(57)【要約】      （修正有）【課題】造血幹細胞移植を必要としている被験者において造血コンパートメント再構築を増進する方法の提供。【解決手段】（ａ）ＭＹＣ組成物を含む組成物、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方により約１３日間未満にわたって処理された造血幹細胞群を取得する工程と、（ｂ）前記被験者に対して、被験者の該造血コンパートメントを再構築するために前記処理された造血幹細胞群の治療的有効量を投与する工程とを含み、造血コンパートメント再構築が、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者における造血コンパートメント再構築に比較して増進される、方法。【選択図】図９
2018095654.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
造血幹細胞移植を必要としている被験者において造血コンパートメント再構築を増進する方法であって、
（ａ）ＭＹＣ組成物を含む組成物、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方により約１３日間未満にわたって処理された造血幹細胞群を取得する工程と、
（ｂ）前記被験者に対して、被験者の該造血コンパートメントを再構築するために前記処理された造血幹細胞群の治療的有効量を投与する工程とを含み、造血コンパートメント再構築が、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者における造血コンパートメント再構築に比較して増進される、方法。
【請求項２】
前記造血幹細胞群が、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方によって、約１２日間未満、約１１日間未満、約１０日間未満、約９日間未満、約８日間未満、約７日間未満、約６日間未満、約５日間未満、約４日間未満、約２日間未満、又は約１日間未満にわたって処理される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記造血幹細胞群が、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方によって、約２４時間未満、約２３時間未満、約２２時間未満、約２１時間未満、約２０時間未満、約１９時間未満、約１８時間未満、約１７時間未満、約１６時間未満、約１５時間未満、約１４時間未満、約１３時間未満、約１２時間未満、約１１時間未満、約１０時間未満、約９時間未満、約８時間未満、約７時間未満、約６時間未満、約５時間未満、約４時間未満、約３時間未満、約２時間未満、又は約１時間未満にわたって処理される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記造血幹細胞群が、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方によって、約６０分間未満、約５５分間未満、約５０分間未満、約４５分間未満、約４０分間未満、約３５分間未満、約３０分間未満、約２９分間未満、約２８分間未満、約２７分間未満、約２６分間未満、約２５分間未満、約２４分間未満、約２３分間未満、約２２分間未満、約２１分間未満、約２０分間未満、約１９分間未満、約１８分間未満、約１７分間未満、約１６分間未満、約１５分間未満、約１４分間未満、約１３分間未満、約１２分間未満、約１１分間未満、又は約１０分間未満にわたって処理される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記造血幹細胞群が、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物で処理される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記造血幹細胞群が、前記Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物で処理される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記造血幹細胞群が、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物と、前記Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物とで処理される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ＭＹＣ組成物を含む組成物の治療的有効量が、少なくとも０．５μ／ｍＬ、少なくとも０．６μ／ｍＬ、少なくとも０．７μ／ｍＬ、少なくとも０．８μ／ｍＬ、少なくとも０．９μ／ｍＬ、少なくとも１μ／ｍＬ、少なくとも２μ／ｍＬ、少なくとも３μ／ｍＬ、少なくとも４μ／ｍＬ、少なくとも５μ／ｍＬ、少なくとも６μ／ｍＬ、少なくとも７μ／ｍＬ、少なくとも８μ／ｍＬ、少なくとも９μ／ｍＬ、少なくとも１０μ／ｍＬ、少なくとも１５μ／ｍＬ、少なくとも２０μ／ｍＬ、少なくとも２５μ／ｍＬ、少なくとも３０μ／ｍＬ、少なくとも３５μ／ｍＬ、少なくとも４０μ／ｍＬ、少なくとも４５μ／ｍＬ、少なくとも５０μ／ｍＬ、少なくとも５５μ／ｍＬ、少なくとも６０μ／ｍＬ、少なくとも６５μ／ｍＬ、少なくとも７０μ／ｍＬ、少なくとも７５μ／ｍＬ、少なくとも８０μ／ｍＬ、少なくとも８５μ／ｍＬ、少なくとも９０μ／ｍＬ、少なくとも９５μ／ｍＬ、又は少なくとも１００μ／ｍＬである、請求項１〜４及び７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記Ｂｃｌ−２組成物が、Ｂｃｌ−２ポリペプチド、その相同体、その類似体、又はその生物学的フラグメントを含む、請求項１〜４及び６〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記Ｂｃｌ−２組成物がタンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）を含む、請求項１〜４及び６〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記Ｂｃｌ−２組成物がＰＴＤ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質である、請求項１〜４及び６〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記Ｂｃｌ−２組成物がＴＡＴ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質である、請求項１〜４及び６〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物の治療的有効量が、少なくとも０．５μ／ｍＬ、少なくとも０．６μ／ｍＬ、少なくとも０．７μ／ｍＬ、少なくとも０．８μ／ｍＬ、少なくとも０．９μ／ｍＬ、少なくとも１μ／ｍＬ、少なくとも２μ／ｍＬ、少なくとも３μ／ｍＬ、少なくとも４μ／ｍＬ、少なくとも５μ／ｍＬ、少なくとも６μ／ｍＬ、少なくとも７μ／ｍＬ、少なくとも８μ／ｍＬ、少なくとも９μ／ｍＬ、少なくとも１０μ／ｍＬ、少なくとも１５μ／ｍＬ、少なくとも２０μ／ｍＬ、少なくとも２５μ／ｍＬ、少なくとも３０μ／ｍＬ、少なくとも３５μ／ｍＬ、少なくとも４０μ／ｍＬ、少なくとも４５μ／ｍＬ、少なくとも５０μ／ｍＬ、少なくとも５５μ／ｍＬ、少なくとも６０μ／ｍＬ、少なくとも６５μ／ｍＬ、少なくとも７０μ／ｍＬ、少なくとも７５μ／ｍＬ、少なくとも８０μ／ｍＬ、少なくとも８５μ／ｍＬ、少なくとも９０μ／ｍＬ、少なくとも９５μ／ｍＬ、又は少なくとも１００μ／ｍＬである、請求項１〜４及び６〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＭＹＣ組成物を含む組成物が更に製薬的に許容される担体を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記造血幹細胞群が、前記必要としている被験者に投与される前に洗浄される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記造血幹細胞群が、該造血幹細胞群の洗浄なしで前記必要としている被験者に投与される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記被験者が、悪性血液疾患、骨髄腫、多発性骨髄腫、白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、リンパ腫、無痛性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、神経芽腫、網膜芽腫、シュバッハマン・ダイアモンド症候群、脳腫瘍、ユーイング肉腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、再発胚細胞腫瘍、血液疾患、異常ヘモグロビン症、自己免疫疾患、若年性特発性関節炎、全身性エリテマトーデス、重症複合免疫不全、不良な幹細胞を伴う先天性好中球減少症、重度の再生不良性貧血、鎌状赤血球症、骨髄形成異常症候群、慢性肉芽腫症、代謝障害、ハーラー症候群、ゴーシェ病、大理石骨病、乳児性悪性大理石骨病、心臓病、ＨＩＶ、又はＡＩＤＳを現在有するか又は過去に有していた、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記被験者が臓器移植を受けている、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記造血幹細胞群が、骨髄、末梢血細胞、アフェレーシスを行った末梢血細胞、白血球分離を行った末梢血細胞、臍帯血、羊水、培養ＨＳＣ細胞、不死化ＨＳＣ細胞株、又は条件的不死化ＨＳＣ細胞株から取得されたものである、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
処理された造血幹細胞群が、造血幹細胞（ＨＳＣ）移植術の一工程として投与される、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＨＳＣ移植術が骨髄破壊的ＨＳＣ移植術である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＨＳＣ移植術が非骨髄破壊的ＨＳＣ移植術である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
ＨＳＣ移植が、自家ＨＳＣ移植又は同種ＨＳＣ移植である、請求項２０〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
処理された造血幹細胞群の投与が、前記被験者におけるＨＳＣ移植後の造血コンパートメント再構築を加速する、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
処理された造血幹細胞群の投与によって、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方を含む組成物で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者における造血コンパートメント再構築に比べて、造血コンパートメント再構築の少なくとも５０％の加速が達成される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方を含む組成物で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者におけるＴ細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも５０％加速されたＴ細胞コンパートメント再構築がもたらされる、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方を含む組成物で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者におけるＢ細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも５０％加速されたＢ細胞コンパートメント再構築がもたらされる、請求項２４〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方を含む組成物で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者におけるＮＫ細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも５０％加速されたＮＫ細胞コンパートメント再構築がもたらされる、請求項２４〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方を含む組成物で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者における骨髄系細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも５０％加速された骨髄系細胞コンパートメント再構築がもたらされる、請求項２４〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方を含む組成物で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者における好中球回復に比べて、少なくとも５０％加速された好中球回復がもたらされる、請求項２４〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＭＹＣ組成物を含む組成物の投与によって、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方を含む組成物で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者に比べて、前記被験者の骨髄ニッチに生産的に定着するＨＳＣの５０％の増加がもたらされる、請求項２４〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方、及び所望により少なくとも１つのサイトカイン、増殖因子、抗体、及び／又は小分子調節因子を含む第３の組成物を投与することを更に含む、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記第３の組成物が更に製薬的に許容される担体を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記造血幹細胞群が、ヒト造血幹細胞群である、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
被験者の造血コンパートメント細胞形成を増進する方法であって、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の治療的有効量を、必要としている被験者に投与する工程を含み、造血コンパートメント形成が、前記組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメント形成に比べて増進される、方法。
【請求項３６】
前記組成物がＭＹＣ組成物を含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記組成物がＢｃｌ−２組成物を含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記組成物がＭＹＣ組成物及びＢｃｌ−２組成物を含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
前記Ｂｃｌ−２組成物が、Ｂｃｌ−２ポリペプチド、その相同体、その類似体、又はその生物学的フラグメントを含む、請求項３５又は３７〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記Ｂｃｌ−２組成物がタンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）を含む、請求項３５又は３７〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記Ｂｃｌ−２組成物がＰＴＤ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質である、請求項３５又は３７〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記Ｂｃｌ−２組成物がＴＡＴ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質である、請求項３５又は３７〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＭＹＣ組成物が、ＭＹＣポリペプチド、その相同体、その類似体、又はその生物学的フラグメントを含む、請求項１〜５、７、及び１５〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記ＭＹＣ組成物がタンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）を含む、請求項１〜５、７、１５〜３６、及び３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記ＭＹＣ組成物がＰＴＤ−ＭＹＣ融合タンパク質である、請求項１〜５、７、１５〜３６、３８、及び４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記ＭＹＣ組成物がＴＡＴ−ＭＹＣ融合タンパク質である、請求項１〜５、７、１５〜３６、３８、及び４４〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記被験者が造血幹細胞（ＨＳＣ）移植を現在必要としているか又は過去に必要としていた、請求項３５〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記被験者が、悪性血液疾患、骨髄腫、多発性骨髄腫、白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、リンパ腫、無痛性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、神経芽腫、網膜芽腫、シュバッハマン・ダイアモンド症候群、脳腫瘍、ユーイング肉腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、再発胚細胞腫瘍、血液疾患、異常ヘモグロビン症、自己免疫疾患、若年性特発性関節炎、全身性エリテマトーデス、重症複合免疫不全、不良な幹細胞を伴う先天性好中球減少症、重度の再生不良性貧血、鎌状赤血球症、骨髄形成異常症候群、慢性肉芽腫症、代謝障害、ハーラー症候群、ゴーシェ病、大理石骨病、乳児性悪性大理石骨病、心臓病、ＨＩＶ、又はＡＩＤＳを現在有するか又は過去に有していた、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記被験者が臓器移植を受けている、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
前記被験者の造血コンパートメント再構築を達成するために、ＨＳＣを含む第２の組成物の治療的有効量を投与することを更に含む、請求項４７〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物が、前記第２の組成物の投与の前、後、又は同時に投与される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物が、前記第２の組成物の投与よりも、少なくとも５日、少なくとも４日、少なくとも３日、少なくとも２日、又は少なくとも１日前に投与される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物が、前記第２の組成物の投与と同時に投与される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物が、前記第２の組成物の投与の、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも１週間、少なくとも２週間、又は少なくとも３週間後に投与される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与によって、前記第２の組成物に含まれるＨＳＣの増殖がもたらされる、請求項５３又は５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記ＨＳＣを含む第２の組成物が、第２の組成物の投与前に、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方の存在下で培養される、請求項５０〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方の存在下で前記第２の組成物を培養することにより、前記ＨＳＣが条件的に不死化される、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方の存在下で前記第２の組成物を培養することにより、前記ＨＳＣの増殖がもたらされる、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
投与される際の前記第２の組成物が、前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方の存在下で培養した結果として、前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む、請求項５６〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記ＨＳＣが、骨髄、末梢血細胞、アフェレーシスを行った末梢血細胞、白血球分離を行った末梢血細胞、臍帯血、羊水、培養ＨＳＣ細胞、不死化ＨＳＣ細胞株、又は条件的不死化ＨＳＣ細胞株から取得されたものである、請求項５０〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
前記第２の組成物が、ＨＳＣ移植術の一工程として投与される、請求項５０〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記ＨＳＣ移植術が骨髄破壊的ＨＳＣ移植術である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記ＨＳＣ移植術が非骨髄破壊的ＨＳＣ移植術である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
ＨＳＣ移植が、自家ＨＳＣ移植又は同種ＨＳＣ移植である、請求項５０〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与によって、前記被験者のＨＳＣ移植後の造血コンパートメント再構築が加速される、請求項５０〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与により、前記組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメント再構築に比べて、造血コンパートメント再構築の少なくとも５０％の加速が達成される、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記組成物を投与されていない被験者におけるＴ細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも５０％加速されたＴ細胞コンパートメント再構築がもたらされる、請求項６５又は６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記組成物を投与されていない被験者におけるＢ細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも５０％加速されたＢ細胞コンパートメント再構築がもたらされる、請求項６５〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記組成物を投与されていない被験者におけるＮＫ細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも５０％加速されたＮＫ細胞コンパートメント再構築がもたらされる、請求項６５〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記組成物を投与されていない被験者における骨髄系細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも５０％加速された骨髄系細胞コンパートメント再構築がもたらされる、請求項６５〜６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記組成物を投与されていない被験者における好中球回復に比べて、少なくとも５０％加速された好中球回復がもたらされる、請求項６５〜７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物を投与することにより、前記被験者の骨髄ニッチに生産的に定着するＨＳＣの５０％の増加がもたらされる、請求項６５〜７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物を投与した場合に、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物を投与しなかった場合に必要とされる量に比べて、前記被験者に投与される前記第２の組成物の治療的有効量が少なくなる、請求項６５〜７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
少なくとも１つのサイトカイン、増殖因子、抗体、及び／又は小分子調節因子を含む第３の組成物を投与することを更に含む、請求項６５〜７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
前記第３の組成物が更に製薬的に許容される担体を含む、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記第２の組成物に含まれる前記ＨＳＣがヒトＨＳＣである、請求項６５〜７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
前記被験者が造血コンパートメント自家再構築を現在必要としているか又は過去に必要としていた、請求項３５〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方が、内因性造血幹細胞（ＨＳＣ）を誘導して、前記被験者の前記造血コンパートメントを自家再構築させる、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記造血コンパートメントの自家再構築が、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む前記組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメントの自家再構築に比べて増進される、請求項７７又は７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記被験者における前記増進された造血コンパートメント自家再構築が、増進されたＴ細胞コンパートメント自家再構築、増進されたＢ細胞コンパートメント自家再構築、増進されたＮＫ細胞コンパートメント自家再構築、増進された骨髄系細胞コンパートメント自家再構築、又は好中球回復をもたらす、請求項７７〜７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、内因性ＨＳＣの増殖をもたらす、請求項７７〜８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
前記被験者が化学療法を現在受けているか又は過去に受けている、請求項７７〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記化学療法による造血コンパートメントの減少を防止する、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記化学療法による内因性ＨＳＣの量の減少を防止する、請求項８２又は８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記被験者が放射線治療を現在受けているか又は受けていた、請求項７７〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記放射線治療による造血コンパートメントの減少を防止する、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記放射線治療による内因性ＨＳＣの量の減少を防止する、請求項８５又は８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記被験者が骨髄不全症候群を有している、請求項７７〜８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
前記骨髄不全症候群が再生不良性貧血又は湾岸戦争症候群である、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記骨髄不全症候群が遺伝性骨髄不全症候群（ＩＢＭＦＳ）である、請求項８８に記載の方法。
【請求項９１】
前記ＩＢＭＦＳが、無巨核球性血小板減少症、ダイアモンド・ブラックファン貧血、先天性角化不全症、ファンコーニ貧血、ピアソン症候群、重度の先天性好中球減少症、シュバッハマン・ダイアモンド症候群、及び血小板減少性橈骨欠損、ＩＶＩＣ症候群、ＷＴ症候群、橈尺骨癒合症、及び運動失調−汎血球減少症から選択される、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記骨髄不全症候群による造血コンパートメント細胞の減少を防止する、請求項８８〜９１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記骨髄不全症候群による内因性ＨＳＣの減少を防止する、請求項８８〜９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９４】
前記ＭＹＣ組成物を含む組成物の治療的有効量が、少なくとも０．１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４０ｍｇ／ｋｇ、又は少なくとも５０ｍｇ／ｋｇである、請求項３５〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９５】
前記Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物の治療的有効量が、少なくとも０．１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４０ｍｇ／ｋｇ、又は少なくとも５０ｍｇ／ｋｇである、請求項３５〜９４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９６】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物が更に製薬的に許容される担体を含む、請求項３５〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９７】
前記被験者がヒト患者である、請求項１〜９７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
前記被験者が非ヒト動物である、請求項１〜９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９９】
被験者に造血幹細胞（ＨＳＣ）を移植した後の造血コンパートメント再構築を加速する方法であって、
ａ）ＨＳＣを含む第１の組成物の治療的有効量を投与して、必要としている被験者の造血コンパートメント再構築を達成する工程と、
ｂ）ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む第２の組成物を、前記被験者に投与する工程と、
を含み、前記第２の組成物を投与することによって、第２の組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメント再構築に比べて、造血コンパートメント再構築の少なくとも５０％の加速が達成される、方法。
【請求項１００】
被験者の造血コンパートメントの自家再構築を増進する方法であって、造血コンパートメントの自家再構築を必要としている被験者に、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の治療的有効量を投与する工程を含み、
前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方が、内因性造血幹細胞（ＨＳＣ）を誘導して、前記被験者の造血コンパートメントを自家再構築させ、
造血コンパートメントの自家再構築が、前記組成物を投与されていない被験者の造血コンパートメントの自家再構築に比べて増進される、方法。
【請求項１０１】
化学療法による造血コンパートメント細胞の減少を治療する方法であって、化学療法を現在受けているか又は過去に受けている被験者に対し、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の治療的有効量を投与する工程を含み、前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方が、内因性造血幹細胞（ＨＳＣ）を誘導して前記被験者の造血コンパートメントを自家再構築させる、方法。
【請求項１０２】
放射線治療による造血コンパートメント細胞の減少を治療する方法であって、放射線治療を現在受けているか又は過去に受けている被験者に対し、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の治療的有効量を投与する工程を含み、前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方が、内因性造血幹細胞（ＨＳＣ）を誘導して前記被験者の造血コンパートメントを自家再構築させる、方法。
【請求項１０３】
骨髄不全症候群を治療する方法であって、骨髄不全症候群を有する被験者に対し、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の治療的有効量を投与する工程を含み、前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方が、内因性造血幹細胞（ＨＳＣ）を誘導して前記被験者の該造血コンパートメントを自家再構築させる、方法。
【請求項１０４】
造血コンパートメント細胞形成を現在必要とするか又は必要としていた被験者において、造血コンパートメント細胞形成を増進するための、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の使用であって、前記組成物の使用が、組成物を投与されていない患者における造血コンパートメント形成に比べて、造血コンパートメント形成を増進させる、使用。
【請求項１０５】
前記被験者が造血幹細胞（ＨＳＣ）移植を現在必要とするか又は必要としていた、請求項１０４に記載の使用。
【請求項１０６】
前記被験者が、悪性血液疾患、骨髄腫、多発性骨髄腫、白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、リンパ腫、無痛性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、神経芽腫、網膜芽腫、シュバッハマン・ダイアモンド症候群、脳腫瘍、ユーイング肉腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、再発胚細胞腫瘍、血液疾患、異常ヘモグロビン症、自己免疫疾患、若年性特発性関節炎、全身性エリテマトーデス、重症複合免疫不全、不良な幹細胞を伴う先天性好中球減少症、重度の再生不良性貧血、鎌状赤血球症、骨髄形成異常症候群、慢性肉芽腫症、代謝障害、ハーラー症候群、ゴーシェ病、大理石骨病、乳児性悪性大理石骨病、心臓病、ＨＩＶ、又はＡＩＤＳを現在有するか又は過去に有していた、請求項１０５に記載の使用。
【請求項１０７】
前記被験者が臓器移植を受けている、請求項１０５に記載の使用。
【請求項１０８】
前記被験者がＨＳＣ移植を現在受けているか、又はすでに受けている、請求項１０５〜１０７に記載の使用。
【請求項１０９】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物が、前記ＨＳＣ移植の前、後、又は同時に投与される、請求項１０８に記載の使用。
【請求項１１０】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物が、前記ＨＳＣ移植よりも、少なくとも５日、少なくとも４日、少なくとも３日、少なくとも２日、又は少なくとも１日前に、投与される、請求項１０９に記載の使用。
【請求項１１１】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物が、前記ＨＳＣ移植と同時に投与される、請求項１０９に記載の使用。
【請求項１１２】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物が、前記ＨＳＣ移植の、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも１週間、少なくとも２週間、又は少なくとも３週間後に投与される、請求項１０９に記載の使用。
【請求項１１３】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与によって、移植されたＨＳＣの増殖がもたらされる、請求項１１１又は１１２に記載の使用。
【請求項１１４】
移植されたＨＳＣが、ＨＳＣ移植の前に、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方の存在下で培養される、請求項１０８〜１１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１５】
前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方の存在下で前記ＨＳＣを培養することにより、前記ＨＳＣが条件的に不死化される、請求項１１４に記載の使用。
【請求項１１６】
前記ＨＳＣの不死化により、ＨＳＣの増殖がもたらされる、請求項１１５に記載の使用。
【請求項１１７】
前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方の存在下で培養された結果として、移植されたＨＳＣが、前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む、請求項１１４〜１１６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１８】
移植されたＨＳＣが、骨髄、末梢血細胞、アフェレーシスを行った末梢血細胞、白血球分離を行った末梢血細胞、臍帯血、羊水、培養ＨＳＣ細胞、不死化ＨＳＣ細胞株、又は条件的不死化ＨＳＣ細胞株から取得されたものである、請求項１０８〜１１７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１９】
ＨＳＣ移植術が、骨髄破壊的ＨＳＣ移植術である、請求項１０８〜１１８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２０】
ＨＳＣ移植術が、非骨髄破壊的ＨＳＣ移植術である、請求項１０８〜１１８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２１】
ＨＳＣ移植術が、自家ＨＳＣ移植術である、請求項１０８〜１１９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２２】
ＨＳＣ移植術が、同種ＨＳＣ移植術である、請求項１０８〜１１９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２３】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与によって、前記被験者のＨＳＣ移植後の造血コンパートメント再構築が加速される、請求項１０８〜１２２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２４】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与により、前記組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメント再構築に比べて、造血コンパートメント再構築の少なくとも５０％の加速が達成される、請求項１２３に記載の使用。
【請求項１２５】
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記組成物を投与されていない被験者におけるＴ細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも５０％加速されたＴ細胞コンパートメント再構築がもたらされる、請求項１２３又は１２４に記載の使用。
【請求項１２６】
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記組成物を投与されていない被験者におけるＢ細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも５０％加速されたＢ細胞コンパートメント再構築がもたらされる、請求項１２３〜１２５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２７】
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記組成物を投与されていない被験者におけるＮＫ細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも５０％加速されたＮＫ細胞コンパートメント再構築がもたらされる、請求項１２３〜１２６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２８】
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記組成物を投与されていない被験者における骨髄系細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも５０％加速された骨髄系細胞コンパートメント再構築がもたらされる、請求項１２３〜１２７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２９】
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記組成物を投与されていない被験者における好中球回復に比べて、少なくとも５０％加速された好中球回復がもたらされる、請求項１２３〜１２８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３０】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む前記組成物を投与することにより、前記被験者の骨髄ニッチに生産的に定着するＨＳＣの５０％の増加がもたらされる、請求項１２３〜１２９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３１】
少なくとも１つのサイトカイン、増殖因子、抗体、及び／又は小分子調節因子を含む第２の組成物を投与することを更に含む、請求項１２３〜１３０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３２】
第３の組成物が更に製薬的に許容される担体を含む、請求項１３１に記載の使用。
【請求項１３３】
移植されるＨＳＣがヒトＨＳＣである、請求項１０８〜１３２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３４】
前記被験者が造血コンパートメントの自家再構築を現在必要とするか又は必要としていた、請求項１０４に記載の使用。
【請求項１３５】
前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方が、内因性造血幹細胞（ＨＳＣ）を誘導して、前記被験者の前記造血コンパートメントを自家再構築させる、請求項１３４に記載の使用。
【請求項１３６】
前記造血コンパートメントの自家再構築が、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメントの自家再構築に比べて増進される、請求項１３４又は１３５に記載の使用。
【請求項１３７】
前記被験者における増進された造血コンパートメント自家再構築が、増進されたＴ細胞コンパートメント自家再構築、増進されたＢ細胞コンパートメント自家再構築、増進されたＮＫ細胞コンパートメント自家再構築、増進された骨髄系細胞コンパートメント自家再構築、又は好中球回復をもたらす、請求項１３４〜１３６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３８】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、内因性ＨＳＣの増殖をもたらす、請求項１３４〜１３７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３９】
前記被験者が化学療法を現在受けているか又はすでに受けている、請求項１３４〜１３８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４０】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記化学療法による造血コンパートメントの減少を防止する、請求項１３９に記載の使用。
【請求項１４１】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記化学療法による内因性ＨＳＣの量の減少を防止する、請求項１３９又は１４０に記載の使用。
【請求項１４２】
前記被験者が放射線治療を現在受けているか又は受けていた、請求項１３４〜１３８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４３】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記放射線治療による造血コンパートメントの減少を防止する、請求項１４２に記載の使用。
【請求項１４４】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記放射線治療による内因性ＨＳＣの量の減少を防止する、請求項１４２又は１４３に記載の使用。
【請求項１４５】
前記被験者が骨髄不全症候群を有している、請求項１３４〜１４４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４６】
前記骨髄不全症候群が再生不良性貧血又は湾岸戦争症候群である、請求項１４５に記載の使用。
【請求項１４７】
前記骨髄不全症候群が遺伝性骨髄不全症候群（ＩＢＭＦＳ）である、請求項１４６に記載の使用。
【請求項１４８】
前記ＩＢＭＦＳが、無巨核球性血小板減少症、ダイアモンド・ブラックファン貧血、先天性角化不全症、ファンコーニ貧血、ピアソン症候群、重度の先天性好中球減少症、シュバッハマン・ダイアモンド症候群、及び血小板減少性橈骨欠損、ＩＶＩＣ症候群、ＷＴ症候群、橈尺骨癒合症、及び運動失調−汎血球減少症から選択される、請求項１４７に記載の使用。
【請求項１４９】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記骨髄不全症候群による造血コンパートメント細胞の減少を防止する、請求項１４５〜１４８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５０】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記骨髄不全症候群による内因性ＨＳＣの減少を防止する、請求項１４５〜１４９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５１】
前記ＭＹＣ組成物がＴＡＴ−ＭＹＣである、請求項１０４〜１５０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５２】
前記ＭＹＣ組成物を含む組成物の治療的有効量が、少なくとも０．１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４０ｍｇ／ｋｇ、又は少なくとも５０ｍｇ／ｋｇである、請求項１０４〜１５１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５３】
前記Ｂｃｌ−２組成物がＴＡＴ−Ｂｃｌ−２である、請求項１０４〜１５２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５４】
前記Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物の治療的有効量が、少なくとも０．１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４０ｍｇ／ｋｇ、又は少なくとも５０ｍｇ／ｋｇである、請求項１０４〜１５１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５５】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物が更に製薬的に許容される担体を含む、請求項１０４〜１５４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５６】
前記被験者がヒト患者である、請求項１０４〜１５５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５７】
前記被験者が非ヒト動物である、請求項１０４〜１５５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５８】
造血幹細胞（ＨＳＣ）の移植を受けたか又は受ける予定の患者での、造血コンパートメント再構築を加速させるための、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の使用であって、前記組成物の使用により、組成物の投与を受けない被験者における造血コンパートメント再構築に比べ、造血コンパートメント再構築の少なくとも５０％の加速が達成される、使用。
【請求項１５９】
造血コンパートメント細胞が現在減少しているか又は過去に減少していた患者での、造血コンパートメントの自家再構築を増進するための、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の使用であって、前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方が、内因性造血幹細胞（ＨＳＣ）を誘導して、患者の造血コンパートメントを自家再構築させ、前記組成物の使用により、組成物の投与を受けない被験者における造血コンパートメント自家再構築に比べ、造血コンパートメント自家再構築が増進される、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、米国仮特許出願第６１／６７４，２２４号（２０１２年７月２０日出願）及び米国仮特許出願第６１／７８５，６９１号（２０１３年３月１４日出願）の利益を主張するものであり、これら両出願の全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルとしての配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの下記の提出物の内容の全体が、参照により本明細書に組み込まれる：配列表のコンピュータ読み取り可能形式（ＣＲＦ）（ファイル名６９１７７２０００８４０ＳｅｑＬｉｓｔ．ｔｘｔ、記録日：２０１３年７月１９日、サイズ：９ＫＢ）。
【０００３】
（発明の分野）
本開示は一般に、造血幹細胞による造血コンパートメント細胞形成、細胞生存、及び細胞増殖に関する。特に本開示は、造血コンパートメント再構築の加速、及び造血コンパートメント自家再構築の増進に関する。
【背景技術】
【０００４】
