(57)【要約】本発明は、雄哺乳動物を可逆的に不妊にするための方法を提供する。従って、開示されたN置換イミノ化合物、及びそれらの薬学的組成物は、雄哺乳動物の妊孕性を完全に損なうが、雌哺乳動物に対する効果は示さず、従って雄避妊薬として有用である。特に有効な化合物は、下記式のNアルキル化ピペリジンに由来するイミノ糖である：2005532274.tif 000019［式中、R2は、直鎖型又は分岐型のC1-18アルキル、C2-18アルケニルもしくはアルキニル；又はアラルキルであり、これは、-OH；-F；-Cl；-Br；-I；-NH2；アルキルアミノ及びジアルキルアミノ；直鎖型又は分岐型のC1-6アルキル、C2-6アルケニル及びアルキニル；アラルキル；直鎖型又は分岐型のC1-6アルコキシ、アリールオキシ；アラルコキシ；-CN、-NO2、-COOH、-COO(アルキル)；-COO(アリール)；-C(O)NH(C1-6アルキル)；-C(O)NH(アリール)；スルホニル；(C1-6アルキル)スルホニル；アリールスルホニル；スルファモイル、(C1-6アルキル)スルファモイル；(C1-6アルキル)チオ；(C1-6アルキル)スルホンアミド；アリールスルホンアミド；-NHNH2；並びに-NHOHのうちの1個または複数で任意に置換されうる］。
2005532274.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
妊孕性の雄哺乳動物を可逆的に不妊にする方法であって、以下の工程を含む方法：
（a）1種または複数の薬学的に許容される賦形剤と、治療的有効量の式IもしくはIIの化合物、又はその立体異性体、薬学的に許容される塩、もしくは溶媒和化合物とを含む薬学的組成物を該哺乳動物に投与する工程であって、該組成物が該雄哺乳動物を不妊にするのに十分な量及び時間投与される工程：
2005532274.tif 000011
｛式中、R11、R11'、R12、R12'、R13、R13'、R14、R14'、R15、R15'、R31、R31'、R32、R32'、R33、R33'、R34、及びR34'は、各々、-H；-OH；-F；-Cl；-Br；-I；-NH2；アルキルアミノ及びジアルキルアミノ；直鎖型又は分岐型のC1-6アルキル、C2-6アルケニル及びアルキニル；アラルキル；直鎖型又は分岐型のC1-6アルコキシ；アリールオキシ；アラルコキシ；-(アルキレン)オキシ(アルキル)；-CN、-NO2、-COOH、-COO(アルキル)；-COO(アリール)；-C(O)NH(C1-6アルキル)；-C(O)NH(アリール)；スルホニル；(C1-6アルキル)スルホニル：アリールスルホニル；スルファモイル、(C1-6アルキル)スルファモイル；(C1-6アルキル)チオ；(C1-6アルキル)スルホンアミド；アリールスルホンアミド；-NHNH2；-NHOH；アリール、並びにヘテロアリールからなる群より互いに独立に選択され［ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、及びヘテロアリール部分は、各々、-OH；-F；-Cl；-Br；-I；-NH2；アルキルアミノ及びジアルキルアミノ；直鎖型又は分岐型のC1-6アルキル、C2-6アルケニル及びアルキニル；アラルキル；直鎖型又は分岐型のC1-6アルコキシ、アリールオキシ；アラルコキシ；-(アルキレン)オキシ(アルキル)；-CN、-NO2、-COOH、-COO(アルキル)；-COO(アリール)；-C(O)NH(C1-6アルキル)；-C(O)NH(アリール)；スルホニル；(C1-6アルキル)スルホニル；アリールスルホニル；スルファモイル、(C1-6アルキル)スルファモイル；(C1-6アルキル)チオ；(C1-6アルキル)スルホンアミド；アリールスルホンアミド；-NHNH2；並びに-NHOHからなる群より独立に選択される1個または複数の基で任意に置換されうる］；
R2及びR4は、直鎖型又は分岐型のC1-18アルキル、C2-18アルケニル及びアルキニル；並びにアラルキルからなる群より互いに独立に選択される置換基であり［ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、及びアリール部分は、各々、-OH；-F；-Cl；-Br；-I；-NH2；アルキルアミノ及びジアルキルアミノ；直鎖型又は分岐型のC1-6アルキル、C2-6アルケニル、及びアルキニル；アラルキル；直鎖型又は分岐型のC1-6アルコキシ、アリールオキシ；アラルコキシ；-CN、-NO2、-COOH、-COO(アルキル)；-COO(アリール)；-C(O)NH(C1-6アルキル)；-C(O)NH(アリール)；スルホニル；(C1-6アルキル)スルホニル；アリールスルホニル；スルファモイル、(C1-6アルキル)スルファモイル；(C1-6アルキル)チオ；(C1-6アルキル)スルホンアミド；アリールスルホンアミド；-NHNH2；並びに-NHOHからなる群より独立に選択される1個または複数の基で任意に置換されうる］｝；並びに
（b）該哺乳動物への該組成物の投与を中止する工程であって、それによって該哺乳動物が妊孕性にされる工程。
【請求項２】
化合物が式Iの化合物である、請求項1記載の方法。
【請求項３】
R11、R11'、R12、R12'、R13、R13'、R14、R14'、R15、及びR15'のうちの少なくとも一つが、-CH2OHである、請求項2記載の方法。
【請求項４】
R11、R11'、R12、R12'、R13、R13'、R14、R14'、R15、及びR15'のうちの少なくとも一つが、-OHである、請求項2記載の方法。
【請求項５】
R2が、直鎖型又は分岐型のC1-18アルキル基である、請求項2記載の方法。
【請求項６】
R2が、直鎖型又は分岐型のC4-9アルキル基である、請求項5記載の方法。
【請求項７】
R11、R11'、R12、R12'、R13、R13'、R14、R14'、R15、及びR15'のうちの少なくとも二つが、-CH3、-CH2OH、及び-OHからなる群より選択される、請求項2記載の方法。
【請求項８】
化合物が、
2005532274.tif 000012
及びそれらの立体異性体からなる群より選択される、請求項7記載の方法。
【請求項９】
化合物が、以下の表に示された化合物からなる群より選択される、請求項8記載の方法。
2005532274.tif 000013
【請求項１０】
R2が、C1-6アルコキシで任意に置換された直鎖型又は分岐型のC1-18アルキル基である、請求項9記載の方法。
【請求項１１】
化合物が、
2005532274.tif 000014
からなる群より選択される、請求項10記載の方法。
【請求項１２】
化合物が式IIの化合物である、請求項1記載の方法。
【請求項１３】
R31、R31'、R32、R32'、R33、R33'、R34、及びR34'のうちの少なくとも一つが-CH2OHである、請求項12記載の方法。
【請求項１４】
R31、R31'、R32、R32'、R33、R33'、R34、及びR34'のうちの少なくとも一つが-OHである、請求項12記載の方法。
【請求項１５】
R4が、直鎖型又は分岐型のC1-18アルキル基である、請求項12記載の方法。
【請求項１６】
R4が、直鎖型又は分岐型のC4-9アルキル基である、請求項15記載の方法。
【請求項１７】
R31、R31'、R32、R32'、R33、R33'、R34、及びR34'のうちの少なくとも二つが、-CH3、-CH2OH、及び-OHからなる群より選択される、請求項12記載の方法。
【請求項１８】
R4が、直鎖型又は分岐型のC1-18アルキル基である、請求項17記載の方法。
【請求項１９】
工程（a）及び（b）を連続的に繰り返す工程をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項２０】
妊孕性の雄哺乳動物を可逆的に不妊にする方法であって、以下の工程を含む方法：
（a）1種または複数の薬学的に許容される賦形剤と、治療的有効量の式IもしくはIIの化合物、又はその立体異性体、薬学的に許容される塩、もしくは溶媒和物とを含む薬学的組成物を該哺乳動物に投与する工程であって、該組成物が該雄哺乳動物を不妊にするのに十分な量及び時間投与される工程：
2005532274.tif 000015
｛式中、R11、R11'、R12、R12'、R13、R13'、R14、R14'、R15、R15'、R31、R31'、R32、R32'、R33、R33'、R34、及びR34'は、各々、-H；-OH；-F；-Cl；-Br；-I；-NH2；アルキルアミノ及びジアルキルアミノ；直鎖型又は分岐型のC1-6アルキル、C2-6アルケニル及びアルキニル；アラルキル；直鎖型又は分岐型のC1-6アルコキシ；アリールオキシ；アラルコキシ；-(アルキレン)オキシ(アルキル)；-CN、-NO2、-COOH、-COO(アルキル)；-COO(アリール)；-C(O)NH(C1-6アルキル)；-C(O)NH(アリール)；スルホニル；(C1-6アルキル)スルホニル：アリールスルホニル；スルファモイル、(C1-6アルキル)スルファモイル；(C1-6アルキル)チオ；(C1-6アルキル)スルホンアミド；アリールスルホンアミド；-NHNH2；-NHOH；アリール、並びにヘテロアリールからなる群より互いに独立に選択され［ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、及びヘテロアリール部分は、各々、-OH；-F；-Cl；-Br；-I；-NH2；アルキルアミノ及びジアルキルアミノ；直鎖型又は分岐型のC1-6アルキル、C2-6アルケニル及びアルキニル；アラルキル；直鎖型又は分岐型のC1-6アルコキシ、アリールオキシ；アラルコキシ；-(アルキレン)オキシ(アルキル)；-CN、-NO2、-COOH、-COO(アルキル)；-COO(アリール)；-C(O)NH(C1-6アルキル)；-C(O)NH(アリール)；スルホニル；(C1-6アルキル)スルホニル；アリールスルホニル；スルファモイル、(C1-6アルキル)スルファモイル；(C1-6アルキル)チオ；(C1-6アルキル)スルホンアミド；アリールスルホンアミド；-NHNH2；並びに-NHOHからなる群より独立に選択される1個または複数の基で任意に置換されうる］；
