(57)【要約】新規なエキセンジンおよびエキセンジン・アゴニスト化合物処方ならびにその投与方法を提供する。これらの組成物および方法は、血漿グルコースを低下させ、または胃内容排出を遅延および／もしくは鈍化させ、または食物取込みを阻害することによって恩恵を受ける糖尿病または症状を治療するのに有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
長期放出型処方中に、組成物をヒトに投与する場合に所定の放出期間の少なくとも２５％の間少なくとも５ｐｇ／ｍｌの平均持続血漿レベルが達成されるような量のエキセンジンまたはエキセンジン・アゴニスト・ペプチドを含む医薬組成物であって、ここに該処方は該ペプチドを所定の放出期間にわたって放出することができ、該期間は少なくとも１時間であることを特徴とする医薬組成物。
【請求項２】
血漿が所定の放出期間の少なくとも５０％の間達成される請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
血漿レベルが所定の放出期間の少なくとも７５％の間達成される請求項１記載の医薬組成物。
【請求項４】
血漿レベルが少なくとも４０ｐｇ／ｍｌである請求項１ないし３いずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
血漿レベルが少なくとも１００ｐｇ／ｍｌである請求項１ないし３いずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
血漿レベルが約５ｐｇ／ｍｌないし約１００ｐｇ／ｍｌである請求項１ないし３いずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
血漿レベルが約５ｐｇ／ｍｌないし約４０ｐｇ／ｍｌである請求項１ないし３いずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
血漿レベルが約４０ｐｇ／ｍｌないし約１００ｐｇ／ｍｌである請求項１ないし３いずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
所定の放出期間が少なくとも１日である請求項１ないし８いずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
所定の放出期間が少なくとも１週間である請求項１ないし８いずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
所定の放出期間が少なくとも１ヶ月である請求項１ないし８いずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを約０．０００５μｇ／ｋｇ／用量ないし約０．０２μｇ／ｋｇ／用量の範囲の量で患者に投与することを含む、その投与を必要とする患者にエキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを投与する方法。
【請求項１３】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを約０．０００５μｇ／ｋｇ／用量以上であって０．００５μｇ／ｋｇ／用量未満の量で投与する請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを約０．０００５μｇ／ｋｇ／用量以上であって０．００５μｇ／ｋｇ／用量未満の量で投与する請求項１２記載の方法。
【請求項１５】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを約０．０００５μｇ／ｋｇ／用量以上であって０．００１μｇ／ｋｇ／用量未満の量で投与する請求項１２記載の方法。
【請求項１６】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを約０．００１μｇ／ｋｇ／用量以上であって０．０２μｇ／ｋｇ／用量未満の量で投与する請求項１２記載の方法。
【請求項１７】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを約０．００１μｇ／ｋｇ／用量以上であって０．００５μｇ／ｋｇ／用量未満の量で投与する請求項１２記載の方法。
【請求項１８】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを鼻腔、経口、口内、舌下、気管内、経皮、経粘膜または経肺経路を介して投与する請求項１２ないし１７いずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを非経口投与する請求項１２ないし１７いずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
非経口投与が皮下である請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
非経口投与が、少なくとも１時間の時間過程にわたる長期投与用に設計された植込み型（implanted)または注射型の徐放組成物を介する請求項１９記載の方法。
【請求項２２】
徐放組成物が少なくとも１日にわたる長期投与用に設計されている請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
徐放組成物が少なくとも１週間にわたる長期投与用に設計されている請求項２１記載の方法。
【請求項２４】
徐放組成物が少なくとも１ヶ月にわたる長期投与用に設計されている請求項２１記載の方法。
【請求項２５】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを、少なくとも５ｐｇ／ｍｌの平均持続血漿レベルが投与した時間の少なくとも２５％の間達成されるように、少なくとも１時間の時間にわたって投与する請求項１ないし２１いずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを、少なくとも５ｐｇ／ｍｌの平均持続血漿レベルが投与した時間の少なくとも５０％の間達成されるように、少なくとも２４時間の時間にわたって投与する請求項１ないし２１いずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを、少なくとも５ｐｇ／ｍｌの平均持続血漿レベルが投与した時間の少なくとも５０％の間達成されるように、少なくとも１週間の時間にわたって投与する請求項１ないし２１いずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを、少なくとも５ｐｇ／ｍｌの平均持続血漿レベルが投与した時間の少なくとも５０％の間達成されるように、少なくとも１ヶ月の時間にわたって投与する請求項１ないし２１いずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを、少なくとも４０ｐｇ／ｍｌの平均持続血漿レベルが投与した時間の少なくとも７５％の間達成されるように、少なくとも１時間の時間にわたって投与する請求項１ないし２１いずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを、少なくとも４０ｐｇ／ｍｌの平均持続血漿レベルが投与した時間の少なくとも９０％の間達成されるように、少なくとも１時間の時間にわたって投与する請求項１ないし２１いずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを、１日の時間経過にわたって単一または分割した用量で投与する請求項１２ないし２２、２５、２６、２９または３０いずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを、１日当たりに１回ないし４回患者に投与する請求項１２ないし２２、２５、２６、２９ないし３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを、１日当たりに２回患者に投与する請求項１２ないし２２、２５、２６、２９ないし３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
患者が真性糖尿病に罹っている請求項１ないし３３いずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
患者がグルコース代謝異常（impared glucose tolerance）に罹っている請求項１ないし３４いずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
患者が肥満である請求項１ないし３５いずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
患者が高血糖症である請求項１ないし３６いずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
患者が脂質異常症に罹っている請求項１ないし３７いずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
患者が心血管疾患に罹っている請求項１ないし３８いずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストの平均持続血漿レベルが約５００ｐｇ／ｍｌを超えない請求項１ないし３９いずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストの平均持続血漿レベルが約２００ｐｇ／ｍｌを超えない請求項１ないし３９いずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストの平均持続血漿レベルが約１００ｐｇ／ｍｌを超えない請求項１ないし３９いずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストの平均持続血漿レベルが約６０ｐｇ／ｍｌを超えない請求項１ないし３９いずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
エキセンジン・アゴニストがエキセンジン・アナログである請求項１ないし１１いずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４５】
エキセンジン・アゴニストがエキセンジン・アナログである請求項１２ないし４３いずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストがエキセンジンである請求項１ないし１１いずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
エキセンジンがエキセンジン−４である請求項４６記載の医薬組成物。
【請求項４８】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストがエキセンジンである請求項１２ないし４３いずれか１項に記載の方法。
【請求項４９】
エキセンジンがエキセンジン−４である請求項４８記載の方法。
【請求項５０】
請求項１ないし１１、４４、４６または４７いずれか１項に記載の医薬組成物を投与することを含む、投与を必要とする患者にエキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを投与する方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、仮特許出願、仮特許出願番号、係属中の非仮特許出願番号１０／１５７,２２４号に変更するための請求中の出願である、２００２年５月２８日に出願された"Novel Exendin Agonist Formulations and Methods of Administration Thereof"なる表題の米国特許出願の優先権を主張する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、いずれの手段によっても生体活性であってデリバリー可能な新規なエキセンジンおよびペプチド・エキセンジン・アゴニスト処方、投与量、および投与量処方に関する。
【０００３】
背景
以下の記載には、本発明を理解するのに有用となり得る情報が含まれている。本明細書中に提供するいずれかの情報がここに特許請求する発明または関連発明に対して先行技術となることも、特異的または暗黙的に参照したいずれかの刊行物が先行技術となることも断じて許されない。
【０００４】
エキセンジンは、アメリカドクトカゲおよびメキシコドクトカゲの唾液分泌物中に見出されるペプチドである。エキセンジン−３［配列番号：１  His Ser Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser-ＮＨ２］は、ヘロデルマ・ホリダム(Heloderma horridum)（メキシコドクトカゲ）の唾液分泌物中に存在し、エキセンジン−４［配列番号：２  His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser-ＮＨ２］はヘロデルマ・サスペクタム(Heloderma suspectum)（アメリカドクトカゲ）の唾液分泌物中に存在する(Eng，J．ら、J．Biol．Chem.，265：20259−62，1990；Eng，J.ら、J. Biol. Chem.，267：7402−05，1992)。
【０００５】
報告によれば、エキセンジン−４は、ソマトスタチン放出を刺激し、単離した胃においてガストリン放出を阻害し得る (Gokeら、J．Biol．Chem.，268：19650−55，1993；Scheppら、Eur．J. Pharmacol.，69：183−91，1994；Eisseleら、Life Sci.，55：629−34，1994)。報告によれば、エキセンジン−３およびエキセンジン−４は、膵臓腺房細胞におけるｃＡＭＰ産生を刺激し、膵臓腺房細胞からのアミラーゼ放出を刺激することが見出されている (Malhotra，R.ら、Regulatory Peptides, 41：149−56，1992；Raufmanら、J．Biol．Chem., 267：21432−37，1992；Singhら、Regul. Pept.，53：47−59, 1994)。
【０００６】
それらのインスリン分泌増強活性に基づいて、真性糖尿病の治療および高血糖症の予防にエキセンジン−３およびエキセンジン−４の使用が提唱されている(Eng、米国特許第５,４２４,２８６号)。
【０００７】
エキセンジン−４は、エキセンジン−４とある程度同様のグルコース低下効果を示す哺乳動物ペプチドであるＧＬＰ−１よりも顕著に長い作用期間も有する。エキセンジンは、哺乳動物ＧＬＰ−１に類似していない（ChenおよびDrucker, J. Biol. Chem. 272 (7): 4108-15 (1997)）。アメリカドクトカゲが、エキセンジンよりも哺乳動物プログルカゴンにより類似するプログルカゴン（それからＧＬＰ−１がプロセシングされる）について別々の遺伝子も有するという知見は、エキセンジンがＧＬＰ−１の種ホモログではないことを示している。
【０００８】
胃腸運動の調節用（ＰＣＴ／ＵＳ９７／１４１９９）、食物摂取の減少用（ＰＣＴ／ＵＳ９８／００４４９）ならびに筋肉収縮および利尿効果用（ＰＣＴ／ＵＳ９９／０２５５４）のごときエキセンジンおよびエキセンジン・アゴニストの種々の用途が示唆されている。新規なエキセンジン・アゴニスト化合物は、例えばＰＣＴ／ＵＳ９８／１６３８７、ＰＣＴ／ＵＳ９８／２４２１０およびＰＣＴ／ＵＳ９８／２４２７３に記載されている。
【０００９】
ペプチド薬剤のデリバリーは困難な場合がある。それは、分子のサイズ、タンパク質分解性の分解に対する感受性、迅速な血漿クリアランス、独特な用量−応答曲線、免疫原性、生体不和合性（bioincompatibility）、ならびにペプチドおよびタンパク質の凝集、吸着および変性の受け易さのごとき要素のためである。したがって、上記に参照したエキセンジンおよびペプチド・エキセンジン・アゴニスト・アナログのごときペプチド薬剤を投与するための、不便で、時として痛ましい注射に代わる方法の開発に対する要望が存在し続けている。
【００１０】
発明の概要
注射によるエキセンジンおよびエキセンジン・アゴニストの投与に有用な処方および投与量に加えて、これらの課題を解決し、かつ、治療上有効量のエキセンジンおよびエキセンジン・アゴニストの非注射デリバリーに有用である処方、投与量処方および方法をここに記載し、特許請求する。
【００１１】
以前に知られまたは予想されていたよりもより低血漿レベルのエキセンジンおよびエキセンジン・アゴニストでも、特に少なくとも１時間、より好ましくは少なくとも２−２４時間、最も好ましくは１日ないし４ヶ月にわたって連続して投与した場合には、血中グルコースを低下させるのに有効であることを発見した。最も好ましい投与を達成するためには、関心のある投与期間のエキセンジンおよびエキセンジン・アゴニストの連続した放出またはデリバリーを提供する処方および方法が必要である。これらの例には、注入ポンプ、連続注入、またはポリマー、油剤もしくは水不溶性マトリクスを利用する放出制御型処方が含まれる。
【００１２】
驚くべき低い用量および血漿レベルのエキセンジンおよびアゴニストが治療結果を生じることを発見した。必要とする患者に対するエキセンジンおよびアゴニストの投与方法を提供する。かかる患者には、真性糖尿病に罹った患者、グルコース代謝異常（ＩＴＧ）に罹った患者、肥満、高血糖症である患者、または脂質異常症および／もしくは心血管疾患に罹った患者が含まれる。投与様式に依存して、約０.０００５μｇ／ｋｇ／用量ないし約１２０００μｇ／ｋｇ／用量の用量を用いて、治療的な血漿レベル（少なくとも５ｐｇ／ｍｌ、好ましくは少なくとも４０ｐｇ／ｍｌ）を達成し得る。好ましくは、ピーク血漿レベルは約５００ｐｇ／ｍｌ、より好ましくは約２５０ｐｇ／ｍｌ、および最も好ましくは約１５０ｐｇ／ｍｌを超えない。
【００１３】
非経口投与する場合、約０.００１μｇ／ｋｇ／用量ないし約１.０μｇ／ｋｇ／用量の量のエキセンジンおよびアゴニストが、治療的効果を作り出す。巨丸剤、あるいは例えば注入または徐放マトリクスによる、長期にわたる皮下投与が好ましい。徐放とは、少なくとも１時間、好ましくは少なくとも１日、１週間または１ヶ月にわたって起こるものであるがより長期間の放出も意図される。理想的には、放出は均一であるが、放出プロファイルにおける変動は許容し得る。連続して投与しない場合、好ましくはエキセンジンおよびアゴニストは、１日あたり１ないし４回、好ましくは１日あたり２回投与する。
【００１４】
非経口経路の投与によらない場合、エキセンジンまたはアゴニストは、鼻腔、口腔、口内、舌下、気管内、経皮、経粘膜、肺または当該技術分野で知られているいずれか他の経路を介して投与し得る。
【００１５】
本発明は、少なくとも５ｐｇ／ｍｌのヒトにおける血漿レベルが所定の放出期間の少なくとも２５％、より好ましくは放出期間の５０％、７５％または９０％の間達成されるような量で、エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニスト、特に、少なくとも１時間の所定の放出期間にわたってペプチドを放出することができる、長期放出処方中のペプチド（ペプチドに限定されるものではない）を含む医薬組成物を特徴とする。好ましくは、平均持続血漿レベル（所定の放出期間内、例えば開始時、終了時、または中間時に採った少なくとも２の血漿レベルの平均を意味する）は、所定の放出期間の２５−１００％にわたって少なくとも４０ｐｇ／ｍｌである。
【００１６】
"エキセンジン・アゴニスト"とは、例えば、エキセンジンが１またはそれを超えるこれらの効果を引き起こす受容体に結合することによって、またはそれによってエキセンジンが１またはそれを超えるこれらの効果を引き起こすシグナル伝達カスケードを活性化することによって、エキセンジンの１またはそれを超える効果を模倣する化合物を意味する。エキセンジン・アゴニストには、エキセンジンの１またはそれを超える望ましい活性を有するエキセンジン−３およびエキセンジン−４のアナログおよび誘導体のごときエキセンジン・アゴニスト・ペプチドが含まれる。種々のエキセンジン・アゴニスト・アナログを本明細書で同定または参照する。しかしながら、本発明の処方に用いるための分子には、エキセンジン・アゴニストまたはアンタゴニストとして作用する、いずれかの起源に由来するペプチドおよびペプチド・フラグメントならびに小分子が含まれる。
