(57)【要約】ＩＬ‐１３Ｒα２を発現する細胞を有する疾患であるか、あるいは該疾患を発症するリスクのある対象者においてＩＬ‐１２Ｒα２に対する免疫応答を刺激する方法は、該対象者の体外で抗癌ワクチンを製剤化する工程と、該対象者においてＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激するのに十分な量の該ワクチンを該対象者に投与する工程とを含む。ＩＬ‐１３Ｒα２を発現する細胞を有する疾患であるか、あるいは該疾患を発症するリスクのある対象者においてＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激するための組成物は、ＩＬ‐１３Ｒα２に対して免疫応答を刺激することができる単離薬剤を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＬ‐１３Ｒα２を発現する細胞を有する疾患であるか、あるいは該疾患を発症するリスクのある対象者において、ＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激する方法であって、
（ａ）動物に投与した場合にＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激することができる薬剤を含んでなる抗癌ワクチンを、該対象者の体外で製剤化する工程と、
（ｂ）該対象者においてＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激するのに十分な量の該ワクチンを該対象者に投与する工程と
からなる方法。
【請求項２】
ＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激することができる前記薬剤が、配列番号１のうち少なくとも７個連続したアミノ酸からなるペプチドを含んでなる請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激することができる前記薬剤が、配列番号１のアミノ酸配列からなるタンパク質である請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ワクチンがさらにアジュバントを含んでなる請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記アジュバントが、アルミニウム塩、水中油乳剤、サポニンを含む組成物、細菌タンパク質を含む組成物、およびサイトカインよりなる群から選択される物質を含む請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記対象者においてＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激するのに十分な量の前記ワクチンを該対象者に投与する工程（ｂ）が、少なくとも第１の用量および第２の用量として該ワクチンを投与することからなり、該対象者に前記第１の用量を投与してから少なくとも２４時間後に同対象者に前記第２の用量を投与することを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項７】
ＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激することができる前記薬剤が、配列番号１のうち少なくとも７個連続したアミノ酸からなるペプチドをコードする核酸を含んでなる請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記核酸が裸のＤＮＡである請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記核酸が発現ベクターに組み込まれている請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
ＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激することができる前記薬剤が、配列番号１のうち少なくとも７個連続したアミノ酸からなるペプチドを発現する細胞を含んでなる請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
配列番号１のうち少なくとも７個連続したアミノ酸からなる前記ペプチドが、配列番号１のアミノ酸配列からなるタンパク質である請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記細胞が樹状細胞である請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記細胞がヒト細胞である請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記細胞がヒト細胞である請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
ＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激することができる前記薬剤が、配列番号１のうち少なくとも７個連続したアミノ酸からなるペプチドをコードする精製核酸が導入されている細胞を含んでなる請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
ＩＬ‐１３Ｒα２を発現する細胞を有する癌であるか、該癌を発症するリスクのある対象者を規定する工程からさらになる請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
ＩＬ‐１３Ｒα２を発現する細胞が膠腫細胞である請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記対象者がヒトである請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
動物に投与した場合にＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激するための組成物であって、
（ａ）動物に投与した場合にＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激することができる単離薬剤と、
（ｂ）製薬上許容できる担体と
を含んでなる組成物。
【請求項２０】
動物に投与した場合にＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激することができる前記薬剤が、配列番号１のうち少なくとも７個連続したアミノ酸からなるペプチドを含んでなる請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
配列番号１のうち少なくとも７個連続したアミノ酸からなる前記ペプチドが、配列番号１のアミノ酸配列からなるタンパク質である請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記組成物が、さらにアジュバントを含んでなる請求項２０に記載の組成物。
【請求項２３】
前記アジュバントが、アルミニウム塩、水中油乳剤、サポニンを含む組成物、細菌タンパク質を含む組成物、およびサイトカインよりなる群から選択される物質を含む請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
動物に投与した場合にＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激し得る前記薬剤が、配列番号１のうち少なくとも７個連続したアミノ酸からなるペプチドをコードする核酸を含んでなる請求項１９に記載の組成物。
【請求項２５】
前記核酸が裸のＤＮＡである請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記核酸が発現ベクターに組み込まれている請求項２４に記載の組成物。
【請求項２７】
ＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激することができる前記薬剤が、配列番号１のうち少なくとも７個連続したアミノ酸からなるペプチドを発現する細胞を含んでなる請求項１９に記載の組成物。
【請求項２８】
配列番号１のうち少なくとも７個連続したアミノ酸からなる前記ペプチドが、配列番号１のアミノ酸配列からなるタンパク質である請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
前記細胞が樹状細胞である請求項２７に記載の組成物。
【請求項３０】
前記細胞がヒト細胞である請求項２７に記載の組成物。
【請求項３１】
前記細胞がヒト細胞である請求項２９に記載の組成物。
【請求項３２】
ＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激することができる前記薬剤が、配列番号１のうち少なくとも７個連続したアミノ酸からなるペプチドをコードする精製核酸が導入されている細胞を含んでなる請求項１９に記載の組成物。
【請求項３３】
対象者においてＩＬ‐１３Ｒα２を発現する細胞を抗体の標的とする方法であって、
（ａ）ＩＬ‐１３Ｒα２に特異的に結合する抗体および製薬上許容できる担体を含んでなる医薬組成物を対象者の体外で製剤化する工程と、
（ｂ）該対象者においてＩＬ‐１３Ｒα２を発現する細胞に該抗体を特異的に結合させるのに十分な量の該医薬組成物を該対象者に投与する工程と
からなる方法。
【請求項３４】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記抗体がポリクローナル抗体である請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
ＩＬ‐１３Ｒα２に特異的に結合する抗体および製薬上許容できる担体を含んでなる医薬組成物。
【請求項３７】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項３６に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
前記抗体がポリクローナル抗体である請求項３６に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に生物学、免疫学、医学および腫瘍学の分野に関する。より具体的には、本発明は、免疫系モジュレーターとして、ならびに癌の治療と予防のためのワクチンの標的としてインターロイキン１３（ＩＬ‐１３）受容体サブユニットα２（ＩＬ‐１３Ｒα２）を使用することに関する。
【背景技術】
【０００２】
癌は現在、先進国において死因の第２位である（非特許文献１）。最近の研究から腫瘍形成の多くの分子機構が明らかになったにもかかわらず、固形腫瘍を治療する上で広く臨床上の成功に到達した新規な治療法はわずかである。したがって、全体切除術、化学療法、および放射線療法が、依然として大部分の悪性腫瘍にとって治療の柱となっている。好成績が増えてはいるが、これら治療法の各々は、多数の望ましくない副作用を依然として引き起こしている。この主要原因は、これら従来法のいずれも疾患細胞だけを特異的に標的としてはいないことである。例えば、外科手術は、疼痛、健常組織に対する外傷性損傷および瘢痕を生じる。放射線療法および化学療法は、吐き気、免疫抑制、胃潰瘍および二次的腫瘍形成を引き起こす。
【０００３】
より特異的に疾患細胞を標的とする方法を開発するための努力の中で、腫瘍免疫学の発達により、癌細胞に優先的または特異的に発現する抗原が発見された。これら腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）または腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）は、このような抗原を発現している癌細胞を選択的に対象とする免疫応答を刺激するために設計された癌ワクチンにおける抗原性薬剤として使用されている。非特許文献２〜４を参照されたい。これら抗原の最も広く研究されたものの中に、黒色腫関連抗原、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、Ｅ６およびＥ７、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ｐ５３、ならびにガングリオシド類（例えば、ＧＭ２）がある。比較的最近の研究では、ある種のＴＡＡおよびＴＳＡが特異的免疫応答の刺激に特に有効であることが示されている。
【０００４】
例えば、黒色腫関連抗原による先導的研究では、Ｔ細胞活性化ＴＳＡとしてＭＡＧＥ‐１（黒色腫抗原１）の同定がもたらされた（非特許文献５）。続いて同様の方法を用いて他のグループが、他のＭＡＧＥ類、ＭＡＲＴ‐１、糖タンパク質１００（ｇｐ１００）、チロシナーゼ、ＢＡＧＥ、およびＧＡＧＥなど他のＴ細胞活性化黒色腫抗原を同定した。上記の非特許文献４に概説されている。癌免疫学において最も画期的な最近の知見の１つは、ＳＥＲＥＸ（「組換えｃＤＮＡ発現ライブラリーの血清学的分析」の略）法が開発された後に現れた。非特許文献６を参照のこと。ＳＥＲＥＸ法は、自己腫瘍のｃＤＮＡ発現ライブラリーを患者の血清中に含まれる抗体に曝露することにより同ライブラリーをスクリーニングすることを含む。いくつかの活性癌抗原が、この方法を用いて同定された。非特許文献７を参照されたい。さらに、ＳＥＲＥＸ分析により、患者が癌抗原に対して高力価のＩｇＧ抗体を産生することが示されたが、これはヘルパーＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞）とＢ細胞とが癌に対する免疫応答を刺激する際に協調的に作用することを示す知見である。
【０００５】
さらに、ＳＥＲＥＸ分析により、「癌／精巣」抗原（ＣＴＡ）と呼ばれる一群の癌抗原が同定された。ＣＴＡは、（ａ）正常な器官のうち、ほとんど精巣のみに発現が限られる、（ｂ）多種多様の腫瘍において発現する、（ｃ）同定された各ファミリーに複数のメンバーが存在する、および（ｄ）これらの遺伝子がＸ染色体に局在する（特記すべき例外はＳＣＰ１）、などのいくつかの共通の特徴を有している。非特許文献８を参照のこと。前述の評価基準に基づいて、いくつかの以前に同定されたＴＡＡまたはＴＳＡ（例えば、Ｍ
ＡＧＥ、ＢＡＧＥおよびＧＡＧＥ）がＣＴＡとして再発見された。特に、多くの非ＣＴＡ抗原と違って、以前に同定されたこれらのＣＴＡの大部分ならびに新たに同定されたＣＴＡ（例えば、ＳＳＸ２、ＮＹ‐ＥＳＯ‐１、ＳＣＰ１およびＣＴ７）は、対象者において免疫応答を刺激することが明白に示された。
【非特許文献１】ウィンゴ（Ｗｉｎｇｏ）ら、Ｊ．Ｒｅｇ．Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ、第２５巻、ｐ．４３〜５１、１９９８年
【非特許文献２】「腫瘍免疫学：免疫療法と癌ワクチン（Tumor Immunology: Immunotherapy and Cancer Vaccines ）」、エイ・ジー・ダルグレイシュ（A.G. Dalgleish）およびエム・ジェイ・ブラウニング（M.J. Browning ）編、ケンブリッジ大学プレス（Cambridge University Press）、１９９６年
【非特許文献３】「癌の免疫療法（Immunotherapy in Cancer ）」、エム・ゴア（M. Gore ）およびピー・リッチイズ（P. Riches ）編、ジョン  ワイリー・アンド・サン社（John Wiley & Son Ltd. ）、１９９６年
【非特許文献４】メウラー（Maeurer ）ら、メラノーマ・リサーチ（Melanoma Res. ）、第６巻、ｐ．１１〜２４、１９９６年
【非特許文献５】トラベルサリ（Ｔｒａｖｅｒｓａｒｉ）ら、イムノジェネティクス（Immunogenetics）、第３５巻、ｐ．１４５〜１５２、１９９２年
【非特許文献６】サーヒン（Ｓａｈｉｎ）ら、プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズＵＳＡ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）、第９２巻、ｐ．１１８１０〜１１８１３、１９９５年
