(57)【要約】本発明は、危篤状態の患者における死亡率および罹病率を低下させる新規な方法に関し、この方法は患者に有効量のＦＧＦ−２１を投与することを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
危篤状態の患者における死亡率および罹病率を低下させる方法であって、患者にＦＧＦ−２１を有効量で投与することを含む方法。
【請求項２】
危篤状態の患者が全身性炎症反応症候群に罹患している、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
危篤状態の患者が呼吸窮迫症に罹患している、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
患者が急性肺障害を有している、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
患者が急性呼吸窮迫症候群を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
患者が多臓器不全症候群を有している、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
患者が敗血症を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ＦＧＦ−２１を連続注入によって投与する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
ＦＧＦ−２１をボーラス注射によって投与する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
危篤状態の患者における死亡率および罹病率を低下させるための医薬の製造におけるＦＧＦ−２１の使用。
【請求項１１】
危篤状態の患者における全身性呼吸反応症候群と関連した死亡率および罹病率を低下させるための医薬の製造における、ＦＧＦ−２１の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、危篤状態の患者に関連した罹病率および死亡率を低下させるための線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ−２１）の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
長期間の集中治療を必要とする危篤患者は死および実質的な死亡率の高い危険性を有する。患者が集中治療室（ＩＣＵ）に入れられる一般的な原因は、伝染性障害（敗血症）および非感染性の病理学的原因（膵炎、虚血、多発外傷および組織損傷、出血性ショック、および免疫媒介器官損傷等）と関連した全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
頻繁に生じるＳＩＲＳの合併症は、器官系機能不全（急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、ショック、腎不全および多臓器不全症候群（ＭＯＤＳ）を含む）の発症であり、これらは全て、不都合な結果の危険性を上昇させる。多くの専門家はあるタイプの栄養補助が危篤状態の患者での代謝安定性の回復を助けるために有益であると考えるが、このような補助の利点および効果は、十分にコントロールされた無作為臨床試験が存在しないため、議論が分かれている。
【０００４】
高血糖およびインスリン耐性は栄養補助を与えられている危篤状態の患者に共通のものであるので、栄養供給を行っている危篤状態の患者における過度の高血糖を治療するためにインスリンを投与するＩＣＵもある。事実、最近の研究では、外科集中治療室において血中グルコースを１１０ｍｇ／デシリットルより低いレベルに維持するために外来性インスリンを使用すると、糖尿病の病歴があるかどうかにかかわらず、危篤状態の患者における罹病率および死亡率が低下したことが記録されている（Ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｅｒｇｈｅ，ら、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．，３４５（１９）：１３５９，２００１）。
【０００５】
