(57)【要約】ポリエチレングリコールアルデヒド化合物が提供される。このような化合物を製造及び使用する方法並びに化学的中間体も提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
Ｒ１−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｘ−Ｙ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨＯ（Ｉ）
〔式中、
Ｒ１はキャッピング基であり、
ＸはＯ又はＮＨであり、
Ｙは
【化１】
2005533913.tif 000034
からなる群より選ばれ、
Ｚはアミノ酸の側鎖であり、
ｍは１〜１７であり、
ｎは１０〜１０，０００でありそして
ｐは１〜３である〕
の化合物。
【請求項２】
Ｒ１が、ハロゲン、エポキシド、マレイミド、オルトピリジルジスルフィド、トシラート、イソシアネート、ヒドラジン水和物、ハロゲン化シアヌル、Ｎ−スクシンイミジルオキシ、スルホ−Ｎ−スクシンイミジルオキシ、１−ベンゾトリアゾリルオキシ、１−イミダゾリルオキシ、ｐ−ニトロフェニルオキシ及び
【化２】
2005533913.tif 000035
からなる群より選ばれる請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式（III）：
【化３】
2005533913.tif 000036
有する請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
式（IV）：
【化４】
2005533913.tif 000037
を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
式（Ｖ）：
【化５】
2005533913.tif 000038
を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
式（VI）：
【化６】
2005533913.tif 000039
を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
式（II）：
【化７】
2005533913.tif 000040
〔式中、
Ｒ１はキャッピング基であり、
ｍは１〜１７であり、
ｎは１０〜１０，０００であり、そして
ｐは１〜３である〕
の化合物。
【請求項８】
ｐが３である請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
ｐが３であり、Ｒ1がメトキシであり、ｍが１であり、そしてｎが１００〜７５０である請求項７に記載の化合物。
【請求項１０】
式（VIII）：
【化８】
2005533913.tif 000041
〔式中、
ｍは１〜１７であり、
ｎは１０〜１０，０００であり、そして
ｐは１〜３である〕
の化合物。
【請求項１１】
式（IX）：
Ｒ１−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｘ−Ｙ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨ−（ＯＣＨ２−ＣＨ３）２（IX）
〔式中、
Ｒ１はキャッピング基であり、
ＸはＯ又はＮＨであり、
Ｙは、
【化９】
2005533913.tif 000042
からなる群より選ばれ、
Ｚはアミノ酸の側鎖であり、
ｍは１〜１７であり、
ｎは１０〜１０，０００でありそして
ｐは１〜３である〕
の化合物。
【請求項１２】
式（Ｘ）：
【化１０】
2005533913.tif 000043
〔式中、
Ｒ１はキャッピング基であり、
ｍは１〜１７であり、
ｎは１０〜１０，０００であり、そして
ｐは１〜３である〕
の化合物。
【請求項１３】
式（XI）：
【化１１】
2005533913.tif 000044
〔式中、
ｍは１〜１７であり、
ｎは１０〜１０，０００でありそして
ｐは１〜３である〕
の化合物。
【請求項１４】
式（IX）：
Ｒ１−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｘ−Ｙ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨ−（ＯＣＨ２−ＣＨ３）２（IX）
の化合物を加水分解して、式（Ｉ）：
Ｒ１−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｘ−Ｙ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨＯ（Ｉ）
〔各式中、
Ｒ１はキャッピング基であり、
ＸはＯ又はＮＨであり、
Ｙは、
【化１２】
2005533913.tif 000045
からなる群より選ばれ、
Ｚはアミノ酸の側鎖であり、
ｍは１〜１７であり、
ｎは１０〜１０，０００でありそして
ｐは１〜３である〕
のポリエチレングリコールアルデヒドを生成させることを含む、ポリエチレングリコールアルデヒドを製造する方法。
【請求項１５】
式（Ｘ）
【化１３】
2005533913.tif 000046
の化合物を加水分解して、式（II）：
【化１４】
2005533913.tif 000047
〔各式中、
Ｒ１はキャッピング基であり、
ｍは１〜１７であり、
ｎは１０〜１０，０００でありそして
ｐは１〜３である〕
のポリエチレングリコールアルデヒドを生成させることを含む、ポリエチレングリコールアルデヒドを製造する方法。
【請求項１６】
式（XII）：
Ｒ１−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯＯＨ（XII）
の化合物を、式（XIII）：
Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨ−（ＯＣＨ２−ＣＨ３）２  （XIII）
の化合物と反応させることにより式（Ｘ）の化合物を製造する請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
式（XIV）：
Ｒ１−Ｏ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯＯＲ３（XIV）
〔式中、Ｒ３は分岐状又は非分岐状Ｃ1〜Ｃ４アルキルである〕
の化合物を加水分解することにより式（XII）の化合物を製造する請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
式（XV）：
Ｒ１−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＨ  （XV）
の化合物を、式（XVI）
Ｒ２−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯＯＲ３    （XVI）
〔式中、Ｒ２はハロゲンである〕
の化合物と反応させることにより式（XIV）の化合物を製造する請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
式（XVII）
【化１５】
2005533913.tif 000048
の化合物を加水分解して、式（VIII）
【化１６】
2005533913.tif 000049
〔式中、
ｍは１〜１７であり、
ｎは１０〜１０，０００であり、そして
ｐは１〜３である〕
