(57)【要約】対象において皮膚を増量させるための化粧剤および方法であって、1,4-結合D-グルコースオリゴ糖若しくは多糖よりなる有効成分を含み、該オリゴ糖若しくは多糖が皮膚に輸送された後、当該皮膚若しくはその近傍において繊維芽細胞が蓄積されコラーゲン産生が引き起こされる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における皮膚の増量化の方法であって、1,4-結合D-グルコースオリゴ糖若しくは多糖よりなる活性成分を該皮膚に輸送し、その後、該オリゴ糖若しくは多糖が当該輸送部位若しくはその近傍で繊維芽細胞を蓄積させてコラーゲン産生を誘導することよりなる方法。
【請求項２】
該オリゴ糖若しくは多糖が、サッカロマイセス・セレビジエー由来のD-マンノース多糖（マンナン）；ピキア・ホルスティが産生する細胞外ホスホマンナンであって、該ホスホマンナンの、精製されたD-マンノース高分子量酸抵抗性多糖核；6-O-ホスホ-α-D-マンノース-(1,3)-α-D-マンノース-(1,3)-α-D-マンノース-(1,3)-α-D-マンノース-(1,2)-α-D-マンノース、フェニックス・カナリーヤシ（Phoenix canariensis）種子より単離されたマンナンの酸加水分解によって得られるβ-1,4-D-マンノースオリゴ糖；β-1,4-マンノペンタオース、β-1,4-マンノヘキサオース；β-1,4-マンノヘプタオース、β-1,4-マンノオクタオース、β-1,4-マンノノナオース、β-1,4-マンノデカノース、β-1,4-マンノウンデカノース、β-1,4-マンノドデカノース、アミロペクチン、アミロース、アミロース酸加水分解により得られる1,4-D-グルコースオリゴ糖、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオース、α-1,4-マルトオクタオース、マルトノナオース、マルトデカノース、マルトウンデカノース；マルトドデカノースおよびその混合物若しくは組み合わせ、その物理的修飾した同族体および化学的修飾した同族体よりなる群から選択される請求項１の方法。
【請求項３】
該オリゴ糖若しくは多糖が、マルトペンタオースである、請求項３の方法。
【請求項４】
該オリゴ糖若しくは多糖が、β-1,4-マンノヘキサオースである、請求項３の方法。
【請求項５】
該オリゴ糖若しくは多糖が、O-リン酸化マンナンである、請求項３の方法。
【請求項６】
該オリゴ糖若しくは多糖が、アミロースまたはアミロペクチンである、請求項３の方法。
【請求項７】
該オリゴ糖若しくは多糖が、ピキア・ホルスティが産生する細胞外ホスホマンナンの、精製されたD-マンノース高分子量酸抵抗性多糖フラグメント（多糖核分画）である、請求項３の方法。
【請求項８】
精製されたD-マンノース高分子量酸抵抗性多糖フラグメントが6-O-ホスホ-α-D-マンノース-(1,3)-α-D-マンノース-(1,3)-α-D-マンノース-(1,3)-α-D-マンノース-(1,2)-α-D-マンノースよりなる、請求項８の方法。
【請求項９】
該オリゴ糖若しくは多糖を皮膚に直接注射するかまたは局所的に投与する、請求項１から８のいずれかの方法。
【請求項１０】
該オリゴ糖若しくは多糖を重量濃度０．００１％から１００％の範囲で皮膚に輸送する、請求項１から９のいずれかの方法。
【請求項１１】
該オリゴ糖若しくは多糖を重量濃度０．０１％から７０％の範囲で皮膚に輸送する、請求項１０の方法。
【請求項１２】
該オリゴ糖若しくは多糖を重量濃度０．１％から３０％の範囲で皮膚に輸送する、請求項１１の方法。
【請求項１３】
該オリゴ糖若しくは多糖を重量濃度１％から２０％の範囲で皮膚に輸送する、請求項１２の方法。
【請求項１４】
未処置の皮膚と比較して、皺のより少ない、組織がなめらかで堅固かつ豊潤で弾力性のある皮膚を与える、請求項１から１３のいずれかの方法。
【請求項１５】
対象において皮膚を増量させるための1,4-結合D-グルコースオリゴ糖若しくは多糖の使用であって、オリゴ糖若しくは多糖を皮膚に輸送した後、該皮膚若しくはその近傍において繊維芽細胞が蓄積されコラーゲン産生が引き起こされる方法。
【請求項１６】
対象において皮膚を増量させるための化粧剤であって、適切な希釈剤若しくは賦形剤中に有効量の1,4-結合D-グルコースオリゴ糖若しくは多糖を含み、該オリゴ糖若しくは多糖が皮膚において繊維芽細胞を蓄積させコラーゲン産生を引き起こす化粧剤。
【請求項１７】
該オリゴ糖若しくは多糖が、サッカロマイセス・セレビジエー由来のD-マンノース多糖（マンナン）；ピキア・ホルスティが産生する細胞外ホスホマンナンであって、該ホスホマンナンの、精製されたD-マンノース高分子量酸抵抗性多糖核；6-O-ホスホ-α-D-マンノース-(1,3)-α-D-マンノース-(1,3)-α-D-マンノース-(1,3)-α-D-マンノース-(1,2)-α-D-マンノース、フェニックス・カナリーヤシ（Phoenix canariensis）種子より単離されたマンナンの酸加水分解によって得られるβ-1,4-D-マンノースオリゴ糖；β-1,4-マンノペンタオース、β-1,4-マンノヘキサオース；β-1,4-マンノヘプタオース、β-1,4-マンノオクタオース、β-1,4-マンノノナオース、β-1,4-マンノデカノース、β-1,4-マンノウンデカノース、β-1,4-マンノドデカノース、アミロペクチン、アミロース、アミロース酸加水分解により得られる1,4-D-グルコースオリゴ糖、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオース、α-1,4-マルトオクタオース、マルトノナオース、マルトデカノース、マルトウンデカノース；マルトドデカノースおよびその混合物若しくは組み合わせ、その物理的修飾した同族体および化学的修飾物した同族体よりなる群から選択される、請求項１６の化粧剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚における皺取りおよび組織の再構築作用を有する炭水化物および炭水化物含有化合物に関する。