(57)【要約】広範にわたる種々のヒト固形腫瘍において、積極的な転移表現型および不十分な臨床的予後は、レセプターチロシンキナーゼＭｅｔおよびそのアゴニストリガンドＨＧＦの発現と相関する。本発明は、（ａ）Ｍｅｔ特異的であるｍＡｂおよびそれらを産生するハイブリドーマ細胞株、ならびに（ｂ）抗Ｍｅｔ  ｍＡｂおよび抗ＨＧＦ  ｍＡｂの組み合わせを開示する。直接標識される場合、これらの抗体は、このような腫瘍を画像化するのに有用である。抗Ｍｅｔ  ｍＡｂ組成物ならびに、Ｍｅｔを有する腫瘍のシンチグラフィー検出、診断、予後、モニタリングおよび処置のための方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
モノクローナル抗体であって：
（ａ）受入番号ＰＴＡ−４３４９でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されるモノクローナル抗体Ｍｅｔ３；および
（ｂ）受入番号ＰＴＡ−４４７７でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されるモノクローナル抗体Ｍｅｔ５からなる群から選択される、モノクローナル抗体または該抗体の抗原結合フラグメントもしくは誘導体。
【請求項２】
受入番号ＰＴＡ−４３４９でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託された前記ハイブリドーマ細胞株によって産生される、請求項１に記載のＭｅｔ３モノクローナル抗体、またはそのフラグメントもしくは誘導体。
【請求項３】
受入番号ＰＴＡ−４４７７でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託された前記ハイブリドーマ細胞株によって産生される、請求項１に記載のＭｅｔ５モノクローナル抗体、またはそのフラグメントもしくは誘導体。
【請求項４】
請求項２に記載のモノクローナル抗体、またはそのフラグメントもしくは誘導体を識別する生物学的特徴の全てを有する、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体。
【請求項５】
請求項３に記載のモノクローナル抗体、またはそのフラグメントもしくは誘導体と識別する生物学的特徴の全てを有する、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体。
【請求項６】
Ｍｅｔに特異的なヒト化モノクローナル抗体であって、該抗体の重鎖および／もしくは軽鎖可変領域、または該可変領域の抗原結合部位が、請求項２または３に記載のモノクローナル抗体の対応する領域または部位を識別する同一の生物学的または構造的特徴の全てを有し、該ヒト化モノクローナル抗体の残り実質的に全てが、ヒト起源であるか、または該ヒト化モノクローナル抗体の抗原結合フラグメントもしくは誘導体である、ヒト化モノクローナル抗体。
【請求項７】
Ｍｅｔに特異的なヒトモノクローナル抗体であって、該抗体は、請求項２に記載のモノクローナル抗体が結合するエピトープと同じエピトープ、または該ヒト抗体の抗原結合フラグメントもしくは誘導体に結合する、ヒトモノクローナル抗体。
【請求項８】
Ｍｅｔに特異的なヒトモノクローナル抗体であって、該抗体は、請求項３に記載のモノクローナル抗体が結合するエピトープと同じエピトープ、または該ヒト化抗体の抗原結合フラグメントもしくは誘導体に結合する、ヒトモノクローナル抗体。
【請求項９】
請求項１に記載のモノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体を含む、組成物。
【請求項１０】
請求項２に記載のモノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体を含む、組成物。
【請求項１１】
請求項３に記載のモノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体を含む、組成物。
【請求項１２】
請求項９〜１１のいずれか１項に記載の組成物であって、さらに、Ｍｅｔエピトープに特異的な１つ以上のさらなる抗体を含むか、または、該さらなる１つ以上の抗体の抗原結合フラグメントもしくは誘導体を含む、組成物。
【請求項１３】
請求項９〜１１のいずれか１項に記載の組成物であって、さらに、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）に特異的な１つ以上の抗体を含むか、または該１つ以上のＨＧＦ特異的な抗体の抗原結合フラグメントもしくは誘導体を含む、組成物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の組成物であって、前記１つ以上のＨＧＦ特異的抗体が：
（ａ）受入番号ＰＴＡ−３４１４でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されるモノクローナル抗体；
（ｂ）受入番号ＰＴＡ−３４１６でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されるモノクローナル抗体；
（ｃ）受入番号ＰＴＡ−３４１３でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されるモノクローナル抗体；および
（ｄ）受入番号ＰＴＡ−３４１２でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されるモノクローナル抗体、
からなる群から選択される、組成物。
【請求項１５】
診断的に有用な組成物であって、以下：
（ａ）請求項１〜８のいずれか１項に記載の診断的または検出可能に標識されたモノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体、および；
（ｂ）診断的に受容可能なキャリアまたは賦形剤
を含む、組成物。
【請求項１６】
診断的に有用な組成物であって、以下：
（ａ）請求項９〜１１のいずれか１項に記載の診断的または検出可能に標識された組成物；および
（ｂ）診断的に受容可能なキャリアまたは賦形剤
を含む、組成物。
【請求項１７】
診断的に有用な組成物であって、以下：
（ａ）請求項１２に記載の診断的または検出可能に標識された組成物；および
（ｂ）診断的に受容可能なキャリアまたは賦形剤
を含む、組成物。
【請求項１８】
診断的に有用な組成物であって、以下：
（ａ）請求項１３に記載の診断的または検出可能に標識された組成物；および
（ｂ）診断的に受容可能なキャリアまたは賦形剤
を含む、組成物。
【請求項１９】
請求項１５に記載の診断的に有用な組成物であって、ここで前記モノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体が、放射性核種、ＰＥＴ画像化可能な試薬ＭＲＩ画像化可能な試薬、蛍光物質、蛍光源、発色団、色素源、リン光物質、化学発光物質および生体発光物質からなる群から選択される検出可能な標識で標識される、組成物。
【請求項２０】
請求項１６に記載の診断的に有用な組成物であって、ここで前記モノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体が、放射性核種、ＰＥＴ画像化可能な試薬、ＭＲＩ画像化可能な試薬、蛍光物質、蛍光源、発色団、色素源、リン光物質、化学発光物質および生体発光物質からなる群から選択される検出可能な標識で標識される、組成物。
【請求項２１】
前記モノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体が、放射性核種で標識される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
前記放射性核種がインビボで検出可能なものである、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記放射性核種が放射免疫シンチグラフィーにより検出可能なものである、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
請求項２１に記載の組成物であって、ここで、前記放射性核種が、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９９Ｔｃ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、９７Ｒｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、８９Ｚｒおよび２０１Ｔｌからなる群から選択される、組成物。
【請求項２５】
前記放射性核種が１２５Ｉである、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記モノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体が放射性核種で標識される、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２７】
前記放射性核種がインビボで検出可能なものである、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記放射性核種が放射免疫シンチグラフィーにより検出可能なものである、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
請求項２６に記載の組成物であって、ここで、前記放射性核種が、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９９Ｔｃ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、９７Ｒｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、８９Ｚｒおよび２０１Ｔｌからなる群から選択される、組成物。
【請求項３０】
前記放射性核種が１２５Ｉである、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記検出可能な標識が、蛍光物質または蛍光源である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項３２】
請求項３１に記載の組成物であって、ここで前記蛍光物質または蛍光源が、フルオレセイン、ローダミン、ダンシル、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルデヒド、フルオレサミン、フルオレセイン誘導体、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｇｒｅｅｎ、Ｒｈｏｄｏｌ  ＧｒｅｅｎおよびＴｅｘａｓ  Ｒｅｄからなる群から選択される、組成物。
【請求項３３】
前記検出可能な標識が、蛍光物質または蛍光源である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項３４】
請求項３３に記載の組成物であって、ここで前記蛍光物質または蛍光源が、フルオレセイン、ローダミン、ダンシル、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルデヒド、フルオレサミン、フルオレセイン誘導体、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｇｒｅｅｎ、Ｒｈｏｄｏｌ  ＧｒｅｅｎおよびＴｅｘａｓ  Ｒｅｄからなる群から選択される、組成物。
【請求項３５】
前記検出可能な標識が、前記抗体に結合された１つ以上のジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）残基を介して該抗体に結合する、請求項１９に記載の組成物。
【請求項３６】
前記検出可能な標識が、１つのＤＴＰＡ残基を介して前記抗体に結合する、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
ＭＲＩ診断に有用な、請求項３５に記載の組成物であって、ここで金属原子が前記ＤＴＰＡ残基に結合する、組成物。
【請求項３８】
前記金属が、ガドリニウム、マンガン、銅、鉄、金およびユーロピウムからなる群から選択される、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
前記金属がガドリニウムである、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
前記検出可能な標識が、前記抗体に結合された１つ以上のジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）残基を介して該抗体に結合する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項４１】
前記検出可能な標識が、１つのＤＴＰＡ残基を介して前記抗体に結合する、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
ＭＲＩ診断に有用な、請求項４０に記載の組成物であって、ここで金属原子が前記ＤＴＰＡ残基に結合する、組成物。
【請求項４３】
前記金属が、ガドリニウム、マンガン、銅、鉄、金およびユーロピウムからなる群から選択される、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４４】
前記金属がガドリニウムである、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
Ｍｅｔ発現腫瘍を処置するのに有用な治療用組成物であって、以下：
（ａ）治療有効量の、請求項１〜８のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体；および
（ｂ）薬学的または治療的に受容可能なキャリアまたは賦形剤
を含む、治療用組成物。
【請求項４６】
Ｍｅｔ発現腫瘍を処置するのに有用な治療用組成物であって、以下：
（ａ）治療有効量の、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の組成物；および
（ｂ）薬学的または治療的に受容可能なキャリアまたは賦形剤
を含む、治療用組成物。
【請求項４７】
Ｍｅｔ発現腫瘍を処置するのに有用な治療用組成物であって、以下：
（ａ）治療有効量の、請求項１２に記載の組成物；および
（ｂ）薬学的または治療的に受容可能なキャリアまたは賦形剤
を含む、治療用組成物。
【請求項４８】
Ｍｅｔ発現腫瘍を処置するのに有用な治療用組成物であって、以下：
（ａ）治療有効量の、請求項１３に記載の組成物；および
（ｂ）薬学的または治療的に受容可能なキャリアまたは賦形剤
を含む、治療用組成物。
【請求項４９】
注射または注入に適する形態での、請求項４５に記載の治療用組成物。
【請求項５０】
請求項４５に記載の治療用組成物であって、ここで前記抗体、フラグメントまたは誘導体の少なくとも１つが、治療部分に結合するか、結合体化するか、または治療部分で標識される、治療用組成物。
【請求項５１】
前記治療部分が放射性核種である、請求項５０に記載の治療用組成物。
【請求項５２】
請求項５１に記載の治療用組成物であって、ここで、前記放射性核種が、４７Ｓｃ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、１０９Ｐｄ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂおよび２１７Ｂｉからなる群から選択される、組成物。
【請求項５３】
注射または注入に適する形態での、請求項４６に記載の治療用組成物。
【請求項５４】
請求項４６に記載の治療用組成物であって、ここで前記抗体、フラグメントまたは誘導体の少なくとも１つが、治療部分に結合するか、結合体化するか、または治療部分で標識される、治療用組成物。
【請求項５５】
前記治療部分が放射性核種である、請求項５４に記載の治療用組成物。
【請求項５６】
請求項５５に記載の治療用組成物であって、ここで、前記放射性核種が、４７Ｓｃ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、１０９Ｐｄ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂおよび２１７Ｂｉからなる群から選択される、組成物。
【請求項５７】
注射または注入に適する形態での、請求項４７に記載の治療用組成物。
【請求項５８】
請求項４７に記載の治療用組成物であって、ここで前記抗体、フラグメントまたは誘導体の少なくとも１つが、治療部分に結合するか、結合体化するか、または治療部分で標識される、治療用組成物。
【請求項５９】
前記治療部分が放射性核種である、請求項５８に記載の治療用組成物。
【請求項６０】
請求項５９に記載の治療用組成物であって、ここで、前記放射性核種が、４７Ｓｃ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、１０９Ｐｄ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂおよび２１７Ｂｉからなる群から選択される、組成物。
【請求項６１】
注射または注入に適する形態での、請求項４８に記載の治療用組成物。
【請求項６２】
請求項４８に記載の治療用組成物であって、ここで前記抗体、フラグメントまたは誘導体の少なくとも１つが、治療部分に結合するか、結合体化するか、または治療部分で標識される、治療用組成物。
【請求項６３】
前記治療部分が放射性核種である、請求項６２に記載の治療用組成物。
【請求項６４】
請求項６３に記載の治療用組成物であって、ここで、前記放射性核種が、４７Ｓｃ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、１０９Ｐｄ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂおよび２１７Ｂｉからなる群から選択される、組成物。
【請求項６５】
キットであって、以下：
（ａ）請求項１〜８のいずれか１項に記載の抗体、フラグメントまたは誘導体を含む、標識された第１の容器；
（ｂ）診断的または薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を含む、標識された第２の容器；および
（ｃ）；被験体の癌性状態または腫瘍であって、該被験体の癌腫または腫瘍細胞がＭｅｔを発現する、癌性状態または腫瘍を診断、予後、モニタリングまたは処置するための該抗体の使用のための説明書
を含み、ここで、該抗体、フラグメントまたは誘導体が該状態の診断、予後、モニタリングまたは処置に効果的であり、そして、該標識された容器が、該抗体が該診断、予後、モニタリングまたは処置のために使用され得ることを示す、キット。
【請求項６６】
Ｍｅｔの存在を検出するための方法であって、該Ｍｅｔは、（ｉ）細胞表面上、（ｉｉ）組織内、（ｉｉｉ）器官内または（ｉｖ）生物学的サンプル内であり、この細胞、組織、器官またはサンプルは、Ｍｅｔを発現することが予想され、該方法は以下：
（ａ）細胞、組織、器官またはサンプルを請求項１５に記載の組成物と接触させる工程；
（ｂ）細胞、組織、器官またはサンプルに関する前記標識の存在を検出する工程
を包含する、方法。
【請求項６７】
Ｍｅｔの存在を検出するための方法であって、該Ｍｅｔは、（ｉ）細胞表面上、（ｉｉ）組織内、（ｉｉｉ）器官内または（ｉｖ）生物学的サンプル内であり、この細胞、組織、器官またはサンプルは、Ｍｅｔを発現することが予想され、該方法は以下：
（ａ）細胞、組織、器官またはサンプルを請求項１６に記載の組成物と接触させる工程；
（ｂ）細胞、組織、器官またはサンプルに関する前記標識の存在を検出する工程
を包含する、方法。
【請求項６８】
Ｍｅｔの存在を検出するための方法であって、該Ｍｅｔは、（ｉ）細胞表面上、（ｉｉ）組織内、（ｉｉｉ）器官内または（ｉｖ）生物学的サンプル内であり、この細胞、組織、器官またはサンプルは、Ｍｅｔを発現することが予想され、該方法は以下：
（ａ）細胞、組織、器官またはサンプルを請求項１７に記載の組成物と接触させる工程；
（ｂ）細胞、組織、器官またはサンプルに関する前記標識の存在を検出する工程
を包含する、方法。
【請求項６９】
Ｍｅｔの存在を検出するための方法であって、該Ｍｅｔは、（ｉ）細胞表面上、（ｉｉ）組織内、（ｉｉｉ）器官内または（ｉｖ）生物学的サンプル内であり、この細胞、組織、器官またはサンプルは、Ｍｅｔを発現することが予想され、該方法は以下：
（ａ）細胞、組織、器官またはサンプルを請求項１８に記載の組成物と接触させる工程；
（ｂ）細胞、組織、器官またはサンプルに関する前記標識の存在を検出する工程
を包含する、方法。
【請求項７０】
前記接触および検出がインビトロである、請求項６６に記載の方法。
【請求項７１】
前記接触がインビボでありかつ前記検出がインビトロである、請求項６６に記載の方法。
【請求項７２】
前記接触および検出がインビボである、請求項６６に記載の方法。
【請求項７３】
前記接触および検出がインビボである、請求項６７に記載の方法。
【請求項７４】
前記接触および検出がインビボである、請求項６８に記載の方法。
【請求項７５】
前記接触および検出がインビボである、請求項６９に記載の方法。
【請求項７６】
前記検出可能な標識が放射性核種である、請求項７２に記載の方法。
【請求項７７】
前記検出可能な標識が放射性核種である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７８】
前記検出可能な標識が放射性核種である、請求項７４に記載の方法。
【請求項７９】
前記検出可能な標識が放射性核種である、請求項７５に記載の方法。
【請求項８０】
請求項７６に記載の方法であって、ここで、前記放射性核種が、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９９Ｔｃ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、９７Ｒｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、８９Ｚｒおよび２０１Ｔｌからなる群から選択される、方法。
【請求項８１】
請求項７７に記載の方法であって、ここで、前記放射性核種が、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９９Ｔｃ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、９７Ｒｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、８９Ｚｒおよび２０１Ｔｌからなる群から選択される、方法。
【請求項８２】
請求項７８に記載の方法であって、ここで、前記放射性核種が、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９９Ｔｃ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、９７Ｒｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、８９Ｚｒおよび２０１Ｔｌからなる群から選択される、方法。
【請求項８３】
請求項７９に記載の方法であって、ここで、前記放射性核種が、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９９Ｔｃ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、９７Ｒｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、８９Ｚｒおよび２０１Ｔｌからなる群から選択される、方法。
【請求項８４】
前記検出が放射免疫シンチグラフィーによってである、請求項８０に記載の方法。
【請求項８５】
前記検出が放射免疫シンチグラフィーによってである、請求項８１に記載の方法。
【請求項８６】
前記検出が放射免疫シンチグラフィーによってである、請求項８２に記載の方法。
【請求項８７】
前記検出が放射免疫シンチグラフィーによってである、請求項８３に記載の方法。
【請求項８８】
前記放射性核種が１２５Ｉである、請求項８４に記載の方法。
【請求項８９】
前記放射性核種が１２５Ｉである、請求項８５に記載の方法。
【請求項９０】
前記放射性核種が１２５Ｉである、請求項８６に記載の方法。
【請求項９１】
前記放射性核種が１２５Ｉである、請求項８７に記載の方法。
【請求項９２】
前記検出可能な標識がＭＲＩ画像化可能な試薬でありかつ前記検出がＭＲＩによってである、請求項７２に記載の方法。
【請求項９３】
前記検出可能な標識がＭＲＩ画像化可能な試薬でありかつ前記検出がＭＲＩによってである、請求項７３に記載の方法。
【請求項９４】
前記検出可能な標識がＭＲＩ画像化可能な試薬でありかつ前記検出がＭＲＩによってである、請求項７４に記載の方法。
【請求項９５】
前記検出可能な標識がＭＲＩ画像化可能な試薬でありかつ前記検出がＭＲＩによってである、請求項７５に記載の方法。
【請求項９６】
（ｉ）Ｍｅｔ発現腫瘍細胞の増殖、遊走もしくは浸潤、または（ｉｉ）Ｍｅｔ発現腫瘍細胞によって誘導される脈管形成を阻害するための方法であって、該細胞を、有効量の請求項４５に記載の治療用組成物に接触させる工程を包含する、方法。
【請求項９７】
（ｉ）Ｍｅｔ発現腫瘍細胞の増殖、遊走もしくは浸潤、または（ｉｉ）Ｍｅｔ発現腫瘍細胞によって誘導される脈管形成を阻害するための方法であって、該細胞を、有効量の請求項４６に記載の治療用組成物に接触させる工程を包含する、方法。
【請求項９８】
（ｉ）Ｍｅｔ発現腫瘍細胞の増殖、遊走もしくは浸潤、または（ｉｉ）Ｍｅｔ発現腫瘍細胞によって誘導される脈管形成を阻害するための方法であって、該細胞を、有効量の請求項４７に記載の治療用組成物に接触させる工程を包含する、方法。
【請求項９９】
（ｉ）Ｍｅｔ発現腫瘍細胞の増殖、遊走もしくは浸潤、または（ｉｉ）Ｍｅｔ発現腫瘍細胞によって誘導される脈管形成を阻害するための方法であって、該細胞を、有効量の請求項４８に記載の治療用組成物に接触させる工程を包含する、方法。
【請求項１００】
前記接触がインビボである、請求項９６に記載の方法。
【請求項１０１】
前記接触がインビボである、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０２】
前記接触がインビボである、請求項９８に記載の方法。
【請求項１０３】
前記接触がインビボである、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０４】
前記治療用組成物が注射または注入に適する形態である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０５】
請求項１００に記載の方法であって、ここで前記治療用組成物において、前記抗体、フラグメントまたは誘導体の少なくとも１つが、治療部分に結合するか、結合体化するか、または治療部分で標識される、方法。
【請求項１０６】
前記治療用組成物において、前記治療部分が放射性核種である、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
前記治療用組成物が注射または注入に適する形態である、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０８】
