(57)【要約】  種々の骨同化化合物は、哺乳動物における骨質量、密度、および／または強度を維持および／または増加するのに有用である。好ましい化合物は、骨同化活性を増強するが、所望でない雌性化または雄性化効果を最小または排除する。
2005511489.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨量、骨密度および骨強度からなる群より選択される骨特性を増加または維持するのに有効な投薬養生法によりANGELS化合物を被験体に投与する工程を含む方法。
【請求項２】
ANGELS化合物が非フェノール系である請求項１記載の方法。
【請求項３】
ANGELS化合物がエストレンジオール、アンドロステンジオール、エストランジオール、アンドロスタンジオール、ノルエストレンジオール、ホモエストレンジオール、セコエストレンジオール、ノルアンドロステンジオール、ホモアンドロステンジオール、セコアンドロステンジオール、ノルエストランジオール、ホモエストランジオール、セコエストランジオール、ノルアンドロスタンジオール、ホモアンドロスタンジオール、セコアンドロスタンジオール、およびエストラトリエノールからなる群より選択される、請求項２記載の方法。
【請求項４】
ANGELS化合物がエストレンジオールまたはアンドロステンジオールである請求項３記載の方法。
【請求項５】
エストレンジオールが５（１０）−エストレンジオールである請求項４記載の方法。
【請求項６】
５（１０）−エストレンジオールが５（１０）−エストレン−３α，１７α−ジオール、５（１０）−エストレン−３α，１７β−ジオール、５（１０）−エストレン−３β，１７α−ジオールおよび５（１０）−エストレン−３β，１７β−ジオールからなる群より選択される請求項５記載の方法。
【請求項７】
ANGELS化合物が５（６）−エストレンジオールまたは５（６）−アンドロステンジオールである請求項４記載の方法。
【請求項８】
ANGELS化合物が５（６）−エストレン−３α，１７α−ジオール、５（６）−エストレン−３α，１７β−ジオール、５（６）−エストレン−３β，１７α−ジオール、５（６）−エストレン−３β，１７β−ジオール、５（６）−アンドロステン−３α，１７α−ジオール、５（６）−アンドロステン−３α，１７β−ジオール、５（６）−アンドロステン−３β，１７α−ジオール、および５（６）−アンドロステン−３β，１７β−ジオールからなる群より選択される請求項７記載の方法。
【請求項９】
ANGELS化合物が４−エストレンジオールまたは４−アンドロステンジオールである請求項４記載の方法。
【請求項１０】
ANGELS化合物が−エストレン−３α，１７α−ジオール、４−エストレン−３α，１７β−ジオール、４−エストレン−３β，１７α−ジオール、４−エストレン−３β，１７β−ジオール、４−アンドロステン−３α，１７α−ジオール、４−アンドロステン−３α，１７β−ジオール、４−アンドロステン−３β，１７α−ジオール、および４−アンドロステン−３α，１７β−ジオールからなる群より選択される請求項９記載の方法。
【請求項１１】
ANGELS化合物がエストランジオールまたはアンドロスタンジオールである請求項３記載の方法。
【請求項１２】
ANGELS化合物がエストラン−３α，１７α−ジオール、エストラン−３α，１７β−ジオール、エストラン−３β，１７α−ジオール，エストラン−３β，１７β−ジオール、アンドロスタン−３α，１７α−ジオール、アンドロスタン−３α，１７β−ジオール、アンドロスタン−３β，１７α−ジオール、およびアンドロスタン−３β，１７β−ジオールからなる群より選択される請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
ANGELS化合物が５α−エストランジオールまたは５α−アンドロスタンジオールである請求項１１記載の方法。
【請求項１４】
ANGELS化合物が５α−エストラン−３α，１７α−ジオール、５α−エストラン−３α，１７β−ジオール、５α−エストラン−３β，１７α−ジオール，５α−エストラン−３β，１７β−ジオール、５α−アンドロスタン−３α，１７α−ジオール、５α−アンドロスタン−３α，１７β−ジオール、５α−アンドロスタン−３β，１７α−ジオール、および５α−アンドロスタン−３β，１７β−ジオールからなる群より選択される請求項１２記載の方法。
【請求項１５】
ANGELS化合物が５β−エストランジオールまたは５β−アンドロスタンジオールである請求項１１記載の方法。
【請求項１６】
ANGELS化合物が５β−エストラン−３α，１７α−ジオール、５β−エストラン−３α、１７β−ジオール、５β−エストラン−３β、１７α−ジオール、５β−  エストラン−３β，１７β−ジオール、５β−アンドロスタン−３α，１７α−ジオール、５β−アンドロスタン−３α，１７β−ジオール、５β−アンドロスタン−３β，１７α−ジオール、および５β−アンドロスタン−３β，１７β−ジオールからなる群より選択される請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
ANGELS化合物がノルエストレンジオール、ホモエストレンジオール、セコエストレンジオール、ノルアンドロステンジオール、ホモアンドロステンジオール、セコアンドロステンジオール、ノルエストランジオール，ホモエストランジオール、セコエストランジオール、ノルアンドロスタンジオール、ホモアンドロスタンジオール、およびセコアンドロスタンジオールからなる群より選択される請求項３記載の方法。
【請求項１８】
ANGELS化合物がノルエストレンジオール、ホモエストレンジオール、およびセコエストレンジオールからなる群より選択される請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
ANGELS化合物がノルエストランジオール、ホモエストランジオール、およびセコエストランジオールからなる群より選択される請求項１７記載の方法。
【請求項２０】
ANGELS化合物がノルアンドロステンジオール、ホモアンドロステンジオール、およびセコアンドロステンジオールからなる群より選択される請求項１７記載の方法。
【請求項２１】
ANGELS化合物がノルアンドロスタンジオール、ホモアンドロスタンジオール、およびセコアンドロスタンジオールからなる群より選択される請求項１７記載の方法。
【請求項２２】
ANGELS化合物がエストラトリエノールである請求項３記載の方法。
【請求項２３】
エストラトリエノールがエストラトリエン−２−オール，エストラトリエン−３−オール、エストラトリエン−４−オール、およびエストラトリエン−５−オールからなる群より選択される請求項２０記載の方法。
【請求項２４】
エストラトリエノールがセコエストラトリエノール、ノルエストラトリエノール、およびホモエストラトリエノールからなる群より選択される請求項２０記載の方法。
【請求項２５】
エストラトリエノールが、
【化１】
2005511489.tif 000055
（式中、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、およびＲ13はそれぞれ個々に、水素、Ｃ1〜Ｃ5アルキルおよびトリフルオロメチルからなる群より選択され；ＡおよびＢはそれぞれ独立して、ＣＨまたはＮであり；Ｒ12は水素、ヒドロキシ、およびＣ1〜Ｃ5アルキルからなる群より選択される）
からなる群より選択される、請求項２０記載の方法。
【請求項２６】
Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、およびＲ13はそれぞれ個々に、水素、メチル、エチル、およびトリフルオロメチルからなる群より選択される、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
ANGELS化合物が
【化２】
2005511489.tif 000056
（式中、Ｒは水素またはＣl〜Ｃ5アルキルであり；Ｒ’およびＲ’’はそれぞれ個々に水素、Ｃl〜Ｃ5アルキル、トリフルオロメチル、フェニル、およびＣl〜Ｃ5アルキル置換フェニルからなる群より選択される）
からなる群より選択される請求項１記載の方法。
【請求項２８】
Ｒは水素、メチル、およびエチルからなる群より選択され、Ｒ’およびＲ’’はそれぞれ個々に水素、メチル、エチル、プロピル、トリフルオロメチル、フェニル、２−トルイル、３−トルイル、および４−トルイルからなる群より選択される、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
ANGELS化合物が
【化３】
2005511489.tif 000057
（式中、Ｒ1は水素、Ｃl〜Ｃ5アルキル、シクロアルキル、フェニル、およびＣl〜Ｃ5アルキルフェニルからなる群より選択され；Ｒ2は水素、Ｃl〜Ｃ5アルキル、およびトリフルオロメチルからなる群より選択され；Ｒ3は水素、Ｃl〜Ｃ5アルキル、シクロアルキル、ヒドロキシシクロアルキル、フェニル、およびＣl〜Ｃ5アルキルフェニルからなる群より選択される）
からなる群より選択される、請求項１記載の方法。
【請求項３０】
Ｒ1は水素、メチル、エチル、イソプロピル、シクロヘキシル、およびフェニルからなる群より選択され；Ｒ2は水素、メチル、エチル、イソプロピル、およびトリフルオロメチルからなる群より選択され；Ｒ3は水素、メチル、エチル、イソプロピル、フェニル、シクロヘキシル、シクロペンチル、および４−ヒドロキシシクロヘキシルからなる群より選択される、請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
被験体が骨障害に罹患している請求項１記載の方法。
【請求項３２】
骨障害が、骨粗鬆症、パジェット病、骨形成不全症、慢性副甲状腺機能亢進症、甲状腺機能亢進症、慢性関節リウマチ、ゴーラム−スタウト病、マッキューン−オールブライト症候群、癌の骨転移、多発性骨髄腫の骨転移および歯槽突起骨減損からなる群より選択される、請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
骨障害が骨粗鬆症である請求項３２記載の方法。
【請求項３４】
骨粗鬆症が閉経後、雄性、老年性、グルココルチコイド誘導性、アルコール誘導性、食欲不振／無月経関連性、不動化誘導性、無重力誘導性、移植後、移動性、特発性、および若年性からなる群より選択される、請求項３３記載の方法。
【請求項３５】
骨特性が骨量である請求項１記載の方法。
【請求項３６】
骨特性が骨密度である請求項１記載の方法。
【請求項３７】
骨特性が骨強度である請求項１記載の方法。
【請求項３８】
性欲の増加、血管運動障害の制御、血管拡張の促進、骨減損の低減、気分変動の低減、コレステロールの低下、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）の減少、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）の増加、アテローム性動脈硬化症の遅延、癌の進行の遅延、心臓血管疾患の進行の遅延、加齢性神経変性の遅延、神経変性性疾患の進行の遅延、癌の危険の低減、心臓血管疾患の危険の低減、脳卒中の危険の低減、および神経変性性疾患の危険の低減からなる群より選択される処置を提供するのに有効な投薬養生法によりANGELS化合物を被験体に投与する工程を含む方法。
【請求項３９】
投薬養生法が血管運動障害を制御または血管拡張を促進するのに有効である請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
投薬養生法が心臓血管疾患の進行を遅延またはアテローム性動脈硬化症を遅延、心臓血管疾患の危険を低減、または脳卒中の危険を低減するのに有効である請求項３８記載の方法。
【請求項４１】
投薬養生法がコレステロールを低下、ＬＤＬを減少、またはＨＤＬを増加するのに有効である請求項３８記載の方法。
【請求項４２】
投薬養生法が加齢性神経変性を遅延、神経変性性疾患の進行を遅延、または神経変性性疾患の危険を低減するのに有効である請求項３８記載の方法。
【請求項４３】
投薬養生法が性欲を増加するのに有効である請求項３８記載の方法。
【請求項４４】
投薬養生法が骨損失を低減するのに有効である請求項３８記載の方法。
【請求項４５】
投薬養生法が気分変動を低減するのに有効である請求項３８記載の方法。
【請求項４６】
投薬養生法が癌の危険を低減、または癌の進行を遅延するのに有効である請求項３８記載の方法。
【請求項４７】
【化４】
2005511489.tif 000058
（式中、Ｒl、Ｒ3およびＲ6はそれぞれ個々に、水素またはメチルであり；
ｍおよびｎはそれぞれ個々に、１〜３の範囲の整数であり；
Ｒ2およびＲ5はそれぞれ個々に、水素、ハロゲン、メルカプト、ヒドロキシル、シアノ、アミノ、エテニル、エチニル、アリール、Ｃl〜Ｃ5ヘテロアリール、Ｃl〜Ｃ5アルキル、Ｃl〜Ｃ5シクロアルキル、Ｃl〜Ｃ5ハロアルキル、Ｃl〜Ｃ5アルキルチオ，Ｃl〜Ｃ5エステル，Ｃl〜Ｃ5アルコキシ、Ｃl〜Ｃ5アシル、Ｃl〜Ｃ5アルキルアミン、およびＣl〜Ｃ5アシルオキシからなる群より選択され；
Ｒ4は水素、エテニル、エチニル、アリール、Ｃl〜Ｃ5ヘテロアリール、Ｃl〜Ｃ5アルキル、Ｃl〜Ｃ5シクロアルキル、Ｃl〜Ｃ5ハロアルキル、Ｃl〜Ｃ5エステル、およびＣl〜Ｃ5アシルからなる群より選択される）
からなる群より選択される式で表される化合物を含有してなる医薬組成物。
【請求項４８】
化合物が式
【化５】
2005511489.tif 000059
で表される請求項４７記載の医薬組成物。
【請求項４９】
ｎが１または３である請求項４８記載の医薬組成物。
【請求項５０】
ｍが１または３である請求項４８記載の医薬組成物。
【請求項５１】
化合物が式
【化６】
2005511489.tif 000060
で表される請求項４８記載の医薬組成物。
【請求項５２】
Ｒ2が水素、Ｃl〜Ｃ5アルキル、フェニル、およびＣl〜Ｃ5アルキル置換フェニルからなる群より選択され；Ｒ4が水素、Ｃl〜Ｃ5アルキルおよびエチニルからなる群より選択され；Ｒ5が水素およびＣl〜Ｃ5アルキルからなる群より選択される請求項５１記載の医薬組成物。
【請求項５３】
化合物が式
【化７】
2005511489.tif 000061
で表される請求項４７記載の医薬組成物。
【請求項５４】
ｎが１または３である請求項５３記載の医薬組成物。
【請求項５５】
ｍが１または３である請求項５３記載の医薬組成物。
【請求項５６】
化合物が式
【化８】
2005511489.tif 000062
で表される請求項５３記載の医薬組成物。
【請求項５７】
Ｒ2が水素、Ｃl〜Ｃ5アルキル、フェニル、およびＣl〜Ｃ5アルキル置換フェニルからなる群より選択され；Ｒ4が水素、Ｃl〜Ｃ5アルキルおよびエチニルからなる群より選択され；Ｒ5が水素およびＣl〜Ｃ5アルキルからなる群より選択される請求項５６記載の医薬組成物。
【請求項５８】
化合物が式
【化９】
2005511489.tif 000063
で表される請求項４７記載の医薬組成物。
【請求項５９】
ｎが１または３である請求項５８記載の医薬組成物。
【請求項６０】
ｍが１または３である請求項５８記載の医薬組成物。
【請求項６１】
化合物が式
【化１０】
2005511489.tif 000064
で表される請求項５８記載の医薬組成物。
【請求項６２】
Ｒ2が水素、Ｃl〜Ｃ5アルキル、フェニル、およびＣl〜Ｃ5アルキル置換フェニルからなる群より選択され；Ｒ4が水素、Ｃl〜Ｃ5アルキルおよびエチニルからなる群より選択され；Ｒ5が水素およびＣl〜Ｃ5アルキルからなる群より選択される請求項６１記載の医薬組成物。
【請求項６３】
化合物が式
【化１１】
2005511489.tif 000065
で表される請求項４７記載の医薬組成物。
【請求項６４】
ｎが１または３である請求項６３記載の医薬組成物。
【請求項６５】
ｍが１または３である請求項６３記載の医薬組成物。
【請求項６６】
化合物が式
【化１２】
2005511489.tif 000066
で表される請求項６３記載の医薬組成物。
【請求項６７】
Ｒ2が水素、Ｃl〜Ｃ5アルキル、フェニル、およびＣl〜Ｃ5アルキル置換フェニルからなる群より選択され；Ｒ4が水素、Ｃl〜Ｃ5アルキルおよびエチニルからなる群より選択され；Ｒ5が水素およびＣl〜Ｃ5アルキルからなる群より選択される請求項６６記載の医薬組成物。
【請求項６８】
【化１３】
2005511489.tif 000067
（式中、Ｒl、Ｒ3およびＲ6はそれぞれ個々に、水素またはメチルであり；
Ｒ2およびＲ5はそれぞれ個々に、水素、ハロゲン、メルカプト、ヒドロキシル、シアノ、アミノ、エテニル、エチニル、アリール、Ｃl〜Ｃ5ヘテロアリール、Ｃl〜Ｃ5アルキル、Ｃl〜Ｃ5シクロアルキル、Ｃl〜Ｃ5ハロアルキル、Ｃl〜Ｃ5アルキルチオ，Ｃl〜Ｃ5エステル，Ｃl〜Ｃ5アルコキシ、Ｃl〜Ｃ5アシル、Ｃl〜Ｃ5アルキルアミン、およびＣl〜Ｃ5アシルオキシからなる群より選択され；
Ｒ4は水素、エテニル、エチニル、アリール、Ｃl〜Ｃ5ヘテロアリール、Ｃl〜Ｃ5アルキル、Ｃl〜Ｃ5シクロアルキル、Ｃl〜Ｃ5ハロアルキル、Ｃl〜Ｃ5エステル、およびＣl〜Ｃ5アシルからなる群より選択される）
からなる群より選択される式で表される化合物を含有してなる医薬組成物。
【請求項６９】
化合物が
【化１４】
2005511489.tif 000068
からなる群より選択される式で表される請求項６８記載の医薬組成物。
【請求項７０】
Ｒ2が水素、Ｃl〜Ｃ5アルキル、フェニル、およびＣl〜Ｃ5アルキル置換フェニルからなる群より選択され；Ｒ4が水素、Ｃl〜Ｃ5アルキルおよびエチニルからなる群より選択され；Ｒ5が水素およびＣl〜Ｃ5アルキルからなる群より選択される請求項６９記載の医薬組成物。
【請求項７１】
化合物が
【化１５】
2005511489.tif 000069
からなる群より選択される式で表される請求項６８記載の医薬組成物。
【請求項７２】
Ｒ2が水素、Ｃl〜Ｃ5アルキル、フェニル、およびＣl〜Ｃ5アルキル置換フェニルからなる群より選択され；Ｒ4が水素、Ｃl〜Ｃ5アルキルおよびエチニルからなる群より選択され；Ｒ5が水素およびＣl〜Ｃ5アルキルからなる群より選択される請求項７１記載の医薬組成物。
【請求項７３】
化合物が
【化１６】
2005511489.tif 000070
からなる群より選択される式で表される請求項６８記載の医薬組成物。
【請求項７４】
Ｒ2が水素、Ｃl〜Ｃ5アルキル、フェニル、およびＣl〜Ｃ5アルキル置換フェニルからなる群より選択され；Ｒ4が水素、Ｃl〜Ｃ5アルキルおよびエチニルからなる群より選択され；Ｒ5が水素およびＣl〜Ｃ5アルキルからなる群より選択される請求項７３記載の医薬組成物。
【請求項７５】
【化１７】
2005511489.tif 000071
（式中、Ｒl3、Ｒ14、およびＲ15はそれぞれ個々に、水素、エテニル、エチニル、Ｃl〜Ｃ5アルキル、シクロアルキルおよびフェニルからなる群より選択され；Ｒ16は水素、ヒドロキシル、およびＣl〜Ｃ5ヒドロキシアルキルからなる群より選択される）
からなる群より選択される式で表される化合物を含有してなる医薬組成物。
【請求項７６】
化合物が
【化１８】
2005511489.tif 000072
からなる群より選択される式で表される請求項７５記載の医薬組成物。
【請求項７７】
Ｒl3およびＲ14はそれぞれ個々に、水素、Ｃl〜Ｃ5アルキル、シクロアルキルおよびフェニルからなる群より選択され；Ｒ16はヒドロキシルである請求項７６記載の医薬組成物。
【請求項７８】
化合物が
【化１９】
2005511489.tif 000073
からなる群より選択される式で表される請求項７５記載の医薬組成物。
【請求項７９】
Ｒl3、Ｒ14およびＲ15はそれぞれ個々に、水素、Ｃl〜Ｃ5アルキル、シクロアルキルおよびフェニルからなる群より選択される請求項７８記載の医薬組成物。
【請求項８０】
化合物が
【化２０】
2005511489.tif 000074
からなる群より選択される式で表される請求項７５記載の医薬組成物。
【請求項８１】
Ｒl3、Ｒ14およびＲ15はそれぞれ個々に、水素、Ｃl〜Ｃ5アルキル、シクロアルキルおよびフェニルからなる群より選択される請求項８０記載の医薬組成物。
【請求項８２】
【化２１】
2005511489.tif 000075
（式中、ｍおよびｎはそれぞれ個々に、１〜４の範囲の整数であり；Ｒ3およびＲ5はそれぞれ個々に、ヒドロキシ、水素、Ｃl〜Ｃ5アルキル、Ｃl〜Ｃ5ヒドロキシアルキル、Ｃl〜Ｃ5アルコキシ、Ｃl〜Ｃ5チオアルコキシ、フェニル、およびＣl〜Ｃ5アルキル置換フェニルからなる群より選択され；Ｒ6は水素およびＣl〜Ｃ5アルキルからなる群より選択される）
からなる群より選択される式で表される化合物を含有してなる医薬組成物。
【請求項８３】
化合物が
【化２２】
2005511489.tif 000076
からなる群より選択される式で表される請求項８２記載の医薬組成物。
【請求項８４】
Ｒ3は水素、メチルおよびエチルからなる群より選択され；Ｒ5およびＲ6はそれぞれ個々に、水素およびＣl〜Ｃ5アルキルからなる群より選択される、請求項８３記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
米国政府資金提供
本発明は、一部において、米国立衛生研究所からの寄付金により補助された。したがって、連邦政府は本発明において一定の権利を有する。
【０００２】
発明の背景
発明の分野
本発明は、哺乳動物の処置に有用な化合物、特に、ヒトにおいて骨の質量および／または密度および／または強度を維持または増大するのに有用であるが、現在利用可能な処置の所望されない効果を最小化または排除する化合物に関する。
【０００３】
関連技術の記載
