(57)【要約】  式（Ｉ）〔式中、Ｌ１は、エーテル（Ｒ１−ＯＲ２）ｍ（ここで、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に選択され、１〜１２個の炭素原子を有する炭化水素から誘導され、ｍは１−４の整数を表す）、または１〜２０個の炭素原子を有する炭化水素Ｒから誘導され；Ｆは発蛍光団としての非置換ピレンまたは置換ピレンを表し；Ｑは消光物質を表し；Ｌ２は、Ｃ（Ｏ）−Ｌ１またはＣ（Ｏ）−Ｌ１−ＮＨ（ここで、Ｌ１は上記定義の通り）を表す〕の化合物を開示する。本発明の化合物はホスホリパーゼＡ２、特にＰＡＦ−ＡＨの活性の測定に用いられ得る。    【化１】2005511701.tif 000022
2005511701.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）で示される化合物
【化１】
2005511701.tif 000020
〔式中、Ｌ１は、エーテル（Ｒ１−ＯＲ２）ｍまたは１〜２０個の炭素原子を有する炭化水素Ｒから誘導され、前記Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に選択され、１〜１２個の炭素原子を有する炭化水素から誘導され、ｍは１〜４の整数を表し；
Ｆは発蛍光団としての非置換ピレンまたは置換ピレンであり；
Ｑは消光物質であり；
Ｌ２は、Ｃ（Ｏ）−Ｌ１またはＣ（Ｏ）−Ｌ１−ＮＨであり、該Ｌ１は上記定義の通りである〕。
【請求項２】
消光物質が２，４−ジニトロフェニル残基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１およびＲ２がそれぞれ独立に（ＣＨ２）ｎであり、ｎが２〜１２の整数である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｌ１が（ＣＨ２）４−Ｏ−（ＣＨ２）１０を表す、請求項１乃至３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒが（ＣＨ２）ｏであり、ｏが１〜２０の整数である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項６】
Ｌ２が、Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐまたはＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ−ＮＨであり、ｐが１〜２０の整数である、請求項１乃至５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｌ２がＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）５−ＮＨである、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
前記化合物が下記式（２）の構造を有する、請求項１乃至７のいずれか１項に記載の化合物。
【化２】
2005511701.tif 000021
【請求項９】
ホスホリパーゼＡ２の活性を測定するための請求項１乃至８のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１０】
前記ホスホリパーゼＡ２が血小板活性化因子アセチルヒドロラーゼである、請求項１１に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）、特に、血小板活性化因子アセチルヒドロラーゼ（ＰＡＦ−ＡＨ）の活性を測定するのに適した化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
血小板活性化因子（ＰＡＦ）は、生理・病理プロセスに関与する生物活性リン脂質である。この因子は、ｓｎ−２位のアセテート基を切断する特異的アセチルヒドロラーゼ、すなわち、血小板活性化因子アセチルヒドロラーゼ（リポタンパク質関連ホスホリパーゼＡ２とも称されるＰＡＦ−ＡＨ，ＥＣ３．１．１．４７）によって生物学的に不活性な生成物に変換される。この基質特異性は、ＰＡＦの他に、ｓｎ−２エステルのω位に極性置換基を有する酸化リン脂質をさらに含む。これらの変性物質は酸化リポタンパク質中によく見出される。ＰＡＦや酸化リン脂質に加えて酸化リポタンパク質もさまざまな疾患に関与するので、この酵素はそのような疾患の発生にも決定的な影響を及ぼすと思われる。
【０００３】
近年、ＰＡＦ−ＡＨの研究はますますその重要性を増してきている。特に、ＰＡＦ−ＡＨ活性の異常はさまざまな疾患で確認されている。治療薬として遺伝子組換え技術によって製造されたこの酵素の一連の臨床試験や検査の開始は、この治療薬がヒトに非常に重要であることを示している〔第３期臨床実験は２００１年春に敗血症適応領域で開始される予定である（ｗｗｗ．ｉｃｏｓ．ｃｏｍ）〕。したがって、総じてＰＬＡ２、特にＰＡＦ−ＡＨの活性を測定するための十分に実行可能な方法を得ることが必要とされる。
【０００４】
ＰＡＦ−ＡＨ活性の測定するためには、放射能測定、ＵＶ測定または蛍光測定などの多様な方法が文献に記載されている。これらの方法のほぼすべてにおいて、基質とその酵素を含むサンプルとを実際に反応させた後に、１つ以上の処理工程（例えば、抽出、結果として生じる標識に対する反応）が続くので、連続的に酵素動力学を測定することは不可能である。
【０００５】
最も古くかつ現在最も広く用いられている測定法は放射能測定をベースとしている（例えば、非特許文献１参照）。これらの方法は、［３Ｈ］−アセテート標識した天然基質と検査対象サンプルとを反応させることにより、放射能標識酢酸を切断する工程を含む。検査製剤をクロマトグラフィー処理した後、切断した酢酸の放射活性を測定することができる。しかし、クロマトグラフィー処理は時間がかかるだけでなく、ある程度、高額な費用が掛かる。
【０００６】
非特許文献２は、ＰＬＡ２およびＰＡＦ−ＡＨの測定法における分子内消光ＢＯＤＩＰＹ標識リン脂質類似体を開示している。これらの類似体の１つは、１−（Ｎ−（ＢＯＤＩＰＹ−ＦＬ−ペンタノイル）−１１−アミノウンデシル）−２−（（Ｎ−（２，４−ジニトロフェニル）アミノ）−８−アミノオクタノイル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンである。ＢＯＤＩＰＹは発蛍光団として作用する。
【０００７】
しかし、この化合物は極めて重大な不都合を有する。例えば、ＰＬＡ２、特にＰＡＦ−ＡＨの活性を測定するために上記化合物を用いても、膜における横方拡散速度の変化を提示することができない。さらに、上記化合物の性質は天然リン脂質の性質とは大きく異なる。
【非特許文献１】エム  イー  ブランクら（Ｍ．Ｅ．Ｂｌａｎｋ  ｅｔ  ａｌ），Ｊ．Ｂｉｏ      ｌ．Ｃｈｅｍ．、１９８１年、第２５６巻、第１７５〜１７８頁。
【非特許文献２】エイチ  エス  ヘンドリックソンら（Ｈ．Ｓ．Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎ  ｅ      ｔ  ａｌ）、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１９９９年、第２７６巻、第２７〜３５頁。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、本発明の目的は、従来技術から分っている不都合を有することなく、ＰＬＡ２、特にＰＡＦ−ＡＨの活性を測定し得る方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明によれば、これは、下記式（１）の化合物によって達成される。
【００１０】
【化１】
2005511701.tif 000003
上記式中、Ｌ１は、エーテル（Ｒ１−ＯＲ２）ｍまたは１〜２０個の炭素原子を有する炭化水素Ｒから誘導され、前記Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に選択され、１〜１２個の炭素原子を有する炭化水素から誘導され、ｍは１〜４の整数であり；
Ｆは発蛍光団としての非置換または置換ピレンであり；
Ｑは消光物質であり；
Ｌ２は、Ｃ（Ｏ）−Ｌ１またはＣ（Ｏ）−Ｌ１−ＮＨであり、このＬ１は上記定義の通りである。
【００１１】
