(57)【要約】本発明はキャリア流体中において、外層が設けられた少なくとも１つの磁性粒子の磁気応答変化を検出するための方法に関し、その方法が前記外層に関して前記磁性粒子の特徴的な回転時間の測定方法の使用を含み、その測定方法が外部交番磁場の影響下での前記キャリア流体中のブラウン緩和の測定を含む。この方法は、粒子の有効体積または粒子のキャリア流体との相互作用を修正すると、粒子の流体力学的体積が変化し、これは磁化率の異位相成分がその最大値を示す周波数（ｆｍａｘ）の変化をもたらすことを示唆する。
2005527782.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キャリア流体中において、外層が設けられた少なくとも１つの磁性粒子の磁気応答変化を検出するための方法であって、前記方法が前記外層に関して前記磁性粒子の固有回転時間の測定方法の使用を含み、該測定方法が外部交番磁場の影響下での前記キャリア流体中のブラウン緩和の測定を含んでおり、
前記方法はさらに、磁化率の異位相成分がその最大値を示す周波数（ｆｍａｘ）の変化をもたらす前記粒子の流体力学的体積を変化する、前記粒子の有効体積または前記粒子の前記キャリア流体との相互作用の修正を含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
前記測定がある周波数範囲における磁化率の同位相および／または異位相成分の測定を含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記測定が相対的な測定を含み、これによって、修正された粒子系の変化が本来の系と比較されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項４】
少なくとも２つの試料コンテナおよび２つの検出器コイルが使用されることを特徴とする請求項３記載の方法。
【請求項５】
発振器回路が第１の周波数、すなわち、共鳴周波数で使用され、検出器コイルは、それらが互いに異位相となるように前記発振回路内の周波数決定要素として設置されることを特徴とする請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記コイルにわたる前記発振回路からの振動の周波数および／または影響または振幅が測定されることを特徴とする請求項５記載の方法。
【請求項７】
外部発振器／周波数発生器は、双方の検出器コイル間の差が測定されるように、かつ、前記周波数発生器の出力電流および／または電圧と交流ブリッジにかかる電流／電圧との間の位相差が測定されるように前記コイルを前記交流ブリッジ内に設置した構成であることを特徴とする請求項４記載の方法。
【請求項８】
前記発振器または周波数発生器の前記出力電流／電圧間の振幅の差が測定され、前記ブリッジにおける前記電流／電圧の振幅と比較されることを特徴とする請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記測定は１つまたはいくつかの周波数において達成されることを特徴とする請求項８記載の方法。
【請求項１０】
雑音源が使用され、前記系の応答が出力信号のＦＦＴ（高速フーリエ変換）解析の手段によって分析されることを特徴とする請求項３記載の方法。
【請求項１１】
前記コイル間の信号の差がゼロに設定されることを特徴とする請求項３記載の方法。
【請求項１２】
前記ゼロ設定は、各試料コンテナの位置を機械的に調整すること、あるいは、信号の差が最小に抑えられるように各検出コイルの位置を変更することにより得られることを特徴とする請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
前記ゼロ設定は、磁性物質が本来の信号への余分の寄与を創出し、これを介して前記本来の信号がゼロに設定できるように、前記試料コンテナを含む空間の１つに磁性物質を所定量供給することで、前記信号を最小に抑えることにより得られることを特徴とする請求項１１記載の方法。
【請求項１４】
前記磁性物質は実質的にゼロの磁気損失（虚数部分＝０）を示すこと、および、磁化率の実数部分は検査される周波数範囲では一定であることを特徴とする請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
前記方法は流体中の異なる生体分子または他の分子を分析するための分析機器において使用されることを特徴とする請求項１〜１４いずれか１項記載の方法。
【請求項１６】
前記分子は血液、血漿、血清、および、尿などの流体溶液中の１つまたはいくつかの蛋白質を含むことを特徴とする請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
前記分析（分子２）は、前記分析の開始前に前記粒子に接続される第２（分子１）との相互作用を介して、前記粒子に接続されることを特徴とする請求項１５記載の方法。
【請求項１８】
特に互いに集積することができる分子は抗体−抗原、受容体−ホルモン、２本の相補的なＤＮＡ単鎖、および、酵素−基質／酵素−阻害物質の１つまたはいくつかを含むことを特徴とする請求項１５記載の方法。
【請求項１９】
前記磁性粒子の表面はデキストラン、アルカンチオ、適当な端部原子団、または、特定のペプチドの１つまたはいくつかを備えた表面で覆うことを介して修正されることを特徴とする請求項１〜１８いずれか１項記載の方法。
【請求項２０】
デキストラン表面（または、他の適当な中間層）に対しては、例えばシアン臭化物活性化またはカルボン酸活性化の手段によって、第１の分子、例えば抗体が結合できることを特徴とする請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
キャリア流体中において、外層が設けられた少なくとも１つの磁性粒子の磁気応答変化を検出するための装置であって、これによる方法が前記外層の影響に関する前記磁性粒子の固有回転時間の測定を含み、前記測定が外部交番磁場の影響下での前記キャリア流体中のブラウン緩和の測定を含み、前記装置は前記交番磁場を発生するための手段、検出電子回路に接続される少なくとも２つの実質的に同一な検出コイル、および、キャリア流体を吸収するための試料コンテナを含む装置において、
前記装置が、前記粒子の有効体積の修正、または、前記粒子の流体力学的体積が変化した時の前記粒子の前記キャリア流体との相互作用において、磁化率の異位相成分がその最大値となる周波数（ｆｍａｘ）の変化を測定するための手段を含むことを特徴とする装置。
【請求項２２】
励磁コイルが、試料コンテナによる均一磁場の発生のために検出コイルおよび前記試料コンテナを取り囲むことを特徴とする請求項２１記載の装置。
【請求項２３】
