(57)【要約】本発明は、局所治療用調製物、およびウイルスおよび炎症疾患を処置するため、ならびに、皮膚および粘膜の局所炎症の痛みを減少させるための方法に関する。本調製物には、ｎ−ドコサノールを含むクリームが含まれる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
実質的に、約１０重量％のｎ−ドコサノール、約５重量％の、モノステアリン酸スクロース、ジステアリン酸スクロース、およびその混合物からなる群より選択されるステアリン酸エステル、約８重量％の軽ミネラルオイル、約５重量％のプロピレングリコール、約２．７重量％のベンジルアルコール、および約６９．３重量％の水からなる、ウイルスおよび炎症疾患の処置における、皮膚および粘膜への適用のための、治療用クリーム。
【請求項２】
実質的に、約１０重量％のｎ−ドコサノール、約５重量％の、モノステアリン酸スクロース、ジステアリン酸スクロース、およびその混合物からなる群より選択されるステアリン酸エステル、約８重量％の軽ミネラルオイル、約５重量％のプロピレングリコール、約２．７重量％のベンジルアルコール、および約６９．３重量％の水からなる、安定した治療用局所クリームを、皮膚または粘膜に適用することを含む、皮膚および粘膜のウイルス感染および炎症を処置する方法。
【請求項３】
実質的に、約１０重量％のｎ−ドコサノール、約５重量％の、モノステアリン酸スクロース、ジステアリン酸スクロース、およびその混合物からなる群より選択されるステアリン酸エステル、約８重量％の軽ミネラルオイル、約５重量％のプロピレングリコール、約２．７重量％のベンジルアルコール、および約６９．３重量％の水からなる組成物を、炎症表面に適用することを含む、皮膚および粘膜の表面炎症の痛みを減少させる方法。
【請求項４】
皮膚または粘膜のウイルス感染および炎症の処置のための薬剤の調製における、実質的に、約１０重量％のｎ−ドコサノール、約５重量％の、モノステアリン酸スクロース、ジステアリン酸スクロース、およびその混合物からなる群より選択されるステアリン酸エステル、約８重量％の軽ミネラルオイル、約５重量％のプロピレングリコール、約２．７重量％のベンジルアルコール、および約６９．３重量％の水からなる組成物の使用。
【請求項５】
皮膚または粘膜の表面炎症の痛みを減少させるための薬剤の調製における、実質的に、約１０重量％のｎ−ドコサノール、約５重量％の、モノステアリン酸スクロース、ジステアリン酸スクロース、およびその混合物からなる群より選択されるステアリン酸エステル、約８重量％の軽ミネラルオイル、約５重量％のプロピレングリコール、約２．７重量％のベンジルアルコール、および約６９．３重量％の水からなる組成物の使用。
【請求項６】
実質的に、糖に基づくエステル界面活性剤、約５重量％を超える、ｎ−ドコサノール、ミネラルオイル、皮膚軟化共溶媒および水からなる、ウイルスおよび炎症疾患の処置における、皮膚および膜への適用のための、治療用クリーム。
【請求項７】
前記クリームが、少なくとも３ヶ月の期間、および繰り返し凍結融解サイクルの後、少なくとも４０℃の温度で安定である、請求項６に記載の治療用クリーム。
【請求項８】
前記糖に基づくエステル界面活性剤が、ヤシ脂肪酸スクロース、ステアリン酸スクロースおよびジステアリン酸スクロースからなる群より選択される、請求項６に記載の治療用クリーム。
【請求項９】
前記糖に基づくエステル界面活性剤が、ヤシ脂肪酸スクロース、ステアリン酸スクロースおよびジステアリン酸スクロースからなるスクロースエステル類の群から選択される、少なくとも１つの化合物を含み、ここで、スクロースエステル（類）が、約３重量％以上のクリームを含む、請求項８の治療用クリーム。
【請求項１０】
前記スクロースエステル（類）が、約５重量％以上のクリームを含む、請求項９に記載
の治療用クリーム。
【請求項１１】
前記皮膚軟化共溶媒が、ポリオキシプロピレンステアリルエーテル、エチルヘキサンジオール、およびベンジルアルコールまたはそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項６に記載の治療用クリーム。
【請求項１２】
前記ｎ−ドコサノールが、少なくともおよそ１０重量％のクリームを含む、請求項６に記載の治療用クリーム。
【請求項１３】
主要な治療用組成物が、実質的にｎ−ドコサノールからなり、前記クリームが、ヤシ脂肪酸スクロース、ステアリン酸スクロースおよびジステアリン酸スクロースからなる群より選択される１つ以上の化合物、およびポリオキシプロピレンステアリルエーテル、エチルヘキサンジオールおよびベンジルアルコールからなる群より選択される１つ以上の化合物に基づく、安定で、有効な治療用クリーム。
【請求項１４】
前記スクロースエステル（類）が、少なくともおよそ５重量％のクリームを含む、請求項１３に記載の治療用クリーム。
【請求項１５】
前記ｎ−ドコサノールが、少なくともおよそ１０重量％のクリームを含む、請求項１３に記載の治療用クリーム。
【請求項１６】
少なくとも１つのスクロースエステルが存在し、総組成物の約３重量％を含む条件で、５〜１５重量％の総クリーム、総クリームの０〜１５重量％からなるステアリン酸スクロース、総クリームの０〜１０重量％からなるヤシ脂肪酸スクロース、総クリームの０〜１０重量％からなるジステアリン酸スクロース、総クリームの３〜１５重量％からなるミネラルオイル、総クリームの０．５〜１０重量％からなるベンジルアルコール、および総クリームの４０〜７０重量％からなる水の処方を有する請求項１３に記載の治療用クリーム。
【請求項１７】
治療用活性組成物が、実質的にｎ−ドコサノールからなり、前記クリーム基体が、実質的に、糖に基づくエステル界面活性剤、ｎ−イコサノール、ｎ−ヘンイコサノール、ｎ−トリコサノール、ｎ−テトラコサノール、ｎ−ペンタコサノール、ｎ−ヘキサコサノール、ｎ−ヘプタコサノール、およびｎ−オクタコサノールまたはこれらの混合物からなる群より選択される、２０〜２８炭素原子を有する、少なくとも１つの長鎖脂肪族アルコール、ミネラルオイル、皮膚軟化共溶媒および水をからなる安定した治療用局所クリームを適用することを含む、皮膚および粘膜のウイルス感染および炎症を処置する方法。
【請求項１８】
ｎ−ドコサノールが、半分以上の長鎖脂肪族アルコールを含む請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
皮膚および粘膜のウイルス感染および炎症を処置する方法であって、
少なくとも１つのスクロースエステルが存在するという条件で、
約５〜２０重量％のｎ−ドコサノール、
約０〜１５重量％のステアリン酸スクロース、
約０〜１０重量％のヤシ脂肪酸スクロース、
約０〜１０重量％のジステアリン酸スクロース、
の処方を有する局所クリームを適用することを含み、
ここで、スクロース（類）が、約３重量％以上のクリームを含み、
ポリオキシプロピレンステアリルエーテルまたはベンジルアルコールのいずれかが、少なくとも約１重量％の量で存在するという条件で、
約３〜１５重量％のミネラルオイル、
約２〜１０重量％のプロピレングリコール、
約０〜５重量％のポリオキシプロピレン−１５ステアリルエーテル、
約０．５〜５重量％のベンジルアルコール、および
約４０〜７０重量％の水を含む、方法。
【請求項２０】
スクロースエステル（類）が、約５重量％以上のクリームを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
少なくとも１つのスクロースエステルが存在するという条件で、
約５〜２０重量％のｎ−ドコサノール、
約０〜１５重量％のステアリン酸スクロース、
約０〜１０重量％のヤシ脂肪酸スクロース、
約０〜１０重量％のジステアリン酸スクロース、
の処方を有する抗炎症および抗ウイルスクリームであって、
スクロースエステル（類）が、約３重量％以上のクリームを含み、
ポリオキシプロピレンステアリルエーテルまたはベンジルアルコールのいずれかが、少なくとも約１重量％の量で存在するという条件で、
約３〜１５重量％のミネラルオイル、
約２〜１０重量％のプロピレングリコール、
約０〜５重量％のポリオキシプロピレンステアリルエーテル、
約０〜５重量％のベンジルアルコール、および
約４０〜７０重量％の水を含む、クリーム。
【請求項２２】
スクロースエステル（類）が、約５重量％以上のクリームを含む、請求項２１に記載の抗炎症クリーム。
【請求項２３】
生理学的に適合可能な担体中のｎ−ドコサノールの組成物を炎症表面に適用することを含む、皮膚または膜の表面炎症の痛みを減少させる方法であって、前記ｎ−ドコサノールが、前記組成物の約５〜約２５重量％からなる方法。
【請求項２４】
前記生理学的に適合可能な担体が、ヤシ脂肪酸スクロース、ステアリン酸スクロースおよびジステアリン酸スクロースからなる群より選択する１つ以上の化合物、およびポリオキシプロピレンステアリルエーテル、エチルヘキサンジオール、およびベンジルアルコールからなる群より選択される１つ以上の化合物を含むクリーム基体である、請求項２３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウイルスおよび炎症疾患の処置のため、および皮膚および粘膜の局所的な炎症の痛みを減少させるための局所治療用調製品および方法に関する。調製品には、ｎ−ドコサノールを含むクリームが含まれる。
【背景技術】
【０００２】
ほとんどの抗ウイルス治療用化合物は、感染標的細胞内での、種々の特定のウイルス遺伝的複製機構を阻害する。これらのアプローチは、宿主細胞に対する毒性、薬物耐性ウイルス亜株の誘導、および、宿主細胞に対する突然変異誘発物質および／または催奇形性剤として働く可能性などの不利な点を有する。その結果、そのような宿主細胞に対する有害な影響のない、効果的な治療を提供する新規抗ウイルス化合物に対する検索が、最重要事項である。
【０００３】
再発型口−顔面単純ヘルペス（再発型単純口唇ヘルペス、ＨＳＬ）は、米国人口の２０〜４０パーセントで起こると見積もられる、一般的な疾患である（Ｈｉｇｇｉｎｓ  ＣＲ，Ｓｃｈｏｆｉｅｌｄ  ＪＫ，  Ｔａｔｎａｌｌ  ＦＭ，Ｌｅｉｇｈ  ＩＭ  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｖｉｒｏｌ．Ｓｕｐｐｌ．１；２２−６，１９９３）。この疾患の主要な特徴は、単純ヘルペスウイルス（一般的に１型［ＨＳＶ−１］）の、ストレス、日光、熱、呼吸管感染および月経のような刺激に対する応答における、発疹の前の潜伏維持能力である（Ｓｐｒｕａｎｃｅ  ＳＬ，ｉｎ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｒｐｅｓ  ｖｉｒｕｓｅｓ，  Ｓａｃｋｓ  ＳＬ，Ｓｔｒａｕｓ  ＳＥ，Ｗｈｉｔｌｅｙ  ＲＪ，Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ＰＤ，ｅｄｉｔｏｒ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ：ＩＳＯ  Ｐｒｅｓｓ，ｐ．３−４２，１９９５）。発疹下で進行しない症状は、中止または非障害症状として呼ばれてきた。古典的な障害は、創傷の前の水疱−潰瘍状態へ進展するものであった。
【０００４】
ＨＳＬは、７〜１０日のうちに通常発生する、治癒を伴って自己制限される（Ｓｐｒｕａｎｃｅ  ＳＬ，Ｏｖｅｒａｌ  ＪＣ，Ｋｅｍ  Ｅ，Ｋｒｕｅｇｅｒ  ＧＧ，Ｐｌｉａｍ
Ｖ，Ｍｉｌｌｅｒ  Ｗ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２９７：６９−７５，１９９７、Ｓｐｒｕａｎｃｅ  ＳＬ  Ｓｅｍｉｎ．ｉｎ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１：２００−６，１９９２、およびＳｈａｆｒａｎ  ＳＤ，Ｓａｃｋｓ  ＳＬ，Ａｏｋｉ  ＦＹ，Ｔｙｒｒｅｌｌ  ＤＬ，Ｓｃｈｌｅｃｈ  ＷＦ  3rd，  Ｍｅｎｄｅｌｓｏｎ  Ｊ．Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１７６：７８−８３，１９９７）。障害は、発生の８時間以内にしばしば最大の障害重症度となり、急速に進行する（Ｓｐｒｕａｎｃｅ  ＳＬ，Ｗｅｎｅｒｓｔｒｏｍ  Ｇ．Ｏｒａｌ  Ｓｕｒｇ．５８：６６７−７１，１９８４）。したがって、治療用処置に関する時間帯は小さく、抗ウイルス治療は初期に投与することが重要である。発疹またはそれより後期に開始した抗ウイルス治療は、障害重度または中断障害の頻度に有意な影響を与えることが出来ない。
【０００５】
宿主細胞に潜在的に有害ではない抗ウイルス活性を提供する化合物が同定され、いくらかの将来有望な結果が示されてきた。経口抗ウイルス薬剤、塩化水素バラシクロビルが、生殖器ヘルペス発生を抑制するため、および生殖器ヘルペスの再発発生の処置のために使用される。１９７０年代後半、たとえば、Ｓｎｉｐｅｓとその共同研究者ら（Ｓｎｉｐｅｓ  Ｗ，Ｐｅｒｓｏｎ  Ｓ，Ｋｅｌｌｅｒ  Ｇ，Ｔａｙｌｏｒ  Ｗ，Ｋｅｉｔｈ  Ａ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  １１：９８−１０４（１９７７）；Ｓａｎｄｓ  Ｊ．Ａｕｐｅｒｉｎ  Ｄ，Ｓｎｉｐｅｓ  Ｗ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．１５：６７−７３（１９７９））が、飽和および不飽和両方の、中鎖長のアルコールに対するかかる活性を示している一連の研究を報告
した。最適な抗ウイルス活性が、１０〜１２炭素長飽和アルコールで観察され、１４〜１８炭素長のアルコールではより少ない抗ウイルス活性が観察され、それより長い鎖長のアルコールは試験しなかった。
【０００６】
有意な抗ウイルス活性がＣ−１０およびＣ−１２アルコールで観察された一方で、これらの化合物はまた、細胞毒性および溶血性効果を示した。同様の観察が、不飽和アルコールおよびモノグルセリド類で見られ、３つの二重結合を含むＣ−１８アルコールで弱い活性が見られた。続いて、Ｃｌａｒｋとその共同研究者ら（Ｃｌａｒｋ  ＬＬ，米国特許第４，６７０，４７１号（１９８７）、ＭｃＢｒｉｄｅ  ＰＴ，Ｃｌａｒｋ  ＬＬ，Ｋｒｕｅｇｅｒ  ＧＧ  Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．８９：３８０−３８３（１９８７））は、３０炭素長飽和アルコール、トリアコンタノールが、抗ヘルペス剤としての活性を有すると結論づけた。しかしながら、組織培養研究により、トリアコンタノールが、直接の抗ウイルス活性を欠くことが示されたので、動物実験で観察された見かけの抗ヘルペス活性は、この化合物の免疫調節効果を反映したものである可能性が考えられる。
【０００７】
１９７４年には、ｎ−ドコサノールが、全身の治療的価値を有すると報告された。たとえば、Ｄｅｂａｔ、米国特許第４，１８６，２１１号は、経口で服用したときに、１−ドコサノールが、前立腺の肥大の処置において治療的に効果的であることを報告した。同様の研究が、１０年後に、Ｙａｍａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．、たとえば米国特許第４，６２４，９６６号にて報告され、だがしかしそこでは、間違った化学名で、ｎ−ドコサノールをポリフェニル化合物として列記されており、治療におけるｎ−ドコサノールの経口または非経口投与を記述している。
【０００８】
１８炭素より長い化合物が、局所抗ウイルスまたは炎症活性を有するかどうかを確かめるために試験されてきた（Ｋａｔｚ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ明細書第ＷＯ９７／１６４３４号）。ｎ−ドコサノールの抗ウイルス特性を試験した、我々の研究室での試験は良好であった（Ｋａｔｚ，ＤＨ，米国特許第４，８７４，７９４号）。
【０００９】
ｎ−ドコサノールは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにて、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２、サイトメガロウイルス、水痘・帯状ヘルペスウイルスおよびヒトヘルペスウイルス６を含む、広いスペクトルの脂質エンベロープウイルスを阻害する（Ｋａｔｚ  ＤＨ，Ｍａｒｃｅｌｌｅｔｔｉ  ＪＦ，Ｋｈａｌｉｌ  ＭＨ，Ｐｏｐｅ  ＬＥ，Ｋａｔｚ  ＬＲ．Ｐｔｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１０８２５−９，１９９１；Ｋａｔｚ  ＤＨ，Ｍａｒｃｅｌｌｅｔｔｉ  ＪＦ，Ｐｏｐｅ  ＬＥ，Ｋｈａｌｉｌ  ＭＨ，ＭｃＦａｄｄｅｎ  ＲＲ，Ｋａｔｚ  ＬＲ，Ｋａｔｚ  ＤＨ  Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ
１７：８７９−８２，１９９２；Ｐｏｐｅ  ＬＥ，Ｍａｒｃｅｌｌｅｔｔｉ  ＪＦ，Ｋａｔｚ  ＬＲ，Ｋａｔｚ  ＤＨ  Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．３７：２１６７−７８，１９９６、およびＰｏｐｅ  ＬＥ，Ｍａｒｃｅｌｌｅｔｔｉ  ＪＦ，Ｋａｔｚ  ＬＲ，Ｌｉｎ
ＪＹ，  Ｋａｔｚ  ＤＨ，Ｐａｒｉｓｈ  ＭＬ，Ｓｐｅａｒ  ＰＧ  Ａｎｔｉｖｉｒ．Ｒｅｓ．４０：８５−９４，１９８８）。その活性の機構は新規であり、細胞取り込みおよび代謝変換の後、ｎ−ドコサノールは、１または２段階のウイルス進入、核局在化の遮断および続くウイルスの複製を阻害する。より最近の実験により、ｎ−ドコサノールが、主に宿主細胞とのウイルス融合の工程にて干渉することによって、抗−ＨＳＶ活性を示す可能性があることが示唆されている（Ｐｏｐｅ  ＬＥ，Ｍａｒｃｅｌｌｅｔｔｉ  ＪＦ，Ｋａｔｚ  ＬＲ，Ｌｉｎ  ＪＹ，Ｋａｔｚ  ＤＨ，Ｐａｒｉｓｈ  ＭＬ，Ｓｐｅａｒ  ＰＧ  Ａｎｔｉｖｉｒ．Ｒｅｓ．４０：８５−９４，１９８８）。２０００年７月に、ｎ−ドコサノール  １０重量％クリームが、米国食品医薬品局によって、再発型口顔面単純ヘルペス感染のためのＯＴＣ局所処置として許可された（登録商標ＡｂｒｅｖａTM）。
【００１０】
安定した、効果的なｎ−ドコサノール含有局所処方は課題を示している。特定の従来の
処方のクリームおよび軟膏が予備評価に適合しうる一方で、特定の賦形剤が、ｎ−ドコサノールの活性に対して不利であり得る。たとえば、浸透増強剤がしばしばそのような処方において、賦形剤として使用されるが、局所処方における賦形剤の安定化活性における効果は、実際には予測し得ない。たとえば、Ｒａｊａｄｈｙａｋｓｈａによって報告されたアゾンは、優れた浸透増強剤であるが、クリーム処方における安定化成分としては知られていない。
【００１１】
ココナッツ脂肪酸のスクロースエステルが、浸透増強剤として処方されている、Ｃｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第４，８６５，８４８号および他の特許。しかしながら、Ｃｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．は、これらの物質からのクリームの安定性を示唆しておらず、また、Ｃｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．特許からそのような安定性を推察する理由は存在していない。そのような化合物における文献では、これらの物質は、Ｃ−２０〜Ｃ−２８脂肪族アルコール含有クリームの安定化において、とりわけ効果的であるとは示唆されていない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
安定した効果的なｎ−ドコサノール含有局所処方は課題を示している。特定の従来の処方のクリームおよび軟膏は、予備評価では適用しうる一方で、特定の賦形剤が、ｎ−ドコサノールの活性に不利であり得る。したがって、長期間安定であり、生理学的に許容可能であり、皮膚および膜への局所適用に好適である、ｎ−ドコサノールの再生可能で効果的な処方に対する必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
第１の実施形態において、治療用クリームが、約１０重量％のｎ−ドコサノール、約５重量％の、モノステアリン酸スクロース、ジステアリン酸スクロースおよびこれらの混合物からなる群より選択されるステアリン酸エステル、約８重量％の軽ミネラルオイル、約５重量％のプロピレングリコール、約２．７重量％のベンジルアルコール、および約６９．３重量％の水を含む、ウイルスおよび炎症疾患の処置における、皮膚および粘膜への適用のために提供される。
【００１４】
第２の実施形態において、皮膚および粘膜のウイルス感染および炎症を処置する方法が、約１０重量％のｎ−ドコサノール、約５重量％の、モノステアリン酸スクロース、ジステアリン酸スクロースおよびこれらの混合物からなる群より選択されるステアリン酸エステル、約８重量％の軽ミネラルオイル、約５重量％のプロピレングリコール、約２．７重量％のベンジルアルコール、および約６９．３重量％の水を含む、安定な治療用局所クリームを、皮膚および粘膜への適用することを含んで提供される。
【００１５】
第３の実施形態において、皮膚および粘膜の表面炎症の痛みを減少させる方法が、約１０重量％のｎ−ドコサノール、約５重量％の、モノステアリン酸スクロース、ジステアリン酸スクロースおよびこれらの混合物からなる群より選択されるステアリン酸エステル、約８重量％の軽ミネラルオイル、約５重量％のプロピレングリコール、約２．７重量％のベンジルアルコール、および約６９．３重量％の水を含む組成物を、炎症表面に適用することを含んで提供される。
【００１６】
第４の実施形態において、皮膚および粘膜のウイルス感染および炎症の処置のための医薬品の調製において、約１０重量％のｎ−ドコサノール、約５重量％の、モノステアリン酸スクロース、ジステアリン酸スクロースおよびこれらの混合物からなる群より選択されるステアリン酸エステル、約８重量％の軽ミネラルオイル、約５重量％のプロピレングリコール、約２．７重量％のベンジルアルコール、および約６９．３重量％の水を含む、組