本発明は特に、動物および人間において皺取り剤および組織の再構築剤としてのこれら化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚組織は細胞タンパクおよび糖タンパク成分を含み、これらは組織の厚さおよび形態の両方に影響する。繊維芽細胞は代表的な皮膚の細胞構成要素であって、皮膚組織の重要な構成成分である種々のタンパクを産生する。そのタンパクのひとつがコラーゲンであり、皮膚形状の人工的な増量に使用でき、実際広く使用されている(Klein, AW et al, 1997)。老化と皮膚の皺の特徴は細胞質の減少である(Gilchrest and Chiu,1995 ; Fenske and Lober, 1986; Contet-Audonneau et al, 1999)。老化と皺に対する対処の潜在的目標は、該当域における細胞質の増加であり、この増加がコラーゲンを含む細胞外皮膚成分の産生増加になればさらに望ましい。レチノイン酸（化粧品としての有益性が信じられているが）を用いて損傷を受けた皮膚治療を行う臨床上の特徴の一つは新しいコラーゲン合成の増加である(Gilchrest, 1997)。皮膚において通常使用される他の皺取りはグリコール酸であって、in vitroの培養繊維芽細胞においてコラーゲン合成を増加させることが示された(Moy et al.,1996)。この効果はin vivoにおいても発揮されることが示唆され、グリコール酸使用に関連する見かけ上の有効な効果が説明される。また、皮膚表面上のコラー
ゲン欠乏が光線による老化の主たる原因であるとの提案がある(Kang et al., 1997)。
【０００３】
Yvin et alの米国特許5,980, 916号、「ラミナリンおよびそれから得られたオリゴ糖の化粧品での使用と皮膚治療剤の製造」には、ラミナリンまたはラミナリンから誘導されたオリゴ糖の化粧品若しくは薬剤、特に皮膚用剤としての使用が記載されている。ラミナリンは、海藻ラミナリアspp（コンブ）由来の多糖であり、β-1,3-D-グルコースと少量のβ-1,6-D-グルコースが結合した直鎖上のポリマーである。この特許はラミナリン、それから得られるオリゴ糖およびこれらの物質を含む組成物には、ヒト皮膚の繊維芽細胞および上皮のケラチノサイトを刺激し、再生し、調節し活性化する作用があると述べている。しかし、ラミナリン由来以外の多糖若しくはオリゴ糖を用いて、当該皮膚細胞に対し本質的にラミナリンの該細胞刺激の有効量からなる活性成分を輸送し、繊維芽細胞およびケラチノサイトよりなる群から選択される皮膚細胞を刺激する方法に使用することは開示しない。この特許が示唆するのは明らかに、ラミナリンおよびそれから得られたオリゴ糖が培養された皮膚細胞に刺激作用を有することである。in vivoの皮膚細胞が同様に刺激されることは示唆しない。また、ラミナリンおよびそれから得られたオリゴ糖が、生きている哺乳類の皮膚に適用した場合に活性を示すことも示唆しない。さらに、他のオリゴ糖や多糖が皮膚の増量や組織再構築活性を有することも何ら示唆しないし、意味しない。
Bar-Shalom, et alの米国特許5,916,880号、「硫酸化糖による皮膚の皺の軽減」には、皮膚の局所投与用薬剤の調製のための硫酸化糖、塩若しくはその複合体の使用が記載されている。化粧品用途で皮膚の皺を軽減する方法、硫酸化単糖、硫酸化二糖、塩およびその複合体よりなる群から選択される少なくとも一つの化合物の化粧品的使用の有効量を当該皮膚領域に局所的に投与することよりなる方法がクレームされている。しかし、この特許は皮膚の皺取りについて硫酸化糖以外の使用は何らクレームしていない。特許権者は、多硫酸化又は全硫酸化糖が好ましいと述べており、このことはふたつまたはそれより多くの、可能ならすべてが、炭水化物部分の置換基として硫酸化された部分が存在することを意味する。該特許はまた、硫酸化されていないオリゴ糖若しくは多糖を硫酸化単糖、硫酸化二糖とともに使用する可能性をクレームするが、その可能性を与える開示はなされていない。この特許に開示された方法および化合物は、硫酸化されていないオリゴ糖若しくは多糖が皮膚の増量または組織の再構築作用を有することを示唆しないし、意味しない。
【０００４】
本発明者は多くの炭水化物（オリゴ糖および多糖）が皮膚の増量または組織の再構築作用を有することを見出した。
発明の要約
本発明は、全体的には、皮膚上又は皮膚内に投与した場合に、繊維芽細胞を引きつけコラーゲン産生を刺激して皮膚の増量を与える薬剤の使用を提供する。
第一の観点は、本発明により、対象における皮膚増量の方法、即ち、D-グルコースが1,4-結合したオリゴ糖若しくは多糖よりなる活性成分を皮膚に輸送し、その輸送部位若しくは近傍で該オリゴ糖若しくは多糖によって繊維芽細胞を集積させて皮膚コラーゲンの産生を誘導する方法が提供される。
