(57)【要約】  本発明は、インビトロ、インビボで有効で、目的とする免疫学的および薬理学的活性を示す、植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物を含有し、場合によって、植物Cuminum cyminumの果実からの抽出物を含有する新規の薬草組成物;その製法;および前記の新規の薬草組成物を投与することによる、乾癬および関連する免疫学的および生物学的疾患を処置する方法を提供する。植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物および分画により示されるインビトロ、インビボで有用で、目的とする免疫学的および薬理学的活性には、抗乾癬活性に関与することが知られている免疫抑制、リンパ球増殖の阻害、IL-2阻害などのサイトカイン変調、IFNγ阻害、IL-10誘発、ケラチノサイト増殖の阻害、角質溶解活性、内皮細胞増殖の阻害、ICAM-1などの細胞接着分子発現の阻害、NESTの阻害、p60srcチロシンキナーゼなどの酵素の阻害が含まれる。新規の薬草組成物は、乾癬斑、滴状乾癬、膿疱性乾癬および爪の乾癬を含む乾癬;皮膚炎および強皮症;湿疹;乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、クローン病、多発性硬化症、過敏性腸疾患、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデスおよびシェーグレン症候群などの炎症性疾患および他の自己免疫疾患;ぜん息および慢性閉塞性肺疾患などのアレルギーなどの様々な疾患を処置する際に有用で、安全で、よく許容され、非毒性で、有害作用または副作用が最小限で可逆的であり、さらに重要なことには、治療計画の完了後に、疾患の再発または回帰を最小限に抑制する。さらに本発明は、植物Cuminum cyminumの果実の水性、エタノール性または水性-エタノール性抽出物にホスホジエステラーゼ(III、IVおよびV)阻害および5-リポキシゲナーゼ阻害作用が存在することを記載している。【特許請求の範囲】
【請求項１】
有機成分を含有する植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの有効量の抽出物を、薬剤として許容される担体と組み合わせて含み、前記抽出物が、目的とする免疫学的および薬理学的特性を示す、乾癬ならびに関連する生理学的および免疫学的疾患を処置するための経口投与および局所塗布用の薬草組成物。
【請求項２】
有機成分を含有し、場合によって植物Cuminum cyminumの果実からの抽出物を含有する植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの有効量の抽出物を薬剤として許容される担体と組み合わせて含み、前記抽出物が目的とする免疫学的および薬理学的特性を示す、乾癬ならびに関連する生化学的および免疫学的疾患を処置するための経口投与用の薬草組成物。
【請求項３】
請求項1に記載の薬草組成物を哺乳動物に投与することを含む、乾癬ならびに関連する生化学的および免疫学的疾患を処置するための方法。
【請求項４】
請求項2に記載の前記薬草組成物を哺乳動物に投与することを含む、乾癬ならびに関連する生化学的および免疫学的疾患を処置するための方法。
【請求項５】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物が、水抽出物、エタノール抽出物または水-エタノール抽出物であり、液体の形である、請求項1および2のいずれかに記載の薬草組成物。
【請求項６】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物が、乾燥粉末である、請求項1に記載の薬草組成物。
【請求項７】
前記植物Cuminum cyminumの果実からの抽出物が、水抽出物、エタノール抽出物または水-エタノール抽出物であり、液体の形である、請求項2に記載の薬草組成物。
【請求項８】
前記植物Cuminum cyminumの果実からの抽出物が、乾燥粉末である、請求項2に記載の薬草組成物。
【請求項９】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物中に存在する前記有機成分に、アルカロイド、フラボノイド、有機酸、アミノ酸、遊離の糖/グリコシドおよび塩からなる混合物が含まれる、請求項1および2のいずれかに記載の薬草組成物。
【請求項１０】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物の量が、前記薬草組成物の重量の50から5000mgを構成する、請求項1に記載の経口投与用の薬草組成物。
【請求項１１】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物の量が、前記薬草組成物の10から50重量%を構成し、残りが、前記植物Cuminum cyminumの果実からの抽出物および/または薬剤として許容される担体からなる、請求項2に記載の経口投与用の薬草組成物。
【請求項１２】
植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物10から50重量%および植物Cuminum cyminumの果実からの抽出物60から90重量%を含有し、場合によって、残りが、薬剤として許容される担体からなる、請求項2に記載の経口投与用の薬草組成物。
【請求項１３】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物の量が、前記薬草組成物の重量の2から100mgを構成し、残りが、前記植物Cuminum cyminumの果実からの抽出物および/または薬剤として許容される担体からなる、請求項2に記載の経口投与用の薬草組成物。
【請求項１４】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物が、前記抽出物の0.5から10重量%を構成する、請求項1に記載の経口投与用の薬草組成物。
【請求項１５】
前記関連する生化学的および免疫学的疾患に、皮膚疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、アレルギーおよび慢性閉塞性肺疾患が含まれる、請求項3または4に記載の方法。
【請求項１６】
前記皮膚疾患に、皮膚炎、湿疹および強皮症が含まれる、請求項15に記載の方法。
【請求項１７】
前記免疫学的疾患に、乾癬斑、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪の乾癬、乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、クローン病、多発性硬化症、過敏性腸疾患、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデスおよびシェーグレン症候群などの自己免疫疾患が含まれる、請求項15に記載の方法。
【請求項１８】
前記アレルギーに、ぜん息が含まれる、請求項15に記載の方法。
【請求項１９】
免疫抑制、リンパ球増殖の阻害、サイトカイン変調、ケラチノサイト増殖の阻害、角質溶解活性、内皮細胞増殖の阻害、細胞接着分子発現の阻害、ホスホジエステラーゼ(III、IVおよびV)の阻害、MESTの阻害、酵素の阻害;サイトカイン発現の阻害、血管形成の阻害、増殖マーカーの阻害、インテグリンの阻害、免疫細胞輸送、リンパ球輸送、好中球輸送、単球輸送およびTh1サイトカイン過発現が含まれる、請求項1および2のいずれか一項に記載の、前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物により示される目的とする免疫学的および薬理学的特性。
【請求項２０】
IL-2阻害である、請求項19に記載の前記サイトカイン変調。
【請求項２１】
IFNγ阻害である、請求項19に記載の前記サイトカイン変調。
【請求項２２】
IL-10誘発である、請求項19に記載の前記サイトカイン変調。
【請求項２３】
ICAM-1である、請求項19に記載の前記細胞接着分子発現の阻害。
【請求項２４】
p60srcチロシンキナーゼおよび5-リポキシゲナーゼ阻害である、請求項19に記載の前記酵素阻害。
【請求項２５】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物10から50重量%を含有する請求項1の薬草組成物を哺乳動物に経口投与することを含む、請求項3に記載の乾癬ならびに関連する生化学的および免疫学的疾患を処置する方法。
【請求項２６】
請求項1の薬草組成物を哺乳動物に経口投与することを含み、該組成物中で、前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物の量が、前記薬草組成物の重量の50から5000mgを構成する、請求項3に記載の乾癬ならびに関連する生化学的および免疫学的疾患を処置する方法。
【請求項２７】
植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物10から50重量%および植物Cuminum cyminumの果実からの抽出物60から90重量%を含有し、場合によって、残りが、薬剤として許容される担体からなる請求項2の薬草組成物を哺乳動物に経口投与することを含む、請求項4に記載の乾癬ならびに関連する生化学的および免疫学的疾患を処置する方法。
【請求項２８】
請求項2の薬草組成物を哺乳動物に経口投与することを含み、前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物の量は、薬草組成物の重量の2mgから100mgを構成し、残りは、前記植物Cuminum cyminumの果実からの抽出物および薬剤として許容される担体からなる、請求項4に記載の乾癬ならびに関連する生化学的および免疫学的疾患を処置する方法。
【請求項２９】
請求項1の薬草組成物を哺乳動物に局所塗布することを含み、前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物の量は、前記抽出物の0.5重量%から10重量%を構成し、場合によって残りは、薬剤として許容される担体からなる、請求項3に記載の乾癬ならびに関連する生化学的および免疫学的疾患を処置する方法。
【請求項３０】
経口経路による、請求項3、4、25、26、27および28のいずれか一項に記載の、請求項1および2の薬草組成物の投与様式。
【請求項３１】
局所塗布による、請求項3および29のいずれか一項に記載の、請求項1の薬草組成物の投与様式。
【請求項３２】
錠剤、カプセル、シロップ、エリキシルおよび懸濁液の形である、請求項3、4、25、26、27および28のいずれか一項に記載の経口投与に適した、請求項1および2の薬草組成物。
【請求項３３】
軟膏、クリーム、ローション、オイルまたは経皮薬物送達系の形である、請求項3および29のいずれか一項に記載された局所塗布に適した請求項1の薬草組成物。
【請求項３４】
ラクトース、スクロース、マンニトール、ソルビトールおよびキシリトールなどの糖;トウモロコシデンプン、タピオカデンプンおよび馬鈴薯デンプンなどのデンプン;ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボマー;白ロウ、カルナウバロウ;アニオン性乳化ロウ;白色ワセリン;カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよびメチルセルロースなどのセルロースおよびその誘導体;リン酸二カルシウムおよびリン酸三カルシウムなどのリン酸カルシウム;硫酸ナトリウム;硫酸カルシウム、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール;ステアリン酸;ステアリン酸マグネシウムおよびステアリン酸カルシウムなどのアルカリ土類金属ステアリン酸塩;ステアリン酸;落花生油、綿実油、ゴマ油、オリーブ油およびトウモロコシ油などの植物油;非イオン性、カチオン性およびアニオン性界面活性剤;エチレングリコールポリマー;β-シクロデキストリン;脂肪族アルコールおよび加水分解された穀類固体;非毒性相容性充填剤;結合剤;崩壊剤;緩衝剤;防腐剤;酸化防止剤;滑剤;ならびに着香剤から選択される、請求項1および2のいずれか一項に記載の薬剤として許容される担体。
【請求項３５】
植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られ、有機成分を含有する有効量の分画を、薬剤として許容される担体と組み合わせて含み、前記分画が、目的とする免疫学的および薬理学的特性を示す、乾癬ならびに関連性化学的および免疫学的疾患を処置するための経口投与および局所塗布用の薬草組成物。
【請求項３６】
請求項35に記載の前記薬草組成物を哺乳動物に経口投与または局所塗布することを含む、乾癬ならびに関連する生化学的および免疫学的疾患を処置する方法。
【請求項３７】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物から得られる前記分画が、n-ブタノール可溶性分画である、請求項35に記載の薬草組成物。
【請求項３８】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物から得られる前記分画が、メタノール可溶性分画である、請求項35に記載の薬草組成物。
【請求項３９】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物から得られる前記分画が、メタノール不溶性分画である、請求項35に記載の薬草組成物。
【請求項４０】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物から得られる前記n-ブタノール可溶性分画中に存在する前記有機成分に、アルカロイド、フラボノイドおよび他の低分子量の化合物が含まれる、請求項35および37のいずれか一項に記載の薬草組成物。
【請求項４１】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物から得られる前記メタノール可溶性分画中に存在する前記有機成分に、アミノ酸、有機酸および塩が含まれる、請求項35および38のいずれか一項に記載の薬草組成物。
【請求項４２】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物から得られる前記メタノール不溶性分画中に存在する前記有機成分に、遊離の糖/グリコシド、有機酸および塩が含まれる、請求項35および39のいずれか一項に記載の薬草組成物。
【請求項４３】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物から得られる前記分画が、水抽出物である、請求項35、37、38および39のいずれか一項に記載の薬草組成物。
【請求項４４】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物から得られる前記分画が、乾燥粉末または粘性物質である、請求項35、37、38および39のいずれか一項に記載の薬草組成物。
【請求項４５】
植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる前記n-ブタノール可溶性分画の量が、5mgから200mgである、請求項35および37のいずれか一項に記載の薬草組成物。
【請求項４６】
植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる前記メタノール可溶性分画の量が、25mgから2550mgである、請求項35および38のいずれか一項に記載の薬草組成物。
【請求項４７】
植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる前記メタノール不溶性分画の量が、5mgから1250mgである、請求項35および39のいずれか一項に記載の薬草組成物。
【請求項４８】
皮膚疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、アレルギーおよび慢性閉塞性肺疾患が含まれる、請求項35に記載の関連する生化学的および免疫学的疾患。
【請求項４９】
皮膚炎、強皮症および湿疹である、請求項48に記載の皮膚疾患。
【請求項５０】
乾癬斑、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪の乾癬、乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、クローン病、多発性硬化症、過敏性腸疾患、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデスおよびシェーグレン症候群である、請求項48に記載の自己免疫疾患。
【請求項５１】
ぜん息が含まれる、請求項48に記載のアレルギー。
【請求項５２】
免疫抑制、リンパ球増殖の阻害、サイトカイン変調、ケラチノサイト増殖の阻害、角質溶解活性、内皮細胞増殖の阻害、細胞接着分子発現の阻害;MESTの阻害;サイトカイン発現の阻害、血管形成の阻害、増殖マーカーの阻害、インテグリンの阻害、全身性エリテマトーデス、免疫細胞の輸送、リンパ球輸送、好中球輸送、単球輸送およびTh1サイトカイン過発現が含まれる、請求項35に記載の、前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物から得られる前記分画により示される目的とする免疫学的および薬理学的特性。
【請求項５３】
IL-2阻害である、請求項52に記載のサイトカイン変調。
【請求項５４】
IFNγ阻害である、請求項52に記載のサイトカイン変調。
【請求項５５】
IL-10誘発である、請求項52に記載のサイトカイン変調。
【請求項５６】
ICAM-1である、請求項52に記載の細胞接着分子発現の阻害。
【請求項５７】
植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物から得られる前記n-ブタノール可溶性分画5mgから200mgを含有し、残りが薬剤として許容される担体からなる、請求項35に記載の薬草組成物を哺乳動物に経口投与することを含む、請求項36に記載の乾癬ならびに関連する生化学的および免疫学的疾患を処置する方法。
【請求項５８】
植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物から得られる前記メタノール可溶性分画25から2550mgを含有し、残りが薬剤として許容される担体からなる、請求項35に記載の薬草組成物を哺乳動物に経口投与することを含む、請求項36に記載の乾癬ならびに関連する生化学的および免疫学的疾患を処置する方法。
【請求項５９】
