(57)【要約】真菌培養株から新規ソルダリン誘導体を単離した。本化合物はヒト及び動物真菌感染の治療及び／又は予防と、作物の植物病原性真菌の防除に有用である。２種の新規真菌培養株ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＰＴＡ−３８６２及びＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＰＴＡ−３８６１を使用して本発明の化合物を発酵生産することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下式：
【化１】
2005519039.tif 000011
の化合物又は医薬もしくは農薬として許容可能なその塩。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物と医薬的に許容可能なキャリヤーを含む医薬組成物。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物と第２の治療剤又は医薬的に許容可能なその塩との組合せを含む医薬製剤。
【請求項４】
第２の治療剤がアゾール、ポリエン、プリン・ピリミジンヌクレオチド阻害剤、ニューモカンジン誘導体、エキノカンジン誘導体、ポリオキシン、マンナン阻害剤、殺菌／透過誘導性蛋白質産物、延長因子阻害剤及び免疫調節剤から構成される群から選択される化合物である請求項３に記載の医薬製剤。
【請求項５】
第２の治療剤がイントラコナゾール、フルシトシン、フルコナゾール、アンホテリシンＢ及びカスポフンギンから構成される群から選択される化合物である請求項４に記載の医薬製剤。
【請求項６】
請求項１に記載の化合物と農薬として許容可能なキャリヤーを含む農薬組成物。
【請求項７】
請求項１に記載の化合物と除草剤、殺虫剤、殺細菌剤、殺線虫剤、軟体動物駆除剤、成長調節剤、微量栄養素、肥料及び殺真菌剤から構成される群から選択される第２の活性成分を含む農薬組成物。
【請求項８】
哺乳動物の真菌感染の治療又は予防方法であって、治療薬として有効量の請求項１に記載の化合物を前記哺乳動物に投与することを含む前記方法。
【請求項９】
哺乳動物の真菌感染の治療又は予防方法であって、治療薬として有効量の請求項１に記載の化合物とアゾール、ポリエン、プリン・ピリミジンヌクレオチド阻害剤、ニューモカンジン誘導体、エキノカンジン誘導体、ポリオキシン、マンナン阻害剤、殺菌／透過誘導性蛋白質産物、延長因子阻害剤及び免疫調節剤から構成される群から選択される第２の治療剤を前記哺乳動物に投与することを含む前記方法。
【請求項１０】
植物病原性真菌の防除方法であって、このような防除を必要とする植物に治療薬として有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む前記方法。
【請求項１１】
植物病原性真菌の防除方法であって、このような防除を必要とする植物に治療薬として有効量の請求項１に記載の化合物と除草剤、殺虫剤、殺細菌剤、殺線虫剤、軟体動物駆除剤、成長調節剤、微量栄養素、肥料及び殺真菌剤から構成される群から選択される第２の活性成分を投与することを含む前記方法。
【請求項１２】
延長因子２（ＥＦ２）の阻害方法であって、このような治療を必要とする対象に有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む前記方法。
【請求項１３】
Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  ＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎにＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＰＴＡ−３８６２として寄託されたＭｏｒｉｎｉａ種の培養株。
【請求項１４】
請求項１に記載の化合物の製造方法であって、ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＰＴＡ−３８６２の培養と発酵を含む前記方法。
【請求項１５】
Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  ＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎにＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＰＴＡ−３８６１として寄託されたＣｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ種の培養株。
【請求項１６】
請求項１に記載の化合物の製造方法であって、ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＰＴＡ−３８６１の培養と発酵を含む前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は発酵により誘導され、抗真菌剤として有用な新規化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ソルダリンはカビＳｏｒｄａｒｉａ  ａｒａｎｅｏｓａから単離された抗真菌抗生物質である（ＧＢ１，１６２，０２７及びＨｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ，１９７１，５１：１１９−２０参照）。ソルダリン骨格をもつ他の化合物も抗真菌剤として報告されている。日本特許公開第６２０４０２９２号はＺｏｐｆｉｅｌｌａ  ｍａｒｉｎａ種から単離された化合物ゾフィマリンを開示しており、日本特許公開第０６１５７５８２はＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ種から単離された化合物ＢＥ−３１４０５を開示しており、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，１９９５，４８：１１７１−１１７２にはＳＣＨ５７４０４が報告されている。ＰＣＴ出願第ＷＯ９６／１４３２６号及びＷＯ９６／１４３２７号には半合成ソルダリン誘導体が報告されている。
