(57)【要約】本発明はソラナムグリコシド類の化学的合成法に関し、より詳細にはソラマルジンおよび新規のβ−単糖類中間体化合物の化学的合成法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式Ｉ：
【化１】
2005502671.tif 000018
（式中Ｒ1およびＲ2の各々が同じであるか異なっており、慣用的な炭水化物保護基である。）
で表されるグルコース−ソラソジン接合体またはその誘導体。
【請求項２】
請求項１に記載のグルコース−ソラソジン接合体の製造方法であって、ソラソジンと、以下の一般式ＩＩ：
【化２】
2005502671.tif 000019
（式中、Ｒ3は各々独立にベンゾイル、アセチルまたはピバロイル基であり、
Ｒ4がＣｌ、ＢｒまたはＩから選択されるハロゲンで、Ｒ5が水素であるか、または
Ｒ4が水素で、Ｒ5がＳＥｔまたはＳＰｈである。）で表されるグルコピラノシル受容体とを反応させ、次いで、場合により、得られたグリコシドの脱保護をして、以下の式Ｖ：
【化３】
2005502671.tif 000020
で表される化合物を製造し、そしてもっとも反応性のヒドロキシル基（ＯＨ−３およびＯＨ−６）を再エステル化して、以下の式ＩＩａ：
【化４】
2005502671.tif 000021
（式中、Ｒ2はピバロイルまたはアセチルから選択される基である。）
を製造する、前記方法。
【請求項３】
ソラマルジンの製造方法であって、式ＩＩａ：
【化５】
2005502671.tif 000022
（式中、Ｒ2は請求項１に定義したとおりである。）のジオールとα−Ｌ−ラムノピラノシル受容体とのグリコシル化により、式ＩＩＩ（１）の保護されたソラマルジンを製造し、これを脱エステル化して式ＩＩＩ（２）
【化６】
2005502671.tif 000023
（式中、（１）Ｒ1＝ピバロイルおよびＲ2＝ベンゾイルまたはアセチル
（２）Ｒ1＝Ｒ2＝Ｈである。）
のソラマルジンを製造する、前記方法。
【請求項４】
請求項２の記載の方法であって、Ｄ−グルコースピラノシル受容体がテトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−グルコピラノシルブロミドであるか、テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グルコピラノシルブロミドである、前記方法。
【請求項５】
請求項２または４に記載の方法であって、グリコシル化反応を、トリフルオロメタンスルホン酸銀（銀トリフレート）、ボロントリフルオライドジエチルエーテレート、トリメチルシリルトリフレートブロミド、Ｎ−ヨードスクシンイミドまたはジメチルチオメチルスルホニウムトリフレート、銀トリフルオロメチルトリフレートから選択される促進剤の存在下で行う、前記方法。
【請求項６】
請求項２に記載の方法であって、保護されたグリコシドを、メタノール−ジクロロメタン溶液中でナトリウムメトキシドで処理し、次いで固体ＣＯ2またはマイルドなイオン交換樹脂により中和することによって脱保護する、前記方法。
【請求項７】
請求項２に記載の方法であって、もっとも反応性のヒドロキシル基（ＯＨ−３およびＯＨ−６）をピリジン中のピバロイルクロリドで再エステル化する、前記方法。
【請求項８】
請求項３に記載の方法であって、ラムノース受容体が、トリ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｌ−ラムノピラノシルブロミド、トリ−Ｏ−ピバロイル−α−Ｌ−ラムノピラノシルトリクロロアセトアミデートまたは一般式ＩＶ：
【化７】
2005502671.tif 000024
（式中、Ｒ6はＢｒ、Ｃｌ、Ｉ、ＳＥｔまたはＳＰｈであり、
Ｒ7はベンゾイル、アセチルまたはピバロイルである。）
のグリコシドのグルコシドである、前記方法。
【請求項９】