植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物から得られる前記メタノール不溶性分画5から1250mgを含有し、残りが薬剤として許容される担体からなる、請求項35に記載の薬草組成物を哺乳動物に経口投与することを含む、請求項36に記載の乾癬ならびに関連する生化学的および免疫学的疾患を処置する方法。
【請求項６０】
経口経路による、請求項36、57、58および59のいずれか一項による請求項35に記載の薬草組成物の投与様式。
【請求項６１】
局所塗布による、請求項36による請求項35の前記薬草組成物の投与様式。
【請求項６２】
錠剤、カプセル、シロップ、エリキシルまたは懸濁液の形である、請求項36、57、58および59のいずれか一項による経口投与に適した請求項35に記載の薬草組成物。
【請求項６３】
軟膏、クリーム、ゲル、ローション、オイルまたは経皮薬物輸送システムの形である、請求項36および61のいずれか一項による局所塗布に適した請求項35の薬草組成物。
【請求項６４】
ラクトース、スクロース、マンニトール、ソルビトールおよびキシリトールなどの糖;トウモロコシデンプン、タピオカデンプンおよび馬鈴薯デンプンなどのデンプン;ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボマー;白ロウ、カルナウバロウ;アニオン性乳化ロウ;白色ワセリン;カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよびメチルセルロースなどのセルロースおよびその誘導体;リン酸二カルシウムおよびリン酸三カルシウムなどのリン酸カルシウム;硫酸ナトリウム;硫酸カルシウム、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール;ステアリン酸;ステアリン酸マグネシウムおよびステアリン酸カルシウムなどのアルカリ土類金属ステアリン酸塩;ステアリン酸;落花生油、綿実油、ゴマ油、オリーブ油およびトウモロコシ油などの植物油;非イオン性、カチオン性およびアニオン性界面活性剤;エチレングリコールポリマー;β-シクロデキストリン;脂肪族アルコールおよび加水分解された穀類固体;非毒性相容性充填剤;結合剤;崩壊剤;緩衝剤;防腐剤;酸化防止剤;滑剤;ならびに着香剤から選択される、請求項1および2のいずれか一項に記載の薬剤として許容される担体。
【請求項６５】
請求項1および2のいずれか一項の植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物を調製する方法において、
a)前記植物の葉または茎を水で洗浄する工程と、
b)前記植物の葉または茎を溶剤と共に粉砕して、葉または茎の粗いペーストを得る工程と、
c)続いて、前記粗いペーストを前記溶剤の存在下に室温で16時間冷浸または浸出する工程と、
d)続いて、前記植物の葉および茎に存在する前記有機成分を溶剤で抽出する工程と、
e)すべての溶剤抽出物を合わせる工程と、
f)合わせた溶剤抽出物を濾過する工程と、
g)工程(f)で得られた濾液を遠心分離する工程と、
h)濾液を1/5の容量まで濃縮する工程と、
i)場合によって、工程(h)から得られた濃縮物を凍結乾燥または噴霧乾燥させて、乾燥粉末を得る工程、
とを含む方法。
【請求項６６】
前記溶剤を、水、エタノールまたはこれらの混合物から選択する、請求項65に記載の方法。
【請求項６７】
工程(h)で、前記溶剤を、回転蒸発器中、50℃未満の温度で蒸発させる、請求項65に記載の方法。
【請求項６８】
前記抽出される有機成分に、アルカロイド、フラボノイド、アミノ酸、有機酸、糖/グリコシドおよび塩が含まれる、請求項65に記載の方法。
【請求項６９】
植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの前記抽出物の塩基価が、280から345である、請求項65に記載の方法。
【請求項７０】
前記水抽出物を、液-液分配クロマトグラフィーに掛ける工程を含む、請求項35に記載の植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの水抽出物の分画を調製する方法。
【請求項７１】
請求項37による植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの前記n-ブタノール可溶性分画を調製する方法において、
a.請求項65(i)で調製された植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの前記水抽出物とn-ブタノールとを室温で混合し、この混合物を放置して、n-ブタノール層を分離する工程と、
b.工程(a)のプロセスを2回繰り返す工程と、
c.分離された水性層を別に保存する工程と、
d.有機成分を含有する3つの分離されたn-ブタノール抽出物をすべて合わせる工程と、
e.合わせたn-ブタノール抽出物を水で洗浄する工程と、
f.工程(d)の抽出物を蒸発、凍結乾燥または噴霧乾燥させることを含む、前記n-ブタノール可溶性分画の粘性物質を得る工程、
とを含む方法。
【請求項７２】
(f)で、前記溶剤を、回転蒸発器中、50℃未満で蒸発させる、請求項71に記載の方法。
【請求項７３】
請求項38に記載の植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の前記メタノール可溶性分画を調製する方法において、
a.請求項71の工程(c)からの前記分離された水性相を、その6から7倍容量のメタノールと混合する工程と、
b.沈殿した固体を遠心分離する工程と、
c.工程(b)の上澄み溶液を蒸発、凍結乾燥または噴霧乾燥させることを含む、前記メタノール可溶性分画の乾燥粉末を得る工程、
とを含む方法。
【請求項７４】
(c)で、溶剤を回転蒸発器中、50℃未満で蒸発させる、請求項73に記載の方法。
【請求項７５】
メタノール可溶性分画の塩基価が、290〜340である、請求項73に記載の方法。
【請求項７６】
請求項73に記載の工程(b)から得られた前記メタノール不溶性固体を乾燥させることを含む、請求項39に記載の植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の前記メタノール不溶性分画を調製する方法。
【請求項７７】
請求項39に記載の植物Argemone mexicanaの葉および/または茎のメタノール不溶性分画を調製する方法において、
a.請求項73に記載の工程(b)から得られた前記メタノール不溶性固体を溶かす工程と、
b.工程(a)の溶液を超音波処理する工程と、
c.工程(b)の超音波処理された溶液を遠心分離する工程と、
d.工程(c)の溶液を蒸発、凍結乾燥または噴霧乾燥させることを含む、前記メタノール不溶性分画の乾燥粉末を得る工程、
を含む方法。
【請求項７８】
(d)で、溶剤を回転蒸発器中、50℃未満で蒸発させる、請求項75に記載の方法。
【請求項７９】
前記メタノール不溶性分画の塩基価が、350〜380である、請求項76および77に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、これまで知られていない有効なインビトロおよびインビボ免疫学的および薬理学的活性を示し、通常の許容限界の範囲内の比較的良好な許容性で乾癬面積/重度指数(PASI)スコアの割合の著しい低減をもたらす、アルカロイド、フラボノイド、有機酸、アミノ酸、糖/グリコシドおよび塩からなる混合物を含む植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる水性、エタノール性または水-エタノール性抽出物を含有する薬草組成物に関する。
【０００２】
本発明は、これまで知られていない有効なインビトロおよびインビボ免疫学的および薬理学的活性を示し、通常の許容限界の範囲内の比較的良好な許容性でPASIスコアの率の著しい低減をもたらす、アルカロイド、フラボノイド、有機酸、アミノ酸、糖/グリコシドおよび塩からなる混合物を含む植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる水性、エタノール性または水-エタノール性抽出物を、植物Cuminum cyminumの果実から得られる水性、エタノール性または水-エタノール性抽出物と場合によって組み合わせて含む薬草組成物に関する。
【０００３】
さらに本発明は、これまで知られていない有効なインビトロおよびインビボ免疫学的および薬理学的活性を示す、アルカロイド、フラボノイド、有機酸、アミノ酸、糖/グリコシドおよび塩からなる混合物を含む植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる水性、エタノール性または水-エタノール性抽出物の分画を含有する薬草組成物に関する。
【０００４】
さらに本発明は、植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる抽出物を、場合によって、薬草組成物に含まれる植物Cuminum cyminumの果実から得られる水性、エタノール性または水性-エタノール性抽出物と組み合わされた形で調製するための選択的方法に関する。
【０００５】
さらに本発明は、薬草組成物中に含有される植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からのn-ブタノール可溶性、メタノール可溶性およびメタノール不溶性分画などの分画を調製するための選択的方法に関する。
【０００６】
さらに本発明は、抗乾癬活性に関与することが知られている免疫抑制、リンパ球増殖の阻害、IL-2阻害などのサイトカイン変調、IFNγ阻害、IL-10誘発、ケラチノサイト増殖の阻害、角質溶解活性、内皮細胞増殖の阻害、ICAM-1などの細胞接着分子発現の阻害、MESTの阻害、p60srcチロシンキナーゼなどの酵素の阻害を示す植物Argemone mexicanaの葉および茎から得られる抽出物および植物Argemone mexicanaの葉および茎から得られる分画に、および乾癬斑、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪の乾癬を含む乾癬などの皮膚疾患;皮膚炎および強皮症;湿疹;乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、クローン病、多発性硬化症、過敏性腸疾患、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデスおよびシェーグレン症候群などの炎症性疾患および他の自己免疫疾患;ぜん息および慢性閉塞性疾患などのアレルギーを処置および予防するための前記の抽出物および分画の有用性に関する。
【０００７】
さらに本発明は、前記の疾患、特に乾癬を処置および予防する方法に関し、これは、植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる抽出物を含有し、さらに植物Cuminum cyminumの果実から得られる水性、エタノール性または水-エタノール性抽出物を場合によって含有する薬草組成物を経口経路を介して、または局所塗布により哺乳動物に投与することを含む。
【０００８】
さらに本発明は、前記の疾患、特に乾癬を処置および予防する方法に関し、これは、植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる分画を含有する薬草組成物を経口経路により、または局所塗布により哺乳動物に投与することを含む。
【０００９】
さらに本発明は、植物Cuminum cyminumの果実から得られる水性、エタノール性または水-エタノール性抽出物に関し、およびホスホジエステラーゼ(III、IVおよびV)の阻害および5-リポキシゲナーゼの阻害などの酵素の阻害を行うCuminum cyminum植物抽出物の作用機序を提供する。
【００１０】
略語/符号の説明
本明細書を通して使用される次の略語/符号は、次の通りである：
[1]:植物Argemone mexicanaの葉および/または茎ならびに植物Cuminum cyminumの果実の水性(水)抽出物、
[2]:植物Argemone mexicanaの葉および/または茎ならびに植物Cuminum cyminumの果実の水性(水)抽出物を凍結乾燥させると得られる乾燥粉末、
[3]:植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の水性(水)抽出物を凍結乾燥させると得られる乾燥粉末、
[4]:植物Cuminum cyminumの果実の水性(水)抽出物を凍結乾燥させると得られる乾燥粉末、
[5]:植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の水性(水)抽出物のn-ブタノール可溶性分画、
[6]:植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の水性(水)抽出物のメタノール可溶性分画、
[7]:植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の水性(水)抽出物のメタノール不溶性分画。
【背景技術】
【００１１】
乾癬などの皮膚疾患は、過形成、表皮の肥厚および赤色の鱗状斑の存在をもたらす炎症性で異常な上皮ケラチノサイト過増殖により特徴付けられる。その特有の臨床徴候で認識され、白色の鱗屑で覆われた限局性赤色斑により特徴付けられる慢性的な皮膚状態は、痒みのある鱗状の皮膚をもたらす。乾癬は、非常に可視的な疾患であり、往々にして、顔面、頭皮、胴部および肢に及ぶ。この慢性疾患での病変は通常、緩解と悪化とを被る。乾癬は、皮膚疾患として表れるが、欠陥または欠損を有する細胞に仲介される免疫の疾患であると考えられている。現在、乾癬は、自己免疫疾患として描写され、その際、活性化されたT-リンパ球、複数のサイトカインの産生により、二次的な上皮異常が生じる。制御を受けないリンパ球は、耐アポトーシス性ケラチノサイトの増殖を刺激するサイトカインを産生する。乾癬性皮膚病変は、炎症により特徴付けられ、この際、T細胞および好中球が真皮および表皮の両方を浸潤し、過剰な皮剥けは、内皮過増殖および異常なケラチノサイト分化に関与している(Reich等、2001年)。乾癬での欠点は、過度に迅速なケラチノサイトの成長および皮膚表面からの鱗屑の落剥であるようである。薬物療法は、このプロセスを遅くすることを対象としている。
【００１２】
乾癬患者で観察される症状には、代謝亢進、表皮層での炎症応答の衰弱、血管拡張ならびに表皮細胞層への白血球の遊走および浸潤による細胞の過剰な代謝回転に起因する表皮細胞の過形成および異常な角質化を含む(Beutner、1982年)。しかしながら現在は、表皮過形成は、病的な皮膚内に蓄積されるCD8+およびCD4+Tリンパ球により仲介される病変の皮膚領域での免疫系の活性化に対する反応であることが認められている。実際に現在は、乾癬は、ヒトの最も一般的なT細胞仲介炎症性疾患であると認められている。乾癬の臨床的外観は大部分が、表皮変化によってもたらされるので、この疾患は慣例的に、過剰なケラチノサイト増殖および異常な分化のいずれかと見なされていた。乾癬病変内では、ケラチノサイト細胞サイクル時間は、約1/8に短縮され(36時間、正常な皮膚では311時間)、分割細胞の数は二倍であり、これにより、増殖性表皮が生じる。さらに最近では、皮膚病変部へのTリンパ球の浸潤は、乾癬の必須形態の1つであると認められている。乾癬での表皮変化は、皮膚病変部でのTリンパ球の作用に起因することを、現在の証拠は示唆している。
【００１３】
乾癬を、皮膚病変部内でのTリンパ球の選択的累積に基づく炎症疾患として仮に分類することができたが、Tリンパ球が、疾患プロセスを誘発または持続させることを、直接的な証拠が示している。PUVA療法は、疾患の進展に協力するリンパ球を枯渇させることが判明した。これらのデータは、発病でのT細胞の役割に一致した。シクロスポリンは、疾患の活性に劇的な作用を有することが判明した。シクロスポリンがT細胞活性化に対してかなりの阻害作用を有するので、乾癬は基本的に炎症疾患であるとの主張がなされ始めた。
【００１４】
Tリンパ球は真皮を浸潤し、次いで、ケラチノサイトに接着して、乾癬斑を産生するようである。したがって、T細胞の接着および輸送を調節する分子は、合理的な処置ターゲットであり、病態生理学でのその役割は、かなり重要である。ケモカインによる誘発を遮断するか、インテグリン結合(LFA-1とICAM-1との)を遮断することにより、血管内接着事象を阻害することができる。その表面発現のインテグリン遮断または低減は、抗乾癬療法に役立つリンパ球輸送のために重要な事象であろう。
【００１５】
乾癬を改善するために使用される様々な、時として毒となる処置の数は、この疾患の耐性特性の証拠である。乾癬患者の大部分(90%)が、疾患の限られた形態を示すので、ジトラノール、タール製剤、コルチコステロイドおよび最近導入されたビタミンD3類似体(カルシポトリオール(calcipotriol)、カルシトリオール)を含む局所処置を使用することができる。乾癬患者のうちの少数(10%)は、より深刻な状態を示し、彼らのため、数多くの全身処置様式を利用することができる。特異的全身療法には、UVB、PUVA、メトトレキセート、ビタミンA誘導体(アシトレチン(acitretin))およびシクロスポリンAなどの免疫抑制剤が含まれる。乾癬を処置するためのシクロスポリンおよびFK-506の有効性は、T細胞仮説を疾患の主な原因として支持している。
【００１６】
コルチコステロイドを局所使用することにより、乾癬の症状が軽くなる。しかしながら、このような処置で必要である長期間にわたるその投与により、タキフィラキシーが生じて、用量を増やさなければならないか、より強い薬物を使用しなければならず、感染病変部に局所的に塗布すると、周辺の正常な皮膚の萎縮および蒼白または色素沈着の喪失が生じる(BNF、2001年)。
【００１７】
冒されている部分に、ソラーレンを外部または内部投与し、および長波紫外線を照射することからなる光線療法(紫外線の照射)または光化学処置を使用することは、老化の加速または皮膚の色素沈着および発ガンの誘発の可能性などの欠点を伴う(BNF、2001年)。
【００１８】
ステロイドに比較すると少ない副作用を伴うとはいえ、それでも、コールタールを外部使用することは、強い臭気、皮膚の着色などを含む欠点を有する。時によっては、刺激性の皮膚炎が生じうる。
【００１９】
メトトレキセートは、乾癬症状を処置するために選択される薬剤であるが、綿密に監視する必要がある。それというのも、これは、肝損傷をもたらすか、および/または酸素を担持する赤血球、感染を撲滅する白血球および血餅を増強する血小板の産生を低下させうる。ソラーレンおよびメトトレキセートの長期使用によって、乾癬を伴う患者での扁平上皮細胞ガンの危険性が著しく高まる(Stern、1994年)。
【００２０】
エトレチネートなどのレチノイドは、難治性乾癬を患っている患者に内部摂取されるが、これは、催奇形性で、長期間にわたって体内に蓄積されるようなので、出産可能な人では、これを避けるべきである(BNF、2001年)。シクロスポリン、タクロリムスおよびアスコマイシン(Ascomycin)などの大環状免疫抑制剤を使用することは、腎機能を損なうか、高血圧をもたらす。ヒドロキシウレアで起こりうる副作用には、貧血ならびに白血球および血小板の減少が含まれる。