請求項１０１に記載の方法であって、ここで前記治療用組成物において、前記抗体、フラグメントまたは誘導体の少なくとも１つが、治療部分に結合するか、結合体化するか、または治療部分で標識される、方法。
【請求項１０９】
前記治療用組成物において、前記治療部分が放射性核種である、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
前記治療用組成物が注射または注入に適する形態である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１１１】
請求項１０２に記載の方法であって、ここで前記治療用組成物において、前記抗体、フラグメントまたは誘導体の少なくとも１つが、治療部分に結合するか、結合体化するか、または治療部分で標識される、方法。
【請求項１１２】
前記治療用組成物において、前記治療部分が放射性核種である、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
前記治療用組成物が注射または注入に適する形態である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１１４】
請求項１０３に記載の方法であって、ここで前記治療用組成物において、前記抗体、フラグメントまたは誘導体の少なくとも１つが、治療部分に結合するか、結合体化するか、または治療部分で標識される、方法。
【請求項１１５】
前記治療用組成物において、前記治療部分が放射性核種である、請求項１１４に記載の方法。
【請求項１１６】
（ｉ）Ｍｅｔ発現細胞の望ましくない増殖、遊走もしくは浸潤、または（ｉｉ）Ｍｅｔ発現細胞によって誘導される望ましくない脈管形成に関する癌性疾患または状態を有する被験体を処置するための方法であって、有効量の請求項４５に記載の治療用組成物を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１１７】
（ｉ）Ｍｅｔ発現細胞の望ましくない増殖、遊走もしくは浸潤、または（ｉｉ）Ｍｅｔ発現細胞によって誘導される望ましくない脈管形成に関する癌性疾患または状態を有する被験体を処置するための方法であって、有効量の請求項４６に記載の治療用組成物を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１１８】
（ｉ）Ｍｅｔ発現細胞の望ましくない増殖、遊走もしくは浸潤、または（ｉｉ）Ｍｅｔ発現細胞によって誘導される望ましくない脈管形成に関する癌性疾患または状態を有する被験体を処置するための方法であって、有効量の請求項４７に記載の治療用組成物を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１１９】
（ｉ）Ｍｅｔ発現細胞の望ましくない増殖、遊走もしくは浸潤、または（ｉｉ）Ｍｅｔ発現細胞によって誘導される望ましくない脈管形成に関する癌性疾患または状態を有する被験体を処置するための方法であって、有効量の請求項４８に記載の治療用組成物を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１２０】
請求項１１６に記載の方法であって、ここで前記治療用組成物において、前記抗体、フラグメントまたは誘導体の少なくとも１つが、治療部分に結合するか、結合体化するか、または治療部分で標識される、方法。
【請求項１２１】
請求項１１７に記載の方法であって、ここで前記治療用組成物において、前記抗体、フラグメントまたは誘導体の少なくとも１つが、治療部分に結合するか、結合体化するか、または治療部分で標識される、方法。
【請求項１２２】
請求項１１８に記載の方法であって、ここで前記治療用組成物において、前記抗体、フラグメントまたは誘導体の少なくとも１つが、治療部分に結合するか、結合体化するか、または治療部分で標識される、方法。
【請求項１２３】
請求項１１９に記載の方法であって、ここで前記治療用組成物において、前記抗体、フラグメントまたは誘導体の少なくとも１つが、治療部分に結合するか、結合体化するか、または治療部分で標識される、方法。
【請求項１２４】
受入番号ＰＴＡ−４３４９でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託された、前記ハイブリドーマ細胞株。
【請求項１２５】
受入番号ＰＴＡ−４４７７でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託された、前記ハイブリドーマ細胞株。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
（発明の背景）
（発明の分野）
本発明は、医学、免疫学ならびに癌診断および癌治療の分野において、Ｍｅｔ、オンコジーン産物を発現し、そして肝細胞増殖因子／分散因子に結合する腫瘍を画像化および処置するのに有用なモノクローナル抗体（ｍＡｂ）組成物に関する。
【０００２】
（背景技術の説明）
心血管医学の分野において、生物医学の画像化が、危険の合理的評価を可能にする因子の可視化および定量化、従って、治療の選択の案内に成功している。本発明者らは、身体的ストレス試験または薬理的ストレス試験（「心臓危険性層別化」として公知のプロセス）と組み合わせた非侵襲性の画像化方法によって心筋潅流を日常的に評価する。腫瘍学の分野では、遅れを取っているが、最近の進歩は、新たに診断され、臨床的に制限された癌を持つほとんどまたは全ての患者が、「転位性危険性層別化」（ＭＲＳ）として役立つ（またはこれに寄与する）試験を受けることを可能にし得る平行するアプローチの進歩につながっている。低いＭＲＳスコアを持つ人は、転移性または侵襲性の性質の危険性の低い腫瘍を有すると考えられ、そして抑えめにモニタリングされ得、処置され得る；中間のＭＲＳスコアを有する人は、抑えめに処置され得るが、頻繁にモニタリングされ得る；ＭＲＳが高い危険性にある人は、対応してより積極的な治療および集中的なモニタリングプロトコルに同意し、耐えるための客観的基準を有する。ＭＲＳを介して、本発明者らは、今まで考えに至らなかった方法で癌を持つ患者の処置およびモニタリングを客観的に個別化し得る。
【０００３】
全ての分裂細胞は、腫瘍になる可能性を有し、そして全ての腫瘍が、率直に言って悪性腫瘍（すなわち、侵襲し、転移し得る）となる可能性を有する。２０年以上の間、分子腫瘍学者が、発癌および癌の進行に重要で、特徴的な、および潜在的に診断する分子を２０年以上の間探し求めてきた。現在、非常に行き渡った遺伝子発現微量検定法分析および数千の分子に対するプロテオーム解析を同時に実施する技術能力を備えた、プロセスが、加速している（Ｔａｋａｈａｓｈｉ  Ｍら、２００１、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８：９７５４−９７５９およびＰＣＴ公開ＷＯ０２／０７９４１１Ａ２；Ｈｕａｎｇ  Ｙら、２００１，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８：１５０４４−１５０４９；Ｍｉｌｌｅｒ  ＪＣら、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｓｅｒａ：ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ．」Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，ｉｎ  ｐｒｅｓｓ、２００２）。この技術により調べられたあらゆる型の癌について「非常に悪性の」状態を決定するのに役立つか、またはこの状態の外部の腫瘍の指標として働き得る候補分子の一覧がますます増加している。増加するデータの山から、少なくともいくつかの分子が、悪性癌そのものを処置するのに有用なマーカーおよび処置のための標的として現れることが期待される。一方、その存在および発現形態が、転移の危険性に関するいくつかの分子が、遺伝子発現分析技術における最近の急増の前に公知であった。ＭＲＳのための、または少なくとも将来のＭＲＳアルゴリズムのための原型としてこれらの分子の開発が、まさに始まったところである。１つのこのような例は、Ｍｅｔとして公知の分子である。
【０００４】
ｃ−ｍｅｔ−プロトオンコジーンのタンパク質産物であるＭｅｔは、１９８４初頭、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  ＩｎｓｔｉｔｕｔｅにてＧｅｏｒｇｅ  Ｖａｎｄｅ  Ｗｏｕｄｅの研究室において発見され、研究された（Ｃｏｏｐｅｒ  ＣＳら、１９８４、Ｎａｔｕｒｅ  ３１１：２９−３３；Ｄｅａｎ  Ｍら、１９８５、Ｎａｔｕｒｅ  ３１８：３８５−３８８；Ｉｙｅｒ  Ａら、１９９０，Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒ  １：  ８７−９５）。Ｍｅｔは、表皮増殖因子（ＥＧＦ）レセプターとして同じファミリーのレセプタープロテインチロシンキナーゼである。この膜貫通タンパク質は、細胞外ドメイン（ＥＣＤ）が、肝細胞増殖因子／分散因子（ＨＧＦ／ＳＦ、また本明細書中に省略されるＨＧＦ）と結合する細胞表面膜レセプターとして作用する。Ｍｅｔは、リガンドと結合して活性キナーゼを形成する後に二量体化する。細胞内チロシンキナーゼドメインは、生化学反応の複合体カスケードを活性化する。通常の条件下で、Ｍｅｔは、要となる分子であり、細胞分化、運動性、増殖、器官形成、脈管形成、およびアポトーシスの原因である分子シグナル伝達経路において作用する（Ｈａｄｄａｄ  Ｒら、２００１，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２１：４２４３−４２５２）。腫瘍細胞において、ＭｅｔおよびＨＧＦの異常な発現は、侵襲性／転移性の表現型の発現に導く。これを支持するものは、多くの型のヒト固体腫瘍（頭部および頸部、甲状腺、肺、胸、腹、肝臓、膵臓、結腸および腸、腎臓、膀胱、前立腺、卵巣、子宮、皮膚、骨、筋肉、ならびに他の結合組織が起源である癌を含む）のトランスフェクション実験および回顧的分析の結果である。Ｈａｄｄａｄら，前述；（Ｓｔｕａｒｔ，ＫＡ  ら（２０００）Ｉｎｔ  ＪＥｘｐ  Ｐａｔｈ  ８１：１７−３０；ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｖｏｏｒｔ，Ｒら（２０００）Ａｄｖ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ７９：３９−９０）。  ＨＧＦによるＭｅｔ活性のパラクリン機構およびオートクリン機構の両方が、ヒト腫瘍において生じる。さらに、生殖細胞系統で遺伝したか、または散発性の癌において見出されるかのいずれかのＭｅｔにおける変異の活性化が、種々のヒト癌の一因であることが、示されてきた。（Ｓｃｈｍｉｄｔ  Ｌら，１９９７，Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  １６：６８−７３１３）．
腫瘍のスペクトルの全域で、一般にＭｅｔ−ＨＧＦ発現のレベルは、臨床的結果と逆に相関する。この相関は、ヒト乳癌および前立腺癌腫について最も詳細に検証されてきた。胸部腫瘍中でのＭｅｔの過剰発現は、乳癌の進行と関係し、（Ｎｉｅｍａｎｎ  Ｃら，１９９８，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １４３：５３３−５４５；Ｔｓａｒｆａｔｙ  Ｉら，１９９９，Ａｎａｌ  Ｑｕａｎｔ  Ｃｙｔｏｌ  Ｈｉｓｔｏｌ  ２１：３９７−４０８；Ｆｉｒｏｎ  Ｍら，２０００，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９：２３８６−２３９７）、そして、高度なＨＧＦ発現はまた、腺管乳癌における乏しい生存と相関する（Ｙａｍａｓｈｉｔａ  ＪＩら，１９９４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５４：１６３０−１６３３；Ｇｈｏｕｓｓｏｕｂ  ＲＡＤら，Ｃａｎｃｅｒ  ８２：１５１３−１５２０）。Ｔｓａｒｆａｔｙら（前述）は、同じ原発性乳癌腫区域における腫瘍（Ｔ）組織に対して関与しない（Ｎ）Ｍｅｔ発現を定量化した。この患者群における全体のＭｅｔ分布は、Ｔ＜Ｎで４０％以下、Ｎ＝Ｔで４０％以下、Ｔ＞Ｎで２０％であった。正常組織よりも腫瘍においてより高いＭｅｔ発現が、乏しい患者の結果と関係した。
【０００５】
３つのグループ（Ｊｉｎ  Ｌら，１９９７，Ｃａｎｃｅｒ  ７９：７４９−７６０；Ｔｕｃｋ  Ａら，１９９６，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １４８：２２５−２３２；Ｅｄａｋｕｎｉ  Ｇら，２００１，Ｐａｔｈｏｌ  Ｉｎｔ’ｌ  ５１：１７２−１７８）が、良性の胸部組織および悪性の胸部組織におけるＭｅｔ発現およびＨＧＦ発現を検証し、しばしばレセプターおよびリガンドの両方が、発現され、そして、発現は、良性の胸部組織よりも、乳癌およびインサイチュの癌腫においてより高いことを見出した。Ｍｅｔは主に上皮乳癌細胞において検出される一方、ＨＧＦは、腫瘍細胞および細胞型間質において検出され、このことはＨＧＦが、オートクライン機構およびパラクライン機構のいずれかまたは両方によって乳癌細胞の増殖および侵襲性に寄与することを意味する。この結論はまた、ＭｅｔおよびＨＧＦによるトランスフェクション後の乳癌細胞の減少した細管形成によって達成される増加した腫瘍形成活性および転移活性を示す結果によって支持される（Ｆｉｒｏｎら、前述）。Ｍｅｔがまた、ヒト前立腺癌腫の性質において重要な役割を果たす、臨床的証拠および実験的証拠の集合が増大している。４つの独立した研究室が、局所的前立腺癌の約２分の１〜３分の２ではあるが、これらの腫瘍の全ての骨転移によって明らかにＭｅｔの異常な発現を報告している。このことは、Ｍｅｔが、前立腺癌における転移性増殖について強い選択的な機構を提供することを示す（Ｈｕｍｐｈｒｅｙ  ＰＡら，１９９５，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １４７：３８６−３９６；Ｐｉｓｔｅｒｓ  ＬＬら，１９９５，Ｊ  Ｕｒｏｌ  １５４：２９３−２９８；Ｗａｔａｎａｂｅ  Ｍら，１９９９，Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ  １４１：１７３−１７８；Ｋｎｕｄｓｅｎ  ＢＳら，２００２，Ｕｒｏｌｏｇｙ，６０：１１１３−１１１７））。
【０００６】
単純に考えて、より良好になるまで、または良好にならない限り、Ｍｅｔは、（１）非常に悪性の癌が器官の組織に独立してＭｅｔを発現し、そして（２）Ｍｅｔが、癌に対する組織特異的マーカーではなくプロセス特異的マーカーであり、腫瘍起源の指標ではなく腫瘍密度の指標である点で、非常に悪性癌の「代名詞」とみなし得る。
【０００７】
これらの意見を頭に置いて、本発明者らは、Ｍｅｔを利用するための分子画像化を利用することを提示して、インビボでの特定の固形腫瘍におけるＭｅｔ発現の状態を決定し、そしてその情報を供給されて、より好ましい臨床結果に向かって腫瘍の運命を変えるＭｅｔ特異的治療を設計する。
【０００８】
本開示は、分子画像化手段の進歩を記載し、そして細胞レベルでＭｅｔの性質を明瞭にするようにアプローチをし、これらのアプローチをインビボでのヒト癌の動物モデルに、および天然に存在するヒト癌に適用する。
【０００９】
本発明者らおよび同僚は、分子画像化としてＭｅｔを利用するようアプローチし、そして治療標的は、４つの一般的な領域に入る：
１顕微鏡的分子画像化：免疫組織化学、免疫蛍光（ＩＦ）、および共焦点レーザー走査顕微鏡（ＣＬＳＭ）
２．核分子画像化：放射免疫シンチグラフィー
３．「誘発的」機能分子画像化：磁気共鳴画像化および超音波検査による腫瘍生理学の評価
４．癌治療のＭｅｔ特異的形態
本発明は、主に上記アプローチ番号２に焦点が当てられ、番号４の下で発展に導く。
【００１０】
多くの刊行物が抗Ｍｅｔ抗体を開示する。Ｓｃｈｗａｌｌに対する米国特許第５，６８６，２９２号、同第６，２０７，１５２号、同第６，２１４，３４４号（１９９７年１１月１１日、２００１年３月２７日、および２００１年４月１０日それぞれ、ｍＡｂｓ、特にＨＧＦレセプターのアンタゴニストである一価抗体および癌を処置するそれらの使用を開示する。）これらの文書は、これらの抗体またはフラグメントを用いるインビボでの診断に言及していない。
【００１１】
米国特許第６，０９９，８４１号（Ｈｉｌｌａｎら）（２０００年８月８日）は、ＨＧＦレセプターアンタゴニストである抗体およびフラグメントを開示する。この文書は、これらの分子が、ＨＧＦレセプター活性化を実質的に高めるのに使用され得、薬学的組成物、製造物品、またはキットに含まれ得ることを開示する。これらの分子ＨＧＦレセプターアンタゴニストを使用する処置およびインビボでの診断の方法もまた、開示される。インビボでの診断に関して開示されていることは、「インビボでの画像化アッセイのような、当該分野で公知の種々の診断アッセイが使用され得、…」というあいまいな供述のみである。より注意が払われるインビボでのみの使用は、肝細胞増殖を刺激することである。
【００１２】
Ｐｒａｔら，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １１：５９５４−５９６２（１９９１）は、ｃ−Ｍｅｔ遺伝子によりコードされるβ鎖の細胞外ドメインに特異的ないくつかのｍＡｂｓを記載した（ＷＯ９２／２０７９２もまた参照のこと）。ｍＡｂを、Ｍｅｔを過剰発現する全ての生存するＧＴＬ−１６細胞（ヒト胃癌腫細胞株）によるマウスの免疫後に選択した。ハイブリッド上清を、ＧＴＬ細胞への結合のためにスクリーニングした。ＤＬ−２１、ＤＮ−３０、ＤＮ−３１およびＤＯ−２４として呼ばれる４つのｍＡｂを、選択した。Ｐｒａｔら，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃ  ４９：３２３−３２８（１９９１）は、ヒト通常組織および腫瘍組織におけるＭｅｔタンパク質の分布を検出するための抗−ｃ−Ｍｅｔ  ｍＡｂを記載した。Ｙａｍａｄａら，Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  ６３７：３０８−３１２（１９９４）もまた、参照のこと。ｍＡｂ  ＤＯ−２４が、ＩｇＧ２ａアイソタイプ抗体であると報告された。
【００１３】
Ｃｒｅｐａｌｄｉら，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １２５：３１３−３２０（１９９４）は、ｍＡｂ  ＤＯ−２４およびｍＡｂＤＮ−３０（前述）およびｍＡｂ  ＤＱ−１３を用いて上皮の組織およびＭＤＣＫ細胞単層におけるＨＧＦレセプターの細胞下分布を同定することを報告した。この文書に従って、ＤＱ−１３を、ヒトｃ−Ｍｅｔの１９Ｃ末端アミノ酸（Ｓｅｒｌ３７２〜Ｓｅｒ１３９０）に対応するペプチドに対して惹起した。
【００１４】
ヒトｃ−Ｍｅｔの細胞質ドメインに特異的なｍＡｂは、Ｂｏｔｔａｒｏら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１：８０１−８０４（１９９１）によって記載された。
【００１５】
Ｓｉｌｖａｇｎｏら，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ  １５：１８５７−１８６５（１９９５）は、インビボでのＭｅｔアンタゴニスト抗体を使用してＭａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）プラグにおける血管形成を促進することが記載された。
【００１６】
Ｈｉｌｌａｎら（前述）に従って；上で引用されたいくつかのｍＡｂは、Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ，Ｌａｋｅ  Ｐｌａｃｉｄ，ＮＹから市販されていた（細胞外エピトープに特異的なＤＯ−２４およびＤＬ−２１、細胞内エピトープに特異的なＤＱ−１３）。
【００１７】
（腫瘍画像化）
放射免疫シンチグラフィーは、癌の実験的および臨床的分子画像化について重要かつ魅力的な様式である。実質的に任意の所定のタンパク質抗原（複合体タンパク質混合物の小量成分として、または全細胞の小量表面成分として存在するものとしてさえ）に対して反応性のｍＡｂを惹起し、特徴付けし、増殖させ得る。適切な量における放射標識ｍＡｂについての、およびシンチグラフィーについての適切な量の確立された方法は、入手可能で、実現可能で、比較的安価で、そしてエピトープの特異性に関係無く実質的に任意のｍＡｂに適合可能である。新しい放射標識方法は、連続的に出現し、そして多くの研究室は、全長キメラ分子およびヒト化分子から単量体抗体フラグメントおよび多量体抗体フラグメントまでの、（あるいは）免疫結合体までの広範な抗体誘導体を、改善された標的選択性およびより好ましい生物的代謝回転力学を持つ潜在的により優れた画像化剤および治療剤として評価している。（プログラムおよび要旨，Ｎｉｎｔｈ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｗｉｔｈ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ．２００２．Ｃａｎｃｅｒ  ＢｉｏｔＳｉｅｒａｐｙ＆Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  １  ７  ：４６５−４９４）。
【００１８】
さらに、実験動物におけるおよびヒトにおける放射免疫シンチグラフィーを実施するのに必要な試薬、供給品、および装置は一般的である。何十年もの間、使わなかったかまたは修復した臨床的γカメラが、動物画像化適用について十分であると証明され、そしてこれらはそうであり続けている。小動物画像化のために適合された改変したまたは特注のγカメラが、より広く入手可能になっている。
【００１９】
分子画像化様式としてのシンチグラフィーの主な利点（抗体による画像化に限定されない）は、得られた画像が、本質的に定量的であるということである。γ放射の物理学および核画像の数学的分析（光子減衰および他のアーチファクトについての補正を含む）は、十分に理解されている。動物モデルおよびヒト研究において、本発明者らは、標的病変との放射性薬品相互作用の正味の集積および幾つかの速度論的パラメータを非侵襲的かつ正確に測定し得、そして診断画像の定量的分析と組み合わせられた直接計数のための生物学的サンプルのなお小さなセット（例えば、血液および排出物）の同時収集は、治療目的についての有用な線量測定概算の作成を可能にする。
【００２０】
多くの異なる放射性薬品は、画像化新生物に利用可能である。それらは、古典的な薬剤（例えば、ヨウ化ナトリウム（Ｎａ−１３１Ｉ）、塩化タリウム（２０１ＴＩＣＩ）、およびクエン酸ガリウム（６７Ｇａ−クエン酸））から、高度に選択的な陽電子−放射レポーター遺伝子検出システム（Ｖａｌｌａｂｈａｊｏｓｕｌａ  Ｓ（２００１），Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ．Ｉ  Ｋｈａｌｋｈａｌｉら，編  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ．ｐｐ．３１−６２；Ｉｙｅｒ  Ｍら（２００１）Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  ４２，９６−１０５）までの範囲である。特定の細胞表面成分に結合する放射標識された分子は、腫瘍画像化および治療への１つの首尾良いアプローチを提供する。例としては、神経内分泌新生物を画像化および潜在的に処置するためのＯｃｔｒｅｏＳｃａｎ（登録商標）、結腸大腸癌および卵巣癌を画像化するためのＣＥＡＳｃａｎ（登録商標）およびＯｎｃｏＳｃｉｎｔ（登録商標）、ならびに特定のリンパ腫を検出および処置するためのＢｅｘｘａｒ（登録商標）およびＺｅｖａｌｉｎ（登録商標）である。
【００２１】
このストラテジーの新規なバリエーションとして、本発明者らは、放射性薬品（ならびに関連する診断薬剤および治療薬剤）を開発し始め、この放射性薬品は、Ｍｅｔ癌遺伝子産物の標的化に基づく、起源組織による以外の新生物の表現型および侵襲性／転移性の可能性に従って、新生物を区別するように設計される。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００２２】
（発明の要旨）
診断薬剤および治療薬剤として組織特異的ｍＡｂを用いる新規なバリエーションとして、本発明者らは、放射性薬品の形態で例示される、抗体ベースの薬剤を開発し、この薬剤は、起源組織による以外の表現型および侵襲性／転移性の可能性に従って、新生物を区別する。このような抗体は、Ｍｅｔ癌遺伝子タンパク質産物の細胞外エピトープに特異的である。本発明者らは、ヒトＭｅｔ（「ｈＭｅｔ」または「ｈｕＭｅｔ」）のＥＣＤに対してｍＡｂを惹起および特徴付けした；それらはまた、ヒトＨＧＦに特異的な抗体（「ｈＨＧＦ」または「ｈｕＨＧＦ」）を産生した。それらは、最近、単一のｍＡｂ以外の、異なるエピトープ特異性を有する少なくとも３つの抗ＨＧＦ  ｍＡｂの混合物が、インビボでＨＧＦによるＭｅｔの活性化を遮断するのに必要であったと報告された（Ｃａｏ  Ｂら（２００１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８：７４４３−７４４８５；同時係属ＰＣＴ出願，Ｃａｏら，ＷＯ０１／３４６５０（これらは、その全体が本明細書で参考として援用される））。
【００２３】
ＭｅｔおよびＨＧＦに対して反応性の放射標識されたｍＡｂと、特に、ｈＨＧＦおよびｈＭｅｔの両方を産生する腫瘍との混合物を用いる腫瘍の画像化が、本明細書に開示され、それゆえに、オートクライン様式で増殖するように刺激される。本発明者らは、抗ｈＭｅｔ抗体および抗ｈＨＧＦ抗体またはそれらの組み合わせを使用して、これらのｍＡｂが、特異的である（ヌードマウスにおいて）タンパク質を発現または分泌するヒト腫瘍をインビボで画像化し得ることを発見した。
【００２４】
幾つかの新規な抗Ｍｅｔ  ｍＡｂをｈＭｅｔに対して産生し、そして特徴付けた。これらのｍＡｂを産生するハイブリドーマ細胞株を、受託番号ＰＴＡ−４３４９およびＰＴＡ−４４７７の下、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託した。
【００２５】
これらの抗体（Ｍｅｔ３およびＭｅｔ５）は、イムノアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）において、または高レベルのｈＭｅｔを発現することが既知の腫瘍細胞に対する間接的ＩＦにおいて、または生物学的活性もしくは生化学的活性の抗体阻害（例えば、スキャッターアッセイまたはウロキナーゼ−刺激アッセイにおいて）によって、ｈＭｅｔに結合する。
【００２６】
放射標識単独または抗ＨＧＦ  ｍＡｂの中和混合物との組み合わせのいずれかの、２Ｆ６と称される１つのハイブリドーマ由来の放射性ヨウ素化抗ｈＭｅｔ  ｍＡｂ（＝Ｍｅｔ３）は、そのような腫瘍を保有するマウスのガンマカメラシンチグラフィーによって実証されるように、ｈＭｅｔおよびｈＨＧＦについての腫瘍オートクラインを迅速かつ有効に検出した。
【００２７】
少なくとも２つの抗ｈＭｅｔ  ｍＡｂは、Ｍｅｔと結合する場合にはアゴニストであることが示された。少なくとも１つの抗Ｍｅｔ  ｍＡｂは、Ｍｅｔと結合する場合には強力なアンタゴニストであった。
【００２８】
従って、本発明は、以下の新規なｍＡｂに関する：
（ａ）受託番号ＰＴＡ−４３４９の下でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたｍＡｂ  Ｍｅｔ３；および
