(57)【要約】本発明は患者の眼における緑内障および眼内圧の上昇につながる他の状態の治療での強力なカリウムチャンネル遮断剤またはそれらの配合物の使用に関する。本発明は哺乳動物種、特には、ヒトの眼に対する神経保護効果の付与へのそのような化合物の使用にも関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造式Ｉの化合物または医薬適合性の塩、鏡像異性体、ジアステレオマーもしくはそれらの混合物：
【化１】
2005532363.tif 000077
（ここで、
Ｒは水素またはＣ１−６アルキルを表し；
Ｒ１は水素またはＣ１−６アルキル、ＣＦ３、Ｃ１−６アルコキシ、ＣＯＲｃ、ＣＯ２Ｒ８、ＣＯＮＨＣＨ２ＣＯ２Ｒ、Ｎ（Ｒ）２を表し、該アルキルおよびアルコキシはＲｂから選択される１−３の基で場合により置換され；
Ｘは−（ＣＨＲ７）ｐ−を表し；
Ｙは存在しないか、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎ−または−ＣＨ（ＯＲ）−であり；
ＱはＮ、ＣＲｙまたはＯを表し、ここで、ＱがＯであるときＲ２は存在せず；
ＲｙはＨまたはＣ１−６アルキルを表し；
ＲｗはＨ、Ｃ１−６アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−６アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−６アルキル、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ２Ｃ１−６アルキル、−ＳＯ２Ｃ６−１０アリール、ＮＯ２、ＣＮまたは−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２を表し；
Ｒ２は水素、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−６アルキルＳＲ、−（ＣＨ２）ｎＯ（ＣＨ２）ｍＯＲ、−（ＣＨ２）ｎＣ１−６アルコキシ、−（ＣＨ２）ｎＣ３−８シクロアルキル、−（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリル、−（ＣＨ２）ｎＣ５−１０ヘテロアリール、−Ｎ（Ｒ）２、−ＣＯＯＲまたは−（ＣＨ２）ｎＣ６−１０アリールを表し、該アルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールはＲａから選択される１−３の基で場合により置換され；
Ｒ３は水素、Ｃ１−１０アルキル、−（ＣＨ２）ｎＣ３−８シクロアルキル、−（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリル、−（ＣＨ２）ｎＣ５−１０ヘテロアリール、−（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ、−（ＣＨ２）ｎＣ６−１０アリール、−（ＣＨ２）ｎＮＢＲ８、−（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣＯＯＲ、−（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ８）ＣＯ２Ｒ、−（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ８）ＣＯＲ、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣＯＲ、−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ（Ｒ８）、アリール、−（ＣＨ２）ｎＣ１−６アルコキシ、ＣＦ３、−（ＣＨ２）ｎＳＯ２Ｒ、−（ＣＨ２）ｎＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−（ＣＨ２）ｎＣＯＮ（Ｒ）２、−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＣ（Ｒ）３、−（ＣＨ２）ｎＣＯＲ８、ニトロ、シアノまたはハロゲンを表し、該アルキル、アルコキシ、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールは１−３基のＲａで場合により置換され；
または、ＱがＮであるとき、Ｒ２およびＲ３は介在するＮ原子と共に、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）もしくはＮＲの１−２の原子が割り込み、１−４の二重結合を場合により有し、およびＲａから選択される１−３の基で場合により置換される４−１０員複素環式炭素環を形成し；
Ｒ４およびＲ５は、独立に、水素、Ｃ１−６アルコキシ、ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、ＣＯＯＲ、ＳＯ３Ｈ、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｒ、Ｃ１−６アルキルカルボニル、Ｓ（Ｏ）ｑＲｙ、ＯＰＯ（ＯＨ）２、ＣＦ３、Ｎ（Ｒ）２、ニトロ、シアノまたはハロゲンを表し；
Ｒ６は水素、Ｃ１−１０アルキル、−（ＣＨ２）ｎＣ６−１０アリール、−（ＣＨ２）ｎＣ５−１０ヘテロアリール、（Ｃ６−１０アリール）Ｏ−、−（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリル、−（ＣＨ２）ｎＣ３−８シクロアルキル、−ＣＯＯＲ、−Ｃ（Ｏ）ＣＯ２Ｒを表し、該アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルおよびアルキルはＲａから選択される１−３の基で場合により置換され；
Ｒ７は水素、Ｃ１−６アルキル、−（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲまたは−（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２を表し、
Ｒ８は−（ＣＨ２）ｎＣ３−８シクロアルキル、−（ＣＨ２）ｎ３−１０ヘテロシクリル、Ｃ１−６アルコキシまたは−（ＣＨ２）ｎＣ５−１０ヘテロアリールを表し、該ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールはＲａから選択される１−３の基で場合により置換され；
ＲａはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、Ｎ（Ｒ）２、ＮＯ２、ＣＮ、−ＣＯＲ８、−ＣＯＮＨＲ８、−ＣＯＮ（Ｒ８）２、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ、−ＮＨ（ＣＨ２）ｎＯＲ、−ＣＯＯＲ、−ＯＣＦ３、−ＮＨＣＯＲ、−ＳＯ２Ｒ、−ＳＯ２ＮＲ２、−ＳＲ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）Ｏ−、−（ＣＨ２）ｎＯ（ＣＨ２）ｍＯＲ、−（ＣＨ２）ｎＣ１−６アルコキシ、（アリール）Ｏ−、−ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）Ｓ（Ｏ）ｍ−、Ｈ２Ｎ−Ｃ（ＮＨ）−、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）Ｃ（Ｏ）−、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−、−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＲｗ（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリル−Ｒｗ、−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリル−Ｒｗ、−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）Ｓ（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリル−Ｒｗ、−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）−Ｃ３−１０ヘテロシクリル−Ｒｗ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｚ１−Ｃ（＝Ｚ２）Ｎ（Ｒ）２、−（Ｃ２−６アルケニル）ＮＲｗ（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリル−Ｒｗ、−（Ｃ２−６アルケニル）Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリル−Ｒｗ、−（Ｃ２−６アルケニル）Ｓ（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリル−Ｒｗ、−（Ｃ２−６アルケニル）−Ｃ３−１０ヘテロシクリル−Ｒｗ、−（Ｃ２−６アルケニル）−Ｚ１−Ｃ（＝Ｚ２）Ｎ（Ｒ）２、−（ＣＨ２）ｎＳＯ２Ｒ、−（ＣＨ２）ｎＳＯ３Ｈ、−（ＣＨ２）ｎＰＯ（ＯＲ）２、シクロヘキシル、モルホリニル、ピペリジル、ピロリジニル、チオフェニル、フェニル、ピリジル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、チエニル、フリル、イソチアゾリル、Ｃ２−６アルケニル、およびＣ１−Ｃ１０アルキルを表し、該アルキル、アルケニル、アルコキシ、フェニル、ピリジル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、チエニル、フリル、およびイソチアゾリルはＣ１−Ｃ６アルキル、ＣＮ、（ＣＨ２）ｎテトラゾリル、ＣＯＯＲ、ＳＯ３Ｈ、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＳＯ３Ｈおよび
【化２】
2005532363.tif 000078
から選択される１−３の基で場合により置換され；
Ｚ１およびＺ２は、独立にＮＲｗ、Ｏ、ＣＨ２またはＳを表し；
ＲｂはＣ１−６アルキル、−ＣＯＯＲ、−ＳＯ３Ｒ、−ＯＰＯ（ＯＨ）２、−（ＣＨ２）ｎＣ６−１０アリールまたは−（ＣＨ２）ｎＣ５−１０ヘテロアリールを表し；
Ｒｃは水素、Ｃ１−６アルキルまたは−（ＣＨ２）ｎＣ６−１０アリールを表し；
ｍは０−３であり；
ｎは０−３であり；
ｑは０−２であり；並びに
ｐは０−１である。）
【請求項２】
ＸがＣＨＲ７を表す構造式Ｉの化合物。
【請求項３】
Ｙが−ＣＯ（ＣＨ２）ｎ−である請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ＹがＣＨ（ＯＲ）である請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
ＱがＮである請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
ＱがＣＨである請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ６が（ＣＨ２）ｎＣ６−１０アリール、（ＣＨ２）ｎＣ５−１０ヘテロアリール、（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリルまたは（ＣＨ２）ｎＣ３−８シクロアルキルであり、該アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルおよびアルキルが１から３基のＲａで場合により置換される、請求項２に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ７が水素またはＣ１−６アルキルである請求項６に記載の化合物。
【請求項９】
ＱがＮであり、およびｎが０である請求項６に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｙが−ＣＯ（ＣＨ２）ｎであり、ＱがＮであり、ｎが０であり、Ｒ２がＣ１−１０アルキルまたはＣ１−６アルキルＯＨであり、およびＲ３が（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリルであり、該ヘテロシクリルおよびアルキルが１から３基のＲａで場合により置換される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
以下の表１から表１４から選択される化合物または医薬適合性の塩、鏡像異性体、ジアステレオマーもしくはそれらの混合物：
【表１】
2005532363.tif 000079
【表２】
2005532363.tif 000080
【表３】
2005532363.tif 000081
【表４】
2005532363.tif 000082
【表５】
2005532363.tif 000083
【表６】
2005532363.tif 000084
【表７】
2005532363.tif 000085
【表８】
2005532363.tif 000086
【表９】
2005532363.tif 000087
【表１０】
2005532363.tif 000088
【表１１】
2005532363.tif 000089
【表１２】
2005532363.tif 000090
【表１３】
2005532363.tif 000091
2005532363.tif 000092
【表１４】
2005532363.tif 000093
2005532363.tif 000094
【請求項１２】
高眼圧または緑内障を治療するための方法であって、そのような治療を必要とする患者に治療上有効な量の請求項１の化合物を投与することを含む方法。
【請求項１３】
