(57)【要約】ＥＧＦおよびガストリンを、免疫抑制と組み合わせて含む、島新生療法のため、ならびに初期段階の糖尿病を、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび免疫抑制剤で処置または予防するための、組成物および方法が提供される。１つの実施形態において、糖尿病の被験体の処置における使用のための医薬の製造に関する方法が提供され、この方法において、この医薬は、島新生療法のための組成物、および免疫応答の抑制のための薬剤を含有する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
糖尿病の被験体の処置における使用のための医薬の製造に関する方法であって、該医薬は、島新生療法のための組成物、および免疫応答の抑制のための薬剤を含有する、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、島新生療法のための前記組成物は、ＥＧＦレセプターリガンドを含有する、方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法であって、少なくとも２種の免疫応答の抑制のための薬剤をさらに含有する、方法。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法であって、島新生療法のための前記組成物は、ガストリン／コレシステキニン（ＣＣＫ）レセプターリガンドを含有する、方法。
【請求項５】
請求項２に記載の方法であって、前記ＥＧＦレセプターリガンドは、組換え型ヒトＥＧＦである、方法。
【請求項６】
請求項２に記載の方法であって、前記ＥＧＦレセプターリガンドは、ＥＧＦ５１Ｎである、方法。
【請求項７】
請求項４に記載の方法であって、前記ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドは、ヒトガストリン１７である、方法。
【請求項８】
請求項１に記載の方法であって、免疫応答の抑制のための前記薬剤は、薬物である、方法。
【請求項９】
請求項１に記載の方法であって、免疫応答の抑制のための前記薬剤は、ラパマイシン；コルチコステロイド；アザチオプリン；マイコフェノレート  モヘチル；シクロスポリン；シクロホスファミド；メトトレキセート；６−メルカプトプリン；ＦＫ５０６（Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）；１５−デオキシスペルグアリン；ＦＴＹ  ７２０；ミトキサントロン；２−アミノ−１，３−プロパンジオール；２−アミノ−２［２−（４−オクチルフェニル）エチル］プロパン−１，３−ジオールヒドロクロリド；６−（３−ジメチル−アミノプロピオニル）フォルスコリン；およびデメチムノマイシンからなる群より選択される、少なくとも１種である、方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法であって、前記ラパマイシンは、ＥｖｅｒｏｌｉｍｕｓまたはＳｉｒｏｌｉｍｕｓである、方法。
【請求項１１】
請求項９に記載の方法であって、前記コルチコステロイドは、デキサメタゾンである、方法。
【請求項１２】
請求項１に記載の方法であって、免疫応答の抑制のための前記薬剤は、タンパク質である、方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の方法であって、前記タンパク質は、抗体のアミノ酸配列を含む、方法。
【請求項１４】
請求項１に記載の方法であって、免疫応答の抑制のための前記薬剤は、ｈｕｌ  １２４；ＢＴＩ−３２２；アロトラップ−ＨＬＡ−Ｂ２７０；ＯＫＴ４Ａ；エンリモマブ；ＡＢＸ−ＣＢＬ；ＯＫＴ３；ＡＴＧＡＭ；バシリキシマブ；ダクリズマブ；抗胸腺細胞免疫グロブリン；ＩＳＡｔｘ２４７；Ｍｅｄｉ−５００；Ｍｅｄｉ−５０７；アレファセプト；エファリズマブ；インフリキシマブ；およびインターフェロンからなる群より選択される、少なくとも１種である、方法。
【請求項１５】
請求項１に記載の方法であって、前記医薬の製造において、前記島新生療法用組成物および免疫応答の抑制のための前記薬剤は、連続投与のために処方される、方法。
【請求項１６】
請求項１５に記載の方法であって、前記医薬の製造において、前記組成物および前記薬剤は、該薬剤の投与と該組成物の投与との間の、少なくとも１日の期間中に貯蔵のために処方される、方法。
【請求項１７】
請求項１５に記載の方法であって、前記医薬の製造において、前記組成物および前記薬剤は、該薬剤の投与と該組成物の投与との間の、少なくとも１週間の期間中に貯蔵のために処方される、方法。
【請求項１８】
請求項１５に記載の方法であって、前記医薬の製造において、前記組成物および前記薬剤は、該薬剤の投与と該組成物の投与との間の、少なくとも６週間の期間中に貯蔵のために処方される、方法。
【請求項１９】
請求項１に記載の方法であって、前記医薬の製造において、少なくとも１種の前記島新生療法用組成物および免疫応答の抑制のための前記薬剤は、全身投与のために処方される、方法。
【請求項２０】
請求項１９に記載の方法であって、前記医薬の製造において、少なくとも１種の前記島新生療法用組成物および免疫応答の抑制のための前記薬剤は、ボーラス投与のために処方される、方法。
【請求項２１】
請求項１に記載の方法であって、前記医薬の製造において、少なくとも１種の前記島新生療法用組成物および免疫応答の抑制のための前記薬剤は、静脈内、皮下、腹膜内、および筋肉内からなる群より選択される、経路による投与のために処方される、方法。
【請求項２２】
請求項１に記載の方法であって、前記医薬の製造において、少なくとも１種の前記島新生療法用組成物および免疫応答の抑制のための前記薬剤は、経口投与のために処方される、方法。
【請求項２３】
請求項１に記載の方法であって、前記医薬の製造において、免疫応答の抑制のための前記薬剤は、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ、Ｔｃｒｏｌｉｍｕｓ、Ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ、ＩＳＡｔｘ２４７、およびダクリズマブの群から選択される、少なくとも１種を含有するように処方される、方法。
【請求項２４】
請求項１に記載の方法であって、前記医薬の製造において、免疫応答の抑制のための前記薬剤は、糖尿病の哺乳動物への投与のために処方される、方法。
【請求項２５】
請求項１に記載の方法であって、前記医薬の製造において、免疫応答の抑制のための前記薬剤は、ヒトへの投与のために処方される、方法。
【請求項２６】
糖尿病の被験体の処置における使用のための医薬の製造に関する方法であって、該医薬は、少なくとも１種のＥＧＦレセプターリガンドおよびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンド、および少なくとも１種の免疫抑制薬剤からなる、島新生療法のための組成物を含有する、方法。
【請求項２７】
請求項２６に記載の方法であって、前記医薬は、前記ＥＧＦレセプターリガンドの非存在下で、前記ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび少なくとも１種の免疫抑制薬剤を含有するように処方される、方法。
【請求項２８】
請求項２７に記載の方法であって、前記医薬は、前記ＥＧＦレセプターリガンドの非存在下で、前記ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび少なくとも１種の免疫抑制薬剤を投与するように処方され、さらに該方法は、任意の薬剤または組成物の欠投与の期間を含む、方法。
【請求項２９】
請求項２６に記載の方法であって、前記医薬は、糖尿病が最近発症した糖尿病の患者のために処方される、方法。
【請求項３０】
請求項２８に記載の方法であって、前記医薬は、前記組成物および前記薬剤の連続投与のために処方される、方法。
【請求項３１】
請求項２６の方法であって、前記医薬は、前記ＥＧＦレセプターリガンド、前記ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンド、および前記免疫抑制薬剤の各々が有効量であるように処方される、方法。
【請求項３２】
請求項１および請求項２６のいずれか１項に記載の方法であって、前記組成物または前記薬剤は、さらに薬学的に受容可能な緩衝液を含有するように処方される方法。
【請求項３３】
糖尿病の被験体の処置における使用のための医薬の製造に関する方法であって、該医薬は、少なくとも１種のＥＧＦ５１Ｎおよびガストリン１７、および少なくとも１種の免疫抑制薬剤からなる、島新生療法のための組成物を含有する、方法。
【請求項３４】
請求項３３に記載の方法であって、前記医薬は、前記薬剤が有効量のＴａｃｒｏｌｉｍｕｓおよびＳｉｒｏｌｉｍｕｓの各々であるように処方される、方法。
【請求項３５】
請求項３３に記載の方法であって、前記医薬は、有効量の少なくとも１種のＥＧＦ５１Ｎおよびガストリン１７、および有効量のＴａｃｒｏｌｉｍｕｓ、Ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ、ダクリズマブ、ＩＳＡｔｘ２４７、およびＳｉｒｏｌｉｍｕｓのうち少なくとも１種を含有するように処方される、方法。
【請求項３６】
糖尿病の被験体の処置における使用のための医薬の製造に関する方法であって、該医薬は、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび免疫応答の抑制のための薬剤を含有する、方法。
【請求項３７】
請求項３６に記載の方法であって、前記ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドは、ガストリン１７である、方法。
【請求項３８】
請求項３６に記載の方法であって、免疫応答の抑制のための前記薬剤は、薬物である、方法。
【請求項３９】
請求項３６に記載の方法であって、免疫応答の抑制のための前記薬剤は、ラパマイシン；コルチコステロイド；アザチオプリン；マイコフェノレート  モヘチル；シクロスポリン；シクロホスファミド；メトトレキセート；６−メルカプトプリン；ＦＫ５０６；ＩＳＡｔｘ２４７；１５−デオキシスペルグアリン；ＦＴＹ  ７２０；ミトキサントロン；２−アミノ−１，３−プロパンジオール；２−アミノ−２［２−（４−オクチルフェニル）エチル］プロパン−１，３−ジオールヒドロクロリド；６−（３−ジメチル−アミノプロピオニル）フォルスコリン；およびデメチムノマイシンからなる群の少なくとも１種から選択される、方法。
【請求項４０】
請求項３９に記載の方法であって、前記ラパマイシンは、ＳｉｒｏｌｉｍｕｓまたはＥｖｅｒｏｌｉｍｕｓである、方法。
【請求項４１】
請求項３９に記載の方法であって、前記コルチコステロイドは、デキサメタゾンである、方法。
【請求項４２】
請求項３６に記載の方法であって、免疫応答の抑制のための前記薬剤は、タンパク質である、方法。
【請求項４３】
請求項４２に記載の方法であって、前記タンパク質は、抗体のアミノ酸配列を含む、方法。
【請求項４４】
請求項４３に記載の方法であって、免疫応答の抑制のための前記薬剤は、ｈｕｌ  １２４；ＢＴＩ−３２２；アロトラップ−ＨＬＡ−Ｂ２７０；ＯＫＴ４Ａ；エンリモマブ；ＡＢＸ−ＣＢＬ；ＯＫＴ３；ＡＴＧＡＭ；バシリキシマブ；ダクリズマブ；抗胸腺細胞免疫グロブリン；ＩＳＡｔｘ２４７；Ｍｅｄｉ−５００；Ｍｅｄｉ−５０７；アレファセプト；エファリズマブ；およびインフリキシマブからなる群より選択される、少なくとも１種である、方法。
【請求項４５】