【０００５】
該オリゴ糖若しくは多糖は、好ましくは、サッカロマイセス・セレビジエー（Saccharomyces cerevisiae）由来のD-マンノース；ピキア・ホルスティ（Pichia holstii）により産生される細胞外ホスホマンナンであって、該ホスホマンナンを精製した高分子酸耐性多糖核；6-O-ホスホ-α-D-マンノース-(1,3)-α-D-マンノース-(1,3)-α-D-マンノース-(1,3)-α-D-マンノース-(1,2)-α-D-マンノース、フェニックス・カナリーヤシ（Phoenix canariensis）種子より単離されたマンナンの酸加水分解によって得られるβ-1,4-D-マンノースオリゴ糖；β-1,4-マンノペンタオース、β-1,4-マンノヘキサオース；β-1,4-マンノヘプタオース、β-1,4-マンノオクタオース、β-1,4-マンノノナオース、β-1,4-マンノデカノース、β-1,4-マンノウンデカノース、β-1,4-マンノドデカノース、アミロペクチン、アミロース、アミロース酸加水分解により得られる1,4-D-グルコースオリゴ糖、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオース、α-1,4-マルトオクタオース、マルトノナオース、マルトデカノース、マルトウンデカノース；マルトドデカノース、これらの混合物または組み合わせ、物理的修飾体および化学的修飾体よりなる群から選択される。
【０００６】
ある好ましい態様としては、該オリゴ糖若しくは多糖は、マルトペンタオースである。
別の好ましい態様としては、該オリゴ糖若しくは多糖は、1,4-β-マンノヘキサオースである。
別の好ましい態様としては、該オリゴ糖若しくは多糖は、O-リン酸化マンナンである。
別の好ましい態様としては、該オリゴ糖若しくは多糖は、アミロースまたはアミロペクチンである。
別の好ましい態様としては、該オリゴ糖若しくは多糖は、ピキア・ホルスティ（Pichia holstii）により産生される細胞外ホスホマンナンであって、該ホスホマンナンを精製したD-マンノース高分子酸耐性多糖フラグメント（多糖核分画）である。好ましくは、該D-マンノース高分子酸耐性多糖フラグメントは、6-O-ホスホ-α-D-マンノース-(1,3)-α-D-マンノース-(1,3)-α-D-マンノース-(1,3)-α-D-マンノース-(1,2)-α-D-マンノースを含む。
【０００７】
本発明はまた、経皮的浸透や溶解度を増大させるような、該オリゴ糖若しくは多糖の化学的修飾体の使用も包含する。例えば、パルミチン酸のような脂質部分を該オリゴ糖若しくは多糖と結合させると経皮的浸透性を増大させ得る。また、アミロースのような不溶性炭水化物は化学的修飾によって水溶性を増大させ注射製剤化を可能にすることもできる。
好ましくは、本発明の対象は皺取りまたは皮膚増量化を必要とする人間である。
該オリゴ糖若しくは多糖は皮膚に直接注射するか局部的に投与することができる。該オリゴ糖若しくは多糖は重量濃度０．００１％から１００％の範囲で皮膚に輸送することができる。好ましくは、０．０１％から７０％の範囲である。
より好ましくは、重量濃度０．１％から３０％の範囲で皮膚に輸送する。さらに好ましくは、該オリゴ糖若しくは多糖は重量濃度１％から２０％の範囲で皮膚に輸送する。
【０００８】
第二の観点は、本発明により、D-グルコースが1,4-結合したオリゴ糖若しくは多糖の皮膚増量化のための使用が提供される。当該使用においては、オリゴ糖若しくは多糖が皮膚に輸送された後、その輸送部位若しくは近傍で該オリゴ糖若しくは多糖によって繊維芽細胞が集積し皮膚コラーゲンの産生が引き起こされる。
第三の観点は、本発明により、対象における皮膚増量のための化粧品剤が提供される。その化粧品剤には、適切な希釈剤若しくは賦形剤中でD-グルコースが1,4-結合したオリゴ糖若しくは多糖の有効量が含まれ、該オリゴ糖若しくは多糖は皮膚中の繊維芽細胞を集積し皮膚コラーゲンの産生を誘導する。
【０００９】
好ましくは、該オリゴ糖若しくは多糖はサッカロマイセス・セレビジエー由来のD-マンノース多糖（マンナン）；ピキア・ホルスティにより産生される細胞外ホスホマンナンであって、該ホスホマンナンを精製した高分子酸耐性多糖核；6-O-ホスホ-α-D-マンノース-(1,3)-α-D-マンノース-(1,3)-α-D-マンノース-(1,3)-α-D-マンノース-(1,2)-α-D-マンノース、フェニックス・カナリーヤシ（Phoenix canariensis）種子より単離されたマンナンの酸加水分解によって得られるβ-1,4-D-マンノースオリゴ糖；β-1,4-マンノペンタオース、β-1,4-マンノヘキサオース；β-1,4-マンノヘプタオース、β-1,4-マンノオクタオース、β-1,4-マンノノナオース、β-1,4-マンノデカノース、β-1,4-マンノウンデカノース、β-1,4-マンノドデカノース、アミロペクチン、アミロース、アミロース酸加水分解により得られる1,4-D-グルコースオリゴ糖、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオース、α-1,4-マルトオクタオース、マルトノナオース、マルトデカノース、マルトウンデカノース；マルトドデカノースおよびこれら混合物又は組み合わせよりなる群から選択される。
【００１０】
