(57)【要約】      （修正有）【課題】ナノからマイクロメートル寸法のシステムの運動を高い空間および時間分解能で検出するデバイスおよび方法を提供する。【解決手段】少なくとも１つの物体を保持するように適合された可撓性支持体と、前記支持体の変位を測定するためのセンサと、前記物体によって誘起される変動から前記支持体の変動を区別するための処理手段とを備える運動検出器を構成することで、細胞および細菌の単一分子の立体構造変化、生化学反応、薬物標的の相互作用、ならびに内部および外部運動を監視するために使用することができる。【選択図】図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの物体（６〜９）を保持するように適合された可撓性支持体（１、５）と、前記支持体（１）の変位を測定するためのセンサ（４）と、前記物体（６〜９）によって誘起される変動から前記支持体（１）の変動を区別するための処理手段とを備える運動検出器。
【請求項２】
前記処理手段は、前記変位の分散を計算するように適合される、請求項１に記載の運動検出器。
【請求項３】
前記支持体はカンチレバー（１）を備える、請求項１または２に記載の運動検出器。
【請求項４】
前記センサは、前記カンチレバーの一部に固定され、または前記カンチレバーの一部を形成する、請求項３に記載の運動検出器。
【請求項５】
センサは圧電材料を備える、請求項４に記載の運動検出器。
【請求項６】
前記センサ（４）は光センサである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の運動検出器。
【請求項７】
前記光センサは光検出器（４）である、請求項６に記載の運動検出器。
【請求項８】
分析チャンバをさらに備える、請求項１〜７のいずれか１項に記載の運動検出器。
【請求項９】
前記分析チャンバは、前記チャンバ内で物体（複数可）（６〜９）に対して異なる流体環境を提供するように適合された入口および出口手段を備える、請求項８に記載の運動検出器。
【請求項１０】
前記支持体（１）上に位置する少なくとも１つの物体（６〜９）を分析するための請求項１〜９のいずれか１項に記載の運動検出器の使用。
【請求項１１】
前記物体（６〜９）は生物学的物体である、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
前記生体は細菌（６、９）である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
ＭＩＣおよび／またはＭＢＣの定量的な推定のための請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
可撓性支持体（１）上に保持された少なくとも１つの物体を分析する方法であって；前記支持体（１）の変位を測定する工程と、前記物体（６〜９）によって誘起される変動から前記支持体（１）の変動を区別するための処理工程とを含む上記方法。
【請求項１５】
少なくとも１つの物体（６〜９）の動きまたはダイナミクスを検出する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記処理工程は、前記変位の分散を計算する工程を含む、請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記支持体（１、５）に対する前記物体（６〜９）の粘着を容易にするために物体（６〜９）に適用される前処理を含む、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オングストロームからマイクロメートルの範囲の寸法を有する非常に小さいスケールの物体の分析に関する。本発明は、詳細には、排他的ではないが、前記物体の動きまたは内部ダイナミクスの検出に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、マイクロ機械発振器およびナノ機械発振器が新しいクラスのセンサになり、非常に精密な発振器が高感度の変位検出器に連結されて、複数の極めて有効な実験技法（１）をもたらした。驚くべきことに、現在まで、そのようなデバイスの適用分野はほとんど、非常に小さい質量の存在を判定する共振周波数の測定（２〜７）、または特有のナノ寸法のシステムの存在によって誘起される応力偏向の静的判定（８〜１３）に制限されてきた。
【０００３】
