(57)【要約】次の一般式(Ｉ)：【化１】2005500303.tif 000024[上式中：Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は上述したものである]のアンタゴニストを有効量、哺乳動物に投与することにより、ヒト成長ホルモンが関与する疾患を治療するための方法が開示される。
2005500303.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物におけるｈＧＨ又はその変異体とｈＧＨ結合タンパク質又は受容体との間の結合相互作用を阻害する方法であって、阻害量の次の一般式(Ｉ)：
【化１】
2005500303.tif 000015
[上式中：
ＸはＮ又はＣＨであり；
Ｒ１ないしＲ４は独立して、Ｈ、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ、ニトロ、ＳＯ３、アルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環、複素環からなる群から選択され；該アルキル、アルケニル及びアルキニル基は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２又はＣ(Ｏ)が挿入されていてもよく、ヒドロキシル、ハロゲン、カルボキシル、アミノ、ニトロ、炭素環又は複素環で置換されていてもよく；又は
Ｒ１及びＲ２は共同して、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ又はニトロで置換されていてもよい、５、６又は７員の炭素環又は複素環を形成し；また
Ｒ５は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環、複素環からなる群から選択され；該アルキル、アルケニル及びアルキニル基は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２又はＣ(Ｏ)が挿入されていてもよく、炭素環又は複素環で置換されていてもよい]
の化合物を哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項２】
ＸがＮである請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が独立して、Ｈ、ハロ、ニトロ、カルボキシル、アルキル、アルコキシ及びアルカノイルであり、ここで、該アルキル、アルコキシ及びアルカノイルは、ハロゲンで置換されていてもよい、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ニトロ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ２-Ｃｌ、ＳＯ２-ＣＦ３、ＳＯ２-ＣＨＣｌ２、Ｍｅ、ＣＦ３、ＯＭｅ、Ｏ-ＣＨＦ２、Ｏ-ＣＦ２-ＣＨＦ２、Ｏ-ＣＨ２-ＣＦ３、Ｃ(Ｏ)-ｎＰｒ、Ｃ(Ｏ)ＮＨ２、Ｃ(Ｏ)ＮＨ-Ｅｔ-Ｃ(Ｏ)Ｏ-Ｍｅ及びＥｔ-Ｎ(ｎＰｒ)２からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
Ｒ１及びＲ２は独立して、Ｈ、Ｍｅ又はＣｌであり、Ｒ３及びＲ４が双方ともＨである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
Ｒ５が、Ｈ、アルキル、アリール又はアラルキルである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
Ｒ５がＨである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
Ｒ５がＭｅである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
式(Ｉ)の前記化合物が：
【化２】
2005500303.tif 000016
2005500303.tif 000017
2005500303.tif 000018
2005500303.tif 000019
2005500303.tif 000020
2005500303.tif 000021
2005500303.tif 000022
からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
過多のｈＧＨ又はｈＧＨ受容体に関連した哺乳動物の疾病又は病状を治療するための方法であって、有効量の次の式(Ｉ)：
【化３】
2005500303.tif 000023
[上式中：
ＸはＮ又はＣＨであり；
Ｒ１ないしＲ４は独立して、Ｈ、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ、ニトロ、アルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環、複素環からなる群から選択され；該アルキル、アルケニル及びアルキニル基は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２又はＣ(Ｏ)が挿入されていてもよく、ヒドロキシル、ハロゲン、カルボキシル、アミノ、ニトロ、炭素環又は複素環で置換されていてもよく；又は
Ｒ１及びＲ２は共同して、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ又はニトロで置換されていてもよい、５、６又は７員の炭素環又は複素環を形成し；また
Ｒ５は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環、複素環からなる群から選択され；該アルキル、アルケニル及びアルキニル基は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２又はＣ(Ｏ)が挿入されていてもよく、炭素環又は複素環で置換されていてもよい]
の化合物を哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項１１】
前記疾病又は病状が、癌、低血糖症、糖尿病、巨大症、末端肥大症、加齢性黄斑変性、糖尿病性ニューロパシー、又は糖尿病性網膜症からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記癌が、乳癌、前立腺癌、結腸直腸癌、肺癌又はメラノーマである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記化合物が：からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記疾病又は病状の治療に有効な第２の薬剤を、前記哺乳動物に投与することをさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
前記第２の薬剤が、インシュリン、血糖降下剤、成長阻害剤、アンジオスタティック剤、又は細胞毒性剤である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記第２の薬剤が化学療法剤である、請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
(発明の分野)
この発明は、治療方法及びキットを含む、ヒト成長ホルモン(ｈＧＨ)疾患の治療に有用な、ヒト成長ホルモンの小分子アンタゴニストに関する。
【０００２】
(発明の背景)
ｈＧＨは正常なヒトの成長と発達の調節の多くの面に関与している。この22,000ダルトンの下垂体ホルモンは、とりわけ伸長成長(linear growth)(体形成(somatogenesis))、乳汁分泌、マクロファージの活性化及びインスリン様及び糖尿病誘発性効果を含む多数の生物学的効果を示す(Chawla, Annu. Rev. Med., 34:519(1983);Edwards等，Science, 239:769(1988);Isaksson等, Annu. Rev.  Physiol., 47:483(1985);ThornerとVance, J. Clin. Invest., 82:745(1988);HughesとFriesen, Annu. Rev. Physiol., 47:469(1985))。これらの生物学的効果はｈＧＨと特定の細胞受容体間の相互作用に由来する。