前記励磁コイル、測定コイル、および、試料コンテナは同心に設置され、それらの垂直中心軸の周囲に調整されることを特徴とする請求項２２記載の装置。
【請求項２４】
前記装置は発振器システムを含み、前記検出コイルは発振器回路における周波数決定要素を形成することを特徴とする請求項２２記載の装置。
【請求項２５】
前記コイルは前記発振器のリターンコイル内に配置されることを特徴とする請求項２１記載の装置。
【請求項２６】
前記コイルは励磁コイルとして配置されることを特徴とする請求項２１記載の装置。
【請求項２７】
個々の試料を取り囲む前記コイルは、共鳴周波数が前記コイルのそれぞれインダクタンスと抵抗との間の差から決定されるように、互いに対して電気的に位相がシフトされることを特徴とする請求項２１記載の装置。
【請求項２８】
前記コイルは交流ブリッジ内に設置されることを特徴とする請求項２１記載の装置。
【請求項２９】
オペアンプが２つの電圧を相互に減算するために配置されることを特徴とする請求項２２記載の装置。
【請求項３０】
前記装置は位相ロック回路を含むことを特徴とする請求項２１記載の装置。
【請求項３１】
前記装置は、ホワイトノイズによって前記コイルを励磁するための時間可変電流を発生するための信号を発生する発振器／周波数発生器を含むことを特徴とする請求項２１記載の装置。
【請求項３２】
周波数依存情報が、応答のＦＦＴフィルタリングを介して受信されることを特徴とする請求項２１記載の装置。
【請求項３３】
前記コイルにわたる前記測定を直列または並列で行うことを特徴とする請求項２１記載の装置。
【請求項３４】
前記装置は２つの電流源に接続される正弦波発生器を含む回路を含み、各電流源の出力を、各コイルの各１つの端部に接続すると共に、前記第１および第２のコイルにわたる電圧差を出力する差動増幅器の入力に接続することを特徴とする請求項２１記載の装置。
【請求項３５】
前記装置は雑音源をさらに含むと共に、前記装置の前記応答は出力信号の１つのＦＦＴ（高速フーリエ変換）解析を使用して分析されることを特徴とする請求項２１記載の装置。
【請求項３６】
磁性粒子を含むキャリア流体中の分子の量を決定するための方法であって、
Ａ．分析する物質と相互に作用し合う／反応する層を粒子に供給するステップと、
Ｂ．磁性粒子を分子に関して分析される試料と調合するステップと、
Ｃ．ステップＢに従って準備された流体で試料コンテナを充填するステップと、
Ｄ．試料コンテナを検出システムに設置するステップと、
Ｅ．特定の振幅および周波数を持つ外部測定場を試料に加えるステップと、
Ｆ．この周波数での（同位相および異位相成分の双方における）磁気応答を測定するステップと、
Ｇ．ステップＤまたはＥに従って、周波数を変えて再び測定を行うステップ、および
Ｈ．検査される周波数間隔におけるデータを使用することによる同位相および異位相の成分からのブラウン緩和時間の決定を介して結果を分析するステップを含む方法。
【請求項３７】
異なる周波数において（同位相および異位相の成分の同じ値について）周波数シフトを決定することを特徴とする請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
前記分子は生体分子から構成されることを特徴とする請求項３６又は３７記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、キャリア流体中において、外層が設けられた少なくとも１つの磁性粒子の磁気応答変化を検出するための構成に関し、その方法は、前記外層に関して前記磁性粒子の固有回転時間の測定を含む測定方法の使用を含み、前記測定方法は外部交番磁場の影響下での前記キャリア流体中のブラウン緩和の測定を含む。
【背景技術】
【０００２】
約２０ｎｍ未満の直径を有する磁性球体粒子は、磁場と無磁場の双方において単磁区となっている。単磁区となっている粒子は、その粒子が１つの磁化の方向のみを含むことを意味する。
【０００３】
粒子の大きさ、幾何学的形状、温度、測定時間、磁場、および、材料によって、粒子は熱ブロックまたは超常磁性のいずれかになり得る。熱ブロック化した粒子についての磁化の方向は、粒子の結晶方位に応じて磁性粒子内の特定の方向に配向され、この方向に「ロック」される一方、粒子系の影響を受ける。外部磁場の影響下では、粒子全体が物理的に回転し、そのため、それらの磁化の方向は外部から加えられた磁場の方向に徐々に部分的に一致していく。
【０００４】
小さな磁性粒子は多くの材料、例えば磁鉄鉱（Ｆｅ３Ｏ４）、マグネマイト（maghemite；γ‐Ｆｅ２Ｏ４）、コバルトドープ酸化鉄、または、コバルト酸化鉄（ＣｏＦｅ２Ｏ４）から製造される。他の磁性材料、特に（限定的ではないが）、希土類金属〔例えば、イッテルビウム（ytterbium）またはネオジム（neodymium）〕、希土類金属を含むそれらの合金もしくは化合物、または、ドープされた磁性（元素）物質も同じく使用可能である。粒子の大きさは約３ｎｍから約３０ｎｍに生産される。このプロセスでの最終的な大きさは、製造中の多くの異なるパラメータに依存する。
【０００５】
小さな粒子の磁化は異なる２つの方法、ネール（Neelian）緩和、または、他方でブラウン緩和を介して緩和できる。これらの緩和現象は、粒子の磁気配列構造に関連する。それらは核磁気共鳴（ＮＭＲ）現象と取り違えてはならず、後者は原子核内での共鳴を述べたものである。後者の共鳴現象は、数Ｈｚから数ＭＨｚまでの間隔にある本特許において検討される現象に対する共鳴周波数とは異なる典型的にＧＨｚの範囲内の共鳴周波数を有する。
【０００６】
ネール緩和
ネール緩和において、粒子内の磁化は粒子の物理的な回転を伴わずに緩和する（熱ブロック化なし）。この種の緩和の緩和時間は、大きさ、温度、材料、および、（高粒子濃度では）粒子間の磁気引力に強く依存する。この緩和の場合、粒子内の磁化の方向が時間とともにその方向を迅速に変える必要があるので、粒子は超常磁性でなければならない。無磁場におけるネール緩和の時間は以下の等式に従って記述することができる。
【０００７】
2005527782.tif 000003
ここで、τ０は固有緩和時間であり、Ｋは磁気異方性定数、Ｖは磁性粒子の体積、ｋはボルツマン定数、Ｔは温度である。
【０００８】
ブラウン緩和
ブラウン緩和では、粒子が物理的に回転する時に磁化の方向が回転する。この緩和の場合、磁化が粒子内で特定の方向にロックされなければならないので、粒子は熱ブロック化される必要がある。ブラウン緩和の緩和時間は、流体力学的粒子体積、粒子が分散されるキャリア流体の粘度、粒子の表面とその表面に最も近い流体層との関係（それぞれ、疎水性と親水性）に依存する。ブラウンの式は以下の等式に従って近似的に記述することができる。
【０００９】
2005527782.tif 000004