さらに、本明細書に記載するほとんどの技法の感度は、液体環境の存在下で大いに低減される（１４）。
【０００４】
要約すると、それらの現況技術センサの使用は、非常に小さい物体の静的判定に制限されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
非常に小さい物体の精密で効率的な動的測定を提供することは、大きな共同体にとって大いに重要なはずである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、特許請求の範囲内に定義される運動検出器に関する。
【０００７】
検出器は、少なくとも１つの物体（たとえば、動きまたは内因性ダイナミクス（ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ  ｄｙｎａｍｉｃｓ）を有する物体）を保持するように適合された可撓性支持体（ｆｌｅｘｉｂｌｅ  ｓｕｐｐｏｒｔ）と、前記支持体の変位を測定するためのセンサと、前記物体によって誘起される動きから前記支持体の動きを区別するための処理手段とを備える。
【０００８】
本発明はまた、典型的にはオングストロームからマイクロメートルに及ぶ小さい寸法の標本を分析する方法に関する。
【０００９】
本発明による方法は、あらゆる種類の環境、真空、空気、液体、または生理学的媒体内で使用することができる。
【００１０】
本明細書では、「変動」という用語は、あらゆるタイプの運動、特に振動および偏向を包含する。
【００１１】
本発明は、外的または内的刺激の有無にかかわらず、蛋白質、脂質、核酸、糖質、ウイルス、細菌、または細胞などの物体の動きまたは内因性ダイナミクス（またはそれらの欠如）を検出するのに特に有用となり得る。
【００１２】
本発明はまた、可撓性支持体の変位を誘起する作用を示しうる物体を分析するのに使用することができる。前記支持体の変位の誘起は、物体の動き、物体によって誘起される熱的変動、物体と可撓性支持体との間の相互作用の変化、物体の内部ダイナミクス、または物体によって生成されて前記支持体の変動を誘発する何らかの物理的、化学的、もしくは生物学的な現象によって生じることがある。
【００１３】
本発明は、以下の図で示すいくつかの非限定的な例を含む詳細な説明を読めば本章でよりよく理解されよう：
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】ナノスケールで動きを感知する本発明による第１のセットアップを示す図である。
【図２】ナノスケールで動きを感知する本発明による別のセットアップを示す図である。
【図３】人間のＴｏｐｏＩＩの理論上の分子構造、およびＴｏｐｏＩＩ薬物の相互作用を観察する本発明によるセットアップを示す図である。
【図４】人間のトポイソメラーゼＩＩとＡＴＰおよびアクラルビシン（ＡＣＬＡＲ）との相互作用の分析（偏向および分散）を表す図である。
【図５】人間のトポイソメラーゼＩＩと異なる濃度のＡＴＰとの相互作用の分析（偏向および分散）を表す図である。
【図６】人間のＴｏｐｏＩＩとスーパーコイルＤＮＡとの相互作用の分析（偏向および分散）を表す図である。
【図７】化学的および／または物理的刺激に対する曝露後の細菌の生存能力を観察する本発明による別のセットアップを示す図である。
【図８】抗生物質に対する大腸菌の耐性の分析（偏向および分散）を表す図である。
【図９】本発明による検出器を用いた用量依存分析（分散値）を表す図である。
【図１０】アンピシリンに対する黄色ブドウ球菌の曝露の分析（偏向および分散）を表す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
図１は、運動検出器がカンチレバー１と、レーザ・ビーム２と、鏡３と、２つまたは４つの区分からなるフォトダイオード４とを備える本発明の第１の実施形態を表す。
【００１６】
図２は、同様のアセンブリを表すが、カンチレバーは光ファイバ５に置き換えられ、レーザ・ビーム２はファイバ５内でコリメートされ、その自由端部に向かって集められる。
【００１７】
調査すべき１つまたはいくつかの可動の物体（６〜９）（図３、図６、および図７も参照）が、マイクロ寸法の可撓性支持体１、５上に位置する。支持体１の変動は、時間の関数として記録される。この方法には、たとえば環境の化学的または物理的修正に曝露されたとき物体（複数可）のダイナミクスの進展を監視するという利点がある。このシステムは、１つまたはいくつかの変動する支持体、支持体が導入される分析チャンバ、ならびに支持体の動きを検出および記録する信号変換システムで構成することができることが有利である。
