(57)【要約】本発明は、ナトリウムチャネル遮断薬に関する。本発明は、これらのナトリウムチャネル遮断薬を使用する様々な治療方法も含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(I)：
【化１】
2005526726.tif 000028
[式中、
Xは、水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、低級アルキル、非置換もしくは置換フェニル、低級アルキル-チオ、フェニル-低級アルキル-チオ、低級アルキル-スルホニル、またはフェニル-低級アルキル-スルホニルであり、
Yは、水素、ヒドロキシル、メルカプト、低級アルコキシ、低級アルキル-チオ、ハロゲン、低級アルキル、非置換もしくは置換単核式アリール、または-N(R2)2であり、
R1は、水素または低級アルキルであり、
各R2は、独立に、-R7、-(CH2)m-OR8、-(CH2)m-NR7R10、-(CH2)n(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-(CH2CH2O)m-R8、-(CH2CH2O)m-CH2CH2NR7R10、-(CH2)n-C(=O)NR7R10、-(CH2)n-Zg-R7、-(CH2)m-NR10-CH2(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-(CH2)n-CO2R7または
【化２】
2005526726.tif 000029
であり、
R3およびR4は各々、独立に、水素、式(A)で示される基、低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、フェニル、フェニル-低級アルキル、(ハロフェニル)-低級アルキル、低級-(アルキルフェニルアルキル)、低級(アルコキシフェニル)-低級アルキル、ナフチル-低級アルキルまたはピリジル-低級アルキルである（但し、R3とR4の少なくとも1つが式(A)で示される基である）、
【化３】
2005526726.tif 000030
ここで、各RLは、独立に、-R7、-(CH2)n-OR8、-O-(CH2)m-OR8、-(CH2)n-NR7R10、-O-(CH2)m-NR7R10、-(CH2)n(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-O-(CH2)m(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-(CH2CH2O)m-R8、-O-(CH2CH2O)m-R8、-(CH2CH2O)m-CH2CH2NR7R10、-O-(CH2CH2O)m-CH2CH2NR7R10、-(CH2)n-C(=O)NR7R10、-O-(CH2)m-C(=O)NR7R10、-(CH2)n-(Z)g-R7、-O-(CH2)m-(Z)g-R7、-(CH2)n-NR10-CH2(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-O-(CH2)m-NR10-CH2(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-(CH2)n-CO2R7、-O-(CH2)m-CO2R7、-OSO3H、-O-グルクロニド、-O-グルコース、
【化４】
2005526726.tif 000031
であり、
各oは、独立に、0〜10の整数であり、
各pは、0〜10の整数であって、
各隣接鎖におけるoとpの合計が0〜10であり、
各xは、独立に、O、NR10、C(=O)、CHOH、C(=N-R10)、CHNR7R10または単結合であり、
各R6は、独立に、-R7、-OH、-OR11、-N(R7)2、-(CH2)m-OR8、-O-(CH2)m-OR8、-(CH2)n-NR7R10、-O-(CH2)m-NR7R10、-(CH2)n(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-O-(CH2)m(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-(CH2CH2O)m-R8、-O-(CH2CH2O)m-R8、-(CH2CH2O)m-CH2CH2NR7R10、-O-(CH2CH2O)m-CH2CH2NR7R10、-(CH2)n-C(=O)NR7R10、-O-(CH2)m-C(=O)NR7R10、-(CH2)n-(Z)g-R7、-O-(CH2)m-(Z)g-R7、-(CH2)n-NR10-CH2(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-O-(CH2)m-NR10-CH2(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-(CH2)n-CO2R7、-O-(CH2)m-CO2R7、-OSO3H、-O-グルクロニド、-O-グルコース、
【化５】
2005526726.tif 000032
であり、
ここで、2つのR6が-OR11であり、フェニル環上で互いに隣接して位置するときに、前記2つのR6のアルキル部分がともに結合して、メチレンジオキシ基を形成することができ、
各R7は、独立に、水素または低級アルキルであり、
各R8は、独立に、水素、低級アルキル、-C(=O)-R11、グルクロニド、2-テトラヒドロピラニルまたは
【化６】
2005526726.tif 000033
であり、
各R9は、独立に、-CO2R7、-CON(R7)2、-SO2CH3または-C(=O)R7であり、
各R10は、独立に、-H、-SO2CH3、-CO2R7、-C(=O)NR7R9、-C(=O)R7または-CH2-(CHOH)n-CH2OHであり、
各Zは、独立に、CHOH、C(=O)、CHNR7R10、C=NR10またはNR10であり、
各R11は、独立に、低級アルキルであり、
各gは、独立に、1〜6の整数であり、
各mは、独立に、1〜7の整数であり、
各nは、独立に、0〜7の整数であり、
各Qは、独立に、C-R6または窒素原子であって、環内の最高3つのQが窒素原子である]
の化合物、または製薬品として許容されるその塩、そのすべての鏡像異性体、ジアステレオマーおよびラセミ混合物。
【請求項２】
Yが-NH2である、請求項1に記載の化合物。
【請求項３】
R2が水素である、請求項2に記載の化合物。
【請求項４】
R1が水素である、請求項3に記載の化合物。
【請求項５】
Xが塩素である、請求項4に記載の化合物。
【請求項６】
R3が水素である、請求項5に記載の化合物。
【請求項７】
各RLが水素である、請求項6に記載の化合物。
【請求項８】
oが4である、請求項7に記載の化合物。
【請求項９】
pが0である、請求項8に記載の化合物。
【請求項１０】
xが単結合である、請求項9に記載の化合物。
【請求項１１】
各R6が水素である、請求項10に記載の化合物。
【請求項１２】
最高1つのQが窒素原子である、請求項11に記載の化合物。
【請求項１３】
Qが窒素原子ではない、請求項12に記載の化合物。
【請求項１４】
Xがハロゲンであり、
Yが-N(R7)2であり、
R1が水素またはC1〜C3アルキルであり、
R2が-R7、-(CH2)m-OR7または-(CH2)n-CO2R7であり、
R3が式(A)で示される基であり、
R4が水素、式(A)で示される基または低級アルキルである、請求項1に記載の化合物。
【請求項１５】
Xがクロロまたはブロモであり、
Yが-N(R7)2であり、
R2が水素またはC1〜C3アルキルであり、
最高3つのR6が、上で定義したように水素以外であり、
最高3つのRLが、上で定義したように水素以外であり、
最高2つのQが窒素原子である、請求項14に記載の化合物。
【請求項１６】
Yが-NH2である、請求項15に記載の化合物。
【請求項１７】
R4が水素であり、
最高1つのRLが、上で定義したように水素以外であり、
最高2つのR6が、上で定義したように水素以外であり、
最高1つのQが窒素原子である、請求項16に記載の化合物。
【請求項１８】
xが、O、NR7、C=O、CHOHまたはC=N-R6である、請求項17に記載の化合物。
【請求項１９】
xが単結合である、請求項17に記載の化合物。
【請求項２０】
xが、O、NR7、C=O、CHOHまたはC=N-R6である、請求項1に記載の化合物。
【請求項２１】
xが単結合である、請求項1に記載の化合物。
【請求項２２】
各R6が水素である、請求項1に記載の化合物。
【請求項２３】
最高2つのR6が、請求項1に定義したように水素以外である、請求項1に記載の化合物。
【請求項２４】
1つのR6が、請求項1に定義したように水素以外である、請求項1に記載の化合物。
【請求項２５】
1つのR6が-OHである、請求項1に記載の化合物。
【請求項２６】
各RLが水素である、請求項1に記載の化合物。
【請求項２７】
最高2つのRLが、請求項1に定義したように水素以外である、請求項1に記載の化合物。
【請求項２８】
1つのRLが、請求項1に定義したように水素以外である、請求項1に記載の化合物。
【請求項２９】
xが単結合であり、oとpの合計が4〜6である、請求項1に記載の化合物。
【請求項３０】
【化７】
2005526726.tif 000034
の式によって示される、請求項1に記載の化合物。
【請求項３１】
製薬品として許容される塩の形態である、請求項30に記載の化合物。
【請求項３２】
塩酸塩の形態である、請求項31に記載の化合物。
【請求項３３】
【化８】
2005526726.tif 000035
の式によって示される、請求項1に記載の化合物。
【請求項３４】
製薬品として許容される塩の形態である、請求項33に記載の化合物。
【請求項３５】
塩酸塩の形態である、請求項34に記載の化合物。
【請求項３６】
【化９】
2005526726.tif 000036
の式によって示される、請求項1に記載の化合物。
【請求項３７】
製薬品として許容される塩の形態である、請求項36に記載の化合物。
【請求項３８】
塩酸塩の形態である、請求項37に記載の化合物。
【請求項３９】
【化１０】
2005526726.tif 000037
の式によって示される、請求項1に記載の化合物。
【請求項４０】
製薬品として許容される塩の形態である、請求項39に記載の化合物。
【請求項４１】
塩酸塩の形態である、請求項40に記載の化合物。
【請求項４２】
【化１１】
2005526726.tif 000038
の式によって示される、請求項1に記載の化合物。
【請求項４３】
製薬品として許容される塩の形態である、請求項42に記載の化合物。
【請求項４４】
塩酸塩の形態である、請求項43に記載の化合物。
【請求項４５】
【化１２】
2005526726.tif 000039
の式によって示される、請求項1に記載の化合物。
【請求項４６】
製薬品として許容される塩の形態である、請求項45に記載の化合物。
【請求項４７】
塩酸塩の形態である、請求項46に記載の化合物。
【請求項４８】
製薬品として許容される塩の形態である、請求項1に記載の化合物。
【請求項４９】
請求項1に記載の化合物および製薬品として許容される担体を含む製薬品組成物。
【請求項５０】
粘膜表面の水分補給を促進する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を対象の粘膜表面に投与することを含む方法。
【請求項５１】
粘膜防御を回復する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を、それを必要とする対象の粘膜表面に局所投与することを含む方法。
【請求項５２】
ナトリウムチャネルを遮断する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物をナトリウムチャネルに接触させることを含む方法。
【請求項５３】
慢性気管支炎を治療する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項５４】
嚢胞性線維症を治療する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項５５】
副鼻腔炎を治療する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項５６】
膣の乾燥を治療する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を、それを必要とする対象の膣管に投与することを含む方法。
【請求項５７】
ドライアイを治療する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を、それを必要とする対象の目に投与することを含む方法。
【請求項５８】
眼球への水分補給を促進する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を対象の目に投与することを含む方法。
【請求項５９】
角膜への水分補給を促進する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を対象の目に投与することを含む方法。
【請求項６０】
粘膜表面における粘液クリアランスを促進する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を対象の粘膜表面に投与することを含む方法。
【請求項６１】
シェーグレン疾患を治療する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項６２】
遠位腸閉塞症候群を治療する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項６３】
乾皮症を治療する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を、それを必要とする対象の皮膚に投与することを含む方法。
【請求項６４】
食道炎を治療する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項６５】
口渇(口内乾燥症)を治療する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を、それを必要とする対象の口に投与することを含む方法。
【請求項６６】
鼻の乾燥を治療する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を、それを必要とする対象の鼻道に投与することを含む方法。
【請求項６７】
前記鼻の乾燥が、乾燥酸素を前記対象に与えることによって引き起こされる、請求項66に記載の方法。
【請求項６８】
換気装置によって誘発される肺炎を防止する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を、換気装置に接する対象に投与することを含む方法。
【請求項６９】
喘息を治療する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項７０】
原発性線毛ジスキネジアを治療する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項７１】
中耳炎を治療する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項７２】
診断目的で痰を誘発させる方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項７３】
慢性閉塞性肺疾患を治療する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項７４】
気腫を治療する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項７５】