【０００３】
アグリコンであるソルダリシンはソルダリンから酸加水分解により得ることができる（ＨａｕｓｅｒとＳｉｇｇ，Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ，１９７１，５１：１１９−２０）。ソルダリシンメチルエステルの全合成はＫａｔｏら，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９３，１００２−１００４に報告され、当該文献はｏ−メトキシメチルソルダリシンメチルエステルも開示している。ＭａｎｄｅｒとＲｏｂｉｎｓｏｎ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９１，５６（１１）：３３９５−３６０１には４−デホルミル−４−ヒドロキシメチルソルダリシンの二酢酸エステルが開示されている。ソルダリシンも報告されているその誘導体も生体活性をもつことは示されていない。
【０００４】
Ｂａｌｋｏｖｅｃら（米国特許第６，０４０，４６３号及び６，１３６，８５３号）はソルダリン誘導体の化合物を開示している。
【０００５】
Ｎｉｅｌｓｅｎ−Ｋａｈｎら（米国特許第５，９７２，９９６号）とＴｓｅ，Ｂｒｕｎｏ（米国特許第５，９６５，６１２号）は４−シアノ−４−デホルミルソルダリン誘導体の化合物を開示している。
【０００６】
Ｓｔｕｒｒら（米国特許第６，２２８，６２２号）はＣ１１−ヒドロキシソルダリンの化合物とＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ種（Ｍｅｒｃｋ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ＭＡ７２３５）を使用した生体内変換によるその製造方法を開示している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は発酵から単離され、ヒト及び農作物真菌感染に関連する病原体に対する強力な汎用抗真菌剤である新規ソルダリン類似体を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明はヒト及び農作物真菌感染に関連する病原体に対して使用することが可能な広範囲の活性をもつ強力な抗真菌剤である式Ｉ：
【０００９】
【化１】
2005519039.tif 000002
の化合物又は医薬もしくは農薬として許容可能なその塩に関する。本発明は式Ｉの化合物の製造方法、前記化合物を含有する医薬及び農薬組成物、式Ｉの化合物を使用したヒト及び動物の真菌感染の治療又は予防方法、並びにヒト、動物及び植物材料の真菌感染の防除方法にも関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明はヒト及び農作物真菌感染に関連する病原体に対して使用することが可能な広範囲の活性をもつ強力な抗真菌剤である式Ｉ：
【００１１】
【化２】
2005519039.tif 000003
の化合物又は医薬もしくは農薬として許容可能なその塩に関する。
【００１２】
本発明の１側面は式Ｉの化合物と医薬的に許容可能なキャリヤーを含む医薬組成物を提供する。
【００１３】
本発明の別の側面は式Ｉの化合物と第２の治療剤又は医薬的に許容可能なその塩の組合せを含有する医薬製剤を提供する。当該第２の治療剤はアゾール、ポリエン、プリンヌクレオチド阻害剤、ニューモカンジン誘導体、エキノカンジン誘導体、延長因子阻害剤及び免疫調節剤から構成される群から選択される化合物である。より具体的には、第２の治療剤は、アゾール（例えばフルコナゾール、ボリコナゾール、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ミコナゾール、ＥＲ３０３４６、ＳＣＨ５６５９２）；ポリエン（例えばアンホテリシンＢ、ナイスタチン又はそのリポソーム及び脂質形、例えばＡｂｅｌｃｅｔ、ＡｍＢｉｓｏｍｅ及びＡｍｐｈｏｃｉｌ）；プリンもしくはピリミジンヌクレオチド阻害剤（例えばフルシトシン）；又はポリオキシン（例えばニッコーマイシン、特にニッコーマイシンＺもしくは他のキチン阻害剤）、延長因子阻害剤（例えばソルダリン及びその類似体）、マンナン阻害剤（例えばプレダマイシン）、殺菌／透過誘導性（ＢＰＩ）蛋白質産物（例えばＸＭＰ．９７又はＸＭＰ．１２７）又は複合炭水化物抗真菌剤及びニューモカンジンもしくはエキノカンジン誘導体（例えばカスポフンギン及びマイコフンギン）から選択される。好ましい第２の治療剤はイントラコナゾール、フルシトシン、フルコナゾール、アンホテリシンＢ及びカスポフンギンから構成される群から選択される化合物である。
【００１４】
本発明の更に別の側面は式Ｉの化合物と農薬として許容可能なキャリヤーを含む農薬組成物を提供する。
【００１５】
本発明の更に別の側面は式Ｉの化合物と除草剤、殺虫剤、殺細菌剤、殺線虫剤、軟体動物駆除剤、成長調節剤、微量栄養素、肥料及び殺真菌剤から構成される群から選択される第２の活性成分を含む農薬組成物を提供する。
【００１６】
本発明の更に別の側面は哺乳動物（ヒトを含む）の真菌感染の治療又は予防方法として、治療薬として有効量の式Ｉの化合物を前記哺乳動物に投与することを含む方法を提供する。
【００１７】
本発明の更に別の側面は哺乳動物の真菌感染の治療又は予防方法として、治療薬として有効量の式Ｉの化合物とアゾール、ポリエン、プリン・ピリミジンヌクレオチド阻害剤、ニューモカンジン誘導体、エキノカンジン誘導体、ポリオキシン、マンナン阻害剤、殺菌／透過誘導性蛋白質産物、延長因子阻害剤及び免疫調節剤から構成される群から選択される第２の治療剤を前記哺乳動物に投与することを含む方法を提供する。
【００１８】
本発明の更に別の側面は植物病原性真菌の防除方法として、このような防除を必要とする植物に治療薬として有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００１９】