子供における成長ホルモンの欠乏は小人症を招くが、これはここ十年以上の間、ｈＧＨの外因性投与により成功裏に治療されている。ｈＧＨの遺伝学的及び翻訳後修飾形態の識別のため(Lewis, Ann. Rev. Physiol., 46:33(1984))、ｈＧＨが臨床的に投与される場合、それに対するあらゆる免疫応答を特性付けるため、またホルモンの循環レベルを定量するため、ｈＧＨの抗原性にも興味が持たれている。
【０００３】
ｈＧＨは胎盤性ラクトゲン、プロラクチン及び成長ホルモンの他の遺伝的及び種変異体を含む相同のホルモンのファミリーのメンバーである(Nichol等, Endocrine Reviews, 7:169(1986))。ｈＧＨは広い種特異性を示し、クローン化された体形成受容体(Leung等, Nature, 330:537(1987))またはプロラクチン(Boutin等, Cell, 53:69(1988))受容体のいずれかに結合する点においてこれらの間では変わっている。
ｈＧＨのクローン化遺伝子は、大腸菌において分泌型で発現されており(Chang等, Gene, 55:189(1987))、そのＤＮＡ及びアミノ酸配列が報告されている(Goeddel等, Nature,  281:544(1979);Gray等, Gene, 39:247(1985)。ブタ成長ホルモン(pＧＨ)に対する三次元フォールディングパターンが、中程度の分解能と精製度で報告されている(Abdel-Meguid等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA,  84:6434(1987)。ｈＧＨの受容体と抗体エピトープが、Cunningham等, Science, 243:1330-1336(1989)及びCunninghamとWells,  Science, 244:1081-1085(1989)においてホモログ-スキャニング突然変異誘発及びアラニン-スキャニング突然変異誘発によって同定されている。
【０００４】
タンパク質-タンパク質界面の分子の詳細を示す多数の高分解能構造がある(総説としてArgos, Protein Eng., 2:101-113(1988);Janin等, J. Mol. Biol. ,204:155-164(1988);Miller, Protein Eng., 3:77-83(1989);Davies等, Annu. Rev. Biochem., 59:439-473(1990)を参照のこと)。これらは接触残基を明らかにしているが、それらに対するエネルギー論は明らかにせず、どのようにしてドッキングが生じているかも明らかにしていない。会合と解離に影響する接触残基の役割の包括的な理解は分子認識プロセスの基本であり、合理的なタンパク質及び薬剤の設計に特に重要である。
おそらく最もよく特徴付けられているホルモン-受容体複合体は、ｈＧＨとその受容体(ｈＧＨbp)の細胞外ドメインの間のものである。総説として、WellsとDe Vos, Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct., 22:329-351(1993)を参照のこと。高分解能構造的及び突然変異的分析(CunninghamとWells, 上記参照;Cunningham等, Science, 254:821-825(1999))そして構造的分析(De Vos等, Science, 255:306-312(1992))により、ｈＧＨの一分子がサイト１及びサイト２と呼ばれるホルモン上の独特の部位を用いて二つの受容体分子と連続的に結合することが示されている。
【０００５】
多くのｈＧＨの自然に生じている突然変異体が同定されている。これらにはｈＧＨ-V(Seeberg,DNA, 1:239(1982);米国特許第4,446,235号、第4,670,393号及び第4,665,180号）及びｈＧＨの32-46残基の欠失を含む20KｈＧＨが含まれる(Kostyo等, Biochem. Biophys. Acta, 925:314(1987);Lewis等, J. Biol. Chem., 253:2679(1978))。
ある研究者は通常Cys-53とCys-165の間に存在するジスルフィド結合を破壊するために、ｈＧＨの165位のシステインをアラニンに置換することを報告している(Tokunaga等, Eur.J. Biochem., 153:445(1985))。この単一置換はｈＧＨの三次元構造を明らかに維持し、ｈＧＨに対する受容体によって認識される変異体をつくり出した。
また別の研究者は固体樹脂支持体上でのｈＧＨのインビトロ合成を報告している。この研究者による最初の報告では、ｈＧＨに対して正しくない188アミノ酸配列が開示された(Li等, J. Am.Chem. Soc., 88:2050(1966);米国特許第3,853,832号)。第二の報告は190アミノ酸配列を開示した(米国特許第3,853,833号)。この後者の配列もまた不正確である。特にｈＧＨは68位の後に付加的なグルタミンを持ち、73位はグルタミンよりむしろグルタミン酸、106位はアスパラギンよりむしろアスパラギン酸、108位はアスパラキン酸よりむしろアスパラギンを持つ。
ヒスチジン18及びヒスチジン21を含むｈＧＨのスプライシングを受ける配列を含むアミノ末端メチオニルウシ成長ホルモン(bＧＨ)の構造が示されている(米国特許第4,880,910号)。付加的なｈＧＨ変異体及び抗-ＧＨ受容体抗体が、例えば米国特許第5,506,107号及び同6,040,136号；及び国際公開第94/10994号に記載されている。
【０００６】
一価ファージディスプレー(Bass等, Proteins, 8:309-314(1990))がｈＧＨbpに対するｈＧＨ内のサイト1のアフィニティーを改良するために用いられ得ることが以前に示されている(Lowman等,Biochemistry, 30:10832-10838(1991))。結合アフィニティーの適度の改良(野生型ｈＧＨより3から8倍タイトな)をそれぞれがサイト1中の四つの異なるコドンが突然変異された三つの独立のライブラリーを分類することによって生産された。サイト1に対する結合アフィニティーがわずかに促進され、サイト2を結合する能力をブロックされたｈＧＨ変異体は、単独のサイト2変異体よりよいｈＧＨ受容体の拮抗剤であった(Fuh等, Science, 256:1677-1680(1992)。
サイト1アフィニティーにおける付加的な改良は、ライブラリー当たりさらに多くの残基を突然変異することによって得られ得る。しかしながら約5より多いコドンを同時に無作為化する場合、全ての可能な残基の組み合わせを表すのを確認するのに十分な形質転換体を生産するのは適しなかった(LowmanとWells, Methods:Companion Methods Enzymol., 3:205-216(1991)。タンパク質-タンパク質界面での突然変異は通常結合に対して付加的な効果を示す(Wells, Biochemistry, 29:8509-8517(1990))。
【０００７】
ｈＧＨとbＧＨのリシン残基が、成長ホルモン受容体とのｈＧＨとbＧＨの相互作用に関与しており、構造-機能関係において特に41,64,70及び115位のリシンまたはアルギニン残基が関与していることが開示されている(Martal等, FEBS Lett.,180:295-299(1985))。ラジオレセプターアッセイによって減少した活性を引き起こすために、メチル化、エチル化、グアニジン化及びアセトイミジン化によってリシン残基が化学的に修飾された。
ヒト成長ホルモンとその受容体との間の結合表面における突然変異誘発実験では、接触側鎖の一部が結合エネルギーの大きなフラクションに寄与していることが示されている(ClacksonとWells, Science, 267：383-386(1995))。特に、受容体それぞれのTrp104及びTrp169は、高親和性(1:1)複合体に対する結合エネルギーにおいて4.5kcal mol−１以上寄与している。これは、これらのエネルギー的に重要な接触を含む、受容体表面の小分子擬態が、ｈＧＨに対して顕著なアフィニティーを有していることを示唆している。
末端肥大症は、内部器官、特に心臓の肥大と同様に、骨の異常成長と軟組織の膨張に特徴付けられ、長い骨が融合した場合、思春期水酸化のＧＨ過多の結果生じる疾病である。末端肥大症は典型的にはＧＨを分泌する下垂体腫瘍によって引き起こされる。該疾病のホールマークは循環ＧＨとＩＧＦ-Ｉの高レベルである。
【０００８】