請求項３６に記載の方法であって、前記ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび免疫応答の抑制のための前記薬剤は、連続的に投与される、方法。
【請求項４６】
請求項３６に記載の方法であって、前記ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドは、ボーラス投与のために処方される、方法。
【請求項４７】
請求項３６に記載の方法であって、前記レセプターリガンドは、静脈内、皮下、腹膜内、および筋肉内からなる群より選択される経路による投与のために、処方される、方法。
【請求項４８】
請求項３６に記載の方法であって、免疫応答の抑制のための前記薬剤は、経口の送達経路、全身の送達経路、静脈内の送達経路、皮下の送達経路、腹膜内の送達経路、および筋肉内の送達経路からなる群より選択される経路による投与のために、処方される、方法。
【請求項４９】
請求項３６に記載の方法であって、免疫応答の抑制のための前記薬剤は、少なくとも１種のＴａｃｒｏｌｉｍｕｓ、ＩＳＡｔｘ２４７、Ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ、およびダクリズマブから選択される、方法。
【請求項５０】
請求項１、請求項２６、請求項３３、および請求項３６のいずれか１項に記載の方法であって、さらに、絶食時の血糖のレベル；膵臓のインスリン含有量のレベル；膵臓のβ細胞含有量のレベル；および血漿インスリンＣペプチドのレベル測定の群から選択される、前記被験体における生理的なパラメーターを測定する工程を包含する、方法。
【請求項５１】
請求項３６に記載の方法であって、前記医薬は、哺乳動物である被験体のために処方される、方法。
【請求項５２】
請求項３６に記載の方法であって、前記医薬は、糖尿病の哺乳動物である被験体のために処方される、方法。
【請求項５３】
請求項３６に記載の方法であって、前記医薬は、糖尿病が最近発症した糖尿病の哺乳動物である被験体のために処方される、方法。
【請求項５４】
請求項３６に記載の方法であって、前記医薬は、ヒトである被験体のために処方される、方法。
【請求項５５】
糖尿病の被験体の処置における使用のための医薬の製造に関する方法であって、該医薬は、有効量のガストリン１７、および有効量の少なくとも１種の免疫抑制薬剤を含有する組成物を有する、方法。
【請求項５６】
請求項５５に記載の方法であって、前記少なくとも１種の免疫抑制薬剤は、ＴａｃｒｏｌｉｍｕｓまたはＳｉｒｏｌｉｍｕｓである、方法。
【請求項５７】
請求項５６に記載の方法であって、前記医薬は、さらに有効量のＩＳＡｔｘ２４７またはダクリズマブを含有する、方法。
【請求項５８】
請求項５５〜５７のいずれか１項に記載の方法であって、前記医薬は、さらに薬学的に受容可能な緩衝液を含有する、方法。
【請求項５９】
免疫応答の抑制のための薬剤、および少なくとも１種のＥＧＦレセプターリガンドおよびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを含有する、薬学的な組成物。
【請求項６０】
請求項５９に記載の組成物であって、前記ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドは、ガストリンである、組成物。
【請求項６１】
請求項５９に記載の組成物であって、前記ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドは、ガストリン１７である、組成物。
【請求項６２】
請求項６１に記載の組成物であって、前記ガストリン１７は、ガストリン１７Ｍｅｔ１５またはガストリン１７Ｌｅｕ１５である、組成物。
【請求項６３】
請求項５９に記載の組成物であって、前記ＥＧＦレセプターリガンドは、ＥＧＦである、組成物。
【請求項６４】
請求項５９に記載の組成物であって、前記ＥＧＦは、組換え型ヒトＥＧＦ５１Ｎである、組成物。
【請求項６５】
請求項５９に記載の組成物であって、免疫応答の抑制のための前記薬剤は、薬物である、組成物。
【請求項６６】
請求項５９に記載の組成物であって、免疫応答の抑制のための前記薬剤は、ラパマイシン；コルチコステロイド；アザチオプリン；マイコフェノレート  モヘチル；シクロスポリン；シクロホスファミド；メトトレキセート；６−メルカプトプリン；ＦＫ５０６（Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）；１５−デオキシスペルグアリン；ＦＴＹ  ７２０；ミトキサントロン；２−アミノ−１，３−プロパンジオール；塩酸２−アミノ−２［２−（４−オクチルフェニル）エチル］プロパン−１，３−ジオール；６−（３−ジメチル−アミノプロピオニル）フォルスコリン；およびデメチムノマイシンからなる群より選択される、少なくとも１種である、組成物。
【請求項６７】
請求項５９に記載の組成物であって、免疫応答の抑制のための前記薬剤は、タンパク質である、組成物。
【請求項６８】
請求項５９に記載の組成物であって、免疫応答の抑制のための前記薬剤は、抗体の一部である、組成物。
【請求項６９】
請求項５９に記載の組成物であって、免疫応答の抑制のための前記薬剤は、  ｈｕｌ  １２４；ＢＴＩ−３２２；アロトラップ−ＨＬＡ−Ｂ２７０；ＯＫＴ４Ａ；エンリモマブ；ＡＢＸ−ＣＢＬ；ＯＫＴ３；ＡＴＧＡＭ；バシリキシマブ；ダクリズマブ；抗胸腺細胞免疫グロブリン；ＩＳＡｔｘ２４７；Ｍｅｄｉ−５００；Ｍｅｄｉ−５０７；アレファセプト；エファリズマブ；インフリキシマブ；およびインターフェロンからなる群より選択される、少なくとも１種である、組成物。
【請求項７０】
糖尿病の被験体の処置のためのキットであって、該キットは、島新生療法のための組成物、免疫抑制薬剤、および容器を備える、キット。
【請求項７１】
請求項５９〜６９のいずれか１項に記載の組成物の、少なくとも単回用量を備える、キット。
【請求項７２】
請求項７０〜７２のいずれか１項に記載のキットであり、さらに使用のための説明書を備える、キット。
【請求項７３】
糖尿病の被験体の処置における使用のための医薬の製造に関する方法であって、該方法は、有効量のガストリン１７、および有効量の免疫抑制薬剤のうち少なくとも１つを含有する、組成物の製造を包含する、方法。
【請求項７４】
糖尿病の被験体の処置における使用のための医薬の製造に関する方法であって、該方法は、有効量のガストリン１７、および有効量のＴａｃｒｏｌｉｍｕｓおよびＳｉｒｏｌｉｍｕｓの各々を含有する、医薬の製造を包含する、方法。
【請求項７５】
糖尿病の被験体の処置のための組成物の製造における、有効量のガストリン１７および少なくとも１種の免疫抑制薬剤の各々の、使用。
【請求項７６】
糖尿病の被験体の処置のための医薬の製造における、有効量のガストリン１７、および有効量のＴａｃｒｏｌｉｍｕｓおよびＳｉｒｏｌｉｍｕｓの各々の、使用。
【請求項７７】
糖尿病の被験体の処置のための医薬の製造のための、免疫抑制薬剤、および少なくとも１種のＥＧＦレセプターリガンドおよびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドの、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、島新生（ｉｓｌｅｔ  ｎｅｏｇｅｎｅｓｉｓ）療法（Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ）および免疫抑制用薬剤による糖尿病の被験体を処置するための方法および組成物、ならびにガストリン／ＣＣＫリガンドレセプターおよび免疫抑制用薬剤による糖尿病の被験体を処置するための方法および組成物に関連する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
アメリカの人口の中の約８００，０００人の人々が、インスリン欠乏性糖尿病（若年性糖尿病またはＩ型糖尿病としても知られる）を患い、毎年約３０，０００の新規患者が発生する。さらに、非常に多くかつ急速に増加した数の患者は、
ＩＩ型糖尿病（成人発症糖尿病またはインスリン抵抗性糖尿病とも呼ばれる）の型を有し、流行伝染病のような勢いのレベルのこの集団の中で、この糖尿病は膵臓疲労とインスリン不全を引き起こす。
【０００３】
糖尿病を特徴付ける異常な高血中グルコース（高血糖（ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉａ））は、治療されずに放置された場合、種々の病理学的状態、例えば、非治癒性末梢血管潰瘍、失明へと結びつく網膜損傷、および腎不全の結果を生じる。Ｉ型糖尿病およびＩＩ型糖尿病は、患者のグルコース自己モニタリングにより測定された血中グルコースレベルに応じたインスリン注射により処置されるが、必ずしもすべてのＩＩ型患者がインスリン治療を要求するまで進行するとは限らない。代表的には、１日当たり、複数回投与のインスリンが、これらの患者へと送達される。糖尿病の重篤な病理学的結果は、より厳密さを欠く血中グルコースレベルの調節と相関する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（実施形態の要旨）
一つの局面において、本発明の実施形態は、糖尿病の被験体の処置における使用のための医薬の製造ための方法であり、この方法は被験体に島新生療法のための組成物および免疫応答を抑制するための薬剤を投与することを含む。この方法はさらに、ＥＧＦレセプターリガンドを含む島新生療法のための組成物を使用する。この方法は、免疫応答を抑制するための少なくとも２つの薬剤を含む島新生療法のための組成物をさらに使用する。島新生療法のためのこの方法の組成物は、ガストリン／コレシステキニン（ｃｈｏｌｅｃｙｓｔｅｋｉｎｉｎ）（ＣＣＫ）レセプターリガンドを含む。このＥＧＦレセプターリガンドは、組換えヒトＥＧＦであり、例えば、このＥＧＦレセプターリガンドはＥＧＦ５１Ｎである。このガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドはヒトのガストリンｌ７である。関連する実施形態では、免疫応答を抑制するためのこの薬剤は、薬物であり、例えば、免疫応答を抑制するためのこの薬剤は、ラパマイシン（ｒａｐａｍｙｃｉｎ）；コルチコステロイド；アザチオプリン；マイコフェノラートモヘチル（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌａｔｅ  ｍｏｆｅｔｉｌ）；シクロスポリン；シクロホスファミド；メトトレキサート；６−メルカプトプリン；ＦＫ５０６（タクロリムス（Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ））；１５−デオキシスペルグアリン（１５−ｄｅｏｘｙｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ）；ＦＴＹ  ７２０；ミトキサントロン；２−アミノ−１，３−プロパンジオール；２−アミノ−２［２−（４−オクチルフェニル）エチル］プロパン−１，３−ジオール塩酸塩；６−（３−ジメチル−アミノプロピオニル）フォルスコリン；およびデメタイムノマイシン（ｄｅｍｅｔｈｉｍｍｕｎｏｍｙｃｉｎ）からなる群から選択される少なくとも一つである。このラパマイシンは、エベロリムス（Ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）またはシロリムス（Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）である。このコルチコステロイドは、デキサメタゾンである。免疫応答を抑制するためのこの薬剤は、タンパク質であり、例えば、このタンパク質は、抗体のアミノ酸配列を含む。免疫応答を抑制するための例示的な抗体は、以下：ｈｕｌ  １２４；ＢＴＩ−３２２；アロトラップ（ａｌｌｏｔｒａｐ）−ＨＬＡ−Ｂ２７０；ＯＫＴ４Ａ；エンリノマブ（Ｅｎｌｉｍｏｍａｂ）；ＡＢＸ−ＣＢＬ；ＯＫＴ３；ＡＴＧＡＭ；バシリキシマブ（ｂａｓｉｌｉｘｉｍａｂ）；ダクリズマブ（ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）；反胸腺細胞免疫グロブリン；ＩＳＡｔｘ２４７；Ｍｅｄｉ−５００；Ｍｅｄｉ−５０７；アレファセプト（Ａｌｅｆａｃｅｐｔ）；エファリズマブ（ｅｆａｌｉｚｕｍａｂ）；インフリキシマブ（ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）からなる群から選択される少なくとも一つであり得る；代替の実施形態では、そのタンパク質は、ＧＦＡＰ、Ｓ１００βもしくはインターフェロンのようなサイトカインまたは増殖因子である。