骨髄移植における造血幹細胞の使用は、多くの悪性血液疾患（例えば白血病）及びいくつかの広く見られる自己免疫疾患の治療に用いられる手法に変革をもたらし、免疫不全症の重要な治療となっている（Ｂｕｃｋｌｅｙ，ＲＨ，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２２，６２５〜６５５，２００４（非特許文献1））。造血幹細胞移植の使用は、いくつかの例において、高レベルの放射線照射の影響を軽減するという成果も収めている（Ｂｉｓｈｏｐ，ＭＲ，Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  １５  Ｓｕｐｐｌ  ２，３０５〜３１０，１９９７（非特許文献2））。加えて、造血幹細胞移植は、多数の固形臓器腫瘍を有する患者に対する細胞毒性化学療法薬の高用量投与を可能とし、これにより薬剤誘発毒性後の骨髄の再増殖を可能とするために使用されている（Ｃｒｉｖｅｌｌａｒｉ，Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ  １２，７９〜８９，２００７（非特許文献3））。固形臓器移植の生着率を改善するための造血幹細胞移植の使用は、この医療処置の別の近年の応用例である（Ｄｅｌｉｓ，Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐａｎｃｒｅａｓ  ３２，１〜８，２００６（非特許文献4））。最近の研究では更に、骨髄移植が心臓疾患の治療にも有用でありうることが示されている（Ｅｎｇｅｌｍａｎｎ，ＭＧ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  ８，３９６〜４１４，２００６（非特許文献5））。この効果の原理は不明であるが、これらの所見は、他の組織を生じるように造血幹細胞を再プログラミングできる可能性を示している（Ｋｉｅｌ，ＭＪ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ  ２８３，２９〜３９，２００５（非特許文献6））。したがって、成人の造血幹細胞は、議論の的となっている胚性幹細胞治療よりも幅広い利用性を有する可能性があり、これに代わるものとなりうる。これらの造血幹細胞移植の治療における応用は、造血幹細胞移植を改善する医学的及び経済的インパクトをもたらす。
【０００５】
いくつかの問題が、造血幹細胞（ＨＳＣ）の治療用途を制限している。例えば、大きな問題の１つは、移植に利用できるＨＳＣの数が少ないことである。骨髄不全、自己免疫疾患、先天性免疫不全、又は悪性血液疾患を患っている患者は、自家移植のための良好なＨＳＣ源を提供しない（Ｌｉｎｋｅｒ，Ｃ，Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔ  Ｒｅｓ  Ｃｌｉｎ  Ｈａｅｍａｔｏｌ  ２０，７７〜８４，２００７（非特許文献7））。加えて、一部の骨髄不全患者及びがん患者では、放射線又は化学療法治療の後、完全なＨＳＣ生着を達成するために、複数回のＨＳＣ移植が必要になる（Ｏｌｉａｎｓｋｙ，ＤＭ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ  Ｂｌｏｏｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  １３，１〜２５，２００７（非特許文献8））。自家ＨＳＣ移植が不可能な場合は、適切な組織適合性を有する骨髄ドナーを特定するという別の問題がある。これは一般に、６００万人を超えるドナー候補者が含まれている登録簿を使用して行われる（ｄｅ  Ｍｅｌｌｏ，ＡＮ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｔｅｌｅｍｅｄ．Ｔｅｌｅｃａｒｅ  １２  Ｓｕｐｐｌ３，６４〜６，２００６（非特許文献9））。加えて、ドナーは選択された後、血液中にＨＳＣを移動させ、次に４〜５日かけて白血球除去法を行い、希少な長期ＨＳＣを単離するための過酷で苦痛を伴うプロセスを経なければならない（Ｎｅｒｖｉ，Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ９９，６９０〜７０５，２００６（非特許文献10））。移植に利用可能なＨＳＣの数が少ないという問題を解決するため、単離後にエクスビボでＨＳＣを増殖させることによる多くの新しいアプローチが存在するが、何年間にもわたって利用可能かつ生体活性を持続する長期的に再増殖するＨＳＣを大量に生成する手法は、未だ確立されていない（Ｈｏｆｆｍａｎ，Ｒ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ  ６，１８４〜９１，１９９９（非特許文献11））。
【０００６】
ＨＳＣ移植の治療用途を制限するもう１つの問題は、移植レシピエントの常在免疫系の除去後に、移植されたＨＳＣが、機能する成熟した造血系（すなわち造血コンパートメント）を再構築するのに必要な時間である。移植されたＨＳＣの効果的な生着を促進するのに必要な要素の１つは、常在免疫系の除去である。これは、全身の放射線照射又は化学的除去によって一般的に行われている。このプロセスの結果として、患者はほぼ完全に免疫無防備状態となり、環境中の微生物（呼吸及び食事などの通常の活動でヒトが日常的に接している）による日和見感染症に非常に感染しやすくなる。この問題は、その多くが既存の抗生物質に対して高い耐性を有する医原性感染源の種類と多様性を顕著に増大させるため、益々重要な問題となっている。ＨＳＣ移植後の成熟した造血系の回復に要する時間は、移植レシピエントが日和見感染症を発症し最終的に死亡に至るリスクに大きく影響する。
【０００７】
ＨＳＣ移植レシピエントにおける成熟した造血系を再増殖させるのに要する時間は、いくつかの変数により影響を受ける。そのような変数の１つに、ＨＳＣ移植後の様々な造血系を再増殖させるのに要する回復時間の違いがある。例えば骨髄系コンパートメントは、単球、好中球、及び好塩基球からなり、ＨＳＣ移植後に回復するまでに通常４〜８週間を要する。リンパ系コンパートメントは、ヒトにおいて、これより大幅に長い回復時間を要する。例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及びＮＫＴ細胞は回復に４〜８週間を要するが、Ｂ細胞は多くの患者では回復までに１２ヵ月以上を要する。骨髄系細胞の回復時間は、食物により媒介される微生物及び環境中の微生物に対する最小限必要な防御力にとって極めて重要である。ＨＳＣ移植のレシピエントにおいて成熟した造血系を再増殖させるのに要する時間に影響するもう１つの変数は、移植に利用できるＨＳＣの数と、レシピエントの身体の大きさ／体重である。更に別の変数として、ＨＳＣ移植患者が移植の前に受けていた可能性がある他の治療の性質がある。何らかの形態のがんを患う患者の多くは、ＨＳＣ移植を受けるのに先立って複数ラウンドの化学療法を受けていることになる。こうした細胞毒性薬の使用は、骨髄ニッチ（移植されたＨＳＣが定着して分化プロセスを開始する場所）に影響を与えうる。ニッチが細胞毒性薬によって破壊された場合には、ニッチを再構築し、次いで多能性ＨＳＣをニッチに植えつけるために、複数回のＨＳＣ移植が必要となりうる。
【０００８】
更に、ＨＳＣ移植後の成熟した造血系の回復時間は、ドナーのＨＳＣが骨髄ニッチにたどり着く能力に大きく依存する。ＨＳＣは、一旦骨髄ニッチに到達した後、ニッチに在住する（resident）細胞との分子クロストークを確立する必要がある。この分子クロストークは、ＨＳＣ内の細胞内因性信号の性質及びレベルを調節して、ＨＳＣの生存、増殖、自己複製、及び分化を調節すると考えられている。よって、ＨＳＣが骨髄ニッチにたどり着くこと、適切に定着すること、又はニッチとのこうしたクロストークを適正に確立することのいずれかができないと、ＨＳＣ生着の不全につながりうる。更に、ＨＳＣが骨髄ニッチにたどり着かない場合には、成熟造血系の短期的な回復のみ又は成熟造血系の部分的な再構築のみももたらされるが、これは長期的な骨髄不全の結果、徐々に失われる。
【０００９】
よって、患者の常在免疫系の除去とＨＳＣ移植による造血系再構築との間の時間のずれは、潜在的に致命的な合併症（例えば日和見感染症又はＨＳＣ生着不全）を発症する主なリスクの１つとなる。ＨＳＣ移植後に成熟造血系を再構築するのに要する時間を短縮するため、複数のアプローチが試みられている。そのようなアプローチの例としては、移植により多くの数のＨＳＣを使用すること、常在免疫系の部分的除去とより少数のＨＳＣの複数回の移植、既存Ｔ細胞を保持するためのドナー骨髄の前処理、ＨＳＣ移植後の患者の増殖因子治療、並びに、Ｅ−セレクチン発現に影響する酵素を標的としたモノクローナル抗体及び／又は小分子調節因子の使用によってＨＳＣ移植後の骨髄ニッチへのＨＳＣ定着率を向上させることが挙げられる（Ａｄａｍｓ  ＧＢ  ａｎｄ  Ｓｃａｄｄｅｎ  ＤＴ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １５，９６〜９９，２００８（非特許文献12）；Ｃａｍｐｂｅｌｌ  ＴＢ  ａｎｄ  Ｂｒｏｘｍｅｙｅｒ  ＨＥ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃ．１３，１７９５〜１８０５，２００８（非特許文献13）；Ｒｏｃｈａ  Ｖ  ａｎｄ  Ｂｏｘｍｅｙｅｒ  Ｈ，Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  １６，Ｓ１２６〜Ｓ１３２，２００９（非特許文献14）；ａｎｄ  Ｈｏｇａｔｔ  Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１３，５４４４〜５５，２００９（非特許文献15））。しかしながら、これらの解決策は、現行のアプローチに比べてある程度の改善をもたらすのみに過ぎず、患者集団における致死的日和見感染症の頻度には大きく影響しない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｂｕｃｋｌｅｙ，ＲＨ，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２２，６２５〜６５５，２００４
【非特許文献２】Ｂｉｓｈｏｐ，ＭＲ，Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  １５  Ｓｕｐｐｌ  ２，３０５〜３１０，１９９７
【非特許文献３】Ｃｒｉｖｅｌｌａｒｉ，Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ  １２，７９〜８９，２００７
【非特許文献４】Ｄｅｌｉｓ，Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐａｎｃｒｅａｓ  ３２，１〜８，２００６
【非特許文献５】Ｅｎｇｅｌｍａｎｎ，ＭＧ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  ８，３９６〜４１４，２００６
【非特許文献６】Ｋｉｅｌ，ＭＪ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ  ２８３，２９〜３９，２００５
【非特許文献７】Ｌｉｎｋｅｒ，Ｃ，Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔ  Ｒｅｓ  Ｃｌｉｎ  Ｈａｅｍａｔｏｌ  ２０，７７〜８４，２００７
【非特許文献８】Ｏｌｉａｎｓｋｙ，ＤＭ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ  Ｂｌｏｏｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  １３，１〜２５，２００７
【非特許文献９】ｄｅ  Ｍｅｌｌｏ，ＡＮ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｔｅｌｅｍｅｄ．Ｔｅｌｅｃａｒｅ  １２  Ｓｕｐｐｌ３，６４〜６，２００６
【非特許文献１０】Ｎｅｒｖｉ，Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ９９，６９０〜７０５，２００６
【非特許文献１１】Ｈｏｆｆｍａｎ，Ｒ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ  ６，１８４〜９１，１９９９
【非特許文献１２】Ａｄａｍｓ  ＧＢ  ａｎｄ  Ｓｃａｄｄｅｎ  ＤＴ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １５，９６〜９９，２００８
【非特許文献１３】Ｃａｍｐｂｅｌｌ  ＴＢ  ａｎｄ  Ｂｒｏｘｍｅｙｅｒ  ＨＥ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃ．１３，１７９５〜１８０５，２００８
【非特許文献１４】Ｒｏｃｈａ  Ｖ  ａｎｄ  Ｂｏｘｍｅｙｅｒ  Ｈ，Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  １６，Ｓ１２６〜Ｓ１３２，２００９
【非特許文献１５】Ｈｏｇａｔｔ  Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１３，５４４４〜５５，２００９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
したがって、移植に利用可能なＨＳＣの数を増加させること、骨髄ニッチに生産的に定着するＨＳＣの数を増やすこと、日和見感染症のリスクを低減すること、及びＨＳＣ生着不全のリスクを低減すること、のうち１つ以上をもたらすような、造血幹細胞（ＨＳＣ）移植レシピエントの造血コンパートメント再構築を加速するための改善されたアプローチが求められている。また、造血コンパートメントの自家再構築が必要な被験者において、造血コンパートメントの自家再構築を増進するための改善されたアプローチも求められている。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上記の必要性を満たすため、本開示は、被験者にＨＳＣを移植する前に、ＭＹＣ組成物（例えばタンパク質導入ドメイン−ＭＹＣ（ＰＴＤ−ＭＹＣ）融合タンパク質）、Ｂｃｌ−２組成物（例えばＰＴＤ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質）、又はこれら両方でＨＳＣの集団を処理することにより、造血コンパートメント再構築（例えばＨＳＣ生着）を増進する新規な方法を提供し、また、ＭＹＣ組成物（例えばタンパク質導入ドメイン−ＭＹＣ（ＰＴＤ−ＭＹＣ）融合タンパク質）、Ｂｃｌ−２組成物（例えばＰＴＤ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質）、又はこれら両方を有する組成物を投与することにより被験者の造血コンパートメント細胞の形成を増進する新規な方法を提供する。特定の態様は、ＭＹＣ組成物（例えばタンパク質導入ドメイン−ＭＹＣ（ＰＴＤ−ＭＹＣ）融合タンパク質）、Ｂｃｌ−２組成物（例えばＰＴＤ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質）、又はこれら両方を有する組成物を、ＨＳＣ移植と組み合わせて投与することによる、造血幹細胞（ＨＳＣ）移植レシピエントにおける造血コンパートメント再構築を加速する方法に関する。このような新しい造血コンパートメント再構築を加速する方法は、有利な点として、移植レシピエントの骨髄ニッチに生産的に定着するＨＳＣの数を増加させ、及び／又は、骨髄系及びリンパ系コンパートメント再構築の速度を増進することができ、これによって、移植レシピエントにおける日和見感染症のリスクを低減し、かつＨＳＣ生着不全のリスクを低減することが可能になる。
【００１３】
加えて、本開示は、少なくとも部分的に、ＭＹＣポリペプチドとタンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）（例えばＨＩＶ  ＴＡＴタンパク質導入ドメイン）とを含む融合タンパク質（ＴＡＴ−ＭＹＣ融合タンパク質）を有する組成物をＨＳＣ移植後に投与することで、ＨＳＣ移植レシピエントにおける成熟造血系の回復時間が加速されるという、驚くべき発見に基づいている。理論に束縛されるものではないが、ＭＹＣ組成物（例えばＰＴＤ−ＭＹＣ融合タンパク質）をＨＳＣ移植レシピエントに投与することで、レシピエントの造血コンパートメントにおけるＭＹＣ活性が増加し、これによってレシピエント体内の骨髄ニッチへのＨＳＣ定着増進と、移植後のＨＳＣの生存率増進がもたらされ、より高いＨＳＣ定着率を生じると考えられる。増進されたＨＳＣ定着により、骨髄ニッチで細胞マトリックスと効果的に相互作用できる移植ＨＳＣの数が増加し（すなわち、生産的定着）、自己複製して関連する前駆細胞タイプを産生する骨髄ニッチにおける移植ＨＳＣの数が増加し、かつ、骨髄ニッチへの定着の動態が改善され、これによって造血コンパートメント再構築の加速をもたらす。理論に束縛されるものではないが、ＭＹＣ組成物（例えばＰＴＤ−ＭＹＣ融合タンパク質）をＨＳＣ移植レシピエントに投与することで、移植ＨＳＣにおけるＭＹＣ活性が増大し、これにより、自己複製し、機能性かつ成熟した造血系（すなわち造血コンパートメント）を再構築するための関連する前駆細胞タイプ及びサブタイプを産生するＨＳＣの数が増加するとも考えられている。更に、移植の約１０分前〜約２４時間前に、ＭＹＣ組成物（例えばＰＴＤ−ＭＹＣ融合タンパク質）と共に移植するようＨＳＣを処理することで、ＨＳＣ移植レシピエント体内での成熟造血系の回復時間が加速される。いくつかの実施形態において、ＭＹＣ組成物をＨＳＣに形質導入又は他の形で導入するのに要する時間は、ＨＳＣ移植レシピエント体内での成熟造血系の回復時間の加速を達成するのに充分である。
【００１４】
本開示の他の態様は、更に、被験者の体内の造血コンパートメントを自家再構築させる内因性ＨＳＣを誘導する、ＭＹＣ組成物（例えばタンパク質導入ドメイン−ＭＹＣ（ＰＴＤ−ＭＹＣ）融合タンパク質）、Ｂｃｌ−２組成物（例えばタンパク質導入ドメイン−Ｂｃｌ−２（ＰＴＤ−Ｂｃｌ−２）融合タンパク質）、又はこれら両方を有する組成物を投与することにより、造血コンパートメントの自家再構築を必要とする被験者の体内での造血コンパートメント自家再構築を増進する新しい方法に関するものである。有利な点として、このような造血コンパートメントの自家再構築を増進する新しい方法は、化学療法及び放射線治療などの造血コンパートメントに対する障害から患者を保護するか又は回復を促進しうる。このような新しい方法は更に、骨髄不全症候群の治療にも使用することができる。理論に束縛されるものではないが、ＭＹＣ組成物（例えばＰＴＤ−ＭＹＣ融合タンパク質）、Ｂｃｌ−２組成物（例えばＰＴＤ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質）、又はこれら両方を、造血コンパートメントの自家再構築を必要とする被験者に投与することによって、内因性ＨＳＣにおけるＭＹＣ活性、Ｂｃｌ−２活性、又はこれら両方が増大し、これによって、自己複製し、機能性かつ成熟した造血系（すなわち造血コンパートメント）を自家再構築するための関連する前駆細胞タイプ及びサブタイプを産生するＨＳＣの数が増加するものと考えられる。
【００１５】
更に、理論に束縛されるものではないが、ＭＹＣ活性は骨髄ニッチへのＨＳＣ局在化も増進すると考えられる。
【００１６】
Ｒｅｆａｅｌｉらは、がん原遺伝子ＭＹＣがＢ細胞免疫寛容を破壊しうると述べているが（Ｒｅｆａｅｌｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １０２（１１）：４０９７〜４１０２，２００５）、ＲｅｆａｅｌｉらはＰＴＤ−ＭＹＣ融合タンパク質の使用に関する手引きは提供しておらず、また造血コンパートメント細胞を形成するＨＳＣの能力増進におけるＭＹＣの役割についても述べていない。更に、ＵＳ２００７／０１１６６９１号、ＵＳ２０１０／０２９７７６３号、ＷＯ２００７／０４７５８３号、ＵＳ２０１０／００４７２１７号、及びＷＯ２０１０／０１１６４４号は、条件的に不死化された長期的幹細胞、及び分化した細胞の調製方法を開示しているが、これらの出願のいずれも、ＭＹＣが、ＨＳＣ移植レシピエント体内における造血コンパートメントを再構築する外因的に加えられるＨＳＣの能力を増進することについても、あるいはＭＹＣが、被験者体内の造血コンパートメントを自家再構築する内因性ＨＳＣの能力を増進することについても開示していない。
【００１７】
ＲｅｆａｅｌｉらのＵＳ２００７／０１１６６９１号、ＵＳ２０１０／０２９７７６３号、ＷＯ２００７／０４７５８３号、ＵＳ２０１０／００４７２１７号、及びＷＯ２０１０／０１１６４４号とは対照的に、本発明者らは、ＭＹＣ組成物（例えばＰＴＤ−ＭＹＣ融合タンパク質）をＨＳＣ移植レシピエントに２４時間後に投与することで、成熟した造血系の回復に要する時間を少なくとも５０％短縮することにより、造血コンパートメントの再構築が加速されるという驚くべき事実を示した。
【００１８】
本発明者らは更に、造血コンパートメントの減少を示す被験者に、ＭＹＣ組成物（例えばＰＴＤ−ＭＹＣ融合タンパク質）を投与することにより、被験者の自家再構築が増進されるという驚くべき事実を示している。したがって、本開示は、造血幹細胞移植を必要としている被験者に対する、造血コンパートメント再構築を増進する方法に関するものであり、これは、ＭＹＣ組成物を含む組成物、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方で、造血幹細胞群を、約１３日間未満にわたって処理する工程と、処理した造血幹細胞群の治療的有効量を被験者に投与して、被験者の造血コンパートメントを再構築させる工程とを含み、造血コンパートメントの再構築は、ＭＹＣ組成物を含む組成物、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方によって処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者における造血コンパートメント再構築に比べて、増進される。有利な点として、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む本開示の組成物は、前処理された造血幹細胞を投与された被験者に対しても投与することができ、これによって、被験者体内での造血コンパートメント再構築を維持及び／又は更に増進することができる。
【００１９】
前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、造血幹細胞群は、ＭＹＣ組成物を含む組成物、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方によって、約１２日間未満、約１１日間未満、約１０日間未満、約９日間未満、約８日間未満、約７日間未満、約６日間未満、約５日間未満、約４日間未満、約２日間未満、又は約１日間未満にわたって処理される。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、造血幹細胞群は、ＭＹＣ組成物を含む組成物、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方によって、約２４時間未満、約２３時間未満、約２２時間未満、約２１時間未満、約２０時間未満、約１９時間未満、約１８時間未満、約１７時間未満、約１６時間未満、約１５時間未満、約１４時間未満、約１３時間未満、約１２時間未満、約１１時間未満、約１０時間未満、約９時間未満、約８時間未満、約７時間未満、約６時間未満、約５時間未満、約４時間未満、約３時間未満、約２時間未満、又は約１時間未満にわたって処理される。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、造血幹細胞群は、ＭＹＣ組成物を含む組成物、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方によって、約６０分間未満、約５５分間未満、約５０分間未満、約４５分間未満、約４０分間未満、約３５分間未満、約３０分間未満、約２９分間未満、約２８分間未満、約２７分間未満、約２６分間未満、約２５分間未満、約２４分間未満、約２３分間未満、約２２分間未満、約２１分間未満、約２０分間未満、約１９分間未満、約１８分間未満、約１７分間未満、約１６分間未満、約１５分間未満、約１４分間未満、約１３分間未満、約１２分間未満、約１１分間未満、又は約１０分間未満にわたって処理される。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、造血幹細胞群は、ＭＹＣ組成物を含む組成物で処理される。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、造血幹細胞群は、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物で処理される。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、造血幹細胞群は、ＭＹＣ組成物を含む組成物及びＢｃｌ−２組成物を含む組成物で処理される。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物を含む組成物の治療的有効量は、少なくとも０．５μ／ｍＬ、少なくとも０．６μ／ｍＬ、少なくとも０．７μ／ｍＬ、少なくとも０．８μ／ｍＬ、少なくとも０．９μ／ｍＬ、少なくとも１μ／ｍＬ、少なくとも２μ／ｍＬ、少なくとも３μ／ｍＬ、少なくとも４μ／ｍＬ、少なくとも５μ／ｍＬ、少なくとも６μ／ｍＬ、少なくとも７μ／ｍＬ、少なくとも８μ／ｍＬ、少なくとも９μ／ｍＬ、少なくとも１０μ／ｍＬ、少なくとも１５μ／ｍＬ、少なくとも２０μ／ｍＬ、少なくとも２５μ／ｍＬ、少なくとも３０μ／ｍＬ、少なくとも３５μ／ｍＬ、少なくとも４０μ／ｍＬ、少なくとも４５μ／ｍＬ、少なくとも５０μ／ｍＬ、少なくとも５５μ／ｍＬ、少なくとも６０μ／ｍＬ、少なくとも６５μ／ｍＬ、少なくとも７０μ／ｍＬ、少なくとも７５μ／ｍＬ、少なくとも８０μ／ｍＬ、少なくとも８５μ／ｍＬ、少なくとも９０μ／���Ｌ、少なくとも９５μ／ｍＬ、又は少なくとも１００μ／ｍＬである。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、Ｂｃｌ−２組成物は、Ｂｃｌ−２ポリペプチド、その相同体、その類似体、又はその生物学的に活性なフラグメントを含む。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、Ｂｃｌ−２組成物はタンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）を含む。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、Ｂｃｌ−２組成物はＰＴＤ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質である。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、Ｂｃｌ−２組成物はＴＡＴ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質である。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物の治療的有効量は、少なくとも０．５μ／ｍＬ、少なくとも０．６μ／ｍＬ、少なくとも０．７μ／ｍＬ、少なくとも０．８μ／ｍＬ、少なくとも０．９μ／ｍＬ、少なくとも１μ／ｍＬ、少なくとも２μ／ｍＬ、少なくとも３μ／ｍＬ、少なくとも４μ／ｍＬ、少なくとも５μ／ｍＬ、少なくとも６μ／ｍＬ、少なくとも７μ／ｍＬ、少なくとも８μ／ｍＬ、少なくとも９μ／ｍＬ、少なくとも１０μ／ｍＬ、少なくとも１５μ／ｍＬ、少なくとも２０μ／ｍＬ、少なくとも２５μ／ｍＬ、少なくとも３０μ／ｍＬ、少なくとも３５μ／ｍＬ、少なくとも４０μ／ｍＬ、少なくとも４５μ／ｍＬ、少なくとも５０μ／ｍＬ、少なくとも５５μ／ｍＬ、少なくとも６０μ／ｍＬ、少なくとも６５μ／ｍＬ、少なくとも７０μ／ｍＬ、少なくとも７５μ／ｍＬ、少なくとも８０μ／ｍＬ、少なくとも８５μ／ｍＬ、少なくとも９０μ／ｍＬ、少なくとも９５μ／ｍＬ、又は少なくとも１００μ／ｍＬである。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物を含む組成物は更に、製薬的に許容される担体を含む。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、造血幹細胞群は、必要としている被験者に投与される前に洗浄される。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、造血幹細胞群は、造血幹細胞群を洗浄することなく、必要としている被験者に投与される。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者は、悪性血液疾患、骨髄腫、多発性骨髄腫、白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、リンパ腫、無痛性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、神経芽腫、網膜芽腫、シュバッハマン・ダイアモンド症候群、脳腫瘍、ユーイング肉腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、再発胚細胞腫瘍、血液疾患、異常ヘモグロビン症、自己免疫疾患、若年性特発性関節炎、全身性エリテマトーデス、重症複合免疫不全、不良な幹細胞を伴う先天性好中球減少症、重度の再生不良性貧血、鎌状赤血球症、骨髄形成異常症候群、慢性肉芽腫症、代謝障害、ハーラー症候群、ゴーシェ病、大理石骨病、乳児性悪性大理石骨病、心臓病、ＨＩＶ、又はＡＩＤＳを現在有するか又は過去に有していた。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者は臓器移植を受けている。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、造血幹細胞群は、骨髄、末梢血細胞、アフェレーシスを行った末梢血細胞、白血球分離を行った末梢血細胞、臍帯血、羊水、培養ＨＳＣ細胞、不死化ＨＳＣ細胞株、又は条件的不死化ＨＳＣ細胞株から取得されたものである。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、処理された造血幹細胞群は、造血幹細胞（ＨＳＣ）移植術の一工程として投与される。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＨＳＣ移植術は骨髄破壊的ＨＳＣ移植術である。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＨＳＣ移植術は非骨髄破壊的ＨＳＣ移植術である。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＨＳＣ移植は、自家ＨＳＣ移植又は同種ＨＳＣ移植である。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、処理された造血幹細胞群は、ＨＳＣ移植後の被験者体内の造血コンパートメント再構築を加速する。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、処理された造血幹細胞群の投与によって、造血コンパートメント再構築は、ＭＹＣ組成物を含む組成物、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方を含む組成物で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者における造血コンパートメント再構築に比べて、少なくとも５０％の加速が達成される。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、Ｔ細胞コンパートメントの再構築がもたらされ、これは、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方を含む組成物で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者におけるＴ細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも５０％加速されている。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、Ｂ細胞コンパートメントの再構築がもたらされ、これは、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方を含む組成物で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者におけるＢ細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも５０％加速されている。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、ＮＫ細胞コンパートメントの再構築がもたらされ、これは、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方を含む組成物で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者におけるＮＫ細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも５０％加速されている。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、骨髄系細胞コンパートメントの再構築がもたらされ、これは、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方を含む組成物で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者における骨髄系細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも５０％加速されている。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、好中球回復がもたらされ、これは、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方を含む組成物で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者における好中球回復に比べて、少なくとも５０％加速されている。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物を含む組成物の投与によって、被験者体内の骨髄ニッチへのＨＳＣ生産的定着には、ＭＹＣ組成物を含む組成物、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方を含む組成物で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者に比べて、５０％の増加がもたらされる。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、更に、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方と、所望により、少なくとも１つのサイトカイン、増殖因子、抗体、及び／又は小分子調節因子とを含む、第３の組成物を投与することが含まれる。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、この第３の組成物は更に、製薬的に許容される担体を含む。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、この造血幹細胞群は、ヒト造血幹細胞群である。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物は、ＭＹＣポリペプチド、その相同体、その類似体、又はその生物学的に活性なフラグメントを含む。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ化合物は、タンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）を含む。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物は、ＰＴＤ−ＭＹＣ融合タンパク質である。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物は、ＴＡＴ−ＭＹＣ融合タンパク質である。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者はヒトの患者である。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者はヒト以外の動物である。
【００２０】
本開示の他の態様は、被験者体内の造血コンパートメント細胞形成を増進する方法に関するものであり、これは、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の治療的有効量を、必要としている被験者に投与する工程を含み、ここにおいてこの造血コンパートメント形成は、この組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメント形成に比べて、増進されている。
【００２１】
前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、この組成物はＭＹＣ組成物を含む。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、この組成物はＢｃｌ−２組成物を含む。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、この組成物はＭＹＣ組成物とＢｃｌ−２組成物を含む。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、Ｂｃｌ−２組成物は、Ｂｃｌ−２ポリペプチド、その相同体、その類似体、又はその生物学的に活性なフラグメントを含む。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、Ｂｃｌ−２組成物はタンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）を含む。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、Ｂｃｌ−２組成物はＰＴＤ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質である。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、Ｂｃｌ−２組成物はＴＡＴ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質である。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物は、ＭＹＣポリペプチド、その相同体、その類似体、又はその生物学的に活性なフラグメントを含む。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ化合物は、タンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）を含む。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物は、ＰＴＤ−ＭＹＣ融合タンパク質である。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物は、ＴＡＴ−ＭＹＣ融合タンパク質である。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者は、造血幹細胞（ＨＳＣ）移植を現在必要としているか又は過去に必要としていた。特定の実施形態において、被験者は、悪性血液疾患、骨髄腫、多発性骨髄腫、白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、リンパ腫、無痛性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、神経芽腫、網膜芽腫、シュバッハマン・ダイアモンド症候群、脳腫瘍、ユーイング肉腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、再発胚細胞腫瘍、血液疾患、異常ヘモグロビン症、自己免疫疾患、若年性特発性関節炎、全身性エリテマトーデス、重症複合免疫不全、不良な幹細胞を伴う先天性好中球減少症、重度の再生不良性貧血、鎌状赤血球症、骨髄形成異常症候群、慢性肉芽腫症、代謝障害、ハーラー症候群、ゴーシェ病、大理石骨病、乳児性悪性大理石骨病、心臓病、ＨＩＶ、又はＡＩＤＳを現在有するか又は過去に有していた。特定の実施形態において、被験者は臓器移植を受けている。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、この方法は更に、被験者体内の造血コンパートメント再構築を達成するために、ＨＳＣを含む第２の組成物の治療的有効量を投与する工程を含む。特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物は、第２の組成物の投与よりも前、後、又は同時に投与される。特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物は、第２の組成物の投与よりも、少なくとも５日、少なくとも４日、少なくとも３日、少なくとも２日、又は少なくとも１日前に、投与される。特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物は、第２の組成物の投与と同時に投与される。特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物は、第２の組成物の投与の、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも１週間、少なくとも２週間、又は少なくとも３週間後に投与される。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与は、第２の組成物に含まれるＨＳＣの増殖をもたらす。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＨＳＣを含む第２の組成物は、第２の組成物の投与前に、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方の存在下で培養されたものである。特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方の存在下で第２の組成物を培養することにより、ＨＳＣが条件的に不死化される。特定の実施形態において、ＨＳＣの不死化により、ＨＳＣの増殖がもたらされる。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、投与時の第２の組成物は、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方の存在下で培養された結果として、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＨＳＣは、骨髄、末梢血細胞、アフェレーシスを行った末梢血細胞、白血球分離を行った末梢血細胞、臍帯血、羊水、培養ＨＳＣ細胞、不死化ＨＳＣ細胞株、又は条件的不死化ＨＳＣ細胞株から取得されたものである。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＨＳＣは、骨髄、末梢血細胞、アフェレーシスを行った末梢血細胞、白血球分離を行った末梢血細胞、臍帯血、又は羊水中に存在する。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、第２の組成物は、ＨＳＣ移植術の一工程として投与される。特定の実施形態において、ＨＳＣ移植術は骨髄破壊的ＨＳＣ移植術である。特定の実施形態において、ＨＳＣ移植術は非骨髄破壊的ＨＳＣ移植術である。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＨＳＣ移植は、自家ＨＳＣ移植又は同種ＨＳＣ移植である。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与により、被験者にＨＳＣ移植を行った後の造血コンパートメント再構築が加速される。特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与により、造血コンパートメント再構築が、組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメント再構築に比べて、少なくとも５０％の加速が達成される。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者体内での加速された造血コンパートメント再構築により、組成物を投与されていない被験者におけるＴ細胞再構築に比べて、少なくとも５０％加速されたＴ細胞コンパートメント再構築がもたらされる。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者体内での加速された造血コンパートメント再構築により、組成物を投与されていない被験者におけるＢ細胞再構築に比べて、少なくとも５０％加速されたＢ細胞コンパートメント再構築がもたらされる。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者体内での加速された造血コンパートメント再構築により、組成物を投与されていない被験者におけるＮＫ細胞再構築に比べて、少なくとも５０％加速されたＮＫ細胞コンパートメント再構築がもたらされる。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者体内での加速された造血コンパートメント再構築により、組成物を投与されていない被験者における骨髄系細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも５０％加速された骨髄系細胞コンパートメント再構築がもたらされる。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者体内での加速された造血コンパートメント再構築により、組成物を投与されていない被験者における好中球回復に比べて、少なくとも５０％加速された好中球回復がもたらされる。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与によって、被験者体内の骨髄ニッチへのＨＳＣ生産的定着には、５０％の増加がもたらされる。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物が投与された場合の、被験者に投与される第２の組成物の治療的有効量は、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物が投与されない場合に必要な量よりも少ない。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、更に、所望により、少なくとも１つのサイトカイン、増殖因子、抗体、及び／又は小分子調節因子を含む、第３の組成物を投与することが含まれる。特定の実施形態において、第３の組成物は更に、製薬的に許容される担体を含む。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、第２の組成物内に含まれるＨＳＣはヒトＨＳＣである。特定の実施形態において、被験者は、造血コンパートメントの自家再構築を現在必要としているか、過去に必要としていた。特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方は、内因性造血幹細胞（ＨＳＣ）を誘導して、被験者の体内において造血コンパートメントを自家再構築させる。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、この造血コンパートメントの自家再構築は、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物を投与されていない被験者の造血コンパートメント自家再構築に比べて、増進されている。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者における増進された造血コンパートメント自家再構築は、増進されたＴ細胞コンパートメント自家再構築、増進されたＢ細胞コンパートメント自家再構築、増進されたＮＫ細胞コンパートメント自家再構築、増進された骨髄系細胞コンパートメント自家再構築、又は好中球回復をもたらす。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与は、内因性ＨＳＣの増殖をもたらす。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者は化学療法を現在受けているか、又はすでに受けている。特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与は、化学療法による造血コンパートメントの減少を防止する。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与は、化学療法による内因性ＨＳＣの減少を防止する。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者は放射線治療を現在受けているか、又はすでに受けている。特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与は、放射線治療による造血コンパートメントの減少を防止する。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与は、放射線治療による内因性ＨＳＣの減少を防止する。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者は骨髄不全症候群を有する。特定の実施形態において、この骨髄不全症候群は再生不良性貧血又は湾岸戦争症候群である。特定の実施形態において、この骨髄不全症候群は遺伝性骨髄不全症候群（ＩＢＭＦＳ）である。特定の実施形態において、ＩＢＭＦＳは、無巨核球性血小板減少症、ダイアモンド・ブラックファン貧血、先天性角化不全症、ファンコーニ貧血、ピアソン症候群、重度の先天性好中球減少症、シュバッハマン・ダイアモンド症候群、及び血小板減少性橈骨欠損、ＩＶＩＣ症候群、ＷＴ症候群、橈尺骨癒合症、及び運動失調−汎血球減少症から選択される。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与は、骨髄不全症候群による造血コンパートメント細胞の減
少を防止する。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与は骨髄不全症候群による内因性ＨＳＣの減少を防止する。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物を含む組成物の治療的有効量は、被験者の体重に対して少なくとも０．１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４０ｍｇ／ｋｇ、又は少なくとも５０ｍｇ／ｋｇである。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、Ｂｃｌ−２組成物の治療的有効量は、被験者の体重に対して少なくとも０．１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４０ｍｇ／ｋｇ、又は少なくとも５０ｍｇ／ｋｇである。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物は更に、製薬的に許容される担体を含む。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者はヒトの患者である。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者はヒト以外の動物である。
【００２２】
本開示の他の態様は、被験者における造血幹細胞（ＨＳＣ）移植後の造血コンパートメント再構築を加速する方法に関するものであり、これは、ａ）ＨＳＣを含む第１の組成物の治療的有効量を投与することにより、必要としている被験者において造血コンパートメント再構築を達成する工程と、ｂ）ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む第２の組成物を被験者に投与する工程とによるものであり、ここにおいて第２の組成物の投与により、第２の組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメント再構築に比べて、少なくとも５０％加速された造血コンパートメント再構築が達成される。
【００２３】
本開示の他の態様は、被験者における造血コンパートメントの自家再構築を増進する方法に関するものであり、これは、造血コンパートメントの自家再構築を必要としている被験者に対し、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の治療的有効量を投与する工程によって行われ、ここにおいてＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方が、内因性造血幹細胞（ＨＳＣ）を誘導して被験者体内の造血コンパートメントを自家再構築させ、かつ、ここにおいて造血コンパートメントの自家再構築は、組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメント自家再構築に比べて増進されている。
【００２４】
