(57)【要約】タウフィラメントの形成もしくは重合を阻害および／または逆転させる方法を提供する。これらの方法は、タウフィラメントの形成もしくは重合を阻害および／または逆転させる医薬組成物を投与することによって、ある種の神経障害のｉｎ  ｖｉｖｏでの治療に使用することができる。特に好ましい薬剤組成物は、一般式（Ｉ）（Ｒ１は、炭素原子１から６個を有する脂肪族基であり、Ｒ２およびＲ３は、独立に、炭素原子１から６個を有する第２の脂肪族基、炭素原子１から６個を有するヒドロキシル置換脂肪族基、またはフェニル基である）の阻害剤あるいはその阻害剤の薬学的に許容可能な塩を含む。
2005500346.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者の脳中のタンパク質タウの集合を調節する方法であって、
脳中のタウ重合を阻害する方法が必要な患者を特定すること、および
その患者に薬理学的有効量の脂肪酸酸化の阻害剤を投与することを含み、この阻害剤は、（１）一般式Ｉ
【化１】
2005500346.tif 000022
（式中、Ｒ１は、炭素原子１から６個を有する脂肪族基であり、Ｒ２およびＲ３は、独立に、炭素原子１から６個を有する第２の脂肪族基、炭素原子１から６個を有するヒドロキシル置換脂肪族基、またはフェニル基である）の第１の化合物、（２）一般式ＩＩ
【化２】
2005500346.tif 000023
（式中、Ｒ４、Ｒ６、およびＲ８は、独立に、炭素原子１から６個を有する第３の脂肪族基であり、Ｒ５およびＲ７は、独立に、炭素原子１から６個を有する第４の脂肪族基、または炭素原子１から６個を有する第２のヒドロキシル置換脂肪族基である）の第２の化合物、（３）一般式ＩＩＩ
【化３】
2005500346.tif 000024
の第３の化合物、（４）一般式ＩＶ
【化４】
2005500346.tif 000025
（式中、Ｒ９およびＲ１０は、独立に、炭素原子１から６個を有する第４の脂肪族基である）の第４の化合物、（５）一般式Ｖ
【化５】
2005500346.tif 000026
（式中、Ｒ１１は、炭素原子１から６個を有するカルボン酸置換脂肪族基であり、Ｒ１２は、炭素原子１から６個を有する第５の脂肪族基である）の第５の化合物、ならびにこれらの薬学的に許容可能な塩
からなる群から選択されることを特徴とする方法。
【請求項２】
阻害剤は、第１の化合物または第１の化合物の薬学的に許容可能な塩であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はメチル基であることを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項４】
Ｒ１およびＲ２はメチル基であり、Ｒ３はフェニル基であることを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項５】
Ｒ１はメチル基であり、Ｒ２は２−ヒドロキシエチル基であり、Ｒ３はエチル基であることを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項６】
Ｒ１はメチル基であり、Ｒ２およびＲ３はエチル基であることを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項７】
阻害剤は、第２の化合物または第２の化合物の薬学的に許容可能な塩であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項８】
Ｒ４およびＲ８はメチル基であり、Ｒ５およびＲ７は２−ヒドロキシルエチル基であり、Ｒ６はエチル基であることを特徴とする請求項７に記載の方法。
【請求項９】
阻害剤は、第２の化合物のアイオダイド塩であることを特徴とする請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
阻害剤は、第３の化合物または第３の化合物の薬学的に許容可能な塩であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
阻害剤は、第４の化合物または第４の化合物の薬学的に許容可能な塩であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
Ｒ９およびＲ１０はメチル基であることを特徴とする請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
阻害剤は、第５の化合物または第５の化合物の薬学的に許容可能な塩であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
Ｒ１１は−（ＣＨ２）３ＣＯＯＨであり、Ｒ１２はメチル基であることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
患者はヒトであり、薬理学的有効量は１日あたり約１０から約１０００ｍｇであることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
哺乳動物の脳中のタウフィラメント形成を阻害または逆転させる方法であって、前記方法が、
脳中のタウ重合を阻害する方法が必要な哺乳動物を特定すること、および
その哺乳動物に薬理学的有効量の、（１）一般式Ｉ
【化６】
2005500346.tif 000027
（式中、Ｒ１は、炭素原子１から６個を有する脂肪族基であり、Ｒ２およびＲ３は、独立に、炭素原子１から６個を有する第２の脂肪族基、炭素原子１から６個を有するヒドロキシル置換脂肪族基、またはフェニル基である）の脂肪酸酸化の阻害剤、あるいは（２）該阻害剤の薬学的に許容可能な塩を投与することを含むことを特徴とする方法。
【請求項１７】
哺乳動物はヒトであることを特徴とする請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はメチル基であることを特徴とする請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
Ｒ１およびＲ２はメチル基であり、Ｒ３はフェニル基であることを特徴とする請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
Ｒ１はメチル基であり、Ｒ２は２−ヒドロキシエチル基であり、Ｒ３はエチル基であることを特徴とする請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
Ｒ１はメチル基であり、Ｒ２およびＲ３はエチル基であることを特徴とする請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
薬理学的有効量は１日あたり約１０から約１０００ｍｇであることを特徴とする請求項１７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タウフィラメントの形成もしくは重合を阻害および／または逆転させる方法に関する。本発明はまた、タウフィラメントの形成もしくは重合を阻害および／または逆転させる医薬組成物を投与することによって、ある種の神経障害をｉｎ  ｖｉｖｏで治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
微小管結合タンパク質タウは、細胞骨格の維持に寄与していると思われる溶解性サイトゾルタンパク質である（非特許文献１および２）。しかし、多くの疾患状態では、タウタンパク質は未知の細胞状態によって誘発され、線維状構造に自己会合する（非特許文献３）。これらの線維状形態のタウは、アルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ：ＡＤ）（非特許文献４、５、６）、大脳皮質基底核変性症（ｃｏｒｔｉｃｏｂａｓａｌ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ：ＣＢＤ）（非特許文献７）、進行性核上性麻痺（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｓｕｐｒａｎｕｃｌｅａｒ  ｐａｌｓｙ：ＰＳＰ）（非特許文献８）、ピック病（Ｐｉｃｋ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ：ＰＤ）（非特許文献９）、ダウン症候群（非特許文献１０）、ならびに第１７番染色体に連鎖する前頭側頭型痴呆およびパーキンソン症候群（ｆｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏｒａｌ  ｄｅｍｅｎｔｉａｓ  ａｎｄ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ  ｌｉｎｋｅｄ  ｔｏ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  １７：ＦＴＤＰ−１７）（非特許文献１１）などの種々の神経変性疾患に見出されうる。これらの神経変性疾患の効果的な治療法の特定の必要性が依然として残されている。
【０００３】
