(57)【要約】感染性媒介物により誘発された疾患、特に結核治療のための方法および組成物。特に、感染性疾患の治療のための置換エチレンジアミンを含む方法および組成物が提供される。１つの実施形態において、これらの方法および組成物は、例えば結核のようなマイコバクテリア感染症の治療のために使用される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式Ｉ：
【化１】
2005526129.tif 000093
［式中、Ｒ４はＨ、アルキル、アリール、アルキルおよびアリールで置換されたヘテロ原子、アルケニル、アルキニル、アラルキル、アラルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニルから選択され、
式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、アラルキル、アラルケニル、アラルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロアリール、ハライド、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、シリル、シロキシ、アミノから選択されるか；または、
Ｒ１はＨ、アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、アラルキル、アラルケニル、アラルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロアリール、ハライド、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、シリル、シロキシ、アミノから選択され、そして、ＮＲ２Ｒ２は環式第二級アミンから誘導される］の置換エチレンジアミン化合物を含む組成物。
【請求項２】
置換エチレンジアミンのＮＨＲ１またはＮＲ２Ｒ３が下記化学構造：
【化２】
2005526129.tif 000094
を有する請求項１記載の組成物。
【請求項３】
置換エチレンジアミン化合物が下記：
【化３】
2005526129.tif 000095
【化４】
2005526129.tif 000096
【化５】
2005526129.tif 000097
から選択される請求項２記載の組成物。
【請求項４】
置換エチレンジアミンのＮＨＲ１またはＮＲ２Ｒ３が下記化学構造：
【化６】
2005526129.tif 000098
を有する請求項１記載の組成物。
【請求項５】
置換エチレンジアミン化合物が下記：
【化７】
2005526129.tif 000099
【化８】
2005526129.tif 000100
【化９】
2005526129.tif 000101
から選択される請求項４記載の組成物。
【請求項６】
置換エチレンジアミンのＮＨＲ１またはＮＲ２Ｒ３が下記化学構造：
【化１０】
2005526129.tif 000102
を有する請求項１記載の組成物。
【請求項７】
置換エチレンジアミン化合物が下記：
【化１１】
2005526129.tif 000103
【化１２】
2005526129.tif 000104
【化１３】
2005526129.tif 000105
から選択される請求項６記載の組成物。
【請求項８】
置換エチレンジアミンのＮＨＲ１またはＮＲ２Ｒ３が下記化学構造：
【化１４】
2005526129.tif 000106
を有する請求項１記載の組成物。
【請求項９】
置換エチレンジアミン化合物が下記：
【化１５】
2005526129.tif 000107
【化１６】
2005526129.tif 000108
から選択される請求項８記載の組成物。
【請求項１０】
置換エチレンジアミン化合物が下記：
【化１７】
2005526129.tif 000109
から選択される請求項９記載の組成物。
【請求項１１】
置換エチレンジアミン化合物が下記：
【化１８】
2005526129.tif 000110
【化１９】
2005526129.tif 000111
【化２０】
2005526129.tif 000112
【化２１】
2005526129.tif 000113
【化２２】
2005526129.tif 000114
から選択される請求項１記載の組成物。
【請求項１２】
下記式：
【化２３】
2005526129.tif 000115
［式中、Ｒ４はＨ、アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、アラルキル、アラルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニルから選択され；
式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、アラルキル、アラルケニル、アラルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロアリール、ハライド、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、シリル、シロキシ、アミノから選択されるか；または、
Ｒ１はＨ、アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、アラルキル、アラルケニル、アラルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロアリール、ハライド、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、シリル、シロキシ、アミノから選択され、そして、ＮＲ２Ｒ２は環式第二級アミンから誘導される］の置換エチレンジアミン化合物の調製方法であって、下記工程：
塩基の存在下のハロ供与試薬でヒドロキシル基を含む固体支持レジンを活性化することによりハロ基を含む固体支持レジンを製造すること；
初期第一級アミンでハロ基を置き換えることによりアミン基を含む固体支持レジンを製造すること；
塩基性化合物の存在下のハロアシルハライドで、または、塩基の存在下のハロアシル酸でアミン基をアシル化することによりα−ハロアセチルアミド基を含む固体支持レジンを製造すること；
α−ハロアセチルアミドのα−ハロ基を第二または次の第一級アミンで置き換えることによりα−アミンイミド基を含む固体支持レジンを製造すること；
還元剤によりα−アミンイミド基上のカルボニル部分を還元することにより炭素原子２個で隔たれたアミン基２個を含む固体支持レジンを製造すること；
酸の存在下で固体支持レジンから炭素原子２個で隔たれたアミン基を脱離させることにより置換されたエチレンジアミン化合物を製造すること；
を含む上記方法。
【請求項１３】
初期第一級アミンがＲ１ＮＨ２である請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
第二または次の第一級アミンがＲ２Ｒ３ＨＮである請求項１２記載の方法。
【請求項１５】
下記式：
【化２４】
2005526129.tif 000116
［式中、Ｒ４はＨ、アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、アラルキル、アラルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニルから選択され、
式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、アラルキル、アラルケニル、アラルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロアリール、ハライド、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、シリル、シロキシ、アミノから選択されるか；または、
Ｒ１はＨ、アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、アラルキル、アラルケニル、アラルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロアリール、ハライド、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、シリル、シロキシ、アミノから選択され、そして、ＮＲ２Ｒ３は環式第二級アミンから誘導される］の置換エチレンジアミン化合物有効量を投与することを含む感染性媒介物により誘発された疾患の治療方法。
【請求項１６】
感染性媒介物が細菌性、真菌性、寄生虫性、またはウィルス性の媒介物である請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
細菌性媒介物がＭ．ツベルクロシス、Ｍ．アビウム−イントラセルラエ、Ｍ．カンサシ、Ｍ．フォーチュイタム、Ｍ．ケロナエ、Ｍ．レプラエ、Ｍ．アフリカナム、Ｍ．ミクロチ、Ｍ．アビウムパラツベルクロシス、Ｍ．イントラセルラエ、Ｍ．スクロフラセウム、Ｍ．ゼノピ、Ｍ．マリナムまたはＭ．ウルセランスを含む請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
感染性疾患が結核またはクローン病を含む請求項１５記載の方法。
【請求項１９】
置換エチレンジアミンアミン化合物が下記式：
【化２５】
2005526129.tif 000117
のものである請求項１５記載の方法。
【請求項２０】
製薬用担体を更に含む請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
下記物質：
【化２６】
2005526129.tif 000118
【化２７】
2005526129.tif 000119
【化２８】
2005526129.tif 000120
を含む置換エチレンジアミン化合物を含む組成物。
【請求項２２】
下記式：
【化２９】
2005526129.tif 000121
［式中、Ｒ４はＨ、アルキル、アリール、アルキルおよびアリールで置換されたヘテロ原子、アルケニル、アルキニル、アラルキル、アラルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニルから選択され、
式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、アラルキル、アラルケニル、アラルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロアリール、ハライド、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、シリル、シロキシ、アミノから選択される］の置換エチレンジアミン化合物の調製方法であって、下記工程：
塩基の存在下のハロ供与試薬でヒドロキシル基を含む固体支持レジンを活性化することによりハロ基を含む固体支持レジンを製造すること；
初期第一級アミンでハロ基を置き換えることによりアミン基を含む固体支持レジンを製造すること；
カップリング剤および塩基の存在下でＦＭＯＣ保護されたアミノ酸でアミン基をアシル化すること、次いで、ＦＭＯＣ保護基を除去してα−アミノアセトアミド基を含む固体支持レジンを製造すること；
カルボニル化合物でα−アミノアセトアミド基のα−アミノ基を修飾することによりα−アミノアセトアミド基の相当する誘導体を含む固体支持レジンを製造すること；
還元剤によりアミド基上のカルボニル部分を還元することにより炭素原子２個で隔たれたアミン基２個を含む固体支持レジンを製造すること；および
酸の存在下で固体支持レジンから炭素原子２個で隔たれたアミン基を脱離させることにより置換したエチレンジアミン化合物を製造すること；
を含む上記方法。
【請求項２３】
請求項２１記載の組成物の医薬有効量を投与することを含む感染性疾患の治療方法。
【請求項２４】
下記式：
【化３０】
2005526129.tif 000122
［式中、Ｒ４はＨ、アルキル、アリール、アルキルおよびアリールで置換したヘテロ原子、アルケニル、アルキニル、アラルキル、アラルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニルから選択され、
式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、アラルキル、アラルケニル、アラルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロアリール、ハライド、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、シリル、シロキシ、アミノから選択されるか；または、
Ｒ１はＨ、アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、アラルキル、アラルケニル、アラルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロアリール、ハライド、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、シリル、シロキシ、アミノから選択され、そして、ＮＲ２Ｒ２は環式第二級アミンから誘導される］の対称な置換エチレンジアミン化合物を含む組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は微生物により誘発された疾患、特に結核の治療のための方法および組成物に関する。本発明はまた改善された抗マイコバクテリア活性を有する方法および組成物、即ち、新規の置換エチレンジアミン化合物を含む組成物に関する。
（本発明の背景）
マイコバクテリア感染症は結核のような疾患として顕在化する場合が多い。マイコバクテリアにより誘発されるヒトの感染症は古来より遍在しており、結核は今日でもなお主要な死因である。１９世紀半ばより生活水準の改善に平行して疾患の発生率は低下しているものの、マイコバクテリア疾患はなお医療環境が制約されている地域での罹患および死亡の主要な原因となっている。更にまた、マイコバクテリア疾患は免疫無防備状態の患者において圧倒的に蔓延している疾患を誘発する。全世界の多くの保健機関の尽力にも関わらず、マイコバクテリア疾患の根絶はこれまで達成されておらず、また今後の根絶の見通しもない。世界中の人口のほぼ三分の一がマイコバクテリウム・ツベルクロシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｕｃｕｌｏｓｉｓ）の合併症、即ち、一般的に結核（ＴＢ）と称されるものに感染しており、年間約８百万の新規症例が発生し、２〜３百万の死亡例がある。結核（ＴＢ）は単一の病因性媒介物に起因するヒトの死亡の最も多い原因となっている（Ｄｙｅら，  Ｊ．Ａｍ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，２８２，６７７−６８６，（１９９９）および２０００年度ＷＨＯ／ＯＭＳプレスリリース参照）。
【０００２】
数十年に及ぶ減少の後、ＴＢは現在では増加傾向にある。米国においては一千万人までの感染が疑われている。１９９０年には約２８０００症例が新たに報告されており、１９８９年より９．４パーセント増加している。ＴＢ症例の１６％増が１９８５〜１９９０年に確認されている。人口過密な生活条件および共有される大気空間が特にＴＢ蔓延を誘発しており、例えば囚人および米国都市のホームレスにおいて観察されている増加の原因となっている。
【０００３】
「後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）」の全患者の約半数がマイコバクテリア感染症に罹患しており、ＴＢは特に多数の合併症となっている。ＡＩＤＳ患者は臨床的ＴＢを発症する危険性がより高く、抗ＴＢ治療は非ＡＩＤＳ患者の場合よりも有効性が低い。その結果、感染は致死的に蔓延した疾患にまで進行する場合が多い。
【０００４】
Ｍ．ツベルクロシス以外のマイコバクテリアがＡＩＤＳ患者の罹患する日和見感染においてより多く検出されれるようになった。Ｍ．アビウム−イントラセルラエ（Ｍ．ａｖｉｕｍ−ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）複合体（ＭＡＣ）に由来する生物、特に血清型４および８がＡＩＤＳ患者のマイコバクテリア単離株の６８％に相当する。多数のＭＡＣ（組織グラム当たり１０１０個に及ぶ抗酸性バチルス（ａｃｉｄ-ｆａｓｔ  ｂａｃｉｌｌｉ）が検出されており、その結果、感染したＡＩＤＳ患者の予後は悪くなっている。
【０００５】
世界保健機構（ＷＨＯ）はＴＢとの戦いを激励しており、「免疫化のための拡張プログラム（ＥＰＩ）」のような予防の企画および「直接監視下短期化学療法（ＤＯＴＳ）」のような治療コンプライアンスの提唱を薦めている。ＴＢの根絶のためには、診断、治療および予防が等しく重要である。活動性のＴＢ患者の迅速な検出により早期の治療が可能となり、これにより約９０％の治癒が予測される。従って、ＴＢとの戦いのためには早期の診断が重要である。更にまた、治療コンプライアンスは感染の除去のみならず薬剤耐性株の発生の低減も確実に行うようにする。
【０００６】
薬剤耐性Ｍ．ツベルクロシスの発生は極めて混乱を招く現象である。標準的な薬剤少なくとも１種に対して耐性であることがわかった新しいＴＢ症例の比率は１９８０年代初頭の１０％から１９９１年には２３％にまで増大している。従って治療方法へのコンプライアンスもまたＴＢを除去し薬剤耐性株の発生を防止するための努力における重要な要素である。等しく重要なことは、マイコバクテリアの薬剤耐性株により誘発される疾患に対するワクチンとして、および、治療として有効となる新しい治療薬の開発である。
【０００７】
３７種を超えるマイコバクテリアが発見されているが、全ヒト感染の９５％超がマイコバクテリアの６種、即ちＭ．ツベルクロシス、Ｍ．アビウムイントラセルラエ（Ｍ．ａｖｉｕｍ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、Ｍ．カンサシ（Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ）、Ｍ．フォーチュイタム（Ｍ．ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ）、Ｍ．ケロナエ（Ｍ．ｃｈｅｌｏｎｅ）およびＭ．レプラエ（Ｍ．ｌｅｐｒａｅ）により誘発されている。ヒトにおける最も蔓延しているマイコバクテリア疾患はＭ．ツベルクロシス、Ｍ．ボビス（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）またはＭ．アフリカナム（Ｍ．ａｆｒｉｃａｎｕｍ）を含むマイコバクテリア種により主に誘発される結核（ＴＢ）である（Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ  １９９２）。感染は典型的には肺内の末端経路にまで到達可能な感染性粒子の吸引により開始される。肺胞のマクロファージによる包囲の後、バチルスは自由に複製可能であり、最終的には貪食細胞の破壊をもたらす。カスケード作用が発生し、その際に貪食細胞の破壊が別のマクロファージおよびリンパ球を感染部位に遊走させ、そこでもこれらは最終的に除去される。疾患は、局所的にリンパ節並びに血流および他の組織、例えば骨髄、脾臓、腎臓、骨および中枢神経系に移行する感染マクロファージにより、初期段階において更に播種される（Ｍｕｒｒａｙら，  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｔｈｅ  Ｃ．Ｖ．  Ｍｏｓｂｙ  Ｃｏｍｐａｎｙ  ２１９−２３０（１９９０）参照）。
【０００８】
マイコバクテリアの病原性に寄与する因子に関してはまだ明確に理解されていない。多くの研究者等は細胞壁の脂質および細菌表面が、コロニー形態および病原性に寄与するものとしている。特定のマイコバクテリア細胞表面上のＣ−ミコーシド（ｍｙｃｏｓｉｄｅ）がマクロファージ内の生物の生存の促進に重要であることを示唆する証拠がある。コードファクターであるトレハロース６，６’ジミコレートが他のマイコバクテリアに関与しているとされている。
【０００９】