本発明の化合物は、発蛍光団として非置換または置換ピレンを含むが、蛍光性ではない。というのも、そのような蛍光は、これも本発明の化合物中に含まれている消光物質によって消光されるからである。ＰＬＡ２、特にＰＡＦ−ＡＨの影響下では、消光物質は切断され、残りの化合物から空間的に分離される。これによって蛍光消光が失活するので、蛍光の増大が観察される。この蛍光強度の増大は、おおむねＰＬＡ２の活性に比例するので、ＰＬＡ２、特にＰＡＦ−ＡＨの活性の指標となる。
【００１２】
驚くべきことには、ＰＬＡ２、特にＰＡＦ−ＡＨの活性を測定するために上記化合物を用いると、膜における横方拡散速度の変化を提示し得ることが判明した。その上、上記化合物の性質は、天然リン脂質の性質と大きく異なる。さらに、本発明の化合物は、活性の測定を特に有効かつ容易に実施することができる。活性は直接かつ連続的に測定され得る。
【００１３】
上記に概説したように、本発明の化合物中には非置換または置換ピレンが発蛍光団として存在する。この発蛍光団は、その１位を介してＬ１に結合し得る。上記ピレンを置換する場合、発蛍光団としてのその性質に有意な影響を及ぼさない置換基を使用する。そのような置換基は当業者には公知である。そのような置換基は、ピレンのＣ原子を置換するアミノ基もしくはカルボニル基、またはＮ、Ｓ、もしくはＰなどのヘテロ原子であり得る。本発明の化合物は、それぞれ独立に選択される１種以上の置換基を含み得る。
【００１４】
上記ピレンは、他の発蛍光団、例えば、ＮＢＤ（Ｎ−（７−ニトロベンズ−２−オキサ−１，３−ジアゾル−４−イル））またはＢＯＤＩＰＹ（４，４−ジフルオロ−４−ボラ
−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン）と比べると、極性が低く、消光波長と発光波長との間隔が大きく、水溶液中で機能する能力を有し、細胞中で有利に分配され、蛍光消光せずに膜に組込むことができ、かつＰＨ非依存性蛍光であるという利点を有する。ピレンのさらなる有利な性質は、高濃度でエキシマーを形成し、同時に発光波長を長波長へとシフトすることである。エキシマー形成により、発蛍光団の濃度を評価することができる。
【００１５】
上記式（１）によれば、本発明の化合物は消光物質を含んでいる。消光物質は、蛍光の分野においてそれ自体公知の化合物であり、発蛍光団の蛍光強度を低減するかまたは消光する。そのような消光物質の例としては、１個以上、特に２個のニトロ基で置換されるフェニル残基、例えば、２，４−ジニトロフェニル残基が挙げられる。これらの消光物質は分子内で発蛍光団の蛍光強度を特に有効に低減または消光することができる。
【００１６】
本発明の化合物において、発蛍光団は、リンカーを介してグルセロールのｓｎ−１位の酸素原子に結合される。消光物質も、リンカーを介して、すなわちグリセロールのｓｎ−２位でグリセロールに結合される。そのような場合、リンカーは、それらの大きさ、特に長さに関して、蛍光強度の最適な消光が観察できるように選択される。消光物質とグリセロール残基とを結合するリンカーＬ２は、Ｏ−Ｃ（Ｏ）基のためにＰＬＡ２、特にＰＡＦ−ＡＨにより加水分解可能である。加水分解によってリンカーと共に消光物質が本発明の化合物から切断されるが、そうなると、分子内消光がもはや不可能なので、蛍光強度が増大する。それに対し、発蛍光団とグリセロールとを結合するリンカーＬ１は、ＰＬＡ２、特にＰＡＦ−ＡＨによって切断されてはならない。それどころか、このリンカーは蛍光強度を検出するために代謝的に安定である必要がある。
【００１７】
先に概説したように、リンカーは、エーテル（Ｒ１−ＯＲ２）ｍから誘導され得る。前記Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に選択され、かつ１〜１２個の炭素原子を有する炭化水素から誘導され、ｍは１〜４の整数である。
【００１８】
用語「炭化水素」とは、炭素と水素のみからなる有機化合物を表す。その例としては、アルカン、アルケン、およびアルキンが挙げられる。アルケンとアルキンはいくつかの不飽和結合を有し得る。上記式（１）によれば、上記炭化水素の２個の水素原子は、リンカーとして、またはリンカー中で、それらの機能を果たし得るように置換される。そのような置換は、特に、炭化水素の末端Ｃ原子で達成され得る。
【００１９】
本発明の化合物の好ましい実施形態において、前記Ｒ１およびＲ２は、（ＣＨ２）ｎであり、前記ｎは２〜１２の整数である。Ｌ１は、特に、（ＣＨ２）４−Ｏ−（ＣＨ２）１０を表す。ＣＨ２鎖を含むリンカーは、酵素処理をしても、発蛍光団が本発明の化合物中に留まり、励起されて蛍光を発し得ることを保証する格別な代謝安定性を有するため、特に好ましい。
【００２０】
先に概説したように、リンカーＬ１は、炭化水素Ｒから誘導され得る。Ｒは、（ＣＨ２）ｏであるのが好ましく、前記ｏは１〜２０の整数、特に２〜６である。この種のリンカーは、代謝的に安定であるために、酵素処理中に本発明の化合物から発蛍光団が不要に切断されるのを防止するので特に好ましいことが判明した。
【００２１】
本発明の化合物は、消光物質とグリセロールのｓｎ−２位とを結合させる第２リンカーＬ２を含んでいる。先に概説したように、Ｌ２は、Ｃ（Ｏ）−Ｌ１またはＣ（Ｏ）−Ｌ１−ＮＨであり、Ｌ１は上記定義の通りである。
【００２２】
１つの好ましい実施形態において、Ｌ２は、Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐまたはＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ−ＮＨであり、前記ｐは１〜２０、特に２〜６の整数であり、Ｌ２は特にＣ
（Ｏ）−（ＣＨ２）５−ＮＨを表す。これらのリンカーは、一方では、ＣＨ２鎖が代謝的に安定であるために、この位置での消光物質の不要な切断が回避され、他方では、ＰＬＡ２、特にＰＡＦ−ＡＨのエステル基−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−がこれらの酵素によって意図的かつ選択的に切断されるという理由で特に好適である。
【００２３】
ピレンとグリセロールの１位との結合の１つの利点は、その結合が代謝的に安定であり、これも検査対象サンプル中に存在し得るホスホリパーゼＡ１活性による試験の阻害が認められないことである。
【００２４】
グリセロールのｓｎ−３位にはホスファチジルコリン残基が存在する。これは、本発明の化合物が天然リン脂質の生物物理的挙動を示すことを有利に保証する。
特に好ましい実施形態において、本発明の化合物は下記式（２）の構造を有する。
【化２】
2005511701.tif 000004
【００２５】
本発明のこの式（２）の化合物は、特に容易かつ有利にＰＬＡ２、特にＰＡＦ−ＡＨの活性の測定を可能にする。
【００２６】
本発明の化合物を調製するために、当業者は、合成有機化学において慣用的な反応および方法を用いることができる。例えば、先ず、発蛍光団をリンカーに結合させ、次いで、リンカーの第２末端をグリセロールのｓｎ−１位に導入し得る。次いで、ホスホコリン残基をグリセリールのｓｎ−３位に導入し得るが、その場合、グリセロールのｓｎ−２位のＯＨ基を、保護基、例えば、ベンゾイル基で保護し得る。その後、保護基を慣用の方法で切断し、次いで、第２リンカーを、任意で消光物質と一緒に、挿入し得る。本発明の化合物の調製法を中間工程については詳細に説明することなく上述した。例えば、発蛍光団へのリンカーの挿入は、例えば以下の調製の実施例に記載されているように、いくつかの工程で行なわれ得る。
【００２７】
本発明の化合物中に消光物質が存在することによって、蛍光は分子内で消光される。消光物質を本発明化合物から切断すると、分子内消光が不可能になるために、発蛍光団の蛍光強度の増大が観察される。そのような本発明化合物からの消光物質の切断は、ＰＬＡ２、特にＰＡＦ−ＡＨにより、すなわち、ｓｎ−２位のエステル基の加水分解により行なわれ得る。したがって、本発明の化合物は、ＰＬＡ２、特にＰＡＦ−ＡＨの活性の測定に特に好適である。
【００２８】
そのようなＰＬＡ２、特にＰＡＦ−ＡＨの活性測定法においては、この酵素を含むサンプルを本発明の化合物と一緒にインキュベートし、慣用の方法で蛍光を測定する。そのような場合、出来る限り自然に近い環境で酵素の活性を測定し得るように、インキュベーションは、生理的条件下、例えば、水性媒体、例えば緩衝液中ｐＨ７．４、かつ３７℃下で実施するのが好ましい。蛍光の測定、すなわち、蛍光の増大の測定は、連続的に行なわれ
得る。そのような連続的な測定により、数分から数時間、特に５分から０．５時間という長い時間にわたって、蛍光を連続的に測定することができる。
