Pharmaceutical Sciencesの最新版に記載されている。そのような担体又は希釈剤の好ましい例は、水、生理食塩水、フィンガーズ（finger's）溶液、デキストロース溶液及び５％ヒト血清アルブミンを含むが、これらに限定されない。リポソーム及び固定油のような非水性媒体を使用してもよい。医薬的に活性な物質のためのそのような媒体及び物質の使用は、当分野において周知である。活性化合物と不適合性であるものを除き、従来の媒体又は物質の組成物中の使用が企図される。補充的な活性化合物も、組成物中に取り込んでもよい。
【００５５】
本発明の医薬組成物は、意図された投与経路と適合性であるよう製剤化される。投与経路の例は、非経口投与、例えば静脈内投与、皮内投与、皮下投与、経口（例えば、吸入）投与、経皮（局所）投与、経粘膜投与及び直腸投与を含む。非経口適用、皮内適用、皮下適用のために使用される溶液又は懸濁液は、以下の成分を含み得る：注射用水、生理食塩溶液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又はその他の合成溶媒のような無菌の希釈剤；ベンジルアルコール又はメチルパラベンのような抗菌剤；アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムのような抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸のようなキレート化剤；酢酸、クエン酸又はリン酸のような緩衝剤、及び塩化ナトリウム又はデキストロースのような浸透圧調整剤。ｐＨは、塩酸又は水酸化ナトリウムのような酸又は塩基により調整され得る。非経口用調製物は、アンプル、使い捨てシリンジ、又はガラス製もしくはプラスチック製の多用量バイアルに封入され得る。
【００５６】
注射可能な使用に適した医薬組成物は、無菌の水性溶液（水溶性の場合）又は分散物、及び無菌の注射可能な溶液又は分散物の用時調製のための無菌の粉末を含む。静脈内投与の場合、適当な担体は、生理学的生理食塩水、静菌水、クレモフォア（Cremophor）EL（登録商標）（BASF, Parsippany, N.J.）又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を含む。全ての例において、組成物は、無菌でなければならず、かつ容易な注射可能性が存在する程度の流動性を有するべきである。それは、製造及び貯蔵条件下で安定でなければならず、かつ細菌及び真菌のような微生物の汚染作用から保護されていなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコール等）及びその適当な混合物を含有する溶媒又は分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティング剤の使用により、分散液の場合であれば必要とされる粒子サイズの維持により、そして界面活性剤の使用により、維持され得る。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール等により達成され得る。多くの場合、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールのようなポリアルコール、塩化ナトリウムを組成物中に含ませることが好ましいであろう。注射可能組成物の長期持続性の吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物中に含ませることにより実現され得る。
【００５７】
無菌注射可能溶液は、必要とされる量の活性化合物（例えば、インターフェロン−ガンマ、サイトカインアンタゴニスト及び／又は抗エストロゲン剤）を、必要とされるような先に列挙した成分のうちの一つ又は組み合わせと共に適切な溶媒に取り込み、必要であれば、その後に濾過滅菌を行うことにより調製され得る。一般に、分散液は、基本の分散媒及び先に列挙したもののうちの必要とされる他の成分を含有している無菌の媒体に、活性化合物を取り込むことにより調製され得る。無菌注射可能溶液の調製用の無菌粉末の場合、調製法は、予め滅菌濾過された有効成分＋付加的な所望の成分の溶液から、有効成分＋付加的な所望の成分の粉末を与える、真空乾燥及び凍結乾燥である。
【００５８】