本明細書においては、文脈で他の意に解すべき場合を除き、「よりなる」の語は当該要素、整数若しくは工程または要素、整数若しくは工程の群を含み、さらに他の要素、整数若しくは工程または要素、整数若しくは工程の群を排除しないものと解される。
本願明細書中に含まれるいずれの文書、法令、物質、道具、物品等に関する議論ももっぱら本発明の背景を提供するためである。これら内容のすべてまたはいずれかが先行技術の基礎の一部を形成すること、または本願優先権主張日以前にオーストラリアに存在していて本発明の関連分野で共通の一般知識であったことを認めるものではない。
本発明の理解をより明らかにするために、以下の図面と実施例を参照して好ましい態様を記載する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
ある種の炭水化物によって皮膚組織における細胞質増加を誘導し得ることが発見され、それが本願発明の主題である。細胞質増加は炭水化物に晒された領域への細胞の移動によりもたらされると思われる。また、これら新しい細胞の到着は該炭水化物で処理された領域のコラーゲン沈着と関係することが見出された。そして必ずしもすべての炭水化物がこの細胞誘致活性を示す訳ではなく、この点においてこの細胞誘致活性は構造依存性があることが分かった。本発明者らはこの炭水化物の作用は、非特異的というよりむしろ特異的な相互作用によると信じている。さらに、処理された真皮中に新しく移動してくる細胞はそのほとんどが繊維芽細胞であることが分かった。
【００１２】
繊維芽細胞の移動を促進する作用を有する本発明の炭水化物の多くが天然に存在するオリゴ糖若しくは多糖またはそれらの誘導体である。グルコースをベースとするオリゴ糖若しくは多糖が皮膚組織において細胞質増加とコラーゲンの沈着を増加させることが分かった。そのようなオリゴ糖若しくは多糖は1,4-α-D-グルコースオリゴ糖を含み、通常、マルトースオリゴ糖と呼ばれている。マルトースオリゴ糖には、４から１２のグルコース単位が含まれ、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオース、マルトオクタオース、マルトノナオース、マルトデカノース、マルトウンデカノース、マルトドデカノースおよびこれらオリゴ糖の変化量を含むマルトースオリゴ糖が含まれる。マルトース多糖のアミロペクチンはこの点において特に有効であり、上記オリゴ糖を含むデンプンの加水分解物もまた同じ性質を有する。
【００１３】
上記の通り、例えばマルトースオリゴ糖のような、グルコースをベースとするオリゴ糖若しくは多糖が皮膚増量の作用を有する。本願発明に至る過程で、必ずしもすべてのグルコースをベースとするオリゴ糖若しくは多糖が皮膚における細胞質増加とコラーゲン沈着を等しく誘導する訳ではないことが分かった。従って、1,6-α-D-グルコース結合より構成されるオリゴ糖若しくは多糖、デキストランオリゴ糖、デキストラン多糖（デキストラン）は1,4-α-D-グルコース結合したマルトースオリゴ糖若しくは多糖よりもずっと活性は低い。1,6-α-D-グルコースオリゴ糖若しくは多糖の効力は弱いので、実際的な見地からするとこれらは臨床上効力なしと考えられる。
【００１４】
マンノースをベースとする、本発明のオリゴ糖および多糖は皮膚組織において細胞質増加とコラーゲン沈着を増加させることが分かったが、1,4-β-D-マンノースオリゴ糖および多糖を含み、これらは、通常、1,4-β-D-マンナンと呼ばれる。これらの中には、フェニックス・カナリーヤシ（Phoenix canariensis）の種子より単離された1,4-β-D-マンノース高分子およびそれから単離されたオリゴ糖が包含される(Villarroya and Petek, 1976)。４から１２のマンノース単位よりなるβ-D-1,4-マンノースオリゴ糖およびその混合物は適用された皮膚組織上において細胞質とコラーゲン沈着の増加に有効である。
その他のマンノースをベースとするオリゴ糖および多糖には、酵母ピキア・ホルスティ（Pichia holstii）の培地から単離されたリン酸化オリゴ糖およびリン酸化多糖(Parolis, et al.,1996;Bretthauer et al.,1973)が含まれ、適用された皮膚組織上において細胞質とコラーゲン沈着の増加に有効であることが分かった。サッカロマイセス・セレビジエーから単離されたマンナン(Lee and Ballou, 1965)もこの点において有効であることが分かった。
【００１５】
ここに記載した研究の結果、ある種の糖、特になかでも、マルトペンタオース；マルトヘキサオース；マルトヘプタオース；1,4-β-D-マンノペンタオース；ピキア・ホルスティから単離されたリン酸化マンナン；ピキア・ホルスティ由来のマンナンを酸加水分解して得られる五糖(PM5)およびリン酸化多糖核（PPME）；サッカロマイセス・セレビジエーから単離されたマンナンが組織の再構築および皺取りの薬物として有効である。これら薬物を皮膚に適用すれば、繊維芽細胞の移動とコラーゲン沈着および哺乳類皮膚の適用部位における皮膚の厚みを増加させる。
本発明は、組織の再構築および皺取りの薬物としての特異的なオリゴ糖若しくは多糖の使用に関する。この側面においては、少なくとも一つのオリゴ糖若しくは多糖又はその修飾体の有効量を動物または人間の患者に投与することよりなる、該患者における皮膚組織再構築と皺取りのための方法が提供される。
【００１６】