【００１７】
もう１の態様によれば、本発明は、糖尿病（１型および２型糖尿病を含む）、肥満症、ならびに胃内容排出を遅延し、血漿グルコースレベルを低下させ、および食物取込みを減少させ得る治療剤の投与から恩恵を受ける他の状態を治療するのに有用である、新規なエキセンジン・アゴニスト化合物の処方および投与量、ならびにそれを投与する方法を提供する。
【００１８】
本発明には、エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを投与することよってインスリン感度を高めることを目的とした対象の治療方法も含まれる。本明細書に記載するエキセンジンおよびエキセンジン・アゴニストの処方および投与量を用いて、内因性または外因性のインスリンに対する対象の感度を高め得る。
【００１９】
好ましい形態の以下の記載から、および請求の範囲の内容から、本発明の他の特徴および利点は明らかであろう。
【００２０】
本発明と一致し、本明細書中で使用するように、以下の用語は別段指摘しない限り以下の意味を有するように定義される。"医薬上許容される塩"には、かかる化合物および有機または無機酸の組合せから誘導される本発明の化合物の塩が含まれる。実際には、塩形態の使用は塩基形態の使用と実質的に等しい。本発明の化合物は、有利塩基および塩形態の両方で有用であり、両方の形態は本発明の範囲内と考える。
【００２１】
発明の詳細な説明
エキセンジンおよびエキセンジン・アゴニスト
エキセンジン−３およびエキセンジン−４は自然界に存在するペプチドである。エキセンジン−４の動物試験は、血中グルコースを低下させるその能力が数時間持続することを示している。エキセンジン−４、３９のアミノ酸のポリペプチドは、本明細書に記載する固相合成を用いて合成し、この合成物質は天然のエキセンジン−４のものと同一であることが示されている。単離した自然界に存在するエキセンジンまたは遺伝子組換えで作製したエキセンジンも、いずれのエキセンジン・アゴニストまたはアナログと同様に本発明の方法または組成物において完全に機能する。また、エキセンジン活性の拮抗が望まれる用途のためのエキセンジン・アンタゴニストおよびアゴニスト・アナログの使用も意図する。
【００２２】
エキセンジン−４の非臨床薬理学の種々の態様が研究されている。脳においては、エキセンジン−４は主に菱脳（hindbrain）の最後野（area postrema）および孤束核（nucleus tractus solitarius）領域に結合し、前脳の脳弓下器官に結合する。エキセンジン−４の結合は、ラットおよびマウスの脳および腎臓において観察されている。腎臓におけるエキセンジン−４が結合する構造は知られていない。
【００２３】
多くの他の実験がエキセンジン−４およびＧＬＰ−１の生物作用を比較しており、エキセンジン−４について特性のより好ましいスペクトルを実証している。単一の皮下用量のエキセンジン−４はｄｂ／ｄｂ（糖尿病）およびｏｂ／ｏｂ（糖尿病性肥満）マウスにおける血漿グルコースを４０％まで低下した。Ｚｕｃｋｅｒ糖尿病肥満（ＺＤＦ）ラットにおいては、エキセンジン−４を用いた５週間の処理が４１％までＨｂＡ１ｃ（血漿グルコースレベルを評価するために用いられるグルコシル化ヘモグロビンの測定）を低下した。肥満ＺＤＦラットにおける５週間の処理の後に、インスリン感度が７６％改善された。グルコース代謝異常霊長類においては、血漿グルコースにおける用量依存性の低下も観察された。グルコース刺激されたインスリンの放出を増幅することにおいては、エキセンジンがＧＬＰ−１よりもより強力および／または有効であることを示す実験の結果を記載している実施例５も参照されたい。さらに、実施例６は、イン・ビボ(in vivo)でグルコースを低下させるエキセンジン−４の能力がＧＬＰ−１のものよりも３４３０倍より強力であったことを示す研究を記載している。
【００２４】
エキセンジン−４のインスリン分泌増強作用も齧歯類で観察されており、非絶食Harlan Sprague Dawley（ＨＳＤ）ラットにおいては１００％を超えて、非絶食ｄｂ／ｄｂマウスにおいては〜１０倍に上って、グルコースに対するインスリン応答を改善した。より高い前処理血漿グルコース濃度は、より大きなグルコース低下効果と関連していた。したがって、エキセンジン−４の観察されたグルコース低下効果はグルコース依存的のようであり、動物がすでに正常血糖である場合には最小である。実施例７および１１に記載するごとく、エキセンジン−４処理は、血糖インデックスおよびインスリン感度における改善とも関連している。
【００２５】
エキセンジン−４は、ＨＳＤラットにおける胃内容排出を用量依存的に遅延させ、ＧＬＰ−１よりこの作用について約９０倍強力であった。また、エキセンジン−４は、末梢投与後にＮＩＨ／Ｓｗ（Ｓｗｉｓｓ）マウスにおける食物取込みを減少させることも示されており、この作用についてはＧＬＰ−１よりも少なくとも１０００倍強力であることが示された。エキセンジン−４は、高インスリン血症の高血糖クランプ状態の間の麻酔ＺＤＦラットにおいてほぼ４０％血漿中グルカゴン濃度を低下させたが、正常ラットにおける正常血糖状態の間、血漿中グルカゴン濃度に影響しなかった。実施例３を参照されたい。エキセンジン−４は、肥満ＺＤＦラットにおいて、体重を用量依存的に低下させるが、痩身ＺＤＦラットにおいては、体重の観察された減少は一過性であるようであった。
【００２６】
インスリン分泌を増加させ、回復させ、ならびにグルカゴン分泌を阻害することに対する効果を通して、エキセンジン−４は、インスリンを分泌する能力を保持する２型糖尿病に罹った人々に有用である。また、食物取込み、胃内容排出、栄養吸収を変調する他の機構、およびグルカゴン分泌に対するその効果は、例えば、肥満、１型糖尿病、およびインスリン分泌が低下した２型糖尿病の人々の治療において、エキセンジン−４の有用性も支持する。
【００２７】
エキセンジン−４の毒性学は、マウス、ラットおよびサルにおける単回投与試験、ラットおよびサルにおける反復投与試験（２８回までの連続する日用量）ならびに突然変異誘発性および染色体変化についてのｉｎ ｖｉｔｒｏ試験において観察されている。現在まで、死亡は起きておらず、血液学、臨床化学または全体観察および顕微鏡的な組織変化における処理に関連した変化は観察されていない。エキセンジン−４は、非突然変異誘発性であることが示され、（５０００μｇ／ｍｌまでの）試験濃度にて染色体異常は生じなかった。
【００２８】
エキセンジン−４の非臨床的な薬物動力学および代謝の研究の支持において、多数のイムノアッセイが開発された。限定された感度(〜１００ｐＭ)を有するラジオイムノアッセイが、初期の薬物動力学的な試験に用いられた。エキセンジン−４についての２部位ＩＲＭＡアッセイは、１５ｐＭ（６３ｐｇ／ｍｌ）の定量下限をもってその後に実質的に検証された。マウス・モノクローナル抗体を用いる検証されたサンドイッチ型免疫酵素アッセイ（ＩＥＭＡ）アッセイは２.５ｐｇ／ｍｌの定量下限を有していた（実施例１を参照されたい）。皮下投与されたエキセンジン−４のバイオアべイラビリティーは、ラジオイムノアッセイを用いてほぼ５０〜８０％であることが判明した。これは、腹腔内投与後に見られたもの（４８〜６０％）と同様であった。ピーク血漿濃度（Ｃｍａｘ）は、３０および４３分（Ｔｍａｘ）の間に生じた。ＣｍａｘおよびＡＵＣ値は、両方とも用量と単調に関連した。皮下投与されたエキセンジン−４についての見かけの最終半減期は、ほぼ９０〜１１０分であった。これは、静脈内投与後に見られた１４〜４１分よりかなり長かった。同様の結果は、ＩＲＭＡアッセイを用いて得られた。ＧＬＰ−１と比較したエキセンジン−４を用いた分解試験は、エキセンジン−４が分解に対して比較的抵抗性であることを示している。
【００２９】
代謝に対するその安定性について、および、その物理的特徴の改善について、特にそれがペプチド安定性および別のデリバリーシステムへの従順性に適するため、エキセンジンの活性に関連し得る構造を評価するための構造活性関係（ＳＡＲ）の調査は、エキセンジン・アゴニスト・ペプチド化合物の発見につながった。エキセンジン・アゴニストには、１またはそれを超える自然界に存在するアミノ酸が除去されたまたは他のアミノ酸（または複数のアミノ酸）で置き換えられたエキセンジン・ペプチド・アナログが含まれる。好ましいエキセンジン・アゴニストは、エキセンジン−４のアゴニスト・アナログである。特に好ましいエキセンジン・アゴニストには、エキセンジン−３［配列番号：１］、エキセンジン−４［配列番号：２］、
エキセンジン−４（１−３０）［配列番号：６  His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly］、
エキセンジン−４（１−３０）アミド［配列番号：７  His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly−ＮＨ２］、
エキセンジン４（１−２８）アミド［配列番号：４０  His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn−ＮＨ２］、
１４Leu, ２５Pheエキセンジン−４［配列番号：９  His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser−ＮＨ２］、
１４Leu, ２５Pheエキセンジン−４（１−２８）アミド［配列番号：４１  His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn−ＮＨ２］、および
１４Leu, ２２Ala, ２５Pheエキセンジン−４（１−２８）アミド［配列番号：８  His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Ala Ile Glu Phe Leu Lys Asn−ＮＨ２］、ならびに式（Ｉ）［配列番号：３］：
Xaa1 Xaa2 Xaa3 Gly Thr Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Ser Lys Gln Xaa9 Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13 Leu Lys Asn Gly Gly Xaa14 Ser Ser Gly Ala Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18-Ｚ
［式中、Xaa1はHis、ArgまたはTyr；Xaa2はSer、Gly、AlaまたはThr；Xaa3はAspまたはGlu；Xaa4はPhe、Tyrまたはナフチルアラニン；Xaa5はThrまたはSer；Xaa6はSerまたはThr；Xaa7はAspまたはGlu；Xaa8はLeu、Ile、Val、ペンチルグリシンまたはMet；Xaa9はLeu、Ile、ペンチルグリシン、ValまたはMet；Xaa10はPhe、Tyrまたはナフチルアラニン；Xaa11はIle、Val、Leu、ペンチルグリシン、tert-ブチルグリシンまたはMet；Xaa12はGluまたはAsp；Xaa13はTrp、Phe、Tyrまたはナフチルアラニン；Xaa14、Xaa15、Xaa16およびXaa17は独立してPro、ホモプロリン、３Hyp、４Hyp、チオプロリン、Ｎ-アルキルグリシン、Ｎ-アルキルペンチルグリシンまたはＮ-アルキルアラニン；Xaa18はSer、ThrまたはTyr；およびＺは-ＯＨまたは-ＮＨ2；但し、当該化合物はエキセンジン−３またはエキセンジン−４ではない］で示される化合物を含む"Novel Exendin Agonist Compounds"なる発明の名称の１９９８年８月６日に出願された国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９８／１６３８７に記載されたものが含まれる。
【００３０】
Ｎ−アルキルグリシン、Ｎ−アルキルペンチルグリシンおよびＮ−アルキルアラニンについての好ましいＮ−アルキル基には、好ましくは１ないし約６個の炭素原子、より好ましくは１ないし４個の炭素原子の低級アルキル基が含まれる。好適な化合物には、配列番号：９ないし３９のアミノ酸配列を有する図１５に列挙するものが含まれる。
【００３１】
好ましいエキセンジン ・アゴニスト化合物には、Xaa1がHisまたはTyrであるものが含まれる。より好ましくは、Xaa1はHisである。
好ましいのは、Xaa2がGlyであるそれらの化合物である。
好ましいのは、Xaa９がLeu、ペンチルグリシンまたはMetであるそれらの化合物である。
好ましい化合物には、Xaa13がTrpまたはPheであるものが含まれる。
【００３２】
また、好ましくは、Xaa4がPheまたはナフチルアラニンであり； Xaa11がIleまたはValであって、Xaa14、Xaa15、Xaa16およびXaa17が独立して、Pro、ホモプロリン、チオプロリンまたはＮ-アルキルアラニンから選択される化合物である。好ましいＮ−アルキルアラニンは１ないし約６の炭素原子のＮ−アルキル基を有する。
【００３３】
特に好ましい態様によれば、Xaa15、Xaa16およびXaa17は同じアミノ酸残基である。
好ましいものは、Xaa18がSerまたはTyr、より好ましくはSerである化合物である。
好ましいＺは−ＮＨ２である。
【００３４】
１の態様によれば、好ましいものは、Xaa1がHisまたはTyr、より好ましくはHis；Xaa2がGly；Xaa4がPheまたはナフチルアラニン；Xaa9がLeu、ペンチルグリシンまたはMet；Xaa10がPheまたはナフチルアラニン；Xaa11がIleまたはVal；Xaa14、Xaa15、Xaa16およびXaa17が独立して、Pro、ホモプロリン、チオプロリンまたはＮ−アルキルアラニンから選択され；およびXaa18がSerまたはTyr、より好ましくはSerである式（Ｉ）で示される化合物である。より好ましくは、Ｚは−ＮＨ２である。
【００３５】
特に好ましい態様によれば、特に好ましい化合物には、Xaa1がHisまたはArg；Xaa2がGly；Xaa3がAspまたはGlu；Xaa4がPheまたはナフチルアラニン；Xaa５がThrまたはSer；Xaa6がSerまたはThr；Xaa7がAspまたはGlu；Xaa8がLeuまたはペンチルグリシン；Xaa9がLeuまたはペンチルグリシン；Xaa10がPheまたはナフチルアラニン；Xaa11がIle、Valまたはtert-ブチルグリシン；Xaa12がGluまたはAsp；Xaa13がTrpまたはPhe；Xaa14、Xaa15、Xaa16およびXaa17が独立して、Pro、ホモプロリン、チオプロリンまたはＮ−メチルアラニン；Xaa18がSerまたはTyr；Ｚが−ＯＨまたは−ＮＨ2であり；但し、当該化合物は配列番号：１または２いずれかの式を有するものではない式（Ｉ）で示されるものが含まれる。より好ましくは特に好ましい化合物には、配列番号：９、１０、２１、２２、２３、２６、２８、３４、３５および３９で示されるアミノ酸配列を有するものが含まれる。
【００３６】
特に好ましい態様によれば、Xaa9がLeu、Ile、Valまたはペンチルグリシン、より好ましくはLeuまたはペンチルグリシンであって、Xaa13がPhe、Tyrまたはナフチルアラニン、より好ましくはPheまたはナフチルアラニンである化合物を提供する。これらの化合物は、有利な作用期間を示し、イン・ビトロ（in vitro)およびイン・ビボ（in vivo)の双方、ならびに当該化合物の合成の間の、酸化分解の影響をより受けにくいであろう。
【００３７】
エキセンジン ・アゴニスト化合物には、式（ＩＩ）［配列番号：４］：
Xaa1 Xaa2 Xaa3 Gly Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Ala Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26 Xaa27 Xaa28-Ｚ1
［式中、
Xaa1はHis、ArgまたはTyr；
Xaa2はSer、Gly、AlaまたはThr；
Xaa3はAspまたはGlu；
Xaa5はAlaまたはThr；
Xaa6はAla、Phe、Tyrまたはナフチルアラニン；
Xaa7はThrまたはSer；
Xaa8はAla、SerまたはThr；
Xaa9はAspまたはGlu；
Xaa10はAla、Leu、Ile、Val、ペンチルグリシンまたはMet；
Xaa11はAlaまたはSer；
Xaa12はAlaまたはLys；
Xaa13はAlaまたはGln；
Xaa14はAla、Leu、Ile、ペンチルグリシン、ValまたはMet；
Xaa15はAlaまたはGlu；
Xaa16はAlaまたはGlu；
Xaa17はAlaまたはGlu；
Xaa19はAlaまたはVal；
Xaa20はAlaまたはArg；
Xaa21はAlaまたはLeu；
Xaa22はAla、Phe、Tyrまたはナフチルアラニン；
Xaa23はIle、Val、Leu、ペンチルグリシン、tert-ブチルグリシンまたはMet；
Xaa24はAla、GluまたはAsp；
Xaa25はAla、Trp、Phe、Tyrまたはナフチルアラニン；
Xaa26はAlaまたはLeu；
Xaa27はAlaまたはLys；
Xaa28はAlaまたはAsn；
Ｚ1は
−ＯＨ、
−ＮＨ2、
Gly-Ｚ2、
Gly Gly-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser Ser-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37-Ｚ2または
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38-Ｚ2；
Xaa31、Xaa36、Xaa37およびXaa38は独立して、Pro、ホモプロリン、３Hyp、４Hyp、チオプロリン、Ｎ-アルキルグリシン、Ｎ-アルキルペンチルグリシンまたはＮ-アルキルアラニン；および
Ｚ2は-ＯＨまたは-ＮＨ2；
但し、Xaa3、Xaa5、Xaa6、Xaa8、Xaa10、Xaa11、Xaa12、Xaa13、Xaa14、Xaa15、Xaa16、Xaa17、Xaa19、Xaa20、Xaa21、Xaa24、Xaa25、Xaa26、Xaa27およびXaa28の３以下は、Alaである］
で示される化合物を含み、"Novel Exendin Agonist Compounds"なる発明の名称の１９９８年１１月１３日に出願された国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９８／２４２１０に記載されているものも含まれる。
【００３８】
Ｎ−アルキルグリシン、Ｎ−アルキルペンチルグリシンおよびＮ−アルキルアラニンについての好ましいＮ−アルキル基には、好ましくは１ないし約６の炭素原子、より好ましくは１ないし４の炭素原子の低級アルキル基が含まれる。
【００３９】
好ましいエキセンジン・アゴニスト化合物には、Xaa1がHisまたはTyrであるものが含まれる。より好ましくは、Xaa1はHisである。
好ましくは、Xaa2がGlyである化合物である。
好ましくは、Xaa14がLeu、ペンチルグリシンまたはMetである化合物である。
好ましい化合物は、Xaa25がTrpまたはPheであるものである。
好ましい化合物は、Xaa6がPheまたはナフチルアラニン；
Xaa22がPheまたはナフチルアラニンであり、Xaa23がIleまたはValであるものである。
【００４０】
好ましい化合物は、Xaa31、Xaa36、Xaa37およびXaa38が独立して、Pro、ホモプロリン、チオプロリンおよびＮ−アルキルアラニンから選択される化合物である。
【００４１】
好ましくは、Ｚ1は−ＮＨ２である。
好ましくは、Ｚ2は−ＮＨ２である。
【００４２】
