(57)【要約】本発明は、ウイルス感染のインヒビターであり、そして／または抗融合特性を示すＣ３４ペプチド誘導体に関する。詳細には、本発明は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＶ）、麻疹ウイルス（ＭｅＶ）、およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）のウイルス感染の処置について長期間の作用を有する、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＶ）、麻疹ウイルス（ＭｅＶ）、およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）のウイルスに対する阻害活性を有するＣ３４誘導体に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式Ｉ〜ＶＩＩＩの化合物：
［化１−１］
2005500274.tif 000007
［化１−２］
2005500274.tif 000008
。
【請求項２】
薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせた請求項１に記載の化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項３】
ＨＩＶ、ＲＳＶ、ＨＰＶ、ＭｅＶ、またはＳＩＶの活性を阻害するための、請求項２に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
被験体におけるＨＩＶ、ＲＳＶ、ＨＰＶ、ＭｅＶまたはＳＩＶの活性を阻害するための方法であって、該方法は、有効量の請求項１に記載の化合物を単独または薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせて投与する工程を包含する、方法。
【請求項５】
血液成分に共有結合された請求項１に記載の化合物を含む結合体。
【請求項６】
請求項１に記載の化合物のインビボでの半減期を延長させる方法であって、該方法は、血液成分に該化合物を共有結合させる工程を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウイルス感染のインヒビターであり、そして／または抗融合（ａｎｔｉｆｕｓｏｇｅｎｉｃ）特性を示すＣ３４ペプチド誘導体に関する。詳細には、本発明は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＶ）、麻疹ウイルス（ＭｅＶ）、およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）のウイルス感染の処置について長期間の作用を有する、各々のウイルスに対する阻害活性を有するＣ３４誘導体に関する。
【背景技術】
【０００２】
膜融合事象は、正常な細胞生物学的過程において通常のことであるが、例えば、細胞への被覆したウイルスの進入を含む、種々の疾患状態にもまた関連する。ペプチドは、膜融合関連事象を阻害するか、そうでなければ破壊すること（例えば、感染していない細胞へのレトロウイルスの伝播を阻害することを含む）が知られている。
【０００３】
ＨＩＶは、レトロウイルスのレンチウイルスファミリーのメンバーであり、そして２つ有力な型のＨＩＶ（ＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２）が存在し、各々の種々の系統が同定されている。ＨＩＶは、ＣＤ−４＋細胞を標的化し、そしてウイルスの進入は、細胞表面上のＣＤ４糖タンパク質およびケモカインレセプターへのＨＩＶタンパク質ｇｐ１２０の結合に依存する。Ｃ３４は、ＨＩＶに対する抗ウイルス活性を示すこと（遊離のウイルスによるＣＤ−４＋細胞感染を阻害することおよび／または感染したＣＤ−４＋細胞と感染していないＣＤ−４＋細胞との間のＨＩＶ誘導性合胞体形成を阻害することを含む）が知られている。この阻害は、ｇｐ４１における第一の７回反復領域（ｈｅｐｔａｄ  ｒｅｐｅａｔ  ｒｅｇｉｏｎ）にＣＤ３４を結合し、それにより第一の７回反復領域および第二の７回反復領域が融合性ヘアピン構造を形成するのを防ぐことにより生じると考えられている。
【０００４】
Ｃ３４は、抗融合活性を有すること（すなわち、２つ以上の実体の間（例えば、ウイルス−細胞、細胞−細胞）での膜融合事象を阻害するか、またはそのペプチドの非存在下で生じる膜融合のレベルに対してそのレベルを減少させること）が知られている。より詳細には、ＷＯ  ００／０６５９９は、ｇｐ４１を不活性化し、それにより細胞へのＨＩＶ−１進入を阻害するかまたは減少させるためのＣ３４の使用を教示する。
【０００５】
当該分野において記載される多くの抗ウイルスペプチドまたは抗融合ペプチドは、強力な抗ウイルス活性および／または抗融合活性を示すが、Ｃ３４は、全てのそのようなペプチドのように、主に血清の迅速な除去ならびにペプチダーゼ活性およびプロテアーゼ活性に起因するインビボでの短い半減期の影響を受ける。次いで、このことは、有効な抗ウイルス活性を有意に減少させる。
【０００６】
従って、抗融合活性に実質的に影響することなく、Ｃ３４のようなペプチドのインビボでの半減期を延長させる方法の必要性が存在する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（発明の要旨）
本発明に従い、対応する改変されていないＣ３４ペプチドと比較した場合、延長されたインビボでの半減期を有する新規に提供されるＣ３４ペプチド誘導体が存在する。より詳細には、本発明は、血液成分のチオール基と反応して、インビボまたはエキソビボのいずれかで安定な共有結合を形成し得る、以下に例示される式Ｉ〜ＶＩＩＩの化合物に関連する。
【０００８】
【化２−１】
2005500274.tif 000002
【０００９】
【化２−２】
2005500274.tif 000003
【００１０】
【化２−３】
2005500274.tif 000004
好ましい血液成分は、タンパク質（例えば、免疫グロブリン（ＩｇＧおよびＩｇＭを含む）、血清アルブミン、フェリチン、ステロイド結合タンパク質、トランスフェリン、チロキシン結合タンパク質、α−２−マクログロブリン等）を含み、血清アルブミンおよびＩｇＧがより好ましく、そして血清アルブミンが最も好ましい。
【００１１】
本発明の別の局面において、薬学的に受容可能なキャリアとくみ合わせて式Ｉ〜ＶＩＩＩの誘導体を含む薬学的組成物が提供される。そのような組成物は、ＨＩＶ、ＲＳＶ、ＨＰＶ、ＭｅＶまたはＳＩＶの活性を阻害するのに有用である。
【００１２】
本発明のさらなる実施形態において、ＨＩＶ、ＲＳＶ、ＨＰＶ、ＭｅＶまたはＳＩＶの活性を阻害するための方法が提供される。この方法は、被験体（好ましくは哺乳動物）に、有効量の式Ｉ〜ＶＩＩＩの化合物またはその結合体を、単独でかまたは薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせて投与する工程を包含する。
【００１３】
本発明のさらなる局面において、血液成分に共有結合された式Ｉ〜ＶＩＩＩの化合物を含む結合体が提供される。
【００１４】
本発明のさらなる局面において、被験体におけるＣ３４ペプチドのインビボでの半減期を延長するための方法が提供され、この方法は、血液成分に式Ｉ〜ＶＩＩＩの化合物を共有結合させる工程を包含する。
【００１５】
（発明の詳細な説明）
本発明は、これらおよび他の必要性に対処し、そして抗ウイルス活性および／または抗融合活性を有する式Ｉ〜ＶＩＩＩのＣ３４ペプチド誘導体に関する。これらのＣ３４ペプチド誘導体は、インビボでの増大された安定性およびペプチダーゼ消化またはプロテアーゼ消化に対する減少された感受性を提供する。結果として、式Ｉ〜ＶＩＩＩの化合物は、ペプチドのより頻繁であるかまたは連続的でさえある、投与の必要性を最小限にする。本発明のＣ３４誘導体が、例えば、多数のウイルス（ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＶ）、麻疹ウイルス（ＭｅＶ）、およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）を含む）に対する予防薬および／または処置として使用され得る。