【００２１】
合成ビタミンD3類似体であるカルシポトリオールが、幅広く処方される乾癬処置の1種となっている。しかしながら、これは、有効な局所コルチコステロイドよりもかなり強い皮膚刺激をもたらす。一般的な副作用には、病変部または辺縁部刺激、顔面または頭皮刺激または乾癬の悪化が含まれる(Ashcroft等、2000年)。
【００２２】
乾癬処置に対する現在のバイオテクノロジー手法は、細胞増殖または疾患の免疫成分への直接的な薬剤仲介攻撃に関する。様々な段階で免疫応答を遮断することが知られているClenoliximab、MEDI-507、ICM3、IDEC-114、SMART抗CD3、Zenapax Amavive、Hul 134、Xanelim、HuMaxCD4、IC747、IDEC-114、IDEC-131、Nuvion、DAB389IL-2、ONTAKおよびEtarnerceptなどの免疫抑制性の免疫生物学的製剤は現在、様々な相で臨床試験されている。
【００２３】
多くの処置は、乾癬を処置するために利用することができる。しかし、これらのいずれも、普遍的に安全かつ有効であるわけではない。乾癬の影響の度合いは、うつ、高血圧およびうっ血性心不全などの他の疾患の度合いと同様である。この疾患を処置するためのコストは、米国では1年当りおよび患者1人当り、平均して800米国ドルであり、この疾患によって、生産力が著しく失われる(Feldman、2000年)。様々な処置可能性にもかかわらず、その散発的な経過、処置に対する様々な応答および副作用によって、乾癬は、治癒が難しい疾患である。乾癬の破壊的な性質は、疾患を被っている人が緩解を達成するために、彼らが知っている疾患が遅かれ早かれ再発するまで耐えようとしているこれらの副作用の規模によって強調される。
【００２４】
臨床的な症状発現および不都合とは別に、患者の生活へのこの疾患の心理的影響は、大変なものである。乾癬は、患者の情動および身体的衰弱のすべてのアスペクトに影響を及ぼす複雑な症状であり、このことにより、生活の質が著しく低下する(Fortune等、1998年)。乾癬などの皮膚疾患は、世界中で数百万人の生活の質を著しく低下させている。さらに、往々にして、明らかに眼でみることができるので、冒されている個々人は、顕著な苦痛、羞恥および不快を被る。
【非特許文献１】Raychudhuri,S.K.等、2001年
【非特許文献２】Raychaudhuri,S.P.等、1999年
【非特許文献３】Raychudhuri,S.P.等、2001年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２５】
緊急ではないとしても、現在の処置の欠点および限界を処理して、再発および深刻な副作用なしに完全な治癒をもたらし、さらに、乾癬を患っている人に投与する場合に安全、有効で、よく許容され、非毒性である乾癬を処置するための新規の薬剤に対する高い必要性が存在する。
【００２６】
大昔から、植物は、ヒトのための食物および薬剤の豊富な源であった。植物の多くの部分が、数多くの方法でヒトによって、その通常の生活で使用されてきたし、今も使用されている。植物またはその部分は、経口消費される茶または他の調製物/製剤を調製するために使用されてきた。多くの場合に、これらは、局所塗布するためにも使用されてきた。
【００２７】
薬用目的で使用される植物の一例は、Argemone mexicanaである。この植物は、Mexican PoppyまたはPrickly Poppy、Bhatkateya、BharbhandまたはSatyanashiとしても知られている。これは、インドのアーユルヴェーダで薬用目的で使用されている。これは、鎮痛剤、軟下剤、駆風剤、下剤、緩和剤、浄化剤(depurative)、利尿剤、催吐薬、月経促進剤、去痰薬、止血剤、緩下剤、麻酔剤、下剤、鎮静剤、刺激剤、発汗薬および傷薬であると報告されている(Duke,J.A.、2001年)。Argemone mexicanaは、ガン、カタル、下疳、胆嚢炎、風邪、疝痛、排尿障害、発疹、突出物、眼、熱、頭痛、ヘルペス、炎症、痒み、眼炎、出産、急性カタル性結膜炎、リウマチ、疥癬、皮膚疾患、歯痛およびいぼのための民間療法薬である。報告によると、この植物は、虫を下し、痒み、らい病、白斑、炎症、胆汁性発熱を治し、有痛排尿困難、様々な毒に対する解毒薬で使用可能である。これは、血液を豊富にし、良好な去痰薬および催淫薬であり(Kirtikar,K.R.等、1933年)、風邪および肺炎の際に使用することができる(Oakes,A.J.等、1958年)。尿感染を、Argemone mexicanaの植物全体、さらに植物Latania verschaffeltiiの根および植物Caesalpinia bonducの葉および茎からなる煎薬を用いて(Gurib-Fakim,A.等、1996年)、または沸騰している植物Argemone mexicanaから調製された茶を使用して(Elridge,J.、1975年)処置することができる。根を含む植物全体を、肝炎を処置するためには、沸騰させ、濃い濃度で消費し、体を清潔し、体液平衡を改善し、排尿を調節するためには、茶として摂取する(Halberstein,R.A.等、1978年)。植物Argemone mexicanaを植物Bursera simarubからのチップと共に沸騰させることにより調製された飲料は、高血圧に使用することができる(Asprey,G.F.等、1955年)。この植物を、コスタリカでは下剤として、およびグアテマラでは酒酔いのための処置薬として使用する。キュラソー原住民は、ぜん息、カルドーシス(cardosis)、咳および発熱で、若葉の茶を摂取する。バハマ人は、これを肝炎のために使用し;ジャマイカ人は風邪および発熱のために使用し;ユカタン人は肝臓症、黄疸および百日咳のために使用し;他方で、ベネズエラ人はこれを、ガン、てんかんおよびマラリアのために使用する。この植物の乳液は、眼炎、白癬、疥癬およびいぼのために幅広く使用されている。
【００２８】
Argemone mexicanaは既に知られており、幅広く使用されているという事実にもかかわらず、この植物の様々な薬用用途、疾患が処置されること、またはこの植物の有効性を記載している文献はほとんど存在しないか、存在しない。
【００２９】
許容可能な科学的証拠を伴わずに、多様な薬用用途が、植物Argemone mexicanaの様々な部分に帰されており、先行技術が、アルカロイド、フラボノイド、アミノ酸、有機酸および糖が植物中に存在することを報告しているが、前記の薬用活性をもたらすArgemone mexicanaの活性成分は、知られておらず、明確な定義も成されていない。
【００３０】
乾癬ならびに同様の生化学的および免疫学的障害を介して生じる疾患を処置するために、植物Argemone mexicanaの葉および茎を使用することを、先行技術は体系的に教示または示唆していないことは、大いに強調されるべきである。例えば、植物Argemone mexicanaの葉または茎から調製された抽出物を、経口投与により、または局所塗布として乾癬を処置するために使用することは従来知られておらず、したがって、新規であり、発明性がある。
【００３１】
場合によって植物Cuminum cyminumの抽出物を含有する植物Argemone mexicanaの葉および茎の抽出物は、概念研究の試験のために選択された。この植物の葉または茎の抽出物および分画を、概念研究および機構研究の別の試験のために取り上げた。
【課題を解決するための手段】
【００３２】
したがって、哺乳動物での乾癬を処置するための新規組成物を提供することが、本発明の目的である。
【００３３】
本発明の他の目的は、乾癬斑、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪の乾癬などの皮膚疾患;皮膚炎および強皮症;湿疹;乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、クローン病、多発性硬化症、過敏性腸疾患、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデスおよびシェーグレン症候群などの炎症性疾患および他の自己免疫疾患;ぜん息および慢性閉塞性肺疾患などのアレルギーなどの様々な他の疾患を処置するための新規組成物を提供することである。
【００３４】
本発明の他の目的は、安全で、よく許容され、非毒性であり、最小かつ可逆性の有害作用または副作用を伴い、さらに重要なことには、治療計画の完了後に疾患の再発または回帰を最小限にする、哺乳動物での様々な疾患、特に乾癬を処置するための新規組成物を提供することである。
【００３５】
本発明のさらに他の目的は、安全で、よく許容され、非毒性であり、有害作用または副作用が最小限で可逆性であり、さらに重要なことには、治療計画の完了後に疾患の再発または回帰を最小限に抑え、経口投与または局所塗布に適した、哺乳動物での様々な疾患、特に乾癬を処置するための組成物を提供することである。
【００３６】
本発明の他の目的は、選択的で、簡単で、効果があり、対費用効果の高い、組成物を調製する方法を提供することである。
【００３７】
本発明のさらに他の目的は、安全で、よく許容され、非毒性であり、有害作用または副作用が最小限で可逆性であり、さらに重要なことに、治療計画の完了後に疾患の再発または回帰を最小限に抑え、経口投与または局所塗布に適している組成物を投与することを含む、様々な疾患、特に乾癬を処置するための方法を提供することである。
【００３８】
前記で述べたように、様々な疾患、例えば、乾癬、皮膚炎および強皮症などの皮膚疾患;乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、クローン病、多発性硬化症、過敏性腸疾患、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデスおよびシェーグレン症候群などの炎症性疾患および他の自己免疫疾患;ぜん息および慢性閉塞性肺疾患などのアレルギーを処置するために、植物Argemone mexicanaの葉および/または茎を使用することを、先行技術が体系的に教示または示唆していないことは、大いに強調されるべきである。
【００３９】
植物Argemone mexicanaの葉および/または茎を、水、エタノールまたは水とエタノールとの混合物で抽出することができ、このようにして得られた抽出物は、従来知られていなかったインビトロおよびインビボで使用することができる免疫学的および薬理学的活性を示し、したがって、乾癬および他の疾患を処置および予防するための新規の薬剤/組成物をもたらし、この前記の薬剤/組成物は、正常な許容限界の範囲内で比較的良好な許容性を有し、PASIスコアの率の著しい低減を示し、安全で、よく許容され、非毒性で、有害作用または副作用が最小限で可逆性であり、さらに重要なことには、治療計画の完了後に、疾患の再発または回帰を最小限に抑えることを、本発明者らは発見した。
【００４０】
さらに、植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる水、エタノールまたは水とエタノールからなる混合物抽出物を、植物Cuminum cyminumの果実から得られる水性、エタノール性または水性-エタノール性抽出物と場合によって組み合わせることができ、この組合せも、従来知られていなかったインビトロおよびインビボで使用することができる免疫学的および薬理学的活性を示し、したがって、乾癬および他の疾患を処置および予防するための新規の薬剤/組成物をもたらし、この前記の薬剤/組成物は、正常な許容限界の範囲内で比較的良好な許容性を有し、PASIスコアの割合の著しい低減を示し、安全で、よく許容され、非毒性で、有害作用または副作用が最小限で可逆性であり、さらに重要なことには、治療計画の完了後に、疾患の再発または回帰を最小限に抑えることを、本発明者らは発見した。
【００４１】
加えて、植物Cuminum cyminumの果実から得られる水性、エタノール性または水性-エタノール性抽出物と場合によって組み合わされた形の、植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる抽出物を選択的な方法で調製することができ、この際、使用された植物の部分に存在する実質的にすべての化合物、例えば、アルカロイド、フラボノイド、有機酸、アミノ酸、糖および塩が抽出されることを、本発明者らは発見した。
【００４２】
さらに、こうして得られた植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる抽出物を、この場合にも選択的な方法により、複数の分画に分別することができ、これらの分画は、元の抽出物中に含まれる実質的にすべての化合物、例えば、アルカロイド、フラボノイド、有機酸、アミノ酸、糖および塩からなる混合物を含有し、これらは分画中に保たれることを、本発明者らは発見した。
【００４３】
加えて、植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる抽出物の分画は、従来知られていなかったインビトロおよびインビボで使用することができる免疫学的および薬理学的活性を示し、したがって、乾癬および他の疾患を処置および予防するための新規の薬剤/組成物をもたらし、この前記の薬剤/組成物は、正常な許容限界の範囲内で比較的良好な許容性を有し、PASIスコアの割合の著しい低減を示し、安全で、よく許容され、非毒性で、有害作用または副作用が最小限で可逆性であり、さらに重要なことには、治療計画の完了後に、疾患の再発または回帰を最小限に抑えることを、本発明者らは発見した。
【００４４】
さらに、植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる抽出物ならびに植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる抽出物から得られる分画は、インビトロおよびインビボで有用性を示し、これは、抗乾癬活性に関与することが知られている、免疫抑制、リンパ球増殖の阻害、IL-2阻害などのサイトカイン変調、IFNγの阻害、IL-10の誘発、ケラチノサイト増殖の阻害、角質溶解活性、内皮細胞増殖の阻害、ICAM-1などの細胞接着分子発現の阻害、MESTの阻害およびp60srcチロシンキナーゼなどの酵素の阻害を示すことを、本発明者らは発見した。
【００４５】
水を含む数種の溶剤を、植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる抽出物を分別するために使用することができるが、n-ブタノールおよびメタノールなどの溶剤だけが、3種の個別の分画、すなわち、n-ブタノール可溶性分画、メタノール可溶性分画およびメタノール不溶性分画をもたらし、これらは、アルカロイド、アミノ酸、糖および塩を含む有機化合物からなる主要な群を含有することに加えて、従来知られていなかったが、抗乾癬活性に関与する前記のようなインビトロおよびインビボで有用な免疫学的および薬理学的活性を示すことを、本発明者らは発見した。
【００４６】
したがって、有効かつ経済的な、植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から調製される抽出物を調製する方法およびこの抽出物の分画を選択的に調製する方法および乾癬を含む様々な疾患を処置するために抽出物および分画を使用することはいずれも、従来知られておらず、したがって、新規であり、本発明の進歩性を成している。
【００４７】
さらに意外にも、植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる前記の抽出物および分画を、経口投与および局所塗布に適している新規の組成物に処方することができ、したがって、安全で、よく許容され、非毒性で、有害作用または副作用が最小限で可逆性であり、さらに重要なことには、治療計画の完了後に、疾患の再発または回帰を最小限に抑え、このことが本発明の他の長所の基礎を成している、乾癬および他の疾患を処置および予防するための新規の方法が得られることを、本発明者らは発見した。
【００４８】
最後に、意外にも、前記の薬草組成物は、乾癬ならびに、乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、クローン病、多発性硬化症、過敏性腸疾患、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、ぜん息および慢性閉塞性肺疾患などのアレルギーなどの他の疾患を処置および予防するための薬草組成物の有用性および有効性を減じることのない植物Cuminum cyminumの果実から得られる抽出物を場合によって含有してよく、このことが、本発明の他の長所のさらに別の基礎を成すことを、本発明者らは発見した。
【００４９】
したがって、前記に従い、本発明は、
i)乾癬斑、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪の乾癬を含む乾癬;皮膚炎および強皮症;湿疹;乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、クローン病、多発性硬化症、過敏性腸疾患、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデスおよびシェーグレン症候群などの炎症性疾患および他の自己免疫疾患;ぜん息および慢性閉塞性肺疾患などのアレルギーを処置および予防する際に有用な新規の薬草組成物;
ii)安全で、よく許容され、非毒性で、有害作用または副作用が最小限で可逆性であり、さらに重要なことには、治療計画の完了後に、疾患の再発または回帰を最小限に抑える薬草組成物;
iii)活性成分として、植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる水性、エタノール性または水性-エタノール性抽出物を、植物Cuminum cyminumの果実から得られる水性、エタノール性または水性-エタノール性抽出物と組み合わされた形で、薬剤として許容される担体と共に含有し、抗乾癬活性に関与することが知られているインビトロおよびインビボで免疫学的および薬理学的な有用な活性、免疫抑制、リンパ球増殖の阻害、IL-2阻害などのサイトカイン変調、IFNγの阻害、IL-10の誘発、ケラチノサイト増殖の阻害、角質溶解活性、内皮細胞増殖の阻害、ICAM-1などの細胞接着分子発現の阻害、MESTの阻害およびp60srcチロシンキナーゼなどの酵素の阻害を示す薬草組成物;または