１の態様によれば、好ましいものは、Xaa1がHisまたはTyr、より好ましくはHis；Xaa2がGly；Xaa6がPheまたはナフチルアラニン；Xaa14がLeu、ペンチルグリシンまたはMet；Xaa22がPheまたはナフチルアラニン；Xaa23がIleまたはVal；Xaa31、Xaa36、Xaa37およびXaa38が独立して、Pro、ホモプロリン、チオプロリンまたはＮ−アルキルアラニンから選択される式（ＩＩ）で示される化合物である。より好ましくは、Ｚ1は−ＮＨ２である。
【００４３】
特に好ましい態様によれば、特に好ましい化合物には、Xaa1がHisまたはArg；Xaa2がGlyまたはAla；Xaa3がAspまたはGlu；Xaa5がAlaまたはThr；Xaa6がAla、Pheまたはナフチルアラニン；Xaa7がThrまたはSer；Xaa8がAla、SerまたはThr；Xaa9がAspまたはGlu；Xaa10がAla、Leuまたはペンチルグリシン；Xaa11がAlaまたはSer；Xaa12がAlaまたはLys；Xaa13がAlaまたはGln；Xaa14がAla、Leuまたはペンチルグリシン；Xaa15がAlaまたはGlu；Xaa16がAlaまたはGlu；Xaa17がAlaまたはGlu；Xaa19がAlaまたはVal；Xaa20がAlaまたはArg；Xaa21がAlaまたはLeu；Xaa22がPheまたはナフチルアラニン；Xaa23がIle、Valまたはtert-ブチルグリシン；Xaa24がAla、GluまたはAsp；Xaa25がAla、TrpまたはPhe；Xaa26がAlaまたはLeu；Xaa27がAlaまたはLys；Xaa28がAlaまたはAsn；Ｚ1が-ＯＨ、-ＮＨ2、Gly−Ｚ2、Gly Gly−Ｚ2、Gly Gly Xaa31−Ｚ2、Gly Gly Xaa31 Ser−Ｚ2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser−Ｚ2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly−Ｚ2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala−Ｚ2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36−Ｚ2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37−Ｚ2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38−Ｚ2であり；Xaa31、Xaa36、Xaa37およびXaa38が独立して、Pro、ホモプロリン、チオプロリンまたはＮ−メチルアラニンであって；Ｚ2が−ＯＨまたは−ＮＨ2であり；但し、Xaa3、Xaa5、Xaa6、Xaa8、Xaa10、Xaa11、Xaa12、Xaa13、Xaa14、Xaa15、Xaa16、Xaa17、Xaa19、Xaa20、Xaa21、Xaa24、Xaa25、Xaa26、Xaa27およびXaa28のうち３以下がAlaである式（ＩＩ）のものが含まれる。特に好ましい化合物には、配列番号：４０−６１のアミノ酸配列を有するものが含まれる。
【００４４】
特に好ましい態様によれば、Xaa14がLeu、Ile、Valまたはペンチルグリシン、より好ましくはLeuまたはペンチルグリシンであって、Xaa25がPhe、Tyrまたはナフチルアラニン、より好ましくはPheまたはナフチルアラニンである化合物が提供される。これらの化合物は、イン・ビトロ（in vitro)およびイン・ビボ（in vivo)の双方、ならびに当該化合物の合成の間の、酸化分解の影響をより受けにくいであろう。
【００４５】
エキセンジン・アゴニスト化合物には、式（ＩＩＩ）［配列番号：５］：
Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Ala Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26 Xaa27 Xaa28-Ｚ1
［式中、
Xaa1はHis、Arg、Tyr、Ala、Norval、ValまたはNorleu；
Xaa2はSer、Gly、AlaまたはThr；
Xaa3はAla、AspまたはGlu；
Xaa4はAla、Norval、Val、NorleuまたはGly；
Xaa5はAlaまたはThr；
Xaa6はPhe、Tyrまたはナフチルアラニン；
Xaa7はThrまたはSer；
Xaa8はAla、SerまたはThr；
Xaa9はAla、Norval、Val、Norleu、AspまたはGlu；
Xaa10はAla、Leu、Ile、Val、ペンチルグリシンまたはMet；
Xaa11はAlaまたはSer；
Xaa12はAlaまたはLys；
Xaa13はAlaまたはGln；
Xaa14はAla、Leu、Ile、ペンチルグリシン、ValまたはMet；
Xaa15はAlaまたはGlu；
Xaa16はAlaまたはGlu；
Xaa17はAlaまたはGlu；
Xaa19はAlaまたはVal；
Xaa20はAlaまたはArg；
Xaa21はAlaまたはLeu；
Xaa22はPhe、Tyrまたはナフチルアラニン；
Xaa23はIle、Val、Leu、ペンチルグリシン、tert-ブチルグリシンまたはMet；
Xaa24はAla、GluまたはAsp；
Xaa25はAla、Trp、Phe、Tyrまたはナフチルアラニン；
Xaa26はAlaまたはLeu；
Xaa27はAlaまたはLys；
Xaa28はAlaまたはAsn；
Ｚ1は−ＯＨ、
−ＮＨ2、
Gly-Ｚ2、
Gly Gly-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser Ser-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37-Ｚ2
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38-Ｚ2または
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38 Xaa39-Ｚ2；
ここに、Xaa31、Xaa36、Xaa37およびXaa38は独立して、Pro、ホモプロリン、３Hyp、４Hyp、チオプロリン、Ｎ-アルキルグリシン、Ｎ-アルキルペンチルグリシンまたはＮ-アルキルアラニンであり；
Xaa39はSer、Thr、LysまたはAla；および
Ｚ2は-ＯＨまたは-ＮＨ2；
但し、Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa8、Xaa9、Xaa10、Xaa11、Xaa12、Xaa13、Xaa14、Xaa15、Xaa16、Xaa17、Xaa19、Xaa20、Xaa21、Xaa24、Xaa25、Xaa26、Xaa27およびXaa28の３以下はAlaであり、但し、Xaa1がHis、ArgまたはTyrである場合、Xaa3、Xaa4およびXaa9の少なくとも１はAlaである］
で示される化合物を含む、"Novel Exendin Agonist Compounds"なる発明の名称の１９９８年１１月１３日に出願された国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９８／２４２７３に記載されているものも含まれる。
【００４６】
本発明の処方に有用な化合物には、グルカゴン様ペプチド１およびそのアナログおよびアゴニストも含まれる。かかる化合物は当該技術分野で知られており、例えば、ＷＯ８７０６９４１、ＷＯ０１９８３３１およびＷＯ９８０８８７１に開示されているものが含まれる。
【００４７】
本発明の処方に有用なさらなる化合物には、本明細書に添付する（配列番号：６１−１８８を含む）配列表に開示するものが含まれる。
【００４８】
化合物の調製
本発明の処方および投与量の有効成分を構成するペプチド化合物（例えば、エキセンジン、エキセンジン・アゴニストおよびアンタゴニスト、ならびにエキセンジン・アナログ）は、いずれの方法、例えば遺伝子組換えまたは標準的な固相ペプチド合成技術および好ましくは自動もしくは半自動ペプチド合成器を用いても調製し得る。エキセンジン−３およびエキセンジン−４の調製の例は、以下の実施例１および２に記載する。さらなるエキセンジン・アゴニスト・ペプチド・アナログの調製は、例えばＷＯ００４１５４６に記載されている。
【００４９】
典型的には、自動化または半自動化ペプチド合成技術を用いて、α−Ｎ−カルバモイル保護アミノ酸および樹脂上の伸長するペプチド鎖に結合したアミノ酸を、ジイソプロピルエチルアミンのごとき塩基存在下のジシクロヘキシルカルボジイミドおよび１−ヒドロキシベンゾトリアゾールのごときカップリング剤の存在下、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリジノンまたは塩化メチレンのごとき不活性溶媒中、室温にてカップリングさせる。トリフルオロ酢酸またはピペリジンのごとき試薬を用いて、α−Ｎ−カルバモイル保護基を得られたペプチド−樹脂から除去し、ついで、ペプチド鎖に付加すべき次の所望のＮ−保護アミノ酸を用いて該カップリング反応を繰返す。適当なＮ−保護基は当該技術分野においてよく知られているが、ここにおいては、ｔ−ブチルオキシカルボニル（ｔＢＯＣ）およびフルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）が好ましい。
【００５０】
ペプチド合成器で用いる溶媒、アミノ酸誘導体および４−メチルベンズヒドリル−アミン樹脂は、Applied Biosystems Inc.社（Foster City，CA）から購入し得る。以下の側鎖保護アミノ酸：Boc−Arg（Mts）、Fmoc−Arg（Pmc）、Boc−Thr（Bzl）、Fmoc−Thr（t−Bu）、Boc−Ser（Bzl）、Fmoc−Ser（t−Bu）、Boc−Tyr（BrZ）、Fmoc−Tyr（t−Bu）、Boc−Lys（Cl−Z）、Fmoc−Lys（Boc）、Boc−Glu（Bzl）、Fmoc−Glu（t−Bu）、Fmoc−His（Trt）、Fmoc−Asn（Trt）およびFmoc−Gln（Trt）は、Applied Biosystems，Inc.社から購入し得る。Boc−His（BOM）は、Applied Biosystems，Inc.社またはBachem Inc.社（Torrance，CA）から購入し得る。アニソール、ジメチルスルフィド、フェノール、エタンジチオールおよびチオアニソールは、Aldrich Chemical Company社（Milwaukee，WI）から得ることができる。Air Products and Chemicals社（Allentown，PA）はＨＦを供給している。エチルエーテル、酢酸およびメタノールは、Fisher Scientific社（Pittsburgh，PA）から購入し得る。
【００５１】
固相ペプチド合成は、ＮＭＰ/ＨＯＢｔ（オプション１）システムおよびキャップするｔＢｏｃまたはＦｍｏｃ化学（Applied Biosystems User's Manual for the ABI ４３０A Peptide Synthesizer, Version １.３B、１９８８年７月１日、第６章、４９-７０頁、Applied Biosystems Inc.社製，Foster City，CA）を用いる自動ペプチド合成器（Model ４３０A， Applied Biosystems Inc.社製，Foster City、CA）で行い得る。Boc-ペプチド-樹脂はＨＦ（-５℃ないし０℃にて１時間）を用いて切断し得る。水と酢酸とを交互に用いて該樹脂からペプチドを抽出し、その濾液を凍結乾燥し得る。Fmoc-ペプチド樹脂は、標準的な方法（Introduction to Cleavage Techniques, Applied Biosystems Inc.社製、１９９０年、６-１２頁）に従って切断し得る。ペプチドは、Advanced Chem Tech Synthesizer（Model MPS ３５０，Louisville，Kentucky）を用いてアセンブリーさせることもできる。
【００５２】
ペプチドは、Waters Delta Prep 3000 systemを用いて（分取用または分析用）ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製することができる。Ｃ４、Ｃ８またはＣ１８分取用カラム（１０μ、２.２×２５ｃｍ；Vydac社製，Hesperia，CA）を用いてペプチドを単離することができ、純度はＣ４、Ｃ８またはＣ１８分析用カラム（５μ、０．４６×２５ｃｍ；Vydac社製）を用いて判定することができる。溶媒（Ａ＝０．１％のＴＦＡ／水およびＢ＝０.１％のＴＦＡ／ＣＨ3ＣＮ）は、該分析用カラムには１.０ｍｌ／分の流速で、および該分取用カラムには１５ｍｌ／分で送液することができる。アミノ酸分析はWaters Pico Tagシステム上で行い、Maxima programを用いて処理することができる。ペプチドは、気相酸加水分解(１１５℃にて２０−２４時間)によって加水分解することができる。加水分解物は標準的な方法によって誘導化および分析することができる(CohenらによるThe Pico Tag Method:A Manual of Advanced Techniques for Amino Acid Analysis，pp．11-52，Millipore Corporation社製，Milford，MA(1989))。高速原子衝突分析は、M-Scan，Incorporated社（West Chester，PA）によって行うことができる。質量較正は、ヨウ化セシウムまたはヨウ化セシウム／グリセリンを用いて行うことができる。飛行時間型の検出を用いるプラズマ脱着イオン化分析（plasma desorption ionization analysis）は、Applied Biosystems社製Bio-Ion 20質量分析器上で行うことができる。エレクトロスプレー質量分析を行うことができ、VG-Trio機上で行うことができる。
【００５３】
本発明の処方および投与量に有用なペプチド有効成分化合物は、当該技術分野で現在知られている方法を用いる、組換えＤＮＡ技術を用いても調製することができる。例えば、Sambrookら, Molecular Cloning:A Laboratory Manual, 第２版，Cold Spring Harbor（1989）を参照されたい。
【００５４】
用途
本明細書に記載する処方および投与量は、その薬理学的特性に鑑みれば有利である。詳細には、本発明の処方および投与量はエキセンジンおよびエキセンジン・アゴニストとして有用であり、血中グルコースを低下させる剤としての活性を所有し、胃運動を調節し、ならびに胃内容排出を遅延させ、食物取込みを減少する。
【００５５】
処方および投与
本発明のエキセンジン、エキセンジン・アゴニストおよびアンタゴニスト、エキセンジン・アナログ、処方および投与量は、そのエキセンジン様または抗エキセンジン効果の観点から有用であり、（静脈内、皮内、腹膜内、筋肉内および皮下を含む）非経口投与に好適な処方の形態で簡便に提供し得る。また、経口、鼻腔、口内、舌下、気管内、経皮、経粘膜および経肺投与を含む別のデリバリー経路に有用な処方および投与量も本明細書に記載する。
【００５６】
エキセンジンおよびエキセンジン・アナログをデリバリーする他の好適な手段には、皮下、皮内、静脈内、腹膜内および筋肉内注射、経口、舌下、気管内、経肺、鼻腔、口内、経皮および経粘膜ゲルまたは坐剤が含まれる。種々の処方のバイオアベイラビリティーは変動するため、血漿レベルを用いて適当な投薬を決定し得る。エキセンジン４に関しては、例えば、約５ｐｇ／ｍｌないし約５０００ｐｇ／ｍｌの標的循環濃度範囲が好ましく、約５ｐｇ／ｍｌないし約５００ｐｇ／ｍｌがより好ましく、約１０ｐｇ／ｍｌないし約２００ｐｇ／ｍｌが最も好ましい。エキセンジン・アゴニストおよびアナログに関しては、エキセンジンに対して、アゴニストまたはアナログの効力に基づいて調整するのが適当であり、それは当業者が行う範囲内のことである。
【００５７】
本発明に有用な化合物は、注射、注入または植込み（implant）用の非経口組成物として提供し得る。それは、摂食、吸収ほか用に提供することができ、液体、固体、半固体、ゲルまたはいずれかの好適なマトリクスもしくは担体中に存在させ得る。一般的には、それは、例えばゴマ油、落花生油、オリーブ油のごとき植物油または他の許容し得る担体のごとき不活性な油性物中に懸濁させることができる。好ましくは、それは、水性担体、例えば約３.０ないし約８.０、より詳細には約４.０ないし６.０、および好ましくは約４.０ないし約５.０のｐＨの等張緩衝液中に懸濁または溶解する。これらの組成物は、従来の滅菌技術によって滅菌するか、または濾過滅菌し得る。該組成物は、ｐＨ緩衝化剤のごとき、生理条件に近づけるために必要な医薬上許容される補助剤物質を含み得る。有用な緩衝液には、例えば、酢酸ナトリウム/酢酸緩衝液が含まれる。望ましい等張性は、塩化ナトリウム、またはデキストロース、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコール、ポリオール（マンニトールおよびソルビトールのごとき）または他の無機もしくは有機の溶質のごとき他の医薬上許容し得る剤を用いて達成し得る。ナトリウムイオンを含む緩衝液については塩化ナトリウムが特に好ましい。
【００５８】
エキセンジンおよびエキセンジン・アゴニスト化合物は、医薬上許容される塩（例えば、酸付加塩）および/またはその錯体としても処方化し得る。医薬上許容される塩は、それを投与する濃度においては無毒の塩である。かかる塩の調製は、組成物のその生理学的効果の発揮を妨げることなく、組成物の物理−化学的特徴を変化させることによって、薬理学的使用を促進し得る。物理特性における有用な変化の例には、融点を低下させて経粘膜投与を促進させること、および溶解度を上昇させてより高濃度の薬剤の投与を促進することが含まれる。
【００５９】
医薬上許容される塩には、硫酸塩、塩酸塩、リン酸塩、スルファミン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、シクロヘキシルスルファミン酸塩およびキニン酸塩を含むもののごとき酸付加塩が含まれる。医薬上許容される塩は、塩酸、硫酸、リン酸、スルファミン酸、酢酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、マロン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクロヘキシルスルファミン酸、およびキナ酸のごとき酸から得ることができる。かかる塩は、例えば、遊離酸または遊離塩基形態の生成物と１またはそれを超える当量の適当な塩基または酸とを、塩が不溶性である溶媒または媒質中、あるいは水のごとき溶媒中で反応させ、ついで真空下または凍結乾燥によって水を除去するか、または好適なイオン交換樹脂上で存在する塩のイオンを別のイオンに交換することによって調製し得る。
【００６０】
一般的に、当該技術分野で知られている担体または賦形剤を用いて、本発明の投与量の投与を容易にし得る。担体または賦形剤の例には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、またはラクトースのごとき種々の糖、またはデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、ポリエチレングリコールおよび生理学上和合性の溶媒が含まれる。
【００６１】
望ましい場合には、前記投与量の組成物の溶液は、メチルセルロースのごとき増粘剤を用いて粘稠化し得る。それは、油中水型または水中油型のいずれかのごとき乳化形態に調製し得る。広範な種々の医薬上許容される乳化剤のいずれかを用いることができ、それには、例えばアカシア粉末、非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎのごとき）、またはイオン性界面活性剤（アルカリポリエーテルアルコール硫酸塩またはスルホン酸塩、例えばＴｒｉｔｏｎ）が含まれる。
【００６２】