本発明の更に別の側面は植物病原性真菌の防除方法として、このような防除を必要とする植物に治療薬として有効量の式Ｉの化合物と除草剤、殺虫剤、殺細菌剤、殺線虫剤、軟体動物駆除剤、成長調節剤、微量栄養素、肥料及び殺真菌剤から構成される群から選択される第２の活性成分を投与することを含む方法を提供する。
【００２０】
本明細書で使用する以下の用語は特に他の指定をしない限り以下に指定する意味をもつ。
【００２１】
「植物」なる用語は生きた植物、葉、花、種子、果実及び他の植物由来材料を意味する。この用語は土壌に活性成分を施用する場合には植物の根も意味する。
【００２２】
医薬又は農薬組成物における「組成物」なる用語は１種以上の活性成分とキャリヤーを構成する１種以上の不活性成分を含む生成物と、前記活性成分及び／又は前記不活性成分の任意の２種以上の併用、錯化、凝集もしくは他の相互作用、又は前記活性成分及び／又は前記不活性成分の１種以上の解離、又は前記活性成分及び／又は前記不活性成分の１種以上の他の型の反応から直接又は間接的に得られる生成物とを意味する。
【００２３】
式Ｉの化合物の適当な塩としては無機塩基塩類（例えばアルカリ金属塩（例えばナトリウム及びカリウム塩）、アンモニウム塩及び有機塩基塩類が挙げられる。適当な有機塩基塩類としてはテトラアルキルアンモニウム（例えばテトラブチルアンモニウム又はトリメチルセチルアンモニウム）、トリアルキルアミン（例えばトリエチルアミン）、ジアルキルアミン塩（例えばジシクロヘキシルアミン）、場合により置換基をもつベンジルアミン（例えばフェニルベンジルアミン又はパラブロモベンジルアミン）、エタノールアミン、ジエタノールアミン、Ｎ−メチルグルコサミン、Ｎ−メチルピペリジン、ピリジン及び置換ピリジン（例えばコリジン、ルチジン、４−ジメチルアミノピリジン）及びトリ（ヒドロキシメチル）メチルアミン塩等のアミン塩とアミノ酸塩（例えばリジン又はアルギニン塩）が挙げられる。
【００２４】
本明細書で使用する哺乳動物はヒト及び温血動物（例えばネコ、イヌ等）を含む。
【００２５】
本発明の化合物は培養株ＭＦ６８５６又はＭＦ６８６４の発酵により形成される。
【００２６】
培養株ＭＦ６８５６はＳｉｅｒｒａ  Ａｌｈａｍｉｌｌａ，Ａｌｍｅｒｉａ，スペインで採取したＳｅｄｕｍ  ｓｅｄｉｆｏｒｍｅ（Ｊａｃｑ．）サンプルから単離されたＭｏｒｉｎｉａ種（不完全真菌）の株である。Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ．，Ｉｎｃ．，Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．のカルチャーコレクションの真菌株ＭＦ６８５６はブダペスト条約に従い、２００１年１１月１４付けで１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ  ２０１１０−２２０９に所在のＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎのカルチャーコレクションに寄託され、受託番号ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＰＴＡ−３８６２を付与された。
【００２７】
真菌コロニーは寒天培養で以下の形態学的特徴を示す（Ｋｏｒｎｅｒｕｐ，Ａ．＆  Ｗａｎｓｃｈｅｒ，Ｊ．Ｈ．（１９７８）．Ｍｅｔｈｕｅｎ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｏｌｏｕｒ．第３版．Ｅｙｒｅ，Ｍｅｔｈｕｅｎ，Ｌｏｎｄｏｎによる色名及びコード）。
【００２８】
コーンミール寒天（Ｄｉｆｃｏ）上のコロニーは２２℃、湿度８０％で２１日後に６５ｍｍに達し、平坦、無毛、透明であり、中心に白色菌糸体の小領域（直径８〜１０ｍｍ）がある。臭気と浸出液なし。裏面無色。周辺均一。可溶性色素なし。
【００２９】
オートミール寒天（Ｄｉｆｃｏ）上のコロニーは２２℃、湿度８０％で２１日後に７０ｍｍに達し、平坦でテキスチャーはベルベット状からやや綿毛状であり、ピンクがかった白（７Ａ２）と灰色がかった赤（７Ｂ３）の交互のフリンジが同心円状に配置されている。臭気と浸出液なし。裏面は茶色がかった黄色（５Ｃ８）。可溶性色素なし。
【００３０】
ポテト・デキストロース寒天（Ｄｉｆｃｏ）上のコロニーは２２℃、湿度８０％で２１日後に３０ｍｍに達し、皺が寄り、数個の径方向溝があり、周辺は不均一で、中心はベルベット状のオリーブグレー（３Ｄ２）であり、茶色（７Ｅ８）の浸出液があり、周辺に薄い黄色がかった灰色（３Ｂ２）の広いフリンジがあり、コロニー縁部は外側の白色環状部と内側の狭いオリーブ色（２Ｅ４）フリンジの２色からなる。拡散性の薄茶色（７Ｄ７）色素発生。無臭。
【００３１】
菌糸体は分枝有隔であり、菌糸は透明なオリーブイエローで幅５μｍである。分生子果は密生し、球状であり、分生子果の腔室の内側の分生子柄は単生又は基部で分岐しており、分生子形成細胞は平滑透明円筒形であり、主に１隔壁であり、９．７〜１９（１３）ｘ１．９〜３（２．６）μｍである。分生子は石垣状、紡錘形、楕円形、洋梨形、直線からやや曲線状、平滑で１９．５〜２４．７（２２．４）ｘ６．５μｍであり、６又は７個の横隔壁と１又は２個の縦及び斜め隔壁をもち、玉虫色であり、基部細胞と頂部細胞は透明から準透明であり、中間細胞（１５〜１７μｍ長）は茶色で全体に同色であり、基部細胞は円錐形で付属糸をもたないことが多いが、多少中心寄りに３μｍ長の短い細胞付属糸を１本もつ場合もあり（２本で中心から離れることは稀）、頂部細胞は半球状であり、直線又はやや曲線状の３本の９〜１１（１０．４）μｍ長単生細胞付属糸をもつ。
【００３２】