式Ｉの化合物が溶液局所配合物および懸濁液局所配合物から選択される局所配合物として適用する請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
局所配合物がキサンタンガムまたはゲランガムを場合により含有する請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
β−アドレナリン作動性遮断剤、副交感神経作動薬、ＥＰ４アゴニスト、炭酸脱水素酵素阻害剤、およびプロスタグランジンもしくはプロスタグランジン誘導体からなる群に属する活性成分が場合により配合物に添加される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
β−アドレナリン作動性遮断剤がチモロールであり；副交感神経作動薬がピロカルピンであり；炭酸脱水素酵素阻害剤がドルゾールアミド、アセタゾールアミド、メタゾールアミドもしくはブリンゾールアミドであり；プロスタグランジンがラタノプロストもしくはレスキュラであり、およびプロスタグランジン誘導体がＰＧＦ２αプロスタグランジンから誘導される降圧性脂質である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
黄斑性浮腫、黄斑変性、増加する網膜および視神経頭血液速度、増加する網膜および視神経酸素張力を治療し、および／または神経保護効果を付与するための方法であって、そのような治療を必要とする患者に薬学的に有効な量の請求項１の化合物；または医薬適合性の塩、鏡像異性体、ジアステレオマーもしくはそれらの混合物を投与することを含む方法。
【請求項１８】
式Ｉの化合物を局所配合物として適用する請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
局所配合物がキサンタンガムまたはゲランガムを場合により含有する請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
カリウムチャンネルを含む哺乳動物細胞の再分極または過分極を阻止するための方法であって、それらを必要とするヒトを含む哺乳動物に薬理学的に有効な量の請求項１に記載の化合物、または医薬適合性の塩、鏡像異性体、ジアステレオマーもしくはそれらの混合物を投与することを含む方法。
【請求項２１】
アルツハイマー病、うつ病、認知障害、不整脈障害および／または糖尿病の治療を、それらを必要とする患者において行うための方法であって、薬学的に有効な量の請求項１に記載の化合物、または医薬適合性の塩、鏡像異性体、ジアステレオマーもしくはそれらの混合物を投与することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
緑内障は眼内圧が正常な眼の機能を可能とするには高すぎる眼の変性疾患である。結果として、視神経乳頭に対する損傷を生じることがあり、視覚機能の不可逆的な喪失を生じる。治療を行わない場合、緑内障は最終的に盲目につながり得る。高眼圧、すなわち、視神経乳頭損傷または特徴的な緑内障視野欠損を伴わない眼内圧が上昇した状態は、いまや大多数の眼科医によって単に緑内障の開始における最初期相を表すものと信じられている。
【背景技術】
【０００２】
以前緑内障に用いられていた薬物の多くは不十分であることが立証されている。緑内障の初期の治療方法はピロカルピンを用い、この薬物を有益ではあるが第一線薬物としては不十分なものとする望ましくない局所効果を生じていた。より最近では、多くのβ−アドレナリン作動性アンタゴニストが眼内圧の低下において有効であることを臨床医が注目している。これらの薬剤の多くがこの目的で有効ではあるが、この治療が有効ではないか、または十分に有効ではない患者が患者が幾らか存在する。これらの薬剤の多くは他の特徴、例えば、膜安定化活性も有し、これは服薬量の増加に従ってより明らかとなり、それらを常習的な眼用使用に許容できないものとし、かつ心血管効果をも生じ得る。
【０００３】
ピロカルピンおよびβ−アドレナリン作動性アンタゴニストは眼内圧を低下させるが、これらの薬物のうち酵素炭酸脱水酵素を阻害することによってその作用を表すものはなく、したがって、これらは炭酸脱水酵素経路によってなされる房水形成への寄与の減少を利用することはない。
【０００４】
炭酸脱水酵素阻害剤と呼ばれる薬剤は酵素炭酸脱水酵素を阻害することによって房水の形成を減少させる。そのような炭酸脱水酵素阻害剤は現在全身および局所経路によって眼内圧の治療に用いられるが、これらの薬剤を用いる現在の治療、特に全身経路を用いるもの、は依然として望ましくない効果を伴わないものではない。炭酸脱水酵素阻害剤は基本的な生理学的プロセスの変更における深刻な効果を有するため、全身投与経路の回避が炭酸脱水酵素の阻害によって生じる副作用、例えば、代謝性アシドーシス、嘔吐、知覚麻痺、刺痛、一般的な不快感等の、完全に排除できないとしても、低減に役立つ。局所的な有効炭酸脱水酵素阻害剤は米国特許第４，３８６，０９８号；第４，４１６，８９０号；第４，４２６，３８８号；第４，６６８，６９７号；第４，８６３，９２２号；第４，７９７，４１３号；第５，３７８，７０３号、第５，２４０，９２３号および第５，１５３，１９２号に開示されている。
【０００５】
プロスタグランジンおよびプロスタグランジン誘導体も眼内圧を低下させることが公知である。Ｂｉｔｏの米国特許第４，８８３，８１９号は、眼内圧の低下におけるＰＧＡ、ＰＧＢおよびＰＧＣの使用および合成を記載する。Ｇｏｈらの米国特許第４，８２４，８５７号は、Ｃ−１０が窒素で置換されている誘導体を含めて、眼内圧の低下におけるＰＧＤ２およびそれらの誘導体の使用および合成を記載する。Ｕｅｎｏらの米国特許第５，００１，１５３号は、眼内圧を低下させるための、１３，１４−ジヒドロ−１５−ケトプロスタグランジンおよびプロスタグランジン誘導体の使用および合成を記載する。米国特許第４，５９９，３５３号は、プロスタグランジンおよびプロスタグランジン阻害剤を含むエイコサノイドおよびエイコサノイド誘導体の眼内圧低下における使用を記載する。
【０００６】
プロスタグランジンおよびプロスタグランジン誘導体はブドウ膜強膜流出を高めることによって眼内圧を低下させる。これはＰｇのＦ型およびＡ型の両者に当てはまり、したがって、おそらくはプロスタグランジンのＢ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＪ型並びにそれらの誘導体にも当てはまる。眼内圧の低下へのプロスタグランジン誘導体の使用に関わる問題は、これらの化合物がしばしば眼内圧の初期増加を誘導し、眼色素の色を変化させる可能性があり、かつ眼を取り巻く幾つかの組織の増殖を生じることである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
理解できるように、緑内障および上昇した眼内圧を治療するための幾つかの現行の治療が存在するが、これらの薬剤の効力および副作用プロフィールは理想的ではない。近年、カリウムチャンネル遮断剤が眼の眼内圧を低下させ、したがって、高眼圧およびそれに関連する変性眼状態の治療に対するさらに１つ以上のアプローチを提供することが見出された。カリウムチャンネルの遮断は流体分泌を減少させることが可能であり、幾つかの状況下においては、平滑筋収縮を増大させ、ＩＯＰを低下させることが予想され、眼における神経保護効果を有する（米国特許第５，５７３，７５８号および第５，９２５，３４２号；Ｍｏｏｒｅ，ら，Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  Ｖｉｓ．  Ｓｃｉ  ３８，１９９７；ＷＯ８９／１０７５７、ＷＯ９４／２８９００、およびＷＯ９６／３３７１９を参照）。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の要約）
本発明は、緑内障および患者の眼における上昇した眼内圧に関連する状態の治療における強力なカリウムチャンネル遮断剤またはそれらの配合物の使用に関する。本発明は、哺乳動物種、特にはヒトの眼に神経保護効果を付与するのにそのような化合物を使用することにも関する。特には、本発明は、構造式Ｉ：
【０００９】
【化３】
2005532363.tif 000002
を有する新規インドール化合物または医薬適合性の塩、鏡像異性体、ジアステレオマーもしくはそれらの混合物を使用する緑内障および／または高眼圧（上昇した眼内圧）の治療に関し：
ここで、
Ｒは水素、またはＣ１−６アルキルを表し；
Ｒ１は水素またはＣ１−６アルキル、ＣＦ３、Ｃ１−６アルコキシ、ＣＯＲｃ、ＣＯ２Ｒ８、ＣＯＮＨＣＨ２ＣＯ２Ｒ、Ｎ（Ｒ）２を表し、該アルキルおよびアルコキシはＲｂから選択される１−３の基で場合により置換され；
Ｘは−（ＣＨＲ７）ｐ−を表し；
Ｙは存在しないか、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎ−、もしくは−ＣＨ（ＯＲ）−であり；
ＱはＮ、ＣＲｙ、またはＯを表し、ここで、ＱがＯであるときＲ２は存在せず；
ＲｙはＨ、またはＣ１−６アルキルを表し；
ＲｗはＨ、Ｃ１−６アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−６アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１−６アルキル、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−ＳＯ２Ｃ１−６アルキル、−ＳＯ２Ｃ６−１０アリール、ＮＯ２、ＣＮまたは−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２を表し；
Ｒ２は水素、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−６アルキルＳＲ、−（ＣＨ２）ｎＯ（ＣＨ２）ｍＯＲ、−（ＣＨ２）ｎＣ１−６アルコキシ、−（ＣＨ２）ｎＣ３−８シクロアルキル、−（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリル、−（ＣＨ２）ｎＣ５−１０ヘテロアリール、−Ｎ（Ｒ）２、−ＣＯＯＲ、または−（ＣＨ２）ｎＣ６−１０アリールを表し、該アルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールはＲａから選択される１−３の基で場合により置換され；
Ｒ３は水素、Ｃ１−１０アルキル、−（ＣＨ２）ｎＣ３−８シクロアルキル、−（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリル、−（ＣＨ２）ｎＣ５−１０ヘテロアリール、−（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ、−（ＣＨ２）ｎＣ６−１０アリール、−（ＣＨ２）ｎＮＨＲ８、−（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣＯＯＲ、−（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ８）ＣＯ２Ｒ、−（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ８）ＣＯＲ、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣＯＲ、−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ（Ｒ８）、アリール、−（ＣＨ２）ｎＣ１−６アルコキシ、ＣＦ３、−（ＣＨ２）ｎＳＯ２Ｒ、−（ＣＨ２）ｎＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、−（ＣＨ２）ｎＣＯＮ（Ｒ）２、−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＣ（Ｒ）３、−（ＣＨ２）ｎＣＯＲ８、ニトロ、シアノまたはハロゲンを表し、該アルキル、アルコキシ、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールは１−３基のＲａで場合により置換され；
または、ＱがＮであるとき、Ｒ２およびＲ３は介在するＮ原子と共に、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）もしくはＮＲの１−２の原子が割り込み、１−４の二重結合を場合により有し、かつＲａから選択される１−３の基で場合により置換される４−１０員複素環式炭素環を形成し；
Ｒ４およびＲ５は、独立に、水素、Ｃ１−６アルコキシ、ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、ＣＯＯＲ、ＳＯ３Ｈ、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｒ、Ｃ１−６アルキルカルボニル、Ｓ（Ｏ）ｑＲｙ、ＯＰＯ（ＯＨ）２、ＣＦ３、Ｎ（Ｒ）２、ニトロ、シアノまたはハロゲンを表し；
Ｒ６は水素、Ｃ１−１０アルキル、−（ＣＨ２）ｎＣ６−１０アリール、−（ＣＨ２）ｎＣ５−１０ヘテロアリール、（Ｃ６−１０アリール）Ｏ−、−（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリル、−（ＣＨ２）ｎＣ３−８シクロアルキル、−ＣＯＯＲ、−Ｃ（Ｏ）ＣＯ２Ｒを表し、該アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルおよびアルキルはＲａから選択される１−３の基で場合により置換され；
Ｒ７は水素、Ｃ１−６アルキル、−（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲまたは−（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２を表し、