神経変性の開始へのタウ原線維形成の関与については依然議論がある。異常なタウ重合が神経変性のプロセスを引き起こしているのか、または調節しているのか、あるいは異常なタウ重合はこのプロセスの副産物に過ぎないのかは知られていない。例えば、ＡＤでは、痴呆を引き起こす病理構造が、アミロイド−β陽性老人斑、タウ陽性神経原線維変化、またはこの２つの組合せなのかについては熱心に議論されている（非特許文献１２）。ＡＤの原因病理を理解するために、病的構造自体の重合につながる分子機構の特定する必要性が依然残っている。
【０００４】
タウ重合に関して現在知られていることの多くは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ集合アッセイに由来する。しかし、わずかな例外を除いて、タウ重合を達成するために使用される条件は極めて非生理学的である。タウタンパク質のＡＤ様フィラメントへの自己会合を説明する最初の実験は、８Ｍの尿素中で６０時間インキュベートすることを含んだ（非特許文献１３）。その他の実験では、分子を十分トランケーションした後の化学的架橋（非特許文献１４）、極めて高いタンパク質濃度（４０μＭ）（非特許文献１５）、６週間までのインキュベーション期間（非特許文献１６）、またはこれらの技術の組合せを必要とする。低濃度の生化学的に精製したタウタンパク質の重合をもたらす比較的穏やかな条件が記載されているが（非特許文献１７）、このプロセスは、酸化的条件下でポリアニオン性化合物を加えることにより（非特許文献１５、１８、１９、２０、２１、２２）、および還元条件下で遊離脂肪酸を加えることにより（非特許文献２２、２３、２４、２５、２６）大いに強化されうる。しかし、ｉｎ  ｖｉｖｏでのタウ重合が関係する疾患の治療に使用することができる試薬の特定を促進するのを助けるために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのタウタンパク質の重合をさらに強化する向上した方法を特定することの必要性が依然残されている。
【０００５】
種々のｉｎ  ｖｉｔｒｏ重合技術を使用して、タウのｉｎ  ｖｉｔｒｏ重合を研究している。例えば、タウ重合の脂肪酸誘導が、還元条件下でのリガンド依存的な機構を介して進行することが示されている（非特許文献２４）。別の一連の実験は、予想に反し、タウ分子を種々のタンパク質キナーゼで高度にリン酸化することによって重合のポリアニオン誘導を阻害することを示した（非特許文献２７）。疾患状態でのタウ重合につながる要因のいくつかは現在研究されている。上述の通り、高度なタウ病変がＦＴＤＰ−１７と呼ばれるあるクラスの神経変性障害で認められる。これらの疾患状態は、ミスセンス点突然変異またはタウタンパク質のアイソフォーム発現の変化につながるタウ遺伝子の突然変異と関連している。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験により、ＦＴＤＰ−１７に見られるいくつかの単独のアミノ酸ミスセンス点突然変異はフィラメント形成の増大につながり得ることが示された（非特許文献２２、２６、２８）。タウアイソフォームが異なる重合特性を有し、これらは変化したアイソフォーム組成を有するＦＴＤＰ−１７の場合のタウ病変の増大につながり得ることも示された（非特許文献２５）。しかし、最も一般的な神経変性疾患であるＡＤに関連した危険要因とタウ重合の増大との間の強い関連は確立されていない。したがって、効果的なＡＤ治療法の開発を促進するために、タウ重合に関連するＡＤ危険要因を特定する必要性が残されている。
【０００６】
酸化的ストレスの強力な一因であるという共通の特徴を有する多くの危険要因が特定されている。よって、酸化的ストレスはアルツハイマー病（ＡＤ）の病因に重要な役割を果たしているかもしれない。通常の老化プロセス、頭部外傷、重金属（例えば、Ｆｅ、Ａｌ、Ｈｇ）のレベルの増大、および特にＡＤの場合、β−アミロイドタンパク質（Ａβ）の凝集はすべて、酸化的ストレスの増大の強力な一因であると考えられる。ＡＤに関する酸化的ストレス仮説では、これらの危険要因によって生成されたフリーラジカルは、おそらく反応性酸素種の形態をしており、タンパク質、ＤＮＡ、および脂質／脂肪酸などの酸化を受けやすい生物学的分子を攻撃して最終的には神経変性につながるカスケードを引き起こす（例えば、非特許文献２９参照）。
【０００７】
易損性のＡＤ脳の敏感な分子が酸化的ストレスによって変性するという直接的な証拠がある。フリーラジカルは、グルタミンシンセターゼやクレアチンキナーゼなどの酵素のカルボニル誘導化につながり得る。このプロセスには、その酵素のプロテアーゼ分解が速やかに続く。ＤＮＡもまた酸化的ストレスに敏感である。同年齢の対照と比較した場合、ＡＤ脳では、ミトコンドリアＤＮＡおよびより少ない程度で核ＤＮＡに付加物８−ヒドロキシ−２’−デオキシグアニシンの増大が報告されている。さらに、ＡＤ患者の脳において、鎖切断によるＤＮＡへの酸化的損傷が２倍に増大していることが記載されている（例えば、非特許文献２９参照）。
【０００８】
多不飽和脂肪酸（ＦＡ）は酸化的ストレスに対して特に傷つきやすい。というのは、その二重結合がフリーラジカルによるＨ＋の除去を比較的容易にしているからである。いくつかの報告はＡＤ脳でのＦＡ酸化の部位について意見が異なるが（例えば、非特許文献３０参照）、これらの患者ではチオバルビツール酸反応性物質（ＦＡ酸化のマーカー）が増加していることは明らかである。さらに、マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）およびヒドロキシノネナール（ＨＮＥ）を含む多くのＦＡ分解産物が、ＡＤ患者で通常よりも高濃度で検出できる。Ｆ２−イソプロスタンおよびＦ４−ニューロプロスタンなど特定のＦＡ代謝産物の量の増大はまた、ＡＤ患者の冒された脳領域および推定ＡＤ患者の脳脊髄液にさえ見られる（非特許文献３１）。いくつかのＦＡ分解産物（例えばＨＮＥ）の毒性に加えて、ＦＡ酸化の結果としての膜流動性の変化もＡＤ患者にとって有害な作用となり得る。
【０００９】
酸化的ストレスが神経変性プロセスの重大な一因であるらしいことは明らかになってきているが、これらの要因が、ＡＤ、老人斑、および神経原線維変化に見られる２種の主な病理構造とどのように関連しているのかは明らかでない。主に重合したＡβタンパク質からなる老人斑（ｓｅｎｉｌｅ  ｐｌａｑｕｅｓ：ＳＰ）はフリーラジカルの生成を介して酸化的ストレスに寄与しているかもしれないが、その神経変性プロセスへの関与は明らかでない。Ａβを培養したニューロンに加えると、結果としてタンパク質の酸化と細胞死を増大させるが（非特許文献３２）、増大量のＳＰを有する動物モデルは神経変性の徴候を示さない（非特許文献３３）。さらに、ＳＰの存在はＡＤ患者の痴呆の度合とあまり相関しない（非特許文献３４）。
【００１０】
対照的に、主に重合したタウ分子からなる神経原線維変化（ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ  ｔａｎｇｌｅ：ＮＦＴ）はＡＤの痴呆の度合とよく相関する（非特許文献３４）。さらに、脳の前頭側頭領域に関与する新たなクラスの神経変性障害は、病的タウ封入体によりＳＰの不存在下で引き起こされるようである（非特許文献１１）。最後に、タウフィラメントが形成することにより、動物モデルで神経変性が直接引き起こされるようである。ヤツメウナギのＡＢＣニューロン中でタウタンパク質が過剰発現すると、フィラメント形成およびそれに続くニューロン死につながる（非特許文献３５、３６）。
【００１１】
ＮＦＴの形成は神経変性プロセスに関係しているかもしれないが、ＡＤの酸化的ストレス仮説にどのように関与しているかは明らかでない。これまでのところ、酸化的ストレスとタウフィラメント形成との間の唯一の関連は、タウ分子がｉｎ  ｖｉｔｒｏで重合するためには予めタウ分子が酸化していることが条件であることを記載した報告である。タウのジスルフィド結合二量体をもたらす特定のシステインの酸化は、タウフィラメント形成が引き起こされる前に必要な第１のステップであることが示されている（非特許文献１６）。しかし、これらの結果が有効になるためには特別な条件が必要であることに留意されたい。第一に、この実験は、微小管結合反復（ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｒｅｐｅａｔ：ＭＴＢＲ）領域のみが残るようにアミノ末端領域およびカルボキシ末端領域の両方でトランケートされたタウ分子で実施された。第２に、３つの微小管結合反復のみが使用できた。これは、タウ分子に２個のシステインがあるという事実のためであった。一つはＭＴＢＲ２に、一つはＭＴＢＲ３にあった。両方のシステインがタウ構造に残っていた場合、これらは二量体を形成する代わりに分子内ジスルフィドを優先的に形成した。
【００１２】
タウの酸化理論は、いくつかの理由について論証できないように思われる。酸化的ストレスの結果としてＡＤで特定されたタンパク質酸化の細胞マーカーは、タンパク質カルボニルの生成およびチロシン残基のニトロ化である（例えば、非特許文献３０参照）。酸化的ストレスが実際に、システイン酸化とその後のタウ分子の二量化にどのようにつながるかは明らかでない。ＡＤに見られる線維状のタウ構造は、４個のＭＴＢＲを有するものを含むタウ分子の６種のアイソフォームすべてからなる（例えば、非特許文献３参照）。したがって、２個のシステインを含むタウ分子はｉｎ  ｖｉｖｏで重合可能である。タウ分子のシステイン酸化が前提条件であり、分子内ジスルフィド形成が二量化よりも好ましい場合、ＮＦＴを構成するフィラメント中にタウの４種のＭＴＢＲアイソフォームが存在することは期待しないであろう。したがって、ｉｎ  ｖｉｖｏのタウ重合での酸化の効果および酸化的ストレスがＡＤにおいて神経変性を引き起こす機構を決定する必要性が依然として残されている。