一般的に、本発明の処方および投与量組成物は、一般的に認容された手法に従って成分を混合することによって調製する。例えば、選択した成分を配合機または他の標準的な装置中で単純に混合して濃縮化した混合物を生成し、ついで水または粘結剤を添加することによって最終的な濃度および粘度に調整し、おそらく緩衝液を添加してｐＨを制御し、あるいはさらなる溶質を添加して緊張性を制御し得る。
【００６３】
他の医薬上許容される担体およびその処方は、標準的な処方文献、例えばE. W. MartinによるRemington's Pharmaceutical Sciencesに記載されている。また、Wang，Y.J.およびHanson，M.A. "Parenteral Formulations of Proteins and Peptides: Stability and Stabilizers" Journal of Parenteral Science and Technology, Technical Report No. １０, 増刊４２：２S（１９８８）も参照されたい。
【００６４】
医師による使用に関しては、該化合物は、他の治療剤、例えば、グルコース低下剤、胃内容排出調整剤、脂質低下剤または食物取込阻害剤を含むか含まない一定量のエキセンジン ・アゴニストを含有する投与量ユニット形態で供されるであろう。血中グルコースの制御または胃内容排出の制御および胃内容排出が有利に遅延または調節される条件において使用するためのエキセンジン ・アゴニストの治療上有効量は、食後血中グルコースレベルを、好ましくは約８または９ｍＭ以下まで低下させるか、または血中グルコースレベルを望むように低下させるような量である。糖尿病または糖代謝異常の個人においては、血漿グルコースレベルは正常な個人におけるよりもより高い。かかる個人においては、食後血中グルコースレベルの有利な低下または"スムーシング"を得ることができる。当業者によって認識されるごとく、治療剤の有効量は、患者の身体的状況、得るべき血中糖レベルまたは胃内容排出の阻害レベル、または食物取込み低下の望ましいレベルおよび他の因子を含む多くの因子で変化するであろう。
【００６５】
かかる医薬組成物は対象におけるインスリン感度を増大させるのに有用であり、糖尿病のごとき障害においても同様に使用し得、その場合にはインスリンに対する感度が有益に増大される。化合物の有効日用量を記載する。投与すべき正確な用量は、常駐臨床医によって決定され、さらに用いる特定のエキセンジンまたはエキセンジン・アゴニスト化合物の効力、ならびに個人の年齢、体重および症状にも依存し得る。記載した化合物をデリバリーする好ましい手段は、数時間ないし数ヶ月にわたって化合物を徐々に放出する制御放出処方（例えば、注射可能または植込み可能）を用いてそれを投与することである。この様式の投与の１の利点は、日用量または複数日用量が実際には患者によって見落とされ得るため、患者の応諾における改善である。
【００６６】
患者に対する本願の化合物の投与の最適様式は、特定の疾病または障害、所望の効果、および患者のタイプのごとき当該技術分野で知られている因子に依存する。化合物は典型的にはヒト患者を治療するために用いるが、それらは、他の霊長類、ブタ、ウシおよび家禽のごとき農業用動物、ならびにウマ、イヌおよびネコのごときスポーツ動物およびペットにおける同様または同一の疾患を治療するためにも用い得る。
【００６７】
本発明には、緩衝液（好ましくは、酢酸緩衝液）、等オスモル濃度モディフィアー（好ましくはマンニトール）と一緒に混合したエキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを含むエキセンジンおよびエキセンジン・アゴニストの液体処方が含まれ、それには所望により保存剤（好ましくはｍ−クレゾール）が含まれ、約３.０ないし約８.０（好ましくは、約４.０ないし約５.０）のｐＨを有する。化学的特徴に基づいて、異なるアナログについては他のｐＨ範囲が好ましい場合もあり得る。
【００６８】
非経口液体投与量形態を最良に支持する処方は、有効成分（または複数の有効成分）が生成物の意図する貯蔵寿命にわたって溶液のｐＨを維持する十分な緩衝能力で安定であるものである。投与量形態は等張および／または等オスモル濃度の溶液のいずれかであって、有効成分の安定性を助長するかまたは注射時の痛みを軽減するかまたはそれらの双方とすべきである。しかしながら、非常に小さい注射体積をデリバリーする装置は、処方が等張および／または等オスモルのいずれかであることを必要としない。投与量形態を単位用量として梱包する場合、保存料を含めてもよいが、必要でない。しかしながら、投与量形態をマルチユース容器に梱包する場合には、保存料は必要である。
【００６９】
エキセンジン−４様効力を有する化合物については、これらの投与量形態には、好ましくはほぼ０.００５ないし約５％、より詳細には約０.００５ないし約１.０％、または約０.００５ないし約０.０５％（ｗ／ｖ）の各々の有効成分が、ほぼ０.０２ないし０.５％（ｗ／ｖ）の酢酸、リン酸、クエン酸またはグルタミン酸または同様の緩衝液の単独または組合せ、ならびにほぼ１.０ないし１０％（ｗ／ｖ）の炭水化物または多価アルコールの等オスモル濃度モディフィアー（好ましくはマンニトール）または約０.９％にのぼる塩類溶液またはそれらの両方の組合せと一緒に水性系に含まれて水性の連続相の等張または等オスモル濃度溶液を誘導し、ほぼ３.０ないし７.０、より詳細には約ｐＨ４.０ないし約６.０、または約４.０ないし５.０の最終組成物のｐＨを得る。ｍ−クレゾール、ベンジルアルコール、メチル  エチル、プロピルおよびブチルパラベンおよびフェノールよりなる群から選択されるほぼ０.００５ないし１．０％（ｗ／ｖ）の抗微生物保存料も、処方をマルチユース容器に梱包する場合には存在する。十分量の注射用水を添加して、所望の濃度の溶液を得る。望ましい場合には、塩化ナトリウムならびに他の賦形剤も存在させ得る。しかしながら、かかる賦形剤は、有効成分の全体的安定性を維持しなければならない。
【００７０】
多価アルコールおよび炭水化物はそのバックボーンで同じ特徴、すなわち−ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−を共有している。多価アルコールには、ソルビトール、マンニトール、グリセリンおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のごとき化合物が含まれる。これらの化合物は直鎖分子である。それとは反対に、マンノース、リボース、トレハロース、マルトース、グリセリン、イノシトール、グルコースおよびラクトースのごとき炭水化物は、ケトまたはアルデヒド基を含み得る環状分子である。化合物のこれらの２のクラスは、高温および凍結−解凍または凍結乾燥法によって引き起こされる変性に対してタンパク質を安定化するのにも有効であろう。好適な炭水化物には、ガラクトース、アラビノース、ラクトースまたは糖尿病患者に対して悪影響を有さないいずれか他の炭水化物、すなわち炭水化物が代謝されて血中に高濃度のグルコースを形成するようなことのない炭水化物が含まれる。
【００７１】
好ましくは、本発明のペプチドは、ソルビトール、マンニトール、イノシトール、グリセリン、キシリトールおよびポリプロピレン／エチレングリコールコポリマーのごとき多価アルコール、ならびに分子量２００、４００、１４５０、３３５０、４０００、６０００および８０００の種々のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と混合する。マンニトールは好ましい多価アルコールである。
【００７２】
本発明の液体処方は、実質的に等張および／または等浸透度とすべきである。等張溶液は、ある濃度の電解質を有する溶液として定義し得、あるいは、それを導入するもの、例えばここでは処方の非経口注射の場合には、哺乳動物組織、と等価な浸透圧を発揮する電解質および非電解質の組合せを有する溶液として定義し得る。同様に、等浸透溶液とは、それを導入するものと等価な浸透圧を発揮するある濃度の非電解質を有する溶液と定義し得る。本明細書中で用いる"実質的に等張"とは、±２０％内の、好ましくは±１０％内の等張性を意味する。注射用の処方化製品は、容器、典型的には例えばバイアル、カートリッジ、プレフィル・シリンジまたはディスポーザブル・ペン内に含める。
【００７３】
単位用量非経口凍結乾燥投与量形態を最良に支持する処方は、復元した生成物の意図する貯蔵期間にわたって溶液のｐＨを維持する十分な緩衝能力を有するかまたは有しない、有効成分が合理的に安定であるものである。投与量形態には、ケーキ形成を促進する賦形剤が含まれるべきである。賦形剤は、復元の際にトニシファーおよび／または等オスモル濃度モディフィアーとしても作用して、有効成分の安定性を促進するおよび／または注射時の痛みを軽減し得る。前記したごとく、非常に小さい注射体積をデリバリーする装置は、処方が等張および／または等浸透であることを必要としない場合もある。界面活性剤は、ケーキの特性のためになり得、および／または復元を促進し得る。
【００７４】
これらの投与量形態には、それがエキセンジン４と効力において同様である場合には、ほぼ０.００５ないし約５％、より詳細には約０.００５ないし約０.０２％、または０.００５ないし０.０５％（ｗ／ｖ）の有効成分が含まれる。処方に緩衝液を含める必要はなく、および／または、復元した有効成分について確立した安定性期間内に容器の内容物を消費することが意図されている場合には、緩衝液で凍結乾燥物を復元する必要はない。緩衝液を用いる場合、それは凍結乾燥物または復元溶液中に含ませ得る。したがって、処方および／または復元溶媒には、個別または集合的に、ほぼ０.０２ないし０.５％（ｗ／ｖ）の酢酸、リン酸、クエン酸またはグルタミン酸緩衝液を単独または組合せて含ませて、ほぼ３.０ないし７.０、より詳細には約ｐＨ４.０ないし約６.０、または約４.０ないし５.０の最終組成物のｐＨを得ることができる。賦形剤は、復元した水性相中のほぼ１.０ないし１０％（ｗ／ｖ）の炭水化物または多価アルコール等オスモル濃度モディフィアー（前記した）または復元した水性相中の等張または等浸透圧溶液に通じる０.９％にのぼる塩類溶液またはそれらの両方からなり得る。界面活性剤、好ましくは約０.１ないし約1.０％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０または他の非イオン性洗浄剤を含め得る。前記したごとく、望ましい場合には、塩化ナトリウム、ならびに他の賦形剤も凍結乾燥した単位投与量処方に存在させ得る。しかしながら、かかる賦形剤は、有効成分の全体的な安定性を維持しなければならない。処方は、同定した有効パラメータ内で凍結乾燥して、有効成分の安定性を維持する。
【００７５】
凍結乾燥前の本発明の液体処方は、（例えば、注入または注射処方について）等張が望ましい場合、実質的に、凍結乾燥前かまたは復元後に等張および／または等浸透溶液を形成できる等張および／または等浸透であるべきである。凍結乾燥した形態および復元後の両方に対する貯蔵期間実験によって確立した期間内に処方は用いるべきである。凍結乾燥した生成物は、容器、典型的には例えば、バイアル内に含ませる。カートリッジ、プレフィル・シリンジまたはディスポーザブル・ペンのごとき他の容器を用いる場合には、復元溶液も含ませ得る。
【００７６】
前記した非経口液体および凍結乾燥単位投与量処方を用いる場合、複数用量非経口凍結乾燥投与量形態を最良に支持する処方は、その中で有効成分が、生成物の意図された"使用されている"貯蔵期間にわたって溶液のｐＨを維持する十分な緩衝能力を有する合理的に安定なものである。投与量形態は膨張剤を含んで、ケーキ形成を促進すべきである。膨張剤は復元時にトニシファーおよび／または等オスモル濃度モディフィアーとしても作用して、有効成分の安定性を促進するかまたは注射時の痛みを軽減するかまたはその両方を奏し得る。再度、非常に小さい注射体積をデリバリーする装置は、処方を等張および／または等浸透のいずれかとする必要はない。しかしながら、患者による複数の使用を容易にするために保存料は必要である。
【００７７】
容器の内容物を復元した有効成分について確立した安定性期間内に消費することを意図する場合には、処方に緩衝液を含めるおよび／または凍結乾燥物を緩衝液で復元する必要はない。緩衝液を用いる場合、それは凍結乾燥物または復元溶媒に含め得る。したがって、処方および／または復元溶媒は、個別または集合的に、ほぼ０.０２ないし０.５％（ｗ／ｖ）の酢酸、リン酸、クエン酸またはグルタミン酸緩衝液を単独または組合せて含んで、ほぼ３.０ないし８.０、より詳細には約ｐＨ４.０ないし約６.０または約４.０ないし５.０のｐＨの最終組成物のｐＨを得ることができる。膨張剤は、ほぼ１.０ないし１０％（ｗ／ｖ）の炭水化物または多価アルコール等オスモル濃度モディフィアー（好ましくはマンニトール）または０.９％までの塩類溶液のいずれか、またはそのれらの両方からなり得、復元した水性相中の等張または等浸透溶液に通じる。界面活性剤、好ましくは約０.１ないし約１.０％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０または他の非イオン性洗浄剤を含め得る。処方をマルチユース容器に梱包する場合、ｍ−クレゾール、ベンジルアルコール、メチル、エチル、プロピルおよびブチルパラベンおよびフェノール（好ましくは、ｍ−クレゾール）よりなる群から選択されるほぼ０.００５ないし１.０％（ｗ／ｖ）の抗微生物保存剤も存在させる。望ましい場合には、塩化ナトリウムならびに他の賦形剤も存在させ得る。
【００７８】
本発明の好ましい処方は、液剤、固形剤、または、少なくとも１時間の期間にわたって本発明の有効成分をデリバリーすることができる半固形デポー剤、徐放型もしくは連続放出型の処方である。好ましい形態において、放出は２４時間ないし４ヶ月間の期間にわたって起こる。かかる徐放または長期放出型の処方は、好ましくは、マトリックス中、または例えば腸溶性コーティングまたは徐溶解性コーティングのごときコーティング中の、徐溶解性ペプチド結晶（例えば、米国特許第６,３８０,３５７号に開示されているごとき）のごとき徐溶解性の形態または処方中の有効成分からなる（例えば、有効成分のコートされた顆粒）。徐放性マトリクスは、通常は生分解性ポリマー、非生分解性ポリマー、ワックス、脂肪物質ほかであり、当該技術分野で知られている（例えば、米国特許第６,３６８,６３０号および関連する特許、第６,３７９,７０４号および関連する特許を参照されたい）。また、非経口制御放出型デリバリーは、ポリマー性マイクロカプセル、マトリクス、溶液、植込み錠およびデバイスを形成し、それを非経口的に投与するかまたは外科手術的手段によって達成し得る。これらの投与量形態は、典型的には、ポリマー性マトリクスまたはデバイス中に幾分かのペプチドが捕われることに起因してより低いバイオアベイラビリティーを有するであろう（例えば、米国特許第６,３７９,７０４号、第６,３７９,７０３号および第６,２９６,８４２号を参照されたい）。
【００７９】
さらに、本発明は、経口、口内、舌下、気管内、鼻腔および経肺デリバリーに有用な固体または半固体形状を含む。経肺および／または気管内投与量形態を最良に支持する処方は、保存型または非保存型の液体処方および／または乾燥粉末処方とし得る。該保存型または非保存型の液体処方は、保存型または非保存型液体非経口処方下では前記の処方と実質的に同一であろう。エキセンジンに関しては、例えば、溶液のｐＨは好ましくは約３.０ないし７.０、より好ましくは約４.０ないし６.０、または約４.０ないし５.０であるが、約５.０以上のｐＨが気管支収縮の可能性を低下させるのに最も好ましい。乾燥粉末処方および固体投与量形態（経口、舌下および口内）は、膨張剤および／または塩を含んで粒子サイズ形成および適当な粒子サイズ分布を促進し得る。界面活性剤および／または塩も、粒子形状の特性の利益を受けることができ、および／または、有効成分の組織取込を促進し得る。
【００８０】
乾燥粉末および固体投与量形態は、各々、１％ないし１００％（ｗ／ｗ）の範囲で有効成分を含み得る。粒子サイズ形成および／または分布を促進するために膨張剤および／塩を必ずしも含める必要はない。膨張剤および／または塩は、ほぼ０ないし９９％（ｗ／ｗ）の炭水化物もしくは多価アルコールまたはほぼ０ないし９９％の塩のいずれかまたはそれらの両方の組合せからなり得、好ましい粒子サイズおよび分布に通じる。界面活性剤、好ましくは約０.１ないし約１.０％（ｗ／ｗ）のポリソルベート８０または他の非イオン性洗浄剤が含まれ得る。望ましい場合には、塩化ナトリウムならびに他の賦形剤も存在させてもよい。しかしながら、かかる賦形剤は、有効成分の全体安定性を維持し、投与後の水和または溶解の適当なレベルを促進するであろう。典型的には、ある処方には、酵素インヒビター、浸透エンハンサーまたは錯化剤が含まれて、投与部位からの吸収が促進される。固形投与量形態においては、当該技術分野で典型的に知られている賦形剤が取り込まれ、ある形態にはコーティング剤が含まれて投与後の生物環境からペプチドを保護する。
【００８１】
鼻腔および／または気管内投与量形態を最良に支持する処方は、先に記載した保存型または非保存型の液体投与量処方または乾燥粉末処方のいずれかとし得る。エタノールまたはプロピレングリコールのごとき粘膜バリアを通した吸収を促進するためおよびペプチドを分解する酵素を阻害するための成分を添加し得る。
【００８２】
霧化液剤、溶解性ゲル剤、粘着錠剤および／またはパッチを用いて、口内デリバリーを促進し得る。例えば、ゲル剤は種々のタイプのデンプンおよび／またはセルロース誘導体から調製し得る。エタノールまたはプロピレングリコールのごとき粘膜バリアを通した吸収を促進する成分を添加し得る。
【００８３】
舌下デリバリーは、舌下で容易に溶解可能でなければならない点を除いては経口固体投与量形態と同様とし得る最良に支持された固形投与量形態とし得る。
【００８４】
経口デリバリーは、溶液が保存料を含まない点を除いては非経口液体処方と同様である液体（ゲルカップ(gel cap)）処方によって最良に支持し得、より濃縮し得、あるいは懸濁液からなり、消化管における有効成分の取込を促進するまたは分解を阻害するさらなる添加剤を含み得る。固形投与量形態は、錠剤形成を促進する有効成分と一緒に当該技術分野で知られている賦形剤を含むであろう。これらの成分には、多価アルコール（マンニトールのごとき）、炭水化物、またはデンプンの型、セルロース誘導体、および／または他の不活性な生理学上和合性の物質が含まれ得る。錠剤はコートして胃中の消化を最小限にとどめ、それによって消化管にさらに沿った分解および取込みを促進し得る。
【００８５】
さらに、注射によって与える場合および他の経路によって与える場合のエキセンジンおよびエキセンジン・アゴニストの好ましい投与量も、本発明の範囲内に存在する。したがって、エキセンジンおよび匹敵する効力を有するエキセンジン・アゴニストの処方を提供する。（例えば、注射、注入、徐放、摂取ほかによる）投与については、一般的に、用量は、約０.５μｇないし約１０００μｇ、好ましくは約１.０μｇ／日ないし約５００μｇ／日の範囲に入り、一般的には約０.００１ないし約１.０μｇ／ｋｇの範囲に入り、例えば１日あたり１ないし４回または連続注入または放出として与える。典型的に、約７０ｋｇ（１型糖尿病の平均）ないし約９０ｋｇ（２型糖尿病の平均）の範囲の体重の糖尿病に罹った患者については、例えば、これは、連続、単一または分割した用量で約１.０ないし約１２０μｇ／日の全体投与を生じるであろう。分割した用量で投与する場合、用量を好ましくは１日あたり２または４回投与し、より好ましくは１日当たり２回投与する。
【００８６】