ここで、ＶＨは（ポリマ層を含む）全粒子の流体力学的体積であり、ηは周囲のキャリア流体の粘度、ｋはボルツマン定数、Ｔは温度である。上記の導出においては、完全な湿潤（親水性）であることが仮定されており、回転速度は一定である（初期近似は無視される）。
【００１０】
したがって、ブラウン緩和時間は粒子の（有効な）大きさおよび粒子に対する環境の影響に依存する。粒子がブラウン緩和を示しているか、ネール緩和（Kneeling relaxation）を示しているかを見分けるために、中でも、外部からの影響（例えば、他の流体の粘度、温度変化、加えられる静磁場など）が緩和時間を変化させるかどうかを調べることができる。
【００１１】
同様に、粒子系についての共鳴周波数の決定に関する場合では、周波数領域における現象を調べることができる。これらの周波数は、例えば（ブラウン緩和の場合は数ＨｚからｋＨｚの領域、ネール緩和の場合は典型的にＭＨｚ領域における）交流サスペトメトリ（AC-suspetmetri）の手段によって得ることができる。
【００１２】
明らかに、上記のブラウン運動（ブラウン緩和）は、中でも粒子の体積に依存する。すなわち、粒子が大きくなれば、緩和時間が長くなる、つまり、粒子の運動が小さくなる。約１μｍを超える粒子の緩和時間は１秒間より大幅に長く、このことは、実際では、無視できる運動を意味する。しかし、これらの粒子は検出に使用することはできる。しかし、より大きな粒子は他のタイプの緩和を示し、その緩和では、データの十分な解釈のために粒子の慣性およびキャリア流体の粘性弾性特性が含まれなければならない。
【００１３】
周波数磁化率
交番磁場における粒子系の磁化は、
2005527782.tif 000005
に従って記述することができ、ここで、Ｍは磁化、Ｈは外部交番磁場であり、χは同位相成分（実数部分）χ’および１つの異位相成分（虚数部分）χ’’から構成される、周波数依存複素磁化率である。磁性粒子系の同位相および異位相の成分は、近似的に以下のように記述することができる。
【００１４】
2005527782.tif 000006
ここで、χ０は磁化率の直流値であり、τは磁気緩和の緩和時間である。
【００１５】
粒子の一部（大きな粒子）がブラウン緩和を経験し、一部（小さな粒子）がネール緩和を経験する様々な粒子の大きさを備えた粒子系を仮定すると、交流磁場の周波数範囲に依存して双方の緩和過程からの磁気応答の寄与を得る。図１はブラウン緩和およびネール緩和の双方を示す粒子系の周波数に応じた総磁気応答を図式的に示す。図中の上側の曲線（破線）は磁化率の実数部分であり、下側の曲線（実線）は磁化率の虚数部分である。低周波数での虚数部分の最大値はブラウン緩和からのもので、高周波数での最大値はネール緩和からのものである。総磁気応答は磁化率の実数および虚数の双方の部分に対する双方の過程からの寄与の和である。
【００１６】
本出願の場合、ブラウン緩和のみが興味深く、したがって、検討はこれらの低周波数に集中される。
【００１７】
１つのみの流体力学的体積を持つブラウン緩和を示す粒子を備えた粒子系の場合、以下の式に従って、ある周波数で異位相成分（複素磁化率の虚数部分χ’’）に最大値を得る。
【００１８】
2005527782.tif 000007
この周波数ｆｍａｘの周辺では、磁化率の実数部分χ’が大幅に減少する一方、磁化率の虚数部分χ’’は最大値を示す。最大値（図１のＢ）における値χ’’は、中でもブラウン緩和を経験する特定の数の粒子についての測定値である一方、χ’’における最大値の後のχ’（図１のＣ）に対する磁気応答のレベルは、加えられた交流磁場にまだ磁気的に追随することができる粒子（この場合、ネール緩和を経験する粒子）の総数についての測定値である。十分に低い周波数では全粒子が交流磁場に磁気的に追随できる。すなわち、これらの低周波数（図１のＡ）における磁化率の実数部分は、粒子の総数についての測定値である。したがって、ブラウン粒子からの寄与は総寄与Ａとネール寄与Ｃとの間の差（図１のＤ）として定量化できる。高い周波数では、ネール緩和の結果としてχ’’において新しい最大値が得られる（図１のＥ）。したがって、これら２つの値の比較は、本出願が関心を寄せる試料中でブラウン緩和を経験する粒子の濃度の測定値をもたらす。χ’’の最大値の幅δｆｍａｘ（および、χ’の低下の速度）は、粒子に対する流体再衝撃（摩擦）によるエネルギ放散の測定値である。この摩擦は（中でも）試料中の粒子集団が示し得るような粒子間の流体力学的体積の広がりとともに変化するが、部分的には（温度依存の）統計学的な変動にも依存する。
【００１９】
磁化率、ブラウン緩和、および、エネルギ放散の測定を介して、粒子の総濃度、この粒子集団においてブラウン緩和を経験する粒子の程度、キャリア流体中の粒子の中間サイズ、および、粒子体積の広がりを決定することができる。
【００２０】
磁性粒子は生体分子または抗体の磁気応答の変化を測定するために、それらのキャリアとして使用されて来ている。これらの方法では粒子が固定表面に拘束されるか、粒子が凝集するかのいずれかとなる。粒子系が磁化された後、磁性応答が時間［６］とともにどのように減少していくか、または、外部磁場が磁性粒子に加えられた時の磁気応答が測定された［８］。これらの測定において、ネール緩和とブラウン緩和とは分離することができた。測定は本発明の場合とは全く異なる技術を使用して行われ、極低温流体および先進的な電子回路を必要とするいわゆるＳＱＵＩＤ技術が使用されている。グロスマン（Grossmann）他（参考文献６）も特定の標的分子を決定するために抗体に収容された磁性ナノ粒子を使用するが、これをＳＱＵＩＤ技術、すなわち、超伝導検出器と組み合わせている。
【００２１】
本発明による手順と上述の方法との間には３つの基本的な相違がある。
（ｉ）この例に示すように、他者が周波数領域の代わりに時間／周期領域における測定を選択し、粒子系を「予備磁化」することが必要な場合、本発明による測定の背景となる物理学的原理は従来の実施とは異なる。
（ｉｉ）多くの者が測定のために使用する測定方法は、当然感度が高いが、費用がかかる複雑な技術、すなわち、ＳＱＵＩＤ技術から構成されている。
（ｉｉｉ）本発明は粒子の凝集が回避されることに基づいており、これは、凝集が形成されないように粒子に特徴のある表面を設けることを介して達成される。例えば、分析される物質と特に反応するモノクロディナル抗体は、粒子の表面を覆うことができる。知られている技術によれば、複数の結合方法を持つ生体分子が分析されている。
【００２２】
コーティツ（Kotits）他（参考文献７）も磁性ナノ粒子の系におけるブラウン緩和を研究した。彼らはビオチン（biotine）で覆われた磁性球体を使用した。この系に対して、彼らは異なる量のアビジン（avidin）を加えた。アビジンがビオチンに対して4ヶ所の結合位置を有する時、凝集を含むアビジンが創出される。本方法において、分子１および分子２は凝集が創出されない方法で選択される。それは、例えば磁性球体に結合された単クローン抗体（分子１）であってもよい。この単クローン抗体は標的分子上の特定のエチポープ（etipope）に結合し、このことが凝集の防止をもたらす（図９）。