本開示の他の態様は、化学療法による造血コンパートメント細胞の減少を治療する方法に関するものであり、これは、化学療法を現在受けているか又はすでに受けている被験者に対し、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の治療的有効量を投与する工程によって行われ、ここにおいてＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方が、内因性造血幹細胞（ＨＳＣ）を誘導して被験者体内の造血コンパートメントを自家再構築させる。
【００２５】
本開示の他の態様は、放射線治療による造血コンパートメント細胞の減少を治療する方法に関するものであり、これは、放射線治療を現在受けているか又はすでに受けている被験者に対し、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の治療的有効量を投与する工程によって行われ、ここにおいてＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方が、内因性造血幹細胞（ＨＳＣ）を誘導して被験者体内の造血コンパートメントを自家再構築させる。
【００２６】
本開示の他の態様は、骨髄不全症候群を治療する方法に関するものであり、これは、骨髄不全症候群を有する被験者に対し、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の治療的有効量を投与する工程によって行われ、ここにおいてＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方が、内因性造血幹細胞（ＨＳＣ）を誘導して被験者体内の造血コンパートメントを自家再構築させる。
【００２７】
本開示の他の態様は、造血コンパートメント細胞形成を現在必要とするか又は必要としていた被験者において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物を使用することにより、造血コンパートメント細胞形成を増進することに関するものであり、ここにおいてこの組成物の使用は、組成物を投与されていない患者における造血コンパートメント形成に比べて、造血コンパートメント形成を増進する。
【００２８】
前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者は、造血幹細胞（ＨＳＣ）移植を現在必要としているか又は過去に必要としていた。特定の実施形態において、被験者は、悪性血液疾患、骨髄腫、多発性骨髄腫、白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、リンパ腫、無痛性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、神経芽腫、網膜芽腫、シュバッハマン・ダイアモンド症候群、脳腫瘍、ユーイング肉腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、再発胚細胞腫瘍、血液疾患、異常ヘモグロビン症、自己免疫疾患、若年性特発性関節炎、全身性エリテマトーデス、重症複合免疫不全、不良な幹細胞を伴う先天性好中球減少症、重度の再生不良性貧血、鎌状赤血球症、骨髄形成異常症候群、慢性肉芽腫症、代謝障害、ハーラー症候群、ゴーシェ病、大理石骨病、乳児性悪性大理石骨病、心臓病、ＨＩＶ、又はＡＩＤＳを現在有するか又は過去に有していた。特定の実施形態において、被験者は臓器移植を受けている。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者はＨＳＣ移植を現在受けているか、又はすでに受けている。特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物は、ＨＳＣ移植よりも前、後、又は同時に投与される。特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物は、ＨＳＣ移植よりも、少なくとも５日、少なくとも４日、少なくとも３日、少なくとも２日、又は少なくとも１日前に、投与される。特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物は、ＨＳＣ移植と同時に投与される。特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物は、ＨＳＣ移植の、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも１週間、少なくとも２週間、又は少なくとも３週間後に投与される。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与は、移植されたＨＳＣの増殖をもたらす。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、移植されたＨＳＣは、ＨＳＣ移植の前に、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方の存在下で培養される。特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方の存在下でＨＳＣを培養することにより、ＨＳＣが条件的に不死化される。特定の実施形態において、ＨＳＣの不死化により、ＨＳＣの増殖がもたらされる。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、移植されたＨＳＣは、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方の存在下で培養された結果として、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、移植されたＨＳＣは、骨髄、末梢血細胞、アフェレーシスを行った末梢血細胞、白血球分離を行った末梢血細胞、臍帯血、羊水、培養ＨＳＣ細胞、不死化ＨＳＣ細胞株、又は条件的不死化ＨＳＣ細胞株から取得されたものである。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、このＨＳＣ移植術は骨髄破壊的ＨＳＣ移植術であるか、又は骨髄破壊的ＨＳＣ移植術であった。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、このＨＳＣ移植術は非骨髄破壊的ＨＳＣ移植術であるか、又は非骨髄破壊的ＨＳＣ移植術であった。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＨＳＣ移植は、自家ＨＳＣ移植であるか、又は自家ＨＳＣ移植であった。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＨＳＣ移植は、同種ＨＳＣ移植であるか、又は同種ＨＳＣ移植であった。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与により、被験者にＨＳＣ移植を行った後の造血コンパートメント再構築が加速される。特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与により、造血コンパートメント再構築が、組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメント再構築に比べて、少なくとも５０％の加速が達成される。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者体内での加速された造血コンパートメント再構築により、組成物を投与されていない被験者におけるＴ細胞再構築に比べて、少なくとも５０％加速されたＴ細胞コンパートメント再構築がもたらされる。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者体内での加速された造血コンパートメント再構築により、組成物を投与されていない被験者におけるＢ細胞再構築に比べて、少なくとも５０％加速されたＢ細胞コンパートメント再構築がもたらされる。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者体内での加速された造血コンパートメント再構築により、組成物を投与されていない被験者におけるＮＫ細胞再構築に比べて、少なくとも５０％加速されたＮＫ細胞コンパートメント再構築がもたらされる。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者体内での加速された造血コンパートメント再構築により、組成物を投与されていない被験者における骨髄系細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも５０％加速された骨髄系細胞コンパートメント再構築がもたらされる。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者体内での加速された造血コンパートメント再構築により、組成物を投与されていない被験者における好中球回復に比べて、少なくとも５０％加速された好中球回復がもたらされる。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与によって、被験者体内の骨髄ニッチへのＨＳＣ生産的定着には、５０％の増加がもたらされる。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、更に、所望により、少なくとも１つのサイトカイン、増殖因子、抗体、及び／又は小分子調節因子を含む、第２の組成物を投与することが含まれる。特定の実施形態において、第３の組成物は更に、製薬的に許容される担体を含む。
【００２９】
前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、移植されたＨＳＣはヒトＨＳＣである。特定の実施形態において、被験者は、造血コンパートメントの自家再構築を現在必要としているか、過去に必要としていた。特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方は、内因性造血幹細胞（ＨＳＣ）を誘導して、被験者の体内において造血コンパートメントを自家再構築させる。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、この造血コンパートメントの自家再構築は、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物を投与されていない被験者の造血コンパートメント自家再構築に比べて、増進されている。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者における増進された造血コンパートメント自家再構築は、増進されたＴ細胞コンパートメント自家再構築、増進されたＢ細胞コンパートメント自家再構築、増進されたＮＫ細胞コンパートメント自家再構築、増進された骨髄系細胞コンパートメント自家再構築、又は好中球回復をもたらす。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与は、内因性ＨＳＣの増殖をもたらす。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者は化学療法を現在受けているか、又はすでに受けている。特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与は、化学療法による造血コンパートメントの減少を防止する。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与は、化学療法による内因性ＨＳＣの減少を防止する。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者は放射線治療を現在受けているか、又はすでに受けている。特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与は、放射線治療による造血コンパートメントの減少を防止する。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与は、放射線治療による内因性ＨＳＣの減少を防止する。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者は骨髄不全症候群を有する。特定の実施形態において、この骨髄不全症候群は再生不良性貧血又は湾岸戦争症候群である。特定の実施形態において、この骨髄不全症候群は遺伝性骨髄不全症候群（ＩＢＭＦＳ）である。特定の実施形態において、ＩＢＭＦＳは、無巨核球性血小板減少症、ダイアモンド・ブラックファン貧血、先天性角化不全症、ファンコーニ貧血、ピアソン症候群、重度の先天性好中球減少症、シュバッハマン・ダイアモンド症候群、及び血小板減少性橈骨欠損、ＩＶＩＣ症候群、ＷＴ症候群、橈尺骨癒合症、及び運動失調−汎血球減少症から選択される。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与は、骨髄不全症候群による造血コンパートメント細胞の減少を防止する。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与は骨髄不全症候群による内因性ＨＳＣの減少を防止する。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物はＴＡＴ−ＭＹＣである。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物を含む組成物の治療的有効量は、被験者の体重に対して少なくとも０．１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４０ｍｇ／ｋｇ、又は少なくとも５０ｍｇ／ｋｇである。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、Ｂｃｌ−２組成物はＴＡＴ−Ｂｃｌ−２である。
【００３０】
前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、Ｂｃｌ−２組成物の治療的有効量は、被験者の体重に対して少なくとも０．１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４０ｍｇ／ｋｇ、又は少なくとも５０ｍｇ／ｋｇである。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物は更に、製薬的に許容される担体を含む。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、ＭＹＣ組成物を含む組成物で、被験者はヒト患者である。前述の実施形態の任意のものと組み合わせうる特定の実施形態において、被験者はヒト以外の動物である。
【００３１】
本開示の他の態様は、造血幹細胞（ＨＳＣ）の移植を受けたか又は受ける予定の患者に、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物を使用して、造血コンパートメント再構築を加速させることに関するものであり、ここにおいて、この組成物の使用により、この組成物の投与を受けない被験者における造血コンパートメント再構築に比べ、造血コンパートメント再構築において少なくとも５０％の加速が達成される。
【００３２】
本開示の他の態様は、造血コンパートメント細胞が現在減少しているか又は過去に減少していた患者に、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物を使用して、造血コンパートメントの自家再構築を増進することに関するものであり、ここにおいてＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方が、内因性造血幹細胞（ＨＳＣ）を誘導して、患者体内の造血コンパートメントを自家再構築させ、かつここにおいて、この組成物の使用により、この組成物の投与を受けない被験者における造血コンパートメント自家再構築に比べ、造血コンパートメント自家再構築が増進される。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】増殖した骨髄細胞で移植を行いＴＡＴ−ＭＹＣで処理を行ってから４週間後のマウスにおけるＴ細胞の発生を示す、ＦＡＣＳ染色の結果を図示する。パネルは、ＴＣＲβ陽性ＰＢＭＣのフローサイトメトリーを示す。図１のＡ及びＢは、細胞移植もＴＡＴ−ＭＹＣ処理も受けなかった、Ｒａｇ−１−／−（図１のＡ）及びＣ５７ＢＬ／６（図１のＢ）コントロールマウスの細胞のフローサイトメトリーを図示する。図１のＣ及びＤは、５×１０３個の増殖した骨髄細胞のみを注入したＲａｇ−１−／−マウス（図１のＣ）、また、移植から２４時間後に１０μｇのＴａｔ−ＭＹＣ注入を受けたマウス（図１のＤ）の細胞のフローサイトメトリーを図示する。
【図２】増殖した骨髄細胞で移植を行いＴＡＴ−ＭＹＣで処理を行ってから４週間後のマウスにおけるＢ細胞の発生を示す、ＦＡＣＳ染色の結果を図示する。パネルは、Ｂ２２０陽性ＰＢＭＣのフローサイトメトリーを示す。図２のＡ及びＢは、細胞移植もＴＡＴ−ＭＹＣ処理も受けなかった、Ｒａｇ−１−／−（図２のＡ）及びＣ５７ＢＬ／６（図２のＢ）コントロールマウスの細胞のフローサイトメトリーを図示する。図２のＣ及びＤは、５×１０３個の増殖した骨髄細胞のみを注入したＲａｇ−１−／−マウス（図２のＣ）、また、移植から２４時間後に１０μｇのＴａｔ−ＭＹＣ注入を受けたマウス（図２のＤ）の細胞のフローサイトメトリーを図示する。
【図３】増殖した骨髄細胞で移植を行いＴＡＴ−ＭＹＣで処理を行ってから８週間後のマウスにおけるＴ細胞の発生を示す、ＦＡＣＳ染色の結果を図示する。パネルは、ＴＣＲβ陽性ＰＢＭＣのフローサイトメトリーを示す。図３のＡ及びＢは、細胞移植もＴＡＴ−ＭＹＣ処理も受けなかった、Ｒａｇ−１−／−（図３のＡ）及びＣ５７ＢＬ／６（図３のＢ）コントロールマウスの細胞のフローサイトメトリーを図示する。図３のＣ及びＤは、５×１０３個の増殖した骨髄細胞のみを注入したＲａｇ−１−／−マウス（図３のＣ）、また、移植から２４時間後に１０μｇのＴａｔ−ＭＹＣ注入を受けたマウス（図３のＤ）の細胞のフローサイトメトリーを図示する。
【図４】増殖した骨髄細胞で移植を行いＴＡＴ−ＭＹＣで処理を行ってから８週間後のマウスにおけるＢ細胞の発生を示す、ＦＡＣＳ染色の結果を図示する。パネルは、Ｂ２２０陽性ＰＢＭＣのフローサイトメトリーを示す。図４のＡ及びＢは、細胞移植もＴＡＴ−ＭＹＣ処理も受けなかった、Ｒａｇ−１−／−（図４のＡ）及びＣ５７ＢＬ／６（図４のＢ）コントロールマウスの細胞のフローサイトメトリーを図示する。図４のＣ及びＤは、５×１０３個の増殖した骨髄細胞のみを注入したＲａｇ−１−／−マウス（図４のＣ）、また、移植から２４時間後に１０μｇのＴａｔ−ＭＹＣ注入を受けたマウス（図４のＤ）の細胞のフローサイトメトリーを図示する。
【図５】新たに分離した全骨髄細胞で移植を行いＴＡＴ−ＭＹＣで処理を行ってから４週間後のマウスにおけるＴ細胞の発生を示す、ＦＡＣＳ染色の結果を図示する。パネルは、ＣＤ８×ＣＤ４陽性細胞についてゲーティングされた分離ＰＢＭＣのフローサイトメトリーを示す。図５のＡ及びＢは、細胞移植もＴＡＴ−ＭＹＣ処理も受けなかった、Ｒａｇ−１−／−（図５のＡ）及びＣ５７ＢＬ／６（図５のＢ）コントロールマウスの細胞のフローサイトメトリーを図示する。図５のＣ及びＤは、１×１０６個の全骨髄細胞のみを注入したＲａｇ−１−／−マウス（図５のＣ）、また、移植から２４時間後に１０μｇのＴａｔ−ＭＹＣ注入を受けたマウス（図５のＤ）の細胞のフローサイトメトリーを図示する。
【図６】図５に示されているマウスの全コホートのＴ細胞パーセンテージをグラフで図示する。図６のＡは、Ｃ５７ＢＬ／６コントロールマウス（無処理、最初の列）、１０６個のＢＭ細胞のみで処理したＲａｇ−１−／−マウス（中央の列）、及び１０６個のＢＭ細胞で処理し、２４時間後に１０μｇのＴＡＴ−ＭＹＣで処理したＲａｇ−１−／−マウス（最後の列）におけるＣＤ４陽性Ｔ細胞のパーセンテージを示す。図６のＢは、Ｃ５７ＢＬ／６コントロールマウス（無処理、最初の列）、１０６個のＢＭ細胞のみで処理したＲａｇ−１−／−マウス（中央の列）、及び１０６個のＢＭ細胞で処理し、２４時間後に１０μｇのＴＡＴ−ＭＹＣで処理したＲａｇ−１−／−マウス（最後の列）におけるＣＤ８  Ｔ細胞のパーセンテージを示す。
【図７】新たに分離した全骨髄細胞で移植を行いＴＡＴ−ＭＹＣで処理を行ってから４週間後のマウスにおけるＢ細胞の発生を示す、ＦＡＣＳ染色の結果を図示する。パネルは、Ｂ２２０×ＣＤ１９陽性細胞についてゲーティングされた分離ＰＢＭＣのフローサイトメトリーを示す。図７のＡ及びＢは、細胞移植もＴＡＴ−ＭＹＣ処理も受けなかった、Ｒａｇ−１−／−（図７のＡ）及びＣ５７ＢＬ／６（図７のＢ）コントロールマウスの細胞のフローサイトメトリーを図示する。図７のＣ及びＤは、１×１０６個の全骨髄細胞のみを注入したＲａｇ−１−／−マウス（図７のＣ）、また、移植から２４時間後に１０μｇのＴａｔ−ＭＹＣ注入を受けたマウス（図７のＤ）の細胞のフローサイトメトリーを図示する。
【図８】図７に示されているマウスの全コホートのＢ細胞パーセンテージをグラフで図示する。このグラフは、Ｃ５７ＢＬ／６コントロールマウス（無処理、最初の列）、１０６個のＢＭ細胞のみで処理したＲａｇ−１−／−マウス（中央の列）、及び１０６個のＢＭ細胞で処理し、２４時間後に１０μｇのＴＡＴ−ＭＹＣで処理したＲａｇ−１−／−マウス（最後の列）におけるＣＤ１９×Ｂ２２０陽性Ｂ細胞のパーセンテージを示す。
【図９】図５〜８に示すＲａｇ−１−／−マウスコホートの脾臓Ｔ細胞及びＢ細胞の活性化をグラフで図示する。図９のＡ及びＢは、１０６個の新鮮な骨髄細胞が移植されたがＴＡＴ−ＭＹＣの処理はされていないＲａｇ−１−／−マウスのＴ細胞（図９のＡ）及びＢ細胞（図９のＢ）の活性化を示す。図９のＣ及びＤは、新鮮な骨髄細胞移植の後に１０μｇのＴＡＴ−ＭＹＣで処理されたＲａｇ−１−／−マウスのＴ細胞（図９のＣ）及びＢ細胞（図９のＤ）の活性化を示す。
【図１０】５ＦＵでの非致死的チャレンジの後、ＴＡＴ−ＭＹＣでの処理を受けてから２週間後のマウスのＴ細胞再構築を示すＦＡＣＳ染色の結果を図示する。パネルは、ＣＤ８×ＣＤ４陽性細胞についてゲーティングされた分離ＰＢＭＣのフローサイトメトリーを示す。図１０のＡは、ＴＡＴ−ＭＹＣ処理を受けなかったＣ５７ＢＬ／６コントロールマウスの細胞のフローサイトメトリーを図示する。図１０のＢは、１０μｇのＴＡＴ−ＣＲＥで処理されたＣ５７ＢＬ／６マウスの細胞のフローサイトメトリーを図示する。図１０のＣは、５ＦＵチャレンジから２４時間後に１０μｇのＴａｔ−ＭＹＣで処理されたＣ５７ＢＬ／６マウスの細胞のフローサイトメトリーを図示する。
【図１１】図１０に示す５ＦＵチャレンジを受けたマウスの全コホートの再構築ＣＤ４Ｔ細胞のパーセンテージをグラフで図示する。このグラフは、Ｃ５７ＢＬ／６コントロールマウス（無処理、最初の列）、１０μｇのＴＡＴ−ＭＹＣで処理したＣ５７ＢＬ／６マウス（中央の列）、及び１０μｇのＴＡＴ−ＣＲＥで処理したＣ５７ＢＬ／６マウス（最後の列）におけるＣＤ４陽性Ｔ細胞のパーセンテージを示す。
【図１２】図１０に示す５ＦＵチャレンジを受けたマウスの全コホートの再構築ＣＤ８Ｔ細胞のパーセンテージをグラフで図示する。このグラフは、Ｃ５７ＢＬ／６コントロールマウス（無処理、最初の列）、１０μｇのＴＡＴ−ＭＹＣで処理したＣ５７ＢＬ／６マウス（中央の列）、及び１０μｇのＴＡＴ−ＣＲＥで処理したＣ５７ＢＬ／６マウス（最後の列）におけるＣＤ８陽性Ｔ細胞のパーセンテージを示す。
【図１３】致死レベル未満の放射線照射後に、新たに分離した全骨髄の移植及びＴＡＴ−ＭＹＣ処理を行ってから４週間後のマウスのＴ細胞再構築を示すＦＡＣＳ染色の結果を図示する。パネルは、ＣＤ４×ＴＣＲβ陽性細胞についてゲーティングされた分離ＰＢＭＣのフローサイトメトリーを示す。図１３のＡ及びＢは、細胞移植もＴＡＴ−ＭＹＣ処理も受けなかった、Ｒａｇ−１−／−（図１３のＡ）及びＣ５７ＢＬ／６（図１３のＢ）コントロールマウスの細胞のフローサイトメトリーを図示する。図１３のＣ、Ｄ、及びＥは、１×１０６個の全骨髄細胞のみを注入（図１３のＣ）、又は、移植から２４時間後に１０μｇのＴａｔ−ＭＹＣを静脈内注入（図１３のＤ）又は筋肉内注入（図１３のＥ）されたＲａｇ−１−／−マウスの細胞のフローサイトメトリーを図示する。
【図１４】図１３に示す５ＦＵチャレンジを受けたマウスの全コホートの再構築ＣＤ４Ｔ細胞のパーセンテージをグラフで図示する。グラフは、Ｒａｇ−１−／−コントロールマウス（無処理、最初の列）、１０μｇのＴＡＴ−ＭＹＣ静脈内注入で処理したＲａｇ−１−／−マウス（中央の列）、及び１０μｇのＴＡＴ−ＣＲＥ筋肉内注入で処理したＲａｇ−１−／−マウスのＣＤ４陽性Ｔ細胞のパーセンテージを示す。
【図１５】致死レベル未満の放射線照射後に、新たに分離した全骨髄の移植及びＴＡＴ−ＭＹＣ処理を行ってから４週間後のマウスのＢ細胞再構築を示すＦＡＣＳ染色の結果を図示する。パネルは、ＩｇＭ×ＣＤ１９陽性細胞についてゲーティングされた分離ＰＢＭＣのフローサイトメトリーを示す。図１５のＡ及びＢは、細胞移植もＴＡＴ−ＭＹＣ処理も受けなかった、Ｒａｇ−１−／−（図１５のＡ）及びＣ５７ＢＬ／６（図１５のＢ）コントロールマウスの細胞のフローサイトメトリーを図示する。図１５のＣ、Ｄ、及びＥは、１×１０６個の全骨髄細胞のみを注入（図１５のＣ）、又は、移植から２４時間後に１０μｇのＴａｔ−ＭＹＣを静脈内注入（図１５のＤ）又は筋肉内注入（図１５のＥ）されたＲａｇ−１−／−マウスの細胞のフローサイトメトリーを図示する。
【図１６】ＨＳＣ移植を受けてから、Ｔａｔ−ＭＹＣ又はＴａｔ−ＣＲＥのいずれかで処理された、あるいは図１５に示す移植から２４時間後のコントロールの、致死レベル未満の放射線照射を受けたマウス全コホートの再構築Ｂ細胞のパーセンテージをグラフで図示する。グラフは、Ｒａｇ−１−／−コントロールマウス（無処理、最初の列）、１０μｇのＴＡＴ−ＭＹＣ静脈内注入で処理したＲａｇ−１−／−マウス（中央の列）、及び１０μｇのＴＡＴ−ＣＲＥ筋肉内注入で処理したＲａｇ−１−／−マウスのＣＤ１９×Ｂ２２０陽性Ｂ細胞のパーセンテージを示す。
【図１７】ヒト臍帯血由来タンパク質変換長期（ｐｔｌｔ）−ＨＳＣのインビボでの機能分析を示す。図１７のＡは、サイトカインカクテル中インビトロで増殖させた（最初のパネル、ＦＣＢ）、又は、Ｔａｔ−ＭＹＣ及びＴａｔ−Ｂｃｌ−２を添加したサイトカインカクテル中で増殖させた（第２のパネル、ＦＣＢ  ＴＭＴＢ）、１０６個の臍帯血細胞の移植を受けたか、あるいは５×１０６個の新鮮な未操作臍帯血細胞（第３のパネル、新鮮ＦＣＢ）の移植を受けた、致死レベル未満で放射線照射されたＮＳＧマウスのコホートの骨髄の再構築を示すＦＡＣＳ分析の結果を図示する。図１７のＢは、図１７のＡの第２パネルに示すｐｔｌｔ−ＨＳＣで再構築された異種キメラマウスの骨髄細胞、脾臓細胞、及び胸腺細胞のＦＡＣＳ分析結果を図示する。全ての細胞はヒトＣＤ４５について染色された。ＣＤ４５＋細胞のゲーティングにより、骨髄中にヒトＣＤ３４＋ＣＤ３８ｌｏ細胞（第１パネル、ＢＭ）、脾臓中にヒトＣＤ１９＋及びヒトＣＤ３＋リンパ球（第２パネル、脾臓）、及び胸腺中にヒトＣＤ３＋細胞（第３パネル、胸腺）が示されている。図１７のＣは、図１７のＡの第２パネルに示すＮＳＧマウスで発生したヒト脾臓Ｂ細胞のＦＡＣＳ分析結果を図示する。脾臓Ｂ細胞はＣＦＳＥで標識付けされ、ヒトＣＤ４０及びＩｇＭに対するモノクローナル抗体の存在下で培養された。このマウスのヒトＢ細胞は、抗原受容体の刺激後に、増殖を行った。図１７のＤは、メチルセルロース上に接種した後のヒトＣＤ３４＋ＣＤ３８ｌｏから得た骨髄赤芽球コロニー（赤芽球バースト形成細胞（ＢＦＵ−Ｅ）、コロニー形成ユニット巨核球（ＣＦＵ−Ｍ）、コロニー形成ユニット顆粒球（ＣＦＵ−Ｇ）、及びコロニー形成ユニット顆粒球単球（ＣＦＵ−ＧＭ））の定量のグラフ表示を示す。ヒトＣＤ３４＋ＣＤ３８ｌｏ細胞は、図１７のＡ第２パネルに示され、更に１７のＢ第１パネルで分析されたＮＳＧ異種キメラマウスの骨髄から取得された。図１７のＥは、メチルセルロース上に再接種した後の、骨髄赤芽球コロニーの発生の定量のグラフ表示を示す。図１７のＦは、図１７のＡ第２パネルに示すＮＳＧマウスから得た骨髄細胞のＣＤ４５陽性群における骨髄系及びリンパ系細胞の分化（ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３、及びＣＤ１９発現）の定量のグラフ表示を示す。図１７のＧは、図１７のＡ第２パネルに示すＮＳＧマウスから得た脾臓細胞のＣＤ４５陽性群における骨髄系及びリンパ系細胞の分化（ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３、及びＣＤ１９発現）の定量のグラフ表示を示す。
【図１８】致死レベル未満の放射線照射後に、新鮮な胎児臍帯血の移植及びＴＡＴ−ＭＹＣ又はＴａｔ−ＣＲＥ制御タンパク質で処理してから８週間後の、ＮＳＧマウスの末梢血の再構築を示すＦＡＣＳ染色の結果を図示する。パネルは、ヒトＣＤ４５陽性細胞についてゲーティングされた分離ＰＢＭＣのフローサイトメトリーを示す。図１８のＡ〜Ｃは、５×１０５個（図１８のＡ）、１×１０６個（図１８のＢ）、又は５×１０６個（図１８のＣ）の新たに分離された胎児臍帯血細胞を移植され、２４時間後に１０μｇのＴａｔ−ＣＲＥを注入されたＮＳＧマウスの細胞のフローサイトメトリーを図示する。図１８のＤ〜Ｆは、５×１０５個（図１８のＤ）、１×１０６個（図１８のＥ）、又は５×１０６個（図１８のＦ）の新たに分離された胎児臍帯血細胞を移植され、２４時間後に１０μｇのＴａｔ−ＭＹＣを注入されたＮＳＧマウスの細胞のフローサイトメトリーを図示する。
【図１９】致死レベル未満の放射線照射後に、新鮮な胎児臍帯血の移植及びＴＡＴ−ＭＹＣ又はＴａｔ−ＣＲＥ制御タンパク質で処理してから８週間後の、ＮＳＧマウスの骨髄の再構築を示すＦＡＣＳ染色の結果を図示する。パネルは、ヒトＣＤ４５陽性細胞についてゲーティングされた分離骨髄のフローサイトメトリーを示す。図１９のＡ〜Ｃは、５×１０５個（図１９のＡ）、１×１０６個（図１９のＢ）、又は５×１０６個（図１９のＣ）の新たに分離された胎児臍帯血細胞を移植され、２４時間後に１０μｇのＴａｔ−ＣＲＥを注入されたＮＳＧマウスの細胞のフローサイトメトリーを図示する。図１９のＤ〜Ｆは、５×１０５個（図１９のＤ）、１×１０６個（図１９のＥ）、又は５×１０６個（図１９のＦ）の新たに分離された胎児臍帯血細胞を移植され、２４時間後に１０μｇのＴａｔ−ＭＹＣを注入されたＮＳＧマウスの細胞のフローサイトメトリーを図示する。
【図２０】致死レベル未満の放射線照射後に、新鮮な胎児臍帯血の移植及びＴＡＴ−ＭＹＣ又はＴａｔ−ＣＲＥ制御タンパク質で処理してから８週間後の、ＮＳＧマウスの脾臓の再構築を示すＦＡＣＳ染色の結果を図示する。パネルは、ヒトＣＤ４５陽性細胞についてゲーティングされた分離脾臓細胞のフローサイトメトリーを示す。図２０のＡ〜Ｃは、５×１０５個（図２０のＡ）、１×１０６個（図２０のＢ）、又は５×１０６（図２０のＣ）の新たに分離された胎児臍帯血細胞を移植され、２４時間後に１０μｇのＴａｔ−ＣＲＥを注入されたＮＳＧマウスの細胞のフローサイトメトリーを図示する。図２０のＤ〜Ｆは、５×１０５個（図２０のＤ）、１×１０６個（図２０のＥ）、又は５×１０６個（図２０のＦ）の新たに分離された胎児臍帯血細胞を移植され、２４時間後に１０μｇのＴａｔ−ＭＹＣを注入されたＮＳＧマウスの細胞のフローサイトメトリーを図示する。
【図２１】致死レベル未満の放射線照射後に、マウスに注入する前にＴＡＴ−ＭＹＣで１時間インビトロで処理した、新鮮な胎児臍帯血細胞の移植を行ってから８週間後の、ＮＳＧマウスの末梢血の再構築を示すＦＡＣＳ染色の結果を図示する。パネルは、ヒトＣＤ４５陽性細胞についてゲーティングされた分離ＰＢＭＣのフローサイトメトリーを示す。図２１のＡは、５×１０６個の新たに分離された胎児臍帯血細胞を移植されたＮＳＧマウスの細胞のフローサイトメトリーを図示する。図２１のＢは、マウスに細胞を注入する前にＴａｔ−ＭＹＣで１時間インビトロで処理した、５×１０６個の新たに分離された胎児臍帯血細胞を移植されたＮＳＧマウスの細胞のフローサイトメトリーを図示する。
【図２２】致死レベル未満の放射線照射後に、マウスに注入する前にＴＡＴ−ＭＹＣで１時間インビトロで処理した、新鮮な胎児臍帯血細胞の移植を行ってから８か月後の、ＮＳＧマウスの骨髄、脾臓及び胸腺の長期的再構築を示すＦＡＣＳ染色の結果を図示する。パネルは、ヒトＣＤ４５陽性細胞についてゲーティングされた、分離された骨髄細胞、脾臓細胞、及び胸腺細胞のフローサイトメトリーを示す。図２２のＡは、５×１０６個の新たに分離された胎児臍帯血細胞を移植されたＮＳＧマウスの骨髄細胞のフローサイトメトリーを図示する。図２２のＢは、マウスに細胞を注入する前にＴａｔ−ＭＹＣで１時間インビトロで処理した、５×１０６個の新たに分離された胎児臍帯血細胞を移植されたＮＳＧマウスの骨髄細胞のフローサイトメトリーを図示する。図２２のＣは、５×１０６個の新たに分離された胎児臍帯血細胞を移植されたＮＳＧマウスの脾臓細胞のフローサイトメトリーを図示する。図２２のＤは、マウスに細胞を注入する前にＴａｔ−ＭＹＣで１時間インビトロで処理した、５×１０６個の新たに分離された胎児臍帯血細胞を移植されたＮＳＧマウスの脾臓細胞のフローサイトメトリーを図示する。図２２のＥは、５×１０６個の新たに分離された胎児臍帯血細胞を移植されたＮＳＧマウスの胸腺細胞のフローサイトメトリーを図示する。図２２のＦは、マウスに細胞を注入する前にＴａｔ−ＭＹＣで１時間インビトロで処理した、５×１０６個の新たに分離された胎児臍帯血細胞を移植されたＮＳＧマウスの胸腺細胞のフローサイトメトリーを図示する。
【図２３】コントロールＮＳＧマウス（図２３のＡ）、致死レベル未満の放射線照射を受け、サイトカインカクテル中インビトロで増殖させた５×１０６個のＣ−ＧＳＦ動員された成熟血球の移植を受けたＮＳＧマウス（図２３のＢ）、又は、Ｔａｔ−ＭＹＣ及びＴａｔ−Ｂｃｌ−２を添加したサイトカインカクテル中インビトロで増殖させた５×１０６個のＣ−ＧＳＦ動員された成熟血球の移植を受けたＮＳＧマウス（図２３のＣ）の、末梢血のＦＡＣＳ分析の結果を図示する。
【図２４】Ｔａｔ−ＭＹＣポリペプチドのいくつかの実施形態のアミノ酸及び核酸の配列を図示する。
【図２５】Ｂｃｌ−２ドメインポリペプチドのいくつかの実施形態のアミノ酸及び核酸の配列を図示する。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
本開示は、必要としている被験者に対し、ＭＹＣ組成物（例えばタンパク質導入ドメイン−ＭＹＣ（ＰＴＤ−ＭＹＣ）融合タンパク質）を含む組成物、Ｂｃｌ−２組成物（例えばタンパク質導入ドメイン−Ｂｃｌ−２（ＰＴＤ−Ｂｃｌ−２）融合タンパク質）を含む組成物、又はこれら両方を投与することにより、造血コンパートメント細胞の形成を増進することに一部関する。特定の態様において、本開示は、ＭＹＣ組成物（例えばタンパク質導入ドメイン−ＭＹＣ（ＰＴＤ−ＭＹＣ）融合タンパク質）を含む組成物、Ｂｃｌ−２組成物（例えばタンパク質導入ドメイン−Ｂｃｌ−２（ＰＴＤ−Ｂｃｌ−２）融合タンパク質）を含む組成物、又はこれら両方を投与することにより、ＨＳＣ移植レシピエントにおける造血幹細胞（ＨＳＣ）生着及び造血コンパートメント再構築を加速することに関する。いくつかの実施形態において、ＨＳＣ移植レシピエントは更に、ＭＹＣ組成物（例えばタンパク質導入ドメイン−ＭＹＣ（ＰＴＤ−ＭＹＣ）融合タンパク質）を含む組成物、Ｂｃｌ−２組成物（例えばタンパク質導入ドメイン−Ｂｃｌ−２（ＰＴＤ−Ｂｃｌ−２）融合タンパク質）を含む組成物、又はこれら両方を投与されることによって、ＨＳＣ移植レシピエント体内でのＨＳＣ生着及び造血コンパートメント再構築の維持及び／又は更なる加速がなされる。本明細書で使用されるとき、ＨＳＣ移植は骨髄移植を含むがこれに制限されない。
【００３５】
更に、本開示は少なくとも部分的に、ＭＹＣポリペプチド及びＰＴＤ（例えばＨＩＶ  ＴＡＴタンパク質導入ドメイン）を含む融合タンパク質を有する組成物を骨髄移植後に投与することで、骨髄移植後の成熟した造血系の回復に要する時間が短縮されるという発見に基づいている。例えば、致死レベルに放射線照射されたマウスに骨髄移植を行ってからＭＹＣ組成物を投与した場合、Ｔ細胞回復に要する時間は、約９週間だったものが約４週間に短縮され、Ｂ細胞回復に要する時間は、約１０週間だったものが約４週間に短縮された。したがって、本開示の一態様は、被験者における造血幹細胞（ＨＳＣ）移植後の造血コンパートメント再構築を加速する方法を提供し、これは、ａ）ＨＳＣを含む第１の組成物の治療的有効量を投与することにより、必要としている被験者において造血コンパートメント再構築を達成する工程と、ｂ）ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む第２の組成物を被験者に投与する工程とによるものであり、ここにおいて第２の組成物の投与により、第２の組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメント再構築に比べて、少なくとも５０％加速された造血コンパートメント再構築が達成される。
【００３６】
別の態様において、本開示は、タンパク質導入ドメイン−ＭＹＣ（ＰＴＤ−ＭＹＣ）融合タンパク質を有する組成物を投与することにより、必要としている被験者の体内での、造血コンパートメントの自家再構築を増進することに関する。本開示は更に、ＭＹＣ組成物の投与が、化学療法及び／又は放射線治療を受けた患者において、その治療による造血コンパートメント細胞の減少が生じた後の回復を増進しうるという新発見に少なくとも部分的に基づいている。例えば、化学療法薬５−フルオロウラシル治療後の患者に、ＭＹＣ組成物を投与することにより、５−フルオロウラシル治療による造血コンパートメント細胞（例えばＣＤ８＋Ｔ細胞）の減少の後の、造血コンパートメント細胞の回復が加速されたことが示されている（図１４）。
【００３７】
本開示の別の一態様は、被験者における造血コンパートメントの自家再構築を増進する方法を提供し、これは、造血コンパートメントの自家再構築を必要としている被験者に対し、ＭＹＣ組成物を含む組成物、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方の治療的有効量を投与する工程によって行われ、ここにおいてＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方が、内因性造血幹細胞（ＨＳＣ）を誘導して被験者体内の造血コンパートメントを自家再構築させ、造血コンパートメントの自家再構築は、組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメント自家再構築に比べて増進されている。
【００３８】
別の態様において、本開示は部分的に、造血幹細胞移植を必要としている被験者に、ＨＳＣを投与する前に、ＭＹＣ組成物（例えばタンパク質導入ドメイン−ＭＹＣ（ＰＴＤ−ＭＹＣ）融合タンパク質）、Ｂｃｌ−２組成物（ＰＴＤ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質）、又はこれら両方でＨＳＣ群を前処理することにより、被験者の体内における造血コンパートメント再構築を増進することに関する。特定の態様において、本開示は、被験者にＨＳＣを投与する前に、タンパク質導入ドメイン−ＭＹＣ（ＰＴＤ−ＭＹＣ）融合タンパク質、タンパク質導入ドメイン−Ｂｃｌ−２（ＰＴＤ−Ｂｃｌ−２）融合タンパク質、又はこれら両方でＨＳＣを前処理することによって、ＨＳＣ移植レシピエント体内における造血幹細胞（ＨＳＣ）生着及び造血コンパートメント再構築を加速することに関する。驚くべきことに、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方については、移植前に少なくともわずか１時間（更に、恐らくはわずか約１０分間）ＨＳＣを前処理することで、造血コンパートメント再構築の増進を達成するのに充分である。
【００３９】
したがって、特定の好ましい実施形態は、造血幹細胞移植を必要としている被験者に対する、造血コンパートメント再構築を増進する方法に関するものであり、これは、ＭＹＣ組成物を含む組成物、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方で、造血幹細胞群を、約１３日間未満にわたって処理する工程と、処理した造血幹細胞群の治療的有効量を被験者に投与して、被験者の造血コンパートメントを再構築させる工程とを含み、ここにおいて、造血コンパートメントの再構築は、ＭＹＣ組成物を含む組成物、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方によって処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者における造血コンパートメント再構築に比べて、増進されている。いくつかの実施形態において、造血幹細胞群は、ＭＹＣ組成物を含む組成物、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方で、約１２日間以下〜約１日間以下、例えば、約１２日間以下、約１１日間以下、約１０日間以下、約９日間以下、約８日間以下、約７日間以下、約６日間以下、約５日間以下、約４日間以下、約２日間以下、又は約１日間以下、処理される。いくつかの実施形態において、造血幹細胞群は、ＭＹＣ組成物を含む組成物、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方で、約２４時間以下〜約１時間以下、例えば、約２４時間以下、約２３時間以下、約２２時間以下、約２１時間以下、約２０時間以下、約１９時間以下、約１８時間以下、約１７時間以下、約１６時間以下、約１５時間以下、約１４時間以下、約１３時間以下、約１２時間以下、約１１時間以下、約１０時間以下、約９時間以下、約８時間以下、約７時間以下、約６時間以下、約５時間以下、約４時間以下、約３時間以下、約２時間以下、又は約１時間以下、処理される。いくつかの実施形態において、造血幹細胞群は、ＭＹＣ組成物を含む組成物、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物、又はこれら両方で、約６０分以下〜約１０分以下、例えば、約６０分間以下、約５５分間以下、約５０分間以下、約４５分間以下、約４０分間以下、約３５分間以下、約３０分間以下、約２９分間以下、約２８分間以下、約２７分間以下、約２６分間以下、約２５分間以下、約２４分間以下、約２３分間以下、約２２分間以下、約２１分間以下、約２０分間以下、約１９分間以下、約１８分間以下、約１７分間以下、約１６分間以下、約１５分間以下、約１４分間以下、約１３分間以下、約１２分間以下、約１１分間以下、又は約１０分間以下、処理される。
【００４０】
本明細書で使用されるとき、用語「造血コンパートメント」は、全ての血液細胞系を含む被験者体内の細胞コンパートメントを指し、これは骨髄系（単球、マクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、赤血球、巨核球、血小板、及び樹状細胞を含むがこれらに限定されない）並びにリンパ系（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫＴ細胞、及びＮＫ細胞を含むがこれらに限定されない）を含むがこれらに限定されない。「造血コンパートメント」は、組織固有及び特殊な種類を含め、未熟、成熟、未分化、及び分化した全ての白血球群及び下位群を含みうる。
【００４１】
本明細書で使用されるとき、被験者体内における用語「造血コンパートメント細胞形成」は、造血幹細胞（ＨＳＣ）分化、ＨＳＣ増殖、及び／又はＨＳＣ生存による、造血コンパートメント内の造血コンパートメントの任意の血球系列の１つ以上を産生及び／又は増殖させることを指す。「造血コンパートメント細胞形成」は、例えばＨＳＣ移植レシピエント体内の造血コンパートメント再構築などの、外因性ＨＳＣによるＨＳＣ生着の結果でありうる。あるいは、「造血コンパートメント細胞形成」は、例えば被験者体内での造血コンパートメントの自家再構築による、内因性ＨＳＣ分化、内因性ＨＳＣ増殖、及び／又は内因性ＨＳＣ生存の結果でありうる。いくつかの実施形態において、「造血コンパートメント細胞形成」は、骨髄系形成、骨髄系前駆細胞形成、単球形成、マクロファージ形成、好中球形成、好塩基球形成、好酸球形成、赤血球形成、巨核球形成、血小板形成、樹状細胞形成、リンパ系形成、リンパ系前駆細胞形成、Ｔ細胞形成、Ｂ細胞形成、ＮＫＴ細胞形成、及びＮＫ細胞形成の１つ以上を含むがこれらに限定されない。
【００４２】
本明細書で使用されるとき、被験者体内における「造血コンパートメント細胞形成の増進」は、ｉ）ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方で処理されていない外因性ＨＳＣを投与された被験者体内の造血コンパートメント細胞形成速度に比べて、あるいはＭＹＣ組成物を投与されていない被験者体内のＨＳＣからの造血コンパートメント細胞形成速度に比べて、造血コンパートメント細胞形成の速度を、約５％以上〜約５００％以上増加させること（例えば外因性ＨＳＣによる造血コンパートメント再構築の加速、又は内因性ＨＳＣによる自家再構築の加速）；ｉｉ）ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方で処理されていない外因性ＨＳＣを投与された被験者体内の造血コンパートメント内で形成される造血コンパートメント細胞の量に比べて、あるいはＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を投与されていない被験者体内の造血コンパートメント内で形成される造血コンパートメント細胞の量に比べて、外因性又は内因性ＨＳＣのいずれかにより被験者の造血コンパートメント内で形成される造血コンパートメント細胞の量を、約５％以上〜約５００％以上増加させること；又は、ｉｉｉ）ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方で処理されていない外因性ＨＳＣを投与された被験者体内で失われる造血コンパートメント細胞の量に比べて、あるいはＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を投与されていない被験者体内で失われる造血コンパートメント細胞の量に比べて、被験者体内の造血コンパートメント細胞の喪失を、約５％以上〜約５００％以上減少させること；のうち１つ以上を指す。更に、被験者体内における「造血コンパートメント細胞形成の増進」は、外因性ＨＳＣによる造血コンパートメント再構築の増進（例えばＨＳＣ生着）、及び内因性ＨＳＣによる造血コンパートメントの自家再構築の増進を含むがこれらに限定されない。本明細書で使用されるとき、被験者体内における「造血コンパートメント細胞の喪失」は、細胞壊死、アポトーシス、及び同様物による造血コンパートメント細胞の減少を指す。
【００４３】
同様に、被験者体内における造血コンパートメント細胞形成は、次の場合に増進される：ｉ）ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方で処理されていない外因性ＨＳＣを投与された被験者体内の造血コンパートメント細胞形成速度に比べて、あるいはＭＹＣ組成物を投与されていない被験者体内のＨＳＣからの造血コンパートメント細胞形成速度に比べて、造血コンパートメント細胞形成の速度が、例えば約５％以上〜約５００％以上増加している（例えば外因性ＨＳＣによる造血コンパートメント再構築が加速されている、又は内因性ＨＳＣによる自家再構築が加速されている）；ｉｉ）ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方で処理されていない外因性ＨＳＣを投与された被験者体内の造血コンパートメント内で形成される造血コンパートメント細胞の量に比べて、あるいはＭＹＣ組成物を投与されていない被験者体内の造血コンパートメント内で形成される造血コンパートメント細胞の量に比べて、被験者の造血コンパートメント内で形成される造血コンパートメント細胞の量が、例えば約５％以上〜約５００％以上増加している；及び／又は、ｉｉｉ）ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方で処理されていない外因性ＨＳＣを投与された被験者体内で失われる造血コンパートメント細胞の量に比べて、あるいはＭＹＣ組成物を投与されていない被験者体内で失われる造血コンパートメント細胞の量に比べて、被験者体内の造血コンパートメント細胞の喪失が、例えば約５％以上〜約５００％以上減少している。
【００４４】
ＨＳＣの造血コンパートメント細胞形成（例えば造血コンパートメント再構築又は自家再構築）の速度の測定、被験者体内の造血コンパートメントで形成される造血コンパートメント細胞の量の測定、及び／又は被験者体内における造血コンパートメント細胞の喪失の測定には、当該技術分野で周知の方法、及び本明細書で開示されている方法の任意のものが使用されうる。１つの非限定的な実施例において、血球系列に固有の蛍光標識抗体マーカーと蛍光活性化フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）分析が利用される。
【００４５】
特定の実施形態において、造血コンパートメント細胞形成の速度は、造血コンパートメント細胞形成の速度が、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方で処理されていない外因性ＨＳＣを投与された被験者体内の造血コンパートメント細胞形成速度に比べて、あるいはＭＹＣ組成物を投与されていない被験者体内のＨＳＣからの造血コンパートメント細胞形成速度に比べて、例えば、約５％以上、約１０％以上、約１５％以上、約２０％、約２５％以上、約３０％以上、約３１％以上、約３２％以上、約３３％以上、約３４％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約６６％以上、約６７％以上、約６８％以上、約６９％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以上、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約４００％以上、約５００％以上、又はそれ以上増加している場合に、増加していると見なされる。
【００４６】
特定の実施形態において、被験者の造血コンパートメントで形成される造血コンパートメント細胞の量は、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方で処理されていない外因性ＨＳＣを投与された被験者体内の造血コンパートメント内で形成される造血コンパートメント細胞の量に比べて、あるいはＭＹＣ組成物を投与されていない被験者体内の造血コンパートメント内で形成される造血コンパートメント細胞の量に比べて、例えば、約５％以上、約１０％以上、約１５％以上、約２０％、約２５％以上、約３０％以上、約３１％以上、約３２％以上、約３３％以上、約３４％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約６６％以上、約６７％以上、約６８％以上、約６９％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以上、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約４００％以上、約５００％、又はそれ以上増加している場合に、増加していると見なされる。
【００４７】
特定の実施形態において、被験者体内での造血コンパートメント細胞の喪失は、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方で処理されていない外因性ＨＳＣを投与された被験者体内で失われる造血コンパートメント細胞の量に比べて、あるいはＭＹＣ組成物を投与されていない被験者体内で失われる造血コンパートメント細胞の量に比べて、例えば、約５％以上、約１０％以上、約１５％以上、約２０％、約２５％以上、約３０％以上、約３１％以上、約３２％以上、約３３％以上、約３４％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約６６％以上、約６７％以上、約６８％以上、約６９％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以上、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約４００％以上、約５００％、又はそれ以上減少している場合に、減少していると見なされる。
【００４８】
ＭＹＣ組成物
本開示の特定の態様は、造血幹細胞群（ＨＳＣ）を、ＭＹＣ組成物を含む組成物で処理することにより、造血コンパートメント再構築を増進することに関する。本開示のＨＳＣは、ＭＹＣ組成物単独で、又は本開示のＢｃｌ−２組成物と組み合わせて処理されうる。当該技術分野で周知及び本明細書に開示される任意の方法を用いて、組成物（例えば融合タンパク質）で細胞を処理することができる。例えば、造血幹細胞群は、ＭＹＣ組成物の存在下で培養されうる。本開示の他の態様は、必要としている被験者に対し、ＭＹＣ組成物を含む組成物を投与することによって、被験者体内の造血コンパートメント形成を増進することに関する。
【００４９】
本明細書で使用されるとき、「ＭＹＣ組成物」は、ＭＹＣポリペプチド；ＭＹＣポリペプチドの変種又は変異体、修飾ＭＹＣポリペプチド、ＭＹＣポリペプチドの相同体；ＭＹＣポリペプチドの類似体；ＭＹＣポリペプチドの生物学的に活性なフラグメント；ＭＹＣポリペプチドの下流標的、その相同体、その類似体、その生物学的に活性なフラグメント；並びに、ＭＹＣポリペプチドを含む融合タンパク質、その相同体、その類似体、及びその生物学的に活性なフラグメントを指す。本開示のＭＹＣ組成物は、当該技術分野で周知の任意のＭＹＣポリペプチド、その変種、その変異体、その相同体、その類似体、又はその生物学的に活性なフラグメントを含む（例えば、米国特許公開第ＵＳ２００７／０１１６６９１号、米国特許公開第ＵＳ２００９／０２９１０９４号、米国特許公開第ＵＳ２０１０／００４７２１７号、米国特許公開第ＵＳ２０１０／００５５１２９号、及び米国特許公開第ＵＳ２０１０／０２７９３５１）。
【００５０】