経口組成物は、一般に、不活性希釈剤又は摂取可能担体を含む。それらは、ゼラチンカプセルに封入されてもよいし、又は錠剤へと圧縮されてもよい。経口治療的投与の目的のため、活性化合物は、賦形剤と共に取り込まれ、錠剤、トローチ剤又はカプセル剤の形態で使用され得る。経口組成物は、含嗽剤として使用するため流動性担体を使用しても調製され得、この場合、流動性担体中の化合物は、経口的に適用され、含嗽され、そして吐出されるか又は飲み込まれる。薬学的に適合性の結合剤及び／又は補助材料が、組成物の一部として含まれ得る。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤等は、以下の成分又は類似の性質を有する化合物のうちの任意のものを含有していてもよい：微晶質セルロース、トラガカントゴム又はゼラチンのような結合剤；デンプン又は乳糖のような賦形剤、アルギン酸、プリモゲル（Primogel）又はコーンスターチのような崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム又はステロテス（Sterotes）のような滑沢剤；コロイド性二酸化シリコンのような流動促進剤；ショ糖又はサッカリンのような甘味剤；又はペパーミント、サリチル酸メチル又はオレンジ風味のような風味剤。
【００５９】
吸入による投与の場合、化合物は、適当な噴霧剤、例えば二酸化炭素のような気体を含有している加圧されたコンテナもしくはディスペンサー、又はネブライザーからエアロゾルスプレーの形態で送達される。
【００６０】
全身投与は、経粘膜的又は経皮的な手段によってもよい。経粘膜的又は経皮的な投与の場合、透過させるべき関門にとって適切な浸透促進剤が、製剤中に使用される。そのような浸透促進剤は、一般に、当分野において既知であり、例えば経粘膜投与の場合であれば、界面活性剤、胆汁酸塩及びフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、鼻スプレー又は坐剤の使用により達成され得る。経皮投与の場合、活性化合物は、当分野において一般に既知のような軟膏剤（ointment）、膏剤（salve）、ゲル剤又はクリーム剤へと製剤化される。
【００６１】
化合物は、坐剤（例えば、カカオ脂及びその他のグリセリドのような従来の坐剤用基剤を用いる）又は直腸送達用の停留浣腸の形態でも調製され得る。
【００６２】
一態様において、活性化合物は、植込み剤及びマイクロカプセル送達系を含む放出制御製剤のような、体内からの迅速な排除から化合物を防御するであろう担体を用いて調製される。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル及びポリ乳酸のような生分解性の生体適合性のポリマーが使用され得る。そのような製剤の調製のための方法は、当業者には明らかであろう。材料は、Alza Corporation and Nova Pharmaceuticals, Inc.からも商業的に入手され得る。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体により感染細胞へとターゲティングされたリポソームを含む）も、医薬的に許容される担体として使用され得る。これらは、例えば米国特許第４，５２２，８１１号に記載されたような、当業者に既知の方法に従い調製され得る。
【００６３】
投与の容易さ及び投薬量の均一性のため、投薬単位形態で経口用又は非経口用の組成物を製剤化することが特に有利である。投薬単位形態とは、本明細書で使用されるように、治療すべき対象のための単位投薬量として好適な物理的に別個の単位をさし；各単位は、必要とされた医薬的担体と共に所望の治療効果を生ずるよう計算された予定された量の活性化合物を含有している。本発明の投薬単位形態に関する明細は、活性化合物の特有の特徴、及び達成すべき特定の治療効果、及び個体の治療のための活性化合物のような配合（compounding）の分野に固有の制限により支配され、そして直接それらに依存している。
【００６４】
医薬組成物は、投与に関する指示と一緒に、コンテナ、パック又はディスペンサーに含まれ得る。
【００６５】
以下、内部の図面を参照する実施例（これらに限定的なものではない）により、本発明を例示する。
【００６６】
実施例１：ＩＦＮ−γはＩＬ−１によるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の誘導を阻害した
培養ヒト皮下脂肪細胞（カタログ番号ＳＰ−１０１２、ＳＰ−１０２４、ＳＰ−１０９６、ＳＰ−７５又はＳＰ−２５）をZen-Bio, Inc.(Research Triangle Park, NC）より購入し、製造業者の指示に従い培養した。
【００６７】
ヒト脂肪細胞（およそ１００，０００細胞／ウェル）を、ＩＦＮ−γ（０．１ug/ml、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β及びＩＦＮ−γはＲ＆Ｄより購入した）と共に、そしてＩＦＮ−γなしで、異なる用量（示されたような）のＩＬ−１α及びＩＬ−１βの存在下又は非存在下で２４時間培養した。条件培地中へのエストラジオール放出の量を、製造業者の指示に従いアクティブ（Active）（登録商標）エストラジオールＥＩＡキットを使用した、エストラジオールに関するラジオイムノアッセイにより決定した（カタログ番号DSL-10-4300,Diagnostic Systems Laboratories, Inc., Webster, TX）。各値は、三つのウェルの平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を表す。男性又は女性の患者に由来する細胞を使用した１０回のさらなる実験において、類似の結果が再現可能であった。図１中の黒楕円により示されるように、ＩＬ−１α及びＩＬ−１βの両方が、エストラジオール生成を有意に増加させた。しかしながら、やはり図１に例示されるように、黒三角は、ＩＦＮ−γを細胞に与えた場合、ＩＬ−１α及びＩＬ−１βにより誘導されるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成をＩＦＮ−γが阻害することを示している。