【非特許文献７】オールド、エル・ジェイ（Old, L.J. ）およびティー・シー・チェン（T.C. Chen ）、ザ・ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メディシン（J.Exp.Med.）、第１８７巻、ｐ．１１６３〜１１６７、１９９８年
【非特許文献８】チェン（Ｃｈｅｎ）ら、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（J.Biol.Chem.）、第２７３巻、ｐ．１７６１８〜１７６２５、１９９８年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、癌免疫療法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、ＩＬ‐１３Ｒα２が癌／精巣抗原であるという発見に関する。この発見は重要である。というのも、他の大部分の癌関連薬剤とは対照的に、癌に対する有効な免疫療法剤として今までに試験された癌／精巣抗原のほとんどが、対象者における抗癌免疫応答の刺激に非常に有効であることが証明されているからである。したがって、本発見は、ＩＬ‐１３Ｒα２を発現する癌の予防および／または治療のための方法ならびに組成物を提供する。
【０００８】
高グレードの膠腫（ＨＧＧ）細胞は、その表面上に高レベルのＩＬ‐１３Ｒα２を発現することが示されていることから、特に本発明は、対象者におけるＨＧＧの治療および／または予防に関する。ヒトＨＧＧは、アストログリア起源の異種性脳腫瘍を迅速に進行させる。ＨＧＧを治療するための有効な理学療法が、未だ臨床使用には許容されていないことから、本発明は特に重要である。大多数のＨＧＧ患者は、ＩＬ‐１３に対する限定性の高い受容体、すなわち、ＩＬ‐４とは独立の様式でＩＬ‐１３に結合する受容体を過剰発現することが以前に示された。最近、ＩＬ‐１３Ｒα２と呼ばれる新しいＩＬ‐１３結合タンパク質がクローニングされた。このタンパク質は、ＩＬ‐１３に親和性を有するがＩＬ‐４には親和性がないことが示された。大まかに比較すると、この特徴は、ＨＧＧ上に発現されたＩＬ‐１３に対し限定の度合いの高い受容体に合致する。以下により詳細に記載するように、精巣を除いて正常なヒト組織はＩＬ‐１３Ｒα２をほとんどまたはまったく発現しないことから、本発明者らは、ＩＬ‐１３Ｒα２がＨＧＧおよびＩＬ‐１３Ｒα
２を発現する他の癌の選択的標的として寄与することを本願明細書で証明する。また、正常組織の多くはＩＬ‐１３に結合する受容体を発現するが、この受容体（ＩＬ‐１３およびＩＬ‐４の双方に結合することから時には「共有」受容体と呼ばれる）は、同受容体がＩＬ‐１３およびＩＬ‐４の双方に結合するのに対し、ＩＬ‐１３Ｒα２（「限定」受容体と考えられている）はＩＬ‐１３とだけ結合するという点において、限定受容体とは機能的に異なっている。この２つの受容体は構造的にも異なっており、限定受容体は４２ｋＤａのモノマーで、共有受容体は４５ｋＤａの構成成分（ＩＬ‐１３Ｒα１と呼ばれる）および１４０ｋＤａの構成成分（ＩＬ‐４Ｒαと呼ばれる）からなるヘテロダイマーである。
【０００９】
上記のように、本発明者らの組織分布に関する研究により、ＩＬ‐１３Ｒα２は正常組織の中で精巣でのみ強く発現されることが示された。この知見は、（ａ）ＩＬ‐１３Ｒα２はＨＧＧで選択的に過剰発現されるが、正常な中枢神経系（ＣＮＳ）組織では発現されない、および（ｂ）ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子は染色体Ｘに局在化している、という知見とともに、ＩＬ‐１３Ｒα２がＣＴＡであることを示している。ＭＡＧＥおよびＢＡＧＥなどの他のＣＴＡについては、癌細胞に対して強力な免疫応答を刺激することが証明されていることから（ミンツおよびデビンスキー（Mintz and Debinski）、クリティカル・レビューズ・イン・オンコジェネシス（Cri t.Rev.Oncogen）、第１１巻、ｐ．７７〜９５、
２０００年を参照のこと）、本発明は、対象者における抗癌免疫応答を引き起こすか、または増大させるのに有用な方法および組成物を提供する。
【００１０】
抗癌免疫療法の目的に関して、ＩＬ‐１３Ｒα２は、他の癌関連抗原に対して以下の明白な利点を有している。第１に、ＩＬ‐１３Ｒα２は細胞表面受容体であり、免疫系のうち体液性免疫への曝露が可能である。第２に、ＩＬ‐１３Ｒα２は試験されたＨＧＧの大多数で発現しており、ＩＬ‐１３Ｒα２のＨＧＧ進行における重要な役割および免疫療法の標的としての可能性が示されている。第３に、ＩＬ‐１３Ｒα２の生理学的分布は癌細胞および精巣に限定されており、標的が健常組織にも発現している場合に見られる自己免疫副作用の可能性が制限される。さらに、精巣がＭＨＣクラスＩ分子をほとんど発現しない免疫特権器官であることから自己免疫副作用の可能性は少ない。第４に、ｈＩＬ‐１３Ｒα２はそのサイズ（完全長ＩＬ‐１３Ｒα２が３８０アミノ酸で細胞外ドメインが３４３アミノ酸）から抗癌免疫療法に理想的な標的であり、認識し標的とするための複数のエピトープを免疫系に提供する。
【００１１】
したがって、１態様において本発明は、ＩＬ‐１３Ｒα２を発現する細胞を伴う疾患であるか、あるいは発症するリスクのある対象者において、ＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激する方法を特徴とする。前記方法は、（ａ）動物に投与した場合にＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激し得る薬剤を含有する抗癌ワクチンを、該対象者の体外で製剤化する工程と、（ｂ）該対象者においてＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激するのに十分な量で該ワクチンを該対象者に投与する工程とを含む。
【００１２】
他の態様において、本発明は、動物に投与した場合にＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激するための組成物を特徴とする。前記組成物は、（ａ）動物に投与した場合にＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激し得る単離薬剤と、（ｂ）製薬上許容できる担体とを含む。
【００１３】
前述の方法および組成物の双方において、ＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激し得る前記薬剤は、配列番号１のうち少なくとも７つの連続したアミノ酸を含むペプチドを含み得る。例えば、前記薬剤は、配列番号１のアミノ酸配列を含むタンパク質であり得る。前記薬剤はまた、配列番号１のうち少なくとも７つの連続したアミノ酸を含むペプチドをコードする核酸の形態を取り得る。このような核酸は、裸のＤＮＡとして、または前記
核酸を含む発現ベクター構築物において使用可能である。ＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激し得る前記薬剤はまた、細胞であり得る。この細胞は、配列番号１のうち少なくとも７つの連続したアミノ酸を含むペプチドを発現する細胞でもよいし、または配列番号１のうち少なくとも７つの連続したアミノ酸を含むペプチドをコードする精製核酸が導入されている細胞でもよい。
【００１４】
本発明の範囲内のワクチンおよび組成物は、アルミニウム塩、水中油乳剤、サポニンを含む組成物、細菌タンパク質を含む組成物、またはサイトカインなどのアジュバントをさらに含み得る。
【００１５】
本発明の方法は、ＩＬ‐１３Ｒα２を発現する細胞（例えば、膠腫細胞）を有する癌であるか、または該癌を発症するリスクのある対象者（例えば、ヒト）を規定する工程をさらに含み得る。また前記方法において、前記対象者においてＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激するのに十分な量で該対象者に前記ワクチンを投与する工程には、少なくとも第１の用量および第２の用量としてワクチンを投与し、前記第１の用量を該対象者に投与してから少なくとも２４時間後に前記第２の用量を該対象者に投与する工程が含まれうる。
【００１６】
別途定義しない限り、本明細書中で用いられる専門用語はすべて、本発明が属する分野の当業者により一般に理解されるのと同一の意味を有する。分子生物学用語の定義は、例えば、リーガー（Ｒｉｅｇｅｒ）ら、「古典遺伝学および分子遺伝学用語集（Glossary of Genetics: Classical and Molecular ）」、第５版、ニューヨーク所在のスプリンガー出版（Springer-Verlag ）、１９９１年；およびレヴィン（Le win ）、「遺伝子  第５
版（Genes V ）、ニューヨーク所在のオックスフォード大学出版（Oxford University Press ）、１９９４年に見ることが可能である。ヌクレオチド塩基の標準的な１文字表記およびアミノ酸残基の１文字表記および３文字表記を使用する。
【００１７】
本明細書中で用いられる「核酸」とは、２つ以上のヌクレオチドからなる鎖を意味する。例えば、ＲＮＡ（リボ核酸）およびＤＮＡ（デオキシリボ核酸）は核酸である。「単離」核酸とは、該核酸が天然に存在する生物細胞中の他の核酸配列、すなわち他の染色体および染色体外ＤＮＡならびにＲＮＡから、例えば、従来の核酸精製法により実質的に分離または精製された核酸である。したがって、前記用語は、ベクター中、自己複製プラスミドもしくはウィルス中、または原核生物もしくは真核生物のゲノムＤＮＡ中に組み込まれた組換え核酸分子を含む。同用語は、ｃＤＮＡ、ゲノム断片、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により生成された断片、または制限酵素による断片などの分離分子を含む。また同用語は、組換え核酸分子および化学的に合成された核酸分子も含む。「組換え」核酸分子とは、２つ、そうでなければ別々の配列セグメントを、例えば、化学合成により、あるいは遺伝子工学技術を用いた単離核酸セグメントの操作により、人工的に組み合わせることで作製された核酸分子である。
【００１８】
核酸分子またはポリペプチドを称する場合、用語の「天然（の）」とは、天然由来（例えば、「野生型」）の核酸またはポリペプチドを称する。ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子の「相同体」とは、ヒト以外の種から単離されたＩＬ‐１３Ｒα２ポリペプチドをコードする遺伝子配列である。「裸の核酸」という語は、発現ベクターに組み込まれていない単離核酸を意味する。
【００１９】
用語「ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子」または「ＩＬ‐１３Ｒα２ポリヌクレオチド」とは、ＩＬ‐１３Ｒα２をコードする天然の核酸配列（例えば、配列番号２（図２）に示されるＩＬ‐１３Ｒα２のｃＤＮＡ配列）、ＩＬ‐１３Ｒα２ｃＤＮＡが転写され得るゲノム配列、ならびに／または前記配列の対立形質を示す変異体および相同体を意味する。
【００２０】
本明細書中で用いられる「タンパク質」、「ペプチド」、または「ポリペプチド」とは、長さまたは翻訳後修飾（例えばグリコシル化またはリン酸化）にかかわらず、ペプチド結合したアミノ酸鎖の任意のものを意味する。一般に、用語「ペプチド」は、本明細書において長さが約２５アミノ酸残基未満のアミノ酸鎖を称するために用いられ、一方、用語「タンパク質」および「ポリペプチド」は、より大きなアミノ酸鎖を称するために用いられる。タンパク質またはペプチドを称する場合、用語「単離（された）」とは、他の細胞内タンパク質から単離されるか、あるいは合成的に作製されたタンパク質またはペプチドを意味する。したがって前記用語は、精製ポリペプチドおよび組換えポリペプチドのいずれも包含する。用語「組換えタンパク質」または「組換えペプチド」とは組換え核酸技法により生成されるタンパク質またはペプチドを指し、同技法では一般にペプチドまたはタンパク質をコードする核酸が好適な発現ベクターに挿入され、次に、適切な条件下で培養すると宿主細胞がペプチドまたはタンパク質を生産するように同宿主細胞を形質転換するのに用いられる。
【００２１】
「ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質」、「ＩＬ‐１３Ｒα２ポリペプチド」または単純に「ＩＬ‐１３Ｒα２」とは、配列番号１（図１）のタンパク質、または配列番号１と少なくとも６５％（だが好ましくは、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、または９９％）のアミノ酸配列同一性を有し、かつ配列番号１のタンパク質に特異的に結合する抗体と交差反応するタンパク質などの、ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子発現産物を意味する。
【００２２】
本明細書中で用いられる「配列同一性」とは、２つの配列を、サブユニットのマッチングを最大にするように、すなわち、ギャップと挿入に配慮して整列（アライン）させた場合の、２つの配列で対応する位置において同一なサブユニットの比率（％）を意味する。２つの配列の両サブユニット位置に同じモノマーサブユニットがある場合、例えば、２つのＤＮＡ分子の各々において所与の位置にアデニンがある場合、分子はその位置において同一である。例えば、長さ１０ヌクレオチドの配列のうち７つの位置が、もう１つの１０ヌクレオチド配列において対応する位置と同一である場合、この２つの配列は７０％の配列同一性を有している。比較される配列の長さは少なくとも６０ヌクレオチドであることが好ましく、より好ましくは少なくとも７５ヌクレオチド、最も好ましくは１００ヌクレオチドである。典型的には、配列同一性は、配列解析ソフトウェア（例えば、米国５３７０５  ウィスコンシン州マディソン、ユニバーシティー・アベニュー１７１０所在のウィスコンシン大学バイオテクノロジーセンター（University of Wisconsin Biotechnology Center）ジェネテックス・コンピュータグループ（Genetics Computer Group ）の、シーケンスアナリシス・ソフトウェアパッケージ（Sequence Analysis Software Package））を用いて測定する。
【００２３】
第１の核酸配列を第２の核酸配列と機能的関連を持たせて配置する場合、第１の核酸配列を、第２の核酸配列と「作動可能なように」連結させる。例えば、プロモーターがコード配列の転写または発現に影響を与える場合、該プロモーターを該コード配列と作動可能なように連結させる。一般に、作動可能なように連結されたＤＮＡ配列は連続的であり、２つのタンパク質コード領域の連結が必要な場合には、読み取り枠が合致している。
【００２４】
本明細書中で用いられる用語「ベクター」は、それに連結された他の核酸を輸送することができる核酸分子をいう。作動可能なように連結された遺伝子を発現させることができるベクターを、本明細書では「発現ベクター」と称する。本明細書中で用いられる用語「プロモーター」とは、そのプロモーターに作動可能なように連結された、選択された核酸配列の発現を調節し、細胞中でその選択された核酸配列の発現をもたらす核酸配列を意味する。前記用語は、「組織特異的」プロモーター、すなわち、特定の細胞（例えば、特定組織の細胞）中でのみ選択された核酸配列の発現をもたらすプロモーターを包含する。前
記用語はまた、主として１つの組織において選択された核酸の発現を調節するが、他の組織における発現をも引き起こす、いわゆる「漏出（leaky ）」プロモーターも含む。前記用語はまた、組織非特異的プロモーターおよび構成的に活性を有し誘導性のプロモーターのいずれも包含する。
【００２５】
「免疫応答を刺激する」とは、リンパ球（例えば、Ｂ細胞もしくはＴ細胞）または他の免疫系成分の活性化を誘発、または増大させることを意味する。特定抗原に対する免疫応答の刺激は、その抗原に対する抗体力価の増大、またはその抗原に特異的な表面受容体を有する１種以上のリンパ球の活性化として測定し得る。リンパ球の活性化は、従来のアッセイ、例えば、有糸分裂の誘導、サイトカインの分泌、細胞表面分子の発現のモジュレーション、免疫グロブリンの分泌（Ｂ細胞）、および標的細胞の殺傷増加（細胞傷害性Ｔ細胞）により決定し得る。