のポリエチレングリコールを生成させることを含む、ポリエチレングリコールアルデヒドを製造する方法。
【請求項２０】
式（XVIII）：
ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯＯＨ  （XVIII）
の化合物を、式（XIX）：
Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨ−（ＯＣＨ２−ＣＨ３）２  （XIX）
の化合物と反応させることにより式（VIII）の化合物を製造する請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
式（XX）：
Ｒ３ＯＯＣ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯＯＲ３  （XX）
〔式中、Ｒ３は分岐状又は非分岐状Ｃ１〜Ｃ４アルキルである〕
の化合物を加水分解することにより式（XVIII）の化合物を製造する請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
式（XXI）：
ＨＯ−ＣＨ２ＣＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＨ  （XXI）
の化合物を、式（XVI）
Ｒ２−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯＯＲ３（XVI）
〔式中、Ｒ２はハロゲンである〕
の化合物と反応させることにより式（XX）の化合物を製造する請求項２１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリエチレングリコールアルデヒドに関するものであり、そしてこのような誘導体を製造する方法及び、例えばポリペプチド及び他の生体分子のペグ化（pegylation）においてこのような誘導体を使用する方法に関する。
【０００２】
ポリエチレングリコール（“ＰＥＧ”）は種々の分子量で入手可能な線状又は分岐状の中性ポリエーテルである。ＰＥＧの構造はＨＯ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｈ、（式中、ｎはＰＥＧにおけるエチレンオキシド単位の反復の数を示す）である。
【０００３】
ＰＥＧ及びＰＥＧ誘導体は種々の生体分子を修飾するのに使用されてきた。このような分子に付加されると、ＰＥＧはそれらの溶解度を増加させそしてそれらの寸法を増加させるが、望ましい性質に対しては殆ど影響を与えない。有利なことに、ＰＥＧ結合生体分子（PEG conjugated biomolecules）は身体における保持の増加及び代謝の遅延を示すことができる。
【０００４】
種々のＰＥＧ誘導体がこのような用途のために開発された。このようなＰＥＧ誘導体は、例えば、U.S.Patent 5,252,714、U.S.Patent 5,672,662、U.S.Patent 5,959,265、U.S.Patent 5,990,237及びU.S.Patent 6,340,742に記載されている。
【０００５】
ＰＥＧの官能化のために２つの一般的アプローチ、即ち、（１）末端ヒドロキシル基を一連の反応によってより活性な官能基に変えること及び又は（２）ＰＥＧを制御された条件下に二官能性化合物と反応させて、二官能性化合物の官能基の一方がＰＥＧポリマーと反応しそして他方は活性なままであるようにすること、が使用されてきた。大抵の場合に、所望のＰＥＧ誘導体を達成するのにいくつかの段階を行わなければならない。所望のＰＥＧ誘導体はしばしば低い収率で製造されそして単離するのに複雑な精製方法を必要とする。更に、ＰＥＧ誘導体は問題の生体分子に対する非特異的結合を示すことがあり、これは単一の生体分子への多数のＰＥＧの付加及び／又は活性部位でのＰＥＧ付加を生じさせることがある。多数のＰＥＧ付加はペグ化された（pegylated）生体分子の精製を困難にすることがある。多数のＰＥＧ付加及び／又は活性な部位でのペグ化は、生体分子の活性を減少させることもある。
【０００６】
故に、ポリペプチド及びα−アミノ基を含有する他の生体分子を含む種々の他の分子との結合（conjugation）に適当な改良されたＰＥＧ誘導体を提供することは有利であろう。高い収率及び純度で製造することができそして改良された性能特性を有する生体分子を与えるように結合させる（conjugated）ことができるＰＥＧ誘導体を提供する必要は依然としてある。
【０００７】
本発明のこれらの目的及び他の目的を以下により詳細に説明する。
【０００８】
本発明の化合物は、一般式（Ｉ）：
Ｒ１−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｘ−Ｙ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨＯ（Ｉ）
〔式中、Ｒ１はキャッピング基であり、ＸはＯ又はＮＨであり、Ｙは
【化１７】
2005533913.tif 000002
からなる群より選ばれ、
Ｚはアミノ酸の側鎖であり、ｍは１〜１７であり、ｎは１０〜１０，０００でありそしてｐは１〜３である〕
を有するポリエチレングリコールのアルデヒド誘導体である。
【０００９】
本発明は、式（II）：
【化１８】
2005533913.tif 000003
〔式中、Ｒ１、ｍ、ｎ及びｐは前記したとおりである〕
の化合物も提供する。
【００１０】
本発明の他の好ましい態様は、式（VIII）：
【化１９】
2005533913.tif 000004
〔式中、ｍ、ｎ及びｐは前記したとおりである〕
の二官能性ポリエチレングリコールアルデヒド化合物を提供する。
【００１１】
本発明は、式（IX）
Ｒ１−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｘ−Ｙ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨ−（ＯＣＨ２−ＣＨ３）２（IX）
〔式中、Ｒ１、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ｍ、ｎ及びｐは前記したとおりである〕
の中間体化合物も提供する。
【００１２】
本発明は、更に式（Ｘ）：
【化２０】
2005533913.tif 000005
〔式中、Ｒ１、ｍ、ｎ及びｐは前記したとおりである〕
の中間体化合物を提供する。
【００１３】
式（XI）：
【化２１】
2005533913.tif 000006
〔式中、各ｍ、ｎ及びｐは同一であるか又は相異なりそして前記したとおりである〕
の中間体化合物も提供される。
【００１４】
本発明は、更に式（IX）：
Ｒ１−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｘ−Ｙ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨ−（ＯＣＨ２−ＣＨ３）２（IX）
の化合物を加水分解して、式（Ｉ）：
Ｒ１−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｘ−Ｙ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨＯ（Ｉ）〔式中、Ｒ１、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ｍ、ｎ及びｐは前記したとおりである〕