【００６８】
実施例２：ヒト脂肪細胞における構成的エストラジオール生成に対する組換えヒトＩＦＮ−γの用量依存的な阻害効果
ヒト脂肪細胞（１００，０００細胞／ウェル）を、増加する用量のＩＦＮ−γ（０．０００１〜１ug/ml、Ｒ＆Ｄより購入）と共に、そしてＩＦＮ−γなしで、７２時間培養した。条件培地中のエストラジオールの量を、実施例１に記載されたようなラジオイムノアッセイにより決定した。各値は、三つのウェルの平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を表す。女性患者に由来する細胞を使用した３回のさらなる実験において、類似の結果が再現可能であった。結果は、図２に例示されるように、ヒト脂肪細胞における構成性のエストラジオール生成に対する用量依存的な阻害効果をＩＦＮ−γが有していることを示している。
【００６９】
実施例３：ＩＦＮ−γはヒト脂肪細胞における構成性のアロマターゼｍＲＮＡ及びＩＬ−１ｂによるアロマターゼｍＲＮＡの誘導を阻害した
脂肪細胞培養物を、ＩＬ−１−β、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、並びにＩＬ−１−βとＩＦＮ−γとの組み合わせ、及びＴＮＦ−αとＩＦＮ−γとの組み合わせにより処理した。続いて、培養脂肪細胞からの全ＲＮＡを従来の方法を使用して単離した。逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）をアロマターゼ特異的プライマーを使用して実施した。ＲＴ−ＰＣＲにより産生された増幅されたアロマターゼｃＤＮＡ断片をアガロースゲル上で分離した。図３に示されるように、単独のＩＬ−１及びＴＮＦは、未処理対照と比較してアロマターゼｍＲＮＡの転写を誘導する。しかしながら、ＩＦＮ−γの投与は、ＩＬ−１又はＴＮＦと一緒に与えられた場合、アロマターゼｍＲＮＡの転写を阻害する。下パネルは、構成的に発現するハウスキーピング（household）遺伝子グリセロ−アルデヒドホスホスフェートデヒドロゲナーゼ（glcero-aldehyde phosphosphate dehydrogenase）（ＧＡＰＤＨ）の転写を示している。対照レーンは、脂肪細胞におけるアロマターゼｍＲＮＡの発現の基点レベルを示している。
【００７０】
実施例４：ＩＦＮ−γは６個のサイトカインの混合物によるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の誘導を阻害した
ヒト脂肪細胞（１００，０００細胞／ウェル）を、ＩＦＮ−γ（０．１ug/ml）、ＩＦＮ−１ａ（１ug/ml）又はＩＦＮ−ｂ（２ug/ml）と共に、そしてそれらなしで、異なる用量のサイトカイン混合物（ＩＬ−１ｂ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１１及びオンコスタチンＭ、各０．０１ug/ml、示されたような希釈）の存在下又は非存在下で７２時間培養した。ＩＦＮ−ａはＰＢＬより購入し、ＩＦＮ−ｂはSeronoより入手した。条件培地中へのエストラジオール放出の量を、実施例１に記載されたようなラジオイムノアッセイにより決定した。各値は、三つのウェルの平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を表す。３回のさらなる実験において、類似の結果が得られた。結果は、図４に例示されるように、ＩＦＮ−γは脂肪細胞エストラジオール生成を阻害するが、ＩＦＮ−α又はＩＦＮ−βは阻害しないことを示している。
【００７１】
実施例５：ＩＦＮ−γは１５種のサイトカイン（ＩＬ−１ａ、ＩＬ−１ｂ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１１、ＧＨ、ＩＧＦ−１、ＬＩＦ、ＳＣＦ、ＦＡＳ、ＴＲＡＩＬ、ＯＸ４０Ｌ及びオンコスタチンＭ、各０．０１ug/ml）の混合物によるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の誘導を阻害した
