(57)【要約】本発明は、新規ＰＤＦ阻害剤およびその新規使用方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2005532358.tif 000005
［式中：
Ａは、５〜７個の原子からなり、０〜４個のヘテロ原子を含む、縮合芳香族または脂肪族環系であり、Ａは、置換されていてもよい１〜９個の炭素原子を有するアルキルまたはシクロアルキル、ハロ、１〜９個の炭素原子を有するアルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、１〜９個の炭素原子を有するヒドロキシアルキルおよびアルコキシアルキル（ここに、該アルキルおよびアルキレン基は、独立して、１〜９個の炭素原子を有する）、置換されていてもよいアリールまたは置換されていてもよいヘテロアリール、カルボキシおよびアルコキシカルボニルから選択される１、２または３個の置換基により置換されていてもよく、ＸおよびＹは、独立して、ハロ、ヒドロキシまたは１〜３個のヒドロキシアルキルである］
で示される化合物。
【請求項２】
５−クロロ−４−［２−（Ｎ−ホルミル−Ｎ−ヒドロキシ−アミノ）−エチル］アミド−ベンズイミダゾール。
【請求項３】
対象に請求項１記載の化合物を投与することによる、細菌感染の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、ペプチドデホルミラーゼ阻害剤としての、新規Ｎ−［２−（Ｎ−ホルミル−Ｎ−ヒドロキシ−アミノ）−エチル］−アリールアミド化合物およびそれらの化合物を含む医薬組成物の使用に関する。
【０００２】
（発明の背景）
細菌のイニシエーターであるメチオニルｔＲＮＡは、ホルミル−メチオニルｔＲＮＡを生じるメチオニルｔＲＮＡホルミルトランスフェラーゼ（ＦＭＴ）により修飾される。ついで、ホルミルメチオニン（ｆ−Ｍｅｔ）は、新たに合成されたポリペプチドのＮ−末端に取り込まれる。ついで、ポリペプチドデホルミラーゼ（ＰＤＦまたはＤｅｆ）は一次翻訳産物を脱ホルミル化してＮ−メチオニルポリペプチドを生じさせる。大部分の細胞内蛋白はメチオニンアミノペプチダーゼ（ＭＡＰ）によりさらにプロセッシングされて、成熟ペプチドおよび遊離メチオニンを生じ、遊離メチオニンは再利用される。ＰＤＦおよびＭＡＰはいずれも細菌増殖に必須であり、ＰＤＦはＭＡＰ活性に必要である。この一連の反応はメチオニンサイクルと呼ばれる（図１）。
【化１】
2005532358.tif 000002
【０００３】
現在に至るまで、ポリペプチドデホルミラーゼホモログ遺伝子が細菌、葉緑体含有植物、マウスおよびヒトにおいて見出されている。植物蛋白は核にコードされているが、葉緑体局在化シグナルを担持していると思われる。このことは、葉緑体ＲＮＡおよび蛋白の合成がユーバクテリア（eubacteria）のそれと大変類似しているという観察結果と矛盾しない。哺乳類ＰＤＦ遺伝子ホモログの蛋白発現については情報がないが、かかる蛋白の機能的役割は今日に至るまで示されていない（Meinnel, T. 2000, Parasitology Today 16(4), 165-168）。
【０００４】
ポリペプチドデホルミラーゼはすべてのユーバクテリアにおいて見出されており、それに関して広範なゲノム配列情報が利用可能である。ＰＤＦホモログ間の配列の多様性は大きく、関連性の低い配列間では２０％程度の同一性しかない。しかしながら、活性部位周辺の保存性は非常に高く、数個の完全に保存された残基があり、それらは１個のシステインおよび２個のヒスチジンを含み、それらは活性部位金属との共同作用に必要である（Meinnel, T. et al, 1997, Journal of Molecular Biology, 267, 749-761）。
【０００５】
ＰＤＦは、インビトロでの細菌増殖に必須であることが示されているので（Mazel, D. et al, EMBO J. 13 (4), 914-923, 1994）、魅力的な抗細菌標的であることが認識されているが、真核蛋白合成には関与するとは考えられておらず（Rajagopalan et al, J. Am. Chem. Soc. 119, 12418-12419, 1997）、原核細胞において保存されている（Kozak, M. Microbiol. Rev. 47, 1-45, 1983）。それゆえ、ＰＤＦ阻害剤は広スペクトル抗細菌剤として役立つ可能性がある。
【０００６】
（発明の概要）