のポリエチレングリコールアルデヒドを生成させることを含む、ポリエチレングリコールアルデヒドを製造する方法を提供する。
【００１５】
本発明が「製造する方法」に関するならば、「製造するプロセス」を意味する。
【００１６】
本発明は、式（X）：
【化２２】
2005533913.tif 000007
の化合物を加水分解して、式（II）：
【化２３】
2005533913.tif 000008
〔式中、Ｒ１、ｍ、ｎ及びｐは前記したとおりである〕
のポリエチレングリコールアルデヒドを生成させることを含む、ポリエチレングリコールアルデヒドを製造する方法も提供する。
【００１７】
本発明は、式（XVII）：
【化２４】
2005533913.tif 000009
の化合物を加水分解して、式（VIII）：
【化２５】
2005533913.tif 000010
〔式中、ｍ、ｎ及びｐは前記したとおりである〕
のポリエチレングリコールアルデヒドを生成させることを含む、ポリエチレングリコールアルデヒドを製造する方法を提供する。
【００１８】
本発明は、ポリペプチド及び他の生体分子のペグ化に関連して使用することができる種々の化合物及び化学的中間体及び方法を提供する。本発明はポリエチレングリコールアルデヒドのための新規な化学的構造を与える。
【００１９】
本発明の化合物は一般式（Ｉ）：
Ｒ１−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｘ−Ｙ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨＯ（Ｉ）
〔式中、Ｒ１はキャッピング基であり、ＸはＯ又はＮＨであり、Ｙは、
【化２６】
2005533913.tif 000011
からなる群より選ばれ、
Ｚはアミノ酸の側鎖であり、ｍは１〜１７であり、ｎは１０〜１０，０００であり、そしてｐは１〜３である〕
を有するポリエチレングリコールのアルデヒド誘導体である。
【００２０】
本明細書で使用したＲ１「キャッピング基」は、選択に依存して、他の化学的部分と一般に非反応性であるか又は一般に反応性である適当な化学的基である。上記式の末端アルデヒド基は対象の化学的部分、例えばポリペプチドのα−アミノ基への容易な共有結合による付加を可能にする。Ｒ１キャッピング基は二官能性、例えば対象の第２の化学的部分への共有結合による付加を許容するか又は阻止するように選ばれる。
【００２１】
キャッピング基が他の化学的部分と一般に非反応性である場合には、Ｒ１は相対的に不活性である。Ｒ１が相対的に不活性であるならば、得られるポリエチレングリコールアルデヒドの構造は一官能性であり、それゆえ対象の１つのみの化学的部分と共有結合する。適当な一般に非反応性のＲ１キャッピング基は、水素、ヒドロキシル、低級アルキル、低級アルコキシ、低級シクロアルキル、低級アルケニル、低級シクロアルケニル、アリール及びヘテロアリールを含む。
【００２２】
本明細書で使用された「低級アルキル」という用語は、１〜７個、好ましくは１〜４個の炭素原子を含有する置換されているか又は置換されていない直鎖又は分岐鎖アルキル基、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ．ブチル、ｔｅｒｔ．ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル等を意味する。
【００２３】
「低級アルコキシ」という用語は酸素原子を介して結合している前記した低級アルキル基を意味し、低級アルコキシ基の例は、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｓｅｃ．ブトキシ、ｔｅｒｔ．ブトキシ、ｎ−ペントキシ等である。
【００２４】
「低級シクロアルキル」という用語は、３〜７個、好ましくは４〜６個の炭素原子を含有する置換されているか又は置換されていないシクロアルキル基、即ち、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル又はシクロヘプチルを意味する。
【００２５】
本明細書で使用された「低級アルケニル」という用語は、２〜７個、好ましくは２〜５個の炭素原子を含有する置換されているか又は置換されていない直鎖又は分岐鎖アルケニル基、例えば、エテニル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル等を意味する。
【００２６】
低級シクロアルケニル」という用語は、４〜７個の炭素原子を含有する置換されているか又は置換されていないシクロアルケニル基、例えば、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル等を意味する。
【００２７】
「アリール」という用語は、置換されていないフェニル又はナフチル基、あるいは場合によりハロゲン、低級アルキル、低級アルコキシ、トリフルオロメチル、ヒドロキシル、カルボン酸、カルボン酸エステル、ニトロ、アミノ又はフェニル、特に、ハロゲン、低級アルキル、低級アルコキシ、トリフルオロメチル、ヒドロキシル、ニトロ、アミノ及びフェニルにより一置換又は多置換されているフェニル又はナフチル基を意味する。
【００２８】
「ヘテロアリール」という用語は、Ｎ、Ｓ及びＯから選ばれる1個又はそれより多くのヘテロ原子を含有する５員又は６員ヘテロ芳香族基を意味する。
【００２９】
好ましい一般に非反応性のＲ１キャッピング基はメトキシ、ヒドロキシル又はベンジルオキシを含む。特に好ましいＲ１キャッピング基はメトキシである。Ｒ１がメトキシであるときは、アルデヒド及び関連した化合物は、本明細書では、時には「ｍ」がメトキシを表す「ｍＰＥＧ」化合物として表される。
【００３０】
Ｒ１キャッピング基が他の化学的部分と一般に反応性であるならば、Ｒ１はある他の官能基、例えば、ペプチド及び／又はタンパク質におけるアミン及び／又はスルフヒドリルと反応することができる官能基である。このような場合に、Ｒ１は反応させるために強い触媒又は極めて非実用的な反応条件を必要とする基とは対照的に、他の分子における求電子基又は求核基と容易に反応することができる官能基であることができる。Ｒ１が相対的に反応性であるならば、ポリエチレングリコールアルデヒドは二官能性であり、それゆえ２つの化学的部分と共有結合することができる。
【００３１】
適当な一般に反応性のＲ１キャッピング基の例は、ハロゲン、エポキシド、マレイミド、オルトピリジルジスルフィド、トシラート、イソシアネート、ヒドラジン水和物、ハロゲン化シアヌル、Ｎ−スクシンイミジルオキシ、スルホ−Ｎ−スクシンイミジルオキシ、１−ベンゾトリアゾリルオキシ、１−イミダゾリルオキシ、ｐ−ニトロフェニルオキシ及び
【化２７】
2005533913.tif 000012
を含む。
【００３２】
「ハロゲン」という用語はフッ素、塩素、臭素又はヨウ素を意味する。
【００３３】
好ましい一般に反応性のＲ１キャッピング基は、
【化２８】
2005533913.tif 000013
である。このＲ１基の使用はポリエチレングリコールアルデヒドの両端にアルデヒド基を有するポリエチレングリコールアルデヒドをもたらす。したがって、得られるポリエチレングリコールアルデヒドは両端で結合性を示す。しかしながら、これらの二官能性化合物は完全に対称性である必要はないこと及び式において第１のｍ、ｎ及び／又はｐが第２のｍ、ｎ及び／又はｐと同じであるか又は異なることができることは認められるであろう。しかしながら、化合物が対称である、即ち、式において両方の示されたｍが同じ値を有し、両ｎが同じ値を有しそして両ｐが同じ値を有することを意味することが好ましい。