Zen-Bio, Incより入手されたヒト脂肪細胞（１００，０００細胞／ウェル）を、ＩＦＮ−γ（０．１ug/ml）と共に、そしてＩＦＮ−γなしで、異なる用量のサイトカイン混合物（示されたような希釈）の存在下又は非存在下で４８時間培養した。条件培地中へのエストラジオール放出の量を、実施例１に記載されたようなラジオイムノアッセイにより決定した。各値は、三つのウェルの平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を表す。３回のさらなる実験において、類似の結果が得られた。図５に例示されるように、ＩＦＮ−γは、サイトカイン混合物により刺激される脂肪細胞エストラジオール生成を阻害した。これらの結果は、ＩＦＮ−γの阻害効果が、特異的なサイトカインの各受容体との結合の阻止によるのではないことを示している。
【００７２】
実施例６：ＩＦＮ−γはＬＰＳによるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の誘導を阻害した
Zen-Bio, Inc、より入手されたヒト脂肪細胞（１００，０００細胞／ウェル）を、ＩＦＮ−γ（０．１ug/ml、ＬＰＳはSigmaより購入）と共に、そしてＩＦＮ−γなしで、異なる用量のＬＰＳ（示されたような希釈）の存在下又は非存在下で７２時間培養した。条件培地中へのエストラジオール放出の量を、実施例１に記載されたようなラジオイムノアッセイにより決定した。各値は、三つのウェルの平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を表す。別々の患者に由来する細胞を使用した４回のさらなる実験において、類似の結果が再現可能であった。結果は、図６に例示されるように、ＬＰＳにより刺激される脂肪細胞からのエストラジオール生成をＩＦＮ−γが阻害することを示している。
【００７３】
実施例７：ＩＦＮ−γはＰＭＡ（５ng/ml）、ＬＰＳ（１０ug/ml）及びＰＧＥ２（１０ug/ml）の混合物によるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の誘導を阻害した
Zen-Bio, Inc、より入手されたヒト脂肪細胞（１００，０００細胞／ウェル）を、ＩＦＮ−γ（０．１ug/ml）と共に、そしてＩＦＮ−γなしで、異なる用量のＬＰＳ混合物、ＰＭＡ及びＰＧＥ２（示されたような希釈）の存在下又は非存在下で４８時間培養した。ＩＦＮ−γは、Sigmaより購入されたＬＰＳ、ＰＭＡ及びＰＧＥ２の混合物と同時、８時間後又は２４時間後に添加した。条件培地中へのエストラジオール放出の量を、実施例１に記載されたようなラジオイムノアッセイにより決定した。各値は、三つのウェルの平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を表す。結果は、図７に例示されるように、ＬＰＳ、ＰＭＡ及びＰＧＥ２により刺激される脂肪細胞からのエストラジオール生成をＩＦＮ−γが０〜２４時間阻害することを示している。
【００７４】
実施例８：ＩＦＮ−γはＴＲＡＩＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−１１及びＬＩＦによるヒト脂肪細胞におけるアロマターゼｍＲＮＡの誘導を阻害した
Zen-Bio, Inc、より入手されたヒト脂肪細胞（１００％コンフルエンスの１個のフラスコから）を、ＩＦＮ−γ（０．１ug/ml、ＦＡＳリガンド、ＴＲＡＩＬ及びＯＸ４０リガンドをAlexisより入手した以外、サイトカインは全てＲ＆Ｄより購入した）と共に、そしてＩＦＮ−γなしで、示されたような異なるサイトカイン０．１ug/mlの存在下又は非存在下で７２時間培養した。ヒトアロマターゼ及びＧＡＰＤＨに特異的なオリゴ（２０マー）を使用したＲＴ−ＰＣＲ（各試料につきＲＮＡ５０ngを用いて３０サイクル）のため、全ＲＮＡを抽出した。結果は、図８に例示されるように、ＴＲＡＩＬ、ＯＸ４０、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１１及びＬＩＦにより誘導されるアロマターゼｍＲＮＡの発現をＩＦＮ−γが阻害することを示している。
【００７５】
実施例９：サイトカイン（ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１１、ＯＳＭ、ＧＨ及びＩＧＦ−１）はヒト前脂肪細胞におけるエストラジオール生成を刺激する
ヒト脂肪細胞（１００，０００細胞／ウェル）を、異なるサイトカイン（ＩＬ−６（０．５ug/ml）、ＩＬ−８（０．５ug/ml）、ＩＬ−１１（０．５ug/ml）、オンコスタチンＭ（０．５ug/ml）、ＧＨ（５ug/ml）及びＩＧＦ−１（５ug/ml）の存在下で７２時間培養した。条件培地中へのエストラジオール放出の量を、実施例１に記載されたようなラジオイムノアッセイにより決定した。各値は、三つのウェルの平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を表す。結果は、図９に例示されるように、ＩＦＮ−γは、サイトカインＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１１、ＯＳＭ、ＧＨ及びＩＧＦ−１が、各々、ヒト前脂肪細胞におけるエストラジオール生成を刺激することを示している。