【００１３】
本出願と同日に出願し、２０００年７月２１日出願の米国特許仮出願第６０／２２１７７７号明細書に基づく同時係属米国特許出願第      号明細書に記載の方法を使用して、特定のかなり低分子量のリガンド（一般に、約４００ダルトン未満）を特定した。これはタウプロトマーに対して化学両論量以下（substoichiometric）の濃度でタウフィラメントの形成もしくは重合を阻害および／または逆転させる。本出願と同じ譲受人が所有するこの同時係属出願を参照により本明細書に組み込む。これらのリガンドまたは阻害剤を治療的に使用して、タウフィラメントが形成される、アルツハイマー病を含むある種の神経障害または疾患状態をｉｎ  ｖｉｖｏで治療することができる。
【００１４】
【特許文献１】
Capratheら、米国特許第６００１３３１号明細書（１９９９年１２月１４日）
【非特許文献１】
Johnsonら、Alzheimer's Disease Review 3:125 (1998)
【非特許文献２】
Bueeら、Brain Research Reviews 33: 95 (2000)
【非特許文献３】
Spillantiniら、Trends Neurosci., 21: 428 (1998)
【非特許文献４】
Woodら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 4040 (1986)
【非特許文献５】
Kosikら、Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A 83: 4044 (1986)
【非特許文献６】
Grundke-Iqbalら、J. Biol. Chem. 261: 6084 (1986)
【非特許文献７】
Feanyら、Am. J. Pathol. 146: 1388 (1995)
【非特許文献８】
Tabatonら、Ann. Neurol. 24: 407 (1988)
【非特許文献９】
Murayamaら、Ann. Neurol. 27: 394 (1990)
【非特許文献１０】
Papasozomenosら、Lab Invest. 60: 123 (1989)
【非特許文献１１】
Spillantiniら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 4113 (1997)
【非特許文献１２】
Hardyら、Nat. Neurosci. 1: 355 (1998)
【非特許文献１３】
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【非特許文献１４】
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【非特許文献１５】
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【非特許文献１６】
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【非特許文献１９】
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【非特許文献５０】
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Bueeら、Brain Res Rev. 33: 95 (2000)
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１５】
一実施形態では、本発明は、患者の脳中のタンパク質タウの集合を調節する方法を提供する。この方法は、
脳中のタウ重合を阻害する方法が必要な患者を特定すること、および
その患者に薬理学的有効量の脂肪酸酸化の阻害剤を投与することを含み、この阻害剤は、（１）一般式
【００１６】
【化１】
2005500346.tif 000003
【００１７】
（式中、Ｒ１は、炭素原子１から６個を有する脂肪族基であり、Ｒ２およびＲ３は、独立に、炭素原子１から６個を有する第２の脂肪族基、炭素原子１から６個を有するヒドロキシル置換脂肪族基、またはフェニル基である）の第１の化合物、（２）一般式
【００１８】
【化２】
2005500346.tif 000004
【００１９】
（式中、Ｒ４、Ｒ６、およびＲ８は、独立に、炭素原子１から６個を有する第３の脂肪族基であり、Ｒ５およびＲ７は、独立に、炭素原子１から６個を有する第４の脂肪族基、または炭素原子１から６個を有する第２のヒドロキシル置換脂肪族基である）の第２の化合物、（３）一般式
【００２０】
【化３】
2005500346.tif 000005
【００２１】
の第３の化合物、（４）一般式
【００２２】
【化４】
2005500346.tif 000006
【００２３】
（式中、Ｒ９およびＲ１０は、独立に、炭素原子１から６個を有する第４の脂肪族基である）の第４の化合物、（５）一般式
【００２４】
【化５】
2005500346.tif 000007
【００２５】
（式中、Ｒ１１は、炭素原子１から６個を有するカルボン酸置換脂肪族基であり、Ｒ１２は、炭素原子１から６個を有する第５の脂肪族基である）の第５の化合物、ならびに（６）これらの薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される。
【００２６】
阻害剤は、一般式
【００２７】
【化６】
2005500346.tif 000008
【００２８】
（式中、Ｒ１は、炭素原子１から６個を有する脂肪族基であり、Ｒ２およびＲ３は、独立に、炭素原子１から６個を有する第２の脂肪族基、炭素原子１から６個を有するヒドロキシル置換脂肪族基、またはフェニル基である）の第１の化合物であることが好ましい。より好ましくは、阻害剤は、式Ｉ’
【００２９】
【化７】
2005500346.tif 000009
【００３０】
を有する２−［［４−（ジメチルアミノ）フェニル］アゾ］−６−メトキシルベンゾチアゾール（すなわち、上記の式ＩにおいてＲ１、Ｒ２、およびＲ３がメチル基である）である。
【００３１】
一実施形態では、患者はヒトである。一般に、阻害剤は、従来技術を使用して決定することができる有効量で投与される。一般に、阻害剤は、１日あたり約１０ｍｇから１日あたり約１０００ｍｇから選択される量で投与される。一実施形態では、投与は少なくとも１週間にわたり繰り返し実施される。一実施形態では、投与は少なくとも１カ月間にわたり繰り返し実施される。一実施形態では、投与は少なくとも３カ月間にわたり繰り返し実施される。一実施形態では、投与は少なくとも１年間にわたり繰り返し実施される。別の実施形態では、投与は１カ月に少なくとも１回実施される。別の実施形態では、投与は１週間に少なくとも１回実施される。別の実施形態では、投与は１日に少なくとも１回実施される。別の実施形態では、投与は１週間に少なくとも１回少なくとも１カ月間実施される。別の実施形態では、投与は１日に少なくとも１回少なくとも１カ月間実施される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３２】
本発明は、脳中のタンパク質タウの集合を調節する必要のある哺乳動物の脳中のタンパク質タウの集合を調節する方法であり、この方法は、哺乳動物に、薬学的に許容可能な担体中の薬理学的有効量の脂肪酸酸化の阻害剤を投与することを含む。本発明の目的では、用語「タンパク質タウの集合を調節する」とは、タウフィラメントの形成もしくは重合を阻害および／または逆転させること、および／または、タウフィラメント形成または重合の速度を抑えることを含むが、これらだけに限定されない。
【００３３】
タウタンパク質は集合して、コンゴ赤およびチオフラビンＳなどの組織化学的染料との結合が可能な線状フィラメントになり、これは「アミロイド」沈着に特有の伸長したβシート構造と重合することを示唆する（非特許文献３７、３８）。タウタンパク質断片と完全長タウタンパク質を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏで実施したリガンドが媒介する集合反応に基づくと、重合はその微小管反復領域に位置する短い疎水性の配列によって媒介される（非特許文献３９、４０）。しかし、この領域の外側の配列は、重合の動態およびフィラメント内のプロトマーの組織化の両方に著しい効果を有する（非特許文献４０、４１）。よって、他のタンパク質由来のアミロイド原線維との一般的な類似性を維持しながらも、完全長タウタンパク質のフィラメントは重合阻害剤を結合する潜在的に独特なファーマコフォアを与える。
【００３４】