他の側面においては、オリゴ糖若しくは多糖又はその誘導体を含む少なくとも一つのリン酸糖の使用であって、組織の再構築および皺取りのための、化粧料組成物と人間および動物の医薬組成物を調製若しくは生産するための使用に関する。この側面においては、許容される化粧料、人間若しくは動物のための医薬の担体若しくは希釈剤とともに、少なくとも一つのリン酸化されたオリゴ糖若しくは多糖又はその誘導体よりなる化粧料組成物又は人間若しくは動物の医薬組成物が提供される。
本発明において使用することのできるオリゴ糖若しくは多糖は、天然に存在するものと合成によるものとからなり、その中にはリン酸糖残基、即ち、少なくともひとつのリン酸部分が結合した糖残基が含まれる。有用なオリゴ糖および多糖にはマンノースおよびホスホマンノース残基、マルトヘキサオース、マルトペンタオース、酵母マンナンよりなる多糖が含まれ、特に有用なオリゴ糖および多糖の中にはホスホマンノースを含むものが含まれる。現在、好ましい薬物としては、限定はされないが、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオース、1,4-β-D-マンノペンタオース、1,4-β-D-マンノヘキサオース、ピキア・ホルスティから単離されたリン酸化マンナン；ピキア・ホルスティ由来のマンナンを酸加水分解して得られる五糖(PM5)およびリン酸化多糖核（PPME）；サッカロマイセス・セレビジエーから単離されたマンナン、アミロースおよびアミノペクチンが含まれる。
【００１７】
PM5を調製するための適切な手段はＷＯ９０／０１９３８中に見ることができ、参考のために記載した。
本発明における炭水化物の作用機序の論理的説明により、本願発明を限定することは意図されていないが、本発明の活性化合物はその適用部位に繊維芽細胞を引きよせ当該部位にコラーゲン沈着を誘導することにより皺取りと皮膚組織再構築作用を発現すると信じられる。従って、活性なオリゴ糖、リン酸化オリゴ糖、多糖、リン酸化多糖またはその誘導体には、その投与部位において繊維芽細胞の移動とコラーゲン沈着の誘発に有効な化合物がいずれも含まれる。
【００１８】
本発明において活性な皺取りおよび皮膚組織再構築の薬剤は、顔や首の皮膚の浅い若しくは深い皺を含む柔組織を再構築しその欠陥を治癒するために使用することができる。これらの活性な薬剤は単独で使用することもできるし、互いに若しくは他の炭水化物と組み合わせて、またはコラーゲンやヒアルロン酸を含む他の公知の皮膚組織再構築剤と組み合わせて使用することもできる。
皮膚の増量または再構築とは真皮の構造を変化させることをいう。これらは、本発明のオリゴ糖または多糖により真皮中の細胞が刺激され新たなコラーゲンを産生させることにより起こる。再構築されまたは増量化された真皮は皺のより少ない、組織がなめらかで堅固、豊潤で弾力性のある皮膚を与える。
本発明は、投与部位に繊維芽細胞を引きよせコラーゲン産生を誘導し得るオリゴ糖または多糖を含むクリーム剤を局所投与することにより実施できる。注射剤による処置は通常、より少ない頻度で投与を維持しつつ２，３ヶ月の期間、一つ以上の処置方法でもって開始される。
【００１９】
本発明による処置の結果として、皺のより少ない、組織がなめらかで堅固、豊潤で弾力性のある皮膚が望まれる。
局所投与により繊維芽細胞を引き寄せ、併せてコラーゲン産生を刺激する薬物は他に知られていない。本発明は、皮膚の所望の部位で内因性のコラーゲン産生能力を提供する。他の処置が、皮膚の増量と再構築のために外因性コラーゲンの追加をしばしば必要とするのと対照的である。ヒト以外の動物由来コラーゲンを使用する処置には極めて不利な点があり、特にウシコラーゲンの場合はウィルスやプリオン等の感染若しくは有害物で汚染されていることがある。
局所投与のための製剤は通常、適切な基剤中に０．１％から飽和のオリゴ糖または多糖を含む。そのような基剤は当業者によく知られており、オリゴ糖または多糖のリポソームへのカプセル化、その他例えば欧州特許０５７２４９４号(1999 Taylor)の様に、無水基剤中で溶解していないオリゴ糖または多糖の微小カプセル化若しくは微小粒子（約２μm〜２０μm）等が含まれる。
【００２０】
吸収増大のため多くの医薬または組成物がプロドラッグとして与えられる。この点における一つの方法は脂溶性を増加させるような化学的修飾を提供することである。プロドラッグは生体内で特異的若しくは非特異的に活性薬へと変換される。
更に、プロドラッグから活性薬への非特異的変換は加水分解により可能である。プロドラッグから活性薬への特異的変換は酵素によって行われ得る。皮膚のエステラーゼ酵素は、脂溶性向上のために糖に付加させたパルミチン酸エステルを切断することができる。
【００２１】
本発明に適したオリゴ糖または多糖の修飾に好適な方法の例は次の文献に見出すことができる；Raku T, Kitagawa M, Shimakawa H, Tokiwa Y. 「脂溶性を有するトレハロースエステルの酵素的合成」J. Biotechnol., 2003 Feb 13;100(3):203-208；Redmann I, Pina M, Guyot B, Blaise P, Farines M, Graille J. 「グルコース脂肪酸の化学的酵素的合成」 Carbohydr. Res., 1997 May 12;300(2):103-108；Tsuzuki W, Kitamura Y,Suzuki T, Kobayashi S. 「修飾リパーゼによる糖脂肪酸エステルの合成」 Biotechnol. Bioeng. 1999 Aug 5;64(3):267-271；Bousquet MP, Willemot RM, Monsan P, Boures E. 「皮膚化粧料適用のための不飽和脂肪酸グルコシドエステルの酵素的合成」 Biotechnol. Bioeng., 1999 Jun 20;63(6):730-736。しかしながら、必要な修飾の種類により、また修飾されるオリゴ糖や多糖化合物によっては、他の化学的修飾法もまた適切である。