コロニー形態と病原性との相関は特にＭ．アビウムにおいて顕著である。Ｍ．アビウムバチルスは数種の異なるコロニー型で存在する。従来の実験用の培地上で透明または粗放なコロニーとして生育するバチルスは組織培養物中のマクロファージ内で複製可能であり、感受性を有するマウスに注射すると病原性を示し、抗生物質に耐性を示す。実験用の培地上に維持された粗放または透明なバチルスはしばしば自発的に不透明のＲコロニー形態をとり、その時点でそれらはマクロファージ内で複製不可能であり、マウスに対して非病原性かつ、抗生物質に対して高度な感受性を示す。Ｍ．アビウムの透明かつ粗放な菌株と不透明な菌株とのコロニー形態の相違はほぼ確実に、保護カプセルとして作用する透明かつ粗放な生物の表面上の糖脂質コーティングの存在によるものである。このカプセルまたはコーティングは主にリソソーム酵素および抗生物質から病原性Ｍ．アビウム生物を見かけ上遮蔽するＣ−ミコーシドよりなる。これとは対照的に、Ｍ．アビウムの非病原性の不透明型はその表面上には極めて僅かのＣ−ミコーシドを有するのみである。両者、抗生物質に対する耐性および、マクロファージによる殺傷への抵抗性はＭ．アビウムの表面上の糖脂質のバリアに起因するものとされている。
【００１０】
マイコバクテリア感染の診断は、従来の診断が喀痰スミア、胸部Ｘ線検査（ＣＸＲ）および臨床症状に基いてはいるものの、病原体の単離と同定により確認される。培地上のマイコバクテリアの単離には４〜８週間もの長期間を要する。種の同定には更に２週間を要する。マイコバクテリアの検出には、数種類の他の手法、例えばポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、マイコバクテリア結核直接試験または増幅マイコバクテリア結核直接試験（ＭＴＤ）および放射性標識を利用する検出法などが存在する。
【００１１】
Ｍ．ツベルクロシスにより誘発される感染を検出するために広範に使用されている診断法の１つはツベルクリン皮膚試験である。皮膚試験の多くの形態が利用可能であるが、典型的にはツベルクリン抗原の２種の標品、即ち旧ツベルクリン（ＯＴ）または精製蛋白誘導体（ＰＰＤ）の一方を用いる。抗原標品は皮内注射するか、または局所適用し、その後、複数の穿刺接種器を用いて皮膚内部に侵襲的に移送する（尖叉試験）。皮膚試験の診断方法には幾つかの問題点がある。例えば、尖叉試験は皮内の層に注射される抗原の量が正確に制御できないため一般的には推奨されていない（Ｍｕｒｒａｙら，  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｔｈｅ  Ｃ．Ｖ．  Ｍｏｓｂｙ  Ｃｏｍｐａｎｙ  ２１９−２３０（１９９０）参照）。
【００１２】
ツベルクリン皮膚試験は広範に使用されているものの、それらは典型的には結果を得るためには２〜３日間を要し、そして多くの場合、マイコバクテリアに曝露されたが健康である対象において擬陽性がしばしばみられるため、結果は不正確なものとなる。更にまた、活動性のＴＢ患者のみならずカルメット‐ゲラン杆菌（Ｂａｃｉｌｌｅ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ）（ＢＣＧ）でワクチン接種された者およびマイコバクテリアに感染したが発症しなかった者においても陽性結果が観察されるため、誤診断が頻発する。従って、ツベルクリン皮膚試験により家庭生活におけるＴＢ接触のような他のものから感染した活動性ＴＢ患者を識別することは困難である。更にまた、ツベルクリン試験はしばしば、Ｍ．ツベルクロシス以外のマイコバクテリア（ＭＯＴＴ）に感染していた個体において交叉反応を示す。従って、現在使用可能な皮膚試験を用いた診断は誤りおよび不正確さの傾向を呈する場合が多い。
【００１３】
薬剤感受性生物により誘発される結核の標準的な治療は２ヶ月間に投与される４薬剤、その後４ヶ月間に投与される２薬剤よりなる６ヶ月の用法である。治療の６ヶ月の経過中に投与される２種類の最も重要な薬剤はイソニアジドおよびリファンピンである。用法は相対的に簡素であるものの、その投与は極めて複雑である。治療の第１段階においては１日当たり８または９錠の服用が必要であり、つまり恐れを抱かせ混乱を招く展望となる。重症の患者でも数週間以内に症状がなくなり、ほぼ全てが数ヶ月以内に治癒するとみなされる。しかしながら、治療を完了しない場合は、患者は再発を経験する場合があり、そして治療を完了するまで継続しない患者の再発率は高い。種々の形態での患者中心の治療法が治療の堅持を促すために使用されている。患者の服用を確実なものとする最も有効な方法は直接観察される療法の使用であり、この場合、保健医療チームのメンバーに患者が各薬剤の各用量を服用していることを観察させることが含まれる。直接観察療法は病院、患者の居所、または何れかの相互に合意した場所において提供されることができる。薬剤感受性生物により誘発された結核にかかり、治療を完了した患者のほぼ全てが治癒し、再発の危険性は極めて低くなる（「終了放棄：米国における結核の除去」：米国健康促進疾病予防部門医薬研究所における結核排除に関するＬ．Ｇｅｉｔｅｒ委員会、未公開）。
【００１４】
必要とされていることは改善されたワクチン接種および治療プロトコルを含む有効な治療方法である。現在使用可能な治療薬は、もはや治療コンプライアンスのもつ問題の結果として一貫した有効なものではなく、これらのコンプライアンスの問題は薬剤耐性マイコバクテリア菌株の発生に寄与している。
【００１５】
エタンブトール（ＥＭＢ）はＴＢの治療のために広範に使用されている抗生物質であり、１９８８年には結核の治療において３００百万超の投薬がなされている。
【００１６】
【化１】
2005526129.tif 000002
１９５０年代にＬｅｄｅｒｌｅ研究所において開発されたエタンブトールは低い毒性および良好な薬物動態を呈する。しかしながら、エタンブトールは約５μｇ／ｍｌの比較的高い最小発育抑制濃度（ＭＩＣ）を有し、視神経炎を誘発する場合がある。即ち、新しくより効果的な治療用組成物の必要性が増大している（例えば米国特許第３，１７６，０４０号、米国特許第４，２６２，１２２号、米国特許第４，００６，２３４号、米国特許第３，９３１，１５７号、米国特許第３，９３１，１５２号、米国特許出願第２９，３５８号およびＨａｕｓｌｅｒら，  Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １１  （２００１）１６７９−１６８１参照）。解読の時代においてエタンブトールの有益な作用の発見以来、ＴＢ治療の薬理学的な進歩はほとんどなかった。更にまた、薬剤耐性菌株の複合的発生により、また、マイコバクテリア疾患のより顕著な蔓延により、新しい組成物が結核に対抗するためには必須であることがより顕著になってきている。
【００１７】
改善されたワクチン接種および治療のプロトコルを含む明らかに有効な治療方法が必要である。結核の発症を予防し、その結果治療の必要を排除する治療用ワクチンが望ましい。エタンブトールのような現在入手可能な治療薬は有効であるものの、薬剤耐性菌株の出現でエタンブトールより汎用性の高い新しい処方および組成物が必要となってきた。現在使用可能な治療薬は、薬剤耐性マイコバクテリア菌株の発生をもたらす治療コンプライアンスに関する問題点の結果としては、もはや一貫して効果的なものではない。必要とされているものは高度に有効な治療を提供し、結核の薬物療法を短期化または簡素化するような新しい抗結核剤である。
【００１８】
（本発明の概要）
本発明は感染性疾患の治療のために有効なエチレンジアミン化合物を含む方法および組成物を含む。本発明はまた改善された抗結核活性を有する置換エチレンジアミンを含む抗マイコバクテリア活性が改善された置換エチレンジアミンを含む方法および組成物を提供する。
【００１９】
本発明は種々のアミン化合物から誘導できる置換エチレンジアミンを意図している。本発明においては、置換エチレンジアミンは以下に示す構造に基く。
【００２０】
【化２】
2005526129.tif 000003
本明細書に記載する置換エチレンジアミン以下の通り合成し、活性をスクリーニングする。スプリットプール手法を用いて、固体ポリスチレン支持体上に置換エチレンジアミンの化学ライブラリを調製する。この手法は置換エチレンジアミンの多様なセットの合成を可能にする。これらのジアミンを、抗ＴＢ活性について、Ｍ．ツベルクロシスの最近完了したゲノム配列に基いたハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）試験および最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）試験を含むｉｎ  ｖｉｔｒｏの生物学的試験を用いてスクリーニングする。
【００２１】
本明細書に記載する方法および組成物は細菌およびウィルスなどを含む感染性生物により誘発される疾患に対して有効な置換エチレンジアミンを含む。本発明の１つの実施形態はマイコバクテリア疾患に対して有効な置換エチレンジアミンを含む方法および組成物を提供する。本発明の他の実施形態はマイコバクテリア疾患に対して５０μＭ以下のＭＩＣを有する置換エチレンジアミンを含む方法および組成物を提供する。本発明の他の実施形態はマイコバクテリア疾患に対して２５μＭ以下のＭＩＣを有する置換エチレンジアミンを含む。本発明の更に他の実施形態はマイコバクテリア疾患に対して１２．５μＭ以下のＭＩＣを有する置換エチレンジアミンを含む。本発明の他の実施形態はマイコバクテリア疾患に対して５μＭ以下のＭＩＣを有する置換エチレンジアミンを含む。本発明の他の実施形態においては、方法および組成物は１０％以上のＨＴＳ  Ｌｕｃ活性を有する置換エチレンジアミンを含む。本発明の更に他の実施形態においては、方法および組成物はアミン基の１つが第一級アミンから誘導され、もう１つのアミン基が第一級または第二級アミンから誘導される置換エチレンジアミンを含む。本発明の別の実施形態においては、方法および組成物は、アミンの１つがｃｉｓ−（−）−ミルタニルアミン、シクロオクチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン、３，３−ジフェニルプロピルアミン、（＋）−ボルニルアミン、１−アダマンタンメチルアミン、（＋）−イソピノカンフェイルアミン（ｉｓｏｐｉｎｏｃａｍｐｈｅｙｌａｍｉｎｅ）または（−）−イソピノカンフェイルアミンから誘導される置換エチレンジアミンを含む。
【００２２】
本発明は置換エチレンジアミンの種々の塩複合体および他の置換誘導体を意図する。本発明はまた置換エチレンジアミンのエナンチオマーおよび他の立体異性体およびその置換誘導体も意図する。本発明は更に、ヒトなどを含む動物の治療も意図する。
【００２３】
従って、本発明の目的は微生物により誘発される疾患の治療および予防のための方法および組成物を提供することである。
【００２４】
従って、本発明の目的は感染性疾患の治療および予防のための方法および組成物を提供することである。
【００２５】
本発明の他の目的は例えば結核を含むマイコバクテリア疾患の治療および予防のための方法および組成物を提供することである。
【００２６】
本発明の更に他の目的は置換エチレンジアミンを含む組成物を用いた感染性疾患の治療および予防のための方法および組成物を提供することである。
【００２７】
本発明の他の目的は置換エチレンジアミンを含む組成物を用いたマイコバクテリア疾患の治療および予防のための方法および組成物を提供することである。
【００２８】
また更に他の本発明の目的は置換エチレンジアミンを含む組成物を用いた結核の治療および予防のための方法および組成物を提供することである。
【００２９】
本発明の他の目的は置換エチレンジアミンを含む組成物を用いた結核の治療および予防のための方法および組成物であって、ジアミンのＭＩＣが５０μＭ以下であるものを提供することである。
【００３０】
本発明の他の目的は置換エチレンジアミンを含む組成物を用いた結核の治療および予防のための方法および組成物であってジアミンのＭＩＣが２５μＭ以下であるものを提供することである。
【００３１】
本発明の別の目的は置換エチレンジアミンを含む組成物を用いた結核の治療および予防のための方法および組成物であってジアミンのＭＩＣが１２．５μＭ以下であるものを提供することである。
【００３２】
本発明の他の目的は置換エチレンジアミンを含む組成物を用いた結核の治療および予防のための方法および組成物であってジアミンのＭＩＣが５μＭ以下であるものを提供することである。
【００３３】
本発明の他の目的は置換エチレンジアミンを含む組成物を用いた結核の治療および予防のための方法および組成物であってジアミンのＨＴＳ／Ｌｕｃ活性が１０％以上であるものを提供することである。
【００３４】
本発明の他の目的は置換エチレンジアミンを含む組成物を用いた結核の治療および予防のための方法および組成物であって、アミン基の１つが第一級アミンから誘導され、もう１つのアミン基が第一級または第二級アミンから誘導されるものを提供することである。
【００３５】
本発明の更に他の目的は置換エチレンジアミンを含む組成物を用いた結核の治療および／または予防のための方法および組成物であって、アミンの１つがｃｉｓ−（−）−ミルタニルアミン、シクロオクチルアミン、２，２−ジフェニルエチルアミン、３，３−ジフェニルプロピルアミン、（＋）−ボルニルアミン、１−アダマンタンメチルアミン、（＋）−イソピノカンフェイルアミンまたは（−）−イソピノカンフェイルアミンから誘導されるものを提供することである。
【００３６】
本発明の更に他の目的はマイコバクテリア疾患の治療および予防のための治療用製剤のための組成物を提供することである。
【００３７】
本発明の更に他の目的はＭ．ツベルクロシスの複合体、Ｍ．アビウムイントラセルラエ、Ｍ．カンサシ、Ｍ．フォーチュイタム、Ｍ．ケロナエ、Ｍ．レプラエ、Ｍ．アフリカナム、Ｍ．ミクロチ（Ｍ．ｍｉｃｒｏｔｉ）またはＭ．ボビスを含むマイコバクテリア菌種により誘発されるマイコバクテリア疾患の治療および予防のための治療用製剤のための組成物を提供することである。
【００３８】
本発明のこれらの目的および他の目的、特徴および利点は以下に示す開示した実施形態の詳細な説明および添付する請求項の検討により明らかにされるものである。
【００３９】
（発明の詳細な説明）
本発明は以下に記載する本明細書に含まれる特定の実施形態の詳細な説明を参照することにより更に容易に理解される。しかしながら、本発明はその特定の実施形態における特定の詳細を参照しながら説明しているが、そのような詳細が本発明の範囲を限定するものではない。２００２年５月１７日出願の米国特許出願第１０／１４７，５８７号、および２００２年５月１７日出願の米国暫定特許出願第６０／３８１，２２０号を含む本明細書に示す参考文献の全内容はその全体が参照として本明細書に組み入れられる。
【００４０】
マイコバクテリア感染症、例えば結核を起こすものは、かつては発生が減少すると考えられていたが、再燃しており、再度、重要な健康上の危険性をもたらしている。結核（ＴＢ）は単一の病因性媒介物に起因するヒトの死亡の最も多い原因となっており、これにより、毎年２〜３百万人の結核感染者が死亡している。人口密集地または低生活水準の地域がマイコバクテリアに罹患した患者を保有することがますます明らかになってきている。免疫無防備状態の個人はマイコバクテリア感染およびそのような感染による死亡の危険性が高い。更にまた、マイコバクテリアの薬剤耐性菌株の発生により、そのような感染者の治療における問題がもたらされる。
【００４１】
マイコバクテリアに感染している者の多くは貧困であるか、または、不十分な保健衛生施設しかない地域で生活している。種々の障害（経済、教育水準等）の結果として、これらの個人の多くは処方された薬剤の用法を遵守することができない。最終的には、これらの人々や他の個人による継続的な非コンプライアンス状態により疾患の蔓延がもたらされる。この非コンプライアンスはしばしば、マイコバクテリアの薬剤耐性菌株の発生で悪化する。マイコバクテリアの種々の菌株を標的とする効果的な組成物およびワクチンが漸増する結核の症例数を管理下におくためには必要である。
【００４２】
化学療法は結核の標準的な治療法である。一部の現在の化学療法には毎日２ヶ月間、または、隔週で４〜１２ヶ月間、３または４剤を組み合わせて使用することが必要なものがある。表１は標準的な結核薬剤用法の数種の治療スケジュールを示す。
【００４３】
【表１】
2005526129.tif 000004
数十年にわたる既存の抗生物質の誤使用および長期の複雑な薬剤用法へのコンプライアンス不良により、マイコバクテリア結核の突然変異がもたらされ、全世界的に結核の制御を困難にした薬剤耐性の流行を生じさせている。イソニアジド、リファンピシン、ピラジンアミド、エタンブトールおよびストレプトマイシンのような第１選択肢群の薬剤を含む現在処方されている薬剤の大多数は１９５０〜１９７０年代に開発されている。即ち、結核化学療法のこの早期の開発はその処理においてマイコバクテリウム・ツベルクロシスのゲノム配列、この数十年の医薬品の発見の進歩、および、国家的薬剤試験およびコンビナトリアル化学の意義を含んでいなかった。
【００４４】
その結果、薬剤耐性Ｍ．ツベルクロシス菌株および潜伏性の結核感染症の治療には、高度に有効な治療および短期化し簡素化された結核化学療法を提供する新しい抗結核薬剤が必要になっている。更にまた、これらの薬剤は、疾患の人口統計学的研究によればコストが重要な要因であることから、低コストで合成して調製することがのぞましい。
【００４５】
本発明は例えば細菌を含む微生物により誘発される疾患の治療および予防において有効な置換エチレンジアミン化合物の分類を含む方法および組成物を提供する。特に本発明の方法および組成物は微生物であるＭ．ツベルクロシスの生育を抑制する際に有効である。本発明の方法および組成物はヒト並びに他の動物におけるマイコバクテリア感染症の治療を意図している。例えば、本発明はＭ．ボビスに感染したウシの治療のために特に有用である。
【００４６】
本明細書において用いる「結核」という用語はＭ．ツベルクロシスの複合体を含むマイコバクテリア種により誘発される感染症に通常関わっている疾患状態を含む。「結核」という用語はまたＭ．ツベルクロシス意外のマイコバクテリア（ＭＯＴＴ）により誘発されるマイコバクテリア感染症にも関わっている。他のマイコバクテリア種にはＭ．アビウム−イントラセルラエ、Ｍ．カンサシ、Ｍ．フォーチュイタム、Ｍ．ケロナエ、Ｍ．レプラエ、Ｍ．アフリカナムおよびＭ．ミクロチ、Ｍ．アビウムパラツベルクロシス（Ｍ．ａｖｉｕｍ  ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、Ｍ．イントラセルラエ、Ｍ．スクロフラセウム（Ｍ．ｓｃｒｏｆｕｌａｃｅｕｍ）、Ｍ．ゼノピ（Ｍ．ｘｅｎｏｐｉ）、Ｍ．マリナム（Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍ）、Ｍ．ウルセランス（Ｍ．ｕｌｃｅｒａｎｓ）が包含される。
【００４７】
本発明は更に、例として、細菌性、真菌性、寄生虫性、またはウィルス性の媒介物により誘発されるものを含む感染性疾患の治療に有効な方法および組成物を含む。このような感染性媒介物の例には、例えばブドウ球菌、連鎖球菌、ナイセリア類、球菌、腸内細菌科、シュードモナス類、ビブリオ類、カンピロバクター類、パスツレラ類、ボルデテラ類、フランシセラ属、ブルセラ族、レジオネラ類、バクテロイド類、グラム陰性バチルス、クロストリジウム、コリネバクテリウム、プロピオニバクテリウム、グラム陽性バチルス、炭疽菌、アクチノミセス属、ノカルジア属、マイコバクテリウム、トレポネーマ属、ボレリア属、レプトスピラ属、マイコプラズマ属、ウレアプラズマ族、リケッチア、クラミジア類、全身性真菌症、日和見真菌症、原生動物、線虫、吸虫類、条虫、アデノウィルス、ヘルペスウィルス、ポックスウイルス、パポバウィルス、肝炎ウィルス、オルトミキソウィルス、パラミキソウィルス、コロナウィルス、ピコルナウィルス、レオウィルス、トガウィルス、フラビウィルス、ブンヤウィルス科、ラブドウィルス、ヒト免疫不全ウィルスおよびレトロウィルスが包含される。
【００４８】
本発明は更に結核、らい病、クローン病、後天性免疫不全症候群、ライム病、キャットスクラッチ病、ロッキー山紅斑熱およびインフルエンザを含む感染性疾患の治療のための方法および組成物を例として提供する。
【００４９】
本発明の抗感染の方法および組成物は置換エチレンジアミン化合物１種またはそれ以上を含有する。特にこれらの化合物は下記式：
【００５０】
【化３】
2005526129.tif 000005
［式中、「Ｒ１ＮＨ」は典型的に第一級アミンから誘導され、そして「Ｒ２Ｒ３Ｎ」は典型的な第一級または第二級アミンから誘導される］を有する広範な種類の置換エチレンジアミン化合物を包含する。本発明のエチレンジアミンはビルディングブロックとして第一級および第二級アミンを用い、そして、アミン部分をエチレンリンカー基礎的要素にカップリングさせるモジュラー方法により調製される。代表的な第一級アミン、非環式第二級アミン、および環式第二級アミンをそれぞれ図２、３および４に示す。