肺炎を治療する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項７６】
便秘症を治療する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項７７】
前記化合物を、経口または坐剤または浣腸によって投与する、請求項76に記載の方法。
【請求項７８】
慢性憩室炎を治療する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項７９】
本発明は、鼻副鼻腔炎を治療する方法であって、
請求項1に記載の有効量の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。
【請求項８０】
高血圧を治療する方法であって、
請求項1に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項８１】
血圧を降下させる方法であって、
請求項1に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項８２】
水腫を治療する方法であって、
請求項1に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項８３】
利尿を促進する方法であって、
請求項1に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項８４】
ナトリウム利尿を促進する方法であって、
請求項1に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項８５】
塩分排泄を促進する方法であって、
請求項1に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
【請求項８６】
請求項1に記載の化合物、および
P2Y2阻害剤を含む組成物。
【請求項８７】
請求項1に記載の化合物、および
気管支拡張剤を含む組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ナトリウムチャネル遮断薬に関する。本発明は、本発明のナトリウムチャネル遮断薬を用いた様々な治療方法も含む。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、その全体を参照により本明細書に援用する、2002年2月19日に出願された米国出願第10/076,551号の一部継続出願である。
【０００３】
環境と体の境界にある粘膜表面は、いくつかの「先天的な防御」、すなわち、防御機構を発達させた。そのような先天的防御の主要な一形態は、これらの粘膜表面を体液で清浄にすることである。一般に、粘膜表面上の体液層の量は、多くは水(および対陽イオン)と結合した陰イオン(Cl-および/またはHCO3-)分泌である上皮体液分泌と、多くは対陰イオン(Cl-および/またはHCO3-)と結合したNa+吸収である上皮体液吸収とのバランスの影響を受ける。多くの粘膜表面疾患は、(少なすぎる)分泌と(比較的多すぎる)吸収との不均衡によって、これらの粘膜表面の防御液(protective liquid)があまりにも少なすぎるために起きている。これらの粘膜機能不全を特徴づける塩類輸送プロセスの欠陥は、粘膜表面の上皮層に存在する。
【０００４】
粘膜表面の防御液層を補充する一手法は、Na+チャネルと体液吸収を遮断することによって系を「再び平衡に戻す」ことである。Na+と体液の吸収の律速段階を仲介する上皮タンパク質は、上皮Na+チャネル(ENaC)である。ENaCは、上皮の先端面(apical surface)、すなわち、粘膜表面-環境境界面に位置する。したがって、ENaCによって媒介されるNa+と体液の吸収を抑制するためには、(ENaCの細胞外ドメインから遮断する)アミロライドクラスのENaC遮断薬を粘膜表面に送達させなければならず、この部位に保持して治療上の効用を得ることが重要である。本発明は、粘膜表面の体液が少なすぎることを特徴とする疾患、これらの疾患の治療に必要な効力が大きく、粘膜吸収が少なく、ENaCからの解離(「開裂(unbinding)」または分離)が遅くなるように設計された「局所的」ナトリウムチャネル遮断薬を記述する。
【０００５】
慢性気管支炎の最も一般的な致死的遺伝型(genetic form)を含めた慢性気管支炎(CB)、嚢胞性線維症(CF)は、一般に肺からの粘液を体が排除できない疾患であり、これは最終的に慢性の気道感染をもたらす。正常な肺においては、慢性の肺内気道感染(慢性気管支炎)に対する一次防御(primary defense)は、気管支気道表面からの粘液の連続的なクリアランスによってもたらされる。この健康上の機能によって、有害となり得る毒素および病原体が肺から効率的に除去される。最近のデータは、CBとCFの引き金となる異常、すなわち、「基本的欠陥」が、気道表面からの粘液排除障害であることを示している。粘液排除障害は、気道表面の体液とムチンの量の不均衡によるものである。この「気道表面粘液」(ASL)は、主に、血しょうに類似した比率(すなわち、等張性)の塩と水からなる。ムチン巨大分子は、通常は、吸入された細菌を捕捉し「繊毛周囲液(periciliary liquid)」(PCL)と呼ばれる水のような低粘度溶液中で続けざまに打つ繊毛の動きによって肺から輸送される明確な「粘液層」中に組織化されている。病態においては、気道表面のASLとしての粘液量が不均衡になる。この結果、ASLが相対的に減少し、粘液が濃縮され、PCLの潤滑活性が低下し、繊毛活動によって粘液が口に排除されなくなる。肺からの粘液の機械的クリアランスが低下すると、気道表面に付着して、粘液の細菌コロニーが慢性的に形成される。これが、細菌の慢性的滞留であり、粘液に閉じ込めた細菌を長期にわたって死滅させる局所的抗菌物質の機能不全であって、その結果、このタイプの表面感染に対する体の炎症反応が慢性化し、CBおよびCF症候群となる。
【０００６】
現在、米国における罹患人口は、(主に喫煙暴露からの)後天性型慢性気管支炎が12,000,000人であり、遺伝型嚢胞性線維症が約30,000人である。どちらもほぼ同数の患者がヨーロッパにもいる。アジアにおいては、CFはほとんどいないが、CBの発生率が高く、世界の他の地域同様、増加しつつある。
【０００７】
現在、これらの疾患を引き起こす基本的欠陥レベルにおいて、特にCBおよびCFを治療する製品はまだ満足できるものがなく、医学的に大いに求められている。慢性気管支炎および嚢胞性線維症の現行療法は、これらの疾患の症状および/または後遺症を治療することに的を絞っている。したがって、慢性気管支炎の場合、β作用薬、吸入ステロイド、抗コリン作動薬、経口テオフィリンおよびホスホジエステラーゼ阻害薬がすべて開発下にある。しかし、これら薬物のいずれもが、肺から粘液を排除できない基本的問題を有効に治療するものではない。同様に、嚢胞性線維症においても、同じ範ちゅうの製薬品が使用される。これらの戦略は、付着粘液の塊の中で増殖した細菌を死滅させようとするが効果のない好中球によって肺に堆積されたDNAをCF肺から排除するように設計されたより最近の戦略(「Pulmozyme」;Genentech)、ならびに付着粘液の細菌プラークを除去する肺自体の死滅機序(killing mechanisms)を増強させるように設計された吸入抗生物質(「TOBI」)の使用によって補完されるものである。引き金となる病変を治療しない場合、粘液滞留/閉塞、細菌感染が慢性化し、抗菌治療に対する抵抗性が増加するというのが一般的な体の原理である。したがって、CBおよびCF肺疾患の対処されていない主な治療ニーズは、気道粘液に水分を補給する有効手段(すなわち、ASLの体積の回復/拡張)、および細菌とともに肺からのそのクリアランスを促進させる手段である。
【０００８】
R.C.Boucherは、米国特許第6,264,975号において、粘膜表面に水分を補給するピラジノイルグアニジンナトリウムチャネル遮断薬の使用を記述している。周知の利尿薬アミロライド、ベンザミルおよびフェナミルによって代表されるこれらの化合物が有効である。しかし、これらの化合物は、(1)効果が比較的小さく(肺が吸入できる薬物量が限られているのでこれは重要である)、(2)迅速に吸収され(これは、粘膜表面上の薬物の半減期を制限するものである)、(3)ENaCから自由に分離され得るという重大な欠点を有する。これらの周知の利尿薬に具現化されるこれらの欠点が合わさると、粘膜表面に水分を補給する治療上の利点を有するのには効力および/または粘膜表面上での有効半減期が不十分な化合物しか得られない。
【０００９】
求められているのが、CB/CF患者の肺からの粘液のクリアランスを回復するのにより有効な薬物であることは明らかである。これらの新しい療法の価値は、CFおよびCB患者集団の生活の質および寿命の向上となって現れる。
【００１０】
体内および体表面の他の粘膜表面は、それらの表面での防御表面液の正常な生理がわずかに異なるが、疾患の病態生理は、共通した主題、すなわち、防御表面液が少なすぎることを反映している。例えば、口内乾燥症(口渇)では、Na+(ENaC)輸送によって仲介される口腔からの体液吸収が連続して行われているにもかかわらず、耳下腺舌下腺および顎下腺が体液を分泌することができないために、口腔で体液が枯渇する。同様に、乾性角結膜炎(keratoconjunctivitis sira)(ドライアイ)は、結合表面(conjunctional surfaces)での連続したNa+依存的体液吸収にもかかわらず、涙腺が体液を分泌できないことに起因する。鼻副鼻腔炎においては、CB同様、ムチン分泌と相対的ASL枯渇との不均衡がある。最後に、消化管においては、近位小腸におけるCl-(および体液)の分泌障害は、末端回腸におけるNa+(および体液)吸収の増加と相まって、遠位腸閉塞症候群(DIGS)をもたらす。高齢の患者では、下行結腸における過剰なNa+(および体積)吸収は、便秘および憩室炎を生じる。
【００１１】
5000万人のアメリカ人および世界中で数億の人が、高血圧とその後の続発症(sequale)に罹り、うっ血性心不全および死亡率の増加をもたらしている。これは、西側世界で死因の第1位にあり、これらの疾患を治療する新しい製薬品が必要とされている。したがって、本発明の新規ナトリウムチャネル遮断薬の一部は、腎臓を標的とするように設計することもでき、したがって、高血圧、うっ血性心不全(CHF)および他の循環器病の治療用利尿薬として使用することができる。これらの新しい製薬品は、単体で使用することも、またはベータ遮断薬、ACE阻害薬、HMGCoAレダクターゼ阻害薬、カルシウムチャネル遮断薬および他の心血管の製薬品と併用することもできる。
【特許文献１】R.C.Boucher、米国特許第6,264,975号
【特許文献２】米国特許第5,656,256号
【特許文献３】米国特許第5,292,498号
【特許文献４】Jacobus、米国特許第5,789,391号
【特許文献５】米国特許第5,740,794号
【特許文献６】米国特許第5,654,007号
【特許文献７】米国特許第5,458,135号
【特許文献８】米国特許第5,775,320号
【特許文献９】米国特許第5,785,049号
【特許文献１０】米国特許第5,622,166号
【特許文献１１】米国特許第5,577,497号
【特許文献１２】米国特許第5,645,051号
【特許文献１３】米国特許第5,492,112号
【特許文献１４】米国特許第5,826,570号
【特許文献１５】米国特許第5,813,397号
【特許文献１６】米国特許第5,819,726号
【特許文献１７】米国特許第5,655,516号
【特許文献１８】米国特許第4,501,729号
【非特許文献１】Remington:The Science and Practice of Pharmacy、86章(第19版、1995)中のJ.Nairn、Solutions,Emulsions,Suspensions and Extracts
【特許文献１９】Schor、米国特許第4,389,393号
【特許文献２０】Illum、米国特許第5,707,644号
【特許文献２１】Suzuki、米国特許第4,294,829号
【特許文献２２】Suzuki、米国特許第4,835,142号
【非特許文献２】E.J.Cragoe、「The Synthesis of Amiloride and Its Analogs」(第3章)、Amiloride and Its Analogs、25〜36ページ
【特許文献２３】米国特許第3,313,813号
【非特許文献３】Sabater等、Journal of Applied Physiology、1999、2191〜2196ページ
【特許文献２４】Cragoe,E.J.Jr.、Oltersdorf,O.W.Jr.およびdelSolms.S.J.(1981)米国特許第4,246,406号
【非特許文献４】Taylor,E.C.;Harrington,P.M.;Schin,C.Heterocycles、1989、28、1169
【非特許文献５】Widsheis等、Synthesis、1994、87〜92
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明の一目的は、既知の化合物よりも強力で、かつ/または粘膜表面からの吸収が遅く、かつ/またはより非可逆的な化合物を提供することである。
【００１３】
本発明の別の態様は、アミロード(amilorde)、ベンザミル、フェナミルなどの化合物よりも強力で、かつ/または吸収が遅く、かつ/またはより非可逆的な化合物を提供することである。したがって、これらの化合物は、粘膜表面で既知の化合物よりも長い薬力学的半減期を有する。
【００１４】
本発明の別の目的は、(1)既知の化合物よりも粘膜表面、特に気道表面からの吸収が遅く、(2)粘膜表面に投与された後に粘膜表面から吸収されるときに、投与された親化合物よりもナトリウムチャネルを遮断する効力が弱い、その代謝誘導体(derivitives)にインビボで転化される化合物を提供することである。
【００１５】
本発明の別の目的は、アミロライド、ベンザミル、フェンナミルなどの化合物よりも強力で、かつ/または吸収が遅く、かつ/またはより非可逆的な化合物を提供することである。したがって、そのような化合物は、粘膜表面で従来の化合物よりも長い薬力学的半減期を有する。
【００１６】
本発明の別の目的は、循環器病の治療に使用する、腎臓を標的とした化合物を提供することである。
【００１７】
本発明の別の目的は、上記化合物の薬理学的諸特性を利用した治療方法を提供することである。
【００１８】
特に、本発明の一目的は、粘膜表面の水分補給に依拠する治療方法を提供することである。
【００１９】
特に、本発明の一目的は、循環器病を治療する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本発明の目的は、式(I)で示されるクラスのピラジノイルグアニジン化合物、または製薬品として許容されるその塩、そのすべての鏡像異性体、ジアステレオマーおよびラセミ混合物を用いて実施することができる。
【００２１】
【化１】
2005526726.tif 000002
【００２２】
式中、
Xは、水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、低級アルキル、非置換もしくは置換フェニル、低級アルキル-チオ、フェニル-低級アルキル-チオ、低級アルキル-スルホニル、またはフェニル-低級アルキル-スルホニルであり、
Yは、水素、ヒドロキシル、メルカプト、低級アルコキシ、低級アルキル-チオ、ハロゲン、低級アルキル、非置換もしくは置換単核式アリール、または-N(R2)2であり、
R1は、水素または低級アルキルであり、