【００３４】
本発明の化合物において、ＸはＯ又はＮＨである。好ましくは、ＸはＯである。更に、Ｙは
【化２９】
2005533913.tif 000014
〔式中、Ｚはアミノ酸の側鎖である〕
からなる群より選ばれる。
【００３５】
本発明において、mは１〜１７である。好ましい態様では、ｍは１〜１４である。更に好ましくはｍは１〜７でありそしてなお更に好ましくは、ｍは１〜４である。最も好ましくは、ｍは１である。
【００３６】
一般的構造
【化３０】
2005533913.tif 000015
を有するＹ基の場合には、Ｙ基はペプチド結合を介してアミノ酸への連結を示す。したがって、この一般的構造は、アミノ酸として単一のグリシンが使用される場合には、
【化３１】
2005533913.tif 000016
という簡単な特定の構造を生じさせる。ＺがＣＨ３である場合には、アミノ酸はアラニンである。ＺがＣＨ２ＯＨであるならば、アミノ酸はセリンである。
【００３７】
下記する種々のアミノ酸構造の説明から認められうるとおり、より多くのそして異なるアミノ酸が使用される場合には、より複雑な構造が可能であることは明らかである。好ましくは、１つのみのアミノ酸が使用される。
【００３８】
【化３２】
2005533913.tif 000017
【００３９】
本発明では、ｎは１０〜１０，０００である。本発明の好ましい態様では、ｎは２０〜５，０００である。好ましくは、ｎは５０〜２，５００、なお更に好ましくは、ｎは７５〜１，０００である。最も好ましくは、ｎは１００〜７５０である。
【００４０】
本発明では、ｐは１〜３である。好ましくは、ｐは３である。
好ましい態様では、ｐは３であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０であるか、又はｐは２であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０であるか、又は、ｐは１であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０である。
【００４１】
本発明は、下記のごとき式II〜VI：
【化３３】
2005533913.tif 000018
の化合物である式Ｉの化合物を含むが、それらに限定はされない。
【００４２】
好ましいＲ１キャッピング部分は相対的に非反応性であり、メトキシ、ヒドロキシ及びベンジルオキシが好ましい。
【００４３】
本発明の好ましい化合物は上記グループＡ内に入る。したがって、本発明は式（II）：
【化３４】
2005533913.tif 000019
〔式中、Ｒ１、ｍ、ｎ及びｐは前記したとおりである〕
の化合物を提供する。
【００４４】
好ましい態様では、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１であり、そしてｎは１００〜７５０である。更に好ましくは、ｐは３であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０である。
【００４５】
本発明の他の好ましい態様は、式（VIII）
【化３５】
2005533913.tif 000020
〔式中、ｍ、ｎ及びｐは上記したとおりである〕
の二官能性ポリエチレングリコールアルデヒド化合物を提供する。
【００４６】
好ましい態様では、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０である。更に好ましくは、ｐは３であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０である。
【００４７】
本発明は、上記した本発明のポリエチレングリコールアルデヒド化合物に転化されうる種々の化学的中間体も提供する。これらの中間体は式（IX）
Ｒ１−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｘ−Ｙ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨ−（ＯＣＨ２−ＣＨ３）２（IX）
〔式中、Ｒ１、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ｍ、ｎ及びｐは前記したとおりである〕
の化合物を含む。
【００４８】
好ましい態様では、ｐは３であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０であるか、又はｐは２であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０であるか、又はｐは１であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０である。
【００４９】
本発明は更に、式（Ｘ）：
【化３６】
2005533913.tif 000021
〔式中、Ｒ１、ｍ、ｎ及びｐは上記したとおりである〕
の中間体化合物を提供する。
【００５０】
好ましい態様では、ｐは３であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０であるか、又はｐは２であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０であるか、又はｐは１であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０である。
【００５１】
式（XI）
【化３７】
2005533913.tif 000022
〔式中、各ｍ、ｎ及びｐは同じであるか又は相異なりそして前記したとおりである〕
の中間体化合物も提供される。
【００５２】
好ましい態様では、ｐは３であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０であるか、又はｐは２であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０であるか、又はｐは１であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０である。
【００５３】
本発明の化合物は、既知の試薬及び方法を使用して、いかなる適当な方法によっても製造することができる。しかしながら、本発明は、式（IX）
Ｒ１−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｘ−Ｙ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨ−（ＯＣＨ２−ＣＨ３）２（IX）
の化合物を加水分解して式（Ｉ）：
Ｒ１−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｘ−Ｙ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨＯ（Ｉ）
〔式中、Ｒ１、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ｍ、ｎ及びｐは前記したとおりである〕
