(57)【要約】本発明は、細菌種バシラス・アミロリクエファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)およびバシラス・リケニホルミス(Bacillus licheniformis)のα-アミラーゼから誘導されたα-アミラーゼであって、対応する洗浄剤および浄化剤の洗浄および浄化性能を増大させることができるα-アミラーゼに関する。また本発明は、該ハイブリッド酵素を含む洗浄剤および浄化剤、該タンパク質または対応する製剤を用いる織物または硬表面の浄化方法、ならびに、織物または硬表面を浄化するための該タンパク質または対応する製剤の使用に関する。さらに本発明は、細菌種バシラス・アミロリクエファシエンスおよびバシラス・リケニホルミスのα-アミラーゼからなるハイブリッドアミラーゼを調製し、これを対応する製剤に添加することによって、洗浄剤および浄化剤の性能を改善するための方法に関する。
2005527640.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミロース分解ハイブリッドタンパク質を含んでなる洗浄剤または浄化剤であって、該アミロース分解ハイブリッドタンパク質のアミノ酸配列が、それぞれ相同位置に、１を越えるアミノ酸を含む少なくとも１つの、バシラス・アミロリクエファシエンスα-アミラーゼの部分配列と同一の部分配列を含み、かつ、それぞれ相同位置に、１を越えるアミノ酸を含む少なくとも１つの、バシラス・リケニホルミスα-アミラーゼの部分配列と同一の部分配列を含むことを特徴とする洗浄剤または浄化剤。
【請求項２】
出発分子まで遡ることができるハイブリッドアミラーゼの部分配列が、７個を越える、好ましくは１４個を越える、特に好ましくは２１〜４６２個のアミノ酸の長さであることを特徴とする請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
ハイブリッドタンパク質が、出発配列に従って互いに相補性である３個または２個の部分配列から構成されることを特徴とする請求項１または２に記載の製剤。
【請求項４】
ハイブリッドアミラーゼの融合点が、配列番号４の番号付与に従って、位置１７、３４、７６、１０８、１１２、１４２、１４７、１４９、１５１、１６３、１７４、１７９、１８５、１９１、１９８、２０７、２３１、２３４、２４４、２５６、２６３、２７６、４３１、８４、９９、４２９、２０１、１９、４３３および１５３の１つまたはそれ以上の１０アミノ酸上流〜１０アミノ酸下流の領域内に位置することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の製剤。
【請求項５】
ハイブリッドアミラーゼの融合点が、配列番号４の番号付与に従って、位置１７、３４、７６、１０８、１１２、１４２、１４７、１４９、１５１、１６３、１７４、１７９、１８５、１９１、１９８、２０７、２３１、２３４、２４４、２５６、２６３、２７６、４３１、８４、９９、４２９、２０１、１９、４３３および１５３の１つまたはそれ以上の５アミノ酸上流〜５アミノ酸下流の領域内に位置することを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の製剤。
【請求項６】
ハイブリッドアミラーゼの融合点が、配列番号４の番号付与に従って、位置１７、３４、７６、１０８、１１２、１４２、１４７、１４９、１５１、１６３、１７４、１７９、１８５、１９１、１９８、２０７、２３１、２３４、２４４、２５６、２６３、２７６、４３１、８４、９９、４２９、２０１、１９、４３３および１５３の１つまたはそれ以上のところに位置することを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の製剤。
【請求項７】
ハイブリッドアミラーゼＡＬ１７、ＡＬ１０８、ＡＬ１４２、ＡＬ１４７、ＡＬ１４９、ＡＬ１５１、ＡＬ１６３、ＡＬ１７４、ＡＬ１７９、ＡＬ１８５、ＡＬ１９１、ＡＬ１９８、ＡＬ２０７、ＡＬ２３１、ＡＬ２３４、ＡＬ２４４、ＡＬ２６３、ＡＬ２７６、ＡＬ４３１、ＡＬＡ１７−１５１、ＡＬＡ７６−１５１、ＡＬＡ９９−４２９、ＡＬＡ１２−１５１、ＡＬＡ１１２−２０１、ＬＡ１９および／またはＬＡ４３１のいずれかを含むことを特徴とする請求項４〜６のいずれかに記載の製剤。
【請求項８】
ハイブリッドアミラーゼの融合点が、配列番号４の番号付与に従って、位置３４、２５６、８４、１９および１５３の１つまたはそれ以上の１０アミノ酸上流〜１０アミノ酸下流の領域内に、好ましくは該位置の１つまたはそれ以上の５アミノ酸上流〜５アミノ酸下流の領域内に、特に好ましくは該位置の１つまたはそれ以上のところに位置することを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載の製剤。
【請求項９】
ハイブリッドアミラーゼＡＬ３４(配列番号６)、ＡＬ２５６(配列番号１２)、ＡＬＡ３４−８４(配列番号１４)および／またはＬＡＬ１９−１５３(配列番号１８)のいずれかを含むことを特徴とする請求項８に記載の製剤。
【請求項１０】
ハイブリッドアミラーゼの融合点が、配列番号４の番号付与に従って、位置１９、７６、１１２および４３３の１つまたはそれ以上の１０アミノ酸上流〜１０アミノ酸下流の領域内に、好ましくは該位置の１つまたはそれ以上の５アミノ酸上流〜５アミノ酸下流の領域内に、特に好ましくは該位置の１つまたはそれ以上のところに位置することを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載の製剤。
【請求項１１】
ハイブリッドアミラーゼが、部分配列として、バシラス・アミロリクエファシエンスα-アミラーゼ(配列番号４)のアミノ酸位置１９〜７６の部分配列、ならびに、さらなる部分配列として、バシラス・リケニホルミスα-アミラーゼ(配列番号２)のアミノ酸位置４３３〜４８３の部分配列を有することを特徴とする請求項１０に記載の製剤。
【請求項１２】
ハイブリッドタンパク質が、ＡＬ７６(配列番号８)と少なくとも９８％、好ましくは９９％、特に好ましくは１００％同一であることを特徴とする請求項１〜１１のいずれかに記載の製剤。
【請求項１３】
ハイブリッドタンパク質が、ＡＬ１１２(配列番号１０)と少なくとも９８％、好ましくは９９％、特に好ましくは１００％同一であることを特徴とする請求項１〜１１のいずれかに記載の製剤。
【請求項１４】
ハイブリッドタンパク質が、ＬＡＬ１９−４３３(配列番号１６)と少なくとも９８％、好ましくは９９％、特に好ましくは１００％同一であることを特徴とする請求項１〜１１のいずれかに記載の製剤。
【請求項１５】
それぞれ５個以下の連続アミノ酸、好ましくはそれぞれ３個以下の連続アミノ酸、特に好ましくはそれぞれ１個のみのアミノ酸の欠失によって、あるいは、アミノ酸の置換によって得られる請求項１〜１４のいずれかに記載のハイブリッドアミラーゼを含むことを特徴とする洗浄剤または浄化剤。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれかに記載のハイブリッドアミラーゼの少なくとも１つの部分であって、アミロース分解活性を付与する部分において同一であるアミロース分解キメラタンパク質、または挿入突然変異によって得られるアミロース分解タンパク質を含むことを特徴とする洗浄剤または浄化剤。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれかに記載のハイブリッドアミラーゼのアミロース分解誘導体を含むことを特徴とする洗浄剤または浄化剤。
【請求項１８】
ハイブリッド形成によって生じる少なくとも１つの抗原決定基を、請求項１〜１７のいずれかに記載のタンパク質または誘導体のいずれかと共有するアミロース分解タンパク質または誘導体を含むことを特徴とする洗浄剤または浄化剤。
【請求項１９】
０.０００００１〜５重量％、特に０.００００１〜３重量％のアミロース分解タンパク質または誘導体を含むことを特徴とする請求項１〜１８のいずれかに記載の製剤。
【請求項２０】
１またはそれ以上の他のアミロース分解タンパク質、特にα-アミラーゼをさらに含むことを特徴とする請求項１〜１９のいずれかに記載の製剤。
【請求項２１】
他の酵素、特に１またはそれ以上のプロテアーゼ、リパーゼ、β-グルカナーゼおよび／またはセルラーゼをさらに含むことを特徴とする請求項１〜２０のいずれかに記載の製剤。
【請求項２２】
１を越える相を含むことを特徴とする請求項１〜２１のいずれかに記載の製剤。
【請求項２３】
固体であり、かつ、少なくとも２つの異なる固体成分、特に粉末、顆粒または押出物が、全体的にゆるやかな混合物中に存在することを特徴とする請求項１〜２２のいずれかに記載の製剤。
【請求項２４】
一緒に結合した少なくとも２つの固体相が、特に接合圧縮工程の後に存在することを特徴とする請求項１〜２３のいずれかに記載の製剤。
【請求項２５】
相の少なくとも１つがアミラーゼ感受性材料(特にデンプン)を含んでなるか、または少なくとも部分的に、該材料によって囲まれているかもしくは被覆されていることを特徴とする請求項２２〜２４のいずれかに記載の製剤。
【請求項２６】
全体として液体、ゲルまたはペースト形態にあり、存在するタンパク質および／または存在する酵素の少なくとも１つおよび／または存在する他の成分の少なくとも１つが、個々にまたは他の成分と一緒になって、封入形態中、好ましくはマイクロカプセル中、特に好ましくはアミラーゼ感受性材料から作製されたマイクロカプセル中にあることを特徴とする請求項１〜２２のいずれかに記載の製剤。
【請求項２７】
製剤の他の成分のいずれかが、アミロース分解活性を改変、特に安定化し、そして／または製剤の洗浄または浄化性能へのその寄与を増大させることを特徴とする請求項１〜２６のいずれかに記載の製剤。
【請求項２８】
工程の少なくとも１つにおいて、請求項１〜１８のいずれかに記載のアミロース分解タンパク質または誘導体が活性になることを特徴とする、織物または硬表面を浄化するための方法。
【請求項２９】
工程の少なくとも１つにおいて、請求項１〜２７のいずれかに記載の製剤を使用することを特徴とする、織物または硬表面を浄化するための方法。
【請求項３０】
アミロース分解タンパク質または誘導体を、工程において、適用あたり０.０１〜４００ｍｇ、好ましくは０.０２〜２００ｍｇ、特に好ましくは０.０２〜１００ｍｇの量で使用することを特徴とする請求項２８または２９に記載の方法。
【請求項３１】
請求項１〜１８のいずれかに記載のアミロース分解タンパク質または誘導体の単独の、または少なくとも１つの他の浄化活性成分もしくは浄化作用を助ける活性成分と一緒の、織物または硬表面を浄化するための使用。
【請求項３２】
織物または硬表面を浄化するための、請求項１〜２７のいずれかに記載の製剤の使用。
【請求項３３】
適用あたり、好ましくは食器洗浄機または洗浄用機械における適用あたり、０.０１〜４００ｍｇ、好ましくは０.０２〜２００ｍｇ、特に好ましくは０.０２〜１００ｍｇのアミロース分解タンパク質または誘導体を使用することを特徴とする請求項３１または３２に記載の使用。
【請求項３４】
１を越える相を含む洗浄剤または浄化剤における、請求項１〜１８のいずれかに記載のアミロース分解タンパク質または誘導体の単独の、または少なくとも１つの他の浄化活性成分もしくは浄化作用を助ける活性成分と一緒の、それ自体または他の相を活性化するための使用。
【請求項３５】
封入された成分を含む洗浄剤または浄化剤における、請求項１〜１８のいずれかに記載のアミロース分解タンパク質または誘導体の単独の、または少なくとも１つの他の浄化活性成分もしくは浄化作用を助ける活性成分と一緒の、カプセルから該成分を放出させるための使用。
【請求項３６】
それぞれ少なくとも１を越えるアミノ酸を含むバシラス・アミロリクエファシエンスおよびバシラス・リケニホルミス由来のα-アミラーゼの部分配列を、それぞれ相同位置において融合させて、アミロース分解活性のハイブリッドアミラーゼを得ること、ならびに、該ハイブリッドアミラーゼを製剤に添加することを特徴とする、洗浄剤または浄化剤の洗浄または浄化性能を改善するための方法。
【請求項３７】
出発分子まで遡ることができるハイブリッドアミラーゼの部分配列が、７個を越える、好ましくは１４個を越える、特に好ましくは２１〜４６２個のアミノ酸の長さであることを特徴とする請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
ハイブリッドタンパク質が、出発配列に従って互いに相補性である３個または２個の部分配列から構成されることを特徴とする請求項３６または３７に記載の方法。
【請求項３９】
ハイブリッドアミラーゼの融合点が、配列番号４の番号付与に従って、位置１７、３４、７６、１０８、１１２、１４２、１４７、１４９、１５１、１６３、１７４、１７９、１８５、１９１、１９８、２０７、２３１、２３４、２４４、２５６、２６３、２７６、４３１、８４、９９、４２９、２０１、１９、４３３および１５３の１つまたはそれ以上の１０アミノ酸上流〜１０アミノ酸下流の領域内に位置することを特徴とする請求項３６〜３８のいずれかに記載の方法。
【請求項４０】
ハイブリッドアミラーゼの融合点が、配列番号４の番号付与に従って、位置１７、３４、７６、１０８、１１２、１４２、１４７、１４９、１５１、１６３、１７４、１７９、１８５、１９１、１９８、２０７、２３１、２３４、２４４、２５６、２６３、２７６、４３１、８４、９９、４２９、２０１、１９、４３３および１５３の１つまたはそれ以上の５アミノ酸上流〜５アミノ酸下流の領域内に位置することを特徴とする請求項３６〜３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
ハイブリッドアミラーゼの融合点が、配列番号４の番号付与に従って、位置１７、３４、７６、１０８、１１２、１４２、１４７、１４９、１５１、１６３、１７４、１７９、１８５、１９１、１９８、２０７、２３１、２３４、２４４、２５６、２６３、２７６、４３１、８４、９９、４２９、２０１、１９、４３３および１５３の１つまたはそれ以上のところに位置することを特徴とする請求項３６〜４０のいずれかに記載の方法。
【請求項４２】
得られたハイブリッドアミラーゼが、それぞれ５個以下の連続アミノ酸、好ましくはそれぞれ３個以下の連続アミノ酸、特に好ましくはそれぞれ１個のみのアミノ酸の、１またはそれ以上の欠失をさらに受けていることを特徴とする請求項３６〜４１のいずれかに記載の方法。
【請求項４３】
得られたハイブリッドアミラーゼが、少なくとも１つの位置において、順に好ましくは、配列番号４の番号付与に従って、１３２、３２０および４１２位の１つ、２つまたは３つにおいて、アミノ酸置換をさらに受けていることを特徴とする請求項３６〜４２のいずれかに記載の方法。
【請求項４４】
得られたハイブリッドアミラーゼが、挿入をさらに獲得しているか、またはアミロース分解キメラタンパク質であることを特徴とする請求項３６〜４３のいずれかに記載の方法。
【請求項４５】
得られたハイブリッドアミラーゼがさらに誘導されていることを特徴とする請求項３６〜４４のいずれかに記載の方法。
【請求項４６】
ハイブリッドアミラーゼが、対応する部分領域において、配列番号１および配列番号３に示されるヌクレオチド配列またはこれらと同義のヌクレオチド配列を有する核酸を用いて形成されることを特徴とする請求項３６〜４５のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細菌種バシラス・アミロリクエファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)およびバシラス・リケニホルミス(Bacillus licheniformis)のα-アミラーゼから誘導されたハイブリッドα-アミラーゼを含む洗浄剤および浄化剤、該タンパク質または対応する製剤が関与する織物または硬表面の浄化方法、ならびに、織物または硬表面を浄化するための該タンパク質または対応する製剤の使用に関する。さらに本発明は、細菌種バシラス・アミロリクエファシエンスおよびバシラス・リケニホルミスのα-アミラーゼからなるハイブリッドアミラーゼを調製し、該ハイブリッドアミラーゼを該製剤に添加することによって、洗浄剤および浄化剤の性能を改善するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
α-アミラーゼ(Ｅ.Ｃ.３.２.１.１)は、デンプンおよびデンプン様ポリマー(例えば、アミロース、アミロペクチンまたはグリコーゲンなど)の内部α-１,４-グリコシド結合を加水分解し、デキストリンおよびβ-１,６-分岐したオリゴ糖を生成させる。これらは、以下の２つの理由により、最も重要な産業上利用されている酵素の中でもとりわけ重要な酵素である。即ち、一方において、これらは微生物によって周囲培地に放出されるので、これらを、比較的少ない労力で発酵および培養培地からの精製によって、工業的規模で得ることができる。他方において、アミラーゼは、広い応用範囲で必要とされている。
【０００３】
α-アミラーゼの重要な産業上の用途は、洗浄剤および浄化剤における活性成分としての使用である。このような製剤のそれぞれ洗浄性能および浄化性能に対する該酵素の寄与は、デンプン汚れの分解である。加水分解生成物は、洗浄剤または浄化剤の他の成分によって結合されるか、溶解されるか、乳化されるか、もしくは懸濁されるか、あるいは、その比較的高い溶解性のゆえに洗浄液により洗い流されるので、該製剤の酵素と他の成分の間の有利な相乗作用が得られる。
【０００４】
洗浄剤および浄化剤において使用するのに適するであろう天然供給源由来のα-アミラーゼの精力的な探索が行われている。食品製造、化粧品および医薬品のためのデンプン切断酵素、例えばピメロバクター(Pimelobacter)、シュードモナス(Pseudomonas)およびサーマス(Thermus)由来の酵素(ＥＰ６３６６９３)、および、リゾビウム(Rhizobium)、アルスロバクター(Arthrobacter)、ブレビバクテリウム(Brevibacterium)およびミクロコッカス(Micrococcus)由来の同種の酵素(ＥＰ６２８６３０)、ピロコッカス(Pyrococcus)由来の酵素(ＷＯ９４／１９４５４)、および、高温および強酸性反応条件でのデンプン液化のためのスルホロブス(Sulfolobus)由来の酵素(それぞれＥＰ７２７４８５およびＷＯ９６／０２６３３)が同定されている。バシラス種のアミラーゼ(ＷＯ９５／２６３９７およびＷＯ９７／００３２４)が、アルカリｐＨの使用のために見い出されている。洗浄剤に対するこれら酵素の低い感受性のゆえに、種々のバシラス種由来の他のアミラーゼ(ＥＰ６７０３６７)が、洗浄剤または浄化剤において使用するのに適している。また、サーモアルカリバクター(Thermoalcalibacter)のアミラーゼ(ＷＯ９８／１３４８１)は、カルシウムイオンに対する不感受性が高いので、最初から洗浄剤における使用に高い適格性を有している。
【０００５】
洗浄剤および浄化剤において使用されることが多いα-アミラーゼは、バシラス・リケニホルミス由来のα-アミラーゼである。例えば、Novozymes A/S[Bagsvaerd、デンマーク]からの対応する製品は、商品名 TermamylＲを有しており、Genencor Int.[Rochester、ニューヨーク、米国]からの製品は、PurastarＲと呼ばれている。バシラス・アミロリクエファシエンスによって産生され、例えばＵＳ１２２７３７４に従ってバシラス・スブチリス(B. subtilis)により発酵生産することができるα-アミラーゼが、Novozymes A/SからBANＲの名称で市販されている。バシラス・リケニホルミス(B. licheniformis)、バシラス・アミロリクエファシエンス(B. amyloliquefaciens)α-アミラーゼの配列ならびにバシラス・ステアロサーモフィラス(B. stearothermophilus)α-アミラーゼの配列が、例えば、国際特許出願ＷＯ９６／２３８７４に記載されている。
【０００６】
これらのアミラーゼ分子およびその密接な関連物が、特定の応用(特に、洗浄剤および浄化剤におけるその使用)に関連して最適化するために、多くの発明において、特に分子生物学的改変により、さらに開発されている。このような最適化は、例えば、基質特異性、種々の条件下での酵素の安定性または酵素活性それ自体に関係するであろう。
【０００７】
これらのさらなる開発の１つの原理は、特性を改善するために点突然変異を使用することからなる。例えば、国際特許出願ＷＯ９６／２３８７３は、洗浄剤および浄化剤において使用するために、野生型酵素として知られていたか、またはアルカリ性プロテアーゼの産生体として以前に記載されていた微生物に由来するα-アミラーゼの改善された変異体を開示している。例えば、国際特許出願ＷＯ９９／２０７６８の突然変異誘発法は、浄化剤成分の存在下で特に適するα-アミラーゼ変異体を与える。この種の改変において、個々の酵素特性における変化は、実質的に常に、当該酵素の他の特性および性能にも影響を与える。このようにして得られ、その後に市販されている最適化生成物の例は、DuramylＲ(ＷＯ９４／０２５９７)であり、これは、酸化に対して低下した感受性を有している[Novozymes；SOEFW-Journal、123、(1997)、723-731頁]。
【０００８】
他の例は次の通りである。国際特許出願ＷＯ９９／０２７０２のアミラーゼは、比較的高い温度で出発分子よりも安定である。国際特許出願ＷＯ９９／２３２１１の酵素は、高いｐＨ、カルシウムイオンの存在下、および比較的高い温度で安定である。国際特許出願ＷＯ９７／４３４２４のα-アミラーゼは、変化したカルシウムイオン結合挙動、従って変化した酵素特性を示す。
【０００９】
異なる最適化方法または追加で使用される最適化方法には、例えば、化学的改変(ＤＥ４０１３１４２)が含まれる。
【００１０】
例えば、国際特許出願ＷＯ９９／４３７９３は、既知のα-アミラーゼのさらなる展開のために別の原理を適用する。これは、NovamylＲと既知のシクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ(ＣＧＴアーゼ)の間の配列類似性を使用して、比較的大きな分子部分を分子生物学的方法により組換え、こうして関連分子のホストを構築することを含んでなる。この後者は、追加のＣＧＴアーゼ特異的なコンセンサス配列(ボックス)および機能を有するα-アミラーゼ、または逆に、α-アミラーゼに典型的な追加の領域および機能を有するＣＧＴアーゼであるか、または両分子のキメラである。
【００１１】
国際特許出願ＷＯ９９／５７２５０は、どのように洗浄剤酵素の洗浄性能を増大させうるかについての同等の方法を開示している。これに記載されている原理は、当該酵素を、非アミノ酸リンカーを介して、細菌起源のセルロース結合ドメイン(ＣＢＤ)に共有結合させることを含んでなる。この後者は、酵素が織物表面において、より活性になることを確実にする。文献ＷＯ９９／５７２５２は、このコンセプトにおいて、他の可能なリンカーを包含し、文献ＷＯ９９／５７２５４は、キメラタンパク質の形成を伴って、またはＷＯ９９／５７２５２に記載されたリンカーを介して、ＣＢＤに結合された他の酵素(例えば、グリコシルトランスフェラーゼまたはアシルトランスフェラーゼなど)を包含する。