線維芽細胞増殖因子は、発達段階および成人の組織において広く発現され（Ｂａｉｒｄら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌｓ，３：２３９−２４３，１９９１）、複数の生理学的機能で重要な役割を果たしている大型のポリペプチドである。線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ−２１）は近年同定されたＦＧＦであり、これは３Ｔ３−Ｌ１含脂肪細胞（脂肪組織代謝の研究に用いられるインビトロモデル）におけるグルコースの取込を刺激し、インスリン感受性を強化する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、栄養消化に応答してのグルコースレベルの単なる間接的な調節というよりも、ＦＧＦ−２１のより基本的な役割を提供する。本発明は、ＦＧＦ−２１が全体的な代謝状態に影響を与え、敗血症および非感染性病理学的原因から生じるＳＩＲＳに応答した身体のストレスの間に生じるかもしれないマイナスの副作用を妨げうるという発見に関連している。従って、本発明は危篤状態の患者において生じる死亡率および罹病率を低下させるためのＦＧＦ−２１の使用を含む。
【０００７】
本発明は、危篤状態の患者に関係する死亡率および罹病率を低下させる方法に関し、この方法は危篤状態の患者に治療上有効な量のＦＧＦ−２１を投与することを含む。
【０００８】
本発明はまた、伝染性障害ならびに非感染性の病理学的原因に関連する全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）に罹患した危篤状態の患者の死亡率および罹病率を低下させる方法に関し、これは危篤状態の患者に治療上有効な量のＦＧＦ−２１を投与することを含む。ＳＩＲＳに関連する状態の例としては、敗血症、膵炎、虚血、多発外傷および組織損傷、出血性ショック、および免疫媒介器官損傷、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、ショック、腎不全および多臓器不全症候群（ＭＯＤＳ）が挙げられる。
【０００９】
本発明はまた、呼吸器疾患に罹患した危篤状態の患者における死亡率および罹病率の低下方法に関する。
【発明の効果】
【００１０】
ＦＧＦ−２１を用いる方法および組成物、特に薬物（医薬組成物または製剤）は、危篤状態の患者の死亡率および罹病率の低下に有効である。さらに、このような組成物は全身性炎症反応症候群に関係する死亡率および罹病率を低下させる際に有効である。さらに、このような組成物は、種々の程度の呼吸窮迫症を導くことが多い特定の外傷または状態の結果として生じるストレス反応に関連する死亡率および罹病率を低下させる際に有効である。本発明に関して、「被検体」または「患者」は好ましくはヒトであるが、ペット（例えば、イヌ、ネコなど）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマなど）および実験動物（例えば、ラット、マウス、モルモットなど）のような動物でもあり得る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
救命医療医学の実施は病院を拠点としており、危篤状態の患者のニーズに専ら向けられており、それにより規定されている。危篤状態の患者としては、生理学的に不安定な、継続的に協力体制にある医師、看護、および呼吸管理を必要とする患者が挙げられる。このタイプの治療は、処置の持続的な監視および力価測定を提供するために特に細部への配慮を払う必要がある。危篤状態の患者としては、生理学的不全状態の危険性があり、それゆえ、不都合の発生を予防するために集中治療チームが即時の診療を提供しうるように持続的なモニタリングを必要とする患者が挙げられる。危篤状態の患者は、連続的な滴定されている管理を提供しうるチームにより施されねばならないモニタリングおよび生命維持に特別の必要性を有している。
【００１２】
本発明は、ＦＧＦ−２１の投与を通じて危篤状態の患者の死亡率および罹病率を低下させる方法に関する。本発明において意図される危篤状態の患者は通常、不安定な代謝亢進状態を被っている。この不安定な代謝状態は幾らか栄養に相対的な欠損を導きうる基質代謝の変化に起因する。通常、脂肪および筋肉両方の酸化の増加である。
【００１３】
ＦＧＦ−２１の投与が死亡率および罹病率の危険性を低下しうる危篤状態の患者は、全身炎症性反応症候群または呼吸窮迫症を被っている患者であることが好ましい。罹病率の低下とは、危篤状態の患者がさらなる疾患、状態または症状を発症する可能性の低下、またはさらなる疾患、状態または症状の重篤度の低下を意味する。例えば、罹病率を低下させることは、菌血症または敗血症または多臓器不全と関連した合併症の発生の低下に対応しうる。