【０００５】
これらの方法に従って、この島新生療法の組成物および免疫応答を抑制するためのこの薬剤は、順次投与のために処方される。一つの実施例は、この島新生療法の組成物および免疫応答を抑制するためのこの薬剤を、順次投与のために、およびこの薬剤の投与とこの組成物の投与との間に少なくとも１日の期間が可能となるために処方することを含む。あるいは、この薬剤の投与とこの組成物の投与との間のこの期間は、少なくとも１週間、または少なくとも６週間である。
【０００６】
上記の実施形態では、この島新生療法の組成物および免疫応答を抑制するためのこの薬剤の中の少なくとも一つが、全身投与のために処方される。代りとして、この島新生療法の組成物および免疫応答を抑制するためのこの薬剤の少なくとも一つは、ボーラス剤投与のために処方される。例えば、この島新生療法の組成物および免疫応答を抑制するためのこの薬剤の中の少なくとも一つは、静脈内、皮下、腹腔内、および筋肉内からなる群から選択された経路による投与のために処方される。ある実施形態では、免疫応答を抑制するためのこの薬剤は、経口投与のために処方される。ある実施形態では、免疫応答を抑制するための薬剤が、シロリムス、タクロリムス、エバロリムス、ＩＳＡｔｘ２４７およびダクリズマブの群から選択された少なくとも一つである。
【０００７】
ほとんどの場合、この使用が処方される被験体は、糖尿病の哺乳動物であり、例えば、被験体はヒトである。代替的に、被験体は実験動物、例えば、ＮＯＤマウスであり得る。
【０００８】
別の局面において、本発明の実施形態は、糖尿病の被験体の処置における使用のための医薬の製造ための方法であり、この方法は被験体にＥＧＦレセプターリガンドおよびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドの少なくとも一つからなる、島新生療法のための組成物を処方すること、ならびに少なくとも一つの免疫抑制剤を投与することを含む。関連する実施形態では、この方法は、このＥＧＦレセプターリガンドがない状態で、このガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびこの少なくとも一つの免疫抑制剤をさらに処方することを含む。この方法の一つの実施形態では、このＥＧＦレセプターリガンドがない状態でこのガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびこの少なくとも一つの免疫抑制剤をさらに投与することに先立ち、この方法は、この薬剤またはこの組成物の中のいずれの投与もない期間をさらに含む。糖尿病の被験体は、例えば、最近発症した糖尿病を有する。さらに、この非投与期間に続いて、この組成物およびこの薬剤が、順次投与のために処方される。ある実施形態では、このＥＧＦレセプターリガンド、このガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびこの免疫抑制剤の各々が、有効用量で処方される。この組成物またはこの薬剤は、さらにある実施形態であり、薬学的に受理可能な緩衝液で処方される。
【０００９】
本発明のなお別の特徴は、糖尿病被験体の処置における使用のための医薬品を製造する方法である。この方法は、ＥＧＦ５１Ｎおよびガストリン１７のうちの少なくとも１種からなる島新生治療のための組成物を被験体に投与する工程、および少なくとも１種の免疫抑制剤を投与する工程を包含する。少なくとも１種の薬剤は、タクロリムスおよびシロリムスの各々の有効量であるように処方される。あるいは、この方法は、ＥＧＦ５１Ｎおよびガストリン１７のうちの少なくとも１種の有効量を処方する工程、およびタクロリムス、エベロリムス（Ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、ダクリズマブ、ＩＳＡｔｘ２４７、およびシロリムスのうちの少なくとも１種の有効量を処方する工程をさらに包含する。あるいは、この方法は、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび免疫応答を抑制するための薬剤を被験体に使用するために処方する工程を包含する。例えば、このガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドは、ガストリン１７である。この免疫応答を抑制するための薬剤は、例えば、薬物であり、この免疫応答を抑制するための薬剤は、ラパマイシン；コルチコステロイド；アザチオプリン；ミコフェノレートモフェチル（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌａｔｅ  ｍｏｆｅｔｉｌ）；シクロスポリン；シクロホスファミド；メトトレキサート；６−メルカプトプリン；ＦＫ５０６；ＩＳＡｔｘ２４７；１５−デオキシスペルグアリン（ｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ）；ＦＴＹ７２０；ミトキサントロン；２−アミノ−１，３−プロパンジオール；２−アミノ−２［２−（４−オクチルフェニル）エチル］プロパン−１，３−ジオールヒドロクロリド；６−（３−ジメチル−アミノプロピオニル）フォルスコリン；およびデメチムノマイシン（ｄｅｍｅｔｈｉｍｍｕｎｏｍｙｃｉｎ）からなる群のうちの少なくとも１種から選択される。例えば、ラパマイシンは、シロリムスまたはエベロリムスである。例えば、コルチコステロイドは、デキサメタゾンである。
【００１０】
あるいは、この方法の実施形態において、この免疫応答を抑制するための薬剤は、例えば、タンパク質であり、このタンパク質は、抗体のアミノ酸配列を含む。例えば、この免疫応答を抑制するための薬剤は、ｈｕｌ  １２４；ＢＴＩ−３２２；アロトラップ−ＨＬＡ−Ｂ２７０；ＯＫＴ４Ａ；エンリモマブ；ＡＢＸ−ＣＢＬ；ＯＫＴ３；ＡＴＧＡＭ；バシリキシマブ；ダクリズマブ；抗胸腺細胞免疫グロブリン；ＩＳＡｔｘ２４７；Ｍｅｄｉ−５００；Ｍｅｄｉ−５０７；アレファセプト；エファリズマブ；およびインフリキシマブからなる群より選択される少なくとも１種である。この方法は、連続して投与される、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび免疫応答を抑制するための薬剤を処方する工程を包含する。さらに、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドは、ボーラスとして投与される。例えば、レセプターリガンドの投与は、さらに、静脈内、皮下、腹腔内、および筋肉内からなる群より選択される経路を使用する。免疫応答を抑制するための薬剤の投与は、経口、全身、静脈内、皮下、腹腔内、および筋肉内の送達経路からなる群より選択される経路を使用する。この方法の一実施形態において、この免疫応答を抑制するための薬剤は、タクロリムス、ＩＳＡｔｘ２４７、エベロリムス、シロリムス、およびダクリズマブのうちの少なくとも１種から選択される。
【００１１】
本明細書中の方法の実施形態のいずれかにおいて、本発明は、被験体における生理学的パラメーターを測定する工程、例えば、絶食時血中グルコース；膵臓インスリン含有量；膵臓β細胞含有量；および血漿インスリンＣペプチドのレベルを測定する工程、をさらに包含する。この被験体は、例えば、哺乳動物であり、この被験体は、例えば、糖尿病哺乳動物である。この被験体は、例えば、最近糖尿病が発症した糖尿病哺乳動物であり、この被験体はヒトである。
【００１２】
本発明はまた、糖尿病被験体を処置する方法を特徴とする。この方法は、有効量のガストリン１７および有効量の少なくとも１種の免疫抑制剤を含む組成物を被験体に投与する工程を包含する。この免疫抑制剤の少なくとも１種は、タクロリムスまたはシロリムスである。この方法は、有効用量のＩＳＡｔｘ２４７またはダクリズマブを被験体に投与する工程をさらに包含し得る。この投与される組成物は、薬学的に受容可能な緩衝液をさらに含む。
【００１３】
免疫応答を抑制するための薬剤およびＥＧＦレセプターリガンドおよびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドのうちの少なくとも１種を含む薬学的組成物もまた特徴とする。このガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドは、ガストリンである。例えば、このガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドは、ガストリン１７であり、ガストリン１７は、ガストリン１７Ｍｅｔ１５またはガストリン１７Ｌｅｕ１５である。
【００１４】
さらに、このＥＧＦレセプターリガンドは、例えば、ＥＧＦであり、このＥＧＦは、組換えヒトＥＧＦ５１Ｎである。さらに、この免疫応答を抑制するための薬剤は、薬物である。例えば、この免疫応答を抑制するための薬剤は、ラパマイシン；コルチコステロイド；アザチオプリン；ミコフェノレートモフェチル（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌａｔｅ  ｍｏｆｅｔｉｌ）；シクロスポリン；シクロホスファミド；メトトレキサート；６−メルカプトプリン；ＦＫ５０６（タクロリムス）；１５−デオキシスペルグアリン（ｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ）；ＦＴＹ７２０；ミトキサントロン；２−アミノ−１，３−プロパンジオール；２−アミノ−２［２−（４−オクチルフェニル）エチル］プロパン−１，３−ジオールヒドロクロリド；６−（３−ジメチル−アミノプロピオニル）フォルスコリン；およびデメチムノマイシン（ｄｅｍｅｔｈｉｍｍｕｎｏｍｙｃｉｎ）からなる群より選択される少なくとも１種である。あるいは、この免疫応答を抑制するための薬剤は、タンパク質である。例えば、この免疫応答を抑制するための薬剤は、例えば、抗体の一部であり、この薬剤は、ｈｕｌ  １２４；ＢＴＩ−３２２；アロトラップ−ＨＬＡ−Ｂ２７０；ＯＫＴ４Ａ；エンリモマブ；ＡＢＸ−ＣＢＬ；ＯＫＴ３；ＡＴＧＡＭ；バシリキシマブ；ダクリズマブ；抗胸腺細胞免疫グロブリン；ＩＳＡｔｘ２４７；Ｍｅｄｉ−５００；Ｍｅｄｉ−５０７；アレファセプト；エファリズマブ；インフリキシマブ；およびインターフェロンからなる群より選択される少なくとも１種である。
【００１５】
別の局面は、島新生治療のための組成物、免疫抑制剤および容器を含む、糖尿病被験体の処置のためのキットである。このキットは、本明細書中の組成物のうちのいずれか１つ以上の少なくとも１用量を含む。このキットは、使用のための説明書をさらに含み得る。
【００１６】
