(57)【要約】本発明は、ウイルス呼吸系感染症の広域の予防法と治療法を提供する。特に本発明は、RSウイルス（RSV）、パラインフルエンザウイルス（PIV）、および／またはヒトメタニューモウイルス（hHPV）感染が引き起こす症状を予防、治療または改善する方法であって、1つ以上の抗RSV抗原抗体もしくはその抗原結合断片、1つ以上の抗hMPV抗原抗体もしくはその抗原結合断片、および／または1つ以上の抗PIV抗原抗体もしくはその抗原結合断片の有効量を被験体に投与することを含む方法に関する。ある実施形態において、抗RSV抗原抗体、抗PIV抗原抗体、および／または抗hMPV抗原抗体、またはこれらの抗原結合断片のある血清力価が該被験体において達成される。ある具体的な実施形態において、被験体はヒトであり、好ましくは抗RSV抗原抗体、抗PIV抗原抗体、および／または抗hMPV抗原抗体はヒトであるかまたはヒト化されている。本発明はさらに、抗RSV抗原抗体、抗PIV抗原抗体、および／または抗hMPV抗原抗体、またはこれらの抗原結合断片を含む組成物に関する。本発明はまた、1つ以上の抗RSV抗原抗体、抗PIV抗原抗体、および／または抗hMPV抗原抗体、またはこれらの抗原結合断片を含む検出可能なまたは診断用組成物と、この組成物を使用してRSV、PIVおよび／またはhMPV感染を検出または診断する方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体のウイルス感染を予防する方法であって：
(i)予防的有効量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片であって、RSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片；および
(ii)予防的有効量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片（ここで、1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片は、hMPV抗原に免疫特異的に結合する）を、被験体に投与することを含む方法。
【請求項２】
1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片はRSVを中和する、請求項1の方法。
【請求項３】
1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片はhMPVを中和する、請求項1の方法。
【請求項４】
1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片は、被験体の細胞のRSV感染を阻止する、請求項1の方法。
【請求項５】
1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片は、被験体の細胞のhMPV感染を阻止する、請求項1の方法。
【請求項６】
被験体の呼吸系ウイルス感染の1つ以上の症状を治療する方法であって：
(i)予防的有効量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片であって、RSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片；および
(ii)予防的有効量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片であって、hMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片を、被験体に投与することを含む方法。
【請求項７】
受動免疫療法であって：
(i)第1の用量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片であって、RSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片；および
(ii)第2の用量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片であって、hMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片を、被験体に投与することを含み、
ここで第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも25％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも25％低下させる方法。
【請求項８】
第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも50％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも50％低下させる、請求項7の方法。
【請求項９】
第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも75％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも75％低下させる、請求項7の方法。
【請求項１０】
第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも90％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも90％低下させる、請求項7の方法。
【請求項１１】
受動免疫療法であって：
(i)第1の用量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片であって、RSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片；および
(ii)第2の用量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片であって、hMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片を、被験体に投与することを含み、
ここで被験体中の1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片を15日間投与後に少なくとも10μg/mlであり、被験体中の1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片を15日間投与後に少なくとも10μg/mlである方法。
【請求項１２】
RSV抗原のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号390〜398のアミノ酸配列である、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項１３】
RSV抗原のアミノ酸配列は、RSV核タンパク質、RSVホスホタンパク質、RSVマトリックスタンパク質、RSV小疎水性タンパク質、RSV RNA依存性RNAポリメラーゼ、RSV Fタンパク質、またはRSV Gタンパク質のアミノ酸配列と90％同一である、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項１４】
RSV抗原は、RSV核タンパク質、RSVホスホタンパク質、RSVマトリックスタンパク質、RSV小疎水性タンパク質、RSV RNA依存性RNAポリメラーゼ、RSV Fタンパク質、およびRSV Gタンパク質よりなる群から選択される、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項１５】
1つ以上の該第1の抗体は、A群またはB群RSVの抗原に免疫特異的に結合する、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項１６】
RSV抗原はRSV Fタンパク質である、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項１７】
1つ以上の該第2の抗体は七面鳥APV抗原と交差反応する、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項１８】
1つ以上の該第2の抗体は、(i)ヒト抗体であるかまたはヒト化抗体であり、かつ(ii)七面鳥APV抗原と交差反応する、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項１９】
該七面鳥APV抗原は、七面鳥APV核タンパク質、七面鳥APVホスホタンパク質、七面鳥APVマトリックスタンパク質、七面鳥APV小疎水性タンパク質、七面鳥APV RNA依存性RNAポリメラーゼ、七面鳥APV Fタンパク質、および七面鳥APV Gタンパク質よりなる群から選択される、請求項17の方法。
【請求項２０】
該七面鳥APV抗原は、トリニューモウイルスA型、トリニューモウイルスB型、またはトリニューモウイルスC型の抗原である、請求項17の方法。
【請求項２１】
該七面鳥APV抗原のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号424〜429のアミノ酸配列である、請求項17の方法。
【請求項２２】
hMPV抗原のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号399〜406、420、または421のアミノ酸配列である、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項２３】
hMPV抗原は、hMPV核タンパク質、hMPVホスホタンパク質、hMPVマトリックスタンパク質、hMPV小疎水性タンパク質、hMPV RNA依存性RNAポリメラーゼ、hMPV Fタンパク質、およびhMPV Gタンパク質よりなる群から選択される、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項２４】
hMPV抗原はhMPV Fタンパク質である、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項２５】
第1の抗体は、Palivizumab；AFFF；P12f2；P12f4；P11d4；A1e9；A12a6；A13c4；A17d4；A4B4；1X-493L1；FR H3-3F4；M3H9；Y10H6；DG；AFFF(1)；6H8；L1-7E5；L2-15B10；A13a11；A1h5；A4B4(1)；A4B4-F52S；またはA4B4L1FR-S28Rである、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項２６】
1つ以上の第1の抗体の有効量は、15mg/kg以下である、請求項1または6の方法。
【請求項２７】
1つ以上の第1の抗体の有効量は、10mg/kg以下である、請求項1または6の方法。
【請求項２８】
1つ以上の第1の抗体の有効量は、1mg/kg以下である、請求項1または6の方法。
【請求項２９】
1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片の有効量は、15mg/kg以下である、請求項1または6の方法。
【請求項３０】
1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片の有効量は、10mg/kg以下である、請求項1または6の方法。
【請求項３１】
1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片の有効量は、1mg/kg以下である、請求項1または6の方法。
【請求項３２】
1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片は、1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片を投与する前の期間に投与される、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項３３】
1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片は、1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片を投与する前の期間に投与される、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項３４】
1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片および1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片は、同時に投与される、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項３５】
1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片は、2回以上の投与で順に投与され、1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片の投与は互いに一定期間で分離され、かつ1つ以上の第2の抗体または抗原結合断片は、その順序の前、最中、または後に投与される、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項３６】
1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片は、2回以上の投与で順に投与され、1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片の投与は互いに一定期間で分離され、かつ1つ以上の該第1の抗体または抗原結合断片は、その順序の前、最中、または後に投与される、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項３７】
1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片ならびに1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片は、2回以上の投与で順に投与され、該投与は互いに一定期間で分離される、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項３８】
期間は少なくとも1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、1ヶ月、2ヶ月、または3ヶ月である、請求項32の方法。
【請求項３９】
期間は少なくとも1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、1ヶ月、2ヶ月、または3ヶ月である、請求項33の方法。
【請求項４０】
期間は少なくとも1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、1ヶ月、2ヶ月、または3ヶ月である、請求項34の方法。
【請求項４１】
期間は少なくとも1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、1ヶ月、2ヶ月、または3ヶ月である、請求項35の方法。
【請求項４２】
期間は少なくとも1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、1ヶ月、2ヶ月、または3ヶ月である、請求項36の方法。
【請求項４３】
期間は少なくとも1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、1ヶ月、2ヶ月、または3ヶ月である、請求項37の方法。
【請求項４４】
1つ以上の第1の抗体もしくはその抗原結合断片および／または1つ以上の第2の抗体もしくはその抗原結合断片は、ネブライザーまたは吸入器により投与される、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項４５】
1つ以上の第1の抗体もしくはその抗原結合断片ならびに／または1つ以上の第2の抗体もしくはその抗原結合断片は、筋肉内、静脈内または皮下投与される、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項４６】
ウイルス感染は、RSVとhMPVによる感染である、請求項1または6の方法。
【請求項４７】
ウイルス感染は、RSVとAPVによる感染である、請求項1または6の方法。
【請求項４８】
抗体の少なくとも1つは、モノクローナル抗体、合成抗体、細胞内発現抗体(intrabody)、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化キメラ抗体、ヒト化抗体、グリコシル化抗体、多重特異的抗体、ヒト抗体、1本鎖抗体、または二重特異的抗体である、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項４９】
抗体の少なくとも1つはヒト抗体である、請求項48の方法。
【請求項５０】
抗体の少なくとも1つはヒト化抗体である、請求項48の方法。
【請求項５１】
抗体の少なくとも1つは合成抗体である、請求項48の方法。
【請求項５２】
被験体は哺乳動物である、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項５３】
哺乳動物は霊長類である、請求項52の方法。
【請求項５４】
霊長類はヒトである、請求項53の方法。
【請求項５５】
ヒトは老人である、請求項54の方法。
【請求項５６】
ヒトは移植受容者である、請求項54の方法。
【請求項５７】
ヒトは免疫無防備状態患者である、請求項54の方法。
【請求項５８】
ヒトはAIDS患者である、請求項54の方法。
【請求項５９】
ヒトは幼児である、請求項54の方法。
【請求項６０】
ヒトは、嚢胞性繊維症、気管支肺異形成症、先天性心疾患、先天性免疫不全症、または後天性免疫不全症を有するか、または骨髄移植を受けたことがある、請求項54の方法。
【請求項６１】
幼児は、早産で生まれたか、またはRSV感染および／またはhMPV感染の入院のリスクがある、請求項59の方法。
【請求項６２】
ヒト幼児は早産で生まれた、請求項59の方法。
【請求項６３】
幼児は妊娠32週齢で生まれた、請求項62の方法。
【請求項６４】
幼児は妊娠32〜35週齢に生まれた、請求項62の方法。
【請求項６５】
幼児は妊娠35週齢を超えて生まれた、請求項62の方法。
【請求項６６】
幼児は妊娠38週齢を超えている、請求項59の方法。
【請求項６７】
哺乳動物は霊長類ではない、請求項52の方法。
【請求項６８】
非霊長類哺乳動物は、RSV感染および／またはhMPV感染の動物モデルである、請求項67の方法。
【請求項６９】
非霊長類哺乳動物はコトンラットである、請求項67の方法。
【請求項７０】
抗体はRSVシーズン前およびその最中に１ヶ月に1回投与される、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項７１】
抗体はRSVシーズン前およびその最中に2ヶ月毎に投与される、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項７２】
抗体はRSVシーズン前およびその最中に1回投与される、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項７３】
該断片の少なくとも1つは、Fab断片、F(ab')断片、F(ab')2断片、Fd、1本鎖Fv、ジスルフィド結合Fv、VLドメインを含む断片、またはVHドメインを含む断片である、請求項1、6、7または11の方法。
【請求項７４】
被験体のウイルス感染を予防する方法であって：
(i)ある用量の1つ以上の抗体またはその抗原結合断片を被験体に投与することを含んでなり、ここで、1つ以上の該抗体またはその抗原結合断片は、(i)ヒトであるかまたはヒト化されており、(ii)七面鳥APV抗原と交差反応し、そして(iii)hMPV抗原に免疫特異的に結合する、方法。
【請求項７５】
被験体の呼吸系ウイルス感染の1つ以上の症状を予防する方法であって：
(i)ある用量の1つ以上の抗体またはその抗原結合断片を被験体に投与することを含んでなり、ここで、1つ以上の該抗体またはその抗原結合断片は、(i)ヒトであるかまたはヒト化されており、(ii)七面鳥APV抗原と交差反応し、そして(iii)hMPV抗原に免疫特異的に結合する、方法。
【請求項７６】
受動免疫療法であって：
(i)ある用量の1つ以上の抗体またはその抗原結合断片を被験体に投与することを含んでなり、ここで、1つ以上の該抗体またはその抗原結合断片は、(i)ヒトであるかまたはヒト化されており、(ii)七面鳥APV抗原と交差反応し、そして(iii)hMPV抗原に免疫特異的に結合し、
ここで前記用量は、hMPV感染の発症率を少なくとも25％低下させる、方法。
【請求項７７】
用量はhMPV感染の発症率を少なくとも50％低下させる、請求項76の方法。
【請求項７８】
用量はhMPV感染の発症率を少なくとも75％低下させる、請求項76の方法。
【請求項７９】
用量はhMPV感染の発症率を少なくとも90％低下させる、請求項76の方法。
【請求項８０】
受動免疫療法であって、(i)ある用量の1つ以上の抗体またはその抗原結合断片を被験体に投与することを含んでなり、ここで、1つ以上の該抗体またはその抗原結合断片は、(i)ヒトであるかまたはヒト化されており、(ii)七面鳥APV抗原と交差反応し、そして(iii)hMPV抗原に免疫特異的に結合し、
ここで、被験体中の1つ以上の該抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、1つ以上の該抗体またはその抗原結合断片を15日間投与した後に少なくとも10μg/mlである方法。
【請求項８１】
(i)1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片（ここで、1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片は、RSV抗原に免疫特異的に結合する）；および
(ii)1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片（ここで、1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片は、hMPV抗原に免疫特異的に結合する）、を含む医薬組成物。
【請求項８２】
RSV抗原のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号390〜398のアミノ酸配列である、請求項81の医薬組成物。
【請求項８３】
RSV抗原のアミノ酸配列は、RSV核タンパク質、RSVホスホタンパク質、RSVマトリックスタンパク質、RSV小疎水性タンパク質、RSV RNA依存性RNAポリメラーゼ、RSV Fタンパク質、またはRSV Gタンパク質のアミノ酸配列と90％同一である、請求項81の医薬組成物。
【請求項８４】
RSV抗原は、RSV核タンパク質、RSVホスホタンパク質、RSVマトリックスタンパク質、RSV小疎水性タンパク質、RSV RNA依存性RNAポリメラーゼ、RSV Fタンパク質、およびRSV Gタンパク質よりなる群から選択される、請求項81の医薬組成物。
【請求項８５】
1つ以上の第1の抗体は、A群またはB群RSVの抗原に免疫特異的に結合する、請求項81の医薬組成物。
【請求項８６】
RSV抗原はRSV Fタンパク質である、請求項81の医薬組成物。
【請求項８７】
1つ以上の第2の抗体は七面鳥APV抗原と交差反応する、請求項81の医薬組成物。
【請求項８８】
1つ以上の第2の抗体は、(i)ヒト抗体であるかまたはヒト化抗体であり、かつ(ii)七面鳥APV抗原と交差反応する、請求項81の医薬組成物。
【請求項８９】
七面鳥APV抗原は、七面鳥APV核タンパク質、七面鳥APVホスホタンパク質、七面鳥APVマトリックスタンパク質、七面鳥APV小疎水性タンパク質、七面鳥APV RNA依存性RNAポリメラーゼ、七面鳥APV Fタンパク質、および七面鳥APV Gタンパク質よりなる群から選択される、請求項87の医薬組成物。
【請求項９０】
七面鳥APV抗原は、トリニューモウイルスA型、トリニューモウイルスB型、またはトリニューモウイルスC型の抗原である、請求項87の医薬組成物。
【請求項９１】
七面鳥APV抗原のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号424〜429のアミノ酸配列である、請求項87の方法。
【請求項９２】
hMPV抗原のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号399〜406、420、または421のアミノ酸配列である、請求項81の医薬組成物。
【請求項９３】
hMPV抗原は、hMPV核タンパク質、hMPVホスホタンパク質、hMPVマトリックスタンパク質、hMPV小疎水性タンパク質、hMPV RNA依存性RNAポリメラーゼ、hMPV Fタンパク質、およびhMPV Gタンパク質よりなる群から選択される、請求項81の医薬組成物。
【請求項９４】
hMPV抗原はhMPV Fタンパク質である、請求項81の医薬組成物。
【請求項９５】
第1の抗体は、Palivizumab；AFFF；P12f2；P12f4；P11d4；Ale9；A12a6；A13c4；A17d4；A4B4；1X-493L1；FR H3-3F4；M3H9；Y10H6；DG；AFFF(1)；6H8；L1-7E5；L2-15B10；A13a11；A1h5；A4B4(1)；A4B4-F52S；またはA4B4L1FR-S28Rである、請求項81の医薬組成物。
【請求項９６】
抗体の少なくとも1つは、モノクローナル抗体、合成抗体、細胞内発現抗体(intrabody) 、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化キメラ抗体、ヒト化抗体、グリコシル化抗体、多重特異的抗体、ヒト抗体、1本鎖抗体、または二重特異的抗体である、請求項81の医薬組成物。
【請求項９７】
抗体の少なくとも1つはヒト抗体である、請求項96の医薬組成物。
【請求項９８】
抗体の少なくとも1つはヒト化抗体である、請求項96の医薬組成物。
【請求項９９】
抗体の少なくとも1つは合成抗体である、請求項96の医薬組成物。
【請求項１００】
断片の少なくとも1つは、Fab断片、F(ab')断片、F(ab')2断片、Fd、1本鎖Fv、ジスルフィド結合Fv、VLドメインを含む断片、またはVHドメインを含む断片である、請求項81の医薬組成物。
【請求項１０１】
1つ以上の抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物であって、1つ以上の該抗体またはその抗原結合断片は、(i)ヒトであるかまたはヒト化されており、(ii)七面鳥APV抗原と交差反応し、そして(iii)hMPV抗原に免疫特異的に結合する、医薬組成物。
【請求項１０２】
被験体のウイルス感染を予防する方法であって：
(i)予防的有効量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片であって、PIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片；および
(ii)予防的有効量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片であって、hMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片を、被験体に投与することを含む方法。
【請求項１０３】
1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片はPIVを中和する、請求項102の方法。
【請求項１０４】
1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片はhMPVを中和する、請求項102の方法。
【請求項１０５】
1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片は、被験体の細胞のPIV感染を阻止する、請求項102の方法。
【請求項１０６】
1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片は、被験体の細胞のhMPV感染を阻止する、請求項102の方法。
【請求項１０７】
被験体の呼吸系ウイルス感染の1つ以上の症状を治療する方法であって：
(i)治療的有効量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片であって、PIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片；および
(ii)治療的有効量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片であって、hMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片を、被験体に投与することを含む方法。
【請求項１０８】
受動免疫療法であって：
(i)第1の用量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片であって、PIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片；および
(ii)第2の用量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片であって、hMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片を、被験体に投与することを含み、
ここで第1の用量はPIV感染の発症率を少なくとも25％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも25％低下させる方法。
【請求項１０９】
第1の用量はPIV感染の発症率を少なくとも50％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも50％低下させる、請求項108の方法。
【請求項１１０】
第1の用量はPIV感染の発症率を少なくとも75％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも75％低下させる、請求項108の方法。
【請求項１１１】
第1の用量はPIV感染の発症率を少なくとも90％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも90％低下させる、請求項108の方法。
【請求項１１２】
受動免疫療法であって：
(i)第1の用量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片であって、PIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片；および
(ii)第2の用量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片であって、hMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片を、被験体に投与することを含み、
ここで被験体中の1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片を15日間投与した後に少なくとも10μg/mlであり、被験体中の1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片を15日間投与した後に少なくとも10μg/mlである方法。
【請求項１１３】
PIV抗原のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号407〜419のアミノ酸配列である、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１１４】
PIV抗原のアミノ酸配列は、PIVヌクレオカプシドホスホタンパク質、PIV Lタンパク質、PIVマトリックスタンパク質、PIV HN糖タンパク質、PIV RNA依存性RNAポリメラーゼ、PIV Y1タンパク質、PIV Dタンパク質、またはPIV Cタンパク質のアミノ酸配列と90％同一である、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１１５】
PIV抗原は、PIVヌクレオカプシドホスホタンパク質、PIV Lタンパク質、PIVマトリックスタンパク質、PIV HN糖タンパク質、PIV RNA依存性RNAポリメラーゼ、PIV Y1タンパク質、PIV Dタンパク質、およびPIV Cタンパク質よりなる群から選択される、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１１６】
1つ以上の第1の抗体は、ヒトPIV 1型、ヒトPIV 2型、ヒトPIV 3型、またはヒトPIV 4型の抗原に免疫特異的に結合する、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１１７】
PIV抗原はPIV Fタンパク質である、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１１８】
1つ以上の第2の抗体は七面鳥APV抗原と交差反応する、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１１９】
1つ以上の第2の抗体は、(i)ヒト抗体であるかまたはヒト化抗体であり、かつ(ii)七面鳥APV抗原と交差反応する、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１２０】
七面鳥APV抗原は、七面鳥APV核タンパク質、七面鳥APVホスホタンパク質、七面鳥APVマトリックスタンパク質、七面鳥APV小疎水性タンパク質、七面鳥APV RNA依存性RNAポリメラーゼ、七面鳥APV Fタンパク質、および七面鳥APV Gタンパク質よりなる群から選択される、請求項118、119の方法。
【請求項１２１】
七面鳥APV抗原は、トリニューモウイルスA型、トリニューモウイルスB型、またはトリニューモウイルスC型の抗原である、請求項118、119の方法。
【請求項１２２】
七面鳥APV抗原のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号424〜429のアミノ酸配列である、請求項118、119の方法。
【請求項１２３】
hMPV抗原のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号399〜406、420、または421のアミノ酸配列である、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１２４】
hMPV抗原は、hMPV核タンパク質、hMPVホスホタンパク質、hMPVマトリックスタンパク質、hMPV小疎水性タンパク質、hMPV RNA依存性RNAポリメラーゼ、hMPV Fタンパク質、およびhMPV Gタンパク質よりなる群から選択される、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１２５】
hMPV抗原はhMPV Fタンパク質である、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１２６】
1つ以上の第1の抗体の有効量は、100mg/kg以下である、請求項102または107の方法。
【請求項１２７】
1つ以上の第1の抗体の有効量は、10mg/kg以下である、請求項102または107の方法。
【請求項１２８】
1つ以上の第1の抗体の有効量は、1mg/kg以下である、請求項102または107の方法。
【請求項１２９】
1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片の有効量は、100mg/kg以下である、請求項102または107の方法。
【請求項１３０】
1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片の有効量は、10mg/kg以下である、請求項102または107の方法。
【請求項１３１】
1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片の有効量は、1mg/kg以下である、請求項102または107の方法。
【請求項１３２】
1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片は、1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片を投与する前の期間に投与される、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１３３】
1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片は、1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片を投与する前の期間に投与される、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１３４】
1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片および1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片は、同時に投与される、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１３５】
1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片は、2回以上の投与で順に投与され、1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片の投与は互いに一定期間で分離され、かつ1つ以上の第2の抗体または抗原結合断片は、その順序の前、最中、または後に投与される、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１３６】
1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片は、2回以上の投与で順に投与され、1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片の投与は互いに一定期間で分離され、かつ1つ以上の該第1の抗体または抗原結合断片は、その順序の前、最中、または後に投与される、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１３７】
1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片および1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片は、2回以上の投与で順に投与され、ここで該投与は互いに一定期間で分離される、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１３８】
期間は少なくとも1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、1ヶ月、2ヶ月、または3ヶ月である、請求項132の方法。
【請求項１３９】
期間は少なくとも1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、1ヶ月、2ヶ月、または3ヶ月である、請求項133の方法。
【請求項１４０】
期間は少なくとも1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、1ヶ月、2ヶ月、または3ヶ月である、請求項135の方法。
【請求項１４１】
期間は少なくとも1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、1ヶ月、2ヶ月、または3ヶ月である、請求項136の方法。
【請求項１４２】
期間は少なくとも1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、1ヶ月、2ヶ月、または3ヶ月である、請求項137の方法。
【請求項１４３】
1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片および／または1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片は、ネブライザーまたは吸入器により投与される、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１４４】
1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片および／または1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片は、筋肉内、静脈内または皮下投与される、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１４５】
ウイルス感染は、PIVとhMPVによる感染である、請求項102または107の方法。
【請求項１４６】
ウイルス感染は、PIVとAPVによる感染である、請求項102または107の方法。
【請求項１４７】
抗体の少なくとも1つは、モノクローナル抗体、合成抗体、細胞内発現抗体(intrabody) 、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化キメラ抗体、ヒト化抗体、グリコシル化抗体、多重特異的抗体、ヒト抗体、1本鎖抗体、または二重特異的抗体である、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１４８】
抗体の少なくとも1つはヒト抗体である、請求項147の方法。
【請求項１４９】
抗体の少なくとも1つはヒト化抗体である、請求項147の方法。
【請求項１５０】
抗体の少なくとも1つは合成抗体である、請求項147の方法。
【請求項１５１】
被験体は哺乳動物である、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１５２】
哺乳動物は霊長類である、請求項151の方法。
【請求項１５３】
霊長類はヒトである、請求項152の方法。
【請求項１５４】
ヒトは老人である、請求項153の方法。
【請求項１５５】
ヒトは移植受容者である、請求項153の方法。
【請求項１５６】
ヒトは免疫無防備状態患者である、請求項153の方法。
【請求項１５７】
ヒトはAIDS患者である、請求項153の方法。
【請求項１５８】
ヒトは幼児である、請求項153の方法。
【請求項１５９】
ヒトは、嚢胞性繊維症、気管支肺異形成症、先天性心疾患、先天性免疫不全症、または後天性免疫不全症を有するか、または骨髄移植を受けたことがある、請求項153の方法。
【請求項１６０】
幼児は、早産で生まれたか、またはPIV感染および／またはhMPV感染の入院のリスクがある、請求項158の方法。
【請求項１６１】
ヒト幼児は早産で生まれた、請求項158の方法。
【請求項１６２】
幼児は妊娠32週齢で生まれた、請求項161の方法。
【請求項１６３】
幼児は妊娠32〜35週齢に生まれた、請求項161の方法。
【請求項１６４】
幼児は妊娠35週齢を超えて生まれた、請求項161の方法。
【請求項１６５】
幼児は妊娠38週齢を超えている、請求項158の方法。
【請求項１６６】
哺乳動物は霊長類ではない、請求項151の方法。
【請求項１６７】
非霊長類哺乳動物は、PIV感染および／またはhMPV感染の動物モデルである、請求項166の方法。
【請求項１６８】
非霊長類哺乳動物はコトンラットである、請求項166の方法。
【請求項１６９】
抗体はPIVシーズン前およびその最中に1ヶ月に1回投与される、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１７０】
抗体はPIVシーズン前およびその最中に2ヶ月毎に投与される、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１７１】
抗体はPIVシーズン前およびその最中に1回投与される、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１７２】
断片の少なくとも1つは、Fab断片、F(ab')断片、F(ab')2断片、Fd、1本鎖Fv、ジスルフィド結合Fv、VLドメインを含む断片、またはVHドメインを含む断片である、請求項102、107、108または112の方法。
【請求項１７３】
被験体のウイルス感染を予防する方法であって：
(i)予防的有効量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片であって、RSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片；
(ii)予防的有効量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片であって、hMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片；および
(iii)予防的有効量の1つ以上の第3の抗体またはその抗原結合断片であって、PIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片、を被験体に投与することを含む方法。
【請求項１７４】
1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片はRSVを中和する、請求項173の方法。
【請求項１７５】
1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片はhMPVを中和する、請求項173の方法。
【請求項１７６】
1つ以上の第3の抗体またはその抗原結合断片はPIVを中和する、請求項173の方法。
【請求項１７７】
1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片は、被験体の細胞のRSV感染を阻止する、請求項173の方法。
【請求項１７８】
1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片は、被験体の細胞のhMPV感染を阻止する、請求項173の方法。
【請求項１７９】
1つ以上の第3の抗体またはその抗原結合断片は、被験体の細胞のPIV感染を阻止する、請求項173の方法。
【請求項１８０】
被験体の呼吸系ウイルス感染を予防する方法であって：
(i)治療的有効量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片であって、RSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片；
(ii)治療的有効量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片であって、hMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片；および
(iii)治療的有効量の1つ以上の第3の抗体またはその抗原結合断片であって、PIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片、を被験体に投与することを含む方法。
【請求項１８１】
受動免疫療法であって：
(i)第1の用量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片であって、RSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片；
(ii)第2の用量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片であって、hMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片；および
(iii)第1の用量の1つ以上の第3の抗体またはその抗原結合断片であって、PIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第3の抗体またはその抗原結合断片；
を、被験体に投与することを含み、
ここで第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも25％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも25％低下させ、そして第3の用量はPIV感染の発症率を少なくとも25％低下させる方法。
【請求項１８２】
第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも50％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも50％低下させ、そして第3の用量はPIV感染の発症率を少なくとも50％低下させる、請求項181の方法。
【請求項１８３】
第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも75％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも75％低下させ、そして第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも75％低下させる、請求項181の方法。
【請求項１８４】
第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも90％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも90％低下させ、そして第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも90％低下させる、請求項181の方法。
【請求項１８５】
受動免疫療法であって：
(i)第1の用量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片であって、RSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片；および
(ii)第2の用量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片であって、hMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片；および
(iii)第3の用量の1つ以上の第3の抗体またはその抗原結合断片であって、PIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第3の抗体またはその抗原結合断片
を、被験体に投与することを含み、
ここで被験体中の1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片を15日間投与した後に少なくとも10μg/mlであり、被験体中の1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片を15日間投与した後に少なくとも10μg/mlであり、そして被験体中の1つ以上の該第3の抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、1つ以上の該第3の抗体またはその抗原結合断片を15日間投与した後に少なくとも10μg/mlである方法。
【請求項１８６】
PIV抗原のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号407〜419のアミノ酸配列である、請求項173、180、181または185の方法。
【請求項１８７】
PIV抗原のアミノ酸配列は、PIV核タンパク質、PIVホスホタンパク質、PIVマトリックスタンパク質、PIV小疎水性タンパク質、PIV RNA依存性RNAポリメラーゼ、PIV Fタンパク質、またはPIV Gタンパク質のアミノ酸配列と90％同一である、請求項173、180、181または185の方法。
【請求項１８８】
PIV抗原は、PIV核タンパク質、PIVホスホタンパク質、PIVマトリックスタンパク質、PIV小疎水性タンパク質、PIV RNA依存性RNAポリメラーゼ、PIV Fタンパク質、およびPIV Gタンパク質よりなる群から選択される、請求項173、180、181または185の方法。
【請求項１８９】
被験体のウイルス感染を予防する方法であって：
(i)予防的有効量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片であって、RSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の第1の抗体または抗原結合断片；および
(ii)予防的有効量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片であって、PIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片を、被験体に投与することを含む方法。
【請求項１９０】
1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片はRSVを中和する、請求項189の方法。
【請求項１９１】
1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片はPIVを中和する、請求項189の方法。
【請求項１９２】
1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片は、被験体の細胞のRSV感染を阻止する、請求項189の方法。
【請求項１９３】
1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片は、被験体の細胞のPIV感染を阻止する、請求項189の方法。
【請求項１９４】
被験体の呼吸系ウイルス感染の1つ以上の症状を治療する方法であって：
(i)治療的有効量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片であって、RSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片；および
(ii)治療的有効量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片であって、PIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片を、被験体に投与することを含む方法。
【請求項１９５】
受動免疫療法であって：
(i)第1の用量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片であって、RSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片；および
(ii)第2の用量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片であって、PIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片を、被験体に投与することを含み、
ここで第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも25％低下させ、第2の用量はPIV感染の発症率を少なくとも25％低下させる方法。
【請求項１９６】
第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも50％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも50％低下させる、請求項195の方法。
【請求項１９７】
第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも75％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも75％低下させる、請求項195の方法。
【請求項１９８】
第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも90％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも90％低下させる、請求項195の方法。
【請求項１９９】
受動免疫療法であって：
(i)第1の用量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片であって、RSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片；および
(ii)第2の用量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片であって、PIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片を、被験体に投与することを含み、
ここで被験体中の1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、1つ以上の該第1の抗体またはその抗原結合断片を15日間投与した後に少なくとも10μg/mlであり、被験体中の1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、1つ以上の該第2の抗体またはその抗原結合断片を15日間投与した後に少なくとも10μg/mlである方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、2002年7月25日に出願された米国特許出願第60398,475号（これは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）の利益を請求する。
【０００２】
1. 緒言
本発明は、ウイルス呼吸系感染症の広域の予防法と治療法を提供する。特に本発明は、RSウイルス（RSV）、パラインフルエンザウイルス（PIV）、および／またはヒトメタニューモウイルス（hHPV）感染が引き起こす症状を予防、治療または改善する方法であって、1つ以上の抗RSV抗原抗体もしくはその抗原結合断片、1つ以上の抗hMPV抗原抗体もしくはその抗原結合断片、および／または1つ以上の抗PIV抗原抗体もしくはその抗原結合断片の有効量を被験体に投与することを含む方法に関する。ある実施形態において、抗RSV抗原抗体、抗PIV抗原抗体、および／または抗hMPV抗原抗体、またはこれらの抗原結合断片のある血清力価が該被験体において達成される。ある具体的な実施形態において、被験体はヒトであり、好ましくは抗RSV抗原抗体、抗PIV抗原抗体、および／または抗hMPV抗原抗体はヒトであるかまたはヒト化されている。本発明はさらに、抗RSV抗原抗体、抗PIV抗原抗体、および／または抗hMPV抗原抗体、またはこれらの抗原結合断片を含む組成物に関する。本発明はまた、1つ以上の抗RSV抗原抗体、抗PIV抗原抗体、および／または抗hMPV抗原抗体、またはこれらの抗原結合断片を含む検出可能なまたは診断用組成物と、この組成物を使用してRSV、PIVおよび／またはhMPV感染を検出または診断する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
2. 発明の背景
2.1. PIV感染
パラインフルエンザウイルス感染は、幼児と小児で重症の呼吸器疾患を引き起こす（Taoら、1999, Vaccine 17:1100-08）。感染性パラインフルエンザウイルス感染症は、世界中で呼吸器感染症にかかった小児患者のすべての入院数の約20％を占める。同上。
【０００４】
PIVは、パラミクソウイルス科のパラミクソウイルス属の一員である。PIVは2つの構造モジュール(module)から構成されている：(1) 内部リボ核タンパク質コア、またはヌクレオカプシド（ウイルスゲノムを含む）、(2) 外部のほぼ球形のリポタンパク質エンベロープ。そのゲノムは、マイナスセンスRNAの1本鎖からなり、これは、約15,456ヌクレオチドの長さであり、少なくとも8個のポリペプチドをコードする。これらのタンパク質には、ヌクレオカプシド構造タンパク質（属によりNP、NC、またはN）、ホスホタンパク質（P）、マトリックスタンパク質（M）、融合糖タンパク質（F）、血球凝集素−ノイラミニダーゼ糖タンパク質（HN）、大ポリメラーゼタンパク質（L）、および機能が未知のCタンパク質とDタンパク質がある（同上）。
【０００５】
パラインフルエンザヌクレオカプシドタンパク質（NP、NC、またはN）は、RNAと直接相互作用するアミノ末端ドメイン（分子の約3分の2を含む）と、組み立てられたヌクレオカプシドの表面上に存在するカルボキシ末端ドメインとを含む、各タンパク質内の2つのドメインからなる。これらの2つのドメインの結合部にヒンジが存在すると考えられ、従ってこのタンパク質にある程度の可撓性を付与している（Fieldsら（編）、1991, Fundamental Virology, 第2版参照、ラーベンプレス（Raven Press）、ニューヨーク、これは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。マトリックスタンパク質（M）は明らかにウイルス組み立てに関与し、ウイルス膜とヌクレオカプシドタンパク質の両方と相互作用する。リン酸化を受けるホスホタンパク質（P）は、転写において制御的役割を果たし、またメチル化、リン酸化およびポリアデニル化にも関与している可能性がある。融合糖タンパク質（F）はウイルス膜と相互作用し、まず不活性前駆体として産生され、次に翻訳後切断を受けて2つのジスルフィド結合で結合したポリペプチドを産生する。活性Fタンパク質はまた、ウイルスエンベロープと宿主細胞原形質膜との融合を促進することにより、宿主細胞へのパラインフルエンザウイルス粒子の貫通を促進する（同上）。糖タンパク質である血球凝集素−ノイラミニダーゼ（HN）は、エンベロープから突き出て、ウイルスが血球凝集素活性ノイラミニダーゼ活性を含有することを可能にする。HNはアミノ末端で強い疎水性であり、これがHNタンパク質を脂質二重層中に固定されることを可能にする。同上。最後に大ポリメラーゼタンパク質（L）は、転写と複製の両方で重要な役割を果たす（同上）。
【０００６】
2.2 RSV感染症