エストロゲンおよびアンドロゲンは、生殖の生物学において絶対必要な役割に加え、骨を含むいくつかの非生殖組織に重要な調節的影響を与える。実際、閉経時のエストロゲン欠乏は、現代において最も一般的な代謝性骨疾患の１つである閉経後骨粗鬆症の原因となっている。閉経後の数十年間エストロゲン置換療法を延長するための最も正当な原理（および唯一承認されたFDA適応）がこの疾患の予防である。骨粗鬆症の予防におけるエストロゲン置換療法の効力、ならびにエストロゲンの生殖組織および非生殖組織に対する効果がレセプター作用の類似のメカニズムから生じるという仮定に基づき、生殖組織および非生殖組織におけるエストロゲン欠乏の有害効果を同様に予防するために、ここ６０年間で数百万人の閉経後女性に対してエストロゲンの置換療法が施されている。去勢または加齢にともなう生殖機能の低下による男性のアンドロゲン（およびおそらくエストロゲン）の欠乏もまた、男性における骨粗鬆症発症の主な要因である。
【０００４】
骨粗鬆症は、骨の脆化および骨折につながる、骨の質量および質の低下として表わされる。骨は、生細胞およびタンパク質とミネラルとのマトリックスからなる動的組織である。２種類の高度に分化した細胞：古い骨を除去する破骨細胞、および新しい骨を形成する骨芽細胞によりなされるリモデリングプロセスにより絶えず生殖される。リモデリングは、主に、骨の内表面で起こり、基本多細胞単位（BMU）と称する一次的な解剖構造により行なわれる。これらのBMUは、前面の破骨細胞および後方の骨芽細胞の組を含む。BMUが骨表面を移動すると、破骨細胞が陥凹穴を形成し、これは次に骨芽細胞により創られる新しい骨により逐次充填される。破骨細胞はアポトーシス（プログラムされた細胞死）により死に至り、食細胞により速やかに除去される。骨芽細胞のより長い寿命（破骨細胞が約３週間であるのに比べて３ヶ月）の間、一部の骨芽細胞は静態骨表面を覆う管壁細胞に変換され、一部は骨細胞として石化骨マトリックス内に封入される。しかしながら、骨芽細胞のほとんどは、アポトーシスにより死に至る。
【０００５】
骨粗鬆症を含む、成体骨格の代謝性障害のほとんどは、破骨細胞による古い骨の吸収と、続く骨芽細胞による置換との間の不均衡により生じると考えられる。性ステロイド（エストロゲンまたはアンドロゲン）は、破骨細胞および骨芽細胞の生成速度を減衰させることにより、リモデリングサイクルの回数を減少させる。その結果、性ステロイドの低減により、骨リモデリング速度の増大がもたらされる。性ステロイドはまた、アポトーシスのプロセスを調節することにより、反対方向に破骨細胞および骨芽細胞の寿命を調節する。エストロゲンの欠乏は、骨芽細胞性−骨細胞性細胞のアポトーシスを促進し、破骨細胞のアポトーシスを遅延する。骨形成性骨芽細胞の寿命の短縮および骨吸収性破骨細胞の寿命の延長は、骨形成と吸収のバランスを吸収の方に傾ける。したがって、性ステロイド欠乏は、骨の損失および骨粗鬆症発症をもたらす。
【０００６】
閉経後の卵巣機能の低下は、骨粗鬆症の発症ならびに性欲の低下、顔面潮紅として知られる血管運動障害、リポ蛋白の好ましくない変化、認識機能の低下およびおそらく冠動脈疾患、心臓発作およびアルツハイマー病のような神経変性疾患の主なリスクファクターである。エストロゲンは、骨ミネラル密度の維持、顔面潮紅の緩和、認識および満足感の向上、心臓血管の健康の改善、血中脂質の低下など、女性の閉経後の症状および諸障害の処置のために広く使用されている。しかしながら、これらの処置において典型的に使用される、エストラジオール（Estrace（登録商標））または結合体化ウマエストロゲン（Premarin（登録商標））などのエストロゲンは、望ましくない効果を有する。例えば、これらは、子宮および乳房を刺激する傾向があり、それによりこれらの２つの組織を高い癌発症リスクにさらし、現存するエストロゲン応答性癌細胞の成長を刺激する。
【０００７】
米国において骨粗鬆症の予防および／または処置のために現在承認されている薬物であるエストロゲン、ラロキシフェン、ビスホスホネートおよび鼻腔カルシトニンスプレーはすべて抗吸収剤であり、これは、破骨細胞前駆細胞の発生および／または破骨細胞の漸増および機能を減少させ、骨リモデリングの速度を低下させる。現在骨折リスクの高い範囲から正常範囲に骨の質量を上げることにより損失した骨、例えば骨粗鬆症の結果の骨損失を置換し得る承認治療法はない。１．５〜２年の間にわたる副甲状腺ホルモン（PTH）の連日投与は、損失した骨を置換し得、同化骨療法、すなわち骨質量を確かに増加し得る治療法の第一候補であり得る。この処置は、現在FDAの承認待ちである。いわゆる同化ステロイドは、過去において骨粗鬆症の治療用に考慮されてきたが、女性における男性化変化を含むその副作用のため、この処置の形態は受け入れがたいものとなっている。したがって、PTHを除き、骨粗鬆症のための承認されている処置または考慮中の処置は損失した骨、例えば骨粗鬆症の結果の骨損失を置換し得る同化剤ではない。また、エストロゲンおよびラロキシフェンを含むこれらの化合物は、冠状動脈疾患、心臓発作および神経変性性疾患などの閉経後状態のエストロゲン欠乏に関連すると考えられる他の障害の処置には承認されていない。
【０００８】
発明の概要
本発明者らは、非ゲノトロピック(genotropic)エストロゲン様シグナル伝達のアクチベータ「ANGELS」である化合物を見出した。ANGELS化合物は、エストロゲンおよびアンドロゲンの非ゲノトロピック効果によく似ているが、実質的に自身のゲノトロピック効果を欠く低分子である。例えば、本発明者らは、ANGELS化合物が骨の形成を刺激するが、女性化効果または男性化効果をほとんど、または全くもたないことを見出した。
【０００９】
好ましい態様は、骨質量、骨密度および骨強度からなる群より選ばれる骨の性質を増加または維持するのに有効な投薬計画により、ANGELS化合物を被験体に投与することを含む方法を提供する。好ましくは、ANGELS化合物は非フェノール性である。好ましい態様では、ANGELS化合物は、エストレンジオール、アンドロステンジオール、エストランジオール、アンドロスタンジオール、ノル−エストレンジオール、ホモ−エストレンジオール、セコ−エストレンジオール、ノル−アンドロステンジオール、ホモ−アンドロステンジオール、セコ−アンドロステンジオール、ノル−エストランジオール、ホモ−エストランジオール、セコ−エストランジオール、ノル−アンドロスタンジオール、ホモ−アンドロスタンジオール、セコ−アンドロスタンジオールおよびエストラトリエノールからなる群より選ばれる。
【００１０】
好ましい態様では、ANGELS化合物はエストレンジオールまたはアンドロステンジオールである。好ましくは、エストレンジオールは5(10)-エストレンジオールである。好ましくは、5(10)-エストレンジオールは、5(10)-エストレン-3α,17α-ジオール、5(10)-エストレン-3α,17β-ジオール、5(10)-エストレン-3β,17α-ジオールおよび5(10)-エストレン-3β,17β-ジオールからなる群より選ばれる。好ましくは、ANGELS化合物は、5(6)-エストレンジオールまたは5(6)-アンドロステンジオールである。好ましくは、ANGELS化合物は、5(6)-エストレン-3α,17α-ジオール、5(6)-エストレン-3α,17β-ジオール、5(6)-エストレン-3β,17α-ジオール、5(6)-エストレン-3β,17β-ジオール、5(6)-アンドロステン-3α,17α-ジオール、5(6)-アンドロステン-3α,17β-ジオール、5(6)-アンドロステン-3β,17α-ジオールおよび5(6)-アンドロステン-3β,17β-ジオールからなる群より選ばれる。好ましくは、ANGELS化合物は、4-エストレンジオールまたは4-アンドロステンジオールである。好ましくは、ANGELS化合物は、4-エストレン-3α,17α-ジオール、4-エストレン-3α,17β-ジオール、4-エストレン-3β,17α-ジオール、4-エストレン-3β,17β-ジオール、4-アンドロステン-3α,17α-ジオール、4-アンドロステン-3α,17β-ジオール、4-アンドロステン-3β,17α-ジオールおよび4-アンドロステン-3α,17β-ジオールからなる群より選ばれる。
【００１１】
好ましい態様では、ANGELS化合物は、エストランジオールまたはアンドロスタンジオールである。好ましくは、ANGELS化合物は、エストラン-3α,17α-ジオール、エストラン-3α,17β-ジオール、エストラン-3β,17α-ジオールエストラン-3β,17β-ジオール、アンドロスタン-3α,17α-ジオール、アンドロスタン-3α,17β-ジオール、アンドロスタン-3β,17α-ジオールおよびアンドロスタン-3β,17β-ジオールからなる群より選ばれる。好ましくは、ANGELS化合物は、5α-エストランジオールまたは5α-アンドロスタンジオールである。好ましくは、ANGELS化合物は、5α-エストラン-3α,17α-ジオール、5α-エストラン-3α,17β-ジオール、5α-エストラン-3β,17α-ジオール、5α-エストラン-3β,17β-ジオール、5α-アンドロスタン-3α,17α-ジオール、5α-アンドロスタン-3α,17β-ジオール、5α-アンドロスタン-3β,17α-ジオールおよび5α-アンドロスタン-3β,17β-ジオールからなる群より選ばれる。好ましくは、ANGELS化合物は、5β-エストランジオールまたは5β-アンドロスタンジオールである。好ましくは、ANGELS化合物は、5β-エストラン-3α,17α-ジオール、5β-エストラン-3α,17β-ジオール、5β-エストラン-3β,17α-ジオール、5β-エストラン-3β,17β-ジオール、5β-アンドロスタン-3α,17α-ジオール、5β-アンドロスタン-3α,17β-ジオール、5β-アンドロスタン-3β,17α-ジオールおよび5β-アンドロスタン-3β,17β-ジオールからなる群より選ばれる。
【００１２】
好ましい態様では、ANGELS化合物は、ノル−エストレンジオール、ホモ−エストレンジオール、セコ−エストレンジオール、ノル−アンドロステンジオール、ホモ−アンドロステンジオール、セコ−アンドロステンジオール、ノル−エストランジオール、ホモ−エストランジオール、セコ−エストランジオール、ノル−アンドロスタンジオール、ホモ−アンドロスタンジオールおよびセコ−アンドロスタンジオールからなる群より選ばれる。好ましくは、ANGELS化合物は、ノル−エストレンジオール、ホモ−エストレンジオールおよびセコ−エストレンジオールからなる群より選ばれる。好ましくは、ANGELS化合物は、ノル−エストランジオール、ホモ−エストランジオールおよびセコ−エストランジオールからなる群より選ばれる。好ましくは、ANGELS化合物は、ノル−アンドロステンジオール、ホモ−アンドロステンジオールおよびセコ−アンドロステンジオールからなる群より選ばれる。好ましくは、ANGELS化合物は、ノル−アンドロスタンジオール、ホモ−アンドロスタンジオールおよびセコ−アンドロスタンジオールからなる群より選ばれる。
【００１３】
好ましい態様では、ANGELS化合物はエストラトリエノールである。好ましくは、エストラトリエノールは、エストラトリエン-2-オール、エストラトリエン-3−オール、エストラトリエン−4-オールおよびエストラトリエン-5-オールからなる群より選ばれる。好ましくは、エストラトリエノールは、セコ−エストラトリエノール、ノル−エストラトリエノールおよびホモ−エストラトリエノールからなる群より選ばれる。好ましくは、エストラトリエノールは、
【００１４】
【化１】
2005511489.tif 000003
【００１５】
からなる群より選ばれる。
【００１６】
式中、R7、R8、R9、R10、R11およびR13は、それぞれ個々に、水素、C1〜C5アルキルおよびトリフルオロメチルからなる群より選ばれる；ＡおよびＢは、それぞれ独立してCHまたはNである；ならびにR12は、水素、ヒドロキシおよびC1〜C5アルキルからなる群より選ばれる。好ましくは、R7、R8、R9、R10、R11およびR13は、それぞれ個々に、水素、メチル、エチルおよびトリフルオロメチルからなる群より選ばれる。
【００１７】
好ましい態様では、ANGELS化合物は、
【００１８】
【化２】
2005511489.tif 000004
【００１９】
からなる群より選ばれる。
【００２０】
式中、Rは、水素またはC1〜C5アルキルであり、式中、R'およびR''は、それぞれ個々に、水素、C1〜C5アルキル、トリフルオロメチル、フェニルおよびC1〜C5アルキル置換フェニルからなる群より選ばれる。好ましくは、Rは、水素、メチルおよびエチルからなる群より選ばれ、R'およびR''は、それぞれ個々に、水素、メチル、エチル、プロピル、トリフルオロメチル、フェニル、2-トルイル、3-トルイルおよび4-トルイルからなる群より選ばれる。
【００２１】
好ましい態様では、ANGELS化合物は、
【００２２】
【化３】
2005511489.tif 000005
【００２３】
からなる群より選ばれる。
【００２４】
式中、R1は、水素、C1〜C5アルキル、シクロアルキル、フェニルおよびC1〜C5アルキルフェニルからなる群より選ばれる；R2は、水素、C1〜C5アルキルおよびトリフルオロメチルからなる群より選ばれる；R3は、水素、C1〜C5アルキル、シクロアルキル、ヒドロキシシクロアルキル、フェニルおよびC1〜C5アルキルフェニルからなる群より選ばれる。好ましくは、R1は、水素、メチル、エチル、イソプロピル、シクロヘキシルおよびフェニルからなる群より選ばれる；R2は、水素、メチル、エチル、イソプロピルおよびトリフルオロメチルからなる群より選ばれる；R3は、水素、メチル、エチル、イソプロピル、フェニル、シクロヘキシル、シクロペンチルおよび4-ヒドロキシシクロヘキシルからなる群より選ばれる。
【００２５】
好ましい態様では、ANGELS化合物が投与される被験体は骨障害を患う。好ましくは、骨障害は、骨粗鬆症、パジェット病、骨形成不全、慢性上皮小体機能亢進、甲状腺機能亢進、慢性関節リウマチ、ゴーラム−スタウト病、マックキューン−オールブライト症候群、癌の骨転移、多発性骨髄腫の骨転移および顎堤骨欠損からなる群より選ばれる。好ましくは、骨障害は骨粗鬆症である。好ましくは、骨粗鬆症は、閉経後、男性性、老人性、グルココルチコイド誘導性、アルコール誘導性、無食欲／無月経関連性、不動誘導性、無重量感誘導性、移植術後、移動性、特発性および若年性のものからなる群より選ばれる。
【００２６】
好ましい態様では、ANGELS化合物の投与により増加または維持される骨の性質は、骨質量および／または骨密度および／または骨強度である。
【００２７】
さらに好ましい態様は、性欲の増大、血管運動障害のコントロール、血管拡張の促進、骨欠損の低減、気分のむらの低減、コレステロールの低下、低密度リポ蛋白（LDL）の減少、高密度リポ蛋白（HDL）の増加、アテローム性動脈硬化の遅滞、癌進行の遅滞、心臓血管疾患の進行の遅滞、加齢関連神経変性の遅滞、神経変性性疾患の進行の遅滞、癌のリスクの低減、心臓血管疾患のリスクの低減、心臓発作のリスクの低減および神経変性性疾患のリスクの低減からなる群より選ばれる処置を提供するのに有効な投薬計画により被験体にANGELS化合物を投与することを含む方法をさらに提供する。好ましくは、投薬計画は、血管運動障害のコントロールまたは血管拡張の促進に有効である。好ましくは、投薬計画は、心臓血管疾患の進行の遅滞、アテローム性動脈硬化の遅滞、心臓血管疾患のリスクの低減または心臓発作のリスクの低減に有効である。好ましくは、投薬計画は、コレステロールの低下、LDLの減少またはHDLの増加に有効である。好ましくは、投薬計画は、加齢関連神経変性の遅滞、神経変性性疾患の進行の遅滞または神経変性性疾患のリスクの低減に有効である。好ましくは、投薬計画は性欲の増大に有効である。好ましくは、投薬計画は骨欠損の低減に有効である。好ましくは、投薬計画は気分のむらの低減に有効である。好ましくは、投薬計画は、癌のリスクの低減または癌進行の遅滞に有効である。
【００２８】
さらなる好ましい態様は、ANGELS化合物および該化合物の１つ以上を含有してなる医薬組成物をさらに提供する。好ましい態様は、
【００２９】
【化４】
2005511489.tif 000006
【００３０】
からなる群より選ばれる式で表される化合物を含有してなる医薬組成物を提供する。
【００３１】
式中、R1、R3およびR6は、それぞれ個々に、水素またはメチルである；式中、mおよびnは、それぞれ個々に、1〜3の範囲の整数である；式中、R2およびR5は、それぞれ個々に、水素、ハロゲン、メルカプト、ヒドロキシル、シアノ、アミノ、エテニル、エチニル、アリール、C1〜C5ヘテロアリール、C1〜C5アルキル、C1〜C5シクロアルキル、C1〜C5ハロアルキル、C1〜C5アルキルチオ、C1〜C5エステル、C1〜C5アルコキシ、C1〜C5アシル、C1〜C5アルキルアミンおよびC1〜C5アシルオキシからなる群より選ばれる；ならびに、式中、R4は、水素、エテニル、エチニル、アリール、C1〜C5ヘテロアリール、C1〜C5アルキル、C1〜C5シクロアルキル、C1〜C5ハロアルキル、C1〜C5エステルおよびC1〜C5アシルからなる群より選ばれる。
【００３２】
好ましい態様では、これらの化合物は、以下の式
【００３３】
【化５】
2005511489.tif 000007
【００３４】
で表され、式中、m、nおよび種々のR基の本体は、上記の対応する構造について示したものと同じである。
【００３５】
好ましい態様では、すぐ上に示した化学構造においてnは1または3である。好ましい態様では、すぐ上に示した化学構造においてmは1または3である。好ましくは、これらの化合物は、以下の式：
【００３６】
【化６】
2005511489.tif 000008
【００３７】
で表され、式中、種々のR基の本体は、上記の対応する一般構造の場合と同じである。
【００３８】
好ましくは、すぐ上に示した構造において、R2は、水素、C1〜C5アルキル、フェニルおよびC1〜C5アルキル置換フェニルからなる群より選ばれる；R4は、水素、C1〜C5アルキルおよびエチニルからなる群より選ばれる；ならびにR5は、水素およびC1〜C5アルキルからなる群より選ばれる。
【００３９】
他の好ましい態様では、これらの化合物は、以下の式：
【００４０】
【化７】
2005511489.tif 000009
【００４１】
で表され、式中、m、nおよび種々のR基の本体は、上記の対応する構造について示したものと同じである。
【００４２】
好ましい態様では、すぐ上に示した化学構造においてnは1または3である。好ましい態様では、すぐ上に示した化学構造においてmは1または3である。好ましくは、これらの化合物は、以下の式：
【００４３】
【化８】
2005511489.tif 000010
【００４４】
で表され、式中、種々のR基の本体は、上記の対応する一般構造の場合と同じである。
【００４５】
好ましくは、すぐ上に示した構造において、R2は、水素、C1〜C5アルキル、フェニルおよびC1〜C5アルキル置換フェニルからなる群より選ばれる；R4は、水素、C1〜C5アルキルおよびエチニルからなる群より選ばれる；ならびにR5は、水素およびC1〜C5アルキルからなる群より選ばれる。
【００４６】
他の好ましい態様では、これらの化合物は、以下の式：
【００４７】
【化９】
2005511489.tif 000011
【００４８】
で表され、式中、m、nおよび種々のR基の本体は、上記の対応する構造について示したものと同じである。
【００４９】
好ましい態様では、すぐ上に示した化学構造においてnは1または3である。好ましい態様では、すぐ上に示した化学構造においてmは1または3である。好ましくは、これらの化合物は、以下の式：
【００５０】
【化１０】
2005511489.tif 000012
【００５１】
で表され、式中、種々のR基の本体は、上記の対応する一般構造の場合と同じである。
【００５２】
好ましくは、すぐ上に示した構造において、R2は、水素、C1〜C5アルキル、フェニルおよびC1〜C5アルキル置換フェニルからなる群より選ばれる；R4は、水素、C1〜C5アルキルおよびエチニルからなる群より選ばれる；ならびにR5は、水素およびC1〜C5アルキルからなる群より選ばれる。
【００５３】
他の好ましい態様では、これらの化合物は、以下の式：
【００５４】
【化１１】
2005511489.tif 000013
【００５５】
で表され、式中、m、nおよび種々のR基の本体は、上記の対応する構造について示したものと同じである。
【００５６】
好ましい態様では、すぐ上に示した化学構造においてnは1または3である。好ましい態様では、すぐ上に示した化学構造においてmは1または3である。好ましくは、これらの化合物は、以下の式：
【００５７】
【化１２】
2005511489.tif 000014
【００５８】
で表され、式中、種々のR基の本体は、上記の対応する一般構造の場合と同じである。
【００５９】
好ましくは、すぐ上に示した構造において、R2は、水素、C1〜C5アルキル、フェニルおよびC1〜C5アルキル置換フェニルからなる群より選ばれる；R4は、水素、C1〜C5アルキルおよびエチニルからなる群より選ばれる；ならびにR5は、水素およびC1〜C5アルキルからなる群より選ばれる。
【００６０】
さらなる好ましい態様は、ANGELS化合物および該化合物の１つ以上を含有してなる医薬組成物をさらに提供する。好ましい態様は、
【００６１】
【化１３】
2005511489.tif 000015
【００６２】
からなる群より選ばれる式で表される化合物を含有してなる医薬組成物を提供する。
【００６３】
式中、R1、R3およびR6は、それぞれ個々に、水素またはメチルである；式中、R2およびR5は、それぞれ個々に、水素、ハロゲン、メルカプト、ヒドロキシル、シアノ、アミノ、エテニル、エチニル、アリール、C1〜C5ヘテロアリール、C1〜C5アルキル、C1〜C5シクロアルキル、C1〜C5ハロアルキル、C1〜C5アルキルチオ、C1〜C5エステル、C1〜C5アルコキシ、C1〜C5アシル、C1〜C5アルキルアミンおよびC1〜C5アシルオキシからなる群より選ばれる；ならびに、式中、R4は、水素、エテニル、エチニル、アリール、C1〜C5ヘテロアリール、C1〜C5アルキル、C1〜C5シクロアルキル、C1〜C5ハロアルキル、C1〜C5エステルおよびC1〜C5アシルからなる群より選ばれる。好ましい態様では、これらの化合物は、以下の式：
【００６４】
【化１４】
2005511489.tif 000016
【００６５】
で表され、式中、種々のR基の本体は、上記の対応する構造について示したものと同じである。
