(57)【要約】【課題】生体内の観察に有用な吸引型保定器具を提供する。【解決手段】  棒状部材１０と、棒状部材１０に接続された、開口２１を有する環状部材２０と、を備える吸引型保定器具。吸引型保定器具において、環状部材２０に吸引用凹部２２が設けられており、吸引用凹部２２の側壁から棒状部材１０の端面１１に貫通する吸引孔３０が設けられている。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
棒状部材と、
前記棒状部材に接続された、開口を有する環状部材と、
を備え、
前記環状部材に吸引用凹部が設けられており、
前記吸引用凹部の側壁から前記棒状部材の端面に貫通する吸引孔が設けられている、
吸引型保定器具。
【請求項２】
前記環状部材が、顕微鏡に対向する第１面と、前記第１面と対向し、生体に接触する第２面と、を備え、
前記開口が、前記第１面から前記第２面に貫通する、
請求項１に記載の吸引型保定器具。
【請求項３】
前記環状部材において、前記吸引用凹部が、前記第１面に設けられており、かつ、前記開口を周回する、請求項２に記載の吸引型保定器具。
【請求項４】
前記環状部材において、前記開口と前記吸引用凹部を結ぶ複数の溝が前記第１面に設けられている、請求項３に記載の吸引型保定器具。
【請求項５】
前記複数の溝が、前記開口に対して放射状に設けられている、請求項４に記載の吸引型保定器具。
【請求項６】
前記環状部材の側壁に、観察対象の生体の骨と勘合する勘合用凹部が設けられている、請求項１から５のいずれか１項に記載の吸引型保定器具。
【請求項７】
前記開口が、前記生体に対向する側において、末広がりになっている、請求項１から６のいずれか１項に記載の吸引型保定器具。
【請求項８】
ヒトを除く動物に体内組織を露出させる切開部を設けることと、
前記動物に設けられた切開部に請求項１から７のいずれか１項に記載の吸引型保定器具の環状部材を配置することと、
前記環状部材上にガラスプレートを配置することと、
前記ガラスプレートと前記体内組織との間の気体を、前記吸引型保定器具に設けられた吸引孔を介して吸引して、前記体内組織を前記環状部材の開口内に吸引し、前記ガラスプレートに接触させることと、
前記ガラスプレート上から前記体内組織を観察することと、
を含む、動物の体内組織の観察方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は生体観察技術に係り、吸引型保定器具及び体内組織の観察方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、２光子励起法による、生体内組織の観察が行われている。２光子励起法においては、レンズの焦点付近のみの蛍光を観察することが可能である。また、２光子励起には、赤外線を使うため、予め蛍光試薬等を生体に投与することにより、生体内組織の深部における分子機構及び細胞機構を、生体を生かしたまま観察することが可能である。生体内組織を２光子励起法で観察する際には、生体内組織を露出させる切開部を生体に設ける。切開部を介して露出した生体内組織は、呼吸器系や循環器系の動きにあわせて動く。しかし、生体内組織が動くと、焦点位置に位置する部位が変化するため、生体内組織を適切に観察することができない。そのため、切開部から露出した生体内組織を吸引してガラスの裏面に張り付け、ガラスの上から生体内組織を観察する方法が提案されている（例えば、非特許文献１、２参照。）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Mark R Looney et al., " Stabilized imaging of immune surveillance in the mouse lung", Nature Methods, VOL. 8, NO. 1, 91-96, January, 2011
【非特許文献２】Mark B. Headley et al., "Visualization of immediate immune responses to pioneer metastatic cells in the lung", Nature VOL. 531, 513-517, 24, March, 2016
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、生体内の観察に有用な吸引型保定器具及び体内組織の観察方法を提供することを目的の一つとする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の態様によれば、棒状部材と、棒状部材に接続された、開口を有する環状部材と、を備え、環状部材に吸引用凹部が設けられており、吸引用凹部の側壁から棒状部材の端面に貫通する吸引孔が設けられている、吸引型保定器具が提供される。
【０００６】
上記の吸引型保定器具において、環状部材が、顕微鏡に対向する第１面と、第１面と対向し、生体に接触する第２面と、を備え、開口が、第１面から第２面に貫通してもよい。
【０００７】
上記の吸引型保定器具における環状部材において、吸引用凹部が、第１面に設けられており、かつ、開口を周回してもよい。