【００２３】
さらに、類似する方法から本発明による方法を区別する他の事項は、この場合に、磁気応答の周波数依存性が比較的単純な測定器構成を使用して、異なる測定周波数においてどのように変化するかということである。本発明をさらに区別するものは、本発明によれば、異なる生体分子または抗体がその流体力学的体積を変化させるまで粒子表面と結合していることである。従来の方法によれば、粒子は固定表面と結合するか、または粒子は凝縮する。
【００２４】
米国特許第６，０２７，９４６号は流体または固相中にある検体の磁気緩和測定法（magneto-relaxometric）による定量的な検出のためのプロセス、分析の磁気緩和測定法による検出のための物質、および免疫磁気記録を記載する。この過程はＳＱＵＩＤ技術を使用し、装置も方法も本発明とは異なる。
【発明の開示】
【００２５】
本発明は、外部交流磁場の影響下にあるキャリア流体（例えば、水もしくは適当な緩衝流体、または、検出の最終的標的である生体分子に適する他の流体）においてブラウン緩和を示す磁性粒子の磁気応答変化の検出に関する。例えば生体分子または抗体が粒子の表面に結合している時、粒子の有効体積または周囲の流体との粒子の相互作用を修正すると、個々の粒子の流体力学的体積が変化（増加）し、これは周波数ｆｍａｘの変化（低下）を意味し、ここで、磁化率の異位相成分は最大値となる。
【００２６】
そのため、冒頭に述べた方法は、さらに粒子の有効体積または粒子のキャリア流体との相互作用を修正すると粒子の流体力学的体積が変化すること、これは磁化率の異位相成分が最大値となる周波数の変化を伴う方法の使用を包含する。測定は実際には相対的な測定であり、修正された粒子系における変化は元の系と比較される。少なくとも２つの試料コンテナおよび２つの検出器コイルが測定のために使用される。好ましくは、共鳴周波数である周波数の発振器回路が使用され、ここで、検出器コイルは、互いに異位相となるように発振器回路における周波数決定要素として定置される。したがって、周波数の変化および／または影響、または、コイルにわたる発振回路からの発振の振幅が測定される。
【００２７】
外部の発振器／周波数発生器を配置することができ、それらにおいて、コイルは、双方の検出器コイル間の差が測定され、かつ、周波数発生器の出力電流および／または電圧とブリッジに流れる電流／かかる電圧との位相差が測定されるように交流ブリッジとなっている。この場合、発振器出力電流／電圧間の振幅差が測定でき、ブリッジにおける電流／電圧の振幅と比較できる。測定は１つまたはいくつかの異なる周波数で達成される。
【００２８】
雑音源も同じく使用され、系の応答は出力信号のＦＦＴ（高速フーリエ変換）解析の手段によって解析できる。
【００２９】
１つの実施形態によれば、信号の差はコイル間でゼロに設定され、これは試料コンテナの位置をそれぞれ機械的に調整すること、またはその代わりに信号差が最小に抑えられるように検出コイルの位置をそれぞれ変更することを介して行われる。このゼロ設定は、空間の１つに磁性物質の所定の量を追加することを介して信号を最小に抑えることにより行うことができ、ここで、試料コンテナは、物質が本来の信号に対して余分な寄与を創出、したがって、本来の信号がゼロに設定できるように定置される。磁性物質は実質的にゼロの磁気損失（虚数部分＝０）を示し、磁化率の実数部分は検査が行われる周波数範囲において一定である。
【００３０】
本方法は、これに限定するものではないが、好ましくは、流体中の異なる生体分子または他の分子を解析するための分析機器に使用される。この分子は血液、血漿、血清、尿などの流体溶液中の１つまたはいくつかの蛋白質を含む。分析（分子２）は第２の分子（分子１）との相互作用を介して粒子と接続することができ、第２の分子は解析が開始される前に粒子に接続される。集積されることが可能な特定の分子は、各々に対して、抗体−抗原、受容体−ホルモン、ＤＮＡの２本の相補的な単鎖、および、酵素−基質／酵素−阻害物質の１つまたはいくつかを含むことができる。
【００３１】
好ましい実施形態によれば、磁性粒子の表面は、デキストラン（dextrane）、アルカンチオ（alkanethiols）、適当な端部原子団、または、いくつかのペプチドの１つまたはいくつかを備えた表面で覆うことを介して修正される。したがって、デキストランによる表面（または、他の適当な中間層）は、例えばシアン臭化物活性化またはカルボン酸活性化の手段によって、第１の分子、例えば抗体を結合することができる。
【００３２】
本発明は、キャリア流体中の、外層が設けられた少なくとも１つの磁性粒子の磁気応答における変化を検出するための方法を実施するための装置にも関し、この方法は外層の振動に関した磁性粒子の固有回転時間の測定を含む。装置は、検出電子回路に接続される少なくとも２つの実質的に同一の検出コイル、および、キャリア流体を吸収するための試料コンテナを含む。励磁コイルは、試料コンテナにおける均一な磁場の発生のために、検出コイルおよび試料コンテナを取り囲むことができる。１つの実施形態において、励磁コイル、測定コイル、および、試料コンテナが同心に定置され、その垂直中心軸の周囲に調整される。装置は発振器システムをさらに含むことができ、ここで、検出コイルは発振器回路における周波数決定要素を構成する。コイルは、発振器のリターンコイル内に配列される。試料を取り囲むコイルは互いに対してそれぞれ電気的に位相がシフトされており、そのため、それぞれのコイルのインダクタンスと抵抗の間の差から共鳴周波数が決定される。コイルは交流ブリッジ内に定置される。加えて、オペアンプは２つの電圧を互いに減算するように構成することができる。
【００３３】
装置は、１つの実施形態において位相ロック回路を含む。第２の実施形態において、装置はホワイトノイズによってコイルを励磁するための周期可変電流を発生するための信号を生じる発振器／周波数発生器を含む。周波数依存情報は、応答のＦＦＴフィルタリングを介して受信される。
【００３４】
本発明は、磁性粒子を含むキャリア流体における分子の量を決定する方法にも関し、決定は：
Ａ．分析する物質と相互に作用し合う／反応する層を備えた磁性粒子を供給するステップと、
Ｂ．分子に関して分析される試料を磁性粒子と調合するステップと、
Ｃ．ステップＢに従って準備された流体を試料コンテナに充填するステップと、
Ｄ．検出システムに試料コンテナを設置するステップと、
Ｅ．特定の振幅および周波数を持つ外部測定磁場を試料に加えるステップと、
Ｆ．この周波数での（同位相および異位相成分の双方における）磁気応答を測定するステップと、