Ｒ８は−（ＣＨ２）ｎＣ３−８シクロアルキル、−（ＣＨ２）ｎ３−１０ヘテロシクリル、Ｃ１−６アルコキシまたは−（ＣＨ２）ｎＣ５−１０ヘテロアリールを表し、該ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールはＲａから選択される１−３の基で場合により置換され；
ＲａはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、Ｎ（Ｒ）２、ＮＯ２、ＣＮ、−ＣＯＲ８、−ＣＯＮＨＲ８、−ＣＯＮ（Ｒ８）２、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ、−ＮＨ（ＣＨ２）ｎＯＲ、−ＣＯＯＲ、−ＯＣＦ３、−ＮＨＣＯＲ、−ＳＯ２Ｒ、−ＳＯ２ＮＲ２、−ＳＲ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）Ｏ−、−（ＣＨ２）ｎＯ（ＣＨ２）ｍＯＲ、−（ＣＨ２）ｎＣ１−６アルコキシ、（アリール）Ｏ−、−ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）Ｓ（Ｏ）ｍ−、Ｈ２Ｎ−Ｃ（ＮＨ）−、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）Ｃ（Ｏ）−、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−、−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＲｗ（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリル−Ｒｗ、−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリル−Ｒｗ、−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）Ｓ（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリル−Ｒｗ、−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）−Ｃ３−１０ヘテロシクリル−Ｒｗ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｚ１−Ｃ（＝Ｚ２）Ｎ（Ｒ）２、−（Ｃ２−６アルケニル）ＮＲｗ（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリル−Ｒｗ、−（Ｃ２−６アルケニル）Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリル−Ｒｗ、−（Ｃ２−６アルケニル）Ｓ（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリル−Ｒｗ、−（Ｃ２−６アルケニル）−Ｃ３−１０ヘテロシクリル−Ｒｗ、−（Ｃ２−６アルケニル）−Ｚ１−Ｃ（＝Ｚ２）Ｎ（Ｒ）２、−（ＣＨ２）ｎＳＯ２Ｒ、−（ＣＨ２）ｎＳＯ３Ｈ、−（ＣＨ２）ｎＰＯ（ＯＲ）２、シクロヘキシル、モルホリニル、ピペリジル、ピロリジニル、チオフェニル、フェニル、ピリジル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、チエニル、フリル、イソチアゾリル、Ｃ２−６アルケニル、およびＣ１−Ｃ１０アルキルを表し、該アルキル、アルケニル、アルコキシ、フェニル、ピリジル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、チエニル、フリル、およびイソチアゾリルはＣ１−Ｃ６アルキル、ＣＯＯＲ、ＳＯ３Ｈ、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＳＯ３Ｈおよび
【００１０】
【化４】
2005532363.tif 000003
から選択される１−３の基で場合により置換され；
Ｚ１およびＺ２は、独立にＮＲｗ、Ｏ、ＣＨ２、またはＳを表し；
ＲｂはＣ１−６アルキル、−ＣＯＯＲ、−ＳＯ３Ｒ、−ＯＰＯ（ＯＨ）２、−（ＣＨ２）ｎＣ６−１０アリール、または−（ＣＨ２）ｎＣ５−１０ヘテロアリールを表し；
Ｒｃは水素、Ｃ１−６アルキル、または−（ＣＨ２）ｎＣ６−１０アリールを表し；
ｍは０−３であり；
ｎは０−３であり；
ｑは０−２であり；並びに
ｐは０−１である。
【００１１】
本発明のこの側面および他の側面は本発明を精査することで全体として理解される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
（発明の詳細な説明）
本発明は式Ｉの新規カリウムチャンネル遮断剤を指向する。また、上記式Ｉのカリウムチャンネル遮断剤および医薬適合性の担体を含有する組成物の投与、特には、局所またはイントラ・カマラル（ｉｎｔｒａ−ｃａｍａｒａｌ）投与による、上昇した眼内圧の低下または緑内障の治療のための方法にも関する。
【００１３】
本発明の一実施態様は、ＸがＣＨＲ７であるときに実現される。
【００１４】
本発明の一実施態様は、Ｙが−ＣＯ（ＣＨ２）ｎであり、かつ他の全ての可変因子が本来記載される通りであるときに実現される。本発明の下位実施態様は、ｎが０であるときに実現される。
【００１５】
本発明の別の実施態様は、ＹがＣＨ（ＯＲ）であり、かつ他の全ての可変因子が本来記載される通りであるときに実現される。
【００１６】
本発明のさらに別の実施態様は、ＱがＮであり、かつ他の全ての可変因子が本来記載される通りであるときに実現される。
【００１７】
本発明のさらに別の実施態様は、ＱがＣＨであり、かつ他の全ての可変因子が本来記載される通りであるときに実現される。
【００１８】
別の実施態様においては、ＲｗがＨ、Ｃ１−６アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−６アルキルおよび−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２から選択される。
【００１９】
本発明のさらに別の実施態様は、Ｒ６が（ＣＨ２）ｎＣ６−１０アリール（ＣＨ２）ｎＣ５−１０ヘテロアリール、（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリル、または（ＣＨ２）ｎＣ３−８シクロアルキルであり、該アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルおよびシクロアルキルが１から３基のＲａで場合により置換され、かつ全ての他の可変因子が本来記載される通りであるときに実現される。
【００２０】
本発明のさらに別の実施態様は、Ｒ６が（ＣＨ２）ｎＣ６−１０アリール、（ＣＨ２）ｎＣ５−１０ヘテロアリールまたは（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリルであり、該アリール、ヘテロアリールおよびヘテロシクリルが１から３基のＲａで場合により置換され、かつ他の全ての可変因子が本来記載される通りであるときに実現される。
【００２１】
本発明のさらに別の実施態様は、Ｒ７が水素またはＣ１−６アルキルであり、かつ他の全ての可変因子が本来記載される通りであるときに実現される。
【００２２】
本発明のさらに別の実施態様は、Ｙが−ＣＯ（ＣＨ２）ｎであり、かつＱがＮであるときに実現される。本発明の下位実施態様はｎが０であるときに実現される。
【００２３】
本発明のさらに別の実施態様は、Ｙが−ＣＯ（ＣＨ２）ｎであり、ＱがＮであり、Ｒ２がＣ１−１０アルキルまたはＣ１−６アルキルＯＨであり、かつＲ３が（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリルであり、該ヘテロシクリルおよびアルキルが１から３基のＲａで場合により置換されるときに実現される。本発明の下位実施態様は、ｎが０であるときに実現される。
【００２４】
本発明のさらに別の実施態様は、Ｒ２およびＲ３が介在するＮ原子と共に、１−２原子のＯ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）またはＮＲが場合により割り込み、かつ１−４の二重結合を場合により有し、かつＲａから選択される１−３の基で場合により置換される４−１０員複素環式炭素環を形成するときに実現され；
該複素環基の例は：
【００２５】
【化５】
2005532363.tif 000004
等である。
【００２６】
本発明の別の実施態様は、ＲａがＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ３、Ｎ（Ｒ）２、ＮＯ２、ＣＮ、−ＣＯＮＨＲ８、−ＣＯＮ（Ｒ８）２、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ、−ＮＨ（ＣＨ２）ｎＯＲ、−ＣＯＯＲ、−ＯＣＦ３、−ＮＨＣＯＲ、−ＳＯ２Ｒ、−ＳＯ２ＮＲ２、−ＳＲ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）Ｏ−、−（ＣＨ２）ｎＯ（ＣＨ２）ｍＯＲ、−（ＣＨ２）ｎＣ１−６アルコキシ、（アリール）Ｏ−、−ＯＨ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）Ｓ（Ｏ）ｍ−、Ｈ２Ｎ−Ｃ（ＮＨ）−、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）Ｃ（Ｏ）−、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−、−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＲｗ（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリル−Ｒｗ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｚ１−Ｃ（＝Ｚ２）Ｎ（Ｒ）２、−（Ｃ２−６アルケニル）ＮＲｗ（ＣＨ２）ｎＣ３−１０ヘテロシクリル−Ｒｗ、−（Ｃ２−６アルケニル）−Ｚ１−Ｃ（＝Ｚ２）Ｎ（Ｒ）２、−（ＣＨ２）ｎＳＯ２Ｒ、−（ＣＨ２）ｎＳＯ３Ｈ、−（ＣＨ２）ｎＰＯ（ＯＲ）２、Ｃ２−６アルケニル、およびＣ１−Ｃ１０アルキルから選択され、該アルキルおよびアルケニルがＣ１−Ｃ６アルキルおよびＣＯＯＲから選択される１−３の基で場合により置換されるときに実現される；
本発明において用いられる化合物は表１から１４によって表される：
【００２７】
【表１５】
2005532363.tif 000005
【００２８】
【表１６】
2005532363.tif 000006
【００２９】
【表１７】
2005532363.tif 000007
【００３０】
【表１８】
2005532363.tif 000008
【００３１】
【表１９】
2005532363.tif 000009
【００３２】
【表２０】
2005532363.tif 000010
【００３３】
または医薬適合性の塩、鏡像異性体、ジアステレオマーもしくはそれらの混合物。
【００３４】
本発明の他の例は表７から１４において説明される：
【００３５】
【表２１】
2005532363.tif 000011
【００３６】
【表２２】
2005532363.tif 000012
【００３７】
【表２３】
2005532363.tif 000013
【００３８】
【表２４】
2005532363.tif 000014
【００３９】
【表２５】
2005532363.tif 000015
【００４０】
または医薬適合性の塩、鏡像異性体、ジアステレオマーもしくはそれらの混合物。
【００４１】
【表２６】
2005532363.tif 000016
【００４２】
【表２７】
2005532363.tif 000017
2005532363.tif 000018
【００４３】
【表２８】
2005532363.tif 000019
2005532363.tif 000020
または医薬適合性の塩、鏡像異性体、ジアステレオマーもしくはそれらの混合物。
【００４４】
本発明を、他に指定されない限り以下に定義される用語を用いて、ここで詳細に説明する。
【００４５】
本発明の化合物は非対称中心、キラル軸およびキラル平面を有することができ、ラセミ化合物、ラセミ混合物、および個々のジアステレオマーとして生じ、光学異性体を含む全ての考え得る異性体が本発明に含まれる（Ｅ．Ｌ．  Ｅｌｉｅｌ  ａｎｄ  Ｓ．Ｈ．  Ｗｉｌｅｎ  Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆＣａｒｂｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  （Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９９４）、特には、１１１９−１１９０頁を参照）。
【００４６】
いかなる可変因子（例えば、アリール、複素環、Ｒ１、Ｒ６等）がいかなる構成において１回を上回って現れるときでも、各々の出現に対するそれらの定義は全ての他の出現時で独立である。その上、置換基／または可変因子の組合せはそのような組合せが安定な化合物を生じる場合にのみ許容される。
【００４７】
「アルキル」という用語は、他に定義されない限り、１から１０個の炭素原子を含む一価アルカン（炭化水素）誘導基を指す。それは直鎖、分岐鎖または環状であり得る。好ましいアルキル基には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、シクロプロピル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが含まれる。アルキル基がアルキル基で置換されると言われるとき、それは「分岐アルキル基」と交換可能に用いられる。
【００４８】
