(57)【要約】本発明は、タンパク質チロシンホスファターゼ１Ｂ（「ＰＴＰ−１Ｂ」）の活性を調節することによって糖尿病および／またはその関連合併症を処置するための新規かつ改善された方法に関する。本発明の化合物は、ＰＴＰ−１Ｂの活性部位に対して遠位であるＰＴＰ−１Ｂエキソ部位として本明細書中に記載される新規な結合部位に結合することによって活性なＰＴＰ−１Ｂを調節する。本発明はまた、Ｔ細胞タンパク質チロシンホスファターゼ（「ＴＰ−ＰＴＰ」）の活性を調節することによって免疫系障害を処置する新規かつ改善された方法に関する。本発明の化合物は、ＰＴＰ−１Ｂの活性部位に対して遠位であるＴＣ−ＰＴＰエキソ部位として本明細書中に記載される新規な結合部位に結合することによってＴＣ−ＰＴＰの活性を調節する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＴＰ−１Ｂを阻害し、そしてＰＴＰ−１Ｂエキソ部位形成残基の少なくとも１つと相互作用する化合物。
【請求項２】
ＴＣ−ＰＴＰを阻害し、そしてＴＣ−ＰＴＰエキソ部位形成残基の少なくとも１つと相互作用する化合物。
【請求項３】
以下の構造：
【化１】
2005526051.tif 000030
を有する化合物であって、ここで、
Ｒ１は、水素、メチル、エチル、またはプロピルであり；
Ｒ２は、水素、−Ｓ（Ｏ２）Ｒ３、−ＮＨ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、−ＮＨ（Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ３、−Ｓ（Ｏ２）ＮＲ４Ｒ５、または−ＮＲ４Ｓ（Ｏ２）Ｒ３であり、ここでＲ３は、Ｃ１〜Ｃ５アルキルであり、Ｒ４は、水素、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、無置換環式部分、または置換環式部分であり、そしてＲ５は、水素であるか、またはＲ５およびＲ４は、共に無置換環式部分もしくは置換環式部分を形成するかのいずれかであり；
Ｒ６は、水素であるか、あるいはＲ２が−ＮＲ４Ｓ（Ｏ２）ＮＲ３である場合、Ｒ６およびＲ４は、共に無置換環式部分もしくは置換環式部分を形成し；ならびに
Ｌは、−ＮＨＳ（Ｏ２）−または−Ｓ（Ｏ２）ＮＲ７ＣＨ２−であり、ここで、Ｒ７は、水素またはＣ１〜Ｃ５アルキルである、化合物。
【請求項４】
請求項３に記載の化合物であって、ここで、置換された環式基上の１つ以上の置換基は、以下：Ｃ１〜Ｃ５アルキル、フェニル、ベンジル、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、Ｂｒ、−ＯＨ、；−ＮＯ２；−ＣＮ；−ＣＦ３；−ＣＨ２ＣＦ３；−ＣＨ２Ｃｌ；−ＣＨ２ＯＨ；−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ；−ＣＨ２ＮＨ２；−ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３；−ＯＲ８；−Ｃ（Ｏ）Ｒ８；−ＣＯＯＲ８；−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９；−ＯＣ（Ｏ）Ｒ８；−ＯＣＯＯＲ８；−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９；−ＮＲ８Ｒ９；−Ｓ（Ｏ）２Ｒ８；および−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）Ｒ９（ここで、Ｒ８およびＲ９は、各々独立して水素、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、フェニルまたはベンジルである）からなる群から各々独立して選択される、化合物。
【請求項５】
請求項３に記載の化合物であって、Ｒ２およびＲ６は、共に水素である、化合物。
【請求項６】
請求項３に記載の化合物であって、Ｒ２は、−Ｓ（Ｏ２）ＮＨＲ５であり（ここで、Ｒ５は、無置換環式部分または置換環式部分である）、そしてＲ６は、水素である、化合物。
【請求項７】
請求項３に記載の化合物であって、ここで、Ｒ２は、−Ｓ（Ｏ２）Ｒ３であり、Ｒ３は、メチル、エチル、またはプロピルであり、そしてＲ６は、水素である、化合物。
【請求項８】
請求項３に記載の化合物であって、ここで、Ｒ２は、−ＮＨ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３であり（ここで、Ｒ３は、メチル、エチル、またはプロピルである）、そしてＲ６は、水素である、化合物。
【請求項９】
請求項３に記載の化合物であって、ここで、Ｒ２は、−ＮＨ（Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ３であり（ここで、Ｒ３は、メチル、エチル、またはプロピルである）、そしてＲ６は、水素である、化合物。
【請求項１０】
請求項３に記載の化合物であって、ここで、Ｒ２は、−ＮＲ４Ｓ（Ｏ２）Ｒ３であり、ここで、Ｒ３は、メチルであり、そしてＲ４およびＲ６は、無置換ヘテロ環または置換へテロ環を共に形成する、化合物。
【請求項１１】
以下の構造：
【化２】
2005526051.tif 000031
を有する化合物であって、ここで、
Ｒ１０は、Ｃ１〜Ｃ５アルキルまたはＮＨＲ１１であり、ここで、Ｒ１１は、水素、Ｃ１〜Ｃ１０アルキルまたはアリールであり；そして
Ｌは、−ＮＨＳ（Ｏ２）−または−Ｓ（Ｏ２）Ｎ（ＣＨ２）３ＣＨ２−である、化合物。
【請求項１２】
請求項１１に記載の化合物であって、ここで、Ｒ１０は、メチル、エチルまたはプロピルである、化合物。
【請求項１３】
請求項１１に記載の化合物であって、ここで、Ｒ１０は、ＮＨＲ１１であり、そしてＲ１１は、水素である、化合物。
【請求項１４】
請求項１１に記載の化合物であって、ここで、Ｒ１０は、ＮＨＲ１１であり、そしてＲ１１は、アリールである、化合物。
【請求項１５】
請求項１９に記載の化合物であって、ここで、Ｒ１１は、フェニルである、化合物。
【請求項１６】
請求項１９に記載の化合物であって、ここで、Ｒ１１は、ヘテロアリールである、化合物。
【請求項１７】
ＰＴＰ−１Ｂのエキソ部位変異体。
【請求項１８】
ＴＣ−ＰＴＰのエキソ部位変異体。
【請求項１９】
薬学的に受容可能なキャリアーと混ぜ合わせた、有効量の請求項１〜３、および１１のいずれか１項に記載の化合物、またはそのプロドラッグもしくは薬学的に受容可能な誘導体を含む薬学的組成物。
【請求項２０】
以下：
ａ）試験化合物をＰＴＰ−１Ｂと接触させる工程；
ｂ）該試験化合物をＰＴＰ−１Ｂのエキソ部位変異体と接触させる工程；および
ｃ）該試験化合物の存在下でのＰＴＰ−１Ｂの活性と該試験化合物の存在下でのＰＴＰ−１Ｂの該エキソ部位変異体の活性を比較する工程、
を包含するＰＴＰ−１Ｂのエキソ部位インヒビターを同定する方法。
【請求項２１】
以下：
ａ）試験化合物をＴＣ−ＰＴＰと接触させる工程；
ｂ）該試験化合物をＴＣ−ＰＴＰのエキソ部位変異体と接触させる工程；および
ｃ）該試験化合物の存在下でのＴＣ−ＰＴＰの活性と該試験化合物の存在下でのＴＣ−ＰＴＰの該エキソ部位変異体の活性を比較する工程、
を包含するＴＣ−ＰＴＰのエキソ部位インヒビターを同定する方法。
【請求項２２】
２型糖尿病、または２型糖尿病に関連する病的状態を処置するための方法であって、請求項１に記載のＰＴＰ−１Ｂエキソ部位インヒビターの治療的に有効量を必要な被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２３】
請求項２２に記載の方法であって、ここで、２型糖尿病に関連する前記病的状態は、インスリン耐性である、方法。
【請求項２４】
炎症を処置するための方法であって、請求項２に記載のＴＣ−ＰＴＰエキソ部位インヒビターの治療的有効量を必要な被験体に投与する工程を包含して提供される、方法。
【請求項２５】
免疫系障害を処置するための方法であって、請求項２に記載のＴＣ−ＰＴＰエキソ部位インヒビターの治療的有効量を必要な被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２６】
造血障害を処置するための方法であって、請求項２に記載のＴＣ−ＰＴＰエキソ部位インヒビターの治療的有効量を必要な被験体に投与する工程を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
（背景）
真性糖尿病は、潜在的な消耗性疾患（例えば、心血管系疾患および発作）の主要な危険因子であり、そして成人における失明、腎不全および下肢の切断の主な原因である。２型真性糖尿病すなわち非インスリン依存性真性糖尿病が、すべての糖尿病の症例の９０％以上を占める。２型糖尿病に対する現在の処置は、血糖のレベルを低くするという結果を出しているが、副作用として、体重の増加、高血糖症、水腫、および肝臓毒性が挙げられる。肥満は、しばしば糖尿病と強く関連している状態であり、処置の選択肢をさらに複雑にする。特に、肥満は、糖尿病の顕著な特徴であるインスリン抵抗性をさらに悪化させ、その結果、代表的には、２、３年後には現在の糖尿病に対する処置は、その効力を失う。結果として、糖尿病および／またはその関連する合併症の処置のための新規の改良された方法に対する、必要性が存在する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００２】
（好ましい実施形態の説明）
（Ａ．定義）
他に定義しない限り、本明細書中で使用される技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者が一般的に理解している意味と同じ意味を有する。参考文献（例えば、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎら、Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  第２版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ  １９９４）、ならびにＭａｒｃｈ、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  第４版、Ｊｏｈｎ  ＷｉｌｅｙとＳｏｎｓ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ  １９９２））が、当業者に本願において使用される用語の多くについて一般的な指針を提供する。
【０００３】
用語「２型糖尿病」、「ＩＩ型糖尿病」、「２型真性糖尿病」、「ＩＩ型真性糖尿病」、「非インスリン依存性糖尿病」、および「非インスリン依存性真性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）」は、交換可能に使用され、脂肪細胞および筋肉細胞のレベルでのインスリン抵抗性ならびに生じた高血糖症によって特徴付けられる慢性疾患を参照する。
【０００４】
用語「２型糖尿病に関連する病理状態」は、少なくとも部分的には２型糖尿病の長期的効果から生じるあらゆる状態を参照するために使用される。それらの状態として、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害、高血圧症、アテローム性動脈硬化症、糖尿病性潰瘍、ならびに一般的には高い血糖レベルによって引き起こされる血管、神経、および他の内部構造に対して生じた損傷が挙げられるが、これらに限定はされない。
【０００５】
用語「肥満」は、過剰量の体脂肪を記載するために使用される。代表的には、３０ｋｇ／ｍ２以上のボディマス指数（ＢＭＩ）を有する場合に、人は肥満であると考えられる。
【０００６】
用語「処置」は、治療的処置および、予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）測定または予防的（ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ）測定の両方を参照し、ここで目的は、標的とされる病的容態または障害を予防または遅延（軽減）することである。処置を必要とする人々には、すでに障害を有している人々および、障害を有する傾向にある人々または障害が予防されるべき人々が挙げられる。従って、肥満の場合においては、用語「処置」には、肥満の被験者の処置および肥満が進行する危険性がある被験者の予防的処置が含まれる。同様に、２型糖尿病の場合においては、「処置」は、２型糖尿病と診断された被験体の処置および２型糖尿病が進行する危険性がある被験体の処置の両方を参照する。
【０００７】
処置の目的のための用語「哺乳動物」は、哺乳動物（ヒト、家畜および農園動物、ならびに動物園の動物、競技用の動物、またはペット用の動物（例えば、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギなど）が挙げられる）として分類される任意の動物を参照する。好ましくは、哺乳動物は、ヒトである。
【０００８】
（Ｂ．詳細な説明）