【００５１】
一般的に、本発明のエチレンジアミン化合物の化学部分であるＲ１、Ｒ２およびＲ３は独立して、Ｈ、アルキル；アリール；アルケニル；アルキニル；アラルキル；アラルケニル；アラルキニル；シクロアルキル；シクロアルケニル；ヘテロアルキル；ヘテロアリール；ハライド；アルコキシ；アリールオキシ；アルキルチオ；アリールチオ；シリル；シロキシ；ジスルフィド基；尿素基；アミノ等、およびこれらの直鎖または分枝鎖の誘導体、これらの環式誘導体、これらの置換誘導体、これらのヘテロ原子誘導体、これらの複素環誘導体、これらの官能性付与誘導体、これらの塩、例えば塩酸塩および酢酸塩、その異性体またはこれらの組み合わせから選択される。例えば窒素含有複素環部分には例えばピリジニル（ピリジンから誘導し環炭素を介して結合）、ピペリジニル（ピペリジンから誘導し環窒素原子または環炭素を介して結合）およびピロリジニル（ピロリジンから誘導し環窒素原子または環炭素を介して結合）が包含される。Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の置換または官能性付与された誘導体の例は、アシル、ホルミル、ヒドロキシ、アシルハライド、アミド、アミノ、アジド、酸、アルコキシ、アリールオキシ、ハライド、カルボニル、エーテル、エステル、チオエーテル、チオエステル、ニトリル、アルキルチオ、アリールチオ、スルホン酸およびその塩、チオール、アルケニル、アルキニル、ニトロ、イミン、イミド、アルキル、アリール、これらこれらの組み合わせなどのような置換基を含む部分などを包含する。更にまた、記載した部分のアルキル化誘導体の場合は、アルキル置換基は記載した化学部分に懸垂していてよく、或いは、アルキル置換基を介してアミン窒素に結合するために用いられてよい。
【００５２】
本発明の化学部分Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の例は、Ｈ；メチル；エチル；プロピル；ブチル；ペンチル；ヘキシル；ヘプチル；オクチル；エテニル；プロペニル；ブテニル；エチニル；プロピニル；ブチニル；シクロプロピル；シクロブチル；シクロペンチル；シクロヘキシル；シクロオクチル；シクロブテニル；シクロペンテニル；シクロヘキセニル；フェニル；トリル；キシリル；ベンジル；ナフチル；ピリジニル；フラニル；エトラヒドロ−１−ナプチル；ピペリジニル；インドリル；インドリニル；ピロリジイル；２−（メトキシメチル）ピロリジニル；ピペラジニル；キノリニル；キノリル；アルキル化１，３−ジオキソラン；トリアジニル；モルフォリニル；フェニル；ピラゾリル；インダニル；インドリル；ピラゾリル；チアジアゾリル；ローダニニル；チオラクトニル；ジベンゾフラニル；ベンゾチアゾリル；ホモピペリジニル；チアゾリル；キノヌクリジニル；イソキサゾリジノニル；これらこれらの何れかの異性体、誘導体または置換類似体；または何れかの置換または未置換の化学種、例えばアルコール、エーテル、チオール、チオエーテル、第三級アミン、第二級アミン、第一級アミン、エステル、チオエステル、カルボン酸、ジオール、ジエステル、アクリル酸、アクリルエステル、メチオニンエチルエステル、ベンジル−１−システインエチルエステル、イミン、アルデヒド、ケトン、アミドまたはジエンを包含する。本発明のＲ１、Ｒ２およびＲ３の化学部分のさらに別の例としては、以下の物質種または以下の物質種の置換またはアルキル化誘導体でアミン窒素に共有結合したもの、即ち、フラン；テトラヒドロフラン；インドール；ピペラジン；ピロリジン；ピロリジノン；ピリジン；キノリン；アントラセン；テトラヒドロキノリン；ナフタレン；ピラゾール；イミダゾール；チオフェン；ピロリジン；モルフォリン等を包含する。列挙した物質種またはその様な物質種の置換またはアルキル化誘導体の１つの特長は、それらが、当業者の知るとおり、懸垂置換基またはアルキル基を介するか、適切なヘテロ原子を介するか、または、適切な環原子を介するなどして、何れかの態様でアミン窒素に共有結合していることである。
【００５３】
本発明の化学部分Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はまた例えば環式アルカンおよび環式アルケンを包含し、そして、架橋または非架橋の環を包含する。架橋環の例は、次の基などを含む、即ちイソピノカンフェニル；ボルニル；ノルボルニル；アダマンタンテチル；ｃｉｓ（−）−ミルタニル；アダマンチル；ノルアダマンチル；６−アザビシクロ［３．２．１］オクタン；ｅｘｏ−ノルボルナン。
【００５４】
本発明の１つの実施形態においては、ＮＲ２Ｒ３は環式第二級アミンから誘導される。本発明の環式化学部分ＮＲ２Ｒ３の例は４−ベンジルピペリジン；３−ピペリジンメタノール；ピペリジン；トリプタミン；モルフォリン；４−ピペリジノピペリジン；エチル１−ピペラジンカルボン酸；１−（２−アミノ−エチル）−ピペラジン；デカヒドロキノリン；１，２，３，４−テトラヒドロ−ピリドインドール（何れかのアミンにおける反応）；３−アミノ−５−フェニルピラゾール；３−アミノピラゾール；１−（２−フルオロフェニル）ピペラジン；１−プロリンメチルエステル；ヒスチジノール；１−ピペロニル−ピペラジン；ヘキサメチルイミン；４−ヒドロキシピペリジン；２−ピペリジンメタノール；１，３，３−トリメチル−６−アザビシクロ［３．２．１］オクタン；３−ピロリジノール；１−メチルピペラジン；（Ｓ）−（＋）−（２−ピロリジニルメチル）ピロリジン；１−メチルホモピペラジン；２−エチル−ピペリジン；１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン；１−（４−フルオロフェニル）ピペラジン；ｄ，ｌ−トリプトファンメチルエステル；ｔｅｒｔ−ブチル（１５，４５）−（−）−２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシレート；イソニペコタミド；ヘプタメチレンイミン；α−メチルトリプタミン；６，７−ジメトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン；３−アミノピロリジン；３，５−ジメチルピペリジン；２，６−ジメチルモルフォリン；１，４−ジオキソ−８−アザスピロ［４．５］デカン；１−メトール−６，７−ジヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン；１，３，４，６，７，８−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド（１，２−Ａ）ピリミジン；１，２，３，４−テトラヒドロキノリン；１−（２−メトキシフェニル）ピペラジン；１−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル）ピペラジン；（Ｓ）−（＋）−２−（アミノメチル）ピロリジン；（３Ｓ（３ａ，４Ａｂ），８Ａｂ）−Ｎ−ｔ−ブチル−Ｄ−エカヒドロ−３−イソキノ−リンカルボキシアミド；（Ｒ）−シクロセリン；ホモピペラジン；２，６−ジメチルピペラジン（何れかのアミンにおける反応）；イミノジベンジル；５−メトキシトリプトアミン；４，４’−ビピペリジン；１−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン；４−メチルピペリジン；１−ヒスチジンメチルエステル；またはメチルピペコリエートである。
【００５５】
Ｒ１ＨＮ置換基は第一級アミンから誘導される。Ｒ２Ｒ３Ｎ置換基は典型的には、第一級および第二級アミンから誘導されるが、アミノ酸またはアミノ酸前駆体から生じてもよい。アミノ酸はアミノアルコールに転換できる。Ｒ２Ｒ３Ｎ部分の原料としてアミノ酸を用いる場合は、前駆体化合物はとりわけ、他の中から即ち以下の化合物およびその誘導体から選択してよい、即ち、ｄ，ｌ−トリプトファンメチルエステル；１−メチオニンエチルエステル；１−リジンメチルエステル（何れかの第一級アミンにおける反応を介する）；（Ｓ）−ベンジル−１−システインエチルエステル；１−アルギニンメチルエステル（何れかの第一級アミンにおける反応を介する）；ｌ−グルタミン酸エチルエステル；ｌ−ヒスチジンメチルエステルまたは（３Ｓ（３ａ，４Ａｂ），８Ａｂ）−Ｎ−ｔ−ブチル−Ｄ−エカヒドロ−３−イソ−キノリンカルボキシアミド。
【００５６】
本発明の置換エチレンジアミン化合物のＲ４部分は典型的にはＨ、アルキルまたはアリールから選択されるが、Ｒ４はまたアルケニル、アルキニル、アラルキル、アラルケニル、アラルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル等を構成することもできる。Ｒ４化学部分の例は、Ｈ；メチル；エチル；プロピル；ブチル；ペンチル；ヘキシル；ヘプチル；オクチル；エテニル；プロペニル；ブテニル；エチニル；プロピニル；ブチニル；シクロブチル；シクロペンチル；シクロヘキシル；シクロブテニル；シクロペンテニル；シクロヘキセニル；フェニル；トリル；キシリル；ベンジル；ナフチル；これより誘導される直鎖または分枝鎖；その環式誘導体；その置換、官能性付与およびヘテロ原子の誘導体等の複素環誘導体等を包含する。典型的には、Ｒ４はＨ、メチル、エチル、ブチルまたはフェニルから選択される。しかしながら、Ｒ４が「Ｈ」である場合は、エチレンジアミンはエタンブトールを含まない。
【００５７】
本明細書に記載したエチレンジアミン化合物の大部分は好ましくは図１に示す代表的な反応スキームの１つに示すとおり、固体支持体合成を用いて調製する。しかしながら、Ｒ４がＨである場合は、Ｒ１ＮＨ２について立体障害アミンを使用したり、または、Ｒ１ＮＨ２についてアミノアルキレンモルフォリンまたはアミノアルキレンピペイジンのようなジアミンを用いる場合は反応は良好に進行しない。Ｒ４がメチルまたはフェニルである場合は、Ｒ３Ｒ２ＮＨに対して立体障害アミンを用いることは、反応部位における立体障害のために功を奏さない。このような場合は、相当するアミノアルコールを生成する競合加水分解反応およびアミドエチレンアミンの不完全還元が反応スキームに干渉する。その結果、所望のジアミン生成物が低収率で得られる。
【００５８】
エチレンジアミンの調製は好ましくはＲｉｎｋ−ａｃｉｄレジンを用いて６工程で行う。合成の第１工程は、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中のトリフェニルホスフィンおよびヘキサクロロエタンによる処理によるＲｉｎｋ−ａｃｉｄからリンククロリドへの変換である。この工程の後、ジクロロエタン中のＨｕｎｉｇ塩基（ＥｔＮ（ｉ−Ｐｒ）２）の存在下で第一級アミンを添加する。第３工程は図１に示した２つのアシル化経路の何れか一方を用いたレジン結合アミンのアシル化である。アシル化工程は好ましくはＴＨＦ中のピリジンの存在下、α−クロロアセチルクロリド、α−ブロモ−α−メチルアセチルブロミド、α−ブロモ−α−エチルアセチルブロミド、α−ブロモ−α−ブチルアセチルブロミドまたはα−クロロ−α−フェニル−アセチルクロリドの何れかを用いて行う。当該分野でよく知られた他のアシル化試薬も使用してよいが、ただし、α−ブロモアセチルハライドは低い生成物収率をもたらし、これはＨＢｒ除去に起因すると考えられる。アセチル化はまた、ジクロロメタン（ＤＣＭ）およびジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中のベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢｒｏｐ）およびＮ１Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＥｔＮ（ｉ−Ｐｒ）２）の存在下、α−ブロモ−α−メチル酢酸またはα−クロロ−α−メチル酢酸を用いたペプチドカップリングの機序を介して行ってもよい。ここでもまた、当該分野でよく知られた他のアシル化試薬も使用してよい。アシル化工程は好ましくは良好なアシル化生成物収率を得るためには２回行う。
【００５９】
第２の窒素部分の導入は好ましくはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中のＨｕｎｉｇ塩基の存在下で行う。中間体のアミン−アミドの還元はＲｅｄ−Ａｌ（トルエン中ナトリウムビス（２−メトキシエトキシ）アルミニウムハイドライドの３．４Ｍ溶液）を用いて行う。最終生成物はジクロロメタン（ＤＣＭ）中のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）の１０％溶液（容量）を用いてレジン支持体から脱離させる。溶媒を蒸発させ、最終ジアミン生成物のＴＦＡ塩を質量スペクトルで分析し、Ｍ．ツベルクロシスに対する有効性についてスクリーニングする。上記の固体支持体合成を用いて調製した置換エチレンジアミンのいくつかを後に記載する溶液相合成を用いてまた調製する。
【００６０】
置換エチレンジアミンライブラリの形成
置換エチレンジアミンライブラリの調製のためには図１に示す固体支持体合成が好ましく用いられる。固相合成は少なくとも３つの主要な利点、即ち（ｉ）クロマトグラフィ操作法を使用する必要性が低下する、（ｉｉ）過剰量の試薬を使用して高収率で反応を推進する、および（ｉｉｉ）スプリットプール手法を用いて大量の化合物を合成する、という利点を有する。１，２−ジアミンライブラリの固体支持体合成は短ペプチドの還元により既に行われている（Ｃｕｅｒｖｏら，  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  １９９４：  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ；  Ｍａｉａ  ＨＳＬ  Ｅｄ．，  Ｅｓｏｍ：Ｌｅｉｄｅｎ，  １９９５，  ４６５−４６６）。しかしながら、本明細書に記載の通り、エチレンジアミンライブラリは単純なアミノ酸ではなくアミンを使用して創生することにより、ビルディングブロック単量体における場合より大きい多様性を得る。各支持体合成の最初の３工程、即ち、Ｒｉｎｋ−ａｃｉｄレジンの活性化、第１のアミンの添加、および、アシル化工程をＡＲＧＯＮＡＵＴ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ（登録商標），Ｉｎｃ．，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｆｏｒｎｉａにより製造されたＱＵＥＳＴ（登録商標）２１０シンセサイザー上の１０ｍｌ試験管内で実施する。シンセサイザーは５ｍｌまたは１０ｍｌの反応試験管内で同時に２０までの反応を取り扱い、これにより標的化合物の迅速な合成が可能となる。シンセサイザーはプログラム可能な温度制御および攪拌、および、反応容器への溶媒の自動化された供給が可能である。第２のアミンの添加、Ｒｅｄ−Ａｌを用いた還元および固体支持体からの脱離は９６ウェルの薬品耐性プレート中の２ｍｌウェル中で行う。
【００６１】
固体支持体合成の前に、図２、３および４に示す１〜２８８番の各アミンを１モル溶液としてＤＭＦに溶解し、３枚の９６ウェルプレート（ウェル当たり１アミン）に組織化し、これらのアミンの３枚のマスタープレートを得る。各第一級アミンおよび特定のＲ４基に由来する個々のハロアセチルアミドを支持体合成の最初の３工程において形成する。次に個々のハロアセチルアミドを１０〜３０のグループにプールする。ＤＣＭ／ＴＨＦの２：１混合物中のプールしたレジンの懸濁液を１、２または３枚の反応プレートに均一に分配し、ウェル当たり懸濁液１５〜２０ｍｇとなるようにする。使用される反応プレートの数は使用可能な懸濁液の量に基く。プールしたレジンの各ウェルをマスタープレートから相当するアミンと反応させる。図５は代表的なプールのフロー模式図である。各反応は１６〜２０時間、７０〜７５℃で、ＤＭＦ中、Ｈｕｎｉｇ塩基の存在下、個別のウェル中で行われる。その結果得られた各アミン−アミドを室温で６５＋ｗ％のＲｅｄ−Ａｌを用いて還元する。還元の後、ＤＣＭ中１０％容量のＴＦＡで脱離する。各反応ウェル中の溶媒を蒸発させ、そしてジアミンのＴＦＡ塩を分析（質量スペクトル）し、Ｍ．ツベルクロシスに関してスクリーニングする。プールしたジアミンの１プレートをＭ．スメグマチスに対してスクリーニングする。各プレート中で無作為に選択した２列、即ち９６ウェルプレート中の２４試料、またはライブラリの２５％を質量スペクトルで調べる。特別なプロトコルおよび詳細な方法は後に記載の実施例において示す。
【００６２】
Ｍ．ツベルクロシスに対するスクリーニング
上記した通り調製した合成置換エチレンジアミン（化合物の目標数約１００，０００）の全ライブラリをエタンブトール（ＥＭＢ）感受性Ｌｕｃ試験においてＭ．ツベルクロシスに対してｉｎ  ｖｉｔｒｏでスクリーニングした。ＭＩＣ（最小発育阻止濃度）も求めた。ＭＩＣは成長阻止物資、ここにおいては置換エチレンジアミンの最小濃度であり、その状態においては試験下で微生物の複製が行われない。スクリーニングはハイスルーアウトスクリーニング（ＨＴＳ）Ｌｕｃ試験を用いて、ＥＢ誘導遺伝子へのルシフェラーゼのプロモーター融合を含む組み換えマイコバクテリアで行った（Ｌｕｃ試験）。Ｌｕｃ試験およびＭＩＣ試験は後に詳述する。これらの試験は当該分野でよく知られている。この初期スクリーニングに基いて、３００＋の化合物の混合物が抗ＴＢ活性を示すことがわかった。図６はＲｖ０３４１ＥＭＢ誘導プロモーターを含むルシフェラーゼレポーター菌株における典型的な試験データを示す。図６は９６ウェルプレートの１枚における１列（列Ｄ）中のプールした化合物の混合物に関する秒当たりの％最大ルミネセンスカウント（％Ｍａｘ．ＬＣＰＳ）を示す。
【００６３】
反応性ウェルのデコンボリューション
Ｍ．ツベルクロシススクリーニングにより、デコンボリューションのために選択した約３００種の活性化合物の混合物があることがわかった。特に、ＨＴＳＬｕｃ試験において約１２．５μＭ未満の活性および／または約１２．５μＭ未満のＭＩＣを有するウェルを合計３３６ウェル選択した。
【００６４】
デコンボリューションは、各活性化合物プール中における各置換エチレンジアミン化合物の個々の再合成により行った。各活性ウェル中のプール化合物を個々に合成し、スクリーニングした。各活性プール中の標的ジアミン化合物の合成は前記した反応工程（第２のアミンの添加、Ｒｅｄ−Ａｌによる還元および固体支持体からの脱離）に従って保存したアーカイブのα−ハロアセチルアミド（レジン結合ハロアセチルアミド）を用いて９６ウェルプレート中で行った。アーカイブのレジンは４℃で個々の化合物として保存した。９６ウェルプレートは前述した通り残余の合成工程に使用した。
【００６５】
同様のスクリーニング試験、ＭＩＣおよびＨＴＳＬｕｃ試験を各デコンボリューションした各化合物に対して実施した。デコンボリューションした化合物に関する代表的なルミネセンスのデータを図７および８に示す。図７および８は個々の化合物に関する秒当たりルミネセンスカウント（ＬＣＰＳ）である。
【００６６】
スクリーニング結果の総括
全体として、デコンボリューションスクリーニングの結果によれば、Ｍ．ツベルクロシスに対する抑制活性を有するエチレンジアミン化合物は約２０００種発見された。これらの化合物のうち１５０種超が約１２．５μＭ以下のＭＩＣを示した。図９は５０μＭ以下のＭＩＣである全ての合成された個々の化合物に関するＭＩＣデータを総括したものである。図１０は各濃度において少なくとも約１０％の活性を示す全化合物に関するＬｕｃ試験データを総括したものである（結果は累積値ではない）。ＭＩＣおよびＬｕｃ活性は各反応工程における推定８０％収率に基いて約２０％の化学収率を有する非精製試料に関して得た。Ｌｕｃ試験において３２化合物が１．５６μＭにおいて活性を示し、そして、ＭＩＣ試験においては、少なくとも１１化合物が３．１３μＭのＭＩＣを示していた。
【００６７】
置換エチレンジアミンの活性に寄与した上位１３ジアミンの総頻度は図１１に示すとおりであり、各アミンはその数字の表示により示す。これらのアミンには以下のものが包含される。
＃１１  ２，３−ジメチルシルオケキシアミン
＃１８  ３，３−ジフェニルプロピルアミン
＃４４  １−アダマンタンメチルアミン
＃４７  ２，２−ジフェニルエチルアミン
＃６３  （Ｓ）−２−アミノ−１−ブタノール
＃７４．１  （−）−ｃｉｓ−ミルタニルアミン