シクロアルキルは、他に定義されない限り、交互もしくは共鳴二重結合を炭素原子間に持たない、３から１５個の炭素原子を含むアルキルの一種である。これは融合している１から４の環を含むことができる。そのようなシクロアルキル要素の例には、これらに限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチルが含まれる。
【００４９】
アルコキシは、酸素架橋を介して結合する、指示された数の炭素原子を含むアルキル基を指し、アルキル基はここで説明されるように場合により置換される。これらの基は直鎖もしくは分岐鎖配置のいずれかにある指示された長さの基であり、長さが２炭素原子以上である場合、これらは二重もしくは三重結合を含むことができる。そのようなアルコキシ基の例は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、三級ブトキシ、ペントキシ、イソペントキシ、ヘキソキシ、イソヘキソキシ、アリルオキシ、プロパルギルオキシ等である。
【００５０】
ハロゲン（ハロ）は、塩素、フッ素、ヨウ素または臭素を刺す。
【００５１】
アリールは芳香族環、例えば、フェニル、置換フェニル等に加えて、融合している環、例えば、ナフチル、フェナントレニル等を指す。したがって、いかなるアリール基もが少なくとも６原子を有する少なくとも１つの環を含み、２２個のまでの原子を含む５つまでのそのような環が存在し、隣接する炭素原子もしくは適切なヘテロ原子間に交互（共鳴）二重結合が存在する。アリール基の例は、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、ビフェニル、フェナントリル、アントリルもしくはアセナフチルおよびフェナントレニル、好ましくは、フェニル、ナフチルもしくはフェナントレニルである。アリール基は、同様に、定義されるように置換されていてもよい。好ましい置換アリールにはフェニルおよびナフチルが含まれる。
【００５２】
ヘテロシクリルまたは複素環式という用語は、ここで用いられる場合、飽和もしくは不飽和のいずれかであり、炭素原子並びにＮ、Ｏ、およびＳからなる群より選択される１から４個のヘテロ原子からなり、並びに上に定義される複素環のいずれかがベンゼン環に融合するあらゆる二環式基を含む、安定な５から７員単環式もしくは安定な８から１１員二環式複素環を表す。この複素環は安定な構造を創出するいかなるヘテロ原子または炭素原子でも結合することができる。融合複素環系は炭素環式環を含むことができ、ただ１つの複素環を含むことが必要である。複素環または複素環式という用語はヘテロアリール部分を含む。複素環式要素の例には、これらの限定されるものではないが、アゼピニル、ベンズイミダゾリル、ベンズイソキサゾリル、ベンゾフラザニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾフリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、ベンズオキサゾリル、クロマニル、シンノリニル、ジヒドロベンゾフリル、ジヒドロベンゾチエニル、ジヒドロベンゾチオピラニル、ジヒドロベンゾチオピラニルスルホン、ジヒドロピロリル、１，３−ジオキソラニル、フリル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、イソクロマニル、イソインドリニル、イソキノリニル、イソチアゾリジニル、イソチアゾリル、イソチアゾリジニル、モルホリニル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、２−オキソアゼピニル、オキサゾリル、２−オキソピペラジニル、２−オキソピペラジニル、２−オキソピロリジニル、ピペリジル、ピペラジニル、ピリジル、ピラジニル、ピラゾリジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピロリジニル、ピロリル、キナゾリニル、キノリニル、キノキサリニル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、チアモルホリニル、チアモルホリニルスルホキシド、チアゾリル、チアゾリニル、チエノフリル、チエノチエニル、およびチエニルが含まれる。好ましくは、複素環は２−アゼピノニル、ベンズイミダゾリル、２−ジアザピノニル、ジヒドロイミダゾリル、ジヒドロピロリル、イミダゾリル、２−イミダゾリジノニル、インドリル、イソキノリニル、モルホリニル、ピペリジル、ピペラジニル、ピリジル、ピロリジニル、２−ピペリジノニル、２−ピリミジノニル、２−ピロリジノニル、キノリニル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロイソキノリニル、およびチエニルから選択される。
【００５３】
「ヘテロ原子」という用語は、独立の基準で選択されるＯ、ＳまたはＮを意味する。
【００５４】
「ヘテロアリール」という用語は、少なくとも１個のヘテロ原子、Ｏ、ＳもしくはＮを含み、炭素もしくは窒素原子が結合点であり、１もしくは２個のさらなる炭素原子がＯもしくはＳから選択されるヘテロ原子で場合により置換され、かつ１から３個のさらなる炭素原子が窒素ヘテロ原子で場合により置換される、５もしくは６個の環原子を有する単環式芳香族炭化水素基、または８から１０原子を有する二環式芳香族基を指し、該ヘテロアリール基はここに記載されるように場合により置換される。そのような複素環式要素の例には、これらに限定されるものではないが、ベンズイミダゾリル、ベンズイソキサゾリル、ベンゾフラザニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾフリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、ベンズオキサゾリル、クロマニル、シンノリニル、ジヒドロベンゾフリル、ジヒドロベンゾチエニル、ジヒドロベンゾチオピラニル、ジヒドロベンゾチオピラニルスルホン、フリル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、イソクロマニル、イソインドリニル、イソキノリニル、イソチアゾリル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピロリル、キナゾリニル、キノリニル、キノキサリニル、テトラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、チアゾリル、チエノフリル、チエノチエニル、チエニルおよびトリアゾリルが含まれる。さらなる窒素原子が第１の窒素および酸素もしくはイオウと共に存在し、例えば、チアジアゾールをもたらすことができる。
【００５５】
本発明は高眼圧または緑内障の治療方法であって、それらを必要とする患者に式Ｉの化合物のうちの１つをβ−アドレナリン作動性遮断剤、例えば、チモロール、副交感神経作動薬、例えば、ピロカルピン、炭酸脱水酵素阻害剤、例えば、ドルゾールアミド、アセタゾールアミド、メタゾールアミドもしくはブリンゾールアミド、２００２年６月６日出願のＵＳＳＮ６０／３８６，６４１（代理人整理番号ＭＣ０５９ＰＶ）、２００２年１０月２５日出願の６０／４２１，４０２（代理人整理番号ＭＣ０６７ＰＶ）、２００３年３月２６日出願の６０／４５７，７００（代理人整理番号ＭＣ０８０ＰＶ）、２００２年８月２８日出願の６０／４０６，５３０（代理人整理番号ＭＣ０６０ＰＶ）並びに２００２年１１月２７日出願のＰＣＴ出願ＰＣＴ０２／３８０３９、および２００２年１１月２７日出願のＰＣＴ０２／３８０４０（全て参照してその全体がここに組み込まれる）に開示されるようなＥＰ４アゴニスト、プロスタグランジン、例えば、ラタノプロスト、レスキュラ、Ｓ１０３３またはプロスタグランジン誘導体、例えば、ＰＧＦ２αプロスタグランジンから誘導される降圧性脂質との組合せで投与することによる方法にも関する。降圧性脂質（基本プロスタグランジン構造のα鎖連結上のカルボン酸基が電気化学的に中性の置換基で置換されている）の一例は、カルボン酸基がＣ１−６アルコキシ基、例えば、ＯＣＨ３（ＰＧＦ２α１−ＯＣＨ３）、またはヒドロキシ基（ＰＧＦ２α１−ＯＨ）で置換されているものである。
【００５６】
好ましいカリウムチャンネル遮断剤はカルシウム活性化カリウムチャンネル遮断剤である。より好ましいカリウムチャンネル遮断剤は高伝導性カルシウム活性化カリウム（（Ｍａｘｉ−Ｋ）チャンネル遮断剤である。Ｍａｘｉ−Ｋチャンネルは、ニューロン、平滑筋および上皮組織において一般的であり、かつ膜電位および細胞内Ｃａ２＋によって開閉するイオンチャンネルのファミリーである。
【００５７】
眼内圧（ＩＯＰ）は房水動力学によって制御される。房水は非色素性毛様体上皮のレベルで産生され、主として小柱網を介する流出によって一掃される。房水の流入はイオン輸送プロセスによって制御される。非色素性毛様体上皮中のｍａｘｉ−Ｋチャンネルが２つの機構によって塩化物分泌を間接的に制御するものと考えられる；これらのチャンネルは過分極した膜電位（内部が負）を維持し、それが細胞からの塩化物流出に駆動力を与え、かつ塩化物イオン移動のための対イオン（Ｋ＋）をも与える。水がＫＣｌと共に受動的に移動し、それが房水の産生を可能にする。この組織におけるｍａｘｉ−Ｋチャンネルの阻害は流入を減少させる。Ｍａｘｉ−Ｋチャンネルは特定の平滑筋組織の収縮性を制御することも示されており、幾つかの場合においては、チャンネル遮断剤が静止状態の筋肉を収縮させることが可能であり、または自発的活性組織の筋原活性を増加させることができる。毛様体筋肉の収縮は、ピロカルピンで生じるように、小柱網を開放し、かつ房水の流出を刺激する。したがって、ｍａｘｉ−Ｋチャンネルは幾つかの方法で房水動力学に多大な影響を及ぼし得る；このチャンネルの遮断は、流入もしくは流出プロセスに影響を及ぼすことにより、または流入／流出プロセスの両者に影響を及ぼす組合せにより、ＩＯＰを低下させる。
【００５８】
本発明は、ｍａｘｉ−Ｋチャンネルが、遮断された場合に、正味の溶質およびＨ２Ｏ流出を阻害することによって房水産生を阻害し、したがって、ＩＯＰを低下させるという知見に基づく。この知見は、ｍａｘｉ−Ｋチャンネル遮断剤が他の眼科学的機能不全、例えば、黄斑性浮腫および黄斑変性の治療に有用であることを示唆する。ＩＯＰの低下が網膜および視神経への血流を促進することは公知である。したがって、本発明の化合物は黄斑性浮腫および／または黄斑変性の治療に有用である。
【００５９】
黄斑性浮腫は、眼の後極の網膜内の非常に重要な中心視覚帯内での膨潤である。網膜内での流体の蓄積は神経要素を互いに、およびそれらの局所血液供給から脱着させる傾向にあり、これがその領域における視覚機能の休止状態を創出する。
【００６０】
緑内障は視神経の進行性の萎縮を特徴とし、しばしば上昇した眼内圧（ＩＯＰ）に関連付けられる。しかしながら、緑内障は、必ずしもＩＯＰに影響を及ぼすことなしに、神経保護効果を付与する薬物を用いることによって治療することができる。Ａｒｃｈ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  Ｖｏｌ．  １１２，Ｊａｎ  １９９４，ｐｐ．  ３７−４４；Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｏｐｈｔｈａｍｏｌ．  ＆  Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，３２，５，Ａｐｒｉｌ  １９９１，ｐｐ．  １５９３−９９を参照。ＩＯＰを低下させるｍａｘｉ−Ｋチャンネル遮断剤が神経保護効果の付与に有用であることは信じられる。それらがＩＯＰを低下させることによって網膜および視神経頭血液速度を増加させ、かつ網膜および視神経酸素を増加させることに有効であり、それが一緒に連関するときに視神経の健康に役立つことも信じられる。結果として、本発明は、さらに、網膜および視神経頭血液速度を増加させ、網膜および視神経酸素張力を増加させることの他に、神経保護効果またはそれらの組合せを付与するための方法に関する。
【００６１】
上に示されるように、カリウムチャンネルアンタゴニストはヒトを含む哺乳動物における幾つかの生理学的障害に有用である。カリウムチャンネルを含むイオンチャンネルは全ての哺乳動物細胞において見いだされ、様々な生理学的プロセスおよび正常細胞ホメオスタシスの修飾に関与する。カリウムチャンネルは、一般には、膜電位の休止を制御し、カリウムイオンの流出は細胞脱分極後の原形質膜の再分極を生じる。カリウムチャンネルアンタゴニストは再分極を阻止し、細胞が脱分極した励起状態に止まることを可能にする。
【００６２】
幾つかの異なるカリウムチャンネル・サブタイプが存在する。生理学的には、最も重要なカリウムチャンネル・サブタイプの１つがニューロン組織、平滑筋および上皮組織に存在するＭａｘｉ−Ｋチャンネルである。細胞内カルシウム濃度（Ｃａ２＋ｉ）および膜電位がこれらのチャンネルを開閉する。例えば、Ｍａｘｉ−Ｋチャンネルは、細胞内Ｃａ２＋濃度の増加により、または膜脱分極（電位の変化）により、開放されてカリウムイオンの流出を可能にする。細胞内カルシウム濃度の上昇は神経伝達物質放出に必要である。したがって、Ｍａｘｉ−Ｋチャンネルの修飾は膜電位を制御することによる神経末端からの神経伝達物質放出に影響を及ぼし、それは次に、電圧開閉カルシウムチェンネルを介する細胞外Ｃａ２＋の流入に影響を及ぼす。したがって、本発明の化合物は、神経伝達物質放出が損なわれている神経学的障害の治療において有用である。
【００６３】
幾つかの市販薬物はカリウムチャンネルアンタゴニストとして機能する。これらのうちの最も重要なものには、化合物グリブリド、グリピジドおよびトルブタミドが含まれる。これらのカリウムチャンネルアンタゴニストは抗糖尿病薬として有用である。本発明の化合物をこれらの化合物の１種類以上と組み合わせて糖尿病を治療することができる。
