(57)【要約】ライノウイルス感染症の予防および治療に使用されるグリオキサール誘導体について、ここに開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ライノウイスル感染症の予防または治療に使用される薬剤を調製するための、
ａ）ｐ−（α−エトキシ−ｐ−フェニル−フェナシルアミノ）−安息香酸（キセナラミン）と、
【化１】
2005526121.tif 000012
ｂ）４，４’−ビス−ビフェニルグリオキサール−水和物（キセナルジアール）と、
【化２】
2005526121.tif 000013
ｃ）ｐ−（α−エトキシ−β−ケト−β−１−ナフチル）−エチルアミノ−安息香酸（ＤＶ１）と、
【化３】
2005526121.tif 000014
ｄ）ｐ−（α−エトキシ−β−ケト−β−２−ナフチル）−エチルアミノ−安息香酸（ＤＶ２）と、
【化４】
2005526121.tif 000015
ｅ）ｐ−（α−エトキシ−β−ケト−β−２−クマロイル）−エチルアミノ−安息香酸（ＤＶ３）と、
【化５】
2005526121.tif 000016
ｆ）ｐ−（α−エトキシ−β−ケト−β−１−フェナントリル）−エチルアミノ−安息香酸（ＤＶ４）と、
【化６】
2005526121.tif 000017
ｇ）ｐ−（α−エトキシ−β−ケト−β−２−フェナントリル）−エチルアミノ−安息香酸（ＤＶ５）と
【化７】
2005526121.tif 000018
からなる群から選択される化合物の使用。
【請求項２】
上気道、中気道、および下気道の感染症を予防または治療するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項３】
風邪を予防または治療するための、請求項１または２に記載の化合物の使用。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物を含有する、吸入投与のための医薬品組成物。
【請求項５】
溶液、懸濁液、分散液、粉末、および顆粒の形態をとる請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
スプレーおよびエアロゾルを調製するための、請求項４および５に記載の組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ライノウイルス感染症の治療および予防のためにグリオキサール誘導体を使用することに関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトライノウイルス（ＨＲＶ）はピコナウイルス科に属し、風邪の病因と見なされている。
【０００３】
ライノウイルスは、免疫グロブリンの系統に属し、またＬＦＡ−１（リンパ球機能関連分子−１）のリガンドとして機能する特定の受容体、主としてタンパク質ＩＣＡＭ−１に結合することによって、宿主細胞に感染する。
【０００４】
ライノウイルスの感染力を低下させるよう作られたこれまでの種々の手法の中で、本発明者等は以下の手法を挙げることができる。すなわち、
１）ウイルス結合を阻止する抗表面受容体抗体の開発、２）抗ウイルス応答を誘発するインターフェロンの使用、３）ウイルス複製阻害剤の開発、および４）ウイルスカプシドのタンパク質に対する抗体の開発である。さらに、前記手法は、望ましくない副作用が生じることから満足のいかないものであることがしばしば明らかにされた。例えばインターフェロンの経鼻投与では、ウイルス感染の重症度が低下するが、鼻粘膜の出血を引き起こすことが観察されている。
【０００５】
グリコサル誘導体は、ケトアルデヒド官能基の存在を特徴とする構造的に同質な化合物の種類である。その中でビフェニルケトアルデヒド誘導体、特にキセナラミンおよびキセナルジアールは、インフルエンザウイルス（Ａ−ＰＲ８）、マウス肝炎ウイルス（ＭＨＶ−３）、グレイグ、アフタ、はしか、およびポリオ−１ウイルスに対して抗ウイルス活性を持つことが知られている（ＲＥＦＥＲＥＮＣＥＳ参照）。
【０００６】