各R2は、独立に、-R7、-(CH2)m-OR8、-(CH2)m-NR7R10、-(CH2)n(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-(CH2CH2O)m-R8、-(CH2CH2O)m-CH2CH2NR7R10、-(CH2)n-C(=O)nR7R10、-(CH2)n-Zg-R7、-(CH2)m-NR10-CH2(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-(CH2)n-CO2R7または下式のものである。
【００２３】
【化２】
2005526726.tif 000003
【００２４】
R3およびR4は各々、独立に、水素、式(A)で示される基、低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、フェニル、フェニル-低級アルキル、(ハロフェニル)-低級アルキル、低級-(アルキルフェニルアルキル)、低級(アルコキシフェニル)-低級アルキル、ナフチル-低級アルキル、またはピリジル-低級アルキルであって、R3およびR4の少なくとも1つが、式(A)で示される基である。
【００２５】
【化３】
2005526726.tif 000004
【００２６】
式中、各RLは、独立に、-R7、-(CH2)n-OR8、-O-(CH2)m-OR8、-(CH2)n-NR7R10、-O-(CH2)m-NR7R10、-(CH2)n(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-O-(CH2)m(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-(CH2CH2O)m-R8、-O-(CH2CH2O)m-R8、-(CH2CH2O)m-CH2CH2NR7R10、-O-(CH2CH2O)m-CH2CH2NR7R10、-(CH2)n-C(=O)nR7R10、-O-(CH2)m-C(=O)nR7R10、-(CH2)n-(Z)g-R7、-O-(CH2)m-(Z)g-R7、-(CH2)n-NR10-CH2(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-O-(CH2)m-NR10-CH2(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-(CH2)n-CO2R7、-O-(CH2)m-CO2R7、-OSO3H、-O-グルクロニド、-O-グルコース、または下式のものである。
【００２７】
【化４】
2005526726.tif 000005
【００２８】
各oは、独立に、0〜10の整数であり、
各pは、0〜10の整数であって、
各隣接鎖におけるoとpの合計は0〜10であり、
各xは、独立に、O、NR10、C(=O)、CHOH、C(=N-R10)、CHNR7R10または単結合であり、
各R6は、独立に、-R7、-OH、-OR11、-N(R7)2、-(CH2)m-OR8、-O-(CH2)m-OR8、-(CH2)n-NR7R10、-O-(CH2)m-NR7R10、-(CH2)n(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-O-(CH2)m(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-(CH2CH2O)m-R8、-O-(CH2CH2O)m-R8、-(CH2CH2O)m-CH2CH2NR7R10、-O-(CH2CH2O)m-CH2CH2NR7R10、-(CH2)n-C(=O)NR7R10、-O-(CH2)m-C(=O)NR7R10、-(CH2)n-(Z)g-R7、-O-(CH2)m-(Z)g-R7、-(CH2)n-NR10-CH2(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-O-(CH2)m-NR10-CH2(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-(CH2)n-CO2R7、-O-(CH2)m-CO2R7、-OSO3H、-O-グルクロニド、-O-グルコース、または下式のものである。
【００２９】
【化５】
2005526726.tif 000006
【００３０】
2つのR6が-OR11であり、フェニル環上で互いに隣接して位置するときに、その2つのR6のアルキル部分がともに結合して、メチレンジオキシ基を形成することができ、
各R7は、独立に、水素または低級アルキルであり、
各R8は、独立に、水素、低級アルキル、-C(=O)-R11、グルクロニド、2-テトラヒドロピラニル、または下式のものである。
【００３１】
【化６】
2005526726.tif 000007
【００３２】
各R9は、独立に、-CO2R7、-CON(R7)2、-SO2CH3または-C(=O)R7であり、
各R10は、独立に、-H、-SO2CH3、-CO2R7、-C(=O)NR7R9、-C(=O)R7または-CH2-(CHOH)n-CH2OHであり、
各Zは、独立に、CHOH、C(=O)、CHNR7R10、C=NR10またはNR10であり、
各R11は、独立に、低級アルキルであり、
各gは、独立に、1〜6の整数であり、
各mは、独立に、1〜7の整数であり、
各nは、独立に、0〜7の整数であり、
各Qは、独立に、C-R6または窒素原子であって、環内の最高3つのQが窒素原子である。
【００３３】
現在は、上記化合物を含む製薬品組成物も提供する。
【００３４】
本発明は、粘膜表面の水分補給を促進する方法であって、対象の粘膜表面に有効量の式(I)の化合物を投与することを含む方法も提供する。
【００３５】
本発明は、粘膜防御を回復する方法であって、有効量の式(I)の化合物を、それを必要とする対象の粘膜表面に局所投与することを含む方法も提供する。
【００３６】
本発明は、ENaCを遮断する方法であって、ナトリウムチャネルに有効量の式(I)の化合物を接触させることを含む方法も提供する。
【００３７】
本発明は、粘膜表面における粘液クリアランスを促進する方法であって、対象の粘膜表面に有効量の式(I)の化合物を投与することを含む方法も提供する。
【００３８】
本発明は、慢性気管支炎を治療する方法であって、有効量の式(I)の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。
【００３９】
本発明は、嚢胞性線維症を治療する方法であって、有効量の式(I)の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。
【００４０】
本発明は、鼻副鼻腔炎を治療する方法であって、有効量の式(I)の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。
【００４１】
本発明は、鼻の乾燥(nasal dehydration)を治療する方法であって、有効量の式(I)の化合物を、それを必要とする対象の鼻道に投与することを含む方法も提供する。
【００４２】
特定の実施形態においては、乾燥酸素を対象に与えることによって鼻を乾燥させる。
【００４３】
本発明は、副鼻腔炎を治療する方法であって、有効量の式(I)の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。
【００４４】
本発明は、肺炎を治療する方法であって、有効量の式(I)の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。
【００４５】
本発明は、人工呼吸器によって誘発される肺炎を防止する方法であって、有効な式(I)の化合物を人工呼吸器によって対象に投与することを含む方法も提供する。
【００４６】
本発明は、喘息を治療する方法であって、有効量の式(I)の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。
【００４７】
本発明は、原発性線毛ジスキネジアを治療する方法であって、有効量の式(I)の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。
【００４８】
本発明は、中耳炎を治療する方法であって、有効量の式(I)の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。
【００４９】
本発明は、診断目的で痰を誘発させる方法であって、有効量の式(I)の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。
【００５０】
本発明は、慢性閉塞性肺疾患を治療する方法であって、有効量の式(I)の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。
【００５１】
本発明は、気腫を治療する方法であって、有効量の式(I)の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。
【００５２】
本発明は、ドライアイを治療する方法であって、有効量の式(I)の化合物を、それを必要とする対象の目に投与することを含む方法も提供する。
【００５３】
本発明は、眼球への水分補給を促進する方法であって、有効量の式(I)の化合物を対象の目に投与することを含む方法も提供する。
【００５４】
本発明は、角膜への水分補給を促進する方法であって、有効量の式(I)の化合物を対象の目に投与することを含む方法も提供する。
【００５５】
本発明は、シェーグレン病を治療する方法であって、有効量の式(I)の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。
【００５６】
本発明は、膣の乾燥を治療する方法であって、有効量の式(I)の化合物を、それを必要とする対象の膣管に投与することを含む方法も提供する。
【００５７】
本発明は、乾皮症を治療する方法であって、有効量の式(I)の化合物を、それを必要とする対象の皮膚に投与することを含む方法も提供する。
【００５８】
本発明は、口渇(口内乾燥症)を治療する方法であって、有効量の式(I)の化合物を、それを必要とする対象の口に投与することを含む方法も提供する。
【００５９】
本発明は、遠位腸閉塞症候群を治療する方法であって、有効量の式(I)の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。
【００６０】
本発明は、食道炎を治療する方法であって、有効量の式(I)の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。
【００６１】
本発明は、便秘症を治療する方法であって、有効量の式(I)の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。この方法の一実施形態においては、その化合物を経口または坐剤または浣腸によって投与する。
【００６２】
本発明は、慢性憩室炎を治療する方法であって、有効量の式(I)の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。
【００６３】
本発明は、高血圧を治療する方法であって、式(I)の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。
【００６４】
本発明は、血圧を降下させる方法であって、式(I)の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。
【００６５】
本発明は、水腫を治療する方法であって、式(I)の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。
【００６６】
本発明は、利尿を促進する方法であって、式(I)の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。
【００６７】
本発明は、ナトリウム利尿を促進する方法であって、式(I)の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。
【００６８】
本発明は、塩分排泄を促進する方法であって、式(I)の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。
【００６９】
本発明のより完全な評価、およびそれに付随する利点の多くは、以下の詳細な説明を以下の図とともに参照してより良く理解することによって容易に得られる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００７０】
本発明は、式(I)の化合物が、アミロライド、ベンザミル、フェンナミルなどの化合物よりも強力で、かつ/または粘膜表面、特に気道表面からの吸収が遅く、かつ/またはENaCとの相互作用からより非可逆的であることの発見に基づいている。したがって、式(I)の化合物は、粘膜表面において、これらの化合物よりも長い半減期を有する。
【００７１】
本発明は、式(I)に包含されるある種の化合物が、投与後に粘膜表面から吸収された後に、投与された親化合物よりも、ナトリウムチャネルを遮断する効力が小さいその代謝誘導体にインビボで転化されるという発見に基づいてもいる。この重要な性質は、この化合物が、レシピエントの体の標的以外の部位、例えば腎臓に位置するナトリウムチャネルを遮断することによって望ましくない副作用を起こす傾向が弱まることを意味する。
【００７２】
本発明は、式(1)に包含されるある種の化合物が腎臓を標的とし、したがって心血管作動薬として使用できるという発見にも基づいている。
【００７３】
式(I)で示される化合物において、Xは、水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、低級アルキル、低級シクロアルキル、非置換もしくは置換フェニル、低級アルキル-チオ、フェニル-低級アルキル-チオ、低級アルキル-スルホニル、またはフェニル-低級アルキル-スルホニルとすることができる。ハロゲンが好ましい。
【００７４】
ハロゲンの例としては、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素がある。塩素および臭素が好ましいハロゲンである。塩素が特に好ましい。この記述を、本開示を通して使用する「ハロゲン」という用語に適用する。
【００７５】
本明細書で使用する「低級アルキル」という用語は、8つ未満の炭素原子を有するアルキル基を意味する。この範囲は、1、2、3、4、5、6および7炭素原子など炭素原子のすべての特定の値、およびその部分範囲を含む。「アルキル」という用語は、例えば、直鎖、分枝、環式アルキル基などすべてのタイプの基を包含する。この記述を、本開示を通して使用する「低級アルキル」という用語に適用する。適切な低級アルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、シクロプロピル、ブチル、イソブチルなどがある。
【００７６】
フェニル基の置換基としては、ハロゲンなどがある。特に好ましいハロゲン置換基は、塩素および臭素である。
【００７７】
Yは、水素、ヒドロキシル、メルカプト、低級アルコキシ、低級アルキル-チオ、ハロゲン、低級アルキル、低級シクロアルキル、単核式アリールまたは-N(R2)2とすることができる。低級アルコキシ基のアルキル部分は、上述したとおりである。単核式アリールの例としては、フェニル基がある。フェニル基は、上述したように置換されていてもいなくてもよい。Yの好ましいアイデンティティは-N(R2)2である。各R2が水素である化合物が特に好ましい。
【００７８】
R1は、水素または低級アルキルとすることができる。R1は、水素であることが好ましい。
【００７９】