ＧＨ又はＧＨ作用のメディエーターの循環レベルの上昇により特徴付けられる他の成長ホルモン疾患には、巨大症、糖尿病及びその合併症、例えば糖尿病性網膜症及び糖尿病性ニューロパシー、並びに増殖的な新生血管形成を含む糖尿病性網膜症のような目の血管の疾病が含まれる。このような目の疾病の例には、例えば、早産児の網膜症、鎌状赤血球貧血と関連した網膜症、及び加齢性黄斑変性が含まれる。さらにＧＨに関連した疾患は、成長によってＧＨまたはＧＨ機能のメディエーター(例えばＩＧＦ-Ｉ)に応答する悪性腫瘍、及びＧＨ受容体を発現する悪性腫瘍である。このような悪性腫瘍の例には、ウィルムス腫、様々な肉腫(例えば骨肉腫)、バーキット型リンパ腫、結腸直腸の癌腫、肺癌腫、リンパ芽球白血病、メラノーマ、及び胸部、大腸、前立腺、甲状腺、胸腺、脳、唾液腺、骨、脊髄及び他の癌が含まれる。
従って、患者への投与時に、ｈＧＨに結合するかその活性を阻害する化合物を提供することが望まれている。
【０００９】
(発明の要約)
本発明の一側面において、次の一般式(Ｉ)：
【化１】
2005500303.tif 000003
[上式中：
ＸはＮ又はＣＨであり；
Ｒ１ないしＲ４は独立して、Ｈ、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ、ニトロ、アルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環、複素環からなる群から選択され；該アルキル、アルケニル及びアルキニル基は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２又はＣ(Ｏ)が挿入されていてもよく、ヒドロキシル、ハロゲン、カルボキシル、アミノ、ニトロ、炭素環又は複素環で置換されていてもよく；又は
Ｒ１及びＲ２は共同して、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ又はニトロで置換されていてもよい、５、６又は７員の炭素環又は複素環を形成し；また
Ｒ５は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環、複素環からなる群から選択され；該アルキル、アルケニル及びアルキニル基は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２又はＣ(Ｏ)が挿入されていてもよく、炭素環又は複素環で置換されていてもよい]
の化合物を阻害量、哺乳動物に投与することを含む、該哺乳動物におけるｈＧＨ又はその変異体とｈＧＨ結合タンパク質又は受容体との間の結合性相互作用を阻害する方法を提供することにある。
【００１０】
(本発明の詳細な記載)
本発明は、一般式(Ｉ)の化合物を阻害量、哺乳動物に投与することを含む、該哺乳動物におけるｈＧＨ又はその変異体とｈＧＨ結合タンパク質又は受容体との間の結合性相互作用を阻害する方法に関する。また本発明の化合物は、ここでは「インヒビター」又は「アンタゴニスト」と称される。さらに本発明は、ＧＨ作用の阻害が治療的又は予防的に有用である疾病、病状又は疾患の治療を含む。このような疾患には、ＩＧＦ-Ｉ等の、ＧＨ又はＧＨ作用のメディエーターの循環レベルの低減が望まれているもの、例えば巨大症及び末端肥大症等の、ＧＨ過多により特徴付けられる疾患が含まれる。他の例には、糖尿病及び合併症、例えば糖尿病性網膜症及び糖尿病性ニューロパシー、並びに増殖的な新生血管形成を含む糖尿病性網膜症のような目の血管の疾病が含まれる。このような目の疾病の例には、例えば、早産児の網膜症、鎌状赤血球貧血と関連した網膜症、及び加齢性黄斑変性が含まれる。ここでの定義に入る疾患は、ＧＨまたはＧＨ作用のメディエーター(例えばＩＧＦ-Ｉ)に応答して成長する悪性腫瘍、及びＧＨ受容体を発現する悪性腫瘍である。このような悪性腫瘍の例には、ウィルムス腫、様々な肉腫(例えば骨肉腫)、バーキット型リンパ腫、結腸直腸の癌腫、肺癌腫、リンパ芽球白血病、メラノーマ、及び胸部、大腸、前立腺、甲状腺、胸腺、脳、唾液腺、脊髄又は骨の癌が含まれる。しかしながら、以下に記載する他の癌もここに含まれる。ここで治療される好ましい癌は、胸部、前立腺、直腸結腸、肺及びメラノーマである。
【００１１】
ここで用いられる治療目的の「哺乳動物」は哺乳類に分類される任意の動物を称し、ヒト、家畜及び農業用動物、及び動物園、スポーツ、又はペット動物、例えばイヌ、ウマ、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウシ等を含む。好ましくは、ここでの哺乳動物はヒトである。
【００１２】
ここで使用される場合、「高血糖性疾患」なる用語は、インシュリン耐性の結果生じる疾患及び糖尿病の全ての形態、例えばＩ型及びＩＩ型糖尿病、並びに強度のインシュリン耐性、インシュリン過剰症及び高脂血症、例えば、肥満患者、及びインシュリン耐性糖尿病、例えばマンデンホール症候群、ヴェルナー症候群、妖精症、脂肪組織萎縮性糖尿病、及び他の脂肪組織萎縮症等を称する。好ましい高血糖性疾患は糖尿病、特にＩ型及びＩＩ型糖尿病である。「糖尿病」自体は、インシュリンの不十分な生産又は利用を含む炭水化物代謝の進行性疾患を称し、高血糖及び糖尿によって特徴付けられる。
ここで用いられる「治療」なる用語は、治癒的処置、予防的手法又は防止的手法の両方を称する。治療が必要なものとは、既に疾患に罹っているもの、並びに疾患に罹りやすい又は疾患が診断されているもの又は疾患が防止されているものを含む。連続的治療又は投与は、少なくとも毎日を基にした治療を意味し、一又は複数の日で治療が中断されない。間欠的治療又は投与、あるいは間欠形式での治療又は投与とは、連続的ではないが周期的な治療を称する。ここでの治療措置は、連続的又は間欠的のいずれかとできる。
【００１３】
「有効量」なる用語は、哺乳動物において、疾患の治療度合いを低減し、又はその徴候を低減させるのに必要な阻害又はアンタゴニスト化合物の量を称する。癌の場合、アンタゴニストの有効量は、癌細胞の数を低減させ；腫瘍の大きさを低減させ；末梢器官への癌細胞の浸潤を阻害し(すなわち、ある程度遅延化、好ましくは停止させ)；腫瘍転移を阻害し(すなわち、ある程度遅延化、好ましくは停止させ)；腫瘍の成長をある程度阻害し；及び／又は疾患に関連する一又は複数の徴候をある程度緩和させる量とされる。アンタゴニストが癌細胞の成長を防止し、及び／又は存在する癌細胞を殺す範囲では、アンタゴニストには細胞増殖抑制性及び／又は細胞傷害性がある。癌治療にとって、インビボにおける有効性は、例えば疾病の進行時間(ＴＴＰ)を算定するか、及び／又は反応速度(ＲＲ)を決定することにより測定することができる。
【００１４】
化合物
本発明の方法は、式(Ｉ)：
【化２】
2005500303.tif 000004
[上式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は上述したものである]
の化合物の投与を含む。
ＸはＮ又はＣＨである。好ましい実施態様において、ＸはＮである。
Ｒ１及びＲ２は独立して、Ｈ、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ(ＮＨ２)、ニトロ、ＳＯ３、アルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環、複素環からなる群から選択される。アルキル、アルケニル及びアルキニル基は、直鎖状又は分枝状であり、その長さに１２までの炭素原子を有する脂肪族鎖である。好ましい実施態様において、脂肪族鎖は、その長さに１〜８、より好ましくは１〜４の炭素原子を有する。炭素環基は、飽和、不飽和、又は部分的に不飽和であり、置換されていてもよい３-ないし７員のものである。好ましい炭素環には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル及びフェニルが含まれる。複素環は、Ｎ、Ｏ及びＳ等の１〜３のヘテロ原子が挿入され、飽和、不飽和、又は部分的に不飽和の５-ないし７員のものであることが好ましい。好ましい複素環には、ピリジン、ピラジン、チオフェン及びトリアジンが含まれる。
【００１５】
脂肪族鎖は、鎖の一又は複数の炭素原子が、Ｎ(又はＮＨ)、Ｏ又はＳ等のヘテロ原子、並びにＳＯ、ＳＯ２又はカルボニル基、すなわちＣ(Ｏ)に置き換えられた、「挿入」されたものであってもよい。隣接した炭素原子は置き換えられてもよく、アミド類、すなわち-ＮＨ-Ｃ(Ｏ)-又は-Ｃ(Ｏ)-ＮＨ-、スルホンアミド類、すなわち-ＮＨ-ＳＯ２-又は-ＳＯ２-ＮＨ-、エステル類、すなわち-Ｏ-Ｃ(Ｏ)-又は-Ｃ(Ｏ)-Ｏ-、チオエステル類、すなわち-Ｓ-Ｃ(Ｏ)-又は-Ｃ(Ｏ)-Ｓ-、尿素類、すなわち-ＮＨ-Ｃ(Ｏ)-ＮＨ-、アミジン類、すなわち-ＮＨ-Ｃ(ＮＨ)-又は-Ｃ(ＮＨ)-ＮＨ-、グアニジン類、すなわち-ＮＨ-Ｃ(ＮＨ)-ＮＨ-、及びその他の部分を提供する。