アゾ染料２−［［４−（ジメチルアミノ）フェニル］アゾ］−６−メトキシルベンゾチアゾール（化合物Ｉ’）ならびに類似化合物は、精製された組換えｈｔａｕ４０からの脂肪酸で媒介される直線状フィラメントの形成を阻害することが見出された。以前に記載されたチアジン誘導体とは異なり（非特許文献４２）、２−［［４−（ジメチルアミノ）フェニル］アゾ］−６−メトキシルベンゾチアゾール（化合物Ｉ’）は、１００ｎＭ未満の濃度およびタウプロトマーに関して化学両論量以下でタウ重合を５０％まで阻害した。化合物Ｉ’はまた、これらの条件下で成熟合成直線状フィラメントの分解を促進した。ＡＤ脳からの真正のヘリカルフィラメント対もまた、ミクロモル濃度の化合物Ｉ’により不安定化された。その有効性に加え、化合物Ｉ’は、生理的ｐＨで変化しないことにより他のアミロイド阻害剤よりも有利であり（非特許文献４３）、これは無傷細胞でのタウ重合活性の薬理学的に詳細な分析を促進させる。
【００３５】
タウ原線維で作用する化合物Ｉ’では、凝集解除活性は、タウプロトマーよりもはるかに低濃度で存在するフィラメント末端で発現される。この結果の支持として、化合物Ｉ’が媒介する分解は、化学両論量以下の濃度で進行し、フィラメント長のほぼ指数関数的な分布を維持しながら一次反応速度論に従うことが分かった。さらに、化合物Ｉ’が媒介する解重合に伴うフィラメント数の減少は、段階的な末端方向の解重合と一致し、フィラメント長に沿った破滅的的なフィラメントの破壊とは一致しなかった。理論にとらわれようとするものではないが、この阻害パターンは３つの一般的機構のいずれに由来してもよい。第１に、化合物Ｉ’はｉｎ  ｖｉｔｒｏのタウ重合を促進させるのに使用されるアラキドン酸を妨げることができる。集合を促進させることに加え、希釈実験によりフィラメントの安定性を維持するためには脂肪酸が重要であることが確認された。ただし、この機構はありそうにないように思われる。というのは、化合物Ｉ’のＩＣ５０はアラキドン酸のモル濃度の＜０．１％であり、さらに化合物Ｉ’は脂肪酸が存在しない真正のフィラメントの分解を行ったからである。第２に、化合物Ｉ’はタウモノマーに結合し、原線維形成を支持しない複合体を形成することができる。この機構は、化学量論濃度のフルフェナム酸によるトランスサイレチンや化学両論量以下の濃度のコルヒチンによるチューブリンなどの球状プロトマーの重合の阻害を引き出している（非特許文献４４、４５）。後者の例では、重合の化学両論量以下の阻害および分解の促進はフィラメントの極性に依存し、集合および薬物作用は一方の末端で主に起こり、分解はその反対の末端で進行する（非特許文献４６）。播種実験は成長極性を有するタウフィラメントと一致するので（非特許文献２４）、現在のところこの機構を除外することはできない。とはいえ、単量のタウタンパク質は溶液中での秩序立った構造を制限しているので、第３の可能性としては、低濃度の化合物Ｉ’の受容体は実際のところコンゴ赤で提示された通りの原線維の伸長したβシート構造であるかもしれない（非特許文献４７）。化合物Ｉ’のように、コンゴ赤は平面性芳香族アゾ染料であり、その結合の化学量論および光学的性質（複屈折）に基づき、アミロイド原線維長全体に沿って結合すると考えられる（非特許文献４７）。アミロイド原線維長に沿った高分子の結合は凝集解除につながり得るが（非特許文献４８、４９）、コンゴ赤のような小さな有機染料の同様の結合は必ずしもそうではない（非特許文献５０参照）。例えば、合成タウフィラメントを結合するために必要なチオフラビンＳ（コンゴ赤と構造的に同様の蛍光染料）の濃度（ＥＣ５０約１ｍＭ；例えば、非特許文献２４参照）はタウ重合を阻害または逆転させるのに十分ではない。同様に、合成Ａβ１−４０フィラメントを結合するのに必要な濃度（ＥＣ５０＝３．２ｍＭ；特許文献１）では化合物Ｉ’は、Ａβ１−４０集合を妨げない。対照的に、Ｒｏ９０−７５０１（チオフラビンＳの類似体；非特許文献５１）および化合物Ｉ’はそれぞれＡｂとタウ原線維の重合を阻害し、凝集解除を促進させる。これらのデータは、化合物Ｉ’と他の染料を受け入れるアミロイドフィラメント上���結合部位が異種であるかもしれず（非特許文献５２）、原線維長に沿って現れる性質とは異なる性質を有するフィラメント末端に位置する部位があることを示唆する。この場合、フィラメント末端の一方または両方への直接結合はタウのさらなる付加を妨げることができ、タウプロトマーの分離は妨害されないか、または促進さえされることにつながる。フィラメント長に沿った化合物Ｉ’のさらなる結合はフィラメント末端で生じる阻害に影響することもあれば影響しないこともある。しかし、原線維の染料結合部位すべてが同種であること、および、化合物Ｉ’のようなある種のリガンドのみが凝集解除を促進させるのに十分にプロトマーの構造を変化させるということは排除できない。
【００３６】
本明細書で記載した化合物Ｉ’の阻害特性は、形態学およびプロトマーの化学量論に基づいて、ＰＨＦの一方のヘミフィラメントに対応する組換え完全長タウから調製した合成直線状フィラメントで決定した（非特許文献２４、５３）。この構造的類似性と一致して、化合物Ｉ’は真正ＰＨＦの少なくとも一部を不安定化することが可能であった。これらのデータは、かなりの微小不均一性にもかかわらず、真正タウフィラメントに現れるタウ−タウ相互作用が脂肪酸誘導タウフィラメント中で繰り返されていることを示唆する。その結果として、ここで記載したｉｎ  ｖｉｔｒｏ系は潜在的により大きな親和性と選択性を有するさらなるタウフィラメントアンタゴニストの開発に有用である。
【００３７】
本発明での使用に適切な阻害剤は、（１）一般式
【００３８】
【化８】
2005500346.tif 000010
【００３９】
（式中、Ｒ１は、炭素原子１から６個を有する脂肪族基であり、Ｒ２およびＲ３は、独立に、炭素原子１から６個を有する第２の脂肪族基、炭素原子１から６個を有するヒドロキシル置換脂肪族基、またはフェニル基である）の第１の化合物、（２）一般式
【００４０】
【化９】
2005500346.tif 000011
【００４１】
（式中、Ｒ４、Ｒ６、およびＲ８は、独立に、炭素原子１から６個を有する第３の脂肪族基であり、Ｒ５およびＲ７は、独立に、炭素原子１から６個を有する第４の脂肪族基、または炭素原子１から６個を有する第２のヒドロキシル置換脂肪族基である）の第２の化合物、（３）一般式
【００４２】
【化１０】
2005500346.tif 000012
【００４３】
の第３の化合物、（４）一般式
【００４４】
【化１１】
2005500346.tif 000013
【００４５】
（式中、Ｒ９およびＲ１０は、独立に、炭素原子１から６個を有する第４の脂肪族基である）の第４の化合物、（５）一般式
【００４６】
【化１２】
2005500346.tif 000014
【００４７】
（式中、Ｒ１１は、炭素原子１から６個を有するカルボン酸置換脂肪族基であり、Ｒ１２は、炭素原子１から６個を有する第５の脂肪族基である）の第５の化合物、ならびにこれらの薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される。これらの阻害剤の混合物も使用することができる。
【００４８】
上記の式Ｉ、ＩＩ、ＩＶ、およびＶにおいて、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、およびＲ１１は、独立に、炭素原子１から６個を有するアルキル基である。このようなアルキル基または脂肪族基の例は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、およびヘキシルであり、直鎖状および分枝鎖状基の両方を含む。このアルキル基はメチルまたはエチルであることが好ましく、より好ましくはメチルである。
【００４９】
上記の式Ｉにおいて、Ｒ２およびＲ３は、独立に、炭素原子１から６個を有するアルキル基または脂肪族基、炭素原子１から６個を有するヒドロキシル置換アルキル基または脂肪族基、あるいはフェニル基である。このようなアルキル基または脂肪族基の例は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、およびヘキシル基であり、直鎖状および分枝鎖状基の両方を含む。このアルキル基はメチルまたはエチルであることが好ましく、より好ましくはメチルである。このようなヒドロキシル置換アルキル基または脂肪族基の例は、ヒドロキシル置換メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、およびヘキシルであり、直鎖状および分枝鎖状基の両方を含む。このヒドロキシル置換アルキル基は好ましくは−（ＣＨ２）ｎＣＨ２ＯＨ基であって、ｎは０から５の整数、より好ましくはｎは１である。
【００５０】
上記の式ＩＩにおいて、Ｒ５およびＲ７は、独立に、炭素原子１から６個を有するアルキル基もしくは脂肪族基または炭素原子１から６個を有するヒドロキシル置換アルキル基もしくは脂肪族基である。このようなアルキル基または脂肪族基の例は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、およびヘキシル基であり、直鎖状および分枝鎖状基の両方を含む。このアルキル基はメチルまたはエチルであることが好ましく、より好ましくはメチルである。このようなヒドロキシル置換アルキル基または脂肪族基の例は、ヒドロキシル置換メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、およびヘキシルであり、直鎖状および分枝鎖状基の両方を含む。このヒドロキシル置換アルキル基は好ましくは−（ＣＨ２）ｎＣＨ２ＯＨ基であって、ｎは０から５の整数、より好ましくはｎは１である。