ＭＦ６８５６は球状で密生し、３本の単生頂部付属糸のある石垣状分生子をもつことからＭｏｒｉｎｉａ属に分類される。この属の単一の種であるＭ．ｐｅｓｔａｌｏｚｚｉｏｉｄｅｓは分生子果が同様であり、分生子は楕円形、紡錘形、石垣状、玉虫色で通常は３本の頂部付属糸をもつが（Ｂｅｒｌ．＆  Ｂｒｅｓ．（Ｇｕｂａ，Ｅ．Ｆ．１９６１．Ｍｏｎｏｇｒａｐｈ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｈａｅｔｉａ  ａｎｄ  Ｐｅｓｔａｌｏｔｉａ．Ｈａｒｖａｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ：Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）、ＭＦ６８５６はこの種と多少の形態学的類似性を示す。しかし、ＭＦ６８５６にはＭ．ｐｅｓｔａｌｏｚｚｉｏｉｄｅｓには分類しかねる多少の重要な相違点もある。即ち、ＭＦ６８５６の分生子は頂部付属糸がＭ．ｐｅｓｔａｌｏｚｚｉｏｉｄｅｓよりも短く、Ｍ．ｐｅｓｔａｌｏｚｚｉｏｉｄｅｓには存在しない１又は２本の短い基部付属糸が存在する場合もある。更に、Ｍ．ｐｅｓｔａｌｏｚｚｉｏｉｄｅｓの分生子は分生子分離後も小柄として結合していることが多い屈曲糸状分生子形成細胞上に形成されるが、ＭＦ６８５６の分生子は分離後に分生子基部細胞に結合していることが稀な著しく幅が広く短い円筒形分生子形成細胞上に形成される。従って、ＭＦ６８５６はＭｏｒｉｎｉａ属の不確定種として分類される。
【００３３】
培養株ＭＦ６８６４はＰｕｅｒｔｏ  Ｖａｒｇａｓ，コスタリカで採取したサボテン幹サンプルから単離されたＣｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ種の株である。Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ．，Ｉｎｃ．，Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．のカルチャーコレクションの真菌株ＭＦ６８６４はブダペスト条約に従い、２００１年１１月１４付けで１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ  ２０１１０−２２０９に所在のＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎのカルチャーコレクションに寄託され、受託番号ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＰＴＡ−３８６１を付与された。
【００３４】
真菌コロニーは寒天培養で以下の形態学的特徴を示す（Ｋｏｒｎｅｒｕｐ，Ａ．＆  Ｗａｎｓｃｈｅｒ，Ｊ．Ｈ．（１９７８）．Ｍｅｔｈｕｅｎ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｏｌｏｕｒ．第３版．Ｅｙｒｅ，Ｍｅｔｈｕｅｎ，Ｌｏｎｄｏｎによる色名及びコード）。
【００３５】
コーンミール寒天（Ｄｉｆｃｏ）上のコロニーは２２℃、湿度８０％で２１日後に７７ｍｍに達し、テキスチャーは平坦で中心が綿毛状であるが、密集せず、オリーブグレー（２Ｆ２）であり、縁部に向かって毛が少なくなり、黄色がかった灰色になる（２Ｄ２，２Ｂ２）。臭気と浸出液はない。周辺は均一で透明である。裏面はオリーブブラウン（４Ｆ６）で放射状外観であり、中心の周囲に同心円状の環アレーをもつ。可溶性色素なし。
【００３６】
オートミール寒天（Ｄｉｆｃｏ）上のコロニーは２２℃、湿度８０％で２１日後に７５ｍｍに達し、平坦でコロニー中心に直径５〜１０ｍｍの窪みがあり、その中に暗色菌糸群が含まれ、テキスチャーはベルベット状から綿毛状であり、中心はダークグレー（２Ｆ１）で周辺に向かってライトグレー（２Ｂ２）になる。周辺は白色で均一である。臭気と浸出液はない。裏面はミディアムグレー（４Ｅ１）である。可溶性色素なし。
【００３７】
ポテト・デキストロース寒天（Ｄｉｆｃｏ）上のコロニーは２２℃、湿度８０％で２１日後に８０ｍｍに達し、平坦で中心はベルベット状であり、タークグレー（１Ｆ１）とミディアムグレーの交互のフリンジが同心円状に配置されており（１Ｅ１）、周辺に向かって透明（４Ｂ１）希薄になり、縁部は透明である。黒色菌糸のクラスターに透明浸出液が発生し、コロニー中心の周囲に不規則に分配された暗色スポットを形成する。周辺は均一である。裏面はオリーブ色（３Ｆ７）。無臭。薄黄色（３Ａ５）可溶性色素。
【００３８】
栄養菌糸は有隔、透明、不規則寸法であるか、又はオリーブ色菌糸束を形成する。分生子柄はマクロネマタスで８０〜１５０μｍ長であり、これよりも著しく長い場合もあり、厚さ３〜５μｍでペール〜ミディアムオリーブブラウンであり、平滑であるか又は細かい粗面である。分枝分生子は平滑でペールオリーブブラウンであり、１５〜３２（２１．５）ｘ３〜５（４．５）μｍで０〜４（多くの場合は２）隔壁である。分生子形成細胞は平滑でペールオリーブブラウンであり、多出芽型で一般に集積し、末端と中間の仮軸がほぼ円筒形で瘢痕性であり、瘢痕が目立つ。分生子は平滑でペールオリーブブラウン〜透明で楕円形のレモン形であり、３〜７（５）ｘ２〜３．５（２．５）μｍで無隔壁であり、瘢痕が目立つ。
【００３９】
分生子柄がマクロネマタスでオリーブブラウンであり、分枝分生子が存在し、分生子形成細胞が集積して多出芽型であり、仮軸と分生子が分枝鎖で両端又は基部のみに瘢痕の目立つ点はＣｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ  Ｌｉｎｋ  ｅｘ  Ｆｒｉｅｓ属（アナモルフＭｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａｃｅａｅ）の特徴である。ＭＦ６８６４は熱帯地方でよく見られる汎存真菌種であるＣ．ｔｅｎｕｉｓｓｉｍｕｍ  Ｃｏｏｋｅ（Ｆｒｅｓｅｎ．）ｄｅ  Ｖｒｉｅｓ．の分生子柄に似たこぶのない長尺直線状で茶色の分生子柄を形成する。しかし、Ｃ．ｔｅｎｕｉｓｓｉｍｕｍは分生子寸法範囲がＭＦ６８６４よりも著しく広い（Ｅｌｌｉｓ，Ｍ．Ｂ．１９７６．Ｍｏｒｅ  Ｄｅｍａｔｉａｃｅｏｕｓ  Ｈｙｐｈｏｍｙｃｅｔｅｓ．Ｃｏｍｍｏｎｗｅａｌｔｈ  Ｍｙｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ：Ｋｅｗ，ＵＫ）。Ｃ．ｔｅｎｕｉｓｓｉｍｕｍは分生子柄分枝又は分枝分生子に関する他の形態学的特徴に関する情報がないことに加えて分生子寸法が分散しているので、ＭＦ６８６４をこの種の株であると明確に同定することはできないため、この単離株はＣｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ属の未確定種として分類される。