【００１６】
ネイティブのＣ３４ペプチド配列に対する改変により、そのペプチドが血液成分の利用可能なチオール基と反応して安定した共有結合を形成することを可能にする。本発明の１つの実施形態において、血液成分は、移動血液タンパク質（例えば、アルブミン（これが最も好ましい））を含む血液タンパク質を含む。
【００１７】
式Ｉ〜ＶＩＩＩの化合物は、細胞のウイルス感染（例えば、細胞−細胞融合または遊離ウイルスの感染）を阻害する。感染経路は、被覆もしくはカプセル化されたウイルスにおいて生じるような膜融合、またはウイルス構造および細胞構造に関与するいくつかの他の融合事象に関与し得る。
【００１８】
本発明の抗ウイルスＣ３４誘導体が共有結合する血液成分は、固定化されていても移動性でもよい。固定化された血液成分は、非移動性血液成分であり、組織、膜レセプター、間質タンパク質、フィブリンタンパク質、コラーゲン、血小板、内皮細胞、上皮細胞およびそれらの結合される膜レセプターおよび膜性レセプター、全身性体細胞、骨格筋細胞および平滑筋細胞、神経成分、骨細胞ならびに全ての体組織（特に循環系およびリンパ系に関連する全ての体組織が挙げられる。移動性血液成分は、任意の延長された期間にわたり（一般的には、５分間を超えず、より一般的には１分間を超えない）固定された位置を有さない。これらの血液成分は、膜に結合されておらす、そして延長された期間にわたり血液中に少なくとも０．１μｇ／ｍｌの最小濃度で存在する。移動性血液成分としては、血清アルブミン、トランスフェリン、フェリチンおよび免疫グロブリン（例えば、ＩｇＭおよびＩｇＧ）が挙げられる。移動性血液成分の半減期は、少なくとも約１２時間である。
【００１９】
保護基は、本発明のＣ３４誘導体の合成プロセスの間、必要とされ得る。これらの保護基は、ペプチド合成の分野において慣用的であり、そして一般的にペプチド誘導体を他の官能基との反応から保護し得る化学基として記載され得る。種々の保護基が、市販されており、それらの例は、米国特許第５，４９３，００７号（本明細書中に参考として援用される）に見出され得る。適切な保護基の代表的な例としては、アセチル、フルオレニルメチルオキしカルボニル（ＦＭＯＣ）、ｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）などが挙げられる。さらに、表１は、アミノ酸の３文字表記および１文字表記の両方を提供する。
【００２０】
【表１】
2005500274.tif 000005
本発明のＣ３４誘導体は、血液成分との結合体がインビボで生じるようにインビボで投与され得るか、またはそれらは最初にインビトロで血液成分と結合体化され、そしてインビボで投与された結合体化誘導体を生じ得る。
【００２１】
本発明は、既存の抗ウイルスペプチドおよび抗融合ペプチドを示す特性を利用する。これらのペプチドにより阻害され得るウイルスとしては、例えば、米国特許第６，０１３，２６３号および米国特許第６，０１７，５３６号の表Ｖ〜ＶＩＩおよび表ＩＸ〜ＸＩＶに列挙されるウイルスの全ての系統が挙げられるが、これらに限定されない。これらのウイルスとしては、例えば、ヒトレトロウイルス（ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２およびヒトＴリンパ球ウイルス（ＨＴＬＶ−ＩおよびＨＴＬＶ−ＩＩ）を含む）および非ヒトレトロウイルス（ウシ白血病ウイルス、ネコ肉種ウイルス、ネコ白血病ウイルス、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、サル肉腫ウイルス、サル白血病ウイルス、およびヒツジ進行性肺炎ウイルスを含む）が挙げられる。非レトロウイルスはまた、本発明のＣ３４誘導体により阻害され得、これらのウイルスとしては、ヒトＲＳウイルス（ＲＳＶ）、イヌジステンパーウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶ）、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス（ＭｅＶ）、エプスタイン−バーウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、およびサルマソン−ファイザーウイルスが挙げられる。非被覆ウイルスはまた、本発明のＣ３４誘導体により阻害され得、そしてこれらのウイルスとしては、ピコルナウイルス（例えば、ポリオウイルス）、Ａ型肝炎ウイルス、エンテロウイルス、エコウイルス、コクサッキーウイルス、パポバウイルス（例えば、パピローマウイルス）、パルボウイルス、アデノウイルス、およびレオウイルスが挙げられるがこれらに限定されない。
【００２２】
本発明の目的は、タンパク質キャリア上のペプチドの選択的結合体化を通して、このペプチドの抗ウイルス特性を実質的に改変することなく、このペプチドに改善されたバイオアベイラビリティー、延長された半減期、およびより良好な分布を与えるようにＣ３４ペプチド配列を改変することである。本発明のために選択されるキャリアとしては、そのフリーのチオールを通して結合体化されたアルブミンである（これらに限定されない）。
【００２３】
本発明のＣ３４誘導体は、特に、移動性血液タンパク質上のチオール基と反応するように設計されている。そのような反応は、移動性血液タンパク質（例えば、血清アルブミンまたはＩｇＧ）上のチオール基へのマレイミド結合で改変されたペプチドの共有結合により確立される。
【００２４】
チオール基は、インビボで、例えば、アミノ基より豊富ではないので、本発明のマレイミド改変Ｃ３４ペプチドは、より少ないタンパク質に共有結合する。例えば、アルブミン（最も豊富な血液タンパク質）において、単一のチオール基のみが存在する。従って、Ｃ３４−マレイミド−アルブミン結合体は、おおよそ１：１のモル比のＣ３４ペプチド：アルブミンを含む傾向にある。アルブミンに加えて、ＩｇＧ分子（クラスＩＩ）もまた、フリーのチオールを有する。ＩｇＧ分子および血清アルブミンは、血液中の多数の可溶性タンパク質を形成するので、これらはまた、Ｃ３４ペプチド誘導体に共有結合するのに有効な血液中の多数のフリーのチオール基を形成する。
【００２５】
さらに、フリーのチオール含有タンパク質（ＩｇＧを含む）の中においてさえ、マレミドを用いる特定の標識は、アルブミン自体の特有の特徴に起因してＣ３４−マレイミド−アルブミン結合体の優先的な形成を導く。種の中でも高度に保存されている、アルブミンの単一のフリーのチオール基は、アミノ酸残基３４（Ｃｙｓ３４）に位置する。アルブミンのＣｙｓ３４が他のフリーのチオール含有タンパク質上のフリーのチオールに対して、反応性を増加させたことが、最近実証された。このことは、アルブミンのＣｙｓ３４についての５．５という非常に低いｐＫ値に一部起因する。この値は、一般的に、システイン残基についての代表的なｐＫ値（代表的に約８である）より非常に低い。この低いｐＫに起因して、正常な生理学的条件下で、アルブミンのＣｙｓ３４は、大部分がイオン化形態であり、それは、その反応性を劇的に増大させる。Ｃｙｓ３４の低いｐＫ値に加えて、Ｃｙｓ３４の反応性を増大させる別の因子は、その位置であり、その位置は、アルブミンのＶ領域（ｒｅｇｉｏｎ  Ｖ）の１つのループの表面に対して閉じた疎水性ポケットの中である。この位置は、Ｃｙｓ３４を、全ての種類のリガンドに対して非常に有用にし、そしてフリーのラジカルトラップおよびフリーチオールスカベンジャーとしてＣｙｓ３４の生物学的役割において重要な因子である。これらの特性は、Ｃｙｓ３４をマレイミドＣ３４と高度に反応性にし、そしてその反応速度増加は、マレイミドＣ３４と他のフリーのチオール含有タンパク質との反応の速度に対して１０００倍程度に高くあり得る。
