(57)【要約】ＴＡＣＩレセプタ−抗体が提供される。ＴＡＣＩ抗体は製薬的組成物、製造品、又はキットに含めることができる。ＴＡＣＩ抗体を用いた治療法と診断法も提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号３のアミノ酸２から１６６を有するＴＡＣＩレセプターに特異的に結合する抗体。
【請求項２】
ＢＣＭＡレセプターに結合しない請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
モノクローナル抗体である請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
前記モノクローナル抗体がＡＴＣＣに受入番号ＰＴＡ−４２９７で寄託されているハイブリドーマにより分泌される１Ｇ１０．１．５抗体、ＡＴＣＣに受入番号ＰＴＡ−４２９８で寄託されているハイブリドーマにより分泌される５Ｂ６．３．１０抗体、又はＡＴＣＣに受入番号ＰＴＡ−４２９９で寄託されているハイブリドーマにより分泌される６Ｄ１１．３．１抗体を含む、請求項３に記載のモノクローナル抗体。
【請求項５】
ＡＴＣＣ受入番号ＰＴＡ−４２９７で寄託されているハイブリドーマ細胞系により産生される１Ｇ１０．１．５モノクローナル抗体、ＡＴＣＣ受入番号ＰＴＡ−４２９８で寄託されているハイブリドーマ細胞系により産生される５Ｂ６．３．１０抗体、又はＡＴＣＣ受入番号ＰＴＡ−４２９９で寄託されているハイブリドーマ細胞系により産生される６Ｄ１１．３．１抗体が結合するエピトープと同じエピトープに結合するモノクローナル抗体。
【請求項６】
モノクローナル抗体１Ｇ１０．１．５を産生し、ＡＴＣＣに受入番号ＰＴＡ−４２９７で寄託されているハイブリドーマ細胞系。
【請求項７】
ＡＴＣＣに受入番号ＰＴＡ−４２９７で寄託されているハイブリドーマ細胞系によって分泌されるモノクローナル抗体１Ｇ１０．１．５。
【請求項８】
モノクローナル抗体５Ｂ６．３．１０を産生し、ＡＴＣＣに受入番号ＰＴＡ−４２９８で寄託されているハイブリドーマ細胞系。
【請求項９】
ＡＴＣＣに受入番号ＰＴＡ−４２９８で寄託されているハイブリドーマ細胞系によって分泌されるモノクローナル抗体５Ｂ６．３．１０。
【請求項１０】
モノクローナル抗体６Ｄ１１．３．１を産生し、ＡＴＣＣに受入番号ＰＴＡ−４２９９で寄託されているハイブリドーマ細胞系。
【請求項１１】
ＡＴＣＣに受入番号ＰＴＡ−４２９９で寄託されているハイブリドーマ細胞系によって分泌されるモノクローナル抗体６Ｄ１１．３．１。
【請求項１２】
配列番号３のアミノ酸２から１６６を有するＴＡＣＩレセプターに結合し、ＡＴＣＣに受入番号ＰＴＡ−４２９７で寄託されたハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体の、前記ＴＡＣＩレセプターに対する結合を競合的に阻害する抗体を含む、単離された抗ＴＡＣＩレセプターモノクローナル抗体。
【請求項１３】
配列番号３のアミノ酸２から１６６を有するＴＡＣＩレセプターに結合し、ＡＴＣＣに受入番号ＰＴＡ−４２９８で寄託されたハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体の、前記ＴＡＣＩレセプターに対する結合を競合的に阻害する抗体を含む、単離された抗ＴＡＣＩレセプターモノクローナル抗体。
【請求項１４】
配列番号３のアミノ酸２から１６６を有するＴＡＣＩレセプターに結合し、ＡＴＣＣに受入番号ＰＴＡ−４２９９で寄託されたハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体の、前記ＴＡＣＩレセプターに対する結合を競合的に阻害する抗体を含む、単離された抗ＴＡＣＩレセプターモノクローナル抗体。
【請求項１５】
ＴＡＣＩポリペプチドに特異的に結合し、（ａ）ＡＴＣＣに受入番号ＰＴＡ−４２９７で寄託されたハイブリドーマにより分泌される１Ｇ１０．１．５抗体由来の配列；（ｂ）ＡＴＣＣに受入番号ＰＴＡ−４２９８で寄託されたハイブリドーマにより分泌される５Ｂ６．３．１０抗体由来の配列；又は（ｃ）ＡＴＣＣに受入番号ＰＴＡ−４２９９で寄託されたハイブリドーマにより分泌される６Ｄ１１．３．１抗体由来の配列を有するキメラ抗ＴＡＣＩ抗体。
【請求項１６】
ヒト化抗体である請求項１５に記載の抗ＴＡＣＩ抗体。
【請求項１７】
ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、及びポリオキシアルキレンからなる群から選択される１以上の非タンパク質様ポリマーに結合する、請求項１に記載の抗ＴＡＣＩレセプター抗体。
【請求項１８】
細胞障害剤又は酵素に結合する、請求項１に記載の抗ＴＡＣＩレセプター抗体。
【請求項１９】
放射性同位元素、蛍光性化合物又は化学発光性化合物に結合する、請求項１に記載の抗ＴＡＣＩレセプター抗体。
【請求項２０】
グリコシル化されている請求項１に記載の抗ＴＡＣＩレセプター抗体。
【請求項２１】
非グリコシル化されている請求項１に記載の抗ＴＡＣＩレセプター抗体。
【請求項２２】
哺乳動物細胞におけるＴＡＬＬ−１又はＴＡＣＩポリペプチドの生物学的活性を調節する方法であって、前記哺乳動物細胞をＴＡＣＩレセプター抗体の有効量に接触させることを含み、よって配列番号３のアミノ酸２から１６６を有するＴＡＣＩレセプターに対して前記抗体を特異的に結合させる方法。
【請求項２３】
ＴＡＣＩレセプターに特異的に結合し、且つＢ細胞増殖を阻害するがＴＡＣＩレセプターに対するＢＬｙＳの結合を阻害しない抗体。
【請求項２４】
モノクローナル抗体である請求項１に記載の抗体。
【請求項２５】
２００３年２月１１日にＡＴＣＣに７Ｂ６．１５．１１（受入番号ＰＴＡ−５０００）で寄託されたハイブリドーマ細胞系により産生される、請求項１に記載の抗体。
【請求項２６】
２００３年２月１１日にＡＴＣＣに７Ｂ６．１５．１１（受入番号ＰＴＡ−５０００）で寄託されたハイブリドーマ細胞系により産生される抗体が結合するエピトープと同じエピトープに結合する、請求項２４に記載のモノクローナル抗体。
【請求項２７】
２００３年２月１１日にＡＴＣＣに７Ｂ６．１５．１１（受入番号ＰＴＡ−５０００）で寄託されたハイブリドーマ細胞系により産生される抗体が結合するエピトープと同じエピトープに結合するモノクローナル抗体。
【請求項２８】
モノクローナル抗体７Ｂ６を産生し、７Ｂ６．１５．１１（受入番号ＰＴＡ−５０００）としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ細胞系。
【請求項２９】
受入番号ＰＴＡ−５０００としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体７Ｂ６。
【請求項３０】
ＴＡＣＩレセプターに結合し、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−５０００で寄託されたハイブリドーマにより産生されたモノクローナル抗体の前記ＴＡＣＩレセプターに対する結合を競合的に阻害する抗体を含む、モノクローナル抗体。
【請求項３１】
ＴＡＣＩポリペプチドに特異的に結合し、受入番号ＰＴＡ−５０００としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマにより産生される抗体の可変領域由来の配列を有するモノクローナル抗体。
【請求項３２】
キメラ抗体である請求項３１に記載の抗体。
【請求項３３】
ヒト化抗体である請求項３１に記載の抗体。
【請求項３４】
ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、及びポリオキシアルキレンからなる群から選択される１以上の非タンパク質様ポリマーに結合する、請求項２３、２６、３０、及び３１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３５】
細胞障害剤又は酵素に結合する、請求項２３、２６、３０、及び３１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３６】
放射性同位元素、蛍光性化合物又は化学発光性化合物に結合する、請求項２３、２６、３０、及び３１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３７】
グリコシル化されている、請求項２３、２６、３０、及び３１のいずれか１項に記載の抗体の抗体。
【請求項３８】
非グリコシル化形態である、請求項２３、２６、３０、及び３１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３９】
哺乳動物細胞におけるＴＡＣＩポリペプチド生物学的活性を調節する方法であって、前記哺乳動物細胞を請求項２３、２６、３０、及び３１のいずれか１項に記載の抗体にさらすことを含む方法。
【請求項４０】
ＡＴＣＣに受入番号ＰＴＡ−４９９９で寄託された４Ｃ７．２．１ハイブリドーマ細胞系により産生される抗体が結合するエピトープと同じエピトープに結合するモノクローナル抗体。
【請求項４１】
受入番号ＰＴＡ−４９９９としてＡＴＣＣに寄託された４Ｃ７．２．１ハイブリドーマ細胞系。
【請求項４２】
受入番号ＰＴＡ−４９９９としてＡＴＣＣに寄託された４Ｃ７．２．１ハイブリドーマにより分泌されるモノクローナル抗体。
【請求項４３】
ＴＡＣＩポリペプチドに特異的に結合し、受入番号ＰＴＡ−４９９９としてＡＴＣＣに寄託された４Ｃ７．２．１ハイブリドーマにより分泌される抗体の可変領域由来の配列を有するキメラ抗ＴＡＣＩ抗体。
【請求項４４】
ヒト化抗体である請求項４３に記載の抗ＴＡＣＩ抗体。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
発明の分野
本発明は、一般に、TACI抗体、並びにTACI、腫瘍壊死因子（TNF）及び、TNFとTNFRファミリ−のメンバ−で、TALL-1、APRIL、TACI、BR３、及びBCMAと呼ばれるものを含むTNFR関連分子等の活性を調節するためのTACI抗体の使用法に関する。本発明はまた、そのようなTNF及びTNFR関連分子により起こる病理的状態または哺乳動物細胞の、インビトロ、インサイツ、及び／又はインビボでの診断及び／又は治療に関する。
【０００２】
発明の背景
様々な分子、例えば腫瘍壊死因子−アルファ(「TNF−α」)、腫瘍壊死因子−ベ−タ(「TNF−β」又は「リンホトキシン−アルファ」)、リンホトキシン−ベ−タ(「ＬＴ−ベ−タ」)、CD30リガンド、CD27リガンド、CD40リガンド、OX-40リガンド、4-1BBリガンド、Apo-1リガンド(Ｆａｓリガンド又はCD９５リガンドとも称される)、Apo-2リガンド(Apo2L又はTRAILとも称される)、Apo-3リガンド(TWEAKとも称される)、APRIL、OPGリガンド(RANKリガンド、ODF又はTRANCEとも称される)、及びTALL-1(B1yS、BAFF又はTHANKとも称される)は、サイトカインの腫瘍壊死因子(「TNF」)ファミリ−のメンバ−として同定されている［例えば、Gruss及びDower, Blood, 85：3378−3404(1995)；Schmidら, Proc. Natl. Acad. Sci., 83：1881(1986)；Dealtryら, Eur. J. Immunol., 17：689(1987)；Pittiら, J. Biol. Chem., 271：12687−12690(1996)；Wileyら, Immunity, 3：673−682(1995)；Browning等, Cell, 72：847−856 (1993)；Armitage等, Nature, 357：80−82 (1992)、1997年1月16日に公開された国際公開第97/01633号；1997年７月17日に公開された国際公開第97/25428号；Marstersら, Curr. Biol., 8：525−528(1998)；Chicheporticheら, Biol. Chem., 272：32401−32410(1997)；Hahneら, J. Exp. Med., 188：1185−1190(1998)；1998年7月2日に公開された国際公開第98/28426号；1998年10月22日に公開された国際公開第98/46751号；1998年5月7日に公開された国際公開第98/18921号；Mooreら, Science, 285：260−263(1999)；Shuら, J. Leukocyte Biol., 65：680(1999)；Schneiderら, J. Exp. Med., 189：1747−1756(1999)；Mukhopadhyayら, J. Biol. Chem., 274：15978−15981(1999)を参照のこと］。これらの分子のなかでも、TNF−アルファ、TNF−ベ−タ、CD30リガンド、4-1BBリガンド、Apo-1リガンド、Apo-2リガンド(Apo2L／TRAIL)及びApo-3リガンド(TWEAK)は、アポト−シス性細胞死に関与していることが報告されている。
【０００３】
TNFファミリーの様々な分子も免疫系の機能又は発達に関与していると言われている（Gruss他、Blood, 85:3378, 1995年）。Zheng他は、TNF-αが刺激作用後のCD8陽性Ｔ細胞のアポトーシスに関与していることを報告している（Zheng他, Nature, 377:348-351, 1995年）。他の研究者によってCD30リガンドが、胸腺の自己反応性Ｔ細胞の欠失に関与している可能性があることが報告されている（Amakawa他, Cold Spring Harbor Laboratory Symposium on Programmed Cell Death, Abstr. No. 10, 1995年）。CD40リガンドは、増殖、免疫グロブリン分泌、および生存を含め、Ｂ細胞の多くの機能を活性化する（Renshaw他, J. Exp. Med., 180:1889, 1994年）。最近同定された別のTNFファミリーのサイトカインであるTALL-1（BlyS）は、特定の条件下で、Ｂ細胞の増殖および免疫グロブリン分泌を誘発するということが報告されている（Moore他、上掲; Schneider他、上掲; Mackay他, J. Exp. Med., 190:1697, 1999年; Shu他、J. Leukocyte Biol., 65:680-683 (1999); Gross他、Nature, 404:995-999 (2000)）。
マウスFas/Apo-1レセプターまたはリガンド遺伝子の突然変異体（それぞれｌｐｒおよびｇｌｄと呼ばれる）は、Apo-1 リガンドが末梢の自己反応性リンパ球のクローン欠失の制御に関与している可能性を含め、いくつかの自己免疫疾患に関連付けられてきた（Krammer他, Curr. Op. Immunol., 6:279-289, 1994年; Nagata他, Science, 267:1449-1456, 1995年）。 Apo-1リガンドはまた、CD4陽性Ｔリンパ球およびＢリンパ球に、刺激後アポトーシスを誘発することが報告されており、またその機能が不要になったときに活性化リンパ球の消失に関与している可能性がある（Krammer他、上掲; Nagata他、上掲）。Apo-1レセプターに特異的に結合するアゴニストマウスモノクローナル抗体は、TNF-αに相当する、またはTNF-αに類似の、細胞死活性を示すことが報告されている（Yonehara他, J. Exp. Med., 169:1747-1756, 1989年）。
【０００４】
OPGリガンドと呼ばれるTNF関連リガンド（RANKリガンド、TRANCE、またはODFとも呼ばれる）は、特定の免疫制御活性にある程度関与していることが文献に報告されている。1998年７月2日公開のWO98/28426は、２型膜貫通タンパク質である可溶形態のリガンド（その文献ではRANKリガンドと称する）が、樹状細胞の成熟を促し、CD1a+樹状細胞の、MLRにおけるallo-刺激能力を増強し、インビトロにおいてTGF-βの存在下で生存能力のあるヒト抹消血Ｔ細胞の数を向上させることが明らかになったことを開示している（加えてAnderson他, Nature, 390:175-179, 1997年参照）。WO98/28426にも、リガンドは１マクロファージ腫瘍細胞系（RAW264.7と呼ばれる; ATCC TIB71）によるTNF-αの生産を向上させたが、それら腫瘍細胞による酸化窒素の生産を刺激することはなかったことが開示されている。
樹状細胞の活性の調節（例えば、Wong他, J. Exp. Med., 186:2075-2080, 1997年; Wong他, J. Leukocyte Biol., 65:715-724, 1999年; Josien他, J. Immunol., 162:2562-2568, 1999年; Josien他, J. Exp. Med., 191495-501, 2000年参照）および免疫応答におけるＴ細胞活性への作用（例えば、Bachmann他, J. Exp. Med., 189:1025-1031, 1999年; Green他, J. Exp. Med., 189:1017-1020, 1999年参照）にOPGリガンド/TRANCE/ODFが関与していると推定されることが文献で述べられている。Kong他, Nature, 397:315-323, 1999年には、破壊されたopgl遺伝子を有するマウスが、重症の骨粗鬆症を示し、破骨細胞が欠如し、ＴおよびＢリンパ球の早期分化の欠損を示したことが報告されている。Kongらは、さらに、インビボにおけるＴ細胞の系統的活性が、OPGLが媒介する破骨細胞発生および骨の喪失の増大を引き起こしたと報告している（Kong他, Nature, 402:304-308, 1999年）。
【０００５】
TNFファミリーのサイトカインによって媒介されるこれら様々な細胞反応の誘導は、それらが特定の細胞レセプターに結合することにより開始されると考えられる。以前に、約55-kDaおよび75-kDaの、２つの異なるTNFレセプター（それぞれTNFR1とTNFR2）が同定された（Hohman他, J. Biol. Chem., 264:14927-14934, 1989年; Brockhaus他, Proc. Natl. Acad. Sci., 87:3127-3131, 1990年; EP417,563, 1991年3月20日公開; Loetscher他, Cell, 61:351, 1990年; Schall他, Cell, 61:361, 1990年; Smith他, Science, 248:1019-1023, 1990年; Lewis 他., Proc. Natl. Acad. Sci., 88:2830-2834, 1991年; Goodwin他, Mol. Cell. Biol., 11:3020-3026, 1991年）。これらTNFRは、細胞外領域、膜貫通領域および細胞内領域を含め、細胞表面レセプターの典型的な構造を共有していることが分かった。両レセプターの細胞外の部分はまた、天然において可溶性TNF結合タンパク質であった（Nophar, Y.他, EMBO J., 9:3269 1990年; Kohno, T. 他, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 87:8331, 1990年; Hale 他, J. Cell. Biochem. Supplement 15F, 1991年, p. 113 (P424)）。
１および２型TNFRの細胞外領域（TNFR1およびTNFR2)は、ＮＨ２末端から始まり１から４までの番号で表される４つのシステインリッチドメイン（CRD）からなる、反復したアミノ酸配列パターンを有する。（Schall他、上掲; Loetscher他、上掲; Smith他、上掲; Nophar他、上掲; Kohno他、上掲; Banner他, Cell, 73:431-435, 1993年）。他の複数の細胞表面タンパク質には、同じようなCRDの反復パターンが存在し、それらタンパク質には、p75神経成長因子レセプター（NGFR）（Johnson他, Cell, 47:545, 1986年; Radeke他, Nature, 325:593, 1987年)、Ｂ細胞抗原CD40（Stamenkovic他, EMBO J., 8:1403, 1989年）、Ｔ細胞抗原OX40（Mallet 他., EMBO J., 9:1063, 1990年）、およびFas抗原（Yonehara他、上掲、およびItoh他, Cell, 66:233-243, 1991年）が含まれる。CRDはまた、ショープおよび粘液種ポックスウイルスの可溶性TNFR（sTNFR）様Ｔ２タンパク質 にも見られる（Upton他, Virology, 160:20-29, 1987年; Smith他, Biochem. Biophys. Res. Commun., 176:335, 1991年; Upton他, Virology, 184:370, 1991年）。これら配列のアラインメントが最適であることは、サイトカイン残基の位置がよく保存されていることを示す。これらレセプターを、集合的に、TNF／NGFレセプタースーパーファミリーのメンバーと称することがある。
【０００６】
今日までに同定されているリンフォトキシン−α以外のTNFファミリーのリガンドは、一般に、２型膜貫通タンパク質であり、そのＣ末端は細胞外にある。対照的に、今日までに同定されているTNFレセプター（TNFR）ファミリーは、通常１型膜貫通タンパク質である。しかしながら、TNFリガンドファミリーとレセプターファミリーの両方において、ファミリーメンバー間に同定される相同性は主に細胞外ドメイン（「ECD」）で見つかっている。TNF−α、Apo-1リガンドおよびCD40リガンドを含むTNFファミリーサイトカインのいくつかは、細胞表面においてタンパク分解的に切断されている。いずれの場合も、結果として得られるタンパク質は、通常、可溶性サイトカインとして機能するホモ三量体分子を形成する。TNFレセプターファミリーのタンパク質はまた、通常タンパク分解的に切断されており、よって同族サイトカインの抑制因子として機能できる可溶性レセプターECDを放出する。
RANKと呼ばれるTNFRファミリーのメンバーは、OPGリガンドのレセプターとして同定されている（1998年7月2日公開WO98/28426; Anderson他, Nature, 390:175-179, 1997年; Lacey他, Cell, 93:165-176, 1998年)。OPG（FDCR-1またはOCIF）と呼ばれる別のTNFR関連分子もOPGリガンドのレセプターとして同定されている（Simonet他, Cell, 89:309, 1997年; Yasuda他, Endocrinology, 139:1329, 1998; Yun他, J. Immunol., 161:6113-6121, 1998年）。Yun他（上掲）は、OPG/FDCR-1/OCIFは膜結合形態と分泌形態の両方で発現し、樹状細胞、EBV形質転換Ｂ細胞系、および扁桃Ｂ細胞を含む免疫系の細胞内において限定的な発現パターンを有することを開示している。Yun他はまた、Ｂ細胞および樹状細胞におけるOPG/FDCR-1/OCIFの発現は、Ｂ細胞の活性に関与する分子であるCD40によって上方制御することが可能であることを開示している。しかしながら、Yun他は、OPG/FDCR-1/OCIFが免疫応答の制御においてどのように機能するかは不明であるとしている。
【０００７】
さらに最近になって、TNFRファミリーの他のメンバーが同定された。von Bulowらによる、Science, 278:138-141, 1997年には、膜貫通活性化体およびCAML相互作用因子（CAML-Interactor）または「TACI」と呼ばれる原形質膜レセプターが記載されている。TACIレセプターは、TNFRファミリーの特徴であるシステインリッチモチーフを持つことが報告されている。インビボアッセイでは、形質移入されたJurkat細胞表面上のTACIと、TACIに特異的な抗体との架橋により、NF-KBの活性が起こった（1998年9月18日公開WO 98/39361も参照のこと）。TACIノックアウトマウスが応答性亢進Ｂ細胞を持つことが報告されている一方、TNFRヌルマウスは識別可能な表現型を持たなかった（Yan他、Nature Immunology, 2:638-643 (2001); von Bulow他、Immunity, 14:573-582 (2001); Xu他、Mol. Cell. Biology, 21:4067-4074 (2001)）。また、2000年7月13日公開のWO00/40716; 2001年11月15日公開のWO01/85782も参照のこと。
Laabiら（EMBO J., 11:3897-3904, 1992年）は、発現時期がＢ細胞末端の成熟と一致していることが分かった「BCM」と呼ばれる新規遺伝子の同定について報告している。BCMの正常cDNAのオープンリーディングフレームは、単一の膜貫通ドメインを有する１８４アミノ酸長ポリペプチドを予測した。この遺伝子は後に「BCMA」と名付けられた（Laabi他, Nucleic Acids Res., 22:1147-1154, 1994年）。BCMA mRNAの発現は、前Ｂリンパ球段階を示すヒト悪性Ｂ細胞系には無く、よってリンパ球の分化段階に関係していると考えられる（Gras他, Int. Immunology, 7:1093-1106, 1995年）。Madryらによる Int. Immunology, 10:1693-1702,（1998年）には、マウスBCMA cDNAのクローニングが記載されている。マウスBCMA cDNAは、ヒトBCMAポリペプチドに対して６２％の同一性を有する１８５アミノ酸長のポリペプチドをコードすることが報告されている。マウスおよびヒトBCMAタンパク質の配列のアラインメントにより、Ｎ末端領域に６つの保存されたモチーフが存在することが明らかになった。これは、BCMAタンパク質がTNFRスーパーファミリーに属することを示している（Madry他, 上掲）。2000年11月16日公開のWO00/68378; 2000年8月31日公開のWO00/50633も参照のこと。
【０００８】
Tall-1（BlyS）リガンドはTACI及びBCMAレセプターに結合することが報告されている（Gross他、上掲（2000）; Thompson他、J. Exp. Med., 192:129-135 (2000); Yan他、上掲（2000）; Marsters他、Curr. Biol., 10:785-758 (2000); 2000年7月13日公開のWO00/40716; 2000年11月9日公開のWO00/67034; 2001年2月22日公開のWO01/12812）。TACI及びBCMAは、同様に、Aprilとして知られるリガンドに結合することが報告されている。
Marstersらによる、Curr. Biol., 6:750 (1996年) には、Apo-3と呼ばれる完全長天然配列のヒトポリペプチドが記載されている。それは細胞外システインリッチ反復の点でTNFRファミリーに対して類似性を示し、細胞質のデスドメイン配列を有する点でTNFR１およびCD95に類似している（Marsters他, Curr. Biol., 6:1669, 1996年も参照のこと）。Apo-3はまた、DR３、ｗｓｌ−１、TRAMP、およびLARDと呼ばれることもある（Chinnaiyan他, Science, 274:990, 1996年; Kitson他, Nature, 384:372, 1996年; Bodmer他, Immunity, 6:79 (1997); Screaton 他, Proc. Natl. Acad. Sci., 94:4615-4619, 1997年）。
【０００９】
Panらにより、「DR4」と呼ばれる別のTNFレセプターファミリーのメンバーが開示されている（Pan他, Science, 276:111-113, 1997年; ならびに1998年７月30日公開のWO98/32856を参照）。このDR4は、細胞自殺機構に関与可能な細胞質のデスドメインを有することが報告されている。Panらにより、DR4は、Apo2L/TRAIL として知られるリガンドのレセプターと考えられることが開示されている。
SheridanらによるScience, 277:818-821（1997年）およびPanらによるScience, 277:815-818（1997年）には、Apo2L/TRAILのレセプターと考えられる別の分子が開示されている（1998年11月19日公開のWO98/51793; 1998年9月24日公開のWO98/41629も参照）。この分子はDR5と称される（あるいは、Apo-2; TRAIL-R, TR6, Tango-63, hAPO8, TRICK2またはKILLERとも称される）（Screaton他, Curr. Biol., 7:693-696, 1997年; Walczak他, EMBO J., 16:5386-5387, 1997年; Wu他, Nature Genetics, 17:141-143, 1997年; 1998年8月20日公開のWO98/35986; 1998年10月14日公開のEP870,827; 1998年10月22日公開のWO98/46643; 1999年1月21日公開のWO99/02653; 1999年2月25日公開のWO99/09165; 1999年3月11日公開のWO99/11791 参照）。DR4と同様に、DR5は細胞質のデスドメインを有し、アポトーシスの信号を出すことができると報告されている。Apo-2L/TRAILとDR5の間に形成された複合体の結晶構造が、HymowitzらによるMolecular Cell, 4:563-571(1999年)に記載されている。
【００１０】
デスドメインを含むさらに別のレセプターであるDR6が最近同定された（Pan他, FEBS Letters, 431:351-356, 1998年）。４つの推定のシステインリッチ細胞外ドメイン、および１つの細胞質のデスドメインを含む他に、DR6は、細胞質領域のプロリンに富むモチーフと重複する推定上のロイシン−ジッパー配列を含むと考えられる。プロリンに富むモチーフは、src-相同-3ドメインに結合する配列と類似しており、多くの細胞内シグナル伝達分子に見出される。上述したデスドメインを含む他のレセプターと対照的に、DR6は、アポトーシスに敏感な指標細胞株MCF-7に細胞死を誘発しない。これはこのレセプターの別の機能を示すものである。このような観察から、DR6は、現在、活性化した死レセプターからの下流のシグナル伝達を媒介する、FADD, RAIDD及びRIPなどのデスドメインを含むアダプター分子と関連していないと考えられている（Pan他, FEBS Lett., 431:351, 1998年）。