本発明は、細菌性ポリペプチドデホルミラーゼ阻害活性を有する、下記式（Ｉ）により示される新規Ｎ−［２−（Ｎ−ホルミル−Ｎ−ヒドロキシ−アミノ）−エチル］−アリールアミドおよびＰＤＦ阻害剤としてのその使用に関する。
さらに、本発明は、ヒトを含む動物におけるＰＤＦの阻害方法であって、治療を必要とする対象に、有効量の下記する式（Ｉ）で示される化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０００７】
（発明の詳細な説明）
本発明の方法に有用な化合物は、下記式（Ｉ）：
【化２】
2005532358.tif 000003
［式中：
Ａは、５〜７個の原子からなり、１〜４個のヘテロ原子を含む、縮合芳香族または脂肪族環系であり、ここに、Ａは、１〜９個の炭素原子を有する置換されていてもよいアルキルまたはシクロアルキル、ハロ、１〜９個の炭素原子を有するアルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、１〜９個の炭素原子を有するヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、置換されていてもよいアリールまたは置換されていてもよいヘテロアリール、カルボキシおよびアルコキシカルボニルから選択される１、２または３個の置換基により置換されていてもよく、ＸおよびＹは、独立して、ハロ、ヒドロキシまたは１〜３個の炭素原子を有するヒドロキシアルキルである］
から選択される。
【０００８】
本明細書で用いられる場合、「アルキル」は、炭素−炭素結合により共に結合した置換されていてもよい炭化水素基を意味する。アルキル炭化水素基は、直鎖、分枝鎖または環状、飽和または不飽和であってもよい。
【０００９】
本明細書で用いられる場合、「アリール」は、共役パイ電子系を有し、２個までの共役または縮合環系を含有する、置換されていてもよい芳香族基を意味する。「アルキル」は、カルボサイクリックアリール、ヘテロサイクリックアリールおよびビアリール基を含み、これらはすべて置換されていてもよい。
【００１０】
本発明の好ましい化合物は：
５−クロロ−４−［２−（Ｎ−ホルミル−Ｎ−ヒドロキシ−アミノ）−エチル］アミド−ベンズイミダゾールを含む。
【００１１】
また、本発明は、医薬上許容される塩および複合体を含む。塩酸塩、臭化水素塩およびトリフルオロ酢酸塩が好ましい。本発明の化合物は、１個またはそれ以上の不斉炭素原子を含有していてもよく、ラセミ体および光学活性形態で存在することができる。これらのすべての化合物およびジアステレオマーは、本発明の範囲内に含まれる。
【００１２】
特許請求の範囲に記載の本発明の範囲を限定するものではない、単に本発明の化合物の製造方法を説明する下記の合成スキームに関連して、本発明の化合物および方法はより良く理解されるだろう。
【００１３】
式（Ｉ）で示される化合物は、スキーム１に従って調製することができる。
【化３】
2005532358.tif 000004
【００１４】
アリールジカルボン酸（１）は購入することができるか、あるいは標準的な文献記載の方法により調製することができる。（１）を酸塩化物に変換し、アミノアセトアルデヒドをジメチルアセタールでアミノ化することにより、アミド（２）を得た。ＴＨＦ中の６ＮのＨＣｌで脱保護し、得られたアルデヒド（３）をＭｅＯＨ中のヒドロキシルアミンおよび酢酸ナトリウムで処理することにより、オキシム（４）を得た。オキシムを、酸性条件下、ＭｅＯＨ中のＮａＣＮＢＨ３で、ヒドロキシルアミン（５）に還元した。最終的に、ピリジン中のヒドロキシルアミンを、ギ酸および無水酢酸から形成される混合酸無水物で処理することにより、Ｎ−ホルミル−Ｎ−ヒドロキシルアミン（Ｉ）を得た。
５−クロロ−４−［２−（Ｎ−ホルミル−Ｎ−ヒドロキシ−アミノ）−エチル］アミド−ベンズイミダゾールを、上記した実施例と同様の方法で５−クロロ−４−カルボキシ−ベンズイミダゾールから調製した。
【００１５】
５−クロロ−４−カルボキシ−ベンズイミダゾールの調製
ａ）６−アミノ−２−クロロ−５−ニトロ安息香酸