糖尿病被験体の処置において使用するための医薬品を製造する方法もまた特徴とする。この方法は、有効用量のガストリン１７および有効用量の少なくとも１種の免疫抑制剤を含む組成物の製造を包含する。例えば、糖尿病被験体の処置において使用するための医薬品を製造する方法であり、その結果、この医薬品は、有効用量のガストリン１７および有効用量のタクロリムスおよびシロリムスの各々を有する。糖尿病被験体を処置するための組成物の製造において、ガストリン１７の各々の有効用量および少なくとも１種の免疫抑制剤を使用することもまた特徴とする。糖尿病被験体を処置するための医薬品の製造において、有効用量のガストリン１７および有効用量のタクロリムスおよびシロリムスの各々を使用することもまた特徴とする。糖尿病被験体を処置するための医薬品の製造において、免疫抑制剤およびＥＧＦレセプターリガンドおよびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドのうちの少なくとも１種を使用することもまた特徴とする。
【００１７】
グルコースモニタリングおよびインスリン注射に代わる糖尿病治療は、以前、インスリンおよびインスリンを生成するβ細胞の免疫拒絶によって制限されてきた。島新生治療（Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ；米国特許第５，８８５，９５６号および同第６，２８８，３０１号）のための組成物による免疫抑制のための薬剤を投与すると、糖尿病の処置に非常に利益がある。
【００１８】
本発明の特徴は、島新生治療のための組成物（Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ）、および免疫応答を抑制するための薬剤を被験体に投与する工程によって、糖尿病被験体を処置する方法である。この薬剤は、タンパク質、例えば、抗体の全体または一部であり得る。あるいは、この薬剤は、薬物であり得、この薬物は、本明細書中に記載される場合、約５，０００ダルトン未満、約２，０００ダルトン未満、または約１，０００ダルトン未満の分子量を有する低分子量化合物を意味する。島新生治療のための組成物は、例えば、ＥＧＦレセプターリガンドを含み、このＥＧＦレセプターリガンドは、組換えヒトＥＧＦである。例えば、このＥＧＦレセプターリガンドは、ＥＧＦ５１Ｎである。さらに、島新生治療のための組成物は、ガストリン／コレシステキニン（ＣＣＫ）レセプターリガンドを含む。例えば、このガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドは、１５位にｌｅｕを有するヒトガストリン１７である。
【００１９】
免疫応答を抑制するための薬剤は、以下のうちの少なくとも１つであり得る：ラパマイシン；コルチコステロイド；アザチオプリン；ミコフェノール酸モフェチル（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌａｔｅ  ｍｏｆｅｔｉｌ）；  シクロスポリン；シクロホスファミド；メトトレキサート；６−メルカプトプリン；ＦＫ５０６；１５−デオキシスペルグアリン（ｄｅｏｘｙｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ）；ＦＴＹ  ７２０；ミトザントロン；２−アミノ−１，３−プロパンジオール；２−アミノ−２［２−（４−オクチルフェニル）エチル］プロパン−１，３−ジオールヒドロクロリド；６−（３−ジメチル−アミノプロピオニル）フォルスコリン；またはデメチムノミオシン（ｄｅｍｅｔｈｉｍｍｕｎｏｍｙｃｉｎ）。用語「ラパマイシン」は、ラパマイシンファルマコア（ｒａｐａｍｙｃｉｎ  ｐｈａｒｍａｃｏｒｅ）を実質的に共有し、そして免疫抑制活性を共有する、任意の関連化学実体または関連誘導体を意味する。用語「コルチコステロイド」は、免疫抑制活性を共有する、任意の関連化学実体を意味する。例えば、用語ラパマイシンは、シロリムス（Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）（ラパマイシンである）およびＳＤＺ−ＲＡＤ（エベロリムス（Ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）としても知られる）を含む。コルチステロイドの例は、デキサメタゾンである。
【００２０】
あるいは、免疫応答を抑制するための、タンパク質である薬剤は、抗体のアミノ酸配列を含む。例えば、この薬剤は、以下のうちの少なくとも１つである：ｈｕｌ  １２４；ＢＴＩ−３２２；アロトラップ（ａｌｌｏｔｒａｐ）−ＨＬＡ−Ｂ２７０；ＯＫＴ４Ａ；エンリモマブ（Ｅｎｌｉｍｏｍａｂ）；ＡＢＸ−ＣＢＬ；ＯＫＴ３；ＡＴＧＡＭ；バシリキシマブ（ｂａｓｉｌｉｘｉｍａｂ）；ダクリズマブ（ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）；抗胸腺細胞免疫グロブリン；ＩＳＡｔｘ２４７；Ｍｅｄｉ−５００；Ｍｅｄｉ−５０７；アレファセプト（Ａｌｅｆａｃｅｐｔ）；エファリズマブ（ｅｆａｌｉｚｕｍａｂ）；インフリキシマブ（ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）。なお別の代替物は、免疫応答を抑制するための薬剤が、抗体でないタンパク質、例えば、グリア線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）であるか、もしくは別のグリアタンパク質Ｓ１００β（Ｓｅｌｉｎｆｒｅｕｎｄ，Ｒ．ら  Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１９９０，１１１：２０２１−２０２８）であるか、またはインターフェロンであることである。なお別の実施形態において、免疫応答を抑制するための薬剤は、ランダムアミノ配列中にアミノ酸残基のサブセットを有するコポリマー分子の集団を含む。例えば、コポリマーは、酢酸ガラティラメル（ｇｌａｔｉｒａｍｅｒ  ａｃｅｔａｔｅ）（ＣｏｐａｘｏｎｅＴＭとして公知）である。
【００２１】
幾つかの実施形態において、島新生治療組成物および免疫応答を抑制するための薬剤は、同時に投与される。あるいは、島新生治療組成物および免疫応答を抑制するための薬剤は、連続的に投与される。同時投与は、この組成物とこの薬剤とを一緒に組み合わせて投与しても、それぞれ互いに約１５分以内、約３０分以内、約１時間以内、または約１日以内にすら投与し得る。連続的投与は、島新生治療組成物の投与と免疫抑制剤の投与との間が約１日より長く経過する（例えば、Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ組成物の投与と免疫抑制剤の投与との間が約１週間、約２週間または約６週間経過する）ことを意味する。
【００２２】
糖尿病患者を治療するための、可能性のある実施形態において、免疫抑制剤は、約数日または約１週間の経過にわたって投与され、そしてＩ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ組成物は、後に（例えば、この薬剤もこの組成物も投与しない一定期間の後）投与される。この組成物もこの薬剤も投与しない期間は、患者をモニターし、患者における免疫抑制に際し何らかの変化が観察され得るか否かを決定するために使用され得る。代替の実施形態において、Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ組成物は、約数日または約１週間あるいは約数週間の経過にわたって投与され、そして免疫抑制剤は、後に（例えば、この薬剤もこの組成物も投与しない一定期間の後）投与される。なお別の代替の実施形態において、Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ組成物および免疫抑制剤の両方が投与され得、その後Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ組成物は中止されるが、免疫抑制は続けられる。なお別の実施形態において、Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ組成物および免疫抑制剤の組み合わせが投与され、次に、ガストリン／ＣＣＫリガンドおよび免疫抑制剤の組み合わせによる処置を行う。本明細書中で使用される場合、用語「１つの（ａｎ）」は、はまた、「少なくとも１つ」を意味し得、従って、例えば、「１つの」免疫抑制剤は、投与されて首尾よい免疫反応抑制をもたらす、２つ以上の免疫抑制剤であり得る。
【００２３】
島新生治療組成物は、全身的に投与される。例えば、ボーラスとして、静脈内、皮下（ｓｃ）、腹腔内（ｉｐ）、および筋肉内（ｉｍ）からなる群から選択される経路により、投与される。静脈内投与は、注入（点滴）またはボーラスとして投与され得る。免疫応答を抑制するための薬剤は、例えば、この薬剤が経口投与可能な薬物である場合、経口投与され得る。あるいは、免疫応答を抑制するための薬剤は、例えば、静脈内、皮下、腹腔内、および筋肉内からなる群から選択される経路により、全身的に投与される。免疫応答を抑制するための薬剤は、例えば、タクロリムス、シロリムス、およびダクリズマブのうちの１つであり得る。
【００２４】
この方法は、被験体における生理学的パラメーター（例えば、空腹時血糖；膵臓インスリン含量；膵臓β細胞含量；膵臓島含量のレベル）を測定する工程を、さらに包含し得る。被験体は、糖尿病非ヒト哺乳動物である。例えば、被験体は、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスである。後者の被験体において、本方法は、インスリンの非投与下における生存程度を評価する工程をさらに包含し得る。あるいは、被験体はヒトであり、例えば、被験体はヒト患者であり、例えば、ヒト糖尿病患者であり、例えば、１形態の糖尿病を有するヒトであり、そして処置を必要とする。
【００２５】
提供される別の実施形態は、糖尿病の被験体を処置する方法であり、この方法は、被験体に有効用量のＥＧＦ５１Ｎおよびガストリン１７の少なくとも１つからなる島新生治療のための組成物を投与する工程、ならびに有効用量の少なくとも１つの免疫抑制剤を投与する工程を、包含する。提供されるなお別の実施形態は、糖尿病の被験体を処置する方法であり、この方法は、被験体に、有効用量のＥＧＦ５１Ｎおよびガストリン１７の少なくとも１つからなる島新生治療のための組成物を投与する工程、ならびに有効用量のタクロリムスおよびシロリムスの各々を投与する工程を、包含する。提供されるなお別の実施形態は、糖尿病の被験体を処置する方法であり、この方法は、被験体に、有効用量の、ＥＧＦ５１Ｎおよびガストリン１７の少なくとも１つからなる島新生治療のための組成物を投与する工程、ならびに有効用量の、タクロリムス、ダクリズマブおよびシロリムスのうちの少なくとも１つを投与する工程を、包含する。この組成物または薬剤は、薬学的に受容可能な緩衝液を、さらに含み得る。
【００２６】
本明細書中で、糖尿病の被験体の処置のためのキットもまた、提供される。このキットは、免疫抑制剤、Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ組成物、および容器を含む。このキットは、使用のための指示書をさらに含み得る。
【００２７】
ガストリン／コレシストキニン（ＣＣＫ）レセプターリガンドおよび免疫応答の抑制のための薬剤を含有する、糖尿病を処置するための薬学的組成物が、提供される。ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドは、１つの実施形態において、ガストリン（例えば、ガストリン１７Ｍｅｔ１５、またはガストリン１７Ｌｅｕ１５である。