【００６６】
好ましくは、すぐ上に示した構造において、R2は、水素、C1〜C5アルキル、フェニルおよびC1〜C5アルキル置換フェニルからなる群より選ばれる；R4は、水素、C1〜C5アルキルおよびエチニルからなる群より選ばれる；ならびにR5は、水素およびC1〜C5アルキルからなる群より選ばれる。
【００６７】
他の好ましい態様では、これらの化合物は、以下の式：
【００６８】
【化１５】
2005511489.tif 000017
【００６９】
で表され、式中、種々のR基の本体は、上記の対応する構造について示したものと同じである。
【００７０】
好ましくは、すぐ上に示した構造において、R2は、水素、C1〜C5アルキル、フェニルおよびC1〜C5アルキル置換フェニルからなる群より選ばれる；R4は、水素、C1〜C5アルキルおよびエチニルからなる群より選ばれる；ならびにR5は、水素およびC1〜C5アルキルからなる群より選ばれる。
【００７１】
他の好ましい態様では、これらの化合物は、以下の式：
【００７２】
【化１６】
2005511489.tif 000018
【００７３】
で表され、式中、種々のR基の本体は、上記の対応する構造について示したものと同じである。
【００７４】
好ましくは、すぐ上に示した構造において、R2は、水素、C1〜C5アルキル、フェニルおよびC1〜C5アルキル置換フェニルからなる群より選ばれる；R4は、水素、C1〜C5アルキルおよびエチニルからなる群より選ばれる；ならびにR5は、水素およびC1〜C5アルキルからなる群より選ばれる。
【００７５】
さらなる好ましい態様は、ANGELS化合物および該化合物の１つ以上を含有してなる医薬組成物をさらに提供する。好ましい態様は、
【００７６】
【化１７】
2005511489.tif 000019
【００７７】
からなる群より選ばれる式で表される化合物を含有してなる医薬組成物を提供する。
【００７８】
式中、R13、R14、およびR15は、それぞれ個々に、水素、エテニル、エチニル、C1〜C5アルキル、シクロアルキルおよびフェニルからなる群より選ばれる；ならびに式中、Ｒ16は、水素、ヒドロキシルおよびC1〜C5ヒドロキシアルキルからなる群より選ばれる。
【００７９】
他の好ましい態様では、これらの化合物は、以下の式：
【００８０】
【化１８】
2005511489.tif 000020
【００８１】
で表され、式中、種々のR基の本体は、上記の対応する構造について示したものと同じである。
【００８２】
好ましくは、すぐ上に示した構造において、R13およびR14は、それぞれ個々に、水素、C1〜C5アルキル、シクロアルキルおよびフェニルからなる群より選ばれる；ならびにＲ16はヒドロキシルである。
【００８３】
他の好ましい態様では、これらの化合物は、以下の式：
【００８４】
【化１９】
2005511489.tif 000021
【００８５】
で表され、式中、種々のR基の本体は、上記の対応する構造について示したものと同じである。
【００８６】
好ましくは、すぐ上に示した構造において、R13、R14およびR15は、それぞれ個々に、水素、C1〜C5アルキル、シクロアルキルおよびフェニルからなる群より選ばれる。
【００８７】
他の好ましい態様では、これらの化合物は、以下の式：
【００８８】
【化２０】
2005511489.tif 000022
【００８９】
で表され、式中、種々のR基の本体は、上記の対応する構造について示したものと同じである。
【００９０】
好ましくは、すぐ上に示した構造において、R13、R14およびR15は、それぞれ個々に、水素、C1〜C5アルキル、シクロアルキルおよびフェニルからなる群より選ばれる。
【００９１】
さらなる好ましい態様は、ANGELS化合物および該化合物の１つ以上を含有してなる医薬組成物をさらに提供する。好ましい態様は、
【００９２】
【化２１】
2005511489.tif 000023
【００９３】
からなる群より選ばれる式で表される化合物を含有してなる医薬組成物を提供する。
【００９４】
式中、mおよびnは、それぞれ個々に、1〜4の範囲の整数である；R3およびR5は、それぞれ個々に、ヒドロキシ、水素、C1〜C5アルキル、C1〜C5ヒドロキシアルキル、C1〜C5アルコキシ、C1〜C5チオアルコキシ、フェニルおよびC1〜C5アルキル置換フェニルからなる群より選ばれる；ならびに、式中、R6は、水素およびC1〜C5アルキルからなる群より選ばれる。
【００９５】
他の好ましい態様では、これらの化合物は、以下の式：
【００９６】
【化２２】
2005511489.tif 000024
【００９７】
で表され、式中、種々のR基の本体は、上記の対応する構造について示したものと同じである。
【００９８】
好ましくは、すぐ上に示した構造において、R3は、水素、メチルおよびエチルからなる群より選ばれる；ならびにR5およびR6は、それぞれ個々に、水素およびC1〜C5アルキルからなる群より選ばれる。
【００９９】
本発明のこれらの局面および他の局面は、本発明を説明することを意図するが本発明を限定することを意図しない、以下の記載、添付の図面から自明となろう。
【０１００】
好ましい態様の詳述
好ましい態様において、本発明は、ANGELS化合物、ならびに健康および満足のいく状態を増強するためにこれらの化合物を用いる方法を含む。ANGELS化合物は、エストロゲンおよびアンドロゲンの非ゲノトロピック効果によく似ているが、ゲノトロピック効果を実質的に欠く小さい（約1000以下の分子量）化合物である。好ましいANGELS化合物は、非フェノール性であり、したがってエストロゲンではない。ヒトにおいて、エストロゲンおよびアンドロゲンの非ゲノトロピック効果としては、いくつかの骨同化機能、アテローム防御機能(atheroprotective)および神経保護機能が挙げられる。かかる非ゲノトロピック効果の例としては、血管拡張の促進、顔面潮紅の抑制、骨欠損の低減、骨密度の増加、骨質量の増加、骨強度の増加、気分のむらの低減、コレステロールの低下、アテローム性動脈硬化の遅滞、癌進行の遅滞、心臓血管疾患の進行の遅滞、神経変性性疾患の進行の遅滞、癌のリスクの低減、心臓血管疾患のリスクの低減、心臓発作のリスクの低減および／または神経変性性疾患のリスクの低減が挙げられ得る。
【０１０１】
しかしながら、ヒトにおいてエストロゲンまたはアンドロゲンレベルを維持または補うことの有益な効果は、そのゲノトロピック副作用により制限される。これらのゲノトロピック効果は、典型的には子宮癌、乳癌および／または卵巣癌として現れ、および／または反対の性に与えた場合には臨床的に重要な女性化もしくは男性化効果である。例えば、有益な非ゲノトロピック効果を生じるのに有効な投薬計画によりエストロゲンを男性に与えると、胸の発育（女性化乳房）、胸部痛（乳房痛）および発毛の低下ならびに射精量の減少および精子数の減少などの望ましくない女性化効果も生じる傾向がある。同様に、有益な非ゲノトロピック効果を生じるのに有効な投薬計画によりアンドロゲンを女性に投与すると、顔面の発毛（多毛）、にきび、咽頭膨大、声色の低下、筋肉肥大、陰核の膨大（陰核巨大）および無月経などの望ましくない男性化効果も生じる傾向がある。
【０１０２】
好ましいANGELS化合物は、骨粗鬆症性の骨を少なくとも部分的に正常の質量、密度および／または強度まで回復し、これは、現在承認されている治療法では不可能であり、好ましくは、生殖器官の癌のリスクが臨床的に無視でき、かつ臨床的に重要な男性化副作用もしくは女性化副作用を伴わずに、エストロゲンおよび／またはアンドロゲンの他の有益な効果も提供する。ANGELS化合物は、現在理解されている用語であるSERMではない。SERMは、骨中および心臓血管系ではエストロゲンアゴニストであるが、子宮または乳房中ではアンタゴニストである。例えば、ラロキシフェンは、骨中、およびエストロゲンの非存在下でのみ弱いエストロゲンアゴニストである。ラロキシフェンおよび別のSERMであるタモキシフェンはともに、エストロゲンの存在下、例えば、閉経前女性においては骨に対してアンタゴニストである。すなわち、SERMはエストロゲンが十分な状態では骨の損失を引き起こす。SERMは、せいぜい骨中のエストロゲンと同様であり得るが、エストロゲンは、もはや骨粗鬆症の処置のための治療法の標準法とはみなされていない。さらに、最近の証拠では、SERMは男性には有効でないことが示されている。結局、ラロキシフェンは、血管運動系に対してエストロゲンのアンタゴニストであり、顔面潮紅を悪化させる。
【０１０３】
以下に示すように、ANGELS化合物は、エストロゲンまたはSERMのいずれとも全く異なる機構により作用すると考えられる。本発明は、実施のいかなる理論にも限定されないが、データは、性ステロイドが、生殖器官の質量および機能を保護するため、または乳癌細胞の増殖を刺激するために利用されるものとは基本的に異なるレセプター作用の機構により成人骨格を保護することを示す。具体的には、性ステロイドレセプターの古典的なゲノトロピック作用は、生殖組織に対する効果に必須であるが、この作用は、その骨の保護効果にはなくてもよいものである。例えば、エストロゲンまたはアンドロゲンは、ＭＡＰキナーゼの非ゲノトロピック調節ならびに下流転写依存性および下流転写非依存性の事象により、骨芽細胞に対する抗アポトーシス効果および破骨細胞に対するプロアポトーシス効果をはたらかせると考えられる。ANGELS化合物は、古典的な転写に影響を与えることなく、これらの非ゲノトロピック効果を実質的に再現する。例えば、性ステロイドは骨の損失を予防するが、好ましいANGELS化合物は、生殖器官に影響を与えることなく、いずれの性においても骨の質量および／または密度および／または強度を増加させることが現在見出されている。
【０１０４】
好ましいANGELS化合物は、骨に対してエストロゲンより優れているが、子宮または乳房活性をほとんど、または全く示さない。さらに、好ましいANGELS化合物は、女性化効果が臨床的に無視できるため、男性に有効である。また、好ましいANGELS化合物は、顔面潮紅を減少させることにより血管運動系に対してエストロゲンのように作用する。好ましいANGELS化合物は、以下に記載するような４つのカテゴリーに分類される。これらの類別は、便宜上のものであり、本発明の範囲の限定とみなすものではない。本明細書中の特定の化合物および／または化合物の種類の詳述には、その立体異性体、塩、誘導体および代謝物も含まれることを理解されたい。したがって、当業者であれば、本明細書に記載される種々の構造式がすべての立体異性体を示すことが理解されよう。
【０１０５】
カテゴリーＩ：  エストレン、エストラン、アンドロステンおよびアンドロスタン
カテゴリーＩに含まれるANGELS化合物の例をスキーム1Aに示し、他のアナログおよび誘導体を包含する一般構造をスキーム1Bに示す。カテゴリーＩの単純な形のメンバーのいくつかは公知化合物であり、そのうちいくつかは市販されている（例えば、Steraloids Inc., Newport, Rhode Island）。種々の環連結位置および環融合位置の立体化学が天然ステロイドにおいて典型的なもの（すなわち、5α、8β、9α、10β、13β、14α、17β、）と逆であるアナログは、カテゴリーＩに含まれ、好ましくは、5βおよび／または17α配座のものである。これらのアナログはすべて、ステロイドの完全な合成に対する十分確立されたアプローチを用いて、または公知の、および／または市販されている（Steraloids Inc., Newport, Rhode Island）ステロイドの新規なアナログおよび誘導体への変換により調製され得る。ステロイド合成およびステロイド変換反応のための標準的な方法は、以下の文献：FieserおよびFieser, 1967；FriedおよびEdward, 1972；KirkおよびHartshorn, 1968；Shoppee, 1964；ならびにDjerassi, 1963に見られ得る。カテゴリーＩのいくつかのメンバーの合成の例をスキーム１Ｃに示す。
【０１０６】
カテゴリーＩのメンバーの有効性および効力は、スキーム2Aに示すような様式で種々の位置、好ましくは7α、11βおよび17α位の置換により増強され得、選択的骨同化活性の効力の増大を提供する。３つの位置すべてにおける好ましい置換基としては、ハロゲン、ヘテロ原子および置換ヘテロ原子基、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールおよびヘテロアリール基、前記置換基のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ハロゲンおよびヘテロ原子置換アナログ、ならびにアルキルおよびアルケニル置換基の環式アナログが挙げられる。３つの位置すべてにおけるより好ましい置換基としては、低ハロゲンまたは置換（C1〜C4）ヘテロ原子、低アルキルまたはシクロアルキル基（C1〜C5）、低アルケニルまたはアルキニル基（C2〜C6）、低アリールおよびヘテロアリール基、ならびに低置換基（C1〜C4）を有する前記置換基のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ハロゲンおよびヘテロ原子置換アナログが挙げられる。7α位で非常に好ましい置換基としては、低ハロゲン（F、ClまたはBr）または低（C1〜C2）アルキル置換基を有するヘテロ原子が挙げられる。11β位で非常に好ましい置換基としては、低ハロゲン（F、Cl、Br）を有する、もしくは有さない低アルキル基（C1〜C3）、または低（C1〜C2）アルキル置換基を有するヘテロ原子を有する低アルキル基（C1〜C3）、低ハロゲン（F、Cl、Br）またはＨもしくは低（C1〜C2）アルキル置換基を有するヘテロ原子を有する、または有さない低アルキル（C1〜C3）を有する、あるいは有さないアルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロアリール基が挙げられる。１7α位で非常に好ましい置換基としては、低ハロゲン（F、Cl、Br）を有する、または有さない低アルキル基（C1〜C3）、低ハロゲン（F、Cl、Br）またはＨもしくは低（C1〜C2）アルキル置換基を有するヘテロ原子を有するあるいは有さない低アルキル基（C1〜C3）を有する、または有さないアルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロアリール基が挙げられる。
【０１０７】
スキーム2Aの図は、単純なエストレンまたはエストラン系に基づくものであるが、
カテゴリーＩの全てのメンバー、好ましくはスキーム1Aおよび1Bに示すものは、同様に置換されてもよい。種々の環連結位置および環融合位置の立体化学が天然ステロイドににおいて典型的なもの（すなわち、5α、8β、9α、10β、13β、14α、17β、）と逆であるアナログは、同様または増強された骨同化活性を有し得ることを理解されたい。本発明は、いかなる理論にも拘束されないが、選択的置換は、該化合物のエストロゲンレセプターに対する結合親和性および結合速度論を調節し得、非特異的結合を低下し得、および／または代謝を低減し得ると考えられる。
【０１０８】
好ましいカテゴリーＩのANGELS化合物は、エストレンジオール（例えば、5(10)-エストレンジオール、5(6)-エストレンジオールおよび4-エストレンジオール）、アンドロステンジオール（例えば、5(6)-アンドロステンジオールおよび4-アンドロステンジオール）、エストランジオール（例えば、5α-エストランジオールおよび5β-エストランジオール）ならびにアンドロスタンジオール（例えば、5α-アンドロスタンジオールおよび5β-アンドロスタンジオール）である。好ましいANGELS化合物の例としては、5(10)-エストレン-3α,17α-ジオール、5(10)-エストレン-3α,17β-ジオール、5(10)-エストレン-3β,17α-ジオール、5(10)-エストレン-3β,17β-ジオール、5(6)-エストレン-3α,17α-ジオール、5(6)-エストレン-3α,17β-ジオール、5(6)-エストレン-3β,17α-ジオール、5(6)-エストレン-3β,17β-ジオール、5(6)-アンドロステン-3α,17α-ジオール、5(6)-アンドロステン-3α,17β-ジオール、5(6)-アンドロステン-3β,17α-ジオール、5(6)-アンドロステン-3β,17β-ジオール、4-エストレン-3α,17α-ジオール、4-エストレン-3α,17β-ジオール、4-エストレン-3β,17α-ジオール、4-エストレン-3β,17β-ジオール、4-アンドロステン-3α,17α-ジオール、4-アンドロステン-3α,17β-ジオール、4-アンドロステン-3β,17α-ジオール、4-アンドロステン-3β,17β-ジオール、エストラン-3α,17α-ジオール、エストラン-3α,17β-ジオール、エストラン-3β,17α-ジオール、エストラン-3β,17β-ジオール、アンドロスタン-3α,17α-ジオール、アンドロスタン-3α,17β-ジオール、アンドロスタン-3β,17α-ジオール、アンドロスタン-3β,17β-ジオール、5α-エストラン-3α,17α-ジオール、5α-エストラン-3α,17β-ジオール、5α-エストラン-3β,17α-ジオール、5α-エストラン-3β,17β-ジオール、5α-アンドロスタン-3α,17α-ジオール、5α-アンドロスタン-3α,17β-ジオール、5α-アンドロスタン-3β,17α-ジオール、5α-アンドロスタン-3β,17β-ジオール、5β-エストラン-3α,17α-ジオール、5β-エストラン-3α,17β-ジオール、5β-エストラン-3β,17α-ジオール、5β-エストラン-3β,17β-ジオール、5β-アンドロスタン-3α,17α-ジオール、5β-アンドロスタン-3α,17β-ジオール、5β-アンドロスタン-3β,17α-ジオールおよび5β-アンドロスタン-3β,17β-ジオールが挙げられる。
【０１０９】
かかる置換化合物の合成のための多くの方法は当業者に公知である。好ましい例は、特に17α位の置換について、ステロイド合成に関する上記の一般的な文献に見られ得る。7α位および11β位の置換について、具体的な参考は、以下の刊行物：7α：（Frenchら、1993b；Tedescoら、1997a）およびそこに引用された文献；11β：（Frenchら、1993a；Pomperら、1990；Tedescoら、1997b）およびそこに引用された文献になされている。カテゴリーＩのいくつかのメンバーの合成の例をスキーム2Cに示す。
【０１１０】
いくつかの好ましいANGELS化合物の例は、以下の式（Ｉ）〜（ＩＶ）：
【０１１１】
【化２３】
2005511489.tif 000025
【０１１２】
で表される。
【０１１３】
式中、R1、R3およびR6は、それぞれ個々に、水素、メチルまたはエチルであり、より好ましくはメチルである；mおよびnは、それぞれ個々に、1〜3の範囲の整数であり、R2およびR5は、それぞれ個々に、水素、ハロゲン、メルカプト、ヒドロキシル、シアノ、アミノ、エテニル、エチニル、アリール、C1〜C5ヘテロアリール、C1〜C5アルキル、C1〜C5シクロアルキル、C1〜C5ハロアルキル、C1〜C5アルキルチオ、C1〜C5エステル、C1〜C5アルコキシ、C1〜C5アシル、C1〜C5アルキルアミンおよびC1〜C5アシルオキシからなる群より選ばれる；ならびにR4は、水素、エテニル、エチニル、アリール、C1〜C5ヘテロアリール、C1〜C5アルキル、C1〜C5シクロアルキル、C1〜C5ハロアルキル、C1〜C5エステルおよびC1〜C5アシルからなる群より選ばれる。式（Ｉ）〜（ＩＶ）で表される化学構造は、すべての立体異性体を包含し、したがって、R1、R2、R3、R4、R5およびR6の立体化学的配座は、それぞれ個々に、アルファまたはベータであり得る。R2置換基は、環内の（CH2）m炭素原子および／または他の炭素のいずれかに結合し得る。
【０１１４】
好ましい態様では、式（Ｉ）は、式中、m=n=2である以下の式（Ｖ）に示すような4-エストレンジオールおよび4-アンドロステンジオールを表す。好ましくは、R2は、水素、C1〜C5アルキル、フェニルおよびC1〜C5アルキル置換フェニルからなる群より選ばれる；R4は、水素、C1〜C5アルキルおよびエチニルからなる群より選ばれる；ならびにR5は、水素およびC1〜C5アルキルからなる群より選ばれる。好ましい4-エストレンジオールおよび4-アンドロステンジオールの構造を、式（Ｖ）を参考に表１に記載する。
【０１１５】
【化２４】
2005511489.tif 000026
【０１１６】
【表１】
2005511489.tif 000027
【０１１７】
好ましい態様では、式（ＩＩ）は、式中、m=n=2である以下の式（ＶＩ）に示すような5(10)エストレンジオールを表す。好ましくは、R2は、水素、C1〜C5アルキル、フェニルおよびC1〜C5アルキル置換フェニルからなる群より選ばれる；R4は、水素、C1〜C5アルキルおよびエチニルからなる群より選ばれる；ならびにR5は、水素およびC1〜C5アルキルからなる群より選ばれる。好ましい5(10)エストレンジオールの構造を、式（ＶＩ）を参考に表２に記載する。
【０１１８】
【化２５】
2005511489.tif 000028
【０１１９】
【表２】
2005511489.tif 000029
【０１２０】
好ましい態様では、式（ＩＩＩ）は、式中、m=n=2である以下の式（ＶＩＩ）に示すような5(6)エストレンジオールおよび5(6)アンドロステンジオールを表す。好ましくは、R2は、水素、C1〜C5アルキル、フェニルおよびC1〜C5アルキル置換フェニルからなる群より選ばれる；R4は、水素、C1〜C5アルキルおよびエチニルからなる群より選ばれる；ならびにR5は、水素およびC1〜C5アルキルからなる群より選ばれる。好ましい5(6)エストレンジオールおよび5(6)アンドロステンジオールの構造を、式（ＶＩＩ）を参考に表３に記載する。
【０１２１】
【化２６】
2005511489.tif 000030
【０１２２】
【表３】
2005511489.tif 000031
【０１２３】