好ましくは、エキセンジンおよびエキセンジン・アゴニストは、液剤を用いて非経口投与し、好ましくは注射によって、例えば皮下注射によって投与する。好ましくは、かかる処方については約１μｇ−３０μｇないし約１ｍｇのエキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを１日当たりに投与する。より好ましくは、約１−３０μｇないし約５００μｇ、または約１−３０μｇないし約５０μｇのエキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを１日当たりに投与する。最も好ましくは、約３μｇないし約５０μｇのエキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストを１日当たりに投与する。エキセンジン−４に近づく効力を有する化合物についての患者の体重に基づく好ましい用量は、用量当たりまたは１日当たり約０.０００５μｇ／ｋｇないし用量当たりまたは１日当たり約２.０μｇ／ｋｇの範囲である。より好ましくは、エキセンジン−４に近づく効力を有する化合物についての患者の体重に基づく用量は、用量当たり（または例えば注入または徐放デポー剤組成物によって連続的に投与する場合は１日当たり）約０.０２μｇ／ｋｇないし用量当たりまたは１日当たり約０.１μｇ／ｋｇの範囲である。最も好ましくは、エキセンジン−４に近づく効力を有する化合物についての患者の体重に基づく巨丸剤用量は、用量当たり約０.０２μｇ／ｋｇないし用量当たり約０.１μｇ／ｋｇの範囲である。巨丸剤用量は、１日当たり１ないし４回、好ましくは１日当たり１ないし２回投与する。エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストの用量は、連続注入によって与える場合にはより少量であり、好ましくは約０.０００５μｇ／ｋｇ／日ないし約２μｇ／ｋｇ／日、より好ましくは約０.２μｇ／ｋｇ／日ないし約１.０μｇ／ｋｇ／日であろう。
【００８７】
いずれかの投与から生じる血漿レベルは治療レベルを達成するであろう。エキセンジン−４に匹敵する効力を有する化合物の巨丸剤用量については、ピーク血漿レベルは好ましくは一般的に約４０ｐｇ／ｍｌを超え、より好ましくは約１００ｐｇ／ｍｌを超え、連続または持続放出投与（すなわち、約１時間ないし数週間または数ヶ月、またはより長期間にわたって起こるデリバリー）については、ピークまたは平均持続血漿レベルは、好ましくは約５ｐｇ／ｍｌを超え、より好ましくは約４０ｐｇ／ｍｌを超えるであろう。平均持続血漿レベルは、エキセンジンまたはアゴニスト投与の意図する期間にわたる２またはそれを超える血漿レベルの測定値の平均を採ることによって決定する。投与の"意図する期間"とは、エキセンジンまたはアゴニストの治療レベルがデリバリーされると意図される時間である。例えば、１ヶ月に１回植込んだ徐放型生分解処方は、１ヶ月の期間にわたって治療量の薬剤を放出することを意図し得る（または予め決定し得る）。処方の残余は、１ヶ月よりも長期にわたって持続するが、サブ治療レベルの薬剤を放出する。平均持続血漿レベルは、１ヶ月の意図する治療放出期間の間に測定したこれらエキセンジン血漿レベルの平均であろう。
【００８８】
エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニストの用量は、通常、経口、口内、舌下、鼻腔、気管内、経肺または経皮または経粘膜デリバリーのごとき非注射法によって与える場合はより多いであろう。
【００８９】
例えば、本発明による経口投与量は、非経口（例えば、注射可能な）処方で使用する有効成分の約１０ないし約１００倍、例えば単一または分割用量で１日当たり約５ないし約１２０００μｇ、好ましくは１日当たり約５ないし約５０００μｇの有効成分を含むであろう。本発明による経肺投与量は、約１０ないし約１００倍、例えば単一または分割用量で１日当たり約１ないし約１２０００μｇ、好ましくは１日当たり約５０ないし１０００μｇの有効成分を含むであろう。本発明による鼻腔、口内および舌下投与量も、約１０ないし約１００倍、例えば単一または分割用量で１日当たり約１ないし約１２０００μｇの有効成分を含むであろう。
【００９０】
鼻腔投与に好ましい投与量は１日当たり約１０−１０００ないし約１２００−１２０００μｇであり、口内投与に好ましい投与量は１日当たり約１０−１０００ないし約１２００−１２０００μｇであり、舌下投与に好ましい投与量は１日当たり約１０−１０００ないし約１２００−８０００μｇである。舌下投与量は、好ましくは口内投与量よりも小さい。エキセンジン−４の効力よりも小さいまたは大きい効力を有するエキセンジン・アゴニストの投与量は、上記したものおよび本明細書中の他の箇所の記載から適当なように増減する。
【００９１】
臨床実験
エキセンジンの実験はヒト対象において行い、それを出してエキセンジンおよびエキセンジン・アナログの有用性を実証する。選択した実験の要約を以下に示す。
【００９２】
下記実施例８に記載するごとく、健康な有志者における皮下エキセンジン−４の安全性、許容性、および薬理動態を調べる二重盲検、プラセボ対照の単一の増加してゆく用量の実験を行った。エキセンジン−４の５の単一皮下用量（０.０１、０.０５、０.１、０.２または０.３μｇ／ｋｇ）を、絶食状態の４０の健康な男性有志者で実験した。最大血漿エキセンジン−４濃度は、調べた用量の中でほとんど差がなく、投与１−２時間の間に達成された。データの検定は、Ｃｍａｘについての用量依存的増大を示した。この実験で報告された重大な有害事象は存在しなかった。
【００９３】
この実験に参加した健康な男性有志者においては、エキセンジン−４は０.１μｇ／ｋｇまでのおよびそれを含んでの皮下用量で良好に耐性であった。血漿グルコース濃度における低下は、この用量でも観察された。０.２μｇ／ｋｇ以上の用量で、最も一般的に観察される有害な事象は、頭痛、悪心、嘔吐、目眩および起立性低血圧である。０.０５μｇ／ｋｇ以上の用量を投与した後に、血漿グルコース濃度の一時的な落ち込みが存在した。
【００９４】
下記実施例１０は、０.１μｇ／ｋｇ未満の用量におけるエキセンジン−４のグルコース低下効果についての用量−応答関係のさらなる実験を記載している。規定食±経口低血糖剤で処理した２型糖尿病に罹った１４の対象［平均（±ＳＥ年齢５５±２；平均ＢＭＩ（３０.２±１.６ｋｇ／ｍ２）］を、経口剤を中止した後に１０−１４日間実験した。一晩絶食後の別の日に、プラセボ、０.０１、０.０２、０.０５および０.１μｇ／ｋｇのエキセンジン−４を無作為に皮下注射した後に評価を行った。標準化されたＳｕｓｔａｃａｌ（登録商標）食事（７ｋｃａｌ／ｋｇ）の摂取直前に注射を与え、つづいてつづく３００分の間に頻繁な間隔で血漿グルコース試料を収集した。
【００９５】
血糖症応答は、５時間の時間の間の血漿グルコース濃度における時間−計量平均（±ＳＥ）変化として定量化した。応答は、０.１μｇ／ｋｇのエキセンジン−４を用いた絶食（空腹時）グルコース濃度より下の３０.５±８.６ｍｇ／ｄＬ減少と比較して、プラセボの絶食グルコース濃度より上の＋４２.０±７.９ｍｇ／ｄＬ増加の範囲であった。
【００９６】
このグルコース低下効果のＥＤ５０は０.０３８μｇ／ｋｇであった。０.１μｇ／ｋｇ未満のエキセンジン−４用量は、胃腸管副作用からグルコース低下効果を分離するようであった。実施例１０は、エキセンジン−４が０.１μｇ／ｋｇ未満の用量で良好に耐性であるのみならず、これらの用量は２型糖尿病に罹った人々における食後血漿グルコース濃度（０.０３８μｇ／ｋｇのＥＤ５０）を実質的に低下したことを示している。
【００９７】
デリバリーの別の経路
エキセンジン−４をデリバリーする別の経路の実行可能性を、投与後の、糖尿病動物における血漿グルコース低下のごとき生物学的応答の観察と結合して動物の循環中のエキセンジン−４を測定することによって探査した。エキセンジン−４の通路を幾つかの表面、呼吸器管（鼻腔、気管および肺の経路）および消化管（舌下、胃管および十二指腸内の経路）を横切って調べた。血中におけるエキセンジン−４の生物学的効果および外観は、呼吸管を介する投与の各経路で、ならびに胃腸管を介した舌下および胃管栄養したペプチドで観察されている。
【００９８】
気管内投与−本明細書中に記載するごとく、絶食ラットへのエキセンジン−４の気管内投与（２０μｇ／５０μＬ／動物）は、投与後５−１０分以内に２０６０±９６０ｐｇ／ｍＬまでの平均エキセンジン−４濃度における上昇を生じた。上昇したエキセンジン−４濃度は滴下後少なくとも１時間維持された（図４を参照されたい）。糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスにおいては、エキセンジン−４の気管内滴下（１μｇ／動物）は、処理後１.５時間に、血漿グルコース濃度を３０％低下し、一方でビヒクル対照群におけるそれは４１％増加した。これらの動物において、エキセンジン−４の平均血漿濃度は、処理後４.５時間に７７７±３６５ｐｇ／ｍｌであった（図５ａおよび５ｂを参照されたい）。
【００９９】
糖尿病ｏｂ／ｏｂマウスにおいては、エキセンジン−４の気管内滴下（１μｇ／動物）は、４時間後に前処理の４３％まで血漿グルコース濃度を低下し、一方でビヒクル対照群におけるそれは変化しなかった（図６ａおよび６ｂを参照されたい）。
【０１００】
９の一晩絶食させた雄性スプラーグ・ドーリー・ラット（９６−１１５日齢、体重３６５−３９５、平均３８５ｇ）をハロセインで麻酔し、気管切開し、大腿動脈を通してカテーテル挿管した。ｔ＝０においては、２.１μｇ（ｎ＝３），２１μｇ（ｎ＝３）または２１０μｇのエキセンジンを溶解した３０μＬの塩類溶液を挿管法を超えて気管に注入した。５、１０、２０、３０、６０、９０、１２０、１５０、１８０、２４０、３００および３６０分後に血液を採取し、遠心し、血漿を、無傷エキセンジン−４分子のＮ−末端およびＣ−末端エピトープに向けたつづく免疫ラジオメトリー（ＩＲＭＡ）アッセイのために−２０℃にて保存した。気管内投与の後に、ピーク血漿濃度の６１−７４％が５分以内に観察された。Ｔｍａｘは投与後２０ないし３０分に起こった。ＡＵＣおよびＣｍａｘは用量に比例した。２.１μｇ（１.５ｎｍ／ｋｇ）の用量においては、〜５０ｐＭの血漿濃度を生じ（その場合、ヒトにおいてグルコース低下効果が観察された）、バイオアベイラビリティーは７.３％であった。変動係数は４４％であった。より高用量では、バイオアベイラビリティーは僅かに低く、ＣＶはより高かった（図７ａおよび７ｂを参照されたい）。気管経路の投与を介しては、ｔ１／２（Ｃｍａｘの５０％未満に血漿が降下する時間と独断的に定義した）は最低用量については３０−６０分で、２のより高用量については６０−９０分であった。要するに、エキセンジン−４の生物学的に有効な量が、明らかな呼吸窮迫を発生することなく気管を介して迅速に吸収される。呼吸管は、エキセンジン−４の投与の実行可能な経路である。
【０１０１】
経肺投与−エキセンジン−４の増加した血漿濃度が、エアゾール散布したエキセンジン−４に曝露したラットにおいて検出された。大気１ｍＬ当たりほぼ８ｎｇのエアゾール散布したエキセンジン−４へのラットの曝露は、処理後５分に３００−１９００ｐｇ／ｍＬのピーク血漿エキセンジン−４濃度を生じた（図８を参照されたい）。エアゾール散布したエキセンジン−４への糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスの同様な曝露は、１７０±６７ｐｇ／ｍＬの平均血漿エキセンジン−４濃度が検出された場合、１時間後に血漿グルコース濃度における３３％の低下に通じた。エアゾール化した塩類溶液に曝露した対照群における糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスは、血漿グルコースにおいて何ら変化を記録しなかった（図９ａおよび９ｂを参照されたい）。
【０１０２】
鼻腔投与−ラットの鼻孔へのエキセンジン−４の適用は、血漿濃度における上昇に通じた。３００ｐｇ／ｍＬおよび６７５７ｐｇ／ｍＬのピーク値が、各々、１μｇおよび１００μｇのエキセンジン−４（２μＬの塩類溶液に溶解した）を投与した１０分後に検出された（図１０を参照されたい）。
【０１０３】
消化管（gut）を介した投与−雄性ｄｂ／ｄｂマウス（ほぼ５０ｇ体重）を２時間、塩類溶液またはエキセンジン−４（エキセンジン−４）を胃内投与する前後に絶食させた。処理１時間後に、血漿グルコース濃度における９％の低下が１ｍｇ／２００μｌ／動物で観察され、１５％の低下が３ｍｇ／２００μｌ／動物で観察され、それと比較して対照においては血漿グルコースの１０％の上昇が観察された（図１１を参照されたい）。
【０１０４】
舌下投与−糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスに対するエキセンジン−４（１００μｇ／５μＬ／動物）の舌下適用は、処理１時間後に、血漿グルコース濃度における１５％の低下に通じた。３０％の上昇が塩類溶液を与えた対象群について観察された。６０分における平均エキセンジン−４血漿レベルは、４５２０±１８４６ｐｇ／ｍＬであった（図１２ａ、１２ｂおよび１２ｃを参照されたい）。
【０１０５】
８のスプラーグ・ドーリー・ラット（〜３００ｇ）をメトファン（metophane）で簡単に麻酔し、その間に１０μｇ／３μＬ（ｎ＝４）または１００μｇ／３μＬ（ｎ＝４）を含有する溶液を舌の下にピペットで適用した。その後に、局所麻酔した尾部から血液試料を採取し、ＩＲＭＡによってエキセンジン−４についてアッセイした。血漿濃度は投与後３分までに上昇し始め、投与後１０分および３０分に最大になった（各々、１０μｇおよび１００μｇ用量）。その後に、血漿エキセンジン−４濃度は、５時間を超えて定量下限（ＬＬＯＯ）の上方にとどまった。各実験の終点までの曲線下面積を、台形法（trapezoidal method）によって計算した。２の数字が導かれ、その１は総免疫反応性に由来し、もう１はｔ＝０に存在した非ゼロ値上方の増分に由来する。これらの値を同一動物モデルにおける歴史的な静脈内巨丸剤データと比較して、各々、バイオアベイラビリティーの高および低概算値を得た。１０μｇ用量については、舌下バイオアベイラビリティーは３.１−９.６％であり、１００μｇ用量についてはバイオアベイラビリティーは１.３−１．５％でより低かった。ＡＵＣの変動性は投与後の第１時間時間に最大であった（１０および１００μｇ用量についてＣＶ  ７４％および１２８％）。５時間の積算については、ＡＵＣの変動係数は各々２０％および６４％であった。ピーク血漿濃度（Ｃｍａｘ）は、舌下投与後と皮下投与後とで同程度に迅速に生じた（Ｔｍａｘ  〜３０分）。１０μｇのエキセンジン−４の舌下投与後のＣｍａｘは静脈内巨丸剤後で１.５％であったが、皮下巨丸剤後に得られたそれの１４．５％であった。１００μｇのエキセンジン−４の舌下投与後のＣｍａｘは、静脈内巨丸剤後に観察された値の０.２９％、皮下巨丸剤後に得られた値の６.１％に過ぎなかった（図１２ｄおよび１２ｅを参照されたい）。舌下投与によるデリバリーは、舌の下に置く場合、吸収促進成分を含有する固形投与量形態を用いることによって高めることができた。最低の舌下用量を用いた場合、バイオアベイラビリティーおよびＣｍａｘは最大であり、Ｔｍａｘは最短であり、バイオアベイラビリティーの変動は最少であった。最低舌下用量は、ヒトにおいてグルコースを低下させるのに有効であると予想される濃度と同様な血漿濃度を生じた（〜５０−１００ｐＭ）。
【０１０６】
本発明の理解を支援するために、一連の実験結果を記載する以下の実施例を含める。本発明に関連する実験は、勿論、本発明および本発明のかかる変形を特異的に限定するものと解釈されるべきではなく、現在知られまたは後に開発される、当業者の範囲内に入るものは本明細書およびその後に特許請求する発明の範囲内に入ると考える。
【０１０７】
実施例１−エキセンジン−４の連続皮下注入は持続した血漿コントロールを供する
この単純盲検、プラセボ対照する用量を増加させてゆく実験を設計して、２型真性糖尿病に罹った患者において、エキセンジン−４の４の用量の（０.２μｇ／ｋｇ／日；０.４μｇ／ｋｇ／日；０.６μｇ／ｋｇ／日；および０.８μｇ／ｋｇ／日）２３時間の連続皮下注入とプラセボとを比較した。対象は５の処理連続のうちの１に無作為に割り当て；各連続内で、各対象にはプラセボおよびＡＣ２９９３の４の用量を用量を増加させてゆく様式で与えた。プラセボ注入は１日目および別の日に与えた。対象には１０連続日の間に合計１０の注入（６のプラセボおよび４のエキセンジン−４）を与えた。
【０１０８】
体重維持食餌プログラムを割り当て、対象には３の分離した食事およびイブニング・スナックを毎日与えた。各日において各食事およびスナックは同時に（±１５分）消費した。この実験では、エキセンジン−４が多数の機構を介して血漿グルコースを低下させることもさらに実証し、その中でもグルコース依存性のインスリノトロピズム（insulinotropism）が突出していた。この実験は、皮下の連続注入による２型糖尿病（ＤＭ２）に罹った患者の治療を分析した。先のデータは急速に食事後グルコースを低下させる際だった効果を実証しており、２８日のデータはエキセンジン−４を１日に２回食事前注射として投与した場合（０.０８μｇ／ｋｇ）の改善された血糖症（ＨｂＡｌｃ）および体重コントロールの有利な効果を確立した。この単純盲検、プラセボ対照した実験においては、ＤＭ２に罹った患者において、エキセンジン−４の４の用量（０.２μｇ／ｋｇ／日；０.４μｇ／ｋｇ／日；０.６μｇ／ｋｇ／日；および０.８μｇ／ｋｇ／日）の２３時間の連続皮下注入とプラセボとを比較した。メトホルミンおよび／または食事（ベースラインＨｂＡｌｃ：７．４−１０．６％）で不十分に制御したＤＭ２に罹った１２の患者（６９−８５ｋｇ；平均（±ＳＤ）年齢＝５４±７）には、各々、合計１０の矩形波注入（６のプラセボおよび４のエキセンジン−４）を１０の連続日の過程にわたって与えた。各注入の間に、血漿グルコースおよびエキセンジン−４は種々の時間間隔で測定した。一連の血漿の試料は、確認された免疫酵素アッセイ（ＩＥＭＡ）を用いてアッセイした。このサンドイッチ型のアッセイでは、エキセンジン−４と反応するマウス・ベースのモノクローナル抗体を用いるが、１または両方の抗体はＧＬＰ−１と反応しない。定量の下限は２.５ｐｇ／ｍｌであった。
【０１０９】
朝食、昼食、夕食およびイブニング・スナックは、注入の最初の１４時間以内に与えた。血漿エキセンジン−４濃度は用量に比例し、安定状態は少なくとも注入４時間後に達した。ｔ＝３時間から注入の終了までの各時点において、エキセンジン−４のすべての用量はプラセボと比較して平均血漿グルコース濃度を低下させた（図１）。
【０１１０】
これらの結果は、ＤＭ２に罹った患者において、皮下連続注入としてデリバリーした場合に食前、食事および絶食状態においてグルコースを低下させるエキセンジン−４の有効性を実証している。
【０１１１】
実施例２−絶食状態におけるエキセンジン−４のグルコース低下効果
この実験においては、一晩絶食後の８時間にわたる循環グルコース（図２）、インスリン（図３）、およびグルカゴン濃度に対する単一ＳＣ  ＡＣ２９９３注射の効果を調べた。メトホルミンおよび／またはチアゾリジンジオンで処理した２型真性糖尿病に罹った１３の患者［６１.５％男性；（平均±ＳＤ）ＢＭＩ  ３２.８±５.４ｋｇ／ｍ２；年齢４９±７歳；ＨｂＡｌｃ  ９.８±１.３％；絶食血漿グルコース（ＦＰＧ）２２１.８±４１.５ｍｇ／ｄＬ］を登録した。各患者に、エキセンジン−４の３の注射（０.０５、０.１および０.２μｇ／ｋｇ）および１のプラセボ（ＰＢＯ）注射を無作為な順序で与えた。ＰＢＯと比較したすべてのエキセンジン用量について、ｔ＝３時間にＦＰＧは最下点に達して、平均ＦＰＧは８時間の投与期間後期間の間に顕著に落ちた。
【０１１２】
平均血漿インスリン濃度（Ｉｎｓ）ＡＵＣ（０−８時間）およびピークＩｎｓは、用量依存的な様式で上昇した（図３）。Ｉｎｓは、すべてのエキセンジン用量についてＦＰＧ最下点と一致してｔ＝３時間付近に急速に降下した。血漿グルカゴン濃度の増加ＡＵＣ（０−３時間）（ｐｇ*時間／ｍＬ）は、−２２.５±２６（ＰＢＯ）と比較して−６４.３±３４（０.２μｇ／ｋｇのエキセンジン）、−６３.４±４２（０.１μｇ／ｋｇ）および−５０.５±３４（０.０５μｇ／ｋｇ）であった。実験薬物療法のすべての用量は良好に耐性であった。有害な事象は以前に報告したエキセンジン実験と同様であり、主として軽度／中度の悪心からなり；低血糖症は存在しなかった。本発明者らは、エキセンジンが絶食の間に、少なくとも部分的には、２型糖尿病においてＩｎｓをグルコース依存的に増加させ、グルカゴン濃度を鋭敏に抑制することによって、グルコースを有効に低下させるとの結論を下している。その効力のある食後の抗−高血糖効果に加えて、エキセンジンは、吸収後期間の間にＦＰＧを重大に低下させた。したがって、エキセンジンは糖尿病における終日グルコース制御を提供し得る。
【０１１３】