【００２６】
本明細書中で用いられる「結合する」または「〜と相互作用する」とは、１つの分子がサンプル中の特定のもう１つの分子を認識して付着するが、サンプル中の他の構造的に無関係な分子は実質的に認識も付着もしないことを意味する。一般に、第２の分子に「特異的に結合する」第１の分子は、その第２の分子に対して約１０５〜１０６リットル／モル以上の大きな結合親和性を有する。
【００２７】
用語「抗体」とは、免疫グロブリン由来の任意の抗原結合ペプチドを意味する。前記用語は、ポリクローナル抗血清、モノクローナル抗体、酵素消化により生成された免疫グロブリン断片（例えば、Ｆａｂ断片）または遺伝子工学により生成された免疫グロブリン断片（例えば、ｓＦｖ断片）を含む。
【００２８】
本明細書中に記載されるのと類似または等価の方法および材料を、本発明の実施または試験に使用し得るが、好適な方法と材料は以下に記載されている。本願明細書に記載されたすべての刊行物、特許出願、特許および他の引用文献は、その全体を本願明細書に援用する。矛盾がある場合は、定義を含めて本願明細書が優先される。さらに、以下に論じる具体的な実施態様は単なる例示であって、限定を意図するものではない。
【００２９】
本発明は、添付の特許請求の範囲によって具体的に示される。本発明の上記およびさらなる利点は、添付の図面と関連させて以下の説明を参照することにより十分に理解することができよう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３０】
本発明は、ＩＬ‐１３Ｒα２を発現する細胞を有する癌その他の疾患であるか、または発症する危険性のある対象者においてＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答の刺激に関連する組成物および方法を包含する。以下に記載される好ましい実施形態は、これらの組成物と方法の適応を例示する。これらの実施形態の説明にかかわらず、本発明の他の態様を、下記に提供される説明に基づいて作製および／または実施し得る。
【００３１】
（生物学的方法）
従来の分子生物学的技法を含む方法を、本願明細書中で説明する。このような技法は一般に当業界で知られており、「分子クローニング：実験マニュアル（Molecular Cloning:
A Laboratory Manual）」、第２版、第１〜３巻、サンブルック（Sambrook）ら、ニューヨーク州コールドスプリング・ハーバー所在のコールドスプリングハーバー・ラボラトリ・プレス（Cold Spring Harbor Laboratory Press ）、１９８９年；および「分子生物学の最新プロトコール（Current Protocols in Molecular Biology）」、オースベル（Ausubel ）ら編、ニューヨーク所在のグリーン・パブリッシング・アンド・ワイリー‐インターサイエンス（Greene Publishing and Wiley ‐Interscience）、１９９２年（定期的に
更新）などの実験法の専門書に詳細に記載されている。核酸の化学合成法については、例えば、ビューケージおよびカルサース（Beaucage and Carruthers ）、Ｔｅｔｒａ．Ｌｅｔｔｓ．、第２２巻、ｐ．１８５９〜１８６２、１９８１年、およびマテウッシ（Matteucci ）ら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、第１０３巻、ｐ．３１８５、１９８１年において考察されている。核酸の化学合成は、例えば、市販の自動オリゴヌクレオチド合成装置で実施し得る。免疫学的方法（例えば、抗原特異的抗体、免疫沈降およびイムノブロッティング）については、例えば、「免疫学の最新プロトコール（Current Protocols in Immunology ）」、コリガン（Coligan ）ら編、ニューヨーク所在のジョン・ワイリー・アンド・サンズ社（John Wiley & Sons ）、１９９１年；および「免疫学的解析方法（Methods of Immunological Analysis ）」、マセイエフ（Masseyeff ）ら編、ニューヨーク所在のジョン・ワイリー・アンド・サンズ社（John Wiley & Sons ）、１９９２年に記載されている。従来の遺伝子移植法および遺伝子治療法も、本発明における使用に適合可能である。「遺伝子治療：原理と応用（Gene Therapy: Principles and Applications ）」、ティー・ブラッケンシュタイン（T. Blackenstein ）編、スプリンガー出版（Springer Verlag ）、１９９９年；「遺伝子治療プロトコール（分子医学的方法）（Gene Therapy Protocols (Methods in Molecular Medicine)）」、ピー・ディー・ロビンズ（P.D. Robbins）編、ヒューマナ・プレス（Humana Press）、１９９７年；および「ヒト遺伝子治療のためのレトロベクター（Retro-vectors for Human Gene Therapy）」、シー・ピー・ホジソン（C.P. Hodgson）編、スプリンガー出版（Springer Verlag ）、１９９６年を参照されたい。
【００３２】
（癌／精巣抗原としてのＩＬ‐１３Ｒα２の同定）
その名が示すとおり、ＩＬ‐１３Ｒα２はリンホカインＩＬ‐１３に対する受容体である。ＩＬ‐１３は、Ｂ細胞およびＴ細胞の双方により分泌されるＩＬ‐４の相同体として同定されている。ミンティー（Minty ）ら、Ｎａｔｕｒｅ、第３６巻、ｐ．２４８〜２５１、１９９３年；マッケンジー（ＭａｃＫｅｎｚｉｅ）ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、第９０巻、ｐ．３７３５〜３７３９、１９９３年を参照のこと。いくつかのタイプの正常細胞は、ＩＬ‐１３／ＩＬ‐４共有受容体と呼ばれるＩＬ‐１３受容体を含有するが、同受容体はＩＬ‐１３Ｒα１（インターロイキン１３受容体α１）と名付けられたＩＬ‐１３結合性の構成成分を含むヘテロダイマーである。ヒルトン（Hilton）ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、第９３巻、ｐ．４９７〜５０１、１９９６年；アマン（Aman）ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、第２７１巻、ｐ．２９２６５〜２９２７０、１９９６年；ミロー（Miloux）ら、ＦＥＢＥＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、第４０巻、ｐ．１６３〜１６６、１９９７年を参照のこと。ＩＬ‐１３Ｒα１に加え、前記共有受容体は、ＩＬ‐４に結合するための構成成分であるｐ１４０（またはＩＬ‐４Ｒα）と称されるタンパク質も含んでいる。イゼルダ（Idzerda ）ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、第１７１巻、ｐ．８６１〜８７３、１９９０年；ヒルトン（Hilton）ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、第９３巻、ｐ．４９７〜５０１、１９９６年；デビンスキー（Debinski）ら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．、第１６巻、ｐ．４４９〜４５３、１９９５年；ズラウスキー（Zurawski）ら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、第１２巻、ｐ．２６６３〜２６７０、１９９３年；ミンティー（Minty ）ら、Ｎａｔｕｒｅ、第３６巻、ｐ．２４８〜２５１、１９９３年を参照のこと。細胞をＩＬ‐１３に曝露すると、ＩＬ‐４の曝露後に生じる応答と極めて類似した応答を生じる。ズラウスキー、ジー（Zurawski, G ）およびジェイ・イー・デブリーズ（J.E. de Vries ）、Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ．、第１２巻、ｐ．１６９〜１７４、１９９４年を参照のこと。ＩＬ‐１３およびＩＬ‐４双方への曝露から生じる細胞内応答の例としては、ＣＤ７２、ＩｇＭおよびＭＨＣクラスＩＩ抗原の発現増強、ならびにＣＤ２３発現の誘導およびＢリンパ球におけるＩｇＥ重鎖遺伝子産生が含まれる。同文献を参照のこと。
【００３３】
興味深い成果において、ＩＬ‐１３Ｒα１は、細胞に存在する唯一のＩＬ‐１３結合部
位ではないことが判明した。以前の研究において、多くの癌（最も著しくはＨＧＧ）はＩＬ‐１３と結合し得ることが立証された。デビンスキー（Debinski）ら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、第１巻、ｐ．１２５３〜１２５８、１９９５年；デビンスキー（Debinski）ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、第２７１巻、ｐ．２２４２８〜２２４３３、１９９６年；デビンスキー（Debinski）ら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．、第１６巻、ｐ．４４９〜４５３、１９９８年；デビンスキー（Debinski）ら、Ｃｒｉｔｉｃ  Ｒｅｖ．Ｏｎｃｏｇｅｎ、第９巻、ｐ．２５６〜２６８、１９９８年；デビンスキー（Debinski）ら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、第５巻、ｐ．９８５〜９９０、１９９９年。これらの研究をとおして、これら腫瘍の多くについてのＩＬ‐１３結合能は、ＩＬ‐１３／ＩＬ‐４共有受容体（すなわち、ＩＬ‐１３Ｒα１／ｐ１４０からなるヘテロダイマーであることが現在知られている受容体）によって媒介されるのではないことがますます明らかとなった。とりわけ、共有受容体を含有するリンパ球細胞においては、該受容体をＩＬ‐４で飽和させることによりＩＬ‐１３への結合が阻止された。ズラウスキー（Zurawski）ら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、第１２巻、ｐ．２６６３〜２６７０、１９９３年を参照のこと。これは、大過剰のＩＬ‐４を中和アッセイに用いた場合でもＩＬ‐１３への結合が変化しなかったＨＧＧ細胞の場合とは異なっていた。デビンスキー（Debinski）ら、Ｃｌｉｎ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｒｅｓ．、第１巻、ｐ．１２５３〜１２５８、１９９５年；デビンスキー（Debinski）ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、第２７１巻、ｐ．２２４２８〜２２４３３、１９９６年；デビンスキー（Debinski）ら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．、第１６巻、ｐ．４４９〜４５３、１９９８年。さらなる実験において、グリア芽腫（ＨＧＧ）細胞に結合する能力を維持しているが、ＩＬ‐４／ＩＬ‐１３共有受容体のみを発現している細胞と相互作用し、細胞内にシグナル伝達を引き起こす能力を喪失した、理論的に設計されたＩＬ‐１３変異体が創製された。デビンスキー（Debinski）ら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．、第１６巻、ｐ．４４９〜４５３、１９９８年；トンプソン、ジェイ・ピー（Thompson, J.P.）およびダブリュ．デビンスキー（W. Debinski ）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、第２７４巻、ｐ．２９９４４〜２９９５０、１９９９年；デビンスキー、ダブリュ（Debinski W. ）およびジェイ・ピー・トンプソン（J.P. Thompson ）、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、第５巻、ｐ．３１４３ｓ〜３１４７ｓ、１９９９年を参照のこと。この証拠は、既知のＩＬ‐４結合タンパク質に無関係な別のＩＬ‐１３結合タンパク質の存在を支持するものであった。転移腎細胞癌の細胞（Ｃａｋｉ‐１細胞）上の新規なＩＬ‐１３結合タンパク質が単離され、このタンパク質をコードする遺伝子がクローン化された際に追加の証拠が得られた。キャプット（Ｃａｐｕｔ）ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、第２７１巻、ｐ．１６９２１、１９９６年。ＩＬ‐１３Ｒα２と呼ばれるこのタンパク質をコードする遺伝子は引き続きクローン化され、配列決定された。同文献を参照のこと。本願明細書中ＩＬ‐１３Ｒα２と称されるこの新規なＩＬ‐１３結合タンパク質は、ＩＬ‐４には特異的に結合しないことが示された。ＩＬ‐１３／４共有受容体およびＩＬ‐４とは独立のＩＬ‐１３受容体の構造案を図３に示す。
【００３４】
この新規に発見された受容体がＨＧＧに存在するかどうかを調べるために、本発明者らは、ＨＧＧの樹立細胞株、およびＨＧＧ外植細胞と腫瘍標本における同受容体の遺伝子発現を評価した。ＨＧＧについてのこれらの研究に加えて、この新規受容体の正常組織発現パターンを詳細に特性解析するために、本発明者らは、大量の正常中枢神経系（ＣＮＳ）組織および末梢器官をＩＬ‐１３Ｒα２のｍＲＮＡ転写産物についてスクリーニングした。これらの研究から本発明者らは、ＩＬ‐１３Ｒα２の発現が、精巣を除く全ての正常成人組織において実質的に存在しないことを発見した。初期の研究では、ＩＬ‐１３Ｒα２をコードする遺伝子はＸ染色体に局在していた。グオ（Guo ）ら、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ、第４２巻、ｐ．１４１〜１４５、１９９７年。
【００３５】
したがって、本発明者らの発見により、ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質を腫瘍抗原のＣＴＡ群のメンバーとして特徴付けることが可能となった。さらに、ＩＬ‐１３Ｒα２は膜貫
通受容体であることから、ＭＨＣ提示とは独立に細胞外環境に曝露される。したがって、免疫系成分により認識されるためには細胞表面上のＭＨＣ分子との複合状態でペプチド断片として提示されなければならない細胞内抗原とは対照的に、細胞毒性薬剤または抗体は、表面にＩＬ‐１３Ｒα２を担持する癌細胞を直接標的とすることが可能である。抗膠腫ワクチンの合理的な設計の基礎として寄与し得るこのように広く存在するＨＧＧ関連抗原は他に知られていないことから、ＩＬ‐１３Ｒα２がＨＧＧ関連のＣＴＡであるというこの知見は重要である。
【００３６】
（ワクチン）
本発明は、対象者に投与された場合、該対象者においてＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激し得るワクチンを提供する。本発明におけるワクチンは、対象者に導入された場合、ＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を誘起または増強し得る任意の物質の形態を取り得る抗原性薬剤を含む。典型的な免疫応答には、（ａ）ＩＬ‐１３Ｒα２に特異的に結合する抗体の産生、または力価の増大、および（ｂ）（例えば、標的細胞を死滅させるための、またはＢリンパ球における抗体産生の活性化を支援するための）Ｔリンパ球の活性化が含まれる。例えばタンパク質およびペプチドベースのワクチン、腫瘍細胞ワクチン、樹状細胞／遺伝子療法ワクチンならびにＤＮＡ／ウィルスワクチンなどの多種多様な抗原性薬剤が、タンパク抗原に対する免疫応答の刺激に効果的であることが示されている。例えば、グレーテン、ティー・エフ（Greten, T.F.）およびイー・エム・ジャフィー（E.M.
