(57)【要約】【目的】被験者から取得した体液のサンプル中にあるポリペプチドを観察するため質量分析を使用して、感染性海綿状脳症（ＴＳＥ）を診断する。ポリペプチドは、ＴＳＥ感染被験者及び非感染被験者の体液では相違して含まれており、３５００から３００００の範囲の分子量を有する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
感染性海綿状脳症（ＴＳＥ）または該ＴＳＥを患っている疑いのある被験者においてその可能性の診断方法は、
前記被験者から取り出した体液のサンプルを質量分析にかけて、それにより該サンプルにおけるポリペプチドのテスト量を決定し、
前記テスト量が前記ＴＳＥの診断に対応するか否かを判断することを備え、
前記ポリペプチドは、ＴＳＥ感染被験者と非感染被験者の前記体液で相違して含まれており、３５００から３００００までの範囲で分子量を有する。
【請求項２】
前記ポリペプチドは、ＴＳＥ感染被験者の体液に存在し、非ＴＳＥ感染被験者の体液には存在せず、これにより体液サンプル中の前記ポリペプチドの存在がＴＳＥであることを示す請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ポリペプチドは、ＴＳＥ感染被験者の体液に存在せず、非ＴＳＥ感染被験者の体液には存在し、これにより体液サンプル中の前記ポリペプチドの非存在がＴＳＥであることを示す請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記質量分析は、レーザー脱離／イオン化質量分析である請求項１から３のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記サンプルは、固定化金属親和性捕獲（ＩＭＡＣ）、該ポリペプチドと結合する疎水性、強アニオン性、または弱カチオン性交換表面を有するプロープで吸収される請求項１から４のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記ポリペプチドは、表面増幅レーザー脱離／イオン化（ＳＥＬＤＩ）及び飛行時間型質量分析法（ＴＯＦ−ＭＳ）によって決定される請求項１から５のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記体液は、脳脊髄液、血漿、血清、血液、または涙である請求項１から６のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
複数の前記ポリペプチドは前記サンプル内で決定される請求項１から７のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記ＴＳＥは、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）である請求項１から８のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
約４７８０、約６７００、約８６００、または約１３３７５の分子量を有する１またはそれより多くのそれぞれのポリペプチドが決定され、そのようなポリペプチドの１つまたはそれより多い存在がＣＪＤであることを示す請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
約３９７０、約３９９０、約４２９４、約４４７８、約１００７５、約１１７３０、約１４０４３、または約１７８３９の分子量をそれぞれ有する１つまたはそれより多いポリペプチドが決定され、そのようなポリペプチドの１つまたはそれより多い不存在がＣＪＤを示す請求項９、または１０に記載の方法。
【請求項１２】
約７７００の分子量を有するポリペプチドが決定され、そのようなポリペプチドの存在がＣＪＤであることを示す請求項９から１１のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