【００７６】
実施例１０：オンコスタチンＭに対するモノクローナル抗体はオンコスタチンＭによるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の誘導を阻害する
ヒト脂肪細胞（１００，０００細胞／ウェル）を、オンコスタチンＭに対するモノクローナル抗体（２００ug/ml）と共に、そして抗体なしで、オンコスタチンＭ（示されたような濃度）の存在下で７２時間培養した。条件培地中へのエストラジオール放出の量を、実施例１に記載されたようなラジオイムノアッセイにより決定した。各値は、三つのウェルの平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を表す。結果は、図１０に例示されるように、オンコスタチンＭにより刺激される脂肪細胞エストラジオール生成をオンコスタチンＭに対するモノクローナル抗体が阻害することを示している。
【００７７】
実施例１１：ＩＬ−１１に対するモノクローナル抗体はＩＬ−１１によるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の誘導を阻害する
ヒト脂肪細胞（１００，０００細胞／ウェル）を、ＩＬ−１１に対するモノクローナル抗体（２００ug/ml）と共に、そして抗体なしで、ＩＬ−１１（示されたような濃度）の存在下で７２時間培養した。条件培地中へのエストラジオール放出の量を、実施例１に記載されたようなラジオイムノアッセイにより決定した。各値は、三つのウェルの平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を表す。結果は、図１１に例示されるように、ＩＬ−１１により刺激される脂肪細胞エストラジオール生成をＩＬ−１１に対するモノクローナル抗体が阻害することを示している。
【００７８】
実施例１２：インターフェロンアルファ／ベータ受容体（ＩＦＮＡＲ）はＩＦＮ−βによるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の誘導を阻害する
ヒト脂肪細胞（１００，０００細胞／ウェル）を、ＩＦＮＡＲ（４ug/ml）と共に、そしてＩＦＮＡＲなしで、ＩＦＮ−β（示されたような濃度）の存在下で７２時間培養した。条件培地中へのエストラジオール放出の量を、実施例１に記載されたようなラジオイムノアッセイにより決定した。各値は、三つのウェルの平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を表す。結果は、図１２に例示されるように、ＩＦＮＡＲがＩＦＮ−βにより刺激される脂肪細胞エストラジオール生成を阻害することを示している。
【００７９】
実施例１３：ＩＬ−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ＲＡ）はＩＬ−１α及びＩＬ−１βによるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の誘導を阻害する
ヒト脂肪細胞（１００，０００細胞／ウェル）を、ＩＬ−１ＲＡ（４ug/ml）と共に、そしてＩＬ−１ＲＡなしで、ＩＬ−１α及びＩＬ−１β（示されたような濃度）の存在下で７２時間培養した。条件培地中へのエストラジオール放出の量を、実施例１に記載されたようなラジオイムノアッセイにより決定した。各値は、三つのウェルの平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を表す。結果は、図１３に例示されるように、ＩＬ−１α及びＩＬ−１βにより刺激される脂肪細胞エストラジオール生成をＩＬ−１ＲＡが阻害することを示している。
【００８０】
以上の実施例は、例示的なものとして評価されるべきであり、本発明の範囲を制限するためのものではない。
【００８１】
この明細書中で引用された全ての出版物及び特許出願は、個々の出版物及び特許出願が、各々、特別かつ個々に引用例として取り込まれると示されたかのごとく、引用例として本明細書に取り込まれる。前記の発明は、理解の明確のため例示及び実施例により幾分詳細に記載されたが、この発明の教示を考慮すれば、請求の範囲の本質又は範囲を逸することなくある種の変化及び修飾がそれらに対してなされ得ることが、当業者には容易に明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００８２】
【図１Ａ】ＩＦＮ−γが、ヒト脂肪細胞におけるＩＬ−１αによるエストラジオール生成の誘導を阻害することを示す図である。