のポリエチレングリコールアルデヒドを生成させることを含む、ポリエチレングリコールアルデヒドを製造する特定の方法を提供する。好ましくは、加水分解は酸で触媒される。適当な触媒酸は、トリフルオロ酢酸、塩酸、リン酸、硫酸及び硝酸を含む。好ましくは、酸はトリフルオロ酢酸である。
【００５４】
好ましい態様では、ｐは３であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０であるか、又はｐは２であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０であるか、又はｐは１であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０である。
【００５５】
式（II）のポリエチレングリコールアルデヒド化合物は、いかなる適当な方法によっても製造することができる。しかしながら、例として、式（II）のポリエチレングリコールアルデヒドは下記の如くして製造することができる。即ち、最初にポリエチレングリコールを乾燥する。第二にポリエチレングリコールを酢酸のハロゲン化誘導体と反応させる。得られる反応混合物を加水分解すると、ＰＥＧカルボン酸が得られる。別法として、乾燥段階の後、ＰＥＧの直接酸化から生成物ＰＥＧカルボン酸を誘導することもできる。次いで、ＰＥＧカルボン酸をジエチルアセタールのアミン誘導体で処理してＰＥＧアセタールアミンを生成させ、これをハロゲン化カルボン酸と反応させて式のポリエチレングリコールアルデヒドを生成させる。次いでポリエチレングリコールアルデヒド生成物を集めそして精製する。
【００５６】
ポリエチレングリコールアルデヒド生成物はいかなる適当な方法においても収集及び精製することができる。例として、ポリエチレングリコールアルデヒド生成物はジクロロメタンで抽出することができる。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過し、濃縮しそしてジエチルエーテルで沈殿させる。生成物、ＰＥＧアルデヒドをろ過により集めそして真空下に乾燥する。
【００５７】
かくして、本発明は、式（Ｘ）：
【化３８】
2005533913.tif 000023
の化合物を加水分解して、式（II）：
【化３９】
2005533913.tif 000024
〔式中、Ｒ１、ｍ、ｎ及びｐは前記したとおりである〕
のポリエチレングリコールアルデヒドを生成させることを含む、ポリエチレングリコールアルデヒドを製造する方法を提供する。
【００５８】
式（Ｘ）の化合物は、式（XII）：
Ｒ１−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯＯＨ（XII）
の化合物を、式（XIII）
Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨ−（ＯＣＨ２−ＣＨ３）２  （XIII）
の化合物と反応させることにより製造することができる。
【００５９】
ＰＥＧ酸又はＰＥＧカルボン酸を製造するための他の方法は直接酸化である。この場合に、酸化剤、例えば、ＣｒＯ３又はＫ２Ｃｒ２Ｏ７／Ｈ２ＳＯ４、バナジン酸アンモニウムの存在下のＨＮＯ３又はジョーンズ試薬（Jone's reagent）（ＣｒＯ３及びＨ２ＳＯ４）を使用することができる。
【００６０】
式（XII）の化合物は、式（XIV）：
Ｒ１−Ｏ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯＯＲ３（XIV）
〔式中、Ｒ３は分岐状又は非分岐状Ｃ1〜Ｃ４アルキルである〕
の化合物を加水分解することにより製造することができる。
【００６１】
式（XIV）の化合物は、式（XV）
Ｒ１−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＨ  （XV）
の化合物を、式（XVI）
Ｒ２−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯＯＲ３  （XVI）
〔式中、Ｒ２はハロゲンである〕
の化合物と反応させることにより製造することができる。好ましくは、Ｒ２は臭素又は塩素である。式（XVI）の適当な化合物はブロモ酢酸ｔ−ブチル、ブロモ酢酸メチル、ブロモ酢酸エチル、クロロ酢酸ｔ−ブチル、クロロ酢酸メチル及びクロロ酢酸エチルを含む。この反応段階のために使用することができる他の試薬、即ち、式（XVI）に対する代替物は、例えば、カリウムｔ−ブトキシド、アルカリ金属水素化物、例えば、水素化ナトリウム又はカリウムナフタリドの存在下の、ブロモ酢酸ｔ−ブチル、ブロモ酢酸メチル、ブロモ酢酸エチル、クロロ酢酸ｔ−ブチル、クロロ酢酸メチル又はクロロ酢酸エチルである。好ましくは、式（XVI）の化合物はブロモ酢酸ｔ−ブチルである。
【００６２】
好ましい態様では、ｐは３であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０であるか、又はｐは２であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０であるか、又はｐは１であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０である。
【００６３】
式（III）〜（VI）の化合物（それぞれ、グループＢ〜Ｅとも呼ばれる）は同様にいかなる適当な手段によっても製造することができる。しかしながら、例として、下記の反応スキームを使用して式（III）〜（VI）（グループＢ〜Ｅ）の化合物を製造することができる。
【００６４】
上記したポリエチレングリコールアルデヒドの場合と同じく、二官能性ポリエチレングリコールアルデヒドはいかなる適当な手段によっても製造することができる。本発明は、式（XVII）
【化４０】
2005533913.tif 000025
の化合物を加水分解して、式（VIII）：
【化４１】
2005533913.tif 000026
〔式中、ｍ、ｎ及びｐは前記したとおりである〕
のポリエチレングリコールアルデヒドを生成させることを含む、ポリエチレングリコールアルデヒドを製造する方法を提供する。
【００６５】
式（VI）の化合物は、式（XVIII）：
ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯＯＨ  （XVIII）
の化合物を式（XIX）：
Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨ−（ＯＣＨ２−ＣＨ３）２  （XIX）
の化合物と反応させることにより製造することができる。
【００６６】
式（XVIII）の化合物は、式（XX）：
Ｒ３ＯＯＣ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯＯＲ３  （XX）
〔式中、Ｒ３は分岐状又は非分岐状Ｃ１〜Ｃ４アルキルである〕
の化合物を加水分解することにより製造することができる。
【００６７】
式（XX）の化合物は、式（XXI）：
ＨＯ−ＣＨ２ＣＨ２−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＨ  （XXI）
の化合物を、式（XVI）：
Ｒ２−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯＯＲ３  （XVI）
〔式中、Ｒ２はハロゲンである〕
の化合物と反応させることにより製造することができる。
【００６８】