＃７７．１  シクロオクチルアミン
＃７８．１  ２−アダマンタミン
＃１０５ａ  （１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−（−）−イソピノカンフェイルアミン
＃２３１  ２−メトキシフェネチルアミン
＃２５５  （Ｓ）−シルコヘキシルエチルアミン
＃２６６  ウンデシルアミン
＃２７２  ゲラニルアミン
置換エチレンジアミンの活性に寄与した他のアミン類を表２に示す。表２の化合物はそのＭＩＣ結果により分類した。ＱＵＥＳＴ（登録商標）シンセサイザー上でより大量（２〜６０ｍｇ）に合成し、半プレパラティブＣ１８カラムを用いてＨＰＬＣ精製した化合物のいくつかを表３に示す。全般的に、表３の各化合物の最終純度は少なくとも９０％であった。
【００６８】
【表２】
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【００６９】
【表３】
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本発明はまた感染性疾患に対して有用であるジアミン化合物の新しいライブラリに関する。従来のジアミン化合物の構造的多様性を更に拡張するために、アミン成分２個の間の架橋リンカー内にアミノ酸を取り込む合成スキームが開発されている。アミノ酸の使用により多様なリンカーエレメント並びにキラリティーが得られ、その代表例は図４２に示すとおりである。ジアミン化合物はウェル当たり１０化合物のプールにおいて９６ウェルのフォーマットでｍｍｏｌ規模において調製した（プレートの大多数に関し）。表２５（図４３）は合成したプレートのデータを総括したものである。  
反応スキームは図４４に示すとおりである。
【００７０】
Ｒｉｎｋレジンを用いた固相合成。２１枚の９６ウェルプレートを調製した。本発明者等の最初の１００，０００化合物ライブラリ（スキーム１、図４１）を創生するために使用したものと同様のＲｉｎｋレジンからはじめる６工程の合成経路を適用して標的ジアミンを製造した（スキーム５、図４４）。全体として、これらのスキームの全工程は、第２のアミノ官能基の形成が起こる１つ（工程４）を除いて同様である。スキーム１において、第２のアミンはリンカーのＣ１−官能基の親核置換を介した全シントン（ｓｙｎｔｈｏｎ）として分子内に導入されるが、一方スキーム５においては、これはカルボニル化合物による既存のアミノ部分の修飾を介して進行する。
【００７１】
第１のアミンの支持体への結合はＧａｒｉｇｉｐａｔｉのプロトコルに従って行った。ＴＨＦ中のトリフェニルホスフィンおよびジクロロエタンによる処理により、Ｒｉｎｋ−ａｃｉｄレジン（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）をＲｉｎｋ−ｃｈｌｏｒｉｄｅに変換した。これによりレジンが活性化され、次いで、ジクロロエタン中のＨｕｎｉｇ塩基の存在下でアミンＮ１の添加により負荷した。アミンＮ１には例えばアルキルおよびアリール第一級アミンが包含される。１００，０００ライブラリの調製のためにＮ１として以前使用した１７７種の第一級アミンのうち、そのエチレンジアミン誘導体のｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性データ（前の〜１００Ｋライブラリより）並びに構造的多様性に基いて（図４５および４６）僅か３０種のみを本スキームにおいて選択した。
【００７２】
次の工程においては、アシル化反応は、室温でＤＣＭ／ＤＭＦ混合物中のＨＡＴＵ（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）およびＥｔＮ（ｉｓｏ−Ｐｒ）２の存在下でＦＭＯＣ保護アミノ酸とのペプチド結合を介して行った。反応は２回することにより生成物の収率を向上させた。このライブラリを創生するために使用したアミノ酸のリストを表２６に示す（図４７）。
【００７３】
脱保護（ＦＭＯＣ基の除去）は室温でピペリジンとの反応により行った。アミノ基の誘導は７２〜９６時間、室温で、ＮａＢＣＮＨ３の存在下、アルデヒド、ケトンおよびカルボン酸のような種々のカルボニル化合物を用いた還元的アルキル化により行った。カルボニル化合物の選択は、最終ジアミン生成物がエタンブトール類似体の前のライブラリ並びに構造的多様性から発生したヒット化合物中で観察された置換基の同一または同種のタイプを担持するように行った（図４８）。使用したカルボニル化合物の全リストを表２７に示す（図４９）。
【００７４】
アミノエチレンアミドから相当するジアミンへの還元を室温で可溶性還元剤６５＋ｗ％Ｒｅｄ−Ａｌを用いて行った。レジンからの生成物の脱離はジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸１０％溶液を用いて行い、ジアミンのＴＦＡ塩が形成された。
【００７５】
ライブラリの製造のために、合成スキームの最初の３工程（レジン活性化、アミン負荷およびアシル化）を試験管当たりレジン０．１〜０．１５ｇの規模でＱｕｅｓｔ２１０シンセサイザーを用いて行った。アシル化の後、形成されたレジンを十分洗浄し、乾燥し、次に１０レジンのグループを一緒にプールした。各レジンの少量（〜０．０５ｇ）をアーカイブとした後にプールすることにより、再合成および活性物質のデコンボリューションを容易にした。
【００７６】
ＦＭＯＣ基の脱保護、カルボニル成分の添加、還元、および、脱離はＷｈａｔｍａｎ  ＰｏｌｙｆｉｌｔｒｏｎｉｃｓのＣｏｍｂｉｃｌａｍｐｓシステムまたはＲｏｂｂｉｎｓ  ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃのＦｌｅｘＣｈｅｍシステムを用いて、９６ウェル反応ブロック中で行った。ＤＣＭ／ＴＨＦの２：１混合物中のプールしたレジンの懸濁液を１反応プレートに均一に分配したところ、ウェル当たりレジン約１０ｍｇとなった。９６種のカルボニル化合物を９６ウェルプレート１枚中にアレイ化し、ウェル当たり１カルボニル化合物となるように１０レジンの個々のプール各々に添加し、これにより推定でプレート当たり９６０ジアミンが生成されるようにした。還元は同じフォーマットで行い、保存プレートへの脱離および濾過の後にＴＦＡを蒸発させ、その後生物学的試験に供した。
【００７７】
調製した化合物の定性評価は、プレート当たり無作為に選択した２列（１６試料）、即ち、総数の１７％を用いてエレクトロスプレーイオン化質量スペクトル分析により行った。化合物の良好な生成は計算された質量の分子イオンの出現に基いて判断した。合成に用いたアミノ酸に応じて、予測されるイオンのパーセントが観察され、従って、予測された化合物が形成され、５〜６０％の範囲であった（表２５、図４３）。ＭＳ分析に基く場合、標的２０，０００化合物のうち、４，５００ジアミンが実際に形成された。
【００７８】
製剤
本発明の置換エチレンジアミン化合物を含有する組成物を含む治療薬は知られた方法を用いて製薬上許容しうる担体のような生理学的に許容される製剤にて調製できる。例えば、置換エチレンジアミン化合物を製薬上許容しうる賦形剤と組み合わせることにより治療組成物を形成する。
【００７９】
本発明の組成物は固体、液体またはエアロゾルの形態で投与してよい。固体組成物の例には丸薬、クリーム、石鹸および移植可能な剤型が包含される。丸薬は経口投与してよい。治療用クリームおよび抗マイコバクテリア石鹸は局所投与してよい。移植可能な剤型は局所、例えば肺に投与するか、または、治療用組成物の全身放出のために例えば皮下に移植してよい。液体組成物の例は、筋肉内、皮下、静脈内、動脈内への注射に適する製剤、および、局所および眼内に投与するための製剤を包含する。エアロゾル製剤の例には肺への投与のための吸入用製剤が包含される。
【００８０】
徐放性マトリックスとは本明細書においては、酵素的または酸／塩基加水分解により、または、溶解により分解可能な通常は重合体である物質より製造したマトリックスである。いったん体内に挿入されると、マトリックスは酵素および体液の作用を受ける。徐放性マトリックスは例えばリポソーム、ポリラクチド、ポリグリコリド（グリコール酸の重合体）、ポリラクチドコ−グリコリド（乳酸とグリコール酸の共重合体）、ポリ無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリペプチド、ヒアルロン酸、コラーゲン、硫酸コンドロイチン、カルボン酸、脂肪酸、リン脂質、多糖類、核酸、ポリアミノ酸、アミノ酸、例えばフェニルアラニン、チロシン、イソロイシン、ポリヌクレオチド、ポリビニルプロピレン、ポリビニルピロリドンおよびシリコーンなどを含む生体適合性の物質から適宜選択する。好ましい生物分解性のマトリックスはポリラクチド、ポリグリコリドまたはポリラクチド−コグリコリドの何れか１つのマトリックスである。
【００８１】
組成物の用量は、治療すべき状態、使用する特定の組成物、および、他の臨床的因子、例えば患者の体重および状態、および投与経路により異なる。適当な用量は１００〜０．１ｍｇ／ｋｇの範囲である。より好ましい用量は５０〜０．２ｍｇ／ｋｇの範囲である。更に好ましい用量は２５〜０．５ｍｇ／ｋｇの範囲である。錠剤または他の形態の媒体は置換エチレンジアミン１〜１０００ｍｇを含有してよい。エタンブトールまたは他の抗結核剤と同様の用量範囲および投与のスケジュールを用いてよい。
【００８２】
組成物はマイコバクテリア疾患と複合して発生している他の障害の治療のための他の組成物および操作法と組み合わせて投与してよい。例えば結核は後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）と関連した二次的な合併症として生じる場合が多い。手術、放射線療法または化学療法を含むＡＩＤＳ治療を受けている患者は本明細書に記載した治療方法および組成物の利益をこうむると考えられる。
【００８３】
以下の特定の実施例は置換エチレンジアミン化合物の特定の合成およびＭ．ツベルクロシスのコロニー生育のｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでの抑制に適用される点において、本発明を説明するものである。更に、Ｒ．Ｌｅｅ等のＪ．Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．２００３，  ５，  １７２−１８７の記載はその全体が参照として本明細書に組み入れられる。化学的操作法における微小な変更を含む他の実施例は当業者には自明のことであり、本発明はこれらの特定の記載した実施例に限定されないものとする。
【００８４】
（実施例Ｉ）
エチレンジアミンライブラリの発生  
Ｒｉｎｋ−ａｃｉｄレジンはＮＯＶＡＢＩＯＣＨＥＭ（登録商標）Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａより入手した。溶媒：アセトニトリル、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド、エチレンジクロリド、メタノールおよびテトラヒドロフランはＡＬＤＲＩＣＨ（登録商標），Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎより購入し、入手した状態で使用した。その他の全ての試薬はＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ（登録商標），Ｗｅｓｔ  Ｍｏｎｒｏｅ  Ｈｉｇｈｌａｎｄ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓより購入した。固相合成はＡＲＧＯＮＡＵＴ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ（登録商標），Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａにより製造されたＱＵＥＳＴ（登録商標）２１０シンセサイザー上で行い、その際、ＷＨＡＴＭＡＮ（登録商標）ＰＯＬＹＦＩＬＴＲＯＮＩＣＳ（登録商標）（Ｋｅｎｔ、Ｅｎｇｌａｎｄ；Ｒｏｃｋｌａｎｄ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）およびＲＯＢＢＩＮＳ  ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ（登録商標），Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａより入手したコンビナトリアル化学装置による補助を得た。溶媒の蒸発は、ＳＡＶＡＮＴ（登録商標），Ｈｏｌｂｒｏｏｋ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋより入手したＳＰＥＥＤＶＡＣ（登録商標）ＡＥＳを用いて行った。全ての必要なクロマトグラフィ分離はＷＡＴＥＲＳのＡＬＬＩＡＮＣＥ  ＨＴ  ＳＹＳＴＥＭ（登録商標），Ｍｉｌｆｏｒｄ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓを用いて行った。分析用の薄層クロマトグラフィはＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ（登録商標），Ｗｅｓｔ  Ｍｏｎｒｏｅ  Ｈｉｇｈｌａｎｄ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓより入手したＭＥＲＣＫ（登録商標）シリカゲル６０Ｆ２５４プレート上で行った。  
Ｒｉｎｋ−ａｃｉｄレジンの活性化、第１のアミンの添加およびアシル化工程はＱＵＥＳＴ（登録商標）２１０シンセサイザーを用いて１０ｍｌの試験管内で行った。第２のアミンの添加、Ｒｅｄ−ＡＬを用いた還元および固体支持体からの脱離は９６深型（２ｍｌ）ウェル薬品耐性プレート中で行った。
【００８５】
Ａ．Ｒｉｎｋ−ａｃｉｄレジンの活性化
Ｒｉｎｋ−ａｃｉｄレジンはレジングラム当たりリンカー０．４３〜０．６３ｍｍｏｌの被覆を有していた。このレジン４〜５グラムをジクロロメタンおよびテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）の２：１混合物８０ｍｌ中に懸濁し、１０本の１０ｍｌ試験管に分配し、試験管当たりレジン懸濁液８ｍｌした。各懸濁液を濾過し、ＴＨＦで２回洗浄した。ＴＨＦ３０ｍｌ中のトリフェニルホスフィン（３．８０ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）の溶液を調製し、この溶液３ｍｌを各試験管に添加し、その後、ＴＨＦ中のヘキサクロロエタンの溶液（ＴＨＦ３０ｍｌ中ヘキサクロロエタン３．３９ｇ／１４．３ｍｍｏｌ）３ｍｌを添加した。室温で６時間攪拌した後、活性化レジン各々をＴＨＦで２回、そして、ジクロロメタンで２回洗浄した。
【００８６】
Ｂ．第１のアミンの添加
活性化したｒｉｎｋレジンの入った試験管各々にジクロロエタン３ｍｌ、Ｎ１Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＥｔＮ（ｉＰｒ）２）０．３ｍｌ（１．７４ｍｍｏｌ）および相当するアミン（約１ｍｍｏｌ）を添加した。選択したアミンが室温で固体である場合は、それをＤＭＦ中の溶液または懸濁液として添加した。十分な量のジクロロエタンを試験管各々に添加し、最終容量８ｍｌとした。反応混合物を４５℃で６〜８時間加熱した。レジンを濾過し、ジクロロメタンとメタノールの２：１混合物（１×８ｍｌ）、次にメタノール（２×８ｍｌ）で洗浄し、次に１０分間アルゴン下で乾燥した。
【００８７】
Ｃ．ハロアシルクロリドによるアシル化
ａ．クロロアセチルクロリドを用いたアシル化。各レジンをＴＨＦ（２×８ｍｌ）で予備洗浄し、次にＴＨＦ（８ｍｌ）、ピリジン（０．３ｍｌ、３．６７ｍｍｏｌ）およびクロロアセチルクロリド（０．２５ｍｌ、２．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で８時間、次に室温で６〜８時間攪拌した。各レジンを濾過し、ジクロロメタン／メタノールの２：１混合物（１×８ｍｌ）、メタノール試薬で（２×８ｍｌ）およびＴＨＦ（２×８ｍｌ）で洗浄した。アシル化は同じ負荷レジンを用いて反復したが、その際の反応時間は短縮化して４５℃で４時間および室温で２時間とした。次に各レジンを濾過し、ジクロロメタンおよびメタノールの２：１混合物（１×８ｍｌ）、次にメタノール（３×８ｍｌ）で洗浄した。ついで各レジンを１０分間アルゴン下で乾燥した。次に各レジンをガラスビンに移し、１時間真空下のデシケーター中で乾燥した。
【００８８】
ｂ．α−フェニル−α−クロロアセチルクロリドによるアシル化。クロロアセチルクロリドによるアシル化と同様の操作法を用いた。ｒｉｎｋ−ａｃｉｄレジンのリンカーに対して２．５ｍｍｏｌ過剰量のα−フェニル−α−クロロアセチルクロリドを用いた。
【００８９】
ｃ．α−ハロ−α−メチル；α−ハロ−α−エチルおよびα−ハロ−α−ブチルアセチルブロミドによるアシル化。α−ブロモプロポニルブロミド（Ｒ４＝Ｍｅ）、α−ブロモブチリルブロミド（Ｒ４＝Ｅｔ）およびα−ブロモヘキサノイルブロミド（Ｒ４＝Ｂｕ）の１：１：１混合物（容量）を用いてモル比０．５２：０．５６：０．４２（ｍｍｏｌ）とした。これにより、元のレジンの被覆量が０．６３ｍｍｏｌ／ｇ（試験管当たりレジン０．５ｇ）であるとすれば、それぞれ１．６５、１．７５および１．３１のモル過剰量、元のレジンの被覆量が０．４３ｍｍｏｌ／ｇ（試験管当たりレジン０．５ｇ）であるとすれば、それぞれ２．４、２．６および１．９のモル過剰量になる。
【００９０】
ｄ．α−クロロ−α−メチル酢酸によるアシル化。各レジンをジクロロメタンで予備洗浄した。各試験管にジクロロメタン中３ｍｌのＰｙＢｒｏｐ（０．２９ｇ、０．６２ｍｍｏｌ）の溶液、ＤＭＦ３ｍｌ中α−クロロ−α−メチル酢酸（０．０９５ｇ、０．６２ｍｍｏｌ）およびＥｔＮ（ｉＰｒ）２（０．２ｍｌ、１．２ｍｍｏｌ）を添加した。各反応混合物を室温で１６〜１８時間反応させた。次に各レジンを濾過し、ジクロロメタン（２×８ｍｌ）およびメタノール（２×８ｍｌ）で洗浄し、アシル化を反復した。次に各レジンを濾過しジクロロメタン（２×８ｍｌ）およびメタノール（３×８ｍｌ）で洗浄し、約１０分間アルゴン下で乾燥した。各レジンをガラスビンに移し、１時間真空下のデシケーター中で乾燥した。
【００９１】
Ｄ．第２のアミンの添加
最初の３工程で得られた１０または３０の調製したα−ハロアセチルアミドレジンをプールし、個々のレジンの各々０．０５〜０．１０グラムを必要なデコンボリューションのために残した。ジクロロメタンおよびＴＨＦの２：１混合物１００ｍｌ中のプールしたレジン混合物の懸濁液を１、２または３枚の９６ウェルの反応プレートに分配した。１枚の反応プレートについては１．７〜２．０グラムのレジンを使用した。２枚の反応プレートについては３．０〜３．３グラムのレジンを使用し、３枚の反応プレートについては４．７〜５．０グラムのレジンを使用した。次に分配した懸濁液をろ過マニホルド、つまり９６ウェル反応プレートのチャンバー（ｃｈａｍｂｅｒ）から溶媒および試薬を取り出すために通常使用されている小型で軽量のマニホルドを用いて濾過した。反応プレートをＣＯＭＢＩＣＬＡＭＰＳ（登録商標）（Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ，Ｗｅｓｔ  Ｖｉｒｇｉｎｉａ）に移し、ＤＭＦ中１０％ＥｔＮ（ｉＰｒ）２をウェル当たり０．２ｍｌ（ウェル当たりＥｔＮ（ｉＰｒ）２０．２１ｍｍｏｌ）添加し、その後、相当するマスタープレートの適切なアミンの１．０Ｍ溶液をウェル当たり０．１ｍｌ（ウェル当たりアミン０．１ｍｍｏｌ）添加した。合成中はＣＯＭＢＩＣＬＡＭＰＳ（登録商標）に９６ウェル反応プレートを収納することにより、プレートへの試薬の添加および高温で数時間試薬および溶媒を維持する適切な密閉性を達成した。これらのクランプは可変の薬品耐性の密閉用ガスケットを施された上部および底部カバーよりなる。それらは上部および底部のカバーの間に９６ウェルの反応プレートを収容できるように設計されている。反応プレートは密封して１６時間７０〜７５℃のオーブン中に保持した。室温に冷却した後、レジンを濾過し、ＤＣＭ／メタノールの１：１混合物（１×１ｍｌ）、メタノール（２×１ｍｌ）で洗浄し、２時間真空下のデシケーター中で乾燥した。
【００９２】
Ｅ．Ｒｅｄ−Ａｌによる還元