RSウイルス（RSV）は、幼児と小児の重症の下気道疾患の主原因である（Feigenら（編）、1987、Textbook of Pediatric Infectious Diseases中、ダブリュー・ビー・ソンダース（WB Saunders）、フィラデルフィア、1653〜1675頁；New Vaccine Development, Establishing Priorities、第1巻、1985、ナショナルアカデミープレス（National Academy Press）、ワシントンDC、397〜409頁；およびRuuskanenら、1993, Curr. Probl. Pediatr. 23:50-79）。RSV感染の毎年の流行性は世界的に明らかであるが、ある季節のRSV疾患の発症率と重症度は地域により変動する（Hall, C.B., 1993, Contemp. Pediatr. 10:92-110）。北半球の温帯地域では、これは通常晩秋に始まり晩春に終わる。1次RSV感染はほとんど6週齢〜2才の小児で起き、まれに院内流行中に生後4週間以内に起きる（Hallら、1979, New Engl. J. Med. 300:393-396）。RSV感染のリスクの高い小児には、特に限定されないが、早産児（Hallら、1979, New Engl. J. Med. 300:393-396）、気管支肺異形成の小児（Groothuisら、1988, Pediatrics 82:199-203）、先天性心疾患（MacDonaldら、New Engl. J. Med. 307:397-400）、先天性または後天性免疫不全症（Ograら、1988, Pediatr. Infect. Dis. J. 7:246-249；およびPohlら、1992, J. Infect. Dis. 165:166-169）、および嚢胞性繊維症（Abmanら、1988, J. Pediatr. 113:826-830）がある。RSV感染で入院した心疾患または肺疾患の幼児の死亡率は、3％〜4％である（Navasら、1992, J. Pediatr. 121:348-354）。
【０００７】
RSVは幼児や小児と同様に成人にも起きる。健常成人ではRSVは、主に上気道疾患を引き起こす。一部の成人（特に老人）は、以前報告されているよりはるかに高率に症候性RSV感染症を有することが、最近明らかになっていきた（Evans, A.S.（編）、Viral Infections of Humans. Epidemiology and Control, 第3版、Plenum Medical Book, ニューヨーク、525〜544頁）。ナーシングホーム患者および施設の若者の間でもいくつかの流行が報告されている（Falsey, A.R., 1991, Infect. Control Hosp. Epidemiol. 12:602-608；およびGarvieら、1980, Br. Med. J. 281:1253-1254）。最後にRSVは、免疫抑制者、特に骨髄移植患者で重症の疾患を引き起こすことがある（Hertzら、1989, Medicine 68:269-281）。
【０００８】
確立したRSV疾患の治療オプションは限定されている。下気道の重症のRSV疾患はしばしば、加湿酸素の投与と呼吸補助を含むかなりの補助的治療が必要である（Fieldsら編、1990, Virology, 第2版、第1巻、ラーベンプレス（Raven Press）、ニューヨーク、1045-1072頁）。
【０００９】
ワクチンによりRSV感染を予防できる可能性があるが、まだこれを適応症として認可されたワクチンは無い。ワクチン開発に対する大きな障害は安全性である。ホルマリンで不活性化したワクチンは免疫原性であるが、これは予想外に、免疫した幼児で同様に調製した3価ワクチンを免疫した幼児より、RSVによるより高率かつ重症の下気道疾患を引き起こした（Kimら、1969, Am. J. Epidemiol. 89:422-434；およびKapikianら、1969, Am. J. Epidemiol. 89:405-421）。いくつかのRSVワクチン候補が断念されており、いくつかは開発中である（Murphyら、1994, Virus Res. 32:13-36）が、安全性の問題が解決してもワクチンの効力も改良しなければならない。解決すべき多くの問題がある。下気道疾患の発症率のピークは生後2〜5ヶ月であるため、誕生直後の新生児期免疫が必要である。新生児の免疫応答の未成熟さが母親から獲得したRSV抗体の高力価と組合わさって、新生児期のワクチンの免疫原性を低下させると予測される（Murphyら、1988, J. Virol. 62:3907-3910；およびMurphyら、1991, Vaccine 9:185-189）。最後に、1次RSV感染と疾患は、以後のRSV疾患に対して充分防御してくれない（Hendersonら、1979, New Engl. J. Med. 300:530-534）。
【００１０】
現在RSV疾患の予防のために認可されている唯一のアプローチは受動免疫である。IgGの防御性役割を示唆する最初の証拠は、フェレット（Prince, G.A., 博士論文、カリホルニア大学ロサンゼルス校、1975）とヒト（Lambrechtら、1976, J. Infect. Dis. 134:211-217；およびGlezenら、1981, J. Pediatr. 98:708-715）の母親の抗体が関与する観察結果から得られた。Hemmingら（Morellら編、1986、Clinical Use of Intravenous Immunoglobulins、アカデミックプレス（Academic Press）、ロンドン、285-294頁）は、新生児敗血症が疑われる新生児の静脈内免疫グロブリン（IVIG）の薬物動態が関与する試験中に、RSV感染の治療または予防においてRSV抗体が有用である可能性を認識した。この試験では、その呼吸器分泌物がRSVを与えた一人の幼児がIVIG注入後に急速に回復することが観察された。IVIGロットの以後の解析により、異常に高力価のRSV中和抗体が明らかになった。この同じ研究者のグループは次に、RSV中和抗体が濃縮された高度免疫抗体または免疫グロブリンが、RSV感染に対してコトンラットおよび霊長類を防御する能力を調べた（Princeら、1985, Virus Res. 3:193-206；Princeら、1990, J. Virol. 64:3091-3092；Hemmingら、1985, J. Infect. Dis. 152:1083-1087；Princeら、1983, Infect. Immun. 42:81-87；およびPrinceら、1985, J. Virol. 55:517-520）。これらの研究の結果は、予防的に投与されたRSV中和抗体が、コトンラットの気道でのRSVの複製を阻害することを示唆した。治療的に投与するとRSV抗体は、コトンラットと非ヒト霊長類モデルの両方で肺でのウイルス複製を低下させた。さらに免疫血清または免疫グロブリンの受動注入は、次にRSVで抗原刺激したコトンラットで肺病態を悪化させなかった。
【００１１】
最近の臨床試験は、この受動的に投与されたRSV高度免疫グロブリン（RSV IVIG）が、リスクのある小児をRSVによる重症の下気道感染から防御する能力を証明した（Groothiusら、1993, New Engl. J. Med. 329:1524-1530；およびPREVENT研究グループ、1997, Pediatrics 99:93-99）。これは、RSV感染の予防に対して大きな進歩であるが、この治療法は広く使用されるにはいくつかの限界がある。第1にRSV IVIGは、その有効用量を達成するためには数時間にわたる静脈内注入が必要である。第2に高度免疫グロブリン中の活性物質の濃度は、リスクのある成人または心肺機能が低下したほとんどの小児を治療するのに不充分である。第3に静脈内注入では、RSVシーズンには毎月通院する必要がある。最後に、この製品に対する需要を満たすのに、RSVに対する高度免疫グロブリンを産生するための充分な供与者を選択することが困難である。現在、高度免疫グロブリンを産生するのに充分なRSV中和抗体力価を持つのは、正常供与者の約8％のみである。
【００１２】
免疫グロブリンの比活性を改良するための1つの方法は、1つ以上の高力価のRSV中和モノクローナル抗体（MAb）を開発することであろう。好適な薬物動態を保持し、かつヒト抗マウス抗体応答の出現を避ける（RSVシーズンの間繰り返し投与が必要であろうから）ために、このようなMAbはヒトであるかまたはヒト化されていなければなければならないであろう。RSV表面上の2つの糖タンパク質（FとG）が、中和抗体の標的であることが証明されている（Feildsら、1990, 前述；およびMurphyら、1994, 前述）。これらの2つのタンパク質はまた、主にウイルス認識と標的細胞への侵入に関与する；Gタンパク質は第2ポリマー成分細胞受容体に結合し、Fタンパク質はウイルスと細胞との融合を促進する。Fタンパク質はまた感染細胞の表面で発現され、シンシチウム（融合細胞）形成に至る他の細胞との以後の融合に関与する。すなわちFタンパク質に対する抗体はウイルスを中和するか、細胞へのウイルスの侵入を阻止するか、またはシンシチウム形成を妨害する。Gタンパク質とFタンパク質についてAサブタイプとBサブタイプの抗原性および構造的差が記載されているが、最も大きな抗原性の差はG糖タンパク質にあり、ここでアミノ酸配列はわずか53％の相同性であり、抗原性の関連性は5％である（Walshら、1987, J. Infect. Dis. 155:1198-1204；およびJohnsonら、1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:5625-5629）。逆にFタンパク質に対して作成した抗体は、サブタイプAとBの間で高度の交差反応性を示す。BeelerとCoelingh（1989, J. Virol. 7:2941-2950）は、RSV Fタンパク質に対する18個の異なるマウスMAbの徹底的な解析を行った。これらのMAbの生理学的および生化学的性質の比較により、3つの明確な抗原性部位（A、BおよびCと呼ぶ）が同定された。1956〜1985年に単離されたRSV株のパネルに対して行われた中和試験は、抗原性部位AとC内のエピトープが高度に保存され、抗原性部位Bのエピトープが可変性であることを証明した。
【００１３】
RSVのFタンパク質のA抗原性部位中のエピトープに対するヒト化抗体（SYNAGIS（登録商標））は、RSVシーズン（北半球では11月〜4月）中に、RSVにより引き起こされた重症の下気道疾患の予防のために、推奨された月毎の投与量の15mg/kg体重で小児患者に筋肉内投与することが認可されている。SYNAGIS（登録商標）は、ヒト（95％）とマウス（5％）抗体配列の複合体である。Johnsonら、1997, J. Infect. Diseases 176:1215-1224およびUS Patent No. 5,824,307（その全内容は参照することにより本明細書に組み込まれる）を参照されたい。Cor（Pressら、1970、Biochem. J. 117:641-660）とCess（Takashiら、1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:194-198）のヒトIgG1の定常ドメインとVH遺伝子の可変フレームワーク領域からヒト重鎖配列が得られた。ヒト軽鎖配列は、Cκの定常ドメインと、Jκ-4（Bentleyら、1980, Nature 288:5194-5198）を有するVL遺伝子の可変フレームワーク領域から得られた。マウス配列は、ヒト抗体フレームワークへのマウス相補性決定領域の移植を含む方法により、マウスモノクローナル抗体Mab1129（Beelerら、1989, J. Virol. 63:2941-2950）から得られた。
【００１４】
2.3 鳥類およびヒトメタニューモウイルス
最近、軽い上気道疾患から重症の細気管支炎と肺炎の、hRSV感染が引き起こす症状を思わせる臨床症状を有する28人の小児から、パラミクソウイルス科の新しいメンバーが単離された（Van Den Hoogenら、2001, Nature Medicine 7:719-724）。この新しいウイルスは、配列相同性と遺伝子配置に基づきヒトメタニューモウイルス（hMPV）と命名された。研究によりさらに、オランダのほとんどすべての子供は5才までにhMPVに暴露され、このウイルスは少なくとも半世紀ヒトの中を循環していることが証明された。
【００１５】
ヒトメタニューモウイルスのゲノム配置は、Van Den Hoogenら、2002, Virology 295:119-132に記載されている。ヒトメタニューモウイルスは最近、北アメリカの患者から単離された（Peretら、2002, J. Infect. Diseases 185:1660-1663）。
【００１６】
ヒトメタニューモウイルスはトリニューモウイルスに関係している。例えばhMPVのFタンパク質は、APVのFタンパク質と相同性が高い。ヒトメタニューモウイルスのFタンパク質をマガモ（Mallard Duck）から単離されたトリメタニューモウイルスのFタンパク質と整列させると、エクトドメインが85.6％の同一性を示す。ヒトメタニューモウイルスのFタンパク質を七面鳥（サブグループB）から単離されたトリニューモウイルスのFタンパク質と整列させると、エクトドメインが75％の同一性を示す。例えば、HallerとTangによる2002年2月21日に出願された本出願人による同時係属仮出願No. 60:358,934（標題「メタニューモウイルスから得られた異種抗原を含む組換えパラインフルエンザウイルス発現系とワクチン」）を参照されたい（これは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【００１７】
トリニューモウイルス（APV）が引き起こす呼吸系疾患は南アフリカで1970年代後半に最初に記載され（Buysら、1980, Turkey 28:36-46）、そこでは七面鳥産業にとって壊滅的な影響があった。七面鳥の疾患は副鼻腔炎と鼻炎を特徴とし、七面鳥鼻気管炎（TRT）と呼ばれた。APVのヨーロッパ分離株はまた、ニワトリの頬腫れ症候群（swollen head syndrome）の要因であることが強く示唆されている（O'Brien, 1985, Vet. Rec. 117:619-620）。元々この疾患は、ニューカッスル病ウイルス（NDV）に感染したブロイラーニワトリの群に出現し、ニューカッスル病（ND）に関連する二次的問題であると考えられた。ヨーロッパAPVに対する抗体が、SHSの発症後罹患したニワトリで検出され（Cookら、1998, Avian Pathol. 17:403-410）、APVが原因であることを示唆している。
【００１８】
トリニューモウイルスは、1本鎖の非セグメント化RNAウイルスであり、パラミクソウイルス科（Paramyxoviridae）のニューモウイルス亜科（Pneumovirinae）のメタニューモウイルス属（metapneumovirus）に属する（CavanaghとBarrett, 1988, Virus Res. 11:241-256; Lingら, 1992, J. Gen. Virol. 73:1709-1715; Yuら, 1992, J. Gen. Virol. 73:1355-1363）。パラミクソウイルス科は、2つの亜科に分けられる：パラミクソウイルス亜科（Paramyxovirinae）とニューモウイルス亜科（Pneumovirinae）。パラミクソウイルス亜科は、特に限定されないがパラミクソウイルス属（Paramyxovirus）、ルブラウイルス属 (Rubulavirus)、およびモルビリウイルス属（Morbillivirus）を含む。最近ニューモウイルス亜科は、遺伝子の順序に基づき2つの属に分けられた：すなわち、ニューモウイルス（pneumovirus）とメタニューモウイルス（metapneumovirus）（Naylorら、1998, J. Gen. Virol., 79:1393-1398; Pringle, 1998, Arch. Virol. 143:1449-1159）。ニューモウイルス属には、特に限定されないが、ヒトRSウイルス（hRSV）、ウシRSウイルス（bRSV）、ヒツジRSウイルス、およびマウスニューモウイルスがある。メタニューモウイルス属には、特に限定されないが、ヨーロッパトリニューモウイルス（サブグループAとB）があり、これはhRSV（ニューモウイルス属の標準種）から区別される（Naylorら、1998, J. Gen. Virol., 79:1393-1398; Pringle, 1998, Arch. Virol. 143:1449-1159）。APVのUS分離株は、ヨーロッパ分離株とは抗原的および遺伝子的に異なることがわかったため、メタニューモウイルス属内の第3の群（サブグループC）である（Seal, 1998, Virus Res. 58:45-52; Senneら、1998, Proc. 47th WPDC, カリホルニア、67-68頁）。
【００１９】
負に染色されたAPVの電子顕微鏡観察は、長さが1000〜2000nmの範囲の長い繊維を有する、多形性の、特に球の直径が80〜200nmの範囲のウイルス粒子を明らかにする（CollinsとGough、1988, J. Gen. Virol. 69:909-916）。このエンベロープは、長さが13〜15nmのとげが散在した膜からなる。ヌクレオカプシドはらせん形で、直径14mmでピッチが7mmである。ヌクレオカプシドの直径は、パラミクソウイルス（Paramyxovirus）属やモルビリウイルス（Morbillivirus ）属のもの（これらは通常約18nmの直径を有する）より小さい。
【００２０】
トリニューモウイルス感染は世界中の家禽に何年も存在しているにもかかわらず、アメリカ合衆国では新たに起きている疾患である。1996年5月にコロラドで非常に感染性の強い七面鳥の呼吸器疾患が出現し、後にアイオワ州Amesの国立家畜サービス研究所（National Veterinary Services Laboatory (NVSL)）で単離された（Senneら、1997, Proc. 134th Ann. Mtg., AVMA, pp.190）。この時期以前は、米国とカナダにはトリニューモウイルスはいないものだと考えられていた（Personら、1993, Newly Emerging and Re-emerging Avian Diseases: Applied Research and Practical Applications for Diagnosis and Control、78-83頁中；HeckerとMyers, 1993, Vet. Rec. 132:172）。1997年の初期に、ミネソタ州の七面鳥で血清学的にAPVの存在が検出された。最初に診断が確認されるまでに、すでにAPV感染症は多くの農場に広がっていた。この疾患は上気道の臨床症状（泡沫状の目、鼻汁、および鼻腔の腫脹）を引き起こす。これは2次感染により悪化する。感染した鳥の罹患率は100％にもなる。死亡率は1〜90％の範囲であり、6〜12週齢の家禽で最大になる。
【００２１】
トリニューモウイルスは接触により伝搬する。鼻汁、感染した鳥の行動、汚染水、汚染された装置；汚染された飼料トラック、および荷下ろし活動などが、ウイルスの伝搬に寄与する。回収された七面鳥はキャリアーであると考えられる。ウイルスは卵を生む七面鳥の卵管上皮に感染することが証明されており、APVは若い家禽で検出されているため、卵伝搬の可能性が考えられる。
【００２２】
hMPVを用いる最近の研究に基づくと、hMPVは、ヒト特に若年性の呼吸系疾患の重要な要因のようである。
【００２３】
すなわち、これらの3つのウイルス（RSV、hMPVおよびPIV）は、ヒトの呼吸系疾患のかなりの部分を引き起こす。必要なことは、ウイルスによる呼吸系疾患の発症率を低下させるための広範囲の予防である。
【００２４】
本明細書の文献の引用または考察は、決してこれらが本発明の先行技術であることを認めるものではない。
【００２５】
2.4 宿主細胞へのウイルスの侵入
エンベロープのあるウイルス（例えばレトロウイルス、オルソミクソウイルス、フィロウイルス、およびパラミクソウイルス）が宿主細胞中へ侵入するのに、いわゆるヘプタッドリピート（heptad repeat）が関与する融合機構を使用する可能性が明らかになってきている（Eckertら、2001, Annu. Rev. Biochem. 70:777-810；Weissenhornら、1999, Mol. Membr. Biol. 16:3-9；Lambら、1999, Mol. Membr. Biol. 16:11-19；Skehelら、2000, Annu. Rev. Biochem. 69:531-569；Bentz,J., 2000, Biophys J. 78:886-900；Peisajovichら、2002, Trends Biochem. Sci. 27:183-190）。このモデルによると、（例えばパラミクソウイルスの）Fタンパク質のＮ末端に位置する融合ペプチドは、暴露されて自体が細胞膜中に挿入される。さらに融合タンパク質は、融合中にコンフォメーションの変化を受ける（Wangら、2003, Biochem. Biophys. Res. Commun. 302:469-475）。高度に保存されたヘプタッドリピート（HR）領域は、融合プロセスの促進に関与しているとされている（Wangら、2003, Biochem. Biophys. Res. Commun. 302:469-475）。従って、ヘプタッドリピートは、宿主細胞との融合の阻害による、ウイルス感染および／または増殖を予防するための魅力的な標的である。
【発明の開示】
【００２６】
3 発明の要約
本発明は、ウイルス呼吸系感染症の広域の予防法と治療法を提供する。ウイルスは、特に幼児、早産児、老人、免疫無防備状態患者、移植受容者などの重症の呼吸系感染症の大きな原因である。呼吸系感染症は、本発明により提供される併用治療／予防法を使用して効果的に予防および／または治療することができる。本発明は、(i)1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片；(ii)1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片；および／または(iii)1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片を、被験体に投与することを含んでなる、広い併用治療／予防法を提供する。種々のウイルスの抗原に対する複数の抗体を被験体に提供することにより、その被験体中の呼吸系ウイルス感染のリスクが低下する。異なる免疫特異性の抗体を投与する具体的な利点は、異なる株のウイルスおよび天然に存在する変化を有するウイルスは、被験体の免疫から逃げられず、複数の抗体の少なくとも1つにより認識されるということである。
【００２７】
ある実施形態において本発明は、被験体のウイルス感染を予防する方法であって、(i)予防的有効量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片は、RSV抗原に免疫特異的に結合する）；および(ii)予防的有効量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片は、hMPV抗原に免疫特異的に結合する）を、被験体に投与することを含む方法を提供する。ある実施形態において1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片は、RSVを中和する。ある実施形態において1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、hMPVを中和する。ある実施形態において1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片は、被験体の細胞のRSV感染を阻止する。ある実施形態において1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、被験体の細胞のhMPV感染を阻止する。
【００２８】
ある実施形態において本発明は、被験体の呼吸系ウイルス感染の1つ以上の症状を治療する方法であって、(i)治療的有効量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片は、RSV抗原に免疫特異的に結合する）；および(ii)治療的有効量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片は、hMPV抗原に免疫特異的に結合する）を、被験体に投与することを含む方法を提供する。
【００２９】
ある実施形態において本発明は、受動免疫療法であって、(i)第1の用量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片は、RSV抗原に免疫特異的に結合する）；および(ii)第2の用量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片は、hMPV抗原に免疫特異的に結合する）を、被験体に投与することを含み、ここで第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも25％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも25％低下させる方法を提供する。ある実施形態において第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも50％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも50％低下させる。ある実施形態において第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも75％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも75％低下させる。ある実施形態において第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも90％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも90％低下させる。
【００３０】
ある実施形態において本発明は、受動免疫療法であって、(i)第1の用量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片は、RSV抗原に免疫特異的に結合する）；および(ii)第2の用量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片は、hMPV抗原に免疫特異的に結合する）を、被験体に投与することを含み、ここで被験体中の該1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、該1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片を15日間投与後に少なくとも10μg/mlであり、被験体中の該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片を15日間投与後に少なくとも10μg/mlである方法を提供する。
【００３１】
ある実施形態において、RSV抗原のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号390〜398のアミノ酸配列である。ある実施形態においてRSV抗原のアミノ酸配列は、RSV核タンパク質、RSVホスホタンパク質、RSVマトリックスタンパク質、RSV小疎水性タンパク質、RSV RNA依存性RNAポリメラーゼ、RSV Fタンパク質、またはRSV Gタンパク質のアミノ酸配列と90％同一である。ある実施形態においてRSV抗原は、RSV核タンパク質、RSVホスホタンパク質、RSVマトリックスタンパク質、RSV小疎水性タンパク質、RSV RNA依存性RNAポリメラーゼ、RSV Fタンパク質、またはRSV Gタンパク質よりなる群から選択される。ある実施形態において1つ以上の抗RSV抗原抗体は、A群またはB群RSVの抗原に免疫特異的に結合する。ある実施形態において、RSV抗原はRSV Fタンパク質である。ある実施形態において、1つ以上の抗hMPV抗原抗体は七面鳥APV抗原と交差反応する。ある実施形態において1つ以上の抗hMPV抗原抗体は、(i)ヒト抗体であるかまたはヒト化抗体であり、かつ(ii)七面鳥APV抗原と交差反応する。ある実施形態において七面鳥APV抗原は、七面鳥APV核タンパク質、七面鳥APVホスホタンパク質、七面鳥APVマトリックスタンパク質、七面鳥APV小疎水性タンパク質、七面鳥APV RNA依存性RNAポリメラーゼ、七面鳥APV Fタンパク質、または七面鳥APV Gタンパク質よりなる群から選択される。ある実施形態において七面鳥APV抗原は、トリニューモウイルスA型、トリニューモウイルスB型、またはトリニューモウイルスC型の抗原である。ある実施形態において七面鳥APV抗原のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号424〜429のアミノ酸配列である。ある実施形態においてhMPV抗原のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号399〜406、420、または421のアミノ酸配列である。ある実施形態においてhMPV抗原は、hMPV核タンパク質、hMPVホスホタンパク質、hMPVマトリックスタンパク質、hMPV小疎水性タンパク質、hMPV RNA依存性RNAポリメラーゼ、hMPV Fタンパク質、またはhMPV Gタンパク質よりなる群から選択される。ある実施形態においてhMPV抗原はhMPV Fタンパク質である。ある実施形態において抗RSV抗原抗体はSYNAGIS（登録商標）（Palivizumab）；AFFF；P12f2；P12f4；P11d4；Ale9；A12a6；A13c4；A17d4；A4B4；1X-493L1；FR H3-3F4；M3H9；Y10H6；DG；AFFF(1)；6H8；L1-7E5；L2-15B10；A13a11；A1h5；A4B4(1)；A4B4-F52S；またはA4B4L1FR-S28Rである。ある実施形態において該1つ以上の抗RSV抗原抗体の有効量は、100mg/kgまたはそれ以下である。ある実施形態において該1つ以上の抗RSV抗原抗体の有効量は、10mg/kgまたはそれ以下である。ある実施形態において該1つ以上の抗RSV抗原抗体の有効量は、1mg/kgまたはそれ以下である。ある実施形態において該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片の有効量は、100mg/kgまたはそれ以下である。ある実施形態において該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片の有効量は、10mg/kgまたはそれ以下である。ある実施形態において該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片の有効量は、1mg/kgまたはそれ以下である。ある実施形態において1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片は、該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片を投与する前の期間に投与される。ある実施形態において1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、該1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片を投与する前の期間に投与される��ある実施形態において、1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片および該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、同時に投与される。ある実施形態において1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片は、2回以上の投与で順に投与され、ここで、該1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片の投与は互いに一定期間で分離され、かつここで、該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、その順序の前、最中、または後に投与される。ある実施形態において1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片は、2回以上の投与で順に投与され、ここで、該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片の投与は互いに一定期間で分離され、かつここで、該1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片は、その順序の前、最中、または後に投与される。ある実施形態において、1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片および1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、2回以上の投与で順に投与され、ここで該投与は互いに一定期間で分離される。ある実施形態において、期間は少なくとも1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、1ヶ月、2ヶ月、または3ヶ月である。ある実施形態において、1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片および／または該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、ネブライザーまたは吸入器により投与される。ある実施形態において、1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片および／または該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、筋肉内、静脈内または皮下投与される。ある実施形態においてウイルス感染は、RSVとhMPVによる感染である。ある実施形態においてウイルス感染は、RSVとAPVによる感染である。ある実施形態において該抗体の少なくとも1つは、モノクローナル抗体、合成抗体、細胞内発現抗体(intrabody) 、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化キメラ抗体、ヒト化抗体、グリコシル化抗体、多重特異的抗体、ヒト抗体、1本鎖抗体、または二重特異的抗体である。ある実施形態において該抗体の少なくとも1つはヒト抗体である。ある実施形態において該抗体の少なくとも1つはヒト化抗体である。ある実施形態において該抗体の少なくとも1つは合成抗体である。ある実施形態において、被験体は哺乳動物である。ある実施形態において、哺乳動物は霊長類である。ある実施形態において、霊長類はヒトである。ある実施形態において、ヒトは老人である。ある実施形態において、ヒトは移植受容者である。ある実施形態において、ヒトは免疫無防備状態患者である。ある実施形態において、ヒトはAIDS患者である。ある実施形態において、ヒトは幼児である。ある実施形態においてヒトは、嚢胞性繊維症、気管支肺異形成症、先天性心疾患、先天性免疫不全症、または後天性免疫不全症を有するか、または骨髄移植を受けたことがある。ある実施形態において幼児は、早産で生まれたか、またはRSV感染および／またはhMPV感染の入院のリスクがある。ある実施形態においてヒト幼児は早産で生まれた。ある実施形態において幼児は妊娠32週齢未満である。ある実施形態において幼児は妊年32〜35週齢である。ある実施形態において幼児は妊娠35週齢を超えている。ある実施形態において幼児は妊娠38週齢を超えている。ある実施形態において哺乳動物は霊長類ではない。ある実施形態において、非霊長類哺乳動物はRSV感染および／またはhMPV感染の動物モデルである。ある実施形態において非霊長類哺乳動物はコトンラットである。ある実施形態において、抗体はRSVシーズン前およびその最中に2ヶ月毎に投与される。ある実施形態において、抗体はRSVシーズン前およびその最中に1回投与される。ある実施形態において該断片の少なくとも1つは、Fab断片、F(ab')断片、F(ab')2断片、Fd、1本鎖Fv、ジスルフィド結合Fv、VLドメインを含む断片、またはVHドメインを含む断片である。
【００３２】
ある実施形態において本発明は、被験体のウイルス感染を予防する方法であって、(i)ある用量の1つ以上の抗体またはその抗原結合断片を被験体に投与することを含み、ここで、該1つ以上の抗体またはその抗原結合断片は、(i)ヒトであるかまたはヒト化されており、(ii)七面鳥APV抗原と交差反応し、そして(iii)hMPV抗原に免疫特異的に結合する、方法を提供する。
【００３３】
ある実施形態において本発明は、被験体の呼吸系ウイルス感染の1つ以上の症状を治療する方法であって、(i)ある用量の1つ以上の抗体またはその抗原結合断片を被験体に投与することを含み、ここで該1つ以上の抗体またはその抗原結合断片は、(i)ヒトであるかまたはヒト化されており、(ii)七面鳥APV抗原と交差反応し、そして(iii)hMPV抗原に免疫特異的に結合する、方法を提供する。
【００３４】
ある実施形態において本発明は、受動免疫療法であって、(i)ある用量の1つ以上の抗体またはその抗原結合断片を被験体に投与することを含み、ここで該1つ以上の抗体またはその抗原結合断片は、(i)ヒトであるかまたはヒト化されており、(ii)七面鳥APV抗原と交差反応し、そして(iii)hMPV抗原に免疫特異的に結合し、ここで用量はhMPV感染の発症率を少なくとも25％低下させるものである、方法を提供する。ある実施形態において、用量はhMPV感染の発症率を少なくとも50％低下させる。ある実施形態において、用量はhMPV感染の発症率を少なくとも75％低下させる。ある実施形態において、用量はhMPV感染の発症率を少なくとも90％低下させる。
【００３５】
ある実施形態において本発明は、受動免疫療法であって、(i)ある用量の1つ以上の抗体またはその抗原結合断片を被験体に投与することを含み、ここで、該1つ以上の抗体またはその抗原結合断片は、(i)ヒトであるかまたはヒト化されており、(ii)七面鳥APV抗原と交差反応し、そして(iii)hMPV抗原に免疫特異的に結合し、ここで、被験体中の該1つ以上の抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、該1つ以上の抗体またはその抗原結合断片を15日間投与後に少なくとも10μg/mlである方法を提供する。
【００３６】
ある実施形態において本発明は、医薬組成物であって、(i)1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片は、RSV抗原に免疫特異的に結合する）；および(ii)1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片は、hMPV抗原に免疫特異的に結合する）を含む医薬組成物を提供する。ある実施形態において、RSV抗原のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号390〜398のアミノ酸配列である。ある実施形態においてRSV抗原のアミノ酸配列は、RSV核タンパク質、RSVホスホタンパク質、RSVマトリックスタンパク質、RSV小疎水性タンパク質、RSV RNA依存性RNAポリメラーゼ、RSV Fタンパク質、またはRSV Gタンパク質のアミノ酸配列と90％同一である。ある実施形態においてRSV抗原は、RSV核タンパク質、RSVホスホタンパク質、RSVマトリックスタンパク質、RSV小疎水性タンパク質、RSV RNA依存性RNAポリメラーゼ、RSV Fタンパク質、およびRSV Gタンパク質よりなる群から選択される。ある実施形態において、該1つ以上の抗RSV抗原抗体は、A群またはB群RSVの抗原に免疫特異的に結合する。ある実施形態において、RSV抗原はRSV Fタンパク質である。ある実施形態において、1つ以上の抗hMPV抗原抗体は七面鳥APV抗原と交差反応する。ある実施形態において1つ以上の抗hMPV抗原抗体は、(i)ヒト抗体であるかまたはヒト化抗体であり、かつ(ii)七面鳥APV抗原と交差反応する。ある実施形態において該七面鳥APV抗原は、七面鳥APV核タンパク質、七面鳥APVホスホタンパク質、七面鳥APVマトリックスタンパク質、七面鳥APV小疎水性タンパク質、七面鳥APV RNA依存性RNAポリメラーゼ、七面鳥APV Fタンパク質、および七面鳥APV Gタンパク質よりなる群から選択される。ある実施形態において七面鳥APV抗原は、トリニューモウイルスA型、トリニューモウイルスB型、またはトリニューモウイルスC型の抗原である。ある実施形態において七面鳥APV抗原のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号424〜429のアミノ酸配列である。ある実施形態においてhMPV抗原のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号399〜406、420、または421のアミノ酸配列である。ある実施形態においてhMPV抗原は、hMPV核タンパク質、hMPVホスホタンパク質、hMPVマトリックスタンパク質、hMPV小疎水性タンパク質、hMPV RNA依存性RNAポリメラーゼ、hMPV Fタンパク質、およびhMPV Gタンパク質よりなる群から選択される。ある実施形態においてhMPV抗原はhMPV Fタンパク質である。ある実施形態において抗RSV抗原抗体はSYNAGIS（登録商標）（Palivizumab）；AFFF；P12f2；P12f4；P11d4；Ale9；A12a6；A13c4；A17d4；A4B4；1X-493L1；FR H3-3F4；M3H9；Y10H6；DG；AFFF(1)；6H8；L1-7E5；L2-15B10；A13a11；A1h5；A4B4(1)；A4B4-F52S；またはA4B4L1FR-S28Rである。ある実施形態において該抗体の少なくとも1つは、モノクローナル抗体、合成抗体、細胞内発現抗体 、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化キメラ抗体、ヒト化抗体、グリコシル化抗体、多重特異的抗体、ヒト抗体、1本鎖抗体、または二重特異的抗体である。ある実施形態において該抗体の少なくとも1つはヒト抗体である。ある実施形態において該抗体の少なくとも1つはヒト化抗体である。ある実施形態において、該抗体の少なくとも1つは合成抗体である。ある実施形態において、該断片の少なくとも1つは、Fab断片、F(ab')断片、F(ab')2断片、Fd、1本鎖Fv、ジスルフィド結合Fv、VLドメインを含む断片、またはVHドメインを含む断片である。
【００３７】
ある実施形態において本出願は、1つ以上の抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物を提供し、ここで該1つ以上の抗体またはその抗原結合断片は、(i)ヒトであるかまたはヒト化されており、(ii)七面鳥APV抗原と交差反応し、そして(iii)hMPV抗原に免疫特異的に結合する。
【００３８】
ある実施形態において本発明は、(i)予防的有効量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第1の抗体または抗原結合断片はPIV抗原に免疫特異的に結合する）；および(ii)予防的有効量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片はhMPV抗原に免疫特異的に結合する）を、被験体に投与することを含む方法を提供する。ある実施形態において、該1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片はPIVを中和する。ある実施形態において、該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片はhMPVを中和する。ある実施形態において該1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片は、被験体の細胞のPIV感染を阻止する。ある実施形態において該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、被験体の細胞のhMPV感染を阻止する。
【００３９】
ある実施形態において本発明は、被験体の呼吸系ウイルス感染の1つ以上の症状を治療する方法であって、(i)治療的有効量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片はPIV抗原に免疫特異的に結合する）；および(ii)治療的有効量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片はhMPV抗原に免疫特異的に結合する）を被験体に投与することを含む方法を提供する。
【００４０】
ある実施形態において本発明は、受動免疫療法であって、(i)第1の用量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片はPIV抗原に免疫特異的に結合する）；および(ii)第2の用量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片はhMPV抗原に免疫特異的に結合する）を被験体に投与することを含み、ここで第1の用量は、PIV感染の発症率を少なくとも25％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも25％低下させる、方法を提供する。ある実施形態において、第1の用量はPIV感染の発症率を少なくとも50％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも50％低下させる。ある実施形態において、第1の用量はPIV感染の発症率を少なくとも75％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも75％低下させる。ある実施形態において、第1の用量はPIV感染の発症率を少なくとも90％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも90％低下させる。
【００４１】
ある実施形態において本発明は、受動免疫療法であって、(i)第1の用量の1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片はPIV抗原に免疫特異的に結合する）；および(ii)第2の用量の1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片はhMPV抗原に免疫特異的に結合する）を被験体に投与することを含み、ここで被験体中の該1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、該1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片を15日間投与した後に少なくとも10μg/mlであり、被験体中の該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片を15日間投与した後に少なくとも10μg/mlである方法を提供する。ある実施形態において、PIV抗原のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号407〜419のアミノ酸配列である。ある実施形態においてPIV抗原のアミノ酸配列は、PIVヌクレオカプシドホスホタンパク質、PIV Lタンパク質、PIVマトリックスタンパク質、PIV HN糖タンパク質、PIV RNA依存性RNAポリメラーゼ、PIV Y1タンパク質、PIV Dタンパク質、またはPIV Cタンパク質のアミノ酸配列と90％同一である。ある実施形態においてPIV抗原は、PIVヌクレオカプシドホスホタンパク質、PIV Lタンパク質、PIVマトリックスタンパク質、PIV HN糖タンパク質、PIV RNA依存性RNAポリメラーゼ、PIV Y1タンパク質、PIV Dタンパク質、またはPIV Cタンパク質よりなる群から選択される。ある実施形態において該1つ以上の抗hMPV抗原抗体は、ヒトPIV 1型、ヒトPIV 2型、ヒトPIV 3型、またはヒトPIV 4型に免疫特異的に結合する。ある実施形態において、PIV抗原はPIV Fタンパク質である。ある実施形態において、該1つ以上の抗hMPV抗原抗体は七面鳥APV抗原と交差反応する。ある実施形態において1つ以上の抗hMPV抗原抗体は、(i)ヒト抗体であるかまたはヒト化抗体であり、かつ(ii)七面鳥APV抗原と交差反応する。ある実施形態において該七面鳥APV抗原は、七面鳥APV核タンパク質、七面鳥APVホスホタンパク質、七面鳥APVマトリックスタンパク質、七面鳥APV小疎水性タンパク質、七面鳥APV RNA依存性RNAポリメラーゼ、七面鳥APV Fタンパク質、および七面鳥APV Gタンパク質よりなる群から選択される。ある実施形態において該七面鳥APV抗原は、トリニューモウイルスA型、トリニューモウイルスB型、またはトリニューモウイルスC型の抗原である。ある実施形態において七面鳥APV抗原のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号424〜429のアミノ酸配列である。ある実施形態においてhMPV抗原のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号399〜406、420、または421のアミノ酸配列である。ある実施形態においてhMPV抗原は、hMPV核タンパク質、hMPVホスホタンパク質、hMPVマトリックスタンパク質、hMPV小疎水性タンパク質、hMPV RNA依存性RNAポリメラーゼ、hMPV Fタンパク質、およびhMPV Gタンパク質よりなる群から選択される。ある実施形態においてhMPV抗原はhMPV Fタンパク質である。ある実施形態において該1つ以上の抗PIV抗原抗体の有効量は、100mg/kgまたはそれ以下である。ある実施形態において該1つ以上の抗PIV抗原抗体の有効量は、10mg/kgまたはそれ以下である。ある実施形態において該1つ以上の抗PIV抗原抗体の有効量は、1mg/kgまたはそれ以下である。ある実施形態において該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片の有効量は、100mg/kgまたはそれ以下である。ある実施形態において該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片の有効量は、10mg/kgまたはそれ以下である。ある実施形態において該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片の有効量は、1mg/kgまたはそれ以下である。ある実施形態において該1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片は、該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片を投与する前の期間に投与される。ある実施形態において1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、該1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片を投与する前の期間に投与される。ある実施形態において、該1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片および該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、同時に投与される。ある実施形態において該1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片は、2回以上の投与で順に投与され、ここで、該1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片の投与は互いに一定期間で分離され、かつここで、該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、その順序の前、最中、または後に投与される。ある実施形態において該1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片は、2回以上の投与で順に投与され、ここで、該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片の投与は互いに一定期間で分離され、かつここで、該1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片は、その順序の前、最中、または後に投与される。ある実施形態において、該1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片および該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、2回以上の投与で順に投与され、ここで該投与は互いに一定期間で分離される。ある実施形態において、期間は少なくとも1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、1ヶ月、2ヶ月、または3ヶ月である。ある実施形態において、該1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片および／または該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、ネブライザーまたは吸入器により投与される。ある実施形態において、該1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片および／または該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、筋肉内、静脈内または皮下投与される。ある実施形態においてウイルス感染は、PIVとhMPVによる感染である。ある実施形態においてウイルス感染は、PIVとAPVによる感染である。ある実施形態において該抗体の少なくとも1つは、モノクローナル抗体、合成抗体、細胞内発現抗体（intrabody）、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化キメラ抗体、ヒト化抗体、グリコシル化抗体、多重特異的抗体、ヒト抗体、1本鎖抗体、または二重特異的抗体である。ある実施形態において該抗体の少なくとも1つはヒト抗体である。ある実施形態において該抗体の少なくとも1つはヒト化抗体である。ある実施形態において、該抗体の少なくとも1つは合成抗体である。ある実施形態において、被験体は哺乳動物である。ある実施形態において、哺乳動物は霊長類である。ある実施形態において、霊長類はヒトである。ある実施形態において、ヒトは老人である。ある実施形態において、ヒトは移植受容者である。ある実施形態におい���、ヒトは免疫無防備状態患者である。ある実施形態において、ヒトはAIDS患者である。ある実施形態において、ヒトは幼児である。ある実施形態においてヒトは、嚢胞性繊維症、気管支肺異形成症、先天性心疾患、先天性免疫不全症、または後天性免疫不全症を有するか、または骨髄移植を受けたことがある。ある実施形態において幼児は、早産で生まれたか、またはPIV感染および／またはhMPV感染の入院のリスクがある。ある実施形態において、ヒト幼児は早産で生まれた。ある実施形態において、幼児は妊娠32週齢未満である。ある実施形態において、幼児は妊娠32〜35週齢である。ある実施形態において、幼児は妊娠35週齢を超えている。ある実施形態において、幼児は妊娠38週齢を超えている。ある実施形態において、哺乳動物は霊長類ではない。ある実施形態において、非霊長類哺乳動物は、PIV感染および／またはhMPV感染の動物モデルである。ある実施形態において、非霊長類哺乳動物はコトンラットである。ある実施形態において、抗体はPIVシーズン前およびその最中に月1回投与される。ある実施形態において、抗体はPIVシーズン前およびその最中に2ヶ月毎に投与される。ある実施形態において、抗体はPIVシーズン前およびその最中に1回投与される。ある実施形態において、該断片の少なくとも1つは、Fab断片、F(ab')断片、F(ab')2断片、Fd、1本鎖Fv、ジスルフィド結合Fv、VLドメインを含む断片、またはVHドメインを含む断片である。
【００４２】
ある実施形態において本発明は、被験体のウイルス感染を予防する方法であって、(i)予防的有効量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第1の抗体または抗原結合断片はRSV抗原に免疫特異的に結合する）；および(ii)予防的有効量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片はhMPV抗原に免疫特異的に結合する）；および(iii)予防的有効量の1つ以上の第3の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第3の抗体またはその抗原結合断片はPIV抗原に免疫特異的に結合する）を、被験体に投与することを含む方法を提供する。ある実施形態において、該1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片はRSVを中和する。ある実施形態において、該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片はhMPVを中和する。ある実施形態において該1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片は、PIVを中和する。ある実施形態において該1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片は、被験体の細胞のRSV感染を阻止する。ある実施形態において該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、被験体の細胞のhMPV感染を阻止する。ある実施形態において該1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片は、被験体の細胞のPIV感染を阻止する。
【００４３】
ある実施形態において本発明は、被験体の呼吸系ウイルス感染の1つ以上の症状を治療する方法であって、(i)治療的有効量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片はRSV抗原に免疫特異的に結合する）；(ii)治療的有効量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片はhMPV抗原に免疫特異的に結合する）；および(iii)治療的有効量の1つ以上の第3の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第3の抗体またはその抗原結合断片はPIV抗原に免疫特異的に結合する）を被験体に投与することを含む方法を提供する。
【００４４】
ある実施形態において本発明は、受動免疫療法であって、(i)第1の用量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片はRSV抗原に免疫特異的に結合する）；(ii)第2の用量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片はhMPV抗原に免疫特異的に結合する）；および(iii)第3の用量の1つ以上の第3の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第3の抗体またはその抗原結合断片はPIV抗原に免疫特異的に結合する）を被験体に投与することを含み、ここで第1の用量は、RSV感染の発症率を少なくとも25％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも25％低下させ、第3の用量はPIV感染の発症率を少なくとも25％低下させる、方法を提供する。ある実施形態において、第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも50％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも50％低下させ、第3の用量はPIV感染の発症率を少なくとも50％低下させる。ある実施形態において、第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも75％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも75％低下させ、第3の用量はPIV感染の発症率を少なくとも75％低下させる。ある実施形態において、第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも90％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも90％低下させ、第3の用量はPIV感染の発症率を少なくとも90％低下させる。
【００４５】
ある実施形態において本発明は、受動免疫療法であって、(i)第1の用量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片はRSV抗原に免疫特異的に結合する）；(ii)第2の用量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片はhMPV抗原に免疫特異的に結合する）；および(iii)第3の用量の1つ以上の第3の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第3の抗体またはその抗原結合断片はPIV抗原に免疫特異的に結合する）を被験体に投与することを含み、ここで被験体中の該1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、該1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片を15日間投与後に少なくとも10μg/mlであり、被験体中の該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、該1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片を15日間投与後に少なくとも10μg/mlであり、被験体中の該1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、該1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片を15日間投与後に少なくとも10μg/mlである方法を提供する。ある実施形態において、PIV抗原のアミノ酸配列はそれぞれ配列番号407〜419のアミノ酸配列である。ある実施形態においてPIV抗原のアミノ酸配列は、PIV核タンパク質、PIVホスホタンパク質、PIVマトリックスタンパク質、PIV 小疎水性タンパク質、PIV RNA依存性RNAポリメラーゼ、PIV Fタンパク質、またはPIV Gタンパク質のアミノ酸配列と90％同一である。ある実施形態においてPIV抗原は、PIV核タンパク質、PIVホスホタンパク質、PIVマトリックスタンパク質、PIV 小疎水性タンパク質、PIV RNA依存性RNAポリメラーゼ、PIV Fタンパク質、およびPIV Gタンパク質よりなる群から選択される。