R2及びR4は、直鎖型又は分岐型のC1-18アルキル、C2-18アルケニル及びアルキニル；並びにアラルキルからなる群より互いに独立に選択される置換基であり［ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、及びアリール部分は、各々、-OH；-F；-Cl；-Br；-I；-NH2；アルキルアミノ及びジアルキルアミノ；直鎖型又は分岐型のC1-6アルキル、C2-6アルケニル、及びアルキニル；アラルキル；直鎖型又は分岐型のC1-6アルコキシ、アリールオキシ；アラルコキシ；-CN、-NO2、-COOH、-COO(アルキル)；-COO(アリール)；-C(O)NH(C1-6アルキル)；-C(O)NH(アリール)；スルホニル；(C1-6アルキル)スルホニル；アリールスルホニル；スルファモイル、(C1-6アルキル)スルファモイル；(C1-6アルキル)チオ；(C1-6アルキル)スルホンアミド；アリールスルホンアミド；-NHNH2；並びに-NHOHからなる群より独立に選択される1個または複数の基で任意に置換されうる］｝；
（b）該哺乳動物への該組成物の投与を中止する工程（それによって該哺乳動物は妊孕性にされる）；並びに
（c）工程（a）及び（b）を1回以上繰り返す工程。
【請求項２１】
化合物が式Iの化合物である、請求項20記載の方法。
【請求項２２】
R11、R11'、R12、R12'、R13、R13'、R14、R14'、R15、及びR15'のうちの少なくとも一つが、-CH2OHである、請求項21記載の方法。
【請求項２３】
R11、R11'、R12、R12'、R13、R13'、R14、R14'、R15、及びR15'のうちの少なくとも一つが、-OHである、請求項21記載の方法。
【請求項２４】
R2が、直鎖型又は分岐型のC1-18アルキル基である、請求項21記載の方法。
【請求項２５】
R2が、直鎖型又は分岐型のC4-9アルキル基である、請求項24記載の方法。
【請求項２６】
R11、R11'、R12、R12'、R13、R13'、R14、R14'、R15、及びR15'のうちの少なくとも二つが、-CH3、-CH2OH、及び-OHからなる群より選択される、請求項21記載の方法。
【請求項２７】
化合物が、
2005532274.tif 000016
及びそれらの立体異性体からなる群より選択される、請求項26記載の方法。
【請求項２８】
化合物が、以下の表に示された化合物からなる群より選択される、請求項27記載の方法。
2005532274.tif 000017
【請求項２９】
R2が、C1-6アルコキシで任意に置換された直鎖型又は分岐型のC1-18アルキル基である、請求項28記載の方法。
【請求項３０】
化合物が、
2005532274.tif 000018
からなる群より選択される、請求項29記載の方法。
【請求項３１】
化合物が式IIの化合物である、請求項20記載の方法。
【請求項３２】
R31、R31'、R32、R32'、R33、R33'、R34、及びR34'のうちの少なくとも一つが、-CH2OHである、請求項31記載の方法。
【請求項３３】
R31、R31'、R32、R32'、R33、R33'、R34、及びR34'のうちの少なくとも一つが、-OHである、請求項31記載の方法。
【請求項３４】
R4が、直鎖型又は分岐型のC1-18アルキル基である、請求項31記載の方法。
【請求項３５】
R4が、直鎖型又は分岐型のC4-9アルキル基である、請求項34記載の方法。
【請求項３６】
R31、R31'、R32、R32'、R33、R33'、R34、及びR34'のうちの少なくとも二つが、-CH3、-CH2OH、及び-OHからなる群より選択される、請求項31記載の方法。
【請求項３７】
R4が、直鎖型又は分岐型のC1-18アルキル基である、請求項36記載の方法。
【請求項３８】
工程（a）、（b）、及び（c）を連続的に繰り返す工程をさらに含む、請求項20記載の方法。
【請求項３９】
哺乳動物がヒトである、請求項1又は20記載の方法。
【請求項４０】
哺乳動物がコンパニオン哺乳動物である、請求項1又は20記載の方法。
【請求項４１】
哺乳動物が、イヌ、ネコ、及びウマからなる群より選択される、請求項40記載の方法。
【請求項４２】
哺乳動物が有蹄動物である、請求項1又は20記載の方法。
【請求項４３】
哺乳動物が、ウシ、ヒツジ、ヤギ、水牛、ラクダ、及びブタからなる群より選択される、請求項42記載の方法。
【請求項４４】
哺乳動物が、類人猿、サル、ラマ、げっ歯動物、及びウサギからなる群より選択される、請求項1又は20記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、2002年5月20日出願の米国特許仮出願第60/381,329号及び2002年3月13日出願の米国特許仮出願第60/363,561号に基づく優先権を主張し、これらは参照として組み込まれる。
【０００２】
発明の分野
本発明は、雄哺乳動物に特効性の（specific）避妊薬の投与により、雄哺乳動物を可逆的に不妊にする方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
スフィンゴ糖脂質（GSL）は、哺乳動物原形質膜に存在し、疎水性化合物セラミドと多くの異なるオリゴ糖構造のうちの一つとから構成された両親媒性分子であり（GSL命名法については、Svennerholm、（1994）Prog Brain Res 101、XI-XIVを参照のこと）、GSLは、膜貫通シグナル伝達、細胞の接着、分化、遊走、及び形態形成、発癌性形質転換、並びに神経系の発達を含む、複数の生物学的過程に関与していることが示されている（
2005532274.tif 000003
に概説）。しかしながら、最近まで、GSLが欠損している細胞及び生物が存在しなかったために、特にインビボでのそれらの生物学的意義の直接証拠を得ることは困難であった。過去数年間に、グルコシルセラミドに基づくGSL全ての生合成における第一工程を触媒するセラミドグルコシルトランスフェラーゼを含む、GSL生合成経路において重要な役割を果たすグリコシルトランスフェラーゼをコードするcDNAクローンが同定された（Lloyd及びFurukawa（1998）Glycoconj J 15、627-36；Ichikawa及びHirabayashi、（1998）Trends Cell Biol 8、198-202に概説）。後者の酵素が欠損している黒色腫細胞系の確立は、グルコシルセラミドに基づくGSLが、単細胞レベルでは生存可能性にとって不可欠でないことを示した（Ichikawaら、（1994）Proc Natl Acad Sci U S A 91、2703-7）。この酵素を欠くマウス胚性幹細胞は、インビトロでは、造血系及びニューロンの分化へと誘導され得るが、インビボでは、充分に分化した組織を形成せず；セラミドグルコシルトランスフェラーゼを欠くマウス胚は、原腸胚期を越えて発達しない（Yamashitaら、（1999）Proc Natl Acad Sci U S A 96、9142-7）。さらに、ガングリオシドGM2/GD2シンターゼの遺伝子が破壊されており、従ってGM3/GD3より複雑な全てのガングリオシドを欠いているマウスは、正常に発達するが、神経系における軸索変性及び髄鞘形成の減少を示し、一生のうちの後期に運動行動の欠陥を示す（Sheikhら、（1999）Proc Natl Acad Sci USA 96、7532-7）。意外にも、これらのマウスにおける複雑なガングリオシドの欠如は、精子形成の障害にも関連しており、雄不妊をもたらす（Takamiyaら、（1998）Proc Natl Acad Sci U S A 95、12147-52）。
【０００４】
GSL機能を探究するための別の非遺伝学的アプローチは、滴定可能なGSL生合成の阻害剤によりそれらのレベルを操作することであり（
2005532274.tif 000004
に概説／記載）；この特徴を有する化合物は、いくつかの臨床的適用を有し得る（Platt及びButters、（1998）Biochem Pharmacol 56、421-30；Radin、（1999）Biochem Pharmacol 57、589-95に概説）。アルキル化イミノ糖は、セラミドグルコシルトランスフェラーゼを阻害することにより、様々なグルコシルセラミドに基づくGSLの合成の速度を低下させることが、以前に確立されている（Plattら、（1994）J Biol Chem 269、8362-5；Plattら、（1994）J Biol Chem 269、27108-14）。これらの化合物は、広い用量範囲で実験動物に経口投与され得、高い投薬量レベルですらよく容認され、GSL生合成の広範かつ長期的な減弱を可能するという独特の利点を有する（Plattら、（1997）J Biol Chem 272、19365-72；Anderssonら、（2000）Biochem Pharmacol 59：821-29：Dwek,R.A.、Butters,T.D.、Platt,F.M.、及びZitzmann,N.（2002）Nature Reviews Drug Discovery 1、65-75）。アルキル化イミノ糖N-ブチルデオキシノジリマイシン（NB-DNJ）は、（N-グリカン合成に関与している）α-グルコシダーゼ1の強力な阻害剤であり、かつグルコシルセラミドグルコシルトランスフェラーゼのさらに強力な阻害剤であり、ヒトにおいてよく容認される（Fischlら、（1994）J Acquir Immune Defic Syndr 7、139-47）。本発明者は、NB-DNJが、GSL分解の障害を有するマウスモデルにおいて治療的に有効であることを以前に見出した（Plattら、（1997）Science 276、428-31；Jeyakurnarら、（1999）Proc Natl Acad Sci U S A 96、6388-93）。