iv)活性成分として、植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる水性、エタノール性または水性-エタノール性抽出物から得られるn-ブタノール可溶性分画、メタノール-可溶性分画またはメタノール不溶性分画を、薬剤として許容される担体と共に含有し、抗乾癬活性に関与することが知られているインビトロおよびインビボで免疫学的および薬理学的な有用な活性、免疫抑制、リンパ球増殖の阻害、IL-2阻害などのサイトカイン変調、IFNγの阻害、IL-10の誘発、ケラチノサイト増殖の阻害、角質溶解活性、内皮細胞増殖の阻害、ICAM-1などの細胞接着分子発現の阻害、MESTの阻害およびp60srcチロシンキナーゼなどの酵素の阻害を示す薬草組成物;または
v)インビトロでのヒトケラチノサイト増殖阻害、ヒト真皮微小血管内皮細胞(HDMEC)増殖阻害およびマイトジェン誘発リンパ球増殖阻害特性を有し、したがって、免疫抑制が必要とされる乾癬および関連する疾患を処置するために有用な、アルカロイド、フラボノイド、有機酸、アミノ酸、糖および塩からなる混合物を含む植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる水性、エタノール性または水性-エタノール性抽出物を含有する新規の組成物。ヒト真皮微小血管内皮細胞(HDMEC)増殖阻害は、過剰な血管形成が存在する腫瘍状態のために使用することもできる;
vi)インビトロでのヒトケラチノサイト増殖阻害、ヒト真皮微小血管内皮細胞(HDMEC)増殖阻害およびマイトジェン誘発リンパ球増殖阻害特性を有し、したがって、免疫抑制が必要とされる乾癬および関連する疾患を処置するために有用な、アルカロイド、フラボノイド、有機酸、アミノ酸、糖および塩からなる混合物を含む植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる水性抽出物から得られるn-ブタノール可溶性分画、メタノール可溶性分画またはメタノール不溶性分画を含有する新規の組成物。ヒト真皮微小血管内皮細胞(HDMEC)増殖阻害は、過剰な血管形成が存在する腫瘍状態のために使用することもできる;
vii)乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、クローン病、多発性硬化症、過敏性腸疾患、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデスおよびシェーグレン症候群などの自己免疫疾患、ぜん息および慢性閉塞性肺疾患などのアレルギーならびに関連する症状の際に使用するための、(インターロイキン-2)IL-2、(インターフェロンγ)IFNγ阻害特性に仲介される抗乾癬活性を有する、アルカロイド、フラボノイド、有機酸、アミノ酸、糖および塩からなる混合物を含む植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる水性、エタノール性または水性-エタノール性抽出物を含有する新規の組成物;
viii)乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、クローン病、多発性硬化症、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデスおよびシェーグレン症候群などの自己免疫疾患、ぜん息および慢性閉塞性肺疾患などのアレルギーならびに関連する症状の際に使用するための、(インターロイキン-2)IL-2、(インターフェロンγ)IFNγ阻害特性に仲介される抗乾癬活性を有する、アルカロイド、フラボノイド、有機酸、アミノ酸、糖および塩からなる混合物を含む植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる水性抽出物から得られるn-ブタノール可溶性分画、メタノール可溶性分画またはメタノール不溶性分画を含有する新規の組成物;
ix)乾癬を処置および予防するために有用なインターロイキン-10(IL-10)誘発因子特性を有する、アルカロイド、フラボノイド、有機酸、アミノ酸、糖および塩からなる混合物を含む植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる水性、エタノール性または水性-エタノール性抽出物を含有する新規組成物;
x)乾癬を処置および予防するために有用なインターロイキン-10(IL-10)誘発因子特性を有する、アルカロイド、フラボノイド、有機酸、アミノ酸、糖および塩からなる混合物を含む植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる水性抽出物から得られるn-ブタノール可溶性分画、メタノール可溶性分画またはメタノール不溶性分画を含有する新規組成物;
xi)乾癬を処置および予防するために有用なp70srcチロシンキナーゼ阻害を有する、アルカロイド、フラボノイド、有機酸、アミノ酸、糖および塩からなる混合物を含む植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる水性、エタノール性または水性-エタノール性抽出物を含有する新規組成物;
xii)乾癬を処置および予防するために有用なp70srcチロシンキナーゼ阻害を有する、アルカロイド、フラボノイド、有機酸、アミノ酸、糖および塩からなる混合物を含む植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる水性抽出物から得られるn-ブタノール可溶性分画、メタノール可溶性分画またはメタノール不溶性分画を含有する新規組成物;
xiii)乾癬を処置および予防するために有用な、リンパ球、単球および好中球の輸送を含む、免疫細胞の阻害に使用するための内皮細胞上での(細胞間接着分子-1)ICAM-1細胞接着分子の発現阻害を有する、アルカロイド、フラボノイド、有機酸、アミノ酸、糖および塩からなる混合物を含む植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる水性、エタノール性または水性-エタノール性抽出物を含有する新規組成物;
xiv)乾癬を処置および予防するために有用な、リンパ球、単球および好中球の輸送を含む、免疫細胞の阻害に使用するための内皮細胞上での(細胞間接着分子-1)ICAM-1細胞接着分子発現阻害を有する、アルカロイド、フラボノイド、有機酸、アミノ酸、糖および塩からなる混合物を含む植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる水性抽出物から得られるn-ブタノール可溶性分画、メタノール可溶性分画またはメタノール不溶性分画を含有する新規組成物;
xv)乾癬ならびに、乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、クローン病、多発性硬化症、過敏性腸疾患、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群などの他の自己免疫疾患、ぜん息および慢性閉塞性肺疾患などのアレルギーおよび関連する症状を処置および予防するために有用なマウス耳腫脹試験(mouse ear swelling test)でのインビボ免疫抑制活性を有する、アルカロイド、フラボノイド、有機酸、アミノ酸、糖および塩からなる混合物を含む植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる水性、エタノール性または水性-エタノール性抽出物を含有する新規組成物;
xvi)乾癬ならびに、乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、クローン病、多発性硬化症、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群などの他の自己免疫疾患、ぜん息および慢性閉塞性肺疾患などのアレルギーおよび関連する症状を処置および予防するために有用なマウス耳腫脹試験でのインビボ免疫抑制活性を有する、アルカロイド、フラボノイド、有機酸、アミノ酸、糖および塩からなる混合物を含む植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる水性抽出物から得られるn-ブタノール可溶性分画、メタノール可溶性分画またはメタノール不溶性分画を含有する新規組成物;
xvii)粗いペーストの形である植物Argemone mexicanaの葉および茎をそれぞれ水、エタノールまたはこれらの混合物で抽出する工程と、この抽出物を乾燥させて、粉末を得る工程とを含む、植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から水性、エタノール性または水性-エタノール性抽出物を選択的に調製する方法;
xviii)いずれも粗いペーストの形である植物Argemone mexicanaの葉および/または茎をならびに植物Cuminum cyminumの果実をそれぞれ水、エタノールまたはこれらの混合物で抽出する工程を含む、植物Cuminum cyminumの果実から得られる水性抽出物と場合によって組み合わされた形の植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの水性、エタノール性または水性-エタノール性抽出物を選択的に調製する方法;
xix)植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の水性抽出物を、n-ブタノールと水との間に分配する工程を含む、アルカロイド、フラボノイドおよび他の有機化合物からなる混合物を含む植物Argemone mexicanaの葉および/または茎のn-ブタノール可溶性分画を選択的に調製する方法;
xx)植物Argemone mexicanaの葉および茎をn-ブタノールと水との間に分配して得られた水性層にメタノールを加える工程と、沈殿した固体を分離する工程とを含む、アミノ酸、有機酸および塩からなる混合物を含む植物Argemone mexicanaの葉および/または茎のメタノール可溶性分画を選択的に調製する方法。上澄み溶液は、メタノール可溶性分画を含有する;
xxi)植物Argemone mexicanaの葉および/または茎をn-ブタノールと水との間に分配して得られた水性層にメタノールを加える工程と、沈殿した固体を分離する工程とを含む、有機酸、糖および塩からなる混合物を含む植物Argemone mexicanaの葉および/または茎のメタノール不溶性分画を選択的に調製する方法。沈殿した固体は、乾燥させ、水中に再溶解させると、メタノール不溶性分画を構成する;
xxiii)簡単で、有効かつ対費用効果の高い、粗いペーストの形である植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から水性、エタノール性または水性エタノール性抽出物を選択的に調製する方法;
xxiv)植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の水性抽出物を、n-ブタノールと水との間に分配する工程を含む、簡単で、有効かつ対費用効果の高い、アルカロイド、フラボノイドおよび他の有機化合物からなる混合物を含む植物Argemone mexicanaの葉および/または茎のn-ブタノール可溶性分画を選択的に調製する方法;
xxv)植物Argemone mexicanaの葉および/または茎をn-ブタノールと水との間に分配して得られた水性層にメタノールを加える工程と、沈殿した固体を分離する工程とを含む、アミノ酸、有機酸および塩からなる混合物を含む植物Argemone mexicanaの葉および/または茎のメタノール可溶性分画を選択的に調製する方法。この上澄み溶液は、簡単で、有効かつ対費用効果の高いメタノール可溶性分画を構成する;
xxvi)植物Argemone mexicanaの葉および/または茎をn-ブタノールと水との間に分配して得られた水性層にメタノールを加える工程と、沈殿した固体を分離する工程とを含む、有機酸、糖および塩からなる混合物を含む植物Argemone mexicanaの葉および/または茎のメタノール不溶性分画を選択的に調製する方法。沈殿した固体は、乾燥させ、水中に再溶解させると、簡単で、有効かつ対費用効果の高いメタノール不溶性分画を構成する;
xxvii)ホスホジエステラーゼ(III、IVおよびV)阻害および5-リポキシゲナーゼ阻害などの酵素阻害を行う植物Cuminum cyminumの果実から得られる水性、エタノール性または水性-エタノール性抽出物;
xxviii)植物Cuminum cyminumの果実をそれぞれ水、エタノールまたはこれらの混合物で抽出する工程と、この抽出物を乾燥させて、粉末を得る工程とを含む、植物Cuminum cyminumの果実から得られる水性、エタノール性または水性-エタノール性抽出物を調製する方法;
xxix)アルカロイド、フラボノイド、有機酸、アミノ酸、糖および塩からなる混合物を含む植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の水性、エタノール性または水性-エタノール性抽出物を、薬剤として許容される賦形剤と共に含有する新規組成物を調製する方法;
xxx)アルカロイド、フラボノイド、有機酸、アミノ酸、糖および塩からなる混合物を含む植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の水性、エタノール性または水性-エタノール性抽出物を、植物Cuminum cyminumの果実から得られる水性抽出物と場合によって組み合わされた形で、薬剤として許容される担体と共に含有する新規組成物を調製する方法;
xxxi)植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の水性抽出物から得られるn-ブタノール可溶性分画、メタノール可溶性分画またはメタノール不溶性分画を、薬剤として許容される担体と共に含有する新規組成物を調製する方法;
xxxii)治療的有効量の本発明の新規組成物を患者に経口で、または局所塗布で投与することを含む、乾癬ならびに、乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、クローン病、多発性硬化症、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、ぜん息および慢性梗塞性肺疾患などのアレルギーなどの他の疾患を処置する方法
を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５０】
本発明を、下記で詳述する:
1)植物:Argemone mexicana
本発明で使用される植物は、Argemone mexicanaである。好ましい植物は、Argemone mexicana Linnであり、後記では、Argemone mexicanaと称する。この薬草は、高度1500mまでのインド全域に帰化している、農地および荒地に存在する非常に一般的な雑草である。成長した植物は、高さ1.2mまでの直立で、棘のある一年生の薬草である。葉は、無柄で、半抱茎で、曲がりくねって羽状に分裂しており、縁、中央脈および葉脈下の部分でとげ状であり、花は、黄色で、直径2.5〜7.5cmであり、朔は、楕円または楕円-棘状、まれには棘がなく、種は小さく、丸く、黒褐色で、深く網状に小陥没がある。
【００５１】
Argemone mexicanaは、Mexican Poppy、Prickly Poppy、Bharbhand、Satyanashi、ShialkantaおよびBhatkateyaを含む数多くの一般または通俗名称によっても知られている。
【００５２】
植物Argemone mexicana中に存在する化合物には特に、
i)プロトピン(protopine)、硝酸プロトピン、ベルベリン、硝酸ベルベリン、クリプトピン、アロクリプトピン、コプチシン(coptisine)、サンギナリン、ジヒドロサンギナリン、ノルサンギナリン、6-アセトニルジヒドロサンギナリン、ジヒドロケレリトリン、ケレリトリン、ノルケレリトリン、6-アセトニルジヒドロケレリトリン、(-)ケイランチホリン(cheilanthifoline)、(-)-β-スクレリン(scoulerine)メトヒドロキシド、(-)-α-スチロピンメトヒドロキシド、6-アセトニルジヒドロサンギナリン、(-)-α-テトラヒドロパルマチン(palmatine)メトヒドロキシド、レチクリン(reticuline)、タリホリン(thalifoline)、ムラミン(muramine)、アルゲモニン(argemonine)、ノルアルゲミニン、ヘレリトリン(helleritrine)およびオキシヒドラスチニンなどのアルカロイド;
ii)イソルマネチン(isorhmanetin)、イソラムネチン-3-グルコシドおよびイソラムネチン-3,7-ジグルコシドなどのフラボノイド;
iii)パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、オレイン酸、リノール酸、ラウリン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、ヘキサデセン酸およびリシノール酸、11-オキソ-トリアコンタン酸および11-ヒドロキシトリアコンタン酸などの脂肪酸;
iv)ヒスチジン、リシン、グルタミン酸、グリシン、アラニン、ロイシン、バリン、フェニルアラニン、チロシン、トレオニン、アルギニン、セリン、アスパラギン、システイン、メチオニン、トリプトファン、ヒドロキシプロリン、プロリンおよびアスパラギン酸などのアミノ酸;
v)グルコースおよびフルクトースおよびグリコシドなどの炭水化物;
vi)コハク酸、クエン酸、酒石酸およびリンゴ酸などの有機酸;および
vii)セリルアルコール、β-シトステロール、硝酸カリウム、リン酸カルシウムおよび硫酸カルシウムなどの他の化合物
が含まれる。
【００５３】
2)植物Argemone mexicanaの葉および茎の抽出物の調製
本発明の抽出物は、植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から取得する。好ましくは、新鮮な葉を集める。葉および茎を、水で洗浄し、粉末化し、ブレンドしてペーストにする。
【００５４】
本発明の抽出物は、数多くの抽出手順により調製することができる。適切な手順には例えば、超臨界液、液化ガスまたは適切な溶剤を使用する冷浸、浸出および抽出が含まれる。通常、抽出手順により、植物中に存在する水溶性化合物の実質的にすべてを含有する抽出物が得られる。
【００５５】
この植物の葉および茎を抽出するために適した溶剤は、水およびアルコール、特に、エタノールまたは水とアルコールとの混合物である。
【００５６】
好ましい抽出手順は、水、エタノールおよびこれらの混合物を使用する多段の連続的な冷浸および浸出プロセスである。抽出を好ましくは、室温で実施する。植物の葉および茎を粉砕し、水、エタノールまたは水とエタノールとの混合物で浸出する。植物と抽出溶剤との比は、植物原料1g当り0.5ml〜3ml、好ましくは、植物原料1g当り約1mlである。
【００５７】
