(57)【要約】腫瘍の処置に有用である、高純度結晶のアントラサイクリン誘導体、及び新規の結晶形態の４−デメトキシ−３’−デアミノ−３’−アジリジニル−４’−メタンスルホニルダウノルビシンの製造方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
超臨界流体を使用してアントラサイクリン誘導体の高純度結晶を得る方法。
【請求項２】
アントラサイクリン誘導体が４−デメトキシ−３’−デアミノ−３’−アジリジニル−４’−メタンスルホニルダウノルビシンである請求項１に記載の方法。
【請求項３】
超臨界流体が二酸化炭素である請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
２５〜５５℃の温度、１０〜６０メガパスカルの圧力、５０ｍｌ／分〜４ｌ／分の流速で約３時間実施することを特徴とする請求項１から３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
粉末Ｘ線回折で以下の表ＩＩに示す特有のピークを有する無溶媒結晶形態の４−デメトキシ−３’−デアミノ−３’−アジリジニル−４’−メタンスルホニルダウノルビシンを得ることを特徴とする請求項１から４のいずれかに記載の方法。
【表１】
2005502637.tif 000008
【請求項６】
粉末Ｘ線回折で以下の表Ｉに示す特有のピークを有する無溶媒結晶形態の４−デメトキシ−３’−デアミノ−３’−アジリジニル−４’−メタンスルホニルダウノルビシン。
【表２】
2005502637.tif 000009
【請求項７】
超臨界流体抽出を４０〜４５℃の温度、３８〜６０メガパスカルの圧力、４００〜８００ｍｌ／分の流速で約３時間実施することを特徴とする請求項６に記載の結晶形態の４−デメトキシ−３’−デアミノ−３’−アジリジニル−４’−メタンスルホニルダウノルビシンの調製方法。
【請求項８】
ヒトまたは動物の身体の治療的処置に使用するための請求項６に記載の結晶形態の４−デメトキシ−３’−デアミノ−３’−アジリジニル−４’−メタンスルホニルダウノルビシン。
【請求項９】
癌の処置を必要としている患者で癌の処置に使用する医薬品の調製における請求項６に記載の結晶形態の４−デメトキシ−３’−デアミノ−３’−アジリジニル−４’−メタンスルホニルダウノルビシンの使用。
【請求項１０】
請求項６に記載の結晶形態の４−デメトキシ−３’−デアミノ−３’−アジリジニル−４’−メタンスルホニルダウノルビシンおよび薬剤として許容される希釈剤もしくは担体を含む薬剤組成物。
【請求項１１】
請求項１０に記載の薬剤組成物を、それを必要としている患者に投与することを含む癌の処置方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高純度アントラサイクリン誘導体の製造方法、新規の結晶形態のアントラサイクリン、その調製方法およびそれを含有する薬剤組成物に関する。本発明は、残留溶媒をほとんど含有しない高純度結晶形態のアントラサイクリン誘導体の調製において超臨界流体を使用することを特徴とする。さらに、本発明は新規の結晶相のアントラサイクリンを提供する。
【背景技術】
【０００２】
よく知られている部類の制癌剤であるアントラサイクリンの分野では、高品質、高純度の結晶は様々な工業用途および研究用途のために非常に大きな価値がある。例えば、薬剤学的研究においてしばしば起こる問題は、分子構造を決定するためのＸ線構造解析用の大きな単結晶を得ることが困難なことである。結晶化は、バイオテクノロジーおよび製薬工業での精製方法としてもよく用いられる。より規則正しく配列された結晶は一般により高純度の製品をもたらす。より大きい結晶は一般的に包装や取り扱いの操作に利点をもたらす。従来の結晶精製方法は一般に高温で熱的に安定した分子に限定され、こうした通常の乾燥技術は、熱的に不安定で結晶が溶媒和した化合物に対しては役に立たない場合がある。
【０００３】
過去１０年間、圧縮ガス、液化ガス、および超臨界流体として知られるガスと液体の中間的な物質が貧溶媒（ａｎｔｉ−ｓｏｌｖｅｎｔ）として使用されてきた。純粋な化合物はその臨界温度（Ｔｃ）および臨界圧力（Ｐｃ）で臨界状態となる。化合物は、その臨界温度を超えた温度およびその臨界圧力下で、またはその臨界圧力を超えた圧力およびその臨界温度下で、あるいは臨界温度と臨界圧力の両方を超えた条件下で超臨界流体となる。これらのパラメータは、充分に安定な高純度の成分化合物すべてに固有の熱力学的特性である。例えば、二酸化炭素はその臨界温度３１．１℃およびその臨界圧力７２．８ａｔｍ（１，０７０ｐｓｉｇ、７．３８メガパスカル）に等しいまたはそれを超える条件下で超臨界流体となる。臨界超過領域では、通常は気体である化合物は著しく増大した溶媒和力を示す。２０４ａｔｍ（３，０００ｐｓｉｇ、２０．７メガパスカル）の圧力および４０℃の温度では、二酸化炭素は約０．８ｇ／ｍｌの密度を有し、双極子モーメントがゼロである無極性有機溶媒に非常に類似した挙動を示す。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