本発明は、プロテインチロシンホスファターゼ  １Ｂ（「ＰＴＰ−１Ｂ」）の活性を調節することによる、新しい改良された糖尿病および／またはその関連する合併症の処置方法に関する。本発明の化合物は、ＰＴＰ−１Ｂの活性部位に対して遠位である新規の結合部位（本明細書中では、「ＰＴＰ−１Ｂエキソサイト」と参照される）に結合することで、ＰＴＰ−１Ｂの活性を調節する。従って、本発明の１つの局面において、ＰＴＰ−１Ｂのエキソサイトに結合する化合物が提供される。本発明の別の局面において、ＰＴＰ−１Ｂの活性を調節するために、これらの化合物を使用する方法が提供される。本発明の別の局面において、様々な疾患状態（糖尿病、インスリン抵抗性、および肥満を含む）を処置するためにＰＴＰ−１Ｂのエキソサイトインヒビターを使用する方法が提供される。
【０００９】
本発明はまた、Ｔ細胞プロテインチロシンホスファターゼ（「ＴＣ−ＰＴＰ」）の活性を調節することによる、免疫系の障害を処置する方法に関する。本発明の化合物は、ＴＣ−ＰＴＰの活性部位に対して遠位である新規の結合部位（本明細書中では、「ＴＣ−ＰＴＰエキソサイト」と参照される）に結合することで、ＴＣ−ＰＴＰを調節する。従って、本発明の１つの局面において、ＴＣ−ＰＴＰのエキソサイトに結合する化合物が提供される。本発明の別の局面において、ＴＣ−ＰＴＰの活性を調節するために、これらの化合物を使用する方法が提供される。本発明の別の局面において、様々な疾患状態（炎症、免疫系の障害、および造血系の障害を含む）を処置するために、ＴＣ−ＰＴＰのエキソサイトインヒビターを使用する方法が提供される。
【００１０】
ＰＴＰ−１ＢおよびＴＣ−ＰＴＰは、プロテインチロシンホスファターゼである。チロシンのリン酸化は、可逆的および動的であり、リン酸化されたタンパク質とリン酸化されていないタンパク質との間の平衡は、リン酸基の付加を触媒するプロテインチロシンキナーゼ（「ＰＴＫ」）および逆の活性すなわち付加されたリン酸基の除去を触媒するプロテインチロシンホスファターゼ（「ＰＴＰ」）の対向する活性により支配されている。
【００１１】
ＰＴＰのシグネチャ−モチーフ（Ｓｉｇｎａｔｕｒｅ  ｍｏｔｉｆ）は、（Ｈ／Ｖ）Ｃ（Ｘ）５Ｒ（Ｓ／Ｔ）であり、ここで、Ｘは任意のアミノ酸残基である。Ｚｈａｎｇ、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ５：４１６〜４２３（２００１）；およびＺｈａｎｇ、Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  ４２：２０９〜２３４（２００２）を参照のこと。ＰＴＰシグネチャ−モチーフは、触媒的ＰＴＰドメインの活性部位中のクリティカルループ（ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｌｏｏｐ）（ＰＴＰループまたはＰ−ループと呼ばれる）において見出され、３つの必須の触媒的残基のうちの２つ（システインおよびアルギニン）を含む。第３の触媒的残基はアスパラギン酸であり、ＷＰＤループ（フレキシブルループとしても公知である）において見出される。さらに、全てのＰＴＰは、金属イオンの存在なしにｐ−ニトロフェニルホスフェ−トを加水分解する能力、バナジン酸塩に対する感受性、およびオカダイック酸に対する非感受性によって特徴付けられる。
【００１２】
チロシン特異的ＰＴＰと二重特異ＰＴＰとの間には、アミノ酸配列のバリエーションおよび基質特異性の違いに関わらず、そのＰＴＰドメインの三次元構造は著しく類似している。ＰＴＰドメインは、現在までにその構造が解釈されており、その両端においてαへリックスを隣接する高度にねじれた複合β−シートから構成されるα／βドメインである。ＰＴＰドメインの三次元折りたたみにおける類似性に起因して、ＰＴＰの機能の多様性は、一般的にはＰＴＰ触媒ドメインのＮ末端およびＣ末端中に見出される多様な非触媒的な調節ドメインおよび標的ドメインの存在の結果である。
【００１３】
ＰＴＰドメインの活性部位は、分子表面上の溝（ｃｒｅｖｉｃｅ）の中に位置しており、いくつかのクリティカルループによって形成される。ＰＴＰドメインの配列中の２７個の不変残基の大部分が、これらのループに見出される。触媒部位からより遠位に位置する不変残基は埋もれており、タンパク質ドメインの三次元折りたたみを安定化すると考えられている。
【００１４】
ＰＴＰによって触媒される加水分解反応のメカニズムは、以下の通りであると考えられている。ｐＴｙｒのリン酸基が、主鎖のアミド基およびＰＴＰループのＡｒｇ側鎖によって、活性部位の内部に調和される。活性部位へのｐＴｙｒの結合により、開いた形態から閉じた形態へのＷＰＤループの主要なコンフォメーション変化（８オングストロームもの変化）が引き起され、その結果、ＷＰＤループの中にあるアスパラギン酸が適切に位置決めされ、加水分解反応における一般酸として作用するようになる。触媒反応は、（ＰＴＰループ中の）システインによる求核攻撃によって始まり、システイニル−リン酸中間体が形成される。切れやすい（ｓｃｉｓｓｉｌｅ）リン酸−酸素結合の切断が、ＷＰＤループのアスパラギン酸によるフェノール性酸素のプロトン化によって容易になる。閉じた形態または触媒能力を有する形態（この状態では、ＷＰＤループが活性部位を塞いでいる）が、外部のリン酸アクセプターへの非特異的なリン酸基の転移反応を防止していると考えられている。さらに、閉じたＷＰＤループが、最終的にはシステイニル−リン酸中間体を加水分解する、求核的な水分子の活性化において役割を果たしていると考えられている。
【００１５】
ＰＴＰ−１ＢおよびＴＣ−ＰＴＰの両方におけるエキソサイトの発見により、これらの重要なホスファターゼを調節する代替的経路が開かれる。現在まで、ＰＴＰ−１ＢおよびＴＣ−ＰＴＰを標的化する公知の薬物プログラムは全て、活性部位インヒビターの同定に焦点を合わせてきた。一般的には、これらのプログラムは、標的酵素に対する強力な活性部位インヒビターを同定するという点では成功しているが、細胞貫入（大部分のｐ−Ｔｙｒ模倣物の高度な荷電特性を考慮して）の達成、選択性およびインビボの効力には問題が多い。しかし、実際はエキソサイトは活性部位よりもより疎水性であり、そしてエキソサイトは一般的にはホスファターゼ間で保存されていないので、細胞貫入および選択性をはるかに容易に達成し得る。さらに、エキソサイトインヒビターは内因性基質と競合する必要はないので、ＰＴＰ活性部位インヒビターよりも強力ではない化合物を用いて、インビボの効力を達成し得る。
【００１６】
（ＰＴＰ−１Ｂ）
ＰＴＰ−１Ｂは、代謝速度およびインスリン感受性の調節において主要な役割を果たすことが示されている。ＰＴＰ−１Ｂを糖尿病および肥満と関連づける説得力のある研究の１つが、マウスにおけるノックアウト研究である。Ｅｌｃｈｅｂｌｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８３：１５４４〜１５４８（１９９９）およびＫｌａｍａｎら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２０：５４７９〜５４８９（２０００）。ＰＴＰ−１Ｂをコードする遺伝子のマウスホモログを破壊することで、健康なマウスが生じる。断食状態では、グルコース濃度またはインスリン濃度において、ＰＴＰ−１Ｂ欠損マウスとコントロールマウスとの間で違いは検出されなかった。しかし、エサを与えた状態では、コントロールマウスより、ＰＴＰ−１Ｂ欠損マウスは、グルコース濃度は少しだけ低く、循環インスリン濃度は約半分であった。さらに、高脂肪の食事を与えた場合、ＰＴＰ−１Ｂ欠損マウスは体重増加に抵抗性であり、インスリン感受性を保持していた。一方、コントロールマウスは、体重が急速に増加し、インスリン抵抗性となった。この研究およびその後の他の研究により、ＰＴＰ−１Ｂは、様々な代謝障害（糖尿病および肥満を含む）の処置における妥当な標的であることが証明されている。
【００１７】
ヒトＰＴＰ−１Ｂは４３５アミノ酸のタンパク質である。配列には、短いＮ末端配列、ＰＴＰドメインおよびＥＲアンカーが含まれている。全長タンパク質は、細菌においては不溶性であるので、代表的には、ＰＴＰ−１Ｂの研究は、ヒト胎盤から最初に単離された２９８アミノ酸の形態あるいは３２１アミノ酸の形態について行われている。活性研究において、これらの短縮化形態は、完全に機能しており、そして最初の２９８残基のみが秩序だっている（ｏｒｄｅｒｅｄ）結晶学的所見と一致する。
【００１８】
（ＴＣ−ＰＴＰ）
ヒトＴＣ−ＰＴＰは４１５アミノ酸のタンパク質であり、とりわけ、造血、ならびにＴ細胞およびＢ細胞の活性化に関与する。２つのＴＣ−ＰＴＰのアイソフォームまたはスプライス改変体が発現されており、Ｃ末端の最末端においてのみ異なる。スプライス改変体は、ＴＣ−ＰＴＰの細胞内の局在を制御する手段であるようである。４８ｋＤの改変体は、Ｃ末端テイルとして３４残基の疎水性配列を含み、小胞体に局在化する。３４６〜３５８残基および疎水性Ｃ末端テイルは両方とも、この形態のＴＣ−ＰＴＰが小胞体に標的化されるのに必要である。対称的に、４５ｋＤの改変体は、６アミノ酸の親水性配列を含み、主に核内において見出される。３５０〜３５８の残基および３７７〜３８１の残基は、二つに分かれた核局在化シグナルを形成すると考えられている。
【００１９】
図１は、ヒトＰＴＰ−１ＢとヒトＴＣ−ＰＴＰとの配列アラインメントである。配列は、ＰＴＰ−１Ｂの最初の２９８残基とＴＣ−ＰＴＰの最初の２９６残基との間において６８％の同一性を示す。本明細書中でＴＣ−ＰＴＰ配列を参照する場合、慣例に従い、ＰＴＰ−１Ｂに基づく残基番号体系を使用して、それを参照する。例えば、ＰＴＰ−１Ｂの活性部位中の触媒的システインは、Ｃｙｓ−２１５である。たとえ連続的に番号付けされていた場合であって、活性部位のシステインが２１４番目のアミノ酸であるとしても、ＰＴＰ−１Ｂとの配列アラインメントに基づいて、ＴＣ−ＰＴＰにおいてそれに対応するシステインもまた、Ｃｙｓ−２１５と参照される。
【００２０】
（エキソ部位）
本発明の１つの局面において、ＰＴＰ−１Ｂのエキソ部位に結合する化合物が提供される。このエキソ部位は、ＰＴＰ−１Ｂの、Ｇｌｕ−１８６；Ｓｅｒ−１８７；Ｐｒｏ−１８８；Ａｌａ−１８９；Ｌｅｕ−１９２；Ａｓｎ−１９３；Ｐｈｅ−１９６；Ｌｙｓ−１９７；Ａｒｇ−１９９；Ｇｌｕ−２００；Ｌｅｕ−２７２；Ｇｌｕ−２７６；Ｇｌｙ−２７７；Ｌｙｓ−２７９；Ｐｈｅ−２８０；Ｉｌｅ−２８１；およびＭｅｔ−２８２からなる群より選択される少なくとも１つ（より好ましくは、少なくとも２つの残基）を含む、適応性の結合部位である。適切なリガンドの存在下で、これらの残基の１つ以上は、通常は存在しない、適応性の結合部位を形成する。説明の目的で、本明細書中でエキソ部位と称されるこの適応性の結合部位の形成は、以下の化合物：
【００２１】
【化３】
2005526051.tif 000002
を参照して記載される。
【００２２】
この化合物は、約３０μＭのＩＣ５０でＰＴＰ−１Ｂに結合し、そしてこれを阻害する。化合物５の存在下で、図２に示されるように、ＰＴＰ−１Ｂは、活性部位に対して遠位のエキソ部位を作製する。図２の画像は、ＰＴＰ−１Ｂおよび化合物５の結晶複合体に基づく。エキソ部位結合部位を形成する割れ目の存在を強調するために、残基Ｇｌｕ−１８６；Ｓｅｒ−１８７；Ｐｒｏ−１８８；Ａｌａ−１８９；Ｌｅｕ−１９２；Ａｓｎ−１９３；Ｐｈｅ−１９６；Ｌｙｓ−１９７；Ｇｌｕ−２００；Ｌｅｕ−２７２；Ｇｌｕ−２７６’Ｇｌｙ−２７７；Ｌｙｓ−２７９；Ｐｈｅ−２８０；Ｉｌｅ−２８１；およびＭｅｔ−２８２の表面にアクセス可能な表面が示される（Ａｒｇ−１９９は、エキソ部位のこの図には描かれない）。図３は、残基Ｇｌｕ−１８６；Ｓｅｒ−１８７；Ｐｒｏ−１８８；Ａｌａ−１８９；Ｌｅｕ−１９２；Ａｓｎ−１９３；Ｐｈｅ−１９６；Ｌｙｓ−１９７；Ｇｌｕ−２００；Ｌｅｕ−２７２；Ｇｌｕ−２７６’Ｇｌｙ−２７７；Ｌｙｓ−２７９；Ｐｈｅ−２８０；Ｉｌｅ−２８１；およびＭｅｔ−２８２の炭素およびヘテロ原子のみを示す、同じ領域の図示である。
【００２３】
エキソ部位は、適応性結合部位と称される。なぜなら、適切なリガンドの存在は、エキソ部位結合部位を作製する酵素における、主要なコンホメーション転移を誘導するからである。このようなリガンドの非存在下では、エキソ部位の存在は、これらの同じ残基が連続した表面アクセス可能領域を形成しないことを考慮して、認識も予測もされ得ない。図４は、エキソ部位リガンドの非存在下での、ＰＴＰ−１Ｂの残基１〜２９８の結晶構造である。見られ得るように、エキソ部位領域の大部分は、もはや表面アクセス可能ではない。なぜなら、これは、残基２８３〜２９８によって形成されるヘリックスの存在によって、閉塞されるからである。
【００２４】
エキソ部位リガンドの存在下で生じる大きいコンホメーション変化は、少なくとも３つの残基（Ｔｙｒ−１５２、Ａｓｎ−１９３、およびＴｒｐ−２９１）の相互作用によって媒介され、そしてＰＴＰ−１Ｂの調節機構の一部であると考えられる。図５は、エキソ部位リガンドの非存在下での、これらの残基の主要な相互作用のいくつかを示す。Ａｓｎ−１９３のＮδ２は、Ｔｙｒ−１５２のＯηと水素結合を形成し、そして残基２８３〜２９８によって形成されるヘリックスは、Ｔｒｐ−２９１のインドール環と、Ｐｈｅ−２８０およびＰｈｅ−１９６のフェニル環との、少なくとも部分的に非結合相互作用由来の位置に維持される（図示せず）。第四の残基Ｌｙｓ−１９７（図示せず）もまた、Ａｓｎ−１９３のＮδ２とＴｙｒ−１５２のＯηとの間の水素結合相互作用を維持することに関与すると考えられる。
【００２５】
