(57)【要約】本発明は式（Ｉ）【化１】2005527504.tif 000008式中ＸはＣＨ２またはＳ、で示される化合物またはその医薬的に許容される塩を提供する。  該化合物およびその対応する医薬的に許容される酸付加塩はＤＰＩＶまたはＤＰＩＶ様酵素が介在する病態、例えば関節炎、肥満、免疫および自己免疫疾患、同種移植、癌、神経疾患または皮膚疾患などの治療に有用である。
2005527504.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2005527504.tif 000007
式中ＸはＣＨ２またはＳである、
で示される化合物またはその酸付加塩。
【請求項２】
医薬的に許容される担体および／または賦形剤と請求項１に記載の化合物からなる医薬組成物。
【請求項３】
ジペプチジルペプチダーゼＩＶまたはジペプチジルペプチダーゼＩＶ様酵素に関連する疾患または病態の予防または治療用の、ジペプチジルペプチダーゼＩＶまたはジペプチジルペプチダーゼＩＶ様酵素を阻害する医薬の製造のための、請求項１記載の化合物または請求項２記載の医薬組成物の使用。
【請求項４】
哺乳動物における食物摂取により上昇した血糖値を低下させるための、請求項３記載の使用。
【請求項５】
インシュリン非依存性糖尿病、関節炎、肥満、免疫および自己免疫疾患、同種移植、癌、神経疾患および皮膚疾患の予防または治療のための、請求項３または請求項４記載の使用。
【請求項６】
治療を要する哺乳動物に、治療効果量の請求項１記載の化合物または請求項２記載の医薬組成物を投与することを特徴とする、ジペプチジルペプチダーゼＩＶまたはジペプチジルペプチダーゼＩＶ様酵素が関連する疾患または病態の予防または治療のための、ジペプチジルペプチダーゼＩＶまたはジペプチジルペプチダーゼＩＶ様酵素の阻害方法。
【請求項７】
哺乳動物における食物摂取により上昇した血糖値を低下させるための、請求項６記載の方法。
【請求項８】
インシュリン非依存性糖尿病、関節炎、肥満、免疫および自己免疫疾患、同種移植、癌、神経疾患および皮膚疾患からなる群から選ばれる疾患または病態の予防または治療のための、請求項６または請求項７記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害の分野に関する。さらに詳しくは、グルタミニルピロリジンおよびグルタミニルチアゾリジン、該化合物を含有する医薬組成物、およびジペプチジルペプチダーゼＩＶおよびジペプチジルペプチダーゼＩＶ様酵素活性を阻害するための該化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＩＶ）はＮ−末端ジペプチドを、好ましくは末端から２番目の位置にプロリン残基を有するペプチド鎖から切断するセリンプロテアーゼである。哺乳動物系におけるＤＰＩＶの生物学的役割は完全には確立されていないが、神経ペプチド代謝、Ｔ細胞活性化、癌細胞の内皮細胞への接着、およびＨＩＶのリンパ球細胞への進入において重要は役割を果たしていると信じられている。
【０００３】
同様に、ＤＰＩＶはグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）と胃抑制ペプチド（ＧＩＰ）として知られているグルコース依存性インスリン刺激性ペプチドの不活性化に関与していることが発見された。ＧＬＰ−１は膵臓インスリン分泌の主たる刺激剤であり、グルコース処理に直接的に貢献的影響を持っている為、ＷＯ９７／４０８３２およびＵＳ６，３０３，６６１には、ＤＰＩＶおよびＤＰＩＶ様酵素活性の阻害は興味のある検討対象、例えばインシュリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）の治療に興味ある検討対象であることが示された。
【０００４】
本発明の１態様は、例えばＤＰＩＶおよびＤＰＩＶ様酵素の阻害による病態の治療に有効な新規のＤＰＩＶ阻害剤、ＤＰＩＶおよびＤＰＩＶ様酵素の阻害に有用な医薬組成物、および該酵素活性を阻害する方法を提供することにある。
【０００５】
本発明の他の態様としては、治療方法、特に糖尿病の治療方法、その中でもインスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）または２型糖尿病の治療方法、および糖尿病に伴う病態の治療方法、およびその方法に使用できる組成物に関する。
【０００６】
ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＩＶ）は、腎臓、肝臓、腸を含む身体の多様な組織で発見されるポストプロリン（それほどではないにせよ、ポストアラニン、ポストセリンまたはポストグリシン）切断セリンプロテアーゼである。
【０００７】
ＤＰＩＶ阻害剤が耐糖能異常および糖尿病の治療に有用であろうことは知られている（国際特許出願公開番号ＷＯ９９／６１４３１、ペーダーソン、ＲＡら、Diabetes、１９９８ ８月；４７（８）：１２５３−８およびポウリー、ＲＰら、Metabolism １９９９ ３月；４８（３）：３８５−９）。特に、ＷＯ９９／６１４３１はアミノ酸残基とチアゾリジンまたはピロリジン基を有するＤＰＩＶ阻害剤およびその塩、特にＬ−スレオ−イソロイシルチアゾリジン、Ｌ−アロ−イソロイシルチアゾリジン、Ｌ−スレオ−イソロイシルピロリジン、Ｌ−アロ−イソロイシルチアゾリジン、Ｌ−アロ−イソロイシルピロリジンおよびその塩を開示している。
【０００８】
低分子量ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害剤のさらなる例としては、テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキサミド誘導体、Ｎ−置換−２−シアノピロール類および−ピロリジン類、Ｎ−（Ｎ’−置換グリシル）−２−シアノピロリジン類、Ｎ−（置換グリシル）−チアゾリジン類、Ｎ−（置換グリシル）−４−シアノチアゾリジン類、ボロニル阻害剤およびシクロプロピル縮合ピロリジン類などの薬剤が挙げられる。ジペプチジルペプチダーゼＩＶの阻害剤はＵＳ６，０１１，１５５；ＵＳ６，１０７，３１７；ＵＳ６，１１０，９４９；ＵＳ６，１２４，３０５；ＵＳ６，１７２，０８１；ＷＯ９９／６１４３１、ＷＯ９９／６７２７８、ＷＯ９９／６７２７９、ＤＥ１９８３４５９１、ＷＯ９７／４０８３２、ＤＥ１９６１６４８６Ｃ２、ＷＯ９８／１９９９８、ＷＯ００／０７６１７、ＷＯ９９／３８５０１、ＷＯ９９／４６２７２、ＷＯ９９／３８５０１、ＷＯ０１／６８６０３、ＷＯ０１／４０１８０、ＷＯ０１／８１３３７、ＷＯ０１／８１３０４、ＷＯ０１／５５１０５およびＷＯ０２／０２５６０に開示される。これらが教示するところは、阻害剤、その製造およびその使用に関するその全体にわたって参照することによりこの明細書に組み込まれている。
【発明の概要】
【０００９】
本発明は式：
【化１】
2005527504.tif 000003
式中ＸはＣＨ２またはＳである、
で示される化合物またはその医薬的に許容される塩に関する。
【００１０】
そのような化合物およびその対応する医薬的に許容される酸付加塩はＤＰＩＶまたはＤＰＩＶ様酵素が介在する病態、例えば、関節炎、肥満、免疫および自己免疫疾患、同種移植、癌、神経疾患および皮膚疾患の治療に有用である。
【００１１】
さらに好ましい態様では、本発明化合物は、経口糖負荷に応答して上昇した血糖値を下げることにより耐糖能を改善し、よってインスリン非依存性糖尿病の治療に有用である。
【００１２】
本発明はジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＩＶ）阻害の分野に関し、さらに詳しくは、グルタミニルピロリジンおよびグルタミニルチアゾリジン、該化合物を含有する医薬組成物、およびＤＰＩＶおよびＤＰＩＶ様酵素活性阻害における該化合物の使用に関する。
【００１３】
本発明は、例えばＤＰＩＶ阻害による病態の治療に有用な新規なＤＰＩＶ阻害剤、例えばＤＰＩＶおよびＤＰＩＶ様酵素活性阻害に有用は医薬組成物、およびＤＰＩＶおよびＤＰＩＶ様酵素活性の阻害方法を提供する。
【００１４】
本発明は式：
【化２】
2005527504.tif 000004
で示される化合物、
および特に式（Ｉ）：
【化３】
2005527504.tif 000005
で示される化合物、
またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１５】
本発明のさらに好ましい化合物は、式（ＩＩ）：
【化４】
2005527504.tif 000006
で示される化合物、
またはその医薬的に許容される塩である。
【００１６】
本発明化合物は酸付加塩、特に医薬的に許容される酸付加塩に変換できる。医薬的に許容される塩は、一般的にアミノ酸塩基側鎖が無機または有機酸でプロトン化された形である。代表的な有機または無機酸としては、塩酸、臭素酸、過塩素酸、硫酸、硝酸、リン酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、シュウ酸、パモン酸、２−ナフタレンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクロヘキサンスルファミン酸、サリチル酸、サッカリン酸、またはトリフルオロ酢酸が挙げられる。本発明化合物のすべての医薬的に許容される酸付加塩が本発明範囲に包含される。