好ましい態様では、式（ＩＶ）は、式中、m=n=2である以下の式（ＶＩＩＩ）に示すようなエストランジオールおよびアンドロスタンジオールを表す。式中R6が水素である好ましいエストランジオールおよびアンドロスタンジオールの構造を、式（ＶＩＩＩ）を参考に表４に記載する。好ましくは、R2は、水素、C1〜C5アルキル、フェニルおよびC1〜C5アルキル置換フェニルからなる群より選ばれる；R4は、水素、C1〜C5アルキルおよびエチニルからなる群より選ばれる；ならびにR5は、水素およびC1〜C5アルキルからなる群より選ばれる。当業者なら、式（ＶＩＩＩ）が5αおよび5β立体異性体を含むすべての立体異性体を表すことが理解されよう。
【０１２４】
【化２７】
2005511489.tif 000032
【０１２５】
【表４】
2005511489.tif 000033
【０１２６】
カテゴリーＩＩ：  エストレンおよびエストランの環修飾アナログ
環のサイズが拡大された（Ａ、Ｂ、ＣまたはＤ環を「ホモエストレンジオール、ホモアンドロステンジオール、ホモエストランジオールおよびホモアンドロスタンジオール」と称する）、縮小された（Ａ、Ｂ、ＣまたはＤ環を「ノルエストレンジオール、ノルアンドロステンジオール、ノルエストランジオールおよびノルアンドロスタンジオール」と称する）、または破壊された（Ａ、Ｂ、ＣまたはＤ環を「セコエストレンジオール、セコアンドロステンジオール、セコエストランジオールおよびセコアンドロスタンジオール」またはＡ／Ｂ、Ｂ／ＣもしくはＣ／Ｄを「シクロエストレンジオール、シクロアンドロステンジオール、シクロエストランジオールおよびシクロアンドロスタンジオール」と称する）、多くのエストレンジオール、アンドロステンジオール、エストランジオールおよびアンドロスタンジオールのアナログが知られている。カテゴリーＩＩの化合物の例をスキーム3Aに示し、好ましい環のサイズ、置換基および置換パターンを示す一般構造をスキーム３Ｂに示す。
【０１２７】
スキーム3Aおよび３Ｂに示す例は、１つの典型的なエストレンを基本とするものであるが、カテゴリーＩＩは、スキーム1Aおよび1Bに示される任意のエストレン、エストラン、アンドロステンまたはアンドロスタンのアナログの類似ホモ−、ノル−、セコ−およびシクロ−アナログをも含む。また、カテゴリーＩＩは、種々の環連結位置および環融合位置の立体化学が天然ステロイドに典型的なもの（すなわち、5α、8β、9α、10β、13β、14α、17β）と逆であるアナログを含む。
【０１２８】
多くの方法が、ホモ−、ノル−、セコ−およびシクロ−アナログの合成のために利用可能である。多くの例が、ステロイド合成に関する上述の一般的な文献にみられ得る。ステロイドの合成および修飾の反応に関し、以下のさらなる刊行物：FieserおよびFieser, 1967；FriedおよびEdward, 1972；KirkおよびHartshorn, 1968；Shoppee, 1964；Djerassi, 1963；ならびにそこに引用された文献に具体的な記載がなされている。また、ホモ−ステロイドを調製するに必要な炭素環の拡大のため、ノル−ステロイドを調製するに必要な炭素環の縮小のため、ならびに種々のセコ−およびシクロアナログを得るのに必要な炭素環式環および炭素鎖の開裂のための、一般的に知られた多くの方法がある（Paquette, 1995；Trost, 1991）。これらの方法は、SmithおよびMarch（SmithおよびMarch,2001）ならびにLarock（Larock,1998）による書物などの合成方法論に関する一般的な書物、ならびにこれらの具体的トピックに関する概説論文にかなり記載されている。カテゴリーＩＩのいくつかのメンバーの合成の例をスキーム３Ｃに示す。
【０１２９】
好ましい態様では、式（Ｉ）は、式中、mおよび／またはnが1または2であるノル−エストレンジオールおよびノル−アンドロステンジオール、式中、mおよび／またはnが２または３であるホモ−エストレンジオールおよびホモ−アンドロステンジオール、または式中、mまたはnの一方が１であり他方が３である、ノル−およびホモ−環の両方を含有するエストレンジオールおよびアンドロステンジオールを表す。式中、Ｒ2およびＲ5が水素でありＲ3がメチルである種々の好ましいANGELS化合物の構造を、式（Ｉ）を参考に表５に記載する。
【０１３０】
【表５】
2005511489.tif 000034
【０１３１】
好ましい態様では、式（ＩＩ）は、式中、mおよび／またはnが1または2であるノル−5(10)-エストレンジオール、式中、mおよび／またはnが２または３であるホモ−5(10)-エストレンジオール、および式中、mまたはnの一方が１であり他方が３である、ノル−およびホモ−環の両方を含有する5(10)-エストレンジオールを表す。好ましくは、R2は、水素、C1〜C5アルキル、フェニルおよびC1〜C5アルキル置換フェニルからなる群より選ばれる；R4は、水素、C1〜C5アルキルおよびエチニルからなる群より選ばれる；ならびにR5は、水素およびC1〜C5アルキルからなる群より選ばれる。式中、R3がメチルでありR5が水素である種々の好ましいANGELS化合物の構造を、式（ＩＩ）を参考に表６に記載する。
【０１３２】
【表６】
2005511489.tif 000035
【０１３３】
好ましい態様では、式（ＩＩＩ）は、式中、mおよび／またはnが1または2であるノル−5(6)-エストレンジオールおよびノル−5(6)-アンドロステンジオール、式中、mおよび／またはnが２または３であるホモ−5(6)-エストレンジオールおよびホモ−5(6)-アンドロステンジオール、ならびに式中、mまたはnの一方が1であり他方が3である、ノル−およびホモ−環の両方を含有する5(6)-エストレンジオールおよび5(6)-アンドロステンジオールを表す。好ましくは、R2は、水素、C1〜C5アルキル、フェニルおよびC1〜C5アルキル置換フェニルからなる群より選ばれる；R4は、水素、C1〜C5アルキルおよびエチニルからなる群より選ばれる；ならびにR5は、水素およびC1〜C5アルキルからなる群より選ばれる。式中、Ｒ3がメチルであり、Ｒ5が水素である好ましいANGELS化合物の構造を、式（ＩＩＩ）を参考に表７に記載する。
【０１３４】
【表７】
2005511489.tif 000036
【０１３５】
好ましい態様では、式（ＩＶ）は、式中、mおよび／またはnが1または2であるノル−エストランジオールおよびノル−アンドロスタンジオール、式中、mおよび／またはnが２または３であるホモ−エストランジオールおよびホモ−アンドロスタンジオール、ならびに式中、mまたはnの一方が１であり他方が３である、ノル−およびホモ−環の両方を含有するエストランジオールおよびアンドロスタンジオールを表す。好ましくは、R2は、水素、C1〜C5アルキル、フェニルおよびC1〜C5アルキル置換フェニルからなる群より選ばれる；R4は、水素、C1〜C5アルキルおよびエチニルからなる群より選ばれる；ならびにR5は、水素およびC1〜C5アルキルからなる群より選ばれる。Ｒ2およびＲ5が水素でありＲ3がメチルである好ましいANGELS化合物の構造を、式（ＩＶ）を参考に表８に記載する。
【０１３６】
【表８】
2005511489.tif 000037
【０１３７】
好ましい態様では、カテゴリー（ＩＩ）のANGELS化合物は、以下の構造で表され、式中、R13、R14、およびR15は、それぞれ個々に、水素、エテニル、エチニル、C1〜C5アルキル、シクロアルキルおよびフェニルからなる群より選ばれる；ならびに、式中、Ｒ16は、水素、ヒドロキシルおよびC1〜C5ヒドロキシアルキルからなる群より選ばれる。
【０１３８】
【化２８】
2005511489.tif 000038
【０１３９】
より好ましくは、すぐ上に示した構造のそれぞれにおいて、R13、R14およびR15は、それぞれ個々に、水素、C1〜C5アルキル、シクロアルキルおよびフェニルからなる群より選ばれる；ならびにＲ16は、好ましくはヒドロキシルである。この態様について、より好ましい構造は
【０１４０】
【化２９】
2005511489.tif 000039
【０１４１】
からなる群より選ばれる式で表される。
【０１４２】
最も好ましくは、すぐ上に示した構造のそれぞれにおいて、R13、R14およびR15は、それぞれ個々に、水素、C1〜C5アルキル、シクロアルキルおよびフェニルからなる群より選ばれる。
【０１４３】
好ましい態様では、カテゴリー（ＩＩ）のANGELS化合物は、以下の構造で表され、式中、mおよびnは、それぞれ個々に、1〜4の範囲の整数である；Ｒ3およびR5は、それぞれ個々に、ヒドロキシ、水素、C1〜C5アルキル、C1〜C5ヒドロキシアルキル、C1〜C5アルコキシ、C1〜C5チオアルコキシ、フェニルおよびC1〜C5アルキル置換フェニルからなる群より選ばれる；ならびにＲ6は、水素およびC1〜C5アルキルからなる群より選ばれる。
【０１４４】
【化３０】
2005511489.tif 000040
【０１４５】
この好ましい態様におけるより好ましいANGELS化合物は、以下の群より選ばれる構造を有し、式中、R3、R5およびR6はそれぞれ、上記と同じ意味をもつ。
【０１４６】
【化３１】
2005511489.tif 000041
【０１４７】
最も好ましくは、すぐ上に示した構造のそれぞれにおいて、R3は、水素、メチルおよびエチルからなる群より選ばれる；ならびにR5およびR6は、それぞれ個々に、水素およびC1〜C5アルキルからなる群より選ばれる。
【０１４８】
カテゴリーＩＩＩ：  エストレンおよびエストランの複素環式および複素非環式アナログ
カテゴリーＩＩＩの好ましいメンバーをスキーム４Ａに示し、一般構造をスキーム４Ｂに示す。図示した構造は、単純なエストレンもしくはエストラン系を基本とするものであるが、スキーム１に示されるような他のエストレン、エストラン、アンドロステンおよびアンドロスタンの複素環式アナログおよび複素非環式アナログがカテゴリーＩＩＩに含まれる。
【０１４９】
カテゴリーＩＩＩ化合物内のヘテロ原子は、固相または溶液相自動合成法に容易に採用されるコンビナトリアル合成法の使用を可能にすることにより、迅速な合成を促進し得る。例えば、StaufferおよびKatzenellenbogen, 2000bならびにそこに引用された文献を参照のこと。
【０１５０】
カテゴリーＩＩＩの化合物の合成は、先に挙げた文献に記載された方法、ならびにこのトピックに関する種々の書籍（EicherおよびHauptmann, 1995；Gilchrist, 1992；Guptaら、1999；Jouleら、1995）およびそこに引用されている文献に記載されているような基本的な複素環合成法、ならびに有機合成の分野の当業者に周知の基本的なヘテロ原子系合成法を用いることによりなされ得る。このクラスのいくつかのメンバーの合成の例をスキーム４Ｃおよび４Ｄに示す。
【０１５１】
ANGELS化合物はまた、複素環式エストレンアナログであり得る。種々の好ましい複素環式エストレンアナログは、以下の式で表され得、式中、Rは水素またはC1〜C5アルキルである；ならびに式中、R'およびR''は、それぞれ個々に、水素、C1〜C5アルキル、トリフルオロメチルおよびC1〜C5アルキル置換フェニルからなる群より選ばれる。好ましいANGELS化合物の例を以下の表９に示す。
【０１５２】
【化３２】
2005511489.tif 000042
【０１５３】
【表９】
2005511489.tif 000043
【０１５４】
ANGELS化合物はまた、複素非環式エストレンアナログであり得る。種々の好ましい複素非環式エストレンアナログは、以下の式で表され得、式中、R1は水素、C1〜C5アルキル、シクロアルキル、フェニルおよびC1〜C5アルキルフェニルからなる群より選ばれる；R2は水素、C1〜C5アルキルおよびトリフルオロメチルからなる群より選ばれる；ならびにR3は水素、C1〜C5アルキル、シクロアルキル、ヒドロキシシクロアルキル、フェニルおよびC1〜C5アルキルフェニルからなる群より選ばれる。好ましいANGELS化合物の例を以下の表１０に示す。
【０１５５】
【化３３】
2005511489.tif 000044
【０１５６】
【表１０】
2005511489.tif 000045
【０１５７】
カテゴリーＩＶ：エストレン-3−オールアナログ
カテゴリーＩＶは、エストレン-3−オールのアナログ、例えばエストラトリエノールアナログを含む。カテゴリーＩＶの化合物の種々の好ましい例をスキーム５Ａに示し、カテゴリーＩＶ化合物を示す一般構造をスキーム５Ｂに示す。これらの化合物の基本設計は、好ましくは、C-1、2、3、または4位のいずれか、もしくはその種々の組み合わせにヒドロキシル基を有する、フェノールであるエストロゲン様Ａ環を含み、構造の残部が最大の有効性および効力を達成するように選択される。
【０１５８】
スキーム1〜4に示したエストレンアナログと同様、エストラトリエノールは、効力および／または選択性を増強する置換基を含むＢ、Ｃ、およびＤ環における種々の類似構造（スキーム2Aに具体的に示す）、ノル−、ホモ−、セコ−およびシクロ−ステロイドアナログ（スキーム3Aおよび3Bに具体的に示す）、ならびに複素環式および複素非環式アナログ（スキーム4Aおよび4Bに具体的に示す）を包含し得る。カテゴリーＩＶは、これらのアナログを包含する。
【０１５９】
合成の目的のため、エストラトリエノールは、エストレンよりもエストロゲンに似ている傾向があり、その合成には、エストレンについて上記した一般的かつ具体的な合成方法論を使用することができ、Ａ−環にエストラトリエノール官能性をもたせるような適切な修飾を伴う。かかる修飾は、ステロイド合成の当業者に知られている。いくつかのカテゴリーＩＶ化合物の合成の例をスキーム5Cおよび5Dに示す。
【０１６０】
ANGELS化合物を含有する医薬組成物
好ましい態様は、１つ以上のANGELS化合物、好ましくは、カテゴリーＩ、ＩＩ、ＩＩＩおよび／またはＩＶのうちの１つ以上の化合物を含有してなる医薬組成物を提供する。したがって、ANGELS化合物またはその混合物は、本明細書に記載のように骨の質量および／または密度および／または強度を増加するのに有効な量で、任意に、以下に記載のような薬学的に許容され得る担体または希釈剤とともに投与され得る。本明細書に開示されるANGELS化合物の種々の投与方法に関する本明細書での記載は該化合物からなる医薬組成物にもあてはまることが理解される。
【０１６１】
ANGELS化合物は、全身、部分または局所送達、例えば、経口、非経口、静脈内、皮内、皮下、口腔内、鼻腔内、吸入、膣、直腸または局所送達のための任意の適切な経路により、液体または固体形態で投与され得る。本明細書に記載の化合物の投与方法は、特定の用量によるものであっても、徐放ビヒクルによるものであってもよい。
【０１６２】
ANGELS化合物の好ましい投与様式は経口である。経口組成物は、好ましくは、不活性希釈剤または可食担体を含む。活性化合物は、ゼラチンカプセル内に封入されるか、または錠剤に圧縮され得る。経口治療用投与の目的のため、該化合物は、賦形剤とともに混合され得、錠剤、トローチまたはカプセルの形態で使用され得る。薬学的適合性の結合剤および／またはアジュバント物質が組成物の一部として含まれ得る。
【０１６３】
錠剤、丸剤、カプセル、トローチなどは、任意の以下の薬学的に許容され得る担体：微結晶性セルロース、トラガカントガムもしくはゼラチンなどの結合剤；デンプンもしくはラクトースなどの賦形剤、アルギン酸、Primogelもしくはコーンスターチなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムもしくはSterotesなどの滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素などの光沢剤(glidant)；スクロースもしくはサッカリンなどの甘味料；および／またはペパーミント、サリチル酸メチルもしくはオレンジ香料などの香味剤または類似する性質の化合物を含み得る。投薬単位形態がカプセルである場合、上記種類の材料以外に、脂肪油などの液体担体を含み得る。また、投薬単位形態は、投薬単位の物理的形態を修飾する種々の他の材料、例えば、砂糖、シェラックもしくは腸溶性剤のコーティング剤を含み得る。
【０１６４】
ANGELS化合物は、エリキシル、懸濁液、シロップ、ウェハス、チューインガムなどの成分として投与され得る、シロップは、活性化合物以外に、甘味剤としてのスクロースならびにある種の保存料、染料および着色料および香料を含んでもよい。
【０１６５】
また、ANGELS化合物は、所望の作用を損なわない他の活性物質、または１つ以上の他のANGELS化合物などの所望の作用を置換する材料；17β-エストラジオールもしくはエチニルエストラジオールのような古典的なエストロゲン；アレンドロネート、エチドロネート、パミドロネート、リゼドロネート、ティルドロネート、ゾレドロネート、シマドロネート、クロドロネート、イバンドロネート、オルパドロネート、ネリドロネート、EB-1053のようなビスホスホネート；サケ、ウナギもしくはヒト起源のカルシトニン；ならびにグルタチオン、アスコルビン酸もしくは亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤と混合され得る。薬学的に許容され得る担体は、非経口、皮内、皮下または局所への適用に使用される溶液または懸濁液であり得、したがって、以下の成分：注射用水、生理食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールもしくは他の合成溶剤などの滅菌希釈剤；ベンジルアルコールもしくはメチルパラベンなどの抗菌剤；エチレンジアミン四酢酸（EDTA）などのキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩もしくはリン酸塩などのバッファーおよび塩化ナトリウムもしくはデキストロースなどの張度の調整のための薬剤の１つ以上を含有し得る。非経口調製物は、アンプル、使い捨て注射器またはガラス製もしくはプラスチック製の複数用量バイアル内に封入され得る。静脈内に投与される場合、好ましい担体は、生理食塩水またはリン酸緩衝生理食塩水（PBS）である。
【０１６６】
好ましい態様において、ANGELS化合物は、インプラントおよびマイクロカプセル化送達システムを含む徐放製剤などの、体からの急速排除に対して該化合物を保護する担体を用いて調製される。エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ酪酸などの生分解性生体適合性ポリマーを使用することができる。かかる製剤の調製方法は、当業者に公知である。
【０１６７】
リポソーム懸濁液（特定細胞の表面抗原に対するモノクロナール抗体により標的化されるリポソームを含む）もまた薬学的に許容され得る担体である。これらは、例えば、米国特許第4,522,811号に記載のような、当業者に公知の方法にしたがって調製され得る。例えば、リポソーム製剤は、適切な脂質（ステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ステアロイルホスファチジルコリン、アラカドイルホスファチジルコリン、および／またはコレステロールなど）を無機溶剤に溶解し、後に該溶媒を蒸発させ、容器の表面に乾燥脂質の薄膜を残すことにより調製され得る。ANGELS化合物またはその一リン酸塩、二リン酸塩および／または三リン酸塩誘導体の水溶液を、次いで、容器内に導入する。次いで、脂質物質を容器の側面から遊離させるため、および脂質凝集物を分散させるために容器を手で揺らし、それによりリポソーム懸濁液を形成させる。
【０１６８】
非経口投与のためには、ANGELS化合物を、好ましくは、単位投薬注射可能形態（溶液、懸濁液、エマルジョン）で、非経口ビヒクルである薬学的に許容され得る担体と組み合わせて製剤化する。かかるビヒクルは、好ましくは、非毒性および非治療性である。かかるビヒクルの例は、水、生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、および５％ヒト血清アルブミンである。固定油およびオレイン酸エチルなどの非水性ビヒクルもまた使用し得る。リポソームを担体として使用してもよい。ビヒクルは、等張性および化学安定性を増大する物質、例えば、バッファーおよび保存料などの少量の添加剤を含み得る。ANGELS化合物は、好ましくは、約10ナノグラム/ml〜約100ミリグラム/ml、より好ましくは約10マイクログラム/ml〜約10ミリグラム/mlの濃度でかかるビヒクル内に製剤化される。
【０１６９】
医薬組成物中のANGELS化合物の濃度は、好ましくは、該化合物の吸収速度、不活化速度および排出速度ならびに当業者に公知のその他の要因を考慮することにより調整される。
【０１７０】
ANGELS化合物およびその医薬組成物を用いる治療法
本明細書に開示されるANGELS化合物（これらの化合物を含有する医薬組成物を含む）は、好ましくは、哺乳動物、より好ましくはヒトを治療するために使用される。好ましい治療法は、治療の必要がある哺乳動物を識別すること、および１つ以上のANGELS化合物、より好ましくは、カテゴリーＩ、ＩＩ、ＩＩＩおよび／またはＩＶにおける１つ以上の化合物の治療有効量を哺乳動物に投与することを含む。
【０１７１】
本明細書に記載されるANGELS化合物は、骨の質量および／または密度および／または強度を維持および／または増加するのに有用である。好ましくは、本明細書に記載されるANGELS化合物は、低い骨の質量および／または密度および／または強度を有すると識別された個体および／または低い骨の質量および／または密度および／または強度を発現するリスクのある個体を処置するために使用される。低い骨の質量および／または密度および／または強度を有する哺乳動物を識別するための方法は当業者に公知であり、二重エネルギー吸収測定法、臨床的骨ソノメトリー(sonometry)、Ｘ線、ＣＡＴスキャン、および骨生検の組織形態学検査が挙げられる。骨欠損の症状としては、背部痛、経時的な伸長の低下、猫背に付随する症状および骨折頻度の増加が挙げられ得る。低い骨の質量および／または密度および／または強度を発現するリスクのある個体を識別するための方法はまた当業者に公知であり、性別、年齢、人種、家族歴、喫煙、エストロゲンまたはアンドロゲン欠乏、コルチコステロイドへの曝露、および慢性アルコール中毒などの種々のリスク要因の評価が挙げられる。