【００５１】
上記の式Ｖにおいて、Ｒ１１は、炭素原子１から６個を有するカルボン酸アルキル基または脂肪族基である。このようなカルボン酸置換アルキル基または脂肪族基の例は、カルボン酸置換メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、およびヘキシルであり、直鎖状および分枝鎖状基の両方を含む。このカルボン酸置換アルキル基は好ましくは−（ＣＨ２）ｎＣＨ２ＣＯＯＨ基であって、ｎは０から５の整数、より好ましくはｎは２である。
【００５２】
これらの阻害剤は、本出願と同日に出願し、２０００年７月２１日出願の米国特許仮出願第６０／２２１７７７号明細書に基づく同時係属米国特許出願第      号明細書に記載の方法を本質的に使用して同定した。これらの阻害剤は特定の比較的低分子量のリガンドであり、タウフィラメントの形成もしくは重合を阻害および／または逆転させる。本出願と同じ譲受人が所有するこの同時係属出願を参照により本明細書に組み込む。これらのリガンドまたは阻害剤を治療的に使用して、タウフィラメントが形成される、アルツハイマー病を含むある種の神経障害または疾患状態を治療することができる。
【００５３】
阻害剤は、一般式
【００５４】
【化１３】
2005500346.tif 000015
【００５５】
（式中、Ｒ１は、炭素原子１から６個を有する脂肪族基であり、Ｒ２およびＲ３は、独立に、炭素原子１から６個を有する第２の脂肪族基、炭素原子１から６個を有するヒドロキシル置換脂肪族基、またはフェニル基である）の第１の化合物であることが好ましい。より好ましくは、阻害剤は、２−［［４−（ジメチルアミノ）フェニル］アゾ］−６−メトキシルベンゾチアゾール（すなわち、上記の式ＩにおいてＲ１、Ｒ２、およびＲ３はメチル基である；化合物Ｉ’）である。この好ましい阻害剤は、タウに対する化学両論量以下の濃度（１：４０のモル比）において、約６０ｎＭのＩＣ５０で、完全長タウタンパク質のアラキドン酸重合を阻害した。一般式Ｉの他の阻害剤の具体例は、約６０ｎＭのＩＣ５０を有する［４−（６−メトキシ−ベンゾチアゾール−２−イルアゾ）フェニル］−メチルフェニルアミン（すなわち、Ｒ１およびＲ２はメチル基であり、Ｒ３はフェニルである）；約６０ｎＭのＩＣ５０を有する２−［［４−（Ｎ−エチル−Ｎ−β−ヒドロキシエチルアミノ）フェニル］アゾ］−６−メトキシベンゾチアゾール（すなわち、Ｒ１はメチルであり、Ｒ２は２−ヒドロキシエチルであり、Ｒ３はエチルである）；ならびに約６０ｎＭのＩＣ５０を有する２−［［４−（ジエチルアミノ）フェニル］アゾ］−６−メトキシベンゾチアゾール（すなわち、Ｒ１はメチルであり、Ｒ２およびＲ３はエチル基である）を含む。
【００５６】
他の阻害剤には、上記の一般式ＩＩの化合物が含まれる。より好ましくは、一般式ＩＩにおいて、Ｒ４およびＲ８はメチル基であり、Ｒ５およびＲ７は−（ＣＨ２）２ＯＨであり、Ｒ６はエチルである。したがって、一般式ＩＩの好ましい阻害剤は、３−（２−ヒドロキシ−エチル）−２−｛２−［３−（２−ヒドロキシル−エチル）−５−メトキシ−３Ｈ−ベンゾチアゾール−２−イリデンメチル］−ブト−１−エニル｝−５−メトキシ−ベンゾチアゾール−３−イウムである。より好ましくは、この阻害剤のアイオダイド塩を使用する。この好ましい阻害剤のアイオダイド塩のＩＣ５０は約４０ｎＭである。
【００５７】
別の阻害剤は上記の式ＩＩＩの化合物である。化合物ＩＩＩは３−ヒドロキシ−ナフタレン−２−カルボン酸）２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデン）−ヒドラジドであり、ＩＣ５０は約６００ｎＭである。
【００５８】
本発明の他の阻害剤には一般式ＩＶの化合物が含まれる。一般式ＩＶの好ましい阻害剤は３−［４’−（３−カルボキシ−２−ヒドロキシ−４−メチル−シクロヘキサ−１，５−ジエニルアゾ）−ビフェニル−４−イルアゾ］−２−ヒドロキシ−６−メチル安息香酸（すなわち、Ｒ９およびＲ１０はメチル基である）であり、ＩＣ５０は約４００ｎＭである。
【００５９】
本発明の他の阻害剤としては一般式Ｖの化合物が挙げられる。一般式Ｖの好ましい阻害剤は４−［３−（２−ヒドロキシ−ナフタレン−１−イルアゾ）−５−メチル−チオフェン−２−イル］−酪酸（すなわち、Ｒ１１は−（ＣＨ２）３ＣＯＯＨであり、Ｒ１２はメチル基である）であり、ＩＣ５０は約７００ｎＭである。
【００６０】
ある特に好ましい実施形態では、哺乳動物はヒトである。一般に、阻害剤は、従来技術を使用して決定することができる有効量で投与される。一般に、阻害剤は、１日あたり約１０ｍｇから１日あたり約１０００ｍｇから選択される量を投与する。
【００６１】
本発明の阻害剤はまた、例えば抗酸化的性質を有するビタミン、非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤＳ）、およびシクロオキシゲナーゼ−２の選択的阻害剤を含む他の脂肪酸酸化の阻害剤（すなわち、共阻害剤）と組み合わせて投与することができる。抗酸化的性質を有する適切なビタミンには、ビタミンＥ、βカロチン、およびビタミンＣが含まれるが、これらだけに限定されない。適切な非ステロイド系抗炎症剤には、アスピリン、ジロフェニック、およびイブプロフェンが含まれるが、これらだけに限定されない。別の実施形態では、脂肪酸酸素化の阻害剤はシクロオキシゲナーゼ−２の選択的阻害剤である。これらの共阻害剤は、使用する場合には、一般に１日あたり約１０００ｍｇから１日あたり約２５００ｍｇを投与する。
【００６２】
一実施形態では、本発明の阻害剤の投与は少なくとも１週間にわたり繰り返し実施される。一実施形態では、投与は少なくとも１カ月間にわたり繰り返し実施される。一実施形態では、投与は少なくとも３カ月間にわたり繰り返し実施される。一実施形態では、投与は少なくとも１年間にわたり繰り返し実施される。別の実施形態では、投与は１カ月に少なくとも１回実施される。別の実施形態では、投与は１週間に少なくとも１回実施される。別の実施形態では、投与は１日に少なくとも１回実施される。別の実施形態では、投与は１週間に少なくとも１回少なくとも１カ月間実施される。別の実施形態では、投与は少なくとも１日に１回少なくとも１カ月間実施される。
【００６３】
本発明のこの態様は、酸化脂肪酸によるタウ重合の誘発に伴う種々の疾患および障害の治療および／または予防を提供する。本発明は、対象に有効量の本発明の治療剤を投与することによる治療（および予防）方法を提供する。好ましい態様では、この治療剤は実質的に精製されている。患者または対象は、好ましくはウシ、ブタ、ウマ、ニワトリ、ネコ、イヌなどを含むがこれらだけに限定されない動物であり、より好ましくは哺乳動物であり、最も好ましくはヒトである。
【００６４】
種々の送達系が知られ、本発明の治療剤の投与に使用することができる。このような系は、例えば、リポソームでのカプセル化、微粒子、マイクロカプセル、治療剤を発現することが可能な組換え細胞（例えば、非特許文献５４参照）、レトロウイルスまたはその他のベクターなどの一部としての治療用核酸の構築を含む。導入の方法は、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻内、硬膜外、および経口経路があるが、これらだけに限定されない。治療剤は、例えば、注入またはボーラス注射、上皮または皮膚粘膜内膜（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜など）を介する吸収を含む任意の従来の経路で投与することができ、他の生物学的活性剤と一緒に投与することができる。投与は、全身的または局所的であることができる。さらに、本発明の医薬組成物を、脳室内および髄腔内注射を含む任意の適切な経路で中枢神経系に導入することが望ましい。脳室内注射は、例えば容器に取り付けた脳室内カテーテルによって容易にすることができる。エアゾル剤を含む配合物を使用して、（例えば、吸入器またはネブライザーにより）肺投与を用いることもできる。
【００６５】
特定の実施形態では、本発明の医薬組成物を脳のような治療が必要な部分に局所的に投与することが望ましい。これは、例えば、限定するものではないが、手術中の局所注入、局所適用（例えば、創傷包帯）、注射、カテーテル、坐剤、またはインプラント（例えば、唾液腺（sialastic）膜または繊維のような膜を含む多孔性、無孔性、ゼラチン質の材料から形成したインプラント）などにより達成することができる。一実施形態では、脳のような、酸化による損傷を受けている組織の部位（またはかつての部位）への直接注射によって投与することができる。別の実施形態では、治療剤は、小胞、特にリポソームに送達することができる（例えば、非特許文献５５、５６参照）。
【００６６】
さらに別の実施形態では、治療剤は徐放系で送達することができる。一実施形態では、ポンプを使用してもよい（例えば、非特許文献５５、５７、５８、５９参照）。別の実施形態では、高分子材料を使用することができる（例えば、非特許文献６０、６１、６２、６３参照）。非特許文献６０の総説で論じられている他の徐放系も使用することができる。
【００６７】