【００１７】
遊離化合物とその塩形態の化合物との密接な関係を鑑みて、ある化合物がこれに関連して引用される場合はいつでも、状況に応じてそれが可能でありあるいは適当である場合は、その対応する塩もまた意図されているものとする。
【００１８】
本発明はさらに本発明化合物のプロドラッグもその発明範囲に包含するものである。一般的に、そのようなプロドラッグはインビボで所望の治療活性化合物に容易に変換できる、化合物の機能的誘導体である。よって、このような場合には、本発明の治療方法で用語「投与する」は、対象に投与後インビボで上記特定の化合物に変換される、１個または複数個の請求の範囲の化合物のプロドラッグバージョンと開示される、多様な疾患の治療も包含する。好ましいプロドラッグ誘導体の選択および調製の通常の工程は、例えば、「プロドラッグのデザイン」、H. Bundgaard, Elsevier編、１９８５および特許出願ＤＥ１９８２８１１３、ＤＥ１９８２８１１４、ＷＯ９９／６７２２８およびＷＯ９９／６７２７９に記載され、それらはここに参照されて組み込まれている。
【００１９】
本発明による化合物が少なくとも１つの不斉中心を持つ場合は、それらはそのために鏡像異性体として存在しうる。化合物が２個あるいはそれ以上の不斉中心を持つ場合は、それらはさらにジアステレオマーとして存在しうる。そのような異性体およびそれらの混合物すべてが本発明範囲に包含されるものであることは、理解されるべきである。さらに、化合物の結晶形のいくつかは多形体として存在し、それらも本発明内に包含されるものである。また、化合物のいくつかは、水や一般的な有機溶媒と溶媒和物（例えば水和物）を形成することがあり、そのような溶媒和物もまた本発明範囲に包含されるべきものである。
【００２０】
塩を含む化合物はまたその水和物として得る事ができ、あるいはそれらの結晶化に用いた他の溶媒も含む。
【００２１】
上記のとおり、本発明化合物および特に式ＩおよびＩＩの化合物およびその対応する医薬的に許容される酸付加塩はＤＰＩＶおよびＤＰＩＶ様酵素活性阻害に有用である。本発明化合物およびその対応する医薬的に許容される酸付加塩のＤＰＩＶおよびＤＰＩＶ様酵素活性を阻害する能力は、実施例４および５で示すように、インビトロおよびヒト血漿内でのＫｉ値を測定するＤＰＩＶ活性アッセイを用いて示すことができる。本発明化合物のＫｉ値は、ブタ腎臓ＤＰＩＶに対して、グルタミニルチアゾリジンではＫｉ＝３．１２×１０−７Ｍ±５．１１×１０−１０Ｍ、グルタミニルピロリジンではＫｉ＝１．３０×１０−６Ｍ±８．４９×１０−８Ｍであった。本発明化合物のＫｉ値は、ヒト血漿中、グルタミニルチアゾリジンでは、５分間プレインキュベーション後でＫｉ＝４．０３×１０−７Ｍ±２．１９×１０−１０Ｍ、２２時間プレインキュベーション後でＫｉ＝５．１３×１０−７Ｍ±１．２６×１０−８Ｍ、またはグルタミニルピロリジンでは、５分間プレインキュベーション後でＫｉ＝１．３０×１０−６Ｍ±４．８９×１０−８Ｍ、２２時間プレインキュベーション後でＫｉ＝１．３６×１０−６Ｍ±３．２１×１０−８Ｍであった。
【００２２】
本発明化合物およびその対応する医薬的に許容される酸付加塩のインビボでのＤＰＩＶを阻害する能力は、実施例９に示すように、ウィスターラットへの経口または脈管内投与により示すことができる。本発明化合物はウィスターラットへ経口または脈管内投与後いずれでも、インビボでＤＰＩＶ活性を阻害する。
【００２３】
ＤＰＩＶは哺乳動物の広範囲な器官および組織、例えば腸刷子縁細胞（Gutschmidt Sら、ラット空腸絨毛と刷子縁領域でのプロテイン含量の“原位置（In situ）”測定および四酵素活性とのその相関、Histochemistry、1981,72 (3), 467-79）、外分泌腺上皮細胞、肝細胞、腎細管、内皮細胞、筋線維芽細胞（Feller A. C. ら．、ヒト組織におけるジペプチジルペプチダーゼＩＶを検出するモノクロナル抗体。Virchows Arch. A. Pathol. Anat. Histopathol. 1986; 409 (2): 263-73）、神経細胞、ある種の表層上皮の側膜、例えば卵管、子宮および精嚢腺、精嚢腺上皮などの管腔細胞質中、およびブルンナー腺の粘膜細胞（Hartel S. ら、ラット器官におけるジペプチジルペプチダーゼ（ＤＰＰ）ＩＶ。免疫組織化学と活性組織化学の比較。Histochemistry 1988; 89 (2): 151-61）、生殖器官、例えば精巣上体尾および膨大部、精嚢およびその分泌物（Agrawal & Vanha-Perttula、ウシ生殖器官およびその分泌物におけるジペプチジルペプチダーゼ、Int. J. Androl. 1986, 9 (6): 435-52）に存在する。ヒト血清において、２個のジペプチジルペプチダーゼの分子形が存在する（Krepela E. ら、正常ヒト血清中のジペプチジルペプチダーゼＩＶの２分子形の実証。Physiol. Bohemoslov. 1983, 32 (6): 486-96）。ＤＰＩＶの血清高分子量形は活性化Ｔ細胞表面に発現される（Duke-Cohan J. S. ら、血清高分子量ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＣＤ２６）は活性化Ｔ細胞から放出される新規抗原ＤＰＰＴ−Ｌと類似している。J. Immunol. 1996,156 (5): 1714-21）。
【００２４】
本発明化合物およびその対応する医薬的に許容される酸付加塩はインビボでＤＰＩＶを阻害することができる。本発明の一態様において、すべての哺乳動物の組織および器官由来のＤＰＩＶのすべての分子形、相同体、およびエピトープ、および未だ発見されていないものもまた本発明範囲に包含されるべきものである。
【００２５】
プロリン特異性プロテアーゼのまれな群の中で、ＤＰＩＶは、ポリペプチド鎖のアミノ末端から２番目の残基で、プロリンに特異的な唯一の膜結合酵素であると元来信じられていた。しかしながら、ＤＰＩＶと構造的に非相同であるが対応する酵素活性を有する他の分子が近年同定された。現在のところ同定されているＤＰＩＶ様酵素としては、例えば、フィブロブラスト活性化タンパクα、ジペプチジルペプチダーゼＩＶβ、ジペプチジルアミノペプチダーゼ様タンパク、Ｎ−アセチル化α結合酸性ジペプチダーゼ、静止細胞プロリンジペプチダーゼ、ジペプチジルペプチダーゼＩＩ、アトラクチンおよびジペプチジルペプチダーゼＩＶ関連タンパク（ＤＰＰ８）が挙げられ、Sedo & Malikの総論に開示されている（Sedo & Malik、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ様分子：相同タンパクまたは相同活性？、Biochimica et Biophysica Acta 2001, 36506 : 1-10）。
【００２６】
さらに、ＤＰＩＶ様酵素はＷＯ０１／１９８６６、ＷＯ０２／０４６１０、ＷＯ０２／３４９００およびＷ００２／３１１３４に開示されている。ＷＯ０１／１９８６６は、ＤＰＩＶおよびフィブロブラスト活性化タンパク（ＦＡＰ）に構造的および機能的に類似点を有した新規なヒトジペプチジルアミノペプチダーゼ（ＤＰＰ８）を開示している。ＷＯ０２／０４６１０は、ヒトジペプチジルペプチダーゼＩＶ様酵素を調節する試薬、およびヒトジペプチジルペプチダーゼＩＶ様酵素遺伝子生成物に結合する試薬を開示している。これらの試薬は、機能障害または疾患、例えばこれらに限定されないが、腫瘍や、痛みや神経変性疾患を含む末梢および中枢神経系疾患などの、予防、緩解または治療に役割を果たすことが出来る。ＷＯ０２／０４６１０のジペプチジルペプチダーゼＩＶ様酵素は本分野でよく知られている。ジーンバンクデータベースでは、この酵素はＫＩＡＡ１４９２（２００１年２月に登録、２０００年４月４日にＡＢ０４０９２５として提示）として登録されている。
【００２７】
ＷＯ０２／３４９００は、ＤＰＩＶとＤＰＰ８のアミノ酸配列に有意な相同を示すジペプチジルペプチダーゼ９（ＤＰＰ９）を開示している。ＷＯ０２／３１１３４は３種のＤＰＩＶ様酵素、ＤＰＲＰ１、ＤＰＲＰ２およびＤＰＲＰ３を開示している。配列分析により、ＤＰＲＰ１はＷＯ０１／１９８６６に開示のＤＰＰ８と一致し、ＤＰＲＰ２はＤＰＰ９と一致し、ＤＰＲＰ３はＷＯ０２／０４６１０に開示のＫＩＡＡ１４９２と一致する。
【００２８】
本発明の他の好ましい態様において、すべての哺乳動物の組織および器官由来のＤＰＩＶ様酵素活性を示すタンパクのすべての分子形、相同体、およびエピトープ、および未だ発見されていないものもまた本発明範囲に包含されるべきものである。
【００２９】
本発明化合物およびその対応する医薬的に許容される酸付加塩のＤＰＩＶ様酵素を阻害する能力は、実施例６に示すように、インビトロでＫｉ値を測定する酵素活性アッセイを用いて示すことが出来る。ブタジペプチジルペプチダーゼＩＩに対する本発明化合物のＫｉ値は、グルタミニルピロリジンではＫｉ＝８．５２×１０−５Ｍ±６．３３×１０−６Ｍ、グルタミニルチアゾリジンではＫｉ＝１．０７×１０−５Ｍ±３．８１×１０−７Ｍであった。すべて化合物はブタジペプチジルペプチダーゼＩＩを阻害する。
【００３０】