【００４０】
発酵手順
一般に、Ｍｏｒｉｎｉａ種として同定されたＭＦ６８５６（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＰＴＡ−３８６２）とＣｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ種として同定されたＭＦ６８６４（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＰＴＡ−３８６１）とは、同化炭素及び窒素源を含む水性栄養培地で培養する。例えば、液中好気性条件（例えば振盪培養、深部培養等）下に培養株を増殖させることができる。水性培地は発酵工程の開始及び終了（回収）時にｐＨ約６〜８に維持することが好ましい。モルホリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ）、モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）等の緩衝液を使用するか、又は内在的に緩衝性をもつ栄養材料を選択することにより所望ｐＨを維持することができる。
【００４１】
栄養培地中の好適な炭素源は炭水化物（例えばグルコース、キシロース、ガラクトース、グリセリン、澱粉、スクロース、デキストリン等）である。添加可能な他の炭素源としてはマルトース、ラムノース、ラフィノース、アラビノース、マンノース、琥珀酸ナトリウム等が挙げられる。
【００４２】
好適な窒素源は酵母エキス、肉エキス、ペプトン、グルテンミール、綿実ミール、大豆ミール及び他の植物ミール（部分又は完全脱脂物）、カゼイン水解物、大豆水解物及び酵母水解物、コーンスティープリカー、ドライイースト、小麦胚芽、フェザーミール、ピーナツ粉、蒸留廃液可溶分（ＤＳ）等、並びに無機及び有機窒素化合物、例えばアンモニウム塩（例えば硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等）、尿素、アミノ酸等である。
【００４３】
炭素及び窒素源は併用すると有利であるが、微量の成長因子と多量の無機栄養素を含有する低純度材料も利用できるので、純粋形態で使用する必要はない。所望により、無機塩（例えば炭酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリウム、マグネシウム塩、銅塩、コバルト塩等）を培地に加えてもよい。必要に応じ、特に培地が過度に発泡する場合には、脱泡剤（例えば流動パラフィン、脂肪油、植物油、鉱物油又はシリコーン）を加えてもよい。
【００４４】
細胞を大量に生産する条件については、液中好気性培養条件が細胞培養法の１例である。少量生産には、フラスコ又はびんでの振盪又は表面培養を利用する。更に、大型タンクで増殖を行う場合には、生産工程中の増殖の遅れを避けるように生産タンクに接種するのに生物の栄養形を使用することが好ましい。従って、「スラント」生産した生物の胞子又は菌糸体を比較的少量の培地に接種して前記接種培地（「シード用培地」とも言う）を培養することにより生物の栄養形接種材料をまず生産した後に、培養した栄養形接種材料を大型タンクに無菌的に移すことが望ましい。接種材料を生産する発酵培地は一般に接種前にオートクレーブ滅菌する。培地のｐＨはオートクレーブ滅菌段階までに一般に約６〜７に調整する。
【００４５】
培養混合物の撹拌と通気は種々の方法で実施することができる。撹拌はプロペラ又は同様の機械的撹拌装置、発酵器の回転又は振盪、種々のポンプ装置、又は無菌空気の培地流通により行うことができる。通気は発酵混合物に無菌空気を通すことにより行うことができる。
【００４６】
発酵は約２０℃〜３０℃、好ましくは２２〜２５℃の温度で約１４〜２８日間行うのが一般的であり、発酵条件及び規模に応じて調節することができる。
【００４７】
発酵を実施するのに好適な培養／生産用培地としては実施例に記載したような培地が挙げられる。
【００４８】
化合物の単離及び特性決定
化合物Ｉはメチルエチルケトンで抽出して数時間室温で混合することによりどちらかの真菌培養株の発酵産物から回収される。その後、混合物を濾過し、式Ｉの粗化合物を残渣として含むように濾液を濃縮乾涸する。他の適当な抽出溶媒としては酢酸エチル、メタノール及びアセトンが挙げられる。等容量のメタノールを加え、数時間室温で撹拌することにより液体発酵ブロスを抽出する。非混和性溶媒（例えばメチルエチルケトン又は酢酸エチル）も適当である。次に混合物を濾過し、式Ｉの粗化合物の溶液を得る。他の適当な抽出溶媒としてはアセトン又はエタノールが挙げられる。
【００４９】
固体発酵ブロスからの産物は抽出物からイオン交換樹脂での吸着／溶出により回収する。液体発酵からの産物はポリスチレンジビニルベンゼン樹脂での固相吸着／溶出により回収する。次に、固体発酵について記載したと同様に弱塩基性イオン交換樹脂で溶出液を更に精製する。次に、好ましくは逆相で、クロマトグラフィーにより生成物を更に単離する。
【００５０】
粗発酵から式Ｉの化合物を捕獲するのに好適なイオン交換吸着／溶出樹脂は親水性弱塩基性ポリマーである。式Ｉの化合物を含む粗抽出液をメタノールと水の混合物に溶かし、約ｐＨ７に調整し、イオン交換樹脂ベッドに吸着させる。イオン強度の高い溶液で樹脂を洗浄するか又は溶離剤溶液のｐＨを下げることにより式Ｉの化合物を回収する。水混和性溶媒を使用して液体発酵の抽出液から式Ｉの化合物を捕獲するのに好適な吸着／溶出樹脂はポリスチレンジビニルベンゼンポリマー（例えばＭｉｔｓｕｂｉｓｈｉ  ＳＰ２０７）である。低有機溶媒濃度、高水濃度で式Ｉの化合物を樹脂に吸着させ、有機溶媒（例えばメタノール）で樹脂を洗浄することにより溶出させる。固体発酵のメチルエチルケトン抽出液から式Ｉの化合物を初期精製するのに高速向流クロマトグラフィーを使用してもよい。