実施例３−エキセンジン−４はＺｕｃｋｅｒ糖尿病肥満ラットにおける高血糖症クランプ（hyperglycemic clamp）の間にグルカゴン分泌を低下させる
絶対的または相対的高グルカゴン血症は、１型および２型真性糖尿病の特徴である場合があり、過度なグルカゴン分泌の抑制は静グルカゴン剤を用いる療法の潜在的な利益である。この実施例においては、麻酔した雄性のＺｕｃｋｅｒ糖尿病肥満（ＺＤＦ）ラットにおけるグルカゴン分泌に対するエキセンジン−４の効果を調べた。高インスリン血症性の高血糖症クランプ・プロトコールを用いて、グルカゴン分泌に影響を及ぼす傾向のある因子を一定に保持した。血症グルコースは、塩類溶液（ｎ＝７）またはエキセンジン−４（０.２１μｇ＋２.１μｇ／ｍｌ／ｈ；ｎ＝７）の静脈内注入を開始する６０分前に〜３４ｍＭにクランプした。これらの注入前に測定した血漿グルカゴン濃度は、両方の群において同様であった（各々、３０６±３０ｐＭ  対  ２５２±３２ｐＭ；ｎ.ｓ.）。
【０１１４】
エキセンジン−４を注入したラットにおける平均血漿グルカゴン濃度は、クランプの最後の６０分間において、塩類溶液を注入したラットにおけるもののほぼ半分であった（各々、１６５±１８ｐＭ  対  ２９８±２６ｐＭ；Ｐ＜０.００２）。高血糖症クランプ・プロトコールは、インスリン感度の測定も可能であった。クランプの間のグルコース注入速度は、対照ラットに対してエキセンジン−４処理したラットにおいて１１１±７％まで増大した（Ｐ＜０.００１）。言い換えれば、エキセンジン−４は高血糖症クランプ実験の間のＺＤＦラットに静グルカゴン効果を示し、その効果は糖尿病のヒトの治療上の利益となるであろう。
【０１１５】
実施例４−静脈内、皮下および腹膜内投与後のラットにおけるエキセンジン−４の薬剤動力学
この実施例では、２.１、２１、２１０μｇ／ラットをｉ.ｖ.、巨丸剤、ｓ.ｃ.およびｉ.ｐ.投与した後のならびに２.１、２１、２１０μｇ／ラットをｉ.ｖ.注入（３時間）した後のラット（各〜３５０ｇ体重）におけるエキセンジン−４の血漿薬剤動力学を明らかにするための作業を記載する。血漿の一連の試料（〜１２０μＬ）を、確認されたイムノラジオメトリーアッセイ（ＩＲＭＡ）を用いてアッセイした。このサンドウィッチ型のアッセイでは、エキセンジン−４と反応するが、ＧＬＰ−１またはエキセンジン−４もしくはＧＬＰ−１の試験した代謝物とは反応しないマウス・ベースのモノクローナル抗体を用いる。定量の下限は１５ｐＭ（６３ｐｇ／ｍＬ）であった。エキセンジン−４に対する概算ｔ１／２はｉ．ｖ．巨丸剤については１８−４１分であり、ｉ.ｖ．連続については２８−４９分であり、ｓ.ｃ.については９０−２１６分であり、ｉ.ｐ.注射については１２５−１７４分であった。バイオアベイラビリティーは、ｓ.ｃ.およびｉ.ｐ.注射について６５−７６％であった。ｉ.ｖ．注入から決定したクリアランスは４−８ｍＬ／分であった。各経路の投与内のＣｍａｘおよびＡＵＣ値は両方とも用量に比例した。分配の体積は４５７−８６７ｍＬであった。クリアランスおよびバイオアベイラビリティーは用量依存的でなかった。Ｃｍａｘ（または安定状態血漿濃度；Ｃｓｓ）を以下の表に示す。
【０１１６】
【表１】
2005533768.tif 000002
【０１１７】
実施例５−ラットにおける静脈内グルコース攻撃の間のエキセンジン−４およびグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）のインスリン分泌増強作用の比較
この実験では、ラットにおける静脈内（ｉ.ｖ.）グルコース攻撃後のイン・ビボ(in vivo)の合成エキセンジン−４およびＧＬＰ−１のインスリン分泌増強作用を比較する。スプラーグ・ドーリー・ラット（〜４００ｇ）をハロセインで麻酔し、大腿動脈および伏在静脈を介してカニューレ挿管した。９０分間の回復期間の後に、塩類溶液またはペプチド（各々、３０ｐｍｏｌ／ｋｇ／分）をｉ.ｖ.投与した（１ｍｌ／ｈを２時間；各群についてｎ＝４〜５）。注入を開始した後３０分に、Ｄ−グルコース（５.７ｍｍｏｌ／ｋｇ、０.８ｍｌ）をｉ.ｖ注射した。塩類溶液処理した、エキセンジン−４処理したおよびＧＬＰ−１処理したラットにおいては、血漿グルコース濃度は注射前は同様であり（９.３±０.３、９.７±０.３、１０.３±０.４ｍＭ）、グルコース注射後に同様の量だけ増加し（２１.７、２１.３、２３.７ｍＭ）、同様な６０分グルコースＡＵＣ（各々、９８７±３９、９０７±３０、１０９６±６８ｍＭ・分）を生じた。すなわち、高血糖刺激は、各処理群において同様であった。塩類溶液処理したラットにおける血漿インスリン濃度は、グルコース攻撃で３.３倍に増加した（２３０±５３ないし７６５±１８８ｐＭのピーク）。エキセンジン−４注入を用いると、血漿インスリン濃度における増加は６.８倍（３６３±６０ないし２４８６±３６５ｐＭ）であった。ＧＬＰ−１を用いた場合、血漿インスリン濃度における増加は２.９倍（３９１±２７ないし１１４５±１６９ｐＭ）であり、これは塩類溶液処理したラットで得られたものと同様であった。塩類溶液処理したラットにおける６０分インスリンＡＵＣは２４±６ｎＭ・分であり、エキセンジン処理したラットにおいては２.８倍（６７±８ｎＭ・分；Ｐ＜０.００３  対  塩類溶液；Ｐ＜０.０２  対  ＧＬＰ−１）増加し、ＧＬＰ−１処理したラットにおいては２０％（ｎ.ｓ.  対  塩類溶液）増加した。エキセンジン−４によるグルコース刺激インスリン放出の増幅は３および３００ｐｍｏｌ／ｋｇ／分の注入速度でも試験し、用量依存的であることが示された。したがって、エキセンジン−４は、無傷ラットにおけるグルコース刺激インスリン放出を増幅することにおいて、ＧＬＰ−１よりもより効力がありおよび／または有効である。
【０１１８】
実施例６−ＧＬＰ−１およびエキセンジン−４のＧＬＰ−１受容体結合／活性化およびグルコース低下効果の比較
エキセンジン−４は固相ペプチド合成技術によって合成し、ＧＬＰ−１受容体に対する結合およびその活性化のイン・ビトロ(in vitro)の観点から、および糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスにおける血漿グルコースを低下させるイン・ビボ(in vivo)の観点から合成ＧＬＰ−１と比較した。ＧＬＰ−１受容体を発現しているラット膵島細胞腫セルライン（ＲＩＮｍ５ｆ）の原形質膜調製において、ペプチドを、放射性同位元素標識ＧＬＰ−１を結合および置換する能力およびｃＡＭＰの産生を刺激する能力についてアッセイした。結合効力の相対的順序はＧＬＰ−１＞エキセンジン−４であることが判明した。シクラーゼ活性化の相対的順序はＧＬＰ−１＝エキセンジン−４であった。以下の表に示すように、アフィニティーは４ないし５倍の範囲にわたって異なる。それに対して、イン・ビボ(in vivo)グルコース低下効力は３４３０倍の範囲で異なっていた。エキセンジン−４はＧＬＰ−１よりも３４３０倍より効力が高かった。エキセンジン−４のイン・ビボ(in vivo)効力はＧＬＰ−１受容体における効力に合致せず、特性の集合の頂点のようである。
【０１１９】
【表２】
2005533768.tif 000003
【０１２０】
実施例７−一対を摂食させたおよびエキセンジン−４処理したＺｕｃｋｅｒ糖尿病肥満ラットにおける血糖症指数およびインスリン感度の比較
本実施例は、ＺＤＦラットにおけるエキセンジン−４の有利な効果が食餌取込みにおける変化に対して二次的であったかを試験する。ここでは、１０μｇのエキセンジン−４で１日当たり２回皮下接種したＺＤＦラットが摂食した食餌と同量の食餌を消費した塩類溶液処理した合致した動物において観察された効果に対するエキセンジン−４で得られた効果を比較する。血漿グルコースおよびＨｂＡｌｃは６週間、毎週測定した。最後の処理の１日後に、動物をハロセインで麻酔し、高インスリン血症性（５０ｍＵ／ｋｇ／分）の正常血糖クランプに付した。６週間にわたるＨｂＡｌｃにおける変化は処理群間で異なり（Ｐ＜０.００１  ＡＮＯＶＡ）、自由に摂食させたラット（ｎ＝５）および一対を摂食させたラット（ｎ＝５）において増加したが、エキセンジン−４処理したラット（ｎ＝５）においては減少した。同様にして、血漿グルコースにおける変化も処理群間で異なり（Ｐ＜０.００２  ＡＮＯＶＡ）、自由に摂食させたＺＤＦラットおよび一対を摂食させたＺＤＦラットにおいて増加したが、エキセンジン−４で処理したＺＤＦラットにおいては減少した。３時間のクランプ・プロトコールの最後の時間において、エキセンジン−４処理したラットにおけるグルコース注入速度は、各々、一対を摂食させた対照（＋１０５％）および自由に摂食させた対照（＋２０％）よりもより高い傾向であった（１０.１４±１.４３  ｎ＝５、８.６４±０.８７  ｎ＝４、４.９３±２.０２ｍｇ／ｋｇ／分  ｎ＝３；ｎ.ｓ.  Ｐ＝０.０９  ＡＮＯＶＡ）。インスリン感度のもう１の指数である血漿乳酸濃度は処理群間で顕著に異なり（Ｐ＜０.０２  ＡＮＯＶＡ）、エキセンジン−４処理したラットで最も低かった。したがって、エキセンジン−４処理は、血糖症指数における改善、および完全ではないにしろ部分的には同量の食餌を摂食させた対照に合致するインスリン感度における改善と関連し、ＺＤＦラットにおけるエキセンジン−４での代謝制御における改善が少なくとも部分的にはカロリー制限を超える機構に起因することを示している。
【０１２１】
実施例８−臨床実験、ならびに健全な一晩絶食した志願者における皮下合成エキセンジン−４による内因性インスリン分泌の刺激
安全性ならびに合成エキセンジン−４の耐性および薬理動力学を開発するための二重盲検、プラセボ対照の単一の増加してゆく用量の臨床試験において、血漿グルコースおよびインスリン濃度に対する効果を評価しつつ、皮下注射用に処方したエキセンジン−４を健全な男性志願者において評価した。エキセンジン−４の５の単一皮下用量（０.０１、０.０５、０.１、０.２または０.３μｇ／ｋｇ）を絶食状態の４０の健全な男性志願者において実験した。最高の血漿エキセンジン−４濃度は、調べた用量の中でほとんど差異なくして投薬１時間〜２時間後に達した。データを調べると、Ｃｍａｘの用量依存的な増大を示した。この実験においておよびこの実験に参加した健全な男性志願者において報告された重篤な有害な事象は存在せず、エキセンジン−４は０.１μｇ／ｋｇまでおよびそれを含む皮下用量において良好に耐性であった。血漿グルコース濃度の低下もこの用量で観察された。０.２μｇ／ｋｇ以上の用量で最も一般的に観察された有害な事象は、頭痛、悪心、嘔吐、目眩および起立性低血圧であった。０.０５μｇ／ｋｇ以上の用量の投与後に、血漿グルコース濃度の一時的な落ち込みが存在した。
【０１２２】
４０の１８−４０歳の健全な痩身（平均ＢＭＩ（±ＳＥ）２２.７±１.２）対象を無作為に５の群に割り当てた。８の対象の各群内において、６をエキセンジン−４に、２をプラセボ（ＰＢＯ）に割り当てた。エキセンジン−４（０.０１、０.０５、０.１、０.２または０.３μｇ／ｋｇ）またはプラセボは一晩絶食後に投与し、安全性および耐性と一緒にエキセンジン−４、グルコースおよびインスリン濃度をモニターした。安全性の問題は全く観察されなかった。＜０.１μｇ／ｋｇの用量はＰＢＯと同様に耐性であり、一方０.２および０.３μｇ／ｋｇは悪心および嘔吐の用量依存的な増加を誘起した。ピーク血漿エキセンジン−４濃度は用量依存的に上昇し、０.１μｇ／ｋｇの後、エキセンジン−４免疫反応性は３６０分間持続した。血漿グルコースは０.０１μｇ／ｋｇ以外のすべての用量の後に低下し、３０分までに最下点に達し、１８０分以内にベースラインに復帰した。０.３μｇ／ｋｇを与えた対象には、投薬後３０分に栄養飲料を与え、それらのデータの比較は排除した。血漿グルコース（０−１８０分）における平均変化：各々、ＰＢＯについて０.０３±０.０７、−０.０７±０.０８、−０.３８±０.１４、−０.８５±０.１３および−０.８３±０.２３ミリモル／Ｌ、０.０１、０.０５、０.１および０.２μｇ／ｋｇ；ＰＢＯに対して  Ｐ＜０.０２）。記録された最低の血漿グルコースは３.４ミリモル／Ｌであった。血漿インスリンにおける対応する平均変化（０−１２０分）は０.４３±０.５９、２.３７±０.５８、２.２８±０.６６、４.９１±１.２３および１４.００±３.３４μＵ／ｍＬ；０.１および０.２μｇ／ｋｇ群についてＰＢＯに対して  Ｐ＜０.０１であった。したがって、健全な一晩絶食した志願者においては、エキセンジン−４の注射は（１）安全性の問題を全く示さず、（２）＜０.１μｇ／ｋｇの用量において良好に耐性であり、（３）６時間までの血漿中のエキセンジン−４免疫反応性に通じ、（４）低血糖症を誘導することなく、用量依存的な様式で血漿インスリンを増加させ、血漿グルコースを低下させた。
【０１２３】
実施例９−齧歯類におけるエキセンジン−４の別のデリバリーの有効性
本実施例では、注射に代わる手段によるエキセンジン−４のデリバリーを試験し、生物学的効果を発揮する十分量で粘膜表面を横切るその能力を調べた。血漿グルコースおよび無傷合成エキセンジン−４の濃度における変化（２−部位免疫ラジオメトリック・アッセイによって測定した）が、気管経由、エアゾールミスト（経肺）経由、胃管栄養（経口）経由、および舌下（舌下）で異なる用量の合成エキセンジン−４を含有する塩類溶液を投与したｄｂ／ｄｂマウスにおいて観察された。
【０１２４】
気管投与については、雄性ｄｂ／ｄｂマウス（ほぼ５０ｇ）を２時間絶食し、麻酔下で気管に挿管した。塩類溶液に溶解した２０μｌの塩類溶液または１μｇのエキセンジン−４を各動物の気管に投与する前または投与した後に、動物から採血した（７５μｌ、眼窩脈洞）。血漿エキセンジンおよびグルコースのレベルを決定した（図５ａおよび図５ｂ）。
【０１２５】
胃内投与については、雄性ｄｂ／ｄｂマウス（各〜５０ｇ）を２時間絶食させ、２００μｌの塩類溶液を各動物に巨丸剤用量（０、０.３、１および３ｍｇ／マウス）で胃内投与する前または後に採血した（４０μｌ、眼窩脈洞）（用量当たりの血漿グルコースに対する効果、図１１）。
【０１２６】
糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスに対するエキセンジン（５μｌ中、１００μｇ／動物）の舌下適用は、処理後１時間の血漿グルコース濃度における１５％低下に通じた。塩類溶液を与えた対照群については３０％増加が認められた。６０分における平均エキセンジン血漿レベルは、４５２０±１８４６ｐｇ／ｍｌであった。図１２Ａおよび１２Ｂ。
【０１２７】
投与の同じ経路ならびに十二指腸内および鼻腔内投与をラットにおいて試験し、例えば舌下および気管内経路についてバイオアベイラビリティーを計算した。一晩絶食させた雄性ラット（３５０−４００ｇ）を、麻酔下で気管および大腿動脈にカニューレ挿管した。各ラットの気管に５０μｌ塩類溶液に溶解した２０μｇのエキセンジン−４を投与する前および投与した後（５、１５、３０、４５、６０および７５分）に、血液を動脈線から引き出した。血漿エキセンジンレベルは、免疫ラジオメトリー・アッセイで決定した（図４）。
【０１２８】
経肺投与については、一晩絶食させた雄性ラット（各々、ほぼ３５０ｇ）を２リットルのチャンバーに入れてエアゾール化したエキセンジン−４に１０分間曝露した。エキセンジン−４は５Ｌ／分の流速で０.２ｍｇ／分の速度で噴霧した。エアゾール化したエキセンジン−４の濃度は、実験の過程の間に引き込んだチャンバー大気の試料から概算した。結果を図８に示す。ｄｂ／ｄｂマウスにおける同様の曝露は、図９Ａおよび９Ｂに示すグルコースおよびエキセンジン血漿レベルに対する効果を作り出した。
【０１２９】
鼻腔注入については、絶食させていないHarnal Sprague Dawleyラット（各々、３１１−３６５ｇ）に、２μｌ中の０、１または１００μｇのエキセンジン−４を鼻孔への適用によって投薬した。麻酔した（ハリケーン（Hurricane））尾部端からの血液試料は投薬０、３、１０、２０、３０および６０分に採取し、エキセンジン血漿レベルはＩＲＭＡによって測定した（図１０）。
【０１３０】
マウスにおける前記の各々経由で投与したエキセンジン−４は、投与後１ないし４時間に顕著なグルコース低下活性を生じた（ｄｂ／ｄｂマウス、気管内  Ｐ＜０.０２；ｏｂ／ｏｂマウス、気管内  Ｐ＜０．０００２；ｄｂ／ｄｂマウス  エアゾール  Ｐ＜０.０００１；胃管栄養  Ｐ＜０.００２；舌下  Ｐ＜０.０２）。血漿エキセンジン−４濃度における用量依存的な増大は、７７７±３６５ｐｇ／ｍＬ（ｄｂ／ｄｂマウス、気管内）；１７０±６７ｐｇ／ｍＬ（ｄｂ／ｄｂマウス、エアゾール）；４５２０±１８４６ｐｇ／ｍＬ（ｄｂ／ｄｂマウス、舌下；図１２Ａおよび１２Ｂ）までであった。同様に、ラットにおいては、エキセンジン−４濃度は６８,６８２±３８,６６１ｐｇ／ｍＬ（気管内；図４）；１９００ｐｇ／ｍＬ（経肺）；６７５７ｐｇ／ｍＬ（鼻腔）；３,８６２±２,８８４ｐｇ／ｍＬ（舌下；図１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ）まで観察されたが、十二指腸内デリバリーした場合には明白な吸収または生物活性は観察されなかった。塩類溶液中のエキセンジン−４のバイオアベイラビリティーは気管を介してデリバリーした場合、最低用量で〜７.３％であり、その場合Ｃｍａｘの６１−７４％は５分以内に観察された。その後の動力学は、皮下投与後に観察されたものと同様であった。舌下でデリバリーした塩類溶液中のエキセンジン−４のバイオアベイラビリティーは最低用量で３.１〜９.６％であった。これらの実験は、簡便な非注射経路を介した生物学上有効量のエキセンジン−４およびそのペプチド・アゴニスト・アナログのデリバリーを支持している。
【０１３１】
実施例１０−２型真性糖尿病に罹ったヒトに皮下接種によって投与した合成エキセンジン−４の用量の範囲の代謝効果に対する単純盲検、プラセボ対照の実験
本実施例では、２型真性糖尿病に罹った対象に皮下経路によって投与した合成エキセンジン−４の用量の範囲の代謝効果を調べるための２の部分の単純盲検、プラセボ対照の実験を記載する。実験に関与する対象は２型糖尿病と診断され、食餌および／または経口低血糖剤（ＯＨＡ）で制御されており、＞７.０％のＨｂＡｌｃ濃度を有するが、スクリーニング診察（screening visit）には＜１２.０％である個人であった。
【０１３２】
実験はスクリーニング診察と開始し、その後にＯＨＡを摂取している対象にこの薬物療法を中止するよう指示し、ＯＨＡの効果が消えた場合、ほぼ１４日後に臨床に戻した。１部に参加した対象は、第１の用量の前に正午にクリニックにて診察し、３または４の計画した投薬日に開始した。各投薬事象は２４時間離れるよう計画した。
【０１３３】
同意およびスクリーニングの後に、対象を無作為に割り当てて合成エキセンジン−４またはプラセボを投与した。実験の第１の部分において、６の対象をin-patient臨床研究ユニットに３ないし４日間閉じ込め、４の処理シークエンスに割り当て、そこではそれらは以下の各用量を受けた：プラセボ、または０.１または０.０１またはおそらく０.００１μｇ／ｋｇの合成エキセンジン−４。用量は、一晩絶食後に皮下投与した。標準化した液体食餌を実験薬物療法の注射から１５分後に投与した。以下の表は、１部についての投薬計画を示している：
【０１３４】
【表３】
2005533768.tif 000004
【０１３５】
実験の第２の部において、１部の完了のほぼ３日後に、８の対象もin-patient臨床研究ユニットに４日間閉じ込めた。対象は１部に参加した者とは異なる対象であった。２部の間の実験手法および事象の計画は１部と一致した。用量は、１部におけるグルコースに対する効果を分析した後に決定した。
【０１３６】
１部の間は０.０１μｇ／ｋｇで示された顕著な効果は存在しなかったため、２部では以下の計画に従って対象に投薬した：
【０１３７】
【表４】
2005533768.tif 000005
【０１３８】
２部に参加した対象は、同様に１部からのデータを再検討した後にその投薬を開始した。すべての対象は安全性の再評価のためにin-patientユニットから解放されて臨床上４ないし６日後に復帰した。
【０１３９】