【０１７２】
本明細書に記載されるANGELS化合物は、性欲の増大、血管運動障害のコントロール、血管拡張の促進、骨欠損の低減、気分のむらの低減、コレステロールの低下、低密度リポ蛋白（LDL）の減少、高密度リポ蛋白（HDL）の増加、アテローム性動脈硬化の遅滞、癌進行の遅滞、心臓血管疾患の進行の遅滞、加齢関連神経変性の遅滞、神経変性性疾患の進行の遅滞、癌のリスクの低減、心臓血管疾患のリスクの低減、心臓発作のリスクの低減および／または神経変性性疾患のリスクの低減などの他の適応症に有用である。
【０１７３】
本明細書に開示されるANGELS化合物（これらの化合物を含有する医薬組成物を含む）は、好ましくは、該化合物を哺乳動物に治療有効量で提供する投薬計画により哺乳動物に投与される。治療有効量は、骨の質量および／または密度および／または強度の低下速度を遅延するのに有効な量であり得るが、好ましくは、質量および／または密度および／または強度を維持するのに有効な量である。
【０１７４】
好ましい治療有効量は、広範囲で変わり得る。用量および投薬計画は、患者の処置の必要性の種類(nature)、例えば、骨の密度および／または強度の増加の必要性、特定の活性ANGELS化合物の特徴、例えば、その治療インデックス、患者、患者の既往歴および当業者に公知のその他の要因を考慮することにより好ましく選択される。ANGELS化合物の好ましい１日あたりの投薬量は、典型的には、患者の体重あたり、約1マイクログラム/kg〜約100ミリグラム/kgの範囲であるが、適切な状況において、より高い、またはより低い用量を使用し得る。より好ましくは、ANGELS化合物の１日あたりの投薬量は、典型的には、患者の体重あたり、約10マイクログラム/kg〜約10ミリグラム/kgの範囲、すなわち等量徐放投薬量である。好ましい投薬計画としては、ANGELS化合物を被験体に長期間にわたって、好ましくは少なくとも約１ヶ月間、より好ましくは少なくとも約３ヶ月間、投与することが挙げられる。
【０１７５】
治療有効量は、臨床試験などの方法により当業者によって決定され得る。投薬量は、骨の質量および／または密度および／または強度の所望の維持および／または増加を達成するために、必要に応じて個々の場合において調整され得る。徐放投薬および注入も具体的に予想される。投与は、経口、吸入によるもの、注射によるもの、注入によるもの、埋め込みによるもの、または任意の他の適当な経路によるものであり得る。
【０１７６】
ANGELS化合物は、一度に投与してもよく、様々な時間間隔で投与するようにいくつかの低用量に分けてもよい。いずれの特定の患者に対しても、具体的な投薬計画は、個人の必要性および該組成物を投与する人物もしくは該投与を監督する人物の専門的判断にしたがって経時的に調整されるべきであること、ならびに本明細書に記載の濃度範囲は例示のみであって、請求項に記載の発明の範囲または実施を制限することを意図するものではないことをさらに理解されたい。
【０１７７】
本発明は、実施のいかなる理論にも拘束されない。したがって、ANGELS化合物が作用すると考えられる機構の以下の考察を当業者の利益のために提供するが、本発明の範囲を限定するものではない。
【０１７８】
エストロゲンおよびアンドロゲンは、それぞれ、核レセプターのスーパーファミリーに属する非常に特殊なタンパク質：エストロゲンレセプター（ER）αおよびβならびにアンドロゲンレセプター（AR）によるシグナル伝達によって、多くの組織および器官に対して自身の調節的影響を及ぼす（KingおよびGreene, 1984；Quigleyら, 1995；Mangelsdorfら, 1995；Kuiperら, 1996；McKennaおよびO'Malley,2002；Katzenellenbogenら, 1996；MoggsおよびOrphanides, 2001；Hallら, 2001）と考えられる。それにもかかわらず、これらのホルモンの数多くの効果は、レセプターとDNAとのシス−またはトランス−相互作用により生じる転写調節の確立されたモデルによって説明され得ない。かかる効果は、集合的に「非ゲノム」作用または「非ゲノトロピック」作用によるものであった（PietrasおよびSzego,1997；Valverdeら,1999；McEwenおよびAlves,1999；Toran-Allerandら, 1999；Chenら, 1999；Simonciniら, 2000；Falkensteinら, 2000；Wyckoffら, 2001；Levin, 2001）。転写に対する性ステロイドのよく知られた効果と「非ゲノトロピック」作用との関係は、ほとんど未知のままである。さらに、これまでは、性ステロイドの非ゲノトロピック作用がインビボで生物学的に関連するという証拠はなかった。
【０１７９】
最近、エストロゲンおよびアンドロゲンは、Src/Shc/ERKシグナル伝達経路を速やかに活性化することによって、骨芽細胞／破骨細胞のアポトーシスを減衰させることが示された（Kousteniら, 2001）。この効果は、そのレセプターのリガンド結合ドメインのみを必要とし、レセプタータンパク質の古典的なゲノトロピック作用が核標的化により排除されるのとは異なる。予想外にも、ERα、ERβまたはARは、リガンドがエストロゲンであるか、またはアンドロゲンであるかに関係なく、同様の有効性を伴ってこの効果を媒介する。さらに、この非ゲノトロピック効果は、合成リガンドを有するレセプターのゲノトロピック作用とは別個のものと考えられ得る。
【０１８０】
現今、性ステロイドが、生殖器官の質量および機能を保持するために利用されるものとは基本的に異なるレセプター作用機構により成人骨格を保護することが分かった。具体的には、本明細書に記載される結果は、エストロゲンまたはアンドロゲンが、ＭＡＰキナーゼの非ゲノトロピック調節ならびに下流転写依存性および下流転写非依存性の事象により、骨芽細胞に対する抗アポトーシス効果および破骨細胞に対するプロアポトーシス効果を奏することを示す。これらの作用は、雌および雄マウスにおける生殖ではないが骨と同等性である性ステロイドの効果の発揮と一致する、緩やかなリガンド／レセプター特異性を示す。本発明の好ましい化合物4-エストレン-3α,17β-ジオールは、古典的な転写に影響することなくこれらの非ゲノトロピック効果を忠実に再現し、卵巣摘出した雌において、骨質量をエストロゲンが十分な状態のレベルより上まで増加させ、精巣摘出した雄において、すくなくともDHTと同程度に有効であり、両性において生殖器官に影響を及ぼさず、したがってエストロゲンまたはアンドロゲンの使用に関連する副作用およびリスクを回避または最小限にする。これらの所見は、ANGELS化合物が、骨同化性で性的中性のホルモン置換療法の可能性を持った新しい種類の薬物治療剤であることを示す。これらおよびさらなるデータを図１〜１５に示す。
【０１８１】
図１は、細胞質キナーゼの非ゲノトロピック活性化ならびに下流転写依存性事象および下流転写非依存性事象が性ステロイドの抗アポトーシス効果に必要とされることを示す。HeLa細胞を、SREまたはAP-1が分泌されたアルカリホスファターゼ（SEAP）の発現を誘発するレポーター構築物と、野生型ERα（ＡおよびＢ）；またはそのリガンド結合ドメイン（Ｅ）もしくは膜（E-Mem）もしくは核（E-Nuc）局在配列に融合されたＥとで同時トランスフェクトした（Ａ）。優性ネガティブ（dn）MEKまたはdn JnkもまたERαトランスフェクト細胞のサブセットに導入した。細胞をビヒクルまたは示したステロイド（10-8M）に15分間曝露した。次いで、ステロイド含有培地を除去し、細胞を２回洗浄し、ステロイドを含有しない新しい培地中で培養を継続した。６時間後に上清みを回収し、SEAP活性をアッセイした。図1Aおよび1Bにおいて、100％は、ビヒクル処理細胞における活性を示す。（Ｃ）HeLa細胞をERαおよびnEGFPおよび示した転写因子の野生型またはdn変異体で同時トランスフェクトした。トランスフェクト細胞を１時間10-8M E2で処理した後、エトポシド（100μM）で６時間処理し、蛍光細胞の核形態学によりアポトーシスをアッセイした。（Ｄ）HeLa細胞（上側パネル）をBadのリン酸化不可能なdn変異型であるERαで一過的に同時トランスフェクトした。頭蓋冠由来マウス骨芽性細胞（下側パネル）をPI3Kインヒビターワートマンニンで前処理した。次いで、細胞を（Ｃ）のようにして処理した。バーは３回測定の平均±SD、*はビヒクルに対してANOVAによるｐが＜0.05を示す。（Ｅ）性ステロイドによる遺伝子転写およびアポトーシスのキナーゼ媒介性非ゲノトロピック調節の提案モデル。
【０１８２】
図２は、エストロゲンによるSRE-SEAPの転写調節がSrc/Shc/ERKシグナル伝達経路を必要とすることを示す。HeLa細胞を、wt MEKまたはdn MEK、wt Srcまたはキナーゼ活性を欠くSrc変異体（Src K-）ならびにwt Shcまたはリン酸化の主要部位がフェニルアラニンで置換されたdn Shc変異体（Y239F/Y240F/Y317F（Shc FFF）、Y317F（Shc YYF）またはY239F/Y240F（Shc FFY））と、全長ERαをコードする発現構築物とでトランスフェクトした。Srcキナーゼ活性およびSrcキナーゼによるShcリン酸化の主要部位であるチロシン317でのShcのリン酸化は、E2によるSRE活性の刺激に必要とされる。100％は、ビヒクル処理細胞における活性を示す。バーは３回測定の平均±SD、*はビヒクルに対してANOVAによるｐが＜0.05を示す。
【０１８３】
図３は、エストロゲンによるAP-1-SEAPの調節がJNKシグナル伝達経路を必要とすることを示す。HeLa細胞を、wt JNK1、dn JNK1、dn MEK、またはdn AP-1と、全長ERαをコードする発現構築物とでトランスフェクトした。100％は、ビヒクル処理細胞における活性を示す。バーは、３回測定の平均±SD、*は、E2なしで培養した細胞に対してANOVAによるｐが＜0.05を示す。
【０１８４】
図４は、性非特異的非ゲノトロピック機構を介するSRE-媒介性転写およびAP-1-媒介性転写の調節を示す。HeLa細胞を、SRE-SEAPまたはAP-1-SEAPレポーター構築物と、ARとで一過的にトランスフェクトした。細胞をビヒクルまたは示したステロイド（10-8M）に１５分間曝露した。次いで、ステロイド含有培地を除去し、細胞を２回洗浄し、ステロイドを含有しない新しい培地中で培養を継続した。６時間後に上清みを回収し、SEAP活性をアッセイした。100％は、ビヒクル処理細胞における活性を示す。バーは３回測定の平均±SD、*はビヒクルに対してANOVAによるｐが＜0.05を示す。
【０１８５】
図５は、Elk-1のE2誘導性リン酸化が、SREの活性化に必要とされることを示す。Ａ．HeLa細胞を、ERαとwt構築物またはdn Elk-1構築物のいずれかとで同時トランスフェクトした。wt対照（ElkC）は、複数のERKリン酸化部位（Maraisら、1993）を含有する、Elk-1のＣ末端ドメイン（アミノ酸307〜428）と、GAL4のDNA結合ドメイン（GAL4-DBD）との融合タンパク質である。ElkC活性を、ルシフェラーゼ転写がGAL4結合部位の制御下にあるレポータープラスミド（GAL4-luc）の同時トランスフェクションにより測定した。dn Elk-1は、Elk-1のDNA結合ドメインを欠く。ElkC383/389において、ERKによるリン酸化の標的であるセリン138および139は、アラニンで置換されている。E2は、ElkC構築物の存在下でElk-1活性を誘導したが、dn Elk-1またはリン酸化不活性ElkC383/389変異体の存在下では誘導しなかった。Ｂ．HeLa細胞を、ElkC構築物またはElkC383/389構築物と、ERα、SRE-SEAPとでトランスフェクトした。E2は、ElkCの存在下で、SRE-SEAPの強い活性化を誘導したが、ElkC383/389の存在下では誘導しなかった。バーは３回測定の平均±SD、*はビヒクルに対してANOVAによるｐが＜0.05を示す。
【０１８６】
図６は、性ステロイドの抗アポトーシス効果に必要とされるElk-1、C/EBPβ、CREBおよびJNK1/AP-1転写活性が、ERまたはARのいずれかにより媒介されることを示す。HeLa細胞を、nEGFPおよび示した転写因子の野生型またはdn変異型と、ERα（Ａ）またはAR（ＢおよびＣ）とで同時トランスフェクトした。次いで、細胞を１時間10-8M E2で処理した後、エトポシド（100μM）で６時間処理した。ピクノーゼ核を有するトランスフェクト（蛍光）細胞の割合を調べることによりアポトーシスを定量した。バーは３回測定の平均±SD、*はビヒクルに対してANOVAによるｐが＜0.05を示す。HeLa細胞を、nEGFP、および示した転写因子の野生型またはdn変異型と、ERα（Ａ）、またはAR（ＢおよびＣ）とで同時トランスフェクトした。次いで、細胞を１時間10-8M E2で処理した後、エトポシド（100μM）で６時間処理した。ピクノーゼ核を有するトランスフェクト（蛍光）細胞の割合を調べることによりアポトーシスを定量した。バーは３回測定の平均±SD、*はビヒクルに対してANOVAによるｐが＜0.05を示す。
【０１８７】
生殖組織の発生、成長、維持および機能は、全般的に、雌ではエストロゲンおよび雄ではアンドロゲンに依存する。しかしながら、非生殖組織に対する性ステロイドの効果の性特異性は、大きく緩和される。例えば、エストロゲンは、雌において、骨欠損に対する保護、コレステロールの低下またはアテローム性動脈硬化の遅延に対して雄と同程度に有効である（ManolagasおよびKousteni, 2001；Khoslaら, 1998；Bilezikianら, 1998；Hodginら, 2001；Cronigerら, 2001；Hodginら, 2002；Lewisら, 2001；Manolagasら, 2002）。逆に、非芳香族化アンドロゲンは胸大動脈の弛緩を促進し（Komesaroffら、2001）、本明細書に示すデータに示されるように、4-エストレン-3α,17β-ジオールは、卵巣摘出成体雌において骨の損失を防止する。
【０１８８】
図７は、雌および雄マウスにおけるエストロゲンおよびアンドロゲンの生殖性作用ではなく骨格性作用が同等であることを示す。Ｙ染色体特異的cDNAプローブを用いた肝臓DNAのサザンブロット解析により性別を決定した新生児雌または雄マウスの頭蓋冠から骨芽性細胞（Ａ）を単離し、前述のようにして培養した。示したステロイドがエトポシド誘導性アポトーシスを防御する能力を図１Ｄの下側パネルに示すようにして調べた。（Ｂ）成体雌または雄マウス由来の骨髄培養物において破骨細胞を発生させ、次いで、ビヒクルまたは示した濃度のステロイドで２４時間処理し、この時点でアポトーシスを受けた細胞の数を測定した。調べた雌４匹のうち１匹および雄４匹のうち１匹の代表的な結果を示す。各時点は、３回測定の平均±SD、*はビヒクルに対してANOVAによるｐが＜0.05を示す。（Ｃ＆Ｄ）８ヶ月齢Swiss Websterマウス（１群あたりn=8〜10）を偽手術、卵巣摘出（OVX）または精巣摘出（ORX）した。OVXおよびORX動物を、次いで、未処置のままにするか、またはE2（0.025mg）またはDHT（10mg）を含有する６０日間低速放出ペレットを直ちに移植した。６週間後にＢＭＤおよび子宮または精嚢の湿潤重量を測定した。バーは、平均±SD、*はOVXおよびORXに対するｐが＜0.05を示す。
【０１８９】
図８は、破骨細胞に対する性ステロイドのプロアポトーシス効果がＳｒｃ／ERKシグナル伝達を必要とすることを示す。破骨細胞をU012345またはPP1で１時間前処理した後、E2またはDHTを添加した。２４時間後、アポトーシス破骨細胞の割合を図７のようにして調べた。バーは３回測定の平均±SD、*はビヒクルに対してANOVAによるｐが＜0.05を示す。
【０１９０】
図９は、雌および雄マウスにおけるエストロゲンおよびアンドロゲンの骨格性作用の同等性を示す。６ヶ月齢Swiss Websterマウス（１群あたりn=8〜10）を偽手術、卵巣摘出（OVX）、精巣摘出（ORX）、または去勢し、E2（0.025mg）またはDHT（10mg）を含有する６０日間低速放出ペレットを直ちに移植した。６週間後、椎骨の組織学的切片における破骨細胞アポトーシス（Ａ）、エキソビボ骨髄培養物における骨芽細胞発生および破骨細胞発生（ＢおよびＣ）、ならびに血清オステオカルシン濃度（Ｄ）を調べた。バーは、平均±SD、*はOVXおよびORXに対するｐが＜0.05を示す。
【０１９１】
上述の結果は、骨のような非生殖組織に対する性ステロイドの効果の緩和された特異性に対して考えられ得る機構的説明を提供する。具体的には、ERαもしくはβまたはARは、SREおよびAP-1のような偏在性転写因子の活性ならびにタンパク質、例えばキナーゼの下流のBadの機能の調節において同じ互換的プロファイルのリガンド／レセプター特異性を示すことにより、リガンドがエストロゲンであるかアンドロゲンであるかに関係なく、同様の有効性を伴ってSrc/Shc/ERKシグナル伝達経路によりシグナルを伝達し得る。このことと一致して、データは、雄および雌において、インビトロおよびインビボでの骨細胞の生存ならびに骨の損失に対する防御におけるエストロゲンおよびアンドロゲンの効果が同等であることを示す。両性由来の骨細胞における互換的リガンド／レセプター相互作用が雄および雌におけるその効果の同等性の一因となるという主張に賛同し、ERαおよびERβの両方、またはこれらのタンパク質の任意のバリアントを欠くマウス（DERKO）由来の細胞において、E2がERKリン酸化を刺激し、骨芽細胞のアポトーシスを防止し、破骨細胞のアポトーシスを刺激することが示されている（Dupontら,2000）。野生型対照のように、DERKO細胞におけるE2の効果は、ICI 182,780またはフルタミドのいずれかにより妨げられ得る（Chenら, 2002）。さらに、エストロゲンのAR媒介性効果と一致して、DERKOマウスはOVX後に骨が粗くなり、これは、E2の投与により防ぎ得る（Gentileら, 2001）。
【０１９２】
図10は、子ヒツジ子宮細胞質ゾル、ヒトERα、およびヒトERβについての4-エストレン-3α,17β-ジオール、およびE2の相対結合親和性（RBA）を示す。ビヒクルまたは示した化合物の11の希釈物を、50mM Tris（pH8.0）、10％グリセロール、0.01Mメルカプトエタノール、および0.3mg/mlオボアルブミンからなる緩衝液中で10nMの3H E2および0.3〜0.4nMの示したタンパク質と0℃で18〜24時間インキュベートした。タンパク質を、ヒドロキシルアパタイト（HAP）に吸着させ、遊離リガンドを洗浄によって除去した（Carlsonら, 1997）。結果を、特異的結合％として示す。4-エストレン-3α,17β-ジオールのRBA値を括弧内に示し、各タンパク質調製物中のE2（100％として定義）と比較する。記号は、各測定点を二連で測定した2つの異なる実験の平均±SDを示す。
【０１９３】
図11は、4-エストレン-3α,17β-ジオールを投与した性腺摘出したマウスにおいて、4-エストレン-3α,17β-ジオールが骨密度を増加させることを示す。3つの個別の実験では、6もしくは8月齢の雌または6月齢の雄スイスウェブスターマウス（n=8〜10／群）を、偽操作するか、性腺摘出するか、または性腺摘出し、直ちにE2（0.025mg）、DHT（10mg）、もしくは4-エストレン-3α,17β-ジオール（7.6mg）を含む60日徐放ペレットを移植した。8月齢の雌を使用した実験においては4週間後と6週間後の両方で、そして6月齢の雌および雄を使用した実験においては6週間後のみで、全身、脊椎、および後肢のBMDを測定した（A、B、およびC）。雌における6週間のBMD（B）は、6月齢および8月齢のマウスを使用した2つの実験によりプールした値を示す。
【０１９４】
図12は、図11（A）に記載の実験の6月齢および8月齢の雌および雄マウス由来のL5における圧縮強度を示す。遠位大腿骨の長手方向脱灰切片を（B）に示す。置換用量（1×ERT）のビヒクルまたはE2を投与した動物と比較して300倍のE2置換用量（300×ERT）の4-エストレン-3α,17β-ジオールを投与したマウスにおける皮質骨および子柱の幅の増加に留意のこと。対照的に、100×ERTでE2を投与したマウスで発症する海綿骨硬化症（cancellous sclerosis）に留意のこと。雌（8月齢）および雄（C）由来のL1〜L4脊椎切片における骨芽細胞アポトーシス。バーは、平均±SDを示す。*p<0.05 vs OVXまたはORX；**p<0.05 vs OVXまたはORXおよびvs OVX+E2。
【０１９５】
図13は、4-エストレン-3α,17β-ジオールが、子柱および皮質骨の幅ならびに骨芽細胞数および血清オステオカルシンを増加させることを示す。6月齢の雌由来のL1〜L4脊椎（A〜F）ならびに6〜8月齢の雌由来のプールした血清オステオカルシン濃度（G）の組織形態学的測定分析。バーは、平均±SDを示す。*p<0.05 vs OVX；**p<0.05 vs OVXおよびvs OVX +E2；*p<0.05 vs OVX+E2。本明細書中に記載するANGELS化合物は、哺乳動物の骨量および／または骨強度および／または骨密度の維持および／または増加に有用である。このような化合物を必要とする哺乳動物（好ましくはヒト）には、雌の骨粗鬆症（閉経後）、雄の骨粗鬆症、糖質コルチコイド誘導性骨粗鬆症、運動不足および加齢関連骨粗鬆症、特発性または若年性骨粗鬆症、移植関連骨粗鬆症、ならびに顎堤骨量減少などの病態を罹患した哺乳動物を含み得る。さらに、本明細書中に記載の化合物は、男性化または女性化効果を有する治療に耐え得ないか耐えることを望まない被験体への投与に特に有用である。例えば、乳癌患者（特に、ゴナドトロピン放出ホルモン（GnRH）療法を行ったかまたは卵巣摘出した、骨転移した患者）、前立腺癌患者（特に、GnRH／去勢治療を行った患者）、および骨髄腫／リンパ腫患者は、元の病態（例えば、癌）の再発リスクがあるので、エストロゲンまたはアンドロゲンでの治療候補としては不十分であることが多い。