特定の好ましい実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物は、タンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）に連結されている（例えば融合され）ＭＹＣポリペプチド、その変種、その変異体、その相同体、その類似体、又はその生物学的に活性なフラグメントを含む、融合タンパク質である。
【００５１】
ＭＹＣポリペプチド
いくつかの実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物はＭＹＣポリペプチドである。本開示のＭＹＣポリペプチドは、完全長ＭＹＣタンパク質の１つ以上の活性を有する任意のポリペプチドを含むがこれに限定されない。
【００５２】
本明細書で使用されるとき、「ＭＹＣ」及び「ＭＹＣタンパク質」は互換的に使用され、ｂＨＬＨ（塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス）転写因子のＭＹＣファミリーの一員であるタンパク質を指す。本開示のＭＹＣタンパク質は、ＭＹＣ応答遺伝子の発現を調節する転写因子であり、よって、転写因子として細胞の核を機能させる必要がある。ＭＹＣ活性は特定のＭＹＣ応答遺伝子の発現を活性化させ、同時に、他のＭＹＣ応答遺伝子の発現を抑制することができる。ＭＹＣ活性は、細胞増殖、細胞成長、及びアポトーシスを含むがこれらに限定されない様々な細胞機能を調節することができる。
【００５３】
本開示のＭＹＣ組成物は、内因性ＭＹＣの過剰発現、又は遺伝子操作によるＭＹＣの遺伝子組み換え発現の必要なしに、ＭＹＣの外因性添加によって、造血コンパートメント細胞形成を必要としている被験者の体内においてＭＹＣ活性を増加させることができる。
【００５４】
本開示のＭＹＣポリペプチドは、完全長ＭＹＣタンパク質、完全長ＭＹＣタンパク質の少なくとも１つの活性を保持するフラグメント、完全長ＭＹＣタンパク質の少なくとも１つの活性を保持する相同体、及び完全長ＭＹＣタンパク質の少なくとも１つの活性を保持する類似体を含むがこれらに限定されない。本開示のＭＹＣポリペプチドは、当該技術分野で周知の任意の好適な方法によって作製されうる。例えば、ＭＹＣポリペプチドは、天然源から精製することができ、遺伝子組み換えにより発現させることができ、又は化学的に合成することができる。
【００５５】
ＭＹＣタンパク質
本開示の方法の任意のものにおいて使用するのに好適な完全長ＭＹＣタンパク質の例としては、ｃ−ＭＹＣ、Ｎ−ＭＹＣ、Ｌ−ＭＹＣ、及びＳ−ＭＹＣが挙げられるがこれらに限定されない。
【００５６】
特定の好ましい実施形態において、ＭＹＣポリペプチドは完全長ｃ−ＭＹＣポリペプチドである。ｃ−ＭＹＣポリペプチドは、下記の特徴のうち１つ以上を有しうる：このポリペプチドは４３９個のアミノ酸のポリマーであり得、このポリペプチドは分子量４８，８０４ｋＤａを有し得、このポリペプチドは塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックスロイシンジッパー（ｂＨＬＨ／ＬＺ）ドメインを含み得、あるいはこのポリペプチドはＣＡＣＧＴＧを含む配列（すなわちＥボックス配列）に結合しうる。好ましくは、ｃ−ＭＹＣポリペプチドは、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００２４５８．２を有するヒトｃ−ＭＹＣポリペプチドである。更に、本開示のｃ−ＭＹＣポリペプチドは、翻訳後修飾を受けていないｃ−ＭＹＣポリペプチドでありうる。あるいは、本開示のｃ−ＭＹＣポリペプチドは、翻訳後修飾を受けているｃ−ＭＹＣポリペプチドでありうる。
【００５７】
いくつかの実施形態において、ＭＹＣポリペプチドは、タンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）を含む融合タンパク質である。特定の実施形態において、ＭＹＣポリペプチドは、本開示のＴＡＴタンパク質、又はそのフラグメントを含む融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、このＭＹＣポリペプチドは、下記のアミノ酸配列（配列番号：１）を有するＴＡＴ−ＭＹＣ融合タンパク質である：
ＭＲＫＫＲＲＱＲＲＲＭＰＬＮＶＳＦＴＮＲＮＹＤＬＤＹＤＳＶＱＰＹＦＹＣＤＥＥＥＮＦＹＱＱＱＱＱＳＥＬＱＰＰＡＰＳＥＤＩＷＫＫＦＥＬＬＰＴＰＰＬＳＰＳＲＲＳＧＬＣＳＰＳＹＶＡＶＴＰＦＳＬＲＧＤＮＤＧＧＧＧＳＦＳＴＡＤＱＬＥＭＶＴＥＬＬＧＧＤＭＶＮＱＳＦＩＣＤＰＤＤＥＴＦＩＫＮＩＩＩＱＤＣＭＷＳＧＦＳＡＡＡＫＬＶＳＥＫＬＡＳＹＱＡＡＲＫＤＳＧＳＰＮＰＡＲＧＨＳＶＣＳＴＳＳＬＹＬＱＤＬＳＡＡＡＳＥＣＩＤＰＳＶＶＦＰＹＰＬＮＤＳＳＳＰＫＳＣＡＳＱＤＳＳＡＦＳＰＳＳＤＳＬＬＳＳＴＥＳＳＰＱＧＳＰＥＰＬＶＬＨＥＥＴＰＰＴＴＳＳＤＳＥＥＥＱＥＤＥＥＥＩＤＶＶＳＶＥＫＲＱＡＰＧＫＲＳＥＳＧＳＰＳＡＧＧＨＳＫＰＰＨＳＰＬＶＬＫＲＣＨＶＳＴＨＱＨＮＹＡＡＰＰＳＴＲＫＤＹＰＡＡＫＲＶＫＬＤＳＶＲＶＬＲＱＩＳＮＮＲＫＣＴＳＰＲＳＳＤＴＥＥＮＶＫＲＲＴＨＮＶＬＥＲＱＲＲＮＥＬＫＲＳＦＦＡＬＲＤＱＩＰＥＬＥＮＮＥＫＡＰＫＶＶＩＬＫＫＡＴＡＹＩＬＳＶＱＡＥＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＬＲＫＲＲＥＱＬＫＨＫＬＥＱＬＲＫＧＥＬＮＳＫＬＥＧＫＰＩＰＮＰＬＬＧＬＤＳＴＲＴＧＨＨＨＨＨＨ
【００５８】
配列番号：１のＴＡＴ−ＭＹＣポリペプチドにおいて、アミノ酸２〜１０はＨＩＶ  ＴＡＴタンパク質導入ドメインに対応し、アミノ酸１１〜４５４はｃ−ＭＹＣのアミノ酸配列に対応し、アミノ酸４５５〜４６８は１４個のアミノ酸Ｖ５エピトープに対応し、及びアミノ酸４７２〜４７７は６個のヒスチジンタグに対応する。
【００５９】
生物学的に活性なＭＹＣフラグメント
他の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物は、完全長ＭＹＣタンパク質の少なくとも１つの活性を保持する、完全長ＭＹＣタンパク質の生物学的に活性なフラグメントである。ＭＹＣポリペプチドは、ｃ−Ｍｙｃ、Ｎ−Ｍｙｃ、Ｌ−Ｍｙｃ、又はＳ−Ｍｙｃのフラグメントでありうる。
【００６０】
本開示のＭＹＣフラグメントは、ＭＹＣタンパク質のアミノ酸配列のうち、少なくとも１０個、少なくとも１５個、少なくとも２０個、少なくとも２５個、少なくとも３０個、少なくとも３５個、少なくとも４０個、少なくとも４５個、少なくとも５０個、少なくとも５５個、少なくとも６０個、少なくとも６５個、少なくとも７０個、少なくとも７５個、少なくとも８０個、少なくとも８５個、少なくとも９０個、少なくとも９５個、少なくとも１００個、少なくとも１５０個、少なくとも２００個、少なくとも２５０個、少なくとも３００個、少なくとも３５０個、少なくとも４００個、又はそれ以上の連続するアミノ酸残基を含みうる。
【００６１】
ＭＹＣ相同体
他の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物は、完全長ＭＹＣタンパク質の少なくとも１つの活性を保持する、ＭＹＣタンパク質の相同体、又はそのフラグメントの相同体である。
【００６２】
例えば、本開示のＭＹＣポリペプチドは、ＭＹＣタンパク質又はそのフラグメントに、少なくとも４０％〜１００％同一、例えば少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は約４０％〜約１００％の任意の他のパーセンテージで同一の、アミノ酸配列を含みうる。特定の実施形態において、ＭＹＣポリペプチドは、ｃ−Ｍｙｃ、Ｎ−Ｍｙｃ、Ｌ−Ｍｙｃ、Ｓ−Ｍｙｃ、又はそのフラグメントの相同体である。
【００６３】
本開示のＭＹＣポリペプチドは更に、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００２４５８．２を有するヒトｃ−Ｍｙｃポリペプチドの機能性相同体又は類似体、又はそのフラグメントを含む。特定の実施形態において、ｃ−Ｍｙｃ相同体又は類似体は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００２４５８．２のｃ−Ｍｙｃポリペプチド配列又はそのフラグメントに、少なくとも４０％〜１００％同一、例えば少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は約４０％〜約１００％の任意の他のパーセンテージで同一の、アミノ酸配列を含む。
【００６４】
他の実施形態において、ｃ−Ｍｙｃの相同体又は類似体は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００２４５８．２のｃ−Ｍｙｃポリペプチド配列又はそのフラグメントに、少なくとも５０％〜１００％同一、例えば少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は約５０％〜約１００％の任意の他のパーセンテージで同一の、少なくとも１０個のアミノ酸、少なくとも２０個のアミノ酸、少なくとも３０個のアミノ酸、少なくとも４０個のアミノ酸、少なくとも５０個のアミノ酸、少なくとも６０個のアミノ酸、少なくとも７０個のアミノ酸、少なくとも８０個のアミノ酸、少なくとも９０個のアミノ酸、少なくとも１００個のアミノ酸、少なくとも１５０個のアミノ酸、少なくとも２００個のアミノ酸、少なくとも２５０個のアミノ酸、少なくとも３００個のアミノ酸、少なくとも３５０個のアミノ酸、少なくとも４００個のアミノ酸、又はそれ以上の長さであるポリペプチド配列を含む。
【００６５】
本明細書で使用されるとき、「相同体」は、参照配列と、第２の配列の少なくともフラグメントとの間に、アミノ酸配列の類似性を有するタンパク質又はポリペプチドを指す。相同体は、当該技術分野で周知の任意の方法によって、好ましくはＢＬＡＳＴツールを使用することによって、参照配列を、単一の第２配列若しくは配列のフラグメントと、又は配列データベースと比較して、同定することができる。後述されるように、ＢＬＡＳＴは、同一性及び類似性のパーセントに基づいて配列を比較する。
【００６６】
２つ以上の配列（例えばアミノ酸配列）の文脈における用語「同一」又は「同一性」パーセントは、同じである２つ以上の配列又はサブ配列を指す。２つの配列は、比較ウィンドウにわたって、又は測定される指定領域にわたって、後述の配列比較アルゴリズムのうち１つを使用して、又は手動位置合わせと視覚的検査によって、比較し、最も一致するように整合させた場合、指定されたパーセンテージ（すなわち、指定領域にわたって、又は指定されていない場合は配列全体にわたって、２９％同一、所望により３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％又は１００％同一）の同じアミノ酸残基又はヌクレオチドを有する場合に、実質的に同一である。所望により、同一性は、少なくとも約１０個のアミノ酸長さである領域にわたって、またより好ましくは、２０個、５０個、２００個、又はそれ以上のアミノ酸長さである領域にわたって、存在する。
【００６７】
配列比較のため、典型的には１つの配列が参照配列として用いられ、これに対して試験配列が比較される。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列と参照配列がコンピュータに入力され、必要に応じて部分列座標が指定され、配列アルゴリズムパラメータが指定される。デフォルトのプログラムパラメータを使用することができ、あるいは、別のパラメータを指定することができる。配列比較アルゴリズムは次に、プログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列の配列同一性パーセントを計算する。２つの配列の同一性を比較する際、配列は必ずしも連続的である必要はなく、任意のギャップをペナルティとして有し得、これが全体の同一性パーセントから差し引かれうる。ｂｌａｓｔｐのデフォルトパラメータは、ギャップ開きペナルティ＝１１、ギャップ延長ペナルティ＝１である。ｂｌａｓｔｎのデフォルトパラメータは、ギャップ開きペナルティ＝５、ギャップ延長ペナルティ＝２である。
【００６８】
本明細書で使用されるとき、「比較ウィンドウ」は任意の数、例えば２０〜６００個、一般には約５０〜約２００個、より一般には約１００〜約１５０個の連続位置のセグメントに対する参照を含み、ここにおいて配列は、２つの配列が最適に位置合わせされた後に、同じ数の連続位置の配列と比較されうる。比較のための配列位置合わせの方法は当該技術分野で周知である。比較のための最適な配列位置合わせは、例えば、局所的相同性アルゴリズム（Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ（１９８１））、相同性位置合わせアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ（１９７０）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ４８（３）：４４３〜４５３）、類似性検索方法（Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８５（８）：２４４４〜２４４８）、これらのアルゴリズムのコンピュータ化実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  ＧｅｎｅｔｉｃｓソフトウェアパッケージのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）、又は、手動位置合わせと視覚的検査［例えばＢｒｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｉｎｃ．（Ｒｉｎｇｂｏｕ  Ｅｄ）を参照］によって、実施することができる。
【００６９】
配列同一性及び配列類似性のパーセントを決定するのに好適なアルゴリズムの２つの例が、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ  ２．０アルゴリズムであり、これらはそれぞれ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２５（１７）：３３８９〜３４０２及びＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２１５（３）−４０３〜４１０に記載されている。ＢＬＡＳＴ解析を実行するソフトウェアは、米国バイオテクノロジー情報センターから公開入手できる。このアルゴリズムは、最初に、データベース配列内の同じ長さのワードと整合させたときに、一致するか又はある程度のプラス値の閾値スコアＴを満たす、クエリ配列における長さＷの短いワードを特定することによって、高スコア配列ペア（ＨＳＰ）を特定することを含む。Ｔは、隣接ワードスコア閾値と呼ばれる（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，前述）。これらの初期隣接ワードのヒットが、それを含むより長いＨＳＰを見つけるための検索開始のきっかけとなる。ワードヒットは、累積位置合わせスコアが増加しうる限り、各配列に沿って両方向に延長される。累積スコアは、ヌクレオチド配列については、パラメータＭ（一致する残基ペアの報酬スコア。常に＞０）、及びＮ（一致しない残基のペナルティスコア。常に＜０）を用いて計算される。アミノ酸配列については、スコア行列を使用して、累積スコアが計算される。各方向でのワードヒットの延長は、次の場合に停止される：累積位置合わせスコアが、最大達成値から量Ｘ下がった場合；１つ以上のマイナススコア残基位置合わせの累積により、累積スコアが０以下になった場合；又は配列のいずれかの端に達した場合。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータＷ、Ｔ、及びＸは、位置合わせの感度及び速度を決定する。アミノ酸配列については、ＢＬＡＳＴＰプログラムはｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈが３、ｅｘｐｅｃｔａｔｉｏｎ（Ｅ）が１０、及びＢＬＯＳＵＭ６２スコア行列［Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ａｎｄ  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，（１９９２）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９（２２）：１０９１５〜１０９１９を参照］位置合わせ（Ｂ）が５０、ｅｘｐｅｃｔａｔｉｏｎ（Ｅ）が１０、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、及び両ストランドの比較をデフォルトとして使用する。ヌクレオチド配列については、ＢＬＡＳＴＮプログラムは、ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ（Ｗ）が１１、ｅｘｐｅｃｔａｔｉｏｎ（Ｅ）が１０、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、及び両ストランドの比較をデフォルトとして使用する。
【００７０】
ＢＬＡＳＴアルゴリズムは更に、２つの配列間の類似性の統計的解析を実施する（例えばＫａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，（１９９３）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９０（１２）：５８７３〜５８７７を参照）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムにより提供される類似性の１つの測定値は、最小和確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列の間の一致がたまたま一致する確率の指標を提供する。例えば、核酸は、試験核酸を参照核酸と比較したときの最小和確率が０．２未満、より好ましくは０．０１未満、最も好ましくは０．００１未満の場合に、参照配列と類似であると見なされる。
【００７１】
上述の配列同一性パーセンテージ以外に、２つのポリペプチドが実質的に同一であることを示す別の指標は、第１のポリペプチドが、第２のポリペプチドに対して生成される抗体に対して、免疫学的に交差反応性であることである。よって、例えば、２つのペプチドの違いが保存的置換のみである場合、ポリペプチドは典型的に、第２のポリペプチドに実質的に同一である。
【００７２】
本明細書に記述されるように、好適なＭＹＣポリペプチドは更に、本開示のＭＹＣポリペプチドの保存的に修飾された変異体を含む。本明細書で使用されるとき、「保存的に修飾された変異体」は、あるアミノ酸が化学的に類似のアミノ酸で置換されるような、コードされたアミノ酸配列に対する個々の置換、欠失、又は付加を含む。機能的に類似のアミノ酸を提供する保存的置換表は、当該技術分野において周知である。下記の８つの群が、互いに保存的置換であるアミノ酸を含む：１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リシン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；７）セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）；及び８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えばＣｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（１９８４）を参照）。
【００７３】
ＭＹＣ類似体
他の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物は、完全長ＭＹＣタンパク質の少なくとも１つの活性を保持する、ＭＹＣタンパク質の類似体、又はそのフラグメントの類似体である。特定の実施形態において、ＭＹＣポリペプチドは、ｃ−Ｍｙｃ、Ｎ−Ｍｙｃ、Ｌ−Ｍｙｃ、Ｓ−Ｍｙｃ、又はそのフラグメントの類似体である。
【００７４】
本明細書で使用されるとき、「類似体」は、例えばＭＹＣポリペプチドなどの、関心対象のタンパク質に構造的又は機能的に似たタンパク質を指す。開始タンパク質に比較して、類似体は、同じ、類似、又は改善された活性及び／又は機能を呈しうる。類似体のスクリーニング及び／又は類似体の合成の方法は、当該技術分野において周知である。
【００７５】
本開示の好適なＭＹＣ類似体には、ＨＩＦ−１ａ及びＩＣＮ−１が挙げられるがこれらに限定されない。
【００７６】
ＭＹＣの下流タンパク質
他の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物は、ＭＹＣ経路におけるＭＹＣの下流のタンパク質である。当該技術分野において周知の任意の下流タンパク質が、本開示の方法と共に使用するのに好適である。ＭＹＣの下流である好適なタンパク質の例としては、ＡＫＴ及びＡＫＴ関連タンパク質（例えばＰＤＫ−１、ｍＴＯＲＣ２、ＰＩ３Ｋ−δ）が挙げられるがこれらに限定されない。ＭＹＣの下流タンパク質は更に、タンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）を含みうる。したがって、特定の実施形態において、ＭＹＣの下流タンパク質は、ＡＫＴ−ＰＴＤ融合タンパク質、ＰＴＤ−ＰＤＫ−１融合タンパク質、ＰＴＤ−ｍＴＯＲＣ２融合タンパク質、又はＰＴＤ−ＰＩ３Ｋ−δ融合タンパク質である。
【００７７】
他の実施形態において、造血コンパートメント再構築は、必要としている被験者に、ＨＳＣの生存及び／又は増殖に拮抗し、かつＭＹＣの下流であるタンパク質を阻害する阻害剤（例えば遺伝的、化学、小分子など）で前処理されたＨＳＣを投与することにより、増進される。同様に、造血コンパートメント形成は、必要としている被験者に、ＨＳＣ生存及び／又は増殖に拮抗し、かつＭＹＣの下流であるタンパク質を阻害する阻害剤（例えば遺伝的、化学、小分子など）を含む組成物の治療的有効量を投与することにより、増進される。組成物（例えば阻害剤を含むもの）の治療的有効量を投与する方法、及び治療的量を決定する方法は、当該技術分野で周知であり、本明細書に記載される。ＨＳＣの生存及び／又は増殖に拮抗し、かつＭＹＣの下流であるタンパク質の例としては、ｐＴＥＮ、ＰＰ２Ａ、ＰＨＬＰＰ、ＣＴＭＰが挙げられるがこれらに限定されない。本明細書に記述される方法を含むがこれに制限されることなく、タンパク質及び／又は遺伝子の発現、活性、及び／又は機能を阻害するための当該技術分野で周知の任意の方法を使用することができる。非限定的な例としては、遺伝的阻害剤、小分子阻害剤、ＲＮＡ干渉、及び抗体が挙げられる。
【００７８】
完全長ＭＹＣタンパク質の活性
他の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物は、少なくとも１つのＭＹＣ活性を有する完全長ＭＹＣポリペプチド、完全長ＭＹＣタンパク質の少なくとも１つの活性を保持するＭＹＣタンパク質のフラグメント、完全長ＭＹＣタンパク質の少なくとも１つの活性を保持するＭＹＣタンパク質の相同体、又は完全長ＭＹＣタンパク質の少なくとも１つの活性を保持するＭＹＣタンパク質の類似体を含む。
【００７９】
本開示の完全長ＭＹＣタンパク質は、数多くの活性を有する。そのような活性の例としては、転写因子活性、たんぱく結合活性、核酸結合活性、細胞増殖調節活性、細胞成長調節活性、アポトーシス調節活性、形態形成調節活性、発生調節活性、及び増進された造血コンパートメント再構築活性が挙げられるがこれらに限定されない。
【００８０】
いくつかの実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物は、ＨＳＣ移植レシピエント（骨髄移植レシピエントを含むがこれに限定されない）における造血コンパートメント再構築を増進するＭＹＣ活性を有する。理論に束縛されるものではないが、ＭＹＣ活性は、レシピエント体内の骨髄ニッチへの移植されたＨＳＣの生産的定着を増進すると考えられる。ＨＳＣ移植後の成熟した造血系の回復時間は、投与されたＨＳＣが骨髄ニッチに定着する能力に大きく依存する。ＨＳＣは、一旦骨髄ニッチに到達した後、ニッチ在住細胞との分子クロストークを確立する必要がある。この分子クロストークは、ＨＳＣ内の細胞内因性信号の性質及びレベルを調節して、ＨＳＣの生存、増殖、自己複製、及び分化を調節すると考えられている。骨髄ニッチとＨＳＣとの間の定着及び分極細胞分裂プロセスを調節する表面分子の完全な状態については完全に明らかにはなっていないが、いくつかの接着分子（例えばＰ−セレクチン及びＥ−セレクチン）がこのプロセスに関与していることは明らかである。理論に束縛されるものではないが、ＭＹＣは、骨髄ニッチでのＨＳＣの定着及び維持において、ＰＳＧＬ１、ＶＬＡ４、ＶＬＡ５、ＬＦＡ１及びＣＤ２６に加えて、Ｐ−セレクチン及びＥ−セレクチンの発現の主要なレギュレータであると考えられる。また、ＭＹＣはＨＳＣ内の生存及び分化のレギュレータである。更に、ＭＹＣは、ＨＳＣ多能性及び自己複製の維持に関与するいくつかの追加の経路（例えばＷｎｔ経路）の発現及び／又は機能を調節すると考えられる。この分子相互作用により、ＨＳＣは、不等細胞分裂を支持するほぼ静止の状態を再開することができ、これにより、成熟した造血系を生じさせる短期的ＨＳＣの生成が可能になり、またＨＳＣ移植レシピエントの生涯にわたって造血系の再構築成功を実現する長期的ＨＳＣコンパートメントが形成される。よって、本開示のＭＹＣ組成物をＨＳＣ移植レシピエント投与することにより、レシピエント体内の骨髄ニッチに生産的に定着するＨＳＣの、少なくとも５０％の増加がもたらされる。
【００８１】
更なる実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物は、造血コンパートメントの自家再構築を必要とする被験者において、造血コンパートメントの自家再構築を増進する活性をもつＭＹＣポリペプチドを含む。理論に束縛されるものではないが、ＭＹＣ活性は、内因性ＨＳＣが自己再生する能力と、全ての造血コンパートメント系列に分化する能力を増進し、これによって造血コンパートメントの自家再構築を増進すると考えられる。理論に束縛されるものではないが、ＭＹＣ活性は更に、骨髄ニッチへのＨＳＣ定着を増進すると考えられる。
【００８２】
有利な点として、ＭＹＣ組成物の形態でのＭＹＣの投与は、被験者体内での一過性ＭＹＣ活性をもたらす。この一過性ＭＹＣ活性は、長期的なＭＹＣ活性（例えば発がん性）の潜在的な悪影響を回避する。
【００８３】
加えて、本開示のＭＹＣ組成物は、内因性及び外因的に移植されたＨＳＣ及び前駆系統の両方のＭＹＣの細胞内レベルを増加させることができる。よって、特定の実施形態において、造血コンパートメントの自家再構築を必要としている被験者に本開示のＭＹＣ組成物を投与することで、内因性ＨＳＣの増殖がもたらされる。他の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物をＨＳＣ移植レシピエント（例えば骨髄移植レシピエント）に投与することで、移植されたＨＳＣの増殖がもたらされる。
【００８４】
本明細書に記述されるように、本開示のＭＹＣ組成物の治療的有効量は、約０．５μ／ｍＬ以上〜約１００μ／ｍＬ以上であり、例えば、約０．５μ／ｍＬ以上、約０．６μ／ｍＬ以上、約０．７μ／ｍＬ以上、約０．８μ／ｍＬ以上、約０．９μ／ｍＬ以上、約１μ／ｍＬ以上、約２μ／ｍＬ以上、約３μ／ｍＬ以上、約４μ／ｍＬ以上、約５μ／ｍＬ以上、約６μ／ｍＬ以上、約７μ／ｍＬ以上、約８μ／ｍＬ以上、約９μ／ｍＬ以上、約１０μ／ｍＬ以上、約１５μ／ｍＬ以上、約２０μ／ｍＬ以上、約２５μ／ｍＬ以上、約３０μ／ｍＬ以上、約３５μ／ｍＬ以上、約４０μ／ｍＬ以上、約４５μ／ｍＬ以上、約５０μ／ｍＬ以上、約５５μ／ｍＬ以上、約６０μ／ｍＬ以上、約６５μ／ｍＬ以上、約７０μ／ｍＬ以上、約７５μ／ｍＬ以上、約８０μ／ｍＬ以上、約８５μ／ｍＬ以上、約９０μ／ｍＬ以上、約９５μ／ｍＬ以上、又は約１００μ／ｍＬ以上のＭＹＣ組成物である。
【００８５】
Ｂｃｌ−２組成物
本開示の特定の態様は、造血幹細胞群（ＨＳＣ）を、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物で処理することにより、造血コンパートメント再構築を増進することに関する。本開示のＨＳＣは、Ｂｃｌ−２組成物単独で、又は本開示のＭＹＣ組成物と組み合わせて処理されうる。当該技術分野で周知及び本明細書に開示される任意の方法を用いて、組成物（例えば融合タンパク質）で細胞を処理することができる。例えば、造血幹細胞群は、Ｂｃｌ−２組成物の存在下で培養されうる。いくつかの実施形態において、造血幹細胞群は、本開示のＭＹＣ組成物と本開示のＢｃｌ−２組成物との組み合わせで処理されうる。本開示の他の態様は、必要としている被験者に対し、Ｂｃｌ−２組成物を含む組成物を投与することによって、被験者体内の造血コンパートメント形成を増進することに関する。
【００８６】
いくつかの実施形態において、本開示のＢｃｌ−２組成物を含む組成物を、必要としている被験者に対して投与することによって、被験者体内の造血コンパートメント形成を増進することができる。理論に束縛されるものではないが、Ｂｃｌ−２組成物は、造血細胞コンパートメント形成（例えば、外因性ＨＳＣ、又は内因性ＨＳＣの自家再構築による、造血コンパートメント再構築及び／又は生着）を増進させるのに充分な期間、外因性及び／又は内因性造血幹細胞の生存を持続（すなわち、細胞生存を増加）させることができる。造血細胞コンパートメント形成を測定する代表的な方法は本明細書に開示され、また当該技術分野において周知である。Ｂｃｌ−２組成物は、本開示のＭＹＣ組成物に加えて、又はこの代わりに、投与することができる。
【００８７】
本明細書で使用されるとき、「Ｂｃｌ−２組成物」は、Ｂｃｌ−２ポリペプチド；Ｂｃｌ−２ポリペプチドの変種又は変異体、修飾Ｂｃｌ−２ポリペプチド、Ｂｃｌ−２ポリペプチドの相同体；Ｂｃｌ−２ポリペプチドの類似体；Ｂｃｌ−２ポリペプチドの生物学的に活性なフラグメント；Ｂｃｌ−２ポリペプチドの下流標的、その相同体、その類似体、又はその生物学的に活性なフラグメント；並びに、Ｂｃｌ−２ポリペプチドを含む融合タンパク質、その相同体、その類似体、及びその生物学的に活性なフラグメントを指す。本開示のＢｃｌ−２組成物は、当該技術分野で周知の任意のＢｃｌ−２ポリペプチド、その変種、その変異体、その相同体、その類似体、又はその生物学的に活性なフラグメントを含む（例えば、米国特許公開第ＵＳ２００７／０１１６６９１号、米国特許公開第ＵＳ２０１０／００４７２１７号、及び米国特許公開第ＵＳ２０１０／０２７９３５１号）。
【００８８】
特定の好ましい実施形態において、本開示のＢｃｌ−２組成物は、タンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）に連結されている（例えば融合され）Ｂｃｌ−２ポリペプチド、その変種、その変異体、その相同体、その類似体、又はその生物学的に活性なフラグメントを含む、融合タンパク質である。
【００８９】
Ｂｃｌ−２ポリペプチド
いくつかの実施形態において、本開示のＢｃｌ−２組成物はＢｃｌ−２ポリペプチドである。本開示のＢｃｌ−２ポリペプチドには、Ｂｃｌ−２タンパク質活性を有する任意のポリペプチドが含まれるがこれに限定されない。
【００９０】
本明細書で使用されるとき、「Ｂｃｌ−２」、「Ｂｃｌ−２ポリペプチド」及び「Ｂｃｌ−２タンパク質」は互換的に使用され、１つ以上及び／又は全てのＢｃｌ−２相同性（ＢＨ）ドメイン（例えばＢＨ１、ＢＨ２、ＢＨ３、及びＢＨ４を含むがこれらに限定されない）を有するＢｃｌ−２タンパク質ファミリーの一員であるタンパク質を指す。Ｂｃｌ−２タンパク質ファミリーの構成員は典型的に、ヘテロダイマー又はホモダイマーを形成し、アポトーシスのレギュレータとして機能する。特定の好ましい実施形態において、本開示のＢｃｌ−２ポリペプチドは抗アポトーシス活性を有する。
【００９１】
本開示のＢｃｌ−２組成物は、内因性Ｂｃｌ−２の過剰発現、又は遺伝子操作によるＢｃｌ−２の遺伝子組み換え発現の必要なしに、Ｂｃｌ−２の外因性添加によって、造血コンパートメント細胞形成を必要としている被験者の体内においてＢｃｌ−２活性を増加させることができる。
【００９２】
本開示のＢｃｌ−２ポリペプチドは、完全長Ｂｃｌ−２タンパク質、完全長Ｂｃｌ−２タンパク質の活性を保持するフラグメント、その相同体、及びその類似体を含むがこれらに限定されない。いくつかの実施形態において、完全長Ｂｃｌ−２タンパク質の活性を保持するＢｃｌ−２フラグメントには、構造化されていないループドメインが欠失している短縮形状のＢｃｌ−２が含まれる（Ａｎｄｅｒｓｏｎ、Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）．Ｒｅｆｏｌｄｉｎｇ、ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｌｏｏｐ  ｄｅｌｅｔｉｏｎ  ｍｕｔａｎｔ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｂｃｌ−２  ｆｒｏｍ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ  ｂｏｄｉｅｓ．Ｐｒｏｔ  Ｅｘｐｒ．Ｐｕｒｉｆ．１５、１６２〜７０）。本開示のＢｃｌ−２ポリペプチドは、当該技術分野で周知の任意の好適な方法によって作製されうる。例えば、Ｂｃｌ−２ポリペプチドは、天然源から精製することができ、遺伝子組み換えにより発現させることができ、又は化学的に合成することができる。
【００９３】
Ｂｃｌ−２タンパク質
本開示の任意の方法において使用するのに好適な完全長Ｂｃｌ−２タンパク質の例としては、Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ｘ、Ｂｃｌ−ＸＬ、Ｍｃｌ−１、ＣＥＤ−９、Ｂｃｌ−２関連タンパク質Ａ１、Ｂｆｌ−１、及びＢｃｌ−ｗが挙げられるがこれらに限定されない。
【００９４】
特定の好ましい実施形態において、Ｂｃｌ−２ポリペプチドは、構造化されていないループドメインが欠失している完全長ヒトＢｃｌ−２ポリペプチドである。ヒトＢｃｌ−２ポリペプチドは下記の特徴のうち１つ以上を有しうる：このポリペプチドは２３９個のアミノ酸のポリマーであり得、このポリペプチドは分子量２６．３ｋＤａを有し得、又はこのポリペプチドは少なくとも１つのＢｃｌ−２相同性（ＢＨ）ドメイン（例えばＢＨ１、ＢＨ２、ＢＨ３、及びＢＨ４）を含みうる。好ましくは、このヒトＢｃｌ−２ポリペプチドは、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿０００６２４．２を有するＢｃｌ−２ポリペプチドである。更に、本開示のＢｃｌ−２ポリペプチドは、翻訳後修飾を受けていないＢｃｌ−２ポリペプチドでありうる。あるいは、Ｂｃｌ−２ポリペプチドは、翻訳後修飾を受けているＢｃｌ−２ポリペプチドでありうる。
【００９５】
いくつかの実施形態において、Ｂｃｌ−２ポリペプチドは、タンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）を含む融合タンパク質である。特定の実施形態において、Ｂｃｌ−２ポリペプチドは、本開示のＴＡＴタンパク質、又はそのフラグメントを含む融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、Ｂｃｌ−２ポリペプチドは、ＴＡＴ−Ｂｃｌ−２Δ融合タンパク質であり、ここにおいてＢｃｌ−２ポリペプチドは、構造化されていないループドメインの欠失を有する。特定の実施形態において、ＴＡＴ−Ｂｃｌ−２Δ融合タンパク質は下記のアミノ酸配列（配列番号：３）を有する：
ＭＲＫＫＲＲＱＲＲＲＭＡＨＡＧＲＳＧＹＤＮＲＥＩＶＭＫＹＩＨＹＫＬＳＱＲＡＴＳＧＩＳＩＥＡＡＧＰＡＬＳＰＶＰＰＶＶＨＬＴＬＲＱＡＧＤＤＦＳＲＲＹＲＲＤＦＡＥＭＳＳＱＬＨＬＴＰＦＴＡＲＧＣＦＡＴＶＶＥＥＬＦＲＤＧＶＮＷＧＲＩＶＡＦＦＥＦＧＧＶＭＣＶＥＳＶＮＲＥＭＳＰＬＶＤＮＩＡＬＷＭＴＥＹＬＮＲＨＬＨＴＷＩＱＤＮＧＧＷＤＡＦＶＥＬＹＧＰＳＭＲＰＬＦＤＦＳＷＬＳＬＫＴＬＬＳＬＡＬＶＧＡＣＩＴＬＧＡＹＬＳＨＫＫＧＥＬＮＳＫＬＥＧＫＰＩＰＮＰＬＬＧＬＤＳＴＲＴＧＨＨＨＨＨＨ
【００９６】
配列番号：３のＴＡＴ−Ｂｃｌ−２Δポリペプチドにおいて、アミノ酸２〜１０はＨＩＶ  ＴＡＴタンパク質導入ドメインに対応し、アミノ酸１１〜２１２はＢｃｌ−２Δのアミノ酸配列に対応し、アミノ酸２１３〜２２６は１４個のアミノ酸Ｖ５エピトープに対応し、及びアミノ酸２３０〜２３５は６個のヒスチジンタグに対応する。
【００９７】
生物学的に活性なＢｃｌ−２フラグメント
他の実施形態において、本開示のＢｃｌ−２組成物は、完全長Ｂｃｌ−２タンパク質の少なくとも１つの活性を保持する、完全長Ｂｃｌ−２タンパク質の生物学的に活性なフラグメントである。Ｂｃｌ−２ポリペプチドは、Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ｘ、Ｂｃｌ−ＸＬ、Ｍｃｌ−１、ＣＥＤ−９、Ｂｃｌ−２関連タンパク質Ａ１、Ｂｆｌ−１、又はＢｃｌ−ｗのフラグメントでありうる。
【００９８】
本開示のＢｃｌ−２フラグメントは、Ｂｃｌ−２のアミノ酸配列の、少なくとも１０個、少なくとも１５個、少なくとも２０個、少なくとも２５個、少なくとも３０個、少なくとも３５個、少なくとも４０個、少なくとも４５個、少なくとも５０個、少なくとも５５個、少なくとも６０個、少なくとも６５個、少なくとも７０個、少なくとも７５個、少なくとも８０個、少なくとも８５個、少なくとも９０個、少なくとも９５個、少なくとも１００個、少なくとも１１０個、少なくとも１２０個、少なくとも１３０個、少なくとも１４０個、少なくとも１５０個、少なくとも１６０個、少なくとも１７０個、少なくとも１８０個、少なくとも１９０個、少なくとも２００個、少なくとも２１０個、少なくとも２２０個、少なくとも２３０個、又はそれ以上の連続するアミノ酸残基を含みうる。
【００９９】
Ｂｃｌ−２相同体及び類似体
他の実施形態において、本開示のＢｃｌ−２組成物は、Ｂｃｌ−２タンパク質の相同体若しくは類似体又はそのフラグメントである。例えば、本開示のＢｃｌ−２ポリペプチドは、Ｂｃｌ−２タンパク質又はそのフラグメントに、少なくとも４０％〜１００％同一、例えば少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は約４０％〜約１００％の任意の他のパーセンテージで同一の、アミノ酸配列を含みうる。特定の実施形態において、Ｂｃｌ−２ポリペプチドは、Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ｘ、Ｂｃｌ−ＸＬ、Ｍｃｌ−１、ＣＥＤ−９、Ｂｃｌ−２関連タンパク質Ａ１、Ｂｆｌ−１、Ｂｃｌ−ｗ、又はそのフラグメントの相同体又は類似体である。
【０１００】
本開示のＢｃｌ−２ポリペプチドは更に、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００６２４．２を有するヒトＢｃｌ−２ポリペプチドの相同体又は類似体、又はそのフラグメントを含む。特定の実施形態において、Ｂｃｌ−２の相同体又は類似体は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００６２４．２のＢｃｌ−２ポリペプチド配列又はそのフラグメントに、少なくとも４０％〜１００％同一、例えば少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は約４０％〜約１００％の任意の他のパーセンテージで同一の、アミノ酸配列を含みうる。
【０１０１】
他の実施形態において、Ｂｃｌ−２の相同体又は類似体は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００６２４．２のＢｃｌ−２ポリペプチド配列又はそのフラグメントに、少なくとも５０％〜１００％同一、例えば少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は約５０％〜約１００％の任意の他のパーセンテージで同一の、少なくとも１０個のアミノ酸、少なくとも２０個のアミノ酸、少なくとも３０個のアミノ酸、少なくとも４０個のアミノ酸、少なくとも５０個のアミノ酸、少なくとも６０個のアミノ酸、少なくとも７０個のアミノ酸、少なくとも８０個のアミノ酸、少なくとも９０個のアミノ酸、少なくとも１００個のアミノ酸、少なくとも１１０個のアミノ酸、少なくとも１２０個のアミノ酸、少なくとも１３０個のアミノ酸、少なくとも１４０個のアミノ酸、少なくとも１５０個のアミノ酸、少なくとも１６０個のアミノ酸、少なくとも１７０個のアミノ酸、少なくとも１８０個のアミノ酸、少なくとも１９０個のアミノ酸、少なくとも２００個のアミノ酸、少なくとも２１０個のアミノ酸、少なくとも２２０個のアミノ酸、少なくとも２３０個のアミノ酸、又はそれ以上の長さであるポリペプチド配列を含む。
【０１０２】
本明細書に記述されるように、好適なＢｃｌ−２ポリペプチドは更に、本開示のＢｃｌ−２ポリペプチドの保存的に修飾された変異体を含む。
【０１０３】
完全長Ｂｃｌ−２タンパク質の活性
他の実施形態において、本開示のＢｃｌ−２組成物は、少なくとも１つのＢｃｌ−２活性を有する完全長Ｂｃｌ−２ポリペプチド、完全長Ｂｃｌ−２タンパク質の少なくとも１つの活性を保持するＢｃｌ−２タンパク質のフラグメント、完全長Ｂｃｌ−２タンパク質の少なくとも１つの活性を保持するＢｃｌ−２タンパク質の相同体、又は完全長Ｂｃｌ−２タンパク質の少なくとも１つの活性を保持するＢｃｌ−２タンパク質の類似体を含む。
【０１０４】
本開示の完全長Ｂｃｌ−２タンパク質は、数多くの活性を有する。そのような活性の例としては、アポトーシス調節活性、細胞生存調節活性、タンパク質結合活性、ミトコンドリア膜浸透性調節活性、カスパーゼ調節活性、電位依存性アニオンチャネル調節活性、Ｇ２チェックポイント調節活性、ミトコンドリア外膜チャネル（ＶＤＡＣ）調節活性、ミトコンドリア膜電位調節活性、タンパク質チャネル活性、及びシトクロムＣ調節活性が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１０５】
いくつかの実施形態において、本開示のＢｃｌ−２組成物は、単独又はＭＹＣ組成物と組み合わせて、ＨＳＣ移植前にＨＳＣをこの組成物で処理した場合に、ＨＳＣ移植レシピエント（骨髄移植レシピエントを含むがこれに限定されない）の体内における造血コンパートメント再構築を増進するＢｃｌ−２活性を有する。
【０１０６】
本明細書に記述されるように、本開示のＢｃｌ−２組成物の治療的有効量は、約０．５μ／ｍＬ以上〜約１００μ／ｍＬ以上であり、例えば、約０．５μ／ｍＬ以上、約０．６μ／ｍＬ以上、約０．７μ／ｍＬ以上、約０．８μ／ｍＬ以上、約０．９μ／ｍＬ以上、約１μ／ｍＬ以上、約２μ／ｍＬ以上、約３μ／ｍＬ以上、約４μ／ｍＬ以上、約５μ／ｍＬ以上、約６μ／ｍＬ以上、約７μ／ｍＬ以上、約８μ／ｍＬ以上、約９μ／ｍＬ以上、約１０μ／ｍＬ以上、約１５μ／ｍＬ以上、約２０μ／ｍＬ以上、約２５μ／ｍＬ以上、約３０μ／ｍＬ以上、約３５μ／ｍＬ以上、約４０μ／ｍＬ以上、約４５μ／ｍＬ以上、約５０μ／ｍＬ以上、約５５μ／ｍＬ以上、約６０μ／ｍＬ以上、約６５μ／ｍＬ以上、約７０μ／ｍＬ以上、約７５μ／ｍＬ以上、約８０μ／ｍＬ以上、約８５μ／ｍＬ以上、約９０μ／ｍＬ以上、約９５μ／ｍＬ以上、又は約１００μ／ｍＬ以上のＭＹＣ組成物である。
【０１０７】
タンパク質導入ドメイン
本開示の特定の態様は、タンパク質導入ドメインを含む融合タンパク質に関する。いくつかの実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物は、ＭＹＣポリペプチドに融合されたタンパク質導入ドメインを含む融合タンパク質である。他の実施形態において、本開示のＢｃｌ−２組成物は、Ｂｃｌ−２ポリペプチドに融合されたタンパク質導入ドメインを含む融合タンパク質である。
【０１０８】
本明細書で使用されるとき、用語「ペプチド導入ドメイン」、「タンパク質導入ドメイン」、及び「ＰＴＤ」は互換的に使用され、哺乳類細胞内への、及び／又は哺乳類細胞内のコンパートメントへのタンパク質浸透を促進するペプチド配列又はタンパク質のドメインを指す。１つの非限定的な例において、ＰＴＤは、連結したペプチド及び／又はタンパク質の、細胞核への浸透を促進する。
【０１０９】
本開示のＰＴＤは、当該技術分野で周知のタンパク質ドメインを分離する任意の方法、例えば標準的な分子生物学及び生化学的技法によって、ＰＴＤ含有タンパク質から分離することができる。あるいは、本開示のＰＴＤは合成することができる。本開示の好適なＰＴＤは、長さが約８〜約３０個のアミノ酸残基であり、塩基性アミノ酸残基（例えばアルギニン（Ａｒｇ）及びリシン（Ｌｙｓ））が豊富に存在している。
【０１１０】
本開示の好適なＰＴＤは、強い免疫原性ではなく、また同様に、被験者に投与された場合に、強い免疫反応を誘導しない。更に、本開示のＰＴＤは、免疫不全状態の被験者（例えば骨髄又はＨＳＣ移植を受けたか、現在受けようとしているか、これから受ける被験者）に投与された場合に、免疫反応を誘導しない。
【０１１１】
本明細書に記述されるように、本開示のＰＴＤは、哺乳類細胞内への、及び／又は哺乳類細胞内のコンパートメントへの、ペプチド及び／又はタンパク質浸透を促進するために、ペプチド及び／又はタンパク質に連結される（例えば融合、接合、架橋など）。例えば、特定の実施形態において、本開示のＰＴＤはＭＹＣタンパク質に連結される。
【０１１２】
本開示の任意の方法において使用するのに好適なタンパク質導入ドメインは、当該技術分野で周知の任意のＰＴＤを含む（例えば米国特許公開第ＵＳ２００７／０１１６６９１号及び米国特許公開第ＵＳ２０１０／００５５１２９号）。例えば、好適なＰＴＤは、レンチウイルスＴＡＴ（転写のトランス活性化因子）タンパク質、レンチウイルスＶＰＲタンパク質、ヘルペスウイルスＶＰ２２タンパク質、及びホメオタンパク質を含むがこれらに限定されないタンパク質から取得又は誘導されうる。
【０１１３】
レンチウイルスＴＡＴタンパク質から取得又は誘導される好適なＰＴＤの例としては、ＴＡＴタンパク質含有ウイルスのＴＡＴタンパク質由来のＰＴＤ、ＴＡＴタンパク質含有レンチウイルスのＴＡＴタンパク質由来のＰＴＤ、ＨＩＶ−１  ＴＡＴタンパク質由来のＰＴＤ、ＨＩＶ−２  ＴＡＴタンパク質由来のＰＴＤ、ＳＩＶ  ＴＡＴタンパク質由来のＰＴＤ、霊長類レンチウイルスＴＡＴタンパク質由来のＰＴＤ、ヒツジレンチウイルスＴＡＴタンパク質由来のＰＴＤ、ウシレンチウイルスＴＡＴタンパク質由来のＰＴＤ、ウマレンチウイルスＴＡＴタンパク質由来のＰＴＤ、ネコレンチウイルスＴＡＴタンパク質由来のＰＴＤ、ＨＩＶ、ＳＩＶ、霊長類レンチウイルス、ヒツジレンチウイルス、ウシレンチウイルス、ウマレンチウイルス、又はネコレンチウイルスの亜種のＴＡＴタンパク質由来のＰＴＤ、及びこれらの相同体が挙げられるがこれらに限定されない。特定の実施形態において、ＰＴＤは、ＨＩＶ  ＴＡＴタンパク質のアミノ酸残基４８〜５７である（ＴＡＴ［４８〜５７］）。他の実施形態において、ＰＴＤは、ＨＩＶ  ＴＡＴタンパク質のアミノ酸残基５７〜４８である（ＴＡＴ［５７〜４８］）。
【０１１４】
レンチウイルスＶＰＲタンパク質から取得又は誘導されうる好適なＰＴＤの例としては、ＶＰＲタンパク質含有ウイルスのＶＰＲタンパク質由来のＰＴＤ、ＶＰＲタンパク質含有レンチウイルスのＶＰＲタンパク質由来のＰＴＤ、ＨＩＶ−１  ＶＰＲタンパク質由来のＰＴＤ、ＨＩＶ−２  ＶＰＲタンパク質由来のＰＴＤ、ＳＩＶ  ＶＰＲタンパク質由来のＰＴＤ、霊長類レンチウイルスＶＰＲタンパク質由来のＰＴＤ、ヒツジレンチウイルスＶＰＲタンパク質由来のＰＴＤ、ウシレンチウイルスＶＰＲタンパク質由来のＰＴＤ、ウマレンチウイルスＶＰＲタンパク質由来のＰＴＤ、ネコレンチウイルスＶＰＲタンパク質由来のＰＴＤ、ＨＩＶ、ＳＩＶ、霊長類レンチウイルス、ヒツジレンチウイルス、ウシレンチウイルス、ウマレンチウイルス、又はネコレンチウイルスの亜種のＶＰＲタンパク質由来のＰＴＤ、及びこれらの相同体が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１１５】
ヘルペスウイルスＶＰ２２タンパク質から取得又は誘導されうる好適なＰＴＤの例としては、ヒトヘルペスウイルス１（ＨＳＶ−１）ＶＰ２２タンパク質由来のＰＴＤ、ヒトヘルペスウイルス２（ＨＳＶ−２）ＶＰ２２タンパク質由来のＰＴＤ、ＢＨＶ−１  ＶＰ２２タンパク質由来のＰＴＤ、オウムヘルペスウイルス１ＶＰ２２タンパク質由来のＰＴＤ、ウマヘルペスウイルス１  ＶＰ２２タンパク質由来のＰＴＤ、ウマヘルペスウイルス４  ＶＰ２２タンパク質由来のＰＴＤ、トリヘルペスウイルス２  ＶＰ２２タンパク質由来のＰＴＤ、水痘・帯状疱疹ウイルスＶＰ２２タンパク質由来のＰＴＤ、及びこれらの相同体が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１１６】
ホメオドメイン転写因子から取得又は誘導されうる好適なＰＴＤの例としては、ショウジョウバエＡｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａ（Ａｎｔｐ）タンパク質由来のホメオドメイン（ＨＤ）、ショウジョウバエＦｕｓｈｉ  ｔａｒａｚｕ（Ｆｔｚ）タンパク質由来のＨＤ、ショウジョウバエＥｎｇｒａｉｌｅｄ（Ｅｎ）タンパク質由来のＨＤ、トリＥｎｇｒａｉｌｅｄ−２タンパク質由来のＨＤ、哺乳類ホメオタンパク質由来のＨＤ、ヒトホメオタンパク質由来のＨＤ、ヒトＨｏｘ−Ａ５ホメオタンパク質由来のＨＤ、ヒトＨｏｘ−Ａ４ホメオタンパク質由来のＨＤ、ヒトＨｏｘ−Ｂ５ホメオタンパク質由来のＨＤ、ヒトＨｏｘ−Ｂ６ホメオタンパク質由来のＨＤ、ヒトＨｏｘ−Ｂ７ホメオタンパク質由来のＨＤ、ヒトＨｏｘ−Ｄ３ホメオタンパク質由来のＨＤ、ヒトＧＯＸホメオタンパク質由来のＨＤ、ヒトＭＯＸ−２ホメオタンパク質由来のＨＤ、ヒトＨｏｘｃ−８ホメオタンパク質由来のＨＤ、ヒトＩｓｌｅｔ−１（Ｉｓｌ−１）ホメオタンパク質由来のＨＤ、及びこれらの相同体が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１１７】
加えて、好適なＰＴＤには、Ｋａｐｏｓｉ−ＦＧＦ（Ｋ−ＦＧＦ又はＦＧＦ−４）由来のＰＴＤ、ＦＧＦ−２由来のＰＴＤ、ＦＧＦ−１由来のＰＴＤ、及び、ＦＧＦファミリータンパク質の他の構成員由来のＰＴＤが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１１８】
他の好適なＰＴＤには、合成ＰＴＤが挙げられる（例えばＢｅｅｒｅｎｓ、ＡＭＪ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｕｒｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２００３  Ｏｃｔ；３（５）：４８６〜９４）。
【０１１９】
更に好適なＰＴＤには、ＣＨＡＲＩＯＴ（商標）ペプチド（Ａｃｔｉｖｅ  Ｍｏｔｉｆ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、本開示のＰＴＤは遺伝子組み換えにより作製され、一方他の実施形態において、ＰＴＤは合成されるか、天然源から精製される。
【０１２１】
ＰＴＤ融合タンパク質の修飾
いくつかの実施形態において、本開示のＰＴＤ含有融合タンパク質は、ＰＴＤをＭＹＣ又はＢｃｌ−２ポリペプチドに連結させる１つ以上の分子を含む、ＰＴＤ−ＭＹＣ融合タンパク質及びＰＴＤ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質を含む。いくつかの実施形態において、１つ以上のリンカー分子は、アミノ酸ペプチドである。
【０１２２】
本開示のＰＴＤ含有融合タンパク質は更に、融合タンパク質の精製を促進する少なくとも１つのアミノ酸配列を含みうる。例えば、ＰＴＤ−ＭＹＣ融合タンパク質は、タンパク質標識（例えばポリヒスチジン標識、例えば６個のヒスチジンエピトープ標識）を含みうる。あるいは、ＰＴＤ含有融合タンパク質は、Ｖ５ドメインを含みうる。したがって、特定の実施形態において、本開示のＰＴＤ含有融合タンパク質は更に、ポリヒスチジン標識を含む。好ましくは、このポリヒスチジン標識は６個のヒスチジン標識である。より好ましくは、このヒスチジン標識は配列ＨＨＨＨＨＨを含む。
【０１２３】
加えて、このヒスチジン標識は、当該技術分野で周知の任意の好適な方法により、本開示のＰＴＤ含有融合タンパク質に付加されうる。例えば、この配列はポリヒスチジン標識をコードする発現ベクター内にクローン化されうる。あるいは、ポリヒスチジン標識はＰＣＲにより付加されうる（すなわち、ＰＣＲプライマーがポリヒスチジン配列を含む）。
【０１２４】
更に、本開示のＰＴＤ含有融合タンパク質は、少なくとも１つのタンパク質標識も含みうる。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのタンパク質標識は、エピトープ標識である。好ましくは、このエピトープ標識はＶ５エピトープ標識である。いくつかの実施形態において、このＶ５エピトープ標識は、アミノ酸配列：ＧＫＰＩＰＮＰＬＬＧＬＤＳＴを含み、一方他の実施形態において、このＶ５エピトープ標識は、アミノ酸配列：ＩＰＮＰＬＬＧＬＤを含む。このアミノ酸は、Ｄ型又はＬ型のいずれかでありうる。いくつかの実施形態において、第１の複数のアミノ酸がＤ型、第２の複数のアミノ酸がＬ型である。加えて、本開示のＶ５エピトープ標識は、当該技術分野で周知の任意の好適な方法により、本開示のＰＴＤ含有融合タンパク質に付加されうる。例えば、ＰＴＤ含有融合タンパク質配列は、Ｖ５エピトープ標識をコードする発現ベクター内にクローン化されうる。あるいは、Ｖ５エピトープ標識は、ＰＣＲにより付加されうる（すなわち、ＰＣＲプライマーがＶ５エピトープ配列を含む）。
【０１２５】
特定の実施形態において、本開示のＰＴＤ含有融合タンパク質は、ポリヒスチジン標識とエピトープ標識を含む。好ましくは、このＰＴＤ含有融合タンパク質は、６個のヒスチジン標識とＶ５エピトープ標識とを含む。
【０１２６】