【００４６】
ある実施形態において本発明は、被験体のウイルス感染を予防する方法であって、(i)予防的有効量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第1の抗体または抗原結合断片はRSV抗原に免疫特異的に結合する）；および(ii)予防的有効量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片はPIV抗原に免疫特異的に結合する）を、被験体に投与することを含む方法を提供する。ある実施形態において、該1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片はRSVを中和する。ある実施形態において、該1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片は、PIVを中和する。ある実施形態において該1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片は、被験体の細胞のRSV感染を阻止する。ある実施形態において該1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片は、被験体の細胞のPIV感染を阻止する。
【００４７】
ある実施形態において本発明は、被験体の呼吸系ウイルス感染の1つ以上の症状を治療する方法であって、(i)治療的有効量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第1の抗体または抗原結合断片はRSV抗原に免疫特異的に結合する）；および(ii)治療的有効量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片はPIV抗原に免疫特異的に結合する）を、被験体に投与することを含む方法を提供する。
【００４８】
ある実施形態において本発明は、受動免疫療法であって、(i)第1の用量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片はRSV抗原に免疫特異的に結合する）；および(ii)第2の用量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片はPIV抗原に免疫特異的に結合する）を、被験体に投与することを含み、ここで第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも25％低下させ、第2の用量はPIV感染の発症率を少なくとも25％低下させる方法を提供する。ある実施形態において第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも50％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも50％低下させる。ある実施形態において第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも75％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも75％低下させる。ある実施形態において第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも90％低下させ、第2の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも90％低下させる。
【００４９】
ある実施形態において本発明は、受動免疫療法であって、(i)第1の用量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片は、RSV抗原に免疫特異的に結合する）；および(ii)第2の用量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片は、PIV抗原に免疫特異的に結合する）を、被験体に投与することを含み、ここで被験体中の該1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、該1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片を15日間投与後に少なくとも10μg/mlであり、被験体中の該1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、該1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片を15日間投与後に少なくとも10μg/mlである方法を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５０】
3.2. 定義
本明細書において「類似体」という用語は、あるポリペプチドまたはあるポリペプチドの断片と同様または同一の機能を有するポリペプチドを意味し、あるポリペプチドは、例えば抗体またはその抗原結合断片でもよいが、あるポリペプチドまたはその断片と必ずしも同様のもしくは同一のアミノ酸配列を含まず、またはあるポリペプチドと同様のもしくは同一の構造を有さない。
【００５１】
あるポリペプチドと同様のアミノ酸配列を有するポリペプチドは、以下の少なくとも1つを満足するポリペプチドである：(a)あるポリペプチドのアミノ酸配列と少なくとも30％、少なくとも35％、少なくとも40％、少なくとも45％、少なくとも50％、少なくとも55％、少なくとも60％、少なくとも65％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、または少なくとも99％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチド；(b)少なくとも5アミノ酸残基、少なくとも15アミノ酸残基、少なくとも20アミノ酸残基、少なくとも25アミノ酸残基、少なくとも40アミノ酸残基、少なくとも50アミノ酸残基、少なくとも60アミノ酸残基、少なくとも70アミノ酸残基、少なくとも80アミノ酸残基、少なくとも90アミノ酸残基、少なくとも100アミノ酸残基、少なくとも125アミノ酸残基、または少なくとも150アミノ酸残基のあるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と、厳密性条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によりコードされるポリペプチド；および(c)あるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と少なくとも30％、少なくとも35％、少なくとも40％、少なくとも45％、少なくとも50％、少なくとも55％、少なくとも60％、少なくとも65％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、または少なくとも99％同一であるヌクレオチド配列によりコードされるポリペプチド。あるポリペプチドと同様の構造を有するポリペプチドは、あるポリペプチドと同様の2次、3次または4次構造を有するポリペプチドを意味する。ポリペプチドの構造は、当業者に公知の方法により決定することができ、特に限定されないがＸ線結晶学、核磁気共鳴、および結晶学的電子顕微鏡がある。本発明においてあるポリペプチドは、RSVポリペプチド、APVポリペプチド、hMPVポリペプチド、PIVポリペプチド、RSVポリペプチドの断片、APVポリペプチドの断片、hMPVポリペプチドの断片、PIVポリペプチドの断片、RSVポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体、APVポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体、PIVポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体、hMPVポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体、RSVポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体断片、APVポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体断片、PIVポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体断片、hMPVポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体断片でもよい。
【００５２】
本明細書において「抗体」という用語は、モノクローナル抗体、多重特異的抗体（例えば二重特異的）、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化（camelised）抗体、キメラ抗体、1本鎖Fvs（scFv）、1本鎖抗体、合成抗体、シングルドメイン抗体、Fab断片、F(ab)断片、ジスルフィド結合Fvs（sdFv）、および抗イディオタイプ（抗Id）抗体、および上記のエピトープ結合断片を意味する。特に抗体は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫活性断片（すなわち抗原結合部位を含む分子）を含む。免疫グロブリン分子は、任意のタイプ（例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、IgAおよびIgY）、クラス（例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1およびIgA2）またはサブクラスでよい。
【００５３】
本明細書において「組合せ」という用語は、2つ以上の予防薬および／または治療薬の使用を意味する。「組合せ」という用語は、呼吸系ウイルス感染を有する被験体に予防薬および／または治療薬が投与される順序は制限しない。第1の予防薬または治療薬は、呼吸系ウイルス感染にかかりやすいかったかまたはかかりやすい被験体への第2の予防薬または治療薬の投与の前（例えば、5分、15分、30分、45分、1時間、2時間、4時間、6時間、12時間、24時間、48時間、72時間、96時間、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、8週間、または12週間）、同時、または後（例えば、5分、15分、30分、45分、1時間、2時間、4時間、6時間、12時間、24時間、48時間、72時間、96時間、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、8週間、または12週間）に投与することができる。任意の追加の予防薬または治療薬を、任意の順序で他の追加の予防薬または治療薬とともに投与してもよい。
【００５４】
本明細書において「相乗的」という用語は、任意の2つ以上の単一の薬剤の組合せの付加作用より有効な予防薬または治療薬の組合せを意味する。予防薬または治療薬の組合せの相乗作用は、呼吸系ウイルス感染を有する被験体への1つ以上の薬剤のより少量の使用および／またはより少ない投与頻度を可能にする。1つ以上の薬剤のより少量の使用および／またはより少ない投与頻度が可能なことは、呼吸系ウイルス感染の予防または治療において、該薬剤の薬効を低下させることなく被験体への該薬剤投与に関連する毒性を、あまり頻繁ではないが低下させる。さらに相乗作用により、呼吸系ウイルス感染の予防または治療において、薬剤の改良された薬効が得られることがある。最後に予防薬または治療薬の組合せの相乗作用は、任意の単一の治療法の使用が引き起こす有害な好ましくない副作用を避けるかまたは低下させることがある。
【００５５】
本明細書において「誘導体」という用語は、アミノ酸残基置換、欠失または付加の導入により改変されているポリペプチドを意味する。また「誘導体」という用語は、すなわちポリペプチドへの任意の型の分子の共有結合により修飾されているポリペプチドを意味する。さらなる修飾は、特にグリコシル化、アセチル化、ペギル化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロック基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への結合である。修飾には、特に当業者に公知の方法（例えば、化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの存在下での合成など）による化学修飾がある。さらにあるポリペプチドの誘導体は、そのポリペプチドに1つ以上の非古典的アミノ酸を導入することにより作成することができる。ポリペプチド誘導体は、それが得られたポリペプチドと同様のまたは同一の機能を有する。
【００５６】
本明細書において「有効な中和力価」という用語は、臨床的に有効（ヒトで）であるか、例えばコトンラット中のウイルスを99％低下させることが証明されている動物（ヒトまたはコトンラット）の血清中に存在する量に対応する抗体の量を意味する。99％低下は、RSV、PIVおよび／またはhMPVの具体的な抗原刺激、例えば103pfu、104pfu、105pfu、106pfu、107pfu、108pfu、または109pfuの具体的な変化により規定される。
【００５７】
本明細書において「エピトープ」という用語は、動物好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトで、抗原性および／または免疫原性を有するタンパク質またはポリペプチドの部分を意味する。免疫原性を有するエピトープは、動物で抗体応答を誘発するタンパク質またはポリペプチドの部分である。抗原性を有するエピトープは、当該分野で公知の方法（例えば本明細書に記載のイムノアッセイ）により測定される、抗体が免疫特異的に結合するタンパク質またはポリペプチドの部分である。抗原性エピトープは、必ずしも免疫原性である必要はない。
【００５８】
本明細書において「断片」という用語は、ポリペプチド、タンパク質、または抗体の少なくとも5個の連続的アミノ酸残基、少なくとも10個の連続的アミノ酸残基、少なくとも15個の連続的アミノ酸残基、少なくとも20個の連続的アミノ酸残基、少なくとも25個の連続的アミノ酸残基、少なくとも40個の連続的アミノ酸残基、少なくとも50個の連続的アミノ酸残基、少なくとも60個の連続的アミノ酸残基、少なくとも70個の連続的アミノ酸残基、少なくとも80個の連続的アミノ酸残基、少なくとも90個の連続的アミノ酸残基、少なくとも100個の連続的アミノ酸残基、少なくとも125個の連続的アミノ酸残基、少なくとも150個の連続的アミノ酸残基、少なくとも175個の連続的アミノ酸残基、少なくとも200個の連続的アミノ酸残基、または少なくとも250個の連続的アミノ酸残基のアミノ酸配列を含むペプチドまたはポリペプチドを意味する。好ましくは断片は、ポリペプチド、タンパク質または抗体の反応性を有する。
【００５９】
本明細書において「ヒト幼児」という用語は、24ヶ月未満、好ましくは16ヶ月未満、12ヶ月未満、6ヶ月未満、3ヶ月未満、2ヶ月未満、または1ヶ月未満の年齢のヒトを意味する。ある実施形態においてヒト幼児は、妊娠38週齢を超えて生まれる。
【００６０】
本明細書において「早産で生まれたヒト幼児」という用語は、妊娠40週齢未満、妊娠35週齢未満で生まれたヒトを意味する。具体的な実施形態において、早産で生まれたヒト幼児は妊娠35〜38週齢である。ある実施形態において早産で生まれた幼児は妊娠38週齢、好ましくは幼児は妊娠38週齢未満である。
【００６１】
「単離された」または「精製された」抗体またはその断片は、細胞性物質もしくはそのタンパク質が得られる組織源からの他の汚染タンパク質を実質的に含まず、または化学合成される時化学前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まない。「細胞性物質を実質的に含まない」という用語は、抗体もしくは抗体断片がそれが単離されたかまたは組換え産生された細胞の細胞性成分から分離されている、抗体もしくは抗体断片の調製物を含む。すなわち細胞性物質を実質的に含まない抗体または抗体断片は、約30％、20％、10％または5％未満の異種タンパク質（ここで「汚染タンパク質」とも呼ぶ）を有する抗体または抗体断片の調製物を含む。抗体または抗体断片が組換え産生される時、これはまた培養培地を実質的に含まず、すなわち培養培地は、タンパク質調製物の容量の約20％、10％または5％未満である。抗体または抗体断片が化学合成により産生される時、これは化学前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まなす、すなわちタンパク質の合成に関与する化学前駆体もしくは他の化学物質から分離されている。従って抗体または抗体断片のそのような調製物は、約30％、20％、10％、5％（重量％）未満の、目的の抗体または抗体断片以外の化学前駆体または化合物を有する。好適な実施形態において本発明の抗体またはその断片は、単離されているか精製されている。
【００６２】
「単離された」核酸分子とは、天然起源の核酸分子中に存在する他の核酸分子から分離されているものである。さらに「単離された」核酸分子（例えばcDNA分子）は組換え法で産生される時、他の細胞性物質または培養培地を実質的に含まないか、または化学合成される時、化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まない。好適な実施形態において、本発明の抗体またはその断片をコードする核酸分子は単離されているか精製されている。
【００６３】
本明細書において「融合タンパク質」という用語は、抗体またはその断片のアミノ酸配列と、異種ポリペプチド（例えば、非抗RSV抗体、非抗PIV抗体、非抗APV抗体、および／または非抗hMPV抗体）のアミノ酸配列とを含むポリペプチドを意味する。
【００６４】
本明細書において「高力価」という用語は、本明細書に記載のように生物活性（例えば、RSV、APV、hMPV、PIVの中和）の種々の測定法で測定されるような高力価を示す抗体またはその抗原結合断片を意味する。例えば本発明の高力価抗体またはその断片は、本明細書に記載のマイクロ中和アッセイで測定すると、EC50値が0.01nM未満、0.025nM未満、0.05nM未満、0.1nM未満、0.25nM未満、0.5nM未満、0.75nM未満、1nM未満、1.25nM未満、1.5nM未満、1.75nM未満、または2nM未満である。さらに本発明の高力価抗体またはその断片は、該抗体または抗体断片を投与されていない被験体（例えばコトンラット）と比較して、105pfuで抗原刺激した5日後の被験体（例えばコトンラット）で、少なくとも30％、40％、50％、60％、75％、好ましくは少なくとも95％、およびさらに好ましくは99％低いRSV力価、PIV力価、APV力価、および／またはhMPV力価を与える。本発明のある実施形態において、本発明の高力価抗体またはその断片は、1つ以上のRSV抗原、1つ以上のPIV抗原、1つ以上のhMPV抗原、および／または1つ以上のAPV抗原について高親和性および／または高結合活性（avidity）を示す（例えば、1つ以上のRSV抗原、1つ以上のPIV抗原、1つ以上のhMPV抗原、および／または1つ以上のAPV抗原について、少なくとも2×108 M-1、少なくとも2.5×108 M-1、少なくとも5×108 M-1、少なくとも109 M-1、少なくとも5×109 M-1、少なくとも1010 M-1、少なくとも5×1010 M-1、少なくとも1011 M-1、少なくとも5×1011 M-1、少なくとも1012 M-1、または少なくとも5×1012 M-1の親和性を有する抗体または抗体断片）。
【００６５】
本明細書において「宿主」という用語は、哺乳動物好ましくはヒトを意味する。
【００６６】
本明細書において「宿主細胞」という用語は、核酸分子でトランスフェクトされた特定の被験体細胞、およびそのような細胞の子孫または子孫候補を意味する。そのような細胞の子孫は、以後の世代に起きる変異または環境の影響のために、または宿主細胞ゲノムへの核酸分子の組み込みのために、核酸分子でトランスフェクトされた親細胞と同一ではないことがある。
【００６７】
本発明のある実施形態において「予防的に有効な血清力価」は、被験体の呼吸系ウイルス感染、特にRSV感染、hMPV感染、PIV感染、および／またはAPV感染の発症率を低下させる、哺乳動物好ましくはヒト中の血清力価である。好ましくは予防的に有効な血清力価は、RSV感染、hMPV感染、PIV感染、および／またはAPV感染により生じる合併症の可能性が最も高い被験体（例えば、嚢胞性繊維症、気管支肺異形成症、先天性心疾患、先天性免疫不全症、または後天性免疫不全症を有するか、または骨髄移植を受けたことがある被験体、ヒト幼児、または老人）の、RSV感染、hMPV感染、PIV感染、および／またはAPV感染の発症率を低下させる。本発明の他のある実施形態において「予防的に有効な血清力価」は、105pfuで抗原刺激した5日後のRSV力価、hMPV力価、PIV力価、および／またはAPV力価が、それぞれRSV抗原、hMPV抗原、PIV抗原、および／またはAPV抗原に免疫特異的に結合する抗体または抗体断片を投与されていないコトンラットを105pfuのRSV、hMPV、APVおよび／またはPIVで抗原刺激した5日後のRSV力価、hMPV力価、PIV力価、および／またはAPV力価より、90％すなわち1log低くなるコトンラット中の血清力価である。予防的に有効な量は、それ自体が予防的に有効ではなくても、他の薬剤と組合せると予防的に有効である量を含む。
【００６８】
本発明のある実施形態において「治療的に有効な血清力価」は、哺乳動物の呼吸系ウイルス感染、特にRSV感染、hMPV感染、APV感染、および／またはPIV感染に関連する重症度、期間および／または症状を低下させる、哺乳動物好ましくはヒトの血清力価である。好ましくは治療的に有効な血清力価は、RSV感染、hMPV感染、APV感染、および／またはPIV感染により生じる合併症の可能性が最も高いヒト（例えば、嚢胞性繊維症、気管支肺異形成症、先天性心疾患、先天性免疫不全症、または後天性免疫不全症を有するか、または骨髄移植を受けたことがあるヒト、ヒト幼児、または老人）の、RSV感染、hMPV感染、APV感染、および／またはPIV感染の重症度、期間および／または症状を低下させる。本発明の他のある実施形態において「治療的に有効な血清力価」は、105pfuで抗原刺激した5日後のRSV、APV、hMPV、および／またはPIV力価が、それぞれRSV抗原、hMPV抗原、PIV抗原、および／またはAPV抗原に免疫特異的に結合する抗体または抗体断片を投与されていないコトンラットを105pfuのRSV、hMPV、APVおよび／またはPIVで抗原刺激した5日後のRSV力価、hMPV力価、PIV力価、および／またはAPV力価より、90％すなわち1log低くなるコトンラット中の血清力価である。治療的に有効な量は、それ自体が治療的に有効ではなくても、他の薬剤と組合せると治療的に有効である量を含む。
【００６９】
「抗PIV抗原抗体」という用語は、PIV抗原に免疫特異的に結合する抗体または抗体断片を意味する。PIV抗原は、例えばPIVヌクレオカプシド構造タンパク質、PIVホスホタンパク質、PIV融合糖タンパク質、PIV Lタンパク質、PIVマトリックスタンパク質、PIV HN糖タンパク質、PIV RNA依存性RNAポリメラーゼ、PIV Y1タンパク質、PIV Dタンパク質、またはPIV Cタンパク質の、PIVポリペプチドまたはその断片を意味する。PIV抗原はまた、PIVヌクレオカプシド構造タンパク質、PIVホスホタンパク質、PIV融合糖タンパク質、PIV Lタンパク質、PIVマトリックスタンパク質、PIV HN糖タンパク質、PIV RNA依存性RNAポリメラーゼ、PIV Y1タンパク質、PIV Dタンパク質、またはPIV Cタンパク質と比較して、同様のアミノ酸配列を有するポリペプチドを意味する。
【００７０】
「抗RSV抗原抗体」という用語は、RSV抗原に免疫特異的に結合する抗体または抗体断片を意味する。RSV抗原は、例えばRSVヌクレオタンパク質、RSVホスホタンパク質、RSVマトリックスタンパク質、RSV小疎水性タンパク質、RSV RNA依存性RSVポリメラーゼ、RSV Fタンパク質、およびRSV Gタンパク質の、RSVポリペプチドまたはその断片を意味する。RSV抗原はまた、RSVヌクレオタンパク質、RSVホスホタンパク質、RSVマトリックスタンパク質、RSV小疎水性タンパク質、RSV RNA依存性RNAポリメラーゼ、RSV Fタンパク質、およびRSV Gタンパク質と比較して、同様のアミノ酸配列を有するポリペプチドを意味する。
【００７１】
「抗hMPV抗原抗体」という用語は、hMPV抗原に免疫特異的に結合する抗体または抗体断片を意味する。hMPV抗原は、例えばhMPVヌクレオタンパク質、hMPVホスホタンパク質、hMPVマトリックスタンパク質、hMPV小疎水性タンパク質、hMPV RNA依存性hMPVポリメラーゼ、hMPV Fタンパク質、およびhMPV Gタンパク質の、hMPVポリペプチドまたはその断片を意味する。hMPV抗原はまた、hMPVヌクレオタンパク質、hMPVホスホタンパク質、hMPVマトリックスタンパク質、hMPV小疎水性タンパク質、hMPV RNA依存性hMPVポリメラーゼ、hMPV Fタンパク質、およびhMPV Gタンパク質と比較して、同様のアミノ酸配列を有するポリペプチドを意味する。
【００７２】
本明細書において「血清力価」という用語は、少なくとも10、好ましくは少なくとも20、および最も好ましくは少なくとも40の被験体の集団中の平均血清力価を意味する。
【００７３】
本明細書において「被験体」という用語は、脊椎動物好ましくは哺乳動物を意味する。被験体は、霊長類、ラット、マウス、またはコトンラットでもよい。さらに好ましくは被験体はヒトである。
【００７４】
本明細書において「免疫特異的に結合する」と「抗RSV、抗hMPV、または抗PIV抗体」という用語および類似の用語は、ELISAアッセイまたは当業者に公知の他のイムノアッセイ（例えば、下記セクション4.8に記載）で、RSV抗原、hMPV抗原、またはPIV抗原に免疫特異的に結合する抗体またはその断片を意味する。ある実施形態において、RSV抗原、hMPV抗原、またはPIV抗原に免疫特異的に結合する抗体またはその断片は、例えばイムノアッセイ、BIAcore、または当該分野で公知の他のアッセイにより測定すると、より低いかまたは同等の親和性を有する他のペプチドまたはポリペプチドに結合してもよい。他のある実施形態において、RSV抗原、hMPV抗原、またはPIV抗原に免疫特異的に結合する抗体またはその断片は、例えばイムノアッセイ、BIAcore、または当該分野で公知の他のアッセイにより測定すると、他のペプチドまたはポリペプチドに結合しない。RSV抗原、hMPV抗原、またはPIV抗原に免疫特異的に結合する抗体またはその断片は、関連抗原と交差反応性でもよい。好ましくは、RSV抗原、hMPV抗原、またはPIV抗原に免疫特異的に結合する抗体またはその断片は、他の抗原と交差反応しない。RSV抗原、hMPV抗原、またはPIV抗原に免疫特異的に結合する抗体またはその断片は、イムノアッセイ、BIAcore、または当該分野で公知の他のアッセイにより同定することができる。ある実施形態において抗体またはその断片は、RSV抗原、hMPV抗原、またはPIV抗原に結合する時、例えば特に限定されないが放射免疫定量法（RIA）、酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）、BIAcore、または当業者に公知の他の方法のような実験的方法を使用して測定すると、任意の交差反応性抗原に対するより大きい親和性で、RSV抗原、hMPV抗原、またはPIV抗原に特異的に結合する。抗体特異性の議論については、例えばPaul編、1989, Fundamental Immunology Second Edition, ラーベンプレス（Raven Press）、ニューヨーク、332〜336頁を参照されたい。ある実施形態において抗体またはその断片は、放射免疫定量法（RIA）、酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）のような実験的方法を使用して測定す
ると、任意の交差反応性抗原に対するのと同等の親和性で、RSV抗原、hMPV抗原、またはPIV抗原に特異的に結合する。
【００７５】
2つのアミノ酸配列または2つの核酸配列のパーセント同一性を決定するためには、配列は最適な比較のために整列させられる（例えば、第2のアミノ酸配列または核酸配列との最適な整列のために、第1のアミノ酸配列または核酸配列の配列中にギャップを導入してもよい）。次に、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置でアミノ酸残基またはヌクレオチドが比較される。第1の配列中のある位置が第2の配列中の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドにより占められる時、その位置で分子は同一である。2つの配列間のパーセント同一性は、配列により共有される同じ位置の数の関数である（すなわち、％同一性＝同一の重複位置の数／位置の総数×100％）。ある実施形態において2つの配列は同じ長さである。
【００７６】
2つの配列間のパーセント同一性は、数学的アルゴリズムを使用して行うことができる。2つの配列間の比較のために使用される数学的アルゴリズムの好適な非限定例は、KarlinとAltschul、1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877により修飾された、KarlinとAltschul、1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、Altschulら、1990, J. Mol. Biol. 215:403のNBLASTとXBLASTプログラム中に取り込まれる。BLASTヌクレオチド検索は、本発明の核酸分子に相同的なヌクレオチド配列を得るために、NBLASTヌクレオチドプログラムパラメータ（例えば、score＝100、wordlength＝12）を用いて行うことができる。BLASTタンパク質検索は、本発明のタンパク質分子に相同的なアミノ酸配列を得るために、XBLASTプログラムパラメータ（例えば、score＝50、wordlength＝3）を用いて行うことができる。比較目的にギャップのある整列を得るために、Altschulら、1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402に記載のようにGapped BLASTを使用することができる。あるいはPSI-BLASTを使用して繰り返しを検索を行い、分子間の遠い関係を検出することができる（前述）。BLAST、Gapped BLAST、およびPSI-BLASTプログラムを使用する時、各プログラム（例えば、XBLASTおよびNBLAST）のデフォルトパラメータを使用することができる（例えば、http://www.ncbi.nlm.nih.govを参照）。配列の比較のために使用される数学的アルゴリズムの別の好適な非限定例は、MyersとMiller、1988, CABIOS 4:11-17のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、GCG配列整列ソフトウェアパッケージの一部であるALIGNプログラム（バージョン2.0）中に取り込まれる。アミノ酸配列を比較するためにALIGNプログラムを使用する時、PAM120加重残基表、ギャップ長penalty 12およびギャップpenalty 4を使用することができる。
【００７７】
2つの配列間のパーセント同一性は、ギャップ有りまたは無しで上記と類似の方法を使用して決定することができる。パーセント同一性を計算するには、典型的には正確な一致のみが計数される。
【００７８】
RSV、PIV、hMPVおよびAPVへの言及は、各ウイルスの群、亜群、分離株、型および株を含む。具体的な実施形態においてRSV、PIVおよびhMPVは、それぞれヒトRSV、PIVおよびhMPVのすべての群、亜群、分離株、型および株を含む。
【００７９】
略語
cDNA              相補的DNA
L                 大タンパク質
M                 マトリックスタンパク質（エンベロープの内側を覆う）
F                 融合糖タンパク質
HN                血球凝集素−ノイラミニダーゼ糖タンパク質
N, NPまたはNC     核タンパク質（RNAに結合し、ポリメラーゼ活性に必要）
P                 ホスホタンパク質
MOI               感染多重度
NA                ノイラミニダーゼ（エンベロープ糖タンパク質）
PIV               パラインフルエンザウイルス
nt                ヌクレオチド
hMPV              ヒトメタニューモウイルス
APV               トリニューモウイルス
4. 発明の詳細な説明
4.1 抗体
本発明は、ウイルス呼吸系感染症の広域の予防と、ある実施形態では治療のための受動免疫療法を提供する。本発明の方法で使用される抗体は、RSV抗原に免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片、hMPV抗原に免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片、PIV抗原に免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含み、具体的な実施形態においてhMPV抗原に免疫特異的に結合しAPV抗原と交差反応するヒトまたはヒト化抗体を含む。具体的な実施形態において本発明の方法で使用される抗体は、hMPV抗原に免疫特異的に結合しAPV抗原と交差反応する抗体である。具体的な実施形態において本発明の方法で使用される抗体は、hMPV抗原に免疫特異的に結合し七面鳥APV抗原と交差反応するヒトまたはヒト化抗体である。他の具体的な実施形態において抗hMPV抗体は、七面鳥トリニューモウイルスまたはAPVの任意の他の種のAPV抗原と反応しない。
【００８０】
ある実施形態においてウイルス抗原の断片は、本発明の方法で使用される抗体を産生するための免疫原として使用される。ある実施形態において断片は好ましくは、少なくとも4、少なくとも5、少なくとも6、少なくとも7、さらに好ましくは少なくとも8、少なくとも9、少なくとも10、少なくとも11、少なくとも12、少なくとも13、少なくとも14、少なくとも15、少なくとも20、少なくとも25、少なくとも30、少なくとも40、少なくとも50、少なくとも75、または少なくとも100アミノ酸の配列を含有する。より具体的なある実施形態において断片は、約15〜約30アミノ酸の長さである。免疫原性または抗原性エピトープを含む好適なポリペプチドは、少なくとも10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、または100アミノ酸残基の長さである。追加の非限定的な好適な抗原性エピトープは、本明細書に開示の抗原性エピトープならびにその部分を含む。
【００８１】
ある実施形態において抗PIV抗原抗体、抗RSV抗原抗体、および／または抗hMPV抗原抗体は、呼吸系感染症を引き起こすウイルスの細胞への結合を阻害する。ある実施形態において抗PIV抗原抗体、抗RSV抗原抗体、および／または抗hMPV抗原抗体は、被験体の呼吸系感染症を引き起こすウイルスの細胞への結合を阻害する。ある実施形態において抗PIV抗原抗体、抗RSV抗原抗体、および／または抗hMPV抗原抗体は、呼吸系感染症を引き起こすウイルスによる被験体の感染を阻害する。ある実施形態において抗PIV抗原抗体、抗RSV抗原抗体、および／または抗hMPV抗原抗体は、呼吸系感染症を引き起こすウイルスの中和を引き起こす。
【００８２】
本発明の方法で使用される抗体は、後述のセクション4.1.5、4.1.6および4.1.7で議論される種々のウイルス抗原に免疫特異的に結合する。ある実施形態において本発明の方法で使用される少なくとも1つの抗体は、PIV、hMPVまたはRSVの抗原のエピトープに免疫特異的に結合し、それぞれPIV、hMPVまたはRSVの同じ抗原上の他のエピトープと交差反応する。ある実施形態において本発明の方法で使用される少なくとも1つの抗体は、PIV、hMPVまたはRSVの抗原のエピトープに免疫特異的に結合し、異なるウイルスの類似抗原と交差反応する。例えばRSVのFタンパク質に免疫特異的に結合する抗体は、hMPVのFタンパク質と交差反応する。具体的な実施形態において抗RSV抗原抗体はSYNAGIS（登録商標）である。SYNAGIS（登録商標）はまた、Palivizumabとしても知られている。SYNAGIS（登録商標）（Palivizumab）のアミノ酸配列は、Youngらの国際出願公報WO02/43660、標題「予防と治療のための抗RSV抗体の投与法」に開示されている（これは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。他の具体的な実施形態において抗RSV抗原抗体は、SYNAGIS（登録商標）ではない。ある具体的な実施形態において抗RSV抗原抗体は、AFFF；P12f2；P12f4；P11d4；Ale9；A12a6；A13c4；A17d4；A4B4；1X-493L1；FR H3-3F4；M3H9；Y10H6；DG；AFFF(1)；6H8；L1-7E5；L2-15B10；A13a11；A1h5；A4B4(1)；A4B4-F52S；またはA4B4L1FR-S28Rである。これらの抗体は、Youngらの国際出願公報WO02/43660、標題「予防と治療のための抗RSV抗体の投与法」に開示されている（これは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【００８３】
ある実施形態において本発明の方法で使用される少なくとも1つの抗体は、PIV、hMPVまたはRSVの1つのサブグループ（タイプ、サブタイプ、群、分離株など）の抗原に免疫特異的に結合し、それぞれPIV、hMPVまたはRSVの別のサブグループ（タイプ、サブタイプ、群、分離株など）の類似抗原に免疫特異的に結合する（それぞれ、セクション4.1.5、4.1.6および4.1.7を参照）。
【００８４】
本発明の抗体には、特に限定されないがモノクローナル抗体、多重特異的抗体、合成抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、1本鎖Fvs（scFv）、1本鎖抗体、Fab断片、F(ab')断片、ジスルフィド結合Fvs（sdFv）、および抗イディオタイプ（抗Id）抗体（例えば本発明の抗体の抗Id抗体を含む）、および上記のエピトープ結合断片がある。特に本発明の抗体は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫活性断片（すなわち、RSV、PIV、APVおよび／またはhMPV抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子）を含む。本発明の免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子の任意のタイプ（例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、IgAおよびIgY）、クラス（例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1およびIgA2）またはサブクラスでよい。
【００８５】
本発明の抗体は、鳥および哺乳動物（例えば、ヒト、マウス、ロバ、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、またはニワトリ）を含む任意の動物起源でよい。好ましくは本発明の抗体はヒト抗体またはヒト化抗体である。本明細書において「ヒト」抗体は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体、およびヒト免疫グロブリンライブラリー（特に限定されないが、ヒト免疫グロブリン配列に相同的な免疫グロブリン配列の合成ライブラリーを含む）から単離された抗体とを含む。
【００８６】
本発明の抗体は、単一特異的、二重特異的、三重特異的、またはより大きな多重特異的でもよい。多重特異的抗体は、RSV、PIV、またはhMPVの1つの抗原の異なるエピトープに特異的でもよい。ある実施形態において多重特異的抗体は、RSV、PIV、またはhMPVの2つ以上の抗原に特異的である。ある実施形態において多重特異的抗体は、RSVの抗原とhMPVの抗原に特異的である。ある実施形態において多重特異的抗体は、PIVの抗原とhMPVの抗原に特異的である。ある実施形態において多重特異的抗体は、PIVの抗原とRSVの抗原に特異的である。ある実施形態において多重特異的抗体は、RSVの抗原、PIVの抗原およびhMPVの抗原に特異的である。多重特異的抗体については、PCT公報WO93/17715、WO92/08802、WO91/00360、およびWO92/05793；Tuttら、J. Immunol. 147:60-69(1991)；US Patent No. 4,474,893、4,714,681、4,925,648、5,573,920および5,601,819；およびKostelnyら、J. Immunol. 148:1547-1553(1992)を参照されたい。
【００８７】
ある実施形態において、本発明の方法において高力価抗体を使用することができる。例えば高力価抗体は、適切な抗体遺伝子配列を遺伝子操作し、適当な宿主中で抗体配列を発現することにより産生することができる。産生された抗体をスクリーニングして、例えばBIAcoreアッセイ（セクション4.8.3参照）で高kon値を有する抗体を同定することができる。
【００８８】
ある実施形態において本発明の方法で使用される抗体またはその断片の親和性定数またはKa（kon/koff）は、少なくとも102 M-1、少なくとも5×102 M-1、少なくとも103 M-1、少なくとも5×103 M-1、少なくとも104 M-1、少なくとも5×104 M-1、少なくとも105 M-1、少なくとも5×105 M-1、少なくとも106 M-1、少なくとも5×106 M-1、少なくとも107 M-1、少なくとも5×107 M-1、少なくとも108 M-1、少なくとも5×108 M-1、少なくとも109 M-1、少なくとも5×109 M-1、少なくとも1010 M-1、少なくとも5×1010 M-1、少なくとも1011 M-1、少なくとも5×1011 M-1、少なくとも1012 M-1、少なくとも5×1012 M-1、少なくとも1013 M-1、少なくとも5×1013 M-1、少なくとも1014 M-1、少なくとも5×1014 M-1、少なくとも1015 M-1、少なくとも5×1015 M-1である。さらに別の実施形態において本発明の方法で使用される抗体またはその断片の親和性定数またはKd（koff/kon）は、10-2 M-1未満、5×10-2 M-1未満、10-3 M-1未満、5×10-3 M-1未満、10-4 M-1未満、5×10-4 M-1未満、10-5 M-1未満、5×10-5 M-1未満、10-6 M-1未満、5×10-6 M-1未満、10-7 M-1未満、5×10-7 M-1未満、10-8 M-1未満、5×10-8 M-1未満、10-9 M-1未満、5×10-9 M-1未満、10-10- M-1未満、5×10-10- M-1未満、10-11 M-1未満、5×10-11 M-1未満、10-12 M-1未満、5×10-12 M-1未満、10-13 M-1未満、5×10-13 M-1未満、10-14 M-1未満、5×10-14 M-1未満、10-15 M-1未満、5×10-15 M-1未満である。
【００８９】
ある実施形態において本発明の方法で使用される抗体またはその断片の平均有効濃度（EC50）は、in vitroマイクロ中和アッセイで0.01nM未満、0.025nM未満、0.05nM未満、0.1nM未満、0.25nM未満、0.5nM未満、0.75nM未満、1nM未満、1.25nM未満、1.5nM未満、1.75nM未満、または2nM未満である。平均有効濃度は、in vitroマイクロ中和アッセイでRSVの50％を中和する抗体または抗体断片の濃度である。好適な実施形態において本発明の方法で使用される抗体またはその断片のEC50は、in vitroマイクロ中和アッセイで0.01nM未満、0.025nM未満、0.05nM未満、0.1nM未満、0.25nM未満、0.5nM未満、0.75nM未満、1nM未満、1.25nM未満、1.5nM未満、1.75nM未満、または2nM未満である。
【００９０】
ある実施形態において本発明の方法で使用される抗体は、抗RSV抗原抗体、抗PIV抗原抗体、および／または抗hMPV抗原抗体の誘導体である。当業者に公知の標準的方法を使用して、本発明の方法で使用される抗体をコードするヌクレオチド配列に変異（例えば、アミノ酸置換を引き起こす部位特異的突然変異誘発およびPCR性突然変異誘発）を導入することができる。好ましくは誘導体は、元々の分子に対して25未満のアミノ酸の置換、20未満のアミノ酸の置換、15未満のアミノ酸の置換、10未満のアミノ酸の置換、5未満のアミノ酸の置換、4未満のアミノ酸の置換、3未満のアミノ酸の置換、または2未満のアミノ酸の置換を含む。好適な実施形態において誘導体は、1つ以上の予測される非必須アミノ酸残基で保存的アミノ酸置換を有する。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、同様の電荷の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されるものである。同様の電荷の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該分野で規定されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン酸、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖を有するアミノ酸（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）がある。あるいは変異は、コード配列のすべてまたは一部に沿ってランダム（例えば飽和突然変異誘発）に導入され、生じる変異体を生物活性についてスクリーニングして、活性を保持する変異体を同定することができる。突然変異誘発後に、コードされるタンパク質を発現し、タンパク質の活性を測定することができる。
【００９１】
本発明の方法で使用される抗体は、すなわち抗体への任意の型の分子の共有結合により修飾された誘導体を含む。例えば特に限定されないが、抗体誘導体は、例えばグリコシル化、アセチル化、ペギル化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロック基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への結合などにより修飾されている抗体を含む。公知の方法（特異的化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの存在下での合成などを含む）により、無数の化学修飾の任意のものを実施することができる。さらに誘導体は、1つ以上の非古典的アミノ酸を含有してもよい。
【００９２】
本発明はまた、当業者に公知のフレームワーク領域を含む本発明の抗体またはその断片を提供する。ある実施形態において本発明の方法で使用される抗体またはその断片の1つ以上のフレームワーク領域、好ましくはすべてのフレームワーク領域は、ヒト化されている。ある実施形態において本発明の方法で使用される抗体は、合成抗体、モノクローナル抗体、細胞内発現抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化キメラ抗体、ヒト化抗体、グリコシル化抗体、多重特異的抗体、ヒト抗体、1本鎖抗体、または二重特異的抗体である。
【００９３】
本発明のある実施形態において本発明の方法で使用される抗体は、哺乳動物（好ましくはヒト）での半減期が、12時間より大きい、1日より大きい、3日より大きい、6日より大きい、10日より大きい、15日より大きい、20日より大きい、25日より大きい、30日より大きい、35日より大きい、40日より大きい、45日より大きい、2ヶ月より大きい、3ヶ月より大きい、4ヶ月より大きい、または5ヶ月より大きい。in vivoの半減期が増加している抗体またはその抗原結合断片は、当業者に公知の方法により作成することができる。例えばin vivoの半減期が増加している抗体またはその抗原結合断片は、FcドメインとFcRn受容体との相互作用に関与することが特定されているアミノ酸残基を修飾（例えば、置換、欠失または付加）することにより作成することができる（例えば、PCT公報WO97/34631、およびJohnsonらが2001年12月12日に出願した米国特許出願第10/020,354号、標題「半減期が延長した分子、組成物およびその使用」を参照、これらは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。そのような抗体またはその抗原結合断片は、当業者に公知の方法（例えば、本明細書に記載のイムノアッセイ）を使用して、RSV抗原に対する結合活性またはin vivoの薬効について試験することができる。
【００９４】
さらにin vivoの半減期が増加した抗体またはその抗原結合断片は、抗体または抗体断片にポリマー分子（例えば、高分子量ポリエチレングリコール（PEG））を結合させることにより作成することができる。PEGは、多官能性リンカー有りまたは無しで、該抗体または抗体断片のＮ末端またはＣ末端へのPEGの部位特異的結合により、またはリジン残基上に存在するイプシロンアミノ基により、該抗体または抗体断片に結合することができる。生物活性の喪失が最小になる線状または分岐ポリマー誘導体化が使用されるであろう。結合の程度は、SDS-PAGEおよび質量スペクトル法により詳細に追跡して、抗体へのPEG分子の正しい結合が確認される。未処理PEGは、サイズ排除クロマトグラフィーまたはイオン交換クロマトグラフィーにより抗体−PEGコンジュゲートから分離することができる。PEG誘導体化抗体またはその抗原結合断片は、当業者に公知の方法（例えば、本明細書に記載のイムノアッセイ）を使用して、RSV抗原への結合ならびにin vivoの効力について試験することができる。
【００９５】
ある実施形態において本発明の方法で使用される抗体は、RSV、PIVおよび／またはhMPV抗原に免疫特異的に結合する抗体またはその断片と、異種ポリペプチドとを含む融合タンパク質である。好ましくは抗体または抗体断片が融合する異種ポリペプチドは、呼吸系上皮細胞に抗体をターゲティングするのに有用である。
【００９６】
ある実施形態において本発明の方法で使用される抗体またはその断片は、RSV抗原、PIV抗原および／またはhMPV抗原と、その宿主細胞受容体との相互作用を破壊または妨害する。
【００９７】
ある実施形態において本発明の方法で使用される抗体は、1本鎖抗体である。1本鎖抗体の設計と構築は、Marascoら、1993, Proc. Natl. Acad. Sci. 90:7889-7893（これは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【００９８】
ある実施形態において本発明の方法で使用される抗体は、細胞内エピトープに結合する、すなわち細胞内発現抗体（intrabody）である。細胞内発現抗体は、抗原に免疫特異的に結合することができる抗体の少なくとも一部を含有し、好ましくはその分泌をコードする配列を含有しない。そのような抗体は細胞内でその抗原に結合する。ある実施形態において細胞内発現抗体は、1本鎖Fv（「sFv」）を含む。sFvは、抗体のVHおよびVLドメインを含む抗体断片であり、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖に存在する。一般にFvポリペプチドは、抗体のVHとVLドメインの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これはsFvが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする。sFvの総説については、PluckthunのThe Pharmacology of Monoclonal Antibodies、第113巻、RosenburgとMoore編、スプリンガーフェアラーク（Springer-Verlag）、ニューヨーク、269-315頁（1994）を参照されたい。さらなる実施形態において細胞内発現抗体は好ましくは、機能可能な分泌配列を含まず、従って細胞内にとどまる（一般的には、Marasco, WA, 1998, 「細胞内発現抗体：基礎的研究と臨床的遺伝子治療応用」、スプリンガー（Springer）、ニューヨークを参照）。
【００９９】
細胞内発現抗体の作成は当業者に公知であり、例えばUS Patent No. 6,004,940；6,072,036；5,965,371に記載されている（これらは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。さらに細胞内発現抗体の構築は、OhageとSteipe、1999, J. Mol. Biol. 291:1119-1128；Ohageら、1999, J. Mol. Biol. 291:1129-1134；およびWirtzとSteipe, 1999, Protein Science 8:2245-2250に記載されている（これらは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。例えば抗体の組換え産生について記載されている（例えばセクション4.1.2と4.1.3）ような組換え分子生物学的方法もまた、細胞内発現抗体の作成に使用される。抗ウイルス剤としての細胞内発現抗体の考察は、Marasco, 2001, Curr. Top. Microbiol. Immunol. 260:247-270に記載されている（これは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０１００】
特に本発明は、(i)1つ以上の抗RSV抗原細胞内発現抗体またはその断片、および1つ以上の抗PIV抗原細胞内発現抗体またはその断片；(ii)1つ以上の抗PIV抗原細胞内発現抗体またはその断片、および1つ以上の抗hMPV抗原細胞内発現抗体またはその断片；または(iii)1つ以上の抗RSV抗原細胞内発現抗体またはその断片、1つ以上の抗PIV抗原細胞内発現抗体またはその断片、および1つ以上の抗hMPV抗原細胞内発現抗体またはその断片を投与することにより、呼吸系感染症の1つ以上の症状を治療、予防および／または改善する方法を提供する。本発明はまた、細胞内発現抗体と抗体またはその抗原結合断片の組合せを投与することを含む。例えば特に限定されないが本発明の方法は、1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片、および1つ以上の抗hMPV抗原細胞内発現抗体またはその断片を投与することを含む。
【０１０１】
ある実施形態において本発明の細胞内発現抗体は、抗原に対する完全な抗体（定常領域と可変領域とを有する）の結合有効性の少なくとも約75％を保持する。さらに好ましくは細胞内発現抗体は、完全な抗体の結合有効性の少なくとも85％を保持する。さらに好ましくは細胞内発現抗体は、完全な抗体の結合有効性の少なくとも95％を保持する。
【０１０２】
細胞内発現抗体の産生において目的のVHおよびVL鎖の可変領域をコードするポリヌクレオチドは、例えばそのようなドメインのPCR増幅の鋳型としてハイブリドーマmRNAまたは脾臓mRNAを使用してクローン化することができる（Huseら、1989, Science 246:1276）。ある好適な実施形態においてVHおよびVLドメインをコードするポリヌクレオチドは、リンカーをコードするポリヌクレオチド配列により結合して、1本鎖抗体（sFv）が作成される。sFvは典型的には、配列VH−リンカー−VLまたはVL−リンカー−VHを有する単一のペプチドを含む。リンカーは、重鎖と軽鎖が互いに結合して正しいコンフォメーション配向になることを可能にするように選択される（例えばHustonら、1991, Methods in Enzym. 203:46-121を参照、これは参照することにより本明細書に組み込まれる）。さらなる実施形態においてリンカーは、未変性のFvコンフォメーションのひずみを最小にするために、融合点と各可変ドメインとの距離（例えば3.5nm）にまたがることができる。そのような実施形態においてリンカーは、少なくとも5アミノ酸残基、少なくとも10アミノ酸残基、少なくとも15アミノ酸残基、またはそれ以上のポリペプチドである。さらなる実施形態においてリンカーは、組合せ部位のVHとVLドメインの立体妨害を引き起こさない。そのような実施形態においてリンカーは、35アミノ酸またはそれ以下、30アミノ酸またはそれ以下、25アミノ酸またはそれ以下である。すなわち最も好適な実施形態においてリンカーは、15〜25アミノ酸残基の長さである。さらなる実施形態において、VHとVLドメインが抗原を検出するのに必要なコンフォメーションを取ることができるように、リンカーは親水性であり、充分な可撓性である。細胞内発現抗体は、同一のVHとVLドメインの間に挿入された異なるリンカー配列を用いて作成される。特定のVHとVLドメインの対に適切な性質を有するリンカーは、それぞれの抗原結合の程度を評価することにより、経験的に決定することができる。リンカーの例には、特に限定されないが表1に開示した配列がある。
【０１０３】
表1
配列
(GlyGlyGlyGlySer)3
Glu Ser Gly Arg Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gln
Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Val Asp
Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Ser Ser Glu Gly Lys Gly
Lys Glu Ser Gly Ser Val Ser Ser Glu Gln Leu Ala Gln Phe Arg Ser Leu Asp
Glu Ser Gly Ser Val Ser Ser Glu Glu Leu Ala Phe Arg Ser Leu Asp
ある実施形態において、細胞内発現抗体は細胞質中で発現される。他の実施形態において、細胞内発現抗体は種々の細胞内位置に局在化されている。そのような実施形態において特異的局在化配列はヌクレオチド内ポリペプチドに結合されて、細胞内発現抗体を特異的な位置に向けることができる。細胞内発現抗体は、例えば以下の細胞内位置に局在化される：小胞体（Munroら、1987, Cell 48:899-907；Hangejordenら、1991, J. Biol. Chem. 266:6015）；核（Lanfordら、1986, Cell 46:575；Stantonら、1986, PNAS 83:1772；Harlowら、1985, Mol. Cell. Biol. 5:1605）；核小体領域（Seomiら、1990, J. Virol. 64:1803；Kubotaら、1989, Biochem. Biophys. Res. Commun. 162:963；Siomiら、1998, Cell 55:197）；エンドソームコンパートメント（Bakkeら、1990, Cell 63:707-716）；ミトコンドリアマトリックス（Pugsley, A.P., 1989, 「タンパク質ターゲティング」、アカデミックプレス社（Academic Press Inc.）；ゴルジ装置（Tangら、1992, J. Biol. Chem. 267:10122-6）；リポソーム（Letourneurら、1992, Cell 69:1183）；および原形質膜（Marchildonら、1984, PNAS 81:7679-82；Hendersonら、1987, PNAS 89:339-43；Rheeら、1987, J. Virol. 61:1045-53；Schultzら、1984, J. Virol. 133:431-7；Ootsuyamaら、1985, Jpn. J. Can. Res. 76:1132-5；Ratnerら、1985, Nature 313:277-84）。局在化シグナルの例には、特に限定されないが表2に開示の配列がある。
【０１０４】
表2
局在                              配列
小胞体                        Lys Asp Glu Leu
小胞体                        Asp Asp Glu Leu
小胞体                        Asp Glu Glu Leu
小胞体                        Gln Glu Asp Leu
小胞体                        Arg Asp Glu Leu
核                            Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val
核                            Pro Gln Lys Lys Ile Lys Ser
核                            Gln Pro Lys Lys Pro
核                            Arg Lys Lys Arg
核小体領域                    Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg
Ala His Gln
核小体領域                    Arg Gln Ala Arg Arg Asn Arg Arg Arg
Arg Trp Arg Glu Arg Gln Arg
核小体領域                    Met Pro Leu Thr Arg Arg Arg Pro Ala Ala
Ser Gln Ala Leu Ala Pro Pro Thr Pro
エンドソームコンパートメント  Met Asp Asp Gln Arg Asp Leu Ile Ser
Asn Asn Glu Gln Leu Pro