請求項３に記載の方法であって、保護されたソラマルジンが、メタノール−ジクロロメタン溶液またはメタノール−テトラヒドロフラン−水混合物中のナトリウムメトキシド、または水酸化ナトリウムから選択される塩基による処理で脱エステル化し、次いで固体ＣＯ2またはマイルドな酸イオン交換樹脂で中和する、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ソラナムグリコシドの化学的合成に関し、より詳細にはソラマルジンおよび新規のβ−単糖類中間体化合物の合成に関する。
【０００２】
ソラソジンおよびそのグリコシドは臨床学的に非常に重要である。種々のステロイド性薬剤の合成のための出発物質として広く用いられている。例えば、アグリコンソラソジンはコルチゾンおよびプロゲステロンの合成源である。
【０００３】
さらに天然に発生する接合体ソラソジングリコシド類は潜在的に抗新生物性特性を有するということは充分に確立している。特に重要なのは、トリグリコシドソラソジン  （２２Ｒ，２５Ｒ）−スピロ−５−エン−３β−イル−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１−＞２ガル）−Ｏ−ｐ−Ｄ−グルコピラノシル−（１−＞３  ガル）−β−Ｄ−ガラクトピラノースおよびソラマルジン  （２２Ｒ，２５Ｒ）−スピロ−５−エン−３β−イル−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１−＞２  グル）−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１−＞４  グル）−β−Ｄ−グルコ−ピラノースである。このようなトリグリコシドは以下の式で示される：
【０００４】
【化１】
2005502671.tif 000002
【０００５】
【化２】
2005502671.tif 000003
【０００６】
上記トリグリコシド類は慣用的には植物源から抽出により得ている。したがって商業的に入手可能のＳ．ソドマエウム（S.sodomaeum)、通常ＢＥＣと称される（Drug Future, 1988, vol. 13.8, 714-716）ものはソラマルジン、ソラソジンおよびそれらの異性体ジグリコシド類の粗製混合物である。BECを作る抽出工程はS.ソドマエウムの果実を大容量の酢酸でホモジェナイズし、液体をモスリンで濾過し、次いでアンモニアでグリコシド類を沈殿させる工程を含む（Drugs of today (1990), vol. 26, No. 1, p. 55-58）。ソラソジングリコシド混合物の収率は大変低い（およそ１％）。さらに個々の製造工程は、スケールアップ、生ずる化合物の定義づけおよび製品品質という見地からGMPに定められていない。
【０００７】
したがって、不純物をほとんど或いは全く含まない活性の抗新生物性トリグリコシドソラマルジンを高収率で生成する対費用効果の高い製造法に対する大きな要求がある。他のステロイド性環システムとは違い、ソラソジンステロイド骨格は非常に消失しやすいチッ素含有環を有する。よって無傷のステロイド骨格を維持しつつ、このアグリコンを直ちに化学的に修飾することはできない。したがってアグリコンソラソジンは入手可能であるにも関わらず、アグリコン材料を出発材料とするソラマルジンの合成を開示した従来技術はない。
【０００８】
ソラマルジンの合成は、比較的不活性のヒドロキシル基においてソラソジンを立体選択的にグリコシル化することが必要とされる。
ソラソジンは従来のステロイドグリコシル化技術と適合性がないことがわかっている。したがって、ソラソジンをテトラベンゾイルα−D−グルコピラノシルトリクロロアセトイミデートとトリメチルシリル−トリフレートまたはトリフルオライドエーテレートにより処理した後にグリコシル化は観察されない（未発表の結果）。
【０００９】
本発明に存在する課題は、対費用効果の高いソラマルジンの調製方法を提供することである。
本発明は、特定のグルコピラノシル受容体を用いて、ソラソジンの立体選択的β−グリコシル化を高収率で達成したことに帰される。好ましくは、反応は促進剤の存在下で行われる。
発明の詳細な説明
こうして、以下の式II；
【００１０】
【化３】
2005502671.tif 000004
【００１１】
（式中、R3は各々独立にベンソイル、アセチルまたはピバロイル基を表し、