約３２９５、約４３１５、約４４３６、約６２００、約８９３６、約９１０７、約９１４５、約９１８５、約９４５４、または約１３５５０Ｄａの分子量を有するポリペプチドが決定され、そのようなポリペプチドの１つ以上の不存在または減少量がＣＪＤであることを示す請求項９から１２のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
約７５７４、約７９３０、約７９７５、または約８０２０Ｄａの分子量を有するポリペプチドが決定され、そのようなポリペプチドの１つ以上の存在または増加量がＣＪＤであることを示す請求項９から１３のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＴＳＥは牛海綿状脳症（ＢＳＥ）である請求項１から８のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ポリペプチドは約１０２２０の分子量を有し、該ポリペプチドの存在がＢＳＥであることを示す請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＴＳＥはスクレピーである請求項１から８のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
診断、前兆、治療への適用に対して、ＴＳＥ感染被験者と非感染被験者の体液で相違して含まれるポリペプチドの使用であって、
前記ポリペプチドは、３５００から３００００までの範囲で分子量を有し、質量分析により決定することができる。
【請求項１９】
診断、前兆、治療への適用に対しての材料の使用であって、
該材料は、ＴＳＥ感染被験者と非感染被験者の体液で相違して含まれるポリペプチドを認識したり、該ポリペプチドと結合したり、または該ポリペプチドと親和性を有したりし、
前ポリペプチドは、３５００から３００００までの範囲で分子量を有し、質量分析により決定することができる。
【請求項２０】
前記材料は、抗体または抗体チップである請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
ＴＳＥの診断で使用するためのキットであって、体液のサンプルを受け取って、質量分析で配置するためのプローブからなり、
それにより該サンプルでのポリペプチドのテスト量を決定し、
該ポリペプチドはＴＳＥ感染被験者とＴＳＥ非感染の被験者との体液で相違して含まれており、
該ポリペプチドは、３５００から３００００までの範囲で分子量を有する。
【請求項２２】
前記プローブは前記ポリペプチドの吸収のための吸着剤を含む請求項２１に記載のキット。
【請求項２３】
さらに、前記プローブから非結合または弱い結合の前記材料を取り除くための洗浄溶液を備える請求項２２に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、感染性海綿状脳症（ＴＳＥ）の診断法に関する。
【背景技術】
【０００２】
感染性海綿状脳症（ＴＳＥｓ）は、中枢神経系の神経変性病である。それらは、伝染し、遺伝し、または、散発的に発病する可能性があり、そして動物でも観察され、例えば牛における牛海綿状脳症（ＢＳＥ）または羊におけるスクレピーであり、人間におけるクロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群、致死性家族性不眠症、またはクールと同様である。それらは、長い潜伏期間を有しており、運動失調、痴呆、精神障害、及び死へと導く。神経病的変化は、脳組織の空胞変性、アストログリオーシス（ａｓｔｒｏｇｌｉｏｓｉｓ）、及びアミロイド斑形成を含んでいる。これらの病気は、生前に発症することを診断することは困難である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