ミトコンドリアマトリックス    Met Leu Phe Asn Leu Arg Xaa Xaa Leu
Asn Asn Ala Ala Phe Arg His Gly His
Asn Phe Met Val Arg Asn Phe Arg Cys
Gly Gln Pro Lys Xaa
原形質膜                      GCVCSSNP
原形質膜                      GQTVTTPL
原形質膜                      GQELSQHE
原形質膜                      GNSPSYNP
原形質膜                      GVSGSKGQ
原形質膜                      GQTITTPL
原形質膜                      GQTLTTPL
原形質膜                      GQIFSRSA
原形質膜                      GQIHGLSP
原形質膜                      GARASVLS
原形質膜                      GCTLSAEE
VHとVLドメインは、一般に保存された構造ジスルフィド結合を有する免疫グロブリンドメインからなる。細胞内発現抗体が還元性環境（例えば細胞質）中で発現される実施形態において、そのような構造的特徴が存在する。ジスルフィド結合形成が存在しないために生じる免疫グロブリン構造の安定性の低下を補償するために、細胞内発現抗体ポリペプチド配列に変異を作成することができる。ある実施形態において細胞内発現抗体のVHおよび／またはVLドメインは、還元性環境中で発現が安定化されるように、1つ以上の点突然変異を含有する（Steipeら、1994, J. Mol. Biol. 240:188-92；WirtzとSteipe, 1999, Protein Science 8:2245-50；OhageとSteipe、1999, J. Mol. Biol. 291:1119-28；Ohageら、1999, J. Mol. Biol. 291:1129-34）。
【０１０５】
4.1.1 抗体の産生方法
本発明の方法で使用される抗体またはその断片は、抗体の合成のために当該分野で公知の任意の方法、特に化学合成または好ましくは組換え発現法により産生することができる。
【０１０６】
RSV、PIVおよび／またはhMPV抗原に対するポリクローナル抗体は、当該分野で公知の種々の方法により産生することができる。例えばRSV、PIVおよび／またはhMPV抗原は、種々の宿主動物（特に限定されないが、ウサギ、マウス、ラットなどを含む）に投与して、RSV、PIVおよび／またはhMPV抗原に特異的なポリクローナル抗体を含有する血清の産生を誘導することができる。種々のアジュバントを使用して、宿主種により免疫学的応答を誘導してもよく、特に限定されないがフロイント（完全および不完全）、ミネラルゲル（例えば、水酸化アルミニウム）、表面活性物質（例えば、リソレシチン）、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油エマルジョン、キーホールリンペットヘモシアニン、ジニトロフェノール、および有用な可能性のあるヒトアジュバント、例えばBCG（カルメット−ゲラン菌）およびコリネバクテリウム・パルブム（Corynebacterium parvum）がある。そのようなアジュバントはまた、当該分野で公知である。
【０１０７】
モノクローナル抗体は、当該分野で公知の広範な方法（ハイブリドーマ、組み換え体、およびファージ表示法、またはこれらの組合せの使用を含む）を使用して調製することができる。例えばモノクローナル抗体は、当該分野で公知であり、例えばHarlowら、Antibodies: A Laboratory Manual（コールドスプリングハーバーラボラトリープレス（Cold Spring Harbor Laboratory Press）、第2版、1988）；Hammerlingら、Manoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)（これらの文献は、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載のハイブリドーマ法を使用して、産生することができる。本明細書において「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ法により産生される抗体に限定されない。「モノクローナル抗体」という用語は、単一のクローン（任意の真核生物、原核生物、またはファージクローンを含む）から得られる抗体を意味し、それが産生される方法ではない。
【０１０８】
ハイブリドーマ技術を使用して特異的抗体を産生しスクリーニングする方法は、当該分野でルーチンであり、公知である。簡単に説明すると、マウスをRSV、PIVおよび／またはhMPV抗原で免疫し、いったん免疫応答が検出されたら（例えば、マウス血清中に、RSV、PIVおよび／またはhMPV抗原に特異的な抗体が検出されたら）、マウス脾臓を採取し、脾臓細胞を単離する。次に公知の方法により、脾臓細胞を適当なミエローマ細胞（例えば、ATCCから入手できる細胞株SP20）と融合させる。ハイブリドーマを選択し、限界希釈によりクローン化する。次にハイブリドーマクローンを、本発明のポリペプチドに結合することができる抗体を分泌する細胞について、当該分野で公知の方法により測定する。マウスを陽性ハイブリドーマクローンで免疫することにより、一般に高レベルの上記を含有する腹水液を生成することができる。
【０１０９】
具体的な実施形態においてAPVの抗原は、hMPVに対する抗体を作成するのに使用される。
【０１１０】
ある実施形態においてモノクローナル抗体は、本発明の抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を培養することを含み、ここで好ましくは、ハイブリドーマはRSV、PIVおよび／またはhMPV抗原で免疫したマウスから単離した脾臓細胞をミエローマ細胞と融合して、次にRSV、PIVおよび／またはhMPV抗原に結合できる抗体を分泌するハイブリドーマクローンについて、融合から生じるハイブリドーマをスクリーニングする。
【０１１１】
特異的RSV、PIVおよび／またはhMPVエピトープを認識する抗体断片は、当該分野で公知の任意の方法により生成することができる。例えば、本発明のFabとF(ab')2断片は、パパイン（Fab断片を産生するため）またはペプシン（F(ab')2断片を産生するため）のような酵素を使用して、免疫グロブリン分子のタンパク質分解的切断により産生される。F(ab')2断片は、可変領域、軽鎖定常領域、および重鎖のCH1ドメインを含有する。さらに本発明の抗体はまた、当該分野で公知の種々のファージ表示（phage display）法を使用して生成することもできる。
【０１１２】
ファージディスプレイ（phage display）法では、これらをコードするポリヌクレオチド配列を有するファージ粒子の表面に、機能性抗体ドメインが表示される。VHとVLドメインをコードするDNA配列を、動物cDNAライブラリー（例えば、リンパ組織のヒトまたはマウスcDNAライブラリー）から増幅する。VHおよびVLドメインをコードするDNAを、PCRによりscFvリンカーと組換え、ファジミドベクター（例えば、pCANTAB6またはpCOMB3HSS）中にクローン化する。ベクターを大腸菌（E. coli）中に電気穿孔し、大腸菌（E. coli）にヘルパーファージを感染させる。これらの方法で使用されるファージは、典型的にはfdとM13を含む繊維状ファージであり、VHとVLドメインは、通常ファージ遺伝子IIIまたは遺伝子VIIIに組換え的に融合される。目的のRSV、PIVおよび／またはhMPV抗原に結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、抗原（例えば、標識抗原、または固相表面もしくはビーズに結合もしくは捕捉された抗原）を使用して、選択または同定することができる。本発明の抗体を作成するのに使用できるファージ表示（phage display）法の例には、Brinkmanら、1995, J. Immunol. Methods 182:41-50；Amesら、1995,J. Immunol. Methods 184:177-186；Kettleboroughら、1994, Eur. J. Immunol. 24:952-958；Persicら、1997, Gene 187:9-18；Burtonら、1994, Advances in Immunology 57:191-280；PCT出願PCT/GB91/01134；PCT公報 WO90/02809、WO91/10737、WO92/01047、WO92/18619、WO93/11236、WO95/15982、WO95/20401、およびWO97/01047；およびUS Patent No. 5,698,426、5,223,409、5,403,484、5,580,717、5,427,908、5,750,753、5,821,047、5,571,698、5,427,908、5,516,637、5,780,225、5,658,727、5,733,743および5,969,108（これらのそれぞれは、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載のものがある。
【０１１３】
上記文献に記載のように、ファージ選択後、ファージから抗体コード領域を単離し、全抗体（ヒト抗体、または他の所望の抗体結合断片を含む）を生成するのに使用され、任意の所望の宿主（哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、および細菌、例えば下記のもの）中で発現される。Fab、Fab'およびF(ab')2断片を組換え的に産生する方法はまた、当該分野で公知の方法（例えば、PCT公報 WO92/22324；Mullinaxら、1992, Bio/Techniques 12(6):864-869；Sawaiら、1995, AJRI 34:26-34；およびBetterら、1988, Science 240:1041-1043、これらの文献は、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）を使用して利用される。
【０１１４】
全抗体を作成するために、VHまたはVLヌクレオチド配列、制限部位、および制限部位を防御するためのフランキング配列を含むPCRプライマーを使用して、scFvクローン中でVHまたはVL配列を増幅することができる。当業者に公知のクローニング法を使用して、PCR増幅したVHドメインを、VH定常領域（例えば、ヒトガンマ4定常領域）を発現するベクター中にクローン化することができ、PCR増幅したVLドメインを、VL定常領域（例えば、ヒトカッパまたはラムダ定常領域）を発現するベクター中にクローン化することができる。好ましくは、VHまたはVLドメインを発現するベクターは、EF-1αプロモーター、分泌シグナル、可変ドメイン、定常ドメイン、および選択マーカー（例えば、ネオマイシン）のクローニング部位を含む。VHとVLドメインはまた、必要な定常領域を発現する1つのベクター中にクローン化される。次に当業者に公知の技術を使用して、重鎖変換ベクターと軽鎖変換ベクターを細胞株中に同時トランスフェクトして、完全長抗体（例えば、IgG）を発現する安定なまたは一過性細胞株が作成される。
【０１１５】
ある用途（ヒトでの抗体のin vivo用途、およびin vitro検出アッセイを含む）について、ヒトまたはキメラ抗体を使用することが好ましいかも知れない。完全にヒトの抗体は、ヒト被験体の治療的処置に特に好ましい。ヒト免疫グロブリン配列またはヒト免疫グロブリン配列に相同的な合成配列から得られる抗体ライブラリーを使用して、上記ファージ表示（phage display）法を含む当該分野で公知の種々の方法により、ヒト抗体を作成することができる。また、US Patent No. 4,444,887および4,716,111；およびPCT公報 WO98/46645、WO98/50433、WO98/24893、WO98/16654、WO96/34096、WO96/33735、およびWO91/10741（これらのそれぞれは、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）も参照されたい。
【０１１６】
ヒト抗体はまた、機能性内因性免疫グロブリンを発現することができないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができる、トランスジェニックマウスを使用して産生することができる。例えば、ヒト重鎖と軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体は、ランダムにまたは相同的組換えにより、マウス胚幹細胞中に導入される。あるいは、ヒト可変領域、定常領域および多様性領域を、ヒト重鎖と軽鎖遺伝子以外に、マウス胚幹細胞中に導入してもよい。マウス重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、相同的組換えによりヒト免疫グロブリン遺伝子座を導入して、別々にまたは同時に非機能性にされる。特に、JH領域のホモ接合性欠失は、内因性抗体産生を妨害する。修飾胚幹細胞を拡張し、胚盤胞中に微量注入して、キメラマウスを産生する。次にキメラマウスを飼育して、ヒト抗体を発現するホモ接合性子孫を産生する。選択された抗原（例えば、本発明のポリペプチドのすべてまたは一部）を用いる、通常の方法でトランスジェニックマウスを免疫する。従来のハイブリドーマ技術を使用して、免疫したトランスジェニックマウスから、抗原に対するモノクローナル抗体を得ることができる。トランスジェニックマウスが有するヒト免疫グロブリントランス遺伝子は、Ｂ細胞分化中に再配置され、グリコシル化クラススイッチングと体細胞変異を受ける。すなわち、このような技術を使用して、治療的に有用なIgG、IgA、IgMおよびIgE抗体を産生することが可能である。ヒト抗体を産生するためのこの技術の概説については、LonbergとHuszar（1995, Int. Rev. Immunol. 13:65-93）を参照されたい。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を産生する技術と、そのような抗体を産生するためのプロトコールの詳細な考察については、PCT公報 WO98/24893、WO96/34096、およびWO96/33735；およびUS Patent No. 5,413,923、5,625,126、5,633,425、5,569,825、5,661,016、5,545,806、5,814,318、および5,939,598を参照されたい（これらは、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。さらに、Medarex, Inc.（Princeton, NJ）、Abgenix, Inc.（Fre
emont, CA）およびGenpharm（San Jose，CA）のような会社は、上記と類似の技術を使用して、選択された抗原に対するヒト抗体を提供している。
【０１１７】
キメラ抗体は、非ヒト（例えばマウス）抗体由来の可変領域とヒト免疫グロブリン定常領域とを有する抗体のように、抗体の異なる部分が、異なる免疫グロブリン分子に由来する分子である。キメラ抗体の産生方法は、当該分野で公知である。例えば、Morrison, 1985, Science 229:1202；Oiら、1986, Bio/Techniques 4:214；Gilliesら、1989, J. Immunol. Methods 125:191-202；およびUS Patent No. 5,807,715、4,816,567および4,816,397を参照されたい（これらは、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。ヒトからの1つ以上のCDRと非ヒト免疫グロブリン分子からのフレームワーク領域とを含むキメラ抗体を、当該分野で公知の種々の技術を使用して産生することができ、例えばCDR移植（EP239,400；PCT公報 WO91/09967；およびUS Patent No. 5,225,539、5,530,101、および5,585,089）、化粧張り法（veering）または付け替え法（resurfacing）（EP592,106；EP519,596；Padlan, 1991, Molecular Immunology 28(4/5):489-498；Studnickaら、1994, Protein Engineering 7(6)：805-814；およびRoguskaら、1994, PNAS 91:969-973）、および鎖シャフリング（US Patent No. 5,565,332）がある。好適な実施形態において抗体は、表3に記載の1つ以上のCDR3（好ましくはすべてのCDR）とヒトフレームワーク領域とを含む。しばしば、抗原結合を改変、好ましくは改善するために、フレームワーク領域中のフレームワーク残基は、CDRドナー抗体からの対応する残基で置換される。これらのフレームワーク置換は、当該分野で公知の方法により確認され、例えば、CDRとフレームワーク残基との相互作用のモデル化による抗原結合に重要なフレームワーク残基の同定と、特定の位置の通常のフレームワーク残基の同定のための配列比較がある（例えば、Queenら、US Patent No. 5,585,089；およびRiechmannら、1988, Nature 332:323を参照、これらは、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０１１８】
さらに、本発明の抗体を用いて当業者に公知の技術を使用して、RSV、PIVおよび／またはhMPV抗原を「模倣」する抗イディオタイプ抗体を作成することができる（例えば、GreenspanとBona、1989, FASEB J. 7(5):437-444；およびNissinoff, 1991, J. Immunol. 147(8):2429-2438を参照）。例えば、RSV、PIVおよび／またはhMPVに結合しその宿主細胞へのRSV、PIVおよび／またはhMPVの結合を競合的に阻害（当該分野で公知で前述の方法により測定される）する本発明の抗体を使用して、RSV、PIVおよび／またはhMPV抗原を「模倣」し、RSV、PIVおよび／またはhMPV受容体に結合、すなわち宿主細胞への結合についてウイルスと競合し、従ってウイルスによる宿主細胞の感染率を低下させることができる。
【０１１９】
他のある実施形態において当業者に公知の方法により生成される抗−抗イディオタイプが本発明の方法で使用される。そのような抗−抗イディオタイプは抗RSV、PIVおよび／またはhMPV抗体の結合ドメインを模倣し、その結果RSV、PIVおよび／またはhMPVに結合し中和する。そのような中和性抗−抗イディオタイプまたはそのような抗−抗イディオタイプのFab断片は、治療法でRSV、PIVおよび／またはhMPVを中和するのに使用することができる。例えばそのような抗−抗イディオタイプ抗体を使用してRSV、PIVおよび／またはhMPVに結合することができ、従って感染を予防することができる。
【０１２０】
ある実施形態においてRSV、PIV、またはhMPVのタンパク質の断片が、本発明の方法で使用される抗体の作成のための免疫原として使用される。免疫原として使用されるRSV、PIV、またはhMPVのタンパク質の断片は、少なくとも10、20、30、40、50、75、100、250、500、750、または少なくとも1000アミノ酸の長さでもよい。ある実施形態においてRSV、PIV、またはhMPVのタンパク質の合成ペプチドは免疫原として使用される。
【０１２１】
ある実施形態においてウイルス抗原の断片は、本発明の方法で使用される抗体を産生するための免疫原として使用される。ある実施形態において断片は、好ましくは少なくとも4、少なくとも5、少なくとも6、少なくとも7、さらに好ましくは少なくとも8、少なくとも9、少なくとも10、少なくとも11、少なくとも12、少なくとも13、少なくとも14、少なくとも15、少なくとも20、少なくとも25、少なくとも30、少なくとも40、少なくとも50、少なくとも75、または少なくとも100アミノ酸の配列を含有する。より具体的なある実施形態において断片は、約15〜約30アミノ酸の長さである。免疫原性または抗原性エピトープを含む好適なポリペプチドは、少なくとも10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、または100アミノ酸残基の長さである。追加の非限定的な好適な抗原性エピトープは、本明細書に開示の抗原性エピトープならびにその部分を含む。
【０１２２】
4.1.2  抗体をコードするポリヌクレオチド
当該分野で公知の任意の方法により、本発明の方法で使用される抗体をコードするポリヌクレオチドが得られ、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が決定される。いくつかの抗体のアミノ酸配列が公知である（表2に記載）ため、これらの抗体をコードするヌクレオチド配列は、当該分野で公知の方法を使用して決定することができ、例えば、特定のアミノ酸をコードすることが知られているヌクレオチドコドンが、本発明の抗体またはその断片をコードする核酸を作成するように組み立てられる。抗体をコードするそのようなポリヌクレオチドは、化学合成されたオリゴヌクレオチド（例えば、Kutmeierら, 1994, Bio/Techniques  17:242）から組み立てられ、これは、簡単に説明すると、抗体をコードする配列の一部を含有する重複オリゴヌクレオチドの合成、これらのオリゴヌクレオチドのアニーリングと連結、そして次に、連結したオリゴヌクレオチドのPCRによる増幅を含む。
【０１２３】
あるいは適当な供給源の核酸から、抗体をコードするポリヌクレオチドを作成してもよい。特定の抗体をコードする核酸を含有するクローンが入手できないが、抗体分子の配列がわかっているなら、免疫グロブリンをコードする核酸を化学的に合成するか、または適当な供給源（例えば、抗体cDNAライブラリー、または本発明の抗体を発現するように選択されたハイブリドーマ細胞のような、抗体を発現する組織もしくは細胞から作成されるcDNAライブラリー、または単離される核酸、好ましくはポリA+RNA）から、配列の3'末端と5'末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用してPCR増幅により得られるか、または特定の遺伝子配列に特異的なポリヌクレオチドプローブを使用してクローニングして、抗体をコードするcDNAライブラリーから例えばcDNAクローンを同定することにより得られる。次に、PCRにより作成された増幅した核酸を、当該分野で公知の任意の方法により、複製可能なクローニングベクター中にクローニングしてもよい。
【０１２４】
いったん抗体のヌクレオチド配列が決定されると、抗体のヌクレオチド配列を、ヌクレオチド配列の操作について当該分野で公知の方法、例えば組換えDNA技術、部位特異的突然変異誘発、PCRなど（例えば、Sambrookら、1990, Molecular Cloning, A Laboratory Manual、第2版、コールドスプリングハーバーラボラトリー（Cold Spring Harbor Laboratory）、 コールドスプリングハーバー（Cold Spring Harbor）、ニューヨーク州、およびAusubelら、1998, Current Protocols in Molecular Biology, ジョンワイリーアンドサンズ（John Wiley & Sons）、ニューヨーク州を参照、これらは、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）を使用して操作して、例えばアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を作成するための異なるアミノ酸配列を有する抗体を作成してもよい。
【０１２５】
具体例において、ルーチンの組換えDNA技術を使用して、1つ以上のCDRがフレームワーク領域内に挿入される。フレームワーク領域は、天然に存在するかまたは共通フレームワーク領域であり、好ましくはヒトフレームワーク領域である（例えば、ヒトフレームワーク領域のリストについては、Chothiaら、1998, J. Mol. Biol. 278:457-479を参照）。好ましくは、フレームワーク領域とCDRの組合せにより作成されるポリヌクレオチドは、RSV、PIVおよび／またはhMPV抗原に特異的に結合する抗体をコードする。ある実施形態においてフレームワーク領域内に1つ以上のアミノ酸置換を作成してもよく、好ましくはアミノ酸置換は、その抗原への抗体の結合を改良する。さらにそのような方法を使用して、鎖内ジスルフィド結合に参加する1つ以上の可変領域システイン残基のアミノ酸置換または欠失を作成して、1つ以上の鎖内ジスルフィド結合が欠如した抗体分子を作成してもよい。ポリヌクレオチドに対する他の変更は本発明により包含され、当業者の技術の範囲内である。
【０１２６】
4.1.3  抗体の組換え発現
本発明の方法で使用される抗体、その誘導体または類似体（例えば、本発明の抗体の重鎖または軽鎖、またはこれらの一部、または本発明の1本鎖抗体）の組換え発現には、抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの構築が必要である。本発明の抗体分子または抗体の重鎖もしくは軽鎖、またはその一部（好ましくは、重鎖または軽鎖可変ドメインを含有するが、必ずしもそうではない）をコードするポリヌクレオチドがいったん得られると、抗体分子の産生のためのベクターが、当該分野で公知の技術を使用して組換えDNA技術により産生される。すなわち、抗体をコードするヌクレオチド配列を含有するポリヌクレオチドを発現することによりタンパク質を調製する方法が、本明細書に記載される。抗体コード配列と適当な転写および翻訳調節シグナルを含有する発現ベクターを構築するのに、当該分野で公知の方法を使用することができる。これらの方法には、例えばin vitro組換えDNA技術、合成法、およびin vivo遺伝子組換えがある。すなわち本発明は、プロモーターに機能できる形で結合した、本発明の抗体分子、抗体の重鎖もしくは軽鎖、抗体の重鎖もしくは軽鎖可変ドメインまたはその一部、または重鎖もしくは軽鎖CDRをコードするヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターを提供する。そのようなベクターは、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含有し（例えば、PCT公報 WO86/05807；PCT公報 WO89/01036；およびUS Patent No. 5,122,464を参照）、抗体の可変ドメインは、全重鎖、全軽鎖、または全重鎖と全軽鎖の発現のために、そのようなベクター中にクローン化してもよい。
【０１２７】
発現ベクターは、従来法により宿主細胞中に移され、次にトランスフェクトされた細胞は、本発明の抗体を産生するために従来法により培養される。すなわち本発明は、異種プロモーターに機能できる形で結合した、本発明の抗体もしくはその断片、その重鎖もしくは軽鎖、もしくはその一部、または本発明の1本鎖抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する宿主細胞を含む。2本鎖抗体の発現のための好適な実施形態において、重鎖と軽鎖をコードするベクターが、後述のように全免疫グロブリン分子の発現のために宿主細胞中で同時発現される。
【０１２８】
本発明の抗体分子を発現するのに、多くの宿主−発現ベクター系が使用される（例えば、US Patent No. 5,807,715を参照）。そのような宿主−発現ベクター系は、目的のコード配列が産生され次に精製されるビヒクルであるが、また適当なヌクレオチドコード配列で形質転換またはトランスフェクトされると本発明の抗体分子をin situで発現する細胞でもある。これらには、特に限定されないが、抗体コード配列を含有する組換えバクテリオファージDNA、プラスミドDNAまたはコスミドDNA発現ベクターで形質転換された細菌（例えば、大腸菌（E. coli）および枯草菌（B. subtilis））；抗体コード配列を含有する組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、サッカロミセス・ピキア（Saccharomyces Pichia））；抗体コード配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）が感染した昆虫細胞系；組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、CaMV；タバコモザイクウイルス、TMV）が感染したか、または抗体コード配列を含有する組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Tiプラスミド）で形質転換された植物細胞系；哺乳動物細胞のゲノムから得られるプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）または哺乳動物ウイルスから得られるプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター；ワクシニアウイルス7.5Kプロモーター）を含有する組換え発現構築体を有する哺乳動物細胞系（例えば、COS、CHO、BHK、293、NS0、および3T3細胞）がある。好ましくは、大腸菌（Escherichia coli）のような細菌細胞、およびさらに好ましくは真核細胞（特に組換え抗体分子の発現のために）が、組換え抗体分子の発現のために使用される。例えば、ヒトサイトメガロウイルスからの主要前早期遺伝子プロモーター要素のようなベクターと組合せた、チャイニーズハムスター卵巣細胞（CHO）のような哺乳動物細胞は、抗体の有効な発現系である（Foeckingら、1986, Gene 45:101；およびCockettら、1990, Bio/Technology 8:2）。具体例において、1つ以上のRSV抗原に免疫特異的に結合する抗体またはその断片をコードするヌク
レオチド配列の発現は、構成性プロモーター、誘導性プロモーター、または組織特異的プロモーターにより制御される。
【０１２９】
細菌系では、発現される抗体分子の使用目的に依存して、多くの発現ベクターが有効に選択される。例えば、抗体分子の医薬組成物の作成のために多量のそのようなタンパク質が産生される時、容易に精製可能な高レベルの融合タンパク質生成物の発現を指令するベクターが好ましい。そのようなベクターには、特に限定されないが、大腸菌（E. coli）発現ベクターpUR278（Rutherら、1983, EMBO 12:1791）（ここで抗体コード配列は、lacZコード配列のフレーム内でベクターに個別に連結されて、その結果融合タンパク質が産生される）；pINベクター（Inouye & Inoue、 1985, Nucleic Acids Res. 13:3101-3109；VAn Heeke & Schuster, 1989, J. Biol. Chem. 24:5503-5509）などがある。pGEXベクターもまた、グルタチオン5-トランスフェラーゼ（GST）との融合タンパク質として外来ポリペプチドを発現するのに使用される。一般にそのような融合タンパク質は可溶性であり、アガロースビーズへの吸着と結合、および次に遊離のグルタチオンの存在下で溶出することにより、溶解細胞から容易に精製することができる。pGEXベクターは、トロンビンまたは第Xa因子を含むように設計され、その結果クローン化された標的遺伝子産物を、GST残基から放出することができる。
【０１３０】
昆虫系では、外来遺伝子を発現するためのベクターとして、オートグラファ・カリホルニア（Autographa california）核ポリヘドロシスウイルス（AcNPV）が使用される、このウイルスはスポドプテラ・フルギペルダ（Spodoptera frugiperda）細胞中で増殖する。抗体コード配列を、個別にウイルスの非必須領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）中にクローン化し、AcNPVプロモーター（例えばポリヘドリンプロモーター）の制御下に置く。
【０１３１】
哺乳動物宿主細胞では、多くのウイルスベースの発現系が使用される。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合は、目的の抗体コード配列は、アデノウイルス転写／翻訳制御複合体（例えば、後期プロモーターと三連リーダー配列）に連結される。次にこのキメラ遺伝子は、in vitroまたはin vivo組換えによりアデノウイルスゲノム中に挿入される。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域E1またはE3）への挿入により組換えウイルスが得られ、これは生存活性があり感染宿主中で抗体分子を発現することができる（例えば、Logan & Shenk，1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:355-359を参照）。挿入された抗体コード配列の効率的な翻訳のために、特異的開始シグナルも必要である。これらのシグナルには、ATG開始コドンと隣接配列がある。さらに開始コドンは、全挿入体の翻訳を確保するために、所望のコード配列の読みとり枠と同調していなければならない。これらの外来翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、種々の起源（天然と合成の両方）でよい。発現の効率は、適切な転写増強要素、転写ターミネーターなどを含めることにより増強される（例えば、Bittnerら、1987, Methods in Enzymol. 153:51-544）。
【０１３２】
さらに、挿入された配列の発現を調節し、所望の特異的な方法で遺伝子産物を修飾し処理する宿主細胞株が選択される。タンパク質生成物のそのような修飾（例えば、グリコシル化）および処理（例えば、切断）は、タンパク質の機能にとって重要である。異なる宿主細胞は、翻訳後プロセシングとタンパク質および遺伝子産物の修飾のための特徴的かつ特異的な機構を有する。発現される外来タンパク質の正しい修飾とプロセシングを確保するために、適切な細胞株または宿主系を選択することができる。このために、1次転写体の正しいプロセシング、遺伝子産物のグリコシル化およびリン酸化のための細胞機構を有する真核生物宿主細胞が使用される。そのような哺乳動物宿主細胞には、特に限定されないが、CHO、VERY、BHK、Hela、COS、MDCK、293、3T3、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT2O、およびT47D、NS0（免疫グロブリン鎖を内因性に産生しないマウスミエローマ細胞株）、CRL7O3OおよびHsS78Bst細胞がある。
【０１３３】
組換えタンパク質の長期の高収率産生のために、安定な発現が好ましい。例えば、抗体分子を安定に発現する細胞株を作成してもよい。ウイルスの複製開始点を含有する発現ベクターを使用する代わりに、適切な発現制御要素（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）と選択マーカーにより制御されるDNAで、宿主細胞を形質転換してもよい。外来DNAの導入後に、作成した細胞を強化培地中で1〜2日間増殖させ、次に選択培地に変える。組換えプラスミド中の選択マーカーは、選択に対する耐性を与え、細胞がプラスミドをその染色体内に安定に組み込むことを可能にし、増殖して細胞増殖巣を形成し、これは次にクローン化され細胞株中に拡張される。この方法は、抗体分子を発現する細胞株を作成するのに有利に使用される。そのような作成細胞株は、抗体分子と直接または間接に相互作用する組成物のスクリーニングと評価に、特に有用である。
【０１３４】
多くの選択系が使用され、特に限定されないが、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Wiglerら、1977, Cell 11:223）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Szybalska & Szybalski, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 48:202）、およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Lowyら、1980, Cell 22:8-17）遺伝子を、それぞれtk-、hgprt-、またはaprt-細胞中で使用することができる。また抗代謝物耐性を、以下の遺伝子の選択の基礎として使用してもよい：dhfr、メソトレキセートに耐性を付与する（Wiglerら、1980, Natl. Acad. Sci. USA 77:357；O'Hareら、1981，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:1527）；gpt、これは、ミコフェノール酸に対する耐性を付与する（Mulligan & Berg, 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:2072）；neo、これはアミノグリコシドG-418に対する耐性を付与する（WuとWu, 1991, Biotherapy, 3:87-95；Tlstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596；Mulligan, 1993, Science 260:926-932；およびMorganとAnderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62:191-217；May, 1993, TIB TECH 11(5):155-215）；およびhygro、これはヒグロマイシンに対する耐性を付与する（Santerreら、1984, Gene 30:147）。所望の組換えクローンを選択するのに、組換えDNA技術の分野で一般的に知られている方法をルーチンに応用してもよく、そのような方法は、例えばAusubelら、Current Protocols in Molecular Biology, ジョンワイリーアンドサンズ（John Wiley & Sons）、NY (1993)；Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990)；および第12章と13章、Dracopoliら、Current Protocols in Human Genetics, ジョンワイリーアンドサンズ（John Wiley and Sons）、NY (1994)；Colberre-Garapinら、1981, J. Mol. Biol. 150:1、これらは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０１３５】
抗体分子の発現レベルは、ベクター増幅により上昇させることができる（総説については、BebbingtonとHentschel, The Use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning, Vol. 3 (アカデミックプレス（Academic Press）、ニューヨーク、1987））。抗体を発現するベクター系のマーカーが増幅可能な時、宿主細胞の培養物中に存在するインヒビターのレベルの上昇は、マーカー遺伝子のコピー数を増加させる。増幅された領域は抗体遺伝子と関連するため、抗体の産生も増加するであろう（Crouseら, 1983, Mol. Cell. Biol. 3:257）。
【０１３６】
宿主細胞は、本発明の2つのベクター（重鎖由来のポリペプチドをコードする第1のベクターと、軽鎖由来のポリペプチドをコードする第2のベクター）と同時トランスフェクトしてもよい。この2つのベクターは、重鎖と軽鎖ポリペプチドの等しい発現を可能にする同一の選択マーカーを含有してもよい。あるいは重鎖と軽鎖ポリペプチドの両方をコードし、かつこれを発現することができる単一のベクターを使用してもよい。そのような状況において、毒性の遊離の重鎖が過剰になるのを避けるために、軽鎖を重鎖の前におくべきである（Proudfoot, 1986, Nature 322:52；およびKohler, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:2197）。重鎖と軽鎖のコード配列は、cDNAまたはゲノムDNAを含有してもよい。
【０１３７】
本発明の方法で使用される抗体分子がいったん組換え発現により産生されると、これは免疫グロブリン分子の精製について当該分野で公知の任意の方法、例えばクロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、特にプロテインＡ後の特異的抗原の親和性、およびサイズカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、示差的溶解度、またはタンパク質の精製のための他の標準的方法により、精製される。さらに、本発明の抗体またはその断片は、精製を促進するために、本明細書に記載のまたは当該分野で公知の異種ポリペプチド配列に融合してもよい。
【０１３８】
4.1.4 Bite技術
ある実施形態において本発明の方法で使用される抗体および本発明の医薬組成物の抗体は、二重特異的Ｔ細胞エンゲージャー（BiTE）である。二重特異的Ｔ細胞エンゲージャー（BiTE）は、標的の抗原特異的排除のためにＴ細胞を再指令する。BiTE分子は、分子の一端にＴ細胞抗原（例えばCD3）に結合する抗原結合ドメインと、標的細胞上の抗原に結合する抗原結合ドメインとを有する。BiTE分子は最近WO99/54440に記載された（これは参照することにより本明細書に組み込まれる）。この刊行物は、CD19とCD3抗原（CD19×CD3）の結合部位を含む新規1本鎖多官能性ポリペプチドを記載する。この分子は2つの抗体から得られ、1つはＢ細胞上のCD19に結合し、1つはＴ細胞上のCD3に結合する抗体である。これらの異なる抗体の可変領域はポリペプチド配列により連結され、こうして1つの分子を作成する。また特異的結合ドメインの可変重鎖（VH）と軽鎖（VL）を可撓性リンカーと連結して、1本鎖二重特異的抗体を作成することが記載されている。
【０１３９】
本発明の実施形態において、目的のポリペプチド(例えば、MPV、RSVおよび／またはPIVの抗原）に免疫特異的に結合する抗体またはその断片は、BiTE分子の一部を含む。例えば目的のポリペプチド(例えば、MPV、RSVおよび／またはPIVの抗原）に特異的に結合する抗体のVHおよび／またはVL（好ましくはsvFV）は、上記の分子のように抗CD3結合部分に融合することができ、こうして目的のポリペプチド(例えば、MPV、RSVおよび／またはPIVの抗原）を標的とするBiTE分子が作成される。目的のポリペプチド(例えば、MPV、RSVおよび／またはPIVの抗原）に対する抗体の可変重鎖および／または軽鎖以外に、目的のポリペプチド(例えば、MPV、RSVおよび／またはPIVの抗原）に結合する他の分子は、BiTE分子を含み、例えば抗ウイルス化合物がある。別の実施形態においてBiTE分子は、他のＴ細胞抗原（CD3以外）に結合する分子を含む。例えばＴ細胞抗原（例えば、CD2、CD4、CD8、CD11a、TCRおよびCD28）に免疫特異的に結合するリガンドおよび／または抗体は、本発明の一部であると考えられる。このリストは網羅的なものではなく、Ｔ細胞抗原に免疫特異的に結合することができる他の分子がBiTE分子の一部として使用できることを例示するのみである。これらの分子は、抗体または天然のリガンドのVHおよび／またはVL部分を含む（例えばその天然のリガンドがCD3であるLFA3）。BiTE分子はアンタゴニストでもよい。
【０１４０】
本発明で使用される「結合ドメイン」は、未変性の抗体、遊離のscFv断片、またはこれらの対応する免疫グロブリン鎖（好ましくはVH鎖）のようなエピトープに特異的に結合できる3次元構造を含むドメインを示す。すなわち該ドメインは、抗体または免疫グロブリン鎖のVHおよび／またはVLドメイン、好ましくは少なくともVHドメイン、またはさらに好ましくは可撓性ポリペプチドリンカー（scFv）によりリンカーされるVHとVLドメインを含むことができる。一方目的のポリペプチドに含有される該結合ドメインは、Ｔ細胞または細胞性抗原上の抗原を認識する抗体または免疫グロブリン鎖の少なくとも1つの相補性決定領域（CDR）を含有してもよい。この点で、目的のポリペプチド中に存在する結合ドメインは抗体から得られるのみでなく、他のＴ細胞または細胞性抗原結合タンパク質（例えば、天然に存在する表面受容体またはリガンド）から得られる。本発明の実施形態において、上記ポリペプチドの該第1および第2のドメインは、天然の抗体からのVHおよびVL領域を模倣するかまたはこれらに対応する。目的のポリペプチドの結合部位を与える抗体は、例えばモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異的抗体、合成抗体、抗体断片（例えばFab、FvまたはscFv断片など）、またはこれらの任意の化学修飾した誘導体でもよい。
【０１４１】
4.1.5 抗体コンジュゲート
ある実施形態において、本発明の方法で使用される抗体またはその断片は、融合タンパク質を作成するために、異種ポリペプチド（またはその部分、好ましくは少なくとも10、少なくとも20、少なくとも30、少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、少なくとも90、または少なくとも100アミノ酸のポリペプチド）に、組換え法で融合したかまたは化学的に結合している（共有結合および非共有結合コンジュゲートを含む）。融合は必ずしも直接的ではなくて、リンカー配列を介してもよい。例えば特定の細胞表面受容体に特異的な抗体に、この抗体を融合または結合させることにより、in vitroまたはin vivoで特定の種類の細胞（例えば、呼吸上皮細胞）に異種ポリペプチドを標的化するのに使用される。異種ポリペプチドに融合または結合した抗体はまた、当該分野で公知のin vitroイムノアッセイおよび精製法で使用される。例えば、PCT公報WO93/21232；EP439,095；Naramuraら、Immunol. Lett. 39:91-99 (1994)；US Patent No. 5,474,981；Gilliesら、PNAS 89:1428-1432 (1992)；およびFellら、J. Immunol. 146:2446-2452 (1991)を参照されたい（これらは、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０１４２】
ある実施形態において、抗RSV抗原抗体は抗体コンジュゲートである。他の実施形態において、抗PIV抗原抗体は抗体コンジュゲートである。他の実施形態において、抗hMPV抗原抗体は抗体コンジュゲートである。
【０１４３】
本発明の方法で使用される抗体またはその断片の追加の融合タンパク質は、遺伝子シャフリング、モチーフシャフリング、エキソンシャフリング、および／またはコドンシャフリング（まとめて「DNAシャフリング」と呼ぶ）の技術により作成される。本発明の抗体またはその断片（例えば、より大きい親和性とより小さい解離速度を有する抗体または抗体結合断片）の活性を改変するのに、DNAシャフリングを使用してもよい。一般的には、US Patent No. 5,605,793；5,811,238；5,830,721；5,834,252；および5,837,458、およびPattenら、Curr. Opinion Biotechnol. 8:724-33 (1997)；Harayama、Trends Biotechnol. 16(2):76-82 (1998)；Hanssonら、J. Mol. Biol. 287:265-76 (1999)；およびLorenzoとBlasco、Biotechniques 24(2):308-13 (1998)を参照されたい（これらの各特許と文献は、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。ある実施形態において、抗体もしくはその抗原結合断片、またはコードされた抗体もしくはその抗原結合断片は、エラーを受けやすいPCRによるランダム突然変異誘発、ランダムヌクレオチド挿入、または他の方法後に組換えを行うことにより改変してもよい。別の実施形態において、抗体もしくは抗体断片をコードするポリヌクレオチドの1つ以上の部分（この部分は、RSV、PIVおよび／またはhMPV抗原に免疫特異的に結合する）を、1つ以上の異種分子の1つ以上の成分、モチーフ、セクション、部分、ドメイン、断片などと組換えてもよい。
【０１４４】
さらに本発明の方法で使用される抗体またはその断片は、マーカー配列（例えば、ペプチド）に融合させて、精製を容易にすることができる。好適な実施形態においてマーカーアミノ酸配列は、例えば特にpQEベクター（QIAGEN, Inc., 9259 Eton Avenue, Chatsworth, CA, 91311）のようなヘキサヒスチジンペプチドであり、その多くは市販されている。例えばGentzら、1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821-824が記載のように、ヘキサヒスチジンは、融合タンパク質の便利な精製法となる。精製に有用な他のペプチドタグには、特に限定されないが血球凝集素「HA」タグがあり、これはインフルエンザウイルス血球凝集素タンパク質由来のエピトープに対応する（Wilsonら、1984, Cell 37:767）。
【０１４５】
抗体またはその断片は、例えば特に限定されないが細胞毒素（例えば、細胞増殖抑制剤または細胞破壊剤）、治療薬、または放射性金属イオン（例えば、アルファ放射体）のような治療薬部分に結合してもよい。細胞毒素または細胞毒性物質には、特に限定されないが細胞に有害な任意の物質がある。例としては、特に限定されないがパクリタキセル、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、1-ジヒドロテストステロン、糖質コルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロパノロール、およびプロマイシン、およびこれらの類似体もしくは同族体がある。治療薬には、特に限定されないが抗代謝物（例えば、メソトレキセート、6-メルカプトプリン、6-チオグアニン、シタラビン、5-フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパクロランブシル、メルファラン、カルムスチン（BSNU）とロムスチン（CCNU）、シクロトホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびシスジクロロジアミン白金(II)（DDP）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前は、ダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（AMC））、および抗分裂剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）、および抗ウイルス剤、例えば特に限定されないが、ヌクレオシド類似体（例えば、ジドブジン、アシクロビル、ガングシクロビル、ビダラビン、イドクスリジン、トリフルリジンおよびリバビリン）、ならびにフォスカルネット、アマンタジン、リマンタジン、サキナビル、インジナビル、リトナビル、およびアルファインターフェロンがある。
【０１４６】
さらに、本発明の方法で使用される抗体またはその断片は、特定の生物学的応答を修飾する治療薬または薬剤部分に結合してもよい。治療薬または薬剤部分は、古典的な化学治療薬に限定されるものではない。例えば、薬剤部分は、所望の生物活性を有するタンパク質またはポリペプチドでもよい。そのようなタンパク質には、特に限定されないが例えば、毒素、例えば、アブリン、リシンA、シュードモナス外毒素、またはジフテリア毒素；タンパク質、例えば腫瘍壊死因子、α-インターフェロン、β-インターフェロン、神経増殖因子、血小板由来増殖因子、組織プラスミノーゲンアクチベータ、アポトーシス剤（例えば、TNF-α、TNF-β、AIMI（国際特許公報WO97/33899を参照）、AIMII（国際特許公報WO97/34911を参照）、Fasリガンド（Takahashiら、J. Immunol. 6:1567-1574）、およびVEGI（国際特許公報WO99/23105を参照））、血栓剤もしくは抗血管剤、例えばアンギオスタチンまたはエンドスタチン；生物学的応答調節物質、例えばリンホカイン（例えば、インターロイキン-1（「IL-1」）、インターロイキン-2（「IL-2」）、インターロイキン-6（「IL-6」）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「GM-CSF」）、および顆粒球コロニー刺激因子（「G-CSF」））、または増殖因子（例えば、成長ホルモン（「GH」）がある。
【０１４７】
そのような治療薬部分を抗体に結合させる方法は当該分野で公知であり、例えばArnonら、「癌治療の薬剤の免疫ターゲティングのためのモノクローナル抗体」、Monoclonal antibodies And Cancer Therapy、Reisfeldら（編）、243-56頁（Alan R. Liss, Inc. 1985）；Hellstromら、「薬剤送達のための抗体」、Controlled Drug Delivery（第2版）、Robinsonら（編）、623-53頁（Marcel Dekker, Inc. 1987）；Thorpe、「癌治療における細胞障害性物質の抗体担体：総説」、Monoclona Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, Pincheraら（編）、475-506頁（1985）；「癌治療における放射能標識抗体の治療的使用の解析、結果および将来展望」、Monoclona Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwinら（編）、303-16頁（アカデミックプレス（Academic Press）、1985）、およびThorpeら、1982, Immunol. Rev. 62:119-58を参照されたい。
【０１４８】
そこに結合した治療薬部分があるかまたは無い抗体またはその断片は、単独でまたは細胞障害性因子および／またはサイトカインと組合せて、治療薬として使用することができる。
【０１４９】
あるいは抗体は、Segal（US Patent No. 4,676,980）（これは、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載のように、抗体を第2の抗体に結合させて、抗体ヘテロコンジュゲートを作成することができる。
【０１５０】
抗体はまた、固体支持体に結合してもよく、これは、イムノアッセイまたは標的抗原の精製に特に有用である。このような固体支持体には、特に限定されないが、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、塩化ポリビニル、またはポリプロピレンがある。
【０１５１】
4.1.6 抗RSV抗原抗体
本発明の方法で使用される抗RSV抗原抗体は、RSVの抗原に免疫特異的に結合する。ある実施形態において抗RSV抗原抗体は、RSVのA群のRSV抗原に免疫特異的に結合する。ある実施形態において抗RSV抗原抗体は、RSVのB群のRSV抗原に免疫特異的に結合する。ある実施形態において抗体は、他の群の類似の抗原と交差反応する1つの群のRSVの抗原に結合する。
【０１５２】
ある実施形態において抗RSV抗原抗体は、RSV核タンパク質、RSVホスホタンパク質、RSVマトリックスタンパク質、RSV小疎水性タンパク質、RSV RNA依存性RNAポリメラーゼ、RSV Fタンパク質、および／またはRSV Gタンパク質に免疫特異的に結合する。
【０１５３】
ある実施形態において抗RSV抗原抗体は、RSV核タンパク質、RSVホスホタンパク質、RSVマトリックスタンパク質、RSV小疎水性タンパク質、RSV RNA依存性RNAポリメラーゼ、RSV Fタンパク質、またはRSV Gタンパク質の対立遺伝子変種に結合する。
【０１５４】
ある実施形態において抗RSV抗原抗体は、特に例えば配列番号390のアミノ酸配列を有するRSV結合糖タンパク質；例えば配列番号391のアミノ酸配列を有するRSV融合糖タンパク質；例えば配列番号392のアミノ酸配列を有するRSV小疎水性タンパク質；例えば配列番号393のアミノ酸配列を有するRSV RNAポリメラーゼベータサブユニット（大構造タンパク質）（Lタンパク質）；例えば配列番号394のアミノ酸配列を有するRSVホスホタンパク質P；例えば配列番号395のアミノ酸配列を有するRSV結合糖タンパク質G；例えば配列番号396のアミノ酸配列を有するRSVヌクレオカプシドタンパク質；例えば配列番号397のアミノ酸配列を有するRSV核タンパク質（N）；および／または、例えば配列番号398のアミノ酸配列を有するRSVマトリックスタンパク質に免疫特異的に結合する。
【０１５５】
ある実施形態において抗RSV抗原抗体は、配列番号390の結合糖タンパク質；配列番号391の融合糖タンパク質；配列番号392の小疎水性タンパク質；配列番号393のRNAポリメラーゼベータサブユニット（大構造タンパク質）（Lタンパク質）；配列番号394のホスホタンパク質P；配列番号395の結合糖タンパク質G；配列番号396のヌクレオカプシドタンパク質；配列番号397の核タンパク質（N）；および／または、例えば配列番号398のマトリックスタンパク質のアミノ酸配列に、少なくとも60％、70％、80％、90％、95％、または少なくとも98％同一であるアミノ酸配列からなるタンパク質／ポリペプチドに免疫特異的に結合する。ある実施形態において抗RSV抗原抗体は、配列番号390の結合糖タンパク質；配列番号391の融合糖タンパク質；配列番号392の小疎水性タンパク質；配列番号393のRNAポリメラーゼベータサブユニット（大構造タンパク質）（Lタンパク質）；配列番号394のホスホタンパク質P；配列番号395の結合糖タンパク質G；配列番号396のヌクレオカプシドタンパク質；配列番号397の核タンパク質（N）；および／または、例えば配列番号398のマトリックスタンパク質のアミノ酸配列に、多くても70％、80％、90％、95％、98％または多くても100％同一であるアミノ酸配列からなるタンパク質／ポリペプチドに免疫特異的に結合する。
【０１５６】
ある実施形態において抗RSV抗原抗体は、Youngらによる米国特許出願第09/724,531号（2000年11月28日出願）；09/996,288号（2001年11月28日出願）；および09/996,265号（2000年11月28日出願）、すべて標題「予防と治療のための抗RSV抗体の投与方法」（これらは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）の抗RSV抗原抗体であるか、またはこれらの方法により調製される。本発明の方法で使用できる安定化された抗体調製物の方法と組成物は、米国特許仮出願第60/388,921号（2002年6月14日出願）、および60/388,920号（2002年6月14日出願）（これらは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されている。
【０１５７】
ある実施形態において、RSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片は、SYNAGIS（登録商標）（Palivizumab）のFcドメインよりFcRn受容体に対してより大きい親和性を有するFcドメインを含む。そのような抗体は、米国特許出願第10/020,354号（2001年12月12日出願）（これは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０１５８】
ある実施形態において1つ以上の抗RSV抗原抗体は、特に限定されないがSYNAGIS（登録商標）（Palivizumab）を含む。ある実施形態において1つ以上の抗RSV抗体は、特に限定されないがA4B4（セクション4.1.5を参照）を含む。ある具体的な実施形態において抗RSV抗原抗体は、AFFF；P12f2；P12f4；P11d4；Ale9；A12a6；A13c4；A17d4；A4B4；1X-493L1；FR H3-3F4；M3H9；Y10H6；DG；AFFF(1)；6H8；L1-7E5；L2-15B10；A13a11；A1h5；A4B4(1)；A4B4-F52S；またはA4B4L1FR-S28Rである。これらの抗体は、Youngらの国際出願公報WO02/43660、標題「予防と治療のための抗RSV抗体の投与法」に開示されている（これは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０１５９】
ある実施形態においてRSV抗原に結合する1つ以上の抗体は、SYNAGIS（登録商標）がRSV F糖タンパク質に対するより、RSV抗原に対してより大きい高結合活性および／または親和性を有する。ある実施形態においてRSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体は、任意のすでに公知の抗RSV抗原特異的抗体またはその抗原結合断片より、RSV抗原に対してより大きい親和性および／または結合活性（avidity）を示す。ある実施形態において抗RSV抗体はSYNAGIS（登録商標）ではない。
【０１６０】
本発明の方法について、少なくとも2×108 M-1、少なくとも2.5×108 M-1、少なくとも5×108 M-1、少なくとも109 M-1、少なくとも5×109 M-1、少なくとも1010 M-1、少なくとも5×1010 M-1、少なくとも1011 M-1、少なくとも5×1011 M-1、少なくとも1012 M-1、少なくとも5×1012 M-1、少なくとも1013 M-1、少なくとも5×1013 M-1、少なくとも1014 M-1、少なくとも5×1014 M-1、少なくとも1015 M-1、または少なくとも5×1015 M-1の親和性定数でRSV抗原に免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が使用できる。具体的な実施形態においてRSV抗原に免疫特異的に結合する抗体はSYNAGIS（登録商標）であり、これはRSV F糖タンパク質に結合する。本発明はまた、(i)少なくとも2×108 M-1、少なくとも2.5×108 M-1、少なくとも5×108 M-1、少なくとも109 M-1、少なくとも5×109 M-1、少なくとも1010 M-1、少なくとも5×1010 M-1、少なくとも1011 M-1、少なくとも5×1011 M-1、少なくとも1012 M-1、少なくとも5×1012 M-1、少なくとも1013 M-1、少なくとも5×1013 M-1、少なくとも1014 M-1、少なくとも5×1014 M-1、少なくとも1015 M-1、または少なくとも5×1015 M-1の親和性定数でRSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体、および(ii)少なくとも2×108 M-1、少なくとも2.5×108 M-1、少なくとも5×108 M-1、少なくとも109 M-1、少なくとも5×109 M-1、少なくとも1010 M-1、少なくとも5×1010 M-1、少なくとも1011 M-1、少なくとも5×1011 M-1、少なくとも1012 M-1、少なくとも5×1012 M-1、少なくとも1013 M-1、少なくとも5×1013 M-1、少なくとも1014 M-1、少なくとも5×1014 M-1、少なくとも1015 M-1、または少なくとも5×1015 M-1の親和性定数でRSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体とを含む医薬組成物を提供する。