【０００５】
ホルモン調節に対する精子形成の感受性は、雄避妊薬の開発において非常に注目されている（Amoryら、（2000）Trends Endocrinol Metab 11、61-66；Anderson、（2000）Br Med Bull 56、717-728；Handelsman、（2000）Int J Androl 23 別冊2、8-12；Oxynosら、（2000）Baillieres Best Pract Res Clin Endocrinol Metab 14、473-487）。男性は、下垂体からの性腺刺激ホルモン（LH及びFSH）分泌の抑制によって、無精子、従って不妊になり得る。これは、プロゲストーゲン、抗アンドロゲン、5α-レダクターゼ阻害剤、又は性腺刺激ホルモン放出ホルモン・アンタゴニストの投与によって達成され得る。これらのアプローチに関する現在の問題は、以下の通りである（Anderson、（2000）、前記）：第1に、それらは完全に有効ではなく；精子形成の完全な抑制は必ずしも達成されない。第2に、下垂体性腺刺激ホルモンの不足は、精巣テストステロン産生を減少させるため、テストステロン補充が必要となる。現在入手可能なテストステロン調製物は、完全には許容されない。第3に、外因的なテストステロンは、多数の有害な代謝的効果を有している。最後に、雄避妊薬として評価された大部分の化合物及び大部分のテストステロン調製物は、筋肉注射又は皮下植込みされる必要がある。従って、当技術分野においては、雄胚細胞の発生及び成熟における薬理学的介入のための非内分泌アプローチが引き続き必要とされている。本発明は、非ホルモン的な雄避妊の方法を提供することにより、この目的を満たす。
【発明の開示】
【０００６】
発明の概要
本発明は、N置換イミノ糖化合物を含む薬学的組成物を雄哺乳動物に投与することにより、雄哺乳動物を可逆的に不妊にするための方法を提供する。イミノ糖化合物は、式I又はIIによって表され得る：
2005532274.tif 000005
式中、R11、R11'、R12、R12'、R13、R13'、R14、R14'、R15、R15'、R31、R31'、R32、R32'、R33、R33'、R34、及びR34'は、各々、-H；-OH；-F；-Cl；-Br；-I；-NH2；アルキルアミノ及びジアルキルアミノ；直鎖型又は分岐型のC1-6アルキル、C2-6アルケニル及びアルキニル；アラルキル；直鎖型又は分岐型のC1-6アルコキシ；アリールオキシ；アラルコキシ；-(アルキレン)オキシ(アルキル)；-CN、-NO2、-COOH、-COO(アルキル)；-COO(アリール)；-C(O)NH(C1-6アルキル)；-C(O)NH(アリール)；スルホニル；(C1-6アルキル)スルホニル：アリールスルホニル；スルファモイル、(C1-6アルキル)スルファモイル；(C1-6アルキル)チオ；(C1-6アルキル)スルホンアミド；アリールスルホンアミド；-NHNH2；-NHOH；アリール、並びにヘテロアリールからなる群より互いに独立に選択される。
【０００７】
R2及びR4は、直鎖型又は分岐型のC1-18アルキル、C2-18アルケニル及びアルキニル；並びにアラルキルからなる群より互いに独立に選択される置換基である。
【０００８】
アルキル、アルケニル、アルキニル、及びアリール部分は、各々、-OH；-F；-Cl；-Br；-I；-NH2；アルキルアミノ及びジアルキルアミノ；直鎖型又は分岐型のC1-6アルキル、C2-6アルケニル及びアルキニル；アラルキル；直鎖型又は分岐型のC1-6アルコキシ、アリールオキシ；アラルコキシ；-CN、-NO2、-COOH、-COO(アルキル)；-COO(アリール)；-C(O)NH(C1-6アルキル)；-C(O)NH(アリール)；スルホニル；(C1-6アルキル)スルホニル；アリールスルホニル；スルファモイル、(C1-6アルキル)スルファモイル；(C1-6アルキル)チオ；(C1-6アルキル)スルホンアミド；アリールスルホンアミド；-NHNH2；並びに-NHOHからなる群より独立に選択される1個または複数の基で任意に置換されうる。
【０００９】
本発明の一つの局面によると、組成物は、雄哺乳動物を不妊にするのに十分な時間投与される。処置の後、組成物がもはや投与されない場合、雄哺乳動物は妊孕性（fertile）を取り戻す。
【００１０】
本発明のもう一つの局面によると、組成物は、雄哺乳動物を不妊にするために投与され、哺乳動物から撤去され（それによって哺乳動物は妊孕性を完全に取り戻す）、次いで哺乳動物を不妊にするためにもう一度投与される。
【００１１】
本発明のイミノ糖化合物の投与は、雄マウスを絶対不妊にするが、雌の妊孕性に対しては効果を及ぼさない。従って、本発明のイミノ糖化合物は、雄避妊薬として有効に役立つ。
【００１２】
定義
特記しない限り、「1つの（a）」又は「1つの（an）」という用語は、「1つ以上の」を意味する。
【００１３】
特記しない限り、「アルキル」という用語は、本明細書において使用されるように、1個、2個、3個、4個、5個、又は6個の炭素原子を含有している直鎖型又は分岐型のアルキル遊離基をさし、例えばメチル、エチル、ブチル、及びノニルを含む。
【００１４】
「アリール」という用語は、本明細書において使用されるように、フェニルのような単環式芳香族基、又はインダニル、ナフチル、もしくはフルオレニルのようなベンゾ縮合芳香族基等をさす。
【００１５】
「ヘテロアリール」という用語は、1個または複数のヘテロ原子を含有している芳香族化合物をさす。例には、ピリジル、フリル、及びチエニル、又はインドリルもしくはキノリニルのような1個または複数のヘテロ原子を含有しているベンゾ縮合芳香族が含まれる。
【００１６】
「ヘテロ原子」という用語は、本明細書において使用されるように、N、O、及びSのような非炭素原子をさす。
【００１７】
「シクロアルキル」という用語は、本明細書において使用されるように、3個、4個、5個、6個、7個、又は8個の炭素を含有している炭素環式環をさし、例えばシクロプロピル及びシクロヘキシルを含む。
【００１８】
特記しない限り、「アルコキシ」という用語は、本明細書において使用されるように、1個、2個、3個、4個、5個、又は6個の炭素原子を含有している直鎖型又は分岐型のアルコキシをさし、例えばメトキシ及びエトキシを含む。
【００１９】
「アルケニル」という用語は、本明細書において使用されるように、プロペニル及びビニルのような、1個または複数の二重結合を含有している直鎖型又は分岐型のアルキルをさす。
【００２０】
「アラルキル」という用語は、本明細書において使用されるように、ベンジル及びフェネチルのような、アリールで置換されたアルキルをさす。
【００２１】
「アルキニル」という用語は、本明細書において使用されるように、エチニル及びプロピニルのような、1個または複数の三重結合を含有している直鎖型又は分岐型のアルキルをさす。
【００２２】
「アリールオキシ」という用語は、本明細書において使用されるように、-OH基の水素原子をアリール基に交換することにより作出された置換基をさし、例えばフェノキシを含む。
【００２３】
「アラルコキシ」という用語は、本明細書において使用されるように、2-フェニルエトキシのような、アリール基で置換されたアルコキシ基をさす。
【００２４】
「アルキルアミノ」という用語は、本明細書において使用されるように、メチルアミノ（-NHCH3）及びエチルアミノ（-NHCH2CH3）のような、1個のアルキル基で置換されたアミノ基をさす。
【００２５】
「ジアルキルアミノ」という用語は、本明細書において使用されるように、ジメチルアミノ（-N(CH3)2）及びジエチルアミノ（-N(CH2CH3)2）のような、2個のアルキル基で置換されたアミノ基をさす。
【００２６】
好ましい態様の詳細な説明
本発明の方法において使用される化合物は、雄避妊薬として有効である。最も広い局面において、化合物は、式I又はIIによって表される。
2005532274.tif 000006
【００２７】
一つの局面において、本発明は、式Iの化合物を企図する。R11、R11'、R12、R12'、R13、R13'、R14、R14'、R15、及びR15'は、各々、-H；-OH；-F；-Cl；-Br；-I；-NH2；アルキルアミノ及びジアルキルアミノ；直鎖型又は分岐型のC1-6アルキル、C2-6アルケニル及びアルキニル；アラルキル；直鎖型又は分岐型のC1-6アルコキシ；アリールオキシ；アラルコキシ；-(アルキレン)オキシ(アルキル)；-CN、-NO2、-COOH、-COO(アルキル)；-COO(アリール)；-C(O)NH(C1-6アルキル)；-C(O)NH(アリール)；スルホニル；(C1-6アルキル)スルホニル：アリールスルホニル；スルファモイル、(C1-6アルキル)スルファモイル；(C1-6アルキル)チオ；(C1-6アルキル)スルホンアミド；アリールスルホンアミド；-NHNH2；-NHOH；アリール、並びにヘテロアリールからなる群より互いに独立に選択される。
【００２８】
好ましい態様において、R11、R11'、R12、R12'、R13、R13'、R14、R14'、R15、及びR15'のうちの少なくとも一つは、ヒドロキシメチル基（-CH2OH）である。又は、R11、R11'、R12、R12'、R13、R13'、R14、R14'、R15、及びR15'のうちの少なくとも一つは、ヒドロキシ基（-OH）である。最も好ましい態様は、R11、R11'、R12、R12'、R13、R13'、R14、R14'、R15、及びR15'のうちの少なくとも二つが、-CH3、-CH2OH、及び-OHより選択されることを企図する。
【００２９】