【００２２】
注射剤は水又は生理的食塩水中に溶解したオリゴ糖や多糖よりなる。適切な製剤にはオリゴ糖や多糖とコラーゲンや架橋ヒアルロン酸のような軟組織増量に使用される他の薬剤と組み合わせたものも含まれる。後者は、オリゴ糖や多糖の長期にわたる効果とともに、コラーゲンや架橋ヒアルロン酸による軟組織増量が即時に提供される利点がある。
ラットおよびヒトの繊維芽細胞は形態学上およびその機能上同一である。従って、ラット皮膚モデルにおける結果は直接ヒトの状況に外挿することができる。本発明者により得られた実験結果は、本発明が皮膚の特性改善可能性を示すことが明らかである。
他の薬物において、それほどまでに皮膚で繊維芽細胞を引き寄せコラーゲン産生を刺激する能力を示すものは知られておらず、本発明は皮膚増量の科学において予期できなかった進歩を明らかに提供する。
【００２３】
注射用として適切な薬学的製剤には、無菌水溶液（水溶性の場合）または分散液および無菌の注射用溶液若しくは分散液の即時調製のための無菌粉末等が含まれる。当該製剤は無菌であって注射針を容易に通過できる程度の流動性がなければならない。そして、製造および保管の条件下で安定であり、細菌やカビ等の微生物による汚染に対抗して保存されなければならない。担体としては溶媒または分散媒、例えば水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール等）、その適切な混合物および野菜オイル等が可能である。例えばレシチンのようなコーティング剤の使用、分散剤の場合には必要な粒子サイズの維持および界面活性剤の使用により適切な流動性を維持することができる。種々の抗菌剤または抗カビ剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チルメロサール（thirmerosal）等により微生物の行動を阻止することができる。多くの場合、例えば、砂糖、塩化ナトリウム等の等張化剤を含むことが好ましい。注射用組成物の吸収延長はモノステアリン酸マグネシウムやゼラチン等の吸収を遅延させる薬物を組成物中で使用することによりもたらされる。
【００２４】
無菌の注射用溶液は必要量の活性化合物を、要すれば種々の他の添加剤とともに適切な溶媒中に加え、無菌濾過を行って調製される。分散液は、一般に、種々の無菌活性成分を無菌の基剤に加えて調製され、当該基剤には基本となる分散媒と上記に列挙した中の必要な他の成分が含まれる。無菌の注射用溶液調製のための無菌粉末の場合は、真空乾燥又は凍結乾燥の技術が好ましく、これら技術によって、先の無菌濾過溶液から活性成分に所望の追加成分を任意に加えた粉末が得られる。
ここで用いられる「薬学的に許容される担体および／または希釈剤」とは、あらゆる溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤、抗カビ剤、等張化剤、吸収遅延化剤等を含む。薬学的に活性な物質に対してそのような媒体や薬剤を使用することは当業者によく知られている。慣用的に使用される媒体や薬剤が当該有効成分と相容れない場合を除いて、治療のための組成物中での使用が熟考される。該組成物中に補助的な活性成分を加えることもまた可能である。
【００２５】
投与量の均等性および投与の容易性のためには、投与量単位形の非経口投与組成物を製剤化することは有用である。ここでいう投与量単位形とは、対象である哺乳類に対する単一の投与量として適した、物理的に別個の単位をいう；各単位は必要な薬学的担体若しくは希釈剤との関連で所望の効果を発揮するように計算された所定量の活性成分を含む。本発明における新規な投与量単位形の仕様は、以下のものによって変化し、そして直接的に依存する；(a)活性物質の独自の性質および達成される効果；および(b)以下に詳しく開示するように身体の健康が損なわれた病的状況にある生存中の対象において、病気の治療のための活性物質を配合する技術に固有の制限。
局所投与に適した希釈剤およびクリーム基剤は当業者によく知られており本発明に適用することができる。
【実施例１】
【００２６】
正常ラット皮膚における、投与部位への細胞移動に対する皮内注射したグルコース、マルトースおよびマルトペンタオースの効果。
健康な、特定病原体未感染の週齢１０−１２週の雌性Fischerラット（ｎ＝３）をエーテル麻酔し、ミニ電気バリカンで背中の二つの領域、それぞれ脊柱の両側で平行に約1.5cm×４cmの範囲の毛を刈った。試験物質および対照物質を定められた一辺１cmの正方形の中心に注射した。生じ得る身体構造上の部位の効果をコントロールするため、それら物質は少なくとも一度は四つの異なる部位に注射した。薬物は１００mg/mlの濃度で生理食塩水に溶解し投与前に無菌濾過した。３０ゲージ針を用いて５０μlの注射量を皮内投与し、対照は通常の無菌生理食塩水５０μlを皮内投与した。投与４８時間後に動物を屠殺し、投与部位を切片にして顕微鏡検査に付した。この検査において、生理食塩水およびグルコース、マルトースは投与部位の細胞質に対していずれも影響を与えなかった。しかしマルトペンタオースを投与した部位は、真皮の下部層において有意に細胞質増加（P=０．００１）が認められた。