脂肪族鎖、炭素環及び複素環は、ヒドロキシル、ハロゲン、カルボキシル、アミノ、ニトロ、炭素環又は複素環等の基で置換されていてもよい。好ましい実施態様において、Ｒ１及びＲ２は独立して、Ｈ、ハロ、ニトロ、カルボキシル、アルキル、アルコキシ及びアルカノイルからなる群から選択され、ここで、該アルキル、アルコキシ及びアルカノイルは、ハロゲンで置換されていてもよい。他の好ましい実施態様において、Ｒ１及びＲ２は独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ニトロ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ２-Ｃｌ、ＳＯ２-ＣＦ３、ＳＯ２-ＣＨＣｌ２、Ｍｅ、ＣＦ３、ＯＭｅ、Ｏ-ＣＨＦ２、Ｏ-ＣＦ２-ＣＨＦ２、Ｏ-ＣＨ２-ＣＦ３、Ｃ(Ｏ)-ｎＰｒ、Ｃ(Ｏ)ＮＨ２、Ｃ(Ｏ)ＮＨ-Ｅｔ-Ｃ(Ｏ)Ｏ-Ｍｅ及びＥｔ-Ｎ(ｎＰｒ)２からなる群から選択される。特に好ましい実施態様において、Ｒ１及びＲ２は独立して、Ｈ、Ｍｅ又はＣｌである。他の特に好ましい実施態様において、Ｒ３及びＲ４が双方ともＨであると同時に、Ｒ１及びＲ２は双方ともＣｌ、Ｒ１及びＲ２は双方ともＭｅであり、Ｒ１がＣｌであるとＲ２はＨであり、Ｒ１がＭｅであるとＲ２はＨである。
他の実施態様において、Ｒ１及びＲ２は共同して、それらが依存するベンゼン環の炭素原子と共に、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ又はニトロで置換されていてもよい５、６又は７員の炭素環又は複素環を形成する。
【００１６】
Ｒ３及びＲ４は独立して、Ｒ１及びＲ２で定義された基から選択される。好ましい実施態様において、Ｒ３及びＲ４は独立して、Ｈ、ハロゲン、アルキル及びニトロである。特に好ましい実施態様において、Ｒ３及びＲ４は双方ともＨである。
Ｒ５は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環、複素環からなる群から選択される。アルキル、アルケニル及びアルキニル脂肪族鎖は直鎖状又は分枝状であり、Ｒ１及びＲ２に記載されたもので置換されていてもよく、また挿入されていてもよい。好ましい実施態様において、Ｒ５は、炭素環又は複素環で置換されたアルキル、又は複素環、アルキル、Ｈである。特定の実施態様において、Ｒ５はＨ、Ｍｅ、ブチル、フェニル、ベンジル、４,６-ジメトキシ-ピリミジン-２-イル、チオフェニルメチル,４,６-ジメトキシ-１,３,５-トリアジニル、４,６-ジエトキシ-１,３,５-トリアジニル、ｐ-ヒドロキシフェニル、ｐ-クロロフェニル、及びｐ-メチルフェニルである。特に好ましい実施態様において、Ｒ５はＨである。他の特に好ましい実施態様において、Ｒ５はＭｅである。他の特に好ましい実施態様において、Ｒ５はＭｅであり、同時にＲ１及びＲ２は独立して、Ｈ、Ｍｅ又はＣｌであり、Ｒ３及びＲ４は双方ともＨである。
【００１７】
好ましい実施態様において、本発明の方法に使用される化合物には：
【化３】
2005500303.tif 000005
2005500303.tif 000006
2005500303.tif 000007
2005500303.tif 000008
2005500303.tif 000009
2005500303.tif 000010
が含まれる。
【００１８】
化合物の合成
本発明の方法に使用される化合物は、商業的に得られるか、又は市販されている出発物質から通常の有機合成技術に従い調製され得る。これらの化合物の多くの合成は、Holanら, J. Chem. Soc. C, 1967, 1:20-5、並びに英国特許出願第29584号、オーストラリア特許出願第6886087号、欧州特許出願第517476号及びカナダ国特許出願第2115737号に記載されている。一般的に、化合物は次の一般的なスキーム：
【化４】
2005500303.tif 000011
に従い調製され得る。
【００１９】
化合物に存在する特定の置換基に応じて、適切な保護及び脱保護手順が、従来技術で標準的なように必要とされることが理解される。多くの保護基がGreene及びWuts, Protective Groups in Organic Chemistry 2d edition, John Wiley and Sons, 1991に記載されており、詳細な保護及び脱保護手順も記載されている。例えば適切なアミノ保護基には、ｔ-ブチルオキシカルボニル(Boc)、フルオレニル-メチルオキシカルボニル(Fmoc)、２-トリメチルシリル-エチルオキシカルボニル(Teoc)、１-メチル-１-(４-ビフェニルイル)エトキシカルボニル(Bpoc)、アリルオキシカルボニル(Alloc)、及びベンジルオキシカルボニル(Cbz)が含まれる。カルボキシル基はフルオレニルメチル基として保護可能であり、ヒドロキシル基はトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチル及びトリメトキシトリチル基で保護され得る。
本発明の方法に使用される化合物はキラル中心が導入されたものであってもよく、よって幾何及び立体異性体として存在する。このような全ての異性体が考慮されており、純粋な異性体形態、又はこのような異性体の混合物、及びラセミ化合物にかからわず、本発明の範疇に入る。立体異性化合物は、当該技術において確立された技術、例えばクロマトグラフィー、すなわちキラルＨＰＬＣ、又は結晶化方法により分離され得る。ここに記載されたこのような化合物の互変異性体も、本発明の方法の範疇に入る。
【００２０】
塩
本発明の方法に使用される化合物の「製薬的に許容可能な」塩には、酸付加塩及び塩基付加塩の双方が含まれる。製薬的に許容可能な酸付加塩とは、生物学的な有効性及び遊離塩基の性質を保持し、生物学的ではないか、あるいは所望等されていない、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、炭酸、リン酸等の無機酸、及び脂肪族、脂環式、芳香族、アル脂肪族又はアリール脂肪族(araliphatic)、複素環、カルボン酸及びスルホン酸クラスの有機酸、例えばギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸(maloneic acid)、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、グルタミン酸、アントラニル酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、エンボン酸(embonic acid)、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ-トルエンスルホン酸、サリチル酸等から選択される有機酸で形成される塩を意味する。
【００２１】
製薬的に許容可能な塩基との付加塩には、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウムの塩等の無機塩基から誘導されたものが含まれる。特に好ましくは、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウム及びマグネシウムの塩である。製薬的に許容可能な無毒の有機塩基から誘導された塩には、第１級、第２級及び第３級アミン、自然に発生した置換アミン類を含む置換アミン類、環状アミン類及び塩基性イオン交換樹脂、例えばイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２-ジエチルアミノエタノール、トリメタミン、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン(hydrabamine)、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペリジン(piperizine)、ピペリジン、Ｎ-エチルピペリジン、ポリアミン樹脂等の塩が含まれる。特に好ましい無毒の有機塩基は、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、トリメタミン、ジシクロヘキシルアミン、コリン及びカフェインである。
【００２２】
付加的な活性剤