実験に使用した合成エキセンジン−４は、酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４.５）中に処方化されて４.３％のマンニトールを等オスモル濃度モディフィアーとして含有する、皮下注射用の無色透明の無菌溶液であった。合成エキセンジン−４注射の強度は０.１ｍｇ／ｍＬであった。１ｍＬの溶液をゴム性ストッパーを有する３ｍＬバイアルに供給した。プラセボ溶液は同じ無菌処方から作製したが、薬剤物質、合成エキセンジン−４は含んでいない。
【０１４０】
実験の結果を図１６および１７に示す。それらは、２型糖尿病に罹ったヒトにおいて血中グルコースを低下させる種々の異なる用量のエキセンジン−４（０.０２μｇ／ｋｇ、０.０５μｇ／ｋｇ、および０.１μｇ／ｋｇ）の能力を示している。
【０１４１】
実施例１１
本実施例では、糖尿病肥満Ｚｕｃｋｅｒラットにおけるエキセンジン−４およびそのアゴニストのインスリン感受性化効果の用量−応答を決定する実験を記載する。これらの実験で用いたエキセンジン−４はBachem社（Torrance, CA; Cat H8730、Lot506189）、American Peptides社（Sunnyvale, CA; Cat 301577、Lot K1005ITI）から、および研究室での固相合成（lot AR1374-11；ペプチド含量  ９３.３％）から得た。３９の雄性糖尿病肥満Ｚｕｃｋｅｒラット（ＺＤＦ）／ＧｍｉＴＭ−（ｆａ／ｆａ）（１１６±２０日齢；体重４４１±３９ｇ）を５の処理群に割り当てた：塩類溶液注射のみ（ｎ＝９）、エキセンジン−４注射０.１、１、１０または１００μｇ（各々、ｎ＝９、１０、６、５）。これらのうち、３５のラットを高インスリン血症の高血糖クランプ実験に用いた（各々、ｎ＝９、７、９、５、５）。一晩絶食させた意識のあるラットの局所麻酔した尾部（Hurricaine brandの２０％局所ベンゾカイン溶液、Beutlich, Waukegan, IL)から、処理前に、および処理の間５週間に隔週にヘモグロビンＡlcを分析する（DCA2000 latex immuno-agglutination inhibition, Bayer Diagnostics, Tarrytown, NY）ために血液を採取した。体重は毎日測定した。
【０１４２】
処理の６週間後に、最後のエキセンジン−４（または塩類溶液）用量の〜１６時間後であって一晩絶食させた後に、高インスリン血症の正常血糖クランプ（DeFronzo RA, Tobin JD, Andres R: Glucose clamp technique: a method for quantifying insulin secretion and resistance. Amer J Physiol 237: E214-23, 1979）をハロセイン麻酔したラットに対して行った。ラットは体温調節され、気管切開され、２０％のＤ−グルコースおよびインスリンを注入するために伏在静脈を介してカテーテル挿管され、血液サンプリングおよび血圧モニターのために大腿動脈を介してカテーテル挿管した（P23XL transducer, Spectramed, Oxnard, CA; universal amplifier, Gould, Valley View, OH; A/D conversion, DataTranslation, Wilmington, DE）。インスリン（Humulin-R, Eli Lilly, Indianapolis, IN）を５０ｍＵ／ｋｇ／分で注入し、ｔ＝−３０分で開始してｔ＝＋１８０分まで続けた。グルコースを種々の速度で注入して、５分間隔のグルコースサンプリングおよび分析によって決定した正常血糖を維持した（固定化グルコースオキシダーゼ法；YSI 2300-Stat Analyzer, Yellow Springs, OH）。クランプの間の平均血漿グルコースは１０３.９ｍｇ／ｄＬであった（平均変動係数は５.８％であった）。分析用のグルコース注入速度データは、応答が安定状態に近づくｔ＝６０−１８０分から採取した。グルコースアナライザーに取り込まれた固定化乳酸オキシダーゼセンサーから得た血漿乳酸データも収集した。
【０１４３】
注射は、月曜から金曜は午前８時および午後４時に、土曜および日曜には〜午前１０時に腹膜内投与した。
一対統計分析は、有意のレベルとしてＰ＜０.０５を用いるスチュデントのｔ−検定の通常の手順を用いて行った（Instat v3.0, GraphPad Software, San Diego, CA）。用量応答分析は４パラメータのロジスティック回帰を用い、一般的効果を一方向ＡＮＯＶＡ（Prism v3.0、GraphPad Software, San Diego, CA）を用いて検定した。
【０１４４】
結果は、エキセンジン−４の異なる用量で６週間処理した糖尿病肥満Ｚｕｃｋｅｒラットにおいては、食餌取込における用量依存的な減少（ＥＤ５０  ０.１４μｇ±０.１５  ｌｏｇ；図１３ａを参照されたい）および２７±２ｇまでの体重における用量依存的な減少（ＥＤ５０  ０.４２μｇ±０.１５  ｌｏｇ；図１３ｂを参照されたい）が存在し、塩類溶液注射した対照と比較して体重の５.６±０.５％の低下を表している。
【０１４５】
この群のラットでは、ヘモグロビンＡ１ｃがすべての群において早期に上昇したため、糖尿病の経過は進行性のように見えた。にもかかわらず、エキセンジン−４の注射は用量依存的にヘモグロビンＡ１ｃにおける上昇を拘束し、逆転させるようであった（図１３ｃを参照されたい）。処理の最後の２週間の間に測定したヘモグロビンＡ１ｃに対する効果のエキセンジン−４の用量−応答は一般的に有意であって（Ｐ＝０.０５  ＡＮＯＶＡ）、１μｇおよび１００μｇ用量で特異的であった（各々、Ｐ＜０.００５、Ｐ＜０.０２）。処理の最後の２週間の絶食血漿トリグリセリドに関して同様のパターンが観察され、そこでは血漿濃度はすべての用量において５１％ないし６５％有意に低下した（Ｐ＜０.００２  ＡＮＯＶＡ）。
【０１４６】
３９のラットのうちの３５を、それらの最後の処理後〜１６時間の高インスリン症性、正常血糖クランプに進捗した実験に入れた。エキセンジン処理したラットよりも塩類溶液処理したラットにおいてより高い（４８９±２８ｍｇ／ｄＬ）初期絶食血漿グルコース濃度は、インスリン注入で降下し、その後、同様な血漿グルコース濃度にクランプした（６０−１８０分にて１０５.６ｍｇ／ｄＬ；平均変動係数４.６％；図１４ａを参照されたい）。正常血糖を維持するために必要なグルコース注入速度は、エキセンジン−４での先の処理によって用量依存的に上昇した（ＥＤ５０  １.０μｇ±０.４１  ｌｏｇ；図１４ｂを参照されたい）。エキセンジン−４処理は、塩類溶液処理した対照に対して４８％までグルコース注入速度を上昇した。
【０１４７】
クランプ法の前およびその間の血漿乳酸濃度は、エキセンジン−４での先の処理によって容量依存的に低下した（ＥＤ５０  ４μｇ±０.２５  ｌｏｇ；図１４ｃを参照されたい）。クランプの６０ないし１８０分の平均血漿乳酸濃度における４２％までの低下を表しているこの降下は、主として、クランプ前（基底）乳酸濃度における低下に起因するようであった；高インスリン症の間の血漿乳酸における上昇分はすべての処理群において同様であった。クランプ法の前またはその間に測定した平均動脈圧における処理に関連した差異は存在しなかった。
【０１４８】
エキセンジン−４の長期間の投与後に観察されたインスリン感度におけるほぼ５０％の増大は、エキセンジン−４がイン・ビトロ(in vitro)のインスリン感受性の組織で何ら急性の効果を有さないという観察（すなわち、単離したひらめ筋におけるグリコーゲンへのあるいは単離した含脂肪細胞中の脂質への放射性同位元素標識したグルコースの基底またはインスリン刺激した取込みに対して効果が全く存在しなかった；Pittnerら, 未発表）に鑑みれば、重要かつ予期せぬことでもあった。インスリン感度における増大が幾分かの部分は改善された血糖症の制御およびグルコース毒性の低下から生じ得るという可能性はざっと見て存在しないが、インスリン感受性化として分類されないものを含む種々の抗−糖尿病療法からのインスリン感度の増大は極めて変化し得ることが報告されており、ＧＬＰ−１を用いた急激な処理がヒトにおけるインスリン感度を直ちに変化させないようであることが報告されている（Orskov L, Holst JJ, Moller J, Orskov C, Moller N, Alberti KG, Schmitz O: GLP-1 does not acutely affect insulin sensitivity in healthy man.  Diabetologia 39: 1227-32, 1996; Ahren B, Larsson H, Holst JJ: Effects of glucagon-like peptide-1 on islet function and insulin sensitivity in noninsulin-dependent diabetes mellitus. J Clin Endocrinol Metab 82: 473-8, 1997; UK Prospective Diabetes Study Group: Intensive blood-glucose control with sulphonylureas or insulin compared with conventional treatment and risk of complications in patients with type 2 diabetes (UKPDS 33). Lancet 352: 837-53, 1998)。したがって、エキセンジン−４の長期投与は、それを超えないにしても、チアゾリジンジオンおよびメトホルミンのごときインスリン抵抗性改善薬剤を含む他の療法で観察されたものほど大きなインスリン感度における増大と関連するようである。
【０１４９】
実施例Ａ−Ｅ
使用した試薬
ＧＬＰ−１[７−３６]ＮＨ２（ＧＬＰ−１）はBachem社（Torrance, CA）から購入した。他のすべてのペプチドは、本明細書に記載したような合成法を用いて調製した。全化学薬品は、最高市販グレードのものとした。ｃＡＭＰ ＳＰＡイムノアッセイは、Amersham社から購入した。放射性リガンドは、New England Nuclear社（Boston, MA）から購入した。ＲＩＮｍ５ｆ細胞（American Type Tissue Collection, Rockville, MD）は、１０％ウシ胎児血清および２ｍＭ Ｌ−グルタミンを含むＤＭＥ/Ｆ１２培地中で増殖させた。細胞は、３７℃および５％ ＣＯ2/９５％湿潤空気にて増殖させ、２ないし３日毎に培地を換えた。細胞は密集するまで増殖させ、次いで採取しＰｏｌｙｔｒｏｎホモジナイザーを用いてホモジナイズした。細胞ホモジネートは使用するまで−７０℃にて凍結貯蔵した。
【０１５０】
実施例Ａ  ＧＬＰ−１受容体結合試験
受容体結合は、ＲＩＮｍ５ｆ膜からの[125Ｉ]ＧＬＰ−１または[125Ｉ] エキセンジン （９−３９）の置換を測定することによって調べた。アッセイ緩衝液は、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ中に５μｇ／ｍｌのベスタチン、１μｇ／ｍｌのホスホラミドン、１ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン(画分Ｖ)、１ｍｇ／ｍｌのバシトラシン、および１ｍＭ ＭｇＣｌ2、ｐＨ７.４を含む。結合を測定するために、３０μｇの膜タンパク質（Bradfordプロテインアッセイ）を２００μlのアッセイ緩衝液に再懸濁させ、６０ｐＭ [125Ｉ]ＧＬＰ−１または[125Ｉ]エキセンジン(９-３９)および非標識ペプチドと９６ウエルプレート(Nagle Nunc, Rochester, NY)中、２３℃にて１２０分間インキュベートした。インキュベーションは、Tomtec Mach II プレートハーペスター(Wallac Inc., Gaithersburg, MD)を用いて、ポリエチレンイミン処理したＧＦ／Ｂガラス繊維フィルター(Wallac Inc., Gaithersburg, MD)を通す、ｐＨ７.４の冷リン酸緩衝生理食塩水での迅速な濾過によって終わらせた。フィルターを乾燥させ、シンチラントと結合させ、放射活性はＢｅｔａｐｌａｔｅ液体シンチレーションカウンター(Wallac Inc.社製)で測定した。
【０１５１】
ペプチド試料は、１０-6Ｍないし１０-12Ｍの濃度範囲にわたって６段階希釈の２点のアッセイで試行して、反応曲線を生成した。試料の生物活性は、IC50値として表し、それは４変数論理式(PrismTM、GraphPAD Software)を用いる反復曲線フィッティング(iterative curve-fitting)プログラムを用いて生データから計算した。
【０１５２】
実施例Ｂ  シクラーゼ活性化試験
アッセイ緩衝液は、ｐＨ７.４の５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ中に１０μＭ ＧＴＰ、０.７５ｍＭ ＡＴＰ、２.５ｍＭ ＭｇＣｌ2、０.５ｍＭ ホスホクレアチン、１２.５ Ｕ/ｍｌ クレアチンキナーゼ、０.４ｍｇ/ｍｌ アプロチニン、１μＭ ＩＢＭＸを含有した。膜およびペプチドは、９６ウエルフィルター底プレート(Millipore Corp., Bedford, MA)中の１００ｍｌのアッセイ緩衝液中で結合させた。３７℃での２０分間のインキュベーションの後、アッセイはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ ｖａｃｕｕｍ ｍａｎｉｆｏｌｄを用いて新たな９６ウエルプレートへの濾過による上清の移動によって終えた。上清ｃＡＭＰ含量はＳＰＡイムノアッセイによって定量した。ペプチド試料は、１０-6Ｍないし１０-12Ｍの濃度範囲にわたって７段階希釈の３点のアッセイで試行して、反応曲線を生成した。特定の試料の生物活性は、上記のごとく計算したＥＣ50値として表した。
【０１５３】
実施例Ｃ  ｄｂ/ｄｂマウスにおける血中グルコースレベルの測定
少なくとも３月齢のＣ５７ＢＬＫＳ/Ｊ-ｍ-ｄｂマウスを試験に利用した。マウスはJackson Laboratoryから得、使用前少なくとも１週間馴化させた。マウスは、午前６時に明るくする１２：１２の明：暗サイクルで２２℃±１℃にて１０群で飼育した。全動物は、ベースラインの血液試料を採取する２時間前に食餌を取り上げた。メトファンで軽麻酔の後、約７０μｌの血液は眼穿刺を介して各マウスから抜き取った。ベースライン血液試料を集めた後、血漿中グルコース濃度を測定するために、全動物は、ビヒクル（１０．９％ ＮａＣｌ）、ビヒクル中のエキセンジン−４または試験化合物（１μg）のいずれかの皮下注射を受ける。血液試料は、注射から正確に１時間後に同一手法を用いて再度抜き取って、血漿中グルコース濃度を測定した。各動物につき、ベースライン値からの血漿値中の値の％変化を計算した。
【０１５４】
実施例Ｄ  ｄｂ/ｄｂマウスにおける血中グルコースレベルの用量反応測定
少なくとも３月齢のＣ５７ＢＬＫＳ/Ｊ-ｍ-ｄｂ/ｄｂマウスを試験に利用した。マウスはJackson Laboratoryから得、使用前少なくとも１週間馴化させた。マウスは、午前６時に明るくする１２：１２の明：暗サイクルで２２℃±１℃にて１０群で飼育した。全動物は、ベースラインの血液試料を採取する２時間前に食餌を取り上げた。メトファンで軽麻酔の後、約７０μｌの血液は眼穿刺を介して各マウスから抜き取った。ベースライン血液試料を集めた後、血漿中グルコースを測定するために、全動物は指示された濃度のビヒクル、エキセンジン−４または試験化合物のいずれかの皮下注射を受けた。血液試料は、注射から正確に１時間後に同一手法を用いて再度抜き取って、血漿中グルコース濃度を測定した。各動物につき、ベースライン値からの血漿の値の％変化を計算して、用量依存的関連をGraphpad PrizmTM ソフトウエアを用いて評価した。
【０１５５】
実施例Ｅ  胃内容排出
以下の試験は、ラットにおける胃内容排出に対するエキセンジン−４およびエキセンジン・アゴニスト化合物の効果を調べるために行い得る。この実験はScarpignatoら, Arch. Int. Pharmacodyn. Ther. ２４６：２８６-９４(１９８０)の方法の変形に準じた。雄性Harlan Sprague Dawley(HSD)ラットを用いた。全動物は１２：１２時間の明：暗サイクル(実験は明るいサイクルの間に行う)で２２.７±０.８℃にて飼育し、自由に食餌(Diet LM-４８５, Teklad, Madison, WI)および給水させた。エキセンジン−４は、標準的なペプチド合成法に従って合成した。エキセンジン−４の調製を実施例１４に記載する。以下に記載する方法による胃内容排出の判定は、〜２０時間の絶食後に行って分光吸光度測定を妨害する糜粥を胃が含まないことを保証した。
【０１５６】
覚醒ラットは、ガバージによって、１.５％ メチルセルロース(M-０２６２, Sigma Chemical Co, St Louis, MO)および０.０５％ フェノールレッド指示薬を含有する１.５ｍｌの無カロリーゲルを受け、ラットは５％ ハロセインを用いて麻酔し、胃を曝し、動脈鉗子を用いて幽門および下部食道括約筋にてクランプし、取り出し、固定容量まで作成したアルカリ溶液中へ開けた。胃内容量は、５６０ｎｍの波長での吸収によって測定されたアルカリ溶液中のフェノールレッドの強度から導いた。７のラットに対する別々の実験において、胃および小腸は摘出され、アルカリ溶液で開けられた。ガバージの２０分以内の上部胃腸管から回収できたフェノールレッドの量は８９±４％であり；腸管腔表面に回収しがたく結合したらしい染料は残りを説明できる。１００％未満の最大色素回収を計算するために、２０分後に残留している胃内容量のパーセントを同一実験におけるガバージ直後に犠牲にした対照ラットから回収した胃内容量の関数として表した。パーセント胃内容残量=(２０分での吸光度)/(０mmでの吸光度)×１００。
【０１５７】
本明細書に示しおよび記載したものに加えて本発明の種々の変形が、先の記載から当業者に明らかになり、それらは以下の特許請求の範囲に入る。
【図面の簡単な説明】
【０１５８】
【図１】図１は試験したすべての用量において連続注入したエキセンジンがプラセボと比較して平均血漿グルコース濃度を低下させたことを示す。
【図２】図２は絶食状態の血漿グルコースに対するエキセンジンの巨丸剤用量の効果を図示する。
【図３】図３は絶食状態の血清インスリンに対するエキセンジンの巨丸剤用量の効果を示す。
【図４】気管内投与後のラットにおけるエキセンジン−４の血漿レベルを図示する。
【図５ａ】図５ａはｄｂ／ｄｂマウスにおける気管内注入後の血漿エキセンジン−４濃度を図示する。
【図５ｂ】図５ｂはｄｂ／ｄｂマウスにおける血漿グルコースに対するエキセンジン−４の気管内投与の効果を図示する。
【図６ａ】図６ａはｏｂ／ｏｂマウスにおける血漿グルコースに対するエキセンジン−４の気管内投与の効果を図示する。
【図６ｂ】図６ｂはｏｂ／ｏｂマウスにおける血漿グルコースに対するエキセンジン−４の気管内投与の効果を図示する。
【図７ａ】図７ａはラットへの気管内滴下後の血漿エキセンジン−４濃度を図示する。
【図７ｂ】図７ｂはラットへの気管内滴下後のエキセンジン−４のバイオアベイラビリティーを図示する。
【図８】図８はエアゾール化したエキセンジン−４に曝露したラットにおける血漿エキセンジン−４濃度を図示する。白抜き四角は、噴霧化エキセンジンに曝露した時間を示す。
【図９ａ】図９ａはｄｂ／ｄｂマウスにおける血漿グルコースに対するエアゾール化したエキセンジン−４への１０分間の曝露の効果を図示する。
【図９ｂ】図９ｂはエアゾール化したエキセンジン−４にｄｂ／ｄｂマウスを１０分間曝露した後の血漿エキセンジン−４濃度を図示する。
【図１０】図１０はエキセンジン−４を鼻腔内投与した後のラットにおける血漿エキセンジン−４濃度を図示する。
【図１１】図１１はｄｂ／ｄｂマウスにおける血漿グルコースに対するエキセンジン−４の胃内投与の効果を図示する。
【図１２ａ】図１２ａはｄｂ／ｄｂマウスに舌下投与した後の血漿エキセンジン−４濃度を図示する。
【図１２ｂ】図１２ｂはｄｂ／ｄｂマウスにおける血漿グルコースに対するエキセンジン−４の舌下投与の効果を図示する。