【０１６１】
RSV抗原に免疫特異的に結合する抗体は当該分野で公知であることを認識されたい。例えばSYNAGIS（登録商標）は、小児患者のRSV感染の予防のために現在使用されているヒト化モノクローナル抗体である。具体的な実施形態において本発明の方法で使用される抗体は、SYNAGIS（登録商標）またはその抗体結合断片である（例えば、SYNAGIS（登録商標）の1つ以上の相補性決定領域（CDR）、好ましくは可変ドメインを含有する）。SYNAGIS（登録商標）のアミノ酸配列は、例えばJohnsonら、1997, J. Infect. Diseases 176:1215-1224、およびUS Patent No. 5,824,307、およびYoungらの国際出願公報WO02/43660、標題「予防と治療のための抗RSV抗体の投与法」に開示されている（これらは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０１６２】
ある実施形態において本発明の方法と組成物で使用される抗体またはその断片は、RSVの株に関係なく1つ以上のRSV抗原に免疫特異的に結合する。特に抗RSV抗原抗体は、ヒトRSV AおよびヒトRSV Bの抗原に結合する。ある実施形態において抗RSV抗原抗体は、別のRSV株に対して1つのRSV株からのRSV抗原に結合する。特に抗RSV抗原抗体はヒトRSV Aの抗原に結合し、ヒトRSV Bには結合せず、逆も真である。具体的な実施形態において抗体またはその抗原結合断片は、RSV F糖タンパク質、G糖タンパク質、またはSHタンパク質に免疫特異的に結合する。ある実施形態において抗RSV抗原抗体は、RSV F糖タンパク質に免疫特異的に結合する。別の好適な実施形態において抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片は、RSV F糖タンパク質のA、B、C、I、II、IV、V、またはVI抗原部位に結合する（例えばLopezら、1998, J. Virol. 72:6922-6928を参照、これは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。ある実施形態において抗RSV抗原抗体は、RSV核タンパク質、RSVホスホタンパク質、RSVマトリックスタンパク質、RSV小疎水性タンパク質、RSV RNA依存性RNAポリメラーゼ、RSV Fタンパク質、またはRSV Gタンパク質に結合する。
【０１６３】
ある実施形態において抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片は、1つ以上のRSV抗原に対して高結合親和性を有する。具体的な実施形態において抗RSV抗体またはその抗原結合断片は、結合定数またはkon速度（抗体（Ab）＋抗原（Ag）kon→Ab-Ag）<|<BOX1>|>が、少なくとも105 M-1s-1、少なくとも5×105 M-1s-1、少なくとも106 M-1s-1、少なくとも5×106 M-1s-1、少なくとも107 M-1s-1、少なくとも5×107 M-1s-1、または少なくとも5×108 M-1s-1である。好適な実施形態において本発明の抗体またはその断片は、konが少なくとも2×105 M-1s-1、少なくとも5×105 M-1s-1、少なくとも106 M-1s-1、少なくとも5×106 M-1s-1、少なくとも107 M-1s-1、少なくとも5×107 M-1s-1、または少なくとも5×108 M-1s-1である。
【０１６４】
別の実施形態において抗RSV抗原抗体またはその断片は、koff速度（Ab（Ab）＋Ag）が10-1s-1未満、5×10-1 s-1未満、10-2 s-1未満、5×10-2 s-1未満、10-3 s-1未満、5×10-3 s-1未満、10-4 s-1未満、5×10-4 s-1未満、10-5 s-1未満、5×10-5 s-1未満、10-6 s-1未満、5×10-6 s-1未満、10-7 s-1未満、5×10-7 s-1未満、10-8 s-1未満、5×10-8 s-1未満、10-9 s-1未満、5×10-9 s-1未満、または10-10 s-1未満である。好適な実施形態において抗RSV抗原抗体またはその断片は、konが5×10-4 s-1未満、10-5 s-1未満、5×10-5 s-1未満、10-6 s-1未満、5×10-6 s-1未満、10-7 s-1未満、5×10-7 s-1未満、10-8 s-1未満、5×10-8 s-1未満、10-9 s-1未満、5×10-9 s-1未満、または10-10 s-1未満である。
【０１６５】
ある実施形態において本発明の方法で使用される抗体またはその断片は、1つ以上のVL CDRおよび／または1つ以上のVH CDR中に1つ以上のアミノ酸残基の置換を有するSYNAGIS（登録商標）のアミノ酸配列を含む。具体的な実施形態において本発明の方法で使用される抗体は、表3で太字で示し下線を引いているアミノ酸残基の1つ以上のアミノ酸残基置換を有するSYNAGIS（登録商標）のアミノ酸配列を含む。この実施形態においてアミノ酸残基の置換は、保存的でも非保存的でもよい。SYNAGIS（登録商標）のVHドメイン、VH CDR、VLドメインおよび／またはVL CDR中に置換を導入することによる作成される抗体または抗体断片は、in vitroおよびin vivoで、例えばRSV FAgに結合する能力、RSVを中和する能力、またはRSV感染が引き起こす1つ以上の症状を予防、治療または改善する能力について、試験することができる。
【０１６６】
表3. SYNAGIS（登録商標）のCDR配列
CDR                    配列
VH1                  TSGMSVG
VH2             DIWWDDKKDYNPSLKS
VH3                SMTTNWYFDV
VL1                KCQLSVGYMH
VL2                  DTSKLAS
VL3                 FQGSGYPFT
下線を引いたアミノ酸残基が、置換すべき好適な残基である。
【０１６７】
ある実施形態において1つ以上の抗RSV抗原抗体の異なるドメインのアミノ酸配列は以下の通りである：VHドメイン：配列番号422：VH CDR1：TAGMSVG；VH CDR2：DIWWDDKKHYNPSLKD；VH CDR3：DMIFNFYFDV；VLドメイン：配列番号423；VL CDR1：SASSRVGYMH；VL CDR2：DTLLLDS；VL CDR3：FQGSGYPFT。この抗体は、Youngらの国際出願公報No.: WO02/43660、標題「予防と治療のための抗RSV抗体の投与法」（これは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）にA4B4(1)として開示されている。
【０１６８】
ある実施形態において抗RSV抗原抗体は、AFFF；P12f2；P12f4；P11d4；Ale9；A12a6；A13c4；A17d4；A4B4；1X-493L1；FR H3-3F4；M3H9；Y10H6；DG；AFFF(1)；6H8；L1-7E5；L2-15B10；A13a11；A1h5；A4B4(1)；A4B4-F52S；またはA4B4L1FR-S28Rである。これらの抗体は、Youngらの国際出願公報No.: WO02/43660、標題「予防と治療のための抗RSV抗体の投与法」（これは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）にA4B4(1)として開示されている。
【０１６９】
4.1.7 抗hMPV抗原抗体
hMPV、またはhMPVのタンパク質またはその断片、類似体、誘導体もしくは同族体に免疫特異的に結合する抗体を、本発明の方法で使用することができる。哺乳動物MPVおよび哺乳動物MPVのタンパク質およびその同族体は、セクション4.1.7.1に記載される。
【０１７０】
4.1.7.1 hMPV
哺乳動物メタニューモウイルスの構造的性状解析
哺乳動物MPVは、パラミクソウイルス科（paramyxoviridae）のニューモウイルス亜科（Pneumovirinae）に属するマイナスセンス1本鎖RNAである。さらに哺乳動物MPVは系統発生的にメタニューモウイルス属に属するものとして同定され、ここで哺乳動物メタニューモウイルスは、系統発生的に、鳥類鼻気管炎の原因物質である七面鳥鼻気管炎ウイルスより、CNCM（パリ）にI-2614として寄託されているウイルス分離株（配列番号19）に、より密接に関連している。ウイルスは、例えばウイルスの核酸配列情報を得て、これを系統発生分析で試験することにより、系統発生的にメタニューモウイルス属に対応するとして同定される。当業者に公知の任意の方法を使用して、ウイルス株の間の系統発生的関係を決定することができる。WO02/057302として公開された国際特許出願PCT/NL02/00040（これは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）に、他の方法が開示されている。特にPCT/NL02/00040は、12頁27行〜19頁29行（これは参照することにより本明細書に組み込まれる）で系統発生解析に適した核酸配列を開示している。ウイルスは、下記でさらに詳述されるような配列類似性の基づいて哺乳動物MPVとしてさらに同定することができる。
【０１７１】
具体的な実施形態において哺乳動物MPVはヒトMPVである。
【０１７２】
本明細書に開示の哺乳動物MPVに対するウイルスの系統発生的関連性と配列類似性以外に、本明細書に開示の哺乳動物MPVのゲノム構成に対するウイルスのゲノム構成の類似性を使用して、ウイルスを哺乳動物MPVとして同定することもできる。ある実施形態において哺乳動物MPVのゲノム構成は、パラミクソウイルス科（paramyxoviridae）のニューモウイルス亜科（Pneumovirinae）内のニューモウイルスのゲノム構成とは異なる。メタニューモウイルスとニューモウイルスの2つの属の分類は主にその遺伝子配置に基づく：メタニューモウイルスは一般的にNS1またはNS2のような非構造タンパク質が欠如し（Randhawaら、1997, J. Virol. 71:9849-9854も参照）、遺伝子の順序はニューモウイルスとは異なる（RSV：3'-NS1-NS2-N-P-M-SH-G-F-M2-L-5'、APV：3'-N-P-M-F-M2-SH-G-L-5'）（Lungら、1992, J. Gen. Virol. 73:1709-1715；Yuら、1992, Virology 186:426-434；Randhawaら、1997, J. Virol. 71:9849-9854）。
【０１７３】
さらに本発明の哺乳動物MPVは、その免疫学的性質により同定することができる。ある実施形態において、哺乳動物MPVを中和できる哺乳動物MPVに対する特異的抗血清を作成することができる。哺乳動物MPVを中和することもできるMPVに対するモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体を作成することができる（WO02/057302を参照、これは参照することにより本明細書に組み込まれる）。
【０１７４】
本発明の哺乳動物MPVは、哺乳動物宿主すなわち哺乳動物培養細胞または哺乳動物に感染できる能力により、さらに性状解析される。APVと異なり哺乳動物MPVは、ニワトリや七面鳥中で複製しないかまたは低レベルでのみ複製する。しかし哺乳動物MPVは、哺乳動物宿主例えばマカークザル（cynomolgous macaques）中で複製する。より具体的なある実施形態において哺乳動物MPVは、哺乳動物宿主中で複製できる能力によりさらに性状解析される。より具体的なある実施形態において哺乳動物MPVは、哺乳動物MPVのゲノムにコードされるタンパク質を哺乳動物宿主に発現させる能力によりさらに性状解析される。さらに具体的な実施形態において哺乳動物MPVにより発現されるウイルスタンパク質は、哺乳動物宿主の細胞質膜中に挿入される。ある実施形態において本発明の哺乳動物MPVは哺乳動物宿主に感染することができ、哺乳動物MPVの新しい感染性ウイルス粒子を哺乳動物宿主に産生させることができる。本発明の哺乳動物MPVの機能的特徴のさらに詳細な説明については、下記を参照されたい。
【０１７５】
ある実施形態において電子顕微鏡でのウイルスの出現またはクロロホルムに対するその感受性を使用して、哺乳動物MPVとしてウイルスを同定することができる。本発明の哺乳動物MPVは、電子顕微鏡でパラミクソウイルス様粒子として現れる。哺乳動物MPVは、一貫してクロロホルムによる処理に対して感受性である；哺乳動物MPVはtMK細胞またはこれと機能的同等の細胞で培養することが最適であり、これは基本的にほとんどの細胞培養物中でトリプシン依存性である。さらに哺乳動物MPVは典型的な細胞障害作用（CPE）を有し、赤血球の分子種に対して血球凝集活性が欠如している。MPV分離株により誘導されるCPEは、hRSVにより誘導されるCPEと同様であり、特徴的なシンシチウム形成の後に細胞の迅速な内部破壊と培養プレートからの以後のはく離が起きる。ほとんどのパラミクソウイルスは血球凝集活性を有し、ほとんどのニューモウイルスはこれを持たない（Pringle, C.R.、The Paramyxoviruses；（D.W. Kingsbury）1-39中（プレヌム・プレス（Plenum Press）、ニューヨーク、1991））。哺乳動物MPVは、M2タンパク質をコードする核酸断片中に第2の重複ORF（M2-2）を含有する。この第2の重複ORFの存在は、Ahmadinaら、1999, J. Gen. Vir. 80:2011-2016中に示されるように他のニューモウイルス中に存在する。
【０１７６】
ある実施形態においてウイルス分離株は、以下の方法により哺乳動物MPVとして同定することができる。試験サンプルは、例えば動物またはヒトから得られる。次にサンプルを、ニューモウイルス亜科のウイルスの存在について試験する。ニューモウイルス亜科のウイルスが存在するなら、本明細書に記載のように哺乳動物MPVの任意の特徴、例えば特に限定されないが、哺乳動物MPVに対する系統発生的関連性、哺乳動物MPVのヌクレオチド配列とのヌクレオチド配列同一性、哺乳動物MPVのアミノ酸配列とのアミノ酸配列同一性／相同性、およびゲノム構成について試験することができる。さらにウイルスは、MPV分離株からの核酸配列を使用して交差ハイブリダイゼーション実験により、哺乳動物MPVに特異的なプライマーを使用してRT-PCRにより、または哺乳動物MPV分離株に対する抗体を使用して古典的交差血清学実験により、哺乳動物MPVとして同定することができる。他のある実施形態において哺乳動物MPVは、動物の抗血清による定量的中和により測定されるようなその免疫学的特殊性に基づいて同定することができる。抗血清は、例えば哺乳動物MPVに感染したフェレット、ブタまたはマカークザルから得ることができる。
【０１７７】
ある実施形態において血清型は、哺乳動物MPV以外のウイルスと交差反応しない。ある実施形態において血清型は、両方向に同種対異種の力価比＞16を示す。中和がいずれかまたは両方の方向に2つのウイルスの間である程度の交差反応（同種対異種の力価比が8または16）を示すなら、DNA配列の実質的な生物物理的／生化学的差が存在するなら血清型の特殊性が仮定される。中和がいずれかまたは両方の方向に2つのウイルスの間で顕著な交差反応（同種対異種の力価比が8より小さい）を示すなら、試験中の分離株の血清型の同一性が仮定される。本明細書においてMPV分離株00-1（CNCM（パリ）に寄託されている（配列番号19））としても知られている分離株I-2614は、プロトタイプとして使用することができる。
【０１７８】
ある実施形態においてウイルスは、配列または寄託により本明細書に開示されるウイルス分離株のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列と比較して、ウイルスタンパク質または核酸の配列相同性／同一性を用いて哺乳動物MPVとして同定することができる。特に、ウイルスのゲノムが、I-2614としてCNCM（パリ）に寄託されたウイルス分離株とパーセント核酸同一性（これは、APV-Cと比較して本発明において下記で同定されるLタンパク質、Mタンパク質、Nタンパク質、Pタンパク質またはFタンパク質をコードする核酸について本発明で同定されるパーセントより高い）を有する核酸配列を含有する時、ウイルスは哺乳動物MPVとして同定される（表4を参照）（PCT WO02/05302、12〜19頁を参照、これは参照することにより本明細書に組み込まれる）。理論に拘束されるつもりは無いが一般に、ウイルス種、特にRNAウイルス種は、しばしばウイルス群のメンバーが配列不均一性を示す準種を構成する。すなわちそのような個々の分離株は、APV-Cと比較するといくぶん異なるパーセントの配列同一性を有するかも知れないと予測される。
【０１７９】
今日までのMPVのタンパク質と同じファミリーの既知の他の任意のウイルスとの最も高いアミノ配列同一性は、APV-CとヒトMPVとの同一性である。ヒトMPVとAPV-Cの間では、図30に示す配列を比較する時推論されるように、マトリックスタンパク質のアミノ酸配列同一性は87％、核タンパク質について88％、ホスホタンパク質について68％、融合タンパク質について81％、およびポリメラーゼタンパク質の部分について56〜64％である。これらの最大値と比較してより高い相同性を有するタンパク質をコードするORFを含有するウイルス分離株は、哺乳動物MPVであると見なされる。他のウイルスと同様に、哺乳動物MPVの異なる分離株の間にある程度の変動がる。
【０１８０】
表4：MPVのORFと他のパラミクソウイルスのORFとのアミノ酸配列同一性
N        P        M        F        M2-1     M2-2     L
APV A       69       55       78       67       72       26       64
APV B       69       51       76       67       71       27       -2
APV C       88       68       87       81       84       56       -2
hRSV A      42       24       38       34       36       18       42
hRSV B      41       23       37       33       35       19       44
bRSV        42       22       38       34       35       13       44
PVM         45       26       37       39       33       12       -2
その他3     7-11     4-9      7-10     10-18    -4 -4       13-14
脚注：
1. 既知のGタンパク質とSHタンパク質で配列相同性が見つからなかったため除外した。
【０１８１】
2. 配列が入手できない。
【０１８２】
3. その他：ヒトパラインフルエンザウイルス2型と3型、センダイウイルス、麻疹ウイルス、nipahウイルス、アザラシジステンパーウイルス、およびニューカッスル病ウイルス。
【０１８３】
4. ウイルスゲノムにORFは無い。
【０１８４】
本発明の方法で使用される抗体を作成するための免疫原として、哺乳動物MPVの任意のタンパク質を使用することができる。ある実施形態において本発明の治療法で使用される抗体は、後述の哺乳動物MPVのタンパク質に免疫特異的に結合する。
【０１８５】
ある実施形態において哺乳動物MPVのSHタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号382（分離株NL/1/00のSHタンパク質：表5を参照）のアミノ酸配列と少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも45％、少なくとも50％、少なくとも55％、少なくとも60％、少なくとも65％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも98％、少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一である。配列番号382（分離株NL/1/00のSHタンパク質：表5を参照）と少なくとも30％同一であるSHタンパク質を含む単離されたマイナスセンス1本鎖RNAメタニューモウイルスは、哺乳動物宿主に感染することができる。ある実施形態において配列番号382（分離株NL/1/00のSHタンパク質：表5を参照）と少なくとも30％同一であるSHタンパク質を含む単離されたマイナスセンス1本鎖RNAメタニューモウイルスは、哺乳動物宿主中で複製することができる。ある実施形態において哺乳動物MPVは、配列番号382（分離株NL/1/00のSHタンパク質：表5を参照）と少なくとも30％同一であるSHタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含有する。
【０１８６】
ある実施形態において哺乳動物MPVのGタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号322（分離株NL/1/00のGタンパク質：表5を参照）のアミノ酸配列と少なくとも20％、少なくとも25％、少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも45％、少なくとも50％、少なくとも55％、少なくとも60％、少なくとも65％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも98％、少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一である。配列番号322（分離株NL/1/00のGタンパク質：表5を参照）と少なくとも20％同一であるGタンパク質を含む単離されたマイナスセンス1本鎖RNAメタニューモウイルスは、哺乳動物宿主に感染することができる。ある実施形態において配列番号322（分離株NL/1/00のGタンパク質：表5を参照）と少なくとも20％同一であるGタンパク質を含む単離されたマイナスセンス1本鎖RNAメタニューモウイルスは、哺乳動物宿主中で複製することができる。ある実施形態において哺乳動物MPVは、配列番号322（分離株NL/1/00のGタンパク質：表5を参照）と少なくとも20％同一であるGタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含有する。
【０１８７】
ある実施形態において哺乳動物MPVのLタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号330（分離株NL/1/00のLタンパク質：表5を参照）のアミノ酸配列と少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも98％、少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一である。配列番号330（分離株NL/1/00のLタンパク質：表5を参照）と少なくとも85％同一であるLタンパク質を含む単離されたマイナスセンス1本鎖RNAメタニューモウイルスは、哺乳動物宿主に感染することができる。ある実施形態において配列番号330（分離株NL/1/00のLタンパク質：表5を参照）と少なくとも85％同一であるLタンパク質を含む単離されたマイナスセンス1本鎖RNAメタニューモウイルスは、哺乳動物宿主中で複製することができる。ある実施形態において哺乳動物MPVは、配列番号330（分離株NL/1/00のLタンパク質：表5を参照）と少なくとも20％同一であるLタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含有する。
【０１８８】
ある実施形態において哺乳動物MPVのNタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号366のアミノ酸配列と少なくとも90％、少なくとも95％、または少なくとも98％同一である。配列番号366アミノ酸配列と少なくとも90％同一であるNタンパク質を含む単離されたマイナスセンス1本鎖RNAメタニューモウイルスは、哺乳動物宿主に感染することができる。ある実施形態において配列番号366とアミノ酸配列が少なくとも90％同一であるNタンパク質を含む単離されたマイナスセンス1本鎖RNAメタニューモウイルスは、哺乳動物宿主中で複製することができる。ある実施形態において哺乳動物MPVは、配列番号366のアミノ酸配列と少なくとも90％、少なくとも95％、または少なくとも98％同一であるNタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含有する。
【０１８９】
哺乳動物MPVのPタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号374のアミノ酸配列と少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％、または少なくとも98％同一である。配列番号374とアミノ酸配列が少なくとも70％同一であるPタンパク質を含む哺乳動物MPVは、哺乳動物宿主に感染することができる。ある実施形態において配列番号374とアミノ酸配列が少なくとも70％同一であるPタンパク質を含む哺乳動物MPVは、哺乳動物宿主中で複製することができる。アミノ酸同一性は、Pタンパク質の全長にわたって計算される。ある実施形態において哺乳動物MPVは、配列番号374のアミノ酸配列と少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％、または少なくとも98％同一であるPタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含有する。
【０１９０】
哺乳動物MPVのMタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号358のアミノ酸配列と少なくとも90％、少なくとも95％または少なくとも98％同一である。配列番号358とアミノ酸配列が少なくとも90％同一であるMタンパク質を含む哺乳動物MPVは、哺乳動物宿主に感染することができる。ある実施形態において配列番号358とアミノ酸配列が90％同一であるMタンパク質を含む単離されたマイナスセンス1本鎖RNAメタニューモウイルスは、哺乳動物宿主中で複製することができる。アミノ酸同一性は、Mタンパク質の全長にわたって計算される。ある実施形態において哺乳動物MPVは、配列番号358のアミノ酸配列と少なくとも90％、少なくとも95％、または少なくとも98％同一であるMタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含有する。
【０１９１】
哺乳動物MPVのFタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号314のアミノ酸配列と少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、または少なくとも98％同一である。配列番号314とアミノ酸配列が少なくとも85％同一であるFタンパク質を含む哺乳動物MPVは、哺乳動物宿主に感染することができる。ある実施形態において配列番号314とアミノ酸配列が85％同一であるFタンパク質を含む単離されたマイナスセンス1本鎖RNAメタニューモウイルスは、哺乳動物宿主中で複製することができる。アミノ酸同一性は、Fタンパク質の全長にわたって計算される。ある実施形態において哺乳動物MPVは、配列番号314のアミノ酸配列と少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、または少なくとも98％同一であるFタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含有する。
【０１９２】
哺乳動物MPVのM2-1タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号338のアミノ酸配列と少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、または少なくとも98％同一である。配列番号338とアミノ酸配列が少なくとも85％同一であるM2-1タンパク質を含む哺乳動物MPVは、哺乳動物宿主に感染することができる。ある実施形態において配列番号338とアミノ酸配列が85％同一であるM2-1タンパク質を含む単離されたマイナスセンス1本鎖RNAメタニューモウイルスは、哺乳動物宿主中で複製することができる。アミノ酸同一性は、M2-1タンパク質の全長にわたって計算される。ある実施形態において哺乳動物MPVは、配列番号338のアミノ酸配列と少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、または少なくとも98％同一であるM2-1タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含有する。
【０１９３】
哺乳動物MPVのM2-2タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号346のアミノ酸配列と少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％、または少なくとも98％同一である。配列番号346とアミノ酸配列が少なくとも60％同一であるM2-2タンパク質を含む単離された哺乳動物MPVは、哺乳動物宿主に感染することができる。ある実施形態において配列番号346とアミノ酸配列が60％同一であるM2-2タンパク質を含む単離されたマイナスセンス1本鎖RNAメタニューモウイルスは、哺乳動物宿主中で複製することができる。アミノ酸同一性は、M2-2タンパク質の全長にわたって計算される。ある実施形態において哺乳動物MPVは、配列番号346のアミノ酸配列と少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％、または少なくとも98％同一であるM2-1タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含有する。
【０１９４】
ある実施形態においてマイナスセンス1本鎖RNAメタニューモウイルスは、(i)配列番号366と少なくとも90％のアミノ酸配列同一性を有するNタンパク質；(ii)配列番号374と少なくとも70％のアミノ酸配列同一性を有するPタンパク質；(iii)配列番号358と少なくとも90％のアミノ酸配列同一性を有するMタンパク質；(iv)配列番号314と少なくとも85％のアミノ酸配列同一性を有するFタンパク質；(v)配列番号338と少なくとも85％のアミノ酸配列同一性を有するM2-1タンパク質；および(vi)配列番号346と少なくとも60％のアミノ酸配列同一性を有するM2-2タンパク質よりなる群から選択される、少なくとも2つのタンパク質、少なくとも3つのタンパク質、少なくとも4つのタンパク質、少なくとも5つのタンパク質、または6つのタンパク質をコードする。
【０１９５】
哺乳動物MPVはサブグループAとサブグループBの2つのサブグループに分けられ、2つのサブグループはそれぞれA1とA2、そしてB1とB2に分けられる。哺乳動物MPVが、分離株99-1（配列番号18）より分離株00-1（配列番号19）に系統発生的により近いなら、サブグループAのメンバーとして同定することができる。哺乳動物MPVが、分離株00-1（配列番号19）より分離株99-1（配列番号18）に系統発生的により近いなら、サブグループBのメンバーとして同定することができる。他の実施形態において個々のORFのヌクレオチド配列またはアミノ酸配列相同性を使用して、サブグループAまたはBに属するとして哺乳動物MPVを分類することができる。
【０１９６】
哺乳動物MPVの異なる分離株は4つの変種（変種A1、変種A2、変種B1、変種B2）に分けられる（図21と22を参照）。分離株00-1（配列番号19）は、哺乳動物MPVの変種A1の例である。分離株00-1（配列番号18）は、哺乳動物MPVの変種B1の例である。こうして哺乳動物MPVは、哺乳動物MPVの他の変種のメンバーに系統発生的に関連するより、変種の既知のメンバーに系統発生的により密接に関連するなら、特定の変種に属する。任意のORFおよびコードされるポリペプチドを、特定のサブグループまたは変種（N、P、L、M、SH、G、M2またはFポリペプチド）に属するとしてMPV分離株を型判定するのに使用してもよい。具体的な実施形態において変種への哺乳動物MPVの分類は、Gタンパク質の配列に基づく。理論に拘束されるつもりは無いが、哺乳動物MPVの異なる変種のGタンパク質の中の変動の程度が大きいため、Gタンパク質配列は、系統発生分析に非常に適している。
【０１９７】
本発明のある実施形態において配列相同性は、後述のようにある条件下でハイブリダイズする2つの配列の能力により決定される。哺乳動物MPVの核酸にハイブリダイズ可能な核酸、またはその逆相補体、またはその相補体は、配列相同性および互いの同一性を決定するために本発明の方法で使用することができる。ある実施形態において核酸は、高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズされる。
【０１９８】
ハイブリダイゼーション条件（例えば特に限定されないが、温度、塩濃度、pH、ホルムアミド濃度）は当業者に公知である。（例えば、Sambrookら、1989, 第9〜11章、モレキュラークローニング、実験室マニュアル（Molecular Cloning: A Laboratory Manual）、コールドスプリングハーバーラボラトリープレス（Cold Spring Harbor Laboratory Press）、コールドスプリングハーバー（Cold Spring Harbor）、ニューヨークを参照されたい。参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。ある実施形態においてハイブリダイゼーションは水溶液中で行われ、溶液のイオン強度は一定に維持されるが、ハイブリダイゼーション温度は、ハイブリダイズされる配列の間の配列相同性の程度に応じて変化される。互いに100％同一であり200塩基対より長いDNA配列については、ハイブリダイゼーションは完全なハイブリッドの融点（Tm）の約15〜25℃低い温度で行われる。融点（Tm）は以下の式を使用して計算される（BoltonとMcCarthy, 1962, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:1390）：
Tm＝81.5℃−16.6(log10[Na+])＋(%G+C)−0.63(％ホルムアミド)−(600/l)
ここで、(Tm)は融点であり、[Na+]はナトリウム濃度であり、G+Cはグアニンとシトシン含量であり、lは塩基対中のハイブリッドの長さである。配列間のミスマッチの影響は、Bonnerらの式を使用して計算することができる（Bonnerら、1973, J. Mol. Biol. 81:123-135）：ハイブリッド中の塩基のミスマッチの各1％について、融点は1〜1.5℃低下する。
【０１９９】
すなわち、2つの配列がハイブリダイズする温度を測定することにより、当業者はある配列が既知の配列にどの程度似ているかのを推定することができる。これは、例えば経験的に決定されたハイブリダイゼーション温度を、その完全な一致でハイブリダイズする既知の配列について計算されたハイブリダイゼーション温度と比較することにより行われる。Bonnerらの式を使用することにより、ハイブリダイゼーション温度とパーセントミスマッチの関係を利用して配列類似性についての情報が得られる。
【０２００】
例えば特に限定されないが、そのような高ストリンジェンシー条件を使用する方法は以下の通りである。DNAを含有するフィルターのプレハイブリダイゼーションは、6×SSC、50mMトリス塩酸（pH7.5）、1mM EDTA、0.02％ PVP、0.02％フィコール、0.02％ BSAおよび500μg/mlの変性サケ精子DNAからのバッファー中で65℃で8時間〜一晩行われる。フィルターは、100μg/mlの変性サケ精子DNAと5〜20×106cpmの32P標識PBを含有するプレハイブリダイゼーション混合物中で65℃で48時間行われる。フィルターの洗浄は、2×SSC、0.01％ PVP、0.01％フィコール、0.01％ BSAを含有する溶液中で37℃で1時間行われる。次に0.1×SSCで50℃で45分洗浄した後、オートラジオグラフィーを行う。使用される他の高ストリンジェンシー条件は当該分野で公知である。本発明の他の実施形態においてハイブリダイゼーションは、中〜低ストリンジェンシー条件下で行われ、そのような条件は当業者に公知である（例えば、Sambrookら、1989, 第9〜11章、モレキュラークローニング、実験室マニュアル（Molecular Cloning: A Laboratory Manual）第2版、コールドスプリングハーバーラボラトリープレス（Cold Spring Harbor Laboratory Press）、コールドスプリングハーバー（Cold Spring Harbor）、ニューヨーク；また、Ausubelら、実験室法マニュアルの「分子生物学の現代のプロトコール（Current Protocols in Molecular Biology）」シリーズ、1987〜1997 Curren Protocols, 1994〜1997、ジョンワイリーアンドサンズインク（John Wiley and Sons Inc.）を参照されたい。これらのそれぞれは、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。低ストリンジェンシー条件の例が以下のバッファー系により提供される：35％ホルムアミド、5×SSC、50mMトリス塩酸（pH7.5）、5mM EDTA、0.02％ PVP、0.02％フィコール、0.2％ BSA、100μg/mlの変性サケ精子DNA、および10％(w/w) のデキストラン硫酸を含むバッファー中で40℃で18〜20時間ハイブリダイゼーション、2×SSC、25mMトリス塩酸（pH7.4）、5mM EDTAおよび0.1％ SDSからなるバッファー中で洗浄し、2×SSC、25mMトリス塩酸（pH7.4）、5mM EDTAおよび0.1％ SDSからなるバッファー中で60℃で1.5時間洗浄。
【０２０１】
ある実施形態において哺乳動物MPVは、哺乳動物MPVの特定の変種に特異的なプローブを使用して、変種の1つの中に分類することができる。そのようなプローブには、RT-PCRのプライマー（表5）および抗体がある。
【０２０２】
本発明のある実施形態において哺乳動物MPVの異なる変種は、異なるウイルスタンパク質のアミノ酸配列により互いに区別することができる。他の実施形態において哺乳動物MPVの異なる変種は、ウイルスゲノムにコードされる異なるORFのヌクレオチド配列により区別することができる。哺乳動物MPVの変種は、特に限定されないがA1、A2、B1またはB2でもよい。
【０２０３】
哺乳動物MPVの分離株は、系統発生的にそれが以下の任意の他のウイルス分離株：NL/1/00（配列番号19）、NL/17/00（配列番号20）およびNL/1/94（配列番号21）に関連するより、ウイルス分離株NL/1/99（配列番号18）により密接に関連するなら、変種B1として分類される。哺乳動物MPVの1つ以上のORFを使用して、哺乳動物MPVを変種に分類することができる。もしそのGタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/99（配列番号324）により示される哺乳動物MPV変種B1のGタンパク質と少なくとも66％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも98％、または少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのNタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/99（配列番号368）により示される哺乳動物MPV変種B1のNタンパク質と少なくとも98.5％、少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのPタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/99（配列番号376）により示される哺乳動物MPV変種B1のPタンパク質と少なくとも96％、少なくとも98％、または少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのMタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/99（配列番号360）により示される哺乳動物MPV変種B1のMタンパク質と同一なら；もしそのFタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/99（配列番号316）により示される哺乳動物MPV変種B1のFタンパク質と少なくとも99％同一なら；もしそのM2-1タンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/99（配列番号340）により示される哺乳動物MPV変種B1のM2-1タンパク質と少なくとも98％、または少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのM2-2タンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/99（配列番号348）により示される哺乳動物MPV変種B1のM2-2タンパク質と少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのSHタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/99（配列番号384）により示される哺乳動物MPV変種
B1のSHタンパク質と少なくとも83％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも98％、または少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのLタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/99（配列番号332）により示される哺乳動物MPV変種B1のLタンパク質と少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら、哺乳動物MPVはMPV変種B1として分類することができる。
【０２０４】
哺乳動物MPVの分離株は、系統発生的にそれが以下の任意の他のウイルス分離株：NL/1/99（配列番号18）、NL/17/00（配列番号20）およびNL/1/94（配列番号21）に関連するより、ウイルス分離株NL/1/00（配列番号19）により密接に関連するなら、変種A1として分類される。哺乳動物MPVの1つ以上のORFを使用して、哺乳動物MPVを変種に分類することができる。もしそのGタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/00（配列番号322）により示される哺乳動物MPV変種A1のGタンパク質と少なくとも66％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも98％、または少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのNタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/00（配列番号366）により示される哺乳動物MPV変種A1のNタンパク質と少なくとも99.5％同一なら；もしそのPタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/00（配列番号374）により示される哺乳動物MPV変種A1のPタンパク質と少なくとも96％、少なくとも98％、または少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのMタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/00（配列番号358）により示される哺乳動物MPV変種A1のMタンパク質と少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのFタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/00（配列番号314）により示される哺乳動物MPV変種A1のFタンパク質と少なくとも98％、または少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのM2-1タンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/00（配列番号338）により示される哺乳動物MPV変種A1のM2-1タンパク質と少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのM2-2タンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/00（配列番号346）により示される哺乳動物MPV変種A1のM2-2タンパク質と少なくとも96％、または少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのSHタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/00
（配列番号382）により示される哺乳動物MPV変種A1のSHタンパク質と少なくとも84％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも98％、または少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのLタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/00（配列番号330）により示される哺乳動物MPV変種A1のLタンパク質と少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら、哺乳動物MPVはMPV変種A1として分類することができる。
【０２０５】
哺乳動物MPVの分離株は、系統発生的にそれが以下の任意の他のウイルス分離株：NL/1/99（配列番号18）、NL/1/00（配列番号19）およびNL/1/94（配列番号21）に関連するより、ウイルス分離株NL/17/00（配列番号20）により密接に関連するなら、変種A2として分類される。哺乳動物MPVの1つ以上のORFを使用して、哺乳動物MPVを変種に分類することができる。もしそのGタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/17/00（配列番号332）により示される哺乳動物MPV変種A2のGタンパク質と少なくとも66％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも98％、または少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのNタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/17/00（配列番号367）により示される哺乳動物MPV変種A2のNタンパク質と少なくとも99.5％同一なら；もしそのPタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/17/00（配列番号375）により示される哺乳動物MPV変種A2のPタンパク質と少なくとも96％、少なくとも98％、または少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのMタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/17/00（配列番号359）により示される哺乳動物MPV変種A2のMタンパク質と少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのFタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/17/00（配列番号315）により示される哺乳動物MPV変種A2のFタンパク質と少なくとも98％、または少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのM2-1タンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/17/00（配列番号339）により示される哺乳動物MPV変種A2のM2-1タンパク質と少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのM2-2タンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/17/00（配列番号347）により示される哺乳動物MPV変種A2のM2-2タンパク質と少なくとも96％、少なくとも98％、少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのSHタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/17/00（配列番号383）により示される哺乳動物MPV変種A2のSHタンパク質と少なくとも84％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも98％、少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのLタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/17/00（配列番号331）により示される哺乳動物MPV変種A2のLタンパク質と少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら、哺乳動物MPVはMPV変種A2として分類することができる。
【０２０６】
哺乳動物MPVの分離株は、系統発生的にそれが以下の任意の他のウイルス分離株：NL/1/99（配列番号18）、NL/17/00（配列番号19）およびNL/17/00（配列番号20）に関連するより、ウイルス分離株NL/1/94（配列番号21）により密接に関連するなら、変種B2として分類される。哺乳動物MPVの1つ以上のORFを使用して、哺乳動物MPVを変種に分類することができる。もしそのGタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/94（配列番号325）により示される哺乳動物MPV変種B2のGタンパク質と少なくとも66％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも98％、または少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのNタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/94（配列番号369）により示される哺乳動物MPV変種B2のNタンパク質と少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのPタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/94（配列番号377）により示される哺乳動物MPV変種B2のPタンパク質と少なくとも96％、少なくとも98％、または少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのMタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/94（配列番号361）により示される哺乳動物MPV変種B2のMタンパク質と同一なら；もしそのFタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/94（配列番号317）により示される哺乳動物MPV変種B2のFタンパク質と少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのM2-1タンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/94（配列番号341）により示される哺乳動物MPV変種B2のM2-1タンパク質と少なくとも98％、または少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのM2-2タンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/94（配列番号349）により示される哺乳動物MPV変種B2のM2-2タンパク質と少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；もしそのSHタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/94（配列番号385）により示される哺乳動物M
PV変種B2のSHタンパク質と少なくとも84％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも98％、または少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら；および／または、もしそのLタンパク質のアミノ酸配列が、プロトタイプNL/1/94（配列番号333）により示される哺乳動物MPV変種B2のLタンパク質と少なくとも99％、または少なくとも99.5％同一なら、哺乳動物MPVはMPV変種B2として分類することができる。
【０２０７】
ある実施形態において配列同一性のパーセントは、完全長タンパク質の整列に基づく。他の実施形態において配列同一性のパーセントは、タンパク質の連続的アミノ酸配列の整列に基づき、ここでアミノ酸配列は、25アミノ酸、50アミノ酸、75アミノ酸、100アミノ酸、125アミノ酸、150アミノ酸、175アミノ酸、200アミノ酸、225アミノ酸、250アミノ酸、275アミノ酸、300アミノ酸、325アミノ酸、350アミノ酸、375アミノ酸、400アミノ酸、425アミノ酸、450アミノ酸、475アミノ酸、500v750アミノ酸、1000アミノ酸、1250アミノ酸、1500アミノ酸、1750アミノ酸、2000アミノ酸、または2250アミノ酸の長さでもよい。
【０２０８】
哺乳動物MPVの機能的特徴
哺乳動物MPVの構造的定義以外に、哺乳動物MPVはその機能的特徴により規定することができる。ある実施形態において哺乳動物MPVは、哺乳動物宿主に感染することができる。哺乳動物宿主は、哺乳動物細胞、組織、臓器または哺乳動物でもよい。具体的な実施形態において哺乳動物宿主は、ヒトまたはヒト細胞もしくは臓器である。当業者に公知の任意の方法を使用して、哺乳動物宿主が哺乳動物MPVに感染しているかどうかを試験することができる。ある実施形態においてウイルスは、哺乳動物細胞に結合する能力について試験される。他のある実施形態においてウイルスは、哺乳動物細胞中にゲノムを輸送する能力について試験される。具体例でウイルスの遺伝子は、検出可能なように例えば放射能標識される。次にウイルスは、哺乳動物細胞と少なくとも1分、少なくとも5分、少なくとも15分、少なくとも30分、少なくとも1時間、少なくとも2時間、少なくとも5時間、少なくとも12時間、または少なくとも1日インキュベートされる。次に細胞は洗浄され、細胞からウイルス粒子を除去し、次に細胞は検出可能な標識物によりウイルスゲノムの存在について試験される。別の実施形態において細胞中のウイルスゲノムの存在は、RT-PCRを使用して哺乳動物MPV特異的プライマーを使用して検出される（PCT WO02/057302、37〜44頁を参照、これは参照することにより本明細書に組み込まれる）。
【０２０９】
ある実施形態において哺乳動物ウイルスは哺乳動物宿主に感染することができ、哺乳動物MPVの一部が哺乳動物宿主の細胞質膜中に挿入されるようにする。哺乳動物宿主は、培養哺乳動物細胞、臓器、組織、または哺乳動物でもよい。具体例において哺乳動物細胞は、哺乳動物ウイルスとインキュベートされる。次に細胞は、細胞の表面からウイルスを除去する条件下で洗浄される。当業者に公知の任意の方法を使用して、哺乳動物細胞の細胞質膜に挿入される新に発現されたウイルスタンパク質を検出することができる。例えばウイルスで細胞を感染後、細胞は、検出可能な標識アミノ酸を含む培地中で維持される。次に細胞が採取され、溶解され、細胞質画分が膜画分から分離される。次に膜画分の部分は可溶化され、次に哺乳動物MPVの部分に特異的な抗体（例えば特に限定されないが、Fタンパク質またはGタンパク質）を使用して免疫沈降される。免疫沈降タンパク質は次に、SDS-PAGEに付される。次にウイルスタンパク質の存在は、オートラジオグラフィーにより検出することができる。別の実施形態において宿主細胞の細胞質膜中のウイルスタンパク質の存在は、哺乳動物MPVの部分に特異的な1つ以上の抗体を使用して免疫細胞化学により検出することができる。
【０２１０】
さらに別の実施形態において哺乳動物MPVは、哺乳動物宿主に感染することができ哺乳動物宿主中で複製することができる。哺乳動物宿主は、培養哺乳動物細胞、臓器、組織、または哺乳動物でもよい。当業者に公知の任意の方法を使用して、ウイルスが哺乳動物細胞に感染することができるか、および哺乳動物宿主中で複製することができるかを決定することができる。具体的な実施形態において哺乳動物細胞はウイルスで感染される。次に細胞は、少なくとも30分、少なくとも1時間、少なくとも2時間、少なくとも5時間、少なくとも12時間、少なくとも1日、または少なくとも2日維持される。細胞中のウイルスゲノムRNAのレベルは、ノーザンブロット解析、RT-PCR、またはインサイチューハイブリダイゼーションを使用して、ウイルスゲノムに特異的なプローブを使用して追跡することができる。ウイルスゲノムRNAの増加は、ウイルスが哺乳動物細胞に感染することができ、哺乳動物細胞内に複製することができることを証明する。
【０２１１】
さらに別の実施形態において哺乳動物MPVは哺乳動物宿主に感染することができ、ここで感染は哺乳動物宿主に新しい感染性哺乳動物MPVを産生させる。哺乳動物宿主は、培養哺乳動物細胞または哺乳動物でもよい。ウイルスが哺乳動物宿主に感染することができ、かつ新しい感染性ウイルス粒子を哺乳動物宿主に産生させることができるかどうかを調べるのに、当該分野で公知の任意の方法を使用することができる。例として哺乳動物細胞は哺乳動物ウイルスで感染される。次に細胞は洗浄され、少なくとも30分、少なくとも1時間、少なくとも2時間、少なくとも5時間、少なくとも12時間、少なくとも1日、少なくとも2日、少なくとも1週間、または少なくとも12日インキュベートされる。ウイルスの力価は、当業者に公知の任意の方法により追跡される。方法の例はセクション5.8に記載される。
【０２１２】
ある実施形態において、哺乳動物MPVはヒトMPVである。このセクションに記載の試験はまた、ヒトMPVを用いて行うことができる。ある実施形態においてヒトMPVは、哺乳動物宿主（例えば哺乳動物または哺乳動物培養細胞）に感染することができる。
【０２１３】
ある実施形態においてヒトMPVは哺乳動物宿主に感染することができ、ヒトMPVの一部が哺乳動物宿主の細胞質膜中に挿入されるようにする。
【０２１４】
さらに別の実施形態においてヒトMPVは哺乳動物宿主に感染することができ、哺乳動物宿主中で複製することができる。
【０２１５】
さらに他の実施形態において本発明のヒトMPVは、哺乳動物宿主に感染することができ、哺乳動物宿主中で複製することができ、ここで感染と複製は、哺乳動物宿主が新しい感染性ヒトMPVを産生しパッケージさせるようにする。
【０２１６】
ある実施形態において哺乳動物MPVは、たとえ哺乳動物宿主に感染することができても、鳥類宿主（例えば鳥類または鳥類培養細胞）に感染することもできる。ある実施形態において哺乳動物MPVは鳥類宿主に感染することができ、哺乳動物MPVが鳥類宿主の細胞質膜中に挿入されるようにする。さらに他の実施形態において本発明の哺乳動物MPVは、鳥類宿主に感染することができ、鳥類宿主中で複製することができる。さらに他の実施形態において本発明の哺乳動物MPVは、鳥類宿主に感染することができ、鳥類宿主中で複製することができ、ここで感染と複製は、鳥類宿主が新しい感染性ヒトMPVを産生しパッケージさせるようにする。
【０２１７】
哺乳動物MPVの説明はまた、本本出願人による同時係属米国特許出願第10/371,099号および10/371,122号（いずれも2003年2月21日出願）に記載されている（いずれも参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０２１８】
4.1.7.2 抗hMPV抗体
本発明の方法で使用される抗hMPV抗原抗体は、hMPV核タンパク質、hMPVホスホタンパク質、hMPVマトリックスタンパク質、hMPV小疎水性タンパク質、hMPV RNA依存性RNAポリメラーゼ、hMPV Fタンパク質、およびhMPV Gタンパク質に免疫特異的に結合する抗体でもよい。
【０２１９】