【００２９】
したがって、本発明の化合物は、酵素ＰＬＡ２、特にＰＡＦ−ＡＨの測定に特に好適である。これらの化合物は、特に効果的、直接的、容易、迅速かつ低コストの測定を可能にする。その上、この活性測定は、連続的に、すなわち、長時間にわたって実施することができので、酵素動力学に関する貴重な情報が得られる。さらに、本発明の化合物を用いると、極めて正確な値が得られ、それによって、特に治療および診断を目的とした信頼し得る提示を行うことができる。
【００３０】
酵素の活性測定は、例えば以下のような多くの用途を有し得る。
・例えば、以下のような場合における、ヒトおよび動物の多種多様な生物学的サンプル（鼻分泌物、精液、肺分泌物（ＢＡＬ）、血液またはその成分、単離細胞集団、生検組織、胆嚢分泌物、腸分泌物、糞便検体を鑑別診断するための診断薬として：
−  他の局所性および全身性炎症症状；
−  アレルギー性および／または免疫性疾患、例えば、花粉アレルギーおよびラテックスアレルギー、糸球体腎炎；
−  中毒発生疾患、例えば、中毒性肺不全（ｔｏｘｉｃ  ｌｕｎｇ  ｆａｉｌｕｒｅ）または中毒症状；
−  冠動脈疾患、例えば、急性冠症候群、狭心症、プリンツメタルアンギナ、心筋梗塞、ならびに、動脈硬化症、急性脳発作；
−  他の症状、例えば、移植、手術、他の侵襲性処置後の症状；
−  上記医学的症候群に関する健康診断関連において；
−  多様な代謝機能、例えば、高脂血症などの不特定症状、酸化ストレス亢進症状の検出；
−  急性炎症性疾患、例えば、敗血症、ＡＲＤＳ（肺不全）、および孤立性器官の炎症、特に創傷治癒障害の診断；
−  慢性炎症症状、例えば、関節リウマチや、リウマチ型の他の疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病の検出；
・以下のような医学的処置の療法モニタリングとして：
−  特に上述の治療適応分野における、あらゆる種類の医学的介入、例えば、組換え酵素を用いた治療、および対応酵素の活性の変化を伴うあらゆるタイプの医学的介入；
−  特に上述の治療適応分野における、侵襲的処置、例えば、炎症原因の除去手術、心肺機能の代替または機械的支持を含む手術、肝臓手術および多様な移植；
−  上記の組み合わせ。
【００３１】
本発明の化合物を用いて、ＰＬＡ２、特にＰＡＦ−ＡＨの活性を測定する方法は多くの利点を有する。例えば、酵素活性は、厄介な処理工程や副反応なしに測定することができる。適当な阻害剤の添加により、種々のヒドロラーゼの混合物中のリン脂質エステルを切断する酵素を選択的に測定することが可能である。本発明の化合物を用いた酵素活性の測定は、マイクロタイタープレートのウエル内で行なわれ得る。さらに、この活性測定はＨＴＳにも適している。連続測定により、ＩＣ５０やＫＩ値などの動力学的データを検出することができる。
【００３２】
以下の実施例は、図１および図２を参照して本発明を説明しているが、本発明はそれらの実施例に限定されるものではない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３３】
実施例１：本発明に従った１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−２−（６−（２，４−ジニトロフェニル）アミノヘキソイル）−ｒａｃ−グリセ
ロ−３−ホスホコリンの調製
【００３４】
ジクロロリン酸（２−ブロモエチルエステル）
【化３】
2005511701.tif 000005
４２．５ｇ（０．２７５ｍｏｌ）の塩化ホスホリルを５０ｍｌのジクロロメタンに溶かした溶液に、１５ｍｌのジクロロメタン中の２７ｇ（０．２１５ｍｏｌ）のブロモエタノールを室温下で１５分かけて滴下した。１５分後、反応溶液に微量のアルゴン流を１８時間通した。オイルポンプ真空（７３〜７４℃、３＊１０−２ミリバール）下で蒸留して、５０．５ｇ（７６％）の無色透明な液体を得た。
Ｍ（Ｃ２Ｈ４７８Ｂｒ３５Ｃｌ２Ｏ２３１Ｐ）＝２３９ｇ／ｍｏｌ
ＥＩ−ＭＳ：  ｍ／ｚ（％）＝２４３（０．５）［Ｍ］，２４１（０．９）［Ｍ］，２３９（０．６）［Ｍ］，１６３（２５），１６１（４１），１４９（１８），１４７（３０），１３７（３６），１３５（５５），１１９（２３），１１７（３４），１０９（６４），１０８（１００），１０７（６９），１０６（１００），９９（１８），４７（２７）．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝４．５９（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｂｒ，３ＪＨＨ＝６．２６Ｈｚ，３ＪＨＰ＝１０．３４Ｈｚ），３．１３（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｏ，３ＪＨＨ＝６．２６Ｈｚ，４ＪＨＰ＝１．０５Ｈｚ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝６９．８８（１  ＣＨ２Ｏ，２ＪＣＰ＝８．３９Ｈｚ），２７．３２（１
ＣＨ２Ｂｒ，３ＪＣＰ＝１０．２９Ｈｚ）．ＩＲ（フィルム）：ｖ（ｃｍ−１）＝３０３３ｗ，２９７１ｗ，２８８３ｗ，１４５３ｍ，１４２３ｍ，１３８５ｗ，１３０６ｓ，１２３３ｍ，１１８０ｍ，１０７１ｓ，１０１６ｓ，９６３ｍ，９０８ｍ，８４５ｗ，７５９ｍ．
【００３５】
４−オキソ−４−（ピレン−１−イル）酪酸
【化４】
2005511701.tif 000006
０．５ｇ（５ｍｍｏｌ）の無水コハク酸を６０ｍｌのニトロベンゾールに溶かした溶液に、１．３２ｇ（５ｍｍｏｌ）の無水ＡｌＣｌ３と１ｇ（５ｍｍｏｌ）のピレンを０℃で加えた。室温下で１８時間反応させた後、この溶液を３０ｍｌの氷塩酸（２５％）上に注ぎ、沈殿物を得た。濾過し、エタノール（ＥｔＯＨ）から再結晶して、１．２３３ｇ（８２％）の４−オキソ−４−（ピレン−１−イル）酪酸を得た。
Ｍ（Ｃ２０Ｈ１４Ｏ３）＝３０２ｇ／ｍｏｌ
ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ（％）＝３０３（１０）［ＭＨ＋］，３０２（４２）［Ｍ］，２３０（１６），２２９（１００），２０２（１１），２０１（６５），２００（２４）．ＨＲ−ＥＩ−ＭＳ（Ｃ２０Ｈ１４Ｏ３）：計算値：３０２．０９４３；実測値：３０２．０９４３．１Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］−ＤＭＳＯ）：δ（ｐｐｍ）＝８．８１−８．１２（９Ｈ，ｍ，ＣＨ芳香族），３．５２（２Ｈ，ｔ，ＣＯＯＨ２，３ＪＨＨ＝６．２２Ｈｚ），２．８２（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２ＣＯ２Ｈ，３ＪＨＨ＝６．２２Ｈｚ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（［Ｄ６］−ＤＭＳＯ）：δ（ｐｐｍ）＝２０３．０５（１  ＣＯ），１７３．８７（１  ＣＯ２Ｈ），１３２．９７−１２３．４１（９  ＣＨ芳香族，７  Ｃ芳香族），３６．８７（
１  ＣＯＣＨ２），２８．５２（１  ＣＨ２ＣＯ２Ｈ）．ＩＲ（ＫＢｒ）：ｖ（ｃｍ−１）＝３４２６ｍ，３０３９ｍ，２９８４ｍ，２９２９ｍ，２６７７ｗ，２５９４ｗ，１６９５ｓ，１６６５ｓ，１５０７ｗ，１４０４ｗ，１２１２ｍ，１１２３ｗ，１０７５ｗ，８４２ｍ，７１３ｗ．
【００３６】
４−（ピレン−１−イル）酪酸
【化５】
2005511701.tif 000007
１ｇ（２．７８ｍｍｏｌ）の４−オキソ−４−（ピレン−１−イル）酪酸を３０ｍｌのジエチレングリコールに溶かし、これに、０．５ｇ（１０ｍｍｏｌ）の水和ヒドラジンおよび０．５６ｇ（１０ｍｍｏｌ）のＫＯＨを加えた。反応溶液を２時間加熱還流し、次いで、氷冷した塩酸（２５％）上に注ぎ、黄色沈殿物を得た。固体を濾過し、ＥｔＯＨから再結晶して、５７０ｍｇ（７１％）の４−（ピレン−１−イル）酪酸を得た。
Ｍ（Ｃ２０Ｈ１６Ｏ２）＝２８８ｇ／ｍｏｌ
ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ（％）＝２８９（１６）［ＭＨ＋］，２８８（６２）［Ｍ］，２１６（２０），２１５（１００），２１３（１１）．ＨＲ−ＥＩ−ＭＳ（Ｃ２０Ｈ１６Ｏ２）：計算値：２８８．１１５０；実測値：２８８．１１５０．１Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］−ＤＭＳＯ）：δ（ｐｐｍ）＝８．５０−７．９２（９Ｈ，ｍ，ＣＨ芳香族），３．３６（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｃ１６Ｈ９），２．４１（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２ＣＯ２Ｈ），２．０４（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２）．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝８．３２−７．８６（９Ｈ，ｍ，ＣＨ芳香族），３．４２（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２Ｃ１６Ｈ９，３ＪＨＨ＝７．５７Ｈｚ），２．５１（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２ＣＯ２Ｈ，３ＪＨＨ＝７．００Ｈｚ），２．２３（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２，３ＪＨＨ＝７．５７Ｈｚ，３ＪＨＨ＝７．００Ｈｚ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（［Ｄ６］−ＤＭＳＯ）：δ（ｐｐｍ）＝１７４．７４（１  ＣＯ），１３６．３９−１２３．３９（９  ＣＨ芳香族，７  Ｃ芳香族），３３．６４−２６．９８（１  ＣＨ２ＣＯ２Ｈ，２ＣＨ２）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝１７７．４８（１
ＣＯ），１３５．２５−１２３．０４（９  ＣＨ芳香族，７  Ｃ芳香族），３３．２１−２６．４６（１  ＣＨ２ＣＯ２Ｈ，２  ＣＨ２）．ＩＲ（ＫＢｒ）：ｖ（ｃｍ−１）＝３４４７ｗ，３０３７ｗ，２９５０ｍ，２９３４ｗ，２８７４ｗ，１６９５ｓ，１４３１ｗ，１２７５ｍ，１２０６ｍ，９１８ｗ，８４６ｓ，７１１ｗ．
【００３７】
４−（ピレン−１−イル）酪酸メチルエステル
【化６】
2005511701.tif 000008
４０ｍｌのメタノールに２０ｍｌ（２６０ｍｍｏｌ）の塩化チオニルを０℃で滴下した。次いで、この溶液を室温下で１時間攪拌した。５．５０ｇ（１９ｍｍｏｌ）の４−（ピレン−１−イル）酪酸を添加した後、調製物を室温下で一晩攪拌した。飽和ＮａＨＣＯ３溶液を加えて反応物を中和し、酢酸エチルエステルで抽出した。分析用に有機相からアリコートを採取した。残りの粗生成物はその後の４−（ピレン−１−イル）ブタン−１−オールの調製に用いた。
Ｍ（Ｃ２１Ｈ１８Ｏ２）＝３０２ｇ／ｍｏｌ
ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ（％）＝３０３（１３）［ＭＨ＋］，３０２（５７）［Ｍ］，２２８（１５），２１６（２２），２１５（１００），２１３（１２），１０８（１３）．ＨＲ−ＥＩ−ＭＳ（Ｃ２１Ｈ１８Ｏ２）：計算値：３０２．１３０７；実測値：３０２．１３０６．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝８．２５−７．７０（９Ｈ，ｍ，ＣＨ芳香族），３．６３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３），２．３６（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２ＣＯ，３ＪＨＨ＝７．２０Ｈｚ），２．１１（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２，３ＪＨＨ＝７．６０Ｈｚ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝１７３．７３（１  ＣＯ），１３５．５１−１２３．１５（９  ＣＨ芳香族，７，Ｃ芳香族），５１．３８（１  ＣＨ３），３３．５２−２６．６４（１  ＣＨ２ＣＯ，２  ＣＨ２）．ＩＲ（ＫＢｒ）：ｖ（ｃｍ−１）＝３０３３ｗ，２９４９ｗ，２８７６ｗ，１７３４ｓ，１４２９ｍ，１２０９ｍ，１１６１ｍ，８４２ｓ．
【００３８】
４−（ピレン−１−イル）ブタン−１−オール
【化７】
2005511701.tif 000009
前工程からの粗生成物を３０ｍｌのＴＨＦに０℃で溶かし、これに、３ｇ（７９ｍｍｏｌ）のＬｉＡｌＨ４を加えた。反応物を室温下で一晩攪拌した。次いで、過剰な還元剤を加水分解した。カラムクロマトグラフィーにかけて、４．６ｇ（９２％、２ステップ）の所望の化合物を得た。
Ｍ（Ｃ２０Ｈ１８Ｏ）＝２７４ｇ／ｍｏｌ
ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ（％）＝２７５（１０）［ＭＨ＋］，２７４（５３）［Ｍ］，２１６（１７），２１５（１００）．ＨＲ−ＥＩ−ＭＳ（Ｃ２０Ｈ１８Ｏ）：計算値：２７４．１３５８；実測値：２７４．１３５７．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝８．２３−７．７９（９Ｈ，ｍ，ＣＨ芳香族），３．６４（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２Ｏ，３ＪＨＨ＝６．３９Ｈｚ），３．３１（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２Ｃ１６Ｈ９，３ＪＨＨ＝７．６０Ｈｚ），１．８７（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２，３ＪＨＨ＝７．７０Ｈｚ，３ＪＨＨ＝７．６０Ｈｚ），１．６９（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２，３ＪＨＨ＝７．７０Ｈｚ、３ＪＨＨ＝６．３９Ｈｚ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝１３６．６５−１２３．３５（９  ＣＨ芳香族，７  Ｃ芳香族），６２．７７（１  ＣＨ２Ｏ），３３．１７−２７．９３（３  ＣＨ２）．ＩＲ（ＫＢｒ）：ｖ〜（ｃｍ−１）＝３４２３ｓ，幅広，３０３８ｍ，２９２７ｍ，２８５９ｍ，１１８１ｗ，１０３０ｗ，９８２ｗ，８４１ｓ．
【００３９】
１−［４−（１０−ブロモデシルオキシ）ブチル］ピレン
【化８】
2005511701.tif 000010
２ｇ（７．３ｍｍｏｌ）の４−（ピレン−１−イル）ブタン−１−オールを１ｇ（９ｍｍｏｌ）のカリウム−ｔ−ブチレートを含む５０ｍｌのトルエン中で１００℃で１時間加熱した。次いで、２．２２ｇ（７．４ｍｍｏｌ）の１，１０−ジブロモデカンを加え、さらに１６時間加熱した。カラムクロマトグラフィーにかけて、２．８２ｇ（７９％）の薄
黄色固体を得た。
Ｍ（Ｃ３０Ｈ３７Ｏ７８Ｂｒ）＝４９２ｇ／ｍｏｌ
ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ（％）＝４９５（１０）［ＭＨ＋］，４９４（３１）［Ｍ］，４９３（１０）［ＭＨ＋］，４９２（３３）［Ｍ］，４１２（１３），２２８（２２），２１５（１００），５５（１８），４１（１３）．ＨＲ−ＥＩ−ＭＳ（Ｃ３０Ｈ３７Ｏ７８Ｂｒ）：計算値：４９２．２０２８；実測値：４９２．２０２８．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝８．３０−７．８５（９Ｈ，ｍ，ＣＨ芳香族），３．４９−３．４５（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２Ｂｒ，３ＪＨＨ＝６．４４Ｈｚ），３．４１−３．３４（６Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｃ１６Ｈ９，２  ＣＨ２Ｏ，３ＪＨＨ＝７．０８Ｈｚ，３ＪＨＨ＝６．８１Ｈｚ），１．９６−１．９０（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２，３ＪＨＨ＝７．０８Ｈｚ，３ＪＨＨ＝６．４４Ｈｚ），１．８３−１．７３（４Ｈ，ｍ，２  ＣＨ２，３ＪＨＨ＝６．８１Ｈｚ），１．５５−１．５３（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．２５（１２Ｈ，ｍ，６  ＣＨ２）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝１３６．７２−１２３．３０（９  ＣＨ芳香族，７  Ｃ芳香族），７０．９３−７０．５５（２  ＣＨ２Ｏ），３３．９４−２６．１５（１  ＣＨ２Ｂｒ，１１  ＣＨ２）．ＩＲ（ＫＢｒ）：ｖ〜（ｃｍ−１）＝３０３７ｗ，２９２４ｓ，２８５１ｓ，１４９９ｍ，１４４８ｍ，１４２９ｗ，１３６９ｗ，１２４３ｗ，１１８４ｗ，１１１７ｓ，１０６３ｗ，９６５ｗ，８４９ｍ，８４１ｓ，７１０ｓ．