【００１２】
洗浄剤および浄化剤において使用するために確立されたα-アミラーゼのこれら全てのさらなる開発の必要性は、例えば、特定の条件に劇的に影響を及ぼし、そして酵素の有効性を損なう、例えば漂白剤のような新たに開発された成分に起因する。しかし、この必要性は、種々の清浄目的や、消費者の習慣および要求の変化(これによれば、例えば、低温および中温での浄化のための洗浄剤に対する要求が増加している)にも起因する。
【００１３】
融合またはハイブリッドタンパク質を製造するための方法が、従来技術において十分に確立されている。即ち、例えば欧州特許出願ＥＰ２０８４９１は、ハイブリッドタンパク質を製造するためのインビボ法であって、対応するＤＮＡセクションを、一方を他方の後ろで、ベクター中にクローニングすることに基づく方法を記載している。これには、例えば、Ｎ末端領域がバシラス・ステアロサーモフィラスα-アミラーゼの領域に対応し、Ｃ末端領域がバシラス・リケニホルミスα-アミラーゼの領域に対応するハイブリッドアミラーゼも含まれる。
【００１４】
国際特許出願ＷＯ９６／２３８７４は、バシラス・リケニホルミス(B. licheniformis)、バシラス・アミロリクエファシエンス(B. amyloliquefaciens)、バシラス・ステアロサーモフィラス(B. stearothermophilus)、およびアスペルギラス・オリザエ(Aspergillus oryzae)由来のα-アミラーゼのハイブリッドを開示している。これらの中には、ハイブリッドのアミノ酸１〜３００がバシラス・アミロリクエファシエンスα-アミラーゼに由来し、アミノ酸３０１〜４８３がバシラス・リケニホルミスα-アミラーゼに由来するハイブリッドが具体的に存在する。即ち、本願の用語(後記を参照)によれば、これはＡＬ３００と言うこともできる。また、変異体ＡＬ３７もこれに記載されている。この出願の教示によれば、このようなハイブリッドアミラーゼを、Termamyl様アミラーゼの三次元構造を決定するために調製し、この後者に基づいて、酵素活性に重要である位置を検出することができる。次いで、この位置を、部位指向性突然変異誘発によって特異的に改変することができ、適当な用途に供することができる。従って、酵素特性を変化させるのに使用しうる個々の位置および該位置のための特異的な置換の両方が挙げられている。この文献は、点突然変異に付されていないハイブリッドアミラーゼそれ自体の、さらに可能な産業上の使用を開示していない。
【００１５】
これらの知見に基づいて、ＷＯ９７／４１２１３は、野生型酵素および個々のハイブリッドアミラーゼ(ＡＬ３７を含む)の両方の点突然変異誘発によって得られ、洗浄剤および浄化剤においても使用される、さらなる変異体を開示している。
【００１６】
国際特許出願ＷＯ００／６００５９は、基質デンプンにおける改変された切断パターンに関して開発され、従って、デンプンの加工に特に適する変異体を開示している。このため、この出願によれば、長い分岐オリゴ糖の生成が、比較的短い分岐オリゴ糖の生成よりも有利である。この文献は、天然α-アミラーゼおよびハイブリッドアミラーゼ[例えば、ＡＬ３３およびＡＬ３７(これらの配列は同一である)など]の両方の多くの点突然変異であって、特に、４１２位(バシラス・リケニホルミスの番号付与に従う)の突然変異、好ましくはＴ４１２Ａをも含みうる点突然変異を開示している。しかし、これに加えて、少なくとも第２の突然変異が、１３、４８〜５４、５７、１０７、１０８、１１１、１６８および１９７位のいずれかに存在しなければならず、なおさらなる置換を有する複数の突然変異体が好ましい。
【００１７】
最後に挙げた３つの文献のどれも、バシラス・アミロリクエファシエンスの番号付与に従って、融合位置として、１７、３４(バシラス・リケニホルミスの番号付与に従えば３６に対応する)、７６、１０８、１１２、１４２、１４７、１４９、１５１、１６３、１７４、１７９、１８５、１９１、１９８、２０７、２３１、２３４、２４４、２５６、２６３、２７６、４３１、８４、９９、４２９、２０１、１９、４３３または１５３位を開示していない。同様に、１３４または３２０位(バシラス・リケニホルミスの番号付与)に配列変異を有するハイブリッドアミラーゼは開示されておらず、４１２位における突然変異の開示は、さらなる規定された変異と組合せて、また、酵素活性の特別の変化に関係して為されている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
従って、本発明の目的は、少なくとも洗浄剤および浄化剤の分野において、新規なアミロース分解酵素またはこれまで知られていないアミロース分解酵素を含んでなる洗浄剤および浄化剤、好ましくは、確立されたα-アミラーゼよりも優れた洗浄または浄化性能を示すアミロース分解酵素を含んでなる洗浄剤および浄化剤を提供することであった。
目的の一部は、織物または硬表面を浄化するための方法であって、この種のアミラーゼのゆえに、洗浄および浄化性能の点で改善された結果を有する方法を提供することであった。
目的の第２の部分は、このように改善された性能を用いる可能な用途を示すことであった。
目的の第３の部分は、新規なアミラーゼの開発によって洗浄剤および浄化剤の性能を改善しうる方法を示すことであった。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
上記の目的は、細菌種バシラス・アミロリクエファシエンスおよびバシラス・リケニホルミス由来のα-アミラーゼから、適切にマッチしている部分の融合によって形成させうるハイブリッドタンパク質を提供することによって達成される。
【００２０】
この解決法の驚くべき事実は、天然の古くから確立されているα-アミラーゼの配列の組換え単独であっても、洗浄剤または浄化剤のためのより効果的なアミラーゼを製造しうるということである。これらのハイブリッドアミラーゼは、この使用分野に関連する特別の開発のための出発点になりうる。
【００２１】
即ち、本発明は、アミロース分解ハイブリッドタンパク質を含んでなる洗浄剤または浄化剤であって、該アミロース分解ハイブリッドタンパク質のアミノ酸配列が、それぞれ相同位置に、１を越えるアミノ酸を含む少なくとも１つの、バシラス・アミロリクエファシエンスα-アミラーゼの部分配列と同一の部分配列を含み、かつ、それぞれ相同位置に、１を越えるアミノ酸を含む少なくとも１つの、バシラス・リケニホルミスα-アミラーゼの部分配列と同一の部分配列を含むことを特徴とする洗浄剤または浄化剤に関する。これらの中で、出発分子まで遡ることができるハイブリッドアミラーゼの部分配列が、７個を越える、好ましくは１４個を越える、特に好ましくは２１〜４６２個のアミノ酸の長さであり、そして／または、ハイブリッドタンパク質が、出発配列に従って互いに相補性である３個または２個の部分配列から構成される製剤が好ましい。
【００２２】
本目的は、好ましくは、ハイブリッドアミラーゼが、バシラス・アミロリクエファシエンスα-アミラーゼ(配列番号４)の番号付与に従って、１７、３４、７６、１０８、１１２、１４２、１４７、１４９、１５１、１６３、１７４、１７９、１８５、１９１、１９８、２０７、２３１、２３４、２４４、２５６、２６３、２７６、４３１、８４、９９、４２９、２０１、１９、４３３および１５３位の近くに、即ち、さらに好ましくは、該位置の１０または５アミノ酸上流および下流の領域内に、または正確に該位置に融合点を有する製剤によって達成される。これらの中で、特に好ましいのは、ハイブリッドアミラーゼＡＬ１７、ＡＬ１０８、ＡＬ１４２、ＡＬ１４７、ＡＬ１４９、ＡＬ１５１、ＡＬ１６３、ＡＬ１７４、ＡＬ１７９、ＡＬ１８５、ＡＬ１９１、ＡＬ１９８、ＡＬ２０７、ＡＬ２３１、ＡＬ２３４、ＡＬ２４４、ＡＬ２６３、ＡＬ２７６、ＡＬ４３１、ＡＬＡ１７−１５１、ＡＬＡ７６−１５１、ＡＬＡ９９−４２９、ＡＬＡ１２−１５１、ＡＬＡ１１２−２０１、ＬＡ１９およびＬＡ４３１である。
【００２３】
本目的は、特に好ましくは、ハイブリッドアミラーゼが、バシラス・アミロリクエファシエンスα-アミラーゼ(配列番号４)の番号付与に従って、３４、２５６、８４、１９および１５３位の近くに、即ち、さらに好ましくは、該位置の１０または５アミノ酸上流および下流の領域内に、または正確に該位置に融合点を有する製剤によって達成される。これらの中で、特に好ましいのは、ハイブリッドアミラーゼＡＬ３４(配列番号６)、ＡＬ２５６(配列番号１２)、ＡＬＡ３４−８４(配列番号１４)およびＬＡＬ１９−１５３(配列番号１８)である。
【００２４】
本目的は、極めて好ましくは、ハイブリッドアミラーゼが、部分配列として、バシラス・アミロリクエファシエンスα-アミラーゼ(配列番号４)のアミノ酸位置１９〜７６の部分配列、ならびに、さらなる部分配列として、バシラス・リケニホルミスα-アミラーゼ(配列番号２)のアミノ酸位置４３３〜４８３の部分配列を有する製剤によって達成される。これらの中で、特に好ましいのは、ハイブリッドアミラーゼＡＬ７６(配列番号８)、ＡＬ１１２(配列番号１０)およびＬＡＬ１９−４３３(配列番号１６)、ならびに、これらに対してそれぞれ少なくとも９８％、好ましくは９９％、特に好ましくは１００％同一である分子である。ここで含まれるのは、点突然変異誘発によて、例えば個々のアミノ酸の置換によって得られる変異体である。
【００２５】
本目的は、さらに、ハイブリッドアミラーゼが、５個以下のアミノ酸を含む短い領域の欠失、挿入突然変異誘発または誘導体化によって得られるか、またはハイブリッド形成によって生じる抗原決定基を上記のタンパク質と共有する製剤によって達成される。
【００２６】
本発明のこの対象の洗浄剤または浄化剤は、好ましくは０.０００００１〜５重量％、特に０.００００１〜３重量％の割合のハイブリッドアミラーゼ、および／またはさらなる酵素を含有する。これらは、自体既知の提供物または集合物または複数相で存在することができるか、あるいは、その中のアミロース分解活性は、製剤成分の放出のための機能を果たすことができるか、またはそれ自体調節されることができる。
【００２７】
本目的の一部は、織物または硬表面を浄化するための方法によって達成される。即ち、この方法は、本発明の第２の対象を構成し、その工程の少なくとも１つにおいて、ハイブリッドアミラーゼまたは本発明の第１の対象の製剤を使用することを特徴とする。該ハイブリッドアミラーゼは、当該工程において、適用あたり０.０１〜４００ｍｇ、好ましくは０.０２〜２００ｍｇ、特に好ましくは０.０２〜１００ｍｇの量で使用する。
【００２８】
本目的の第２の部分は、織物または硬表面を浄化するためまたは対応する製剤の成分を放出させるための、本発明に関連するハイブリッドアミラーゼの適宜に可能な使用によって達成される。即ち、この使用は本発明の第３の対象を構成する。該ハイブリッドアミラーゼは、食器洗浄機または洗浄用機械における適用あたり、０.０１〜４００ｍｇ、好ましくは０.０２〜２００ｍｇ、特に好ましくは０.０２〜１００ｍｇの量で使用する。
【００２９】
本目的の第３の部分は、洗浄剤または浄化剤の性能を改善するための全ての方法によって達成される。この方法は、本発明の別の対象であり、ハイブリッドアミラーゼの開発に基づく(該ハイブリッドアミラーゼは、バシラス・アミロリクエファシエンスおよびバシラス・リケニホルミス由来のα-アミラーゼのそれぞれ少なくとも１を越えるアミノ酸を、それぞれ相同位置に含む部分配列の融合によって、アミロース分解活性のハイブリッドアミラーゼが得られるように、それぞれ調製され、製剤に添加される)。
【００３０】
このように、上記のハイブリッドアミラーゼ、特に、本願により提供されたバシラス・アミロリクエファシエンスおよびバシラス・リケニホルミス由来の天然遺伝子に関する配列情報(配列番号３および配列番号１)に基づく解決が好ましい。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３１】
タンパク質とは、本願によれば、天然のアミノ酸からなり、実質的に線状構造を有し、かつ、通常は３次元構造を採ることによってその機能を発揮するポリマーを意味する。本願においては、タンパク質を構成する１９個の天然のＬアミノ酸を、国際的慣習の１文字コードおよび３文字コードによって示す。
【００３２】
本願における酵素とは、特定の生化学的機能を発揮するタンパク質を意味する。アミロース分解タンパク質またはアミロース分解機能を有する酵素とは、多糖のα-１,４-グリコシド結合、特に多糖の内部に位置する結合を、加水分解するものを意味し、これはα-１,４-アミラーゼ(Ｅ.Ｃ.３.２.１.１)または略してα-アミラーゼとも呼ばれる。
【００３３】
多くのタンパク質は、「プレタンパク質」(前駆体タンパク質)として、即ちシグナルまたはリーダーペプチドを伴って形成される。これは、タンパク質のＮ末端部分を意味し、その機能は、通常、生成したタンパク質の、産生細胞からペリプラズムへのまたは周囲培地への輸出および／またはその正しい折り畳みを確実にすることである。しかし、産業上の用途には、例えば本発明の範囲内で、成熟ペプチド、即ちその産生後にプロセシングを受けた酵素が、その酵素活性のゆえに、プレタンパク質よりも好ましい。
【００３４】
本願における核酸とは、天然にはヌクレオチドから構成され、情報担体として機能し、タンパク質または酵素の一次アミノ酸配列をコードする分子を意味する。核酸は一本鎖として、または該一本鎖に相補的な一本鎖として、または二本鎖として存在することができる。分子生物学的作業のためには、天然においてより耐久性が高い情報担体としての核酸ＤＮＡが好ましい。これに対して、ＲＮＡは、自然環境で、例えば発現細胞中で、本発明を実施するために産生される。
【００３５】
ＤＮＡの場合、両相補鎖の配列を、それぞれに可能な３つの読み枠の全てについて考慮しなければならない。異なるコドントリプレットが同じアミノ酸をコードしうるので、ある特定のアミノ酸配列を、複数の異なるヌクレオチド配列(これらは同一性が低いこともある)から導きうるという事実も考慮しなければならない(遺伝暗号の縮重)。さらに、これらのコドンの使い方は、種々の生物によって異なっている。これらの理由から、アミノ酸配列とヌクレオチド配列の両方が保護範囲に含まれていなければならず、示したヌクレオチド配列は、いずれの場合も、ある特定のアミノ酸配列をコードする配列を例示するにすぎないとみなすべきである。
あるタンパク質に対応する情報単位を、本願においては遺伝子ともいう。
【００３６】
当業者であれば、現在広く知られている方法、例えば化学合成またはポリメラーゼ連鎖反応(ＰＣＲ)などを、分子生物学および／またはタンパク質化学の標準的方法と組み合わせることにより、既知のＤＮＡ配列および／またはアミノ酸配列に基づいて、適切な核酸から完全な遺伝子までを製造することができる。そのような方法は、例えば「Lexikon der Biochemie」(生化学辞典)[Spektrum Akademischer Verlag、ベルリン、1999、第1巻、267-271および第2巻、227-229頁]から既知である。
【００３７】
例えば自体公知の分子生物学的方法によって生じさせることができるヌクレオチド配列の変化は、突然変異と呼ばれる。変化の種類に応じて、例えば、欠失、挿入または置換突然変異、または種々の遺伝子もしくは遺伝子の一部が互いに融合している変異(シャフリング)などが知られている。これらは遺伝子突然変異である。対応する生物は突然変異体と呼ばれる。突然変異した核酸から得られるタンパク質は変異体と呼ばれる。従って、例えば欠失、挿入もしくは置換突然変異または融合は、欠失、挿入もしくは置換突然変異型遺伝子または融合遺伝子をもたらし、タンパク質レベルでは、対応する欠失、挿入もしくは置換変異体または融合タンパク質をもたらす。本願においては、突然変異を通常の１文字コードによって示す。従って、例えば、点突然変異Ｔ４１０Ａは、このタンパク質の４１０位における置換であって、アミノ酸アラニンがアミノ酸トレオニンの代わりに置換されている置換である。
【００３８】
断片とは、天然タンパク質または完全に翻訳された遺伝子に対応するタンパク質よりも小さいあらゆるタンパク質またはペプチドを意味し、例えば合成的によって得られるものであってもよい。これらの断片は、そのアミノ酸配列により、対応する完全タンパク質に関連づけることができる。これらは、例えば同じ構造を採ることができるか、またはアミロース分解活性もしくは部分活性(例えば基質の複合体化など)を発揮することができる。出発タンパク質の断片および欠失変異体とは基本的によく似ているが、断片が比較的小さい部分を表すのに対して、欠失突然変異体は、短い領域を、従って個々の部分的機能を欠いているに過ぎない。
核酸レベルで断片に相当するのは、部分配列である。
【００３９】
本願におけるキメラタンパク質またはハイブリッドタンパク質とは、同じ生物または異なる生物に由来する異なるポリペプチド鎖に天然起源を有する複数の要素から構成されているタンパク質を意味する。この手法は、シャフリングまたは融合突然変異誘発とも呼ばれる。このような融合の目的は、例えば、タンパク質に融合させた部分を利用して、特定の酵素機能を引き出すかまたは改変すること、あるいは、いずれかの点で改良された性質を有する酵素を得ることであることができる。
【００４０】
挿入突然変異によって得られたタンパク質とは、自体公知の方法を用いて、核酸断片またはタンパク質断片を出発配列中に挿入することによって得られた変異体を意味する。これらは、その基本的な類似性のゆえに、キメラタンパク質に分類されるべきである。これらは、キメラタンパク質とは、タンパク質全体の大きさに対する無改変タンパク質部分の大きさの比率だけで異なっている。このような挿入突然変異型タンパク質においては、外来タンパク質の割合がキメラタンパク質の場合よりも低い。
【００４１】
逆位突然変異誘発、即ち部分配列の反転は、欠失と挿入の両方の特殊な形態であるとみなすことができる。これは、元のアミノ酸配列から逸脱する、さまざまな分子部分の再編成にも当てはまる。このような再編成は、元のタンパク質の欠失変異体、挿入変異体およびシャフリング変異体とみなすことができる。
【００４２】
本願における誘導体とは、あるタンパク質の純粋なアミノ酸鎖が化学修飾されているタンパク質を意味する。これらの誘導体化は、例えば宿主生物によるタンパク質生合成に関連して生物学的に行うことができる。この場合には、分子生物学的方法を使用することができる。しかし、この誘導体化は、例えば、アミノ酸側鎖の化学変換によって、またはタンパク質への別の化合物の共有結合よって、化学的に行うこともできる。このような化合物は、例えば、二官能性の化学化合物を介して本発明のタンパク質に結合される他のタンパク質であってよい。また、誘導体化は、巨大分子支持体への共有結合をも意味する。
【００４３】
抗血清または特定抗体との反応によって、タンパク質を、免疫学的に関連したタンパク質の群にまとめることもできる。ある群の構成員は、それらが１つの抗体によって認識される同一の抗原決定基を有するという点で識別される。
本発明によれば、全ての酵素、タンパク質、断片および誘導体は、明示的にそのように呼ぶ必要がない限り、タンパク質という一般的用語に包含される。
【００４４】
例えば、一般利用が可能なデータベースに登録されている既知の酵素と比較することにより、検討中の酵素の酵素活性または構造要素などの特徴的分子部分を、アミノ酸配列またはヌクレオチド配列から推定することが可能になる。
【００４５】
このような比較は、検討中のタンパク質のヌクレオチド配列またはアミノ酸配列中の類似配列を互いに関係づけることによって行われる。これは相同関係表示(homologization)と呼ばれる。関係する位置を一覧表の形式で関係づけることをアラインメントという。ヌクレオチド配列を解析する場合には、ここでも両方の相補鎖およびそれぞれについて可能な３つの読み枠の全てを、遺伝暗号の縮重および生物特異的なコドン使用頻度と同様に、考慮しなければならない。一方、アラインメントは、コンピュータプログラムにより、例えばＦＡＳＴＡまたはＢＬＡＳＴアルゴリズムによって作成される。この手法は、例えばD.J.LipmanおよびW.R.Pearson (1985)[Science、第227巻、1435-1441頁]により記載されている。比較配列中の全ての一致位置をまとめたものをコンセンサス配列という。
【００４６】
このような比較により、比較配列間の類似性または相同性に関する言及も可能になる。これは一致率(％)、即ち、同一位置における同一ヌクレオチドまたはアミノ酸残基の割合として表される。相同性という用語のより広い定義では、保存されたアミノ酸置換もこの値に含まれる。その場合は、これを類似率(％)という。このような言及は、タンパク質または遺伝子の全体について、または個別の領域のみについて行うことができる。
【００４７】
異なるタンパク質の相同領域とは、通常は、一次アミノ酸配列の一致によって認識することができる同じ構造要素および／または機能を有する領域である。これは、極めて小さい領域「ボックス」(これは、わずか数アミノ酸からなり、通常は全体の活性にとって必須の機能を発揮する)における完全な一致までの範囲にわたる。相同領域の機能とは、完全なタンパク質によって発揮される機能のうちごく小さい部分的機能、例えば、基質複合体または遷移複合体を生成するための個々の水素結合の形成などを意味する。
【００４８】
少なくとも２つのタンパク質の間の相同領域の同定は、これらのタンパク質を、同等の機能を有する融合またはハイブリッドタンパク質に一体化する基礎である。これに関連して、あるタンパク質の少なくとも１つの領域が、他のタンパク質の相同領域によって置換される。従って、融合した領域は、ぴったり適合しているにちがいなく、タンパク質全体の主機能を保持しているにちがいない。例えば、融合が、２つのアミラーゼの部分配列の融合であるときには、本発明に従って、ハイブリッドアミラーゼが得られる(融合生成物それ自体が全体としてアミロース分解活性を有するとき)。
【００４９】
酵素活性を、実際の反応に関与しないタンパク質の他の領域によって定性的または定量的に改変することができる。これは、例えば、酵素の安定性、活性、反応条件または基質特異性に関係する。
【００５０】
抗血清または特定抗体との反応によって、タンパク質を、免疫学的に関連したタンパク質の群にまとめることもできる。ある群の構成員は、それらが１つの抗体によって認識される同一の抗原決定基を有するという点で識別される。
【００５１】
酵素の性能とは、それぞれの場合に考慮される産業領域におけるその効力を意味する。このような性能は、実際の酵素活性に基づくが、さらに、特定のプロセスに関係するさらなる要因に依存する。これらには、例えば、安定性、基質結合、このような基質を担持する物質との相互作用、または他の成分との相互作用(特に、相乗作用)が含まれる。従って、例えば、ある酵素が洗浄剤または浄化剤における使用に適しているか否かを検討するには、他の成分と配合された製剤の洗浄または浄化性能に対する寄与を考慮する。
【００５２】
本発明によれば、本発明に必須であるタンパク質を、洗浄剤または浄化剤において使用する。ここで、その酵素活性が、少なくとも１つの表面の少なくとも１つのデンプン汚れまたはデンプン様汚れに対する、少なくとも１つの洗浄剤または浄化剤配合物の性能の改善に寄与するものを使用するのが好ましい。１を越える浄化課題において、当該製剤の洗浄または浄化性能に寄与するものが特に好ましい。