最近同定されたレセプターのさらなるグループは、「デコイレセプター」と呼ばれるもので、シグナル伝達分子というよりはむしろ抑制因子として機能すると考えられている。このグループは、共に細胞表面分子であるDCR1（TRID, LITまたはTRAIL-R3とも呼ばれる)（Pan他, Science, 276:111-113, 1997年; Sheridan他, Science, 277:818-821, 1997年; McFarlane他, J. Biol. Chem., 272:25417-25420, 1997年; Schneider他, FEBS Letters, 416:329-334, 1997年; Degli-Esposti他, J. Exp. Med., 186:1165-1170, 1997年; およびMongkolsapaya他, J. Immunol., 160:3-6, 1998年）およびDCR2（TRUNDDまたはTRAIL-R4とも呼ばれる）（Marsters他, Curr. Biol., 7:1003-1006, 1997年; Pan他, FEBS Letters, 424:41-45, 1998年; Degli-Esposti他, Immunity, 7:813-820, 1997年）、ならびに、共に分泌性の可溶タンパク質である、OPG（Simonet他, 上掲; Emery他、下掲）およびDCR3（Pitti他, Nature, 396:699-703, 1998年）を含む。
【００１１】
これらに加えて新規に同定されたTNFRファミリーのメンバーには、CAR1、HVEM、GITR、ZTNFR-5、NTR-1、およびTNFL1が含まれる（Brojatsch他, Cell, 87:845-855, 1996年; Montgomery他, Cell, 87:427-436, 1996年; Marsters他, J. Biol. Chem., 272:14029-14032, 1997年; Nocentini他, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:6216-6221, 1997年; Emery他, J. Biol. Chem., 273:14363-14367, 1998年; 1999年1月28日のWO99/04001; 1999年2月18日公開のWO99/07738; 1999年7月8日公開のWO99/33980 ）。
Tewariらにより最近概説されているように、 TNFR1、TNFR2およびCD40は 、転写因子であるNF-κBの活性を通じて炎症誘発性サイトカインおよび同時刺激性サイトカイン、サイトカインレセプター、および細胞接着分子の発現を調節する（Tewari他, Curr. OP Genet. Develop., 6:39-44, 1996年）。NF-κBは、サブユニットに保存Rel領域を含む二量体転写因子のファミリーの原型である（Verma他, Genes Develop., 9:2723-2735, 1996年; Baldwin, Ann. Rev. Immunol., 14:649-681, 1996年）。その潜伏形態において、NF-κBはIκB抑制因子ファミリーのメンバーと複合する。特定の刺激に対してIκBが非活性化されると、放出されたNF-κBは、特定のDNA配列に結合する核に転座し、遺伝子転写を活性化する。上述したように、今日までに同定されているTNFRのメンバーは、細胞内デスドメインの領域を含むか、または欠いている。デスドメインを欠く一部のTNFR分子、例えばTNFR2、CD40、HVEM、およびGITRは、NF-κB活性を調節することができる（例えば、Lotz他, J. Leukocyte Biol., 60:1-7, 1996年参照）。
TNFファミリーのサイトカインおよびそれらのレセプターに関する概説については、AshkenaziおよびDixit, Science, 281:1305-1308, 1998年; Golstein, Curr. Biol., 7:750-753, 1997年; Gruss and Dower, 上掲, Nagata, Cell, 88:355-365、1997年; およびLocksley他, Cell, 104:487-501 (2001); Wallach, TNF Ligand & TNF/NGF Receptor Families, Cytokine Reference, Academic Press, pp.371-411 (2001)を参照のこと。
【００１２】
発明の概要
本発明は、TACI抗体及びTACI抗体の使用法を提供する。抗体は、アンタゴニスト又はアゴニストとして作用し得、中でも、TALL-1、APRIL、TACI、BCMA、TACIs、又はBR3の存在（又は不在）により生じる病理的状態又は哺乳動物細胞の、インビトロ、インサイツ、又はインビボでの診断又は治療に用途を見出すことができる。
本発明の好ましい実施形態は、ヒトTACIに特異的に結合でき、及び／又はTACI及び／又はそのリガンドに関連する生物学的活性を調節でき、よって免疫関連疾患などの様々な疾病及び病理的状態の治療に有用である抗TACI抗体を含む。
【００１３】
本発明の一実施形態では、抗TACI抗体はTACIを活性化する。別の実施形態では、抗TACI抗体は、BlySのTACIへの結合を遮断しながら、又は遮断することなく、B細胞増殖又は生存を阻害する。別の実施形態では、本発明は、TALL-1又はAprilとTACIの間の相互作用を遮断又は中和するためのTACI抗体の使用法を提供する。このようなアンタゴニストは、TALL-1とTACI及び／又はBCMAの間の相互作用を遮断又は中和することもできる。例えば、本発明は、TALL-1リガンド又はTACIレセプターの活性を低減、中和又は遮断するのに有効な量の１以上のＴＡＣＩ抗体に対し、哺乳動物細胞、例えば白血球（好ましくはＢ細胞）、を接触させることからなる方法を提供する。細胞は細胞培地又は哺乳動物、たとえば免疫関連疾患又は癌に罹患している哺乳動物から採取したものでよい。
本発明の典型的な方法は、TALL-1又はAPRILの発現及び／又は活性の増大に関連して、又はその結果、哺乳動物に生じた病理的状態又は疾病を治療する方法を含む。治療法では、好ましくはTALL-1リガンド及び／又はAPRILリガンドによる活性又はレセプター結合をそれぞれ低減又は遮断するTACI抗体を投与する。選択的に、本方法に使用されるTACI抗体は、TALL-1とAPRIL両方の活性を遮断又は中和できるもの、例えばTALL-1とAPRIL両方の活性を遮断又は中和する二重アンタゴニストでもよい。選択的に、本方法に使用されるアンタゴニスト分子は、TALL-1の活性を遮断又は中和できるが、APRILについてはできないものである。本方法は、1種類のアンタゴニスト分子又は２種類以上のアンタゴニストの組合せを考慮する。
【００１４】
本発明はまた、TACI抗体を含む組成物を提供する。場合によっては、本発明の組成物は製薬的に許容可能な担体又は希釈剤を含む。好ましくは、本組成物は、病理的状態又は疾病を治療するのに治療的に有効な量の１以上のTACI抗体を含む。
本発明はまたは、1以上のTACI抗体を含む製造品及びキットを提供する。
【００１５】
具体的な実施形態では、配列番号３のアミノ酸２〜１６６を含むTACIレセプターに特異的に結合する抗体が提供される。選択的に、抗体はBCMAレセプターに結合しないモノクローナル抗体である。選択的に、モノクローナル抗体は、ACTTに受入番号PTA-4297で寄託されているハイブリドーマにより分泌される１G10.1.5抗体、ACTTに受入番号PTA-4298で寄託されているハイブリドーマにより分泌される5B6.3.10抗体、又はACTTに受入番号PTA-4299で寄託されているハイブリドーマにより分泌される6D11.3.1抗体を含む。
更に、ACTTに受入番号PTA-4297で寄託されているハイブリドーマ細胞系により産生される１G10.1.5モノクローナル抗体、ACTTに受入番号PTA-4298で寄託されているハイブリドーマ細胞系により産生される5B6.3.10モノクローナル抗体、又はACTTに受入番号PTA-4299で寄託されているハイブリドーマ細胞系により産生される6D11.3.1モノクローナル抗体、ACTTに受入番号PTA-5000で寄託されている7B6.15.11ハイブリドーマ細胞系により産生される抗体、又はACTTに受入番号PTA-4999で寄託されている４C7.2.1ハイブリドーマにより産生される抗体が結合するエピトープと同じエピトープに結合するモノクローナル抗体が提供される。
【００１６】
また別の特定の実施形態では、ATCCに受入番号PTA-4297で寄託された、モノクローナル抗体１G10.1.5を産生するハイブリドーマ細胞系（モノクローナル抗体１G10.1.5はATCCに受入番号PTA-4297で寄託されたハイブリドーマにより分泌される）、ATCCに受入番号PTA-4298で寄託された、モノクローナル抗体5B6.3.10を産生するハイブリドーマ細胞系（モノクローナル抗体5B6.3.10はATCCに受入番号PTA-4298で寄託されたハイブリドーマにより分泌される）、ATCCに受入番号PTA-4299で寄託された、モノクローナル抗体6D11.3.1を産生するハイブリドーマ細胞系（モノクローナル抗体6D11.3.1はATCCに受入番号PTA-4299で寄託されたハイブリドーマにより分泌される）、ATCCに受入番号PTA-4297で寄託された、モノクローナル抗体G10.1.5を産生するハイブリドーマ細胞系（モノクローナル抗体G10.1.5はATCCに受入番号PTA-4297で寄託されたハイブリドーマにより分泌される）、ATCCに受入番号PTA-5000で寄託された、モノクローナル抗体を産生する7B6.15.11ハイブリドーマ細胞系（モノクローナル抗体はATCCに受入番号PTA-5000で寄託された7B.15.11ハイブリドーマにより産生される）、及びATCCに受入番号PTA-4999で寄託された、モノクローナル抗体を産生する4C7.2.1ハイブリドーマ細胞系（モノクローナル抗体はATCCに受入番号PTA-4999で寄託された4C7.2.1ハイブリドーマにより産生される）が提供される。
更に、配列番号３のアミノ酸２〜１６６を含むTACIレセプターに結合し、ATCC  PTA-4297で寄託されたハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体の前記TACIレセプターに対する結合を競合的に阻害する抗体を含む、単離された抗TACIレセプターモノクローナル抗体、配列番号３のアミノ酸２〜１６６を含むTACIレセプターに結合し、ATCC  PTA-4298で寄託されたハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体の前記TACIレセプターに対する結合を競合的に阻害する抗体を含む、単離された抗TACIレセプターモノクローナル抗体、及び、配列番号３のアミノ酸２〜１６６を含むTACIレセプターに結合し、ATCC  PTA-4299で寄託されたハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体の前記TACI抗体に対する結合を競合的に阻害する抗体を含む、単離された抗TACIレセプターモノクローナル抗体が提供される。
【００１７】
また別の実施形態では、抗体は、(a)ATCCに受入番号PTA-4297で寄託されたハイブリドーマにより分泌される1G10.1.5抗体由来の配列、(b) ATCCに受入番号PTA-4298で寄託されたハイブリドーマにより分泌される5B6.3.10抗体由来の配列、(c) ATCCに受入番号PTA-4299で寄託されたハイブリドーマにより分泌される6D11.3.1抗体由来の配列、(d) ATCCに受入番号PTA-5000で寄託された7B6.15.11ハイブリドーマにより分泌される抗体由来の配列、又は(e) ATCCに受入番号PTA-4999で寄託された4C7.2.1ハイブリドーマにより分泌される抗体由来の配列を含み、TACIポリペプチドに特異的に結合するキメラ抗TACI抗体である。
別の実施形態では、抗TACIレセプター抗体は、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、及びポリオキシアルキレンからなる群から選択される１以上の非タンパク質様ポリマー、或いは細胞障害剤又は酵素、或いは放射性同位体、蛍光化合物又は化学発光化合物に結合する。
【００１８】
発明の詳細な記載
１．定義
ここで用いられる場合、「ＢＲ３」又は「ＢＲ３ポリペプチド」又は「ＢＲ３レセプター」という用語は、「天然配列ＢＲ３ポリペプチド」及び「ＢＲ３変異体」（ここでさらに定義される）を含む。「ＢＲ３」は図６に示されるポリヌクレオチド配列及びその変異体もしくは断片を含む核酸分子、図６に示される配列及びその変異体並びに前述の断片を含む核酸分子によってコードされるこれらのポリペプチドに対して与えられた名称である。本発明のＢＲ３ポリペプチドは、ヒト組織タイプ又は他のソース由来のような、種々のソースから単離され、組換体及び／又は合成的な方法によって調製される。
「天然配列」ＢＲ３ポリペプチドは、天然由来の対応するＢＲ３ポリペプチドと同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。このような天然配列ＢＲ３ポリペプチドは、自然から単離することもできるし、組換体及び／又は合成手段により生産することもできる。「天然配列ＢＲ３ポリペプチド」という用語には、特に、ポリペプチドの自然に生じる切断又は分泌形態（例えば、細胞外ドメイン配列）、自然に生じる変異形態(例えば、選択的にスプライシングされた形態)及び自然に生じる対立遺伝子変異体が含まれる。本発明のＢＲ３ポリペプチドは、図６Ｂ（配列番号１６）のアミノ酸残基１−１８４の隣接する配列を含むか又はそれから構成されるＢＲ３ポリペプチド、及び2002年3月28日公開のWO02/24909に開示されたポリペプチド（「ＢＡＦＦ−Ｒ」と呼ばれる）を包含する。
【００１９】
ＢＲ３「細胞外ドメイン」又は「ＥＣＤ」は、膜貫通及び細胞質ドメインを実質的に有しないＢＲ３ポリペプチドの形態を意味する。通常、ＢＲ３ポリペプチドＥＣＤは、それらの膜貫通及び／又は細胞質ドメインを約１％未満、好ましくはそのようなドメインを約０．５％未満しか持たない。本発明のＢＲ３ポリペプチドについて同定された任意の膜貫通ドメインは、疎水性ドメインのその型を同定するために当該分野において日常的に使用される基準に従い同定されることが理解されるであろう。膜貫通ドメインの厳密な境界は変わり得るが、最初に同定されたドメインのいずれかの末端から約５アミノ酸を越えない可能性が高い。ＢＲ３のＥＣＤ形態は、図６Ｂのアミノ酸１−７７又は２−６２から構成されるものを含む。
「ＢＲ３変異体」とは、図６に示す核酸分子又はその特定化された断片によってコードされるＢＲ３ポリペプチドと、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８１％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８２％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８３％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８４％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８６％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８７％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８８％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８９％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９１％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９２％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９３％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９４％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９６％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９８％のアミノ酸配列同一性、そして、さらにより好ましくは少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有している。ＢＲ３変異体ポリペプチドは、天然ＢＲ３ポリペプチド配列は含まない。通常、ＢＲ３変異体ポリペプチドは少なくとも約１０アミノ酸長、しばしば少なくとも約２０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約３０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約４０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約５０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約６０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約７０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約８０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約９０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約１００アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約１５０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約２００アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約２５０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約３００アミノ酸長、又はそれ以上である。
【００２０】
ここで用いられる場合、「ＴＡＣＩ」又は「ＴＡＣＩポリペプチド」又は「ＴＡＣＩレセプター」という用語は、「天然配列ＴＡＣＩポリペプチド」及び「ＴＡＣＩ変異体」（ここでさらに定義される）を含む。「ＴＡＣＩ」は図１に示されるポリヌクレオチド配列及びその変異体もしくは断片を含む核酸分子、図１に示される配列及びその変異体断片並びに前述の断片を含む核酸分子によってコードされるこれらのポリペプチドに対して与えられた名称である。本発明のＴＡＣＩポリペプチドは、ヒト組織タイプ又は他のソース由来のような、種々のソースから単離され、組換体及び／又は合成的な方法によって調製される。
「天然配列」ＴＡＣＩポリペプチドは、天然由来の対応するＴＡＣＩポリペプチドと同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。このような天然配列ＴＡＣＩポリペプチドは、自然から単離することもできるし、組換体及び／又は合成手段により生産することもできる。「天然配列ＴＡＣＩポリペプチド」という用語には、特に、ＴＡＣＩポリペプチドの自然に生じる切断又は分泌形態（例えば、細胞外ドメイン配列）、自然に生じる変異形態(例えば、選択的にスプライシングされた形態)及びＴＡＣＩポリペプチドの自然に生じる対立遺伝子変異体が含まれる。本発明のＴＡＣＩポリペプチドは、限定はしないが、von Bulow等, 上掲及び1998年9月11日に発行されたＷＯ９８／３９３６１に記述されたポリペプチド、スプライス変異体（上述にて「ｈＴＡＣＩ（２６５）」と称され、図１Ｃ（配列番号１７）に示される）、Ｆｉｇｓ．１（配列番号３）の１−２９３アミノ酸残基の隣接する配列を含むＴＡＣＩポリペプチド、及び2000年7月13日公開のWO00/40716及び2001年11月15日公開のWO01/85782に開示されたポリペプチドを包含する。
【００２１】
ＴＡＣＩ「細胞外ドメイン」又は「ＥＣＤ」は、膜貫通及び細胞質ドメインを実質的に有しないＴＡＣＩポリペプチドの形態を意味する。通常、ＴＡＣＩポリペプチドＥＣＤは、それらの膜貫通及び／又は細胞質ドメインを約１％未満、好ましくはそのようなドメインを約０．５％未満しか持たない。本発明のＴＡＣＩポリペプチドについて同定された任意の膜貫通ドメインは、疎水性ドメインのその型を同定するために当該分野において日常的に使用される基準に従い同定されることが理解されるであろう。膜貫通ドメインの厳密な境界は変わり得るが、最初に同定されたドメインのいずれかの末端から約５アミノ酸を越えない可能性が高い。ＴＡＣＩのＥＣＤ形態はvon Bulow等, 上掲及び1998年9月11日に発行されたＷＯ９８／３９３６１に記載されるものを含む。
「ＴＡＣＩ変異体」とは、全長天然配列ＴＡＣＩ又はＴＡＣＩ ＥＣＤと、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有するＴＡＣＩポリペプチドを意味する。このようなＴＡＣＩ変異体ポリペプチドには、例えば、全長天然アミノ酸配列のＮ-及び／又はＣ-末端、並びに一又は複数の内部ドメインにおいて１つ又は複数のアミノ酸残基が付加、もしくは欠失されたＴＡＣＩポリペプチドが含まれる。ＴＡＣＩ ＥＣＤの断片も考慮される。通常、ＴＡＣＩ変異体ポリペプチドは、図１に示される核酸分子又はその特定化された断片によってコードされるＴＡＣＩポリペプチドと、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８１％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８２％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８３％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８４％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８６％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８７％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８８％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８９％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９１％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９２％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９３％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９４％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９６％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９８％のアミノ酸配列同一性、そして、さらにより好ましくは少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有している。ＴＡＣＩ変異体ポリペプチドは、天然ＴＡＣＩポリペプチドは含まない。通常、ＴＡＣＩ変異体ポリペプチドは少なくとも約１０アミノ酸長、しばしば少なくとも約２０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約３０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約４０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約５０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約６０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約７０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約８０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約９０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約１００アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約１５０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約２００アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約２５０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約３００アミノ酸長、又はそれ以上である。
【００２２】
ここで用いられる場合、「ＴＡＣＩｓ」とは、図５の残基１−２４６のアミノ酸配列、或いはその断片又は変異体を含み、かつ単一のシステインリッチドメインを含むポリペプチドを意味する。場合によっては、このようなＴＡＣＩｓポリペプチドは図５Ｂの残基１−２４６の隣接配列を含む。また場合によっては、このようなＴＡＣＩｓポリペプチドは、図５Ａに示されたコード化ポリヌクレオチド配列を含む核酸分子によりコードされる。本発明のＴＡＣＩｓポリペプチドは、ヒト組織タイプ又は他のソース由来のような、種々のソースから単離され、組換体及び／又は合成的な方法によって調製される。「天然配列」ＴＡＣＩｓポリペプチドは、天然由来のポリペプチドを含む。そのような天然配列ＴＡＣＩｓポリペプチドは、自然から単離することもできるし、組換体及び／又は合成手段により生産することもできる。ＴＡＣＩｓポリペプチドは、図５Ｂに示す配列と、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を、より好ましくは、図５Ａに示すコード化核酸配列又はその特異的な断片によってコードされるＴＡＣＩｓポリペプチドと、少なくとも約８１％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８２％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８３％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８４％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８６％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８７％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８８％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８９％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９１％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９２％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９３％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９４％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９６％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９８％のアミノ酸配列同一性、そして、さらにより好ましくは少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有し、図５Ｂに示すポリペプチドの断片又は変異体を含む。このような変異ポリペプチドは、例えば、図５Ｂに示すアミノ酸配列のＮ及び／又はＣ末端、並びに１以上の内部ドメインにおいて、１以上のアミノ酸残基が加えられているか、又は削除されているポリペプチドを含む。
ＴＡＣＩｓ「細胞外ドメイン」又は「ＥＣＤ」は、膜貫通及び細胞質ドメインを実質的に有しないＴＡＣＩｓポリペプチドの形態を意味する。通常、ＴＡＣＩｓポリペプチドＥＣＤは、それらの膜貫通及び／又は細胞質ドメインを約１％未満、好ましくはそのようなドメインを約０．５％未満しか持たない。本発明のＴＡＣＩｓポリペプチドについて同定された任意の膜貫通ドメインは、疎水性ドメインのその型を同定するために当該分野において日常的に使用される基準に従い同定されることが理解されるであろう。膜貫通ドメインの厳密な境界は変わり得るが、最初に同定されたドメインのいずれかの末端から約５アミノ酸を越えない可能性が高い。ＴＡＣＩｓのＥＣＤ形態は、図５Ｂのアミノ酸残基１−１１９、及び場合によっては図５Ｂのアミノ酸残基１−１１９の隣接配列を含むポリペプチドを含む。
【００２３】
ここで用いられる場合、「ＢＣＭＡ」又は「ＢＣＭＡポリペプチド」又は「ＢＣＭＡレセプター」という用語は、「天然配列ＢＣＭＡポリペプチド」及び「ＢＣＭＡ変異体」（ここでさらに定義される）を含む。「ＢＣＭＡ」は図２に示されるポリヌクレオチド配列及びその変異体を含む核酸分子、図２に示される配列及びその変異体断片並びに前述の断片を含む核酸分子によってコードされるこれらのポリペプチドに対して与えられた名称である。本発明のＢＣＭＡポリペプチドは、ヒト組織タイプ又は他のソース由来のような、種々のソースから単離され、組換体及び／又は合成的な方法によって調製される。