ＣＪＤ患者の脳脊髄液（ＣＳＦ）は、２次元ポリアクリルアミドゲル電気泳動［Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，Ｍ．Ｇ．Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３１５，２７９（１９８６），Ｈｓｉｃｋ，Ｇ．，Ｋｅｎｎｅｙ，Ｋ．，Ｇｉｂｂｓ，Ｃ．Ｊ．，Ｌｅｅ，Ｋ．Ｈ．＆Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，Ｍ．Ｂ．Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３３５，９２４（１９９６）．］によって、２つの付加したポリペプチド（１４−３−３ポリペプチドとして知られている）を示す。それらの１４−３−３ポリペプチドの作用は、ＴＳＥでははっきりしないままである。それらは、ＣＪＤ診断の進歩のために生前検査で使用することができるが、特異性が低い。
【０００４】
ＰＣＴ明細書ＷＯ９８／２３９６２及び９８／３２７１０と、Ｓｃｈｍｅｒｒ，Ｍ．Ｊ．，ｔｈｅ  Ｂｅｃｋｍａｎｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｐａｃｅ  Ｓｅｔｔｅｒ  Ｎｅｗｓｌｅｔｔｅｒ  ３（２），１−４（Ｊｕｎｅ  １９９９）とに記載されているように、（ＣＪＤに関連のある）プリオンタンパク質の異常形成に対してモノクローナル抗体を利用することができ、また酵素免疫測定法において使用することができるが、これらの方法はまだ十分に発展していない。
【０００５】
ＰＣＴ／ＥＰ  ０１／０２８９４は、タンパク質（Ｈ−ＦＡＢＰまたはＢ−ＦＡＢＰ）と結合している心臓または脳脂肪酸の濃度が体液のサンプルで決定されるＴＳＥｓに対する診断分析と関係する。
【０００６】
ＵＳ−Ａ−６２２５０４７には、差異マップを生成するためにリテンテイトクロマトグラフィーの使用が記載されており、特に、２つのサンプル間で相違する分析物を同定する方法が記載されている。そこに記載されている１つの特殊な方法は、レーザー脱離質量分析法である。
【０００７】
ＷＯ０１／２５７９１には、前立腺ガン診断を支援するための方法が記載されており、これはポリペプチドマーカーのテスト量を決めるものであり、このポリペプチドマーカーは、前立腺ガン患者と前立腺ガン患者でない被験者とのサンプル内に相違するものが存在する。マーカーは質量分析法、好ましくはレーザー脱離質量分析法を使って決められる。
【０００８】
体液に対する新しい非侵襲性ＴＳＥマーカー（特に、血液中のＣＪＤ及びＢＳＥマーカー）の発達とマーカーを決定する新しい方法により、臨床医学者が早期診断を確立するのを手助けすることであろう。この問題は、今、本発明によって解決される。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、感染性海綿状脳症（ＴＳＥ）の診断方法、またはＴＳＥを患っている疑いのある被験者においてその可能性の診断方法を提供する。その診断方法は、被験者から取り出した体液のサンプルを質量分析し、それによりサンプル中のポリペプチドのテスト量を決定することからなっている。そのポリペプチドはＴＳＥ感染被験者とＴＳＥ非感染被験者との体液とで相違して含まれており、３５００から３００００の範囲の分子量を有しており、テスト量はＴＳＥの診断と整合性をとるか否かで決定される。
【００１０】
本発明は、また、ＴＳＥ感染被験者とＴＳＥ非感染被験者との体液において相違して含まれているポリペプチドであって、３５００から３００００の範囲の分子量を有しており、診断、前兆、治療的応用のために、質量分析によって決定可能なポリペプチドの使用を提供する。
【００１１】