各R2は、独立に、-R7、-(CH2)m-OR8、-(CH2)m-NR7R10、-(CH2)n(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-(CH2CH2O)m-R8、-(CH2CH2O)m-CH2CH2NR7R10、-(CH2)n-C(=O)NR7R10、-(CH2)n-Zg-R7、-(CH2)m-NR10-CH2(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-(CH2)n-CO2R7または
【００８０】
【化７】
2005526726.tif 000008
【００８１】
とすることができる。
【００８２】
水素および低級アルキル、特にC1〜C3アルキルがR2として好ましい。水素が特に好ましい。
【００８３】
R3およびR4は、R3とR4の少なくとも1つが式(A)で示される基である限り、独立に、水素、式(A)で示される基、低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、フェニル、フェニル-低級アルキル、(ハロフェニル)-低級アルキル、低級-(アルキルフェニルアルキル)、低級(アルコキシフェニル)-低級アルキル、ナフチル-低級アルキルまたはピリジル-低級アルキルとすることができる。
【００８４】
好ましい化合物は、R3とR4の一方が水素であり、もう一方が式(A)で示される化合物である。
【００８５】
式(A)においては、-(C(RL)2)o-x-(C(RL)2)p-部分は、芳香環に結合したアルキレン基と定義される。変数oおよびpは、鎖中のoとpの合計が1〜10である限り、各々0〜10の整数とすることができる。したがって、oとpは、各々、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9または10とすることができる。oとpの合計は、2〜6であることが好ましい。特に好ましい実施形態においては、oとpの合計は4である。
【００８６】
アルキレン鎖の連結基xは、独立に、O、NR10、C(=O)、CHOH、C(=N-R10)、CHNR7R10または単結合とすることができる。したがって、xが単結合であるときには、環に結合したアルキレン鎖は、式-(C(RL)2)o+p-で表され、o+pの合計は0〜10である。
【００８７】
各RLは、独立に、-R7、-(CH2)n-OR8、-O-(CH2)m-OR8、-(CH2)n-NR7R10、-O-(CH2)m-NR7R10、-(CH2)n(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-O-(CH2)m(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-(CH2CH2O)m-R8、-O-(CH2CH2O)m-R8、-(CH2CH2O)m-CH2CH2NR7R10、-O(CH2CH2O)m-CH2CH2NR7R10、-(CH2)n-C(=O)NR7R10、-O-(CH2)m-C(=O)NR7R10、-(CH2)n-(Z)g-R7、-O-(CH2)m-(Z)g-R7、-(CH2)n-NR10-CH2(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-O-(CH2)m-NR10-CH2(CHOR8)(CHOR8)n-CH2OR8、-(CH2)n-CO2R7、-O-(CH2)m-CO2R7、-OSO3H、-O-グルクロニド、-O-グルコース、
【００８８】
【化８】
2005526726.tif 000009
【００８９】
とすることができる。
【００９０】
好ましいRL基としては、-H、-OH、-N(R7)2などがあり、特に各R7は水素である。
【００９１】
式(A)のアルキレン鎖においては、炭素原子に結合した1つのRL基が水素以外のとき、その炭素原子に結合したもう一方のRL原子は水素であり、すなわち、式-CHRL-であることが好ましい。アルキレン鎖の最高2つのRL基が水素以外であり、その鎖のそれ以外のRL基は水素であることも好ましい。アルキレン鎖の1つのRL基のみが水素以外であり、その鎖のそれ以外のRL基は水素であることがさらに好ましい。これらの実施形態においては、xは単結合であることが好ましい。
【００９２】
本発明の特定の別の実施形態においては、アルキレン鎖のRL基のすべてが水素である。これらの実施形態においては、アルキレン鎖は式-(CH2)O-x-(CH2)p-で示される。
【００９３】
上述したように、式(A)の環上には4つのR6基がある。2つのR6が-OR11でありフェニル環上で互いに隣接して位置するときには、2つのR6基のアルキル部分がともに結合してメチレンジオキシ基、すなわち、式-O-CH2-O-の基を形成することができる。
【００９４】
上述したように、R6は水素とすることができる。したがって、1、2、3または4つのR6基を水素以外とすることができる。最高3つのR6基は水素以外であることが好ましい。
【００９５】
各gは、独立に、1〜6の整数である。したがって、各gを、1、2、3、4、5または6とすることができる。
【００９６】
各mは、1〜7の整数である。したがって、各mを、1、2、3、4、5、6または7とすることができる。
【００９７】
各nは、0〜7の整数である。したがって、各nを、0、1、2、3、4、5、6または7とすることができる。
【００９８】
式(A)の各Qは、C-R6または窒素原子であり、環内の最高3つのQは窒素原子である。したがって、環内には1、2または3つの窒素原子が存在し得る。最高2つのQが窒素原子であることが好ましい。最高1つのQが窒素原子であることがより好ましい。特定の実施形態においては、窒素原子は、環の3位にある。本発明の別の実施形態においては、各QはC-R6であり、すなわち、環内に窒素原子はない。
【００９９】
本発明の好ましい実施形態においては、Yは-NH2である。
【０１００】
別の好ましい実施形態においては、R2は水素である。
【０１０１】
別の好ましい実施形態においては、R1は水素である。
【０１０２】
別の好ましい実施形態においては、Xは塩素である。
【０１０３】
別の好ましい実施形態においては、R3は水素である。
【０１０４】
別の好ましい実施形態においては、RLは水素である。
【０１０５】
別の好ましい実施形態においては、oは4である。
【０１０６】
別の好ましい実施形態においては、pは0である。
【０１０７】
別の好ましい実施形態においては、oとpの合計は4である。
【０１０８】
別の好ましい実施形態においては、xは単結合である。
【０１０９】
別の好ましい実施形態においては、R6は水素である。
【０１１０】
別の好ましい実施形態においては、最高1つのQは窒素原子である。
【０１１１】
別の好ましい実施形態においては、Qは窒素原子ではない。
【０１１２】
本発明の好ましい実施形態においては、
Xはハロゲンであり、
Yは-N(R7)2であり、
R1は水素またはC1〜C3アルキルであり、
R2は-R7、-OR7、CH2OR7または-CO2R7であり、
R3は式(A)で示される基であり、
R4は水素、式(A)で示される基、または低級アルキルである。
【０１１３】
本発明の別の好ましい実施形態においては、
Xは、クロロまたはブロモであり、
Yは-N(R7)2であり、
R2は水素またはC1〜C3アルキルであり、
最高3つのR6は、上述したように、水素以外であり、
最高3つのRLは、上述したように、水素以外であり、
最高2つのQは窒素原子である。
【０１１４】
本発明の別の好ましい実施形態においては、
Yは-NH2である。
【０１１５】
本発明の別の好ましい実施形態においては、
R4は水素であり、
最高1つのRLは、上述したように、水素以外であり、
最高2つのR6は、上述したように、水素以外であり、
最高1つのQは窒素原子である。
【０１１６】
本発明の別の好ましい実施形態においては、式(I)の化合物は次式で示される。
【０１１７】
【化９】
2005526726.tif 000010
【０１１８】
本発明の別の好ましい実施形態においては、式(I)の化合物は次式で示される。
【０１１９】
【化１０】
2005526726.tif 000011
【０１２０】
本発明の別の好ましい実施形態においては、式(I)の化合物は次式で示される。
【０１２１】
【化１１】
2005526726.tif 000012
【０１２２】
本発明の別の好ましい実施形態においては、式(I)の化合物は次式で示される。
【０１２３】
【化１２】
2005526726.tif 000013
【０１２４】
本発明の別の好ましい実施形態においては、式(I)の化合物は次式で示される。
【０１２５】
【化１３】
2005526726.tif 000014
【０１２６】
本発明の別の好ましい実施形態においては、式(I)の化合物は次式で示される。
【０１２７】
【化１４】
2005526726.tif 000015
【０１２８】
式(I)の化合物を、遊離塩基として調製し使用することができる。あるいは、この化合物を、製薬品として許容される塩として調製し使用することができる。製薬品として許容される塩は、親化合物の所望の生物活性が保持され、または増大し、かつ望ましくない毒物効果を与えない塩である。このような塩の例は、(a)無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸などとともに形成される酸付加塩、(b)例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチン酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、メタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン酸、マロン酸、スルホサリチル酸、グリコール酸、2-ヒドロキシ-3-ナフトエート、パモエート、サリチル酸、ステアリン酸、フタル酸、マンデル酸、乳酸などの有機酸とともに形成される塩、および(c)元素陰イオン、例えば、塩素、臭素およびヨウ素から形成される塩である。
【０１２９】
式(I)の範囲内にある化合物のすべての鏡像異性体、ジアステレオマーおよびラセミ混合物も、本発明に包含されることに留意されたい。そのような鏡像異性体とジアステレオマーのすべての混合物は、本発明の範囲内にある。
【０１３０】
特定の理論に拘泥するものではないが、式(I)の化合物は、ナトリウムチャネル遮断薬としてインビボで機能すると考えられる。粘膜表面の上皮ナトリウムチャネルを遮断することによって、式(I)の化合物は、粘膜表面による水の吸収を抑制する。この効果によって、粘膜表面の防御液の体積が増加し、系の平衡が回復し、したがって疾患が治療される。
【０１３１】
本発明は、上記式(I)の化合物の諸特性を利用した治療方法も提供する。したがって、本発明の方法による治療を受けることができる対象は、嚢胞性線維症、原発性線毛ジスキネジア、慢性気管支炎、慢性閉塞性気道疾患の患者、人工呼吸を受けている患者、急性肺炎患者などであるが、これらだけに限定されない。本発明を用いて、患者の少なくとも1つの肺に活性化合物を投与し、次いで患者から痰試料を引き出す、または収集することによって、患者から痰試料を得ることができる。一般に、本発明は、エアゾール剤(液剤または乾燥散剤)または洗浄によって呼吸器粘膜表面に投与される。
【０１３２】
本発明による方法によって治療することができる対象には、鼻から酸素補給(気道表面を乾燥させ易い措置)を受けている患者、鼻の気道表面に影響を及ぼすアレルギー疾患または応答(例えば、花粉、ダスト、動物の毛または粒子、昆虫、昆虫粒子などへのアレルギー性応答)に罹った患者、鼻の気道表面の細菌感染、例えば、黄色ブドウ球菌感染などのブドウ球菌感染、ヘモフィルスインフルエンザ感染、肺炎連鎖球菌感染、緑膿菌感染など)に罹った患者、鼻の気道表面に影響を及ぼす炎症性疾患に罹った患者、あるいは副鼻腔炎(有効成分は、副鼻腔中につまった体液の排出を促進するのに有効な量を投与することによって、副鼻腔中につまった分泌粘液の排液を促進するために投与される)、または複合、鼻副鼻腔炎に罹った患者も含まれる。本発明は、エアゾール剤および点滴薬を含めて、局所的な送達によって鼻腔表面に投与することができる。
【０１３３】
本発明は、気道表面以外の粘膜表面に水分を補給するために使用することができる。このような他の粘膜表面としては、胃腸表面、口内面、尿道表面、眼球表面または目の表面、内耳、中耳などがある。例えば、本発明の活性化合物は、局所/局部、経口または経直腸を含めて任意の適切な手段によって、有効量を投与することができる。
【０１３４】
本発明の化合物は、心血管系に関係する様々な機能を治療するのにも有用である。したがって、本発明の化合物は、血圧降下薬としての使用に有用である。この化合物は、血圧を下げ、水腫を治療するためにも使用することができる。さらに、本発明の化合物は、利尿、ナトリウム利尿および塩分排泄を促進するためにも有用である。この化合物は、単体で使用し、あるいはベータ遮断薬、ACE阻害剤、HMGCoAレダクターゼ阻害剤、カルシウムチャネル遮断薬、および他の心血管薬と併用して、高血圧、うっ血性心不全を治療し、心血管の死亡率を減少させることができる。
【０１３５】
本発明は、主にヒト対象の治療に関するが、獣医目的でイヌ、ネコなどの他の哺乳動物対象の治療に使用することもできる。
【０１３６】
上述したように、本発明の組成物を調製するために使用される化合物は、製薬品として許容される遊離塩基の形とすることができる。この化合物の遊離塩基は、一般に、その塩よりも水溶液に不溶であるので、遊離塩基組成物は、肺に有効成分をより持続的に放出するために使用される。溶液に溶解しない粒子の形態で肺に入れられた有効成分は、生理学的応答を誘起することができないが、溶液中に徐々に溶解し、生物が利用可能な薬物のデポーとして働く。
【０１３７】
本発明の別の態様は、製薬品として許容される担体(例えば、担体水溶液)中の式(I)の化合物を含む製薬品組成物である。一般に、式(I)の化合物は、組成物中に、粘膜表面による水の再吸収を抑制するのに有効な量で含まれる。
【０１３８】
本発明の化合物は、P2Y2受容体作用薬、または製薬品として許容されるその塩とともに使用することもできる(本明細書では時折「有効成分」とも称する)。この組成物は、さらに、P2Y2受容体作用薬、または製薬品として許容されるその塩を含むこともできる(本明細書では時折「有効成分」とも称する)。P2Y2受容体作用薬は、一般に、気道表面、特に鼻の気道表面による塩化物および水の分泌を刺激するのに有効な量で含まれる。適切なP2Y2受容体作用薬は、米国特許第6,264,975号のカラム9〜10、米国特許第5,656,256号および米国特許第5,292,498号に記載されている。各特許を参照により本明細書に援用する。
【０１３９】
気管支拡張剤(Bronchodiloators)を、本発明の化合物と併用することもできる。これらの気管支拡張剤には、エピネフリン、イソプロテレノール、フェノテロール、アルブテレオール(albutereol)、テルブタリン、ピルブテロール、ビトルテロール、メタプロテレノール、イオセタリン(iosetharine)、キシナホ酸サルメテロールを含めて、ただしこれらだけに限定されないβアドレナリン作動薬、および臭化イプラトロピウムを含めて、ただしこれだけに限定されない抗コリン作用薬、およびテオフィリン、アミノフィリンなどの化合物が含まれる。これらの化合物は、本明細書に記載する活性化合物の前に、または同時に、既知の技術に従って投与することができる。
【０１４０】
本発明の別の態様は、上述した活性化合物を製薬品として許容される担体(例えば、担体水溶液)中に含む医薬製剤である。一般に、活性化合物は、気道および他の表面を含めた粘膜表面による水の再吸収を抑制するなど、粘膜表面の治療に有効な量で組成物中に含まれる。
【０１４１】
