(57)【要約】門脈および肝静脈の急性機能障害の治療用薬物における、明細書に記載のような式(Ｉ)の化合物およびそれらの塩の使用。【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式(Ｉ)：
【化１】
2005526127.tif 000016
［式中、
−  ヒドロキシ基と7位の炭素原子との間の結合は、α-またはβ-配置であり、ここで、該結合がβ-配置であるときには、式(Ｉ)のステロイド構造はウルソデオキシコール酸残基に相当し、上記の結合がα-配置であるときには、そのステロイド構造はケノデオキシコール酸残基に相当し；
b0＝0、1；
c0＝0、1、但しそれらは同時に0ではあり得ない；
B＝TB-X2-TBI、ここで、TBおよびTBIは同一または異なって、TB＝X (ここで、Xは-O-、-S-、-N(R1c)であり、R1cはH、C1-C5直鎖もしくは分枝鎖状アルキルである)、そしてTBI＝(CO)txまたは(X)txx (ここで、txx＝0のときtx＝1およびtxx＝1のときtx =0という条件で、txおよびtxxは0もしくは1であり、Xは上記で定義したとおりであり；
X2は、txおよびtxxの値により、TBI＝COまたはXで、Xが上記で定義したとおりであるとき、Bに対するTB-X2-TBI部分が、
−  アミノ酸、
−  ヒドロキシ酸、
−  モノまたはポリアルコール
から選択されるような二価の基であり(ここで、TBの遊離原子価はZで飽和されており、ZはHまたはC1-C10直鎖もしくは分枝鎖状アルキルであり、TBIの遊離原子価はOZ、Zまたは-N(Z1)(Z2) (ここで、Z1およびZ2は同一または異なって、上記のZと同じ意味を有する)で飽和されており)；
−  C＝-Tc-Y-、ここで、TC＝(CO)または上記で定義したとおりのX；
b0＝c0＝1のとき：TC＝(CO)、tx＝0のとき、TC＝X
txx＝0のとき、Xは上記で定義したとおりであり；
b0＝0のとき：TC＝Xで、Xは上記で定義したとおりであり；
c0＝0のとき：tx＝0、tBI＝X＝-O-；
Yは：
Yp ：
【化２】
2005526127.tif 000017
［ここで：
nIXは0〜10、好ましくは1〜3の整数であり；
nIIXは1〜10、好ましくは1〜3の整数であり；
RTIX、RTIX'、RTIIX、RTIIX'は、同一または異なって、HまたはC1-C4直鎖もしくは分枝鎖状アルキルであり、好ましくはRTIX、RTIX'、RTIIXおよびRTIIX'はHであり；
Y3は、窒素、酸素または硫黄から選択される1または2のヘテロ原子を含む5または6員のヘテロ環であり、この環は飽和、不飽和または芳香族である］；
次のものから選択されるYO：
−  アルキレンオキシ基-R'O (ここで、R'はC1-C20の直鎖もしくは分枝鎖状アルキル、好ましくは2〜6炭素原子を有するものである)、または5〜7の炭素原子を有するシクロアルキレン(シクロアルキレン環の1以上の炭素原子は、結局はヘテロ原子により置換されており、該環は任意にR'タイプの側鎖を有してもよく、ここでR'は上記で定義したとおりである)；あるいは以下の基の1つ：
【化３】
2005526127.tif 000018
［ここで、nf'は1〜6の整数、好ましくは1〜4の炭素原子である］
【化４】
2005526127.tif 000019
［ここで、R1f＝H、CH3であり、nf'は上記で定義したとおりである］
から選択されるY0
および次のものから選択されるYAr：
【化５】
2005526127.tif 000020
［ここで、n3は0〜3の整数であり、n3'は1〜3の整数である］；
【化６】
2005526127.tif 000021
［ここで、n3およびn3'は上記で定義したとおりである］
から選択される］
を有する化合物またはそれらの塩の肝静脈および門脈循環障害の急性期治療のための使用。
【請求項２】
B前駆体が：
−  アミノ酸、好ましくはL-カルノシン(式CI)、アンセリン(CII)、セレノシステイン(CIII)、セレノメチオニン(CIV)、ペニシラミン(CV)、N-アセチルペニシラミン(CVI)、システイン(CVII)、N-アセチルシステイン(CVIII)、グルタチオン(CIX)またはそれらのエステル類、好ましくはエチルもしくはイソプロピルエステル、アスパラギン酸(PI)、ヒスチジン(PII)、5-ヒドロキシトリプトファン(PIII)：
