(57)【要約】生きた細胞培養物に流体を暴露する装置に関し、この装置は、複数の細胞培養室に共通な媒体室と媒体案内手段を有する。媒体室、細胞培養室および媒体案内手段は、細胞培養室で実質的に同時に媒体交換を行えるように配置されている。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
底部と、頂部と、流体流入手段と、媒体流入手段と、媒体流出手段と、媒体室と複数の細胞培養室とからなる生きた細胞に流体を暴露するための装置であって、前記媒体室がすべての細胞培養室に共通であることを特徴とする暴露装置。
【請求項２】
前記媒体室が媒体案内手段を有することを特徴とする請求項１記載の暴露装置。
【請求項３】
前記媒体案内手段が前記暴露装置の底部の隆起した領域から形成さていることを特徴とする請求項２記載の暴露装置。
【請求項４】
前記媒体案内手段が媒体室内の形成された島であり、その周囲を栄養液が流れることを特徴とする請求項２または３記載の暴露装置。
【請求項５】
前記媒体案内手段が前記媒体室の内の中央に位置することを特徴とする請求項２乃至４いずれか１項記載の暴露装置。
【請求項６】
前記媒体案内手段が前記各細胞培養室から等距離に位置していることを特徴とする請求項２乃至５いずれか１項記載の暴露装置。
【請求項７】
前記暴露装置が３つの細胞培養室を含むことを特徴とする先行請求項いずれか１項記載の暴露装置。
【請求項８】
前記細胞培養室の底部が、間隙によって前記暴露装置の底部から間隔を置いて位置し、作動時に栄養液が前記媒体室内で各細胞培養室の下を自由に流れることを特徴とする先行請求項いずれか１項に記載の暴露装置。
【請求項９】
前記間隙が少なくとも１ｍｍであることを特徴とする請求項８記載の暴露装置。
【請求項１０】
前記間隙が少なくとも２ｍｍ以上であることを特徴とする請求項８または９記載の暴露装置。
【請求項１１】
前記媒体流入手段が前記暴露装置の底部に位置し、作動時に媒体が前記媒体室に自由に流れることを特徴とする先行請求項いずれか１項に記載の暴露装置。
【請求項１２】
前記媒体流入手段が前記暴露装置の底部の側壁に位置していることを特徴とする請求項１１記載の暴露装置。
【請求項１３】
前記媒体流入手段が前記暴露装置の底部の底壁に位置していることを特徴とする請求項１１記載の暴露装置。
【請求項１４】
前記媒体流入手段がパイプまたは管であることを特徴とする先行請求項いずれか１項に記載の暴露装置。
【請求項１５】
前記媒体流出手段が前記媒体流入手段から離れていることを特徴とする先行請求項いずれか１項に記載の暴露装置。
【請求項１６】
前記媒体流出手段がすべての細胞培養室および／または前記媒体案内手段によって前記媒体流入手段から離れて位置していることを特徴とする請求項１５記載の暴露装置。
【請求項１７】
前記媒体流出手段が暴露装置の頂部から栄養液を取り除くことができるように作動することを特徴とする先行請求項いずれか１項に記載の暴露装置。
【請求項１８】
前記媒体流出手段が前記暴露装置の頂部から前記媒体室内へと延びていることを特徴とする請求項１７記載の暴露装置。
【請求項１９】
前記媒体流出手段が２つの流出手段を含むことを特徴とする先行請求項いずれか１項に記載の暴露装置。
【請求項２０】
前記媒体流出手段の１つが細胞培養物の底部に媒体を供給するように位置し、もう一方の媒体流出が細胞培養物を完全に媒体で浸すように位置していることを特徴とする請求項１９記載の暴露装置。
【請求項２１】
前記媒体流出手段がパイプまたは管であることを特徴とする先行請求項いずれか１項に記載の暴露装置。
【請求項２２】
前記媒体流出手段が係止手段によって暴露装置内に係止されていることを特徴とする請求項２１記載の暴露装置。
【請求項２３】
前記係止手段が、中央に孔を有するネジであることを特徴とする請求項２２記載の暴露装置。
【請求項２４】
前記係止手段が前記媒体流出管の位置を調整することができる摩擦係止手段であることを特徴とする請求項２２記載の暴露装置。