R4がCl、BrまたはIから選択されるハロゲンで、R5が水素であるか、または
R4が水素でR5がSEｔまたはSPｈである。）
のD−グルコピラノシル受容体と、ソラソジンとを反応させることにより、対応する式I；
【００１２】
【化４】
2005502671.tif 000005
【００１３】
の保護されたβ−グリコシドを高収率で得ることができることを図らずも発見した。
D−グルコピラノシル受容体としてテトラ−O−ベンゾイル−α−D−グルコピラノシルブロミドが好ましい。
【００１４】
好ましくは反応は促進剤の存在下に行われる。糖化学において用いることができる慣用的な促進剤を用いることができる。以下の促進剤が特に好ましい：銀トリフレート（トリフルオロメタンスルホン酸銀）、銀トリフルオロメタントリフレート、ボロントリフルオライド（−１０℃）、ジエチルエーテレート、トリメチルシリルトリフレートブロミド、N−ヨードスクシンイミドまたはジメチル、チオメチルスルホニウムトリフレート、ここで銀トリフレートがもっとも好ましい。
【００１５】
反応は好ましくはジクロロメタンを溶剤として用いて行う。好ましくは反応時間は３０分間〜１時間であり、−２０℃で行う。
本発明はさらにソラマルジンの合成中間体として用いることができる以下の式Iの新規のβ−グリコシド：
【００１６】
【化５】
2005502671.tif 000006
【００１７】
（式中、R1およびR2は各々同じであるか異なっており、慣用的な保護基であり、好ましくはベンゾイル、ピバロイルまたはアセチル基である。）を提供する。所望の最終生成物ソラマルジンは、式Iのβ−グリコシドを脱保護して以下の式V：
【００１８】
【化６】
2005502671.tif 000007
【００１９】
の化合物を得て、そして場合により、慣用的な保護基を用いてもっとも活性のヒドロキシル基（OH−３およびOH−６）を再エステル化して式IIａ：
【００２０】
【化７】
2005502671.tif 000008
【００２１】
（式中、R2は上述の通りである。）を得ることにより調製することができ、ここで好ましい保護基はピバロイル基である。
次いで部分的に保護したβ−グリコシドジオールをOH−２およびOH−４の位置で、適切なα−Ｌ−ラムノピラノシル受容体でグリコシル化する。適切なラムノース受容体は、トリ−O−ベンゾイル−α−ラムノピラノシルブロミド、トリ−O−ピバロイル−α−L−ラムノピラノシルトリクロロアセトイミデートまたは式IV：
【００２２】
【化８】
2005502671.tif 000009
【００２３】
（式中、R6はBr、Cl、I、SEｔまたはSPｈであり、そして
R7は任意の慣用的な保護基、好ましくはベンゾイル、アセチルまたはピバロイルである。）
のグリコシドが挙げられる。
【００２４】
ラムノース受容体としてトリ−O−ベンゾイル−α−L−ラムノピラノシルブロミドが好ましい。
式III（１）および（２）の保護されたソラマルジン：
【００２５】
【化９】
2005502671.tif 000010
【００２６】
を慣用的な方法、例えば保護されたソラマルジンをメタノール−ジクロロメタン溶液またはメタノール−テトラヒドロフラン−水混合物中でナトリウムメトキシドまたは水酸化ナトリウムなどの塩基で処理することにより脱エステル化して、次いで、例えば固体CO2またはマイルドな酸性イオン交換樹脂（例えば、アンバーリスト（登録商標）５０H+またはダウエックス（登録商標）（H+形））で中和することができる。本発明の合成方法においてこれらのイオン交換樹脂を他の任意の脱保護工程で用いることもできる。
【００２７】
以下に説明する実施例は単に例示を目的とするものであり、本発明の範囲を限定するものと解してはならない。
合成実施例１
工程A  ブロモ２，３，４，６−テトラ−O−ベンゾイル−α−D−グルコピラノース（テトラ−O−ベンゾイル−α−D−グルコピラノシルブロミド）の合成
【００２８】
【化１０】
2005502671.tif 000011
【００２９】