R2は、-OH；-F；-Cl；-Br；-I；-NH2；アルキルアミノ及びジアルキルアミノ；直鎖型又は分岐型のC1-6アルキル、C2-6アルケニル及びアルキニル；アラルキル；直鎖型又は分岐型のC1-6アルコキシ、アリールオキシ；アラルコキシ；-CN、-NO2、-COOH、-COO(アルキル)；-COO(アリール)；-C(O)NH(C1-6アルキル)；-C(O)NH(アリール)；スルホニル；(C1-6アルキル)スルホニル；アリールスルホニル；スルファモイル、(C1-6アルキル)スルファモイル；(C1-6アルキル)チオ；(C1-6アルキル)スルホンアミド；アリールスルホンアミド；-NHNH2；並びに-NHOHより独立に選択される1個または複数の基で任意に置換される、直鎖型又は分岐型のC1-18アルキル、C2-18アルケニル及びアルキニル、並びにアラルキルより選択される置換基である。
【００３０】
好ましくは、R2は、任意に置換された直鎖型又は分岐型のC1-18アルキル基である。さらに好ましくは、R2は、任意に置換された直鎖型又は分岐型のC4-9アルキル基である。R2の例には、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、及びノニルのようなアルキル置換基が含まれる。置換されたアルキル基であるR2の例は、7-オキサノナニル（oxanonanyl）(-CH2(CH2)5-O-CH2CH3）である。最も好ましくは、R2は、n-ブチル、n-ノニル、又は7-オキサノニルである。
【００３１】
式Iのある種の態様において、化合物は以下の式のうちの一つとして表され得る。
2005532274.tif 000007
【００３２】
上記式における各環炭素原子の立体化学は、他の環炭素原子のものと独立に異なっていてもよい。より好ましくは、化合物は、表1に示される式のうちの一つを有している。
【００３３】
（表１）
2005532274.tif 000008
【００３４】
さらに好ましくは、化合物はN-アルキル置換体であって、ここでR2は、C1-6アルコキシ基で任意に置換された直鎖型又は分岐型のC1-18アルキル基である。最も好ましい化合物には、N-ブチルデオキシガラクトノジリマイシン（NB-DGJ）、N-ブチルデオキシノジリマイシン（NB-DNJ）、N-ノニルデオキシノジリマイシン（NN-DNJ）、N-ノニル-6-メチルデオキシノジリマイシン（NN-6-MeDNJ）、及びN-7-オキサノニル-6-メチルデオキシガラクトノジリマイシン（N-7-オキサノニル-6-MeDGJ）が含まれる。
2005532274.tif 000009
【００３５】
本発明のもう一つの局面は、式IIの化合物を企図する。R31、R31'、R32、R32'、R33、R33'、R34、及びR34'は、各々、-H；-OH；-F；-Cl；-Br；-I；-NH2；アルキルアミノ及びジアルキルアミノ；直鎖型又は分岐型のC1-6アルキル、C2-6アルケニル及びアルキニル；アラルキル；直鎖型又は分岐型のC1-6アルコキシ；アリールオキシ；アラルコキシ；-(アルキレン)オキシ(アルキル)；-CN、-NO2、-COOH、-COO(アルキル)；-COO(アリール)；-C(O)NH(C1-6アルキル)；-C(O)NH(アリール)；スルホニル；(C1-6アルキル)スルホニル：アリールスルホニル；スルファモイル、(C1-6アルキル)スルファモイル；(C1-6アルキル)チオ；(C1-6アルキル)スルホンアミド；アリールスルホンアミド；-NHNH2；-NHOH；アリール、並びにヘテロアリールからなる群より互いに独立に選択される。
【００３６】
好ましい態様において、R31、R31'、R32、R32'、R33、R33'、R34、及びR34'のうちの少なくとも一つは、ヒドロキシメチル基（-CH2OH）である。又は、R11、R11'、R12、R12'、R13、R13'、R14、R14'、R15、及びR15'のうちの少なくとも一つは、ヒドロキシ基（-OH）である。最も好ましい態様は、R11、R11'、R12、R12'、R13、R13'、R14、R14'、R15、及びR15'のうちの少なくとも二つが、-CH3、-CH2OH、及び-OHより選択されることを企図する。
【００３７】
式II中、R4は、-OH；-F；-Cl；-Br；-I；-NH2；アルキルアミノ及びジアルキルアミノ；直鎖型又は分岐型のC1-6アルキル、C2-6アルケニル及びアルキニル；アラルキル；直鎖型又は分岐型のC1-6アルコキシ、アリールオキシ；アラルコキシ；-CN、-NO2、-COOH、-COO(アルキル)；-COO(アリール)；-C(O)NH(C1-6アルキル)；-C(O)NH(アリール)；スルホニル；(C1-6アルキル)スルホニル；アリールスルホニル；スルファモイル、(C1-6アルキル)スルファモイル；(C1-6アルキル)チオ；(C1-6アルキル)スルホンアミド；アリールスルホンアミド；-NHNH2；並びに-NHOHより独立に選択される1個または複数の基で任意に置換された、直鎖型又は分岐型のC1-18アルキル、C2-18アルケニル及びアルキニル、並びにアラルキルより選択される置換基である。
【００３８】
好ましくは、R4は、任意に置換された直鎖型又は分岐型のC1-18アルキル基である。さらに好ましくは、R4は、任意に置換された直鎖型又は分岐型のC4-9アルキル基である。R4の例には、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、及びノニルのようなアルキル置換基が含まれる。置換されたアルキル基であるR2の例は、7-オキサノナニル(-CH2(CH2)5-O-CH2CH3）である。最も好ましくは、R4は、n-ブチル、n-ノニル、又は7-オキサノニルである。
【００３９】
さらにもう一つの態様において、本発明は、第一工程において、治療的有効量の前記の化合物が、薬学的組成物として、妊孕性の雄哺乳動物に投与される方法を提供する。組成物の投与の長さは、組成物が投与されている間、雄哺乳動物を不妊にするのに十分である。第二工程における組成物の撤去により、雄哺乳動物は、以前の妊孕性の状態へと完全に回復する。好ましい態様において、第一及び第二の工程は連続的に繰り返され得、それによって、所望の期間にわたり、不妊期及び妊孕性期が交互に雄哺乳動物に与えられる。
【００４０】
本発明のさらなる態様は、雄哺乳動物をもう一度不妊にするのに十分な時間、本発明の組成物の投与を再開する第三工程を付加的に含む、上記のような方法を提供する。好ましい態様において、三つの工程は連続的に繰り返され得る。このようにして、雄哺乳動物は、不妊期、続いて妊孕性期、最後に不妊期を経る。
【００４１】
本発明は、全ての雄哺乳動物に適用可能である。特に、それは、ヒト、並びにイヌ、ネコ、及びウマを含むコンパニオン哺乳動物に適用可能である。さらに、それは、有蹄動物、特にウシ、ヒツジ、ヤギ、水牛、ラクダ、及びブタのような経済的に重要な哺乳動物、並びに、例えば類人猿、サル、ラマ、げっ歯動物（例えば、ラット又はマウス）、及びウサギに適用可能である。
【００４２】
化合物の調製
本発明の化合物は、出発材料として使用される商業的に入手可能なイミノ化合物から調製され得る。商業的な供給元には、Sigma、St.Louis、MO；Cambridge Research Biochemicals、Norwich、Cheshire、United Kingdom；及びToronto Research Chemicals、Ontario、Canadaが含まれる。
【００４３】
又は、本発明の化合物は、当業者に既知の合成法によって調製され得る。例えば、多様なデオキシノジリマイシン（DNJ）誘導体の合成が、米国特許第5,622,972号；第5,200523号；第5,043,273号；第4,944,572号；第4,246,345号；第4,266,025号；第4,405,714号；及び第4,806,650号に記載されている。N-ブチルデオキシノジリマイシン（NB-DNJ）の作製のための例示的な方法及び手順は、EP-B-0012278；EP-A-0624652；米国特許第4,182,767号；第4,266,025号；第4,405,714号；及び第5,151,519号に示されている。N-ブチルデオキシガラクトノジリマイシン（NB-DGJ）は、Plattら、（1994）J.Biol.Chem.、269：27108-14に記載されたようにして作製され得る。本明細書に記載されたその他のイミノ糖化合物は、既知であり、米国特許第4,861,892号；第4,894,388号；第4,910,310号；第4,996,329号；第5,011,929号；第5,013,842号；第5,017,704号；第5,580,884号；第5,286,877号；第5,100,797号；及び第6,291,657号に示された方法によって調製され得る。
【００４４】
薬学的組成物
本発明の化合物は、多様な投与様式のため製剤化され得る。技術及び製剤は、一般に、Remington's Pharmaceutical Sciences（第18版）、Mack Publishing Co.（1990）に見出され得る。
【００４５】
医薬品は、任意の適切な経路、例えば経口（頬もしくは舌下を含む）、直腸、鼻、局所（頬、舌下、もしくは経皮を含む）、又は非経口（皮下、筋肉内、静脈内、もしくは皮内を含む）の経路による投与に適合し得るが、経口投与が好ましい。そのような組成物は、薬学分野において既知の任意の方法により、例えば無菌条件下で活性成分を担体と混和することにより、調製され得る。
【００４６】