【請求項２５】
前記媒体流出手段が第１ポンプに取り付けられ、前記媒体流入手段が第２ポンプに取り付けられていることを特徴とする先行請求項いずれか１項に記載の暴露装置。
【請求項２６】
作動時に前記第１ポンプ手段が制御可能な第１汲み上げ速度を有し、前記第２ポンプ手段が制御可能な第２汲み上げ速度を有し、前記第１汲み上げ速度が少なくとも前記第２汲み上げ速度に等しいことを特徴とする請求項２５記載の暴露装置。
【請求項２７】
前記第１汲み上げ速度が前記第２汲み上げ速度を超えることを特徴とする請求項２６記載の暴露装置。
【請求項２８】
前記暴露装置がさらに流体暴露室を含むことを特徴とする先行請求項いずれか１項に記載の暴露装置。
【請求項２９】
前記流体暴露室が前記細胞培養室に共通であることを特徴とする請求項２８記載の暴露装置。
【請求項３０】
さらに流体分散手段を含むことを特徴とする請求項２８または２９記載の暴露装置。
【請求項３１】
前記流体分散手段が各細胞培養室に実質的に同時に流体を暴露することを特徴とする請求項３０記載の暴露装置。
【請求項３２】
前記流体分散手段が前記細胞培養室上に位置するディスク状のプレートであることを特徴とする請求項３０または３１記載の暴露装置。
【請求項３３】
前記流体流入手段が暴露装置の頂部に位置していることを特徴とする先行請求項いずれか１項に記載の暴露装置。
【請求項３４】
前記流体流入手段が流体発生手段と接続し、流体が前記流体流入手段を介して暴露装置に搬送されることを特徴とする先行請求項いずれか１項に記載の暴露装置。
【請求項３５】
さらに細胞培養室のための支持体を含むことを特徴とする先行請求項いずれか１項に記載の暴露装置。
【請求項３６】
前記細胞培養室支持体が、PTFE（ポリテトラフルオロエチレン）、ステンレススチール、Perspex（登録商標）およびガラスからなる群から選択される材料から形成されることを特徴とする先行請求項いずれか１項に記載の暴露装置。
【請求項３７】
細胞培養室に栄養液を供給する方法であって栄養液供給手段と媒体案内手段と細胞培養室が、前記各細胞培養室で実質的に同時に栄養液の補充を行うように配置されていることを特徴とする方法。
【請求項３８】
複数の細胞培養室に共通の媒体室と媒体案内手段を有する生きた細胞に流体を暴露するための装置であって、前記細胞培養室と媒体案内手段が実質的に同時に媒体交換を前記細胞培養室で行うように互いに配置されていることを特徴とする暴露装置。
【請求項３９】
添付図面および実施例を参照して詳述した暴露装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、流体混合物、特に紙巻タバコ煙および／または気体混合物を生きた細胞培養物に暴露するための暴露装置（exposure device）に関する。
【背景技術】
【０００２】
生きた細胞培養物上に気体を放出する種々の暴露装置が知られている。これら種々の公知の装置は、細胞培養室への煙の放出およびこの細胞培養室で生育した細胞培養物の底部に栄養液を放出するためのものである。これらの公知の装置は、気体と栄養液が混合するのを防ぐために複雑かつ時には高価な装置になってしまう。例えば、下記特許文献１には気体が装置の上部プレート内に導入され、放射煙分散手段によって個別の細胞培養室へと供給される暴露装置が開示されている。気体は、その後細胞培養室上部から暴露装置のベースプレートの中央空気出口へと供給される。従って気体は、細胞培養物の上面に直接供給される。栄養液は、装置のベースプレート貯蔵部に接続された入り口および出口導管を介して各細胞培養室へと供給され、各細胞培養室は個別の貯蔵室内に位置しているので、気体と栄養液は別々に維持され、栄養液は独立して細胞培養室に供される。この特許文献に開示されている装置は、複雑であり、かつ、製造費も高く、細胞への気体の流量を監視して確実に細胞がその流量によって損傷を受けないようにしなければならない。さらに各媒体貯蔵室はその入り口および出口導管を有しているので、多くの入り口および出口のための管が必要となる。