対照的に、図６は、エキソ部位リガンド５の存在下の状況を示す。見られるように、化合物５のベンゾフラン部分は、残基２８３〜２９８によって形成されるヘリックスを置換し、そして／または混乱させる、Ｔｒｐ−２９１のインドール環を示す。化合物５のカルボニル酸素は、Ａｓｎ−１９３のＮδ２と水素結合を形成し、その結果、Ａｓｎ−１９３のＮδ２は、Ｔｙｒ−１５２のＯηへの水素結合のために、もはや利用可能ではない。Ａｓｎ−１９３とＴｙｒ−１５２との間の水素結合の分裂は、部分的に、Ｔｙｒ−１５２のフェノール環のコンホメーション変化を媒介する。Ｔｙｒ−１５２のフェノール環の回転は、酵素を機能的に不活性化させるＰＴＰ−１Ｂの活性部位のコンホメーション変化を進行させる。
【００２６】
３つの主要な残基の重要性（特に、Ａｓｎ−１９３とＴｙｒ−１５２との間の相互作用）は、化合物５が他のホスファターゼのエキソ部位に結合し、そしてこのホスファターゼを阻害する能力（またはその欠如）によって支持される。ＴＣ−ＰＴＰにおいて、ＰＴＰ−１Ｂの、エキソ部位形成残基の多く（Ａｓｎ−１９３、Ｌｙｓ−１９７およびＴｙｒ−１５２を含む）が変換される。驚くべきことではないが、化合物５はまた、ＴＣ−ＰＴＰを阻害するが、ＰＴＰ−１Ｂについて観察されるよりわずかに低い効力である（約１３０μＭのＩＣ５０）。対照的に、化合物５は、チロシンホスファターゼ白血球に共通の抗原関連タンパク質（「ＬＡＲ」）を阻害せず、ここで、ＰＴＰ−１Ｂのエキソ部位形成残基は、一般に、変換されない（Ａｓｎ−１９３、Ｌｙｓ−１９７およびＴｙｒ−１５２を含む）。ＰＴＰ−１ＢおよびＬＡＲの配列整列は、図７に示される。
【００２７】
（エキソ部位インヒビターおよびこれを同定する方法）
本発明の１つの局面において、ＰＴＰ−１ＢのＧｌｕ−１８６；Ｓｅｒ−１８７；Ｐｒｏ−１８８；Ａｌａ−１８９；Ｌｅｕ−１９２；Ａｓｎ−１９３；Ｐｈｅ−１９６；Ｌｙｓ−１９７；Ａｒｇ−１９９；Ｇｌｕ−２００；Ｌｅｕ−２７２；Ｇｌｕ−２７６；Ｇｌｙ−２７７；Ｌｙｓ−２７９；Ｐｈｅ−２８０；Ｉｌｅ−２８１；およびＭｅｔ−２８２からなる群（包括的に、「ＰＴＰ−１Ｂエキソ部位形成残基」と称される）より選択される少なくとも１つの残基（好ましくは、少なくとも２つの残基であり、そしてより好ましくは、少なくとも３つの残基）と相互作用する化合物が提供される。得られるエキソ部位リガンド−ＰＴＰ−１Ｂ複合体は、本発明の別の局面とみなされる。１つの実施形態において、ＰＴＰ−１ＢのＡｓｎ−１９３、Ｐｈｅ−１９６、Ｌｙｓ−１９７、Ａｒｇ−１９９；Ｇｌｕ−２７６、およびＰｈｅ−２８０からなる群より選択される少なくとも１つの残基（好ましくは、少なくとも２つの残基であり、そしてより好ましくは、少なくとも３つの残基）と相互作用する化合物が提供される。別の実施形態において、化合物とＰＴＰ−１Ｂエキソ部位形成残基との間の相互作用は、この化合物とＡｓｎ−１９３とＰｈｅ−１９６との間の相互作用を含む。なお別の実施形態において、化合物とＰＴＰ−１Ｂエキソ部位形成残基との間の相互作用は、この化合物とＡｓｎ−１９３とＰｈｅ−２８０との間の相互作用を含む。
【００２８】
本発明の別の局面において、化合物は、ＴＣ−ＰＴＰのＧｌｕ−１８６；Ｓｅｒ−１８７；Ｐｒｏ−１８８；Ａｌａ−１８９；Ｌｅｕ−１９２；Ａｓｎ−１９３；Ｐｈｅ−１９６；Ｌｙｓ−１９７；Ａｒｇ−１９９；Ｇｌｕ−２００；Ｍｅｔ−２７２；Ｇｌｕ−２７６；Ｇｌｙ−２７７；Ｌｙｓ−２７９；Ｃｙｓ−２８０；Ｉｌｅ−２８１；およびＬｙｓ−２８２（集合的にＴＣ−ＰＴＰエキソ部位（ｅｘｏｓｉｔｅ）形成残基）からなる群から選択される少なくとも１つの残基（好ましくは少なくとも２つの残基そしてより好ましくは少なくとも３つの残基）と相互作用する化合物が、提供される。生じるエキソ部位配位子ＴＣ−ＰＴＰ複合体は、本発明の別の局面と考えられる。１つの実施形態において、ＴＣ−ＰＴＰのＡｓｎ−１９３；Ｐｈｅ−１９６；Ｌｙｓ−１９７；Ａｒｇ−１９９；Ｇｌｕ−２７６；およびＣｙｓ−２８０からなる群から選択される少なくとも１つの残基（好ましくは少なくとも２つの残基そしてより好ましくは少なくとも３つの残基）と相互作用する化合物が、提供される。別の実施形態において、化合物とＴＣ−ＰＴＰエキソ部位形成残基との間の相互作用は、化合物とＡｓｎ−１９３およびＰｈｅ−１９６との間の相互作用を含む。なお別の実施形態において、化合物とＴＣ−ＰＴＰエキソ部位形成残基との間の相互作用は、化合物とＡｓｎ−１９３およびＣｙｓ−２８０との間の相互作用を含む。
【００２９】
化合物がエキソ部位形成残基と水素結合、塩橋、またはファンデルワールス接触を形成する場合、化合物は、エキソ部位形成残基（ＰＴＰ−１ＢまたはＴＣ−ＰＴＰのいずれか）と相互作用すると言われる。ドナー原子とアクセプター原子との間の距離が約２．５Å〜約３．０Åの間の場合、化合物は、ヒドロキシル−ヒドロキシル水素結合またはヒドロキシル−カルボニル水素結合を形成すると考えられる。ドナー原子とアクセプター原子との間の距離が約２．７Å〜約３．３Åの間の場合、化合物は、アミド−カルボニル水素結合、アミド−ヒドロキシル水素結合、またはアミド−イミダゾール水素結合を形成すると考えられる。ドナー原子とアクセプター原子との間の距離が約３．３Å〜約３．９Åの間の場合、化合物は、アミド−硫黄水素結合を形成すると考えられる。
【００３０】
アミノ（イオン化された）基とカルボン酸（イオン化された）基との間の距離が約２．５Å〜約４．０Åの間の場合、化合物は、エキソ部位形成残基と塩橋を形成すると考えられる。
【００３１】
化合物中の炭素またはヘテロ原子とエキソ部位形成残基中の炭素またはヘテロ原子との間の距離が約２．０Å〜約５．０Åの間（好ましくは約２．５Å〜約４．０Åの間、そしてより好ましくは約２．５Å〜約３．５Åの間）の場合、化合物は、ファンデルワールス接触を行なうと考えられる。
【００３２】
別の実施形態において、化合物（これはＰＴＰ−１Ｂのエキソ部位配位子またはＴＣ−ＰＴＰのエキソ部位配位子のいずれかである）は、「単離された」化合物である。本明細書中で用いられる場合、用語「単離された」は、精製された（重量により測定される結果、少なくとも８０％純粋、好ましくは少なくとも９０％純粋、より好ましくは少なくとも９５％純粋、そして最も好ましくは少なくとも９９％純粋）ことを意味する。ポリペプチドのような自然に存在する化合物に関する用語「単離された」は、自然に存在しない任意の状態を含む。ポリペプチドに関する自然に存在しない状態の例は、ポリペプチドの精製された形態または組換え形態である。別の実施形態において、化合物は、ポリペプチドではない。なお別の実施形態において、化合物は、アミノ酸残基を含まない。
【００３３】
本発明の別の局面において、ＰＴＰ−１Ｂのエキソ部位に結合し、かつＰＴＰ−１Ｂの活性を阻害する化合物を同定すための方法が、提供される。１つの実施形態において、この方法は、以下：
ａ）試験化合物をＰＴＰ−１Ｂと接触させる工程；
ｂ）試験化合物をＰＴＰ−１Ｂのエキソ部位変異体と接触させる工程；および
ｃ）試験化合物の存在下でのＰＴＰ−１Ｂの活性を、試験化合物の存在下でのＰＴＰ−１Ｂのエキソ部位変異体の活性と比較する工程
を包含する。
【００３４】
これらの方法の目的のためのＰＴＰ−１Ｂは、野生型ＰＴＰ−１Ｂまたはその任意の機能的な短縮形態（例えば、ホスホチロシンを脱リン酸化し得、全てのネイティブのエキソ部位形成残基を含む形態）である。１つの実施形態において、ＰＴＰ−１Ｂは、ヒトＰＴＰ−１Ｂである。別の実施形態において、ＰＴＰ−１Ｂは、配列番号１を含む。
【００３５】
ＰＴＰ−１Ｂのエキソ部位変異体は、少なくとも１つのＰＴＰ−１Ｂエキソ部位形成残基が、異なるアミノ酸に改変されて、その結果、生じるＰＴＰ−１Ｂが、もはやエキソ部位を介して阻害され得ないか、またはエキソ部位を介して阻害される能力の減少（化合物５のような既知のエキソ部位インヒビターについて配列番号１と比べて約７５％未満；好ましくは約５０％未満、より好ましくは２５％）を表すＰＴＰ−１Ｂ変異体である。ＰＴＰ−１Ｂのエキソ部位変異体は、本発明の別の局面を含む。
【００３６】
１つの実施形態において、ＰＴＰ−１Ｂのエキソ部位変異体は、Ａｓｎ−１９３は、別のアミノ酸に変異されているＰＴＰ−１Ｂ変異体である。別の実施形態において、ＰＴＰ−１Ｂのエキソ部位変異体は、Ａｓｎ−１９３がアラニンに変異されているＰＴＰ−１Ｂである。別の実施形態において、ＰＴＰ−１Ｂのエキソ部位変異体は、Ｌｙｓ−１９７が別のアミノ酸に変異されているＰＴＰ−１Ｂである。別の実施形態において、ＰＴＰ−１Ｂのエキソ部位変異体は、Ｌｙｓ−１９７がシステインに変異されているＰＴＰ−１Ｂである。別の実施形態において、ＰＴＰ−１Ｂのエキソ部位変異体は、Ａｓｎ−１９３およびＰｈｅ−１９６が変異されているＰＴＰ−１Ｂである。別の実施形態において、ＰＴＰ−１Ｂのエキソ部位変異体は、Ａｓｎ−１９３がアラニンに変異され、そしてＬｙｓ−１９７がシステインに変異されているＰＴＰ−１Ｂである。別の実施形態において、ＰＴＰ−１Ｂのエキソ部位変異体は、Ａｓｎ−１９３がアラニンに変異され、Ｐｈｅ−１９６がアルギニンに変異されているＰＴＰ−１Ｂである。別の実施形態において、ＰＴＰ−１Ｂのエキソ部位変異体は、Ａｓｎ−１９３、Ｐｈｅ−１９６、およびＰｈｅ−２８０が変異されているＰＴＰ−１Ｂである。別の実施形態において、ＰＴＰ−１Ｂのエキソ部位変異体は、Ａｓｎ−１９３がアラニンに変異され、Ｐｈｅ−１９６がアルギニンに変異され、そしてＰｈｅ−２８０がシステインに変異されているＰＴＰ−１Ｂである。
【００３７】
ＰＴＰ−１Ｂを阻害するがＰＴＰ−１Ｂのエキソ部位変異体を阻害しない試験化合物は、潜在的なエキソ部位阻害剤である。活性部位配位子と非競合的な様式でＰＴＰ−１Ｂを阻害し、かつ化合物５のような既知のエキソ部位配位子と競合的な様式でＰＴＰ−１Ｂを阻害する化合物は、ＰＴＰ−１Ｂエキソ部位阻害剤である。
【００３８】
本発明の別の局面において、ＴＣ−ＰＴＰのエキソ部位に結合し、ＴＣ−ＰＴＰの活性を阻害する化合物を見つけるための方法が、提供される。１つの実施形態において、この方法は、以下：
ａ）試験化合物をＴＣ−ＰＴＰと接触させる工程；
ｂ）試験化合物をＴＣ−ＰＴＰのエキソ部位変異体と接触させる工程；および
ｃ）試験化合物の存在下でのＴＣ−ＰＴＰの活性を、試験化合物の存在下でのＴＣ−ＰＴＰのエキソ部位変異体の活性と比較する工程
を包含する。
【００３９】
これらの方法の目的のためのＴＣ−ＰＴＰは、野生型ＴＣ−ＰＴＰまたはその任意の機能的な短縮形態（例えば、ホスホチロシンを脱リン酸化し得、全てのネイティブの外部形成残基を含む形態）である。１つの実施形態において、ＴＣ−ＰＴＰは、ヒトＴＣ−ＰＴＰである。別の実施形態において、ＴＣ−ＰＴＰは、配列番号２を含む。
【００４０】
ＴＣ−ＰＴＰのエキソ部位変異体は、少なくとも１つのＴＣ−ＰＴＰエキソ部位形成残基が、異なるアミノ酸に改変されて、その結果、生じるＴＣ−ＰＴＰが、もはやエキソ部位を介して阻害され得ないか、またはエキソ部位を介して阻害される能力の減少（化合物５のような既知のエキソ部位阻害剤について配列番号２と比べて約７５％未満；好ましくは約５０％未満、より好ましくは２５％）を表すＴＣ−ＰＴＰである。ＴＣ−ＰＴＰのエキソ部位変異体は、本発明の別の局面を含む。
【００４１】
１つの実施形態において、ＴＣ−ＰＴＰのエキソ部位変異体は、Ａｓｎ−１９３が別のアミノ酸に変異されているＴＣ−ＰＴＰである。別の実施形態において、ＴＣ−ＰＴＰのエキソ部位変異体は、Ａｓｎ−１９３がアラニンに変異されているＴＣ−ＰＴＰである。別の実施形態において、ＴＣ−ＰＴＰのエキソ部位変異体は、Ｌｙｓ−１９７が別のアミノ酸に変異されているＴＣ−ＰＴＰである。別の実施形態において、ＴＣ−ＰＴＰのエキソ部位変異体は、Ｌｙｓ−１９７がシステインに変異されているＴＣ−ＰＴＰである。別の実施形態において、ＴＣ−ＰＴＰのエキソ部位変異体は、Ａｓｎ−１９３およびＰｈｅ−１９６が変異されているＴＣ−ＰＴＰである。１つの実施形態において、ＴＣ−ＰＴＰのエキソ部位変異体は、Ａｓｎ−１９３がアラニンに変異され、そしてＰｈｅ−１９６はアルギニンに変異されているＴＣ−ＰＴＰである。別の実施形態において、ＴＣ−ＰＴＰのエキソ部位変異体は、Ａｓｎ−１９３およびＬｙｓ−１９７が変異されているＴＣ−ＰＴＰである。別の実施形態において、ＴＣ−ＰＴＰのエキソ部位変異体は、Ａｓｎ−１９３がアラニンに変異され、そしてＬｙｓ−１９７がシステインに変異されているＴＣ−ＰＴＰである。
【００４２】
ＴＣ−ＰＴＰを阻害するが変異体ＴＣ−ＰＴＰを阻害しない試験化合物は、潜在的なＴＣ−ＰＴＰエキソ部位インヒビターである。活性部位配位子と非競合的な様式でＴＣ−ＰＴＰを阻害し、かつエキソ部位配位子と競合的な様式でＴＣ−ＰＴＰを阻害する化合物は、ＴＣ−ＰＴＰエキソ部位インヒビターである。
【００４３】
（本発明の化合物）
本発明の別の局面において、以下の構造：
【００４４】
【化４】
2005526051.tif 000003
を有する化合物が、提供される。
ここで：
Ｒ１は、水素、メチル、エチル、またはプロピルであり；
Ｒ２は、水素、−Ｓ（Ｏ２）Ｒ３、−ＮＨ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、−ＮＨ（Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ３、−Ｓ（Ｏ２）ＮＲ４Ｒ５、または−ＮＲ４Ｓ（Ｏ２）Ｒ３であり、ここでＲ３はＣ１〜Ｃ５のアルキル、Ｒ４は水素、Ｃ１〜Ｃ５のアルキル、無置換環式部分、または置換された環式部分であり、そしてＲ５は水素であるか、Ｒ５とＲ４が一緒になって無置換環式部分または置換された環式部分を一緒に形成するかのいずれかであり；