（ｂ）受託番号ＰＴＡ−４４７７の下でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたｍＡｂ  Ｍｅｔ５、
または抗体の抗原結合フラグメントもしくは誘導体。
【００２９】
ａｈａ  ｍＡｂ、またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体は、上記のｍＡｂ、フラグメントまたは誘導体の同定生物学的特徴を全て有することもまた、意図される。
【００３０】
１つの実施形態は、Ｍｅｔに特異的なヒト化ｍＡｂ（または抗原結合フラグメントもしくは誘導体）を含み、ここで抗Ｍｅｔ  ｍＡｂの重鎖領域および／もしくは軽鎖Ｖ領域、またはＶ領域の抗原結合部位は、上記の新規なｍＡｂの対応する領域または部位の全ての同定的生物学的特徴または構造的特徴を有し、そしてヒト化ｍＡｂの実質的に残り全ては、ヒト起源である。上記ｍＡｂ（Ｍｅｔ３またはＭｅｔ５）が結合するエピトープと同じエピトープに結合するＭｅｔエピトープに特異的なヒトｍＡｂ、またはヒト抗体の抗原結合フラグメントもしくは誘導体もまた、含まれる。
【００３１】
上記ｍＡｂ、フラグメントまたは誘導体を含む組成物もまた、意図される。この組成物は、Ｍｅｔに特異的な１つ以上のさらなる抗体をさらに含み得るか、またはさらなる１つ以上の抗体の抗原結合フラグメントもしくは誘導体を含み得る。上記組成物は、ＨＧＦに特異的な１つ以上の抗体、フラグメントもしくは誘導体をさらに含み得る。好ましくは、抗ＨＧＦは、以下かなる群より選択される：
（ａ）受託番号ＰＴＡ−３４１４の下でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたｍＡｂ；
（ｂ）受託番号ＰＴＡ−３４１６の下でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたｍＡｂ；
（ｃ）受託番号ＰＴＡ−３４１３の下でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたｍＡｂ；および
（ｄ）受託番号ＰＴＡ−３４１２の下でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたｍＡｂ。
【００３２】
上記の好ましい組成物は、この組成物における少なくとも１つの抗体が、適切な診断的標識または検出可能な標識、好ましくは、インビボで検出可能な標識を保有する（それらの標識に結合する、それらの標識と結合体化される、それらの標識により標識される）点において、診断的に有用である。好ましい検出可能な標識としては、放射性核種ＰＥＴ画像化可能剤ＭＲＩ画像化可能剤、蛍光物質（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｒ）、蛍光原（ｆｌｕｏｒｏｇｅｎ）、発色団、色素原、リン光物質（ｐｈｏｓｐｈｏｒｅｓｃｅｒ）、化学発光物質（ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｒ）または生体発光物質（ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｒ）が挙げられる。このような標識は、組織サンプル中のＭｅｔレベルまたはＨＧＦレベルの検出または定量を可能にし、そして、それゆえに、Ｍｅｔの発現もしくは増強された発現（またはＨＧＦのその結合）が、病理学的診断マーカーおよび／または治療標的として振る舞うか、または役立つ疾患、特に、癌における診断ツールおよび予後判定ツールとして使用され得る。好ましい放射性核種は、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９９Ｔｃ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、９７ＲＵ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、８９Ｚｒおよび２０１Ｔｌかなる群より選択される。最も好ましい標識は、１２５Ｉである。好ましいインビボでの検出は、放射免疫シンチグラフィーによる。
【００３３】
診断的抗体組成物において、蛍光物質または蛍光原は、好ましくは、フルオレセイン、ローダミン、ダンシル、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルデヒド、フルオレサミン、フルオレセイン誘導体、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ、Ｒｈｏｄａｉｍｉｎｅ  Ｇｒｅｅｎ、Ｒｈｏｄｏｌ  ＧｒｅｅｎまたはＴｅｘａｓ  Ｒｅｄである。
【００３４】
好ましくは、診断標識は、タンパク質に結合された１つ以上のジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）残基を介して抗体タンパク質に結合される。好ましい実施形態において、標識は、１つのＤＴＰＡ残基を介して結合される。抗体が、１つ（またはそれより多い）ＤＴＰＡに結合しているＭＲＩのための好ましい診断組成物は、金属原子に結合している。１つの好ましい診断方法は、これらの標識されたタンパク質を使用するＭＲＩである。ＭＲＩに有用な多数の金属（放射性同位体ではない）としては、ガドリニウム、マンガネーゼ、銅、鉄、金およびユーロピウムが挙げられる。ガドリニウムが、最も好ましい。一般的に、診断用途における検出可能性に必要な標識された抗体の量は、考慮（例えば、年齢、状態、性別）および患者における疾患の程度、禁忌、必要ならば、他の変数に依存して変化し、そして、個々の医師または診断医により調整されるべきである。投薬量は、各単一の抗体または抗体の組み合わせにつき、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇで変化し得る。
【００３５】
本発明は、（ｉ）細胞表面上、（ｉｉ）組織中、（ｉｉｉ）器官、または（ｉｖ）生物学的サンプル中の、Ｍｅｔの存在を検出するための方法を提供し、これらの細胞、組織、器官またはサンプルは、Ｍｅｔを発現していると疑われ、この方法は、以下の工程を包含する：
（ａ）細胞、組織、器官またはサンプルと上記のような診断組成物とを接触させる工程；
（ｂ）細胞、組織、器官またはサンプルに関連する標識の存在を検出する工程。
【００３６】
この方法において、接触させる工程および検出する工程は、インビトロであり得；接触させる工程は、インビボ、そして検出する工程は、インビトロ、または好ましくは、接触させる工程および検出する工程は、インビボであり得る。この方法は、診断、予後判定、および／またはモニタリング（例えば、治療後）の目的のために実施され得る。インビボにおいて、検出は、好ましくは、上記のような放射性核種によりものであり、好ましくは、放射免疫シンチグラフィーによるものである。この方法はまたＭＲＩ画像化可能剤である検出可能な標識を利用し得、そしてＭＲＩを使用して、Ｍｅｔ発現腫瘍の結合および局在化を検出し得る。
【００３７】
Ｍｅｔ発現癌の進行を決定する方法であって、この方法は、以下の工程を包含する：
ａ）癌を有する患者由来の組織サンプルと上記のような抗体組成物とを接触させる工程；
ｂ）抗体のＭｅｔへの結合を検出する工程；
ｃ）サンプル中のＭｅｔ（またはＨＧＦ）の量を測定する工程；ならびに
ｄ）抗体結合と癌発生の臨床的に規定された病期とを相関させる工程。
【００３８】
患者におけるＭｅｔ発現癌の存在を検出するための方法であって、この方法は、以下の工程：
ａ）被験体由来の組織サンプルと上記抗体組成物とを接触させる工程；
ｂ）サンプル中のＭｅｔ（および、必要に応じて、ＨＧＦを伴う）と抗体との結合を検出する工程、
を包含し、それにより、コントロール組織サンプルから抗体への抗原の結合に対して、抗原の抗体への結合の増加が、サンプル中のＭｅｔの量の増加を示し、それにより、Ｍｅｔの量の増加が、サンプル中の癌性組織の存在を示す。
【００３９】
Ｍｅｔ発現腫瘍を処置するのに有用な治療組成物もまた、提供され、ここで、少なくとも１つの抗体（またはフラグメントもしくは誘導体）は、適切な治療「標識」（本明細書で「治療的部分」ともいわれる）を保有する。治療的部分は、ＭｅｔおよびＨＧＦの発現に関連する疾患または状態を処置する際に、それを活性化させるタンパク質に加えられる、原子、分子、化合物、または任意の化学成分である。治療的に活性な部分は、タンパク質に直接的または間接的に結合され得る。治療的に標識されたポリペプチド（抗体、フラグメント、誘導体）タンパク質は、薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を含む医薬組成物として投与され、好ましくは、注入に適した形態である。
【００４０】
好ましい治療的部分は、放射性核種（例えば、４７Ｓｃ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、１０９Ｐｄ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂまたは２１７Ｂｉ）である。
【００４１】
本発明は、製造の物品および関連するキットを含む。キットは、以下：
ａ）上記のような抗体、フラグメントまたは誘導体を含む、標識された第１の容器；
ｂ）診断的にもしくは薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を含む、標識された第２の容器；ならびに
ｃ）抗体を使用して、被験体における癌性状態もしくは腫瘍を診断、予後判定、モニタリング、または処置するための指示書であって、ここで、被験体における癌細胞または腫瘍細胞が、Ｍｅｔを発現する、指示書、
を含み得、ここで、抗体、フラグメントまたは誘導体は、状態を診断、予後判定、モニタリングまたは処置するのに有効であり、かつ、標識された容器上の標識は、抗体が、類似の場合を診断、予後判定、モニタリングまたは処置するために使用され得る。
【００４２】
（ｉ）Ｍｅｔ発現腫瘍細胞の増殖、移動、もしくは浸潤、または（ｉｉ）Ｍｅｔ発現腫瘍細胞によって誘導される脈管形成を阻害するための方法もまた、提供され、この方法は、細胞と有効量の上記治療組成物とを接触させる工程を包含する。好ましくは、接触させる工程は、インビボである。
【００４３】
処置方法において、治療組成物は、好ましくは、少なくとも１つの抗体、フラグメントまたは誘導体が、治療的部分に結合し、治療的部分と結合体化し、あるいは治療的部分により標識される治療組成物である。
【００４４】
本発明は、（ｉ）Ｍｅｔ発現細胞の所望でない増殖、移動もしくは浸潤、または（ｉｉ）Ｍｅｔ発現細胞によって誘導される所望でない脈管形成、に関連する癌性疾患または状態を有する被験体を処置するための方法を提供し、この方法は、有効量の上記治療組成物、好ましくは、少なくとも１つの抗体、フラグメントまたは誘導体が、治療的部分に結合し、治療的部分と結合体化し、あるいは治療的部分により標識される治療組成物を、被験体に投与する工程を包含する。
【００４５】
（好ましい実施形態の説明）
Ｍｅｔおよび／またはそのリガンドであるＨＧＦの不適切な発現は、種々のヒト固形癌において、芳しくない予後に関連する。本発明者らは、いくつかの新規の抗Ｍｅｔ  ｍＡｂおよび／または１つ以上の抗ＨＧＦ  ｍＡｂとの抗Ｍｅｔ  ｍＡｂの組み合わせを使用して、インビボでの腫瘍におけるＭｅｔおよびＨＧＦの発現の核画像化のための動物モデルを開発した。本発明者らは、ヌードマウス中のＭｅｔ発現腫瘍異種移植片が、放射標識した抗Ｍｅｔ単独または抗ＨＧＦ  ｍＡｂとの組み合わせの注射の１時間後には、ある場合において、注射後約３日に起こるピークの画像コントラスト（腫瘍における活性  対  体全体における活性）を有して、視覚化され得ることを開示した。Ｍｅｔ発現腫瘍異種移植片は、見積もられた注射活性の約５％〜２０％の照射線標識したｍＡｂの最初の取り込みの範囲を示す。腫瘍関連放射活性は、ピーク画像コントラストにおいて、体全体の活性の約１０％〜約４０％に相当した。放射標識ｍＡｂの転換は、高い初期取り込み値を示す腫瘍異種移植片において、実質的により迅速なようであった。
【００４６】
次の説明において、免疫学、細胞生物学および分子生物学の当業者に公知の種々の方法論に対して参照がなされる。参照がなされるそのような公知の方法論を記載する出版物および他の資料は、完全に記載されているかのように、その全体が参考として本明細書中に援用される。免疫学の一般原理を記載する標準的参考文献としては、Ａ．Ｋ．Ａｂｂａｓら、Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第４版），Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，２０００；Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙら、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ．Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ，第４版，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９；Ｒｏｉｔｔ，Ｉ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（現在の版）Ｃ．Ｖ．Ｍｏｓｂｙ  Ｃｏ．，Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ（１９９９）；Ｋｌｅｉｎ，Ｊ．，Ｉｍｍｏｌｏｇｙ，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ，（１９９０）が挙げられる。
【００４７】
抗体は、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子としても公知のポリペプチドであり、これは、特定の抗体またはエピトープへの結合特異性を示す。用語「抗体」の本使用は、広く、従来のインタクトな４鎖Ｉｇ分子（ＩｇＧ抗体、ＩｇＡ抗体およびＩｇＥ抗体の特徴）を越えて拡張される。抗体は、ポリクローナル抗体（例えば、分画された免疫血清または分画されない血清）またはｍＡｂ（以下を参照のこと）の形態において、起こり得る。また、１つより多くの抗原特異性を有するＩｇ分子（例えば、２つの異なる抗体由来の抗原結合領域または抗原結合鎖を結合することによって形成される二重特異的抗体）が、含まれる。抗体は、代表的には、特定の抗原に対する結合特異性を示すポリペプチドである。天然のＩｇ分子は、代表的にはヘテロテトラマー糖タンパク質（２つの同一の軽鎖（Ｌ）および２つの同一の重鎖（Ｈ）から構成物され、各Ｌ鎖は、１つの鎖間ジスルフィド結合によって、Ｈ鎖に結合される）である。さらなるジスルフィドが、２つのＨ鎖を架橋する。各Ｈ鎖およびＬ鎖は、規則正しく間隔のあいた鎖内ジスルフィド結合を有する。各Ｈ鎖およびＬ鎖のＮ末端は、可変（Ｖ）ドメインまたは領域（ＶＨおよびＶＬ）を含む。ＶＨドメインのＣ末端側に、多くの定常（Ｃ）ドメイン（ＣＨ）があり；Ｌ鎖は、そのｃ末端で、単一Ｃドメインのみを有する（ＣＬと称される）。特定のアミノ酸残基は、ＶＨドメインとＶＣドメインとの間のインターフェースを形成する。脊椎動物のＬ鎖はそれらのＣ末端のアミノ酸配列に基づいて、２つの別個の型（アイソトープともまた呼ばれる、κおよびλ）のうちの１つに割り当てられる。それらのＣＨドメインの配列に依存して、Ｉｇは、異なるクラス：ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥおよびＩｇＤのメンバーであり、それぞれγ、μ、αおよびδと称されるそれらのＨ鎖によって同定される。いくつかのサブクラスまたはアイソタイプが、公知である（例えば、ＩｇＧアイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４（それぞれγ１、γ２、γ３およびγ４として公知なＨ鎖を含む）またはＩｇＡアイソタイプＩｇＡ１およびＩｇＡ２（それぞれα１およびα２として公知のＨ鎖を含む）。
【００４８】
抗体分子の記載されるドメインまたは領域に対して使用される場合、用語「可変」は、異なる抗体間で異なり、また、抗体の抗原特異性を担う、アミノ酸配列をいう。配列可変性は、Ｖ領域を通じて等しく分配されるが、代表的にはＶＨドメインまたはＶＬドメインに存在する、３つの特定領域（相補性決定領域（ＣＤＲ）または、超可変領域と称される）においてより大きい。Ｖドメインのより高度に保存された部位は、フレームワーク（ＦＲ）領域と呼ばれる。各ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、代表的には４つのＦＲ領域を含む。主として、３つのＣＤＲ領域に結合されるβシート形状を採り、これは、βシート構造を結合するループを形成し、また、いくつかの場合において、βシート構造の一部を形成する。各鎖中のＣＤＲは、ＦＲ領域によって非常に近位に保持され、また、他の鎖からのＣＤＲを有し、抗原結合部位（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９８７））の形成に寄与する。Ｃドメインは、抗原結合において直接的に関連しないが、種々のエフェクター機能（オプソニン作用、相補的固定および抗体依存細胞毒性）を示す。
【００４９】
Ｉｇ分子（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦｖまたはｓｃＦｖフラグメント（全てが当該分野において周知である）を含む）の抗原結合フラグメントはまた、抗体の定義中に含まれる。ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントは、インタクトな抗体のＦｃフラグメントを欠き、循環からより迅速に除去され、また、インタクトな抗体よりもより低い非特異的組織結合を有し得る（Ｗａｈｌら、Ｊ  Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２４：３１６−３２５（１９８３））。Ｆａｂフラグメント（および単一の抗原結合部位のみを有する一価抗体の他の形態）は、他の公知の利点を有する（特に、インビボでのＭｅｔ保有細胞への抗体の侵入またはＭｅｔの活性化、および確かめられたシグナル伝達経路を避けるか、あるいは制限することが好ましい場合）。本発明において有用である抗体のＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ＦｖおよびｓｃＦｖフラグメントまたは形態が、Ｍｅｔタンパク質の検出、定量または単離、ならびにインタクトな抗体の場合と同様の様式でＭｅｔ発現腫瘍の診断または治療のために使用され得ることが理解される。従来のフラグメントは、代表的には、酵素（例えば、パパイン（Ｆａｂフラグメントについて）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２フラグメントについて）を使用するタンパク質溶解性分裂によって生成される。Ｆｖフラグメントは、（Ｈｏｃｈｍａｎ，Ｊ．ら、１９７３，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １２：  １１３０−１１３５；Ｓｈａｒｏｎ，  Ｊ，ら、１９７６，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １５：１５９１−１５９４）中に記載される。ｓｃＦｖポリペプチドは、目的のＩｇ由来の超可変領域を含み、インタクトなＩｇのサイズの画分の間、天然のＩｇの抗原結合部位を再生成する（Ｓｋｅｒｒａ，Ａ．ら、（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４０：１０３８−１０４１；Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ａ．ら、（１９８９）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１７８：４９７−５１５；Ｗｉｎｔｅｒ，Ｇ．ら、（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３４９：２９３−２９９）；Ｂｉｒｄら、（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３；Ｈｕｓｔｏｎら、（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９；米国特許第４，７０４，６９２号，同第４，８５３，８７１号，同第４，９４，６７７８号，同第５，２６０，２０３号，同第５，４５５，０３０号）。異なる特異性の抗体由来の１つのよりも多く抗原結合抗体フラグメントを結合することによって形成される二量体抗体および複数特異的抗体は、抗体として含まれる。
【００５０】
本明細書中で使用される「モノクローナル抗体またはｍＡｂは、実質的に単一Ｂリンパ球クローンの生成物である抗体の（全体でない場合）均質な集団の一部である抗体をいう。ｍＡｂは、当該分野において周知であり、それは、従来の方法を使用して製造される；例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７（１９７５）；米国特許第４，３７６，１１０号；Ｈａｒｌｏｗ，Ｅ．ら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８８）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ：Ａ  Ｎｅｗ  Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｅｓ，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ（１９８０）；Ｈ．Ｚｏｌａら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，１９８２）を参照のこと。ｍＡｂｓは、同様に、組み換え的に生成され得る（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に従う）。ｍＡｂは、単一種由来であり得る（例えば、マウスｍＡｂまたはヒトｍＡｂ）か、あるいはキメラであり得る。
【００５１】
本発明のｍＡｂは、「キメラ」抗体を含むことが企図される。キメラ抗体は、Ｉｇ分子であり、ここで、分子のことなる部位は、異なる動物種由来である。例は、マウスｍＡｂ由来の可変領域およびヒトＩｇ定常領域を有するＩｇである。キメラ抗体のような抗原結合フラグメントが、また意図される。キメラ抗体およびそれらの生成のための方法が、当該分野において公知である。例えば、Ｃａｂｉｌｌｙら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：３２７３−３２７７（１９８４）；Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許第４，８１６，５６７号（３／２８／８９）および同第６，３３１，４１５号（１２／１８／０１）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１−６８５５（１９８４）；Ｂｏｕｌｉｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：６４３−６４６（１９８４）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：２６８−２７０（１９８５）；Ｓａｈａｇａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：１０６６−１０７４（１９８６）；Ｌｉｕら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：３４３９−３４４３（１９８７）；Ｂｅｔｔｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１−１０４３（１９８８））を参照のこと。これらの参考文献は、本明細書中に参考として援用される。
【００５２】
好ましいキメラ抗体は、「ヒト化」抗体である。非ヒト抗体をヒト化するための方法が、当該分野において周知である。非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化形態は、キメラＩｇ、その鎖またはフラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’などのような）（非ヒトＩｇ由来の最小配列を含む）である。好ましいヒト化抗体において、ヒトＩｇＣＤＲ非ヒト種（ドナーまたは移植抗体（例えば、マウス、ラット、ウサギ））からの残基を受け取り、レシピエント抗体は、レシピエントＣＤＲとドナーＣＤＲ残基とを交換する）。いくつかの実例において、ヒトＩｇのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基によって置換され得る。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体でも、移植されるＣＤＲまたは構造配列においてのいずれかでも認められない残基を含み得る。一般には、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、代表的には２つのＶドメインの実質的に全てを含み、ここで、非ヒトＩｇのそれらに対応するＣＤＲ領域の全てか、または実質的に全て、および、ＦＲ領域の全て、または実質的に全ては、ヒトＩｇコンセンサス配列のＶドメインである。ヒト化抗体はまた、必要に応じて、ヒトＩｇ  Ｃ領域の少なくとも一部を含む（例えば、Ｆｃ）。Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ，２：５９３−５９６（１９９２）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８））；米国特許第４，８１６，５６７号）を参照のこと。
【００５３】
ヒト化抗体を製造するために使用されるヒトＶドメイン（ＶＨおよびＶＬ）の選択は、ヒトに対して反復的に投与される場合、生成物の抗原性を減少するために重要である。「最適に一致する」方法に従って、げっ歯類抗体のＶドメインの配列は、公知のヒト可変ドメイン配列の全ライブラリーに対してスクリーニングされる。次いで、げっ歯類に最も近いヒト配列は、ヒト化抗体のためのヒトＦＲとして受け入れられる（Ｓｉｍｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７））。別の方法は、Ｌ鎖またはＨ鎖の特定の部分群の全てのヒト抗体のコンセンサス配列由来の特定のＦＲを使用する。同じＦＲが、いくつかの異なるヒト化抗体について使用され得る（Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３−２６３２（１９９３））。
【００５４】
ヒト化抗体が、抗原に対するその（好ましくは高い）結合親和性および他の好ましい生物学的特性を保つことが、重要である。これを達成するために、ヒト化抗体は、親配列およびヒト化配列の３次元（３Ｄ）モデルを用いる親配列および種々の概念上のヒト化産物の分析のプロセスによって設計される。３Ｄ  Ｉｇモデルは、市販されており、当業者に公知である。入手可能なコンピュータープログラムが、選択された候補Ｉｇ配列の有望な３Ｄ立体配座構造を例示および展示する。これらの展示の調査が、候補Ｉｇ配列の機能的能力における特定のアミノ酸残基の可能性のある役割の分析を可能にする。この方法において、ＦＲ残基が、コンセンサス配列および導入配列から、選択され得、結合され得、その結果所望される抗体特徴が達成される。一般に、ＣＤＲ残基が、抗原結合への影響に直接的におよび最も実質的に関与する（例えば、ＷＯ９４／０４６７９）。