「天然配列」ＢＣＭＡポリペプチドは、天然由来の対応するＢＣＭＡポリペプチドと同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。このような天然配列ＢＣＭＡポリペプチドは、自然から単離することもできるし、組換体及び／又は合成手段により生産することもできる。「天然配列ＢＣＭＡポリペプチド」という用語には、特に、ＢＣＭＡポリペプチドの自然に生じる切断又は分泌形態（例えば、細胞外ドメイン配列）、自然に生じる変異形態(例えば、選択的にスプライシングされた形態)及びＢＣＭＡポリペプチドの自然に生じる対立遺伝子変異体が含まれる。本発明のＢＣＭＡポリペプチドは、Laabi等, EMBO J.,11:3897-3904(1992)；Laabi等, Nucleic Acids Res., 22:1147-1154(1994)；Gras等, Int.Immunology, 7:1093-1106 (1995)；Madry等, Int. Immunology, 10:1693-1702(1998)； 2000年11月16日公開のWO00/50633;2000年8月31日公開のWO00/50633；及び図２（配列番号６）の１−１８４アミノ酸残基の隣接する配列を含むＢＣＭＡポリペプチドを包含する。
【００２４】
ＢＣＭＡ「細胞外ドメイン」又は「ＥＣＤ」は、膜貫通及び細胞質ドメインを実質的に有しないＢＣＭＡポリペプチドの形態を意味する。通常、ＢＣＭＡポリペプチドＥＣＤは、それらの膜貫通及び／又は細胞質ドメインを約１％未満、好ましくはそのようなドメインを約０．５％未満しか持たない。本発明のＢＣＭＡポリペプチドについて同定された任意の膜貫通ドメインは、疎水性ドメインのその型を同定するために当該分野において日常的に使用される基準に従い同定されることが理解されるであろう。膜貫通ドメインの厳密な境界は変わり得るが、最初に同定されたドメインのいずれかの末端から約５アミノ酸を越えない可能性が高い。ＢＣＭＡのＥＣＤ形態はLaabi等, EMBO J.,11:3897-3904(1992)；Laabi等, Nucleic Acids Res., 22:1147-1154(1994)；Gras等, Int.Immunology, 7:1093-1106 (1995)；Madry等, Int. Immunology, 10:1693-1702(1998)に記載されるものを含む。
「ＢＣＭＡ変異体」とは、天然配列ＢＣＭＡ又はＢＣＭＡ ＥＣＤと、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有するＢＣＭＡポリペプチドを意味する。このようなＢＣＭＡ変異体ポリペプチドには、例えば、全長天然アミノ酸配列のＮ-及び／又はＣ-末端、並びに一又は複数の内部ドメインにおいて１つ又は複数のアミノ酸残基が付加、もしくは欠失されたＢＣＭＡポリペプチドが含まれる。ＢＣＭＡ ＥＣＤの断片も考慮される。通常、ＢＣＭＡ変異体ポリペプチドは、図２に示される核酸分子又は特定化されたその断片によってコードされるＢＣＭＡポリペプチドと、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８１％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８２％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８３％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８４％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８６％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８７％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８８％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約８９％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９１％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９２％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９３％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９４％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９６％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも約９８％のアミノ酸配列同一性、そして、さらにより好ましくは少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有している。ＢＣＭＡ変異体ポリペプチドは、天然ＢＣＭＡポリペプチドは含まない。通常、ＢＣＭＡ変異体ポリペプチドは少なくとも約１０アミノ酸長、しばしば少なくとも約２０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約３０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約４０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約５０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約６０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約７０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約８０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約９０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約１００アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約１５０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約２００アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約２５０アミノ酸長、さらにしばしば少なくとも約３００アミノ酸長、又はそれ以上である。
【００２５】
ここで用いられる場合、「ＴＡＬＬ−１」又は「ＴＡＬＬ−１ポリペプチド」という用語は、「天然配列ＴＡＬＬ−１ポリペプチド」及び「ＴＡＬＬ−１変異体」を含む。「ＴＡＬＬ−１」は図３に示されるポリヌクレオチド配列及びその変異体を含む核酸分子、図３に示される配列及びその変異体断片並びに天然配列ＴＡＬＬ−１の生物学的活性を有する前述の断片を含む核酸分子によってコードされるこれらのポリペプチドに対して与えられた名称である。ＴＡＬＬ−１の変異体は、図３に示される天然配列ＴＡＬＬ−１ポリペプチドと、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、及びさらにより好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有する。「天然配列」ＴＡＬＬ−１ポリペプチドは、天然由来の対応するＴＡＬＬ−１ポリペプチドと同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。このような天然配列ＴＡＬＬ−１ポリペプチドは、自然から単離することもできるし、組換体及び／又は合成手段により生産することもできる。「天然配列ＴＡＬＬ−１ポリペプチド」という用語には、特に、ＴＡＬＬ−１ポリペプチドの自然に生じる切断又は分泌形態（例えば、細胞外ドメイン配列）、自然に生じる変異形態(例えば、選択的にスプライシングされた形態)及びＴＡＬＬ−１ポリペプチドの自然に生じる対立遺伝子変異体が含まれる。「ＴＡＬＬ−１」という用語は、Shu等, GenBank 登録番号AF136293；1998年5月7日発行のＷＯ９８／１８９２１；1998年10月7日発行のEP869,180；1998年6月25日発行のＷＯ９８／２７１１４；1999年3月18日発行のＷＯ９９／１２９６４；1999年7月8日発行のＷＯ９９／３３９８０；1998年10月7日公開のＥＰ８６９１８０；Moore等, 上掲；Schneider等, 上掲；Mukhopadhyay等, 上掲に記載されるこれらのポリペプチドを含む。
【００２６】
ここで用いられる場合、「ＡＰＲＩＬ」又は「ＡＰＲＩＬポリペプチド」という用語は、「天然配列ＡＰＲＩＬポリペプチド」及び「ＡＰＲＩＬ変異体」を含む。「ＡＰＲＩＬ」は図４Ａ−Ｂに示されるポリヌクレオチド配列及びその変異体を含む核酸分子、図４Ａ−Ｂに示される配列及びその変異体断片並びに天然配列ＡＰＲＩＬの生物学的活性を有する前述の断片を含む核酸分子によってコードされるこれらのポリペプチドに対して与えられた名称である。ＡＰＲＩＬの変異体は、図４Ａ−Ｂに示される天然配列ＡＰＲＩＬポリペプチドと、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、及びさらにより好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有する。「天然配列」ＡＰＲＩＬポリペプチドは、天然由来の対応するＡＰＲＩＬポリペプチドと同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。このような天然配列ＡＰＲＩＬポリペプチドは、自然から単離することもできるし、組換体及び／又は合成手段により生産することもできる。「天然配列ＡＰＲＩＬポリペプチド」という用語には、特に、ＡＰＲＩＬポリペプチドの自然に生じる切断又は分泌形態（例えば、細胞外ドメイン配列）、自然に生じる変異形態(例えば、選択的にスプライシングされた形態)及びＡＰＲＩＬポリペプチドの自然に生じる対立遺伝子変異体が含まれる。「ＡＰＲＩＬ」という用語は、Hahne等, J.Exp.Med., 188:1185-1190(1998)；GenBank 登録番号AF046888；1999年1月7日発行のＷＯ９９／００５１８；1999年7月15日発行のＷＯ９９／３５１７０；1999年3月18日発行のＷＯ９９／１２９６５；1999年7月8日発行のＷＯ９９／３３９８０；1997年9月18日発行のＷＯ９７／３３９０２；1999年3月11日発行のＷＯ９９／１１７９１；1999年3月28日発行のEP911,633；1999年10月7日発行のＷＯ９９／５０４１６に記載されるこれらのポリペプチドを含む。
【００２７】
ハイブリダイゼーション反応の「ストリンジェンシー」は、当業者によって容易に決定され、一般的にプローブ長、洗浄温度、及び塩濃度に依存する経験的な計算である。一般に、プローブが長くなると適切なアニーリングに必要な温度が高くなり、プローブが短くなるとそれに必要な温度は低くなる。ハイブリダイゼーションは、一般的に、相補鎖がその融点より低い環境に存在する場合に、変性DNAの再アニールする能力に依存する。プローブとハイブリダイゼーション配列の間で所望される相同性の程度が高くなればなるほど、用いることができる相対温度が高くなる。その結果、より高い相対温度は、反応条件をよりストリンジェントにする（緊縮性を高める）ことになり、低い温度は緊縮性を低下させることになる。ハイブリダイゼーション反応の緊縮性の更なる詳細及び説明については、Ausubelら, Current Protocols in Molecular BiologyWiley Interscience Publishers, (1995）を参照のこと。
ここで定義される「ストリンジェントな条件」又は「高度にストリンジェントな条件」は、（１）洗浄のために低イオン強度及び高温度、５０℃において０．０１５Ｍの塩化ナトリウム／０．００１５Ｍのクエン酸ナトリウム／０．１％のドデシル硫酸ナトリウムを用いるもの；（２）ハイブリダイゼーション中に変性剤、例えば、４２℃において５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドと０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％フィコール／０．１％のポリビニルピロリドン／５０ｍＭのｐＨ６．５のリン酸ナトリウムバッファー、及び７５０ｍＭの塩化ナトリウム、７５ｍＭクエン酸ナトリウムを用いるもの；又は（３）４２℃における５０％ホルムアミド、５ｘSSC（０．７５ＭのNaCl、０．０７５Ｍのクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％のピロリン酸ナトリウム、５ｘデンハード液、超音波処理サケ精子DNA（50μg/ml）、０．１％SDS、及び１０％のデキストラン硫酸と、４２℃における０．２ｘSSC（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）中の洗浄及び５５℃での５０％ホルムアミド、次いで５５℃におけるEDTAを含む０．１ｘSSCからなる高緊縮性洗浄を用いるもの、と定義される。
「中程度のストリンジェントな条件」は、Sambrookら, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (ニューヨーク: コールド・スプリング・ハーバー出版, 1989）に記載されているように同定され、上記の緊縮性より低い洗浄溶液及びハイブリダイゼーション条件（例えば、温度、イオン強度及び％SDS）の使用を含む。中程度の緊縮性条件の例は、２０％ホルムアミド、５ｘSSC（１５０ｍＭのNaCl、１５ｍＭのクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５ｘデンハード液、１０％デキストラン硫酸、及び２０ｍｇ／ｍＬの変性剪断サケ精子DNAを含む溶液中の３７℃での終夜インキュベーション、次いで１ｘSSC中３７−５０℃でのフィルターの洗浄といった条件である。当業者であれば、プローブ長などの因子に適合させる必要に応じて、どのようにして温度、イオン強度等を調節するかを認識する。
【００２８】
核酸は、他の核酸配列と機能的な関係にあるときに「作用可能に結合し」ている。例えば、プレ配列又は分泌リーダーのDNAは、ポリペプチドの分泌に参画するプレタンパク質として発現されているならば、そのポリペプチドのDNAに作用可能に結合している；プロモーター又はエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼすならば、コード配列に作用可能に結合している；又はリボソーム結合部位は、もしそれが翻訳を容易にするような位置にあるなら、コード配列と作用可能に結合している。一般的に、「作用可能に結合している」とは、結合したDNA配列が近接しており、分泌リーダーの場合には近接していて読みフェーズにあることを意味する。しかし、エンハンサーは必ずしも近接している必要はない。結合は簡便な制限部位でのライゲーションにより達成される。そのような部位が存在しない場合は、従来の手法に従って、合成オリゴヌクレオチドアダプター又はリンカーが使用される。
「アミノ酸」という用語は、天然に生じるＬ−α−アミノ酸すべてを意味する。この定義は、ノルロイシン、オルニチン、およびホモシステインを含むことを意図する。アミノ酸はアルファベット１文字または３文字で表す：
Ａｓｐ    Ｄ    アスパラギン酸
Ｔｈｒ    Ｔ    トレオニン
Ｓｅｒ    Ｓ    セリン
Ｇｌｕ    Ｅ    グルタミン酸
Ｐｒｏ    Ｐ    プロリン
Ｇｌｙ    Ｇ    グリシン
Ａｌａ    Ａ    アラニン
Ｃｙｓ    Ｃ    システイン
Ｖａｌ    Ｖ    バリン
Ｍｅｔ    Ｍ    メチオニン
Ｉｌｅ    Ｉ    イソロイシン
Ｌｅｕ    Ｌ    ロイシン
Ｔｙｒ    Ｙ    チロシン
Ｐｈｅ    Ｆ    フェニルアラニン
Ｈｉｓ    Ｈ    ヒスチジン
Ｌｙｓ    Ｋ    リジン
Ａｒｇ    Ｒ    アルギニン
Ｔｒｐ    Ｗ    トリプトファン
Ｇｌｎ    Ｑ    グルタミン
Ａｓｎ    Ｎ    アスパラギン
配列表および図面において使用されている上記以外の1文字または３文字の略表記は、配列中の任意の位置における２つ以上のアミノ酸またはヌクレオチドを表す。
【００２９】
ここに同定されるリガンド又はレセプターポリペプチド配列に対する「パーセント(％)アミノ酸配列同一性」は、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入し、如何なる保存的置換も配列同一性の一部と考えないとした、ここで同定されたリガンド又はレセプター配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセントとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当業者の技量の範囲にある種々の方法、例えばBLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2又はMegalign(DNASTAR)ソフトウエアのような公に入手可能なコンピュータソフトウエアを使用することにより達成可能である。当業者であれば、比較される配列の全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。しかし、ここでの目的のためには、％アミノ酸配列同一性値は、配列比較コンピュータプログラムALIGN-2を用いて得られる。ALIGN-2プログラムの完全なソースコードを下記表に示す。ALIGN-2配列比較コンピュータプログラムはジェネンテック社によって作成され、以下の表に示したソースコードは米国著作権庁, Washington D.C., 20559に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号TXU510087の下に登録されている。ALIGN-2プログラムはジェネンテック社、South San Francisco, Californiaを通して公的に入手可能である。ALIGN-2プログラムは、UNIX(登録商標)オペレーティングシステム、好ましくはデジタルUNIX(登録商標) V4.0Dでの使用のためにコンパイルされる。全ての配列比較パラメータは、ALIGN-2プログラムによって設定され変動しない。
ここで用いられる「イムノアドヘシン」なる用語は、異種タンパク質（「アドヘシン」）の結合特異性と免疫グロブリン定常ドメインとを結合した抗体様分子を指す。構造的には、イムノアドヘシンは、所望の結合特異性を持ち、抗体の抗原認識及び結合部位以外である（即ち「異種の」）アミノ酸配列と、免疫グロブリン定常ドメイン配列との融合物を含む。イムノアドヘシン分子のアドへシン部分は、典型的には少なくともレセプター又はリガンドの結合部位を含む隣接アミノ酸配列である。イムノアドヘシンの免疫グロブリン定常ドメイン配列は、ＩｇＧ-１、ＩｇＧ-２、ＩｇＧ-３又はＩｇＧ-４サブタイプ、ＩｇＡ（ＩｇＡ-１及びＩｇＡ-２を含む）、ＩｇＥ、ＩｇＤ又はＩｇＭなどの任意の免疫グロブリンから得ることができる。
【００３０】
「アンタゴニスト」なる用語は最も広い意味で用いられ、インビトロ、インサイツ又はインビボにおいて、ＴＡＬＬ−１ポリペプチド、ＡＰＲＩＬポリペプチド、又はＴＡＬＬ−１及びＡＰＲＩＬ両方の、１つ又は複数の生物学的活性を部分的又は完全に遮断、阻害、又は中和する任意の分子を含む。ＴＡＬＬ−１及びＡＰＲＩＬポリペプチドのそのような生物学的活性の例には、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、ＴＡＣＩｓ又はＢＲ３へのＴＡＬＬ−１又はＡＰＲＩＬの結合、Ｂ細胞によるＮＦ−ＫＢの活性化及び増殖の活性化及びＩｇ分泌の活性化、リウマチ様関節炎や狼瘡等の免疫関連疾患、並びに文献にさらに報告されているものが含まれる。アンタゴニストは直接的又は間接的に機能する。例えば、アンタゴニストは、インビトロ、インサイツ又はインビボにおいて、ＴＡＣＩｓ又はＴＡＣＩへの直接的結合の結果として、ＴＡＬＬ−１ポリペプチド、ＡＰＲＩＬポリペプチド、又はＴＡＬＬ−１及びＡＰＲＩＬ両方の１つ又は複数の生物学的活性を部分的又は完全に遮断、阻害、又は中和するよう機能することが可能である。また、アンタゴニストは、インビトロ、インサイツ又はインビボにおいて、例えば、ＢＣＭＡ又はＢＲ３、或いは他のエフェクター分子への結合が遮断又は阻害された結果として、ＴＡＬＬ−１ポリペプチド、ＡＰＲＩＬポリペプチド、又はＴＡＬＬ−１及びＡＰＲＩＬ両方の１つ又は複数の生物学的活性を部分的又は完全に遮断、阻害、又は中和するために間接的に機能する。アンタゴニスト分子は、分子が、ＴＡＬＬ−１とＡＰＲＩＬ両方の生物学的活性を部分的又は完全に遮断、阻害又は中和できる、「二重」アンタゴニスト活性も含んでよい。
「アゴニスト」なる用語は最も広い意味で用いられ、インビトロ、インサイツ又はインビボにおいて、ＴＡＣＩ又はＴＡＣＩｓポリペプチド、又はＴＡＣＩ及びＴＡＣＩｓ両方の、１つ又は複数の生物学的活性を部分的又は完全に遮断、阻害、又は中和する任意の分子を含む。ＴＡＣＩ及びＴＡＣＩｓのそのような生物学的活性の例には、ＮＦ−ＫＢの活性化、免疫グロブリン産生及び分泌の誘発又は阻害、及び細胞増殖が含まれる。アゴニストは、直接的又は間接的に機能する。例えば、アゴニストは、インビトロ、インサイツ又はインビボにおいて、ＴＡＣＩｓ又はＴＡＣＩへの直接的結合の結果として、ＴＡＣＩｓポリペプチド、ＴＡＣＩポリペプチド、又はＴＡＣＩ及びＴＡＣＩｓ両方の１つ又は複数の生物学的活性を部分的又は完全に遮断、阻害、又は中和するよう機能することが可能であり、これによりレセプターの活性化又はシグナル形質導入が起こり得る。また、アゴニストは、例えば別のエフェクター分子を刺激することによりＴＡＣＩｓ又はＴＡＣＩレセプターの活性化又はシグナル形質導入が起こる結果として、インビトロ、インサイツ又はインビボにおいて、ＴＡＣＩｓポリペプチド、ＴＡＣＩポリペプチド、又はＴＡＣＩｓ及びＴＡＣＩ両方の１つ又は複数の生物学的活性を部分的又は完全に亢進、刺激又は活性化するために、間接的に機能する。
【００３１】
「抗体」という用語は最も広い意味において使用され、特に、例えばＢＲ３、ＴＡＣＩｓ、ＴＡＬＬ−１、ＡＰＲＩＬ，ＴＡＣＩ、又はＢＣＭＡに対する単一のモノクローナル抗体と、ポリペプチド特異性を持つ抗-DR4抗体組成物と、一本鎖抗体と、抗体の断片を含む。本明細書で使用する「抗体」は、本明細書で述べる所望のアゴニスト的特性または拮抗的特性を示すものである限り、無傷免疫グロブリンまたは抗体分子、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（つまり、少なくとも２つの無傷抗体から形成された二重特異性抗体）、および免疫グロブリン断片（例えばFab、F(ab')2、またはFv）を含む。
典型的に、抗体は、特定の抗原に対する結合特性を示すタンパク質またはポリペプチドである。天然の抗体は、通常、２つの同一の軽(L)鎖および２つの同一の重(H)鎖からなるヘテロ四量体の糖タンパク質である。通常、軽鎖の各々は、共有ジスルフィド結合により１つの重鎖に結合しており、ジスルフィド結合の数は免疫グロブリンのイソタイプによって異なる。また、各重鎖および軽鎖は、等間隔に並ぶ鎖内ジスルフィド架橋を有する。各重鎖の一端には可変ドメイン（ＶＨ）があって、それに複数の定常ドメインが続いている。各軽鎖の一端（ＶＬ）には可変ドメインが、他端には定常ドメインがある；軽鎖の定常ドメインは重鎖の第一の定常ドメインと整列しており、軽鎖の可変ドメインは重鎖の可変ドメインと整列している。特定のアミノ酸残基が軽鎖の可変ドメインと重鎖の可変ドメインの界面を形成すると考えられている（Chothia他, J. Mol. Biol., 186:651-663, 1985年; Novotny and Haber, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:4592-4596, 1985年）。任意の脊椎動物の種由来の抗体の軽鎖は、その定常ドメインアミノ酸配列に基づいて、κおよびλと呼ばれる２つの明確に区別される型の一方に割り当てることができる。重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、免疫グロブリンを複数のクラスに分けることができる。免疫グロブリンには５つの主要なクラス：IgA、IgD、IgE、IgG およびIgMがあり、これらのうち複数をさらにサブクラス（イソタイプ）、例えば、IgG-1、IgG-2、IgG-3およびIgG-4、ならびにIgA-1およびIgA-2に分けることができる。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖の定常ドメインを、それぞれ、α、δ、υ、γおよびμと呼ぶ。
【００３２】
「抗体断片」は、無傷の抗体の一部、通常は無傷の抗体の抗原結合又は可変領域を含む。抗体断片の例は、Fab、Fab'、F(ab')2、及びFv断片；ダイアボディ(diabodies)；一本鎖抗体分子；及び抗体断片から形成された多重特異性抗体を含む。
「可変」という用語は、抗体間で配列が異なる可変ドメインの特定の部分を表すために使用され、特定の抗原に対する特定の抗体の各々の結合および特異性に利用される。しかしながら、抗体の可変ドメインにおいて可変性は通常一様に分布してはいない。典型的には、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメイン両方の相補性決定領域（CDR）または高頻度可変領域と呼ばれる３つの染色体部分に集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分をフレームワーク(FR)と呼ぶ。天然の重鎖および軽鎖の各可変ドメインは、大部分がβ−シート構造を取り入れ、３つのCDRにより連結された４つのFR領域を有しており、それらCDRはβ−シート構造を連結するループを形成するか、場合によってはβ−シート構造の一部を形成する。各鎖のCDRはFR領域によって互いに近接して保持されており、別の鎖のCDRと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している（Kabat, E.A.他、Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institute of Health, Bethesda, メリーランド州、1987年参照）。定常ドメインは抗原への抗体の結合に直接関与しないが、抗体依存性の細胞毒性への抗体の関与など、様々な作動体機能を示す。
【００３３】
ここで使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を称する、すなわち、集団を構成する個々の抗体が、少量存在しうる自然に生じる可能な突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、一つの抗原部位に指向する。さらに、異なる決定基(エピトープ)に対応する異なる抗体を典型的に含む従来の(ポリクローナル)抗体調製物とは異なり、各モノクローナル抗体は抗原の単一の決定基に指向する。
ここで、モノクローナル抗体は特に、所望の生物学的活性、または特性を有するものである限りにおいて、指定の起源の種、免疫グロブリンのクラス、またはサブクラスに関係なく、定常ドメイン（例えば「ヒト化」抗体）、または重鎖を有する軽鎖、または別の種由来の鎖を有するある種由来の鎖、または異種タンパク質との融合を有する対象の抗体の（高頻度可変を含む）可変ドメインをスプライシングすることにより生成される「キメラ」抗体、ハイブリッド抗体、および組換え抗体、ならびに抗体断片（例えばFab、F(ab’)、F(ab’)2、およびFv）を含む。例えば米国特許第4,816,567号、およびMageらによるMonoclonal Antibody Production Techniques and Applications 79-97ページ（Marcel Dekker, Inc.: New York, 1987年）を参照のこと。
【００３４】
このように、「モノクローナル」との形容は、実質的に均一な抗体集団から得られたという抗体の性質を示し、抗体を何か特定の方法で生産しなければならないことを意味するものではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、最初にKohler及びMilstein, Nature, 256:495 (1975)に記載されたハイブリドーマ法によって作ることができ、あるいは米国特許第4,816,567号に記載されたような組換えDNA法によって作ることができる(参照)。「モノクローナル抗体」は、また、例えばMcCaffertyらによるNature, 348:552-554（1990年）に記載された技術を用いてファージ抗体ライブラリから単離することができる。
非ヒト(例えばマウス)抗体の「ヒト化」形とは、特定のキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、あるいはそれらの断片(例えばFv、Fab、Fab'、F(ab')2あるいは抗体の他の抗原結合サブ配列)であって、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むものである。大部分において、ヒト化抗体はレシピエントの相補性決定領域(CDR)の残基が、マウス、ラット又はウサギのような所望の特異性、親和性及び能力を有する非ヒト(ドナー抗体)のCDRの残基によって置換されたヒト免疫グロブリン(レシピエント抗体)である。ある場合には、ヒト免疫グロブリンのFvフレームワーク領域(FR)残基は、対応する非ヒト残基によって置換されている。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、移入されたCDRもしくはフレームワーク配列にも見出されない残基を含んでもよい。これらの修飾は抗体の能力を更に洗練し、最適化するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、全てあるいはほとんど全てのCDR領域が非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、全てあるいはほとんど全てのFR領域がヒト免疫グロブリン共通配列のものである、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体は、最適には免疫グロブリン定常領域又はドメイン(Fc)、典型的にはヒトの免疫グロブリンの定常領域又はドメインの少なくとも一部を含んでなる。