本発明の方法は、付加的な活性成分又は活性剤、例えば成長阻害剤、アンジオスタティック剤、又は細胞毒性剤を投与することをさらに含んでいてもよい。好ましくは、薬剤は化学療法剤又は抗体、好ましくは成長阻害抗体、細胞死を誘発する抗体、又はアポトーシスを誘発する抗体である。
よって、本出願では、治療される特定の徴候に応じて、アンタゴニストと一又は複数の他の治療剤(類)を組み合わせることを考慮している。薬剤の例としては、糖尿病の徴候がある場合はインシュリン、癌の治療のためには細胞毒性剤である。
インシュリンが投与される場合、それはインシュリンの任意の製剤とすることができるが、好ましくはＮＰＨインシュリンであり、ＮＰＨインシュリンの用量は、約５〜５０単位／注射(すなわち約０．２〜２ｍｇ)で皮下に、１日２回なされる。インシュリンと化合物とを組合せるため、この製剤において、化合物に対するＮＰＨインシュリンの比率は重量で一般的に、約１０：１〜１：５０、好ましくは約１：１〜１：２０、より好ましくは約１：１〜１：１０、さらに好ましくは約１：１〜１：５、最も好ましくは約１：１〜１：３である。
【００２３】
さらに、製剤は有効量の血糖降下剤、例えばスルホニル尿素と共に適切に投与される。血糖降下剤は、非経口、経鼻、経口、又は他の有効な経路を含む適切な技術によって哺乳動物に投与される。最も好ましくは、投与は経口経路による。例えば、Upjohnから１．２５、２．５、及び５ｍｇ錠剤濃度で市販されているMICRONASETM錠剤（グリブリド）は経口投与に適している。この治療に配されたＩＩ型糖尿病のための通常の維持用量は、一般的に１日当たり約１．２５から２０ｍｇの範囲であり、それは、適当と認められた場合に１回投薬又は１日を通して分割して与えられる。(Physician's Desk Reference, 2563-2565 (1995))。処方に利用可能なグリブリドをベースとする錠剤の他の例は、GLYNASETMブランド薬（Upjohn）及びDIABETATMブランド薬（Hoechst-Russel）を含む。GLUCOTROLTM（Pratt）は、５及び１０ｍｇ強度で利用可能なグリピジド(１-シクロヘキシル-３-(ｐ-(２-(５-メチルピラジンカルボキサミド)エチル)フェニル)スルホニル)尿素)錠剤であり、食事制限に続いて血糖降下治療を必要とするＩＩ型糖尿病又は他のスルホニル尿素に対する反応が止まった患者に対しても処方される。Phisician's Desk Reference, 1902-1903 (1995)。スルホニル尿素以外の他の血糖降下剤、例えばビグアニド（例えばメトホルミン及びフェンホルミン）又はチアゾリジンジオン(例えばトログリトゾン(troglitozone))、又はインシュリン作用に影響する他の薬剤も用いられる。チアゾリジンジオンが、本化合物と共に使用されるならば、それは現在使用されているものと同様のレベル又は多少低いレベルで使用され、本化合物単独又はジオンと一緒の場合に見られる効果により調節することができる。それ自身で使用されるトログリタゾン(troglitazone)(REZULINＴＭ)の典型的な用量は、１日当たり約１００-１０００ｍｇ、より好ましくは２００-８００ｍｇ／日であり、ここではこの範囲で適用される。例えば、Ghazzi等, Diabetes, 46:433-439(1997)を参照のこと。トログリタゾンよりも強いインシュリン感作剤である他のチアゾリジンジオン類はより少ない用量で使用されるであろう。
【００２４】
アンタゴニストは、ペプチド(又は多価抗体)、多価又は二価抗体(又は抗体類)、化学療法剤(類)(化学療法剤の多剤併用を含む)、他の細胞毒性剤(類)、抗血管形成剤(類)、サイトカイン類、及び／又は成長阻害剤(類)と共に同時投与されてもよい。例えば、アンタゴニストは、Ｂ細胞表面抗原に対するアポトーシス誘発性抗体(例えば二価又は多価抗体)(例えば、RITUXAN(登録商標)、ZEVALIN(登録商標)又はBEXXAR(登録商標)抗-ＣＤ２０抗体)、及び／又は(１)アポトーシス誘発性抗体(例えば、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーの受容体に対する二価又は多価抗体、例えば抗-ＤＲ４又は抗-ＤＲ５抗体)、又は(２)ＴＮＦファミリーのサイトカインであるサイトカイン(例えばApo2L)と組合せられてもよい。同様に、アンタゴニストは抗-ＥｒｂＢ抗体(例えば、HERCEPTIN(登録商標)抗-HER2抗体)単独と一緒に、又は(１)と(２)を組み合わせて投与されてもよい。別に又は加えて、患者は放射線治療(例えば外部からの光線照射、又は放射標識された薬剤、例えば抗体を用いた治療)、卵巣切除、化学的又は外科的、高用量化学療法を、骨髄移植又は末梢血液幹細胞救助又は移植と一緒に組み合わせて受けてもよい。上述したこのような組み合わせ治療には、組み合わせ投与(二又はそれ以上の薬剤を、同一又は別々の製剤に含有させる)、別個投与が含まれ、この場合、アンタゴニストの投与は補助的な治療又は治療類の前及び／又は後に行うことができる。このような他の薬剤の有効量は、製剤に存在するアンタゴニストの量、疾患又は治療の種類、上述にて議論した他の要因に依存する。これらは一般的に、前に使用した同様の用量又は投与経路、又は今まで使用されていた用量の約１〜９９％で使用される。
ここで用いられる「細胞毒性剤」という用語は、細胞の機能を阻害し又は妨害し、及び／又は細胞の破壊を引き起こす物質を称する。この用語は放射活性アイソトープ（例えばＡｔ211，Ｉ131，Ｉ125，Ｙ90，Ｒｅ186，Ｒｅ１８８，Ｓｍ１５３，Ｂｉ212，Ｐ32，及びＬｕの放射性アイソトープ）、化学療法剤、及び断片及び／又はその変異体を含む細菌性、真菌性、植物又は動物起源の酵素的に活性な毒素又は小分子毒素等の毒素を含むことが意図されている。
【００２５】
「化学療法剤」は、癌の治療に有用な化学的化合物である。化学療法剤の例には、チオテパ及びシクロスホスファミド(CYTOXAN(登録商標))のようなアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンのようなスルホン酸アルキル類；ベンゾドーパ(benzodopa)、カルボコン、メツレドーパ(meturedopa)、及びウレドーパ(uredopa)のようなアジリジン類；アルトレートアミン(altretamine)、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレン-チオホスホラミド(triethylene-thiophosphoramide)及びトリメチローロメラミン(trimethylolomelamine)を含むエチレンイミン類及びメチラメラミン類；アセトゲニン(acetogenins）(特にブラタシン(bullatacin)及びブラタシノン(bullatacinone)）；カンプトセシン(合成類似体トポテカン（topotecan）を含む）；ブリオスタチン；カリスタチン(callystatin）；ＣＣ-１０６５(そのアドゼレシン(adozelesin)、カルゼレシン(carzelesin)及びバイゼレシン(bizelesin）合成類似体を含む）；クリプトフィシン(cryptophycin）(特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン(dolastatin）；デュオカルマイシン(duocarmycin ）（合成類似体、KW-2189及びCBI-TMIを含む）； エレトロビン(eleutherobin）；パンクラチスタチン(pancratistatin ）；サルコディクチン(sarcodictyin）；スポンジスタチン(spongistatin ）；クロランブシル、クロルナファジン(chlornaphazine)、チョロホスファミド(cholophosphamide)、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン(novembichin)、フェネステリン(phenesterine)、プレドニムスチン(prednimustine)、トロフォスファミド(trofosfamide)、ウラシルマスタード等のナイトロジェンマスタード；ニトロスレアス(nitrosureas)、例えばカルムスチン(carmustine)、クロロゾトシン(chlorozotocin)、フォテムスチン(fotemustine)、ロムスチン(lomustine)、ニムスチン、ラニムスチン；エネジイン(enediyne) 抗生物質等の抗生物質（例えば、カリケアマイシン(calicheamicin)、特にカリケアマイシンγ１Ｉ及びカリケアマイシンθＩ１、例えば、Agnew  