本発明の他の態様において、本発明の化合物およびその医薬的に許容される酸付加塩は、非ＤＰＩＶおよび非ＤＰＩＶ様プロリン特異性酵素に対する阻害活性がないか、あっても低い活性である。実施例７に記載のように、グルタミニルチアゾリジンおよびグルタミニルピロリジンでは、ジペプチジルペプチダーゼＩおよびプロリルオリゴペプチダーゼへの阻害はなかった。プロリダーゼに対しては、両化合物はＤＰＩＶと比較して顕著に低い活性を示した。プロリダーゼに対するＩＣ５０値は、グルタミニルチアゾリジンはＩＣ５０＞３ｍＭで、グルタミニルピロリジンはＩＣ５０＝３．４×１０−４Ｍ±５．６３×１０−５Ｍであった。
【００３１】
ＤＰＩＶおよびＤＰＩＶ様酵素活性阻害能を考慮すると、本発明化合物、特に式ＩおよびＩＩの化合物、およびその対応する医薬的に許容される酸付加塩は、該酵素活性が介在する病態の治療に有用である。よって、ここに開示の化合物はインシュリン非依存性糖尿病、関節炎、肥満、免疫および自己免疫疾患、同種移植、癌、多発性硬化症等の神経疾患および皮膚疾患などの病態の治療に有用である。
【００３２】
本発明のさらに好ましい態様において、本発明化合物およびその対応する医薬的に許容される酸付加塩は、経口糖負荷に応答して上昇した血糖値を下げることにより耐糖能を改善し、よって、インシュリン非依存性糖尿病の治療に有用である。本発明化合物およびその対応する医薬的に許容される酸付加塩の、経口糖負荷に応答して耐糖能を改善する能力は、糖尿病ズッカーラットを用いて測定できる。この方法は実施例１０および１１に示す。糖尿病ズッカーラットへ５ｍｇ／ｋｇ（体重）、１５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ（体重）のグルタミニルチアゾリジンまたはグルタミニルピロリジンを経口投与することにより、上昇した血糖値レベルの用量依存性低下が得られ、よって糖尿病ズッカーラットの耐糖能が改善された。
【００３３】
本発明化合物は、実施例５によるとヒト血漿中で安定である。驚くべきことには、本発明のさらに好ましい態様として、本発明化合物およびその対応する医薬的に許容される酸付加塩は、哺乳動物に投与後にインビボで分解される。本発明化合物およびその対応する医薬的に許容される酸付加塩の、インビボで分解される能力はウィスターラットと後続のＬＣ／ＭＳ分析を用いて測定できる。グルタミニルチアゾリジンはウィスターラットに経口投与後、各ピログルタミニルチアゾリジンに分解されることが判明した。
【００３４】
よって、本発明は、それを必要とする対象においてＤＰＩＶまたはＤＰＩＶ様酵素活性の変調により介在される病態の治療方法を提供し、該方法は本発明のいずれかの化合物またはその医薬組成物のいずれかを、該病態の治療に有効な量および投与計画で投与することを特徴とする。さらに、本発明は、対象においてＤＰＩＶ活性の変調により介在される病態の予防用または治療用医薬の製造のための、本発明化合物およびその対応する医薬的に許容される酸付加塩の使用も包含するものである。化合物は通常の投与方法、例えばこれに限定はされないが、静脈内、経口、皮下、筋肉内、皮内および非経口投与により患者に投与できる。
【００３５】
さらなる他の態様において、本発明は、医薬組成物への本発明化合物およびその対応する医薬的に許容される酸付加塩の製剤を提供する。
【００３６】
ここで用いる用語「対象」とは、治療、観察または実験対象である動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくは、ヒトを意味する。
【００３７】
ここで用いる用語「治療効果量」は、組織系、動物またはヒトにおいて、例えば治療される疾患または傷害の症状の緩和も含む、研究者、獣医、医者または他の臨床医学者が求めている生物学的または医薬的応答を引き出す為の活性化合物または医薬の量を意味する。
【００３８】
ここで用いる用語「組成物」は、請求の範囲の化合物の治療効果量を含有する生成物、および直接的または間接的に請求の範囲の化合物の組み合わせからなるいかなる生成物をも包含するものである。
【００３９】
本発明の医薬組成物の調製にあたり、活性成分として本発明の１個あるいは複数の化合物、特に式Ｉまたは式ＩＩの化合物、およびその対応する医薬的に許容される酸付加塩を、医薬的に許容される担体と、通常の医薬配合技術により密に混合する。該担体は投与に適した製剤形、例えば経口や筋肉内などの非経口に適した製剤形により、広範な剤形から選択できる。経口用組成物を調製するには、通常の医薬媒体いずれも使用できる。よって、液体経口製剤には、例えば、懸濁剤、エリキシル剤および溶液剤には、好適な担体および添加剤としては、水、グリコール、油、アルコール、風味剤、保存剤、着色剤等が挙げられる。粉末、カプセル、ゲルキャップおよび錠剤などの固体経口製剤に、好適な担体および添加剤としては、デンプン、白糖、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤等が挙げられる。投与の際の簡便さ故に、錠剤およびカプセル剤はもっとも有利な経口単位投与形であり、それらでは固体医薬担体が用いられる。要すれば、錠剤は標準的技術による糖衣錠または腸溶錠である。非経口投与製剤では、担体としては通常滅菌水が挙げられ、溶解性や保存性を助ける目的の他の成分も含まれる。
【００４０】
注射可能な懸濁製剤は、適当な液体担体、懸濁化剤等を用いる。医薬組成物はここでは単位投与形あたり、例えば錠剤、カプセル剤、粉末、注射剤、ティースプーンフル等あたり上記の効果投与量を輸送する為に必要な活性成分量を含有する。医薬組成物は、ここでは投与単位形あたり、例えば錠剤、カプセル剤、粉末、注射剤、ティースプーンフル等あたり、約０．０１ｍｇから約１０００ｍｇ（好ましくは約５〜約５００ｍｇ）含有し、１日あたり約０．１から約３００ｍｇ／ｋｇ（体重）（好ましくは１日あたり１から５０ｍｇ／ｋｇ）の投与量で投与される。しかしながら、投与量は患者の要求、治療病態の重篤度、および用いる化合物によって変動する。連日投与でも間隔を開けた（post-periodic）投与計画いずれも採用できる。通常は投与量は患者の個性、その病態および所望の治療効果を基にして内科医により調節される。
【００４１】
好ましくは、これらの組成物は、経口、非経口、経鼻投与、舌下投与または直腸投与に、または吸引投与または吸入投与に、錠剤、丸剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、滅菌非経口溶液または懸濁剤、定量エアゾール剤または液体スプレー、ドロップ剤、アンプル剤、自己注射剤、または坐剤などの単位投与形である。別には、組成物は週１または月１投与に適した剤形でもいい。例えば、活性化合物の不溶性塩、例えばデカン酸塩は筋肉内注射用のデボー製剤に用いる。錠剤等の固体組成物の調製には、主たる活性成分を医薬担体、例えば通常の打錠用成分、トウモロコシデンプン、乳糖、蔗糖、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸２カルシウムやガムなど、および水などの他の医薬的希釈剤と理想的に混合し、本発明化合物またはその医薬的に許容される塩の均一な混合物を含有する固体前製剤組成物を得る。これらの前製剤組成物を均一と言った場合は、活性成分が組成物全体に亘り均一に理想的に分散し、該組成物がさらに錠剤、丸剤またはカプセル剤等の等しく効果を持つ投与形に容易に再分割されることを意味する。この固体前製剤組成物は、ついで、約０．１〜約１０００ｍｇ、好ましくは約５〜約５００ｍｇの本発明活性成分を含有する上記の単位投与形に再分割される。
【００４２】
新規組成物の錠剤または丸剤を有利に被覆、あるいは混合されて持続性作用の利点を有した投与形が得られる。例えば、錠剤または丸剤は内部投与構成成分と外部投与構成成分からなり、後者は前者を包む（envelope）型である。この２つの構成成分は、腸内での崩壊を防ぎ、内部構成成分を無傷で十二指腸に輸送し、あるいは内部成分の放出を遅らせる腸溶性層で隔離される。そのような腸溶性層あるいは被覆には、多くの重合体酸を含む材料とセラック、セチルアルコール、および酢酸セルロースなど多様な材料が用いられる。
【００４３】
本発明の新規組成物が経口投与用または注射用に有利に適合された液体製剤としては、水溶液製剤、好適に味のついたシロップ、水性または油性懸濁剤、および綿実油、ごま油、ココナッツ油またはピーナッツ油などの食用油で風味を付した乳濁剤、およびエリキシル剤および同様の医薬用担体製剤が挙げられる。水性懸濁剤に適した分散化剤または懸濁化剤としては合成または天然ガム、例えばトラガカント、アカシア、アルギン酸塩、デキストラン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ポリビニルピロリドンまたはゼラチンが挙げられる。
【００４４】
本発明による化合物の調製方法により立体異性体の混合物を生じた場合、これらの異性体はプレパラティブクロマトグラフィーなどの通常の技術により分離できる。化合物はラセミ体で調製され、あるいは個々の鏡像異性体は鏡像特異的合成法または光学分割法により調製される。化合物は、標準的技術、例えば光学活性酸（例えば（−）−ジ−ｐ−トルオイル−ｄ−酒石酸および／または（＋）−ジ−ｐ−トルオイル−ｌ−酒石酸）と塩形成してジアステレオマー対形成し、ついで分別晶出および遊離塩基の再生成によりそれらの成分鏡像異性体に分割できる。また化合物はジアステレオマーエステルまたはアミドの形成、ついでクロマトグラフィーによる分離、およびキラル補助基の除去により分割できる。別法として、化合物はキラルＨＰＬＣカラムを用いて分割できる。