一般に、本発明の阻害剤は通常、薬学的に許容可能な担体を使用して投与される。用語「薬学的に許容可能な」は、連邦政府または州政府の規制当局により承認された、または米国薬局方もしくは他の一般に認められた薬局方に動物、より具体的にはヒトへの使用の目的で記載されていることを意味する。用語「担体」は、希釈剤、アジュバント、賦形剤、ビヒクルであって、これらと一緒に治療剤を投与するものを指す。このような薬学的担体は、水および油などの無菌の液体であることができ、落花生油、大豆油、鉱油、胡麻油などのような石油、動物、植物、または合成由来のものを含む。医薬組成物を静脈投与する場合、水が好ましい担体である。生理食塩水、水性デキストロース、およびグリセロール溶液も特に注射可能な溶液用の液体担体として使用することができる。適切な薬学的賦形剤には、澱粉、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、コメ、小麦粉、胡粉（chalk）、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセリル、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが含まれる。治療剤は、所望であれば、少量の湿潤剤、乳化剤、またはｐＨ緩衝剤も含むことができる。これらの治療剤は、溶液、懸濁液、乳濁液、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、徐放性配合物などの形態をとることができる。治療剤は、伝統的な結合剤およびトリグリセリドなどの担体と共に坐剤として配合することができる。経口配合物は、薬学的等級のマンニトール、ラクトース、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、セルロース、炭酸マグネシウムなどのような標準的な担体を含むことができる。適切な薬学的担体の例は非特許文献６４に記載されている。このような治療剤は、治療有効量の活性成分を好ましくは精製形態で患者に合った投与をするように適切な量の担体と一緒に含む。配合物は投与方法に適していなければならない。
【００６８】
好ましい実施形態では、組成物は、ヒトへの静脈内投与に適応させた医薬組成物として通常の手順に従って配合する。典型的には、静脈内投与用の組成物は無菌等張水性バッファー中の溶液である。必要な場合には、組成物はまた、溶解剤および注射部位の痛みを緩和するためのリグノカインなどの局所麻酔剤を含んでもよい。一般に、成分は別個に、または例えば活性剤の量を示すアンプルもしくはサシェなどの密閉容器中の凍結乾燥粉末もしくは水を含まない濃縮物として単位剤形中に一緒に混合して与える。組成物を注入で投与する場合、無菌の薬学的等級の水または生理食塩水を含む注入ビンで投与することができる。組成物を注射で投与する場合、無菌水または生理食塩水のアンプルを成分が投与前に混合されるように提供することができる。
【００６９】
有効な本発明の治療剤の量は、タウ関連障害または状態の性質ならびにその障害または状態の段階に依存する。有効量は標準的な臨床技術で決定することができる。さらに、最適な投与量範囲の同定を助けるために、下記のようなｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを必要に応じて使用することができる。配合物中で使用される厳密な用量は投与経路にも依存し、医療関係者の判断および各患者の状況に従って決定するべきである。しかし、適切な投与量範囲は約１０ｍｇ／日から約１０００ｍｇ／日である。効果的な用量は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験系から導出した用量−応答曲線から外挿することができる。本発明はまた、本発明の治療剤の１種または複数の成分を入れた１個または複数の容器を含む薬学的パックまたはキットを供給する。
【００７０】
一実施形態では、患者の脳中のタンパク質タウの集合を調節する方法は、
脳中のタウ重合を阻害する方法が必要な患者を特定すること、および
その患者に薬理学的有効量の本明細書で定義した式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、またはＶの脂肪酸酸化の阻害剤を投与することを含む。
【００７１】
一実施形態では、その特定は、患者のタウの変異体ゲノムサブタイプを特定することに基づく。通常、これらの変異体サブタイプはタウタンパク質重合の増大に関与する。非特許文献３の総説を参照されたい。別の実施形態では、この特定はアルツハイマー病の診断とは別である。この実施形態では、特定は、ピック病、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症および家族性前頭側頭型痴呆、および第１７番染色体に連鎖するパーキンソン症候群（ＦＴＤＰ−１７）などのタウ重合に関連する別の疾患の診断であることができるが、これだけに限定されない。
【００７２】
以下の実施例では本発明の方法および組成物を記載し、説明する。この実施例は本発明を単に説明するためのものであり、その範囲または精神を制限するものではない。別段の記載がない限り、パーセンテージはすべて重量に基づく。当業者ならば実施例で記載した材料、条件、およびプロセスの変形を使用できることは容易に理解するであろう。
【実施例】
【００７３】
材料。組換えｈｔａｕ４０および二重変異体ｈｔａｕ４０Ｃ２９１Ａ，Ｃ３２２Ａを前に記載した通りに発現させ精製した（非特許文献６５、６６、および本出願と同日に出願し、２０００年７月２１日出願の米国特許仮出願第６０／２２１７７７号明細書に基づく同時係属米国特許出願第      号明細書）。Ａβ１−４０（Ｂａｃｈｅｍ、米国ペンシルベニア州フィラデルフィア）の保存溶液をＤＭＳＯ中で調製し、使用前に濾過した（０．２ｍｍカットオフ）。チオフラビンＳ（Ｓｉｇｍａ、米国ミズーリ州セントルイス）を水（１０ｍＭ）中で調製した。分子量は約６５０ダルトンと推定する。アラキドン酸（Ｆｌｕｋａ、米国ウィスコンシン州ミルウォーキー）を１００％のエタノールで再構成し、使用するまでアルゴンガス下−８０℃で保存した。タウ重合阻害剤２−［［４−（ジメチルアミノ）フェニル］アゾ］−６−メトキシベンゾチアゾール（Ｎｅｕｒｏｎａｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．、米国イリノイ州エバンストン）を溶解させ、ＤＭＳＯ中−２０℃で保存した。ＡＤ由来のタウフィラメントを調製し（非特許文献６７）、使用するまで２０℃において濃度約１ｍｇ／ｍｌ、−で保存した。
【００７４】
タウ重合。タウの精製したアイソフォームを前に記載した通りに重合させた（非特許文献６８、２４、２５）。手短に言えば、２〜８ｍＭ（最終濃度）のｈｔａｕ４０または変異体ｈｔａｕ４０Ｃ２９１Ａ，Ｃ３２２Ａを、室温において、２−［［４−（ジメチルアミノ）フェニル］アゾ］−６−メトキシルベンゾチアゾール（化合物Ｉ’）の存在下または不存在下で、４ｍＭのチオフラビンＳを含む重合バッファー（１０ｍＭの４−［２−ヒドロキシエチル］−１−ピペラジンエタンスルホン酸、１００ｍＭのＮａＣｌ、および５ｍＭのＤＴＴ）と共にインキュベートした。アラキドン酸（７５〜１００ｍＭ）を加えることによって重合を誘導し、以下で説明する蛍光または電子顕微鏡検査で分析するまで重合を続けた。存在する場合、化合物Ｉ’の最終濃度は０．０５〜２ｍＭで変動した。対照反応はＤＭＳＯビヒクルで標準化し、反応すべてで５％に制限した。
【００７５】
タウ解重合。精製したｈｔａｕ４０またはｈｔａｕ４０Ｃ２９１Ａ，Ｃ３２２Ａ（８ｍＭ）の溶液を上記の通り３．５時間重合させた。希釈で媒介される解重合をアッセイするために、反応生成物の一定分量（５０ｍｌ）を４ｍＭのチオフラビンＳを含む重合バッファー１ｍｌを含む攪拌石英キュベットに注入すると、時間関数として蛍光の減衰が起こった（室温）。存在する場合、アラキドン酸は５０ｍＭであり、タウは２ｍＭに維持した。
【００７６】
阻害剤が媒介する解重合をアッセイするために、化合物Ｉ’を重合したタウに最終濃度０．２ｍＭまで、２本の別個のミクロ遠心分離管に加えた。１０、２０、３０、４５、６０分間のインキュベーション後に各試料から一定分量を取り出し、以下で説明する蛍光または電子顕微鏡検査アッセイにかけた。対照（化合物Ｉ’なし）反応はＤＭＳＯビヒクルで標準化した。これは反応すべてで５％に制限した。
【００７７】
時点を添加後の０、１０、および２０分に限定した以外は、真正のフィラメント（０．０３３ｍｇ／ｍｌ）を解重合する化合物Ｉ’（２ｍＭ）の能力を上記の通りアッセイした。
【００７８】
蛍光。タウの凝集および分解を、前に記載した通りのチオフラビンＳ蛍光で監視した（非特許文献２４）。化合物Ｉ’の阻害活性は、得られたデータを以下の関係
Ａ＝Ａ０＋（Ａｍａｘ−Ａ０）／［１＋１０（ｌｏｇ ＩＣ５０−ｌｏｇＸ）］
（ＡおよびＡ０は、それぞれ阻害剤（濃度Ｘ）の存在下および不存在下でブランク調節した蛍光である）に当てはめて定量した。ＩＣ５０値はＧＲＡＰＨＰＡＤ  ＰＲＩＳＭ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ．）の非線形回帰アルゴリズムを使用して計算した。
【００７９】