成物の使用が提供される。
【００１７】
第５の実施形態において、皮膚または粘膜の表面炎症の痛みを減少させるための医薬品の調製において、約１０重量％のｎ−ドコサノール、約５重量％の、モノステアリン酸スクロース、ジステアリン酸スクロースおよびこれらの混合物からなる群より選択されるステアリン酸エステル、約８重量％の軽ミネラルオイル、約５重量％のプロピレングリコール、約２．７重量％のベンジルアルコール、および約６９．３重量％の水を含む、組成物の使用が提供される。
【００１８】
第６の実施形態において、治療用クリームが、糖に基づくエステル界面活性剤、約５重量％を超えるｎ−ドコサノール、ミネラルオイル、皮膚軟化共溶媒および水を含む、ウイルスおよび炎症疾患の処置における、皮膚および膜への適用のために提供される。
【００１９】
第６の実施形態の第１の態様において、クリームは、少なくとも３ヶ月、繰り返し凍結融解サイクルの後、少なくとも４０℃の温度で安定である。
【００２０】
第６の実施形態の第２の態様において、糖に基づくエステル界面活性剤は、ヤシ脂肪酸スクロース、ステアリン酸スクロースおよびジステアリン酸スクロースからなる群より選択される。
【００２１】
第６の実施形態の第３の態様において、糖に基づくエステル界面活性剤は、ヤシ脂肪酸スクロース、ステアリン酸スクロースおよびジステアリン酸スクロースからなるスクロースエステルの群より選択される、少なくとも１つの化合物を含み、ここで、スクロースエステル（類）は、３重量％以上でクリームに含まれる。他の態様において、スクロースエステル（類）は、約５重量％以上でクリームに含まれる。
【００２２】
第６の実施形態の第４の態様において、皮膚軟化共溶媒は、ポリオキシプロピレンステアリルエーテル、エチルヘキサンジオールおよびベンジルアルコールまたはこれらの組み合わせからなる群より選択される。
【００２３】
第６の実施形態の第５の態様において、ｎ−ドコサノールは、少なくともおよそ１０重量％でクリームに含まれる。
【００２４】
第７の実施形態において、安定で、効果的な治療用クリームは、主要な治療用組成物が、実質的に、ｎ−ドコサノールからなり、クリーム基体が、ヤシ脂肪酸スクロース、ステアリン酸スクロースおよびジステアリン酸スクロースからなる群より選択される１つ以上の化合物、およびポリオキシプロピレンステアリルエーテル、エチルヘキサンジオールおよびベンジルアルコールからなる群より選択される１つ以上の化合物を含むように提供される。
【００２５】
第７の実施形態の第１の態様において、スクロースエステル（類）は、少なくともおよそ５重量％でクリームに含まれる。
【００２６】
第７の実施形態の第２の態様において、ｎ−ドコサノールは、少なくともおよそ１０重量％でクリームに含まれる。
【００２７】
第７の実施形態の第３の態様において、治療用クリームは、少なくとも１つのスクロースエステルが存在し、総組成物の約３重量％を含む条件で、総クリームの５〜１５重量％までで作製されるｎ−ドコサノール、総クリームの０〜１５重量％からのステアリン酸スクロース、総クリームの０〜１０重量％からのヤシ脂肪酸スクロース、総クリームの０〜
１０重量％からのジステアリン酸スクロース、総クリームの３〜１５重量％を含むミネラルオイル、総クリームの０．５〜１０重量％からなるベンジルアルコール、および総クリームの４０〜７０重量％からなる水の処方を有する。
【００２８】
第８の実施形態において、皮膚および粘膜のウイルス感染および炎症を処置する方法が、実質的にｎ−ドコサノールを含み、前記クリーム基体が、実質的に、糖に基づくエステル界面活性剤、ｎ−エイコサノール、ｎ−ヘンエイコサノール、ｎ−トリコサノール、ｎ−テトラコサノール、ｎ−ペンタコサノール、ｎ−ヘキサコサノール、ｎ−ヘプタコサノール、およびｎ−オクタコサノールまたはその混合物からなる群より選択される、２０〜２８炭素原子を有する、少なくとも１つの長鎖脂肪族アルコール、ミネラルオイル、皮膚軟化共溶媒および水を含む、安定した治療用局所クリームを適用することを含んで提供される。
【００２９】
第８の実施形態の第１の態様において、ｎ−ドコサノールは、半分以上の長鎖脂肪族アルコールを含む。
【００３０】
第９の実施形態において、皮膚および粘膜のウイルス感染および炎症を処置する方法は、少なくとも１つのスクロースエステルが存在するという条件で、約５〜２０重量％のｎ−ドコサノール、約０〜１５重量％のステアリン酸スクロース、約０〜１０重量％のヤシ脂肪酸スクロース、約０〜１０重量％のジステアリン酸スクロース、の処方を有する局所クリームを適用することを含んで提供され、ここで、スクロース（類）は、約３重量％以上のクリームを含み、ポリオキシプロピレンステアリルエーテルまたはベンジルアルコールいずれかが、少なくとも約１重量％の量で存在するという条件で、約３〜１５重量％のプロピレングリコール、約２〜１０重量％のプロピレングリコール、約０．５〜５重量％のベンジルアルコール、および約４０〜７０重量％の水が含まれる。
【００３１】
第９の実施形態の第１の態様において、スクロースエステル（類）は、約５重量％以上でクリームに含まれる。
【００３２】
第１０の実施形態において、抗炎症および抗ウイルスクリームが、少なくとも１つのスクロースエステルが存在するという条件で、約５〜２０重量％のｎ−ドコサノール、約０〜１５重量％のステアリン酸スクロース、約０〜１０重量％のヤシ脂肪酸スクロース、約０〜１０重量％のジステアリン酸スクロース、の処方を有して提供され、ここで、スクロース（類）が、約３重量％以上のクリーム、ポリオキシプロピレンステアリルエーテルまたはベンジルアルコールいずれかが、少なくとも約１重量％の量で存在するという条件で、約３〜１５重量％のプロピレングリコール、約２〜１０重量％のプロピレングリコール、約０．５〜５重量％のベンジルアルコールおよび約４０〜７０重量％の水が含まれる。
【００３３】
第１０の実施形態の第１の態様において、スクロースエステル（類）は、約５重量％以上のクリームを含む。
【００３４】
第１１の実施形態において、皮膚または膜の表面炎症の痛みを減少させる方法が、薬理学的に許容可能な担体中のｎ−ドコサノールの組成物を、炎症表面に適用することを含んで提供され、前記ｎ−ドコサノールは、前記組成物の約５〜約２５重量％で含まれる。
【００３５】
第１１の実施形態の第１の態様において、前記生理学的に適合可能な担体は、ヤシ脂肪酸スクロース、ステアリン酸スクロースおよびジステアリン酸スクロースからなる群より選択する１つ以上の化合物、およびポリオキシプロピレンステアリルエーテル、エチルヘキサンジオール、およびベンジルアルコールからなる群より選択される１つ以上の化合物を含むクリーム基体である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３６】
以下の説明および実施例により、本発明の好ましい実施形態の詳細を説明する。当業者は、本発明の範囲内で多数の変化および改変があることを認識されたい。したがって、好ましい実施形態の説明は本発明の範囲を限定するとみなされるべきではない。
１０％ドコサノールクリーム
クリームを調製するために、水に不溶性の化合物であるｎ−ドコサノール（純度９８％；Ｍ．Ｍｉｃｈｅｌ  ａｎｄ  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．）をヤシ脂肪酸スクロース、ステアリン酸スクロース、ジステアリン酸スクロース、ミネラルオイル、プロピレングリコールおよびポリオキシプロピレン−１５−ステアリルエーテルと、８０℃にて混合した。水を加え、混合してクリームとした。
【００３７】
クリームはまた、ｎ−ドコサノールを除くすべての物質を水に加えてクリームの主成分を形成させ、それにｎ−ドコサノールを混合することによって作ってもよい。
【００３８】
以下の割合が一般的に適していることが分かった。ｎ−ドコサノール、５〜２５重量％（または少なくとも１つの他の２０〜２８炭素原子を有する長鎖の脂肪族アルコール、すなわちｎ−エイコサノール、ｎ−ヘネイコサノール、ｎ−トリコサノール、ｎ−テトラコサノール、ｎ−ペンタコサノール、ｎ−ヘキサコサノール、ｎ−ヘプタコサノール、およびｎ−オクタコサノールとの混合物中のｎ−ドコサノール）；ステアリン酸スクロース、０〜１５重量％；ヤシ脂肪酸スクロース、０〜１０重量％；ジステアリン酸スクロース、０〜１０重量％（少なくとも１つのスクロースエステルが存在し、そのスクロースエステルが全組成の内約３重量％以上、好ましくは１０重量％を占めるという条件下で）；ミネラルオイルＮＦ、３〜１５重量％；プロピレングリコールＵＳＰ、２〜１０重量％；ポリオキシプロピレン−１５−ステアリルエーテル、０〜５重量％；ベンジルアルコールＮＦ、０〜５重量％（ポリオキシプロピレンステアリルエーテルかベンジルアルコールのどちらかが２重量％の量で存在するという条件下で）；精製水、４０〜７０重量％。しかしながら、ある実施形態においては別の割合が好ましいこともある。
【００３９】
以下の割合が、一般的に最適であると分かった。２０〜２８炭素原子を有する、少なくとも１つの他の長鎖脂肪族アルコール、ｎ−ドコサノール、５〜１０重量％（または少なくとも１つの他の２０〜２８炭素原子を有する長鎖の脂肪族アルコール、すなわちｎ−エイコサノール、ｎ−ヘネイコサノール、ｎ−トリコサノール、ｎ−テトラコサノール、ｎ−ペンタコサノール、ｎ−ヘキサコサノール、ｎ−ヘプタコサノール、およびｎ−オクタコサノールとの混合物中のｎ−ドコサノール）；ステアリン酸スクロース、６重量％；ヤシ脂肪酸スクロース、５重量％；ジステアリン酸スクロース、５重量％（少なくとも１つのスクロースエステルが存在し、そのスクロースエステルが全組成のうち約３重量％以上、好ましくは１０重量％をしめるという条件下で）；ミネラルオイルＮＦ、８重量％；プロピレングリコールＵＳＰ、５重量％；ポリオキシプロピレン−１５−ステアリルエーテル、２〜３重量％；ベンジルアルコールＮＦ、２〜３重量％（ポリオキシプロピレンステアリルエーテルかベンジルアルコールのどちらかが２重量％の量で存在するという条件下で）；精製水、５５〜６０重量％。しかしながら、ある実施形態においては別の割合が好ましいこともある。
【００４０】
ポリオキシプロピレンステアリルエーテルまたはベンジルアルコールおよびスクロースエーテルの代わりに２−エチル−１，３ヘキサンジオールを含む処方もまた、有効であることが分かった。しかしながら、ある実施形態、例えば繰り返し局所的に使用することを目的とした組成においては２−エチル−１，３−ヘキサンジオール以外の組成物が好ましいこともある。
【００４１】
好ましい実施形態のｎ−ドコサノール組成（処方Ｉ）を下記の表１に記載している。
【００４２】
【表１】
2005519868.tif 000002
【００４３】
このｎ−ドコサノールクリームは、ｎ−ドコサノールが動物のヘルペスモデルに対して一貫して活性をもつことが分かった、広範囲の動物を用いた治療試験を行なえる短い期間より長く十分な安定性をもち（図１〜３）、安全で、耐性であることが示されたヒト臨床研究の最初の第Ｉ相に用いた。アメリカ合衆国以外の特定の国では、２−エチル−１，３−ヘキサンジオールを繰り返し使用することが容認されない可能性がある。そのため、他の実施形態においては、２−エチル−１，３−ヘキサンジオールを等量（２．７重量％）でポリオキシプロピレン−１５−ステアリルエーテルに換え、５重量％のステアリン酸スクロースを５重量％のジステアリン酸スクロースに交換することが好ましい。結果生じたｎ−ドコサノール組成物（処方ＩＩ）を下記の表２に記載している。
【００４４】
【表２】
2005519868.tif 000003
【００４５】
この改変した処方ＩＩにより、最終的な薬剤産物の物理的な安定性が得られ、モルモットを用いたヘルペス動物モデルにおいて良好な働きをすることができる（図１および２を参照のこと）。しかしこの処方はＵＳＰの防腐剤効果試験で不合格であった。したがってこの処方はＵＳＰの防腐剤効果試験に合格することを必要としない使用、すなわち、ヒト
以外への使用にのみ、適している。下記のように、両親媒性賦形剤としてポリオキシプロピレン−１５−ステアリルエーテルをベンジルアルコールに交換することにより微生物学的安定性を改善することができる。
【００４６】
安定な組成物が得られる特定の特に好ましい実施形態では、ここで界面活性剤は約５重量％で存在する、記載した分類の界面活性剤の１つまたは２つのみを用いる。安定したクリームを産生するために、界面活性剤をわずかな種類で、および少量で用いる能力は、われわれの研究室での研究において予想外の望ましい結果であった。界面活性剤が過剰であると界面活性剤の濃度が５重量％以上で、炎症の可能性が増すことから、過剰の界面活性剤は望ましくない。さらに、過剰量の非イオン界面活性剤を含む処方ではしばしば防腐効果についての問題が起こる。
【００４７】
親水性−脂肪親和性平衡（ＨＬＢ）値が９．０〜１３．０の範囲の、いくつかの界面活性剤混合物を利用する際、種々のｎ−ドコサノールクリームを処方し、ついで最適のエマルジョン特性、物理的性質、薬効および加速に対する物理的安定性について選別した。ほとんどの薬剤エマルジョンは、最適なＨＬＢにするために２成分の界面活性剤混合物を基にしているが、試験結果から、改善したｎ−ドコサノール処方においてはステアリン酸スクロース単独のものが他の界面活性剤混合物と同等の、以上の働きをすることが明らかになった。そのような界面活性剤混合物を含むｎ−ドコサノール処方（処方ＩＩＩ）は以下である。
【００４８】
【表３】
2005519868.tif 000004
【００４９】
処方Ｉと比較した時の処方ＩＩＩの相違点としては、２−エチル−１，３−ヘキサンジオールを、安全な使用と公定地位の長い歴史を持つ公知の防腐剤および両親媒溶媒であるベンジルアルコールに交換したことがあげられる。ベンジルアルコールの液体特性および類似作用により、エチルヘキサンジオールからの交換が合理的で危険性が低いものとなっている。産物の薬剤特性を変えずに、および顕微鏡検査に基づくエマルジョンの品質に負の影響を与えずに、および加速試験において物理的性質を失うことなく、総界面活性剤濃度を５重量％活性まで減少させた。処方の性質に実質的な影響を与えずにヤシ脂肪酸スクロースを処方から除去した。
【００５０】
クリームは加熱および成分の付加により、またはさらに好ましい、油溶解性成分の混合および水溶性組成物と別々に加熱する手法により作製することができる。次に、熱油溶解性組成物を激しく混合しながら熱い水層に加える。表４は評価した処方の要約である。
【００５１】
【表４】
2005519868.tif 000005
【００５２】
ｎ−ドコサノール処方ＩＩＩは加速物理的安定性のスクリーニング（４２℃で保存、凍結融解周期）に合格し、またＵＳＰ防腐剤効果試験にも合格した。度重なる根拠によりモルモットヘルペスモデルにおける薬効が実証された。
【００５３】
安定性を観察するために、ｎ−ドコサノールクリーム処方を、室温（３０℃）、高い温度（４２℃）、およびポリプロピレン瓶中での凍結融解、というさまざまな条件下で保存した。凍結融解の試料を４８時間の凍結融解周期、すなわち凍結温度（−１５℃）で２４時間および室温にて２４時間に適用した。クリーム試料をそれぞれの条件下で保存し、さまざまな設定時間において、物理的な安定性を視覚的に検査した。３０℃にて１２ヶ月後、または４２℃にて３ヶ月後、または２４回の凍結融解周期後、全ての試料が灰色がかった白色のクリームとして残った。シネレシスまたは層分離の履歴は見られなかった。上記の視覚的検査に基づいて、１０重量％のｎ−ドコサノールの処方ＩＩＩは任意の規定された条件下では物理的に安定であるとみなした。
【００５４】
処方ＩＩＩの正確な保存寿命は測定しなかったが、経験値から、保存寿命は市販のｎ−ドコサノール含有クリームよりも適当であることが示唆される。したがって、特定のｎ−ドコサノール処方は不安定である一方で、特定の処方、安定でかつ有効であることが分かった処方ＩＩＩは好ましい。
【００５５】
疎水性および親水性化合物のクリーム処方の技術分野の当業者は、ある実施形態においてある置き換えも好ましいことを理解される。例えば、グリセロールまたはその他のグリ
コールをプロピレングリコールの代わりに用いることは、割合をいくつか調整すれば好ましい。ポリプロピレン−１５−ステアリルエーテルをその他のポリオキシレンが基礎になっているエーテルに置き換えることも可能であることが分かった。糖が基礎になっているエーテルについても、含まれる全体量がｎ−ドコサノールを安定化させるのに十分であれば、相対的な割合は大幅に変更してよい。この量は好ましくは約５〜２５重量％であるが、最少量および最大量は正確には測定していない。
【００５６】
特に好ましい実施形態においては、ｎ−ドコサノールクリームの処方は１０重量％ｎ−ドコサノール、５重量％のステアリン酸スクロース、８重量％のミネラルオイルＮＦ、５重量％のプロピレングリコールＵＳＰ、２．７重量％のベンジルアルコールＮＦおよび６９．３重量％の精製水からなる処方ＩＩＩである。
【００５７】
有効量のｎ−ドコサノールを単体でまたはその他の前記のアルコールとの混合物として含む、長期間安定なクリーム調製物を調製し、それらの化合物の薬理学を解明した。好ましい実施形態においては、通常の取扱い条件下で１年以上の保存寿命を持つ、すなわち１年以上室温で安定であり、凍結融解周期の繰り返しに耐えることができ、ヒトの治療を含む、動物の皮膚または膜組織のウイルス誘導性および炎症性の疾患の治療への利用に適しているような、長期間安定な局所的クリーム処方が得られる。クリームの成分としては、生理的な有効成分としてのｎ−ドコサノール単体、またはその他の典型的な長鎖（Ｃ−２０〜Ｃ−２８）脂肪族アルコールとの混合体、水、油、糖のエステル、および脂肪酸、生理的に不活性である、または体内で代謝することができるエステル、皮膚または膜組織の作用部位へのｎ−ドコサノールの浸透を補助し、および生理的に有効なアルコールに対する安定な担体形成を補助する皮膚軟化剤があげられる。
【００５８】
糖を基本とするエステルは、分子量が約１５０を超える、好ましくは２５０を超える糖部位および分子量が約１５０以上、好ましくは２５０を超える脂肪酸からなる。エステルは約４００以上の分子量を有する。ここで用いる糖とは、高級アルコールのケトンまたはアルデヒド誘導体である、甘いまたはほのかに甘い炭水化物を指し、糖類および二糖類の両方を含むが、二糖類を基本とするエステルが好ましい。高分子量の多価アルコールを従来の糖と置き換えてよい。そのようなエステル化した糖を基本とした界面活性剤の例証は一般的な化学文献および様々なカタログ、例えば、ＭｃＣｕｔｃｈｅｏｎ’ｓ  ｄｉｒｅｃｔｏｒｉｅｓ、Ｖｏｌｕｍｅ１−ＥＭＵＬＳＩＦＥＲＳ＆ＤＥＴＥＲＧＥＮＴＳ、およびＶｏｌｕｍｅ２−ＦＵＮＣＴＩＯＮＡＬ  ＭＡＴＥＲＩＡＬＳ、（ＭｃＣｕｔｃｈｅｏｎ’ｓ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ、Ｔｈｅ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  Ｃｏｎｆｅｃｔｉｏｎｅｒ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｇｌｅｎ  Ｒｏｃｋ、ＮＪ、ＵＳＡ、１９９３）で見ることが出来る。スクロース脂肪酸エステルが好ましい。ステアリン酸スクロースおよびジステアリン酸スクロースは、クリームの油と水層を乳化させるようなｎ−ドコサノールクリーム処方に利用するのに好ましい非イオン性の界面活性剤である。これらの界面活性剤は非炎症性であり、そのため例えばヘルペスウイルスによって引き起こされる水疱の治療に特に好ましい。ステアリン酸スクロースは、従来の界面活性剤（例えばＢｒｉｊ、Ｍｙｒｊ、およびＳｐａｎという登録商標の界面活性剤、ＩＣＩ  Ａｍｅｒｉｃａｓ
ｏｆ  Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＤＥから売り出されている界面活性剤）と比べて、ｎ−ドコサノールに対する界面活性剤としてより優れた性質を示す。
【００５９】
ポリプロピレングリコールは、局所用処方に安全に使用されている長い歴史を持つので、ｎ−ドコサノールクリーム処方への利用に好ましい。クリーム処方へのプロピレングリコールの利用法のひとつは、皮膚になめらかで柔軟な感覚を与える湿潤剤としての利用である。ミネラルオイルもまた、ｎ−ドコサノールクリーム処方へ利用するのに好ましい。ｎ−ドコサノールとともに、好ましいクリーム処方の液体層を形成する。ミネラルオイルは局所用産物に安全に使用されている長い歴史をもち、例えば経皮的な水分喪失を防ぎ、
局所用産物のテクスチャーを向上させる働きをすることにより、皮膚軟化剤として働くような作用をもってよい。
【００６０】
ある薬理学的研究は、これらの研究で用いる細胞に対してより適合性があるが、効果的な局所治療に必要な濃度および安定性を欠くことがあるために、ある実施形態においては局所用の薬剤調製物として適さない、懸濁液を用いて実施された。
【００６１】