本発明は、さらに、ＴＳＥの診断で使用するためのキットを提供する。このキットは、体液のサンプルを受け取り、質量分析で配置するためのプローブからなり、それによりサンプル中のポリペプチドのテスト量を決定する。そのポリペプチドはＴＳＥ感染した被験者とＴＳＥ非感染の被験者との体液において相違して含まれており、３５００から３００００の範囲の分子量を有している。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明は、感染性海綿状脳症（ＴＳＥ）の診断方法、またはＴＳＥを患っている疑いのある被験者においてその可能性の診断方法を提供する。被験者から取り出した体液のサンプルを質量分析にかけて、ＴＳＥ感染被験者と非感染被験者の体液に相違して含まれるポリペプチドマーカーのサンプルにおける存在または非存在を決定する。ポリペプチドマーカーは、３５００から３００００まで、好ましくは３９００から１８０００までの範囲の分子量を有しており、マーカーの存在または非存在がＴＳＥであるかの指針となる。
【００１３】
この方法は、ＴＳＥのすべての型に適用することができ、それを患っている、もしくは患いの疑いのあるあらゆる人間または動物に適用することができる。この方法は、人間の患者におけるＣＪＤ、特に新しい変異ＣＪＤや、牛等の反芻動物おけるＢＳＥや、羊におけるスクレピーのように他の動物におけるＢＳＥに似た症状の診断に特に適用することができる。
【００１４】
ポリペプチドという用語は、例えば、炭水化物、リン酸塩、硫酸塩の非ペプチド残基の付加、または他の翻訳後の修飾による修飾されたペプチドだけでなく、タンパク質とタンパク質フラグメントを含む。
【００１５】
サンプルは、ポリペプチドとプローブの吸収性材料との間の結合ができる条件下でプローブに吸収される。吸収性材料は、金属イオンと錯化する金属キレート基から構成されるのが好ましく、好ましい金属は銅である。ポリペプチドの検出の前に、プローブと非結合の、または弱い結合の材料は洗浄溶液で取り除かれ、それにより、サンプル中のポリペプチドが豊富になる。サンプルは、ポリペプチドと結合することができる固定化金属親和性捕獲（ＩＭＡＣ）表面を有するプローブに吸収されるのが好ましい。サンプルは、また、ポリペプチドを結合することができる条件下で、疎水性、強アニオン性、または弱カチオン性交換表面を有するプローブに吸収される。プローブは、いくつかの吸着穴を有する細長い片からなり、分光器に入れられ、それからその中で移動して、イオン化手段（例えば、レーザー）によって、各片は順に打たれ、分光器により読み出される。ポリペプチドは、表面増幅レーザー脱離／イオン化（ＳＥＬＤＩ）及び飛行時間型質量分析法（ＴＯＦ−ＭＳ）によって決定されるのが好ましい。
【００１６】
原理的には、どのような体液でも診断のためのサンプルを提供することに使用することができるが、好ましくは、体液は脳脊髄液（ＣＳＦ）、血漿、血清、血液、尿、または涙である。
【００１７】
本発明の１つの実施形態において、ＴＳＥは、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）である。この場合、ポリペプチドは約４７８０、約６７００、約８６００、または約１３３７５の分子量を有しているのが好ましく、そのようなポリペプチドの１つまたはそれより多い存在がＣＪＤであることを示す。二者択一的に、約３９７０、約３９９０、約４２９４、約４４７８、約１００７５、約１１７３０、約１４０４３、または約１７８３９の分子量をそれぞれ有する１つまたはそれより多いポリペプチドが決定され、そのようなポリペプチドの１つまたはそれより多い欠如がＣＪＤであることを示す。さらに、二者択一的に、約７７００の分子量を有するポリペプチドが決定され、そのようなポリペプチドの存在がＣＪＤであることを示す。もう１つの例に関しては、ＣＪＤは次に示す１つまたはそれより多くのピーク：約３２９５、約４３１５、約４４３６、約６２００、約８９３６、約９１０７、約９１４５、約９１８５、約９４５４、及び約１３５５０Ｄａの減少により示される。また、さらなる例については、ＣＪＤは次に示す１つまたはそれより多くのピーク：約７５７４、約７９３０、約７９７５、及び８０２０の増加により示される。本発明は、ＣＤＪの診断を行う目的のために、そのあらゆる組み合わせにおいて、上記の分子量の値のうちいずれか１つまたはそれより多くで計測をすることを採用することに真価を認められる。