【００２６】
Ｃ３４マレイミド−アルブミン結合体の別の利点は、アルブミン（詳細にはＣｙｓ３４）へのＣ３４の１：１での充填に関連する再現性である。他の技術（例えば、グルタルアルデヒド、ＤＣＣ、ＥＤＣおよび例えば、フリーのアミンの他の化学活性化因子（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）は、この選択性を欠く。例えば、アルブミンは、５２個のリジン残基を含み、それらのうち２５〜３０個がアルブミンの表面に位置し、従って、結合体化のために利用可能である。これらのリジン残基を活性化するか、あるいはこれらのリジン残基を介してＣ３４への結合を改変することにより、結合体の異種の集団を生じる。１：１のモル比のＣ３４：アルブミンが使用される場合でさえ、収率は、複数の結合体産物からなり、それらのいくつかは、アルブミン１分子当たり０、１、２個以上のＣ３４を含み、そして各々は、２５〜３０の利用可能なリジン部位のうち任意の１個以上でランダムに結合したＣ３４を有する。多数の可能なくみ合わせをとることにより、正確な組成物および各々の結合体バッチの性質の特徴付けは、困難になり、バッチ−バッチの再現性は、ほとんど不可能であり、このことは、そのような結合体を治療薬として所望されないものにする。さらに、アルブミンのリジン残基を介する結合体化がアルブミン１分子あたりより多くの治療的薬剤を送達するという利点を少なくとも有するようであるが、研究は、治療的薬剤：アルブミンの１：１の比率が好ましいことを示した。Ｓｔｅｈｌｅら、「Ｔｈｅ  Ｌｏａｄｉｎｇ  Ｒａｔｅ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓ  Ｔｕｍｏｒ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ−Ａｌｂｕｍｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｉｎ  Ｒａｔｓ」、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ、Ｖｏｌ．８、ｐｐ．６７７−６８５（１９８８）（その全体が本明細書中に参考として援用される）による論説において、著者らは、グルタルアルデヒドを介する抗癌メトトレキセート：アルブミンの１：１の比率が最も有望な結果を与えたことを報告している。５：１〜２０：１のメトトレキセート分子を有する結合体は、ＨＰＬＣプロファイルを変化し、そしてインビボで迅速に肝臓に取り込まれたが、これらの結合体は優先的に腫瘍細胞により取り込まれ得る。これらの高い比率でのアルブミンに対するコンフォメーション変化が、その治療的キャリアとしての効果を減少させることが想定される。
【００２７】
本発明のＣ３４誘導体のインビボでの調節された投与の間、アルブミンおよびＩｇＧのインビボでの特異的標識が調節され得る。典型的な投与において、投与されたＣ３４誘導体の８０〜９０％がアルブミンを標識し、そして５％未満がＩｇＧを標識する。遊離チオール（例えば、グルタチオン）のトレース標識もまた生じる。このような特異的標識は、Ｃ３４の推定の半減期の正確な計算を可能にするので、インビボでの用途に好ましい。
【００２８】
調節された特異的インビボ標識を提供することに加えて、本発明のＣ３４誘導体は、エキソビボで血清アルブミンおよびＩｇＧの特異的な標識を提供し得る。このようなエキソビボでの標識は、血清アルブミンおよび／またはＩｇＧを含有する血液、血清または生理食塩水溶液へのＣ３４誘導体の添加を含む。一旦、Ｃ３４誘導体とのエキソビボでの複合体化が生じたら、血液、血清または生理食塩水溶液は、インビボ処置のために患者の血液に再投与されても凍結乾燥されてもよい。
【００２９】
本発明のＣ３４誘導体は、当業者に周知の固相ペプチド化学の標準法によって合成され得る。例えば、ペプチドは、Ｒａｉｎｉｎ  ＰＴＩ  Ｓｙｍｐｈｏｎｙ合成機を使用して、Ｓｔｅｗａｒｄら、Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＩＩ．，（１９８４）によって記載される手順に従う固相科学技術によって合成され得る。同様に、ペプチドフラグメントが合成され得、その後Ｃ３４ペプチド配列を形成するために合わせられても一緒に連結されてもよい（セグメント縮合）。
【００３０】
固相ペプチド合成について、多くの技術の要旨は、Ｓｔｅｗａｒｔら、「Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｃｏ．（Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ），１９６３、およびＭｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，Ｈｏｒｍｏｎａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，１９７３，２  ４６において見出され得る。古典的溶液合成について、例えば、Ｓｃｈｒｏｄｅｒら、「Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」ｖｏｌｕｍｅ  １，Ａｃａｃｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）を参照のこと。一般に、このような方法は、ポリマー上の成長ペプチド鎖への１つ以上のアミノ酸または適切に保護されたアミノ酸の連続添加を含む。通常、第１のアミノ酸のアミノ基またはカルボキシル基のいずれかは、適切な保護基によって保護される。次いで、この保護されたアミノ酸および／または誘導体化されたアミノ酸は、適切に保護された相補的な（アミノまたはカルボキシル）基を有する配列にアミノ結合を形成するに適切な条件下で、次のアミノ酸を添加することによって、活性な固体支持体に付着されるか、または溶液において利用されるかのいずれかである。次いで、保護基は、この新たに添加されたアミノ酸残基から除去され、そして次のアミノ酸（適切に保護されている）が添加などされる。
【００３１】
所望のアミノ酸全てが適当な配列に連結された後、任意の残りの保護基（および任意の固体支持体）は、最終ペプチドを提供するために、連続してかまたは同時に切断される。この一般的な手順の単純な改変によって、成長鎖に１つより多くのアミノ酸を、例えば、保護されたトリペプチドを適切に保護されたジペプチドと（キラル中心をラセミ化しない条件下で）カップリングして脱保護の後にペンタペプチドを形成させることによって同時に添加し得る。
【００３２】
本発明のＣ３４誘導体を調製する特に好ましい方法としては、固相ペプチド合成が挙げられ、ここで、アミノ酸α−Ｎ末端が、酸感受性基または塩基感受性基によって保護される。このような保護基は、以下のような特性を有するべきである：ペプチド結合形成の条件に対して安定であるが、成長ペプチド鎖が破壊したりそこに含まれるどのキラル中心がラセミ化したりすることなく容易に除去される。Ｎ保護基およびＣ保護基の例は、Ｇｒｅｅｎｅ，「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  Ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，」（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ｐｐ．１５２−１８６（１９８１））（これは、本明細書中に参考として援用される）に記載される。