【００５３】
このような表面は、好ましくは織物または硬表面である。このために選択すべき条件(例えば、温度、ｐＨ、イオン濃度、酸化還元状態または機械的影響など)は、特定の浄化課題(即ち、汚れおよび担体物質に関連する)に対して最適化すべきである。即ち、洗浄剤および浄化剤のための通常の温度は、手による製剤については１０℃〜４０℃超の範囲内であり、機械用製剤または産業用途については６０℃〜９５℃の範囲内である。好ましくは、当該製剤の成分を互いに調整する。
【００５４】
本発明の製剤を特徴づけるハイブリッドアミラーゼは、相同な相補領域において、バシラス・アミロリクエファシエンスおよびバシラス・リケニホルミスのα-アミラーゼの部分配列からなる。即ち、当該ハイブリッドアミラーゼの各アミノ酸は、一方または他方の出発配列のいずれかの相同位置に見い出すことができる少なくとも２個のアミノ酸を含む部分領域に位置している。このことは、例えば、図２のアラインメントに基づいて理解することができる。
【００５５】
これら２つの出発酵素の配列は、だれでも利用できるデータベースから、ａｍｙＡ(バシラス・アミロリクエファシエンスα-アミラーゼについて)またはａｍｙＬ(バシラス・リケニホルミスα-アミラーゼについて)の名称で得ることができる。例えば、Swiss-Protデータベース[Geneva Bioinformatics (GeneBio) S.A.、Geneva、スイス国；http://www.genebio.com/sprot.html]において、これらは、受託番号Ｐ００６９２(バシラス・アミロリクエファシエンスα-アミラーゼａｍｙＡについて)およびＰ０６２７８(バシラス・リケニホルミスα-アミラーゼａｍｙＬについて)として挙げられている。さらに、これらは、本願の配列表において、それぞれ配列番号４および配列番号２として示されている(また、対応するヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号３および配列番号１として示されている)。
【００５６】
両バシラス種は、文献に詳しく記載されており、菌株コレクションからだれでも入手することができる。即ち、例えばバシラス・アミロリクエファシエンスは、Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH [Mascheroder Weg 1b、38124 Braunschweig、独国；http://www.dsmz.de]からＤＳＭ７の名称のもとで、または、American Type Culture Collection [10801 University Boulevard、Manassas、VA 20110-2209、米国；http://www.atcc.org]からＡＴＣＣ２３３５０の名称のもとで入手することができる。バシラス・リケニホルミスは、同じところから、例えばそれぞれＤＳＭ１３およびＡＴＣＣ１４５８０の名称のもとで得ることができる。
【００５７】
これらの菌株から、対応するα-アミラーゼ遺伝子を、例えば、本願の配列表(それぞれ、配列番号３および配列番号１)に基づいて合成したプライマーを用いてＰＣＲにより得ることができる。得られたＰＣＲ産物を、自体既知の方法に従ってクローニングし、任意の好都合な方法でさらに加工することができる(後記を参照)。
【００５８】
本発明によれば、適当なハイブリッドの群を、出発配列に基づいて規定および命名することができる。文字Ｌをバシラス・リケニホルミス由来のアミラーゼに選択し、文字Ａをバシラス・アミロリクエファシエンス由来のアミラーゼに選択したときには、Ｎ末端配列がバシラス・リケニホルミスα-アミラーゼのものであり、Ｃ末端配列がバシラス・アミロリクエファシエンスα-アミラーゼのものである酵素は、ハイブリッド群ＬＡに属する。逆の構成であれば、それはハイブリッド群ＡＬに属し、３つの部分の融合であれば、出発酵素のどの部分配列を混合したかに依存して、相応にハイブリッド群ＬＡＬまたはＡＬＡに属する。
【００５９】
付加された数は、部位(その部位において融合が生じる)、即ち、アミノ酸(そのアミノ酸のＣ末端から融合が生じる)に関して、分子を明瞭に特徴づける。不明確である場合には、バシラス・アミロリクエファシエンスα-アミラーゼ(配列番号４)の番号付与が確実である。即ち、例えば分子ＡＬ７６は、バシラス・アミロリクエファシエンスアミラーゼのＮ末端７６アミノ酸、およびそれに隣接してＣ末端に向かって、バシラス・リケニホルミスα-アミラーゼの相同アミノ酸(即ち、バシラス・リケニホルミスα-アミラーゼの番号付与に従って、７９位に存在するチロシンからの相同アミノ酸)を有する。例えば、ハイブリッドアミラーゼＬＡＬ１９−４３３は、バシラス・リケニホルミスα-アミラーゼのＮ末端２１アミノ酸、これに続いてバシラス・アミロリクエファシエンスα-アミラーゼの相同領域(即ち、相同な相補領域においてヒスチジンに続くトリプトファンから始まって下流に、両番号付与に従って４３３位のグリシンまで)、そして最後にバシラス・リケニホルミスα-アミラーゼの残りのアミノ酸(即ち、アミノ酸４３４〜４８３の領域)からなる。また、これらの融合点は、図２において強調されている。
【００６０】
アミノ酸配列を考慮する際に、番号付与に関する何らかの不明確さが生じたときには、配列表に開示した対応するヌクレオチド配列が解決を与える。これは、ハイブリッドタンパク質の形成が、対応するＤＮＡのレベルで有利に起こるためである。即ち、融合点の数は、ここでもそれぞれバシラス・アミロリクエファシエンスのコドン番号付与(配列番号３)に関連して、コドンの数に由来する(該コドンの第１、第２または第３の核塩基の下流で、他のＤＮＡへの転換が生じる)。
【００６１】
図１は、本願の好ましい態様を特徴づけるハイブリッドアミラーゼを図式的に示すものである。これらは、バシラス・アミロリクエファシエンスα-アミラーゼの少なくとも１つの配列領域(少なくとも２個のアミノ酸を含む)、ならびに、バシラス・リケニホルミスα-アミラーゼの少なくとも１つの配列領域(同様に少なくとも２個のアミノ酸を含む)を含んでなる。
【００６２】
ハイブリッドアミラーゼの部分配列(これは、出発分子まで遡るべきである)は、７個を越える、好ましくは１４個を越える、特に好ましくは２１〜４６２個のアミノ酸の長さである。これは、例えば図１から明らかなように、特に好ましい代表例の部分配列(後記を参照)が、２１〜４６２個のアミノ酸の長さであるためである。これに示した融合部位のランダムな組合せは、少なくとも８個(融合点７６および８４)、次いで１５個(融合点１９および３４)、そして最後に２１〜４６２個のアミノ酸長さの本発明のタンパク質を導く。
【００６３】
本ハイブリッドタンパク質は、出発配列に従って互いに相補性である３個または２個の部分配列からなるのが好ましい。即ち、本ハイブリッドタンパク質は、１個または２個の融合部位を有しており、ハイブリッド群ＡＬ、ＬＡ、ＬＡＬおよびＡＬＡのいずれかに割り当てることができる。
【００６４】
インビボ法によるこの種のハイブリッドアミラーゼの製造は、B.Conrad、V.Hoang、A.PolleyおよびJ.Hofemeisterによる刊行物「Hybrid Bacillus amyloliquefaciens X Bacillus licheniformis α-Amylases. Construction, properties and sequence determinants」(1995)[Eur.J.Biochem.、230、481-490頁]に詳しく記載されている。この中で、ハイブリッドアミラーゼは、インビボ組換えによって得られている。これは、例えば、両遺伝子を、一方を他方の後ろで同じベクター中にクローニングし、これを宿主細胞中に導入することによって行うことができる[H.Weber、C.Weissmann (1983):「Formation of genes coding for hybrid proteins by recombination between related, cloned genes in E. coli」、Nucleic Acid Res.、11、5661-5669頁、およびＥＰ２０８４９１を参照]。これにより、特定の制限切断部位とは無関係に、該２つの遺伝子間の組換え現象に帰することができるハイブリッドアミラーゼの宿主が得られるであろう。得られるタンパク質は、Conradらの研究の図２に、図式的に示されている。
【００６５】
しかし、１を越える融合を行うためには、従来技術において確立されているインビトロ法がより有望である。即ち、既存の制限切断部位および追加導入した制限切断部位の両方への融合によって、ハイブリッドアミラーゼを生成させることができる。即ち、自体既知の点突然変異誘発法に従って、例えばミスマッチ(不正対合)プライマーにより、所望のヌクレオチドを置換することによって、追加の切断部位を当該の両遺伝子(配列番号１および３)に導入することができる。これに関連して、唯一の同義コドンを生成させるため、即ち、誘導されたアミノ酸配列に影響を及ぼさない突然変異のみを配置するために、遺伝暗号の縮重を利用することができる。生成させる制限切断部位は、自由に選択することができる。これは、それぞれの場合において、インビトロ融合のための適当な制限酵素に適合させることができるためである。これは、特に、独特の切断部位を生成させる際に当てはまる。別法によれば、部分配列を用いて、好ましくは切断部位を含むプライマーを用いて、ＰＣＲ反応を行うこともでき、得られた生成物を互いに連結することができる。
【００６６】
この種の融合タンパク質を得る他の可能性は、例えば、(a)帰納的な配列組換えと同等の方法による適当な断片のランダム組換え(例えば、特許出願ＷＯ９８／０５７６４、ＷＯ９７／３５９６６、ＥＰ５９０６８９およびＥＰ２２９０４６に記載されている)、ならびに、(b)ＰＣＲに基づく方法による適当な断片のランダム組換え(このような方法の例は、国際特許出願ＷＯ９８／４２８３２に記載されているＳｔＥＰ法である)である。
【００６７】
次いで、融合させたＤＮＡ分子を、自体既知の方法に従って、宿主細胞中でクローニングし、増幅し、そして発現させることができる。これに適する系(例えば、ベクターおよび／または宿主細胞など)も、従来技術から同様に既知であり、多数が市販されている。高い生成物生成速度を有する容易に培養しうる宿主細胞が、当該ハイブリッドアミラーゼの工業生産に特に適している。
【００６８】
両出発酵素は、対応する製剤の洗浄または浄化性能に、特にデンプン汚れおよびデンプン様汚れに対して、寄与しうることが知られている。即ち、両野生型分子は、市販のα-アミラーゼ BANＲおよびTermamylＲ(製造元 Novozymes、A/S、Bagsvaerd、デンマーク国)の出発点である。しかし、これらは異なる酵素特性を有している(特に、熱安定性に関して)。即ち、バシラス・アミロリクエファシエンスα-アミラーゼの熱安定性は、バシラス・リケニホルミスの熱安定性よりも明らかに低い[Tomazic,S.J.およびKlibanov,A.M.、(1988)、J.Biol.Chem.、263、3086-3091頁および3092-3096頁]。
【００６９】
これら２つの出発酵素から記載したようにして得ることができるハイブリッドアミラーゼは、Conradらの研究のゆえに、また、出発酵素の酵素活性に基づいて予測されるように、アミロース分解活性を有するはずである。しかし、このことは、デンプン汚れおよびデンプン様汚れに対する対応する製剤の洗浄または浄化性能の増大と必ずしも等しい訳ではない。例えば、出発酵素よりも実質的に不安定であり、従って洗浄剤または浄化剤の成分として適さない酵素を得ることもできる。しかし、それらが、それらを適切に豊富化した少なくとも１つの洗浄剤および／または浄化剤の洗浄および／または浄化性能を、規定の条件下で改善することができるときに、それらを使用するのが好ましいであろう。
【００７０】
適当なハイブリッドアミラーゼを含むかまたは比較用に含まない洗浄剤または浄化剤の配合物を調製し、該配合物の洗浄性能(即ち、特にデンプン含有汚れに対する洗浄性能)を試験することによって、これを実験的に調べることができる。この種の実験は、本特許出願の例示態様に示されている。
【００７１】
本願の図１およびConradらの上記刊行物の図２に示されている融合タンパク質は、バシラス・アミロリクエファシエンスα-アミラーゼ配列(配列番号２)の番号付与に従って、タンパク質レベルで、以下の位置：１７、３４、７６、１０８、１１２、１４２、１４７、１４９、１５１、１６３、１７４、１７９、１８５、１９１、１９８、２０７、２３１、２３４、２４４、２５６、２６３、２７６、４３１、８４、９９、４２９、２０１、１９、４３３および１５３に対応する出発遺伝子内の部位における格子およびデノボ融合によって創製されている。これは、それぞれこの位置を占めるアミノ酸のＣ末端に、それぞれ他の配列のアミノ酸が続くことを意味する。本発明の好ましい態様には、融合部位が、これらの位置の１０アミノ酸上流〜１０アミノ酸下流の領域内に位置しているハイブリッドタンパク質が含まれる。これらの態様と比較して、融合部位が、これらの位置の９、８、７、６、５、４、３、２または１アミノ酸上流〜９、８、７、６、５、４、３、２または１アミノ酸下流の領域内に位置しているハイブリッドタンパク質がこの順に好ましい。融合点が、正確にこれらの位置に、即ち、これらのＣ末端に位置しているハイブリッドタンパク質が特に好ましい。
【００７２】
上で説明したように、ハイブリッドタンパク質中に存在する種々の部分配列の出自およびその融合位置が、その名称をも決定する。どのアミノ酸配列が個々の場合に生じるかは、２つの出発酵素の野生型アミノ酸配列(配列表の配列番号２および配列番号４で示される)に基づいて、および図２に基づいて習得することができる。
【００７３】
Conradらの刊行物において、ある種のアミロース分解活性が、以下の特別のハイブリッドアミラーゼ：ＡＬ１７、ＡＬ１０８、ＡＬ１４２、ＡＬ１４７、ＡＬ１４９、ＡＬ１５１、ＡＬ１６３、ＡＬ１７４、ＡＬ１７９、ＡＬ１８５、ＡＬ１９１、ＡＬ１９８、ＡＬ２０７、ＡＬ２３１、ＡＬ２３４、ＡＬ２４４、ＡＬ２６３、ＡＬ２７６、ＡＬ４３１、ＡＬＡ１７−１５１、ＡＬＡ７６−１５１、ＡＬＡ９９−４２９、ＡＬＡ１２−１５１、ＡＬＡ１１２−２０１、ＬＡ１９およびＬＡ４３１について、既に検出されている。即ち、これらは、本発明の好ましい態様を特徴づける。
【００７４】
本発明のこの対象の特に好ましい態様を特徴づけるハイブリッドアミラーゼは、配列番号４の番号付与に従って、３４、２５６、８４、１９および／または１５３位の近くに融合点を有する。該融合点は、該位置の１０、９、８、７、６、５、４、３、２および１アミノ酸上流(この順に好ましい)〜１０、９、８、７、６、５、４、３、２および１アミノ酸下流(この順に好ましい)の領域内に位置する。
【００７５】
ここで、ハイブリッドアミラーゼＡＬ３４(配列番号６)、ＡＬ２５６(配列番号１２)、ＡＬＡ３４−８４(配列番号１４)および／またはＬＡＬ１９−１５３(配列番号１８)を含む製剤が特に好ましい。これは、これらが、デンプン汚れまたはデンプン様汚れに対する対応する配合物の洗浄または浄化性能を改善することができるためである。これらの一部は、本願の例示態様から推論することができるように、従来技術において確立された酵素の洗浄または浄化性能と同等の性能を示す。
【００７６】
本発明のこの対象の特に好ましい態様を特徴づけるハイブリッドアミラーゼは、配列番号４の番号付与に従って、１９、７６、１１２および／または４３３位の近くに融合点を有する。該融合点は、該位置の１０、９、８、７、６、５、４、３、２および１アミノ酸上流(この順に好ましい)〜１０、９、８、７、６、５、４、３、２および１アミノ酸下流(この順に好ましい)の領域内に位置する。
【００７７】
ここで、部分配列として、バシラス・アミロリクエファシエンスα-アミラーゼ(配列番号４)のアミノ酸位置１９〜７６の部分配列、ならびに、さらなる部分配列として、バシラス・リケニホルミスα-アミラーゼ(配列番号２)のアミノ酸位置４３３〜４８３の部分配列を有するハイブリッドアミラーゼを含む製剤が特に好ましい。
【００７８】
例えば、Conradらの研究は、バシラス・アミロリクエファシエンスα-アミラーゼの位置３４〜７６の部分が、完全分子のための温度安定化機能を発揮することを開示している。しかし、この領域がこの特性の原因を為すだけでなく、温度安定性は、このアミラーゼの他の領域との相互作用に基づいている可能性がある。即ち、バシラス・アミロリクエファシエンスα-アミラーゼの部分配列１９〜７６ならびにバシラス・リケニホルミスα-アミラーゼのアミノ酸位置４３３〜４８３の部分配列を同時に有する酵素は、対応する配合物の洗浄または浄化性能に対して良好な寄与を示した。これは、ある種の恐らくは未だ知られていない構造的特徴が、適当な条件(温度、ｐＨ、イオン濃度、機械的負荷)下の酵素に、繊維または硬表面においてデンプン汚れまたはデンプン様汚れを除去する能力を付与するということに起因するのであろう。このことは、本願の実施例によって確認される。
【００７９】
このために、ＡＬ７６(配列番号８)またはＡＬ１１２(配列番号１０)またはＬＡＬ１９−４３３(配列番号１６)に対して、少なくとも９８％、順に好ましくは９８.２５％、９８.５％、９８.７５％、９９％、９９.２５％、９９.５％、９９.７５％および１００％同一であるハイブリッドアミラーゼを含んでなる製剤が特に好ましい。
【００８０】
例えば、行った実施例において、これらの酵素は、そこで試験した製剤のデンプン汚れまたはデンプン様汚れに対する洗浄または浄化性能を改善した。これら酵素の寄与は、洗浄剤または浄化剤の確立されたアミラーゼの寄与に、部分的に等しいかまたはそれより高いこともあった。
【００８１】
酵素ＡＬ７６、ＡＬ１１２およびＬＡＬ１９−４３３の良好な洗浄および浄化性能は、バシラス・アミロリクエファシエンスα-アミラーゼの１９〜７６位の領域と、バシラス・リケニホルミスα-アミラーゼのＣ末端ドメイン(即ち、４３３位以降)との組合せが、当該変異体の安定性に対してだけでなく、洗浄および浄化性能に対しても特に有利な効果を有することを示唆する。
【００８２】
これらの特に好ましい酵素ＡＬ７６(配列番号８)、ＡＬ１１２(配列番号１０)およびＬＡＬ１９−４３３(配列番号１６)の相同領域の保護範囲には、それぞれ、個々の点突然変異によってこれら酵素から誘導することができる酵素も含まれる。これらには、順に好ましくは１、２または３個の点突然変異を有する酵素、好ましくは、バシラス・リケニホルミスα-アミラーゼの番号付与に従って１３４、３２０および４１２位に、またはバシラス・アミロリクエファシエンスα-アミラーゼの番号付与に従って１３２、３２０および４１２位に対応するアミノ酸位置に置換を有する酵素が含まれる。
【００８３】
これらの中で、ＡＬ７６変異体Ｒ１３２Ｌ、Ａ３１８Ｓおよび／またはＴ４１０Ａ(配列番号８の番号付与に従う)、ＡＬ１１２変異体Ｒ１３２Ｌ、Ａ３１８Ｓおよび／またはＴ４１０Ａ(配列番号１０の番号付与に従う)、ならびに、ＬＡＬ１９−４３３変異体Ｑ１３４Ｌ、Ａ３２２Ｓおよび／またはＴ４１４Ａ(配列番号１６の番号付与に従う)が特に好ましい。これは、例えば、ＡＬ７６変異体Ｒ１３２Ｌ/Ａ３１８Ｓ/Ｔ４１０Ａが、本願の実施例２〜７に対応する洗浄実験において、ＡＬ７６の結果と同等の驚くべき陽性の結果を与えたためである。
【００８４】
さらに別のおよび／または他の点突然変異を、上記に従って順に好ましい種々のハイブリッドアミラーゼの他の位置において行うこともできる。これらの点突然変異の中で、個々のアミノ酸の置換が好ましく、これらの中で、洗浄剤または浄化剤における使用に対してアミラーゼの特性を改善する置換が特に好ましい。これには、例えば、酸化性条件、高温(特に、４０〜９５℃)、変性剤(例えば、界面活性剤または錯生成剤)に対する安定性、カルシウム結合の改善、最適ｐＨの調節、加水分解すべき基質との相互作用、または浄化すべき材料の表面への特異的または非特異的結合の改変が含まれる。
【００８５】
この種の変異は、従来技術から当業者には周知であるように、部位指向性突然変異誘発によって、例えばミスマッチプライマーを用いて調製することができる。別法によれば、ランダム法(ランダム突然変異誘発)と、洗浄剤または浄化剤の対応する配合物の洗浄性能への寄与についてのその後の選択との組合せを使用することもできる。この種の突然変異誘発法は、例えば国際特許出願ＷＯ９６／２３８７４、ＷＯ９７／４１２１３およびＷＯ００／６００５９において、ハイブリッドアミラーゼに対して開示されている。得られた変異体の予備選択は、本願の実施例１に記載したようにして行うことができ、これらを、後記の実施例に従ってさらに試験することができる。
【００８６】
本発明のこの対象のさらなる態様は、それぞれ５個以下の連続アミノ酸、および順に好ましくは、それぞれ４、３、２個以下、特に好ましくは、それぞれ１個のみのアミノ酸の欠失によって得られる、本発明に関連するハイブリッドアミラーゼを含むことを特徴とする洗浄剤または浄化剤である。
【００８７】
この種のハイブリッドアミラーゼは、例えば、出発配列の上記融合において、または他にそれとは独立して、比較的短い配列領域を好ましくは特異的に削除することによって得ることができる。このような配列領域は、例えば、洗浄または浄化性能を損なうことのない融合中の個々のアミノ酸の損失または比較的小さい不安定化要素であってよい。
【００８８】
本発明のこの対象のさらなる態様は、ハイブリッドアミラーゼとして、上記ハイブリッドアミラーゼの少なくとも１つの部分(この部分はアミロース分解活性を付与する)において同一であるアミロース分解キメラタンパク質、または挿入突然変異によって得られるアミロース分解タンパク質を含むことを特徴とする洗浄剤または浄化剤である。
【００８９】
即ち、例えば、ＷＯ９９／５７２５０の教示を適用する際に、このような酵素をセルロース結合ドメインと組合せて、基質との相互作用を増大させることができる。同様に、例えば、他の洗浄または浄化活性酵素を、本発明に関連するハイブリッドアミラーゼに融合させることもできる。原則的に、融合がＮ末端もしくはＣ末端で起こるか、または挿入によって起こるかは、ここでは重要ではない。重要なことは、性能改善された製剤を提供するという目的の達成のみである。
【００９０】
本発明のこの対象のさらなる態様は、上記ハイブリッドアミラーゼのいずれかのアミロース分解誘導体を含んでなることを特徴とする洗浄剤または浄化剤である。
【００９１】
このような誘導体は、特に、低分子量化合物またはポリマーの化学結合によって得られる分子である。このような改変の目的は、例えば、ＷＯ００／２２１０３の教示に従えばアレルゲン作用の軽減であってよく、ＷＯ９９／５８６５１に従えば酵素パラメーターの最適化であってよく、または、ＥＰ１０８８８８７に従えば安定性の増大であってよい。例えば、ＷＯ００／２６３５４の教示を適用することによって、タンパク質をグリコシル化により改変することもできる。
【００９２】
本発明のこの対象のさらなる態様は、ハイブリッド形成によって生じる少なくとも１つの抗原決定基を、上記のタンパク質または誘導体のいずれかと共有する、アミロース分解タンパク質または誘導体を含むことを特徴とする洗浄剤または浄化剤である。
【００９３】