【図１Ｂ】ＩＦＮ−γが、ヒト脂肪細胞におけるＩＬ−１βによるエストラジオール生成の誘導を阻害することを示す図である。
【図２】ヒト脂肪細胞における構成性エストラジオール生成に対する組換えヒトＩＦＮ−γの用量依存的な阻害効果を示す図である。
【図３】インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）が、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）又は腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）により転写が誘導された際のアロマターゼｍＲＮＡの転写を阻害することを示す図である。下パネルは、ハウスホールド遺伝子グリセロ−アルデヒドリン酸デヒドロゲナーゼ（glcero-aldehyde phosphate dehydrogenase）（ＧＡＰＤＨ）の転写を示している。対照レーンは、脂肪細胞におけるアロマターゼｍＲＮＡ発現の基底レベルを示している。
【図４】サイトカインの混合物により刺激されたヒト脂肪細胞からのエストラジオール生成に対するインターフェロン（ＩＦＮ）α、β及びγのディファレンシャルな効果を示す図である。ＩＦＮ−γは刺激された生成を阻害するが、ＩＦＮ−α又はＩＦＮ−βは刺激されたエストラジオール生成を阻害しない。
【図５】ＩＦＮ−γが、１５個のサイトカイン（ＩＬ−１ａ、ＩＬ−１ｂ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１１、ＧＨ、ＩＧＦ−１、ＬＩＦ、ＳＣＦ、ＦＡＳ、ＴＲＡＩＬ、ＯＸ４０Ｌ及びオンコスタチンＭ、各０．０１ug/ml）の混合物によるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の刺激を阻害することを示す図である。
【図６】ＩＦＮ−γが、ＬＰＳによるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の刺激を阻害することを示す図である。
【図７】ＩＦＮ−γが、ＰＭＡ（５ng/ml）、ＬＰＳ（１０ug/ml）及びＰＧＥ２（１０ug/ml）の混合物によるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の刺激を阻害することを示す図である。
【図８】サイトカイン腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、ＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０Ｌ）、インターロイキン−１−ベータ（ＩＬ−１−β）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）及び白血病阻害因子（ＬＩＦ）が、全て、アロマターゼｍＲＮＡ発現を誘導し、これらの全てのサイトカインによるアロマターゼｍＲＮＡ発現の誘導がＩＦＮ−γにより阻害されることを示す図である。
【図９】サイトカイン（ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１１、ＯＳＭ、ＧＨ及びＩＧＦ−１）が、ヒト前脂肪細胞におけるエストラジオール生成を刺激することを示す図である。
【図１０】オンコスタチンＭに対するモノクローナル抗体が、オンコスタチンＭによるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の誘導を阻害することを示す図である。
【図１１】ＩＬ−１１に対するモノクローナル抗体が、ＩＬ−１１によるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の誘導を阻害することを示す図である。
【図１２】インターフェロンアルファ／ベータ受容体（ＩＦＮＡＲ）が、ＩＦＮ−βによるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の誘導を阻害することを示す図である。
【図１３Ａ】ＩＬ−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ＲＡ）が、ＩＬ−１αによるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の誘導を阻害することを示す図である。
【図１３Ｂ】ＩＬ−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ＲＡ）が、ＩＬ−１βによるヒト脂肪細胞におけるエストラジオール生成の誘導を阻害することを示す図である。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【国際調査報告】
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