【００１４】
本明細書中で用いる場合、「全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）」は、多数の臨床状態に関連した炎症プロセスを意味し、これには１種より多くの以下の臨床上の徴候が挙げられるが、これらに限定しない。（１）３８℃より高いか、または３６℃より低い体温。（２）１分当たりの心拍数が９０回よりも早い心拍数。（３）１分あたり２０回よりも多い呼吸回数により表される頻呼吸、または３２ｍｍＨｇより低いＰａＣｏ２により示される過呼吸。および（４）白血球数の変化（例えば、１２，０００／ｃｕ  ｍｍよりも高いカウント、４，０００／ｃｕ  ｍｍよりも低いカウント、または１０％より高い未成熟好中球の存在。これらの生理学的変化は、そのような異常（例えば、化学療法、誘発性の好中球減少症および白血球減少症）に関して他の公知の原因が存在しない場合にベースラインからの急速な変化を示すであろう。
【００１５】
本明細書中で用いる場合、「敗血症」は感染から生じるＳＩＲＳとして定義される。ＳＩＲＳの非感染性の病理学的原因としては、膵炎、虚血、多発外傷および組織損傷（すなわち、激しい障害または重篤な火傷）、出血性ショック、免疫媒介器官損傷、および腫瘍ネクローシス因子および他のサイトカインのような炎症プロセスの推定メディエーターの外的投与を挙げることができる。
【００１６】
敗血性ショックおよび多臓器不全は、ＩＣＵ環境における罹病率および死亡率の主な誘因である。敗血症は、サイトカインネットワーク、白血球および補体カスケードおよび凝血／繊維素溶解系（内皮を含む）を含む多数の宿主防御機構の活性化に関連し、媒介されている。種々の器官の微小血管内のフィブリン沈着と関連した播種性血管内凝固（ＤＩＣ）および他の程度の消費性凝固障害は、敗血症／敗血性ショックの徴候である。宿主防御応答の標的器官に与える下流効果は、多臓器不全症候群（ＭＯＤＳ）の発症における重要なメディエーターであり、敗血症、重篤な敗血症およびショックを伴う敗血症を有する患者の予後の悪さの原因である。
【００１７】
本明細書中で用いる場合、「呼吸窮迫症」はあるタイプの肺の機能不全に起因して患者が呼吸困難を来している状態を示す。これらの患者は、酸素補給を伴う治療に不応性、または反応性の種々の程度の低酸素血症を示すことが多い。
【００１８】
呼吸窮迫症は直接肺損傷に起因する肺機能障害を有する患者で生じるかもしれないし、または全身処置の場合におけるような間接的な肺損傷に起因して生じるかもしれない。さらに、慢性のアルコール中毒、慢性の肺疾患および低い血清ｐＨのような二次因子の存在と同様に、複数の誘発障害の存在は、実質的に危険性を上昇させる。
【００１９】
直接的肺損傷の原因のいくつかとしては、肺炎、胃内容物の吸引、肺挫傷、脂肪塞栓、溺水、気道障害、肺移植後の高地性および再灌流性の肺水腫または肺塞栓摘出術が挙げられる。間接的肺損傷のいくつかの原因としては、敗血症、ショックを伴う重篤な外傷および複数回の輸血、心肺バイパス、薬物過剰摂取、急性膵炎および血液製剤の輸血が挙げられる。
【００２０】
呼吸窮迫症を引き起こす肺障害の１つのクラスは、肺性心として公知の症候群と関連している。これらの障害は、肺高血圧症と呼ばれる肺循環内の圧力の上昇を生じる慢性の低酸素血症と関連している。確実な肺高血圧症により、右心室の作業負荷が上昇し、これにより、その巨大化または肥大が導かれる。通常、肺性心は、持続した右心室圧の上昇および右心への静脈還流の減少の臨床的徴候により定義される右心不全として提示される。
【００２１】
気腫および慢性気管支炎を含む慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）はまた、呼吸窮迫症を引き起こし、通気の閉塞により特徴付けられる。ＣＯＰＤは第４位の死因であり、毎年１００，０００人を超える生命を奪う。
【００２２】