【００１８】
本発明の別の実施形態においては、ＴＳＥは牛海綿状脳症（ＢＳＥ）である。この場合、ポリペプチドは約１０２２０の分子量を有しているのが好ましく、このポリペプチドの存在がＢＳＥであることを示す。
【００１９】
本発明のさらなる実施形態において、ＴＳＥはスクレピーである。
ポリペプチドまたはポリペプチド群の分子量の計測は、質量分析で達成される。ここでの全ての分子量は、Ｄａで計測される。上記で引用された分子量は１％よりもよい精度、好ましくは約０．１％の範囲内の精度で計測することができる。この明細書では、分子量に関して「約」という用語は、上記又は下記で引用された値について、約１％の変動の範囲内、好ましくは約０．１％の範囲内を意味する。
【００２０】
本発明は、また、診断、前兆、治療への適用に対して、ＴＳＥ感染被験者と非感染被験者の体液に相違して含まれるポリペプチドの使用に関し、そのポリペプチドは、３５００から３００００の範囲の分子量を有し、質量分析により決定することができる。これは、上記で言及したポリペプチドに対して認識したり、結合したり、またはある親和性を有したりする材料の合成、及び／または使用を伴う。そのような材料の例は、抗体及び抗体チップである。ここで使用される用語「抗体」は、ポリクローナル抗血清、モノクローナル抗体、Ｆａｂ等の抗体のフラグメント、及び遺伝子改変抗体を含む。抗体は、キメラでもよいし、単一種でもよい。上記で言及されている「前兆的」適用は、例えば、体液のサンプルにおいて上記で言及したポリペプチドの量を計測することによって、ＴＳＥの起こりそうな経過の決定をすることを含む。上記で言及されている「治療的」適用は、例えば、上記で言及したポリペプチドに対して認識したり、結合したり、または親和性を有したりする材料を合成したり、治療においてそのような材料を使用することを含む。その材料は、この場合、例えば、抗体と薬剤を組み合わせることで修飾され、それにより目標となる動物の特異的領域へ薬剤を標的にする。
【００２１】
本発明の方法手順はどのようなＴＳＥの診断にも適用することができる。体液サンプルは、感染及び非感染の被験者から調達されたものである。サンプル中のポリペプチドの相違的保持のため、結合していない、または弱い結合をしている材料を除去するために洗浄液を選択的に使って、そのサンプルは様々な吸収性媒体で処理された表面を有するプローブへ適用することができる。もし、適しているなら、エネルギー吸収材料も適用することができる。そのとき、プローブは質量分析へ入れられ、様々な質量分析の設定を使って様々なサンプル／吸収の組み合わせに対して、読み取りが行われる。与えられた１組の条件下での感染と非感染とのサンプルの比較は、感染と非感染とのサンプルで異なって現れる１つまたはそれより多くのポリペプチドを明らかにする。これらのポリペプチドの存在または非存在は、被験者が感染しているか否かを決定する同様の条件（吸収剤、分析装置の設定等）下での被験者の流体サンプルのテストで使用される。
【００２２】
ここでのポリペプチドの「存在または非存在」への言及は、感染と非感染とのサンプルにおいて検出されるポリペプチドの量にかなり相違があることを単に意味していることを理解すべきである。このように、テストサンプル中のポリペプチドの「存在」は、ポリペプチドが実際に存在するが、比較テストサンプル中よりかなり少ない量であるという可能性を含む。本発明によれば、診断はポリペプチドの存在または非存在に基づいてなされ、これは比較テストサンプルを参照してかなり少ないまたはかなり多い量においてポリペプチドの存在を含む。
【００２３】
以下の例で本発明を証明する。
【実施例１】
【００２４】