【００５５】
ヒト抗体の産生のために、免疫化の際に、内在性Ｉｇ産生の非存在下でヒト抗体の全レパートリーを産生可能なトランスジェニック動物（例えば、マウス）が、利用される。例えば、キメラのマウスおよび生殖細胞系変異マウスにおける抗体Ｈ鎖結合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合の欠失が、内因性抗体産生の完全な阻害を生じる。ヒト生殖細胞系Ｉｇ遺伝子アレイをこのような生殖細胞系変異マウスに移すことは、抗原投与の際にヒト抗体の産生を生じる（Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：２５５１−２５５（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら  Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら、Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ.７：３３（１９９３））。
【００５６】
ヒト抗体がまた、ファージディスプレイライブラリーにおいて産生され得る（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．，２２２：５８１（１９９１））。ＣｏｔｅらおよびＢｏｅｒｎｅｒらの技術がまた、ヒトｍＡｂの調製に利用可能である（Ｃｏｌｅら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）およびＢｏｅｒｎｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１４７：８６−９５（１９９１））。
【００５７】
本発明のｍＡｂまたはそれらのドメインの抗原結合フラグメントを含む、他のタイプのキメラ分子または融合ポリペプチドは、インビボで延長された半減期のために設計されたキメラ分子または融合ポリペプチドを含む。これは、ＩｇＧ分子のＦｃ領域の「サルベージレセプター」結合エピトープの配列および高次構造を最初に同定することを含み得る。「サルベージレセプター結合エピトープ」とは、本明細書中で、特定のＩｇＧ分子のインビボ半減期の増加に寄与する（他のＩｇクラスと比較した場合）、任意のアイソタイプのＩｇＧ分子のＦｃ領域のエピトープまたはフラグメントをいう。一度このエピトープが同定されると、ｍＡｂの配列は同定された結合エピトープの配列および高次構造を含むように修飾される。配列を変化後、キメラを、修飾されていないＩｇ分子またはＩｇ鎖と比較してより長いインビボ半減期について試験する。より長い半減期が明らかでない場合、同定した結合エピトープの配列および高次構造を含むように配列をさらに変える。このキメラ分子の抗原結合活性または他の所望の生物活性が維持されることに気を付ける。サルベージレセプター結合エピトープは、一般的に、１つまたは２つのＦｃドメインのループの全てまたは一部と一致する領域を構成する；好ましくは、この配列は、抗Ｍｅｔ抗体フラグメント中の類似の位置に「移植」される。好ましくは、Ｆｃドメインの１つまたは２つのループに由来する３つ以上の残基が、移される；より好ましくは、エピトープは、ＩｇＧ  ＣＨ２ドメインから選ばれ、そして１つまたはそれ以上の抗Ｍｅｔ抗体のＣＨ１、ＣＨ３、またはＶＨ領域に移される。あるいは、ＣＨ２ドメインに由来するエピトープは抗Ｍｅｔ抗体フラグメントのＣＬドメインまたはＶＬドメインに移される。
【００５８】
本明細書中で意図される、別のキメラ分子は、Ｉｇ定常ドメインまたは無関係の（異種の）ポリペプチド（例えば、アルブミン）と融合した抗Ｍｅｔ抗体鎖またはフラグメントを含む。このようなキメラは、モノマー、ホモマルチマーまたはヘテロマルチマーとして設計され得、ヘテロダイマーが好ましい。
【００５９】
別の実施形態において、キメラは、アルブミンと融合した抗Ｍｅｔ抗体フラグメントを含む。このようなキメラは、プラスミド発現ベクターにアルブミンの全コード領域を挿入することにより構築され得る。抗体鎖またはフラグメントをコードするＤＮＡは、アルブミンコード配列に対して５’側に、リンカーをコードする挿入物とともに挿入され得る（例えば、Ｇｌｙ４（Ｌｕら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ３５６：５６〜５９（１９９４）））。キメラを、所望の哺乳動物細胞または酵母で発現させ得る。
【００６０】
一般的に、これら様々なキメラ分子は、よりありふれたキメラ抗体と類似の方法で構築され得、ここで、ある抗体由来の可変ドメインは、他の抗体のＶドメインに置換される。このような、抗体−非抗体融合物を調製する際のさらなる詳細については、例えば、Ｃａｐｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３７：５２５（１９８９）；Ｂｙｒｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３４４：６６７（１９９０）を参照のこと。
【００６１】
二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体フラグメントである。ここで、このフラグメントは、同じポリペプチド鎖中で、ＶＬドメインに結合するＶＨドメインを含む（ＶＨ−ＶＬ）。非常に短いので、同じ鎖上の２つのドメイン間でペアリングが可能ではないリンカーを用い、ドメインを別の鎖の相補ドメインとペアを作らされ、そして２つの抗原結合部位を形成させられる。二重特異性抗体は、例えばＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，９０：６４４４〜６４４８（１９９３）において、さらに詳細に記載される。
【００６２】
抗イディオタイプ（抗−Ｉｄ）抗体は、一般的に、抗原結合部位と結合する独自の決定基を認識する抗体である。抗−Ｉｄ抗体は、抗Ｉｄが調製されるｍＡｂで、ｍＡｂの供給源と同じ種および遺伝子型の動物（例えば、マウスの株）を免疫することで調製され得る。免疫化された動物は、これらのイディオタイプ決定基に対する、抗体（抗−Ｉｄ抗体）を産生することにより、免疫化する抗体のイディオタイプエピトープを認識しそして応答する。抗−Ｉｄ抗体はまた、「免疫原」として使用され、さらに別の動物において免疫応答を誘導し、いわゆる抗−抗−Ｉｄ抗体を産生し得る。抗−抗−Ｉｄ抗体は、抗−Ｉｄを誘導する元のｍＡｂとエピトープ的に同じである。従って、ｍＡｂのイディオタイプ決定基に対する抗体の使用により、同一の特異性の抗体を発現する別のクローンを同定することが可能である。従って、抗−Ｉｄ  ｍＡｂは、関与する場合、エピトープと構造的に類似する、それらの独自のイディオタイプエピトープ、または「イディオトープ」（例えばＭｅｔエピトープ）を有する。
【００６３】
（抗体の機能的誘導体および化学的に修飾された抗体）
抗Ｍｅｔ抗体の化学的修飾（共有結合修飾を含む）は、本発明の範囲内である。あるタイプの修飾は、選択された側鎖またはＮ−またはＣ−末端残基と反応し得る有機誘導体化薬剤と標的アミノ酸残基を反応させることにより、分子に導入される。
【００６４】
二官能性薬剤を用いた誘導体化は、抗体（またはフラグメントまたは誘導体）を、精製法（下記）に使用される水不溶性支持マトリックスまたは表面に架橋するために、有用である。一般的に使用される架橋剤としては、以下が挙げられる：例えば、１，１−ビス（ジアゾ−アセチル）−２−フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（例えば、４−アジドサリチル酸とのエステル）、ホモ二官能性イミドエステル（例えば、ジスクシンイミジルエステル（例えば、３，３’−ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート））が挙げられる）、および二官能性マレイミド（例えば、ビス−Ｎ−マレイミド−１，８−オクタン。メチル−３−［（ｐ−アジドフェニル）ジチオ］プロピオイミデートのような誘導体化薬剤は、光を照射された場合、架橋し得る光活性化可能な中間体を形成する。ブロモシアン活性化炭水化物のような反応性水不溶性マトリックスおよび米国特許第３，９６９，２８７号；同３，６９１，０１６号；同４，１９５，１２８号；同４，２４７，６４２号；同４，２２９，５３７号；および同４，３３０，４４０号に記載される反応性基質は、タンパク質固定化において使用される。
【００６５】
他の修飾としては、グルタミニル残基およびアスパラギニル残基の、それぞれに対応する、グルタミル残基およびアスパルチル残基の脱アミド、プロリンおよびリジンのヒドロキシル化、セリル残基またはトレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン側鎖、アルギニン側鎖、およびヒスチジン側鎖のａ−アミノ基のメチル化（例えば、Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，（１９８３）を参照のこと）、Ｎ末端アミンのアセチル化、および任意のＣ末端カルボキシル基のアミド化が挙げられる。修飾された形態の残基は、本発明の範囲内である。
【００６６】
ポリペプチドの天然グリコシル化パターンが変化した抗体もまた、本明細書中に含まれる。これは、１つ以上の炭水化物部分の欠失および／または天然ポリペプチド鎖に存在しない、１つ以上のグリコシル化部位を付加することを意味する。タンパク質のグリコシル化は、代表的にＮ連結（Ａｓｐ側鎖に結合した）グリコシル化またはＯ連結（ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはＳｅｒまたはＴｈｒ；おそらく、５−ヒドロキシＰｒｏまたは５−ヒドロキシＬｙｓに結合した）グリコシル化である。トリペプチドＡｓｐ−Ｚ−ＳｅｒおよびＡｓｐ−Ｚ−Ｔｈｒ（ここで、Ｚは任意のアミノ酸であるが、Ｐｒｏではない）は、Ａｓｐ側鎖に対する炭水化物部分の酵素的連結の認識配列である。これらの配列のいずれかの存在は、潜在的なＮ−グリコシル化部位を形成する。Ｏ連結グリコシル化は、普通はＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースの結合を含む。グリコシル化部位のポリペプチドへの付加は、１つ以上の上記のトリペプチド配列を含むように天然アミノ酸配列を変えること（Ｎ連結グリコシル化部位に対する）あるいは１つ以上のセリンまたはトレオニンの付加または１つ以上のセリンもしくはトレオニンによる置換（Ｏ連結グリコシル化部位に対する）により達成され得る。アミノ酸配列は、ＤＮＡレベルでの変化（例えば、前もって選択した塩基で、Ｉｇポリペプチド鎖をコードするＤＮＡを変異することにより所望のアミノ酸をコードするコドンを生成する）で変えられ得る。例えば、米国特許第５，３６４，９３４号を参照のこと。
【００６７】
ポリペプチドへのグリコシドの化学的結合または酵素的結合がまた使用され得る。使用される結合様態にに依存して、糖は、（ａ）アルギニンおよびＨｉｓ、（ｂ）遊離カルボキシル基、（ｃ）遊離スルフヒドリル基（例えば、Ｃｙｓの遊離スルフヒドリル基）、（ｄ）遊離ヒドロキシル基（例えば、セリン、Ｔｈｒ、またはヒドロキシＰｒｏの遊離ヒドロキシル基）、（ｅ）芳香族残基（例えば、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、またはＴｒｐの芳香族残基）、または（ｆ）Ｇｌｎのアミド基に付着され得る。これらの方法は、ＷＯ８７／０５３３０（１１  Ｓｅｐｔ  １９８７）およびＡｐｌｉｎら，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，ｐｐ．２５９−３０６（１９８１）に記載される。
【００６８】
存在する炭水化物部分の除去は、化学的にまたは酵素的に、あるいはコドンの変異置換によって（上記のように）達成され得る。化学的な脱グリコシル化は、例えば、イポリペプチドをンタクトなままにしながら、ポリペプチドをトリフルオロメタンスルホン酸、または大部分のまたは全ての糖（連結する糖（Ｎ−アセチルグルコサミンまたはＮ−アセチルガラクトサミン）を除く）を切断する等価の化合物に曝すことにより、達成される。Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎら，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，２５９：５２（１９８７）；Ｅｄｇｅら，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１８：１３１（１９８１）を参照のこと。多数のエンドグリコシダーゼおよびエキソグリコシダーゼのうち任意のものが、ポリペプチドからの炭水化物部分の酵素的切断に使用される（Ｔｈｏｔａｋｕｒａら，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１３８：３５０（１９８７））。
【００６９】
潜在的なグリコシル化部位でのグリコシル化は、Ｎ−グリコシド結合の形成を阻害するツニカマイシンの使用により阻害され得る（Ｄｕｓｋｉｎら，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２５７：３１０５（１９８２））。
【００７０】
本抗体の別の型の化学修飾は、多数の異なる非蛋白性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン）のいずれかに１つに、米国特許第４，６４０，８３５号；同４，４９６，６８９号；同４，３０１，１４４号；同４，６７０，４１７号；４，７９１，１９２号および同４，１７９，３３７号ならびにＷＯ９３／００１０９に記載されるような様式で結合することを含む。
【００７１】
インビボ診断および治療の使用に加えて、本発明の抗体またはフラグメントは、細胞のサンプルまたは他の生物学的サンプルにおけるＭｅｔの存在を定量的にまたは定性的に検出するために使用され得る。例えば、ｍＡｂの治療用量または治療形態を受けている被験体の循環または組織におけるＭｅｔのレベルをモニターリングすることが所望され得る。従って、本発明で有用な抗体（またはそのフラグメント）は、Ｍｅｔ産生腫瘍細胞の存在を検出するために組織学的に利用され得る。
【００７２】
本発明は、特に、ＨＧＦまたはＭｅｔ−ＨＧＦ複合体のＭｅｔの様々なエピトープに対して、反応性の多くの有用なｍＡｂに関連する。最も好ましいｍＡｂは、Ｍｅｔに特異的なｍＡｂ、特にＭｅｔ  ＥＣＤ上のエピトープに特異的なｍＡｂである。
【００７３】
本発明のｍＡｂおよび組み合わせは、各ｍＡｂに使用される様々な名前（いくつかは、より長い名称の略語である）とともに以下の表１に示される。これらのｍＡｂを産生するハイブリドーマは、本願書の出願前に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に寄託された。これらのＡＴＣＣ特許寄託名称（または登録番号）は、表１に提供される。
【００７４】
【表１】
2005527488.tif 000002
最初に、Ｍｅｔ発現腫瘍の各画像化は、ｈＭｅｔのｈＨＧＦおよびＥＣＤ（ＨＧＦ結合ドメイン）に結合するｍＡｂの混合物を放射ヨウ素標識することにより、達成された。以下の実施例１〜３およびＨａｙら，Ｍｏｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ，２００１，１：５６−６２（参考としてその全体が援用される）を参照のこと。１２５Ｉ−ｍＡｂ混合物を、いくつかのタイプの腫瘍の１つを保有するマウスに静脈内（ｉ．ｖ．）注射した。ある分類の腫瘍は、腫瘍が発現したｈＨＧＦを用いるｈＭｅｔのオートクライン刺激により増殖した。他の腫瘍は、ｍＨＧＦを用いたｍＭｅｔのオートクライン分泌−パラクリン刺激により増殖した（マウスＭｅｔおよびマウスＨＧＦ）。
【００７５】
本明細書中で例示された放射性映像アプローチとの組み合わせに加え、本発明はまた、観察された反応の分子基礎を理解するための、免疫化学的分析および生化学的分析と組み合わせた顕微鏡画像技術を含む（例えば、インビボのＭｅｔ発現腫瘍の特徴を画像化するために、総細胞Ｍｅｔレベル、ｍＡｂへのＭｅｔの表面接触、Ｍｅｔ活性化の状態、およびレセプターの代謝回転の速度のようなパラメーターの相対的寄与率を決定する）。
【００７６】
（診断組成物および方法）
抗ｈＭｅｔ  ｍＡｂ単独（好ましくはＭｅｔ３またはＭｅｔ５）、抗ｈＭｅｔ  ｍＡｂの組み合わせ（例えば、Ｍｅｔ３＋Ｍｅｔ５）または１つ以上の抗ｈＭｅｔ  ｍＡｂの抗ｈＨＧＦ  ｍＡｂとの組み合わせは、例えば、哺乳動物（好ましくはヒト）における新生物の放射免疫シンチグラフィーによる画像化における（ならびに免疫療法および放射免疫療法のための）、新規アプローチを提供する。いくつかのｍＡｂまたはその誘導体（例えば、Ｂｅｘｘａｒ（登録商標）、ＯｎｃｏＳｃｉｎｔ（登録商標）、ＰｒｏｓｔａＳｃｉｎｔ（登録商標）、Ｖｅｒｌｕｎａ（登録商標）、ＣＥＡＳｃａｎ（登録商標）、Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））は、放射免疫シンチグラフィーまたは放射免疫療法のための臨床的承認を得ている。これらは全て、細胞の起源の腫瘍（例えば、癌腫、肉腫、リンパ腫など）に基づいて、新生物を標的化する。対照的に、本発明は、Ｍｅｔおよび／またはｈＨＧＦの不適切な発現に基づいて、新生物を標的化する。これは、組織の起源によって限定されることなく、広範なヒト固形腫瘍における乏しい予後と相関している。新生物細胞において、ＭｅｔおよびＨＧＦの異常な発現は、浸潤／転移の表現型の出現を導く。
【００７７】
抗ｈＭｅｔ  ｍＡｂのうち１つまたはそれらの組み合わせは、必要に応じて、抗ｈＨＧＦ  ｍＡｂと組み合わされて、動物およびヒトにおける新生物の放射免疫シンチグラフィー、免疫療法および放射免疫療法についての新規アプローチを提供する。
【００７８】
放射免疫シンチグラフィーまたは放射免疫療法のために臨床的に承認されたいくつかのｍＡｂまたはその誘導体（例えば、Ｂｅｘｘａｒ（登録商標）、ＯｎｃｏＳｃｉｎｔ（登録商標）、ＰｒｏｓｔａＳｃｉｎｔ（登録商標）、Ｖｅｒｌｕｎａ（登録商標）、ＣＥＡＳｃａｎ（登録商標）、Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））は、全て、腫瘍細胞の起源（例えば、癌腫、肉腫、リンパ腫など）に基づいて、新生物を標的化する。対照的に、抗ｈＭｅｔ  ｍＡｂは、単独または抗ｈＨＧＦ  ｍＡｂと組み合わせて、Ｍｅｔおよび／またはｈＨＧＦの不適切な発現に基づいて、新生物を標的化する。これは、広範なヒト固形腫瘍における乏しい予後と相関している。新生物細胞において、ＭｅｔおよびＨＧＦの異常な発現は、浸潤／転移の表現型の出現を導く。このような放射標識されたｍＡｂは、ヒトにおいてＭｅｔ発現腫瘍および／またはＨＧＦ／ＳＦ発現腫瘍を検出する際に、有効である。
【００７９】
本発明のｍＡｂは、例えば、細胞の表面上または内部のＭｅｔを検出するために、直接標識され得、そして使用され得る。このようなアプローチを、以下に例示する。結合の間および結合後のｍＡｂの運命は、インビトロまたはインビボで、標識を検出するための適切な方法を使用して、追跡され得る。標識されたｍＡｂは、診断および予後のために、インビボで利用され得る。
【００８０】
用語「診断的に標識された」は、ｍＡｂが、診断的に検出可能な標識に結合されていることを意味する。当業者に公知の、多くの異なる標識および標識方法が存在する。本発明において使用され得る標識の型の例としては、放射性同位体、常磁性同位体、および陽子射出断層撮影法（ＰＥＴ）によって画像化され得る化合物が挙げられる。当業者は、本発明において使用されるｍＡｂに結合するために適切な他の標識について知っているか、または、慣用的な実験によって、確認し得る。このようなクラスの多数の診断標識が、以下に開示される。診断的に標識された（例えば、放射標識された）ｍＡｂは、動物モデルにおいてＭｅｔ発現ヒト腫瘍および／またはＨＧＦ発現ヒト腫瘍を検出する際に有効であり、従って、このような腫瘍を有するヒトにおいて同様に有効であることが予測される。
【００８１】
腫瘍細胞上でのＭｅｔのより高い発現に起因して、腫瘍組織に対するこれらの標識されたｍＡｂの結合  対  正常組織バックグラウンドを識別することが可能である。さらに、腫瘍のクラス（異なる起源の器官および組織）にわたるＭｅｔの広範な発現に起因して、この単一の表面マーカーの画像化は、任意の特定の腫瘍型について特異的ではないが、任意のＭｅｔ発現腫瘍については一般的に使用され得る。このことは、腫瘍型特異的マーカーを標的化する画像化剤とは、対照的である。
【００８２】
診断および画像化のために適切な検出可能な標識としては、放射標識、蛍光標識、蛍光発生標識または他の化学的標識が挙げられる。γカウンター、シンチレーションカウンター、ＰＥＴ走査またはオートラジオグラフィーによって簡単に検出される有用な放射標識としては、３Ｈ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１１、３５Ｓおよび１４Ｃが挙げられる。さらに、１３１Ｉは、有用な治療的同位体である（以下を参照のこと）。
【００８３】
一般的な蛍光標識としては、フルオレセイン、ローダミン、ダンシル、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルアルデヒドおよびフルオレサミンが挙げられる。発蛍光団（例えば、ダンシル基）は、特定の波長の光によって励起されて、蛍光を発するはずである。例えば、Ｈａｕｇｌａｎｄ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，第６版，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ．，１９９６を参照のこと。フルオレセイン、フルオレセイン誘導体およびフルオレセイン様分子（例えば、Ｏｒｅｇｏｎ  ＧｒｅｅｎＴＭおよびその誘導体、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  ＧｒｅｅｎＴＭならびにＲｈｏｄｏｌ  ＧｒｅｅｎＴＭ）は、イソチオシアネート、スクシンイミジルエステルまたはジクロロトリアジニル反応性基を使用して、アミン基にカップリングされる。同様に、発蛍光団はまた、マレイミド、ヨードアセトアミドおよびアジリジン反応性基を使用して、チオールにカップリングされ得る。長波長ローダミン（これは、基本的に、窒素上に置換基を有する、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  ＧｒｅｅｎＴＭ誘導体である）は、公知の最も光安定性の蛍光標識試薬である。そのスペクトルは、４と１０との間のｐＨの変化によって影響されず、これは、多くの生物学的適用について、フルオレセインを上回る重要な利点である。この群には、テトラメチルローダミン、Ｘ−ローダミンおよびＴｅｘａｓ  ＲｅｄＴＭ誘導体が挙げられる。本発明に従うペプチドを誘導体化するための他の好ましい発蛍光団は、紫外線光によって励起されるものである。例としては、カスケードブルー、クマリン誘導体、ナフタレン（ダンシルクロリドは、このメンバーである）、ピレンおよびピリジルオキサゾール誘導体が挙げられる。最近記載された２つの関連する無機物質（例えば、硫酸カドミウムを含む半導体ナノ結晶（Ｂｒｕｃｈｅｚ，Ｍ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８１：２０１３−２０１６（１９９８））および量子ドット（例えば、硫酸亜鉛キャップされたセレン化カドミウム）（（Ｃｈａｎ，Ｗ．Ｃ．Ｗ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８１：２０１６−２０１８（１９９８）））もまた、標識として挙げられる。
【００８４】
なお別のアプローチにおいて抗Ｍｅｔ  ｍＡｂのアミノ基は、蛍光産物（例えば、フルオレスカミン、ジアルデヒド（例えば、ｏ−フタルジアルデヒド）、ナフタレン−２，３−ジカルボキシレートおよびアントラセン−２，３−ジカルボキシレート）を生じる試薬と反応することが可能である。７−ニトロベンズ−２−オキサ−１，３−ジアゾール（ＮＢＤ）誘導体の塩化物およびフッ化物は共に、蛍光産物を生じるようにアミンを改変するために有用である。
【００８５】
ｍＡｂはまた、蛍光放出金属（例えば、１５２Ｅｕ＋またはランタニド系列の他の金属）を使用して、検出のために標識され得る。これらの金属は、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のような金属キレート基を使用して、ペプチドに結合され得る。アルデヒド形態のＤＴＰＡは、ＮＨ２含有ｍＡｂを容易に改変し得る。
【００８６】
インビボの診断または治療について、放射性核種は、ＤＴＰＡおよびＥＤＴＡのようなキレート剤を使用して、直接的または間接的のいずれかで、ｍＡｂに結合され得る。このような放射性核種の例は、９９Ｔｃ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、９７Ｒｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、８９Ｚｒ、９０Ｙおよび２０１Ｔｌである。一般に、診断的用途における検出性に必要とされる標識されたｍＡｂの量は、年齢、状態、性別および患者における疾患の程度、禁忌（存在する場合）ならびに他の変数のような考慮事項に依存して変動しそして個々の医師または診断医によって調節される。投薬量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。
【００８７】
ｍＡｂはまた、リン光化合物または化学発光化合物にこれらをカップリングすることによって、検出可能にされ得る。次いで、化学発光タグ化ペプチドの存在は、化学反応の過程の間に生じる発光の存在を検出することによって、決定される。特に有用な化学発光剤の例は、ルミノール、イソルミノール、芳香族（ｔｈｅｒｏｍａｔｉｃ）アクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩およびシュウ酸エステルである。同様に、生体発光化合物は、ペプチドを標識するために使用され得る。生体発光は、生物学的系（ここで、触媒タンパク質が、化学発光反応の効率を増大させる）において見出される化学発光の１つの型である。生体発光タンパク質の存在は、発光の存在を検出することによって決定される。標識を目的とする重要な生体発光化合物は、ルシフェリン、ルシフェラーゼおよびエクオリンである。
【００８８】
なお別の実施形態において、比色検出が、高い消光係数を有する発色団を有するかまたはそれを生じる発色化合物に基づいて、使用される。
【００８９】
標識されたｍＡｂのインサイチュ検出は、被験体から組織学的検体を取り出し、そして標識を検出するのに適切な条件下で顕微鏡によってそれを試験することによって、達成され得る。当業者は、任意の広範な種々の組織学的方法（例えば、染色手順）が、このようなインサイチュ検出を達成するために改変され得ることを、容易に理解する。
【００９０】