【００１８】
支持体１、５は、原子間力顕微鏡検査（ＡＦＭ）（図１、図３、図６、および図７参照）、光ファイバ５、圧電システム（図示せず）、膜、または変動することが可能な任意のマイクロデバイス内で使用されるものなどのカンチレバー１とすることができる。支持体１、５は、任意の手段によって、たとえば化学的、生物学的、または物理的方法を使用して、その表面上への物体の付着を可能にするように最適化されなければならない。
【００１９】
物体６〜９は、単一分子からナノデバイス、蛋白質、ＤＮＡ、ウイルス、細菌、単細胞、または複雑な多細胞系など複雑な標本に及ぶことができる。
【００２０】
分析チャンバは、異なる環境状態に対する物体（複数可）の曝露を可能にするために、単一または複数の入口と、センサおよび物体を含む空間と、１つまたはいくつかの出口とを備えることが好ましい。
【００２１】
信号変換システム、たとえば光検出器４は、支持体１、５の変動による物体６〜９の変動を検出する。光検出器４は、それだけに限定されるものではないが、光の反射、光の干渉、圧電、電気、磁気、容量、またはトンネリングの検出システムに基づくものとすることができる。例として、同様のシステムは通常、ＡＦＭ顕微鏡検査、微量天秤、または加速度計内で用いられる。
【００２２】
信号変換システムによって収集されたデータは、物体ダイナミクスの変化を立証することが可能な任意の種類の操作を実行することによって、信号の動的成分を強調するように最適化された専用の電子機器によって分析することができることが有利である。
【００２３】
好ましい実施形態では、変動する検出器はまず、物体６〜９の付着を促進するように処理される。第２の工程で、支持体１、５は、物体６〜９に曝露される。この手順は、分析チャンバの内側または外側で実施することができる。次の工程で、標本の周りの化学的または物理的環境を修正することによって、分析チャンバ内に異なる運動状態が作られる。記載するすべての工程中、標本の立体構造の変化またはその運動は、変動を誘起し、その変動は、センサによって測定可能な（電気）信号に変換され、専用の電子機器によって記録される。データは最後に、標本の動きの乱れまたは修正を強調するように専用のアルゴリズムによって分析される。
【００２４】
〔実施例１〕
薬物親和性の検出
これらの実験は、トポイソメラーゼＩＩ（ＴｏｐｏＩＩ、図３）、および抗がん剤に対するその相互作用に関する。ＴｏｐｏＩＩは、ＤＮＡと相互作用してそのトポロジーを簡略化し、転写を安全に行うことを可能にする必須酵素である。
【００２５】
この酵素は、その３Ｄ立体構造を変更してＤＮＡに作用するためにＡＴＰを必要とする。ＴｏｐｏＩＩはまた、アクラルビシンなどの多数の抗がん剤の好ましい標的である。この薬物は、ＴｏｐｏＩＩに結合し、その立体構造を凍結させてその作用を阻害する（１５）。第１の実験では、ＴｏｐｏＩＩをカンチレバーの両側へ吸着させた。次いでそれをＡＦＭの分析チャンバ内に導入し、そのレーザ・ビームをカンチレバーの頂端上へコリメートさせた。レーザ・ビームの反射は、分割光検出器へ送られ、図１、より詳細には図３に示すように、カンチレバーの変動の検出を可能にした。
【００２６】
この実験は、ＡＴＰが欠乏した緩衝剤、ＡＴＰを豊富に含む溶液、およびアクラルビシン＋ＡＴＰを豊富に含む媒体を分析チャンバ内で連続して注入すること、ならびにその結果生じるカンチレバーの変動を記録することからなる。
【００２７】
カンチレバーおよびＴｏｐｏＩＩを浸漬させた液体の媒体を交換することによって、発明者らは意外にも、図４で見ることができるように、カンチレバー変動の分散が、ＡＴＰを欠乏させた緩衝剤またはアクラルビシンの存在下と比べて、ＡＴＰの存在下で著しく高くなることに注目した。同様の観察結果が、電力スペクトル分析、相関関数、ウェーブレット、フーリエ変換および高速フーリエ変換（ＦＦＴ）のような分散計算以外の他の統計ツールでも見られる。
【００２８】
この実験は、ＡＰＴＥＳで被覆されたＡＦＭカンチレバーを使用して実行した。実験中に注入された異なる緩衝剤は：緩衝剤（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、および０．５ｍＭのジチオスレイトール）、０．０２ｍＭのＡＴＰ、ならびに０．０２ｍＭのＡＴＰ＋１００μＭのアクラルビシンである。上部のパネルは、カンチレバーの偏向データを示し、下部は、分散に関するカンチレバー変動の違いを立証する。