【化７】
2005526127.tif 000022
−  ヒドロキシ酸、好ましくは以下から選択される：没食子酸(DI)、フェルラ酸(DII)、ゲンチシン酸(DIII)、クエン酸(DIV)、カフェー酸(DV)、ジヒドロキシカフェー酸(DVI)、p-クマル酸(DVII)、バニリン酸(DVIII)、ジヒドロキシマレイン酸(NIII)：
【化８】
2005526127.tif 000023
−好ましくは、以下から選択されるモノまたはポリアルコール類：ノルジヒドログアイアレチン酸(EI)、クエルセチン(EII)、カテキン(EIII)、ケンフェロール(EIV)、スルフレチン(EV)、ヒドロキノン(EVIII)、ゴッシポール(EIX)、レダクチン酸(EX)、メトキシヒドロキノン(EXI)、ヒドロキシヒドロキノン(EXII)、没食子酸プロピル(EXIII)、3,5-ジ-ter.ブチル-4-ヒドロキシベンジル-チオグリコレート(EXXIV)、サッカロース(EC)、アスコルビン酸(ECI)およびイソアスコルビン酸(ECII)、p-クマルアルコール(ECIII)、4-ヒドロキシ-フェニルエチルアルコール(ECIV)、コニフェリルアルコール(ECV)、2-チオウラシル(QI)、2-メルカプトエタノール(QII) 
【化９】
2005526127.tif 000024
【化１０】
2005526127.tif 000025
から選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
基CのY3が、以下の二価の基：
【化１１】
2005526127.tif 000026
から選択される、請求項１および２に記載の使用。
【請求項４】
Y3が、次の意味を有する請求項３に記載の使用：窒素原子に関してオルト位に遊離原子価を両方に有する(Y12)；窒素原子に結合した遊離原子価を両方に有する(Y16)；3,5-ジ置換ピラゾール(Y1)；遊離原子価が窒素原子に関して環のパラ位にある(Y19)。
【請求項５】
式(Ｉ)においてb0＝c0＝1、Bは前駆体フェルル酸から生じ、アルキレンオキシ-R'O-から選択されるY＝Y0、R'は好ましくは3〜6の炭素原子を含む、請求項１〜２に記載の使用。
【請求項６】
式(Ｉ)の化合物が、次の式：
【化１２】
2005526127.tif 000027
を有する、(3α,5β,7β)-3,7-ジヒドロキシコラン-24-オイック酸 2-メトキシ-4[3-[4-(ニトロオキシ)ブトキシ]-3-オキソ-1-プロペニル]-フェニルエステルである、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
式(Ｉ)において、b0＝0、アルキレンオキシ-R'O- (R'は好ましくは炭素原子3〜6を含む)から選択されるY＝Y0、またはY＝YArである、請求項１に記載の使用。
【請求項８】
式(Ｉ)の化合物が、式：
【化１３】
2005526127.tif 000028
の(3α,5β,7β)-3,7-ジヒドロキシコラン-24-オイック酸 4-(ニトロオキシ)-ブチルエステルである、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
b0＝0、アルキレンオキシ-R'O- (R'は好ましくは炭素原子3〜6を含む)から選択されるY＝Y0またはY＝YArである、式(Ｉ)の化合物。
【請求項１０】
式：
【化１４】
2005526127.tif 000029
の(3α,5β,7β)-3,7-ジヒドロキシコラン-24-オイック酸 4-(ニトロオキシ)-ブチルエステルである、式(Ｉ)の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肝静脈および門脈循環障害または血行力学代償障害(hemodynamic decompensation)の急性期治療(acute treatment)用薬物の使用に関する。
【０００２】