【特許文献１】ドイツ特許第１９５２６５３３号
【０００３】
下記特許文献２では、媒体が複数の個別の細胞培養室へと１つの流入パイプを介して供給される。各細胞培養室は、その下に独自の別個の媒体室を有する。この装置も複雑であり、製造に費用が掛かり、各細胞培養室で連続的な媒体の交換を行うことができない。栄養液は、細胞に栄養液を供給するのと同じ手段によって取り除かれなければならず、従って栄養液は、新しい栄養液および／または添加剤を含む媒体が細胞培養物に供給される前に取り除かなければならない。
【特許文献２】国際公開第ＷＯ９９／３６５０５号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、すべての細胞培養室に共通な媒体室を有し、これにより各細胞培養室で連続的な媒体交換が可能な生きた細胞培養物に流体を暴露するための暴露装置を提供することである。
【０００５】
さらに本発明は、構造が簡単で、安価に製造でき、簡単に使用できる生きた細胞培養物の暴露装置を提供することも目的としている。
【０００６】
またさらに本発明は、媒体を人的または電気的な介在なしに所定の流入および流出量で細胞培養物の底部に供給する、または細胞培養物が完全に浸されるように作動可能な生きた細胞培養物の暴露手段を提供することも目的としている。
【０００７】
またさらに本発明は、媒体をその中で成長する細胞培養物に供給し続けるために媒体の流入速度および流出速度のバランスを取る必要のない、生きた細胞培養物の暴露装置を提供することも目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、底部と、頂部と、流体流入手段と、媒体流入手段と、媒体流出手段と媒体室と複数の細胞培養室とからなり、媒体室がすべての細胞培養室に共通な、生きた細胞培養物の暴露手段を提供する。
【０００９】
好ましくは媒体室は、それに設けられた媒体案内手段を有する。媒体案内手段は、暴露装置の底部の隆起した領域から形成されると有効である。媒体案内手段は、媒体室内に島状に形成し、この周りを栄養液が流れるようにするのが好適である。媒体案内手段は、各細胞培養室の下の媒体流を案内するために媒体室内に位置する。媒体案内手段は、媒体室の中央に位置するのが好ましく、各細胞培養室から等距離に位置するのがさらに好ましい。
【００１０】
暴露装置は、各細胞培養室の底部が、媒体室内に位置するように位置した２つ以上の細胞培養室からなることが好ましい。暴露装置は、３つの細胞培養室からなると有効である。暴露装置は、あらゆる数の細胞培養室および異なる大きさの細胞培養室からなるように構成されるのが好適である。本発明の暴露装置に使用するのに好適な細胞培養室は、当業者には自明である。
【００１１】
各細胞培養室の底部は、媒体を媒体室内の各細胞培養室の下を自由に流れるようにすることができる隙間によって暴露装置の底部から離れていることが好ましい。各細胞培養室での媒体の連続交換は、各細胞培養室の下で媒体が自由に流れることによって促進される。連続的な媒体の交換は、さらに媒体案内手段の位置決めによって向上される。
【００１２】
各細胞培養室の底部と暴露装置の底部との間を媒体が自由に流れる隙間は、少なくとも１ｍｍであると好適である。各細胞培養室の底部と暴露装置の底部との間の隙間は、約２ｍｍ以上であることが好ましい。各細胞培養室の底部と暴露装置の底部との間の隙間は、約４ｍｍであることがさらに好ましい。
【００１３】
媒体は、暴露装置の媒体室へと媒体流入手段によって供給され、媒体流出手段によって暴露装置の媒体室から取り除かれる。
【００１４】
媒体流入手段は、暴露装置の底部に媒体を供給するために位置するのが好ましく、これによって媒体が媒体室へ直接流れる。媒体流入手段は、さらに好ましくは暴露装置の底部の側壁または底壁に位置する。
【００１５】
媒体流入手段は、パイプまたは管であると好適である。