反応プレートをＣＯＭＢＩＣＬＡＭＰＳ（登録商標）中に入れた。Ｒｅｄ−Ａｌ（トルエン中６５＋ｗ％）およびＴＨＦの１：６混合物をウェル当たり０．６ｍｌ（ウェル当たりＲｅｄ−Ａｌ０．２８ｍｍｏｌ）添加し、４時間反応させた。次に各レジンを濾過し、ＴＨＦ（２×１ｍｌ）およびメタノール（３×１ｍｌ）で洗浄した。メタノールの添加は慎重に行う。次に各レジンを真空下で乾燥した。
【００９３】
Ｆ．最終エチレンジアミン化合物の脱離
この工程は、反応プレートから採取プレートに脱離生成物を回収するために設計したテフロンコート済みのアルミニウムの濾過／収集真空マニホルドである脱離マニホルドを用いて行った。マニホルドは受容する９６ウェル収集プレート内の相当するウェルに各ウェルの濾液を指図することができるように設計されている。反応プレート（このマニホルド内の収集プレートの上部に設置）にＴＦＡ、ジクロロメタンおよびメタノールの１０：８５：５混合物を添加した（ウェル当たり混合物０．５ｍｌ）。１５分後、溶液を濾過し、収集プレート上の適切なウェルに収集した。手順を反復した。溶媒をＳＰＥＥＤＶＡＣ（登録商標），Ｈｏｌｂｒｏｏｋ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ上で蒸発させ、残存した試料（ＴＦＡ塩）を更に精製することなく試験した。
【００９４】
（実施例ＩＩ）
デコンボリューション例
活性ウェルのデコンボリューションは、プールする前にアシル化工程の終了時に分取しておいたアーカイブしたα−ハロアセチルアミドレジン（１０レジン、各々０．０５〜０．１０ｇ）から個別の化合物の再合成により行った。各レジンを９６ウェルのフィルタープレートの個別の行（１または２または３など、テンプレート参照）に割り付け、Ｘ列（Ａ、Ｂ、Ｃなど）に分割し、ここでＸは元のスクリーニングプレート内で発見されたヒット数とした。１列の各ウェルに対し、選択したＮ２（Ｒ3Ｒ２ＮＨ）ヒットアミン（０．１ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１８０ｍｌ）およびＥｔＮｉＰｒ２（２０ｍｌ）を添加し、第１の選択したアミンは列「Ａ」のレジンに添加し、第２のアミンは列「Ｂ」のレジンに、第３のアミンは列「Ｃ」のレジン、などに添加した。代表的な９６ウェルフィルタープレートのレイアウトを表４に示す。
【００９５】
反応プレートを密封し、１６時間７０〜７５℃のオーブン中で保持した。室温に冷却した後、レジンを濾過し、ＤＣＭとメタノールの１：１混合物（１×１ｍｌ）、メタノール（２×１ｍｌ）で洗浄し、２時間真空下のデシケーター中で乾燥した。還元および脱離は元の合成プロトコルの工程５および６に従って実施した。脱離により得られた生成物ウェルをＥＳＩ−ＭＳ（エレクトロスプレーイオン化質量スペクトル分析）により分析し、活性物質の名称を確認し、同じＬｕｃおよびＭＩＣ分析において試験した。
【００９６】
【表４】
2005526129.tif 000036
【００９７】
（実施例ＩＩＩ）
ＱＵＥＳＴ（登録商標）２１０シンセサイザーを用いた選択した置換エチレンジアミン化合物の固相合成
実施例Ｉにおいて上記した固相プロトコルを選択した置換エチレンジアミン化合物のスケールアップ合成に適用した。ここでは、Ｒｉｎｋ−ａｃｉｄレジンの活性化から最終生成物の脱離までの全ての反応工程を、２０の平行反応の同時合成が可能なＱＵＥＳＴ（登録商標）機器のみを用いて行った。粗製試料の精製全てはＨＰＬＣにより行い、９０％超の純度で所望の生成物を得た。表３は置換エチレンジアミンのスケールアップを示す。ここでは、活性化合物の１つ、Ｎ−ゲラニル−Ｎ’−（２−アダマンチル）エタン−１，２−ジアミンの合成を一例として以下に記載する。  
Ｎ−ゲラニル−Ｎ’−（２−アダマンチル）エタン−１，２−ジアミン（化合物１０９）の調製を図１２に示す。
【００９８】
【化４】
2005526129.tif 000037
１．Ｒｉｎｋ−ａｃｉｄレジンの活性化。Ｒｉｎｋ−Ｃｌレジンの合成。被覆（リンカー）０．４３〜０．６３ｍｍｏｌ／ｇのＲｉｎｋ−ａｃｉｄレジン（０．８ｇ，０．５ｍｍｏｌ）をＱＵＥＳＴ（登録商標）２１０シンセサイザーの１０ｍｌ試験管の１本にいれ、ＴＨＦで２回洗浄した。ＴＨＦ（３ｍｌ）中のトリフェニルホスフィン（０．３８０ｇ、１．４５ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、その後、ＴＨＦ（３ｍｌ）中のヘキサクロロエタン（０．４ｇ、１．４３ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。ＴＨＦを試験管容量となるまで添加した（約２ｍｌ）。６時間後、レジンを濾過し、ＴＨＦ（２×８ｍｌ）およびジクロロメタン（２×８ｍｌ）で洗浄した。
【００９９】
２．第１のアミンの添加。レジン結合ゲラニルアミンの合成。試験管に活性化したレジンをジクロロエタン３ｍｌ、ＥｔＮ（ｉＰｒ）２（０．３ｍｌ、１．７４ｍｍｏｌ）およびゲラニルアミン（０．２３０ｇ、１．５ｍｍｏｌ）と共に添加した。ジクロロエタンを添加して８ｍｌの容量とした。反応を４５℃で８時間、室温で６〜８時間行った。ゲラニルアミンを充填したレジンを濾過し、ジクロロメタンとメタノールの２：１混合物（１×８ｍｌ）、次いでメタノール（２×８ｍｌ）で洗浄し、アルゴン下で１０分間吸引乾燥した。
【０１００】
３．クロロアセチルクロリドによるアシル化。レジン結合Ｎ−ゲラニル−α−クロロアセトアミドの合成。レジンはＴＨＦ（２×８ｍｌ）で予備洗浄した。試験管にＴＨＦ８ｍｌ、ピリジン（０．３ｍｌ、３．６７ｍｍｏｌ）およびクロロアセチルクロリド（０．２ｍｌ、２．５ｍｍｏｌ）を添加し、４５℃で８時間、室温（ＲＴ）で６〜８時間、攪拌した。反応が完了した後、レジンを濾過し、ジクロロメタンおよびメタノールの２：１混合物（１×８ｍｌ）、メタノール（２×８ｍｌ）およびＴＨＦで洗浄し、そして、同じ試薬の充填で、しかしより短い反応時間、即ち４５℃で４時間、室温で２時間で、アシル化を反復した。終了時にレジンに充填したα−クロロアセトアミドを濾過し、ジクロロメタンとメタノールの２：１混合物（１×８ｍｌ）、メタノール（３×８ｍｌ）で洗浄し、そしてアルゴン下で１５分間吸引乾燥した。
【０１０１】
４．第２のアミンの添加。レジン結合Ｎ−ゲラニル−Ｎ’−（２−アダマンチル）アセトアミドの合成。レジンの入った試験管にＤＭＦ（３ｍｌ）およびＥｔＮ（ｉＰｒ）２（０．６ｍｌ、４．４ｍｍｏｌ）を添加し、その後、ＤＭＦ（４ｍｌ）中に２−塩酸アダマンタミン（２．０ｇ、１．１ｍｍｏｌ）の懸濁液を添加し、１６時間７０〜７５℃で攪拌した。室温に冷却した後、レジンを濾過し、ＤＣＭとメタノールの１：１混合物（１×８ｍｌ）、メタノール（２×８ｍｌ）で洗浄し、アルゴン下で１５分間吸引乾燥した。
【０１０２】
５．Ｒｅｄ−Ａｌによる還元。レジン結合Ｎ−ゲラニル−Ｎ’−（２−アダマンチル）エタン−１，２−ジアミンの合成。得られたレジンを試験管中無水ＴＨＦ（３ｍｌ）中に懸濁し、１５分間攪拌した。トルエン中６５＋ｗ％の市販のＲｅｄ−Ａｌを添加（２．０ｍｌ、６．４ｍｍｏｌ）し、その後無水ＴＨＦ２〜３ｍｌを添加した（試験管の容量を満たすため）。本混合物を４時間反応させた。反応後、レジンを濾過し、ＴＨＦ（１×８ｍｌ）、ＴＨＦとメタノールの１：１混合物（１×８ｍｌ）（ＭｅＯＨの添加は慎重に行う）、メタノール（３×８ｍｌ）で洗浄し、次に乾燥した。
【０１０３】
６．レジンからの脱離および精製。Ｎ−ゲラニル−Ｎ’−（２−アダマンチル）エタン−１，２−ジアミンアセテートの合成。合成のこの最終工程に関し、レジンの入った試験管にＴＦＡとジクロロメタンの１０：９０混合物を添加し、形成した輝赤色の懸濁液を３０分間攪拌した。ＭｅＯＨ（５０ｍｌ）を添加した後、無色の懸濁液を濾過し、濾液を適切な試験管内に収集した。手順を反復し、溶媒をＳＰＥＥＤＶＡＣ（登録商標）を用いて蒸発させた。粗製のＮ−ゲラニル−Ｎ’−（２−アダマンチル）エタン−１，２−ジアミン（トリフルオロ酢酸塩の形態）の半分を以下の条件でＨＰＬＣにて精製した。即ち、カラムＣ１８、流量４ｍｌ／分、３０分流動、勾配開始は５％ＡｃＯＨ／ＭｅＯＨ（１００％）、終了はアセトニトリル（１００％）。得られたもの：Ｎ−ゲラニル−Ｎ’−（２−アダマンチル）エタン−１，２−ジアミンジアセテート２７ｍｇ、収率２４％、ＮＭＲによる純度９８％。
【０１０４】
（実施例ＩＶ）
活性化合物の代表的溶液相合成
塩酸塩（化合物５９）としてのＮ−（シクロオクチル）−Ｎ’−（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−（−）−イソピノカンフェイルエタン１，２−ジアミンの調製を図１３に示す。
【０１０５】
【化５】
2005526129.tif 000038
ブロモシクロオクチルアセチルアミド。０℃の無水ＴＨＦ（８０ｍｌ）中のシクロオクチルアミン（３．３ｇ、０．０２６ｍｏｌ）およびピリジン（２．４２ｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）の混合物にブロモアセチルブロミド（５．７８ｇ、０．０２９ｍｏｌ）を、シリンジを介して滴下した。反応温度はアイスバスにより維持した。反応混合物をゆっくり室温に戻し、１時間室温で攪拌した。沈殿物を濾過して除き、エチルエーテル（１×３０ｍｌ）で洗浄し、濾液をロータリーエバポレーターで濃縮乾固した。ブロモシクロオクチルアセチルアミドは更に精製することなく第２の工程に付した。
【０１０６】
Ｎ−（シクロオクチル）−Ｎ’−（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−（−）−イソピノカンフェイルエタン１，２−ジアミン。ＤＭＦ（６０ｍｌ）中のブロモシクロオクチルアセチルアミドの溶液に、Ｈｕｎｉｇ塩基（４．６４ｇ、０．０３６ｍｏｌ）および（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−（−）−イソピノカンフェイルアミン（４．５ｇ、０．０２９ｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１６時間８０℃で攪拌した。室温に冷却した後、反応混合物をエチルエーテル１５０ｍｌで希釈し、１ＭＮａＯＨ溶液（２×５０ｍｌ）で洗浄した。有機層を塩水（１×５０ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上に乾燥し、ロータリーエバポレーター上で濃縮乾固した。茶色油状物として残存する物質（１１．０４ｇ）はＣＯＭＢＩＦＬＡＳＫ（登録商標）（Ｉｓｃｏ，Ｌｉｎｃｏｌｎ，Ｎｅｂｒａｓｋａ，ＵＳＡ）上で精製し、その際、ＢＩＯＴＡＧＥ（登録商標）（Ｂｉｏｔａｇｅ，Ｉｎｃ，ｏｆ  Ｄｙａｘ  Ｃｏｒｐ、Ｖａ，ＵＳＡ）から市販されているシリカゲルカートリッジを用い、その後の移動相の勾配は、３０分の運転をＤＣＭ１００％で開始し、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ（６００：４００：１０）の混合物で終了した。最終生成物（７．２９ｇ）は茶色油状物として得られた。収率７６％、純度９０％。
【０１０７】
Ｎ−（シクロオクチル）−Ｎ’−（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−（−）−イソピノカンフェイルエタン１，２−ジアミン。無水ＴＨＦ（１６０ｍｌ）中の前工程から得られたアミドの溶液にＴＨＦ（２８ｍｌ，０．０９ｍｏｌ）中の６５ｗｔ％溶液としての市販（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ（登録商標））Ｒｅｄ−Ａｌをシリンジで滴下した。得られた混合物を２０時間還流下で攪拌した。室温に冷却した後、反応混合物を１．５ＭＮａＯＨ（２００ｍｌ）に注ぎ込み、エチルエーテル（２×１００ｍｌ）で抽出した。有機層を塩水（１×１００ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上に乾燥し、ロータリーエバポレーターで蒸発乾固し、茶色油状物として粗生成物７．２ｇを得た。前の工程と同様の装置および条件を用いて粗生成物をクロマトグラフィ精製し、ジアミン３．５ｇを得た。ジアミンをエチルエーテル中のＨＣｌの２．０Ｍ溶液（２５ｍｌ）で処理し、一夜冷蔵庫中に保存した。暗黄色の固体（４．２ｇ）を形成し、これを濾過し、ＭｅＯＨおよびエチルエーテルから再結晶させ、ＨＣｌ塩としてジアミン１．５ｇが得られ（純度は９８％超、ＮＭＲおよびＭＳが可能）、全体収率１９％であった。
【０１０８】
（実施例Ｖ）
質量スペクトル分析
質量スペクトルデータはＳＣＩＥＸ（登録商標）、Ｔｏｒｏｎｔｏ，Ｃａｎａｄａ製のオートサンプラーを接続したＰＥＲＫＩＮ  ＥＬＭＥＲ（登録商標）／ＳＣＩＥＸ（登録商標）、ＡＰＩ−３００，ＴＱＭＳ上でエレクトロスプレーイオン化法により得た。
【０１０９】
Ａ．置換エチレンジアミンのライブラリ
質量スペクトルはエチレンジアミンのライブラリの反応結果をモニタリングするための手段として使用した。質量スペクトルはウェル当たり１０または３０化合物のプールにおいて約２８，０００化合物について反応プレート当たり無作為に選択した２列（２４試料）で行った。即ちウェル当たり１０化合物を合成する場合、各ウェルの質量スペクトルは各化合物につき適切な分子イオンに相関する１０シグナルを含まなければならない。特定のシグナルの有無は特定の合成の実施可能性を示している。質量スペクトルデータおよび種々のアミンの反応性の全般的分析に基く場合、１１２，０００化合物中から６７，０００化合物が形成されたと推定される。
【０１１０】
図１４は１試料ウェルの代表的な質量スペクトルの特徴を示す。代表的なエチレンジアミン化合物の質量スペクトルを図１５に示す。以下に示す表５〜８は代表的な反応ウェルに関する質量スペクトルデータを説明するための例を列挙しており、各ウェルは１０置換エチレンジアミンを含んでいる。
【０１１１】
【表５】
2005526129.tif 000039
【０１１２】
【表６】
2005526129.tif 000040
【０１１３】
【表７】
2005526129.tif 000041
【０１１４】
【表８】
2005526129.tif 000042
【０１１５】
（実施例ＶＩ）
１ＨＮＭＲスペクトル分析
プロトンＮＭＲデータはＶＡＲＩＡＮ（登録商標）核磁気共鳴スペクトル分析器（Ｐａｌｔｏ  Ａｌｔｏ，  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）上において５００ＭＨｚで記録した。
【０１１６】
代表的な置換エチレンジアミンをＨＰＬＣで精製し、プロトンＮＭＲで分析した。代表的なプロトンＮＭＲの特徴を図１６に示す。一部の代表的なヒット化合物のＮＭＲおよびＭＳデータを以下に示す。
【０１１７】
化合物６
Ｎ２−（１−アダマンチルメチル）−Ｎ１−（３，３−ジフェニルプロピル）プロパン−１，２−ジアミン。
【０１１８】
【化６】
2005526129.tif 000043
化合物７
Ｎ−（３，３−ジフェニルプロピル）−Ｎ’−（１−アダマンチルメチル）エタン−１，２−ジアミン。
【０１１９】
【化７】
2005526129.tif 000044
化合物１０
Ｎ−（−）−ｃｉｓ−ミルタニル−Ｎ’−（３，３−ジフェニルプロピル）エタン−１，２−ジアミン。
【０１２０】
【化８】
2005526129.tif 000045
化合物１４
Ｎ−（３，３−ジフェニルプロピル）−Ｎ’−ｅｘｏ−（２−ノルボルニ）エタン−１，２−ジアミン。
【０１２１】
【化９】
2005526129.tif 000046
化合物２１
Ｎ−（３，３−ジフェニルプロピル）−Ｎ’−（１Ｓ）−（１−エチルシクロヘキサン）エタン−１，２−ジアミン。
【０１２２】
【化１０】
2005526129.tif 000047
化合物３２
Ｎ−（２，２−ジフェニルエチル）−Ｎ’−（Ｒ）−（＋）−ボルニルエタン−１，２−ジアミン。
【０１２３】
【化１１】
2005526129.tif 000048
化合物３４
Ｎ−（２，２−ジフェニルエチル）−Ｎ’−（１−アダマンチルメチル）エタン−１，２−ジアミン。
【０１２４】
【化１２】
2005526129.tif 000049
化合物３７
Ｎ−（２，２−ジフェニルエチル）−Ｎ’−（−）−ｃｉｓ−ミルタニルエタン−１，２−ジアミン。
【０１２５】
【化１３】
2005526129.tif 000050
化合物３８
Ｎ−（−）−ｃｉｓ−ミルタニル−Ｎ’−（２，２−ジフェニルエチル）プロパン−１，２−ジアミン。
【０１２６】
【化１４】
2005526129.tif 000051
化合物４０
Ｎ−（２，２−ジフェニルエチル）−Ｎ’−（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−（−）−イソピノカンフェイルエタン−１，２−ジアミン。
【０１２７】
【化１５】
2005526129.tif 000052
化合物４７
Ｎ−（−）−ｃｉｓ−ミルタニルエタン−Ｎ’−（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−（−）−イソピノカンフェイルエタン−１，２−ジアミン。）
【０１２８】
【化１６】
2005526129.tif 000053
化合物５２
Ｎ−（３，３−ジフェニルプロピル）−Ｎ’−シクロオクチルエタン−１，２−ジアミン。
【０１２９】
【化１７】
2005526129.tif 000054
化合物５５
Ｎ−（１−アダマンチルメチル）−Ｎ’−シクロオクチルエタン−１，２−ジアミン。
【０１３０】
【化１８】
2005526129.tif 000055
化合物５７
Ｎ−（−）−ｃｉｓ−ミルタニル−Ｎ’−（シクロオクチル）エタン−１，２−ジアミン。
【０１３１】
【化１９】
2005526129.tif 000056
化合物５８
Ｎ−（２−アダマンチル）−Ｎ’−シクロオクチルエタン−１，２−ジアミン。
【０１３２】
【化２０】
2005526129.tif 000057
化合物５９
Ｎ−（シクロオクチル）−Ｎ’−（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−（−）−イソピノカンフェイルエタン−１，２−ジアミン。
【０１３３】
【化２１】
2005526129.tif 000058
化合物６２
Ｎ−（−）−ｃｉｓ−ミルタニル−Ｎ’−（１Ｓ）−（１−エチルシクロヘキサン）エタン−１，２−ジアミン。
【０１３４】
【化２２】
2005526129.tif 000059
化合物６５
Ｎ−ｔｒａｎｓ−（２−フェニルシクロプロピル）−Ｎ’−（１−アダマンチル）エタン−１，２−ジアミン。
【０１３５】
【化２３】
2005526129.tif 000060
化合物６６
Ｎ−（３，３−ジフェニプロピル）−Ｎ’−（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−（−）−イソピノカンフェイルエタン−１，２−ジアミン。
【０１３６】
【化２４】
2005526129.tif 000061
化合物７３
Ｎ−（２−アダマンチル）−Ｎ’−［２−（２−メトキシフェニル）エチル］エタン−１，２−ジアミン。
【０１３７】
【化２５】
2005526129.tif 000062
化合物７８
Ｎ−２−アダマンチル−Ｎ’−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル−エタン−１，２−ジアミン。
【０１３８】
【化２６】
2005526129.tif 000063
化合物１０９
Ｎ−ゲラニル−Ｎ’−（２−アダマンチル）エタン−１，２−ジアミン。
【０１３９】
【化２７】
2005526129.tif 000064
化合物１１１
Ｎ−ゲラニル−Ｎ’−（２−エチルピペリジン）エタン−１，２−ジアミン。
【０１４０】
【化２８】
2005526129.tif 000065
化合物１１６
Ｎ−ゲラニル−Ｎ'−アリル−Ｎ'−（シクロペンチル）エタン−１，２−シアミン
【０１４１】
【化２９】
2005526129.tif 000066
化合物１１７
Ｎ−ゲラニル−Ｎ’−ジフェニルメチルエタン−１，２−ジアミン。
【０１４２】
【化３０】
2005526129.tif 000067
化合物１２５
Ｎ，Ｎ’−ｂｉｓ−（−）−ｃｉｓ−ミルタニルプロパン−１，２−ジアミン。
【０１４３】
【化３１】
2005526129.tif 000068
化合物１５１
Ｎ−［２−（２−メトキシ）フェニルエチル］−Ｎ’−（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−（−）−イソピノカンフェイル−エタン−１，２−ジアミン。
【０１４４】