Ｇ．周波数を変えてステップＤまたはＥに従って測定を行うステップと、
Ｈ．検査される周波数間隔におけるデータの使用を介した同位相および異位相の成分からのブラウン緩和時間の決定を介して結果を分析するステップを含むことができる。
【００３５】
本方法は、異なる周波数における（同位相および異位相成分の同じ値に対する）周波数シフトを決定するステップをさらに含む。分子は生体分子から構成される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３６】
以下、いくつかの実施形態に関して、かつ、添付の図面を参照して本発明を説明する。
【００３７】
図３は、粒子がブラウン緩和を経験する時に、磁化率の同位相および異位相成分が２つの異なる流体力学的直径、５０ｎｍ（曲線２）および６０ｎｍ（曲線１）について室温で周波数とともにどのように変化するかを示す。粒子は水中に分散している。粒子の異位相成分は、ブラウン緩和時間に対応する周波数においてそれぞれ最大値を示す一方、同位相成分はその周波数では減少する。
【００３８】
図３には、磁気応答が異なる流体力学的体積における周波数平面内でどのように変化するかも示す。これらの計算において、熱ブロック化した磁気コイルおよび（実際の粒子系では、特定の大きさ分布があるが）１つのみの粒子サイズが仮定され、これは周波数平面における幾分広い磁気応答をもたらすが、本方法には影響を及ぼさない。同図においては、流体力学的直径が増加すると、磁気応答が周波数を下方にシフトすることを見ることができる。この周波数シフトを測定することにより、例えば、ある生体分子が表面に装着されている（したがって、流体力学が増加した）か、または、異なる生体分子間の相互連結が発生しているかを決定できる。周波数のシフトが生体分子の大きさおよび周囲の流体とのそれらの相互作用の特性に依存するために、周波数シフトの程度を調べることによって、個々の生体分子または抗体の相対濃度を決定することが可能である。
【００３９】
知られている手順は、異なる（表面の）修正について数Ｈｚからほぼ数ＭＨｚまでの広い周波数間隔にわたってχ’およびχ’’の双方を検出し、その後の収集データの処理を介してこれらを互いに比較する（図１および３を参照）ことである。粒子系におけるブラウン運動を特徴付ける、しばしば使用される他の方法は、時間領域における交番磁場に対する粒子の応答を調べること、いわゆる緩和時間測定である。本発明は周波数領域の測定を取り扱うため、緩和時間測定における測定方法の詳しい記述は避ける。
【００４０】
もし必要条件が粒子の修正（−複数の修正）の効果を検査することであれば、流体の粘度は一定に留まるべきである。粘度の変化は粒子のブラウン運動を変化させ、χ’およびχ’’の周波数依存性を変化させる。したがって、粘度の変化の影響は、中でも粒子修正によって引き起こされた寄与から分離することが困難となり得る。他方、この効果は、同一の粒子を使用するが当該流体を変更する時に、異なる流体の粘度を比較するために使用できる。
【００４１】
１つの方法は、１つのみの周波数ｆｍａｘでのχ’およびχ’’の検出に焦点を合わせ、同時に、δｆｍａｘまたは少数の離散周波数値周辺を決定することである。必要であれば、与えられた粒子系は、例えばブラウン緩和の程度または広がったサイズに関して別個に特徴付けることができる。
【００４２】
これらの方法を機能させるために、粒子は、粒子サイズおよび磁気コアの磁気異方性を制限する熱的にブロック化された磁気コア（磁性粒子の体積）を有さなければならない。
【００４３】
本方法の使用に適する典型的な粒子系は、約２０ｎｍの直径を持つ磁鉄鉱またはマグネマイトから作られる磁気コアを持つ粒子である。熱ブロック化した磁化を示す粒子には他の材料、例えば約１０ｎｍから１５ｎｍの大きさを持つＣｏドープ酸化第二鉄またはＣｏＦｅ２Ｏ４、可能なものとして希土類金属などもある。
【００４４】
多くの実用例において、特に以下に検討されるものは、磁気コアが外層、例えばポリアクリルアミド（polyacrylamide）またはデクストラン（dextrane）などのポリマで被覆されている。他の被覆材料も当然見出すことができ、例えば金属層（Ａｕなど）、他のポリマ、シラン（silanes）またはチオール（thioles）などの特定の化学化合物などである。層の厚さは、粒子の総直径が約２５ｎｍから１μｍ（または、より大きく）まで変化するように選択することもしばしば適する。
【００４５】
可能な限り大きな粒子修正での周波数伝送率を受信するために、比較的小さな粒子（約５０ｎｍ）が使用される。もし約５０ｎｍから１μｍの総サイズ（直径）が使用されるなら、十分大きな周波数変化率が本方法で受信されることが想定される。
【００４６】
図２は、反時計方向に回転する２つの付加層２１、２２で覆われた磁気コア２０を示す。図中の異なる層間に示す太い黒線は層の体積を構成する材料から分離可能な中間表面材料を示す。外層２２に対しては、長く細い生体分子２３が装着されている。粒子の図はさらに重要な条件を示す。すなわち、粒子の調合は、異なる層が互いに十分強く固着され（中間層の結合エンタルピが高い）、外部磁場が粒子に加えられた時にそれらの層が互いに応じて回転することが防止されるように異なる層の材料が選択されるという条件に従うべきである。
【００４７】
通常使用される検出方法は、励磁コイルに定置された二重フラッシュシステム（検出フラッシュシステム）に対する誘導電圧の「変化」を検出することである。試料は検出コイルの１つに設置される。この場合、試料からの信号を測定するために、ロックイン（lock-in）増幅技術が使用される。この方法は感度が高く、ほとんどの業務用交流磁化率計に使用されている。周波数間隔は典型的に約０．０１Ｈｚから１０ｋＨｚまでである。この測定システムではより高い周波数で測定することは困難である。僅かに高い周波数、例えば６０ｋＨｚまで測定することは可能であるが、それには、特別に設計された測定システムが必要である。さらに高い周波数、例えば１０ＭＨｚまでにおける磁化率を測定するためには、インダクタンスおよび抵抗の変化の検出に基づく方法を、軟磁性材料（もし高い測定周波数が使用されるなら、例えば、ミュー金属またはある種のフェライト材料）のトロイダルコイルシステム（troid coil system）に対して使用することができる。次に、磁気トロイド内の細い隙間に試料が設置され、隙間が空虚である時および隙間に試料を設置した後のそれぞれで、トロイドの回路パラメータを測定する。
【００４８】
これら全ての方法に共通することは、螺旋状に巻かれたコイルの特徴を、抵抗Ｒと直列になったインダクタンスＬで構成（及びこれらに容量Ｃを並列に接続。容量は巻線の電気的絶縁に依存し、且つ、低い周波数ではしばしば無視できる：図４参照）された等価電気回路で示すことができることである。ここで、回路の抵抗およびインダクタンスは、磁性試料がコイル内に設置された時に変化し得る。