本明細書に開示する活性化合物は、局所、経口、経直腸、経膣、経眼、経皮などを含めて任意の適切な手段によって粘膜表面に投与することができる。例えば、便秘症の治療の場合、活性化合物を、胃腸管粘膜表面に経口または経直腸投与することができる。活性化合物は、経口投与用の液滴、錠剤などとして、直腸投与または生殖器-尿道投与用の坐剤などとして、無菌生理食塩水または無菌希薄食塩水または局所溶液などの製薬品として許容される任意適切な形の担体と混合することができる。必要に応じて、賦形剤を製剤に入れて活性化合物の溶解性を高めることができる。
【０１４２】
本明細書に開示する活性化合物を、生理食塩水、希薄食塩水、蒸留水などの製薬品として許容される担体中の活性化合物のスプレー、ミストまたは液滴を含めて、任意適切な手段によって患者の気道表面に投与することができる。例えば、活性化合物を製剤として調製し、Jacobusの米国特許第5,789,391号の記載のとおりに投与することができる。この特許の開示を、参照によりその全体を本明細書に援用する。
【０１４３】
本発明の実施用に調製された固体または液体粒子有効成分は、上述したように、呼吸して吸い込まれる、または呼吸して吸い込まれないサイズの粒子、すなわち、呼吸して吸い込まれる粒子の場合、吸入によって口および喉頭を通過し、気管支および肺胞に入るのに十分小さなサイズの粒子、ならびに呼吸して吸い込まれない粒子の場合、喉頭を通過し、気管支および肺胞に入るのではなく、鼻の気道に保持されるのに十分な大きさの粒子を含む。一般に、約1〜5ミクロンの粒子(特に、約4.7ミクロン未満)は呼吸によって吸い込まれる。呼吸して吸い込まれないサイズの粒子は、約5ミクロンよりも大きく、可視液滴サイズまでである。したがって、経鼻投与の場合、10〜500μmのサイズの粒子を使用して、鼻腔中に確実に保持させることができる。
【０１４４】
本発明による製剤の製造においては、有効成分、またはその生理学的に許容される塩もしくは遊離塩基は、一般に、なかでも許容される担体と混合される。担体が、製剤中の他のあらゆる成分と親和性があり、患者に有害であってはならないことは言うまでもない。担体は、固体または液体、またはその両方でなければならず、好ましくは、0.5%〜99重量%の活性化合物を含むことができる単位用量製剤、例えば、カプセル剤として化合物とともに処方される。1つまたは複数の活性化合物を本発明の製剤に混合することができ、この製剤を、本質的に成分を混合することからなる周知の任意の調剤技術によって調製することができる。
【０１４５】
呼吸して吸い込まれる、または呼吸して吸い込まれない微粉化有効成分の乾燥粒子を含む組成物は、乾燥有効成分を乳鉢と乳棒で粉砕し、次いでその微粉化組成物を400メッシュのふるいを通して、大きな凝集体を分解または分離させることによって調製することができる。
【０１４６】
有効成分組成物微粒子は、場合によっては、エアゾール剤処方を容易にするのに役立つ分散剤を含むことができる。適切な分散剤はラクトースであり、任意の適切な比(例えば、1:1重量比)で有効成分と混合することができる。
【０１４７】
本明細書に開示する活性化合物は、対象の鼻道、副鼻腔および肺を含めた気道表面に、点鼻剤、ミストなど当分野で既知の適切な手段によって投与することができる。本発明の一実施形態においては、本発明の活性化合物および気管支鏡洗浄によって投与される。本発明の好ましい実施形態においては、対象が吸入し、呼吸して吸い込まれる、活性化合物を含む粒子のエアゾール懸濁液剤を投与することによって、本発明の活性化合物を肺気道表面に付着させる。呼吸して吸い込まれる粒子は、液体でも固体でもよい。エアゾール粒子を対象の肺に投与する多数の吸入器が知られている。
【０１４８】
米国特許第5,740,794号、同5,654,007号、同5,458,135号、同5,775,320号および同5,785,049号に記載されたものを含めて、ただしこれらだけに限定されない、Inhale Therapeutic Systems、Palo Alto、California、USAによって開発されたものなどの吸入器を使用することができる。これらの特許の各々を参照により本明細書に援用する。本出願人は、本明細書に引用する特許文献のすべての開示を、参照によりその全体を本明細書に援用することを特に意図している。米国特許第5,622,166号、同5,577,497号、同5,645,051号および同5,492,112号に開示されたものを含めて、ただしこれらだけに限定されない、Dura Pharmaceuticals,Inc.、San Diego、California、USAによって開発されたものなどの吸入器も使用することができる。これらの特許の各々を参照により本明細書に援用する。また、米国特許第5,826,570号、同5,813,397号、同5,819,726号および同5,655,516号に開示されたものを含めて、ただしこれらだけに限定されない、Aradigm Corp.、Hayward、California、USAによって開発されたものなどの吸入器も使用することができる。これらの特許の各々を参照により本明細書に援用する。これらの装置は、乾燥粒子吸入器として特に適切である。
【０１４９】
活性化合物を含む液体粒子のエアゾールを、圧力駆動エアゾールネブライザー、超音波ネブライザーなど任意の適切な手段によって生成させることができる。例えば、参照により本明細書に援用する米国特許第4,501,729号を参照されたい。ネブライザーは、圧縮ガス、一般に空気または酸素を細いベンチュリオリフィスに通して加速することによって、または超音波撹拌によって、活性成分の溶液または懸濁液を治療用エアゾールミストに変換する市販装置である。ネブライザーでの使用に適した製剤は、活性成分の担体溶液からなり、活性成分は製剤の最大40%w/w、好ましくは20%w/w未満を構成する。担体は、一般に、水(最も好ましくは、発熱性物質を含まない無菌水)または希薄アルコール水溶液である。パーフルオロ炭素担体を使用することもできる。任意に選択される添加剤としては、製剤が無菌でない場合は防腐剤、例えば、ヒドロキシ安息香酸メチル、酸化防止剤、矯味矯臭剤、揮発油、緩衝剤、界面活性剤などがある。
【０１５０】
活性化合物を含む固体粒子のエアゾールを、同様に、任意の固体粒子エアゾール発生装置で発生させることができる。固体粒子製薬品を対象に投与するためのエアゾール発生装置は、上述したように呼吸して吸い込まれる粒子を生成し、所定用量の医薬品を含むある体積のエアゾール剤を、ヒト投与に適切な速度で発生させる。説明のための固体粒子エアゾール発生装置のタイプは吸入器である。通気法による投与に適切な製剤としては、吸入器によって送達させることができる、または鼻から吸い込んで鼻腔に取り込むことができる微粉砕散剤などがある。吸入器では、散剤(例えば、本明細書に記載する治療を実施するのに有効な定量用量の散在)は、生体位で貫通または開口される、一般にゼラチンまたはプラスチックでできたカプセルまたはカートリッジに入れられており、装置から吸入または手動ポンプによって取り出される空気で送達される。吸入器に使用される散剤は、活性成分のみ、または活性成分と、ラクトースなどの適切な粉末希釈剤と、任意に選択される界面活性剤とを含む散剤混合物からなる。活性成分は、一般に、製剤の0.1〜100%w/wを構成する。説明のための第2のタイプのエアゾール発生装置は、定量用量吸入器である。定量用量吸入器は、加圧エアゾールディスペンサーであり、一般に、液化噴霧剤中に活性成分の懸濁液または溶液を含む。使用中には、これらの装置は、定量体積、一般に10〜150μlを送達するようになされたバルブを通して製剤を放出して、活性成分を含む微粒子スプレーを生成する。適切な噴霧剤としては、ある種のクロロフルオロ炭素化合物、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタンおよびそれらの混合物が挙げられる。製剤は、さらに、1つまたは複数の共溶媒、例えば、エタノール、オレイン酸またはトリオレイン酸ソルビタンなどの界面活性剤、酸化防止剤、および適切な矯味矯臭剤も含むことができる。
【０１５１】
エアゾールは、固体粒子から形成されても、液体粒子から形成されても、エアゾール発生装置によって、約10〜150リットル/分、より好ましくは30〜150リットル/分、最も好ましくは約60リットル/分で発生させることができる。より多量の医薬品を含むエアゾール剤を、より迅速に投与することができる。
【０１５２】
本明細書に開示する活性化合物の投与量は、治療する病態、および対象の状態によって変わるが、一般に、気道表面に付着した製薬品で約0.01、0.03、0.05、0.1〜1、5、10または20mgとすることができる。一日量は、1回または複数回の単位用量投与に分割することができる。肺気道表面の製薬品濃度を10-9〜104Mとすることが目標である。
【０１５３】
別の実施形態においては、それらは、対象が鼻から吸入する活性化合物を含む呼吸して吸い込まれる粒子、または呼吸して吸い込まれない粒子(好ましくは、呼吸して吸い込まれない粒子)のエアゾール懸濁液剤を投与することによって投与される。呼吸して吸い込まれる粒子、または呼吸して吸い込まれない粒子は、液体でも固体でもよい。含まれる活性製薬品の量は、対象の気道表面の有効成分の溶解濃度が、約10-9、10-8または10-7〜約10-3、10-2、10-1mol/l、より好ましくは約10-7〜約10-4mol/lに達するのに十分な量とすることができる。
【０１５４】
活性化合物の投与量は、治療する病態、および対象の状態によって変わるが、一般に、対象の鼻気道表面の活性化合物の溶解濃度が、約10-9、10-8、10-7〜約10-3、10-2、10-1mol/l、より好ましくは約10-7〜約10-4mol/lに達するのに十分な量とすることができる。投与する個々の活性化合物製剤の溶解性に応じて、一日量を1回または数回の単位用量投与に分割することができる。ヒト対象に対する1日の投与重量は、対象の年齢および病態に応じて、有効成分粒子約0.01、0.03、0.1、0.5または1.0〜10または20ミリグラムとすることができる。現時点で好ましい単位用量は、1日に2〜10回の投与計画で与えられる有効成分約0.5ミリグラムである。この投与量を、任意の適切な手段によって(例えば、ゼラチンカプセル剤をカプセル化した)あらかじめ包装された単位として提供することができる。
【０１５５】
本発明の一実施形態においては、有効成分組成物微粒子は、有効成分の遊離塩基および製薬品として許容される塩の両方を含有しており、有効成分を迅速に放出して、または持続的に放出して鼻の分泌粘液に溶解させることができる。このような組成物は、患者を迅速に解放するのにも、時間を掛けて持続的に解放するのにも役立つ。持続的解放は、1日の必要な投与数を少なくすることによって、有効成分治療の経過とともに患者の服薬率が増加すると予想される。
【０１５６】
気道投与に適切な医薬製剤としては、溶液剤、エマルジョン剤、懸濁液剤、抽出液剤などがある。一般には、参照により本明細書に援用するRemington:The Science and Practice of Pharmacy、86章(第19版、1995)中のJ.Nairn、Solutions,Emulsions,Suspensions and Extractsを参照されたい。経鼻投与に適切な医薬製剤は、Schorの米国特許第4,389,393号、Illumの同5,707,644号、Suzukiの同4,294,829号、およびSuzukiの同4,835,142号に記載のように調製することができる。これらの開示を、参照によりその全体を本明細書に援用する。
【０１５７】
有効成分の無菌食塩水溶液、滅菌水などの、製薬品として許容される担体水溶液を単に鼻にスプレーするなど、任意の適切な手段によって、活性化合物を含む液体粒子のミストまたはエアゾールを発生させることができる。投与には、圧力駆動エアゾールネブライザーまたは超音波ネブライザーを用いることができる。例えば、米国特許第4,501,729号および同5,656,256号を参照されたい。両方の特許を参照により本明細書に援用する。鼻の液滴またはスプレーボトルまたはネブライザーでの使用に適切な製剤は、活性成分の担体溶液からなり、活性成分は、製剤の最大40%w/w、好ましくは20%w/w未満を構成する。一般に、担体は、水(最も好ましくは、発熱性物質を含まない無菌水)または希薄アルコール水溶液であり、好ましくは、0.12%〜0.8%塩化ナトリウム溶液中で調製される。任意に選択される添加剤としては、製剤が無菌でない場合は防腐剤、例えば、ヒドロキシ安息香酸メチル、酸化防止剤、矯味矯臭剤、揮発油、緩衝剤、浸透圧的に活性な成分(例えば、マンニトール、キシリトール、エリスリトール)、界面活性剤などがある。
【０１５８】
呼吸して吸い込まれる、または呼吸して吸い込まれない微粉化有効成分の乾燥粒子を含む組成物は、乾燥有効成分を乳鉢と乳棒で粉砕し、次いでその微粉化組成物を400メッシュのふるいを通して、大きな凝集体を分解または分離させることによって調製することができる。
【０１５９】
粒子組成物は、場合によっては、エアゾールの形成を促進するのに役立つ分散剤を含むことができる。適切な分散剤はラクトースであり、任意の適切な比(例えば、重量比1:1)で有効成分と混合することができる。
【０１６０】
式(I)の化合物は、当分野で既知の手順によって合成することができる。代表的な合成手順を、以下のスキームに示す。
【０１６１】
【化１５】
2005526726.tif 000016
【０１６２】
これらの手順は、例えば、参照により本明細書に援用するE.J.Cragoe、「The Synthesis of Amiloride and Its Analogs」(第3章)、Amiloride and Its Analogs、25〜36ページに記載されている。化合物を調製する別の方法は、例えば、参照により本明細書に援用する米国特許第3,313,813号に記載されている。特に、米国特許第3,313,813号に記載の方法A、B、CおよびDを参照されたい。
【０１６３】
いくつかのアッセイを使用して本発明の化合物を特徴づけることができる。代表的なアッセイを以下に考察する。
【０１６４】
ナトリウムチャネル遮断活性および可逆性のインビトロ測定
本発明の化合物の作用機序および/または効力を評価するのに使用されるアッセイの1つは、Ussingチャンバに取り付けた気道上皮単層を用いて、短絡電流(Isc)下で測定した気道上皮ナトリウム電流の管腔薬物阻害(lumenal drug inhibition)を測定するものである。新たに切除されたヒト、イヌ、ヒツジまたはげっ歯類の気道から得られた細胞を、多孔質の0.4ミクロンSnapwell(商標)Inserts(CoStar)に蒔き、ホルモン特定培地(hormonally defined media)において空気-液体界面(ALI)条件で培養し、Usingチャンバのクレブスリンガー重炭酸塩(Krebs bicarbonate Ringer)(KBR)に浸しながらナトリウム輸送活性(Isc)を評価する。すべての被検薬を、(1×10-11Mから3×10-5Mへの)ハーフログ用量(half-log dose)添加手順で管腔液(lumenal bath)に添加し、Isc(阻害)の累積変化を記録する。すべての薬物を、ジメチルスルホキシド中で濃度1×10-2Mの原液として調製し、-20℃で保存する。通常、8つの試料を並行して分析する。1回の分析につき、2つの試料にアミロライドおよび/またはベンザミルを正の対照として混合する。最大濃度(5×10-5M)を投与した後、薬物を含まない新しいKBR溶液で管腔液を3回交換し、得られるIscを約5分間の各洗浄後に測定する。可逆性は、3回目の洗浄後のナトリウム電流のベースライン値に対する復帰割合として定義される。電位固定から得られる全データを、コンピュータインターフェースを介して収集し、オフラインで解析する。
【０１６５】