【００２９】
これは、ＴｏｐｏＩＩは、ＡＴＰの非存在下では平衡状態にあり、ＡＴＰの存在下では立体構造変化を受け、アクラルビシンの作用に曝露させると再び平衡状態になったことを示す。驚くべきことに、図５に示すように、ＡＴＰによってＴｏｐｏＩＩ分子上で誘起される立体構造変化はその濃度に依存した。この実験で使用した媒体は：緩衝剤（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、および０．５ｍＭのジチオスレイトール）、０．０２ｍＭのＡＴＰ、０．２ｍＭのＡＴＰ、２ｍＭのＡＴＰ、ならびに再び緩衝剤である。上部のパネルは、カンチレバーの偏向データを示し、下部のパネルは、分散に関するカンチレバー変動の違いを立証する。
【００３０】
後者の図は、提案する技法が、分子の立体構造変化に関する情報を定量的に送達することが可能であることを示す。
【００３１】
〔実施例２〕
生化学反応の検出
前述のように、ＴｏｐｏＩＩは、ＤＮＡと相互作用してそのトポロジーを簡略化する。発明者らの方法を用いてこの反応を記録するために、発明者らは、図６に示すように、ＡＦＭカンチレバーの両側にＴｏｐｏＩＩ−スーパーコイルＤＮＡ複合体を堆積させた。
【００３２】
この実験は、ＡＰＴＥＳで被覆されたＡＦＭカンチレバーを使用して実行した。実験中に注入された異なる媒体は：緩衝剤（５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、および０．５ｍＭのジチオスレイトール）、０．０２ｍＭのＡＭＰＰＮＰ（ＡＴＰ類似体）、ならびに０．０２ｍＭのＡＴＰである。パネルＡは、カンチレバーの偏向データを示す。パネルＢは、ＴｏｐｏＩＩ−ＤＮＡの相互作用を可能にする実験セットアップを示す。ａ）ＤＮＡ分子、ｂ）ＴｏｐｏＩＩ、ｃ）ＡＦＭカンチレバー、ｄ）レーザ・ビーム。パネルＣは、分散に関する違いを立証する。
【００３３】
この場合も、ＴｏｐｏＩＩ−スーパーコイルＤＮＡ複合体で覆われたカンチレバーを分析チャンバ内に挿入し、いくつかの連続する液体環境：すなわち１）ＡＴＰのない溶液、２）非機能性のＡＴＰ代用物を含む、ＡＭＰＰＭＰと呼ばれる緩衝剤、３）ＡＴＰを濃縮した媒体に曝露させた。ＡＭＰＰＭＰは、ＴｏｐｏＩＩの作用を阻害する非加水分解性のＡＴＰ類似体である。ＡＴＰを含む溶液を分析チャンバ内へ注入することによって、ＡＴＰのない緩衝剤またはＡＭＰＰＭＰを含む溶液中で行われた記録と比べて、カンチレバー変動分散が著しく増大することに注目した。これらの実験の結果を図７に示す。
【００３４】
〔実施例３〕
抗生物質感受性検出
本方法は、細菌の外部ならびに内部の運動を検出するのに十分なほど感度が高く、抗菌剤の作用を評価するために使用することができる。この実験は、秒から分の範囲の非常に高い時間分解能で抗生物質に対する細菌の感度を探る能力を示す。
【００３５】
カナマイシンに耐性であるがアンピシリンに感受性のある運動性細菌（大腸菌）を、カンチレバーの両面に吸着させた。この細菌をどちらも抗生物質に連続して曝露させて、細菌の運動／生存能力に与える影響を判定した（図７参照）。
【００３６】
これらの実験では、カンチレバーを分析チャンバ内に導入し、細菌を含む溶液に曝露させ、最終的に細菌をその表面に付着させた。次いでこのシステムを：１）栄養分の欠乏した緩衝剤、２）栄養液（溶原培地（ＬＢ））、３）カナマイシンを豊富に含むＬＢ溶液、４）ＬＢ溶液、５）アンピシリンを濃縮したＬＢ溶液、最後に６）ＬＢ溶液に曝露させた。細菌の運動は、工程２）中に増大し、工程３）でカナマイシンに曝露されると減少し、工程４）で栄養分の存在下で再び増大し、工程５）でアンピシリンの存在下で劇的に低減し、工程６）で栄養液の存在にかかわらず同じ値のままであることが明らかになった。
【００３７】
図８は、実験の異なる段階中のカンチレバー変動およびそのＳＴＤの進展を示す。
【００３８】
この実験は、ＡＰＴＥＳで被覆されたＡＦＭカンチレバーを使用して実行した。実験の異なる段階：すなわちＰＢＳ、ＰＢＳ内への細菌の導入、ＬＢ内への細菌の導入、カナマイシンへの曝露、ＬＢによる洗浄、アンピシリンへの曝露、ＬＢによる洗浄を示す。上部のパネルは、カンチレバーの偏向データを示し、下部のパネルは、分散に関する違いを立証する。