攪拌機および温度計を具備した１リットルの３径丸底フラスコにＤ−グルコース（３０ｇ）を入れた。ピリジン（３００ｍＬ）を加え混合物を穏やかに加熱して溶解させた。氷／水で混合物を１０〜１２℃まで冷却し、ベンゾイルクロリド（１１６ｍＬ）を４０分間にわたって滴下した（温度は２０℃に達した）。約９０ｍＬのベンゾイルクロリドを加えたところで混合物はより粘稠になり淡黄色沈殿が形成した。ベンゾイルクロリドの添加を完了した後、混合物を室温で一晩撹拌し、淡褐色スラリーが形成した。水（４００ｍＬ）を加えて混合物をジクロロメタン（ＤＣＭ）（３×８００ｍＬ）で抽出した。有機相を分離し、水（６００ｍＬ）、１ＮＨＣｌ（２×６００ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ3（８００ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥し（ＭｇＳＯ4）濾過して溶媒を除去し、粘稠なオイル（２）が残った。
【００３０】
次いで、完全にベンゾイル化されたグルコース（２）をジクロロメタン（２００ｍＬ）に溶解し、氷／水浴で０℃まで冷却した。臭化水素（３２％酢酸溶液、１４２ｍＬ）を次いで３０分間にわたって反応混合物に滴下した。添加が終了すると混合物を放置して室温に戻し、そして一晩撹拌した。ジクロロメタン（４００ｍＬ）（ＤＣＭ）を加えて混合物を氷水（４×５００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ3（３×５００ｍＬ）で洗浄して、ＭｇＳＯ4で乾燥し、そして活性炭で濾過した。溶剤を減圧下で除去すると淡黄色オイルが残り、即座に（on standing）凝固した。表題の化合物（３）をジエチルエーテル（８００ｍＬ）および石油エーテル（７００ｍＬ）から再結晶し、８５ｇの白色固体を与えた。
【００３１】
工程Ｂ  ブロモ２，３，４−トリ−O−ベンゾイル−ラムノピラノース（トリ−O−ベンゾイル−ラムノピラノシルブロミド）の合成
【００３２】
【化１１】
2005502671.tif 000012
【００３３】
攪拌機、温度計および圧力補正滴下漏斗を具備した２５０ｍＬの丸底フラスコにＬ−ラムノース（２０ｇ）を入れた。ピリジン（２５ｍＬ）を加え、混合物を氷／水浴を用いて０℃まで冷却した。次いでベンゾイルクロリド（９０ｍＬ）を２０分間にわたって滴下し、そして添加が完了した後混合物を２時間６０℃で加熱した。混合物を室温まで冷却後、水（３０ｍＬ）を加え、２０分間撹拌し、次いでジクロロメタン（ＤＣＭ）５００ｍＬで希釈した。混合物を冷水（２×２００ｍＬ）、１Ｎ  ＨＣｌ（３×２５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ3（３００ｍＬ）および飽和食塩水（３００ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ4上で乾燥し、活性炭で濾過して、減圧下で溶剤を除去して粘稠なシロップ（５）を与えた。
【００３４】
完全にベンソイル化したラムノース（５）を酢酸（３０ｍＬ）に溶解し、そして溶液を０℃まで冷却した。臭化水素（３２％酢酸溶液）を次いで２０分間にわたって滴下した。添加が完了したときに混合物を放置して室温まで戻し、そして一晩撹拌した（１８時間）。
【００３５】
ジクロロメタン（４００ｍＬ）を加え、そして混合物を氷／水（２×２００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4上で乾燥して濾過し、そして減圧下で溶剤を除去するとオイルを与え、即座に結晶化した。トルエン／石油エーテルから再結晶し、表題の化合物（６）２３ｇを白色固体として得た。
【００３６】
工程Ｃ  ソラソジン−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−グルコース（テトラ−Ｏ−ベンゾイル−ソラソド−５エン−３β−イル−Ｄ−グルコピラノシドの合成
【００３７】
【化１２】
2005502671.tif 000013
【００３８】