１つの部分配列から他のものへの本発明に関連する転換は、本発明に従って改善された製剤および相応して好ましい態様を特徴づける。他方において、本発明に必須であるハイブリッドアミラーゼが、対応する製剤において実際に活性であることは、免疫学的交差反応によって容易に証明することができる。
【００９４】
本発明の製剤は、本発明に必須であるハイブリッドアミラーゼまたはその誘導体を、好ましくは０.０００００１〜５重量％、順に好ましくは０.００００５〜４重量％、０.００００１〜３重量％、０.０００１〜２重量％、特に好ましくは０.００１〜１重量％の量で含んでなる。
【００９５】
本発明の洗浄剤または浄化剤は、洗浄機において産業スケールで使用するため、または手による洗濯もしくは浄化のための、あらゆる考えられる種類の浄化剤(濃厚物および未希釈の形態で使用しうる製剤の両方)を意味する。これらには、例えば、織物、カーペットまたは天然繊維のための洗浄剤が含まれる(これらのために、本発明においては用語「洗浄剤」を用いる)。また、これらには、例えば、食器洗浄機のための食器洗浄剤または手による食器洗浄剤または硬表面(例えば、金属、ガラス、磁器、セラミック、タイル、石、被覆された表面、プラスチック、木材または皮革)のための浄化剤が含まれる(これらのために、本発明においては用語「浄化剤」を用いる)。本発明のタンパク質が添加されている限り、あらゆる種類の浄化剤が本発明の態様である。
【００９６】
本発明の態様は、従来技術において確立されており、そして／または適切である、本発明の製剤のあらゆる提示物を包含する。これらには、例えば、固体、粉末、液体、ゲル様またはペースト様の製剤が含まれる(これらは、適切であれば、複数の相からなり、圧縮されているか、または未圧縮である)。さらなる例には、大きい容器に充填されたかまたは少量ずつ充填された押出物、顆粒、タブレットまたはポーチが含まれる。
【００９７】
本発明に必須の酵素とは別に、本発明の製剤は、適切であれば、さらなる成分、例えば界面活性剤(例えば、非イオン性、陰イオン性および／または両性界面活性剤)、および／または漂白剤、および／またはビルダー、ならびに、適切であれば、さらなる従来の成分を含有する。
【００９８】
用いられる非イオン性界面活性剤は、好ましくはアルコキシル化(有利にはエトキシル化)され、特に、好ましくは８〜１８個の炭素原子および１モルのアルコールあたり平均して１〜１２モルのエチレンオキシド(ＥＯ)を有する第一級アルコールである。ここで、このアルコール基は、オキソアルコール基において普通に存在するように、直鎖もしくは好ましくは２位でメチル分岐していてもよく、また、直鎖およびメチル分岐した基を混合して含んでいてもよい。しかし、特に好ましいのは、１２〜１８個の炭素原子を有する天然起源(例えば、ココナツ、パーム、獣脂、またはオレイルアルコール由来)のアルコールの直鎖基およびアルコール１モルあたり平均して２〜８個のＥＯを含む、アルコールエトキシレートである。好ましいエトキシル化アルコールとしては、例えば、３個のＥＯまたは４個のＥＯを有するＣ１２-１４アルコール、７個のＥＯを有するＣ９-１１アルコール、３個のＥＯ、５個のＥＯ、７個のＥＯ、または８個のＥＯを有するＣ１３-１５アルコール、３個のＥＯ、５個のＥＯ、または７個のＥＯを有するＣ１２-１８アルコール、およびこれらの混合物(例えば、３個のＥＯを有するＣ１２-１４アルコールと５個のＥＯを有するＣ１２-１８アルコールとの混合物)が挙げられる。所定のエトキシル化の程度は、特定の生成物についての統計学的な平均(これは、整数であっても分数であってもよい)である。好ましいアルコールエトキシレートは、狭い同族体分布を有する(狭範囲エトキシレート、ＮＲＥ)。これらの非イオン性界面活性剤に加えて、１２個より多いＥＯを有する脂肪アルコールを用いることもできる。その例は、１４個のＥＯ、２５個のＥＯ、３０個のＥＯ、または４０個のＥＯを有する獣脂脂肪アルコールである。
【００９９】
唯一の非イオン性界面活性剤として、または他の非イオン性界面活性剤との組み合わせのいずれかで用いられる、好適に用いられる非イオン性界面活性剤のさらなる群は、アルコキシ化、好ましくはエトキシル化またはエトキシル化され、かつプロポキシル化され、好ましくはアルキル鎖中に１〜４個の炭素原子を有する脂肪酸アルキルエステル、特に脂肪酸メチルエステルである。
【０１００】
有利に用いることができる非イオン性界面活性剤のさらなる群は、アルキルポリグリコシド(ＡＰＧ)である。使用しうるアルキルポリグリコシドは、一般式：ＲＯ(Ｇ)Ｚを満たし、ここで、Ｒは、直鎖または分岐鎖の、特に２位でメチル分岐した、飽和または不飽和の、８〜２２個、好ましくは１２〜１８個の炭素原子を有する脂肪族基であり、Ｇは、５〜６個の炭素原子を有するグリコース単位、好ましくはグルコースを示す記号である。グリコシル化の程度であるｚは、ここでは、１.０〜４.０、好ましくは１.０〜２.０、特に１.１〜１.４の範囲内である。直鎖アルキルポリグルコシド、即ち、ポリグリコシル基がグルコース基であり、アルキル基がｎ-アルキル基であるアルキルポリグリコシドを用いるのが好ましい。
【０１０１】
アミンオキシド型の非イオン性界面活性剤、例えば、Ｎ-ヤシ油アルキル-Ｎ,Ｎ-ジメチルアミンオキシド、およびＮ-獣脂アルキル-Ｎ,Ｎ-ジヒドロキシエチルアミンオキシド、および脂肪酸アルカノールアミドの非イオン性界面活性剤も適当でありうる。これらの非イオン性界面活性剤の割合は、好ましくはエトキシル化脂肪アルコールの割合より少なく、特にその半分以下である。
【０１０２】
さらなる適当な界面活性剤は、以下の式(II)：
【化１】
2005527640.tif 000003
[式中、ＲＣＯは、６〜２２個の炭素原子を有する脂肪族アシル基であり、Ｒ１は、水素、アルキル、またはヒドロキシアルキル基(１〜４個の炭素原子を有する)であり、そして[Ｚ]は、３〜１０個の炭素原子および３〜１０個のヒドロキシル基を有する直鎖または分岐鎖のポリヒドロキシアルキル基である]
で示されるポリヒドロキシ脂肪酸アミドである。このポリヒドロキシ脂肪酸アミドは、アンモニア、アルキルアミン、またはアルカノールアミンを用いた還元糖の還元的アミノ化、および引き続く、脂肪酸、脂肪酸アルキルエステル、または脂肪酸塩化物を用いたアシル化によって通常得られる公知の物質である。
【０１０３】
また、ポリヒドロキシ脂肪酸アミドの群は、以下の式(III)：
【化２】
2005527640.tif 000004
[式中、Ｒは、７〜１２個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐鎖のアルキルまたはアルケニル基であり、Ｒ１は、直鎖、分岐鎖もしくは環状のアルキル基またはアリール基(２〜８個の炭素原子を有する)であり、Ｒ２は、直鎖、分岐鎖もしくは環状のアルキル基またはアリール基、またはオキシ-アルキル基(１〜８個の炭素原子を有する)であり、ここでＣ１-４アルキルまたはフェニル基が好ましく、そして[Ｚ]は、直鎖ポリヒドロキシアルキル基(そのアルキル鎖は、少なくとも２つのヒドロキシル基によって置換されている)であるか、またはアルコキシル化(好ましくは、エトキシル化もしくはプロポキシル化)されたこの基の誘導体である]
で示される化合物を包含する。
【０１０４】
[Ｚ]は、好ましくは、還元糖、例えば、グルコース、フルクトース、マルトース、ラクトース、ガラクトース、マンノース、またはキシロースの還元的アミノ化によって得られる。Ｎ-アルコキシ置換またはＮ-アリールオキシ置換された化合物は、例えば、触媒としてアルコキシドの存在下で脂肪酸メチルエステルとの反応によって、所望のポリヒドロキシ脂肪酸アミドに転化することができる。
【０１０５】
用いられる陰イオン性界面活性剤は、例えば、スルホネート型およびスルフェート型のものである。スルホネート型の適当な界面活性剤は、好ましくは、Ｃ９-１３アルキルベンゼンスルホネート、オレフィンスルホネート(即ち、アルケンとヒドロキシアルカンスルホネートの混合物)、およびジスルホネート(これは、例えば、末端または内部の二重結合を有するＣ１２-１８モノオレフィンから、ガス状三酸化イオウを用いたスルホン化、および引き続くスルホン化生成物のアルカリ性もしくは酸性の加水分解によって得られる)である。また適するのは、例えば、Ｃ１２-１８アルカンから、スルホクロロ化またはスルホオキシド化とその後の加水分解または中和によって得られるアルカンスルホネートである。同様に適するのは、α-スルホ脂肪酸のエステル(エステルスルホネート)、例えば、水素化されたココナツ、パーム核または獣脂脂肪酸のα-スルホン化メチルエステルである。
【０１０６】
さらなる適当な陰イオン性界面活性剤は、スルフェート化脂肪酸グリセロールエステルである。脂肪酸グリセロールエステルとは、１〜３モルの脂肪酸を用いたモノグリセロールのエステル化による調製中に、または０.３〜２モルのグリセロールを用いたトリグリセリドのエステル交換中に得られるモノエステル、ジエステル、およびトリエステル、ならびにこれらの混合物を意味する。ここで好ましいスルフェート化脂肪酸グリセロールエステルは、６〜２２個の炭素原子を有する飽和脂肪酸(例えば、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ミリスチン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、またはベヘン酸)のスルフェート化生成物である。
【０１０７】
好ましいアルキル(アルケニル)スルフェートは、Ｃ１２-Ｃ１８脂肪アルコール(例えば、ココナツ脂肪アルコール、獣脂脂肪アルコール、ラウリルアルコール、ミリスチルアルコール、セチルアルコール、またはステアリルアルコール)の、またはＣ１０-Ｃ２０-オキソアルコールの硫酸半エステル、およびこれら鎖長の第二級アルコールの半エステルの、アルカリ金属(特にナトリウム)塩である。さらに好ましいのは、この鎖長のアルキル(アルケニル)スルフェートであって、油脂化学原料に基づく等価な化合物と類似の分解挙動を有する合成の石油化学に基づく直鎖アルキル基を含むスルフェートである。洗浄性能の観点から、Ｃ１２-Ｃ１６-アルキルスルフェート、およびＣ１２-Ｃ１５-アルキルスルフェート、およびＣ１４-Ｃ１５-アルキルスルフェートが好ましい。２,３-アルキルスルフェートも適当な陰イオン性界面活性剤である。
【０１０８】
また、１〜６モルのエチレンオキシド(ＥＯ)でエトキシル化された直鎖または分岐鎖のＣ７-２１アルコール、例えば、平均して３.５モルのＥＯを有する２-メチル分岐したＣ９-１１-アルコールまたは１〜４個のＥＯを有するＣ１２-１８脂肪アルコールの硫酸モノエステルも適する。それらの高い発泡挙動のゆえに、これらは、比較的少量でのみ、例えば、５重量％まで、通常は１〜５重量％の量で浄化剤に用いられる。
【０１０９】
さらに適する陰イオン性界面活性剤は、アルキルスルホコハク酸の塩であり、これはスルホスクシネートまたはスルホコハク酸エステルとも呼ばれ、スルホコハク酸とアルコール(好ましくは脂肪アルコール、特にエトキシル化脂肪アルコール)とのモノエステルおよび／またはジエステルである。好ましいスルホスクシネートは、Ｃ８-１８脂肪アルコール基またはその混合物を含む。特に好ましいスルホスクシネートは、それ自体が非イオン性界面活性剤であるエトキシル化脂肪アルコール由来の脂肪アルコール基を含む(説明については下記を参照)。ここで、脂肪アルコール基が、狭い同族体分布を有するエトキシル化脂肪アルコール由来であるスルホスクシネートが特に好ましい。同様に、アルキル(アルケニル)鎖中に好ましくは８〜１８個の炭素原子を有するアルキル(アルケニル)コハク酸またはその塩を使用することもできる。
【０１１０】
さらに適する陰イオン性界面活性剤は、特に石鹸である。飽和脂肪酸石鹸(例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、水素化エルカ酸、およびベヘン酸の塩)、特に、天然の脂肪酸(例えば、ココナツ、パーム核、または獣脂脂肪酸)由来の石鹸混合物が適当である。
【０１１１】
石鹸を含む陰イオン性界面活性剤は、そのナトリウム塩、カリウム塩、またはアンモニウム塩の形態で、また、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、またはトリエタノールアミンのような有機塩基の可溶性塩として存在することができる。陰イオン性界面活性剤は、好ましくは、そのナトリウム塩、またはカリウム塩の形態、特に、ナトリウム塩の形態にある。
【０１１２】
界面活性剤は、最終の製剤に対して、好ましくは５〜５０重量％、特に８〜３０重量％の全体量で、本発明の浄化剤または洗浄剤中に存在することができる。
【０１１３】
本発明の製剤は漂白剤を含むことができる。漂白剤として働き、かつ水中でＨ２Ｏ２を生成する化合物の中で、過炭酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム四水和物、および過ホウ酸ナトリウム一水和物が特に重要である。使用しうる他の漂白剤は、例えば、ペルオキソピロリン酸、クエン酸過水和物およびＨ２Ｏ２生成過酸塩または過酸(例えば、過硫酸塩または過硫酸)である。また有用なのは、一般式：Ｈ２Ｎ-ＣＯ-ＮＨ２・Ｈ２Ｏ２で示すことができる尿素ペルオキソヒドレートペルカルバミドである。特に、硬表面を浄化するために、例えば、食器洗浄機のために用いる場合、この製剤は、所望により、有機漂白剤の群からの漂白剤を含むことができるが、これらの使用は、織物を洗浄するための製剤においても原則的に可能である。代表的な有機漂白剤は、過酸化ジアシル(例えば過酸化ジベンゾイルなど)である。さらなる代表的な有機漂白剤は、ペルオキシ酸であり、具体的な例は、ペルオキシ酸アルキルおよびペルオキシ酸アリールである。好ましい代表例は、ペルオキシ安息香酸およびその環置換誘導体(例えば、ペルオキシ安息香酸アルキル)であるが、以下のものを用いることもできる：ペルオキシ-α-ナフトエ酸およびモノペルオキシフタル酸マグネシウム、脂肪族または置換脂肪族ペルオキシ酸、例えば、ペルオキシラウリン酸、ペルオキシステアリン酸、ε-フタルイミドペルオキシカプロン酸(フタルイミドペルオキシヘキサン酸、ＰＡＰ)、ｏ-カルボキシ-ベンズアミドペルオキシカプロン酸、Ｎ-ノネニルアミドペルアジピン酸、およびＮ-ノネニルアミドペルコハク酸、ならびに脂肪族およびアリール脂肪族ペルオキシジカルボン酸、例えば、１,１２-ジペルオキシカルボン酸、１,９-ジペルオキシアゼライン酸、ジペルオキシセバシン酸、ジペルオキシブラシル酸、ジペルオキシフタル酸、２-デシルジペルオキシブタン-１,４-二酸、Ｎ,Ｎ-テレフタロイル-ジ(６-アミノペルカプロン酸)。
【０１１４】
製剤の漂白剤含量は、有利には過ホウ酸塩一水和物または過炭酸塩を用いて、１〜４０重量％、特に１０〜２０重量％であることができる。アミラーゼと過炭酸塩との、またはアミラーゼと過カルボン酸との相乗的な使用が、それぞれ国際特許出願ＷＯ９９／６３０３６およびＷＯ９９／６３０３７に開示されている。
【０１１５】
６０℃以下の温度での洗浄の場合に、特に洗濯の前処理の場合に、改善された漂白作用を達成するために、本製剤は、漂白活性化剤を含んでいてもよい。使用しうる漂白活性化物質は、過加水分解条件下において、好ましくは１〜１０個の炭素原子、特に２〜４個の炭素原子を有する脂肪族ペルオキソカルボン酸および／または置換もしくは未置換の過安息香酸を与える化合物である。このような数の炭素原子のＯ-アシル基および／またはＮ-アシル基および／または置換もしくは未置換のベンゾイル基を保持する物質が適当である。以下のものが好ましい：複数でアシル化されたアルキレンジアミン、特にテトラアセチルエチレンジアミン(ＴＡＥＤ)、アシル化されたトリアジン誘導体、特に１,５-ジアセチル-２,４-ジオキソヘキサヒドロ-１,３,５-トリアジン(ＤＡＤＨＴ)、アシル化されたグリコールウリル類、特に１,３,４,６-テトラアセチルグリコールウリル(ＴＡＧＵ)、Ｎ-アシルイミド類、特にＮ-ノナノイルスクシンイミド(ＮＯＳＩ)、アシル化フェノールスルホネート、特にｎ-ノナノイルオキシベンゼンスルホネートもしくはイソノナノイルオキシベンゼンスルホネート(ｎ-ＮＯＢＳもしくはiso-ＮＯＢＳ)、アシル化ヒドロキシカルボン酸、例えばトリエチル-Ｏ-アセチルシトレート(ＴＥＯＣ)、カルボン酸無水物、特に無水フタル酸、イサトイン酸無水物および／またはコハク酸無水物、カルボキシアミド、例えばＮ-メチルジアセトアミド、グリコリド、アシル化多価アルコール、特にトリアセチン、エチレングリコールジアセテート、イソプロペニアセテート、２,５-ジアセトキシ-２,５-ジヒドロフラン、およびエノールエステル(独国特許出願ＤＥ１９６１６６９３およびＤＥ１９６１６７６７に開示される)、ならびにアセチル化ソルビトールおよびマンニトールまたはその混合物[欧州特許出願ＥＰ０５２５２３９(SORMAN)に開示される]、アシル化糖誘導体、特にペンタアセチルグルコース(ＰＡＧ)、ペンタアセチルフルクトース、テトラアセチルキシロースおよびオクタアセチルラクトース、ならびにアセチル化され所望によりＮ-アルキル化されたグルカミンまたはグルコノラクトン、トリアゾールもしくはトリアゾール誘導体、および／または特にカプロラクタムおよび／またはカプロラクタム誘導体、好ましくはＮ-アシル化ラクタム、例えばＮ-ベンゾイルカプロラクタムおよびＮ-アセチルカプロラクタム(国際特許出願ＷＯ９４／２７９７０、ＷＯ９４／２８１０２、ＷＯ９４／２８１０３、ＷＯ９５／００６２６、ＷＯ９５／１４７５９、およびＷＯ９５／１７４９８に開示される)。独国特許出願ＤＥ１９６１６７６９に開示される親水性に置換されたアシルアセタール、ならびに、独国特許出願ＤＥ１９６１６７７０および国際特許出願ＷＯ９５／１４０７５に記載されたアシルラクタムも、同様に好ましく用いられる。独国特許出願ＤＥ４４４３１７７に開示される従来の漂白活性化剤の組み合わせを用いることもできる。ニトリル誘導体、例えば、シアノピリジン、ニトリルクワット(nitrile quat)、例えば、Ｎ-アルキルアンモニウムアセトニトリル、および／またはシアノアミド誘導体を用いることもできる。好ましい漂白活性化剤は、４-(オクタノイルオキシ)ベンゼンスルホン酸ナトリウム、ｎ-ノナノイル-���キシベンゼンスルホネートまたはイソノナノイルオキシベンゼンスルホネート(ｎ-ＮＯＢＳまたはiso-ＮＯＢＳ)、ウンデセノイルオキシベンゼンスルホネート(ＵＤＯＢＳ)、ドデカノイルオキシベンゼンスルホン酸ナトリウム(ＤＯＢＳ)、デカノイルオキシ安息香酸(ＤＯＢＡ、ＯＢＣ１０)、および／またはドデカノイルオキシベンゼンスルホネート(ＯＢＳ１２)、ならびに、Ｎ-メチルモルホリニウムアセトニトリル(ＭＭＡ)である。このような漂白活性化剤は、総組成物に対して、通常は０.０１〜２０重量％の量、好ましくは０.１〜１５重量％の量、特に１〜１０重量％の量で存在することができる。
【０１１６】
従来の漂白活性化剤に加えて、またはその代わりに、「漂白触媒」が存在することもできる。これらの物質は、漂白増強遷移金属塩または遷移金属錯体、例えば、Ｍｎ、Ｆｅ、Ｃｏ、ＲｕまたはＭｏサレン錯体またはカルボニル錯体である。Ｍｎ、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｒｕ、Ｍｏ、Ｔｉ、ＶおよびＣｕ錯体(Ｎ含有三脚リガンドを含む)、ならびに、Ｃｏ、Ｆｅ、ＣｕおよびＲｕアンミン錯体も、漂白触媒として適しており、ＤＥ１９７０９２８４Ａ１に記載される化合物を用いるのが好ましい。ＷＯ９９／６３０３８のアセトニトリル誘導体およびＷＯ９９／６３０４１の漂白活性化遷移金属錯体化合物が、アミラーゼとの組み合わせで、漂白活性化作用を現すことができる。
【０１１７】
本発明の製剤は、通常は１またはそれ以上のビルダー、特に、ゼオライト(沸石)、ケイ酸塩、炭酸塩、有機コビルダー、さらに、使用に反対する環境的な理由がなければリン酸塩をも含有する。後者は、特に、機械食器洗浄用の浄化剤における使用のために好ましいビルダーである。
【０１１８】
ここで挙げることができる化合物は、一般式：ＮａＭＳｉｘＯ２ｘ＋１・ｙＨ２Ｏ[式中、Ｍは、ナトリウムまたは水素であり、ｘは、１.６〜４、好ましくは１.９〜４.０の数であり、ｙは、０〜２０の数であり、そしてｘの好ましい値は、２、３または４である]で示される結晶性の層状ケイ酸ナトリウムである。この種の結晶性フィロケイ酸塩は、例えば、欧州特許出願ＥＰ０１６４５１４に記載されている。示した式の好ましい結晶性フィロケイ酸塩は、Ｍがナトリウムであり、ｘが２または３の値をとるケイ酸塩である。特に、βナトリウムおよびδナトリウム二ケイ酸塩(Ｎａ２Ｓｉ２Ｏ５・ｙＨ２Ｏ)が好ましい。この種の化合物は、例えば、ＳＫＳＲ(Clariant)の商品名で販売されている。即ち、ＳＫＳ-６Ｒは、主に、式：Ｎａ２Ｓｉ２Ｏ５・ｙＨ２Ｏを有する二ケイ酸δナトリウムであり、ＳＫＳ-７Ｒは、主に二ケイ酸βナトリウムである。二ケイ酸δナトリウムと酸(例えば、クエン酸またはカルボン酸)との反応によって、カネマイトＮａＨＳｉ２Ｏ５・ｙＨ２Ｏ[それぞれ、ＳＫＳ-９ＲおよびＳＫＳ-１０Ｒの商品名で販売されている(Clariant)]が得られる。このようなフィロケイ酸塩の化学的改変体を使用することが有利であることもある。即ち、例えば、フィロケイ酸塩のアルカリ度に、適切に影響を与えることができる。リン酸塩または炭酸塩を用いてドープされたフィロケイ酸塩は、変化した結晶形態(二ケイ酸δナトリウムに比べて)を有し、より迅速に溶解し、増大したカルシウム結合能力(二ケイ酸δナトリウムに比べて)を示す。即ち、一般実験式：ｘＮａ２Ｏ・ｙＳｉＯ２Ｏ・ｚＰ２Ｏ５で示されるフィロケイ酸塩(ここで、ｘ／ｙの比は、０.３５〜０.６の数であり、ｘ／ｚの比は、１.７５〜１２００の数であり、そしてｙ／ｚの比は、４〜２８００の数である)が、独国特許出願ＤＥ１９６０１０６３に記載されている。フィロケイ酸塩の溶解性を、特に微細に顆粒化されたフィロケイ酸塩を用いることによって増大させることができる。結晶性フィロケイ酸塩と他の成分とのコンパウンドを使用することもできる。ここで挙げることができるコンパウンドは、特に、セルロース誘導体とのコンパウンド(有利な崩壊作用を有し、特に洗浄剤タブレットにおいて用いられる)、ならびに、ポリカルボキシレート(例えばクエン酸)、またはポリマー性ポリカルボキシレート(例えばアクリル酸コポリマー)とのコンパウンドである。
【０１１９】
１：２〜１：３.３、好ましくは１：２〜１：２.８、特に１：２〜１：２.６のＮａ２Ｏ：ＳｉＯ２のモジュラスを有する無定形ケイ酸ナトリウム(これは、遅延した溶解および二次洗浄特性を有する)を用いることもできる。通常の無定形ケイ酸ナトリウムと比較した溶解の遅延は、種々の手段によって、例えば、表面処理、コンパウンド化、圧密／圧縮によって、または過剰乾燥によって、誘導することができる。本発明の範囲内で、「無定形」という用語は「Ｘ線無定形」をも意味する。このことは、Ｘ線回折実験において、ケイ酸塩は、結晶性物質に典型的な鋭いＸ線屈折を生じず、代わりに、せいぜいこれら散乱Ｘ線の１またはそれ以上の最大値(数度単位の回折角度の幅を有する)を与えることを意味する。しかし、特に良好なビルダー特性は、電子回折実験において、ケイ酸塩粒子が、十分規定されないかまたは鋭い回折最大値を与える場合に、得られるであろう。これは、この生成物が、１０〜数百ｎｍ(高くとも５０ｎｍまで、特に高くとも２０ｎｍまでの値が好ましい)のサイズを有する微結晶性領域を有する効果であると解釈されるべきである。圧縮／圧密された無定形ケイ酸塩、コンパウンド化された無定形ケイ酸塩、および過剰乾燥されたＸ線無定形ケイ酸塩が特に好ましい。