【００４０】
２，２−ジメチル−４−［１０−Ｏ−（４−（ピレン−１−イル）ブトキシ）デシル］メチル］−［１，３］−ジオキソラン
【化９】
2005511701.tif 000011
１．８５ｇ（１４ｍｍｏｌ）の２，２−ジメチル−４−ヒドロキシメチルー１，３−ジオキソランを１．６ｇ（１４ｍｍｏｌ）のカリウム−ｔ−ブチレートを含む８０ｍｌのトルエン中で１時間加熱還流した。室温に冷ました後、２．１１８ｇ（４．３ｍｍｏｌ）の１−［４−（１０−ブロモデシルオキシ）ブチル］ピレンを加え、さらに１８時間加熱した。カラムクロマトグラフィーにかけて、１．１７４ｇ（５０％）の薄黄色固体を得た。Ｍ（Ｃ３６Ｈ４８Ｏ）＝５４４ｇ／ｍｏｌ
ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ（％）＝５４５（２２）［ＭＨ＋］，５４４（６２）［Ｍ］，２５７（２２），２１５（１００），１０１（１８），５５（１１），４３（１４）．ＨＲ−ＥＩ−ＭＳ（Ｃ３６Ｈ４８Ｏ４）：計算値：５４４．３５５３；実測値：５４４．３５５３．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝８．２９−７．８３（９Ｈ，ｍ，ＣＨ芳香族），４．２６−４．２１（２Ｈ，ｍ，ＣＨＣＨ２Ｏ），４．０７−４．００（１Ｈ，ｍ，ＣＨＯ），３．７５−３．３１（１０Ｈ，ｍ，４  ＯＣＨ２，ＣＨ２Ｃ１６Ｈ９），１．９５−１．８６（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．７８−１．７２（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．５５−１．５３（４Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．４１および１．３５（６Ｈ，ｓ，２  ＣＨ３），１．２６（１２Ｈ，ｍ，６ＣＨ２）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝１３６．９２−１２３．４８（９  ＣＨ芳香族，７  Ｃ芳香族），１０９．３３（１  Ｃ（ＣＨ３）２），７４．７７（１  ＣＨＯ），７１．８５−７０．６４（４  ＣＨ２Ｏ），６６．９４（１  ＣＨ２Ｏ），３３．３３−２５．８９（１１  ＣＨ２），２６．７７および２５．４３（２  ＣＨ３）．ＩＲ（ＫＢｒ）：ｖ〜（ｃｍ−１）＝３０５９ｍ，２９５２ｓ，２８９０ｍ，２８６６ｓ，１５２４ｗ，１４６７ｍ，１３６９ｗ，１２８９ｍ，１１１２１ｍ，１０５８ｍ，８３７ｗ，６８４ｓ．
【００４１】
１−Ｏ−｛１−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−ｒａｃ−グリセロール
【化１０】
2005511701.tif 000012
１ｍｌのトリフルオロ酢酸を１０ｍｌのトルエン中の０．１８３ｇ（０．３３６ｍｍｏｌ）の２，２−ジメチル−４−［１０−Ｏ−（４−（ピレン−１−イル）ブトキシ）デシル）メチル］−［１，３］−ジオキソランに０℃で加え、１時間攪拌した。ＮａＨＣＯ３水溶液を加えて中和した後、カラムクロマトグラフィーにかけて、０．１６０ｇ（９４％）の薄黄色固体を得た。
Ｍ（Ｃ３３Ｈ４４Ｏ４）＝５０４ｇ／ｍｏｌ
ＥＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ（％）＝５０５（３２）［ＭＨ＋］，５０４（１００）［Ｍ］，２５７（１７），２２８（２１），２１６（１９），２１５（８９），５５（１４）．ＨＲ−ＥＩ−ＭＳ（Ｃ３３Ｈ４４Ｏ４）：計算値：５０４．３２４０；実測値：５０４．３２３８．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝８．２９−７．８３（９Ｈ，ｍ，ＣＨ芳香族），３．８７−３．５９（３Ｈ，ｍ，ＣＨＯＨ，ＣＨ２ＯＨ），３．４７−３．３１（１０Ｈ，ｍ，４  ＯＣＨ２，ＣＨ２Ｃ１６Ｈ９），１．９４−１．８９（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．７７−１．７２（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．５４−１．５１（４Ｈ，ｍ，２  ＣＨ２），１．２４（１２Ｈ，ｍ，６  ＣＨ２）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝１３６．９４−１２３．４８（９  ＣＨ芳香族，７  Ｃ芳香族），７２．０３−７０．６５（４  ＣＨ２Ｏ），７０．５０（１  ＣＨＯＨ），６３．８１（１  ＣＨ２ＯＨ），３３．３１−２５．９７（１１  ＣＨ２）．ＩＲ（ＫＢｒ）：ｖ〜（ｃｍ−１）＝３４１９ｓ，幅広，３０５８ｗ，２９３２ｍ，２８５１ｍ，１４３７ｍ，１４３３ｍ，１２６５ｍ，１２０５ｍ，１１８６ｍ，１１３８ｍ，１１１２ｍ，１０４８ｍ，８４３ｍ．
【００４２】
１−Ｏ−｛１−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−３−Ｏ−トリフェニルメチル−ｒａｃ−グリセロール
【化１１】
2005511701.tif 000013
５０ｍｌのアセトニトリル中４．２１５ｇ（８．４ｍｍｏｌ）の１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−ｒａｃ−グルセロールを調製し、これに、２０ｍｌのアセトニトリル中４．０９ｇ（１０ｍｍｏｌ）の１−（トリフェニルメチル）ピリジニウムテトラフルオロボレーとを加えた。溶液を１８時間攪拌し、濃縮して、クロロホルムで抽出した。固体を濾去した。濾液をカラムクロマトグラフィーにかけて、３．６９７ｇ（５９％）の薄黄色固体として所望の化合物を得た。
Ｍ（Ｃ５２Ｈ５８Ｏ４）＝７４６ｇ／ｍｏｌ
ＦＡＢ−ＭＳ（ＦＡＢ＋，ＮＢＡ）：ｍ／ｚ＝７４６．４［Ｍ］，５０４．３，２４４．
１，２１５．１．ＨＲ−ＦＡＢ（Ｃ５２Ｈ５８Ｏ４）：計算値：７４６．４３３５；実測値：７４６．４３７５．ＨＲ−ＦＡＢ（Ｃ５２Ｈ５８Ｏ４Ｎａ）：計算値：７６９，４２３３；実測値：７６９．４３０４．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝８．３１−７．８５（９Ｈ，ｍ，ＣＨ芳香族），７．４５−７．１９（１５Ｈ，ｍ，ＣＨ芳香族），３．９５（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），３．５５−３．３３（１０Ｈ，ｍ，４  ＯＣＨ２，ＣＨ２Ｃ１６Ｈ９），３．２４−３．１８（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２ＯＣ（Ｃ６Ｈ５）３），１．９７−１．８７（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．８１−１．７３（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．５５−１．５１（４Ｈ，ｍ，２  ＣＨ２），１．２５（１２Ｈ，ｍ，６  ＣＨ２）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝１４６．９０−１２３．５１（２４  ＣＨ芳香族，１０  Ｃ芳香族），８６．６５（１  Ｃ（Ｃ６Ｈ５）３），７２．９５−７０．６７（４  ＣＨ２Ｏ），６９．８７（１  ＣＨ），６４．６５（１  ＣＨ２ＯＣ（Ｃ６Ｈ５）３），３３．３５−２６．９７（１１  ＣＨ２）．ＩＲ（ＫＢｒ）：ｖ〜（ｃｍ−１）＝３４２９ｍ，３０５６ｗ，２９２７ｓ，２８５５ｓ，１６０２ｗ，１４９０ｍ，１４４８ｍ，１３１９ｗ，１２１３ｍ，１１１３ｍ，１０７７ｍ，１０３３ｍ，８９９ｗ，８４６ｍ，７４６ｍ，７０６ｓ．
【００４３】
１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−２−Ｏ−ベンゾイル−３−Ｏ−トリフェニルメチル−ｒａｃ−グリセロール
【化１２】
2005511701.tif 000014