Ｒ６は、水素であるかまたは代替的に、Ｒ２が−ＮＲ４Ｓ（Ｏ２）ＮＲ３の場合、Ｒ６とＲ４が一緒になって無置換環式部分または置換された環式部分を形成し；そして、
Ｌは、−ＮＨＳ（Ｏ２）−または−Ｓ（Ｏ２）ＮＲ７ＣＨ２−であり、ここでＲ７は、水素またはＣ１〜Ｃ５のアルキルである。
【００４５】
１つの実施形態において、化合物が、構造Ｉであり、ここで、置換された環式基上の１つ以上の置換基が、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、フェニル、ベンジル、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、Ｂｒ、−ＯＨ；−ＮＯ２；−ＣＮ；−ＣＦ３；−ＣＨ２ＣＦ３；−ＣＨ２Ｃｌ；−ＣＨ２ＯＨ；−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ；−ＣＨ２ＮＨ２；−ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３；−ＯＲ８；−Ｃ（Ｏ）Ｒ８；−ＣＯＯＲ８；−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９；−ＯＣ（Ｏ）Ｒ８；−ＯＣＯＯＲ８；−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９；−ＮＲ８Ｒ９；−Ｓ（Ｏ）２Ｒ８；および−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）Ｒ９からなる群から各々独立して選択され、ここでＲ８およびＲ９が、各々独立して水素、Ｃ１〜Ｃ５のアルキル、フェニルまたはベンジルである。
【００４６】
別の実施形態において、化合物が、構造Ｉであり、ここでＲ１がエチルである。
【００４７】
別の実施形態において、化合物が、構造Ｉであり、ここでＲ２およびＲ６が両方水素である。
【００４８】
別の実施形態において、化合物が構造Ｉであり、ここでＲ２が−Ｓ（Ｏ２）ＮＨＲ５であり、ここでＲ５が、無置換の環式部分または置換された環式部分であり、そしてＲ６は、水素である。別の実施形態において環式部分は、モルホリンまたはピペリジンである。別の実施形態において、環式部分は、アリール基である。別の実施形態において、環式部分は、フェニルである。別の実施形態において、環式部分は、５員環のヘテロアリールである。別の実施形態において、環式部分は、イミダゾール、オキサゾール、またはチアゾールである。別の実施形態において、環式部分は、６員環のヘテロアリールである。別の実施形態において、環式部分は、ピリジン、ピリミジン、またはピラジンである。
【００４９】
別の実施形態において、化合物は、構造Ｉであり、ここでＲ２は、−Ｓ（Ｏ２）Ｒ３であり、ここでＲ３は、メチル、エチル、またはプロピルであり、そしてＲ６は、水素である。
【００５０】
別の実施形態において、化合物は、構造Ｉであり、ここでＲ２は、−ＮＨ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３であり、ここでＲ３は、メチル、エチル、またはプロピルであり、そしてＲ６は、水素である。
【００５１】
別の実施形態において、化合物は、構造Ｉであり、ここでＲ２は、−ＮＨ（Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ３であり、ここでＲ３は、メチル、エチル、またはプロピルであり、そしてＲ６は、水素である。
【００５２】
別の実施形態において、化合物は、構造Ｉであり、ここでＲ２は、−ＮＲ４Ｓ（Ｏ２）Ｒ３であり、ここでＲ３は、メチルであり、そしてＲ４およびＲ６は、一緒になって無置換へテロシクロまたは置換されたヘテロシクロを形成する。別の実施形態において、Ｒ４およびＲ６は、一緒になって置換されていないピロリジンまたは置換されたピロリジンを形成する。
【００５３】
別の実施形態において、化合物は構造Ｉであり、ここでＬは、−ＮＨＳ（Ｏ２）−である。
【００５４】
別の実施形態において、化合物は構造Ｉであり、ここでＬは、−Ｓ（Ｏ２）ＮＲ７ＣＨ２−であり、そしてＲ７はメチルである。
【００５５】
別の実施形態において、化合物は構造Ｉであり、ここでＬは、−Ｓ（Ｏ２）ＮＲ７ＣＨ２−であり、そしてＲ７はエチルである。
【００５６】
別の実施形態において、化合物は構造Ｉであり、ここでＬは、−Ｓ（Ｏ２）ＮＲ７ＣＨ２−であり、そしてＲ７はプロピルである。
【００５７】
本発明の別の実施形態において、以下の構造：
【００５８】
【化５】
2005526051.tif 000004
を有する化合物が提供され、
ここで：
Ｒ１０は、Ｃ１〜Ｃ５のアルキルまたはＮＨＲ１１であり、ここでＲ１１は水素、Ｃ１〜Ｃ１０のアルキルまたはアリールであり；そして、
Ｌは、−ＮＨＳ（Ｏ２）−または−Ｓ（Ｏ２）Ｎ（ＣＨ２）３ＣＨ２−である。
【００５９】
１つの実施形態において、化合物は、構造ＩＩであり、そしてＲ１０は、メチル、エチルまたはプロピルである。
【００６０】
別の実施形態において、この化合物は、構造ＩＩであり、そしてＲ１０は、ＮＨＲ１１である。別の実施形態において、Ｒ１１は、水素である。別の実施形態において、Ｒ１１は、アリールである。別の実施形態において、Ｒ１１は、ヘテロアリールである。別の実施形態において、Ｒ１１は、フェニルである。別の実施形態において、Ｒ１１は、チアゾールである。別の実施形態において、Ｒ１１は、ピリミジンである。
【００６１】
本発明の化合物は、１つ以上の不斉中心を含むことが、当業者によって理解される。本発明の化合物は、別個に、エナンチオマー、ジアステレオマーまたは幾何学的異性体の形態でありうるか、または他に示されない限り、立体異性体の混合物の形態であり得る。二重結合を含む化合物の場合、これらの二重結合は、他に示されない限り、ＺまたはＥあるいはそれらの混合物のいずれかであり得る。
【００６２】
本明細書中で使用される場合、「脂肪族」または「非置換脂肪族」とは、直鎖炭化水素、分枝炭化水素、環状炭化水素、または多環式炭化水素を言い、そして、アルキル部分、アルケニル部分、アルキニル部分、シクロアルキル部分、シクロアルケニル部分、およびシクロアルキニル部分を含む。
【００６３】
用語「アルキル」または「非置換アルキル」とは、飽和炭化水素を言う。
【００６４】
用語「アルケニル」または「非置換アルケニル」とは、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する炭化水素を言う。
【００６５】
用語「アルキニル」または「非置換アルキニル」とは、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する炭化水素を言う。
【００６６】
用語「アリール」または「非置換アリール」とは、少なくとも１つの芳香環を有する、モノ非置換部分または多環式非置換部分を言う。この用語は、少なくとも１つの芳香環内に１つ以上のヘテロ原子を含むヘテロアリールを含む。アリールの例示的な例としては以下が挙げられる：フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、インデニル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、イソキノリニルなど。
【００６７】
用語「アルキルアリール」または「非置換アルキルアリール」とは、少なくとも１つの脂肪族基で置換されたアリール部分を言う。
【００６８】
用語「シクロ」または「環状部分」とは、モノ脂肪族基または多環式脂肪族基あるいはモノ芳香族基または多環式芳香族基を言う。環状脂肪族基は、部分的な非置換の環状部分（１つ以上の二重結合または三重結合を有する）を含む。この用語は、複素環基およびヘテロアリール基を含む。
【００６９】
用語「置換部分」とは、少なくとも１つの水素原子が別の基で置換される部分の置換された変形を言い、この別の基としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：脂肪族；アリール、アルキルアリール、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ、Ｂｒ、−ＯＨ；−ＮＯ２；−ＣＮ；−ＣＦ３；−ＣＨ２ＣＦ３；−ＣＨ２Ｃｌ；−ＣＨ２ＯＨ；−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ；−ＣＨ２ＮＨ２；−ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３；−ＯＲＸ；−Ｃ（Ｏ）ＲＸ；−ＣＯＯＲＸ；−Ｃ（Ｏ）ＮＲＸＲＹ；−ＯＣ（Ｏ）ＲＸ；−ＯＣＯＯＲＸ；−ＯＣ（Ｏ）ＮＲＸＲＹ；−ＮＲＸＲＹ；−Ｓ（Ｏ）２ＲＸ；および−ＮＲＸＣ（Ｏ）Ｒｙ。ここで、ＲＸおよびＲＹは、それぞれ独立して、水素、置換型脂肪族、非置換脂肪族、置換型アリール、または非置換アリールである。さらに、部分上の隣接基での置換は、共に環状基を形成し得る。
【００７０】
（薬学的組成物）
本発明は、特に、ＰＴＰ−１Ｂインヒビターに関して、肥満、糖尿病および２型糖尿病が関連する病理学的状態（例えば、インスリン抵抗性）を処置するための、そして、ＴＣ−ＰＴＰに関して、炎症、ならびに造血性障害および免疫学的障害を処置するための特に有用な化合物を提供する。造血性障害としては、障害性Ｂ細胞リンパ球および／または赤血球生成に関する障害が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７１】
本発明の１つの局面において、薬学的組成物が提供され、これは、本明細書中に記載された化合物（またはプロドラッグ、その薬学的に受容可能な塩または他の薬学的に受容可能な誘導体）の任意の１つを含み、そして必要に応じて、薬学的に受容可能なキャリアを含む。特定の実施形態において、これらの組成物は、１つ以上のさらなる治療剤を必要に応じて含む。これらの治療薬剤は、ＰＴＰ−１Ｂインヒビターに関して、他の抗糖尿病薬物を含み得、そしてＴＣ−ＰＴＰに関して、免疫応答を調節する他の薬剤を含み得る。あるいは、さらなる治療薬剤は、本発明の化合物の任意の副作用を軽減するか、または緩和する薬剤であり得る。
【００７２】
用語「薬学的に受容可能な誘導体」は、化合物（または任意の他の付加物または誘導体）の任意の薬学的に受容可能な塩、エステルまたはこのようなエステルの塩であり、これらを患者に投与した場合、所望の化合物を（直接的にか、または間接的に）提供し得る。薬学的に受容可能な誘導体は、特に、プロドラッグ（さらなる部分を代表的に含む化合物の誘導体）を含み、この部分は、インビボにおいて、薬理学的に活性な種として親分子を産生することを除く。
【００７３】
用語「薬学的に受容可能な塩」とは、信頼できる医学的判断内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などを有することなくヒトおよび低級動物の組織に関する使用に適切であり、そして妥当な利益／危険の割合に比例する塩を言う。アミン、カルボン酸、および他の型の化合物の薬学的に受容可能な塩は、当該分野で周知である。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅらは、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，６６：１−１９（１９７７）（本明細書中に参考として援用される）において、薬学的に受容可能な塩を詳細に記載した。この塩は、インサイチュで、本発明の化合物の最終単離および精製の間に調製され得か、または遊離塩基官能性または遊離酸官能性を適切な試薬（以下に一般的に記載されるような）を反応することによって、別々に調製され得る。例えば、遊離塩基官能性は、適切な酸と反応され得る。さらに、本発明の化合物が、酸生部分を有する場合、それらの適切な薬学的に受容可能な塩は、金属塩（例えば、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩またはカリウム塩）；およびアルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩またはマグネシウム塩））を含み得る。薬学的に受容可能な、無毒性の酸付加塩の例は、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸および過塩素酸）を用いるか、あるいは有機酸（例えば、酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸またはマロン酸）を用いるか、あるいは、当該分野で使用される他の方法（例えば、イオン交換）を使用することにより形成されるアミノ基の塩である。他の薬学的に受容可能な塩としては、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホナート、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、カンファレート、カンファスルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンテンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトネート、グリセロリン酸塩グルコネート、ヘルニ硫酸塩（ｈｅｒｎｉｓｕｌｆａｔｅ）、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヒドロヨウ化物、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオネート、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩マロネート、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチネート、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモエート（ｐａｍｏａｔｅ）、ペクチネート、過硫酸塩、３−フェニルプルピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられる。代表的なアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム塩、リチウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩などが挙げられる。さらなる薬学的に受容可能な塩としては、適切な場合、非毒性アンモニウム、４級アンモニウム、および対イオン（例えば、ハロゲン、水酸化物、カルボン酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、低アルキルスルホン酸塩、アリールスルホン酸塩）を用いて形成されたアミンカチオンが挙げられる。