【化３２】
2005526129.tif 000069
Ｎ−２−（２−メトキシフェニル）エチル−Ｎ’−アリル−Ｎ’−シクロペンチル−エタン−１，２−ジアミン。
【０１４５】
【化３３】
2005526129.tif 000070
Ｎ２−（３−フェニルプロピル）−Ｎ１−［２−（４−フルオロフェニル）エチル］−１−フェニルエタン−１，２−ジアミン。
【０１４６】
【化３４】
2005526129.tif 000071
【０１４７】
（実施例ＶＩＩ）
Ｍ．ツベルクロシスＲｖ０３４１ｐのＬｕｃｓ薬剤応答
本明細書に記載する置換エチレンジアミンを、Ｒｖ０３４１ＥＭＢ誘導プロモーターとルシフェラーゼのプロモーター融合を含む組み換えマイコバクテリアによるハイスループットスクリーニングアッセイを用いて、マイコバクテリウム・ツベルクロシスに対する試験を行った。この試験は化合物の混合物および／または個々の化合物における抗マイコバクテリア活性を迅速かつ高い信頼性をもって特定する。本試験においては、活性化合物または活性化合物の混合物に対してマイコバクテリアを試験する場合に生物発光が増大する。本試験の間、各未精製の置換ジイソプロピルエーテルについて理論値の収率は１００％と予測され、各試料の活性を市販のエタンブトール（９９．０％純度）と比較した。結果は３．１μＭのＥＭＢの活性に基いて、ＬＣＰＳおよび％Ｍａｘ．ＬＣＰＳで記載した。
【０１４８】
置換エチレンジアミンを以下の操作法に従って分析した。ジアミンは高速真空下で乾燥し、ウェル当たり約６．３ｍｍｏｌの濃度とした。次に各ジアミンまたはジアミン混合物を３１．５ｍＭジアミンの濃度となるようにメタノール２００μｌ中に再懸濁または溶解した。ジアミン溶液を７Ｈ９ブロス培地中２００μＭの濃度に希釈した（３１．５ｍＭ保存溶液の１：１５．７５希釈の後、１：１０希釈、各希釈は７Ｈ９ブロス培地により行う）。次に、希釈したジアミン溶液５０μｌを不透明な９６ウェルプレートの１２のうち、１列目の第１のウェルに添加した。７Ｈ９ブロス培地２５μｌを列の残余のウェル（＃２〜１２）の各々に添加した。「ウェル１」中のジアミン溶液を「ウェル１」から「ウェル２」へ２５μｌを移行させ、２５μｌの移行を「ウェル２」から「ウェル３」へ、そしてその後も同様に「ウェル１１」まで繰り返すことにより連続希釈した。「ウェル１１」において、過剰な２５μｌの溶液を廃棄した。「ウェル１２」はレポーター菌株のバックグラウンド活性を評価するための生育対照として使用した。次にプレートを被覆し２４時間３７℃でインキュベートした。分析直前に以下の基質、即ち、５０ｍＭＨＥＰＥＳｐＨ７．０および０．４％トリトンＸ−１００を含有する緩衝液を調製した。次に１ＭのＤＴＴ０．２５ｍｌおよびＤＭＳＯ中１０ｍｇ／ｍｌルシフェリン１４μｌを緩衝液５ｍｌに添加した。この最終溶液（５０μｌ）をインキュベーション期間終了直後に１２ウェルの各々に添加した。各ウェルのルミネセンスをＴＯＰＣＯＵＴ（登録商標）（Ｄｏｗｎｅｒｓ，Ｇｒｏｖｅ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）ＮＸＴルミノメーター（５５／ウェル）を用いてルシフェリン基質添加２０分後に測定した。
【０１４９】
図６〜８は９６ウェルのライブラリプレートの１２ウェル（１列）の連続希釈によるＲｖ０３４１ＥＭＢ誘導プロモーターを含むルシフェラーゼレポーター株に関する典型的な試験データを示す。図１０は３．１μＭのエタンブトールの活性に基いて、少なくとも１０％のルシフェラーゼ活性を有する置換エチレンジアミンの数を示す。
【０１５０】
図６はＲｖ０３４１ＥＭＢ誘導プロモーターを含むルシフェラーゼレポーター株における典型的な試験データを示す。データは９６ウェルのライブラリの１列（列Ｄ）の化合物混合物に関するＨＴＳＬｕｃ試験で得られた値を示す。列Ｄは数回の連続希釈に付した。試験における化合物混合物の有効性はルミネセンスの強度により測定し、そして、３．１μＭのエタンブトール（強度１００％、純度９９％）と比較した。図６における各曲線は１ウェル、または１０化合物を示す。結果は秒当たりの％最大ルミネセンスカウントとして記載する（％Ｍａｘ．ＬＣＰＳ）。スクリーニングの間、未精製の各化合物について理論値で１００％の化学収率が予測された。濃度は単一の化合物に対するものである。この初期のスクリーニングに基く場合、３００＋の化合物混合物が抗ＴＢ活性を示した。
【０１５１】
（実施例ＶＩＩＩ）
代表的なＭＩＣ実験
最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）は播種した細胞の複製が起こらない生育抑制剤、ここでは置換エチレンジアミンの濃度である。ミクロ希釈法を用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏでマイコバクテリウム・ツベルクロシスの生育を抑制することができる置換エチレンジアミンのＭＩＣを測定した。代表的なＭＩＣ実験においては、細菌であるマイコバクテリウム・ツベルクロシス（Ｍ．ｔｂ）のＨ３７ＲＶ株を６００ｎｍで０．２のＯＤ（光学密度）となるまで７Ｈ９培地中で培養した。次に細菌培養物を７Ｈ９培地で１：１００希釈した。イソニアジドおよびエタンブトールの保存溶液を各々７Ｈ９培地中３２μｇ／ｍｌに調製した。イソニアジドおよびエタンブトールの３．２ｍｇ／ｍｌ溶液を各々水溶液中に調製した。次に本溶液を濾過し、７Ｈ９培地中１：１００に希釈した。Ｓｉｇｍａより購入した各薬剤は「実験室専用」の等級であった。各置換エチレンジアミンの１０ｍＭ溶液をメタノール中に調製した。次に、７Ｈ９培地１００μｌを９６ウェルプレート（列（Ａ〜Ｈ）ｘ行（１〜１２）の各ウェルに添加した。列Ｃ〜Ｈの第１のウェルに更に７Ｈ９培地８０μｌを添加した。イソニアジド溶液１００μｌをウェルＡ１に添加し、エタンブトール溶液１００μｌをウェルＢ１に添加した。６種の置換エチレンジアミン各々２０μｌをウェルＣ１〜Ｈ１（行１）にそれぞれ添加した。各置換エチレンジアミンおよびイソニアジドおよびエタンブトールの連続希釈は各列にわたり行った。例えば、列Ｃ１〜Ｃ１２にわたる連続希釈は前のウェルの１００μｌを混合して次の隣接ウェルに移行させることにより行った。「行１２」における各ウェル中には、最終希釈物の１００μｌを廃棄した。次にＭ．ｔｂの希釈Ｈ３７Ｒｖ菌株１００μｌを各ウェルに添加した。次に９６ウェルプレートを被覆し、１０日間３７℃でインキュベートした。反転プレートリーダーを用いてプレートの細菌生育または非生育を読み取った。ＭＩＣはＭ．ｔｂの目視可能な生育を抑制した置換エチレンジアミンの最小濃度として求めた。
【０１５２】
各ウェルの濃度を列挙した代表的なプレートレイアウトを表９に示す。表１０には選択した化合物のＭＩＣおよびＬＤ５０のデータを示す。ＬＤ５０は細胞（Ｍ．ｔｂのＨ３７Ｒｖ菌株）の５０％が殺傷される置換エチレンジアミンの濃度である。表１１はエタンブトール（ＥＭＢ）と比較した場合の精製置換エチレンジアミンのＭＩＣデータを列挙したものである。図９は種々の濃度水準におけるＭＩＣ活性を有する置換エチレンジアミン化合物の数を示す。
【０１５３】
【表９】
2005526129.tif 000072
【０１５４】
【表１０】
2005526129.tif 000073
上記した操作法を用いてバッチ化された化合物（ウェル当たり１０化合物）も調べた。置換エチレンジアミンの合成バッチを高速真空下で乾燥し、ＤＭＳＯまたは滅菌水中に２．５ｍｇ／ｍｌの濃度で再懸濁した。
【０１５５】
【表１１】
2005526129.tif 000074
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【０１５６】
（実施例ＩＸ）
薬剤耐性患者単離株に対する置換エチレンジアミンの二次スクリーニングおよび評価
二次スクリーニングは３臨床耐性ＭＤＲ患者単離株に対する置換エチレンジアミン化合物の活性を調べるためにこれらの一部に対して行った。ＭＤＲの菌株ＴＮ５７６はＷ１株（ＳＴＰＲ、ＩＮＨＲ、ＲＩＦＲ、ＥＭＢＲ、ＥＴＨＲ、ＫＡＮＲ、ＣＡＰＲ）として分類され、菌株ＴＮ５８７はＷ株（ＳＴＰＲ、ＩＮＨＲ、ＲＩＦＲ、ＥＭＢＲ、ＫＡＮＲ）として分類され、そして、第３の菌株ＴＮ３０８６はＷ株（ＳＴＰＲ、ＩＮＨＲ、ＲＩＦＲ、ＥＭＢＲ、ＫＡＮＲ）として分類される。各ＭＤＲ菌株はエタンブトールに対して高度な耐性を示し、ＭＩＣ値は１２．５〜２５μＭを超える。以下の置換エチレンジアミン、ＭＰ１１６、ＭＰ１１７、ＲＬ２４１、化合物＃５９および＃１０９に関するＭＩＣを３患者単離株全てについて測定した。
【０１５７】
【化３５】
2005526129.tif 000077
【０１５８】
【化３６】
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【０１５９】
【化３７】
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【０１６０】
【化３８】
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【０１６１】
【化３９】
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本試験の結果を表１２〜１３に示す。表１４は各ＭＤＲ菌株をその耐性によって特性化したものである。
【０１６２】
【表１２】
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【０１６３】
【表１３】
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【０１６４】
【表１４】
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【０１６５】
（実施例Ｘ）
ｉｎ  ｖｉｖｏ動物試験
動物モデルを薬剤発見サイクルの最終段階において使用することにより、ヒトの疾患状態の代表的な系におけるいくつかの置換エチレンジアミン化合物の抗微生物効果を評価した。ｉｎ  ｖｉｖｏ試験では、Ｍ．ツベルクロシスＨ３７Ｒｖの約２００コロニー形成単位を含むエアロゾルを用いて４匹の６週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスに接種した。
【０１６６】
Ａ．ＣＦＵ肺試験
Ｍ．ツベルクロシスＨ３７Ｒｖでエアロゾル処置したマウスを接種後１０〜１２週後に検査した。薬剤（置換エチレンジアミン）は感染後１４日目または２１日目に開始し、食道カニューレ（胃管栄養法）を介して７日間／週の頻度で投与した。群当たりマウス５匹の肺における細菌数を約１週間の間隔で生存コロニー計数により測定した。被験薬剤は第一選択抗結核剤のイソニアジドと、そして第二選択薬剤エタンブトールと直接比較した。イソニアジドおよびエタンブトールはそれぞれ２５ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇで試験した。置換エチレンジアミンである化合物３７、化合物５９および化合物１０９は各々１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇで試験した。図１７〜１９は３つの独立したＣＦＵ肺試験のデータを示す。各試験において、回収可能で培養可能であるコロニー形成単位（ＣＦＵ）の数を種々の時間間隔（日数）で測定した。
【０１６７】
Ｂ．病変試験  
化合物５９および化合物１０９が細菌荷重による肉視的病態の進行を防止する能力をＣＦＵ／肺試験と組み合わせて測定した。肉視的病態は肺表面の病変を目視可能な計量により測定した。検査による計量はＣＦＵ測定のための良好な代替法であり、実際のコロニー形成単位により測定される細菌荷重と直接相関している。病変はまず目視により検査し、次に肺を処理してプレーティングし、ＣＦＵ定量に付した。病変試験は疾患としての病変の進行を防止する薬剤の能力を示すものである。図２０は病変試験のデータを示す。相当するＣＦＵの結果は図１９に示す。
【０１６８】
Ｃ．毒性試験  
毒性は用量漸増試験により測定した。本試験は候補当たり１０匹のＣ５７ＢＬ／６マウスを用いて行った。２日おきにマウスに漸増濃度の薬剤を投与し、悪影響がないかどうかモニタリングした。投与スキームは５０、１００、２００、４００、６００、８００および１０００ｍｇ／ｋｇとした。１０００ｍｇ／ｋｇの最大限度は用量漸増の最終値および担体中の薬剤の溶解度に基いている。化合物３７は１００ｍｇ／ｋｇでマウスにおいて毒性を示した。化合物５９および１０９はそれぞれ１０００ｍｇ／ｋｇおよび８００ｍｇ／ｋｇでマウスにおいて忍容性を示した。
【０１６９】
上記は本発明の好ましい実施形態にのみ関するものであり、多くの変更または改変が本発明の考え方および範囲を逸脱することなく可能である。本明細書に記載した参考文献の各々はその全体が参照として本明細書に組み入れられる。
【０１７０】
（実施例ＸＩ）
ヒット化合物のｉｎ  ｖｉｔｒｏ毒性および選択性指数
２６化合物（３７、５９および１０９を含む）を当該分野でよく知られた方法により、モンキー腎臓細胞（Ｖｅｒｏ）およびヒト頚部癌細胞（ＨｅＬａ）を用いながら、毒性のｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルにおいて試験した。この毒性試験のデータおよびＭＩＣデータを用いて選択性指数（ＳＩ）、即ちＩＣ５０：ＭＩＣの比を計算した（表１５）。選択性指数は１．７６〜１６．６７であった。化合物１０９は最高値の選択性指数を有していた。
【０１７１】
【表１５】
2005526129.tif 000085
【０１７２】
（実施例ＸＩＩ）
エタンブトール類似体のｉｎ  ｖｉｖｏ効果
化合物５８、５９、７３、１０９および１１１を選択してＴＢのマウスモデルにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ効果試験に付した。化合物５８および５９はその分子内に同じシクロオクチルフラグメントを共有しており、化合物５８、７３および１０９はあくまで一部分を共有しており、そして、１０９および１１１はゲラニルフラグメントを共有している（図２２）。
【０１７３】
これらの試験において、８週齢の近親交配雌性マウスＣ５７ＢＬ／６にＭ．ツベルクロシスを静脈内感染させた。感染３週後、薬剤治療を開始した（詳細なプロトコルを記載する）。薬剤は胃管栄養法により経口で投与した。マウスは３時点（感染後１５日目、３０日目および４５日目）に屠殺し、脾臓および肺のＣＦＵを測定した（図２３および２４）。これらの試験によれば、化合物１０９は１００ｍｇ／ｋｇのエタンブトールの活性と同等の活性を１および１０ｍｇ／ｋｇの用量で有していた。
【０１７４】
材料および方法
マウス：８週齢の雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウスはＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  （Ｒａｌｅｉｇｈ，ＮＣ）より購入し、ＢＩＯＣＡＬ，  Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）のＢＳＬ−２施設で飼育し、感染前少なくとも４日間馴化させた。
マイコバクテリア：一例のＭ．ツベルクロシスＨ３７ＲｖＰａｓｔｅｕｒの凍結および解凍したものを０．５％ＢＳＡおよび０．０５％ツイーン８０を添加した７Ｈ１０ブロス培地５ｍｌに添加し、３７℃で１週間インキュベートし、次に、１ｍｌを培地２５ｍｌに添加した（２週間で２回目の継代）。培養物を２回洗浄し、０．５％ＢＳＡおよび０．０５％ツイーン８０中に再懸濁し、細分して−８０℃で凍結した。培養物のＣＦＵを測定するために細分物を解凍し、１０倍希釈物を寒天７Ｈ９上にプレーティングし、ＣＦＵ計数を２０日後に計算した。
感染：培養物の凍結試料を解凍し、約１０６ＣＦＵ／ｍｌの濃度に希釈した。ＰＢＳ０．２ｍｌ中の相当する用量において外側尾部静脈よりＭ．ツベルクロシスＨ３７Ｒｖを静脈内感染させた。
抗微生物剤：ＩＮＨ、ＥＭＢ、エタンブトール類似体。
薬剤治療プロトコル：化合物のマウスへの治療は感染の２０日後に開始した。化合物を水溶液中１０％エタノールに溶解し、胃管栄養法により投与した（マウス当たり０．２ｍｌ）。治療は一週間に５日間行い、４または６週間継続した。化学療法開始の２、４および６週間後、マウス（群当たり６匹）を屠殺し、肺および脾臓を摘出し、０．０５％ツイーン８０含有ＰＢＳ２ｍｌ中で滅菌ホモジナイズした。ホモジネートを７Ｈ１０寒天皿上に連続希釈してプレーティングし、３７℃でインキュベートした。ＣＦＵ計数は３週間後に計算した。
統計学的分析：臓器におけるＣＦＵの結果を分析するために、ＡＮＯＶＡ試験を実施し；有意差をスチューデントのｔ検定により推定し、ｐ＜０．０５を統計学的有意とみなした。
【０１７５】
結果
新規化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ活性：これらの化合物の活性を図２１〜２４に示す。図２１（脾臓）および２２（肺）において示される実験において、マウスを５×１０５ＣＦＵのＭ．ツベルクロシスＨ３７Ｒｖに感染させ、感染の２０日後に化学療法を開始した。マウスにはＩＮＨ（２５ｍｇ／ｋｇ）、ＥＭＢ（１００ｍｇ／ｋｇ）、化合物７３および１０９（共に１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ）を投与した。結果によれば、脾臓においては、化合物７３および１０９は１００ｍｇ／ｋｇのＥＭＢと同等の活性を有していた（図２１）。脾臓においては、１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇにおけるこれらの化合物の活性の間に統計学的有意差は認められなかった。肺においては、１０ｍｇ／ｋｇの濃度の化合物１０９は４および６週間後において、１００ｍｇ／ｋｇのＥＭＢよりも有効であった。肺においては、１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇの濃度の化合物１０９について統計学的有意差がみとめられた（図２２）。ＩＮＨは脾臓および肺の両方において最も高い活性を示した。
【０１７６】
化合物７３および１０９はまた、感染濃度を高くしてより短期のモデルにおいて試験した（図２３および２４）。マウスには５×１０６ＣＦＵのＭ．ツベルクロシスＨ３７Ｒｖを感染させ、感染の１５日後に化学療法を開始した。マウスにはＩＮＨ（２５ｍｇ／ｋｇ）、ＥＭＢ（１００ｍｇ／ｋｇ）、化合物１０９（０．１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇおよび２５ｍｇ／ｋｇ）、５８、７３および１１１（全て２５ｍｇ／ｋｇ）で処理した。マウスには４週間処理した。脾臓および肺の両方において、１０ｍｇ／ｋｇおよび２５ｍｇ／ｋｇの濃度の化合物１０９は１００ｍｇ／ｋｇのＥＭＢと同等の活性を有しており、０．１ｍｇ／ｋｇの濃度では未投与の対照と比較して最小限ではあるが十分な差が治療４週間後に現れた（図２３および２４）。化合物７３（２５ｍｇ／ｋｇ）と１０９（２５ｍｇ／ｋｇ）との間には統計学的有意差が認められた。肺においては、これらの化合物の活性の間に有意差はみとめられなかった。化合物５８および１１１は脾臓および肺の両方でｉｎ  ｖｉｖｏ活性を示したが、しかしながら、化合物７３および１０９が好ましい。これらの実験の結果によれば、化合物７３および１０９は低濃度において１００ｍｇ／ｋｇのＥＭＢと同等の活性を示し、場合によっては化合物１０９のほうがより高い活性を示した。
【０１７７】
化合物１１１および５９の試験は５×１０５ＣＦＵのＭ．ツベルクロシスＨ３７Ｒｖに感染させたＢ６マウスにおいて実施し、感染の２０日後に化学療法を開始した（図２５および２６）。両方の化合物とも、１００ｍｇ／ｋｇのＥＭＢに匹敵する抗結核活性を１０ｍｇ／ｋｇの濃度で示した。
【０１７８】
全実験において、ＩＮＨはＥＭＢおよび他の化合物より高値の活性を示し、化学療法の４〜６週間中、２〜３ｌｏｇ臓器中の細菌数を低減し；ＥＭＢ（１００ｍｇ／ｋｇ）に類似した新しい化合物は１．０〜２．０ｌｏｇで細菌数を低減した。試験した化合物のうち、臓器中のマイコバクテリアの最大の低減能力、および、毒性および薬物動態のパラメーターの観点から、７３および１０９が最も好ましかった。
【０１７９】
（実施例ＸＩＩＩ）
ｉｎ  ｖｉｖｏ毒性
マウスにおける予備用量加速試験によれば、化合物１０９は８００ｍｇ／ｋｇまで、化合物５９は１０００ｍｇ／ｋｇまでの用量で良好な忍容性を示している。化合物３７は１００ｍｇ／ｋｇの用量で致死性が認められた（Ｃｌｉｆ  Ｂａｒｒｙ，ＮＩＡＩＤ，未公表データ）。