いくつかの実施形態において、本開示のＰＴＤ含有融合タンパク質は任意の望ましい順序に配列することができる。いくつかの実施形態において、ＰＴＤ含有融合タンパク質は、ａ）ＭＹＣ又はＢｃｌ−２ポリペプチドにインフレームで接続されるタンパク質導入ドメイン、ｂ）Ｖ５ドメインにインフレームで接続されるＭＹＣ又はＢｃｌ−２ポリペプチド、及びｃ）６個のヒスチジンエピトープ標識にインフレームで接続されるＶ５ドメイン、の順で配列されうる。いくつかの実施形態において、ＰＴＤ含有融合タンパク質は、ａ）タンパク質導入ドメインにインフレームで接続されるＭＹＣ又はＢｃｌ−２ポリペプチド、ｂ）Ｖ５ドメインにインフレームで接続されるタンパク質導入ドメイン、及びｃ）６個のヒスチジンエピトープ標識にインフレームで接続されるＶ５ドメイン、の順で配列されうる。いくつかの実施形態において、各配列それぞれの間に、付加的に介在するアミノ酸配列を含めることができる。いくつかの実施形態において、追加のアミノ酸配列を、配列の開始位置及び／又は終了位置に含めることができる。
【０１２７】
いくつかの実施形態において、ＰＴＤ含有融合タンパク質は、タンパク質導入ドメイン、ＭＹＣ又はＢｃｌ−２ポリペプチド、及び短いペプチドドメインを含む。この短いペプチドドメインは可変でありうる。いくつかの実施形態において、この短いペプチドドメインは、Ｖ５、ヒスチジン標識、ＨＡ（血球凝集素）標識、ＦＬＡＧ標識、ＣＢＰ（カルモジュリン結合ペプチド）、ＣＹＤ（共有結合性でありながら分離可能なＮｏｒｐＤペプチド）、ＳｔｒｅｐＩＩ、又はＨＰＣ（タンパク質Ｃの重鎖）のうち少なくとも１つから選択される。いくつかの実施形態において、短いペプチドドメインは、約１０又は２０個のアミノ酸の長さである。いくつかの実施形態において、短いペプチドドメインは、２〜２０個、例えば６〜２０個のアミノ酸の長さである。いくつかの実施形態において、上述に列記したもののうち２つ（例えば、Ｖ５とヒスチジン標識）は、一緒に短いペプチドドメインとして使用することができる。
【０１２８】
ＰＴＤ含有融合タンパク質の構築
本開示のＰＴＤ含有融合タンパク質は、当該技術分野で周知の任意の好適な方法によって構築することができる（例えば米国特許公開第ＵＳ２０１０／００５５１２９号）。
【０１２９】
１つの非限定的な例において、本開示のＰＴＤ−ＭＹＣ融合タンパク質をコードする核酸配列は、ＰＣＲにより作製されうる。これは、インフレームＰＴＤ配列（例えばＴＡＴのＲＫＫＲＲＱＲＲＲの９個アミノ酸配列）を含むＭＹＣ配列のためのフォワードプライマーと、終止コドンを除去するよう設計されたＭＹＣ配列のためのリバースプライマーとを設計することによって達成されうる。そのようなプライマーを使用したＰＣＲ反応によるＰＣＲ生成物は、次に、当該技術分野で周知の好適な発現ベクターにクローン化される。
【０１３０】
１つの非限定的な例において、本開示のＰＴＤ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質をコードする核酸配列は、ＰＣＲにより作製されうる。これは、インフレームＰＴＤ配列（例えばＴＡＴのＲＫＫＲＲＱＲＲＲの９個アミノ酸配列）を含むＢｃｌ−２配列のためのフォワードプライマーと、終止コドンを除去するよう設計されたＢｃｌ−２配列のためのリバースプライマーとを設計することによって達成されうる。そのようなプライマーを使用したＰＣＲ反応によるＰＣＲ生成物は、次に、当該技術分野で周知の好適な発現ベクターにクローン化される。Ｂｃｌ−２の構造化されていないループは、部位特異的突然変異誘発キットを使用して、Ｂｃｌ−２コーディング配列から除去されうる。
【０１３１】
ＰＴＤ含有組成物
他の実施形態において、本開示のＰＴＤ含有融合タンパク質は、組成物中に含まれる。治療法のために、そのような融合タンパク質含有組成物は、製薬的に許容される担体を含み得、これには、被験者（例えばＨＳＣ移植レシピエント）にＰＴＤ含有融合タンパク質を送達するための、製薬的に許容される賦形剤及び／又は送達ビヒクルが含まれる。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、ＰＴＤ含有融合タンパク質はＰＴＤ−ＭＹＣであり、ＰＴＤ−ＭＹＣ融合タンパク質含有組成物（ＰＴＤ−ＭＹＣ組成物）の治療的有効量が被験者に投与されて、第２の組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメント再構築に比較して、造血コンパートメント再構築の少なくとも５０％加速が達成される。他の実施形態において、ＰＴＤ−ＭＹＣ組成物の治療的有効量が被験者に投与されて、ＰＴＤ−ＭＹＣ組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメントの自家再構築に比較して、増進された造血コンパートメントの自家再構築が達成される。有利な点として、本開示のＰＴＤ−ＭＹＣ組成物は、被験者に投与されたときに低毒性を有する。したがって、ＰＴＤ−ＭＹＣ組成物は、被験者の体重に対して約０．１〜約５０ｍｇ／ｋｇの範囲の量で投与されうる。特定の実施形態において、ＰＴＤ−ＭＹＣ融合タンパク質を含む組成物の治療的有効量は、被験者の体重に対して、少なくとも０．１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４０ｍｇ／ｋｇ、又は少なくとも５０ｍｇ／ｋｇである。
【０１３３】
他の実施形態において、ＰＴＤ含有融合タンパク質はＰＴＤ−Ｂｃｌ−２であり、ＰＴＤ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質含有組成物（ＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物）の治療的有効量が被験者に投与されて、第２の組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメント再構築に比較して、造血コンパートメント再構築の少なくとも５０％加速が達成される。他の実施形態において、ＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物の治療的有効量が被験者に投与されて、ＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメントの自家再構築に比較して、増進された造血コンパートメントの自家再構築が達成される。有利な点として、本開示のＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物は、被験者に投与されたときに低毒性を有する。したがって、ＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物は、被験者の体重に対して約０．１〜約５０ｍｇ／ｋｇの範囲の量で投与されうる。特定の実施形態において、ＰＴＤ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質を含む組成物の治療的有効量は、被験者の体重に対して、少なくとも０．１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも０．９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも６ｍｇ／ｋｇ、少なくとも７ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも９ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも４０ｍｇ／ｋｇ、又は少なくとも５０ｍｇ／ｋｇである。
【０１３４】
本開示のＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又は本開示のＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物は、少なくとも１日１回、少なくとも１日２回、少なくとも１日３回、少なくとも１日４回、少なくとも１日５回、又はそれ以上、投与することができる。あるいは、本開示のＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又は本開示のＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物は、少なくとも２日に１回、少なくとも３日に１回、少なくとも４日に１回、少なくとも５日に１回、又は少なくとも６日に１回、少なくとも１週間に１回、少なくとも２週間に１回、少なくとも３週間に１回、又は少なくとも４週間に１回、投与することができる。
【０１３５】
有利な点として、本開示のＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又は本開示のＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物は、ＨＳＣ移植の約５日間以上前〜約１２時間以上前に、又はＨＳＣ移植と同時に、又はＨＳＣ移植の約１２時間以上後〜約３週間以上後に、被験者に投与されたときに、ＨＳＣ移植（例えばＨＳＣ生着）（例えば骨髄移植）による造血コンパートメント再構築を加速することができる。本開示のＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又は本開示のＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物は、ＨＳＣ移植が行われる同じ場所、及びＨＳＣ移植が行われる場所とは別の医院又は診療所、及びＨＳＣ移植を受ける被験者の自宅又は居住場所を含む、任意の好適な場所で投与することができる。本開示のＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又は本開示のＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物を投与するには、当該技術分野で周知及び本明細書に開示される任意の方法が使用されうる。いくつかの実施形態において、ＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又はＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物は、当該技術分野で周知及び本明細書に開示される任意の好適な製薬的に許容される担体と一緒に投与される。他の実施形態において、ＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又はＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物は、静脈注射製剤を含むがこれに限定されない、該技術分野で周知の好適な製剤として投与される。
【０１３６】
本明細書で使用されるとき、本開示のＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又は本開示のＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物の投与は、移植されるＨＳＣと同じ混合物及び／又は製剤中、あるいは、移植されるＨＳＣとは別の混合物及び／又は製剤中で投与される際に、ＨＳＣ移植と「同時」に起こる。ＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又はＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物が別の混合物及び／又は製剤中で投与される際、ＨＳＣ移植と「同時に」起こる本開示のＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又は本開示のＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物の投与には、ＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又はＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物をＨＳＣ移植の約１１時間以上前〜約１分以上前に投与すること、あるいは、ＨＳＣ移植の約１分以上後〜約１１時間以上後に投与することが含まれるがこれらに限定されない。本明細書で使用されるとき、本開示のＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又は本開示のＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物の投与は、ＨＳＣ移植の約５日間以上前〜約１２時間以上前に別の混合物及び／又は製剤中で投与される際に、ＨＳＣ移植の「前に」起こる。本明細書で使用されるとき、本開示のＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又は本開示のＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物の投与は、ＨＳＣ移植の約１２時間以上後〜約３週間以上後に別の混合物及び／又は製剤中で投与される際に、ＨＳＣ移植の「後に」起こる。
【０１３７】
したがって、特定の実施形態において、本開示のＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又は本開示のＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物は、被験者に対して、ＨＳＣ移植の前、後、又は同時に投与される。いくつかの実施形態において、ＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又はＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物は、ＨＳＣ移植の約５日間以上前、約４日間以上前、約３日間以上前、約２日間以上前、約１日以上前、約２３時間以上前、約２２時間以上前、約２１時間以上前、約２０時間以上前、約１９時間以上前、約１８時間以上前、約１７時間以上前、約１６時間以上前、約１５時間以上前、約１４時間以上前、約１３時間以上前、又は約１２時間以上前に投与される。他の実施形態において、ＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又はＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物は、ＨＳＣ移植と同時に投与される。更なる実施形態において、ＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又はＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物は、ＨＳＣ移植の約１２時間以上後、約１３時間以上後、約１４時間以上後、約１５時間以上後、約１６時間以上後、約１７時間以上後、約１８時間以上後、約１９時間以上後、約２０時間以上後、約２１時間以上後、約２２時間以上後、又は約２３時間以上後上、約１日間以上後、約２日間以上後、約３日間以上後、約４日間以上後、約５日間以上後、約６日間以上後、約１週間以上後、約２週間以上後、又は約３週間以上後に投与される。
【０１３８】
治療用途
本開示のＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又は本開示のＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物は、様々な病状、疾病、及び症候群の治療において、数多くの治療用途がある。そのような用途には、ＨＳＣ移植レシピエント（例えば骨髄移植レシピエント）における造血コンパートメント再構築の加速；造血コンパートメントの自家再構築の増進；化学療法又は放射線治療による造血コンパートメント減少の治療；骨髄不全症候群の治療；及び長期的ＨＳＣ生着不全の治療が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１３９】
本明細書で使用されるとき、化学療法、放射線治療、及び／又はその他の造血コンパートメント細胞喪失をもたらす病状による「造血コンパートメント細胞の減少の防止」とは、化学療法、放射線治療、骨髄不全、及び／又はその他の造血コンパートメント細胞喪失をもたらす病状の結果として、細胞壊死、アポトーシス、又は同様物によって失われる、本開示の何らかの造血コンパートメント細胞の量の減少を低減及び／又は阻害することを指す。細胞喪失の定量（例えば細胞壊死、アポトーシスなどの定量）のために、当該技術分野で周知及び本明細書に開示される任意の方法が使用されうる。１つの非限定的な実施例において、ＤＮＡインターカレーション染料を使用して、細胞喪失を定量する。いくつかの実施形態において、「造血コンパートメント細胞の減少の防止」とは、化学療法、放射線治療、骨髄不全、及び／又はその他の造血コンパートメント細胞喪失をもたらす病状の結果としての、造血コンパートメント細胞喪失が、約２５％以上〜約９９％以上、又はそれ以上減少することを含みうる。
【０１４０】
特定の実施形態において、本開示のＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又は本開示のＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物は、レシピエント体内の造血コンパートメント再構築を加速することにより、ＨＳＣ移植レシピエントにおける生着不全及び日和見感染症のリスクを低減するのに使用されうる。
【０１４１】
あるいは、本開示のＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又は本開示のＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物は、被験者の骨髄不全症候群を治療するのに使用されうる。骨髄不全症候群は、遺伝性の場合があり、又は、例えば感染症、又は慢性疲労症候群の結果として起こる場合がある。加えて、ＨＳＣ移植レシピエントにおける骨髄不全は、例えば、ＨＳＣの数が不充分な移植、不適合ＨＳＣの移植、又はレシピエントの健康状態の結果として起こり得る。
【０１４２】
後天性骨髄不全症候群には、再生不良性貧血及び湾岸戦争症候群が含まれうるがこれらに限定されない。
【０１４３】
遺伝性骨髄不全症候群（ＩＢＭＦＳ）には、無巨核球性血小板減少症、ダイアモンド・ブラックファン貧血、先天性角化不全症、ファンコーニ貧血、ピアソン症候群、重度の先天性好中球減少症、シュバッハマン・ダイアモンド症候群、及び血小板減少性橈骨欠損、ＩＶＩＣ症候群、ＷＴ症候群、橈尺骨癒合症、及び運動失調−汎血球減少症が挙げられうるがこれらに限定されない。
【０１４４】
更なる実施形態において、本開示のＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又は本開示のＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物は、移植されたＨＳＣの初期生着の後に、造血キメラ化が不首尾となった（すなわち、長期的ＨＳＣ生着不全）ＨＳＣ移植レシピエントを治療するのに使用することができる。
【０１４５】
毒物（例えば化学物質、化学療法薬、又は放射線）への曝露は、被験者の造血コンパートメントの減少又は喪失をもたらしうる。本明細書で使用されるとき、造血コンパートメントの減少は、造血コンパートメント内の全細胞量の減少、あるいは、造血コンパートメント内の特定の細胞群又は細胞亜群の減少があった場合に起こり得る。造血コンパートメント内の特定の細胞群又は細胞亜群の例としては、骨髄細胞、単球、マクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、赤血球、巨核球、血小板、樹状細胞、リンパ球、Ｔ細胞前駆細胞、プロＴ細胞、プレＴ細胞、ダブルポジティブＴ細胞、未熟Ｔ細胞、成熟Ｔ細胞、Ｂ細胞前駆細胞、プロＢ細胞、早期プロＢ細胞、後期プロＢ細胞、大型プレＢ細胞、小型プレＢ細胞、未熟Ｂ細胞、成熟Ｂ細胞、ＮＫＴ細胞、及びＮＫ細胞が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１４６】
したがって、特定の実施形態において、本開示のＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又は本開示のＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物は、そのような毒物に曝露した被験者を治療するのに使用されうる。いくつかの実施形態において、本開示のＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又は本開示のＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物で被験者を治療することによって、化学療法又は放射線治療を現在受けているか又は過去に受けた被験者の造血コンパートメント細胞の減少又は喪失を防止する。他の実施形態において、本開示のＰＴＤ−ＭＹＣ組成物及び／又は本開示のＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物で被験者を治療することによって、化学療法又は放射線治療を現在受けているか又は過去に受けた被験者の内因性ＨＳＣの量の減少又は喪失を防止する。
【０１４７】
造血幹細胞
本開示の他の態様は、造血コンパートメント再構築を増進するため、必要としている被験者にＨＳＣを移植する前に、造血幹細胞群（ＨＳＣ）を、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、又はこれら両方で処理することに関する。本開示の他の態様は、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、又はこれら両方を投与してＨＳＣによる造血コンパートメント細胞の生成を誘導することにより、必要としている被験者体内の造血コンパートメント細胞形成を増進することに関する。本開示の方法により治療される「被験者」、「患者」、又は「宿主」は、造血コンパートメント細胞形成（例えば造血コンパートメント再構築又は自家再構築）の増進を必要としている、ヒト、又は非ヒト（例えば本明細書で開示される非ヒト動物の任意のもの）でありうる。本明細書で開示されるように、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、又はこれら両方で前処理された本開示のＨＳＣは、造血コンパートメント再構築を必要としている患者に投与する前に洗浄することができる。
【０１４８】
あるいは、ＭＹＣ組成物及び／又はＢｃｌ−２組成物の一過性効果が被験者に対して有害ではないため、前処理されたＨＳＣは、投与前に洗浄することなしに被験者に投与されうる。本明細書で開示される当該技術分野で周知の任意の好適な溶液を使用して、前処理されたＨＳＣを洗浄することができる。１つの非限定的な例において、ｐＨ調整済み生理食塩水を使用して、被験者にＨＳＣを投与する前に、前処理されたＨＳＣを洗浄する。前処理されたＨＳＣは、被験者に投与する約１分間以上前〜約１時間前、約６時間前、約８時間前、約１２時間前、約２４時間前、又はそれ以上前に、洗浄することができる。
【０１４９】
本開示のＨＳＣは、造血コンパートメントの全細胞タイプを生成させることができ、これは、骨髄系（単球、マクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、赤血球、巨核球、血小板、及び樹状細胞を含むがこれらに限定されない）並びにリンパ系（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫＴ細胞、及びＮＫ細胞を含むがこれらに限定されない）を含むがこれらに限定されない。
【０１５０】
いくつかの実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物は、ＨＳＣ移植レシピエントの体内での造血コンパートメント再構築を加速する。本明細書に記述されるように、ＨＳＣ移植レシピエントは、骨髄移植、ＨＳＣの豊富な骨髄移植、臍帯血移植、ＨＳＣの豊富な臍帯血移植、胎盤由来血移植、精製又は部分的に精製されたＨＳＣ移植、ＨＳＣ細胞株由来のＨＳＣ移植、又は条件的に不死化されたＨＳＣ移植を受け得る。そのような実施形態において、ＨＳＣはＨＳＣ移植術のプロセスの一工程として投与されうる。本明細書に記述されるように、ＨＳＣは、移植骨髄、移植臍帯血、又は移植細胞株内に含まれうるが、これらに限定されない。特定の好ましい実施形態において、移植レシピエントはヒト被験者である。好適なＨＳＣは、当該技術分野で周知の任意の好適な技法により取得することができる。例えば、ＨＳＣは、大腿骨、骨盤、肋骨、胸骨、及びその他の骨を含む、ドナーの骨髄中に見出すことができる。骨髄細胞を抽出又は採取するための当該技術分野で周知の任意の方法を使用することができる。１つの非限定的な例において、ＨＳＣは、針及び注射器を用いて骨盤の髄腔から直接、細胞を吸引することによって取得することができる。複数の小さな吸引を実施することで、骨盤から豊富な量の骨髄を取得することができる。
【０１５１】
本開示の方法に使用するのに好適なＨＳＣは、胚性幹（ＥＳ）細胞及び／又は誘導多能性幹（ｉＰＳ）細胞から作製されうる。当該技術分野で周知のＥＳ細胞及び／又はｉＰＳ細胞からＨＳＣを作製する任意の方法を使用することができる（例えばＫｅｌｌｅｒ、Ｇ．Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．２００５  １９：１１２９〜１１５５；及びＰａｐａｐｅｔｒｏｕ  Ｓａｄｅｌａｉｎ、Ｆ１０００  Ｍｅｄ  Ｒｅｐ．２０１０  Ｊｕｎ  １６；２）。例えば、ＨＳＣは、早期胎芽における造血前駆におけるＥＳ細胞培養の造血発生をパターニングすることにより、ＥＳ細胞から作製されうる（例えばＫｅｌｌｅｒ、Ｇ．Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．２００５  １９：１１２９〜１１５５）。
【０１５２】
加えて、本開示の方法に使用するのに好適なＨＳＣは、当該技術分野で周知の任意の好適な技法によって取得することができる。例えば、ＨＳＣは、大腿骨、骨盤、肋骨、胸骨、及びその他の骨を含む、ドナーの骨髄中に見出すことができる。骨髄細胞を抽出又は採取するための当該技術分野で周知の任意の方法を使用することができる。１つの非限定的な例において、ＨＳＣは、針及び注射器を用いて骨盤の髄腔から直接、細胞を吸引することによって取得することができる。複数の小さな吸引を実施することで、骨盤から豊富な量の骨髄を取得することができる。
【０１５３】
好適なＨＳＣは、しばしば、ドナーの骨髄コンパートメントからのＨＳＣ放出を誘導するサイトカイン（例えばＧ−ＣＳＦ（顆粒球コロニー刺激性因子））で前処理した後に、ドナー血液中に見出される末梢血細胞から取得されうる。ＨＳＣは、ＨＳＣを豊富にするためにアフェレーシス手順を行った末梢血からも取得することができる。当該技術分野で周知の任意のアフェレーシス手順を使用することができる。特定の実施形態において、このアフェレーシス手順は白血球除去法である。
【０１５４】
加えて、好適なＨＳＣは、臍帯血、胎盤、及び動員された末梢血から取得することができる。実験目的では、動物の胎児肝臓、胎児脾臓、及びＡＧＭ（大動脈−生殖腺−中腎）も、ＨＳＣの有用な取得源である。加えて、ＨＳＣは、ドナーの骨髄、末梢血、臍帯、又は胎児組織から取得したＨＳＣ源から獲得することができる。あるいは、ＨＳＣは、ドナーの骨髄、末梢血、臍帯、又は胎児組織サンプル中に含まれうる。
【０１５５】
いくつかの実施形態において、ＨＳＣはヒト臍帯又は胎盤から取得される。利用可能な他のＨＳＣ源は、動物胎児の発生途中の血液産生組織である。ヒトにおいては、ＨＳＣは約１２〜１８週までに、ヒト胎児の循環血液中に見出されうる。いくつかの実施形態において、ヒトＨＳＣは例えば、血液型Ａ＋、Ａ−、Ｂ＋、Ｂ−、Ｏ＋、Ｏ−、ＡＢ＋、及びＡＢ−の、骨髄、臍帯、末梢血、又は胎児血液組織などの任意の供給源から取得される。他の実施形態において、ヒトＨＳＣは例えば、万能ドナー又は稀な血液型を有するドナーの、骨髄、臍帯、末梢血、又は胎児血液組織などの任意の供給源から取得される。稀な血液型は当該技術分野で周知であり、これには、Ｏｈ、ＣＤＥ／ＣＤＥ、ＣｄＥ／ＣｄＥ、ＣｗＤ−／ＣｗＤ−、−Ｄ−／−Ｄ−、Ｒｈｎｕｌｌ、Ｒｈ：−５１、ＬＷ（ａ−ｂ＋）、ＬＷ（ａ−ｂ−）、Ｓ−ｓ−Ｕ−、Ｓ−ｓ−Ｕ（＋）、ｐｐ、Ｐｋ、Ｌｕ（ａ＋ｂ−）、Ｌｕ（ａ−ｂ−）、Ｋｐ（ａ＋ｂ−）、Ｋｐ（ａ−ｂ−）、Ｊｓ（ａ＋ｂ−）、Ｋｏ、Ｋ：−１１、Ｆｙ（ａ−ｂ−）、Ｊｋ（ａ−ｂ−）、Ｄｉ（ｂ−）、Ｉ−、Ｙｔ（ａ−）、Ｓｃ：−１、Ｃｏ（ａ−）、Ｃｏ（ａ−ｂ−）、Ｄｏ（ａ−）、Ｖｅｌ−、Ｇｅ−、Ｌａｎ−、Ｌａｎ（＋）、Ｇｙ（ａ−）、Ｈｙ−、Ａｔ（ａ−）、Ｊｒ（ａ−）、Ｉｎ（ｂ−）、Ｔｃ（ａ−）、Ｃｒ（ａ−）、Ｅｒ（ａ−）、Ｏｋ（ａ−）、ＪＭＨ−、及びＥｎ（ａ−）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１５６】
他の実施形態において、ヒトＨＳＣは例えば、自己免疫疾患、免疫不全、又はＨＳＣ移植で利益がありうる任意の他の疾病又は疾患を有するドナーの、骨髄、臍帯、末梢血、又は胎児血液組織などの任意の供給源から取得される。そのようなドナーはレシピエントでもありうる。有利な点として、そのようなドナーから取得されたＨＳＣは、パーソナライズされたＨＳＣ治療に使用することができる。
【０１５７】
１つの非限定的な例において、ヒトＨＳＣは、幹細胞ドナーに麻酔を行い、腸骨稜の後側上方に針を刺し、注射器で骨髄細胞を吸引することによって取得することができる。別の非限定的な例において、ヒトＨＳＣは、ドナーの末梢血から取得することができ、ここにおいて、末梢血から幹細胞を採取する数日前に、ドナーにはＧ−ＣＳＦが注入され、これにより幹細胞を末梢血中に動員させる。
【０１５８】
したがって、いくつかの実施形態において、ＨＳＣは自家ドナーから取得され、すなわち、ドナーは、そのようなＨＳＣに由来するＨＳＣのレシピエントでもある。当該技術分野で周知及び本明細書に記述される任意の方法を使用して、自家ドナーからＨＳＣを取得することができる。ＨＳＣ及び／又はこれから誘導又は作製された任意の治療産物が次に、移植、投与、及び／又は輸注により元のドナーに戻される。同様に、ＨＳＣは、例えばＨＳＣ移植を必要としている被験者のきょうだい、親、又はその他の近親者などの同種ドナーから取得することができる。１つの非限定的な例において、同種ＨＳＣは、異なる血液型、又は主要組織適合性（ＭＨＣ）又はヒト白血球抗原（ＨＬＡ）マッチの供給源からＨＳＣを採取することによって取得される。自家及び／又は同種ＨＳＣ移植は、例えば提供の数日後、数か月後、又は更には数年後の、任意の時点で行われうる。自家提供は、ＨＳＣを必要としている被験者が、他のドナー（同種及び／又は万能ドナーを含む）からのＨＳＣ移植及び／又は輸注に対して、不良な、悪化させる、又は有毒な反応を有しうる場合に、特に有用でありうる。自家及び／又は同種提供により利益が得られる可能性がある患者の例は当該技術分野で周知であり、これには、自己免疫疾患、血液疾病又は疾患、免疫疾病又は疾患、又はその他の関連する疾病又は病状を被っている患者が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１５９】
例えば、骨髄、末梢血、又は臍帯血から取得された細胞は、典型的に、抽出又は採取後に加工される。抽出又は加工された細胞を処理するための当該技術分野で周知の任意の方法が使用できる。加工工程の例としては、濾過、遠心分離、血液病理学的スクリーニング、ウイルス及び／又は微生物感染スクリーニング、赤血球除去、同種幹細胞移植レシピエントにおいて移植片対宿主病の発生を低減するためのＴ細胞除去、体積減量、細胞分離、後の加工に好適なように培地又は緩衝液中に細胞を再懸濁、非幹細胞からの幹細胞の分離（例えば幹細胞富化）、増殖因子、サイトカイン、及び／又はホルモンと共にエクスビボ又はインビトロでの幹細胞増殖、並びに冷凍保存が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１６０】
幹細胞富化のために任意の好適な方法を使用することができる。幹細胞富化の方法の例としては、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）及び磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１６１】
したがって、特定の実施形態において、本開示の方法における使用に好適なＨＳＣはヒトＨＳＣである。他の実施形態において、本開示の方法における使用に好適なＨＳＣは、被験者に対して自家のものである。更に他の実施形態において、本開示の方法における使用に好適なＨＳＣは、被験者に対して同種のものである。
【０１６２】
ドナーから取得されたＨＳＣは、当該技術分野で周知の任意の好適な幹細胞同定及び富化の方法によって（例えば特定の表現型又は遺伝子型マーカーを利用することによって）同定及び／又は豊富にされうる。例えば、いくつかの実施形態において、ＨＳＣの同定は、ＨＳＣに関連付けられている、又は系統の最終的に分化した細胞に特異的に関連付けられている、細胞表面マーカーを使用することを含む。好適な表面マーカーには、ｃ−ｋｉｔ、Ｓｃａ−１、ＣＤ４、ＣＤ３４、ＣＤ３８、Ｔｈｙ１、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ４３、ＣＤ４５、ＣＤ５９、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、ＣＤ１３３、ＣＤ１３５、ＡＢＣＧ２、ＮＫ１．１、Ｂ２２０、Ｔｅｒ−１１９、Ｆｌｋ−２、ＣＤＣＰ１、エンドムシン、Ｇｒ−１、ＣＤ４６、Ｍａｃ−１、Ｔｈｙ１．１、及び、受容体のシグナルリンパ球活性化分子（ＳＬＡＭ）ファミリーのうち１つ以上を含むがこれらに限定されない。ＳＬＡＭ受容体の例としては、ＣＤ１５０、ＣＤ４８、及びＣＤ２４４が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１６３】
加えて、ドナーから取得されるＨＳＣは、当該技術分野で周知の任意の好適な方法によって非幹細胞から分離することができ、これには、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）及び磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１６４】
１つの非限定的な例において、ヒト末梢血細胞は、ｃ−ｋｉｔ、Ｓｃａ−１、ＣＤ３４、ＣＤ３８、Ｔｈｙ１、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ４３、ＣＤ４５、ＣＤ５９、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、ＣＤ１３３、ＡＢＣＧ２、ＮＫ１．１、Ｂ２２０、Ｔｅｒ−１１９、Ｆｌｋ−２、ＣＤＣＰ１、エンドムシン、又はＧｒ−１を認識する抗体とともにインキュベーションされる。ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＮＫ１．１、Ｂ２２０、Ｔｅｒ−１１９、及びＧｒ−１に対する抗体は、磁気ビーズに結合される。ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＮＫ１．１、Ｂ２２０、Ｔｅｒ−１１９、又はＧｒ−１を発現する細胞が、磁気ビーズを保持するよう装備されたカラム内に入れられ、細胞が、磁気ビーズに結合した抗体に付着する。ＭＡＣＳカラムによって捕捉されなかった細胞は、ＦＡＣＳ解析の対象となる。ｃ−ｋｉｔ、Ｓｃａ−１、ＣＤ３４、ＣＤ３８、Ｔｈｙ１に対する抗体が、当該技術分野で周知の蛍光材料に結合される。ＣＤ３４＋、ＣＤ３８ｌｏｗ／−、ｃ−ｋｉｔ−／ｌｏｗ、Ｔｈｙ１＋である細胞は、細胞に関連付けられる蛍光抗体のタイプのおかげで、サンプルの他の部分から分離される。これらの細胞は、本開示の任意の方法で使用するのに好適な、ヒト長期的ＨＳＣとして提供される。
【０１６５】
他の非限定的な一実施例において、被験者から採取された細胞が、上述の磁気ビーズに結合された抗体（ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＮＫ１．１、Ｂ２２０、Ｔｅｒ−１１９、又はＧｒ−１の１つ以上に対する抗体）と同じセットで標識付けられ、次に蛍光結合されたＣＤ１５０、ＣＤ２４４及び／又はＣＤ４８抗体で標識付けられる。磁気ビーズ結合抗体によって捕捉された細胞をサンプルから除去した後、サンプルは、ＦＡＣＳによって解析され、ＣＤ１５０＋、ＣＤ２４４−及びＣＤ４８−細胞が長期的ＨＳＣとして保持される。
【０１６６】
いくつかの実施形態において、本開示の方法に利用されるＨＳＣは、ｃ−ｋｉｔ＋、Ｓｃａ−１＋、ＣＤ３４ｌｏｗ／−、ＣＤ３８＋、Ｔｈｙ１＋／ｌｏｗ、ＣＤ３４＋、ＣＤ３８ｌｏｗ／−、ｃ−ｋｉｔ−／ｌｏｗ、及び／又はＴｈｙ１＋のマーカーのうち１つ以上を含む。いくつかの実施形態において、本開示の方法に利用されるＨＳＣは、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＮＫ１．１、Ｂ２２０、Ｔｅｒ−１１９、及び／又はＧｒ−１のマーカーのうち１つ以上を欠いている。特定の実施形態において、本開示の方法に利用されるＨＳＣは、Ａ＋、Ａ−、Ｂ＋、Ｂ−、Ｏ＋、Ｏ−、ＡＢ＋、ＡＢ−型のものである。
【０１６７】
あるいは、好適なＨＳＣは、非ヒト供給源から取得されうる。好適な非ヒトＨＳＣは、実験／研究動物、齧歯類、ペット、家畜、農場動物、使役動物、荷物を運ぶ動物、希少又は絶滅危惧種、競走用動物、及び動物園動物を含むがこれらに限定されない非ヒト動物の、大腿骨、骨盤、肋骨、胸骨、及びその他の骨から分離されうる。更なる好適な非ヒト動物の例としては、サル、霊長類、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、及びニワトリが挙げられるがこれらに限定されない。例えばＨＳＣは、ネズミの骨髄細胞から、例えばｃ−ｋｉｔ、Ｓｃａ−１、ＣＤ３４、ＣＤ３８、Ｔｈｙ１、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ４３、ＣＤ４５、ＣＤ５９、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、ＣＤ１３３、ＡＢＣＧ２、ＮＫ１．１、Ｂ２２０、Ｔｅｒ−１１９、Ｆｌｋ−２、ＣＤＣＰ１、エンドムシン、又はＧｒ−１の１つ以上などの細胞表面分子を認識する抗体と共に、骨髄細胞をインキュベーションすることによって、取得することができる。ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤＳ、ＮＫ１．Ｉ、Ｂ２２０、Ｔｅｒ−１１９、及びＧｒ−１に対する抗体は、磁気ビーズに結合される。ＭＡＣＳ装置内で、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＮＫ１．１、Ｂ２２０、Ｔｅｒ−１１９、又はＧｒ−１を表面に搭載する細胞が、磁気ビーズを保持するよう装備されたカラム内に入れられ、細胞が、磁気ビーズに結合した抗体に付着する。ＭＡＣＳカラムによって捕捉されなかった細胞は、ＦＡＣＳ解析の対象となる。ＦＡＣＳ解析では、例えばｃ−ｋｉｔ、Ｓｃａ−１、ＣＤ３４、ＣＤ３８、Ｔｈｙ１などの表面分子の抗体が、蛍光剤量に結合される。ｃ−ｋｉｔ＋、Ｓｃａ−１＋、ＣＤ３４ｌｏｗ／−、ＣＤ３８＋、Ｔｈｙ１＋／ｌｏｗである細胞は、細胞に関連付けられる蛍光抗体のタイプのおかげで、サンプルの他の部分から分離される。これらの細胞は、本開示の任意の方法で使用するのに好適な、ネズミ長期的ＨＳＣとして提供される。他の実施形態において、骨髄、臍帯血、胎児組織、及び末梢血の細胞から、ネズミ長期的ＨＳＣを分離するのに、異なるセットのマーカーが使用される。
【０１６８】
いくつかの実施形態において、骨髄からＨＳＣを取得するには、最初にＨＳＣドナー（例えばマウス）に、ドナーの骨髄中のＨＳＣを豊富にするために、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）を注入してＨＳＣの増殖を誘導させる。
【０１６９】
更に、本開示の任意の方法で使用するための好適なＨＳＣは、臍帯血、骨髄、末梢血、若しくはその他の供給源から取得されたものであっても、又はこれらの中に存在するものであっても、望ましいように、血清と共に又は血清なしで、任意の好適な、市販又はカスタム定義の培地中で、成長又は増殖させることができる（例えばＨａｒｔｓｈｏｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｆｏｒ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、ｐ．２２１〜２２４、Ｒ．Ｓｍｉｔｈ、Ｅｄｉｔｏｒ；Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ、２００７）。例えば、無血清培地は、アルブミン及び／又はトランスフェリンを利用することができ、これは無血清培地においてＣＤ３４＋細胞の成長及び増殖に有用であることが示されている。また、例えば中でもＦｌｔ−３リガンド、幹細胞因子（ＳＣＦ）、及びトロンボポチエン（ＴＰＯ）などのサイトカインを含めることができる。ＨＳＣは、バイオリアクターなどの容器内で増殖させることもできる（例えばＬｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １２４：５９２〜６０１、２００６）。ＨＳＣのエクスビボ増殖に好適な培地は更に、間質細胞（例えばリンパ細網間質細胞）などのＨＳＣ支持細胞を含み得、これは例えば、リンパ性組織の離解から誘導することができ、これはインビトロ、エクスビボ、及びインビボでのＨＳＣの維持、成長、及び分化、並びにその子孫を支持することが示されている。
【０１７０】
ＨＳＣ成長又は増殖は、当該技術分野で周知の慣例的技法に従って、インビトロ又はインビボで測定することができる。例えば、国際特許第ＷＯ  ２００８／０７３７４８号は、ＨＳＣのインビボ及びインビトロ増殖を測定するための方法、並びに、例えば中間前駆細胞などの潜在的に異質性の群（例えば骨髄）における、ＨＳＣの成長／増殖と他の細胞の成長／増殖とを区別する方法を記述している。
【０１７１】
ＨＳＣ細胞株
他の実施形態において、本開示の任意の方法において使用するための好適なＨＳＣは、ＨＳＣ細胞株に由来するものでありうる。好適なＨＳＣ細胞株には、当該技術分野で周知の任意の培養された造血幹細胞株が含まれる。非限定的な例としては、米国特許公開第ＵＳ２００７／０１１６６９１号及び米国特許公開第ＵＳ２０１０／００４７２１７号に記述されている条件的に不死化した長期的幹細胞株が挙げられる。
【０１７２】
特定の実施形態において、本開示の方法における使用に好適なＨＳＣは、被験者に対してＨＳＣを投与する前に、条件的に不死化されている。例えば、本明細書に記述される任意の方法によって取得されたＨＳＣは、調節可能な（例えば誘導可能、制御可能な）がん原遺伝子（例えばＭＹＣなどのように、細胞生存及び増殖を促進する）で処理され、及び／又はＨＳＣのアポトーシスを阻害するタンパク質（例えばＢｃｌ−２）で処理されうる（例えば米国特許公開第ＵＳ２００７／０１１６６９１号）。いくつかの実施形態において、この調節可能がん原遺伝子はＭＹＣ組成物である。好ましくは、このＭＹＣ組成物はＴＡＴ−ＭＹＣ融合タンパク質である。ＨＳＣのアポトーシスを阻害するタンパク質も、調節可能でありうる。例えば、この調節可能タンパク質は、ＰＴＤ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質、例えばＴＡＴ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質でありうる。
【０１７３】
他の実施形態において、本開示の方法における使用に好適なＨＳＣは、被験者にＨＳＣを投与する前に、本開示のＭＹＣ組成物（例えばＴＡＴ−ＭＹＣタンパク質融合）、本開示のＢｃｌ−２組成物（例えばＴＡＴ−Ｂｃｌ−２タンパク質融合）、又はこれら両方の存在下で培養される。好ましくは、ＭＹＣ組成物及び／又はＢｃｌ−２組成物の存在下での第１の組成物の培養によって、ＨＳＣが条件的に不死化され、これによって培養ＨＳＣの膨張がもたらされる。
【０１７４】
本明細書で使用されるとき、「造血幹細胞の増殖」又は「ＨＳＣの増殖」は、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、又はこれら両方と共に培養又はこれらで処理されていないＨＳＣに比べて、細胞増殖及び／又は細胞生存において増加していることを指す。例えば、ＨＳＣ増殖は、ＨＳＣ増殖、ＨＳＣ生存、又はこれら両方が約１０％以上〜約５００％以上増加した場合に起こる。ＨＳＣ増殖及び／又は生存の増加を測定するための当該技術分野で周知及び本明細書に開示される任意の方法を使用することができる。
【０１７５】
したがって、本開示の任意の方法において使用するための好適なＨＳＣは、骨髄から、アフェレーシス手順から、末梢血細胞から、白血球除去法を行った末梢血細胞から、臍帯血から、羊水から、培養ＨＳＣ細胞から、不死化ＨＳＣ細胞株から、又は条件的不死化ＨＳＣ細胞株から取得することができる。あるいは、本開示の任意の方法において使用するための好適なＨＳＣは、骨髄中、末梢血細胞中、白血球除去法を行った末梢血細胞中、臍帯血中、羊水中、及び培養ＨＳＣ細胞中に存在しうる。
【０１７６】
遺伝子導入アプローチ
いくつかの実施形態において、本開示の方法に使用するための条件的不死化ＨＳＣは、当該技術分野で周知の任意の遺伝子導入アプローチを用いて確立されている（例えば米国特許公開第ＵＳ２００７／０１１６６９１号及び米国特許公開第ＵＳ２０１０／００４７２１７号）。例えば、ＨＳＣは、ＨＳＣの増殖群を取得し、例えばＭＹＣポリペプチド及び／又はＢｃｌ−２ポリペプチド（例えば誘導可能及び／又は制御可能）をコードするベクターをＨＳＣにトランスフェクト（形質導入）し、ＭＹＣポリペプチド及び／又はＢｃｌ−２ポリペプチドをコードするベクターをＨＳＣにトランスフェクト（形質導入）し、かつ、ＭＹＣポリペプチド及び／又はＢｃｌ−２ポリペプチドが誘導されたか及び／又は活性である条件下で、幹細胞増殖因子の組み合わせの存在下で、トランスフェクトされたＨＳＣを増殖させることによって、不死化することができる。
【０１７７】
ＭＹＣポリペプチド及び／又はＢｃｌ−２ポリペプチドは調節可能であり（例えば誘導可能又は制御可能）、これによって、ポリペプチドは、ＨＳＣを不死化抗体に維持するか又は望ましい細胞タイプに分化させたい場合に、ポリペプチドを活性化及び不活性化することができる（すなわち、オンにするか又はオフにすることができる）。
【０１７８】
いくつかの実施形態において、ＭＹＣポリペプチド及び／又はＢｃｌ−２ポリペプチドは、活性が誘導可能又は抑制可能になるように修飾されている。例えば、ＭＹＣポリペプチド及び／又はＢｃｌ−２ポリペプチドは更に、誘導可能受容体を含みうる。特定の実施形態において、組み換えタンパク質はエストロゲン受容体（ＥＲ）を含む。特定の実施形態において、細胞の生存及び／又は増殖を促進し、かつエストロゲン受容体を含む組み換えタンパク質は、ＭＹＣ−ＥＲポリペプチド及び／又はＢｃｌ−２−ＥＲポリペプチドである。特定の実施形態において、エストロゲン受容体を含むタンパク質は、４−ヒドロキシタモキシフェン（４−ＯＨＴ）によって誘導される。あるいは、このタンパク質は、グルココルチコイド受容体（ＧＲ）、例えばミフェプリストン（ＭＩＦＥＰＲＥＸ）に感受性のグルココルチコイド受容体を含みうる。特定の実施形態において、グルチココルチコイド受容体を含むタンパク質は、ＭＹＣ−ＧＲポリペプチド及び／又はＢｃｌ−２−ＧＲポリペプチドである。
【０１７９】
当該技術分野で周知のＨＳＣの増殖群を取得するための任意の当該技術分野で周知の方法を使用することができる。例えば、ＨＳＣは、細胞増殖及び／又は細胞分裂を促進する１つ以上の増殖因子と共に培養することができる。
【０１８０】
好ましくは、ベクターは組み込み型ベクターであり、これは細胞のゲノム内に組み込まれる能力を有する（例えばレトロウイルスベクター）。ＨＳＣは、細胞（特に哺乳類細胞）をトランスフェクトする任意の好適な方法（技法の組み合わせを用いることを含む）を用いて、ベクターでトランスフェクト及び／又は変換することができる。好適なベクターの例としては、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、パルボウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、コロナウイルスベクター、カリシウイルスベクター、パピローマウイルスベクター、フラビウイルスベクター、オルトミクソウイルスベクター、トガウイルスベクター、ピコルナウイルスベクター、アデノウイルスベクター、並びに修飾及び弱毒化されたヘルペスウイルスベクターが挙げられるがこれらに限定されない。そのようなウイルスベクターは更に、ＨＳＣに対してこれらを標的付けるための特定の表面発現分子で修飾することができ、例えば膜結合ＳＣＦ、又はその他の幹細胞特異的増殖因子リガンドで修飾することができる。哺乳類細胞のトランスフェクションの他の方法としては、哺乳類発現ベクターの直接エレクトロポレーション、例えばＮＵＣＬＥＯＦＥＣＴＯＲ（商標）技術（ＡＭＡＸＡ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いることが挙げられるがこれに限定されない。この技術は、多くの初代細胞及びトランスフェクトが難しい細胞株において、非常に効率的な非ウイルス遺伝子導入である。これは、長い間知られているエレクトロポレーションが改善されたもので、電流と溶液との細胞タイプ固有の組み合わせを使用して、多陰イオン性マクロ分子を直接核内に移入することに基づいている。加えて、トランスフェクションの好適な方法には、当該技術分野で周知の、細菌、酵母、及びその他の人工的な遺伝子送達方法が含まれうる。
【０１８１】
内因性発現の増進
いくつかの実施形態において、本開示の方法で使用するための条件的不死化ＨＳＣは、本開示の任意のＭＹＣタンパク質を含むがこれに限定されない、細胞生存及び／又は増殖を促進する内因性タンパク質の発現を増進することによって達成されうる。加えて、本開示の方法で使用するための条件的不死化ＨＳＣは、本開示の任意のＢｃｌ−２タンパク質を含むがこれに限定されない、アポトーシスを阻害する内因性タンパク質の発現を増進することによっても達成されうる。
【０１８２】
タンパク質形質導入アプローチ
いくつかの実施形態において、本明細書で開示される任意の方法によって取得及び／又は産生されるＨＳＣは、細胞生存及び／若しくは増殖を促進する遺伝子産物（本開示のＭＹＣタンパク質を含むがこれに限定されない）、並びに／又はＨＳＣのアポトーシスを阻害するタンパク質（本開示のＢｃｌ−２タンパク質を含むがこれに限定されない）で処理されうる。いくつかの実施形態において、このＭＹＣタンパク質はＰＴＤを含む融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、このＢｃｌ−２タンパク質はＰＴＤを含む融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、本明細書で開示される任意の方法によって取得及び／又は産生されたＨＳＣは、本開示のＭＹＣタンパク質の少なくとも１つの機能を一時的にアップレギュレーションすることができる１つ以上の化合物（所望により外因性タンパク質）で処理されうる。いくつかの実施形態において、このＭＹＣタンパク質はＰＴＤ−ＭＹＣ融合タンパク質である。特定の実施形態において、このＰＴＤ−ＭＹＣ融合タンパク質はＴＡＴ−ＭＹＣ融合タンパク質である。
【０１８３】
いくつかの実施形態において、本明細書で開示される任意の方法によって取得されたＨＳＣは、本開示のＢｃｌ−２タンパク質の少なくとも１つの機能を一時的にアップレギュレーションすることができる１つ以上の化合物（所望により外因性タンパク質）で処理されうる。いくつかの実施形態において、この外因性Ｂｃｌ−２タンパク質はＰＴＤ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、このＰＴＤ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質はＴＡＴ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質である。
【０１８４】
他の実施形態において、本開示の任意の方法において使用するための好適なＨＳＣは、ＰＴＤに融合した本開示のＭＹＣタンパク質を含む融合タンパク質（例えばＰＴＤ−ＭＹＣ融合タンパク質）を含む組成物、ＰＴＤに融合した本開示のＢｃｌ−２タンパク質を含む融合タンパク質（例えばＰＴＤ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質）を含む組成物、又はこれら両方で処理される。
【０１８５】
したがって、本開示の任意の方法において使用するための好適なＨＳＣは、胚性幹細胞（ＥＳ細胞）、胎児幹細胞、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）、骨髄、末梢血、アフェレーシスを行った末梢血細胞、白血球分離を行った末梢血細胞、臍帯血、羊水、培養ＨＳＣ細胞、不死化ＨＳＣ細胞株、又は条件的不死化ＨＳＣ細胞株から取得されうる。
【０１８６】
ＨＳＣ組成物