本研究の目的は、クロイツフェルト・ヤコブ病が発症した患者の体液（脳脊髄液、血漿、及びその他）中の特異的ポリペプチドを検出することである。サンプルは、表面増幅レーザー脱離イオン化（ＳＥＬＤＩ）質量分析（ＭＳ）技術により分析される。この技術は、リテンテイトクロマトグラフィーの異なる型を使用することによるタンパク質の微小規模の親和捕獲と、それから飛行時間型質量分析法による分析とを包含している。相違するマップは、Ｃｉｐｈｅｒｇｅｎ  バイオシステム  ＰＢＳ  ＩＩ  質量分析（フリーモント、ＣＡ，ＵＳＡ）を使って分析される与えられたサンプルの典型的なタンパク質プロファイリングのそれぞれに対応して生成される。ＣＪＤ患者からの脳脊髄液（ＣＳＦ）サンプルのグループで発生するスペクトルを痴呆患者のグループで発生するサンプルスペクトルと比較すると、相違して現れたピークは識別される。
【００２５】
ＳＥＬＤＩ分析は、金属親和性を有する特異的ポリペプチドを検出するために未精製のヒトＣＳＦサンプルの２μｌを使用して行う。固定化銅親和性アレイ（ＩＭＡＣ−Ｃｕ++）は、サンプルからタンパク質の特異的サブセットのために選択する銅に対して親和性を有するタンパク質を捕獲するためにこのアプローチで使用される。捕獲されたタンパク質は、ＰＢＳＩＩ  タンパク質チップアレイリーダ（Ｃｉｐｈｅｒｇｅｎ  バイオシステム、フリーモント、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して直接検出される。
【００２６】
次の手順は、クロマトグラフィックＴＥＤ−Ｃｕ（ＩＩ）吸着アレイを使用してタンパク質チップアレイのプロセッシングや分析のために使用される。ＴＥＤは、シリコンオキシドでコーティングされたステンレス鋼基板上にコーティングされた（トリス（カルボニルメチル）エチレンジアミン−Ｃｕ）吸着剤である。
・表面は、最初に各スポットに対して１００ｍＭの硫酸銅１０μｌでロードされ、保湿槽で１５分間保温される。
・その後、過剰な非結合銅を取り除くため、チップを約１０秒間脱イオン水で２回すすぐことにより洗う。
・サンプルをロードする前、Ｉ−ＭＡＣ３アレイは、５分間ＰＢＳ  ＮａＣｌ  ０．５Ｍの５μｌで一度平衡になる。
・平衡バッファを取り除いた後、同じバッファ３μｌを、ＣＳＦ２μｌを適用する前に、加える。チップは保湿槽で２０分間保温される。
・サンプルはその後取り除かれ、その表面を平衡バッファ（５分おきに）３回洗う。
・最後に２回水でそそぐ。
・その表面は、空気乾燥をした後、５０％アセトニトリルと０．５％トリフルオロアセチル酸中で合成された不飽和シナピン酸（ＳＰＡ、Ｃｉｐｈｅｒｇｅｎ  バイオシステム）の０．５μｌを加える。
・レーザー脱離／イオン化飛行時間型質量分析法で各スポットの保持されたタンパク質の分析の前に、チップを再び空気乾燥する。
・いったん、データ収集を自動化するために適切な検知感度とレーザーエネルギーを確立して、タンパク質チップアレイを装置の中へ入れ、分析する。
・得られたスペクトルは、デルディメンション４１００ＰＣ上で起動するバイオマークウィザードソフトウェア（Ｃｉｐｈｅｒｇｅｎ  バイオシステム、フリーモント、ＣＡ、ＵＳＡ）で分析される。それは、マルチプルスペクトルに交差して一致するピークセットを生じる。
【００２７】
図１から図４は、上述したように調製したＩＭＡＣ３タンパク質チップアレイを使用して、ＣＪＤ診断患者からのＣＳＦと標準のＣＳＦとの間で行われる比較研究の結果を示す。この研究では、我々は、ＣＪＤの影響を受けた患者からのＣＳＦにおいて、４つのピークが大きく相違する増加をすることが分かった。これらの分子量はそれぞれ、約４７８０、６７００、８６００、及び１３３７５である（質量精度は約０．１％である）。図１は、０から１００，０００Ｄａまでの２つのスペクトルビューであって、それぞれ標準サンプルとＣＪＤサンプルとを示している。図２は、４７８０Ｄａのタンパク質のピークを示している。図３は、６７００と８６００Ｄａのタンパク質のピークを示している。図４は、１３３７５Ｄａのタンパク質のピークを示している。これらのデータは、約４７８０、６７００、８６００、及び１３３７５ＤａのピークはＣＳＦサンプルにおけるＣＪＤを診断するために使用することができるということを証明している。