【００７４】
用語「薬学的に受容可能なエステル」とは、インビボで加水分解されるエステルを言い、そしてヒトの体内で容易に分解され、親化合物またはその塩を除去するエステルを含む。適切なエステル基としては、例えば、薬学的に受容可能な脂肪族カルボン酸（特にアルカン酸、アルケン酸、シクロアルカン酸およびアルカン２酸）に由来するエステル基が挙げられ、ここで、各アルキル部分またはアルケニル部分は、６個以下の炭素原子を有利に有する。特定のエステルの例としては、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、酪酸塩、アクリレートおよびエチルコハク酸塩が挙げられる。
【００７５】
用語「薬学的に受容可能なプロドラッグ」とは、本明細書中で使用する場合、本発明の化合物のプロドラッグを言い、ここで、このプロドラッグは、信頼のある医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などを有するヒトおよび低級動物の問題に関する使用に適切であり、妥当な利益／危険の割合に比例し、そしてそれらの意図された使用ならびに双性イオン形態（ここで、可能な本発明の化合物である）に有効である。用語「プロドラッグ」とは、例えば、血液中の加水分解により、インビボで迅速に変化され、上記の式の本発明の化合物を産生する化合物を言う。考察は、Ｔ．ＨｉｇｕｃｈｉおよびＶ．Ｓｔｅｌｌａ，Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ｔｈｅ  Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ＳｅｒｉｅｓのＶｏｌ．１４およびＥｄｗａｒｄ  Ｂ．Ｒｏｃｈｅ編，Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７（これらの両方は、参考として本明細書中に援用される）中に提供される。
【００７６】
上記のように、本発明の薬学的組成物はさらに、薬学的に受容可能なキャリアを含み得、ここで、本明細書中で使用される場合、このキャリアは、所望の特定の投薬形態に適するような、任意の全ての溶媒、希釈剤、または他の液体ビヒクル、分散または懸濁補助剤、表面活性剤、等張性薬剤、増粘剤または乳化剤、保存剤、固形結合剤、潤滑剤などが挙げられる。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１６版，Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８０）は、薬学的な組成物の処方およびそれらの調製のための公知の技術において使用される種々のキャリアを開示する。任意の従来のキャリア媒体が、例えば、任意の所望ではない生物学的効果を生成するか、そうでなければ、有害な様式で、薬学的組成物の任意の他の成分と相互作用して、本発明の化合物と適合しない範囲以外、その使用は、本発明の範囲内であることが企図される。薬学的に受容可能なキャリアとして利用され得る材料の任意の例としては、糖類（例えば、ラクトース、グルコースおよびスクロース）；デンプン（例えば、コーンスターチおよびポテトスターチ）；セルロースおよびその誘導体（例えば、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース）；粉末化トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；賦形剤（例えば、ココアバターおよび坐薬ワックス）；オイル（例えば、ピーナッツオイル、綿実油、ヒマワリ油、ゴマ油、オリーブオイル、コーン油およびダイズ油）；グリコール（例えば、プロピレングリコール）；エステル（オレイン酸エチルおよびリノール酸エチル）；寒天；緩衝剤（例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化マグネシウム）；無発熱物質水；等張性整理食塩水；リンガー溶液；エチルアルコールおよびリン酸緩衝溶液、ならびに他の非毒性の適合潤滑油（例えば、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム）、ならびに発色薬剤、放出薬剤、コーティング薬剤、甘味薬剤、香料添加剤および香料薬剤、保存剤、ならびに処方者の判断に従って、組成物においてもまた存在し得る抗酸化剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７７】
（使用方法および投薬形態）
本発明の別の局面において、その必要のある被験体に、治療的有効量のＰＴＰ−１Ｂ部位外インヒビターを投与する工程を含む、糖尿病を処置するための方法が提供される。
【００７８】
本発明の別の局面において、その必要のある被験体に、治療的有効量のＰＴＰ−１Ｂ部位外インヒビターを投与する工程を含む、インスリン抵抗性を処置するための方法が提供される。
【００７９】
本発明の別の局面において、その必要のある被験体に、治療的有効量のＰＴＰ−１Ｂ部位外インヒビターを投与する工程を含む、糖尿病を処置するための方法が提供される。
【００８０】
本発明の別の局面において、その必要のある被験体に、治療的有効量のＴＣ−ＰＴＰ部位外インヒビターを投与する工程を含む、炎症を処置するための方法が提供される。
【００８１】
本発明の別の局面において、その必要のある被験体に、治療的有効量のＴＣ−ＰＴＰ部位外インヒビターを投与する工程を含む、免疫系障害を処置するための方法が提供される。
【００８２】
本発明のなお別の局面において、その必要のある被験体に、治療的有効量のＴＣ−ＰＴＰ部位外インヒビターを投与する工程を含む、造血障害を処置するための方法が提供される。
【００８３】
用語被験体とは、哺乳動物、より好ましくはヒトを言う。
【００８４】
用語「有効量」とは、被験体の生物学的応答または医学的応答を誘発する化合物の量を言い、これは、研究者または臨床医により追求される。用語「治療的有効量」とは、この量を受けていない一致する被験体と比較して、疾患または障害の進行速度において、疾患または障害の改善された処置、治癒、予防、または寛解を生じ、そしてまた、正常な生理学的機能を高めるような効果的な量を含む。必要とされる正確な量は、種、年齢、および被験体の一般的な状態、感染の重症度、特定の治療薬剤、その投薬様式などに基づき、被験体から被験体に変化する。
【００８５】
本発明の化合物は、好ましくは、投薬の容易さおよび投薬の均一性のために、投薬単位形態で処方される。表示「投薬単位形態」とは、本明細書中で使用される場合、処置されるべき患者に適切な治療薬剤の物理的に分離した単位を言う。しかし、本発明の化合物および組成物の総一日用法は、主治医により、健全な医学的判断内に決定される。任意の特定の患者または生物体に対する、特異的な治療有効用量レベルは、処置される障害および障害の重症度を含む因子の変化；使用される特異的な化合物の活性；使用される特異的な組成物；患者の年齢、体重、一般的な健康、性別および食事制限；投与時間、投与経路、および使用される特異的化合物の排出速度；処置の持続時間；使用される化合物と組み合わせてか、または同時に使用される薬物；ならびに医学分野で周知の因子などに依存する。
【００８６】
さらに、所望の投薬量中に適切な薬学的に受容可能なキャリアを有する処方物の後、本発明の薬学的組成物は、処置される感染の重篤度に依存して、経口的に、直腸的に、非経口的に、槽内的に、膣内的に、腹腔内的に、局所的に（散剤、軟膏、またはドロップとして）、頬的に（ｂｕｃａｌｌｙ）、経口スプレーまたは経鼻スプレーとして、などで、ヒトおよび他の動物に投与され得る。特定の実施形態において、本発明の化合物は、１日当たり被験体体重の約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇまで、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇまで、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇまでの投薬量で、１日に１回以上投与され、所望の治療効果を得ることができる。０．００１ｍｇ／ｋｇ未満または５０ｍｇ／ｋｇを超える（例えば、５０〜１００ｍｇ／ｋｇ）投薬量が、被験体に投与され得ることがまた、理解される。特定の実施形態において、化合物は、経口的または非経口的に投与される。
【００８７】
経口投与のための液体投薬形態は、薬学的に受容可能なエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシルが挙げられるがこれらに限定されない。活性化合物に加えて、液体投薬形態は、当該分野で通常使用される不活性希釈剤（例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤（例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、エチルカーボネート、エチルアセテート、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、オイル（特に、綿実油、アメリカホドイモ油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにこれらの混合物））を含み得る。不活性希釈剤の他に、経口組成物は、アジュバント（湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、甘味料、香味料、香料）を含み得る。
【００８８】
注射可能調製物（例えば、水性滅菌注射可能懸濁物または油性滅菌注射可能懸濁物）は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を使用して、公知技術に従って処方され得る。滅菌注射可能調製物はまた、非毒性非経口的に受容可能な希釈剤または溶媒中の滅菌注射可能な溶液、懸濁液またはエマルジョン（例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液として）であり得る。水、リンゲル溶液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．および等張塩化ナトリウム溶液は、使用され得る受容可能なビヒクルおよび溶媒中にある。さらに、滅菌不揮発性油は、溶媒または懸濁溶媒として慣例的に使用される。この目的のために、任意のブランドの不揮発性油（合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む）が、使用され得る。さらに、脂肪酸（例えば、オレイン酸）は、注射可能な調製物中で使用される。
【００８９】
注射可能な処方物は、例えば、細菌保持フィルターを通しての濾過または滅菌固体組成物の形態での滅菌剤を組込むことによって滅菌され得、この滅菌固体組成物は、使用の前に滅菌水または他の滅菌注射可能な溶媒中に溶解され得るかまたは分散され得る。
【００９０】
薬物の効果を長くするために、皮下注射または筋内注射からの薬物の吸収を遅らせることが、しばしば望ましい。これは、水の溶解度が低い液体懸濁物または結晶質またはアモルファスの使用によって、達成され得る。次いで、薬物の吸収速度は、その溶解速度に依存し、次いで、この溶解速度は、結晶のサイズおよび結晶質形態に依存し得る。あるいは、非経口投与された薬物形態の遅延吸収は、油性ビヒクル中に薬物を溶解するかまたは懸濁することによって達成される。注射可能蓄積（ｄｅｐｏｔ）形態は、生体分解性ポリマー（例えば、ポリラクチド−ポリグリコリド）中に薬物のマイクロカプセルマトリクスを形成することによって生成される。薬物  対  ポリマーの比および使用される特定のポリマーの性質に依存して、薬物放出の速度は、制御され得る。他の生体分解性ポリマーの例としては、（ポリ（オルトエステル）およびポリ（アンヒドリド）が挙げられる。蓄積注射可能処方物はまた、体組織と適合性であるリポソームまたはマイクロエマルジョン中に薬物を閉じ込めることによって調製される。