【００３５】
「ヒト抗体」は、ヒトにより生成される抗体のアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基を有するもの、および／またはヒト抗体をつくる既知の技術のいずれかを使用して、またはここに開示するようにして、つくられたものである。ヒト抗体のこのような定義は、少なくとも１つのヒト重鎖ポリペプチドまたは少なくとも1つのヒト軽鎖ポリペプチド、例えばマウス軽鎖およびヒト重鎖ポリペプチドを含む抗体を含む。ヒト抗体は、様々な従来技術を使用して生成することができる。一実施態様では、ライブラリがヒト抗体を発現する場合、そのようなファージライブラリからヒト抗体を選択する（Vaughan他、 Nature Biotechnology, 14:309-314, 1996年; Sheets他 PNAS, アメリカ合衆国、95:6157-6162,1998年; HoogenboomおよびWinter, J. Mol. Biol., 227:381, 1991年; Marks他, J. Mol. Biol., 222:581, 1991年）。ヒト抗体はまた、ヒト免疫グロブリン座を、トランスジェニック動物、例えば、内因性免疫グロブリン遺伝子が特異的にまたは完全に非活性化されているマウスに導入することにより生成することができる。実験によりヒト抗体の産生が確認されており、それは遺伝子の再配列、アセンブリ、および抗体のレパートリーを含め、すべての面でヒトに見られる抗体産生に非常に類似している。この方法は、例えば、米国特許第5,545,807号、同第5,545,806号、同第5,569,825号、同第5,625,126号、同第5,633,425号、同第5,661,016号、および以下の科学文献に開示されている：Marks他, Bio/Technology, 10: 779-783, 1992年; Lonberg他, Nature, 368: 856-859, 1994年; Morrison, Nature, 368:812-13, 1994年; Fishwild他, Nature Biotechnology, 14: 845-51, 1996年; Neuberger, Nature Biotechnology, 14: 826, 1996年; Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol., 13:65-93, 1995年。あるいは、ヒト抗体は、標的となる抗原を志向する抗体を産生するＢリンパ球（このようなＢリンパ球は個体から回収できるか、またはインビボで免疫することができる）の不死化により調製することもできる。 例えば、Cole他, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77, 1985年; Boerner他, J. Immunol., 147 (1):86-95, 1991年; および米国特許第5,750,373号を参照のこと。
【００３６】
「Ｆｃ領域」という用語は、無傷の抗体のパパイン消化により生成される免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。Ｆｃ領域は天然配列のＦｃ領域または変異体Ｆｃ領域でありうる。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界はまちまちであるが、ヒトIgG重鎖のFc領域は、通常、約Cys226または約Pro230に位置するアミノ酸残基からFc領域のカルボキシル末端まで延びていると定義される（ここではKabat他, 上掲による番号付けシステムを使用した）。免疫グロブリンのＦｃ領域は、通常、２つの定常ドメイン、１つのＣＨ２ドメインおよび１つのＣＨ３ドメインを含み、場合によってはＣＨ４ドメインを含む。
ここで使用する「Ｆｃ領域鎖」という表現は、Ｆｃ領域の２つのポリペプチド鎖のうちの１つを意味する。
【００３７】
ヒトIgG Fc領域の「CH2ドメイン」（「Cγ2」ドメインとも呼ばれる）は、通常、約231位のアミノ酸残基から約340位のアミノ酸残基まで延びている。CH2ドメインは、別のドメインと親密な対にならないという点で独特である。代わりに、２つのＮ結合分岐炭水化物鎖が、無傷の天然IgG分子の２つのCH2ドメインの間に挿入される。炭水化物はドメイン−ドメイン対の代替物を提供し、CH2ドメインの安定化を助けることができると推測される。BurtonによるMolec. Immunol. 22:161-206 (1985年)を参照のこと。ここで、CH2ドメインは天然配列のCH2ドメインまたは変異体CH2ドメインとすることができる。
「CH3ドメイン」は、Fc領域におけるＣ末端からCH2ドメインまでの範囲（つまり、IgGの約341位のアミノ酸から約447位のアミノ酸）を含む。ここでは、CH3領域は、天然配列のCH3ドメインか、または変異体CH3ドメイン（例えば、その一鎖に「protroberance」が導入され、それに対応して他の鎖に「空洞」が導入されたCH3ドメイン：米国特許第5,821,333号参照）とすることができる。このような変異体CH3ドメインを使用して本明細書に開示する多重特異性（例えば二重特異性）抗体をつくることができる。
【００３８】
「ヒンジ領域」は、通常、ヒトIgG1の約Glu216または約Cys226から約Pro230まで延びていると定義される（Burton, Molec. Immunol.22:161-206, 1985年）。他のIgGイソタイプのヒンジ領域は、同じ位置に内部重鎖S-S結合を形成する最初と最後のシステイン残基を配置することによりIgG1と整列させることができる。本明細書のヒンジ領域は、天然配列のヒンジ領域か、または変異体ヒンジ領域とすることができる。変異体ヒンジ領域の２つのポリペプチド鎖は、通常、１つのポリペプチド鎖につき少なくとも１つのシステイン残基を保持しており、よって２つの変異体ヒンジ領域のポリペプチド鎖は２つの鎖の間にジスルフィド結合を形成することができる。本発明の好ましいヒンジ領域は、天然配列のヒトヒンジ領域、例えば天然配列のヒトIgG1ヒンジ領域である。
「機能的Fc領域」は、天然配列Fc領域の少なくとも１つの「作動体機能」を有する。例示的「作動体機能」には、C1q結合、補体依存性細胞障害作用（CDC）、Fｃレセプター結合、抗体依存性細胞媒介性細胞障害作用（ADCC）、食作用、細胞表面レセプター（例えばＢ細胞レセプター； BCR）の下方制御などが含まれる。そのような作動体機能は、通常、Fc領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わさることを必要とし、そのような抗体の作動体機能を評価するための当技術分野で既知の様々なアッセイを使用して評価される。
【００３９】
「天然配列Fc領域」は、天然に由来するFc領域と同じアミノ酸配列を有する。「変異体ポリペプチドを含む。「変異体Fc領域」には、最低１つのアミノ酸修飾だけが天然配列のFc領域と異なるアミノ酸配列が含まれる。好ましくは、変異体Fc領域は、天然配列のFc領域、または親ポリペプチドのFc領域と比較した場合に、天然配列Fc領域または親ポリペプチドのFc領域において少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば約１から約１０のアミノ酸置換、好ましくは約１から約５のアミノ酸置換を有する。ここに開示する突然変異Fc領域は、天然配列のFc領域および／または親ポリペプチドのFc領域に対して、少なくとも約80%の配列同一性を有し、好ましくは少なくとも約90%、さらに好ましくは少なくとも約95%の配列同一性を有する。
「抗体依存性細胞媒介性細胞障害作用」および「ADCC」は、Fcレセプター（FcR）を発現する非特異性の毒性細胞（例えば、ナチュラルキラー(NK)細胞、好中球、およびマクロファージ）が標的細胞に境界抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介性反応を指す。ADCC、NK細胞を媒介する一次細胞はFcγRIIIのみを発現し、一方単核細胞はFcγRI、FcγRII、およびFcγRIIIを発現する。造血細胞上のFcR発現は、RavetchおよびKinetによる、Annu. Rev. Immunol., 9:457-92(1991年)の、464ページの表３にまとめられている。目的の分子のADCC活性を評価するために、インビボADCCアッセイ（例えば米国特許第5,500,362号または同第5,821,337号に記載）を行うことができる。そのようなアッセイに有用な作動体細胞には、抹消血単核細胞（PBMC）およびナチュラルキラー（NK）細胞が含まれる。あるいは、またはそれに加えて、目的とする分子のADCC活性をインビボで、例えばClynesらによる PNAS(アメリカ合衆国)、 95:652-656(1998年)に開示されているような動物モデルにおいて評価することができる。
【００４０】
「ヒト作動体細胞」は、１以上のFcRsを発現する白血球であり、作動体機能を果たす。好ましくは、細胞は少なくともFcγRIIIを発現し、ADCC作動体機能を果たす。ADCCを媒介するヒト白血球の例には、抹消血単核細胞（PBMC）、ナチュラルキラー（NK）細胞、単核細胞、細胞障害性Ｔ細胞および好中球が含まれ、中でもPBMCとNK細胞が好ましい。作動体細胞はその天然供給源、例えば血液またはPBMCからここに開示するように単離することができる。
「Fcレセプター」および「FcR」という用語は、抗体のFc領域に結合するレセプターを表すために使用される。好ましいFcRは天然配列ヒトFcRである。さらに、好ましいFcRはIgG抗体に結合するもの（ガンマレセプター）であり、FcγRI、FcγRII、およびFcγRIIIサブクラス のレセプターを含み、それには対立変異体およびそれらレセプターの変形スプライス形式が含まれる。FcγRIIレセプターはFcγRIIA（「活性化レセプター」）およびFcγRIIB（「抑制レセプター」）を含み、それらは主にその細胞質ドメインにおいて異なる類似したアミノ酸配列を有する。活性化レセプターであるFcγRIIAは、その細胞質ドメインに免疫レセプターのトリオシン（tryosine）に基づく活性化モチーフ（ITAM）を有する。阻害するレセプターFcγRIIBは、その細胞質ドメインにある免疫レセプター チロシンベース阻害モチーフ（ITIM）を有する（Daeron, Annu. Rev. Immunol., 15:203-234, 1997年に記載）。FcRはRavetchおよびKinet, Annu. Rev. Immunol., 9:457-92(1991年); Capel他, Immunomethods, 4:25-34(1994年); およびde Haas他, J. Lab. Clin. Med., 126:330-41(1995年)に説明されている。本明細書で使用する「FcR」という語は、将来同定されるものも含め、その他のFcRを包括する。この用語はまた、母性IgGの胎児への移転をつかさどる新生児レセプターであるFcRnを含む（Guyer他, J. Immunol., 117:587, 1976年;およびKim他, J. Immunol., 24:249, 1994年）。
【００４１】
「補体依存性細胞障害作用」および「CDC」は、補体存在下における標的の溶解を指す。補体の活性経路は補体系（C1q）の第一成分の分子の、同族抗原と複合した分子（例えば抗体）への結合により開始される。補体の活性を評価するため、例えばGazzano-SantoroらによるJ. Immunol. Methods, 202:163(1996年)に記載されているようなCDCアッセイを実行することができる。
「親和性成熟」抗体は、その1つ以上のCDRに1つ以上の変更を有する抗体であって、そのような変更を有しない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性を向上させる。好ましい親和性成熟抗体は、標的抗原に対して、ナノモル単位の、さらにはピコモル単位の親和性を有する。親和成熟抗体は、当技術分野において既知の方法により生産できる。Marks他は、  Bio/Technology, 10:779-783(1992年)において、VHドメインとVLドメインのシャフリングによる親和成熟を開示している。CDRおよび／またはフレームワーク残基のランダムな突然変異誘発が、Barbas他、Proc Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813(1994年); Schier他、Gene, 169:147-155 (1995年);  Yelton他、J. Immunol., 155:1994-2004 (1995年); Jackson他, J. Immunol., 154(7):3310-9 (1995年); およびHawkins他, J. Mol. Biol., 226:889-896 (1992年)に開示されている。
「抗体の免疫特異的結合」に使用される「免疫特異的」という用語は、抗体の抗原混合部位と抗体により認識される特異的な抗原との間に発生する抗原に特異的な結合の相互作用を意味する。
【００４２】
「単離された」とは、ここで開示された種々のタンパク質を記述するために使用する場合は、その自然環境の成分から同定され分離され及び／又は回収されたポリペプチドを意味する。その自然環境の夾雑成分とは、そのタンパク質の診断又は治療への使用を概して妨害する物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質様又は非タンパク質様溶質が含まれる。好ましい実施態様では、タンパク質は、(１)スピニングカップシークエネーターを使用することにより、少なくとも１５残基のＮ末端あるいは内部アミノ酸配列を得るのに十分なほど、あるいは、(２)クーマシーブルーあるいは好ましくは銀染色を用いた非還元又は還元条件下でのSDS-PAGEによって均一になるまで精製される。単離されたタンパク質には、組換え細胞内のインサイツのポリペプチドが含まれるが、これはタンパク質の自然環境の少なくとも１つの成分が存在しないためである。しかしながら、通常は、単離されたタンパク質は少なくとも１つの精製工程により調製される。
「治療」又は「療法」とは、治療上の処置及び予防的療法又は防護的療法の双方を称する。
【００４３】
治療又は療法を目的として「哺乳動物」と言うときは、ヒト、家及び牧場の動物、及び動物園の動物、運動用の動物、愛玩用動物、例えばイヌ、ウマ、ネコ、ウシ等々を含む哺乳動物として分類されるあらゆる動物を意味する。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
「ＴＡＬＬ−１関連の病理的状態」及び「ＡＰＲＩＬ関連の病理的状態」とは、正常で健康な哺乳動物における発現又は活性化のレベルよりも多いか又は少ない、ＴＡＬＬ−１又はＡＰＲＩＬの異常なレベルの発現又は活性化に関連する病態又は状態を指し、この状態においては、そのようなレベルの上昇又は低下は全身、局所、又は特定の組織又は細胞型又は身体の位置で発生している。ＴＡＬＬ−１関連の病理的状態及びＡＰＲＩＬ関連の病理的状態には、急性及び慢性の免疫関連疾患及び癌が含まれる。
【００４４】
「癌」、「癌性の」および「悪性の」という用語は、典型的には調節されない細胞成長を特徴とする、哺乳動物における生理学的状態を指すか記述する。癌の例には、これらに限定されるものではないが、腺癌、リンパ腫、芽細胞腫、黒色腫、肉腫、及び白血病を含む悪性腫瘍が含まれる。このような癌のより特定の例には、扁平細胞癌(squamous cell cancer)、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃腸癌、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、子宮頸管癌、卵巣癌、肝癌および肝細胞腫などの肝臓癌、膀胱癌、乳癌、大腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、骨髄腫（多発性骨髄腫など）唾液腺癌、腎癌およびビルムス腫などの腎臓癌、基底細胞癌、黒色腫、前立腺癌、産卵口癌、甲状腺癌、、精巣癌、食道癌、並びに多種多様な頭部及び頸部の癌が含まれる。本発明の治療を行なうことができる癌は場合によっては、リンパ腫、白血病及び骨髄腫、並びにそのサブタイプ、例えばバーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、急性リンパ芽球又はリンパ性白血病、非ホジキン及びホジキンリンパ腫、及び急性骨髄性白血病が含まれる。
【００４５】
「免疫関連疾患」という用語は、哺乳動物の免疫系の成分が、哺乳動物の病理学的状態の原因であるか、媒介又は寄与するものである疾患を意味する。また、免疫反応の刺激又は介在により疾患の進行に改善された効果が付与される疾患も含まれる。この用語には、自己免疫疾患、免疫媒介炎症疾患、非免疫媒介炎症疾患、感染症、及び免疫欠損症が含まれる。そのうちの一部が免疫又はＴ細胞媒介であり、本発明によって治療することが可能な免疫関連及び炎症性疾患の例には、全身性エリテマトーデス、リウマチ様関節炎、若年型慢性関節炎、脊椎関節症、全身性硬化症（強皮症）、特発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）、シェーグレン症候群、全身性血管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間ヘモグロビン尿症）、自己免疫性血小板減少症（溶血性血小板減少性紫斑病、免疫媒介血小板減少症）、甲状腺炎（バセドウ病、橋本甲状腺炎、若年型リンパ球性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）、糖尿病、免疫媒介腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）、中枢及び末梢神経系の脱髄疾患例えば多発性硬化症、特発性脱髄多発神経障害又はギラン・バレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発神経障害、肝胆道疾患例えば感染性肝炎（A、B、C、D、E型肝炎、及び他の非肝親和性ウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎、炎症性肺疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）、グルテン過敏性腸疾患、及びウィップル病、水疱性皮膚病を含む自己免疫又は免疫媒介皮膚疾患、多形滲出性紅斑及び接触性皮膚炎、乾癬、アレルギー性疾患例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症及び蕁麻疹、肺の免疫疾患例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症及び過敏性肺炎、拒絶反応及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患が含まれる。感染症疾患には、AIDS（HIV感染）、A、B、C、D及びＥ型肝炎、細菌感染症、真菌感染症、原虫感染症及び寄生虫症が含まれる。
本明細書の「自己免疫疾患」という語は広義で使用され、一般的な意味で、自己の組織成分に対する個体の体液または細胞の免疫反応から正常または健康な組織の破壊が生じる、哺乳動物の障害、または状態を指す。例として、これらに限定するものではないが、エリテマトーデス、甲状腺炎、リウマチ様関節炎、乾癬、多発性硬化症、自己免疫糖尿病、および炎症性腸疾患が挙げられる。
【００４６】
この出願で用いられる「プロドラッグ」という用語は、親-薬剤に比較して癌細胞に対する細胞障害性が低く、酵素的に活性化又はより活性な親形態に変換される製薬的活性物質の前駆体又は誘導体形態を意味する。例えば、Wilman, 「Prodrugs in Cancer Chemotherapy」, Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615th Meeting, Belfast (1986),及びStella ら, 「Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery」、Directed Drug Delivery, Borchardt等（編）, pp.147-267, Humana Press (1985)参照。本発明のプロドラッグは、これらに限られないが、ホスファート含有プロドラッグ、チオホスファート含有プロドラッグ、スルファート含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、Ｄ-アミノ酸変性プロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、βラクタム含有プロドラッグ、任意に置換されたフェノキシアセトアミド含有プロドラッグ又は任意に置換されたフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、より活性のある細胞毒のない薬剤に転換可能な５-フルオロシトシン及び他の５-フルオロウリジンプロドラッグを含む。限定するものではないが、本発明で使用されるプロドラッグ形態に誘導体化可能な細胞障害剤の例には、後述の化学療法剤が含まれる。
ここで用いられる「細胞障害剤」という用語は、細胞の機能を阻害又は抑制し及び／又は細胞破壊を生ずる物質を指す。この用語は、放射性同位体（例えば、At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32およびLuの放射性同位体）、化学療法剤、及び小分子毒素または細菌、真菌、植物又は動物起源の酵素活性毒素等の毒素、又はそれらの断片および/または変異体を含むことを意図する。
【００４７】
「化学療法剤」は、癌などの状態の治療に有用な化学的化合物である。化学療法剤の例には、チオテパ及びシクロスホスファミド(CYTOXAN(登録商標))のようなアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンのようなスルホン酸アルキル類；ベンゾドーパ(benzodopa)、カルボコン、メツレドーパ(meturedopa)、及びウレドーパ(uredopa)のようなアジリジン類；アルトレートアミン(altretamine)、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド(triethylenethiophosphaoramide)及びトリメチローロメラミン(trimethylolomelamine)を含むエチレンイミン類及びメチラメラミン類；アセトゲニン(acetogenins）(特にブラタシン(bullatacin)及びブラタシノン(bullatacinone)）；カンプトセシン(合成類似体トポテカン（topotecan）を含む）；ブリオスタチン；カリスタチン(callystatin）；ＣＣ-１０６５(そのアドゼレシン(adozelesin)、カルゼレシン(carzelesin)及びバイゼレシン(bizelesin）合成類似体を含む）；クリプトフィシン(cryptophycin）(特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン(dolastatin）；デュオカルマイシン(duocarmycin ）（合成類似体、KW-2189及びCBI-TMIを含む）； エレトロビン(eleutherobin）；パンクラチスタチン(pancratistatin）；サルコディクチン(sarcodictyin）；スポンジスタチン(spongistatin）；クロランブシル、クロルナファジン(chlornaphazine)、チョロホスファミド(cholophosphamide)、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン(novembichin)、フェネステリン(phenesterine)、プレドニムスチン(prednimustine)、トロフォスファミド(trofosfamide)、ウラシルマスタード等のナイトロジェンマスタード；ニトロスレアス(nitrosureas)、例えばカルムスチン(carmustine)、クロロゾトシン(chlorozotocin)、フォテムスチン(fotemustine)、ロムスチン(lomustine)、ニムスチン、ラニムスチン；エネジイン(enediyne) 抗生物質等の抗生物質（例えば、カリケアマイシン(calicheamicin)、特にカリケアマイシンγ１I及びカリケアマイシンθＩ１、例えば、Agnew  Chem Intl. Ed. Engl., 33：183-186(1994)を参照のこと；ダイネミシンＡ(dynemicinＡ）を含むダイネミシン(dynemicin）；エスペラマイシン(esperamicin）； 同様にネオカルチノスタチン発光団及び関連色素蛋白エネジイン(enediyne) 抗生物質発光団）、アクラシノマイシン(aclacinomysins)、アクチノマイシン、オースラマイシン(authramycin)、アザセリン、ブレオマイシン(bleomycins)、カクチノマイシン(cactinomycin)、カラビシン(carabicin)、カルミノマイシン(carminomycin）、カルジノフィリン(carzinophilin)、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン(detorubicin）、６-ジアゾ-５-オキソ-Ｌ-ノルロイシン、ドキソルビシン (モルフォリノ−ドキソルビシン、シアノモルフォリノ-ドキソルビシン、２-ピロリノ-ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン(esorubicin）、イダルビシン、マセロマイシン(marcellomycin）、マイトマイシン(mitomycins）、マイコフェノール酸(mycophenolic acid)、ノガラマイシン(nogalamycin)、オリボマイシン(olivomycins)、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン(potfiromycin)、ピューロマイシン、クエラマイシン(quelamycin)、ロドルビシン(rodorubicin)、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジ��(tubercidin)、ウベニメクス、ジノスタチン(zinostatin)、ゾルビシン(zorubicin)；メトトレキセート及び５-フルオロウラシル(５-ＦＵ）のような抗-代謝産物；デノプテリン(denopterin)、メトトレキセート、プテロプテリン(pteropterin)、トリメトレキセート(trimetrexate)のような葉酸類似体；フルダラビン(fludarabine)、６-メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンのようなプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン(azacitidine)、６-アザウリジン(azauridine)、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン(enocitabine)、フロキシウリジン(floxuridine)、５−ＦＵのようなピリミジン類似体；カルステロン(calusterone)、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン(testolactone)のようなアンドロゲン類；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンのような抗副腎剤；フロリン酸(frolinic acid)のような葉酸リプレニッシャー(replenisher)；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン(amsacrine)；ベストラブシル(bestrabucil)；ビサントレン(bisantrene)；エダトラキセート(edatraxate)；デフォファミン(defofamine)；デメコルシン(demecolcine)；ジアジコン(diaziquone)；エルフォルニチン(elfornithine)；酢酸エリプチニウム(elliptinium acetate)；エポチロン(epothilone)；エトグルシド(etoglucid)；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン(lonidamine)；メイタンシン(maytansine)及びアンサマイトシン(ansamitocin)のようなメイタンシノイド(maytansinoid)；ミトグアゾン(mitoguazone)；ミトキサントロン；モピダモール(mopidamol)；ニトラクリン(nitracrine)；ペントスタチン；フェナメット(phenamet)；ピラルビシン；ポドフィリン酸(podophyllinic acid)；２-エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＫＳ(登録商標)；ラゾキサン(razoxane)；リゾキシン(rhizoxin)；シゾフィラン；スピロゲルマニウム(spirogermanium)；テニュアゾン酸(tenuazonic acid)；トリアジコン(triaziquone)；２,２',２''-トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン(trichothecenes)(特に、Ｔ-２トキシン、ベラキュリンＡ(verracurin A)、ロリデンＡ(roridin A)及びアングイデン(anguidine)）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン(mannomustine)；ミトブロニトール；ミトラクトール(mitolactol)；ピポブロマン(pipobroman)；ガシトシン(gacytosine)；アラビノシド（「Ara-C」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えばパクリタキセル（タキソール(登録商標)、Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ）、及びドキセタキセル（タキソテア(登録商標）、Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France）；クロランブシル；ゲンシタビン(gemcitabine)；６-チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；シスプラチン及びカルボプラチンのようなプラチナ類似体；ビンブラスチン；プラチナ；エトポシド(ＶＰ-１６）；イフォスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン(Navelbine)；ノバントロン(novantrone)；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；キセローダ(xeloda)；イバンドロナート(ibandronate)；ＣＰＴ-１１；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ２０００；ジフルオロメチロールニチン(ＤＭＦＯ)；レチノイン酸；カペシタビン(capecitabine)；並びに上述したものの製薬的に許容可能な塩類、酸類又は誘導体���含まれる。また、この定義には、腫瘍に対するホルモン作用を調節又は阻害するように働く抗ホルモン剤、例えばタモキシフェン、ラロキシフェン(raloxifene)、例えば４(５)-イミダゾール類を阻害するアロマターゼ、４-ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン(trioxifene)、ケオキシフェン(keoxifene)、ＬＹ１１７０１８、オナプリストーン(onapristone)、及びトレミフェン(Fareston)；及び抗アンドロゲン、例えばフルタミド(flutamide)、ニルタミド(nilutamide)、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリン；並びに上記のものの製薬的に許容可能な塩類、酸類又は誘導体が含まれる。