上記した本発明のポリエチレングリコールアルデヒド組成物は、生体分子を含む様々な分子を、適当な方法を使用して誘導体化するのに使用することができる。
【００６９】
本発明のＰＥＧアルデヒド化合物は、ペプチド及び他の生体分子のペグ化のためにＮ−末端部位特異的である。本発明のＰＥＧアルデヒドは、生体分子又はタンパク質のＮ−末端α−アミノ基との結合体（conjugate）を形成して、ＰＥＧと生体分子又はタンパク質との間の安定な第二級アミン連結を形成する。
【００７０】
本発明のＰＥＧアルデヒドによりペグ化された生体分子は、ＰＥＧ付加の数及び場所の再現性を示し、これはあまり複雑でない精製ストラテジーをもたらす。この部位特異的ペグ化は、ペグ化部位が、生体分子又はペプチドが細胞の受容体に結合する部位から遠く離れている結合体をもたらすことができ、これはペグ化された生体分子、タンパク質又はペプチドがそれらの生物学的活性の多く又はすべてを保持することを可能とするであろう。本発明のＰＥＧ−アルデヒドはアルファ（α）アミノ基を含有するいかなる生体分子とも反応することができる。
【００７１】
選ばれたポリエチレングリコールアルデヒドに依存して、ポリエチレングリコールは一端で（一官能性ポリエチレングリコールアルデヒド）又は両端で（二官能性ポリエチレングリコールアルデヒド）生体分子に共有結合することができる。
述べたとおり、本発明のポリエチレングリコールアルデヒドはＮ−末端部位特異的ペグ化のために使用することができる。部位特異的Ｎ−末端連結は、単一のポリペプチドの架橋及び多重誘導体化を回避するペグ化されたポリペプチドをもたらす。この部位特異的共有結合による連結を生成するために、いかなる適当な反応条件も使用することができる。一般に、反応混合物のｐＨは、ペグ化されるべきポリペプチドのα−アミノ酸を活性化するのに十分に酸性である。典型的には、ｐＨは約５．５〜約７．４、好ましくは、約６．５である。
【００７２】
したがって、式（XXII）：
ＮＨ２Ｂ（XXII）
の少なくとも１つのポリペプチドを、式（Ｉ）：
Ｒ１−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｘ−Ｙ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨＯ（Ｉ）
〔式中、Ｒ１、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ｍ、ｎ及びｐは前記したとおりである〕
のポリエチレングリコールアルデヒド分子と反応させて、式（XXIII）：
Ｒ１−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｘ−Ｙ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−ＮＨＢ（XXIII）
〔式中、ポリエチレングリコールアルデヒド分子はポリペプチドのＮ−末端アミノ基に結合している〕
の化合物を生成させることを含む、ポリエチレングリコール分子をポリペプチドに付加させる方法が提供される。
【００７３】
好ましい態様では、ｐは３であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０であるか、又はｐは２であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０であるか、又はｐは１であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０である。
【００７４】
式（XXII）の化合物は、インターフェロン−α、インターフェロン−β、コンセンサスインターフェロン、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、顆粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン（ＩＬ−２、ＩＬ−１０及びＩＬ−１２を含む）及びコロニー刺激因子を含むいかなるポリペプチドであってもよい。
【００７５】
式（XXII）の化合物は免疫グロブリン、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びそのサブクラス及びそれらの断片であることもできる。「抗体」又は「抗体断片」という用語は、ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体、完全な（entire）免疫グロブリン又は抗体又は標的抗原に結合する免疫グロブリン分子の機能的断片を表す。このような抗体断片の例は、Ｆｖ（可変性断片）、一本鎖Ｆｖ、相補性決定領域（ＣＤＲｓ）、ＶＬ（軽鎖可変領域）、ＶＨ（重鎖可変領域）、Ｆａｂ（抗原結合性断片）、Ｆ（ａｂ）２′及びこれらの組み合わせ又は標的抗原に結合することができる免疫グロブリンペプチドのすべての他の機能的グループを含む。
【００７６】
述べたとおり、ペグ化された化合物はいかなる所望の方法においても製造することができる。α−アミノ基の部位特異的ペグ化に有利な条件、例えばｐＨが選ばれるべきである。
【００７７】
一般に、ポリペプチドは、式（XXII）の化合物及びＰＥＧ試薬を１：１〜１：１００のモル比の範囲で加えることによって、本発明のポリエチレングリコール化合物によりペグ化することができる。次いで反応濃縮物は、５．５〜９．０のｐＨ範囲で約．５〜２４時間室温又は４℃でホウ酸塩、リン酸塩又はトリス緩衝液中に置くことができる。ＰＥＧ試薬対ペプチド／タンパク質のモル比は一般に１：１〜１００：１である。ペプチド／タンパク質の濃度は一般に１〜１０mg/mlである。緩衝液の濃度は通常１０〜５００mMである。
【００７８】
ペグ化された化合物はいかなる所望の方法においても単離又は精製することができる。例として、得られる反応混合物を平衡化緩衝液（２０mM、トリス、ｐＨ  ７．５）で希釈することができ、次いで得られる混合物をＱ−セファロースカラムに適用する。混合物をＱＡ−カラムに適用した後、それを７５M ＮａＣｌで溶離された平衡化緩衝液で洗浄し、２００mM  ＮａＣｌで溶離し、1M ＮａＣｌで溶離しそして１M ＨＯＡＣ＋１M  ＮａＣｌ及び０．５ＮａＯＨで再生する。逆相ＨＰＬＣを使用することにより、Ｎ−末端モノペグ化生成物を混合物中の他の副生物から分離することが可能である。各収集された生成物を、次いでマトリックス介助レーザーデソープション／イオン化−飛行時間型質量分析法（Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization-Time of Flight Mass Spectrometry(MALDI-TOF)）により確かめることができる。
【００７９】
本発明のペグ化方法の好ましい態様では、式（XXII）
ＮＨ２Ｂ  （XXII）
のポリペプチドを式（II）
Ｒ１−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨＯ（II）
〔式中、Ｒ１、ｍ、ｎ及びｐは前記したとおりである〕
のポリエチレングリコールアルデヒド分子と反応させて、式（XXIV）：
Ｒ１−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−ＮＨＢ（XXIV）
〔式中、ポリエチレングリコールアルデヒド分子はポリペプチドのＮ−末端アミノ基に結合している〕
の化合物を生成させる。
【００８０】