【０１２０】
微細結晶性の結合水含有の合成ゼオライト(適切な場合に使用することができる)は、好ましくはゼオライトＡおよび／またはＰである。ゼオライトＰとしては、ゼオライトＭＡＰＲ(Crosfieldからの市販製品)が特に好ましい。しかし、ゼオライトＸならびにＡ、Ｘおよび／またはＰの混合物も適している。市販されており、かつ本発明の範囲内で好ましく使用しうる製品は、例えば、ゼオライトＸおよびゼオライトＡの共結晶化物(ゼオライトＸが約８０重量％)であり、これは、商品名VEGOBOND AXＲとしてCONDEA Augusta S.p.A.から販売されており、かつ式：ｎＮａ２Ｏ・(１-ｎ)Ｋ２Ｏ・Ａｌ２Ｏ３・(２-２.５)ＳｉＯ２・(３.５-５.５)Ｈ２Ｏで示すことができる。
【０１２１】
適当なゼオライトは、１０μｍ未満の平均粒子サイズ(容積分布；測定方法：Coulterカウンター)を有しており、好ましくは１８〜２２重量％、特に２０〜２２重量％の結合水を含有する。
【０１２２】
ビルダー物質として一般に公知のリン酸塩の使用は、このような使用が環境的な理由のために回避されるべきでなければ、当然ながら可能である。多様な市販のリン酸塩の中で、洗浄剤および浄化剤の産業においては、アルカリ金属リン酸塩が最も重要であり、三リン酸五ナトリウムまたは三リン酸五カリウム(トリポリリン酸ナトリウムまたはカリウム)が特に好ましい。
【０１２３】
この点に関して、アルカリ金属リン酸塩は、種々のリン酸のアルカリ金属塩(特に、ナトリウム塩およびカリウム塩)の総称的な用語であり、メタリン酸(ＨＰＯ３)ｎとオルトリン酸Ｈ３ＰＯ４ならびにさらに高分子量の代表物との間で区別することができる。このリン酸塩は、いくつかの利点を兼ね備える。即ち、これらは、アルカリ担体として働き、機械部分への石灰分の沈着および織布における石灰分の付着を妨げ、そしてさらに浄化性能に寄与する。
【０１２４】
リン酸二水素ナトリウム、ＮａＨ２ＰＯ４は、二水和物(密度１.９１ｇ／ｃｍ３、融点６０℃)および一水和物(密度２.０４ｇ／ｃｍ３)として存在する。両方の塩とも白色粉末であり、水に極めて容易に溶解し、加熱によってその結晶水を失い、２００℃で弱い酸性の二リン酸(二リン酸水素二ナトリウム、Ｎａ２Ｈ２Ｐ２Ｏ７)に転化し、高温で、三メタリン酸ナトリウム(Ｎａ３Ｐ３Ｏ９)およびMaddrellの塩(以下を参照)に転化する。ＮａＨ２ＰＯ４は酸性である(リン酸を水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨ４.５に調整し、懸濁液を噴霧したときに生成する)。リン酸二水素カリウム(一級または一塩基性のリン酸カリウム、二リン酸カリウム、ＫＤＰ)、ＫＨ２ＰＯ４、は、密度２.３３ｇ／ｃｍ３の白色塩であり、２５３°の融点を有し[ポリリン酸カリウム(ＫＰＯ３)ｘの生成を伴う分解]、そして水に容易に溶解する。
【０１２５】
リン酸水素二ナトリウム(二級リン酸ナトリウム)、Ｎａ２ＨＰＯ４は、無色結晶性の塩であり、水に極めて容易に溶解する。これは、無水型で、ならびに、２モルの水(密度２.０６６ｇ／ｃｍ３、９５℃で水の損失)、７モルの水(密度１.６８ｇ／ｃｍ３、融点４８℃、５Ｈ２Ｏの損失を伴う)、および１２モルの水(密度１.５２ｇ／ｃｍ３、融点３５℃、５Ｈ２Ｏの損失を伴う)と共に存在し、１００℃で無水になり、さらに強制的な加熱によって二リン酸塩Ｎａ４Ｐ２Ｏ７に転化する。リン酸水素二ナトリウムは、指示薬としてフェノールフタレインを用いて、ソーダ溶液によりリン酸を中和することによって調製される。リン酸水素二カリウム(二級または二塩基性のリン酸カリウム)、Ｋ２ＨＰＯ４は、無定形の白色塩であり、水に容易に溶解する。
【０１２６】
リン酸三ナトリウム、第三リン酸ナトリウム、Ｎａ３ＰＯ４は、無色の結晶であり、これは、１２水和物型では、１.６２ｇ／ｃｍ３の密度、および７３〜７６℃の融点(分解)を有し、１０水和物型(１９〜２０％Ｐ２Ｏ５に対応する)では、１００℃の融点を有し、無水型(３９〜４０％Ｐ２Ｏ５に対応する)では、２.５３６ｇ／ｃｍ３の密度を有する。リン酸三ナトリウムは、アルカリ性反応を伴って水に容易に溶解し、正確に１モルのリン酸二ナトリウムおよび１モルのＮａＯＨの溶液を蒸発させることによって調製される。リン酸三カリウム(第三または三塩基性のリン酸カリウム)、Ｋ３ＰＯ４は、白色であり、密度２.５６ｇ／ｃｍ３の潮解性の顆粒粉末であり、１３４０℃の融点を有し、アルカリ性反応を伴って水に容易に溶解する。これは、例えば、トーマススラグを炭素および硫酸カリウムと加熱したときに生成する。価格が高いにもかかわらず、より容易な溶解性であり、従って非常に効果的であるリン酸カリウムは、浄化剤産業においては、対応するナトリウム化合物よりも好ましいことが多い。
【０１２７】
二リン酸四ナトリウム(ピロリン酸ナトリウム)、Ｎａ４Ｐ２Ｏ７は、無水型(密度２.５３４ｇ／ｃｍ３、融点９８８℃、また８８０℃も知られている)で、および１０水和物(密度１.８１５〜１.８３６ｇ／ｃｍ３、融点９４℃で水を損失)として存在する。両物質とも無色の結晶であり、アルカリ性反応を伴って水に溶解する。Ｎａ４Ｐ２Ｏ７は、＞２００℃でのリン酸二ナトリウムの加熱中に生成するか、または化学量論比のリン酸とソーダとの反応および噴霧によるこの溶液の脱水によって生成する。この１０水和物は、重金属塩および硬度成分を錯化し、これにより水の硬度を低下させる。二リン酸カリウム(ピロリン酸カリウム)、Ｋ４Ｐ２Ｏ７は、三水和物型で存在しており、無色であり、密度２.３３ｇ／ｃｍ３の吸湿性粉末であり、水に可溶性であり、２５℃で１％濃度の溶液のｐＨが１０.４である。
【０１２８】
ＮａＨ２ＰＯ４およびＫＨ２ＰＯ４の縮合によって、それぞれ、高分子量のリン酸ナトリウムおよびリン酸カリウムが生成する。これらの中で、環状の代表物であるそれぞれメタリン酸ナトリウムおよびメタリン酸カリウム、ならびに、鎖形成型であるそれぞれポリリン酸ナトリウムおよびポリリン酸カリウムは、区別することができる。特に後者については、複数の名称が用いられている(即ち、メルトリン酸塩またはサーマルリン酸塩、グラハムの塩、クロールの塩、およびマドレルの塩)。全ての高級リン酸ナトリウムおよびリン酸カリウムは、縮合リン酸塩と総称される。
【０１２９】
工業的に重要な三リン酸五ナトリウム、Ｎａ５Ｐ３Ｏ１０(トリポリリン酸ナトリウム)は、非吸湿性の白色の水溶性塩であり、これは、無水物または６Ｈ２Ｏを有する結晶であり、一般式：ＮａＯ-[Ｐ(Ｏ)(ＯＮａ)-Ｏ]ｎ-Ｎａ(ここでｎ＝３)で示される。１００ｇの水中で、約１７ｇの塩(結晶水を含まない)が室温で溶解し、約２０ｇが６０℃で溶解し、約３２ｇが１００℃で溶解する。この溶液を１００℃で２時間加熱すると、約８％のオルトリン酸塩および１５％の二リン酸型が加水分解により生成する。三リン酸五ナトリウムの調製において、リン酸を、化学量論比でソーダ溶液または水酸化ナトリウム溶液と反応させ、この溶液を噴霧によって脱水する。グラハムの塩および二リン酸ナトリウムと同様に、三リン酸五ナトリウムは、多くの不溶性の金属化合物(石灰石鹸などを含む)を溶解する。三リン酸五カリウム、Ｋ５Ｐ３Ｏ１０(トリポリリン酸カリウム)は、例えば、５０重量％濃度溶液(＞２３％Ｐ２Ｏ５、２５％Ｋ２Ｏ)の形態で市販されている。ポリリン酸カリウムは、洗浄剤および浄化剤の産業において広く用いられている。さらに、本発明の範囲内で同様に使用しうるトリポリリン酸ナトリウムカリウムも存在する。これらは、例えば、トリメタリン酸ナトリウムをＫＯＨで加水分解するときに、以下のように生成する：
【化３】
2005527640.tif 000005
【０１３０】
本発明によれば、これらを正確に、トリポリリン酸ナトリウム、トリポリリン酸カリウム、またはこれら２つの混合物として用いることができる。また、トリポリリン酸ナトリウムおよびトリポリリン酸ナトリウムカリウムの混合物、またはトリポリリン酸カリウムおよびトリポリリン酸ナトリウムカリウムの混合物、またはトリポリリン酸ナトリウムおよびトリポリリン酸カリウムおよびトリポリリン酸ナトリウムカリウムの混合物を、本発明に従って用いることもできる。
【０１３１】
本発明の洗浄剤および浄化剤において使用しうる有機コビルダーは、特に、ポリカルボキシレート、またはポリカルボン酸、ポリマー性ポリカルボキシレート、ポリアスパラギン酸、ポリアセタール、所望により酸化されたデキストリン、さらなる有機コビルダー(以下を参照)、およびホスホン酸塩である。これら群の物質を以下に説明する。
【０１３２】
使用しうる有機ビルダー物質は、例えば、ナトリウム塩の形態で使用しうるポリカルボン酸である。このポリカルボン酸という用語は、１を越える酸官能基を保持するカルボン酸を意味する。これらの例は、その使用が環境上の理由によって回避されない限り、クエン酸、アジピン酸、コハク酸、グルタル酸、リンゴ酸、酒石酸、マレイン酸、フマル酸、糖酸、アミノカルボン酸、ニトリロ三酢酸(ＮＴＡ)、およびこれらの混合物である。好ましい塩は、ポリカルボン酸の塩、例えば、クエン酸、アジピン酸、コハク酸、グルタル酸、酒石酸、糖酸、およびこれらの混合物の塩である。
【０１３３】
また、酸自体を使用することもできる。そのビルダー作用に加えて、酸は、通常は酸性化成分の特性をも有し、これによって、残りの成分の混合物に起因するｐＨが望まれない限り、洗浄剤または浄化剤の低いｐＨおよび中程度のｐＨを確立することを助ける。環境的に安全な酸を、ここで具体的に挙げると、例えば、クエン酸、酢酸、酒石酸、リンゴ酸、乳酸、グリコール酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、グルコン酸、およびこれらの任意の混合物である。しかし、無機酸、特に硫酸、または塩基、特にアンモニウムまたはアルカリ金属水酸化物も、ｐＨ調節剤として働くことができる。本発明の製剤は、このような調節剤を、好ましくは２０重量％以下、特に１.２〜１７重量％の量で含有する。
【０１３４】
また、適当なビルダーはポリマー性ポリカルボキシレートである。これらは、例えば、ポリアクリル酸またはポリメタクリル酸のアルカリ金属塩であり、例えば、５００〜７００００ｇ／モルの相対分子量を有するものである。
【０１３５】
本明細書の目的のために、ポリマー性ポリカルボキシレートに対して与えられた分子量は、原則的に、ＵＶ検出器を用いてゲル透過クロマトグラフィー(ＧＰＣ)によって測定された、それぞれの酸型の重量平均分子量Ｍｗである。測定は、外部のポリアクリル酸標準(調べたポリマーに対する構造的類似性のゆえに、現実的な分子量の値を与える)に対して行った。これらの数値は、標準としてポリスチレンスルホン酸を用いて得られた分子量値とはかなり異なる。ポリスチレンスルホン酸に対して測定された分子量は、本明細書中に示した分子量よりも、通常はかなり高い。
【０１３６】
適当なポリマーは、特にポリアクリレートであり、これは、好ましくは２０００〜２００００ｇ／モルの分子量を有する。その優れた溶解性のゆえに、この群において好ましいのは、短鎖ポリアクリレートであり、これは、２０００〜１００００ｇ／モル、特に好ましくは３０００〜５０００ｇ／モルの分子量を有する。
【０１３７】
また、コポリマー性のポリカルボキシレート、特に、アクリル酸とメタクリル酸とのコポリマー、およびアクリル酸またはメタクリル酸とマレイン酸とのコポリマーが適当である。特に適当であることがわかったコポリマーは、アクリル酸とマレイン酸とのコポリマーであって、５０〜９０重量％のアクリル酸および５０〜１０重量％のマレイン酸を含むコポリマーである。これらの相対分子量は、遊離酸に基づいて、通常は２０００〜７００００ｇ／モル、好ましくは２００００〜５００００ｇ／モル、特に３００００〜４００００ｇ／モルである。(コ)ポリマー性ポリカルボキシレートは、粉末としてまたは水溶液として用いることができる。(コ)ポリマー性ポリカルボキシレートは、製剤含量の０.５〜２０重量％、特に１〜１０重量％であってよい。
【０１３８】
水中での溶解性を改善するため、このポリマーは、モノマーとしてアリルスルホン酸、例えばアリルオキシベンゼンスルホン酸およびメタアリルスルホン酸などを含有することもできる。
【０１３９】
また、特に好ましいのは、２を越える異なるモノマー単位の生分解性ポリマー、例えば、モノマーとしてアクリル酸の塩およびマレイン酸の塩ならびにビニルアルコールもしくはビニルアルコール誘導体を含むポリマー、あるいは、モノマーとしてアクリル酸の塩および２-アルキルアリルスルホン酸の塩および糖誘導体を含むポリマーである。
【０１４０】
さらなる好ましいコポリマーは、好ましくは、モノマーとしてアクロレインおよびアクリル酸／アクリル酸塩またはアクロレインおよび酢酸ビニルを有するコポリマーである。
【０１４１】
また、挙げることができるさらなる好ましいビルダー物質は、ポリマー性アミノジカルボン酸、それらの塩またはそれらの前駆体物質である。ポリアスパラギン酸またはその塩および誘導体が特に好ましい。
【０１４２】
さらなる適当なビルダー物質は、ポリアセタールであり、これは、ジアルデヒドとポリカルボン酸(５〜７個の炭素原子および少なくとも３個のヒドロキシル基を有する)との反応によって得ることができる。好ましいポリアセタールは、ジアルデヒド(例えば、グリオキサール、グルタルアルデヒド、テレフタルアルデヒド、およびそれらの混合物)から、およびポリオールカルボン酸(例えば、グルコン酸および／またはグルコヘプトン酸)から得られる。
【０１４３】
さらなる適当な有機ビルダー物質は、デキストリン、例えば、デンプンの部分的加水分解によって得られる炭水化物のオリゴマーまたはポリマーである。この加水分解は、通常のプロセス、例えば、酸-触媒プロセスまたは酵素-触媒プロセスによって行うことができる。この加水分解生成物は、好ましくは、４００〜５０００００ｇ／モルの範囲の平均分子量を有する。この場合、０.５〜４０、特に２〜３０の範囲内のデキストロース当量(ＤＥ)を有する多糖が好ましい。ここでＤＥとは、１００のＤＥを有するデキストロースと比較したときの、多糖の還元作用の通常の指標である。３〜２０のＤＥを有するマルトデキストリンおよび２０〜３７のＤＥを有する乾燥グルコースシロップ、ならびに、２０００〜３００００ｇ／モルの範囲内の高い分子量を有する「黄色デキストリン」および「白色デキストリン」を用いることができる。
【０１４４】
このようなデキストリンの酸化された誘導体は、サッカリド環の少なくとも１つのアルコール官能基をカルボン酸官能基に酸化しうる酸化剤とデキストリンとの反応生成物である。本発明の製剤に特に好ましい有機ビルダーは、それぞれ、欧州特許出願ＥＰ４７２０４２、国際特許出願ＷＯ９７／２５３９９、および欧州特許出願ＥＰ７５５９４４の酸化されたデンプンおよびそれらの誘導体である。
【０１４５】
オキシジスクシネートおよびジスクシネートの他の誘導体、好ましくはエチレンジアミンジスクシネートも、さらなる適当なコビルダーである。ここで、エチレンジアミンＮ,Ｎ'-ジスクシネート(ＥＤＤＳ)は、好ましくは、そのナトリウム塩またはマグネシウム塩の形態で用いられる。これに関連して、グリセロールジスクシネートおよびグリセロールトリスクシネートがさらに好ましい。ゼオライト含有および／またはケイ酸塩含有の配合物における適当な使用量は、３〜１５重量％である。
【０１４６】
使用しうるさらなる有機コビルダーは、例えば、アセチル化ヒドロキシカルボン酸またはその塩であり、これらは、適切であればラクトン形態で存在していてもよく、また、少なくとも４個の炭素原子および少なくとも１つの水酸基および多くとも２つの酸基を含んでいる。
【０１４７】
コビルダーの特性を有するさらなる群の物質は、ホスホン酸塩である。これらは、特に、ホスホン酸ヒドロキシアルカンおよびホスホン酸アミノアルカンである。ホスホン酸ヒドロキシアルカンの中で、１-ヒドロキシエタン-１,１-ジホスホネート(ＨＥＤＰ)は、コビルダーとして特に重要である。これは、好ましくはナトリウム塩、二ナトリウム塩(中性である)、および四ナトリウム塩(アルカリ性である)(ｐＨ９)として用いられる。適当なホスホン酸アミノアルカンは、好ましくは、エチレンジアミンテトラメチレンホスホネート(ＥＤＴＭＰ)、ジエチレントリアミンペンタメチレンホスホネート(ＤＴＰＭＰ)、およびこれらの高級同族体である。これらは、好ましくは、中性ナトリウム塩の形態で、例えば、ＥＤＴＭＰの６ナトリウム塩として、またはＤＴＰＭＰの７ナトリウム塩および８ナトリウム塩として用いられる。ここで、ホスホン酸塩の群からのビルダーとして、ＨＥＤＰを用いるのが好ましい。さらに、ホスホン酸アミノアルカンは、顕著な重金属結合能力を有する。従って、特に製剤が漂白剤をも含む場合には、ホスホン酸アミノアルカン、特にＤＴＰＭＰまたはこのホスホン酸塩の混合物を使用するのが好ましいこともある。
【０１４８】
さらに、アルカリ土類金属イオンと錯体を形成しうる全ての化合物を、コビルダーとして用いることができる。
【０１４９】
本発明の製剤は、ビルダー物質を、適切であれば、９０重量％までの量で含有していてよく、好ましくは７５重量％までの量で含有する。本発明の洗浄剤は、特に、５〜５０重量％のビルダー含量を有する。硬表面を浄化するため、特に、食器洗浄機のための本発明の製剤において、ビルダー物質の含量は、特に５〜８８重量％であり、好ましくは、この製剤においては水不溶性のビルダー材料を用いない。特に、食器洗浄機のための本発明の製剤の好ましい態様は、２０〜４０重量％の水溶性有機ビルダー、特にアルカリ金属クエン酸塩、５〜１５重量％のアルカリ金属炭酸塩、および２０〜４０重量％のアルカリ金属二ケイ酸塩を含有する。
【０１５０】
洗浄剤および浄化剤の液体〜ゼラチン様の組成物において使用しうる溶媒は、例えば、一価もしくは多価アルコール、アルカノールアミンまたはグリコールエーテルの群からのものである(これらが、所定の濃度範囲内で水と混和性であるとき)。好ましくは、これら溶媒は、エタノール、ｎ-またはｉ-プロパノール、ブタノール、エチレングリコールメチルエーテル、エチレングリコールエチルエーテル、エチレングリコールプロピルエーテル、エチレングリコールモノ-ｎ-ブチルエーテル、ジエチレングリコールメチルエーテル、ジエチレングリコールエチルエーテル、プロピレングリコールメチル、エチルまたはプロピルエーテル、ジプロピレングリコールモノメチルまたはモノエチルエーテル、ジイソプロピレングリコールモノメチルまたはモノエチルエーテル、メトキシ、エトキシ、またはブトキシトリグリコール、１-ブトキシエトキシ-２-プロパノール、３-メチル-３-メトキシブタノール、プロピレングリコールｔ-ブチルエーテル、およびこれら溶媒の混合物から選択される。
【０１５１】
溶媒は、本発明の液体〜ゼラチン様の洗浄剤および浄化剤において、０.１〜２０重量％、好ましくは１５重量％以下、特に１０重量％以下の量で用いることができる。
【０１５２】
粘度を調節するために、１またはそれ以上の増粘剤または増粘系を、本発明の組成物に添加することができる。これらの高分子量物質(これらは膨潤剤とも呼ばれる)は、通常、液体を吸収し、その過程で膨潤し、最終的には粘稠な真のまたはコロイド性の溶液に転換する。
【０１５３】
適当な増粘剤は、無機またはポリマー性の有機化合物である。無機の増粘剤には、例えば、ポリケイ酸、粘土鉱物(例えば、モンモリロナイト、ゼオライト、シリカ、およびベントナイト)が含まれる。有機の増粘剤は、天然ポリマー、改変された天然ポリマー、および全合成ポリマーの群からのものである。このような天然ポリマーは、例えば、寒天、カラゲーン、トラガカント、アラビアゴム、アルギン酸塩、ペクチン、ポリオース、グアール粉末、イナゴマメ種子粉末、デンプン、デキストリン、ゼラチン、およびカゼインである。増粘剤として用いられる改変された天然物質は、主に、改変されたデンプンおよびセルロースの群からのものである。ここで挙げることができる例は、カルボキシメチルセルロースおよび他のセルロースエーテル、ヒドロキシエチルセルロースおよびヒドロキシプロピルセルロース、ならびにイナゴマメ粉末エーテルである。全合成の増粘剤は、ポリマー、例えば、ポリアクリル化合物およびポリメタクリル化合物、ビニルポリマー、ポリカルボン酸、ポリエーテル、ポリイミン、ポリアミド、ならびにポリウレタンである。
【０１５４】
増粘剤は、最終の組成物に対して、５重量％まで、好ましくは０.０５〜２重量％、特に好ましくは０.１〜１.５重量％の量で存在することができる。
【０１５５】
本発明の洗浄剤および浄化剤は、適切であれば、さらなる通常の成分として、金属イオン封鎖剤、電解質、およびさらなる助剤(例えば、蛍光増白剤、灰化抑制剤、銀腐食抑制剤、色移行抑制剤、発泡抑制剤、研磨物質、色素、および／または芳香剤、および微生物作用物質および／またはＵＶ吸収剤)を含有することができる。
【０１５６】
本発明の織物洗浄剤は、蛍光増白剤として、ジアミノスチルベンジスルホン酸の誘導体またはそのアルカリ金属塩を含むことができる。適するのは、例えば、４,４'-ビス(２-アニリノ-４-モルホリノ-１,３,５-トリアジニル-６-アミノ)スチルベン-２,２'-ジスルホン酸または同様に構築された化合物(モルホリノ基の代わりに、ジエタノールアミノ基、メチルアミノ基、アニリノ基、または２-メトキシエチルアミノ基を保持する)である。さらに、置換されたジフェニルスチリル型の増白剤、例えば、４,４'-ビス(２-スルホスチリル)ジフェニル、４,４'-ビス(４-クロロ-３-スルホスチリル)ジフェニル、または４-(４-クロロスチリル)-４'-(２-スルホスチリル)ジフェニルのアルカリ金属塩が存在することもできる。上記の蛍光増白剤の混合物を使用することもできる。
【０１５７】
灰化抑制剤は、織物繊維から剥落した汚れを、液中に懸濁したまま維持する機能を有する。この目的に適するのは、通常は有機性の水溶性コロイド、例えばデンプン、にかわ、ゼラチン、デンプンもしくはセルロースのエーテルカルボン酸またはエーテルスルホン酸の塩、あるいは、セルロースもしくはデンプンの酸性硫酸エステルの塩である。酸性の基を含む水溶性ポリアミドもこの目的に適する。さらに、上記したもの以外のデンプン誘導体、例えば、アルデヒドデンプンを用いることもできる。セルロースエーテル、例えば、カルボキシメチルセルロース(Ｎａ塩)、メチルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、および混合エーテル、例えば、メチルヒドロキシエチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、メチルカルボキシメチルセルロース、およびこれらの混合物を、例えば、製剤に基づいて、０.１〜５重量％の量で用いるのが好ましい。
【０１５８】
銀腐食から保護するために、銀腐食抑制剤を、本発明の食器洗浄剤において用いることができる。このような抑制剤は、先行技術において公知である[例えば、ベンゾトリアゾール、塩化鉄(III)、またはＣｏＳＯ４]。例えば、欧州特許ＥＰ０７３６０８４Ｂ１に開示されているように、酵素と一緒に用いるのに特に適する銀腐食抑制剤は、マンガン、チタン、ジルコニウム、ハフニウム、バナジウム、コバルトまたはセリウムの塩、および／または、これらの特定した金属が、酸化段階II、III、IV、ＶまたはVIのいずれかで存在する錯体である。このような化合物の例は、ＭｎＳＯ４、Ｖ２Ｏ５、Ｖ２Ｏ４、ＶＯ２、ＴｉＯＳＯ４、Ｋ２ＴｉＦ６、Ｋ２ＺｒＦ６、Ｃｏ(ＮＯ３)２、Ｃｏ(ＮＯ３)３、およびこれらの混合物である。