Jaffee ）、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．、第１７巻、ｐ．１０４７〜１０６０、１９９９年を参照されたい。前述に加えて、抗原性薬剤により刺激された抗原特異的免疫応答を非特異的に増強させるために、またワクチン中の他の成分を対象者へ送達しやすくするために、アジュバントおよび賦形剤／担体などの種々の物質を本発明のワクチン組成物に含めることが可能である。
【００３７】
（タンパク質／ペプチドベースのワクチン）
本発明のワクチンに使用する抗原性薬剤は、天然のＩＬ‐１３Ｒα２（配列番号１）またはＩＬ‐１３Ｒα２のペプチド断片の形態を取り得る。抗原タンパク質全体から作製されたワクチンは、これらが同タンパク質により示される潜在的抗原部位のすべてに対して免疫応答を刺激する能力を有することから有利である。一方、ペプチド抗原（例えばタンパク質全体の中の７〜１５個または８〜１２個連続したアミノ酸）を用いて作製されたワクチンは、一般に該タンパク質によって示されるすべての潜在的抗原部位よりも少数の部位に対し免疫応答を刺激することになる。ペプチドベースのワクチンは、例えば、望ましくない交差反応を避けるために、刺激される免疫応答をより特異的に標的とすることが望ましい場合には、タンパク質全体をベースにしたワクチンよりも有利なこともある。例えば、ワクチンに使用するペプチドを、（１）ＭＨＣクラスＩ分子またはＭＨＣクラスＩＩ分子により提示されることが知られている特定の抗原エピトープに相当するように、あるいは（２）ｉｎ  ｖｉｖｏにおける安定性の増大を示すか、または天然のエピトープよりもＭＨＣ分子に高い結合親和性を示すかのいずれかである一方、依然としてＴ細胞を特異的に活性化する能力を有する修飾形態のエピトープに相当するように選択することができる。アヨーブ（Ayyoub）ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、第２７４巻、ｐ．１０２２７〜１０２３４、１９９９年；パークハースト（Parkhurst ）ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．、第１５７巻、ｐ．２５３９〜２５４８、１９９６年を参照されたい。ペプチドをベースにしたワクチンは、無傷のタンパク質に対する免疫寛容を回避することが示された。デシス（Disis ）ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、第１５６巻、ｐ．３１５１〜３１５８、１９９６年。一種類のペプチド断片のみからなるワクチンに加えて、本発明の他のワクチンには、ＩＬ‐１３Ｒα２から誘導された数種の異なるペプチドのカクテルから作製されたワクチンも含まれる。
【００３８】
上記に示したように、本発明のワクチンは、抗原性薬剤としてＩＬ‐１３Ｒα２タンパ
ク質を含み得る。ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質の好ましい形態は、図１に示すアミノ酸配列（配列番号１）を有する精製された天然ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質を含んでいる。天然のＩＬ‐１３Ｒα２の断片、類縁体および誘導体などの天然ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質の変異体もまた、本発明のワクチン中の抗原性薬剤として使用することが考慮されている。このような変異体としては、例えば、天然ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子の天然に存在する対立遺伝子変異体によってコードされるポリペプチド、天然ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子の相同体によってコードされるポリペプチド、天然ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子の天然には存在しない変異体によってコードされるポリペプチドが挙げられる。このような変異体の中で好ましいものは、ワクチンの一部として対象者に投与されると天然ＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激し得るものである。
【００３９】
ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質変異体は、１または複数のアミノ酸が天然ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質と異なっているペプチド配列を有する。このような変異体のペプチド配列は、天然ＩＬ‐１３Ｒα２ポリペプチドの１または複数のアミノ酸の欠失、付加または置換を特徴とし得る。アミノ酸の挿入は、約１〜４個連続したアミノ酸の挿入であることが好ましく、欠失は約１〜１０個連続したアミノ酸の欠失であることが好ましい。ある適用例において、変異ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質は、天然ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質の機能活性（例えば、ＩＬ‐１３に特異的に結合する能力）を実質的に維持している。他の適用例では、変異ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質は、ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質の機能活性を欠いているか、または同活性の有意な減少を特徴としている。天然ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質の機能活性を保持することが望ましい場合、サイレントまたは保存的な変化を特徴とする本発明の核酸分子を発現することにより、好ましいＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質変異体を作製し得る。機能活性において実質的変化を有する変異ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質は、保存的ではない変化を特徴とする本発明の核酸分子を発現することにより作製し得る。
【００４０】
１つまたは複数の具体的なモチーフ（例えば、ＭＨＣ分子に高親和性で結合すると思われるもの）および／またはドメインに相当するＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質断片は、任意のサイズのものとして本発明に範囲内にある。例えば、ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質のうち少なくとも５個、１０個、２５個、３０個、４０個、５０個、５０個、７０個、７５個、８０個、９０個、１００個、１１０個、１２０個、１３０個、１４０個、１５０個、１６０個、１７０個、１８０個、１９０個、２００個、２１０個、２２０個、２３０個、２４０個、２５０個、２６０個、２７０個、２８０個、３００個またはそれ以上連続したアミノ酸からなるＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質ペプチド断片は、本発明の範囲内にある。長さが７〜１５アミノ酸（好ましくは、８〜１２アミノ酸）の断片（例えば、ＭＨＣ分子の窪みに嵌るサイズのもの）は、このようなサイズのペプチドが効率的な免疫原性薬剤として寄与することが示されているので好ましい。タンパク質全体の中から免疫原性ペプチドを効率的に同定する方法は当業界で知られており、例えば、両親媒性アルゴリズムを用いる。例えば、ベルゾフスキー、ジェイ・エイ（Berzofsky, J.A. ）、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、第１２巻、ｐ．２５６、１９９３年；米国特許第５，９７６，５４１号および米国特許第５，９８０，８９９号を参照されたい。対象者において最も免疫原性の高いペプチドについては、抗原全体の中で重複を有する一連のペプチド断片（例えば、７〜３０個連続したアミノ酸長）を調製し、当該断片をワクチン組成物に含めて該対象者（または遺伝子的に類似したこのような対象者群）に投与し、免疫応答刺激について該対象者を分析することによって測定することも可能である。次に所望の応答を誘導するこれらのペプチド断片を選択し得る。
【００４１】
ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質の単離ペプチド部分は、このようなペプチドをコードする核酸の対応する断片から組換え技法により生産されたペプチドをスクリーニングすることにより入手し得る。さらに、従来のメリフィールド（Merrifield）固相ｆ−Ｍｏｃまたは
ｔ−Ｂｏｃ化学などの当業界に知られている方法を用いて断片を化学的に合成することが可能である。例えば、上記方法と同様、本発明のＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質を、断片どうし重なりあわない所望の長さの断片に任意に分割してもよいし、あるいは、好ましくは重複を有する所望の長さの断片に分割してもよい。前記断片を（組換え技法または化学合成により）製造し、ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質に対する免疫応答を刺激する抗原性薬剤として機能し得るこれらのペプチド断片を同定するべく試験することが可能である。
【００４２】
本発明の他の態様は、組換え型のＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質に関する。天然ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質の他に、本発明の使用に好ましい組換えポリペプチドは、配列番号２の核酸配列と少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％）を有する核酸によりコードされる。好ましい実施形態において、変異体ＩＬ‐１３Ｒα２は、天然ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質に対する免疫応答を刺激する能力を有する。ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質変異体は、当業界で知られている種々の方法により作製し得る。例えば、ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質変異体を、個別の点変異を導入すること、あるいは末端を切断することなどの突然変異誘発により作製し得る。突然変異によって、天然ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質の抗原活性よりも高いＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質変異体、実質的に同じ抗原活性の変異体、または抗原活性のごく一部を有する変異体が得られる。作製し得る他のＩＬ‐１３Ｒα２変異体としては、例えばプロテアーゼの標的配列を改変する変異によって、タンパク分解性切断に抵抗性であるか、あるいはより感受性の高いものが挙げられる。ペプチドのアミノ酸配列を変化させることによって、天然ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質よりも大きなまたは小さな抗原活性を有するＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質変異体がもたらされるかどうかは、該変異体と天然ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質それぞれをワクチン接種した対象者におけるＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答刺激能に関して両タンパク質を比較することにより容易に決定し得る。
【００４３】
他の例として、ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質変異体は、縮重オリゴヌクレオチド配列から生成され得る。縮重遺伝子配列の化学合成を自動ＤＮＡ合成装置により実施し、次いで合成遺伝子を適切な発現ベクターに連結させることが可能である。縮重させた遺伝子セットの目的は、考えられるＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質配列の所望のセットをコードする配列のすべてを１つの混合物として提供することである。縮重オリゴヌクレオチドの合成は当業界でよく知られている（例えば、ナラング、エスエイ（Narang, SA）、１９８３年、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、第３９巻、ｐ．３；イタクラ（Itakura ）ら、１９８１年、「組換えＤＮＡ、第３回クリーブランドマクロ分子シンポジウム会報（Recombinant DNA, Proc. 3rd Cleveland Sympos. Macromolecules ）」、エイジー・ワルトン（AG Walton ）編、アムステルダム所在のエルゼビア（Elsevier）、ｐ．２７３〜２８９；イタクラ（Itakura ）ら、１９８４年、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、第５３巻、ｐ．３２３；イタクラ（Itakura ）ら、１９８４年、Ｓｃｉｅｎｃｅ、第１９８巻、ｐ．１０５６；イケ（Ike ）ら、１９８３年、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．、第１１巻、ｐ．４７７を参照）。このような技法は、他のタンパク質を方向づけて進化させることに使用されている（例えば、スコット（Scott ）ら、１９９０年、Ｓｃｉｅｎｃｅ、第２４９巻、ｐ．３８６〜３９０；ロバーツ（Roberts ）ら、１９９２年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、第８９巻、ｐ．２４２９〜２４３３；デブリン（Devlin）ら、１９９０年、Ｓｃｉｅｎｃｅ、第２４９巻、ｐ．４０４〜４０６；クワーラ（Cwirla）ら、１９９０年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、第８７巻、ｐ．６３７８〜６３８２；ならびに米国特許第５，２２３，４０９号；米国特許第５，１９８，３４６号；および米国特許第５，０９６，８１５号を参照）。同様に、対象者においてＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激する能力を有する断片のスクリーニングおよびその後の選択を目的にＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質断片の多彩な集団を生成するため、ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子クローンについてのコード配列断片のライブラリーを提供することができる
。化学合成を含め、このようなライブラリーを作製するための種々の技法が当業界において知られている。１実施形態において、コード配列断片のライブラリーは、（ｉ）ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子コード配列の二本鎖ＰＣＲ断片を、１分子当たり約１度だけニックが入る条件下でヌクレアーゼ処理すること；（ｉｉ）二本鎖ＤＮＡを変性させること；（ｉｉｉ）異なるニック生成物由来のセンス／アンチセンス対を含み得る二本鎖ＤＮＡを形成するためにＤＮＡを再生させること；（ｉｖ）再形成された二重鎖からＳ１ヌクレアーゼ処理により１本鎖部分を除去すること；および（ｖ）生じた断片ライブラリーを発現ベクターに連結すること、によって創製し得る。この例示的方法によって、様々なサイズのＮ末端、Ｃ末端および内部断片をコードする発現ライブラリーを誘導し得る。本発明はまた、対象者においてＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激し得る模倣物（例えば、ペプチド剤または非ペプチド剤）を生成するための、ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質の縮小も提供する。例えば、ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質およびそのペプチドのアミノ酸残基の非加水分解性ペプチド類縁体は、ベンゾジアゼピンを用いて（例えば、フライディンガー（Freidinger）ら、「ペプチド：化学と生物学（Peptides: Chemistry and Biology ）」、ジー・アール・マーシャル（G.R. Marshall ）編、オランダ国ライデン（Leiden）所在のＥＳＣＯＭ出版社、１９８８年を参照）、アゼピンを用いて（例えば、ハフマン（Huffman ）ら、「ペプチド：化学と生物学（Peptides: Chemistry and Biology ）」、ジー・アール・マーシャル（G.R. Marshall ）編、オランダ国ライデン（Leiden）所在のＥＳＣＯＭ出版社、１９８８年を参照）、置換γラクタム環を用いて（ガーベイ（Garvey）ら、「ペプチド：化学と生物学（Peptides: Chemistry and Biology ）」、ジー・アール・マーシャル（G.R. Marshall ）編、オランダ国ライデン（Leiden）所在のＥＳＣＯＭ出版社、１９８８年を参照）、ケト−メチレンプソイドペプチドを用いて（エベンソン（Ewenson ）ら、１９８６年、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、第２９巻、ｐ．２９５；およびエベンソン（Ewenson ）ら、「ペプチド：構造と機能（第９回アメリカペプチドシンポジウム会報）（Peptides:Structure and Function (Proceedings of the 9th American Peptide Symposium) ）」ピアース・ケミカル社（Pierce Chemical Co. ）、イリノイ州ロックランド所在、１９８５年）、β‐ターンジペプチドコアを用いて（ナガイ（Nagai ）ら、１９８５年、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ、第２６巻、ｐ．６４７；およびサトウ（Sato）ら、１９８６年、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ．Ｔｒａｎｓ．、第１巻、ｐ．１２３１）、およびｂ‐アミノアルコールを用いて（ゴードン（Gordon）ら、１９８５年、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、第１２６巻、ｐ．４１９；およびダン（Dann）、１９８６年、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、第１３４巻、ｐ．７１）、作製可能である。ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質を、グリコシル基、脂質、リン酸塩、アセチル基などのような他の化学構成成分との共有結合コンジュゲートまたは凝集コンジュゲートの形成によるＩＬ‐１３Ｒα２誘導体創製のために化学的に修飾することも可能である。ＩＬ‐１３���α２タンパク質またはペプチドの共有結合による誘導体は、該タンパク質／ペプチドのアミノ酸側鎖上の官能基に、または該タンパク質／ペプチドのＮ末端またはＣ末端に、前記化学構成成分を連結させることによって調製し得る。