インビボの診断的な放射画像化について、利用可能な検出機器の型は、放射性核種の選択における主要な因子である。選択された放射性核種は、特定の機器によって検出可能な型のデコイを有さなければならない。一般に、診断的画像化を可視化するための任意の従来法が、本発明に従って利用され得る。インビボ診断のための放射性核種の選択における別の因子は、その半減期が、標的組織による最大取り込みの時点でなお標識が検出可能であるように十分に長いが、宿主の有害な照射が最小化されるのに十分に短いことである。１つの好ましい実施形態において、インビボの画像化のために使用される放射性核種は、粒子を放射しないが１４０〜２００ｋｅＶの範囲で多数の光子を生じ、これは、従来のγカウンターによって容易に検出され得る。
【００９１】
好ましい診断方法は、放射免疫シンチグラフィー分析であり、これは、好ましくは、連続的全身γカメラ画像を生じ、そして定量的「対象領域（ｒｅｇｉｏｎ−ｏｆ−ｉｎｔｅｒｅｓｔ）」（ＲＯＩ）分析による局所的活性の決定を可能にする様式で、行われる。実施例が、以下に提供される。
【００９２】
本発明によれば、生検または切除される全てのヒト固形腫瘍は、そのＭｅｔ発現状態を特徴づけるために、免疫組織化学によって慣用的に調査され得る。Ｍｅｔ陽性腫瘍を有する全ての患者は、次いで、Ｍｅｔ指向性核画像化研究を受けて、残留病変または臨床的に不顕性の病変を明らかにし、そしてそれらのＭｅｔの異常を評価するか、または証拠がないことを報告する。残留病変または新たに明らかにされた病変を有する任意の患者は、誘発診断ＭＲＩおよび／または超音波検査法によって評価されて、それらの腫瘍の生理学的応答性を決定し得、次いで、適切な治療レジメン（化学療法、免疫療法、放射免疫療法）が考案される。最後に、誘発機能的画像化またはＭｅｔ指向性核画像化は、治療に応答したＭｅｔの量および活性の変化をモニタリングするために使用される。
【００９３】
以下に例示されるように、ｈＨＧＦおよびｈＭｅｔの相互作用に起因するオートクライン様式での腫瘍増殖は、ｍＨＧＦ、ｍＭｅｔまたはこれら両方を発現する腫瘍よりもより迅速に、１２５Ｉ−ｍＡｂ混合物を取り込み、そして浄化する。ｈＨＧＦ／ｈＭｅｔを有する腫瘍において、全身放射活性に対する平均腫瘍放射活性の比は、注射後一日目に＞０．３であった。従って、ｈＨＧＦおよびｈＭｅｔの発現に起因するオートクライン様増殖を受ける腫瘍の放射免疫検出は、リガンド（ＨＧＦ）−レセプター（Ｍｅｔ）対と反応性であるｍＡＢの放射性要素化（１２５Ｉ）混合物を使用して、達成される。
【００９４】
本発明の方法は、しばしば、新たに診断された癌患者に、新規種類の「転移リスク層別化」（これは、所定の腫瘍が、腫瘍の起源の「組織」に依存せずに、引き続いて浸潤または転移する可能性が高いか低いかを評価するための非侵襲性手段を使用する）を提供する。このような情報は、個々の患者基準に基づいて、適切なモニタリングおよび治療のプロトコルを設計する能力を改善する。非常に多数の患者が、診断的画像化ならびに免疫療法および／または放射免疫療法のために、抗ｈＭｅｔ  ｍＡｂを使用する本発明から、利益を受け得る。
【００９５】
本発明は、例えば、Ｍｉｃｈｉｇａｎにおける、新たに発見された固形腫瘍を有する全ての患者の半分だけが、それらの病期決定および転移リスク評価の一部として抗ｈＭｅｔ  ｍＡｂおよび／または抗ｈＨＧＦ  ｍＡｂのいずれかを用いる本発明の方法を使用する画像化を受ける場合に、一年に２０，０００例より多い数が、Ｍｉｃｈｉｇａｎにおける癌の任意の単一の型の実際の年間発生率をはるかに超え、そして全ての他のＦＡＤに承認されたｍＡｂによって現在提供される、組み合わされた臨床的容量をはるかに超えることを計算した。
【００９６】
インビボの画像化は、他の方法によって観察できない不顕性の転移を検出するために使用され得る。Ｍｅｔの発現は、癌患者における疾患の進行に相関し得、その結果、後期病期の癌を有する患者が、原発性腫瘍および転移の両方においてより高いレベルのＭｅｔ発現（またはＨＧＦ結合）を有する。ＭｅｔまたはＨＧＦを標的化した画像化は、腫瘍を非侵襲的に病期決定するか、またはＭｅｔ／ＨＧＦの増大したレベルの存在に関連する別の疾患を検出するために、使用され得る。
【００９７】
本発明の組成物は、所望の動物種の任意の適切な細胞、組織、器官または生物学的サンプルの組み合わせて、診断手順、予後手順または研究手順において使用され得る。用語「生物学的サンプル」によって、正常被験体または罹患被験体の身体由来の任意の流体または他の材料（例えば、血液、血清、血漿、リンパ、尿、唾液、涙、脳脊髄液、乳汁、羊水、胆汁、腹水、膿など）が意図される。器官または組織の抽出物、および被験体由来の任意の細胞または組織の調製物がインキュベートされた培養流体もまた、この用語の意味に含まれる。
【００９８】
本発明の診断的に標識されたｍＡｂは、従来の投薬形態中に組み込まれ得る。
【００９９】
好ましくは、診断のために、標識されたｍＡｂは、例えば、注射または注入によって、全身的に投与される。使用される場合、注射または注入は、任意の公知の経路（好ましくは、静脈内注射または注入、皮下注射、筋内、頭蓋内または髄腔内の注射または注入、あるいは腹腔内投与）によるものであり得る。注射可能剤は、従来の形態で、溶液形態または懸濁物形態、固体形態のいずれかとして、調製され得る。
【０１００】
本発明は、任意の多数の動物の属および種の診断において使用され得、そしてヒトまたは脊椎動物の医療の実施において等しく適用可能である。従って、これらの組成物は、家畜および商業的動物（トリ、およびより好ましくは哺乳動物、ならびにヒトを含む）と共に使用され得る。
【０１０１】
（試薬の組成）
上述したように、本発明の抗体組成物はまた、治療またはインビボ診断使用に対するさらなる有用性を提供する。例えば、抗体組成物は、特定の細胞および組織におけるＭｅｔの過剰発現を検出するのに有用である。（これはまた、診断ツールとしても役立ち得る。）当該分野で公知の種々の免疫アッセイ技術（例えば、不均一相または均一相のいずれかにおいて行われる、競合結合アッセイ、直接または間接サンドイッチアッセイおよび免疫沈降アッセイ）が使用され得る。例えば、Ｚｏｌａ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８７）ｐｐ．１４７−１５８を参照のこと。この様式で使用される抗体は、直接的または間接的のいずれかで検出可能なシグナルを生じる検出可能な標識で、検出可能に標識され得る。インビボ使用のための簡便な標識としては、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓまたは１２５Ｉに対する放射性同位体が挙げられる。蛍光および化学発光の標識および系は上述される。検出可能な標識を抗体に結合体化するかまたは連結するための任意の公知の方法（例えば、Ｈｕｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  １９４：４９５（１９６２）；Ｇ．Ｓ．Ｄａｖｉｄら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １３：１０１４−１０２１（１９７４）；Ｄ．Ｐａｉｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ  ４０：２１９−２３０（１９８１）；およびＨ．Ｎｙｇｒｅｎ，Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ  Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．３０：４０７（１９８２）に記載される方法）が使用され得る。
【０１０２】
抗体またはフラグメントを標識する好ましい方法は、抗体またはフラグメントを酵素に連結、そして抗体またはフラグメントを酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）または、酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）に使用することによってである。このようなアッセイは、以下により詳細に記載される：ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ  ＯＦ  ＡＮＴＩＧＥＮＳ，Ｖｏｌ．１（Ｖａｎ  Ｒｅｇｅｎｍｏｒｔｅｌ，Ｍ．，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ  １９９２，ｐｐ．２０９−２５９における、Ｂｕｔｌｅｒ，Ｊ．Ｅ．、Ｔｈｅ  Ｂｅｈａｖｉｏｒ  ｏｆ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  ｏｎ  ａ  Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ（Ｃｈａｐｔｅｒ  １１）；ｖａｎ  Ｏｓｓ，Ｃ．Ｊ．ら（編），ＩＭＭＵＮＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９４，ｐｐ．７５９−８０３における、Ｂｕｔｌｅｒ，Ｊ．Ｅ．，ＥＬＩＳＡ（Ｃｈａｐｔｅｒ  ２９）；Ｂｕｔｌｅｒ，Ｊ．Ｅ．（編），ＩＭＭＵＮＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ  ＯＦ  ＳＯＬＩＤ−ＰＨＡＳＥ  ＩＭＭＵＮＯＡＳＳＡＹ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，１９９１；Ｖｏｌｌｅｒ，Ａ．ら、Ｂｕｌｌ．ＷＨＯ  ５３：５５−６５（１９７６）；Ｖｏｌｌｅｒ，Ａ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．３１：５０７−５２０（１９７８）；Ｂｕｔｌｅｒ，Ｊ．Ｅ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．７３：４８２−５２３（１９８１）；Ｍａｇｇｉｏ，Ｅ．（編），Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，１９８０  Ｉｓｈｉｋａｗａ，Ｅ．ら（編）Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，Ｋａｇａｋｕ  Ｓｈｏｉｎ，Ｔｏｋｙｏ，１９８１。
【０１０３】
その基質に後で曝露される場合、次いで、この酵素は、（例えば、分光光度的、蛍光定量的によってまたは視覚的手段によって）検出し得る化学部分を生じるような様式で基質と反応する。この目的で一般に使用される酵素としては、以下が挙げられる：西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、マレイン酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、Δ−Ｖ−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、α−グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコアミラーゼおよびアセチルコリンエステラーゼ。
【０１０４】
本発明の抗体はまた、アッセイ、調製アフィニティクロマトグラフィーおよびＭｅｔを含む混合物からの分子の固相分離においてＭｅｔ、またはＭｅｔを発現する細胞に対して結合する親和性リガンドとしても有用である。このような抗体組成物はまた、フローサイトメトリー方法論および／または固相方法論を使用して、抗体が結合する細胞を同定、濃縮、精製または単離するのに使用され得る。ｍＡｂは、ビオチン化ｍＡｂと共に、従来の方法（例えば、ＣＮＢｒ活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）またはＡｇａｒｏｓｅ（登録商標）、ＮＨＳ−Ａｇａｒｏｓｅ（登録商標）またはＳｅｐｈａｒｏｓ（登録商標）、エポキシ活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）またはＡｇａｒｏｓｅ（登録商標）、ＥＡＨ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）またはＡｇａｒｏｓｅ（登録商標）、ストレプトアビジン−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）またはＡｇａｒｏｓｅ（登録商標）との結合）を使用して固定化され得る。一般に、本発明のｍＡｂは、これらの化合物を示された目的のために固相に固定化し得る任意の他の方法によって、固定化され得る。例えば、Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｃｈｏｍａｔｏｇｒａｐｌａｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＬＫＢ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を参照のこと。従って、１つの実施形態は、本明細書中に記載されるような、固体支持体もしくは樹脂に結合したｍＡｂまたはその混合物を含む組成物である。この化合物は、直接またはスペーサー（好ましくは２〜１２個の炭素原子を有する疎水性鎖）を介して結合され得る。
【０１０５】
「固相」または「固体支持体」または「キャリア」によって、ｍＡｂまたは誘導体を結合し得る任意の支持体またはキャリアが意図される。上述のＳｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）またはＡｇａｒｏｓｅ（登録商標）に加え、周知の支持体またはキャリアとしては、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然または改変セルロース（例えば、ニトロセルロース）、ポリアクリルアミド、ポリビニリデンジフルオリド、他のアガロースおよびマグネタイト（磁気ビーズを含む）がある。キャリアは、完全に不溶性か、または部分的に可溶性であり得る。支持体物質は、結合分子がレセプター物質に結合し得る限り任意の可能な構造構成を有し得る。従って、支持体構成は、ビーズにおいてのように、球状であり得るか、あるいは試験管もしくはマイクロプレートのウェルの内部表面または、ロッドの外部表面のように、円筒状であり得る。あるいは、表面は、シート、テストストリップ、マイクロプレートのウェルの底部表面などのように平らであり得る。
【０１０６】
（薬学的組成物および治療的組成物ならびにその投与）
本発明の薬学的組成物において使用され得る化合物は、上述の全ての化合物およびこれらの化合物の薬学的に受容可能な塩を含む。本発明の組成物は、それ自体が活性であり得るか、またはインビボで活性型に変換される「プロドラッグ」として作用し得る。
【０１０７】
本発明の組成物アンタゴニストを投与するための有効投薬量および計画は、経験的に決定され得る；このような決定を行うことは、当該分野の技術の範疇である。当業者は、ｍＡｂ組成物の有効投薬量が、例えば、処置される被験体の種、投与経路、使用されるｍＡｂ調製物または構築物の特定の型、および被験体哺乳動物に投与される任意の他の薬物または薬剤に依存して変化することを理解する。ｍＡｂの適当な容量を選択する手引きは、抗体の治療的使用に関する文献（例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｓ．Ｆｅｒｒｏｎｅら編，Ｎｏｇｅｓ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐａｒｋ  Ｒｉｄｇｅ，ＮＪ（１９８５）、特に、ｃｈａｐ．２２およびｐｐ．３０３−３５７；Ｓｍｉｔｈら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ（Ｈａｂｅｒら編）Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９７７），ｐｐ．３６５−３８９）に見出される。治療的ｍＡｂ組成物の代表的な１日の投薬量は、上述の因子に依存して、体重１ｋｇあたり、約１μｇと約１００ｍｇとの間の範囲であり得る。
【０１０８】
別の実施形態において、本発明のｍＡｂ組成物は、有効量の１以上の他の治療剤と組み合わせてか、または放射治療のような別の治療様式と組み合わせて、被験体に投与される。企図される治療剤としては、抗癌化学治療剤、免疫アジュバントおよび生物学的生成物（免疫刺激サイトカイン）が挙げられる。本発明の抗体組成物を用いる、Ｍｅｔ発現腫瘍を有する被験体の処置は、現在それらだけで（すなわち、本発明の抗体を含まない）有効と考えられているレベルより下のレベルを含む、低用量の化学療法薬物に対して腫瘍を「感作」感受性にすると考えられる。本発明の組み合わせ治療における使用が企図される薬物としては、当該分野で周知の任意の以下のものが挙げられる：例えば、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）、シクロホスファミド、チオテパ、ブスルファン、タキソール、メトトレキサート、シスプラチン、カルボプラチン、メルファラン、ビンブラスチンなど。この抗体組成物は、１つ以上の化学療法剤または生物療法剤の前、後または同時に投与され得る。抗体組成物および一緒に使用される従来の薬物の量は、例えば、薬物の型、処置される腫瘍または癌の性質および程度、投与の計画および個々の経路に基づく。正確な用量の決定は、経験的に、そして、従来の薬剤またはより知られている薬剤に対する既知の応答に基づいて決定される。一般に、用量は、抗体組成物および従来薬物の各々が別々に投与される場合、一般により少ない。
【０１０９】
本発明の組成物の投与（単独でかまたは組み合わせで）の後、被験体の状態および、腫瘍または癌の状態を種々の従来方法でモニタリングする。例えば、腫瘍塊は、物理的手段（触診を含む）によって、標準のＸ線および他の放射性技術によって、ならびに／または、新規の診断方法および本明細書中に記載する組成物を使用することによって、モニタリングされ得る。
【０１１０】
本発明の化合物およびその薬学的に受容可能な塩は、従来の投薬形態（例えば、カプセル、浸透オブラート、錠剤または注射用調製物）に組み込まれ得る。固体または液体の薬学的に受容可能なキャリアが使用され得る。注射剤は、従来の形態で、溶液または懸濁剤（注射前に液体中の溶液または懸濁剤に適した固体形態）としてか、または乳剤として調製され得る。固体キャリアとしては、以下が挙げられる：デンプン、ラクトース、硫酸カルシウム二水和物、テラアルバ、ショ糖、滑石、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸マグネシウムおよびステアリン酸。液体キャリアとしては、以下が挙げられる：シロップ、ピーナッツ油、オリーブ油、生理食塩水、水、デキストロース、グリセロールなど。同様に、キャリアまたは希釈剤は、任意の延長放出物質（例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリル）を単独でか、または蝋とともに含み得る。液体キャリアが使用される場合、調製物は、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤、軟ゼラチンカプセル、アンプルのような滅菌注射用溶液（例えば、溶液）または水性もしくは非水性液体懸濁剤の形態であり得る。このような薬学的組成物の概要については、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ（Ｇｅｎｎａｒｏ  第１８版、１９９０）において見出され得る。
【０１１１】
固体キャリアとしては、以下が挙げられる：デンプン、ラクトース、硫酸カルシウム二水和物、テラアルバ、ショ糖、滑石、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸マグネシウムおよびステアリン酸。液体キャリアとしては、以下が挙げられる：シロップ、ピーナッツ油、オリーブ油、生理食塩水、水、デキストロース、グリセロールなど。同様に、キャリアまたは希釈剤は、任意の延長放出物質（例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリル）を単独でか、または蝋とともに含み得る。液体キャリアが使用される場合、調製物は、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤、軟ゼラチンカプセル、アンプルのような滅菌注射用液（例えば、溶液）または水性もしくは非水性液体懸濁剤の形態であり得る。このような薬学的組成物の概要については、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ（Ｇｅｎｎａｒｏ  第１８版、１９９０）において見出され得る。
【０１１２】
薬学的調製物は、製薬化学の従来技術に従って作製され、従来技術としては、錠剤形態について必要な場合、混合、造粒および圧縮のような工程、または、経口、非経口、局所、経皮、膣内、陰茎内、経鼻、経気管支、頭蓋内、経眼、経耳および直腸投与のための所望の生成物を得るために、適切な場合、混合、充填、および成分の溶解を含む。薬学的組成物はまた、微量の非毒性補助物質（例えば、湿潤剤、乳化剤、ｐＨ緩衝剤など）を含み得る。
【０１１３】
好ましい投与経路は全身であるが、薬学的組成物は、局所または経皮的に（例えば、軟膏、クリームまたはゲル）；経口的に；直腸的に（例えば、坐剤）；非経口的に（注射によってかまたは連続的な注入によって）；膣内に；陰茎内に；経鼻的に；経気管支的に；頭蓋内に；経耳的に；または経眼的に投与され得る。
【０１１４】
噴霧可能エアロゾル調製物はまた、局所適用にとって適切であり、ここで、組成物（好ましくは固体または液体の挿入キャリア物質との組み合わせにおいて）は、搾り出し容器中（ｓｑｕｅｅｚｅ  ｂｏｔｔｌｅ）に詰められるか、または加圧された揮発性物質（通常は、ガス状発射剤）と共に混合剤中に詰められる。エアロゾル調製物は、本発明の化合物に加えて、溶媒、緩衝剤、界面活性剤、香料および／または抗酸化剤を含み得る。
【０１１５】
好ましい局所適用（特にヒトにとって）について、影響される領域（例えば、肌表面、粘膜、目など）に、有効量の化合物を投与することが好ましい。この量は、一般的に、１回の適用あたり約０．００１ｍｇ〜約１ｇの範囲の所定の抗体であり、投与される領域、症状の重症度、および使用される局所のビヒクルの性質に依存する。
【０１１６】
本発明の治療的組成物は、標識された抗体に加えて、１つ以上のさらなる抗腫瘍剤（例えば、有糸分裂インヒビター（例えば、ビンブラスチン）；アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド）；葉酸インヒビター（例えば、メトトレキサート、ピリトレキシムまたはトリメトレキサート）；抗代謝剤（例えば、５−フルオロウラシルアラビノシドおよびシトシンアラビノシド）；インターカレート抗生物質（ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｉｎｇ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）（例えば、アドリアマイシンおよびブレオマイシン）；酵素または酵素インヒビター（例えば、アスパラギナーゼ、トポイソメラーゼインヒビター（例えば、エトポサイド）；または生物学的応答調製剤（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｍｏｄｉｆｉｅｒ）（例えば、インターフェロンまたはインターロイキン）を含み得る。事実、本明細書に開示される標識された抗体との組み合わせにおいて、任意の公知の癌治療剤を含む薬学的組成物が、本明細書の範囲内である。薬学的組成物はまた、１つ以上の他の医薬（例えば、抗菌剤、抗真菌剤、抗寄生剤、抗ウイルス剤および抗コクシジウム剤を含む抗感染剤）を含み、危険性のある標的患者のさらなる症状を処置する。
【０１１７】
（治療的組成物）
好ましい実施形態において、本明細書に記載される抗体は、「治療的結合され（る）」かまたは「治療的標識され」（これらの用語は、変換可能であることが企図される）そして、抗体は、目指し（ｈｏｍｅ）結合する部位（例えば、原発腫瘍部位または腫瘍転移部位）に治療剤を送達するために使用される。用語「治療的結合される」は、タンパク質が、腫瘍増殖または腫瘍浸潤の「成分」に物理的に向けられる別の治療薬に結合されることを意味する。
【０１１８】
有用な治療的放射性同位体（原子番号の順に並べた）の例としては、４７Ｓｃ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、１０９Ｐｄ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂおよび２１７Ｂｉが挙げられる。これらの原子は、ポリペプチドに直接的に結合され得るか、キレートの一部として間接的に結合され得るか、またはヨードの場合、ヨード化Ｂｏｌｔｏｎ−Ｈｕｎｔｅｒ基の一部として間接的に結合され得る。
【０１１９】
放射性核種結合体の好ましい用量は、標的部位に送達される特定の放射活性の関数であり、、この用量は、腫瘍の型、腫瘍の位置、および血管形成、ポリペプチドキャリアの動力学および生物学的分散、核種による放射性放射のエネルギーなどによって変化する。放射線治療の分野の当業者は、過度の実験なしに、所望の治療利益をもたらすために、特定の粒子核種の用量に関連して標識タンパク質の用量を容易に調整し得る。
【０１２０】
本明細書中に含まれる別の治療的アプローチは、ホウ素中性子捕獲治療（ＮＣＴ）の使用であり、ここで、ホウ素化抗体は、所望の標的部位（例えば、腫瘍、最も好ましくは頭蓋内腫瘍）に送達される（Ｂａｒｔｈ，Ｒ．Ｆ．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｖｅｓｔ．１４：５３４−５５０（１９９６）；Ｍｉｓｈｉｍａ，Ｙ．（編）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｎｅｕｔｒｏｎ  Ｃａｐｔｕｒｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．，１９９６；Ｓｏｌｏｗａｙ，Ａ．Ｈ．ら、（編）、Ｊ．Ｎｅｕｒｏ−Ｏｎｃｏｌ．３３：１−１８８（１９９７））。安定な同位体１０Ｂは、低エネルギーの熱中性子（＜０．０２５ｅＶ）を放射し、得られた核捕獲は、α粒子および７Ｌｉ核を産生し、それらは、高い線形エネルギー転換および、それぞれ約９μｍおよび約５μｍの通過波長を有する。この方法は、血液、内皮細胞および正常組織（例えば、脳）低レベルな腫瘍において、１０Ｂの蓄積が予測される。そのような送達は、上皮増殖成長因子を使用することによって達成された（Ｙａｎｇ．Ｗ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５７：４３３３−４３３９（１９９７））。
【０１２１】
ホウ素ＮＣＴに加えて、ガドリニウム（特に、１５７Ｇｄ）は、本発明の抗体を用いるＮＣＴにおける使用のために特に利点があることが明らかである。１５７Ｇｄは、天然に存在する同位体の間で、最も高い（２５５，０００ｂａｒｎ）（１０Ｂの熱中性子捕獲断面積よりも６６倍大きい）有し；Ｇｄ中性子捕獲反応は、長い範囲の（＞１００μｍ）即発γ線、内部転換電子、Ｘ線およびオージェ電子を放出することが、最近報告されている（Ｔｏｋｕｍｉｔｓｕ，Ｈら、Ｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ  ４７：８３８−８４２（１９９９）、その全体が、参考として援用される）。従って、Ｇｄ−ＮＣＴは、光子が腫瘍細胞にヒットする機会、ならびに電子が、局所的におよび集中的にこれらの細胞を損傷する機会を増加させ得る。別の利点は、Ｇｄが、ＭＲＩ画像化診断薬として長く使用されることである。本抗体のＧｄ充填投与形態を使用することによって、Ｇｄ−ＮＣＴとＭＲＩ診断とを統合することが可能である。Ｇｄ−ＮＣＴにおける使用のための、本発明の抗体を標識するためのＧｄの好ましい形態は、ガドペンテト酸（ｇａｄｏｐｅｎｔｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）である（Ｇｄ−ＤＴＰＡ）。