ある実施形態の一般的に好ましいクリーム処方は、最終的なクリーム処方の全体重量に基づいた重量に関して、ｎ−ドコサノールは典型的には約５〜約１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５重量％であり、さらに好ましくは約６、７、８、または９重量％〜約１１、１２、１３、１４、または１５重量％であり、最も好ましくは、１０．０％であり、ステアリン酸スクロースは、典型的には約０〜約１１、１２、１３、１４、または１５重量％であり、好ましくは約１、２、または３重量％〜約４、５、６、７、８、９、または１０重量％であり、および／またはヤシ脂肪酸スクロースは、典型的には約０〜約１１、１２、１３、１４、または１５重量％であり、好ましくは約１、２、または３重量％〜約４、５、６、７、８、９、または１０重量％であり、および／またはジステアリン酸スクロースは、典型的に約０〜約１１、１２、１３、１４、または１５重量％であり、好ましくは約１、２、または３重量％〜４、５、６、７、８、９、または１０重量％である。少なくとも一つのスクロースエステルまたは同等の糖を基礎としたエステルが概して、全体の化合物の少なくとも約３％、好ましくは約４重量％〜約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５重量％、最も好ましくは約５．０重量％を構成し、油、例えばミネラルオイルＮＦは典型的には、約３重量％〜約１５重量％、好ましくは約４、５、６、または７重量％〜約９、１０、１１、または１２重量％、最も好ましくは約８．０重量％である。グリコール、例えばプロピレングリコールＵＳＰ、または同等物は概して、約２重量％〜約８、９、または１０重量％、好ましくは約３または４重量％〜約６または７重量％、最も好ましくは約５．０重量％であり、皮膚を軟化するグリコールエステル、例えばポリプロピレン−１５−ステアリルエーテル、またはベンジルアルコールは典型的には、約０〜約３．５、４、４．５、または５重量％、好ましくは約０．５、０．７５、１、１．２４、１．５、１．７５、２、２．２５、２．５、または２．６重量％〜約２．７５、２．８、２．９、または３重量％、最も好ましくは約２．７重量％であり、水は概して、約４０、４１、４２、４３、または４４重量％〜約７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、または８０重量％、好ましくは約４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、または５５重量％〜５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、または６９重量％、最も好ましくは約６９．３重量％である。この一般的な処方の範囲内で、安定であり、上記の、本明細書に記載されている明細および指標で説いたデータに基づいて示される治療効果をあらわすような特定の処方を多く調製してよい。したがって、有効な局所治療用化合物が、ｎ−ドコサノールを単体で、または通常の長鎖（Ｃ−２０〜Ｃ２８）脂肪族アルコールとの混合物として必ず含む効果的な局所治療用組成物を調製しうる。
【００６２】
本処方は、医薬の製造において、また、ヒトおよび動物患者の治療においても利用してよい。
実験
ＨＳＶ誘導障害におけるｎ−ドコサノールクリームの効果を、実験動物モデルにおいて確認するため、およびその活性をＺＯＶＩＲＡＸのものと比較するために、無毛モルモットに、１×１０6ＰＦＵのＨＳＶ−１を接種し、ついで、ｎ−ドコサノール含有または対照クリーム、またはＺＯＶＩＲＡＸ軟膏いずれかで処置した。ｎ−ドコサノールクリームは、記述したように構築した。対照クリームは、ステアリン酸をｎ−ドコサノールと置換したこと以外は、同様の様式で構築した。処置は、ウイルス接種２または４８時間後のい
ずれかで開始した。部位を、指定した時間点で、膿のたまった水膨れとして定義される、小胞形成に関して評価した。
【００６３】
図１は、処方Ｉと、処方ＩＩの異なる３つの調製物、ならびにＺＯＶＩＲＡＸの比較活性を示している。ｎ−ドコサノールクリームの処方Ｉおよび処方ＩＩは両方とも、ＺＯＶＩＲＡＸ軟膏よりもより大きな阻害力を示した。
【００６４】
図２は、処方Ｉ、処方ＩＡおよび処方ＩＩの比較活性を示している。ＨＳＶ−１誘導障害の優位な阻害が、３つのすべての処方に関して示された。
【００６５】
図３は、処方ＩＩＩ対処方Ｉの活性の比較を示しており、また、相対的界面活性剤濃度が、処方Ｉのものより改変されたこれらの処方の特定の改変を図示している。
【００６６】
界面活性剤濃度の改変は、薬物活性の程度に、好ましい有害効果を有することが発見された。処方ＩＩＩは、ＨＳＶ誘導障害に対して、強力な阻害力を有することが示された。
【００６７】
再発型口または生殖器ＨＳＶＩまたはＩＩ感染のボランティア患者も急性ヘルペス発生の種々の段階で、局所ｎ−ドコサノール含有クリームで処置した。処置を、前駆症状段階の間に開始する場合、ｎ−ドコサノールクリームは、感染のさらなる進行を阻止しうる（すなわち、小胞形成を防止する）。処置を、小胞形成がすでに起こった後に開始する場合、ｎ−ドコサノールクリームは、そのようなヘルペス障害の治癒（すなわち再上皮化の完了）のための時間を短縮しうる。
【００６８】
処方内での１０重量％ｎ−ドコサノールの選択を、無毛モルモットでの用量応答試験にて調べた。無毛モルモットの背中の部分に、すでに記述したように、ＨＳＶ−２を摂取させた。この部位を、１、５、１０および２０重量％ｎ−ドコサノール処方で処置した。ｎ−ドコサノールを含まない、賦形剤対照もまた本研究に含めた。図４で図示した結果は、ウイルス接種の７２時間後、未処理部位が平均４１小胞を提示したことを示している。２０重量％および１０重量％ｎ−ドコサノール含有クリームは、それぞれ５０％および６０％まで、小胞数を阻害した。１重量％および５重量％ｎ−ドコサノール含有クリームは、１０重量％調製物よりも効果が小さかった。対照賦形剤は、適切な阻害効果を示さなかった。
【００６９】
クリーム内でのｎ−ドコサノールの濃度が、ｎ−ドコサノールクリームの物理的外見、安定性、および効果において役割を果たす可能性があることが観察された。５、１０および２０重量％ｎ−ドコサノールを含むクリームの比較を実施した。一般的に、産物の粘土が、処方中のｎ−ドコサノールの濃度と直接関連して変化することが観察された（図４）。５重量％処方が、ローション様の形態で、もっとも低い粘度を持ち、相に分離する傾向にあった。２０重量％処方は、もっとも高い粘度を持ち、すり込むことが難しく、ヒト皮膚上に白色残余物を残す傾向にあった。クリームからのｎ−ドコサノールの完全な除去により、結果として、室温での一晩の保存の後、相分離を起こす水性ローション型処方となる。１０重量％処方は、物理的に安定であり、化粧学的にもっとも満足がいくもので、簡単にすり込め、ヒト皮膚上に残余物を残さない。結果により、活性成分としてのその機能に加えて、ｎ−ドコサノールはまた、試験したクリーム内で、濃厚化剤およびエマルション安定剤としても機能することが明らかになった。無毛モルモットでのｉｎ  ｖｉｖｏ試験により、１０重量％処方が、５重量％または２０重量％処方よりもよい効果を有することが示された。１０重量％処方がほとんどの適用で好ましいけれども、一方で、特定の実施形態において、１０重量％より少ない、たとえば５重量％またはそれ以下のｎ−ドコサノールを含む処方が好ましい可能性があり、他の実施形態では、１０重量％以上、たとえば２０重量％以上のｎ−ドコサノールを含む処方が好ましい可能性がある。
【００７０】
ベンジルアルコールが、特定の環境下で、ある程度の抗ウイルス活性を有することが報告されてきたので（Ｆａｒａｈ，Ａ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，米国特許第４，２００，６５５号）、前記処方内の抗ウイルス薬剤として、ベンジルアルコールが作用するかどうかを決定するために、好ましい実施形態の処方を試験した。ベンジルアルコールおよびｎ−ドコサノールを含むクリーム（１０重量％ｎ−ドコサノールクリーム）、およびベンジルアルコールのみを含むクリーム（プラセボ）を、無毛モルモットにおけるＨＳＶ−２誘導皮膚障害において試験した。モルモットの背中の部位にＨＳＶ−２を植え付けた。この部位を、図５で示したように処置し、ウイルス接種４８、５６、７２および７８時間後に、賦形剤形成に関して評価した。４８時間の時点で、未処理部位で、平均４４小胞が存在し、接種後、７２時間まで、比較的一定に保たれた。７８時間の時点で、小胞の分解が明瞭になってきており、接種後９６時間までに、小胞はもはや見られなくなった。ｎ−ドコサノールクリームでの処置により、４８〜５６時間の時点で、５０〜６０％まで、小胞数が阻害され、解析の７２〜７８時間の時点で、優位により大きな割合まで阻害された。対照賦形剤での処置は、どの時点でも小胞数に好ましい効果はなかった。未処理および処理部位を、切断し、ウイルス培養に進めた。小胞の存在は、処置またはアッセイの時間にかかわらず、感染ウイルスの存在と直接相関した（図示せず）。したがって、小胞数は、本明細書で記述した試験において、疾患状態の適切な指示物である。さらに、クリームおよびプラセボを、口唇ヘルペスの患者、６８人を含む、パイロット第ＩＩ相試験で試験した。二重盲検試験の結果は、ｎ−ドコサノールクリームの早期での適用が、半分近くまで、事象の期間を減少させた。処理群の平均出現期間は、３．４日であり、一方で、プラセボ群は、平均６．６日の出現であった。
【００７１】
上記の結果により、処方内でのｎ−ドコサノールの存在は、有意な抗ウイルス活性をもたらすことが示されている。
【００７２】
ｎ−ドコサノールの抗ウイルス活性がまた、ベンジルアルコールを含む１０重量％ｎ−ドコサノールクリーム処方の任意の賦形剤を含まない、非イオン性界面活性剤Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８中のｎ−ドコサノールの懸濁処方においても示されてきた。図６にて要約した結果は、２つの重要な点を示している。第１に、パネルＡで示したように、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８中のｎ−ドコサノールの懸濁処方はまた、クリーム処方で観察されたように、ウイルス感染の２時間後に適用した場合に、ＨＳＶ−１感染小胞を阻害した。したがって、未処理部位は、ウイルス感染４８時間後に、平均７４の小胞を示したが、ｎ−ドコサノール／Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８で処理した部位ではたった２８小胞しか観察されなかった（６３％阻害）。ヒトにおける特定のＨＳＶに対するＦＤＡ−許可処置である、ＺＯＶＩＲＡＸでの処置もまた、小胞数の減少に関連したが、しかし、ｎ−ドコサノールのものより小さかった。
【００７３】
ｎ−ドコサノールでの連続処置の結果、７２時間の時間点で、より少ない小胞となった。ｎ−ドコサノール調製物に対する賦形剤対照は、いずれの時間点でも効果を持たなかった。
【００７４】
図６から得られる第２の主要な点は、ｎ−ドコサノールが、小胞が発現した後に投与しても、ＨＳＶ−１誘導疾患の分解を促進することである（パネルＢ）。種々の部位が、４８時間点にて、おおよそ等しい数の小胞を示したが、その時間まで、処理していなかったため、予想されたものである。４８時間の時点で平均７３小胞から、７２時間の時点で４３処方まで、未処理部位で小胞数が減少した。ＺＯＶＩＲＡＸでの処置は、７２時間の時点での適度の促進された小胞分解と関連し（２７小胞、未処理部位に対して３７％減少）、これは、同様の設定の他の実験と一致する。重要なことに、ｎ−ドコサノール／Ｆ−６８の適用は、未処理群と比較したときに、７７％の小胞数の減少によって示されたように
、小胞分解を有意に促進した。同様の結論が、同様のデザインの実験におけるクリーム処方を用いて得られた。このことは、ｎ−ドコサノールが、ＨＳＶ誘導疾患の過程の後に、予防的に投与する必要がないことを示している。
【００７５】
３つの安全性および耐性試験を、健康な白人男性および女性ボランティアで実施した。合計７８人の健康なボランティアに薬剤を投与した。安全性試験により、ｎ−ドコサノール１０重量％クリームの処方は、光毒性を引き起こさないが、若干の初期刺激があり、また、低頻度ではあっても、アレルギー感受性を引き起こす可能性があることが示された（７８人の接触皮膚炎経験者への暴露により１対象）。
【００７６】
２つの臨床効果研究および試験を完了した。試験Ａは、再発型口唇ヘルペスの６３人の患者（男性および女性）での、無作為、二重盲検、プラセボコントロール試験であた。口唇ヘルペス試験、試験Ａにおける、３１人のｎ−ドコサノール１０重量％クリーム処置患者のすべてがその処置を完了し、３１人の患者の内２人が、クリーム適用後に、激しいまたは刺激感受性を報告した。
【００７７】
臨床検査値（血液化学、血液学、尿解析）における臨床的に有意な変化は、いずれの試験でも現れなかった、試験Ｂは、再発型生殖器ヘルペスの、４５人の女性患者での、無作為、二重盲検、プラセボコントロール試験であった。生殖器研究、研究Ｂでの、２２人のｎ−ドコサノール１０重量％クリーム処置患者のすべてが、薬物に関連する副作用を報告すること無しに、その処置を完了した。
【００７８】
研究Ａ
６５人の患者（年齢１８〜６０歳）が、研究Ａに参加し、３２人の患者をまず、１０重量％ｎ−ドコサノールクリームを与えるようにまず無作為化し、３３人をまず、プラセボクリームを与えるように無作為化した。処置を患者で開始し、処置を、前駆症状または紅斑段階で開始した場合に「早期」、丘疹段階またはそれより後期の場合に、「後期」と定義した。２人の患者を解析より除外した。６３人の評価可能な患者のうち、２２人を、試験のクロスオーバー期にエントリーした。さらに、１３人の患者を、同一の研究医薬品で、１つ以上の事象を処置した。したがって、４８人を、１０重量％ｎ−ドコサノールクリームで処置し、１５人を、プラセボクリームで処置した、９８人のヘルペス事象を解析した。
【００７９】
研究Ａの結果を、表５において、第１処置事象、クロスオーバー処置およびすべての処置事象の合計にしたがって要約した。
【００８０】
【表５】
2005519868.tif 000006
【００８１】
３１人の患者を、１０重量％ｎ−ドコサノールで口唇ヘルペスの第１事象を処置し、３２人をプラセボで処置した（パートＡ）。ｎ−ドコサノール群中１０人の患者およびプラセボ群中４人の患者を、早期処置として分類した。早期処置ｎ−ドコサノール群での平均治癒時間は、他の処置様式と比較して、４．３〜４．８日減少した。この差は、ｎ−ドコサノールに対して統計学的に有意であった（Ｐ＝０．０００１）。後期治療群においては、ｎ−ドコサノールは、第１事象における平均治癒時間を０．５日減少させたが、これは統計学的に有意でなかった。
【００８２】
クロスオーバー試験を行った２２人の患者のうち、研究の両方のパートにて、早期にその障害を処置した数（クロスオーバー期にて、７人がｎ−ドコサノールを使用し、１人がプラセボを使用した）は、意味のある統計学的解析には少なすぎた（パートＢ）。しかしながら、実質的な数（クロスオーバー期にて、１０人がｎ−ドコサノールを使用し、２１人がプラセボを使用した）を後期、その障害に関して処置し、したがって、この観点から、患者内比較が可能である。後期処置の結果の変数の解析により、ｎ−ドコサノールに対して、有意な差が明らかになった（Ｐ＝０．０３）。
【００８３】
研究Ａの９８の処置事象すべてからのデータを一緒に評価する（単一事象、クロスオーバー事象および同一の薬剤によるさらなる事象）ことにより、ｎ−ドコサノール処置患者（５．７日）対プラセボ処置患者（７．３日）において、１．６日の平均総治癒の統計学的に有意な（Ｐ＝０．０２）減少が明らかである（パートＣ）。合計で、２０の事象を、早期処置として分離し、局所ｎ−ドコサノールは、３．３日まで、平均治癒時間を減少さ
せた（Ｐ＝０．０５）。最終的に、ｎ−ドコサノールでの早期処置の効果を、他のすべての処置法と比較し、早期処置ｎ−ドコサノール群での平均治癒時間（３．４日）が、他の群での６．５〜７．４日の範囲から、非常に有意に異なっており、この差は、ｎ−ドコサノールに関して非常に有意である（Ｐ＝０．０００２）。ｎ−ドコサノール１０重量％での後期処置と、早期および後期プラセボ処置の間の差は有意ではなかった。
【００８４】
表５で要約したデータによって表されるように、（前駆症状または紅斑段階での）１０重量％ｎ−ドコサノールクリームによる早期処置によって、他の処置で得られたものと比較して、非常に有意な治癒時間の短縮が得られた。さらに、障害が現れてから開始した、後期処置は結果として、他の解析を介してではなく、本研究のクロスオーバー部分で、ｎ−ドコサノール処置群における治癒時間の、統計学的に有意な減少となった。
【００８５】
研究Ｂ
再発型生殖器ヘルペスの６０人の女性患者を、症状のない、そして前駆段階ではない間に、研究にエントリーした。１３人の対象を、早期段階生殖器ヘルペス再発の処置のために、患者開始試験において、まず、１０重量％ｎ−ドコサノールクリームを与えるように無作為化し、１３人には、プラセボクリームを与えた。４４人の患者に処置を開始し、ヘルペス事象が出たならば、病院に戻ってきてもらい、これらの患者のうち２２人に、ｎ−ドコサノールを与え、２２人にプラセボを与えた。
【００８６】
１６人の評価可能なｎ−ドコサノール患者における治癒までの平均時間は、１．８〜８．６日の範囲の、４．７日±１．９であり、１８人の評価可能なプラセボ患者では、１．７〜１０．４日の範囲の、５．１日±２．３であった。この差は統計学的には有意ではない（Ｐ＝０．５８２７、ｔ−検定）。不従順であったか、または投与中断した、また観察可能な事象のない、前駆症状の状態の、または同時に酵母感染のあった、非生殖器障害の患者は評価可能ではないと考えた。すべての患者を含めた場合、ｎ−ドコサノールの治癒までの平均時間は、１．８〜９．８日の範囲の、５．５日±２．５であった。プラセボ群に関しては、治癒は、平均４．７日±２．３で達成された。この群の治癒時間は、１．７〜１０．４日の範囲であった。２つの処置群の間で、治癒までの平均時間に統計学的に有意な差はなかった（ｐ＝０．２７０３、ｔ−検定）。
【００８７】
患者を、処置を開始した時の障害の段階（前駆症状、紅斑または丘疹）にしたがって、層別した場合にも、統計学的に有意な差はなかった。患者レーティングに基づいた平均治癒時間は、臨床医のものと同一であった（全ｎ−ドコサノール患者５．６日対全プラセボ患者４．５日）。
【００８８】
３つの痛み解析を、痛みの患者の自己査定に基づいて実施し、「痛み無し」を維持する時間、最初の「痛み無し」の時間、および痛みの最初の減少の時間を実施した。
【００８９】
「痛み無し」を維持する時間は、適用した時の最初の痛みから、１）痛みが、２回連続する記録の時間に、「痛み無し」とスコア化された場合、および２）事象の残りの間、さらなる痛みの記録が、「中程度」痛みの２つの連続する記録の２つの分離した事象よりも頻度も重傷度も大きくない場合の時間、までを測定した。最初の「痛み無し」までの時間は、適用時の最初の痛みから、「痛み無し」の最初の記録までの間隔として定義した。痛みの最初の減少までの時間は、適用時の最初の痛みの時間から、痛みのレベルの減少が記録された時間までで測定し、先の査定に関連する。最初の２４時間内に痛みが消えたか、痛みの報告を行わなかったため、何人かの患者をこれらの解析から除外した。
【００９０】
ｎ−ドコサノールで処置した、１５人の評価可能な患者は、１４人の評価可能なプラセボ患者よりも、より早く「痛み無し」の維持応答を達成し、ｎ−ドコサノール患者に関し
ては、平均３．２日±１．９であり、対して、プラセボ患者に関しては、４．１日±２．５であった。ｎ−ドコサノール患者はまた、プラセボ患者よりもはやく、「痛み無し」を達成した。ｎ−ドコサノール患者は、痛みが開始したのち、平均２．６日±２．１で「痛み無し」を最初に記録し、一方プラセボ患者は、痛みが開始した後、平均３．４±２．１で、「痛みなし」を最初に記録した。評価可能なｎ−ドコサノール患者のうち、先行適用における痛みと関連して、痛みの最初の減少が、痛みが開始した後、平均１．２日±１．０で起きた。プラセボ患者では、平均１．８日±１．４にて、痛みの最初の減少が起こった。これらの違いは、統計学的には有意ではなかった（それぞれｐ＝０．２７７５、０．３２５および０．１７５７、ｔ−検定）。従わなかったか、投与中断した、またが観察可能な事象を伴う前駆症状を持たない、または同時の酵母感染を有する、非生殖器障害の患者は、評価可能ではないと考えた。
【００９１】
好ましい実施形態において、皮膚または膜の表面炎症の痛みを減少させる方法は、生理学的に適合可能な担体中で、任意に、ｎ−エイコサノール、ｎ−ヘネイコサノール、ｎ−トリコサノール、ｎ−テトラコサノール、ｎ−ペンタコサノール、ｎ−ヘキサコサノール、ｎ−ヘプタコサノール、およびｎ−オクタコサノール、またはその混合物を含む、２０〜２８炭素原子を有する、少なくとも１つの長鎖脂肪族アルコールとの組み合わせで、ｎ−ドコサノールの組成物を、炎症表面に適用することを含み、前記アルコールは、前記組成物の約５〜約２５重量％含まれる。好ましくは、生理学的担体は、ヤシ脂肪酸スクロース、ステアリン酸スクロースおよびジステアリン酸スクロースからなる群より選択される１つ以上の化合物、およびポリオキシプロピレンステアリルエーテルエチルヘキサンジオールおよびベンジルアルコールからなる群より選択される１つ以上の化合物を含む、クリーム基体である。
【００９２】
１０重量％ｎ−ドコサノールクリームで処理した患者およびプラセボクリームを与えた患者間で、時間対治癒において、研究Ｂにて、統計学的に有意な差が見られなかったものの、ｎ−ドコサノールで処置した評価可能な患者の間で、時間対治癒が減少する傾向が観察された。これらの異なる痛み解析のすべては、その差が統計学的に有意ではないけれども、ｎ−ドコサノール  １０重量％クリームを与えた患者において、痛みのより迅速な分解を示した。この研究で、統計学的な優位性を検出できなかったのは、部分的に、（１）研究集団が小さかった、（２）生殖器ヘルペス障害の自然歴に関連して、２つの研究群の間で、研究エントリーが異なること、および（３）事象における２つの群の障害段階および処置開始の間に、同等ではない分散があることが反映されうる。
【００９３】
臨床試験に加えて、いくつかの研究を、ｎ−ドコサノールの薬理学評価を説明するために実施した。これらの研究は、結果として、図７〜１３にて記述し、以下で議論する。
【００９４】
ｎ−ドコサノールの、生物学的システムへ許容可能な伝達を可能にする、適切な処方が開発された。最初に、不活性および非毒性界面活性剤、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８中の、ｎ−ドコサノール分子の懸濁液を処方することによって達成された。そのような懸濁液は均質であり、直径平均０．１０ミクロンの粒子を含むｎ−ドコサノールからなる。この方法で懸濁させると、ｎ−ドコサノールは、類人猿およびヒト細胞株の、１型および２型単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染性に対して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの阻害活性を示す。ｎ−ドコサノール／Ｐｌｕｒｏｎｉｃ懸濁液は、ＨＳＶの野生型およびアシクロビル抵抗性変異体に対して、等しく効果的である。