【００４４】
ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質を、１つまたは複数の他のタンパク質に融合させることも可能である。例えば、ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質またはその免疫原性部分を、ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質または部分を対象者体内の特定の標的部位へ（例えば、その部位で局所的に免疫応答を刺激するために）送達する標的化リガンドとして役立つ他のタンパク質に融合させることができる。例えば、ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質またはペプチドの特異的標的を腫瘍（例えばＨＧＧ）とするために、ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質またはペプチドを変異ＩＬ‐１３分子または抗ＩＬ‐１３受容体抗体と融合させることができる。他の例として、抗原の免疫原性を増強するために、ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質またはペプチドを、シュードモナス（例えば、Ｄ５５３）またはジフテリアの菌体外毒素から誘導されるものなどのトキソイドに融合させる。
【００４５】
例えば、組換え融合構築物を作製かつ発現させる、あるいは２つ以上のタンパク質を一緒に共有結合させて１つの分子を形成する架橋剤を用いる、２つ以上のタンパク質を一緒に融合する多数の方法が当業界に知られている。この適用に好適なものはいずれも本発明に使用し得る。本発明のＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質またはペプチドは、周知の方法により作製し得る。例えば、目的のタンパク質またはペプチドをコードするヌクレオチド配列を発現させる核酸ベクターでトランスフェクションした宿主細胞を、該ペプチドを発現させる適切な条件下で培養することが可能である。細胞をハーベストし、溶菌してタンパク質を単離すればよい。組換えＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質またはペプチドは、イオン交換クロマトグラフィ、ゲルろ過クロマトグラフィ、限外ろ過、電気泳動、および当該タンパク質またはペプチドに特異的な抗体を用いたイムノアフィニティ精製など、タンパク質を精製するための当業界で周知の技法を用いて宿主細胞から単離することができる。
【００４６】
例えば、ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質またはペプチドを細胞内で発現させた後にイムノアフィニティクロマトグラフィを用いて単離し得る。例えば、目的のタンパク質またはペプチドに特異的に結合する抗ＩＬ‐１３Ｒα２抗体をカラムクロマトグラフィのマトリックス上に固定化することが可能であり、該マトリックスをイムノアフィニティクロマトグラフィに使用して細胞溶解物から標準的な方法（例えば、オースベル（Ausbel）らの上記文献を参照）によりタンパク質またはペプチドを精製し得る。イムノアフィニティクロマトグラフィ後、該タンパク質またはペプチドを、他の標準的な方法、例えば、高速液体クロマトグラフィ（例えば、フィッシャー（Fisher）、「生化学および分子生物学における実験技法（Laboratory Techniques In Biochemistry And Molecular Biology ）」、ワークおよびバードン（Work and Burdon ）編、エルゼビア（Elsevier）、１９８０年を参照）によりさらに精製し得る。他の実施形態において、本発明に利用されるＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質またはペプチドは、その精製を容易にする親和性タグ（例えば、ＧＳＴ）を含有する融合タンパク質として発現される。
【００４７】
本発明のワクチンの抗原性薬剤（例えば、ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質またはそのペプチド断片）と関連して、免疫応答をブーストするためにアジュバントを使用することができる。本発明の使用に好適なアジュバントは、抗原性薬剤により刺激される抗原特異的免疫応答を非特異的に増強し得る任意の物質を含み得る。多くのこのようなアジュバントが知られており、例えば、（１）フロイントのアジュバント（完全および不完全）；（２）Ｒｉｂｉ（商標）アジュバントシステム（コリキサ（Corixa）、ワシントン州シアトル所在）などの水中油乳化製剤；（３）アルミニウム塩（例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムなど）；（４）サポニンベースのアジュバント（マサチューセッツ州フラミンガム所在のアクイラ・バイオサイエンシズ（Aquila Biosciences）のＳｔｉｍｕｌｏｎ（商標））；（５）ＩＬ‐１、ＩＬ‐２、マクロファージコロニー刺激因子、および腫瘍壊死因子などのサイトカイン；ならびに（６）ムラミルペプチドまたは細菌細胞壁成分、トキシンおよびトキソイドなどの免疫刺激剤として作用する他の物質、などが含まれる。
【００４８】
それらの製剤の対象者への投与を促進するために、本発明のワクチン組成物（例えば、タンパク質／ペプチド抗原およびアジュバント）を、製薬上許容できる担体または賦形剤をさらに含み得る。例えば、タンパク質／ペプチド抗原およびアジュバントを、水、生理食塩水、グリセロール、エタノールなどの希釈剤と混合することができる。保存剤、界面活性剤、乳化剤、緩衝剤などの他の物質も含めることができる。一般に、本発明のタンパク質／ペプチドベースのワクチン組成物は、溶液または懸濁液として非経口注入用に調製される。ワクチン組成物を、対象者への注入前に液体（例えば、生理食塩水）で再構成可能な固体（例えば、凍結乾燥粉剤）として調製することも可能である。ワクチン組成物を乳化することも、リポソーム中にカプセル化することも可能である。
【００４９】
（核酸ベースのワクチン）
核酸ベースのワクチンは、顕著な細胞性免疫応答を誘発することが知られている。例えば、ダンリー（Donnely ）ら、１９９７年；ローゼンバーグ、エス・エイ（Rosenberg, S.A. ）、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、第１０巻、ｐ．２８１、１９９９年を参照されたい。したがって、タンパク質／ペプチドベースのワクチンの他に、本発明のワクチンに使用するための抗原性薬剤を、対象者に投与する際、ＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激し得る核酸の形態とすることが可能である。このような核酸の例としては、配列番号２（図２）として本願明細書に示された核酸のような天然ＩＬ‐１３Ｒα２をコードする核酸、天然ＩＬ‐１３Ｒα２の変異体をコードする核酸、または天然もしくは変異体ＩＬ‐１３Ｒα２のペプチド断片をコードする核酸が挙げられる。タンパク質抗原全体をコードする核酸より作製されたワクチンは、該タンパク質によって発現される種々の抗原部位のすべてに対して免疫応答を刺激する可能性があるので有利である。一方、ペプチド抗原（例えば、タンパク質全体のうち７〜１５アミノ酸）をコードする核酸より作製されたワクチンは一般に、該タンパク質によって発現される抗原部位となりうる全ての部位よりも少ない部位に対する免疫応答を刺激することになる。
【００５０】
本発明のワクチンに用いられる核酸の形態は、対象者に投与される際、ＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激するのに好適な任意の形態であり得る。例えば、前記核酸は、「裸のＤＮＡ」の形態でもよいし、または発現ベクターに組み込んでもよい。好適な核酸については以下に記載する。対象者において最も免疫原性の高い核酸について、以下に掲げる核酸（例えば、抗原全体またはそのペプチド断片をコードする核酸）のいくつかを調製し、かかる核酸を（例えば、裸の核酸として、または好適な担体に含めた発現ベクター中で）ワクチン組成物に含めて対象者（または遺伝的に類似の対象者群）に投与し、免疫応答の刺激に関して該対象者を分析することにより、決定することが可能である。次いで所望の応答を誘導するこれらの核酸を選択し得る。
【００５１】
本発明において抗原性薬剤として使用される核酸分子は、ＲＮＡの形態でもＤＮＡの形態（例えば、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡおよび合成ＤＮＡ）でもよい。前記ＤＮＡは、２本鎖であっても１本鎖であってもよく、１本鎖の場合は、コード（センス）鎖であっても非コード（アンチセンス）鎖であってもよい。天然ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質をコードするコード配列は、図２に示すヌクレオチド配列と同一であってもよい。該配列は、遺伝子コードの冗長性または縮重性の結果として、配列番号１（図１）に示すのと同じポリペプチドをコードする異なるコード配列であってもよい。
【００５２】
本発明に有用な他の核酸分子は、天然ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質の断片（例えば、翻訳後のプロセシングを経た形態）、類縁体および誘導体をコードするものなどの天然ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子の変異体である。このような変異体は、例えば、天然ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子の天然に存在する対立遺伝子変異体、天然ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子の相同体、または天然ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子の天然には存在しない変異体でありうる。これらの変異体は、１つまたは複数の塩基が天然ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子とは異なっているヌクレオチド配列を有する。例えば、このような変異体のヌクレオチド配列は、天然ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子の１つまたは複数のヌクレオチドの欠失、付加、または置換を特徴とし得る。核酸の挿入物は、約１〜１０個連続したヌクレオチドであることが好ましく、欠失は、約１〜３０個連続したヌクレオチドであることが好ましい。
【００５３】
本発明における天然ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子の天然に存在する対立遺伝子変異体は、天然ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子との配列同一性が少なくとも７５％（例えば、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％
、９８％、および９９％）であり、かつ天然ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質と構造的類似性を有するポリペプチドをコードする、ヒト組織から単離された核酸である。本発明における天然ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子の相同体は、天然ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子との配列同一性が少なくとも７５％（例えば、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、および９９％）であり、かつ天然ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質と構造的類似性を有するポリペプチドをコードする、他の種から単離された核酸である。天然ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子との配列同一性が高率（例えば、７０、８０、９０％以上）の他の核酸分子を同定することを試みて公的核酸データベースおよび／または独自の核酸データベースを検索してもよい。
【００５４】
ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子の天然には存在しない変異体は、自然界には存在せず（例えば、人工的に作製された）、天然ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子との配列同一性が少なくとも７５％（例えば、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、および９９％）であり、かつ天然ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質と構造的類似性を有するポリペプチドをコードする核酸である。ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子の天然には存在しない変異体の例としては、ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質の断片をコードするもの、ストリンジェントな条件下で天然ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子または天然ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子の相補鎖にハイブリダイズするもの、天然ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子または天然ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子の相補鎖と少なくとも６５％の配列同一性を共用しているもの、ならびにＩＬ‐１３Ｒα２融合タンパク質をコードするものが挙げられる。
【００５５】
本発明における天然ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質の断片をコードする核酸は、天然ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質のうち、例えば、２、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００個またはそれ以上のアミノ酸残基をコードするものである。天然ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質の断片をコードする比較的短いオリゴヌクレオチド（例えば、長さが６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、５０、１００、１２５、１５０、または２００塩基対）を使用し得る。完全長の天然ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子またはその変異体の酵素消化（例えば、制限酵素を用いて）または化学的分解により、天然ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質の断片をコードする核酸を作製可能である。
【００５６】
ＩＬ‐１３Ｒα２融合タンパク質をコードする核酸分子もまた、本発明の範囲内にある。このような核酸は、好適な宿主に導入されるとＩＬ‐１３Ｒα２融合タンパク質を発現する構築物（例えば、発現ベクター）を調製することにより作製可能である。例えば、このような構築物は、好適な発現系において該構築物を発現させると融合タンパク質が得られるように、読み枠を合わせて融合された、ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、および他のタンパク質（例えば、検出可能な標識タンパク質または担体タンパク質）をコードする第２のポリヌクレオチドを、ライゲーションすることにより作製可能である。ＩＬ‐１３Ｒα２融合タンパク質を、例えば、ＩＬ‐１３Ｒα２ペプチドの免疫原性を増強するために、ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質／ペプチドの精製を容易にするために、または対象者に投与された後ＩＬ‐１３Ｒα２融合タンパク質の位置を追跡するために使用することができる。