【００１６】
媒体流出手段は、媒体流入手段から離れて位置すると有効であり、すべての細胞培養室および／または媒体案内手段によって媒体流入手段から離れて位置するのが好ましい。
【００１７】
媒体流出手段は、その頂面から媒体を取り除くように動作可能であることが好ましく、暴露装置の頂部から媒体室内へと延びていると好適である。細胞培養室に対する媒体流出手段の取り込み端部の位置は、媒体を細胞培養物の底部または細胞培養物を完全に浸すように供給できるように調整される。これとは別に媒体流出手段は、２つの流出手段からなり、第１の流出手段は、細胞培養物の基底供給をできるように位置し、第２の流出手段は、細胞培養物の液内供給ができるように位置すると有効である。
【００１８】
媒体を細胞培養物の底部に供給する間、媒体のレベルは、媒体が常に細胞培養物の底部と接触するように維持される。これとは別の実験的様式では、媒体レベルは細胞培養物が常に媒体で覆われるように維持してもよく、このような供給様式は浸水供給（submersion feeding）として当業界で知られている。
【００１９】
媒体流出手段はパイプまたは管であると好適である。媒体流出手段は、管の取り込み端部がオペレーターによって選択された装置の底部からの高さに位置するように暴露装置内に係止される、格納式の管であることが好ましい。暴露装置の底部からの管の取り込み端部の高さは、培養物の底部への媒体の供給を促進するために、装置の底部からの細胞培養物の距離に等しいか、またはこれとは別に暴露装置の底部上の管の取り込み端部の高さは、培養物の浸水供給を促進するために細胞培養物の高さより高くてもよい。
【００２０】
媒体流出管の位置の固定は、係止手段によって行ってもよい。係止手段は、中央に穴を有するネジ式構造であってもよく、媒体流出管がネジ山が設けられた中央の穴を通過する。これとは別に媒体流出管の位置を調整するために作動可能な摩擦式係止手段を設けてもよい。
【００２１】
媒体流出手段は第１のポンプ手段に作動的に取り付けられるのが好適であり、このポンプ手段は、制御可能な第1の汲み上げ速度で作動可能である。第１の汲み上げ速度は、約１ｍｌ/分から約２０ｍｌ/分の範囲内である。好ましくは第１の汲み上げ速度は、約１０ｍｌ/分である。
【００２２】
媒体流入手段は第２のポンプ手段に作動的に取り付けられるのが好適であり、このポンプ手段は、制御可能な第２の汲み上げ速度で作動可能である。第２の汲み上げ速度は、約１ｍｌ/分から約１０ｍｌ/分の範囲内である。好ましくは第１の汲み上げ速度は、約７ｍｌ/分である。
【００２３】
第１の汲み上げ速度は、作動時に選択された媒体レベルがさらなる介在を必要とせずに維持されるように、第２の汲み上げ速度に少なくとも等しいと有効である。第１の汲み上げ速度は、第２の汲み上げ速度より速いことが好ましい。第１の汲み上げ速度は、第２の汲み上げ速度より速く、媒体室内の媒体レベルは、作動中約３ｍｍを超えて変動しないことが好ましい。媒体室内の媒体レベルは、作動中約０．５ｍｍを超えて変動しないことが好ましい。
【００２４】
媒体流出手段および／または媒体流入手段は、連続的に作動してもよく、これとは別にオペレーターによって選択された流速で間欠式に栄養液を供給/除去してもよい。媒体流入手段が、連続的に作動する場合、媒体流出手段の第１汲み上げ速度は、媒体流入手段の第２汲み上げ速度を超え、従ってオペレーターによって設定されたレベルで媒体を維持するためにポンプのバランスを取る必要がない。
【００２５】
媒体案内手段ならびに媒体流入および流出手段と共に媒体室が、各細胞培養室で実質的に同時発生的な媒体交換を促進させるのが好ましい。媒体案内手段と細胞培養室は、各細胞培養室で媒体交換が同時発生的に生じるような位置関係にある。
【００２６】
本発明の暴露装置は、さらに細胞培養室に共通な流体暴露室と各細胞培養室に実質的に同時発生的な液体交換を供するために作動可能な流体分散手段とを含む。
【００２７】