【０１５９】
汚れ遊離作用成分または汚れ忌避剤は、通常はポリマーであり、これは、洗浄剤において使用したときに、洗濯物の繊維に対して汚れ忌避特性を付与し、そして／または他の洗浄成分が汚れを剥落する能力を助ける。また、硬表面用の浄化剤においてこれらを使用したときに、同等の効果を観察することができる。
【０１６０】
特に効果的であり、かつ以前から公知である汚れ遊離作用成分は、ジカルボン酸、アルキレングリコールおよびポリアルキレングリコール単位を有するコポリエステルである。これらの例は、ポリエチレンテレフタレートおよびポリオキシエチレングリコールのコポリマーまたは混合ポリマーである(それぞれ、ＤＴ１６１７１４１およびＤＴ２２００９１１)。独国特許出願公開ＤＴ２２５３０６３は、特に、二塩基性カルボン酸とアルキレンまたはシクロアルキレンポリグリコールのコポリマーを含有する酸性の製剤を開示している。独国特許出願ＤＥ２８５７２９２およびＤＥ３３２４２５８ならびに欧州特許ＥＰ０２５３５６７は、エチレンテレフタレートおよびポリエチレンオキシドテレフタレートのポリマー、ならびに、洗浄剤におけるそれらの使用を記載している。欧州特許ＥＰ０６６９４４は、特定のモル比の、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、芳香族ジカルボン酸、およびスルホン化芳香族ジカルボン酸のコポリエステルを含有する製剤に関する。欧州特許ＥＰ０１８５４２７は、エチレンおよび／またはプロピレンテレフタレートおよびポリエチレンオキシドテレフタレート単位を有する、メチル基またはエチル基で末端基キャップしたポリエステル、ならびに、このような汚れ遊離ポリマーを含有する洗浄剤を開示している。欧州特許ＥＰ０２４１９８４は、オキシエチレン基およびテレフタル酸単位に加えて、置換されたエチレン単位およびグリセロール単位を含むポリエステルを開示している。欧州特許ＥＰ０２４１９８５は、オキシエチレン基およびテレフタル酸単位に加えて、１,２-プロピレン、１,２-ブチレンおよび／または３-メトキシ-１,２-プロピレン基ならびにグリセロール単位を含み、かつＣ１〜Ｃ４-アルキル基で末端基キャップされたポリエステルを開示している。欧州特許出願ＥＰ０２７２０３３は、ポリプロピレンテレフタレートおよびポリオキシエチレンテレフタレート単位を有するポリエステルであって、Ｃ１-４アルキルまたはアシル基によって少なくとも部分的に末端基キャップされたポリエステルを開示している。欧州特許ＥＰ０２７４９０７は、スルホエチルで末端基キャップされたテレフタレート含有の汚れ遊離ポリエステルを記載している。欧州特許出願ＥＰ０３５７２８０によれば、不飽和末端基のスルホン化によって、テレフタレート、アルキレングリコールおよびポリ-Ｃ２-４-グリコール単位を有する汚れ遊離ポリエステルが得られる。国際特許出願ＷＯ９５／３２２３２は、汚れを剥落しうる酸性の芳香族ポリエステルに関する。国際特許出願ＷＯ９７／３１０８５は、綿からなる材料のための非ポリマー性の汚れ忌避活性成分であって、複数の機能性単位を有する成分を開示している(第１の単位は、陽イオン性であってよく、例えば、静電的な相互作用によって綿の表面に吸着させることができ、そして第２の単位は、疎水性であり、水／綿の界面に残存する活性成分の原因となるものである)。
【０１６１】
本発明の洗濯洗浄剤における使用のために適する色移行抑制剤には、特に、ポリビニルピロリドン、ポリビニルイミダゾール、ポリマー性Ｎオキシド、例えば、ポリ(ビニルピリジンＮ-オキシド)、およびビニルピロリドンとビニルイミダゾールとのコポリマーが含まれる。
【０１６２】
機械浄化プロセスにおける使用のためには、製剤に発泡抑制剤を添加するのが有利であろう。適当な発泡抑制剤の例は、高い割合のＣ１８-Ｃ２４脂肪酸を有する天然または合成起源の石鹸である。適当な非界面活性剤型の発泡抑制剤の例は、有機ポリシロキサンおよびこれと微細な所望によりシラン処理されたシリカとの混合物、ならびに、パラフィン、ワックス、微結晶性ワックスおよびこれらとシラン処理されたシリカまたはビス-ステアリル-エチレンジアミドとの混合物である。異なる発泡抑制剤の混合物、例えば、シリコーン、パラフィンまたはワックスの混合物を使用するのが有利である。これらの発泡抑制剤、特に、シリコーンおよび／またはパラフィンを含有する発泡抑制剤を、顆粒性の水溶性または分散性の支持物質に結合させるのが好ましい。ここで、パラフィンおよびビス-ステアリルエチレンジアミドの混合物が特に好ましい。
【０１６３】
硬表面のための本発明の浄化剤は、さらに、研磨作用を有する成分(特に、石英粉末、木材粉末、ポリマー粉末、チョークおよびガラスミクロビーズならびにこれらの混合物からなる群からのもの)を含有する。研磨剤は、本発明の浄化剤中に、好ましくは２０重量％以下、特に、５〜１５重量％で存在する。
【０１６４】
製品の審美的な外観を改善し、洗浄性能および浄化性能に加えて、視覚的かつ感覚的に「典型的かつ錯誤のない」製品を消費者に提供するために、色素および芳香剤を、洗浄剤および浄化剤に添加する。芳香油および／または芳香剤として、個々の臭気化合物、例えば、エステル、エーテル、アルデヒド、ケトン、アルコールおよび炭化水素型の合成生成物を使用することができる。エステル型の臭気化合物は、例えば、酢酸ベンジル、イソ酪酸フェノキシエチル、酢酸ｐ-tert-ブチルシクロヘキシル、酢酸リナリル、酢酸ジメチルベンジルカルビニル、酢酸フェニルエチル、安息香酸リナリル、ギ酸ベンジル、グリシン酸エチルメチルフェニル、プロピオン酸アリルシクロヘキシル、プロピオン酸スチラリルおよびサリチル酸ベンジルである。エーテルには、例えば、ベンジルエチルエーテルが含まれ；アルデヒドには、例えば、８〜１８個の炭素原子を有する直鎖アルカナール、シトラール、シトロネラール、シトロネリルオキシアセトアルデヒド、シクラメンアルデヒド、ヒドロキシシトロネラール、リリアール、およびボージュナールが含まれ；ケトンには、例えば、イオノン、α-イソメチルイオノン、およびメチルセドリルケトンが含まれ；アルコールには、アネトール、シトロネロール、オイゲノール、ゲラニオール、リナロール、フェニルエチルアルコール、およびテルピネオールが含まれ；炭化水素には、主にテルペン(例えば、リモネンおよびピネン)が含まれる。しかし、好ましいのは、一緒になって魅力的な香気を生じる種々の臭気剤の混合物の使用である。このような芳香油は、植物供給源から得られる天然の臭気剤混合物、例えば、松根油、柑橘油、ジャスミン油、パチョリ油、バラ油またはイランイラン油を含んでいてもよい。同様に適するのは、マスカテル、セージ油、カモミール油、チョウジ油、バルサム油、ミント油、シナモン葉油、ライム花油、ネズ実油、ベチベル油、オリバナム油、ガルバヌム油およびラブダナム油、さらに、オレンジ花油、ネロリ油、オレンジ果皮油およびビャクダン油である。洗浄剤および浄化剤の色素含量は、配合物全体の通常は０.０１重量％未満であり、芳香剤は配合物全体の２重量％までであってよい。
【０１６５】
芳香剤は、洗浄剤および浄化剤中に直接導入してもよい。しかし、浄化すべき材料への芳香剤の吸着を強化する担体に芳香剤を適用し、より遅い芳香剤の放出によって、特に処理された織物の長く持続する芳香を確実にすることも有利であろう。このような担体として確立された材料は、例えばシクロデキストリンであり、さらに、シクロデキストリン-芳香剤の複合体を、さらなる助剤でさらに被覆することもできる。芳香剤のための別の好ましい担体は、界面活性剤の代わりにまたは界面活性剤と混合して、芳香剤を吸収することができる上記のゼオライトＸである。即ち、上記のゼオライトＸおよび芳香剤(これは、好ましくは、少なくとも部分的にゼオライト上に吸着されている)を含む洗浄剤および浄化剤が好ましい。
【０１６６】
好ましい色素(その選択は、当業者にとって何の困難もない)は、高い貯蔵安定性および製剤の他の成分および光に対する非感受性を有しており、また、織物繊維に顕著な親和性を有さない(それを染色することがないように)。
【０１６７】
微生物を制御するため、洗浄剤および浄化剤は、抗微生物活性成分を含有することができる。ここで、抗微生物スペクトルおよび作用機序に依存して、静菌剤と殺菌剤、静真菌剤と殺真菌剤の間などで区別が為される。これらの群の重要な物質の例は、塩化ベンズアルコニウム、スルホン酸アルキルアリール、ハロゲンフェノール、および酢酸フェノール水銀である。抗微生物作用および抗微生物活性成分という用語は、本発明の教示の範囲内では、当分野で普通の意味を有し、これは、例えば、K.H.Wallhaeusserの「Praxis der Sterilisation、Desinfektion-Konservierung: Keimidentifizierung-Betriebshygiene」[第5版、-Stuttgart; New York: Thieme、1995]に記載されており、そこに記載された抗微生物作用を有する全ての物質を使用することができる。適当な抗微生物活性成分は、好ましくは、以下の群から選択される。即ち、アルコール、アミン、アルデヒド、抗微生物性の酸またはそれらの塩、カルボン酸エステル、酸アミド、フェノール、フェノール誘導体、ジフェニル、ジフェニルアルカン、尿素誘導体、酸素アセタール、窒素アセタール、ならびに、酸素および窒素のホルマール、ベンズアミジン、イソチアゾリン、フタルイミド誘導体、ピリジン誘導体、抗微生物性の界面活性化合物、グアニジン、抗微生物性の両性化合物、キノリン、１,２-ジブロモ-２,４-ジシアノブタン、ヨード-２-プロピルブチルカルバメート、ヨウ素、ヨードフォア、ペルオキソ化合物、ハロゲン化合物、ならびに上記の任意の混合物から選択される。
【０１６８】
抗微生物活性成分は、以下から選択することができる。即ち、エタノール、ｎ-プロパノール、イソプロパノール、１,３-ブタンジオール、フェノキシエタノール、１,２-プロピレングリコール、グリセロール、ウンデシレン酸、安息香酸、サリチル酸、ジヒドロ酢酸、ｏ-フェニルフェノール、Ｎ-メチルモルホリノアセトニトリル(ＭＭＡ)、２-ベンジル-４-クロロフェノール、２,２'-メチレンビス(６-ブロモ-４-クロロフェノール)、４,４'-ジクロロ-２'-ヒドロキシジフェニルエーテル(ジクロサン)、２,４,４'-トリクロロ-２'-ヒドロキシジフェニルエーテル(トリクロサン)、クロロヘキシジン、Ｎ-(４-クロロフェニル)-Ｎ-(３,４-ジクロロフェニル)尿素、Ｎ,Ｎ'-(１,１０-デカンジイルジ-１-ピリジニル-４-イリデン)-ビス(１-オクタンアミン)ジヒドロクロリド、Ｎ,Ｎ'-ビス(４-クロロフェニル)-３,１２-ジイミノ-２,４,１１,１３-テトラアザテトラデカンジイミドアミド、グルコプロタミン、抗微生物性の界面活性四級化合物、グアニジン(ビグアニジンおよびポリグアニジンを含む)、例えば、１,６-ビス(２-エチルヘキシルビグアニドヘキサン)ジヒドロクロリド、１,６-ジ-(Ｎ１,Ｎ１'-フェニルジグアニド-Ｎ５,Ｎ５')ヘキサンテトラヒドロクロリド、１,６-ジ-(Ｎ１,Ｎ１'-フェニル-Ｎ１,Ｎ１-メチルジグアニド-Ｎ５,Ｎ５')ヘキサンジヒドロクロリド、１,６-ジ-(Ｎ１,Ｎ１'-ｏ-クロロフェニルジグアニド-Ｎ５,Ｎ５')ヘキサンジヒドロクロリド、１,６-ジ-(Ｎ１,Ｎ１'-２,６-ジクロロフェニルジグアニド-Ｎ５,Ｎ５')ヘキサンジヒドロクロリド、１,６-ジ-[Ｎ１,Ｎ１'-β-(ｐ-メトキシフェニル)ジグアニド-Ｎ５,Ｎ５']ヘキサンジヒドロクロリド、１,６-ジ-(Ｎ１,Ｎ１'-α-メチル-β-フェニルジグアニド-Ｎ５,Ｎ５')ヘキサンジヒドロクロリド、１,６-ジ-(Ｎ１,Ｎ１'-ｐ-ニトロフェニルジグアニド-Ｎ５,Ｎ５')ヘキサンジヒドロクロリド、ω：ω-ジ-(Ｎ１,Ｎ１'-フェニルジグアニド-Ｎ５,Ｎ５')-ジ-ｎ-プロピルエーテルジヒドロクロリド、ω：ω'-ジ-(Ｎ１,Ｎ１'-ｐ-クロロフェニルジグアニド-Ｎ５,Ｎ５')-ジ-ｎ-プロピルエーテルテトラヒドロクロリド、１,６-ジ-(Ｎ１,Ｎ１'-２,４-ジクロロフェニルジグアニド-Ｎ５,Ｎ５')ヘキサンテトラヒドロクロリド、１,６-ジ-(Ｎ１,Ｎ１'-ｐ-メチルフェニルジグアニド-Ｎ５,Ｎ５')ヘキサンジヒドロクロリド、１,６-ジ-(Ｎ１,Ｎ１'-２,４,５-トリクロロフェニルジグアニド-Ｎ５,Ｎ５')ヘキサンテトラヒドロクロリド、１,６-ジ-[Ｎ１,Ｎ１'-α-(ｐ-クロロフェニル)エチルジグアニド-Ｎ５,Ｎ５']-ヘキサンジヒドロクロリド、ω：ω-ジ-(Ｎ１,Ｎ１'-ｐ-クロロフェニルジグアニド-Ｎ５,Ｎ５')ｍ-キシレンジヒドロクロリド、１,１２-ジ-(Ｎ１,Ｎ１'-ｐ-クロロフェニルジグアニド-Ｎ５,Ｎ５')ドデカンジヒドロクロリド、１,１０-ジ-(Ｎ１,Ｎ１'-フェニルジグアニド-Ｎ５,Ｎ５')デカンテトラヒドロクロリド、１,１２-ジ-(Ｎ１,Ｎ１'-フェニルジグアニド-Ｎ５,Ｎ５')ドデカンテトラヒドロクロリド、１,６-ジ-(Ｎ１,Ｎ１'-ｏ-クロロフェニルジグアニド-Ｎ５,Ｎ５')ヘキサンジヒドロクロリド、１,６-ジ-[Ｎ１,Ｎ１'-ｏ-クロロフェニルジグアニド-Ｎ５,Ｎ５')ヘキサンテトラヒドロクロリド、エチレン-ビス(１-トリルビグアニド)、エチレン-ビス(ｐ-トリルビグアニド)、エチレン-ビス(３,５-ジメチルフェニルビグアニド)、エチレン-ビス(ｐ-tert-アミルフェニルビグ���ニド)、エチレン-ビス(ノニルフェニルビグアニド)、エチレン-ビス(フェニルビグアニド)、エチレン-ビス(Ｎ-ブチルフェニルビグアニド)、エチレン-ビス(２,５-ジエトキシフェニルビグアニド)、エチレン-ビス(２,４-ジメチルフェニルビグアニド)、エチレン-ビス(ｏ-ジフェニルビグアニド)、エチレン-ビス(混合アミルナフチルビグアニド)、Ｎ-ブチルエチレン-ビス(フェニルビグアニド)、トリメチレンビス(ｏ-トリルビグアニド)、Ｎ-ブチル-トリメチル-ビス(フェニルビグアニド)、ならびに、対応する塩、例えば、酢酸塩、グルコン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、クエン酸塩、重亜硫酸塩、フッ化物、ポリマレイン酸塩、Ｎ-ヤシ油アルキルサルコシン酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩、パーフルオロオクタン酸塩、ケイ酸塩、ソルビン酸塩、サリチル酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、エチレンジアミン四酢酸塩、イミノ二酢酸塩、桂皮酸塩、チオシアン酸塩、アルギン酸塩、ピロメリト酸塩、テトラカルボキシ酪酸塩、安息香酸塩、グルタル酸塩、モノフルオロリン酸塩、パーフルオロプロピオン酸塩、ならびに、これらの任意の混合物から選択することができる。
【０１６９】
また、適するのは、ハロゲン化キシレンおよびクレゾール誘導体(例えば、ｐ-クロロメタクレゾールまたはｐ-クロロメタキシレン)、ならびに植物起源(例えば、スパイスまたはハーブ由来)、動物起源および微生物起源の天然の抗微生物活性成分である。好ましくは、抗微生物性の界面活性四級化合物、植物起源の天然の抗微生物活性成分および／または動物起源の天然の抗微生物活性成分、最も好ましくは、カフェイン、テオブロミンおよびテオフィリンを含む群からの植物起源の少なくとも１つの天然の抗微生物活性成分、ならびに、精油(例えば、オイゲノール、チモールおよびゲラニオール)、および／または、酵素(例えば、乳タンパク質、リゾチームおよびラクトペルオキシダーゼ)を含む群からの動物起源の少なくとも１つの天然の抗微生物活性成分、および／または、少なくとも１つの抗微生物性の界面活性四級化合物(アンモニウム、スルホニウム、ホスホニウム、ヨードニウムまたはアルソニウム基を有する)、ペルオキソ化合物、ならびに塩素化合物を使用することができる。微生物起源の物質「バクテリオシン」を使用することもできる。
【０１７０】
抗微生物活性成分として適する四級アンモニウム化合物(ＱＡＣ)は、一般式：(Ｒ１)(Ｒ２)(Ｒ３)(Ｒ４)Ｎ＋Ｘ−を有する[ここで、Ｒ１〜Ｒ４は、同一または異なって、Ｃ１-Ｃ２２-アルキル基、Ｃ７-Ｃ２８-アラルキル基または複素環式基であり、ここで、２つの基またはピリジンのように芳香族導入されている場合には３つの基は、窒素原子と一緒になって、複素環、例えばピリジニウムまたはイミダゾリニウム化合物を形成し、そしてＸ−は、ハロゲンイオン、硫酸イオン、水酸化物イオンまたは同様の陰イオンである]。最適の抗微生物作用のためには、これらの基の少なくとも１つは、好ましくは８〜１８個、特に１２〜１６個の炭素原子の鎖長を有する。
【０１７１】
ＱＡＣは、三級アミンとアルキル化剤(例えば、塩化メチル、塩化ベンジル、硫酸ジメチル、臭化ドデシル、それ以外ではエチレンオキシド)との反応によって調製することができる。１つの長いアルキル基および２つのメチル基を有する三級アミンのアルキル化は特に容易に進行し、２つの長い基および１つのメチル基を有する三級アミンの四級化も、温和な条件下で塩化メチルの補助によって行うことができる。３つの長いアルキル基またはヒドロキシ置換アルキル基を有するアミンは、反応性が低く、硫酸ジメチルを用いて四級化するのが好ましい。
【０１７２】
適当なＱＡＣの例は、塩化ベンズアルコニウム(Ｎ-アルキル-Ｎ,Ｎ-ジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ＣＡＳ番号８００１-５４-５)、ベンズアルコンＢ(ｍ,ｐ-ジクロロベンジルジメチル-Ｃ１２-アルキルアンモニウムクロリド、ＣＡＳ番号５８３９０-７８-６)、塩化ベンズオキソニウム(ベンジルドデシル-ビス(２-ヒドロキシエチル)アンモニウムクロリド)、臭化セトリモニウム(Ｎ-ヘキサデシル-Ｎ,Ｎ-トリメチルアンモニウムブロミド、ＣＡＳ番号５７-０９-０)、塩化ベンズエトニウム(Ｎ,Ｎ-ジメチル-Ｎ-[２-[２-[ｐ-(１,１,３,３-テトラメチルブチル)フェノキシ]エトキシ]エチル]-ベンジルアンモニウムクロリド、ＣＡＳ番号１２１-５４-０)、塩化ジアルキルジメチルアンモニウム、例えば、ジ-ｎ-デシルジメチルアンモニウムクロリド(ＣＡＳ番号７１７３-５１-５-５)、臭化ジデシルジメチルアンモニウム(ＣＡＳ番号２３９０-６８-３)、塩化ジオクチルジメチルアンモニウム、１-セチルピリジニウムクロリド(ＣＡＳ番号１２３-０３-５)、およびヨウ化チアゾリン(ＣＡＳ番号１５７６４-４８-１)、ならびにこれらの混合物である。特に好ましいＱＡＣは、Ｃ８-Ｃ１８-アルキル基を有する塩化ベンズアルコニウム、特に、Ｃ１２-Ｃ１４-アルキルベンジルジメチルアンモニウムクロリドである。
【０１７３】
ハロゲン化ベンズアルコニウムおよび／またはハロゲン化置換ベンズアルコニウムは、例えば、BarquatＲ(Lonzaより)、MarquatＲ(Masonより)、VariquatＲ(Witco／Sherexより)、およびHyamineＲ(Lonzaより)、およびBardacＲ(Lonzaより)として市販されている。さらなる市販の抗微生物活性成分は、Ｎ-(３-クロロアリル)ヘキサミニウムクロリド、例えばDowicideＲおよびDowicilＲ(Dowより)、塩化ベンズエトニウム、例えばHyamineＲ１６２２(Rohm & Haasより)、塩化メチルベンズエトニウム、例えばHyamineＲ１０Ｘ(Rohm & Haasより)、塩化セチルピリジニウム、例えば塩化セパコール(Merrell Labsより)である。
【０１７４】
抗微生物活性成分は、０.０００１〜１重量％、好ましくは０.００１〜０.８重量％、特に好ましくは０.００５〜０.３重量％、そして特に０.０１〜０.２重量％の量で用いられる。
【０１７５】
本製剤は、処理された織物に付着し、繊維の光安定性および／または他の配合物成分の光安定性を改善するＵＶ吸収剤を含有することができる。ＵＶ吸収剤とは、紫外線放射を吸収し、吸収したエネルギーを再び長波長放射(例えば、熱)の形態で放射しうる有機物質(光保護フィルター)を意味する。
【０１７６】
これらの所望の特性を有する化合物は、例えば、無放射の不活性化により活性である化合物、ならびに、２位および／または４位に置換基を有するベンゾフェノンの誘導体である。さらに、置換されたベンゾトリアゾール、３位でフェニル置換されたアクリレート(２位にシアノ基を有するかまたは有さない桂皮酸誘導体)、サリチル酸塩、有機Ｎｉ錯体および天然物質(例えば、ウンベリフェロンおよび内因性ウロカニン酸)も適している。特に重要な物質は、ビフェニルおよび特にスチルベン誘導体[例えば、ＥＰ０７２８７４９Ａに記載され、CibaよりTinosorbＲＦＤまたはTinosorbＲＦＲとして市販されている]である。挙げることができるＵＶ-Ｂ吸収剤は、以下のものである：３-ベンジリデンカンファーまたは３-ベンジリデンノルカンファーおよびこれらの誘導体、例えば３-(４-メチルベンジリデン)カンファー(ＥＰ０６９３４７１Ｂ１に記載)；４-アミノ安息香酸誘導体、好ましくは、４-(ジメチルアミノ)安息香酸２-エチルヘキシル、４-(ジメチルアミノ)安息香酸２-オクチルおよび４-(ジメチルアミノ)安息香酸アミル；桂皮酸のエステル、好ましくは４-メトキシ桂皮酸２-エチルヘキシル、４-メトキシ桂皮酸プロピル、４-メトキシ桂皮酸イソアミル、２-シアノ-３,３-フェニル桂皮酸２-エチルヘキシル(オクトクリレン)；サリチル酸のエステル、好ましくはサリチル酸２-エチルヘキシル、サリチル酸４-イソプロピルベンジル、サリチル酸ホモメンチル；ベンゾフェノンの誘導体、好ましくは２-ヒドロキシ-４-メトキシベンゾフェノン、２-ヒドロキシ-４-メトキシ-４'-メチルベンゾフェノン、２,２'-ジヒドロキシ-４-メトキシベンゾフェノン；ベンザルマロン酸のエステル、好ましくは４-メトキシベンズマロン酸ジ-２-エチルヘキシル；トリアジン誘導体、例えばＥＰ０８１８４５０Ａ１に記載される２,４,６-トリアニリノ-(ｐ-カルボ-２'-エチル-１'-ヘキシルオキシ)-１,３,５-トリアジンおよびオクチルトリアゾン、またはジオクチルブタアミドトリアゾン[UvasorbＲHEB]；プロパン-１,３-ジオン、例えば、１-(４-tert-ブチルフェニル)-３-(４'-メトキシフェニル)プロパン-１,３-ジオン；ケトトリシクロ(５.２.１.０)デカン誘導体(ＥＰ０６９４５２１Ｂ１に記載)。さらに適するのは、以下のものである：２-フェニルベンズイミダゾール-５-スルホン酸およびそのアルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウム、アルキルアンモニウム、アルカノールアンモニウムおよびグルクアンモニウムの塩；ベンゾフェノンのスルホン酸誘導体、好ましくは、２-ヒドロキシ-４-メトキシベンゾフェノン-５-スルホン酸およびその塩；３-ベンジリデンカンファーのスルホン酸誘導体、例えば、４-(２-オキソ-３-ボルニリデンメチル)ベンゼンスルホン酸および２-メチル-５-(２-オキソ-３-ボルニリデン)スルホン酸ならびにこれらの塩。
【０１７７】