【００４８】
ここで使用される場合の「成長阻害剤」とは、インビトロ又はインビボのいずれかにおいて、細胞の成長を阻害する化合物又は組成物を指すものである。よって、成長阻害剤とは、S期におけるそのような遺伝子の過剰発現細胞のパーセンテージを有意に低減させるものである。成長阻害剤の例には、細胞分裂周期の進行をブロックする薬剤(S期以外の場所において)、例えばG1停止及びM期停止を誘発する薬剤が含まれる。伝統的なM期ブロッカーには、ビンカ(ビンクリスチン及びビンブラスチン)、タキソール（登録商標）、及びトポIIインヒビター、例えばドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、及びブレオマイシンが含まれる。G1を停止させるこれらの薬剤、例えばDNAアルキル化剤、例えばタモキシフェン、プレドニソン、ダカーバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキセート、５-フルオロウラシル、及びara-CがS期停止へ波及する。更なる情報は、Murakamiらにより「細胞分裂周期の調節、オンコジーン、及び抗新生物薬(Cell cycle regulation, oncogene, and antineoplastic drugs)」と題された、癌の分子的基礎(The Molecular Basis of Cancer)、Mendelsohn及びIsrael編、第１章(WB Saunders；Philadelphia, 1995)、特に１３頁に見出すことができる。
【００４９】
「サイトカイン」なる用語は、１つの細胞集団から放出され、他の細胞に細胞間メディエータとして作用するタンパク質の一般用語である。このようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン、及び伝統的なポリペプチドホルモンである。サイトカインに含まれるのは、成長ホルモン、例えばヒト成長ホルモン、Ｎ-メチオニルヒト成長ホルモン、及びウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インシュリン；プロインシュリン；レラキシン；プロレラキシン；糖タンパク質ホルモン、例えば濾胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、及び黄体化ホルモン（ＬＨ）；肝臓成長因子；線維芽成長因子；プロラクチン；胎盤ラクトゲン；腫瘍壊死因子-α及び-β；ミューラー阻害因子；マウス生殖腺刺激ホルモン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；神経成長因子；血小板成長因子；ＴＧＦ-α及びＴＧＦ-β等のトランスフォーミング成長因子（ＴＧＦｓ）；インシュリン様成長因子-Ｉ及びＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘発因子；インターフェロン-α、-β、及び-γ等のインターフェロン；コロニー刺激因子（ＣＳＦｓ）、例えばマクロファージ-ＣＳＦ（Ｍ-ＣＳＦ）；顆粒球-マクロファージ-ＣＳＦ（ＧＭ-ＣＳＦ）；及び顆粒球-ＣＳＦ（Ｇ-ＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬｓ）、例えばＩＬ-１、ＩＬ-２、ＩＬ-３、ＩＬ-４、ＩＬ-５、ＩＬ-６、ＩＬ-７、ＩＬ-８、ＩＬ-９、ＩＬ-１１、ＩＬ-１２；及びＬＩＦ及びキットリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子である。ここで用いられる際、用語サイトカインには、天然供給源から、又は組換え細胞培養からのタンパク質、及び天然配列サイトカインの生物学的に活性な等価物が含まれる。
【００５０】
２．方法と材料
本発明は、哺乳動物細胞におけるＴＡＬＬ−１、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、ＴＡＣＩｓ及び／又はＢＲ３の活性を調整するため方法と材料を提供する。本方法においては、細胞を所望の容量のＴＡＣＩ抗体に接触させることを含む。好ましくは、使用するＴＡＣＩ抗体の量は、治療的効果を達成する各リガンド又は各レセプターの結合及び／又は活性に作用するのに効果的な量である。これは、インビボ又はエクスビボにおいて、例えば以下及び実施例に記載の方法に従って達成できる。このようなＴＡＣＩ抗体によって治療する疾病又は疾患の例は、臨床的に事故免疫疾患と呼ばれる哺乳動物の状態を含み、それらは以下に限定されるものではないが、リウマチ様関節炎、多発性硬化症、乾癬、及びループス、又は哺乳動物のＢ細胞応答が異常に上方制御される癌等のその他の病的状態を含む。
【００５１】
Ａ．抗体
抗ＴＡＣＩレセプター抗体が提供され、それは本明細書に開示する方法に使用可能である。モノクローナル抗体は、Kohler及びMilstein, Nature, 256:495 (1975)に記載されているようなハイブリドーマ法を使用することで調製することができる。ハイブリドーマ法では、マウス、ハムスター又は他の適切な宿主動物を典型的には免疫化剤により免疫化することで、免疫化剤に特異的に結合する抗体を生成するかあるいは生成可能なリンパ球を誘発する。また、リンパ球をインビトロで免疫化することもできる。
免疫化剤は、典型的には、ＴＡＣＩポリペプチド（またはＴＡＣＩ ECD）、またはその融合タンパク質、例えばＴＡＣＩ ECD-IgG融合タンパク質を含む。あるいは、免疫化剤は、ＴＡＣＩに対するＴＡＬＬ−１及びＡＰＲＩＬの結合に関与する1以上のアミノ酸を有するＴＡＣＩの断片または一部を含んでもよい。好ましい実施態様では、免疫化剤は、実施例１に記載のような、IgG配列に融合したＴＡＣＩの細胞外ドメイン配列を有する。
【００５２】
一般に、ヒト由来の細胞が望まれる場合には末梢血リンパ球(「ＰＢＬ」)が使用されるか、あるいは非ヒト哺乳動物源が望まれている場合は、脾臓細胞又はリンパ節細胞が使用される。次いで、ポリエチレングリコール等の適当な融合剤を用いてリンパ球を不死化細胞系と融合させ、ハイブリドーマ細胞を形成する（Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, 1986年、pp. 59-103）。不死化細胞系は、通常は、形質転換した哺乳動物細胞、特に齧歯動物、ウシ、及びヒト由来の骨髄腫細胞である。通常、ラット又はマウスの骨髄腫細胞系が使用される。ハイブリドーマ細胞は、好ましくは、未融合の不死化細胞の生存又は成長を阻害する一又は複数の物質を含有する適切な培地で培養される。例えば、親細胞が、酵素のヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ(HGPRT又はHPRT)を欠いていると、ハイブリドーマの培地は、典型的には、ヒポキサチン、アミノプテリン及びチミジンを含み(「ＨＡＴ培地」)、この物質がＨＧＰＲＴ欠乏性細胞の増殖を阻止する。
好ましい不死化細胞系は、効率的に融合し、選択された抗体生成細胞による安定した高レベルの抗体発現を支援し、ＨＡＴ培地のような培地に対して感受性のものである。より好ましい不死化細胞系はマウス骨髄腫系であり、これは例えばカリフォルニア州サンディエゴのSalk Institute Cell Distribution Centerやヴァージニア州マナッサスのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）より入手可能である。ヒトモノクローナル抗体を生成するためのヒト骨髄腫及びマウス-ヒト異種骨髄腫細胞系も開示されている（Kozbor, J. Immunol., 133:3001 ,1984年; Brodeurら, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, Marcel Dekker, Inc., New York, 1987年、pp. 51-63）
【００５３】
次いでハイブリドーマ細胞が培養される培養培地を、ＴＡＣＩに対するモノクローナル抗体の存在の有無に関し分析する。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって生成されたモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降又はラジオイムノアッセイ(ＲＩＡ)や酵素結合免疫測定法(ＥＬＩＳＡ)等のインビトロ結合検定法によって測定する。このような技術及びアッセイは、当該分野において公知である。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えばMunson及びPollard, Anal. Biochem., 107:220 (1980年)によるスキャッチャード分析法によって測定することができる。
所望のハイブリドーマ細胞が同定された後、クローンを限界希釈工程によりサブクローニングし、標準的な方法で成長させることができる（Goding, 上掲）。この目的のための適当な培地には、例えば、ダルベッコの改変イーグル培地及びＲＰＭＩ-１６４０倍地が含まれる。あるいは、ハイブリドーマ細胞は哺乳動物においてインビボで腹水として成長させることもできる。
【００５４】
サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、例えばプロテインＡ−セファロース法、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー法、ゲル電気泳動法、透析法又はアフィニティークロマトグラフィー等の従来の免疫グロブリン精製方法によって培養培地又は腹水液から単離又は精製される。
また、モノクローナル抗体は、組換えDNA法、例えば米国特許第4,816,567号に記載された方法により作成することができる。モノクローナル抗体をコードするDNAは、常套的な方法を用いて(例えば、モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用して)、容易に単離し配列決定することができる。本発明のハイブリドーマ細胞はそのようなDNAの好ましい供給源となる。ひとたび単離されたら、DNAは発現ベクター内に挿入することができ、これが宿主細胞、例えば大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣(ＣＨＯ)細胞、あるいは免疫グロブリンタンパク質を生成などしない骨髄腫細胞内に形質移入され、組換え宿主細胞内でモノクローナル抗体の合成をすることができる。また、DNAは、例えば相同マウス配列に換えてヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインのコード配列を置換することにより（Morrisonら, Proc. Nat. Acad. Sci. 81, 6851, 1984年）、又は免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の一部又は全部を共有結合することにより修飾することができる。
【００５５】
典型的に、このような非免疫グロブリンポリペプチドは本発明の抗体の定常ドメインに置換されるか、または、本発明の抗体の抗原含有部位の可変ドメインに置換され、ＴＡＣＩに対する特異性を有する１つの抗原含有部位、および異なる抗体に対する特異性を有する別の抗原含有部位を含むキメラ二価抗体をつくることができる。
キメラ抗体またはハイブリッド抗体はまた、架橋剤を使用する方法を含め、合成タンパク質化学において公知の方法を使用してインビトロで調製してもよい。例えば、ジスルフィド交換反応を使用して、またはチオエーテル結合形成により、免疫毒性を構築することができる。この目的のために適切な試薬には、イミノチオレートおよびメチル−４−メルカプトブチルイミデートが含まれる。
一本鎖Fv断片も、Iliades他, FEBS Letters, 409:437-441 (1997年)に記載のように生成することができる。様々なリンカーを使用したこのような一本鎖断片は、Kortt他, Protein Engineering, 10:423-433 (1997年)に開示されている。抗体の組換え生成および処置が従来技術で公知である。当業者が使用するそのような技術の典型的な例をいかに詳述する。
【００５６】
(i)ヒト化抗体
一般的に、ヒト化抗体には非ヒト由来の一又は複数のアミノ酸残基が導入される。これら非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、典型的には「移入」可変ドメインから得られる「移入」残基と称される。ヒト化は、基本的に、ウィンター(Winter)及び共同研究者（Jonesら, Nature, 321:522-525 (1986年)；Riechmannら, Nature, 332:323-327 (1988年)；Verhoeyenら, Science, 239:1534-1536 (1988年)）の方法に従って、齧歯類ＣＤＲ又はＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列に置換することにより実施される。
よって、このような「ヒト化」抗体は、無傷のヒト可変ドメインより実質的に少ない分が非ヒト種由来の対応する配列で置換されたキメラ抗体である。実際には、ヒト化抗体は典型的には幾つかのＣＤＲ残基及び場合によっては幾つかのＦＲ残基が齧歯類抗体の類似する部位からの残基によって置換されたヒト抗体である。
更に、抗体を、抗原に対する高結合親和性や他の好ましい生物学的性質を保持してヒト化することが重要である。この目標を達成するべく、好ましい方法では、親及びヒト化配列の三次元モデルを使用して、親配列及び様々な概念的ヒト化産物の分析工程を経てヒト化抗体を調製する。三次元免疫グロブリンモデルは一般的に入手可能であり、当業者にはよく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の推測三次元立体配座構造を図解し、表示するコンピュータプログラムは購入可能である。これら表示を見ることで、候補免疫グロブリン配列の機能における残基のありそうな役割の分析、すなわち候補免疫グログリンの抗原との結合能力に影響を及ぼす残基の分析が可能になる。このようにして、例えば標的抗原に対する親和性が高まるといった、望ましい抗体特性が達成されるように、ＦＲ残基をコンセンサス及び移入配列から選択し、組み合わせることができる。一般的に、CDR残基は、直接かつ最も実質的に抗原結合性に影響を及ぼしている。
【００５７】
(ii)ヒト抗体
ヒトモノクローナル抗体はハイブリドーマ法により作成することができる。ヒトモノクローナル抗体の生成のためのヒト骨髄腫およびマウス−ヒト異種骨髄腫の細胞系は、例えば、Kozbor, J. Immunol. 133, 3001 (1984年), 及びBrodeur他, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp.51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987年)に記載されている。
内在性の免疫グロブリン産生がない状態で、免疫化によりヒト抗体のレパートリーを産生することのできるトランスジェニック動物(例えば、マウス)を作ることが現在では可能である。例えば、キメラ及び生殖系列突然変異体マウスにおける抗体重鎖結合領域(ＪＨ)遺伝子の同型接合除去が内因性抗体産生の完全な阻害をもたらすことが記載されている。このような生殖系列突然変異体マウスにおけるヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子列の移入は、抗原投与時にヒト抗体の産生をもたらす。Jakobovitsら, Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 90:2551 (1993)；Jakobovitsら, Nature 362:255-258 (1993)を参照のこと。
【００５８】
Mendez他(Nature Genetics 15: 146-156 [1997年])はこの技術をさらに改良し、抗原を投与すると親和性の高い完全ヒト抗体を生成する「ゼノマウスII（Xenomouse II）」と称する系列のトランスジェニックマウスを生成した。これは、上述のように、内因性JHセグメントに欠陥を有するマウスに、メガベースのヒト重鎖座および軽鎖座の生殖細胞系に取り込むことにより達成された。ゼノマウスIIは、約66VH遺伝子、完全なDH及びJH領域および３つの異なる定常領域（μ、δおよびχ）を含む1,020kbのヒト重鎖遺伝子座を有し、また32Vκ遺伝子、JκセグメントおよびCκ遺伝子を含む800kbのヒトκ遺伝子座を有する。これらのマウスに生成された抗体は、遺伝子再配列、構成、およびレパートリーを含め、ヒトに見られる抗体に全ての面で非常に類似している。ヒト抗体は、好ましくは、マウス座における遺伝子再配列を抑制する内因性JHセグメントの欠損により、内因性抗体全体にわたって発現する。
別法として、ファージディスプレイ技術(McCaffertyら, Nature 348：552-553, 1990年)を使用して、非免疫化ドナーの免疫グロブリン可変(Ｖ)ドメイン遺伝子レパートリーから、インビトロでヒト抗体及び抗体断片を生産させることができる。この技術によれば、抗体Ｖドメイン遺伝子を、フレーム単位で、繊維状バクテリオファージ、例えばＭ１３又はｆｄの大きい又は小さいコートタンパク質遺伝子のどちらかでクローンし、ファージ粒子の表面で機能的抗体断片として表示させる。繊維状粒子がファージゲノムの一本鎖DNAコピーを含むので、抗体の機能特性に基づく選択によっても、結果としてこれらの特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択が成される。よって、このファージはＢ細胞のいくつかの特性を模倣している。ファージディスプレイは多様な形式で行うことができる；例えばJohnson, Kevin S. 及びChiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3：564-571(1993)を参照せよ。Ｖ-遺伝子セグメントのいくつかの供給源を、ファージディスプレイのために使用できる。Clacksonら, Nature, 352：624-628(1991年)は、免疫化したマウス脾臓由来のＶ遺伝子の小さいランダムなコンビナトリアルライブラリから、多様で多くの抗-オキサゾロン抗体を単離した。非免疫化ヒトドナーのＶ遺伝子のレパートリーが構成可能であり、多様で多くの抗原(自己抗原を含む)に対する抗体は、Marksら, J. Mol. Biol. 222：581-597(1991)、又はGriffithら, EMBO J. 12：725-734(1993)に記載の技術にそのまま従うことで単離することができる。自然な免疫応答において、抗体遺伝子は高い率で突然変異を蓄積する（体細胞過剰変異）。導入された変化の一部は高い親和性を提供し、親和性の高い表面免疫グロブリンを示すＢ細胞は、その後の抗原曝露の間に優先的に複製され、分化される。このような自然の工程を、「チェーンシャフリング」として知られる技術(Marks他, Bio/Technol. 10, 779-783, 1992年)を使用することにより模倣することができる。この方法では、重鎖Ｖ領域遺伝子と軽鎖Ｖ領域遺伝子を、順に、非免疫化ドナーから取得したＶドメイン遺伝子の自然に生じる変異体（レパートリー）のレパートリーで置換することにより、ファージディスプレイによって得られた「一次」ヒト抗体の親和性を改善することができる。この技術により、nM範囲での親和性を有する抗体および抗体断片の生産が可能である。非常に大きなファージ抗体のレパートリー（「マザーオブオール ライブラリー（the Mother-of-all libraries）」とも呼ばれる）を作る方法が、WaterhouseらによるNucl. Acids Res. 21, 2265-2266 (1993年)に開示されている。また、遺伝子シャフリングは、ヒト抗体が元になっている齧歯類の抗体と類似した親和性および特性を有している場合、齧歯類の抗体からヒト抗体を得るために使用することもできる。「エピトープインプリンティング」と呼ばれるこの方法により、ファージディスプレイ技術により得られた齧歯類抗体の重鎖Ｖドメイン遺伝子と軽鎖Ｖドメイン遺伝子をヒトＶドメイン遺伝子のレパートリーで置換し、齧歯類−ヒトキメラを作成する。抗原を選択することにより、機能的抗原結合部位を回復することができるヒト可変部が単離される、つまり、エピトープがパートナーの選択をつかさどる（インプリントする）。残りの齧歯類Ｖドメインを置換するためにこの工程を繰り返すと���ヒト抗体が得られる（1993年4月1日公開のPCT特許出願WO 93/06213を参照）。伝統的なCDR移植による齧歯類抗体のヒト化と異なり、この技術により、齧歯類起源のフレームワークまたはCDR残基を全く持たない完全なヒト抗体が得られる。
【００５９】
下記のように、本発明の抗体は、場合によっては、一量体、抗体、二量体抗体、ならびに抗体の多価形態を含んでよい。当業者は、当分野で既知の技術により、そのような二量体または多価形態を構築することができる。一価抗体を調製する方法もまた、当技術分野で周知である。例えば、一方法では、免疫グロブリン軽鎖と修飾された重鎖の組換え発現を含む。重鎖は一般にFc領域の任意の点で切断され、重鎖の架橋が形成されることが防止される。あるいは、関連するシステイン残基を別のアミノ酸残基で置換するか、または削除し、よって架橋結合を防止する。
【００６０】
(iii)二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体、好ましくはヒトもしくはヒト化抗体である。本発明の場合において、結合特異性の一方はＴＡＣＩ又はＢＲ３レセプターに対してであり、他方はＢＣＭＡ又はＢＲ３レセプター等の任意の他の抗原、好ましくはレセプター又はレセプターサブユニットに対してである。例えば、ＴＡＣＩレセプターおよび別のアポトーシス−情報伝達レセプターに特異的に結合する二重特異性抗体は、本発明に含まれる。
二重特異性抗体を作成する方法は当該技術分野において周知である。伝統的には、二重特異性抗体の組換え生産は、二つの重鎖が異なる特異性を持つ二つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の発現に基づく。Millstein及びCuello, Nature, 305:537-539 (1983年)。免疫グロブリンの重鎖と軽鎖を無作為に取り揃えるため、これらハイブリドーマ(クアドローマ)は１０種の異なる抗体分子の潜在的混合物を生成し、その内一種のみが正しい二重特異性構造を有する。正しい分子の精製は、アフィニティークロマトグラフィー工程によって通常達成されるが、幾分扱いにくく、生産性が低い。同様の手順が1993年5月13日公開のWO 93/08829、及びTrauneckerら, EMBO,10:3655-3659 (1991年)に開示されている。
【００６１】
さらに好ましい別の方法により、所望の結合特異性(抗体-抗原結合部位)を有する抗体可変ドメインを免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合できる。融合は、好ましくは少なくともヒンジ部、ＣＨ２及びＣＨ３領域を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとのものである。少なくとも一つの融合には軽鎖結合に必要な部位を含む第一の重鎖定常領域(ＣＨ１)が存在することが望ましい。免疫グロブリン重鎖融合をコード化するDNA、及び望むのであれば免疫グロブリン軽鎖を、別々の発現ベクターに挿入し、適当な宿主生物に同時形質移入する。これにより、組立に使用される三つのポリペプチド鎖の等しくない比率が所最適な収率をもたらす実施態様において、三つのポリペプチド断片の相互の割合の調節に大きな融通性がもたらされる。しかし、少なくとも二つのポリペプチド鎖の等しい比率での発現が高収率をもたらすとき、又はその比率があまり影響がないときは、２または３個全てのポリペプチド鎖のためのコード化配列を一つの発現ベクターに挿入することが可能である。この手法の好ましい実施態様では、二重特異性抗体は、第一の結合特異性を有する一方のアームのハイブリッド免疫グロブリン重鎖と、他方のアームにハイブリッド免疫グロブリン重鎖-軽鎖対(第二の結合特異性を提供する)とからなる。二重特異性分子の半分にしか免疫グロブリン軽鎖がないと容易な分離法が提供されるため、この非対称的構造は、所望の二重特異性化合物を不要な免疫グロブリン鎖の組み合わせから分離することを容易にすることが分かった。このアプローチ法は、1994年3月3日公開の国際公開第94/04690号に開示されている。
二重特異性抗体を作成するための更なる詳細については、例えばSureshら, Methods in Enzymology, 121:210(1986)を参照されたい。
【００６２】
(iv)ヘテロ抱合抗体
ヘテロ抱合抗体も本発明の範囲に含まれる。ヘテロ抱合抗体は、２つの共有結合した抗体からなる。このような抗体は、例えば、免疫系細胞を不要な細胞に対してターゲティングさせるため(米国特許第4,676,980号)及びＨＩＶ感染の治療のために（WO 91/00360; WO 92/200373; EP 03089)提案されている。ヘテロ抱合抗体は、任意の簡便な架橋法を使用して、調製することができる。適切な架橋剤は当技術分野において既知であり、複数の架橋技術と共に、米国特許第4,676,980号に開示されている。
【００６３】
(v)抗体断片
一部の実施態様においては、抗-ＴＡＣＩ抗体（マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、及び抗体変異体を含む）は抗体断片である。抗体断片を生産するために様々な技術が開発されている。伝統的には、これらの断片は、無傷の抗体のタンパク分解性消化を介して誘導されている(例えば、Morimotoら, J. Biochem. Biophys. Methods 24:107-117 (1992)及びBrennanら, Science, 229:81(1985年)を参照されたい)。しかし、これらの断片は、現在は組換え宿主細胞により直接生産することができる。例えば、Ｆａｂ'-ＳＨ断片は大腸菌から直接回収することができ、化学的に結合してF(ab')２断片を形成することができる(Carterら, Bio/Technology 10:163-167(1992年))。他の実施態様では、ロイシンジッパーGCN4を使用してF(ab')2を形成し、F(ab')2分子の構築を促進する。別の実施態様では、組換え宿主細胞の培地からFv、FabまたはF(ab')2断片を直接分離することができる。抗体断片を生産するための他の技術は当業者には明らかである。例えば、パパインを使用して消化を行うことができる。パパイン消化の例は、1994年12月22日公開のWO94/29348および米国特許第4,342,566号に開示されている。抗体のパパイン消化は、通常、Fab断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片を生成する。各Fab断片は単一の抗原結合部位、および残存性Fc断片を持つ。ペプシン処理により、２つ抗原結合部位を持ち、抗原に架橋結合する能力のあるF(ab')２が生成される。
抗原消化で生成されるFab断片は、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第一定常ドメイン（CH1）も含む。Fab’断片は、それに加えて、抗原ヒンジ領域由来の１以上のシステインを含む、重鎖のCH1ドメインのカルボキシ末端に少数の残基を持つ点においてFab断片と異なる。本発明では、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を持つFab'として、ここではFab'-SHと記載する。F(ab')２抗体断片は、もともとそれらの間にヒンジシステインを有するFab'断片の対として生成されたものである。抗体断片の他の化学的結合も知られている。
【００６４】