Chem Intl. Ed. Engl., 33：183-186(1994)を参照のこと；ダイネミシンＡ(dynemicinＡ）を含むダイネミシン(dynemicin）；色素タンパク等のビスホスホナート類；エスペラマイシン(esperamicin）； 同様にネオカルチノスタチン発光団及び関連色素蛋白エネジイン(enediyne) 抗生物質発光団）、アクラシノマイシン(aclacinomysins)、アクチノマイシン、オースラマイシン(authramycin)、アザセリン、ブレオマイシン(bleomycins)、カクチノマイシン(cactinomycin)、カラビシン(carabicin)、カルミノマイシン(carminomycin）、カルジノフィリン(carzinophilin)、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン(detorubicin）、６-ジアゾ-５-オキソ-Ｌ-ノルロイシン、ドキソルビシン(AdriamycinTM)(モルフォリノ−ドキソルビシン、シアノモルフォリノ-ドキソルビシン、２-ピロリノ-ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン(esorubicin）、イダルビシン、マセロマイシン(marcellomycin）、マイトマイシンＣ等のマイトマイシン(mitomycins）、マイコフェノール酸(mycophenolic acid)、ノガラマイシン(nogalamycin)、オリボマイシン(olivomycins)、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン(potfiromycin)、ピューロマイシン、クエラマイシン(quelamycin)、ロドルビシン(rodorubicin)、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン(tubercidin)、ウベニメクス、ジノスタチン(zinostatin)、ゾルビシン(zorubicin)；メトトレキセート及び５-フルオロウラシル(５-ＦＵ）のような抗-代謝産物；デノプテリン(denopterin)、メトトレキセート、プテロプテリン(pteropterin)、トリメトレキセート(trimetrexate)のような葉酸類似体；フルダラビン(fludarabine)、６-メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンのようなプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン(azacitidine)、６-アザウリジン(azauridine)、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン(enocitabine)、フロキシウリジン(floxuridine)のようなピリミジン類似体；カルステロン(calusterone)、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン(testolactone)のようなアンドロゲン類；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンのような抗副腎剤；フロリン酸(frolinic acid)のような葉酸リプレニッシャー(replenisher)；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン(amsacrine)；ベストラブシル(bestrabucil)；ビサントレン(bisantrene)；エダトラキセート(edatraxate)；デフォファミン(defofamine)；デメコルシン(demecolcine)；ジアジコン(diaziquone)；エルフォルニチン(elfornithine)；酢酸エリプチニウム(elliptinium acetate)；エポチロン(epothilone)；エトグルシド(etoglucid)；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン(lonidamine)；メイタンシン(maytansine)及びアンサマイトシン(ansamitocin )のようなメイタンシノイド(maytansinoid)；ミトグアゾン(mitoguazone)；ミトキサントロン；モピダモール(mopidamol)；ニトラクリン(nitracrine)；ペントスタチン；フェナメット(phenamet)；ピラルビシン；ロソキサントロン(losoxantrone)；ポドフィリン酸(podophyllinic acid)；２-エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＫＳ(登録商標)；ラゾキサン(razoxane)；リゾキシン(rhizoxin)；シゾフィラン；スピロゲルマニウム(spirogermanium)；テニュアゾン酸(tenuazonic acid)；トリアジコン(triaziquone)；２,２',２''-トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン(trichothecenes)(特に、Ｔ-２トキシン、ベラキュリンＡ(verracurin A)、ロリデンＡ(roridin A)及びアングイデン(anguidine)）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン(mannomustine)；ミトブロニトール；ミトラクトール(mitolactol)；ピポブロマン(pipobroman)；ガシトシン(gacytosine)；アラビノシド（「Ara-C」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えばパクリタキセル（タキソール(登録商標)、Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ）、及びドキセタキセル（タキソテア(登録商標）、Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France）；クロランブシル；ゲンシタビン(gemcitabine)(Gemzar(登録商標))；６-チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；シスプラチン及びカルボプラチンのようなプラチナ類似体；ビンブラスチン；プラチナ；エトポシド(ＶＰ-１６）；イフォスファミド；ミトキサントン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン(Navelbine(登録商標))；ノバントロン(novantron)；テニポシド；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；キセローダ(xeloda)；イバンドロナート(ibandronate)；ＣＰＴ-１１；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ２０００；ジフルオロメチロールニチン(ＤＭＦＯ)；レチノイン酸等のレチノイド類；カペシタビン(capecitabine)；並びに上述したものの製薬的に許容可能な塩類、酸類又は誘導体が含まれる。