２．５７８ｇ（３．４５５ｍｍｏｌ）の１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−３−Ｏ−トリフェニルメチル−ｒａｃ−グリセロールおよび１．５ｍｌ（１８．６６ｍｍｏｌ）のピリジンを５０ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２に溶かした溶液に、５４０ｍｇ（３．８５７ｍｍｏｌ）の塩化ベンゾイルを０℃で滴下し、室温下で１時間攪拌した。カラムクロマトグラフィーにかけて、２．８ｇ（９５％）の生成物を単離した。
Ｍ（Ｃ５９Ｈ６２Ｏ５）＝８５０ｇ／ｍｏｌ
ＦＡＢ−ＭＳ（ＦＡＢ＋，ＮＢＡ）：ｍ／ｚ＝８７３．４［Ｍ＋Ｎａ］，８５０．４［Ｍ］，６０８．３，５９１．３，３９１．３，３０７．１，２４３．１，２１５．１．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝８．３０−７．８６（９Ｈ，ｍ，ＣＨ芳香族），７．４５−７．２１（２０Ｈ，ｍ，ＣＨ芳香族），５．４６−５．４１（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），３．７９−３．３４（１２Ｈ，ｍ，４  ＯＣＨ２Ｏ，ＣＨ２Ｃ１６Ｈ９，ＣＨ２ＯＣ（Ｃ６Ｈ５）３），１．９７−１．８９（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．８０−１．７２（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．５５−１．５１（４Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．２５（１２Ｈ，ｍ，ＣＨ２）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝１６６．００（１  ＣＯ），１４６．８８−１２３．５１（２９  ＣＨ芳香族，１１  Ｃ芳香族），８６．４７（１
Ｃ（Ｃ６Ｈ５）３），７２．６５（１  ＣＨ），７１．５９−６９．４７（４  ＣＨ２Ｏ），６２．８６（１  ＣＨ２ＯＣ（Ｃ６Ｈ５）３），３３．３５−２６．０１（１１  ＣＨ２）．ＩＲ（ＫＢｒ）：ｖ〜（ｃｍ−１）＝３０５７ｗ，２９２７ｓ，２８５４ｍ，１７１８ｓ，１４４８ｍ，１３８４ｍ，１２７２ｍ，１２１２ｗ，１１７７ｗ，１１５８ｗ，１１１２ｍ，１０３２ｗ，８９９ｗ，８４６ｍ，７６３ｍ，７０３ｍ．
【００４４】
１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−２−Ｏ−ベンゾイル−ｒａｃ−グリセロール
【化１３】
2005511701.tif 000015
０．５５ｇ（０．６４７ｍｍｏｌ）の１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−２−Ｏ−ベンゾイル−３−Ｏ−トリフェニルメチル−ｒａｃ−グリセロールを２０ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２に溶かし、これに、０．５ｍｌのＢＦ３（ＭｅＯＨ中１３％）を−１０℃で滴下した。１時間後、５ｍｌの氷冷水を加えて反応を停止させた。カラムクロマトグラフィーにかけて、２８０ｍｇ（７１％）の化合物を得た。
Ｍ（Ｃ４０Ｈ４８Ｏ５）＝６０８ｇ／ｍｏｌ
ＦＡＢ−ＭＳ（ＦＡＢ＋，ＮＢＡ）：ｍ／ｚ＝６０８．３［Ｍ］，５９１．３，４６９．３，３２９．１，２５７．２，２１５．１．ＨＲ−ＦＡＢ（Ｃ４０Ｈ４８Ｏ５）：計算値：６０８．３５０２；実測値：６０８．３５１９．ＨＲ−ＦＡＢ（Ｃ４０Ｈ３８Ｏ５Ｎａ）：計算値：６３１．３３９９；実測値：６３１．３４２４．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝８．２９−７．８４（９Ｈ，ｍ，ＣＨ芳香族），７．６２−７．３４（５Ｈ，ｍ，ＣＨ芳香族），５．２７−５．２２（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），３．９９−３．３４（１２Ｈ，ｍ，４  ＣＨ２Ｏ，ＣＨ２Ｃ１６Ｈ９，ＣＨ２ＯＨ），１．９７−１．８８（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．８０−１．７２（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．５７−１．５１（４Ｈ，ｍ，２  ＣＨ２），１．２５（１２Ｈ，ｍ，６  ＣＨ２）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝１６６．３８（１  ＣＯ），１３６．９４−１２３．５１（１４  ＣＨ芳香族，８  Ｃ芳香族），７３．８１（１  ＣＨ），７１．９４−６８．９５（４  ＣＨ２Ｏ），６２．８７（１  ＣＨ２ＯＨ），３３．８０−２６．１９（１１  ＣＨ２）．ＩＲ（ＫＢｒ）：ｖ〜（ｃｍ−１）＝３４３１ｍ，３０３８ｍ，２９３０ｓ，２８５９ｍ，１７１８ｓ，１６０３ｍ，１５８５ｍ，１４５３ｍ，１４３５ｍ，１３１７ｍ，１２７４ｓ，１１７９ｍ，１１１３ｍ，１０２７ｍ，９３６ｍ，８４６ｍ，７０９ｓ．
【００４５】
１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−２−Ｏ−ベンゾイル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリン
【化１４】
2005511701.tif 000016
０．５５ｇ（２．３ｍｍｏｌ）の２−ブロモエチル−ジクロロホスフェートを１５ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２に０℃で加え、これに、１．６ｍｌのピリジンと４ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２との混合物を滴下した。次いで、２１０ｍｇ（３．４５ｍｍｏｌ）の１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−２−Ｏ−ベンゾイル−ｒａｃ−グリセロールを２ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２に溶かし、この溶液を室温下でリン酸化混合物に滴下した。反応物を２時間加熱還流し、室温下で一晩攪拌した。５ｍの氷冷水で加水分解（その後１時間攪拌）した後、反応物をＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（３：２）と共に振盪した。有機相をＮ
ａ２ＳＯ４で脱水し、１５ｍｌのＣＨＣｌ３、１０ｍｌのアセトニトリルおよび５ｍｌのイソプロパノール中で回転させて溶かした。次いで、１．５ｇのトリメチルアミン溶液（エタノール中３３％）を加えた。反応フラスコを緊密に密閉し、５０℃で一晩攪拌した。反応溶液を回転させ、５ｍｌのＣＨＣｌ３で抽出し、それぞれ４ｍｌのギ酸／ＭｅＯＨ（５：７）、４ｍｌの酢酸ナトリウム（０．１Ｍ）／ＭｅＯＨ（５：７）および３ｍｌの塩化ナトリウム（１Ｍ）／ＭｅＯＨ（５：７）の各々を２回ずつ振盪した。ＮａＳＯ４で脱水し、有機相をカラムクロマトグラフィーにかけて、９９ｍｇ（３８％）の所望の化合物を得た。
Ｍ（Ｃ４５Ｈ６０Ｎ２Ｏ８３１Ｐ）＝７７３ｇ／ｍｏｌ
ＦＡＢ−ＭＳ（ＦＡＢ＋，ＮＢＡ）：ｍ／ｚ＝７９６．３［Ｍ＋Ｎａ］，７７４．４［ＭＨ＋］，６０１．５，５６９．４，５３１．４，４１３．３，２１５．１．ＨＲ−ＦＡＢ（Ｃ４５Ｈ６１Ｏ８ＮＰ）：計算値：７７４．４１４５；実測値：７７４．４１３５．ＨＲ−ＦＡＢ（Ｃ４５Ｈ６０Ｏ８ＮＰＮａ）：計算値：７９６．３９５４；実測値：７９６．３９５１．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）＝８．３４−７．８９（９Ｈ，ｍ，ＣＨ芳香族），７．７３−７．４５（５Ｈ，ｍ，ＣＨ芳香族），５．４１−５．３７（１ＣＨ，ｍ，ＣＨ），４．２０−４．１７（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｎ），４．０５−３．３５（１４Ｈ，ｍ，４  ＯＣＨ２，ＣＨ２ＯＰ，ＰＯＣＨ２，ＣＨ２Ｃ１６Ｈ９），３．１６（９Ｈ，ｓ，３  ＣＨ３），１．９６−１．９０（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．８１−１．７２（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．５２−１．４８（４Ｈ，ｍ，２  ＣＨ２），１．２８（１２Ｈ，ｍ，６  ＣＨ２）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）＝１６７．７８（１  ＣＯ），１３８．３０−１２４．６０（１４  ＣＨ芳香族，８  Ｃ芳香族），７４．２７（１  ＣＨ），７２．８１−７０．４８（４  ＣＨ２Ｏ），６８．８７，６６．９０，６０．９５（１  ＣＨ２Ｎ，１  ＣＨ２ＯＰ，１  ＰＯＣＨ２），５４．９０（３  ＣＨ３），３４．３８−２７．２９（１１  ＣＨ２）．