ソラソジン（７）（１５ｇ、３０２ｍｍｏｌ）、ブロモ−ベンゾイル−グルコース（テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−グルコピラノシルブロミド）（２７ｇ、５４４ｍｍｏｌ）および４オングストロームモレキュラーシーブ（粉末状に砕き６０℃の真空オーブンで予備加熱したもの）を、チッ素導入バブラー、圧力補正滴下漏斗および低温温度計を具備した５００ｍＬの丸底フラスコに入れた。無水ジクロロメタン（２５０ｍＬ）を次いで加え、混合物を室温、アルゴン雰囲気下で４０分間撹拌した。混合物を次いで−２０℃まで冷却した。トリフルオロメタンスルホン酸銀（１４ｇ、５４４ｍｍｏｌ）の無水トルエン溶液を次いで加え、ゆっくりと５℃まで温めて粘稠な淡色の沈殿を生成した。ソラソジン（７）のＲfが０．４２である反応混合物の薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）（溶離液；１０：９０のメタノール：ＤＣＭ）は、Ｒf＝０．５のスポットと、Ｒf＝０．８の過剰のブロモ−グルコース（３）のスポットを示した。反応混合物をセライトパッドで濾過し、ＤＣＭ（２００ｍＬ）で洗浄した。濾過物を、次いで減圧下で濃縮し、濃い暗褐色オイルが残った。シリカゲルクロマトグラフィ（溶離液；４０：６０のＥｔＯＡｃ：トルエンから５０：５０のＥｔＯＡｃ：トルエン）により純生成物（８）（３３．４ｇ、１００％）を淡橙色の皮殻質の（crusty）固体として得た。
【００３９】
工程Ｄ  ベンゾイル脱保護
【００４０】
【化１３】
2005502671.tif 000014
【００４１】
完全に保護されたソラソジン−グルコース付加物（８）（３７ｇ、３７７ｍｍｏｌ）をメタノール（４００ｍＬ）およびジクロロメタン（２００ｍＬ）に溶解した。均一な混合物にナトリウムメトキシド（１２ｍＬ、メタノール中２５重量％）を加え、そして反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物の薄層クロマトグラフィ（溶離液；１０：９０のＭｅＯＨ：ＤＣＭ）は保護された付加物（Ｒf＝０．５、ＵＶ不活性）の残渣を検出せず、Ｒf＝０．９なるより高いランニングスポット（メチルベンゾエート）、Ｒf＝０．１５（ＵＶ不活性、Ｈ2ＳＯ4／ＭｅＯＨ炭化により可視化）に現れる生成物のみを検出した。アンバーリスト（登録商標）１５Ｈ+樹脂を１Ｎ  ＨＣｌで活性化し、濾過し、次いでｐＨ７〜８の間になるまで反応混合物に加えた。次いで減圧下で溶剤を除去し、濃い褐色のシロップを与えた。シリカゲルクロマトグラフィ（溶離液；１０：９０のＭｅＯＨ：ＤＣＭから２０：８８：２のＭｅＯＨ：ＤＣＭ：アンモニア水）により純粋な脱保護生成物（９）（１６．４ｇ、７６％）を得た。
薄層クロマトグラフィ（２０：８８：２；ＭｅＯＨ：ＤＣＭ：アンモニア水）は生成物（Ｒf＝０．５５、ＵＶ不活性、Ｈ2ＳＯ4／ＭｅＯＨ炭化）を示した。
【００４２】
工程Ｅ  グルコース−ソラソジン付加物の（３，６）位への選択的ピバロイル化
【００４３】
【化１４】
2005502671.tif 000015
【００４４】
攪拌機と温度計を具備した３径の丸底フラスコに工程Ｄのグルコース−ソラソジン付加物（１６ｇ、２７８ｍｍｏｌ）（９）とピリジン（１２０ｍＬ）を入れた。氷／水を用いて溶液を０℃まで冷却しピバロイルクロリド（６．７ｇ、５５６ｍｍｏｌ）を２０分間にわたって滴下した。約３０分後、ＴＬＣ試料を水と酢酸エチルで分配し；酢酸エチル層を用い（溶離液：５：９５のＭｅＯＨ：ＤＣＭ）、これは、Ｒf＝０．２の位置にモノピバロイル生成物と、Ｒf＝０．１の位置に幾らかの出発物質のみを示していた。さらに２等量のピバロイルクロリド（６．７ｇ）を加えた（前記のＴＬＣは出発物質を示さず、モノ−およびジピバロイル生成物をそれぞれＲf＝０．２およびＲf＝０．４のみを示した）。さらに０℃で９０分後、ＴＬＣはジピバロイル生成物とごくわずかな不純物のみを示した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、５％ＨＣｌ水溶液（２５０ｍＬ）で３回洗浄した。有機相を飽和ブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過して減圧下で溶剤を除去すると褐色のオイルを得た。シリカゲルクロマトグラフィ（溶離液：５：９５のＭｅＯＨ：ＤＣＭから１０：９０のＭｅＯＨ：ＤＣＭ）により、生成物（１０）をオフホワイトの固体（１５ｇ、７２％）として与えた。