【０００８】
上記の吸引型保定器具における環状部材において、開口と吸引用凹部を結ぶ複数の溝が第１面に設けられていてもよい。
【０００９】
上記の吸引型保定器具における環状部材において、複数の溝が、開口に対して放射状に設けられていてもよい。
【００１０】
上記の吸引型保定器具において、環状部材の側壁に、観察対象の生体の骨と勘合する勘合用凹部が設けられていてもよい。
【００１１】
上記の吸引型保定器具において、開口が、生体に対向する側において、末広がりになっていてもよい。
【００１２】
また、本発明の態様によれば、ヒトを含む動物又はヒトを除く動物に、体内組織を露出させる切開部を設けることと、動物に設けられた切開部に上記の吸引型保定器具の環状部材を配置することと、環状部材上にガラスプレートを配置することと、ガラスプレートと体内組織との間の気体を、吸引型保定器具に設けられた吸引孔を介して吸引して、体内組織を環状部材の開口内に吸引し、ガラスプレートに接触させることと、ガラスプレート上から体内組織を観察することと、を含む、体内組織の観察方法が提供される。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、生体内の観察に有用な吸引型保定器具及び体内組織の観察方法を提供可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】実施形態に係る吸引型保定器具の模式的斜視図である。
【図２】実施形態に係る吸引型保定器具の模式的斜視図である。
【図３】実施形態に係る吸引型保定器具の模式的斜視図である。
【図４】実施形態に係る吸引型保定器具の模式的断面図である。
【図５】動物上に配置された実施形態に係る吸引型保定器具の模式的斜視図である。
【図６】動物上に配置された実施形態に係る吸引型保定器具の模式的断面図である。
【図７】動物上に配置された実施形態に係る吸引型保定器具の模式的断面図である。
【図８】参考例に係る吸引型保定器具の模式的断面図である。
【図９】実施例に係る顕微鏡写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下に本発明の実施の形態を説明する。以下の図面の記載において、同一又は類似の部分には同一又は類似の符号で表している。ただし、図面は模式的なものである。したがって、具体的な寸法等は以下の説明を照らし合わせて判断するべきものである。また、図面相互間においても互いの寸法の関係や比率が異なる部分が含まれていることは勿論である。
【００１６】
実施形態に係る吸引型保定器具は、図１から図４に示すように、棒状部材１０と、棒状部材１０に接続された、開口２１を有する環状部材２０と、を備える。実施形態に係る吸引型保定器具において、環状部材２０に吸引用凹部２２が設けられており、吸引用凹部２２の側壁から棒状部材１０の端面１１に貫通する吸引孔３０が設けられている。
【００１７】
環状部材２０は、例えば、円板状で有り、略円形の外周を有するが、特に限定されない。環状部材２０は、顕微鏡に対向する第１面２３と、第１面２３と対向し、生体に接触する第２面２４と、を備える。環状部材２０において、開口２１は、第１面２３から第２面２４に貫通している。開口２１は、例えば円形であるが、これに限定されない。第１面２３及び第２面２４は、凹部や溝を除けば、平面である。
【００１８】
環状部材２０において、吸引用凹部２２は、第１面２３に設けられている。吸引用凹部２２は、例えば、円形の溝であり、開口２１を周回するように、第１面２３に設けられている。また、環状部材２０において、開口２１と吸引用凹部２２の間の第１面２３に、開口２１と吸引用凹部２２を結ぶ複数の溝２５が設けられている。複数の溝２５は、例えば、開口２１に対して放射状に設けられている。
【００１９】
環状部材２０の側壁には、観察対象の生体の骨と勘合する勘合用凹部２６が設けられていてもよい。例えば、生体を開胸して肺を観察する際には、肋骨が勘合用凹部２６に勘合し、肺が開口２１を介して露出するように、実施形態に係る吸引型保定器具が、生体上に配置される。
【００２０】
環状部材２０は、棒状部材１０に直接接続されていてもよいし、中間部材４０を介して棒状部材１０に接続されていてもよい。中間部材４０にも、吸引孔３０が設けられている。中間部材４０は、直方体であっても、円柱状であってもよい。中間部材４０の厚みは、環状部材２０の厚みと同じか、環状部材２０の厚みより薄いほうが好ましい。これにより、環状部材２０の第１面２３上に配置されたカバーグラス等のガラスプレートが環状部材２０より大きくても、環状部材２０の第１面２３に密着することが可能になる。また、生体が、環状部材２０の第２面２４に密着することが可能になる。
【００２１】
棒状部材１０は、直方体であっても、円柱状であってもよい。棒状部材１０の生体に対向する側に平面１２が設けられていると、実施形態に係る吸引型保定器具を、生体やテーブル等に安定的に配置することが可能となる。
【００２２】
実施形態に係る吸引型保定器具は、例えば、アルミニウム等の金属からなるが、実施形態に係る吸引型保定器具の材料は、特に限定されない。