Ｎ保護基の例としては、限定することなく以下が挙げられる：低級アルカノイル基（例えば、ホルミル、アセチル（「Ａｃ」）、プロピオニル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチルなど）；他のアシル基（２−クロロアセチル、２−ブロモアセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタリル、ｏ−ニトロフェノキシアセチル、−クロロブチリル、ベンゾイル、４−クロロベンゾイル、４−ブロモベンゾイル、４−ニトロベンゾイルなどを含む）；スルホニル基（例えば、ベンゼンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニル、ｏ−ニトロフェニルスルホニル、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（ｐｍｃ）など）；カルバメート形成基（例えば、ｔ−アミルオキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシ−ベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、２−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモ−ベンジルオキシカルボニル、３，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、２，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、４−エトキシベンジルオキシカルボニル、２−ニトロ−４，５−ジメトキシ−ベンジルオキシカルボニル、３，４，５−トリメトキシベンジルオキシカルボニル、１−（ｐ−ビフェニルイル）−ｌ−メチル−エトキシカルボニル、α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ベンズヒドリルオキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシカルボニル（ｂｏｃ）、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシ−カルボニル、メトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、２，２，２，−トリクロロエトキシカルボニル、フェノキシ−カルボニル、４−ニトロフェノキシカルボニル、フルオレニル−９−メトキシカルボニル、イソボルニルオキシカルボニル、シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル、フェニルチオカルボニルなど）；アリールアルキル基（例えば、ベンジル、ビフェニルイソプロピルオキシカルボニル、トリフェニルメチル、ベンジルオキシメチル、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）など；ならびにシリル基（例えば、トリメチルシリルなど）。好ましいα−Ｎ保護基は、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル；９−フルオレニルメチルオキシカルボニル；ｔ−ブチルオキシカルボニル（ｂｏｃ）、イ��ボミルオキシカルボニル；３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル；ｔ−アミルオキシカルボニル；２−シアノ−ｔ−ブチルオキシカルボニルなどであり、９−フルオレニル−メチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）がより好ましいが，好ましい側鎖Ｎ保護基は、以下を含む：リジンおよびアルギニンのような側鎖アミノ酸について、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（ｐｍｃ）、ニトロ、ｐ−トルエンスルホニル、４−メトキシベンゼン−スルホニル、Ｃｂｚ、Ｂｏｃ、およびアダマンチルオキシカルボニル；チロシンについて、ベンジル、ｏ−ブロモベンジルオキシカルボニル、２，６−ジクロロベンジル、イソプロピル、ｔ−ブチル（ｔ−Ｂｕ）、シクロヘキシル、シクロペンチル（ｃｙｃｌｏｐｅｎｙｌ）、およびアセチル（Ａｃ）；セリンについて、ｔ−ブチル、ベンジル、およびテトラヒドロピラニル；ヒスチジンについて、トリチル、ベンジル、Ｃｂｚ、ｐ−トルエンスルホニル、および２，４−ジニトロフェニル；トリプトファンについて、ホルミル；アスパラギン酸およびグルタミン酸について、ベンジルおよびｔ−ブチル；ならびにシステインについて、トリフェニルメチル（トリチル）。
【００３３】
カルボキシ保護基は、慣用的に、カルボン酸保護エステルまたはアミド基をいう。このようなカルボキシ保護基は、当業者に周知であり、米国特許第３，８４０，５５６号および米国特許第３，７１９，６６７号（これらの開示は、本明細書中に参考として援用される）に記載されるようなペニシリンの分野およびセファロスポリンの分野におけるカルボキシル基の保護において広く使用されている。例示的なカルボキシ保護基としては、限定することなく以下が挙げられる：Ｃ１〜Ｃ８低級アルキル；アリールアルキル（例えば、フェネチルまたはベンジル）およびその置換誘導体（例えば、アルコキシベンジル基またはニトロベンジル基）；アリールアルケニル（例えば、フェニルエテニル）；アリールおよびその置換誘導体（例えば、５−インダニル）；ジアルキルアミノアルキル（例えば、ジメチルアミノエチル）；アルカノイルオキシアルキル基（例えば、アセトキシメチル、ブチリルオキシメチル、バレリルオキシメチル、イソブチリルオキシメチル、イソバレリルオキシメチル、１−（プロピオニルオキシ）−ｌ−エチル、１−（ピバロイルオキシ）−ｌ−エチル、１−メチル−ｌ−（プロピオニルオキシ）−ｌ−エチル、ピバロイルオキシメチル、プロピオニルオキシメチル）；シクロアルカノイルオキシアルキル基（例えば、シクロプロピルカルボニルオキシメチル、シクロブチルカルボニルオキシメチル、シクロ−ペンチルカルボニルオキシメチル、シクロヘキシルカルボニルオキシメチル）；アロイルオキシアルキル（例えば、ベンゾイルオキシメチル、ベンゾイルオキシエチル）；アリールアルキルカルボニルオキシアルキル（例えば、ベンジルカルボニル−オキシメチル、２−ベンジルカルボニルオキシエチル）；アルコキシカルボニルアルキルまたはシクロアルキルオキシカルボニル−アルキル（例えば、メトキシカルボニルメチル、シクロヘキシルオキシカルボニルメチル、１−メトキシ−カルボニル−ｌ−エチル）；アルコキシカルボニルオキシアルキルまたはシクロアルキルオキシカルボニルオキシアルキル（例えば、メトキシカルボニルオキシメチル、ｔ−ブチルオキシカルボニル−オキシメチル、１−エトキシカルボニルオキシ−ｌ−エチル、１−シクロヘキシルオキシカルボニルオキシ−ｌ−エチル）；アリールオキシカルボニルオキシアルキル（例えば、２−（フェノキシカルボニルオキシ）エチル、２−（５−インダニルオキシカルボニルオキシ）エチル）；アルコキシアルキルカルボニル−オキシアルキル（例えば、２−（１−メトキシ−２−メチルプロパンー２−オイロキシ）−エチル）；アリールアルキルオキシカルボニル−オキシアルキル（例えば、２−（ベンジルオキシカルボニルオキシ）エチル）；アリールアルケニルオキシカルボニルオキシアルキル（例えば、２−（３−フェニルプロペン−２−イルオキシカルボニルオキシ）エチル）；アルコキシカルボニルアミノアルキル（例えば、ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノメチル）；アルキルアミノカルボニルアミノアルキル（例えば、メチルアミノ−カルボニルアミノメチル）；アルカノイルアミノアルキル（例えば、アセチルアミノメチル）；複素環式−カルボニルオキシアルキル（例えば、４−メチルピペラジニルカルボニルオキシメチル）；ジアルキルアミノ−カルボニルアルキル（例えば、ジメチルアミノカルボニルメチル、ジエチルアミノカルボニルメチル）；（５−（低級アルキル）−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）アルキル（例えば、（５−ｔ−ブチル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）メチル）；ならびに（５−フェニル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）アルキル（例えば、（５−フェニル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）メチル。