【００５７】
天然ＩＬ‐１３Ｒα２遺伝子のヌクレオチド配列および天然ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質のアミノ酸配列を用いて、当業者は、例えば、標準的な核酸の変異誘発法または化学合成により、ヌクレオチド配列内に軽微な変異を有する核酸分子を創製し得る。ＩＬ‐１３
Ｒα２変異体の核酸分子を、ＩＬ‐１３Ｒα２変異体タンパク質を産生するために発現させてもよい。
【００５８】
（裸の核酸のワクチン）
本発明は、ＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激するための、裸の核酸のワクチンの使用を提供する。この方法に使用される代表的な裸の核酸のワクチンには、ＩＬ‐１３Ｒα２の１つまたは複数の免疫原性部分をコードするＤＮＡに加えてこれを発現させるのに十分なだけの他の５’および３’エレメントが含まれる。ある特定のタンパク質に対する免疫応答に限定してクラスＩおよびクラスＩＩの双方を刺激するために裸の核酸を使用することは、当業界において周知である。例えば、ローゼンバーグ、エス．エイ．（Rosenberg, S.A. ）、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、第１０巻、ｐ．２８１、１９９９年；ウルマー（Ulmer ）ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、第２５９巻、ｐ．１７４５、１９９３年；ドネリー（Donnelly）ら、Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、第７７２巻、ｐ．４０、１９９５年；シュアーズ（Scheurs ）ら、Ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓ．、第５８巻、ｐ．２５０９、１９９８年；ハーピン（Hurpin）ら、Ｖａｃｃｉｎｅ、第１６巻、ｐ．２０８、１９９８年；レクチス（Lekutis ）ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、第１５８巻、ｐ．４４７１、１９９７年；マニッカン（Manickan）ら、Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ、第６１巻、ｐ．１２５、１９９７年を参照されたい。これらの方法は、ＩＬ‐１３Ｒα２の１つまたは複数の免疫原性部分をコードする核酸を使用することにより本発明における使用に適合させ得る。裸の核酸のワクチンは、任意の好適な方法により対象者に投与し得る。例えば、ＩＬ‐１３Ｒα２のペプチド部分をコードする裸のＤＮＡを対象者の筋肉細胞に注入することが可能であるし、あるいは裸のＤＮＡでコーティングした金粒子を、遺伝子銃を用いて対象者の皮膚細胞に（樹状細胞に取り込ませるために）導入することも可能である。
【００５９】
（発現ベクターワクチン）
本発明はまた、ＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激するための発現ベクターワクチンの使用も提供する。この方法の典型的な適用においては、ＩＬ‐１３Ｒα２の１つまたは複数のペプチドまたはタンパク質抗原をコードする核酸を、宿主細胞（例えば、対象者体内の細胞または対象者に投与された細胞）内での抗原の発現を可能にするベクターに導入する。抗原をコードする核酸は、一般に、プロモーター配列（例えば、組織特異的なもの、構成的活性なもの、または誘導性のもの）またはエンハンサー配列などのベクター内に含まれる他の配列の作動制御下にある。ベクターによりコードされた抗原は、該ベクターを対象者の宿主細胞内に導入すると発現する。発現後、抗原は、Ｔリンパ球などの免疫系細胞へ提示されるためにＭＨＣ分子との会合することが可能であり、その結果免疫応答が刺激される。例えば、コール（Corr）ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、第１８４巻、ｐ．１５５５、１９９６年を参照されたい。
【００６０】
本発明で使用するベクターは、対象者においてコードされた抗原を発現させうる任意のものでよい。例えば、細菌プラスミドおよびウィルス由来のベクターを使用してもよい。代表的なウィルスベクターとしては、レトロウィルスベクター、アデノウィルスベクター、およびアデノ関連ウィルスベクターが挙げられる。「遺伝子治療：原理と応用（Gene Therapy: Principles and Applications ）」、ティー・ブラッケンシュタイン（T. Blackenstein ）編、スプリンガー出版（Springer Verlag ）、１９９９年；「遺伝子治療プロトコール（分子医学的方法）（Gene Therapy Protocols (Methods in Molecular Medicine)）」、ピー・ディー・ロビンズ（P.D. Robbins）編、ヒューマナ・プレス（Humana Press）、１９９７年；および「ヒト遺伝子治療のためのレトロベクター（Retro-vectors for Human Gene Therapy）」、シー・ピー・ホジソン（C.P. Hodgson）編、スプリンガー出版（Springer Verlag ）、１９９６年を参照されたい。
【００６１】
（細胞ベースのワクチン）
本発明において、ＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激するために細胞ベースのワクチンが提供される。種々の癌関連抗原を用いる類似のアプローチにおいて、患者から単離した癌細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養し、サイトカイン、ＭＨＣ分子または共刺激分子などの免疫刺激物をコードするＤＮＡでトランスフェクションした。次に、抗癌応答を生じさせるために免疫系を活性化するため、トランスフェクションした癌細胞を前記患者に再注入した。グレーテン、ティー・エフ（Greten, T.F.）、およびイー・エム・ジャフィー（E.M. Jaffee ）、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．、第１７巻、ｐ．１０４７〜１０６０、１９９９年；シモンズ（Simons）ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、第５７巻、ｐ．１５３７〜１５４６、１９９７年。
【００６２】
本発明は、ＩＬ‐１３Ｒα２またはＩＬ‐１３Ｒα２のペプチド断片を発現する単離細胞をさらに提供する。ＩＬ‐１３Ｒα２を発現する細胞は、そのような細胞（例えば、精巣またはＨＧＧ由来の細胞）を有する対象者から単離し得る。ＩＬ‐１３Ｒα２を発現しない細胞を、多数の様々な方法でこのタンパク質を発現するようにすることも可能である。一例として、ＩＬ‐１３Ｒα２の断片が細胞表面上のＭＨＣ分子と会合する条件下で、ＩＬ‐１３Ｒα２またはそのペプチド断片と共に細胞を培養し得る。あるいは、ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質、ＩＬ‐１３Ｒα２のペプチド断片、または前述の変異体をコードする核酸を細胞に導入し、該細胞に該タンパク質またはペプチドを発現させる条件下で当該細胞を培養することにより、該細胞にＩＬ‐１３Ｒα２を発現させることが可能である。タンパク質、ペプチドまたは変異体の細胞内発現を、任意の従来法によりモニターすることができる。例えば、タンパク質、ペプチドまたは変異体に特異的に結合する蛍光標識抗体を、細胞上のタンパク質、ペプチドまたは変異体の発現を検出するために使用し得る。例えば、キム（Kim ）ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、第２０巻、ｐ．２７６、１９９７年を参照されたい。さらに、前記タンパク質、ペプチドまたは変異体に特異的に結合する抗体を用いるウェスタンブロット法を、細胞の溶解物中のタンパク質、ペプチドまたは変異体の発現を検出するために使用し得る。
【００６３】
ＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激するために好適な細胞のタイプは、原核生物でも真核生物でもよい。多くのこのような細胞が当業界において周知であるので、本願明細書では完全なリストは提供しない。好適な原核生物細胞の例としては、大腸菌、枯草菌および放線菌などの細菌細胞が挙げられる。好適な真核生物細胞の例としては、植物細胞、酵母細胞、昆虫細胞、鳥類細胞、線虫細胞（例えば、シー・エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ））、および哺乳動物細胞（例えば、後でヒト患者に再導入するための該患者由来の自己細胞）が挙げられる。これらの細胞を、プロモーターの誘導、形質転換体の選択、または所望の配列をコードする遺伝子の増幅に適切なものとして改変された従来の栄養培地中で培養することができる。
【００６４】
ＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激するために使用し得る細胞のさらなる例としては、配列番号１のうち少なくとも７個（例えば、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個またはそれ以上）連続したアミノ酸からなるペプチドを発現する細胞が挙げられる。例えば、配列番号１の配列を有するタンパク質を発現する単離細胞を使用し得る。配列番号１のうち少なくとも７個連続したアミノ酸からなるペプチドをコードする精製核酸がその内部に導入されている細胞も使用可能であろう。
【００６５】
ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質、ＩＬ‐１３Ｒα２のペプチド断片、または前述の変異体を発現し得る全ての細胞を、対象者における免疫応答を刺激するために使用することができるが、特定の抗原提示能力を有するので好ましいものもある。このような細胞の例としては、Ｂリンパ球、単球／マクロファージ、樹状細胞（ＤＣ）、ならびに主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）および／または共刺激分子を発現する他の細胞などの、抗原提示細胞（
ＡＰＳ）が挙げられる。
【００６６】
ＤＣは、種々の形態の抗原を効率的に取り込み、処理し、そして免疫学的にナイーブなＴ細胞に対して提示することができる特に強力なＡＰＣとして機能することが知られているので、本発明の細胞ベースのワクチンにおいてＤＣを使用することは特に好ましい。例えば、バンチェロー（Banchereau）ら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第１８巻、ｐ．７６７、２０００年を参照されたい。したがって、特定の腫瘍抗原（例えば、ＩＬ‐１３Ｒα２またはそのペプチド断片）により初回刺激を受けたＤＣは、腫瘍から保護し腫瘍の退縮を引き起こし得る抗癌性の細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の応答を活性化し得る。いくつかの腫瘍関連抗原は、自己抗原に対する免疫寛容性のため免疫原性に乏しい組織分化抗原に相当する。しかしながら、抗原を搭載したＤＣで刺激することにより腫瘍関連抗原の寛容性を破壊し、抗癌性の細胞傷害性免疫応答を誘導することができる。
【００６７】
ＤＣに、ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質、ＩＬ‐１３Ｒα２のペプチド断片、または前述のようなそれらの変異体を発現させることが可能である。例えば、ＤＣを対象者から取り出し、選択した抗原と接触させ、免疫応答を刺激するために該対象者に戻すことが可能である。腫瘍関連抗原でＤＣを初回刺激する生体外（ex vivo ）プロトコールは当業界に知られている。クマモト（Kumamoto）ら、Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、第２８巻、ｐ．６５８、２００１年およびフォング（Fong）ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、第１６７巻、ｐ．７１５０、２００１年を参照されたい。一般に、ＤＣは、例えば、密度勾配分離法、蛍光活性化細胞選別法および免疫学的細胞分離法により末梢血から単離される。米国特許第６，１９４，２０４号を参照されたい。次に、単離されたＤＣがＴ細胞に対する提示用に抗原を処理し得るように、該ＤＣを、精製抗原（例えば、ＩＬ‐１３Ｒα２）を添加した培地中で培養する。抗原を搭載したＤＣを、治療上有効な量（例えば、腫瘍の退縮を引き起こす量）で患者に投与（例えば、注射）し得る。この応答を増強するために、投与に先立ってＤＣをサイトカイン（例えば、ＧＭ‐ＣＳＦ／ＩＬ‐４）に曝露してもよい。タニガワ（Tanigawa）ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、第２６巻、ｐ．４９３、２００１年。さらに、周知の方法に従って特定の抗原をＤＣの標的とすることができる。例えば、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．、第１７巻、ｐ．２５３、１９９９年を参照されたい。
【００６８】
対象者においてＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激するのに最も有効なこれらの細胞ベースのワクチンについては、一連の種々の細胞ベースのワクチン（例えば、抗原全体または抗原の特定のペプチド断片を発現するもの）を調製し、このような種々のワクチンを対象者（または遺伝学的に類似の対象者群）に投与し、免疫応答の刺激に関して該対象者を分析することにより決定することができる。次に、所望の応答を誘導するワクチンを選択し得る。
【００６９】
（抗イディオタイプ抗体ワクチン）
本発明はまた、対象者においてＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激するための、抗イディオタイプ抗体ワクチンの使用をも意図している。この方法において、ＩＬ‐１３Ｒα２の１つまたは複数の免疫原性部分の内部「イメージ」を特徴とする抗イディオタイプ抗体を調製する。例えば、米国特許第５，０５３，２２４号；米国特許第５，２０８，１４６号；米国特許第５，６１２，０３０号；および米国特許第５，９２５，３６２号を参照されたい。ワクチン組成物中に含めたこれら抗イディオタイプ抗体の対象者への投与により、ＩＬ‐１３Ｒα２の実際の免疫原性部分に対して交差反応するＩＬ‐１３Ｒα２の免疫原性部分の「イメージ」に対する免疫応答を刺激することができる。一例として、ＩＬ‐１３Ｒα２のエピトープに対して作製したモノクローナル抗体を用いて宿主動物を免疫化することにより、ポリクローナルの抗イディオタイプ抗体が生じ得る。モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体を調製する方法を、以下により詳細に記載する。
【００７０】
（抗体産生）
本発明の特徴を備えたワクチン製剤／抗原性薬剤を用いて、本発明に有用な抗体を作製することができる。ポリクローナル抗体は、免疫化動物の血清に含まれている不均一な抗体分子の集団である。したがって、本発明における抗体としては、ポリクローナル抗体と、さらにモノクローナル抗体、単鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、およびＦａｂ発現ライブラリーを用いて生産した分子が挙げられる。特定の抗原に対する均一な抗体の集団であるモノクローナル抗体は、上記のＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質およびペプチドならびに標準的ハイブリドーマ技術（例えば、コーラー（Kohler）ら、Ｎａｔｕｒｅ、第２５６号、ｐ．４９５、１９７５年；コーラー（Kohler）ら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、第６巻、ｐ．５１１、１９７６年；コーラー（Kohler）ら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、第６巻、ｐ．２９２、１９７６年；ハンマーリング（Hammerling）ら、「モノクローナル抗体とＴ細胞ハイブリドーマ（Monoclonal Antibodies and T Cell Hybridomas ）」、ニューヨーク所在のエルゼビア（Elsevier）、１９８１年；オースベル（Ausubel ）らの上記文献を参照）を用いて調製し得る。特にモノクローナル抗体は、コーラー（Kohler）ら、Ｎａｔｕｒｅ、第２５６号、ｐ．４９５、１９７５年および米国特許第４，３７６，１１０号すなわち「ヒトＢ細胞ハイブリドーマ法」（コスボア（Kosbor）ら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ、第４巻、ｐ．７２、１９８３年；コール（Cole）ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、第８０巻、ｐ．２０２６、１９８３年）、に記載されるような連続培養中の細胞株に抗体分子を生産させる任意の方法、ならびにＥＢＶ‐ハイブリドーマ法（コール（Cole）ら）、「モノクローナル抗体と抗癌治療（Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy）」、アラン・アール・リス社（Alan R. Liss, Inc.）、ｐ．７７〜９６、１９８３年）により得ることが可能である。このような抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤなどの任意の免疫グロブリンクラスおよびそれらの任意のサブクラスであり得る。本発明のｍＡｂを生産するハイブリドーマは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで培養できる。高力価のｍＡｂをｉｎ  ｖｉｖｏで産生できるので、これは特に有用な生産方法である。