適当な代表的ＵＶ-Ａフィルターは、特にベンゾイルメタンの誘導体、例えばＤＥ１９７１２０３３Ａ１(BASF)に記載されているような１-(４'-tert-ブチルフェニル)-３-(４'-メトキシフェニル)プロパン-１,３-ジオン、４-tert-ブチル-４'-メトキシジベンゾイルメタン(Parsol 1789)、１-フェニル-３-(４'-イソプロピルフェニル)プロパン-１,３-ジオン、およびエナミン化合物である。また、ＵＶ-ＡおよびＵＶ-Ｂフィルターは、当然ながら混合物で用いることもできる。このような可溶性物質に加えて、不溶性の光保護顔料、即ち、微細に分散された好ましくはナノ化された金属の酸化物または塩も、この目的に適する。適当な金属酸化物の例は、特に酸化亜鉛および二酸化チタンであり、さらに、鉄、ジルコニウム、ケイ素、マンガン、アルミニウムおよびセリウムの酸化物ならびにこれらの混合物である。使用しうる塩は、ケイ酸塩(タルク)、硫酸バリウムまたはステアリン酸亜鉛である。酸化物および塩は、皮膚ケアおよび皮膚保護エマルジョンおよび美容化粧品のための顔料の形態で既に用いられている。ここで、粒子は、１００ｎｍ未満、好ましくは５〜５０ｎｍ、特に１５〜３０ｎｍの平均直径を有するべきである。これらは、球の形状を有していてよいが、楕円形状または球形態からいくらか逸脱した形状を有する粒子を使用することもできる。また、顔料を表面処理することもできる(即ち、親水性または疎水性にすることができる)。代表的な例は、被覆された二酸化チタン[例えば、二酸化チタンＴ８０５(Degussa)またはEusolexＲＴ２０００(Merck)など]である。ここで、適当な疎水性の被覆剤は、好ましくはシリコーンであり、特に好ましくはトリアルコキシオクチルシランまたはシメチコーンである。ミクロ化した酸化亜鉛を用いるのが好ましい。さらに適するＵＶ光保護フィルターは、P.Finkelによる概説[SOEFW-Journal 122 (1996)、543頁]に見い出すことができる。
【０１７８】
ＵＶ吸収剤は、通常は０.０１〜５重量％、好ましくは０.０３〜１重量％の量で用いられる。
【０１７９】
特に貯蔵中に、本発明に必須であるタンパク質を、安定剤によって、例えば、変性、崩壊または不活化(例えば、物理的影響、酸化またはタンパク質分解切断による)から保護することができる。微生物から得られるタンパク質の場合、タンパク質分解の抑制が特に重要である。これは、多くの微生物が、種々のプロテアーゼを消化性酵素として周囲培地に分泌するためである。これらのプロテアーゼは、後の精製段階において、関心のあるタンパク質にとって相当に有害となることもある。洗浄剤および浄化剤中においても、本発明に必須であるタンパク質は、プロテアーゼを伴っていることもあり、従って特別の保護を必要とすることもある。
【０１８０】
この目的のために、本発明の製剤は安定剤を含有することもできる。安定剤の１つの群は、可逆的プロテアーゼインヒビターであり、これは、洗浄液中に製剤を希釈するときに解離する。ベンズアミジン塩酸塩およびロイペプチンが、この目的に確立されている。ホウ砂、ホウ酸、ボロン酸またはこれらの塩もしくはエステルが使用されることが多い。これらには、特に、以下のものが含まれる：芳香族基を有する誘導体(例えば、ＷＯ９５／１２６５５による)、オルト置換された誘導体(ＷＯ９２／１９７０７による)、メタ置換された誘導体(ＵＳ５９７２８７３による)、およびパラ置換されたフェニルボロン酸、またはこれらの塩もしくはエステル。国際特許出願ＷＯ９８／１３４６０および欧州特許ＥＰ５８３５３４は、洗浄剤および浄化剤のプロテアーゼの可逆的な阻害のためのペプチドアルデヒド、即ち、還元Ｃ末端を有するオリゴペプチド(２〜５０モノマーのオリゴペプチド)を開示する。ペプチド性の可逆的プロテアーゼインヒビターには、特に、オボムコイド(ＷＯ９３／００４１８)が含まれる。例えば、国際特許出願ＷＯ００／０１８２６は、プロテアーゼ含有製剤における使用のためのプロテアーゼスブチリシンの特異的な可逆的ペプチドインヒビターを開示しており、ＷＯ００／０１８３１は、プロテアーゼおよびインヒビターの対応する融合タンパク質を開示している。
【０１８１】
さらなる酵素安定剤は、アミノアルコール(例えば、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミンおよびプロパノールアミンならびにこれらの混合物)、Ｃ１２までの脂肪族カルボン酸、例えばコハク酸、他のジカルボン酸またはこのような酸の塩(例えば、欧州特許出願ＥＰ０３７８２６１および国際特許出願ＷＯ９７／０５２２７に開示)である。独国特許出願ＤＥ１９６５０５３７は、この目的のための末端基キャップした脂肪アミドアルコキシレートを開示する。国際特許出願ＷＯ９７／１８２８７に開示されるように、ビルダーとして用いられる特定の有機酸は、含まれる酵素をさらに安定化することができる。
【０１８２】
低級脂肪族アルコール、特にポリオール(例えば、グリセロール、エチレングリコール、プロピレングリコールまたはソルビトールなど)は、使用されることが多い他の酵素安定剤である。また、比較的最近の出願(ＥＰ０９６５２６８)によれば、リン酸ジグリセロールも、物理的影響による変性から保護する。さらに、カルシウム塩(例えば、欧州特許出願ＥＰ００２８８６５において、この目的のために開示されている酢酸カルシウムまたはギ酸カルシウムなど)、およびマグネシウム塩(例えば、欧州特許出願ＥＰ０３７８２６２による)も用いられる。
【０１８３】
ポリアミドオリゴマー(ＷＯ９９／４３７８０)またはポリマー性化合物、例えばリグニン(ＷＯ９７／００９３２)、水溶性ビニルコポリマー(ＥＰ８２８７６２)、またはＥＰ７０２７１２に開示されるようなセルロースエーテル、アクリルポリマーおよび／またはポリアミドは、特に物理的影響またはｐＨ変動に対して酵素調製物を安定化する。ポリアミンＮ-オキシド-含有ポリマー(ＥＰ５８７５５０およびＥＰ５８１７５１)は、酵素安定剤として、および色移行抑制剤として同時に作用する。他のポリマー性安定剤は、ＷＯ９７／０５２２７において、他の成分に加えて開示されている直鎖Ｃ８-Ｃ１８ポリオキシアルキレンである。国際特許出願ＷＯ９７／４３３７７およびＷＯ９８／４５３９６におけるように、アルキルポリグリコシドは、本発明の製剤の酵素成分を安定化することができ、さらにそれらの性能を増大させることもできる。ＷＯ９８／１７７６４に開示されている架橋したＮ含有化合物は、汚れ遊離剤として、および酵素安定剤として二重の機能を充足する。疎水性の非イオン性ポリマーは、国際特許出願ＷＯ９７／３２９５８によれば、セルロースにおいて安定化するように、他の安定剤と一緒に混合物中で作用するので、これらの成分または類似の成分は、本発明に必須である酵素に適するものとなりうる。
【０１８４】
特に、ＥＰ７８０４６６に開示されているように、還元剤および抗酸化剤は、酸化崩壊に対する酵素の安定性を増大させる。イオウ含有還元剤は、例えば、ＥＰ００８０７４８およびＥＰ００８０２２３に開示されている。他の例は、亜硫酸ナトリウム(ＥＰ５３３２３９)および還元糖(ＥＰ６５６０５８)である。
【０１８５】
また、使用されることが多いのは、安定剤の組み合わせ、例えば、ポリオール、ホウ酸および／またはホウ砂の組み合わせ(国際特許出願ＷＯ９６／３１５８９)、ホウ酸またはホウ酸塩、還元性の塩およびコハク酸または他のジカルボン酸の組み合わせ(欧州特許出願ＥＰ１２６５０５)、あるいは、ホウ酸またはホウ酸塩と、ポリオールまたはポリアミノ化合物との、および還元性の塩との組み合わせ(欧州特許出願ＥＰ０８０２２３に開示)である。ＷＯ９８／１３４６２によれば、ペプチド-アルデヒド安定剤の作用は、ホウ酸および／またはホウ酸誘導体とポリオールとの組み合わせによって増大し、ＷＯ９８／１３４５９によれば、カルシウムイオンのさらなる使用によって、なおさらに増大する。
【０１８６】
安定化された酵素活性を含む製剤は、本発明の好ましい態様である。複数の示した方法で安定化された酵素を含む製剤が特に好ましい。
【０１８７】
プロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼまたはセルラーゼなどの酵素が、洗浄剤および浄化剤の活性成分として数十年にわたって用いられている。このような製剤のそれぞれ洗浄性能および浄化性能に対するそれらの具体的な寄与は、プロテアーゼの場合はタンパク質性の汚れを分解する能力であり、アミラーゼの場合はデンプン含有汚れの破壊であり、そしてリパーゼの場合は脂肪切断活性である。セルラーゼは、それらの汚れ除去(即ち、一次洗浄および浄化性能)に加えて、特に、洗浄剤の二次洗浄性能に対する寄与のゆえに、そして織物上でのそれらの繊維作用のゆえに、洗浄剤において好ましく用いられる。特定の加水分解性生成物は、他の洗浄剤または浄化剤の成分によって、攻撃、溶解、乳化または懸濁されるか、あるいは、それらの大きい溶解性のゆえに、洗浄液により洗い流され、これによって、酵素と他の成分との間の相乗作用を好都合に生じる。
【０１８８】
本発明に必須であるタンパク質に加えて、本発明の製剤は、他のアミロース分解酵素、特にα-アミラーゼを含むことができる。また、これらは、洗浄剤および浄化剤における使用のために確立された酵素を含むこともできる。市販のアミラーゼの例は、BANＲ、TermamylＲ、PurastarＲ、Amylase-LTＲ、MaxamylＲ、DuramylＲおよび／またはPurafectＲOxAmである。これは、種々の酵素が互いに補足することができるときに当てはまる。このような補足は、例えば調節に関連して、例えば相互活性化によってまたは不活性化によって起こりうる。このような補足は、例えば、既知のα-アミラーゼと相同ではない本発明に必須である酵素の少なくとも１つの部分によって、本発明に必須ではないアミロース分解活性に影響を及ぼすことにより引き起こすことができる。しかし、混合使用は、逸脱した基質特異性のゆえに、敏感であることもできる。両方が本発明の態様である。
【０１８９】
洗浄剤および浄化剤においてアミロース分解酵素を他の洗浄活性および／または浄化活性酵素と共に使用することが、特に化学的に異なる汚れに対して、有利であろう。即ち、本発明のタンパク質に加えて、さらなる追加の酵素によって特徴づけられる洗浄剤または浄化剤が、本発明の好ましい態様である。
【０１９０】
その例には、さらなるアミラーゼに加えて、プロテアーゼだけでなくリパーゼ、クチナーゼ、エステラーゼ、プルラナーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼおよび／またはキシラナーゼ、ならびにこれらの混合物が含まれる。プロテアーゼ、リパーゼ、β-グリカナーゼおよび／またはセルラーゼが特に好ましい。他の酵素は、そのそれぞれの特異的な酵素性能により、対応する製剤の浄化性能を拡張する。これらには、例えば、酵素漂白系の成分としてオキシドレダクターゼまたはペルオキシダーゼ、例えばラッカーゼ(ＷＯ００／３９３０６)、β-グルカナーゼ(ＷＯ９９／０６５１５およびＷＯ９９／０６５１６)またはペクチン溶解酵素(ＷＯ００／４２１４５)が含まれる(これらは、特に、特別の洗浄剤において使用される)。
【０１９１】
本発明の製剤において使用するための市販酵素の例は、プロテアーゼ、例えばSubtilisin BPN'、ProperaseＲ、BLAPＲ、OptimaseＲ、OpticleanＲ、MaxataseＲ、MaxacalＲ、MaxapemＲ、AlcalaseＲ、EsperaseＲ、SavinaseＲ、DurazymＲ、EverlaseＲおよび／またはPurafectＲGまたはPurafectＲOxP、ならびに、リパーゼ、例えばLipolaseＲ、LipomaxＲ、LumafastＲおよび／またはLipozymＲである。
【０１９２】
このような製剤中のプロテアーゼ活性は、Tenside[第７巻 (1970)、125-132頁]に記載されている方法に従って測定することができ、これに応じてＰＵ(プロテアーゼ単位)で示される。好ましい製剤のプロテアーゼ活性は、調製物１ｇあたり１５０００００プロテアーゼ単位までであろう[Tenside、第７巻 (1970)、125-132頁に記載された方法に従って測定したＰＵ]。
【０１９３】
使用しうる酵素の中で、その入手に関連して適するのは、主に、微生物(例えば、細菌または菌類)由来の酵素、例えば、バシラス・スブチリス(Bacillus subtilis)、バシラス・リケニホルミス(Bacillus licheniformis)、ストレプトミセス・グリセウス(Streptomyces griseus)、フミコラ・ラヌギノーザ(Humicola lanuginosa)、フミコラ・インソレンス(Humicola insolens)、シュードモナス・シュードアルカリゲネス(Pseudomonas pseudoalcaligenes)またはシュードモナス・セパシア(Pseudomonas cepacia)からの酵素、特に、これらの菌株によって天然に産生される酵素混合物または他の菌株の酵素との混合物である。これらは、適当な微生物から、既知の方法で発酵法により得られる。これら発酵法は、例えば、独国特許出願公開ＤＥ１９４０４８８およびＤＥ２１２１３９７、米国特許ＵＳ３６２３９５７およびＵＳ４２６４７３８、欧州特許出願ＥＰ００６６３８、さらに国際特許出願ＷＯ９１／０２７９２に記載されている。
【０１９４】
使用するこれらの酵素は、さらに適切であれば、例えば欧州ＥＰ０５６４４７６または国際特許出願ＷＯ９４／２３００５に記載されているように、早すぎる不活性化から酵素を保護するために、担体に吸着させ、そして／または被覆性物質中に封入することもできる。これらは、洗浄剤中に、好ましくは１０重量％までの量で、特に０.２〜２重量％の量で存在する。例えば、国際特許出願ＷＯ９４／１８３１４に記載されているような、酸化分解に対して安定化されている酵素を使用するのが特に好ましい。
【０１９５】
本発明の製剤は、例えば、含まれる活性成分を時間的または空間的に互いに独立して放出させるために、複数の相を含むことができる。このような相は、種々の物質状態にある相であってよいが、特に、同じ物質状態にある２つの相であってよい。
【０１９６】
複数の固体成分からなる本発明の製剤は、単純な方法で、種々の固体成分(特に、種々の成分および／または異なる放出挙動を有する粉末、顆粒または押出物)を、全体的にゆるやかな混合物において互いに混合することによって製造することができる。１またはそれ以上の相からなる本発明の固体製剤は、既知の方法で、例えば噴霧乾燥または顆粒化により、酵素および可能なさらなる熱感受性成分(例えば、漂白剤など)を適切であれば後に独立して添加して製造することができる。特に６５０〜９５０ｇ／Ｌの範囲内の高い嵩密度を有する本発明の製剤を製造するためには、欧州特許ＥＰ０４８６５９２に開示されている押出し工程を含む方法が好ましい。欧州特許ＥＰ０６４２５７６は、顆粒化法を用いる別の好ましい製造法を記載している。
【０１９７】
例えば、固体製剤のためには、タンパク質を、乾燥された形態、顆粒化された形態、封入された形態、または封入されさらに乾燥された形態で使用することができる。これらを、別々に、即ち独立した相として、または同じ相において他の成分と一緒に、圧縮を伴ってまたは伴わずに添加することができる。マイクロカプセル化される酵素を固体形態で処理すべきときには、従来技術において既知である方法(例えば、噴霧乾燥、遠心除去または再可溶化)を用いて、後処理によって得られる水溶液から水を除去することができる。このようにして得られる粒子は、通常はそのサイズが５０〜２００μｍである。
【０１９８】
封入された形態は、他の成分(例えば、漂白剤など)から酵素を保護し、制御された放出を可能にする方法である。そのサイズに依存して、これらのカプセルは、ミリカプセル、マイクロカプセルおよびナノカプセルに分類されるが、マイクロカプセルが酵素に対して特に好ましい。このようなカプセルは、例えば、特許出願ＷＯ９７／２４１７７およびＤＥ１９９１８２６７に開示されている。別の可能な封入方法は、洗浄剤または浄化剤において使用するのに適する酵素を、酵素溶液とデンプンまたはデンプン誘導体の溶液または懸濁液との混合物から出発して、デンプンまたはデンプン誘導体に封入する方法である。独国出願ＤＥ１９９５６３８２は、このような封入方法を記載している。
【０１９９】
また、本発明の固体製剤を、タブレットを与える圧縮または緊密化によって提供することもできる。このようなタブレットは、１またはそれ以上の相を有することができる。即ち、この提供は、２つの固体相を有する本発明の固体製剤を供する可能性をも与える。タブレット形態にある本発明の製剤(１またはそれ以上の相を有することができ、１またはそれ以上の色を有することができ、そして／または、１またはそれ以上の層からなることができる)を製造するために、好ましくは全ての成分(適切であれば、１つの層あたりの全ての成分)を、ミキサー中で互いに混合し、混合物を、通常のタブレット成形機(例えば、偏心プレスまたは回転プレス)を用いて、約５０〜１００ｋＮ／ｃｍ２、好ましくは６０〜７０ｋＮ／ｃｍ２の範囲内のプレス力で圧縮する。特に多層タブレットの場合、少なくとも１つの層を予め圧縮しておくのが有利であろう。これは、好ましくは５〜２０ｋＮ／ｃｍ２、特に１０〜１５ｋＮ／ｃｍ２のプレス力で行う。このようにして製造されたタブレットは、好ましくは１０〜５０ｇ、特に１５〜４０ｇの重量を有する。タブレットの３次元形態は任意であり、円形、卵形または角形であってよく、中間形態も可能である。
【０２００】
多相製剤中の相の少なくとも１つが、アミラーゼ感受性材料(特にデンプン)を含んでなるか、または少なくとも部分的に、該材料によって囲まれているかもしくは被覆されているときに、特に有利である。このようにして、この相は、機械的に安定化され、そして／または外部からの影響に対して保護され、それと同時に、成分の放出を容易にするように洗浄液中で活性なアミラーゼにより攻撃される。
【０２０１】
本発明の液体、ゲル様またはペースト様の製剤に、酵素、さらに本発明に必須であるタンパク質を、従来技術に従って行うタンパク質の獲得および調製から始めて、濃縮された水性溶液または非水性溶液において、例えば液体形態において、例えば溶液、懸濁液またはエマルジョンとして、また、ゲル形態または封入形態において、または乾燥粉末として添加することができる。通常の溶媒中の溶液の形態にあるこのような本発明の洗浄剤または浄化剤を、通常は各成分の単純な混合によって製造する(これら成分は、自動ミキサー中に溶液として、またはバルクで導入することができる)。
【０２０２】
本発明の１つの態様は、本発明に必須であるタンパク質および／または存在する他のタンパク質の１つおよび／または存在する他の成分の１つがマイクロカプセルの形態で添加されている液体、ゲル様またはペースト様の製剤である。これらの中で、アミラーゼ感受性材料で作製されたカプセルを含むものが特に好ましい。洗浄剤または浄化剤におけるアミラーゼ感受性材料および本発明に必須であるアミロース分解酵素の上記のような混合使用は、例えば、デンプン切断酵素がマイクロカプセルの分解を助け、こうして封入された成分を放出する過程を制御することにより、その放出が貯蔵中および／または浄化過程の開始時に起こらず、特定の時間でのみ起こるようにして、相乗作用を示すことができる。この機序が、多種の成分および多種のカプセル型を含んでなる複雑な洗浄剤および浄化剤の系(この系が、本発明の特に好ましい態様である)の基礎になりうる。
【０２０３】
洗浄剤または浄化剤の成分が、少なくとも２つの異なる相、例えば、タブレット形態にある洗浄剤または浄化剤の互いに結合された２またはそれ以上の固体相、または粉末形態にある同じ製剤中の種々の顆粒に分布しているときに、同等の効果が得られる。２相または多相の浄化剤は、機械食器洗浄機および洗浄剤の両方における適用のための当分野の状態である。先に活性化された相中のアミロース分解酵素の活性は、後の相がアミラーゼ感受性の被覆または被膜によって囲まれているとき、またはアミラーゼ感受性材料が固体相の一体成分であり、該成分が、部分的または完全な加水分解時に当該相の崩壊を引き起こすときに、後の相の活性化のための必須条件である。即ち、この目的のための本発明に必須である酵素の使用は、本発明の好ましい態様である。
【０２０４】
洗浄剤および浄化剤の各成分は、適切に互いの性能を助けることができる。例えば、国際特許出願ＷＯ９９／６３０３５は、浄化性能を増大させるためのアミラーゼおよび色移行抑制剤の相乗使用を開示している。また、例えば国際特許出願ＷＯ９８／４５３９６において、コビルダーとして同時に使用しうるポリマー(例えば、アルキルポリグリコシドなど)が、存在する酵素の活性および安定性を安定化および増大させうることが開示されている。同様に、本発明に必須であるアミロース分解活性を、上記した他の成分のいずれかによって改変すること、特に安定化および／または増大させることができる。即ち、本発明の製剤のために適切に調整された配合物は、本発明の特に好ましい態様である。
【０２０５】
上記によれば、工程の少なくとも１つにおいて活性になる本発明に必須のハイブリッドアミラーゼまたはその誘導体によって、織物または硬表面を浄化するための方法を改善することもできる。即ち、このような方法は本発明の方法である。
好ましくは、この種の方法は、工程の少なくとも１つにおいて上記に従って製剤を使用することを特徴とする。
特に好ましくは、この種の方法は、アミロース分解タンパク質または誘導体を、例えば通常の家庭用食器洗浄機または家庭用洗浄機械において、０.０１〜４００ｍｇ、好ましくは０.０２〜２００ｍｇ、特に好ましくは０.０２〜１００ｍｇで使用することを特徴とする。
【０２０６】
これに関連して、０.０００５〜２０ｍｇ／Ｌ、好ましくは０.００５〜１０ｍｇ／Ｌ、特に好ましくは０.００５〜８ｍｇアミロース分解タンパク質／１Ｌ洗浄液の濃度が有利に得られる。タンパク質濃度は、既知の方法、例えばＢＣＡ法(ビシンコニン酸；２,２'-ビキノリル-４,４'-ジカルボン酸)またはビウレット法[A.G.Gornall、C.S.BardawillおよびM.M.David、J.Biol.Chem. 177 (1948)、751-766頁]によって測定することができる。
【０２０７】
上記によれば、本発明に必須であるハイブリッドアミラーゼまたはその誘導体の単独、または少なくとも１つの他の浄化活性成分もしくは浄化作用を助ける活性成分と一緒の、織物または硬表面を浄化するための使用も、本発明の１つの態様である。
これは、本発明の製剤を用いて行うのが好ましい。
【０２０８】
本発明の製剤または本発明に必須であるアミロース分解タンパク質は、洗浄液中のアミロース分解タンパク質について上記した濃度が有利に得られるように、上記した量範囲で使用するのが好ましい。浄化の課題に依存して、製剤の製造元または末端使用者は、これらの量を、量り取ることができる。
【０２０９】
本発明に必須であるハイブリッドアミラーゼまたはその誘導体の別の可能性ある使用は、１を越える相を含む洗浄剤または浄化剤において、それが単独で、または少なくとも１つの他の浄化活性成分もしくは浄化作用を助ける活性成分と一緒に供されたときに、それ自体または他の相を活性化するための使用である。
【０２１０】
本発明に必須であるハイブリッドアミラーゼまたはその誘導体の別の可能性ある使用は、封入された成分を含む洗浄剤または浄化剤において、それが単独で、または少なくとも１つの他の浄化活性成分もしくは浄化作用を助ける活性成分と一緒に供されたときに、カプセルから該成分を放出させるための使用である。