【０１２２】
本発明の方法に従う抗体に結合され得る他の治療的薬剤は、薬物、プロドラッグ、プロドラッグを活性化するための酵素、光感作性薬剤、遺伝子治療薬、アンチセンスベクター、ウイルスベクター、レクチンおよび他の毒素である。
【０１２３】
投与される治療的薬量は、治療的に有効な量であり、これは当業者によって、公知であるか、または容易に確かめられる量である。用量はまた、レシピエントの年齢、健康状態、および体重、もしあるとすれば、同時処置の種類、処置の頻度、および望まれる効果の性質（例えば、抗炎症効果または抗菌効果のような）に依存する。
【０１２４】
レクチンは、炭水化物に結合するタンパク質（一般的には、植物由来）である。他の活性の間で、いくつかのレクチンは、毒素である。公知の最も細胞毒性である物質のいくつかは、細菌または植物起源のタンパク質毒素である（Ｆｒａｎｋｅｌ，Ａ．Ｅ．ら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．３７：１２５−１４２（１９８６））。これらの分子は細胞表面に結合し、細胞性タンパク質の合成を阻害する。最も一般的に使用される植物毒素は、リシンおよびアブリンである；最も一般的に使用される細菌毒素は、ジフテリア毒素およびシュードモナス外毒素Ａである。リシンおよびアブリンにおいて、結合機能および毒性機能は、２つの別個のタンパク質サブユニット（Ａ鎖およびＢ鎖）中に含まれる。リシンＢ鎖は、細胞表面の炭水化物に結合し、そして細胞内へのＡ鎖の取り込みを促進する。一旦、細胞内に入ると、リシンＡ鎖は、真核細胞のリボソームの６０Ｓサブユニットを不活化することによってタンパク質合成を阻害する（Ｅｎｄｏ，Ｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：５９０８−５９１２（１９８７））。単鎖のリボソーム阻害性タンパク質である他の植物由来の毒素としては、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、コムギ麦芽タンパク質、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）、モモカリン（ｍｏｍｏｒｃｈａｒｉｎ）、トリコサンチン（ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｉｎ）およびその他多くのものをが挙げられる（Ｓｔｒｉｐ，Ｆ.ら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ.１９５：１−８（１９８６）。ジフテリア毒素およびシュードモナス外毒素Ａはまた、単鎖タンパク質であり、それらの結合機能および毒性機能は、全毒性活性を有する同一のタンパク質鎖の別個のドメイン内に存在し、その活性は、２つのドメイン間のタンパク質分解性切断を必要とする。シュードモナス毒素Ａは，ジフテリア毒素と同様の触媒活性を有する。リシンは、その毒性α鎖を標的分子（例えば、抗体）に結合させることによって、治療的に使用され、毒性効果の部位特異的送達を可能にする。細菌毒素はまた、抗腫瘍結合体として使用されている。本明細書中に企図されるように、毒性ペプチド鎖または毒性ペプチドドメインは、本発明の抗体に結合され、毒性活性が所望される（例えば、転移性病巣）標的部位に部位特異的様式で送達される。抗体または他のリガンドへの毒素の化学的結合体化のための方法、および毒素含有融合タンパク質の組み換え産生は、当該分野において公知である（例えば、Ｏｌｓｎｅｓ，Ｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  １０：２９１−２９５（１９８９）；Ｖｉｔｅｔｔａ，Ｅ．Ｓ．ら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３：１９７−２１２（１９８５））。
【０１２５】
ＤＮＡ合成、ＲＮＡ合成およびタンパク質合成を含む重要な細胞プロセスを妨害する細胞障害性薬物は、抗体に結合体化され、次いでインビボ治療のために使用される。そのような薬物（ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）およびミトマイシンＣが挙げられるがそれらに限定されない）はまた、本発明の抗体に結合され、この形態で治療的に使用される。
【０１２６】
本発明の別の実施形態において、光感受性剤は、腫瘍への直接的な送達のために、本抗体に結合され得る。
【０１２７】
（治療方法）
本発明の方法は、被験体において、腫瘍の増殖および浸潤を阻害するために使用され得る。腫瘍の増殖および浸潤を阻害することによって、本方法は、同様に腫瘍の転移を阻害することが意図される。哺乳動物被験体（好ましくは、ヒト）は、腫瘍の増殖、浸潤または転移を阻害するのに有効な量で、本発明の治療抗体組成物の量を投与される。この化合物またはその薬学的に受容可能な塩は、好ましくは、上述のような薬学的組成物の形態で投与される。
【０１２８】
組成物の用量は、好ましくは、抗体または抗体の組み合わせの有効な量を含む薬学的投薬単位を含む。有効量は、インビボで正常濃度を達成するために十分な量を意味し、これは、疾患のあらゆる適切なパラメーターの適度な減少を生じ、かつ原発腫瘍または転移腫瘍の増殖、あるいは疾患の無い期間または生存の適度な延長を含む。例えば、患者の２０％における腫瘍増殖の減少は、かなり有効である（Ｆｒｅｉ  ＩＩＩ，Ｅ．、Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ３：１２７−１３６（１９９７））。しかし、この規模の効果は、本発明によって有効である用量についての最小要求量であるとみなされない。
【０１２９】
１つの実施形態において、有効な用量は、好ましくは、本明細書に記載のようなインビボアッセイにおいて、組成物の５０％の有効用量（ＥＤ５０）よりも１０倍高く、より好ましくは、１００倍高い。
【０１３０】
投与される活性化合物の量は、適正な抗体または選択された組み合わせ、疾患または状態、投与経路、レシピエントの健康または体重、他の併用処置の存在（もしあるのであれば、処置の頻度）、所望される効果の性質（例えば、腫瘍転移の阻害）および熟練した開業医の判断に依存する。
【０１３１】
腫瘍を有する被験体（好ましくは、哺乳動物、より好ましくは、ヒト）を処置するための好ましい用量は、体重１キログラムあたり、約１００ｍｇまでの総抗体たんぱく質量である。典型的な単回投薬量は、体重１ｋｇあたり、約１ｎｇと約１００ｍｇとの間である。局所投与について、化合物の約０．０１〜２０％濃度（重量％）の範囲、好ましくは１〜５％が、示唆される。約０．１ｍｇ〜約７ｇの範囲の１日の総１日投薬量は、静脈内投与であることが望ましい。しかし、前述の範囲は、個々の処置レジメンにおける変数の数が大きくなった場合、示唆的であり、これらの好ましい値からのかなりの偏差が予想される。有効用量および最適な用量範囲は、本明細書に記載される方法を用いて、インビトロにおいて決定される得か、またはマウスモデルにおいて決定され得る。
【０１３２】
（抗Ｍｅｔ  ｍＡｂの特徴）
（散乱アッセイ）
再クローン化されたハイブリドーマを、無血清培地中で培養した。培養上清画分中の抗ｈＭｅｔ  ｍＡｂを、プロテインＧ親和性カラムによって個々に別個に精製し、ＩｇＧ濃度を、２ｍｇ／ｍｌに調整した。個々の抗ｈＭｅｔ  ｍＡｂを、ＭＤＣＫ細胞散乱アッセイを使用したＭｅｔに対する活性の中和または活性化についてスクリーニングした。簡単には、ＭＤＣＫ細胞を、５％ＦＢＳを有するＤＭＥＭ中で、ＨＧＦ（５ｎｇ／ウエル）用いるか、または用いずに７．５×１０４細胞／１００μｌ／ウエルでプレートした。各抗ｈＭｅｔ  ｍＡｂを、連続的に、培養培地で２倍濃度に希釈し、１５０μｌの各々の連続希釈物を、９６ウエルプレート中で細胞に添加した。ＨＧＦ／ＳＦ（１μｇ／ウエル）に対する活性を中和したウサギポリクローナル抗血清を、Ｍｅｔ中和コントロールとして含めた。３７℃で一晩のインキュベートした後に、細胞を、５０％エタノール（ｖ／ｖ）中の０．５％クリスタルバイオレットを用いて、１０分間、室温で染色し、散乱を、光学顕微鏡を使用して観察した。
【０１３３】
（ウロキナーゼプラスミノゲンアクチベーター−プラスミンタンパク質分解アッセイ）
ＭＥＴを発現する細胞のＨＧＦ刺激は、セリンプロテアーゼウロキナーゼ（ｕＰＡ）およびそのレセプター（ｕＰＡＲ）の発現を誘導する。次いで、ｕＰＡは、プラスミノゲンを、より広い特異性のプロテアーゼであるプラスミンに切断する。このアッセイにおいて、本発明者らは、過剰のプラスミノゲンを供給して、プラスミンの産生を増幅させ、そして本発明者らはまた、プラスミンのための比色定量基質として、Ｃｈｒｏｍｏｚｙｍｅ  ＰＬを供給する。このプロセスは、Ｃｈｒｏｍｏｚｙｍｅ  ＰＬの着色された切断産物を生じ、これを、４０５ｎｍにおいて分光光度法により定量し得る。
【０１３４】
このアッセイを実施するために、１５００細胞／ウェル（例えば、ＭＤＣＫ−ＩＩ細胞）を、ＤＭＥＭ−１０％  ＦＢＳ中で９６ウェルマイクロプレートに播種する。翌日、ｍＡｂを、種々の濃度で、単独でかまたは１０単位のＨＧＦの存在下で添加する；コントロールウェルは、ＨＧＦを含まず／ｍＡｂを含まず、抗体なしでＨＧＦを含み、そして中和抗ＨＧＦ抗体の存在下でＨＧＦを含む。３日目に、細胞を、フェノールレッドを欠くＤＭＥＭで２回洗浄し、そして２００μｌの反応緩衝液（フェノールレッドを含まないＤＭＥＭ中５０％ｖ／ｖ  ０．０５Ｕ／ｍｌプラスミノゲン；４０％ｖ／ｖ  ５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．２）；および１００ｍＭグリシン中１０％ｖ／ｖ  ３ｍＭ  Ｃｈｒｏｍｏｚｙｍｅ  ＰＬ）とともに４時間インキュベートする。次いで、上清画分を、分光光度法により、切断生成物について４０５ｎｍで分析する。現在までに試験された１０の抗ｈＭｅｔ  ｍＡｂのうちの１つが、ＨＧＦによるｕＰＡの誘導を完全に阻害する（アンタゴニスト）；２つが、ＨＧＦ自体を用いて見られるレベルに匹敵するレベルまで、ｕＰＡを誘導する（アゴニスト）；そして他のものは、これらの両極端の間のスペクトルを形成する。
【０１３５】
（免疫蛍光アッセイ）
実施例を参照のこと。
【０１３６】
（核画像化実験）
抗ｈＭｅｔ  ｍＡｂ  Ｍｅｔ３を、抗ＨＧＦ  ｍＡｂの中和混合物と組み合わせて、Ｍｅｔ発現腫瘍およびＨＧＦ発現腫瘍をインビボで画像化するために使用することは、実施例に詳細に記載される。
【０１３７】
（物品およびキット）
本発明はまた、Ｍｅｔ陽性腫瘍の診断または画像化のため、このような腫瘍を処置するため、およびＭｅｔを検出、定量もしくは精製するために有用な組成物を含む、物品およびキットを提供する。この物品は、ラベルを有する容器を備える。適切な容器としては、例えば、瓶、バイアル、および試験管が挙げられる。これらの容器は、種々の材料（例えば、ガラスまたはプラスチック）から形成され得る。この容器は、活性薬剤を保持し、この薬剤は、１つ以上の本発明によるｍＡｂ（抗Ｍｅｔ抗体、または抗Ｍｅｔ抗体と抗ＨＧＦ抗体との組み合わせのいずれか）を含む組成物である。この容器上のラベルは、その組成物が、事情に応じて、癌の診断のため、モニタリングのためもしくは処置のために使用されること、あるいは好ましくは、Ｍｅｔを発現するかまたはＭｅｔのレベルもしくは代謝回転が、治療のための診断的標的、予後標的または効果的な標的である特定の型の癌または腫瘍を診断、モニタリングまたは処置するために使用されることを示す。別の実施形態において、このラベルは、その組成物が、Ｍｅｔを検出、定量または精製するために有用であることを示し、そしてまた、上記のもののような、インビボまたはインビトロのいずれかでの使用に対する指示を示し得る。
【０１３８】
本発明のキットは、上記容器、および緩衝液または他の試薬を含む第二の容器を備える。このキットは、市販および使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含み得、この材料としては、他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、針、注射器、および使用説明書を備えるパッケージ挿入物が挙げられる。このキットはまた、別の抗癌治療剤（例えば、化学療法薬物）を含有し得る。
【０１３９】
ここで、本明細書を一般的に記載したので、本発明は、以下の実施例を参照することによって、より容易に理解される。これらの実施例は、説明によって提供され、そして特定しない限り、本発明の限定としては意図されない。
【実施例】
【０１４０】
（実施例１）
（材料および方法）
（試薬）
１２５Ｉを、ＮａＩ（ヨウ素１μｇあたり４８０〜６３０ｍＢｑ（１３〜１７ｍＣｉ））として、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｃｏｒｐ．（Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ  Ｈｅｉｇｈｔｓ，ＩＬ）から購入した。ヒトＭｅｔのＣ末端部分と反応性であるＣ−２８ウサギポリクローナル抗体を、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．から購入した。
【０１４１】
（細胞株および腫瘍）
画像化研究を、Ｓ−１１４細胞（ｈＨＧＦおよびｈＭｅｔで形質転換されたＮＩＨ  ３Ｔ３細胞（Ｒｏｎｇ  Ｓら，Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒ．１９９３；４：５６３−５６９））とＭ−１１４細胞（ｍＨＧＦおよびｍＭｅｔで形質転換されたＮＩＨ  ３Ｔ３細胞）との構築された混合物で開始した。細胞を、８％ウシ血清を含むＤＭＥＭ中で増殖させた。ＳＫ−ＬＭＳ−１（ｈＭｅｔおよびｈＨＧＦについてのヒト平滑筋肉腫細胞株オートクライン（Ｊｅｆｆｅｒｓ  Ｍら，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１９９６；１６：１１１５−１１２５））を、１０％  ＦＢＳを補充したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中に維持した。ＤＡ３（ｍＭｅｔを発現するマウス乳腺癌細胞株（Ｆｉｒｏｎ  Ｍら，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２０００；１９：２３８６−２３９７））を、１０％  ＦＢＳおよび抗生物質を補充したＤＭＥＭ中で増殖させた。
【０１４２】
（ｍＡｂの産生および特徴付け）
（抗ＨＧＦ  ｍＡｂ）
抗ＨＧＦ  ｍＡｂの産生およびスクリーニングは、ＷＯ０１／３４６５０Ａ１およびＣａｏら，２００１（前出）（これらの両方は、本明細書中に参考として援用される）に詳細に記載された。簡単にいえば、ＨＧＦが、Ｓ１１４細胞から調製され、そしてこのタンパク質に対するマウスｍＡｂが、Ｂａｌｂ／Ｃマウスに腹腔内（ｉ．ｐ．）で、完全フロイントアジュバント中の精製されたネイティブＨＧＦタンパク質を注射し、次いで不完全フロイントアジュバント中の精製したタンパク質を４回さらに注射することによって、産生された。１ヵ月後、最後のＨＧＦ注射を、アジュバントなしで、ｉ．ｐ．およびｉ．ｖ．で与えた。ハイブリドーマ産生のためのＢ細胞／形質細胞の供給源として動物を選択するために、免疫されたマウスの血清を、それらがＭＤＣＫ細胞散乱アッセイ（従来の、当該分野において認識された、ＨＧＦ／ＳＦの生物学的活性のアッセイ）においてＨＧＦ／ＳＦを中和する能力について試験した。血清が中和抗体を有する動物由来の非細胞を採取し、そして最後の免疫注射の３日後、標準的な技術を使用して、Ｐ３Ｘ６３ＡＦ８／６５３骨髄腫細胞と融合させた。
【０１４３】
（抗Ｍｅｔ  ｍＡｂ）
ｈＭｅｔに対するｍＡｂを、ＢＡＬＢ／ｃマウスに腹腔内（ｉ．ｐ．）で、０．５ｍｌのリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中の５×１０６の１２１−１ＴＨ−１４細胞（ｈＭｅｔを発現する）を注射し、次いで同じ用量をさらに３回注射することによって、産生した。１ヵ月後、０．５ｍｌのＰＢＳ中の１０７のＯｋａｊｉｍａ細胞を、各マウスにｉ．ｐ．で注射した。最後の注射の４日後に得た非細胞を、標準的な技術を使用して、Ｐ３Ｘ６３ＡＦ８／６５３骨髄腫細胞と融合させた。
【０１４４】
ハイブリドーマ細胞を、０．５μｇ／ｍｌのｃ−Ｍｅｔ／Ｆｃキメラタンパク質でコーティングした９６ウェルマイクロプレートを使用するＥＬＩＳＡによって、ｈＭｅｔに対する反応性についてスクリーニングした。ｃ−Ｍｅｔ／Ｆｃとは、コーティング緩衝液（０．２Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３（ｐＨ９．６）、１ウェルあたり５０μｌ）中４℃で一晩の、ヒトＩｇＧ１  Ｈ鎖（Ｒ  ＆  Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓから購入された、カタログ番号３５８−ＭＴ）とのｈＭｅｔ  ＥＣＤの融合タンパク質である。ウェルを２００μｌのブロッキング緩衝液（ＰＢＳ−１％  ＢＳＡ）で、室温で１時間または４℃で一晩ブロッキングした後に、５０μｌのハイブリドーマ上清を、室温で１．５時間、ウェルに添加した。プレートを洗浄緩衝液（ＰＢＳ−０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０）で２回洗浄した。アルカリホスファターゼ結合体化ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ）を、１：２０００希釈で添加し（５０μｌ／ウェル）、そして室温で１．５時間インキュベートした。プレートを洗浄緩衝液で４回洗浄した後、ホスファターゼ基質であるＣＰ−ニトロフェニルホスフェート（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ  ＆  Ｐｅｒｒｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を３０分間添加し、そして吸光度を４０５ｎｍで測定した。ｃ−Ｍｅｔ／Ｆｃタンパク質との強い反応性を有するハイブリドーマ（ＯＤ値＞０．５、一方で陰性コントロール＜０．０２）を再クローニングし、そして反応性をＥＬＩＳＡで確認した。
【０１４５】
ＩＦによってｍＡｂを特徴付けるために、８ウェルストリップ中のＳ−１１４細胞およびコントロールの親ＮＩＨ−３Ｔ３細胞を、ホルムアルデヒドまたはアセトン／メタノール（１：１、Ｖ／ｖ）のいずれかで１０分間、室温で固定し、１０分間風乾し、そしてブロッキング緩衝液（ＰＢＳ−１％  ＢＳＡ）で室温で３０分間ブロックした。精製した抗Ｍｅｔ  ｍＡｂおよびコントロールの正常マウスＩｇＧを、２０μｇ／ｍｌにブロッキング緩衝液で希釈し、そしてＳ−１１４細胞またはコントロールのＮＩＨ  ３Ｔ３細胞のいずれかに、５０μｌ／ウェルで添加した。３７℃で１時間のインキュベーション後、ストリップを洗浄緩衝液（ＰＢＳ−０．５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０）中で３回洗浄した。細胞を、ＦＩＴＣ結合体化ヤギ抗マウスＩｇ血清と共に、１：２０の希釈で３７℃で１時間インキュベートし、次いで、３回洗浄した。サンプルを、蛍光顕微鏡によって観察し、そしてアセトン／メタノールで固定されたＳ−１１４細胞に対して最も強い染色を示すｍＡｂ（２Ｆ６と命名した）を、核画像化のために選択した。なぜなら、これは、ｈＭｅｔ  ＥＣＤに対して最も高い網掛けの親和性を有したからである。
【０１４６】
ＩｇＧ画分を、プロテインＧアフィニティークロマトグラフィーによって、ハイブリドーマ上清から精製し、そして０．２５リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．８〜７．０）中で最終濃度２ｍｇ／ｍｌに調節した。精製したＩｇＧ画分を、小さいアリコート（５０μｇ）中で凍結させて貯蔵し、そして放射性ヨウ素処理の直前に解凍した。
【０１４７】
本明細書中に記載される実験について、等体積の（ａ）２Ｆ６抗ｈＭｅｔ  ｍＡｂおよび（ｂ）４種の抗ＨＧＦ  ｍＡｂ（Ａ．１、Ａ．５、Ａ．７およびＡ．１０と命名した）を含む中和混合物を混合して、ＨＧＦ−Ｍｅｔ対と反応性の混合物を構築した。
【０１４８】
（ｍＡｂ混合物の放射性ヨウ素処理および注射）
最終のｍＡｂ混合物を、放射性核種の供給者の指示に従って、放射性ヨウ素処理した。簡単にいえば、０．１ｍｌの０．２５Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）２５μｇ中のｍＡｂ混合物に、７４ＭＢｑ（２．０ｍＣｉ；２０μｌ）の１２５Ｉをヨウ化ナトリウムとして、および２０ｎｍｏｌ（１０μｌ）のクロラミン−Ｔを添加した。これらの反応物を混合し、そして室温で９０秒間穏やかに撹拌した。この反応を、４２ｎｍｏｌ（２０μｌ）のメタ重亜硫酸ナトリウムの添加によってクエンチした。１２５Ｉ−ｍＡｂを、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ＡＧ  １×８樹脂（５０〜１００メッシュ）の小さいカラムでのイオン交換によって、未反応１２５Ｉから分離した。回収した生成物を４℃で貯蔵し、そして標識の２４時間以内に注射した。放射性同位体標識の効率を、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｇａｍｍａ  ８０００カウンターで決定し、そして最終生成物におけるタンパク質に結合した１２５Ｉの割合を、８０％水性メタノールで展開するＩＴＬＣ−ＳＧストリップ（Ｇｅｌｍａｎ）でのクロマトグラフィーによって評価した。標識混合物からのｍＡｂの完全な回収を仮定すると、放射性同位体標識の効率は６０％より高く、そしてタンパク質に結合し放射活性は、最終生成物の全放射活性の８５％以上を占めた。
【０１４９】
（画像化手順および分析）
動物を画像化し、そしてシンチグラムを、本発明者らおよびその同僚らによって記載される方法（Ｇｒｏｓｓ  ＭＤら（１９８４）Ｉｎｖｅｓｔ  Ｒａｄｉｏｌ  １９：５３０−５３４；Ｈａｙ  ＲＶら（１９９７）Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  Ｃｏｍｍｕｎ  １８：３６７−３７８）によって分析した。簡単にいえば、各マウスに、１２５Ｉ−ｍＡｂ混合物を、５０〜１００μＣｉ（１．８〜３．７ＭＢｑ）で、０．２ｍｌ以下を静脈内（ｉ．ｖ．）で側方に、尾の静脈によって、麻酔を軽く吸入させた状態で与えた。
【０１５０】
各画像化期間の直前に、各マウスに、１３ｍｇ／ｋｇまでのキシラジンおよび８７ｍｇ／ｋｇのケタミンを、ｓ．ｃ．で、肩甲骨間領域に与えた。各マウスの前側（ＤＡ３腫瘍保有マウスについて）および後側（他の全てのマウスについて）の全身γカメラ画像を１２５Ｉ−ｍＡｂ混合物の注射の１時間後、ならびに再度、注射の１日後、３日後、および５日後に獲得した。鎮静したマウスを、１匹または２匹で、コリメータ上の保護層を備える逆カメラヘッドの頂部に配置し、そして最適な肢の伸長を維持するために、この層にテープで留めた。１２５Ｉ活性の画像を、低エネルギーの高感度コリメータを備えるＳｉｅｍｅｎｓ  ＬＥＭ  Ｐｌｕｓ移動カメラで獲得した。画像を１５分間にわたって獲得し、この間に、２×１０５カウントと３×１０６カウントとの間が、１つの全身画像あたりに獲得された。
【０１５１】
比活性を、コンピュータ支援目的領域（ＲＯＩ）分析によって、各腫瘍について、全身について、そして適切なバックグラウンド領域について、各画像化時点で決定した。これらのデータを、バックグラウンド補正および崩壊補正した活性比として以下に表現する。変換したデータのグラフ分析および統計学的分析を、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌで実行した。
【０１５２】
（実施例２）
（抗Ｍｅｔ  ｍＡｂの、免疫蛍光法による特徴付け）
抗ｈＭｅｔ  ＥＣＤ（２Ｆ６）に対して特異的なｍＡｂを、ｈＭｅｔを発現するＳ−１１４細胞を用いて、ＩＦについて特徴付けた。結果を図１に示す。アセトン／メタノール中で固定したＳ−１１４細胞を、ｍＡｂ  ２Ｆ６（＝Ｍｅｔ３）（緑色、パネルＡ）とＭｅｔ  Ｃ末端ペプチド抗体Ｃ−２８に対するウサギポリクローナル抗体（赤色、パネルＢ）との両方を用いて染色した。染色のコロニー形成（黄色）は、パネルＣに明らかである。培養中の細胞の非線織位置および特徴を示すために、Ｎｏｍａｒｓｋｉ画像（パネルＤ）が提供される。
【０１５３】
（実施例３）
（画像解析および定量化）
個々の腫瘍保有マウスの連続全身γカメラ画像を、ｈＨＧＦおよびｈＭｅｔと反応性の１２５Ｉ−ｍＡｂ混合物の静脈内注射後１時間と５日間との間で得た。図２を参照のこと。活性は、早ければ注射後１時間で、ヒト腫瘍（ＳＫ−ＬＭＳ−１およびＳ−１１４、ともにｈＨＧＦおよびｈＭｅｔを発現する）において明らかであり、その後顕著に明らかであった。
【０１５４】
活性はまた、早ければ注射後１日で、マウス腫瘍（Ｍ−１１４（ｍＨＧＦおよびｍＭｅｔを発現する）およびＤＡ３（ｍＭｅｔのみを発現する））において、はっきり見られた。それにもかかわらず、ヒト腫瘍保有マウスは、注射後３日後および５日後でのそれらのずっとより低いレベルの内臓放射能およびより目立つ甲状腺活性（標識されたｍＡｂから放出された遊離放射性ヨウ素の取り込みを示す）からも明らかなように、マウス腫瘍保有マウスよりも急速に血液循環から放射能を除去した。ヒト腫瘍中の絶対放射能レベルおよびマウス腫瘍中の絶対放射能レベルは、一般に、経時的に匹敵するようであったとしても、ヒト腫瘍に関連した非甲状腺性の全身放射能の比率（すなわち、腫瘍画像化コントラスト）は、全ての画像化時点で、マウス腫瘍に関連した非甲状腺性の全身放射能の比率より高いようである。
【０１５５】
４匹のヒト腫瘍保有マウスからの画像および３匹のマウス腫瘍保有マウスからの画像をＲＯＩ分析で評価し、これらの明らかな差異を定量化し、これらが統計学的に有意で有り得るか否かを決定した。その結果を、図３Ａおよび３Ｂに要約する。実際に、全身活性（甲状腺を含む）に対する腫瘍活性の平均比のt検定比較（Ｔｔ：ＷＢｔと示される）は、全ての画像化時点で、マウス腫瘍よりヒト腫瘍に対しての方が有意に高く（１時間でｐ＜０．０２；１時間後ｐ≦０．００１）、注射後１日で０．３４対０．１１の動物および注射後３日で０．３７対０．２３の動物のこれらの小集団の平均値に達する。全身放射能の平均保持率（ＷＢｔ：ＷＢ１ｈとして示される）はまた、ヒト腫瘍に対し、１時間後で有意に低かった（ｐ≦０．００１）。最終的に、腫瘍関連活性の平均保持率（Ｔｔ：Ｔ１ｈ）は、注射後１時間で、マウス腫瘍中よりもヒト腫瘍中が低かったが、この差異は、研究された少数の動物を考えた場合、統計学的に有意ではなかった（１日でｐ＝０．３；３日および５日でｐ＜０．０８）。
【０１５６】