植物の可溶性成分を含有する水性、エタノール性または水性-エタノール性抽出部を組み合わせて、単一の抽出溶液を生じさせる。低温、好ましくは50℃未満、減圧下での慣用の手順により、溶剤を除去して、容量を減らし、抽出化合物の濃度を高めることができる。この際に使用する蒸発または濃縮プロセスを好ましくは選択し、揮発性化合物の損失を最低限にする条件下に実施する。化合物の安定性を確実にするために、効率的な冷却が必要である。
【００５８】
植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から生じた水性抽出物[3]は、275から345の全塩基価を有する。
【００５９】
好ましい浸出抽出プロセスは、水性、エタノール性または水性-エタノール性相での連続的な段階抽出を使用する。処理すべき植物の葉および茎を通常、つき砕いてペーストにする。粉砕した植物原料を容器に入れ、植物原料を覆うに十分な量の水、エタノールまたはこれらの混合物と共に混合することにより、抽出を実施する。植物原料および水、エタノールまたはこれらの混合物からなる混合物を室温に放置して、溶媒を吸収させ、水可溶性原料全体を溶かす。植物原料を、植物抽出物が、底を通過しうるように準備されたパーコレータに入れる。
【００６０】
次いで、パーコレータを覆い、植物原料を、可溶性成分が溶解するに十分な時間冷浸する。通常、植物原料を、室温で約12〜24時間、好ましくは約16時間浸出させる。次いで、溶剤を捕集容器から排出させ、他方で、続いてすべての可溶性化合物を抽出するために十分な別の量の同じ溶剤をパーコレータに加える。
【００６１】
水、エタノールおよびこれらの混合物は、植物中に存在する実質的にすべての可溶性化合物を抽出するが、コスト的および操作の簡便さでは、水が、抽出のための最も好ましい溶剤である。
【００６２】
通常、植物の葉および茎を抽出するために使用される水の量は、植物の葉および茎1グラム当り約0.5から3mlであり、好ましくは、植物原料の葉および茎1グラム当り1mlを使用する。この方法による抽出物の収率は、乾燥重量に対して約5から8%である。抽出物を好ましくは、ろ過および遠心分離する。
【００６３】
このプロセスから生じた抽出物は、前記のようなアルカロイド、フラボノイド、アミノ酸、有機酸、糖および塩を含む植物の水溶性成分を含む。
【００６４】
抽出プロセスを好ましくは、植物原料中の実質的にすべての水溶性化合物を抽出するために十分な容量の溶剤および時間を使用して実施し、最終抽出物が、実質的にすべての水溶性化合物を含有するようにする。
【００６５】
好ましい一実施形態では、得られた抽出物を、減圧下に50℃未満の温度で、元の用量の1/5までに減らす。通常、凍結乾燥または噴霧乾燥により、または回転蒸発器中でさらに乾燥させて、緑がかった褐色の粉末を得ることができる。凍結乾燥が好ましい。
【００６６】
この水性抽出物[3]は、アルカロイド、フラボノイド、有機酸、アミノ酸、糖および塩ならびに植物中に存在する大部分の群の化学成分を含有する。
【００６７】
場合によって、植物Argemone mexicanaの葉および/または茎を植物Cuminum cyminumの果実とブレンドして、これを、ペーストになるまで粉砕し、その後、水、エタノールまたはこれらの混合物で抽出することができる。
【００６８】
もしくは、ペーストになるまで粉砕された植物Cuminum cyminumの果実を別に、水、エタノールまたはこれらの混合物で抽出して、この植物内に存在する実質的にすべての化合物を含有する抽出物を得ることができる。抽出手順は、水、エタノールまたはこれらの混合物を使用する多段の連続冷浸および浸出プロセスを含む。抽出を好ましくは、室温で実施する。
【００６９】
植物と抽出溶剤との比は、植物1グラム当り1ml〜5ml、好ましくは、植物1グラム当り約3mlである。
【００７０】
植物Cuminum cyminumの果実からこうして得られた抽出物を次いで、適切な割合で、植物Argemone mexicanaの葉および茎から得られる抽出物と混合することができる。
【００７１】
3)植物Argemone mexicanaの葉/茎の抽出物の分画の調製
植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の水性抽出物を分別する手順は、多段の液液分配クロマトグラフィー、沈殿および抽出物の乾燥を介して達成され、主要な成分として実質的に異なる群の化合物を有する複数の分画をもたらす。
【００７２】
分別を好ましくは、室温で実施する。植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の水性抽出物を、水(0.066g/ml)に溶かす。この溶液に、n-ブタノールを3回に分けて(1グラム当り、3×10ml)加え、その際、n-ブタノールの層をその都度分離する。3つの別々のn-ブタノール層すべてを相互に混合し、水で洗浄し、減圧下に50℃未満で溶剤を蒸発させると、n-ブタノール可溶性分画の粘性物質が得られる。
【００７３】
前記の工程からの水性洗浄液を、その約6〜7倍の容量のメタノールに攪拌しながら注ぐ。固体が沈殿した後に、溶液を遠心分離し、上澄みをデカンテーションした。減圧下に50℃未満で、このメタノール可溶性分画を濃縮し、凍結乾燥させると、メタノール可溶性分画が得られた。
【００７４】
前記の工程で得られたメタノール不溶性沈殿物を真空下に40℃で乾燥させ、凍結乾燥させる。固体をさらに水(0.1g/ml)に溶かし、超音波処理し、遠心分離し、濾過する。濾液を凍結乾燥させると、水溶性分画が得られる。
【００７５】
通常、植物から、約3〜4.5%のn-ブタノール可溶性分画;46〜54%のメタノール可溶性分画および24〜30%のメタノール不溶性または水溶性分画が得られる。
【００７６】
植物Argemone mexicanaの抽出物から調製された分画は、
i)メタノール可溶性分画[6]:290〜340
ii)メタノール不溶性または水溶性分画[7]:350〜380
の全塩基価を含有する。
【００７７】
n-ブタノール可溶性分画[5]は、アルカロイド、フラボノイドおよび他の低分子量の化合物を含有することが判明し;メタノール可溶性分画[6]は、アミノ酸、有機酸および塩を含有することが判明し;他方で、メタノール不溶性分画[7]は、糖、有機酸および塩を含有することが判明している。
【００７８】
4)植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の抽出物および分画の免疫学的および薬理学的特性
植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる前記の抽出物および分画は、マイトジェン誘発リンパ球増殖阻害、ヒトケラチノサイト増殖阻害、HDMEC増殖阻害、IL-2、IFNγなどのサイトカイン阻害、IL-10などのサイトカイン誘発、p70srcチロシンキナーゼ酵素阻害、内皮細胞での1CAM-1発現阻害およびマウス耳腫脹試験での免疫抑制を示す。前記のように、前記の抽出物および分画の免疫変調特性は、新規であり、したがってこれまで知られてなく、このことが、本発明の重要な態様を成している。この抽出物および分画は、乾癬、リウマチ性関節炎、多発性硬化症、過敏性腸症候群、強皮症、ぜん息、慢性梗塞性肺疾患、アトピー性皮膚炎およびアレルギーなどの一定の徴候を処置する際に有用である。示される活性は、免疫抑制で有用である。免疫抑制活性は、乾癬の処置に関与すると考えられている。
【００７９】
インビトロでのIL-2、IFNγ阻害、IL-10誘発、ヒトケラチノサイト増殖阻害、HDMEC増殖阻害、リンパ球増殖阻害、内皮細胞でのICAM-1発現阻害およびチロシンキナーゼ阻害により、Argemone mexicanaの葉および茎の抽出物および分画が、抗乾癬活性で重要な仲介的役割を有する免疫抑制および抗乾癬特性を示すことが明らかである。
【００８０】
Tリンパ球が、乾癬斑の維持において重要な役割を果たすことが、現在は一般的に認められている。乾癬が発病する際のT細胞の役割が、病原プローブとしてのターゲッティングした免疫療法剤の使用、さらに最近では、SCIDマウスモデルの使用という偶然の発見によって判明した。サイトカインは、生物学的に活性なかなり有力なタンパク質であり、これは、細胞間連絡で必須の役割を果たす。現在研究中の新規手法のいくつかは、皮膚処置用新薬の登録も、現存する処置選択肢の補足も実際にもたらすようである。数種のサイトカインの発現が、炎症性皮膚疾患でアップレギュレーションされ、おそらく、炎症性免疫応答および白血球走化性を仲介する。腫瘍壊死因子α、IL-8およびケラチノサイトにより産生されるGMCSF、さらにエイコサノイドが、成熟病変乾癬への白血球の浸潤の原因である(Bos,J.D.、1997年)。病変部でない皮膚と比較して、乾癬組織では、数多くの炎症誘発性遺伝子の発現が高まる。1型病変部ヘルパーT(Th1)細胞により産生される炎症誘発性サイトカインが、乾癬の発病に関与している(Austin,L.M.等、1999年)。IL-10に対する乾癬の応答は、皮膚Th1細胞仲介炎症の抑制およびIFNγおよびTNFαの発現量減少を伴う。注目すべきことに、遺伝的因子が、IL-10に対する臨床応答に関与している証拠が存在した。IL-10は、乾癬では僅かしか発現されないか、存在しないことが知られている。この相対的なIL-10欠乏は、乾癬の発病に関してかなり重要であり、その正常化は、有利であるはずである。乾癬のためのいくつかの療法、例えば、UV照射、モノメチルフメラート(monomethylfumerate)は、いくつかの細胞型によるIL-10産生を増大させる。cAMP上昇剤などの他の薬物群、例えば、イロプロスト(iloprost)、ペントキシフィリンは、IL-10のアップレギュレーションをもたらす(Platzer,C.等、1995年)。これらの薬剤は、乾癬を処置する際に有効であると知られている。βアドレナリン受容体の阻害剤、例えば、プロパノロール(propanolol)またはシクロキシゲナーゼ(cycloxygenase)、例えばインドメタシンは往々にして、乾癬の増悪をもたらす(Khusru,A.等、1998年)。
【００８１】
IL-10は、Th1応答の免疫調節に多大な影響を有する。これは、特に補助細胞でのIL-12合成の抑制を介して、Tリンパ球およびナチュラルキラー細胞のIFNγ産生を阻害することにより、2型サイトカインパターンの展開を促進する。さらに、これは、炎症誘発性サイトカイン産生および抗原提示能を抑制する。IL-10の静脈注射は、炎症誘発性サイトカイン産生を阻害するためであった(Khusru,A.等、1998年)。IL-10の調節不全は、乾癬で鍵となる役割を果たしうるので、IL-10の処置効果は、抗乾癬治療計画にとって有用であろう。乾癬斑の直下に、IL-10を皮下注射することにより、乾癬患者の病変が完全に消失した(Khusru,A.等、1998年)。IL-10は、ケラチノサイト炎症誘発性サイトカイン合成を阻害することが判明している。乾癬、IL-10欠乏が関与する疾患で、IL-10の免疫学的活性および処置効力を考慮することは、極めて重要であるようである。IL-10の投与、さらに導入は、乾癬処置のための有効な新規の手法でありうる。
【００８２】
TH1応答が、乾癬の病態生理に関与していることが証明されている。IL-2およびIFNγなどのTH1サイトカインは、乾癬でアップレギュレーションされる(Nickoloff,B.J.、1991;Uyemura,K.等、1993年)。これらのサイトカインは、乾癬の炎症および増殖プロセスで鍵となる役割を果たす。大環状群の免疫抑制剤は、IL-2産生を遮断し、したがって、T細胞成長を阻害する。IL-2産生およびT細胞活性化のカルシニューリン依存型およびNFAT仲介型抑制は、乾癬処置で有効であることが証明されている。
【００８３】
特定の位置で活性化されたリンパ球数を減らすことは、IL-2阻害、リンパ球のプリンおよびピリミジン合成阻害、受容体への成長因子シグナル後のシグナル伝達経路の阻害などの複数の手段による手法の1つである。シクロスポリンおよびメトトレキセートが乾癬状態を劇的に改善するという事実がある(Alice B.Gottlieb、2001年)。これらの薬物は、病変部でのリンパ球の増殖に影響を及ぼす。Tリンパ球増殖の阻害が、乾癬では、免疫抑制剤の最も重要な焦点である(Baumann,G.、1992年;Mollison,K.W.、1998年;Finzi A.F.、1989年;Ho,L.J.等、1999年)。シクロスポリンおよびFK506などのIL-2阻害を行う薬物(Dupont,E.等、1986年;Gelfand,E.W.等、1987年;Bloemena,E.等、1988年;Henderson,D.J.、1991年)、ラパマイシンなどのIL-2依存性シグナル伝達経路阻害剤(Thomson,A.W、1991年、Flanagan,W.M.、1993年;Duncan,J.I.、1994年;Siekierka,J.J.、1994年)およびメトトレキセートなどのヌクレオチド合成阻害剤は、マイトジェン誘発リンパ球増殖阻害を阻害することが知られている(Boffa,M.J.、1999年;Levantine,A.、1975年;Bialasiewicz,A.A.、1981年)。
【００８４】
慢性炎症は、ケラチノサイトの過増殖をもたらし、炎症を制御しうる薬剤が、ケラチノサイトの過増殖を制御することが認められている(Meisner Lorraine,F.、2001年;Mollison,K.W.、1998年)。これは、ケラチノサイトに必要で、リンパ球に由来する成長因子を阻害することにより間接的にケラチノサイトを阻害する、免疫細胞に対する化合物の作用である。いくつかのビタミンD3類似体は、ケラチノサイト増殖のためにターゲッティングされている。1.25(OH)2D3は、ガン細胞、表皮細胞ケラチノサイトおよび活性化リンパ球を含む多くの細胞型で成長および分化を調節する能力を有することが発見されている(Kragballe,K.、1992年)。このことによって、過増殖および免疫介在疾患で有用となり得る新規な一群の化合物を開発するための舞台が設定された。1.25(OH)2D3に加えて、合成ビタミンD3類似体である1α-OH-D3、1.24(OH)2D3およびカルシポトリオールが、臨床評価を受けている。カルシポトリオールは、極めて広汎に研究されている。その作用機序はまだ十分には理解されてなく、複雑であることが判明している。最も重要な作用は、ケラチノサイト増殖および分化の直接的な調節であるようである。この研究での目的は、ケラチノサイト増殖に対する抽出物の直接的な作用を理解することである。
【００８５】
皮膚の微小血管系の膨張が、乾癬の顕著な形態である。血管の形態変化をもたらす発病過程は不明なままであるが、考慮される証拠によって、乾癬に血管形成が関与していることが示唆されている(Creamer,D.等、1997年)。ケラチノサイトでのNGFのアップレギュレーションも、剥離をもたらすケラチノサイトおよび血管形成をもたらす内皮細胞の過形成により特徴付けられる状態で観察される。内皮細胞増殖および内皮細胞による細胞間接着分子発現に対するNGFの作用を研究することによる炎症の際のNGFの役割は、乾癬病態生理のための別のニッチである。いくつかのインビボおよびインビトロ研究で、NGFは、炎症応答を誘発しうることが観察された。炎症応答の鍵となる寄与成分であるNGFは、ICAM-1のアップレギュレーションならびに内皮細胞およびケラチノサイトの増殖をもたらす。血管内皮成長因子(VEGF)も、内皮細胞に対して特殊な特異性を有する強力なマイトジェンおよび異常な内皮細胞増殖の鍵となるメディエイターである(Siemeister,G.等、1998年)。表皮増殖は、真皮乳頭内での過剰な微小血管膨張に緊密に関与している(Kuroda,K.等、2001年)。内皮細胞増殖の阻害は、血管形成を阻害し、次いでこのことが、真皮での血管新生および免疫細胞輸送を抑制する助けとなる。
【００８６】
T細胞が皮膚内で活性化されると、一般的な白血球抗原(CLA)などの表面タンパク質を展開し、これらが、T細胞を皮膚へと戻す。正常状態および疾患状態での白血球輸送は通常、接着分子、ケモカインおよび他の走化性化合物の発現により生じる。内皮細胞は、このプロセスで重要な役割を有する。白血球と内皮細胞との結合は、第1の必須工程である。ヒトの皮膚の微小血管内皮細胞は、内皮白血球接着分子-1(ELAM-1またはEセレクチン)、血管細胞接着分子-1(VCAM-1)およびICAM-1などの誘発性白血球接着分子を発現することにより、炎症性白血球の導入に寄与する。ICAM-1の発現の増大は、インビボではT細胞移動に緊密に関与しているが、顆粒球の接着にも寄与している(Munro,J.M.等、1989年;Munro,J.M.等、1991年;Oppenheimer-Marks,N.等、1991年)。白血球は、そのリガンドの白血球機能関与-1分子(LFA-1またはCD11a/CD18)により内皮細胞表面上のICAM-1に結合する。血管内でのTリンパ球のローリングまたは減速は部分的に、セレクチンおよびそのリガンドとの相互作用により仲介される。Tリンパ球と内皮細胞の管腔側との緊密な接着は部分的に、T細胞上のLFA-1と内皮細胞上のICAM-1との相互作用により仲介される。ローリングおよび緊密な接着に続いて、Tリンパ球は、真皮内の隣接する内皮細胞間へとスリップする(Wakita.H.、1994年)。真皮内の活性化Tリンパ球は、ケラチノサイトICAM-1発現の誘発による表皮内でのリンパ球輸送の際に重要であるようである。ICAM-1の発現は、休止細胞に限られるが、IL-1βまたはIFN-αに曝されるなどの活性化因子によりかなり誘発されうる(Dustin,M.L.等、1988;Griffiths,C.E.等、1989年)。
【００８７】
現在では、様々なサイトカイン、走化性因子および接着分子が関与する特定の分子的詳細内容と共に、皮膚内での炎症細胞の輸送がより明らかになっている。鍵となる1つの要素はLFA-1を発現するT細胞の、表皮へのインビボでの運動およびそれに続く、細胞間接着分子-1(ICAM-1)の表面発現を介してのケラチノサイトへの結合である。この相互作用は、幅広い様々な皮膚疾患で同定されている一般的な免疫学的経路を示している。T細胞の走化性および接着に影響を及ぼすICAM-1などのケラチノサイト由来分子の同定によって、皮膚免疫ホメオスタシスでのケラチノサイトの活発な参加的役割を支持する実質的な証拠が追加される。炎症性皮膚疾患は、内皮細胞接着分子のアップレギュレーションに関与するためであり、真皮および表皮に炎症細胞が存在することが、乾癬での重要な特徴と考えられるためである。リンパ球輸送を低下させるために、ICAM-1の発現をダウンレギュレーションすることが、焦点の1つである。ICAM-1のためのアンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドは、乾癬および他の炎症性皮膚疾患の処置でかなり有効であるはずである(Mehta,R.C.等、2000)。
【００８８】