【００９５】
したがって、図７、パネルＡに示したように、アシクロビルおよびｎ−ドコサノールは、野生型ＨＳＶ−２による、プラーク形成を等しく阻害する。図７、パネルＢは、アシクロビル−抵抗性ＨＳＶ−２変異体が、アシクロビルによって阻害されないけれども、ｎ−ドコサノールによって阻害されることを図示している。Ｐｌｕｒｏｎｉｃ界面活性剤のみ
では、任意の抗ウイルス活性を欠く。宿主細胞毒性は、３ｍＭの濃度では、ｎ−ドコサノールで観察されなかった。
【００９６】
ｎ−ドコサノールがその抗ウイルス活性を示す機構を描写するために設計した、大規模な研究を実施した。本研究の結果の全体的な意味は、化合物が、細胞内へのウイルス侵入および感染した標的細胞の核への遊走の共通の経路の１つ以上を干渉することが明らかになったことである。この概念を支持している証拠の鍵となる点は、以下のように要約可能である。（ａ）ウイルスを、ｎ−ドコサノールと混合し、ついで懸濁液より回収し、通常の感染性を保持していることを示すことが可能であるので、化合物は直接の殺ウィルス活性を持たない。（ｂ）化合物は、標的細胞上のＨＳＶ−特異的レセプターに対するヘルペスウイルスの結合を阻害しないけれども、ｎ−ドコサノールの存在下で、標的細胞レセプターに結合したＨＳＶウイルス粒子が、長時間、細胞表面に残る。および（ｃ）吸収された、ウイルスの細胞核への続く誘導が、検出可能ＨＳＶコアおよびエンベロープタンパク質、前早期タンパク質ＩＣＰ−４を発現している細胞の数、および第２プラークアッセイによって測定されたように、阻害される。
【００９７】
上記のウイルス吸収での遅延が、図９で要約した実験で図示されている。この実験で、ＨＳＶ−２を、ｎ−ドコサノールの存在する場合およびしない場合で、Ｖｅｒｏ細胞とともに４℃にてインキュベートして、ウイルスのレセプター結合を可能にさせた。３時間後の時点で、すべての培養物を洗浄し、ついで、ウイルス侵入工程を開始させるために、３７℃にて再プレート化した。その後２０分の間隔にて、種々の培養物を、表面結合物を除去し、不活性化するが、しかしＨＳＶウイルス粒子を吸収しない条件である、ｐＨ３．０クエン酸緩衝液に暴露し、最適なＨＳＶプラークを発達させるために必要な、完全に４４時間の期間、再培養した。０時間にてクエン酸緩衝液に暴露したすべての培養物は、予想されたように、プラークの発達がなかった。
【００９８】
グラフ上の一番上の線で示したように、ＨＳＶ−２の内在化が、未処理およびＰｌｕｒｏｎｉｃ対照試験培養中で、３７℃に移動した後、２０分以内に実質的に完了する。一方、ｎ−ドコサノール試験培養中のＨＳＶの内在化は、２０分まで、４０％完了未満であり、各完了まで１時間以上を必要とした。これらの結果は、ウイルス感染および／または経膜誘導の速度が、ｎ−ドコサノールによって、いくつかの方法で遅延することを、はっきりと示唆している。
【００９９】
内在化の後でも、ｎ−ドコサノール処置細胞にて、完了し、細胞核への続くウイルス遊走が有意に阻害される。したがって、ＥＬＩＳＡによって検出可能なＨＳＶコアおよびエンベロープタンパク質抗原両方の量、ならびに免疫蛍光による、核内ＨＳＶ−特異的前−早期タンパク質ＩＣＰ−４を発現している感染細胞の数が、８０％以上まで減少する。最終的に、第２プラークアッセイ培養にて測定されるように、感染ウイルスの複製が、ｎ−ドコサノール処置した細胞中で、９９％以上まで、明らかに減少する。
【０１００】
要約すると、ｎ−ドコサノールの存在は、ウイルス結合の開始段階には影響を与えないけれども、いくつかの、まだ決定はされていない機構を介して、標的細胞質内へのウイルスの侵入を有意に遅らせる。さらに、核への遊走および局在化の工程が続いて阻害され、生産性ウイルス複製における有意な減少という最終的な効果となる。
【０１０１】
ｎ−ドコサノールが、その抗ウイルス活性を発揮する重要な機構をよりよく定義するために、ｎ−ドコサノールの、界面活性剤安定化懸濁液からの、細胞取り込み、分布および代謝が研究されてきた。そのような研究の結果により、この化合物の抗ウイルス活性の代謝塩基に対する興味深い真相が見えてきた。放射標識ｎ−ドコサノールが、培養Ｖｅｒｏ細胞内に次第に取り込まれ、暴露の６〜１２時間に、細胞あたりのピーク取り込みに達し
たことが示された。いったん化合物が細胞に結合したならば、非特異的に関連した、細胞結合粒子を効果的に除去する、臭化セシウムによる大規模な洗浄によってでさえ、除去ができないので、この工程は、不可逆的である。
【０１０２】
第２に、開始濃度にて、培養液に加えた１％より少ない総ｎ−ドコサノールが、２４時間以内に細胞に結合するようになる。それにもかかわらず、これは、原形質膜にて典型的に見られる脂質分子の数を近似する数量である、細胞あたりおよそ８×１０9分子に相関する。
【０１０３】
培養液に加えた懸濁液中の、ｎ−ドコサノールのそのような小さな画分が、細胞結合するという事実は、実際の生物活性用量が、培養液に加えた薬物量よりも少ないオーダーの規模であることを示唆している。
【０１０４】
超音波分散細胞の分画遠心法によって回収した細胞内小画分を試験する細胞分布研究によって、放射活性化合物の７５％暴露の１２時間後に、細胞膜が含まれ、１％未満ものが、核画分に結合し、放射活性のバランスは、可溶性細胞質画分と関連することが示された。
【０１０５】
ｎ−ドコサノールの代謝変換の解析により、化合物が、極性化合物に次第に代謝され、これが、薄層クロマトグラフィーによって、同化（エーテル結合）または異化（酸化）反応のいずれかを介して産出される、ホスファチドであると明らかにされた。図１０は、ｎ−ドコサノール処理Ｖｅｒｏ細胞の抽出物の、シリカゲルカラムからのメタノール抽出（ホスファチド含有）画分の、薄層クロマトグラフィー解析を示している。代謝されないｎ−ドコサノールを、クロロホルムにて、シリカより先に溶出された。示したように、およそ６２％のカウントが、ホスファチジルコリンの領域に移動し、３８％が、ホスファチジルエタノールアミンの領域に移動した。
【０１０６】
本発明者らの研究によりまた、そのような代謝変換が、適切な代謝阻害剤によって阻害されうることが示された。したがって、効果的なエネルギー位置のアジ化ナトリウムおよび２−デオキシグルコースが、９０％まで、Ｖｅｒｏによるｎ−ドコサノールの取り込み、および８０％まで、極性代謝物への代謝変換両方を減少させる。アジ化ナトリウムおよび２−デオキシグルコースの組み合わせは、主に、エンドサイトーシスを阻害することによる、ｎ−ドコサノールの細胞取り込みを阻害し、しかしながら、エネルギーに依存する様式の機構、またはｎ−ドコサノールの続くエネルギー依存代謝によって促進される受動的拡散機構を含む、他の取り込みの機構もまた、これらのエネルギー位置によって阻害されうる。
【０１０７】
このような研究の興味深い態様は、組成物の抗ウイルス活性におけるｎ−ドコサノールの極性代謝物としての可能性の指摘である。マウスの線維芽細胞の、上述のようなｎ−ドコサノールの代謝変換を通して得られた生成物と類似するエーテル結合化合物を含む、遊離脂肪族アルコール類の増加およびグリセリド類の上昇の双方に関連のあるポリエチレングリコール誘導融合への抵抗が最近立証された。
【０１０８】
ｎ−ドコサノールの酵素的変換が、その抗ウイルス活性に対して、必要条件である可能性を調査するために、実験を実施した。そのような研究の結果により、まず、細胞取り込みの速度および程度ではなく、ｎ−ドコサノールのその極性代謝物への代謝変換の速度および程度を、化合物を懸濁させるために使用した、界面活性剤の性質によって決定し、実際に、代謝変換の効率が、ｎ−ドコサノールの抗ウイルス活性の程度と、直接相関することが示された。
【０１０９】
そのような研究を実施する初期段階には、ｎ−ドコサノールを懸濁させるため、異なる界面活性剤への変更が含まれる。Ｔｅｔｒｏｎｉｃ  ９０８は、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８に非常に関連し、両方ともエチレンオキシドとプロピレンオキシドとのブロックコポリマーである。しかし、Ｐｌｕｒｏｎｉｃは、分子量８，４００の二官能性ポリマーであり、Ｔｅｔｒｏｎｉｃ９０８は、プロピレンオキシドとエチレンオキシドをエチレンジアミンに加え、結果として、２５，０００の平均分子量の分子となる、四官能性コポリマーである。特に、Ｖｅｒｏ細胞を、等しい用量の、Ｔｅｔｒｏｎｉｃ対Ｐｌｕｒｏｎｉｃ中に懸濁させたｎ−ドコサノールに暴露する場合に、化合物の、極性代謝物への代謝の速度および程度は、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ懸濁液よりも、Ｔｅｔｒｏｎｉｃにて、有意に高い。放射活性ｎ−ドコサノールの総取り込みは、２つの異なる懸濁液処方からで等しく、代謝変換のみが有意に異なった。Ｐｌｕｒｏｎｉｃ懸濁液よりもＴｅｔｒｏｎｉｃからのこの高い代謝変換との相関が、ｎ−ドコサノールによるＨＳＶ複製の阻害に関するＥＤ50が、Ｔｅｔｒｏｎｉｃ中で５〜１０ｍＭであり、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ中より、およそ３倍高いことの発見である。これは、Ｔｅｔｒｏｎｉｃ中のｎ−ドコサノールで処置した細胞における代謝変換の３倍高いレベルに関連することが明らかである。
【０１１０】
これらの発見が、とりわけ、Ｖｅｒｏ細胞培養系に特異的なものである可能性を排除するために、Ｖｅｒｏ細胞に関連する、上皮様ウシ腎臓細胞ＭＤＢＫが、ｎ−ドコサノールの抗ＨＳＶ活性に対する、興味深い明らかな抵抗性を示すという事実の利点を用いて、相反解析を実施した。この差は、ｎ−ドコサノールが、ＨＳＶ誘導プラークを阻害することにおいて、Ｖｅｒｏ細胞にて、ＭＤＢＫ細胞においてよりも、３〜４倍効果的であるほど、有意である。総細胞取り込みおよび相対代謝の比較により、ｎ−ドコサノール取り込みの総量および代謝変換の相対量は、ＭＤＢＫ細胞において、Ｖｅｒｏ細胞にて３〜４倍高かった。ＭＤＢＫ細胞対Ｖｅｒｏ細胞での、取り込みの減少および代謝の減少の効果をあわせて、図１１にて図的に描写しており、これは、７２時間後に、Ｖｅｒｏ細胞は、およそ４倍多い量のホスファチド代謝物を含み、この溶媒系にて、最初から維持されたことを示している。２つの細胞株にて代謝される数のうち、形成される主要な種類のホスファチド、ホスファチジルコリンおよびホスファチジルエタノールアミンの相対量は、２つの細胞で異ならなかった。さらに、パルス相実験により、両方の株が、組み込まれた数のすべてを、より極性の形態に最終的に変換することが示された。
【０１１１】
このような結果は、ＭＤＢＫ細胞が、Ｖｅｒｏ細胞内では、効果が小さいか、または効果がないかいずれかである、フィードバック型の機構を介して、ｎ−ドコサノールの取り込みおよび／または代謝を効果的に制御しうることを示唆している。
【０１１２】
以上で要約した機構的な観察と一致して、ｎ−ドコサノールが、多数の異なるウイルス、とりわけ、その外部エンベロープ内に脂質を含み、感染標的細胞へ侵入するために、融合機構を使用するものを、干渉する可能性があることが予想された。表６は、ｎ−ドコサノールの抗ウイルス活性に感受性であることが示された、ヒトおよび齧歯類脂質エンベロープウイルスを要約している。
【０１１３】
【表６】
2005519868.tif 000007
【０１１４】
試験したすべての脂質エンベロープウイルスが、本薬剤によって効果的に阻害されうる。ｎ−ドコサノールは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ両方で、抗ウイルス活性を有する。抗レトロウイルス活性を持ち、毒性のない処方が、ヒトおよび家畜動物における種々のレトロウイルス疾患を処置するのに、非常に有用である。それにもかかわらず、ＡＩＤＳの処置に対する関わり合い、ネコ白血病ウイルス、ウシ白血病ウイルス、ならびにＨＴＡＬＶ−１および−２のような、レトロウイルスによって引き起こされる疾患に対する、処置計画の有用性は、人道主義的な意味において、非常に有益である。研究により、ｎ−ドコサノールが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで、齧歯類レトロウイルスの複製を阻害することが確立された。
【０１１５】
初期の研究は、齧歯類Ｆｒｅｉｎｄ白血病ウイルス（ＦＶ；８）に焦点が当てられた。成体マウスへのＦＶの接種により、白血球創始物、とりわけ好塩基球赤芽細胞の白血病が誘導される。この赤白血病は、ウイルス感染赤血球細胞の急速な増殖、ウイルス血症、免疫抑制、および最終的な動物の死によって特徴づけられる。ＦＶの静脈内注射によって、脾臓のような造血器官、および感染赤血球を介して循環される。そのような感染脾臓を、ウイルス感染の１０日後に固定した場合、分散した顕微鏡的なモジュールを器官の表面上に見ることができ、これらは、白血病細胞のクローンを表し、脾臓病巣アッセイの基礎を形成する。
【０１１６】
図１２にて要約した実験は、ｎ−ドコサノールが、７５フォーカス形成ユニットのＦｒｉｅｎｄウイルスを静脈内注射した、大人マウスにおけるＦｒｉｅｎｄウイルス誘導白血病およびウイルス血症を阻害することを示している。処置群には、ウイルス接種と同日、および続く３日間毎日１回、静脈内で、種々の用量のｎ−ドコサノールまたはＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８賦形剤のみを注射した。１０日後、各群の半分の動物を犠牲死させ、その脾臓内での白血病巣の存在に関して試験し、一方で、残りの動物は、さらに１０日間飼
育し、ウイルス血症をモニタした。ｎ−ドコサノールでの処置は、パネルＡで示しているように、白血病巣の発達、そしてパネルＢで示しているように、ウイルス血症両方に、非常に明確な用量依存阻害効果を持った。一方で、対照としての同量のＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８賦形剤での処置では、識別できる効果は見られなかった。推論ｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究により、初代胎児繊維芽細胞培養における、Ｆｒｉｅｎｄウイルスの複製に対する、本薬剤の非常に強い活性が示唆されたので、これらの結果は、ウイルス複製におけるｎ−ドコサノールの阻害活性を反映していると考えられる。ｎ−ドコサノールは、ＨＩＶ−１およびヒトヘルペスウイルス６のｉｎ  ｖｉｔｒｏ複製を阻害する。
【０１１７】
ＨＩＶにおける初期研究は、米国健康保険局との共同研究により実施され、これらの型のいくつかの実験のうちの１つを、図１３にて要約している。正常のヒト末梢血単核細胞を、培地のみ、またはｎ−ドコサノール、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８対照賦形剤、またはホスホノギ酸（ＰＦＡ）の存在下で、１μｇ／ｍｌ  ＰＨＡ＋５ユニット／ｍｌのＩＬ−２で活性化した。翌日、培養液に、ＨＩＶ−１ウイルスを接種し、ｐ２４ウイルス抗体の検出によって、ウイルス複製の証拠に関して、４日後に試験した。かなりのレベルのＨＩＶ−１複製が、対照処置培養液中で起こり、未処理群で観察されたものと匹敵した。示したように、ｎ−ドコサノールは、ＰＨＡ／ＩＬ−２刺激ヒト末梢血単核細胞の培養液中で、ＨＩＶ−１に対する、用量依存阻害効果を示した。もっとも高い用量での活性は、非常に強力な抗ウイルス化合物である、ホスホノギ酸（ＰＦＡ）で観察されたものと匹敵した。
【０１１８】
ｎ−ドコサノール  １０重量％クリーム（ドコサノール）が、急性ＨＳＬの事象の局所処置に対して、プラセボと比較して効果的であるかどうかを決定するために、２つの独立した、臨床開始、二重盲検、プラセボコントロール試験を、計２１の施設で実施した。文書化されたＨＳＬの経歴を持つ、すでに健康な大人を、ｎ−ドコサノールまたはポリエチレングリコールプラセボに無作為化し、事象の、前駆症状または紅斑段階で処置を開始した。処置は、一日２回の訪問で、治癒が起こる（外皮が突然落ちるか、または活性障害の証拠がもはやなくなる）まで、一日５回行った。
【０１１９】
ｎ−ドコサノール  １０重量％クリーム各グラムは、皮膚および粘膜へ、簡単に適用でき、迅速に消える、白色、非脂肪性、湿潤クリームに処方された、１００ｍｇのｎ−ドコサノールを含んでいる。比較には、ｎ−ドコサノール１０．０重量％、ステアリン酸スクロースおよびジステアリン酸スクロース５重量％、軽ミネラルオイルＮＦ８．０重量％、プロピレングリコールＵＳＰ５．０重量％、ベンジルアルコールＮＦ２．７重量％および精製水ＵＳＰ６９．３重量％が含まれた。混合物は、グラクソスミスクライン（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  ｏｆ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ，ＮＣ．）によって、商標ＡＢＲＥＶＡ（商標）にて、アバニル  ファーマシューティカルズ（Ａｖａｎｉｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）からのライセンスとして市販されている。ｎ−ドコサノールを欠くが、ＰＥＧを含むプラセボ処方を、ｎ−ドコサノール１０重量％の存在下と同一の薬剤として使用した。ＰＥＧ処方は、局所アシクロビルに対する賦形剤および局所ＨＳＬ試験に対するプラセボとしてすでに使用されたものと同一であり、ＦＤＡとの相談により選択された（Ｓｐｒｕａｎｃｅ  ＳＬ、Ｗｅｎｅｒｓｔｒｏｍ  Ｇ．  Ｏｒａｌ  Ｓｕｒｇ．５８：６６７−７１、１９８４；Ｓｐｒｕａｎｃｅ  ＳＬ，Ｓｃｈｉｐｐｅｒ  ＬＥ、Ｏｖｅｒａｌｌ  ＪＣ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１４６：８５−９０、１９８２、およびＦｉｄｄｉａｎ  ＡＰ、Ｉｖａｎｙｉ  Ｌ．Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｄｅｍａｔｏｏｌ．１０９：３２１−６，１９８３を参照のこと）。この例の場合、１０重量％濃度での活性薬剤基質、ｎ−ドコサノールが、クリームの濃度の主要な一因となるものであるので、クリームの賦形剤をプラセボとして使用することは不可能である。これを除去することによって、盲検のための対照として明らかに好適ではない、水性賦形剤が産出される。
【０１２０】
患者を、米国中にて、大学病院、開業病院および公的医療機関を含む２１の病院で採用した。８つの施設を、試験＃０６に割り当て、１３の施設を、試験＃０７に割り当てた。すべての施設を、組み合わせ研究に含め、＃０６／０７とした。組み合わせ研究において、１２パーセント以上の総研究集団、または個々の研究において２４パーセント以上を単一の施設で行うことがないようにした。これらの施設において、前駆症状または紅斑の開始に気づいた１２時間以内に、臨床評価のために参加した、１８歳以上の、男性および女性免疫適格患者を採用した。患者の病歴により、兆候および症状は、１２時間以上存在してはならず、臨床試験において、事象が、紅斑段階下で進展してはならない。それ以外は健康であると決定された患者は、過去１２ヶ月の間に、少なくとも２回の再発で、ＨＳＬの臨床歴を持っていなければならない。もっとも最近の前事象は、スクリーニングの少なくとも１４日前に治癒していなければならない。すべての施設に関して、施設査察会議（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄ）許可を、プロトコールおよびインフォームドコンセント文書に対して得た。すべての患者に、まず、試験の目的とリスクを説明し、登録の前に、サインされたコンセント文書を得た。
【０１２１】
対象者は、処置期間の間、口または口の周辺に化粧品を使用しないことに同意した。子供のいる女性は、確立された出産制御の方法を実践していることであり、参加に際し、陰性尿試験によって決定されたように、妊娠はしていなかった。局所化粧品に対して公知のアレルギーの対象者は、鼻孔上、あごのした、または口の中の障害を有するので、除外した。試験の３０分前の間、または以内での、調査薬剤の使用および、試験の前、７日間、またはそれ以内での、承認された抗ウイルス剤、局所コルチコステロイド、またはＨＳＬに対する他の任意の非特異的治療の使用は禁止された。免疫刺激または免疫抑制を誘導することが知られている全身コルチコステロイド類または他の薬剤の同時の使用もまた禁止された。
【０１２２】
試験は、ＨＳＬの急性再発の患者集団における、プラセボとの、局所ｎ−ドコサノールの、安全性、効果、および耐性の比較および評価のために、多施設、無作為化、二重盲検、プラセボコントロール、並行群、臨床開始、早期処置試験であった。処置を、前駆症状または紅斑段階における症状の事象開始、または丘疹段階の前、１２時間以内に開始した。対照を、ｎ−ドコサノールまたはプラセボ処置いずれかで、４つのブロックでの施設にて、二重盲検様式で、無作為化した。研究開始の時点で、研究薬剤の第１適用は、病院にて、対照によって実施された。続く適用は、対照によって、通常の労働時間に実施された。研究薬剤は、最大１０日間、治癒するまで、１日あたり５回、障害部位に適用した。対照に、激しい運動、シャワーまたは入浴の後に、試験薬剤を再適用するように指示した。これらの追加の適用は、スケジュールとして計数しなかった。対照に、研究薬物適用時間の日記をつけさせた。
【０１２３】