抗体をその定常領域の保存位置でグリコシル化する（JefferisおよびLund, Chem. Immunol. 65:111-128, 1997年; WrightおよびMorrison, TibTECH 15:26-32, 1997年）。免疫グロブリンのオリゴ糖側鎖は、タンパク質の機能（Boyd他., Mol. Immunol. 32:1311-1318, 1996年; WittweおよびHoward, Biochem. 29:4175-4180, 1990年)、および、糖タンパク質の高次構造及び提示される3次元表面に影響しうる糖タンパク質の部分同士の分子内相互作用（HefferisおよびLund, 上掲; Wyss and Wagner, Current Opin. Biotech. 7:409-416, 1996年）に作用する。オリゴ糖はまた、特異的な認識構造に基づいて任意の糖タンパク質を特定の分子に標的化するのに役立つ。例えば、アガラクトシル化IgGにおいて、オリゴ糖部分はCH2内空間の外に「とび出し(flip)」、末端Ｎ−アセチルグリコサミン残基がマンノース結合タンパク質に結合できるようになることが報告されている（Malhotra他, Nature Med. 1:237-243, 1995年）。チャイニーズハムスター卵巣（CHO）細胞において、オリゴ糖のグリコペプチダーゼによるCAMPATH-1H（ヒトリンパ球のCDw52抗原を認識する組換えヒト化マウスモノクローナルIgG1抗体）からの除去を実行した結果、補体媒介性溶解（CMCL）が完全に低減したが（Boyd他, Mol. Immunol. 32:1311-1318, 1996年)、ノイラミニダーゼを使用してシアル酸残基を選択的に除去した結果、DMCLの低減は見られなかった。抗体のグリコシル化はまた、抗体依存性の細胞の細胞障害性（ADCC）に影響することが報告されている。特に、バイセクティングGlcNAcの形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼである、β(1,4)-N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼIII（GnTIII）のテトラサイクリン制御発現を持つCHO細胞で、ADCC活性が向上したことが報告されている（Umana他, Mature Biotech. 17:176-180, 1999年）。
抗体のグリコシル化変異体は、抗体のグリコシル化のパターンが変更された変異体である。変更するとは、抗体に見られる１以上の炭水化物部分を除去し、抗体に１以上の炭水化物部分を加え、グリコシル化の組成（グリコシル化パターン）、グリコシル化の範囲、その他を変更することを意味する。グリコシル化変異体は、例えば、抗体をコードする核酸配列について、１以上のグリコシル化部位の、除去、変更、および/または付加を行うことにより調製することができる。
【００６５】
抗体のグリコシル化は、通常、Ｎ−結合かＯ−結合である。Ｎ−結合とは、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物成分の付与を指す。トリペプチド配列のアスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−トレオニン（ここで、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸）は、炭水化物成分のアスパラギン側鎖への酵素的付与の認識配列である。したがって、ポリペプチド中にこれらトリペプチド配列のいずれかが存在することにより、潜在的グリコシル化部位が創造される。Ｏ−結合のグリコシル化とは、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはトレオニンへの、糖類Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうち１つの付着を指す。５−ヒロドキシプロリン、または５−ヒドロキシリシンを使用してもよい。
抗体へのグリコシル化部位の付加は、（Ｎ−結合グリコシル化部位について）上述のトリペプチド配列の１または複数を有するようにアミノ酸配列を変更することにより常套的に達成される。変更は、また、（Ｏ−結合グリコシル化部位について）元の抗体の配列に対して１以上のセリンまたはトレオニン残基を付加または置換することにより行ってもよい。
【００６６】
抗体のグリコシル化（グリコシル化パターンを含む）は、内在するヌクレオチド配列を変更することなく変更可能である。グリコシル化は抗体を発現するために使用される宿主細胞に大きく依存する。潜在的治療法としての、組換え糖タンパク質の発現に使用される細胞の種類、例えば抗体が、まれに天然細胞であることから、抗体のグリコシル化パターンは大きく変化することが予想される（例えばHse他, J. Biol. Chem. 272:9062-9070, 1997年参照）。宿主細胞の選択に加えて、抗体の組換え生産の間のグリコシル化に影響を与える因子には、成長形態、媒地、製剤、培養密度、酸素添加、pH、精製スキームなどが含まれる。オリゴ等製造に関わるある種の酵素の導入又は過剰発現を含む、特定の宿主生物においてなされたグリコシル化パターンを変えるための様々な方法が提案されている（米国特許第5,047,335号、米国特許第5,510,261号および米国特許第5,278,299号）。グリコシル化、または特定の種類のグリコシル化は、例えばエンドグリコシダーゼＨ（Endo H）の使用により、糖タンパク質から酵素学的に除去することができる。加えて、組換え宿主細胞を遺伝学的に設計することができ、例えば多糖類の特定種のプロセシングにおいて欠損をつくることができる。これら同様の技術は当技術分野において既知である。
抗体のグリコシル化構造は、レクチンクロマトグラフィ、NMR、質量分析、HPLC、GPC、単糖成分分析、連続酵素消化、および高ｐＨアニオン交換クロマトグラフィを使用して電荷に基づきオリゴ糖を分離するHPAEC-PADなどの、炭水化物分析を行う従来技術により容易に分析できる。分析的な目的のためにオリゴ糖を遊離させる方法も知られており、それらには、限定はしないが、酵素的処理（通常ペプチド−Ｎ−グリコシダーゼ Ｆ／エンド−β−ガラクトシダーゼを使用して行う）、主にＯ−結合構造を遊離するのに過酷なアルカリ環境を使用しての除去、およびＮ−結合とＯ−結合両方のオリゴ糖を遊離させるための無水ヒドラジンを使用する化学的方法が含まれる。
【００６７】
三重特異性抗体も本発明の範囲内に含まれる。このような抗体は、例えば、Iliades他（上掲）およびKortt他（上掲）に開示されている。
本発明の抗体は、抗体を細胞障害剤（例えば毒性分子）か、またはプロドラッグ(例えばペプチジル化学療法剤、WO81/01145参照)を活性な抗癌剤に変換するプロドラッグ活性化酵素を抱合させることにより修飾できる。例えば、WO 88/07378および米国特許第4,975,278号参照。この技術は、「抗体依存酵素媒介プロドラッグ療法」（ADEPT）とも呼ばれる。
【００６８】
ADEPTに有用な免疫複合体の酵素成分は、プロドラッグをそのさらに活性な細胞障害性形態に変換するようにプロドラッグに作用することが可能なあらゆる酵素を含む。本発明の方法に有用な酵素は、それらに限定はしないが、リン酸を含有するプロドラッグを遊離剤に変換するのに有用なアルカリホスファターゼ；硫酸を含有するプロドラッグを遊離剤に変換するのに有用なアリールスルファターゼ；非毒性５−フルオロシトシンを抗癌剤の５−フルオロウラシルに変換するのに有用なシトシンデアミナーゼ；ペプチドを含有するプロドラッグを遊離剤に変換するのに有用な、セラチアプロテアーゼ、サーモリシン、スブチリシン、カルボキシペプチダーゼおよびカテプシン（例えばカテプシンＢおよびＬ）などのプロテアーゼ；カスパーゼ3などのカスパーゼ；Ｄ−アミノ酸置換基を含むプロドラッグを変換するのに有用な、Ｄ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化したプロドラッグを遊離剤に変換するのに有用なβ−ガラクトシダーゼおよびノイラミニダーゼなどの炭水化物切断酵素：β−ラクタムにより誘導された薬剤を遊離剤に変換するのに有用なβ−ラクタマーゼ；および、フェノキシベンザミン基またはフェニルアセチル基の各々によりアミン窒素に誘導された薬剤を変換するのに有用な、ペニシリンＶアミダーゼまたはペニシリンＧアミダーゼなどのペニシリンアミダーゼを含む。あるいは、「アブザイム」としても知られる酵素的活性を持つ抗体を使用して、本発明のプロドラッグを遊離活性剤に変えることもできる（例えば、Massey, Nature 328: 457-458, 1987年を参照）。抗体−アブザイム複合体は、アブザイムを腫瘍細胞群に到達させるために、本明細書に開示するようにして調製することができる。
ヘテロ二機能的架橋剤の使用など、当技術分野で周知の技術により、抗体に対して酵素を二重結合的に結合させることができる。あるいは、少なくとも本発明の酵素の機能的に活性な部分に連結した本発明の抗体の抗原結合領域を少なくとも有する融合タンパク質を、当技術分野で周知の組換えDNA技術を使用して構築することができる（例えば、Neuberger他, Nature, 312: 604-608, 1984年を参照）。
【００６９】
さらなる抗体の変形例を考える。例えば、抗体を多様な非タンパク様ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、またはポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコールのコポリマー）の１つにリンクさせることができる。また、例えば、コロイド状薬剤運搬システム（例えば、リポゾーム、アルブミン微粒子、マイクロエマルジョン、ナノ−粒子およびナノカプセル）、またはマクロエマルジョンにおける、界面重合（例えば、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−（methylmethacylate））マイクロカプセル、またはコアセルベーション技術により用意したマイクロカプセルに抗体を包むことができる。このような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Oslo, A., Ed., (1980年)に開示されている。血清の半減期を増大させるため、例えば米国特許第5,739,277号に記載されているように、サルベージレセプター結合エピトープを抗体（特に抗体断片）に組み込むことができる。ここで使用する「サルベージレセプター」という用語は、インビボでIgG分子の血清半減期を増大させるIgG分子（例えばIgG1、IgG2、IgG3、oまたはIgG4）のFc領域のエピトープを指す。
【００７０】
Ｂ．アッセイ方法
リガンド／レセプター結合の研究は、競合的結合アッセイ、直接及び間接サンドウィッチアッセイ、及び免疫沈降アッセイなどの既知のアッセイ法で実施してよい。細胞ベースアッセイ及び動物モデルは、ここで同定されるリガンド及びレセプター間の相互作用、ここで言及される状態及び疾患の進行及び病因をさらに理解するために、診断方法として用いることができる。
一つのアプローチにおいて、哺乳動物細胞はここで記述されるリガンド又はレセプターによって形質移入され、結合又は活性を増強又は阻害するためのアゴニスト又はアンタゴニストが解析される。適切な細胞は、所望の遺伝子によって形質移入され、活性に関してモニターされる。その後、このような形質移入された細胞株は、例えば、Ｂ細胞の増殖又はＩｇの分泌などを、阻害又は増強するアンタゴニスト又はアゴニストの能力を試験するために使用することができる。ここで同定される遺伝子のコード配列で形質移入される細胞は、免疫関連疾患又は癌の治療のための薬剤候補を同定するためにさらに使用され得る。  
【００７１】
さらに、トランスジェニック動物に由来する初代培養は、ここでの細胞ベースアッセイに使用できる。トランスジェニック動物から連続株化細胞を誘導する技術はこの分野で良く知られている[例えばSmall等, Mol. Cell. Biol. 5：642-648 (1985)参照]。
一つの適切な細胞ベースアッセイは、エピトープタグ化リガンド（例えば、ＡＰ又はＦｌａｇ）を、各レセプターを有するか又は発現させる細胞へ添加することであり、抗タグ抗体を用いてＦＡＣＳ染色することによる結合（予想されるアンタゴニストの存在又は非存在下において）の分析である。その他のアッセイにおいて、ＴＡＬＬ−１又はＡＰＲＩＬにより誘導されたＢ細胞の増殖を阻害するアゴニスト又はアンタゴニストの能力がアッセイされる。Ｂ細胞又は細胞株はＴＡＬＬ−１又はＡＰＲＩＬと共に予想されるアンタゴニストの存在又は非存在下において培養され、Ｂ細胞の増殖は３Ｈ−チミジンの取込み又は細胞数によって測定され得る。
さらに、インビトロにおける細胞ベースアッセイの結果は、インビボ動物モデルを使用し、証明することができる。種々の良く知られた動物モデルは、例えば、免疫関連疾患又は癌の進行及び病因についてここに同定されるアゴニスト及びアンタゴニストの役割を更に理解するために、そして候補治療薬の有効性を試験するために、使用できる。これらのモデルのインビボの性質により、特にヒト患者における反応を予測できる。免疫関連疾患の動物モデルは、非組換え及び組換え(トランスジェニック)動物の両方を含む。非組換え動物モデルは、例えば、齧歯類、例えばマウスモデルを含む。このようなモデルは、標準的な技術、例えば、皮下注射、尾部静脈注射、脾臓移植、腹膜内移植、腎被膜下移植等により、細胞を同系マウスに導入することにより作成される。
【００７２】
例えば、移植片対宿主疾患のための動物モデルが知られている。移植片対宿主疾患は、免疫担当細胞が免疫抑制又は寛容患者に移植されたときに起こる。ドナー細胞が宿主抗原を認識して反応する。反応は生命を脅かす重篤な炎症から下痢又は体重減少の軽い場合まで変わり得る。移植片対宿主疾患モデルはＭＨＣ抗原及び少数の移植抗原に対するＴ細胞の反応性を評価する手段を提供する。好適な手法は、Current Protocols in Immunology, unit 4.3に詳細に記載されている。
皮膚移植片拒絶の動物モデルは、Ｔ細胞がインビボ組織破壊を媒介する能力を試験する手段であり、抗ウイルス免疫および腫瘍免疫におけるそれらの役割の指標である。最も普通で許容されるモデルは、マウスの尾の皮膚移植である。繰り返し実験により、皮膚同種移植片拒絶はＴ細胞、ヘルパーＴ細胞およびキラー効果Ｔ細胞に媒介され、抗体ではないことが示された。Auchincloss, H. Jr.及びSachs, D.H., Fundamental Immunology, 2版, W.E. Paul編, Raven Press, NY, 1989年, 889-992。好適な手法は、上記のCurrent Protocols in Immunology, unit 4.4に詳細に記載されている。本発明の組成物の試験に使用できる他の移植片拒絶モデルは、Tanabe, M.ら, Transplantation (1994年) 58: 23及びTinubu, S.A.ら, J. Immunol. (1994年) 4330-4338に記載されている同種心臓移植モデルである。
【００７３】
遅延型過敏症の動物モデルは、同様に細胞媒介免疫機能のアッセイ法を提供する。詳細な型の過敏症反応は、抗原負荷後時間が経過するまでピークに達しない炎症を特徴とするＴ細胞媒介インビボ免疫反応である。これらの反応はまた、組織特異的自己免疫疾患、例えば多発性硬化症（ＭＳ）及び実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ、ＭＳのモデル）を起こす。好適な手法は、上記のCurrent Protocols in Immunology, unit 4.5に詳細に記載されている。
関節炎の動物モデルはコラーゲン誘発関節炎である。このモデルは、ヒトの自己免疫性慢性関節リウマチと臨床的、組織学的及び免疫学的特徴を共有し、ヒトの自己免疫性関節炎の許容されるモデルである。マウス及びラットモデルは、滑膜炎、軟骨及び肋軟骨下骨の浸食を特徴とする。本発明の化合物は、上記のCurrent Protocols in Immunology, unit 15.5に記載されているプロトコールを用いて、自己免疫性関節炎に対する活性について試験できる。また、Issekutz, A.C.ら, Immunology (1996年) 88: 569に記載されているＣＤ１８及びＶＬＡ-４インテグリンに対するモノクローナル抗体を用いたモデルも参照のこと。
【００７４】
喘息のモデルが開示されており、そこでは抗原誘発気道過剰反応性、肺性好酸球増加症及び炎症が、動物をオボアルブミンで感作し、次いで動物にエアロゾルで運ばれる同じタンパク質を負荷することにより誘発される。幾つかの動物モデル（モルモット、ラット、非ヒト霊長類）は、エアロゾル抗原で負荷した際にヒトのアトピー性喘息に似た徴候を示す。マウスモデルは、ヒト喘息の多くの特徴を持つ。本発明の組成物の喘息治療における活性及び有効性を試験するための好適な方法は、Wolyniec, W.W.ら, Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., (1998年) 18: 777 及びその引用文献に記載されている。
さらに、本発明の組成物は、乾癬様疾患の動物モデルでも試験できる。本発明の化合物は、Schon, M.P.ら, Nat. Med. (1997年)3: 183によって記載された、マウスが乾癬に類似する組織病原学的皮膚疾患を示すscid/scidマウスモデルでも試験できる。他の好適なモデルは、Nickoloff, B.J.ら, Am . J. Path. (1995年) 146: 580に記載されたように調製されるヒト皮膚／ｓｃｉｄマウスキメラである。
【００７５】
候補治療組成物の抗癌活性の試験のための種々の動物モデルが知られている。これらは、胸腺欠損マウス又はｓｃｉｄ／ｓｃｉｄマウス、或いはｐ５３ノックアウトマウスのような遺伝的マウス腫瘍モデルへ異種移植するヒト腫瘍を含む。
組換え（トランスジェニック）動物モデルは、ここに同定された遺伝子のコード部分を、トランスジェニック動物作成のための標準的技術を用いて、対象とする動物のゲノムに導入することにより加工できる。トランスジェニック操作の標的として提供できる動物は、限定されないが、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ヒツジ、ヤギ、ブタ、及び非-ヒト霊長類、例えばヒヒ、チンパンジー及びサルを含む。これらの動物に導入遺伝子を導入するのにこの分野で知られた技術は、全核マイクロインジェクション（Hoppe及びWanger, 米国特許第4,873,191号）；胚系列へのレトロウイルス媒介遺伝子転移（例えば、Van der Puttenら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82, 6148-615, 1985年）；胚性肝細胞での遺伝子標的化（Thompsonら, Cell 56, 313-321, 1989年）；胚のエレクトロポレーション（Lo, Mol. Cel. Biol. 3, 1803-1814, 1983）；精子媒介遺伝子転移（Lavitranoら, Cell 57, 717-73, 1989年）を含む。概説のためには、例えば、米国特許第4,736,866号を参照のこと。
【００７６】
本発明の目的のために、トランスジェニック動物は、その細胞の一部にのみ導入遺伝子を有するもの（「モザイク動物」）を含む。導入遺伝子は、単一の導入遺伝子として、又はコンカテマー、例えば頭部と頭部又は頭部と尾部の直列型として組み込まれる。特定の細胞型への導入遺伝子の選択的導入も、例えば、Laskoら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 6232-636 (1992年)の技術に従って可能である。
トランスジェニック動物における導入遺伝子の発現は、標準的技術によって監視できる。例えば、導入遺伝子の組み込みの確認にサザンブロット分析又はＰＣＲ増幅が用いられる。次いで、ｍＲＮＡ発現のレベルは、インサイツハイブリッド形成、ノーザンブロット分析、ＰＣＲ、又は免疫組織化学などの技術を用いて分析できる。動物は、例えば、免疫細胞の特定組織への浸潤を決定する組織学的試験により免疫疾患病理の徴候について、或いは癌性または悪性組織の有無について、更に試験してもよい。
【００７７】
あるいは、動物の胚性細胞に導入されたポリペプチドをコードする変更ゲノムDNAと、同じポリペプチドをコードする内在性遺伝子との間の相同的組換えによって、ここに同定するポリペプチドをコードする欠陥又は変更遺伝子を有する「ノックアウト」動物を作成することができる。例えば、特定のポリペプチドをコードするcDNAは、確立された技術に従い、そのポリペプチドをコードするゲノムDNAのクローニングに使用できる。特定のポリペプチドをコードするゲノムDNAの一部を欠失したり、組み込みを監視するために使用する選択可能なマーカーをコードする遺伝子等の他の遺伝子で置換したりすることができる。典型的には、ベクターは無変化のフランキングDNA(５'と３'末端の両方)を数キロベース含む（例えば、相同的組換えベクターについてThomas and Capecchi, Cell, 51: 503 ,1987年を参照のこと）。ベクターは胚性幹細胞に(例えばエレクトロポレーションによって)導入し、導入されたDNAが内在性DNAと相同的に組換えられた細胞を選択する（例えば、Liら, Cell,69:915, 1992年参照）。選択された細胞は次に動物(例えばマウス又はラット)の胚盤胞内に注入され、集合キメラを形成する（例えば、Bradley, Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells: A Practical Approach, E. J. Robertson, ed. (IRL, Oxford, 1987年), pp. 113-152参照）。その後、キメラ性胚を適切な偽妊娠の雌性乳母に移植し、「ノックアウト」動物を作ると言われる。胚細胞に相同的に組換えられたDNAを有する子孫は標準的な技術により同定され、それらを利用して動物の全細胞が相同的に組換えられたDNAを含む動物を繁殖させることができる。ノックアウト動物は、例えば、そのポリペプチドが不在であることによるある種の病理的状態及び病理的状態の進行に対して防御する能力によって特徴付けられる。
【００７８】
Ｃ．製剤
本明細書に開示されるＴＡＣＩ抗体は、場合によっては担体に使用される。適切な担体とその剤形は、Remington's Pharmaceutical Sciences 16th 版, 1980, Mack Publishing Co., Osol等編に記載されている。通常、製剤を等張性にするため、担体には適量の製薬的に許容可能な塩が使用される。単体の例には、生理食塩水、リンガー液及びブドウ糖液が含まれる。担体のｐＨは好ましくは約５から約８、さらに好ましくは約７．４から約７．８である。当技術分野の業者であれば、投与経路や投与される活性剤の濃度等に応じて適切な担体が選ばれることが分かるであろう。担体は、凍結乾燥された形態でも水溶液の形態でもよい。
許容される担体、賦形剤、又は安定化剤は、好ましくは用いられる用量及び濃度で細胞及び／又は受容者に非毒性であり、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロライド；ヘキサメトニウムクロライド；ベンズアルコニウムクロライド、ベンズエトニウムクロライド；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；メチル又はプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３-ペンタノール；及びｍ-クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリジン等のアミノ酸；グルコース、マンノース、又はデキストリンを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；及び／又はTWEEN（登録商標）、PLURONICS（登録商標）、又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤を含む。
【００７９】
製剤は、また、治療すべき特定の徴候の必要に応じて一以上の活性化合物、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を持つものも含んでよい。
また、ここに開示されるＴＡＣＩ抗体は、例えばコアセルベーション技術により又は界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えば、各々ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン-マイクロカプセル及びポリ（メタクリル酸メチル）マイクロカプセル中、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミン小球、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）中、又はマイクロエマルション中に包括されていてもよい。これらの技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences 16版, Osol, A.編 (1980)に開示されている。
【００８０】
インビボでの投与に使用される製剤は無菌でなければならない。これは、無菌濾過膜による濾過により容易に達成される。
徐放性製剤を調製してもよい。徐放性製剤の好適な例は、活性剤を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスを含み、このマトリクスは成形された物品、例えばフィルム、又はマイクロカプセルの形状である。徐放性マトリクスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ(２-ヒドロキシエチル-メタクリレート)又はポリ(ビニルアルコール））、ポリアクチド（米国特許第3773919号）、Ｌ-グルタミン酸及びγエチル-Ｌ-グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン-酢酸ビニル、LUPRON DEPOT（登録商標）（乳酸-グリコール酸コポリマーと酢酸リュープロリドの注射可能な小球）等の分解性乳酸-グリコール酸コポリマー、ポリ-(Ｄ)-(-)-３-ヒドロキシブチル酸が含まれる。エチレン−酢酸ビニル及び乳酸−グリコール酸などのポリマーにより、１００日を超える期間に亘る分子の放出が可能になり、一方一部のヒドロゲルによりそれよりも短い期間に亘ってタンパク質が放出される。
【００８１】
Ｄ．治療態様
ここに開示される分子は、免疫関連疾患又は癌等、様々な病理的状態の治療に有用である。これらの状態は、例えばここに開示する１以上のＴＡＣＩ抗体又はアンタゴニスト又はアゴニストの投与により、哺乳動物におけるＴＡＬＬ−１、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、ＴＡＣＩｓまたはＢＲ３に関連する活性のうち選択されたものを刺激又は阻害することにより治療可能である。
ここに開示される様々な病理的状態を哺乳動物において診断することは、熟練した医師により可能である。診断技術は、例えば哺乳動物における癌又は免疫関連疾患の診断又は検出を可能にする従来技術において周知である。例えば、触診、血液分析、レントゲン、ＮＭＲ等を含む技術により癌を発見することができる。また、免疫関連疾患も容易に発見できる。全身性エリテマトーデスでは、疾病の中心的メディエータは、自己タンパク質／組織に対する自己反応性抗体の産出、及びそれに続く免疫媒介炎症である。腎臓、肺、筋骨格系、粘膜皮膚、目、中央神経系、心臓血管系、胃腸管、骨髄及び血液を含む複数の器官及び系が臨床的な影響を受ける。
【００８２】
リウマチ様関節炎(ＲＡ)は、主に複数の関節の滑膜に関連する慢性全身性自己免疫炎症疾患であり、結果として関節軟骨に傷害が生じる。病原はＴリンパ球依存性であり、リウマチ因子、自己ＩｇＧに対する自己抗体の生成に付随し、結果として滑液及び血液において高レベルに達する免疫複合体を生成する。関節中のこれらの複合体は、滑膜中へのリンパ球及び単球の顕著な浸潤と、続いての顕著な滑膜変化を誘発し；多数の好中球の添加により同様の細胞で浸潤されるならば、関節空間／液でもしかりである。冒されている組織は、多くの場合対称的なパターンで、主に関節である。しかしながら、２つの主な形態の関節外疾患もまた生じる。一形態は進行中の進行性関節疾患及び肺線維症の典型的病巣、血管炎、及び皮膚潰瘍を伴う関節外病変の発生である。関節外疾患の第２の形態はいわゆるフェルティー症候群であり、これは、ＲＡ疾患過程の末期、時には関節疾患が鎮静した後に生じ、好中球減少、血小板減少及び脾肥大の存在に関与する。これには、梗塞、皮膚潰瘍及び壊疽の形成を伴う複数の器官において血管炎が付随する。多くの場合、患者には、発病している関節上にある皮下組織にリウマチ様小結節が発達し；その小結節は、末期には混合炎症細胞浸潤に包囲された壊死性中心を有する。ＲＡにおいて生じる可能性のある他の徴候には：心外膜炎、胸膜炎、冠動脈炎、肺線維症を伴う間質性肺炎、乾性角結膜炎、及びリウマチ様小結節が含まれる。
若年性慢性関節炎は、多くの場合１６歳未満で発症する慢性特発性炎症疾患である。その表現型はＲＡといくつかの類似点があり；リウマチ因子が陽性である患者の中には若年性リウマチ様関節炎に分類されるものもいる。この疾患は３つの主要なカテゴリー：小関節(pauciarticular)、多関節及び全身性のものに亜分類される。関節炎は重度で典型的には破壊的であり、関節強直症及び遅延成長に至る。他の徴候には慢性前部ブドウ膜炎及び全身性アミロイド症が含まれる。
【００８３】
脊椎関節症は、いくつかの共通した臨床的特徴とＨＬＡ-Ｂ２７遺伝子産物の発現との共通の関連性を持つ疾患のグループである。該疾患には：強直性脊椎炎、ライター症候群(反応性関節炎)、炎症性大腸疾患に関連した関節炎、乾癬に関連した脊椎炎、若年発生脊椎関節症及び未分化脊椎関節症が含まれる。区別する特徴には、脊椎炎を伴うか伴わない仙腸関節炎；炎症非対称性関節炎；ＨＬＡ-Ｂ２７(クラスＩ ＭＨＣのＨＬＡ-Ｂ座位にある血清学的に定義された対立遺伝子)との関連；眼の炎症、及び他のリウマチ疾患に関連した自己抗体の不在が含まれる。疾患の誘導に対する鍵として最も関わっている細胞はＣＤ８＋Ｔリンパ球で、クラスＩ ＭＨＣ分子により提示される抗原を標的としている細胞である。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ分子により発現された外来ペプチドであるかのように、クラスＩ ＭＨＣ対立遺伝子ＨＬＡ-Ｂ２７に対して反応する。ＨＬＡ-２７のエピトープが細菌性又は他の微生物の抗原性エピトープを模倣し、よってＣＤ８＋Ｔ細胞の反応を誘発すると仮定されている。