インターフェロンγ(IFN-γ)および腫瘍壊死因子(TNF)での活性化の後に、リンパ球は、ケラチノサイトに結合する。細胞間接着分子-1(ICAM-1)は、LFA-1のためのリガンドであるので、我々は、培養された内皮細胞内でのICAM-1の細胞発現を研究した。Alicaforsen(ISIS-2302)は、ISIS Pharmaceuticalsにより開発中の、様々な炎症性疾患を処置するための細胞間接着分子ICAM-1のRNアーゼH依存性アンチセンス阻害剤である。
【００８９】
正常な表皮のホメオスタシスを調節するシグナルのバランスが、乾癬では変化する(Inohara,S.、1992年;McKay,I.A.等、1995年;van Ruissen,F.等、1996年)。正常な表皮では、基底層は、連続して局所再生をもたらす始原細胞を含有し、時折、基底上での有糸分裂が観察できるが、基底上の細胞は、最終分化に専念することを認められる。乾癬斑では、複数の細胞層内に数多くの分裂中の細胞および有糸分裂の形態が存在する。乾癬での表皮過増殖は、ケラチノサイト幹細胞に由来する細胞の循環の増大に、または細胞集団の一時的な増幅の増大に由来することが示唆されている(van Ruissen,F.等、1996年;Bata-Csorgo,Z.等、1993年)。タンパク質チロシンキナーゼ(PTK)、乾癬の発病に中心的な役割を有する分子の阻害剤などの、増殖、代謝および炎症プロセスを仲介する特異的なシグナル伝達経路の同定は、抗乾癬薬開発で重要な役割を果たしうる。PTKは、細胞成長、増殖、分化および免疫系のシグナル伝達に緊密に関与している(Hunter,T.等、1985年;Ullrich,A.等、1990年)。受容体チロシンキナーゼおよび細胞間チロシンキナーゼからの未制御のシグナル伝達により、数多くの疾患が生じ、他方で、シグナル伝達の低下も、疾患をもたらす。乾癬では、PTKの過剰シグナル伝達が観察されている。PTKを遮断することが、抗乾癬処置で重要であるようである。乾癬ケラチノサイト成長の有効な抑制剤のために、EGFRキナーゼ活性に対して選択的なPTK阻害剤が報告されている(Hannah BenBassat、2001年)
【００９０】
インビボ研究から、本抽出物は、マウス耳腫脹試験モデルで、DNFB誘発耳腫脹を予防し、さらに、用量依存性であることが観察されている。このことは明らかに、免疫抑制を示している。
【００９１】
5)毒性研究
抽出物および分画[3、5および6]の急性毒性(LD50)を、マウスおよびラットで、経口および静脈内経路で評価した。1用量および1経路当りそれぞれの種類からの10匹の動物からなる群に投薬し、結果を、15日目に算出した。
【００９２】
a)次の値が、水性抽出物[3]で観察された
マウスp.o.のLD0  :  >5000mg/体重kg、
マウスi.v.のLD50  :  >1000mg/体重kg(死亡率50%)
ラットp.o.のLD0  :  >5000mg/体重kg、
ラットi.v.のLD50  :  >1000mg/体重kg(死亡率50%)。
【００９３】
i.v.経路の際に、ラットおよびマウスで観察された症状:
i.v.経路により投与すると、用量に依存して、傾眠、多呼吸、痙攣(convulscence)および全身衰弱が記録された。翌日には、動物は正常であった。生き残った動物では、尾の抜け落ちが観察された。
p.o.で投薬されたマウスおよびラットでは、症状は観察されなかった。
【００９４】
b)メタノール-可溶性分画[5]では、次の値が観察された
マウスp.o.のLD0  :  >5000mg/体重kg、
マウスi.v.のLD50  :  >5000mg/体重kg
p.o.で投薬されたマウスでは、症状が観察されなかった。
【００９５】
c)メタノール-不溶性分画[6]では、次の値が観察された
マウスp.o.のLD0  :  >5000mg/体重kg、
マウスi.v.のLD50  :  >5000mg/体重kg
p.o.で投薬されたマウスでは、症状が観察されなかった。
【００９６】
6)植物Argemone mexicanaの葉および茎の抽出物および分画を含有する新規の薬草組成物
本発明の新規の組成物は、経口投与に適するように、または局所塗布に適すように調製することができる。
【００９７】
経口投与の適した形は、錠剤、カプセル、シロップ、エリキシルまたは懸濁液などの形である。
【００９８】
局所塗布に適した形は、軟膏、クリーム、ローション、オイルまたは経皮薬物送達系などの形である。
【００９９】
単独で、または場合によって植物Cuminum cyminumの果実の抽出物と組み合わされた形で、植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の抽出物を含有する、こうして調製された経口および局所用組成物は付加的に、薬剤として許容される担体と共に処方することができる。
【０１００】
同様に、植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の抽出物から得られる分画を含有する、こうして調製された経口および局所用組成物は付加的に、薬剤として許容される担体と共に処方することができる。
【０１０１】
該抽出物および分画を含有する新規の組成物は、液体、乾燥粉末または粉末化薬草濃縮物、カプセル、錠剤などの形で、哺乳動物患者に経口投与で適切に提供することができる。
【０１０２】
調製された組成物の全量および混合物中での成分の割合は、多少変動しうる。通常の混合物は、経口投与のための1単位用量として、約8〜10インチのサイズの植物Argemone mexicanaの葉約10〜12枚および場合によって、水約50ml中の植物Cuminum cyminum約10gmからなり、新鮮な抽出物を含有する組成物約2から約100mg/gmまたはmlを含有する。
【０１０３】
組成物の成分の濃度および量は通常、次のとおりである:
Argemone mexicanaおよびCuminum cyminumの抽出物を含有する組成物
通常の組成物では、組成物1gmまたはmlあたりの成分の濃度は:
植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物:10〜50%、
植物Cuminum cyminumの果実からの抽出物:60〜90%、
または組成物1gmまたはml当り2mgから100mgである。
【０１０４】
Argemone mexicanaの抽出物を含有する組成物
この組成物は、1日当り50mgから5000mg、好ましくは1000mgの範囲の量で、Argemone mexicanaの葉および/または茎の抽出物[3]を含有してよい。
【０１０５】
Argemone mexicanaの分画を含有する組成物
この組成物は、1日当り5mgから200mgの範囲、好ましくは40mgの量のn-ブタノール可溶性分画[5];1日当り25mgから2550mgの範囲、好ましくは550mgの量のメタノール可溶性分画[6];1日当り5mgから1250mgの範囲、好ましくは280mgの量のメタノール不溶性分画[7]を含有してよい。
【０１０６】
薬剤として許容される適切な担体には:
ラクトース、スクロース、マンニトール、ソルビトールおよびキシリトールなどの糖;トウモロコシデンプン、タピオカデンプンおよび馬鈴薯デンプンなどのデンプン;カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよびメチルセルロースなどのセルロースおよびその誘導体;リン酸二カルシウムおよびリン酸三カルシウムなどのリン酸カルシウム;硫酸ナトリウム;硫酸カルシウム;ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール;ステアリン酸;落花生油、綿実油、ゴマ油、オリーブ油およびトウモロコシ油などの植物油;非イオン性、カチオン性およびアニオン性界面活性剤;エチレングリコールポリマー;βシクロデキストリン;脂肪族アルコール;加水分解された穀類固体;さらに、他の非毒性相容性充填剤;結合剤;崩壊剤;緩衝剤;防腐剤;酸化防止剤;滑剤;着香剤および薬剤処方で通常使用されるものなどが含まれる。
【０１０７】
新規の組成物は、乾癬を処置する際にすばらしい結果を示すことが判明している。
【０１０８】
例えば、新規の組成物を、植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物を含有し、約2から100mg/gmまたはmlの濃度で植物Cuminum cyminumの果実の抽出物を含有する処方物の形で提供することができ、これを、例えば、1〜3mg用量で、1日1回、1週間に7日、最大約8から約20週間にわたって患者に投与することができる。好ましい一実施形態では、抽出物1〜3gmを、1週間に3日間、12〜15週間にわたって連続的に投与する。
【０１０９】
経口投与するための好ましい組成物は、次のものを含有してもよい:
i)植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の水性抽出物265mg+ラクトース282.25mgおよびコロイド状二酸化ケイ素275mg、
ii)植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の水性抽出物のメタノール可溶性分画550mg+ラクトース146.85mgおよびコロイド状二酸化ケイ素3.15mg、
iii)植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の水性抽出物のメタノール可溶性分画280mg+ラクトース366.75mgおよびコロイド状二酸化ケイ素3.25mg、
iv)植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の水性抽出物のn-ブタノール可溶性分画40mg+ラクトース646.55mgおよびコロイド状二酸化ケイ素3.45mg。
【０１１０】
前記の組成物を、均一になるまでブレンドし、次いで、サイズ"00"の硬質ゼラチンカプセルに充填することができる。処理領域を理想的には、RH40±5%で、18〜22℃に維持する。
【０１１１】
本発明の組成物を調製するための通常のプロセスを、下記で詳述する:
1種または複数の活性成分、ラクトースおよびコロイド状二酸化ケイ素を均一になるまでブレンドする。これを、サイズ"00"の硬質ゼラチンカプセルに充填する。処理領域を理想的には、RH40±5%で、18〜22℃に維持する。
【０１１２】
局所塗布剤を投与する場合には、植物Argemone mexicanaの抽出物の量は、抽出物0.5重量%から重量10%の範囲である。好ましい組成物は、4%から6%を含有する。
【０１１３】
局所塗布するための通常の組成物は、
Argemone mexicanaの葉または茎の水性抽出物:5gm
水:100ml
ヒドロキシプロピルメチルセルロース(HPMC):4gm
を含有してよい。前記の成分を、徐々にブレンドして、滑らかなゲルを得た。
【０１１４】
適切な薬剤として許容される担体には、ヒドロキシプロピルメチルセルロースカルボマー、白色ロウ、カルナウバロウ;アニオン性乳化ロウ;白色ワセリン;ポリエチレングリコール、落花生油および薬剤処方物で通常使用されるものなどが含まれる。
（実施例１）
【０１１５】
植物Cuminum cyminumの果実の抽出物と組み合わされた形の植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の抽出物[1]およびその凍結乾燥された粉末[2]の調製
植物Argemone mexicanaの新鮮な葉を集め、水で洗浄した。10〜12枚(20.24gm)を、植物Cuminum cyminumの果実10.09gmおよび水50mlと混合した。この混合物をペーストになるまで粉砕した。この混合物全体を、モスリン布で濾過した。濾液、[1]を、単一用量として患者に投与することができる。抽出物を凍結乾燥させると、緑色がかった褐色の粉末として[1]の8.42%を得ることができる。
【０１１６】
植物Argemone mexicanaの新鮮な葉2.18kgを水、植物Cuminum cyminumの果実1.149kgと共に粉砕した。これらを、水10lt中に30分間放置し、次いで、モスリン布で濾過した。濾液を遠心分離し、濾液を凍結乾燥させると、緑色がかった褐色の粉末[2]358mg(16.4%)が得られた。
（実施例２）
【０１１７】
植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる抽出物に関する概念研究の証明
乾癬面積および重度指数(PASI)スコアを、乾癬の重度を記載するために手ごろな簡易化として長期間にわたって持続した。臨床では大半の研究者がPASIスコアを使用するが、これは、所定の処置プロトコルの有効性を評価するために、病変皮膚の全体表面積、さらにエリトレマー(erythrema)の程度、剥離および厚さを考慮する。乾癬を処置するための本発明による組成物の有効性を、臨床試験の間に、治療計画内で2週間おきに、PASIスコアを算出することにより評価した。
【０１１８】
乾癬を患っている哺乳動物を処置するために、本発明による薬草組成物を使用することにより得られる優れた結果を、臨床データは示している。
【０１１９】
慢性乾癬斑を有すると分類されている22人の感染患者からなる試験集団が、研究に含まれた。この群は、男性19人および女性3人を含んだ。患者は、25〜75歳の範囲であった。処方物[1]を、1週間の内の連続する3日間、1日1回、最大12〜15週間にわたって経口投与した。PASIスコアを、開始時、さらに2週間おきに記録した。この処置期間の間に、内用または外用処置を施与しなかった。患者の約50%が、100%のPASIスコアの低下を示し、患者の約50%が、75〜90%のPASIスコアの低下を示し、および患者1人が、当初スコアに対して約56%のPASIスコアの低下を示した。
【０１２０】
22人の患者での臨床試験の間に記録されたデータの統計的分析を行って、干渉(intervention)の組成物および乾癬を処置するための方法の有効性および許容性を評価した。
【０１２１】
治療計画の間に2週間毎に記録された患者の平均PASIスコア(表-1)は、同じもののグラフ表現を示しており、ここで、「n」は、患者の人数を表している。6.33±2.84から0.90±1.27のPASIスコアの統計的低下が観察され、このことは、本発明の薬草組成物の連続投与は、乾癬進行の処置としてPASIスコアの持続的な低下をもたらすことを示している。数人の患者では、8週間目以降に、疾患の存在しない状態が観察された。
【０１２２】
【表１】
2005519051.tif 000002
【０１２３】
PASIスコア低下は、基礎PASIスコアに比較して2週目以降から、2週間ごとに、薬草組成物で明らかであった(表-2)。処置方法に従った薬草組成物の間断のない投与により、PASIスコアに統計的に有意な割合の低下が生じることを、このデータは示している。試験患者全員で、PASIスコアが低下した。スコアは、6.33±2.84(平均±SD)から0.99±1.27(P<0.001)の処置後レベルまで低下した。
【０１２４】
【表２】
2005519051.tif 000003
【０１２５】
臨床試験の間の薬草組成物での患者の処置に対する許容性応答を分析するために、段階的系を使用した(表-3)。結果は、乾癬を処置する際の薬草組成物の優れた許容性を証明した。いずれの患者でも、深刻な副作用は観察されなかった。処置が完了した後に、患者の乾癬が、ベースラインよりもかなり深刻になる状態であるリバウンドのケースは、存在しなかった。
【０１２６】
【表３】
2005519051.tif 000004
【０１２７】
臨床試験の間に、血液学的、肝性および腎性機能に、正常な許容可能な変化から逸脱する異常な変化は観察されなかった。
(実施例３)
【０１２８】
植物Argemone mexicanaの抽出物[3]の調製
成熟したArgemone mexicanaを、開花している状態の間に集めた。新鮮な植物の葉および/または茎を、柄、花、果実および種から分離した。これらを洗浄し、ペーストになるまで粉砕した。
【０１２９】
ペースト30Kgを容器に入れ、水30リットルと共に混合した。容器をふたで覆い、約23〜27℃の室温で約16時間放置した。浸出の終了時に、バルブを空け、抽出物を集めた。さらなる水30リットルを残留物に加えた。これをさらに、16時間浸出させ、より早いものとして集めた。両方の浸出物を一緒に混合し、濾過し、遠心分離し、デカンテーションした。濾液を、真空下に40℃で回転蒸発器上で、1/5の容量まで減らした。この抽出物をさらに凍結乾燥させると、緑色がかった褐色の粉末2.1Kg(7%)、[3]が得られた。
【０１３０】
10)様々な抽出物の生物活性
p70srcチロシンキナーゼ、p56lynチロシンキナーゼ、5-リポキシゲナーゼ、ホスホジエステラーゼ(PDE)III、PDE  IV、PDE  Vおよびサイクリン依存性キナーゼ(CDK)1などの様々な酵素阻害が、CEREP(USA)で行われた。IL-2、IFNγ、IL-10などのサイトカインアッセイ、ConA誘発マウス脾細胞増殖阻害などのリンパ球増殖阻害、HDMEC増殖、内皮細胞ICAM-1発現、ケラチノサイト増殖およびマウスでのMEST、モルモットでのDTHなどの他のインビボ活性を、下記の実施例IIIに記載する。様々な抽出物の生物活性を、表-4に示す。
【０１３１】
【表４】
2005519051.tif 000005
【０１３２】
Argemone mexicanaの水性抽出物を、IC50を評価するためにさらに研究し、これが、64.15μg/mlのIC50でp60srcチロシンキナーゼに対して阻害性を有することが判明した。タンパク質チロシンキナーゼ(PTK)の阻害剤は、抗乾癬処置で重要な役割を果たす。PTKは、細胞成長、増殖、分化および免疫系のシグナル伝達に緊密に関与している。PTK阻害剤特性は、増殖、分化および作用のためのリンパ球、ケラチノサイトおよび内皮細胞受容体シグナル伝達を、さらに鍵となるシグナル分子のリン酸化を阻害する際に有用である。
【０１３３】
Cuminum cyminumの水性抽出物[4]を用いるアラキドン酸経路での5-リポキシゲナーゼの阻害は、様々な炎症疾患での抗炎症活性を証明した。
（実施例４）
【０１３４】
植物Cuminum cyminumの果実から得られる抽出物[4]の調製
Cuminum cyminumの果実27.5kgを採取し、粉末になるまで粉砕した。水82.5リットルを加えた。容器をふたで覆い、約23〜27℃の室温で約16時間放置した。浸出の終了時に、バルブを開け、抽出物を集めた。浸出物を濾過し、遠心分離し、デカンテーションした。濾液を回転蒸発器上、40℃で真空下に1/5まで減らした。この抽出物をさらに凍結乾燥させると、褐色の粉末2.38kg(8.65%)、[4]が得られた。
（実施例５）
【０１３５】
植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の抽出物のn-ブタノール可溶性分画[5]、メタノール可溶性分画[6]およびメタノール不溶性分画の調製
植物Argemone mexicanaの葉の水性抽出物25gmを、水375mlに溶かした。この組合せを攪拌し、遠心分離し、濾過した。濾液をn-ブタノール3×250mlで分配した。ブタノール層を水125mlで洗浄し、濃縮し、真空下に40℃で乾燥させると、n-ブタノール可溶性分画[5]1.5gm(5.97%)が得られた。