【００２８】
この薬学的組成物は、例えば、非経口投与のために処方される。あるいは、この薬学的組成物は、経口投与のために処方されるか、非経口投与のために処方されるか、または皮下注射、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射、静脈内（ｉ．ｖ．）注射および筋肉内注射からなる群から選択される投与経路のために処方される。この組成物は、全身投与のために処方される。この組成物は、経皮送達および粘膜送達からなる群から選択される投与経路のために処方される。
【００２９】
本発明の特徴は、ガストリン／ＣＣＫリガンドレセプターおよび免疫応答を抑制する因子を含む組成物を被験体に投与することによって、糖尿病被験体を処置する方法である。この因子は、例えば、タンパク質であり得るか、または抗体の全部または一部であり得る。あるいは、因子は薬物であり得、これは、本明細書中で使用される場合、例えば、約５，０００ダルトン未満、約２，０００ダルトン未満、または約１，０００ダルトン未満の分子量を有する低分子量化合物を意味する。
【００３０】
さらに、ガストリン／ＣＣＫレセプターは、ガストリン１７を含み、例えば、ガストリン／ＣＣＫリガンドレセプターは、１５位においてｌｅｕを有するか、または１５位においてｍｅｔを有するヒトガストリン１７である。
【００３１】
免疫応答を抑制するための因子は、以下のうちの少なくとも１つであり得る：ラパマイシン；コルチコステロイド；アザチオプリン；ミコフェノレートモフェチル（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌａｔｅ  ｍｏｆｅｔｉｌ）；シクロスポリン；シクロホスファミド；メトトレキサート；６−メルカプトプリン；ＦＫ５０６；ＩＳＡｔｘ２４７；１５−デオキシスペルグアリン；ＦＴＹ  ７２０；ミトキサントロン；２−アミノ−１，３−プロパンジオール；塩酸２−アミノ−２［２−（４−オクチルフェニル）エチル］プロパン−１，３−ジオール；６−（３−ジメチル−アミノプロピオニル）フォルスコリン；またはデメトイムノマイシン（ｄｅｍｅｔｈｉｍｍｕｎｏｍｙｃｉｎ）。例えば、ラパマイシンは、ＳＤＺ−ＲＡＤである。例えば、コルチコステロイドは、デキサメタゾンである。免疫応答を抑制し得る他の因子は、ガストリン／ＣＣＫリガンドレセプターの使用と共に、組成物の範囲内であると考えられる。あるいは、因子は、抗体のアミノ酸配列を含むタンパク質である。例えば、因子は、以下のうちの少なくとも１つである：ｈｕｌ  １２４；ＢＴＩ−３２２；アロトラップ（ａｌｌｏｔｒａｐ）−ＨＬＡ−Ｂ２７０；ＯＫＴ４Ａ；エンリモマブ（Ｅｎｌｉｍｏｍａｂ）；ＡＢＸ−ＣＢＬ；ＯＫＴ３；ＡＴＧＡＭ；バシリキシマブ（ｂａｓｉｌｉｘｉｍａｂ）；ダクリズマブ（ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）；抗胸腺免疫グロブリン；ＩＳＡｔｘ２４７；Ｍｅｄｉ−５００；Ｍｅｄｉ−５０７；Ａｌｅｆａｃｅｐｔ；エファリズマブ（ｅｆａｌｉｚｕｍａｂ）；またはインフリキシマブ（ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）。異なる実施形態において、免疫応答を抑制するための因子は、天然に存在するサイトカインまたはケモカイン（例えば、インターフェロン）またはグリアタンパク質（例えば、ＧＦＡＰもしくはＳ１００β）であり得る。さらに別の実施形態において、免疫応答を抑制するための因子は、ランダムなアミノ配列におけるアミノ酸残基のサブセットを有するコポリマー分子の集団を含む。例えば、コポリマーは、グラチラマーアセテート（ｇｌａｔｉｒａｍｅｒ  ａｃｅｔａｔｅ）、またはアミノ酸を含む別のコポリマーである（例えば、Ｆｒｉｄｋｉｓ−Ｈａｒａｌｉら，２００２，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓ．１０９：１６３５−１６４３を参照のこと）。
【００３２】
幾つかの実施形態において、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび免疫を抑制するための因子は、同時に投与される。あるいは、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび免疫を抑制するための因子は、連続的に投与される。同時の投与は、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび因子を組み合わせて、または別個に、互いの数分（例えば、１５分、３０分）または数時間（例えば、１時間、４時間）、または一日内でさえ投与することであり得る。連続的投与は、１日より多く、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび免疫を抑制するための因子の投与の間に経過することを意味する。糖尿病患者を処置するための方法の実施形態において、免疫抑制剤は、数日または約１週間の経過にわたって投与され、そしてガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドは、その後、例えば、因子もレセプターリガンドも投与しない期間後に投与される。
【００３３】
因子もレセプターリガンドも投与しない期間を使用して患者をモニタリングし、患者における免疫抑制の変化が観察され得るか否かを決定する。代替の実施形態において、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび免疫応答を抑制する因子の両方がまず、組み合わせて投与され得、次いで、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドの投与を中断し、そして免疫応答を抑制する因子の投与を継続する。本明細書における代替の実施形態は、一定の期間Ｉ．Ｎ．Ｙ．ＴＭ組成物を投与する工程を包含する、糖尿病患者を処置する方法である。この期間は、少なくとも１日、例えば、数日、例えば、少なくとも１週間、例えば、数週間、例えば、少なくとも６週間であり得、その後、少なくとも１つの免疫抑制剤を投与する。
【００３４】
ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドは、全身に投与され、例えば、静脈内、皮下、腹腔内、および筋内からなる群より選択される経路で、ボーラスとして投与される。静脈内投与は、注入（点滴）またはボーラスとして投与され得る。免疫応答を抑制するための因子は、例えば、この因子が経口的に適用可能な薬物である場合、経口的に投与され得る。あるいは、免疫応答を抑制するための因子は、例えば、静脈内、皮下、腹腔内、および筋内から選択される経路で、全身的に投与される。免疫応答を抑制するための因子は、例えば、タクロリムス、シロリムス、ＩＳＡｔｘ２４７、およびダクリズマブのうちの少なくとも１つであり得る。
【００３５】
この方法は、被験体における生理学的パラメーター（例えば、空腹時の血中グルコースレベル；膵臓インシュリン含量；膵臓β細胞含量；および膵島含量）を測定する工程をさらに包含し得る。この被験体は、糖尿病非ヒト哺乳動物であり、例えば、この被験体は、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスである。後者の被験体において、この方法は、インシュリンを投与していない場合の生存度を評価する工程をさらに包含し得る。あるいは、この被験体は、例えば、糖尿病の形態の徴候を有し、処置の必要があるヒト患者である。
【００３６】
本明細書中で示される別の実施形態は、糖尿病被験体を処置する方法であり、この方法は、有効用量のガストリン１７から構成されるガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを、この被験体に投与する工程、および有効用量の少なくとも１種の免疫抑制剤を投与する工程を包含する。示されるさらに別の実施形態は、糖尿病被験体を処置する方法であり、この方法は、有効用量の少なくとも１つのガストリン１７を含む組成物ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを、この被験体に投与する工程、および有効用量のタクロリムス（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）およびシロリムス（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）の各々を投与する工程を包含する。示されるさらに別の実施形態は、糖尿病被験体を処置する方法であり、この方法は、有効用量のガストリン１７から構成されるガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを、この被験体に投与する工程、および有効用量のタクロリムス、ダクリズマブ（ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）、ＩＳＡｔｘ２４７およびシロリムスの少なくとも１つを投与する工程を包含する。本明細書中の組成物および薬剤は、薬学的に受容可能な緩衝液をさらに含み得る。
【００３７】
糖尿病被験体を処置するためのキットもまた、本明細書中で提供され、このキットは、免疫抑制剤、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび容器を含む。このキットは、使用のための説明書をさらに含み得る。本明細書中の任意のキットは、単位用量（すなわち、有効用量）の組成物およびその中の少なくとも１つの薬剤のいずれかまたは両方をさらに含み得る。
【００３８】
（発明の詳細な説明）
本発明は、１つの局面において、島新生物治療（ｉｎｌｅｔ  ｎｅｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｔｈｅｒａｐｙ、Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ）の組成物および方法、例えば、免疫抑制剤と組み合わせたガストリンおよびＥＧＦに関し、これはインビボにおいて新たなβ細胞の増殖を刺激し、島質量を増加させ、そして糖尿病被験体（例えば、糖尿病のヒトおよび動物）において改善されたグルコース耐性を生じる。
【００３９】
ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびＥＧＦレセプターリガンドは、単回組み合わせ用量で投与され得るか、または任意の順番で別々に投与され得る。これらの組成物の「有効組み合わせ用量」は、インシュリン分泌細胞の数の増加、もしくは血中インシュリンレベルの増加、またはβ細胞の質量の増加を生じる量である。ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドは、一実施形態において、１７アミノ酸残基長のヒトガストリンであり、その１５位の残基は、ロイシンであり（１−１７Ｌｅｕ１５、本明細書中でガストリン１７ｌｅｕ１５と呼ばれる）；さらに、ＥＧＦレセプターリガンドは、ヒトＥＧＦ５１Ｎである。有効用量は、ＥＧＦレセプターリガンドに対する比が１より大きいガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを含み得、例えば、有効用量は、ＥＧＦレセプターリガンドに対する比が１０より大きいガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを含む。この用量の簡便な投与経路は、全身注射（例えば、皮下ボーラス）を用いるものである。
【００４０】