急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）は、通常、進行性であり、異なる段階により特徴付けられる。この症候群は通常、状態に関する危険因子を有する患者での呼吸不全の迅速な発症を表す。酸素補給での治療に対して難治性である動脈性低酸素血症は特徴的な疾患である。依存性肺領域（ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｌｕｎｇ  ｚｏｎｅｓ）で生じる肺胞充填、硬化および肺拡張不全があるかもしれないが、しかし、非依存性領域（ｎｏｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ａｒｅａｓ）は実質的な炎症を有するかもしれない。症候群は、持続的低酸素血症、肺胞死腔の増加、および肺コンプライアンスのさらなる減少を伴う線維化性肺胞炎まで進行するかもしれない。肺毛細血管床への損傷から生じる肺高血圧症もまた、発症しうる。
【００２３】
病床の肺損傷の重篤度は様々である。動脈酸素分圧対吸入気酸素画分に対する比が３００未満であることにより定義される重篤度の低い低酸素血症を有する患者、および２００未満の比により定義される低酸素血症の重篤度がより高い患者の両方が本発明により包含される。通常、３００未満の比を有する患者は急性肺損傷を有すると分類され、２００未満の比を有する患者は急性呼吸窮迫症候群を有すると分類される。
【００２４】
急性肺損傷の急性期は、肺胞・毛細管関門の血管透過性の上昇の結果としてのタンパク質に富む浮腫液の気腔域への流入により特徴付けられる。透過性が変化している上皮の完全性の損失は、肺胞の浸水を引き起こし、肺胞腔からの浮腫液の除去に影響を与える正常な液体輸送を破壊し、界面活性物質の産生およびターンオーバーを低下させ、細菌性肺炎を有する患者に敗血性ショックを導き、線維症を引き起こすかもしれない。敗血症は急性肺損傷への進行の危険性の高さと関連している。
【００２５】
代謝亢進が生じる敗血症のような状態では、糖新生の持続およびタンパク質合成の上昇に必要とされるアミノ酸の遊離の両方のために、タンパク質分解が加速される。高血糖症が存在し、血清中に高濃度のトリグリセリドおよび他の脂質が存在しうる。
【００２６】
呼吸機能に障害が起きた患者に関しては、代謝亢進は二酸化炭素産生の酸素消費に対する比率に影響を与えるかもしれない。これは呼吸商（Ｒ／Ｑ）として知られており、正常個体では約０．８５〜約０．９０の間である。過剰な脂肪代謝はＲ／Ｑを低下させる傾向があり、他方、過剰なグルコース代謝はＲ／Ｑを上昇させる傾向がある。呼吸窮迫症を有する患者は、しばしば、二酸化炭素の排出に困難を伴い、そのために異常に高い呼吸商を有する。
【００２７】
また、本発明により包含される危篤状態の患者は、ほとんどの細胞性産物の一過性のダウンレギュレーションおよび熱ショックタンパク質のアップレギュレーションにより特徴付けられる特定のストレス応答を経験する。さらに、このストレス応答は、グルカゴン、成長ホルモン、コルチゾールおよびプロ−および抗−炎症性サイトカインのようなホルモンの活性化に関連する。このストレス応答はおそらく保護的機能を有すると同時に、この反応はこれらの危篤状態の患者におけるさらなる代謝不安定性を生じる。例えば、これら特定のホルモンの活性化は、高血糖を生じる血清グルコースの上昇を生じる。さらに、心臓および他の器官に対する損傷は、アドレナリン作用性の刺激により悪化され得る。さらに、代謝活性に対して顕著な効果を有しうる甲状腺に対して変化があるかもしれない。
【００２８】
線維芽細胞増殖因子は、発生中の組織中および成体の組織中で広範に発現される大型のポリペプチドであり（Ｂａｉｒｄら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌｓ，３：２３９−２４３，１９９１）、複数の生理学的機能に重要な役割を果たす。線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ−２１）は、近年同定されたＦＧＦであり、これは肝臓で選択的に発現されると報告され（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ，１４９２：２０３−２０６，２０００；ＷＯ０１／３６６４０およびＷＯ０１／１８１７２）、虚血性血管疾患、創傷治癒および肺、気管支または肺胞（ａｌｖｅｌｏｒ）細胞または機能の損失と関連した疾患および多数の他の障害の治療として記載されている。
【００２９】
本発明者らは、ＦＧＦ−２１がインビボ敗血性ショックモデルにおいてｏｂ／ｏｂマウスの生存を顕著に改善することを見いだした（実施例３）。さらに、本発明者らはＦＧＦ−２１がグルコース取込を刺激し、３Ｔ３−Ｌ１含脂肪細胞（含脂肪細胞組織代謝の研究に用いられるインビトロモデル）におけるインスリン感受性を増強することもまた、見いだした（実施例１）。ＦＧＦ−２１は、最適濃度（５ｎＭ）未満のインスリンで濃度依存様式で３Ｔ３−Ｌ１含脂肪細胞へのグルコース取込を刺激することが示されている（実施例２、表１）。図２では、ＦＧＦ−２１は７２時間目の処置の際に、３Ｔ３−Ｌ１含脂肪細胞にインスリン依存性グルコース取込に正の影響を与えることが示されている。