【００９１】
直腸投与または膣投与のための組成物は、好ましくは、坐剤であり、これは、本発明の化合物を適切な非刺激性賦形剤またはキャリア（例えば、ココアバター、ポリエチレングリコールまたは坐剤ワックス）と混合することによって調製され得、これらの非刺激性賦形剤またはキャリアは、周囲温度では固体であるが、体温では液体であり、従って、直腸腔または膣腔中で溶解し、そして活性化合物を放出する。
【００９２】
経口投与のための固体投薬形態としては、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、および顆粒剤が挙げられる。このような固体投薬形態において、活性化合物は、以下の少なくとも１つの不活性な薬学的に受容可能な賦形剤またはキャリアと混合される：例えば、クエン酸ナトリウムまたはリン酸ジカルシウムならびに／またはａ）充填剤または増量剤（例えば、スターチ、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、および珪酸）、ｂ）結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロース、およびアカシア）、ｃ）湿潤剤（例えば、グリセロール）、ｄ）崩壊剤（例えば、寒天、カルシウムカーボネート、ジャガイモデンプンもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のシリケート、およびナトリウムカーボネート）、ｅ）溶液遅延剤（ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｒｅｔａｒｄｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）（例えば、パラフィン）、ｆ）吸収促進剤（例えば、四級アンモニウム化合物）、ｇ）湿潤剤（例えば、セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロール）、ｈ）吸収剤（例えば、カオリンおよびベントナイトクレイ）、ならびにｉ）滑沢剤（タルク、カルシウムステアレート、マグネシウムステアレート、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、およびこれらの混合物）。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合において、投薬形態はまた、緩衝剤を含み得る。
【００９３】
類似の型の固体組成物はまた、ラクトースまたは乳糖および高分子量ポリエチレングリコールなどのような賦形剤を使用する軟質充填ゼラチンカプセルおよび硬質充填ゼラチンカプセル中の充填剤として使用され得る。錠剤、糖剤、カプセル剤、丸剤、および顆粒剤の固体投薬形態は、コーティングおよびシェル（例えば、腸溶性コーティング（ｅｎｔｅｒｉｃ  ｃｏａｔｉｎｇ）および薬学的処方物分野において周知の他のコーティング）を用いて調製され得る。これらは、必要に応じて不透明化剤を含み、そしてまた、これらが、優先的には、腸管の特定の部分において、必要に応じて遅延様式で、活性成分のみを放出する組成物からであり得る。使用され得る包埋組成物の例としては、ポリマー性物質およびワックスが挙げられる。類似の型の固体組成物はまた、ラクトースまたは乳糖および高分子量ポリエチレングリコールなどのような賦形剤を使用する軟質充填ゼラチンカプセルおよび硬質充填ゼラチンカプセル中の充填剤として使用され得る。
【００９４】
活性化合物はまた、上記されるように１つ以上の賦形剤を含むマイクロカプセル化形態であり得る。錠剤、糖剤、カプセル剤、丸剤、および顆粒剤の固体投薬形態は、コーティングおよびシェル（例えば、腸溶性コーティング、放出制御コーティング、および薬学的処方物分野において周知の他のコーティング）を用いて調製され得る。このような固体投薬形態において、活性化合物は、少なくとも１つの不活性希釈剤（例えば、スクロース、ラクトースおよびスターチ）と混合され得る。このような投薬形態はまた、通常の実施における場合、不活性希釈剤（例えば、錠剤化滑沢剤および他の錠剤化助剤（例えば、マグネシウムステアレートおよび微晶質セルロース））以外のさらなる物質を含み得る。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合において、投薬形態はまた、緩衝剤を含み得る。これらは、必要に応じて不透明化剤を含み、そしてまた、これらが、優先的には、腸管の特定の部分において、必要に応じて遅延様式で、活性成分のみを放出する組成物からであり得る。使用され得る包埋組成物の例としては、ポリマー性物質およびワックスが挙げられる。
【００９５】
本発明の化合物の局所投与または経皮投与のための投薬形態としては、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、粉末、溶液、スプレー、吸入剤またはパッチが挙げられる。活性成分は、滅菌条件下で、薬学的に受容可能なキャリアおよび、必要とされる場合、任意の必要とされる保存剤または緩衝剤と混合される。眼科用処方物、点耳剤、および点眼剤がまた、本発明の範囲内であるとして企図される。さらに、本発明は、経皮パッチの使用を企図し、これは、体に対する化合物の制御送達を提供する付加的利点を有する。このような投薬形態は、適切な溶媒中に化合物を溶解するかまたは調剤することによって生成される。吸収促進剤はまた、皮膚を通り超える化合物の流れを増加するために使用され得る。速度は、速度増強膜を提供することによってか、またはポリマーマトリクスまたはゲル中に化合物を調剤することによってのいずれかで制御され得る。
【００９６】
本発明の化合物および薬学的組成物が、処方され、組み合わせ療法において使用され得、すなわち、化合物および薬学的組成物が、１つ以上の他の所望の治療手順または医療手順と同時にか、その前にか、またはそれと連続して、処方され得るかまたは投与され得ることがまた、理解される。組み合わせレジメンにおける使用のための治療（療法または手順）の特定の組み合わせは、達成されるべき所望の療法および／または手順ならびに所望の治療効果の適合性を説明する。使用される治療が同じ障害に対して所望の効果を達成し得る（例えば、本発明の化合物は、例えば、別の抗癌剤と同時に投与され得る）か、またはこれらが異なる効果（例えば、任意の有害効果の制御）を達成し得ることがまた、理解される。
【実施例】
【００９７】
（実施例１）
（ＰＴＰ−１Ｂのクローニング）
野生型ヒトＰＴＰ−１Ｂの短縮型版を、以下のように作製した。ヒトＰＴＰ−１Ｂの最初の３２１アミノ酸をコードするｃＤＮＡ（配列番号４）を、ヒト胎児心臓総ＲＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）から単離した。
【００９８】
【化６】
2005526051.tif 000005
ＰＴＰ−１Ｂ  ｃＤＮＡのヌクレオチド９１〜１１４に対応するオリゴヌクレオチドプライマー（Ｆｏｒ）およびＰＴＰ−１Ｂ  ｃＤＮＡのヌクレオチド１０３０〜１０５３に相補的なオリゴヌクレオチドプライマー（Ｒｅｖ）（Ｇｅｎｂａｎｋ  Ｍ３１７２４．１；Ｃｈｅｒｎｏｆｆ，Ｊ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：２７３５−２７３９（１９９０））を、合成し、ポリメラーゼ連鎖反応を使用してＤＮＡを生成するために使用した。
【００９９】
【化７】
2005526051.tif 000006
プライマーＦｏｒｗａｒｄは、最初のＡＴＧコドンにＮｄｅＩ制限部位を組込み、プライマーＲｅｖは、ヌクレオチド１０５３の後にＵＡＡ停止コドンその後にＥｃｏＲＩ制限部位を挿入する。ｃＤＮＡを、制限ヌクレアーゼＮｄｅＩおよびＥｃｏＲＩを用いて消化し、標準的な分子生物学技術を使用してｐＲＳＥＴｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローン化した。単離されたｃＤＮＡの同一性を、ＤＮＡ配列決定分析によって実証した。
【０１００】
より短いｃＤＮＡ（ＰＴＰ−１Ｂ  ２９８（アミノ酸残基１〜２９８をコードする））を、オリゴヌクレオチドプライマーＦｏｒｗａｒｄおよびオリゴヌクレオチドプライマーＲｅｖ２ならびにポリメラーゼ連鎖反応のテンプレートとして上記されるクローンを使用して生成した。
Ｒｅｖｅｒｓｅ２：ＴＧＣＣＧＧＡＡＴＴＣＣＴＴＡＧＴＣＣＴＣＧＴＧＧＧＡＡＡＧＣＴＣＣ（配列番号７）
（実施例２）
（ＰＴＰ−１Ｂ変異型）
以下の変異型を、以下のように作製した。ｐＲＳＥＴｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中のＰＴＰ−１Ｂの３２１アミノ酸形態（配列番号３）を、テンプレートとして使用し、Ｔ７プライマーおよびＲＳＥＴｒｅｖプライマーを、「外側」プライマーとして使用した。
【０１０１】
【化８】
2005526051.tif 000007
ＰＴＰ−１Ｂ［３２１；Ｎ１９３Ａ；Ｆ１９６Ｒ；Ｆ２８０Ｃ］を、ＰＴＰ−１Ｂ［３２１；Ｎ１９３Ａ；Ｆ１９６Ｒ］からのＮｄｅＩ−ＰｓｔＩフラグメント（残基１〜２１５に対応する）を、ＰＴＰ−１Ｂ［３２１；Ｆ２８０Ｃ］からのＰｓｔＩ−ＥｃｏＲＩフラグメント（残基２１６〜３２１に対応する）と連結することによって生成した。
【０１０２】
ＰＴＰ−１Ｂ［２９８；Ｎ１９３Ａ；Ｆ１９６Ｒ；Ｆ２８０Ｃ］を、テンプレートとしてＰＴＰ−１Ｂ［３２１；Ｎ１９３Ａ；Ｆ１９６Ｒ；Ｆ２８０Ｃ］を使用して、ＰＣＲによって生成した。Ｔ７ベクタープライマーを、順方向プライマーとして使用し、残基２９８での短縮を、このプライマーを使用して生成した：
ＴＧＣＣＧＧＡＡＴＴＣＣＴＴＡＧＴＣＣＴＣＧＴＧＣＧＡＡＡＧＣＴＣＣ  （配列番号１２）。
【０１０３】
以下の変異型を、Ｋｕｎｋｅｌ変異誘発およびテンプレートとしてＰＴＰ−１Ｂ［２９８］を使用して作製した。
【０１０４】
【化９】
2005526051.tif 000008
システインに対する変異に加えて、天然に存在するシステインを除去する変異（「スクラブ（ｓｃｒｕｂｓ）」と呼ばれる）はまた、なされ得る。例えば、位置９２および１２１の天然に存在するシステインは、他の残基（例えば、アラニンまたはセリン）に変異され得る。この目的のためのオリゴの例示的な例としては、以下が挙げられる：
Ｃ９２Ａ  ＣＣＡＡＡＡＧＴＧＡＣＣＧＧＣＴＧＴＧＴＴＡＧＧＣＡＡ  配列番号２５
Ｃ１２１Ａ  ＣＣＡＧＴＡＴＴＧＴＧＣＧＧＣＴＴＴＴＡＡＣＧＡＡＣＣ  配列番号２６
Ｃ１２１Ｓ  ＣＣＡＧＴＡＴＴＧＴＧＣＧＣＴＴＴＴＴＡＡＣＧＡＡＣＣ  配列番号２７。
【０１０５】
ＰＴＰ−１Ｂクローンの配列決定は、以下のように達成された。プラスミドＤＮＡの濃度は、２８０ｎｍでの吸光度によって定量された。１０００ｎｇのプラスミドを、配列決定試薬（１μｇ  ＤＮＡ、６μｌ水、３．２ｐｍ／μｌの１μｌ配列決定プライマー、Ｂｉｇ  Ｄｙｅ［Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ］との８μｌの配列決定混合物）と混合した。配列決定プライマーは、配列番号２８および配列番号２９である。
順方向プライマー、「Ｔ７」ＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧ  配列番号２８
逆方向プライマー、「ＲＳＥＴ  ＲＥＶ」ＴＡＧＴＴＡＴＴＧＣＴＣＡＧＣＧＧＴＧＧ  配列番号２９。
【０１０６】
次いで、この混合物は、ＰＣＲサイクル（９６℃、１０秒；５０℃、５秒；６０℃、４分；２５サイクル）によって実行され、そしてＤＮＡ反応生成物を沈殿させた（２０μｌの混合物、８０μｌの７５％イソプロパノール；室温で２０分間インキュベート、次いで、１４Ｋ  ｒｐｍで２０分間ペレット化；２５０μｌの７５％イソプロパノールで洗浄；９４℃で１分間加熱）。次いで、沈殿した生成物を２０μｌのＴＳＢ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）中に再懸濁し、そしてＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ３１０  キャピラリーゲルシーケンサーによって配列を読み、そして分析した。一般的に、１／４のプラスミドが、所望の変異を含んだ。
【０１０７】
（ＰＴＰ−１Ｂのシステイン変異の発現）
変異タンパク質は、以下のように発現された。ＰＴＰ−１Ｂクローンを、ＢＬ２１コドンプラス細胞（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）（１μｌの二本鎖ＤＮＡ、２μｌの５×ＫＣＭ、７μｌの水、１０μｌのＤＭＳＯコンピテント細胞；４℃で２０分間、室温で１０分間インキュベートする）に形質転換し、１００μｇ／ｍｌのアンピシリンを含むＬＢ／寒天上にプレートし、そして３７℃で一晩インキュベートした。２つの単一のコロニーを、プレートまたはこれらの変異体の凍結されたグリセロールストックから摘み上げ、そして５０μｇ／ｍｌのカルベニシリンを含む１００ｍｌの２ＹＴ中で接種し、そして３７℃で一晩増殖させた。一晩の培養物からの５０ｍｌを、１．５Ｌの２ＹＴ／カルベニシリン（５０μｇ／ｍｌ）に添加し、そして後期対数期まで３７℃で３〜４時間でインキュベートした（６００ｎｍにおいて、約０．８〜０．９の吸光度）。この時点で、タンパク質発現は、１ｍＭの最終濃度までのＩＰＴＧの添加とともに誘導された。培養物を３７℃でさらに４時間インキュベートし、次いで、細胞を遠心分離（７Ｋ  ｒｐｍ、７分）によって収集し、そして−２０℃で凍結した。