全身性硬化症(強皮症)は病因がよく知られていない。疾患の顕著な特徴は皮膚の硬結であり；これは活性な炎症プロセスにより誘発されると思われる。強皮症は局部的又は全身性であり：血管病巣が共通しており、微小血管系における内皮細胞傷害が全身性硬化症の発達における初期の重要な事象であり；血管傷害は免疫媒介されうる。免疫学的基準は、皮膚病巣における単核細胞浸潤の存在と、多くの患者において抗細胞核抗体の存在によって導かれる。多くの場合、ＩＣＡＭ-１が皮膚病巣の線維芽細胞の細胞表面でアップレギュレーションされ、これらの細胞とのＴ細胞の相互作用が疾患の病因においてある役割を担っていることが示唆される。関連する他の器官には：胃腸管：萎縮症及び線維症があり、結果として異常なぜん動／運動性となっている平滑筋：腎臓：小弓形及び小葉間動脈に影響を及ぼし、結果として腎皮質の血流が低下し、タンパク尿、高窒素血尿及び高血圧になる同心性内皮下内膜増殖：骨格筋：萎縮、間質性線維症：炎症：肺：間質性肺炎及び間質性線維症：及び心臓：収縮バンド壊死、瘢痕／線維症が含まれる。
【００８４】
皮膚筋炎、多発性筋炎及び他のものを含む特発性炎症ミオパシーは病因がよく知られていない慢性筋肉炎症疾患であり、筋肉の弱化に至る。筋肉損傷／炎症は多くの場合対称的で進行性である。自己抗体は多くの形態と関連している。これらの筋炎特異的自己抗体は、タンパク質合成に関与する成分、タンパク質及びＲＮＡに対して産生されその機能を阻害する。
シェーグレン症候群は、免疫媒介炎症と、涙腺及び唾液腺の続く機能破壊によるものである。この疾患は炎症結合組織疾患に関連するか又はそれに伴う場合がある。この疾患は、双方とも小さいＲＮＡ-タンパク質複合体であるＲｏ及びＬａ抗原に対する自己抗体産生に関連している。病巣は乾性角結膜炎、口内乾燥症で、胆汁性硬変、末梢又は感覚ニューロパシー、及び明白な紫斑病を含む他の徴候又は関連を伴うものに至る。
【００８５】
全身性血管炎症は一次病巣が炎症で、続いて血管にダメージを受け、結果として冒された脈管により供給される組織に虚血／壊死／変性が生じ、いくつかのケースでは最終的な末端器官機能障害になるといった疾患である。また、血管炎(vasculitides)は他の免疫炎症媒介疾患、例えばリウマチ様関節炎、全身性硬化症等、特に免疫複合体の生成に関連した疾患等の続発症として又は二次病変として生じる場合がある。原発性全身性血管炎症グループの疾患には：全身壊死性血管炎：多動脈炎結節(polyarteritis nodosa)、アレルギー性脈管炎及び肉芽腫症、多脈管炎：ヴェゲナー肉芽腫症；リンパ腫様肉芽腫症：及び巨細胞動脈炎が含まれる。その他の血管炎には：粘膜皮膚リンパ節症候群(ＭＬＮＳ又は川崎病)、隔離されたＣＮＳ血管炎、ベヘット(Behet's)病、閉塞性血栓性血管炎(バージャー病)及び皮膚壊死性細静脈炎(venulitis)が含まれる。列挙した血管炎のほとんどの種類の発病メカニズムは、主に脈管壁に免疫グロブリン複合体が付着し、続いてＡＤＣＣ、補体活性又は双方を介して炎症反応が誘発されることによると考えられている。
サルコイドーシスは、体内のほとんど全ての組織中における類上皮細胞肉芽腫の存在により特徴づけられる病因がよく知られていない病状であり；肺の関与が最も一般的である。病因は疾患部位に活性マクロファージ及びリンパ球が残留していることに関連しており、続いてこれらの細胞型より放出される局部的又は全身的活性産物の放出の結果として慢性続発症が生じる。
【００８６】
自己免疫性溶血性貧血、免疫再生不良性貧血、及び発作性夜間血色素尿を含む自己免疫溶性血性貧血は、赤血球(いくつかの場合においては血小板もまた含む他の血液細胞)表面で発現した抗原と反応する抗体が産出される結果によるものであり、補体媒介溶解及び／又はＡＤＣＣ／Ｆｃ‐レセプター媒介メカニズムを介して、その抗体被覆細胞の除去に反映される。
他の臨床的環境における血小板減少性紫斑病及び免疫仲介血小板減少を含む自己免疫性血小板減少では、血小板破壊／除去が、抗体又は補体が血小板に接合し、続いて補体溶解、ＡＤＣＣ又はＦｃ‐レセプター媒介メカニズムにより除去される結果として生じる。
【００８７】
グレーブス疾患、ハシモト甲状腺炎、若年性リンパ球性甲状腺炎、及び萎縮性甲状腺炎を含む甲状腺炎は、甲状腺内に存在し多くの場合甲状腺に特異的なタンパク質と反応する抗体の産生を伴う、甲状腺抗原に対する自己免疫反応の結果によるものである。自然のモデル：ラット(ＢＵＦ及びＢＢラット)及びニワトリ(肥満ニワトリ種)；誘導性モデル：サイログロブリン、甲状腺ミクロソーム抗原(甲状腺ペルオキシダーゼ)のいずれかでの動物の免疫化モデルを含む実験用モデルが存在する。
Ｉ型真性糖尿病又はインシュリン依存性糖尿病は膵臓ランゲルハンス島β細胞の自己免疫破壊であり；この破壊は自己抗体及び自己反応性Ｔ細胞により媒介される。また、インシュリン又はインシュリン様レセプターに対する抗体は、インシュリン‐非反応性の表現型をつくりだすことができる。
【００８８】
糸球体腎炎及び尿細管間質性腎炎を含む免疫仲介腎疾患は、腎抗原に対する自己反応性抗体又はＴ細胞が産生される結果として直接的に、又は他の非腎抗原に対して反応性である、腎臓中の抗体及び／又は免疫複合体の沈着の結果として間接的に、腎組織に抗体又はＴ細胞媒介傷害が生じることによるものである。よって、免疫複合体の生成をもたらす他の免疫媒介疾患により、間接的続発症として免疫媒介腎疾患を誘発しうる。直接的及び間接的免疫メカニズムの双方により、結果として、器官機能が損なわれ、いくつかの場合では腎臓機能不全に進行する、病巣発達を腎組織に生じさせ／誘発する炎症反応が生じる。体液及び細胞免疫メカニズムの双方が障害の発病に関与しうる。
多発性硬化症；特発性脱随性多発神経障害又はギラン‐バレー症候群；及び慢性炎症脱随性多発神経障害を含む中枢及び末梢神経系の脱髄疾患は、自己免疫に原因を有し、オリゴデンドロサイト又はミエリンに直接的に引き起こされる損傷の結果として神経脱髄が生じると考えられている。ＭＳにおいては、疾患の誘発及び進行がＴリンパ球に依存することを示唆する証拠がある。多発性硬化症は、Ｔリンパ球依存性であり、再発性弛緩経路又は慢性進行経路のいずれかを有する脱髄疾患である。病因はよく知られていないが、ウイルス感染、遺伝的素因、環境及び自己免疫性の全てが寄与している。病巣は優勢なＴ細胞媒介小膠細胞の湿潤と、浸潤しているマイクロファージを含み；ＣＤ４＋Ｔリンパ球は病巣における優勢な細胞型である。オリゴデンドロサイトの細胞死と続く脱髄のメカニズムはよく知られていないが、Ｔリンパ球により推進されていると思われる。
【００８９】
好球性肺炎；特発性肺線維症及び過敏性肺炎を含む炎症及び線維症の肺疾患には、調節されない免疫炎症反応が関連している。その反応の阻害は治療的に有益であろう。
水疱性皮膚疾患、多形性紅斑及び接触性皮膚炎を含む自己免疫又は免疫媒介皮膚疾患は自己抗体により媒介され、その発病はＴリンパ球依存性である。
乾癬はＴリンパ球媒介炎症疾患である。病巣にはＴリンパ球、マクロファージ及び抗原プロセシング細胞及びある種の好中球の浸潤が含まれる。
喘息；アレルギー性鼻炎；アトピー性皮膚炎；食物過敏症及び蕁麻疹等を含むアレルギー性疾患はＴリンパ球依存性である。これらの疾患はＴリンパ球誘発性炎症、ＩｇＥ媒介炎症、又は双方の組合せにより主に媒介される。
【００９０】
拒絶反応及び移植片対宿主疾患(ＧＶＨＤ)を含む移植関連疾患はＴリンパ球依存性であり；Ｔリンパ球の機能を阻害することで改善される。
免疫及び／又は炎症反応への介在が有益である他の疾患には、限定するものではないがウイルス感染(限定するものではないがＡＩＤＳ、Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型肝炎を含む)、細菌感染、真菌感染、原生動物感染及び寄生虫感染(ＭＬＲを刺激する分子(又は誘導体／アゴニスト)を治療に利用し、感染要因に対する免疫反応性を増強することができる)、免疫欠損疾患（ＭＬＲを刺激する分子(又は誘導体／アゴニスト)を治療に利用し、受け継ぎ、獲得し、感染誘発されたもの(例えばＨＩＶ感染)又は医原性のもの(例えば化学療法からのもの)に対する免疫欠損の病状に対して免疫反応を増強することができる）、及び異常増殖が含まれる。
【００９１】
ＴＡＣＩ抗体又はアンタゴニスト又はアゴニストは既知の方法、例えば、ボーラスとして又は所定時間に渡る連続注入による静脈内投与、筋肉内、腹膜内、脳脊髄内、皮下、関節間、滑膜内、鞘内、経口、局所、又は吸入経路などにより投与できる。場合によっては、市販されている様々な装置を用いてミニポンプ式注入により投与を行なってもよい。アンタゴニスト又はアゴニストも、従来技術に開示されている遺伝子治療技術を用いて利用できる。
ＴＡＣＩ抗体又はアンタゴニスト又はアゴニストの有効な投与量は経験的に決定することができ、そのような決定を行うことは当業者の技量の範囲にある。一回のみの投与又は複数回に亘る投与を使用できる。単独で使用されるアンタゴニスト又はアゴニストの効果的な用量又は量は、一日当り約１μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ体重あるいはそれ以上の範囲であると現在は考えられる。用量の種間スケーリングは、例えば、Mordenti等, Pharmaceut. Res., 8：1351(1991)に開示されているような当該分野で知られている方法で実施することができる。
【００９２】
ＴＡＣＩ抗体又はアゴニスト又はアンタゴニストをインビボで投与する場合、通常の投与量は、投与経路に応じて、１日当たり哺乳動物の体重の約１０ｎｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇまで、好ましくは約１μｇ／ｋｇ／日から１０ｍｇ／ｋｇ／日とすることができる。特定の容量及び投与方法は、例えば米国特許第4,657,760号、同第5,206,344号、又は5,225,212号等の文献に指標が開示されている。異なる製剤は異なる治療化合物及び異なる疾患に効果を有し、１器官又は組織を標的とする投与には、例えば、別の器官又は組織への投与とは異なる投与方法が必要となると考えられる。当業者であれば、投与されなければならない用量は、例えば治療を受ける哺乳動物、投与経路、及び哺乳動物に投与されている他の薬物又は治療法に応じて変化することを理解するであろう。
細胞の型及び／又は病気の重症度に応じて、例えば一又は複数の別個の投与又は連続注入の何れであれ、約１μｇ／ｋｇないし１５０ｍｇ／ｋｇ(例えば０．１−２０ｍｇ／ｋｇ)のアンタゴニスト抗体又はアゴニスト抗体が患者への最初の候補用量である。上述した要因に応じて、典型的な一日の投与量は約１μｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇあるいはそれ以上の範囲である。数日間又はそれ以上の繰り返し投与の場合、状態によっては、病気の徴候の望ましい抑制が生じるまで処置を維持する。しかしながら、他の投薬計画も有効であろう。
【００９３】
任意の治療薬の投与前に、場合によっては哺乳動物又は患者を試験してＴＡＬＬ−１、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、ＴＡＣＩｓ又はＢＲ３のレベル又は活性を決定することができる。このような試験は、血清試料又は末梢血白血球のＥＬＩＳＡ又はＦＡＣＳにより行うことができる。
本発明の方法では１種類の治療薬を使用することができる。例えば、１のＴＡＣＩ抗体を投与できる。或いは、専門の医師であれば本方法にＴＡＣＩ抗体及びアンタゴニスト又はアゴニストの組合せ、例えばＴＡＣＩ抗体及びＢＲ３抗体の組合せの使用を選択できる。さらに二重アゴニスト又はアンタゴニスト、つまり例えばＴＡＬＬ−１とＡＰＲＩＬの両方を遮断又は阻害するように作用するアンタゴニストの使用も望ましい。そのようなアンタゴニスト分子は、例えば、ＴＡＬＬ−１とＡＰＲＩＬ、又はＴＡＣＩ、ＴＡＣＩｓ、ＢＲ３、及びＢＣＭＡ間で保存されたエピトープに結合することができる。
【００９４】
また本発明に別の療法を加えることも考慮できる。１以上の療法は、限定されないが、従来技術に既知であり、上述の説明でさらに定義した放射線治療、サイトカイン、成長阻害剤、化学療法剤、細胞毒性剤、チロシンキナーゼ阻害薬、ｒａｓファルネシルトランスフェラーゼ阻害薬、血管形成阻害薬、サイクリン依存性キナーゼ阻害薬を含む。加えて、腫瘍抗原を標的とする治療的抗体、例えばＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）又はＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、並びに抗血管形成抗体、例えば抗ＶＥＧＦに基づくものが含まれる。
化学療法剤の調製と用量スケジュールは、製造者の指示書に従って使用されるか、有能な実務家により経験的に決定されて使用される。このような化学療法剤の調製と用量スケジュールは、Chemotherapy Service Ed., M.C. Perry, Williams ＆ Wilkins, Baltimore, MD (1992)にも記載されている。化学療法剤は、アゴニスト又はアンタゴニスト等の投与の前でも後でもよく、またはそれと同時に与えてもよい。例えばアゴニスト又はアンタゴニストは、抗エストロゲン化合物、例えばそのような分子に知られている投与におけるonapristone（EP616812参照）等の抗プロゲステロン又はタモキシフェン等の抗エストロゲン化合物と組み合わせてもよい。
【００９５】
他の抗原に対する抗体、例えばＣＤ２０、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８、ＣＤ４０、ＥｒｂＢ２、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、血管内皮因子（ＶＥＧＦ）、又はその他ＴＮＦＲファミリーメンバー（例えばＤＲ４、ＤＲ５、ＯＰＧ、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２）も投与することが望ましい。或いは、ここに開示される同じ抗原又は２以上の異なる抗原に結合する加えて２以上の抗体を患者に同時投与できる。場合によっては、加えて１以上のサイトカインを患者に投与することが効果的である。１実施形態では、ここに開示するアゴニスト又はアンタゴニストと成長阻害剤を同時投与した。例えば、成長阻害剤をはじめに投与し、続いて本発明のアゴニスト又はアンタゴニストを投与した。
アンタゴニスト又はアゴニスト（及び１以上の他の療法）は、同時に又は逐次的に投与することができる。アンタゴニスト又はアゴニストの投与に続いて、インビトロの治療細胞を分析することができる。インビボ治療があった場合、治療された哺乳動物は熟練した実務家によく知られた様々な方法でモニターすることができる。例えば、Ｉｇ産出などのＢ細胞活性のマーカー（非特異的又は抗原特異的）をアッセイすることができる。
【００９６】
Ｅ．組換え産生法
本発明はまた、ここに開示するようなＴＡＣＩをコードする単離された核酸、ベクター、及び核酸を有する宿主細胞、ならびに抗体産生のための組換え技術を提供する。
抗体の組換え生産のため、それをコードする核酸を単離し、さらなるクローン化（DNAの増幅）または発現のために複製可能なベクターに導入する。抗体をコードするDNAは、従来的な方法を使用して（例えば、抗体をコードする遺伝子に対し特異的結合能を有するオリゴヌクレオチドプローブを使用して）容易に単離され順序付けされる。多くのベクターが入手可能である。ベクター成分は、通常、それらに限定されないが、シグナル配列、複製起点、１以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終結配列のうち1つ以上を含む。
本明細書の方法は、抗-ＴＡＣＩ抗体の軽鎖または重鎖（または軽鎖と重鎖の両方）をコードするDNA配列を含むベクターを提供する段階と、該ベクターで宿主細胞を形質移入または形質転換する段階と、組換え抗-ＴＡＣＩ抗体産物を産生するのに十分な条件の下で宿主細胞を培養する段階を含む、キメラまたは組換え抗ＴＡＣＩ抗体の産生方法を含む。
【００９７】
(i)シグナル配列成分
本発明の抗ＴＡＣＩ抗体は、直接的な組換えにより生産可能であるだけでなく、非相同ポリペプチドによる融合ポリペプチドとしても生産可能である。該融合ポリペプチドは、好ましくは、シグナル配列であるか、または成熟タンパク質またはポリペプチドのＮ−末端に特異的切断部位を有するその他ポリペプチドである。好適に選択した非相同シグナル配列は、宿主細胞によって認識され、処理される（つまり、シグナルペプチダーゼにより切断される）ものである。天然抗体シグナル配列を認識および処理しない原核宿主細胞については、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、lpp、または熱安定性エンテロトキシンIIリーダーからなる群から選択された原核シグナル配列によりシグナル配列を置換する。酵母分泌のため、天然シグナル配列を、例えば、酵母インベルターゼリーダー、α因子リーダー（サッカロミセスおよびKluyvermycesのα−因子リーダーを含む）、または酸性ホスファターゼリーダー、Ｃアルビカンスグリコアミラーゼリーダー、またはWO 90/13646に記載のシグナルにより置換することができる。哺乳動物細胞の発現において、哺乳動物シグナル配列、ならびにウイルス分泌リーダー、例えば、単純ヘルペスgDシグナルが見られる。
そのような前駆領域のDNAは、リーディングフレーム内で、抗体をコードするDNAに結合されている。
【００９８】
(ii)複製成分起点
発現ベクターとクローンベクターの両方は、ベクターによる１以上の選択された宿主細胞の複製を可能にする核酸配列を有する。一般に、クローンベクターのこの配列は、ベクターが宿主の染色体DNAを個別に複製できるようにするものであり、複製起点、または自己複製配列を有する。このような配列は、細菌、酵母およびウイルスの多くに周知である。プラスミドpBR322由来の複製起点は、殆どのグラム陰性菌に適しており、２μ核外細胞機嫌は酵母に適しており、様々なウイルス起源（SV40、ポリオーマ、アデノウイルス、VSVまたはBPV）は哺乳動物細胞におけるクローンベクターに有用である。通常、複製成分起点は哺乳動物発現ベクターに必要でない（典型的に、早期プロモーターを有するため、SV40起源だけが使用できる。）
【００９９】
(iii)選択遺伝子成分
発現ベクターおよびクローンベクターは、選択可能マーカーとも呼ばれる選択遺伝子を含んでよい。典型的な選択遺伝子は、（ａ）抗体またはその他毒素、例えば、アンピリシン、ネオマイシン、メトトレキサート、またはテトラサイクリンに対する耐性を与えるか、（ｂ）栄養要求欠乏を補うか、または（ｃ）複合媒体からは得られない重要な栄養素を供給する（例えばバシラス菌のためのＤ−アラニンラセマーゼをコードする遺伝子）。
選択方法の一例では、宿主細胞の成長を停止させる薬剤を利用する。非相同遺伝子によりうまく形質転換したこれら細胞は、薬剤耐性を与えるタンパク質を産生し、よって選択治療法を生き延びる。このような支配的な選択の例では、ネオマイシン、マイコフェノール酸およびハイグロマイシンなどの薬剤を使用する。
【０１００】
哺乳動物細胞に適した選択可能マーカーの別の例は、DHFR、チミジンキナーゼ、メタロチオネイン-Iおよび-II、好ましくは霊長類のメタロチオネイン遺伝子、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼなどの抗体核酸を取り込む能力を持つ細胞の同定を可能にするものである。
例えば、DHFR選択遺伝子で形質転換した細胞は、はじめに、DHFRの競合的アンタゴニストであるメトトレキサート（Mtx）を含む培地ですべての形質転換体を培養することにより同定される。野生型のDHFRを使用する場合に適切な宿主細胞は、DHFR活性が不十分なチャイニーズハムスター卵巣（CHO）細胞系である。
【０１０１】
あるいは、抗ＤＲ４抗体、野生型DHFRタンパク質、および別の選択可能マーカー、例えばアミノグリコシド３'-ホスホトランスフェラーゼ（APH）をコードするDNA配列により形質転換、または同時形質転換した宿主細胞（特に内因性DHFRを有する野生型の宿主）を、アミノグリコシド抗体（例えばカナマイシン、ネオマイシン、またはG418）などの選択可能マーカーのための選択剤を含む培地中の細胞成長により選択することができる。米国特許第4,965,199号を参照のこと。
酵母で使用するのに適した選択遺伝子は、酵母のプラスミドYRp7中に存在するtrp1遺伝子である（Stinchcomb他, Nature, 282:39 ,1979年)。trp1遺伝子は、例えばATCC番号44076またはPEP4-1などのトリプトファン中での成長能を欠く酵母の突然変異系統の選択マーカーを提供する。次いで、酵母宿主細胞ゲノムのtrp1の損傷の存在は、トリプトファンが存在しない場合の成長による形質転換を検出するために効果的な環境を提供する。Jones, Genetics, 85:12 (1977年)を参照のこと。同様に、Leu2を欠く酵母株（ATCC 20,622または38,626)は、Leu2遺伝子を有する既知のプラスミドにより補われる。 
加えて、1.6μmの環状プラスミドpKD1から得られたベクターを、クルイベロマイセス酵母の形質転換に使用することができる。あるいは、組換えウシキモシン大規模生産のための発現システムがK.lactisについて報告されている。Van den Berg, Bio/Technology, 8:135 (1990年)を参照のこと。クルイベロマイセスの工業生産用株により成熟組換えヒト血清アルブミンを分泌するための安定した多コピー発現ベクターも開示されている。Fleer他, Bio/Technology, 9:968-975 (1991年)を参照のこと。
【０１０２】
(iv)プロモーター成分
通常、発現ベクターおよびクローンベクターは、宿主生物によって認識されるプロモーターを持ち、抗体核酸に作用可能に連結する。原核宿主との使用に適したプロモーターは、phoAプロモーター、ペニシリマーゼおよびラクトースプロモーター系、アルカリホスファターゼ、トリプトファン（trp）プロモーター系、およびtacプロモーターなどのハイブリッドプロモーターを含む。しかしながら、その他の既知の細菌プロモーターも適している。また、細菌系に使用できるプロモーターは、抗ＴＡＣＩ抗体をコードするDNAに作用可能に連結するシャイン・ダルガルノ（S.D.）配列を含む。
真核生物のプロモーター配列が知られている。実質的にすべての真核生物の遺伝子は、転写が開始される部位から約２５から３０の塩基上流に位置するATに富む領域を有する。多くの遺伝子の転写開始から７０から８０塩基上流に見られる別の配列は、CNCAAT領域であり、Nは任意のヌクレオチドでよい。多くの真核生物の遺伝子の3’末端には、コード化配列の3’末端へのポリA尾部の付加のシグナルとなり得るAATAAA配列がある。これら配列の全ては真核生物の発現ベクターに適切に挿入される。
【０１０３】
酵母宿主との使用に適切な促進配列の例には、３−ホスホグリセリン酸塩キナーゼまたはその他の解糖酵素のプロモーター、例えば、エノラーゼ、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース−６リン酸イソメラーゼ、３−ホスホグリセリン塩酸ムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ、およびグルコキナーゼが含まれる。
さらに成長状態により転写が制御されるという長所を持つ誘発性プロモーターであるその他の酵母プロモーターは、アルコールデヒドロゲナーゼ２、イソチトクロームＣ、アシドホスファターゼ、窒素代謝に関連した分解系酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ、およびマルトースとガラクトースを利用する酵素のためのプロモーター領域である。酵母発現における使用に適したベクターおよびプロモーターは、EP73,657にさらに記載されている。酵母エンハンサーも酵母プロモーターと共に有利に使用される。
【０１０４】
哺乳動物宿主細胞のベクターからの抗ＴＡＣＩ抗体転写は、例えばポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（例えばアデノウイルス２）、ウシ乳頭腫ウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルスおよび最も好ましくはシミアンウイルス(SV40)などのウイルスのゲノムから取得されたか、アクチンプロモーターまたは免疫グロブリンプロモーターなどの非相同哺乳動物プロモーターから取得されたか、または熱ショックプロモーターから取得されたプロモーターにより、制御される。但し、これらプロモーターは宿主細胞系と適合することが前提である。
SV40ウイルスの初期および後期プロモーターは、複製のSV40ウイルス起源も含むSV40制限断片として簡便に取得される。ヒトサイトメガロウイルスの直前のプロモーターは、HindIII E制限断片として簡便に取得される。ウシ乳頭腫ウイルスをベクターとして使用して哺乳動物の宿主にDNAを発現させるシステムが、米国特許第4,419,446号に開示されている。このシステムの変形例は、米国特許第4,601,978号に開示されている。さらに、単純ヘルペスウイルス由来のチミジンキナーゼの制御下におけるマウス細胞中のヒトβ−インターフェロンcDNAの発現について、Reyes他, Nature 297:598-601 (1982年)を参照のこと。あるいは、ラウス肉腫ウイルス長末端反復配列もプロモーターとして使用できる。
【０１０５】
(v)エンハンサーエレメント成分
より高等の真核生物による本発明の抗ＴＡＣＩ抗体をコードしているＤＮＡの転写は、ベクター中にエンハンサー配列を挿入することによって増強され得る。哺乳動物の遺伝子由来の多くのエンハンサー配列が現在知られている(グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α-フェトプロテイン及びインスリン)。しかしながら、典型的には、真核細胞ウィルス由来のエンハンサーが用いられるであろう。例としては、複製起点の後期側のＳＶ４０エンハンサー(１００-２７０塩基対)、サイトメガロウィルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー及びアデノウィルスエンハンサーが含まれる。真核生物のプロモーターの活性化のための増強要素については、Yaniv, Nature, 297:17-18 (1982年)もまた参照のこと。エンハンサーは、抗体コード配列の５'又は３'位でベクター中にスプライシングされ得るが、好ましくはプロモーターから５'位に位置している。
【０１０６】
(vi)転写終結成分
真核生物宿主細胞(酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト、又は他の多細胞生物由来の有核細胞)に用いられる発現ベクターは、また、転写の終結及びｍＲＮＡの安定化に必要な配列を含む。このような配列は、真核生物又はウィルスのＤＮＡ又はcDNAの５'、時には３'の非翻訳領域から一般に取得できる。これらの領域は、多価抗体をコードしているｍＲＮＡの非翻訳部分にポリアデニル化断片として転写されるヌクレオチドセグメントを含む。一つの有用な転写終結成分はウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。国際公開第９４／１１０２６号とそこに開示された発現ベクターを参照のこと。
【０１０７】
(vii)宿主細胞の選択及び形質転換
ここに記載のベクター中のＤＮＡをクローニングあるいは発現させるために適切な宿主細胞は、上述の原核生物、酵母、又は高等真核生物細胞である。この目的にとって適切な原核生物は、真正細菌、例えばグラム陰性又はグラム陽性生物体、例えばエシェリチアのような腸内菌科、例えば大腸菌、エンテロバクター、エルウィニア(Erwinia)、クレブシエラ、プロテウス、サルモネラ、例えばネズミチフス菌、セラチア属、例えばセラチア・マルセスキャンス及び赤痢菌属、並びに桿菌、例えば枯草菌及びバシリ・リチェフォルミス(licheniformis)(例えば、１９８９年４月１２日に公開された ＤＤ２６６７１０に開示されたバシリ・リチェニフォルミス４１Ｐ)、シュードモナス属、例えば緑膿菌及びストレプトマイセス属を含む。一つの好適な大腸菌クローニング宿主は大腸菌２９４(ＡＴＣＣ３１４４６)であるが、他の大腸菌Ｂ、大腸菌Ｘ１７７６(ＡＴＣＣ３１５３７)及び大腸菌Ｗ３１１０(ＡＴＣＣ２７３２５)のような株も好適である。これらの例は限定するものではなく例示的なものである。
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母菌のような真核微生物は、ＴＡＣＩ抗体をコードするベクターのための適切なクローニング又は発現宿主である。サッカロミセス・セレヴィシア、又は一般的なパン酵母は下等真核生物宿主微生物のなかで最も一般的に用いられる。しかしながら、多数の他の属、種及び菌株も、一般的に入手可能でここで使用でき、例えば、シゾサッカロマイセスポンベ；クルイベロマイセス宿主、例えばＫ.ラクティス、Ｋ．フラギリス(ＡＴＣＣ１２４２４)、Ｋ.ブルガリカス(ＡＴＣＣ１６０４５)、Ｋ．ウィッケラミイ(ＡＴＣＣ２４１７８)、Ｋ.ワルチイ(ＡＴＣＣ５６５００)、Ｋ．ドロソフィラルム(ＡＴＣＣ３６９０６)、Ｋ．サーモトレランス、及びＫ．マルキシアナス；ヤローウィア(ＥＰ４０２２２６)；ピチアパストリス(ＥＰ１８３０７０)；カンジダ；トリコデルマ・リーシア(ＥＰ２４４２３４)；アカパンカビ；シュワニオマイセス、例えばシュワニオマイセスオクシデンタリス；及び糸状真菌、例えばパンカビ属、アオカビ属、トリポクラジウム、及びコウジカビ属宿主、例えば偽巣性コウジ菌及びクロカビが使用できる。
【０１０８】