データにおける放射能標識ｍＡｂの静脈内注射の有効性における変動の影響を最小にするため、ＲＯＩの結果を、より従来の「注入活性パーセント（％ＩＡ）」（Ｈａｙら、前出）としてではなく、むしろ活性比として表した。技術的要素は、この変動を、マウスにおいて、血管アクセスがより容易なより大きな動物におけるよりも潜在的にずっと大きなものとする。このようにして、推定の注入された放射能に対する、やや正確ではない平均値に頼るよりも、むしろ各動物の実際に測定された最も早い画像化時点での全身活性が、それ自身の注入標準としての役目をする。さらに、有意な放射性核種排出が、注射後１時間の間には生じないと仮定すると、１時間での全身活性に対する腫瘍活性の比（Ｔ１ｈ：ＷＢ１ｈ）は、１時間での腫瘍に対する％ＩＡと非常に近似であり、そしてＴｔ：ＷＢ１ｈの比は、同様に、時間ｔでの腫瘍に対する％ＩＡと近似である。
【０１５７】
ネガティブコントロール実験およびポジティブコントロール実験は、マウス腫瘍およびヒト腫瘍との１２５Ｉ−ｍＡｂ混合物の関連の特異性を明らかにした。これらを以下に要約する：
１．マウス腫瘍（Ｍ−１１４およびＤＡ３）は、注射後１時間または２４時間まで、血液プールの活性以上の有意な活性を示さなかった。
【０１５８】
２．抗Ｍｅｔ１２５Ｉ−ｍＡｂおよび抗ＨＧＦ１２５Ｉ−ｍＡｂの混合物の「古い（ａｇｅｄ）」バッチ（１週間以上冷凍保存され、次いで再純化され、遊離ヨウ素を除去される）は、注射後１時間または２４時間まで、Ｍ−１１４中の血液プール以上の有意な活性を示さなかった。「古い」１２５Ｉ抗Ｍｅｔ  ｍＡｂ単独は、ＳＫ−ＬＭＳ−１を画像化するために有効ではなかった。
【０１５９】
３．新しく標識した抗Ｍｅｔ  ｍＡｂおよび抗ＨＧＦ  ｍＡｂを別々に用いる腫瘍画像実験は、抗Ｍｅｔおよび抗ＨＧＦ／ＳＦの両方が、１２５Ｉ−ｍＡｂ混合物で観察された全体の腫瘍関連活性に寄与したことを示す。
【０１６０】
まとめると、これらの結果は、本研究において観察された腫瘍関連活性のレベルおよび時間的パターンが、新たに放射ヨウ素標識された抗Ｍｅｔおよび抗ＨＧＦの使用に、何らかの形で特有であり、一般的に放射ヨウ素標識されたタンパク質のいくつかの非特異的な性質には特有ではないことを主張する。
【０１６１】
（実施例１〜３の考察）
上記の結果は、ｈＨＧＦおよびｈＭｅｔを発現する（オートクライン様式で）腫瘍（一般的に、腫瘍の迅速に増殖する性質）は、ＨＧＦ−Ｍｅｔのペアに対して反応性のｍＡｂの１２５Ｉ−標識混合物で画像化され得ることを実証する。ｍＨＧＦおよび／またはｍＭｅｔを発現する腫瘍はまた、おそらくエピトープ交差反応性のために、放射ヨウ素標識されたｍＡｂ混合物で画像化され得る。しかし、ヒト腫瘍およびマウス腫瘍による１２５Ｉ−ｍＡｂ混合物のインビボ代謝は、他の数量的規準によるのと同様に、反応速度論において異なる。要するに、調べたヒト腫瘍は、血液循環からのｍＡｂ混合物の迅速な取り込みおよび迅速な排除を示し、そして注射後１時間から５日の範囲での時間で、マウス腫瘍よりも全身放射能の有意に高い比率を構成する。実際に、このような差異は、高い親和性、高い能力の腫瘍と結合に対するより低い親和性およびより所定の放射性トレーサ代謝のより低い能力を有する腫瘍との間で予測される。
【０１６２】
上記の画像化実験は、単一のエピト−プ特異性を有するｍＡｂというよりは、むしろＨＧＦ−Ｍｅｔのペアと反応性であるｍＡｂの「構成された」混合物により開始された。これは、レセプター（Ｍｅｔ）およびそのリガンド（ＨＧＦ）の両方を発現する腫瘍モデル中の任意の他のエピトープから１つの標的エピトープを選択するための、いくつかの推測的な理由の欠如のために行われた。
【０１６３】
さらに、本研究で使用される様々な抗ＨＧＦ  ｍＡｂが、異なるエピトープに結合することがすでに知られている。アニメ形式で図４に図示されるように、放射標識した抗Ｍｅｔ  ｍＡｂは、腫瘍細胞表面上に発現したＭｅｔ分子に直接結合し得るが、抗ＨＧＦ  ｍＡｂは、Ｍｅｔ発現細胞のすぐ近傍に局所的に集中したＨＧＦ分子に結合し得るか、または間接的にＭｅｔ発現腫瘍細胞を有効にターゲティングする（例えば、Ｍｅｔ結合ＨＧＦへの結合によって）、ＨＧＦおよびＭｅｔと三重複合体を形成し得る。
【０１６４】
抗ＨＧＦ  ｍＡｂのこの特定の中和混合物は、Ｍｅｔの安定化に関与し得るので抗Ｍｅｔ  ｍＡｂは、他の場合よりも容易に、または強く結合する。この混合物中に含まれる任意のｍＡｂは、単独で、これらの腫瘍を画像化するために使用され得ることもまた可能である。
【０１６５】
前記に基づき、ヒトにおいてＭｅｔ発現腫瘍および／またはＨＧＦ腫瘍を検出可能な、新しく開発された放射標識ｍＡｂは、所定の被験体について、所定の腫瘍が後で侵入し、転移する可能性（例えば、高いまたは低い）の非侵襲性評価に基づいて、その被験体の「転移性の危険の層別化」を得るための臨床的ツールとして得られることが予測される。は、このような情報は、我々が、各々の患者に基づく適切なモニタリングおよび治療プロトコールを設計する能力を向上する。
【０１６６】
（実施例４）
（Ｍｅｔ３を使用する、ｈＭｅｔ発現腫瘍異種移植片の放射免疫シンチグラフィー）
単一のハイブリドーマクローン由来の抗Ｍｅｔ  ｍＡｂ−−Ｍｅｔ３と称する−−の活性を、４つの異なる組織起源のヒトＭｅｔ発現腫瘍を画像化し、そして、Ｍｅｔの相対量に従ってそれらを区別する能力について試験した。
【０１６７】
１２５ＩをＮａＩ（４８０−６３０  ＭＢｑ；ヨウ素１μｇあたり１３〜１７ｍＣｉ）として、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｃｏｒｐ．（Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ  Ｈｅｉｇｈｔｓ，ＩＬ）より購入した。ヒトＭｅｔのＣ末端部分と反応性のＣ−２８ウサギポリクローナル抗体およびβ−チューブリンと反応性のＨ−２３５ウサギポリクローナル抗体を、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．より購入した。Ａｌｅｘａ４８８結合体化抗マウス抗体をＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓより購入した。免疫修飾試薬をＡｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＢｉｏＴｅｃｈより購入した。
【０１６８】
（細胞株および腫瘍導入）
Ｓ−１１４細胞は、ＮＩＨ  ３Ｔ３細胞をヒトＨＧＦ／ＳＦおよびヒトＭｅｔで形質転換したものである（Ｒｏｎｇら、前出）。ＳＫ−ＬＭＳ−１／ＨＧＦ細胞は、ヒトＭｅｔおよびヒトＨＧＦ／ＳＦを自己分泌するヒト平滑筋肉腫細胞株である（Ｊｅｆｆｅｒｓら、前出）。ＰＣ−３細胞は、ヒト前立腺癌腫細胞株である。Ｍ１４−ＭｅｌおよびＳＫ−ＭＥＬ−２８は、ヒト悪性黒色腫細胞株である。これらの全ての細胞株を、全て、１０％  ＦＢＳを補填したＤＭＥＭ中で維持した。
【０１６９】
約６週齢の雌性胸腺欠損ヌード（ｎｕ／ｎｕ）マウスに、Ｓ−１１４、ＳＫ−ＬＭＳ−１／ＨＧＦもしくはＰＣ−３細胞の懸濁液を、右大腿の後部側面、または、悪性黒色腫細胞懸濁液を大腿の右側隣接部に、皮下注入した。各マウスに、２×１０５個と５×１０５個の間の細胞を移植した。腫瘍を、画像化の前１〜６週間増殖させ、外部のキャリパー測定による最大寸法が≧０．５ｃｍに達した。マウスを、国際動物保護委員会によって承認される条件下で、小集団で収容し、自由にマウス飼料および飲用水に近づけるようにした。
【０１７０】
（細胞株によるＭｅｔ発現の分析）
上に列挙した培養細胞を、以前に記載される手順に少しの改変を加えた免疫ブロッティング（Ｗｅｂｂ，Ｃ．Ｐ．ら、２０００，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：３４２−３４９）により、Ｍｅｔの相対量について分析した。簡単には、細胞をコンフルエンシー近くまで、１０％  ＦＢＳを補填したＤＭＥＭ中で増殖させた。細胞溶解物を調製し、清澄し、そして、タンパク質濃度について分析した。細胞溶解物の標準化アリコートをＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動にかけ、電気移動し、そしてＣ−２８抗Ｍｅｔポリクローナル抗体に続き抗β−チューブリンポリクローナル抗体で免疫修飾した。免疫複合体は、増強された化学発光によって示され、Ｘ線フィルムへの曝露によって可視化した。
【０１７１】
（Ｍｅｔ３の調製および特徴付け）
ヒトＭｅｔの細胞外ドメインに対するｍＡｂを生成し、上述のように反応性についてスクリーニングした。ハイブリドーマクローン２Ｆ６由来の抗体を、ＥＬＩＳＡによってＭｅｔに対する最も高い親和性を、そして、ＩＦによってヒトＭｅｔ細胞外ドメインに対する最も高い明らかな親和性を示すものとして同定した。本明細書中に記載される実験に使用される、クローン２Ｆ６由来の抗体を、Ｍｅｔ３と称する。
【０１７２】
Ｍｅｔ発現の免疫組織化学分析およびヒト組織のホルマリン固定パラフィン包埋切片における分布をＫｎｕｄｓｅｎら、前出に記載されるものを以下のように改変して実施した：顕微鏡用スライド上の組織切片をＭｅｔ３とともにインキュベートし、Ｖｅｎｔａｎａ（登録商標）ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｓｙｓｔｅｍで処理した。スライドを従来の光学顕微鏡で検鏡した。
【０１７３】
培養細胞におけるＭｅｔ発現の免疫蛍光分析を、実質的に上述のように実施し、固定単層細胞をＭｅｔ３次いで、ＦＩＴＣ結合体化抗マウスＩｇＧとともにインキュベートし、およびＣ−２８ポリクローナル抗体次いでローダミン結合体化抗ウサギＩｇＧとともにインキュベートし、適切な蛍光およびフィルターセットで染色パターンを可視化した。
【０１７４】
培養ヒト前立腺癌細胞株に結合するＭｅｔ３の蛍光細胞分析分離装置（ＦＡＣＳ）分析をＢｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒ装置で実施した。培養細胞を、コンフルエンシー近くまで増殖させ、ケラチンで剥離および分離し、そして、ＢＳＡ含有緩衝液中０．１ｍｌあたり約１０６細胞で再懸濁した。細胞懸濁液をＭｅｔ３（１０μｇ／ｍｌ）とともに４℃で３０分間インキュベートし、３回洗浄し、二次抗体（抗マウスＡｌｅｘａ  ｇｒｅｅｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）とともに４℃で１５分間インキュベートし、分析の前に３回洗浄した。
【０１７５】
核画像化実験について、ＩｇＧ画分を、プロテインＧアフィニティークロマトグラフィーによって２Ｆ６（Ｍｅｔ３）ハイブリドーマ細胞株上清画分から精製し、０．２５ナトリウムリン酸緩衝液（ｐＨ６．８〜７．０）中２ｍｇ／ｍｌの最終濃度に調整した。精製ＩｇＧ画分を小さなアリコート（２５〜５０μｇ）中に凍結保存し、放射ヨウ素標識の直前に溶解した。
【０１７６】
（Ｍｅｔ３の放射ヨウ素標識および注射）
Ｍｅｔ３を上述の手順によって放射ヨウ素標識した。回収した生成物を使用するまで４℃で保存し、標識から２４時間以内に注入した。放射標識効果を、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｇａｍｍａ  ８０００  ｃｏｕｎｔｅｒで決定し、最終生成物中のタンパク質−結合１２５Ｉの割合を８０％メタノール水溶液で展開するＩＴＬＣ−ＳＧストリップ（Ｇｅｌｍａｎ）のクロマトグラフィーによって調べた。標識化混合物からｍＡｂを完全に回収したと想定すると、放射標識効果は＞６０％であり、タンパク質−結合放射活性は、最終生成物中の総活性の≧９０％とみなされた。
【０１７７】
（画像化手順および分析）
動物を画像化し、そしてシンチグラムを上記およびＧｒｏｓｓら（前出）；Ｈａｙら，１９９７（前出）；およびＨａｙら，２００２，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｃｏｍｍｕｎ．２３：３６７−３７２に記載される方法によって分析した。簡単には、各マウスに約５０μｌ中の１２５Ｉ−Ｍｅｔ３、５０−１００μＣｉ（１．８−３．７ＭＢｑ）を、軽い吸入麻酔下で尾静脈に皮内注射した。各画像化セッションの直前に、各マウスに、１３ｍｇ／ｋｇまでのキシラジンおよび８７ｍｇ／ｋｇのケタミンを、肩甲骨間領域に皮下注射した。各マウスの背面全身のγカメラ画像を、１２５Ｉ−Ｍｅｔ３注射後１〜２時間に始めて得、注射後１日、３日、および少なくとも５または６日で再び得た。落ち着いた状態のマウスを一匹または対で、コリメータ上に保護層を備える、逆さに向けたカメラヘッドの頂部に配置し、そして最適な肢の延びを維持するようにその層にテープ付けした。１２５Ｉ活性の画像を、低エネルギーで高感度のコリメータを備えるＳｉｅｍｅｎｓ  ＬＥＭ  Ｐｌｕｓモバイルカメラによって得た。全身の画像あたり２×１０５〜３×１０６カウントを回収する間、１５分間にわたって収集（ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ）を得た。
【０１７８】
相対活性を、コンピュータで補助された（ｃｏｍｐｕｔｅｒ−ａｓｓｉｓｔｅｄ）対象領域（ＲＯＩ）の分析によって、各腫瘍について、全身について、および適切なバックグラウンド領域について、各画像化の時点において測定した。これらのデータは、バックグラウンド補正された活性比および減衰補正された活性比として以下に示される。変換したデータのグラフィック分析および統計学分析は、Ｅｘｃｅｌ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ）プログラムを利用した。
【０１７９】
（結果）
（Ｍｅｔ３の特徴）
本明細書中に示されるように、Ｍｅｔ３は、市販されているポリクローナル抗Ｍｅｔ抗体Ｃ−２８（培養されたＳ−１１４細胞中）、ヒトＭｅｔおよびヒトＨＧＦ／ＳＦで形質転換されたマウス株と共存する。図５Ａは、Ｍｅｔ３がまた、ホルマリン固定化パラフィン包埋組織切片での、ヒト組織（例えば、前立腺組織）の免疫組織化学のために使用され得ることを示す。図５Ｂは、ヒト前立腺上皮細胞の初代培養物中でのＩＦ分析によるＭｅｔ３の染色パターンが、Ｃ−２８で観察されるパターンを複製することを示す。さらに、Ｍｅｔ３はＰＣ−３およびＤＵ１４５ヒト前立腺癌細胞株（これらの両方は、Ｍｅｔを発現する）の表面に結合するが、Ｍｅｔをごくわずかしか発現しないＬＮＣａＰ細胞表面に対しては、任意の有意なレベルまで結合しない（Ｋｎｕｄｓｅｎら（前出））。図５Ｃを参照のこと。
【０１８０】
（細胞株によるＭｅｔ発現の分析）
図６に示されるように、この研究用に選択した細胞株は、血清の存在下で培養された場合に、Ｍｅｔの相対発現が劇的に変化する。細胞タンパク質濃度に対して規格化された細胞溶解物を電気泳動、電気移動（ｅｌｅｃｔｒｏｔｒａｎｓｆｅｒ）、ならびにＣ−２８および抗βチューブリン（無関係なハウスキーピング遺伝子産物の種々の細胞株間の匹敵するレベルを確認するためのコントロールとして）での免疫修飾にかけ、Ｍｅｔの存在量を評価する。これらの条件下で、Ｓ−１１４は、ｐ１７０前駆体および成熟ｐ１４０形態の両方のように、Ｍｅｔの最も高い存在量を示した。メラノーマ細胞株は、ＳＫ−ＭＥＬ−２８よりも低いＭ１４−Ｍｅｌを有する、最も低いレベルのＭｅｔを発現した。ＳＫ−ＬＭＳ−１／ＨＧＦおよびＰＣ−３細胞は、総Ｍｅｔの匹敵するレベル（ｐ１７０＋ｐ１４０）で、Ｍｅｔの中間的な存在量を示すが、ＰＣ−３細胞中で検出されるｐ１４０に対するｐ１７０のより低い比を伴う。
【０１８１】
（画像分析および定量化）
図７は、１２５Ｉ−Ｍｅｔ３の静脈内注射後、１〜２時間および５〜６時間で得られる、個々の異種移植片保有マウスの連続的な全身γカメラ画像を示す。一対の同時に画像化された宿主マウスは、ＳＫ−ＬＭＳ−１／ＨＧＦ異種移植片を示す。活性は、最も初期の画像化セッションにおけるＳ−１１４およびＳＫ−ＬＭＳ−１／ＨＧＦ異種移植片中ではっきりと可視化され、ＰＣ−３異種移植片中で最初に示唆された後肢活性のかすかな非対称性を有する。全身の活性の関数としての腫瘍関連放射活性は、注射後３日でのこれらの３つの異種移植片中で最も顕著である。どのメラノーマ異種移植片も、画像化の順序の間に、放射活性の量的にかなりの取りこみまたは保持を示さなかった。
【０１８２】
図８は、２つの形式で示される、定量的な画像ＲＯＩ分析のグラフィック結果を示す。上のパネルは、注射後の時間の関数として、異なる組織起源の異種移植片と関連する注射活性の推定画分を示す。各異種移植片型は、最も初期の画像化セッションにおいて、この関数について最も高い平均値を示し、Ｓ−１１４、ＳＫ−ＬＭＳ−１／ＨＧＦ、およびＰＣ−３について、それぞれ推定注射活性の１８．６±２．１、７．２±２．２、および５．４±２．６％の最大値（±１ｓ．ｄ．）であった。下のパネルは、注射後の時間の関数として、腫瘍  対  全身の活性の平均比を示す。各異種移植片型について、この関数について最も高い値は注射後３日で生じ、Ｓ−１１４、ＳＫ−ＬＭＳ−１／ＨＧＦ、およびＰＣ−３について、それぞれ０．３２±０．１３、０．１５±０．０６、および０．１０±０．０４の平均値（±１ｓ．ｄ．）であった。Ｍ１４−ＭｅｌまたはＳＫ−ＭＥＬ−２８は、注射後の任意の時間において、注射活性または全身活性の３％以下を占める。
【０１８３】
（考察）
実施例１〜３に記載されるように、ヒトＭｅｔ−ＨＧＦレセプター−リガンド複合体の複数のエピトープを認識するｍＡｂの混合物は、自己分泌腫瘍異種移植片の放射免疫シンチグラフィーのために使用され得る。これらの観察は、実施例４に拡張され、これは、ＥＣＤ  ｈＭｅｔの単一のエピトープを認識する単一のハイブリドーマクローンの産物であるＭｅｔ３が、核画像化のために同様に有効であることを示す。これらの研究は、Ｍｅｔ３がヒト組織のホルマリンで固定化パラフィン包埋切片の慣習的な免疫組織化学分析のため、初代ヒト細胞培養物のＩＦ分析のため、およびヒト腫瘍細胞のＦＡＣＳベースの分析のため（特に、正常ヒト前立腺組織および悪性ヒト前立腺組織のサンプルの評価のため）に有用であることを、さらに示す。
【０１８４】
さらなる例にそってここで示される結果は、放射標識されたＭｅｔ３が異なる組織起源の、Ｍｅｔ発現ヒト腫瘍異種移植片を画像化することを支持する。さらに、１２５Ｉ−Ｍｅｔ３取りこみのランク順序および異なる型の異種移植片によって示される保持レベルを、血清の存在下で培養したそれぞれの親細胞株中で生化学的に評価されるように、相対Ｍｅｔ存在量のランク順序でインビボで直接的に補正する。別の言いかたをすると、これらの知見に基づいて、腫瘍を、核画像化分析によって高い、低い、および中間のＭｅｔ３取りこみの分類で独断的に分け、これらそれぞれの分類が、腫瘍細胞中の高い、低い、および中間のＭｅｔ存在量を反映することを推測することが可能である。
【０１８５】
中間のＭｅｔ３取りこみ分類に分けられた２つの腫瘍異種移植片型（ＳＫ−ＬＭＳ−１／ＨＧＦおよびＰＣ−３）は、ここで例示されるＲＯＩ分析関数のいずれに対しても統計学的に有意な差異を示さず、そして培養細胞溶解物の免疫ブロット分析によって、かなりの総Ｍｅｔ存在量（ｐ１７０＋ｐ１４０）を有することを明らかにする。それにも関わらず、両方のＲＯＩ分析関数は、ＰＣ−３中よりも、ＳＫ−ＬＭＳ−１／ＨＧＦ中でより高い値をとる傾向があり、これは、おそらく、前者におけるＭｅｔの自己分泌媒介性ターンオーバーに起因する。従って、放射標識されたＭｅｔ３取りこみにおけるわずかな差異およびかなりの総Ｍｅｔ存在量を有する細胞によるインビボでの保持におけるわずかな差異でさえも、Ｍｅｔの生物学的ターンオーバーの異なる速度に寄与し得る（Ｗｅｂｂら，（前出）；Ｊｅｆｆｅｒｓ，Ｍら，１９９７，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１７：７９９−８０８）。
【０１８６】
この可能性は、本発明者らの最近の研究によって支持され、この研究は、インビボでのさらなる型の異種移植片による１２５Ｉ抗Ｍｅｔ  ｍＡｂクリアランスの速度を、インビトロでのＨＧＦ刺激に対するこれらの反応性と比較する（実施例５５を参照のこと）。
【０１８７】
この放射ヨウ素標識抗Ｍｅｔ  ｍＡｂ（Ｍｅｔ３と示される）は、異なる組織起源のｈＭｅｔ発現異種移植片の画像化に有用であることが結論付けられた。これらの結果に従って、放射標識されたＭｅｔ３でのシンチグラフィーは、これらのＭｅｔ発現レベルに従って、ヒト腫瘍異種移植片を区別し得る。
【０１８８】
（実施例５）
（新しいｍＡｂ、Ｍｅｔ３を使用する、ｈＭｅｔ発現腫瘍異種移植片の放射免疫シンチグラフィー）
単一のハイブリドーマクローンからの二次抗Ｍｅｔモノクローナル抗体（Ｍｅｔ５と示される）（表１を参照）を産生し、そしてＭｅｔ３について上記したのと本質的に同じようにスクリーニングした。免疫沈降およびイムノブロッティング分析およびＦＡＣＳ分析は、このＭｅｔ５  ｍＡｂが、イヌＭｅｔおよびヒトＭｅｔの両方に結合することを示す。ここで示される結果は、Ｍｅｔ５が、Ｍｅｔ３  ｍＡｂよりも、ＭｅｔのＥＣＤの異なるエピトープに結合することを示す。
【０１８９】
この結果は、図９〜１３に示す。
【０１９０】
Ｍｅｔは、イヌ細胞に存在することが見出された。イヌ腎臓細胞株ＭＤＣＫの細胞を培養し、そして所定の濃度でＨＧＦに曝した。細胞溶解物を調製し、Ｍｅｔ５と免疫沈降させ、その後、電気泳動、電気移動、および抗ＰＹ  ４Ｇ１０（抗ホスホチロシン抗体）で免疫修飾し、活性化（ホスホリル化）Ｍｅｔを検出する。ＳＫＬＭＳ−１細胞を既知のポジティブコントロール（Ｍｅｔ−ポジティブ、ＨＧＦ反応性）として同様に処理した。結果は、これらの処理された細胞中に存在する大量のＭｅｔの存在を示し、これは、ＨＧＦ刺激が強くなるにつれて増加する（図９Ａ、９Ｂ）。これは、図１０中に示される第２の実験で示された。
【０１９１】
ＰＣ−３ヒト前立腺癌細胞に結合するＭｅｔ３のＦＡＣＳ分析は、Ｍｅｔ３の存在下での蛍光指示薬（色素結合抗マウスＡｂ）の、細胞との結合を反映するより大きい粒子サイズへの移行を示す（図１１Ａ〜１１Ｃ）。ＭＤＣＫイヌ腎臓細胞へのＭｅｔ５結合（図１２Ａ〜１２Ｃ）の同様の分析は、より大きい粒子サイズへの蛍光指示薬（蛍光標識された抗マウス抗体）の同様の移行を示す。
【０１９２】
２つの異なる型のヒト腫瘍異種移植片の、１２５Ｉ−Ｍｅｔ５での核画像化を、図１３Ａ〜１３Ｄに示す。ヒト鼻咽頭癌（ＮＰＣ）細胞株ＣＮＥ−２および腎臓細胞癌（ＲＣＣ）細胞株７６９−Ｐの異種移植片をヌードマウスの右大腿の皮下で増殖させた（３匹／群）。各マウスを１２５Ｉ−Ｍｅｔ５で静脈内注射し、そして連続的なγカメラ画像を得た（注射後１時間〜５日）。各群中の一匹のマウスの画像に付けられている矢印は、皮下（大腿）腫瘍位置を示す。抗体の結合およびクリアランスの動力学における差異は明らかである。ＲＣＣ腫瘍細胞は、１時間ほどで検出され、そして皮下腫瘍を標識する抗体の証明は、３日かかった。対照的に、ＮＰＣ細胞は、１日で標識を示し、そして腫瘍は、５日で標識されたままである。これは、この二価抗体によって本質的にかまたはこの二価抗体による結合に応答してのいずれかで、細胞表面Ｍｅｔ分子のターンオーバーまたは内在化を反映し得る。
【０１９３】
従って、放射ヨウ素化標識されたＭｅｔ５は、Ｍｅｔ３と同様に、ヌードマウス中のヒト腫瘍異種移植片を画像化するために有効である。この試薬は、Ｍｅｔ特異的画像化ならびにヒトおよびペットのイヌ（この中で、前立腺および骨の癌の自然発生は、比較的通常である）の両方のための診断薬および治療剤の開発を可能にする。
【０１９４】
上で引用される参考文献は、具体的に援用されるか否かに関わらず、その全体が本明細書中で参考として援用される。
【０１９５】
ここで、本発明を全て記載したが、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、かつ過度の実験を伴わずに、本発明が等価のパラメータ、濃度、および条件の広い範囲内で実行され得ることを、当業者は容易に理解する。
【図面の簡単な説明】
【０１９６】
【図１】図１Ａ〜１Ｄは、抗ｈＭｅｔ  ｍＡｂを用いる、腫瘍の免疫蛍光（ＩＦ）  分析を示す。アセトン／メタノール中に固定した抗ｈＭｅｔ  ｍＡｂｓ．Ｓ−１１４細胞を、（Ａ）抗Ｍｅｔ  ｍＡｂ  ２Ｆ６次いでＦＩＴＣ結合体化抗マウスＩｇＧ（緑色Ｆｉｇ．１Ａ）または（Ｂ）ポリクローナル抗Ｍｅｔウサギ抗体Ｃ−２８  （Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）次いでローダミン結合体化  抗ウサギＩｇＧ（赤色、図１Ｂ）のいずれかで標識した。図１Ｃは、ｍＡｂおよびポリクローナル抗体で認識される抗原の共存（黄色）を確認する。図１Ｄは、図１〜１Ｃからの細胞のＮｏｍａｒｓｋｉ−Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  Ｃｏｎｔｒａｓｔ  画像を示す。
【図２】図２は、ｈＨＧＦに特異的な抗体およびｈＭｅｔに特異的な抗体を含む１２５Ｉ標識ｍＡｂ混合物を注射した、腫瘍を有するマウスの一連の全身画像を示す。各未加工像はこの１２５Ｉ−ｍＡｂ混合物を注射した単一の腫瘍を有するマウスに対する連続全身シンチグラムを含む。各マウスにおける腫瘍は、その未加工像の左に示す。各カラムの下に、ｍＡｂ注射後の時間を示し、この時点で各画像を取得した。上の３つの未加工画像について後方投射で、そしてＤＡ３を有するマウスについては前方投射で、画像を得た。大きな矢印は、各腫瘍の横位置を示す。アスタリスクは、甲状腺の横位置を示す。注入後１日のＤＡ３を有するマウスに対する画像の小さな矢印は、泌尿器膀胱活性を示す。Ｍ１１４を有するマウスについての各シンチグラムの上右角の体外放射活性は、位置マーカーを表す。
【図３】図３Ａおよび３Ｂは、ｈＨＧＦおよびｈＭｅｔを発現する腫瘍とｍＨＧＦおよび／またはｍＭｅｔを発現する腫瘍とのＲＯＩ比較を示す。ｈＭｅｔおよびｈＨＧＦに起因して自己分泌様式で成長する腫瘍を有する４匹のマウス（３匹のマウスはＳ−１１４を有し、１匹のマウスはＳＫ−ＬＭＳ−１を有する）ならびに、ｍＨＧＦおよび／またはｍＭｅｔを発現する腫瘍を有する３匹のマウス（２匹のマウスはＤＡ３を有し、１匹のマウスはＭ−１１４を有する）に、ｈＭｅｔおよびｈＨＧＦ／ＳＦに特異的な１２５Ｉ−標識ｍＡｂ混合物を注射した。腫瘍の放射活性（Ｔ）および全身の放射活性（ＷＢ）を、早期として注入後１時間、および後期として注入後５日として得た連続的なシンチグラムの「対象領域」分析によって定量した（図２）。平均値（±１ＳＤ）をＴｔ：Ｔ１時間の比（＝注入後１時間でのＴに対する時間ｔでのＴの比）、ＷＢｔ：ＷＢ１時間、Ｔｔ：ＷＢ１時間およびＴｔ：ＷＢｔについてプロットする。これらのマウスにおけるヒト腫瘍とマウス腫瘍の間の差異は、ＷＢｔ：ＷＢ１時間（１時間後にｐ＜０．００１）およびＴｔ：ＷＢｔ（１時間でｐ＜０．０２；１時間後にｐ≦０．００１）について有意であった。
【図４】図４は、放射標識ｍＡｂが腫瘍細胞に結合する機構の図式表示である。放射標識化抗Ｍｅｔ  ｍＡｂ（＊抗Ｍｅｔ）は、腫瘍細胞表面上に発現されるＭｅｔに直接結合するように図示する。放射標識抗ＨＧＦ  ｍＡｂ（＊抗ＨＧＦ／ＳＦ）は、細胞外環境に濃縮される遊離ＨＧＦに結合し、それによって放射標識化可溶性複合体で腫瘍細胞を包囲し得るか、または細胞表面でｍＡｂ：ＨＧＦ：Ｍｅｔの三元複合体を形成し得る。
【図５Ａ】図５Ａは、抗Ｍｅｔ  ｍＡｂ「Ｍｅｔ３」の反応性を特徴付ける。図５Ａは、Ｍｅｔ３を用いたエキソビボでの免疫組織化学染色を示す。ヒト前立腺組織のホルマリン固定のパラフィン包埋サンプルを、Ｍｅｔ３を用いて免疫組織化学で試験した。正常な前立腺上皮において、暗茶色の染色によってＭｅｔ発現を示す。染色は、基本細胞層において最も顕著である（矢印）。
【図５Ｂ】図５Ｂは抗Ｍｅｔ  ｍＡｂ「Ｍｅｔ３」の反応性を特徴付ける。図５Ｂは、培養された正常ヒト前立腺上皮細胞においてＭｅｔ３がＭｅｔに結合することを示す。正常ヒト前立腺上皮細胞の初代培養を、Ｍｅｔ３（緑色；図５Ｂの左半分）およびＣ−２８ポリクローナル抗体（赤色；図５Ｂの右半分）を用いてＩＦによって試験した。抗体の結合は、形質膜に同時に局在する。