他の実施形態において、本開示の任意の方法において使用するための好適なＨＳＣは、組成物中に含まれる。好適なＨＳＣ含有組成物は、単離された及び／又は精製されたＨＳＣ；全骨髄；ＨＳＣの豊富な骨髄（例えば５−ＦＵ処理した骨髄）；末梢血；及び臍帯血を含むがこれらに限定されない。いくつかの実施形態において、そのような組成物は製薬的に許容される担体を含む。好適な製薬的に許容される担体は、被験者（例えば患者）にＨＳＣを送達するために、製薬的に許容される賦形剤及び／又は送達ビヒクルを含みうる。加えて、製薬的に許容される担体は、ＨＳＣの生存性を支持する細胞培地を含みうる。この培地は一般に、レシピエントの免疫反応を刺激しないようにするため、無血清である。担体は一般に、緩衝されているか、及び／又は発熱物質を含まない。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、ＨＳＣを含む組成物の治療的有効量が、被験者の造血コンパートメント再構築を達成するために被験者に投与される。一般に、１０４〜１０６個のＨＳＣの投与が、造血コンパートメント再構築を達成するのに充分である。特定の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、又はこれら両方をＨＳＣ移植レシピエントに投与することによって、造血コンパートメント再構築を達成するのに必要なＨＳＣの数を減らすことができる。例えば、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、又はこれら両方の治療的有効量をＨＳＣ移植レシピエントに投与することによって、ＭＹＣ組成物及び／又はＢｃｌ−２組成物を投与されていないＨＳＣ移植レシピエントにおける造血コンパートメント再構築に必要なＨＳＣの量に比べて、造血コンパートメント再構築を達成するのに必要な本開示のＨＳＣ組成物中のＨＳＣの治療的有効量を、約１０％以上〜約７５％以上減らすことができる。
【０１８８】
特定の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、又はこれら両方の治療的有効量をＨＳＣ移植レシピエントに投与することによって、ＭＹＣ組成物及び／又はＢｃｌ−２組成物を投与されていないＨＳＣ移植レシピエントにおける造血コンパートメント再構築の達成に必要なＨＳＣの量に比べて、造血コンパートメント再構築を達成するのに必要な本開示のＨＳＣ組成物中のＨＳＣの治療的有効量を、約１０％以上〜約７５％以上、例えば、約１０％以上、約１５％以上、約２０％以上、約２５％以上、約３０％以上、約３５％以上、約４０％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約７０％以上、約７５％以上、又はそれ以上のパーセンテージで、減らすことができる。
【０１８９】
特定の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、又はこれら両方の治療的有効量で移植群を処理することによって、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、又はこれら両方で前処理されたＨＳＣを受け取っていないＨＳＣ移植レシピエントにおける造血コンパートメント再構築の達成に必要なＨＳＣの量に比べて、造血コンパートメント再構築を達成するのに必要なＨＳＣの治療的有効量を、約１０％以上〜約７５％以上、例えば、約１０％以上、約１５％以上、約２０％以上、約２５％以上、約３０％以上、約３５％以上、約４０％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約７０％以上、約７５％以上、又はそれ以上のパーセンテージで、減らすことができる。
【０１９０】
本開示のＨＳＣ組成物及びＨＳＣ群は一般に、被験者（例えば患者）の体内に、任意の好適な方法（注入及び移植を含むがこれらに限定されない）によって投与される。例えば、ＨＳＣは、本開示のＨＳＣ組成物が入った注射器を使用して、作用が意図される組織内に直接注入されうる。あるいは、本開示のＨＳＣ組成物は、ＨＳＣ組成物が入った注射器に取り付けられたカテーテル（例えば中心静脈カテーテル）を経由して送達されうる。
【０１９１】
ＨＳＣ移植
更なる実施形態において、本開示のＨＳＣ組成物及びＨＳＣ群は一般に、ＨＳＣ移植術のプロセスにおける一工程として、造血幹細胞（ＨＳＣ）移植を必要とする被験者に投与される。特定の好ましい実施形態において、この被験者は、ＨＳＣ移植を必要としているヒト被験者である。他の実施形態において、この被験者は任意の非ヒト動物であり、実験／研究動物、齧歯類、ペット、家畜、農場動物、使役動物、荷物を運ぶ動物、希少又は絶滅危惧種、競走用動物、動物園動物、サル、霊長類、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、及びニワトリを含むがこれらに限定されない。
【０１９２】
ＨＳＣ移植術は、骨髄破壊的ＨＳＣ移植でありうる。骨髄破壊は一般に、ＨＳＣ移植レシピエントの内因性造血コンパートメントのアブレーション又は抑制を指す。骨髄破壊はＨＳＣ移植の前に行われる。血液疾患（例えば血液のがん）を患うＨＳＣ移植レシピエントにおいて、骨髄破壊は、その疾患の根絶を助けるために実施されうる。骨髄破壊はまた、移植されたＨＳＣの拒絶のリスク（例えば移植片対宿主病）を低減する一助とするために、ＨＳＣ移植レシピエントの内因性免疫系を抑制するために実施されうる。当該技術分野で周知の骨髄破壊の任意の方法を使用することができる。骨髄破壊手順の例としては、化学療法、放射線照射、及びこれらの組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１９３】
あるいは、ＨＳＣ移植術は非骨髄破壊的でありうる。非骨髄破壊的手順では、ＨＳＣ移植前に、より低用量の化学療法及び／又は放射線をレシピエントに使用する。
【０１９４】
ＨＳＣ移植を必要とする被験者は、ＨＳＣ移植適応を呈する被験者を含む。ＨＳＣ移植適応の例としては、悪性血液疾患、骨髄腫、多発性骨髄腫、白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、リンパ腫、無痛性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、神経芽腫、網膜芽腫、シュバッハマン・ダイアモンド症候群、脳腫瘍、ユーイング肉腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、再発胚細胞腫瘍、血液疾患、異常ヘモグロビン症、自己免疫疾患、若年性特発性関節炎、全身性エリテマトーデス、重症複合免疫不全、不良な幹細胞を伴う先天性好中球減少症、重度の再生不良性貧血、鎌状赤血球症、骨髄形成異常症候群、慢性肉芽腫症、代謝障害、ハーラー症候群、ゴーシェ病、大理石骨病、乳児性悪性大理石骨病、心臓病、ＨＩＶ、及びＡＩＤＳが挙げられるがこれらに限定されない。加えて、ＨＳＣ移植を必要とする被験者には、臓器移植を受けた被験者も含まれうる。
【０１９５】
造血コンパートメント細胞形成の増進
本開示の他の態様は、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与することにより、及び／又は、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方で前処理したＨＳＣ群を投与することにより、これらを必要としている被験者の体内の造血コンパートメント細胞形成を増進することに関する。いくつかの実施形態において、造血コンパートメント細胞形成の増進は、造血コンパートメント再構築の増進を含む。いくつかの実施形態において、造血コンパートメント細胞形成の増進は、造血コンパートメント自家再構築の増進を含む。
【０１９６】
造血コンパートメント再構築の増進
特定の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、又はこれら両方で前処理されたＨＳＣ群を、ＨＳＣ移植を必要としている被験者に投与することによって、被験者の造血コンパートメント再構築が増進される。他の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、又はこれら両方を、ＨＳＣ移植を受けたか又はこれから受ける被験者に投与することによって、被験者の造血コンパートメント再構築が増進される。例えば、ＨＳＣを、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方で前処理してから、このＨＳＣを投与することによって、あるいは、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を投与することによって、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方で前処理していないＨＳＣを投与された被験者、あるいは、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を投与されていない被験者に比べて、被験者体内での、造血コンパートメント再構築の速度を改善し、形成される造血コンパートメント細胞の量を増加させ、あるいは造血コンパートメント細胞の喪失を減少させる。
【０１９７】
好ましくは、ＨＳＣを被験者に投与する前にＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方でＨＳＣを前処理すること、あるいは、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を被験者に投与することによって、前処理されたＨＳＣを投与されていない、あるいはＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を投与されていない被験者における造血コンパートメント再構築に比べて、被験者体内の造血コンパートメント再構築が加速される（すなわち速度が増大する）。
【０１９８】
本明細書で使用されるとき、「造血コンパートメント再構築の加速」は、造血コンパートメント内の１つ以上の血球系列を約２５％以上〜約１００％以上再構築するのに必要な時間の短縮を指し、この血球系列には、単球、マクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、赤血球、巨核球、血小板、及び樹状細胞；並びにリンパ系（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫＴ細胞、及びＮＫ細胞を含むがこれらに限定されない）が含まれるがこれらに限定されない。例えば、造血コンパートメントの再構築に必要な時間を８週間から４週間へと短縮すると、５０％の加速を達成したことになる。
【０１９９】
本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、又はこれら両方での前処理、又は本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、又はこれら両方の投与によって、ＨＳＣ移植を受けたか又はこれから受ける被験者の体内における造血コンパートメント再構築は、前処理されたＨＳＣを投与されていない、又はＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与されていない被験者における造血コンパートメント再構築に比べて、約２５％以上〜約５００％以上、例えば、約２５％以上、約３０％以上、約３１％以上、約３２％以上、約３３％以上、約３４％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約６６％以上、約６７％以上、約６８％以上、約６９％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以上、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約４００％以上、約５００％、又はそれ以上のパーセンテージでの加速が達成されうる。
【０２００】
本明細書に記述される際、造血コンパートメント再構築は、Ｔ細胞コンパートメント再構築、Ｂ細胞コンパートメント再構築、ＮＫ細胞コンパートメント再構築、骨髄系細胞コンパートメント再構築、及び好中球回復を含むがこれらに限定されない。本明細書で使用されるとき、用語「Ｔ細胞コンパートメント」は、未熟、成熟、未分化、及び分化した全てのＴ細胞を含む、被験者体内の細胞コンパートメントを指す。「Ｔ細胞コンパートメント」には、Ｔ細胞前駆細胞、プロＴ細胞、プレＴ細胞、ダブルポジティブＴ細胞、未熟Ｔ細胞、成熟Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞毒性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、制御性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、及びガンマデルタＴ細胞が挙げられるがこれらに限定されない。本明細書で使用されるとき、用語「Ｂ細胞コンパートメント」は、未熟、成熟、未分化、及び分化した全てのＢ細胞を含む、被験者体内の細胞コンパートメントを指す。「Ｂ細胞コンパートメント」には、Ｂ細胞前駆細胞、プロＢ細胞、早期プロＢ細胞、後期プロＢ細胞、大型プレＢ細胞、小型プレＢ細胞、未熟Ｂ細胞、成熟Ｂ細胞、形質Ｂ細胞、メモリーＢ細胞、Ｂ−１細胞、Ｂ−２細胞、辺縁帯Ｂ細胞、及び濾胞Ｂ細胞が挙げられるがこれらに限定されない。本明細書で使用されるとき、用語「ＮＫ細胞コンパートメント」は、未熟、成熟、未分化、及び分化した全てのナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む、被験者体内の細胞コンパートメントを指す。「ＮＫ細胞コンパートメント」にはＮＫ細胞が含まれる。本明細書で使用されるとき、用語「骨髄系細胞コンパートメント」は、未熟、成熟、未分化、及び分化した全ての骨髄系細胞を含む、被験者体内の細胞コンパートメントを指す。「骨髄系細胞コンパートメント」には、単球、マクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、赤血球、巨核球、血小板、及び樹状細胞が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２０１】
したがって、特定の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方で前処理されたＨＳＣを投与された、又は本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与された、ＨＳＣ移植レシピエントにおける、加速された造血コンパートメント再構築は、前処理されたＨＳＣを投与されていない、又はＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与されていない被験者におけるＴ細胞コンパートメント再構築に比べて、約２５％以上〜約５００％以上、例えば、約２５％以上、約３０％以上、約３１％以上、約３２％以上、約３３％以上、約３４％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約６６％以上、約６７％以上、約６８％以上、約６９％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以上、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約４００％以上、約５００％、又はそれ以上のパーセンテージで加速されたＴ細胞コンパートメント再構築をもたらす。
【０２０２】
他の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方で前処理されたＨＳＣを投与された、又は本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与された、ＨＳＣ移植レシピエントにおける、加速された造血コンパートメント再構築は、前処理されたＨＳＣを投与されていない、又はＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与されていない被験者におけるＮＫＴ細胞再構築に比べて、約２５％以上〜約５００％以上、例えば、約２５％以上、約３０％以上、約３１％以上、約３２％以上、約３３％以上、約３４％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約６６％以上、約６７％以上、約６８％以上、約６９％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以上、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約４００％以上、約５００％、又はそれ以上のパーセンテージで加速されたＮＫＴ細胞再構築をもたらす。
【０２０３】
他の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方で前処理されたＨＳＣを投与された、又は本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与された、ＨＳＣ移植レシピエントにおける、加速された造血コンパートメント再構築は、前処理されたＨＳＣを投与されていない、又はＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与されていない被験者におけるＢ細胞コンパートメント再構築に比べて、約２５％以上〜約５００％以上、例えば、約２５％以上、約３０％以上、約３１％以上、約３２％以上、約３３％以上、約３４％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約６６％以上、約６７％以上、約６８％以上、約６９％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以上、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約４００％以上、約５００％、又はそれ以上のパーセンテージで加速されたＢ細胞コンパートメント再構築をもたらす。
【０２０４】
他の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方で前処理されたＨＳＣを投与された、又は本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与された、ＨＳＣ移植レシピエントにおける、加速された造血コンパートメント再構築は、前処理されたＨＳＣを投与されていない、又はＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与されていない被験者におけるＮＫ細胞コンパートメント再構築に比べて、約２５％以上〜約５００％以上、例えば、約２５％以上、約３０％以上、約３１％以上、約３２％以上、約３３％以上、約３４％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約６６％以上、約６７％以上、約６８％以上、約６９％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以上、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約４００％以上、約５００％、又はそれ以上のパーセンテージで加速されたＮＫ細胞コンパートメント再構築をもたらす。
【０２０５】
他の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方で前処理されたＨＳＣを投与された、又は本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与された、ＨＳＣ移植レシピエントにおける、加速された造血コンパートメント再構築は、前処理されたＨＳＣを投与されていない、又はＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与されていない被験者における骨髄系細胞コンパートメント再構築に比べて、約２５％以上〜約５００％以上、例えば、約２５％以上、約３０％以上、約３１％以上、約３２％以上、約３３％以上、約３４％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約６６％以上、約６７％以上、約６８％以上、約６９％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以上、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約４００％以上、約５００％、又はそれ以上のパーセンテージで加速された骨髄系細胞コンパートメント再構築をもたらす。
【０２０６】
他の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方で前処理されたＨＳＣを投与された、又は本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与された、ＨＳＣ移植レシピエントにおける、加速された造血コンパートメント再構築は、前処理されたＨＳＣを投与されていない、又はＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与されていない被験者における単球再構築に比べて、約２５％以上〜約５００％以上、例えば、約２５％以上、約３０％以上、約３１％以上、約３２％以上、約３３％以上、約３４％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約６６％以上、約６７％以上、約６８％以上、約６９％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以上、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約４００％以上、約５００％、又はそれ以上のパーセンテージで加速された単球再構築をもたらす。
【０２０７】
他の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方で前処理されたＨＳＣを投与された、又は本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与された、ＨＳＣ移植レシピエントにおける、加速された造血コンパートメント再構築は、前処理されたＨＳＣを投与されていない、又はＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与されていない被験者におけるマクロファージ再構築に比べて、約２５％以上〜約５００％以上、例えば、約２５％以上、約３０％以上、約３１％以上、約３２％以上、約３３％以上、約３４％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約６６％以上、約６７％以上、約６８％以上、約６９％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以上、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約４００％以上、約５００％、又はそれ以上のパーセンテージで加速されたマクロファージ再構築をもたらす。
【０２０８】
他の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方で前処理されたＨＳＣを投与された、又は本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与された、ＨＳＣ移植レシピエントにおける、加速された造血コンパートメント再構築は、前処理されたＨＳＣを投与されていない、又はＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与されていない被験者における好塩基球再構築に比べて、約２５％以上〜約５００％以上、例えば、約２５％以上、約３０％以上、約３１％以上、約３２％以上、約３３％以上、約３４％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約６６％以上、約６７％以上、約６８％以上、約６９％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以上、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約４００％以上、約５００％、又はそれ以上のパーセンテージで加速された好塩基球再構築をもたらす。
【０２０９】
他の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方で前処理されたＨＳＣを投与された、又は本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与された、ＨＳＣ移植レシピエントにおける、加速された造血コンパートメント再構築は、前処理されたＨＳＣを投与されていない、又はＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与されていない被験者における好酸球再構築に比べて、約２５％以上〜約５００％以上、例えば、約２５％以上、約３０％以上、約３１％以上、約３２％以上、約３３％以上、約３４％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約６６％以上、約６７％以上、約６８％以上、約６９％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以上、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約４００％以上、約５００％、又はそれ以上のパーセンテージで加速された好酸球再構築をもたらす。
【０２１０】
他の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方で前処理されたＨＳＣを投与された、又は本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与された、ＨＳＣ移植レシピエントにおける、加速された造血コンパートメント再構築は、前処理されたＨＳＣを投与されていない、又はＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与されていない被験者における赤血球再構築に比べて、約２５％以上〜約５００％以上、例えば、約２５％以上、約３０％以上、約３１％以上、約３２％以上、約３３％以上、約３４％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約６６％以上、約６７％以上、約６８％以上、約６９％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以上、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約４００％以上、約５００％、又はそれ以上のパーセンテージで加速された赤血球再構築をもたらす。
【０２１１】
他の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方で前処理されたＨＳＣを投与された、又は本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与された、ＨＳＣ移植レシピエントにおける、加速された造血コンパートメント再構築は、前処理されたＨＳＣを投与されていない、又はＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与されていない被験者における巨核球再構築に比べて、約２５％以上〜約５００％以上、例えば、約２５％以上、約３０％以上、約３１％以上、約３２％以上、約３３％以上、約３４％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約６６％以上、約６７％以上、約６８％以上、約６９％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以上、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約４００％以上、約５００％、又はそれ以上のパーセンテージで加速された巨核球再構築をもたらす。
【０２１２】
他の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方で前処理されたＨＳＣを投与された、又は本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与された、ＨＳＣ移植レシピエントにおける、加速された造血コンパートメント再構築は、前処理されたＨＳＣを投与されていない、又はＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与されていない被験者における血小板再構築に比べて、約２５％以上〜約５００％以上、例えば、約２５％以上、約３０％以上、約３１％以上、約３２％以上、約３３％以上、約３４％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約６６％以上、約６７％以上、約６８％以上、約６９％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以上、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約４００％以上、約５００％、又はそれ以上のパーセンテージで加速された血小板再構築をもたらす。
【０２１３】
他の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方で前処理されたＨＳＣを投与された、又は本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与された、ＨＳＣ移植レシピエントにおける、加速された造血コンパートメント再構築は、前処理されたＨＳＣを投与されていない、又はＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与されていない被験者における樹状細胞再構築に比べて、約２５％以上〜約５００％以上、例えば、約２５％以上、約３０％以上、約３１％以上、約３２％以上、約３３％以上、約３４％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約６６％以上、約６７％以上、約６８％以上、約６９％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以上、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約４００％以上、約５００％、又はそれ以上のパーセンテージで加速された樹状細胞再構築をもたらす。
【０２１４】
他の実施形態において、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方で前処理されたＨＳＣを投与された、又は本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与された、ＨＳＣ移植レシピエントにおける、加速された造血コンパートメント再構築は、前処理されたＨＳＣを投与されていない、又はＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、若しくはこれら両方を投与されていない被験者における好中球回復に比べて、約２５％以上〜約５００％以上、例えば、約２５％以上、約３０％以上、約３１％以上、約３２％以上、約３３％以上、約３４％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約６６％以上、約６７％以上、約６８％以上、約６９％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以上、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約４００％以上、約５００％、又はそれ以上のパーセンテージで加速された好中球回復をもたらす。
【０２１５】
増進された造血コンパートメントの自家再構築
他の実施形態において、自家再構築を必要としている被験者に本開示のＭＹＣ組成物を投与することによって、造血コンパートメントの自家再構築が増進される。例えば、ＭＹＣ組成物の投与によって、ＭＹＣ組成物を投与されていない被験者に比べて、被験者体内の自家再構築の速度を改善し、形成される造血コンパートメント細胞の量を増加させ、又は造血コンパートメント細胞の喪失を減少させることができる。
【０２１６】
本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、又はこれら両方を投与することによって、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を投与されていない被験者における造血コンパートメントの自家再構築に比べ、約２５％以上〜約５００％以上、例えば、約２５％以上、約３０％以上、約３１％以上、約３２％以上、約３３％以上、約３４％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約６６％以上、約６７％以上、約６８％以上、約６９％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９５％以上、約１００％以上、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約４００％以上、約５００％以上、又はそれ以上、被験者体内の造血コンパートメントの自家再構築を増進することができる。
【０２１７】
本明細書に記述されるように、造血コンパートメントの自家再構築には、Ｔ細胞コンパートメントの自家再構築、Ｂ細胞コンパートメントの自家再構築、ＮＫＴ細胞の自家再構築、及びＮＫ細胞コンパートメントの自家再構築；骨髄系細胞コンパートメントの自家再構築、例えば単球自家再構築、マクロファージ自家再構築、好塩基球自家再構築、好酸球自家再構築、赤血球自家再構築、巨核球自家再構築、血小板自家再構築、及び樹状細胞自家再構築；並びに好中球回復が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２１８】
組成物製剤
本開示の特定の態様は、本開示のＨＳＣの前処理のため、及びＨＳＣ移植を必要としている被験者の処理のための、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物に関する。他の態様は、必要としている被験者の造血コンパートメント再構築を達成するためのＨＳＣを含む第１の組成物、及び、被験者の造血コンパートメント再構築を増進するための本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む第２の組成物に関する。本開示の他の態様は、必要としている被験者体内の造血コンパートメントの自家再構築を増進するための、本開示のＭＹＣ組成物、本開示のＢｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物に関する。
【０２１９】
いくつかの実施形態において、本開示の組成物は、１つ以上の生理学的に許容される担体を用いて従来の方法で製剤され、この担体には例えば、活性化合物の製薬的使用に好適な調製への加工を促進する賦形剤及び助剤が挙げられる。好適な製薬的に許容される担体には、生理食塩水、緩衝水溶液、溶媒、及び／又は分散媒体が挙げられるがこれらに限定されない。そのような担体の使用は当該技術分野で周知である。この担体は好ましくは無菌である。いくつかの実施形態において、担体は、製造及び保管条件下で安定であり、微生物（例えば細菌及び真菌）の混入操作を防ぐように、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、又はチメロサール（これらに限定されない）を使用して保存される。
【０２２０】
製薬的に許容される担体として使用できる材料及び溶液の例としては、（１）糖（例えばラクトース、グルコース及びショ糖）、（２）デンプン（例えばコーンスターチ及びジャガイモデンプン）、（３）セルロース及びその誘導体（例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、及び酢酸セルロース）、（４）粉末トラガカント、（５）麦芽、（６）ゼラチン、（７）タルク、（８）賦形剤（例えばココアバター及び座薬用ろう、（９）油（例えばピーナッツ油、綿実油、紅花油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油及び大豆油）、（１０）グリコール（例えばプロピレングリコール）、（１１）ポリオール（例えばグリセリン、ソルビトール、マンニトール及びポリエチレングリコール）、（１２）エステル（例えばオレイン酸エチル及びラウリン酸エチル）、（１３）寒天、（１４）緩衝剤（例えば水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム）、（１５）アルギン酸、（１６）発熱物質を含まない水、（１７）等張生理食塩水、（１８）リンゲル液、（１９）エチルアルコール、（２０）ｐＨ緩衝液、（２１）ポリエステル、ポリカーボネート、及び／又はポリ無水物、並びに（２２）その他の製薬的製剤に採用される無毒性の適合性物質、が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２２１】
本開示の組成物の適切な製剤は、選択される投与経路に依存しうる。本明細書に記述される製薬的組成物の要約は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、Ｎｉｎｅｔｅｅｎｔｈ  Ｅｄ（Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．：Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９５）；Ｈｏｏｖｅｒ、Ｊｏｈｎ  Ｅ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．１９７５；Ｌｉｂｅｒｍａｎ、Ｈ．Ａ．ａｎｄ  Ｌａｃｈｍａｎ、Ｌ．，Ｅｄｓ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｃｋｅｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．，１９８０；及びＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｓｅｖｅｎｔｈ  Ｅｄ．（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  １９９９）に記載されている。
【０２２２】
本開示の組成物は、本開示の化合物（例えばＨＳＣ又はＭＹＣ組成物若しくはＢｃｌ−２組成物）の被験者又は細胞への投与を促進しうる。本開示の方法の特定の実施形態において、本明細書に記述される化合物の治療的有効量は、治療される疾患、疾病又は病状を有する患者に対し、製薬的組成物中で投与される。いくつかの実施形態において、この被験者はヒト患者である。他の実施形態において、被験者は非ヒト動物であり、これには、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、サル、ラット、マウス、及び同様物が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２２３】
本開示のＨＳＣ組成物、ＭＹＣ組成物含有組成物、及び／又はＢｃｌ−２組成物含有組成物は、単独で、又は１つ以上の追加治療薬と組み合わせて利用することができる。例えば、ＨＳＣ移植後に成熟した造血系を再構築するのに必要な時間を短縮するのに役立つことが知られている、サイトカイン、増殖因子、抗体、及び／又は小分子を、ＨＳＣ、ＭＹＣ組成物含有組成物、及び／又はＢｃｌ−２組成物含有組成物と組み合わせて投与することができる。例えば、Ｅ−セレクチン発現に影響する酵素を標的とするモノクローナル抗体及び／又は小分子調節因子は、ＨＳＣ移植後の骨髄ニッチへのＨＳＣ定着を改善しうる。その他の例としては、接着タンパク質に影響する抗体又は小分子（β６インテグリン、Ｇ−ＭＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ（is the same）、及びＥｐｏ）が挙げられるがこれらに限定されない。したがって、本開示の方法の特定の実施形態は更に、少なくとも１つのサイトカイン、増殖因子、抗体、及び／又は小分子調節因子を含む第３の組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態において、このサイトカイン及び／又は増殖因子組成物は更に、製薬的に許容される担体を含む。
【０２２４】
本開示の組成物は、被験者に対し、任意の好適な方法で投与することができ、これには例えば、経口、非経口（例えば静脈内、皮下、筋肉内）、経鼻、経頬、経直腸、又は経皮の、複数の投与経路のうち１つ以上が含まれるがこれらに限定されない。
【０２２５】
本開示の組成物製剤には、水性液体分散液、油性乳剤、自己乳化分散液、固溶体、リポソーム分散液、エアロゾル、固体投与形態、粉末、即時放出製剤、制御放出製剤、急速溶解製剤、錠剤、カプセル、ピル、遅延放出製剤、延長放出製剤、パルス放出製剤、マルチパーティクル製剤、及び急速放出製剤と制御放出製剤の混合が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２２６】
本開示の製薬的組成物（例えばＰＴＤ−ＭＹＣ組成物、ＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物、又はサイトカイン及び／若しくは増殖因子組成物）は、所望により、従来の方法で製造され、これには従来の混合、溶解、顆粒化、ドラジェ製造、粉末化（levigating）、乳化、カプセル化、トラップ、又は圧縮プロセスが挙げられるがこれらに限定されない。
【０２２７】
いくつかの実施形態において、本開示の製薬的組成物（例えばＰＴＤ−ＭＹＣ組成物、ＰＴＤ−Ｂｃｌ−２組成物、又はサイトカイン及び／若しくは増殖因子組成物）は、正確な用量を単回投与するのに好適な単位用量形態にされる。単位用量形態においては、この製剤は、適切な量の１つ以上の化合物を含む単位用量に分けられる。いくつかの実施形態において、単位用量は、分離した量の製剤を含むパッケージの形態である。非限定的な例としては、パッケージされた錠剤又はカプセル、及びバイアル又はアンプル内の粉末が挙げられる。水性懸濁液組成物は所望により、再封止できない単回用量容器にパッケージされる。いくつかの実施形態において、複数用量の再封止可能容器が使用される。特定の実施形態において、複数用量容器は、組成物中に保存剤を含む。非経口的注入の製剤は、単回用量形態（アンプルが挙げられるがこれに制限されない）で提供することができ、又は、保存剤添加を伴って複数用量容器で提供することができる。
【０２２８】
下記の実施例は単に例示目的であり、本開示の態様をいかなる意味でも制限することを意図したものではない。
【実施例】
【０２２９】
実施例１：マウスにおける造血再構築の加速
下記の実施例は、増殖させた骨髄細胞（例えばタンパク質形質導入長期造血幹細胞（ｐｔｌｔ−ＨＳＣ））を移植した後、ＴＡＴ−ＭＹＣ融合タンパク質でマウスを処理した結果を示す。
【０２３０】
材料及び方法
週齢４〜６週の雌のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスのコホートを、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）から入手した。マウスを、経静脈的に５ｍｇ／マウスの５−フルオロウラシル（５ＦＵ）で処理した。５ＦＵ処理から５日後に、骨髄（ＢＭ）細胞を脛骨及び大腿骨から採取した。５ｍＬの滅菌ＴＡＣ緩衝液中でインキュベーションすることによって、赤血球を溶解させた（１３５ｍＭ  ＮＨ４ＣＬ、１７ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ  ７．６５）。骨髄細胞を、５μｇ／ｍＬの組み換えＴａｔ−ＭＹＣ、及び１０μｇ／ｍＬの組み換えＴａｔ−Ｂｃｌ−２を添加したＢＭ培地（１５％  ＦＣＳ、１００単位／ｍＬのＰｅｎｎ／Ｓｔｒｅｐ、ＭＥＭ  ＮＥＡＡ（Ｇｉｂｃｏ）、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、組み換えマウスＩＬ−３、ＩＬ−６、及びＳＣＦを含むＤＭＥＭ）中で増殖させた。Ｔａｔ−融合タンパク質を補給するために４８時間ごとにＢＭ培地を交換して細胞を２１日間培養した。
【０２３１】
１５０ｍｍプレート内で、Ｄ１０培地（ＤＭＥＭ、１０％  ＦＢＳ、１００単位／ｍＬのＰｅｎｎ／Ｓｔｒｅｐ、ＭＥＭ  ＮＥＡＡ（Ｇｉｂｃｏ）、２ｍＭのＬ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ））中、プレート当たり１２×１０６個の細胞となるように２９３ＦＴ細胞を接種することによりサイトカイン類を調製した。リン酸カルシウムを用い、１０μｇのｐｃＤＮＡ３．１−ＳＣＦ、１０μｇのｐｃＤＮＡ３．１−ＩＬ３、及び１０μｇのｐｃＤＮＡ３．１−ＩＬ６又は１０μｇのｐｃＤＮＡ３．１−ＴＰＯ、１０μｇのｐｃＤＮＡ３．１−Ｆｌｔ３−Ｌ、及び１０μｇのｐｃＤＮＡ３．１−ＧＭ−ＣＳＦを含む、プレート当たり全体で３０μｇのＤＮＡで細胞をトランスフェクトした（Ｙｏｕｎｇ、Ｒ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（２００８）．Ｆｕｔｕｒｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、４、５９１〜４．）。翌日、培地を除去し、１００ｍＬ  Ｄ１０培地に交換した。細胞を３７℃／５％  ＣＯ２で４〜５日間インキュベーションした。培地を採取し、無菌的に濾過し、３０ｍＬアリコートに分けて−２０℃で冷凍した。
【０２３２】
２１日後、５×１０３の増殖させた骨髄細胞を、直前に３５０Ｒａｄの線量で致死レベル未満の放射線を照射した、Ｃ５７／ＢＬ６を遺伝的背景とするＲａｇ−１−／−マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）に尾静脈経由で骨髄細胞を注入することによって移植した。増殖させた細胞は、３回ＰＢＳで洗浄してから、２００μＬ  ＰＢＳ中で尾静脈経由で注入した。
【０２３３】
２４時間後、マウスの１コホートに、コーン油中に乳化させた１０μｇのＴＡＴ−ＭＹＣを筋肉注射した。この乳剤は、１ｍＬのコーン油に３０μｇのＴａｔ−ＭＹＣを添加することにより調製した。注入の直前に、Ｔａｔ−ＭＹＣを含むコーン油を、第１の注射器から第２の注射器へと、２ウェイストップコックを通して数回通過させた。１０μｇのＴａｔ−ＭＹＣを含む乳剤３００μＬを、尾の側面からマウスに筋肉注射した。
【０２３４】
リンパ系コンパートメントの再構築を、移植から４週間後及び８週間後に尾の静脈穿刺によって採取された末梢血サンプルのフローサイトメトリー解析（ＦＡＣＳ）によって観察した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、ＦＡＣＳにより、ＴＣＲβ及びＢ２２０の発現について観察した。
【０２３５】
結果
図１及び３に示すように、ＴＡＴ−ＭＹＣで処理したマウスでは、エクスビボで増殖させた骨髄細胞を骨髄移植した後に、Ｔ細胞の加速した発生が認められた。Ｒａｇ−１−／−マウスのコホートに、致死レベル未満の放射線を照射し、５×１０３個の増殖させた骨髄細胞を移植した（図１のＣ及びＤ；図３のＣ及びＤ）。各コホートで照射及び移植を行ったマウスの半数に、移植から２４時間後に１０μｇのＴＡＴ−ＭＹＣを注入した（図１のＤ及び図３のＤ）。野生型（非処理及び放射線非照射）のＲａｇ−１−／−マウス（図１のＡ、０．９％  ＴＣＲβ＋細胞、及び図３のＡ、０．８％  ＴＣＲβ＋細胞）及びＣ５７ＢＬ／６マウス（図１のＢ、３４．３％  ＴＣＲβ＋細胞、及び図３のＢ、３４．３％  ＴＣＲβ＋細胞）のＦＡＣＳ解析も、コントロールとして行った。
【０２３６】
４週間後（図１）及び８週間後（図３）にＴ細胞再構築について末梢血のＦＡＣＳ解析によりマウスを試験した。図１のＤは、ＴＡＴ−ＭＹＣで処理したマウス（５．６％  ＴＣＲβ＋細胞）の末梢血中のＴ細胞の４週間後のレベルを、ＴＡＴ−ＭＹＣを注入していないコントロール（図１のＣ）（０．２％  ＴＣＲβ＋細胞）と比較して示す。図３のＤは、ＴＡＴ−ＭＹＣで処理したマウス（１３．１％  ＴＣＲβ＋細胞）の末梢血中のＴ細胞の８週間後のレベルを、ＴＡＴ−ＭＹＣを注入していないコントロール（図３のＣ）（４．２％  ＴＣＲβ＋細胞）と比較して示す。４週間後、ＴＡＴ−ＭＹＣを注入したマウスは、ＴＡＴ−ＭＹＣを注入していないコントロールマウスの８週間後と同様のＴ細胞レベルを示した。Ｔ細胞回復までの平均時間は８〜１０週間であるため、このことは約５０〜６０％の加速を示す。
【０２３７】
図２及び４に示すように、ＴＡＴ−ＭＹＣで処理したマウスでは、増殖させた骨髄細胞を骨髄移植した後に、Ｂ細胞の発生の加速も認められた。Ｃ５７／ＢＬ６を遺伝的背景とするＲａｇ−１−／−マウスのコホートに、致死レベル未満の放射線を照射し、５×１０３個の増殖させた骨髄細胞を移植した。各コホートの照射及び移植を受けたマウスの半数に、移植から２４時間後に１０μｇのＴＡＴ−ＭＹＣを注入した（図２のＤ及び図４のＤ）。野生型（非処理及び放射線非照射）のＲａｇ−１−／−マウス（図２のＡ、１．１５％  Ｂ２２０＋細胞、及び図４のＡ、１％  Ｂ２２０＋細胞）及びＣ５７ＢＬ／６マウス（図２のＢ、２１．４％  Ｂ２２０＋細胞、及び図４のＢ、３４．３％  Ｂ２２０＋細胞）のＦＡＣＳ解析もコントロールとして行った。
【０２３８】
４週間後（図２）及び８週間後（図４）に末梢血のＦＡＣＳ解析によりＢ細胞再構築についてマウスを試験した。図２のＤは、ＴＡＴ−ＭＹＣで処理したマウス（１２．１％  Ｂ２２０＋細胞）の末梢血中のＴ細胞の４週間後のレベルを、ＴＡＴ−ＭＹＣを注入していないコントロール（図２のＣ）（０．３％  Ｂ２２０＋細胞）と比較して示す。図４のＤは、ＴＡＴ−ＭＹＣで処理したマウス（５．４％  Ｂ２２０＋細胞）の末梢血中のＴ細胞の８週間後のレベルを、ＴＡＴ−ＭＹＣを注入していないコントロール（図４のＣ）（１．２％  Ｂ２２０＋細胞）と比較して示す。４週間後、ＴＡＴ−ＭＹＣを注入したマウスは、ＴＡＴ−ＭＹＣを注入していないコントロールマウスの８週間後よりも高いＢ細胞レベルを示した。Ｂ細胞回復までの平均時間は８〜１２週間であるため、このことは約５０〜６７％の加速を示している。
【０２３９】
実施例２：マウスにおける造血系再構築の加速
以下の実施例は、新たに分離した全骨髄の移植後に、ＴＡＴ−ＭＹＣ融合タンパク質でマウスを処理した結果を示す。
【０２４０】
材料及び方法
マウスの全骨髄移植において、ドナー及びレシピエントはいずれもＣ５７／ＢＬ６を遺伝的背景とするものを用いた。
【０２４１】
２匹のドナー野生型Ｃ５７／ＢＬ６マウスから得た大腿骨及び脛骨から骨髄細胞を流し出して採取した。採取した細胞をＤ１０完全培地（ＤＭＥＭに、１０％の加熱不活性化ウシ胎児漿液、１００単位／ｍＬのペニシリン／ストレプトマイシン、１０μｇ／ｍＬのＬ−グルタミン、及びＭＥＭ  ＮＥＡＡを添加したもの）に移した。骨髄の吸引物を解離させて単細胞懸濁液にし、遠心分離によりペレットにした。低張性緩衝液（１３５ｍＭのＮＨ４Ｃｌ、１７ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ  ７．６５）中で、細胞懸濁液をインキュベーションすることにより、赤血球を溶解させた。残りの細胞を次にＤ１０培地で洗浄した後、ＰＢＳで２回洗浄し、同日にＲａｇ−１−／−マウスに移植するまで冷温に保った。
【０２４２】
レシピエントのＲａｇ−１−／−マウスを、３５０Ｒａｄで放射線照射した（全身照射）。レシピエントマウスに１×１０６個の全骨髄細胞を尾静脈注入により注入した。骨髄細胞移植から２４時間後、実施例１で述べたように３００μＬのコーン油に乳化させた１０μｇのＴＡＴ−ＭＹＣをマウスに投与した。ＴＡＴ−ＭＹＣは、筋肉注射により投与した。
【０２４３】
リンパ系コンパートメントの再構築を、尾の静脈穿刺によって採取した末梢血サンプルのフローサイトメトリー解析（ＦＡＣＳ）によって観察した。具体的には、ＣＤ４又はＣＤ８発現Ｔ細胞（ＴＣＲβ）、及びＢ細胞（ＣＤ１９及びＢ２２０発現細胞）の出現について試料を観察した。
【０２４４】
キメラマウスから採取した脾臓細胞試料も、分裂促進刺激に応答する能力について測定した。脾臓由来のＴ細胞及びＢ細胞を、ＣＦＳＥで標識し、ＣＤ３（Ｔ細胞）に対する抗体、又はＩｇＭ及びＣＤ４０（Ｂ細胞）に対する抗体のいずれかで活性化させた。細胞を、刺激から７２時間後に、ＦＡＣＳを使用してＣＦＳＥシグナルの希釈によって測定される分裂について評価した。
【０２４５】
結果
マウス５匹（Ｒａｇ−１−／−マウス）ずつのコホートに、致死レベル未満の放射線を照射し、雌のＣ５７／ＢＬ６マウスから採取した１０６個の全ＢＭ細胞を移植した。移植レシピエントマウスには、２４時間後にＴＡＴ−ＭＹＣを注入するか、又は処理を行わなかった。キメラマウスは飼育施設に保持し、４週間観察した。４週間後、マウスを安楽死させ、ＰＢＭＣ及び脾臓を採取した。この脾臓を使用して、単細胞懸濁液を作製した。この細胞を、ネズミＣＤ４及びＣＤ８に対する蛍光抗体で染色し、フローサイトメトリーで解析した。
【０２４６】
図５及び６は、新たに分離された全骨髄移植後にＴＡＴ−ＭＹＣで処理したマウスにおけるＴ細胞の発生の加速を示している。Ｃ５７／ＢＬ６を遺伝的背景とするＲａｇ−１−／−マウスのコホートに致死レベル未満の放射線を照射し、１×１０６個の全骨髄細胞を移植した。移植を行ったコホートの半数に、移植２４時間後にＴＡＴ−ＭＹＣを注入した。
【０２４７】
図５のＡは、放射線照射も、細胞移植も、Ｔａｔ−ＭＹＣ処理も行わなかったコントロールＲａｇ−１−／−マウスにおける末梢血ＣＤ４及びＣＤ８のＴ細胞のレベルを示す（０．０３％  ＣＤ４＋及び０．８％  ＣＤ８＋細胞）。図５のＢは、コントロールとしての、非処理及び放射線非照射の野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスの末梢血ＣＤ４及びＣＤ８のＴ細胞のレベルを示す（１３．１％  ＣＤ４＋及び１１．１％  ＣＤ８＋細胞）。図５のＤは、ＴＡＴ−ＭＹＣで処理したマウスの末梢血中のＣＤ４及びＣＤ８発現Ｔ細胞の検出（１４．９％  ＣＤ４＋及び８．６％  ＣＤ８細胞）を、ＴＡＴ−ＭＹＣを注入していないマウス（図５のＣ）と比較して示す（４．２％  ＣＤ４＋及び３．２％  ＣＤ８細胞）。４週間後では、全骨髄移植から２４時間後にＴＡＴ−ＭＹＣで処理しマウスは、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスとほぼ同じレベルのＣＤ４及びＣＤ８発現Ｔ細胞を有している。