薬学的に許容される塩は、一般に、当業者に周知であり、以下に制限はされないが、例えば、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ベシル酸塩（besyalte）、安息香酸塩、重炭酸塩、重酒石酸塩、臭化物、エデト酸カルシウム（calcium edetate）、カンシル酸塩（camsylate）、炭酸塩、クエン酸塩、エデト酸塩（edetate）、エジシル酸塩（edisylate）、エストル酸塩（estolate）、エシル酸塩（esylate）、フマル酸塩、グルセプト酸塩（gluceptate）、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩（glycollylarsanilate）、ヘキシルレゾルシン酸塩（hexylresorcinate）、ヒドラバミン塩（hydrabamine）、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩（lactobionate）、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩（mesylate）、粘液酸塩（mucate）、ナプシル酸塩（napsylate）、硝酸塩、パモ酸塩（pamoate）（エンボン酸塩（embonate））、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、亜酢酸塩（subacetate）、コハク酸塩、硫酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、又はテオクル酸塩（teoclate）を含む。その他の薬学的に許容される塩は、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences（第18版）（前記）に見出され得る。
【００４７】
好ましい薬学的に許容される塩には、例えば、酢酸塩、安息香酸塩、臭化物、炭酸塩、クエン酸塩、グルコン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、マレイン酸塩、メシル酸塩、ナプシル酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）、リン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、又は酒石酸塩が含まれる。
【００４８】
注射の場合、本発明の薬剤は、水性溶液、好ましくはハンクス液、リンゲル液、又は生理食塩水緩衝液のような生理学的に適合性の緩衝液で製剤化され得る。そのような経粘膜投与の場合、透過させたい関門にとって適切な透過促進剤が、製剤中に使用される。そのような透過促進剤は、一般に、当技術分野において既知である。
【００４９】
本発明の実施のため、本明細書に開示された化合物を全身投与にとって適当な剤形へと製剤化するための、薬学的に許容される担体の使用は、本発明の範囲内である。妥当な担体の選択及び適当な製造実務によって、本発明の組成物、特に液剤として製剤化されたものは、静脈注射等により非経口投与され得る。化合物は、当技術分野において周知の薬学的に許容される担体を使用して、経口投与にとって適当な剤形へと容易に製剤化され得る。そのような担体は、本発明の化合物が、処置を受ける患者による経口摂取のための錠剤、丸剤、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁剤等として製剤化されることを可能にする。
【００５０】
本発明における使用にとって適当な薬学的組成物は、その意図された目的を達成するために有効な量で活性成分が含有されている組成物を含む。有効量の決定は、特に本明細書に提供された詳細な開示を考慮すれば、十分に当業者の能力の範囲内である。
【００５１】
活性成分に加え、これらの薬学的組成物は、薬学的に使用され得る調製物への活性化合物の加工を容易にする、賦形剤及び補助剤を含む、適当な薬学的に許容される担体を含有していてもよい。経口投与用に製剤化された調製物は、錠剤、糖衣錠、カプセル剤、又は液剤の形態をとり得る。
【００５２】
本明細書に記載された、そして本明細書に提供された方法において使用するためのものでもある医薬品又は避妊薬は、保存剤、可溶化剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、芳香剤、塩、緩衝剤、コーティング剤、又は抗酸化剤のうちの一つ以上を含み得る。それらは、本明細書に記載された化合物及び／又は薬剤に加え、治療的活性を有する薬剤を含有していてもよい。経口使用のための薬学的調製物は、活性化合物を固体賦形剤と組み合わせること、場合により、得られた混合物を破砕すること、錠剤又は糖衣錠のコアを得るため、所望により適当な補助剤を添加した後、顆粒の混合物を加工することにより入手され得る。適当な賦形剤は、特に、乳糖、ショ糖、マンニトール、又はソルビトールを含む糖；セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム（CMC）、及び／又はポリビニルピロリドン（PVP：ポビドン（povidone））のような増量剤である。所望により、架橋されたポリビニルピロリドン、寒天、又はアルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウムのようなその塩のような崩壊剤が、添加され得る。
【００５３】
経口的に使用され得る薬学的調製物には、ゼラチンで作成されたプッシュ・フィット（push-fit）カプセル剤、及びゼラチンとグリセリン又はソルビトールのような可塑剤とで作成された軟密閉カプセル剤が含まれる。プッシュ・フィット・カプセル剤は、乳糖のような増量剤、デンプンのような結合剤、及び／又はタルクもしくはステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤、そして場合により安定剤と混和された活性成分を含有し得る。軟カプセル剤において、活性化合物は、脂肪油、流動パラフィン、又は液体ポリエチレングリコール（PEG）のような適当な液体に溶解又は懸濁され得る。さらに、安定剤が添加され得る。
【００５４】
投与経路
以下、様々な投与経路を、より詳細に論じる。
【００５５】
経口投与
経口投与に適した医薬品は、カプセル剤もしくは錠剤；散剤もしくは顆粒剤；（水性もしくは非水性の液体中の）液剤、シロップ剤、もしくは懸濁剤；内用のフォーム剤（foams）もしくはホイップ剤（whips）；又は乳剤として提供され得る。
【００５６】
錠剤又は硬ゼラチン・カプセル剤は、乳糖、トウモロコシデンプン又はその誘導体、ステアリン酸又はその塩を含み得る。
【００５７】
軟ゼラチン・カプセル剤は、植物油、ロウ、脂肪、半固形又は液状のポリオール等を含み得る。
【００５８】
液剤及びシロップ剤は、水、ポリオール、及び糖を含み得る。懸濁剤の調製には、油（例えば、植物油）が、水中油型又は油中水型の懸濁剤を提供するために使用され得る。
【００５９】
経皮投与
経皮投与に適した医薬品は、レシピエントの表皮と長期にわたり密着し続けるよう意図された個別の湿布剤として提供され得る。例えば、活性成分は、イオントフォレシスによって湿布剤から送達され得る（イオントフォレシスは、Pharmaceutical Research、3（6）：318（1986）に記載されている）。
【００６０】
局所投与
局所投与に適した医薬品は、軟膏剤、クリーム剤、懸濁剤、ローション剤、散剤、液剤、パスタ剤、ゲル剤、スプレー剤、エアロゾル剤、又は油剤として提供され得る。
【００６１】
眼又はその他の外部組織、例えば、口腔及び皮膚の感染には、局所用の軟膏剤又はクリーム剤が好ましくは使用される。軟膏剤へと製剤化される場合、活性成分は、パラフィン性又は水混和性の軟膏基剤と共に利用され得る。又は、活性成分は、水中油型基剤又は油中水型基剤と共にクリーム剤へと製剤化され得る。
【００６２】
眼への局所投与に適した医薬品には、点眼剤が含まれる。この場合、活性成分は、適当な担体、例えば水性溶媒に溶解又は懸濁され得る。
【００６３】
口腔への局所投与に適した医薬品には、ロゼンジ剤（lozenges）、パステル剤（pastilles）、及び洗口剤が含まれる。
【００６４】
直腸投与
直腸投与に適した医薬品は、坐剤又は浣腸剤として提供され得る。
【００６５】
鼻投与
固体の担体を使用する鼻投与に適した医薬品は、（例えば、20〜500ミクロンの範囲の粒子サイズを有する）粗い散剤を含む。これは、吸い込まれるようにして、即ち鼻の近くに保持された散剤のコンテナからの鼻を通した迅速な吸入により、投与され得る。
【００６６】
液状の担体を使用する鼻投与のために採用される組成物には、鼻スプレー剤又は点鼻剤が含まれる。これらは、活性成分の水性又は油性の液剤を含み得る。
【００６７】
吸入による投与に適した医薬品には、様々な型の装置、例えば、加圧されたエアロゾル、噴霧器、又は吸入器により発生させ得る微粒子ダストもしくはミストが含まれる。そのような装置は、予定された投薬量の活性成分を提供するよう構築され得る。
【００６８】
非経口投与
非経口投与に適した医薬品には、水性及び非水性の無菌の注射可能な液剤又は懸濁剤が含まれる。これらは、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、及び組成物を意図されたレシピエントの血液と実質的に等張にする溶質を含有し得る。そのような組成物の中に存在し得るその他の成分には、例えば、水、アルコール、ポリオール、グリセリン、及び植物油が含まれる。非経口投与に適した組成物は、単位用量型（unit-dose）又は多用量型（multi-dose）コンテナ、例えば密封されたアンプル及びバイアルで提示され得、使用直前に無菌の液状担体、例えば注射用無菌水の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保管され得る。用時溶解及び懸濁させる注射剤は、無菌の散剤、顆粒剤、及び錠剤から調製され得る。
【００６９】
投薬量
投薬量は、ルーチンの試験により容易に決定可能であり、医師又は臨床医によって調節されるであろう。適当な用量を決定するための指針は、適当な効力を有するが、非毒性であるか、又は許容可能な毒性を有する量の材料の送達であろう。NB-DNJ又は類似化合物の場合、成人のための1日投薬量は、活性薬剤0.1mg〜5gの範囲内であると予想され得、3〜2400mg、好ましくは5〜800mg、より好ましくは15〜400mg、最も好ましくは15〜100mgの範囲であり得る。投薬量は、1日1回、又は1日2回、3回もしくはそれ以上に分割されて投与され得る。
【００７０】
以下の実施例は、前記の本発明を例示するために提供されるに過ぎず；決して本発明の範囲を制限するためのものではない。本明細書の全体にわたり、公に入手可能な文書の任意の全ての参照は、参照として本願に特別に組み込まれる。