【００４５】
本発明化合物の調製のいずれの過程において、関与するすべての分子の感受性または反応性基を保護することが必要および／あるいは望ましい。これは、Protective Groups in Organic Chemistry, J. F. W. McOmie編, Plenum Press, 1973；および T. W. Greene & P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, 1991 に記載の保護基等、通常の保護基を用いて達成できる。該文献はここに参照文献として組み込まれる。保護基は本分野で既知の方法を用いて以降の都合のよい段階で除くことができる。
【００４６】
本発明に記載のジペプチジルペプチダーゼＩＶおよびＤＰＩＶ様酵素により介在される病態の治療方法は、ここに規定の化合物の１個または複数個および医薬的に許容される担体を含有する医薬組成物を用いて行うことができる。医薬組成物は約０．０１ｍｇから１０００ｍｇ、好ましくは約５から約５００ｍｇの化合物を含有し、選択した投与方法に適した製剤形にすることができる。担体は必要かつ不活性の医薬賦形剤が挙げられ、例えばこれらに限定されないが、結合剤、懸濁化剤、潤滑剤、風味剤、甘味剤、保存剤、色素、およびコーティング剤などが挙げられる。経口投与に適した組成物は、例えば丸剤、錠剤、カプレット剤、カプセル剤（各々即効型、徐放型、持続放出型製剤）、顆粒剤、および粉末剤などの固体製剤、および溶液製剤、シロップ剤、エリキシル剤、乳濁剤、懸濁剤等の液体製剤が挙げられる。非経口投与に適した製剤形は、滅菌溶液製剤、乳濁剤、懸濁剤が挙げられる。
【００４７】
有利に、本発明化合物は一日一回量で投与でき、あるいは総１日投与量は１日あたり２、３あるいは４回に分けて投与できる。さらに、本発明化合物は好適な経鼻担体の局所使用により経鼻剤形で投与でき、または本分野の通常の技術者に既知の経皮パッチなどで投与できる。経皮輸送システムの剤形で投与するために、投与は当然投与計画全体に亘って断続的よりむしろ継続的とし、それに従って投与量も所望の治療効果を得るため修正する必要があろう。
【００４８】
さらに好ましくは、錠剤またはカプセル剤形での経口投与には、活性薬剤成分は経口、非毒性の医薬的に許容される不活性担体、例えばエタノール、グリセロール、水等と混合できる。さらに、要すれば、好適な結合剤、潤滑剤、崩壊剤、および着色剤が混合物に混合できる。好適な結合剤としては、これらに限定されないが、デンプン、ゼラチン、グルコースやベータラクトースなどの天然糖、トウモロコシ甘味料、天然および合成ガム（アカシア、トラガカント、オレイン酸ナトリウム）、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム等が挙げられる。崩壊剤は、これらに限定されないが、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガム等が挙げられる。
【００４９】
液体製剤は、合成および天然ガム（トラガカント、アカシア、メチルセルロース）などの風味つけた懸濁化剤または分散化剤で製剤化したものが適している。非経口投与には、滅菌懸濁剤または溶液製剤が望ましい。一般的に好適な保存剤を含有する等張製剤が、静脈内投与が望ましい場合には採用される。
【００５０】
本発明化合物は、例えば、小単薄板状小嚢、大単薄板状小嚢および複合薄板状小嚢などのリポソーム輸送システムの形状でも投与できる。リポソームは、例えばコレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンなどの多様なリン脂質から、本分野で既知の工程を用いて調製できる。
【００５１】
本発明化合物は好適な薬剤担体として溶解性ポリマーを用い、それとカップリングしてもよい。そのようなポリマーとしては、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタクルアミドフェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルタミドフェノール、またはパルミトイル残基で置換されたポリエチルエネオキシドポリリシンが挙げられる。さらに、本発明化合物は薬剤の放出制御達成に有用な生体内分解性のポリマーの１クラス、例えば、ポリ乳酸、ポリエプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、およびヒドロゲルの架橋または両親媒性ブロックコポリマーなどとカップリングできる。
【００５２】
指定の疾患の治療が必要な場合はいつでも、本発明化合物は上記の組成物のいずれかの形で、本分野で確立された投与計画に従って投与できる。
【００５３】
生成物の１日投与量は、ヒト大人で１日あたり０．０１から１，０００ｍｇの広範囲で変動する。経口投与では、組成物は治療される患者の症状に合わせて、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、２．５、５．０、１０．０、１５．０、２５．０、５０．０、１００、１５０、２００、２５０、５００および１０００ミリグラムの活性成分を含有した錠剤で好ましくは投与される。薬剤の効果量は、一日あたり通常約０．１ｍｇ／ｋｇから約３００ｍｇ／ｋｇ（体重）の投与量で投与される。好ましくは、この範囲は１日あたり約１から約５０ｍｇ／ｋｇ（体重）である。化合物は１日あたり１〜４回の投与計画で投与できる。
【００５４】
投与される至適投与量はこの分野の技術者により容易に決定でき、用いる個々の化合物、投与方法、製剤の強度、投与モードによる生体内利用性、および疾患症状の進行度により変更される。さらに、治療される個々の患者に伴うファクター、例えば患者の年齢、体重、食事および投与回数も一般的に投与量を調整する際に考慮すべきである。
【００５５】
本発明化合物あるいは組成物は食前、食中、あるいは食後に服用できる。
【００５６】
食前に服用する場合は、本発明化合物または組成物は食事１時間前、好ましくは３０分前、あるいは１５分または５分前に服用する。
【００５７】
食中に服用する場合は、本発明化合物または組成物は食事に混合して、または上記のような分離した投与剤形で服用する。
【００５８】
食後に服用する場合は、本発明化合物または組成物は、食事終了後、５、１５または３０分後に、あるいは１時間後に服用する。
【実施例】
【００５９】
実施例１：グルタミニルピロリジン遊離塩基の合成
アシル化：
Ｎ−ベンジル−オキシカルボニルグルタミン（２．０２ｇ、７．２１ミリモル）をＴＨＦ（３５ｍＬ）に溶解し、−１５℃とした。混合物にＣＡＩＢＥ（イソブチルクロロホルミエート）（０．９３７ｍＬ、７．２１ミリモル）と４−メチルモルホリン（０．７９５ｍＬ、７．２１ミリモル）を加え、溶液を１５分間攪拌した。混成無水物の生成をＴＬＣ（溶離液：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ：９／１）で確認した。−１０℃まで加温後、ピロリジン（０．５９６ｍＬ、７．２１ミリモル）を加えた。混合物を室温とし一晩攪拌した。
【００６０】
ワークアップ：
生成した沈殿物を濾過して除き、溶媒を留去した。得られた油状物を酢酸エチル（２０ｍＬ）に溶解し、飽和硫酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、ついで飽和重炭酸ナトリウム溶液、水、食塩水で洗浄した。有機層を分離し、乾燥し、留去した。得られた生成物の純度をＴＬＣ（溶離液：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ：９／１）で確認した。
収量：１．１８ｇ、ろう状固体
【００６１】
切断：
得られた固体Ｚ−保護化合物（１．１８ｇ）を無水エタノール（４０ｍＬ）に溶解した。該溶液にパラジウム炭素（約２０ｍｇ、１０％、ＦＬＵＫＡ）を加え、懸濁液を水素雰囲気下３時間振った。反応の進行をＴＬＣ（溶離液：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ：９／１）でモニターした。反応完了後溶媒を除いて遊離塩基を得た。
収率：９９％
純度はＴＬＣ（ｎ−ブタノール／ＡｃＯＨ／水／酢酸エチル＝１／１／１／１）で調べ、Ｒｆ＝０．４。
反応生成物の同定はＮＭＲ分析で調べた。
【００６２】
実施例２：グルタミニルチアゾリジン塩酸塩の合成
アシル化：
Ｎ−ｔ−ブチル−オキシカルボニルグルタミン（２．０ｇ、８．１２ミリモル）をＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解し、−１５℃とした。該混合物にＣＡＩＢＥ（イソブチルクロロホルミエート）（１．０６ｍＬ、８．１２ミリモル）と４−メチルモルホリン（０．８９５ｍＬ、８．１２ミリモル）を加え、該溶液を１５分間攪拌した。混成無水物の生成をＴＬＣ（溶離液：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ：９／１）で確認した。−１０℃まで加温後、さらに１当量の４−メチルモルホリン（０．８９５ｍＬ、８．１２ミリモル）とチアゾリジン塩酸塩（１．０２ｇ、８．１２ミリモル）を加えた。混合物を室温とし一晩攪拌した。
【００６３】