【００４９】
もし可変（交流）電流Ｉ（ωｔ）（交流磁場と同位相）が回路内を浮遊していれば、これは、実数部分が電流と同位相である一方、虚数部分がＩ（ωｔ）に応じて異位相である複素電圧を誘導する。
【００５０】
第一に、磁化における「差」が、異なる粒子の調合において発生する磁化（または、２つの異なる流体の粘度の比較）において決定されるので、測定システムは通常使用される測定システムとは異なって構成される。図５に概略を示す測定システム５０は、市販されているものと同様の２つの同一な試料コンテナ５３および５４を取り囲む２つの同一の検出コイル５１および５２から構成される。双方の試料コンテナにおいて均一な磁場を発生させる目的を持つ励磁コイル５５は、測定コイルおよび試料コンテナを取り囲む。励磁コイル、測定コイル、そしてまた試料コンテナは同心に定置され、かつ垂直中心軸の周囲に調整もされる。サンプル、そしてまた個々の測定コイル双方のそれぞれの位置は別個に調整できる。最後に述べた２つの、代案となる検出方法を使用する時は、励起コイルの必要がない。
【００５１】
図５の測定システム５０は分離された励磁コイル５５を含む。しかし、これは必ずしも必要ではなく、構成から除くことができる。そのため、測定システムは、双方とも同一の交流電流が供給される２つのコイルのみを含むためにより単純になり、コイルが並列に結合された同様の結合の例は図１２に示され、この場合、励磁コイルは測定装置１００から取り除かれ、コイル１０３および１０４のみが磁化および検出の双方のために使用される。
【００５２】
図５のシステムの持つ実質的な長所は、励磁コイルが取り除かれているか否かということではなく、一部は比較による測定の可能性、および一部はシステムの調整可能性にある。システムの感度はＳ／Ｎの状況からだけでなく、それぞれ個々に検出コイルを持つ試料コンテナ１（５３）および試料コンテナ２（５４）を含む２つの名目上同一の部分的システム間の不釣合いからも決定される。試料コンテナなしで、または、同一の試料コンテナとともに測定されるこの不釣合いは、以下の各項の結果として発生し得る。
【００５３】
・それぞれの検出コイルにおける僅かに異なる回転数。
・検出コイルおよび励磁コイルのそれぞれに関連した試料の設置に関する製造時の小さな許容誤差の結果としての不均一磁場。
・検出コイル内部にある試料コンテナの異なる相対位置。
・製造の許容誤差の影響。
【００５４】
検出コイル間の信号の差をリセット（釣り合わせる）ために、２つの方法を使用することができる：
システムは、それぞれの試料コンテナの位置を機械的に調整するか、代わりに、それぞれの検出コイルの位置を、差の信号の不釣合いが最小に抑えられるように変更可能に構成される。
【００５５】
しかし、システムは試料コンテナが設置される空間の１つに供給される所定の量の乾燥磁性粒子（球体）によるより高速かつより単純な方法で、差の信号を釣り合わせるために構成される（図５および図６を参照）。粒子は本来の信号に対する余分な寄与を創出し、本来の信号はこの寄与を介して調整（ゼロに設定）することができる。乾燥磁性粒子は磁気損失（χ’’＝０）を示さず、同様に磁化率の実数部分は検査される周波数範囲においては定数（χ’＝定数）である。
【００５６】
いくつかの代案となる検出方法がある：
発振器回路におけるフィードバック要素としての測定コイル：
磁性粒子の量の２つの異なる調合もしくは修正を比較する代案方法は、それによって含まれる周波数の変化に、発振器システムの手段によって追随することであり、ここで検出コイルは発振器回路、例えば発振器のリターンコイル（フィードバック回路）における周波数決定要素に寄与する。そのような発振器の共鳴周波数がｆｍａｘである一方、そのコイル係数がδｆｍａｘの測定値であり、これは粒子のエネルギ損失（摩擦）の測定値であることはよく知られている。検出コイルが回路中の周波数決定要素に寄与する時、共鳴周波数はコイルのＬおよびＲの値の変化に追随し、これは粒子の磁化率が変化する時に行われる。
【００５７】
２つの異なる粒子系（または、２つの異なる流体）の比較であるコイル間の交流の差の検出が必要である時、個々の試料を取り囲むコイルは、共鳴周波数がコイルのそれぞれインダクタンス｛ΔＬ（＝Ｌ１−Ｌ２）｝と抵抗｛ΔＲ（＝Ｒ１−Ｒ２）｝との間の差から決定されるように互いに対して位相がシフトされる。受動構成部品のみの手段によってこれを達成するための１つの方法は、コイルを交流ブリッジ内に設置することである。能動構成部品、例えばオペアンプもまた使用することができ、これは、２つの電圧の互いからの単純な減算を含む。適当な組合せをどのようにして構成できるかの概念は図１２を観察することによって得ることができ、コイル１０３および１０４にかかる各電位の差は増幅器１０５の手段によって達成され、もし増幅器１０８の出力が周波数発生器１０７に接続され、かつ、回路が僅かに修正されたなら、電流発生器１０６を通過するフィードバックを介し、コイルに電力を供給する発振器が提供される。当然、回路による他の解決策も見出すことができ、したがって本発明は開示された例に限定されない。
【００５８】
発振器回路は、周波数だけでなく、異なる粒子の調合においてコイルが曝される効果全体（または、発振器の振幅）の変化も検出されるように形成される。すなわち、周波数および放散が回路ΔＬ（＝Ｌ１−Ｌ２）および抵抗ΔＲ（＝Ｒ１−Ｒ２）の有効な変化を決定する。これらの変化は回路における放散の変化の測定値を構成する。同様に、コイルが発振器回路から切断された時に発振の低下の測定を介して放散の絶対測定値も決定することができる。
【００５９】
発振器周波数の変化、および、同じく、発振器システムからの信号振幅の低下または効果の変化（または、振幅の変化）の検出を介して、使用される粒子系に対して特定の周波数ｆｍａｘにおける粒子の共鳴を調整することができ、同様に、この周波数におけるコイル係数（エネルギ損失）が決定できる。
【００６０】
分離された励磁コイルに対する必要性がなくなることで、測定システムは簡略化する。
【００６１】
周波数発生器の手段によって駆動される測定コイル
所望の電圧差を検出するための他の測定原理は、交流検出回路７０に関する原理の概略を示す図７による位相ロック〔いわゆる位相ロックループ（phase lock loop）、ＰＬＬ〕から構成され、ここで、コイル７３および７４はｎ直列に接続される。可変周波数発生器ないしは雑音発生器７１が入力信号として使用され、位相ロックループの手段によって複素電圧差も測定する。電圧差はオペアンプ７２の適当な接続によって達成される。同様の効果は交流ブリッジを構成する時にも同じく得ることができ、ここで、ブリッジの４つの枝路の２つがそれぞれコイル７３および７４を構成する。理論的には、電圧差は入力信号に関してそれぞれ０°および９０°を備えた異位相と決定される。実際には、特定の余分な位相がオペアンプの結果として変位する。再び、２つの検出コイル間の１つかつ同じ周波数での信号の差の検出が所望される。