より具体的には、本発明は、肝門脈管障害の急性期治療用薬物の使用に関しており、例えば肝硬変のような肝疾患の長期的治療用ではない。
【０００３】
一般に、肝障害により引き起こされる血管閉塞または滞留が原因の肝静脈および門脈循環障害は、改善された肝内血流抵抗により、または門脈血流の増加により特徴付けられる。急性期治療は、単に、門脈圧の増加を減少させることを対象にしているのに対して、長期的治療は、疾患の早期に始まり、単に該疾患の進行を制限する目的を有している。本発明は、急性期における門脈圧を減少させることが可能な治療に関する。事実、門脈血流量は生理的数値に戻されず、患者に対して：
【０００４】
−  門脈体静脈の側副循環の発生(胃食道静脈瘤)
−  大静脈中への門脈血の直接シャント(肝性脳障害)
−  腹部臓器うっ血(吸収不良)および脾腫(プレートレットスペニア(platletspenia)を伴う脾機能亢進) 
−  腹水
のような、重大な臨床上の影響を有し得ることが知られている。
【０００５】
肝硬変、肝炎および癌のような慢性肝疾患の場合にも、これらは門脈圧をさらに悪くする。いくつかの熱帯および亜熱帯地方においては、住血吸虫症が際立っているが、先進工業国においては肝硬変が、門脈圧亢進症の最も一般的な原因である。
この障害の様相の一因となる更なる因子は、アルコール関連肝臓障害、先天性肝線維症、薬物中毒または自己免疫疾患であり得る。
【０００６】
食道静脈瘤から(通常は遠位食道から、頻度は低いものの胃底部から、めったにないがその他の部位から)の急性出血は、これらの肝静脈または門脈循環障害の最も一般的な臨床像である。一般的に、患者は、しばしば大規模で、突然の、痛みがない上部の胃腸出血を示す。急性出血は、患者にとって致命的でもある結果を避けるために処置されなければならない、極めて危険な現象である。
【０００７】
静脈瘤の出血の急性期治療のための薬物療法は、門脈圧を減少させ得る薬物の使用にある。バソプレシン、ソマトスタチンおよびその類似化合物が挙げられる。しかしながら、バソプレシンは、腸間膜および心筋虚血症のような副作用を示す。一般に、急性出血の治療におけるこれらの薬物の有効性は確立されていなかった。
【０００８】
このため、急性期における該治療のために通常用いる薬物療法は、例えばプロプラノロール、ナドロールおよびチモロールなどのようなβ-ブロッカーを使用する。これらの薬物は、単独または硝酸イソソルビドと一緒に投与し得る。
【０００９】
β-ブロッカーは門脈血流抵抗の減少において有効であるが、以下の側副枝を示す：
−  それらは心血管系および呼吸器系に対して副作用を有する。このため、それらは心臓血管に問題、喘息およびＣＯＰＤ(慢性閉塞性肺疾患)などを有する患者へは投与できず、
−  いくつかの対象において、生じたこれらの薬物の不耐性は、したがって呼吸困難とブロンコスプネア(bronchospnea)、呼吸困難と心臓病、無力症、胃過敏症および肝性脳障害を発生させる
【００１０】
肝静脈および門脈循環障害の急性期治療のために、例えば硝酸イソソルビドも用いられてきた。しかしながら、それらの全身性の血管拡張作用は、全身性の血圧の減少を起こさせ得るという点で、門脈高血圧症を病む患者により、十分に容認されてはいないかもしれない。
【００１１】
急性静脈瘤治療における上記の薬物により示された副作用のせいで、食道静脈瘤の予防的硬化を含む内視鏡による処置のような外科的技術、経頸静脈性肝内門脈体循環短絡術または外科的短絡が用いられてきた。
【００１２】
したがって、本発明の1つの目的は、改善された有効性および許容性を有する肝静脈および門脈循環障害の急性期治療において有効な薬物を提供することである。肝疾患の慢性期において用いられる治療は、急性期の治療についてなんら示唆せずに、慢性期において用いられる薬物は肝疾患の治療においてのみ作用する。慢性期治療用に用いられる薬物は、主としてウルソデオキシコール酸(ＵＤＣＡ)およびインターフェロンが挙げられる。
【００１３】
したがって、本発明は、次の式(Ｉ)：
【化１】
2005526127.tif 000002
［式中、