【００３９】
アンピシリンのみを抗生物質として使用して、同様の実験を実行した。具体的には、一連の並行実験において、アンピシリン濃度を変化させた。これにより、抗生物質濃度の関数として変動の変化の定量的な用量依存性グラフを得ることが可能になり（図９）、これを使用して、最小阻止濃度（ＭＩＣ）および最小殺菌濃度（ＭＢＣ）を非常に高い精度で予測した。ＡＦＭカンチレバーを使用して、１組の実験を実行した。異なる濃度のアンピシリンは、カンチレバーの変動の異なる分散値をもたらす。曲線は、実験データのＳ字状の適合を示す。直線は、半値分散値における接線である。この直線と１．０軸および０．０軸との交点を、それぞれ細菌のＭＩＣおよびＭＢＣとして定義することができる。
【００４０】
後に、アンピシリンに感受性のある非運動性細菌（黄色ブドウ球菌）を使用して、同様の実験を繰り返した。これらの細菌もまた、アンピシリンに曝露されるとすぐに内部の動きを劇的に減少させた。カンチレバー運動ＲＭＳの結果を、図１０に示す。
【００４１】
この実験では、ＡＰＴＥＳで被覆されたＡＦＭカンチレバーを使用した。実験の異なる段階：すなわちＰＢＳ、ＰＢＳ内への細菌の導入、ＬＢ内への細菌の導入、およびアンピシリンへの曝露を示す。上部のパネルは、カンチレバーの偏向データを示し、下部のパネルは、分散に関する違いを立証する。
【００４２】
これらのパネルは、この方法は通常、運動性ならびに非運動性細菌を監視するために適用できることを実証する。
【００４３】
最後に、カルメット−ゲラン菌（ＢＣＧ、牛結核向けのワクチン）などの成長の遅い細菌を試験物体として使用して、より多くの実験に成功した。
【００４４】
要約すると、本発明は、ナノからマイクロメートル寸法のシステムの運動を高い空間および時間分解能で検出するデバイスおよび方法を提供する。この方法は、細胞および細菌の単一分子の立体構造変化、生化学反応、薬物標的の相互作用、ならびに内部および外部運動を監視するために使用することができる（それだけに限定されるものではない）。この方法は、動きに対する感受性が高いため、極限環境（たとえば、地球外環境）における生体存在の検出器として使用することができる。この手順は、運動検出器の最も小さい変動でも容易かつ定量的に立証することによって、既存の技術（１６〜２４）を改善し、あらゆる種類の環境、特に生理学的媒体内で利用することができる。実現可能な変動および時間分解能は、細胞および分子生物学、細菌学、微生物学、薬物開発、高速薬剤評価、または分子立体構造監視などの膨大な数の分野（それだけに限定されるものではない）へのその潜在的な適用分野を予測することを可能にする。この枠組みで、ヒト結核菌などの成長の遅い細菌に対してこの技法を適用することが最も重要である。さらに、運動原理が極めて簡単であり、必要な材料は標準的で完全に再利用可能であるため（電子機器、微小流体工学、機構）、そのような本発明に基づくデバイスは、非常に低い製造および保守コストを有する。最後に、本発明は、測定処理量および信頼性を改善するために、いくつかのセンサを組み合わせることによって容易に並列化することができる。
【００４５】
先行技術文献
1  Boisen et al., Rep. Prog. Phys., 74 (2011) 036101
2  Ilic et al., Appl. Phys. Lett., 77 (2000) 450-452
3  Braun et al., Nature Nanotech., 4 (2009) 179-185
4  Lui et al., Sensors 2008 IEEE, 1464-1467
5  特許 US 7148017B1
6  特許出願 US 2009235746A1
7  特許出願 WO 2011021984A1
8  Fritz et al., Science, 288 (2000) 316-318
9  Berger et al., Science, 276 (1997) 2021-2024
10  Godin et al., Nanotech., 21 (2010) 075501
11  特許 EP 1342789A2
12  特許 WO 0058729A2
13  特許 WO 03023363A2
14  Luckulum et al., Anal. Bioanal. Chem., 384 (2006) 667-682
15  Jensen et al., Cancer Res., 51 (1991): 5093-5099