現在では、ビフェニル−、ナフチル−、およびクマロイル−グリコサル化合物が、ウイルスが細胞内に入り込むのを防ぐことによって種々のライノウイルス株により引き起こされた感染を止めることができることがわかっている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
したがって本発明の目的は、ライノウイスル感染症、特に風邪の予防または治療に使用される薬剤を調製することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は１）ｐ−（α−エトキシ−ｐ−フェニル−フェナシルアミノ）−安息香酸（キセナラミン）と、
【０００９】
【化１】
2005526121.tif 000002
【００１０】
２）４，４’−ビス−ビフェニルグリオキサール−水和物（キセナルジアール）と、
【００１１】
【化２】
2005526121.tif 000003
【００１２】
３）ｐ−（α−エトキシ−β−ケト−β−１−ナフチル）−エチルアミノ−安息香酸（ＤＶ１）と、
【００１３】
【化３】
2005526121.tif 000004
【００１４】
４）ｐ−（α−エトキシ−β−ケト−β−２−ナフチル）−エチルアミノ−安息香酸（ＤＶ２）と、
【００１５】
【化４】
2005526121.tif 000005
【００１６】
５）ｐ−（α−エトキシ−β−ケト−β−２−クマロイル）−エチルアミノ−安息香酸（ＤＶ３）と、
【００１７】
【化５】
2005526121.tif 000006
【００１８】
６）ｐ−（α−エトキシ−β−ケト−β−１−フェナントリル）−エチルアミノ−安息香酸（ＤＶ４）と、
【００１９】
【化６】
2005526121.tif 000007
【００２０】
７）ｐ−（α−エトキシ−β−ケト−β−２−フェナントリル）−エチルアミノ−安息香酸（ＤＶ５）と
【００２１】
【化７】
2005526121.tif 000008
【００２２】
からなる群から選択される化合物を使用することである。
【００２３】
上記化合物の活性は、ライノウイルスＭおよびＨ株の増殖にそれぞれ適している、アカゲザルとＷＩ３８およびＯｈｉｏ−ＨｅＬａヒト細胞から採った腎臓細胞の単層で実施した、プラーク阻害アッセイで評価した。このアッセイでは、細胞内でのウイルス増殖を妨害することのできる物質の培地を添加することによって、ミクロプラークの形成が未処理の対照培養物に比べて少なくなる。したがってこの試験化合物の有効性は、ウイルスに曝露した後の処理済みおよび未処理の培養物中のミクロプラークをカウントすることにより、決定することができる。
【００２４】
その結果は、試験化合物が、ライノウイルスによって引き起こされる感染プロセスを妨げまたは停止させることができることを示している。さらにこの化合物は、処理した細胞に対する毒性がまったくない。観察された効果はおそらく受容体ブロックに起因すると思われるが、本発明は、特定の作用機序にどのようにも拘束されるものではない。
【００２５】
他の態様によれば、本発明は、医薬品として許容される担体および賦形剤と併せて上記化合物の少なくとも１つを含有する医薬品組成物に関する。好ましい実施形態によれば、組成物は、吸入投与に適した形態をとる。好ましい医薬品形態は、スプレーおよびエアロゾルによって経口または経鼻投与するための溶液、懸濁液、分散液、粉末、および顆粒である。これらは、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．、Ｎｙ、ＵＳＡ、ＸＶＩＩ  Ｅｄ．に記載されているような従来の技法を用いて調製することができる。
【００２６】
活性成分の有効用量は、０．１〜１０ｍｇ／Ｋｇ／ダイの範囲内にすることができ、好ましくは１ｍｇ／Ｋｇ／ダイである。
【００２７】
本発明を、以下の実施例を用いて例示する。
【実施例】
【００２８】
実施例１：細胞単層でのプラークアッセイ
手順：
１．アカゲザルとヒト細胞系（ＷＩ３８、ＭＲＣ−５、およびＯｈｉｏ−Ｈｅｌａ細胞）から採った腎臓細胞の集密単層を、直径６．７５ｃｍのペトリ皿に準備する。
２．増殖培地を吸引する。
３．各皿を、１０ｍｌの培地（血清を含まない増殖培地）、アール食塩液−ラクトアルブミン加水分解物で洗浄し、３３℃で６０分間インキュベートする。