さらなる実施形態において、レシピエント被験体は、免疫系を抑制する薬剤を投与される。例えば、この薬剤は、低分子量有機化合物であり、例えば、タクロリムス、シロリムス、シクロスポリンおよびコルチゾン、ならびに表１に示される他の薬物の少なくとも１つである。代替の実施形態において、この薬剤は抗体であり、例えば、この抗体は、抗ＣＤ１１ａおよび他の抗体（これもまた表１に示される）である。さらに別の代替において、免疫抑制剤は、例えば、ＧＦＡＰまたはＳ１１０βに対する免疫スケジュールの後の被験体によって構築される抗体であり得る。この被験体は、糖尿病であり得、例えば、この被験体は、非肥満糖尿病マウス（ＮＯＤマウス）またはストレプトゾトシンで処置されたマウスである。この被験体は、ヒト、例えば、Ｉ型糖尿病またはＩＩ型糖尿病を有するか、または妊娠糖尿病を有するか、または過去に糖尿病を有していたことがある（例えば、過去の妊娠中に妊娠糖尿病を有していたことがある）、糖尿病患者である。
【００４１】
さらに、新たに発生したβインシュリン分泌細胞または島のサイズおよび機能を評価することは、以下：島β細胞の質量、島β細胞の数、島β細胞の割合、血中グルコース、血清グルコース、血液グリコシル化ヘマグロビン、膵臓β細胞の質量、膵臓β細胞の数、空腹時の結晶Ｃペプチド含量、血清インシュリンおよび膵臓インシュリン含量の群から選択されるパラメーターを測定することである。
【００４２】
糖尿病が特定の自己免疫疾患を引き起こすため、Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭの実施形態は、治療有効用量の、例えば、ＥＧＦおよびガストリン／ＣＣＫの各々に対するレセプターのリガンド（例えば、ガストリンおよびＥＧＦの組み合わせ）を、免疫系を抑制する１種以上の薬剤（すなわち、免疫抑制剤）でも処置された被験体または患者に全身投与することである。ガストリンとＥＧＦとの組み合わせは、糖尿病患者の処置について記載されるように、全身投与され、ここでこの目的は、膵臓内でデノボで形成される島の新生を刺激することである（米国特許第５，８８５，９５６号同第６，２８８，３０１号を参照のこと）。
【００４３】
多数の異なる終点が、ガストリンおよびＥＧＦ処置、またはガストリンおよびＥＧＦおよび免疫抑制剤の組み合わせでの処置が、島移植物中のβ細胞の機能的質量を増加させるか否かを決定するために使用され得る。これらとしては、マウスにβ細胞刺激薬（例えば、グルコースまたはアルギニン）をマウスに注射した後の、循環しているヒトＣペプチドおよびヒトインスリンの、増加した血漿レベルの測定；島移植物から抽出される、増加したヒトインスリン免疫反応性またはｍＲＮＡレベルによって示される、ガストリン／ＥＧＦ処置に対する応答；ならびに処置された動物の形態学的測定によって決定される、増加したβ細胞の数が挙げられる。ヒト島の増強されたβ細胞機能はまた、ストレプトゾトシンにより誘導される糖尿病または遺伝的（ＮＯＤ）糖尿病に罹患するレシピエントマウスにおける高血糖症の逆転によって示され得る。本明細書中の実施例において、糖尿病レシピエント被験体の、ガストリン（ＥＧＦと共にかまたは一種以上の免疫抑制剤と共に）での処置後の増強されたβ細胞機能は、インスリンの脱離の際に改善される生存によって、および空腹時血中グルコースレベルにより示される高血糖症を補正することによって、実証された。さらに、膵臓インスリンと血漿Ｃペプチドの両方の増加が観察された。
【００４４】
【表１−１】
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【００４５】
【表１−２】
2005533775.tif 000003
【００４６】
【表１−３】
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【００４７】
【表１−４】
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【００４８】
【表１−５】
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本明細書中の方法および組成物は、ガストリンおよびＥＧＦおよび免疫抑制剤を用いる臨床試験が、Ｉ型糖尿病およびＩＩ型糖尿病患者において、膵臓内での内因性β島細胞増殖の刺激を遅くするという確証を増加させる。
【００４９】
本明細書中において使用される場合、用語「ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンド」とは、同じ組織内もしくは隣接する組織内、または同じ個体内にあるＥＧＦレセプターもまた刺激され、インスリンを産生する膵臓島細胞の新生が誘導されるように、ガストリン／ＣＣＫレセプターを刺激する化合物を包含する。このようなガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドの例は、米国特許第６，２８８，３０１号に与えられ、そして種々の形態のガストリン（例えば、ガストリン３４（ビッグガストリン）、ガストリン１７（リトルガストリン）、およびガストリン８（ミニガストリン））；種々の形態のコレシストキニン（例えば、ＣＣＫ  ５８、ＣＣＫ  ３３、ＣＣＫ  ２２、ＣＣＫ  １２およびＣＣＫ  ８）；ならびにＥＧＦレセプターリガンドとの同じ相乗活性を示し、そしてＥＧＦレセプターリガンドと相乗的に作用する場合に、成熟膵臓の細胞の分化を誘導してインスリンを分泌する島細胞を形成し得る、他のガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドが挙げられる。上記のもの（ガストリン／ＣＣＫレセプター（例えば、Ａ７１３７８（Ｌｉｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２５８（４  Ｐｔ  １）：Ｇ６４８，１９９０））のペプチドと非ペプチドアゴニストとの両方、または部分アゴニストを含む）の活性アナログ、フラグメントおよび他の修飾もまた意図され、これは、単独でかまたはＥＧＦレセプターリガンドと組み合わせて、成熟膵臓における細胞の分化を誘導して、インスリンを分泌する島細胞を形成する。
【００５０】
小さい形態のガストリン（例えば、ガストリン１７）は、ペプチド合成によって経済的に調製され、そしてこの合成ペプチドは、市販されている。合成されたヒトガストリン１７、および誘導体（例えば、本明細書中の実施例において使用されるような、１５位のメチオニンの代わりにロイシンを有するヒトガストリン１７）はまた、Ｂａｃｈｅｍ  ＡＧ，Ｂｕｂｅｎｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ、およびＲｅｓｅａｒｃｈｐｌｕｓ，Ｎａｎａｓｑｕａｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋから入手可能である。
【００５１】
ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドはまた、上記リガンドの活性なアナログ、フラグメントおよび他の修飾物を包含する。このようなリガンドはまた、内因性のガストリン、コレシストキニンまたは同様に活性のペプチドの、組織貯蔵の部位からの分泌を誘導する化合物を包含する。これらの例は、ガストリン放出ペプチド、オメプラゾール（これは、ガストリン酸の分泌を阻害する）、およびダイズ油トリプシンインヒビター（これは、ＣＣＫ刺激を増加させる）である。
【００５２】
本明細書で使用する場合、用語「ＥＧＦレセプターリガンド」は、同じ組織または隣接する組織、あるいは同じ個体のガストリン／ＣＣＫレセプターも刺激される場合に、インスリン産生ランゲルハンス島細胞の新生が誘導されるようなＥＧＦレセプターを刺激する化合物を含む。このようなＥＧＦレセプターリガンドの例としては、ＥＧＦ１−５３である完全長ＥＧＦが挙げられ、さらに、ＥＧＦ１−４８、ＥＧＦ１−４９、ＥＧＦ１−５２、ならびにそれらのフラグメントおよび活性アナログが挙げられる。ＥＧＦレセプターリガンドの他の例は、ＴＧＦα形態であり、１−４８、１−４７、１−５１ならびにアンフィリグリンおよびｐｏｘウイルス成長因子、ならびにガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドとの相乗的な活性が実証されている任意のＥＧＦレセプターリガンドが挙げられる。これらは、上記のものの活性アナログ、フラグメントおよび改変を含む。また、ＣａｒｐｅｎｔｅｒとＷａｈｌ（Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ（ＳｐｏｒｎとＲｏｂｅｒｔｓ編），４章，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，１９９０）も参照のこと。
【００５３】
ＥＧＦレセプターリガンドである化合物の群は、さらに、正常な、すなわち野生型のＥＧＦの改変体である「改変されたＥＧＦ」を含む。改変は、１つ以上の生物学的活性（例えば、ＥＧＦの浄化速度）に影響することが示されている。この用語は、例えば、種々の残基位置で１個または数個のアミノ酸置換を有する、ヒトＥＧＦのアミノ酸配列と実質的に類似するアミノ酸配列を有するペプチドを含む。
【００５４】
組換えＥＧＦ形態は、一般的に、構造および活性に変化を有するように遺伝学的に操作されている。例えば、ロイシン残基によって置換された位置２１のメチオニンを有するＥＧＦが記載されている（米国特許第４，７６０，０２３号）。５１残基を有する、すなわちｈＥＧＦの位置５２および位置５３の２つのＣ末端残基を欠き、そして位置５１において中性のアミノ酸置換を有する、組換えヒトＥＧＦ（ｈＥＧＦ）は、ＥＧＦ活性を保持し、微生物的生産プロセスの間、および被験体への投与の後で、プロテアーゼ分解に対してより耐性である。ＥＧＦおよびＴＧＦαに有意な類似性を有するタンパク質ファミリーをコードする一連の核酸分子が記載されている（ＷＯ  ００／２９４３８）。中性または酸性のアミノ酸で置換された残基１６のヒスチジンを有するＥＧＦ変異体（変異化ＥＧＦ）が、記載されており（ＷＯ  ９３／０３７５７）、このような形態は、低いｐＨ値で活性を保持する。ＥＧＦおよびＥＧＦαの化学的アナログおよびフラグメントは、ＥＧＦレセプターファミリーの種々のメンバーに結合する能力を保持する（米国特許第４，６８６，２８３号）。ＥＧＦまたはＴＧＦαの種々の改変により、組換えタンパク質の生産、インビトロおよびインビボでの安定性、ならびにインビボでの活性の１つ以上に影響する有利な特性が与えられる。本明細書中の実施例において使用される好ましい組換え改変ＥＧＦレセプターリガンドは、位置５１にアスパラギンを有する、５１アミノ酸長のヒトＥＧＦのＣ末端短縮削除形態（本明細書ではＥＧＦ５１Ｎという）であり、ＥＧＦタンパク質は実質的に完全なＩ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ活性を保持し、正常の、すなわち野生型のｈＥＧＦと少なくともほぼ同じか、またはそれよりも大きいインビボおよび／またはインビトロでの安定性を有する（米国特許出願第１０／０００，８４０号、Ｓ，Ｍａｇｉｌら、２００３年５月１２日にＰＣＴ／ＵＳ０２／３３９０７として公開され、本明細書にその全体が参考として援用される）。
【００５５】
本明細書で使用する場合、用語「免疫抑制剤」とは、免疫応答を抑制する任意の薬剤を意味する。例示的な免疫抑制剤は、表１に示され、それらの薬剤の任意の誘導体または機能的等価物は、本明細書および特許請求の範囲に記載される本発明の実施形態として適切であると考えられる。
【００５６】