【００３０】
ＦＧＦ−２１は、代謝的に不安定な危篤状態の患者の代謝安定性の回復を助けるために独特に適応されている。ＦＧＦ−２１は、グルコース取込を刺激し、インスリン感受性を増強する点で独特である。さらに、ＦＧＦ−２１はヒトにおいて広範な生物学的役割を有し、血糖症に必ずしも関連しないかもしれないメカニズムを介して臓器に影響を与える。それゆえ、ＦＧＦ−２１は危篤状態の患者の治療に理想的に適している。
【００３１】
本発明の方法に有用なＦＧＦ−２１としては、ヒトＦＧＦ−２１（このアミノ酸配列は配列番号１に示す）、ＦＧＦ−２１アナログ、ＦＧＦ−２１誘導体およびＦＧＦ−２１レセプターの他のアゴニスト（以下、総称してＦＧＦ−２１化合物と呼ぶ）が挙げられる。ＦＧＦ−２１アナログはＦＧＦ−２１に対して充分なホモロジーを有するので、化合物はＦＧＦ−２１レセプターに結合する能力を有し、グルコース取込刺激または本明細書中に記載の他の生理学的効果を生じるシグナル伝達経路を開始する。例えば、ＦＧＦ−２１化合物を、実施例２に記載のような細胞ベースのアッセイを用いてグルコース取込活性に関して試験することができる。
【００３２】
ＦＧＦ−２１化合物が本発明により含まれる方法に適しているかどうかを決定するために、実施例３に記載するようにインビボ生存率試験を行うことができる。
【００３３】
また、ＦＧＦ−２１化合物としては、ＦＧＦ−２１またはＦＧＦ−２１アナログのアミノ酸配列を有するが、さらにアミノ酸側鎖基、α炭素原子、末端アミノ基または末端カルボン酸基の１種以上に化学修飾を有する分子として定義される「ＦＧＦ−２１誘導体」を挙げることができる。化学修飾としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定しない：化学的部分を付加すること、新規な結合を作製すること、および化学的部分を除去すること。
【００３４】
アミノ酸側鎖基の修飾としては以下のものが挙げられるが、これらに限定しない：リジンεアミノ基のアシル化、アルギニン、ヒスチジンまたはリジンのＮ−アルキル化、グルタミン酸またはアスパラギン酸のカルボン酸基のアルキル化、およびグルタミンまたはアスパラギンの脱アミド化が挙げられる。末端アミノ基の修飾としては以下のものが挙げられるが、これらに限定しない：脱アミノ、Ｎ−低級アルキル、Ｎ−ジ−低級アルキル、およびＮ−アシル修飾。末端カルボキシ基の修飾としては以下のものが挙げられるが、これらに限定しない：アミド、低級アルキルアミド、ジアルキルアミドおよび低級アルキルエステル修飾。さらに、１種以上の側鎖基または末端基は、当業者であるタンパク質化学者に公知の保護基により保護することができる。アミノ酸のα炭素はモノまたはジメチル化されていても良い。
【００３５】
本発明に従って投与されるＦＧＦ−２１は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９８９）に記載されるような当該分野において公知の任意の方法により製造され、および/または単離することができる。
【００３６】
種々のタンパク質精製方法を用いることができ、このような方法は当該分野において公知であり、例えば、Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８２：８３〜９（１９９０）およびＳｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，ＮＹ（１９８２）に記載されている。選択される精製工程は、例えば、ＦＧＦ−２１に対して用いられる産生方法の性質に依存する。
【００３７】
組成物
本発明のＦＧＦ−２１は、製薬上許容される組成物として製剤化されうる。製薬上許容される薬物製品は、製薬上許容される緩衝液と組み合わせられたＦＧＦ−２１化合物を有し得、このなかでは、ｐＨが非経口投与に適しており、許容可能な安定性および溶解特性を提供するように調節されている。製薬上許容される抗菌剤もまた、加えることができる。メタ−クレゾールおよびフェノールは好ましい製薬上許容される抗菌剤である。１種以上の製薬上許容される塩もまた、イオン強度または等張性を調節するために加えることができる。１種以上の賦形剤を製剤の等張性をさらに調節するために加えることができる。グリセリンは等張性調節賦形剤の１例である。