【実施例２】
【００２８】
ＢＳＥ感染牛（ＢＳＥ＋）と非感染牛（ＢＳＥ−）からの血漿サンプルを使用して、実施例１を繰り返す。この結果は、図５及び図６で示される。図５は、０から５０，０００Ｄａまでのサンプルの種類ごとのスペクトルビューを示す。我々は、図６で説明したように、約１０２２０Ｄａのタンパク質は、ＢＳＥ＋血漿サンプルにおいてかなり増加していることを観察した。このことは、約１０２２０Ｄａのピークは血漿サンプルにおけるＢＳＥを診断するために使用することができるということを証明している。
【実施例３】
【００２９】
ＣＪＤ感染患者（ＣＪＤ＋）と非感染患者（ＣＪＤ−、またＣＴＳ＝スイス輸血センターとして言及される）からの血漿サンプルを使用して、実施例２を繰り返す。この結果は、図７及び８に示される。図７は、０から５０，０００Ｄａまでのサンプルの種類ごとのスペクトルビューを示す。我々は、図８Ａ及び図８Ｂで説明したように、約３９７０、約３９９０、約４２９４、約４４７８、約１００７５、約１１７３０、約１４０４３、または約１７８３９のポリペプチドは、ＣＪＤ＋血漿サンプルにおいてかなり減少していることを観察した。我々は、また、図８Ｂで説明するように、約７７７０ＤａのピークはＣＪＤ＋血漿サンプルにおいて増加していることを観察した。このことは、約３９７０、約３９９０、約４２９４、約４４７８、約１００７５、約１１７３０、約１４０４３、約１７８３９、または約７７７０Ｄａのピークは血漿サンプルにおいてＣＪＤを診断するために使用することができるということを証明している。
【実施例４】
【００３０】
実施例３を繰り返すが、データを分析するソフトウェアのより最新のバージョンを使用する。この結果は図９Ａから９Ｅに示しており、上記の実施例でのそれらの同定に加えて、タンパク質のレベルでいくつかの新しいバリエーションを示している。
【００３１】
図９Ａにおいて、矢印は約３２９５Ｄａのピークを示しており、そのピークはＣＪＤサンプルにおいて減少している。
図９Ｂにおいて、番号が付された矢印は、以下を示す。
【００３２】
１−約３９７６Ｄａのピークであって、そのピークはＣＪＤサンプルにおいて減少している（実施例３での３９７０Ｄａのピークに対応する）。
２−約３９９２Ｄａのピークであって、そのピークはＣＪＤサンプルにおいて減少している（実施例３での３９９０Ｄａのピークに対応する）。
【００３３】
３−約４３００Ｄａのピークであって、そのピークはＣＪＤサンプルにおいて減少している（実施例３での４２９４Ｄａのピークに対応する）。
４−約４３１５Ｄａのピークであって、そのピークはＣＪＤサンプルにおいて減少している。
【００３４】
５−約４４３６Ｄａのピークであって、そのピークはＣＪＤサンプルにおいて減少している。
６−約４４８４Ｄａのピークであって、そのピークはＣＪＤサンプルにおいて減少している（実施例３での４４７８Ｄａのピークに対応する）。
【００３５】
図９Ｃにおいて、矢印は約６２００Ｄａのピークを示しており、そのピークはＣＪＤサンプルにおいて減少している。
図９Ｄにおいて、番号が付された矢印は、以下を示す。
【００３６】
１０−約７５７４Ｄａのピークであって、そのピークはＣＪＤサンプルにおいて増加している。
１１−約７７７３Ｄａのピークであって、そのピークはＣＪＤサンプルにおいて増加している（実施例３での７７７０Ｄａのピークに対応する）。
【００３７】
１２−約７９３０Ｄａのピークであって、そのピークはＣＪＤサンプルにおいて増加している。
１３−約７９７５Ｄａのピークであって、そのピークはＣＪＤサンプルにおいて増加している。
【００３８】
１４−約８０２０Ｄａのピークであって、そのピークはＣＪＤサンプルにおいて増加している。
１５−約８９３６Ｄａのピークであって、そのピークはＣＪＤサンプルにおいて減少している。
【００３９】
１６−約９１０７Ｄａのピークであって、そのピークはＣＪＤサンプルにおいて減少している。