【００４５】
工程Ｆ  ３，６−保護されたグルコース−ソラソジン付加物への２モルのラムノースの添加
【００４６】
【化１５】
2005502671.tif 000016
【００４７】
工程Ｂからのラムノースブロミド（６）（１９ｇ、３５５ｍｍｏｌ）、ジピバロイル−グルコース−ソラソジン（１２ｇ、１６１ｍｍｏｌ）、４オングストロームモレキュラーシーブ（３０ｇ、５０℃でオーブンで予め加熱したもの）を攪拌機、低温温度計、アルゴン導入バブラーおよび圧力補正滴下漏斗を具備した３径フラスコに入れた。無水ＤＣＭを加え、混合物を室温で４０分間アルゴン下で撹拌した。
【００４８】
次いで混合物を−３０℃で冷却し、銀トリフレートのトルエン溶液（８０ｍＬ）を２０分間にわたって滴下し、−３０℃の温度を維持した。添加後、得られた淡黄色の沈殿を−２０℃で３０分間撹拌し、次いでそのままゆっくりと−５℃になるまで３５分間にわたって放置した。ＴＬＣ試料（溶離液：５：９５のＭｅＯＨ：ＤＣＭ）はＲf＝０．４とＲf＝０．３にＵＶ活性の化合物を示した。３ｍＬのトリエチルアミンを加えそして混合物をＤＣＭで希釈しそしてセライトパッドで濾過した。セライトをＤＣＭ（２００ｍＬ）で洗浄し、濾過物を減圧下でエバポレーションし紫色のシロップを得た。シリカゲルクロマトグラフィ（５：９５から１０：９５のＭｅＯＨ：ＤＣＭ）は純粋な完全に保護されたソラマルジン（１１）（１３．６ｇ、５０％）を、皮殻質の淡黄色固体として得た。
【００４９】
工程Ｇ  完全に保護されたソラマルジンの脱保護
【００５０】
【化１６】
2005502671.tif 000017
【００５１】
ＴＨＦ、ＭｅＯＨおよび水（１：１：１、２０：２０：２０ｍＬ）を完全に保護されたソラマルジン（１１）（８ｇ、４．８ｍｍｏｌ）に加えた。水酸化ナトリウム（１．９ｇ、４８ｍｍｏｌ）を次いで加え、得られた混合物を４０℃で１８時間穏やかに加熱した。混合物を冷却してメタノール（５０ｍＬ）で希釈し、アンバーリスト５０Ｈ+でｐＨ７〜８になるまで中和した。混合物を濾過し、濾過物を減圧下でエバポレーションし、濃い褐色の半固体の物質を得た。ＴＬＣはＲf＝０．４５に生成物（溶離液：７０：２８：２のＤＣＭ：ＭｅＯＨ：アンモニア水）を示し、これは検定済みのソラマルジンと同一であった。
【００５２】
シリカゲルクロマトグラフィ（溶離液：８０：２０のＤＣＭ：ＭｅＯＨから７８：２０：２のＤＣＭ：ＭｅＯＨ：アンモニア水）により、ごく近くのＲf＝０．４７の流れる（running）スポットとともにＲf＝０．４５に生成物３．４ｇを得た。
【００５３】
さらなる精製
半固体ペーストを３％酢酸（４５０ｍＬ）中に取り、２０分間ほぼ完全に溶解するまで撹拌した。溶液を不溶物質からデカントし、濃アンモニアでｐＨ８（微細な沈殿が形成する点）に調整した。沈殿を高速遠心分離器にかけ、形成したペレットから上澄みをデカントした。ペレットを、次いで３回水で洗浄し、次いで水（１００ｍＬ）に分散させ、そして凍結乾燥して淡白色固体（１．５２ｇ）を得た。７８％の純ソラマルジン（１２）をさらに慣用的な逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィで精製した。
【００５４】
得られた生成物ソラマルジン［（２２Ｒ，２５Ｒ）−スピロ−５−エン−３β−イル−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１−２グル）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１−４グル）−β−Ｄ−グルコピラノース］をさらなる分析に供した。
【００５５】