ある実施形態において抗hMPV抗原抗体は、カナダからのhMPV分離株のhMPV抗原、オランダからのhMPV分離株、および／またはオーストラリアからのhMPV分離株からのhMPV抗原に免疫特異的に結合する。異なる分離株がPeretら、2002, J. Infect. Diseases 185:1660-1663（これは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０２２０】
ある実施形態において抗hMPV抗原抗体は、hMPV核タンパク質、hMPVホスホタンパク質、hMPVマトリックスタンパク質、hMPV小疎水性タンパク質、hMPV RNA依存性RNAポリメラーゼ、hMPV Fタンパク質、および／またはhMPV Gタンパク質の対立遺伝子変種に結合する。
【０２２１】
ある実施形態において本発明の治療法で使用される抗体は、哺乳動物MPV、またはセクション4.1.7.1に記載の哺乳動物MPVのタンパク質に免疫特異的に結合する抗体である。ある実施形態において本発明の治療法で使用される抗体は、ヒトMPVに免疫特異的に結合する抗体である。
【０２２２】
ある実施形態において抗hMPV抗原抗体は、例えばそれぞれ配列番号399〜406、420、または421のアミノ酸配列からなるタンパク質／ポリペプチドに免疫特異的に結合する。
【０２２３】
ある実施形態において抗hMPV抗原抗体は、それぞれ配列番号399〜406、420、または421のアミノ酸配列と少なくとも60％、70％、80％、90％、95％、または少なくとも98％同一であるアミノ酸配列からなるタンパク質／ポリペプチドに免疫特異的に結合する。ある実施形態において抗hMPV抗原抗体は、それぞれ配列番号399〜406、420、または421のアミノ酸配列と多くても70％、80％、90％、95％、98％、または多くても100％同一であるアミノ酸配列からなるタンパク質／ポリペプチドに免疫特異的に結合する。
【０２２４】
ある実施形態において抗hMPV抗原抗体は、鳥類、特に七面鳥、カモ、またはニワトリに関連するAPVからのAPV抗原と交差反応する。より具体的なある実施形態において抗hMPV抗体は、APV-A、APV-B、APV-C、および／またはAPV-D、またはこれらの組合せ、特に七面鳥APVの抗原と交差反応する。より具体的なある実施形態において抗hMPV抗原抗体は、ヨーロッパAPV分離株からの抗原と交差反応する。他のある実施形態において抗hMPV抗原抗体は、北アメリカAPV分離株からの抗原と交差反応する。ある実施形態において抗hMPV抗原抗体は、APV核タンパク質、APVホスホタンパク質、APVマトリックスタンパク質、APV小疎水性タンパク質、APV RNA依存性RNAポリメラーゼ、APV Fタンパク質、および／またはAPV Gタンパク質と交差反応する。ある実施形態において抗hMPV抗原抗体は、APV抗原と交差反応しない。ある実施形態において抗hMPV抗原抗体は、例えばそれぞれ配列番号424〜429のアミノ酸配列のAPV抗原と交差反応する。
【０２２５】
具体的な実施形態においてhMPVのFタンパク質に対するモノクローナル抗体が作成される。より具体的な実施形態においてhMPVのFタンパク質は、バキュロウイルス発現系を使用して産生される（例えば、BD Biosciences（ニュージャージー州）からのBD BaculoGold（登録商標）バキュロウイルス発現ベクター系を使用することができる）。ある実施形態においてFタンパク質は、タンパク質が発現される細胞からのFタンパク質の分泌を誘導する膜貫通ドメイン無しで発現される。Fタンパク質に対する抗体の作成のためのFタンパク質の発現に使用される発現構築体の例を、図1に示す。
【０２２６】
ある実施形態において本発明の方法で使用される抗体の作成のために、以下のアミノ酸配列を含有するペプチドが使用される：配列番号234または配列番号279のアミノ酸19〜28；アミノ酸94〜106；アミノ酸476〜409；および／またはアミノ酸223〜236。ある実施形態において配列番号430〜437のアミノ酸配列を含有するペプチドは、本発明の方法で使用される抗体の作成のための免疫原として使用される。理論に拘束されるつもりは無いが配列番号430〜437の配列は、ヒトメタニューモウイルスの異なる株のFタンパク質のヘプタッド繰り返しを含有する。
【０２２７】
ある実施形態において、本発明の方法で使用される抗体はヘプタッド繰り返しに結合する。より具体的なある実施形態において本発明の方法で使用される抗体は、哺乳動物メタニューモウイルス（例えば、hMPV）のFタンパク質のペプタッド繰り返しに結合する。さらに、より具体的なある実施形態において本発明の方法で使用される抗体は、哺乳動物メタニューモウイルス（例えばhMPV）のFタンパク質のヘプタッド繰り返し1またはヘプタッド繰り返し2に結合する。ある実施形態において本発明の方法で使用される抗体は、APVのFタンパク質のヘプタッド繰り返しに結合する。
【０２２８】
ヒトメタニューモウイルスFタンパク質とマガモ（Mallard Duck）から単離されたトリニューモウイルスのFタンパク質との整列は、エクトドメインの85.6％の同一性を示す。ヒトメタニューモウイルスFタンパク質と七面鳥（サブグループB）から単離されたトリニューモウイルスのFタンパク質との整列は、エクトドメインの75％の同一性を示す。例えば、HallerとTangによる2002年2月21日に出願された本出願人による同時係属仮出願No. 60:358,934（標題「メタニューモウイルスから得られた異種抗原を含む組換えパラインフルエンザウイルス発現系とワクチン」）を参照されたい（これは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。従ってトリメタニューモウイルスからの抗原および特に七面鳥メタニューモウイルスからのFタンパク質は、ヒトメタニューモウイルスに対する抗体を作成するための有用な抗原である。
【０２２９】
ある実施形態において抗hMPV抗原抗体は二重特異的抗体である。ある実施形態においてこの二重特異的抗体は、同じhMPV抗原の2つの異なるエピトープに結合する。他のある実施形態において二重特異的抗体は、2つの異なるhMPV抗原上のエピトープに結合する。ある実施形態において二重特異的抗体は、(i)hMPV抗原および(ii)APV、PIVおよび／またはRSV抗原に免疫特異的に結合する。
【０２３０】
ある実施形態において本発明の方法で使用される抗体は、RSVのFタンパク質およびhMPVのFタンパク質に結合する二重特異的抗体である。二重特異的抗体は、化学的方法または組換え法により作成することができる。抗体はダイアボディ（diabody）、F(ab')2、ルシンジッパー（lucine zippers）に融合したF(ab')2、1本鎖ダイアボディ（diabody）などでもよい。抗体は多価抗体、例えば4価抗体でもよい。ある実施形態において二重特異的抗体は、RSV Fタンパク質に結合する抗体の一部についてのNumaxまたはSynagisを使用して、hMPV Fタンパク質に結合する抗体と組合せて構築される。
【０２３１】
4.1.7.3 多重タンパク質モノクローナル抗体
多重タンパク質モノクローナル抗体を作成するために、Balb/cマウスまたはSJLマウス（マウスは、例えばジャクソンラボラトリー（Jackson Laboratory）、メイン州から得られる）をまずhMPVで、後でアジュバント化したhMPV、ウシPIVまたは精製したhMPVのFタンパク質で免疫する。より具体的な実施形態においてマウスを、鼻内にhMPVを1〜2回免疫し、次にhMPVの腹腔内注入（すべての型の中和抗体を産生するために）またはbPIV/hMPV Fの鼻内免疫、または精製したFタンパク質の腹腔内免疫により免疫する。bPIV/hMPV Fは、hMPV Fタンパク質のコード配列がウシPIVに挿入されているキメラウイルスである。PIVベクターのより詳細な説明と発現系としてのその使用は、本出願人による同時係属仮出願No. 10/371,264および10/373,567（いずれも2003年2月21日出願）に記載されている（いずれも参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。具体的な実施形態において各免疫について106〜107pfu/ml/マウスのウイルス100μlを使用する。
【０２３２】
4.1.8 抗PIV抗原抗体
ある実施形態において抗PIV抗原抗体は、PIVヌクレオカプシド構造タンパク質、PIV融合糖タンパク質、PIVホスホタンパク質、PIV Lタンパク質、PIVマトリックスタンパク質、PIV HN糖タンパク質、PIV RNA依存性RNAポリメラーゼ、PIV Y1タンパク質、PIV Dタンパク質、F糖タンパク質、PIV血球凝集素−ノイラミニダーゼ、またはPIV Cタンパク質に免疫特異的に結合する。
【０２３３】
ある実施形態において抗PIV抗原抗体は、PIV 1型、PIV 2型、および／またはPIV 3型の抗原、またはこれらの任意の組合せに結合する。
【０２３４】
ある実施形態において抗PIV抗原抗体は、PIVヌクレオカプシド構造タンパク質、PIV融合糖タンパク質、PIVホスホタンパク質、PIV Lタンパク質、PIVマトリックスタンパク質、PIV HN糖タンパク質、PIV小疎水性タンパク質、PIV RNA依存性RNAポリメラーゼ、PIV Y1タンパク質、PIV Dタンパク質、F糖タンパク質、PIV血球凝集素−ノイラミニダーゼ、またはPIV Cタンパク質の対立遺伝子変種に結合する。
【０２３５】
ある実施形態において抗PIV抗原抗体は、例えば配列番号407のアミノ酸配列を有するPIV RNAポリメラーゼアルファサブユニット（ヌクレオカプシドホスホタンパク質）；例えば配列番号408のアミノ酸配列を有するPIV Lポリメラーゼタンパク質；例えば配列番号409のアミノ酸配列を有するPIV HN糖タンパク質；例えば配列番号410のアミノ酸配列を有するPIVマトリックスタンパク質；例えば配列番号411のアミノ酸配列を有するPIV Y1タンパク質；例えば配列番号412のアミノ酸配列を有するPIV Cタンパク質；例えば配列番号413のアミノ酸配列を有するPIVホスホタンパク質；例えば配列番号414のアミノ酸配列を有するPIV核タンパク質；例えば配列番号415のアミノ酸配列を有するPIV F糖タンパク質；例えば配列番号416のアミノ酸配列を有するPIV Dタンパク質；例えば配列番号417のアミノ酸配列を有するPIV血球凝集素−ノイラミニダーゼ；例えば配列番号418のアミノ酸配列を有するPIVヌクレオカプシドタンパク質；例えば配列番号419のアミノ酸配列を有するPIV Pタンパク質に免疫特異的に結合する。
【０２３６】
ある実施形態において抗PIV抗原抗体は、RNAポリメラーゼアルファサブユニット（ヌクレオカプシドホスホタンパク質）、配列番号407；Lポリメラーゼタンパク質、配列番号408；HN糖タンパク質、配列番号409；マトリックスタンパク質、配列番号410；Y1タンパク質、配列番号411；Cタンパク質、配列番号412；ホスホタンパク質、配列番号413；核タンパク質、配列番号414；F糖タンパク質、配列番号415；Dタンパク質、配列番号416；血球凝集素−ノイラミニダーゼ、配列番号417；ヌクレオカプシドタンパク質、配列番号418；Pタンパク質、配列番号419のアミノ酸配列と、少なくとも60％、70％、80％、90％、95％、または少なくとも98％同一であるアミノ酸配列からなるタンパク質／ポリペプチドに免疫特異的に結合する。ある実施形態において抗PIV抗原抗体は、RNAポリメラーゼアルファサブユニット（ヌクレオカプシドホスホタンパク質）、配列番号407；Lポリメラーゼタンパク質、配列番号408；HN糖タンパク質、配列番号409；マトリックスタンパク質、配列番号410；Y1タンパク質、配列番号411；Cタンパク質、配列番号412；ホスホタンパク質、配列番号413；核タンパク質、配列番号414；F糖タンパク質、配列番号415；Dタンパク質、配列番号416；血球凝集素−ノイラミニダーゼ、配列番号417；ヌクレオカプシドタンパク質、配列番号418；Pタンパク質、配列番号419のアミノ酸配列と、多くても70％、80％、90％、95％、または多くても98％同一であるアミノ酸配列からなるタンパク質／ポリペプチドに免疫特異的に結合する。
【０２３７】
4.2 呼吸系ウイルス感染の予防と治療
本発明は、ウイルス呼吸系感染症の広域の予防法と治療法を提供する。被験体の呼吸系ウイルス感染に対する広域の防御を得るために、その各々が呼吸系感染症を引き起こす異なるウイルス上のエピトープに免疫特異的に結合する複数の抗体が被験体に投与される。ある実施形態において呼吸系感染症を引き起こす異なるウイルスの抗原に免疫特異的に結合する複数の抗体が投与される。ある実施形態においてhMPV、PIV、および／またはRSVの異なる抗原に免疫特異的に結合する複数の抗体が投与される。ある実施形態において異なる呼吸系ウイルスからの抗原に交差反応する抗体が投与される。具体的な実施形態において、hMPVの抗原に免疫特異的に結合する抗体は、APVの抗原、特に七面鳥APVと交差反応する。単一特異的hMPVのFタンパク質に免疫特異的に結合する抗体は、APVのFタンパク質と交差反応する。
【０２３８】
ある実施形態において、被験体に同定するされる少なくとも1つの抗体は抗体−コンジュゲートである。
【０２３９】
異なる免疫特異性を有する異なる抗体の投与は、ウイルスの一部の抗原が修飾されたアミノ酸配列を持っていても、予防／治療が呼吸系ウイルスに対して有効であることを確実にする。一般に、投与される複数の抗体の少なくとも1つが、1つ以上の感染性呼吸系ウイルス粒子に免疫特異的に結合することを確実にするための2つのアプローチがある。まず、1つ以上のウイルスの異なるエピトープに対する抗体を複数の抗体に含める。すなわちたとえ感染性呼吸系ウイルス粒子のエピトープの1つが、それに対して抗体の1つが作成された対応するエピトープと異なっていても、複数の抗体の他の抗体が感染性呼吸系ウイルス粒子のエピトープに免疫特異的に結合する。ある実施形態において、たとえ感染性呼吸系ウイルス粒子の抗原の1つが、それに対して複数の抗体のうちの１つの抗体が作成された対応する抗原と異なっていても、複数の抗体の他の抗体が感染性呼吸系ウイルス粒子の抗原に免疫特異的に結合する。第2に、異なるウイルスからの異なる抗原（例えば、RSVからのFタンパク質およびhMPVからのFタンパク質）と交差反応する抗体は、ウイルスの範囲、ウイルスのサブタイプ、ウイルスのサブグループ、変異ウイルス、ウイルスの群、およびそれに対して複数の抗体が有効なウイルスのタイプを広げるために、複数の抗体に含めることができる。
【０２４０】
本発明のある実施形態において被験体に投与される抗体は、呼吸系ウイルス感染の治療および／または予防において相乗作用を有する。ある実施形態において種々の抗体の組合せが呼吸系ウイルス感染の治療または予防に有効であるが、1つのみの抗体の個々の投与は、呼吸系ウイルス感染の治療または予防に有効ではない。
【０２４１】
ある実施形態において本発明の方法は、(i)1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片；(ii)1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片；および／または(iii)1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片；および(iv)呼吸系感染症を引き起こすウイルスに対して作成された1つ以上のワクチンを投与することを含む。具体的な実施形態においてワクチンは、hMPVに対するものである。そのようなワクチンは、2002年2月21日に出願された米国仮出願No. 60:358,934（標題「メタニューモウイルスから得られた異種抗原を含む組換えパラインフルエンザウイルス発現系とワクチン」）に記載されている（これは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０２４２】
他のある実施形態においてこの方法は、抗ウイルス剤を投与することをさらに含む。抗ウイルス剤には、特に限定されないが、ヌクレオシド類似体（例えば、ジドブジン、アシクロビル、ガングシクロビル、ビダラビン、イドクスリジン、トリフルリジンおよびリバビリン）、ならびにフォスカルネット、アマンタジン、リマンタジン、サキナビル、インジナビル、リトナビル、およびアルファインターフェロンがある。
【０２４３】
4.2.1 抗RSV抗原抗体、抗hMPV抗原抗体、および抗PIV抗原抗体を用いる組合せ予防と治療
ある実施形態において本発明は、被験体の呼吸系ウイルス感染の1つ以上の症状を予防、治療および／または改善する方法であって、1つ以上の抗RSV抗原抗体もしくはその抗原結合断片、1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片、および1つ以上の抗hMPV抗原抗体もしくはその抗原結合断片を被験体に投与することを含む方法を提供する。具体的な実施形態において本発明は、予防的有効量の1つ以上の抗RSV抗原抗体もしくはその抗原結合断片、予防的有効量の1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片、および予防的有効量の1つ以上の抗hMPV抗原抗体もしくはその抗原結合断片を被験体に投与して、被験体の呼吸系ウイルス感染を予防することを含む方法を提供する。具体的な実施形態において本発明は、治療的有効量の1つ以上の抗RSV抗原抗体もしくはその抗原結合断片、治療的有効量の1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片、および治療的有効量の1つ以上の抗hMPV抗原抗体もしくはその抗原結合断片を被験体に投与して、被験体の呼吸系ウイルス感染を治療することを含む方法を提供する。本発明の具体的な実施形態において呼吸系ウイルス感染は、RSV、PIVおよび／またはhMPVによる感染である。ある実施形態において被験体は、RSV、PIVおよび／またはhMPVによる感染のリスクに暴露される。
【０２４４】
ある実施形態において本発明は、受動免疫療法であって、第1の用量の1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片、第2の用量の1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片、および第3の用量の1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片を投与することを含み、ここで第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも25％低下させ、第2の用量はPIV感染の発症率を少なくとも25％低下させ、および第3の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも25％低下させる方法を提供する。ある実施形態において第1の用量はRSV感染の発症率を少なくとも10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、または少なくとも98％低下させ、第2の用量はPIV感染の発症率を少なくとも10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、または少なくとも98％低下させ、第3の用量はhMPV感染の発症率を少なくとも510％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、95％、または少なくとも98％低下させる。
【０２４５】
ある実施形態において本発明は、受動免疫療法であって、(i)第1の用量の1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片は、RSV抗原に免疫特異的に結合する）；(ii)第2の用量の1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片（ここで、該1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片は、hMPV抗原に免疫特異的に結合する）、および(iii)第3の用量の1つ以上の第3の抗体（ここで、該1つ以上の第3の抗体またはその抗原結合断片は、PIV抗原に免疫特異的に結合する）を被験体に投与することを含み、ここで被験体中の該1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、該1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片を15日間投与後に少なくとも10μg/mlであり、被験体中の該1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、該1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片を15日間投与後に少なくとも10μg/mlであり、被験体中の該1つ以上の第3の抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、該1つ以上の第3の抗体またはその抗原結合断片を15日間投与後に少なくとも10μg/mlである方法を提供する。ある実施形態において該1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、該1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片を15日間投与後に少なくとも0.1μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、75μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、250μg/ml、または少なくとも500μg/mlであり、該1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、該1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片を15日間投与後に少なくとも0.1μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、75μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、250μg/ml、または少なくとも500μg/mlであり、該1つ以上の第3の抗体またはその抗原結合断片の血清力価は、該1つ以上の第3の抗体またはその抗原結合断片を15日間投与後に少なくとも0.1μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、75μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、250μg/ml、または少なくとも500μg/mlである。
【０２４６】
ある実施形態において1つ以上の抗RSV抗原抗体、1つ以上の抗PIV抗原抗体、および1つ以上の抗hMPV抗原抗体、またはこれらの抗体の任意の組合せは、同時に投与される。より具体的なある実施形態において抗体は、同じ経路（特に限定されないが静脈内または筋肉内）により同時に投与される。他のある実施形態において抗体は、異なる経路により同時に投与される。
【０２４７】
他のある実施形態において抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片は、抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片の投与の前に投与される。他のある実施形態において抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片の投与の前に投与される。
【０２４８】
ある実施形態において抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片は、一定期間により分けられて互いの後に投与される。ある実施形態において期間は、少なくとも1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、1ヶ月、2ヶ月、または3ヶ月である。本発明の具体的な実施形態において1つ以上の抗RSV抗原抗体が最初に投与され、1つ以上の抗PIV抗原抗体が2番目に投与され、および1つ以上の抗hMPV抗原抗体が3番目に投与される。本発明の具体的な実施形態において1つ以上の抗hMPV抗原抗体が最初に投与され、1つ以上の抗RSV抗原抗体が2番目に投与され、および1つ以上の抗PIV抗原抗体が3番目に投与される。本発明の具体的な実施形態において1つ以上の抗PIV抗原抗体が最初に投与され、1つ以上の抗hMPV抗原抗体が2番目に投与され、および1つ以上の抗RSV抗原抗体が3番目に投与される。ある実施形態において抗体の少なくとも1つは、一定期間により分けられた数回の投与の連続で投与される。投与の任意の順序も、本発明の方法により包含される。
【０２４９】
1つ以上の抗PIV抗原抗体、1つ以上の抗hMPV抗原抗体、および1つ以上の抗RSV抗原抗体はまた、循環的に投与することができる。循環治療法は、第1の予防薬または治療薬をある時間投与し、次に第2の予防薬または治療薬をある時間投与し、次に第3の予防薬または治療薬をある時間投与するなどして、この連続投与を繰り返す（すなわちサイクル）ことを含み、薬剤の1つに対する耐性の出現を低下させ、薬剤のいつの副作用を回避または低下させ、および／または治療の効力を改良する。
【０２５０】
ある実施形態において同じ抗体の投与を繰り返してもよく、投与は、少なくとも10日、15日、30日、2ヶ月、3ヶ月、または少なくとも6ヶ月分離される。ある実施形態において同じ抗体の投与は、多くても10日、15日、30日、2ヶ月、3ヶ月、または少なくとも6ヶ月分離される。
【０２５１】
4.2.2 抗RSV抗原抗体と抗hMPV抗原抗体を用いる組合せ予防と治療
本発明は、被験体の呼吸系ウイルス感染が引き起こす1つ以上の症状を予防および／または治療、および改善する方法であって、(i)1つ以上のRSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片；および(ii)1つ以上のhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片を、該被験体に投与することを含む方法を提供する。具体的な実施形態において被験体はヒトである。具体的な実施形態において被験体は、ウイルス呼吸系感染症を有し、特にRSVおよび／またはhMPVで感染される。具体的な実施形態においてこの方法は、被験体がRSVおよび／またはhMPVにかかることを防ぐ。具体的な実施形態において被験体は、RSVおよび／またはhMPV感染のリスクに暴露される。
【０２５２】
ある実施形態において1つ以上の第1の抗体はRSVを中和する。ある実施形態において1つ以上の第1の抗体は、in vitroマイクロ中和アッセイ（後述）で、少なくとも25％、少なくとも30％、少なくとも35％、少なくとも40％、少なくとも45％、少なくとも50％、少なくとも55％、少なくとも60％、少なくとも65％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも98％、または少なくとも99％のRSVを中和する。ある実施形態において1つ以上の第1の抗体は、in vitroマイクロ中和アッセイ（セクション4.8.4に記載）で、多くても25％、多くても30％、多くても35％、多くても40％、多くても45％、多くても50％、多くても55％、多くても60％、多くても65％、多くても70％、多くても75％、多くても80％、多くても85％、多くても90％、多くても95％、多くても98％、または多くても99％のRSVを中和する。
【０２５３】
ある実施形態において1つ以上の第2の抗体はhMPVを中和する。ある実施形態において1つ以上の第2の抗体は、in vitroマイクロ中和アッセイ（後述）で、少なくとも25％、少なくとも30％、少なくとも35％、少なくとも40％、少なくとも45％、少なくとも50％、少なくとも55％、少なくとも60％、少なくとも65％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも98％、または少なくとも99％のhMPVを中和する。ある実施形態において1つ以上の第1の抗体は、in vitroマイクロ中和アッセイで、多くても25％、多くても30％、多くても35％、多くても40％、多くても45％、多くても50％、多くても55％、多くても60％、多くても65％、多くても70％、多くても75％、多くても80％、多くても85％、多くても90％、多くても95％、多くても98％、または多くても99％のhMPVを中和する。
【０２５４】
ある実施形態において、RSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体の少なくとも1つは、高親和性および／または高結合活性抗体であり、および／またはより長い血清半減期を有する。ある実施形態において、hMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体の少なくとも1つは、高親和性および／または高結合活性抗体であり、および／またはより長い血清半減期を有する。
【０２５５】
本発明の抗体の高親和性および／または高結合活性は、RSV感染および／またはhMPV感染が引き起こす症状の改善のために、非高親和性または非高結合活性と比較して、より少量の抗体の使用を可能にする。1つ以上のRSV抗原に免疫特異的に結合するより少量の抗体および1つ以上のhMPV抗原に免疫特異的に結合するより少量の抗体の使用は、副作用の確率を低下させるとともにより有効な予防を提供する。さらに抗体の高親和性および／または高結合活性は、それぞれRSV感染およびhMPV感染が引き起こす症状の予防、中和、治療および改善に従来必要であると考えられていたものより、より低頻度の該抗体の投与を可能にする。
【０２５６】
ある実施形態においてRSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体および／またはhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体は、RSV感染の部位に直接投与することができる。特に少なくとも1つの抗体は肺送達により投与することができる。そのような投与モードは、被験体への抗体の投与用量と頻度を低下させることができる。
【０２５７】
ある実施形態において投与された抗体の少なくとも1つの血清力価は、1μg/mlまたはそれ以下、2μg/mlまたはそれ以下、5μg/mlまたはそれ以下、少なくとも6μg/mlまたはそれ以下、10μg/mlまたはそれ以下、15μg/mlまたはそれ以下、20μg/mlまたはそれ以下、または25μg/mlまたはそれ以下である。ある実施形態において投与された抗体の少なくとも1つの血清力価は、少なくとも1μg/ml、少なくとも2μg/ml、少なくとも5μg/ml、少なくとも6μg/ml、少なくとも10μg/ml、少なくとも15μg/ml、少なくとも20μg/ml、少なくとも25μg/ml、少なくとも50μg/ml、少なくとも100μg/ml、少なくとも125μg/ml、少なくとも150μg/ml、少なくとも175μg/ml、少なくとも200μg/ml、少なくとも225μg/ml、少なくとも250μg/ml、少なくとも275μg/ml、少なくとも300μg/ml、少なくとも325μg/ml、少なくとも350μg/ml、少なくとも375μg/ml、または少なくとも400μg/mlである。好ましくはRSV抗原および／またはhMPV抗原に免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片の第1の用量の投与の約20日（好ましくは25、30、35、または40日）後に、かつ該抗体またはその抗原結合断片の他の用量の投与無しで、ある血清力価、または1μg/mlまたはそれ以下、2μg/mlまたはそれ以下、5μg/mlまたはそれ以下、6μg/mlまたはそれ以下、10μg/mlまたはそれ以下、15μg/mlまたはそれ以下、20μg/mlまたはそれ以下、または25μg/mlまたはそれ以下の血清力価が達成される。好ましくはRSV抗原および／またはhMPV抗原に免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片の第1の用量の投与の約20日（好ましくは25、30、35、または40日）後に、かつ該抗体またはその抗原結合断片の他の用量の投与無しで、ある血清力価、または少なくとも1μg/ml、少なくとも2μg/ml、少なくとも5μg/ml、少なくとも6μg/ml、少なくとも10μg/ml、少なくとも15μg/ml、少なくとも20μg/ml、少なくとも25μg/ml、少なくとも50μg/ml、少なくとも100μg/ml、少なくとも125μg/ml、少なくとも150μg/ml、少なくとも175μg/ml、少なくとも200μg/ml、少なくとも225μg/ml、少なくとも250μg/ml、少なくとも275μg/ml、少なくとも300μg/ml、少なくとも325μg/ml、少なくとも350μg/ml、少なくとも375μg/ml、または少なくとも400μg/mlの血清力価が達成される。
【０２５８】
具体的な実施形態において、20mg/kg未満、15mg/kg、10mg/kg、2.5mg/kg未満、1mg/kg未満、または0.5mg/kg未満の用量の抗体または抗体断片を非霊長類哺乳動物に投与した少なくとも1日後に、RSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片およびhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片の、少なくとも0.4μg/ml、1μg/ml、4μg/ml、10μg/ml、40μg/ml、少なくとも80μg/ml、少なくとも100μg/ml、少なくとも120μg/ml、少なくとも150μg/ml、少なくとも200μg/ml、少なくとも250μg/ml、または少なくとも300μg/mlの非霊長類哺乳動物中の血清力価が達成される。別の実施形態において、約5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、または30mg/kgの用量の抗体または抗体断片を非霊長類哺乳動物に投与した少なくとも1日後に、1つ以上のRSV抗原に免疫特異的に結合するかおよび／またはhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片の、少なくとも150μg/ml、少なくとも200μg/ml、少なくとも250μg/ml、少なくとも300μg/ml、少なくとも350μg/ml、または少なくとも400μg/mlの非霊長類哺乳動物中の血清力価が達成される。
【０２５９】
別の実施形態において、5mg/kg未満、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、または30mg/kg、好ましくは3mg/kg未満、1mg/kg未満、または0.5mg/kg未満の用量の抗体または抗体断片を霊長類に投与した少なくとも30日後に、1つ以上のRSV抗原および／または1つ以上のhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片の、少なくとも0.4μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、40μg/ml、好ましくは少なくとも80μg/ml、少なくとも100μg/ml、少なくとも120μg/ml、少なくとも150μg/ml、少なくとも200μg/ml、少なくとも250μg/ml、または少なくとも300μg/mlの霊長類中の血清力価が達成される。さらに別の実施形態において、約5mg/kg未満、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、または30mg/kgの抗体または抗体断片を霊長類に投与した少なくとも30日後に、1つ以上のRSV抗原および／または1つ以上のhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片の、少なくとも200μg/ml、少なくとも250μg/ml、少なくとも300μg/ml、少なくとも350μg/ml、または少なくとも400μg/mlの霊長類中の血清力価が達成される。
【０２６０】
本発明は、哺乳動物、好ましくはヒトの呼吸系ウイルス感染が引き起こす1つ以上の症状を予防、治療または改善する方法であって、第1の用量の(i)1つ以上のRSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片の予防的または治療的有効量、および(ii)1つ以上のhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片の予防的または治療的有効量を該哺乳動物に投与することを含み、ここで該有効量は、1.5mg/kg未満、8mg/kg、15mg/kg、50mg/kg、または100mg/kg未満であるかまたはほぼこの量の抗体またはその抗原結合断片であり、第1の投与の30日後および以後の任意の投与の前に40μg/mlより大きい血清力価を与える、方法を提供する。ある実施形態において、(i)1つ以上のPIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片の第1の用量の20mg/kg未満、15mg/kg、10mg/kg、好ましくは5mg/kg未満、3mg/kg未満、または1mg/kg未満またはほぼこの量；および(ii)1つ以上のhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片の第2の用量の20mg/kg未満、15mg/kg、10mg/kg、5mg/kg未満、3mg/kg未満、または1mg/kg未満またはほぼこの量を投与して、第1の用量の抗体または抗体断片の投与の30日後および以後の投与の前に、少なくとも40μg/ml、少なくとも80μg/ml、少なくとも120μg/ml、少なくとも150μg/ml、少なくとも200μg/ml、少なくとも250μg/ml、または少なくとも300μg/mlの血清抗体力価が達成されるようにすることにより、ヒト被験体の呼吸系ウイルス感染が予防または治療されるか、または呼吸系ウイルス感染が引き起こす1つ以上の症状が改善される。別の実施形態において、第1の用量の約15mg/kgの、(i)1つ以上のRSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片；および(ii)1つ以上のhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片を投与して、第1の用量の抗体またはその抗体断片の投与の30日後および以後の投与の前に、少なくとも10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、75μg/ml、または少なくとも100μg/ml、少なくとも200μg/ml、少なくとも250μg/ml、少なくとも300μg/ml、少なくとも350μg/ml、または少なくとも400μg/mlの血清抗体力価が達成されるようにすることにより、ヒト被験体の呼吸系感染が予防または治療されるか、または呼吸系ウイルス感染が引き起こす1つ以上の症状が改善される。
【０２６１】
ある実施形態において呼吸系ウイルス感染は、RSVおよび／またはhMPVによる感染である。
【０２６２】
本発明のある実施形態において抗体の断片、すなわちRSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体、および／またはhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体は、可変重鎖（「VH」）ドメインを含む。
【０２６３】
本発明のある実施形態において、RSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体の断片、および／またはhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体の断片は、可変軽鎖（「VL」）を含む。
【０２６４】
ある実施形態において少なくとも1つの断片または抗体は、VHドメインおよびVLドメインを含む。
【０２６５】
本発明のある実施形態において抗体は、持続放出性製剤により投与される。
【０２６６】
ある実施形態においてRSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片（以後「抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片」）、およびhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片（以後「抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片」）は、同時に投与される。さらに具体的なある実施形態において抗体は、同じ経路（特に限定されないが、静脈内または筋肉内）により同時に投与される。他のある実施形態において抗体は、異なる経路により同時に投与される。
【０２６７】
他のある実施形態において抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片は、抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片の投与の前に投与される。他のある実施形態において抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片の投与の前に投与される。
【０２６８】
ある実施形態において抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片は、一定期間で分けられて個々の投与の順序で投与され、抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、抗RSV抗原抗体の投与の前、同時、または後に投与される。ある実施形態において抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、一定期間で分けられて個々の投与の順序で投与され、抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片は、抗hMPV抗原抗体の投与の前、同時、または後に投与される。ある実施形態において期間は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、1ヶ月、2ヶ月、または3ヶ月である。
【０２６９】
ある実施形態において抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片と抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片の両方は、一定期間で分けられて個々の投与の順序で投与される。さらに具体的なある実施形態において投与の2つの順序は互いに同期している。他の実施形態において2つの順序は、互いに同期していない。
【０２７０】
本発明は、(i)1つ以上のRSV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片、および(ii)1つ以上のhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片を含む組成物を提供する。ある実施形態において医薬組成物は、薬剤学的に許容される担体をさらに含む。
【０２７１】
ある実施形態において同じ抗体の投与は繰り返してもよく、投与は、少なくとも10日、15日、30日、2ヶ月、3ヶ月、または少なくとも6ヶ月分離される。ある実施形態において同じ抗体の投与は繰り返してもよく、投与は、多くても10日、15日、30日、2ヶ月、3ヶ月、または少なくとも6ヶ月分離される。
【０２７２】
4.2.3 抗PIV抗原抗体および抗hMPV抗原抗体の組合せ予防と治療
本発明は、被験体の呼吸系ウイルス感染が引き起こす1つ以上の症状を予防および／または治療、および改善する方法であって、(i)1つ以上のPIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の第1の抗体またはその抗原結合断片；および(ii)1つ以上のhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の第2の抗体またはその抗原結合断片を、該被験体に投与することを含む方法を提供する。具体的な実施形態において被験体は、PIVおよびhMPVに感染したヒトである。具体的な実施形態においてこの方法は、被験体がPIVおよびhMPVに感染することを防ぐ。具体的な実施形態において被験体は、PIVおよびhMPV感染に罹りやすい。
【０２７３】
ある実施形態において1つ以上の第1の抗体はPIVを中和する。ある実施形態において1つ以上の第1の抗体は、in vitroマイクロ中和アッセイ（後述）で、少なくとも25％、少なくとも30％、少なくとも35％、少なくとも40％、少なくとも45％、少なくとも50％、少なくとも55％、少なくとも60％、少なくとも65％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも98％、または少なくとも99％のPIVを中和する。ある実施形態において1つ以上の第1の抗体は、in vitroマイクロ中和アッセイ（セクション4.8.4に記載）で、少なくとも25％、多くても30％、多くても35％、多くても40％、多くても45％、多くても50％、多くても55％、多くても60％、多くても65％、多くても70％、多くても75％、多くても80％、多くても85％、多くても90％、多くても95％、多くても98％、または多くても99％のPIVを中和する。
【０２７４】
ある実施形態において1つ以上の第2の抗体はhMPVを中和する。ある実施形態において1つ以上の第2の抗体は、in vitroマイクロ中和アッセイ（後述）で、少なくとも25％、少なくとも30％、少なくとも35％、少なくとも40％、少なくとも45％、少なくとも50％、少なくとも55％、少なくとも60％、少なくとも65％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも98％、または少なくとも99％のhMPVを中和する。ある実施形態において1つ以上の第1の抗体は、in vitroマイクロ中和アッセイで、多くても25％、多くても30％、多くても35％、多くても40％、多くても45％、多くても50％、多くても55％、多くても60％、多くても65％、多くても70％、多くても75％、多くても80％、多くても85％、多くても90％、多くても95％、多くても98％、または多くても99％のhMPVを中和する。
【０２７５】
ある実施形態において、PIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体の少なくとも1つは、高親和性および／または高結合活性抗体であり、および／またはより長い血清半減期を有する。ある実施形態において、hMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体の少なくとも1つは、高親和性および／または高結合活性抗体であり、および／またはより長い血清半減期を有する。
【０２７６】
本発明の抗体の高親和性および／または高結合活性は、PIV感染および／またはhMPV感染が引き起こす症状の改善のために、非高親和性または非高結合活性と比較して、より少量の抗体の使用を可能にする。1つ以上のPIV抗原に免疫特異的に結合するより少量の抗体および1つ以上のhMPV抗原に免疫特異的に結合するより少量の抗体の使用は、副作用の確率を低下させるとともにより有効な予防を提供する。さらに抗体の高親和性および／または高結合活性は、それぞれPIV感染およびhMPV感染が引き起こす症状の予防、中和、治療および改善に従来必要であると考えられていたものより、より低頻度の該抗体の投与を可能にする。
【０２７７】
ある実施形態においてPIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体および／またはhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体は、PIV感染の部位に直接投与することができる。特に少なくとも1つの抗体は肺送達により投与することができる。そのような投与モードは、被験体への抗体の投与用量と頻度を低下させることができる。
【０２７８】
ある実施形態において投与された抗体の少なくとも1つの血清力価は、1μg/mlまたはそれ以下、2μg/mlまたはそれ以下、5μg/mlまたはそれ以下、6μg/mlまたはそれ以下、10μg/mlまたはそれ以下、15μg/mlまたはそれ以下、20μg/mlまたはそれ以下、または25μg/mlまたはそれ以下、100μg/mlまたはそれ以下、または250μg/mlまたはそれ以下である。ある実施形態において投与された抗体の少なくとも1つの血清力価は、少なくとも1μg/ml、少なくとも2μg/ml、少なくとも5μg/ml、少なくとも6μg/ml、少なくとも10μg/ml、少なくとも15μg/ml、少なくとも20μg/ml、少なくとも25μg/ml、少なくとも50μg/ml、少なくとも100μg/ml、少なくとも125μg/ml、少なくとも150μg/ml、少なくとも175μg/ml、少なくとも200μg/ml、少なくとも225μg/ml、少なくとも250μg/ml、少なくとも275μg/ml、少なくとも300μg/ml、少なくとも325μg/ml、少なくとも350μg/ml、少なくとも375μg/ml、または少なくとも400μg/mlである。好ましくはPIV抗原および／またはhMPV抗原に免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片の第1の用量の投与の約20日（好ましくは25、30、35、または40日）後に、かつ該抗体またはその抗原結合断片の他の用量の投与無しで、ある血清力価、または1μg/mlまたはそれ以下、2μg/mlまたはそれ以下、5μg/mlまたはそれ以下、6μg/mlまたはそれ以下、10μg/mlまたはそれ以下、15μg/mlまたはそれ以下、20μg/mlまたはそれ以下、または25μg/mlまたはそれ以下の血清力価が達成される。好ましくはPIV抗原および／またはhMPV抗原に免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片の第1の用量の投与の約20日（好ましくは25、30、35、または40日）後に、かつ該抗体またはその抗原結合断片の他の用量の投与無しで、ある血清力価、または少なくとも1μg/ml、少なくとも2μg/ml、少なくとも5μg/ml、少なくとも6μg/ml、少なくとも10μg/ml、少なくとも15μg/ml、少なくとも20μg/ml、少なくとも25μg/ml、少なくとも50μg/ml、少なくとも100μg/ml、少なくとも125μg/ml、少なくとも150μg/ml、少なくとも175μg/ml、少なくとも200μg/ml、少なくとも225μg/ml、少なくとも250μg/ml、少なくとも275μg/ml、少なくとも300μg/ml、少なくとも325μg/ml、少なくとも350μg/ml、少なくとも375μg/ml、または少なくとも400μg/mlの血清力価が達成される。
【０２７９】
具体的な実施形態において、100mg/kg未満、50mg/kg、10mg/kg、2.5mg/kg未満、1mg/kg未満、または0.5mg/kg未満の用量の抗体または抗体断片を非霊長類哺乳動物に投与した少なくとも1日後に、PIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片およびhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片の、少なくとも0.4μg/ml、1μg/ml、4μg/ml、10μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、少なくとも100μg/ml、少なくとも120μg/ml、少なくとも150μg/ml、少なくとも200μg/ml、少なくとも250μg/ml、または少なくとも300μg/mlの非霊長類哺乳動物中の血清力価が達成される。別の実施形態において、約5mg/kgの用量の抗体または抗体断片を非霊長類哺乳動物に投与した少なくとも1日後に、1つ以上のPIV抗原に免疫特異的に結合するかおよび／またはhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片の、少なくとも150μg/ml、少なくとも200μg/ml、少なくとも250μg/ml、少なくとも300μg/ml、少なくとも350μg/ml、または少なくとも400μg/mlの非霊長類哺乳動物中の血清力価が達成される。
【０２８０】
別の実施形態において、5mg/kg未満、好ましくは3mg/kg未満、1mg/kg未満、または0.5mg/kg未満の用量の抗体または抗体断片を霊長類に投与した少なくとも30日後に、1つ以上のPIV抗原および／または1つ以上のhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片の、少なくとも0.4μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、40μg/ml、好ましくは少なくとも80μg/ml、少なくとも100μg/ml、少なくとも120μg/ml、少なくとも150μg/ml、少なくとも200μg/ml、少なくとも250μg/ml、または少なくとも300μg/mlの霊長類中の血清力価が達成される。さらに別の実施形態において、約15mg/kgの抗体または抗体断片を霊長類に投与した少なくとも30日後に、1つ以上のPIV抗原および／または1つ以上のhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片の、少なくとも200μg/ml、少なくとも250μg/ml、少なくとも300μg/ml、少なくとも350μg/ml、または少なくとも400μg/mlの霊長類中の血清力価が達成される。
【０２８１】
本発明は、哺乳動物、好ましくはヒトの呼吸系ウイルス感染が引き起こす1つ以上の症状を予防、治療または改善する方法であって、第1の用量の(i)1つ以上のPIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片の予防的または治療的有効量、および(ii)1つ以上のhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片の予防的または治療的有効量を該哺乳動物に投与することを含み、ここで該有効量は、1.5mg/kg未満、15mg/kg、50mg/kg、または100mg/kg未満であるかまたはほぼこの量の抗体またはその抗原結合断片であり、第1の投与の30日後および以後の任意の投与の前に0.4μg/mlより大きい、1μg/ml、4μg/ml、10μg/ml、40μg/mlの血清力価を与える、方法を提供する。ある実施形態において、(i)1つ以上のPIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片の第1の用量の100mg/kg未満または10mg/kg未満、約15mg/kg、5mg/kg未満、3mg/kg未満、または1mg/kg未満またはほぼこの量；および(ii)1つ以上のhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片の第2の用量の10mg/kg未満、約15mg/kg、5mg/kg未満、3mg/kg未満、または1mg/kg未満またはほぼこの量を投与して、第1の用量の抗体または抗体断片の投与の30日後および以後の投与の前に、少なくとも0.4μg/ml、1μg/ml、4μg/ml、10μg/ml、40μg/ml、好ましくは少なくとも80μg/ml、または少なくとも120μg/ml、少なくとも150μg/ml、少なくとも200μg/ml、少なくとも250μg/ml、または少なくとも300μg/mlの血清抗体力価が達成されるようにすることにより、ヒト被験体の呼吸系ウイルス感染が予防または治療されるか、または呼吸系ウイルス感染が引き起こす1つ以上の症状が改善される。別の実施形態において、第1の用量の約15mg/kgの、(i)1つ以上のPIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片；および(ii)1つ以上のPIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片を投与して、第1の用量の抗体またはその抗体断片の投与の30日後および以後の投与の前に、少なくとも1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、50μg/ml、75μg/ml、または少なくとも100μg/ml、少なくとも200μg/ml、少なくとも250μg/ml、少なくとも300μg/ml、少なくとも350μg/ml、または少なくとも400μg/mlの血清抗体力価が達成されるようにすることにより、ヒト被験体の呼吸系感染が予防または治療されるか、または呼吸系ウイルス感染が引き起こす1つ以上の症状が改善される。
【０２８２】
ある実施形態において呼吸系ウイルス感染は、PIVおよび／またはhMPVによる感染である。
【０２８３】
本発明のある実施形態において抗体の断片、すなわちPIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体、および／またはhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体は、可変重鎖（「VH」）ドメインを含む。
【０２８４】
本発明のある実施形態において、PIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体の断片、および／またはhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体の断片は、可変軽鎖（「VL」）を含む。
【０２８５】
ある実施形態において少なくとも1つの断片または抗体は、VHドメインおよびVLドメインを含む。
【０２８６】
本発明のある実施形態において抗体は、持続放出性製剤により投与される。
【０２８７】
ある実施形態においてPIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片（以後「抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片」）、およびhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片（以後「抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片」）は、同時に投与される。さらに具体的なある実施形態において抗体は、同じ経路（特に限定されないが、静脈内または筋肉内）により同時に投与される。他のある実施形態において抗体は、異なる経路により同時に投与される。
【０２８８】
他のある実施形態において抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片は、抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片の投与の前に投与される。他のある実施形態において抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片の投与の前に投与される。
【０２８９】
ある実施形態において抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片は、一定期間で分けられて個々の投与の順序で投与され、抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、抗PIV抗原抗体の投与の前、同時、または後に投与される。ある実施形態において抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、一定期間で分けられて個々の投与の順序で投与され、抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片は、抗hMPV抗原抗体の投与の前、同時、または後に投与される。ある実施形態において期間は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、1ヶ月、2ヶ月、または3ヶ月である。
【０２９０】
ある実施形態において抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片および抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、一定期間で分けられて個々の投与の順序で投与される。さらに具体的なある実施形態において投与の2つの順序は互いに同期している。他の実施形態において2つの順序は、互いに同期していない。
【０２９１】
本発明は、(i)1つ以上のPIV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片、および(ii)1つ以上のhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその抗原結合断片を含む組成物を提供する。ある実施形態において医薬組成物は、薬剤学的に許容される担体をさらに含む。
【０２９２】
ある実施形態において同じ抗体の投与は繰り返してもよく、投与は、少なくとも10日、15日、30日、2ヶ月、3ヶ月、または少なくとも6ヶ月分離される。ある実施形態において同じ抗体の投与は繰り返してもよく、投与は、多くても10日、15日、30日、2ヶ月、3ヶ月、または少なくとも6ヶ月分離される。
【０２９３】
4.3  抗体の予防的および治療的使用
本発明の方法で使用される抗体は、抗RSV抗原抗体、抗PIV抗原抗体、および／または抗hMPV抗原抗体である。
【０２９４】