例示的アミドカルボキシ保護基としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：アミノカルボニル基および低級アルキルアミノカルボニル基。上記のカルボキシ保護基のうち、低級アルキル、シクロアルキルまたはアリールアルキルのエステル（例えば、メチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、イソプロピルエステル、ブチルエステル、ｓｅｃ−ブチルエステル、イソブチルエステル、アミルエステル、イソアミルエステル、オクチルエステル、シクロヘキシルエステル、フェニルエチルエステルなど）、あるいはアルカノイルオキシアルキル、シクロアルカノイルオキシアルキル、アロイルオキシアルキルまたはアリールアルキルカルボニルオキシアルキルのエステルが好ましい。好ましいアミドカルボキシ保護基は、低級アルキルアミノ−カルボニル基である。
【００３４】
固相ペプチド合成法において、α−Ｃ末端アミノ酸は、適切な支持体または樹脂に結合される。上記の合成に有用である適切な固体支持体は、段階的な縮合−脱保護反応の試薬および反応条件に対して不活性である材料であり、使用される培地中で不溶性である。α−Ｃ末端カルボキシペプチドの合成について好ましい固体支持体は、４−ヒドロキシメチルフェノキシアセチル−４’−メチルベンジヒドリルアミン樹脂（ＨＭＰ樹脂）である。α−Ｃ末端アミドペプチドについて好ましい固体支持体は、Ｆｍｏｃ保護Ｒａｍａｇｅ樹脂（Ｂａｃｈｅｍ  Ｉｎｃ．，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａによって製造および販売される）である。
【００３５】
固相合成の終わりに、連続的操作または単一操作のいずれかにおいてペプチドは樹脂から回収され、そして脱保護される。ペプチドの回収および脱保護は、チオアニソール、トリイソプロピルシラン、フェノールおよびトリフルオロ酢酸を含む切断試薬を用いて樹脂結合ポリペプチドを処理することによって、単一操作において慣用的に達成され得る。ペプチドのα−Ｃ末端がアルキルアミドである場合、樹脂は、アルキルアミンを用いるアミノ分解によって切断される。あるいは、ペプチドは、トランスエステル化（例えば、メタノールを用いる）、続いてアミノ分解または直接トランスアミド化することによって、回収され得る。保護ペプチドは、この時点で精製されても次の工程に直接進行されてもよい。側鎖保護基の除去は、上記の切断混合物を使用して達成される。完全に脱保護されたペプチドは、以下の型のいずれかまたは全てを使用する一連のクロマトグラフィー工程によって精製され得る：弱塩基性樹脂でのイオン交換（酢酸型）；非誘導体化ポリスチレン−ジビニルベンゼンでの疎水性吸着クロマトグラフィー（例えば、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＸＡＤＴＭ）；シリカゲル吸着クロマトグラフィー；カルボキシメチルセルロースでのイオン交換クロマトグラフィー；分配クロマトグラフィー（例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５ＴＭ、ＬＨ−２０ＴＭまたは向流分配）；高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（特に、オクチルシリカ結合相カラムパッキングまたはフェニル／ヘキシルシリカ結合相カラムパッキングでの逆相ＨＰＬＣ）。当業者は、Ｃ３４ペプチドの受容可能な精製を得るために必要とされる好ましいクロマトグラフィー工程または配列が何であるかを、容易に決定し得る。
【００３６】
これらのペプチドの分子量は、エレクトロスプレー質量分光学を使用して決定される。
【００３７】
本発明のＣ３４誘導体を単独でかまたは組合わせて使用して、その治療効果を最適化し得る。本発明のＣ３４誘導体は、生理学的に受容可能な媒体（例えば、脱イオン水、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、生理食塩水、水性アルコールまたは他のアルコール、血漿、タンパク質溶液、マンニトール、水性グルコース、アルコール、植物油など）中で投与され得る。含まれ得る他の添加物としては、緩衝液（ここで、この媒体は、一般に約５〜１０の範囲のｐＨで緩衝化されており、この緩衝液は、一般に約５０〜２５０ｍＭの、濃度範囲である）塩（この塩濃度は、一般に約５〜５００ｍＭの範囲である）、生理学的に受容可能な安定化剤などが挙げられる。組成物は、簡便な貯蔵および輸送のために凍結乾燥され得る。
【００３８】
Ｃ３４誘導体は、非経口的（例えば、血管内（ＩＶ）、動脈内（ＩＡ）、筋肉内（ＩＭ）、皮下（ＳＣ）など）に投与され得る。投与は、適切な状態で輸液により得る。いくつかの場合において、官能基の反応が比較的遅い場合、投与は、経口、鼻、直腸、経皮またはエアロゾルであり得、ここで、複合体の性質は、血管系への移動を可能にする。通常、単回注射が使用され得るが、所望ならば、１回より多い投与が使用され得る。このペプチド誘導体は、任意の簡便な手段（シリンジ、トカロール、カテーテルなどを含む）によって投与され得る。投与の特定の様式は、単回ボーラスまたは連続的投与などにかかわらず、投与されるべき量に依存して変動する。好ましくは、投与は、血管内であり、ここで、導入部位は、本発明において重要ではなく、好ましくは、急速な血流が存在する部位（例えば、末梢静脈または中心静脈での血管内で）である。他の経路は、用途を見出し得、ここで、投与は、徐放性技術または保護マトリクスと合わせられる。その意図は、血液成分と反応し得るようにＣ３４誘導体が血液内で効果的に分布されることである。複合体の濃度は、広範に変動し、一般に約１ｐｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌの範囲である。血管内の総投与量は、一般に約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、より通常には約１ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌの範囲である。
【００３９】
寿命の長い血液成分（例えば、免疫グロブリン、血清アルブミン、赤血球および血小板）に結合することによって、多くの利点が生じる。Ｃ３４誘導体の活性は、数日〜数週間に広がる。たった１回の投与をこの期間の間に与えることが、必要である。活性化合物が巨大分子に主に結合されるので、よりよい特異性が達成され得、ここで、他の生理学的プロセスを干渉するように細胞内で塞ぐ（ｔａｋｅ  ｕｐ）ようではない。
【００４０】
血液成分間での共有結合の形成は、インビボまたはエキソビボで生じ得る。エキソビボでの共有結合形成について、Ｃ３４誘導体は、精製された血液成分（例えば、ヒト血清アルブミンまたはＩｇＧ）を含む血清または生理食塩水溶液に添加されて、この誘導体と血液成分との間の共有結合形成を可能にする。好ましい形式において、Ｃ３４誘導体は、生理食塩水溶液中でヒト血清アルブミンと反応される。後者は、複合体の形成後、被験体に投与されても凍結乾燥されてもよい。
【００４１】
哺乳動物宿主の血液は、Ｃ３４ペプチドの活性および／またはＣ３４誘導体の存在をモニタリングされ得る。種々の時点で宿主から血液サンプルを採取することによって、Ｃ３４ペプチドが治療的に活性であるに十分な量で寿命の長い血液成分に結合されたか否か、およびその後の血液中のＣ３４レベルが、決定され得る。所望ならば、Ｃ３４が血液成分の何と共有結合されるかがまた、決定され得る。モニタリングはまた、Ｃ３４活性のアッセイ、ＨＰＬＣ−ＭＳまたはＣ３４に対する抗体を使用することによって行われ得る。
【００４２】