【０１０８】
ＰＴＰ−１Ｂタンパク質を、以下に記載されるように、凍結細胞ペレットから精製した。最初に、細胞を、２０ｍＭのＭＥＳ（ｐＨ６．５）、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＤＴＴ、および１０％のグリセロール緩衝液を含む１００ｍｌの緩衝液中で、マイクロフルイダイザーに溶解し（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ［Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ  １１０Ｓ］の３回の通過）、封入体を、遠心分離（１０Ｋ  ｒｐｍ、１０分）によって除去した。全てのＰＴＰ−１Ｂ変異体の精製を４℃で実施した。遠心分離からの上清を、０．４５μｍのセルロースアセテートを通して濾過し（５μｌのこの物質をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析した）、そして緩衝液Ａ（２０ｍＭ  ＭＥＳ（ｐＨ６．５）、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＤＴＴ、１％グリセロール）中に平衡化したＳＰ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅファストフローカラム（２．５ｃｍ直径×１４ｃｍ長さ）上に４ｍｌ／分でロードした。
【０１０９】
次いで、タンパク質を６０分間にわたって、０〜５０％緩衝液Ｂの勾配を使用して溶出した（緩衝液Ｂ：２０ｍＭ  ＭＥＳ（ｐＨ６．５）、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＤＴＴ、１％グリセロール、１Ｍ  ＮａＣｌ）。収率および純度をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって調べ、必要であれば、ＰＴＰ−１Ｂを疎水性相互作用カラムクロマトグラフィー（ＨＩＣ）によってさらに精製した。１．４Ｍの最終濃度に達するまで、タンパク質に、硫酸アンモニウムを補充した。タンパク質溶液を濾過し、そして緩衝液Ａ２（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１．４Ｍの（ＮＨ４）２ＳＯ４、１ｍＭ  ＤＴＴ）中に、４ｍｌ／分でＨＩＣカラム上にロードした。タンパク質を、３０分にわたって０〜１００％の緩衝液Ｂの勾配で溶出した（緩衝液Ｂ２：２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＤＴＴ、１％グリセロール）。最後に、精製したタンパク質を、４℃で、適切なアッセイ緩衝液（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８）、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＤＴＴ、１％グリセロール）中に透析した。収率は、変異体間で変動したが、代表的には、１Ｌ培養物当たり３〜２０ｍｇの範囲であった。
【０１１０】
（実施例３）
この実施例は、ＰＴＰ−１Ｂに対する、本発明の化合物のＩＣ５０を決定するための１つの例示的な方法を記載する。基質、ｐＮＰＰ（Ｓｉｇｍａ）を、１×ＨＮ緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．０）；１００ｍＭ  ＮａＣｌ；１ｍＭ  ＤＴＴ）中で４ｍＭで溶解し、そして８３μｌを２μｌのＤＭＳＯまたは２μｌのＤＭＳＯ中の化合物と混合した。反応を、１５μｌの１×ＨＮ緩衝液中のＰＴＰ−１Ｂ（標準アッセイ条件下において７５０ηｇ）の添加によって開始した。生成物形成の速度（ＯＤ４０５ｎｍマイナスＯＤ６５５ｎｍ、ＢｉｏＲａｄ  ＢｅｎｃｈｍａｒｋまたはＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｓｐｅｃｔａｍａｘ  １９０）を、２５℃で１５分間、３０秒毎に測定し、そしてデータを線形回帰によって分析した。終点アッセイのために、反応を１５分後に、５０μｌ  ３Ｍ  ＮａＯＨを用いて停止し、そしてＯＤ４０５ｎｍ−ＯＤ６５５ｎｍを測定した。ＩＣ５０決定のために、非阻害コントロールに対して正規化した速度を、化合物濃度に対してプロットし、そして４パラメーターの非線形回帰曲線フィッティングを使用してフィットさせた（ｙ＝［（Ａ−Ｄ）／（ｌ＋｛ｘ／Ｃ｝＾Ｂ）］＋Ｄ、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘソフトウェアパッケージ）。
【０１１１】
（実施例４）
この実施例は、本発明の化合物が、外側部位（ｅｘｏｓｉｔｅ）領域においてＰＴＰ−１Ｂに結合することを確認するために使用された方法のうちのいくつかを記載する。
【０１１２】
本発明の化合物（化合物５（ＩＣ５０＝３０μＭ）によって代表される）は、ＰＴＰ−１Ｂがアロステリック部位を有するかのように挙動する。反応速度を、化合物５の種々の濃度の存在下で、基質濃度（ＰＮＰＰ）に対してプロットすると、Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ−Ｍｅｎｔｏｎによって予測される双曲線プロットの代わりに、Ｓ字型の依存性が示される。さらに、アロステリックインヒビターを用いて代表的なように、そして図８によって示されるように、インヒビター濃度の増加とともにＶｍａｘの減少が存在し、Ｋｍに対して有意な効果がない。
【０１１３】
ＰＴＰ−１Ｂの短縮がこの結果に影響したか否かを評価するために、酵素研究を、２９８残基バージョンおよび４０３アミノ酸バージョン（これは、末端疎水性３５アミノ酸のみを欠く）の両方について実施した。ＰＴＰ−１Ｂの両方の形態が類似の結果を示したが、ＰＴＰ−１Ｂの４０３アミノ酸形態に対する外側部位インヒビターの効力は、わずかにより強力である傾向があった。
【０１１４】
外側部位化合物を用いるＰＴＰ−１Ｂの阻害が、いくつかのアーチファクト（例えば、共有結合複合体の形成、タンパク質変性、凝集または沈殿）に起因したか否かを評価するために、時間依存性の実験を実施した。５分から１時間にわたってインキュベーション時間を増加させることは、阻害に対してなんの影響も与えなかった。直接結合動力学は、迅速なオンレート（ｏｎ−ｒａｔｅ）および比較的迅速なオフレート（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）を示した。さらに、バイオコアデータは、化合物５が、１：１の結合化学量論で、ＰＴＰ−１Ｂに結合したことを示した。これはさらに、触媒的に不活性なＰＴＰ−１Ｂ変異体（配列番号１のＣ２１５ＳまたはＤ１８１Ｃバージョン）の添加によって、ＰＴＰ−１Ｂの濃度を２１０ｎＭから２１μＭに増加した、タンパク質力価実験によって実証された。２１μＭのＰＴＰ−１Ｂ変異体の存在下において、化合物５のＩＣ５０は、それぞれ、７７μＭおよび８１μＭであることが決定され、これは、ＩＲペプチド基質（７１μＭ）およびバイコアＫｄ（７５μＭ）を使用するＩＣ５０と一致した。さらに、化合物５に結合したＰＴＰ−１Ｂの結晶構造が解かれ、外側部位領域に結合された化合物５を示した。
【０１１５】
（実施例５）
この実施例は、細胞中のインシュリンレセプターのリン酸化の程度を定量化する例示的なアッセイを記載する。任意の適切な細胞を使用し得る。この実施例において、ＣＨＯ−ＩＲ細胞を、ペニシリンおよびストレプトマイシンで補充したＤＭＥＭ  ｗ／１０％ウシ胎仔血清中で増殖させた。細胞を、９６ウェルプレート中で１ウェルあたり４０，０００細胞の密度でプレートした。次の日に、培地を、血清を含まないＤＭＥＭに変え、そして細胞を１６時間血清飢餓させた。回収の１時間前に、ＤＭＥＭに希釈された種々の濃度の試験化合物を、細胞に添加した。示されるように、ヒトインシュリンを、回収の１０分前に、細胞に添加した。細胞を、３０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１％  トリトンＸ−１００および０．０２％  アジ化ナトリウム中に溶解した。インシュリンレセプターのリン酸化を、以前に記載されたようなＥＬＩＳＡアッセイで定量化した（Ｊｏｎｇｓｏｏｎ  Ｌｅｅ）。図９は、化合物５の用量応答曲線を示す。見られ得るように、インシュリンレセピターのリン酸化レベルは、化合物５の濃度の関数である。
【０１１６】
（実施例６）
この実施例は、典型的なウェスタンブロット実験を記載し、他のホスファターゼと対照的にＰＴＰ−１Ｂを阻害する本発明の化合物の特異性を評価する。この実施例において、ＣＨＯ−ＩＲ細胞を使用した。ＣＨＯ−ＩＲ細胞を、細胞ベースのアッセイにおける上記のような完全培地中で増殖させた。次いで、細胞を、６ウェルプレート中の１ウェルあたり３００，０００細胞の密度でプレートした。次の日に、細胞を、１６時間血清飢餓させた。溶解の１時間前に、細胞を、ＤＭＳＯ、２ｍＭ  ＳＰ３８９２または２５μＭペルバナデートのいずれかで処理した。溶解の１０分前に、１μＭのヒトインシュリンを、示されるウェルに添加した。細胞を、細胞ベースのアッセイにおいて上記される同じ緩衝液（０．１％  ＳＤＳを添加した）で溶解した。溶解に次いで、全細胞溶解物を、４〜１２％Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓゲルに充填し、次いでタンパク質を、ＰＶＤＦ膜に移した。膜を、１時間、室温にて、５％  ミルク／ＴＢＳＴ中でブロックし、次いで、抗−ＩＲ／ＩＧＦ−１Ｒ［ｐＹｐＹ１１６２／１１６３］一次抗体と共に、一晩インキュベートした。次の日に、膜を、ＴＢＳＴで洗浄し、そして１時間、室温にてヤギ抗ウサギ二次抗体と共にインキュベートし、次いで、ＥＣＬで現像した。図１０は、化合物５のウェスタンブロットを示す。９５ｋＤａのバンドは、インシュリンレセプターに対応する。ＤＭＳＯは、ネガティブコントロールである；バナデート（レーンで「Ｖａｎ」とマークされる）（非特異的ホスファターゼインヒビター）は、ポジティブコントロールである；「３８９２」は、化合物５に対応する；そして「Ｉｎｓ」は、インシュリンに対応する。
【０１１７】
（実施例７）
この実施例は、可能性のあるエクソサイト（ｅｘｏｓｉｔｅ）インヒビターをスクリーニングするさらなる方法を記載する。これらのアッセイを使用して、非特異的相互作用を介して阻害する化合物から真のエキソサイトインヒビターを区別する。
【０１１８】
１つの方法において、エキソサイトインヒビターの候補を、アロステリックに調節し得る酵素（触媒的にコンピテントな酵素として本明細書中でいわれる濃度の範囲）を用いて試験する。化合物が、アロステリックな機構を介して単独で阻害する場合、観察された阻害は、予測可能なはずである。例えば、酵素の可飽和阻害または理論的阻害の分数は、以下のように計算され得る：
ｆ＝［Ｋｉ＋Ｅ（ｔｏｔ）＋Ｉ（ｔｏｔ）−ｓｑｒｔ（（（Ｋｉ＋Ｅ（ｔｏｔ）＋Ｉ（ｔｏｔ））＾２）−４＊Ｅ（ｔｏｔ）＊Ｉ（ｔｏｔ））］／（２＊Ｅ（ｔｏｔ））
ここで、ｆは、可飽和阻害分数である；
Ｋｉは、阻害定数またはＩＣ５０である；
Ｅ（ｔｏｔ）は、触媒的にコンピテントな酵素の濃度である；そして
Ｉ（ｔｏｔ）は、インヒビター濃度である。
【０１１９】
例えば、アロステリックなインヒビターのＩＣ５０が３μＭである場合、インヒビター濃度は３μＭであり、そして触媒的にコンピテントな酵素の濃度は０．０１μＭであり、次いで、理論的な阻害は、４９．９４％である。同じ条件下で、触媒的にコンピテントな酵素の濃度が、１．２９μＭまで増加する場合、理論的な阻害は４４．６９％である。従って、エキソサイトインヒビターの候補が、真のアロステリックなインヒビターである場合、０．０１μＭから１．２９μＭまでの酵素濃度の増加は、観察される阻害の有意な変化を生じない。従って、酵素濃度が０．０１μＭから１．２９μＭまで変化する時の劇的な変化が観察される場合、候補化合物はエキソサイトインヒビターではなく、おそらく非特異的相互作用を介して酵素を阻害するようである。
【０１２０】
別の方法において、非特異的相互作用を、アロステリックに調節をし得る、同じ濃度の酵素（代表的に０．２５〜１倍の間の推定上のＩＣ５０の候補エキソサイトインヒビター）に対する候補化合物を、不活性化された酵素の増加した濃度の存在下でアッセイすることによって排除する。例えば、不活性化されたＰＴＰ−１ＢまたはＴＣ−ＰＣＰは、もはやチロシンを脱リン酸化し得ないものである。この様式において、エキソサイトインヒビターの予測された阻害は、全体的タンパク質濃度の増加にもかかわらず、一定を維持する。不活性化されたＰＴＰ−１ＢおよびＴＣ−ＰＣＰの実例としては、各それぞれのホスファターゼの活性化部位のシステイン（Ｃｙｓ２１５）がセリンに変異される場合である。非特異的様式において阻害する化合物を排除するための他の方法はまた、ＭｃＧｏｖｅｒｎら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４５：１７１２−１７２２（２００２）（本明細書中に参考として援用される）によって記載される方法を使用し得る。
【０１２１】
（実施例８）
この実施例は、以下：
【０１２２】
【化１０】
2005526051.tif 000009