最終化合物の試料を、PE Sciex API 150 EX単一四重極質量分析計を用い、陽イオン電子スプレー質量分析法により分析した。主のシグナルはｍ／ｚ＝８６８．７に観測され、これはプロトン化されたソラマルジンの一原子同位体（monoisotopic）の質量として期待されるものに一致した。
【００５６】
さらにこの化学合成ソラマルジンのＨＰＬＣ保持時間は、薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）と同様、検定された天然の物質と同一であった。ＮＭＲおよび質量分析スペクトルは、予期した構造と一致した。
合成実施例２
工程Ｃ  ソラソジン−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−グルコース（テトラ−Ｏ−ベンゾイル−ソラソド−５エン−３β−イル−Ｄ−グルコピラノシド）の合成
ジクロロメタン（１２０ｍＬ）中のResearch Plus Inc、米国からのソラソジン（７）３．６ｇとテトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−グルコピラノシルブロミド（３）（８．６０ｇ）を粉末モレキュラーシーブ（４オングストローム）とともに５０分間、−１２℃に冷却しながら撹拌した。銀トリフレート（３．３５ｇ）のトルエン（３０ｍＬ）溶液を２０分間にわたり−１２〜−１０℃で滴下した。混合物をさらに３０分間ゆっくり−５℃まで温めながら撹拌した。次いで混合物をセライトで濾過し、ジクロロメタンで洗浄した。濾過物をブライン、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２回）で洗浄し、さらにブラインで洗浄して、乾燥し、濾過して濃縮し、シリカゲル上に置いた。次いでこの物質をＥｔＯＨ：トルエン（４０：６０）によってシリカゲルで溶離し、併せたフラクションを濃縮して白色固体（８）を得た。収率は７．１３ｇで試料はエタノールによる粉砕により結晶化させた。ＮＭＲおよび質量分析スペクトルは、予期される構造と一致した。
【００５７】
工程Ｄ  ベンゾイル脱保護
ジクロロメタン（８０ｍＬ）中でテトラ−Ｏ−ベンジル−ソラソド−５エン−３β−イル−β−Ｄ−グルコピラノシド（８）（１．０ｇ）とナトリウムメトキシド（０．２ｇ）およびメタノールを一晩５０℃で撹拌した。得られた混合物を冷却しDowex-50（Ｈ+形）で中和し、濾過して減圧下で溶剤を除去し、固体残渣を得て、これを最終的にシリカゲルクロマトグラフィで精製して純粋の脱保護物質（９）を得た。ＮＭＲおよび質量分析スペクトルは、予期される構造と一致した。
【国際公開パンフレット】
2005502671.tif 000025
2005502671.tif 000026
2005502671.tif 000027
2005502671.tif 000028
2005502671.tif 000029
2005502671.tif 000030
2005502671.tif 000031
2005502671.tif 000032
2005502671.tif 000033
2005502671.tif 000034
2005502671.tif 000035
2005502671.tif 000036
2005502671.tif 000037
2005502671.tif 000038
2005502671.tif 000039
2005502671.tif 000040
2005502671.tif 000041
2005502671.tif 000042
2005502671.tif 000043
【手続補正書】
【提出日】平成15年12月2日(2003.12.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１】
以下の一般式Ｉ：
【化１】
2005502671.tif 000044
（式中Ｒ1およびＲ2の各々が同じであるか異なっており、ベンゾイル又はピバロイル基である。）
で表されるグルコース−ソラソジン接合体またはその誘導体。
【国際調査報告】
2005502671.tif 000045
2005502671.tif 000046
2005502671.tif 000047