【００５１】
式Ｉの化合物の最終精製に好適な方法は逆相液体クロマトグラフィーである。固定相はＣ８又はＣ１８結合相とすることができる。好適な溶離剤は水とアセトニトリル又はメタノールの酸性化混合物である。その後、アセトニトリル又はメタノールの除去後に減圧濃縮又は凍結乾燥により式Ｉの化合物を回収することができる。
【００５２】
回収した化合物をその後、赤外スペクトル、ＮＭＲスペクトル及び質量スペクトルにより更に特性決定することができる。
【００５３】
ＳＷＯＲＤＩＩＩアッセイ
天然産物ソルダリンは種々の真核生物に由来するｅＥＦ２蛋白質と高度のアミノ酸配列相同を示すのにも拘わらずｅＥＦ２の機能を妨害することにより真菌蛋白質合成を阻害する四環式ジテルペングリコシドである。ソルダリンとその誘導体は感受性真菌でｅＥＦ２−リボソーム−ヌクレオチド複合体と結合する。ヒト、酵母及び植物細胞に由来する精製成分を使用する種々のインビトロアッセイによると、ソルダリンとその誘導体に対する選択的感受性は真菌ｅＥＦ２に依存することが判明した。ソルダリンの真菌特異性によりｅＥＦ２は魅力的な抗感染ターゲットとなる。（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．１９９８，Ｆｅｂ  ６；２７３（６）：３１４８−５１）。
【００５４】
スクリーニングストラテジーは真菌蛋白質合成（延長）のソルダリン感受性段階をターゲットとするが、ヒトｅＥＦ２構築物を含む株を死滅させない天然産物及び／又は合成化学物質を同定することである。具体的には、ヒト対照と他の株の間に示差活性を示す天然産物をスクリーニングするが、初期発見作業に１００％の差は必要ない。真菌ｅＥＦ２及び／又は原生動物ｅＥＦ２のみに対するヒットを観察することも可能であると考えられる。要するに、ユニーク且つ選択的な作用メカニズムをもつ抗感染剤を開発する機会を提供するように真菌及び原生動物ｅＥＦ２の阻害剤を同定するようにＳＷＯＲＤＩＩＩを設計する。
【００５５】
種々の濃度のソルダリンに耐性を示す数種のＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ突然変異体を分析した結果、Ｌ１０ｅ／ｒｐＰ０及びｅＥＦ２の特定領域間の機能的結合が判明し、ｅＥＦ２は特異性決定基であることが分かった。従って、種々の生物と数種の病原性真菌に由来するｅＥＦ２をコードする遺伝子をＭｅｒｃｋ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙで従来記載されているようにクローニングし、特性決定し、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅで発現させた（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  １４７：３８３−９０，２００１）．ｅＥＦ２をコードするＣ．ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ遺伝子をＰＣＲオーバーラップ伸長法により部位特異的突然変異誘発し、Ｓ５２１Ｙ，Ｎ５２３Ｓ単独突然変異体とＳ５２１Ｙ，Ｎ５２３Ｓ二重突然変異体を作成した（Ｇｅｎｅ  ７７：５１−５９，１９８９）．Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃ．ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃ．ｋｒｕｓｅｉ、Ｃ．ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ、Ｃ．ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｃ．ｐａｒｖｕｍ又はヒトＥＦ２からのアミノ酸残基をコードする突然変異体Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ｅＥＦ２遺伝子を従来記載されているようにカセット突然変異誘発により構築した（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．５：８２６−８２９，１９９９）。
【００５６】
上記各真菌ＥＦＴ２構築物からのプラスミドＤＮＡを使用してＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａΔｅｆｔ１Δｅｆｔ２欠失株ＹＥＦＤ１２ｈをロイシン要求性に形質転換した。ロイシンを含まないＳＣ培地で各形質転換細胞からのコロニーを一晩増殖させた後、５ＦＯＡ含有培地に細胞１ｘ１０６個をプレーティングし、ｐＵＲＡ３−ＥＦＴ１を排除した。ソルダリン５μｇ／ｍｌ又は１０μｇ／ｍｌを含有する培地に細胞をプレーティングすることにより予測ソルダリン耐性表現型についても形質転換細胞をアッセイした。コロニーが出現するまでプレートを２９℃で約３日間培養した。従来記載されているように増殖阻害アッセイを実施し、用量応答曲線を作成した（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：３１４８−３１５１，１９９８）。従って、ＳＷＯＲＤＩＩＩはｅＥＦ２構築物のみが異なるＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ株の同系集合から構成される。
【実施例１】
【００５７】
シード用培養菌体の接種
１０％滅菌グリセロールを入れたバイアルで寒天プラグ上に培養菌体を維持し、使用時まで−８０℃で保存した。以下の組成（ｇ／リットル）：
【００５８】
【表１】
2005519039.tif 000004
をもつシード用培地６０ｍｌを入れた２５０ｍｌ三角フラスコに寒天プラグ４個を無菌的に移すことによりシード用培養菌体を接種した。
【００５９】
微量元素溶液は以下の成分から構成した：
【００６０】
【表２】