２００１年３月１２日出願の本出願者らの欧州特許出願第０１／０２７８３号では、結晶形態の４−デメトキシ−３’−デアミノ−３’−アジリジニル−４’−メタンスルホニルダウノルビシンを記載し特許請求している。この化合物は、以下「アルキルサイクリン」と称するが、様々な溶媒から得られる有用な制癌剤である。例えばこれに記載した結晶化方法の一つは、酢酸エチル中の粗アルキルサイクリンの濃縮溶液を冷却（０〜４℃）し、続いてろ過し真空下３０℃で２日間乾燥する方法に基づいている。この方法によって固体状態での安定性が増大した製造バッチが可能となり、化合物の化学分解および固体状態での変性を回避するために減圧下５０℃未満で乾燥することによって、残留酢酸エチルの含有分が除去された。それでも、これらの条件はＧＭＰ（適正製造基準（Ｇｏｏｄ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ））条件に基づいた開発スケールのバッチの乾燥には適合していない。他方、現在の乾燥技術は溶媒を完全に除去するためには有効ではなく、また真空下で４０℃での貯蔵時間が長くなると部分的分解が決定づけられる可能性があると評価された。酢酸エチルはＩＣＨクラス３の溶媒であり、したがって、その存在は、「・・・製造能力及び適正製造基準に関して現実的なものであるものとする」（ＩＣＨ−１９９７年）と認められてきた。しかし、溶媒が他の賦形剤または一次包装物（例えば、硬ゼラチンカプセル）と相互作用して配合物の性能を経時的に変化させ得る場合に配合物を開発する可能性が、そうしたレベルの溶媒の存在の影響によって妨害されることがある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
したがって、本発明は、残留溶媒を完全に抽出するために超臨界流体を様々な圧力および温度条件下で使用することによって、高度に乾燥したアントラサイクリン誘導体の結晶を調製するための新規な方法，およびそのように形成させた結晶組成物を提供する。結晶を形成させるための本方法の１つの実施形態は、９６〜１００％純度の化合物を提供するステップを含む。超臨界流体は、亜酸化窒素、プロパンおよび他の軽アルカン、エチレンおよび他の軽アルケン、フッ化炭素、クロロフッ化炭素および二酸化炭素からなる超臨界流体を形成可能なガスの群から選択されることが好ましい。ＳＣ−ＣＯ２が好ましい超臨界流体である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
超臨界流体抽出プロセスは流体貯蔵器で構成された装置（膜ポンプによってその貯蔵器から抽出が行われる温度調節つきカラム中にポンプ輸送される）によって実施することができる。そのカラムから流出する流体は、マイクロメータ弁によって膨張し、次いでＥｔＯＨのような溶媒を含む容器中で沈降し、カラム充てん物から流出する可能性のある溶解した薬物を回収する。適切な条件を設定するために、この方法を様々な温度、圧力および流速で実施することができる。例えば、ＳＣ−ＣＯ２による方法は、２５〜５５℃の温度、１０〜６０メガパスカルの圧力で、マイクロメータ膨張弁経由で測定して５０ｍｌ／分〜４ｌ／分の流速で約３時間行うことができる。より好ましい精製条件は４０〜４５℃の温度、３０メガパスカル、１００〜８００ｍｌ／分、より好ましくは４００〜８００ｍｌ／分の流速である。アントラサイクリン誘導体の一部をカラム中にサンプリングする。圧縮を防いで、ＳＣ処理のために表面を最大限活用できるようにするために、粉末を予め不活性充てん材（ガラス小球）と混合しておくことができる。
【０００７】
本発明の他の実施形態は新規の結晶性アルキルサイクリン、その調製および抗癌剤としてのその使用を含む。
【０００８】
Ｘ線粉末回折
粉末Ｘ線回折は、室温で５〜３５°（２θ）で、ＣｕＫα黒鉛単色（４０ｋＶ４０ｍＡ）光源で粉末サンプルを照射する、ジーメンス社（Ｓｉｅｍｅｎｓ）のＤ−５００装置を用いて実施した。０．０５°間隔でスキャンを行い、カウント時間は間隔当たり７秒間であった。
【０００９】
結晶性アルキルサイクリンのＸ線粉末回折パターンは、以下の表Ｉ（カラム３に適用した実験条件で得た−実施例１参照）に示す特徴的なピークを有する結晶構造を示している。
【００１０】
【表１】
2005502637.tif 000002
【００１１】
分析方法の説明
熱重量分析（ＴＧＡ）
ＴＧＡ分析はパーキンエルマー社（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）のＴＧＡ−７を用いて実施した。分析温度範囲は３５〜約２１０℃であった。質量損失測定に関して装置の性能が適切であるかどうかを酒石酸ナトリウムで評価し、同時に温度の検定のために強磁性標準物（アルメル合金またはニッケル）を使用した。サンプルを窒素流下（脱溶媒和を増進させ酸化の影響を排除するため）で２℃／分の加熱速度で分析した。加熱範囲は５０〜１５５℃とし、重量損失を目的パラメータとした。サンプリングは密封した既知重量のアルミニウム皿（メトラー社（Ｍｅｔｔｌｅｒ）のＭＥ−２７３３１）を用いて行った。サンプル皿には分析開始前にピンで孔を開けておいた。