本発明は、RSV、PIVおよび／またはhMPV感染が引き起こす1つ以上の症状を予防、治療、または改善するための、哺乳動物（好ましくはヒト）に抗体またはその抗原結合断片を投与することを含む抗体ベースの治療法に関する。本発明の方法は、(i)1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片および1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片を投与し；(ii)1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片および1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片を投与し；(iii)1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片、1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片、および1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片を投与することを含む。本発明の予防および治療組成物は、特に限定されないが、(i)1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片および1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片；(ii)1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片および1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片；(iii)1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片、1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片、および1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片を含む。本発明の方法で使用される抗体またはその断片は、当該分野で公知のまたは本明細書に記載の薬剤学的に許容される組成物で提供される。
【０２９５】
RSV、PIVおよび／またはhMPVがその宿主細胞受容体に結合することを妨害しないがRSV、PIVおよび／またはhMPV複製を阻害またはダウンレギュレートする抗体またはその抗原結合断片はまた、呼吸系感染症が引き起こす1つ以上の症状を予防、治療、または改善するために、哺乳動物に投与することができる。RSV、PIVおよび／またはhMPV複製を阻害またはダウンレギュレートする抗体またはその抗原結合断片の能力は、本明細書に記載の方法または当該分野で公知の方法により測定される。例えばRSV、PIVおよび／またはhMPV複製の阻害またはダウンレギュレーションは、哺乳動物（好ましくはヒト）の肺中のRSV力価を検出することにより測定することができる。
【０２９６】
具体例において本発明の方法で使用される抗体またはその断片は、RSV、PIVおよび／またはhMPV複製を、該抗体または抗体断片の非存在下でのそのRSV、PIVおよび／またはhMPV複製に対して、少なくとも99％、少なくとも95％、少なくとも90％、少なくとも85％、少なくとも80％、少なくとも75％、少なくとも70％、少なくとも60％、少なくとも50％、少なくとも45％、少なくとも40％、少なくとも45％、少なくとも35％、少なくとも30％、少なくとも25％、少なくとも20％、または少なくとも10％、阻害またはダウンレギュレートする。別の実施形態において、抗体の組合せ、抗体断片の組合せ、または抗体と抗体断片の組合せは、RSV、PIVおよび／またはhMPV複製を、該抗体または抗体断片の非存在下でのRSVの複製に対して、少なくとも99％、少なくとも95％、少なくとも90％、少なくとも85％、少なくとも80％、少なくとも75％、少なくとも70％、少なくとも60％、少なくとも50％、少なくとも45％、少なくとも40％、少なくとも45％、少なくとも35％、少なくとも30％、少なくとも25％、少なくとも20％、または少なくとも10％、阻害またはダウンレギュレートする。
【０２９７】
1つ以上のRSV抗原、1つ以上のPIV抗原、および／または1つ以上のhMPV抗原に免疫特異的に結合する本発明の1つ以上の抗体またはその断片は、治療薬として体に局所的にまたは全身的に使用される。本発明の方法で使用される抗体またはその断片はまた、例えば抗体と相互作用するエフェクター細胞の数または活性を上昇させるように機能する、他のモノクローナル抗体もしくはキメラ抗体と組合せて、またはリンホカインもしくは造血性増殖因子(例えば、IL-2、IL-3およびIL-7）と組合せて有効に使用される。本発明の方法で使用される抗体またはその断片はまた、例えば免疫応答を上昇させるように機能する、他のモノクローナル抗体もしくはキメラ抗体と組合せて、またはリンホカインもしくは造血性増殖因子(例えば、IL-2、IL-3およびIL-7）と組合せて、有効に使用される。本発明の方法で使用される抗体またはその断片はまた、RSV感染を治療するのに使用される1つ以上の薬剤（例えば、抗ウイルス剤）と組合せて、有効に使用される。本発明の方法で使用される抗体またはその断片は、1つ以上の以下の薬剤と組合せて使用される：NIH-351（Gemini Technologies）、RSVf-2（Intracel）、F-50042（Pierre Fabre）、T-786（Trimeris）、VP-36676（ViroPharma）、RFI-641（American Home Products）、VP-14637（ViroPharma）、PFP-1と抗ウイルスPFP-2（American Home Products）、RSVワクチン（Avant Immunotherapeutics）、およびF-50077（Pierre Fabre）。ある実施形態において本発明の方法で使用される抗体または断片は、BramsらのUS Patent No. 5,811,524（1998年9月22日発行）（これは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載のように、RSV Fタンパク質に特異的な高親和性ヒトモノクローナル抗体と組合せて投与してもよい。
【０２９８】
本発明の方法で使用される抗体は、単独でまたは他の種類の治療法（例えば、ホルモン療法、免疫療法、および抗炎症剤）と組合せて投与される。一般に、患者と同じ種の起源または種の反応性（抗体の場合）の生成物を投与することが好ましい。すなわち、好適な実施形態において、ヒトまたはヒト化抗体、断片誘導体、類似体または核酸が、治療または予防のためにヒト患者に投与される。
【０２９９】
ある実施形態において、RSV、PIVおよび／またはhMPVについてのイムノアッセイ、RSV、PIVおよび／またはhMPV感染の予防、およびRSV、PIVおよび／またはhMPV感染の治療のために、RSV、PIVおよび／またはhMPV抗原に免疫特異的に結合する、高親和性および／または強力なin vivo阻害性抗体および／または中和抗体が使用される。
【０３００】
ある実施形態において、嚢胞性繊維症、気管支肺異形成症、先天性心疾患、先天性免疫不全症もしくは後天性免疫不全症を有するヒトまたは骨髄移植を受けたヒトの、呼吸系ウイルス感染が引き起こす1つ以上の症状を治療、予防、または改善するために、本発明の治療または予防法が使用される。ある実施形態において本発明の治療および／または予防法は、RSV感染が引き起こす1つ以上の症状を治療、予防、または改善するために、ヒト幼児、好ましくは未熟児で生まれたヒト幼児またはRSV感染で入院するリスクのあるヒト幼児で使用される。ある実施形態において、老人またはグループホーム（例えば、養護ホームまたはリハビリセンター）のヒトの呼吸系ウイルス感染が引き起こす1つ以上の症状を治療、予防、または改善するために、本発明の治療および／または予防法が使用される。
【０３０１】
本発明のある実施形態において、本発明の治療法の標的集団は年齢により規定される。ある実施形態において本発明の治療法の標的集団は、呼吸器感染以外に疾患または障害により特徴付けられる。
【０３０２】
具体的な実施形態において標的集団は、2才より小さい小児を包含する。より具体的な実施形態において2才より小さい小児は、呼吸器感染症以外の疾患に罹っていない。
【０３０３】
他の実施形態において標的集団は、5才より大きい患者を包含する。より具体的な実施形態において5才より大きい患者は、追加の疾患または障害（嚢胞性繊維症、白血病、および非ホジキンリンパ腫を含む）に罹っているか、または最近骨髄移植もしくは腎移植を受けた。
【０３０４】
本発明の具体的な実施形態において標的集団は、hMPV感染が宿主の免疫抑制に関連する被験体を包含する。具体的な実施形態において被験体は、免疫無防備状態の個体である。具体的な実施形態において本発明の方法で治療される被験体はまた、HIVに感染している。
【０３０５】
具体的な実施形態において本発明の方法で治療される被験体は、重症のシンシチウムウイルス細気管支炎に感染される。理論に拘束されるつもりは無いが、重症のシンシチウムウイルス細気管支炎を有すると診断された個体はまた、hMPVに感染している。具体的な実施形態において本発明の方法で治療される被験体は、呼吸器感染症を有すると診断されている。
【０３０６】
ある実施形態において本発明の方法の標的集団は老人を包含する。
【０３０７】
具体的な実施形態において本発明の方法で治療または診断される被験体は、冬季にhMPVに感染した。
【０３０８】
ある実施形態において有効量の抗RSV抗原抗体、抗PIV抗原抗体、および／または抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片は、例えば哺乳動物の喀痰サンプルまたは肺洗浄液中のRSV、PIVおよび／またはhMPVの濃度で測定される肺中のRSV、PIVおよび／またはhMPV力価を低下させる。ある実施形態において、本発明のagの有効量は、哺乳動物の免疫応答を誘導するのに充分である。
【０３０９】
ある実施形態において本発明の方法で使用される抗体は、持続放出性製剤を介して投与される。
【０３１０】
ある実施形態において本発明の方法で使用される抗体は、ヘプタッド繰り返しに結合する。ある実施形態において本発明の方法で使用される抗体は、RSV、PIV、またはhMPVのヘプタッド繰り返しに結合する。ある実施形態において本発明の方法で使用される抗体は、RSV、PIV、またはhMPVのFタンパク質のヘプタッド繰り返しに結合する。より具体的なある実施形態において本発明の方法で使用される抗体は、哺乳動物メタニューモウイルス（例えばhMPV）のFタンパク質のヘプタッド繰り返しに結合する。より具体的なある実施形態において本発明の方法で使用される抗体は、哺乳動物メタニューモウイルス（例えばhMPV）のFタンパク質のヘプタッド繰り返し1またはヘプタッド繰り返し2に結合する。
【０３１１】
本発明のある実施形態においてサブグループAまたはサブグループBのhMPVの抗原に免疫特異的に結合する抗体は、本発明の方法で使用することができる。本発明のある実施形態において、変種A1、A2、B1またはB2のhMPVの抗原に免疫特異的に結合する抗体。
【０３１２】
4.3.1 抗体の投与方法
本発明は、有効量の1つ以上の抗体またはその断片、または本発明の1つ以上の抗体もしくはその断片を含む医薬組成物を被験体に投与することによる、呼吸系ウイルス感染が引き起こす1つ以上の症状の治療、予防、および改善方法を提供する。好適な態様において、本発明の方法で使用される抗体は、混合物（例えば、抗RSV抗原抗体、抗PIV抗原抗体、および／または抗hMPV抗原抗体、またはこれらの任意の組合せを含む組成物）として投与される。好適な態様において抗体またはその断片は実質的に精製されている（すなわち、その作用を制限するかまたは好ましくない副作用を引き起こす物質を実質的に含まない）。被験体は、好ましくは哺乳動物、例えば非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラットなど）および霊長類（例えば、カニクイザルのようなサル、およびヒト）である。好適な実施形態において、被験体はヒトである。別の好適な実施形態において、被験体はヒト幼児または未熟児で生まれたヒト幼児である。より具体的な実施形態において未熟児で生まれた幼児は、妊娠30〜35週齢または35〜40週齢で生まれた。別のある実施形態において未熟児で生まれた幼児は、妊娠32週齢未満で生まれた。別のある実施形態において未熟児で生まれた幼児は、妊娠35〜38週齢未満で生まれた。他の実施形態において被験体は、妊娠38〜40週齢または40週齢以後に生まれた幼児である。未満で生まれた。別の実施形態において、被験体は、嚢胞性繊維症、気管支肺異形成症、先天性心疾患、先天性免疫不全症もしくは後天性免疫不全症を有するヒト、骨髄移植を受けたヒト、または老人である。
【０３１３】
種々のデリバリーシステムが知られており、例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセルへの封入、抗体または抗体断片を発現することができる組換え細胞、受容体介在エンドサイトーシス（例えば、WuとWu、J. Biol. Chem. 262:4429-4432 (1987)を参照）、レトロウイルスまたは他のベクターの一部としての核酸の構築などにより、本発明の方法で使用される抗体またはその断片を投与するのに使用することができる。抗体またはその断片または医薬組成物を投与する方法には、特に限定されないが、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内および皮下）、硬膜外、および粘膜（例えば、鼻内および経口経路）がある。具体例において、抗体もしくはその断片または医薬組成物は、筋肉内、静脈内、または皮下投与される。組成物は、任意の便利な経路により投与され、例えば注入または大量注射、上皮または皮膚粘膜裏層（例えば、口腔粘膜、直腸および小腸粘膜など）を介する吸収により投与され、他の生物活性物質とともに投与されてよい。投与は全身的または局所的でもよい。さらに肺投与も使用され、例えば、吸入器またはネブライザーを使用して、およびエアゾル剤で製剤化して行われる。例えば、US Patent No. 6,019,968、5,985,320、5,985,309、5,934,272、5,874,064、5,855,913、5,290,540、および4,880,078；およびPCT公報WO92/19244、WO97/32572、WO97/44013、WO98/31346、およびWO99/66903を参照されたい（これらのそれぞれは、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。好適な実施形態において、本発明の方法で使用される抗体もしくはその断片、または組成物は、Alkermes AIR（登録商標）肺薬剤デリバリー技術（Alkermes, Inc., Cambridge, MA）を使用して投与される。
【０３１４】
ある実施形態において、抗体またはその断片は密封容器（例えば、抗体または抗体断片の量を示すアンプルまたは小袋）中に入れられる。ある実施形態において各抗体またはその断片または組合せは、密封容器中の乾燥した無菌の凍結乾燥粉末または水分を含まない濃縮物として供給され、被験体への投与のために、例えば水または食塩水で適切な濃度に復元される。安定化された液体抗体製剤については、米国仮特許出願第60/388,920号（2002年6月14日出願）および60/388,921号（2002年6月14日）（これらは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。好ましくは各抗体またはその抗体断片または組合せは、密封容器中の乾燥した無菌の凍結乾燥粉末として、少なくとも5mg、さらに好ましくは少なくとも10mg、少なくとも15mg、少なくとも25mg、少なくとも35mg、少なくとも45mg、少なくとも50mg、または少なくとも75mgの単位服用量で供給される。各凍結乾燥抗体またはその断片または組合せは、元々の容器中で2〜8℃で保存すべきであり、抗体またはその断片は、復元後、12時間以内、好ましくは6時間以内、5時間以内、3時間以内、または1時間以内で投与すべきである。別の実施形態において抗体またはその断片は、抗体または抗体断片の量と濃度を示す密封容器中で液体型で供給される。好ましくは抗体またはその断片の液体型は密封容器中で、少なくとも1mg/ml、さらに好ましくは少なくとも2.5mg/ml、少なくとも5mg/ml、少なくとも8mg/ml、少なくとも10mg/ml、少なくとも15mg/ml、少なくとも25mg/ml、少なくとも50mg/ml、少なくとも100mg/ml、少なくとも125mg/ml、少なくとも150mg/ml、少なくとも200mg/ml、少なくとも250mg/ml、少なくとも、または約2.5mg/ml、5mg/ml、8mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、25mg/ml、50mg/ml、100mg/ml、125mg/ml、150mg/ml、200mg/ml、または250mg/mlで供給される。
【０３１５】
具体例において、抗体を治療に必要な部位に局所的に投与することが好ましい。これは例えば、特に限定されないが注射かまたはインプラントによる局所的注入により行われ、このインプラントは、多孔性、非多孔性、またはゼラチン性物質（例えば、sialastic膜のような膜、または繊維）でもよい。好ましくは抗体またはその断片を投与する時は、抗体またはその断片が吸収されない材料を使用するように注意しなければならない。
【０３１６】
別の実施形態において、抗体は、小胞特にリポソーム中でデリバリーされる（Langer, Science 249:1527-1533 (1990)；Treatら、Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer、Lopez-BeresteinとFidler（編）、Liss, ニューヨーク、353-365頁（1989）；Lopez-BeresteinとFidler、同上、317-327頁；総説は同上）。
【０３１７】
さらに別の実施形態において、組成物は、制御放出システムまたは持続放出システムでデリバリーされる。ある実施形態において、ポンプを使用して制御放出または持続放出が達成される（Langer、前述；Sefton，1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:20；Buchwaldら、1980, Surgery 88:507；Saudekら、1989, New Engl. J. Med. 321:574）。別の実施形態において、ポリマー物質を使用して、本発明の抗体またはその断片の制御放出または持続放出が達成される（例えば、Medical Applications of Controlled Release、LangerとWise（編）、CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974)；Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball（編）、Wiley、ニューヨーク (1984)；RangerとPeppas, 1983, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61；Levyら、1985, Science 228:190,；Duringら、1989, Ann. Neurol. 25:351；Howardら、1989, J. Neurosurg. 71:105）；US Patent No. 5,679,377；US Patent No. 5,916,597；US Patent No. 5,912,015；US Patent No. 5,989,463；US Patent No. 5,128,326；PCT公報 WO99/15154；およびPCT公報 WO99/20253を参照されたい。持続放出性製剤に使用されるポリマーの例には、特に限定されないが、ポリ（2-ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン-co-酢酸ビニル）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（PLG）、ポリアンヒドリド、ポリ（N-ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（PLA）、ポリ（ラクチド-co-グリコリド）（PLGA）、およびポリオルトエステルがある。好適な実施形態において、持続放出性製剤で使用されるポリマーは不活性であり、浸出性の不純物を含まず、保存しても安定であり、無菌で生分解性である。さらに別の実施形態において、制御放出システムまたは持続放出システムは、治療標的（すなわち、肺）の近傍に置くことができ、従って全身に対する量のほんの一部しか必要ではない（例えば、Goodson、Medical Applications of Controlled Release、前述、第2巻、115-138頁（1984）を参照）。
【０３１８】
制御放出システムは、Langer（1990, Science 249:1527-1533）による総説がある。1つ以上の抗体またはその断片を含む持続放出性製剤を製造するには、当業者に公知の任意の技術を使用することができる。例えば、US Patent No. 4,526,938、PCT公報 WO91/05548、PCT公報 WO96/20698、Ningら、1996、「持続放出ゲルを使用するヒト結腸癌異種移植片の腫瘍内放射線療法」、Radiotherapy & Oncology 39:179-189, Songら、1995、「長期循環エマルジョンの抗体性肺ターゲティング」、PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50:372-397, Cleekら、1997、「心血管疾患応用のためのbFGF抗体の生分解性ポリマー担体」、Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-854 およびLamら1997、「局所的デリバリーのための組換えヒト化モノクローナル抗体のマイクロカプセル化」、Proc. Int'l Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-760を参照されたい（これらのそれぞれは、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０３１９】
ある実施形態において抗体は繰り返し投与されて、投与は少なくとも10日、15日、30日、2ヶ月、3ヶ月または少なくとも6ヶ月分離される。ある実施形態において抗体は繰り返し投与されて、投与は多くても10日、15日、30日、2ヶ月、3ヶ月または多くても6ヶ月分離される。
【０３２０】
ある実施形態において抗体は、肺感染症のリスクが高いシーズンに投与される。具体的な実施形態において抗体はRSVシーズンに投与される。
【０３２１】
4.4 医薬組成物
本発明はまた医薬組成物を提供する。このような組成物は以下の1つを含む：1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片、および1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片；(ii)1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片、および1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片；または(iii)1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片、1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片。ある実施形態において医薬組成物は、薬剤学的に許容される担体を含む。具体例において「薬剤学的に許容される」という用語は、連邦政府または州政府の認可機関により認可されているか、または米国薬局方もしくは動物特にヒトでの使用についての他の一般的に認識されている薬局方で認められていることを意味する。「担体」という用語は、希釈剤、アジュバント（例えば、フロインドアジュバント（完全および不完全））、賦形剤、またはそれを用いて治療が行われるビヒクルを含む。このような医薬担体は、例えば水や油のような無菌液体でもよく、石油、動物、植物もしくは合成起源のものがあり、例えばピーナツ油、大豆油、ミネラル油、ゴマ油などを含む。医薬組成物を静脈内投与する時は、水が好適な担体である。食塩水溶液およびブドウ糖水溶液およびグリセロール溶液もまた液体担体として、特に注射溶液に使用することができる。適当な医薬賦形剤には、デンプン、グルコース、乳糖、ショ糖、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどがある。所望であれば、組成物はまた、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはpH緩衝化剤を含むことができる。これらの組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、持続放出性製剤などの形を取ることができる。経口製剤は、標準的担体（例えば、医薬グレードのマンニトール、乳糖、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなど）を含むことができる。適当な医薬担体の例は、E.W. Martinによる「レミントンの薬剤科学（Remington's Pharmaceutical Sciences）」に記載されている。このような組成物は、予防的または治療的有効量の抗体またはその断片を、好ましくは精製された形で、適当量の担体とともに含有し、患者への正しい投与のための形を提供する。製剤は、投与様式に合うものでなければならない。
【０３２２】
具体的な実施形態において本発明の組成物は、米国仮特許出願第60/388,920号（2002年6月14日出願）および60/388,921号（2002年6月14日）（これらは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【０３２３】
好適な実施形態において、組成物は、ヒトへの静脈内投与に適合させた医薬組成物として、ルーチン的方法に従って調製される。典型的には静脈内投与のための組成物は、無菌の等張バッファー水溶液中の溶液である。必要であれば、注射部位の疼痛を緩和するために、組成物は可溶化剤および局所的麻酔剤（例えば、lignocamne）を含んでもよい。
【０３２４】
一般に本発明の組成物の成分は単位投与型で別々に、例えば活性物質の量を示すアンプルまたは小袋のような密封容器中の凍結乾燥粉末もしくは水分を含まない濃度として供給される。組成物が注入により投与される場合、これは無菌の医薬グレードの水または食塩水を含有する注入ビンで与えられる。組成物が注射により投与される場合、注入用無菌水または食塩水のアンプルが提供され、成分は投与前に混合される。
【０３２５】
本発明の組成物は、中性または塩の型で調製される。薬剤学的に許容される塩には、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来する陰イオンと形成されるもの、およびナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第2鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、2-エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来する陽イオンと形成されるものがある。
【０３２６】
呼吸系ウイルス感染が引き起こす1つ以上の症状の治療、予防、または改善に有効な本発明の組成物の量は、標準的な臨床的方法により決定することができる。例えば、呼吸系ウイルス感染が引き起こす1つ以上の症状の治療、予防、または改善に有効な組成物の投与量は、組成物をコトンラットに投与し、それぞれ105 pfuのRSV、PIVおよび／またはhMPVでコトンラットに抗原刺激後にRSV、PIVおよび／またはhMPV力価を測定し、これを、組成物を投与しなかったコトンラットで得られるRSV、PIVおよび／またはhMPV力価と比較することにより決定することができる。従って、105 pfuのRSV、PIVおよび／またはhMPVで抗原刺激したが組成物を投与されていないコトンラットと比較して、105 pfuのRSV、PIVおよび／またはhMPVで抗原刺激したコトンラットのRSV、PIVおよび／またはhMPV力価の1logの低下すなわち90％の低下を引き起こす投与量が、RSV感染が引き起こす症状の治療、予防、または改善のために、ヒトに投与することができる組成物の投与量である。呼吸系ウイルス感染が引き起こす1つ以上の症状の治療、予防、または改善に有効な組成物の投与量は、組成物を動物モデル（例えば、コトンラットまたはサル）に投与し、RSV、PIVおよび／またはhMPV抗原に免疫特異的に結合する抗体またはその断片の血清力価を測定することにより決定することができる。従って、少なくとも1μg/ml、好ましくは2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、25μg/ml、少なくとも35μg/ml、少なくとも40μg/ml、少なくとも50μg/ml、少なくとも75μg/ml、少なくとも100μg/ml、少なくとも125μg/ml、少なくとも150μg/ml、少なくとも200μg/ml、少なくとも250μg/ml、少なくとも300μg/ml、少なくとも350μg/ml、少なくとも400μg/ml、または少なくとも450μlの血清力価となる組成物の投与量を、呼吸系ウイルス感染が引き起こす1つ以上の症状の治療、予防、または改善のために、ヒトに投与することができる。さらに、随時in vitroアッセイを使用して、最適投与量範囲の確定を助けることができる。
【０３２７】
製剤で使用される正確な投与量はまた、投与経路、呼吸系ウイルス感染の重症度に依存し、担当医の判断と各患者の状況に従って決定すべきである。有効な投与量は、in vitroまたは動物モデル（例えば、コトンラットまたはカニクイザル）試験系からの用量応答曲線から外挿してもよい。
【０３２８】
抗体については、患者に投与される量は、典型的には患者の体重につき0.1mg/kg〜100mg/kgである。好ましくは患者に投与される量は、患者の体重につき0.1mg/kg〜20mg/kg、さらに好ましくは患者につき1mg/kg〜10mg/kgである。一般に外来ポリペプチドに対する免疫応答のために、ヒト抗体は他の種の抗体より、ヒトの体内での半減期が長い。すなわち、より少量のヒト抗体とより少ない投与回数がしばしば可能である。さらに、例えば脂質化のような修飾により、抗体の取り込みと組織通過（例えば、肺への）を増強することにより、本発明の方法で使用される抗体またはその断片の投与量と頻度を減少させることができる。
【０３２９】
具体例において、本発明抗体またはその断片、または本発明の抗体またはその断片を含む組成物は、RSVシーズン前またはシーズン中に月に1回投与される。別の実施形態において、本発明の抗体またはその断片、または本発明の抗体またはその断片を含む組成物は、PIVシーズン前またはシーズン中に1ヶ月に1回、6週間に1回、または2ヶ月に1回投与される。ある具体的な実施形態において、本発明の抗体またはその断片、または本発明の抗体またはその断片を含む組成物は、hMPVシーズン前またはシーズン中に1ヶ月に1回、6週間に1回、または2ヶ月に1回投与される。別の実施形態において抗体またはその抗原結合断片、または抗体またはその抗原結合断片を含む組成物は、RSV、PIV、またはhMPVシーズン前またはシーズン中に2ヶ月に1回投与される。さらに別の実施形態において抗体またはその抗原結合断片、または抗体またはその抗原結合断片を含む組成物は、RSV、PIV、またはhMPVシーズン前またはシーズン中に1回投与される。用語「RSVシーズン」は、RSV感染が最も発生しやすいシーズンを意味する。典型的には、北半球のRSVシーズンは11月に始まり4月まで続く。
【０３３０】
ある実施形態において、抗体は、RSVシーズン中に少なくとも1回、2回、3回、4回、5回、6回、7回、8回、9回、10回、15回、または少なくとも20回投与される。ある実施形態において、抗体は、RSVシーズン中に多くても1回、2回、3回、4回、5回、6回、7回、8回、9回、10回、15回、または多くても20回投与される。ある実施形態において、抗体は、PIVシーズン中に少なくとも1回、2回、3回、4回、5回、6回、7回、8回、9回、10回、15回、または少なくとも20回投与される。ある実施形態において、抗体は、PIVシーズン中に多くても1回、2回、3回、4回、5回、6回、7回、8回、9回、10回、15回、または多くても20回投与される。ある実施形態において、抗体は、hMPVシーズン中に少なくとも1回、2回、3回、4回、5回、6回、7回、8回、9回、10回、15回、または少なくとも20回投与される。ある実施形態において、抗体は、hMPVシーズン中に多くても1回、2回、3回、4回、5回、6回、7回、8回、9回、10回、15回、または多くても20回投与される。
【０３３１】
4.5 遺伝子治療
具体例において遺伝子治療により、RSV感染が引き起こす1つ以上の症状を治療、予防、または改善するために、RSV抗原、PIV抗原、および／またはhMPV抗原またはその機能性誘導体に免疫特異的に結合する抗体をコードする配列を含む核酸が投与される。遺伝子治療とは、発現されたかまたは発現可能な核酸を被験体に投与することにより治療が行われることを意味する。本発明のこの実施形態において核酸は、予防または治療作用を仲介するそのコードされた抗体または抗体断片を産生する。具体的な実施形態において、遺伝子治療により被験体に細胞内発現抗体がデリバーされる（セクション4.1を参照）。
【０３３２】
当該分野で利用可能な任意の遺伝子治療法が、本発明で使用できる。方法の例を以下に記載する。
【０３３３】
遺伝子治療法の総説については、Goldspielら、1993, Clinical Pharmacy 12:488-505；WuとWu, 1991, Biotherapy 3:87-95；Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596；Mulligan, Science 260:926-932 (1993)；およびMorganとAnderson, 993, Ann. Rev. Biochem. 62:191-217；May, 1993, TIBTECH 11(5):155-215を参照されたい。使用可能な組換えDNA技術の分野で公知の方法は、アウスベル（Ausubel）ら（編）、Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993)；およびKriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990)に記載されている。
【０３３４】
好適な態様において本発明の組成物は、抗体をコードする核酸を含み、該核酸は、適当な宿主中で抗体もしくは断片またはキメラタンパク質またはその重鎖もしくは軽鎖を発現する発現ベクターの一部である。特にこのような核酸は、抗体コード領域に機能できる形で結合しているプロモーター（好ましくは異種プロモーター）を有し、該プロモーターは、誘導性または構成性および場合により組織特異的である。別の具体的な実施形態において、抗体コード配列と他の所望の配列が、ゲノム内の所望の部位での相同的組換えを促進する領域にフランキングされている核酸分子が使用され、こうして抗体をコードする核酸の染色体発現が提供される（KollerとSmithies, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:8932-8935；Zijlstraら、1989, Nature 342:435-438）。具体例において、発現された抗体分子は、1本鎖抗体であるか、あるいは核酸配列は、抗体の重鎖と軽鎖の両方、またはその断片をコードする配列を含む。
【０３３５】
被験体への核酸のデリバリーは、直接的（この場合、被験体は、核酸または核酸を運搬するベクターに直接暴露される）であるか、または間接的（この場合、細胞はまず核酸でin vitroで形質転換され、次に被験体に移植される）でもよい。これらの2つのアプローチは、それぞれin vivoまたはex vivo遺伝子治療として知られている。
【０３３６】
具体例において、核酸配列は直接in vivoで投与され、ここで発現されてコードされた生成物を産生する。これは当該分野で公知の多くの方法の任意のものにより行われ、例えばこれらを適切な核酸発現ベクターの一部として構築して、例えば欠陥のあるまたは弱毒化レトロウイルスもしくは他のウイルスベクターを使用して感染（US Patent No. 4,980,286を参照）させて、これらを細胞内とするか、裸のDNAの直接注入により、または微粒子衝撃（例えば、遺伝子銃；バイオリスティック、Dupont）により、または脂質もしくは細胞表面受容体またはトランスフェクション物質で被覆、またはリポソーム、微粒子もしくはマイクロカプセル中に封入、または核に入ることが知られているペプチドに連結して投与し、受容体介在エンドヌクレアーゼ（例えば、WuとWu、1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432を参照）（これは、受容体を特異的に発現する細胞型を標的化するのに使用できる）などにより行われる。別の実施形態において、リガンドがエンドソームを破壊するための融合性ウイルスペプチドを含む核酸−リガンド複合体が形成され、核酸がリソソーム分解を避けることを可能にする。さらに別の実施形態において核酸は、in vivoで特異的受容体を標的とすることで、細胞特異的取り込みと発現について標的化することができる（例えば、PCT公報 WO92/06180；WO92/22635；WO92/20316；WO93/14188、WO93/20221を参照）。あるいは相同的組換えにより、核酸を細胞内に導入し、発現のための宿主細胞DNA内に取り込むことができる（KollerとSmithies, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:8932-8935；Zijlstraら、1989, Nature 342:435-438）。
【０３３７】
具体例において、本発明の抗体またはその断片をコードする核酸配列を含有するウイルスベクターが使用される。例えばレトロウイルスベクターを使用することができる（Millerら、993, Meth. Enzymol. 217:581-599を参照）。これらのレトロウイルスベクターは、ウイルスゲノムを正しくパッケージし宿主細胞DNAに組み込むのに必要な成分を含有する。遺伝子治療で使用される抗体をコードする核酸配列が1つ以上のベクター中にクローン化され、これが被験体への遺伝子のデリバリーを促進する。レトロウイルスベクターについてのさらなる詳細は、Boesenら、1994, Biotherapy 6:291-302に記載されており、これは、幹細胞を化学療法に対してより耐性にするために造血幹細胞にmdr1遺伝子をデリバリーするためのレトロウイルスベクターの使用を記載する。遺伝子治療におけるレトロウイルスベクターの使用を例示する他の文献は以下である：Clowesら、1994, J. Clin. Invest. 93:644-651；Kleinら、1994, Blood 83]:1467-1473；SalmonsとGunzberg, 1993, Human Gene Therapy 4:129-141；およびGrossmanとWilson, 1993, Curr. Opin. in Genetics and Devel. 3:110-114。
【０３３８】
アデノウイルスは、遺伝子治療で使用可能な他のウイルスベクターである。アデノウイルスは、気道上皮に遺伝子をデリバリーするための特に魅力的なビヒクルである。アデノウイルスは天然には気道上皮に感染して、そこで軽い疾患を引き起こす。アデノウイルスベースのデリバリーの他の標的は、肝臓、中枢神経系、内皮細胞、および筋肉である。アデノウイルスは、分裂していない細胞に感染できるという利点を有する。KozarskyとWilson, 1993, Curr. Opin. in Genetics and Devel. 3:499-503は、アデノウイルスベースの治療法の総説を提供する。Boutら, 1994, Human Gene Therapy 5:3-10は、アカゲザル（rhesus monkey）の気道上皮に遺伝子を移すためのアデノウイルスベクターの使用を示した。遺伝子治療におけるアデノウイルスの使用の他の例は、Rosenfeldら、1991, Science 252:431-434；Rosenfeldら、1992, Cell 68:143-155；Mastrangeliら、1993, J. Clin. Invest. 91:225-234；PCT公報 WO94/12649；およびWangら、1995, Gene Therapy 2:775-783に記載されている。好適な実施形態において、アデノウイルスベクターが使用される。
【０３３９】
アデノ関連ウイルス（AAV）もまた、遺伝子治療で使用できることが提唱されている（Walshら、1993, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 204:289-300；およびUS Patent No. 5,436,146）。
【０３４０】
遺伝子治療への他のアプローチは、電気穿孔法、リポフェクション、リン酸カルシウム介在トランスフェクション、またはウイルス感染などの方法による組織培養細胞への遺伝子の移動がある。移動法は通常、細胞への選択マーカーの移動を含む。次に細胞を選択して移動した遺伝子を取り込み、発現している細胞を単離する。次に、これらの細胞を被験体にデリバリーする。
【０３４１】
この実施形態において、生じる組換え細胞のin vivo投与の前に、核酸が細胞に導入される。このような導入は、当該分野で公知の任意の方法により行われ、例えば、特に限定されないがトランスフェクション、電気穿孔法、微量注入法、核酸配列を含有するウイルスまたはバクテリオファージベクターによる感染、細胞融合、染色体性遺伝子移動、微小細胞介在遺伝子移動、スフェロプラスト融合などがある。細胞への外来遺伝子の導入のために、多くの方法が当該分野で公知（LoefflerとBehr，1993, Meth. Enzymol. 217:599-618；Cohenら、1993, Meth. Enzymol. 217:618-644；Clin. Pharma. Ther. 29:69-92 (1985)を参照）であり本発明で使用されるが、受容体細胞の必要な発生と生理学的機能は破壊されない。この方法は細胞への核酸の安定な移動を提供し、従って細胞により核酸が発現可能であり、好ましくは遺伝可能であり、その細胞子孫により発現可能である。
【０３４２】
生じる組換え細胞は、当該分野で公知の種々の方法により被験体にデリバリーされる。組換え血液細胞（例えば、造血幹細胞または  前駆細胞）は、好ましくは静脈内投与される。使用が企図される細胞の量は、所望の作用、患者の状態などに依存して、当業者は決定することができる。
【０３４３】
遺伝子治療の目的で核酸を導入することができる細胞には、任意の所望の利用可能な型の細胞があり、特に限定されないが上皮細胞、内皮細胞、ケラチン細胞、繊維芽細胞、筋肉細胞、肝細胞；血液細胞、例えばＴリンパ球、Ｂリンパ球、単核細胞、マクロファージ、好中球、好酸球、巨核球、顆粒球；種々の幹細胞または前駆細胞、特に造血幹細胞または前駆細胞、例えば骨髄、臍帯血、末梢血、胎児肝などから得られるものがある。
【０３４４】
好適な実施形態において、遺伝子治療に使用される細胞は、被験体の自己由来である。
【０３４５】
遺伝子治療に組換え細胞が使用される実施形態において、抗体またはその断片をコードする核酸配列は、その細胞またはその子孫により発現可能であるように細胞内に導入され、次に組換え細胞が治療作用のためにin vivoで投与される。具体例において、幹細胞または前駆細胞が使用される。単離可能でありin vitroで維持できる幹細胞および／または前駆細胞はすべて、本発明のこの実施形態で使用できる可能性がある（例えば、PCT公報 WO94/08598；StempleとAnderson, 1992, Cell 71:973-985；Rheinwald, 1980, Meth. Cell Bio. 21A:229；およびPittelkowとScott, 1986, Mayo Clinic Proc. 61:771を参照）。
【０３４６】
具体例において、遺伝子治療の目的の導入される核酸は、適切な転写インデューサーの有無を制御することにより、核酸の発現が制御できるようにコード領域に機能できる形で結合した誘導性プロモーターを含む。
【０３４７】
4.6 抗体の性状解析と治療的または予防的有用性の証明
抗体は多くの方法で解析される。特に抗体は、RSV抗原、PIV抗原および／またはhMPV抗原に免疫特異的に結合する能力について測定される。このようなアッセイは、溶液中（例えば、Houghtern, 1992, Bio/Techniques 13:412-421）、ビーズ上（Lam, 1991, Nature 354:82-84）、チップ上（Fodor, 1993, Nature 364:555-556）、細菌上（US Patent No. 5,223,409）、胞子上（US Patent No. 5,571,698；5,403,484；および5,223,409）、プラスミド上（Cullら、1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:1865-1869）、またはファージ上（ScottとSmith, 1990, Science 249:386-390：Devlin, 1990, Science 249:404-406；Cwirlaら、1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:6378-6382；およびFelici, 1991, J. Mol. Biol. 222:301-310）中で行われる（これらの文献のそれぞれは、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。RSV抗原、PIV抗原および／またはhMPV抗原またはその断片に免疫特異的に結合することが確認された抗体またはその断片は、次にRSV抗原、PIV抗原および／またはhMPV抗原に対する結合活性と親和性について測定することができる。
【０３４８】
抗体の免疫特異的結合と他の抗原との交差反応性は、当該分野で公知の任意の方法により測定される。免疫特異的結合と交差反応性を解析するのに使用できるイムノアッセイには、特に限定されないが、ほんの一例を挙げただけでも、ウェスタンブロット法、ラジオイムノアッセイ、ELISA（酵素結合免疫吸着測定法）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、イムノラジオメトリックアッセイ、蛍光イムノアッセイ、プロテインＡイムノアッセイのような技術を使用する競合的および非競合的アッセイ系がある（例えば、アウスベル（Ausubel）ら編、1994、Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., ニューヨークを参照、これは、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。イムノアッセイの例を、以下に簡単に記載する（しかし、限定するものではない）。
【０３４９】
免疫沈降プロトコールは一般に、タンパク質ホスファターゼおよび／またはプロテアーゼインヒビター（例えばEDTA、PMSF、アプロチニン、バナジン酸ナトリウム）を補足したRIPAバッファー（1％ NP-40またはトリトンX-100、1％デオキシコール酸ナトリウム、0.1％ SDS、0.15Ｍ NaCl、0.01Ｍリン酸ナトリウム、pH7.2、1％トラジロール）のような溶解バッファーで細胞集団を溶解し、細胞溶解物に目的の抗体を添加し、40℃で一定時間（例えば1〜4時間）インキュベートし、細胞溶解物にプロテインＡおよび／またはプロテインＧセファロースビーズを加え、40℃で約1時間以上インキュベートし、溶解バッファー中でビーズを洗浄し、ビーズをSDS／サンプルバッファー中に再懸濁することを含んでなる。目的の抗体が特定の抗原を免疫沈降させる能力は、例えばウェスタンブロット解析により評価することができる。当業者は、抗原への抗体の結合を上昇させ、バックグランドを低下させるために改変すべきパラメータについて認識しているであろう（例えば、細胞溶解物をセファロースビーズであらかじめ洗浄する）。免疫沈降プロトコールについてのさらなる詳細は、アウスベル（Ausubel）ら編、1994、Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., ニューヨークの10.16.1.を参照されたい。
【０３５０】
ウェスタンブロット解析は一般に、タンパク質サンプルを調製し、ポリアクリルアミドゲルでタンパク質サンプルを電気泳動（例えば、抗原の分子量により8％〜20％のSDS-PAGE）し、ポリアクリルアミドゲルから膜（ニトロセルロース、PVDFまたはナイロン）にタンパク質サンプルを移動させ、ブロッキング溶液（例えば3％ BSAまたは脱脂乳を有するPBS）中で膜をブロックし、洗浄バッファー（例えば、PBS-ツイーン20）で膜を洗浄し、ブロッキングバッファーで希釈した1次抗体（目的の抗体）で膜をブロックし、洗浄バッファーで膜を洗浄し、ブロッキングバッファーで希釈した酵素基質（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）または放射活性分子（例えば、32Pまたは125I）に結合した2次抗体（これは、例えば1次抗体を認識する抗ヒト抗体）で膜をブロックし、抗原の存在を検出することを含む。当業者は、シグナルを上昇させ、バックグランドノイズを低下させるために改変すべきパラメータについて認識しているであろう。ウェスタンブロットプロトコールについてのさらなる詳細は、アウスベル（Ausubel）ら編、1994、Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., ニューヨークの10.8.1.を参照されたい。
【０３５１】
ELISAは、抗原を調製し、96ウェルマイクロタイタープレートのウェルを抗原で被覆し、酵素基質（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）のような検出可能な化合物に結合した目的の抗体をウェルに加え、一定時間インキュベートし、抗原の存在を検出することを含む。ELISAでは目的の抗体は、検出可能な化合物に結合していなくてもよく、その代わり検出可能な化合物に結合した2次抗体（これは目的の抗体を認識する）をウェルに加える。さらに、ウェルを抗原で被覆する代わりに、抗体をウェルに被覆する。この場合、被覆ウェルへの目的の抗原の添加後に、検出可能な化合物に結合した2次抗体を加えてもよい。当業者は、シグナルを上昇させるために改変すべきパラメータと、当該分野で公知のELISAの他の変更態様について認識しているであろう。ウェスタンブロットプロトコールについてのさらなる詳細は、アウスベル（Ausubel）ら編、1994、Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., ニューヨークの11.2.1.を参照されたい。
【０３５２】
抗体の抗原への結合親和性および抗体−抗原相互作用のoff-rateは、競合的結合アッセイにより測定することができる。競合的結合アッセイの1つの例は、標識抗原（例えば、3Hまたは125I）と目的の抗体とを、増加する量の非標識抗原の存在下でインキュベートし、標識抗原に結合した抗体を検出することを含むラジオイムノアッセイである。RSV抗原に対する本発明の抗体またはその断片の親和性と結合off-rateは、スキャチャードプロット解析によりデータから決定することができる。2次抗体を用いる競合もまた、ラジオイムノアッセイを使用して測定することができる。この場合RSV抗原は、標識化合物（例えば、3Hまたは125I）に結合した本発明の抗体またはその断片と、増加する量の非標識抗原の存在下でインキュベートされる。
【０３５３】
好適な実施形態において、RSV、PIVおよび／またはhMPV抗原に対する抗体またはその断片の結合on rateとoff rateを測定するのに、BIAcore速度論解析が使用される。BIAcore速度論解析は、チップからのRSV抗原と、表面上の固定化された抗体またはその断片との結合と解離を解析することを含む（以下の実施例を参照）。
【０３５４】
本発明の抗体またはその断片はまた、当業者に公知の技術を使用して、その宿主細胞受容体へのRSV、PIVおよび／またはhMPVの結合を阻害する能力について測定することもできる。例えばそれぞれRSV、PIVおよび／またはhMPVの受容体を発現する細胞を、抗体またはその断片の存在下または非存在下でそれぞれRSV、PIVおよび／またはhMPVと接触させ、抗体またはその断片がRSV、PIVおよび／またはhMPVの結合を阻害する能力を、例えばフローサイトメトリーまたはシンチレーションアッセイを使用して測定することができる。RSV、PIVおよび／またはhMPV（例えば、F糖タンパク質またはG糖タンパク質のようなRSV、PIVおよび／またはhMPV抗原）または抗体もしくはその断片を、放射活性標識物（例えば、32P、35S、および125I）または蛍光標識物（例えば、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、o-フタルアルデヒド、およびフルオレスカミン）のような検出可能な化合物で標識して、RSVとその宿主細胞受容体との相互作用の検出を可能にすることができる。あるいは、その受容体へのRSV、PIVおよび／またはhMPVの結合を阻害する抗体またはその断片の能力を、無細胞アッセイで測定することができる。例えば、RSV、PIVおよび／またはhMPVまたはRSV、PIVおよび／またはhMPV抗原（例えばＧ糖タンパク質）を抗体またはその断片と接触させ、RSV、PIVおよび／またはhMPVまたはRSV、PIVおよび／またはhMPV抗原のその宿主細胞受容体への結合を抗体またはその断片が阻害する能力を測定することができる。好ましくは、抗体またはその断片は、固体支持体上に固定化され、RSV、PIVおよび／またはhMPVまたはRSV、PIVおよび／またはhMPV抗原は、検出可能な化合物で標識される。あるいは、RSV、PIVおよび／またはhMPVまたはRSV、PIVおよび／またはhMPV抗原を固体支持体上に固定化し、抗体またはその断片が検出可能な化合物で標識される。RSV、PIVおよび／またはhMPVまたはRSV、PIVおよび／またはhMPV抗原は、部分的にまたは完全に精製される（例えば、部分的または完全に他のポリペプチドを含まない）か、または細胞溶解
物の一部でもよい。さらに、RSV、PIVおよび／またはhMPV抗原は、RSV、PIVおよび／またはhMPV抗原とドメイン（例えば、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ）を含む融合タンパク質でもよい。あるいは、RSV、PIVおよび／またはhMPV抗原は、当業者に公知の技術を使用してビオチン化することができる（例えば、ビオチン化キット、Pierce Chemicals; Rockford, IL）。
【０３５５】
本発明の抗体またはその断片はまた、当業者に公知の技術を使用して、RSV、PIVおよび／またはhMPV複製を阻害またはダウンレギュレートする能力について測定することもできる。例えば、RSV、PIVおよび／またはhMPV複製は、例えばJohansonら、1197, Journal of Infectious Disease 176:1215-1224に記載のようにプラークアッセイをにより測定することができる。本発明の抗体またはその断片はまた、RSV、PIVおよび／またはhMPVポリペプチドの発現を阻害またはダウンレギュレートする能力について測定することもできる。特に限定されないが、ウェスタンブロット解析、ノーザンブロッッティング解析、およびRT-PCRを含む当業者に公知の技術を使用して、RSV、PIVおよび／またはhMPVポリペプチドの発現を測定することができる。さらに本発明の抗体またはその断片を、シンシチウムの形成を妨害する能力について測定することができる。
【０３５６】
本発明の抗体またはその断片は好ましくは、ヒトで使用する前に、所望の治療活性または予防活性について、in vitroで次にin vivoで試験される。例えば本発明の特定の抗体または組成物の投与が適用できるかどうかを決定するのに使用することができるin vitroアッセイには、in vitro細胞培養アッセイがあり、被験体の組織サンプルを培養で増殖させ、組織サンプルへの本発明のこのような抗体または組成物の作用が観察される。種々の具体例において、RSV感染に関与する型の細胞（例えば、気道上皮細胞）のうち代表的な細胞でin vitroアッセイを実施し本発明の抗体または組成物が、このような型の細胞に対して所望の作用を有するかどうかを測定することができる。好ましくは抗体または組成物はまた、in vitroアッセイと動物モデル系で試験してから、ヒトに投与することができる。具体例において、コトンラットに本発明の抗体またはその断片、または本発明の組成物を投与し、105 pfuのRSV、PIVおよび／またはhMPVで抗原刺激し、4日またはそれ以上後に、ラットを屠殺し、RSV、PIVおよび／またはhMPV力価と抗RSV、PIVおよび／またはhMPV抗体血清力価を測定する。さらに、この実施形態において、屠殺ラットからの組織（例えば、肺組織）を、組織学的変化について観察することができる。
【０３５７】
本発明において、本発明の抗体またはその断片の予防および／または治療効果を証明するのに、ヒト被験体で臨床試験を行う必要は無い。抗体またはその断片を使用するin vitroおよび動物モデル試験をヒトに外挿すれば、該抗体またはその断片の予防および／または治療的有用性を証明するのに充分である。
【０３５８】
治療で使用される本発明の抗体または組成物は、ラット、マウス、ウシ、サル、およびウサギを含む適当な動物モデル系でその毒性について試験することができる。抗体または組成物の毒性のin vivo試験について、当該分野で公知の任意の動物モデル系が使用される。
【０３５９】
本発明の抗体または組成物の投与後に、例えばウイルス量の減少、1つ以上の症状の改善、呼吸系ウイルス感染の期間の短縮、または死亡率および／または発症率の低下があるなら、この処理は治療的であると見なされる。さらに、1つ以上のRSV、PIVおよび／またはhMPV抗原に免疫特異的に結合する1つ以上の抗体またはその断片の投与後に免疫応答の上昇があるなら、この処理は治療的であると見なされる。
【０３６０】
抗体は、特に限定されないがIFN-α、IFN-β、IFN-γ、IFN-2、IFN-3、IFN-4、IFN-5、IFN-6、IFN-7、IFN-8、IFN-9、IFN-10、IFN-12、およびIFN-15のようなサイトカインの発現レベルに影響を与えるする能力について、in vitroとin vivoで試験することができる。より具体的な実施形態において本発明の抗体または組成物は、その発現が呼吸系ウイルス感染により誘導されている1つ以上のサイトカインの発現レベルに影響を与える能力について試験される。より具体的な実施形態において本発明の抗体または組成物は、1つ以上のウイルス誘導性サイトカインの発現レベルを低下させる能力について試験される。当業者に公知の技術を使用して、サイトカインの発現レベルを測定することができる。例えばRT-PCR、ノーザンブロッッティング解析によりサイトカインのRNAレベルを解析することにより、および例えば免疫沈降後にウェスタンブロット解析とELISAでサイトカインのレベルを解析することにより、サイトカインの発現レベルを測定することができる。好適な実施形態において、本発明の抗体または組成物は、IFN-γの発現に影響を与える能力について試験される。より具体的な実施形態において本発明の抗体または組成物は、その発現が呼吸系ウイルス感染に誘導されているIFN-γの発現に影響を与える能力について試験される。より具体的な実施形態において本発明の抗体または組成物は、ウイルス誘導性のIFN-γの発現に影響を与える能力について試験される。
【０３６１】
抗体は、免疫細胞、好ましくはヒト免疫細胞（例えば特に限定されないが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびナチュラルキラー細胞）の生物活性を調節する能力について、in vitroおよびin vivoで試験することができる。より具体的な実施形態において抗体は、呼吸系ウイルス感染に誘導されている免疫細胞の生物活性を調節する能力について、in vitroおよびin vivoで試験することができる。より具体的な実施形態において抗体は、呼吸系ウイルス感染に誘導されている免疫細胞の1つ以上の生物活性を低下させる能力について試験することができる。抗体またはその抗原結合断片が免疫細胞の生物活性を調節する能力は、抗原の発現を検出し、免疫細胞の増殖を検出し、シグナル伝達分子の活性化を検出し、免疫細胞のエフェクター機能を検出し、または免疫細胞の分化を検出することにより評価することができる。これらの活性を測定するのに、当業者に公知の技術を使用することができる。例えば、3H-チミジン取り込みアッセイとトリパンブルー細胞数計測により、細胞増殖を測定することができる。抗原発現は、例えば特に限定されないが、ウェスタンブロット法、免疫組織化学、ラジオイムノアッセイ、ELISA（酵素結合免疫吸着測定法）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、イムノラジオメトリックアッセイ、蛍光イムノアッセイ、プロテインＡイムノアッセイ、およびFACS解析のような技術を使用する競合的および非競合的アッセイ系を含むイムノアッセイにより測定することができる。シグナル伝達分子の活性化は、例えばキナーゼアッセイおよび電気泳動シフトアッセイ（EMSA）により測定することができる。
【０３６２】
抗体はまた、in vitro、ex vivo、およびin vivoアッセイで、ウイルス複製を阻害するかまたはウイルス量を低下させる能力について測定することができる。抗体はまた、RSV感染の経時変化を減少させる能力について試験することができる。抗体はまた、RSVに感染しているヒトの生存期間を、あるいは25％、好ましくは少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも75％、少なくとも85％、少なくとも95％、または少なくとも99％、上昇させる能力について試験することができる。さらに抗体は、RSVに感染しているヒトの入院期間を、少なくとも60％、好ましくは少なくとも75％、少なくとも85％、少なくとも95％、または少なくとも99％、短縮させる能力について試験することができる。当業者に公知の技術を使用して、本発明の抗体または組成物の機能をin vivoで解析することができる。
【０３６３】
4.7 キット
本発明はまた、本発明の医薬組成物の1つ以上の成分を充填した1つ以上の容器を含む医薬パックまたはキットを提供する。そのような容器には、医薬品または生物学的製剤の製造、使用または販売を規制する政府機関により規定された形の通知（この通知は、ヒトへの投与のために、製造、使用または販売をその期間が認可することを反映する）を随時伴ってよい。
【０３６４】