【０２４８】
図６は、上記及び図５に示されるマウスの全コホートについてＴ細胞のパーセンテージをグラフで示したものである。図６のＡは、野生型Ｃ５７ＢＬ／６（第１列）、放射線照射及び移植を行ったがＴＡＴ−ＭＹＣ処理は行わなかったＲａｇ−１−／−マウス（第２列）、並びに、放射線照射、移植を行い、１０μｇ  ＴＡＴ−ＭＹＣを注入したＲａｇ−１−／−マウス（第３列）における移植４週間後の末梢血中のＣＤ４＋細胞のパーセントを示す。図６のＢは、野生型Ｃ５７ＢＬ／６（最初の列）、放射線照射及び移植を行ったがＴＡＴ−ＭＹＣ処理は行わなかったＲａｇ−１−／−マウス（第２列）、並びに、放射線照射、移植を行い、１０μｇ  ＴＡＴ−ＭＹＣを注入したＲａｇ−１−／−マウス（第３列）における移植４週間後の末梢血中のＣＤ８＋細胞のパーセントを示す。
【０２４９】
図７及び８は、新たに分離された全骨髄移植の後にＴＡＴ−ＭＹＣで処理したマウスにおけるＢ細胞の発生の加速を示している。Ｃ５７／ＢＬ６を遺伝的背景とするＲａｇ−１−／−マウスのコホートに、致死レベル未満の放射線を照射し、１×１０６個の全骨髄細胞を移植した。移植コホートの半数に、移植から２４時間後にＴＡＴ−ＭＹＣを注入した。
【０２５０】
図７のＡは、放射線照射も、細胞移植も、ＴＡＴ−ＭＹＣ処理も受けなかったコントロールＲａｇ−１−／−マウスにおける末梢血ＣＤ１９×Ｂ２２０  Ｂ細胞のレベルを示す（０．２％  ＣＤ１９＋×Ｂ２２０＋細胞）。図７のＢは、コントロールとしての、非処理及び放射線非照射の野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスの末梢血ＣＤ１９×Ｂ２２０  Ｂ細胞のレベルを示す（２５．８％  ＣＤ１９＋×Ｂ２２０＋細胞）。図７のＤは、ＴＡＴ−ＭＹＣで処理されたマウスの末梢血中のＣＤ１９×Ｂ２２０発現Ｂ細胞検出（５．２％  ＣＤ１９＋×Ｂ２２０＋細胞）を、ＴＡＴ−ＭＹＣを注入されていないマウス（図７のＣ）と比較して示す（１．４％  ＣＤ１９＋×Ｂ２２０＋細胞）。４週間後では、全骨髄移植から２４時間後にＴＡＴ−ＭＹＣで処理したマウスは、ＴＡＴ−ＭＹＣで処理していない移植コントロールマウスと比較して有意に高いＣＤ１９×Ｂ２２０  Ｂ細胞のレベルを有している。
【０２５１】
図８は、上記及び図７に示されるマウスの全コホートについてＢ細胞パーセンテージをグラフで示したものである。図８のＡは、野生型Ｃ５７ＢＬ／６（第１列）、放射線照射及び移植を行ったがＴＡＴ−ＭＹＣ処理は行わなかったＲａｇ−１−／−マウス（第２列）、並びに、放射線照射、移植を行い、１０μｇ  ＴＡＴ−ＭＹＣを注入したＲａｇ−１−／−マウス（第３列）における移植４週間後の末梢血中のＣＤ１９×Ｂ２２０＋細胞のパーセントを示す。
【０２５２】
図９は、全骨髄を移植し、移植２４時間後にＴＡＴ−ＭＹＣで処理したキメラマウスの体内で発生したＴ細胞及びＢ細胞が、それらの抗原受容体の刺激後に機能的でありかつ増殖したことを示す。脾臓由来のＴ細胞及びＢ細胞をＣＦＳＥで標識し、ＣＤ３（Ｔ細胞）に対する抗体、又はＩｇＭ及びＣＤ４０（Ｂ細胞）に対する抗体のいずれかで活性化した。細胞を、刺激から７２時間後に、ＦＡＣＳを使用してＣＦＳＥシグナルの希釈によって測定される分裂について評価した。
【０２５３】
図９のＡに示すように、１×１０６個の全骨髄細胞を移植したがＴＡＴ−ＭＹＣによる処理を行っていないマウスの脾臓細胞の３３．３％が、抗ＣＤ３の刺激によりＴ細胞芽球化を示している。１×１０６個の全骨髄細胞を移植し、ＴＡＴ−ＭＹＣによる処理を行ったキメラマウスの脾臓細胞では、ＣＤ３刺激後に３６．６％のＴ細胞芽球化を示している（図９のＣ）。同様に、図９のＢは、１×１０６個の全骨髄細胞を移植したがＴＡＴ−ＭＹＣによる処理を行わなかったマウスの脾臓細胞の６．９２％が、抗ＣＤ４０及び抗ＩｇＭの刺激によりＢ細胞芽球化を示したことを示している。１×１０６個の全骨髄細胞を移植し、ＴＡＴ−ＭＹＣによる処理を行ったキメラマウスの脾臓細胞は、ＣＤ４０及びＩｇＭによる刺激後に１５．８％のＢ細胞芽球化を示している（図９のＤ）。これらのデータは、ＴＡＴ−ＭＹＣ処理を行ったＨＳＣキメラマウスから得られた成熟リンパ系細胞が、抗原受容体を介した活性化後、芽球化して細胞分裂を行う能力を有したことを示している。
【０２５４】
実施例３：５−フルオロウラシルで処理したマウスにおける造血再構築の誘導
以下の実施例は、造血コンパートメントに対して毒性を示すことが知られている化学療法薬５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）を投与した後に、ＴＡＴ−ＭＹＣ融合タンパク質でマウスを処理した結果を示す。
【０２５５】
緒言
様々な環境的障害又は疾病等により生じる骨髄不全を回復させるための現行の手法は、支持療法としての増殖因子の投与及び赤血球輸液に基本的に依存している。これらの手法の最終的な目標は、残存する内因性ＨＳＣに造血コンパートメントを動員して再増殖させる（自家再構築）ように促すことである。しかしながら現行の手法は非効率的であり、多くの場合、骨髄破壊的骨髄移植を行う必要を遅らせるだけのものである。
【０２５６】
加えて、化学療法薬及び放射線照射に対するＨＳＣの感受性が高いため、例えば固形腫瘍の患者に適用可能な各治療の用量は、これまで限定的であった。ＨＳＣ及び造血コンパートメントの喪失は、がん患者における治療にともなう毒性の初期徴候の１つである。がんに使用される治療薬からＨＳＣコンパートメントを保護することができれば、そのような治療を送達するのに現在用いられている手法を大幅に変えることができる。
【０２５７】
少数のドナー細胞によるＨＳＣ移植との関連において、ＴＡＴ−ＭＹＣを用いた実施例１及び２の上記の結果は、ＴＡＴ−ＭＹＣが骨髄不全症候群患者の体内の造血コンパートメントの自家再構築を促進するうえでも有用でありうることを示している。理論に拘束されるものではないが、ＴＡＴ−ＭＹＣによる処理は、残存する少数の常在（resident）ＨＳＣを標的とし、そのようなＨＳＣの分裂を誘導して分化した造血系を生じさせうると考えられる。
【０２５８】
材料及び方法
この実験では、週齢４〜６週の雌のＣ５７／ＢＬ６野生型（ＷＴ）マウスを使用した。マウス５匹のコホートを、５−フルオロウラシル（５ｍｇ／匹）単独で経静脈注入により処理するか、又はその後に１０μｇ／匹のＴＡＴ−ＭＹＣ又は１０μｇ／匹のＴＡＴ−ＣＲＥで処理した（５ＦＵチャレンジの２４時間後）。これらのタンパク質はいずれも、筋肉注射の直前にコーン油中に乳化した。いくつかの実験において、マウスは１０μｇ／匹のＴＡＴ−ＭＹＣ又はＴＡＴ−ＣＲＥのいずれかで前処理した（５ＦＵチャレンジの４８時間前）。
【０２５９】
尾の静脈穿刺によって採取した末梢血サンプルのフローサイトメトリー解析（ＦＡＣＳ）によってリンパ系コンパートメントの再構築を観察した。具体的には、ＣＤ４又はＣＤ８発現Ｔ細胞（ＴＣＲβ）、及びＢ細胞（ＣＤ１９及びＢ２２０発現細胞）の出現について試料を観察した。
【０２６０】
結果
環境的障害のモデルとして、またより広くは任意の骨髄不全の治療モデルとして５−フルオロウラシルによるチャレンジを用いた。図１０、１１及び１２は、５−フルオロウラシルチャレンジから２４時間後にＴＡＴ−ＭＹＣで処理したマウスの、２週間後におけるＴ細胞の自家再構築の加速を示している。Ｃ５７ＢＬ／６マウスのコホートを、５ＦＵでチャレンジし、次いで処理を行わないままとするか（図１０のＡ）、又は５ＦＵチャレンジから２４時間後にコントロールタンパク質ＴＡＴ−ＣＲＥ（図１０のＢ）若しくはＴＡＴ−ＭＹＣ（図１０のＣ）を筋肉注射した。
【０２６１】
図１０のＡは、５ＦＵチャレンジ後にＴＡＴ−ＣＲＥ又はＴＡＴ−ＭＹＣ処理を行わなかった、５ＦＵチャレンジしたＣ５７／ＢＬ６マウスにおける２週間後の末梢血ＣＤ４及びＣＤ８陽性Ｔ細胞のレベルを示す（３．９％  ＣＤ４＋及び２．４％  ＣＤ８＋細胞）。図１０のＢは、５ＦＵチャレンジ後に１０μｇ  ＴＡＴ−ＣＲＥ処理を行った、５ＦＵチャレンジしたＣ５７／ＢＬ６マウスにおける末梢血ＣＤ４及びＣＤ８陽性Ｔ細胞のレベルを示す（５．５％  ＣＤ４＋及び２．５５％  ＣＤ８＋細胞）。図５のＣは、５ＦＵチャレンジ後に１０μｇ  ＴＡＴ−ＭＹＣ処理を行った、５ＦＵチャレンジしたＣ５７／ＢＬ６マウスにおける末梢血ＣＤ４及びＣＤ８陽性Ｔ細胞のレベルを示す（１４．９％  ＣＤ４＋及び９．６９％  ＣＤ８＋細胞）。
【０２６２】
図１１及び１２は、上記及び図１０に示されるマウスの全コホートのＴ細胞パーセンテージをグラフで示したものである。図１１は、いずれのタンパク質でも処理していないＣ５７ＢＬ／６マウス（第１列）、１０μｇ  ＴＡＴ−ＭＹＣを注入したＣ５７ＢＬ／６マウス（第２列）、及び１０μｇ  ＴＡＴ−ＣＲＥを注入したＣ５７ＢＬ／６マウス（第３列）における、５ＦＵチャレンジから２週間後の末梢血中のＣＤ４＋細胞のパーセントを示す。図１２は、いずれのタンパク質でも処理していないＣ５７ＢＬ／６マウス（第１列）、１０μｇ  ＴＡＴ−ＭＹＣを注入したＣ５７ＢＬ／６マウス（第２列）、及び１０μｇ  ＴＡＴ−ＣＲＥを注入したＣ５７ＢＬ／６マウス（第３列）における、５ＦＵチャレンジから２週間後の末梢血中のＣＤ８＋細胞のパーセントを示す。
【０２６３】
他の実験において、５−フルオロウラシルによるチャレンジは、化学療法又は放射線治療の副作用に対するＨＳＣの保護を含む、環境的障害に対する保護のモデルとして使用される。
【０２６４】
Ｃ５７ＢＬ／６マウスのコホートを、非処理のままとするか、ＴＡＴ−ＭＹＣの筋肉注射による処理を行うか、又はコントロールタンパク質（ＴＡＴ−ＣＲＥ）の筋肉注射による処理を行う。５ｍｇの５−ＦＵを２４時間後に経静脈投与する。５ＦＵチャレンジ後の異なる時点で（所望により３日目、５日目、７日目又はそれ以降）、末梢血サンプルのＦＡＣＳ解析により、血中のＴ細胞（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋  Ｔ細胞）の頻度を評価する。ＴＡＴ−ＭＹＣで前処理したマウスと、コントロールタンパク質ＴＡＴ−ＣＲＥで前処理したマウスとの間の比較により、ＴＡＴ−ＭＹＣが造血系に化学的保護を与えるか否かが示される。
【０２６５】
実施例４：遺伝毒性ストレス剤で処理したマウスにおける造血再構築の誘導
以下の実施例では、ＨＳＣに対する、化学的及び放射線による２つの形態の遺伝毒性ストレスを用いる。週齢及び性別が一致したＣ５７／ＢＬ６マウスを、ＴＡＴ−ＭＹＣ又はコントロールタンパク質のいずれかで処理し、次に（５ＦＵ）若しくはシクロホスファミド（ＣＴＸ）などの化学療法薬、又は致死的用量未満の放射線に曝露する。それぞれの刺激に曝露した５〜７日後から、マウス末梢血中の成熟Ｔ細胞及びＢ細胞の頻度の変動を観測する。
【０２６６】
インビボでの造血系への化学的保護を与えるためのＴＡＴ−ＭＹＣの使用
１０匹のＣ５７／ＢＬ６マウスのコホートに、ＴＡＴ−ＭＹＣを注入するか、ネガティブコントロール（例えばＴＡＴ−ＣＲＥ）を注入するか、又は非処理のままとする。２４、４８、又は７２時間後（所望により１〜７２時間の間の任意の時点）、各コホートの５匹のマウスを、５ｍｇ／匹の５ＦＵ又は４ｍｇ／匹のシクロホスファミド（ＣＴＸ）で処理する。コホートの他の５匹は、ＴＡＴ−ＭＹＣ、ＴＡＴ−ＣＲＥ、又は無注入の初期処理のみのままとする。末梢血を静脈穿刺により採取し、血中の成熟Ｔ細胞及びＢ細胞の頻度をＦＡＣＳで解析する。
【０２６７】
５ＦＵ、ブスルファンＡ又はシクロホスファミド（ＣＴＸ）のチャレンジの前にＴＡＴ−ＭＹＣで処理したマウスの末梢血中の成熟Ｔ細胞及びＢ細胞の頻度の変化が、これら化学療法薬に曝露した他のすべてのマウスで観察される成熟Ｔ細胞及びＢ細胞の頻度の顕著な低下と比べて、小さくなっていることについて評価を行う。あるいは、５ＦＵ、ブスルファンＡ又はＣＴＸのチャレンジの前にＴＡＴ−ＭＹＣで処理したマウスの末梢血中の成熟Ｔ細胞及びＢ細胞の頻度を回復するまでの回復時間が、これら化学療法薬に曝露した他のすべてのマウスで観察される成熟Ｔ細胞及びＢ細胞の頻度の回復に要する時間長さと比べて、短縮されていることについて評価を行う。
【０２６８】
付加的な研究としては、ＴＡＴ−ＭＹＣで処理したマウスに対する、５ＦＵ、ブスルファンＡ又はＣＴＸいずれかの用量漸増（又は用量漸減）が挙げられ、これによりＴＡＴ−ＭＹＣ処理により可能になる化学療法薬の用量増加パラメータが決定される。
【０２６９】
インビボで造血系に放射線保護を与えるためのＴＡＴ−ＭＹＣの使用
実験の構成は本質的に上記と同じである。唯一の相違点は、ＴＡＴ−ＭＹＣで処理、ＴＡＴ−ＣＲＥで処理、又は非処理の後、化学療法剤ではなく、一定の用量範囲の放射線照射にマウスを曝露する点である。すなわち、３５０Ｒａｄ及び６００Ｒａｄを、Ｃ５７／ＢＬ６Ｊマウスに使用することができる。ＦＡＣＳにより、末梢血の成熟リンパ系細胞又は骨髄系細胞の変動を観察する。
【０２７０】
致死量未満又は致死量の放射線照射によるチャレンジの前にＴＡＴ−ＭＹＣで処理したマウスの末梢血中の成熟Ｔ細胞及びＢ細胞の頻度の変化が、これら放射線に曝露した他のすべてのマウスで観察される成熟Ｔ細胞及びＢ細胞の頻度の顕著な低下と比べて、低下していることについて評価を行う。あるいは、致死量未満又は致死量の放射線照射のチャレンジの前にＴＡＴ−ＭＹＣで処理したマウスの末梢血中の成熟Ｔ細胞及びＢ細胞の頻度を復元するまで回復時間が、これら放射線に曝露した他のすべてのマウスで観察される成熟Ｔ細胞及びＢ細胞の頻度の回復に要する時間長さと比べて、短縮されていることについて評価を行う。
【０２７１】
付加的な研究としては、ＴＡＴ−ＭＹＣで処理したマウスに対する、放射線照射量の用量漸増（又は用量漸減）が挙げられ、これによりＴＡＴ−ＭＹＣ処理により可能になる放射線照射用量の増加パラメータ、及び放射線と化学療法剤との可能な組み合わせが決定される。
【０２７２】
実施例５：異なる経路による投与後のマウスにおける造血再構築の加速
以下の実施例は、新たに分離された全骨髄移植後の、筋肉注射又は静脈注射のいずれかにより投与したＴＡＴ−ＭＹＣ融合タンパク質でマウスを処理した結果を示す。
【０２７３】
材料及び方法
実験は、ＴＡＴ−ＭＹＣを異なる投与経路を用いて投与した点以外は実施例２に述べたのと同様にして行った。
【０２７４】
簡単に述べると、マウスドナー及びレシピエントはいずれも、Ｃ５７ＢＬ／６を遺伝的背景とするものを用いた。２匹のドナー野生型Ｃ５７／ＢＬ６マウスから得た大腿骨及び脛骨から流し出して骨髄細胞を採取した。骨髄吸引物を解離させて単細胞懸濁液にし、遠心分離によりペレットにし、赤血球を溶解した。次いで、残りの細胞を洗浄した後、同日にＲａｇ−１−／−マウスに移植するまで低温に維持した。
【０２７５】
レシピエントのＲａｇ−１−／−マウスを、３５０Ｒａｄの放射線を照射した（全身照射）。レシピエントマウスに、尾静脈注入により、１×１０６個の全骨髄細胞を注入した。骨髄細胞移植から２４時間後、マウスに、２００μＬのＰＢＳに溶かした１０μｇのＴＡＴ−ＭＹＣの静脈注射、又は、実施例１で述べた３００μＬのコーン油に乳化させた１０μｇのＴＡＴ−ＭＹＣの筋肉注射を投与した。
【０２７６】
尾の静脈穿刺によって採取された末梢血試料のフローサイトメトリー解析（ＦＡＣＳ）によってリンパ系コンパートメントの再構築を観測した。具体的には、ＣＤ４又はＣＤ８発現Ｔ細胞（ＣＤ４×ＴＣＲβ）、及びＢ細胞（ＩｇＭ×ＣＤ１９発現細胞）の出現について試料を観測した。
【０２７７】
結果
マウス５匹（Ｒａｇ−１−／−マウス）ずつのコホートに、致死レベル未満の放射線を照射し、雌のＣ５７／ＢＬ６マウスから採取した１０６個の全骨髄細胞を移植した。この後、移植レシピエントマウスに、２４時間後にＴＡＴ−ＭＹＣを注入するか、又は処理を行わなかった。キメラマウスを飼育施設で維持し、少なくとも４週間観察下に置いた。４週間後、末梢血を静脈穿刺により採取し、Ｔ及びＢ細胞のレベルをＦＡＣＳで評価した。
【０２７８】
図１３及び１４は、新たに分離された全骨髄移植の後にＴＡＴ−ＭＹＣで処理したマウスのＴ細胞の発生の加速を示している。Ｃ５７／ＢＬ６を遺伝的背景とするＲａｇ−１−／−マウスのコホートに、致死レベル未満の放射線を照射し、１×１０６個の全骨髄細胞を移植した（図１３のＣ、Ｄ、及びＥ）。コホートの移植マウスの３分の２に、移植から２４時間後に１０μｇ  ＴＡＴ−ＭＹＣの静脈注射（図１３のＤ）又は筋肉注射（図１３のＥ）を行った。コントロールとして、野生型（非処理及び放射線非照射）のＲａｇ−１−／−マウス（図１３のＡ、０．５７９％  ＣＤ４×ＴＣＲβ＋細胞）及びＣ５７ＢＬ／６マウス（図１３のＢ、１７．５％  ＣＤ４×ＴＣＲβ＋細胞）のＦＡＣＳ解析も行った。
【０２７９】
図１３のＤ及びＥは、ＴＡＴ−ＭＹＣを注射していないコントロール（図１３のＣ）（６．３９％  ＣＤ４×ＴＣＲβ＋細胞）と比較した、ＴＡＴ−ＭＹＣを静脈注射したマウス（３２．８％  ＣＤ４×ＴＣＲβ＋細胞）又はＴＡＴ−ＭＹＣを筋肉注射したマウス（１８．２％  ＣＤ４×ＴＣＲβ＋細胞）の末梢血中のＣＤ４×ＴＣＲβ＋  Ｔ細胞の検出を示す。いずれの経路でＴＡＴ−ＭＹＣを注射したマウスも、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスとほぼ同じレベルのＣＤ４×ＴＣＲβ＋  Ｔ細胞を有していた。
【０２８０】
図１４は、上記及び図１３に示されるマウスの全コホートのＴ細胞パーセンテージをグラフで示したものである。グラフは、移植から４週間後の、野生型Ｒａｇ−１−／−マウス（ＮＴ）、放射線照射、移植を行い、ＴＡＴ−ＭＹＣの静脈注射を行ったＲａｇ−１−／−マウス（ＩＶ）、及び、放射線照射、移植を行い、ＴＡＴ−ＭＹＣの筋肉注射を行ったＲａｇ−１−／−マウス（ＩＭ）における末梢血中のＣＤ４＋細胞のパーセントを示している。
【０２８１】
図１５及び１６は、新たに分離された全骨髄移植の後にＴＡＴ−ＭＹＣで処理したマウスのＢ細胞の発生の加速を示している。Ｃ５７／ＢＬ６を遺伝的背景とするＲａｇ−１−／−マウスのコホートに、致死レベル未満の放射線を照射し、１×１０６個の全骨髄細胞を移植した（図１５のＣ、Ｄ、及びＥ）。コホートの移植マウスの３分の２に、移植から２４時間後に１０μｇ  ＴＡＴ−ＭＹＣの静脈注射（図１５のＤ）又は筋肉注射（図１５のＥ）を行った。コントロールとして、野生型（非処理及び放射線非照射）のＲａｇ−１−／−マウス（図１５のＡ、０．０７１％  ＩｇＭ×ＣＤ１９＋細胞）及びＣ５７ＢＬ／６マウス（図１５のＢ、２３．５％  ＩｇＭ×ＣＤ１９＋細胞）のＦＡＣＳ解析も行った。
【０２８２】
図１５のＤ及びＥは、ＴＡＴ−ＭＹＣを注射しないコントロール（図１５のＣ）（１．４９％  ＩｇＭ×ＣＤ１９＋細胞）と比較した、ＴＡＴ−ＭＹＣ静脈注射を行った（図１５のＤ、２．４１％  ＩｇＭ×ＣＤ１９＋細胞）、又はＴＡＴ−ＭＹＣ筋肉注射を行った（図１５のＥ、６．５３％  ＩｇＭ×ＣＤ１９＋細胞）マウスの末梢血中のＩｇＭ×ＣＤ１９＋  Ｂ細胞の検出を示す。いずれの経路でＴＡＴ−ＭＹＣを注射した場合にも、全骨髄を移植したがＴＡＴ−ＭＹＣで処理しなかったＲａｇ−１−／−マウスと比べて、マウスのＩｇＭ×ＣＤ１９＋  Ｂ細胞レベルは高くなった。
【０２８３】
図１６は、上記及び図１５に示されているマウスの全コホートのＢ細胞パーセンテージをグラフで示したものである。グラフは、移植から４週間後の、野生型Ｒａｇ−１−／−マウス（ＮＴ）、放射線照射、移植を行い、ＴＡＴ−ＭＹＣの静脈注射を行ったＲａｇ−１−／−マウス（ＩＶ）、及び、放射線照射、移植を行い、ＴＡＴ−ＭＹＣの筋肉注射を行ったＲａｇ−１−／−マウス（ＩＭ）における末梢血中のＣＤ１９×Ｂ２２０＋細胞のパーセントを示している。
【０２８４】
実施例６：ＴＡＴ−ＭＹＣ及びＴＡＴ−Ｂｃｌ−２で増殖させたヒト臍帯血由来ＨＳＣを移植したマウスにおける造血再構築の加速
以下の実施例は、ＴＡＴ−ＭＹＣ及びＴＡＴ−Ｂｃｌ−２を用いてインビトロで下臍帯血由来ＨＳＣを増殖させることによって、タンパク質形質導入された長期造血幹細胞（ｐｔｌｔ−ＨＳＣ）を形成した後、致死レベル未満の放射線照射を行ったマウスに移植を行った場合の結果を示す。
【０２８５】
材料及び方法
地域の臍帯血バンクで処分された試料から新鮮な臍帯血細胞を入手した。ヒト細胞はすべて個人識別情報を消去し、治験審査委員会（ＩＲＢ）の監視免除となるようにした。臍帯血量全量を２０ｍＬのアリコートに分け、ＰＢＳで１：１に希釈した。希釈した臍帯血（２０ｍＬ）を、２０ｍＬのＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号１７−１４４０−０３）の上に静かに置いた。細胞を６０分間、９００×ｇでスピンした。ガラス製ピペットでバフィーコートを除去し、ＰＢＳで２回洗浄した。細胞をＦＣＢ培地（Ｉｓｃｏｖｅ（Ｇｉｂｃｏ）に、１０％ヒト血漿、１００単位／ｍＬペニシリン／ストレプトマイシン、ＳＣＦ、ＩＬ３及びＩＬ６を含有する培地３０ｍＬ、並びに、実施例１で上記に述べたＴＰＯ、ＦＬＴ３−Ｌ、及びＧＭ−ＣＳＦを含む培地３０ｍＬを添加したもの）中に再懸濁した。
【０２８６】
２つのＦＣＢ増殖培養を開始した。一方の培養物はＦＣＢ培地のみを含むものとし、第２の培養物はＦＣＢ培地に５μｇ／ｍＬの組み換えＴａｔ−ＭＹＣ及び１０μｇ／ｍＬの組み換えＴａｔ−Ｂｃｌ−２を添加したものとした。両方の培養物の培地を、１４日間の増殖期間にわたって３日ごとに交換した。インビトロで増殖させたヒトＨＳＣの表面表現型を、ヒト抗原ＣＤ４５、ＣＤ３４及びＣＤ３８に対する抗体を用いてＦＡＣＳ解析で評価した。
【０２８７】
ＦＣＢ培地、又はＴａｔ−ＭＹＣ及びＴａｔ−Ｂｃｌ２を添加したＦＣＢ培地中で増殖させた胎児臍帯血細胞（ＦＣＢ）を、直前に１８０Ｒａｄの放射線照射を行ったＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−マウス（ＮＳＧ）（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）に注射した。増殖させたＦＣＢはＰＢＳで３回洗浄し、２００μＬ  ＰＢＳ中で、尾静脈経由で注入した。
【０２８８】
移植から８週間後、移植ＮＳＧマウスの脛骨及び大腿骨から骨髄細胞を採取した。５ｍＬの滅菌ＴＡＣ緩衝液（１３５ｍＭ  ＮＨ４ＣＬ、１７ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ  ７．６５）中でインキュベーションして赤血球を溶解してからＤ１０培地で２回洗浄した。ＢＭ細胞を、ヒト抗原ＣＤ４５、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ１１ｂ及びＣＤ３３に対する抗体を用いて、フローサイトメトリーで解析した。
【０２８９】
安楽死させたＮＳＧマウスから脾臓及び胸腺を採取し、機械的解離により単細胞懸濁液を作製した。細胞をＴＡＣ緩衝液（１３５ｍＭ  ＮＨ４ＣＬ、１７ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．６５）で処理し、赤血球細胞を溶解した。
【０２９０】
発明者らは、ＭｅｔｈｏＣｕｌｔ  Ｏｐｔｉｍｕｍ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）上に細胞を接種し、ＢＦＵ−Ｅ、ＣＦＵ−Ｍ、ＣＦＵ−Ｇ及びＣＦＵ−ＧＭコロニーを生じる能力を調べることにより、ＮＳＧマウスのＢＭから採取したヒトＨＳＣの機能的試験を行った。ＢＭ採取の日に、３００μＬのＤ１０中に入れた１０，０００個のＢＭ細胞を、４ｍＬのＭｅｔｈｏＣｕｌｔに加えた。ＢＭ細胞を含む４ｍＬを、２つの３０ｍＭの培養皿に均等に分け、それぞれが５０００個の細胞を含むようにした。この培養皿を３７℃、５％  ＣＯ２中で１４日間インキュベーションした。倒立顕微鏡を使用してコロニーを数え、細胞形態に基づいて識別した。
【０２９１】
結果
図１７に示すように、Ｔａｔ−ＭＹＣ及びＴａｔ−Ｂｃｌ２を添加したＦＣＢ培地中で増殖させたＨＳＣ（ｐｔｌｔ−ＨＳＣ）を移植することによって作製された異種キメラＮＳＧマウスは、ＢＭ生着の増加を示した。移植から８週間後、ＦＣＢ培地単独で増殖された１×１０６個のＣＤ３４＋／ＣＤ３８ｌｏ細胞を注入したＮＳＧマウスは、０．０３％の移植細胞由来の骨髄コンパートメントを有していた（図１７のＡ、第１パネル）。Ｔａｔ−ＭＹＣ及びＴａｔ−Ｂｃｌ２を添加したＦＣＢ培地で増殖された１×１０６個のＣＤ３４＋／ＣＤ３８ｌｏ細胞を注入したＮＳＧマウスは、１８．２％の移植細胞由来の骨髄コンパートメントを有していた（図１７のＡ、第２パネル）。５×１０６個の新鮮な臍帯血細胞を移植したＮＳＧマウスを生着のコントロールとして使用し（図１７のＡ、第３パネル）、これは移植細胞の２．７％生着を示した。
【０２９２】
Ｔａｔ−ＭＹＣ及びＴａｔ−Ｂｃｌ２を添加したＦＣＢ培地で増殖されたＨＳＣを移植することによって作製された異種キメラＮＳＧマウスのＢＭ、脾臓及び胸腺から得たヒトＣＤ４５＋細胞を分析した。ＦＡＣＳ解析では、ＢＭ中の６．８％のヒトＣＤ４５＋群も、造血幹細胞マーカーＣＤ３４について陽性に染色されることが示された（図１７のＢ、第１パネル）。これらのマウスの脾臓及び胸腺から得たヒトＣＤ４５＋細胞を、Ｂ細胞マーカーＣＤ１９及びＴ細胞マーカーＣＤ３について評価した。Ｔ細胞マーカーＣＤ３と比較して（図１７のＢ、第２パネル、７．７％）、脾臓から得たヒトＣＤ４５＋細胞の大半が、Ｂ細胞マーカーＣＤ１９について陽性に染色された（図１７のＢ、第２パネル、６９．２％）。Ｂ細胞マーカーＣＤ１９と比較して（図１７のＢ、第３パネル、１．２％）、胸腺のＣＤ４５＋群の大半が、ＣＤ３  Ｔ細胞マーカーについて陽性に染色された（図１７のＢ、第３パネル、９１．３％）。
【０２９３】
ｐｔｌｔ−ＨＳＣを移植した異種キメラＮＳＧマウスの脾臓から得たヒトＣＤ４５＋ＣＤ１９＋細胞をＣＦＳＥで標識し、ヒトＣＤ４０及びＩｇＭに対するモノクローナル抗体で活性化させた。この細胞をＣＦＳＥの希釈について、フローサイトメトリーで７２時間分析した。図１７のＣは、異種キメラＮＳＧマウスにおいてインビボで発生したヒトＢ細胞の増殖プロファイルを示す。これらの結果は、Ｔａｔ−ＭＹＣ及びＴａｔ−Ｂｃｌ２による前処理を行った移植ＨＳＣに由来するＢ細胞が、それらのＢ細胞受容体を介して活性化されうることを示している。
【０２９４】
ｐｔｌｔ−ＨＳＣを移植した異種キメラＮＳＧマウスの骨髄から得たヒトＣＤ４５＋、ＣＤ３４＋ＣＤ３８ｌｏ  ＨＳＣを用いてＭｅｔｈｏＣｕｌｔ  Ｏｐｔｉｍｕｍに接種し、骨髄赤芽球幹細胞の存在について評価を行った。培地のみで増殖させた細胞を移植したコントロールＮＳＧマウスから得た細胞と比較して（図１７のＤ、ＦＣＢ）、ｐｔｌｔ−ＨＳＣを移植したＮＳＧマウスから得たこれらの細胞は、ＭｅｔｈｏＣｕｌｔプレートでより多くのコロニーを生じた（図１７のＤ、ＦＣＢ  ＴＭＴＢ）。赤血球系（ＢＦＵ−Ｅ）、骨髄系（ＣＦＵ−Ｍ）、顆粒球（ＣＦＵ−Ｇ）、及び顆粒球マクロファージ（ＣＦＵ−ＧＭ）系に対して選択的な条件下でコロニー形成が認められたが、より多くの骨髄系及び顆粒球の増殖が認められた。加えて、一部のコロニーは、これに続いて連続して再播種した場合にも依然認められた（図１７のＥ）。コロニーの数は、両方の場合で、Ｔａｔ−ＭＹＣ及びＴａｔ−Ｂｃｌ−２と共に１４日間培養したヒト臍帯血細胞によって再構築されたＮＳＧマウスにおいて、新鮮な無操作のヒト臍帯血細胞により再構築されたＮＳＧマウスから得られた細胞よりも大幅に多かった。
【０２９５】
これらの結果は、移植を行ったマウスの骨髄から得たＣＤ４５＋、ＣＤ３４＋ＣＤ３８ｌｏ  ＨＳＣが、ＭｅｔｈｏＣｕｌｔ培地において４つのコロニータイプのすべてを生じることができる造血幹細胞であることを示している。更に、Ｔａｔ−ＭＹＣ及びＴａｔ−Ｂｃｌ２を含むＦＣＢ培養物を移植したＮＳＧマウスから得られた骨髄を播種したプレート上で認められたコロニー数の増加は、骨髄ニッチに存在する造血幹細胞の数がより多いことを反映している。
【０２９６】
更に、Ｔａｔ−ＭＹＣ及びＴａｔ−Ｂｃｌ−２を添加したサイトカインカクテル中であらかじめインビトロで増殖させた１０６個の臍帯血細胞を移植した異種キメラマウスのコホート（黒い四角）を、骨髄系細胞及びリンパ系細胞の分化について評価した。骨髄細胞（図１７のＦ）及び脾臓細胞（図１７のＧ）のＣＤ４５陽性群を、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３、及びＣＤ１９発現について分析した。これらの異種キメラマウスの骨髄及び脾臓において、骨髄系細胞及びリンパ系細胞の両方の分化が観察された。
【０２９７】
実施例７：新たに分離されたヒト全臍帯血を移植し、ＴＡＴ−ＭＹＣを注射したマウスにおける造血再構築の加速
下記の実施例は、新鮮なヒト臍帯血細胞の移植後に、ＴＡＴ−ＭＹＣ融合タンパク質でマウスを処理した結果を示す。
【０２９８】
材料及び方法
実施例６に述べたのと同様にしてヒト臍帯血細胞を入手及び調製した。簡単に述べると、臍帯血をＦｉｃｏｌｌ−ｈｙｐａｑｕｅ及び遠心分離を用いて分離し、バフィーコート分画を得た。バフィーコート細胞を取り出し、２回洗ってから、ＰＢＳ中に再懸濁し、同日中にマウスに移植されるまで低温に維持した。
【０２９９】
ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−（ＮＯＧ）マウスにＦＣＢ細胞を注入する前に、マウスに１８０Ｒａｄの放射線を照射した（全身照射）。次いで、各レシピエントマウスに、尾静脈注入経由で、５×１０５個、１×１０６個、又は５×１０６個のヒトＦＣＢ細胞からなる移植を行った。骨髄細胞移植から２４時間後、マウスに、３００μＬのコーン油中に乳化させた１０μｇのＴＡＴ−ＭＹＣ又は１０μｇのＴＡＴ−ＣＲＥの筋肉注射を行った。
【０３００】
フローサイトメトリーで生着を監視することによって、移植８週間後に、異種キメラマウスの末梢血、骨髄、及び脾臓中のヒトＣＤ４５陽性細胞の存在について評価を行った。
【０３０１】
結果
図１８、１９及び２０に示すように、ヒトの新鮮な胎児臍帯血細胞の異種移植後にＴＡＴ−ＭＹＣで処理した異種キメラＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−マウスの、末梢血（図１８）、骨髄（図１９）、及び脾臓（図２０）において、ヒト細胞の発生の加速が認められた。ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−マウスのコホートに、致死量未満の線量の放射線照射を行った後、５×１０５個（図１８のＡ及びＤ；図１９のＡ及びＤ；図２０のＡ及びＤ）、１×１０６個（図１８のＢ及びＥ；図１９のＢ及びＥ；図２０のＢ及びＥ）、又は５×１０６個（図１８のＣ及びＦ；図１９のＣ及びＥ；図２０のＣ及びＥ）の臍帯血細胞の移植を行った。移植から２４時間後、各コホートの半数のマウスに、ＴＡＴ−ＭＹＣを注射し（図１８のＤ、Ｅ、及びＦ；図１９のＤ、Ｅ、及びＦ；図２０のＤ、Ｅ、及びＦ）、残りの半数にはコントロールタンパク質ＴＡＴ−ＣＲＥを注射した（図１８のＡ、Ｂ、及びＣ；図１９のＡ、Ｂ、及びＣ；図２０のＡ、Ｂ、及びＣ）。
【０３０２】
図１８は、コントロールの、致死レベル未満の放射線照射を行ったＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−マウスにヒト全臍帯血細胞を異種移植した後、ＴＡＴ−ＣＲＥで処理した場合、８週間後の末梢血中において、５×１０５個の細胞を移植した後ではＣＤ４５＋が０％（図１８のＡ）、１×１０６個の細胞を移植した後ではＣＤ４５＋が０．２％（図１８のＢ）、５×１０６個の細胞を移植した後ではＣＤ４５＋が０．７％（図１８のＣ）であったことを示している。致死レベル未満の放射線照射を行ったＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−マウスにヒト全臍帯血細胞を異種移植した後、ＴＡＴ−ＭＹＣで処理した場合、８週間後の末梢血中において、５×１０５個の細胞を移植した後ではＣＤ４５＋が０．０９％（図１８のＤ）、１×１０６個の細胞を移植した後ではＣＤ４５＋が０．１％（図１８のＥ）、５×１０６個の細胞を移植した後ではＣＤ４５＋が９．３％（図１８のＦ）であった。したがって、図１８のＦは、移植８週間後にキメラマウスの末梢血中にヒトＴ細胞（ｈＣＤ４５陽性細胞）が検出されることを示している。Ｔ細胞回復までの平均時間は１２〜２０週間であるため、このことは約３３〜６０％の加速を示している。
【０３０３】
図１９は、コントロールの、致死レベル未満の放射線照射を行ったＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−マウスに、ヒト全臍帯血細胞を異種移植した後、ＴＡＴ−ＣＲＥで処理した場合、８週間後の骨髄中において、５×１０５個の細胞を移植した後ではＣＤ４５＋が０．０２％（図１９のＡ）、１×１０６個の細胞を移植した後ではＣＤ４５＋が７．７％（図１９のＢ）、５×１０６個の細胞を移植した後ではＣＤ４５＋が１１．３％（図１９のＣ）であったことを示している。致死レベル未満の放射線照射を行ったＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−マウスに、ヒト全臍帯血細胞を異種移植した後、ＴＡＴ−ＭＹＣで処理した場合、８週間後の骨髄中において、５×１０５個の細胞を移植した後ではＣＤ４５＋が０．０４％（図１９のＤ）、１×１０６個の細胞を移植した後ではＣＤ４５＋が８．６％（図１９のＥ）、５×１０６個の細胞を移植した後ではＣＤ４５＋が２０．７％（図１９のＦ）であった。
【０３０４】
図２０は、コントロールの、致死レベル未満の放射線照射を行ったＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−マウスに、ヒト全臍帯血細胞を異種移植した後、ＴＡＴ−ＣＲＥで処理した場合、８週間後の脾臓中において、５×１０５個の細胞を移植した後ではＣＤ４５＋が０．９％（図２０のＡ）、１×１０６個の細胞を移植した後ではＣＤ４５＋が１３．９％（図２０のＢ）、５×１０６個の細胞を移植した後ではＣＤ４５＋が２７．６％（図２０のＣ）であったことを示している。致死レベル未満の放射線照射を行ったＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−マウスに、ヒト全臍帯血細胞を異種移植した後、ＴＡＴ−ＭＹＣで処理した場合、８週間後の骨髄中において、５×１０５個の細胞を移植した後ではＣＤ４５＋が１．２％（図２０のＤ）、１×１０６個の細胞を移植した後ではＣＤ４５＋が４．９％（図２０のＥ）、５×１０６個の細胞を移植した後ではＣＤ４５＋が５８％（図２０のＦ）であった。
【０３０５】
実施例８：ＴＡＴ−ＭＹＣ及びＴＡＴ−Ｂｃｌ−２で前処理した、新たに分離したヒト臍帯血細胞を移植したマウスにおける造血再構築の加速
以下の実施例は、マウスへの移植に先立って新鮮なヒト臍帯血細胞をＴＡＴ−ＭＹＣ及びＴＡＴ−Ｂｃｌ−２で前処理した結果を示す。
【０３０６】
材料及び方法
実施例６で述べたのと同様にしてヒト臍帯血細胞を入手及び調製した。簡単に述べると、臍帯血をＦｉｃｏｌｌ−ｈｙｐａｑｕｅ及び遠心分離を用いて分離してバフィーコート分画を得た。バフィーコートを取り出し、２回洗浄してから、ＰＢＳ中に再懸濁させた。
【０３０７】
マウスに注入する前に、分離した臍帯血細胞を、５μｇ／ｍＬ  ＴＡＴ−ＭＹＣ及び５μｇ／ｍＬ  ＴＡＴ−Ｂｃｌ−２に１時間曝露した。融合タンパク質に曝露した後、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、次にＰＢＳ中に再懸濁して５×１０６個／２００μＬとし、マウスに注入するまでの間、低温に維持した。
【０３０８】
ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−（ＮＯＧ）マウスにＦＣＢ細胞を注入する前に、マウスに１８０Ｒａｄの放射線を照射した（全身照射）。次いで、各レシピエントマウスに、尾静脈注入経由で、２００μＬ  ＰＢＳ中に５×１０６個のヒトＦＣＢ細胞を含む移植を行った。
【０３０９】
フローサイトメトリーで生着を観測し、異種キメラマウスの末梢血中のＣＤ４５陽性細胞の存在について評価した。ＦＣＢ移植から８週間後に、最初の採血を行った。
【０３１０】
８ヶ月後、マウスを安楽死させ、異種キメラＮＳＧマウスの脛骨及び大腿骨から骨髄細胞を採取した。脾臓及び胸腺も採取し、細胞を無菌ワイヤメッシュスクリーンに強制的に通過させることによって単細胞懸濁液とした。ＢＭ、脾臓及び胸腺からの赤血球を、５ｍＬ滅菌ＴＡＣ緩衝液（１３５ｍＭ  ＮＨ４ＣＬ、１７ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ  ７．６５）中で溶解し、次いでＤ１０培地で２回洗浄した。ＢＭ、脾臓細胞及び胸腺細胞を、ＦＡＣＳ分析用に調製し、ヒトＣＤ４５陽性細胞の存在について評価した。
【０３１１】
結果
図２１及び２２は、ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−（ＮＯＧ）マウスに移植を行う１時間前に、新鮮なヒト全臍帯血細胞をＴＡＴ−ＭＹＣで前処理することにより、マウスの末梢血中のヒトＣＤ４５細胞の発生が加速され、また、マウスの骨髄、脾臓及び胸腺中のヒトＣＤ４５細胞の長期的な生存率が増大することを示している。ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−マウスのコホートに、致死レベル未満の放射線照射を行い、次いで５×１０６個の臍帯血細胞を投与した。各コホートの半数のマウスについて、この細胞を、ＦＣＢ培地中５μｇ／ｍＬ  ＴＡＴ−ＭＹＣ及び５μｇ／ｍＬ  ＴＡＴ−Ｂｃｌ−２で前処理した（図２１のＢ；図２２のＢ、Ｄ、及びＦ）。残りの半数のマウスについては、細胞はＦＣＢ培地のみで前処理した（図２１のＡ；図２２のＡ、Ｃ、及びＥ）。
【０３１２】
図２１は、コントロールの、致死レベル未満の放射線照射を行ったＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−マウスに、ＦＣＢ培地単独で前処理を行ったヒト全臍帯血細胞の異種移植を行った場合、８週間後の末梢血中で、ＣＤ４５＋細胞が０．８９％であったことを示している（図２１のＡ）。一方、致死レベル未満の放射線照射を行ったＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−マウスに、ＦＣＢ培地中５μｇ／ｍＬ  ＴＡＴ−ＭＹＣ及び５μｇ／ｍＬ  ＴＡＴ−Ｂｃｌ−２で前処理を行ったヒト全臍帯血細胞の異種移植を行った場合、８週間後の末梢血中で、ＣＤ４５＋細胞は１５．７％であった（図２１のＢ）。
【０３１３】
図２２は、コントロールの、致死レベル未満の放射線照射を行ったＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−マウスに、ＦＣＢ培地単独で前処理を行ったヒト全臍帯血細胞の異種移植を行った場合、８週間後時点での骨髄中でＣＤ４５＋細胞が０．０４％（図２２のＡ）、脾臓中でＣＤ４５＋細胞が０．０３％（図２２のＣ）、及び胸腺中でＣＤ４５＋細胞が０．５％（図２２のＥ）であったことを示している。これに対して、致死レベル未満の放射線照射を行ったＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−マウスに、ＦＣＢ培地中５μｇ／ｍＬ  ＴＡＴ−ＭＹＣ及び５μｇ／ｍＬ  ＴＡＴ−Ｂｃｌ−２で前処理を行ったヒト全臍帯血細胞の異種移植を行った場合、８週間後時点での骨髄中でＣＤ４５＋細胞が０．３７％（図２２のＢ）、脾臓中でＣＤ４５＋細胞が２５．２％（図２２のＤ）、及び胸腺中でＣＤ４５＋細胞が５．４％（図２２のＦ）であった。
【０３１４】
他の実験として、５μｇ／ｍＬ  ＴＡＴ−ＭＹＣ及び５μｇ／ｍＬ  ＴＡＴ−Ｂｃｌ−２を使用して別々のヒト臍帯血細胞群を前処理してから異なるＮＯＧマウスのコホートに移植する。発明者らは、ＴＡＴ−ＭＹＣ及びＴＡＴ−Ｂｃｌ−２と共に別々の細胞インキュベーションを行うことで、前処理なしで同じ細胞を移植する場合よりも良好な生着及び再構築の結果が得られるものと予想する。
【０３１５】
実施例９：Ｔａｔ−Ｍｙｃ及びＴａｔ−Ｂｃｌ−２と共に培養したヒトＧ−ＣＳＦ動員化末梢血ＨＳＣによる生着の加速
自家ＨＳＣ移植のためにＧ−ＣＳＦによる動員化を行った５人の患者から瀉血した血液１ｍＬ中にＧ−ＣＳＦ動員化細胞を得た。Ｇ−ＣＳＦ試料はすべて個人識別情報を消去したため、これらの研究では細胞には更なる個人識別情報は伴わない。この細胞を、１０ｍＬのＦＣＢ培地に滴下した。細胞をＦＣＢ培地で２回洗浄し、１０ｍＬ容量中、５μｇ／ｍＬ組み換えＴａｔ−Ｍｙｃ及び５μｇ／ｍＬ組み換えＴａｔ−Ｂｃｌ−２で処理した。この細胞を１２日間培養した。
【０３１６】
細胞を、サイトカインと、Ｔａｔ−ＭＹＣ及びＴａｔ−Ｂｃｌ２を添加した培地中で、１２日間増殖させた。１２日目に、半数の細胞に、５μｇ／ｍＬ  Ｔａｔ−ＭＹＣ及び５μｇ／ｍＬ  Ｔａｔ−Ｂｃｌ２による追加処理を行った。残り半数の細胞は、ＦＣＢ培地単独のままで置かれた。この細胞を３７℃のインキュベーター中で６０分間インキュベーションした。細胞をＰＢＳで３回洗浄し、２００μＬ当たり５×１０６個の細胞となるように再懸濁した。フローサイトメトリーで生着を観察し、異種キメラマウスの末梢血中のＣＤ４５陽性細胞の存在について評価した。ＨＳＣ移植から８週間後に、最初の採血を行った。
【０３１７】
図２３のＡは、コントロールＮＳＧ（図２３のＡ）、８週間前に１×１０６個の増殖させたＧ−ＣＳＦ動員化ＨＳＣ（図２３のＢ）又は１×１０６個の増殖させたＧ−ＣＳＦ動員化ＨＳＣをＴａｔ−ＭＹＣ／Ｔａｔ−Ｂｃｌ−２で処理したもの（図２３のＣ）を移植したＮＳＧマウスから得られた末梢血のＣＤ４５＋染色のＦＡＣＳ解析を示す。末梢血で示されるように、発明者らは、ＴＡＴ−ＭＹＣ及びＴＡＴ−Ｂｃｌ−２で前処理されたＧ−ＣＳＦ動員化細胞を生着させたマウスのＢＭ、脾臓及び胸腺は、前処理なしで同じ細胞を移植した場合よりも、より良好な生着及び再構築が得られるものと予想する。
【０３１８】
実施例１０：ＴＡＴ−ＭＹＣ及びＴＡＴ−Ｂｃｌ−２で前処理したヒトＧ−ＣＳＦ動員化細胞を移植した後にＴＡＴ−ＭＹＣで処理したマウスにおける造血再構築の加速
以下の実施形態は、マウスへの移植に先立ってＴＡＴ−ＭＹＣ及びＴＡＴ−Ｂｃｌ−２でヒトＧ−ＣＳＦ動員化細胞を前処理し、次いで２４時間後にＴＡＴ−ＭＹＣでマウスを処理した場合の結果を示す。
【０３１９】
材料及び方法
自家ＨＳＣ移植のためにＧ−ＣＳＦ動員化を行った５人の患者から瀉血した血液１ｍＬ中にＧ−ＣＳＦ動員化細胞を得た。Ｇ−ＣＳＦ試料はすべて個人識別情報を消去したため、これらの研究では細胞には更なる個人識別情報は伴わない。この細胞を、１０ｍＬのＦＣＢ培地に滴下した。細胞をＦＣＢ培地で２回洗浄し、１０ｍＬ容量中５μｇ／ｍＬ組み換えＴａｔ−ＭＹＣ及び５μｇ／ｍＬ組み換えＴａｔ−Ｂｃｌ−２で処理した。この細胞を１２日間培養した。
【０３２０】
１２日目に、ＮＳＧマウスに注入する１時間前に、増殖させたＧ−ＣＳＦ動員化細胞に対し、５μｇ／ｍＬ  ＴＡＴ−ＭＹＣ及び５μｇ／ｍＬ  ＴＡＴ−Ｂｃｌ２による２回目の処理を行った。この細胞をＰＢＳで３回洗浄し、次に２００μＬ  ＰＢＳ中５×１０６個／匹の細胞を、尾静脈経由で注入した。ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−（ＮＯＧ）マウスにＨＳＣ細胞を注入する前に、マウスに１８０Ｒａｄの放射線を照射した（全身照射）。増殖されたＨＳＣを注入してから２４時間後、マウスに、コーン油中の１０μｇ  Ｔａｔ−ＭＹＣ又は１０μｇ  Ｔａｔ−ＣＲＥを筋肉注射するか、又は何も注入しなかった。８週間後、マウスから血液を採取した。
【０３２１】
フローサイトメトリーで生着を観察し、異種キメラマウスの末梢血中のＣＤ４５陽性細胞の存在について評価した。ＨＳＣ移植から８週間後に、最初の採血を行った。
【０３２２】
８週間後、マウスを安楽死させ、異種キメラＮＳＧマウスの脛骨及び大腿骨から骨髄細胞を採取する。脾臓及び胸腺も採取し、細胞を無菌ワイヤメッシュスクリーンに強制的に通過させることによって単細胞懸濁液とした。ＢＭ、脾臓及び胸腺からの赤血球を、５ｍＬ滅菌ＴＡＣ緩衝液（１３５ｍＭ  ＮＨ４ＣＬ、１７ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ  ７．６５）中で溶解し、次いでＤ１０培地で２回洗浄する。ＢＭ、脾臓細胞及び胸腺細胞を、ＦＡＣＳ分析用に調製し、ヒトＣＤ４５陽性細胞の存在について評価する。
【０３２３】
結果
データは、ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−（ＮＯＧ）マウスに移植する１時間前にＴＡＴ−ＭＹＣ及びＴＡＴ−Ｂｃｌ−２で前処理したＨＳＣを移植してから２４時間後にＴＡＴ−ＭＹＣを注入した場合、ＴＡＴ−ＣＲＥを注入したか、又はＴａｔ−融合タンパク質を注入しなかったが、ＴＡＴ−ＭＹＣ及びＴＡＴ−Ｂｃｌ−２で前処理したＨＳＣをやはり移植したコントロールマウスの場合と比べて、マウスの末梢血中のヒトＣＤ４５細胞の発生加速は見られなかったことを示している。
【０３２４】
８週間後では、末梢血中のＣＤ４５＋細胞レベルにおいて、ＴＡＴ−ＭＹＣ処理したマウスとＴＡＴ−ＣＲＥで処理したマウスとの間にデータの差は見られない。これより前又は後の時点での影響が存在するかどうか、またＢＭ、脾臓、及び胸腺において影響が存在するかどうかを決定するには、更なる研究が必要である。現時点で、これらのデータは、ＴＡＴ−ＭＹＣによる細胞の前処理が、移植後にＴＡＴ−ＭＹＣをマウスに注入した場合と同程度の効果を有しうることを示している。現在までのところ、本発明者らは、細胞を前処理することによる効果の増大、及び、処理済みの細胞を移植した後にマウスにＴａｔ−ＭＹＣを注入することによる効果の増大は観察していない。
【０３２５】
実施例１１：生物学的活性を有するＴａｔ−ＭＹＣ及びＴａｔ−Ｂｃｌ−２融合タンパク質の作製
ＨＩＶ−１  Ｔａｔタンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）とヒトＭｙｃのＯＲＦ又は構造化されていないループドメインが欠失させられたヒトＢｃｌ−２の短縮形とを有する融合タンパク質が作製されている（Ａｎｄｅｒｓｏｎ、Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）．Ｐｒｏｔ  Ｅｘｐｒ．Ｐｕｒｉｆ．１５、１６２〜７０）。この組み換えタンパク質は更に、検出及び精製を促進するためにＶ５ペプチドタグ及び６−Ｈｉｓタグをコードしている（図２４及び図２５）。
【０３２６】
ｐＴＡＴ−ＭＹＣ−Ｖ５−６ｘＨｉｓ（ＡｍｐＲ）及びｐＴＡＴ−Ｂｃｌ２Δ−Ｖ５−６ｘＨｉｓ（ＡｍｐＲ）：ＨＩＶのインフレームＴＡＴタンパク質導入ドメイン（ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ）（配列番号：５）をコードした順方向プライマーを用いて、ヒトｃＭＹＣ又はヒトＢｃｌ２をコードしたｃＤＮＡをＰＣＲ増幅することによりプラスミドを作製した。ＰＣＲ産物を、ｐＥＴ１０１／Ｄ−Ｔｏｐｏ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ベクターにクローニングした。Ｑｕｉｃｋ  Ｃｈａｎｇｅ部位特異的突然変異誘発キット（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ  ＃２００５２１−５）を使用して、構造化されていないループ（アミノ酸２７〜８０）をＢｃｌ−２のコーディング配列から除去した。
【０３２７】
タンパク質は大腸菌に合成させ、均質となるまで精製した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動及びクマシー染色を行ったところ、本研究に使用する最終産物の純度レベルが明らかになった（図１のＢ）。ｐＴＡＴ−ＭＹＣ−Ｖ５−６ｘＨｉｓをＢＬ２１−ＳＴＡＲ（ＤＥ３）細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に導入し、０．５ｍＭ  ＩＰＴＧと共に３７℃で３時間置いて、タンパク質を誘導した。この細胞を細胞溶解緩衝液（８Ｍ尿素、１００ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４、１０ｍＭ  ＴｒｉｓでｐＨ  ７．０、１０ｍＭイミダゾール、ｐＨ  ７．２）中で溶解した。この溶解物を６Ｍ尿素で希釈し、４５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４、５ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ  ７．０とした。この溶解物を、室温で１時間ベンゾナーゼ（５００単位）で処理し、１２，０００ＲＰＭで６０分間遠心して透明とし、０．２２μＭフィルターで濾過した。ＭＹＣ−Ｖ５−６ｘＨｉｓを、ＧＥ  ＡＫＴＡ  ｐｕｒｉｆｉｅｒ  １０  ＦＰＬＣを使用してニッケル親和性カラム（ＧＥ）で精製した。透析緩衝液（４５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４、５ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ  ７．０、５％グリセロール、１ｍＭ  ＤＴＴ）中に透析することにより、ＭＹＣ−Ｖ５−６ｘＨｉｓを再折り畳みさせた。精製したタンパク質をＡｃｔｉｃｌｅａｎ  Ｅｔｏｘカラム（Ｓｔｅｒｏｇｅｎ）に通すことにより、内毒素を低減させた。
【０３２８】
Ｂｃｌ２Δ−Ｖ５−６ｘＨｉｓタンパク質は、上記と同様にして誘導した。細胞を、１Ｌの誘導タンパク質当たり、５０ｍＬの透析緩衝液（２００ｍＭ  ＮａＣｌ、２００ｍＭ  ＫＣＬ、５０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４、５ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ  ７．０、５％グリセロール、１ｍＭ  ＤＴＴ）に５００単位のベンゾナーゼ、１ｍＭ  ＰＭＳＦ、２μｇ／ｍＬのロイペプチン、０．０１５単位／ｍＬのアプロチニン、５μＭの鶏卵リゾチーム（ＨＥＬ）中で溶解し、直ぐに氷浴に移し、１時間置いた。細胞を氷浴上で、２分間で２セット、超音波処理した（デューティサイクル＝５０％、出力＝５）。この溶解物を１２，０００ＲＰＭで６０分間遠心して透明とし、０．２２μＭフィルターで濾過した。Ｂｃｌ２Δ−Ｖ５−６ｘＨｉｓを、上記で述べたようにニッケル親和性カラム（ＧＥ）で精製して内毒素を除去した。
【図１】
2018095654.tif 000003
【図２】
2018095654.tif 000004
【図３】
2018095654.tif 000005
【図４】
2018095654.tif 000006
【図５】
2018095654.tif 000007
【図６】
2018095654.tif 000008
【図７】
2018095654.tif 000009
【図８】
2018095654.tif 000010
【図９】
2018095654.tif 000011
【図１０】
2018095654.tif 000012
【図１１】
2018095654.tif 000013
【図１２】
2018095654.tif 000014
【図１３】
2018095654.tif 000015
【図１４】
2018095654.tif 000016
【図１５】
2018095654.tif 000017
【図１６】
2018095654.tif 000018
【図１７】
2018095654.tif 000019
【図１８】
2018095654.tif 000020
【図１９】
2018095654.tif 000021
【図２０】
2018095654.tif 000022
【図２１】
2018095654.tif 000023
【図２２】
2018095654.tif 000024
【図２３】
2018095654.tif 000025
【図２４】
2018095654.tif 000026
【図２５】
2018095654.tif 000027
【配列表】
2018095654000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年3月2日(2018.3.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
内因性造血幹細胞の量の減少を患う被験者において造血コンパートメント再構築を増進するための組成物であって、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む、前記造血コンパートメント再構築を増進するための組成物。
【請求項２】