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を例証するために提供され、そしてその範囲を限定するように決して解釈されない。
【００４３】
本発明のＣ３４誘導体は、以下に記載される方法および当該分野において公知の他の方法に従って、患者に投与され得る。本発明のＣ３４誘導体の治療的有効量は、当業者に周知の手順によって決定され得、Ｃ３４の潜在的な毒性に関するいかなる懸念も考慮する。
【００４４】
本発明のＣ３４誘導体はまた、以前に感染されていない個体に対して予防的に投与され得る。このことは、個体が感染個体と接触された場合（ここで、高いウイルス伝播リスクが存在する）に生じ得るのと同様に、個体がウイルスへの高い曝露リスクに供された場合において有利であり得る。このことは、ウイルス（例えば、ＨＩＶウイルス）に対する公知の治療が存在する場合に、特に有利であり得る。例として、Ｃ３４誘導体の予防投与は、医療従事者がＨＩＶ感染個体由来の血液に曝露された状況において、または個体がその個体をＨＩＶウイルスに潜在的に暴露するハイリスク活性に従事した他の状況において有利である。
【００４５】
完全に記載されてきた本発明は、そして以下の非限定的な実施例を参照してさらに認識され得、そして理解され得る。
【実施例】
【００４６】
（概説）
他のように示されない限り、Ｃ３４誘導体の各々の合成を、この誘導体の生成の間、手動の介入とともにＳｙｍｐｈｏｎｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒでの自動化固相手順を使用して実施した。この合成を、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸を使用してＦｍｏｃ保護Ｒａｍａｇｅアミドリンカー樹脂上で実施した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液中でＯ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）をアクチベータとして使用しそしてジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）をベースとして使用することによって、カップリングを達成した。２０％ピペリジン／ＤＭＦを使用して、Ｆｍｏｃ保護基を除去した。必要ならば、遊離Ｎα末端を生成するために、ペプチドを樹脂から切断した後に、Ｎ末端でＢｏｃ保護アミノ酸を使用した。合成の間に使用した全てのアミノ酸が、Ｌ−立体化学を有する。ガラス反応容器を、合成の間使用した。
【００４７】
（実施例１）
（式Ｉの化合物）
（工程１：）
本実施例は、１００μモルスケールでの化合物の固相ペプチド合成を記載する。以下の保護アミノ酸を、樹脂に連続的に添加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ−ＯＨ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ。これらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化した。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンの溶液を２０分間使用して達成した（工程１）。最終アミノ酸のアミノ基を、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化した酢酸を使用してアセチル化した。
【００４８】
（工程２：）
Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を手動で行い、そして５ｍＬのＣ６Ｈ６  ＣＨＣｌ３（１：１）：２．５％  ＮＭＭ（ｖ：ｖ）：５％  ＡｃＯＨ（ｖ：ｖ）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ３）４の溶液を用いてこの樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ３（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中２０％  ＡｃＯＨ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。
【００４９】
（工程３：）
次いで、この合成を、Ｆｍｏｃ−ＡＥＥＡ−ＯＨおよび３−マレイミドプロピオン酸の添加について再自動化した（工程３）。あらゆるカップリングの間、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で３回、そしてイソプロパノール（ｉＰｒＯＨ）で３回洗浄した。
【００５０】
（工程４：）
このペプチドを、８５％  ＴＦＡ／５％  トリイソプロピル−シラン（ＴＩＰＳ）／５％  チオアニソールおよび５％フェノールを用いてこの樹脂から切断し、続いてドライアイスで冷却したＥｔ２Ｏによって沈殿させた（工程４）。
【００５１】
（実施例２）
（式ＩＩの化合物）
（工程１：）
本実施例は、１００μｍｏｌｅスケールにおける本化合物の固相ペプチド合成を記載する。以下の保護されたアミノ酸を、連続的に樹脂に添加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ。これらを、その順番に従って、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて、活性化した。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０分間にわたって、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジン溶液を用いて達成した（工程１）。最後のアミノ酸のアミノ基を、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化された酢酸を用いて、アセチル化した。
【００５２】
（工程２：）
Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的な脱保護を手動で実施し、そして２時間にわたって、５ｍＬのＣ６Ｈ６  ＣＨＣｌ３（１：１）：２．５％  ＮＭＭ（ｖ：ｖ）：５％  ＡｃＯＨ（ｖ：ｖ）中に溶解された３当量のＰｄ（ＰＰｈ３）４溶液で樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ３（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＡｃＯＨ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄する。
【００５３】
（工程３：）
次いで、この合成を、Ｆｍｏｃ−ＡＥＥＡ−ＯＨおよび３−マレイミドプロピオン酸の添加について、再度自動化した（工程３）。すべてのカップリング工程の間において、樹脂を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で３回およびイソプロパノール（ｉＰｒＯＨ）で３回洗浄した。
【００５４】
（工程４：）
ペプチドを、８５％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを用いて樹脂から切断し、次いで、ドライアイスで冷却されたＥｔ２Ｏによって沈殿させた（工程４）。
【００５５】
（実施例３）
（式ＩＩＩの化合物）
（工程１：）