16  Mckendry et al., PNAS, 99 (2002) 9783-9788
17  Gupta et al., J. Vac. Sci. Technol. B, 22 (2004) 2785-2791
18  Campbell et al., J. Bios. Bioel., 21 (2005) 462-473
19  Djuric et al., J. Microel. Eng., 84 (2007) 1639-1642
20  特許出願 US 2006121502A1
21  特許出願 US 2003045019A1
22  特許出願 WO 2004038762A2
23  特許出願 WO 03081204A2
24  特許出願 US 2008136291A1
【符号の説明】
【００４６】
１  カンチレバー
２  レーザ・ビーム
３  鏡
４  光検出器
５  光ファイバ
６  動いている標本
７  ＴｏｐｏＩＩ
８  ＤＮＡ分子
９  細菌
【図１】
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【図２】
2018136332.tif 000004
【図３】
2018136332.tif 000005
【図４】
2018136332.tif 000006
【図５】
2018136332.tif 000007
【図６】
2018136332.tif 000008
【図７】
2018136332.tif 000009
【図８】
2018136332.tif 000010
【図９】
2018136332.tif 000011
【図１０】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年4月6日(2018.4.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
運動検出器を用いて生物学的物体を分析する方法であって、運動検出器が、可撓性支持体と、可撓性支持体の変位を測定するためのセンサと、変位を分析するための電子機器を含み、前記方法が、
生物学的物体が可撓性支持体と接触している状態で可撓性支持体の変位をセンサによって測定する工程であって、変位が、生物学的物体によって付与されるナノスケールの運動によりもたらされる、工程、
生物学的物体のナノスケールの運動の存在および変化の少なくとも１つを決定するよう、測定された変位を電子機器によって分析する工程、
を含む、方法。
【請求項２】
分析する工程が、生物学的物体のナノスケールの運動によりもたらされる可撓性支持体の変位の分散を計算する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
可撓性支持体への生物学的物体の付着を容易にするよう生物学的物体を処理する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
生物学的物体が、酵素、細菌、ウイルスおよび細胞の少なくとも１つである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
生物学的物体が細菌を含み、ナノスケールの運動が細菌の運動を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
生物学的物体が酵素であり、ナノスケールの運動が酵素と薬物の相互作用を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
生物学的物体のナノスケールの運動が、その生物学的物体にとって内因性のものである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
分析する工程において、可撓性支持体の共振周波数は考慮されない、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
分析する工程において、変位の分散の増加は、その変動が可撓性支持体上に保持されている生物学的物体によって誘導されたものであることを示す、請求項２に記載の方法。
【請求項１０】
分析する工程が、測定された変位に基づき生物学的物体の生存能力を決定する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【外国語明細書】
2018136332000001.pdf