本発明の流体流入手段は、暴露装置の頂部に位置するのが好ましい。さらに好ましくは流体流入手段は、暴露装置の頂部の中央に位置する。
【００２８】
流体流入手段は、流体発生手段と接続するように構成され、これにより流体が流体流入手段を介して暴露装置へと分岐する。
【００２９】
流体は、流体分岐手段を介して流体流入手段を通過し、流体暴露室へと到達する。流体分岐手段は、流体が流体暴露室に到達する前に流体を分岐させるように作動可能な細胞培養室上に位置するディスク形状であってもよい。
【００３０】
細胞培養室に供給される流体の流量は、最大で毎分可能な空気空間の約７００パーセントであると有効である。
【００３１】
流体流出手段は、媒体が流体流出手段を介して流れないように、媒体室内の媒体のレベルより上に位置するのが好ましい。さらに好ましくは流体流出手段は、媒体流出手段が流体流出手段より媒体室内で下方のレベルに位置する。
【００３２】
流体流出手段は暴露装置の底部の側壁に位置してもよく、これとは別に暴露装置の頂部の側壁に位置させてもよい。
【００３３】
流体は、気体、エアゾールまたはこれらと空気の混合物であることが好ましい。
【００３４】
各細胞培養室は、媒体室中に懸架され、好適には細胞培養室支持体によって所定の位置に保持される。細胞培養室は、その側壁に流体が通過する間隙を有すると有効である。浸水供給方式が採られる場合、細胞培養室は、好適には確実に各細胞培養室で媒体交換が生じるように適合される。好適には細胞培養室は、例えば媒体通路間隙を含む。この媒体通路間隙は、もし含まれるならば、細胞培養室の側壁に位置することが好ましい。本発明に好適に使用される細胞培養室は、当業者には自明である。
【００３５】
細胞培養室支持体は、複数の受け孔を有するシート材料から構成されると有効であり、細胞培養室がこれらの穴内へと下降される。細胞培養室支持体は、流体暴露室と媒体室との間の部分的な仕切りとして作用してもよく、これにより確実に流体が流体流出手段を介して暴露装置を出る前に細胞培養室を介して流れる。
【００３６】
細胞培養室は暴露装置と同じ材料で形成されるのが好ましい。暴露装置と細胞培養室支持体が形成される材料は、不活性材である。ここでいう「不活性材」は、本発明の装置に使用できる流体と化学的に不活性な材料を意味する。暴露装置と細胞培養室支持体は、PTFE（ポリテトラフルオロエチレン）、ステンレススチール、Perspex（登録商標）およびガラスからなる群から選択される材料から形成するのが好適である。その他の材料も当業者には知られている。
【００３７】
さらに本発明は、細胞培養室に栄養液を供給する方法を提供し、これにより栄養液供給手段と、媒体案内手段と細胞培養室は、各細胞培養室で実質的に同時発生的に媒体を補充するように相互に配置される。
【００３８】
さらに本発明は、複数の細胞培養室および媒体案内手段と共通な媒体室を有し、細胞培養室と媒体案内手段は、各細胞培養室で実質的に同時発生的に媒体を補充するように相互に配置される。
【００３９】
本発明を容易に理解し、実施されるように本発明を添付の図面を参照し、以下に詳述する。
【００４０】
図１は、本発明による暴露装置１を示す。この暴露装置は、密閉ネジ（図示せず）によって嵌合された環状の底部２と環状の頂部３とからなる。頂部３と底部２は密封状態にあるとき、密閉ユニットを形成する。頂部３と底部２の間に配されたラバーシールによって暴露装置の作動中、確実に装置から流体が漏れるのを防ぐ。媒体室４は、栄養液を保持するための中空の受け部からなり、暴露装置１の底部２に位置している。頂部３と底部２との間には細胞培養室支持体５が位置している。細胞培養室６が、細胞培養室支持体５の受け孔２１内に位置している。各細胞培養室の底部７は、透過膜で構成され、この膜の上で細胞培養物が生育する。各細胞培養室６は、さらに不活性材料のインサート（図示せず）で構成してもよい。インサートは、不活性材料からなるリングであり、このリングは細胞培養室６の透過膜上に位置するのが好ましい。細胞培養物８は、当該インサートを有する透過膜上の所定の位置に播種され、育成される。インサートは、細胞培養室６が細胞培養室支持体５の受け孔２１内に設置される前に細胞培養室から取り除かれる。インサート（図示していない）は、細胞培養室６の透過膜の周辺部に細胞培養物が生育するのを防ぐ。