【図１２ｃ】図１２ｃはラットに舌下投与した後の血漿エキセンジン−４濃度を図示する。
【図１２ｄ】図１２ｄは舌下投与後のエキセンジン−４のバイオアベイラビリティーを図示する。
【図１２ｅ】図１２ｅは舌下エキセンジン−４のＣｍａｘを図示する。
【図１３ａ】図１３ａは食物取込みに対するエキセンジン−４（１日に２回ｉ.ｐ.投与した）の効果を図示する。用量−応答（右パネル）は、６週間の処理の最後の２週にわたる平均に関する。
【図１３ｂ】図１３ｂは体重の変化（初期体重４４１±３９ｇ）に対するエキセンジン−４（１日に２回ｉ.ｐ.投与した）の効果を図示する。用量−応答（右パネル）は、６週間の処理の最後の２週にわたる平均に関する。
【図１３ｃ】図１３ｃはヘモグロビンＡ１ｃにおける変化（０週では７.６８±０.２０％）に対するエキセンジン−４（１日に２回ｉ.ｐ.投与した）の効果を図示する。用量−応答（右パネル）は、６週間の処理の最後の２週にわたる平均に関する。
【図１４ａ】図１４ａは以前に特定の用量のエキセンジン−４を用いて６週間処理した（ｉ．ｐ．１日当たり２回）ＺＤＦラットに対して行ったクランプ法における血漿グルコース濃度を図示する。
【図１４ｂ】図１４ｂは以前に特定の用量のエキセンジン−４を用いて６週間処理した（ｉ．ｐ．１日当たり２回）ＺＤＦラットに対して行ったクランプ法における正常血糖を維持するために必要なグルコース注入速度を図示する。グルコース注入速度および血漿乳酸濃度についての用量応答は、クランプ法の６０分ないし１８０分に得られた平均値に基づく。
【図１４ｃ】図１４ｃは以前に特定の用量のエキセンジン−４を用いて６週間処理した（ｉ．ｐ．１日当たり２回）ＺＤＦラットに対して行ったクランプ法における血漿乳酸濃度（ｃ）を図示する。グルコース注入速度および血漿乳酸濃度についての用量応答は、クランプ法の６０分ないし１８０分に得られた平均値に基づく。
【図１５ａ】図１５ａは本発明において有用であるある種のエキセンジン・アゴニスト化合物のアミノ酸配列［配列番号：９−２５］を図示する。
【図１５ｂ】図１５ｂは本発明において有用であるある種のエキセンジン・アゴニスト化合物のアミノ酸配列［配列番号：２６−３９］を図示する。
【図１６】図１６は実施例１０に記載する臨床試験からのグルコース低下結果を図示する。
【図１７】図１７は実施例１０に記載する臨床試験からのグルコース低下結果を図示する。
【配列表】
2005533768.tif 000006
2005533768.tif 000007
2005533768.tif 000008
2005533768.tif 000009
2005533768.tif 000010
2005533768.tif 000011
2005533768.tif 000012
2005533768.tif 000013
2005533768.tif 000014
2005533768.tif 000015
2005533768.tif 000016
2005533768.tif 000017
2005533768.tif 000018
2005533768.tif 000019
2005533768.tif 000020
2005533768.tif 000021
2005533768.tif 000022
2005533768.tif 000023
2005533768.tif 000024
2005533768.tif 000025
2005533768.tif 000026
2005533768.tif 000027
2005533768.tif 000028
2005533768.tif 000029
2005533768.tif 000030
2005533768.tif 000031
2005533768.tif 000032
2005533768.tif 000033
2005533768.tif 000034
2005533768.tif 000035
2005533768.tif 000036
2005533768.tif 000037
2005533768.tif 000038
2005533768.tif 000039
2005533768.tif 000040
2005533768.tif 000041
2005533768.tif 000042
2005533768.tif 000043
2005533768.tif 000044
2005533768.tif 000045
2005533768.tif 000046
2005533768.tif 000047
2005533768.tif 000048
2005533768.tif 000049
2005533768.tif 000050
2005533768.tif 000051
2005533768.tif 000052
2005533768.tif 000053
2005533768.tif 000054
2005533768.tif 000055
2005533768.tif 000056
2005533768.tif 000057
2005533768.tif 000058
2005533768.tif 000059
2005533768.tif 000060
2005533768.tif 000061
2005533768.tif 000062
2005533768.tif 000063
2005533768.tif 000064
2005533768.tif 000065
2005533768.tif 000066
2005533768.tif 000067
2005533768.tif 000068
2005533768.tif 000069
2005533768.tif 000070
2005533768.tif 000071
2005533768.tif 000072
2005533768.tif 000073
2005533768.tif 000074
2005533768.tif 000075
2005533768.tif 000076
2005533768.tif 000077
2005533768.tif 000078
2005533768.tif 000079
2005533768.tif 000080
2005533768.tif 000081
2005533768.tif 000082
2005533768.tif 000083
2005533768.tif 000084
2005533768.tif 000085
2005533768.tif 000086
2005533768.tif 000087
2005533768.tif 000088
2005533768.tif 000089
2005533768.tif 000090
2005533768.tif 000091
【図１】
2005533768.tif 000092
【図２】
2005533768.tif 000093
【図３】
2005533768.tif 000094
【図４】
2005533768.tif 000095
【図５ａ】
2005533768.tif 000096
【図５ｂ】
2005533768.tif 000097
【図６ａ】
2005533768.tif 000098
【図６ｂ】
2005533768.tif 000099
【図７ａ】
2005533768.tif 000100
【図７ｂ】
2005533768.tif 000101
【図８】
2005533768.tif 000102
【図９ａ】
2005533768.tif 000103
【図９ｂ】
2005533768.tif 000104
【図１０】
2005533768.tif 000105
【図１１】
2005533768.tif 000106
【図１２ａ】
2005533768.tif 000107
【図１２ｂ】
2005533768.tif 000108
【図１２ｃ】
2005533768.tif 000109
【図１２ｄ】
2005533768.tif 000110
【図１２ｅ】
2005533768.tif 000111
【図１３ａ】
2005533768.tif 000112
【図１３ｂ】
2005533768.tif 000113
【図１３ｃ】
2005533768.tif 000114
【図１４ａ】
2005533768.tif 000115
【図１４ｂ】
2005533768.tif 000116
【図１４ｃ】
2005533768.tif 000117
【図１５ａ】
2005533768.tif 000118
【図１５ｂ】
2005533768.tif 000119
【図１６】
2005533768.tif 000120
【図１７】
2005533768.tif 000121
【手続補正書】
【提出日】平成17年4月14日(2005.4.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも２４時間の所定の放出期間にわたって５ｐｇ／ｍｌないし２５ｐｇ／ｍｌのエキセンジンまたはエキセンジン・アゴニスト・ペプチドの平均持続血漿レベルが対象に提供されるように処方化された、エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニスト・ペプチドを含む医薬組成物。
【請求項２】
該放出期間が少なくとも１週間である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
該放出期間が少なくとも１ヶ月である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項４】
該平均持続血漿レベルが該所定の放出期間の少なくとも５０％の間達成される請求項１または２記載の医薬組成物。
【請求項５】
該平均持続血漿レベルが該所定の放出期間の少なくとも７５％の間達成される請求項１ないし３いずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
該平均持続血漿レベルが５ｐｇ／ｍｌないし２０ｐｇ／ｍｌである請求項１ないし５いずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
少なくとも１ヶ月の間、０.０００５μｇ／ｋｇ／用量ないし１２ｍｇ／ｋｇ／用量のエキセンジンまたはエキセンジン・アゴニスト・ペプチドを対象に提供し、かつ、治療レベルのエキセンジンまたはエキセンジン・アゴニスト・ペプチドを放出するように処方化された、持続放出処方である、エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニスト・ペプチドを含む医薬組成物。
【請求項８】
１.０μｇ／ｋｇ／用量ないし５０μｇ／ｋｇ／用量のエキセンジンまたはエキセンジン・アゴニスト・ペプチドを対象に提供するように処方化された、毎週投与する持続放出処方である、エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニスト・ペプチドを含む医薬組成物。
【請求項９】
該組成物中の該エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニスト・ペプチドが４.０ないし５.０のｐＨである請求項１ないし６いずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
該エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニスト・ペプチドを皮下注射、皮内注射、静脈注射、腹膜内注射、筋肉内注射、経口投与、舌下投与、気管内投与、経肺投与、鼻腔投与、口内投与、経粘膜投与、経皮投与または消化管投与によって投与する請求項１ないし６いずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
該エキセンジンまたはエキセンジン・アゴニスト・ペプチドのペプチド結晶を含む請求項１ないし６いずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
生分解性ポリマー、非生分解性ポリマー、ワックスまたは脂肪物質のうちの少なくとも１を含む請求項１ないし６いずれか１項に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３７】
エキセンジン ・アゴニスト化合物には、式（ＩＩ）［配列番号：４］：
Xaa1 Xaa2 Xaa3 Gly Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Ala Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26 Xaa27 Xaa28-Ｚ1
［式中、
Xaa1はHis、ArgまたはTyr；
Xaa2はSer、Gly、AlaまたはThr；
Xaa3はAla、AspまたはGlu；
Xaa5はAlaまたはThr；
Xaa6はAla、Phe、Tyrまたはナフチルアラニン；
Xaa7はThrまたはSer；
Xaa8はAla、SerまたはThr；
Xaa9はAspまたはGlu；
Xaa10はAla、Leu、Ile、Val、ペンチルグリシンまたはMet；
Xaa11はAlaまたはSer；
Xaa12はAlaまたはLys；
Xaa13はAlaまたはGln；
Xaa14はAla、Leu、Ile、ペンチルグリシン、ValまたはMet；
Xaa15はAlaまたはGlu；
Xaa16はAlaまたはGlu；
Xaa17はAlaまたはGlu；
Xaa19はAlaまたはVal；
Xaa20はAlaまたはArg；
Xaa21はAlaまたはLeu；
Xaa22はAla、Phe、Tyrまたはナフチルアラニン；
Xaa23はIle、Val、Leu、ペンチルグリシン、tert-ブチルグリシンまたはMet；
Xaa24はAla、GluまたはAsp；
Xaa25はAla、Trp、Phe、Tyrまたはナフチルアラニン；
Xaa26はAlaまたはLeu；
Xaa27はAlaまたはLys；
Xaa28はAlaまたはAsn；
Ｚ1は
−ＯＨ、
−ＮＨ2、
Gly-Ｚ2、
Gly Gly-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser Ser-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37-Ｚ2または
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38-Ｚ2；
Xaa31、Xaa36、Xaa37およびXaa38は独立して、Pro、ホモプロリン、３Hyp、４Hyp、チオプロリン、Ｎ-アルキルグリシン、Ｎ-アルキルペンチルグリシンまたはＮ-アルキルアラニン；および
Ｚ2は-ＯＨまたは-ＮＨ2；
但し、Xaa3、Xaa5、Xaa6、Xaa8、Xaa10、Xaa11、Xaa12、Xaa13、Xaa14、Xaa15、Xaa16、Xaa17、Xaa19、Xaa20、Xaa21、Xaa24、Xaa25、Xaa26、Xaa27およびXaa28の３以下は、Alaである］
で示される化合物を含み、"Novel Exendin Agonist Compounds"なる発明の名称の１９９８年１１月１３日に出願された国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９８／２４２１０に記載されているものも含まれる。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４５】
エキセンジン・アゴニスト化合物には、式（ＩＩＩ）［配列番号：５］：
Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Ala Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26 Xaa27 Xaa28-Ｚ1
［式中、
Xaa1はHis、Arg、Tyr、Ala、Norval、ValまたはNorleu；
Xaa2はSer、Gly、AlaまたはThr；
Xaa3はAla、AspまたはGlu；
Xaa4はAla、Norval、Val、NorleuまたはGly；
Xaa5はAlaまたはThr；
Xaa6はAla、Phe、Tyrまたはナフチルアラニン；
Xaa7はThrまたはSer；
Xaa8はAla、SerまたはThr；
Xaa9はAla、Norval、Val、Norleu、AspまたはGlu；
Xaa10はAla、Leu、Ile、Val、ペンチルグリシンまたはMet；
Xaa11はAlaまたはSer；
Xaa12はAlaまたはLys；
Xaa13はAlaまたはGln；
Xaa14はAla、Leu、Ile、ペンチルグリシン、ValまたはMet；
Xaa15はAlaまたはGlu；
Xaa16はAlaまたはGlu；
Xaa17はAlaまたはGlu；
Xaa19はAlaまたはVal；
Xaa20はAlaまたはArg；
Xaa21はAlaまたはLeu；
Xaa22はPhe、Tyrまたはナフチルアラニン；
Xaa23はIle、Val、Leu、ペンチルグリシン、tert-ブチルグリシンまたはMet；
Xaa24はAla、GluまたはAsp；
Xaa25はAla、Trp、Phe、Tyrまたはナフチルアラニン；
Xaa26はAlaまたはLeu；
Xaa27はAlaまたはLys；
Xaa28はAlaまたはAsn；
Ｚ1は−ＯＨ、
−ＮＨ2、
Gly-Ｚ2、
Gly Gly-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser Ser-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36-Ｚ2、
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37-Ｚ2
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38-Ｚ2または
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38 Xaa39-Ｚ2；
ここに、Xaa31、Xaa36、Xaa37およびXaa38は独立して、Pro、ホモプロリン、３Hyp、４Hyp、チオプロリン、Ｎ-アルキルグリシン、Ｎ-アルキルペンチルグリシンまたはＮ-アルキルアラニンであり；
Xaa39はSer、Thr、LysまたはAla；および
Ｚ2は-ＯＨまたは-ＮＨ2；
但し、Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa8、Xaa9、Xaa10、Xaa11、Xaa12、Xaa13、Xaa14、Xaa15、Xaa16、Xaa17、Xaa19、Xaa20、Xaa21、Xaa24、Xaa25、Xaa26、Xaa27およびXaa28の３以下はAlaであり、但し、Xaa1がHis、ArgまたはTyrである場合、Xaa3、Xaa4およびXaa9の少なくとも１はAlaである］
で示される化合物を含む、"Novel Exendin Agonist Compounds"なる発明の名称の１９９８年１１月１３日に出願された国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９８／２４２７３に記載されているものも含まれる。
【手続補正４】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図５ｂ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図５ｂ】
2005533768.tif 000122
【手続補正書】
【提出日】平成17年4月14日(2005.4.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2005533768000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成17年4月19日(2005.4.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2005533768000001.app
【国際調査報告】
2005533768.tif 000123
2005533768.tif 000124
2005533768.tif 000125