ワークアップ：
生成した沈殿物を濾過して除き、溶媒を留去した。得られた油状物をクロロホルム（２０ｍＬ）に溶解し、飽和硫酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、ついで飽和重炭酸ナトリウム溶液、水、食塩水で洗浄した。有機層を分離し、乾燥し、留去した。得られた生成物の純度をＴＬＣ（溶離液：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ：９／１）で確認した。
収量：１．６４ｇ、固体
【００６４】
切断：
得られた固体Ｂｏｃ−保護化合物（６４０ｍｇ）をＨＣｌの氷冷ジオキサン溶液（３．１ｍＬ、１２．９８Ｍ、２０当量）に溶解し、氷上に置いた。反応の進行をＴＬＣ（溶離液：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ：９／１）でモニターした。反応完了後溶媒を除き、得られた油状物をメタノールに溶解し、再度蒸留した。ついで、得られた油状物を酸化リン（Ｖ）で乾燥し、ジエチルエーテルで２回トリチュレーションした。純度はＨＰＬＣで調べた。
収量：０．２６５ｇ
純度はＨＰＬＣで調べた。
反応生成物の同定はＮＭＲ分析で調べた。
【００６５】
実施例３：グルタミニルピロリジン塩酸塩の合成
アシル化：
Ｎ−ｔ−ブチル−オキシカルボニルグルタミン（３．０ｇ、１２．１８ミリモル）をＴＨＦ（７ｍＬ）に溶解し、−１５℃とした。該混合物にＣＡＩＢＥ（イソブチルクロロホルミエート）（１．６ｍＬ、１２．１８ミリモル）と４−メチルモルホリン（１．３ｍＬ、１２．１８ミリモル）を加え、該溶液を１５分間攪拌した。混成無水物の生成をＴＬＣ（溶離液：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ：９／１）で確認した。−１０℃まで加温後、１当量のピロリジン（１．０ｍＬ、１２．１８ミリモル）を加えた。混合物を室温とし一晩攪拌した。
【００６６】
ワークアップ：
生成した沈殿物を濾過して除き、溶媒を留去した。得られた油状物をクロロホルム（２０ｍＬ）に溶解し、飽和硫酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、ついで飽和重炭酸ナトリウム溶液、水、食塩水で洗浄した。有機層を分離し、乾燥し、留去した。得られた生成物の純度をＴＬＣ（溶離液：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ：９／１）で確認した。
収量：２．７ｇ、固体
【００６７】
切断：
得られた固体（２．７ｇ）をＨＣｌの氷冷ジオキサン溶液（１３．０ｍＬ、１２．９８Ｍ、２０当量）に溶解し、氷上に置いた。反応の進行をＴＬＣ（溶離液：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ：９／１）でモニターした。反応完了後溶媒を除き、得られた油状物をメタノールに溶解し、再度蒸留した。ついで、得られた油状物を酸化リン（Ｖ）で乾燥し、ジエチルエーテルで２回トリチュレーションした。
収量：９８０ｍｇ
純度はＨＰＬＣで調べた。
反応生成物の同定はＮＭＲ分析で調べた。
【００６８】
実施例４：Ｋｉ測定
グルタミニルピロリジンとグルタミニルチアゾリジンのＫｉ値測定のため、グリシルプロリル−４−ニトロアニリンに対して特異活性を持つブタ腎臓由来のジペプチジルペプチダーゼＩＶ（３７．５Ｕ／ｍｇ）と酵素濃度（１．４１ｍｇ／ｍＬ）の貯蔵溶液を用いた。
【００６９】
アッセイ混合物：
それぞれ濃度範囲が１×１０−５Ｍ−１×１０−７Ｍ（グルタミニルピロリジン）と１×１０−６Ｍ−１×１０−８Ｍ（グルタミニルチアゾリジン）のグルタミニルピロリジンまたはグルタミニルチアゾリジン（１００μＬ）を、異なる濃度（０．４ｍＭ、０．２ｍＭ、０．１ｍＭ、０．０５ｍＭ）のグリシルプロリル−４−ニトロアニリン（５０μＬ）とＨＥＰＥＳ（１００μＬ、４０ｍＭ、ｐＨ７．６；イオン強度＝０．１２５）と混合した。アッセイ混合物を３０℃で３０分間プレインキュベーションした。プレインキュベーション後、ＤＰＩＶ（２０μＬ、１：６００希釈）を加え、４−ニトロアニリン遊離に基づいて生じた黄色の測定を３０℃、λ＝４０５ｎｍで、プレートリーダー（ＨＴＳ７０００プラス、アプライド・バイオシステムズ、ウェイターシュタット、ドイツ）を用いて１０分間行った。
【００７０】
Ｋｉ値はグラフィット（Graphit）４．０．１５（エリタカス・ソフトウェア・リミティッド（Erithacus, Software, Ltd）、英国）を用い、グルタミニルピロリジンまたはグルタミニルチアゾリジンによるＤＰＩＶ拮抗阻害を基にして計算した。グルタミニルチアゾリジンではＫｉ＝３．１２×１０−７Ｍ±５．１１×１０−１０Ｍ、グルタミニルピロリジンではＫｉ＝１．３０×１０−６Ｍ±８．４９×１０−８Ｍであった。
【００７１】
実施例５：ヒト血漿中のＫｉ測定
ヒト血漿はＮ−末端Ｘａａ−Ｐｒｏ遊離活性を含有する。
それぞれ濃度範囲が１×１０−５Ｍ−１×１０−７Ｍ（グルタミニルピロリジン）、１×１０−６Ｍ−１×１０−８Ｍ（グルタミニルチアゾリジン）のグルタミニルピロリジンまたはグルタミニルチアゾリジン（７０μＬ）を、異なる濃度（０．４ｍＭ、０．２ｍＭ、０．１ｍＭ、０．０５ｍＭ）のグリシルプロリル−４−ニトロアニリン（５０μＬ）とＨＥＰＥＳ（１００μＬ、４０ｍＭ、ｐＨ７．６）と混合した。アッセイ混合物を３０℃で５分間、２２時間それぞれプレインキュベーションした。プレインキュベーション後、ヒト血漿（５０μＬ）を加え、４−ニトロアニリン遊離に基づいて生じた黄色の測定を３０℃、λ＝４０５ｎｍで、プレートリーダー（ＨＴＳ７０００プラス、アプライド・バイオシステムズ、ウェイターシュタット、ドイツ）を用いて１０分間行った。
【００７２】
Ｋｉ値はグラフィット４．０．１５（エリタカス・ソフトウェア・リミティッド、英国）を用い、グルタミニルピロリジンまたはグルタミニルチアゾリジンによるＤＰＩＶ拮抗阻害を基にして計算した。グルタミニルチアゾリジンでは５分間プレインキュベーション後でＫｉ＝４．０３×１０−７Ｍ±２．１９×１０−１０Ｍ、２２時間プレインキュベーション後でＫｉ＝５．１３×１０−７Ｍ±１．２６×１０−８Ｍ、およびグルタミニルピロリジンでは、５分間プレインキュベーション後でＫｉ＝１．３０×１０−６Ｍ±４．８９×１０−８Ｍ、２２時間プレインキュベーション後でＫｉ＝１．３６×１０−６Ｍ±３．２１×１０−８Ｍであった。
【００７３】
実施例６：ＤＰＩＶ様酵素−ジペプチジルペプチダーゼＩＩの阻害
ＤＰＩＩ（３．４．１４．２）は、Ｎ末端がプロトン化していなければオリゴペプチドからＮ−末端ジペプチドを遊離する（McDonald, J. K., Ellis, S. & Reilly, T. J., 1966, J. Biol. Chem., 241, 1494- 1501）。Ｐ１位置のＰｒｏおよびＡｌａが好ましい残基である。酵素活性はＤＰＩＶ様活性として示されるが、ＤＰＩＩは酸性の至適ｐＨを持つ。用いた酵素はブタ腎臓から精製した。
【００７４】
アッセイ：
濃度範囲が１×１０−４Ｍ−５×１０−８Ｍのグルタミニルピロリジンまたはグルタミニルチアゾリジン（１００μＬ）を緩衝液（１００μＬ、４０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．６、０．０１５％ Ｂｒｉｊ、１ｍＭ ＤＴＴ）、リシルアラニルアミノメチルクマリン溶液（５ｍＭ、５０μＬ）とブタＤＰＩＩ（緩衝液で２５０倍希釈、２０μＬ）と混合した。蛍光測定は３０℃、λ（励起）＝３８０ｎｍ、λ（発光）＝４６５ｎｍで２５分間、プレートリーダー（ＨＴＳ７０００プラス、アプライド・バイオシステムズ、ウェイターシュタット、ドイツ）を用いて行った。
Ｋｉ値はグラフィット４．０．１５（エリタカス・ソフトウェア・リミティッド、英国）を用いて計算し、グルタミニルピロリジンではＫｉ＝８．５２×１０−５Ｍ±６．３３×１０−６Ｍ、およびグルタミニルチアゾリジンでは、Ｋｉ＝１．０７×１０−５Ｍ±３．８１×１０−７Ｍであった。
【００７５】
実施例７：交差反応酵素
ジペプチジルペプチダーゼＩ、プロリルオリゴペプチダーゼおよびプロリダーゼに対するグルタミニルピロリジンまたはグルタミニルチアゾリジンの交差反応能を調べた。
ジペプチジルペプチダーゼＩ（ＤＰＩ、カテプシンＣ）：
ＤＰＩまたはカテプシンＣは、その基質のＮ末端からジペプチドを切断するリソソームシステインプロテアーゼである（Gutman, H. R. & Fruton, J. S., 1948, J. Biol : Chem., 174, 851-858）。これはシステインプロテアーゼとして分類されている。
【００７６】
用いた酵素はキアゲン（Qiagen GmbH、ヒルデン、ドイツ）から購入した。完全に活性化された酵素を得る為、酵素をＭＥＳ緩衝液ｐＨ５，６（４０ｍＭ ＭＥＳ、４ｍＭ ＤＴＴ、４ｍＭ ＫＣｌ、２ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０１５％ Ｂｒｉｊ）で１０００倍に希釈し、３０℃で３０分間プレインキュベーションした。
【００７７】
アッセイ：