【００４１】
流体を通過させる間隙９は、流体が細胞培養室６から逃げることができるように各細胞培養室６に設けられている。各細胞培養室６の底部７は、暴露装置の底部から離れており、これによって媒体室４内で各細胞培養室６の下を自由に媒体が流れることができる。媒体案内手段１０が、平面で見て中央に各細胞培養室６から等距離に位置している。
【００４２】
媒体流入手段１１が、底部２に位置しており、ポンプ（図示せず）によって媒体室４に媒体を供給する。媒体流出手段１２は、媒体室４から栄養液を抽出するための第２ポンプ（図示せず）に取り付けられたパイプであってもよい。媒体流出手段１２は、暴露装置１の頂部３から取り外し可能である。媒体流出手段１２の取り込み端部は、細胞培養室支持体５の穴２２を介して媒体室４内を通っている。媒体流出手段１２は、係止手段（図示せず）によって所定の位置に固定される。係止手段は、中央に孔を有するネジによって供してもよい。この場合、媒体流出手段１２は、ネジの中央孔を通過する。
【００４３】
流体流入手段１３は、頂部３の中央に位置し、外方スリーブ１５内を延びる流入孔１４からなり、この流入孔１４は、流体を３つの放射状に配された孔１６を介して流体分散手段１７上で分散させて、流体暴露室１８内に供給する。流体流出手段１９は、底部の側壁２０に位置している。これとは別に流体流出手段１９は、流体を素早く取り除くためにポンプ手段（図示せず）に取り付けてもよい。
【００４４】
装置の作動時には、栄養液（図示せず）は、媒体室内へポンプ（図示せず）によって供給され、栄養液は、細胞を維持するために必要な温度に予め加熱される。栄養液は、それが細胞培養物８の底部への媒体の供給に必要とされるように細胞培養室の底部７と接触する、または栄養液が細胞培養物の浸水供給に必要とされるように媒体室内で細胞培養物８が栄養液で覆われるレベルに達するまで、所定の汲み上げ速度で媒体室内に供給される。
【００４５】
媒体流出ポンプの汲み上げ速度は、媒体流入ポンプの汲み上げ速度を超えるように設定され、従って確実に媒体室４の栄養液を一定のレベルにすることができる。栄養液が媒体流出パイプ１２の底部と接触した場合、媒体は流出ポンプ手段の作用によって吸引される。媒体流出手段の汲み上げ速度および高さは、ポンプの作動時に確実に栄養液レベルが０．５ｍｍを超えて変動しないように選択される。媒体流出パイプ１２の取り込み端部で形成された媒体のメニスカスが、流出ポンプの吸引を停止させる。これによって媒体のレベルは、媒体が常に細胞培養物の底部への媒体の供給中細胞培養室６の底部７と接触する、または浸水供給中同じ深さに細胞培養物８を常に浸水するように維持される。
【００４６】
これとは別の構成では、暴露装置１には２つの媒体流出手段が設けられる。第１の媒体流出手段１２の取り込み端部は、細胞培養物８と暴露装置１の底部上に同じ距離をおいて位置し、第２流出手段１２の取り込み端部は、細胞培養物８の底部より暴露装置１の底部より離れて位置する。第１媒体流出手段１２の作動時には細胞培養物８の基底に媒体が供給され、第２の媒体流出手段１２の作動時には、細胞を浸水させるように媒体が供給される。
【００４７】
媒体流出手段１２のさらに別の態様（図示せず）では、逆Ｙ字型のパイプ状の切り替え手段が設けられる。媒体流出手段１２の２つの取り込み端部は暴露装置の底部から異なる距離を置いて固定され、基底供給と浸水供給条件の切り替えを行うことができる。この切り替え手段には、さらに定期的に間隔を置いて基底供給と浸水供給条件の切り替えを行うタイミング手段が設けられている。
【００４８】