【００４６】
１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリン
【化１５】
2005511701.tif 000017
９０ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ）の１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−２−Ｏ−ベンゾイル−ｒａｃ−グリセロ―３−ホスホコリンを３ｍｌのＭｅＯＨに溶かし、これに、ＭｅＯＨ（１．２５当量）中０．１ＭのＢｕ４ＮＯＨ溶液を１．５ｍｌ加えた。２時間後、反応溶液を濃縮した。カラムクロマトグラフィーにかけて、７１ｍｇ（９０％）のリソ化合物を得た。
Ｍ（Ｃ３８Ｈ５６ＮＯ７３１Ｐ）＝６６９ｇ／ｍｏｌ
ＦＡＢ−ＭＳ（ＦＡＢ＋，ＮＢＡ）：ｍ／ｚ＝６９２．３［Ｍ＋Ｎａ］，６７０．４［ＭＨ＋］，６６９．４［Ｍ］，５８４．３，２４２．３，２８９．１，２１５．１．ＨＲ−ＦＡＢ（Ｃ３８Ｈ５７ＮＯ７３１Ｐ）：計算値：６７０．３８７３；実測値：６７０．３８８１．ＨＲ−ＦＡＢ（Ｃ３８Ｈ５６ＮＯ７３１ＰＮａ）：計算値：６９２．３６９２；実測値：６９２．３６９３．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）＝８．２３−７．８８（９Ｈ，ｍ，ＣＨ芳香族），４．４３−４．３８（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｎ），４．０
２−３．３６（１５Ｈ，ｍ，４  ＯＣＨ２，ＯＣＨ，ＣＨ２ＯＰ，ＰＯＣＨ２，ＣＨ２Ｃ１６Ｈ９），３．２２（９Ｈ，ｓ，３  ＣＨ３），１．９６−１．８７（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．７７−１．６６（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．５５−１．４７（４Ｈ，ｍ，２  ＣＨ２），１．２７（１２Ｈ，ｍ，６  ＣＨ２）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝１７０．４６（１  ＣＯ），１３８．１６−１２４．４８（９  ＣＨ芳香族，７  Ｃ芳香族），７２．９０−７１．４７（４  ＣＨ２Ｏ），７１．０３（１  ＣＨ），６７．３１，６６．６３，５９．３３（１  ＣＨ２ＯＰ，１  ＣＨ２Ｎ，１  ＰＯＣＨ２），５４．７８（３  ＣＨ３），３３．３６−２４．５９（１０  ＣＨ２）．ＩＲ（ＢＫｒ）：ｖ〜（ｃｍ−１）＝３４１８ｓ，３０３９ｍ，２８５２ｍ，１６３５ｍ，１４９０ｍ，１４６７ｍ，１３７５ｗ，１２３０ｍ，１１１１ｍ，１０８７ｍ，１０５１ｍ，９７０ｍ，９２８ｗ，８５０ｍ．
【００４７】
１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−２−（６−（２，４−ジニトロフェニル）アミノヘキソイル）−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリン
【化１６】
2005511701.tif 000018
０．３２６ｇ（１．１ｍｍｏ）の６−（２，４−ジニトロフェニルアミノ）ヘキサン酸、１３６ｍｇ（０．８６ｍｍｏｌ）のＤＣＣおよび４０８ｍｇ（３．２ｍｍｏｌ）のＤＭＡＰを、１０ｍｌのジクロロメタン中の０．１５０ｇ（０．２２ｍｍｏｌ）の１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリンに加え、室温下で４０時間攪拌した。次いで、得られた懸濁液に５ｍｌの水を加え、珪藻土で濾過した。相を分離した後、クロマトグラフィーにかけて、５６ｍｇ（２６％）の生成物を単離した。
Ｍ（Ｃ５０Ｈ６９Ｎ４Ｏ１２３１Ｐ）＝９４８ｇ／ｍｏｌ
ＦＡＢ−ＭＳ（ＦＡＢ＋，ＮＢＡ）：ｍ／ｚ＝９７１．４［Ｍ＋Ｎａ］，９４９．４［ＭＨ＋］，８８４．４，８６２．４，７２１．４，２４３．２，２１５．１．ＨＲ−ＦＡＢ（Ｃ５０Ｈ７０Ｏ１２Ｎ４Ｐ）：計算値：９４９．４７２５；実測値：９４９．４７５５．ＨＲ−ＦＡＢ（Ｃ５０Ｈ６９Ｏ１２Ｎ４ＰＮａ）：計算値：９７１．４５４５；実測値：９７１．４５４７．１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝９．００−６．６７（１２Ｈ，ｍ，ＣＨ芳香族），５．１３−５．１０（１Ｈ，ｍ，ＣＨ），４．３４−４．２８（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｎ），４．０８−３．２３（１６Ｈ，ｍ，４  ＯＣＨ２，ＰＯＣＨ２，ＣＨ２ＯＰ，ＣＨ２Ｎ，ＣＨ２Ｃ１６Ｈ９），３．１８（９Ｈ，ｓ，３  ＣＨ３），２．３８−２，３１（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２ＣＯ），１．９５−１．８６（４Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．８０−１．７２（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．５６−１．４１（８Ｈ，ｍ，４  ＣＨ２），１．２５（１２Ｈ，ｍ，６  ＣＨ２）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）＝１７０．４６（１  ＣＯ），１４８．６６−１１３．９８（１２  ＣＨ芳香族，１０  Ｃ芳香族），７３．８６（１  ＣＨ），７２．８１−６９．１２（４  ＣＨ２Ｏ），６７．３１，６６．６３，６０．３０（１  ＣＨ２ＯＰ，１  ＣＨ２Ｎ，１  ＰＯＣＨ２），５４．７８（３  ＣＨ３），４３．２７（１  ＣＨ２Ｎ），３３．３６−２４．５９（１  ＣＨ２ＣＯ，１４  ＣＨ２）．ＩＲ（ＢＫｒ）：ｖ〜（ｃｍ−１）＝３３６５ｍ，３１０７ｗ，３０４２ｗ，２９２８ｍ，２８５３ｍ，１７２９ｍ，１６２３ｓ，１５
８９ｍ，１５２５ｍ，１５００ｗ，１４７５ｗ，１４２５ｍ，１３６９ｗ，１３３７ｓ，１３１２ｍ，１２８０ｍ，１２４５ｍ，１１８７ｍ，１１４４ｍ，１０９４ｍ，１０６０ｗ，１０３２ｗ，９２３ｗ，８３２ｗ，７４５ｗ．
実施例２：本発明の１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−２−（６−（２，４−ジニトロフェニル）アミノヘキソイル）−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリンを用いたＰＡＦ−ＡＨ活性の測定
検査用に、実施例１の本発明化合物の１０ｍＭ  ＤＭＳＯストック溶液を調製し、次いで、使用緩衝液（０．１Ｍ  トリス塩酸（ＴＲＩＳ  ＨＣｌ）、０．１％  Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、ｐＨ７．４）で、それぞれ各試験に望ましい濃度に希釈した。
【００４８】
（石英キュベットでの測定）
ヘルマ社（Ｈｅｌｍａ）〔独国ミュルハイム（Ｍｕｌｌｈｅｉｍ）／バーデン（Ｂａｄｅｎ）所在〕の１ｍｌ容量石英キュベット（１ｃｍ×１ｃｍ）を使用する。
【００４９】
バリアン社（Ｖａｒｉａｎ）〔独国ダルムシュタット（Ｄａｒｍｓｔａｄｔ）所在〕のケーリー・エクリプス（Ｃａｒｙ  Ｅｃｌｉｐｓｅ）ソフトウエアの設定：
・  動力学モジュールにおいて：励起波長（ｎｍ）＝３４４．００；蛍光波長（ｎｍ）＝３７７．００；励起スリット（ｎｍ）＝５；蛍光スリット（ｎｍ）＝５；平均化時間（ｓ）＝０．１０００；滞留時間（ｓ）＝０．１０００；サイクル時間（分）＝０．２５００；励起フィルター＝自動；蛍光フィルター＝オープン；マルチセルホルダー＝マルチセル；ＰＭＴ電圧（Ｖ）＝中；温度制御。
【００５０】
検査は、４方向ペルチェ（Ｐｅｌｔｉｅｒ）キュベットホルダーを用い、３７℃で実施した。
（マイクロタイタープレートでの測定）