濃度範囲が１×１０−５Ｍ−１×１０−７Ｍのグルタミニルピロリジンまたはグルタミニルチアゾリジン（５０μＬ）を緩衝液−酵素混合液（１１０μＬ）と混合した。アッセイ混合液を３０℃で１５分間プレインキュベーションした。プレインキュベーション後、ヒスチジルセリル−β−ニトロアニリン（１００μＬ、２×１０−５Ｍ）を加え、β−ニトロアニリン遊離に基づいて生じた黄色の測定を３０℃、λ（励起）＝３８０ｎｍ、λ（発光）＝４６５ｎｍでプレートリーダー（ＨＴＳ７０００プラス、アプライド・バイオシステムズ、ウェイターシュタット、ドイツ）を用いて１０分間行った。
ＩＣ５０値はグラフィット４．０．１５（エリタカス・ソフトウェア・リミティッド、英国）を用いて計算した。グルタミニルピロリジンまたはグルタミニルチアゾリジンによるＤＰ Ｉ酵素活性の阻害は見られなかった。
【００７８】
プロリルオリゴペプチダーゼ（ＰＯＰ）
プロリルオリゴペプチダーゼ（ＥＣ ３．４．２１．２６）はＸａａ−Ｐｒｏ結合のＮ末端部でペプチドを切断するセリン型エンドプロテアーゼである（Walter, R., Shlank, H., Glass, J. D., Schwartz, I. L. & Kerenyi, T. D., 1971, Science, 173, 827-829）。基質は分子量３０００Ｄａまでのペプチドである。
用いた酵素は組換えヒトプロリルオリゴペプチダーゼであった。組換え発現は、本分野のいずれかで記載されている標準的条件下、Ｅ．Ｃｏｌｉで行った。
【００７９】
アッセイ：
濃度範囲が１×１０−４Ｍ−５×１０−８Ｍのグルタミニルピロリジンまたはグルタミニルチアゾリジン（１００μＬ）を緩衝液（１００μＬ、４０ｍ ＭＥＰＥＳ、ｐＨ７．６、０．０１５％ Ｂｒｉｊ、１ｍＭ ＤＴＴ）とＰＯＰ溶液（２０μＬ）と混合した。アッセイ混合液を３０℃で１５分間プレインキュベーションした。プレインキュベーション後、グリシルプロリルプロリル−４−ニトロアニリン溶液（０．２９ｍＭ、５０μＬ）を加え、４−ニトロアニリンの遊離に基づいて生じた黄色の測定を３０℃、λ＝４０５ｎｍでプレートリーダー（サンライズ、ティーカン（Tecan）、クレイルスハイム、ドイツ）を用いて１０分間行った。
ＩＣ５０値はグラフィット４．０．１５（エリタカス・ソフトウェア・リミティッド、英国）を用いて計算した。グルタミニルピロリジンまたはグルタミニルチアゾリジンによるＰＯＰ活性の阻害は見られなかった。
【００８０】
プロリダーゼ（Ｘ−Ｐｒｏジペプチダーゼ）
プロリダーゼ（ＥＣ ３．４．１３．９）は最初にベルグマンおよびフルトン（Bergmann, M. & Fruton, JS, 1937, J. Biol. Chem. 189-202）により開示された。プロリダーゼはＸａａ−ＰｒｏジペプチドからＮ末端アミノ酸を遊離させ、ｐＨ６〜９の至適ｐＨを持つ。
ブタ腎臓由来のプロリダーゼ（ＩＣＮバイオメディカルス、エシュウェーゲ、ドイツ）をアッセイ緩衝液（２０ｍＭ ＮＨ４（ＣＨ３ＣＯＯ）２、３ｍＭ ＭｎＣｌ２、ｐＨ７．６）に溶解した（１ｍｇ／ｍＬ）。完全に活性化された酵素を得るため、溶液を６０分間室温下で保温した。
【００８１】
アッセイ：
濃度範囲が５×１０−３Ｍ−５×１０−７Ｍのグルタミニルピロリジンまたはグルタミニルチアゾリジン（４５０μＬ）を緩衝液（５００μＬ、２０ｍＭ ＮＨ４（ＣＨ３ＣＯＯ）２、ｐＨ７．６）とＩｌｅ−Ｐｒｏ−ＯＨ（アッセイ混合物中０．５ｍＭ、２５０μＬ）と混合した。アッセイ混合液を３０℃で５分間プレインキュベーションした。プレインキュベーション後、プロリダーゼ（アッセイ緩衝液で１：１０に希釈、７５μＬ）を加え、３０℃、λ＝２２０で、ＵＶ／Ｖｉｓ光度計、ＵＶ１（サーモ・スペクトロニック、ケンブリッジ、英国）を用いて２０分間測定した。
ＩＣ５０値はグラフィット４．０．１５（エリタカス・ソフトウェア・リミティッド、英国）を用いて計算した。グルタミニルチアゾリジンではＩＣ５０＞３ｍＭであり、グルタミニルピロリジンではＩＣ５０＝３．４×１０−４Ｍ±５．６３×１０−５Ｍであった。
【００８２】
実施例８：血漿安定性
グルタミニルピロリジンまたはグルタミニルチアゾリジンのヒト血漿中での安定性を調べるために、血漿中のＤＰＩＶ活性を規定時間で測定した。ヒト血漿中のＤＰＩＶ平均活性は４３．６９Ｕ／ｍＬであった。反応溶液中、血漿は０．９％ＮａＣｌで希釈し、ＤＰＩＶ活性レベルを２５Ｕ／ｍＬに調節した。
【００８３】
血漿と、異なる濃度（血漿中５×１０−５、２．５×１０−５、１．２５×１０−５Ｍ）のグルタミニルピロリジンまたはグルタミニルチアゾリジンを３７℃で保温した。あらかじめ決めた時点で、検体をピペット・ロボター（pipette roboter、Gilson 215、Liquid handler, Gilson）を用いて採取し、各ウェルに０．９％ＮａＣｌと０．１５％ Ｂｒｉｊ中５×１０−５Ｍのグリシルプロリルアミノメチルクマリン含有のマイクロタイター・プレートに移した。６分後、イソロイシルチアゾリジン（５×１０−５Ｍ ０．９％ＮａＣｌ溶液）を添加して反応を止めた。
【００８４】
蛍光測定は血漿中（標準品）０．９％ＮａＣｌに対してプレートリーダー（ＨＴＳ７０００プラス、アプライド・バイオシステムズ、ウェイターシュタット、ドイツ）を用いて行った。グルタミニルピロリジンまたはグルタミニルチアゾリジンの阻害能の半減期を酵素活性と反応時間をプロットして計算した。
両化合物共、半減期を決定することが出来なかった。該物質はヒト血漿中２２時間以上安定であると考えられる。
【００８５】
実施例９：ウィスターラットへの脈管内投与および経口投与後の、グルタミニルピロリジンおよびグルタミニルチアゾリジンのＤＰＩＶ阻害活性の測定
動物
体重２５０〜３５０ｇの雄ウィスターラット（Shoe; Wist (Sho)）をチエルズヒト・ショーンバルデ（Tierzucht Schoenwalde、ショーンバルデ、ドイツ）から購入した。
【００８６】
飼育環境
温度調節（２２±２℃）および１２／１２時間点灯／非点灯サイクル（点灯：ＡＭ０６：００）の通常の条件下で動物を１匹ずつケージに入れた。標準固形飼料（ssniff（登録商標）、スースト、ドイツ）とＨＣｌで酸性とした水道水は自由に摂取させた。
【００８７】
頚動脈へのカテーテル挿入
飼育環境へ１週間以上適応後、カテーテルをウィスターラットの頚動脈に全身麻酔下（０．２５ｍＬ／ｋｇ（体重）のRompun［２％］（登録商標）（バイエルバイタル、ドイツ）および０．５ｍＬ／ｋｇ（体重）のKetamin 10（Atarost GmbH & Co., ツィストリンゲン、ドイツ）の腹腔内投与）で埋め込んだ。動物は１週間自然に回復させた。カテーテルにヘパリン−生理食塩水（１００ ＩＵ／ｍＬ）を１週間に３回流した。カテーテル機能不全の場合は、第２のカテーテルを各ラットの反対側の頚動脈に挿入した。手術からの１週間の回復後、動物を実験に復活させた。第２カテーテルが機能不全の場合は、動物はこの実験からはずした。新しい動物を選択し、カテーテル挿入から最短で７日後には実験を計画どおりの手順で継続した。
【００８８】
実験計画
無傷のカテーテル機能のラットに、プラシーボ（１ｍＬ生理食塩水、０．１５４モル／Ｌ）またはグルタミニルピロリジン（１００ｍｇ／ｋｇ（体重））またはグルタミニルチアゾリジン（１００ｍｇ／ｋｇ（体重））を経口投与および脈管内（動脈内）投与した。
一晩絶食後、ヘパリン処理した動脈血（１００μＬ）を−３０、−５および０分時に採取した。試験物質を生理食塩水（１．０ｍＬ、０．１５４モル／Ｌ）に直前に溶解し、０分時に給餌チューブ（７５ｍｍ；ファイン・サイエンス・ツールズ（Fine Science Tools）、ハイデルベルグ、ドイツ）を介して経口投与、または脈管内ルートで投与した。経口投与の場合、追加の生理食塩水（１ｍＬ）を動脈カテーテルに注射した。動脈内投与の場合、カテーテルに生理食塩水（３０μＬ）を直ちに通じ、追加の生理食塩水（１ｍＬ）を給餌チューブを介して経口投与した。
【００８９】
プラシーボまたは試験物質を投与後、動脈血を２．５、５、７．５、１０、１５、２０、４０、６０および１２０分時に、意識のある拘束されていないラットの頚動脈カテーテルから採取した。すべての血液検体を、血漿ＤＰＩＶ活性測定用の１Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液（１０μＬ）の入った氷冷エッペンドルフ型チューブに集めた（Eppendorf-Netheler-Hinz、ハンブルグ、ドイツ）。エッペンドルフ型チューブを直ちに遠心分離（12000rpm、２分間、Hettich Zentrifuge EBA 12, ツットリンゲン、ドイツ）した。血漿画分を分析まで氷上に置くか、あるいは−２０℃で分析まで凍結した。すべての血漿検体は以下のデータのラベルを付した。
・コード番号
・動物番号
・採取日
・採取時間
【００９０】
分析方法
血漿ＤＰＩＶ活性測定のためのアッセイ混合物は試薬（８０μＬ）と血漿検体（２０μＬ）から構成されていた。基質グリシルプロリル−４−ニトロアニリンから黄色生成物４−ニトロアニリンの生成の反応速度測定は同じ温度で２分間プレインキュベーション後に３０℃、３９０ｎｍで１分間行った。ＤＰＩＶ活性はｍＵ／ｍＬで示した。
【００９１】
統計学的手法
統計学的評価およびグラフはプリズム（PRISM（登録商標）３．０２（グラフパッド・ソフトウェア・インコーポレーション））で行った。すべてのパラメーターは平均値および標準偏差等の記述的方式で分析した。
【００９２】
結果