【００１２】
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
以下の実験条件を採用した。
【００１３】
材料
ギ酸アンモニウム、分析用グレード
ギ酸、分析用グレード
テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ＨＰＬＣグレード
蒸留水、ＨＰＬＣグレード
装置
脱気装置、ウォーターズ社のモデル７１７Ｐｌｕｓまたは同等のオートサンプラー、ウォーターズ社のモデルＰＤＡ９６６または同等のＵＶダイオードアレイ検出器、ウォーターズ社のＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍ３２ソフトウェアを搭載したパソコン、カラム  Ｓｙｍｍｅｔｒｙ  Ｓｈｉｅｌｄ  Ｃ８（ウォーターズ社）、３．５μｍ、１００×４．６ｍｍを備えたウォーターズ社（Ｗａｔｅｒｓ）のモデル６００液体クロマトグラフまたは同等のもの
サンプル溶液
分析するサンプル約５ｍｇを正確に秤量し、５０ｍｌのメスフラスコに移して溶解し、比率が５０：５０のＨ２Ｏ：ＴＨＦ混合液で分析直前に定容する。
クロマトグラフィー条件
２０μｌのサンプル溶液を以下の実験条件下で液体クロマトグラフに注入する。
【００１４】
2005502637.tif 000003
【００１５】
国際特許出願ＥＰ０１／０２７８３に記載の標準的な結晶化法によって調製したアルキルサイクリンのバッチから出発して、３８メガパスカルを超える圧力で実施するＳＣ−ＣＯ２プロセスで残留溶媒を除去することによって、本発明の結晶性アルキルサイクリンを製造することができる。
【００１６】
本発明のさらなる態様は、抗癌効果をもたらすのに有効な量で、上記の結晶性アルキルサイクリンから出発して得られた薬剤組成物を腫瘍性病態のヒトを含めた哺乳動物に投与することを含む、前記哺乳動物を処置する方法を提供することである。
【００１７】
本明細書では「投与した」または「投与する」という用語は、非経口および／または経口投与を意味する。投与の実際の好ましい方法および順序は、とりわけ、使用するアルキルサイクリンの具体的な剤形、処置する具体的な腫瘍、処置を受ける具体的な宿主によって変化することになることを理解されたい。
【００１８】
本発明の方法では、アルキルサイクリン配合物の投与では、一般に用いられる一連の治療（ｃｏｕｒｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｙ）は、身体表面積ｍ２当たり約０．１〜約２００ｍｇである。より好ましくは、用いられる一連の治療は身体表面積ｍ２当たり約１〜約５０ｍｇである。
【００１９】
本発明の抗悪性腫瘍療法はヒトを含めた哺乳類の胸部、卵巣、肺、大腸、腎臓および脳の腫瘍を処置するため特に適している。
【００２０】
本発明は以下の実施例を参照することにより、より完全に理解されるだろう。
【実施例１】
【００２１】
ＳＣ−ＣＯ２抽出プロセスを実施するために、約５００ｍｇの分量のアルキルサイクリンをサンプリングしてＨＰＬＣカラムに注入した。以下のステンレス鋼のブランクカラムを使用してＳＣ−ＣＯ２抽出に適した４個のサンプルを調製した。
【００２２】
【表２】
2005502637.tif 000004
【００２３】
ガラス小球（０．５〜１ｍｍ）（予めサンプルと混合しておいた）をカラムの不活性充てん材として使用した。抽出プロセスを３時間で実施した。各カラムでの値を、回収した粉末の巨視的な特性についての注記をつけて以下の表に示した。
【００２４】
【表３】
2005502637.tif 000005
【００２５】
各カラムを受け入れた後、充てん物を取り出し、グローブボックス中でガラス球を篩別した。一定分量の複数のサンプルを種々の分析用に調製した。分析値（ＨＰＬＣ分析、ＴＧＡ重量損失および残留酢酸エチル含有量）を以下の表に示す。
【００２６】
【表４】
2005502637.tif 000006
【００２７】
カラム４に適用した実験条件で得られたＸ線粉末回折を以下の表ＩＩに示す。
【００２８】
【表５】
2005502637.tif 000007
【国際公開パンフレット】
2005502637.tif 000010
2005502637.tif 000011
2005502637.tif 000012
2005502637.tif 000013
2005502637.tif 000014
2005502637.tif 000015
2005502637.tif 000016
2005502637.tif 000017
2005502637.tif 000018
2005502637.tif 000019
2005502637.tif 000020
2005502637.tif 000021
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2005502637.tif 000022
【国際調査報告】
2005502637.tif 000023
2005502637.tif 000024
2005502637.tif 000025