【０１３６】
連続的に攪拌しながら、水性分画を、メタノール2.5リットルに注いだ。沈殿の後に、溶液を遠心分離し、上澄みをデカンテーションした。このメタノール可溶性分画を真空下に40℃で濃縮し、凍結乾燥させると、メタノール可溶性分画[6]12.46gm(49.8%)が得られた。
【０１３７】
メタノール不溶性沈殿物を真空下に40℃で乾燥させ、凍結乾燥させると、固体8.48gm(33.89%)が得られ、これを、水85mlに溶かし、超音波処理し、遠心分離し、濾過した。濾液を、凍結乾燥させると、メタノール不溶性および水不溶性分画[7]6.67gm(26.7%)が得られた。
【０１３８】
12)分画の生物活性
12-1:マイトジェン誘発リンパ球増殖阻害を評価する方法の記載
乾癬でのその処置可能性に関するArgemone mexicanaの分画の有効性を評価するために、免疫抑制剤としてのその役割を、インビトロでのマイトジェン誘発リンパ球増殖阻害アッセイで評価した。マイトジェン誘発リンパ球増殖阻害(Gougerot-Pocidalo,M.A.等、1988年;Dayton,J.S.等、1992年)を、インビトロ免疫抑制特性を評価するために使用した。
【０１３９】
簡単に、C57マウス脾細胞を分離した。脾細胞100万個/mlを、ConA(10μg/ml)で、Argemone mexicana、Cuminum cyminumおよび処方物の様々な濃度の様々な抽出物/分画と共に、37℃で、5%CO2を有するCO2インキュβ中で5日間刺激した。増殖細胞を、MTTアッセイで数えた。
【０１４０】
IC50(μg/ml)での、ConA誘発マウス脾細胞増殖に対するArgemone mexicanaの抽出物および分画、[3]、[5]、[6]および[7]の効果は:
水性抽出物[3]は、78μg/mlのIC50で;n-ブタノール抽出物[5]は、34μg/mlで、さらに、メタノール可溶性抽出物[6]は、>200μg/mlで、メタノール不溶性抽出物[7]は、>80μg/mlで、ConA誘発リンパ球増殖阻害を示した。
【０１４１】
Argemone mexicanaのn-ブタノール抽出物[5]は、マウス脾細胞のConA誘発増殖に対して阻害性を有することが判明した。マイトジェン誘発リンパ球増殖に対する阻害活性は、免疫抑制であると知られており、乾癬の処置で有効と十分に確立されている。
【０１４２】
本発明は、CD4+、CD8+細胞を含むリンパ球増殖阻害活性を含む。これらは、乾癬、皮膚炎、強皮症、炎症疾患ならびに、乾癬性関節炎、乾癬斑、滴状乾癬、リウマチ性関節炎、クローン病、多発性硬化症、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群などの他の自己免疫疾患、ぜん息、慢性梗塞性肺疾患などのアレルギーおよび湿疹、鱗屑性の痒みのある斑などの関連状態を処置する際に助けとなる免疫抑制に関する。免疫抑制はさらに、様々な臓器移植に関する。
【０１４３】
12-2:ヒトケラチノサイト増殖阻害を評価する方法の記載
乾癬でのその治療可能性に関して、Argemone mexicanaの分画の有効性を評価するために、インビトロでのヒトケラチノサイト増殖阻害でのその役割を、ヘキソサミニダーゼアッセイにより評価した(Raychudhuri,S.K.等、2001年)。
【０１４４】
簡単に、ヒトケラチノサイトを、ヒト皮膚生検材料から分離し、2000細胞/ウェルを、ケラチノサイト成長培地150μl中で96ウェル平底プレートに加えた。翌日、培地を、ケラチノサイト成長培地:ケラチノサイト基礎培地(1:2容量)150μlに変えた。NGF100ng/mlを、成長因子として加えた。様々な濃度での様々な抽出物の段階希釈液を、ウェル4つずつに加えた。4つのウェルを、ベースライン値として培地のみを用いて維持した。4、6および8日後に、加湿5%CO2インキュβ中37℃で培養し、培地を除去し、PBSで細胞をすすいだ。基質60μl(0.1Mのクエン酸緩衝液、pH5.0中の7.5nMのp-ニトロフェニル-N-アセチル-b-D-グリコサミニド。次いでこの溶液を、等容量の水中0.5%のトリトンX-100と混合し、分取し、-20℃で貯蔵した)を各ウェルに加え、37℃で、加湿5%CO2インキュβ中で90分間インキュベーションした。停止溶液90μl(5mMのEDTAを含有する50mMのグリシン緩衝液、pH10.4)。405nmでの吸収を読取るために、上澄み125μlを96ウェルプレートに移した。
【０１４５】
【表５】
2005519051.tif 000006
【０１４６】
【表６】
2005519051.tif 000007
【０１４７】
植物Argemone mexicanaの様々な抽出物および分画は、320ng/mlから2.5ng/mlの範囲で、ヒトケラチノサイト増殖およびNGF誘発増殖に対して阻害性を有することが判明した。ケラチノサイトに対するこの抗増殖特性は、表皮の過形成を減らすために使用することができ、乾癬を処置する際に有用であると十分に立証されている。
【０１４８】
本発明は、乾癬、乾癬性関節炎、乾癬斑、滴状乾癬、膿疱性乾癬、銀白色の鱗屑を伴う乾癬ならびに、表皮過形成、欠陥を受けた細胞に仲介される、皮膚への感染を高める免疫、Ki67およびPCNAなどの増殖マーカーの介入、慢性皮膚疾患、再発皮膚疾患、ケラチノサイトの過形成、アポトーシス耐性ケラチノサイト、離散性エリテマトーデス丘疹および鱗状斑を含む皮膚疾患などの角質溶解活性を必要とする疾患で使用することができるヒトケラチノサイト増殖およびNGF誘発増殖阻害に関する。
【０１４９】
12-3:ヒトIL-2およびIFNγ産生を評価する方法の記載
乾癬を治療する可能性に関して、植物Argemone mexicanaの分画の効力を評価するために、インビトロでのIL-2およびIFNγ阻害におけるその役割を、PHA誘発PBMC IL-2およびIFNγアッセイにより評価した(Brynskov,J.等、1990年;Ho,L.J.等、1999年)。
【０１５０】
この目的は、ヒトリンパ球からのPHA誘発IL-2およびIFNγ産生に対する抽出物の効果を研究することである。簡略に、末梢血単核細胞(PBMC)を健康な個人から得た。様々な濃度のArgemone mexicanaの種々の抽出物と共に、37℃で5%のCO2を有するCO2インキュβ中で48時間、各ボランティアからのPBMC100万個をPHA(5μg/ml)で刺激した。上澄みを採取し、-70℃で凍結させた。培養上澄み中のIL-2およびIFNγを検出するために、BD PharmingenからのヒトIL-2およびヒトIFNγELISAキットを使用した。阻害パーセントを、対照を参照して算出した。
【０１５１】
【表７】
2005519051.tif 000008
【０１５２】
【表８】
2005519051.tif 000009
【０１５３】
Argemone mexicanaの様々な分画は、64ng/mlから2.5ng/mlの範囲で、マイトジェン誘発IL-2産生およびNGF誘発IL-2産生に対して、阻害性を有することが判明した。マイトジェン/NGF誘発IL-2産生に対するこの阻害活性は、免疫抑制性であることが知られており、乾癬を処置する際に使用することができると充分に立証されている。
【０１５４】
【表９】
2005519051.tif 000010
【０１５５】
【表１０】
2005519051.tif 000011
【０１５６】
Argemone mexicanaの様々な分画は、64ng/mlから2.5ng/mlの範囲で、マイトジェン誘発IFNγ阻害およびNGF誘発IFNγ阻害に対して、阻害性を有することが判明した。マイトジェン/NGF誘発IFNγ産生に対するこの阻害活性は、免疫抑制性であることが知られており、乾癬を処置する際に使用することができると充分に立証されている。
【０１５７】
本発明は、乾癬、皮膚炎、強皮症、炎症疾患ならびに、乾癬性関節炎、乾癬斑、滴状乾癬、慢性関節リウマチ、クローン病、多発性硬化症、過敏性腸疾患、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデス、シェーングレン症候群などの他の自己免疫疾患、ぜん息、慢性梗塞性肺疾患などのアレルギーおよび湿疹、鱗状痒み斑などの関連する状態などの過剰なTH1サイトカイン関与が存在する疾患で使用することができるIL-2およびIFNγ産生阻害に関する。IL-2およびIFNγ阻害はさらに、様々な臓器移植で使用することができる。
【０１５８】
12-4:ヒトIL-10産生を評価する方法の記載
乾癬を処置する可能性に関して、Argemone mexicanaの抽出物および分画の効力を評価するために、インビトロでのIL-10誘発におけるその役割を、ConA誘発PBMC IL-10産生アッセイにより評価した(Raychaudhuri,S.P.等、1999年)。
【０１５９】
簡略に述べると、ヒトPBMCを分離し、様々な濃度のArgemone mexicanaの種々の抽出物と共にConA10μg/mlで刺激し、37℃で、5%のCO2を有するCO2インキュβ中で48時間インキュベーションした。上澄みを採取し、-70℃で凍結させた。培養上澄み液中のIL-10を検出するために、BD PharmingenからのヒトIL-10ELISAキットを使用した。対照を参照して、誘発パーセントを算出した。
【０１６０】
【表１１】
2005519051.tif 000012
【０１６１】
Argemone mexicanaの水性抽出物およびメタノール不溶性抽出物は、200μg/mlから0.2μg/mlの範囲で、ConA活性化ヒトPBMC中でのIL-10のための誘発物質であることが判明した。IL-10は、乾癬処置での調節性サイトカインおよび抗乾癬処置のための十分に立証されたサイトカインであることが判明した。
【０１６２】
IL-10誘発は、乾癬、皮膚炎、強皮症、炎症疾患ならびに、乾癬性関節炎、乾癬斑、滴状乾癬、慢性関節リウマチ、クローン病、多発性硬化症、過敏性腸疾患、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデス、シェーングレン症候群などの他の自己免疫疾患、ぜん息、慢性梗塞性肺疾患などのアレルギーおよび湿疹、鱗状痒み斑などの関連状態で使用することができる。IL-10誘発はさらに、皮膚リンパ球抗原または皮膚白血球抗原を必要とする他の慢性、再発性および他の皮膚疾患で使用することができる。
【０１６３】
12-5:ヒトHDMEC-ICAM-1発現阻害を評価するための方法の記載
乾癬を治療する可能性に関して、Argemone mexicanaの様々な分画の効力を評価するために、インビトロでのヒト内皮細胞ICAM-1発現におけるその役割を、ELISAにより評価した(Raychudhuri,S.P.等、2001年)。
【０１６４】
簡略に述べると、HDMEC(2×104細胞/ウェル)を、付着因子で24時間予備処理された24ウェルプレートに入れた。培地(EGM-MV)は、20%のウシ胎児血清(FCS)を含有する。各実験を三重に行った。24時間後に、培地を5%のFCSを含有するEGM-MVに変え、次の試薬、NGF-β100ng/ml)、抗NGF抗体を有するNGF-βを別々に、様々な濃度のArgemone mexicanaの種々の抽出物と共に加えた。3つのウェルを対照として、培地のみで保持した。24時間のインキュベーションの後に、PBSで3回、細胞を洗浄した。細胞を、0.5%のグルテルアルデヒド(gluteraldehye)で10分間固定した。4℃で、PBS+5mMのEDTA+0.1%のウシ血清アルブミン(BSA)で3回洗浄した。次いで、ICAM-1モノクローナル抗体を0.5μg/ml濃度で、これらのウェルに加えた。1時間後に、PBS+0.1%のBSAでウェルを3回すすぎ、ペルオキシダーゼで標識されたヒツジ抗マウスIgG抗体100μl/ウェル(HBSS中で1:1000=0.1%のBSA)を加えた。1時間後に、ウェルを洗浄し、TMB溶液(100μl/ウェル)を各ウェルに加えた。30分後に、H2SO4(0.5M、50μ/ウェル)を加え、混合した。混合物100マイクロリットルを、96ウェルプレートに移し、492nmで読取った。対照を参照して、誘発パーセントを算出した。
【０１６５】
【表１２】
2005519051.tif 000013
【０１６６】
【表１３】
2005519051.tif 000014
【０１６７】
植物Argemone mexicanaの様々な抽出物および分画は、320ng/mlから2.5ng/mlの範囲で、LPSまたはNGF誘発HDMECでのICAM-1発現に阻害性を有することが判明した。このICAM-1阻害は、皮膚病変部へのリンパ球および単球輸送に影響を及ぼすことが十分に知られており、これは、乾癬状態を処置することができる。
【０１６８】
本発明は、免疫細胞輸送、リンパ球輸送、単球細胞輸送、好中球輸送、マクロファージ輸送などの細胞接着阻害、細胞接着発現阻害、インテグリン阻害を必要とする疾患で使用することができる。この細胞接着阻害は、強皮症、炎症疾患ならびに、乾癬性関節炎、乾癬斑、滴状乾癬、慢性関節リウマチ、クローン病、多発性硬化症、過敏性腸疾患、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデス、シェーングレン症候群などの他の自己免疫疾患、ぜん息、慢性梗塞性肺疾患などのアレルギーおよび湿疹、鱗状痒み斑などの関連状態で使用することができるであろう。
【０１６９】
12-6:ヒトHDMEC増殖阻害を評価する方法の記載
乾癬を治療する可能性に関して、Argemone mexicanaの様々な分画の効力を評価するために、インビトロでのヒト内皮細胞増殖におけるその役割を、ヘキソサミニダーゼアッセイにより評価した(Raychudhuri,S.P.等、2001年)。
【０１７０】
簡略に述べると、貯留されたドナーからの成人HDMECを第3の継代で使用した。培地は、ヒドロコルチゾンを伴わないEGM-MVであった。内皮細胞増殖を、ヘキソサミニダーゼアッセイにより評価した。ヘキソサミニダーゼのための基質は、p-ニトロフェノール-N-アセチル-β-D-グルコサミニドであった。NGF-βを、刺激薬として使用した。NGF-βを、100ng/mlで使用した。NGF中和抗体(100ng/ml)を使用して、NGF誘発EC増殖の阻害を評価した。
【０１７１】
1ウェル当り3300個の細胞を、平底96ウェルマイクロタイタプレートに入れた。24時間後に、細胞を活性化させるために、NGF-βおよびNGF+NGF中和抗体をウェルに3個ずつ加えた。細胞を2日および5日間インキュベーションした。基質溶液を60μlで、平底マイクロタイタウェル中の細胞に加えた。次いで、プレートを、37℃、湿度100%でインキュベーションした。適切な期間の後に、呈色反応が発現し、1ウェル当り5mMのEDTA90μlを含有する50mMのグリシン緩衝液(pH10.4)を加えることにより、酵素活性を遮断した。405nmの吸光度をELISAリーダーで測定した。
【０１７２】
【表１４】
2005519051.tif 000015
【０１７３】
【表１５】
2005519051.tif 000016
【０１７４】
Argemone mexicanaの様々な抽出物および分画は、320ng/mlから12ng/mlの範囲で、NGFを伴うまたは伴わないヒト真皮微小血管内皮細胞(HDMEC)増殖に対して阻害性を有することが判明した。ヒト真皮微小血管内皮細胞(HDMEC)に対するこの抗増殖特性は、真皮の血管形成を減らすために使用することができ、乾癬を処置する際に使用することができることが十分に立証されている。
【０１７５】
本発明は、乾癬およびガンなどの血管形成阻害を必要とする疾患で使用することができる。
【０１７６】
12-7:マウス耳腫脹試験を使用してインビボ免疫抑制を評価する方法の記載
マウスでのDNFB誘発遅延型過敏性を阻害するその能力に関して、Argemone mexicanaの様々な抽出物および分画のインビボでの効力を評価するために、この標準的な手順を使用した(Cornacoff,J.B.等、1992年;Cornacoff,J.B.等、1988年)。
【０１７７】
簡略に述べると、C57BL6マウスをこの試験のために使用した。マウスの背部でマウスを、0.2%のDNFB(オリーブ油とアセトン1:4中)で感作した。3回のブースターDNFB投与を3日毎に行った。マウスの耳介に0.2%のDNFB(オリーブ油とアセトン1:4中)を投与した。24時間後にVarnierキャリパーを用いて、耳の中心で耳の厚さを測った。ネガティブコントロールを参照して、阻害パーセントを算出することにより、分析を行った。抽出物および分画を、様々な用量で経口により投与した。
【０１７８】
Argemone mexicanaの水性[3]およびメタノール不溶性抽出物[7]は、DNFB感作されたC57BL6マウスに対して免疫抑制性であることが判明した。水性抽出物[3]のED50は、13.7mg/kgであると定量され、他方で、メタノール不溶性抽出物[7]では、44.87mg/kgであった。強力な免疫抑制特性が十分に立証され、これは、抗乾癬処置に有効である。
【０１７９】
MESTモデルでの免疫抑制などの本発明は、乾癬、皮膚炎、強皮症、炎症疾患ならびに、乾癬性関節炎、乾癬斑、滴状乾癬、慢性関節リウマチ、クローン病、多発性硬化症、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデス、シェーングレン症候群などの他の自己免疫疾患、ぜん息、慢性梗塞性肺疾患などのアレルギーおよび湿疹、鱗状痒み斑などの関連状態などの、免疫抑制を必要とするいくつかの疾患で使用することができる。免疫抑制は、様々な臓器移植の際にも使用することができる。
【０１８０】
12-8:モルモットでのDNFB誘発遅延型過敏性を使用して、インビボでの免疫抑制を評価する方法の記載
モルモットでの精製タンパク質誘導体(PPD)誘発遅延型過敏性を阻害するその能力に関して、様々な抽出物のインビボでの効力を評価するために、この標準的な手順を使用した。簡略に述べると、フロイント完全アジュバントと共に、PPD100μgでモルモットに真皮内感作をした。フロイント不完全アジュバントを含むPPD100μgからなる2回の後続のブースターを、1週間毎に行った。抽出および分画を様々な用量で経口投与した。PPD100μgを動物の真皮内に投与し、Varnierキャリパーを用いて皮膚の厚さを記録した。同じモルモットで、生理食塩水を注入された皮膚の厚さを引くことにより、皮膚厚の差を算出した。生理食塩水で感作された動物に対して、阻害パーセントを算出した。
【０１８１】
Argemone mexicana[3]およびCuminum cyminum[4]の水性抽出物は、52〜85%阻害の範囲で、PPD感作され、PPD攻撃されたモルモットに対して免疫抑制性であることが判明した。強力な免疫抑制特性が十分に立証され、これは、抗乾癬処置に有効である。
【０１８２】