プラシーボと比較して、投与量１００ｍｇ／ｋｇ（体重）の化合物グルタミニルピロリジンおよびグルタミニルチアゾリジンは、経口および脈管内投与後に血漿ＤＰＩＶ活性を阻害した（図１および図２参照）。
【００９３】
実施例１０：グルタミニルピロリジン経口投与後肥満ズッカーラットにおける投与量逐次漸増試験
動物
平均年齢１１週令（５−１２週令）、平均体重３５０ｇ（１５０−４００ｇ）の雄ズッカーラット（ｎ＝３０、fa/fa）をチャールズ・リバー（ザルツフェルド、ドイツ）から購入した。搬送後、殆どすべての肥満ズッカーラットが明白な糖尿病の症状を呈するまで１２週間以上飼育した。１群（ｎ＝８）の動物を、逐次漸増した３投与量のグルタミニルピロリジンをプラシーボ（食塩水）と比較するために選んだ。
【００９４】
飼育条件
温度調節（２２±２℃）、１２／１２時間点灯／非点灯サイクル（点灯：ＡＭ０６：００）の標準的条件下で動物を１匹ずつケージに入れた。滅菌標準固形飼料（ssniff（登録商標）、スースト、ドイツ）とＨＣｌで酸性とした水道水は自由に摂取させた。
【００９５】
頚動脈へのカテーテル挿入
飼育環境に馴れた２４〜３１週令（平均２５週令）の肥満ズッカーラットを実験用に充分準備した。
カテーテルを肥満ズッカーラットの頚動脈に全身麻酔下（０．２５ｍＬ／ｋｇ（体重）のRompun［２％］（登録商標）（バイエルバイタル、ドイツ）および０．５ｍＬ／ｋｇ（体重）のKetamin 10（Atarost GmbH & Co., ツィストリンゲン、ドイツ）の腹腔内投与）で埋め込んだ。動物は１週間自然に回復させた。カテーテルにヘパリン−生理食塩水（１００ ＩＵ／ｍＬ）を１週間に３回流し込んだ。
【００９６】
実験計画
肥満ズッカーラット（ｎ＝８）にプラシーボ（１ｍＬ生理食塩水、０．１５４モル／Ｌ）または逐次漸増した投与量のグルタミニルピロリジン（５、１５および５０ｍｇ／ｋｇ（体重））を投与した。グルタミニルピロリジン（３７５ｍｇ）をＤＭＳＯ（１０００μＬ、E. Merck, ダルムシュタット、ドイツ（Dimethyl sulfoxide））に溶解した。生理食塩水（１０ｍＬ）を加え、グルタミニルピロリジン（３４．０９ｍｇ）をそれぞれ含有した１ｍＬのアリコートを−２０℃に保存した。試験物質調製のために、用量依存性アリコートを生理食塩水で希釈した。
【００９７】
一晩絶食後、プラシーボまたは試験物質を肥満ズッカーラットに給餌チューブ（１５Ｇ、７５ｍｍ；ファイン・サイエンス・ツールズ、ハイデルベルグ、ドイツ）を介して−１０分時に経口投与した。２ｇ／ｋｇ（体重）のグルコース（４０％溶液、B. ブラウン・メルサンゲン、メルサンゲン、ドイツ）で経口糖負荷試験（ＯＧＴＴ）を±０分時に第２給餌チューブを介して行った。尾静脈から採取した静脈血検体を−３０分、−１５分、±０分、および５、１０、１５、２０、３０、４０、６０、９０および１２０分時に採取し、ガラス製毛細管（２０μＬ）に集め、血糖値測定用溶液１ｍＬを入れた標準チューブに入れた。
すべての血液検体は以下のデータのラベルを付した。
・コード番号
・動物番号
・採取日
・採取時間
【００９８】
分析方法
グルコース値はグルコースオキシダーゼ法を用いて測定した（スーパー・Ｇ・グルコース・アナライザー；ドクターミュウラー・ゲラテバウ（Dr. Muller Geraetebau）、フライタール、ドイツ）。
【００９９】
統計学的手法
統計学的評価およびグラフはプリズム（PRISM（登録商標）３．０２（グラフパッド・ソフトウェア・インコーポレーション）で行った。すべてのパラメーターは平均値および標準偏差等の記述的方式で分析した。
【０１００】
耐糖能に対する投薬の効果
プラシーボ投与糖尿病ズッカーラットは明白な糖尿病の耐糖能障害を示す、強く上昇した血糖の変化（excursion)を示した。グルタミニルピロリジンの５ｍｇ／ｋｇ（体重）用量の投与では、糖尿病ズッカーラットの耐糖能にわずかな改善が見られた。上昇した血糖値の有意な低下および耐糖能の改善はグルタミニルピロリジンの１５ｍｇ／ｋｇ（体重）および５０ｍｇ／ｋｇ（体重）投与により達成された（図３参照）。
【０１０１】
実施例１１：グルタミニルチアゾリジン経口投与後肥満ズッカーラットにおける投与量逐次漸増試験
動物
平均１１週令（５−１２週令）、平均体重３５０ｇ（１５０−４００ｇ）の雄ズッカーラット（fa/fa、ｎ＝３０）をチャールズ・リバー（ザルツフェルド、ドイツ）から購入した。搬送後、殆どすべての肥満ズッカーラットが明白な糖尿病の症状を呈するまで１２週間以上飼育した。１群（ｎ＝８）の動物を、逐次漸増した３投与量のグルタミニルチアゾリジンをプラシーボ（食塩水）と比較するために選んだ。
【０１０２】
飼育条件
温度調節（２２±２℃）、１２／１２時間点灯／非点灯サイクル（点灯：ＡＭ０６：００）の標準的条件下で、動物を１匹ずつケージに入れた。滅菌標準的固形飼料（ssniff（登録商標）、スースト、ドイツ）とＨＣｌで酸性とした水道水は自由に摂取させた。
【０１０３】
頚動脈へのカテーテル挿入
飼育環境に馴れた２４〜３１週令（平均２５週令）の肥満ズッカーラットを実験用に充分準備した。
カテーテルを肥満ズッカーラットの頚動脈に全身麻酔下（０．２５ｍＬ／ｋｇ（体重）のRompun［２％］（登録商標）（バイエルバイタル、ドイツ）および０．５ｍＬ／ｋｇ（体重）のKetamin 10（Atarost GmbH & Co., ツィストリンゲン、ドイツ）の腹腔内投与）で埋め込んだ。動物は１週間自然に回復させた。カテーテルにヘパリン−生理食塩水（１００ ＩＵ／ｍＬ）を１週間に３回流し込んだ。
【０１０４】
実験計画
プラシーボ（１ｍ生理食塩水、０．１５４モル／Ｌ）または逐次漸増した投与量のグルタミニルチアゾリジン（５、１５および５０ｍｇ／ｋｇ（体重））を肥満ズッカーラット（ｎ＝８）に投与した。各量のグルタミニルチアゾリジンを生理食塩水（１０００μＬ）に溶解した。一晩絶食後、プラシーボまたは試験物質を肥満ズッカーラットに給餌チューブ（１５Ｇ、７５ｍｍ；ファイン・サイエンス・ツールズ、ハイデルベルグ、ドイツ）を介して−１０分時に経口投与した。２ｇ／ｋｇ（体重）のグルコース（４０％溶液、B. ブラウン・メルサンゲン、メルサンゲン、ドイツ）で経口糖負荷試験（ＯＧＴＴ）を±０分時に第２給餌チューブを介して行った。尾静脈から採取した静脈血検体を−３０分、−１５分、±０分、および５、１０、１５、２０、３０、４０、６０、９０および１２０分時に採取し、ガラス製毛細管（２０μＬ）に集め、血糖値測定用溶液１ｍＬを入れた標準チューブに入れた。
すべての血液検体は以下のデータのラベルを付した。
・コード番号
・動物番号
・採取日
・採取時間
【０１０５】
分析方法
グルコース値はグルコースオキシダーゼ法を用いて測定した（スーパー・Ｇ・グルコース・アナライザー；ドクターミュウラー・ゲラテバウ（Dr. Muller Geraetebau）、フライタール、ドイツ）。
【０１０６】
統計学的手法
統計学的評価およびグラフはプリズム（PRISM（登録商標）３．０２（グラフパッド・ソフトウェア・インコーポレーション）で行った。すべてのパラメーターは平均値および標準偏差等の記述的方式で分析した。
【０１０７】
耐糖能に対する投薬の効果
プラシーボ投与糖尿病ズッカーラットは明白な糖尿病の耐糖能障害を示す、強く上昇した血糖の変化（excursion)を示した。グルタミニルチアゾリジンの５ｍｇ／ｋｇ（体重）、１５ｍｇ／ｋｇ（体重）および５０ｍｇ／ｋｇ（体重）投与により、糖尿病ズッカーラットにおいて、上昇した血糖値の用量依存性低下および耐糖能の改善が示めされた（図４参照）。
【０１０８】
実施例１２：ウィスターラットへの経口投与後のグルタミニルチアゾリジンのインビボ不活性化
動物／実験計画
実施例９に記載のとおり、グルタミニルチアゾリジンをウィスターラットへ経口投与した。
【０１０９】
分析方法
プラシーボまたはグルタミニルチアゾリジン投与後、動脈血液検体を意識のある拘束されていないラットの頚動脈から２．５、５、７．５、１０、１５、２０、４０、６０および１２０分時に採取し、グルタミニルチアゾリジンの分解生成物の形成を調べた。
分析のために、Ｃ１８カートリッジの単固相抽出法を用いて、対象化合物を血漿から単離した。抽出物をＡＰＣＩポジティブモードで操作するハイフネーテッド・タンデム・マス・スペクトロメトリーを装備したLichrospher 60RPセレクトＢカラムの逆相液体クロマトグラフィーを用いて分析した。内部標準法を定量のために用いた。
【０１１０】
結果
グルタミニルチアゾリジンのウィスターラットへの経口投与後、化合物の分解が認められた。ＬＣ／ＭＣを用いると、分解生成物がピログルタミニルチアゾリジンであると判明した。図５および図６参照。
【図面の簡単な説明】
【０１１１】
本発明の理解のために以下の図面を参照する。
【図１】グルタミニルピロリジン１００ｍｇ／ｋｇ（体重）の経口および脈管内投与後の、ウィスターラット血清中の血漿ＤＰＩＶ活性を示す。
【図２】グルタミニルチアゾリジン１００ｍｇ／ｋｇ（体重）の経口および脈管内投与後の、ウィスターラット血清中の血漿ＤＰＩＶ活性を示す。
【図３】グルタミニルピロリジン５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ（体重）およびプラシーボそれぞれの経口投与後の、糖尿病ズッカーラットにおける血糖値の用量依存性低下を示す。