４．液体を吸引する。
５．１：１０の一連のウイルス希釈液（ライノウイルス株Ｍおよびライノウイルス株Ｈ）をアール食塩液−ラクトアルブミン加水分解物中に調製し、各皿に体積０．２ｍｌのウイルス希釈液を接種する。各ウイルス希釈液は２重に接種する。
６．類似の連続ウイルス希釈液（５と同様）をアール食塩液−ラクトアルブミン加水分解物中に調製し、抗ウイルス試験化合物を所望の濃度で添加する。
７．対照として、所望の濃度で試験用抗ウイルス化合物を添加したアール食塩液−ラクトアルブミン加水分解物を調製する（各試験化合物ごとに１つの対照）。
８．感染した単層を３３℃で６０分間インキュベートし、接種物を均一に分布させるため、１５分間隔で皿を静かに振盪させる。
９．皿を平らな面に置く。
１０．各皿に、４４℃で平衡にしたアール食塩液−子ウシ血清中の栄養寒天１０ｍｌを完全に添加し、硬化させる。このステップは、光を弱めた状態で行わなければならない。
１１．皿に蓋をし、逆さにして、５％ＣＯ2加湿雰囲気中の暗闇で３３℃でインキュベートする。
１２．３日間のインキュベーション後、ミクロプラークをカウントする。ミクロプラークは、ピンクのバックグラウンドに対して色の薄いほぼ円形の領域として現れることになる。
【００２９】
１）ウイルス：ライノウイルスＨ株、細胞系：ＷＩ３８
結果
【００３０】
【表１】
2005526121.tif 000009
【００３１】
化合物は、１２．５γ／ｍｌキセナルジアール溶液の同じモル濃度で試験をした。
【００３２】
２）ウイルス：ライノウイルスＨ株、細胞系：Ｏｈｉｏ−ＨｅＬａ
結果：
【００３３】
【表２】
2005526121.tif 000010
【００３４】
化合物は、１２．５γ／ｍｌキセナルジアール溶液の同じモル濃度で試験をした。
【００３５】
３）ウイルス：ライノウイスルＭ株、細胞株：ＭＫＣ−５
結果
【００３６】
【表３】
2005526121.tif 000011
【００３７】
化合物は、１２．５γ／ｍｌキセナルジアール溶液の同じモル濃度で試験をした。
【００３８】
実施例２：  ｐ−（α−エトキシ−β−ケト−β−２−ナフチル）−エチルアミノ−安息香酸（ＤＶ２）のＩｎ−ｖｉｔｒｏ活性
Ｄ２の活性は、ＨＲ１４ライノウイルスに感染させて２％ウシ胎児血清を添加したダルベッコ培地で増殖させたＨｅＬａ細胞において、漸次的に希釈して評価した。
Ｄ２をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解して１００ｍｇ／ｍｌにし、ダルベッコ培地で３ｍｇ／ｍｌに希釈した。
全ての実験は２回行った。
【００３９】
電子顕微鏡により決定された最大無毒性用量（ＭＮＴＤ）および最小阻害濃度（ＭＩＣ）は、それぞれ５１μｇ／ｍｌおよび０．００６μｇ／ｍｌであった。比ＭＮＴＤ／ＭＩＣとして計算された保護指数は８．５であり、これは、ジソキサリル（Ｄｉｓｏｘａｒｉｌ）などその他の知られている抗ライノウイルス化合物の保護指数よりも非常に高いものである。これらの結果は、ＤＶ２がＨＲ１４ライノウイルスに対して低用量で活性であり、ＨｅＬａ細胞に対して毒性が無いことを示している。
実施例３：医薬品組成物
以下の組成を有する発泡性咀嚼錠を調製した。
活性成分（化合物ＤＶ１〜ＤＶ５、キセナラミン、またはキセナルジアール）＝３５ｍｇ
コーンスターチ＝８ｍｇ
クエン酸（三塩基酸）＝４０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム＝２ｍｇ
スプレー／エアロゾル
スプレー：単回用量ディスペンサ（抽出可能な体積０．１ｍｌ／用量）を備えた１０ｍｌ容器（約１００回用量）。組成（ｗ／ｗ）：
活性成分＝１５％
チモール＝０．８４％
タンニン酸＝１．６８％
アルコール＝４５％
精製水（１００％になるまで）＝約３７．０８％
エアロゾル：ネブライザに適合可能な１ｍｌの単回用量バイアル。
スプレーと同じ組成。
REFERENCES
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【国際調査報告】
2005526121.tif 000019
2005526121.tif 000020