DTHモデルでの免疫抑制などの本発明は、乾癬、皮膚炎、強皮症、炎症疾患ならびに、乾癬性関節炎、乾癬斑、滴状乾癬、慢性関節リウマチ、クローン病、多発性硬化症、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデス、シェーングレン症候群などの他の自己免疫疾患、ぜん息、慢性梗塞性肺疾患などのアレルギーおよび湿疹、鱗状痒み斑などの関連状態などの、免疫抑制を必要とするいくつかの疾患で使用することができる。免疫抑制は、様々な臓器移植の際にも使用することができる。
[参考文献]
2005519051.tif 000017
2005519051.tif 000018
2005519051.tif 000019
【手続補正書】
【提出日】平成16年4月13日(2004.4.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
乾癬ならびに関連する生理学的および免疫学的疾患を処置するための経口投与および局所塗布用の薬草組成物であって、有機成分を含有する植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの有効量の抽出物を、薬剤として許容される担体と組み合わせて含み、目的とする免疫学的および薬理学的特性を示す組成物。
【請求項２】
植物Cuminum cyminumの果実からの抽出物を薬剤として許容される担体と組み合わせてさらに含み、前記抽出物が目的とする免疫学的および薬理学的特性を示す、請求項1に記載の組成物。
【請求項３】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物が、水抽出物、エタノール抽出物または水-エタノール抽出物であり、液体の形である、請求項1または2に記載の組成物。
【請求項４】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物が、乾燥粉末である、請求項1に記載の組成物。
【請求項５】
前記植物Cuminum cyminumの果実からの抽出物が、水抽出物、エタノール抽出物または水-エタノール抽出物であり、液体の形である、請求項2に記載の組成物。
【請求項６】
前記植物Cuminum cyminumの果実からの抽出物が、乾燥粉末である、請求項2に記載の組成物。
【請求項７】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物中に存在する前記有機成分に、アルカロイド、フラボノイド、有機酸、アミノ酸、遊離の糖/グリコシドおよび塩からなる混合物が含まれる、請求項1または2に記載の組成物。
【請求項８】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物の量が、前記薬草組成物の重量の50から5000mgを構成し、前記組成物が、経口投与のために使用される、請求項1に記載の経口投与用の組成物。
【請求項９】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物の量が、前記薬草組成物の10から50重量%を構成し、残りが、前記植物Cuminum cyminumの果実からの抽出物および/または薬剤として許容される担体からなり、前記組成物が、経口投与のために使用される、請求項2に記載の経口投与用の組成物。
【請求項１０】
前記植物Cuminum cyminumの果実からの抽出物が、50から90重量%の量で存在し、場合によって、残りが、薬剤として許容される担体からなる、請求項9に記載の組成物。
【請求項１１】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物の量が、前記薬草組成物の重量の2から100mgを構成し、残りが、前記植物Cuminum cyminumの果実からの抽出物および/または薬剤として許容される担体からなる、請求項2に記載の組成物。
【請求項１２】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物が、前記抽出物の0.5から10重量%を構成し、前記組成物が、局所塗布のために使用される、請求項1に記載の組成物。
【請求項１３】
錠剤、カプセル、シロップ、エリキシルおよび懸濁液の形である、請求項8または9に記載の組成物。
【請求項１４】
軟膏、クリーム、ローション、オイルまたは経皮薬物送達系の形である、請求項12に記載の組成物。
【請求項１５】
前記薬剤として許容される担体は、ラクトース、スクロース、マンニトール、ソルビトールおよびキシリトールなどの糖;トウモロコシデンプン、タピオカデンプンおよび馬鈴薯デンプンなどのデンプン;ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボマー;白ロウ、カルナウバロウ;アニオン性乳化ロウ;白色ワセリン;カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよびメチルセルロースなどのセルロースおよびその誘導体;リン酸二カルシウムおよびリン酸三カルシウムなどのリン酸カルシウム;硫酸ナトリウム;硫酸カルシウム、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール;ステアリン酸;ステアリン酸マグネシウムおよびステアリン酸カルシウムなどのアルカリ土類金属ステアリン酸塩;ステアリン酸;落花生油、綿実油、ゴマ油、オリーブ油およびトウモロコシ油などの植物油;非イオン性、カチオン性およびアニオン性界面活性剤;エチレングリコールポリマー;β-シクロデキストリン;脂肪族アルコールおよび加水分解された穀類固体;非毒性相容性充填剤;結合剤;崩壊剤;緩衝剤;防腐剤;酸化防止剤;滑剤;ならびに着香剤から選択される、請求項１から１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られ、有機成分を含有する有効量の分画を、薬剤として許容される担体と組み合わせて含み、前記分画が、目的とする免疫学的および薬理学的特性を示す、乾癬ならびに関連性化学的および免疫学的疾患を処置するための経口投与または局所塗布用の組成物。
【請求項１７】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物から得られる前記分画が、n-ブタノール可溶性分画である、請求項16に記載の組成物。
【請求項１８】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物から得られる前記分画が、メタノール可溶性分画である、請求項16に記載の組成物。
【請求項１９】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物から得られる前記分画が、メタノール不溶性分画である、請求項16に記載の薬草組成物。
【請求項２０】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物から得られる前記n-ブタノール可溶性分画中に存在する前記有機成分に、アルカロイド、フラボノイドおよび他の低分子量の化合物が含まれる、請求項15または17に記載の組成物。
【請求項２１】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物から得られる前記メタノール可溶性分画中に存在する前記有機成分に、アミノ酸、有機酸および塩が含まれる、請求項15および18のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物から得られる前記メタノール不溶性分画中に存在する前記有機成分に、遊離の糖/グリコシド、有機酸および塩が含まれる、請求項15または18に記載の組成物。
【請求項２３】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物から得られる前記分画が、水抽出物である、請求項15、17、18または19のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物から得られる前記分画が、乾燥粉末または粘性物質である、請求項15、17、18または19のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる前記n-ブタノール可溶性分画の量が、5mgから200mgである、請求項15または17に記載の組成物。
【請求項２６】
植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる前記メタノール可溶性分画の量が、25mgから2550mgである、請求項15または18に記載の組成物。
【請求項２７】
植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から得られる前記メタノール不溶性分画の量が、5mgから1250mgである、請求項15または19に記載の組成物。
【請求項２８】
乾癬および関連する生化学的および免疫学的疾患を処置するための経口投与および局所塗布用の薬草組成物を調製する方法において、
a)前記植物の葉または茎を水で洗浄する工程と、
b)前記植物の葉または茎を溶剤と共に粉砕して、葉または茎の粗いペーストを得る工程と、
c)続いて、前記粗いペーストを前記溶剤の存在下に室温で16時間冷浸または浸出する工程と、
d)続いて、前記植物の葉および茎に存在する前記有機成分を前記溶剤で抽出する工程と、
e)すべての溶剤抽出物を合わせる工程と、
f)合わせた溶剤抽出物を濾過する工程と、
g)工程(f)で得られた濾液を遠心分離する工程と、
h)濾液を1/5の容量まで濃縮する工程と、
i)場合によって、工程(h)から得られた濃縮物を凍結乾燥または噴霧乾燥させて、乾燥粉末を得る工程と、
j)所望の場合には、薬剤として許容される担体を加える工程、
とを含む方法。
【請求項２９】
前記溶剤を、水、エタノールまたはこれらの混合物から選択する、請求項28に記載の方法。
【請求項３０】
工程(h)で、前記溶剤を、回転蒸発器中、50℃未満の温度で蒸発させる、請求項28に記載の方法。
【請求項３１】
前記抽出される有機成分に、アルカロイド、フラボノイド、アミノ酸、有機酸、糖/グリコシドおよび塩が含まれる、請求項28に記載の方法。
【請求項３２】
植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの前記抽出物の塩基価が、280から345である、請求項28に記載の方法。
【請求項３３】
前記抽出物を、液-液分配クロマトグラフィーに掛ける、請求項29に請求の方法。
【請求項３４】
前記担体を加える前に、
a.植物Argemone mexicanaの葉および/または茎から調製した水抽出物とn-ブタノールとを室温で混合し、この混合物を放置して、n-ブタノール層を分離する工程と、
b.工程(a)のプロセスを2回繰り返す工程と、
c.分離された水性層を別に保存する工程と、
d.有機成分を含有する3つの分離されたn-ブタノール抽出物をすべて合わせる工程と、
e.合わせたn-ブタノール抽出物を水で洗浄する工程と、
f.工程(e)の抽出物を蒸発、凍結乾燥または噴霧乾燥させることにより、前記n-ブタノール-可溶性分画の粘性物質を得る工程、
とを含む、請求項28に記載の方法。
【請求項３５】
工程(f)で、前記溶剤を、回転蒸発器中、50℃未満で蒸発させる、請求項34に記載の方法。
【請求項３６】
請求項18に記載の植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の前記メタノール可溶性分画を調製する方法において、
a.請求項34の工程(c)からの前記分離された水性相を、その6から7倍容量のメタノールと混合する工程と、
b.沈殿した固体を遠心分離する工程と、
c.工程(b)の上澄み溶液を蒸発、凍結乾燥または噴霧乾燥させることを含む、前記メタノール可溶性分画の乾燥粉末を得る工程、
とを含む方法。
【請求項３７】
工程(c)で、溶剤を回転蒸発器中、50℃未満で蒸発させる、請求項36に記載の方法。
【請求項３８】
メタノール可溶性分画の塩基価が、290から340である、請求項36に記載の方法。
【請求項３９】
請求項36に記載の工程(b)から得られた前記メタノール不溶性固体を乾燥させることを含む、請求項19に記載の植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の前記メタノール不溶性分画を調製する方法。
【請求項４０】
請求項19に記載の植物Argemone mexicanaの葉および/または茎の前記メタノール不溶性分画を調製する方法において、
a.請求項73に記載の工程(b)から得られた前記メタノール不溶性固体を溶かす工程と、
b.工程(a)の溶液を超音波処理する工程と、
c.工程(b)の超音波処理された溶液を遠心分離する工程と、
d.工程(c)の溶液を蒸発、凍結乾燥または噴霧乾燥させることを含む、前記メタノール不溶性分画の乾燥粉末を得る工程、
を含む方法。
【請求項４１】
工程(d)で、溶剤を回転蒸発器中、50℃未満で蒸発させる、請求項38に記載の方法。
【請求項４２】
前記メタノール不溶性分画の塩基価が、350〜380である、請求項45または46に記載の方法。
【請求項４３】
前記組成物が、有意な免疫学的および薬理学的特性を示す請求項1または2に記載の薬草組成物を、哺乳動物に投与することを含む乾癬ならびに関連する生化学的および免疫学的疾患を処置するための方法。
【請求項４４】
前記関連する生化学的および免疫学的疾患に、皮膚疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、アレルギーおよび慢性閉塞性肺疾患が含まれる、請求項43に記載の方法。
【請求項４５】
前記皮膚疾患に、皮膚炎、湿疹および強皮症が含まれる、請求項44に記載の方法。
【請求項４６】
前記免疫学的疾患に、乾癬斑、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪の乾癬、乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、クローン病、多発性硬化症、過敏性腸疾患、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデスおよびシェーグレン症候群などの自己免疫疾患が含まれる、請求項44に記載の方法。
【請求項４７】
前記アレルギーに、ぜん息が含まれる、請求項44に記載の方法。
【請求項４８】
請求項1および2のいずれか一項に記載の、前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物により示される前記注目すべき免疫学的および薬理学的特性には、免疫抑制、リンパ球増殖の阻害、サイトカイン変調、ケラチノサイト増殖の阻害、角質溶解活性、内皮細胞増殖の阻害、細胞接着分子発現の阻害、ホスホジエステラーゼ(III、IVおよびV)の阻害、MESTの阻害、酵素の阻害;サイトカイン発現の阻害、血管形成の阻害、増殖マーカーの阻害、インテグリンの阻害、免疫細胞輸送、リンパ球輸送、好中球輸送、単球輸送およびTh1サイトカイン過発現が含まれる、請求項44に記載の方法。
【請求項４９】
前記サイトカイン変調は、IL-2阻害である、請求項48に記載の方法。
【請求項５０】
前記は、IFNγ阻害である、請求項48に記載の方法。
【請求項５１】
前記サイトカイン変調は、IL-10誘発である、請求項48に記載の方法。
【請求項５２】
前記細胞接着分子発現の阻害は、ICAM-1である、請求項48に記載の方法。
【請求項５３】
前記酵素阻害は、p60srcチロシンキナーゼおよび5-リポキシゲナーゼ阻害である、請求項48に記載の方法。
【請求項５４】
前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物10から50重量%を含有する請求項1に記載の薬草組成物を哺乳動物に経口投与することを含む、請求項43に記載の方法。
【請求項５５】
請求項1に記載の薬草組成物を哺乳動物に経口投与することを含み、該組成物中で、前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物の量が、前記薬草組成物の重量の50から5000mgを構成する、請求項43に記載の方法。
【請求項５６】
植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物10から50重量%および植物Cuminum cyminumの果実からの抽出物60から90重量%を含有し、場合によって、残りが、薬剤として許容される担体からなる請求項2の薬草組成物を哺乳動物に経口投与することを含む、請求項43に記載の方法。
【請求項５７】
請求項2に記載の薬草組成物を哺乳動物に経口投与することを含み、前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物の量は、薬草組成物の重量の2mgから100mgを構成し、残りは、前記植物Cuminum cyminumの果実からの抽出物および薬剤として許容される担体からなる、請求項43に記載の方法。
【請求項５８】
請求項1に記載の薬草組成物を哺乳動物に局所塗布することを含み、前記植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物の量は、前記抽出物の0.5重量%から10重量%を構成し、場合によって残りは、薬剤として許容される担体からなる、請求項43に記載の方法。
【請求項５９】
請求項3、4、25、26、27および28のいずれか一項の記載による請求項1および2の前記薬草組成物の投与様式は、経口経路による、請求項43に記載の方法。
【請求項６０】
請求項3および29のいずれか一項の記載による請求項1の前記薬草組成物の投与様式は、局所塗布による、請求項43に記載の方法。
【請求項６１】
請求項16に記載の前記薬草組成物を哺乳動物に経口投与または局所塗布することを含む、乾癬ならびに関連する生化学的および免疫学的疾患を処置する方法。
【請求項６２】
前記薬草組成物は、植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物から得られる前記n-ブタノール可溶性分画5mgから200mgを含有し、残りが薬剤として許容される担体からなる、請求項61に記載の方法。
【請求項６３】
前記薬草組成物は、植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物から得られる前記メタノール可溶性分画25から2550mgを含有し、残りが薬剤として許容される担体からなる、請求項61に記載の方法。
【請求項６４】
前記薬草組成物は、植物Argemone mexicanaの葉および/または茎からの抽出物から得られる前記メタノール不溶性分画5から1250mgを含有し、残りが薬剤として許容される担体からなる、請求項61に記載の方法。
【国際調査報告】
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