透過電子顕微鏡検査。重合および解重合反応の一定分量（５０ｍｌ）を取り出し、グルタルアルデヒド（２％）で固定し、３００メッシュのｆｏｒｍｖａｒ／炭素被覆銅グリッド（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、米国ペンシルベニア州Ｆｔ．Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ）に吸着させた。得られたグリッドを水で洗浄し、２％の酢酸ウラニル（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色し、再び水で洗浄し、ブロットして乾燥し、６５ｋＶで作動させたＰｈｉｌｌｉｐｓ  ＣＭ  １２顕微鏡で観察した。各実験条件からの４から６つの無作為抽出したイメージを１３０００倍または２２０００倍のいずれかでフィルム上にキャプチャーし、デジタル化し、較正し、Ｏｐｔｉｍａｓ６．５．１に取り込んで前に記載した通りに（非特許文献２５）フィラメント長およびフィラメント数を定量した。長軸が５０ｎｍより大きい任意の物体として特定された個々のフィラメントを手動で計数した。条件ごとに無作為抽出した４から６つのイメージのそれぞれからの計数を、フィラメント長およびフィラメント数の両方についての平均±標準偏差として報告する。長さの分布を１００ｎｍ幅の瓶中で定量した。５０〜１５０ｎｍ長から開始し、１５１〜２５０ｎｍ、２５１〜３５０ｎｍなどまで続けた。
【００８０】
Ａβ１−４０凝集。Ａβの保存溶液（１ｍＭ）をＤＭＳＯ中で調製し、濾過した（０．２ｍＭカットオフ）。凝集は、Ａβｂ保存溶液を凝集バッファー（１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭの２−［Ｎ−モルホリノ］エタンスルホン酸、ｐＨ６．２、最終体積１００ｍＬ）中２０ｍＭの最終濃度に希釈することによって開始させた。化合物Ｉ’の存在下（２０ｍＭの最終濃度）および不存在下でのＡβ凝集から得られた濁度を時間関数として、Ｂｅｃｋｍａｎ  ＤＵ６４０Ｂ分光光度計により３５０ｎｍでＤＭＳＯビヒクルブランクに対してモニターした（非特許文献６９、７０）。各読み取りの前にキュベットを素早く逆さにした。試料の総ＤＭＳＯビヒクル濃度は制御して、５％（ｖ／ｖ）を超えないようにした。
【００８１】
化合物Ｉ’の結果
タウ重合の阻害。タウ重合の化学的アンタゴニストを特定するために、小分子（主に炭素、水素、酸素、窒素、およびイオウからなる約６０００の有機化合物（＜約７００Ｄａ）を含む）を、本出願と同日に出願し、２０００年７月２１日出願の米国特許仮出願第６０／２２１７７７号明細書に基づく同時係属米国特許出願第      号明細書に記載の方法を使用して、アラキドン酸（５０ｍＭ）によりほぼ生理条件下で誘発されたｈｔａｕ４０（２ｍＭ）集合に対する阻害活性についてスクリーニングした。２−［［４−（ジメチルアミノ）フェニル］アゾ］−６−メトキシルベンゾチアゾール（化合物Ｉ’）、コンゴ赤を含むアゾ染料ファミリーの非荷電（生理学的ｐＨ）メンバーをｈｔａｕ４０に対して阻害活性を有すると同定した。
【００８２】
化合物Ｉ’のｈｔａｕ４０（２ｍＭ）の重合に対する効果をチオフラビンＳ（２〜４ｍＭ）蛍光アッセイを使用して定量した（非特許文献２４）。化合物Ｉ’は、用量依存的に５４±６ｎＭのＩＣ５０でチオフラビンＳ蛍光を阻害した（図１、パネルＡ）。全ての阻害等温線は協同性の徴候を示さず、単一の阻害結合部位の占有度と一致していた。これらのデータは、化合物Ｉ’がタウ重合の強力な阻害剤であり、タウプロトマー、アラキドン酸誘導物質、およびチオフラビンＳプローブに対して化学両論量以下の濃度で活性であることを示唆した。
【００８３】
これらの知見を確認するために、タウフィラメント形成の阻害を透過電子顕微鏡検査で直接観察した（非特許文献２５）。この実験のために２つの理由から、Ｃｙｓ残基を有さないｈｔａｕ４０変異体（ｈｔａｕ４０Ｃ２９１Ａ，Ｃ３２２Ａ；本出願と同日に出願し、２０００年７月２１日出願の米国特許仮出願第６０／２２１７７７号明細書に基づく同時係属米国特許出願第      号明細書に記載）を使用した。第１に、それは、フィラメント長の定量を簡略化する、長いフィラメントビンのより大きな占有を伴うフィラメントの指数関数的な集団を生じた（非特許文献６６）。第２に、Ｃｙｓ残基を欠いているので、化合物Ｉ’によって起こり得るタンパク質の共有結合修飾を排除した。これにより、チューブリン重合の芳香族阻害剤で認められた（非特許文献７１）この潜在的な複雑さを回避した。チオフラビンＳ（４ｍＭ）ありまたはなしでの標準的な条件下でインキュベートしたとき、ｈｔａｕ４０Ｃ２９１Ａ，Ｃ３２２Ａ（８ｍＭ）は豊富な直線状フィラメントを３時間にわたって形成した（図１、パネルＢ）。しかし、化合物Ｉ’（２００ｎＭ；タウプロトマーに対して１：４０のモル化学量論）の存在下では、フィラメントすべての総数または総長のいずれかで測定した重合、通常、対照値の１０〜２０％に減少した（図１、パネルＣ）。これらの結果により、化合物Ｉ’がタウ重合の阻害剤であり、チオフラビンＳプローブの単なる競合結合アンタゴニストとして作用しているのではないことが確認された。
【００８４】
化合物Ｉ’はタウ凝集解除を促進させる。アゾ染料ファミリーの他のメンバーは、アミロイドβペプチド、インスリン、またはプリオンタンパク質などの異なるタンパク質プロトマーで構成される原線維に結合することが示されている（非特許文献４７、５０）。いくつかの例では、これらの染料はプロトマーからの原線維の形成に拮抗することが可能であった（非特許文献７２、７３）。これらの例では、それらは（１）有効モノマー濃度を低下させること、（２）フィラメント末端での成長をブロックすること、または（３）フィラメントの破壊速度を増大させることのいずれかによって作用すると主張されてきた（非特許文献７４）。化合物Ｉ’の場合、タウ重合の５０％阻害は１：４０モル化学量論で認められ（化合物Ｉ’：タウ）、タウモノマーの濃度を低下させることだけによっては作用できないことを示唆している。したがって、化合物Ｉ’が成熟合成フィラメントを阻害して潜在的に解重合または断片化させる能力を詳細に実験した。
【００８５】
化合物Ｉ’の不存在下でのタウ重合の可逆性を、希釈実験でまず示した。重合条件下、室温で３時間ｈｔａｕ４０をインキュベートし、次いで集合バッファー中に希釈した。次に、それに続く質量作用によるタウポリマーの損失をチオフラビンＳ蛍光で経時的に追跡した（非特許文献２４）。集合バッファー単独に入れて２０倍に希釈すると、チオフラビンＳの蛍光は急速に減衰した。最初の一次速度は０．８３分−１であった（図２）。２ｍＭのプロトマー（すなわち、集合の臨界濃度を超える組換えｈｔａｕ４０；非特許文献２４）を含む集合バッファーへの希釈は、崩壊速度を０．３９分−１にほんのわずか減速させた。対照的に、５０ｍＭのアラキドン酸を含むバッファーへの希釈は、崩壊を０．００８５分−１に減速させた。バッファー単独への希釈よりも５０倍遅い。これらのデータは、タウ重合が可逆的であることを示しており、かつ精製した組換えタウタンパク質と機能する場合、成熟合成フィラメントの安定を確実にするにはプロトマーとアラキドン酸の両方の存在が必要であることを確認している。
【００８６】
化合物Ｉ’がまた、成熟フィラメントを不安定化し、希釈実験て認められた解重合を再現することができるのかを決定するために、チオフラビンＳの存在下で３時間、標準の条件で集合したタウフィラメントを化合物Ｉ’（２００ｎＭ）の存在下または不存在下でインキュベートし、様々な時間の後、電子顕微鏡検査および蛍光で検査した。用量応答曲線は再び、単一の結合部位および９１±１３ｎＭのＩＣ５０と一致する阻害パターンを示した（データ示さず）。これらのデータを合わせると、化合物Ｉ’が、化学両論量以下の濃度、８ｍＭのプロトマー（ｈｔａｕ４０）および７５ｍＭのアラキドン酸誘導物質の存在下で合成タウフィラメントのさらなる成長を阻害し、分解を促進していることが示される。
【００８７】
リガンドが媒介する解重合の機構。平衡の直線状タンパク質集合体の末端方向の解重合の動力学的特性は、ポリマーの長さ分布に依存する（非特許文献７５）。長さのほぼ指数関数的な分布をとるタウフィラメントでは（非特許文献７６、６６）、解離速度は一次であると予測される（非特許文献７５）。さらに、フィラメントの分解は、徐々に短縮していくフィラメント長の指数関数的な分布を維持しながら進行すると予測される（非特許文献７５）。
【００８８】
化合物Ｉ’が媒介するタウ解重合が末端方向の機構で進行するのかを決定するために、ｈｔａｕ４０Ｃ２９１Ａ，Ｃ３２２Ａ（４ｍＭ）を３．５時間重合させ、その後、化合物Ｉ’（２００ｍＭ）またはＤＭＳＯビヒクルのみを加え、フィラメント長を電子顕微鏡検査による１時間の「追跡」で測定した。化合物Ｉ’の不存在下では、総ｈｔａｕ４０Ｃ２９１Ａ，Ｃ３２２Ａのフィラメント長および数はこの時間中（図３）、ほぼ平衡に等しい反応と一致してわずかに増大した（非特許文献２６）。対照的に、化合物Ｉ’（２００ｎＭ）を加えると、新たな平衡に達するまで３０分間総フィラメント長が減少した。フィラメントの損失の最初の速度は、これらの条件下で（４ｍＭのｈｔａｕ４０Ｃ２９１Ａ，Ｃ３２２Ａおよび７５ｍＭのアラキドン酸）、一次減衰としてよくモデル化された（ｒ２＝０．９９６；ｋ＝０．０４２分−１）。
【００８９】