−  ヒドロキシ基と7位の炭素原子との間の結合は、α-またはβ-配置であり、ここで、該結合がβ-配置であるときには、式(Ｉ)のステロイド構造はウルソデオキシコール酸残基に相当し、上記の結合がα-配置であるときには、そのステロイド構造はケノデオキシコール酸残基に相当し；
【００１４】
b0＝0、1；
c0＝0、1、但しそれらは同時に0ではあり得ない；
B＝TB-X2-TBI、ここで、TBおよびTBIは、同一または異なって、TB＝X (ここで、Xは-O-、-S-、-N(R1c)であり、R1cはH、C1-C5の直鎖もしくは分枝鎖状アルキルである)、そしてTBI＝(CO)txまたは(X)txx (ここで、txx＝0のときtx＝1およびtxx＝1のときtx =0という条件で、txおよびtxxは0もしくは1であり、Xは上記で定義したとおりであり；
【００１５】
X2は、txおよびtxxの値により、TBI＝COまたはXで、Xが上記で定義したとおりであるとき、Bに対するTB-X2-TBI部分が、
【００１６】
−  アミノ酸、
−  ヒドロキシ酸、
−  モノまたはポリアルコール
から選択されるような二価の基であり(ここで、TBの遊離原子価はZで飽和されており、ZはHまたはC1-C10直鎖もしくは分枝鎖状アルキルであり、TBIの遊離原子価はOZ、Zまたは-N(Z1)(Z2) (ここで、Z1およびZ2は同一または異なって、上記のZと同じ意味を有する)で飽和されており)；
【００１７】
−  C＝-Tc-Y-、ここで、TC＝(CO)または上記で定義したとおりのX；
b0＝c0＝1のとき：TC＝(CO)、tx＝0のとき、TC＝X
txx＝0のとき、Xは上記で定義したとおりであり；
b0＝0のとき：TC＝Xで、Xは上記で定義したとおりであり；
c0＝0のとき：tx＝0、tBI＝X＝-O-；
【００１８】
Yは：
Yp ：
【化２】
2005526127.tif 000003
［ここで：
nIXは0〜10、好ましくは1〜3の整数であり；
nIIXは1〜10、好ましくは1〜3の整数であり；
RTIX、RTIX'、RTIIX、RTIIX'は、同一または異なって、HまたはC1-C4直鎖もしくは分枝鎖状アルキルであり、好ましくはRTIX、RTIX'、RTIIXおよびRTIIX'はHであり；
Y3は、窒素、酸素または硫黄から選択される1または2のヘテロ原子を含む5または6員のヘテロ環であり、この環は飽和、不飽和または芳香族である］；
【００１９】
次のものから選択されるYO：
−  アルキレンオキシ基-R'O (ここでR'はC1-C20の直鎖もしくは分枝鎖状アルキル、好ましくは2〜6の炭素原子を有するものである)、または5〜7の炭素原子を有するシクロアルキレン(シクロアルキレン環の1以上の炭素原子は、結局はヘテロ原子により置換されており、該環は任意にR'タイプの側鎖を有してもよく、ここでR'は上記で定義したとおりである)；あるいは以下の基の1つ：
【００２０】
【化３】
2005526127.tif 000004
［ここで、nf'は1〜6の整数、好ましくは1〜4の炭素原子である］
【化４】
2005526127.tif 000005
［ここで、R1f＝H、CH3であり、nf'は上記で定義したとおりである］
【００２１】
および次のものから選択されるYAr：
【化５】
2005526127.tif 000006
［ここで、n3は0〜3の整数であり、n3'は1〜3の整数である］；
【００２２】
【化６】
2005526127.tif 000007
［ここで、n3およびn3'は上記で定義したとおりである］
から選択される］
を有する化合物の肝静脈または門脈循環障害の急性期治療のための使用に関する。
【００２３】
好ましくは、Ｂ前駆物質は、以下から選択される。
−  アミノ酸類、好ましくはL-カルノシン(式CI)、アンセリン(CII)、セレノシステイン(CIII)、セレノメチオニン(CIV)、ペニシラミン(CV)、N-アセチルペニシラミン(CVI)、システイン(CVII)、N-アセチルシステイン(CVIII)、グルタチオン(CIX)またはそれらのエステル類、好ましくはエチルもしくはイソプロピルエステル、アスパラギン酸(PI)、ヒスチジン(PII)、5-ヒドロキシトリプトファン(PIII)：
【００２４】
【化７】
2005526127.tif 000008
【００２５】