【００６２】
図による電圧差を達成するための可能な原理は、適当な接続のオペアンプ（機器）の使用による。他の可能性は、交流ブリッジにそれぞれのコイルを設置することに基づく。ブリッジは、コイルを介して浮遊する電流の振幅が一定に保たれる可変周波数を発振器／周波数発生器によって供給される。入力信号に関連する与えられた位相変位の結果として得られた電圧差の振幅は、ＰＬＬ回路７５によって決定できる（位相差はＰＬＬ回路によって決定／発生される直流電圧に比例する）。信号の振幅の測定とともに、特定の周波数における試料の特性の十分な解説が得られる。本方法の長所は、第一に、比較的広い周波数間隔にわたって粒子系の磁気特性を測定できること、および、励磁コイルが必要ないことである。
【００６３】
加えて、図１２による結合が図７に示すものと同様の方法で使用できる。出力はＰＬＬ回路に接続され、これは、電流源１０６から発生される電流と出力における電圧差との間の位相シフトを感知する。
【００６４】
時間／周期可変電流を発生するための発振器／周波数発生器信号の使用に対する代案は、ホワイトノイズによってコイルを励磁することである。長所は、周波数発生器を使用せずに、応答のＦＦＴフィルタリングを介して周波数依存情報を受信できることである。
【００６５】
説明したセンサは流体中の異なる生体分子または他の分子の分析のための一般的な分析機器である。分析する分子の例は、例えば、血液、血漿、血清、および、尿などの流体溶液中の蛋白質であることが可能である。本方法は、分析（分子２）が、例えば図８に示すような球体に分析の前に既に接続されている他の分子（分子１）との特定の相互作用を介するなど、何らかの方法で粒子に接続されることが可能であるという条件で機能する。寸法（球体の大きさに関しての分子の大きさ）が縮尺に従っていないことに注意されたい。
【００６６】
図７の結合に対するさらに他の代案を図１１に示す。この結合において、電流緩衝増幅器はオペアンプの後ろに配置される。コイルは「コイル１」および「コイル２」で示す。この結合はコイルを介して２つの同一の電流を供給するという長所を有する。
【００６７】
図７および図１１は直列に接続されたコイルを示した。図１２においては、各コイル、コイル１およびコイル２は並列に配置されている。これは、信号−雑音比が２つのコイルからの差分信号を直接測定することによって高めることができる場合に、より良い測定可能性を可能にする。回路は２つの電流源に接続される正弦波発生器を含む。各コイルの出力、および、同じく各差動増幅器の入力も含まれ、その出力信号はＵ１−Ｕ２、すなわち、それぞれ第１および第２のコイルにかかる電圧である。
【００６８】
生物学的システムにおいては特定の相互作用が通常発生しているため、本センサが、例えば異なる疾病に対する生化学的マーカの分析などのこの領域内で傑出した役割を得られることは可能性がある。特に互いに相互作用が行える分子の例は、以下の通りである。
ａ）抗体−抗原
ｂ）受容体−ホルモン
ｃ）ＤＮＡの２本の相補的な単鎖
ｄ）酵素−基質／酵素−阻害物質
粒子系（例えば、粒子の大きさおよび分子１の選択）は分子２の大きさおよびタイプに従って適合される。
【００６９】
本センサは、例えば医学的診断の範囲内で使用することができる。新しいバイオセンサは、例えばいくつかのＥＬＩＳＡ分析（Enzyme Linked Immunsorbent Assay；固相酵素免疫測定法）に取って代わることができる。現在、この方法は血液、血清、および、脳脊髄液などの複雑な体液に見出される生化学的マーカ（例えば、蛋白質）の内容を決定するために非常に広く使用されている。新しいバイオセンサが取って代われるＥＬＩＳＡ分析の例は以下の通りである。
ａ）脳脊髄液中のタウ蛋白質の分析（アルツハイマー病の診断の一部）
ｂ）血清中のＰＳＡの分析（前立腺ガンの診断）
ｃ）心臓の疾病に関連して測定される急性期応答蛋白質の分析
ｄ）血清中のＣＡ１２５の分析（卵巣内のガンの診断）
本センサは、いくつかのマーカ検出のために、および同時に、同じ系内の異なる大きさおよび／または異なる材料を持つ球体の使用を介して使用できることが想定できる。異なる球体は異なる「生体分子１」で覆われている（図８）。
【００７０】
本新技術は、１つまたはいくつかの分析を同時に達成する「低処理量スクリーニング」のために、または、多数の分析を同時に達成する「高処理量スクリーニング」のために使用できる。後者はセンサを増やすことを介して達成することができる。
【００７１】
本発明は磁性粒子の使用に基づく。磁性球体に装着された試料中の分子２を作るために、磁性球体の表面は適当な方法で修正することができる。これは、例えば、球体の表面をデキストラン（dextrane）、適当な端部原子団を有するアルカンチオ（alkanethiols）、特定のペプチド（peptidos）などで覆うことを介して行うことができる。デキストラン表面（または、他の適する中間層）上では、例えばシアン臭化物活性化またはカルボン酸活性化の手段によって第１の分子、例えば抗体を結合することができる。分子１が磁性球体に接続された時、球体は分析される試料、例えば血清と混合される。
【００７２】
提案される方法を使用して、磁性粒子を含むキャリア流体中の生体分子または抗体の存在を決定するためには、以下のステップが試料の調合、測定、および、測定データの分析において達成されなければならない。
１．特定の物質に関して分析される試料を磁性粒子と混合するステップと、
２．要点１に従って準備された試料で試料コンテナを充填するステップと、
３．（磁気応答の周波数依存を測定するために、どの設備が使用されるかによって）検出コイルまたは検出システムに試料コンテナを設置するステップと、
４．特定の振幅および周波数を持つ外部測定磁場を試料に加えるステップと、
５．この周波数での（同位相および異位相成分の双方における）磁気応答を測定するステップと、
６．ステップ４または５に従って、周波数を変えて測定を達成するステップ、および
７．結果の分析は、（約１０ｋＨｚまでの）検査される周波数間隔における全てのデータの使用を介した同位相および異位相の成分からブラウン緩和時間を決定することである。代案となる分析は、数個の異なる周波数において（同位相および異位相成分の同じ値に対して）周波数のシフトがどの程度大きいかを単に決定することができるだけである。
【００７３】