【００３８】
「製薬上（薬学的に）許容される」とは、ヒトへの投与に適していることを意味する。製薬上許容される製剤は、毒性成分、望ましくない夾雑物などを含有せず、その中の活性化合物の活性と干渉しない。
【００３９】
ＦＧＦ−２１化合物からなる製薬上許容される組成物は、種々の経路（例えば、経口、経鼻投与、吸入または非経口）により投与することができる。非経口投与としては、例えば、筋肉内、静脈内、皮下または腹腔内への注射のような、全身投与を挙げることができる。本発明は主に病院ＩＣＵに収容されている危篤状態の患者を治療する方法に適用されるので、静脈内投与が好ましい。静脈内投与は連続注入またはボーラス注射を使用することができる。連続注入とは、連続的な実質的に不断の特定の期間の間の静脈への溶液の導入を意味する。ボーラス注射とは、一定時間にわたる規定量の（ボーラスという）薬物の注射である。
【００４０】
皮下投与または別のタイプの投与を用いる場合、ＦＧＦ−２１化合物は延長された作用プロフィールを有するように誘導体化されるか、または処方されるであろう。
【００４１】
「治療上有効な量」のＦＧＦ−２１化合物とは、被検体に投与した場合に許容することができない副作用を引き起こすことなく所望の効果を生じる量である。望ましい効果としては、疾患または状態と関連した症状の緩解、疾患または状態と関連した症状の発症の遅延、および処置無しの場合と比較しての寿命の延長を挙げることができる。特に、望ましい効果は、危篤状態と関連した死亡率および罹病率の低下である。
【００４２】
副作用を最小にすると同時に有効性を達成するために、治療の経過の間で一旦定常状態のレベルが得られたら、ＦＧＦ−２１化合物の血漿レベルは顕著に変動させるべきではない。治療過程で一旦定常状態のレベルが達成されたら、本明細書中に記載の範囲内でレベルを維持することを条件として、レベルは顕著には変動しない。当業者であれば、良好な医療業務および個々の患者の臨床条件により決定されるように、ＦＧＦ−２１を含有する治療用組成物に関する薬学的に有効な用量および治療用レジメを簡単に最適化することができる。通常、Ｂｕｃｋｌｅｙら（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ（ＵＳＡ）８２：７３４０−７３４４，１９８５）に記載されているように、血清レベルの約１００倍の成長因子の局所濃度、または組織濃度の１０倍を達成するように製剤を構築する。５−５０ｎｇ／湿重量ｇの組織中のＦＧＦ濃度に基づき、１時間あたり５０〜５０００ｎｇのＦＧＦ−２１の放出が許容される。好ましくは、１時間あたりのＦＧＦ−２１許容放出量は５０〜４０００、５０〜３０００、５０〜２０００、５０〜１０００、５０〜５００、５０〜２５０または５０〜１００ｎｇである。適切な用量で投与されるＦＧＦ−２１により、危篤状態に関連している死亡率および罹病率の低下が生じる。
【００４３】
ＦＧＦ−２１化合物は、通常、病院のＩＣＵに収容された危篤状態の患者に投与される種々の他の医薬と組み合わせて用いることができる。例えば、これらの危篤状態の患者に、ヘパリン（通常、１２時間毎に５，０００単位）、ロベノックスまたはその等価物から構成される、深部静脈血栓症または肺塞栓（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｅｍｂｏｌｉ）用の予防薬（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）を投与することができる。低用量のクマディンを抗凝固剤として用いることができる。ＩＣＵ患者は、Ｈ２ブロッカー、制酸剤、オメプラゾール、スクラフレート（ｓｕｃｒａｆｌａｔｅ）または胃十二指腸潰瘍および出血の可能性に対抗して作用する他の薬物を施されることが多い。通常、ＩＣＵの患者には抗生物質が投与される。敗血症または多臓器不全（ｍｕｌｔｉｓｙｓｔｅｍ  ｏｒｇａｎ  ｆａｉｌｕｒｅ）を有する患者に、カンジダ予防のためにナイスタチンまたはフルコナゾールを投与することができる。
【００４４】
本発明の別の局面において、危篤状態の患者の処置用の医薬としてのＦＧＦ−２１の使用が意図される。
【００４５】
本発明を一般的に記載したが、本発明は以下の実施例を参照することにより、より容易に理解される。これは例示のために提供され、限定することを意図しない。
【実施例】
【００４６】
実施例１