２，６−ジクロロ−３−ニトロ安息香酸（２．９３ｇ、１２．４ｍｍｏｌ）、塩化銅（Ｉ）（０．０２５ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）および水性塩化アンモニウム（１２．５ｍＬ）の混合物を、１２５℃で１８時間、密封した容器中で撹拌した。混合物を、６ＮのＨＣｌで酸性化した。黄色固体沈殿物を、６ＮのＨＣｌで洗浄し、標題化合物を、６−アミノ−２−クロロ−３−ニトロ安息香酸との混合物として得た。１Ｈ ＮＭＲ＊（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）：δ８．１７（ｄ，ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ）；６．７８（ｄ，ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ）。＊主異性体。
【００１６】
ｂ）６−アミノ−２−クロロ−５−ニトロ安息香酸メチル
（トリメチルシリル）ジアゾメタン（ヘキサン中２Ｍ、８ｍＬ、１６ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（５２ｍＬ）およびメタノール（１７ｍＬ）中の６−アミノ−２−クロロ−５−ニトロ安息香酸および６−アミノ−２−クロロ−３−ニトロ安息香酸（１．７４ｇ、８．０３ｍｍｏｌ）の混合物に、０℃で滴下した。混合物を３０分間撹拌し、ロータリーエバポレーターにより濃縮した。残渣を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、３０％の酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、黄色固体（０．８５ｇ、４６％）として標題化合物を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８．０２（ｄ，ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ）；６．６１（ｄ，ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ）；３．８１（ｓ，３Ｈ）。
【００１７】
ｃ）２−クロロ−５，６−ジアミノ−安息香酸メチル
６−アミノ−２−クロロ−５−ニトロ安息香酸メチル（０．８５ｇ、３．６９ｍｍｏｌ）および塩化スズ（ＩＩ）ジアゾメタン（３．５ｇ、１８．４ｍｍｏｌ）を、メタノール（２５ｍＬ）中で２時間還流した。混合物を室温に冷却し、ロータリーエバポレーターで濃縮した。残渣を、酢酸エチルと飽和水酸化カリウム水溶液間で分配した。水相を酢酸エチル（３×）で抽出した。合した有機抽出物を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて、褐色油として標題化合物（０．７３ｇ、９７％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ６．５４（ｄ，ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）；６．４２（ｄ，ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）；３．７４（ｓ，３Ｈ）。
【００１８】
ｄ）４−メトキシカルボニル−５−クロロベンズイミダゾール
２−クロロ−５，６−ジアミノ−安息香酸メチル（０．７３ｇ、３．６１ｍｍｏｌ）を、ギ酸（３０ｍＬ）中で１８時間還流した。混合物を室温に冷却し、ロータリーエバポレーターで濃縮した。残渣を、酢酸エチルと飽和重炭酸ナトリウム水溶液間で分配した。水相を酢酸エチル（３×）で抽出した。合した有機抽出物を乾燥（ＭｇＳＯ４）した。残渣を、ジエチルエーテル／ヘキサンからトリチュレートして、標題化合物を黄褐色固体（０．４７ｇ、６０％）として得た。ＥＳＭＳ：Ｍ＋Ｈ＝２１１。
【００１９】
ｅ）５−クロロ−４−カルボキシ−ベンズイミダゾール
４−メトキシカルボニル−５−クロロベンズイミダゾール（０．４６ｇ、２．１８ｍｍｏｌ）および水酸化ナトリウム（０．４３ｇ、１１ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（５ｍＬ）、メタノール（５ｍＬ）および水（２ｍＬ）中で１８時間、ギ酸（３０ｍＬ）中で１８時間還流した。混合物を冷却し、１ＮのＨＣｌで酸性化した。混合物を酢酸エチル（２×）で洗浄し、減圧下で蒸発させた。固体残渣を、メタノール（２０ｍＬ）中で撹拌し、濾過した。濾液を蒸発させて黄褐色固体として標題化合物（１００％）を得た。ＥＳＭＳ：Ｍ＋Ｈ＝１９７。
【００２０】
以下の化合物は、上記実施例と同様の方法で調製することができる：
６−クロロ−２，３−ジメチル−Ｎ−［２−（Ｎ−ホルミル−Ｎ−ヒドロキシ−アミノ）−エチル］−キノキサリン−５−カルボキサミド
５−クロロ−３−フェニル−Ｎ−［２−（Ｎ−ホルミル−Ｎ−ヒドロキシ−アミノ）−エチル］−３Ｈ−ベンゾトリアゾール−４−カルボキサミド