−  ヒドロキシ酸類、好ましくは以下の：没食子酸(DI)、フェルラ酸(DII)、ゲンチシン酸(DIII)、クエン酸(DIV)、カフェー酸(DV)、ジヒドロキシカフェー酸(DVI)、p-クマル酸(DVII)、バニリン酸(DVIII)、ジヒドロキシマレイン酸(NIII)：
【００２６】
【化８】
2005526127.tif 000009
【００２７】
−  好ましくは以下から選択されるモノまたはポリアルコール類：ノルジヒドログアイアレチン酸(EI)、クエルセチン(EII)、カテキン(EIII)、ケンフェロール(EIV)、スルフレチン(EV)、ヒドロキノン(EVIII)、ゴッシポール(EIX)、レダクチン酸(EX)、メトキシヒドロキノン(EXI)、ヒドロキシヒドロキノン(EXII)、没食子酸プロピル(EXIII)、3,5-ジ-ter.ブチル-4-ヒドロキシベンジル-チオグリコレート(EXXIV)、サッカロース(EC)、アスコルビン酸(ECI)およびイソアスコルビン酸(ECII)、p-クマルアルコール(ECIII)、4-ヒドロキシ-フェニルエチルアルコール(ECIV)、コニフェリルアルコール(ECV)、2-チオウラシル(QI)、2-メルカプトエタノール(QII) 
【００２８】
【化９】
2005526127.tif 000010
【化１０】
2005526127.tif 000011
【００２９】
上記の式を有する化合物は、文献、例えば「The Merck Index」、第12版、(1996)に記載の周知の方法に従って得ることができる。可能なときは、対応する光学または幾何異性体を用いることができる。
【００３０】
b0＝c0＝1で、かつb0＝0およびc0＝1のとき、薬物の基とＸ2の間、およびＸ2とＹとの間の結合は独立してエステル、チオエステルまたはアミド型であり得る。
二価の基Ｃの好ましいＹ3は、以下の：
【００３１】
【化１１】
2005526127.tif 000012
の二価の基から選択される。
【００３２】
Ｙ3の好ましい基は、次の：窒素原子に関してオルト位に遊離原子価を両方とも有する(Y12)；窒素原子に結合した遊離原子価を両方とも有する(Y16)；3,5-ジ置換ピラゾール(Y1)；遊離原子価が窒素原子に関して環のパラ位である(Y19)
である。
【００３３】
式(IIIp)を有するＹ前駆物質(ここで、酸素原子の遊離原子価はHで飽和されており、末端炭素原子の遊離原子価はカルボキシまたはオキシドリル(oxydrilic)基で飽和されている)は、市場で入手可能であるか、またはこの技術分野で周知の方法に従って製造することができる。
【００３４】
本発明による化合物は、酸で塩化され得る少なくとも1つの官能基、例えばアミン基が存在するときは、対応する塩に変換することができる。例えば、塩を得るための方法は、次のとおりである：分子内に塩基性窒素原子が存在するとき、対応する有機または無機酸の当量を用いる反応を、アセトニトリル、テトラヒドロフランのような有機溶媒中で行う。有機酸の例は、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、コハク酸、クエン酸およびトリフルオロ酢酸である。
無機酸の例は、硝酸、塩酸、硫酸およびリン酸である。
【００３５】
本発明による治療的用途に用いられる化合物は、例えば国際公開第00/61604号に記載のようにして得ることができる。
本発明中で用いられる化合物が1以上のキラル中心を有するとき、それらはラセミ化合物の形態または単一エナンチオマーもしくはジアステレオマーとしてのジアステレオマー混合物であってもよい。幾何不斉が存在する場合には、その化合物はシスまたはトランス形態で用いられ得る。
【００３６】
本発明の目的化合物は、当業者に周知の技術に従って、徐放性形態で、非経口または経口使用、例えば舌下、吸入、坐薬または浣腸剤のように経皮用に、対応する医薬組成物に製剤化される：例えば"Remington's Pharmaceutical Sciences" 第15版を参照。
該製剤中の有効成分のモル濃度は、一般に、対応する薬物前駆体の量以下である。
投与し得る1日投与量は、前駆薬物の量と等しいか、最終的にはより少ない。前駆体の1日投与量は、例えば"Physician's Desk Reference"中に見出し得る。