【図４】グルタミニルチアゾリジン５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ（体重）およびプラシーボそれぞれの経口投与後の、糖尿病ズッカーラットにおける血糖値の用量依存性低下を示す。
【図５】ウィスターラットにグルタミニルチアゾリジンを経口投与後に見いだされた、分解生成物ピログルタミニルチアゾリジンの化学構造を示す。
【図６】肥満ズッカーラットに対してグルタミニルチアゾリジンを経口投与後に得られるラット血漿抽出物のクロマトグラムを示す。２．９５分のピークはグルタミニルチアゾリジンを、また６．５７分のピークはピログルタミニルチアゾリジンを示す。
【図１】
2005527504.tif 000009
【図２】
2005527504.tif 000010
【図３】
2005527504.tif 000011
【図４】
2005527504.tif 000012
【図５】
2005527504.tif 000013
【図６】
2005527504.tif 000014
【手続補正書】
【提出日】平成16年9月1日(2004.9.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2005527504.tif 000015
式中ＸはＣＨ２またはＳである、
で示される化合物またはその酸付加塩。
【請求項２】
酸付加塩が、塩酸塩、臭素酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、グリコール酸塩、乳酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、シクロヘキサンスルファミン酸塩、サリチル酸塩、サッカリン酸塩およびトリフルオロ酢酸塩からなる群から選ばれる、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式：
【化２】
2005527504.tif 000016
式中ＸはＣＨ２またはＳである、
で示される化合物の酸付加塩で、該酸付加塩は塩酸塩、臭素酸塩、過塩素酸塩、硝酸塩、プロピオン酸塩、グリコール酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、シクロヘキサンスルファミン酸塩、サリチル酸塩、サッカリン酸塩およびトリフルオロ酢酸塩からなる群から選ばれる酸付加塩である。
【請求項４】
グルタミニルチアゾリジン塩酸塩およびグルタミニルピロリジン塩酸塩から選ばれる、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
グルタミニルチアゾリジン塩酸塩。
【請求項６】
グルタミニルピロリジン塩酸塩。
【請求項７】
上記の請求項のいずれかに記載の化合物の多形体。
【請求項８】
医薬的に許容される担体および／または賦形剤と上記の請求項のいずれかに記載の化合物からなる医薬組成物。
【請求項９】
ジペプチジルペプチダーゼＩＶまたはジペプチジルペプチダーゼＩＶ様酵素に関連する疾患または病態の予防または治療用の、ジペプチジルペプチダーゼＩＶまたはジペプチジルペプチダーゼＩＶ様酵素活性を阻害する医薬の製造のための、上記の請求項のいずれかに記載の化合物または医薬組成物の使用。
【請求項１０】
哺乳動物における食物摂取により上昇した血糖値を低下させるための、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
インシュリン非依存性糖尿病、関節炎、肥満、免疫および自己免疫疾患、同種移植、癌、神経疾患および皮膚疾患の予防または治療のための、請求項９または請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
インシュリン非依存性糖尿病の予防または治療のための、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
治療を要する哺乳動物に、治療効果量の請求項１からの８のいずれかに記載の化合物または医薬組成物を投与することを特徴とする、ジペプチジルペプチダーゼＩＶまたはジペプチジルペプチダーゼＩＶ様酵素が関連する疾患または病態の予防または治療のための、ジペプチジルペプチダーゼＩＶまたはジペプチジルペプチダーゼＩＶ様酵素活性の阻害方法。
【請求項１４】
哺乳動物における食物摂取により上昇した血糖値を低下させるための、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
インシュリン非依存性糖尿病、関節炎、肥満、免疫および自己免疫疾患、同種移植、癌、神経疾患および皮膚疾患からなる群から選ばれる疾患または病態の予防または治療のための、請求項１３または請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
インシュリン非依存性糖尿病の予防または治療のための、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
式：
【化３】
2005527504.tif 000017
で示される、請求項１、３または５に記載の化合物の分解生成物。
【手続補正書】
【提出日】平成17年4月18日(2005.4.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2005527504.tif 000018
式中ＸはＣＨ２またはＳである、
で示される化合物またはその酸付加塩。
【請求項２】
酸付加塩が、塩酸塩、臭素酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、グリコール酸塩、乳酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、シクロヘキサンスルファミン酸塩、サリチル酸塩、サッカリン酸塩およびトリフルオロ酢酸塩からなる群から選ばれる、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式：
【化２】
2005527504.tif 000019
式中ＸはＣＨ２またはＳである、
で示される化合物の酸付加塩で、該酸付加塩は塩酸塩、臭素酸塩、過塩素酸塩、硝酸塩、プロピオン酸塩、グリコール酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、シクロヘキサンスルファミン酸塩、サリチル酸塩、サッカリン酸塩およびトリフルオロ酢酸塩からなる群から選ばれる酸付加塩である。
【請求項４】
グルタミニルチアゾリジン塩酸塩およびグルタミニルピロリジン塩酸塩から選ばれる、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
グルタミニルチアゾリジン塩酸塩。
【請求項６】
グルタミニルピロリジン塩酸塩。
【請求項７】
上記の請求項のいずれかに記載の化合物の多形体。
【請求項８】
医薬的に許容される担体および／または賦形剤と上記の請求項のいずれかに記載の化合物からなる医薬組成物。
【請求項９】
ジペプチジルペプチダーゼＩＶまたはジペプチジルペプチダーゼＩＶ様酵素に関連する疾患または病態の予防または治療用の、ジペプチジルペプチダーゼＩＶまたはジペプチジルペプチダーゼＩＶ様酵素活性を阻害する医薬の製造のための、上記の請求項のいずれかに記載の化合物または医薬組成物の使用。
【請求項１０】
哺乳動物における食物摂取により上昇した血糖値を低下させるための、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
インシュリン非依存性糖尿病、関節炎、肥満、免疫および自己免疫疾患、同種移植、癌、神経疾患および皮膚疾患の予防または治療のための、請求項９または請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
インシュリン非依存性糖尿病の予防または治療のための、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
請求項１からの８のいずれかに記載の化合物を有効成分とするジペプチジルペプチダーゼＩＶまたはジペプチジルペプチダーゼＩＶ様酵素が関連する疾患または病態の予防または治療用医薬組成物。
【請求項１４】
哺乳動物における食物摂取により上昇した血糖値を低下させるための、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
インシュリン非依存性糖尿病、関節炎、肥満、免疫および自己免疫疾患、同種移植、癌、神経疾患および皮膚疾患からなる群から選ばれる疾患または病態の予防または治療のための、請求項１３または請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
インシュリン非依存性糖尿病の予防または治療のための、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
式：
【化３】
2005527504.tif 000020
で示される、請求項１、３または５に記載の化合物の分解生成物。
【国際調査報告】
2005527504.tif 000021
2005527504.tif 000022
2005527504.tif 000023
2005527504.tif 000024
2005527504.tif 000025