対象者には、最初に七日間の、調査員または他の教育された臨床医による１日２回の査定に対して報告するよう求めた。病院訪問は、６時間より短くなく、１６時間より長くないべきである。最初の処置領域を、基準臨床査定として、症例報告書（ＣＲＦ）内でのダイアグラム上で記録した。処置領域における局在サインおよび症状を、各訪問時に記録し、これには、前駆症状／紅斑、丘疹、小胞、潰瘍、かさぶたまたは治癒皮膚（残余紅斑ありまたはなし）、および痛み、熱、かゆみまたはひりひり感の対照報告がふくまれた。７日以内に停止または治癒しなかったＨＳＬ事象の患者はまた、８〜１０日間、１日１回実施した。１０日間以内に、停止または治癒しなかったＨＳＬ事象は処置を中止し、障害停止、治癒または副作用の点で再び査定した。すべてのベースラインおよび効果、安全性パラメータは、臨床医が決定した。
【０１２４】
第１効果エンドポイント（時間対治癒）を、治療開始の日および時間から、すべての局
所サインおよび症状の完全な解決が記録された、すなわち、障害がなくなったか、または完全な治癒が起こった（１０日目に検閲）、病院訪問の日および時間まで、計算し、それには、古典的な事象、および停止事象両方の患者が含まれる。（最終１０日目訪問の時間を、１０日目において検閲した対象者における初期エンドポイント解析のために使用した）。古典的事象を煩っている患者に関して、完全治癒は、「活性障害の証拠なしで、かさぶたがなく、紅斑、離脱またはわずかな非対称性が含まれうる、残余ローション後皮膚変化が存在するか、またはしない」として定義した。
【０１２５】
第２エンドポイントには、１）古典的エピソード（小胞またはより後期の段階まで進展した事象、１０日目に検閲）の完全な治癒、２）事象停止、３）痛みの完全な休止、および４）丘疹段階に至るまで進展しなかった事象として定義された、停止事象の割合が含まれる。停止事象は、ＨＳＬ関連兆候または症状の休止が報告された病院訪問の時点で、治癒されたと考えられた。
【０１２６】
局所ｎ−ドコサノール１０重量％クリームの安全性および耐性を、副作用報告および臨床研究変数の査定によって決定した。
【０１２７】
組み合わせ研究のための試料の大きさは、先の臨床研究からのデータに基づいた。組み合わせ研究は、７００人の評価可能な患者（各群３５０人）で行うと計画され、これにより、８２％の力で、処置群とプラセボ群間の１３時間平均差違の検出が可能になった。２つの副研究をまた、別々に解析した。
【０１２８】
統計学的方法論を、プロトコール中に概略した。強度対処置（ＩＴＴ）集団には、薬物治療を受け、少なくとも１つの処置評価をされたすべての患者が含まれた。効果評価可能集団を、プロトコールにしたがわせ、すくなとも８０％のスケジュール用量を適用した。プロトコールのずれを、研究が進む前に評価した。安全性評価可能集団には、少なくとも１つの、研究薬物治療の適用を使用したすべての患者が含まれる。
【０１２９】
人口統計学的および病歴データを、処置群によって表に記入し、連続変数に対して、記述統計学を使用した。絶対的変数に対しては、頻度および割合を使用した。兆候および症状、前駆症状の局在、現在の経験内容、および障害段階のようなベースライン変数を、変数の解析およびＣｏｃｈｒａｎ−Ｍａｎｔｅｌ−Ｈａｅｎｓｚｅｌ検定のいずれかを用いて、無作為処置群間での均質性に関して比較した（Ａｇｒｅｓｔｉ  Ａ．「絶対的データ解析への導入（Ａｎ  ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  ｃａｔｅｇｏｒｉｃａｌ  ｄａｔａ  ａｎａｌｙｓｉｓ）」Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｗｉｌｅｙ  １９９６；ｐｐ．６０−４を参照のこと）。ベースライン生存兆候に関する記述統計学を計算した。
【０１３０】
初期効果解析のために、少なくとも１つのベースライン後効果査定を受けたすべての患者を含んだ。時間対事象分布を、Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒプロダクトリミット見積もりによって見積もった（Ｋａｐｌａｎ  ＥＬ，Ｍｅｉｅｒ  Ｐ．Ｊ．Ａｍ．Ｓｔａｔ．Ａｓｓｏｃ．  ５３：４５７−８１，１９５８）。時間対事象分散を、ウィルコクソン検定のＧｅｈａｎ一般化を用いて、処置間で比較し、施設によって層別化した（Ｇｅｈａｎ  ＥＡ  Ｂｉｏｎｍｅｔｒｉｋａ  ５２：２０３−２３，１９６５）。ＦＤＡとの諮問にて、処置の効果が、処置期間の早期で予想される場合によい力を発揮するので、一般化ウィルコクソン検定が選ばれた。信頼区間（時間差）を、層別ウィルコクソン検定の絶対値逆転によって得た。その障害が、１０日の時点で治癒しなかった対照からの局所査定を、その時点で打ち切った。停止事象のパーセンテージを、ベースライン訪問時のもっとも最近の段階にて表示している。
【０１３１】
プロトコールにおいて重要なベースライン共変動に対する可能性のある適用が同定され
た。一般化ウィルコクソン検定は、共変動に対する適用を簡単に許容しないので、比例ハザード回帰（Ｃｏｘ回帰）を、共変動適用が、処置に対するｐ−値に効果を有するかどうかを測定する方法として使用した。報告されたすべてのｐ−値は、未適用解析を表している。
【０１３２】
組み合わせ研究において、７４３人の対照を、２１の米国施設で無作為化した。３７３人の固体をｎ−ドコサノールを投与するために無作為化し、３７０人を、プラセボを投与するために無作為化した。３人のｎ−ドコサノール処置患者および３人のプラセボ処置患者（試験集団の０．８％）は、最初の訪問の後、病院へ戻ってこなかった。これらの６人の患者は、安全性解析に加えたが、プロトコールデザインあたり、程度対処置効果手段より除外した。効果評価可能集団は、程度対処置集団とほぼ同一であり、９７．４％の無作為患者が、効果評価可能であった。そのように、ＩＴＴ集団のデータのみを議論する。
【０１３３】
副研究＃０６において、８施設で、３７０人の患者を無作為化し、１８５人をｎ−ドコサノールに、１８５人をプラセボに無作為化した。副研究＃０７では、１３施設で、３７３人の患者を無作為化し、１８８人をｎ−ドコサノールおよびプラセボに無作為化した。
【０１３４】
組み合わせ研究のＩＴＴ集団に関する患者人口統計およびベースライン特徴を、表７に示している。個々の研究の人口統計は、同様であるが、示していない。人種、年齢またはＨＳＬ再発の頻度での、処置間の有意な差はなかった。研究患者の平均年齢は、３７歳であり、１８〜８０歳の範囲であった。小さな性差が同定された。主要な研究参加者は女性および白人であるが、男性も、プラセボレシピエントと比較して、小さな集団のｎ−ドコサノールレシピエントに含まれた（２５％対３３％、それぞれ、ｐ＝０．０１）。登録において、全ての再発事象は、期間としては１２時間以下であった。７５％〜８０％の間の患者が、紅斑での処置を示し、残りは前駆症状のみを示していた。この期間は、両方の処置群で同一であった（表１０も参照のこと）。ベースラインで報告された痛みはまた、処置群間で異ならなかった。
【０１３５】
ベースライン訪問で報告された患者によって得られた、ＨＳＬの過去の経験をまた、組み合わせ研究に関して、表７で要約している。処置群間で、ＨＳＬの最初の開始からの時間、または最後のＨＳＬ事象からの時間、先の年での事象の回数、通常局在前駆症状を経験する患者の割合、またはもっとも最近のＨＳＬ事象の期間において、統計学的に有意な差はなかった。しかしながら、ｎ−ドコサノールレシピエントは、プラセボレシピエントと比較して、より長い歴史的平均事象を報告した（９．５対８．４日、それぞれ、ｐ＝０．０２）。この統計学的な差はまた、研究＃０６でも観察された（それぞれ、１０．１対８．４日、ｐ＝０．０１）。最も最近の先の事象の平均期間（ｎ−ドコサノール対プラセボ、１０．０対８．４日、ｐ＝０．０２）もまた、研究＃０６でも統計学的に異なった。ＨＳＬ歴における処置群の差は、研究＃０７では観察されなかった。統計学的差が、処置群間での人口統計的研究で観察された場合、Ｃｏｘ回帰解析を使用して、共変動効果を査定した。
【０１３６】
これは経験あるＨＳＬ集団であった。参加者は、２０年より大きな平均ＨＳＬ歴で、過去１２ヶ月中、５事象の中央値を報告した。９９％以上の参加者が、そのＨＳＬ事象の前に、通常前駆症状を経験したと報告した。
【０１３７】
ｎ−ドコサノール群のための参加者の平均数は、２４．１であり、プラセボ群のための平均数は２５．７であった。処置コンプライアンスを、実際に行った適用の数を、行うべきであった数と比較して査定し、ｎ−ドコサノール群で、平均９９．２％であり、プラセボ群で平均９９．６％であった。適用またはコンプライアンスの数に関して、処置群間で統計学的に有意な差はなかった。
【０１３８】
【表７】
2005519868.tif 000008
【０１３９】
有効性データを、表８にて、組み合わせ研究および副研究両方に関して、要約している
。組み合わせ研究の結果のみを、本文章で議論する。非常に大部分の参加者は、１０日処置期間の間、治癒した（９１％のｎ−ドコサノール参加者および９０％のプラセボ参加者）。治癒までの時間に関するＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ曲線を、図１４で表示している。すべての障害に関する、中間値時間対完了治癒は、ｎ−ドコサノール参加者に関して、４．０８日であり、対してプラセボ参加者に関して、４．８０日であり、１５％の差違であった（ｐ＝０．００８、９５％  Ｃｌ２、２２時間）。治癒時間の分布もまた、２５および７５百分率で、ｎ−ドコサノール処置で好ましかった。
【０１４０】
男性の数における差に関する比例ハザード回帰を用いる共変量適合は、時間対治癒に関するｐ−値に影響を持たないが、しかし、歴史事象間隔に関して、ｐ−値が減少した（すなわちより有意になった）。
【０１４１】
【表８】
2005519868.tif 000009
【０１４２】
およそ６０〜６５％の対象者で、古典的事象が発達した。時間対治癒における差（表８）は、ｎ−ドコサノール対プラセボ処置群にて、統計学的により短かった（ｐ＝０．０２、９５％  Ｃｌ１、２４．５時間）。このエンドポイントに関して、平均値（１時間）よ
りも、より大きな差が、２５および２７百分率（〜１９時間）にて観察された。
【０１４３】
古典的事象に関して、個々の障害段階の時間対休止に関する値を、表９に表示している。小胞の時間対休止に関する中間値は、およそ２．１日であり、堅かさぶたの時間対休止に関する中間値は、およそ５．８日であった。どちらも、処置群間で統計学的に差はなかった。しかしながら、潰瘍／軟かさぶた段階の中間値時間対休止が、ｎ−ドコサノールでより短かった（３．６１対３．９４日、ｐ＜０．００１；９５％  Ｃｌ８、２５時間）。
【０１４４】
【表９】
2005519868.tif 000010
【０１４５】
ＩＴＴ群中の７３７患者のうち、合計７０５（９６％）を、プラセボおよびｎ−ドコサノール処置集団間に等しく分布させ、彼らは研究の間に、障害の痛みおよび／または熱、かゆみまたはひりひり感を経験した。全ての参加者に関する、痛みおよび／または熱、か
ゆみまたはひりひり感の完全な中止までの中間値時間（表９）は、ｎ−ドコサノールレシピエントに関して、２．１８日であり、対してプラセボレシピエントに関しては、２．７４日であった（およそ２０％減少、ｐ＝０．００２；Ｃｌ  ３、１６．５時間）。
【０１４６】
ベースラインでの状態による中止事象の患者の結果を、表１０にて要約している。全ての対象に対して、より中止事象に向かう傾向（統計学的差はない）が、３９．７％の、中止事象を経験しているｎ−ドコサノールレシピエントにて同定され、一方、プラセボレシピエントでは３４．１％であった（ｐ＝０．１０９；オッズ比に対するＣｌ  ０．９５、１．７３）。紅斑にて処置を始めた対象において、副研究＃０６に関して、３４．３％のｎ−ドコサノールレシピエント対２３．３％のプラセボレシピエント（ｐ＝０．０４８、Ｃｌ  １．００、２．７５）が中止事象を経験した。事象中止までの時間は、急速であり、処置群間で差はなかった。
【０１４７】
【表１０】
2005519868.tif 000011
【０１４８】
副作用は、定量的および定性的に、ｎ−ドコサノール処置患者およびプラセボ処置患者間で同様であった。少なくとも１つの副作用が、組み合わせ研究集団に関して、１９．６
％（７３／３７３）のｎ−ドコサノールレシピエント、および１８．９％（７０／３７０）のプラセボレシピエントで報告された。核処置群にて、５．９％の患者によって報告された頭痛が、もっとも共通の副作用であった。適用部位反応（ｎ−ドコサノール群の２．１％およびプラセボ群の１．９％）および処置領域の外側の単純ヘルペス（２．４％のｎ−ドコサノール群および１．４％のプラセボ群）をのぞいて、全ての副作用は、いずれの処置群でも、２％以下の患者によって報告された。２人の患者（各群１人）が、それぞれ、発疹および処置領域外の、単純ヘルペスの副作用のために、本研究から離脱した。血清学または臨床化学パラメータいずれにおけるベースラインからの変化に関しては、処置群間で、統計学的に有意な差はなかった。
【０１４９】
ｎ−ドコサノール１０％クリームでのこの試験により、再発ＨＳＬの早期臨床開始治療の臨床的な効能が示唆されている。組み合わせ研究解析により、時間対完全治癒、古典的事象の時間対完全治癒、ほとんどの活性感染障害段階（潰瘍／軟かさぶた）の停止、および全てのＨＳＶ症状の停止において、統計学的に有意な減少が示された。中間値時間対治癒は、最初の効果パラメータであり、プラセボと比較して、０．７２日まで減少した。古典的障害の時間対治癒および潰瘍／軟かさぶたの時間対停止もまた有意に減少した。潰瘍／軟かさぶた段階は、ウイルス複製および炎症のピーク期間を示し、これは、その応答の感受性を示しうる。
【０１５０】
個々の副研究（＃０６および＃０７）で同定された、統計学的差違は、組み合わせ研究においてよりも、わずかに弱く、より少ない参加者を反映している。副研究は、組み合わせ研究に対して、および互いに対して、処置効果は同様であった。副研究を通して結果の一致を、本明細書で報告された一般化ウィルコクソン（Ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ  Ｗｉｌｃｏｘｏｎ）に加えて、比例オッズ回帰（Ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌ  Ｏｄｄｓ  Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ）、比例ハザード回帰（Ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌ  Ｈａｚａｒｄｓ  Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ）およびログ−ロジスティック回帰（Ｌｏｇ−Ｌｏｇｉｓｔｉｃ  Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ）法を含む、種々の解析方法および測定方法を用いて解析した（結果は示していない）。見積もられた処置効果は、使用した効果の測定にかかわらず、非常に同類である。さらに、計算された処置効果に関する信頼区間は、ほとんど完全に重なっている。
【０１５１】
副研究に関する組み合わせ解析アプローチは、プロトコールによって計画された。組み合わせた２つの研究は、ＨＳＬにおける２つの局所ペンシクロビルクリーム研究のそれぞれに関して報告されたもののおよそ半分のコホートサイズを示すが、それにもかかわらず、研究は、ＨＳＬの治癒および症状成分両方に対する、ｎ−ドコサノールの臨床的、および統計学的有意さを示した。（ＨＳＬにおける、局所ペンシクロビルクリーム研究の議論に関しては、Ｓｐｒｕａｎｃｅ  ＳＫ，Ｒｅａ  ＴＬ，Ｔｈｏｍｉｎｇ  Ｃ，Ｔｕｃｋｅｒ  Ｒ，Ｓａｌｔｚｍａｎ  Ｒ，Ｂｏｏｎ  Ｒ  ＪＡＭＡ  ２７７：１３７４−９，１９９７、およびＲａｂｏｍ  ＧＷ  ３６ｔｈ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｎ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，  Ｎｅｗ  Ｏｒｌｅａｎｓ，１９９６を参照のこと。）この早期の、臨床開始モデルを、１日２回の観察で使用する場合、７００〜８００患者のコホートが、ＨＳＬのこれらの鍵となる効果成分を示すのに必要であるようにみえる。一方で、障害予防の実演は、より大きな患者集団を必要とする可能性がある。ｎ−ドコサノール処置の好ましい興味深い傾向にも関わらず、本研究は、不運にも、今日まで、観察した率における障害予防を提示するために十分な力はなく、障害予防は、はっきりと示されてきていない。しかしながら、障害開始の前の臨床開始処置により、存在する場所で（適切なコホートサイズで）この処置利点の実演に関する潜在力を明らかに提示されている。前駆症状期において処置を自己で開始する大きな患者集団が、実際に、処置の開始の前に、早期に確立した障害を有する可能性があるので、他の報告された研究デザインのいずれもが、そのような効果
を提示する機会を実際に提供しない。（Ｓｐｒｕａｎｃｅ  ＳＬ，Ｏｖｅｒａｌ  ＪＣ，Ｋｅｒｎ  Ｅ，Ｋｒｕｅｇｅｒ  ＧＧ，Ｐｌｉａｍ  Ｖ，Ｍｉｌｌｅｒ  Ｗ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．２９７：６９−７５，１９９７、およびＳｐｒｕａｎｃｅ  ＳＬ  Ｓｅｍｉｎ．  ｉｎ  Ｄｅｒｒｍａｔｏｌ．１１：２００−６，１９９２）。
【０１５２】
ペンシクロビルクリーム１％は現在、再発型口唇単純ヘルペスの局所処置のために、処方箋によって入手可能である。ペンシクロビルクリームのための製品取扱説明書からの情報に基いて、現在の研究の２倍以上の大きさの米国多施設癌研究において、Ｓｐｒｕａｎｃｅ  ｅｔ  ａｌ．が、ペンシクロビル処置患者が、０．５日の差違で、平均治癒時間が有意に短く経験したことを示した（４．５対５．０日；ｐ＜０．００１）。（Ｓｐｒｕａｎｃｅ  ＳＫ，Ｒｅａ  ＴＬ，Ｔｈｏｍｉｎｇ  Ｃ，Ｔｕｃｋｅｒ５  Ｒ，Ｓａｌｔｚｍａｎ  Ｒ，Ｂｏｏｎ  Ｒ  ＪＡＭＡ  ２７７：１３７４−９，１９９７）。障害痛みの平均期間のおよそ半日の減少によって示されたように（３．９対４．４日、ｐ＜０．００１）、障害痛みは減少した。Ｓｐｒｕａｎｃｅ  ｅｔ  ａｌ．は、ウイルス離脱が、ウイルス離脱の欠失までの中間値時間において差は観察されなかったけれど（３．０対３．０日）、続く離脱時間にわたる変化（小胞および潰瘍／軟かさぶた）によって提示されたように、ペンシクロビルによって減少したことを報告した。多数の対象を試験しなければならないので、ペンシクロビルクリームでの抗ウイルス効果を示すことの難しさにより、生殖器ヘルペスの研究であった、感受性効果マーカーを作製するために、ウイルス培養液を積極的に得るべきであることが示唆される（Ｄｉａｚ−Ｍｉｔｏｍａ  Ｆ，Ｒｕｂｅｎ  Ｍ，Ｓａｃｋｓ  ＳＬ，ＭａｃＰｈｅｒｓｏｍ  Ｐ，Ｃａｉｓｓｉｅ  Ｇ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３４：６５７−６３，１９９６、Ｓａｃｋｓ  ＳＬ，Ａｏｋｉ  ＦＹ，Ｄｉａｚ−Ｍｉｔｏｍａ  Ｆ，Ｓｅｌｌｏｒｓ  Ｊ．Ｓｈａｆｒａｎ  ＳＤ  ＪＡＭＡ２７６：４４−９，１９９６、およびＳａｃｋｓ  ＳＬ，Ｔｙｒｒｅｌｌ  ＤＬ，Ｌａｗｅｅ  Ｄ，Ｓｃｈｌｅｃｈ  Ｗ，Ｇｉｌｌ  ＭＪ，Ａｏｋｉ  ＦＹ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１６４：６６５−７２，１９９１を参照のこと）。治癒の遅延における可能性のある効果のため、積極的ウイルス培養は、ＨＳＬにおいて、しばしば追跡されてきておらず、言い換えればＨＳＬ研究におけるこのパラメータの感度の欠如に関与しうる。したがって、ウイルス培養は、現在の研究では実施されなかった。
【０１５３】
ペンシクロビル研究において観察されたように、これらの研究で、約５日のプラセボ処置時間は、７〜１０日のＨＳＬ障害治癒の報告された通常の歴史よりも短い（Ｓｐｒｕａｎｃｅ  ＳＬ，Ｏｖｅｒａｌ  ＪＣ，Ｋｅｒｎ  Ｅ，Ｋｒｕｅｇｅｒ  ＧＧ，Ｐｌｉａｍ
Ｖ，Ｍｉｌｌｅｒ  Ｗ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２９７：６９−７５，１９９７；Ｓｐｒｕａｎｃｅ  ＳＬ．Ｓｅｍｉｎ．ｉｎ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１：２００−６，１９９２；およびＳｈａｆｒａｎ  ＳＤ，  Ｓａｃｋｓ  ＳＬ，Ａｏｋｉ  ＦＹ，Ｔｙｒｒｅｌｌ  ＤＬ，  Ｓｃｈｌｅｃｈ  ＷＦ  ３rd，Ｍｅｎｄｅｌｓｏｎ  Ｊ，Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ  Ｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１７６：７８−８３，１９９７）。これにより、ＨＳＬにてよく認識された、プラセボ効果の疑惑が持ち上がる（Ｓｐｒｕａｎｃｅ  ＳＬ，「ヘルペスウイルスの臨床管理（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｒｐｅｓ  ｖｉｒｕｓｅｓ）」、Ｓａｃｋｓ  ＳＬ，Ｓｔｒａｕｓ
ＳＥ，Ｗｈｉｔｌｅｙ  ＲＪ，Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ＰＤ，ｅｄｉｔｏｒｓ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ：ＩＯＳ  Ｐｒｅｓｓ，ｐ．３−４２，１９９５、およびＧｕｉｎａｎ  ＭＥ，  ＭａｃＣａｌｍａｎ  Ｊ，Ｋｅｒｎ  ＥＲ，Ｏｖｅｒａｌｌ  ＪＣ  Ｊｒ．，Ｓｐｒｕａｎｃｅ  ＳＬ  ＪＡＭＡ  ２４３：１０５９−６１，１９８０）。プラセボ効果はしばしば、皮膚科の製品で現れ、これは、一般的にプラセボ処置に関連した、生理学的効果からのみでなく、未処理の皮膚の生理をそれ自身が変える障害を単にカバーしていることから由来する（プラセボ効果は、Ｃｈａｐｕｔ  ｄｅ  Ｓａｉｎｔｏｎｇｅ  ＤＭ，Ｈｅｒｘｈｅｉｍｅｒ  Ａ  Ｌａｎｃｅｔ  ３４４：９９５−８，１９９４にて議論されている）。