ＦＧＦ−２１をコードするｍＲＮＡの組織分布
ヒト組織においてＦＧＦ−２１をコードするｍＲＮＡの発現を試験するために、とりわけ、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（上記）に記載の方法を用いて、ノザンブロット分析を行う。好ましくは、全ＦＧＦ−２１ポリペプチドをコードするｃＤＮＡプローブを、ＲｅｄｉｐｒｉｍｅＴＭＤＮＡ標識システム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）を製造業者の指示に従って用いて３２Ｐで標識する。標識後、製造業者のプロトコール（番号ＰＴ１２００−１）に従ってＣＨＲＯＭＡ  ＳＰＩＮ−１００ＴＭカラム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を用いてプローブを精製する。精製し、標識したプローブを用いて種々のヒト組織をＦＧＦ−２１  ｍＲＮＡについて試験する。
【００４７】
種々のヒト組織（Ｈ）またはヒト免疫系組織（ＩＭ）を含む複数組織ノザン（ＭＴＮ）ブロットをＣｌｏｎｔｅｃｈから入手し、製造業者のプロトコル（番号ＰＴ１１９０−１）に従ってＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂハイブリダイゼーション溶液（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いて標識プローブで試験する。ハイブリダイゼーションおよび洗浄の後、ブロットを標本にし、−７０℃で一晩フィルムに曝し、標準的な方法に従って発色させる。
【００４８】
上記の技術により、ＦＧＦ−２１が主に肝臓、腎臓および筋肉で発現することが示される。
【００４９】
実施例２
３Ｔ３−１含脂肪細胞中へのグルコース取込
３Ｔ３−Ｌ１細胞をＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から入手する。細胞を増殖培地（ＧＭ）（ダルベッコ改変イーグル培地中１０％鉄富化ウシ胎仔血清含有）で培養する。標準的な含脂肪細胞分化に関しては、細胞がコンフルエントに達した２日後（０日目と呼ぶ）、細胞を分化培地（ＤＭ）（１０％ウシ胎仔血清、１０μｇ／ｍｌインスリン、１μＭデキサメタゾンおよび０．５μＭイソブチルメチルキサンチン含有）に４８時間、曝す。次いで、細胞を分化後培地（１０％ウシ胎仔血清および１０μｇ／ｍｌインスリン含有）中に維持する。
【００５０】
グルコース輸送アッセイ――０．１ｍＭ  ２−デオキシ−Ｄ−［１４Ｃ］グルコースの蓄積によるアッセイとして、ヘキソース取込を以下のようにして測定する。１２ウェルプレート中の３Ｔ３−Ｌ１含脂肪細胞を、３７℃まで昇温させた０．２％ＢＳＡ含有ＫＲＰ緩衝液（１３６ｍＭ  ＮａＣｌ、４．７ｍＭ  ＫＣｌ、１０ｍＭ  ＮａＰＯ４、０．９ｍＭ  ＣａＣｌ２、０．９ｍＭ  ＭｇＳＯ４、ｐＨ７．４）で２回洗浄し、Ｌｅｉｂｏｖｉｔｚ’ｓ  Ｌ−１５培地（０．２％ＢＳＡ含有）中で２時間、３７℃で大気中でインキュベートし、再度、ＫＲＰ（０．２％ＢＳＡ緩衝液含有）で２回洗浄し、ＫＲＰ（ワートマニン（ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ）非存在下（Ｍｅ２ＳＯのみ）または存在下における０．２％  ＢＳＡ緩衝液）中、３０分間３７℃で大気中でインキュベートする。次いで、インスリンを最終濃度１００ｎＭで１５分間、加え、２−デオキシ−Ｄ−［１４Ｃ］グルコースの取込を最後に４分間、測定する。１０μＭサイトカラシンＢの存在下で測定した非特異的取込を、全ての値から差し引く。タンパク質濃度をＰｉｅｒｃｅビシンコニン酸アッセイで測定する。通常、取込は、各試験について３連または４連で測定する。最適濃度未満でのインスリン（５ｎＭ）で行った濃度依存様式での３Ｔ３−Ｌ１含脂肪細胞中のグルコース取込のＦＧＦ−２１の刺激を、表１に示す。インスリン存在下における急性および慢性の３Ｔ３−Ｌ１含脂肪細胞のＦＧＦ−２１での予備処置の効果を図２に示す。図２は、ＦＧＦ−２１が処理７２時間目にインスリン依存性のグルコース取込に正の影響を与えることを示している。
【表１】
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【００５１】
実施例３
敗血症のインビボモデル