【００７１】
実施例
以下の実施例は、少なくとも3週間の本発明の化合物の経口投与の後、雌マウスが絶対不妊になったが、雄マウスはそうならなかったこと、及びその妊孕性が薬物撤去の後4週間以内に取り戻されたことを示す。精巣重量及び血清テストステロンレベルは影響を受けなかった。処置されたマウスからの精巣上体精虫は、一部運動性であったが、多数の異常：不規則な頭部の形のスペクトル（ほぼ正常及び三角形から円形へら形及び偏円形まで）、先体抗原の欠如、並びに、精細胞のあるサブセットにおける、ミトコンドリア鞘の短縮及び肥厚、を示した。
【００７２】
材料及び方法
化合物−
NB-DNJは、Searle/Monsanto及びOxford Glycosciencesから得られた。NB-DGJは、Toronto Research Chemicalsから購入された。DNJは、Synergy Pharmaceuticals,Incから得られた。
【００７３】
動物−
C57BL/6マウスは、標準的な非無菌条件下で飼育された。マウスは、水を自由に供給され、薬物投与の前にはペレット飼料（expanded Rat and Mouse Chow 3、SDS Ltd.）を給餌された。
【００７４】
マウスの処置−
雄C57BL/6マウスは、標準的な非無菌条件下で飼育された。マウスは、水を自由に供給され、薬物投与の前にはペレット・マウス飼料（expanded Rat and Mouse Chow 3、SDS Ltd.）の食事を給餌された。本発明の化合物を投与するため、マウスは、NB-DNJ、NB-DGJ、NN-6-MeDGJ、又はDNJのいずれかを含有している粉末マウス飼料（expanded Rat and Mouse Chow 1、ground、SDS Ltd.）の食事を給餌された。（いずれも乾燥固体としての）食事及び化合物は、充分に混合され、室温で保管され、混合から7日以内に使用された。
【００７５】
交配アッセイ−
イミノ糖を含有している食事を給餌された雄マウスの妊孕性を査定するため、交配アッセイを使用した：典型的には3群の6週齢雄C57BL/6マウスに、（特記しない限り）5週間、化合物を含有している食事を投与し、その後、各々を4匹の未処置雌C57BL/6マウスと共にケージに収容し、標準的なペレット飼料を供給した。雌は、少なくとも11週齢であり、各実験において年齢マッチングされていた。実験に依って7日又は9日後に、雄を雌から離し；雌を、膣粘液栓、妊娠、そして存在する場合には一腹仔数に関してモニタリングした。雌の妊孕性に対する効果を研究するため、6週齢雌C57BL/6マウスを、5週間NB-DNJで処置し、その後、各々を、4日間、未処置の年齢マッチングされた雄と共にケージに収容した。
【００７６】
内分泌学的アッセイ−
CO2窒息及び頚部脱臼によりマウスを屠殺した後、心臓穿刺を介して血液を得、室温（RT）で凝固させた。遠心分離によって血清を得、使用まで-80℃で保管した。テストステロン、黄体化ホルモン、及び卵胞刺激ホルモンを、当技術分野において周知の方法によって測定した（Huhtaniemi,I.、Nikula,H.、及びRannikko,S.（1985）J Clin Endocrinol Metab 61、698-704；Haavisto,A.M.、Pettersson,K.、Bergendahl,M.、Perheentupa,A.、Roser,J.F.、及びHuhtaniemi,I.（1993）Endocrinology 132、1687-91；van Casteren,J.I.、Schoonen,W.G.、及びKloosterboer,H.J.（2000）Biol Reprod 62、886-94.）。
【００７７】
蛍光顕微鏡検−
免疫蛍光のため、新鮮に切除された精管にストリッピング（stripping）を施し、鉗子で精巣上体尾をM2培地へと剖出し、精虫を15分間分散させた。得られた懸濁物を、ガラススライド上にスメアを調製するために使用した。1時間空気乾燥させた後、細胞を2分間メタノールで固定し、乾燥させ、1〜5日間室温又は4℃で保管した。免疫染色の前に、スメアを5分間メタノールに浸漬し、乾燥させ、0.5％BSA及び0.15Mグリシンを含有しているPBS（PBG）で湿らせた。スライドを、van Dongenら（van Dongen,J.M.、Willemsen,R.、Ginns,E.I.、Sips,H.j.、Tager,J.M.、Barranger,J.A.、及びReuser,A.J.（1985）Eur J Cell Biol 39、179-189）に従い、モノクローナル抗体であるMab18.6（PBG中1：20（Moore,H.D.、Smith,C.A.、Hartman,T.D.、及びBye,A.P.（1987）Gamete Res 17、245-9））、抗sp56（PBG中1：67、クローン7C5、QED Bioscience（Cheng,A.、Le,T.、Palacios,M.、Bookbinder,L.H.、Wassarman,P.M.、Suzuki,F.、及びBleil,J.D.（1994）J Cell Biol 125、867-78）、並びにヤギ抗マウス免疫グロブリンγ及び軽鎖特異的フルオレセイン・イソチオシアネート-コンジュゲート（Ortho）のいずれかで染色した。免疫染色の後、核を、5μg/mlのHoechst 33342（Molecular Probes）で2分間染色し；スライドを蒸留水で濯ぎ、ベクタシールド（Vectashield）（Vector）でマウンティングした。蛍光プローブを、Princeton Instruments CCDカメラを装備したオリンパスBX50顕微鏡を使用して調査した。Metamorph v3.5ソフトウェアで画像を取得し、偽色彩（false-coloured）及びオーバーレイ（overlaied）を行い、Adobe Photoshopでさらに加工した。蛍光試薬で染色された細胞の割合の定量のため、少なくとも100個の細胞をZeiss Axioplan顕微鏡により観察した。
【００７８】
組織学及び走査型電子顕微鏡検−
4％パラホルムアルデヒド、1％グルタルアルデヒドで潅流されたマウスから精巣を得、2日間固定液中に維持し、70％エタノールに移した。組織を2％四酸化オスミウムで後固定し、アラルダイトで包埋し、1μmに切片化し、トルイジンブルーで染色した。切片を、Zeiss Axioskop IIで調査し、Axiovision 3.0ソフトウェアによって操縦されたAxiocamカメラで画像を取得した。
【００７９】
走査型電子顕微鏡検のため、前記のようにして、マウス精虫の乾燥スメアを調製した。細胞を4％パラホルムアルデヒドのPBS溶液で20分間固定し、70％、80％、及び95％エタノールに移し、Polaron CPD7501装置で臨界点乾燥させ、Nanotech Semprep2を使用して金コーティングし、3kVでHitachi S800 FEG-SEMで調査した。透過型電子顕微鏡検のため、精巣上体精虫を、PBS中1mg/ml冷水溶性ポリビニルアルコールに収集し、600×gで10分間スピンした。ペレット化された細胞を、1％グルタルアルデヒド、0.2％ピクリン酸を含む0.2Mカコジル酸（pH7.4）で4℃で一夜固定し、0.1Mカコジル酸（pH7.4）で1回洗浄し、70％エタノール中に保管した。細胞を2％四酸化オスミウムで後固定し、アラルダイトで包埋し、70nmに切片化し、酢酸ウラニル／クエン酸鉛で染色し、80kVでJEOL JEM-100CX顕微鏡で調査した。
【００８０】
運動性分析−
マウスをCO2窒息及び頚部脱臼によって屠殺し、精管と共に精巣上体尾を摘出した。精管にストリッピングを施し、精巣上体尾に軽度の圧力を適用することにより、予め加温されたM2培地（Sigma）に精虫を収集し；細胞を37℃で1時間インキュベートし；JVC TK-1281カメラが取り付けられたLeica DM IRB顕微鏡を使用してビデオ撮影した。Hobson Sperm Tracker（Hobson Vision Ltd.、UK）を使用して、コンピュータ支援精子運動性分析を50フレーム／秒で実施した。各精子試料の運動性パラメータを三つ組で測定し、各決定について200個の精子軌跡からデータを収集した。
【００８１】
統計−
多重比較検定を使用して、複数の実験群からの定量データを有意性に関して分析した。一元配置のANOVAとトゥキーのポスト検定（Tukey's post test）、又はノンパラメトリックANOVA（Kruskal-Wallis検定）とダンのポスト検定（Dunn's post test）を、Macintosh版GraphPad InStatバージョン3.0a（GraphPad Software）を使用して実施した。
【００８２】
実施例1−雄マウスに対するNB-DNJの経口投与の効果
雄マウスの妊孕性に対するNB-DNJの効果を決定するため、6週齢のC57BL/6雄を、1週間ずつ期間を延ばしながら、1日当たり2400mg/kgのNB-DNJで処置し（図1A）、次いで、1週間、未処置の雌マウスと共にケージに収容する交配アッセイに供した。図1Aは、実験開始時、雄が妊孕性であり、標準サイズの同腹仔を生ませ得たこと、及び1週間又は2週間のNB-DNJ処置の後に、この能力が維持されていたことを示す。マウスは、少なくとも3週間の薬物消費の後、不妊となった（図1A）。雄マウスは、5週間の処置後に退薬した場合、4週間以内に妊孕性を取り戻し、標準サイズの同腹仔を生ませた（図1A）。13週齢雄の同じ投薬量による5週間の処置によっても、完全な絶対不妊がもたらされた（データは示さず）。従って、NB-DNJ処置により、雄マウスは不妊となり、この効果は完全に可逆性であった。
【００８３】
実施例2−用量応答