【０１５４】
ＨＳＬ中のｎ−ドコサノール１０％クリームの効果が穏やかである可能性があるが、疾患の自己制限特性が、患者に対して、ほとんど一日（１８時間）大きく間隔を減少させる。さらに、臨床効果の明らかな程度が、以上で議論したように、ＨＳＬの処置において、十分なプラセボ効果であると見なされるまで減少しうる。治癒時間の減少は、痛みの緩和および／または熱、かゆみまたはひりひり感が付随し、また患者に重要である。障害のほとんどの重度の段階（潰瘍／軟かさぶた）の時間は有意に減少し、先に報告されなかった医学的に重要な効果である。一般用医薬品（ＯＴＣ）としてのその許可により、もっとも効果的である可能性のある、事象の段階の早期に適用可能である。
【０１５５】
ドコサノールは、細胞質膜とのウイルス融合の正常の工程を阻害すること、したがって、進入を阻害し、続いてウイルス複製を制限することによって、宿主細胞内へのウイルス侵入を阻害するように見える。ｎ−ドコサノールおよびその代謝物は、ウイルスタンパク質または核酸と直接は相互作用しない。したがって、薬物耐性ＨＳＶの出現はあまりない。抗ウイルスヌクレオシドからの異なる活性様式のために、存在することが示された場合でも、ｎ−ドコサノールに対する耐性は、他の局所または全身性抗ウイルス薬の効果を減衰はしない。さらに、固有の活性機構が、抗ウイルスヌクレオシドとの組み合わせ治療が考慮すべきものであることを示唆している。
【０１５６】
要約すると、ｎ−ドコサノール１０％クリームは、早期ＨＳＬにおける、臨床開始、プラセボコントロール、臨床試験において効果的であることが示された。この処置により、全体の事象持続期間、古典的障害へ発達する事象の持続期間、およびすべての障害症状の持続期間を減少させる。これらの研究に基づいて、ｎ−ドコサノール１０重量％クリームを、ＨＳＬの過程で、出来るだけ早く開始すべきである。
【０１５７】
モルモットモデルを使用して、２つの処方での１０％ドコサノールのｉｎ  ｖｉｖｏ効果を試験するために、研究を構築した。臨床試験により、２０００年７月にＦＤＡ承認に導かれた、口唇単純ヘルペス（ＨＳＬ）の処置における、ドコサノール１０％クリーム（「ｄｏｃ」）の効果が示唆された。ドコサノールは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにて抗ウイルス活性を示すが、動物ＨＳＶモデルにおいて、矛盾した結果が報告された。
【０１５８】
無毛およびＨａｒｔｌｅｙ（毛を刈り、Ｎａｉｒで処理した）モルモットに、電気入れ墨マーカーか、または２０ゲージニードルでひっかいて、ＨＳＶ−１（３×１０ＰＦＵ  ＭａｃｌｎｔｙｒｅまたはＫＯＳ）またはＨＳＶ−２（２×１０  ＰＦＵ  ＭＣ）を、背中に６〜８カ所接種させた。ｄｏｃまたは賦形剤（「ｖｅｈ」）の処置を、１２時間後に開始し、１日３〜４回続けた。ウイルス滴定がピークの時に、動物を安楽死させ、障害を取り除き、ウイルス滴定を、Ｖｅｒｏ細胞内での、ホモジェネートの細胞変性効果を査定することによって決定した。
【０１５９】
無毛モルモットにおいて、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２に対するｄｏｃの抗ウイルス活性が、入れ墨マーカーでの接種の後、小胞の数が減少したこと（たとえば、ＨＳＶ−２に関して、平均ｖｅｈ＝２１．４±２．４対平均ｄｏｃ＝１２．７±１．９、ｐ＜０．０１）、および両方の接種方法に関して、ウイルス滴定の減少（たとえば、ＨＳＶ−１に関して、平均ｌｏｇ  ｖｅｈ＝４．０対平均ｌｏｇ  ｄｏｃ＝３．６、ｐ＜０．００１、およびＨＳＶ−２に関して、平均ｌｏｇ  ｖｅｈ＝５．８４対平均ｌｏｇ  ｄｏｃ＝４．８４、ｐ＜０．００２）、によって示された。障害スコアまたは乱切による接種に続くサイズの減少はなかった。Ｈａｒｔｌｅｙモルモットにおいて、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２小胞数が阻害された（たとえば、ＨＳＶ−２平均ｌｏｇ  ｖｅｈ＝２６．７±８対平均ｌｏｇ  ｄｏｃ＝７．７±４．８、ｐ＜０．００２）。ウイルス滴定の阻害は、無毛動物においてより少なかったが、いくつかの実験で、統計学的に有意であった（ＨＳＶ−１平均ｌ
ｏｇ  ｖｅｈ＝６．３８対平均ｌｏｇ  ｄｏｃ＝５．７９、ｐ＜０．００１、ＨＳＶ−２に関して、平均ｌｏｇ  ｖｅｈ＝５．４７対平均ｌｏｇ  ｄｏｃ＝５．０７、ｐ＝０．０６）。処方の違いは観察されなかった。
【０１６０】
Ｄｏｃは、無毛モルモットにおいて、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２ウイルス滴定、および無毛およびＨａｒｔｌｅｙモルモット両方において、小胞数を減少させた。２つのモデルで、効果における差が、臨床効果を示唆しているにもかかわらず、動物モデルにおいて、ｄｏｃにて、以前の変化した結果を説明しうる。入れ墨ガンでの接種を含む、無毛モデルが、臨床ＨＳＶ感染のよりよいモデルであり得る。
【０１６１】
以上で議論したように、ｎ−ドコサノールは、組織培養液中で、ＨＳＶ複製を阻害する、飽和２２炭素一級アルコールである。たとえば、Ｋａｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，「１−ドコサノールの抗ウイルス活性、単純ヘルペスを含む、脂質エンベロープウイルスの阻害剤（Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  １−ｄｏｃｏｓａｎｏｌ，  ａｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｌｉｐｉｄ−ｅｎｖｅｌｏｐｅｄ  ｖｉｒｕｓｅｓ  ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｈｅｒｐｅｓ  ｓｉｍｐｌｅｘ．）」Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９９１）８８：１０８２５−９、およびＰｏｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，「ｎ−ドコサノールの抗単純ヘルペスウイルス活性は、ウイルス侵入工程の阻害を含む（Ｔｈｅ  ａｎｔｉ−ｈｅｒｐｅｓ  ｓｉｍｐｌｅｘ  ｖｉｒｕｓ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｎ−ｄｏｃｏｓａｎｏｌ  ｉｎｃｌｕｄｅｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｖｉｒａｌ  ｅｎｔｒｙ  ｐｒｏｃｅｓｓ．）」Ａｎｔｉｖｉｒ．Ｒｅｓ．４０：８５−９４（１９９８）を参照のこと。実験動物における疾患の期間を短縮することも示された。Ｍａｒｃｅｌｌｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，「ドコサノール（Ｄｏｃｏｓａｎｏｌ）」１７：８７９−８２（１９９２）。臨床試験は、口唇単純ヘルペスの処置における、ドコサノール１０％クリーム（ｄｏｃ）の効能を示唆した。Ｈａｂｂｅｍａ  ｅｔ  ａｌ．，「再発型口唇ヘルペスの処置におけるｎ−ドコサノール１０％クリーム（ｎ−Ｄｏｃｏｓａｎｏｌ  １０％  ｃｒｅａｍ  （ｄｏｃ）  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｒｐｅｓ
ｓｉｍｐｌｅｘ  ｌａｂｉａｌｉｓ．）」Ａｃｔａ  Ｄｅｒｍ．Ｖｅｎｅｒｅｏｌ．７６：４７９−８１（１９９６）。大規模二重盲検において、３７０人のドコサノール処置患者における中間値時間対治癒は、４．１日であり、３６７人のプラセボ処置患者において観察されたものよりも１８時間短かった（ｐ＝０．００８）。Ｓａｃｋｓ，ｅｔ  ａｌ．，「口唇単純ヘルペスに対する、局所ドコサノール１０％クリームの臨床効果：多施設、無作為化、プラセボコントロール試験（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｔｏｐｉｃａｌ  ｄｏｃｏｓａｎｏｌ  １０％  ｃｒｅａｍ  ｆｏｒ  ｈｅｒｐｅｓ  ｓｉｍｐｌｅｘ  ｌａｂｉａｌｉｓ：Ａ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ，  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，  ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｒｉａｌ．）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍ．４５：２２２−３０（２００１）を参照のこと。ドコサノール群はまた、１）痛みおよびすべての他の症状（かゆみ、熱および／またはひりひり感、ｐ＝０．００２）、２）古典的障害の完全治癒（ｐ＝０．０２３）、および３）古典的障害の潰瘍／軟かさぶた段階の休止（ｐ＜０．００１）までの、処置開始からの時間を減少させることを示した。ＦＤＡが、ヘルペスに対する一般用医薬品処置として、ドコサノール１０％クリームを、２０００年７月に許容した。ドコサノールは、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２、サイトメガロウイルス、水痘帯状ヘルペスウイルスおよびヒトヘルペスウイルスを含む、脂質エンベロープウイルスの広範なスペクトルを、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにて阻害する。データは、細胞取り込みおよび代謝変換の後、ドコサノールが、宿主細胞とのウイルス融合を阻害し、核局在化および続くウイルス複製を阻害することによって、ウイルス侵入を阻害することを示唆している。たとえば、Ｐｏｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，「ｎ−ドコサノールの抗単純ヘルペスウイルス活性は、薬剤の細胞内代謝変換と相関する（Ａｎｔｉ−ｈｅｒｐｅｓ  ｓｉｍｐｌｅｘ  ｖｉｒｕｓ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｎ−ｄｏｃｏｓａｎｏｌ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｃｏ
ｎｖｅｒｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄｒｕｇ．）」Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．７７：２１６７−７８（１９９６）を参照のこと。この活性機構は、抗ウイルス活性は、ＤＮＡ合成の阻害の結果である、ヘルペス感染に関する他の利用可能な処置選択肢のものとは異なる。Ｅｌｉｏｎ，「アシクロビル：発見、活性機構および選択性（Ａｃｙｃｌｏｖｉｒ：ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ，  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ）」Ｊ．Ｍｅｄ．Ｖｉｒｏｌ．１：２−６（１９９２）を参照のこと。
【０１６２】
ドコサノールおよびアシクロビルを、２つの型の処方、クリーム処方およびポリエチレングリコール−（ＰＥＧ）基礎軟膏で調製した。両方の処方の比較を、表１１ａ（ドコサノールおよびアシクロビルクリームの組成物）および表１１ｂ（ＰＥＧ中のドコサノールおよびアシクロビルの比較）にて列記している。
【０１６３】
【表１１】
2005519868.tif 000012
【０１６４】
無毛およびＨａｒｔｌｅｙハムスター（Ｃｒｌ：（ＨＡ）ＢＲ）を、チャールズリバー（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）研究所より得た。これらを使用の前に７日間隔離し、食事と水を任意に与えた。動物を個々にケージにいれ、逼迫病原体なしの条件下で飼育した。ＨＳＶ−１の２つの株（Ｋｏｓ株およびＭａｃｌｎｔｙｒｅ株）およびＨＳＶ−１のＭＳ株を使用した。ウイルスは、これらの実験での使用の前のモルモットにおいて、先に滴定した、細胞培養調製物であった。
【０１６５】
接種の前に、有毛モルモットを、電気カミソリでかり、温水でしめらせ、ついでＮａｉｒ脱毛剤クリームを、３〜４回適用して、残っている毛を除去した。ついで、無毛および有毛動物の両方の背中を温水で洗浄し、完全に乾かした。接種方法１にて、モルモットの背中を、８平方のグリッド内でマークし、それぞれの領域内で、１０ｍｍ直径の障害（傷）を、ウイルスを皮膚に適用し、２０ゲージ接種ニードルを用いて、１０光垂直および水平擦過傷で領域を傷つけることで誘導した。接種方法２においては、６平方のグリッドを
、マーキングペンで書いた。各平方に、電気入れ墨ガン（スパルディング  アンド  ロガーズ社（Ｓｐａｕｌｄｉｎｇ  ａｎｄ  Ｒｏｇｅｒｓ，  Ｉｎｃ．）、Ｖｏｏｒｈｅｅｓｖｉｌｌｅ，ＮＹ）にて、５０〜７５ｌ用量のウイルスを接種した。器具を、ダイアル設定１７にて、各接種部位にて、８０回誘発した。
【０１６６】
接種方法１（傷つけ）にて、各障害（傷）の長さおよび幅を測定し、障害を、０（正常）から４（最大）までの範囲で、日々スコアを割り当てた。これらの測定を、４日目での犠牲死の段階まで続けた（Ｈａｒｔｌｅｙモルモット）。障害内に小胞が形成されうるが、小胞間に傷はなかった。この接種方法にて、小胞を測定し、記録したが、総関与領域は測定しなかった。
【０１６７】
動物を、ウイルス滴定がピークの時点で犠牲死させた。各障害を含む皮膚を、犠牲死動物より取り除き、２％ＦＢＳ、０．１８％ＮａＨＣＯ3、および５０ｇ／ｍｌゼンタマイシンを含むＭＥＭ中の、およそ１０％ｗ／ｖ懸濁液中でホモジナイズした。連続希釈を、Ｖｅｒｏ細胞の２４時間単層を含む９６ウェルプレート内で、三重ウェルにてアッセイした。プレートを密封し、３７℃にて７日間インキュベートし、ついで認識可能なウイルス細胞毒性効果に関して、顕微鏡下で試験した。
【０１６８】
表１２に記述した実験に関して、スチューデントｔ−検定を使用して、平均障害サイズおよび平均障害ウイルス滴定を比較した。ランク付け合計解析を使用して、局所スコアを評価した。全ての他の実験に対して、因子としての処置に関して、一方向Ａｎａｌｙｓｅｓ  ｏｆ  Ｖａｒｉａｎｃｅ  （ＡＮＯＶＡ）を、各研究に関して別々に実施した。ＡＮＯＶＡが有意な場合、ついで最小平方（ＬＳ）は障害ウイルス滴定を意味し、小胞数を計算し、未修正多重比較を、処置の全ての対に関して、これらの平均における差に関して試験するために実施した。
【０１６９】
【表１２】
2005519868.tif 000013
【０１７０】
調製した処方を、以上の表１１ａおよび１１ｂで列記している。全ての試料を、実験的に使用する前に、解析的試験にかけた。ドコサノールを含むクリーム処方は、白色、無臭、非染色および非水溶性クリームである。ドコサノールがない場合、クリーム賦形剤およびクリーム賦形剤中の５％アシクロビルは、水様性、ローション様粘度を有する。ＰＥＧ賦形剤は、ドコサノールおよびアシクロビルを含む処方において白色になる、透明で、水溶性軟膏である。
【０１７１】
表１１ａおよび１１ｂにて列記した処方を、接種方法１（傷つけ）を用いて、無毛モデルにて、ＨＳＶ−１によって誘導した皮膚障害の処置における効力に関して評価した。局所処置を１２時間後に開始し、合計１０処置を、各８時間ごとに続けた。障害の大きさおよび重症度を、感染の２日目および３日目に査定した。４日目に、各障害を切除し、ウイルス含量に関してアッセイした。
【０１７２】
結果を表１２にて要約した。障害の大きさおよびスコアは、クリームまたは軟膏中のドコサノールによって、またはアシクロビル軟膏によって、阻害されなかった。障害の大きさおよび重症度のより大きな阻害が、一般的に、処置を過去４日間続けた場合に観察されることが報告されたが、この研究でのモルモットが、ウイルス含量の測定のために４日目に犠牲死されるので、障害の大きさおよび重症度における効果が観察されるとは予想されなかった。ウイルス滴定減少データにより、両方の賦形剤でのドコサノール処置が、未処理対象平均値と比較した場合に、およそ１ｌｏｇ10にて、平均ウイルス滴定／グラムを減少させたことが示唆された。この差は、統計学的に有意であった（ｐ＜０．０１）。ＰＥＧ中のドコサノールは、１．０ｌｏｇ10までウイルス滴定を減少させ、ＰＥＧ中のアシクロビルは、０．７ｌｏｇ10までウイルス滴定を減少させた。アシクロビルおよびドコサノール間の差は、統計学的に有意でなかった。
【０１７３】
表１２における結果に基づき、またＰＥＧ賦形剤が、ＰＥＧ中のドコサノールのものと一致して同様であるので、ＰＥＧ処方をさらなる研究のために選択した。方法２でウイルスを接種させた無毛モルモットにおける試験の結果を、図１５にて例示している。ウイルス滴定レベルは、賦形剤試験部位（平均ｌｏｇ１０＝４．０）と比較して、ドコサノール（平均ｌｏｇ10＝３．５）およびアシクロビル（平均ｌｏｇ10＝３．０）にて、統計学的に有意に減少した。
【０１７４】
無毛モルモットに、背部上各８カ所にて、入れ墨接種で、Ｍａｃｌｎｔｙｒｅ株ＨＳＶ−１（６０μｌ  ５×１０ＰＦＵ／ｍｌ）を接種させた。処置を接種後１２時間で開始し、３日間、各日３回繰り返した。障害皮膚を、最終処置の１２時間後、４日目に回収し、ウイルス含量に関してアッセイした。処置群は、ｄｏｃ＝ＰＥＧ中１０％ドコサノール（１０部位）、ａｃｙ＝ＰＥＧ中５％アシクロビル（１０部位）、ｖｅｈ＝ＰＥＧ賦形剤（１０部位）、およびｎｏｎｅ＝処置なし（８部位）であった。
【０１７５】
同様の観察が、ＨＳＶ−２（ＭＳ株）による無毛モルモットの続く接種にて得られた。ＨＳＶ−２ウイルス滴定レベルは、ＰＥＧ賦形剤処置部位（平均ｌｏｇ10＝５．８）と比較した場合に、ＰＥＧ中のドコサノールでの局所処置（平均ｌｏｇ10＝５．２）およびＰＥＧ中のアシクロビル（平均ｌｏｇ10＝５．０）での局所処置によって、統計学的に有意に減少した。ウイルス滴定は、局所投与の後、７５％（ドコサノール）および７８％（アシクロビル）減少した。感染後３日目および４日目での小胞／部位の数もまた査定し、図１７に示している。
【０１７６】
無毛モルモットに、背部表面上の各６カ所に、物質と方法にて記述したように、入れ墨ガンを用いて、ＨＳＶ−２のＭＳ株（６０μｌ  １×１０ＰＦＵ／ｍｌ）を接種させた。
処置を、接種後１２時間で開始して、３日間、８時間ごとに繰り返した。小胞数を３日目および４日目に計数した。障害皮膚を、４日後、最終処置後１２時間で回収し、ウイルス含量をアッセイした。すべての処置を、処置をしなかった３部位のみを除いて、９つの部位に適用した。
【０１７７】
無毛モルモットモデルにおける疾患期間は、ウイルスの接種後４〜５日である。無毛モルモットでの疾患の期間は８〜９日である。長期疾患期間により２つの利点が提供される。１）口唇ヘルペスに対して、８〜１０日間のヒトにおける疾患経過をよりよく示す、２）治療効果を観察する広範囲のウインドを提供する。Ｓｐｒｕａｎｃｅ、「再発型口−顔面単純ヘルペスウイルス感染の自然歴（Ｔｈｅ  ｎａｔｕｒａｌ  ｈｉｓｔｏｒｙ  ｏｆ
ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｏｒａｌ−ｆａｃｉａｌ  ｈｅｒｐｅｓ  ｓｉｍｐｌｅｘ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．）」Ｓｅｍｉｎ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１：２００−６（１９９２）、Ｗｈｉｔｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．「単純ヘルペス感染（Ｈｅｒｐｅｓ  ｓｉｍｐｌｅｘ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ．）」Ｌａｎｃｅｔ  ３５７：１５１３−１８（２００１）を参照のこと。モデルは、難点があるが、Ｎａｉｒ処置、続く脱毛により皮膚がひりひりし、したがって、適用した処方に対する感受性が悪化する。クリーム処方賦形剤は、結果として、Ｈａｒｔｌｅｙモルモットモデルにおいて、適切な賦形剤に対するドコサノールクリーム処置の結果を解釈することが不可能になる、重度の刺激となった。この刺激は、無毛モデルでは起こらない。
【０１７８】
入れ墨ガンでのＨＳＶ−２の接種により、９日目までの完全分解を伴う、６日までの長い間に渡り分離障害が発生する。処置研究において、動物を、ピークウイルス滴定レベルの検出のために、６日目に犠牲死させた。小胞数を、犠牲死の時点まで報告した。処置を、接種１２時間後に開始し、１日目から３日目まで、各日４回、４日目から５日目まで、各日３回繰り返し、計９回処置した。皮膚試料を、ウイルス滴定の解析のために６日目に回収した。障害あたりの平均ウイルス滴定を、各処置に関して、図１８にて示している。統計学的情報を、図の下の表で要約している。３日目から５日目に観察された小胞数を、図１９に示しており、これは、障害ウイルス滴定として、同様のパターンの結果を示している。
【０１７９】
Ｈａｒｔｌｅｙモルモットに、背部表面上の各６カ所に、材料と方法にて記述したように、入れ墨ガンを用いて、ＨＳＶ−２のＭＳ株（６０μｌ  ２．９×１０ＰＦＵ／ｍｌ）を接種させた。処置を、接種後１２時間で開始して、３日間、４回／日で繰り返した。小胞数を３、４および５日目に計数した。障害皮膚を、６日後、最終処置後１２時間で回収し、ウイルス含量をアッセイした。各処置を９つの部位に適用した。
【０１８０】