【００７１】
ＩＬ‐１３Ｒα２に特異的に結合するヒト抗体またはヒト型（ｈｕｍａｎｏｉｄ）抗体も、周知の方法を用いて生産し得る。例えば、ＩＬ‐１３Ｒα２に対する抗体生産を刺激するワクチンを投与された対象者など、血清中にポリクローナル抗体を有するヒト対象者からそのポリクローナル抗体を採取することもできる。他の例として、ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質に対するヒト抗体を、マウスなどの動物中でヒト抗体を生産する周知の方法を適合させることにより作製することができる。例えば、フィッシュワイルド、ディー・エム（Fishwild, D.M.）ら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、第１４巻、１９９６年、ｐ．８４５〜８５１；ヘイジネン、アイ（Heijnen, I）ら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ、第９７巻、１９９６年、ｐ．３３１〜３３８；ロンバーグ、エヌ（Lonberg, N）ら、Ｎａｔｕｒｅ、第３６８巻、１９９４年、ｐ．８５６〜８５９；モリソン、エス・エル（Morrison, S.L.）、Ｎａｔｕｒｅ、第３６８巻、１９９４年、ｐ．８１２〜８１３；ノイバーガー、エム（N euberger, M）、
Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、第１４巻、１９９６年、ｐ．８２６；および米国特許第５，５４５，８０６号；米国特許第５，５６９，８２５号；米国特許第５，８７７，３９７号；米国特許第５，９３９，５９８号；米国特許第６，０７５，１８１号；米国特許第６，０９１，００１号；米国特許第６，１１４，５９８号；および米国特許第６，１３０，３１４号を参照されたい。ＩＬ‐１３Ｒα２に対するヒト型抗体は、米国特許第５，５３０，１０１号；米国特許第５，５８５，０８９号；米国特許第５，６９３，７６１号；および米国特許第５，６９３，７６２号に記載されているものなど周知の方法を適合させることにより非ヒト抗体から作製し得る。
【００７２】
ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を生産したら、例えば、オースベルらの上記文献に記載された標準的方法によるウェスタンブロットまたは免疫沈降分析により、
ＩＬ‐１３Ｒα２の特異的認識に関して該抗体を試験し得る。ＩＬ‐１３Ｒα２を特異的に認識して結合する抗体は、本発明において有用である。例えば、このような抗体を、サンプル中のＩＬ‐１３Ｒα２の濃度をモニターするための（例えば、ＩＬ‐１３Ｒα２の細胞内発現量または細胞内局在化、あるいは液体サンプル中の可溶性形態のＩＬ‐１３Ｒα２の存在および量を決定するための）イムノアッセイに使用し得る。
【００７３】
本発明のＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質選択的抗体は、保存性の高い領域の外側に位置し、荷電残基の頻度が高いなどの評価基準に照らして抗原性になり易いと思われる、ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質の断片を用いて生産されることが好ましい。交差反応性の抗ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質抗体は、このタンパク質ファミリーのメンバー間で保存されているＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質の断片を用いて生産される。１つの特定の例において、このような断片は、標準的なＰＣＲ法によって生成された後にｐＧＥＸ発現ベクター（オースベルら、上記文献）にクローニングされる。融合タンパク質を大腸菌内で発現させ、オースベルらの上記文献に記載されているようにグルタチオンアガロースの親和性マトリックスを用いて精製する。
【００７４】
場合によっては、抗血清の親和性または特異性が低いという問題が起きる可能性を最小限にすることが望ましいかもしれない。そのような状況下では、各タンパク質について２つまたは３つの融合体を生成し、各融合体を少なくとも２匹のウサギに注入することができる。好ましくは少なくとも３つのブースター注射を含む一連の注射により、抗血清を得ることができる。組換えＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質、またはグルココルチコイド受容体、ＣＡＴもしくはルシフェラーゼのような対照タンパク質を免疫沈降させる能力に関して、抗血清のチェックも行う。
【００７５】
単鎖抗体の生産のための記載の方法（例えば、米国特許第４，９４６，７７８号、米国特許第４，９４６，７７８号、および米国特許第４，７０４，６９２号）を、ＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質またはその断片に対する単鎖抗体を生産するために適合させることができる。アミノ酸架橋を介してＦｖ領域の重鎖断片と軽鎖断片とを連結して、単鎖ポリペプチドを生じさせることにより、単鎖抗体が形成される。
【００７６】
特定のエピトープを認識して結合する抗体断片は、周知の方法により生成され得る。例えば、このような断片としては、抗体分子のペプシン消化により生産可能なＦ（ａｂ’）２断片、およびＦ（ａｂ’）２断片のジスルフィド架橋を還元することにより生成可能なＦａｂ断片が挙げられるが、これらに限定はされない。あるいは、望ましい特異性を有するモノクローナルＦａｂ断片の迅速かつ簡便な同定を可能にするためにＦａｂ発現ライブラリーを構築し得る（フーセ（Huse）ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、第２４６巻、ｐ．１２７５、１９８９年）。
【００７７】
（対象者においてＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を誘導する方法）
本発明は、ＩＬ‐１３Ｒα２を発現する細胞を有する癌であるか、あるいは該癌を発症するリスクのある対象者において、ＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激する方法を提供する。このような方法は、（ａ）該対象者の体外で抗癌ワクチン組成物（上記のとおり）として製剤化すること、および（ｂ）該対象者においてＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激するのに十分な量で該対象者に該ワクチンを投与することにより実施され得る。
【００７８】
（対象者）
本発明の組成物と方法は、任意の好適な対象者、例えば、哺乳動物（例えば、ヒト、イヌ、ネコ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマなど）などの動物とともに利用し得る。ＩＬ‐１３Ｒα２を過剰発現する細胞を有する癌または他の疾患（例えば、ＨＧＧなどの脳腫瘍）に
罹患しているか、あるいは発症するリスクのあるヒト患者が特に好ましい対象者である。
【００７９】
（多価ワクチンの成分としてのＩＬ‐１３Ｒα２）
本発明はまた、対象者においてＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激し得る１つまたは複数の前述の組成物を組み入れる多価ワクチンを提供する。２つの一般的なタイプの多価ワクチンが本発明の範囲内にある。第１は、ＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激し得る複数の薬剤を含有するワクチン（例えば、下表１に掲げたうちの２、３、４、５、６、７、８種またはそれ以上の異なるペプチドを含有する組成物）である。第２は、（ａ）ＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激し得る薬剤、および（ｂ）ＩＬ‐１３Ｒα２以外の分子（例えば、他のＴＳＡまたはＴＡＡ）に対する免疫応答を刺激し得る異なる薬剤の双方を含有するワクチンである。
【００８０】
（対象者へのワクチン投与）
本発明のワクチン組成物は、対象者においてＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激する方法に使用し得る。この方法において、本発明のワクチン組成物は、前述の免疫応答を刺激する任意の方法により対象者に投与し得る。選択される的確な方法は、投与される特定のワクチン組成物によって決まる。注入による非経口投与については、当該部位（in
situ ）（すなわち、特定の組織または組織上の位置、例えば腫瘍中またはリンパ節中）、筋肉内、静脈内、腹腔内、または他の非経口経路により注入され得る。例えば、タンパク質／ペプチドベースのワクチンについては、該ワクチンを皮下または皮内注射によって投与してもよい。場合によっては、例えば、静脈内注射、腹腔内注射、標的組織中へのｉｎ  ｓｉｔｕ注射などの他の経路を使用することができる。
【００８１】
裸の核酸のワクチンまたは発現ベクターワクチンは、筋肉内注射により投与され得る。細胞ベースのワクチンは、任意の好適な方法、例えば、皮下注射により動物に導入可能である。非経口経路に加えて、本発明のワクチンを、非経口経路ではなく、すなわち、経口、舌下、尿道、膣または直腸投与によっても投与し得る。
【００８２】
注射用製剤は、単位投与形態で、例えば、アンプル中または複数回用量用の容器中に、添加保存剤と共に含めてもよい。前記組成物を、懸濁液、溶液または油性媒体もしくは水性媒体中の乳剤などの形態とすることが可能であり、懸濁剤、安定化剤および／または分散剤などの製剤化剤を含めることができる。あるいは、前記ワクチン組成物を、使用前に好適な媒体（例えば、発熱物質を含まない滅菌水）で調製するための粉末形態（例えば、凍結乾燥形態）としてもよい。
【００８３】
本発明の抗原性組成物（例えば、アジュバントを加えた抗原性薬剤）の動物への送達を促進するために、該抗原性組成物を製薬上許容できる担体または賦形剤と混合することが可能である。このような製薬上許容できる担体または賦形剤の例としては、水、生理食塩水、クエン酸緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、酢酸緩衝生理食塩水、および重炭酸塩緩衝生理食塩水などの希釈剤；ならびにアミノ酸、アルコール、タンパク質（例えば、血清アルブミン）、ＥＤＴＡ、マンニトール、ソルビトールおよびグリセロールなどの安定化剤が挙げられる。対象者に投与する際の感染または副作用の機会を最少にするために、担体および賦形剤が、滅菌されておりかつ発熱物質を含まないことが好ましい。ＵＳＰグレードの担体および賦形剤は、ワクチン組成物をヒト対象者へ送達するためには特に好ましい。抗原性薬剤を好適なポリマー材料もしくは疎水性材料またはイオン交換樹脂に添加することにより、ワクチン組成物をデポー製剤として長期徐放用に製剤化することも可能である。そのようなワクチン組成物は、わずかに溶解性の誘導体としてワクチン組成物を調製することによっても作製し得る。デポー製剤は、移植（例えば、皮下または筋肉内への外科的移植）または注射によって対象者に投与可能である。前述の製剤を作製する方法はよく知られており、例えば、「レミントンの製薬学（Remington's Pharmaceutical
Sciences ）」に見いだすことができる。
【００８４】
（投薬）
本発明のワクチン組成物は、対象者においてＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激するのに十分な量で該対象者に投与され、過度に毒性作用を引き起こさないことが好ましい。このような治療的有効量は、以下に記載のとおり決定し得る。
【００８５】
本発明に利用されるワクチンの毒性および治療効率は、ＬＤ５０（集団の５０％致死用量）およびＥＤ５０（集団の５０％治療的有効用量）を決定するために培養細胞または実験動物のいずれかを用いて標準的手法により決定可能である。毒性作用と治療効果との用量比が治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０比として表し得る。治療指数の大きいワクチンが好ましい。毒性副作用を示すものを使用する場合もあり、そのような副作用による潜在的ダメージを最小限にする送達系を設計するべく注意を払う必要がある。動物実験から得られたデータは、ヒトに使用するための用量範囲について製剤化するために使用し得る。このようなワクチンの用量は、毒性がほとんどまたは全くないがＥＤ５０が含まれる範囲内にあることが好ましい。前記用量は、この範囲内において、使用される剤形および利用される投与経路によって変わりうる。
【００８６】
本発明のワクチンは、種々の異なるワクチン接種スケジュールを用いて対象者に投与され得る。例えば、核酸ワクチンを１回だけ対象者に投与してもよいし、一方、タンパク質／ペプチドベースのワクチンを、複数回（１、２、３、４、５回またはそれ以上）対象者に投与してもよい。例えば、強力な免疫応答を刺激しようと試みる場合、本発明のワクチン組成物の初回用量を対象者に投与してから少なくとも２４時間後に、２回目（ブースター）の用量を該対象者に投与してもよい。
【００８７】
（キット）
本発明はまた、対象者においてＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激するためのキットを提供する。このようなキットは、製薬上許容できる形態の上記の抗原性薬剤が１つまたは複数入っている容器を含み得る。容器中の抗原性薬剤は、液体形態でも（例えば、溶液として）、または固体形態でも（例えば、凍結乾燥粉剤または乾燥粉剤として）あり得る。例えば、抗原性薬剤が固体である場合、本発明におけるキットは、該固体を注射用に好適な液体に再構成するための製薬上許容できる溶液（例えば、デキストロースを含む、または含まない滅菌生理食塩水）が入っている容器をさらに含み得る。本発明のキットは、（ａ）抗原性薬剤を投与するための１つまたは複数の器具（例えば針またはシリンジ、アルコールパッドを包装したものなど）；および／または（ｂ）キット使用のための取り扱い説明書印刷物、をさらに含み得る。
【実施例１】
【００８８】
（ＩＬ‐１３Ｒα２は、ＨＧＧ関連のＩＬ‐１３受容体の生物学的特徴を模倣する）
正常なチャイニーズハムスターの卵巣（ＣＨＯ）細胞を、ＩＬ‐１３Ｒα２の完全長オープンリーディングフレームを含有するｐｃＤＮＡ３．１プラスミド（インビトロゲン社（Invitrogen））でトランスフェクションし、陽性クローンをジェネテシン（geneticin ）により選択した。これらクローンにおけるＩＬ‐１３Ｒα２の発現を、１２５Ｉ標識ＩＬ‐１３に結合する能力に関して試験した。選択されたクローンは、ＩＬ‐４とは独立に標識ＩＬ‐１３に結合することが示された。さらに、標識ＩＬ‐１３は、生理的条件下で多くの組織に見られるＩＬ‐１３／ＩＬ‐４共有受容体よりもＨＧＧ上のＩＬ‐１３結合タンパク質に対して大きな親和性を有することが示されたＩＬ‐１３の変異体、ＩＬ‐１３．Ｅ１３Ｋによって置換された。さらに、ＩＬ‐１３ＲαでトランスフェクションされたこれらのＣＨＯ細胞を、ＨＧＧ細胞に対して強力な用量依存的細胞毒性を示す融合タンパク質であるＩＬ‐１３．Ｅ１３Ｋ‐ＰＥ３８ＱＱＲ細胞毒に曝露した。受容体を発現す
るクローンはＩＬ‐１３への親和性に正比例して死滅したが、ＣＨＯ細胞単独または空のプラスミドでトランスフェクションしたＣＨＯ細胞は死滅しなかった。中和実験では、過剰のＩＬ‐１３によりＩＬ‐１３．Ｅ１３Ｋ‐ＰＥ３８ＱＱＲの細胞毒性作用が抑制された。したがって、毒素ＰＥ３８ＱＱＲが該細胞に入りこんで同細胞を死滅させ得た唯一の経路は、受容体を媒介した飲食作用、すなわち細胞毒のＩＬ‐１３部分により導かれるプロセスであった。ＩＬ‐１３．Ｅ１３Ｋ／増強緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）融合タンパク質の使用により、このプロセスが生じたことが確認された。このように、ＩＬ‐１３Ｒα２が、ｉｎ  ｓｉｔｕおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいてＨＧＧ上に見出される、より限定的でＩＬ‐４とは独立したＩＬ‐１３結合部位に帰する特徴を共有することが示された。
【実施例２】
【００８９】
（精巣癌抗原としてのＩＬ‐１３Ｒα２の同定）
（材料と方法）
（ＲＮＡ供給源）  高グレードの膠腫細胞株Ａ‐１７２ＭＧ、Ｕ‐３７３ＭＧ、Ｕ‐２５１ＭＧおよびヒト多形グリア芽腫外植細胞（Ｇ‐４８）を、適切な培地中で培養して増殖させた。酸‐イソチオシアン酸グアニジウム‐フェノール‐クロロホルム法により該細胞から全ＲＮＡを抽出した。ミニオリゴ（ｄＴ）セルローススピンカラムキット（Mini‐oligo(dT)Cellulose Spin Columne Kit ）（ファイブプライム‐スリープライム社（5 ‐prime ‐3 prime Inc.）、コロラド州ボールダー所在）を用いて、ポリ（Ａ）＋ＲＮＡをさらに単離した。２μｇのポリ（Ａ）＋ＲＮＡを１％アガロース・ホルムアルデヒドゲル上で電気泳動し、０．４５μｍマグナチャージ（magna charge）ナイロン（マサチューセッツ州ウェストボロー所在のＭＳＩ社）にトランスファーし、ＵＶ架橋させた（カリフォルニア州ラジョラ所在のストラタジーン社（St ratagene））。ＲＮＡブロット膜も、ク