１７−約９１４５Ｄａのピークであって、そのピークはＣＪＤサンプルにおいて減少している。
【００４０】
１８−約９１８５Ｄａのピークであって、そのピークはＣＪＤサンプルにおいて減少している。
１９−約９４５４Ｄａのピークであって、そのピークはＣＪＤサンプルにおいて減少している。
【００４１】
図９Ｅにおいて、番号が付された矢印は、以下を示す。
２０−約１００６８Ｄａのピークであって、そのピークはＣＪＤサンプルにおいて減少している（実施例３での１００７５Ｄａのピークに対応する）。
【００４２】
２１−約１３５５０Ｄａのピークであって、そのピークはＣＪＤサンプルにおいて減少している。
２２−約１７８０９Ｄａのピークであって、そのピークはＣＪＤサンプルにおいて減少している（実施例３での１７８３９Ｄａのピークに対応する）。
【００４３】
この実施例は、上記のピークのうちいずれか１つ、またはどのような組み合わせでもそれらのうちの２つ以上のピークはＣＪＤを診断するのに使用できることを証明している。
上記で引用した各公開公報は、この明細書中で依存される範囲で参照されることにより、この明細書中に組み込まれている。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】図１は、レーザー脱離／イオン化質量分析を使った標準のサンプルとＣＪＤ感染のサンプルとからのＣＳＦのスペクトル図である。
【図２】図２は、ＣＪＤ感染ＣＳＦサンプルにおける約４７８０Ｄａでのタンパク質ピークを強調している対応図である。
【図３】図３は、ＣＪＤ感染ＣＳＦサンプルにおける約６７００と８６００Ｄａでのタンパク質ピークを強調している対応図である。
【図４】図４は、ＣＪＤ感染ＣＳＦサンプルにおける約１３３７５Ｄａでのタンパク質ピークを強調している対応図である。
【図５】図５は、レーザー脱離／イオン化質量分析を使った標準のサンプルとＢＳＥ感染サンプルとからの血漿のスペクトル図である。
【図６】図６は、図５に対応し、ＢＳＥ感染血漿サンプルにおける約１０２２０Ｄａでのタンパク質ピークを強調している図である。
【図７】図７は、レーザー脱離／イオン化質量分析を使ったＣＪＤ感染患者（ＣＪＤ＋）と非ＣＪＤ感染患者（ＣＪＤ−）とからの血漿のスペクトル図である。
【図８Ａ】図８Ａは、図７に対応し、ＣＪＤ＋とＣＪＤ−の血漿サンプルにおいて相違して表されたポリペプチドピークを強調している図である。
【図８Ｂ】図８Ｂは、図７に対応し、ＣＪＤ＋とＣＪＤ−の血漿サンプルにおいて相違して表されたポリペプチドピークを強調している図である。
【図９Ａ】図９Ａは、感染及び非感染サンプルにおいて相違して表されたポリペプチドピークをさらに強調しているＣＪＤ感染患者からの血漿（血漿ＣＪＤ）と非感染患者からの血漿（血漿ＣＴＳ）のスペクトル図である。
【図９Ｂ】図９Ｂは、感染及び非感染サンプルにおいて相違して表されたポリペプチドピークをさらに強調しているＣＪＤ感染患者からの血漿（血漿ＣＪＤ）と非感染患者からの血漿（血漿ＣＴＳ）のスペクトル図である。
【図９Ｃ】図９Ｃは、感染及び非感染サンプルにおいて相違して表されたポリペプチドピークをさらに強調しているＣＪＤ感染患者からの血漿（血漿ＣＪＤ）と非感染患者からの血漿（血漿ＣＴＳ）のスペクトル図である。
【図９Ｄ】図９Ｄは、感染及び非感染サンプルにおいて相違して表されたポリペプチドピークをさらに強調しているＣＪＤ感染患者からの血漿（血漿ＣＪＤ）と非感染患者からの血漿（血漿ＣＴＳ）のスペクトル図である。
【図９Ｅ】図９Ｅは、感染及び非感染サンプルにおいて相違して表されたポリペプチドピークをさらに強調しているＣＪＤ感染患者からの血漿（血漿ＣＪＤ）と非感染患者からの血漿（血漿ＣＴＳ）のスペクトル図である。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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