ドコサノールでの先の研究には、ウイルス滴定計測が含まれなかったが、治癒が起こるまでの小胞数の計数によって査定したように、疾患期間の減少に焦点を当てた。早期の研究によって観察されたより早い治癒時間は、抗ウイルス活性に関連しない活性機構によるものでありえた。この研究からの結果により、ドコサノール含有処方が、結果として、無毛（賦形剤または未処理部位と比較して）およびＨａｒｔｌｅｙモルモットモデル（未処理部位と比較して）両方において、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２を感染させたモルモットの皮膚で、ウイルス含量を減少させることになることが確立した。観察された阻害は、アシクロビルにて観察されたものとほぼ同等であり、２つの処置の間で、統計学的に有意な差は、一般的に観察されなかった。
【０１８１】
局所適用化合物の抗ＨＳＶ活性は、使用した局所賦形剤に非常に依存している。Ｓｉｄｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，「実験動物での、１型ヘルペスウイルス誘導皮膚障害におけるＤＭＳＯ賦形剤中のビダラビンの効果（Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｖｉｄａｒａｂｉｎｅ  ｉｎ  ＤＭＳＯ  ｃｅｈｉｃｌｅ  ｏｎ  ｔｙｐｅ  １  ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ−ｉｎｄ
ｕｃｅｄ  ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｌｅｓｉｏｎｓ  ｉｎ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｎｉｍａｌｓ．）」Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．３３：１４１−５０（１９８７）を参照のこと。他の賦形剤が、抗ウイルス活性を潜在的に増強可能であるけれども、ＰＥＧおよびクリーム賦形剤両方が、ドコサノールおよびアシクロビルの伝達に関して、相対的によく働いたことが明らかである。
【０１８２】
２つのモデルにおける異なる結果は、化学的に脱毛し、刈った皮膚において誘導された刺激の結果であり得る。刺激は、治癒率を変化しうる炎症を誘導する。ウイルス滴定レベルの減少が、無毛およびＨａｒｔｌｅｙモルモットにおけるドコサノール処置の後に観察されたが、賦形剤処理部位と比較した統計学的な有意さは、無毛モデルにおいて、より再現よく示された。障害あたりのウイルス滴定の減少もまた、効果の程度は、小胞数を評価したときよりも小さかったけれども、小胞数の減少に相関した。
【０１８３】
入れ墨ガンで接種させた、無毛モルモットモデルは、皮膚誘導ヘルペス障害の処置における、ドコサノール処方の効果の再現ある証拠を提供し、これは、Ｈａｒｔｌｅｙモルモットモデルよりもより再現される結果を提供する。この研究の結果より、ドコサノールは、これらのモデル系において、アシクロビル軟膏でのものとほとんど等しい程度まで、ＨＳＶの複製を阻害することが確立され、このことは、ヘルペスの処置におけるその効果が、その抗ウイルス活性からの結果であり得ることを示唆している。
【０１８４】
ｎ−ドコサノール１０％クリームとして処方されたｎ−ドコサノールを、単純ヘルペス感染の局所処置に関して研究した。再発型口−顔面単純ヘルペス感染の治癒時間を減少させる効果が、第ＩＩ相および第ＩＩＩ相プラセボコントロール試験にて示されてきた。陽性の結果がまた、ＨＩＶ−１陽性患者における皮膚カポシ肉腫障害に対する局所処置として、ｎ−ドコサノール１０％クリームを用いた、第ＩＩＩ相パイロット試験にて得られた。ｎ−ドコサノール局所クリームは、赤毛サルにおけるＳＩＶｍａｃ２５ｌの膣伝染を防止し、このことは、化合物が、ヒトにおけるＨＩＶの伝染を予防するために、予防的に有用であり得る、抗微生物機能をもつことを示唆している。
【０１８５】
ｎ−ドコサノールは、広範囲の脂質エンベロープウイルスに対して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにて、抗ウイルス活性を示している。感受性ヒトウイルスには、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２（アシクロビル抵抗性株および臨床単離物を含む）、Ａ型インフルエンザ、呼吸器合胞体ウイルス、サイトメガロウイルス、水痘・帯状ヘルペス  ウイルス、ヒトヘルペスウイルス６およびＨＩＶ−１が含まれる。ＩＤ50値（５０％阻害が観察される濃度）は、これらの感受性ウイルスに関して、３〜１２ｍＭの範囲であった。非エンベロープウイルスおよびエンドサイトーシスされるエンベロープウイルスは、ｎ−ドコサノールの効果に対して、明らかな抵抗性を有する。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ効果研究に関して、不溶性ｎ−ドコサノールを、この分子を、不活性、非毒性界面活性剤Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８、ポリエチレンオキシドとポリプロピレンオキシドのブロックコポリマー、または関連する分子Ｔｅｔｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８中に懸濁させて処方した。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性のために必要な、比較的高い濃度のｎ−ドコサノールは、界面活性剤安定粒子の生理学的性質の結果であり得る。しかしながら、３００ｍＭほどのｎ−ドコサノール濃度は細胞毒性ではないので、薬剤に対する治療指数は好ましい。
【０１８６】
一般的にＨＳＶで実施した研究により、ウイルス調製物が、感染性の欠損なしに、化合物と混合可能であるので、ｎ−ドコサノールは、ウイルスを直接的に不活性化しないことが示唆された。代わりに、薬物は、ウイルス複製を阻害する様式で、標的細胞を明らかに改変する。研究により、放射標識ｎ−ドコサノールが、宿主細胞に非常に組み込まれ、ホスファチジルコリンおよびホスファチジルエタノールアミンのクロマトグラフィー性質を有する、リン脂質に代謝されることが示された。さらに、ｎ−ドコサノール代謝の量を増
加させる条件が、抗ウイルス活性の量を増強し、これは、薬物のこの細胞内代謝変換が、抗ウイルス活性に必要であることを示唆している。
【０１８７】
ｎ−ドコサノールは、二次プラークアッセイにて評価されたように、ＨＳＶ−誘導プラーク形成およびウイルス粒子の産出を阻害する。また、ＥＬＩＳＡによって測定されたように、ＨＳＶコアおよびエンベロープタンパク質の産出、および細胞内ＨＳＶ−１特異的前−早期タンパク質を発現している細胞数を阻害する。これらの観察により、ｎ−ドコサノールが、ＨＳＶ感染における早期段階を干渉することが示唆された。
【０１８８】
（１）ウイルスゲノムの、感受性宿主細胞の核内への侵入において、β−ガラクトシダーゼを発現しているＨＳＶ組換え体ウイルス、（２）細胞内へのＨＳＶビリオンタンパク質の侵入における、β−ガラクトシダーゼを発現するために形質転換した宿主細胞、および（３）塩化オクタデシルローダミンＢで蛍光標識したＨＳＶ−２を用いて、ｎ−ドコサノールの抗−ＨＳＶ活性に対する活性機構を調査するために、研究を実施した。
【０１８９】
ｎ−ドコサノール（９８％純度、Ｍ．Ｍｉｃｈｅｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）を、一般的に以下のように、Ｔｅｔｒｏｎｉｃ  ９０８（ポロキサミン  ９０８、Ｎｅｗ  ２５０００、ＢＡＳＦ；Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）中に懸濁した。Ｔｅｔｒｏｎｉｃ  ９０８を、３７℃生理食塩水中、１．６ｍＭまで希釈し、ついで溶液を５０℃まで熱した。ｎ−ドコサノールを、食塩水中Ｔｅｔｒｏｎｉｃに、３００ｍＭまで加え、混合液を、６５Ｗの初期出力にて、２１分間、超音波処理し（Ｂｒａｎｓｏｎ  ４５０ソニファイア、Ｄａｎｂｕｒｙ，ＣＴ）、この懸濁液を８６℃で暖めた。得られた懸濁液は、透過電子顕微鏡によって測定されたような、ａｕ平均サイズ０．１ミクロンの、非常に細かな球形粒子からなる。
【０１９０】
ヘパリンおよびＮＰ−４０をシグマ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）より得、オクタデシルローダミンＢを、モレキュラー  プローブス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）より得た。抗ｇＤ中和モノクローナル抗体（ＩＩＩ−１７４）を産出した。プラーク減少アッセイを、典型的に、Ｖｅｒｏ細胞（Ａｆｒｉｃａｎ  Ｇｒｅｅｎサル肝臓；ＡＴＣＣ第ＣＣＬ−８１）にて実施した。ＨＥｐ−２（ヒト類表皮カルシノーマ、ＡＴＣＣ第ＣＣＬ−２３）、細胞株およびＮＣ−３７ヒトＢ細胞（ＡＴＣＣ第ＣＣＬ２１４）を、アメリカン  タイプ  カルチャー  コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）より得た。ＣＨＯ−ＩＥβ８細胞株を開発した。これは、プロマイシン（Ｐｕｒ）選別可能マーカーおよびＨＳＶ−Ｉ
ＩＣＰ４プロモーターの制御下ｌａｃＺを含むプラスミドでの、Ｃｈｉｎｅｓｅハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ−ＫＩ、ＡＴＣＣ第ＣＣＬ−６１）のトランスフェクションによって選別した。細胞株を、Ｐｕｒ中で選別し、ＨＳＶ感染の後、β−ガラクトシダーゼの発現に関して、ただし感染のない状態で選別した。
【０１９１】
ＨＳＶ−１のＭａｃｌｎｔｙｒｅ株（ＶＲ−５３９）およびＨＳＶ−２のＭＳ株（ＶＲ−５４０）を、Ａｍｅｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎより得た。ＨＳＶ−２（３３３）、野生型株を、Ｆｒｅｄ  Ｒａｐｐ博士より得た。ストック調製物を、Ｖｅｒｏ細胞内で、プラーク形成ユニット（ＰＦＵ）のレベルに関して滴定し、−８０℃にて冷却して保存した。ＨＳＶ−１（ＫＯＳ）ｇＬ８６は、ｇＬ  ＯＲＦが、ＣＭＶプロモーターの制御下、ｌａｃＺで置換される、複製不全変異体である。この変異体は、ｇＬ−発現Ｖｅｒｏ細胞中で増殖させ、完全に感染したが、非補体細胞において、ただ一回の複製しか可能ではない。
【０１９２】
培養した細胞を、Ｌ−グルカミン、ペンストレップを含み、５％ＦＣＳを含むＤＭＥＭ（ｃＤＭＥＭ）中で、３５−ｍｍウェル（２ｍｌ、３×１０５細胞／ｍｌ）に入れた。ｎ
−ドコサノールまたは相当する対照賦形剤（ｎ−ドコサノールを含まない）を、培養の開始の時点で加えた。ついですべての培養液に、１７５ｐ．ｆ．ｕ．のＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２を接種させた。
【０１９３】
培養液をさらに４２〜４４時間インキュベートし、新鮮な培地で１回洗浄し、染色および固定し（染色／固定剤は、メタノール中１．２５ｍｇ／ｍｌのカルボール−フクシン＋２．５ｍｇ／ｍｌのメチレンブルーからなる）、ついで培養顕微鏡（１０×倍率）を用いて、ＨＳＶ−誘導プラークに関してスコア化した。データは、二重の培養液の平均であり、５〜１０％以上は変化しなかった。
【０１９４】
感染２４時間前、培養細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＥＳ）を含む０．５ｍｌ  ｃＤＭＥＭ中で、２．５×１０6細胞／ウェルにて、２４ウェル（１６−ｍｍ）内に蒔いた。細胞接着の後（４〜６時間後）、ヘパリン、ｎ−ドコサノール−界面活性剤、または界面活性剤のみを、０．５ｍｌ  ＤＭＥＭ／１０％ＦＥＳ内の細胞に加えた。薬剤は、望む最終濃度の２倍で、培地内に溶解させた。感染のために、０．７ｍｌの培地を、各ウェルより除去し、２５μｌのウイルス懸濁液を、残りの０．３ｍｌに加えて、少なくとも２０ｐ．ｆ．ｕ．／細胞のウイルス用量を得た。プレートを３時間、３７℃にて振り、ついでさらに２〜３時間、３７℃  ＣＯ2インキュベーター内に入れた。
【０１９５】
感染後５〜６時間の時点で、細胞に、２％ホルムアルデヒドおよび０．２％グルタルアルデヒドを含むＰＥＳを与え、洗浄し、ついで０．０２％ＮＰ−４０、０．０１％デオキシコレートおよび２ｍＭ  ＭｇＣｌ2で浸透させた。再び洗浄した後、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−ガラクトピラノシド（Ｘ−ｇａｌ）を、青色生成物の発生のために加えた。基質を除去し、５０％グリセロールで置換した。プレートの写真を撮った。各ウェル中の色の量を定量するために、すべての細胞からグリセロールを除去し、ついで蒸留Ｈ2Ｏで３×洗浄した。ＤＭＳＯ（０．６ｍｌ）を、色素を可溶化するために加え、１００μｌの各試料ウェルを、２４ウェルプレートから、９６ウェルプレートに移した後、ＯＤ600を、９６ウェルプレートリーダーを用いて記録した。
【０１９６】
ＨＳＶエンベロープを、塩化オクタデシルローダミンＢ（Ｒ−１８）で標識した。ＮＣ−３７ヒトＢ細胞を、２．５×１０5細胞／ｍｌにて、フラスコあたり２５ｍｌでインキュベートした。細胞を、添加無しで、または１５ｍＭのｎ−ドコサノールまたは相当するＴｅｔｒｏｎｉｃ  ９０８の存在下で、３７℃にて一晩インキュベートした。細胞を、遠心によって回収し、１×１０6細胞／ｍｌまで再懸濁した。分液（試験チューブ中０．２ｍｌ）を、１００μｌ  Ｒ−１８標識ＨＳＶ−２の添加の前、２０分間４℃にて冷却した。４℃にて３時間後、本来の濃度にて、ｎ−ドコサノールまたはＴｅｔｒｏｎｉｃ  ９０８を含む３ｍｌの培地を加え、試料を、種々の時間、３７℃にてインキュベートした。細胞を４℃にて遠心し、生理食塩水にて洗浄し、遠心し、食塩水中１０％ホルマリン（３ｍｌ）中に再懸濁させた。細胞を生理食塩水にて洗浄し、１０％ＦＣＳを含むＰＢＳ中に再懸濁させた。蛍光強度を、蛍光活性化細胞ソーターを用いることによって測定した（ＦＡＣＳｃａｎ、ベクトン−デッキンソン（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ））。
【０１９７】
薬物の活性形態は、およそ３時間の半減期で、細胞膜内で有限な寿命を有する。抗ウイルス活性は、ＨＳＶの添加の前にｎ−ドコサノールとともにインキュベートした標的細胞内で増加する。これは、図２０ａにて例示しており、ＨＳＶ−誘導プラークの阻害における、９ｍＭのｎ−ドコサノールとのＶｅｒｏ細胞のインキュベーション時間の効果を示している。この実験において、９ｍＭのｎ−ドコサノールは、ウイルス添加と同時に加えた場合、または３時間前、２８％、Ｖｅｒｏ細胞におけるプラーク形成を阻害し、これは、阻害の６時間前に、薬剤で細胞を処理した場合に増加し、もっともよい阻害は、ＨＳＶ−１添加の２４時間前に処理した細胞で見られた。中間の時間間隔は調べなかった。
【０１９８】
Ｖｅｒｏ細胞が、ｎ−ドコサノールとのインキュベーションの最適時間の後に、ＨＳＶ感染に対する抵抗性を保つ長さを確立させるために、Ｖｅｒｏ細胞を、２１〜２７時間、９ｍＭのｎ−ドコサノールとともにインキュベートした。ついで、取入れられていない薬剤を含む培地を除去し、新鮮な培地で置換した。薬剤は置換しなかった。すぐに、または３７℃で、１、３または６時間後に、ＨＳＶ−１を加えた。ＨＳＶ−１の添加後２時間、過剰なウイルスを除去し、プラーク還元アッセイを、上記のように続けた。図２０ｂで示したように、観察された抗ウイルス活性（％阻害プラーク形成）が、薬物除去とウイルスの添加の間の時間が増加するので、徐々に減少した。薬物除去とＨＳＶ−１添加の間の３時間のうちに、５０％の阻害活性が失われ、６時間間隔では、ＨＳＶ−１プラーク形成の阻害は観察されなかった。
【０１９９】
ＨＳＶ−１の特定の細胞表面レセプターへの接着は、ｎ−ドコサノール処置細胞内で、影響を受けない。先の研究により、ＨＳＶ−１の、特定の細胞表面レセプターへの接着が、ｎ−ドコサノール処置細胞で影響を受けないことが確認された。１５ｍＭのｎ−ドコサノールとともにインキュベートしたＶｅｒｏ細胞は、２ｐ．ｆ．ｕ．／細胞にて加えた、［３Ｈ］ＨＳＶ−１の正常レベルに結合した。ヘパリンは、この相互作用を９６％阻害した。結合アッセイの特異性を、［3Ｈ］ＨＳＶ結合を阻害しなかった、正常マウス血清と比較して、９６％まで結合を減少させたマウスＨＳＶ−１免疫血清を用いて確認した。
【０２００】
β−ｇａｌの産出が、ＨＳＶ−１（ＫＯＳ）ｇＬ８６が感染した、ｎ−ドコサノール処置ＨＥｐ−２細胞中で阻害される。ＨＳＶの標的細胞内への侵入における、ｎ−ドコサノール処置の効果を調査するために、ウイルス構築物ＨＳＶ−１（ＫＯＳ）ｇＬ８６を使用した。ｌａｃＺ発現が、ＣＭＶプロモーターの制御下である、その複製不全変異体において、β−ガラクトシダーゼが、感受性宿主細胞核へのウイルスゲノムの侵入後に発現する。Ｘ−ｇａｌの添加は結果として、感染した細胞の数に対する青色比の発生となる。シグナルの強度は、ウイルス結合を阻害するヘパリン（図２１を参照のこと）、またはｇＤへのモノクローナル抗体を中和することを含む侵入を阻止する薬剤、侵入に必要なＨＳＶ−特定タンパク質によって阻害される。このシグナルは、アシクロビルまたはＤＮＡ断片複製を阻害する他の薬剤によっては阻害されない。
【０２０１】
ＨＳＶ−１（ＫＯＳ）ｇＬ８６の侵入における、０．９〜９．９ｍＭ（０．３３３．３ｍｇ／ｍｌ）の範囲の用量での、ＨＥｐ−２細胞のｎ−ドコサノール処置の効果を試験した。ＨＥｐ−２細胞を、変異体ウイルスを添加する前に、Ｔｅｔｒｏｎｉｃ９０８中に懸濁させたｎ−ドコサノールの示した濃度とともに、２４時間インキュベートした。感染後５〜６時間の時点で、細胞を固定し、浸透させ、Ｘ−ｇａｌを加えた。ｎ−ドコサノール処置は、結果として、４ｍＭほど低いｎ−ドコサノール濃度にて、より少ない青色細胞の目に見える産出となった。ほとんど色の発生が、それぞれ８および１０ｍＭのｎ−ドコサノールで処理した細胞では見られなかった。ウイルス感染の阻害を定量化するために、ＨＥｐ−２細胞内の基質を、ＤＭＳＯの添加によって可溶化し、ＯＤ600を図２１に示したように記録した。ｎ−ドコサノールに関するＩＤ50は、およそ７ｍＭであり、Ｖｅｒｏ中、それぞれ、４および９ｍＭ、またはＨＳＶ産物およびプラーク形成の阻害に対する、ＩＤ50値とほぼ等しい。ｎ−ドコサノールを含まない、賦形剤、Ｔｅｔｒｏｎｉｃ  ９０８は、ウイルス侵入を阻害しなかった。事実、等しい量の賦形剤での細胞の処理は、４０％ほど、青色発生を増強した。ヘパリンを、１および１０μｇ／ｍｌの間の濃度で試験し、阻害は、６μｇ／ｍｌにて完全になるように見えた。これらの結果により、ＨＳＶゲノムが、ｎ−ドコサノール処置細胞内の核へ、効果的に侵入しないことが確立された。ｎ−ドコサノールが、ウイルス接着を阻害できないことと併せて、この実験により、ウイルス侵入の段階が、ｎ−ドコサノール処置によって阻害されること、およびウイルス接触に続くが、ウイルスゲノムの侵入の前に、この事象が起こることが示唆された。
【０２０２】
ｎ−ドコサノールは、ＣＨＯ−ＩＥβ８細胞のＨＳＶ−２（３３３）感染を阻害する。ｎ−ドコサノール処置細胞内でのウイルス侵入の阻害の点をさらにせばめるために、ＣＨＯ細胞にＰｕｒ選択マーカーおよびＨＳＶ−１  ＩＣＰ４プロモーターの制御下でｌａｃＺを含むプラスミドのトランスフェクションによって選別したＣＨＯ−ＩＥβ８細胞内への、ＨＳＶ−２の侵入における薬物の効果を調査した。β−ｇａｌ発現は、細胞内へのウイルス侵入に際して即時におこり、核へのビリオン伝達に依存しない事象である、細胞内へのＨＳＶビリオンタンパク質の進入に際して誘導される。色の発生は、感染した細胞の数に比例し、先のアッセイでのように、ウイルス接着を阻害するヘパリンによって、および（ｇＤへの抗体のような）進入を阻害する薬剤によって、しかし、アシクロビルおよび他のＤＮＡ断片複製阻害剤によってではなく、効果的に阻害される。
【０２０３】
図２２で例示したように、ｎ−ドコサノールは、このアッセイにおいて、β−ガラクトシダーゼ発現を阻害する。賦形剤のみでのＣＨＯ−ＩＥβ８細胞の処置は、結果として、ＯＤ600のわずかな増加となり（〜１０％）、細胞のｎ−ドコサノールの処置は、結果として、感染した細胞を示している発色の、濃度依存的減少となる。この実験において、３０ｍＭのｎ−ドコサノールは、未処理の細胞と比較して４０％、Ｔｅｔｒｏｎｉｃ  ９０８処置細胞と比較して５５％、色の産出を阻害した。無処理細胞と比較において、観察された最大阻害はおよそ７５％であった。これは、結合アッセイにおける阻害の欠失と併せて、ウイルス接着の後、ただしビリオンタンパク質の放出と、ＶＰ１６トランスアクティベーター活性の前の事象間に、阻害の時点を狭める（進入直後事象は、核へのビリオン伝達に依存しない）。
【０２０４】
ｎ−ドコサノール処置ＮＣ−３７ヒトＢ細胞は、塩化オクタデシルローダミンＢ標識ＨＳＶ−２との融合の減少を示す。脂質エンベロープ融合依存ウイルスに対するｎ−ドコサノールの阻害効果の選択性、および殺ウィルス効果の欠損のために、本発明者らは、ｎ−ドコサノールが、標的細胞とのウイルス粒子の効果的な融合を予防するために、標的細胞膜を変化させることによって、ウイルス侵入を阻害する可能性を考慮した。ｎ−ドコサノールの、細胞膜とのＨＳＶ融合における効果を調査するために、本発明者らは、蛍光デクエンチングアッセイを構築した。元のＨＳＶ−２ビリオンの膜を、塩化オクタデシルローダミン（Ｒ−１８）で標識化し、ヒトＢ細胞に加えた。このモデルにおいて、細胞膜へのウイルス融合が起こる場合に、緊密にパックされたローダミン分子が、宿主細胞のより大きな膜内に拡散する。これは、蛍光自己消滅を軽減し、シグナル強度の増加を引き起こす。
【０２０５】