本システムは、異なる流体粘度間での定量的な比較を可能にする。粘度は、粘度の測定に使用される同一の粒子の残り部分に関して、差について、本発明に説明されるものを使用して同様に測定することができる。周波数の変化は異なる粘度の結果として発生する。共鳴周波数ｆｍａｘだけでなく、δｆｍａｘも変化する。粘度を測定する他の方法と比較した本方法の長所は以下の通りである。
・比較的少ない量の流体が必要とされる。
・流体体積における粘度勾配の検出を可能にする、粒子周辺の粘度を局所的に測定可能性。
【００７４】
しかし、この粘度検出方法は異なる流体中でもまだ安定している粒子に基づく。
【００７５】
本発明は、示され述べられた実施形態に限定されない。しかし、従属する「特許請求の範囲」の範囲内での修正、変更、および、相違も可能である。
【００７６】
参考文献
１．E.Kneller,in：磁力と冶金(Magnetism and Metallurgy) vol.1,A.E.BerkowitzおよびE.Kneller編集、Academic Press New York(1969)365.
２．C.P. BeanおよびJ. Livingston,  Ｊ．応用物理(J.Appl.Phys)  30(1959)120S.
３．L.Neel,  Ｃ．Ｒ．アカデミックサイエンス(C.R.Acad.Sci)  228(1949)664.
４．Brown,W.F.,1963,  Ｊ．応用物理(J.Appl.Phys)  34,1319．
５．Fannin,P.C.Scaife,B.K.P.およびCharles,S.W.1988  J.Magn.Magn.Mater.、72、95.
６．R.Kotitz, T.Bunte, W.Weitschies, L.Trahms,  生体結合反応の結合特性検出のための新しい手段としての超伝導量子干渉装置基盤の磁性ナノ物質緩和測定(Superconducting quantum interference device-based magnetic nanoparticle relaxation measurement as a novel tool for the binding specific detection of biological binding reactions)、Ｊ．応用物理(J.Appl.Phys)  81,8,4317,1997.
７．R. Kotitz, H.Matz, L.Trahms, H.Koch, W.Weitschies, T.Rheinlander, W.Semmler, T.Bunte,  免疫学的検定のためのＳＱＵＩＤ基盤のレミナンス測定(SQUID based remanence measurements for immunoassays)、応用超伝導に関するＩＥＥＥ会報  第７巻２号、3678〜81,1997.
８．K.Enpuku, T.Minotani, M.Hotta, A.Nakohado,  高度Ｔｃ ＳＱＵＩＤ磁気計の生体免疫学的検出への応用(Application of High TC SQUID Magnetmeter to Biological Immunoassays)、応用超伝導に関するＩＥＥＥ会報 第１１巻１号、661〜664,2001.
９．H.L.Grossman, Y.R.Chemla, Y.Poon, R.Stevens, J.Clarke, および、M.D.Alper, Rapid,  ＳＱＵＩＤ顕微鏡を用いた高速、高感度、精選した病原体検出法(Sensitive, Selective Detection of Pathogenic Agents using a SQUID Microscope)  ユーロセンサー  XIV、27〜30,2000.
１０．免疫学的検出における磁性粒子の応用(Applications of Magnetic Particles in Immunoassays)、Mary Meza. Ch.22(303〜309頁)、「磁性キャリヤの科学的臨床的応用(Scientific and Clinical Applications of Magnetic Carriers)」Hafeli 他編、Plenum Press, New York, 1997.
1996年9月、ドイツのRostockにおける会議における講義。
１１．「エレクトロニクスの技術(The art of electronics)」、P.HorowitzおよびW.Hill, Cambridge Univ. Press、第２版(1989).
１２．「結晶および他の調和発振器(Design of crystal and other harmonic oscillators)」、B.Parzen, Wiley-Intersci Publ.(1983).
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】ブラウン緩和およびネール緩和の双方を示す粒子系についての周波数に応じた磁気応答を示すグラフである。
【図２】適当な中間層および生体分子を備えた回転する磁性粒子の断面概略図である。
【図３】磁化率の同位相および異位相成分が、２つの異なる流体力学的直径について室温で周波数とともにどのように変化するかを示すグラフである。
【図４】コイルの等価回路を示す図である。
【図５】本発明による例示的な測定システムの断面概略図である。
【図６】ブラウン緩和の測定中に使用される周波数間隔において、χ’＝一定かつχ’’＝０を示す磁性材料の追加の手段による本発明に従った測定システムの調整を示すグラフである。
【図７】本発明による代案の検出回路（励起コイルのない差分測定）を示す概略図である。
【図８】本発明による実用例を示す概略図である。
【図９】抗原上に１つのみのエピトープを集積する単クローン抗体を示す図である。
【図１０】本発明による第２の例示的測定システムの断面を示す概略図である。
【図１１】本発明による第２の代案の検出回路（励起コイルのない差分測定）を示す概略図である。
【図１２】コイルの図７の結合に対する代案を示す図である。ここで、これらは適する回路内においては互いに並列に結合される。
【図１】
2005527782.tif 000008
【図２】
2005527782.tif 000009
【図３】
2005527782.tif 000010
【図４】
2005527782.tif 000011
【図５】
2005527782.tif 000012
【図６】
2005527782.tif 000013
【図７】
2005527782.tif 000014
【図８】
2005527782.tif 000015
【図９】
2005527782.tif 000016
【図１０】
2005527782.tif 000017
【図１１】
2005527782.tif 000018
【図１２】
2005527782.tif 000019
【国際調査報告】
2005527782.tif 000020
2005527782.tif 000021