【０２１１】
本発明の別の態様において、新規なアミラーゼの開発によって洗浄剤または浄化剤の洗浄または浄化性能を改善することができる方法が示される。この方法は、それぞれ相同位置において、バシラス・アミロリクエファシエンスおよびバシラス・リケニホルミスのα-アミラーゼのそれぞれ少なくとも１を越えるアミノ酸を含む部分配列を融合させて、アミロース分解活性のハイブリッドアミラーゼを得ること、これを製剤に添加することを含んでなる。
【０２１２】
この種の方法は、従来技術から自体既知であり、分子生物学的方法に基づいている。これらは、例えば、Fritsch、SambrookおよびManiatisのマニュアル「Molecular cloning：a laboratory manual」[Cold Spring Harbour Laboratory Press、New York、1989]から既知であるか、または「Lexikon der Biochemie (生化学の辞典)」[Spektrum Akademischer Verlag、Berlin、1999]などの参考書籍にまとめられている。これらは、配列表の配列番号１および３に示される出発分子のヌクレオチド配列に基づくのが好ましい。例えば、Conradらの研究(上記を参照)は、対応する遺伝子のインビボ組換えによる、分子の宿主の構築を報告している。同様に、本発明に関連するハイブリッドを創製するさらなる可能性は、既に上で紹介している。
【０２１３】
上記によれば、ハイブリッドアミラーゼの部分配列(これは、出発分子まで遡ることができる)が、７個を越える、好ましくは１４個を越える、特に好ましくは２１〜４６２個のアミノ酸の長さである方法が好ましい。
【０２１４】
上記によれば、ハイブリッドタンパク質が、出発配列に従って互いに相補性である３個または２個の部分配列から構成される方法が好ましい。
【０２１５】
上記によれば、ハイブリッドアミラーゼの融合点が、配列番号４の番号付与に従って、位置１７、３４、７６、１０８、１１２、１４２、１４７、１４９、１５１、１６３、１７４、１７９、１８５、１９１、１９８、２０７、２３１、２３４、２４４、２５６、２６３、２７６、４３１、８４、９９、４２９、２０１、１９、４３３および１５３の１つまたはそれ以上の、１０、９、８、７、６、５、４、３、２および１アミノ酸上流〜１０、９、８、７、６、５、４、３、２および１アミノ酸下流の領域内に、極めて具体的には、正確に該位置の１つまたはそれ以上のところに位置する方法が、この順に好ましい。
【０２１６】
上記によれば、それぞれ５、４、３または２個以下の連続アミノ酸、特に好ましくはそれぞれ１個のみのアミノ酸の１またはそれ以上の欠失をさらに獲得したハイブリッドアミラーゼを含んでなる方法が、この順に好ましい。
【０２１７】
この種の突然変異は、例えば、融合に関連して自体既知のサブ工程を用いて創製することができる。しかし、これらを、融合部位以外の他の位置に導入することもできる。
【０２１８】
上記によれば、少なくとも１つの位置においてアミノ酸置換をさらに受けたハイブリッドアミラーゼを含んでなる方法が好ましい。ここで、配列番号４の番号付与に従って、１３２、３２０および４１２位の１つ、２つまたは３つにおける置換が、順に好ましい。
【０２１９】
上記によれば、挿入をさらに獲得しているか、またはアミロース分解キメラタンパク質であるハイブリッドアミラーゼを含んでなる方法が好ましい。
【０２２０】
上記によれば、例えば別のタンパク質、ポリマーへの結合によって、または別の化学修飾によって、さらに誘導されているハイブリッドアミラーゼを含んでなる方法が好ましい。
【０２２１】
ハイブリッドアミラーゼの形成のために、対応する部分領域において、配列番号１および配列番号３に示されるヌクレオチド配列またはこれらと同義のヌクレオチド配列を有する核酸を使用することを特徴とする方法が、それぞれ特に好ましい。上記のように、アミノ酸配列を保持しながら特定の制限部位を導入するためにヌクレオチド配列を変化させるべきときには、同義コドンの置換が特に有用であろう。得られた突然変異遺伝子を、自体既知の方法で、対応する変異体を得るために増幅し、クローニングし、使用することができる。
【実施例１】
【０２２２】
ハイブリッドアミラーゼ ＡＬ３４、ＡＬ７６、ＡＬ１１２、ＡＬ２５６、ＡＬＡ３４−８４、ＬＡＬ１９−１５３およびＬＡＬ１９−４３３の獲得ならびにこれらの酵素活性の測定
全ての分子生物学的および微生物学的な工程は、例えば、Fritsch、SambrookおよびManiatisのマニュアル「Molecular cloning：a laboratory manual」[Cold Spring Harbour Laboratory Press、New York、1989]に記載されているような通常の方法に従う。
当該酵素を産生する細菌株は、刊行物「Hybrid Bacillus amyloliquefaciens X Bacillus licheniformis α-Amylases. Construction、properties and sequence determinats」(1995)[B.Conrad、V.Hoang、A.PolleyおよびJ.Hofemeister、Eur.J.Biochem.、230、481-490頁]に記載されているようにして得ることができる。
【０２２３】
ハイブリッドアミラーゼＡＬ３４、ＡＬ７６、ＡＬ１１２、ＡＬ２５６、ＡＬＡ３４−８４、ＬＡＬ１９−１５３およびＬＡＬ１９−４３３を発現する細菌株を、１Ｌ振盪フラスコ中の２５０ｍｌ培養液において、３７℃および２００ｒｐｍで増殖させた。使用した培地は、次の通りであった：ＭＬＢＳＰ[１０ｇ／Ｌ カシトン(casitone)；２０ｇ／Ｌ トリプトン、１０ｇ／Ｌ 酵母抽出物、それぞれBecton Dickinson (Cockeysville)から；５ｇ／Ｌ ＮａＣｌ；２７ｇ／Ｌ コハク酸ナトリウム；１００ｍｇ／Ｌ ＭｇＳＯ４＊７Ｈ２Ｏ；７５ｍｇ／Ｌ ＣａＣｌ２＊２Ｈ２Ｏ；０.５μＭ ＭｎＣｌ２；０.５μＭ ＦｅＳＯ４；２％(w/v) グルコース；５０ｍＭ ＰＩＰＥＳ緩衝液(１Ｍストック溶液、ｐＨ７.２から)；７５ｍＭ ＫＰＯ４(１.５Ｍストック溶液、ｐＨ７.０から)；ｐＨ＝７.０、ＫＯＨで調整]および５μｇ／ｍｌ クロラムフェニコール。それぞれの場合に、同じ培地中の２４時間予備培養物の１％目標容量を、接種に使用した。
【０２２４】
６４時間後に、４℃で遠心することによって上清を得た。この上清を５０％プロピレングリコールで安定化し、ＴＡＵ中のアミラーゼ活性をそれから測定した。この目的のために、基質ｐ-ニトロフェニル-α-Ｄ-マルトヘプタグルコシドを使用した(その末端グルコース単位を、ベンジリデン基によってブロックした)。この基質をアミラーゼによって切断して遊離のｐ-ニトロフェニル-オリゴ糖を生成させ、次いでこれを、補助酵素グルコアミラーゼおよびα-グルコシダーゼを用いてグルコースおよびｐ-ニトロフェノールに変換した。この結果、放出されたｐ-ニトロフェノールの量は、アミラーゼ活性に比例した。測定は、例えば、QuickStartＲ試験キット[Abbott、Abbott Park、Illinois、米国]を用いて行った。アッセイ混合物における吸収(４０５ｎｍ)の増加を、分光光度計を用いて、ブランクに対して３７℃で３分間にわたり検出した。検定を、既知活性の酵素標準(例えば、GenencorからのMaxamylＲ／PurastarＲ 2900、２９００ＴＡＵ／ｇを有する)を用いて行った。評価は、標準の酵素濃度の関数として、１分間毎の吸収の差ｄＥ(４０５ｎｍ)をプロットすることによって行った。１ＴＡＵは、所与の条件下で、１分間に１μモルの基質を切断することができる酵素の量である。
【０２２５】
以下の表１は、得られた活性を挙げるものである。
【表１】
2005527640.tif 000006
【実施例２】
【０２２６】
綿織物を、標準化した方法で、以下の汚れ、Ａ：チョコレートムース、Ｂ：ココアを含むオートムギフレーク、Ｃ：ジャガイモデンプンと接触させ、種々の洗浄剤配合物の洗浄性能を、このように調製した材料に基づき、洗濯計(launderometer)を用いて試験した。この目的のために、液比をそれぞれ１：１２に設定し、３０℃の温度で３０分間にわたり洗浄を行った。用量は、洗浄液１Ｌあたり特定の洗浄剤５.８８ｇであった。水硬度は、１６°(ドイツ硬度)であった。
【０２２７】
ＡおよびＢに対して使用した対照洗浄剤は、以下の組成の基本洗浄剤配合物であった(全ての値は重量％である)：４％ 直鎖アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム(ナトリウム塩)、４％ Ｃ１２-Ｃ１８脂肪アルコールスルフェート(ナトリウム塩)、５.５％ Ｃ１２-Ｃ１８脂肪アルコール＋７ＥＯ、１％ ナトリウム石鹸、１１％ 炭酸ナトリウム、２.５％ 無定形二ケイ酸ナトリウム、２０％ 過ホウ酸ナトリウム・４水和物、５.５％ ＴＡＥＤ、２５％ ゼオライトＡ、４.５％ ポリカルボキシレート、０.５％ ホスホネート、２.５％ 発泡抑制剤顆粒、５％ 硫酸ナトリウム、１％ プロテアーゼ顆粒；その残り：水、蛍光増白剤、芳香剤、塩類。この配合物を、種々の実験系列のために、異なるアミラーゼと混合し、それぞれ、１Ｌの洗浄液あたり４４ＴＡＵのアミロース分解酵素の最終濃度を得た。
【０２２８】
本発明に必須であるアミロース分解酵素 ＡＬ７６、ＡＬ１１２およびＬＡＬ１９−４３３を、TermamylＲ、DuramylＲおよびBANＲ(それぞれの製造元：Novo Nordisk A/S、Bagsvaerd、デンマーク)と比較した。汚れＣについては、同じ基本配合物を、プロテアーゼを含有させずに使用し、また、ＡおよびＢについては、対照として、またはアミラーゼと混合して使用した。
【０２２９】
織物の白さの程度を、Minolta CR 310装置を用いてCIELABシステムにおいて、洗浄の前後に、１００％に標準化した標準と比較して測定した。以下の表２は、特定の実験に対して得られた値の差異をまとめるものである。それぞれ５回の測定の平均が挙げられている。これらの値は、使用した製剤の洗浄性能に対する含有酵素の寄与について、直ちに結論づけることを可能にする。
【０２３０】
【表２】
2005527640.tif 000007
【０２３１】
これらのデータは、汚れＡの場合、ハイブリッドアミラーゼＡＬ７６は、３種類の比較酵素の中で最良のものと少なくとも同程度に良好であること；汚れＢの場合、ＡＬ７６およびＬＡＬ１９−４３３は、後者よりも明らかに優れていることを示す。汚れＣの場合、ハイブリッドアミラーゼＡＬ１１２は、３種類の比較酵素の中で最良のものと同程度に良好である。それぞれの場合に、残りの試験した本発明に必須の酵素は、確立された酵素の洗浄性能と少なくとも同等の洗浄性能を示した。これらの結果は、全ての製剤が漂白剤を含有しており、ＡおよびＢにおいては、さらにプロテアーゼ(これに対して、通常、含有酵素は極めて感受性が高い)を含有しているので、なおさら顕著である。
【実施例３】
【０２３２】
綿織物を、標準化した方法で、汚れＢ(ココアを含むオートムギフレーク)および汚れＤ(ココアおよび少量のミルクを含むオートムギフレーク)で汚した。洗濯計を用いた試験を実施例２と同様に行ったが、漂白剤不含の基本洗浄剤配合物を用いた。この配合物は、それぞれ重量％で以下の成分を含有していた：１４％ アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム、６％ 脂肪アルコールスルホン酸ナトリウム、６％ ７回エトキシル化したＣ１２-Ｃ１８脂肪アルコール、１％ 石鹸、２５％ ゼオライトＮａ-Ａ、１０％ 炭酸ナトリウム、５％ ポリマー性ポリカルボキシレート(Sokalan CP5)、１１％ クエン酸三ナトリウム・二水和物、４％ クエン酸、１％ 粒子形状の発泡抑制剤、１％ プロテアーゼ顆粒、５％ 硫酸ナトリウム、その残り：水および塩類。この基本配合物を、種々の実験系列のために、異なるアミラーゼと混合し、それぞれ、１Ｌの洗浄液あたり３３.５ＴＡＵのアミロース分解酵素の最終濃度を得た。本発明に必須であるハイブリッドアミラーゼ ＡＬ７６、ＡＬ１１２およびＬＡＬ１９−４３３を、TermamylＲ、DuramylＲおよびBANＲ(それぞれの製造元：Novo Nordisk A/S、Bagsvaerd、デンマーク)と比較した。用量は、洗浄液１Ｌあたり特定の洗浄剤４.４５ｇであった。
【０２３３】
洗浄後、洗浄した織物の白さの程度を、先の実施例と同様に測定した。以下の表３は、それぞれに得られた差異をまとめるものである。これらは、それぞれ５回の測定の平均であり、ここでも、製剤の洗浄性能に対する特定の酵素の寄与について、直ちに結論づけることを可能にする。
【０２３４】
【表３】
2005527640.tif 000008
【０２３５】
試験した２つの場合において、本発明に必須である３種類の酵素、特にＬＡＬ１９−４３３は、この漂白剤不含の洗浄剤配合物においても、当該製剤の洗浄性能に対する寄与を示し、３種類の比較酵素の洗浄性能よりも優れているか、または誤差の限界内で少なくともそれと同等であった。
【実施例４】
【０２３６】
綿織物を、標準化した方法で、２つの異なる種類の市販のココアミルク飲料(ＥおよびＦ)で汚し、実施例２の記載のように洗濯計を用いて調べた。使用した対照の洗浄剤は、実施例３の基本洗浄剤配合物であったが、プロテアーゼを含有していなかった。これを、実施例３と同様に、種々の実験系列のために異なるアミラーゼと混合し、同じ用量で使用した。
【０２３７】
洗浄後、洗浄した織物の白さの程度を、硫酸バリウムの白さの程度(これを１００％に標準化した)と比較して測定した。測定は、Datacolor SF500-2 分光計において、４６０ｎｍ(ＵＶ遮断フィルター３)、３０ｍｍダイヤフラム、光沢なし、Ｄ６５光源、１０°、ｄ／８°で行った。以下の表４は、反射率(％)として、即ち、硫酸バリウムと比較したときの割合(％)として得られた結果をまとめるものである(それぞれの出発値も同様にこの表に示す)。それぞれ５回の測定の平均を挙げる。これらは、使用した製剤の洗浄性能に対する、それぞれに含まれるアミロース分解酵素の寄与について、直ちに結論づけることを可能にする。
【０２３８】
【表４】
2005527640.tif 000009
【０２３９】
汚れＥの場合、試験した３種類全ての本発明に必須のハイブリッドアミラーゼは、３種類の確立された酵素よりも明らかに優れていた。汚れＦの場合、前者は、誤差の限界内で、確立された酵素とほぼ等価であった。
【実施例５】
【０２４０】
綿織物を、標準化した方法で、汚れＧ(色指示薬としてトマトピューレを含むすりつぶしたジャガイモ)、Ｈ(ココアミルク飲料)、Ｄ(ココアおよび少量のミルクを含むオートムギフレーク)、ＥおよびＦ(２種類の市販のココアミルク飲料)と接触させ、実施例２に記載した実験条件下で洗濯計を用いて調べた。それぞれの場合に使用した洗浄剤の濃度は、ここでも洗浄液１Ｌあたり５.８８ｇであった。
【０２４１】
この目的のために、実施例２に示した基本洗浄剤配合物を、ここでも、漂白剤は含有させるが他の酵素は含有させずに使用した。しかし、α-アミラーゼを、洗浄液１Ｌあたり１２５ＴＡＵの濃度で使用した。ここでは、２種類のハイブリッドアミラーゼ ＡＬ７６およびＬＡＬを、３種類の既知の参照酵素 TermamylＲ、DuramylＲおよびBANＲ(それぞれの製造元：Novo Nordisk A/S、Bagsvaerd、デンマーク)と比較して試験した。
【０２４２】
実施例２に記載したように、達成された織物の白さの程度(％)を、汚れＧ、ＨおよびＤについてはCIELABシステムにより測定した。汚れＥおよびＦについては、硫酸バリウムとの比較測定を、実施例４の記載のように行った。得られたそれぞれ５回の測定の平均を、以下の表５にまとめる。
【０２４３】
【表５】
2005527640.tif 000010
【０２４４】
汚れＧに対しては、ハイブリッドアミラーゼＡＬ７６の値は、３種類の比較酵素の中で最良のものの上部誤差バーの範囲内にあった(即ち、少なくとも同等であるとみなさなければならなかった)。汚れＨおよびＤに対しては、ＡＬ７６は、はるかに良い値を示し、Ｈの場合、これにハイブリッドアミラーゼＬＡＬが続き、そしてその次にのみ、比較のために使用した確立された洗浄剤アミラーゼが続いた。
【０２４５】
汚れＥおよびＦについても、ＡＬ７６は、比較酵素よりも低い値を示さず、ＬＡＬ１９−４３３は、３種類の比較酵素の値よりもごくわずかに悪い値を有していた。従って、この実施例も、ハイブリッドアミラーゼ、特にＡＬ７６およびＬＡＬ１９−４３３が、対応する洗浄剤の洗浄性能に対する寄与の点で、確立された酵素と完全に同等であることを確かめるものである。
【実施例６】
【０２４６】
硬く滑らかな表面を有する容器を、標準化した方法で、水中に浸漬したオートムギフレークと接触させ、家庭用の食器洗浄機 MieleＲ G 575型の通常のプログラムを用いて４５℃で洗浄した。食器洗浄剤２０ｇを１回の食器洗浄あたりに使用した。水硬度は１６°(ドイツ硬度)であった。
【０２４７】
使用した食器洗浄剤は、以下の基本配合を有していた(全ての値はそれぞれ重量％)：５５％ トリポリリン酸ナトリウム(無水として計算)、４％ 無定形二ケイ酸ナトリウム(無水として計算)、２２％ 炭酸ナトリウム、９％ 過ホウ酸ナトリウム、２％ ＴＡＥＤ、２％ 非イオン性界面活性剤、１.４％ プロテアーゼ顆粒、その残り：水、染料、芳香剤。この基本配合物を、種々の実験のために、異なるアミラーゼ、即ち、TermamylＲ、DuramylＲおよびBANＲ(それぞれの製造元：Novo Nordisk A/S、Bagsvaerd、デンマーク)と、またはそれぞれ本発明に必須であるアミロース分解酵素と混合した。酵素を、１回の浄化操作あたり、それぞれ１５０ＴＡＵのアミロース分解活性の有効量(実施例２に示した方法に従って測定した)で使用した。使用した本発明に必須であるハイブリッドアミラーゼの代表例は、ＡＬＡ３４−８４、ＡＬ３４、ＡＬ７６、ＡＬ１１２、ＡＬ２５６、ＬＡＬ１９−１５３、ＬＡＬ１９−４３３であった。
【０２４８】
洗浄後、汚れの除去を、ヨウ素-デンプン反応によりヨウ素で染色した後、尺度０(＝変化なし、即ち、極めて重度に汚れている)から１０(＝どのような検出可能な汚れもない)までにより、視覚的に評価した。得られた結果を、以下の表６にまとめる(この表は、それぞれ９回の測定の平均を挙げるものである)。これらは、使用した製剤の洗浄性能に対する存在酵素の寄与について、直ちに結論づけることを可能にする。
【０２４９】
【表６】
2005527640.tif 000011
【０２５０】
このデンプン汚れに対して、３種類のハイブリッドアミラーゼＡＬ３４、ＡＬ７６およびＡＬ１１２は、製剤の浄化性能に対する寄与を示し、これは、３種類の参照酵素の中で最良のものの値より上であった。α-アミラーゼＬＡＬ１９−１５３だけが、参照酵素の中で最低のものよりも下の値を示したが、対照よりは上であった。即ち、本発明に必須であるハイブリッドアミラーゼは、４５℃において本発明の製剤の浄化性能に対する寄与を示し、これは、この目的に確立された酵素の寄与と同等であるか、またはそれより優れていた。
【実施例７】
【０２５１】
硬く滑らかな表面を有する容器を、標準化した方法で、以下の汚れと接触させた：Ｊ(ＤＩＮオートムギフレーク)、Ｉ(水中に浸漬したオートムギフレーク)およびＫ(デンプン混合物)。
これらを用いて、食器洗浄剤配合物の浄化性能に対する当該アミロース分解酵素の寄与を、先の実施例に記載したように試験した。唯一の相違は、洗浄を５５℃において行ったことであった。
【０２５２】
即ち、ハイブリッドアミラーゼＡＬ１１２、ＬＡＬ１９−４３３およびＡＬ７６を、ここでもα-アミラーゼ TermamylＲ、DuramylＲおよびBANＲ(それぞれの製造元：Novo Nordisk A/S、Bagsvaerd、デンマーク国)と比較して試験した。汚れＪおよびＩについて、先の実施例に記載したように、尺度０〜１０で視覚的に評価を行った。汚れＫの除去を、重量測定によりパーセント(％)で測定した。この目的のために、汚して次に濯いだ容器の重量とこの容器の出発重量の差を、未濯ぎ容器の出発重量に対する重量差と関係づけた。この関係を、除去率(％)とみなすことができる。以下の表７は、この結果を示すものである。
【０２５３】
【表７】
2005527640.tif 000012
【０２５４】
この実験において、ＡＬ７６は、汚れＪに対して、当該製剤の洗浄性能に明らかに最大の寄与を示し、これにＡＬ１１２が続き、その次にのみ比較酵素が続いた。特に、５５℃において浄化すると、汚れＩに対するハイブリッドアミラーゼＡＬ７６の寄与は、３種類全ての参照酵素の寄与よりも明らかに上であり、試験した他の２種類のハイブリッドアミラーゼの寄与は、同等の値であった。同じことが汚れＫにも当てはまった。
【図面の簡単な説明】
【０２５５】
【図１】図１は、本発明に特に必須であるハイブリッドアミラーゼ ＡＬ３４、ＡＬ７６、ＡＬ１１２、ＡＬ２５６、ＡＬＡ３４−８４、ＬＡＬ１９−１５３およびＬＡＬ１９−４３３の構築図である。  それぞれ黒で示した領域は、バシラス・アミロリクエファシエンスα-アミラーゼ(Ｂ.Ａ.；最上部の棒)に由来し、白で示した領域は、バシラス・リケニホルミスα-アミラーゼ(Ｂ.Ｌ.；第２番目の棒)に由来する。第１番目の棒の上に、融合点が、成熟バシラス・アミロリクエファシエンスα-アミラーゼのアミノ酸配列(配列番号４)の番号付与で示されている。
【０２５６】
【図２】図２は、バシラス・リケニホルミス(Ｂ.Ｌ.)およびバシラス・アミロリクエファシエンス(Ｂ.Ａ.)のα-アミラーゼのプレタンパク質(前駆体)のアミノ酸配列のアラインメントを示す図である。  バシラス・リケニホルミスα-アミラーゼのリーダーペプチドは、２９個のアミノ酸を含み、バシラス・アミロリクエファシエンスα-アミラーゼのそれは、３１個のアミノ酸を含む。成熟タンパク質は、それぞれ４８３アミノ酸の長さである。  太字で強調されているのは、成熟タンパク質のそれぞれ第１アミノ酸、ならびに、成熟バシラス・アミロリクエファシエンスタンパク質の番号付与において、１９、３４、７６、８４、１１２、１５３、２５６および４３３位に対応するアミノ酸である。これら位置の１つおよびそれぞれ２つの下流における一方から他の配列へのスイッチ(切換え)は、それぞれ本発明の特に好ましい態様を特徴づける。
【配列表】
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【図１】
2005527640.tif 000046
【図２】
2005527640.tif 000047
【手続補正書】
【提出日】平成16年5月13日(2004.5.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2005527640000001.app
【国際調査報告】
2005527640.tif 000048
2005527640.tif 000049
2005527640.tif 000050
2005527640.tif 000051
2005527640.tif 000052
2005527640.tif 000053