【図５Ｃ】図５Ｃ／１〜５Ｃ／３は抗Ｍｅｔ  ｍＡｂ「Ｍｅｔ３」の反応性を特徴付ける。図５Ｃ／１〜５Ｃ／３は、Ｍｅｔ３がＰＣ−３およびＤＵ１４５前立腺癌腫細胞の表面に結合することを示す：Ｍｅｔ３でのＦＡＣＳ分析（右にシフトする薄い緑色の曲線）は、ＬＮＣａＰ細胞株（非常の低いレベルのＭｅｔ発現を示す）ではなく、Ｍｅｔ発現ＰＣ−３およびＤＵ１４５細胞株における染色表面を示す。
【図６】図６は、選択したヒト癌細胞によるＭｅｔ発現を示す。示される培養細胞株を１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含むＤＭＥＭ中でコンフルエンシー近くまで増殖させた。細胞溶解物の標準化アリコートを、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動にかけ、電気移動し、そしてＣ−２８抗Ｍｅｔポリクローナル抗体（上パネル）に続きＨ−２３５抗β−チューブリンポリクローナル抗体（下パネル）で免疫修飾した。免疫複合体は、増強された化学発光によって示された。結果として得られたルミノグラムの関連領域を示す。
【図７】図７は、腫瘍異種移植片のシンチグラムを示す。示された細胞株を雌胸腺欠損ヌードマウスの、右大腿の背部側面にかまたは右側方（悪性黒色腫に関して）の隣接部位に皮下注射し、異種移植片を導入した。宿主動物を１２５Ｉ−Ｍｅｔ３（これらの腫瘍が最大寸法において≧０．５ｃｍに達した場合、５０〜１００μＣｉを静脈内に与えた）での放射免疫シンチグラフィーにかけた。左に示される腫瘍を有する動物の各々についての連続背部全身シンチグラムの複合（注入後１〜２時間５〜６日）を示す。矢印は、腫瘍異種移植片の位置を示す。いくつかの動物におけるいくつかの時点において、異種移植片近くで明らかな活性の正中焦点は、泌尿器膀胱においての放射性ヨウ素（ｒａｄｉｏｉｏｄｉｄｅ）を示す。各画像における活性のｃｒａｎｉａｄｍｏｓｔ焦点は、甲状腺によって取り込まれる遊離放射性ヨウ素を示す。
【図８Ａ】図８Ａは、シンチグラムの対象領域（ＲＯＩ）  分析を示す。各宿主動物についての連続シンチグラムを定量的ＲＯＩ分析により評価した。図８Ａは、腫瘍異種移植片に関する注入活性の推定割合を、注入後時間の関数として示す。
【図８Ｂ】図８Ｂは、シンチグラムの対象領域（ＲＯＩ）分析を示す。各宿主動物についての連続シンチグラムを定量的ＲＯＩ分析により評価した。図８Ｂは、腫瘍関連放射活性と測定した全身活性の比を注入後時間の関数として示す。各異種移植片群について、各注入後の時点での平均値（＋１ｓ．ｄ．）を示し；群あたりｎ＝３〜５動物である。
【図９】図９Ａおよび９Ｂは、イヌ細胞における活性化Ｍｅｔの存在を示す。イヌの腎臓細胞株ＭＤＣＫの細胞を培養し、示された濃度でＨＧＦに曝露した。細胞溶解物を調製し、Ｍｅｔ５で免疫沈降し、その後、電気泳動し、電気移動し、そして抗ＰＹ４Ｇ１０（抗リン酸チロシン抗体）で免疫修飾し、活性化（リン酸化）Ｍｅｔを検出した。ＳＫＬＭＳ−１細胞を既知のポジティブコントロール（Ｍｅｔ−陽性、ＨＧＦ−反応性）として、同様に処理した。
【図１０】図１０は、図９Ａ／９Ｂと同様に、イヌ細胞における活性化Ｍｅｔを示す。培養ＭＤＣＫ細胞（イヌ腎臓細胞株）を示された濃度でＨＧＦに曝露した。細胞溶解物をＭｅｔ５で免疫沈降し、その後、電気泳動し、電気移動し、そして抗リン酸チロシン抗体で免疫修飾し、活性化（リン酸化）Ｍｅｔを検出した。ＳＫＬＭＳ−１細胞を再度コントロールとして用いた。
【図１１】図１１Ａ〜１１Ｃは、ＰＣ−３ヒト前立腺癌細胞株に結合するＭｅｔ３のＦＡＣＳ分析を示す。Ｍｅｔ３の存在下での蛍光指示薬（色素結合体化抗マウスＡｂ）のより大きい粒子サイズへのシフトは、細胞に関連して反映する。
【図１２】図１２Ａ〜１２Ｃは、ＭＤＣＫイヌ腎臓細胞に結合するＭｅｔ５のＦＡＣＳ分析を示す。Ｍｅｔ５は、細胞に関連して反映する蛍光指示薬（色素結合体化抗マウス抗体）のより大きい粒子サイズへのシフトを誘導した。
【図１３】図１３Ａ〜１３Ｄは、１２５Ｉ−Ｍｅｔ５を用いたヒト腫瘍異種移植片の核画像化の結果を示す。ヒト鼻咽頭癌細胞株ＣＮＥ−２および腎細胞癌細胞株７６９−Ｐの異種移植片をヌードマウスの右大腿の皮下で増殖させた（３マウス／群）。各マウスに、１２５Ｉ−Ｍｅｔ５を静脈内注射し、連続γカメラ画像を取得した（注入後１時間〜５日）。各群の１匹のマウスの画像に付加された矢印は、皮下（大腿）腫瘍位置を示す。
【図１】
2005527488.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【手続補正書】
【提出日】平成16年6月29日(2004.6.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
モノクローナル抗体であって：
（ａ）受入番号ＰＴＡ−４３４９でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されるモノクローナル抗体Ｍｅｔ３；および
（ｂ）受入番号ＰＴＡ−４４７７でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されるモノクローナル抗体Ｍｅｔ５からなる群から選択される、モノクローナル抗体または該抗体の抗原結合フラグメントもしくは誘導体。
【請求項２】
受入番号ＰＴＡ−４３４９でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託された前記ハイブリドーマ細胞株によって産生される、請求項１に記載のＭｅｔ３モノクローナル抗体、またはそのフラグメントもしくは誘導体。
【請求項３】
受入番号ＰＴＡ−４４７７でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託された前記ハイブリドーマ細胞株によって産生される、請求項１に記載のＭｅｔ５モノクローナル抗体、またはそのフラグメントもしくは誘導体。
【請求項４】
請求項２に記載のモノクローナル抗体、またはそのフラグメントもしくは誘導体を識別する生物学的特徴の全てを有する、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体。
【請求項５】
請求項３に記載のモノクローナル抗体、またはそのフラグメントもしくは誘導体と識別する生物学的特徴の全てを有する、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体。
【請求項６】
Ｍｅｔに特異的なヒト化モノクローナル抗体であって、該抗体の重鎖および／もしくは軽鎖可変領域、または該可変領域の抗原結合部位が、請求項２または３に記載のモノクローナル抗体の対応する領域または部位を識別する同一の生物学的または構造的特徴の全てを有し、該ヒト化モノクローナル抗体の残り実質的に全てが、ヒト起源であるか、または該ヒト化モノクローナル抗体の抗原結合フラグメントもしくは誘導体である、ヒト化モノクローナル抗体。
【請求項７】
Ｍｅｔに特異的なヒトモノクローナル抗体であって、該抗体は、請求項２に記載のモノクローナル抗体が結合するエピトープと同じエピトープ、または該ヒト抗体の抗原結合フラグメントもしくは誘導体に結合する、ヒトモノクローナル抗体。
【請求項８】
Ｍｅｔに特異的なヒトモノクローナル抗体であって、該抗体は、請求項３に記載のモノクローナル抗体が結合するエピトープと同じエピトープ、または該ヒト化抗体の抗原結合フラグメントもしくは誘導体に結合する、ヒトモノクローナル抗体。
【請求項９】
請求項１に記載のモノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体を含む、組成物。
【請求項１０】
請求項２に記載のモノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体を含む、組成物。
【請求項１１】
請求項３に記載のモノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体を含む、組成物。
【請求項１２】
請求項９〜１１のいずれか１項に記載の組成物であって、さらに、Ｍｅｔエピトープに特異的な１つ以上のさらなる抗体を含むか、または、該さらなる１つ以上の抗体の抗原結合フラグメントもしくは誘導体を含む、組成物。
【請求項１３】
請求項９〜１１のいずれか１項に記載の組成物であって、さらに、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）に特異的な１つ以上の抗体を含むか、または該１つ以上のＨＧＦ特異的な抗体の抗原結合フラグメントもしくは誘導体を含む、組成物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の組成物であって、前記１つ以上のＨＧＦ特異的抗体が：
（ａ）受入番号ＰＴＡ−３４１４でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されるモノクローナル抗体；
（ｂ）受入番号ＰＴＡ−３４１６でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されるモノクローナル抗体；
（ｃ）受入番号ＰＴＡ−３４１３でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されるモノクローナル抗体；および
（ｄ）受入番号ＰＴＡ−３４１２でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されるモノクローナル抗体、
からなる群から選択される、組成物。
【請求項１５】
診断的に有用な組成物であって、以下：
（ａ）請求項１〜８のいずれか１項に記載の診断的または検出可能に標識されたモノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体、および；
（ｂ）診断的に受容可能なキャリアまたは賦形剤
を含む、組成物。
【請求項１６】
診断的に有用な組成物であって、以下：
（ａ）請求項９〜１１のいずれか１項に記載の診断的または検出可能に標識された組成物；および
（ｂ）診断的に受容可能なキャリアまたは賦形剤
を含む、組成物。
【請求項１７】
診断的に有用な組成物であって、以下：
（ａ）請求項１２に記載の診断的または検出可能に標識された組成物；および
（ｂ）診断的に受容可能なキャリアまたは賦形剤
を含む、組成物。
【請求項１８】
診断的に有用な組成物であって、以下：
（ａ）請求項１３に記載の診断的または検出可能に標識された組成物；および
（ｂ）診断的に受容可能なキャリアまたは賦形剤
を含む、組成物。
【請求項１９】
請求項１５に記載の診断的に有用な組成物であって、ここで前記モノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体が、放射性核種、ＰＥＴ画像化可能な試薬ＭＲＩ画像化可能な試薬、蛍光物質、蛍光源、発色団、色素源、リン光物質、化学発光物質および生体発光物質からなる群から選択される検出可能な標識で標識される、組成物。
【請求項２０】
請求項１６に記載の診断的に有用な組成物であって、ここで前記モノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体が、放射性核種、ＰＥＴ画像化可能な試薬、ＭＲＩ画像化可能な試薬、蛍光物質、蛍光源、発色団、色素源、リン光物質、化学発光物質および生体発光物質からなる群から選択される検出可能な標識で標識される、組成物。
【請求項２１】
前記モノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体が、放射性核種で標識される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
前記放射性核種がインビボで検出可能なものである、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記放射性核種が放射免疫シンチグラフィーにより検出可能なものである、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
請求項２１に記載の組成物であって、ここで、前記放射性核種が、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９９Ｔｃ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、９７Ｒｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、８９Ｚｒおよび２０１Ｔｌからなる群から選択される、組成物。
【請求項２５】
前記放射性核種が１２５Ｉである、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記モノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体が放射性核種で標識される、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２７】
前記放射性核種がインビボで検出可能なものである、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記放射性核種が放射免疫シンチグラフィーにより検出可能なものである、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
請求項２６に記載の組成物であって、ここで、前記放射性核種が、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９９Ｔｃ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、９７Ｒｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、８９Ｚｒおよび２０１Ｔｌからなる群から選択される、組成物。
【請求項３０】
前記放射性核種が１２５Ｉである、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記検出可能な標識が、蛍光物質または蛍光源である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項３２】
請求項３１に記載の組成物であって、ここで前記蛍光物質または蛍光源が、フルオレセイン、ローダミン、ダンシル、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルデヒド、フルオレサミン、フルオレセイン誘導体、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｇｒｅｅｎ、Ｒｈｏｄｏｌ  ＧｒｅｅｎおよびＴｅｘａｓ  Ｒｅｄからなる群から選択される、組成物。
【請求項３３】
前記検出可能な標識が、蛍光物質または蛍光源である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項３４】
請求項３３に記載の組成物であって、ここで前記蛍光物質または蛍光源が、フルオレセイン、ローダミン、ダンシル、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルデヒド、フルオレサミン、フルオレセイン誘導体、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｇｒｅｅｎ、Ｒｈｏｄｏｌ  ＧｒｅｅｎおよびＴｅｘａｓ  Ｒｅｄからなる群から選択される、組成物。
【請求項３５】
前記検出可能な標識が、前記抗体に結合された１つ以上のジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）残基を介して該抗体に結合する、請求項１９に記載の組成物。
【請求項３６】
前記検出可能な標識が、１つのＤＴＰＡ残基を介して前記抗体に結合する、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
ＭＲＩ診断に有用な、請求項３５に記載の組成物であって、ここで金属原子が前記ＤＴＰＡ残基に結合する、組成物。
【請求項３８】
前記金属が、ガドリニウム、マンガン、銅、鉄、金およびユーロピウムからなる群から選択される、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
前記金属がガドリニウムである、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
前記検出可能な標識が、前記抗体に結合された１つ以上のジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）残基を介して該抗体に結合する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項４１】
前記検出可能な標識が、１つのＤＴＰＡ残基を介して前記抗体に結合する、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
ＭＲＩ診断に有用な、請求項４０に記載の組成物であって、ここで金属原子が前記ＤＴＰＡ残基に結合する、組成物。
【請求項４３】
前記金属が、ガドリニウム、マンガン、銅、鉄、金およびユーロピウムからなる群から選択される、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４４】
前記金属がガドリニウムである、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
Ｍｅｔ発現腫瘍を処置するのに有用な治療用組成物であって、以下：
（ａ）治療有効量の、請求項１〜８のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体、フラグメントまたは誘導体；および
（ｂ）薬学的または治療的に受容可能なキャリアまたは賦形剤
を含む、治療用組成物。
【請求項４６】
Ｍｅｔ発現腫瘍を処置するのに有用な治療用組成物であって、以下：
（ａ）治療有効量の、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の組成物；および
（ｂ）薬学的または治療的に受容可能なキャリアまたは賦形剤
を含む、治療用組成物。
【請求項４７】
Ｍｅｔ発現腫瘍を処置するのに有用な治療用組成物であって、以下：
（ａ）治療有効量の、請求項１２に記載の組成物；および
（ｂ）薬学的または治療的に受容可能なキャリアまたは賦形剤
を含む、治療用組成物。
【請求項４８】
Ｍｅｔ発現腫瘍を処置するのに有用な治療用組成物であって、以下：
（ａ）治療有効量の、請求項１３に記載の組成物；および
（ｂ）薬学的または治療的に受容可能なキャリアまたは賦形剤
を含む、治療用組成物。
【請求項４９】
注射または注入に適する形態での、請求項４５に記載の治療用組成物。
【請求項５０】
請求項４５に記載の治療用組成物であって、ここで前記抗体、フラグメントまたは誘導体の少なくとも１つが、治療部分に結合するか、結合体化するか、または治療部分で標識される、治療用組成物。
【請求項５１】
前記治療部分が放射性核種である、請求項５０に記載の治療用組成物。
【請求項５２】
請求項５１に記載の治療用組成物であって、ここで、前記放射性核種が、４７Ｓｃ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、１０９Ｐｄ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂおよび２１７Ｂｉからなる群から選択される、組成物。
【請求項５３】
注射または注入に適する形態での、請求項４６に記載の治療用組成物。
【請求項５４】
請求項４６に記載の治療用組成物であって、ここで前記抗体、フラグメントまたは誘導体の少なくとも１つが、治療部分に結合するか、結合体化するか、または治療部分で標識される、治療用組成物。
【請求項５５】
前記治療部分が放射性核種である、請求項５４に記載の治療用組成物。
【請求項５６】
請求項５５に記載の治療用組成物であって、ここで、前記放射性核種が、４７Ｓｃ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、１０９Ｐｄ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂおよび２１７Ｂｉからなる群から選択される、組成物。
【請求項５７】
注射または注入に適する形態での、請求項４７に記載の治療用組成物。
【請求項５８】
請求項４７に記載の治療用組成物であって、ここで前記抗体、フラグメントまたは誘導体の少なくとも１つが、治療部分に結合するか、結合体化するか、または治療部分で標識される、治療用組成物。
【請求項５９】
前記治療部分が放射性核種である、請求項５８に記載の治療用組成物。
【請求項６０】
請求項５９に記載の治療用組成物であって、ここで、前記放射性核種が、４７Ｓｃ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、１０９Ｐｄ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂおよび２１７Ｂｉからなる群から選択される、組成物。
【請求項６１】
注射または注入に適する形態での、請求項４８に記載の治療用組成物。
【請求項６２】
請求項４８に記載の治療用組成物であって、ここで前記抗体、フラグメントまたは誘導体の少なくとも１つが、治療部分に結合するか、結合体化するか、または治療部分で標識される、治療用組成物。
【請求項６３】
前記治療部分が放射性核種である、請求項６２に記載の治療用組成物。
【請求項６４】
請求項６３に記載の治療用組成物であって、ここで、前記放射性核種が、４７Ｓｃ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、１０９Ｐｄ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂおよび２１７Ｂｉからなる群から選択される、組成物。
【請求項６５】
キットであって、以下：
（ａ）請求項１〜８のいずれか１項に記載の抗体、フラグメントまたは誘導体を含む、標識された第１の容器；
（ｂ）診断的または薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を含む、標識された第２の容器；および
（ｃ）；被験体の癌性状態または腫瘍であって、該被験体の癌腫または腫瘍細胞がＭｅｔを発現する、癌性状態または腫瘍を診断、予後、モニタリングまたは処置するための該抗体の使用のための説明書
を含み、ここで、該抗体、フラグメントまたは誘導体が該状態の診断、予後、モニタリングまたは処置に効果的であり、そして、該標識された容器が、該抗体が該診断、予後、モニタリングまたは処置のために使用され得ることを示す、キット。
【請求項６６】
Ｍｅｔの存在を検出するための組成物であって、該Ｍｅｔは、（ｉ）細胞表面上、（ｉｉ）組織内、（ｉｉｉ）器官内または（ｉｖ）生物学的サンプル内であり、この細胞、組織、器官またはサンプルは、Ｍｅｔを発現することが予想され、該組成物は、請求項１５〜１８のいずれか１項に記載の組成物を含む、組成物。
【請求項６７】
前記検出がインビトロである、請求項６６に記載の組成物。
【請求項６８】
前記検出がインビボである、請求項６６に記載の組成物。
【請求項６９】
前記検出可能な標識が放射性核種である、請求項６８に記載の組成物。
【請求項７０】
請求項６９に記載の組成物であって、ここで、前記放射性核種が、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９９Ｔｃ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、９７Ｒｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、８９Ｚｒおよび２０１Ｔｌからなる群から選択される、組成物。
【請求項７１】
前記検出が放射免疫シンチグラフィーによってである、請求項７０に記載の組成物。
【請求項７２】
前記放射性核種が１２５Ｉである、請求項７１に記載の組成物。
【請求項７３】
前記検出可能な標識がＭＲＩ画像化可能な試薬でありかつ前記検出がＭＲＩによってである、請求項６８に記載の組成物。
【請求項７４】
（ｉ）Ｍｅｔ発現腫瘍細胞の増殖、遊走もしくは浸潤、または（ｉｉ）Ｍｅｔ発現腫瘍細胞によって誘導される脈管形成を阻害するための組成物であって、該細胞を、有効量の請求項４５〜４８のいずれか１項に記載の治療用組成物を含む、組成物。
【請求項７５】
前記治療用組成物が注射または注入に適する形態である、請求項７４に記載の組成物。
【請求項７６】
請求項７４に記載の組成物であって、ここで前記治療用組成物において、前記抗体、フラグメントまたは誘導体の少なくとも１つが、治療部分に結合するか、結合体化するか、または治療部分で標識される、組成物。
【請求項７７】
前記治療用組成物において、前記治療部分が放射性核種である、請求項７６に記載の組成物。
【請求項７８】
請求項４５〜４８に記載の組成物であって、ここで該組成物が、（ｉ）Ｍｅｔ発現細胞の望ましくない増殖、遊走もしくは浸潤、または（ｉｉ）Ｍｅｔ発現細胞によって誘導される望ましくない脈管形成に関する癌性疾患または状態を有する被験体を処置するために使用される、組成物。
【請求項７９】
請求項７８に記載の組成物であって、ここで前記治療用組成物において、前記抗体、フラグメントまたは誘導体の少なくとも１つが、治療部分に結合するか、結合体化するか、または治療部分で標識される、組成物。
【請求項８０】
受入番号ＰＴＡ−４３４９でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託された、前記ハイブリドーマ細胞株。
【請求項８１】
受入番号ＰＴＡ−４４７７でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託された、前記ハイブリドーマ細胞株。
【請求項８２】
Ｍｅｔの存在を検出するための方法であって、該Ｍｅｔは、（ｉ）細胞表面上、（ｉｉ）組織内、（ｉｉｉ）器官内または（ｉｖ）生物学的サンプル内であり、この細胞、組織、器官またはサンプルは、Ｍｅｔを発現することが予想され、該方法は以下：
（ａ）細胞、組織、器官またはサンプルをインビトロで請求項１５〜１８に記載の組成物と接触させる工程；
（ｂ）細胞、組織、器官またはサンプルに関する前記標識の存在をインビトロで検出する工程
を包含する、方法。
【請求項８３】
前記検出可能な標識が放射性核種である、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
請求項８３に記載の方法であって、ここで、前記放射性核種が、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９９Ｔｃ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、９７Ｒｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、８９Ｚｒおよび２０１Ｔｌからなる群から選択される、方法。
【請求項８５】
前記放射性核種が１２５Ｉである、請求項８３に記載の方法。
【国際調査報告】
2005527488.tif 000019
2005527488.tif 000020
2005527488.tif 000021