【０１９６】
図14は、4-エストレン-3α,17β-ジオールが、雌および雄の生殖組織または乳癌細胞に対しては効果がないことを示す。雌および雄のマウスの子宮（A）および精嚢（B）の湿重量を図11に記載した。子宮に対しては4-エストレン-3α,17β-ジオールが効果がないことを、8月齢で子宮摘出したマウスを使用した第2の実験で確認した。（C）図11で示した6月齢のマウス由来のヘマトキシリンで染色した子宮の長手方向の0.3μm厚のパラフィン切片（バーは100μm）。偽操作したマウスおよびOVX+E2で処置したマウス由来の子宮と比較して、OVXで処置したマウスとOVX+4-エストレン-3α,17β-ジオールで処置したマウスの子宮には以下の形態学的相違（薄いおよび萎縮性の円柱上皮、緻密基質、腺数の減少、円柱上皮、子宮内膜間質、および子宮筋層細胞における核：細胞質比の減少、ならびに有糸分裂活性の欠如）があることに留意のこと。（D）MCF-7細胞の増殖を、3Hチミジン取り込みによって決定した。
【０１９７】
上記の結果は、4-エストレン-3α,17β-ジオールにより、典型的な転写に影響を与えることなく、ERまたはARを介してエストロゲンまたはアンドロゲンの非ゲノトロピック効果を忠実に再現し、雌ではエストロゲンよりも、BMDおよび圧縮強度に対して固有且つ優れた効果を有し、雄ではDHTと少なくとも同程度有効であることを示す。どのようにして性ステロイドのゲノトロピック効果を排除して骨に対してより優れた効果を得ることができるのであろうか？本所見は、骨量は主に骨形成と骨吸収との間の局所的(focal)バランスに依存し、次にアポトーシスのタイミングを反映する破骨細胞と骨芽細胞の寿命に依存し、リモデリング速度には依存しないこと（Manolagas, 2000）を強く示唆する。エストロゲンまたはアンドロゲン、さらにリモデリングを抑制する他の薬剤は、リモデリングの増加による骨形成と骨吸収との間の一時的ギャップを埋めることによって最初に骨量を増加させることができる。しかし、これは時間とともに減速し、正常な骨格を再構築することはできない。4-エストレン-3α,17β-ジオールを使用した骨芽細胞数および血清オステオカルシンの相対的増加は、この化合物が潜在的に骨形成と骨吸収との間の局所的バランスをプラスにし、骨量を持続的に増加させ、それにより正常な骨格が再構築されることを示唆する。
【０１９８】
E2またはDHT処置動物と比較した4-エストレン-3α,17β-ジオールで処置したマウスにおけるBMDおよび強度の増加は、付加的機構（例えば、骨芽細胞生成のアップレギュレーションまたは成熟骨芽細胞へと前駆体を発達させること）に起因し得る。この主張は、骨成長を促進する因子によって利用されるいくつかの遍在する転写因子の活性化に対する4-エストレン-3α,17β-ジオール効果の範囲と一致し、このことは、ANGELS化合物が細胞寿命の制御を超えてさらなる生物学的効果を有するはずであることを示す。例えば、ERαの核外機能によるMAPキナーゼの活性化によりc-jun活性が抑制されるという所見とは対照的に、E2で活性化されたERαがゲノトロピック機構によってAP-1活性を刺激することが示されている（Kushnerら、2000）。従って、性ステロイドに対する標的細胞の応答を、非ゲノトロピック作用とゲノトロピック作用との間のバランスによって同定し得る。従って、分子レベルでは、骨に対する4-エストレン-3α,17β-ジオールの優れた効果は、AP-1に対する反調節効果の除去により極めて十分なものとなり得る。この仮定のシナリオに従うと、c-junの抑制が大きいほど、WntアンタゴニストであるDickkopfの転写を大きくが減少させることができ、それによりWntシグナル伝達（強力な骨同化刺激）を発揮させることができる（Boydenら、2002； Grotewold および Ruether, 2002）。
【０１９９】
本明細書中に記載する証拠は、ANGELS化合物がERまたはARの非ゲノトロピック作用を通じて、キナーゼから生じるシグナル伝達カスケードを選択的に活性化することができるが、これらの受容体の通常の転写活性を誘導する能力を欠くので、骨格を性ステロイドの生殖効果と切り離すという、固有の生物学的結果が生じることを証明する。この証拠と一致して、糖質コルチコイド受容体のゲノトロピック機能および非ゲノトロピック機能の不活化は変異マウスを死亡させるのに対し、この受容体の転写活性を排除すると死亡しない（事実上、生きるか死ぬかの差）（Reichardtら、1998）。この理解に基づいて、ERまたはARの機構特異的リガンド（組織特異的リガンド（SERM）または古典的エストロゲンもしくはアンドロゲンと対照的）およびおそらく他の核受容体の機構特異的リガンドは新規の薬物療法学のクラスを提供すると考えられる。
【０２００】
生殖期後の後期の間の性ステロイド置換は、その利点が主に非生殖組織に対する性ステロイド作用に由来する治療法であるのに対し、その副作用は生殖組織に対する作用に起因する。この自明の理は、骨のような非生殖組織に対してはエストロゲンアゴニストとしてであるが生殖組織（すなわち、子宮および乳房）においてはアンタゴニストとして作用する選択的エストロゲン受容体モジュレーター（SERM）を開発するための大きな努力によって強調される。骨に対する4-エストレン-3α,17β-ジオールの優れた性的に中性の効果と、生殖組織に対しては効果がないことに起因して、エストロゲンまたはSERMと比較して4-エストレン-3α,17β-ジオールなどの機構特異的リガンドは、性ステロイド置換療法の有利な療法である（Doranら、2001；Ottら、2002）。既存のホルモン置換療法（Santoroら、1999；Herringtonら、2000；Manson および Martin、2001；Moscaら、2001）の有効性および安全性についての関心の高まりによって、折よく、これらのことを発見し、同時に、これにより骨同化作用性で性的に中性のホルモン置換治療を提供する。
【０２０１】
図15は、4-エストレン-3α,17β-ジオールに関する化合物（スキーム1A由来）のゲノトロピック活性vs非ゲノトロピック活性のスクリーニングの結果を例示し、以下にさらに詳細に考察する。
【０２０２】
実施例
骨同化化合物の合成
エストレンジオールおよびエストランジオールの合成
3位、5位、および17位でエピマーである種々のエストレンジオール、エストランジオール、アンドロステンジオール、およびアンドロスタンジオールの合成を、スキーム1Cに例示する。これらの化合物のほとんどは公知であり、文献に記載の方法によって調製することができる。
【０２０３】
出発材料テストステロンおよび19-ノルテステロンは販売されている（例えば、Steraloids, Inc., Newport, Rhode Island）。より一般的な17βエピマーアルコールを、Mitzunobu法（SmithおよびMarch, 2001）によって転化させて、17αエピマーアルコールを得る。
【０２０４】
水素化ホウ素還元により、種々の4-エストレンジオールおよび4-アンドロステンジオールが得られる。典型的には、3αアルコールと3βアルコールとのエピマー混合物が得られるが、これらをクロマトグラフィーまたは結晶化によって分離することができる。バルキーな水素化物試薬（トリ-t-ブトキシ水素化アルミニウムナトリウムまたはジエチル水素化ホウ素リチウムなど）により、3αまたは3βエピマーアルコールのいずれかの形成の選択性を向上させる場合もある。
【０２０５】
A環エノンの金属還元物の溶解およびその後の水素化ホウ素による還元により、種々のエストランジオールおよびアンドロスタンジオールを得る。
【０２０６】
3-ジエニル-17-ジアセテートの形成、それに続く水素化ホウ素還元およびアルカリ加水分解により、種々の5(6)-エストレンジオールおよび5(6)-アンドロステンジオールを得る。
【０２０７】
種々の5(10)-エストレンジオールを生成するために、エストラジオールメチルエーテルを、Mitzunobu法によって転化し、各エピマーをバーチ還元に供し、その後シュウ酸などの弱酸で処理する（SmithおよびMarch, 2001）。水素化ホウ素還元により、種々の5(10)-エストレンジオールを得る。水素化物還元によってエピマーアルコールを生成させた場合には、立体異性体を分離する。
【０２０８】
環置換基を有するエストレンジオールおよびエストランジオールの合成
17α（系A）、7α（系B）、および11β（系C）に親和性増強置換基を保有する種々のエストレンジオールの合成を、スキーム2Bに例示する。置換エストレンジオールのこれらの３クラスを調製するために、エストラジオールの3-メチルエーテル誘導体または公知の７αまたは11β置換エストロゲン（Frenchら、1993b；Pomperら、1990）をバーチ還元に供し、その後強酸で処理して（Smith および March, 2001）、対応する共役エノンを得る。
【０２０９】
17α置換エストレン（系A）を調製するために、17-アルコールをケトンに酸化することができるように最初に3-ジエニルエーテルの形成によって3-ケトンを選択的に保護する（Fried および Edwards, 1972）。次いで、リチウムトリメチルシリルアセチリド（または他の適切なグリニャール試薬またはリチウム試薬）を添加して、選択的に17βアルコールを得る。次いで、ジエニルエーテルを弱酸で加水分解し、3-ケトンを水素化ホウ素ナトリウムで還元して、所望の17αエストレンを得る。
【０２１０】
7α置換エストレンジオール（系B）または11β置換エストレンジオール（系C）の場合には、所望の置換基は出発エストロゲン誘導体中に既に存在し、これらは記載の引例に記載されている方法によって導入された。所望のエストレンジオールは、3-ケトンの水素化ホウ素ナトリウム還元によって簡単に得られる。
【０２１１】
アナログが本明細書中に例示のものと異なる置換基を有することができるので、7α、11β、および17α置換基の種々の組み合わせを有するアナログを作製することができる。エピマーアルコールを水素化物還元によって生成させる場合には、立体異性体を分離する。任意の第2級アルコールの位置での立体化学を、アルコールをトリフェニルホスフィン、ジイソプロピルアゾジカルボキシレート、および安息香酸ナトリウムで処理するMitzunobuの手順によって転化させることもできる。得られたエピマーの安息香酸塩を、還流エタノール中でのK2CO3またはジオキサン水溶液中でのKOHでの処理によってエピマーアルコールに加水分解する。
【０２１２】
アンドロステンジオールおよびアンドロスタンジオールの合成
テストステロンおよびジヒドロテストステロンからの種々のアンドロステンジオールおよびアンドロスタンジオールの合成を、スキーム1Cに示す。これは、対応するエストレンジオールおよびエストランジオールについて示された方法と類似の方法に従う。
【０２１３】
環置換基を有するアンドロステンジオールおよびアンドロスタンジオールの合成
17α位に置換基を有する多数のアンドロステンジオールおよびアンドロスタンジオールは公知であり、いくつかが市販されている。
【０２１４】
7α位に置換基を有するこれらのアンドロステンジオールおよびアンドロスタンジオールは、6-デヒドロテストステロン17-t-ブチル-ジメチルシリルエーテルに対する適切なグリニャール試薬または有機リチウム試薬の銅触媒1,6-共役付加によって調製することができる。テトラブチルアンモニウムフルオリドでの処理による17保護基の切断後、7α置換テストステロンを、対応するエストレンジオールまたはエストランジオールの調製に使用した同一の方法によって種々の7α置換アンドロステンジオールおよびアンドロスタンジオールに変換することができる。
【０２１５】
11β位に置換基を有するアンドロステンジオールおよびアンドロスタンジオールを、公知の1,4-アンドロスタジエン-3,11,17-トリオンから調製することができる。エチレングリコールおよびトルエンスルホン酸での処理により、17-ケトンが選択的にケタール化する。このジオンの1当量のビニルグリニャール試薬での慎重な処理により、より反応性の高いC-11ケトンへの選択的に付加を行う。得られた11のアリルアルコールを、トリエチルシランおよびトリフルオロ酢酸での処理によって選択的に脱ヒドロキシル化して、11β-ビニル置換生成物を選択的に得ることができる。次いで、ケタールを切断し、穏やかな触媒による水素化により、C-1および11β置換基の二重結合を還元する。水素化ホウ素還元により、11β置換アンドロステンジオールを得る。より強い水素化により、同様に、C-4の二重結合を還元し、水素化ホウ素還元後に11β置換アンドロスタンジオールを得る。
【０２１６】
エストレンジオールおよびエストランジオール由来のノルステロイド、ホモステロイド、セコステロイド、およびシクロステロイドの合成
エストレンジオールまたはエストランジオールに由来するかこれを原型にしたノル、ホモ、セコ、およびシクロステロイドの合成例を、スキーム3Cに記載する。
【０２１７】
A-ノル-エストラン（系A）の例を、19-ノルテストステロンから出発する標準的な環縮小反応によって調製する。ギ酸エチルおよび水素化ナトリウムでのケトン処理によって2-ジアゾ官能基を導入して2-ホルミルケトンを生成し、ジアゾ転移反応および自発的脱ホルミル化手順によってトシルアジドを得る（Larock, 1989； Paquette, 1995）。ジアゾケトンの光分解（Pyrexを介した太陽灯照射）によって起こるクルチウス転位（Smith および March, 2001）により、環縮小酸を得る。四酢酸鉛でのこの酸の処理（Paquette, 1995）により酸化的脱炭酸反応を起こし、所望の環縮小されたノルステロイドアルコールを得る。
【０２１８】
エストランに関連するホモステロイド合成の例（B系）として、19-ノルテストステロンを、環拡大手順（C-3ケトンのウィッティッヒメチレン化後の四酸化オスミウムでのジヒドロキシル化（Paquette, 1995））に供してグリコールを得る。トルエンスルホニルクロリドおよびピリジンでの第一級アルコール官能基の選択的反応によりモノトシレートを得、その後、部位選択的にピナコール転位が起こるナトリウムメトキシドでの処理（Smith および March, 2001）により、環拡大ケトンを得る。水素化ホウ素還元により、所望の環拡大アルコール（ホモステロイド）を得る。
【０２１９】
エストレンに関連するセコステロイド合成について示された例（系C）は、エストロン3-メチルエーテルから出発する。この材料を、十分に先例のある反応において強アルカリを使用して加熱分解してドイシノール酸を得る（Chiら、1995；Scribnerら、1997）。A環フェニルメチルエーテルのバーチ還元およびその後の混合中の強酸処理により共役エノンアルコールを得る。次いで、簡単な水素化ホウ素還元により、エストレンに関連する所望のD環セコステロイドを得る。
【０２２０】
環状ケトン（または環状ジケタールのモノケタール）へのp-メトキシフェニルリチウムの添加によってエストレン型の多数のシクロステロイドの合成（系D）を非常に簡単に行うことができる。生成されたベンジル型水酸基を、シラン媒介脱ヒドロキシル化プロセス（Larock, 1989）によって除去するか、トリアルキルアルミニウムおよび塩化アルミニウムなどのルイス強酸での処理によってアルキル基と置換することができる。フェニルメチルエーテルおよび前述の酸のバーチ還元およびその後の水素化ホウ素還元により、所望のシクロステロイドエストレンアナログを得る。水素化物還元によってエピマーアルコールが生成させた場合には、立体異性体を分離する。
【０２２１】
一定の非ステロイド性ステロイド模倣物に対応し、且つセコステロイドに関連すると見なすことができるエストレンジオールアナログの構造を、系Eに示す（これらの構造中のR1、R2、およびR3はC1-C5アルキル基である）。これらは、公知の非ステロイド性エストロゲンヘキセストロールおよびベンゼストロール由来のアナログである。これらは、一定の簡単な反応によってヘキセストロールまたはベンゼストロールから調製され得、ヘキセストロールおよびベンゼストロール中の2つの6員環はフェノール性であり、これらのフェノールのいずれか1つまたは両方をフェニル基またはシクロヘキセノールもしくはシクロヘキサノールに変換することができる。フェニル基に変換するために、フェノール性ヒドロキシル基のいずれか1つまたは両方を対応するメタンスルホン酸エステルに変換し、次いで、この化合物を炭素支持体上のパラジウム触媒による水素への曝露による触媒的水素添加分解に供する。フェノールを他の2つの環型（シクロヘキセノールまたはシクロヘキサノール）に変換するために、以下の手順を使用する：フェノールのいずれか1つまたは両方を、ヨウ化メチルおよび炭酸カリウムを含むエタノールを使用してメチルエーテルに変換する。バーチ還元（リチウム金属を含む液体アンモニアおよびエタノール）およびその後の強酸との混合により、フェニルメチルエーテル環を共役シクロへキセノンに変換する。遊離フェノールを有する環はこれらの条件下では還元されない。次いで、シクロへキセノン環の水素化ホウ素還元により、対応するシクロヘキセノールを得る。シクロヘキセノール環は、炭素支持体上のパラジウム触媒によるシクロヘキセノール環の水素での水素化によって得ることができる。
【０２２２】
有機合成分野の当業者は、異なる環（B環、C環、またはD環など）が還元または拡大された他のノルステロイドおよびホモステロイド、異なる環（B環またはC環など）が切断されたセコステロイド、異なる環サイズおよび他の置換基を有するシクロステロイド、ならびに非ステロイド性エストレン様化合物のアナログを誘導するこれらの経路の多数の変形形態を容易に想定することができる。さらに、触媒的水素化を使用して、ノル、ホモ、セコ、およびシクロステロイドの対応するエストランアナログを調製することができる。一定の合成では、官能基の相互作用を回避するために保護基を使用することが必要であり得る。
【０２２３】
複素環式コアエストレンアナログの合成
4つの異なる複素環式コアエストレンアナログの合成例を、スキーム4Cに示す。これら4つの系の合成の詳細を以下に示す。
【０２２４】
ピリミジンエストレンアナログ（系A）を、単純なニトリルから容易に調製されるアミジンの1,3-ジオン系との縮合によって構築する。1,3-シクロヘキサジエン（Aldrich）を、1当量のm-クロロペルオキシ安息香酸（m-CPBA）を含むジクロロメタンでの室温で1時間処理によってモノエポキシドに変換する。モノエポキシドを、1当量のジエチルアルミニウムシアニドを含むジクロロメタンにて-78〜25℃で3時間処理して、SN2'を付加してシアノシクロヘキセノールを得る。このニトリルの10倍過剰のリチウムヘキサメチルシリルアミドを含むTHFでの処理およびその後の30倍過剰のTMS-Clでの処理により対応する過シリル化アミジンが生成され、これは縮合に必要な第1の成分である。1,3-ジケトン成分を、2,4-ペンタンジオン（R'、R''=Me）（Aldrich）などの適切な1,3-ジケトンから調製する。1当量のNaHを含むTHFを使用して作製した対応するエノラートを、1当量のプロパナール、イソブチルアルデヒド、またはベンズアルデヒドなどのアルデヒドで処理して、アルドール付加生成物を形成させる。他の1,3-ジケトン前駆体は、市販されているか（Aldrich）、同一のエステル（対称）または２つの異なるエステル（非対称）のいずれか由来のエステルとエステルエノラートとの間のクライゼン縮合、その後のアルカリ加水分解（5N KOHを含むMeOHにて室温で6時間）によって生成させることができる。β-ケト酸を脱炭酸して、1,3-ジケトンを作製することができる。次いで、THF中での10時間の還流による0.3当量の塩化アンモニウムでの等モル量の過シリル化アミジンおよび1,3-ジケトンの処理によってピリミジンを作製する。
【０２２５】
チオフェンアナログ（系B）を、二重金属化付加手順によって3,4-二置換チオフェンから構築する。3,4-ジアルキル-チオフェンは市販されているか、ニトリルカップリング反応から出発する手順によって調製することができる。１つのニトリル（対称）または2つの異なるニトリル（非対称）のいずれかを、これらの対応するアニオン（2当量のNaH、THF、35℃、1時間）に変換し、次いで0℃で0.5当量のI2にて処理する。非対称カップリングを使用して、混合したビス-ニトリルを、2つの対称ビス-ニトリルから分離する。6倍過剰の水素化ジイソブチルアルミニウムを含むトルエン中での-78℃で6時間の処理により、ビス-ニトリルをビス-アルデヒドに還元する。ジクロロメタン中での室温で6時間のビス-アルデヒドの過剰なH2Sおよび無水HClへの曝露により、対応する3,4-二置換チオフェンを生成する。2サイクルの金属化付加手順によって、2位および5位に置換基を導入する。THF中での-30℃で1時間の1.5当量のn-ブチルリチウムでの二置換チオフェンの処理、1当量の臭化第一銅ジメチルスルフィド複合体の付加による対応する銅酸化物への変換、およびその後の過剰量の1,3-シクロヘキサジエンのモノエポキシドでの処理（上記の系Aを参照のこと）により、三置換チオフェンを生成する。エポキシドの代わりに適切なアルデヒドを使用し、チオフェニルリチウムの銅酸化物への変換を使用しないこのプロセスの第2回目のサイクルにより、所望の四置換チオフェンを生成させる。
【０２２６】
ピロールエストレンアナログ（系C）を、1,3-ジオンでの適切なヒドロキシシクロヘキシルヒドラジンの縮合によって調製する。ヒドラジン成分を、50℃のエタノール中で1時間の1,3-シクロヘキサジンモノエポキシド（系Aを参照のこと）と等モル量のヒドラジンとの反応によって調製する。1,3-ジケトン成分を、以下のように調製する。標準的なエノラートアルキル化法（1当量のNaHを含むTHFでの処理、それに続く過剰なアルキル化剤での処理）によってα位でアルキル基と置換することもできる系Aに概説の方法によって調製された適切な1,3-ジケトンを、ジアニオンに変換し（室温で1当量のNaHを含むTHFでの処理、それに続く-20℃で1当量のBuLiでの処理）、次いで、-20〜25℃で1時間の1当量のMoOPH（モリブデンペントキシドピリジンヘキサメチルリン酸トリアミド）で処理して、ヒドロキシ-1,3-ジオンを得る。次いで、ヒドラジン成分と1,3-ジオン成分とを混合し、エタノール中で12時間加温して（25〜60℃）、ピラゾールを生成させる。