化学両論量以下の活性を伴う一次のリガンドが引き起こしたフィラメントの解重合を観察すると、化合物Ｉ’が、無作為のフィラメント破壊よりもフィラメントの末端からのタウプロトマーの順次放出を促進していることを示唆した。この仮説を確認するために、予め集合させたタウフィラメントを化合物Ｉ’で処理した後、タウポリマーの数および長さの分布も調べた。これらのデータは、化合物Ｉ’が媒介する解重合は長さが＞５０ｎｍのフィラメントの数のゆっくりとした減少を伴い、これは無作為の破壊が媒介する解重合モデル（図３）とは一致しないことを示した。さらに、指数関数的なポリマー長の分布は、化合物Ｉ’が媒介する解重合反応の間維持され、フィラメントはより短い長さへシフトした（図４）。これらのデータを合わせると、化学両論量以下の濃度での化合物Ｉ’処理は末端方向のフィラメントの解重合につながることが示唆される。
【００９０】
真正ＰＨＦの分解。組換えプロトマーから生成した合成タウフィラメントとは対照的に、真正のタウフィラメントは、翻訳後修飾が様々な状態の複数のタウアイソフォームからなる（非特許文献７７）。化合物Ｉ’が真正のフィラメントの分解も促進するのかを決定するために、ＡＤ脳から分画遠心法で調製したＰＨＦを単独でまたは化合物Ｉ’（２ｍＭ）の存在下でインキュベートし、電子顕微鏡検査で経時的に追跡した。化合物Ｉ’の不存在下では、真正のフィラメントは２０分間部分的に解重合した。したがって、新鮮な合成ｈｔａｕ４０フィラメントよりはるかに安定ではあるが、真正のフィラメント集団の少なくとも一部は２０分間の時間的経過のなかで分解可能であるように見えた。化合物Ｉ’の存在下では、解重合は大いに強化され、総フィラメント長は対照の１０〜５０％に縮小した（図５）。これらのデータは、タウフィラメントと化合物Ｉ’との間の相互作用は、真正のフィラメントおよび合成フィラメントの両方で保存され、化合物Ｉ’のような化合物がｉｎ  ｖｉｖｏでのフィラメント形成に拮抗可能であることを示唆する。
【００９１】
タウ重合拮抗作用の選択性。他のアゾ染料と同様に、化合物Ｉ’はＡβおよびインスリンから形成したものも含めて種々のアミロイド凝集体に低マイクロモル濃度で結合することが示された（特許文献１）。アミロイド結合が重合阻害活性に付随するかどうかを決定するために、化合物Ｉ’が自然発生のＡβ１−４０集合を阻害する能力を調べた。リガンドの不存在下で、Ａβ１−４０（２０ｍＭ）は１時間遅れで自然に重合した（図６）。Ａβ１−４０プロトマー（２０ｍＭ）に関して化学量論濃度であり、ほぼ公開された結合定数を超える等級の濃度の化合物Ｉ’の存在はＡβ１−４０の集合の動力学をそれほど変更しなかった（図６）。これらのデータは、少なくともＡβ１−４０の場合、化合物Ｉ’の結合活性をその重合阻害活性から分けることが可能であることを示す。さらに、これらのデータは、異なるタンパク質プロトマーから形成されたポリマー構造（すなわち、伸長したβ−シート）の類似性にもかかわらず、標的選択的結合および集合阻害活性を有する化合物Ｉ’のような小リガンドの選択が可能であることを確認している。
【００９２】
他の化合物。化合物Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、およびＶを化合物Ｉ’について上記したものと同様の技術を使用して同定した。
【００９３】
本出願の全体にわたって、種々の特許、刊行物、書籍、ならびに核酸およびアミノ酸配列を引用してきた。これらの特許、刊行物、書籍、および配列のそれぞれの全体を参照により本出願に組み込む。
【図面の簡単な説明】
【００９４】
【図１】パネルＡ：チオフラビンＳ（４ｍＭ）および様々な濃度（０、３、６、１２、２５、５０、１００、２００、４００、８００、１６００ｎＭ）の２−［［４−（ジメチルアミノ）フェニル］アゾ］−６−メトキシルベンゾチアゾール（化合物Ｉ’）の存在下において、実施例で記載した通りの蛍光アッセイを使用してアッセイした（３．５時間、室温）組換えヒトｈｔａｕ４０（８ｍＭ）のアラキドン酸誘導（７５ｍＭ）重合。蛍光が残った対照（％）（すなわち、化合物Ｉ’を含まないＤＭＳＯビヒクル）対化合物Ｉ’の濃度のプロットは、化合物Ｉ’が５４±６ｎＭのＩＣ５０でｈｔａｕ４０の重合を阻害することを示している。パネルＢおよびＣ：実施例で記載した通りの、タウの供給源としてｈｔａｕ４０Ｃ２９１Ａ，Ｃ３２２Ａを使用する化合物Ｉ’の濃度０ｎＭ（パネルＢ）および２００ｎＭ（パネルＣ）での電子顕微鏡検査アッセイにより、化合物Ｉ’がタウ重合を阻害することが確認される。２００ｎＭの化合物Ｉ’（タウに対して１：４０のモル比）の存在下での重合により、総フィラメント数および総フィラメント長はそれぞれ対照値の１４．２±０．６％および２０．２±０．７％（同一実験２回の平均±範囲）に減少した。
【図２】この図は合成タウフィラメントの分解を説明する。組換えｈｔａｕ４０（４ｍＭ）から３時間にわたり室温で調製したフィラメントを２０倍に希釈して、チオフラビンＳ（２ｍＭ）と、４ｍＭのｈｔａｕ４０
【００９５】
2005500346.tif 000016
【００９６】
、７５ｍＭのアラキドン酸（・）、または無添加（□）のいずれかを含む重合バッファーにした。得られた解重合体をチオフラビンＳ蛍光（Ｆ）で経時的に追跡した。これらのデータは、合成タウフィラメントが、安定に関してはタウプロトマーおよびアラキドン酸誘導物質の両方の存在を必要とすることを示す。
【図３】この図は化合物Ｉ’が媒介する解重合の時間的経過を示す。８ｍＭの組換えｈｔａｕ４０Ｃ２９１Ａ，Ｃ３２２Ａ（１００ｍＭのアラキドン酸）から３．５時間かけて室温で調製したフィラメントを、ＤＭＳＯビヒクル
【００９７】
2005500346.tif 000017
【００９８】
または２００ｎＭの化合物Ｉ’（□）の存在下で１時間さらにインキュベートした。反応の一定分量を０、１０、２０、３０、４５、および６０分でグルタルアルデヒドを加えることによって停止させ、長さ≧５０ｎｍのフィラメントを電子顕微鏡検査で分析した。各データ点の上端は領域あたりの総フィラメント長を表し、下端は領域±標準偏差（ｎ＝５回の観察）あたりの総フィラメント数を表す。化合物Ｉ’の不存在下では、タウフィラメント形成は、総フィラメント長（パネルＡ）およびフィラメント数（パネルＢ）領域あたり＞５０ｎｍを少しずつ増大させながら平衡に向けて続いた。しかし、２００ｎＭの化合物Ｉ’の存在下では、領域あたりの総フィラメント長は、最初の一次速度０．０４２分−１（上端、実線）で短縮し、総フィラメント数のゆっくりとした減少を伴った。２００ｎＭの化合物Ｉ’の存在下での１時間のインキュベーション後、総フィラメント数および総フィラメント長は、それぞれビヒクルのみの対照で認められたものの８４±２６％および２１±６％に減少した。
【図４】この図は化合物Ｉ’が媒介する解重合中のフィラメント長の分布を説明する。図３で示した実験から生じた≧５０ｎｍのｈｔａｕ４０Ｃ２９１Ａ，Ｃ３２２Ａフィラメントの相対的な長さの分布をヒストグラム形態（瓶径１００ｎｍ）で、ＤＭＳＯビヒクルまたは２００ｎＭの化合物Ｉ’の添加後１０（□）、２０（・）、３０（○）、４５
【００９９】
2005500346.tif 000018
【０１００】
、および６０（△）分でプロットした。各データ点は１００ｎｍ幅の瓶±標準偏差（ｎ＝５回の観察）での総フィラメント長を表す。パネルＡ：ＤＭＳＯビヒクルの存在下では、ｈｔａｕ４０Ｃ２９１Ａ，Ｃ３２２Ａフィラメントは指数関数分布の長さを維持し、これは１時間のインキュベーション時間にわたってわずかしか変化しない。パネルＢ：２００ｎＭの化合物Ｉ’の存在下では、指数関数分布のフィラメント長は、１０（□）、２０（・）、３０（○）、および６０（△）分のインキュベーション後にも維持されるが、より短いフィラメント長へとシフトする。比較として、各パネルは、時間０
【０１０１】
2005500346.tif 000019
【０１０２】
で最初の長さ分布を示す。
【図５】この図は小分子が媒介する真正のタウフィラメントの分解を示す。ＡＤ脳から単離されたタウフィラメント（０．０３ｍｇ／ｍｌ）を
【０１０３】
2005500346.tif 000020
【０１０４】
ＤＭＳＯビヒクルまたは（□）２ｍＭの化合物Ｉ’の存在下で２０分間インキュベートした。一定分量の反応を０、１０、および２０分間のインキュベーション後、グルタルアルデヒドを加えることによって停止させ、長さ≧５０ｎｍのフィラメントを電子顕微鏡検査で分析した。各データ点は領域±標準偏差（ｎ＝５）あたりの総フィラメント長を表す。化合物Ｉ’での２０分間のインキュベーション後、総フィラメント長はＤＭＳＯビヒクル対照のわずか１４±９％であった。
【図６】この図は化合物Ｉ’がタウ重合に対して選択的であることを説明する。Ａβ（２０μＭ）をＤＭＳＯビヒクル
【０１０５】
2005500346.tif 000021
【０１０６】
または２０μＭの化合物Ｉ’（□）の存在下において集合バッファー中でインキュベートした。得られた集合反応を３５０ｎｍでの吸光度によって追跡した。化合物Ｉ’は、これらの条件下ではＡβ重合を阻害しなかった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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