好ましい態様では、ｐは３であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０であるか、又はｐは２であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０であるか、又はｐは１であり、Ｒ１はメトキシであり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０である。
【００８１】
本発明の化合物の使用の追加の説明は、“Pegylated T20 Polypeptide”と題する同時に出願されたU.S.Patent Applications、即ち、２００２年７月２４日に出願されたUS Serial No.60/398,195及び“Pegylated T1249 Polypeptide”、２００２年７月２４日に出願されたUS Serial No.60/398,190及び２００３年１月１０日に出願されたUS Serial No.60/439,213に開示されており、これらの出願は参照によりあたかも全部が詳述されているかの如く本明細書に組み込まれる。
【００８２】
更に、式（XXII）：
ＮＨ２Ｂ（XXII）
のポリペプチドを、式（VIII）：
【化４２】
2005533913.tif 000027
〔式中、各ｍ、ｎ及びｐは同一であるか又は相異なりそして前記したとおりである〕
のポリエチレングリコールアルデヒド分子と反応させて、式（XXV）：
【化４３】
2005533913.tif 000028
〔式中、ポリエチレングリコールアルデヒド分子はポリペプチドのＮ−末端アミノ基に結合している〕
の化合物を生成させることを含む、ポリエチレングリコール分子をポリペプチドに付加させるための方法が提供される。
【００８３】
好ましい態様では、ｐは３であり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０であるか、又はｐは２であり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０であるか、又はｐは１であり、ｍは１でありそしてｎは１００〜７５０である。
【００８４】
ペグ化されたポリペプチドはいかなる所望の方法においても使用することができる。好適には、それらは医薬的に許容できる賦形剤との混合により医薬的組成物を製造するのに使用される。このような医薬的組成物は単位投与形態にあることができる。それらは、注射可能な溶液又は懸濁液、経皮デリバリー装置であることができ、又はいかなる他の所望の形態にあることもできる。
【００８５】
本発明を更に説明するために下記の実施例が提供される。これらの実施例は、いずれにせよ本発明を説明するだけのものであって、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【実施例】
【００８６】
実施例１
ＰＥＧアルデヒド化合物の製造
トルエン５０〜１００ml中のＰＥＧ（１，０００〜６０，０００ダルトンの分子量）５グラムを１〜３時間還流させることによって共沸乾燥し、次いでトルエン２０〜３０mlを除去する。得られる溶液を室温に冷却し、次いで無水ｔｅｒｔ−ブタノール２０〜５０ml及びトルエン２０〜５０ml中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１〜１０モル過剰）をＰＥＧ溶液に加える。得られる混合物を次いでアルゴン下に室温で２時間攪拌する。
【００８７】
ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（１〜１０モル過剰）を注射器により反応に加えそして反応混合物をアルゴンガス下に室温で一夜攪拌する。式（XVI）で定義された“ｍ”基の所望のサイズに依存して、ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブトキシドを酢酸の他のハロゲン化誘導体、例えばプロピオン酸、酪酸等で置き換えることができる。
【００８８】
次いで反応溶液を回転蒸発により濃縮しそして残留物をジエチルエーテルの添加により沈殿させる。沈殿した生成物、ＰＥＧｔ−ブチルカルボキシエステルをろ別しそして真空中で乾燥する。
【００８９】
次いでＰＥＧｔ−ブチルカルボキシエステル（４g）を１Ｎ水酸化ナトリウム５０〜１００ml中に溶解しそして溶液を室温で一夜攪拌する。混合物のｐＨを１〜６Ｎ塩酸の添加により２．５〜３．０に調節しそして混合物をジクロロメタンで抽出する。次いで有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過し、濃縮しそしてジエチルエーテル中に沈殿させる。生成物、ＰＥＧ−カルボン酸をろ過により集めそして真空下に乾燥する。
【００９０】
次いでＰＥＧ−カルボン酸（３g）を無水ジクロロメタン（２０〜３０ml）中に溶解し、次いで４−アミノブチルアルデヒドジエチルアセタール（１〜５モル過剰）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１〜５モル過剰）及びジシクロヘキシルカルボジイミド（１〜５モル過剰）を添加する。式（XIII）で定義された“ｐ”基の所望のサイズに依存して、４−アミノブチルアルデヒドジエチルアセタールをジエチルアセタールの他のアミン誘導体、例えば、３−アミノプロピオンアルデヒドジエチルアセタール又は２−アミノアセトアルデヒドジエチルアセタールで置き換えることができる。
【００９１】
得られる混合物をアルゴンガス下に室温で一夜攪拌する。反応混合物をろ過し、濃縮しそして２−プロパノールとジエチルエーテルの混合物（１：１）により沈殿させる。ＰＥＧアセタール生成物を真空中で一夜乾燥する。
【００９２】
次いでＰＥＧアセタール生成物を１〜９０%ＣＦ３ＣＯＯＨ１０〜２００mlに溶解し、そして溶液を室温で一夜攪拌する。混合物のｐＨを１ＮのＮａＯＨ溶液の添加により６．０に調節し、次いで塩化ナトリウム（１０重量%）を加えそして溶液のｐＨを１Ｎの」ＮａＯＨの添加により７．０に調節する。次いで混合物をジクロロメタンで抽出する。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過し、濃縮しそしてジエチルエーテルで沈殿させる。生成物、ＰＥＧアルデヒドをろ過により集めそして真空下に乾燥する。
【００９３】
実施例２
ｍＰＥＧ１０ｋ−ブタノアルデヒドの製造
下記は本発明のｍＰＥＧ１０ｋ−ブタノアルデヒドを製造するための一般反応スキームを示す。
【００９４】
【化４４】
2005533913.tif 000029
【００９５】
最初に、トルエン３００mL中の分子量１０，０００ダルトンのカルボキシメチルＰＥＧ（ｍＰＥＧ）（３０．０g、３ミリモル）を、２時間還流することにより共沸乾燥し、次いでトルエン１００mlを除去した。得られる溶液を室温に冷却し、次いで無水ｔｅｒｔ−ブタノール２０ml及びトルエン２０ml中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．６８g、６ミリモル）をＰＥＧ溶液に加えた（１）。得られる混合物をアルゴン下に室温で２時間攪拌した。
【００９６】
ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．００mL、６．７５ミリモル）を注射器により反応に加えそして反応をアルゴン下に室温で一夜攪拌した。次いで反応溶液を回転蒸発により濃縮した。残留物をジエチルエーテルの添加により沈殿させた。沈殿した生成物をろ別しそして真空中で乾燥した。収量：２８g、