【００６４】
カリウムチャンネルアンタゴニストは、クラス３抗不整脈薬として、ヒトにおける急性梗塞の治療にも用いられる。幾つかの天然毒素はアパミン、イベリオトキシン、カリブドトキシン、ノキシウストキシン、カリオトキシン、デンドロトキシン（類）、肥満細胞脱顆粒（ＭＣＤ）ペプチド、およびβ−ブンガロトキシン（β−ＢＴＸ）を含む幾つかの天然毒素はカリウムチャンネルを遮断することが公知である。本発明の化合物をこれらの化合物のうちの１種類以上と組み合わせて不整脈を治療することができる。
【００６５】
うつ病は神経伝達物質放出の減少に関連する。うつ病の現在の治療には、神経伝達物質取り込みの遮断剤、および神経伝達物質の寿命を長期化するように作用する神経伝達物質分解に関与する酵素の阻害剤が含まれる。
【００６６】
アルツハイマー病も神経伝達物質放出の減少を特徴とする。アルツハイマー病は、認識および機能性の深刻な障害につながる脳の神経変性疾患である。この疾患は記憶および学習した機能の進行性の退行につながる。アルツハイマー病は、コリン作動性ニューロンの他にセロトニン作動性、ノルアドレナリン作動性および他の中枢神経伝達系に影響を及ぼす複雑な疾患である。アルツハイマー病の症状は記憶喪失を越えて広がり、人格変化、神経筋変化、発作、および、時折、精神病的特徴が含まれる。
【００６７】
アルツハイマー病は合衆国において最も一般的なタイプの痴呆である。幾つかの見積もりは８５歳を上回る高齢者の４７％までがアルツハイマー病に罹患していることを示唆する。この集団の平均年齢が増加しつつあるため、アルツハイマー病の頻度は増加しており、緊急の注意を必要とする。アルツハイマー病は、その予防または治療に利用可能な適切な方法が現在存在しないため、困難な医療上の問題である。
【００６８】
３つのクラスの薬物がアルツハイマー病の治療について研究されている。第１のクラスはアセチルコリン神経伝達機能を増大させる化合物からなる。現在、抗コリンエステラーゼ剤のようなコリン作動性増強剤がアルツハイマー病の治療において用いられている。特に、アセチルコリンエステラーゼの阻害剤であるフィソスチグミン（エセリン）がその治療において用いられている。フィソスチグミンの投与は、その効果の短い半減期、乏しい経口バイオアベイラビリティ、および、特には消化系に向かう、深刻な用量制限副作用によってかなり制限されるという欠点を有する。タクリン（テトラヒドロアミノクリジン）は使用されている別のコリンエステラーゼ阻害剤である；しかしながら、この化合物は肝毒性を生じることがある。
【００６９】
アルツハイマー病の治療について研究されている第２のクラスの薬物は、他所にはほとんど作用することなくニューロン代謝に影響を及ぼす向知性剤である。これらの薬物はニューロン代謝活性を高めることによって神経細胞機能を改善する。ピラセタムはアセチルコリン前駆体との組合せで有用であり得、かつニューロンにおける幾らかの量の機能的アセチルコリン放出を保持するアルツハイマー病患者に役立ち得る向知性剤である。オキシラセタムはアルツハイマー治療について研究されている別の関連薬物である。
【００７０】
第３のクラスの薬物は脳の脈管構造に影響を及ぼす薬物である。エルゴロイドメシレートの混合物が痴呆の治療に用いられている。エルゴロイドメシレートは血管抵抗を減少させ、それにより、大脳の血流を増加させる。主として脳脈管構造に影響を及ぼす選択的カルシウムチャンネル遮断剤であるニモジピンを含む、カルシウムチャンネル遮断剤も用いられている。
【００７１】
他の雑多な薬物はアルツハイマー病において見いだされる他の欠陥の修正を標的とする。脳ドーパミンおよびノルエピネフリンを増加させる、モノアミンオキシダーゼＢ阻害剤であるセレギリンは、伝えられるところによると、幾らかのアルツハイマー患者において穏やかな改善を生じている。アルミニウムキレート剤はアルツハイマー病がアルミニウムの毒性によるものであると信じる者にとって関心のあるものである。神経遮断薬を含む、挙動に影響を及ぼす薬物および抗不安薬が用いられている。神経遮断薬の副作用は眠気および抗コリン作動性効果から錐体外路性副作用までの範囲をとる；これらの薬物の他の副作用には、発作、抗利尿性ホルモンの不適切な分泌、黄疸、体重増加および錯乱状態の増加が含まれる。マイルドトランキライザーである抗不安薬は神経遮断薬よりも有効性に劣るが、これにもより穏やかな副作用がある。しかしながら、これらの挙動作用性薬物の使用は議論の余地を残したままである。本発明はカリウムチャンネルアンタゴニストとして有用である新規化合物に関する。特定の疾患、例えば、うつ病、記憶障害およびアルツハイマー病が神経伝達物質放出における障害の結果であることは信じられる。したがって、本発明のカリウムチャンネルアンタゴニストは細胞興奮剤として用いることができ、これは神経伝達物質、例えば、アセチルコリン、セロトニンおよびドーパミンの非特異的放出を刺激するはずである。強化された神経伝達物質放出はうつ病およびアルツハイマー病に関連する症状を逆転させるはずである。
【００７２】
本発明の範囲内にある化合物はカリウムチャンネルアンタゴニスト活性を示し、したがって、カリウムチャンネルの機能不全に関連する障害において有用である。幾つかの認知障害、例えば、アルツハイマー病、記憶喪失またはうつ病は神経伝達物質、例えば、セロトニン、ドーパミンまたはアセチルコリン等の強化された放出の恩恵を受けることがある。Ｍａｘｉ−Ｋチャンネルの遮断は細胞脱分極を維持し、したがって、これらの生命維持に必要な神経伝達物質の分泌を強化する。
【００７３】
本発明の化合物は、アルツハイマー病の治療において、抗コリンエステラーゼ剤、例えば、フィソスチグミン（エセリン）およびタクリン（テトラヒドロアミノクリジン）、抗知性薬、例えば、ピラセタム、オキシラセタム、エルゴロイドメシレート、選択的カルシウムチャンネル遮断剤、例えば、ニモジピン、またはモノアミンオキシダーゼＢ阻害剤、例えば、セレギリンと組み合わせることができる。本発明の化合物は、不整脈の治療において、アパミン、イベリオトキシン、カリブドトキシン、ノキシウストキシン、カリオトキシン、デンドロトキシン（類）、肥満細胞脱顆粒性（ＭＣＤ）ペプチド、β−ブンガロトキシン（β−ＢＴＸ）またはそれらの組合せと組み合わせることもできる。本発明の化合物は、さらに、グリブリド、グリピジド、トルブタミドまたはそれらの組合せと組み合わせて糖尿病を治療することもできる。
【００７４】
本明細書における例は請求される発明を説明するがそれを限定するものではない。請求される化合物の各々はカリウムチャンネルアンタゴニストであり、したがって、細胞を脱分極状態に維持して最大神経伝達物質放出を達成することが望ましい既述の神経学的障害において有用である。本発明において生成される化合物は適切かつ公知の医薬適合性の賦形剤と容易に組み合わされて組成物を生成し、これはヒトを含む哺乳動物に投与して有効なカリウムチャンネル遮断を達成することができる。
【００７５】
医薬において用いるため、式Ｉの化合物の塩は医薬適合性の塩である。しかしながら、他の塩も本発明による化合物またはそれらの医薬適合性の塩の調製において有用であり得る。本発明の化合物が酸性であるとき、適切な「医薬適合性の塩」は、無機塩基および有機塩基を含む医薬適合性の非毒性塩基から調製される塩を指す。無機塩基から誘導される塩には、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅、第二鉄、第一鉄、リチウム、マグネシウム、マンガン酸塩、マンガン、カリウム、ナトリウム、亜鉛等が含まれる。特に好ましいものは、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、カリウムおよびナトリウム塩である。医薬適合性の有機非毒性塩基から誘導される塩には、一級、二級および三級アミン、天然置換アミンを含む置換アミン、環状アミンおよび塩基性イオン交換樹脂、例えば、アルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ１−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミン等の塩が含まれる。
【００７６】
本発明の化合物が塩基性であるとき、塩は無機および有機酸を含む医薬適合性の非毒性酸から調製することができる。そのような酸には、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、ショウノウスルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グルタミン酸、臭化水素酸、塩化水素酸、イセチオン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムチン酸、硝酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸等が含まれる。特に好ましいものは、クエン酸、臭化水素酸、塩化水素酸、マレイン酸、リン酸、硫酸および酒石酸である。
【００７７】
上述の医薬適合性の塩および他の典型的な医薬適合性の塩の調製は、Ｂｅｒｇら，「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ，」  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．，１９７７：６６：１−１９によってより完全に記載されている。
【００７８】
ここで用いられる場合、「組成物」という用語は、指定された成分を指定された量含有する製品に加えて、指定された量の指定された成分の組合せから、直接または間接的に、得られるあらゆる製品を包含することが意図される。
【００７９】
本発明による化合物をヒト被験者に投与するとき、１日投薬量は、通常、処方する医師により、一般には個々の患者の年齢、体重、性別および応答の他に患者の症状の重篤性に従って変化する投薬量をもって決定される。
【００８０】
用いられるｍａｘｉ−Ｋ遮断剤は、治療上有効な量で、静脈内、皮下、局所、経皮、非経口または当業者に公知の他のあらゆる方法で投与することができる。眼用組成物が、溶液、懸濁液、軟膏、クリームの形態または固形挿入物として、眼への局所投与に好ましく採用される。この化合物の眼用処方は０．０１から５％、特には、０．５から２％の医薬を含有することができる。服薬量が眼内圧の低下、緑内障の治療、血流速度または酸素張力の増加において有効であるならば、より多量の投薬量、例えば、約１０％またはより少量の投薬量を用いることができる。１回服薬量には、０．００１から５．０ｍｇ、好ましくは０．００５から２．０ｍｇ、特には０．００５から１．０ｍｇの化合物をヒトの眼に適用することができる。
【００８１】
化合物を含有する医薬調製品は非毒性医薬有機担体、または非毒性医薬無機担体と都合よく混合することができる。医薬適合性の担体の典型は、例えば、水、水および水混和性溶媒、例えば、低級アルカノールもしくはアルアルカノールの混合液、植物油、ポリアルキレングリコール、石油ベースのゼリー、エチルセルロース、オレイン酸エチル、カルボキシメチル−セルロース、ポリビニルピロリドン、ミリスチン酸イソプロピルおよび他の通常用いられる許容し得る担体である。医薬調製品は非毒性補助物質、例えば、乳化剤、保存剤、湿潤剤、賦形剤（ｂｏｄｙｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）等、例えば、ポリエチレングリコール２００、３００、４００および６００、カルボワックス１，０００、１，５００、４，０００、６，０００および１０，０００、抗菌性化合物、例えば、四級アンモニウム化合物、非放射性滅菌特性を有することが公知であり、かつ使用中に非傷害性であるフェニル水銀塩、チメロサール、メチルおよびプロピルパラベン、ベンジルアルコール、フェニルエタノール、緩衝性成分、例えば、ホウ酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、グルコン酸バッファ、並びに他の通常の成分、例えば、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミン、オレイン酸塩、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミチレート、ジオクチルナトリウムスルホスクシネート、モノチオグリセロール、チオソルビトール、エチレンジアミン四酢酸等を含むこともできる。加えて、適切な眼用ビヒクルをこの目的のための担体媒体として用いることができ、これには通常のリン酸バッファビヒクル系、等張性ホウ酸ビヒクル、等張性塩化ナトリウムビヒクル、等張性ホウ酸ナトリウムビヒクル等が含まれる。医薬調製品は微粒子配合物の形態であってもよい。医薬調製品は固体挿入物の形態であってもよい。例えば、固体水溶性ポリマーを医薬の担体として用いることができる。挿入物の形成に用いられるポリマーは水溶性の非毒性ポリマー、例えば、セルロース誘導体、例えば、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、（ヒドロキシ低級アルキルセルロース）、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース；アクリレート、例えば、ポリアクリル酸塩、エチルアクリレート、ポリアクチルアミド；天然生成物、例えば、ゼラチン、アルギン酸塩、ペクチン、トラガカントゴム、カラヤゴム、コンドラス（ｃｈｏｎｄｒｕｓ）、寒天、アラビアゴム；デンプン誘導体、例えば、酢酸デンプン、ヒドロキシメチルデンプンエーテル、ヒドロキシプロピルデンプンに加えて、他の合成誘導体、例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメチルエーテル、ポリエチレンオキシド、中性化カルボポールおよびキサンタンガム、ゲランガム、並びに該ポリマーの混合物であり得る。