の化合物の合成を記載し、これを、スキームＡおよび以下のプロトコルに従って調製した。
【０１２３】
【化１１】
2005526051.tif 000010
化合物１。ベンズブロマロン（化合物１）は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃａｍｐａｎｙから購入した。
【０１２４】
化合物２。アセトン（２００ｍＬ）中１（２６．８ｇ、６０．０ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（３３．５ｇ、２４０ｍｍｏｌ）およびヨウ化メチル（１２．９ｇ、９０．０ｍｍｏｌ）の異種混合物を、１６時間加熱して還流した。酢酸エチル（３００ｍＬ）を添加し、そしてこの混合物を、連続して水（２００ｍＬ）、２．５Ｍ  ＮａＯＨ（２×１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で抽出した。この有機部分をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、そして濃縮し、白色固体として２６．３ｇ（１００％収率）の表題の化合物を得た。
【０１２５】
【化１２】
2005526051.tif 000011
化合物３。無水ジオキサン（１２ｍＬ）中２（５．２８ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）の透明な淡黄色溶液を、０℃まで冷却し、そしてニートクロロスルホン酸（４２．４ｇ、３６０ｍｍｏｌ）を激しく撹拌しながら２時間にわたって滴下して、処理した。この反応混合物を、素早く撹拌した１Ｍ  ＨＣｌ（２００ｍＬ）および粉砕した氷（６００ｍＬ）のスラリーに注意深く滴下して移した。この曇った混合物を、エーテル（２×３００ｍＬ）で抽出した。この合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、そして濃縮し、粘性のある油状物を得た。フラッシュカラムクロマトグラフィー（９６：４  ヘキサン／酢酸エチル）によって、白色固体として３．１０ｇ（４８％収率）の表題の化合物を得た。
【０１２６】
【化１３】
2005526051.tif 000012
化合物４。１０ｍＬの無水ＴＨＦ（「テトラヒドロフラン」）中４−アミノ−ベンゼンスルホンアミド（０．２５ｇ、１．４５ｍｍｏＬ）、無水ピリジン（０．３ｍＬ、３．８０ｍｍｏＬ）およびＤＭＡＰ（「ジメチルアミノピリジン」）（０．００６ｇ、０．０４９ｍｍｏＬ）の撹拌した混合物に、５ｍＬのＴＨＦ中６−クロロスルホニルべズブロマロンメチルエーテル（化合物３）（０．５ｇ、０．９３８ｍｍｏＬ）を、シリンジを介して滴下した。６時間室温にて撹拌した後、この反応混合物を、酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈した。この有機層を１．０Ｎ  ＨＣｌ水溶液（２×６０ｍＬ）およびブラインで洗浄し、そしＮａ２ＳＯ４で乾燥し、そして減圧下で濃縮した。粗生成物を、シリカゲルフラッシュカラム（溶離液としてヘキサン中１０〜２０％  ＥｔＯＡｃ）で精製し、明るい黄色固体として０．４１２ｇ（０．６１５ｍｍｏＬ、６５．６％）を得た。
【０１２７】
化合物５。１５ｍＬの無水ＤＣＥ中化合物４の撹拌した溶液に、−７８℃にてＤＣＭ中の１．０Ｍ  ＢＢｒ３（３．１ｍＬ、３．０８ｍｍｏＬ）をゆっくりと添加した。添加の完了の後、この得られた混合物を室温まで温め、そして４時間撹拌した。この反応を、１．０Ｎ  ＨＣｌ推溶液でクエンチした。この反応混合物を、ＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で抽出し、この合わせた有機層を、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。この残渣を、分離用ＨＰＬＣで精製し、白色固体として０．１９２ｇ（０．２９３ｍｍｏＬ、４７．６％）を得た。
【０１２８】
【化１４】
2005526051.tif 000013
（実施例９）
この実施例は、以下：
【０１２９】
【化１５】
2005526051.tif 000014
の構造の化合物の合成を記載し、
ここで、Ｅｔはエチルであり、Ａｒ１は、置換されていないアリールまたは置換アリールである（用語アリールは、ヘテロアリールを含む）。これらの化合物を、Ａｒ１ＮＨ２を４−アミノ−ベンゼンスルホンアミドの代わりに使用したことを除いて、実施例８に従って作製した。Ａｒ１ＮＨ２およびこれらの得られた生成物の特定の実施形態の実例を、表１に示す。
【０１３０】
【表１】
2005526051.tif 000015
（実施例１０）
この実施例は、以下の化合物の合成を記載する。
【０１３１】
【化１６】
2005526051.tif 000016
この化合物を、スキームＢおよび以下のプロトコルに従って作製した。
【０１３２】
【化１７】
2005526051.tif 000017
（化合物６）ベンズブロマロンメチルエーテル（０．３ｇ、０．６９６ｍｍｏＬ）およびヘキサメチレンテトラミン（「ＨＭＥＴ」）（０．４８３ｇ、３．４５ｍｍｏＬ）の混合物に、２０ｍＬのＴＦＡ（「トリフルオロ酢酸」）をゆっくりと添加した。この反応混合物を、８０℃で４８時間加熱した。この反応混合物を室温まで冷却し、６０ｍＬの氷水にプールし、そして強く攪拌した。この混合物をＥｔｏＡｃ（３×８０ｍＬ）で抽出し、そして合わせた有機溶液を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中１０％の酢酸エチル）により、淡黄色油状物として所望のアルデヒドを得た（０．１８０ｇ、５５．７％）。
【０１３３】
【化１８】
2005526051.tif 000018
（化合物７）化合物６（０．１００ｇ、０．２１６ｍｍｏＬ）を、ＴＨＦ／ＤＣＭ（１：１）中に溶解した。プロピルアミン（０．０４７ｍＬ、０．６４８ｍｍｏＬ）を添加し、その後、触媒量の濃酢酸を添加した。５分間攪拌した後、トリアセトキシホウ化水素ナトリウム（０．０９０ｇ、０．４３２ｍｍｏＬ）を、室温で一部ずつ添加した。この反応混合物を２時間攪拌し、次いで、この反応混合物の溶媒部分を減圧下で除去した。残渣を、５０ｍＬのＥｔＯＡｃと５０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３水溶液との間で分配した。この水溶液をＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で抽出し、そして合わせた有機溶液をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物を、精製せずに次の工程に使用した。
【０１３４】
【化１９】
2005526051.tif 000019
（化合物８）無水ＴＨＦ（２ｍＬ）中の化合物７（０．０５０ｇ、０．０９８６ｍｍｏＬ）、トリエチルアミン（０．１１０ｍＬ、０．７８８ｍｍｏＬ）およびＤＭＡＰ（０．００６ｇ、０．０４９ｍｍｏＬ）の攪拌混合物に、シリンジによって、ＴＨＦ（１ｍＬ）中の４−メタンスルホニル−ベンゼンスルホニルクロライド（０．０７５ｇ、０．２９５ｍｍｏＬ）を滴下した。室温で３時間攪拌した後、この反応混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈した。有機溶液を１．０Ｎ  ＨＣｌ水溶液（ｌ×２０ｍＬ）、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、そして濃縮した。粗生成物を、シリカゲルフラッシュカラム（ヘキサン中２０％のＥｔＯＡｃ）で精製して、淡黄色固体として０．０６１ｇ（０．０８３ｍｍｏＬ、８１．１％）を得た。ｍ／ｚ  ７２５、７２７、７２９にて、ＭＳ（ＡＰＩ−ＥＳ＋）。
【０１３５】
（化合物９）無水ＤＣＥ（５ｍＬ）中の化合物８（０．０６１ｇ、０．０８３ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、−７８℃で、ＤＣＭ中１．０Ｍ  ＢＢｒ３（０．２５０ｍＬ、０．２５０ｍｍｏＬ）をゆっくりと添加した。得られた混合物を、室温まで温め、そして４時間攪拌した。この反応を、１．０Ｎ  ＨＣｌ水溶液でクエンチした。得られた反応混合物をＤＣＭ（２×３０ｍＬ）で抽出し、そして合わせた有機溶液をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、そして濃縮した。残渣を、調製的ＨＰＬＣで精製して、白色固体として０．０３０ｇ（０．０４３ｍｍｏＬ、５１．８％）を得た。
【０１３６】
【化２０】
2005526051.tif 000020
（実施例１１）
この実施例は、構造
【０１３７】
【化２１】
2005526051.tif 000021
の化合物の合成を記載する。この化合物において、Ｅｔは、エチルであり、そしてＡｒ２は、非置換アリールまたは置換アリールである（ここで、用語アリールは、ヘテロアリールを含む）。これらの化合物は、Ａｒ２ＳＯ２Ｃｌを、４−メタンスルホニル−ベンゼンスルホニルクロライドの代わりに使用したこと以外、実施例１０に従って作製した。Ａｒ２ＳＯ２Ｃｌの特定の実施形態の例示的な例およびそれらの得られた生成物を、表２に示す。
【０１３８】
【化２２】
2005526051.tif 000022
本明細書を通じて引用される全ての参考文献は、本明細書中で明確に参考として援用される。
【０１３９】
本発明を、その特定の実施形態に関して記載してきたが、種々の変更がなされ得、そして等価物が本発明の真の精神および範囲から逸脱することなく置換され得ることが、当業者に理解される。さらに、多くの改変が、特定の状況、材料、物体の組成、プロセス、プロセス工程（ｓｔｅｐ）または工程（ｓｔｅｐｓ）を、本発明の目的（ｏｂｊｅｃｔｉｏｎ）、精神および範囲に適合させるために、なされ得る。全てのこのような改変は、本明細書に添付される特許請求の範囲内であることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【０１４０】
【図１】図１は、ヒトＰＴＰ−１Ｂ（配列番号１）の最初の２９８残基とヒトＴＣ−ＰＴＰ（ｈＴＣ−ｐｔｐ；配列番号２）の最初の２９６残基との配列アラインメントである。
【図２】図２は、化合物５と複合体化したＰＴＰ−１Ｂのエキソサイト領域である。エキソサイト形成残基の接近可能表面を示す。
【図３】図３は、ＰＴＰ−１Ｂのエキソサイト領域を構成するアミノ酸を示す。
【図４】図４は、図３中と同じＰＴＰ−１Ｂのエキソサイト領域であるが、エキソサイトのリガンドの非存在下のＰＴＰ−１Ｂのエキソサイト領域である。エキソサイト形成残基の接近可能表面を示す。エキソサイト領域の大部分を横断し、そして塞ぐ構造は、残基２８３〜２９８によって形成されるヘリックスである。
【図５】図５は、エキソサイトリガンドの非存在下のＰＴＰ−１Ｂのリボンダイアグラムであり、ここで、Ｔｙｒ−１５２、Ａｓｎ−１９３、およびＴｒｐ−２９１が強調される。
【図６】図６は、エキソサイトリガンド５の存在下のＰＴＰ−１Ｂのリボンダイアグラムであり、ここで、Ｔｙｒ−１５２、Ａｓｎ−１９３、およびＴｒｙｐ−２９１が強調される。
【図７】図７は、ヒトＰＴＰ−１Ｂ（配列番号１）の最初の２９８残基とヒトＬＡＲ（配列番号３）の最初の２９７残基との配列アラインメントである。
【図８】図８は、種々の濃度の化合物５の存在下の、漸増基質濃度に対するＰＴＢ−１Ｂの反応速度のプロットである。
【図９】図９は、漸増濃度の化合物５の関数としての、インスリンレセプターリン酸化についての用量−応答曲線である。
【図１０】図１０は、細胞における化合物５の選択性を示すウエスタンブロットである。９５ｋＤａのバンドがインスリンレセプターに対応する。ＤＭＳＯはネガティブコントロールであり、非特異的ホスファターゼインヒビターであるバナジン酸塩（「Ｖａｎ」とマークされたレーン）がポジティブコントロールである。図１０において、「３８９２」は化合物５に対応し、「Ｉｎｓ」はインスリンに対応する。
【配列表】
2005526051.tif 000023
2005526051.tif 000024
2005526051.tif 000025
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2005526051.tif 000028
2005526051.tif 000029
【図１】
2005526051.tif 000032
【図２】
2005526051.tif 000033
【図３】
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【図４】
2005526051.tif 000035
【図５】
2005526051.tif 000036
【図６】
2005526051.tif 000037
【図７】
2005526051.tif 000038
【図８】
2005526051.tif 000039
【図９】
2005526051.tif 000040
【図１０】
2005526051.tif 000041
【手続補正書】
【提出日】平成17年5月31日(2005.5.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2005526051000001.app
【国際調査報告】
2005526051.tif 000042
2005526051.tif 000043