本明細書で使用する場合、用量スケジュールとは、Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ組成物および１種類以上の免疫抑制剤をそれぞれ有効用量で、一緒にまたは別々に投与するプロトコルをいい、１日あたりに送達される組成物の量、および各組成物が投与される持続時間または期間を含む。
【００５７】
大部分のインスリン依存性糖尿病患者は、少なくとも１日の基準でインスリン注射を必要とする。インスリンの一日あたり複数回の投薬が、病気の特定の状況または糖尿病管理のための食事のもとで必要であり、インスリン投与は、頻繁なグルコースのモニタリングの結果によって示され、糖尿病患者の糖尿病の最適な疾患管理のために別の活動が必要であり、これは、例えば、１日に５回ほどの頻度で行われる。
【００５８】
免疫抑制剤との併用における首尾良い島細胞新生療法に起因する糖尿病の寛解は、グルコースの断食時血中レベルの減少によって、および糖消費の食事的チャレンジに応答した高い血中グルコースのレベルの減少および持続時間の減少によって示される。首尾良い島細胞新生療法を達成すると、血中グルコースレベルのモニタリングから得られるデータに示されるように、例えば、１日あたり５回の注射から２回の注射へ；１日あたり２回の注射から１回の注射へ；および、１日あたり１回の注射から注射なしの状態へとインスリン投与が減少する。糖尿病患者を処置する場合、断食の後および他の生理学的条件下で、インスリン投薬を血中グルコースのレベルに調節することは、糖尿病学の当業者に公知である。
【００５９】
被験者に投与されるべきＩ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ組成物の投薬は、吸収、分布、循環における半減速度、代謝、排出、および本明細書中の実施形態のレセプターリガンドの毒性についての基準を含む標準的なデータにおける、種の間の公知の変化（例えば、霊長類種とげっ歯類種）について調節される。一般的に、投薬は、霊長類種への投与よりも、げっ歯類への投与のほうが約６倍〜約１００倍大きくなるように調節される。
【００６０】
表１の免疫抑制剤または他の等価な薬剤は、製造者が供給するように投与され、薬理学分野の当業者に公知であるようにして、被験体の体重について基準化する。例えば、タクロリムスは一般的に、注射によって、または経口的に投与され、シロリムスは一般的に、経口的に投与される。
【００６１】
レセプターリガンド組成物および免疫抑制剤の投与の様式としては、皮下経路、経皮経路、筋肉内経路、腹腔内経路、静脈内経路、鼻腔内経路、および経口経路が挙げられるが、これらに限定されない。化合物は、任意の簡便な経路によって、例えば、注入またはボーラス注射、ポンプ、内皮層または粘膜皮膚層（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜および小腸粘膜など）を介した吸収によって、投与され得る。本明細書中のレセプターリガンドは、１つまたは複数の種類の他の生物学的活性薬剤と組み合わせて投与され得る。例えば、本明細書中の組成物および方法のレシピエントには、細菌感染がある場合には１種類以上の抗生物質が、頭痛がある場合にはアスピリンが投与され得る。本明細書中のレセプターリガンドの投与は、好ましくは、全身的経路による。
【００６２】
本発明はまた、薬学的組成物も提供する。このような組成物は、治療的有効量の治療剤、および滅菌した薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を含む。このようなキャリアとしては、生理食塩水、緩衝化生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、およびそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。処方物は、投与の様式に適合されるべきである。
【００６３】
組成物は、所望の場合には、微量の湿潤剤もしくは乳化剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ）、またはｐＨ緩衝剤）も含み得る。組成物は、液体溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、ピル、カプセル、持続放出型処方物、または粉末であり得る。組成物は、慣習的な結合剤およびキャリア（例えば、トリグリセリド）を用いて坐剤として処方され得る。経口処方物は、標準的キャリア（例えば、薬学等級のマンニトール、ラクトース、スターチ、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリド、セルロース、炭酸マグネシウムなど）を含み得る。
【００６４】
１つの実施形態において、組成物は、ヒトへの静脈内投与に適した薬学的組成物として慣用的な手順に従って処方される。全身投与のための組成物は、代表的に、滅菌等張性水性緩衝液中の溶液である。必要な場合、組成物はまた、さらなる成分（例えば、可溶化剤）を含み得る。一般的に、成分は、別々にまたは単位投薬形態に予め混合してのいずれかで、供給される。溶液形態に加えて、組成物は、乾燥凍結乾燥粉末として、または非水性濃縮物として、例えば、活性剤の量を示すアンプルまたはサシェ剤のような密閉容器で供給され得る。組成物が注入によって投与される場合、滅菌薬学的等級の水または生理食塩水を含む注入ボトルを使用して調合され得る。組成物が注射によって投与される場合、注射のための滅菌水または生理食塩水のアンプルは、成分が投与前に混合され得るように提供され得る。
【００６５】
本発明の組成物の治療剤実施形態が中性形態または塩形態として処方され得る。薬学的に受容可能な塩としては、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などから誘導される塩のような遊離アミノ基を用いて形成される塩、およびナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第２鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどから誘導される塩のような遊離カルボキシル基を用いて形成される塩が挙げられる。
【００６６】
特定の障害または状態の処置において有効であり得る本明細書中の組成物の各治療剤の量および互いに対するそれらの相対量は、障害または状態の性質に依存し得、そして標準的な臨床的技術によって決定され得る。処方物中で使用される正確な用量はまた、投与の経路、および所定の患者の疾患または障害の程度に依存し、そして医師の判断および各患者の環境に従って決定されるべきである。しかし、非経口投与のための適切な投薬範囲は、一般的に、ＥＧＦレセプターリガンドについて、体重１ｋｇ当たり、約０．０１μｇまたは１μｇ、約１００μｇまで、約２００μｇ、または約５００μｇまでの活性化合物である。好ましくは、ＥＧＦレセプターリガンドの用量範囲は、体重１ｋｇ当たり０．０１μｇ〜１００μｇである。さらに、非経口投与のための適切な投薬範囲は、一般的に、ガストリンレセプターリガンドについて、体重１ｋｇ当たり、約０．１μｇまたは約０．２μｇ、または０．５μｇ〜約２ｍｇ、または約３ｍｇ、または約５ｍｇまでである。好ましくはガストリンレセプターリガンドの用量範囲は、体重１ｋｇ当たり０．１μｇ〜２μｇである。
【００６７】
有効用量は、インビトロまたは動物モデル試験システムから誘導される用量−応答曲線から外挿され得る。毎日の用量は、単一用量として投与されるか、または複数のより小さい画分の用量に分けられて、その日の間で数回で投与される。
【００６８】
坐剤は、一般的に、約０．５重量％〜約１０重量％の範囲で活性成分を含み；経口処方物は、好ましくは、約１０重量％〜約９５重量％の活性成分を含む。
【００６９】
本明細書中の本発明の実施形態は、本発明の薬学的組成物の１つ以上の成分で満たされた１つ以上の容器（例えば、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびＥＧＦレセプターリガンドの各々または両方、ならびに１種以上の免疫抑制剤の単位投薬量を有する容器）を含む薬学的パックまたはキットをまた提供する。このような容器に関するものは、薬学的製品または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府系機関によって規定される形態の情報であり得、この情報は、ヒトの投与のための製造、使用または販売の機関による承認を反映する。このパックまたはキットは、特定の実施形態において、例えば、島新生の誘導および糖尿病からの寛解の前に、投薬スケジュールの間、投与される１つ以上の容器（例えば、インシュリンを有する容器）を含み得る。
【００７０】
いかなる特定のモデルまたは機構によっても制限されないが、糖尿病の初期の発症は、島破壊の異なる段階（例えば、後期の段階の糖尿病とは異なる集団の膵臓細胞を有する）によって特徴付けられることが予期される。例えば、初期発症糖尿病または糖尿病前患者が機能的な（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ）β細胞質量およびより軽いレベルの島細胞前駆体集団（この集団は、後期段階のＩ型糖尿病ではより低いかまたは欠損しているかまたは欠いているようである）を有するようである。その理由のため、本発明は、別の一般的な実施形態において、糖尿病の発症を予防するかまたは糖尿病（例えば、初期発症糖尿病）を処置するための方法が提供され、この方法は、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび免疫応答を抑制する薬剤を含む組成物を、これを必要とする哺乳動物に投与する工程を包含する。さらに、このような処置が、糖尿病患者の長期の維持のために長期間にわたって使用され得ることが予期される。
【００７１】
本発明は、１つの局面において、被験体の島内の既存の機能的β細胞質量を拡張させるか、または精製された島の移植片の糖尿病哺乳動物レシピエントでの膵臓島移植片内の機能的β細胞質量を拡張させるための方法を特徴とする。この方法は、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドの各々および免疫応答を抑制する薬剤の有効用量を含む組成物を投与する工程を包含する。
【００７２】
損傷と組み合わせたガストリンは、新規なβ細胞の増殖（ｇｒｏｗｔｈ）（増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ））を刺激し得、増加した島質量を生じ得る（Ｒｏｏｍａｎ，Ｉ．ら、２００２，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ５１（３）、６８６−６９０）。ガストリンは、膵臓島前駆体細胞の成熟インシュリン産生細胞への分化をもたらし得、従って、島新生を増強し、糖尿病の症状を逆転させるかまたは糖尿病の進行を阻害し得る。
【００７３】
ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび免疫抑制剤は、単一の組合せ用量で投与され得るかまたは任意の順序で別々に投与され得る。これらの組成物の「有効組合せ用量」は、インシュリン分泌細胞の数の増加、またはインシュリン血液レベルの増加、またはβ−細胞質量の増加を生じる用量である。ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドは、１つの実施形態において、１７アミノ酸残基長のヒトガストリンであり、１５位の残基は、ロイシン（ガストリン１７Ｌｅｕ１５）；またはメチオニン（ガストリン１７Ｍｅｔ１５）である。この用量を投与する簡便な投与経路は、全身注射（例えば、皮下ボーラス）である。