【００８２】
本発明の配合物の投与に適する被検体には、霊長類、ヒトおよび他の動物、特には、ヒトおよび家畜、例えば、ネコおよびイヌが含まれる。
【００８３】
医薬調製品は非毒性補助物質、例えば、使用中に非傷害性である抗菌性化合物、例えば、チメロサール、塩化ベンズアルコニウム、メチルおよびプロピルパラベン、臭化ベンジルドデシニウム、ベンジルアルコール、もしくはフェニルエタノール；緩衝性成分、例えば、塩化ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、もしくはグルコン酸バッファ；および他の通常の成分、例えば、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミン、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミチレート、エチレンジアミン四酢酸等を含むことができる。
【００８４】
眼用溶液または懸濁液は、眼内の許容し得るＩＯＰレベルを維持するのに必要となる度に投与することができる。哺乳動物の眼への投与は１日約１回もしくは２回であることが考慮される。
【００８５】
局所眼投与については、本発明の新規配合物は、単位投薬量が治療上有効な量の活性化合物または、組合せ療法の場合には、それらの数倍となるように配合された、溶液、ゲル、軟膏、懸濁液または固体挿入物の形態をとることができる。
【００８６】
説明の目的で示される以下の例は本発明の例証である。
【００８７】
調製例１
６−ＯＭｅ−インドールの合成
【００８８】
【化６】
2005532363.tif 000021
工程Ａ
参考文献：Ｍａｇｎｕｓら，Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １１０，７，２２４３，１９８８の改変。
【００８９】
４−メトキシ−２−ニトロ−アニリン（３５ｇ  −  Ａｌｄｒｉｃｈ）を２５０ｍＬのエタノールに懸濁させた後、１４ｍＬの濃硫酸を添加した。その懸濁液を０℃に冷却した後、イソアミルニトリル（３４ｍＬ）を徐々に添加した。イソアミルニトリルを完全に添加した後、反応混合物を０℃で１．５時間攪拌し、その時点で濃厚な白色スラリーが生じた。その反応混合物を濾過し、沈殿を２００ｍＬの冷エタノールで洗浄した後、５００ｍＬのエーテルで洗浄した。濾過ケークを減圧下で吸引乾燥した。５２ｇの自由流動粉末が集められ、それを次工程において直接用いた。
【００９０】
工程Ｂ
１Ｌフラスコに酢酸イソプロペニル（７５ｍＬ）、アセトン（４００ｍＬ）、０．２５Ｍ  ＨＣｌ（２５０ｍＬ）、Ｃｕ（ＩＩ）Ｃｌ２（４ｇ）およびＬｉＣｌ（１５ｇ）を入れた。これを０℃に冷却した後、上で得られたジアゾニウム塩を少しづつ添加した。その反応混合物を１８時間の反応時間を通して排気した。反応混合物を粘性油にまで濃縮し、酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈して水（５０ｍＬ）で洗浄した。有機相を集め、乾燥させてオレンジ−赤みがかった油にまで濃縮し、それをＳＧＣによる精製に処して無色の低融点生成物を得た（１６ｇ）。ＬＣＭＳ＝［Ｍ＋Ｈ］２０９。
【００９１】
工程Ｃ
工程Ｂにおいて得られた化合物を２００ｍＬの酢酸エチルに取った後、２０ｇのラネーニッケル（予め酢酸エチルで洗浄）を添加した。その反応混合物を大気圧で１２時間、水素と反応させた。ＴＬＣ分析が完全な変換を示した後、反応混合物をセライトのパッドで濾過し、これを酢酸エチルおよびメタノールで完全に洗浄した。合わせた有機抽出物を濃縮し、結晶性白色生成物を得た（１２ｇ）。ＬＣＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］１６２。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣＬ，５００ＭＨｚ））：７．８（ｂｓ，１Ｈ），７．４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝ＸＨｚ）；６．３−６．１（ｍ，３Ｈ）；３．８５（ｓ，３Ｈ）；２．４（ｓ，３Ｈ）。
【００９２】
本発明の化合物は、適切であるならば修正を加えて、スキームＡおよび／またはＢに従って作製することができる。実施例１から８もスキームＡおよび／またはＢに従って生成される。
【００９３】
【化７】
2005532363.tif 000022
Ｒ”はＣＨ３、ｔ−ブチルまたはエチルを表す。
【００９４】
工程Ａ１
６−メトキシインドール（１ｇ、６．２ミリモル  −  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ  ＆  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃａ（スイス））を１００ｍＬフラスコに入れた。排気およびアルゴンでのパージの後、１５ｍＬのジクロロメタンを添加し、次にＥｔＡｌＣｌ２（９．９２ミリモル、トルエン中の１．８Ｍ溶液５．５ｍＬ）を添加し、その反応混合物を１５分間攪拌した後、塩化メチルマグネシウム（６．２ミリモル、エーテル中の３Ｍ溶液２ｍＬ）を添加した。これをさらに１５分間攪拌し、その時点で反応物は濁った。必要とされる酸塩化物（６．５ミリモル）を徐々に添加し、反応混合物をさらに０．５時間攪拌した。その反応混合物を１００ｍＬの酢酸エチルで希釈し、塩化アンモニウムの飽和溶液２０ｍＬを添加することによって失活させた。有機相を分離し、水相を５０ｍＬづつの酢酸エチルで２回戻し抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。通常着色しているその残滓をヘキサン中２０％のエーテルと共に磨砕し、濾過して乾燥させ、全ての場合においてアシル化生成物を得た。この物質を工程Ｂにおいて直接用いた。
【００９５】
工程Ａ２
４．８ミリモルの上で得られた物質を５ｍＬの乾燥ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）に溶解し、次に１当量のＮａＨ（水素化ナトリウム）を添加した。全ての水素ガスの放出が停止した後（通常、約２０分を要する）、ブロモ酢酸メチル（１．５当量）を少しづつ添加した。その反応混合物をさらに１時間攪拌したところ、その後にＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）分析が全ての出発物質の完全な消費を示した。反応混合物を５０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、食塩水（１５ｍＬ×２）で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して油を得、それをＳＧ（シリカゲル）カラムに適用してヘキサン中２０％の酢酸エチルで溶出し、全ての場合においてアルキル化生成物を得た。
【００９６】
工程Ａ３
水酸化リチウム水溶液を用いて上で得られた物質のけん化を行った。２．８８ミリモルのエステルを３０ｍＬのＴＨＦ（テトラヒドロフラン）に溶解し、２当量のＬｉＯＨ（水酸化リチウム）を水中の１Ｍ溶液として添加した。その反応混合物を１時間激しく攪拌した。ＴＬＣ分析は完全な反応を示した。次に、その反応混合物をその元の容積の半分まで蒸発させ、５０ｍＬの酢酸エチルで希釈した。その後、１Ｍ  ＨＣｌ溶液を添加して水相のｐＨを２まで下げた。有機相を分離し、水相を１５ｍＬの酢酸エチルで２回戻し抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、固体になるまで濃縮した。これを、乾燥固体（全ての場合において約２．７ミリモル）を得るため、トルエンと共に反復蒸発させることによって完全に共沸させ、これでアミド形成反応に用いる準備が整った。
【００９７】
工程Ａ４
以下のようにペプチドカップリング試薬ＰｙＢＯＰ（［ブロモ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート］−  Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）を用いてアミド形成を達成した。典型的には、０．３ミリモルの出発酸を１００ｍＬフラスコに入れた後、ＰｙＢｏＰ（０．６ミリモル）および必要なアミノチアゾール（１．２当量、０．３６ミリモル）をアルゴンの下で添加した。溶媒アセトニトリル（２ｍＬ）を添加した後、Ｈｕｎｉｇｓ塩基（０．９ミリモル）を添加した。その反応物を密封し、１００℃に約１時間加熱したところ、その時点でＴＬＣ分析は完全な反応を示した。反応混合物を蒸発させ、１５ｍＬの酢酸エチルに再溶解した。これをシリカゲルの小栓に通し、さらに２０ｍＬの酢酸エチルで洗い流した。合わせた有機相を食塩水で洗浄し、分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させて濃縮した。その残滓を正常相または逆相カラムクロマトグラフィーによって精製した。
【００９８】
【化８】
2005532363.tif 000023
Ｒ”は上で説明される通りである。
【００９９】
工程Ｂ１
１ｇの６−メトキシインドール（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ  ＆  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃａ（スイス））を１０ｍＬのＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）に溶解した後、１．５当量のＮａＨ（９．３ミリモル、鉱物油中６０％の溶液３７２ｍｇ）を添加した。その反応混合物をｒｔで１時間攪拌した後、２当量のブロモ酢酸メチルまたはブロモ酢酸ｔ−ブチルを添加した。１時間後、ＴＬＣによると反応が完了し、標準的な水性ワークアップに処した。ＳＧＣ（シリカゲルクロマトグラフィー）による粗製物の精製で約４．０−４．５ミリモルの生成物を得た。
【０１００】
工程Ｂ２
上で得られた４．０ミリモルの生成物を１５ｍＬのジクロロメタンにアルゴンの下で溶解した。その反応混合物を０℃に冷却した後、１．２当量の二塩化エチルアルミニウムを添加した。０℃で１時間後、必要な酸塩化物（１．２当量）を添加し、その反応混合物を０℃でさらに１時間攪拌した。ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）分析はこの段階で完全な反応を示し、反応物を標準的な水性ワークアップに処した。ＳＧＣ（シリカゲルクロマトグラフィー）精製で約３．５ミリモルの生成物を得た。
【０１０１】
工程Ｂ３ａ（メチルエステルの加水分解）
上で得られたメチルエステル（３．５ミリモル）を２５ｍＬのＴＨＦ（テトラヒドロフラン）に溶解した後、ＬｉＯＨの１Ｍ水溶液１．５当量を添加した。その反応物を０．５時間攪拌したところ、その時点でＴＬＣ分析は完全な加水分解を示した。反応混合物を１５ｍＬの酢酸エチルで希釈し、２ｍＬの１Ｍ  ＨＣｌで酸性化した。有機抽出物を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させて濃縮した。その残滓をトルエン中に懸濁させ、２回蒸発させて酸を白色固体（３．３ミリモル）として得、それを次工程において直接用いた。
【０１０２】
工程Ｂ３ｂ（ｔ−ブチルエステルの加水分解）
上で得られたｔ−ブチルエステル（３．５ミリモル）を１０ｍＬのジクロロメタンに溶解した後、５ｍＬのＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）を添加した。その反応物をｒｔで１時間攪拌したところ、その時点でＴＬＣ分析は完全な反応を示した。溶媒を除去し、生じる残滓をトルエン中に再懸濁させ、乾燥するまで２回蒸発させて酸を白色固体（３．３ミリモル）として得、それを次工程において直接用いた。
【０１０３】
工程Ｂ４
以下のようにペプチドカップリング試薬ＰｙＢｏＰ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）を用いてアミド形成を達成した。典型的には、０．３ミリモルの出発酸を１００ｍＬフラスコに入れた後、ＰｙＢｏＰ（０．６ミリモル）および必要なアミノチアゾール（１．２当量．、０．３６ミリモル）をアルゴンの下で添加した。溶媒アセトニトリル（２ｍＬ）を添加した後、Ｈｕｎｉｇｓ塩基（０．９ミリモル）を添加した。その反応物を密封して１００℃に約１時間加熱したところ、その時点でＴＬＣ分析は完全な反応を示した。その反応混合物を蒸発させ、１５ｍＬの酢酸エチルに再溶解した。これをシリカゲルの小栓に通し、さらに２０ｍＬの酢酸エチルで洗い流した。合わせた有機相を食塩水で洗浄し、分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させて濃縮した。その残滓を正常相または逆相カラムクロマトグラフィーによって精製した。
【実施例１】
【０１０４】
【化９】
2005532363.tif 000024
【実施例２】
【０１０５】
【化１０】
2005532363.tif 000025
【実施例３】
【０１０６】
【化１１】
2005532363.tif 000026
【実施例４】
【０１０７】
【化１２】
2005532363.tif 000027
【実施例５】
【０１０８】
【化１３】
2005532363.tif 000028
【実施例６】
【０１０９】
【化１４】
2005532363.tif 000029
【実施例７】
【０１１０】
【化１５】
2005532363.tif 000030
【実施例８】
【０１１１】
【化１６】
2005532363.tif 000031
【実施例９】
【０１１２】
【化１７】
2005532363.tif 000032
2005532363.tif 000033