【実施例２】
【００２７】
正常ラット皮膚における、投与部位への細胞移動に対する皮内注射したデキストランおよびマルトペンタオースの効果。
上記実施例１に概略を記載した試験と同様にして、週齢１０−１２週の雌性Fischerラット（ｎ＝３）に３０ゲージ針を用いて、i)臨床用デキストラン（MW 71,400）５０mg/ml、ii)マルトペンタオース５０mg/ml、およびiii)通常の生理食塩水をそれぞれ５０μl、皮内投与した。投与４８時間後に皮膚の投与部位を切片にして顕微鏡検査に付した。この場合、デキストラン投与部位には細胞質増加が認められたが生理食塩水投与部位と比較して統計上有意差はなかった。一方、マルトペンタオースを投与した部位は、生理食塩水の場合と比較して明らかにかつ有意の細胞質増加を示した。
【実施例３】
【００２８】
正常ラット皮膚における、投与部位への細胞移動に対する皮内注射したマルトトリオースおよびマルトペンタオースの効果。
前記実施例１に概略を記載した試験と同様にして、週齢１０−１２週の雌性Fischerラット（ｎ＝２）に３０ゲージ針を用いて、i)マルトトリオース１００mg/ml、ii)マルトペンタオース１００mg/ml、およびiii)通常の生理食塩水をそれぞれ５０μl、皮内投与した。投与４８時間後に皮膚の投与部位を切片にして顕微鏡検査に付した。この場合、生理食塩水およびマルトトリオース投与部位には細胞質増加は認められなかったが、実施例１および２と同様マルトペンタオースを投与した部位は、生理食塩水の場合と比較して明らかにかつ有意の細胞質増加を示した。
【実施例４】
【００２９】
正常ラット皮膚における、投与部位への細胞移動に対する皮内注射したマルトペンタオースおよび1,4-β-マンノヘキサオースの効果。
前記実施例１に概略を記載した試験と同様にして、週齢１０−１２週の雌性Fischerラット（ｎ＝２）に３０ゲージ針を用いて、i)マルトペンタオース１００mg/ml、ii) 1,4-β-マンノヘキサオース１００mg/ml、およびiii)通常の生理食塩水をそれぞれ５０μl、皮内投与した。投与４８時間後に皮膚の投与部位を切片にして顕微鏡検査に付した。この場合、マルトペンタオースおよび1,4-β-マンノヘキサオースの投与部位にそれぞれ細胞質の増加が認められ、いずれも生理食塩水に比較して有意差があった。1,4-β-マンノヘキサオースの投与部位はマルトペンタオースのそれと比較して明らかに増加量が大きかったが統計上の有意差はなかった。
【実施例５】
【００３０】
正常ラット皮膚における、投与部位への細胞移動に対する皮内注射したアミロースおよびピキア・ホルスティから単離されたＯ-リン酸化マンナンの効果。
前記実施例１に概略を記載した試験と同様にして、週齢１０−１２週の雌性Fischerラット（ｎ＝２）に３０ゲージ針を用いて、i)アミロース５０mg/ml、ii)ピキア・ホルスティから単離されたＯ-リン酸化マンナン５０mg/ml、およびiii)通常の生理食塩水をそれぞれ５０μl、皮内投与した。投与４８時間後に皮膚の投与部位を切片にして顕微鏡検査に付した。この場合、アミロースおよびＯ-リン酸化マンナンを投与した部位のそれぞれに細胞質増加が認められ、いずれも生理食塩水投与部位に比較して有意差があった。
【実施例６】
【００３１】
この実施例では、Ｏ-リン酸化マンナン皮内投与後の細胞質に与える影響を試験した。この試験に用いる方法は実施例１で使用したものと同様である。エーテル麻酔の後、週齢８−１０週の雌性Fischerラット腹部の両側の毛を刈った。３０ゲージ針を用いて生理食塩水（５０μl）を皮膚上の定められた１cm2の中心に注射し、Ｏ-リン酸化マンナン（５０μl；５０mg/ml生理食塩水）を同様に当該動物の対側性に注射した。４８時間、１週、２週および４週後に動物を過剰のＣＯ２で安楽死させ組織学的評価のために皮膚サンプルを作製した。４８時間、１週および２週後の領域において真皮の細胞質増加（上記の通り）が描写された。Figure１は生理食塩水およびＯ-リン酸化マンナン注射１週間後の該投与部位の組織学的切片を示す。一ヶ月後、細胞質増加は以前と比べると減少はしているが、依然明白であった。
【実施例７】
【００３２】
以下の実施例では五糖（PM5）およびマルトース多糖アミロペクチンを皮膚の局所に投与した後、これらが細胞質増加を誘導し得る能力を評価した。エーテル麻酔の後、週齢８−１０週の雌性Wisterラット腹部の両側の毛を刈った。無菌の生理食塩水（５０μl）、PM5（５０μl；５０mg/ml生理食塩水）、アミロペクチン（５０μl；５０mg/ml生理食塩水）を腹部皮膚上の定められた１cm2の中心に皮内注射した。注射４８時間および７日後動物群を過剰のＣＯ２で安楽死させ、６μmの組織学的切片を作製しＨ＆Ｅおよびゴモリ（コラーゲン）染色して皮膚サンプルを検査した。加えて、真皮中の繊維芽細胞を同定するために、パラフィン埋め込みの皮膚切片中でマウスの抗ラットプロリル4-ヒドロキシラーゼモノクローナル抗体（Chemicon International Inc.）を用いて免疫組織化学を使用した。PM5処理した皮膚切片では、繊維芽細胞様の細胞の増加と、当該増加の大多数とともに真皮下部層のコラーゲン沈着が認められた。