【０１８０】
化合物１０９は５種の用量において二塩酸塩の形態で最もよく用いられており、化合物３７は２用量において塩酸塩の形態でのみ使用されている。
【０１８１】
マウスには胃管栄養法により１００、３００または１０００ｍｇ／ｋｇの濃度で化合物を単回投与した。各化合物の各用量につき１群３匹のマウスを用いた。マウスのモニタリングは実験期間中１日２回行った。薬剤投与後１週間生存したマウスは屠殺し；重要な臓器を無菌的に摘出し、異常および薬剤毒性の効果がないかどうか調べた。ＭＴＤ（ｍｇ／ｋｇ）は致死性／組織異常が認められなかった最高用量である。
【０１８２】
方法：
１．マウスへの処理：Ｃ５７ＢＬ／６雌性マウス（６〜８週齢）に胃管栄養法により１００、３００または１０００ｍｇ／ｋｇの濃度で化合物を単回投与する。化合物は蒸留水中適切な濃度のエタノールに溶解し、マウス当たり０．２ｍｌの容量で投与する。
２．マウスの観察：マウスは投与後４および６時間、その後は一週間にわたり１日２回観察する。マウスの生存および体重は試験期間中を通じて緊密にモニタリングする。
３．薬剤毒性の評価：何らかの異常な外観または挙動の徴候を示すマウス、または、他のマウスが第７日まで生存しなかった群に残存していたものは薬剤毒性の評価のために屠殺する。重要な臓器を無菌的に摘出して観察し、肝臓、心臓および腎臓の組織を採取し、１０％ホルマリン溶液中に入れる。これらの固定した組織を切片化し、薬剤毒性に起因する異常がないかどうか調べる。
【０１８３】
上記試験によれば、化合物１０９の最大忍容用量は６００ｍｇ／ｋｇである（表１６）。臓器には目視可能な変化は観察されない。用量８００ｍｇ／ｋｇは致死量であり；３匹一群のマウスのうちの２匹は３日以内に死亡した（表１７）。化合物３７は１００および３００ｍｇ／ｋｇの用量で良好な忍容性を示した。臓器の目視可能な変化は観察されなかった。化合物３７の最大忍容用量およびｉｎ  ｖｉｖｏでの効果を評価するためのさらなる実験が行われている。
【０１８４】
【表１６】
2005526129.tif 000086
【０１８５】
【表１７】
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【０１８６】
（実施例ＸＩＶ）
化合物３７、５９および１０９の薬物動態試験
当初は全てのＰＫ実験を実施できるような化合物の分析測定方法が開発され、図２９に示すとおりであった。ここでは実験について概説すると、（１）血漿を被験化合物でスパイクし、テルフェナジン１０μｌまたは血漿試料（２００μｌ）を添加し；（２）ＡＣＮ（２ｍｌ）を沈殿蛋白に添加し、２５００ｒｐｍで回転し；（３）上清を蒸発乾固し；（４）希釈溶媒、即ちメタノール（トリフルオロ酢酸０．１％添加）：酢酸アンモニウム（８０／２０）２００μｌを添加し；（５）攪拌し、高速回転混合して上清を使用し；（６）ＳｃｉｅｘＡＰＩ３０００上でＬＣ／ＭＳ／ＭＳを行う。
【０１８７】
血漿中の化合物の生体安定性試験は１および１５ｍｇ／ｍｌの濃度を用いて行った。化合物を３７℃で１、２、３および６時間インキュベートした（表１８）。更に、被験化合物は全て血漿中では２４℃でｐＨ２および７．４において２４時間まで安定であることがわかった。
【０１８８】
【表１８】
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マウス中の化合物３７、５９および１０９のパイロットＰＫ試験をカセット投薬を用いて実施した。３つの類似体全てを１．５ｍｇ／ｍｌで食塩水中に製剤し、マウスに対し、２５ｍｇ／ｋｇで経口、６ｍｇ／ｋｇで腹腔内そして静脈内に同時投与した。１５および７．５ｍｇ／ｋｇの用量でマウスは死亡し、３．７５ｍｇ／ｋｇが投与直後昏睡状態が見られたが、その数分後には正常な外観となった；３ｍｇ／ｋｇでは拒絶反応を示さず、従って静脈内投与として使用した。得られたデータを図３０、３１および３２に示し（被験化合物はＮＣＩインデックスのＮＳＣの下で試験）、そして表１９に総括した。
【０１８９】
【表１９】
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実施した薬物動態試験によれば、化合物５９（ＮＣＩインデックスではＮＳＣ７２２０４０）は相対的に不良なＰＫのプロフィール（ＡＵＣ、Ｃｍａｘ）を有しており、この化合物のその後の試験は中止した。予備毒性データに基いた場合でもやはり化合物３７は候補から除外された。従って、化合物１０９（ＮＣＩによればＮＳＣ７２２０４１）をその後のさらなるＰＫ分析のために選択した。
【０１９０】
化合物ＳＱ１０９は静脈内または経口投与した場合に血漿中のその最小殺菌濃度ＭＢＣ（３１３ｎｇ／ｍｌ）に到達して上回り、半減期は５．２時間、そして肝血流より小さい総クリアランスを有している（図３３、表２０）。
【０１９１】
【表２０】
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その経口生体利用性は経口投与時には僅か３．８％であるが、これはその独特の組織分布パターンにより説明できる。組織分布試験によれば、ＳＱ１０９は主に肺および脾臓に分布（図３４および３５）し、これは肺の疾患として特徴的に顕在化する感染症に対しては極めて好都合なものである。
【０１９２】
超遠心分離法を用いることにより、化合物１０９と結合する血漿の蛋白質は濃度依存性であり、そして、１５％（２０ｎｇ／ｍｌ）〜７４％（２００ｎｇ／ｍｌ）〜４８％（２０００ｎｇ／ｍｌ）に渡って変動することがわかった。静脈内投与（３ｍｇ／ｋｇ）の後、化合物は７０．６：２９．４の比で血漿および赤血球に分布する。
【０１９３】
排出（尿および糞）後の化合物の総量が供給用量の３％を超えていないため、身体内での化合物の消長については殆ど不明である（表２）。
【０１９４】
【表２１】
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尿中の化合物１０９の代謝産物を同定するための初期の試みでは図３６に示すとおり分解生成物の痕跡が得られなかった。例えば、図３７に示すとおり化合物投与後の最初の２４時間中でのマウス尿中には共役した代謝産物（Ｍ＋５２１）の形成に関する痕跡が得られなかった。共役した代謝産物はグルクロン酸との反応により形成される典型的な代謝経路Ｎ−グルクロニド化の産物である（Ｄ．Ａ．Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｔ．Ｌ．Ｌｅｍｋｅ，  Ｆｏｙｅ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐａｌｓ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ５ｔｈ  Ｅｄ．，ｐ．２０２）。
【０１９５】
（実施例ＸＶ）
化合物１０９のｉｎ  ｖｉｔｒｏ薬物動態試験 
化合物１０９のｉｎ  ｖｉｔｒｏ薬理学および早期ＡＤＭＥＴ（吸収、分布、代謝、排出、毒性）の試験は、サービスアグリーメント（役務契約）の元でＣＥＲＥＰ（１５３１８  ＮＥ  ９５ｔｈ  Ｓｔｒｅｅｔ，  Ｒｅｄｍｏｎｄ，  ＷＡ  ９８０５２，  ＵＳＡ，  ｗｗｗ．ｃｅｒｅｐ．ｃｏｍ，  ｔｅｌ４２５  ８９５  ８６６６）に受託し、３０種の標準的受容体に対する試験を含むものであった（ＣＥＲＥＰの表２２および２３参照、図３８および３９に掲載、５種のＣＹＰ４５０酵素、ｈＥＲＧ（Ｋ＋チャンネル）、水溶性、推定腸内透過性、および、代謝安定性（データは図４０、表２４（ａ−ｍ）に示す）。
【０１９６】
（実施例ＸＶＩ）
ビス（２−アダマンチル）エチレンジアミン、ＳＱＢｉｓＡｄ
【０１９７】
【化４０】
2005526129.tif 000092
１０９、５８、７３、７８のような最良の選択指数（表１５）および良好なｉｎ  ｖｉｖｏのデータを有する化合物は同じアダマンタンフラグメントを共有している（図２０）。このフラグメントを単に持つ（エチレンリンカーの両側で）と考えられる化合物について検討することとした。エタンブトール類似体の標的１００，０００化合物ライブラリを調製する間、７０，０００化合物の生成が判明したが、３０，０００化合物は失敗した。この特定の化合物は当初は検出されなかったが、おそらく、極めて低収率で合成されたか、または、立体的要因により形成されることがなかったためである。
【０１９８】
ライブラリスキーム１（図４１）の調製のために使用した合成スキームにおいて、第２工程の立体障害アミンは殆ど生成物を与えなかった。多数の元のプレートに関するＭＳデータを分析すると、Ｒ１ＮＨ２として使用した場合の２−アダマンタミンは所望の生成物を与えることは殆どなく、そして、このことは、合成スキーム２の工程２または工程３において立体障害反応部位が存在することによると説明できる（図４１）。
【０１９９】
化合物ＳＱＢｉｓＡｄはスキーム３（図４１）に示す通り同じ経路を用いた「ウエット化学（ｗｅｔ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」により調製でき、２−アダマンタミン（市販の塩酸塩として使用）が１および２工程で使用された場合に生成物を与えることが立証できる。対称性のため、この化合物は代替の経路で合成することができる。本発明者等はシアノボロ水素化ナトリウムを用いた２−アダマンタノンによるエチレンジアミンの還元的アルキル化によりＳＱＢｉｓＡｄを調製した。最終生成物（更に精製せず）は化合物１０９と同等以上のＭＩＣ（最小発育阻止濃度）を示した。
【０２００】
（実施例ＶＩＩＩ）
修飾されたリンカーによるジアミンライブラリの生成
一般的方法：全試薬ともＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。Ｒｉｎｋ−ａｃｉｄレジンはＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ，Ｉｎｃ．から購入した。溶媒のアセトニトリル、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド、エチレンジクロリド、メタノールおよびテトラヒドロフランはＡｌｄｒｉｃｈから購入し、入手した状態で使用した。固相合成はＱｕｅｓｔ２１０シンセサイザー（Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）およびコンビナトリアル化学装置（Ｗｈａｔｍａｎ  ＰｏｌｙｆｉｌｔｒｏｎｉｃｓおよびＲｏｂｂｉｎｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上で実施した。溶媒の蒸発はＳｐｅｅｄＶａｃＡＥＳ（Ｓａｖａｎｔ）を用いて行った。質量スペクトルデータはオートサンプラーを付設したＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ／Ｓｃｉｅｘ，ＡＰＩ−３００，ＴＱＭＳ上でエレクトロスプレーイオン化法により得た。
【０２０１】
Ｒｉｎｋレジンの活性化、アミンの添加およびアシル化工程はＱｕｅｓｔ２１０シンセサイザーを用いて１０ｍｌ試験管内で行った。ＦＭＯＣ基の除去、カルボニル化合物を用いた還元的アルキル化、Ｒｅｄ−Ａｌによる還元、および、固体支持体からの脱離は、９６深型（２ｍｌ）ウェル薬品耐性プレート中で行った。
【０２０２】
工程１．Ｒｉｎｋ−ａｃｉｄレジンの活性化  
ジクロロメタンおよびＴＨＦの２：１混合物８０ｍｌ中のＲｉｎｋ−ａｃｉｄレジン（０．４３〜０．６３ｍｍｏｌ／ｇの被覆）６ｇ（３．７８ｍｍｏｌ以下）の懸濁液を試験管当たり４ｍｌとなるように試験管２０本に分注し、濾過し、ＴＨＦで２回洗浄した。ＴＨＦ４０ｍｌ中のトリフェニルホスフィン（５．７ｇ、２１．７５ｍｍｏｌ）の溶液を２ｍｌ／試験管となるように添加し、その後、ＴＨＦ２０ｍｌ中のヘキサクロロエタン（５．０９ｇ、２１．４５ｍｍｏｌ）の溶液を１ｍｌ／試験管となるように添加した。６時間後、レジンをＴＨＦ（２×４ｍｌ）およびジクロロメタン（２×４ｍｌ）で洗浄した。
【０２０３】
工程２．第１のアミンの添加  
各試験管にジクロロエタン３ｍｌ、ＥｔＮｉＰｒ２（０．２ｍｌ、１．１５ｍｍｏｌ）および相当するアミン（１ｍｍｏｌ）を添加した。（選択したアミンが固体の場合は、ＤＭＦ中の溶液または懸濁液として添加した。）ジクロロエタンを各試験管に添加して４ｍｌの定容とした。反応は４５℃で８時間、室温で６〜８時間行った。レジンを濾過し、ジクロロメタンとメタノールの２：１混合物（１×４ｍｌ）、次にメタノール（２×４ｍｌ）で洗浄し、吸引乾燥した。
【０２０４】
工程３．Ｆｍｏｃ保護したアミノ酸のアシル化  
レジンはジクロロメタン（２×４ｍｌ）で予備洗浄した。各試験管にジクロロメタン２ｍｌ、ＨＡＴＵ（充填したレジンに対して２ｍｏｌ過剰、０．１４ｇ、０．３９ｍｍｏｌ、ＤＭＦ１ｍｌ中に溶解）およびＤＭＦ１ｍｌに溶解したアミノ酸０．４７ｍｍｏｌ（充填したレジンに対して２．５ｍｏｌ過剰）を添加し、４５℃で８時間、室温で６〜８時間攪拌した。１６時間後、レジンを濾過し、ＤＭＦとジクロロメタンの１：１混合物（１×３ｍｌ）、ジクロロメタン（１×３ｍｌ）で洗浄し、そしてアシル化を同じ量の試薬を用いて反復した。終了時にレジンを濾過し、ＤＭＦとジクロロメタンの１：１混合物（１×３ｍｌ）およびメタノール（３×３ｍｌ）で洗浄し、３０分間吸引乾燥（Ｑｕｅｓｔ上）し、ガラスビンに移し（ガラスビン当たり１レジン）、１時間真空下のデシケーター中で乾燥した。この工程の後、全レジンはＭＳスペクトルを用いた品質管理に付した。
【０２０５】
工程４．アミノ基のアルキル化  
脱保護：  初めの３工程で得られた１０種の調製したレジンをともにプールし、個々のガラスビンにて約０．０５グラム各々を全ての必要なデコンボリューションのために残した。ジクロロメタンおよびＴＨＦの２：１混合物１００ｍｌ中のレジン混合物（２．０〜２．５ｇ）の懸濁液を２枚の９６ウェルフィルタープレートに分配し、濾過マニホルドを用いて濾過した。反応プレートをＣｏｍｂｉｃｌａｍｐｓに移し、ＤＭＦ中ピペリジンの２０％溶液０．２ｍｌを添加してＦｍｏｃ保護基を除去し、１０分間放置した。１０分後、プレートを濾過し、ＤＭＦ０．２ｍｌで洗浄し、ＤＭＦ中ピペリジンの２０％溶液０．２ｍｌを用いて脱保護を反復し、２０分間放置した。そのプレートを濾過した後、ＤＭＦ（ウェル当たり０．２ｍｌ）およびジクロロメタン（ウェル当たり２×０．５ｍｌ）で洗浄した。
【０２０６】
カルボニル化合物との反応：反応プレート上の列Ａの各ウェルにジクロロメタン０．１ｍｌ、マスタープレートから得たＤＭＦ中の適切な酸の約１．０Ｍ溶液０．０８ｍｌ、ＰｙＢｒｏｐのＤＭＦ溶液０．０５ｍｌ（０．０１５ｇ、０．０３ｍｍｏｌ、充填したレジンに対して２．５ｍｏｌ過剰）およびジクロロメタン（０．０２２ｍｌ、０．１３ｍｍｏｌ、充填したレジンに対して１０ｍｏｌ過剰）中のＥｔＮｉＰｒ２０．０５ｍｌを添加した。列Ｂ〜Ｈの各ウェルにＴＨＦ０．１ｍｌ、マスタープレートから得たＤＭＦ中の適切なアルデヒドまたはケトンの約１．０Ｍ溶液０．１６０ｍｌを添加し、３０分間反応させた。３０分後、ＮａＢＣＮＨ３の１．０Ｍ溶液０．０７５ｍｌ（０．０７５ｍｍｏｌ）を添加した。反応プレートを密封し、７２時間ＲＴで保持した。終了時にレジンを濾過し、ＴＨＦ、ＤＣＭ（１×１ｍｌ）、メタノール（２×１ｍｌ）で洗浄し、２時間真空下のデシケーター中で乾燥した。
【０２０７】
工程５．Ｒｅｄ−Ａｌによる還元  
反応プレートをＣｏｍｂｉｃｌａｍｐｓ中に入れた。Ｒｅｄ−Ａｌ（トルエン中６５＋ｗ％）およびＴＨＦの１：６混合物をウェル当たり０．６ｍｌ（ウェル当たりＲｅｄ−Ａｌ０．２８ｍｍｏｌ）添加し、４時間反応させた。反応終了後、レジンを濾過し、ＴＨＦ（２×１ｍｌ）およびメタノール（３×１ｍｌ）で洗浄し、濾過マニホルド中で乾燥した。
【０２０８】
工程６．脱離  
この工程は脱離マニホルドを用いて行った。反応プレート（このマニホルド内の収集プレートの上部に設置）にＴＦＡ、ジクロロメタンおよびメタノールの１０：８５：５混合物をウェル当たり０．５ｍｌ添加した。１５分後、溶液を濾過し、収集プレート上の適切なウェルに収集した。本手順を反復した。溶媒をＳｐｅｅｄｖａｃ上で蒸発させ、残存した試料はそのまま試験に付すことができた。
【０２０９】
デコンボリューション例
活性ウェルのデコンボリューションは、プールする前にアシル化工程の終了時に分取しておいたアーカイブしたＦＭＯＣ保護□−アミノアセトアミドレジン（１０レジン、各々０．０５〜０．１０ｇ）から個別の化合物の再合成により行った。各レジンを９６ウェルのフィルタープレートの個別の行（１または２または３など）に割り付け、Ｘ列（Ａ、Ｂ、Ｃなど）に分割し、このＸは元のスクリーニングプレート内で発見されたヒット数とした。１列の各ウェルに対し、選択したカルボニル化合物（ヒット内に存在）を他の必要な試薬と共に添加し：第１の選択したカルボニル化合物は列「Ａ」のレジンに添加し、第２のカルボニル化合物は列「Ｂ」のレジンに、第３のカルボニル化合物は列「Ｃ」のレジンに等、添加した。代表的な９６ウェルデコンボリューションプレートのレイアウトを表２８、図５２に示す。
【０２１０】
反応プレートを密封し、７２時間ＲＴで保持した。終了時にレジンを濾過し、ＴＨＦ、ＤＣＭ（１×１ｍｌ）、メタノール（２×１ｍｌ）で洗浄し、２時間真空下のデシケーター中で乾燥した。還元および脱離は合成プロトコルの工程５および６に従って実施した。脱離により得られた生成物ウェルをＥＳＩ−ＭＳ（エレクトロスプレーイオン化質量スペクトル分析）により分析し、活性物質の同一性を確認し、ＭＩＣ分析において試験した。ＥＳＩ−ＭＳデータの総括を以下に示す。化合物ヒットおよび構造のリストは表３０、図５３に示す。
【０２１１】
化合物６７３
Ｎ２−［（２−メトキシ−１−ナフチル）メチル］−３−フェニル−Ｎ１−（３−フェニルプロピル）プロパン−１，２−ジアミン。質量スペクトル（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（ＭＨ）＋４３９．２
化合物６７４
Ｎ２−［２−（ベンジルオキシ）エチル］−Ｎ１−（３，３−ジフェニルプロピル）−４−（メチルチオ）ブタン−１，２−ジアミン。質量スペクトル（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（ＭＨ）＋４６３．４
化合物６７５
Ｎ１−（３，３−ジフェニルプロピル）−４−（メチルチオ）−Ｎ２−（３−フェニルプロピル）ブタン−１，２−ジアミン。質量スペクトル（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（ＭＨ）＋４４７．２
化合物６７６
Ｎ２−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ１−（３，３−ジフェニルプロピル）−４−（メチルチオ）ブタン−１，２−ジアミン。質量スペクトル（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（ＭＨ）＋４２５．１
化合物６７７
Ｎ１−（３，３−ジフェニルプロピル）−Ｎ２−（２−エトキシベンジル）−４−（ｍｅｔｈｙｌｔｈｉｏ）ブタン−１，２−ジアミン。質量スペクトル（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（ＭＨ）＋４６３．１
化合物６７８
Ｎ２−［２−（ベンジルオキシ）エチル］−Ｎ１−［（６，６−ジメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタ−２−イル）メチル］−４−（メチルチオ）ブタン−１，２−ジアミン。質量スペクトル（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（ＭＨ）＋４０５．３
化合物６７９
Ｎ１−［（６，６−ジメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタ−２−イル）メチル］−４−（メチルチオ）−Ｎ２−（３−フェニルプロピル）ブタン−１，２−ジアミン。質量スペクトル（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（ＭＨ）＋３８９．５
化合物６８０
Ｎ２−（２−クロロ−４−フルオロベンジル）−４−メチル−Ｎ１−（４−メチルベンジル）ペンタン−１，２−ジアミン。質量スペクトル（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（ＭＨ）＋３６３．３，  ３６５．５；（ＭＣＨ３ＣＮ）  ４０３．３，４０５．３