すべての化合物に対する用量-効果の関係を考慮し、Prism 3.0プログラムによって解析する。IC50値、最大有効濃度および可逆性を計算し、正の対照のアミロライドおよびベンザミルと比較する。
【０１６６】
吸収の薬理評価
(1)アピカル消失アッセイ(Apical Disappearance Assay)
気管支細胞(イヌ、ヒト、ヒツジまたはげっ歯類の細胞)を、多孔質Transwell-Colコラーゲン被覆膜上に密度0.25×106/cm2で蒔き、分極した上皮を活性化するホルモン特定培地の空気-液体界面で成長域1.13cm2を増殖させる。空気-液体界面(ALI)の発生から12〜20日後で、培養物は、>90%繊毛(ciliated)となることが予想され、ムチンが細胞上に蓄積されるはずである。一次の気道上皮細胞試料の完全性を確実にするために、培養物の分極性の完全性の指標となる経上皮抵抗(Rt)および経上皮電位差(PD)を測定する。ヒト細胞系は、先端面からの吸収速度の研究に好ましい。消失アッセイを、インビボの「薄」膜(〜25μl)を模倣した条件下で実施し、実験用ナトリウムチャネル遮断薬または正の対照(アミロライド、ベンザミル、フェンナミル)を先端面に初期濃度10μMで添加することによって開始する。一連の試料(1つの試料につき体積5μl)を、0、5、20、40、90および240分を含めた様々な時間で収集する。濃度を、Fluorocount Microplate FlourometerまたはHPLCを用いて各ナトリウムチャネル遮断薬の固有蛍光を測定することによって決定する。定量分析には、濃度および純度が既知の信頼できる比較基準材料から作成された標準曲線を使用する。消失速度のデータ分析を、非線形回帰、1相指数関数的減衰(one phase exponential decay)(Prism V 3.0)を用いて実施する。
【０１６７】
2.アミロライド同族体取り込みの共焦点顕微鏡法アッセイ
実質的にすべてのアミロライド様分子が、紫外領域で蛍光を発する。これらの分子のこの性質を使用し、x-z共焦点顕微鏡法を用いて細胞の更新を直接測定することができる。等モル濃度の実験化合物と、アミロライド、および細胞区画に迅速に取り込まれることを実証する化合物(ベンザミルおよびフェンナミル)を含めた正の対照とを、共焦点顕微鏡のステージ上の気道培養物の先端面に置く。連続x-z画像を経時的に得て、細胞区画に蓄積される蛍光の大きさを定量化し、蛍光変化対時間としてプロットする。
【０１６８】
3.化合物代謝のインビトロアッセイ
気道上皮細胞は、経上皮吸収過程中に薬物を代謝することができる。また、可能性は低いが、薬物が特異的細胞外酵素活性によって気道上皮表面で代謝される可能性もある。おそらく、表面外(ecto-surface)の現象として、化合物は、肺疾患、例えば嚢胞性線維症の患者の気道をふさぐ感染分泌物によって代謝される可能性の方が高い。したがって、試験化合物と、ヒト気道上皮および/またはヒト気道上皮管腔の産物との相互作用に起因する化合物代謝の特性を明らかにするために、一連のアッセイを実施する。
【０１６９】
第1のシリーズのアッセイでは、KBR中での「ASL」刺激薬としての試験化合物の相互作用を、T-Colインサートシステムで増殖させたヒト気道上皮細胞の先端面に適用する。ほとんどの化合物では、化学種を分離するために高速液体クロマトグラフィー(HPLC)を用い、試験化合物と新規代謝産物の相対量を推定するために、これらの化合物の内因性蛍光特性を用いて代謝(新しい種の発生)を試験する。典型的なアッセイでは、試験溶液(KBR25μl、試験化合物10μMを含有)を上皮管腔表面に置く。試料5〜10μlを管腔およびしょう膜区画から連続的に採取して、(1)管腔液からしょう膜液(serosal bath)に浸透する試験化合物の量、および(2)親化合物から代謝産物が形成されるかどうかをHPLCで分析する。試験分子の蛍光特性が、このようなキャラクタリゼーションに適切でない場合、放射能標識化合物をこれらのアッセイに使用する。HPLCデータから、管腔表面での新規代謝化合物の消失および/または形成速度、および基底膜液中の試験化合物および/または新規代謝産物の出現速度を定量する。新規代謝産物候補のクロマトグラフィー移動度を親化合物に関係付けるデータも定量する。
【０１７０】
CF痰によって試験化合物が代謝されるかどうかを分析するために、(IRBによって承認された)10人のCF患者から得られた喀出されたCF痰の「代表的な」混合物を収集した。その痰を、激しく撹拌しながらKBR溶液の1:5混合物に溶解し、続いてその混合物を、「ニート」痰アリコートと、超遠心分離して「上清」アリコートを得るためのアリコートに分割した(ニート=細胞;上清=液相)。CF痰による化合物代謝の典型的な試験は、37℃でインキュベートした「ニート」CF痰とアリコートCF痰「上清」に既知量の試験化合物を添加し、続いて各痰タイプから一定量を連続的にサンプリングして、化合物の安定性/代謝を上述したようにHPLC分析によって明らかにするものである。上述のとおり、化合物消失、新規代謝産物の形成速度、および新規代謝産物のHPLC移動度の分析を実施する。
【０１７１】
4.動物における薬物の薬理学的効果および作用機序
化合物の粘膜繊毛クリアランス(MCC)促進効果を、参照により本明細書に援用するSabater等、Journal of Applied Physiology、1999、2191〜2196ページに記載のインビボモデルを用いて測定することができる。
【実施例】
【０１７２】
本発明の概略を説明したが、いくつかの具体例を参照することによってさらなる理解を得ることができる。これらの具体例は、説明のためにのみ本明細書に提供されるものであって、別段の記載がないかぎり限定するものではない。
【０１７３】
ナトリウムチャネル遮断薬の調製
材料および方法。すべての試薬および溶媒を、Aldrich Chemical Corp.から購入し、さらに精製せずに使用した。NMRスペクトルを、Bruker WM 360(360MHzの1H NMRおよび90MHzの13C NMR)またはBruker AC 300(300MHzの1H NMRおよび75MHzの13C NMR)から得た。フラッシュクロマトグラフィーを、Elution Solution(PO Box 5147、Charlottesville、Virginia 22905)のシリカゲルカートリッジ(40M FSO-0110-040155、32〜63μm)90gを充填したFlash Elute(商標)システムを用いて138kPa(20psi)(N2)で実施した。GC分析を、Heliflexキャピラリーカラム(Alltech);相:AT-1、長さ:10メートル、ID:0.53mm、フィルム:0.25マイクロメータを装着したShimadzu GC-17を用いて実施した。GCパラメータ:インジェクタ320℃、検出器320℃、FIDガス流量:H2 40ml/min、空気400ml/min。キャリアガス:スプリット比16:1、N2流量15ml/min、N2速度18cm/s。温度プログラムは、70℃0〜3min、70〜300℃3〜10min、300℃10〜15minである。
【０１７４】
HPLC分析を、Microsorb MV C8カラム、100 A、25cmを装着したGilson 322ポンプ、検出器UV/Vis-156 360nmで実施した。移動相:A=0.1%TFAを含むアセトニトリル、B=0.1%TFAを含む水。勾配プログラム:95:5 B:Aを1分間、次いで20:80 B:Aで7分間、次いで100%Aで1分間、続いて100%Aで11分間、流量:1ml/minで洗い出す。
【０１７５】
(実施例1)
4-(4-ヒドロキシフェニル)ブチルアミジノ-3,5-ジアミノ-6-クロロピラジンカルボキサミド塩酸塩(V)
標題の化合物を下記スキーム1に示すように調製した。4-(4-ヒドロキシフェニルブチル)アミンを、以下の手順に記載の型通りの有機変換によって調製した。カップリングを、両方を参照により本明細書に援用するCragoe,E.J.Jr.、Oltersdorf,O.W.Jr.およびdelSolms.S.J.(1981)米国特許第4,246,406号に記載の手順に従って実施した。Vの物理的性質にしたがってワークアップおよび精製を修正した。
【０１７６】
4-メチルフェニルスルホン酸4-(4-メトキシフェニル)ブチルエステル(I)。
ピリジン(15mL)を、4-(4-メトキシフェニル)ブタノール(10.0g、0.055mol)および塩化p-トルエンスルホニル(13.6g、0.072mol)の無水クロロホルム(100mL)冷却(0℃)溶液に撹拌下滴下した。その反応混合物を室温で終夜撹拌した。その後、反応物を10%HCl(300mL)で急冷し、クロロホルムで抽出した。その有機画分を飽和NaHCO3、水で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧除去し、その残渣をフラッシュクロマトグラフィー(溶離液:へキサン、酢酸エチル=15:1)で精製して、透明オイルのI 12.9g(66%)を得た。1H NMR(360MHz,CDCl3)1.61(m,4H)、2.44(s,3H)、2.52(m,2H)、3.78(s,3H)、4.05(m,2H)、6.77(d,J=12.5Hz,2H)、7.05(d,J=12.5Hz,2H)、7.34(d,J=10.5Hz,2H)、7.78(d,J=10.5Hz,2H)。
【０１７７】
【化１６】
2005526726.tif 000017
【０１７８】
4-(4-メトキシフェニル)ブチルアジド(II)。
アジ化ナトリウム(3.07g、0.047mol)を、II(12.9g、0.04mol)の無水DMF(70mL)溶液に添加し、その反応混合物を12時間80℃(油浴)で撹拌した。次いで、溶媒を減圧除去し、その残留オイルをCH2Cl2:エーテル=3:1(100mL)混合物で処理した。得られた溶液を水、塩水で洗浄し(2×100mL)、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧除去し、II 7.6g(95%)を得た。IIの純度(99%)を、GCおよびTLC(溶離液:へキサン、酢酸エチル=1:1)、Rf=0.84で決定した。
【０１７９】
4-(4-メトキシフェニル)ブチルアミン(III)。
水素化アルミニウムリチウム(1M THF溶液55mL、0.055mol)を、II(7.6g、0.037mol)の無水THF(70mL)溶液に0℃で滴下し、アルゴン雰囲気中室温で終夜撹拌した。その反応混合物を、水(1.5mL)、次いで15%NaOH(1.5mL)、さらに水(3mL)で処理して、ろ過した。その固体沈殿物をTHFで洗浄した。混合有機画分を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧除去してIII 6.2g(94%)を得た。IIIの純度(99%)をGCで決定した。1H NMR(360MHz,DMSO-d6)1.34(m,2H)、1.54(m,2H)、2.51(m,4H)、3.70(s,3H)、6.83(d,J=8.6Hz,2H)、7.08(d,J=8.3Hz,2H);13C(90MHz,DMSO-d6)28.6、330、34.1、41.5、54.8、113.1、129.1、132.2、157.3
【０１８０】
臭化水素酸4-(4-ヒドロキシフェニル)ブチルアミン(IV)。
アミンIII(2.32g、0.012mol)を沸騰48%HBr(50mL)中で3時間撹拌した。反応終了後、アルゴンを溶液を通してバブリングさせ、溶媒を減圧蒸発させた。その固体残渣をKOHで乾燥させてIV 3.1g(90%)を得た。API MS m/z=166[C10H15NO+H]+
【０１８１】
4-(4-ヒドロキシフェニル)ブチルアミジノ-3,5-ジアミノ-6-クロロピラジンカルボキサミド塩酸塩(V)。
1-(3,5-ジアミノ-6-クロロピラジノイル-2-メチル-プソイドチオ尿素ヨウ化水素酸塩(0.4g、1.03mmol)を、THF(35mL)とトリエチルアミン(3mL)の混合液中の4-(4-ヒドロキシフェニル)ブチルアミン臭化水素酸塩(IV)懸濁液に添加した。その反応混合物を還流温度で3時間撹拌し、次いでその上清を分離し、溶媒を減圧除去した。その油状残渣を水(2×30mL)、エーテル(3×30mL)で洗浄し、次いで10%HCl(40mL)を添加した。この混合物を10分間激しく撹拌し、次いで黄色固体をろ過して取り出し、乾燥し、エタノールから2回再結晶させて、黄色固体のV 181mg(41%)を得た。純度はHPLCで98%であり、保持時間は9.77分である。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)1.56(br s,4H)、2.48(br s,2H)、3.35(m,2H)、6.65(d,J=8.5Hz,2H)、6.95(d,J=8.6Hz,2H)、7.50(br s,2H)、8.75(br s,1H)、9.05(br.s,1H)、9.33(br s,2H)、10.55(s,1H);13C NMR(75MHz,CD3OD)28.7、29.8、35.4、42.4、111.2、116.1、122.0、130.0、134.0、155.0、156.1、156.8、157.5、167.0;APCI MS m/z=378[C16H20ClN7O2+H]+。
【０１８２】
(実施例2)
4-(4-ヒドロキシフェニル)ブチルアミジノ-3,5-ジアミノ-6-クロロピラジンカルボキサミド塩酸塩
【０１８３】
【化１７】
2005526726.tif 000018
【０１８４】
4-メチルフェニルスルホン酸4-(4-メトキシフェニル)ブチルエステル(1)。
ピリジン(15mL)を、4-(4-メトキシフェニル)ブタノール(10.0g、0.055mol)と塩化p-トルエンスルホニル(13.6g、0.072mol)の無水クロロホルム(100mL)冷却(0℃)溶液に撹拌下滴下した。その反応混合物を室温で終夜撹拌した。その後、その反応物を10%HCl(300mL)で急冷し、クロロホルムで抽出した。その有機画分を飽和NaHCO3、水で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧除去し、その残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製して(溶離液:へキサン/酢酸エチル15:1)透明オイル1 12.9g(66%)を得た。1H NMR(360MHz,CDCl3)1.61(m,4H)、2.44(s,3H)、2.52(m,2H)、3.78(s,3H)、4.05(m,2H)、6.77(d,2H)、7.05(d,2H)、7.34(d,2H)、7.78(d,2H)。
【０１８５】
4-(4-メトキシフェニル)ブチルアジド(2)。
アジ化ナトリウム(3.07g、0.047mol)を1(12.9g、0.04mol)の無水DMF(70mL)溶液に添加し、その反応混合物を12時間80℃(油浴)で撹拌した。次いで、溶媒を減圧除去し、その残留オイルをCH2Cl2/エーテル3:1混合物(100mL)で処理した。得られた溶液を水(2×100mL)、塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧除去して、2 7.6g(95%)を得た。2の純度(99%)をGCおよびTLC(溶離液:へキサン/酢酸エチル1:1)、Rf=0.84で決定した。
【０１８６】
4-(4-メトキシフェニル)ブチルアミン(3)。典型的な手順A