アミロペクチンは真皮の上部および下部の領域において繊維芽細胞様の細胞の浸潤を顕著に生じさせ（Figure２）、それは真皮中のコラーゲン（ゴモリ染色で示された）（Figure３）および繊維芽細胞数（免疫組織化学染色で示された）の増加と関連していた。
【００３３】
ラットを用いた実験データによって、選択された1,4-結合D-グルコースオリゴ糖又は多糖がin vivoでの繊維芽細胞の蓄積とコラーゲン産生を引き起こすことができるとの予期できない、そして有用な特徴が示された。繊維芽細胞の蓄積とコラーゲン産生は、やがて、より皺の少ない、組織がなめらかで堅固、豊潤で弾力性のある皮膚を与える。
特別な態様でもって示されたとおり、本発明においては広く記載された発明の範囲や精神を逸脱することなく、多くのバリエーションや修飾が可能であることが、当業者にとって好評である。そこで、本発明の態様は例示であって限定的でないことを理解すべきである。
【００３４】
参考文献
Klein, AW, Wexler, P, Carruthers, A and Carruthers J, 1997. 「顔面の皺の処置」 Dermatology Clinics, vol 15,595-607. 
Gilchrest, BA and Chiu, N, 1995. In : Merck Manual of Geriatrics. Section 15 Dermatologic and Sensory Organ Disorders Chapter 122「加齢と皮膚」1995 Merck & Co., Inc. Whitehouse Station NJ, USA. 
Fenske, NA and Lober CW. , 1986. 「通常の加齢による皮膚の構造および機能的変化」 Journal of the American Academy of Dermatology, vol 4,571-585. 
Contet-Audonneau, JL, Jeanmarie, C and Pauly, G, 1999. 「ヒトの皺の組織学的研究：皺の有無による、日光に晒された部分と遮蔽された部分との比較」British Journal of Dermatology, vol 140,1038- 1047. 
Gilchrest, BA, 1997. 「トレチノインの局所投与による光損傷の治療・概論」 Journal of the American Academy of Dermatology, vol 36, s27-s36. 
【００３５】
Moy, LS, Howe, K etal., 1996. 「グリコール酸による、in vitro培養ヒト皮膚繊維芽細胞のコラーゲン産生の変化」Dermatological Surgery, vol 22,439-441. 
Kang, S. , Fisher, GJ et al., 1997. 「光による加齢とトレチノイン局所投与：療法、病因および予防法」 Archives of Dermatology, vol 133,1280-1284. 
Villarroya H and Petek, F, 1976. 「アルファルファ種子からのβ-マンナナーゼの単離とその性質」 Biochimica er Biophysica Acta, vol 438,200-211. 
Parolis, LAS, Duus,J, Parolis, H, Meldal, M and Bock, K.「ピキア（ハンセヌラ）ホルスティNRRL Y-2448の細胞外多糖：ホスホマンナン骨格の構造」 Carbohydrate Research, vol 293,101-117. 
Bretthauer, RK, Kaczorowski, GJ and Weise, MJ, 1973.「ハンセヌラ・ホルスティNRRL Y-2448から単離されたリン酸化五糖ホスホマンナンの特徴付け」 Biochemistry, vol 12,1251-1256. 
Lee, Y-C and Ballou, CE, 1965. 「サッカロマイセス・セレビジエーマンナンからのマンノバイオース、マンノトリオースおよび新規マンノテトラオースの調製」 Biochemsitry, vol 4,257- 264. 
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】Figure 1は実施例６におけるラット皮膚の組織学的切断図であり、O-ホスホマンナンの皮内注射投与一週間後の細胞質の増加を示す。
【図２】Figure 2は実施例７におけるラット皮膚の組織学的切断図であり、アミロペクチンの注射一週間後の繊維芽細胞様の細胞（抗ラットプロピル4-ヒドロキシラーゼモノクローナルマウス抗体による免疫組織学的染色を行い、エオシンおよびヘマトキシリンにより対比染色した）の流入を示す。
【図３】Figure 3は実施例７におけるラット皮膚の、ゴモリ（コラーゲン）染色による組織学的切断図であり、アミロペクチン（A）または対照の生理食塩水（B）（５０μl）を一週間前に投与したものを示す。
【図１】
2005527498.tif 000002
【図２】
2005527498.tif 000003
【図３】
2005527498.tif 000004
2005527498.tif 000005
【国際調査報告】
2005527498.tif 000006
2005527498.tif 000007
2005527498.tif 000008