化合物６８１
Ｎ２−［２−（ベンジルオキシ）エチル］−Ｎ１−［２−（４−メトキシフェニル）エチル］−４−メチルペンタン−１，２−ジアミン。質量スペクトル（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（ＭＨ）＋３８５．１
化合物６８２
Ｎ２−［３−（４−クロロフェノキシ）ベンジル］−Ｎ１−［２−（４−メトキシフェニル）エチル］−４−メチルペンタン−１，２−ジアミン。質量スペクトル（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（ＭＨ）＋４６７．１，  ４６９．２
化合物６８３
Ｎ２−（４−イソプロピルベンジル）−Ｎ１−［２−（４−メトキシフェニル）エチル］−４−メチルペンタン−１，２−ジアミン。質量スペクトル（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（ＭＨ）＋３８３．３
化合物６８４
Ｎ１−［２−（４−メトキシフェニル）エチル］−４−メチル−Ｎ２−［（２Ｅ）−３−フェニルプロパ−２−エニル］ペンタン−１，２−ジアミン。質量スペクトル（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（ＭＨ）＋３６７．３；［Ｍ−（ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＰｈ）２Ｈ］＋２５１
化合物６８５
Ｎ２−［２−（ベンジルオキシ）エチル］−４−メチル−Ｎ１−（３−フェニルプロピル）ペンタン−１，２−ジアミン。質量スペクトル（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（ＭＨ）＋３６９．１
化合物６８６
Ｎ２−（２−クロロ−４−フルオロベンジル）−４−メチル−Ｎ１−（３−フェニルプロピル）ペンタン−１，２−ジアミン。質量スペクトル（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（ＭＨ）＋３７７．２，３７８．９
化合物６８７
Ｎ２−［３−（４−クロロフェノキシ）ベンジル］−４−メチル−Ｎ１−（３−フェニルプロピル）ペンタン−１，２−ジアミン。質量スペクトル（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（ＭＨ）＋４５１．１，４５３．３
化合物６８８
Ｎ２−（４−イソプロピルベンジル）−４−メチル−Ｎ１−（３−フェニルプロピル）ペンタン−１，２−ジアミン。質量スペクトル（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（ＭＨ）＋３６７．３
化合物６８９
４−メチル−Ｎ２−［（２Ｅ）−３−フェニルプロパ−２−エニル］−Ｎ１−（３−フェニルプロピル）ペンタン−１，２−ジアミン。質量スペクトル（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（ＭＨ）＋３５１．２
化合物６９０
Ｎ２−（２−エトキシベンジル）−４−メチル−Ｎ１−（３−フェニルプロピル）ペンタン−１，２−ジアミン。質量スペクトル（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（ＭＨ）＋３６９．１
化合物６９１
Ｎ２−デカヒドロナフタレン−２−イル−Ｎ１−［２−（４−フルオロフェニル）エチル］−３−チエン−３−イルプロパン−１，２−ジアミン。質量スペクトル（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（ＭＨ）＋４１５．３。
【０２１２】
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１５．            Ｃｕｅｒｖｏ，  Ｊ．Ｈ．；  Ｗｅｉｔｌ，  Ｆ．；  Ｏｓｔｒｅｔｃｈ，  Ｊ．Ｍ．；  Ｈａｍａｓｈｉｎ，  Ｖ．Ｔ；  Ｈａｎｎａｈ，  Ａ．Ｌ．；  Ｈｏｕｇｈｔｅｎ，  Ｒ．Ａ．  ｉｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  １９９４：  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ；    Ｍａｉａ  ＨＳＬ  Ｅｄ．，  Ｅｓｏｍ：  Ｌｅｉｄｅｎ，  １９９５，  ４６５−４６６。
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１８．            Ｈ．  Ｒｉｎｋ  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．  １９８７，  ２８，  ３７８７．
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２７．Ｓｈａｗａｒ，  Ｒ．Ｍ．；  Ｈｕｍｂｌｅ，  Ｄ．Ｊ．；  Ｖａｎ  Ｄａｌｆｓｅｎ，  Ｊ．Ｍ．；  Ｓｔｏｖｅｒ，  Ｃ．Ｋ．；  Ｈｉｃｋｅｙ，  Ｍ．Ｊ．；  Ｓｔｅｅｌｅ，  Ｓ．；  Ｍｉｔｓｃｈｅｒ，  Ｌ．Ａ．；  Ｂａｋｅｒ，  Ｗ．，「マイコバクテリウム．ボビスＢＣＧおよびマイコバクテリウム．イントラセルラレのルシフェラーゼ発現菌株を用いた抗マイコバクテリア活性のための天然生成物の高速スクリーニング」Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ，  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  １９９７，  ４１，  ５７０−５７４。
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【図面の簡単な説明】
【０２１３】
【図１】図１は置換エチレンジアミンの調製のために使用する種々の固体支持体合成を示すフローチャート模式図である。
【図２】図２（ａ）〜２（ａｃ）は種々の第一級アミンの化学構造を示す。
【図３】図３（ａ）〜３（ｆ）は種々の非環式第二級アミンの化学構造を示す。
【図４】図４（ａ）〜４（ｉ）は種々の環式第二級アミンの化学構造を示す。
【図５】図５は置換エチレンジアミン１０種の代表的な反応プールを示すフロー模式図である。
【図６】図６はプールした置換エチレンジアミン化合物に関するＨＴＳＬｕｃ試験の結果を示す秒あたりルミネセント計数（ＬＣＰＳ）と濃度のグラフである。
【図７】図７は個々の置換エチレンジアミン化合物に関するＨＴＳＬｕｃ試験の結果を示すＬＣＰＳと濃度のグラフである。
【図８】図８は個々の置換エチレンジアミン化合物に関するＨＴＳＬｕｃ試験の結果を示すＬＣＰＳと濃度のグラフである。
【図９】図９は個別の置換エチレンジアミンに関するＭＩＣ活性の概要を示す棒グラフである。
【図１０】図１０は３．１μＭにおけるエタンブトールを比較対照として少なくとも１０％の活性を有する個別の置換エチレンジアミンのルシフェラーゼ活性の概要を示す棒グラフである。
【図１１】図１１はＴＢに対して活性があった置換エチレンジアミン化合物中の選択したアミン単量体の存在の頻度を示す棒グラフである。アミン単量体はその数字で表した記号表示にて示す。
【図１２】図１２はＮ−ゲラニル−Ｎ’−（２−アダマンチル）エタン−１，２−ジアミン（化合物１０９）の合成を示すフロー模式図である。
【図１３】図１３はＮ−（シクロオクチル）−Ｎ’−（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−（−）−イソピノカンフェイルエタン−１，２−ジアミンの塩酸塩（化合物５９）としての合成を示すフロー模式図である。
【図１４】図１４はプールした置換エチレンジアミン化合物を含む１つの代表的な試料ウェルの質量スペクトル図である。
【図１５】図１５は化合物１０９であるＮ−ゲラニル−Ｎ’−（２−アダマンチル）エタン−１，２−ジアミンの質量スペクトル図である。
【図１６】図１６は化合物１０９であるＮ−ゲラニル−Ｎ’−（２−アダマンチル）エタン−１，２−ジアミンのプロトンＮＭＲ図である。
【図１７】図１７は種々の化合物に関する数日間に渡るＣＦＵ／肺生育を示すコロニー形成単位／肺（ＣＦＵ／肺）試験から得た経時的なデータの棒グラフである。
【図１８】図１８は種々の化合物に関する数日間に渡るＣＦＵ／肺生育を示すＣＦＵ／肺試験から得た経時的なデータの棒グラフである。
【図１９】図１９は種々の化合物に関する数日間に渡るＣＦＵ／肺生育を示すＣＦＵ／肺試験から得た経時的なデータの棒グラフである。
【図２０】図２０は種々の化合物を投与した後の目視可能な疾患を示す疾患試験から得られた経時的なデータの棒グラフである。
【図２１】図２１は薬剤候補の同定の模式的表示を示す。
【図２２】図２２はｉｎ  ｖｉｖｏ効果に関して試験した化合物を示す。
【図２３】図２３は１および１０ｍｇ／ｋｇの用量における化合物７３および１０９のｉｎ  ｖｉｖｏでの試験の結果を示すグラフである（脾臓）。
【図２４】図２４は１および１０ｍｇ／ｋｇの用量における化合物７３および１０９のｉｎ  ｖｉｖｏでの試験の結果を示すグラフである（肺）。
【図２５】図２５は１および１０ｍｇ／ｋｇの用量における化合物５９および１１１のｉｎ  ｖｉｖｏでの試験を示すグラフである（脾臓）。
【図２６】図２６は１および１０ｍｇ／ｋｇの用量における化合物５９および１１１のｉｎ  ｖｉｖｏでの試験を示すグラフである（肺）。
【図２７】図２７はＭ．ツベルクロシスＨ３７Ｒｖに感染したＣ５７ＢＬ．６マウスにおける化合物５８、７３、１０９および１１１の薬効試験の結果を示すグラフである（脾臓）。マウスは５×１０６ＣＦＵのＭ．ツベルクロシスＨ３７Ｒｖでｉ．ｖ．感染させ；薬剤投与は感染後１８日目に開始した。ＥＣ−ＥＣ−早期の対照、化学療法開始の日におけるマウス肺のＣＦＵである。マウスへの投与：１−未投与マウス、２−ＩＮＨ（２５ｍｇ／ｋｇ）、３−ＥＭＢ（１００ｍｇ／ｋｇ）、４−化合物１０９（２５ｍｇ／ｋｇ）、４＊−化合物１０９（１０ｍｇ／ｋｇ）、４＊＊−化合物１０９（０．１ｍｇ／ｋｇ）、５−化合物５８（２５ｍｇ／ｋｇ）、６−化合物７３（２５ｍｇ／ｋｇ）、７−化合物１１１（２５ｍｇ／ｋｇ）。
【図２８】図２８はＭ．ツベルクロシスＨ３７Ｒｖに感染したＣ５７ＢＬ．６マウスにおける化合物５８、７３、１０９および１１１の薬効試験の結果を示すグラフである（肺）。マウスは５×１０６ＣＦＵのＭ．ツベルクロシスＨ３７Ｒｖでｉ．ｖ．感染させ；薬剤投与は感染後１８日目に開始した。ＥＣ−ＥＣ−早期の対照、化学療法開始の日におけるマウス肺のＣＦＵである。マウスへの投与：１−未投与マウス、２−ＩＮＨ（２５ｍｇ／ｋｇ）、３−ＥＭＢ（１００ｍｇ／ｋｇ）、４−化合物１０９（２５ｍｇ／ｋｇ）、４＊−化合物１０９（１０ｍｇ／ｋｇ）、４＊＊−化合物１０９（０．１ｍｇ／ｋｇ）、５−化合物５８（２５ｍｇ／ｋｇ）、６−化合物７３（２５ｍｇ／ｋｇ）、７−化合物１１１（２５ｍｇ／ｋｇ）。
【図２９】図２９は被験化合物のＬＣ／ＭＳデータを示す。
【図３０】図３０はマウスへの被験化合物のカセット投与によるＰＫ試験の結果を示すグラフである。経口投与。試験における化合物ＮＳＣ７２２０３９は化合物３７を指し、ＮＳＣ７２２０４０は化合物５９、ＮＳＣ７２２０４１は化合物１０９を指す。
【図３１】図３１はマウスへの被験化合物のカセット投与によるＰＫ試験の結果を示すグラフである。腹腔内投与。試験における化合物ＮＳＣ７２２０３９は化合物３７を指し、ＮＳＣ７２２０４０は化合物５９、ＮＳＣ７２２０４１は化合物１０９を指す。
【図３２】図３２はマウスへの被験化合物のカセット投与によるＰＫ試験の結果を示すグラフである。静脈内投与。試験における化合物ＮＳＣ７２２０３９は化合物３７を指し、ＮＳＣ７２２０４０は化合物５９、ＮＳＣ７２２０４１は化合物１０９を指す。
【図３３】図３３はマウスにおける化合物１０９のＰＫ試験の結果を示すグラフである。
【図３４】図３４はマウスにおける１０９の組織分布である（ｉ．ｖ．３ｍｇ／ｋｇ）。
【図３５】図３５はマウスにおける１０９の組織分布である（ｐ．ｏ．２５ｍｇ／ｋｇ）。
【図３６】図３６はマウス尿中の化合物１０９の代謝である。
【図３７】図３７はマウス尿中に化合物１０９のグルクロニド化代謝産物が存在しなかったことを示している。
【図４１】図４１のスキーム１は固体支持体上のエタンブトール類似体の１００，０００化合物のライブラリの合成を示す。図４１のスキーム２は固体支持体上のＳＱＢｉｓＡｄの合成の試行を示している。
【図４２】図４２はアミノ酸によるアシル化を介して調製した代表的な標的ジアミンの構造を示す。
【図４３】図４３は標的の２０，０００エタンブトール類似体の調製ライブラリに関するジアミンの合成プレートのデータを総括する表２５を示す。
【図４４】図４４はリンカーとしてのアミノ酸を使用したジアミンライブラリの合成を示すスキーム５を示す。
【図４５】図４５はＥＭＢ類似体の元の１００，０００化合物のライブラリにおいて発生したヒットにおけるアミン単量体の存在を示す模式図である。
【図４６】図４６は第一級アミン内での構造的多様性を示す模式図である。
【図４７】図４７はジアミンライブラリの調製において使用したアミノ酸を列挙した表２６を示す。
【図４８】図４８はジアミンライブラリの合成における試薬として使用したカルボニル化合物を示す。
【図４９】図４９はジアミンライブラリの合成に関するマスタープレートでのカルボニル化合物を示す表２７である。
【図５０】図５０はジアミンライブラリに関するＭＩＣおよびＬｕｘデータの代表例である。
【図５１】図５１は抗ＴＢ活性を有する最終ジアミン生成物におけるアルキル化単量体の発生を示す模式図である。
【図５２】図５２は代表的な９６ウェルのデコンボリューションプレートのレイアウトである。
【図５３】図５３は修飾リンカージアミンライブラリに関する化合物ヒットおよび構造を列挙したものである。
【図１】
2005526129.tif 000123
【図２（ａ）】
2005526129.tif 000124
【図２（ｂ）】
2005526129.tif 000125
【図２（ｃ）】
2005526129.tif 000126
【図２（ｄ）】
2005526129.tif 000127
【図２（ｅ）】
2005526129.tif 000128
【図２（ｆ）】
2005526129.tif 000129
【図２（ｇ）】
2005526129.tif 000130
【図２（ｈ）】
2005526129.tif 000131
【図２（ｉ）】
2005526129.tif 000132
【図２（ｊ）】
2005526129.tif 000133
【図２（ｋ）】
2005526129.tif 000134
【図２（ｌ）】
2005526129.tif 000135
【図２（ｍ）】
2005526129.tif 000136
【図２（ｎ）】
2005526129.tif 000137
【図２（ｏ）】
2005526129.tif 000138
【図２（ｐ）】
2005526129.tif 000139
【図２（ｑ）】
2005526129.tif 000140
【図２（ｒ）】
2005526129.tif 000141
【図２（ｓ）】
2005526129.tif 000142
【図２（ｔ）】
2005526129.tif 000143
【図２（ｕ）】
2005526129.tif 000144
【図２（ｖ）】
2005526129.tif 000145
【図２（ｗ）】
2005526129.tif 000146
【図２（ｘ）】
2005526129.tif 000147
【図２（ｙ）】
2005526129.tif 000148
【図２（ｚ）】
2005526129.tif 000149
【図２（ａａ）】
2005526129.tif 000150
【図２（ａｂ）】
2005526129.tif 000151
【図２（ａｃ）】
2005526129.tif 000152
【図３（ａ）】
2005526129.tif 000153
【図３（ｂ）】
2005526129.tif 000154
【図３（ｃ）】
2005526129.tif 000155
【図３（ｄ）】
2005526129.tif 000156
【図３（ｅ）】
2005526129.tif 000157
【図３（ｆ）】
2005526129.tif 000158
【図４（ａ）】
2005526129.tif 000159
【図４（ｂ）】
2005526129.tif 000160
【図４（ｃ）】
2005526129.tif 000161
【図４（ｄ）】
2005526129.tif 000162
【図４（ｅ）】
2005526129.tif 000163
【図４（ｆ）】
2005526129.tif 000164
【図４（ｇ）】
2005526129.tif 000165
【図４（ｈ）】
2005526129.tif 000166
【図４（ｉ）】
2005526129.tif 000167
【図５】
2005526129.tif 000168
【図６】
2005526129.tif 000169
【図７】
2005526129.tif 000170
【図８】
2005526129.tif 000171
【図９】
2005526129.tif 000172
【図１０】
2005526129.tif 000173
【図１１】
2005526129.tif 000174
【図１２】
2005526129.tif 000175
【図１３】
2005526129.tif 000176
【図１４】
2005526129.tif 000177
【図１５】
2005526129.tif 000178
【図１６】
2005526129.tif 000179
【図１７】
2005526129.tif 000180
【図１８】
2005526129.tif 000181
【図１９】
2005526129.tif 000182
【図２０】
2005526129.tif 000183
【図２１】
2005526129.tif 000184
【図２２】
2005526129.tif 000185
【図２３】
2005526129.tif 000186
【図２４】
2005526129.tif 000187
【図２５】
2005526129.tif 000188
【図２６】
2005526129.tif 000189
【図２７】
2005526129.tif 000190
【図２８】
2005526129.tif 000191
【図２９】
2005526129.tif 000192
【図３０】
2005526129.tif 000193
【図３１】
2005526129.tif 000194
【図３２】
2005526129.tif 000195
【図３３】
2005526129.tif 000196
【図３４】
2005526129.tif 000197
【図３５】
2005526129.tif 000198
【図３６】
2005526129.tif 000199
【図３７】
2005526129.tif 000200
【図３８】
2005526129.tif 000201
【図３９】
2005526129.tif 000202
【図４０】
2005526129.tif 000203
【図４１】
2005526129.tif 000204
【図４２】
2005526129.tif 000205
【図４３】
2005526129.tif 000206
【図４４】
2005526129.tif 000207
【図４５】
2005526129.tif 000208
【図４６】
2005526129.tif 000209
【図４７】
2005526129.tif 000210
【図４８】
2005526129.tif 000211
【図４９（ａ）】
2005526129.tif 000212
【図４９（ｂ）】
2005526129.tif 000213
【図４９（ｃ）】
2005526129.tif 000214
【図５０】
2005526129.tif 000215
【図５１】
2005526129.tif 000216
【図５２】
2005526129.tif 000217
【図５３（ａ）】
2005526129.tif 000218
【図５３（ｂ）】
2005526129.tif 000219
【図５３（ｃ）】
2005526129.tif 000220
【国際調査報告】
2005526129.tif 000221
2005526129.tif 000222
2005526129.tif 000223