６−クロロ−Ｎ−［２−（Ｎ−ホルミル−Ｎ−ヒドロキシ−アミノ）−エチル］−ベンゾ［１，２，３］チアジアゾール−７−カルボキサミド
５，６−ジクロロ−Ｎ−［２−（Ｎ−ホルミル−Ｎ−ヒドロキシ−アミノ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−イソベンゾフラン−７−カルボキサミド
６−クロロ−２，３−ジメチル−Ｎ−［２−（Ｎ−ホルミル−Ｎ−ヒドロキシ−アミノ）−エチル］−２，３−ジヒドロ−ベンゾフラン−７−カルボキサミド。
【００２１】
いずれの化学官能基を適切に処理および保護して、上記した方法および実施例セクションで説明した方法と同様の方法により、残りの式（Ｉ）で示される化合物の合成を行なう。
【００２２】
式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩をヒトおよび他の哺乳類の治療に使用するために、通常には、それを標準的な製薬慣習に従って医薬組成物として処方する。
【００２３】
本発明の化合物は、限定するものではないが、気道感染および／またはグラム陽性菌感染を含む、細菌感染の治療に有用である。
【００２４】
式（Ｉ）で示される化合物およびその医薬上許容される塩は、抗生物質に関する標準的な方法で、例えば、経口投与、非経口投与、舌下投与、皮膚から、経皮的に、直腸から、吸入によりあるいは頬側から投与することができる。
【００２５】
経口投与された場合に活性である、式（Ｉ）で示される化合物およびその医薬上許容される塩の組成物は、シロップ、錠剤、カプセル、クリームおよびロゼンジとして処方することができる。一般的には、シロップ処方は、フレーバーまたは着色剤を含有する、液体担体、例えば、エタノール、ピーナッツ油、オリーブ油、グリセリンまたは水中の化合物または塩の溶液からなるだろう。組成物が錠剤形態である場合、固体処方の調製に常用されるいずれの医薬担体を用いてもよい。かかる担体の例としては、ステアリン酸マグネシウム、白陶土、タルク、ゼラチン、アカシア、ステアリン酸、デンプン、ラクトースおよびシュークロースが挙げられる。組成物がカプセル形態である場合、いずれの慣用的なカプセル化法も適しており、例えば、上記担体をハードゼラチンカプセル殻中に用いる。組成物がソフトゼラチン殻カプセル形態である場合、分散液または懸濁液を調製するために常用されるいずれの医薬担体、例えば、水性ガム、セルロース、シリケートまたは油が考えられ、ソフトゼラチンカプセル殻中に含まれる。
【００２６】
典型的な非経口組成物は、非経口的に許容される油、例えば、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、レシチン、落花生油またはゴマ油を含有していてもよい、滅菌水性または非水性担体中の化合物または塩の溶液または懸濁液からなる。
【００２７】
典型的な吸入用組成物は、慣用的な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタンまたはトリクロロフルオロメタンを用いて、乾燥粉末またはエアロゾルの形態として投与することができる溶液、懸濁液またはエマルジョンの形態である。
【００２８】
典型的な坐薬処方は、結合剤および／または滑沢剤、例えば、高分子グリコール、ゼラチン、カカオ脂または他の低融点植物性ワックスあるいは油脂またはその合成アナログと一緒に、このようにして投与された場合に活性である、式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩を含む。
【００２９】
典型的な皮膚および経皮処方は、慣用的な水性または非水性ビヒクル、例えば、クリーム、軟膏、ローションまたはペーストを含むか、あるいは薬用プラスター、パッチまたは膜の形態である。
【００３０】
好ましくは、組成物は、患者が１回で投与することができるように、単位投与形態、例えば、錠剤、カプセルまたは計量エアロゾルである。
【００３１】
経口投与用の各々の単位投与量は、適当には、０．１ｍｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１ｍｇ〜１００ｍｇ／ｋｇを含有し、非経口投与用の各々の単位投与量は、適当には、０．１ｍｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの式（Ｉ）で示される化合物または遊離酸として計算したその医薬上許容される塩を含有する。鼻腔内投与用の各々の単位投与量は、適当には、１人あたり１〜４００ｍｇ、好ましくは１０〜２００ｍｇを含有する。局所処方は、適当には、０．０１〜５．０％の式（Ｉ）で示される化合物を含有する。