2005519039.tif 000005
【００６１】
シード用培地に蒸留水を加えた。ＮａＯＨを加えてｐＨを６．８に調整し、培地を２５０ｍｌ三角フラスコに分注し、セルロースプラグで圧栓した後に１２１℃で２０分間オートクレーブ滅菌した。
【００６２】
シード用培地を２２℃で旋回式シェーカー（２２０ｒｐｍ）にて５日間培養した後に発酵フラスコに接種した。
【実施例２】
【００６３】
ＭＶ８培地におけるＭＦ６８５６の発酵
ＭＶ８生産用培地を次のように処方した（１リットル当たり）：
【００６４】
【表３】
2005519039.tif 000006
【００６５】
生産用培地に蒸留水を加え、ｐＨ調整は行わなかった。これを５００ｍｌ三角フラスコ（フラスコ当たり１２０ｍｌ）に分注し、セルロースプラグで圧栓した後に１２１℃で２０分間オートクレーブ滅菌した。発酵フラスコに栄養形シード用菌体（４％）４．８ｍｌを接種し、２２℃、湿度７０％で旋回式シェーカー（２２０ｒｐｍ）にて２０日間培養した。この発酵ブロスをＭＥＫで直接抽出する。
【実施例３】
【００６６】
ＡＤ２Ｍ２培地におけるＭＦ６８５６の発酵
ＡＤ２Ｍ２生産用培地を次のように処方した（１リットル当たり）：
蒸留水１リットルにグルコースを加えてオートクレーブ滅菌する。オートクレーブ滅菌後に、別途蒸留水１リットルに加えてオートクレーブ滅菌しておいた他の成分を加える。
【００６７】
【表４】
2005519039.tif 000007
【００６８】
生産用培地に蒸留水を加え、ｐＨ７に調整した後にＣａＣＯ３を加えた。これを５００ｍｌ三角フラスコ（フラスコ当たり２２０ｍｌ）に分注し、セルロースプラグで圧栓した後に１２１℃で２０分間オートクレーブ滅菌した。発酵フラスコに栄養形シード用菌体（４％）８．８ｍｌを接種し、予め滅菌しておいたバーミキュライト６７５ｃｃを入れた１リットルＢｅｌｌｃｏびんに注入した。びんを２２℃、湿度７０％で２０日間回転（４ｒｐｍ）培養した。びんの発酵ブロスをＭＥＫで直接抽出する。
【実施例４】
【００６９】
ＬＳＦＭ培地におけるＭＦ６８６４の発酵
ＬＳＦＭ生産用培地を次のように処方した（１リットル当たり）：
【００７０】
【表５】
2005519039.tif 000008
【００７１】
生産用培地に蒸留水を加え、ｐＨ７に調整した。培地を５００ｍｌ三角フラスコ（フラスコ当たり１２０ｍｌ）に分注し、セルロースプラグで圧栓した後に１２１℃で２０分間オートクレーブ滅菌した。発酵フラスコに栄養形シード用菌体（４％）４．８ｍｌを接種し、２２℃、湿度７０％で旋回式シェーカー（２２０ｒｐｍ）にて２３日間培養した。この発酵ブロスをＭＥＫで直接抽出する。
【実施例５】
【００７２】
式Ｉの化合物の単離
ＡＤ２Ｍ２培地におけるＭＦ６８５６の１２リットル固体発酵産物のメチルエチルケトン抽出液を減圧濃縮乾涸した。固体残渣をメタノール（９００ｍＬ）に溶かし、Ｈ２Ｏ（３００ｍＬ）で希釈し、溶液を希ＮａＯＨ釈でｐＨ６．６に調整した。得られた溶液をセライト濾過により清澄化し、濾液を１０ｍＬ／分でＢｉｏＲａｄ  ＡＧ４ｘ４カラム（ギ酸サイクル，ベッド容量２００ｍＬ）にアプライした。カラムを７５％ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（９００ｍＬ）で洗浄した後、式Ｉの化合物を７５％ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ中１００ｍＭギ酸ナトリウム（ｐＨ４．５）の溶液で溶出させ、フラクション２００ｍＬを集めた。式Ｉの化合物はフラクション２及び３で溶出した。フラクション２及び３を合わせ、約２６０ｍＬまで減圧濃縮し、得られた溶液を濃Ｈ３ＰＯ４でｐＨ３．１に調整した。この溶液を等容量のヘキサン：ＥｔＯＡｃ（４：６）で３回抽出した。有機層を合わせてＨ２Ｏで洗浄し、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮すると、式Ｉの粗化合物１．１３ｇが得られた。
【００７３】
上記からの式Ｉの粗化合物を高速向流クロマトグラフィー（ＨＳＣＣＣ）により更に精製した。ＨＳＣＣＣ分離は３００ｍＬ，内径１．６８ｍｍコイルを備えるＰ．Ｃ．Ｉｎｃ．（Ｐｏｔｏｍａｃ，ＭＤ）製多層コイルプラネット遠心機で実施した。まずＣＨ２Ｃｌ２＋０．０４％トリフルオロ酢酸から構成される固定相をカラムに充填した。上記からの式Ｉの粗化合物を固定相（１０ｍＬ）に溶かし、カラムの後端に注入した。コイル回転数８００ｒｐｍで１０ｍＭ  ＮＨ４ＯＨ水溶液の移動相をコイルの後端から先端に向かって３ｍＬ／分でポンプ供給した。ｐＨ電極を通る流れを使用してコイル流出液のｐＨを監視し、フラクション９．０ｍＬを集めた。式Ｉの化合物はフラクション２９〜４３で溶出した。これらのフラクションを合わせ、上述のように脱塩すると、式Ｉの粗化合物２９６ｍｇが得られた。
【００７４】
ＲＰＨＰＬＣを使用して式Ｉの化合物の最終精製を行った。ＨＳＣＣＣ精製からの式Ｉの粗化合物をメタノール（１０ｍＬ）に溶かし、０．１％ギ酸を加えたＨ２Ｏ（５ｍＬ）で希釈した。０．１％ギ酸を加えたＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ（６：４）を流速６０ｍＬ／分で移動相として使用し、上記溶液をＣ８，１５μｍ，５ｃｍｘ２５ｃｍで同一条件下に３回分取ＲＰＨＰＬＣにかけた。式Ｉの化合物は１８．７分に溶出した。式Ｉの化合物を含むフラクションを合わせ、減圧濃縮して過剰のＣＨ３ＣＮを除去し、凍結乾燥し、式Ｉの化合物１３５ｍｇを得た。
【００７５】
ＭＦ６８５６の液体発酵産物を等部量のメタノールで抽出し、固形分をセライトパッドで濾別した。濾液（約５６Ｌ）を希Ｈ２ＳＯ４でｐＨ３．１に調整し、Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ  ＳＰ２０７  Ｓｅｐａｂｅａｄｓカラム（カラム容量＝２．５Ｌ）に１０Ｌ／時でアプライした。カラムを５０％メタノール／Ｈ２Ｏ（８Ｌ）で洗浄し、式Ｉの化合物をメタノール（６．５Ｌ）で溶出させた。メタノール溶出液をＨ２Ｏ１８５０ｍＬで希釈し、希ＮａＯＨでｐＨ６．５に調整した。この溶液をＢｉｏＲａｄ  ＡＧ４ｘ４カラム（容量＝５００ｍＬ）で上述のように更に精製した。上記条件下にＲＰＨＰＬＣ（カラム＝７．５ｃｍｘ２５ｃｍ）を流速２５０ｍＬ／分で使用してイオン交換リッチ画分から式Ｉの化合物の最終精製を行った。