【００３７】
式(Ｉ)中にBが存在するときには、b0＝1であり、本発明による使用に好ましい化合物は、前駆物質フェルル酸から生じるものであり、とりわけより好ましい化合物は、次の式：
【化１２】
2005526127.tif 000013
を有する、(3α,5β,7β)-3,7-ジヒドロキシコラン-24-オイック酸 2-メトキシ-4[3-[4-(ニトロオキシ)ブトキシ]-3-オキソ-1--プロペニル]フェニルエステルである。
【００３８】
式(Ｉ)において、b0＝0のとき、好ましい基Yは、Y0タイプ、とりわけアルキレン基R'O (R'はC3-C6アルキルである)である。特に好ましい化合物は、次の式：
【化１３】
2005526127.tif 000014
の(3α,5β,7β)-3,7-ジヒドロキシコラン-24-オイック酸 4-(ニトロオキシ)ブチルエステルである。
【００３９】
肝臓および門脈の血液動態代償不全の急性期治療用に用いられる本発明の薬物は、驚くべきことに、そして予期せぬことに門脈圧の減少において、最良の結果を有する。事実、例えばウルソデオキシコール酸のような本発明の化合物の前駆物質は、肝障害の長期的治療において有効であるが、急性期治療後の門脈圧減少用ではない。文献中には、高い門脈圧が生じたときの肝障害の急性期治療のための本発明の化合物の使用は、いまだかつて記載されていない。
【００４０】
事実、門脈圧が高い状態、例えばノルエピネフリン処置により誘発された、基礎的な値に関して500％の場合においても、本発明の化合物は、全身性の血液動態パラメーターに影響を及ぼすことなく門脈圧を減少させることができる。慢性期における治療とは異なって、急性期治療において、本発明の化合物の投与は、非常に短期間、一般に2〜3日、多くても1週間行われるのに対して、長期治療において、投与は長期間、少なくとも8週間、肝臓において肝硬変を発病したという点で、数週間行われる。したがって、それほど短期間の処置が、急性期治療において門脈圧の減少においてそれ程高い活性を示し得たことは、予期できなかった。
以下の実施例は本発明を説明するものであって、制限するものではない。
【実施例】
【００４１】
実施例 1
胆管の結索紮およびその後のノルエピネフリンを用いる処置により誘発された肝静脈および門脈循環障害の実験モデルにおける、ウルソデオキシコール酸および(3α,5β,7β)-3,7-ジヒドロキシコラン-24-オイック酸 2-メトキシ-4[3-[4-(ニトロオキシ)ブトキシ]-3-オキソ-1-プロペニル]フェニルエステルの効果
ここで用いられているウルソデオキシコール酸 ニトロオキシ誘導体(NO-urso)は、PCT WO 00/61,604号の実施例1に記載のようにして製造した。
【００４２】
21匹のウィスターラットを各動物7匹の3群に分け、次いで胆管結紮に付した。結紮に続いて3週間以内、動物を安静にしておいた。胆管結紮の結果として、動物は肝静脈および門脈循環の機能障害を発症していた。第3週の終わりに、各群を、以下の週1回の処置プロトコールにかけた：
1 群：対照群は担持体(カルボキシメチルセルロースの1％w/v水懸濁液)で処置した；
2 群：1日2回、投与量28 mg/kgのNO-ursoで処置した；
3 群：1日2回、投与量15 mg/kg (0.04 mmol/kg)のウルソデオキシコール酸(表中のurso)で処置した。
【００４３】
カルボキシメチルセルロースの1％水懸濁液中の残りの化合物を、胃内カニューレにより投与した。
処置(第4週)の終わりに、動物をウレタンで麻酔にかけ、次いで全身性の血圧(MAP)および門脈圧(PP)を、頚動脈および門脈の両方をカテーテル法により記録した。次いで、動物の肝臓を継続的に、蠕動ポンプ(Gilson)を用いて、O2/CO2 (95%-5%)で釣り合いを取ったクレブス溶液(40 ml/分)で潅流した。
このような方法で、両方の試験化合物の薬理学的効果を評価した。
【００４４】
次いで、肝臓内循環収縮を誘発させるために、最初に、ラットの肝臓をノルエピネフリン溶液(1μM)で潅流した。その後、2および3群において、試験化合物のそれぞれの1 mM溶液で単回潅流を行い、門脈圧の変動を記録した。