敗血症のインビボモデルを用いて、動物生存に対するＦＧＦ−２１の効果を試験する。雌性ｏｂ／ｏｂマウス（８〜９週齢）に、リポ多糖類（ＬＰＳ）（ＰＢＳ  １００μｌ中２７．５μｇ  ＬＰＳ／マウス体重１ｇ）を腹腔内注射で投与する。ＦＧＦ−２１またはヒト血清アルブミン（５０μｇ／注射）をＰＢＳ（２００μｌ）中ＢＩＤで皮下注射する（これはＬＰＳの１時間後に開始し、４８時間、続ける）。５４時間にわたり、マウスを生存に関して１日３回モニターする。
【００５２】
４回の個別の実験をまとめると、５４時間後、ヒト血清アルブミンで処置したマウスの９５％が死亡したが、他方、ＦＧＦ−２１で処置したマウスの５８％は生存していた（ｐ値＝０．０５）。さらに、７日（１６８時間）後、ヒト血清アルブミンで処置したマウスの１００％が死亡したが、ＦＧＦ−２１で処置したマウスの２０％はなおも生存していた。
【００５３】
実施例４
ＦＧＦ−２１で処理した３Ｔ３−Ｌ１含脂肪細胞の転写プロファイリング
３Ｔ３−Ｌ１含脂肪細胞をＦＧＦ−２１で処置し、次いで回収し、ホモジナイズし、ＲＮＡを抽出する。簡単に説明すると、パワーホモジナイザー（ｐｏｗｅｒ  ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ）を用いて、細胞サンプルを組織５０ｍｇあたりＴＲＩｚｏｌ試薬（ＧｉｂｃｏＢＲＬ）１ｍｌ中でホモジナイズした。製造業者の指示に従ってＴＲＩｚｏｌ試薬を用いてＲＮＡを抽出した。
【００５４】
ヒトＦＬアレイ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）上でのＧｅｎｅＣｈｉｐハイブリダイゼーション用にＲＮＡを調製する。ハイブリダイゼーションおよびスキャニングの後、平均差異強度（Ａｖｅｒａｇｅ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ  Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ；ＡＤＩ）に従って統計的比較分析を用いてコントロールとＦＧＦ−２１処置サンプルとの間で遺伝子を順序づけする。
【００５５】
これらの変化の正当性（有効性）を確認するために、３Ｔ３−Ｌ１含脂肪細胞からのいくつかの遺伝子の発現を、半定量ＲＴ−ＰＣＲアッセイを用いて試験する。同じｍＲＮＡプールをマイクロアレイおよびＲＴ−ＰＣＲアッセイの両方に用いる。３Ｔ３−Ｌ１含脂肪細胞のＦＧＦ−２１処理によりアップレギュレートされる遺伝子はＧＡＤＤ４５およびｃｈｏｐ−１０であり、これらは通常、両方とも栄養上のストレスの間にアップレギュレートされる。
【図面の簡単な説明】
【００５６】
【図１】図１は線維芽細胞増殖因子２１の２０８アミノ酸配列（配列番号１）を示す。
【図２】図２はインスリン存在下における、急性または慢性予備処置の際の３Ｔ３−Ｌ１含脂肪細胞におけるグルコース取込のＦＧＦ−２１刺激を示す。黒丸：コントロール。黒四角：ＦＧＦ−２１（１μｇ／ｍｌ）、急性予備処置（２０分）。黒三角：ＦＧＦ−２１（１μｇ／ｍｌ）、慢性予備処置（７２時間）。黒菱形：ＦＧＦ−２１（１μｇ／ｍｌ）、慢性予備処置（７２時間）＋急性予備処置（２０分）。
【化１−１】
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【化１−２】
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【化２】
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【配列表】
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【図１−１】
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【図１−２】
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【図２】
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【手続補正書】
【提出日】平成16年9月14日(2004.9.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
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【国際調査報告】
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