パーキンエルマー社（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）〔独国ユーバリンゲン（Ｕｂｅｒｌｉｎｇｅｎ）所在〕の白色９６ウエルタイタープレートおよびグライナー社（Ｇｒｅｉｎｅｒ）〔独国フリケンハウゼン（Ｆｒｉｋｅｎｈａｕｓｅｎ）所在〕の黒色９６ウエルＦＩＡプレートを用いた。
【００５１】
バリアン社（独国ダルムシュタット所在）のケーリー・エクリプス（Ｃａｒｙ  Ｅｃｌｉｐｓｅ）ソフトウエアの設定：
・  動力学モジュールにおいて：励起波長（ｎｍ）＝３４４．００；蛍光波長（ｎｍ）＝３７７．００；励起スリット（ｎｍ）＝５；蛍光スリット（ｎｍ）＝５；平均化時間（ｓ）＝０．１０００；サイクル時間（分）＝０．００００；励起フィルター＝自動；蛍光フィルター＝オープン；ＰＭＴ電圧（Ｖ）＝中；ウエルプレート＝ＯＮ；読取位置＝ウエル中心。
【００５２】
（ＰＡＦ−ＡＨの調製）
（血漿およびヒトＬＤＬの調製および純度検査）
使用緩衝液：ＰＢＳ緩衝液（１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、４０ｍＭ  リン酸、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ＝７．４）。この緩衝液を１５分間アルゴンで飽和した。
【００５３】
（血漿の調製）
３，０００ｒｐｍのヘルムレ（Ｈｅｒｍｌｅ）遠心分離機を用いて、１００ｍｌの採取したてのヘパリン添加血液を２×５０ｍｌ管中室温下で遠心した。各上清から２０ｍｌを取ってプールし、これに、４００μｌの０．１Ｍ  ＥＤＴＡ溶液（ｐＨ＝７．４５）を加え、アルゴン雰囲気とした（mit Argon ueberschichtet) 。
【００５４】
（ＬＤＬの調製）
３２ｍｌの血漿サンプルに１２．２１１２ｇのＫＢｒ  ｐ．ａ．を加え、アルゴン雰囲気とした。ＫＢｒを低速振動により溶解させた。ベックマン社（Ｂｅｃｋｍａｎ）〔独国ミュンヒェン（Ｍｕｎｉｃｈ）所在〕の６×４ｍｌ遠心分離管中で２ｍｌのＰＢＳ溶液を調製し、ＫＢｒを添加した血漿サンプルを加えて層を形成した。次いで、これを、４℃、真空下３７，０００ｒｐｍで２時間遠心した。この後、ロータから遠心分離管を慎重に抜出した。所望のＬＤＬは、遠心分離管の底から約１／３離れた位置の黄色帯域として区別可能である。先ず、上部の白色層を取り出して廃棄した。黄色層は厚さ約１ｍｍである。この層を、先の丸い曲った針を用いて取り出した。全６本の遠心分離管中に含まれていたＬＤＬをプールし、アルゴン雰囲気にした。ＫＢｒを除去するために、得られた溶液のうち３００μｌを、ＰＢＳ緩衝液を用いるセファデックス−Ｇ２５ミニカラムを用いて色層分析にかけた。
【００５５】
（タンパク質測定）
溶液Ａ：１％  Ｎａ２ＢＣＡ、２％  Ｎａ２ＣＯ３Ｈ２Ｏ、０．１６％  酒石酸ナトリウム、０．４％  ＮａＯＨ、０．９５％  ＮａＨＣＯ３、ｐＨ＝１１．２５
溶液Ｂ：４％  ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ
標準としてＢＳＡを用いた。すべての測定は２重測定として実施した。１種の調製物の総量は３００μｌ／ウエルで、たいてい２．５μｌの測定サンプル（場合により希釈後）を用いた。これを水で７５μｌまで満たし、これに、２２５μｌの溶液Ａと溶液Ｂの５０：１混合物を加えた。インキュベーション時間は室温下で２時間であった。次いで、サンプルを５６２ｎｍで光度測定した。
【００５６】
（単離ＬＤＬの純度検査）
検査はサブマリン型ミニゲル電気泳動を用いて実施した。
・  ゲル組成：２０ｍｌのバルビタール緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ＝８．６）、０．３％  Ｓｅｐａｒｉｄｅ（商標）（６０ｍｇ）
・  単離ＬＤＬの調製：１０μｌ（０．５〜１μｇ）の円柱状ＬＤＬ、０．５μｌの９−ジエチルアミノ−５Ｈ［α］フェノキサゼン−５−オン（ナイルレッド）（０．４ｍｇ／ｍｌ）、１０μｌの使用緩衝液（ＴＢＥ緩衝液、３０％  グリセロール、１％  ＳＤＳ、ブロムフェノールブルーのスパチュラチップ）
・  ＴＢＥ緩衝液（８９ｍＭ  トリス塩酸、８９ｍＭ  Ｂ（ＯＨ）３、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ＝８．５）
・  電気泳動時間：室温下で（５６Ｖの一定Ｕで）１時間
・  固定液：２５％  ｉＰｒＯＨ、１０％  酢酸、６５％  水
・  染色液：５０％  ＭｅＯＨ、１０％  酢酸、４０％  水、０．０５％  クーマシーブリリアントブルー  Ｒ２５０
・  脱色液：５％  ＭｅＯＨ、７％  酢酸、８８％  水
（ＬＤＬからのＰＡＦ−ＡＨの単離）
緩衝液Ａ：２５ｍＭ  トリス塩酸、０．１％  Ｔｗｅｅｎ２０、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．６
緩衝液Ｂ：２５ｍＭ  トリス塩酸、０．１％  Ｔｗｅｅｎ２０、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、５０〜２００ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．６（線形勾配）
すべての作業は４℃で実施した。
【００５７】
１ｍｌ（２ｍｇ／ｍｌ）のＬＤＬを、アマーシャム・ファルマシアバイオテク社（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ）〔独国フライブルグ（Ｆｒｅｉｂｕｒｇ）所在〕の予備平衡（緩衝液Ａ）ＤＥＡＥ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）ＦＦクロマトグラフィーカラム上にピペットで移し、６倍カラム充填量で洗浄して、タンパク質を含まない溶離液を得た。次いで、緩衝液Ｂでタンパク質を溶出させた。１００−１５０ｍＭ  ＮａＣｌ留分で最高のＰＡＦ−ＡＨ活性を得た。これらをプールし、限外ろ過（
Ａｍｉｃｏｎ  ＹＭ３０）で濃縮した。次いで、濃縮留分を、アマーシャム・ファルマシアバイオテク社（独国フライブルグ所在）の予備平衡（緩衝液Ａ）Ｂｌｕｅ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅョ   ６ＦＦクロマトグラフィーカラムにピペットで移し、６倍カラム充填量で
洗浄して、タンパク質を含まない溶離液を得た。次いで、緩衝液Ａ＋０．５Ｍ  ＮａＣｌでタンパク質を溶出させた。最高のＰＡＦ−ＡＨ活性を有する留分をプールし、限外ろ過（Ａｍｉｃｏｎ  ＹＭ３０）して濃縮した。
【００５８】
ＰＡＦ−ＡＨの含有量をタンパク質測定により測定した。純度をＬＤＬのＳＤＳ電気泳動と類似の方法で調べた。得られたＰＡＦ−ＡＨは活性を調べるのに十分な純度を有していた。
【００５９】
図１は、本発明の１−Ｏ−｛１０−［４−（ピレン−１−イル）ブトキシ］デシル｝−２−（６−（２，４−ジニトロフェニル）アミノヘキソイル）−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリン化合物に対するＰＡＦ−ＡＨの作用による蛍光増大の時間経過を示している。測定は上述の条件下で実施した。図１から明らかなように、ＰＡＦ−ＡＨの存在下で蛍光の増大が生じる。ＰＡＦ−ＡＨ不在の場合（コントロール）には、蛍光強度の増大は認められなかった。
【００６０】
図２は、異なる量のＰＡＦ−ＡＨまたは異なる希釈度のヒトサンプル物質と、蛍光強度の増大との関係を示している（上述の試験条件）。ＰＡＦ−ＡＨ濃度が高くなるほど蛍光強度の著しい増大を観察し得ることが判明した。
【００６１】
上記明細書中、本願の国際出願時の独語明細書において記載されていた下記の文字を便宜的に「ｖ〜」と表記した。
【数１】
2005511701.tif 000019
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１】ＰＡＦ−ＡＨの作用による蛍光増大の典型的な時間経過を示す図。
【図２】異なる量の酵素または異なる希釈度のヒトサンプル物質と、蛍光増大との関係を示す図。
【図１】
2005511701.tif 000023
【図２】
2005511701.tif 000024
【国際調査報告】
2005511701.tif 000025
2005511701.tif 000026
2005511701.tif 000027
2005511701.tif 000028
2005511701.tif 000029
2005511701.tif 000030