【実施例６】
【００７６】
式Ｉの化合物の同定
赤外スペクトルデータ
赤外スペクトル分析によると、式Ｉの化合物は１８０３、１７１０、１０９６ｃｍ−１でＺｎＳｅ結晶上に薄膜として出現した。
【００７７】
ＮＭＲスペクトルデータ
式Ｉの化合物の１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルを２５℃でＶａｒｉａｎ  ＵｎｉｔｙスペクトロメーターにてＣＤ２Ｃｌ２中１２５ＭＨｚで記録した。５３．８ｐｐｍの溶媒ピークを内部標準として使用して０ｐｐｍのテトラメチルシラン（ＴＭＳ）に対するｐｐｍとして化学シフトを示す。
【００７８】
化合物Ｉの１３Ｃ  ＮＭＲシフト（ＣＤ２Ｃｌ２０．１２５ｍＬ中１．０ｍｇ、２５℃）：２０５．１（ｓ），１７８．９（ｓ），１７６．２（ｓ），１７２．９（ｓ），１４８．８（ｓ），１３１．１（ｄ），１０８．２（ｓ），９８．７（ｄ），８３．０（ｄ），７６．２（ｄ），７４．９（ｄ），７４．１（ｄ），７２．９（ｓ），７０．１（ｄ），６５．９（ｓ），６２．１（ｑ），５９．２（ｓ），４６．９（ｄ），４２．１（ｄ），４１．６（ｄ），３４．２（ｔ），３２．５（ｔ），３２．４（ｔ），３１．４（ｄ），２９．８（ｔ），２９．５（ｔ），２９．３（ｔ），２９．２（ｔ），２９．１（ｔ），２８．０（ｄ），２６．６（ｔ），２５．１（ｔ），２５．０（ｔ），２２．８（ｑ），２１．３（ｑ），１７．７（ｑ），１７．５（ｑ）。
【００７９】
式Ｉの化合物の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを２５℃でＶａｒｉａｎ  ＵｎｉｔｙスペクトロメーターにてＣＤ２Ｃｌ２中５００ＭＨｚで記録した。５．３２ｐｐｍの溶媒ピークを内部標準として使用して０ｐｐｍのテトラメチルシラン（ＴＭＳ）に対するｐｐｍとして化学シフトを示す。
【００８０】
式Ｉの化合物の１Ｈ  ＮＭＲシフト（ＣＤ２Ｃｌ２０．１２５ｍＬ中１．０ｍｇ、２５℃）：０．８０１（ｄ，６．５），０．９６７（ｄ，６．５），１．０２９（ｄ，７．０），１．２５（ｍ），１．３１４（ｄ，６．５），１．６０（ｍ），１．７６（ｍ），１．８０（ｍ），１．９７（ｍ），２．０６（ｍ），２．３０（ｍ），２．３２（ｍ），２．６８６（ｂｒｔ，３．０），３．３２５（ｄ，９．５），３．４７４（ｓ），３．５４４（ｄ，９．５），３．７０３（ｄ，９．５），３．７１４（ｄ，１．００，３．９００（ｄ，９．５），４．５６６（ｄ，１．０），４．５９８（ｄｄ，４．０，７．０），６．０８８（ｂｒｔ，３．０）。
【００８１】
質量スペクトルデータ
ＥＳＩ−ＦＴＭＳにより分析し、［Ｍ＋Ｈ］をｍ／ｚ６９１．３７０５に観測し、Ｃ３７Ｈ５５Ｏ１２について計算した値は６９１．３６９４であった。
【実施例７】
【００８２】
式Ｉの化合物の生体機能
ＳｗｏｒｄＩＩＩアッセイデータ
Ｓｈａｓｔｒｙら，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ．２００１，１４７（２）：３８３−９０に記載されているようにＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ＥＦＴ２プロモーター下に全長異種ｅＥＦ２を発現するＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ株を作成した。ソルダリンを含有するＳＣ培地の１００→０．２μｇ／ｍｌ連続２倍希釈液に菌を接種した後に２９℃で約１６時間培養することにより増殖阻害アッセイからＩＣ５０値を決定した。表Ｉ参照。
【００８３】
【表６】
2005519039.tif 000009
【００８４】
インビトロ翻訳アッセイデータ
Ｓｈａｓｔｒｙら，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００１，１４７（２）：３８３−９０に記載されているようにインビトロ翻訳アッセイを実施した。ＩＣ５０値は３回の独立した実験の平均値である。感度の下限は約０．００５μｇ／ｍｌである。表ＩＩ参照。 
【００８５】
【表７】
2005519039.tif 000010
【００８６】
Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａに対するアッセイ
オートクレーブ滅菌後に下記濃度の薬剤を加えたポテト・デキストロース寒天（Ｄｉｆｃｏ製品）３ｍｌを２４ウェルマイクロタイタープレートのウェルに放置した。Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ（ＡＴＣＣ２６９４３）の胞子懸濁液１０μｌを各ウェルに加え、プレートを２５℃で培養した。ポテト・デキストロース寒天プレートにＡ）ソルダリン及びＢ）式Ｉの化合物をａ）０μｇ／ｍｌ、ｂ）１μｇ／ｍｌ、ｃ）２μｇ／ｍｌ、ｄ）５μｇ／ｍｌ、ｅ）１０μｇ／ｍｌ、及びｆ）２０μｇ／ｍｌ加えた後にプレートにＢｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ（ＡＴＣＣ２６９４３）の懸濁液を接種し、３日目と４日目に写真撮影した。図１参照。
【図面の簡単な説明】
【００８７】
【図１】ポテト・デキストロース寒天プレートにＡ）ソルダリン及びＢ）式Ｉの化合物をａ）０、ｂ）１、ｃ）２、ｄ）５、ｅ）１０及びｆ）２０μｇ／ｍｌ加えた後にＢｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ懸濁液を接種し、３日目と４日目に写真撮影した。
【図１】
2005519039.tif 000012
【国際調査報告】
2005519039.tif 000013
2005519039.tif 000014
2005519039.tif 000015