また、この定義には、腫瘍に対するホルモン作用を調節又は阻害するように働く抗ホルモン剤、例えばタモキシフェン(Nolvadex(登録商標)を含む)、ラロキシフェン(raloxifene)、ドロロキシフェン(droloxifene)、４-ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン(trioxifene)、ケオキシフェン(keoxifene)、ＬＹ１１７０１８、オナプリストーン(onapristone)、及びトレミフェン(FarestonTM)を含む抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体モジュレータ(SERMs)；副腎におけるエストロゲン生成を調節する、アロマターゼ酵素を阻害するアロマターゼインヒビター、例えば４(５)-イミダゾール類、アミノグルテチミド、酢酸メゲステロール(MegaceTM)、エグゼメスタン(exemestane)(AromasinTM)、ホルメスタン(formestane)、ファドロゾール、ボロゾール(vorozole)(RivisorTM)、レトロゾール(letrozole)(FemaraTM)、及びアナストロゾール(anastrozole)(ArimidexTM)；及び抗アンドロゲン、例えばフルタミド(flutamide)、ニルタミド(nilutamide)、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリン；並びにトロキサシタビン(troxacitabine)(１,３-ジオキシラン-ヌクレオシド-シトシン類似体)；アンチセンスオリゴヌクレオチド類、特に不粘着細胞増殖に関係するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えばＰＫＣ-アルファ、Ｒａｆ及びＨ-Ｒａｓ；リボザイム、例えばＶＥＧＦ発現インヒビター(例えばAngiozymeTM)及びＨＥＲ２発現インヒビター；ワクチン、例えば遺伝子治療ワクチン、例えばAllovectinTM、LeuvectinTM、及びVaxidTM；ProleukinTM(rIL-2)；LurtotecanTM(トポイソメラーゼＩインヒビター)；AbarelixTM(rGnRH)；並びに上記のものの製薬的に許容可能な塩類、酸類又は誘導体が含まれる。
【００２６】
本発明で使用される場合の「成長阻害剤」なる用語は、インビトロ及び／又はインビボのいずれかにおいて、細胞の成長を阻害する化合物又は組成物を称する。よって、成長阻害剤とは、Ｓ相における細胞のパーセンテージを有意に低減させるものである。成長阻害剤の例には、細胞分裂周期の進行をブロックする薬剤(Ｓ相以外の場所において)、例えばＧ１停止及びＭ相停止を誘発する薬剤が含まれる。伝統的なＭ相ブロッカーには、ビンカ(ビンクリスチン及びビンブラスチン)、TAXOL(登録商標)、及びトポＩＩインヒビター、例えばドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、及びブレオマイシンが含まれる。Ｇ１を停止させるこれらの薬剤、例えばＤＮＡアルキル化剤、例えばタモキシフェン、プレドニソン、ダカーバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキセート、５-フルオロウラシル、及びａｒａ-ＣがＳ相停止に溢流する。更なる情報は、Murakamiらにより「細胞分裂周期の調節、オンコジーン、及び抗新生物薬」と題された、癌の分子的基礎、Mendelsohn及びIsrael編、第１章(WB Saunders；Philadelphia, 1995)、特に１３頁に見出すことができる。
【００２７】
「成長阻害」抗-ＨＥＲ２抗体の例は、ＨＥＲ２に結合して、ＨＥＲ２が過剰発現した癌細胞の成長を阻害するものである。好ましい成長阻害抗-ＨＥＲ２抗体は、細胞培養において、約０．５〜３０μｇ／ｍｌの抗体濃度で２０％以上、好ましくは５０％以上(例えば約５０％〜１００％)のＳＫＢＲ３胸部腫瘍細胞の成長を阻害し、ここで成長阻害度がＳＫＢＲ３細胞を抗体に暴露して６日後に測定したものである(1997年, 10月14日に公表された米国特許第5,677,171号を参照)。
【００２８】
「細胞死を誘発する」抗体は、生存している細胞を生存不能とさせる原因となるものである。細胞は、一般的に抗体が結合する抗原を発現するものであり、特に細胞は抗原を過剰発現する。好ましくは、細胞は癌細胞、例えば乳房、卵巣、胃、子宮内膜、唾液腺、肺、腎臓、大腸、甲状腺、膵臓又は膀胱細胞である。インビトロでは、細胞はＳＫＢＲ３、ＢＴ４７４、Ｃａｌｕ３、ＭＤＡ-ＭＢ-４５３、ＭＤＡ-ＭＢ-３６１又はＳＫＯＶ３細胞でありうる。インビトロでの細胞死は、補体と免疫エフェクター細胞の非存在下で決定され、抗体依存性細胞障害活性(ＡＤＣＣ)又は補体依存性細胞障害活性(ＣＤＣ)により誘発される細胞死と区別される。よって、細胞死に対するアッセイは、熱不活性化血清(すなわち補体の不在下)を使用し、免疫エフェクター細胞の不在下で行うことができる。抗体が細胞死を誘発可能であるか否かを測定するために、ヨウ化プロピジウム(ＰＩ)、トリパンブルー(Mooreら, Cytotechnology 17:1-11(1995)を参照)又は７ＡＡＤの取込みにより評価される膜完全性の喪失度合いが未処理細胞と比較して評価される。
【００２９】
「アポトーシスを誘発する」抗体は、アネキシンＶの結合、ＤＮＡの断片化、細胞収縮、小胞体の拡張、細胞断片化、及び／又は膜小胞の形成(アポトーシス体と呼ばれる)により決定されるようなプログラム細胞死を誘発するものである。細胞は、抗体が結合する抗原を発現するものであり、抗原を過剰発現していてもよい。細胞は、腫瘍細胞、例えば乳房、卵巣、胃、子宮体、唾液腺、肺、腎臓、大腸、甲状腺、膵臓又は膀胱細胞である。インビトロでは、細胞はＳＫＢＲ３、ＢＴ４７４、Ｃａｌｕ３細胞、ＭＤＡ-ＭＢ-４５３、ＭＤＡ-ＭＢ-３６１又はＳＫＯＶ３細胞でありうる。アポトーシスに伴う細胞の事象を評価するために種々の方法が利用できる。例えば、ホスファチジルセリン(ＰＳ)転位置をアネキシン結合により測定することができ；ＤＮＡ断片化は以下の実施例に開示されているようにＤＮＡラダーリングにより評価することができ；ＤＮＡ断片化に伴う細胞核／染色質凝結は低二倍体細胞の何らかの増加により評価することができる。好ましくは、抗体が結合する抗原を発現する細胞を使用するアネキシン結合アッセイにおいて、アポトーシスを誘発する抗体は、未処理細胞の約２〜５０倍、好ましくは約５〜５０倍、最も好ましくは約１０〜５０倍のアネキシン結合を誘発するという結果を生じるものである。
【００３０】
アポトーシスを誘発する抗体の例には、抗-ＨＥＲ２モノクローナル抗体７Ｆ３(ATCC HB-12216)、及び７Ｃ２(ATCC HB 12215)で、そのヒト化及び／又は親和成熟した変異体を含むもの；抗-ＤＲ５抗体３Ｆ１１.３９.７(ATCC HB-12456)；３Ｈ３.１４.５(ATCC HB-12534)；３Ｄ５.１.１０(ATCC HB-12536)；及び３Ｈ３.１４.５(ATCC HB-12534)で、そのヒト化及び／又は親和成熟した変異体を含むもの；ヒト抗-ＤＲ５受容体抗体１６Ｅ２及び２０Ｅ６で、その親和成熟した変異体を含むもの(出典明示によりここに導入される国際公開第98/51793号)；抗-ＤＲ４抗体４Ｅ７.２４.３(ATCC HB-12454)；４Ｈ６.１７.８(ATCC HB-12455)；１Ｈ５.２５.９(ATCC HB-12695)；４Ｇ７.１８.８(ATCC PTA-99)；及び５Ｇ１１.１７.１(ATCC HB-12694)で、そのヒト化及び／又は親和成熟した変異体を含むものが含まれる。
【００３１】
投与経路
投与される化合物の実際の量及び投与経路は、特定の疾病又は病状、並びに他の要因、例えば大きさ、年齢、性別及び治療される個人の種族的出身に依存し、常套的な分析により決定される。本発明の方法において、本化合物は、経口的(頬、舌下腺、吸入を含む)、経鼻的、経腸的、経膣的、静脈内、真皮下、皮下及び局所的に投与され得る。
【００３２】
製剤
化合物は、製剤技術において常套的に、例えば適切な担体、希釈剤、増粘剤、アジュバント等と共に、投与に適切な組成物中に製剤されるであろう。従って、本発明の他の側面は、式(Ｉ)の化合物と製薬的に許容可能な担体、賦形剤又はアジュバントを含有する製薬用組成物を提供することにある。
また本発明の組成物は、付加的な活性成分をさらに含有してよい。投与形態には、溶液、パウダー、錠剤、カプセル、ゲルカプセル、座薬、局所用軟膏及びクリーム、及び吸入用エアゾールが含まれる。非腸管外投与用の製剤には、バッファー、希釈剤、及び他の適切な添加剤を含み得る滅菌水溶液が含まれる。本発明の化合物と有害反応をしない非腸管外投与に適した製薬的に許容可能な有機又は無機の担体物質を使用することができる。適切な製薬的に許容可能な担体には、限定されるものではないが、水、塩水、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等が含まれる。製剤は、滅菌され、所望するならば、本発明の化合物と有害反応をしない助剤、例えば滑剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、エモリエント、浸透圧に影響を及ぼす塩、バッファー、着色用フレーバー及び／又は芳香物質等と混合することもできる。水性懸濁液は、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール及び／又はデキストリンを含む、懸濁液の濃度を増加させる物質を含んでいてもよい。場合によっては、懸濁液はさらに安定剤を含有してもよい。