実施例１０から１２において説明される化合物は上記スキームＡおよびＢに示されるように調製したが、これらのスキームにおいて示されるアミノチアゾールの代わりに工程Ａ４またはＢ４のいずれかにおいて適切に置換されたアミンを用いた。
【実施例１０】
【０１１３】
【化１８】
2005532363.tif 000034
【実施例１１】
【０１１４】
【化１９】
2005532363.tif 000035
【実施例１２】
【０１１５】
【化２０】
2005532363.tif 000036
【実施例１３】
【０１１６】
【化２１】
2005532363.tif 000037
【実施例１４】
【０１１７】
【化２２】
2005532363.tif 000038
【０１１８】
【化２３】
2005532363.tif 000039
工程１  アリルアミノ−イミダゾリン
１０ｍＬのジクロロメタン中、室温でヨウ化水素酸２−メチルチオ−２−イミダゾリン（１ミリモル）をアリルアミン（２ミリモル）と混合した。その反応物を１２時間攪拌したところ、その時点でＴＬＣ分析は反応の完了を示した。反応混合物を濃縮し、残留する油をＳＧＣに適用してジクロロメタン中１−５％のメタノールで溶出した。０．９ミリモルの所望の生成物が油として得られた。
【０１１９】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：８．３９（１Ｈ，ｂｍ）；５．８（１Ｈ，ｍ）；５．２（２Ｈ，ｍ）；３．８（２Ｈ，ｂｍ）；３．６（４Ｈ，ｂｓ）。
【０１２０】
工程２
化合物Ｃ−１（１ｇ、１．８３ミリモル、スキームＡにおいて示されるように調製）を１００ｍＬフラスコに入れた後、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１０モル％）を添加した。１５ｍＬのアセトニトリルを添加した後、トリエチルアミン（２．５当量）およびアリルアミノイミダゾリン（１．２当量、２．２ミリモル）１を添加した。その反応混合物をアルゴンでパージし、密封して８０℃で７時間加熱したところ、その時点でＴＬＣ分析は反応の完了を示した。その反応混合物を濾過し、元の容積の２０％まで濃縮した。これを逆相ＨＰＬＣカラムに載せて精製し、本化合物Ｃ−２を得た。得られた生成物を水素化工程において用いた。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝５４３。
【０１２１】
工程３
上で得られた生成物をメタノール（１０ｍＬ）に溶解した後、Ｐｄ−Ｃ（１０％）を添加し、反応物を排気し、バルーンを用いて水素で戻しパージした。ＴＬＣ分析は１時間後に反応が完了したことを示した。その反応混合物をセライトのパッドで濾過した。濃縮および逆相ＨＰＬＣでの精製により、所望の化合物Ｃ−２を白色固体として得た。
【０１２２】
１Ｈ  ＮＭＲ：（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ８．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ）；７．７７（３Ｈ，ｍ）；７．５３（１Ｈ，ｂｓ）；７．３７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ）；６．９７（１Ｈ，ｍ）；６．９４（１Ｈ，ｍ）；５．５１（２Ｈ，ｂｓ）；４．３６（１Ｈ，ｂｓ）；３．８２（３Ｈ，ｓ）；３．６９（４Ｈ，ｂｓ）；３．２（２Ｈ，ｍ）；２．８（２Ｈ，ｍ）；１．９（２Ｈ，ｍ）；１．４５（２Ｈ，ｂｓ）；ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝５４５。
【０１２３】
【化２４】
2005532363.tif 000040
2005532363.tif 000041
手順
工程１
化合物Ｄ−２を上記一般スキームＡに説明されるように得た。
【０１２４】
工程２
化合物Ｄ−４を以下のように合成した：１．８ｇの化合物Ｄ−２を６ｍＬのＤＭＦに溶解した後、水素化ナトリウム（１．２当量）を添加した。反応物を室温で０．５時間攪拌した後、メチル−３−ブロモプロプロピオネートを添加した（１．５当量）。その反応物を０．５時間攪拌したところ、その時点でＴＬＣ分析は出発物質の完全な消費を示した。反応物を５０ｍＬの水に注ぎ入れて０．５時間攪拌し、その時点で形成された固体を濾過によって集めて完全に乾燥させた。生じる固体を３０ｍＬのＴＨＦに溶解した後、１Ｍ  ＬｉＯＨの水溶液を添加した。その反応物を１時間攪拌したところ、その時点でＴＬＣ分析は反応の完了を示した。溶媒を蒸発させ、酸性化することで生じる固体を集め、完全に乾燥させた後に次工程において用いた。
【０１２５】
工程３
１００ｍｇの工程２において得られた酸Ｄ−４を１００ｍＬフラスコに入れた後、ｐｙＢｏｐ（２当量）およびシクロヘキシルアミノチアゾール（１．２当量）およびＨｕｎｉｇｓ塩基（３．５当量）を添加した。用いられた溶媒はアセトニトリル（１０ｍＬ）であった。この反応物を不活性雰囲気中で１時間加熱した。標準的な水性および精製により、収率１９％の所望の化合物Ｄ−５［Ｍ＋Ｈ］＝５２２を得た。
【０１２６】
化合物Ｄ−６
（化合物Ｄ−５の調製について説明されたものに）類似する手順を１００ｍｇスケールで用いて、酸Ｄ−４をシクロプロピルメチルアミノチアゾールとカップリングさせ、化合物Ｄ−６を得た。［Ｍ＋Ｈ］＝４９４。
【０１２７】
化合物Ｄ−７
１００ｍｇの酸Ｄ−４をジクロロメタン１０ｍＬ中に１．５当量のジシクロヘキシルカルボジイミドで処理した。その反応混合物を加熱して１時間還流させた後、反応物を濃縮してシリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製し、６９％の所望の化合物Ｇ［Ｍ＋Ｈ］＝５６４を得た。
【実施例１５】
【０１２８】
【化２５】
2005532363.tif 000042
クロロアセトン（６．００グラム、６５ミリモル、使用前に塩基性アルミナを通して濾過）、フェノール１（１０．００グラム、６５ミリモル）および炭酸カリウム（８．９６グラム、６５ミリモル）の懸濁液をＤＭＦ中、室温、窒素雰囲気下で１時間攪拌した。次に、それを酢酸エチル／Ｈ２Ｏで希釈し、層を分離した。水層を１Ｎ  ＨＣｌで酸性化し、酢酸エチル（３×）で抽出した。次に、有機相を水（２×）、および食塩水（１×）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させて濾過し、蒸発させて中間体ａを得た。
【０１２９】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３５００ＭＨｚ）δ８．１４（ｔ，１Ｈ），７．５３（ｔ，１Ｈ），７．３５（ｄ，１Ｈ），７．２７（ｄ，１Ｈ），３．７８（ｓ，２Ｈ），２．３５（ｓ，３Ｈ）。
【０１３０】
中間体ａ（１．８４グラム、８．７５ミリモル）および塩酸４−トリフルオロメトキシフェニルヒドラジン（２．００グラム、４．７６ミリモル）を１００℃、酢酸（４０ｍＬ、０．２２Ｍ）中で１時間、窒素雰囲気下で攪拌し、４−および６−トリフルオロメトキシインドールの１：２混合物を得た。その反応物を室温に冷却して酢酸を減圧下で除去し、残滓を酢酸エチルで希釈して水（１×）および食塩水（１×）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過して蒸発させ、クロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル／１％酢酸、６：ｌ）の後に中間化合物ｂを黄色油として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３５００ＭＨｚ）δ８．４３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），８．１６（ｄｄ，１Ｈ），７．４６（ｄ，１Ｈ），７．２３（ｔ，１Ｈ），７．１４（ｔ，１Ｈ），７．０３（ｄ，１Ｈ），６．７４（ｄ，１Ｈ），２．５４（ｓ，３Ｈ）。
【０１３１】
トリフルオロ酢酸（３ｍＬ、０．２６Ｍ）中の中間体ｂ（０．２９グラム、０．７８ミリモル）の溶液を５０℃、窒素雰囲気下で２時間加熱した。この時間の後、反応物を室温に冷却し、酢酸エチルで希釈して１Ｎ  ＮａＯＨ（２×）、および食塩水（１×）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させて濾過し、蒸発させて化合物ｃを得た。
【０１３２】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３５００ＭＨｚ）δ８．０１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．４９（ｄ，１Ｈ），７．１７（ｓ，１Ｈ），６．９９（ｄ，１Ｈ），６．２６（ｓ，１Ｈ），２．４６（ｓ，３Ｈ）。
【０１３３】
塩化亜鉛（０．２３グラム、１．６６ミリモル）および臭化エチルマグネシウム（エーテル中の３Ｍ溶液０．２９ｍＬ、０．８７ミリモル）をＣＨ２Ｃｌ２中の化合物ｃ（０．１６グラム、０．７４ミリモル）の溶液に添加した。生じる混合物を室温、窒素雰囲気下で１時間攪拌した。その後、塩化４−クロロベンジル（０．２１グラム、１．１８ミリモル）を添加し、攪拌を１時間継続した。塩化アルミニウム（０．０５３グラム、０．３９ミリモル）を添加し、その反応混合物を３時間攪拌した。その後、ＮＨ４Ｃｌ（水溶液）で反応を停止させ、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈して１Ｎ  ＮａＯＨ（１×）および食塩水（３×）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過して蒸発させ、クロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、４：１）の後に化合物ｄを得た。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３５００ＭＨｚ）δ８．５４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．７３（ｄ，２Ｈ），７．４８（ｄ，２Ｈ），７．４０（ｄ，１Ｈ），７．２４（ｓ，１Ｈ），７．０２（ｄ，１Ｈ），２．６０（ｓ，３Ｈ）。
【０１３４】
化合物ｄ（１０１ミリグラム、０．２８６ミリモル）、ブロモ酢酸メチル（５１ミリグラム、０．３４２ミリモル）およびＣｓ２ＣＯ３（１２１ミリグラム、０．３４２ミリモル）の溶液をＤＭＦ（１．４ｍＬ）中、室温で１８時間攪拌した。その反応物をエーテルで希釈した後、水（３×）、食塩水（１×）で洗浄し、乾燥させ、濾過し、蒸発させて明黄色固体を得、それを精製することなくけん化した。そのエステルをＮａＯＨ（０．３４０ｍＬ、１．０Ｍ水溶液）と共にＴＨＦ／ＭｅＯＨ（３：１）中で１８時間攪拌した。その反応物をエーテルで希釈し、１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ３に酸性化した。有機層を分離し、水（２×）、食塩水（１×）で洗浄した後、乾燥させ、濾過し、蒸発させて化合物ｅを得た。
【０１３５】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３５００ＭＨｚ）δ７．７４（ｄ，８．６Ｈｚ，２Ｈ），７．４５（ｄ，８．６Ｈｚ，２Ｈ），７．３３（ｄ，８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．１３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．０４（ｂｒ  ｄ，８．７Ｈｚ），４．９２（ｓ，２Ｈ），２．５３（ｓ，３Ｈ）。
【０１３６】
トリエチルアミン（４２μＬ、０．３０ミリモル）、ＰｙＢｒＯＰ（７０ｍｇ、０．１５ミリモル）、および化合物ｅ（３１ミリグラム、０．０７５ミリモル）をアセトニトリル（２００μＬ）中のＮ−シクロヘキシル−２−アミノチアゾール（１４ミリグラム、０．０７５ミリモル）の懸濁液に連続的に添加した。その透明褐色溶液を１００℃で１．５時間加熱した。その反応物を室温に冷却し、酢酸エチルで希釈した。酢酸エチルを水（１×）、および食塩水（１×）で洗浄した後、乾燥させ、濾過し、蒸発させて粗製生成物を得、それをＣ−１８  ＨＰＬＣ（アセトニトリル：水、１０：９０−１００：０、１５分にわたる勾配溶出）によって精製して化合物ｆを得た。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３５００ＭＨｚ）δ７．８３（ｄ，６．３Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｄ，８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．５２（ｄ，３．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｄ，８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．３１（ｄ，８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），６．９７（ｂｒ  ｄ，８．７Ｈｚ，１Ｈ），４．５５（ｓ，２Ｈ），４．５３（ｍ，１Ｈ），２．４６（ｓ，３Ｈ），１．９３（ｍ，２Ｈ），１．８１（ｍ，２Ｈ），１．６４（ｍ，１Ｈ），１．３７（ｍ，４Ｈ），１．０３（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（Ｍ＋１）５７６。
【実施例１６】
【０１３７】
【化２６】
2005532363.tif 000043
【実施例１７】
【０１３８】
【化２７】
2005532363.tif 000044
【実施例１８】
【０１３９】
【化２８】
2005532363.tif 000045