本発明は、上記方法で使用されるキットを提供する。ある実施形態において、キットは、(i)1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片、および1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片；(ii)1つ以上の抗PIV抗原抗体またはその抗原結合断片、および1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片；(iii)1つ以上の抗RSV抗原抗体またはその抗原結合断片、1つ以上の抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片を含む。ある実施形態においてキットは、1つ以上の抗PIV抗原抗体、1つ以上の抗hMPV抗原抗体、および1つ以上の抗RSV抗原抗体を含む。
【０３６５】
ある実施形態において本発明のキットは、RSV抗原、PIV抗原およびhMPV抗原と反応しない対照抗体をさらに含んでよい。別の具体例において本発明のキットは、RSV抗原、PIV抗原、および／またはhMPV抗原への抗体の結合を検出するための手段を含有する（例えば抗体は、蛍光化合物、酵素基質、放射活性化合物または発光化合物のような検出可能な基質に結合しているか、または1次抗体を認識する2次抗体が、検出可能な基質に結合してもよい）。具体例においてキットは、組換え法で産生されたかまたは化学合成されたRSV抗原、PIV抗原、および／またはhMPV抗原を含んでよい。キットに提供されるRSV抗原、PIV抗原、および／またはhMPV抗原はまた、固体支持体に結合していてもよい。より具体的な実施形態において上記キットの検出手段は、RSV抗原、PIV抗原、および／またはhMPV抗原が結合した固体支持体を含む。そのようなキットはまた、非結合レポーター標識抗ヒト抗体を含む。この実施形態においてRSV抗原、PIV抗原、および／またはhMPV抗原への抗体の結合は、該レポーター標識抗体の結合により検出することができる。
【０３６６】
4.8. 本発明で使用されるアッセイ
4.8.1 感染率の頻度の測定
感染の頻度は、例えば特に限定されないが当該分野で公知の任意の方法により測定することができ、臨床サンプル（例えば、鼻スワブ）を免疫蛍光アッセイ（IFA）によりそれぞれ抗RSV抗原抗体、抗hPIV抗原抗体、および／または抗hMPV抗原抗体を使用して、RSV、PIVおよび／またはhMPVの存在について試験することができる。完全な細胞を含有するサンプルは直接処理することができ、ここで完全な細胞の無い分離株は、まず許容細胞株（例えばHEp-2細胞）で培養すべきである。培養細胞懸濁液は、例えば300×ｇで5分間室温で遠心分離し、次にPBS、pH7.4（Ca++とMg++を含まない）で同じ条件下で洗浄することにより清澄化される。細胞ペレットは分析のために少量のPBSに再懸濁される。完全な細胞を含有する初代臨床分離株はPBSと混合され、300×ｇで5分間室温で遠心分離される。無菌ピペットチップを使用して界面から粘液を除去し、細胞ペレットをPBSで同じ条件下で再洗浄する。次にペレットを分析のために少量のPBSに再懸濁する。各細胞懸濁液の5〜10μlを、アセトン洗浄した12ウェルHTCスーパーキュアドガラススライド上の5mmのウェルにスポットし、風乾させる。スライドを冷（−20℃）アセトンで10分間固定する。PBS−1％BSAを各ウェルに加え次に室温で10分間インキュベートして、反応を阻止する。スライドをPBS−0.1％ツイーン-20で3回洗浄し、風乾する。各1次抗体試薬の10μlをブロッキングバッファーで250ng/mlに希釈し、ウェルにスポットし、反応物を加湿37℃環境で30分間インキュベートする。次にスライドを、PBS−0.1％ツイーン20を3回交換して充分洗浄し、風乾する。ブロッキングバッファーで250ng/mlに希釈した適切な2次結合抗体試薬の10μlを各ウェルにスポットし、反応物を加湿37℃環境でさらに30分間インキュベートする。次にスライドを、PBS−0.1％ツイーン20を3回交換して洗浄する。5μlのPBS−50％グリセロール−10mMトリスpH8.0−1mM EDTAを各反応ウェルにスポットし、スライドにカバーガラスをのせる。次に各反応ウェルを蛍光顕微鏡で200×でB-2Aフィルター（EX450−490nm）を使用して分析する。陽性反応物を、非染色細胞または2次試薬
のみで染色した細胞から得られた自己蛍光バックグランドに対してスコアをつける。RSV陽性反応物を、感染細胞の細胞質中に小さな封入体がある明るい蛍光により解析する。
【０３６７】
4.8.2 血清力価の測定
抗体血清力価は、当該分野で公知の任意の方法により測定され、例えば特に限定されないが、血清サンプル中の抗体または抗体断片の量は、サンドイッチELISAにより定量される。簡単に説明するとELISAは、マイクロタイタープレートを4℃で、血清中の抗体または抗体断片を認識する抗体で被覆する。次にプレートをPBS−ツイーン−0.5％ BSAで室温で約30分間ブロックする。PBS-BSA-BSAで希釈した精製抗体または抗体断片を使用して標準曲線を作成し、サンプルをPBS-BSAで希釈する。サンプルと標準物質をアッセイプレートの二重のウェルに加え、室温で約1時間インキュベートする。次に非結合抗体をPBS-ツイーンで洗い流し、結合抗体と標識2次抗体（例えば、ヤギ抗ヒトIgGに結合した西洋ワサビペルオキシダーゼ）で室温で約1時間処理する。標識抗体の結合は、標識物に特異的な発色基質を加え、基質のターンオーバー速度を例えば分光光度計で測定することにより検出される。血清中の抗体または抗体断片濃度レベルは、サンプルの基質ターンオーバーの速度を標準曲線の基質ターンオーバーの速度と比較することにより決定される。
【０３６８】
4.8.3 BIAcoreアッセイ
抗体結合の動力学的パラメータは、例えばその上に抗原が固定化されているセンサーチップ上に、0.05％ツイーン20を含有するPBS中の種々の濃度の250μlのモノクローナル抗体（「Mab」）の注入して測定することができる。流速を75μl／分で一定に維持する。解離データを15分間または必要に応じてより長時間集める。そのような注入／解離後、典型的には10〜100mM HClの1分パルス（場合により他の再生剤を使用してもよい）を使用して結合mAbを抗原表面から除去する。
【０３６９】
さらに詳しくは結合速度konと解離速度koffを測定するために、抗原を標準的アミンカプリング化学、すなわちEDC/NHS法により直接センサーチップ表面上に固定化した（EDC=N-ジエチルアミノプロピル)-カルボジイミド）。簡単に説明すると、10mM NaoAc（pH4または5.0）中の5〜100nMの抗原溶液を調製し、約30〜50RUの抗原が固定化されるまでEDC/NHS活性化表面上に通す。次に1M Et-NH2を注入して未反応活性エステルを「キャップ」オフする。参照目的に同一の固定化条件下で、抗原を含まないブランク表面を調製する。適当な表面がいったん調製されると、抗体試薬のそれぞれの適切な希釈シリーズをHBS/ツイーン20で調製し、抗原と参照細胞表面に通過させ、これらを直列に連結する。調製される抗体濃度の範囲は、推定される平衡結合定数KDにより変動する。上記したように、適切な再生剤を使用して各注入／解離サイクル後に結合抗体は除去される。
【０３７０】
全データがいったん集められると、生じる結合曲線を装置製造業者であるBIAcore, Inc（Piscataway、ニュージャージー州）が供給するアルゴリズムを使用して全体に適合させる。すべてのデータを1：1ラングミュアモデルに適合させる。これらのアルゴリズムは、konとkoffの両方を計算し、ここから2つの速度定数の比（すなわちkoff/kon）として見かけの平衡結合定数kDが推定される。個々の速度定数のより詳細な処理は、Biaevaluation Software ハンドブック（BIAcore, Inc（Piscataway、ニュージャージー州）に記載されている。
【０３７１】
4.8.4 マイクロ中和アッセイ
ウイルス感染性を中和する抗体またはその抗原結合断片の能力はマイクロ中和アッセイにより測定される。このマイクロ中和アッセイは、Andersonらが記載した方法（1985, J. Clin. Microbiol. 22:1050-1052、この開示内容は、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）を修飾したものである。この方法はまた、Johnsonら、1997, J. Infectious Diseases 180:35-40に記載されている（この開示内容は、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０３７２】
抗体希釈は、96ウェルプレートを使用して三重で行う。10 TCID50のRSV、PIV、APV、および／またはhMPV）を、試験すべき抗体またはその抗原結合断片の連続希釈物と、37℃で2時間96ウェルプレートのウェル中でインキュベートする。次に、RSV感受性培養肝細胞（特に限定されないがHEp-2細胞）（2.5×104）を各ウェルに加え、37℃で5％CO2中で5日間培養する。5日後培地を吸引し、細胞を洗浄し、80％メタノールと20％PBSでプレートに固定する。次に、ウイルス複製を、ウイルス抗原例えばＦタンパク質発現により測定する。固定した細胞を、ビオチン結合抗ウイルス抗原、例えば抗Fタンパク質モノクローナル抗体（pan Fタンパク質、C部位特異的Mab133-1H）とインキュベートし、洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合アビジンをウェルに加える。ウェルを再度洗浄し、基質TMB（チオニトロ安息香酸）のターンオーバーを450nmで測定する。中和力価を、ウイルスのみの対照細胞の450nmの吸収（OD450）を少なくとも50％低下させる抗体濃度として表す。
【０３７３】
4.8.5 ウイルス融合阻害アッセイ
細胞へのウイルス結合後にそれぞれRSV、PIV、およびhMPVに誘導された融合を抗RSV抗原抗体、抗PIV抗原抗体、および／または抗hMPV抗原抗体またはその抗原結合断片が阻止する能力は、融合阻害アッセイで測定される。このアッセイは、マイクロ中和アッセイと同じであるが、細胞は、抗体を加える前に4時間各ウイルスで感染される（Taylorら、1992, J. Gen. Virol. 73:2217-2223）。
【０３７４】
4.8.6 等温力価熱量測定
熱力学的結合親和性とエンタルピーを、抗体と各抗原との相互作用についての等温力価熱量測定（ITC）から測定する。
【０３７５】
抗体を透析液で希釈し、濃度を、パーキンエルマー（Perkin Elmer）Lambda 4B分光光度計を用いて、280nmでの最大ピークの217,000M-1cm-1の吸光係数を使用して、UV分光吸収測定により測定した。吸光係数は多量のサンプルを使用し失うこと無しには正確な濃度を測定するには小さすぎるため、希釈されたRSV抗原、PIV抗原、および／またはhMPV抗原濃度は、元々のサンプルの量と希釈したサンプルの量の比から計算される。
【０３７６】
ITC測定
抗体の結合熱力学を、Microcal, Inc.のVP Titration Calorimeterを使用して、ITC測定により測定する。VP Titration Calorimeterは、断熱容器中に封入した対応した1対のサンプル容器と基準容器（1.409ml）と、サンプル容器中にリガンド溶液を力価測定するための回転スターラー−シリンジからなる。ITC測定は25℃と35℃で行う。サンプル容器はリン酸バッファー中に抗体を含有し、基準容器はバッファー溶液のみを含有する。リン酸バッファー溶液は、HyClone, Inc.の食塩水67mM PO4（pH7.4）である。5〜10μlアリコートの0.05〜0.1mM RSV抗原、PIV抗原、および／またはhMPV抗原溶液を、抗体サンプル溶液中に3〜4分置いて、熱交換シグナルが無くなって明らかになるように結合が飽和するまで力価測定する。
【０３７７】
Microcal, Inc.の非線形、最小自乗最小化ソフトウェアプログラムOrigin5.0を使用して、以下の式(I)に従って、総熱Qtのｉ番目の力価（ΔQ(i)）の熱の増分を、総力価濃度Xtに適合させ
2005533861.tif 000002
（ここで、Ctはサンプル容器中の初期抗体濃度、Vはサンプル容器の容量、そしてｎは結合反応の化学量論量である）、収率値Kb、ΔHbo、およびｎを得た。Kbの測定のためのサンプル濃度の最適範囲はKbの値に依存し、以下の関係により定義される。
【０３７８】
CtKbn≦500                                                    (2)
従って1μMでは、最大Kbは2.5×108M-1未満である。最初の力価測定物添加が、結合等温線に一致しないなら、これはシリンジ開口部−溶液界面での気泡の放出を反映しているかも知れないため、これは最終解析では無視した。
【０３７９】
4.8.7 コトンラット予防
静脈内（IV）経路で投与された時、コトンラットの下気道ウイルス感染を予防する抗RSV抗原抗体、抗PIV抗原抗体、および／または抗hMPV抗原抗体またはその断片の能力を測定するために、このアッセイが使用される。ある実施形態において抗体は、当業者に公知の任意の方法により投与することができる。このアッセイはまた、抗RSV抗原抗体、抗PIV抗原抗体、および／または抗hMPV抗原抗体の血清濃度を、肺RSV、PIVおよび／またはhMPV力価の低下と相関させるためにも使用される。
【０３８０】
ウシ血清アルブミン（BSA）（画分V）はシグマケミカルズ（Sigma Chemicals））から得られる。RSV-Long（Aサブタイプ）、RSV Bサブタイプ、PIV、またはhMPVを、培養肝細胞（例えば特に限定されないが、Hep-2細胞）中で増殖させる。0日に、コトンラットの群（シグモドン・ヒスピディス（Sigmodon hispidis）、平均体重100g）に、筋肉内注射または鼻内経路により目的の抗体またはBSAを投与する。感染の4日後に動物を屠殺し、肺組織を採取し、肺ウイルス力価をプラーク力価測定により測定する。ある実施形態において、0.31、0.63、1.25、2.5、5.5および10mg/kg（体重）の抗体を投与する。ウシ血清アルブミン（BSA）10mg/kgを陰性対照として使用する。抗原刺激時の血清中のヒト抗体濃度は、スイッチELISAにより測定される。
【０３８１】
4.8.8 バイオアベイラビリティ
ある用量の抗体（薬剤）の投与後に全身循環に入る用量のパーセントをバイオアベイラビリティと呼ぶ。より明確にはバイオアベイラビリティは、試験製剤から「吸収される」抗体の量と標準製剤の投与後の「吸収される」量の比として定義される。バイオアベイラビリティの評価に使用される「標準製剤」とはしばしば、静脈内投与された薬剤の水溶液である。
【０３８２】
吸収される抗体の量は、薬剤の作用部位に抗体を送る製剤の能力の尺度と見なされる：これは、例えば剤形の崩壊および溶解性、および生物変換速度対吸収速度のような要因に依存する−同量の活性薬剤を含有する剤形が、薬剤を利用できるようにする能力、従ってその予測される薬物動力学的性質および治療性質を表すことを可能にする能力が大きく異なることがある。
【０３８３】
「吸収される量」は、2つの基準のうちの1つ（薬剤投与後の尿中の時間−血漿濃度曲線（AUC9または排出された薬剤の総（累積）量下の面積）により測定することが便利である。吸収される薬剤の部分が用量に依存せず、排泄速度（半減期）と分布容積が用量と剤形に依存しない場合、「曲線下の面積」と用量の間に線形関係が存在する。例えば吸収プロセスが飽和可能なら、または例えば小腸中の薬剤の結合または薬剤が門脈系を最初に通過する時の肝臓での生物変換のために、薬剤が全身循環に到達しないなら、曲線下の面積と用量の間の関係の直線性が存在することがある。
【０３８４】
4.8.9 臨床治験
in vitroアッセイで試験された本発明の抗体またはその断片および動物モデルは、さらに安全性、耐性、薬物動態について、正常な健常ヒト志願者の群で評価される。志願者には、RSV、PIVおよび／またはhMPV抗原に免疫特異的に結合する抗体またはその断片の単回用量の0.5mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、または15mg/kgが、筋肉内、静脈内または肺デリバリー系で投与される。各志願者は好ましくは、抗体またはその断片の単回用量を投与される少なくとも24時間前に追跡され、臨床的部位で用量を投与後少なくとも48時間追跡される。志願者は、投与後通院して、3日、7日、14日、21日、28日、35日、42日、49日および56日目にモニターされる。
【０３８５】
血液サンプルは、留置カテーテルまたは直接の静脈穿刺により10mlの赤いフタのVacutainer試験管を使用して以下の間隔で採取される：(1)抗体または抗体断片の投与前；(2)抗体または抗体断片の投与中；(3)抗体または抗体断片の投与後、5分、10分、15分、20分、30分、1時間、2時間、4時間、8時間、12時間、24時間、および48時間；および(4)抗体または抗体断片の投与後、3日、7日、14日、21日、28日、35日、42日、49日、および56日。サンプルは室温で凝固させ、遠心分離して血清を集める。
【０３８６】
血清サンプルから抗体または抗体断片が部分的に精製され、サンプル中の抗体または抗体断片の量はELISAにより定量される。簡単に説明するとELISAは、志願者に投与された抗体または抗体断片を認識する抗体でマイクロタイタープレートを4℃で一晩被覆することからなる。次にプレートをPBS-ツイーン-0.5％BSAで室温で約30分ブロックする。志願者には投与されない精製された抗体または抗体断片を使用して、標準曲線を作成する。サンプルをPBS-ツイーン-BSAで希釈する。サンプルと標準物質を室温で約1時間インキュベートする。次に結合抗体を標識抗体（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ヒトIgG）で室温で約1時間処理する。標識抗体の結合を例えば分光光度計により検出する。
【０３８７】
志願者の血清中の抗体または抗体断片の濃度は、用量の投与後の各採取間隔の血清レベルから投与前血清レベル（バックグランドレベル）を引くことにより補正する。各志願者について、モデルに依存しないアプローチ（Gibaldiら編、1982, Pharmacokinetics, 第2版、マーセルデッカー（Marcel Dekker）、ニューヨーク）に従って、補正した血清抗体または抗体断片濃度から計算する。
【０３８８】
4.8.10 MPVの同定方法
本発明は、セクション4.1.7.1に記載のサブグループおよび変種に属するとして、またはまだ性状解析されていないサブグループまたは変種に属するとして性状解析されているものを含む、MPVの分離株の処理を包含する。
【０３８９】
あるサンプル中に存在するタンパク質成分を性状解析するためにイムノアッセイを使用することができる。イムノアッセイは、同定のためにウイルスのペプチド成分を使用してウイルス分離株を比較するための有効な方法である。例えばMPVの分離株を同定する方法は、基本的にMPVに感染していないかまたは特定病原体未感染モルモットもしくはフェレット（詳細な説明において動物は鼻内に接種されるが、筋肉内もしくは皮内接種のような他の接種法も可能である）をプロトタイプ分離株-2614または関連分離株とインキュベートすることを含む。0日、接種後2週間および3週間目に、動物から血清を採取する。ウイルス中和（VN）アッセイで各分離株I-2614に対する間接免疫蛍光アッセイで測定されるように動物は特異的に血清変換され、血清変換された動物からの血清は、該さらなる分離株の免疫学的検出法で使用される。例えば本発明は、ヒトで重症の呼吸器感染症を引き起こすことがあるパラミクソウイルス科（Paramyxoviridae）のヒトメタニューモウイルスまたはメタニューモウイルス様ウイルス（最終的な分類はウイルス分類委員会の議論を待っているため、ここではMPVは分類学的に例えばAPVに対応するとして記載される）の新しいメンバーの性状解析を提供する。MPVが引き起こす疾患の臨床症状は基本的に、例えばせき、筋痛症、嘔吐、熱細気管支炎または肺炎、結膜炎の可能性、これらの組合せのようなhRSVが引き起こす症状と似ている。hRSVに感染した小児で見られるように、特に幼い子は入院が必要である。例えば2001年1月19日にI-2614としてCNCM、パスツール研究所（Institute Pasteur）（パリ）に寄託されたMPVまたは系統発生的にこれに対応するウイルス分離株を使用することができる。
【０３９０】
4.8.10.1 系統発生的解析
哺乳動物MPVの分離株間の系統発生的関係は、後述の方法または当業者に公知の他の方法により評価することができる。系統発生的関係を解析するために多くの方法またはアプローチが利用できる；これらには、距離、最大確率、および最大類似度法がある（Swofford, DL.ら、系統発生的推定。Molecular Systematics中、Hillis, DM, Mortiz, C. およびMable BK編。Sinauer Associates: Massachusetts, アメリカ合衆国、407-514頁；Felsenstein, J., 1981, J. Mol. Evol. 17:368-376）。さらにブートストラッピング法（bootstrapping）は、得られる系統樹の信頼区間を作成し調べるための有効な方法である（Felsenstein, J., 1985, Evolution 29:783-791）。ヌクレオチドまたはペプチド配列情報を使用して哺乳動物MPV分離株を比較する任意の方法またはアプローチを使用して、系統発生的関係を確立することができ、例えば距離、最大確率、および最大類似度法またはアプローチがある。当該分野で公知の任意の方法（特に限定されないがブートストラッピング法を含む）を使用して、系統発生データの質を解析することができる。系統発生的アプローチで使用するためのヌクレオチド配列またはペプチド配列の整列には、特に限定されないが用手法による整列、コンピューターによる対のある整列、およびコンピューターによる多重整列がある。当業者は、必要な情報と可能な時間に基づく好適な整列法と系統発生的アプローチを熟知しているであろう。
【０３９１】
ある実施形態においてDNA最大確率法を使用して、hMPV分離株間の関係が推定される。別の実施形態においてブートストラッピング法を使用して、該系統発生的アプローチの1つを使用して作成された系統発生データの確度が決定される。別の実施形態においてジャンブリング（jumbling）法を系統発生的アプローチに応用した後、データを入力して、系統発生解析への配列順序の入力の効果を最大にする。ある具体的な実施形態においてDNA最大確率法がブートストラッピング法とともに使用される。別の具体的な実施形態においてDNA最大確率法が、ブートストラッピング法とジャンブリング法ともに使用される。別のさらに具体的な実施形態においてDNA最大確率法が50のブートストラップとともに使用される。別の具体的な実施形態においてDNA最大確率法は、50のブートストラップと3つのジャンブルともに使用される。別の具体的な実施形態においてDNA最大確率法は、100のブートストラップと3つのジャンブルともに使用される。
【０３９２】
ある実施形態において、hMPVの分離株からの核酸またはペプチド配列情報が他のhMPV分離株の配列と比較または整列される。アミノ酸配列は、Lタンパク質、Mタンパク質、Nタンパク質、Pタンパク質、またはFタンパク質のアミノ酸配列でもよい。別の実施形態において、1つのhMPV分離株または多くのhMPV分離株からの核酸またはペプチド配列情報が他のウイルスの配列と整列される。別の実施形態において、系統発生的関係が推定されおよび／または系統樹が構築されるように、系統発生的アプローチが応用される。ヌクレオチドまたはペプチド配列情報を使用してhMPV分離株を比較する任意の方法またはアプローチを使用して、系統発生的関係（特に限定されないが、距離、最大確率、および最大類似度法またはアプローチ）が推定される。
【０３９３】
系統発生的解析の他の方法は、国際特許出願PCT/NL02/00040（WO02/057302として公開）（これは参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されている。特にPCT/NL02/00040は、12頁27行〜19頁29行の系統発生的解析に適した核酸配列を開示する（参照することにより本明細書に組み込まれる）。
【０３９４】
系統発生的解析にはウイルスが比較される外群（outgroup）として非MPVの核酸配列を得ることが最も有用であり、非常に有用な外群分離株がトリニューモウイルス血清型C（APV-C）から得られる（例えば図16を参照）。
【０３９５】
多くの方法とプログラムが当該分野で公知であり、系統発生的関係委の推定に使用することができ、例えば特に限定されないが、BioEdit、ClustalW、TreeViewおよびNJPlotがある。配列を整列し系統樹または系統発生的関係を作成するのに使用される方法は、比較すべき配列情報の入力を必要とする。多くの方法またはフォーマットが当該分野で公知であり、配列情報を入力するのに使用することができ、例えば特に限定されないが、FASTA、NBRF、EMBL/SWISS、GDEタンパク質、GDEヌクレオチド、CLUSTALおよびGCG/MSFがある。配列を整列し系統樹または系統発生的関係を作成するのに使用される方法は、結果の出力を必要とする。多くの方法またはフォーマットを情報または結果の出力に使用することができ、例えば特に限定されないが、CLUSTAL、NBRF/PIR、MSF、PHYLIPおよびGDEがある。ある実施形態において系統発生的関係を作成するために、ClustalWが100のブートストラッピングと3つのジャンブルを有するDNA最大確率法とともに使用される。
【０３９６】
4.8.10.2 配列の整列
2つ以上のアミノ酸配列は、その配列相同性と互いの配列同一性を調べるためにBLAST（Altschul, S.F.ら、1990, J. Mol. Biol. 215:403-410）により比較される。2つ以上のヌクレオチド配列は、その配列相同性と互いの配列同一性を調べるためにBLAST（Altschul, S.F.ら、1990, J. Mol. Biol. 215:403-410）により比較される。BLAST比較は、Clustal W法（MacVector（登録商標））を使用して行うことができる。ある具体的な実施形態において、コンピュータープログラムによる2つ以上の配列の整列の後に、用手法による再調整が行われる。
【０３９７】
2つの配列の間のパーセント同一性の測定は、数学的アルゴリズムを使用して行うことができる。2つの配列の比較に使用される数学的アルゴリズムの好適な非限定例は、KarlinとAltschul、1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268であり、KarlinとAltschul、1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877により修飾された。そのようなアルゴリズムは、Altschulら、1990, J. Mol. Biol. 215:403-410のNBLASTとXBLASTプログラム中に取り込まれる。BLASTヌクレオチド比較は、NBALSTプログラムを用いて行うことができる。BLASTアミノ酸配列比較は、XBLASTプログラムを用いて行うことができる。比較目的にギャップのある整列を得るために、Altschulら、1987, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402に記載のようにギャップトBLASTを使用することができる。あるいはPSI-Blastを使用して、分子間の遠い関係を検出する繰り返し検索を行うことができる（Altschulら、1997, 前述）。BLAST、ギャップトBLAST、およびPSI-Blastプログラムを使用する時は、各プログラム（例えば、XBLASTとNBLAST）のデフォールトパラメータを使用することができる（http://www.ncbi.nlm.nih.govを参照）。配列比較に使用される数学的アルゴリズムの他の好適な非限定例は、MyersとMiller、1988, CABIOS 4:11-17のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムはALIGNプログラム（バージョン2.0）中に取り込まれ、これはGCG配列整列ソフトウェアパッケージの一部である。アミノ酸配列を比較するためにALIGNプログラムを使用する時は、PAM120加重残基表が使用される。ギャップ長ペナルティは当業者により設定される。2つの配列間のパーセント同一性は、ギャップ有りまたは無しで上記と同様の方法を使用して決定することができる。パーセント同一性の計算では、典型的には正確な一致のみが計算される。
【０３９８】
4.8.10.3 ハイブリダイゼーション条件
哺乳動物MPVの核酸にハイブリダイズ可能な核酸またはその逆相補体、またはその相補体を本発明の方法で使用して、互いの配列相同性と同一性を決定することができる。ある実施形態において核酸は高厳密性条件下でハイブリダイズされる。例えば特に限定されないが、そのような高厳密性条件を使用する方法は以下の通りである。DNAを含有するフィルターのプレハイブリダイゼーションは、6×SSC、50mMトリス塩酸（pH7.5）、1mM EDTA、0.02％ PVP、0.02％ フィコール、0.02％ BSA、および50μg/ml変性サケ精子DNAからなるバッファー中で、63℃で8時間〜一晩行われる。フィルターは、100μg/ml変性サケ精子DNAと5〜10×106cpmの32P標識プローブを含有するプレハイブリダイゼーション混合物中で65℃で48時間ハイブリダイズされる。フィルターの洗浄は、2×SSC、0.01％ PVP、0.01％ フィコール、および0.01％ BSAを含有する溶液中で37℃で1時間行われる。次に0.1×SSCで50℃で45分洗浄後、オートラジオグラフィーが行われる。使用される高厳密性の他の条件は当該分野で公知である。本発明のある実施形態においてハイブリダイゼーションは中〜低厳密性条件下で行われ、そのような条件は当該分野で公知である（例えばサムブルーク（Sambrook）ら、1989, モレキュラークローニング、実験室マニュアル（Molecular Cloning: A Laboratory Manual）、第2版、コールドスプリングハーバーラボラトリープレス（Cold Spring Harbor Laboratory Press）、コールドスプリングハーバー（Cold Spring Harbor）、ニューヨーク；またアウスベル（Ausubel）ら、分子生物学の現代のプロトコール（Current Protocols in Molecular Biology）シリーズの実験室法マニュアル、1987〜1997 Current Protocols（登録商標）、1994〜1997、ジョンワイリーアンドサンズインク（John Wiley and Sons Inc.）を参照）。
【０３９９】
表5:配列リストの凡例
配列番号1  ヒトメタニューモウイルス分離株00-1マトリックスタンパク質（M）と融合タンパク質（F）遺伝子
配列番号2  トリニューモウイルス融合タンパク質遺伝子、部分cds
配列番号3  トリニューモウイルス分離株1b融合タンパク質mRNA、完全cds
配列番号4  融合タンパク質（F1とF2サブユニット）の七面鳥鼻気管炎ウイルス遺伝子、完全cds
配列番号5  トリニューモウイルスマトリックスタンパク質（M）遺伝子、部分cdsとトリニューモウイルス融合糖タンパク質（F）遺伝子、完全cds
配列番号6  パラミクソウイルスFタンパク質hRSV B
配列番号7  パラミクソウイルスFタンパク質hRSV A2
配列番号8  ヒトメタニューモウイルス01-71（部分配列）
配列番号9  ヒトメタニューモウイルス分離株00-1マトリックスタンパク質（M）と融合タンパク質（F）遺伝子
配列番号10  トリニューモウイルス融合タンパク質遺伝子、部分cds
配列番号11  トリニューモウイルス分離株1b融合タンパク質mRNA、完全cds
配列番号12  融合タンパク質（F1とF2サブユニット）の七面鳥鼻気管炎ウイルス遺伝子、完全cds
配列番号13  トリニューモウイルス融合糖タンパク質（F）遺伝子、完全cds
配列番号14  七面鳥鼻気管炎ウイルス（CVL14/1株）結合タンパク質（G）mRNA、完全cds
配列番号15  七面鳥鼻気管炎ウイルス（6574株）結合タンパク質（G）、完全cds
配列番号16  七面鳥鼻気管炎ウイルス（CVL14/1株）結合タンパク質（G）mRNA、完全cds
配列番号17  七面鳥鼻気管炎ウイルス（6574株）結合タンパク質（G）、完全cds
配列番号18  分離株NL/1/99（99-1）HMPV（ヒトメタニューモウイルス）cDNA配列
配列番号19  分離株NL/1/00（00-1）HMPV cDNA配列
配列番号20  分離株NL/17/00 HMPV cDNA配列
配列番号21  分離株NL/1/94 HMPV cDNA配列
配列番号22  RT-PCRプライマーTR1
配列番号23  RT-PCRプライマーN1
配列番号24  RT-PCRプライマーN2
配列番号25  RT-PCRプライマーM1
配列番号26  RT-PCRプライマーM2
配列番号27  RT-PCRプライマーF1
配列番号28  RT-PCRプライマーN3
配列番号29  RT-PCRプライマーN4
配列番号30  RT-PCRプライマーM3
配列番号31  RT-PCRプライマーM4
配列番号32  RT-PCRプライマーF7
配列番号33  RT-PCRプライマーF8
配列番号34  RT-PCRプライマーL6
配列番号35  RT-PCRプライマーL7
配列番号36  オリゴヌクレオチドプローブM
配列番号37  オリゴヌクレオチドプローブN
配列番号38  オリゴヌクレオチドプローブL
配列番号39  分離株NL/1/00、BI/1/01、FI/4/01、NL/8/01、FI/2/01のTaqManプライマーとプローブ配列
配列番号40  分離株NL/30/01のTaqManプライマーとプローブ配列
配列番号41  分離株NL/22/01とNL/23/01のTaqManプライマーとプローブ配列
配列番号42  分離株NL/17/01のTaqManプライマーとプローブ配列
配列番号43  分離株NL/17/00のTaqManプライマーとプローブ配列
配列番号44  分離株NL/9/01、NL/21/01、およびNL/5/01のTaqManプライマーとプローブ配列
配列番号45  分離株FI/1/01とFI/10/01のTaqManプライマーとプローブ配列
配列番号46  プライマーZF1
配列番号47  プライマーZF4
配列番号48  プライマーZF7
配列番号49  プライマーZF10
配列番号50  プライマーZF13
配列番号51  プライマーZF16
配列番号52  プライマーCS1
配列番号53  プライマーCS4
配列番号54  プライマーCS7
配列番号55  プライマーCS10
配列番号56  プライマーCS13
配列番号57  プライマーCS16
配列番号58  HPIV-1の増幅のための前進プライマー
配列番号59  HPIV-1の増幅のための逆進プライマー
配列番号60  HPIV-2の増幅のための前進プライマー
配列番号61  HPIV-2の増幅のための逆進プライマー
配列番号62  HPIV-3の増幅のための前進プライマー
配列番号63  HPIV-3の増幅のための逆進プライマー
配列番号64  HPIV-4の増幅のための前進プライマー
配列番号65  HPIV-4の増幅のための逆進プライマー
配列番号66  流行性耳下腺炎ウイルスの増幅のための前進プライマー
配列番号67  流行性耳下腺炎ウイルスの増幅のための逆進プライマー
配列番号68  NDVの増幅のための前進プライマー
配列番号69  NDVの増幅のための逆進プライマー
配列番号70  ツパイア（Tupaia）の増幅のための前進プライマー
配列番号71  ツパイア（Tupaia）の増幅のための逆進プライマー
配列番号72  マプエラ（Mapuera）の増幅のための前進プライマー
配列番号73  マプエラ（Mapuera）の増幅のための逆進プライマー
配列番号74  ヘンドラ（Hendra）の増幅のための前進プライマー
配列番号75  ヘンドラ（Hendra）の増幅のための逆進プライマー
配列番号76  ニパー（Nipah）の増幅のための前進プライマー
配列番号77  ニパー（Nipah）の増幅のための逆進プライマー
配列番号78  HRSVの増幅のための前進プライマー
配列番号79  HRSVの増幅のための逆進プライマー
配列番号80  麻疹ウイルスの増幅のための前進プライマー
配列番号81  麻疹ウイルスの増幅のための逆進プライマー
配列番号82  一般的なパラミクソウイルス科ウイルスを増幅するための前進プライマー
配列番号83  一般的なパラミクソウイルス科ウイルスを増幅するための逆進プライマー
配列番号84  分離株NL/1/00(A1)のG遺伝子コード配列
配列番号85  分離株BR/2/01(A1)のG遺伝子コード配列
配列番号86  分離株FL/4/01(A1)のG遺伝子コード配列
配列番号87  分離株FL/3/01(A1)のG遺伝子コード配列
配列番号88  分離株FL/8/01(A1)のG遺伝子コード配列
配列番号89  分離株FL/10/01(A1)のG遺伝子コード配列
配列番号90  分離株NL/10/01(A1)のG遺伝子コード配列
配列番号91  分離株NL/2/02(A1)のG遺伝子コード配列
配列番号92  分離株NL/17/00(A2)のG遺伝子コード配列
配列番号93  分離株NL/1/81(A2)のG遺伝子コード配列
配列番号94  分離株NL/1/93(A2)のG遺伝子コード配列
配列番号95  分離株NL/2/93(A2)のG遺伝子コード配列
配列番号96  分離株NL/3/93(A2)のG遺伝子コード配列
配列番号97  分離株NL/1/95(A2)のG遺伝子コード配列
配列番号98  分離株NL/2/96(A2)のG遺伝子コード配列
配列番号99  分離株NL/3/96(A2)のG遺伝子コード配列
配列番号100  分離株NL/22/01(A2)のG遺伝子コード配列
配列番号101  分離株NL/24/01(A2)のG遺伝子コード配列
配列番号102  分離株NL/23/01(A2)のG遺伝子コード配列
配列番号103  分離株NL/29/01(A2)のG遺伝子コード配列
配列番号104  分離株NL/3/02(A2)のG遺伝子コード配列
配列番号105  分離株NL/1/99(B1)のG遺伝子コード配列
配列番号106  分離株NL/11/00(B1)のG遺伝子コード配列
配列番号107  分離株NL/12/00(B1)のG遺伝子コード配列
配列番号108  分離株NL/5/01(B1)のG遺伝子コード配列
配列番号109  分離株NL/9/01(B1)のG遺伝子コード配列
配列番号110  分離株NL/21/01(B2)のG遺伝子コード配列
配列番号111  分離株NL/1/94(B2)のG遺伝子コード配列
配列番号112  分離株NL/1/82(B2)のG遺伝子コード配列
配列番号113  分離株NL/1/96(B2)のG遺伝子コード配列
配列番号114  分離株NL/6/97(B2)のG遺伝子コード配列
配列番号115  分離株NL/9/00(B2)のG遺伝子コード配列
配列番号116  分離株NL/3/01(B2)のG遺伝子コード配列
配列番号117  分離株NL/4/01(B2)のG遺伝子コード配列
配列番号118  分離株NL/5/01(B2)のG遺伝子コード配列
配列番号119  分離株NL/1/00(A1)のGタンパク質配列
配列番号120  分離株BR/2/01(A1)のGタンパク質配列
配列番号121  分離株FL/4/01(A1)のGタンパク質配列
配列番号122  分離株FL/3/01(A1)のGタンパク質配列
配列番号123  分離株FL/8/01(A1)のGタンパク質配列
配列番号124  分離株FL/10/01(A1)のGタンパク質配列
配列番号125  分離株NL/10/01(A1)のGタンパク質配列
配列番号126  分離株NL/2/02(A1)のGタンパク質配列
配列番号127  分離株NL/17/00(A2)のGタンパク質配列
配列番号128  分離株NL/1/81(A2)のGタンパク質配列
配列番号129  分離株NL/1/93(A2)のGタンパク質配列
配列番号130  分離株NL/2/93(A2)のGタンパク質配列
配列番号131  分離株NL/3/93(A2)のGタンパク質配列
配列番号132  分離株NL/1/95(A2)のGタンパク質配列
配列番号133  分離株NL/2/96(A2)のGタンパク質配列
配列番号134  分離株NL/3/96(A2)のGタンパク質配列
配列番号135  分離株NL/22/01(A2)のGタンパク質配列
配列番号136  分離株NL/24/01(A2)のGタンパク質配列
配列番号137  分離株NL/23/01(A2)のGタンパク質配列
配列番号138  分離株NL/29/01(A2)のGタンパク質配列
配列番号139  分離株NL/3/02(A2)のGタンパク質配列
配列番号140  分離株NL/1/99(B1)のGタンパク質配列
配列番号141  分離株NL/11/00(B1)のGタンパク質配列
配列番号142  分離株NL/12/00(B1)のGタンパク質配列
配列番号143  分離株NL/5/01(B1)のGタンパク質配列
配列番号144  分離株NL/9/01(B1)のGタンパク質配列
配列番号145  分離株NL/21/01(B2)のGタンパク質配列
配列番号146  分離株NL/1/94(B2)のGタンパク質配列
配列番号147  分離株NL/1/82(B2)のGタンパク質配列
配列番号148  分離株NL/1/96(B2)のGタンパク質配列
配列番号149  分離株NL/6/97(B2)のGタンパク質配列
配列番号150  分離株NL/9/00(B2)のGタンパク質配列
配列番号151  分離株NL/3/01(B2)のGタンパク質配列
配列番号152  分離株NL/4/01(B2)のGタンパク質配列
配列番号153  分離株NL/5/01(B2)のGタンパク質配列
配列番号154  分離株NL/1/00のF遺伝子コード配列
配列番号155  分離株UK/1/00のF遺伝子コード配列
配列番号156  分離株NL/2/00のF遺伝子コード配列
配列番号157  分離株NL/13/00のF遺伝子コード配列
配列番号158  分離株NL/14/00のF遺伝子コード配列
配列番号159  分離株FL/3/01のF遺伝子コード配列
配列番号160  分離株FL/4/01のF遺伝子コード配列
配列番号161  分離株FL/8/01のF遺伝子コード配列
配列番号162  分離株UK/1/01のF遺伝子コード配列
配列番号163  分離株UK/7/01のF遺伝子コード配列
配列番号164  分離株FL/10/01のF遺伝子コード配列
配列番号165  分離株NL/6/01のF遺伝子コード配列
配列番号166  分離株NL/8/01のF遺伝子コード配列
配列番号167  分離株NL/10/01のF遺伝子コード配列
配列番号168  分離株NL/14/01のF遺伝子コード配列
配列番号169  分離株NL/20/01のF遺伝子コード配列
配列番号170  分離株NL/25/01のF遺伝子コード配列
配列番号171  分離株NL/26/01のF遺伝子コード配列
配列番号172  分離株NL/28/01のF遺伝子コード配列
配列番号173  分離株NL/30/01のF遺伝子コード配列
配列番号174  分離株BR/2/01のF遺伝子コード配列
配列番号175  分離株BR/3/01のF遺伝子コード配列
配列番号176  分離株NL/2/02のF遺伝子コード配列
配列番号177  分離株NL/4/02のF遺伝子コード配列
配列番号178  分離株NL/5/02のF遺伝子コード配列
配列番号179  分離株NL/6/02のF遺伝子コード配列
配列番号180  分離株NL/7/02のF遺伝子コード配列
配列番号181  分離株NL/9/02のF遺伝子コード配列
配列番号182  分離株FL/1/02のF遺伝子コード配列
配列番号183  分離株NL/1/81のF遺伝子コード配列
配列番号184  分離株NL/1/93のF遺伝子コード配列
配列番号185  分離株NL/2/93のF遺伝子コード配列
配列番号186  分離株NL/4/93のF遺伝子コード配列
配列番号187  分離株NL/1/95のF遺伝子コード配列
配列番号188  分離株NL/2/96のF遺伝子コード配列
配列番号189  分離株NL/3/96のF遺伝子コード配列
配列番号190  分離株NL/1/98のF遺伝子コード配列
配列番号191  分離株NL/17/00のF遺伝子コード配列
配列番号192  分離株NL/22/01のF遺伝子コード配列
配列番号193  分離株NL/29/01のF遺伝子コード配列
配列番号194  分離株NL/23/01のF遺伝子コード配列
配列番号195  分離株NL/17/01のF遺伝子コード配列
配列番号196  分離株NL/24/01のF遺伝子コード配列
配列番号197  分離株NL/3/02のF遺伝子コード配列
配列番号198  分離株NL/3/98のF遺伝子コード配列
配列番号199  分離株NL/1/99のF遺伝子コード配列
配列番号200  分離株NL/2/99のF遺伝子コード配列
配列番号201  分離株NL/3/99のF遺伝子コード配列
配列番号202  分離株NL/11/00のF遺伝子コード配列
配列番号203  分離株NL/12/00のF遺伝子コード配列
配列番号204  分離株NL/1/01のF遺伝子コード配列
配列番号205  分離株NL/5/01のF遺伝子コード配列
配列番号206  分離株NL/9/01のF遺伝子コード配列
配列番号207  分離株NL/19/01のF遺伝子コード配列
配列番号208  分離株NL/21/01のF遺伝子コード配列
配列番号209  分離株UK/11/01のF遺伝子コード配列
配列番号210  分離株FL/1/01のF遺伝子コード配列
配列番号211  分離株FL/2/01のF遺伝子コード配列
配列番号212  分離株FL/5/01のF遺伝子コード配列
配列番号213  分離株FL/7/01のF遺伝子コード配列
配列番号214  分離株FL/9/01のF遺伝子コード配列
配列番号215  分離株UK/10/01のF遺伝子コード配列
配列番号216  分離株NL/1/02のF遺伝子コード配列
配列番号217  分離株NL/1/94のF遺伝子コード配列
配列番号218  分離株NL/1/96のF遺伝子コード配列
配列番号219  分離株NL/6/97のF遺伝子コード配列
配列番号220  分離株NL/7/00のF遺伝子コード配列
配列番号221  分離株NL/9/00のF遺伝子コード配列
配列番号222  分離株NL/19/00のF遺伝子コード配列
配列番号223  分離株NL/28/00のF遺伝子コード配列
配列番号224  分離株NL/3/01のF遺伝子コード配列
配列番号225  分離株NL/4/01のF遺伝子コード配列
配列番号226  分離株NL/11/01のF遺伝子コード配列
配列番号227  分離株NL/15/01のF遺伝子コード配列
配列番号228  分離株NL/18/01のF遺伝子コード配列
配列番号229  分離株FL/6/01のF遺伝子コード配列
配列番号230  分離株UK/5/01のF遺伝子コード配列
配列番号231  分離株UK/8/01のF遺伝子コード配列
配列番号232  分離株NL/12/02のF遺伝子コード配列
配列番号233  分離株HK/1/02のF遺伝子コード配列
配列番号234  分離株NL/1/00のFタンパク質配列
配列番号235  分離株UK/1/00のFタンパク質配列
配列番号236  分離株NL/2/00のFタンパク質配列
配列番号237  分離株NL/13/00のFタンパク質配列
配列番号238  分離株NL/14/00のFタンパク質配列
配列番号239  分離株FL/3/01のFタンパク質配列
配列番号240  分離株FL/4/01のFタンパク質配列
配列番号241  分離株FL/8/01のFタンパク質配列
配列番号242  分離株UK/1/01のFタンパク質配列
配列番号243  分離株UK/7/01のFタンパク質配列
配列番号244  分離株FL/10/01のFタンパク質配列
配列番号245  分離株NL/6/01のFタンパク質配列
配列番号246  分離株NL/8/01のFタンパク質配列
配列番号247  分離株NL/10/01のFタンパク質配列
配列番号248  分離株NL/14/01のFタンパク質配列
配列番号249  分離株NL/20/01のFタンパク質配列
配列番号250  分離株NL/25/01のFタンパク質配列
配列番号251  分離株NL/26/01のFタンパク質配列
配列番号252  分離株NL/28/01のFタンパク質配列
配列番号253  分離株NL/30/01のFタンパク質配列
配列番号254  分離株BR/2/01のFタンパク質配列
配列番号255  分離株BR/3/01のFタンパク質配列
配列番号256  分離株NL/2/02のFタンパク質配列
配列番号257  分離株NL/4/02のFタンパク質配列
配列番号258  分離株NL/5/02のFタンパク質配列
配列番号259  分離株NL/6/02のFタンパク質配列
配列番号260  分離株NL/7/02のFタンパク質配列
配列番号261  分離株NL/9/02のFタンパク質配列
配列番号262  分離株FL/1/02のFタンパク質配列
配列番号263  分離株NL/1/81のFタンパク質配列
配列番号264  分離株NL/1/93のFタンパク質配列
配列番号265  分離株NL/2/93のFタンパク質配列
配列番号266  分離株NL/4/93のFタンパク質配列
配列番号267  分離株NL/1/95のFタンパク質配列
配列番号268  分離株NL/2/96のFタンパク質配列
配列番号269  分離株NL/3/96のFタンパク質配列
配列番号270  分離株NL/1/98のFタンパク質配列
配列番号271  分離株NL/17/00のFタンパク質配列
配列番号272  分離株NL/22/01のFタンパク質配列
配列番号273  分離株NL/29/01のFタンパク質配列
配列番号274  分離株NL/23/01のFタンパク質配列
配列番号275  分離株NL/17/01のFタンパク質配列
配列番号276  分離株NL/24/01のFタンパク質配列
配列番号277  分離株NL/3/02のFタンパク質配列
配列番号278  分離株NL/3/98のFタンパク質配列
配列番号279  分離株NL/1/99のFタンパク質配列
配列番号280  分離株NL/2/99のFタンパク質配列
配列番号281  分離株NL/3/99のFタンパク質配列
配列番号282  分離株NL/11/00のFタンパク質配列
配列番号283  分離株NL/12/00のFタンパク質配列
配列番号284  分離株NL/1/01のFタンパク質配列
配列番号285  分離株NL/5/01のFタンパク質配列
配列番号286  分離株NL/9/01のFタンパク質配列
配列番号287  分離株NL/19/01のFタンパク質配列
配列番号288  分離株NL/21/01のFタンパク質配列
配列番号289  分離株UK/11/01のFタンパク質配列
配列番号290  分離株FL/1/01のFタンパク質配列
配列番号291  分離株FL/2/01のFタンパク質配列
配列番号292  分離株FL/5/01のFタンパク質配列
配列番号293  分離株FL/7/01のFタンパク質配列
配列番号294  分離株FL/9/01のFタンパク質配列
配列番号295  分離株UK/10/01のFタンパク質配列
配列番号296  分離株NL/1/02のFタンパク質配列
配列番号297  分離株NL/1/94のFタンパク質配列
配列番号298  分離株NL/1/96のFタンパク質配列
配列番号299  分離株NL/6/97のFタンパク質配列
配列番号300  分離株NL/7/00のFタンパク質配列
配列番号301  分離株NL/9/00のFタンパク質配列
配列番号302  分離株NL/19/00のFタンパク質配列
配列番号303  分離株NL/28/00のFタンパク質配列
配列番号304  分離株NL/3/01のFタンパク質配列
配列番号305  分離株NL/4/01のFタンパク質配列
配列番号306  分離株NL/11/01のFタンパク質配列
配列番号307  分離株NL/15/01のFタンパク質配列
配列番号308  分離株NL/18/01のFタンパク質配列
配列番号309  分離株FL/6/01のFタンパク質配列
配列番号310  分離株UK/5/01のFタンパク質配列
配列番号311  分離株UK/8/01のFタンパク質配列
配列番号312  分離株NL/12/02のFタンパク質配列
配列番号313  分離株HK/1/02のFタンパク質配列
配列番号314  HMPV分離株NL/1/00のFタンパク質配列
配列番号315  HMPV分離株NL/17/00のFタンパク質配列
配列番号316  HMPV分離株NL/1/99のFタンパク質配列
配列番号317  HMPV分離株NL/1/94のFタンパク質配列
配列番号318  HMPV分離株NL/1/00のF遺伝子配列
配列番号319  HMPV分離株NL/17/00のF遺伝子配列
配列番号320  HMPV分離株NL/1/99のF遺伝子配列
配列番号321  HMPV分離株NL/1/94のF遺伝子配列
配列番号322  HMPV分離株NL/1/00のGタンパク質配列
配列番号323  HMPV分離株NL/17/00のGタンパク質配列
配列番号324  HMPV分離株NL/1/99のGタンパク質配列
配列番号325  HMPV分離株NL/1/94のGタンパク質配列
配列番号326  HMPV分離株NL/1/00のG遺伝子配列
配列番号327  HMPV分離株NL/17/00のG遺伝子配列
配列番号328  HMPV分離株NL/1/99のG遺伝子配列
配列番号329  HMPV分離株NL/1/94のG遺伝子配列
配列番号330  HMPV分離株NL/1/00のLタンパク質配列
配列番号331  HMPV分離株NL/17/00のLタンパク質配列
配列番号332  HMPV分離株NL/1/99のLタンパク質配列
配列番号333  HMPV分離株NL/1/94のLタンパク質配列
配列番号334  HMPV分離株NL/1/00のL遺伝子配列
配列番号335  HMPV分離株NL/17/00のL遺伝子配列
配列番号336  HMPV分離株NL/1/99のL遺伝子配列
配列番号337  HMPV分離株NL/1/94のL遺伝子配列
配列番号338  HMPV分離株NL/1/00のM2-1タンパク質配列
配列番号339  HMPV分離株NL/17/00のM2-1タンパク質配列
配列番号340  HMPV分離株NL/1/99のM2-1タンパク質配列
配列番号341  HMPV分離株NL/1/94のM2-1タンパク質配列
配列番号342  HMPV分離株NL/1/00のM2-1遺伝子配列
配列番号343  HMPV分離株NL/17/00のM2-1遺伝子配列
配列番号344  HMPV分離株NL/1/99のM2-1遺伝子配列
配列番号345  HMPV分離株NL/1/94のM2-1遺伝子配列
配列番号346  HMPV分離株NL/1/00のM2-2タンパク質配列
配列番号347  HMPV分離株NL/17/00のM2-2タンパク質配列
配列番号348  HMPV分離株NL/1/99のM2-2タンパク質配列
配列番号349  HMPV分離株NL/1/94のM2-2タンパク質配列
配列番号350  HMPV分離株NL/1/00のM2-2遺伝子配列
配列番号351  HMPV分離株NL/17/00のM2-2遺伝子配列
配列番号352  HMPV分離株NL/1/99のM2-2遺伝子配列
配列番号353  HMPV分離株NL/1/94のM2-2遺伝子配列
配列番号354  HMPV分離株NL/1/00のM2遺伝子配列
配列番号355  HMPV分離株NL/17/00のM2遺伝子配列
配列番号356  HMPV分離株NL/1/99のM2遺伝子配列
配列番号357  HMPV分離株NL/1/94のM2遺伝子配列
配列番号358  HMPV分離株NL/1/00のMタンパク質配列
配列番号359  HMPV分離株NL/17/00のMタンパク質配列
配列番号360  HMPV分離株NL/1/99のMタンパク質配列
配列番号361  HMPV分離株NL/1/94のMタンパク質配列
配列番号362  HMPV分離株NL/1/00のM遺伝子配列
配列番号363  HMPV分離株NL/17/00のM遺伝子配列
配列番号364  HMPV分離株NL/1/99のM遺伝子配列
配列番号365  HMPV分離株NL/1/94のM遺伝子配列
配列番号366  HMPV分離株NL/1/00のNタンパク質配列
配列番号367  HMPV分離株NL/17/00のNタンパク質配列
配列番号368  HMPV分離株NL/1/99のNタンパク質配列
配列番号369  HMPV分離株NL/1/94のNタンパク質配列
配列番号370  HMPV分離株NL/1/00のN遺伝子配列
配列番号371  HMPV分離株NL/17/00のN遺伝子配列
配列番号372  HMPV分離株NL/1/99のN遺伝子配列
配列番号373  HMPV分離株NL/1/94のN遺伝子配列
配列番号374  HMPV分離株NL/1/00のPタンパク質配列
配列番号375  HMPV分離株NL/17/00のPタンパク質配列
配列番号376  HMPV分離株NL/1/99のPタンパク質配列
配列番号387  HMPV分離株NL/1/94のPタンパク質配列
配列番号378  HMPV分離株NL/1/00のP遺伝子配列
配列番号379  HMPV分離株NL/17/00のP遺伝子配列
配列番号380  HMPV分離株NL/1/99のP遺伝子配列
配列番号381  HMPV分離株NL/1/94のP遺伝子配列
配列番号382  HMPV分離株NL/1/00のSHタンパク質配列
配列番号383  HMPV分離株NL/17/00のSHタンパク質配列
配列番号384  HMPV分離株NL/1/99のSHタンパク質配列
配列番号385  HMPV分離株NL/1/94のSHタンパク質配列
配列番号386  HMPV分離株NL/1/00のSH遺伝子配列
配列番号387  HMPV分離株NL/17/00のSH遺伝子配列
配列番号388  HMPV分離株NL/1/99のSH遺伝子配列
配列番号389  HMPV分離株NL/1/94のSH遺伝子配列
配列番号390  ヒトRSウイルスの結合糖タンパク質
配列番号391  ヒトRSウイルスの融合糖タンパク質
配列番号392  ヒトRSウイルスの小疎水性タンパク質
配列番号393  ヒトRSウイルスのRNAポリメラーゼベータサブユニット（大構造タンパク質）（Lタンパク質）
配列番号394  ヒトRSウイルスのホスホタンパク質P
配列番号395  ヒトRSウイルスの結合糖タンパク質
配列番号396  ヒトRSウイルスのヌクレオカプシドタンパク質
配列番号397  ヒトRSウイルスの核タンパク質（N）
配列番号398  ヒトRSウイルスのマトリックスタンパク質
配列番号399  核タンパク質（N）
配列番号400  ホスホタンパク質（P）
配列番号401  マトリックスタンパク質（M）
配列番号402  マトリックスタンパク質2-1（M2）
配列番号403  マトリックスタンパク質2-2（M2）
配列番号404  小疎水性タンパク質（SH）
配列番号405  ヒトメタニューモウイルスのRNA依存性RNAポリメラーゼ（L）
配列番号406  ヒトメタニューモウイルスのRNA依存性RNAポリメラーゼ（L）
配列番号407  ヒトパラインフルエンザ1ウイルスのRNA依存性RNAポリメラーゼ（L）
配列番号408  ヒトパラインフルエンザ1ウイルスのLポリメラーゼタンパク質
配列番号409  ヒトパラインフルエンザ1ウイルスのHN糖タンパク質
配列番号410  ヒトパラインフルエンザ1ウイルスのマトリックスタンパク質
配列番号411  ヒトパラインフルエンザ1ウイルスのY1タンパク質
配列番号412  ヒトパラインフルエンザ1ウイルスのCタンパク質
配列番号413  ヒトパラインフルエンザ1ウイルスのホスホタンパク質
配列番号414  ヒトパラインフルエンザ1ウイルスの核タンパク質
配列番号415  ヒトパラインフルエンザ1ウイルスのF糖タンパク質
配列番号416  ヒトパラインフルエンザウイルス3のDタンパク質
配列番号417  ヒトパラインフルエンザウイルス3の血球凝集素−ノイラミニダーゼ
配列番号418  ヒトパラインフルエンザウイルス3のヌクレオカプシドタンパク質
配列番号419  ヒトパラインフルエンザウイルス2のPタンパク質
配列番号420  ヒトパラインフルエンザウイルスのFタンパク質
配列番号421  ヒトパラインフルエンザウイルスのGタンパク質
配列番号422  ホモサピエンス
配列番号423  ホモサピエンス
配列番号424  トリニューモウイルス融合タンパク質遺伝子
配列番号425  トリニューモウイルス分離株1b融合タンパク質mRNA
配列番号426  融合タンパク質の七面鳥鼻気管炎ウイルス遺伝子（F1とF2サブユニット）、完全なcds
配列番号427  トリニューモウイルス融合糖タンパク質（F）遺伝子、完全なcds
配列番号428  七面鳥鼻気管炎ウイルス（CVL14/1株）結合タンパク質（G）mRNA、完全なcds
配列番号429  七面鳥鼻気管炎ウイルス（6574株）結合タンパク質（G）
配列番号430  株NL1/の推定HRA配列
配列番号431  株NL17/00の推定HRA配列
配列番号432  株NL1/99の推定HRA配列
配列番号433  株NL1/94の推定HRA配列
配列番号434  株NL1/00の推定HRB配列
配列番号435  株NL17/00の推定HRB配列
配列番号436  株NL1/99の推定HRB配列
配列番号437  株NL1/94の推定HRB配列
同等物
ここに記載した本明細書の具体的な実施形態に対して多くの同等物があることを当業者は認識するか、または日常的な実験を使用して確認することができるであろう。そのような同等物は、以下の特許請求の範囲に包含されるものである。
【０４００】
本明細書に記載のすべての刊行物、特許および特許出願は、それぞれの刊行物、特許および特許出願が参照することにより本明細書に組み込まれるのと同程度に本明細書に参照することにより組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０４０１】
【図１】hMPV Fタンパク質の発現のために発現構築体。
【配列表】
2005533861.tif 000003
2005533861.tif 000004
2005533861.tif 000005
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【図１】
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【国際調査報告】
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