本実施例は、１００μｍｏｌｅスケールにおける本化合物の固相ペプチド合成を記載する。以下の保護されたアミノ酸を、連続的に樹脂に添加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ。これらを、その順番に従って、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて、活性化した。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０分間にわたって、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジン溶液を用いて達成した（工程１）。最後のアミノ酸のアミノ基を、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化された酢酸を用いて、アセチル化した。
【００５６】
（工程２：）
Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的な脱保護を手動で実施し、そして２時間にわたって、５ｍＬのＣ６Ｈ６  ＣＨＣｌ３（１：１）：２．５％  ＮＭＭ（ｖ：ｖ）：５％  ＡｃＯＨ（ｖ：ｖ）中に溶解された３当量のＰｄ（ＰＰｈ３）４溶液で樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ３（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＡｃＯＨ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄する。
【００５７】
（工程３：）
次いで、この合成を、Ｆｍｏｃ−ＡＥＥＡ−ＯＨおよび３−マレイミドプロピオン酸の添加について、再度自動化した（工程３）。すべてのカップリング工程の間において、樹脂を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で３回およびイソプロパノール（ｉＰｒＯＨ）で３回洗浄した。
【００５８】
（工程４：）
ペプチドを、８５％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを用いて樹脂から切断し、次いで、ドライアイスで冷却されたＥｔ２Ｏによって沈殿された（工程４）。
【００５９】
（実施例４）
（式ＩＶの化合物）
（工程１：）
本実施例は、１００μｍｏｌｅスケールにおける本化合物の固相ペプチド合成を記載する。以下の保護されたアミノ酸を、連続的に樹脂に添加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ。これらを、その順番に従って、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて、活性化した。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０分間にわたって、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジン溶液を用いて達成した（工程１）。最終的なアミノ酸のアミノ基を、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化された酢酸を用いて、アセチル化した。
【００６０】
（工程２：）
Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的な脱保護を手動で実施し、そして２時間にわたって、５ｍＬのＣ６Ｈ６  ＣＨＣｌ３（１：１）：２．５％  ＮＭＭ（ｖ：ｖ）：５％  ＡｃＯＨ（ｖ：ｖ）中に溶解された３当量のＰｄ（ＰＰｈ３）４溶液で樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ３（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＡｃＯＨ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄する。
【００６１】
（工程３：）
次いで、この合成を、Ｆｍｏｃ−ＡＥＥＡ−ＯＨおよび３−マレイミドプロピオン酸の添加について、再度自動化した（工程３）。すべてのカップリング工程の間において、樹脂を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で３回およびイソプロパノール（ｉＰｒＯＨ）で３回洗浄した。
【００６２】
（工程４：）
ペプチドを、８５％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを用いて樹脂から切断し、次いで、ドライアイスで冷却されたＥｔ２Ｏによって沈殿された（工程４）。
【００６３】
（実施例５）
（式Ｖの化合物）
（工程１：）
本実施例は、１００μｍｏｌｅスケールにおける本化合物の固相ペプチド合成を記載する。以下の保護されたアミノ酸を、連続的に樹脂に添加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ。これらを、その順番に従って、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて、活性化した。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０分間にわたって、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジン溶液を用いて達成した（工程１）。最終的なアミノ酸のアミノ基を、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化された酢酸を用いて、アセチル化した。
【００６４】
（工程２：）
Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的な脱保護を手動で実施し、そして２時間にわたって、５ｍＬのＣ６Ｈ６  ＣＨＣｌ３（１：１）：２．５％  ＮＭＭ（ｖ：ｖ）：５％  ＡｃＯＨ（ｖ：ｖ）中に溶解された３当量のＰｄ（ＰＰｈ３）４溶液で樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ３（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＡｃＯＨ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄する。
【００６５】
（工程３：）
次いで、この合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加について、再度自動化した（工程３）。すべてのカップリング工程の間において、樹脂を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で３回およびイソプロパノール（ｉＰｒＯＨ）で３回洗浄した。
【００６６】
（工程４：）
ペプチドを、８５％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを用いて樹脂から切断し、次いで、ドライアイスで冷却されたＥｔ２Ｏによって沈殿された（工程４）。
【００６７】
（実施例６）
（式ＶＩの化合物）
（工程１：）
本実施例は、１００μｍｏｌｅスケールにおける本化合物の固相ペプチド合成を記載する。以下の保護されたアミノ酸を、連続的に樹脂に添加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ。これらを、その順番に従って、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて、活性化した。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０分間にわたって、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジン溶液を用いて達成した（工程１）。最終的なアミノ酸のアミノ基を、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル−アミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化された酢酸を用いて、アセチル化した。