【実施例１９】
【０１４０】
【化２９】
2005532363.tif 000046
【実施例２０】
【０１４１】
【化３０】
2005532363.tif 000047
【実施例２１】
【０１４２】
【化３１】
2005532363.tif 000048
【実施例２２】
【０１４３】
【化３２】
2005532363.tif 000049
【実施例２３】
【０１４４】
【化３３】
2005532363.tif 000050
【実施例２４】
【０１４５】
【化３４】
2005532363.tif 000051
【実施例２５】
【０１４６】
【化３５】
2005532363.tif 000052
【実施例２６】
【０１４７】
【化３６】
2005532363.tif 000053
【実施例２７】
【０１４８】
【化３７】
2005532363.tif 000054
【実施例２８】
【０１４９】
【化３８】
2005532363.tif 000055
【実施例２９】
【０１５０】
【化３９】
2005532363.tif 000056
【実施例３０】
【０１５１】
【化４０】
2005532363.tif 000057
【実施例３１】
【０１５２】
【化４１】
2005532363.tif 000058
【実施例３２】
【０１５３】
【化４２】
2005532363.tif 000059
【実施例３３】
【０１５４】
【化４３】
2005532363.tif 000060
【実施例３４】
【０１５５】
【化４４】
2005532363.tif 000061
【実施例３５】
【０１５６】
【化４５】
2005532363.tif 000062
【実施例３６】
【０１５７】
【化４６】
2005532363.tif 000063
【実施例３７】
【０１５８】
【化４７】
2005532363.tif 000064
以下の化合物は実施例３５を当業者に公知の方法で修正することによって作製される。
【０１５９】
【化４８】
2005532363.tif 000065
以下のスキームＥ、ＦおよびＧを用いて、表７から１０中の化合物を調製した：
【０１６０】
【化４９】
2005532363.tif 000066
【０１６１】
【化５０】
2005532363.tif 000067
【０１６２】
【化５１】
2005532363.tif 000068
【０１６３】
【表２９】
2005532363.tif 000069
【０１６４】
【表３０】
2005532363.tif 000070
【０１６５】
【表３１】
2005532363.tif 000071
【０１６６】
【表３２】
2005532363.tif 000072
【０１６７】
【化５２】
2005532363.tif 000073
【０１６８】
【化５３】
2005532363.tif 000074
スキームＨおよびＩを用いて、表１１および１２中の化合物を調製した。
【０１６９】
【表３３】
2005532363.tif 000075
【０１７０】
【表３４】
2005532363.tif 000076
【０１７１】
機能的アッセイ
Ａ、Ｍａｘｉ−Ｋチャンネル
化合物の活性は以下のアッセイによって定量することもできる。
【０１７２】
Ｍａｘｉ−Ｋチャンネルの阻害剤の特定は、ＨＥＫ−２９３細胞におけるチャンネルのアルファおよびベータ１サブユニット両者のトランスフェクション後、およびＨＥＫ−２９３細胞の内在性カリウム伝導性を排除するカリウムチャンネル阻害剤とインキュベートした後に細胞静止電位を設定する発現Ｍａｘｉ−Ｋチャンネルの能力に基づく。ｍａｘｉ−Ｋチャンネルが存在しない状態において、トランスフェクトされたＨＥＫ−２９３細胞はｍａｘｉ−Ｋチャンネルの活動の結果であるＥＫ（−８０ｍＶ）に近い、内部が負である過分極膜電位を示す。ｍａｘｉ−Ｋチャンネル遮断剤とのインキュベーションによるＭａｘｉ−Ｋチャンネルの遮断は細胞の脱分極を生じる。膜電位の変化は、２成分、供与体クマリン（ＣＣ２ＤＭＰＥ）および受容体オキサノール（ＤｉＳＢＡＣ２（３））を用いる電圧感受性蛍光共鳴エネルギー伝達（ＦＲＥＴ）色素対で決定することができる。
【０１７３】
オキサノールは親油性アニオンであり、膜電位に従って膜全体に分布する。正常条件下で、細胞の内側が外側に対して負であるとき、オキサノールは膜の外小葉に蓄積し、クマリンの励起がＦＲＥＴを生じる。膜脱分極を導く条件はオキサノールを細胞の内側に再分布させ、結果として、ＦＲＥＴが減少する。したがって、比の変化（供与体／受容体）が膜脱分極の後に増加し、それにより試験化合物がｍａｘｉ−Ｋチャンネルを活発に遮断するかどうかが決定される。
【０１７４】
ＨＥＫ−２９３細胞は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）、１２３０１  Ｐａｒｋｌａｗｎ  Ｄｒｉｖｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，２０８５２から、受付番号ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５７３で得た。微生物に対する公共アクセスに関するあらゆる制限は特許発行時に取消不能に取り除かれる。ＨＥＫ−２９３細胞におけるｍａｘｉ−Ｋチャンネルのアルファおよびベータ１サブユニットのトランスフェクションは以下のように行った：ＨＥＫ−２９３細胞を１００ｍｍ組織培養処理シャーレにシャーレ当たり３×１０６細胞の密度で塗布し、合計で５枚のシャーレを調製した。１０％ウシ胎児血清、１×Ｌ−グルタミン、および１×ペニシリン／ストレプトマイシンを補足したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）からなる培地中、３７℃、１０％ＣＯ２で細胞を成長させた。Ｍａｘｉ−Ｋ  ｈα（ｐＣＩｎｅｏ）およびＭａｘｉ−Ｋ  ｈβ１（ｐＩＲＥＳｐｕｒｏ）ＤＮＡでトランスフェクトするため、１５０μｌ  ＦｕＧＥＮＥ６（商標）を１０ｍｌの血清非含有／フェノールレッド非含有ＤＭＥＭに滴下により添加し、室温で５分間インキュベートした。次に、そのＦｕＧＥＮＥ６（商標）溶液を２５μｇの各プラスミドＤＮＡを含有するＤＮＡ溶液に滴下により添加し、室温で３０分間インキュベートした。このインキュベーション期間の後、２ｍｌのＦｕＧＥＮＥ６（商標）／ＤＮＡ溶液を細胞の各プレートに滴下により添加し、上記と同じ条件下で細胞を２日増殖させた。第２日の最後に、細胞を６００μｇ／ｍｌ  Ｇ４１８および０．７５μｇ／ｍｌプロマイシンの両者を補足したＤＭＥＭからなる選択培地の下に置いた。細胞を別々のコロニーが形成されるまで成長させた。５つのコロニーを集め、６ウェル組織培養処理シャーレに移した。合計で７５のコロニーを集めた。集密単層が得られるまで細胞を増殖させた。その後、ｍａｘｉ−Ｋチャンネル・アルファおよびベータ１サブユニットの存在について、１２５Ｉ−イベリオトキシン−Ｄ１９Ｙ／Ｙ３６Ｆのチャンネルへの結合を監視するアッセイを用いて細胞を試験した。次に、１２５Ｉ−イベリオトキシン−Ｄ１９Ｙ／Ｙ３６Ｆ結合活性を表す細胞を、トランスフェクトされたＨＥＫ−２９３細胞の膜電位を制御するｍａｘｉ−Ｋチャンネルの能力を蛍光共鳴エネルギー伝達（ＦＲＥＴ）ＡＢＳ技術を用いてＶＩＰＲ機器で監視する機能的アッセイにおいて評価した。最大の信号対雑音比を示すコロニーを制限希釈に処した。このため、細胞を約５細胞／ｍｌで再懸濁させ、２００μｌを９６ウェル組織培養処理プレートの個々のウェルにおいて、ウェル当たり約１個の細胞を加えて、平板培養した。合計で２枚の９６ウェルプレートを作製した。集密単層が形成されたとき、細胞を６ウェル組織培養処理プレートに移した。合計で６２ウェルを移した。集密単層が得られたとき、ＦＲＥＴ−機能的アッセイを用いて細胞を試験した。最良の信号対雑音比を示すトランスフェクトされた細胞を特定し、次の機能的アッセイにおいて用いた。
【０１７５】
機能的アッセイについて：
次に、トランスフェクトされた細胞（２Ｅ＋０６細胞／ｍＬ）を９６ウェル・ポリ−Ｄ−リジンプレートに約１００，０００細胞／ウェルの密度で平板培養し、約１６から２４時間インキュベートする。培地を細胞から吸引除去し、細胞を１００μｌのダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（Ｄ−ＰＢＳ）で１回洗浄する。ウェル当たり１００マイクロリットルの、Ｄ−ＰＢＳ中の約９μＭクマリン（ＣＣ２ＤＭＰＥ）−０．０２％プルロニク−１２７を添加し、ウェルを暗所において約３０分間インキュベートする。細胞を１００μｌのダルベッコリン酸緩衝生理食塩水で２回洗浄し、１００μｌの、１４０  ＮａＣｌ、０．１ＫＣｌ、２ＣａＣｌ２、１ＭｇＣｌ２、２０ヘペス−ＮａＯＨ、ｐＨ７．４、１０  グルコース（ｍＭ）中約４．５μＭのオキサノール（ＤｉＳＢＡＣ２（３））を添加する。ＨＥＫ−２９３細胞の内在性カリウム伝導性の阻害剤３マイクロモルを添加する。ｍａｘｉ−Ｋチャンネル遮断剤を添加し（約０．０１マイクロモルから約１０マイクロモル）、細胞を室温で暗所において約３０分間インキュベートする。
【０１７６】
プレートを電圧／イオン・プローブ・リーダー（ＶＩＰＲ）機器にかけ、ＣＣ２ＤＭＰＥおよびＤｉＳＢＡＣ２（３）の両者の蛍光放射を１０秒間記録する。この時点で、１００μｌの高カリウム溶液（ｍＭ）：１４０ＫＣｌ、２ＣａＣｌ２、１ＭｇＣｌ２、２０ヘペス−ＫＯＨ、ｐＨ７．４、１０  グルコースを添加し、両色素の蛍光放射をさらに１０秒間記録する。比ＣＣ２ＤＭＰＥ／ＤｉＳＢＡＣ２（３）は、高カリウム溶液を添加する前は１に等しい。ｍａｘｉ−Ｋチャンネル阻害剤が存在しない状態において、高カリウム溶液を添加した後の比は１．６５−２．０の間を変化する。既知標準または試験化合物のいずれかによってＭａｘｉ−Ｋチャンネルが完全に阻害されているとき、この比は１のままである。したがって、蛍光比の濃度依存性の変化を監視することにより、Ｍａｘｉ−Ｋチャンネル阻害剤の活性を滴定することができる。
【０１７７】
本発明の化合物は、約１ｎＭから約２０μＭ、より好ましくは、約１０ｎＭから約５００ｎＭの範囲のＩＣ５０で蛍光比の濃度依存性阻害を生じることが見出された。
Ｂ．高伝導性カルシウム活性化カリウムチャンネルに対する化合物効果の電気生理学的アッセイ
方法：
高伝導性カルシウム活性化カリウム（ｍａｘｉ−Ｋ）チャンネルを介して流れる電流のパッチクランプ記録を、ｍａｘｉ−Ｋチャンネルのα−サブユニットを恒常的に発現するＣＨＯ細胞またはα−およびβ−サブユニットの両者を恒常的に発現するＨＥＫ２９３細胞から切除した膜パッチから通常の技術（Ｈａｍｉｌｌら，１９８１，Ｐｆｌｕｇｅｒｓ  Ａｒｃｈｉｖ．  ３９１，８５−１００）を用いて室温で作製した。ガラス毛細管（Ｇａｒｎｅｒ＃７０５２またはＤｒｕｍｍｏｎｄカスタム・ホウケイ酸ガラス１−０１４−１３２０）を２段階で引いて約１−２ミクロンの先端径を有するマイクロピペットを得た。ピペットを、典型的には、１５０ＫＣｌ、１０ヘペス（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンメタンスルホン酸）、１Ｍｇ、０．０１Ｃａ（ｍＭ）を含有し、ＫＯＨでｐＨ７．２０に調整した溶液を充填した。原形質膜およびピペットの間に大抵抗（＞１０９オーム）シールを形成した後、ピペットを細胞から引き抜き、切除された裏返しの膜パッチを形成した。このパッチを、１５０ＫＣｌ、１０ヘペス、５  ＥＧＴＡ（エチレングリコールビス（β−アミノエチルエーテル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸）、１−５μＭの遊離Ｃａ濃度を得るのに十分なＣａを含有し（ｍＭ）、ＫＯＨでｐＨを７．２に調整した浴溶液中に切り取った。例えば、４．１９３ｍＭＣａを添加して２２℃で１μＭの遊離濃度を得た。ＥＰＣ９増幅器（ＨＥＫＡ  Ｅｌｅｋｔｒｏｎｉｃ、Ｌａｍｂｒｅｃｔ、ドイツ）を電圧の制御および膜パッチ全体を流れる電流の測定に用いた。ヘッドステージへの入力をＡｇ／ＡｇＣｌ線でピペット溶液に接続し、増幅器グランドを、０．２ＭＫＣｌに溶解した寒天を充填したチューブで覆われたＡｇ／ＡｇＣｌ線で浴溶液に接続した。ｍａｘｉ−Ｋ電流の素性は膜電位および細胞内カルシウム濃度に対するチャンネル開放の可能性の感度によって確認した。
【０１７８】
データの取得はＰＵＬＳＥソフトウェア（ＨＥＫＡ  Ｅｌｅｋｔｒｏｉｃ）によって制御し、ＰＵＬＳＥＦＩＴ（ＨＥＫＡ  Ｅｌｅｋｔｒｏｎｉｃ）およびＩｇｏｒ（Ｗａｖｅｍｅｔｒｉｃｓ、Ｏｓｗｅｇｏ、ＯＲ）ソフトウェアを用いる後の解析のためにＭａｃＩｎｔｏｓｈコンピュータ（Ａｐｐｌｅ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒｓ）のハードドライブに保存した。
【０１７９】
結果：
ｍａｘｉ−Ｋチャンネルに対する本発明の化合物の効果を切除された裏返し膜パッチにおいて浴溶液の一定灌流で調べた。膜電位は−８０ｍＶで保持し、ｍａｘｉ−Ｋチャンネルを一時的に開放するため正膜電位（典型的には、＋５０ｍＶ）までの短い（１００−２００ｍｓ）電圧ステップを１５秒毎に１回印加した。各々の実験における陽性対照として、カルシウムを添加することなしに１ｍＭ  ＥＧＴＡを標準浴溶液に添加することによって作製された低濃度のカルシウム（＜１０ｎＭ）にパッチを一時的に晒した後にパルス電位でｍａｘｉ−Ｋ電流を排除した。各々の実験において遮断されたチャンネルの割合を、膜パッチの内側に指定された化合物を適用することによって生じるピーク電流の減少から算出した。遮断の安定状態レベルが達成されるまで化合物を適用した。各化合物濃度で得られる遮断率をＨｉｌｌ式でフィットさせることにより、チャンネル遮断のＫＩ値を算出した。本発明において説明される化合物によるチャンネル遮断のＫＩ値は０．０１ｎＭから１０μＭを上回る範囲をとる。
【国際調査報告】
2005532363.tif 000095