初期の仕事は、NB-DNJによって引き起こされるGSLレベルのインビボの減少が、用量依存性であること；例えば、1日当たり600〜2400mg/kgの範囲の用量によって、マウス脾細胞の表面上のガングリオシドGM1レベルがそれぞれ10〜70％減少することを示した（Plattら、（1997）J Biol Chem 272、19365-72）。1日当たり2400mg/kgのNB-DNJにより処置された場合、雄マウスが不妊になることが確立されたため（図1A及び図1B）、不妊を引き起こす最低用量を決定するために、次第に減少する用量の化合物にマウスを曝した。その結果は、図2A及び図2Bに示される。1日当たり1mg/kgは雄に影響を与えず、1日当たり5mg/kgは妊孕性（図2A）及び一腹仔数（図2B）を減少させ、1日当たり15mg/kgはそれらを完全に不妊にした。従って、マウス雄生殖系は、NB-DNJに対して例外的に感受性である。性交後の膣粘液栓の頻度は、NB-DNJ処置によって影響を受けなかったため（図2B）、薬物によって誘導された妊孕性の喪失は、交配行動の変化によって引き起こされたのではなかった。
【００８４】
実施例3−雌マウスの妊孕性
雄マウスとは対照的に、1200mg/kg/日のNB-DNJ処置によって雌マウスは不妊にならなかった。未処置の雄との4日間の交配期間の後、処置された雌（n=5）も未処置の雌（n=4）も100％が妊娠し；これらのマウスは、それぞれ6.2±2.7匹及び7.8±1.0匹の同腹仔を有していた。
【００８５】
129系統の12〜15週齢の雌マウスへ、12週間、2400mg/kg/日のNB-DNJを投与した。この後、薬物を撤去し、雌を129系統の未処置の雄と共にケージに収容した。全ての雌が迅速に妊娠し、平均6匹の同腹仔を有していた。この実験におけるマウスは、セラミド・ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする遺伝子の破壊に関してヘテロ接合性であった。これらのマウスは、野生型129マウスと表現型上は区別不能であり、正常に繁殖する（Coetzeeら、（1996）Cell、86：209-219）。
【００８６】
実施例4−内分泌学
テストステロン、卵胞刺激ホルモン（FSH）、黄体化ホルモン（LH）の血清レベル、及び精巣テストステロンを、NB-DNJで処置されたマウスにおいて決定した。図3A〜図3Dは、15mg/kg/日、150mg/kg/日、又は1200mg/kg/日の化合物が、これらの内分泌学的パラメータを変化させなかったことを示している。対照的に、2400mg/kg/日は、これらのホルモンレベル全てを有意に減少させた（p＜0.001）。従って、イミノ糖で処置された雄の生殖内分泌学は、複雑ガングリオシド欠損動物のものとは異なる。さらに、これらの結果は、（少なくとも15mg/kg/日を要求する）NB-DNJにより誘導される不妊が、生殖ホルモンの低下によって媒介されるのではないことを示している。
【００８７】
実施例5−性腺重量
この研究において、低用量NB-DNJ処置（15mg/kg/日〜150mg/kg/日）は、体重又は性腺重量に影響を与えなかった。1200mg/kg/日及び2400mg/kg/日では、精巣及び精巣上体コンパートメントの重量は、体重に比例して減少した。唯一の例外は最高用量で見られ、その用量においては、精巣上体尾／精管の重量の和が、全体重より大きく減少した（p＜0.05）（それぞれ対照に対して43±7％、60±5％（n＝10））。従って、生腺重量の減少は、高投薬量NB-DNJ療法の効果であり、雄不妊の誘導とは無関係である。さらに、薬物によって引き起こされた妊孕性の喪失は、精巣上体精子数の減少とは関連していなかった。
【００８８】
実施例6−精巣組織学
NB-DNJで処置された動物の精細管においては、対照より高頻度に、より広範な空胞形成が観察された（図4A及び図4B）。さらに、薬物投与後、成熟精子細胞の核は、異常な不均一な形態学を示した。図4B中の挿入写真は、そのようなステップ（step）13精子細胞の例を示しており：それらは、多くの場合、陥凹を有しており、正常なステップ13精子細胞（図4A、挿入写真）よりはるかに短かった（精子細胞の分類及び精巣のステージングに関しては、Russellら（1990）、Histological and Histopathological Evaluation of the Testis、Cache River Press、Clearwater、FL、USAを参照のこと）。
【００８９】
実施例7−精虫の形態学に対する効果
NB-DNJで処置されたマウスの精虫を、改変された形態学を有しているか否かを調べるために調査した。
【００９０】
正常マウス精巣上体精虫の核は、外側に平板化されており、典型的には湾曲した鎌状の形を有する。様々な加水分解酵素を含有しており、特殊な制御された分泌小胞と見なされ得る、比較的大きな、膜で縁どられた細胞小器官、先体が、核を覆っている；先体は、受精にとって不可欠である（Yanagimachi,R.（1994）、The Physiology of Reproduction、Knobil,E.及びNeill,J.D.編（Raven Press、New York）、189〜317頁に概説）。精巣の組織学的観察と一致して（上記実施例6参照）、NB-DNJで処置されたマウスからの精巣上体尾精細胞は、様々な奇形核を有しており：それらは、ほぼ正常であるか、三角形であるか、扁円形であるか、又は細長く、大多数がへら状であった（図4D、図4E、及び図4F）（Hollanderら（1960）Fertil Steril 11、316-324により記載されたような形態学的カテゴリ）。これらの核のうちのいくつかは、前側先端に近い外側陥入を有していた。精巣上体頭に由来する精虫は、類似の影響を受けていた。（ほぼ）正常な核を有する尾精虫の割合は、NB-DNJ投薬量が増加するにつれ劇的に減少し、完全な不妊を達成するための最低用量において6％未満にまで低下した（図2C）。興味深いことに、1200mg/kg/日のNB-DNJでは、50mg/kg/日〜150mg/kg/日より有意に高頻度に（p＜0.01）正常な核形態学が観察された（図2C）。
【００９１】
これらの精虫をさらに特徴決定するため、別個の先体抗原を認識するモノクローナル抗体Mab18.6及び抗sp56を用いた間接免疫蛍光を利用した（Mooreら、前記；Chengら（1994）J Cell Biol 125、867-878）。NB-DNJで処置されたマウスからの精虫のごく一部のみが、Mab18.6（図4D）又は抗sp56で染色され（データは示さず）、それは、薬物用量と共に減少し、15mg/kg/日では10％未満となった（図2D）。この場合にも、1200mg/kg/日は例外的であり：この用量における抗体染色は、15mg/kg/日〜150mg/kg/日よりも高頻度であった（図2D）。しかしながら、薬物で処置されたマウスからのMab18.6陽性精細胞の多くは、正常な三日月形の先体蛍光を示さず、不規則な染色パターンを示した（図4E及び図4F）。実際、Mab18.6陽性細胞のうち、（ほぼ）正常な先体染色の発生率は、15mg/kg/日から1200mg/kg/日まで同等に低く、平均31±10％（n＝3）であった。抗sp56でも、類似した結果が得られた。2400mg/kg/日を投与されたマウスからの精子試料は、1200mg/kg/日で処置されたマウスからのものと類似した特徴を有していた（データは示さず）。最後に、超微細構造レベルにおいても、精巣上体精虫の核を覆う典型的な先体エレメントが見られなかった（図5D、図5E、及び図5F）。
【００９２】
正常マウス精虫の尾部の精子頭部に近いセグメント（中片部）は、ミトコンドリアを保持しており、このミトコンドリアは、二つの平行ヘリックスとして配置され、尾のコア・エレメントの周囲に単層の鞘を形成しているいる（Eddyら、前記に概説）。これらのミトコンドリアの形及び幅は、極めて均一である。NB-DNJ処置は、精巣上体精虫の尾部及びミトコンドリアにおける多数の異常を誘導した。第一に、NB-DNJで処置されたマウスからの精虫の、あるサブセットにおいては、ミトコンドリアが、精子頭部の直後に又は隣接して、はるかに短くかつ広い配置で見出された（図5B及び図5F）。この型の細胞の繊維性の尾部コア構造（外側の密な繊維／軸糸）は、中片部の大部分（改変されたミトコンドリア鞘の後側端部から、次の尾部セグメントである主部の始部まで）においてミトコンドリア外皮を欠いていた。これらの短縮された鞘は、高度に無秩序であり：ミトコンドリアが不規則に配置され、互いの上に積み重なっており；それらのサイズ及び形は広範囲に異なっていた（図5B及び図5F）。
【００９３】
正常マウス精虫の尾部は、頭部から遠ざかって延びており、穏和に湾曲し得る。しかしながら、NB-DNJで処置されたマウスからの精巣上体精虫の一部においては、尾部の近位部分が、半周又は一周（図5E）からいくつかの完全なループ（図5D）まで、精子の頭部又は核に絡み付いていた。このような尾部の巻き付きのため、ミトコンドリア鞘を保持している尾部のセクションが、少なくとも一部、精子頭部に、核に隣接して位置付けられていた（図5E）。最後に、薬物処置により、精虫核の凝縮度は低下し、対照細胞においてははるかに稀であった（図5C）、小さな電子透過性（electronlucent）の焦点を示した（図5D、図5E、及び図5F）。
【００９４】
従って、NB-DNJ処置は、精虫の核異形症をもたらし、先体異常を誘導し、そしてミトコンドリア鞘を含む尾部の無秩序を引き起こす。比較的低い薬物用量は、極めて高い割合の異常精細胞を誘導した。驚くべきことに、使用された最も高い用量では、この効果が部分的に逆転された。1200mg/kg/日で使用されたガラクトース類似体NB-DGJは、NB-DNJで見られたのと類似した範囲の形態学的異常を誘導した（データは示さず）。
【００９５】
実施例8−精子運動性
NB-DNJで処置されたマウスからの精巣上体精虫の構造的欠陥が、機能的な結果を有しているか否かを査定するため、本発明者らはコンピュータ支援精子運動性分析を実施した。15mg/kg/日で、運動率は正常値より有意に低くなり（p＜0.05）、曲線速度及び直線速度も同様であった（p＜0.001）（表2）。
【００９６】
（表２）精子運動性
2005532274.tif 000010