栄養液は、それが各細胞培養室６の底部の下を自由に流れるように媒体室４内を自由に流れる。媒体案内手段１０により確実に各細胞培養室６の下で実質的に同時的に媒体交換が生じる。
【００４９】
装置の作動時には、流体が流体流入手段１３を介してパイプ輸送され、流体分散手段１７によって分散され、流体暴露室１８内へと供給される。流体は、細胞培養物８上を自由に流れる。流体は、それから流体通過間隙９を介して細胞培養室６から排出され、流体流出手段１９を介して暴露装置から出る。
【００５０】
本発明の別の態様では、流体流出手段を暴露装置の頂部に設けてもよい。この場合、流体は流体暴露室１８を介して分散され、細胞培養室６内で分散した後、流体流出手段１９を介して排出される。この別の態様では、細胞培養室６は流体通過間隙９を有さない中実の壁を有する。
【００５１】
栄養液の温度は、暴露装置１を加熱手段（図示せず）上に置くことによって維持される。加熱手段は、暴露装置１の底部２に加熱スポットができないように熱移動が可能な材料で覆われた加温プレートであると好適である。熱移動可能な材料は、例えばバブルラップなどである。
【００５２】
またこれとは別の構成（図示せず）では、栄養液と暴露装置１の温度は、装置を１つ以上のインキュベーター（図示せず）の内側に置くことによって維持してもよい。この構成では栄養液と流入ポンプ手段が第１のインキュベーター内に配置され、少なくとも１つの本発明の暴露装置１が第２のインキュベーター内に配置される。流出ポンプ手段は、第２インキュベーターの外側に位置する。第１および第２インキュベーターは、第１インキュベーター内の装置が第２のインキュベーター内の装置と動作的に連結されるように変型してもよい。さらに第２のインキュベーターは、それに含まれる装置が本発明の流出ポンプ手段と動作的に連結するように変型してもよい。第１および第２のインキュベーターは、細胞培養物８の維持および育成のために好適な温度に維持される。
【００５３】
本発明の別の態様では、暴露装置１の外周部が例えば方形または矩形のなどのいかなる形状であってもよく、媒体案内手段が媒体室内の中央に位置し、各細胞培養室から等距離に位置する。
【実施例１】
【００５４】
本発明の暴露装置は、次のような方法に従って使用することができる。
【００５５】
実験を開始する少なくとも２時間前に２つの大きなボトルに入った栄養液を細胞を維持するのに必要な温度に予め暖め、装置を滅菌する。
【００５６】
膜に取り付けられた培養された細胞を有するCostar  Transwells（登録商標）を暴露装置の細胞室支持体の受け孔内に下降させる。暴露装置の頂部は底部と嵌合され、密閉ネジを用いて密閉する。暴露装置の底部からの媒体流出パイプの高さは、基底および／または浸水供給条件のために設定され、媒体流出パイプは、ネジによって所定の位置に固定される。媒体流入および流出パイプが取り付けられ、流体流入パイプが喫煙装置に取り付けられる。
【００５７】
暴露装置と媒体流入パイプをバブルラップで包み、完全に遮断する。装置を必要な温度に設定された加温プレート上に置く。
【００５８】
媒体流出ポンプの汲み上げ速度は、それが媒体流入ポンプの汲み上げ速度より速く、そして栄養液が媒体室内に暴露装置の底部上の媒体流出パイプの取り込み端部の高さによって決められたレベルにまで供給される。
【００５９】
喫煙装置を作動させ、喫煙装置から発せられる煙が所定の時間、流体流入パイプを介して流体暴露室内に供給される。
【図面の簡単な説明】
【００６０】
【図１】本発明による暴露装置の縦断面図。
【図２】本発明の１つの態様による暴露装置の平面図を装置の頂部、細胞培養室および媒体流出手段を取り除いた状態で示す。
【図１】
2005526514.tif 000003
【図２】
2005526514.tif 000004
【国際調査報告】
2005526514.tif 000005
2005526514.tif 000006
2005526514.tif 000007
2005526514.tif 000008
2005526514.tif 000009