【００３２】
経口投与の１日の投与計画は、適当には、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜４０ｍｇ／ｋｇの式（Ｉ）で示される化合物または遊離酸として計算したその医薬上許容される塩である。非経口投与用の１日の投与計画は、適当には、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜４０ｍｇ／ｋｇの式（Ｉ）で示される化合物または遊離酸として計算したその医薬上許容される塩である。鼻腔内投与および経口吸入用の１日の投与計画は、適当には、約１０〜約５００ｍｇ／人である。所望の活性を示すのに十分な活性成分を１日１〜６回投与してもよい。
本発明の化合物を本発明に従って投与する場合、毒物学的効果は予想されない。
【００３３】
式（Ｉ）で示される化合物の生物学的活性は下記試験により示される：
【００３４】
生物学的アッセイ：
Lazennec および Meinnel, (1997) 「Formate dehydrogenase-coupled spectrophotometric assay of peptide deformylase」 Anal. Biochem. 244, pp.180-182により開発された連続酵素結合アッセイを少々改変して用いてS. aureusまたはE. coliのＰＤＦ活性を２５℃で測定する。反応混合物は５０μｌ中に５０ｍＭのリン酸カリウムバッファー（ｐＨ７．６）、１５ｍＭのＮＡＤ、０．２５Ｕのギ酸デヒドロゲナーゼを含む。ＫＭ濃度の基質ペプチド、ｆ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｓｅｒが含まれる。１０ｎＭのＤｅｆ１酵素を添加して反応の引き金を引き、３４０ｎｍの吸光度を２０分間モニターする。
【００３５】
抗微生物活性のアッセイ：
National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS)が推奨する方法、Document M7-A4, 「Methods for Dilution Susceptibility Tests for Bacteria that Grow Aerobically」（出典明示により本明細書に組み入れる）を用いるブロスのマイクロダイリューション（microdilution）により全−細胞抗微生物活性を調べた。化合物を０．０６から６４ｍｃｇ／ｍｌの範囲で２倍系列希釈して試験した。アッセイにおいて１２株のパネルを評価した。このパネルは下記の研究室株からなっていた：Staphylococcus aureus Oxford、Staphylococcus aureus WCUH29、Enterococcus faecalis I、Enterococcus faecalis 7、Haemophilus influenzae Q1、Haemophilus influenzae NEMC1、Moraxella catarrhalis 1502、Streptococcus pneumoniae 1629、Streptococcus pneumoniae N1387、Streptococcus pneumoniae N1387、E. coli 7623 (AcrABEFD+)およびE. coli 120 (AcrAB-)。肉眼で見た場合に増殖を抑制した化合物の最小濃度として最小阻害濃度（ＭＩＣ）を決定した。ミラーリーダー（mirror reader）を用いてＭＩＣ終点の決定をアシストした。
【００３６】
限定するものではないが、本明細書に引用された特許および特許出願を含むすべての刊行物は、出典明示により本明細書に組み入れる。
【００３７】
上記記載は、その好ましい具体例を含む本発明を完全に開示する。本明細書に特記される具体例の修飾および改善は、特許請求の範囲内に含まれる。当業者は、さらに検討することなく、上記記載を用いて、本発明をそのすべての範囲に利用することができる。したがって、本明細書の実施例は、単なる説明として解釈されるべきであり、いかなる点においても本発明の範囲を限定するものではない。排他的所有権または特権を特許請求する本発明の具体例は、特許請求の範囲に記載する。
【国際調査報告】
2005532358.tif 000006