【００３３】
好ましい実施例において、本発明の化合物は経口送達を介して投与される。経口投与用組成物には、パウダー又は顆粒、水性又は非水性媒体の溶液又は懸濁液、カプセル、小袋、トローチ、錠剤又はＳＥＣ(柔軟弾性カプセル又はキャプレット)が含まれる。増粘剤、香料添加剤、希釈剤、乳化剤、分散補助剤、キャリア物質又はバインダーを、このような製剤に所望するならば添加してもよい。このような製剤は、粘膜に暴露するための消化管に、化合物を送達するために使用される。従って、製剤は、胃の極度なｐＨから化合物を保護し、又は経時的に化合物を放出し、特定の粘膜部位への送達用として最適化するために有効な物質からなる。酸耐性錠剤、カプセル及びキャプレットのための腸溶コーティングは当該技術において公知であり、典型的にはアセタートフタラート、プロピレングリコール及びソルビタン-モノレアートが含まれる。
【００３４】
栄養送達のための製剤を生産する種々の方法が当該技術においてよく知られている。一般的には、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990を参照のこと。本発明の製剤は、公知の方法において不活性で無毒な製薬的適切な賦形剤又は溶媒を使用し、習慣的製剤、例えば錠剤、コーティングされた錠剤、丸薬、顆粒、エアゾール、シロップ、エマルション、懸濁液及び溶液に転換することができる。各ケースにおいて、治療的に活性な化合物は、全混合物の重量に対して約０．５〜９９重量％の濃度、すなわち所望する用量範囲を達成するのに十分な量で存在する。製剤は、例えば溶媒及び／又は賦形剤と活性化合物とを伸長し、適切であるならば乳化剤及び／又は分散剤を使用することにより調製され、例えば水が希釈剤として使用されるケースでは、適切であるならば有機溶媒を補助溶媒として使用することができる。
【００３５】
また組成物は、結合剤(例えば、プレゼラチン化されたトウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース)；フィラー(例えば、ラクトース、マイクロクリスタリンセルロース又はリン酸水素カルシウム)；滑剤(例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク又はシリカ)；分解剤(例えば、デンプン又はグリコール酸デンプンナトリウム)；又は湿潤剤(例えば、ラウリル硫酸ナトリウム)を用いて調製されてもよい。錠剤は当該技術においてよく知られている方法によりコーティングしてもよい。また製剤は、適切な香料添加剤、着色剤及び／又は甘味料をさらに含有していてもよい。
【００３６】
経口投与に適切な本発明の製剤は、それぞれ予め決定された量の活性成分を含有する個別単位で、例えばカプセル、封印物又は錠剤；パウダー又は顆粒；水性液体又は非水性液体の溶液又は懸濁液；又は水中油型エマルション又は油中水型液体エマルション等として提供されてもよい。錠剤は、場合によっては一又は複数の副成分と共に、圧密又は鋳型成形により作製され得る。圧密錠剤は適切な機械において、活性成分を流動性形態、例えばパウダー又は顆粒に圧密し、場合によってはバインダー、滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、界面活性剤又は分散剤と混合することにより調製される。鋳型錠剤は、適切な機械において、不活性希釈剤で湿らされたパウダー化合物の混合物を鋳型成形することにより作製される。錠剤は、コーティングされても筋入れされていてもよく、活性成分がゆっくりと又は制御されて放出されるように調製され得る。
【００３７】
キット
本発明の他の実施態様では、上述した疾患の治療に有用な物質を含有する製造品又はキットである。この製造品は容器と使用説明書、例えばラベル又は容器内に挿入されるか添付されるパッケージ又は生産挿入物を含んでなる。好適な容器は、例えば、ビン、バイアル、シリンジ等、好ましくはバイアルを含む。容器は、ガラス又はプラスチックなどの多様な材料から形成されてよい。容器は、ここで少なくともアンタゴニストを含有する組成物を収容し、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、容器は皮下注射針で貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってよい）。使用説明書は、選択される病状、例えば癌の治療のために、使用者がどのように本組成物を利用するかについて指示するものである。キットは、上述したようなさらなる活性剤、例えば細胞毒性剤を含有する組成物を腫瘍する第２の容器を含んでいてもよい。また、別に又は加えて、製造品はさらに、製薬的に許容可能な希釈バッファー、例えば注射用の静菌水(ＢＷＦＩ)、リン酸緩衝塩水、リンガー液及びデキストロース溶液を含む第２(又は第３の)の容器を具備してもよい。さらに、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針及びシリンジを含む商業的及び使用者の見地から望ましい他の材料を含んでもよい。
【実施例】
【００３８】
実施例１
次の実施例は例示のために提供されるもので、本発明の範囲を限定するものと解してはならない。ここで使用される全ての引用文献は、出典明示によりここに取り込まれる。
複素環芳香族化合物の収集物(全384；各1mmol)をアルドリッチ・ケミカル・カンパニー(Aldrich Chemical Company)から得るか、又は出典明示によりここに取り込まれるHolan等, J. Chem Soc. C, 20-25(1967)に記載されたようにして調製した。各化合物をジメチルスルホキシド(DMSO)に溶解し、１００-ｍＭ溶液を作製し、９６-ウェルのポリプロピレン製の深いウェルプレート(Beckman)に配した。希釈液(DMSOで10倍)を親プレートから調製し；ついで、１０-ｍＭの株を、以下に記載するようなスクリーニングアッセイにおいて５０倍に希釈した(最終濃度200μM；2%のDMSO)。
【００３９】
リン酸緩衝液(PBS)にヒト成長ホルモン(100μM)が入ったものを、製造者の使用説明書に従い、２モル当量のＥＺ-Link-スルホ-NHS-LC-ビオチンTM(Pierce21335TM)で処理した。ビオチン化ヒト成長ホルモン(b-hGH)の、その受容体の細胞外ドメインへの結合性をＥＬＩＳＡ形式でアッセイした。簡単には、Nunc Maxi-SorbTM９６ウェルプレートを４℃で一晩、リン酸緩衝液(PBS)に受容体(２μg/mL)が溶解した溶液で処理した。ついで、プレートを、室温で２時間、ＰＢＳにウシ血清アルブミン(BSA；SigmaA-7638)が溶解した０．２％溶液でブロックした。ｂ-ｈＧＨの適切な希釈液(一般的には、0.05%のTween-20ＴＭ洗浄剤を含有するPBSにおいて、最終濃度約1.5nM)をスクリーニング収集物のアリコート(DMSOに３μLの化合物に対し147μLのb-ｈＧＨ)又はＤＭＳＯを単独で含有するポリプロピレン製プレートに添加し、混合物を放置し、室温で約４５分間平衡にした。ついで、これらの混合物を受容体でコートされたプレートに移し、１５分間放置した。プレートをＰＢＳ／Tween-20TMで洗浄した(10回)。ストレプタビジン-ＨＲＰを共役させ(Zymed Laboratories 43-4323TM)、続いてＴＭＢペルオキシダーゼ試薬(Kirkegaard & Petty Laboratories 50-76-03TM)を使用し、結合したｂ-ｈＧＨを検出した。いくつかの潜在的インヒビター化合物を、複数の濃度で再試験した。以下の表１には、試験した化合物のＩＣ５０を示す。
【００４０】
いくつかの化合物における阻害曲線を測定した。２-トリクロロメチル基を欠く５-クロロベンズイミダゾールは、ｂ-ｈＧＨの受容体への結合を阻害しなかったが、これに対し、トリクロロメチル基を有する試験した全ての化合物は阻害した。また、ベンズイミダゾールの核構造は阻害にとって重要であった：２-トリクロロメチル置換ベンゾオキサゾール又はベンゾチアゾールのいずれも、試験した濃度で結合をブロックできなかった(表１)。
【表１】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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