ロンテック（Clontech）（カリフォルニア州パロアルト所在）から購入した。２つの多組織発現（Multiple Tissue Expression）（ＭＴＥ（商標））ブロット（カタログ番号７７７０‐１および７７７５‐１；www.clontech.com/mtn/index.html ）を分析してＩＬ‐１３結合タンパク質の組織分布を決定した。２セットのヒト脳多組織ノーザン（Human Brain Multiple Tissue Northern）（ＭＴＮ（商標））ブロット（カタログ番号７７５５‐１および７７６９‐１）をアッセイして転写産物が本当に存在することを確認した。さらに、２つのヒト組織ノーザン（Human Tissue Northern ）（ＭＴＮ（商標））ブロット（カタログ番号７７５９‐１および７７６０‐１）を分析してＩＬ‐１３Ｒα２転写産物の組織分布を証明した。
【００９０】
（ｃＤＮＡプローブ）  ｃＤＮＡプローブをＰＣＲ（ＩＬ‐１３Ｒα２とＩＬ‐１３Ｒα１）または制限酵素消化（ＩＬ‐４Ｒα＝ｐ１４０）のいずれかにより生成した。ヒトＩＬ‐１３Ｒα２を含有するｃＤＮＡは、サノフィ研究所（Sanofi Recherche）のパスカル・フェララ（Pascual Ferrara ）博士より提供された。ヒトＩＬ‐１３Ｒα１（またネズミＩＬ‐１３の９３塩基についても）を含有するｃＤＮＡは、ザ・ウォルター・アンド・エリザ・ホール医薬研究所（The Walter and Eliza Hall Institute of Medical Reseach）のダグラス・ジェイ・ヒルトン（Douglas J. Hilton ）博士により提供された。プラスミドｐＨｕＩＬ‐４Ｒ／ＩＤを、制限酵素消化によりＩＬ‐４Ｒαの断片を得るために用いた。これらの断片を１％アガロースゲル上で電気泳動し、ゲルから切除し、ＱＩＡｑｕｉｃｋ（登録商標）ゲル抽出キット（QIAquick Gel Extraction Kit ）（キアゲン社（Quiagen Inc.）、カリフォルニア州バレンシア所在）を用いて精製した。アクチンｃＤＮＡはクロンテック・ラブス（Clontech Labs ）から購入した。
【００９１】
ヒトＩＬ‐１３Ｒα２のプライマーは以下のとおりであった：
正方向  ５’‐ＡＡＧＡＴＴＴＧＧＡＡＧＣＴＴＡＴＧＧＣＴＴＴＣＧＴＴＴＧＣ‐３’（配列番号３）
逆方向  ５’‐ＴＣＣＣＴＣＧＡＡＧＣＴＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＣＡＧＡＡＡＡＡ‐３’（配列番号４）
ヒトＩＬ‐１３Ｒα１のプライマーは以下のとおりであった：
正方向  ５’‐ＡＴＴＡＴＴＡＡＧＣＴＴＡＴＧＧＡＧＴＧＧＣＣＧＧＣＧ‐３’（配列番号５）
逆方向  ５’‐ＴＡＡＣＣＧＧＡＡＧＣＴＴＣＡＣＴＧＡＧＡＧＧＣＴＴＴ‐３’（配列番号６）。
【００９２】
（ノーザンブロット分析）  ５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、５０ｍＭリン酸ナトリウム、５×デンハート液（Denhardt's）、５０μｇ／ｍｌのせん断サケ精子ＤＮＡおよび１％ＳＤＳからなる溶液中、膜を４２℃で一晩プレハイブリダイゼーションした。引き続き、１〜２×１０６ｃｐｍ／ｍｌの３２Ｐ‐ｄＣＴＰを用いてランダムプライム法（ライフテクノロジーズ（Life Technologies ）、メリーランド州ロックビル所在）により標識した完全長ｃＤＮＡを添加した同一溶液中で、膜を４２℃で一晩ハイブリダイゼーションした。ハイブリダイゼーション後、前記膜を、２×ＳＳＣ／０．２％ＳＤＳにより４２℃で２０分間洗浄し、次いで１×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳにより４２℃で２０分間ずつ２回洗浄した。前記膜を、オートラジオグラフィ・フィルムＸ‐ＯＭＡＴ（登録商標）ＡＲ（イーストマンコダック社（Eastman Kodak Co. ）、ニューヨーク州ロチェスター所在）に曝露し、−８０℃に１日、３日および１４日間置いた。続いて膜からプローブを除去し、さらに最大３回までプローブと再反応させた。前記膜を、最初にＩＬ‐１３Ｒα２、次いでＩＬ‐１３Ｒα１、ＩＬ‐４Ｒα＝ｐ１４０およびアクチンをプローブとして探査した。フィルムを、８８×８８ミクロンの画素サイズの透過スキャナ（モレキュラー・ダイナミクス（Molecular Dynamics）、カリフォルニア州サニーヴェール所在）でスキャンした。画像を、ペイント・ショップ・プロ（Paint Shop Pro）Ｖ５．０（ジャスク・ソフトウェア社（Jasc software Inc.）、ミネソタ州エデンプレイリー所在）で編集した。
【００９３】
（結果）
（正常器官におけるＩＬ‐１３Ｒα２転写産物のノーザンブロット分析）  ＩＬ‐１３Ｒα２の発現を調査するために、ＣＮＳの２０種の個別領域および種々の正常な末梢器官を含む複数の正常組織間における該タンパク質の転写産物の存在について、広範な試験を実施した。同一の膜を用いたすべてのノーザンブロットを、標識した各ｃＤＮＡを以下の順序すなわちＩＬ‐１３Ｒα２、ＩＬ‐１３Ｒα１、ＩＬ‐４αおよびβ‐アクチンの順で用いて実施した。こうすることにより、ｍＲＮＡを備えた膜を使用したためにＩＬ‐１３Ｒα２転写産物の濃度が過小評価されることがないようにした。ＩＬ‐１３Ｒα２に関するドット‐ブロット分析（図示していない）および電気泳動で分離したＩＬ‐１３Ｒα２転写産物（図４、パネルＩ〜ＩＶ）のいずれにおいても、フィルムを２週間曝露した後でさえ、試験した器官にＩＬ‐１３Ｒα２転写産物がほとんど検出できないか、または２、３例に極めて弱いシグナルが検出されるだけであった。しかしながら、驚くべきことに、実施された最初のドット‐ブロットにおいて精巣由来の転写産物がＩＬ‐１３Ｒα２のｃＤＮＡプローブにより並外れて高密度に標識された。これは、他のノーザンブロット膜を用いた場合にも見られた。２、３の他の器官（大動脈、肝臓および脳下垂体）が、ＩＬ‐１３Ｒα２のｃＤＮＡにハイブリダイズする転写産物を有していた。該ドットブロットにおける標識密度は、精巣のブロットの場合よりもはるかに低かった。重要なことであるが、ＣＮＳにおいて有意なＩＬ‐１３Ｒα２の発現が存在する証拠はなかった。
【００９４】
ドットブロット分析を用いて得られたこれらの知見を確認するために、電気泳動で分離したｍＲＮＡを用いて追加のブロットを実施した。この場合も、正常なヒト脳の個々の領域に明快なハイブリダイゼーションシグナルは生じなかった（図４、パネルＩおよびＩＩ）。一方、１．５ｋｂのｍＲＮＡに相当する顕著なハイブリダイゼーションバンドを有する唯一の器官が精巣において見られた（図４、パネルＩＩＩ）。検出性の低いシグナルが
、胎盤、肝臓および腎臓に見られた（図４、パネルＩＶ）。このように、正常組織の中で精巣がＩＬ‐１３Ｒα２を顕著に発現する唯一の組織であった。ＩＬ‐１３Ｒα２転写産物は、ＣＮＳでは容易には検出されなかった。
【００９５】
（正常組織におけるＩＬ‐１３Ｒα１転写産物のノーザンブロット分析）  ＩＬ‐４と共有のＩＬ‐１３受容体であるＩＬ‐１３／４受容体のヘテロダイマー形態の構成成分であるＩＬ‐１３Ｒα１の発現を、ドット‐ブロット分析（図示せず）または電気泳動で分離した転写産物のブロット（図５、パネルＩ〜ＩＶ）のいずれかにより様々な正常ヒト組織（図５）について調べた。この結果は、ＩＬ‐１３Ｒα１が、延髄、脊髄、黒質、視床および脳梁由来のＣＮＳ組織など、種々の器官において発現されることを明白に証明した。ｍＲＮＡをサイズで分画することにより、卵巣、心臓、肝臓および肺（図５、それぞれパネルＩＩＩおよびＩＶ）において最も強いシグナルが観測されたドットブロットには多くの陽性シグナルが見られることが確認された。興味深いことに、肝臓では、異なるサイズの二重の陽性シグナルを有する正常器官の例として、ハイブリダイズした２つのｍＲＮＡ種（１つは４．５ｋｂ、もう１つは２．０ｋｂ）が示された。つまり、正常なヒト脳の個々の領域は、ＩＬ‐１３Ｒα１に関して明快な陽性ハイブリダイゼーションシグナルを示した（図５、パネルＩおよびＩＩ）。さらに、多くの重要な末梢器官は、４．５〜４．６５ｋｂのｍＲＮＡに相当するハイブリダイゼーションバンドを示した（図５、パネルＩＩＩおよびＩＶ）。
【００９６】
（正常組織におけるＩＬ‐４Ｒαの遺伝子発現分析）  ＩＬ‐１３Ｒα１の他に、ＩＬ‐４Ｒαは、ＩＬ‐４と共用されるＩＬ‐１３受容体、すなわちＩＬ‐１３／４共有受容体のヘテロダイマー形態のもう１つの成分である。したがって、ＩＬ‐４Ｒα遺伝子発現の分布が、ＩＬ‐１３Ｒα１の遺伝子発現の分布に相当しているかどうかを分析した。本試験で用いられたすべてのノーザンブロット分析膜について、種々の組織におけるＩＬ‐４Ｒα転写産物含量が高いことが示された（図６、パネルＩ、ＩＩおよびＩＶ）。ＣＮＳにおける該転写産物の存在は、ＩＬ‐１３Ｒα１に関してそうであったように、延髄、脊髄、黒質、および視床において最も明白であった（図６、パネルＩとＩＩ）。正常な末梢器官の中で、肝臓、肺、腎臓、腸管、脾臓、胃および精巣が、ＩＬ‐１３Ｒα１で見られたのと概して類似したＩＬ‐４Ｒαの遺伝子発現を示した（図示せず）。このように、正常なヒト脳の個別領域は、ＩＬ‐１３Ｒα１およびＩＬ‐４Ｒαの双方、すなわちＩＬ‐１３／４共有受容体の完全なヘテロダイマーの転写産物を含有する。さらに、心臓、肝臓、肺および腸管を含むいくつかの重要な末梢器官に、ＩＬ‐１３／４受容体の２つのサブユニットが含まれていた。
【００９７】
（β‐アクチンの対照ハイブリダイゼーション）  ＩＬ‐１３受容体の転写産物のノーザンブロット分析に用いられたすべての膜について、ハウスキーピング遺伝子であるβ‐アクチンのｃＤＮＡプローブによるハイブリダイゼーションも実施した（図７。ドットブロットおよびパネルＩＩＩは示していない）。β‐アクチンに関するシグナル強度は、製造元により推定されるように通常は膜上に存在するｍＲＮＡ量に合致する。
【００９８】
（細胞におけるＩＬ‐１３受容体の遺伝子発現）  ２つのＩＬ‐１３受容体の遺伝子発現を、悪性細胞および正常細胞においても調べた（図８）。ＩＬ‐１３Ｒα２、ＩＬ‐１３Ｒα１、ＩＬ‐４Ｒαおよびβ‐アクチンに関する転写産物を、連続ハイブリダイゼーションアッセイにおいて調べた。ＨＧＧの単離外植細胞（Ｇ‐４８）ならびにヒト悪性膠腫の樹立細胞株（Ａ‐１７２ＭＧ、Ｕ‐３７３ＭＧおよびＵ‐２５１ＭＧ）は、ＩＬ‐１３Ｒα２について強いシグナルを示した（図８）。一方、ＩＬ‐１３／４共有受容体の構成要素であるＩＬ‐１３Ｒα１およびＩＬ‐４Ｒαの転写産物は、ＩＬ‐１３Ｒα２の転写産物と比較した場合、より低濃度であった（図８）。Ａ‐１７２ＭＧ細胞は、ＩＬ‐１３／４受容体ヘテロダイマーの成分に最も富むようであった。興味深いことに、ＩＬ‐１
３Ｒα２およびＩＬ‐１３Ｒα１双方について２種の異なるサイズの転写産物が細胞中に見られた（図８）。対照アッセイでは、ヒト臍帯静脈血管内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）がＩＬ‐１３Ｒα１およびＩＬ‐４Ｒα転写産物の存在を示したが、ＩＬ‐１３Ｒα２転写産物の存在は示さなかった（図８）。つまり、ＩＬ‐１３Ｒα２の遺伝子発現はＨＧＧの２つの検体で検出されたが（図８、ＨＧＧ１３とＨＧＧ５２）、２つの正常脳検体では検出されなかった（図８、ＮＢ３とＮＢ６）。しかしながら、ＩＬ‐１３Ｒα１の転写産物はこれらの検体すべてに見られた。他の実験において、いくつかの追加のＨＧＧ脳腫瘍検体はＩＬ‐１３Ｒα２を発現すると判定された。
【実施例３】
【００９９】
（ＩＬ‐１３Ｒα２の代表的免疫原性ペプチド）
表Ｉに、対象者におけるＩＬ‐１３Ｒα２に対する免疫応答を刺激するために使用され得るＩＬ‐１３Ｒα２ペプチドの一覧を示す。この一覧に挙げたペプチドは、ルードヴィヒ癌研究所（Ludwig Institute For Cancer Research）（スイス国ローザンヌ所在）により提供されたコンピュータプログラムを用いてインターネット上（http://www-ludwig.unil.ch.SEREX.html）で得られた。このプログラムにより、ＭＨＣ分子の特定のクラス（すなわち、表Ｉに示されるヒトＭＨＣクラスＩの種々の対立遺伝子）に結合すると予測される免疫原性ペプチドに最も良く（高ストリンジェンシーにおいて）適合するものが提供された。「＊」で示すペプチドは、高ストリンジェンシー下で結合するはずのペプチドである。当業界の技術者であれば、本願明細書に記載されているこれらのペプチドを（例えば自動ペプチド合成により）製造可能であり、やはり本願明細書に記載されている種々の試験対象者（例えば、ＭＨＣタイプが異なる対象者）に投与しようとするワクチン製剤において各ペプチドを使用することができる。次に、特定の試験対象者において所望の免疫応答を刺激するものを同定するために、対象者においてこれらの各ペプチドにより刺激された免疫応答を評価すればよい。
【０１００】
【表１】
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【実施例４】
【０１０１】
（タンパク質ワクチンおよび核酸ワクチンは、腫瘍の発症を予防する）
ＩＬ‐１３Ｒα２を発現する細胞に対する抗体ベースの免疫応答の効果を調べた。ＩＬ‐１３Ｒα２を発現する免疫適格性同系ネズミ膠腫モデルを確立した。Ｇ‐２６ネズミ膠腫細胞をｈＩＬ‐１３Ｒα２により安定にトランスフェクションし、ヒトＨＧＡのＩＬ‐１３結合特性を含有することを確認した。さらに、これらＩＬ‐１３Ｒα２（＋）細胞に免疫適格性のＣ５７ＢＬ／Ｊ６マウスから増殖した腫瘍は、ＨＧＡ限定的なＩＬ‐１３結合性を維持しており、このモデルが検証された。免疫適格性Ｃ５７ＢＬ／Ｊ６マウスに、大腸菌中で生産してアフィニティ精製したＩＬ‐１３Ｒα２組換えタンパク質細胞外ドメイン［６×（Ｈｉｓ）‐（Ｘ因子制限部位）‐ＩＬ‐１３Ｒα２（アミノ酸２７〜３４３）］を完全フロイントアジュバントと一緒に、またはフロイントアジュバントのみを注射した（雄マウス１０匹／群、１０週齢）。マウスを２週ごとに全部で３回ワクチン接種し
た。最後のワクチン接種の３週間後に、実質的な負荷であるＧ‐２６‐ｈＩＬ‐１３Ｒα２（＋）腫瘍細胞（５×１０６個）を、ワクチン接種マウスおよび対照に皮下移植した。腫瘍は、腫瘍細胞注入１６日後に対照群に出現したが、ＩＬ‐１３Ｒα２ワクチン接種群には現れなかった（図１Ａ）。さらに、組換えＩＬ‐１３Ｒα２によるワクチン接種マウスは、ＥＬＩＳＡアッセイにより証明されるようにＩＬ‐１３Ｒα２に対する強力な特異的抗体応答を示した。
【０１０２】
免疫系の細胞性免疫部門による抗腫瘍応答についても調べた。ＣＭＶプロモーター下流にＩＬ‐１３Ｒα２を含有するプラスミドｐｃＤＮＡ３．１／ＩＬ‐１３Ｒα２、またはｐｃＤＮＡ３．１のみを、金粒子に付着させて、遺伝子銃によりマウスにワクチン接種するために用いた（マウス１０匹／群）（Ｖａｃｃｉｎｅ、第１８巻、ｐ．２９３７〜２９４４ページ；２０００年）。マウスを２週間ごとに全部で３回免疫化した。最後のワクチン接種の３週間後に、マウスに５×１０６個のＧ‐２６‐ＩＬ‐１３Ｒα２（＋）ネズミ膠腫細胞を皮下注射した。腫瘍は、腫瘍細胞の注入１６日後にｐｃＤＮＡ３．１ベクターのみをワクチン接種したマウスにのみ出現したが、ｐｃＤＮＡ３．１／Ｒα２をワクチン接種したマウスには腫瘍は見られなかった（図１Ｂ）。
【０１０３】
（他の実施形態）
本発明の組成物および方法をいかに作製し、実施し得るかについて、例をあげて説明してきた。当業者であれば、各種細部を変更して別の詳細な実施形態とすることが可能であること、およびこれら多くの実施形態が本発明の範囲内に入ることを理解するであろう。したがって、本発明の範囲および本発明により包含される実施形態を公に通告するために、特許請求の範囲を作製する。
【図面の簡単な説明】
【０１０４】
【図１】天然のヒトＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質のアミノ酸配列を示す図。
【図２】天然のヒトＩＬ‐１３Ｒα２タンパク質をコードする天然のｍＲＮＡに対応するｃＤＮＡの核酸配列を示す図。
【図３】２つのタイプのＩＬ‐１３受容体、すなわちＩＬ‐４と共有の生理学的ヘテロダイマーＩＬ‐１３／４Ｒ、およびＩＬ‐４とは独立のモノマーのＨＧＧ関連ＩＬ‐１３Ｒを表す略図。Ａ：１４０ｋＤａのＩＬ‐４Ｒα鎖。Ｂ：４５ｋＤａのＩＬ‐１３Ｒα１鎖。ＡおよびＢはヘテロダイマーの高親和性ＩＬ‐１３／４Ｒの構成要素となる。Ｃ：ＩＬ‐１３Ｒα２の４２ｋＤａモノマー。
【図４】一連のＣＮＳ（パネルＩおよびＩＩ）ならびに末梢組織（パネルＩＩＩおよびＩＶ）におけるヒトＩＬ‐１３Ｒα２転写産物のノーザンブロット分析（拡大図）を示す図。ｍＲＮＡの移動位置をキロベースで示す。フィルムは２週間曝露した。
【図５】一連のＣＮＳ（パネルＩおよびＩＩ）ならびに末梢組織（パネルＩＩＩおよびＩＶ）におけるヒトＩＬ‐１３Ｒα２転写産物のノーザンブロット分析（拡大図）を示す図。ｍＲＮＡの移動位置をキロベースで示す。フィルムは、パネルＩＩＩおよびＩＶで示す膜以外は２週間曝露し、パネルＩＩＩおよびＩＶで示す膜は３日間曝露した。
【図６】一連のＣＮＳ（パネルＩおよびＩＩ）ならびに末梢組織（パネルＩＶ）におけるヒト１４０ｋＤａ  ＩＬ‐４Ｒα鎖転写産物のノーザンブロット分析（拡大図）を示す図。ｍＲＮＡの移動位置をキロベースで示す。フィルムは２週間曝露した。
【図７】ＣＮＳ（パネルＩおよびＩＩ）ならびに末梢組織（パネルＩＶ）におけるヒトβ‐アクチン転写産物のノーザンブロット分析を示す図。ｍＲＮＡの移動位置をキロベースで示す。フィルムは１〜３時間曝露した。
【図８】悪性膠腫細胞（Ｇ‐４８、Ａ‐１７２ＭＧ、Ｕ‐３７３ＭＧおよびＵ‐２５１ＭＧ）、正常なヒト臍帯静脈血管内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）、ならびにＧＢＭおよび正常なヒト脳の外科的検体における各種ＩＬ‐１３受容体の転写産物のノーザンブロット分析を示す図。ｍＲＮＡの移動位置をキロベースで示す。フィルムは、アクチン（１時間）以外は２週間曝露した。
【図９】動物モデルにおける腫瘍形成の予防における、（Ａ）ｈＩＬ‐１３Ｒα２組換えタンパク質ワクチン、および（Ｂ）核酸ワクチンの効果を示す２つのグラフ。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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