VCLは曲線速度、VSLは直線速度を示す。データは平均値±SDとして提示されている；n≧3。
【００９７】
さらに、2400mg/kg/日では、両方の速度が、150mg/kg/日よりも有意に低かった（p＜0.001）（表2）。従って、NB-DNJの摂取は、薬物用量と共に進行性である、重度に減縮された精子運動性をもたらす。
【００９８】
実施例9−雄マウスに対するNN-DGJの効果
この実施例においては、8匹のマウス（n＝8）を、40日間、250mg/kg/日のNN-DGJで処置した。図6Aに示されるように、NN-DGJは、未処置のマウスのものと比して、処置されたマウスの体重に影響を与えなかった。
【００９９】
食物を供給された、又は飢餓状態の、未処置のマウス及びNN-DGJで処置されたマウスにおいて、肝臓グリコーゲンレベルを測定した（図6B）。NN-DGJは、飢餓中の肝臓グリコーゲンの分解を阻害しなかった。
【０１００】
NN-DGJは、処置されたマウスにおける胸腺の重量及び脾臓の重量に影響を与えなかった。図6Cに示されるように、NN-DGJで処置されたマウス及び未処置のマウスの胸腺及び脾臓の重量は、事実上同一であった。
【０１０１】
NN-DGJは、処置されたマウス4匹及び未処置のマウス3匹を含む類似の実験において、雄マウスの妊孕性に対する強力かつ可逆的な効果を示した。図6Dに示されるように、NN-DGJの投与によって、5週間の処置の後、マウスの妊孕性は完全に抑制されたが、NN-DGJの撤去後6週間目に、マウスは妊孕性を完全に取り戻した。この可逆的な効果は、一腹仔数でも明示され：NN-DGJの撤去後6週間目、処置された雄と交配された雌の一腹仔数は、未処置の雄と交配された雌の一腹仔数とほぼ同じであった（図6E）。
【０１０２】
実施例10−雄マウス妊孕性に対するNN-6-MeDGJの効果
6匹の雄マウスを、15mg/kg/日（低）又は250mg/kg/日（高）いずれかのNN-6-MeDGJで経口的に処置した（図8A及び図8B）。さらに、NN-6-MeDGJを、皮下に植込まれた放出装置（Alzet minipump；「ポンプ」）により15mg/kg/日で投与した。5週間の処置の後、雄マウスの妊孕性を、前記のような交配アッセイにおいて評価した。図8A及び図8Bは、高用量で雄マウスが不妊になったこと；低用量で処置されたマウスが、減少した妊孕性を示したこと；ポンプを介してNN-6-MeDGJを投与されたマウスの妊孕性が、経口的に摂取させられた低用量マウスのものより低かったことを示している。NN-6-MeDGJの撤去から5週間後、高用量マウスの妊孕性は、対照マウスのものと同じであった。従って、雄マウスの妊孕性は、完全に抑制され、次いで完全に取り戻された。
【０１０３】
雄マウスの身体及び行動に対するNN-6-MeDGJの効果は、未処置のマウスのものと実質的に異ならなかった。8匹のマウスに、40日間、250mg/kg/日のNN-6-MeDGJを摂取させたところ、その間、NN-6-MeDGJで処置されたマウスの体重は、未処置のマウスのものと同じであった（図7A）。さらに、NN-6-MeDGJは、雄マウスの胃腸管、胸腺、及び脾臓の重量に影響を与えなかった（図7C）。最後に、NN-6-MeDGJで処置されたマウスにおける自発行動を、未処置のマウスにおけるそれと比較した。図7Bに示されるように、NN-6-MeDGJは、処置されたマウスの運動に影響を与えなかった。
【０１０４】
本明細書中に引用された出版物及び特許出願及び特許は、全て、参照として完全に本明細書に組み込まれる。以上は、特定の好ましい態様を指すが、本発明はそれにより制限されないことが理解されよう。開示された態様に対して様々な修飾がなされ得ること、及びそのような修飾が、以下の特許請求の範囲によって画定される本発明の範囲に含まれることが、当業者には想到されよう。
【図面の簡単な説明】
【０１０５】
【図１】図1Aは、雄マウスの妊孕性に対するNB-DNJの経口投与及び撤去の効果を示す。図1Aは、動物が処置されないか、又は1〜5週間1日当たり2400mg/kgのNB-DNJを与えられ、その後NB-DNJが投与されなかったことを示す。図1Bは、3匹の雄を、各々、1週間、4匹の雌マウスと共にケージに収容した後の、各雄についての妊娠に対するNB-DNJ及びNB-DGJの効果を示す。
【図２】図2A、図2B、図2C、及び図2Dは、NB-DNJの経口投与による雄マウスにおける不妊の誘導の用量依存性を示す。図2Aは、雄に5週間NB-DNJを含有している食事を給餌し、次いで、9日間各々4匹の雌マウスと共にケージに収容した後の、各雄についての妊娠をNB-DNJの用量と比較している。図2Bは、各雄についての膣栓の数を、用量と比較している（1200mg/kg/日に関しては未決定）。図2Cは、精巣上体精虫を調査された後に観察された、異常な核形態学の割合を、用量と比較している。図2Dは、先体抗原による免疫蛍光を発する細胞の数を、用量と比較している（300mg/kg/日及び600mg/kg/日に関しては未決定）。
【図３】図3A、図3B、図3C、及び図3Dは、個々の雄マウスの生殖内分泌学に対する4つの異なる用量のNB-DNJの効果を示している。図3Aは、黄体化ホルモンに対する効果を示しており；図3Bは、卵胞刺激ホルモンに対する効果を示しており；図3Cは、血清テストステロンに対する効果を示しており；図3Dは、精巣テストステロンに対する効果を示している。
【図４】図4A、図4B、図4C、図4D、図4E、及び図4Fは、正常マウスからの精虫の形態学的特質を、NB-DNJで処置されたマウスからのものと比較している。図4Aは、対照マウスからのステージＩ精細管からの切片を示しており；図4Bは、50mg/kg/日のNB-DNJで処置されたマウスにおける切片を示しており；挿入写真は、ステップ13精子細胞頭部のクローズアップを示している。図4C、図4D、図4E、及び図4Fは、抗先体モノクローナル抗体18.6と共にインキュベートされ、核色素ヘキスト（Hoechst）33342で対比染色された精巣上体精虫を示している。図4Cは、正常マウスからの精巣上体精虫を示しており、図4D、図4E、及び図4Fは、150mg/kg/日で処置されたマウスからの精巣上体精虫を示している。最初の拡大率は、1000×であった。
【図５】図5A及び図5Cは、正常マウスからの精巣上体精虫の形態学的特質を示しており、図5B、図5D、図5E、及び図5Fは、NB-DNJで処置されたマウス（1,200mg/kg/日）におけるそれらを示している。図5Aは、正常な頭部及び中片部を示しており、図5Bは、無秩序なずんぐりとした（squat）ミトコンドリア鞘を有するへら状の精子頭部を示す。図5Cは、正常精虫を示しており、図5D、図5E、及び図5Fは、核の形、尾部の方向性、並びにミトコンドリアの形態学及び配置の改変を有する精虫を示している。バーは2μmを表す。
【図６】図6A、図6B、図6C、図6D、及び図6Eは、雄マウスに対するNN-DGJ（250mg/kg/日）の効果を示している。図6Aは、8匹のNN-DGJで処置されたマウスの体重増加が未処置のマウスのものと同じであったことを示している。図6Bは、NN-DGJで処置されたマウス及び未処置のマウスにおける肝臓グリコーゲンレベルを比較している。図6Cは、NN-DGJで処置されたマウス及び未処置のマウスの胸腺及び脾臓の重量を比較している。図6Dは、NN-DGJによる5週間の処置の後、及び処置を中止した後6週間目の、4匹の雄マウスの妊孕性を示している。同様に、図6Eは、5週間の処置の後、及び処置を中止してから6週間が経過した後の、一腹仔数に対するNN-DGJの効果を示している。
【図７】図7A、図7B、及び図7Cは、雄マウスに対するNN-6-MeDGJ（250mg/kg/日）の効果を示している。図7Aは、NN-6-MeDGJで処置されたマウスの体重増加を未処置のマウスのものと比較している。図7Bは、オープンフィールド試験における、NN-6-MeDGJで処置されたマウスの自発的な水平及び垂直の運動が、未処置のマウスのものと異ならなかったことを示す。図7Cは、NN-6-MeDGJで処置されたマウス及び未処置のマウスの腸管、胸腺、及び脾臓の重量を比較している。
【図８】図8A及び図8Bは、雄マウスの妊孕性に対するNN-6-MeDGJの効果を示す（15mg/kg/日、低、低（ポンプ）；又は250mg/kg/日、高）。図8Aは、同腹仔の数を比較しており、図8Bは、処置中の各投薬量計画における一腹仔数を、処置後5週間目のものと比較している。
【図１】
2005532274.tif 000020
【図２Ａ】
2005532274.tif 000021
【図２Ｂ】
2005532274.tif 000022
【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
2005532274.tif 000024
【図３Ａ】
2005532274.tif 000025
【図３Ｂ】
2005532274.tif 000026
【図３Ｃ】
2005532274.tif 000027
【図３Ｄ】
2005532274.tif 000028
【図４】
2005532274.tif 000029
【図５】
2005532274.tif 000030
【図６Ａ】
2005532274.tif 000031
【図６Ｂ】
2005532274.tif 000032
【図６Ｃ】
2005532274.tif 000033
【図６Ｄ】
2005532274.tif 000034
【図６Ｅ】
2005532274.tif 000035
【図７Ａ】
2005532274.tif 000036
【図７Ｂ】
2005532274.tif 000037
【図７Ｃ】
2005532274.tif 000038
【図８Ａ】
2005532274.tif 000039
【図８Ｂ】
2005532274.tif 000040
【国際調査報告】
2005532274.tif 000041
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