グリコシル化抗体の発現に適切な宿主細胞は、多細胞生物から誘導される。無脊椎動物細胞の例としては植物及び昆虫細胞が含まれる。例えばスポドプテラ・フルギペルダ(毛虫)、アエデス・アエジプティ(蚊)、アエデス・アルボピクトゥス(蚊)、ドゥロソフィラ・メラノガスター(ショウジョウバエ)、及びボンビクス・モリ由来の多数のバキュロウィルス株及び変異体及び対応する許容可能な昆虫宿主細胞が同定されている。形質転換のための種々のウィルス株、例えば、オートグラファ・カリフォルニカＮＰＶのＬ-１変異体とボンビクス・モリ ＮＰＶのＢｍ-５株が公に利用でき、そのようなウィルスは本発明においてここに記載したウィルスとして使用でき、特にスポドプテラ・フルギペルダ細胞の形質転換に使用できる。
綿花、コーン、ジャガイモ、大豆、ペチュニア、トマト、及びタバコのような植物細胞培養を宿主として利用することができる。
【０１０９】
しかしながら、脊椎動物細胞におけるものが最も興味深く、培養(組織培養)中での脊椎動物細胞の増殖は常套的な手順になっている。有用な哺乳動物宿主株化細胞の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株 (ＣＯＳ-７, ＡＴＣＣ ＣＲＬ１６５１);ヒト胚腎臓株（２９３又は懸濁培養での増殖のためにサブクローン化された２９３細胞、Grahamら, J. Gen Virol., 36:59 (1977年)）；ハムスター乳児腎細胞(ＢＨＫ, ＡＴＣＣ ＣＣＬ１０)；チャイニーズハムスター卵巣細胞／-ＤＨＦＲ(ＣＨＯ, Urlaubら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216 (1980年));マウスのセルトリ細胞（ＴＭ４, Mather, Biol. Reprod., 23:243-251 (1980)）;サルの腎細胞 (ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ７０); アフリカミドリザルの腎細胞(ＶＥＲＯ-７６, ＡＴＣＣ ＣＲＬ-１５８７); ヒト子宮頸癌細胞 (ＨＥＬＡ, ＡＴＣＣ ＣＣＬ２); イヌ腎細胞 (ＭＤＣＫ, ＡＴＣＣ ＣＣＬ３４); バッファローラット肝細胞 (ＢＲＬ３Ａ, ＡＴＣＣ ＣＲＬ１４４２); ヒト肺細胞 (Ｗ１３８, ＡＴＣＣ ＣＣＬ７５); ヒト肝細胞 (Ｈｅｐ Ｇ２, ＨＢ８０６５); マウス乳房腫瘍細胞 (ＭＭＴ０６０５６２, ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１);ＴＲＩ細胞（Matherら, Annals N.Y. Acad. Sci., 383:44-68 (1982年)）;ＭＲＣ５細胞;ＦＳ４細胞；及びヒト肝癌株(ＨｅｐＧ２)；及びミエローマ又はリンパ腫細胞（例えばＹ０、Ｊ５５８Ｌ、Ｐ３及びＮＳ０細胞）（米国特許第５８０７７１５号を参照のこと）である。
宿主細胞は、抗体生産のために上述の発現又はクローニングベクターで形質転換され、プロモーターを誘導し、形質転換体を選択し、又は所望の配列をコードしている遺伝子を増幅するために適切に修飾された常套的栄養培地で培養される。
【０１１０】
(viii)宿主細胞の培養
本発明の抗体を産生するために用いられる宿主細胞は種々の培地において培養することができる。市販培地の例としては、ハム(Ｈａｍ)のＦ１０(シグマ)、最小必須培地((ＭＥＭ)、(シグマ)、ＲＰＭＩ-１６４０(シグマ)及びダルベッコの改良イーグル培地((ＤＭＥＭ)、シグマ)が宿主細胞の培養に好適である。また、Hamら, Meth. Enz. 58:44 (1979年), Barnesら, Anal. Biochem. 102:255 (1980年), 米国特許第４７６７７０４号；同４６５７８６６号；同４９２７７６２号；同４５６０６５５号；又は同５１２２４６９号；国際公開第９０／０３４３０号；国際公開第８７／００１９５号；又は米国再発行特許第３０９８５号に記載された何れの培地も宿主細胞に対する培地として使用できる。これらの培地には何れもホルモン及び／又は他の成長因子(例えばインシュリン、トランスフェリン、又は表皮成長因子)、塩類(例えば、塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム及びリン酸塩)、バッファー(例えばＨＥＰＥＳ)、ヌクレオチド(例えばアデノシン及びチミジン)、抗生物質(例えば、ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（登録商標）薬)、微量元素(最終濃度がマイクロモル範囲で通常存在する無機化合物として定義される)及びグルコース又は等価なエネルギー源を必要に応じて補充することができる。任意の他の必要な補充物質もまた当業者に知られている適当な濃度で含むことができる。培養条件、例えば温度、ｐＨ等々は、発現のために選ばれた宿主細胞について過去に用いられているものであり、当業者には明らかであろう。
【０１１１】
(ix)精製
組換え技術を用いる場合、抗体は細胞内、細胞膜周辺腔に生成され、又は培地内に直接分泌される。抗体が細胞内に生成された場合、第１の工程として、宿主細胞か溶解された断片の何れにしても、粒子状の細片が、例えば遠心分離又は限外濾過によって除去される。Carterら, Bio/Technology 10: 163-167 (1992年)は、大腸菌の細胞膜周辺腔に分泌された抗体の単離方法を記載している。簡単に述べると、細胞ペーストを、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ、及びフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）の存在下で約３０分間解凍する。細胞細片は遠心分離で除去できる。抗体が培地に分泌された場合は、そのような発現系からの上清を、一般的には先ず市販のタンパク質濃縮フィルター、例えばＡｍｉｃｏｎ又はＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎの限外濾過装置を用いて濃縮する。ＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害剤を上記の任意の工程に含めて、タンパク質分解を阻害してもよく、また抗生物質を含めて外来性の汚染物の成長を防止してもよい。
細胞から調製した抗体組成物は、例えば、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、及びアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製でき、アフィニティクロマトグラフィーが好ましい精製技術である。アフィニティーリガンドとしてのプロテインＡの適合性は、抗体中に存在する免疫グロブリンＦｃ領域の種及びアイソタイプに依存する。プロテインＡは、ヒトγ１、γ２、又はγ４重鎖に基づく抗体の精製に用いることができる（Lindmarkら, J. immunol. Meth. 62: 1-13 (1983)）。プロテインＧは、全てのマウスアイソタイプ及びヒトγ３に推奨されている（Gussら, EMBO J. 5: 15671575 (1986年)）。アフィニティーリガンドが結合されるマトリクスはアガロースであることが最も多いが、他のマトリクスも使用可能である。孔制御ガラスやポリ(スチレンジビニル)ベンゼン等の機械的に安定なマトリクスは、アガロースで達成できるものより早い流速及び短い処理時間を可能にする。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ（登録商標）樹脂（J.T. Baker, Phillipsburg, NJ）が精製に有用である。イオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー、ヘパリンでのクロマトグラフィー、アニオン又はカチオン交換樹脂上でのＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）クロマトグラフィー（例えばポリアスパラギン酸カラム）、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ-ＰＡＧＥ、及び硫酸アンモニウム沈殿法も、回収される多価抗体に応じて利用可能である。
【０１１２】
Ｆ．製造品
本発明の他の実施態様では、前述した疾患の治療に有用な物質を含有する製造品が提供される。製造品は容器及びラベルを含んでなる。適切な容器には、例えばボトル、バイアル、シリンジ、及び試験管が含まれる。容器はガラス又はプラスチックのような様々な材料で形成することができる。容器は病状の治療に有効な組成物を収容しており、滅菌した出入口を有している(例えば、容器は皮下注射針により貫通可能なストッパーを具備する静脈溶液用のバック又はバイアルであってよい)。組成物中の活性剤はアンタゴニスト又はアゴニストを含む。容器上の又は容器に伴うラベルには、組成物が、選択された病状の治療に使用されることが示されている。製造品は、製薬的に許容可能なバッファー、例えばリン酸緩衝生理食塩水、リンガル液及びブドウ糖液を収容する第２の容器を更に具備する。更に、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、及び使用指示書を含むパッケージ挿入物を含む、市販及び使用者の観点から望ましい他の材料を更に含んでいてもよい。
【０１１３】
2002年7月25日出願の米国仮出願番号60/398,530、及びSeshasayee, D等, (2003) Immunity 18:279-288の全体を、出典明示により本明細書に包含する。
以下の実施例は、説明を目的として提供するものであり、限定的な意味を持たない。本明細書の全ての引用文献の開示内容を出典明示により本明細書に包含することを明記する。
【実施例】
【０１１４】
実施例１
抗ＴＡＣＩモノクローナル抗体の調製
Ｂａｌｂ／ｃマウス（Charles River Laboratoriesから入手）をＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント（Ribi Immunochemical Research Inc., Hamilton, MTから購入）に入った２μｇのヒトＴＡＣＩ−ＩｇＧを各後足のかかとに１０回にわたって注射することにより免疫化した。ヒトＴＡＣＩ−ＩｇＧイムノアドヘシンは、Ashkenazi等, Proc. Natl. Acad. Sci., 88:10535-10539 (1991) に記載の方法により調製した。イムノアドヘシンコンストラクトは、ヒトＴＡＣＩポリペプチドのアミノ酸２−１６６から構成されるものであった。異種シグナル配列（ｐＣＭＶ−１  Ｆｌａｇ（Sigma）のプレプロトリプシンアミノ酸１−１７）を用い、ＴＡＣＩ配列のヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域の下流をコードしてＣＨＯ細胞にＴＡＣＩ−ＥＣＤコンストラクトを発現させ、次いでプロテインＡ親和性クロマトグラフィーにより精製した。
最終追加免疫の３日後、膝窩リンパ節をマウスから除去し、１％のペニシリン−ストレプトマイシンを補ったＤＭＥＭ培地（Biowhittaker Corp.からニュ薄）中で単一細胞懸濁液を調製した。次いで、３５％のポリエチレングリコールを用いてリンパ節細胞をマウス骨髄腫細胞Ｐ３Ｘ６３ＡｇＵ．１（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １５９７）に融合させ、９６ウェル培養プレートで培養した。融合の結果得られたハイブリドーマをＨＡＴ培地において選択した。融合の１０日後、ハイブリドーマ培養液の上清をＥＬＩＳＡでスクリーニングし、ＴＡＣＩ−ＩｇＧに結合するが、ＣＤ４−ＩｇＧに結合しないモノクローナル抗体の存在を試験した。また、捕獲ＥＬＩＳＡ法を用いて、ＢＭＣＡ−ＩｇＧへの結合についてもモノクローナル抗体をスクリーニングした。
【０１１５】
捕獲ＥＬＩＳＡのために、各ウェルに５０ｍＭの炭酸塩緩衝液（ｐＨ９．６）中２．０μｇ／ｍｌのヤギ抗ヒトＩｇＧ−Ｆｃ（Cappel Inc.）を５０μｌ加え、４℃で一晩インキュベートすることにより、９６ウェルのマイクロタイタプレート（Maxisorb; Nunc, Kamstrup, Denmark）をコーティングした。非特異的結合部位を２％のＢＳＡで１時間、室温で遮断した。次いでプレートを洗浄緩衝液（０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ）で３回洗浄した。洗浄段階の後、ＰＢＳ中０．４μｇ／ｍｌのＴＡＣＩ−ＩｇＧ５０μｌ／ウェルを用いて１時間、プレートを室温でインキュベートした。３回の洗浄後、１００μｌのハイブリドーマの上清又は様々な濃度のポリクローナル血清を所定のウェルに添加した。振盪機の上に置いたプレートを室温で１時間インキュベートし、次いで洗浄緩衝液で３回洗浄した。
次に、５０μｌのＨＲＰ−抱合型ヤギ抗マウスＩｇＧ Ｆｃ（Cappel Laboratories）を、アッセイ緩衝液（ＰＢＳ中０．５％ウシ血清アルブミン、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０、０．０１％Ｔｈｉｍｅｒｓｏｌ）中で１：１０００に希釈して各ウェルに加え、振盪機の上で室温で１時間インキュベートした。洗浄緩衝液を用いてプレートを３回洗浄した後、５０μｌの基質（TMBマイクロウェルペルオキシダーゼ基質、Kirkegaard & Perry, Gaithersburg, MD）を各ウェルに加え、室温で１０分間インキュベートした。各ウェルに、５０μｌのＴＭＢ  １−成分停止液（ジエチルグリコール、Kirkegaard & Perry）加えることにより反応を停止させ、自動マイクロタイタプレートリーダーで４５０ｎｍにおける吸光度を読み取った。
次いで、ＥＬＩＳＡでの試験の結果、陽性であった上清を限界希釈により２回クローニングした。
【０１１６】
実施例２
膜ＴＡＣＩを認識する抗ＴＡＣＩ抗体の同定
１Ｇ１０．１．５、５Ｂ６．３．１０．及び６Ｄ１１．３．１と命名した抗ＴＡＣＩ抗体を、上記の実施例１に記載のようにして生成し、調製した。これらのｍＡｂｓは、細胞数測定測定分析により確認したところ、膜ＴＡＣＩを認識した。つまり、ヒトＢリンパＩＭ９細胞（ＡＴＣＣ、ＣＣＬ−１５９）（１００μｌの完全ＲＰＭＩ−１６４０培地中５×１０５細胞）を４８ウェルマイクロタイタプレートに広げ、結合緩衝液２００ｍｌ中１００μｌのＦＩＴＣ−ヤギ抗マウスＩｇＧ  Ｆｃを含む５％のＣＯ２の中で一晩、３７℃でインキュベートした。洗浄後、細胞をＦＡＣＳｃａｎにより分析した。
抗ＴＡＣＩｍＡｂｓがＴＡＣＩのＩＭ９細胞発現を認識することを示す実験結果を図１０に示す。
【０１１７】
実施例３
抗ＴＡＣＩ抗体のアイソタイピング
アイソタイプ特異性ヤギ抗マウスＩｇ（Fisher Biotech, Pittsburgh, PA）を用いて４℃で一晩プレートをコーティングすることにより、抗ＴＡＣＩモノクローナル抗体のアイソタイプ（上記実施例２参照）を決定した。２％のＢＳＡで非特異性結合部位を遮断した後、１００μｌのハイブリドーマ培養液上清又は０．５μｇ／ｍｌの精製ｍＡｂｓを添加した。室温で３０分間インキュベートした後、ＨＲＰ−抱合型ヤギ抗マウスＩｇを用いて室温で３０分インキュベートした。上記したように、プレートに結合したＨＲＰのレベルをＨＲＰ基質を用いて検出した。
抗ＴＡＣＩ抗体、１Ｇ１０．１．５、５Ｂ６．３．１０．及び６Ｄ１１．３．１はＩｇＧ１アイソタイプであることが分かった。
【０１１８】
実施例４
ヒトＢＣＭＡに対する抗ＴＡＣＩ Ｍａｂｓの交差反応
また、ヒトＢＣＭＡに対する１Ｇ１０．１．５、５Ｂ６．３．１０．及び６Ｄ１１．３．１抗体の交差反応の可能性を、捕獲ＥＬＩＳＡを用いて、上述の手順に以下のような変更を加えて判断した。ヒトＢＣＭＡ−ＩｇＧ分子を、ヤギ抗ヒトＩｇＧ−Ｆｃでコーティングしたマイクロタイタウェルに捕獲した。上掲のAshkenazi等による方法に従ってＢＣＭＡ−ＥＣＤイムノアドヘシンを調製した。イムノアドヘシンコンストラクトはヒトＢＣＭＡポリペプチドのアミノ酸５−５１から構成されるものであった。異種シグナル配列（ｐＣＭＶ−１  Ｆｌａｇ（Sigma）のプレプロトリプシンアミノ酸１−１７）を用い、ＢＣＭＡ配列のヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域の下流をコード化して、ＢＣＭＡ−ＥＣＤコンストラクトをＣＨＯ細胞に発現させ、次いでタンパク質Ａ親和性クロマトグラフィーにより精製した。
図８に示すように、これらの抗ＴＡＣＩｍＡｂｓは捕獲ＥＬＩＳＡにおいてＢＣＭＡ−ＩｇＧを認識することができなかった。
【０１１９】
実施例５
抗ＴＡＣＩｍＡｂｓによるＢ細胞増殖の阻止
インビトロでの細胞増殖アッセイを行い、Ｂ細胞に及ぼす１Ｇ１０．１．５、５Ｂ６．３．１０．及び６Ｄ１１．３．１抗体の効果を判断した。
リンパ球分離培地（ICN）を用いてＢ細胞をヒト末梢血から単離した後、ＣＤ１９＋  ＭＡＣＳビーズ（Miltenyi Biotech）を用いて精製した。完全培地（RPMI-1640、１０％ウシ胎児血清、グルタミン２ｍＭ）中に濃縮Ｂ細胞を再懸濁し、組織培養プレートに５×１０５細胞／ウェルで広げた。次いで１０μｇ／ｍｌの抗ヒトＣＤ４０抗体（BD Pharmingen）、１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−４（R&D Systems）、及び様々な濃度の抗ＴＡＣＩ抗体を用いて細胞を３７℃で７２時間培養した。抗マウスＩｇＧ１抗体（BD Pharmingen）を対照として使用した。培養の最後の６時間に亘って培養物をメチル３Ｈ−チミジン（１μＣｉ／ウェル）でパルスラベリングすることにより、Ｂ細胞の増殖を測定した後、回収した。シンチレーションをカウントすることによりチミジンの取り込みを測定した。
結果を図９に示す。細胞の増殖はＣＰＭ×１０−３と報告された。データにより、抗ＣＤ４０抗体によって誘発されたＢ細胞の増殖が、投与量に応じた強さで、６Ｄ１１．３．１及び５Ｂ６．３．１０抗ＴＡＣＩ抗体により阻害されることが示された。ＴＡＣＩノックアウトマウスからの別のデータは、ＴＡＣＩレセプターの機能は抑制性であり、ＴＡＣＩの不在下では細胞はＴＡＬＬ−１からの阻害信号を受け取らないことを示唆している（データは示さず）。
【０１２０】
実施例６
ｈｕＴａｃｉへのＢＬｙＳの結合
ｈｕＴＡＣＩ  ＥＬＩＳＡにＢｌｙｓを結合させるため、５０ｍＭの炭酸塩緩衝液（ｐＨ９．６）中２．０μｇ／ｍｌのヤギ抗ヒトＩｇＧ−Ｆｃ（Cappel Inc）５０μｌを各ウェルに加えることにより９６ウェルマイクロタイタプレート（Maxisorb; Nunc, Kamstrup, Denmark）をコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。２００μｌの２％ＢＳＡを用いて室温で１時間に亘り非特異的結合部位を遮断した。次いでプレートを洗浄緩衝液（０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ）で３回洗浄した。洗浄段階の後、アッセイ緩衝液（ＰＢＳ中０．５％ウシ血清アルブミン、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０）中０．４μｇ／ｍｌのＴＡＣＩ−ＩｇＧ５０μｌ／ウェルを用いてプレートをインキュベートした。３回の洗浄後、１００μｌのハイブリドーマの上清又は様々な濃度のポリクローナル血清を所定のウェルに添加した。１００μｌのＰ３Ｘ６３ＡｇＵ．１骨髄腫細胞で整えた培地を別の所定ウェルに添加し、対照とした。プレートを振盪機の上に置いて室温で１時間インキュベートし、次いで洗浄緩衝液で３回洗浄した。
次に、１００μｌのビオチン化したヒトＢｌｙＳを、アッセイ緩衝液中で１：１６００に希釈して各ウェルに加え、振盪機の上で室温でプレートを１時間インキュベートし、次いで洗浄緩衝液を用いてプレートを３回洗浄した。５０μｌのストレプトアビジン−ＨＲＰ（Zymed laboratory, CAから購入）をアッセイ緩衝液（ＰＢＳ中０．５％ウシ血清アルブミン、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０）中で１：１０００に希釈して各ウェルに加え、振盪機の上で室温でプレートを１時間インキュベートした。プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄した後、５０μｌの基質（TMBマイクロウェルペルオキシダーゼ基質、Kirkegaard & Perry, Gaithersburg, MD）を各ウェルに加え、室温で１０分間インキュベートした。各ウェルに、５０μｌのＴＭＢ  １−成分停止液（ジエチルグリコール、Kirkegaard & Perry）加えることにより反応を停止させ、自動マイクロタイタプレートリーダーで４５０ｎｍにおける吸光度を読み取った。
【０１２１】
実施例７
ＥＬＩＳＡアッセイでＢｌｙＳのＴＡＣＩへの結合を遮断しない抗ＴＡＣＩ抗体によるＢ細胞増殖の阻害
ＴＡＣＩに対する他の抗体をマウスで生成し、ヒト一次Ｂ細胞におけるシグナル伝達に対するそれら抗体の影響を研究した。図１１Ａは３つの抗ＴＡＣＩモノクローナル抗体、６Ｄ１１、７Ｂ６．１５．１１、及び４Ｃ７．２．１の、完全長ヒトＴＡＣＩで形質移入した２９３の細胞への結合を示す。ニセの形質移入を行なった２９３の細胞に対するＴＡＣＩ抗体の結合は見られなかった（データは示さない）。
ＮＦ−ｋＢ活性化活性について抗体をアッセイした。ヒト２９３細胞を、０．１μｇの完全長ヒトＴＡＣＩ発現プラスミドと１μｇのＥＬＡＭ−ルシフェラーゼレポータープラスミド、及び０．１μｇの対照ｐＲＬ−ＴＫプラスミド（Promega Corporation）を用いて形質移入した。４時間後、可溶性組換えヒトＢＬｙＳ又はＴＡＣＩ抗体の表示量を２０時間に亘って加え、レポーター遺伝子活性を判断した。３つの抗体のうち２つ（６Ｄ１１及び７Ｂ６）はＦＮｋＢ−ルシフェラーゼレポーター（二重ルシフェラーゼレポーターアッセイシステム、Promega Corporation）の活性化によって証明される反発的活性を示した。
【０１２２】
等量のタンパク質及び内的なＲｅｎｉｌｌａ（ウミシイタケ）レポーター対照を用いることにより、形質移入の効率のばらつきを制御した。図１１Ｂには、３つの抗体のうち２つ（６Ｄ１１及び７Ｂ６）の反発的活性を示す。可溶性ヒトＢＬｙＳと比較したとき、６Ｄ１１及び７Ｂ６はＮＦ−ｋＢレポーターを活性化することができ、対照として使用できた。３つ目の抗体４Ｃ７はレポーター活性を刺激せず、反発的抗体ではなかった。６Ｄ１１抗体はＢＬｙＳのＴＡＣＩに対する結合を遮断したが、７Ｂ６と４Ｃ７は遮断しなかった（ＥＬＩＳＡ、データは示さず）。
ヒトＢ細胞増殖アッセイにおいて抗体を試験した。磁気ビーズ（リンパ球分離培地, ICN Pharmaceuticals、続いてＣＤ１９＋  ＭＡＣＳビーズ、Miltenyi Biotech）を使用して陽性を選択することにより末梢血から単離した５×１０５のヒトＢ細胞を、α−ＣＤ４０抗体（１０μｇ／ｍｌ、BD Pharmingen）とＩＬ−４（１００ｎｇ／ｍｌ、R&D Systems）を用いて、ＴＡＣＩ反発的抗体の２つの異なるクローンの濃度を７２時間に亘って増大させることにより刺激した。[Ｈ３]の数をＴＡＣＩ反発的抗体濃度の関数としてプロットした。３つの抗体すべてが同じマウスアイソタイプ（ＩｇＧ１）で、４Ｃ７は一致するアイソタイプの対照抗体として機能した。グラフの各指標値からは刺激の不在下における背景Ｂ細胞増殖のレベルを差し引いてある。２つのＴＡＣＩ反発的抗体、６Ｄ１１と７Ｂ６は、α−ＣＤ４０抗体／ＩＬ４により誘発されたＢ細胞の増殖を有意に阻害し、一方、非反発的抗体４Ｃ７は阻害しなかった。図１１Ｃに示すように、α−ＣＤ４０抗体誘発Ｂ細胞増殖は、投与量に依存する形で、ＴＡＣＩに対する２つの反発的モノクローナル抗体により阻害された。３つの抗体すべては同じマウスアイソタイプ（ＩｇＧ１）であり、４Ｃ７は一致するアイソタイプの対照抗体として機能した。グラフの各指標値からは刺激の不在下における背景Ｂ細胞増殖のレベルを差し引いてある。６Ｄ１１と７Ｂ６の両方が２９３細胞におけるＮＦ−ｋＢ活性を刺激することができ、且つＢ細胞の増殖を阻害することができ、その一方非反発的抗体４Ｃ７はどちらの機能も持たないという観察結果は、増殖に対して観察された影響がＴＡＣＩにより誘発された活性阻害シグナルに起因することを示すものである。
【０１２３】
材料の寄託
次の材料をアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション,10801 University Blvd., Manassas, Virginia, 20110-2209, USA(ATCC)に寄託した：
材料                    ATCC寄託番号            寄託日
１Ｇ１０．１．５        ＰＴＡ−４２９７        ２００２年５月７日
５Ｂ６．３．１０        ＰＴＡ−４２９８        ２００２年５月７日
６Ｄ１１．３．１        ＰＴＡ−４２９９        ２００２年５月７日
４Ｃ７．２．１          ＰＴＡ−４９９９        ２００３年２月１１日
７Ｂ６．１５．１１      ＰＴＡ−５０００        ２００３年２月１１日
この寄託は、特許手続き上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約及びその規則(ブダペスト条約)の規定に従って行われた。これは、寄託の日付から３０年間、寄託の生存可能な培養が維持されることを保証するものである。寄託物はブダペスト条約の条項に従い、またジェネンテク社とATCCとの間の合意に従い、ATCCから入手することができ、これは、どれが最初であろうとも、関連した米国特許の発行時又は任意の米国又は外国特許出願の公開時に、寄託培養物の後代を永久かつ非制限的に入手可能とすることを保証し、米国特許法第122条及びそれに従う特許庁長官規則(特に参照番号886OG638の37CFR第1.14条を含む)に従って権利を有すると米国特許商標庁長官が決定した者に後代を入手可能とすることを保証するものである。
【０１２４】
本出願の譲受人は、寄託した培養物が、適切な条件下で培養されていた場合に死亡もしくは損失又は破壊されたならば、材料は通知時に同一の他のものに即座に取り替えることに同意する。寄託物質の入手可能性は、特許法に従いあらゆる政府の権限下で認められた権利に違反して、本発明を実施するライセンスであるとみなされるものではない。
上記の文書による明細書は、当業者に本発明を実施できるようにするために十分であると考えられる。本発明は、本明細書に記載した実施例によってその範囲が限定されるものではない。実際、ここに示し記載したものに加えて、本発明を様々に改変することは、前記の記載から当業者にとっては明らかなものであり、請求の範囲内に入るものである。
【図面の簡単な説明】
【０１２５】
【図１Ａ】図１Ａと図１Ｂは、天然配列ヒトＴＡＣＩ（配列番号１）（逆の相補的配列を配列番号２に示す）をコードするポリヌクレオチド配列、及びその推定上のアミノ酸配列（配列番号３）を示す。
【図１Ｂ】図１Ａと図１Ｂは、天然配列ヒトＴＡＣＩ（配列番号１）（逆の相補的配列を配列番号２に示す）をコードするポリヌクレオチド配列、及びその推定上のアミノ酸配列（配列番号３）を示す。
【図１Ｃ】「ｈＴＡＣＩ（２６５）」と呼ばれるＴＡＣＩスプライス型変異体を示す（配列番号１７）。
【図２】天然配列ヒトＢＣＭＡ（配列番号４）（逆の相補的配列を配列番号５に示す）をコードするポリヌクレオチド配列、及びその推定上のアミノ酸配列（配列番号６）を示す。
【図３】天然配列ヒトＴＡＬＬ−１（配列番号７）（逆の相補的配列を配列番号８に示す）をコードするポリヌクレオチド配列、及びその推定上のアミノ酸配列（配列番号９）を示す。
【図４Ａ】図４Ａと図４Ｂは、天然配列ヒトＡＰＲＩＬ（配列番号１０）（逆の相補的配列を配列番号１１に示す）をコードするポリヌクレオチド配列、及びその推定上のアミノ酸配列（配列番号１２）を示す。
【図４Ｂ】図４Ａと図４Ｂは、天然配列ヒトＡＰＲＩＬ（配列番号１０）（逆の相補的配列を配列番号１１に示す）をコードするポリヌクレオチド配列、及びその推定上のアミノ酸配列（配列番号１２）を示す。
【図５Ａ】天然配列ヒトＴＡＣＩｓ（配列番号１３）をコードするポリヌクレオチド配列（開始及び終止コドンを下線で示す）を示す。
【図５Ｂ】図５Ａの推定上のアミノ酸配列（配列番号１４）を示す。
【図６Ａ】天然配列ヒトＢＲ３（配列番号１５）をコードするポリヌクレオチド配列（開始及び終止コドンを下線で示す）を示す。
【図６Ｂ】図６Ａの推定上のアミノ酸配列（配列番号１６）を示す。
【図７】「比較タンパク質」と命名したアミノ酸の、「ＰＲＯ」と命名したアミノ酸に対する％アミノ酸配列同一性の例示的計算方法を示す。本件における「ＰＲＯ」配列は、図に示すＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、ＴＡＬＬ−１、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩｓ、又はＢＲ３配列である。
【図８】抗体１Ｄ１０、１Ｇ１０、５Ｂ６及び６Ｄ１１のＴＡＣＩ−ＩｇＧ、ＢＣＭＡ−ＩｇＧ及びＣＤ４−ＩｇＧ（対照）に対する結合能を試験するＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す。
【図９】ＴＡＣＩＴＡＬＬ−刺激のネガティブな制御因子であることを示すデータを表すグラフである。抗ＴＡＣＩ抗体５Ｂ６及び６Ｄ１１がＢリンパ球増殖を遮断することが分かる。
【図１０】抗ＴＡＣＩｍＡｂｓがＴＡＣＩを発現しているＩＭ９細胞を認識し、結合することを示すＦＡＣＳ分析の結果を示す。
【図１１】Ａは、マウスに生成されたヒトＴＡＣＩに対する３つのモノクローナル抗体（６Ｄ１１、７Ｂ６及び４Ｃ７）が、２４時間に亘って０．１μｇの完全長ヒトＴＡＣＩで形質移入し、ＰＥ−抱合型αマウスＩｇＧ１二次抗体を用いてＦＡＣＳにより分析した２９３細胞に結合することを示す；Ｂは、完全長ヒトＴＡＣＩ発現プラスミドと１μｇのＥＬＡＭ−ルシフェラーゼレポータープラスミド、及び０．１μｇの対照ｐＲＬ−ＴＫプラスミドで形質移入し、次いで可溶性組換えヒトＢＬｙＳ又はＴＡＣＩ抗体、６Ｄ１１、７Ｂ６及び４Ｃ７で処理したヒト２９３細胞におけるＮＦ−ｋＢ活性の活性化を示す；Ｃは、６Ｄ１１及び７Ｂ６抗ＴＡＣＩ抗体による、抗ＣＤ４０抗体／ＩＬ−４誘発Ｂ細胞増殖の阻害を示す。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際調査報告】
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