ＮＣ−３７ヒトＢ細胞を、Ｒ−１８標識化ＨＳＶ−２の添加の２４時間前に、１５ｍＭのｎ−ドコサノールで処理した。図２３に示すように、このｎ−ドコサノールの濃度が、処理をしなかった細胞と比べて、およそ５０％まで、ウイルス／細胞融合とともに起こる蛍光強度の相対的増加を阻害した。ＮＣ−３７細胞のＴｅｔｒｏｎｉｃ対照懸濁液での処置は阻害せず、代わりに、蛍光強度の認識可能な増加を引き起こし、以上で議論したβ−ｇａｌ発現系での観察を連想させる（図２１および２２）。Ｔｅｔｒｏｎｉｃ対照のみで観察された効果と比較して、ｎ−ドコサノールは、７６％ほどまで、蛍光応答を阻害した。ｎ−ドコサノールは、融合工程の間のみ加えた場合には阻害せず、細胞との化合物の前インキュベーション期間が必須であった。このことは、抗ウイルス工程における代謝変換に関する要求と一致する。この観察はさらに、ｎ−ドコサノールの存在が、それ自身クエンチはせず、蛍光の阻害をしないことを確定した。１：４０希釈での抗−ｇＤ抗体（浸潤の特異的阻害剤）は、蛍光シグナルにおける増加を完全に阻害し（示していない）、このことは、実験プロトコールが、ウイルス浸潤の適切な測定を確認している。これらの結果により、ＨＳＶウイルス粒子の、宿主膜への融合が、ｎ−ドコサノール処置細胞で有意に阻害されることが示唆される。
【０２０６】
最も入手可能である治療用化合物は、ウイルスおよび感染標的細胞によって共有される複製工程を阻害し、したがって、毒性、変異原性および／または催奇形性であり、実質的に、薬物耐性ウイルス変異体亜種を誘導しうる。したがって、新規抗ウイルス化合物、とりわけ、新規の活性機構を有するものの同定が重要である。２２炭素、飽和、一級アルコール、ｎ−ドコサノールは、毒性、変異原性または催奇形性特性を持たない。従来の抗ウイルス薬剤の活性様式と比較して、ｎ−ドコサノールの抗ＨＳＶ活性に対する優れた機構は、細胞膜およびＨＳＶエンベロープ間の融合の阻害であり、結果として、進入および続くウイルス複製の阻害であるように見える。活性機構は、単独または細胞内への進入の主要な方法として、融合を使用し、単一ウイルスタンパク質を標的化する他の抗ウイルス薬剤に対するその活性様式と対照をなす、全ての試験した脂質エンベロープウイルスに対する、ｎ−ドコサノールの効果を説明する。この活性機構に基づくと、ｎ−ドコサノールの抗ウイルス効果に対して抵抗性のＨＳＶ株の出現はあり得ない。
【０２０７】
先の結果により、ｎ−ドコサノールが、脂質エンベロープウイルスに対して特異的であり得ること、および細胞膜との融合によって、まず細胞に進入する脂質エンベロープウイルスが、ｎ−ドコサノールによって効果的に阻害されること、が示唆されてきた。一方、この薬物は一般的に、非エンベロープであるか、エンベロープおよびエンドサイトーシスであるかいずれかのウイルスに対する検出可能な効果を持たない。この一般的なパターンの一つの例外は、インフルエンザＡであり、これは、レセプター仲介エンドサイトーシスを介して細胞に進入することが報告されてきたが、しかしｎ−ドコサノールによって効果的に阻害されるエンベロープウイルスである。
【０２０８】
ｎ−ドコサノールによる抗ウイルス阻害に必要なｉｎ  ｖｉｔｒｏ用量（ｍＭ）は、アシクロビルのような既存の治療用化合物での結果と比較して高い。これは、ｎ−ドコサノール界面活性剤安定化懸濁液の性質からの結果であり得る。ｎ−ドコサノールの不溶性のために、粒子は、熱力学的に安定であり、培養細胞への伝達を非効率的とする。放射標識化ｎ−ドコサノールを用いて決定したように、培養液に加えたｎ−ドコサノールの１０００分子のうち１以下が、細胞に進入する。
【０２０９】
ウイルス複製の最適な阻害が、ＨＳＶをｎ−ドコサノールの添加６〜２４時間で加えた、Ｖｅｒｏ細胞培養液で観察された。この観察は、抗ウイルス活性に対してあきらかに必要な事象である、時間依存取り込みおよび宿主細胞のｎ−ドコサノールの代謝によって説明されうる。ｉｎ  ｖｉｖｏでのこの代謝変換の速度は、組織培養系の人工環境において観察されたものより早い可能性があり、特に界面活性剤安定化粒子の温度安定性が考慮される。本明細書で報告した、ｎ−ドコサノール処置細胞におけるＨＳＶに対する抵抗性の段階的な欠失がまた、必要とされる脂質代謝のみではなく、一定に吸収され、置換される細胞膜それ自身の、急速な回転によると予想される。しかしながら、この急速な回転でも、ウイルス侵入が、取入れられていない薬剤の除去の後数時間、減少した。
【０２１０】
さらに、局所適用クリームが、ｎ−ドコサノールの一定貯蔵として働き、皮膚表面に残る。入手可能なデータにより、ｎ−ドコサノールが、ウイルス複製における早期事象を阻害するが、細胞に接着するＨＳＶの量は阻害しない、宿主細胞における効果を示すことが示唆された。したがって、ｎ−ドコサノールの、ウイルス侵入における革新的に早期の事象における効果が試験された。
【０２１１】
ＨＳＶ−１（ＫＯＳ）ｇＬ８６のＨＥｐ−２細胞への浸潤は、Ｖｅｒｏ細胞において、ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２産出（ＩＤ50＝４ｍＭ）またはプラーク形成（ＩＤ50＝９ｍＭ）の阻害とほぼ等しく、濃度依存で（ＩＤ50＝７ｍＭ）ｎ−ドコサノールによって阻害され（図２１）、ｎ−ドコサノールが、ウイルス複製周期の早期事象を阻害することが確
かめられた。β−ガラクトシダーゼ発現におけるｎ−ドコサノールの阻害活性は、賦形剤のみのあきらかな刺激活性を中和するはずであるが、機構は明らかでない。ＨＳＶ−２進入のｎ−ドコサノール阻害がまた、ビリオン関連調節タンパク質の処置細胞内への放出の減少によって確認された（図２２）。ｎ−ドコサノール処置は、ＨＳＶ前初期プロモーター（ＩＣＰ４）の制御か、安定にトランスフェクトされたｌａｃＺ遺伝子を含む標的細胞におけるβ−ガラクトシダーゼの発現において、８０％もの減少を引き起こした。ｎ−ドコサノール処置細胞内でのウイルス接着の阻害の欠失と併せ、この観察により、ｎ−ドコサノールが、ウイルス接着の後、ただし外皮タンパク質の放出前に起こる事象を阻害することが確認された。これは、前早期進入事象であるが、核内のビリオン局在化に依存しない。ウイルス複製におけるさらなる早期事象はまた、ｎ−ドコサノールによって阻害されうる。
【０２１２】
ｎ−ドコサノールは、ウイルス／細胞融合の生物物理学的工程を阻害すると思われる。ＨＳＶエンベロープ内へ挿入される、塩化オクタデシルローダミンＢの融合依存デクエンチングは、ｎ−ドコサノール処置細胞にて有意に阻害された（図２３）。蛍光阻害の濃度依存性は、他のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにおいて、ｎ−ドコサノールによるＨＳＶ−１複製の阻害に関して観察されたものと比例した。ｎ−ドコサノールまたはその代謝物の取り込み、および正常の膜組成物の結果としての摂動が、接着ビリオンの融合を阻害する方法で、細胞質膜の生物物理学的特性を変化させうる。この化合物は、進入の天然に存在する細胞メディエーターの機能を阻害しうる。
【０２１３】
細胞質膜とＨＳＶエンベロープ間の融合の阻害、および続く複製事象の欠失は、ｎ−ドコサノールの抗ＨＳＶ活性に対する優れた機構であり得る。この活性機構は、一般的に、ｎ−ドコサノールの阻害効果に感受性のウイルスのスペクトルに対して適用可能であり得る。
【０２１４】
以上の記述は、本発明のいくつかの方法および材料を開示している。本発明は、この方法および材料の改変を許容し、また、制作方法および器具の変化も許容する。そのような改変は、本開示および本明細書にて開示された実施の考慮により、当業者に明らかになるであろう。その結果として、本発明は、本明細書にて開示された特定の実施形態に制限される意図はなく、全ての改変および変化が、付随する請求項にて組み込まれたような、本発明の意図および精神の範囲内である。本明細書で引用された全ての特許、明細書および他の参照文献は、その全てが参考文献として組み込まれている。
【図面の簡単な説明】
【０２１５】
【図１】単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ−１）に関連する実験に対するものであり、無毛モルモットにおける、ＨＳＶ−１誘導皮膚障害に対する、処方Ｉ（ｎ−ドコサノール、１０．０重量％；ステアリン酸スクロース、１１．０重量％；ヤシ脂肪酸スクロース、５．０重量％；ミネラルオイル、８．０重量％；プロピレングリコール、５．０重量％；２−エチル−１，３−ヘキサンジオール、２．７重量％；および精製水、５８．３重量％）と、処方ＩＩ（５重量％のステアリン酸スクロースを、ポリオキシプロピレン−１５−ステアリルと同等量のジステアリン酸スクロースおよびエチルヘキサンジオールに代えた以外は処方１と同じ）およびＺＯＶＩＲＡＸ（アシクロビル、Ｂｕｒｒｏｕｇｈｓ  Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  Ｃｏ．，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ、ＮＣ；ウイルスＤＮＡポリメラーゼの活性化を阻害するようなＨＳＶ感染の治療）の３つの異なる調製物での比較活性を表している。
【図２】単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ−１）に関連する実験に対するものであり、処方Ｉ、処方ＩＩ、および処方ＩＡ（ｎ−ドコサノール、１０．０重量％；ステアリン酸スクロース、１１．０重量％；ヤシ脂肪酸スクロース、５．０重量％；ミネラルオイル、８．０重量％；プロピレングリコール、５．０重量％；ベンジルアルコール、２．７重量％；および精製水、５８．３重量％）の比較活性を表す。
【図３Ａ】単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ−１）に関連する実験に対するものであり、処方Ｉと処方ＩＩＩ（ｎ−ドコサノール、１０．０重量％；ステアリン酸スクロース、５．０重量％；ミネラルオイル、８．０重量％；プロピレングリコール、５．０重量％；ベンジルアルコール、２．７重量％；および精製水、５８．３重量％）の比較活性を表している。
【図３Ｂ】単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ−１）に関連する実験に対するものであり、相対的界面活性剤濃度について処方Ｉを改変した特定の処方の活性について比較をしたものを図示している。界面活性剤濃度の改変は、薬物活性の範囲に相当の悪影響を与えることが分かっている。
【図４】単純ヘルペスウイルスＩＩ型（ＨＳＶ−２）に関連する実験に対するものであり、無毛モルモットにおけるＨＳＶ−２誘導皮膚障害の阻害に対する、処方ＩＩＩの投与量と反応の関係を表すデータを図示している。
【図５】単純ヘルペスウイルスＩＩ型（ＨＳＶ−２）に関連する実験に対するものであり、スクロールエステル界面活性剤系に基づいた、クリーム含有ｎ−ドコサノール（処方ＩＩＩ）もまた、無毛モルモットにおけるＨＳＶ−２誘導皮膚障害を阻害することを図示している。
【図６Ａ】小胞ができる前に使用した場合に、界面活性剤Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８を用いて懸濁液として処方したｎ−ドコサノールがまた、ＨＳＶ−１に誘導される小胞形成が阻害されることを実証するデータを図示している。この懸濁液処方は、ベンジルアルコールを含む、ｎ−ドコサノール含有クリームの賦形剤を含まない。
【図６Ｂ】小胞ができた後に使用した場合に、非イオン性界面活性剤Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８中の懸濁液として処方したｎ−ドコサノールがまたＨＳＶ−１に誘導される小胞形成が阻害されることを実証するデータを図示している。この懸濁液処方は、ベンジルアルコールを含む、ｎ−ドコサノール含有クリームの賦形剤を含まない。
【図７】単純ヘルペスウイルスＩＩ型（ＨＳＶ−２）に関連する実験に対するものであり、ｎ−ドコサノールの薬理学を説明するデータを表している。ｎ−ドコサノールがアシクロビル耐性ＨＳＶ−２を阻害することを示すデータを表している。Ｖｅｒｏ細胞を３５ｍｍウェル中で、培地のみ、または指示濃度のアシクロビル、ｎ−ドコサノール−Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８懸濁液、または対照懸濁液（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８のみ）の存在下で培養した（６分、ウェルごと１０5細胞）。この培養物に２４時間後に、１５０ＰＦＵの野生型ＨＳＶ−２または、野性型ＨＳＶ−２から実験室で単離したアシクロビル抵抗性のどちらかを接種させ、４４時間後にプラーク精製および２０μｇ／ｍｌのアシクロビル中に通し、プレートをインキュベートし、固定、染色してプラークの数を計測した。表示したデータは、２連の培養物から計測されたプラークを示す。アシクロビルまたはｎ−ドコサノールで処理した培養物において観察されたものを、非処理の対照培養物のものと比較した阻害率を丸かっこで示す。
【図８】単純ヘルペスウイルスＩＩ型（ＨＳＶ−２）に関連する実験に対するものであり、ｎ−ドコサノールの薬理学を説明するデータを表している。モルモットにおける皮膚ＨＳＶに対するｎ−ドコサノールの局所的エマルジョン処方の用量反応を示すデータである。無毛モルモットの背中を洗浄して、入れ墨器具を用いて皮膚に刺すことにより、精製したＨＳＶ−２を接種した。ウイルスを接種して２時間後、接種部位を１００μｌのクリーム含有ｎ−ドコサノールまたは対照賦形剤で処理するか、または処理しなかった。その部位について、ウイルスの接種の２４、３０、４８、５２、および５６時間後に同様の処理をした。指示時間で、部位ごとの小胞の数を測定した。データは、測定ごと２連の部位から導いた小胞数の平均値および標準エラーとして表している。丸かっこ内の数字は、非処理部位と比較した、処理部位における小胞数の阻害率を示す。
【図９】単純ヘルペスウイルスＩＩ型（ＨＳＶ−２）に関連する実験に対するものであり、ｎ−ドコサノールの薬理学を説明するデータを表している。ＨＳＶ−２がｎ−ドコサノール処理したＶｅｒｏ細胞の表面に長時間残ることを示すデータである。Ｖｅｒｏ細胞を図７に記載のように培養し、一晩インキュベートした。この培養物を次に４℃まで冷却し、１００ＰＦＵのＨＳＶ−２を接種させて４℃にて３時間インキュベートした。０時間において培養物を培地で洗浄し、新鮮な培地（指示阻害剤を含む）に接種し、３７℃にてインキュベートした。それぞれの指示時間において、培養物をクエン酸塩緩衝液（ｐＨ２．５）で洗浄し、新鮮な培地（阻害剤を含まない）に接種した。全部で４４時間インキュベーションした後、培養物を染色してＨＳＶ−２誘導プラークを計測した。データは、群ごと３連の培養物から導いた、幾何学的平均値および標準エラーで表している。
【図１０】ｎ−ドコサノールの薬理学を説明するデータを表している。ホスファチジルコリンおよびホスファチジルエタノールアミンの特性を示すｎ−［14Ｃ］ドコサノールの放射性代謝物のデータを示す。シリカ脂質画分のメタノール溶出物の一部（０．５ｍｌ）を窒素大気下で蒸留し、２０μｌのクロロホルム：メタノール（３：２；ｖ：ｖ）中に再懸濁させてシリカ薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）シート上につけた。クロロホルム：メタノール：酢酸：水（６０：５０：１：４；ｖ：ｖ：ｖ：ｖ）で展開後、ヨウ素蒸気で標準部位を染色し、プラスチックの後ろ側のシートを５ｍｍの片に切った後、閃光分光分析により画分ごとのｃｐｍを測定した。
【図１１】ｎ−ドコサノールの薬理学を説明するデータを表している。ｎ−［14Ｃ］−ドコサノールがＭＤＢＫ細胞によってよりも、Ｖｅｒｏ細胞によって多く代謝されることを示すデータである。ＶｅｒｏまたはＭＤＢＫ細胞は記載のように平板培養した。ｎ−［14Ｃ］−ドコサノールを６ｍＭ（０．２４ｍＭ  Ｔｅｔｒｏｎｉｃ９０８）になるように加え、培養物を３７℃／ＣＯ2にて７２時間インキュベートした。細胞を抽出して、ヘキサン：ジエチルエーテル：酢酸（２０：３０；１；ｖ：ｖ：ｖ）を展開液として用いてＴＬＣにより分析した。この溶媒系では、極性リン脂質はもとのままにとどまる。ｎ−［14Ｃ］−ドコサノールの移動位置を示す。２連の平板培養地を、同一の放射性標識を含まない懸濁液で処理し、血球計算板を用いて、トリパンブルーを除いて細胞を計測した。
【図１２】ｎ−ドコサノールの薬理学を説明するデータを表している。ｎ−ドコサノールが、Ｆｒｉｅｎｄウイルス誘導白血病およびウイルス血症をｉｎ  ｖｉｖｏで阻害することを示すデータである。成体のＢＡＬＢ／ｃマウスに、７５の脾臓病巣形成ＦＶユニットを静脈注射により注入した。処理群に対し、ウイルスの植菌と同日および続く３日間に毎日一回、指示用量のｎ−ドコサノールまたはＰｌｕｒｏｎｉｃ賦形剤を単独で静脈注射により注入した。１０日後に、それぞれの群の実験動物の半数について、脾臓中の白血病巣を検査した（パネルＡ）。残りのマウスをさらに１０日間維持管理し、ウイルス血症について測定するために出血させた（パネルＢ）。Ｘ−Ｃプラーク検定によりウイルス血症を測定した。簡単に言えば、初期の線維芽細胞培養物は、１４日齢のＢＡＬＢ／ｃ胚をトリプシンにより消化し、１０％のウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ中で培養することにより得られる。７２時間後、細胞を１６ｍｍの皿（１０5／ウェル）中に移し、５μｇ／ｍｌのポリブレンで前処理し、次にＦｒｉｅｎｄウイルス株の７５Ｘ−Ｃプラーク形成ユニットまたは試験血漿の希釈物を感染させた。７日間インキュベートした後、培養物に放射線を照射し、Ｘ−Ｃ細胞で覆った（３×１０5／ウェル）。３日後に培養物を洗浄し、染色して、多核化巨大細胞のプラークを計測した。表示したデータは、群ごと３匹から得た、脾臓病巣またはＸ−Ｃプラーク形成ユニットの幾何学的な平均値および標準エラーである。
【図１３】ｎ−ドコサノールの薬理学を説明するデータを表している。ｎ−ドコサノールにより、ＰＨＡ／ＩＬ−２活性化ヒト末梢血単核細胞の培養物中のＨＩＶ−１の複製がｉｎ  ｖｉｔｒｏで阻害されることを示すデータである。ヒト末梢血単核細胞を、５ユニット／ｍｌのＩＬ−２を含む１μｇ／ｍｌのＰＨＡを単独で、またはさらに１００μｇ／ｍｌのＰＦＡも、ｎ−ドコサノール／Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８の指示用量で、または高用量のｎ−ドコサノール／Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８に含まれるＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８対照賦形剤の量を含む培地で培養した。一晩インキュベートした後、培養物を１ビリオン／細胞の多重度でＨＩＶ−１を植菌した。３７℃にて２４時間インキュベートした後、培養物を洗浄し、ＰＨＡおよびＩＬ−２を含むが阻害剤を含まない新鮮な培地でインキュベートした。４日後に、ＨＩＶ−１に対するｐ２４特異的ＥＬＩＳＡによりＨＩＶ−１の複製を測定した。
【図１４】ｎ−ドコサノール１０重量％クリームを用いた急性ＨＳＬの治療における、回復の経過についてのＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ分布を図示している。治療の開始から全ての局所的な兆候および症状が臨床的に観察されるまで、回復の経過を測定した。
【図１５】無毛モルモットにおける、ＰＥＧ処方を用いたＨＳＶ−１阻害をグラフ表示したものである。
【図１６】無毛モルモットにおける、ＰＥＧ処方を用いたＨＳＶ−２阻害をグラフ表示したものである。
【図１７】無毛モルモットにおける、ＨＳＶ−２小胞の数をグラフ表示したものである。
【図１８】Ｈａｒｔｌｅｙモルモットにおける、ＨＳＶ−２阻害をグラフ表示したものである。
【図１９】Ｈａｒｔｌｅｙモルモットにおける、ＨＳＶ−２小胞の数をグラフ表示したものである。
【図２０】細胞をウイルス付加の前にｎ−ドコサノールでインキュベートした際の、ＨＳＶ−１の増加の阻害を示し、この阻害効果の半減期はおよそ３時間である。（Ａ）Ｖｅｒｏ細胞を平板培養して、９ｍＭのｎ−ドコサノール、対応する対照培地で、または何も付加せず、ＨＳＶ−１の付加に先立って０、３、６、または２４時間インキュベートした。ウイルスプラーク検定を続け、ｐ．ｆ．ｕ．の数を測定した。データは非処理のウェルと比較した阻害率として表す。（Ｂ）Ｖｅｒｏ細胞を平板培養し、ｎ−ドコサノールまたは対応する対照培地を加えて、細胞を１０％の加湿ＣＯ2中で３７℃にてインキュベートした。２１、２４、２５、２６、および２７時間後（ＨＳＶ−１付加の６、３、２、１、および０時間前）に、薬剤を含有している培地を除去し、細胞を培地で洗浄した。全部で２７時間後、ＨＳＶ−１を全てのウェルに加えた。２時間後にウイルス含有賦形剤を除去し、ウイルスまたは薬剤を含まない新鮮な培地に取り替えた。培養物を（Ａ）と同様の手法で、インキュベートしてＨＳＶ誘導プラークの数を測定した。
【図２１】ｎ−ドコサノール処理細胞中でインキュベートした際の、ＨＳＶ−１（ＫＯＳ）ｇＬ８６のＨＥｐ−２への進入を示す。培養物のウェルへのＨＥｐ２細胞の接着の後、ｎ−ドコサノール−賦形剤、賦形剤のみを添加、または薬剤を加えなかった（対照）。感染させてから５〜６時間後、細胞にＸ−ｇａｌを加え、６００ｎｍでの吸光度を測定した。
【図２２】Ｔｅｔｒｏｎｉｃ  ９８で懸濁させたｎ−ドコサノールが、ＨＳＶ−２（３３３）のＣＨＯ−ＩＥβ８細胞への侵入を阻害することをグラフで明示したものである。ＣＨＯ−ＩＥβ８細胞を２４ウェルのプレート中にまいた。Ｘ−ｇａｌを加え、６００ｎｍでの吸光度を測定した。
【図２３】ｎ−ドコサノール処理したＮＣ−３７ヒトＢ細胞についての実験結果をグラフで表示したものであり、その細胞は、塩化オクタデシルローダミンＢで標識したＨＳＶ−２により、融合の減少をみせている。ＮＣ−３７ヒトＢ細胞を、１５ｍＭのｎ−ドコサノール、対応する濃度のＴｅｔｒｏｎｉｃ  ９０８（０．１ｍＭ）の存在下で、または何も加えずにインキュベートした。細胞を集めて、化合物がそれぞれ元の濃度で存在するところでＲ−１８標識したＨＳＶ−２を等分に加えた。続いて３７℃にて指示時間でインキュベートし、細胞を固定してＦＡＣスキャンにより蛍光強度を測定した。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【国際調査報告】
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