【００６８】
（工程２：）
Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的な脱保護を手動で実施し、そして２時間にわたって、５ｍＬのＣ６Ｈ６  ＣＨＣｌ３（１：１）：２．５％  ＮＭＭ（ｖ：ｖ）：５％  ＡｃＯＨ（ｖ：ｖ）中に溶解された３当量のＰｄ（ＰＰｈ３）４溶液で樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ３（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％  ＡｃＯＨ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄する。
【００６９】
（工程３：）
次いで、この合成を、Ｆｍｏｃ−ＡＥＥＡ−ＯＨおよび３−マレイミドプロピオン酸の添加について、再度自動化した（工程３）。すべてのカップリング工程の間において、樹脂を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で３回およびイソプロパノール（ｉＰｒＯＨ）で３回洗浄した。
【００７０】
（工程４：）
ペプチドを、８５％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを用いて樹脂から切断し、次いで、ドライアイスで冷却されたＥｔ２Ｏによって沈殿された（工程４）。
【００７１】
（実施例７）
（式ＶＩＩの化合物）
（工程１：）
本実施例は、１００μｍｏｌｅスケールにおける本化合物の固相ペプチド合成を記載する。以下の保護されたアミノ酸を、連続的に樹脂に添加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ。これらを、その順番に従って、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて、活性化した。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０分間にわたって、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジン溶液を用いて達成した（工程１）。最終的なアミノ酸のアミノ基を、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化された酢酸を用いて、アセチル化した。
【００７２】
（工程２：）
３−マレイミドプロピオン酸の添加について、合成を続けた（工程２）。すべてのカップリング工程の間において、樹脂を、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミド（ＤＭＦ）で３回およびイソプロパノール（ｉＰｒＯＨ）で３回洗浄した。
【００７３】
（工程３：）
ペプチドを、８５％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを用いて樹脂から切断し、次いで、ドライアイスで冷却されたＥｔ２Ｏによって沈殿された（工程３）。
【００７４】
（実施例８）
（式ＶＩＩＩの化合物）
（工程１：）
本実施例は、１００μｍｏｌｅスケールにおける本化合物の固相ペプチド合成を記載する。以下の保護されたアミノ酸を、連続的に樹脂に添加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ。これらを、その順番に従って、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて、活性化した。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０分間にわたって、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジン溶液を用いて達成した（工程１）。最終的なアミノ酸のアミノ基を、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を使用して活性化された酢酸を用いて、アセチル化した。
【００７５】
（工程２：）
ＦＭＯＣ−ＡＥＥＡ−ＯＨおよび３−マレイミドプロピオン酸の添加について、合成を続けた（工程２）。すべてのカップリング工程の間において、樹脂を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で３回およびイソプロパノール（ｉＰｒＯＨ）で３回洗浄した。
【００７６】
（工程３：）
ペプチドを、８５％  ＴＦＡ／５％  ＴＩＳ／５％チオアニソールおよび５％フェノールを用いて樹脂から切断し、次いで、ドライアイスで冷却されたＥｔ２Ｏによって沈殿された（工程３）。
【００７７】
（細胞の抗ＨＩＶアッセイ（ＭＴＴアッセイ））
抗ウイルス活性を、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，１９８８，２０，３０９−３２１に記載されたようにして決定した。簡潔には、種々の濃度の試験化合物を、平底マイクロタイタープレートの各ウェルに入れた。引き続いて、ＨＩＶ株（ＨＩＶ−１  ＩＩＩＢ）およびＭＴ−４細胞を、それぞれ、２００  ＣＣＩＤ５０／ウェルおよび３０，０００細胞／ウェルの最終濃度まで添加した。試験化合物の毒性を決定するために、同一の化合物濃度範囲を含む偽感染細胞培養物を、ＨＩＶ感染細胞培養物と並行してインキュベートした。５日間のインキュベーション（３７℃、５％ＣＯ２）後、細胞の生存度を、テトラゾリウム比色ＭＴＴ方法によって決定した。両方のアッセイの結果は、以下の表２に見られる。
【００７８】
【表２】
2005500274.tif 000006
本発明を、その特定の実施形態に関して記載したが、さらなる改変が可能であり得ることが理解され、そして本願は、一般的に本発明の原理に従い、そして、本発明が属する分野において公知であるかまたは慣用的に実施される範囲内となるような、そして本明細書中の上記において示され、かつ下記のように添付の特許請求の範囲内にあるような、本質的特徴に適用され得るような、本発明の記載から出発するものを含む、本発明のあらゆる改変、使用、または適応を包含することが意図される。
【国際公開パンフレット】
2005500274.tif 000009
2005500274.tif 000010
2005500274.tif 000011
2005500274.tif 000012
2005500274.tif 000013
2005500274.tif 000014
2005500274.tif 000015
2005500274.tif 000016
2005500274.tif 000017
2005500274.tif 000018
2005500274.tif 000019
2005500274.tif 000020
2005500274.tif 000021
2005500274.tif 000022
2005500274.tif 000023
2005500274.tif 000024
2005500274.tif 000025
2005500274.tif 000026
2005500274.tif 000027
2005500274.tif 000028
2005500274.tif 000029
2005500274.tif 000030
2005500274.tif 000031
2005500274.tif 000032
2005500274.tif 000033
2005500274.tif 000034
2005500274.tif 000035
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2005500274.tif 000036
【国際調査報告】
2005500274.tif 000037
2005500274.tif 000038
2005500274.tif 000039
2005500274.tif 000040