水素化リチウムアルミニウム(LAH)(1.0M THF溶液55mL、0.055mol)を、2(7.6g、0.037mol)の無水THF(70mL)溶液に0℃で滴下した。その混合物をアルゴン雰囲気下室温で終夜撹拌し、次いでその混合物を水(1.5mL)、次いで15%NaOH(1.5mL)、さらに水(3mL)で処理しろ過した。その固体沈殿物をTHFで洗浄した。混合有機画分を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧除去して3 6.2g(94%)を得た。3の純度(99%)をGCで決定した。1H NMR(360MHz,DMSO-d6)1.34(m,2H)、1.54(m,2H)、2.51(m,4H)、3.70(s,3H)、6.83(d,2H)、7.08(d,2H)。13C(90MHz,DMSO-d6)28.6、330、34.1、41.5、54.8、113.1、129.1、132.2、157.3
【０１８７】
4-(4-ヒドロキシフェニル)ブチルアミン臭化水素酸塩(4)。典型的な手順B
アミン3(2.32g、0.012mol)を沸騰48%HBr(50mL)中で3時間撹拌した。反応終了後、アルゴンを溶液を通してバブリングさせ、溶媒を減圧蒸発させた。その固体残渣をKOHで乾燥させて、4を3.1g(90%)得た。APCI MS m/z=166[C10H15NO+H]+
【０１８８】
4-(4-ヒドロキシフェニル)ブチルアミジノ-3,5-ジアミノ-6-クロロピラジンカルボキサミド塩酸塩(5)。
1-(3,5-ジアミノ-6-クロロピラジノイル-2-メチル-プソイドチオ尿素ヨウ化水素酸塩(0.4g、1.03mmol)を、THF(35mL)とトリエチルアミン(3mL)の混合液中の4-(4-ヒドロキシフェニル)ブチルアミン臭化水素酸塩(4)(0.8g、32mmol)懸濁液に添加した。その反応混合物を沸騰溶媒中で3時間撹拌し、次いでその上清を分離し、溶媒を減圧除去した。その油状残渣を水(2×30mL)、エーテル(3×30mL)で洗浄し、次いで10%HCl(40mL)を添加した。この混合物を10分間激しく撹拌し、次いで黄色固体をろ過して取り出し、乾燥し、エタノールから2回再結晶させて、黄色固体の5(0.18g、41%)を得た。純度はHPLCで98%であり、保持時間は9.77分である。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)1.56(br s,4H)、2.48(br s,2H)、3.35(m,2H)、6.65(d,2H)、6.95(d,2H)、7.50(br s,2H)、8.75(br s,1H)、9.05(br s,1H)、9.33(br s,2H)、10.55(s,1H)。13C NMR(75MHz,CD3OD)28.7、29.8、35.4、42.4、111.2、116.1、122.0、130.0、134.0、155.0、156.1、156.8、157.5、167.0。APCI MS m/z=378[C16H20ClN7O2+H]+。
【０１８９】
(実施例3)
3-(4-ヒドロキシフェニル)プロピルアミジノ-3,5-ジアミノ-6-クロロピラジンカルボキサミド塩酸塩
【０１９０】
【化１８】
2005526726.tif 000019
【０１９１】
メタンスルホン酸3-(4-メトキシフェニル)プロピルエステル(11)。典型的な手順E。
ピリジン(15mL)を、4-(4-メトキシフェニル)プロパノール(10.0g、0.06mol)と塩化メタンスルホニル(14.7g、0.078mol)の無水THF(70mL)冷却(0℃)溶液に撹拌下滴下した。その反応混合物を室温で終夜撹拌した。その後、溶媒を減圧除去し、その残渣を10%HCl(300mL)で急冷し、酢酸エチルで抽出した。その有機画分を飽和NaHCO3、水で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を除去し、その残留粗製エステル11をさらに精製せずに次のステップに使用した。化合物11を黄色オイル(8.8g、60%)として得た。1H NMR(300MHz,CDCl3)2.08(m,2H)、2.60(m,2H)、2.98(m,2H)3.98(s,3H)、3.66(s,3H)、6.85(d,2H)、7.03(d,2H)。
【０１９２】
3-(4-メトキシフェニル)プロピルアジド(12)。
アジド12を、手順Cに従って11(8.8g、0.036mol)およびアジ化ナトリウム(3g、0.045mol)から収率75%で調製した。1H NMR(300MHz,CDCl3)1.90(m,2H)、2.65(t,2H)、3.28(m,2H)、3.80(s,3H)、6.85(d,2H)、7.10(d,2H)。
【０１９３】
3-(4-メトキシフェニル)プロピルアミン(13)。
アミン13を、手順Aに記載のとおり、アジド12(5.2g、0.027mol)およびLAH(1M THF溶液26mL)から調製した。
粗製物13をフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、2:1:0.05クロロホルム/エタノール/濃水酸化アンモニウム)で精製して、透明オイルの純粋なアミン13(3.2g、74%)を得た。1H NMR(300MHz,CDCl3)1.58(m,2H)、2.50(m,4H)、3.72(s,3H)、6.85(d,2H)、7.10(d,2H)。
【０１９４】
3-(4-ヒドロキシフェニル)プロピルアミン臭化水素酸塩(14)。
化合物14を手順Bに従って13(2.5g、0.015mol)から淡褐色固体として収率75%で合成した。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)1.80(m,2H)、2.53(m,2H)、2.78(m,2H)、6.70(d,2H)、7.02(d,2H)、7.80(br s,4H)。
【０１９５】
3-(4-ヒドロキシフェニル)プロピルアミジノ-3,5-ジアミノ-6-クロロピラジンカルボキサミド塩酸塩(15)。
トリエチルアミン(8mL)を、化合物14(0.470g、2mmol)のTHF(40mL)懸濁液に添加し、その混合物を室温で15分間撹拌した。その後、1-(3,5-ジアミノ-6-クロロピラジノイル-2-メチル-プソイドチオ尿素ヨウ化水素酸塩(0.15g、0.4mmol)を添加し、その混合物を還流させながら3時間撹拌した。次いで、その溶液を室温に冷却し、その上清を単離した。溶媒を蒸発させ、その残留オイルをエーテル(2×50mL)、酢酸エチル(50mL)で洗浄し、10%HCl 20mlで処理した。得られた固体をろ過によって単離し、MeOH(約50mL)に溶解した。酢酸エチル(20mL)をこの溶液に添加すると黄色固体が沈殿し、それを遠心分離によって単離し、酢酸エチルで洗浄し、減圧乾燥させて、黄色固体の化合物15(48mg、31%)を得た。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)1.80(br s,2H)、2.58(m,2H)、3.95(br s,4H)、6.70(d,2H)、7.03(d,2H)、7.48(br.s,2H)、8.80(br s,1H)、8.93(br s,1H)、9.32(br s,2H)、10.52(s,1H)。APCI MS m/z=364[C15H18ClN7O2+H]+。
【０１９６】
(実施例4)
5-(4-ヒドロキシフェニル)ペンチルアミジノ-3,5-ジアミノ-6-クロロピラジンカルボキサミド塩酸塩
【０１９７】
【化１９】
2005526726.tif 000020
【０１９８】
5-(4-メトキシフェニル)ペント-4-イン-1-オール(16)。
4-ヨードアニソール(10g、42mmol)、塩化パラジウム(II)(0.2g、1.1mmol)およびトリフェニルホスフィン(0.6g、2.2mmol)を、ジエチルアミン(100mL)に溶解し、次いでヨウ化cupper(I)(0.5g、2.2mmol)および4-ペンチン-1-オール(5mL、53mmol)を添加した。その反応混合物を室温で終夜撹拌し、次いで溶媒を減圧除去した。酢酸エチル(150mL)をその残渣に添加し、その混合物を2N HCl、塩水および水で洗浄した。その有機画分を単離し、硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を減圧除去した。生成物16(7.1g、87%)を、フラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、1:2酢酸エチル/へキサン)によって油状黄色固体として単離した。1H NMR(300MHz,CDCl3)1.88(m,2H)、2.53(m,2H)、3.72(s,3H)、3.74(m,2H)、6.83(d,2H)、7.45(d,2H)。
【０１９９】
5-(4-メトキシフェニル)ペンタン-1-オール(17)。
16(7.1g、37mmol)の150無水エタノール(150mL)溶液を、0.5L Parrフラスコに入れ、炭素担持パラジウム(0.92g、5%ウェットPd/C)をエタノール(25mL)懸濁液として添加した。その反応混合物を、水素圧力345kPa(50psi)で室温で24時間振とうした。その後、この混合物をシリカゲルパッドを通してろ過し、溶媒を減圧除去した。その残渣をフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、1:3酢酸エチル/へキサン)によって精製して透明オイル17(6.7g、92%)を得た。1H NMR(300MHz,CDCl3)1.48(m,2H)、1.60(m,4H)、2.58(m,2H)、3.63(m,2H)3.80(s,3H)、6.83(d,2H)、7.10(d,2H)。
【０２００】
メタンスルホン酸4-(4-メトキシフェニル)ペンチルエステル(18)。
エステル18を、手順Eに従ってアルコール17(6.7g、34.5mmol)および塩化メタンスルホニル(4.5mL、50mmol)から調製した。粗製生成物18(9.0g)を褐色オイルとして得て、精製せずに次のステップに使用した。
【０２０１】
5-(4-メトキシフェニル)ペンチルアジド(19)。
化合物19を、手順Cに従って粗製物18(9.0g)およびアジ化ナトリウム(2.7g、40mmol)から合成した。アジド19(6g、17から79%)をフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、1:1酢酸エチル/へキサン)によって単離した。1H NMR(300MHz,CDCl3)1.40(m,2H)、1.62(m,4H)、2.56(m,2H)、3.35(m,2H)3.80(s,3H)、6.85(d,2H)、7.10(d,2H)。
【０２０２】
5-(4-メトキシフェニル)ペンチルアミン(20)。
アミン20を、手順Aに従って19(6g、27mmol)およびLAH(1.0M THF溶液26mL)から収率70%で調製した。1H NMR(300MHz,CDCl3)1.35(m,2H)、1.48(m,2H)1.61(m,2H)、2.55(m,2H)、2.70(m,2H)3.80(s,3H)、6.85(d,2H)、7.10(d,2H)。
【０２０３】
5-(4-ヒドロキシフェニル)ペンチルアミン(21)。
21のHBr塩を、手順Bに従ってアミン20(2.8g、14mmol)から調製した。遊離アミン21(2g、80%)を、フラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、6:3:0.1、クロロホルム/エタノール/濃水酸化アンモニウム)後に濁ったオイルとして得た。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)1.28(m,2H)、1.55(m,2H)、1.61(m,2H)、2.48(m,2H)、2.58(m,2H)、6.68(d,2H)、6.98(d,2H)。
【０２０４】
5-(4-ヒドロキシフェニル)ペンチルアミジノ-3,5-ジアミノ-6-クロロピラジンカルボキサミド塩酸塩(22)。
1-(3,5-ジアミノ-6-クロロピラジノイル-2-メチル-プソイドチオ尿素ヨウ化水素酸塩(0.25g、0.65mmol)を、21(0.6g、3.4mmol)のTHF(50mL)溶液に添加した。その反応混合物を還流させながら2時間撹拌し、次いで溶媒を減圧除去し、得られたオイルをエーテル(2×50mL)で洗浄し、黄色粉末が形成されるまで酢酸エチルで処理した。この黄色固体をメタノール(70mL)に溶解し、沈殿し始めるまでその体積を徐々に減少させた(約25mL)。その溶液を0℃に冷却し、遠心分離によって沈殿物を回収した。希HCl(10%溶液20mL)を添加し、その混合物を20分間激しく撹拌し、次いでその沈殿物をろ過して取り出し、冷水で洗浄し、乾燥させて黄色固体の22(183mg、39%)を得た。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)1.32(br s,2H)、1.55(m,4H)、2.45(m,2H)、3.29(m,2H)、6.68(d,2H)、6.97(d,2H)、7.46(s,1H)、8.00(br s,1H)、8.83(br s,1H)、8.97(br s,1H)、9.46(d,2H)、10.55(s,1H)。APCI MS m/z=392[C17H22ClN7O2+H]+。
【０２０５】
(実施例5)
4-(3,4-ジヒドロキシフェニル)ブチルアミジノ-3,5-ジアミノ-6-クロロピラジンカルボキサミド塩酸塩
【０２０６】
【化２０】
2005526726.tif 000021
【０２０７】
4-(3,4-ジメトキシフェニル)ブタノール(23)。
4-(3,4-ジメトキシフェニル)酪酸(13g、58mmol)を、無水THF(150mL)に溶解し、次いでアルゴン雰囲気下で激しく撹拌しながらBH3 THF(110mL、1M溶液、110mmol)を滴下した。次いで、その反応混合物を終夜室温で撹拌した。その後、その反応物を0℃の水および10%HCl溶液で急冷し、酢酸エチルで抽出した。その有機画分を硫酸ナトリウムで脱水し、シリカゲルパッドを通過させた。溶媒を減圧除去して透明オイルの23(12.0g、99%)を得た。1H NMR(300MHz,CDCl3)1.62(m,4H)、2.0(s,1H)、2.62(m,2H)、3.65(m,2H)、3.82(s,3H)、3.84(s,3H)6.67〜6.82(m,3H)。
【０２０８】
メタンスルホン酸4-(3,4-ジメトキシフェニル)ブチルエステル(24)。
エステル24を、手順Eに従ってアルコール23(12.0g、57mmol)および塩化メタンスルホニル(8.4g、74mmol)から収率78%で調製した。1H NMR(300MHz,CDCl3)1.65(m,4H)、2.62(m,2H)、3.05(s,3H)、3.88(br s,6H)、4.38(m,2H)6.70〜6.88(m,3H)。
【０２０９】
4-(3,4-ジメトキシフェニル)ブチルアジド(25)。
化合物25を、手順Cに従って24(14.1g 51mmol)およびアジ化ナトリウム(4.0g、66mmol)から収率96%で合成した。1H NMR(300MHz,CDCl3)1.65(m,4H)、2.60(m,2H)、3.30(m,2H)、3.86(br s,6H)、6.70(m,2H)、6.78(m,1H)。
【０２１０】
4-(3,4-ジメトキシフェニル)ブチルアミン(26)。
アミン26を、手順Aに記述したようにアジド25(11.0g、49mol)およびLAH(1M THF溶液26mL)から調製した。粗製物26をフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、93:7:1クロロホルム/エタノール/濃水酸化アンモニウム)によって精製して透明オイルの純粋な26(4.8g、42%)を得た。1H NMR(300MHz,CDCl3)1.42(m,2H)、1.60(m,2H)、2.55(m,2H)、2.74(m,2H)、3.82(s,6H)、3.84(s,3H)、6.70(m,2H)、6.78(m,1H)。
【０２１１】
4-(3,4-ジヒドロキシフェニル)ブチルアミン臭化水素酸塩(27)。