前記内因性造血幹細胞の量の減少が、骨髄不全症候群による減少である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記内因性造血幹細胞の量の減少が、化学療法又は放射線治療による減少である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記被験者が、がんを有する患者である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記被験者が、悪性血液疾患、骨髄腫、多発性骨髄腫、白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、リンパ腫、無痛性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、神経芽腫、網膜芽腫、シュバッハマン・ダイアモンド症候群、脳腫瘍、ユーイング肉腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、再発胚細胞腫瘍、血液疾患、異常ヘモグロビン症、自己免疫疾患、若年性特発性関節炎、全身性エリテマトーデス、重症複合免疫不全、不良な幹細胞を伴う先天性好中球減少症、重度の再生不良性貧血、鎌状赤血球症、骨髄形成異常症候群、慢性肉芽腫症、代謝障害、ハーラー症候群、ゴーシェ病、大理石骨病、乳児性悪性大理石骨病、心臓病、ＨＩＶ、又はＡＩＤＳを有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記被験者が臓器移植を受けている、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記被験者が造血幹細胞（ＨＳＣ）移植を受けている、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記ＨＳＣ移植が、自家ＨＳＣ移植又は同種ＨＳＣ移植である、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記被験者が、骨髄破壊的ＨＳＣ移植術を受けている、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記被験者が、非骨髄破壊的ＨＳＣ移植術を受けている、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ＭＹＣ組成物がＰＴＤ−ＭＹＣ融合タンパク質である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ＭＹＣ組成物がＴＡＴ−ＭＹＣ融合タンパク質である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、前記被験者の造血コンパートメント再構築を達成するために、ＨＳＣを含む第２の組成物の治療的有効量とともに投与される組成物である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物が、前記第２の組成物の投与の前、後、又は同時に投与される組成物である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物が、前記第２の組成物の投与の、少なくとも１日後に投与される組成物である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１６】
治療的有効量のＨＳＣをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
前記ＨＳＣが、投与の前に、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方の存在下で培養される、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記被験者における前記増進された造血コンパートメント自家再構築が、増進されたＴ細胞コンパートメント自家再構築、増進されたＢ細胞コンパートメント自家再構築、増進されたＮＫ細胞コンパートメント自家再構築、増進された骨髄系細胞コンパートメント自家再構築、又は好中球回復をもたらす、請求項１に記載の組成物。
【請求項１９】
前記造血コンパートメント再構築が、前記組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメント再構築に比較して促進される、請求項１に記載の組成物。
【請求項２０】
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与により、前記組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメント再構築に比べて、造血コンパートメント再構築の少なくとも５０％の促進が達成される、請求項１に記載の組成物。
【請求項２１】
前記被験者がヒト被験者である、請求項１に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３２】
本開示の他の態様は、造血コンパートメント細胞が現在減少しているか又は過去に減少していた患者に、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方を含む組成物を使用して、造血コンパートメントの自家再構築を増進することに関するものであり、ここにおいてＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−２組成物、又はこれら両方が、内因性造血幹細胞（ＨＳＣ）を誘導して、患者体内の造血コンパートメントを自家再構築させ、かつここにおいて、この組成物の使用により、この組成物の投与を受けない被験者における造血コンパートメント自家再構築に比べ、造血コンパートメント自家再構築が増進される。
[1]
造血幹細胞移植を必要としている被験者において造血コンパートメント再構築を増進する方法であって、
（ａ）ＭＹＣ組成物を含む組成物、Ｂｃｌ−2組成物を含む組成物、又はこれら両方により約13日間未満にわたって処理された造血幹細胞群を取得する工程と、
（ｂ）前記被験者に対して、被験者の該造血コンパートメントを再構築するために前記処理された造血幹細胞群の治療的有効量を投与する工程とを含み、造血コンパートメント再構築が、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物、前記Ｂｃｌ−2組成物を含む組成物、又はこれら両方で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者における造血コンパートメント再構築に比較して増進される、方法。
[2]
前記造血幹細胞群が、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物、前記Ｂｃｌ−2組成物を含む組成物、又はこれら両方によって、約12日間未満、約11日間未満、約10日間未満、約9日間未満、約8日間未満、約7日間未満、約6日間未満、約5日間未満、約4日間未満、約2日間未満、又は約1日間未満にわたって処理される、前記[1]の方法。
[3]
前記造血幹細胞群が、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物、前記Ｂｃｌ−2組成物を含む組成物、又はこれら両方によって、約24時間未満、約23時間未満、約22時間未満、約21時間未満、約20時間未満、約19時間未満、約18時間未満、約17時間未満、約16時間未満、約15時間未満、約14時間未満、約13時間未満、約12時間未満、約11時間未満、約10時間未満、約9時間未満、約8時間未満、約7時間未満、約6時間未満、約5時間未満、約4時間未満、約3時間未満、約2時間未満、又は約1時間未満にわたって処理される、前記[1]の方法。
[4]
前記造血幹細胞群が、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物、前記Ｂｃｌ−2組成物を含む組成物、又はこれら両方によって、約60分間未満、約55分間未満、約50分間未満、約45分間未満、約40分間未満、約35分間未満、約30分間未満、約29分間未満、約28分間未満、約27分間未満、約26分間未満、約25分間未満、約24分間未満、約23分間未満、約22分間未満、約21分間未満、約20分間未満、約19分間未満、約18分間未満、約17分間未満、約16分間未満、約15分間未満、約14分間未満、約13分間未満、約12分間未満、約11分間未満、又は約10分間未満にわたって処理される、前記[1]の方法。
[5]
前記造血幹細胞群が、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物で処理される、前記[1]〜[4]のいずれかの方法。
[6]
前記造血幹細胞群が、前記Ｂｃｌ−2組成物を含む組成物で処理される、前記[1]〜[4]のいずれかの方法。
[7]
前記造血幹細胞群が、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物と、前記Ｂｃｌ−2組成物を含む組成物とで処理される、前記[1]〜[4]のいずれかの方法。
[8]
前記ＭＹＣ組成物を含む組成物の治療的有効量が、少なくとも0．5μ／ｍＬ、少なくとも0．6μ／ｍＬ、少なくとも0．7μ／ｍＬ、少なくとも0．8μ／ｍＬ、少なくとも0．9μ／ｍＬ、少なくとも1μ／ｍＬ、少なくとも2μ／ｍＬ、少なくとも3μ／ｍＬ、少なくとも4μ／ｍＬ、少なくとも5μ／ｍＬ、少なくとも6μ／ｍＬ、少なくとも7μ／ｍＬ、少なくとも8μ／ｍＬ、少なくとも9μ／ｍＬ、少なくとも10μ／ｍＬ、少なくとも15μ／ｍＬ、少なくとも20μ／ｍＬ、少なくとも25μ／ｍＬ、少なくとも30μ／ｍＬ、少なくとも35μ／ｍＬ、少なくとも40μ／ｍＬ、少なくとも45μ／ｍＬ、少なくとも50μ／ｍＬ、少なくとも55μ／ｍＬ、少なくとも60μ／ｍＬ、少なくとも65μ／ｍＬ、少なくとも70μ／ｍＬ、少なくとも75μ／ｍＬ、少なくとも80μ／ｍＬ、少なくとも85μ／ｍＬ、少なくとも90μ／ｍＬ、少なくとも95μ／ｍＬ、又は少なくとも100μ／ｍＬである、前記[1]〜[4]及び[7]のいずれかの方法。
[9]
前記Ｂｃｌ−2組成物が、Ｂｃｌ−2ポリペプチド、その相同体、その類似体、又はその生物学的フラグメントを含む、前記[1]〜[4]及び[6]〜[7]のいずれかの方法。
[10]
前記Ｂｃｌ−2組成物がタンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）を含む、前記[1]〜[4]及び[6]〜[9]のいずれかの方法。
[11]
前記Ｂｃｌ−2組成物がＰＴＤ−Ｂｃｌ−2融合タンパク質である、前記[1]〜[4]及び[6]〜[10]のいずれかの方法。
[12]
前記Ｂｃｌ−2組成物がＴＡＴ−Ｂｃｌ−2融合タンパク質である、前記[1]〜[4]及び[6]〜[10]のいずれかの方法。
[13]
前記Ｂｃｌ−2組成物を含む組成物の治療的有効量が、少なくとも0．5μ／ｍＬ、少なくとも0．6μ／ｍＬ、少なくとも0．7μ／ｍＬ、少なくとも0．8μ／ｍＬ、少なくとも0．9μ／ｍＬ、少なくとも1μ／ｍＬ、少なくとも2μ／ｍＬ、少なくとも3μ／ｍＬ、少なくとも4μ／ｍＬ、少なくとも5μ／ｍＬ、少なくとも6μ／ｍＬ、少なくとも7μ／ｍＬ、少なくとも8μ／ｍＬ、少なくとも9μ／ｍＬ、少なくとも10μ／ｍＬ、少なくとも15μ／ｍＬ、少なくとも20μ／ｍＬ、少なくとも25μ／ｍＬ、少なくとも30μ／ｍＬ、少なくとも35μ／ｍＬ、少なくとも40μ／ｍＬ、少なくとも45μ／ｍＬ、少なくとも50μ／ｍＬ、少なくとも55μ／ｍＬ、少なくとも60μ／ｍＬ、少なくとも65μ／ｍＬ、少なくとも70μ／ｍＬ、少なくとも75μ／ｍＬ、少なくとも80μ／ｍＬ、少なくとも85μ／ｍＬ、少なくとも90μ／ｍＬ、少なくとも95μ／ｍＬ、又は少なくとも100μ／ｍＬである、前記[1]〜[4]及び[6]〜[12]のいずれかの方法。
[14]
前記ＭＹＣ組成物を含む組成物が更に製薬的に許容される担体を含む、前記[1]〜[13]のいずれかの方法。
[15]
前記造血幹細胞群が、前記必要としている被験者に投与される前に洗浄される、前記[1]〜[14]のいずれかの方法。
[16]
前記造血幹細胞群が、該造血幹細胞群の洗浄なしで前記必要としている被験者に投与される、前記[1]〜[14]のいずれかの方法。
[17]
前記被験者が、悪性血液疾患、骨髄腫、多発性骨髄腫、白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、リンパ腫、無痛性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、神経芽腫、網膜芽腫、シュバッハマン・ダイアモンド症候群、脳腫瘍、ユーイング肉腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、再発胚細胞腫瘍、血液疾患、異常ヘモグロビン症、自己免疫疾患、若年性特発性関節炎、全身性エリテマトーデス、重症複合免疫不全、不良な幹細胞を伴う先天性好中球減少症、重度の再生不良性貧血、鎌状赤血球症、骨髄形成異常症候群、慢性肉芽腫症、代謝障害、ハーラー症候群、ゴーシェ病、大理石骨病、乳児性悪性大理石骨病、心臓病、ＨＩＶ、又はＡＩＤＳを現在有するか又は過去に有していた、前記[1]〜[16]のいずれかの方法。
[18]
前記被験者が臓器移植を受けている、前記[1]〜[16]のいずれかの方法。
[19]
前記造血幹細胞群が、骨髄、末梢血細胞、アフェレーシスを行った末梢血細胞、白血球分離を行った末梢血細胞、臍帯血、羊水、培養ＨＳＣ細胞、不死化ＨＳＣ細胞株、又は条件的不死化ＨＳＣ細胞株から取得されたものである、前記[1]〜[18]のいずれかの方法。
[20]
処理された造血幹細胞群が、造血幹細胞（ＨＳＣ）移植術の一工程として投与される、前記[1]〜[19]のいずれかの方法。
[21]
前記ＨＳＣ移植術が骨髄破壊的ＨＳＣ移植術である、前記[20]の方法。
[22]
前記ＨＳＣ移植術が非骨髄破壊的ＨＳＣ移植術である、前記[20]の方法。
[23]
ＨＳＣ移植が、自家ＨＳＣ移植又は同種ＨＳＣ移植である、前記[20]〜[22]のいずれかの方法。
[24]
処理された造血幹細胞群の投与が、前記被験者におけるＨＳＣ移植後の造血コンパートメント再構築を加速する、前記[1]〜[23]のいずれかの方法。
[25]
処理された造血幹細胞群の投与によって、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物、前記Ｂｃｌ−2組成物を含む組成物、又はこれら両方を含む組成物で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者における造血コンパートメント再構築に比べて、造血コンパートメント再構築の少なくとも50％の加速が達成される、前記[24]の方法。
[26]
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物、前記Ｂｃｌ−2組成物を含む組成物、又はこれら両方を含む組成物で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者におけるＴ細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも50％加速されたＴ細胞コンパートメント再構築がもたらされる、前記[24]又は[25]の方法。
[27]
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物、前記Ｂｃｌ−2組成物を含む組成物、又はこれら両方を含む組成物で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者におけるＢ細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも50％加速されたＢ細胞コンパートメント再構築がもたらされる、前記[24]〜[26]のいずれかの方法。
[28]
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物、前記Ｂｃｌ−2組成物を含む組成物、又はこれら両方を含む組成物で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者におけるＮＫ細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも50％加速されたＮＫ細胞コンパートメント再構築がもたらされる、前記[24]〜[27]のいずれかの方法。
[29]
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物、前記Ｂｃｌ−2組成物を含む組成物、又はこれら両方を含む組成物で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者における骨髄系細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも50％加速された骨髄系細胞コンパートメント再構築がもたらされる、前記[24]〜[28]のいずれかの方法。
[30]
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物、前記Ｂｃｌ−2組成物を含む組成物、又はこれら両方を含む組成物で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者における好中球回復に比べて、少なくとも50％加速された好中球回復がもたらされる、前記[24]〜[29]のいずれかの方法。
[31]
前記ＭＹＣ組成物を含む組成物の投与によって、前記ＭＹＣ組成物を含む組成物、前記Ｂｃｌ−2組成物を含む組成物、又はこれら両方を含む組成物で処理されていない造血幹細胞群を投与された被験者に比べて、前記被験者の骨髄ニッチに生産的に定着するＨＳＣの50％の増加がもたらされる、前記[24]〜[30]のいずれかの方法。
[32]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方、及び所望により少なくとも1つのサイトカイン、増殖因子、抗体、及び／又は小分子調節因子を含む第3の組成物を投与することを更に含む、前記[1]〜[31]のいずれかの方法。
[33]
前記第3の組成物が更に製薬的に許容される担体を含む、前記[32]の方法。
[34]
前記造血幹細胞群が、ヒト造血幹細胞群である、前記[1]〜[33]のいずれかの方法。
[35]
被験者の造血コンパートメント細胞形成を増進する方法であって、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の治療的有効量を、必要としている被験者に投与する工程を含み、造血コンパートメント形成が、前記組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメント形成に比べて増進される、方法。
[36]
前記組成物がＭＹＣ組成物を含む、前記[35]の方法。
[37]
前記組成物がＢｃｌ−2組成物を含む、前記[35]の方法。
[38]
前記組成物がＭＹＣ組成物及びＢｃｌ−2組成物を含む、前記[35]の方法。
[39]
前記Ｂｃｌ−2組成物が、Ｂｃｌ−2ポリペプチド、その相同体、その類似体、又はその生物学的フラグメントを含む、前記[35]又は[37]〜[38]のいずれかの方法。
[40]
前記Ｂｃｌ−2組成物がタンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）を含む、前記[35]又は[37]〜[39]のいずれかの方法。
[41]
前記Ｂｃｌ−2組成物がＰＴＤ−Ｂｃｌ−2融合タンパク質である、前記[35]又は[37]〜[38]のいずれかの方法。
[42]
前記Ｂｃｌ−2組成物がＴＡＴ−Ｂｃｌ−2融合タンパク質である、前記[35]又は[37]〜[41]のいずれかの方法。
[43]
前記ＭＹＣ組成物が、ＭＹＣポリペプチド、その相同体、その類似体、又はその生物学的フラグメントを含む、前記[1]〜[5]、[7]、及び[15]〜[35]のいずれかの方法。
[44]
前記ＭＹＣ組成物がタンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）を含む、前記[1]〜[5]、[7]、[15]〜[36]、及び[38]のいずれかの方法。
[45]
前記ＭＹＣ組成物がＰＴＤ−ＭＹＣ融合タンパク質である、前記[1]〜[5]、[7]、[15]〜[36]、[38]、及び[44]のいずれかの方法。
[46]
前記ＭＹＣ組成物がＴＡＴ−ＭＹＣ融合タンパク質である、前記[1]〜[5]、[7]、[15]〜[36]、[38]、及び[44]〜[45]のいずれかの方法。
[47]
前記被験者が造血幹細胞（ＨＳＣ）移植を現在必要としているか又は過去に必要としていた、前記[35]〜[46]のいずれかの方法。
[48]
前記被験者が、悪性血液疾患、骨髄腫、多発性骨髄腫、白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、リンパ腫、無痛性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、神経芽腫、網膜芽腫、シュバッハマン・ダイアモンド症候群、脳腫瘍、ユーイング肉腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、再発胚細胞腫瘍、血液疾患、異常ヘモグロビン症、自己免疫疾患、若年性特発性関節炎、全身性エリテマトーデス、重症複合免疫不全、不良な幹細胞を伴う先天性好中球減少症、重度の再生不良性貧血、鎌状赤血球症、骨髄形成異常症候群、慢性肉芽腫症、代謝障害、ハーラー症候群、ゴーシェ病、大理石骨病、乳児性悪性大理石骨病、心臓病、ＨＩＶ、又はＡＩＤＳを現在有するか又は過去に有していた、前記[47]の方法。
[49]
前記被験者が臓器移植を受けている、前記[47]の方法。
[50]
前記被験者の造血コンパートメント再構築を達成するために、ＨＳＣを含む第2の組成物の治療的有効量を投与することを更に含む、前記[47]〜[49]のいずれかの方法。
[51]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物が、前記第2の組成物の投与の前、後、又は同時に投与される、前記[50]の方法。
[52]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物が、前記第2の組成物の投与よりも、少なくとも5日、少なくとも4日、少なくとも3日、少なくとも2日、又は少なくとも1日前に投与される、前記[51]の方法。
[53]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物が、前記第2の組成物の投与と同時に投与される、前記[51]の方法。
[54]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物が、前記第2の組成物の投与の、少なくとも1日、少なくとも2日、少なくとも3日、少なくとも4日、少なくとも5日、少なくとも6日、少なくとも1週間、少なくとも2週間、又は少なくとも3週間後に投与される、前記[51]の方法。
[55]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与によって、前記第2の組成物に含まれるＨＳＣの増殖がもたらされる、前記[53]又は[54]のいずれかの方法。
[56]
前記ＨＳＣを含む第2の組成物が、第2の組成物の投与前に、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方の存在下で培養される、前記[50]〜[55]のいずれかの方法。
[57]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方の存在下で前記第2の組成物を培養することにより、前記ＨＳＣが条件的に不死化される、前記[56]の方法。
[58]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方の存在下で前記第2の組成物を培養することにより、前記ＨＳＣの増殖がもたらされる、前記[56]の方法。
[59]
投与される際の前記第2の組成物が、前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方の存在下で培養した結果として、前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む、前記[56]〜[58]のいずれかの方法。
[60]
前記ＨＳＣが、骨髄、末梢血細胞、アフェレーシスを行った末梢血細胞、白血球分離を行った末梢血細胞、臍帯血、羊水、培養ＨＳＣ細胞、不死化ＨＳＣ細胞株、又は条件的不死化ＨＳＣ細胞株から取得されたものである、前記[50]〜[59]のいずれかの方法。
[61]
前記第2の組成物が、ＨＳＣ移植術の一工程として投与される、前記[50]〜[60]のいずれかの方法。
[62]
前記ＨＳＣ移植術が骨髄破壊的ＨＳＣ移植術である、前記[61]の方法。
[63]
前記ＨＳＣ移植術が非骨髄破壊的ＨＳＣ移植術である、前記[61]の方法。
[64]
ＨＳＣ移植が、自家ＨＳＣ移植又は同種ＨＳＣ移植である、前記[50]〜[63]のいずれかの方法。
[65]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与によって、前記被験者のＨＳＣ移植後の造血コンパートメント再構築が加速される、前記[50]〜[64]のいずれかの方法。
[66]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与により、前記組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメント再構築に比べて、造血コンパートメント再構築の少なくとも50％の加速が達成される、前記[65]の方法。
[67]
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記組成物を投与されていない被験者におけるＴ細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも50％加速されたＴ細胞コンパートメント再構築がもたらされる、前記[65]又は[66]の方法。
[68]
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記組成物を投与されていない被験者におけるＢ細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも50％加速されたＢ細胞コンパートメント再構築がもたらされる、前記[65]〜[67]のいずれかの方法。
[69]
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記組成物を投与されていない被験者におけるＮＫ細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも50％加速されたＮＫ細胞コンパートメント再構築がもたらされる、前記[65]〜[68]のいずれかの方法。
[70]
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記組成物を投与されていない被験者における骨髄系細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも50％加速された骨髄系細胞コンパートメント再構築がもたらされる、前記[65]〜[69]のいずれかの方法。
[71]
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記組成物を投与されていない被験者における好中球回復に比べて、少なくとも50％加速された好中球回復がもたらされる、前記[65]〜[70]のいずれかの方法。
[72]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物を投与することにより、前記被験者の骨髄ニッチに生産的に定着するＨＳＣの50％の増加がもたらされる、前記[65]〜[71]のいずれかの方法。
[73]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物を投与した場合に、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物を投与しなかった場合に必要とされる量に比べて、前記被験者に投与される前記第2の組成物の治療的有効量が少なくなる、前記[65]〜[72]のいずれかの方法。
[74]
少なくとも1つのサイトカイン、増殖因子、抗体、及び／又は小分子調節因子を含む第3の組成物を投与することを更に含む、前記[65]〜[73]のいずれかの方法。
[75]
前記第3の組成物が更に製薬的に許容される担体を含む、前記[74]の方法。
[76]
前記第2の組成物に含まれる前記ＨＳＣがヒトＨＳＣである、前記[65]〜[75]のいずれかの方法。
[77]
前記被験者が造血コンパートメント自家再構築を現在必要としているか又は過去に必要としていた、前記[35]〜[46]のいずれかの方法。
[78]
前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方が、内因性造血幹細胞（ＨＳＣ）を誘導して、前記被験者の前記造血コンパートメントを自家再構築させる、前記[77]の方法。
[79]
前記造血コンパートメントの自家再構築が、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む前記組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメントの自家再構築に比べて増進される、前記[77]又は[78]の方法。
[80]
前記被験者における前記増進された造血コンパートメント自家再構築が、増進されたＴ細胞コンパートメント自家再構築、増進されたＢ細胞コンパートメント自家再構築、増進されたＮＫ細胞コンパートメント自家再構築、増進された骨髄系細胞コンパートメント自家再構築、又は好中球回復をもたらす、前記[77]〜[79]のいずれかの方法。
[81]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、内因性ＨＳＣの増殖をもたらす、前記[77]〜[80]のいずれかの方法。
[82]
前記被験者が化学療法を現在受けているか又は過去に受けている、前記[77]〜[81]のいずれかの方法。
[83]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記化学療法による造血コンパートメントの減少を防止する、前記[82]の方法。
[84]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記化学療法による内因性ＨＳＣの量の減少を防止する、前記[82]又は[83]の方法。
[85]
前記被験者が放射線治療を現在受けているか又は受けていた、前記[77]〜[81]のいずれかの方法。
[86]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記放射線治療による造血コンパートメントの減少を防止する、前記[85]の方法。
[87]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記放射線治療による内因性ＨＳＣの量の減少を防止する、前記[85]又は[86]の方法。
[88]
前記被験者が骨髄不全症候群を有している、前記[77]〜[87]のいずれかの方法。
[89]
前記骨髄不全症候群が再生不良性貧血又は湾岸戦争症候群である、前記[88]の方法。
[90]
前記骨髄不全症候群が遺伝性骨髄不全症候群（ＩＢＭＦＳ）である、前記[88]の方法。
[91]
前記ＩＢＭＦＳが、無巨核球性血小板減少症、ダイアモンド・ブラックファン貧血、先天性角化不全症、ファンコーニ貧血、ピアソン症候群、重度の先天性好中球減少症、シュバッハマン・ダイアモンド症候群、及び血小板減少性橈骨欠損、ＩＶＩＣ症候群、ＷＴ症候群、橈尺骨癒合症、及び運動失調−汎血球減少症から選択される、前記[90]の方法。
[92]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記骨髄不全症候群による造血コンパートメント細胞の減少を防止する、前記[88]〜[91]のいずれかの方法。
[93]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記骨髄不全症候群による内因性ＨＳＣの減少を防止する、前記[88]〜[92]のいずれかの方法。
[94]
前記ＭＹＣ組成物を含む組成物の治療的有効量が、少なくとも0．1ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．2ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．3ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．4ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．5ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．6ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．7ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．8ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．9ｍｇ／ｋｇ、少なくとも1ｍｇ／ｋｇ、少なくとも2ｍｇ／ｋｇ、少なくとも3ｍｇ／ｋｇ、少なくとも4ｍｇ／ｋｇ、少なくとも5ｍｇ／ｋｇ、少なくとも6ｍｇ／ｋｇ、少なくとも7ｍｇ／ｋｇ、少なくとも8ｍｇ／ｋｇ、少なくとも9ｍｇ／ｋｇ、少なくとも10ｍｇ／ｋｇ、少なくとも20ｍｇ／ｋｇ、少なくとも30ｍｇ／ｋｇ、少なくとも40ｍｇ／ｋｇ、又は少なくとも50ｍｇ／ｋｇである、前記[35]〜[93]のいずれかの方法。
[95]
前記Ｂｃｌ−2組成物を含む組成物の治療的有効量が、少なくとも0．1ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．2ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．3ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．4ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．5ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．6ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．7ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．8ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．9ｍｇ／ｋｇ、少なくとも1ｍｇ／ｋｇ、少なくとも2ｍｇ／ｋｇ、少なくとも3ｍｇ／ｋｇ、少なくとも4ｍｇ／ｋｇ、少なくとも5ｍｇ／ｋｇ、少なくとも6ｍｇ／ｋｇ、少なくとも7ｍｇ／ｋｇ、少なくとも8ｍｇ／ｋｇ、少なくとも9ｍｇ／ｋｇ、少なくとも10ｍｇ／ｋｇ、少なくとも20ｍｇ／ｋｇ、少なくとも30ｍｇ／ｋｇ、少なくとも40ｍｇ／ｋｇ、又は少なくとも50ｍｇ／ｋｇである、前記[35]〜[94]のいずれかの方法。
[96]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物が更に製薬的に許容される担体を含む、前記[35]〜[95]のいずれかの方法。
[97]
前記被験者がヒト患者である、前記[1]〜[97]のいずれかの方法。
[98]
前記被験者が非ヒト動物である、前記[1]〜[98]のいずれかの方法。
[99]
被験者に造血幹細胞（ＨＳＣ）を移植した後の造血コンパートメント再構築を加速する方法であって、
ａ）ＨＳＣを含む第1の組成物の治療的有効量を投与して、必要としている被験者の造血コンパートメント再構築を達成する工程と、
ｂ）ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む第2の組成物を、前記被験者に投与する工程と、
を含み、前記第2の組成物を投与することによって、第2の組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメント再構築に比べて、造血コンパートメント再構築の少なくとも50％の加速が達成される、方法。
[100]
被験者の造血コンパートメントの自家再構築を増進する方法であって、造血コンパートメントの自家再構築を必要としている被験者に、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の治療的有効量を投与する工程を含み、
前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方が、内因性造血幹細胞（ＨＳＣ）を誘導して、前記被験者の造血コンパートメントを自家再構築させ、
造血コンパートメントの自家再構築が、前記組成物を投与されていない被験者の造血コンパートメントの自家再構築に比べて増進される、方法。
[101]
化学療法による造血コンパートメント細胞の減少を治療する方法であって、化学療法を現在受けているか又は過去に受けている被験者に対し、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の治療的有効量を投与する工程を含み、前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方が、内因性造血幹細胞（ＨＳＣ）を誘導して前記被験者の造血コンパートメントを自家再構築させる、方法。
[102]
放射線治療による造血コンパートメント細胞の減少を治療する方法であって、放射線治療を現在受けているか又は過去に受けている被験者に対し、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の治療的有効量を投与する工程を含み、前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方が、内因性造血幹細胞（ＨＳＣ）を誘導して前記被験者の造血コンパートメントを自家再構築させる、方法。
[103]
骨髄不全症候群を治療する方法であって、骨髄不全症候群を有する被験者に対し、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の治療的有効量を投与する工程を含み、前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方が、内因性造血幹細胞（ＨＳＣ）を誘導して前記被験者の該造血コンパートメントを自家再構築させる、方法。
[104]
造血コンパートメント細胞形成を現在必要とするか又は必要としていた被験者において、造血コンパートメント細胞形成を増進するための、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の使用であって、前記組成物の使用が、組成物を投与されていない患者における造血コンパートメント形成に比べて、造血コンパートメント形成を増進させる、使用。
[105]
前記被験者が造血幹細胞（ＨＳＣ）移植を現在必要とするか又は必要としていた、前記[104]の使用。
[106]
前記被験者が、悪性血液疾患、骨髄腫、多発性骨髄腫、白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、リンパ腫、無痛性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、神経芽腫、網膜芽腫、シュバッハマン・ダイアモンド症候群、脳腫瘍、ユーイング肉腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、再発胚細胞腫瘍、血液疾患、異常ヘモグロビン症、自己免疫疾患、若年性特発性関節炎、全身性エリテマトーデス、重症複合免疫不全、不良な幹細胞を伴う先天性好中球減少症、重度の再生不良性貧血、鎌状赤血球症、骨髄形成異常症候群、慢性肉芽腫症、代謝障害、ハーラー症候群、ゴーシェ病、大理石骨病、乳児性悪性大理石骨病、心臓病、ＨＩＶ、又はＡＩＤＳを現在有するか又は過去に有していた、前記[105]の使用。
[107]
前記被験者が臓器移植を受けている、前記[105]の使用。
[108]
前記被験者がＨＳＣ移植を現在受けているか、又はすでに受けている、前記[105]〜[107]の使用。
[109]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物が、前記ＨＳＣ移植の前、後、又は同時に投与される、前記[108]の使用。
[110]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物が、前記ＨＳＣ移植よりも、少なくとも5日、少なくとも4日、少なくとも3日、少なくとも2日、又は少なくとも1日前に、投与される、前記[109]の使用。
[111]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物が、前記ＨＳＣ移植と同時に投与される、前記[109]の使用。
[112]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物が、前記ＨＳＣ移植の、少なくとも1日、少なくとも2日、少なくとも3日、少なくとも4日、少なくとも5日、少なくとも6日、少なくとも1週間、少なくとも2週間、又は少なくとも3週間後に投与される、前記[109]の使用。
[113]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与によって、移植されたＨＳＣの増殖がもたらされる、前記[111]又は[112]の使用。
[114]
移植されたＨＳＣが、ＨＳＣ移植の前に、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方の存在下で培養される、前記[108]〜[113]のいずれかの使用。
[115]
前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方の存在下で前記ＨＳＣを培養することにより、前記ＨＳＣが条件的に不死化される、前記[114]の使用。
[116]
前記ＨＳＣの不死化により、ＨＳＣの増殖がもたらされる、前記[115]の使用。
[117]
前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方の存在下で培養された結果として、移植されたＨＳＣが、前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む、前記[114]〜[116]のいずれかの使用。
[118]
移植されたＨＳＣが、骨髄、末梢血細胞、アフェレーシスを行った末梢血細胞、白血球分離を行った末梢血細胞、臍帯血、羊水、培養ＨＳＣ細胞、不死化ＨＳＣ細胞株、又は条件的不死化ＨＳＣ細胞株から取得されたものである、前記[108]〜[117]のいずれかの使用。
[119]
ＨＳＣ移植術が、骨髄破壊的ＨＳＣ移植術である、前記[108]〜[118]のいずれかの使用。
[120]
ＨＳＣ移植術が、非骨髄破壊的ＨＳＣ移植術である、前記[108]〜[118]のいずれかの使用。
[121]
ＨＳＣ移植術が、自家ＨＳＣ移植術である、前記[108]〜[119]のいずれかの使用。
[122]
ＨＳＣ移植術が、同種ＨＳＣ移植術である、前記[108]〜[119]のいずれかの使用。
[123]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与によって、前記被験者のＨＳＣ移植後の造血コンパートメント再構築が加速される、前記[108]〜[122]のいずれかの使用。
[124]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与により、前記組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメント再構築に比べて、造血コンパートメント再構築の少なくとも50％の加速が達成される、前記[123]の使用。
[125]
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記組成物を投与されていない被験者におけるＴ細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも50％加速されたＴ細胞コンパートメント再構築がもたらされる、前記[123]又は[124]の使用。
[126]
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記組成物を投与されていない被験者におけるＢ細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも50％加速されたＢ細胞コンパートメント再構築がもたらされる、前記[123]〜[125]のいずれかの使用。
[127]
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記組成物を投与されていない被験者におけるＮＫ細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも50％加速されたＮＫ細胞コンパートメント再構築がもたらされる、前記[123]〜[126]のいずれかの使用。
[128]
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記組成物を投与されていない被験者における骨髄系細胞コンパートメント再構築に比べて、少なくとも50％加速された骨髄系細胞コンパートメント再構築がもたらされる、前記[123]〜[127]のいずれかの使用。
[129]
前記被験者における加速された造血コンパートメント再構築の結果として、前記組成物を投与されていない被験者における好中球回復に比べて、少なくとも50％加速された好中球回復がもたらされる、前記[123]〜[128]のいずれかの使用。
[130]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む前記組成物を投与することにより、前記被験者の骨髄ニッチに生産的に定着するＨＳＣの50％の増加がもたらされる、前記[123]〜[129]のいずれかの使用。
[131]
少なくとも1つのサイトカイン、増殖因子、抗体、及び／又は小分子調節因子を含む第2の組成物を投与することを更に含む、前記[123]〜[130]のいずれかの使用。
[132]
第3の組成物が更に製薬的に許容される担体を含む、前記[131]の使用。
[133]
移植されるＨＳＣがヒトＨＳＣである、前記[108]〜[132]のいずれかの使用。
[134]
前記被験者が造血コンパートメントの自家再構築を現在必要とするか又は必要としていた、前記[104]の使用。
[135]
前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方が、内因性造血幹細胞（ＨＳＣ）を誘導して、前記被験者の前記造血コンパートメントを自家再構築させる、前記[134]の使用。
[136]
前記造血コンパートメントの自家再構築が、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物を投与されていない被験者における造血コンパートメントの自家再構築に比べて増進される、前記[134]又は[135]の使用。
[137]
前記被験者における増進された造血コンパートメント自家再構築が、増進されたＴ細胞コンパートメント自家再構築、増進されたＢ細胞コンパートメント自家再構築、増進されたＮＫ細胞コンパートメント自家再構築、増進された骨髄系細胞コンパートメント自家再構築、又は好中球回復をもたらす、前記[134]〜[136]のいずれかの使用。
[138]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、内因性ＨＳＣの増殖をもたらす、前記[134]〜[137]のいずれかの使用。
[139]
前記被験者が化学療法を現在受けているか又はすでに受けている、前記[134]〜[138]のいずれかの使用。
[140]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記化学療法による造血コンパートメントの減少を防止する、前記[139]の使用。
[141]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記化学療法による内因性ＨＳＣの量の減少を防止する、前記[139]又は[140]の使用。
[142]
前記被験者が放射線治療を現在受けているか又は受けていた、前記[134]〜[138]のいずれかの使用。
[143]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記放射線治療による造血コンパートメントの減少を防止する、前記[142]の使用。
[144]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記放射線治療による内因性ＨＳＣの量の減少を防止する、前記[142]又は[143]の使用。
[145]
前記被験者が骨髄不全症候群を有している、前記[134]〜[144]のいずれかの使用。
[146]
前記骨髄不全症候群が再生不良性貧血又は湾岸戦争症候群である、前記[145]の使用。
[147]
前記骨髄不全症候群が遺伝性骨髄不全症候群（ＩＢＭＦＳ）である、前記[146]の使用。
[148]
前記ＩＢＭＦＳが、無巨核球性血小板減少症、ダイアモンド・ブラックファン貧血、先天性角化不全症、ファンコーニ貧血、ピアソン症候群、重度の先天性好中球減少症、シュバッハマン・ダイアモンド症候群、及び血小板減少性橈骨欠損、ＩＶＩＣ症候群、ＷＴ症候群、橈尺骨癒合症、及び運動失調−汎血球減少症から選択される、前記[147]の使用。
[149]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記骨髄不全症候群による造血コンパートメント細胞の減少を防止する、前記[145]〜[148]のいずれかの使用。
[150]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の投与が、前記骨髄不全症候群による内因性ＨＳＣの減少を防止する、前記[145]〜[149]のいずれかの使用。
[151]
前記ＭＹＣ組成物がＴＡＴ−ＭＹＣである、前記[104]〜[150]のいずれかの使用。
[152]
前記ＭＹＣ組成物を含む組成物の治療的有効量が、少なくとも0．1ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．2ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．3ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．4ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．5ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．6ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．7ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．8ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．9ｍｇ／ｋｇ、少なくとも1ｍｇ／ｋｇ、少なくとも2ｍｇ／ｋｇ、少なくとも3ｍｇ／ｋｇ、少なくとも4ｍｇ／ｋｇ、少なくとも5ｍｇ／ｋｇ、少なくとも6ｍｇ／ｋｇ、少なくとも7ｍｇ／ｋｇ、少なくとも8ｍｇ／ｋｇ、少なくとも9ｍｇ／ｋｇ、少なくとも10ｍｇ／ｋｇ、少なくとも20ｍｇ／ｋｇ、少なくとも30ｍｇ／ｋｇ、少なくとも40ｍｇ／ｋｇ、又は少なくとも50ｍｇ／ｋｇである、前記[104]〜[151]のいずれかの使用。
[153]
前記Ｂｃｌ−2組成物がＴＡＴ−Ｂｃｌ−2である、前記[104]〜[152]のいずれかの使用。
[154]
前記Ｂｃｌ−2組成物を含む組成物の治療的有効量が、少なくとも0．1ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．2ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．3ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．4ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．5ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．6ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．7ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．8ｍｇ／ｋｇ、少なくとも0．9ｍｇ／ｋｇ、少なくとも1ｍｇ／ｋｇ、少なくとも2ｍｇ／ｋｇ、少なくとも3ｍｇ／ｋｇ、少なくとも4ｍｇ／ｋｇ、少なくとも5ｍｇ／ｋｇ、少なくとも6ｍｇ／ｋｇ、少なくとも7ｍｇ／ｋｇ、少なくとも8ｍｇ／ｋｇ、少なくとも9ｍｇ／ｋｇ、少なくとも10ｍｇ／ｋｇ、少なくとも20ｍｇ／ｋｇ、少なくとも30ｍｇ／ｋｇ、少なくとも40ｍｇ／ｋｇ、又は少なくとも50ｍｇ／ｋｇである、前記[104]〜[151]のいずれかの使用。
[155]
ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物が更に製薬的に許容される担体を含む、前記[104]〜[154]のいずれかの使用。
[156]
前記被験者がヒト患者である、前記[104]〜[155]のいずれかの使用。
[157]
前記被験者が非ヒト動物である、前記[104]〜[155]のいずれかの使用。
[158]
造血幹細胞（ＨＳＣ）の移植を受けたか又は受ける予定の患者での、造血コンパートメント再構築を加速させるための、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の使用であって、前記組成物の使用により、組成物の投与を受けない被験者における造血コンパートメント再構築に比べ、造血コンパートメント再構築の少なくとも50％の加速が達成される、使用。
[159]
造血コンパートメント細胞が現在減少しているか又は過去に減少していた患者での、造血コンパートメントの自家再構築を増進するための、ＭＹＣ組成物、Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方を含む組成物の使用であって、前記ＭＹＣ組成物、前記Ｂｃｌ−2組成物、又はこれら両方が、内因性造血幹細胞（ＨＳＣ）を誘導して、患者の造血コンパートメントを自家再構築させ、前記組成物の使用により、組成物の投与を受けない被験者における造血コンパートメント自家再構築に比べ、造血コンパートメント自家再構築が増進される、使用。