【表１】
2005533913.tif 000030
【００９７】
次いで、ｍＰＥＧ１０ｋｔ−ブチルカルボキシメチルエステル（２０g）を1Ｎ水酸化ナトリウム２００mLに溶解しそして溶液を室温で一夜攪拌した（２）。混合物のｐＨを６Ｎ塩酸の添加により２．５に調節しそして混合物をジクロロメタン（５０mL、４０mL及び３０mL）で抽出した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過し、濃縮しそしてジエチルエーテルで沈殿させた。生成物、ｍ−ＰＥＧ１０ｋ−カルボキシメチル酸をろ過により集めそして真空下に乾燥した。収量：１８g
【表２】
2005533913.tif 000031
【００９８】
ｍ−ＰＥＧ１０ｋ−カルボキシメチル酸（３g、０．３ミリモル）を無水ジクロロメタン（２０mL）に溶解し、次いで４−アミノブチルアルデヒドジエチルアセタール（５０mg、０．３ミリモル）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（４０mg、０．３ミリモル）及びジシクロヘキシルカルボジイミド（８０mg、０．３９ミリモル）を添加した（３）。混合物をアルゴン下に室温で一夜攪拌した。反応混合物をろ過し、濃縮しそして２−プロパノール及びジエチルエーテル（１：１）の混合物で沈殿させた。生成物、ｍＰＥＧ１０ｋ−ブタノアセタールを真空中で一夜乾燥した。収量：２．７g、
【表３】
2005533913.tif 000032
【００９９】
最後に、ｍＰＥＧ１０ｋ−ブタノアセタール（５g、０．５ミリモル）を１０%ＣＦ３ＣＯＯＨ５０mLに溶解しそして溶液を室温で一夜攪拌した（４）。混合物のｐＨを１ＮのＮａＯＨ溶液の添加により６．０に調節しそして塩化ナトリウム（１０重量%）を加え、次いで溶液のｐＨを１ＮのＮａＯＨの添加により７．０に調節した。混合物をジクロロメタンで抽出した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過し、濃縮しそしてジエチルエーテル中に沈殿させた。生成物、ｍＰＥＧ１０ｋ−ブタノアルデヒド（５）をろ過により集めそして真空下に乾燥した。収量：４．１g（８２%）。
【表４】
2005533913.tif 000033
【０１００】
実施例３
ｍＰＥＧ１０ｋ−アセタールアルデヒドの製造
実施例１の方法に従って製造されたｍＰＥＧ１０ｋ−ジエチルアセタール（１g、分子量  １０，０００）を８０%トリフルオロ酢酸（Aldrich，９９＋%）１０ml中に溶解することによりｍＰＥＧ１０ｋ−アセタールアルデヒドを製造した。反応溶液をアルゴンガス下に室温で一夜攪拌した。次いで１ＮのＮａＯＨを、６．０のｐＨが得られるまで反応溶液に滴下により加えた。次いで、ＮａＣｌ（１０重量%）を上記溶液に加えた。次いで０．１ＮのＮａＯＨを加えることにより、ｐＨを６．９５±０．０５に調節した。次いで溶液を塩化メチレンで抽出した。次いで有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過し、濃縮しそしてジエチルエーテルで沈殿させた。生成物、ｍＰＥＧ１０ｋ−アセタールアルデヒドをろ過により集めそして真空下に乾燥した。収量：０．８５g（８５%）。
【０１０１】
実施例４
ｍＰＥＧ１０ｋ−プロピオンアルデヒドの製造
実施例１の方法に従って製造されたｍＰＥＧ１０ｋ−プロピオンアセタール（２g、分子量  １０，０００）を８０%トリフルオロ酢酸（Aldrich，９９＋%）２０ml中に溶解することによりｍＰＥＧ１０ｋ−プロピオンアルデヒドを製造した。反応溶液をアルゴンガス下に室温で一夜攪拌した。次いで１ＮのＮａＯＨを、６．０のｐＨが得られるまで反応溶液に滴下により加えた。次いで、ＮａＣｌ（１０重量%）を上記溶液に加えた。次いで１ＮのＮａＯＨを加えることにより、ｐＨを６．９５±０．０５に調節した。次いで溶液を塩化メチレンで抽出した。次いで有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過し、濃縮しそしてジエチルエーテルで沈殿させた。生成物、ｍＰＥＧ１０ｋ−プロピオンアルデヒドをろ過により集めそして真空下に乾燥した。収量：１．８g（９０%）。
【０１０２】
実施例５
ＰＥＧ２０ｋ−ジ−ブタノアルデヒドの製造
実施例１の方法に従って製造されたＰＥＧ２０ｋ−ジ−ブチルアルデヒドジエチルアセタール（３．１g、分子量  ２０，０００）を８０%トリフルオロ酢酸（Aldrich，９９＋%）２０ml中に溶解することによりＰＥＧ２０ｋ−ジ−ブタノアルデヒドを製造した。反応溶液をアルゴンガス下に室温で一夜攪拌した。次いで１ＮのＮａＯＨを、６．０のｐＨが得られるまで反応溶液に滴下により加えた。次いで、ＮａＣｌ（１０重量%）を上記溶液に加えた。次いで０．１ＮのＮａＯＨを加えることにより、ｐＨを６．９５±０．０５に調節した。次いで溶液を塩化メチレンで抽出した。次いで有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過し、濃縮しそしてジエチルエーテルで沈殿させた。生成物、ＰＥＧ２０ｋ−ジ−ブタノアルデヒドをろ過により集めそして真空下に乾燥した。収量：２．５g（８１%）。
【０１０３】
実施例６
ｍ−ＰＥＧ２０ｋ−ブタノアルデヒドの製造
実施例１の方法に従って製造されたｍＰＥＧ２０ｋ−ブチルアルデヒドジエチルアセタール（３．０g、分子量  ２０，０００）を８０%トリフルオロ酢酸（Aldrich，９９＋%）３０ml中に溶解することによりｍＰＥＧ２０ｋ−ブタノアルデヒドを製造した。反応溶液をアルゴンガス下に室温で一夜攪拌した。次いで１ＮのＮａＯＨを、６．０のｐＨが得られるまで反応溶液に滴下により加えた。次いで、ＮａＣｌ（１０重量%）を上記溶液に加えた。次いで１ＮのＮａＯＨを加えることにより、ｐＨを６．９５±０．０５に調節した。次いで溶液を塩化メチレンで抽出した。次いで有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過し、濃縮しそしてジエチルエーテルで沈殿させた。生成物、ｍＰＥＧ２０ｋ−ブタノアルデヒドをろ過により集めそして真空下に乾燥した。収量：２．５g（８３．３%）。
【０１０４】
実施例７
ｍＰＥＧ２０ｋ−ブタノアルデヒドの製造
実施例１の方法に従って製造されたｍＰＥＧ２０ｋ−ブチルアルデヒドジエチルアセタール（１４.７g、分子量  ２０，０００）を１０%トリフルオロ酢酸（Aldrich，９９＋%）２００ml中に溶解することによりｍＰＥＧ２０ｋ−ブタノアルデヒドを製造した。反応溶液をアルゴンガス下に室温で一夜攪拌した。次いで１ＮのＮａＯＨを、６．０のｐＨが得られるまで反応溶液に滴下により加えた。次いで、ＮａＣｌ（１０重量%）を上記溶液に加えた。次いで０．１ＮのＮａＯＨを加えることにより、ｐＨを６．９５±０．０５に調節した。次いで溶液を塩化メチレンで抽出した。次いで有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過し、濃縮しそしてジエチルエーテルで沈殿させた。生成物、ｍＰＥＧ２０ｋ−ブタノアルデヒドをろ過により集めそして真空下に乾燥した。収量：１３．１g（８９%）。
【国際調査報告】
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