【００２３】
次に、実施形態に係る吸引型保定器具を用いる、動物の体内組織の観察方法を説明する。まず、ヒトを含む動物又はヒトを除く動物に、体内組織を露出させる切開部を設ける。以下においては、動物がマウスであり、体内組織が肺である場合を説明する。図５に示すように、マウスに設けられた開胸部に、実施形態に係る吸引型保定器具の環状部材２０を配置する。これにより、環状部材２０の開口２１より、マウスの肺が露出する。
【００２４】
次に、図６に示すように、環状部材２０上に、開口２１を覆うようにスライドガラス等のガラスプレート５０を配置する。さらに、吸引型保定器具に設けられた吸引孔３０から気体の吸引を開始すると、環状部材２０の開口２１内の気体が、開口２１に連通する複数の溝２５、複数の溝２５に連通する吸引用凹部２２、及び吸引用凹部２２に連通する吸引孔３０を介して、外部に排出される。これに伴い、図７に示すように、マウスの肺が、環状部材２０内に吸引され、肺６０の表面と、ガラスプレート５０の下面と、が、接触する。
【００２５】
その後、ガラスプレート５０上に水又はイマージョンオイル等の液体を滴下し、液体を介して対物レンズをガラスプレート５０に接触させて、ガラスプレート５０上から、例えば多光子励起顕微鏡で肺を観察することにより、肺内の細胞の動態等を観察することが可能である。
【００２６】
例えば、図８に示すように、中間部材４０上に突起１４０が設けられており、開口２１に連通する吸引孔１３０が突起１４０内に設けられていると、環状部材２０上に配置されるガラスプレートの大きさが制約されたり、顕微鏡の配置が妨げられたりする場合がある。これに対し、実施形態に係る吸引型保定器具は、図４に示したように、吸引孔３０が、吸引用凹部２２の側壁から棒状部材１０の端面１１に貫通しているため、環状部材２０上に配置されるガラスプレートの大きさが制約されない。したがって、市販のガラスプレートを加工することなく、環状部材２０上に配置することが可能である。また、環状部材２０上における顕微鏡の配置が妨げられることもない。
【００２７】
（他の実施形態）
上記のように本発明を実施の形態によって記載したが、この開示の一部をなす記述及び図面はこの発明を限定するものであると理解するべきではない。この開示から当業者には様々な代替実施の形態、実施例及び運用技術が明らかになるはずである。例えば、吸引型保定器具が配置される動物は、マウスに限定されない。さらに、吸引型保定器具を介して観察される体内組織は、肺に限定されない。例えば、体内組織として、肝臓、腎臓及び膵臓等の内臓、心臓及び脾臓等の血管系、脳等の神経系、眼球等の感覚器系等を、吸引型保定器具を介して観察可能である。このように、本発明は様々な実施の形態等を包含するということを理解すべきである。
【００２８】
（実施例）
マウスを馴致後、イソフルラン麻酔下で、蛍光レポーターインフルエンザウイルス（ＭＡ−Ｖｅｎｕｓ−ＰＲ８又はＭＡ−Ｖｅｎｕｓ−Ｈ５Ｎ１）を経鼻感染させた。感染させて１から４日後、イソフルラン麻酔下で、マウスの気管に人工呼吸装置を装着した。その後、胸部を切開し肺を露出させた。実施形態で説明したような吸引型保定器具を肺の上に配置し、吸引型保定器具の環状部材上にカバーガラス（１３ｍｍ、松浪硝子工業）を配置して、環状部材の開口内の空気を吸引し、肺をカバーガラスの裏面に密着させ、吸引型保定器具で肺を保持した。
【００２９】
カバーガラスの上に水滴を載せ、カバーガラス状の水に対物レンズを接触させた。その後、２光子励起顕微鏡（ＬＳＭ７８０ＮＬＯ、Ｚｅｉｓｓ）を用いて、肺内のタイムラプス像を観察し、撮影した。観察中、肺血管を可視化するために、赤色蛍光色素で標識されたデキストラン（７０ｋＤａ、Ｔｅｘａｓ−Ｒｅｄ  Ｄｅｘｔｒａｎ、登録商標、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）をマウスに静脈投与した。また、観察中のマウスの体温は、ヒーターを用いて確保した。観察終了後、深麻酔下でマウスを頸椎脱臼させ、マウスを安楽死させた。
【００３０】
２光子励起顕微鏡による観察結果を図９に示す。赤色蛍光色素で標識されたデキストランを静脈投与したマウスにおいて、肺血管にデキストランが広がる様子が観察された。また、静脈投与の１０分後には、肺胞内にもデキストランが滲出している様子が認められた。
【符号の説明】
【００３１】
１０・・・棒状部材、１１・・・端面、１２・・・平面、２０・・・環状部材、２１・・・開口、２２・・・吸引用凹部、２３・・・第１面、２４・・・第２面、２５・・・溝、２６・・・勘合用凹部、３０・・・吸引孔、４０・・・中間部材、５０・・・ガラスプレート、６０・・・肺、１３０・・・吸引孔、１４０・・・突起
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2018136265.tif 000009
【図８】
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【図９】
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