化合物27を、手順Bに従って26(2.5g、11mmol)からピンク色の固体として収率62%で合成した。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)1.52(br s,4H)、2.40(m,2H)、2.78(m,2H)、6.42(m,1H)、6.60(m,2H)、7.80(br s,4H)。
【０２１２】
4-(3,4-ジヒドロキシフェニル)ブチルアミジノ-3,5-ジアミノ-6-クロロピラジンカルボキサミド塩酸塩(28)。
1-(3,5-ジアミノ-6-クロロピラジノイル-2-メチル-プソイドチオ尿素ヨウ化水素酸塩(0.2g、0.51mmol)を、THF(35mL)とトリエチルアミン(3mL)混合物中の27の懸濁液に添加した。その反応混合物を還流させながら3時間撹拌し、次いでその上清を分離し、溶媒を減圧除去した。その褐色残渣をエーテル(2×30mL)で洗浄し、続いて10%HCl(5mL)を添加した。その固体材料を収集し、メタノールに溶解し、酢酸エチルを添加して沈降させた。その沈殿物を10%HClで洗浄し乾燥させてベージュ色固体の化合物28(131mg、51%)を得た。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)1.52(br s,4H)、2.42(m,2H)、3.31(m,2H)、6.43(m,1H)、6.61(m,2H)、7.42(br s,2H)、7.90(br s,1H)、8.82(br s,1H)、8.98(br s,1H)、9.25(s,1H)10.52(s,1H)。APCI MS m/z=394[C16H20ClN7O3+H]+。
【０２１３】
(実施例6)
4-(4-ヒドロキシフェニル)-4-オキサブチルアミジノ-3,5-ジアミノ-6-クロロピラジンカルボキサミド臭化水素酸塩
【０２１４】
【化２１】
2005526726.tif 000022
【０２１５】
4-(4-ヒドロキシフェニル)-4-オキサブチルアミジノ-3,5-ジアミノ-6-クロロピラジンカルボキサミド臭化水素酸塩(63)。
激しく撹拌した62(80mg、0.19mmol)の48%HBr(15mL)溶液を、2時間還流させ、次いで冷却した。形成された沈殿物を分離し、水で洗浄し、終夜乾燥させて63(52mg、52%)を得た。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)1.99(m,2H)、3.96(m,2H)、6.77(m,2H)、6.79(m,2H)、7.45(s,2H)、8.74(br s,1H)、8.87(br s,1H)、9.30(s,1H)10.48(s,1H)。APCI MS m/z 380[C15H18ClN7O3+H]+。
【０２１６】
(実施例7)
4-(2,4-ジヒドロキシフェニル)ブチルアミジノ-3,5-ジアミノ-6-クロロピラジンカルボキサミド塩酸塩
【０２１７】
【化２２】
2005526726.tif 000023
【０２１８】
4-(2,4-ジメトキシフェニル)-ブト-3-イン-1-オール(75)。
1-ブロモ-2,4-ジメトキシベンゼン(10g 0.046mol)、塩化パラジウム(0.2g 0.11mmol)およびトリフェニルホスフィン(0.6g 0.0023mol)を、ジエチルアミン(100mL)に窒素雰囲気下で溶解した。ヨウ化銅(I)(0.44g 0.0023mol)および3-ブチン-1-オール(7mL 0.092mol)を、その反応混合物に一度に添加した。その混合物を窒素雰囲気下55℃で終夜撹拌した。触媒をろ過して反応混合物から除去し、同じ量の塩化パラジウム、トリフェニルホスフィン、ヨウ化銅(I)および3-ブチン-1-オールを添加した。その反応混合物を撹拌し、85℃で48時間加熱した。次いで、溶媒を減圧除去し、水(約100mL)をその残渣に添加した。その混合物を、シリカゲルパッドを通した酢酸エチル(350mL)で抽出し、濃縮した。その生成物をフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、1:1へキサン/酢酸エチル)によって精製した。化合物75(4.2g、24%)を褐色オイルとして単離した。1H NMR(300MHz,CDCl3)2.24(t,1H)、2.73(t,2H)、3.80(br s,5H)、3.87(s,3H)、6.43(m,2H)、7.30(m,1H)。
【０２１９】
4-(2,4-ジメトキシフェニル)-ブタン-1-オール(76)。
75(4.2g、0.022mol)のエタノール(約200mL)溶液に、パラジウム(活性炭担持5%ウェット、1g)。次いで、その混合物を、276kPa(40psi)で終夜室温で水素添加した。その混合物をシリカゲルパッドを通してろ過し、溶媒を蒸発させて黄色オイルの76(4.15g、97%)を得た。1H NMR(300MHz,CDCl3)1.59(m,4H)、2.55(m,2H)、3.79(s,6H)、6.43(m,2H)、7.00(m,1H)。
【０２２０】
メタンスルホン酸4-(2,4-ジメトキシフェニル)ブチルエステル(77)。
エステル77を、典型的な手順Eによってアルコール76(4.15g、0.021mol)、塩化メタンスルホニル(2.4mL、0.03mol)およびトリエチルアミン(20mL)から調製した。粗製物77(4.6g、80%)を黄色オイルとして単離した。
【０２２１】
4-(2,4-ジメトキシフェニル)ブチルアジド(78)。
アジド78を典型的な手順Cによってエステル77(4.6g、0.015mol)およびアジ化ナトリウム(1.5g、0.023mol)から調製した。化合物77(4.06g、75%)を黄色オイルとして単離した。1H NMR(300MHz,CDCl3)1.62(m,4H)、2.58(m,2H)、3.30(m,2H)、3.80(s,6H)、6.43(m,2H)、7.00(m,1H)。
【０２２２】
4-(2,4-ジメトキシフェニル)ブチルアミン(79)。
アミン79を典型的な手順Aによってアジド78(4.06g、0.017mol)およびLiAlH4(1.0M THF溶液13mL)から調製した。その物質を、カラムクロマトグラフィー(シリカゲル、2:1:0.1クロロホルム/エタノール/濃水酸化アンモニウム)によって精製して白色固体の79(2.3g、64%)を得た。1H NMR(300MHz,CDCl3)1.53(m,4H)、2.53(m,2H)、2.73(m,2H)、3.80(s,6H)、6.43(m,2H)、7.52(m,1H)。
【０２２３】
4-(2,4-ジメトキシフェニル)ブチルアミジノ-3,5-ジアミノ-6-クロロピラジンカルボキサミド塩酸塩(80)。
1-(3,5-ジアミノ-6-クロロピラジノイル-2-メチル-プソイドチオ尿素ヨウ化水素酸塩(0.3g、0.77mmol)を、79(0.4g、1.9mmol)の無水THF溶液(30mL)に添加した。その反応混合物を還流させながら3時間撹拌し、次いで溶媒を蒸発させた。その残渣を酢酸エチル(2×20mL)で洗浄し、次いで3%HCl(15mL)で処理した。形成された黄色固体を分離し、水で洗浄し、終夜乾燥させて化合物80(0.32g、90%)を得た。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)1.57(s,4H)、2.50(br s,2H)、3.35(br s,2H)、3.73(s,3H)、3.76(s,3H)、6.43(m,1H)、6.52(s,1H)、7.02(m,1H)、7.45(br s,2H)、8.86(br s,1H)、8.99(br s,1H)、9.03(m,1H)、10.56(s,1H)。APCI MS m/z 422[C18H24ClN7O3+H]+。
【０２２４】
4-(2,4-ジヒドロキシフェニル)ブチルアミジノ-3,5-ジアミノ-6-クロロピラジンカルボキサミド塩酸塩(81)。
激しく撹拌した80(290mg、0.63mmol)の48%HBr(20mL)溶液を4時間還流させ、次いで冷却した。溶媒を減圧除去し、その物質をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、4:1:0.1クロロホルム/エタノール/濃水酸化アンモニウム)によって精製した。生成物を含む画分を収集し、溶媒を減圧除去した。その残渣を3%HClで処理し、水(2×5mL)で洗浄し、乾燥させて黄色固体の81(79mg、32%)を得た。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)1.54(s,4H)、2.43(br s,2H)、3.31(br s,2H)、6.12(d,1H)、6.32(s,1H)、6.78(d,1H)、8.86(br s,1H)、8.99(br s,1H)、9.28(s,1H)、10.56(s,1H)。APCI MS m/z 394[C16H20ClN7O3+H]+。
【０２２５】
参考文献:
1.参照により本明細書に援用するTaylor,E.C.;Harrington,P.M.;Schin,C.Heterocycles、1989、28、1169。
2.参照により本明細書に援用するWidsheis等、Synthesis、1994、87〜92。
【０２２６】
(実施例8)
ナトリウムチャネル遮断活性
下表1〜5に示す化合物のイヌ気管支上皮における効力を、上述したインビトロアッセイによって試験した。このアッセイでは正の対照としてアミロライドも試験した。本発明の化合物の結果を、アミロライドに対する促進倍数として記録した。
【０２２７】
【表１】
2005526726.tif 000024
【０２２８】
【表２】
2005526726.tif 000025
【０２２９】
【表３】
2005526726.tif 000026
【０２３０】
【表４】
2005526726.tif 000027
【０２３１】
(実施例9)
4-(4-ヒドロキシフェニル)ブチルアミジノ-3,5-ジアミノ-6-クロロピラジンカルボキサミド塩酸塩(V)のMCCに対する効果
この実験を、4-(4-ヒドロキシフェニル)ブチルアミジノ-3,5-ジアミノ-6-クロロピラジンカルボキサミド塩酸塩(V)、および対照としてビヒクルを用いて実施した。結果を図1および図2に示す。
【０２３２】
方法
動物の調製:The Mount Sinai Animal Research Committeeは、粘膜繊毛クリアランスのインビボ評価のすべての手順を承認した。成体の雌ヒツジ(体重25〜35kg)を、改造ショッピングカートに合わせた特製の装着帯で直立位置に拘束した。雌ヒツジの頭部を固定し、2%リドカインを用いて鼻道に局所麻酔をほどこした。次いで、雌ヒツジに、内径7.5mmの気管内チューブ(ETT)を鼻から挿管した。ETTのカフを声帯の直下に配置し、柔軟な気管支鏡でその位置を確認した。挿管後、粘膜繊毛クリアランスの測定を開始する前に約20分間雌ヒツジを平衡状態に保った。
【０２３３】
放射性エアゾール剤の投与:99mTc-ヒト血清アルブミン(3.1mg/ml;約20mCiを含有)のエアゾール剤を、空気力学径中央値3.6μmの液滴を生成するRaindropネブライザーを用いて発生させた。このネブライザーを、ソレノイドバルブと圧縮空気源(138kPa(20psi))からなる線量測定システムに接続した。ネブライザーの出力を、一端が気管内チューブに接続され、もう一端がピストン式人工呼吸器に接続されたプラスチックT型コネクタに導いた。このシステムを、人工呼吸器の吸気サイクルの開始時に1秒間作動させた。人工呼吸器の1回換気量を500mL、吸気/呼気比を1:1、速度を20呼吸/分に設定して、中心気道付着を最大にした。ヒツジに放射能標識エアゾール剤を5分間呼吸させた。ガンマカメラを用いて、気道からの99mTc-ヒト血清アルブミンのクリアランスを測定した。ヒツジをカート中に支持して自然な直立位置にし、ヒツジの背上方にカメラを配置して、画像域がヒツジの脊髄に垂直になるようにした。外部放射能標識マーカーをヒツジの上に置いて、ガンマカメラの下で適性な体軸を確保した。すべてのイメージを、ガンマカメラと一体化したコンピュータに保存した。ヒツジの右肺に対応する画像全体にわたって目的領域を調べ、カウントを記録した。カウントに崩壊の補正を加え、カウントを初期ベースライン画像中にある放射能の割合として示した。左肺は分析から除外した。というのは、その輪郭が胃に重なり、カウントが放射能標識粘液で見えなくなる恐れがあるからである。
【０２３４】
治療手順(t-ゼロにおける活性評価):放射性エアゾール剤投与直後にベースライン付着画像を得た。ベースライン画像を取得後、0時に、ビヒクル対照(蒸留水)、正の対照(アミロライド)、または実験化合物を4mlの体積からPari LC JetPlusネブライザーを用いて、自由に呼吸をしている雌ヒツジに向けてエアゾール化した。ネブライザーを、圧縮空気により毎分8リットルの流量で駆動させた。溶液の送達時間は10〜12分であった。ETTから過剰の放射性トレーサーが吸気されてカウントが誤って上昇するのを防止するために、全用量の送達直後に雌ヒツジから抜管した。8時間の全観察期間のうち投薬から最初の2時間は15分間隔で、次の6時間は1時間ごとに肺の連続画像を得た。少なくとも7日間の洗い出し期間で、異なる実験製剤を用いた投薬セッションを切り離した。
【０２３５】
治療手順(t-4時間における活性評価):以下の変形した標準手順を用いて、ビヒクル対照(蒸留水)、正の対照化合物(アミロライドまたはベンザミル)、または実験製剤への単一暴露後の応答の持続性を評価した。0時に、ビヒクル対照(蒸留水)、正の対照(アミロライド)、または治験化合物を、4mlの体積からPari LC JetPlusネブライザーを用いて、自由に呼吸をしている雌ヒツジに向けてエアゾール化した。ネブライザーを、圧縮空気により毎分8リットルの流量で駆動させた。溶液の送達時間は10〜12分であった。雌ヒツジを、特製の装着帯で4時間直立位置に拘束した。4時間の終わりに、雌ヒツジに、単一用量のエアゾール化99mTc-ヒト血清アルブミン(3.1mg/ml;約20mCiを含有)をRaindropネブライザーから与えた。放射性トレーサーの全用量を送達させた直後に雌ヒツジから抜管した。放射性エアゾール剤投与直後に、ベースライン付着画像を得た。4時間の全観察期間のうち、放射性トレーサーの投薬から最初の2時間(薬物投与後4〜6時間を意味する)は15分間隔で、次の2時間は1時間ごとに肺の連続画像を得た。少なくとも7日間の洗い出し期間で、異なる実験製剤を用いた投薬セッションを切り離した。
【０２３６】
統計:Windows(登録商標)用SYSTAT、バージョン5を用いてデータを解析した。データを、(効果全体を評価するために)二元配置反復ANOVAを用いて解析し、その後対応のある(paried)t-検定によって特定のペア間の差を明らかにした。Pが0.05以下のときに有意とした。(t-ゼロ評価において投与後の初期の45分に収集したデータから計算される)平均MCC曲線の勾配値を、線形最小二乗回帰を用いて計算して、急速クリアランス相(rapid clearance phase)の初期速度の差を評価した。
【０２３７】
上述の教示に照らして、本発明の多数の改変形態および変形形態が可能であることは明らかである。したがって、添付した特許請求の範囲内で、本明細書に具体的に記載した以外の本発明の実施が可能であることを理解すべきである。
【図面の簡単な説明】
【０２３８】
【図１】図１は、本明細書の実施例9に記載した、MCCに対する本発明の化合物のt=0時間における効果を示す図である。
【図２】図２は、本明細書の実施例9に記載した、MCCに対する本発明の化合物のt=4時間における効果を示す図である。
【図１】
2005526726.tif 000040
【図２】
2005526726.tif 000041
【国際調査報告】
2005526726.tif 000042