【０２２７】
ピリジンエストレンアナログ（系D）を、4-ヒドロキシ-ピペリジン（Aldrich）の2-クロロピリジン前駆体との反応によって調製する。クロロピリジンを以下の手順によって調製する。市販されているかメチルケトンエノラートの0.5当量のヨウ素との反応によって調製することができる1,4-ジケトンを、過剰なシアン化ナトリウムおよび塩化アンモニウムで処理して（プロパノール中での12時間の還流）ピリドン中間体を調製し、これを、オキシ塩化リンを含む1,2-ジクロロエタンでの処理（２時間の還流）によって必要なクロロピリジンに変換する。クロロピリジンの4-ヒドロキシピペリジンでの処理（1,2-ジメトキシエタン中での1時間の還流）により、アミノピリジン付加物を得る。化合物上のこの水酸基を、ベンゾエートとして保護し（過剰な塩化ベンゾイルおよびトルエンを含む2N Na2CO3水溶液）、次いで、1.5当量のBr2および0.2当量のZnBr2で臭素化する。保護したブロモピリジンを、有機亜鉛試薬（リーケZn、THF、0〜25℃）に変換し、次いで、過剰なアルデヒドで処理する。この付加物を鹸化して（2N NaOHを含むジオキサン：水＝1:1）、所望のピリジン生成物を得る。
【０２２８】
有機合成分野の当業者は、リガンドのコアをピラジンおよびピリダジンなどの複素環系ならびにスキーム4Aに記載の関連系で置換された他のエストレンアナログの合成を上記に関連する方法を使用して想定することもできる。さらに、触媒的水素化を使用して、複素環式コア系の対応するエストランアナログを調製することができる。
【０２２９】
非複素環式コアエストレンアナログの合成
３つの異なる複素非環式コアエストレンアナログの合成例を、スキーム4Dに示す。示した3つの複素非環式コアエストレンアナログを、簡単なアミドまたは尿素形成プロセスによって調製する。
【０２３０】
トリフルオロメチル置換アミド（系A）を、3つの成分から調製した。トリフルオロメチルケトン成分を、トリフルオロメチルアニオン（in situでのトリフルオロメチルトリメチルシランに対するフッ化テトラブチルアンモニウムの作用によって作製）の添加によってメトキシエトキシメチル（MEM）エーテル保護4-ヒドロキシシクロヘキサンカルボアルデヒドから調製する。得られたトリフルオロメチルカルビノールを、デス−マーティンペルヨージナンを使用して酸化し、MEMエーテル切断後、所望のトリフルオロメチルケトンを得た。シクロヘキサンカルボン酸を、一般的なメトキシカルボニルシクロヘキセノン（ロビンソン環付加手順によって調製）から調製し、水素化してシクロヘキサノンを得て、NaBH4で選択的にシクロヘキサノールに還元した。加水分解して所望の酸を得る。最初にトリフルオロメチルケトンとシクロヘキシルアミン（Aldrich）との間の還元的アミノ化手順によって所望のアミドを構築し、記載のように作製した対応するイミンをシアノボロ水素化ナトリウムによって還元する。次いで、得られた第二級アミンを、カルボジイミド試薬（ジシクロヘキシルカルボジイミド、DDC）を使用して上記で調製したシクロヘキサンカルボン酸とカップリングして、所望のアミドを得る。
【０２３１】
関連するトリフルオロメチル置換尿素化合物（系B）を調製するために、上記のように調製した第二級アミンを、最初にカルボニルジイミダゾールで活性化し、次いで4-ヒドロキシピペリジンで処理して所望の尿素を得る。
【０２３２】
最終アミド系（系C）を、複合体アニリン（系Aのようなアニリンでのケトンの還元的アミノ化によって調製）とシクロヘキサンカルボン酸（その調製もまた上記の系Aに記載されている）とのDCCカップリングによって調製する。
【０２３３】
有機合成分野の当業者は、他の複素非環式コアエストレンアナログを誘導するこれらの経路の多数の変形形態を容易に想定することができる。触媒的水素化を使用して、対応する複素非環式コアエストランアナログを調製することもできる。一定の合成では、官能基の相互作用を回避するために保護基の使用が必要であり得る。
【０２３４】
炭素環式コアを有するエストラトリエノールの合成
炭素環式コアを有する種々のエストラトリエノールの合成例を、スキーム5Cに示す。
【０２３５】
エストラジオールの種々のA環フェノール異性体が公知であり、これらを、17-水酸基の脱水およびその後の16-デヒドロ-ステロイドの水素化によって対応する炭素環式エストラトリエノール（スキームA）に変換することができる。
【０２３６】
炭素環式コアを有するセコ-エストラトリエノール（系B）を、先のスキーム3Cの系Cに例示した同一の方法および関連する方法を使用した環分解によって調製することができる。この例は、市販の6-デヒドロエストラジオールから出発する。B環を、オゾン分解（A環フェノールに影響を与えるので過剰酸化しないように気をつける）およびその後のオゾン化物のジメチルスルフィドでの処理による穏やかな還元的混合によって切断する。得られたジアルデヒドを、ヒドラジンおよび濃KOH溶液を使用した二重ウォルフ−キシュナー還元またはアルデヒドのトシルヒドラゾンへの変換、およびこれに続くシアノボロ水素化ナトリウムでの還元を含むカグリオッティー反応によってジメチルアナログに変換する。17-水酸基を、上記の系A中の合成のように脱水および触媒的水素化によって除去する。
【０２３７】
環拡大（ノル-エストラトリエノール、系C）および環縮小（ホモ-エストラトリエノール、系C）を、スキーム3C（それぞれ系Aおよび系B）で概説の同一の方法によって調製することができる。
【０２３８】
複素環式コアおよび複素非環式コアを有するエストラトリエノールの合成
複素環式コアおよび複素非環式コアを有する種々のエストラトリエノールの合成例を、スキーム5Dに示す。
【０２３９】
複素環式エストラトリエノールを、標準的な複素環合成法（Gilchrist,1992；Guptaら、1999；Jouleら、1995；Eicher および Hauptmann, 1995）を使用して調製することができる。ピリミジンコアエストラトリエノールの例（系A）については、先のスキーム4C（系A）で概説の方法を使用することができる。特に、適切なアミジン（または過シリル化アミジン）を、適切な1,3-ジケトンと縮合する。
【０２４０】
典型的なチオフェンコアエストラトリエノールの調製（系B）は、3,4-二置換チオフェンから出発する（スキーム4Cの系Bを参照のこと）。このチオフェンを、1当量のブチルリチウムで金属化し、塩化亜鉛誘導体に変換し（1当量の無水ZnCl2）、次いで、パラジウム触媒ネギシ反応においてp-ヨードフェノールとカップリングする。三置換チオフェン生成物を、アルデヒドによる求電子付加によってさらに置換し、SnCl4などのルイス酸によって触媒して最終チオフェンコアエストラトリエノールを得る。
【０２４１】
複素非環式コアエストラトリエンジオールの例（系C）を、スキーム4Dに類似の経路によって調製する。アミン（スキーム4Dの系Aのように調製）を、パラヒドロキシ安息香酸と縮合させて、記載のアミドを得る。有機合成分野の当業者は、種々の他の複素環式コアおよび複素非環式コアを有するエストラトリエノールアナログ（特に、スキーム4A、4C、および4Dに記載の複素環式および複素非環式エストレンのエストラトリエノールアナログであるもの）を誘導するこれらの経路の多数の変形形態を様に想定することができる。
【０２４２】
骨同化化合物の投与による骨量、骨密度、および／または骨強度の増大方法
好ましいANGELS化合物は、骨同化化合物である。ERKおよびJNKキナーゼの活性化により、血清応答エレメント（SRE）およびAP-1依存性転写がそれぞれ得られる（Hill および Treisman, 1995；Treisman, 1996）。この証拠および17β-エストラジオール（E2）ジヒドロテストステロン（DHT）および非同定エストレンは非ゲノトロピック様式でERKを活性化するがピラゾールは活性化しないという以前の所見（Mortensenら、2001；Sunら、1999）に基づいて、本発明者らは、細胞質ゾルキナーゼから下流のSREまたはAP-1依存性転写に対するこれらリガンドの効果を調査した。たった5分のE2への曝露が、HeLa細胞においてSRE依存性転写活性を刺激し、AP-1依存性転写活性をダウンレギュレーションするのに十分であった（図1A）。さらに、正確には骨芽細胞および骨細胞に対するE2の抗アポトーシス効果について先に記載のように、E2誘導性SRE活性化を、dn MEK（ERKリン酸化を担うキナーゼ）によって遮断した。同様に、SrcまたはSch変異体によってSREに対するE2の効果が取り消された（図2）。dn JNK1変異体によってE2によるAP-1-SEAP活性のダウンレギュレーションが取り消された（図1A）。dn MEKまたはdn AP-1はこの点で有効でないが、これらは基本的AP-1-SEAP活性を減少させた（図3）。まとめると、これらの結果により、E2によるSREおよびAP-1活性の調節はそれぞれ、Src/Shc/ERKシグナル伝達およびJNKカスケードの活性化に起因することが確証される。全長ERαでトランスフェクトしたHeLa細胞中で得られたものに対する同一の効果が、リガンド結合ドメイン(E)のみからなる変異体でトランスフェクトした細胞で証明された（図1A）。Src/Shc/ERKシグナル伝達経路および抗アポトーシスの活性化における初期の所見と完全に一致して、原形質膜に対するEドメインのターゲティング（E-Mem）はSREおよびAP-1の両方に対してホルモン効果を保存し、核に対するターゲティング（E-Nuc）はそのような効果を保存せず、これは、直接的受容体／DNA相互作用がE2によるSRE活性およびAP-1活性の調節に必要ではなく、この効果には受容体タンパク質の核外局在化が必要であることを示す。
【０２４３】
DHTまたは4-エストレン-3α,17β-ジオールで処理したERαトランスフェクトHeLa細胞においてSREの刺激およびAP-1のダウンレギュレーションもまた示されたがピラゾールでは示されず、これは、ER依存性SREおよびAP-1調節が受容体作用の非ゲノトロピック機構を介して起こることを示す（図1B）。重要なことは、ERの代わりに空のベクターでトランスフェクトしたHeLa細胞はE2効果を示さず、これらの現象がER依存性であることが確証された（データ示さず）。にもかかわらず、ARでトランスフェクトしたHeLa細胞を使用して、ERαでトランスフェクトしたHeLa細胞を使用して示されたものと同一の結果が得られ（図4）、これは、ERまたはAR依存性SREおよびAP-1調節が交換可能な性ステロイド／受容体相互作用を介して生じる（すなわち、E2はARを介して作用することができ、DHTはERを介して作用することができる）ことを示す。
【０２４４】
Elk-1、C/EBPβ、およびCREBは、いずれもERKによって活性化することができる転写因子である（Cruzaleguiら、1999；Buckら、1999；Bonniら、1999）。一般に転写および特にこれらの因子がSREの活性化およびエストロゲンの抗アポトーシス効果に関与するかどうかを調査した。RNA合成インヒビターであるアクチノマイシンDまたはタンパク質合成インヒビターであるシクロヘキサミドは、それぞれ細胞の生存可能性に影響を与えることなく、3H-ウリジンまたは3H-ロイシンの取り込みが阻害される用量で、マウス頭蓋冠由来の骨芽細胞のエトポシド誘導性アポトーシスに対するE2の保護効果を取り消した（データ示さず）。さらに、ERαトランス活性化Elk-1を介したE2作用およびこのようなElk-1はホルモンによるSRE SEAP活性の刺激に必要であった（図5）。さらに、dn Elk-1の過剰発現またはMAPKトランス活性化はElk-1変異体を不活化するが野生型対照は不活化せず、E2の抗アポトーシス効果を取り消し、これはアクチノマイシンDの効果と一致し、このことは、抗アポトーシスに転写が必要であることを示す（図1C）。アポトーシスに対するE2の保護効果もまた、C/EBPβまたはCREBのdn変異体によって取り消される。最後に、E2の抗アポトーシス効果は、JNK1またはAP-1のdn構築物によって取り消されるが、恒常的(constitutive)活性JNK1によって取り消されず、これはE2がAP-1-SEAP活性をダウンレギュレーションするという所見と一致する。dn fosはE2効果を妨害せず、AP-1のc-jun成分のみを必要とすることを示す。dn Elk-1、C/EBPb、CREB、JNK1、およびAP-1もまた、ARでトランスフェクトしたHeLa細胞におけるE2またはDHTの保護効果ならびにARまたはERのいずれかでトランスフェクトされた細胞におけるDHTの保護効果を取り消した（図6）。dn Elk-1、C/EBPb、CREB、JNK1、およびAP-1の効果を、内因的にERαおよびβを発現するがARを発現しない骨細胞性MLO-Y4細胞を使用して確認した（データ示さず）。
【０２４５】
Elk-1を取り扱ったデータの一部と完全に一致して、E2によるSRE活性のERK媒介刺激が他の細胞型で証明され（Duanら、2001；De Jagerら、2001；Songら、2002）、これは、いくつかの「非ゲノトロピック」作用が遺伝子転写を変化させることを示す。
【０２４６】
キナーゼは、遺伝子転写の変化を介してのみだけでなく、いかなる転写の変化からも独立したタンパク質の機能活性の改変を介しても細胞生存を調整する（Bonniら、1999；Scheid および Duronio, 1998）。さらに、ERKまたはPI3Kのいずれかがリン酸化を誘導し、それによりプロアポトーシス性タンパク質Badを不活化するという証拠が存在する（Yangら、1995；Scheidら、1999；Peruzziら、1999；Lizcanoら、2000）。エストロゲンまたは4-エストレン-3α,17β-ジオールの抗アポトーシス効果にはBadに対するこれら2つのシグナル伝達カスケードの集中が必要であるかどうかを調べた。リン酸化され得ないdn Bad変異体を発現するHeLa細胞がこれら2つのリガンドのうちのいずれか1つに応答することができないことによって証明されるように、Badのリン酸化および不活化はE2または4-エストレン-3α,17β-ジオールの抗アポトーシス作用に不可欠であることが見出された（図1D）。さらに、ワートマニン（PI3Kインヒビター）もまた、E2の抗アポトーシス効果および4-エストレン-3α,17β-ジオールの効果を弱めるが、SB203580（p38インヒビター）は弱めなかった（図1D）。本明細書中に示されていない研究では、PD98059（ERKのインヒビター）またはワートマニンがBadのE2誘導性リン酸化を取り消すこともまた同定された（Kousteniら、2002）。キナーゼ開始シグナル伝達経路および性ステロイドの抗アポトーシス効果に必要なその下流のエフェクターの略図を、図1Eのモデル中に示す。
【０２４７】
次に、非ゲノトロピックシグナルが骨芽細胞以外の骨細胞に影響を与えるかどうかおよび骨細胞の生存に対するその効果が性に非特異的であるかどうかを試験した。これを行うために、E2、DHT、4-エストレン-3α,17β-ジオール、およびピラゾールの効果を雌および雄由来のマウス骨細胞において骨芽細胞および破骨細胞の生存について比較した。E2、DHT、または4-エストレン-3α,17β-ジオールは用量依存性様式で骨芽細胞の初代培養物におけるエトポシド誘導性アポトーシスを弱めるがピラゾールは弱めないことが見出された。しかし、顕著には、ここでの雌または雄由来の細胞調製物の比較によって、細胞におけるE2、DHT、または4-エストレン-3α,17β-ジオールの有効性に性差は存在しなかった（図7A）。骨芽細胞に対するその効果とは顕著に対照的に、E2、DHT、または4-エストレン-3α,17β-ジオールは、用量依存的様式において3倍も多く破骨細胞のアポトーシスを刺激したが、ピラゾールでは刺激されなかった（培養物中のストロマ／骨芽細胞支持細胞の有無と無関係）。同様に、雌と雄で細胞におけるE2、DHT、または4-エストレン-3α,17β-ジオールの有効性に相違が無かった（図7B）。骨芽細胞または破骨細胞の寿命に対するE2またはDHTの効果は、ERアンタゴニスであるトICI 182,780またはARアンタゴニストであるフルタミドのいずれかによって遮断され、同一の現象がERαまたはARのいずれかでトランスフェクトされたHeLa細胞で証明された（示さず）。U012345またはPP1のいずれか（それぞれERKおよびSrcリン酸化の特異的インヒビター）でのE2またはDHTへの曝露1時間前の破骨細胞の前処理により、性ステロイドおよび4-エストレン-3α,17β-ジオールのプロアポトーシス効果が取り消された（図8）。この所見は、骨芽細胞に対する性ステロイドおよび4-エストレン-3α,17β-ジオールの抗アポトーシス効果の場合のように、破骨細胞に対するそのプロアポトーシス効果にSrc/ERKシグナル伝達経路の活性化が必要であることを強く示唆する。
【０２４８】
マウス骨芽細胞に対するエストロゲンおよびアンドロゲンの抗アポトーシス効果、雌および雄由来の破骨細胞に対するプロアポトーシス効果、ならびにERK活性化を媒介する相互交換可能なリガンド／受容体相互作用のインビトロでの証拠のために、E2およびDHTの骨格に対する効果の性特異性を、性ステロイド欠損マウスで比較した。これらの研究のために、成熟スイスウェブスターマウス（8月齢）、n=8〜10頭／群を、偽操作するか性腺摘出した（GNDX）。次いで、GNDX動物を未処置のままにするか、性腺摘出雌および雄の子宮または精嚢の重量を回復させるために必要な最少用量によって同定した生理学的置換に対応する用量でE2またはDHTを含む徐放ペレットで処置した。4週間および／または6週間後、脊椎の組織学的切片中の骨芽細胞アポトーシス、骨中無機質密度(bone mineral density)（BMD）、エキソビボ骨髄培養物における骨芽細胞生成および破骨細胞生成、血清オステオカルシン、ならびに子宮または精嚢の湿重量を測定した。子宮摘出（OVX）または精巣摘出（ORX）により、骨芽細胞アポトーシスの割合が増加し（図7Cおよび7D）、BMDが低下した（図7Eおよび7F）。同様に、性腺摘出により骨芽細胞生成および破骨細胞生成がアップレギュレーションされた（図9）。これら全ての変化が、マウスの性に無関係にE2またはDHT置換のいずれかで有効に阻害された。E2およびDHTの骨格に対する作用の等価物と対照的に、ORX雄へのE2投与では精嚢重量を回復することができなかったが（図7F）、OVX雌へのDHT投与により子宮の湿重量が回復し（図7E）、これはおそらくDHT用量がE2と比較して300倍多いためである。高DHT用量の子宮への影響は、ラットで以前に証明されている（Tobiasら、1994）。
【０２４９】
4-エストレン-3α,17β-ジオールが古典的な転写に影響を与えることなくERまたはARの非ゲノトロピック機能を選択的に活性化することがインビトロで証明されているので、OVXまたはORXスイスウェブスターマウス由来の骨および生殖組織に対するこの化合物のインビボでの効果をE2またはDHTの効果と比較した。詳細には、60日間で徐放するペレットあたり7.6mgの用量の4-エストレン-3α,17β-ジオールを、上記定義のE2またはDHTのいずれかの置換量と比較した。ERに対するそのより低い結合親和性に基づいて、これらの実験においてE2と比較して約300倍の高用量の4-エストレン-3α,17β-ジオールを決定した（図10）。4-エストレン-3α,17β-ジオールは、体重に対しては効果が無かった。雌における全身および脊髄BMDに対してエストラジオールよりも優れていない場合、4-エストレン-3α,17β-ジオールは顕著に有効であった（実験手順のさらなる詳述中の統計分析を参照のこと）。なおさらに顕著には、4-エストレン-3α,17β-ジオールを投与したOVXマウスは、E2を代わりに投与したOVXマウスだけでなくエストロゲン豊富な偽対照と比較して後肢で一貫してBMDがより大きく変化し、これは、大部分が皮質骨のこの部位での同化効果（すなわち、新規の骨の付加）を示す（図11AおよびB）。ORXマウスでDHT置換よりも優れていない場合に、ORX+4-エストレン-3α,17β-ジオール群の脊柱におけるBMDと少なくとも同等の有効性も示すが、ORX+DHTでは示さない4-エストレン-3α,17β-ジオールは、非処置ORX群よりも有意に高かった（図11C）。脊柱において4-エストレン-3α,17β-ジオールがエストラジオールと少なくとも同等に有効であるという主張と一致して、4-エストレン-3α,17β-ジオール処置した雌マウスの脊椎における骨圧縮強度は、E2を投与したマウスよりも高い。しかし、雄マウスでは、4-エストレン-3α,17β-ジオールおよびDHTは等しく有効である（図12A）。重要なことに、骨髄腔の予想される望ましくない閉鎖効果をもたらすE2の薬理学的用量（マウスの置換用量の100倍）と対照的に、4-エストレン-3α,17β-ジオールは骨髄腔に対しては有害な作用は無かった（図12B）。そのインビトロでの性質に一致して、4-エストレン-3α,17β-ジオールは、性腺摘出雌または雄の脊椎における骨芽細胞および破骨細胞のアポトーシスの割合の増加を阻害した（図12C）。
【０２５０】