実験で得られた結果は、NO-ursoまたはウルソデオキシコール酸での処置が、免疫細胞化学法を用いて評価される全身性血液動態パラメーター、すなわち、全身性血圧、心頻度(cardiac frequency)および肝線維症にも影響を及ぼさないことを示している。
【００４５】
表1に示しているデータは、NO-ursoが胆管結紮およびノルエピネフリン(NE)投与による両方で誘発された肝臓内抵抗を減少させること示している。事実、ウルソデオキシコール酸とは違って、NO-ursoの投与は、高い肝臓内抵抗および/または著しい肝硬変を有する動物において肝臓内抵抗を減少できる。
この週処置後に、40 ml/分の潅流率においてNO-ursoは、3 mmHgの門脈圧の減少を誘発した。Ursoで処置したラットは、その代わりに、対照に関して2 mmHgの増加を示した。NO-urso潅流により得られた門脈圧の減少は、統計的に有意(p < 0.01)であった。
【００４６】
ノルエピネフリにより誘発された肝臓内抵抗の増加は、NO-ursoにより有意に減少されたが、ウルソデオキシコール酸によっては減少されなかった。事実、投与量1μMにおけるNEの潅流により測定された肝臓内脈管抵抗の500％上昇は、NO-ursoでの処置により有意に減少された(p < 0.001)が、ウルソデオキシコール酸によっては減少されなかった。この結果は、NO-ursoでの急性期治療が肝繊維症を緩和しないという観測と共に、肝臓内抵抗増加の動的構成要素(脈管圧)に対するこの実験モデルにおいて、NO-ursoが作用することを確認した。得られた結果の間の比較は、肝門脈管の血液動態代償不全の急性期治療におけるNO-ursoの有効性を証明している。
【００４７】
実施例２
(3α,5β,7β)-3,7-ジヒドロキシコラン-24-オイック酸 4-(ニトロオキシ)ブチルエステル (IB)の製造
a)  (3α,5β,7β)-3,7-ジヒドロキシコラン-24-オイック酸 4-ブロモブチルエステルの合成
DMF中、ウルソデオキシコール酸(0.5 g)をナトリウムエチラート(0.09 g)と反応させ、対応するナトリウム塩を得た。この溶液を1,4-ジブロモブタン(0.263 g)のDMF溶液に滴下した。このようにして得た混合物を室温で、撹拌下に終夜放置した。次いで、この混合物を酢酸エチル/水2：1で抽出し、集めた有機相を乾燥し、減圧下で溶媒を留去し、残渣を、溶出剤としてn-ヘキサン/酢酸エチル1：9を用いるシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、(3α,5β,7β)-3,7-ジヒドロキシコラン-24-オイック酸 4-ブロモブチルエステル0.1 gを得た。
1H-NMR (CDCl3、ppm)： 4.12 (2H、t)； 3.62 (2H、m)； 3.45 (2H、t)； 2.3 (2H、m)； 1.98-0.96 (36H、m)； 0.69 3H、s)
【００４８】
b)  (3α,5β,7β)-3,7-ジヒドロキシコラン-24-オイック酸 4-(ニトロオキシ)ブチルエステルの合成
(3α,5β,7β)-3,7-ジヒドロキシコラン-24-オイック酸 4-ブロモブチルエステル(0.1 g)のアセトニトリル(20 ml)溶液に、硝酸銀(0.066 g)を撹拌下に加え、混合物を撹拌下に80℃で6時間加熱した。反応終了後、このようにして得られた析出物をろ別し、溶媒を除去した。粗生成物を、溶出剤として塩化メチレン/酢酸エチル 3/7を用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、所望の化合物50 mgを得た。
1NMR (CDCl3、ppm)： 4.3 (2H、m)； 4.12 (2H、t)； 3.45 (2H、t)； 2.3 (2H、m)； 1.98-0.96 (36H、m)； 0.69 (3H、s)
【００４９】
表１
【表１】
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【国際調査報告】
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