4-エストレン-3α,17β-ジオールに対するE2の骨格に対する効果の個別のプロフィールを説明することが可能な細胞機構の手がかりを得るために、遠位大腿骨幹端および脊椎（L1〜L4）の組織形態計測分析を行った。卵巣摘出後の大腿骨で利用可能な一定限度量の海綿骨組織において組織形態計測値は非常に変動し、この分析の目的には実用的ではない（示さず）。対照的に、遠位大腿骨幹端とほぼ同量の海綿骨組織を集合的に含む4つの脊椎を使用する場合、サンプルの変動は限定的である。E2で処置したOVXマウスと比較して、4-エストレン-3α,17β-ジオールを投与したマウスは、皮質骨および子柱の幅が有意に広くなった（それぞれ、27.8％および33.9％）（図13AおよびB）。最も顕著には、4-エストレン-3α,17β-ジオールで処置したマウスの子柱における骨芽細胞数は、E2処置群のそれよりも多く（319％）（図13C）、これと一致して、骨芽細胞によって産生される非鉱化基質（類骨境界）もまた、270％に増加した（図13D）。骨形成速度（図13E）および破骨細胞数（図13F）は、OVX群と比較してE2または4-エストレン-3α,17β-ジオールのいずれかによって抑制された。これらの所見により、骨の代謝回転における卵巣摘出に誘導される増加の抑制におけるE2置換用量の妥当性が確認され、これはBMD所見を支持する。最後に、BMDデータおよび4-エストレン-3α,17β-ジオールで処置したマウスにおけるより多数の破骨細胞と一致して、血清オステオカルシン（骨芽細胞数の生化学的指標）は、2つの別の実験においてOVX+E2だけでなくエストロゲンもまた豊富である偽対照と比較して高かった（図13G）。
【０２５１】
最も顕著には、骨に対するその効果を考慮して、E2またはDHTと異なり、4-エストレン-3α,17β-ジオールは、性腺摘出したマウスの子宮または精嚢重量に影響を与えなかった（図14AおよびB）。生殖組織に対しては4-エストレン-3α,17β-ジオールが効果がないことを、子宮の組織学的分析によって確認した（図14C）。最後に、E2またはピラゾールと異なり、4-エストレン-3α,17β-ジオールは、MCF-7の細胞増殖を刺激しなかった（図14D）。3つのリガンドはいずれもER陰性MDA-MB-2321細胞の増殖には影響を与えなかった（データ示さず）。
【０２５２】
ANGELS活性についての化合物の迅速なスクリーニング系を、図15に示す。エストロゲン受容体α（ERα）およびエストロゲン受容体β（ERβ）の両方について4-エストレン-3α,17β-ジオールに関する10個の化合物の親和性を同定する競合放射測定結合アッセイ（Carlsonら、1997）の結果を図15Aに示す。親和性を、本質的に結合標準エストラジオールの親和性と比較した％スケールの相対結合親和性（RBA）値として報告する（エストラジオールのRBAは100である）。図15Aにおける化合物番号に関して、化合物1、5、9、および10のみが、ERαまたはERβのいずれかに対して実質的な親和性を有し（すなわち、いずれかの受容体に対して0.1よりも高いRBA値）、他の6つの化合物のRBA値は0.1未満であることがわかる。
【０２５３】
これらの同一の10個の化合物を、レポーター遺伝子アッセイ（Kousteniら、2001）において10-8Mの単一濃度でそのゲノトロピック活性（図15B）についてスクリーニングする。（図15B、上のパネル）。このスクリーニングから、5つの化合物（1、5、6、9、および10）が実質的なゲノトロピック活性を示す（すなわち、これらの化合物はレポーター遺伝子をビヒクル対照（Veh）および4-エストレン-3α,17β-ジオール（4-ED）を超えるレベルに活性化し、いくつかの場合（1、9、および10）、エストラジオール（E2）付近のレベルに活性化する）ことが証明される。したがって、これらの化合物は実質的なゲノトロピック活性を示すので、ANGELS化合物ではない。レポーター遺伝子アッセイにおいて最少の活性から活性を示さない5つの化合物（2、3、4、7、8）を、用量応答アッセイにおいてその抗アポトーシス活性についてさらに試験した（図15B、下のパネル）。これらの５つ全ては、エトポシド誘導性アポトーシスを逆転する高い能力を有することが見出され（Kousteniら、2001）、ANGELSであると見なす。
【０２５４】
実験手順のさらなる詳細
プラスミド：SRE-およびAP-1-SEAPを、Clontech Laboratories（Palo Alto, CA）（Duanら、2001）から購入した。ElkCおよびElkC383/389ならびにdn Elk-1を、S.Safe, Taxas A & M Universityから入手した。GAL4-lucを、M. Karin, University of California, San Diegoから入手した（Tian および Karin, 1999）。ヒトERαリガンド結合ドメイン（E）、E-Mem、およびE-Nuc変異体ならびにwt SrcおよびSrcK295M（Src K-）のcDNA、野生型（wt）、またはShc変異体およびdn MEKの構築は以前に記載されていた（Kousteniら、2001）。JNK1およびdn JNK1を、R.J.Davis, University of Massachusettsから入手した（Whitmarshら、1995）。セリン112、136、および155がアラニン（AAA）に変異したBAD変異体は、X-M Zhou（Apoptosis Technology, Inc. Cambridge, MA）（Zhouら、2000）から提供された。dn CREBおよびdn C/EBPβは、C.Vinson（国立癌研究所、国立衛生研究所、Bethesda, MD）（Ahnら、1998）から提供された。dn AP-1（TAM67）は、T.Chambers（University of Arkansas for Medical Sciences, Little Rock, AR）（Brownら、1994）から提供された。
【０２５５】
一過性トランスフェクションおよびレポーターアッセイ：リポフェクタミンプラス（Life Technologies Inc.）を使用して、HeLa細胞をトランスフェクトした。レポーターアッセイ（ルシフェラーゼまたは分泌性アルカリホスファターゼSEAP）のために、血清枯渇細胞を示したステロイドで15分間処理し、その後にステロイド含有培地を除去し、細胞を1％BSAを含むPBSで2回洗浄し、ステロイドを含まない新鮮な培地を添加した。6時間後にそれぞれ製造者の説明書に従ってGreat EscAPe SEAP化学発光キット（Clontech, Palo Alto, CA）またはデュアルルシフェラーゼキット（Promega, Madison, WI）を使用して、SEAPまたはルシフェラーゼアッセイを行った。両レポーター活性を、ウミシイタケルシフェラーゼ活性に対して正規化した。
【０２５６】
MCF-7細胞増殖アッセイ：MCF-7細胞を10-8M ICI 182,780の存在下で96時間血清を枯渇させ、その後にICI含有培地をビヒクルまたは10-12〜10-7Mの示したステロイドを含む培地でさらに48時間置換した。その時点で、以前に記載のように（Bellidoら、1997）3Hチミジン取り込みの測定によって、増殖をアッセイした。
【０２５７】
インビトロでのアポトーシス細胞の定量：HeLa細胞または頭蓋冠由来の骨芽細胞のアポトーシスを、以前に記載のように（Kousteniら、2001）核の形態変化の直接的視覚化またはトリパンブルー染色によって定量した。30ng/mlのM-CSFおよび30ng/mlの可溶性RANKリガンドとともに培養した骨髄由来の破骨細胞のアポトーシスを、以前に記載されたような（Weinsteinら、2002）カスパーゼ3活性の測定によって定量した。
【０２５８】
骨デンシトメトリー、組織形態計測、骨切片における骨芽細胞アポトーシス、椎骨圧縮試験、およびオステオカルシン測定：DEXAによる生体マウスの骨ミネラル密度（BMD）、静的および動的組織形態計測分析、および脱石灰されていない骨切片のインサイチュニック末端標識（ISEL）による骨芽細胞アポトーシスを以前に記載（Weinsteinら、2002）されたように実施した。骨圧縮強度を、単一カラム物質試験機械、較正した伸張／圧縮負荷細胞およびMerlin IX分析ソフトウエア（Model 5542, Instron Corp., Canton, MA）を使用して測定した。記載されるよう（Weinstein, 2002）に、堵殺の日に周りの軟部組織から第五腰椎を取り除いて、ガーゼで包み、37°±0.5Cの通常の生理食塩水に浸し、試験した。骨の長さ、幅および深さを0.01mmの解像力でデジタルカリパス（Mitutoyo #500-196, Ace Tools, Ft. Smith, AR）で記録した。断面積を楕円と仮定してA=0.25π（幅）（深さ）として計算した。圧縮を妨げる関節および棘突起をアイリスはさみで摘出した。0.5ニュートン未満の適用負荷で予め閉じた後、椎骨を、下段テーブル（生検の終板における不整を調整することによってずれを最小にする小型の丸いシート）を用いてねじ駆動荷重テーブルの間で圧縮した。負荷を破損まで0.5mm/分の速度で尾方から頭方の軸に沿って適用した場合、最もよい材料が得られた。最大負荷およびずれを記録し、最大強度または応力を圧縮測定値および椎骨寸法から計算した。血清オステオカルシン濃度を、以前に記載（Jilkaら、1998）されたように、ラジオイムノアッセイ（Biomedical Technologies Inc., Stoughton, MA）により測定した。
【０２５９】
骨芽細胞および破骨細胞前駆体の定量：マウス大腿部骨髄細胞から得た骨芽細胞および破骨細胞前駆体の数を以前に記載（Jilkaら、1998）されたように測定した。
【０２６０】
統計分析：ANOVAを使用して、処理効果を検出した。具体的には、図１〜６および８において、Dunnett試験（Kuehlら、2002）を使用して、ビヒクル対照群と比較した種々の処理の間の差を検出した。図７ＡおよびＢに示した種々の化合物の効力における差を検出するため、用量応答曲線を、線形傾向についての試験（Kuehl, 2002）を使用して比較した。Bonferrini法を使用して、図７ＥおよびＦ、図１１Ａ、Ｂ、Ｃ、図１２Ａ、図１３、図１４ＡおよびＢならびに図９における処理群の全てのペア比較を実施した。正規性仮定は図３ＣおよびＣならびに図１２Ｃにおけるデータで合わなかったので、Wilcoxonの順位合計試験（rank sum test）（Steelら、1997）を使用して、Bonferroni校正を用いた処理群の全てのペア比較を実施した。図１４Ｄにおいて、両変分ANOVAを使用して、処理および用量効果を検出し、線形傾向についての試験を続いて利用して、各化合物の有意な効果を測定した。図１０において、ロジスティック回帰を使用して、EC50を評価し、次いでEC50を使用して、相対結合親和性を測定した。６および８月齢雌マウスに関する２つの実験の間で、両変分ANOVAによって、BMD、血清オステオカルシン、および子宮重量測定値に有意差はなかった。さらに、２つの実験の全域で処理効果における有意差はなかった。従って、２つの実験におけるこれらの測定値に対応するデータをプールし、図１１Ｂ、１３Ｇ、および１４Ａなどに示した。
【０２６１】
前述の本発明は特定の好ましい態様に関して記載されているが、他の態様は、本明細書の開示を考慮すれば当業者にとって明らかとなる。従って、本発明は、好ましい態様の詳説によって限定されると意図されない。
【０２６２】
参考文献
【０２６３】
【表１１−１】
2005511489.tif 000046
【０２６４】
【表１１−２】
2005511489.tif 000047
【０２６５】
【表１１−３】
2005511489.tif 000048
【０２６６】
【表１１−４】
2005511489.tif 000049
【０２６７】
【表１１−５】
2005511489.tif 000050
【０２６８】
【表１１−６】
2005511489.tif 000051
【０２６９】
【表１１−７】
2005511489.tif 000052
【０２７０】
【表１１−８】
2005511489.tif 000053
【０２７１】
【表１１−９】
2005511489.tif 000054
【図面の簡単な説明】
【０２７２】
【図１Ａ】図１Ａは、細胞質キナーゼの非ゲノトロピック活性化ならびに下流転写依存性事象および下流転写非依存性事象が性ステロイドの抗アポトーシス効果に必要とされることを示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、細胞質キナーゼの非ゲノトロピック活性化ならびに下流転写依存性事象および下流転写非依存性事象が性ステロイドの抗アポトーシス効果に必要とされることを示す。
【図１Ｃ】図１Ｃは、細胞質キナーゼの非ゲノトロピック活性化ならびに下流転写依存性事象および下流転写非依存性事象が性ステロイドの抗アポトーシス効果に必要とされることを示す。
【図１Ｄ】図１Ｄは、細胞質キナーゼの非ゲノトロピック活性化ならびに下流転写依存性事象および下流転写非依存性事象が性ステロイドの抗アポトーシス効果に必要とされることを示す。
【図１Ｅ】図１Ｅは、細胞質キナーゼの非ゲノトロピック活性化ならびに下流転写依存性事象および下流転写非依存性事象が性ステロイドの抗アポトーシス効果に必要とされることを示す。
【図１Ｆ】図１Ｆは、細胞質キナーゼの非ゲノトロピック活性化ならびに下流転写依存性事象および下流転写非依存性事象が性ステロイドの抗アポトーシス効果に必要とされることを示す。
【図２】図２は、エストロゲンによるSRE-SEAPの転写調節がSrc/Shc/ERKシグナル伝達経路を必要とすることを示す。
【図３】図３は、エストロゲンによるAP-1-SEAPの転写調節がJNKシグナル伝達経路を必要とすることを示す。
【図４】図４は、SRE-依存性転写およびAP-1-依存性転写が、性非特異的、非ゲノトロピック機構を介してはたらくことを示す。
【図５】図５Ａ〜Ｂは、Elk-1のエストラジオール誘導性リン酸化が、SRE-SEAPのERa媒介性活性化に必要とされることを示す。
【図６】図６は、Elk-1、C/EBPβ、CREBおよびJNK1/AP-1の調節を伴う転写効果が、ERまたはARのいずれかによる性ステロイドの抗アポトーシス効果に必要とされることを示す。
【図７−１】図７Ａ〜Ｂは、雌および雄マウスにおけるエストロゲンおよびアンドロゲンの骨格性であるが生殖でない作用の同等性を示す。
【図７−２】図７Ｃ〜Ｄは、雌および雄マウスにおけるエストロゲンおよびアンドロゲンの骨格性であるが生殖でない作用の同等性を示す。
【図８】図８は、破骨細胞に対する性ステロイドのプロアポトーシス効果がSrc/ERKシグナル伝達を必要とすることを示す。
【図９−１】図９Ａは、雌および雄マウスにおけるエストロゲンおよびアンドロゲンの骨格性作用の同等性を示す。
【図９−２】図９Ｂ〜Ｃは、雌および雄マウスにおけるエストロゲンおよびアンドロゲンの骨格性作用の同等性を示す。
【図９−３】図９Ｄは、雌および雄マウスにおけるエストロゲンおよびアンドロゲンの骨格性作用の同等性を示す。
【図１０】図１０Ａ〜Ｃは、全長ヒトERαおよびERβに対する4-エストレン-3α,17β-ジオール（ABX102）の相対的結合親和性を示す。
【図１１Ａ】図１１Ａは、4-エストレン-3α,17β-ジオール（4-Ed）を受けた去勢マウスにおける骨密度の増加を示す。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、4-エストレン-3α,17β-ジオール（4-Ed）を受けた去勢マウスにおける骨密度の増加を示す。
【図１１Ｃ】図１１Ｃは、4-エストレン-3α,17β-ジオール（4-Ed）を受けた去勢マウスにおける骨密度の増加を示す。
【図１２Ａ】図１２Ａは、4-エストレン-3α,17β-ジオール（4-Ed）を受けたマウスにおける脊柱圧縮強度の増加、骨髄窩の予防および骨芽細胞アポトーシスの予防を示す。
【図１２Ｂ】図１２Ｂは、4-エストレン-3α,17β-ジオール（4-Ed）を受けたマウスにおける脊柱圧縮強度の増加、骨髄窩の予防および骨芽細胞アポトーシスの予防を示す。
【図１２Ｃ】図１２Ｃは、4-エストレン-3α,17β-ジオール（4-Ed）を受けたマウスにおける脊柱圧縮強度の増加、骨髄窩の予防および骨芽細胞アポトーシスの予防を示す。
【図１３−１】図１３Ａ〜Ｄは、4-エストレン-3α,17β-ジオール（4-Ed）を受けた卵巣除去マウスにおける小柱幅および皮質幅、骨芽細胞数ならびに血清オステオカルシンの増加を示す。
【図１３−２】図１３Ｅ〜Ｇは、4-エストレン-3α,17β-ジオール（4-Ed）を受けた卵巣除去マウスにおける小柱幅および皮質幅、骨芽細胞数ならびに血清オステオカルシンの増加を示す。
【図１４−１】図１４Ａ〜Ｂは、雌および雄の生殖組織または乳癌細胞に対する4-エストレン-3α,17β-ジオール（4-Ed）の効果の欠如を示す。
【図１４−２】図１４Ｃは、雌および雄の生殖組織または乳癌細胞に対する4-エストレン-3α,17β-ジオール（4-Ed）の効果の欠如を示す。
【図１４−３】図１４Ｄは、雌および雄の生殖組織または乳癌細胞に対する4-エストレン-3α,17β-ジオール（4-Ed）の効果の欠如を示す。
【図１５Ａ】図１５Ａは、4-エストレン-3α,17β-ジオール（4-ED）に関連する化合物（スキーム１Ａの）のゲノトロピック活性対非ゲノトロピック活性のスクリーニングの結果を示す。
【図１５Ｂ】図１５Ｂは、4-エストレン-3α,17β-ジオール（4-ED）に関連する化合物（スキーム１Ａの）のゲノトロピック活性対非ゲノトロピック活性のスクリーニングの結果を示す。
【図１６Ａ】スキーム１Ａ（図１６Ａ）は、種々の好ましいエストレン、エストラン、アンドロステンおよびアンドロスタンの化学構造を示す。
【図１６Ｂ】スキーム１Ｂ（図１６Ｂ）は、好ましいエストレン、エストラン、アンドロステンおよびアンドロスタンの一般構造を示す。
【図１６Ｃ】スキーム１Ｃ（図１６Ｃ）は、種々のエストレン、エストラン、アンドロステンおよびアンドロスタンの好ましい合成を示す。
【図１７Ａ】スキーム２Ａ（図１７Ａ）は、有効性変更置換基を有するエストレン、エストレンアナログおよび誘導体の一般構造を示す。
【図１７Ｂ】スキーム２Ｂ（図１７Ｂ）は、有効性変更置換基を有するエストレンアナログの好ましい合成を示す。
【図１８Ａ】スキーム３Ａ（図１８Ａ）は、エストレンの好ましいホモ−、ノル−、セコ−およびシクロ−アナログの化学構造を示す。
【図１８Ｂ】スキーム３Ｂ（図１８Ｂ）は、エストレンの好ましいホモ−、ノル−、セコ−およびシクロ−アナログの一般構造を示す。
【図１８Ｃ】スキーム３Ｃ（図１８Ｃ）は、エストレンの種々のホモ−、ノル−、セコ−およびシクロ−アナログの好ましい合成を示す。
【図１９Ａ】スキーム４Ａ（図１９Ａ）は、エストレンの種々の好ましい複素環式および複素非環式アナログを示す。
【図１９Ｂ】スキーム４Ｂ（図１９Ｂ）は、エストレンの好ましい複素環式および複素非環式アナログの一般構造を示す。
【図１９Ｃ】スキーム４Ｃ（図１９Ｃ）は、エストレンの種々の複素環式アナログの好ましい合成を示す。
【図１９Ｄ】スキーム４Ｄ（図１９Ｄ）は、エストレンの種々の複素非環式アナログの好ましい合成を示す。
【図２０Ａ】スキーム５Ａ（図２０Ａ）は、種々の好ましいエストラトリエンアナログの化学構造を示す。
【図２０Ｂ】スキーム５Ｂ（図２０Ｂ）は、好ましいエストラトリエノールアナログの一般構造を示す。
【図２０Ｃ】スキーム５Ｃ（図２０Ｃ）は、種々の炭素環式エストラトリエノールアナログの好ましい合成を示す。
【図２０Ｄ】スキーム５Ｄ（図２０Ｄ）は、種々の複素環式コアおよび複素非環式コアエストラトリエノールアナログの好ましい合成を示す。
【図１Ａ】
2005511489.tif 000077
【図１Ｂ】
2005511489.tif 000078
【図１Ｃ】
2005511489.tif 000079
【図１Ｄ】
2005511489.tif 000080
【図１Ｅ】
2005511489.tif 000081
【図１Ｆ】
2005511489.tif 000082
【図２】
2005511489.tif 000083
【図３】
2005511489.tif 000084
【図４】
2005511489.tif 000085
【図５】
2005511489.tif 000086
【図６】
2005511489.tif 000087
【図７−１】
2005511489.tif 000088
【図７−２】
2005511489.tif 000089
【図８】
2005511489.tif 000090
【図９−１】
2005511489.tif 000091
【図９−２】
2005511489.tif 000092
【図９−３】
2005511489.tif 000093
【図１０】
2005511489.tif 000094
【図１１Ａ】
2005511489.tif 000095
【図１１Ｂ】
2005511489.tif 000096
【図１１Ｃ】
2005511489.tif 000097
【図１２Ａ】
2005511489.tif 000098
【図１２Ｂ】
2005511489.tif 000099
【図１２Ｃ】
2005511489.tif 000100
【図１３−１】
2005511489.tif 000101
【図１３−２】
2005511489.tif 000102
【図１４−１】
2005511489.tif 000103
【図１４−２】
2005511489.tif 000104
【図１４−３】
2005511489.tif 000105
【図１５Ａ】
2005511489.tif 000106
【図１５Ｂ】
2005511489.tif 000107
【図１６Ａ】
2005511489.tif 000108
【図１６Ｂ】
2005511489.tif 000109
【図１６Ｃ】
2005511489.tif 000110
【図１７Ａ】
2005511489.tif 000111
【図１７Ｂ】
2005511489.tif 000112
【図１８Ａ】
2005511489.tif 000113
【図１８Ｂ】
2005511489.tif 000114
【図１８Ｃ】
2005511489.tif 000115
【図１９Ａ】
2005511489.tif 000116
【図１９Ｂ】
2005511489.tif 000117
【図１９Ｃ】
2005511489.tif 000118
【図１９Ｄ】
2005511489.tif 000119
【図２０Ａ】
2005511489.tif 000120
【図２０Ｂ】
2005511489.tif 000121
【図２０Ｃ】
2005511489.tif 000122
【図２０Ｄ】
2005511489.tif 000123
【国際調査報告】
2005511489.tif 000124