【００７４】
被験体は、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび免疫系を抑制する薬剤を投与される。１つの実施形態において、薬剤は、低分子量有機化合物であり、例えば、Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ、ＩＳＡｔｘ２４７、シクロスポリン、ならびにコルチゾンおよび表１に示される他の薬物のうちの少なくとも１つである。代替の実施形態において、薬剤は、抗体であり、例えば、この抗体は、抗ＣＤ１１ａであり、そして他の抗体はまた、表１に示される。被験体は、糖尿病哺乳動物（例えば、非肥満糖尿病マウス、ＮＯＤマウス）であり得る。被験体は、ヒト糖尿病患者（例えば、Ｉ型またはＩＩ型糖尿病を有する、または妊娠糖尿病を有する、または過去に妊娠糖尿病を有した）であり得る。さらに、新たに発生したβインシュリン分泌細胞または島のサイズおよび機能を評価することは、以下からなる群より選択されるパラメーターを測定することである：島β細胞質量、島β細胞数、島β細胞％、血糖、血清グルコース、血中グリコシル化ヘモグロビン、膵臓β細胞質量、膵臓β細胞数、絶食血漿Ｃペプチド含有量、血清インシュリン、および膵臓インシュリン含有量。
【００７５】
糖尿病は特定の場合において、自己免疫疾患であるため、実施形態は、例えば、ガストリン／ＣＣＫに対するレセプターのリガンドの治療有効量の、免疫応答を抑制する１つ以上の薬剤でもまた処置される被験体または患者への全身投与である（表１を参照のこと）。
【００７６】
多数の異なる指標が、ガストリンおよび免疫応答を抑制する薬剤での処置が膵島移植におけるβ細胞の機能量を増加するか否かを決定するのに用いられ得る。これらとしては、β細胞刺激物質（例えば、グルコースまたはアルギニン）をマウスに注射した後に、増大された循環ヒトＣペプチドおよびヒトインスリンの血漿レベルの測定；増加したヒトインスリン免疫反応性または膵島移植物から抽出されたｍＲＮＡレベルによって示される、ガストリンおよび免疫抑制剤での処置に対する応答；ならびに、処置された動物における膵島の形態計測測定によって決定されるβ細胞の増加した数が挙げられる。ヒト膵島の増強されたβ細胞機能はまた、ストレプトゾトシン誘導性または遺伝性（ＮＯＤ）の糖尿病を有するレシピエントマウスにおける高血糖の逆転によって示され得る。
【００７７】
本願における方法および組成物は、ガストリンおよび免疫抑制剤での処置の臨床治験がＩ型およびＩＩ型の糖尿病患者の膵臓における内因性のβ膵島細胞増殖の刺激を示すという信頼性を増す。
【００７８】
本願における方法はまた、種々の組成物（例えば、ヒト膵島のインビボでの新規増殖を刺激する、投与されたガストリン／ＣＣＫレセプターリガンド、または、投与されたガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドにより誘導される別の内因性因子）の血漿レベルを決定するのに利用可能である。第Ｉ相の薬物動力学的データと組み合せて、これらの方法を用いて得られたデータは、ヒトの有効用量範囲を決定するためのヒト被験体における用量探索研究を減らすことによって、臨床研究の設計を改善し得る。
【００７９】
免疫系を抑制する薬剤またはガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドは、組み合せて膵島前駆細胞のインスリン分泌性膵島細胞への分化を長期間にわたって誘導するのに十分な量で提供される。
【００８０】
一般に、本明細書中の実施形態のいずれかについてのとおり、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび免疫抑制剤を用いた処置に関して、被験体は、哺乳動物（例えば、ヒト）であり得る。さらに、この哺乳動物は、齧歯動物（例えば、マウスまたはラット）、またはイヌ、ネコ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマ、または類人猿（例えば、ゴリラまたはチンパンジー）であり得る。
【００８１】
別の局面では、本発明は、哺乳動物における膵島新生を誘導するための方法を提供し、この方法は、各々、島前駆細胞の細胞分化を増加させて膵臓における島破壊を阻害し、それにより、膵島新生の正味の増加を有するに充分な量の、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび免疫系を抑制する薬剤を含む組成物をこの哺乳動物に投与する工程を包含する。
【００８２】
この組成物は、成熟インスリン分泌細胞への島前駆細胞の分化を誘導するに有効な投与量である。この組成物は、薬学的に受容可能なキャリア、薬学的に受容可能な緩衝液、または薬学的に受容可能な塩に存在し得る。
【００８３】
別の局面では、本発明は、糖尿病を処置または予防するためのキットを提供し、このキットは、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび免疫系を抑制する薬剤を含む組成物、容器、ならびに使用説明書を備える。このキットの組成物は、薬学的に受容可能なキャリアをさらに含み得る。このキットの組成物は、少なくとも１単位投与量で存在し得る。このキットは、少なくとも１単位投与量のインスリンを含み得る。
【００８４】
本明細書中で用いられる場合、投与スケジュールとは、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび少なくとも１つの免疫抑制剤を投与するためのプロトコルであって、各々が有効用量であり、一緒にまたは別々に投与され、そして、１日当りの、および各組成物が投与される持続期間または期間にわたって送達される組成物量を含む、プロトコルをいう。
【００８５】
他に定義されない限り、本明細書における全ての専門用語および科学用語は、本発明が関する分野の当業者によって通常理解される場合と同じ意味を有する。本明細書中に記載される方法および材料と類似かまたは等価な方法および材料が本発明の実施において用いられ得るが、適切な方法および材料が以下に記載される。本明細書中で言及される全ての刊行物、特許、および特許出願は、その全体が参考として援用される。本明細書中の実施例および請求の範囲は、例示の目的のためであり、さらに限定することを意図しない。
【実施例】
【００８６】
（実施例１：島新生組成物および免疫抑制のための組成物で処置した動物の生存）
慢性糖尿病についての本明細書中のマウスモデル（ＮＯＤマウス）を用いて、被験体を、Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ（これは、ＥＧＦ５１Ｎおよびガストリン１７１ｅｕ１５である）についての組成物と組み合わせた免疫抑制剤の影響について試験した。実験の設計を表２に示す。被験体が約２５週齢のときに処置を開始した。被験体を、４つの処置群に配置した：Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ組成物の投与（第２群）、免疫抑制剤の投与（第３群）、両方の組み合わせの投与（第１群）またはビヒクル緩衝液のみで処置したコントロール群（第４群）。３０ｍＭより高い血中グルコース（およびケトーシス）レベルを有する重症の糖尿病被験体は、３〜４週間の前処置にわたる、そして処置の間に６週間にわたる、レギュラー（Ｒ）ブタインスリンおよびＮＰＨ（Ｎ）ウシインスリンの１：１混合物（０．４Ｕの総インスリン）の１日１回ｓｃ注射として投与するというインスリン処置を受けた。インスリン前処置後のこれらの薬剤の投与のためのプロトコルを、表２に示す。
【００８７】
【表２】
2005533775.tif 000007
組成物は、インスリン治療で予め処置されたマウスの生存を延長した（図１；第２群、黒四角）。これらの被験体の半分は、インスリンのみで処置した被験体（第４群、白丸）の１１％と比較して、インスリンおよびＩ．Ｎ．Ｔ．ＴＭの６週間のクールを生存した（第２群）。Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭは、インスリンを用いた処置およびシロリムスおよびタクロリムスを用いた免疫抑制（第３群、白四角）とほぼ同じ生存を生じた。インスリン投与後のＩ．Ｎ．Ｔ．ＴＭおよび免疫抑制の両方を用いた第１群のマウスの処置は、６週間の処置持続期間全体についてのコホート（第１群、黒丸）の完全な生存（１００％）を生じた。
【００８８】
インスリンの投与を止めてから一週間にて、インスリン処置されたビヒクルコントロール群における１１％に対して、Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭおよび同時免疫抑制群において５６％が生き残った。１週間後の、Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭのみの投与の生き残りも、免疫抑制薬のみの投与の生き残りも、存在しなかった。インスリン処置をやめた後３週間にて、Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭおよび同時免疫抑制薬を受ける群１の動物の３１％が、生き残り、ビヒクルコントロールを受ける群４の動物中に生き残りはいなかった。
【００８９】
Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭおよび免疫抑制群における群１の生存しているマウスにおける空腹時血糖値は、インスリン処置の停止後３週間の期間にわたる有意な減少を示した（図２データ）。
【００９０】
【表３】
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インスリン置換療法を受ける慢性の重篤な糖尿病を有するＮＯＤマウスを用いて得られるデータから、Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ組成物のみの投与は生存を延長し、免疫抑制薬のみの投与よりもより効果的であった。インスリン置換療法の６週間の期間についての完全な生存が、同時Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ処置および免疫抑制を受ける群において見られた。インスリン療法を止めた後３週間にて、７週間の間Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭおよび同時免疫抑制を投与された群１の動物のみが、有意な生存を示した（３１％；表３）。さらに、生存しているマウスは、３週間にわたる血糖値において有意な減少を示した。
【００９１】
（実施例２．Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ組成物および免疫抑制薬での処置後の慢性糖尿病マウスの膵臓インスリン含量）
表４は、雌ＮＯＤマウスから得られたサンプル中の空腹時血糖（ＦＢＧ）および膵臓インスリン含量における変化の時間経過を、このマウス種の被験体における増加する週齢の関数として示す参照データを含む。これらのパラメーターの間の関係が、観察される。
【００９２】
これらのデータは、ＮＯＤマウスにおける血糖の有意の上昇が観察される前に、膵臓インスリン含量の急速な減衰により示されるように、有意なβ細胞欠損が生じた。１０〜１２週齢まで、ＦＢＧが４．６ｍＭで正常のままであるのに、膵臓インスリン含量が３７％減少した。さらに、９５％を超えて減少した膵臓インスリン含量と関連した重大なβ細胞崩壊にも関わらず、ＮＯＤマウスにおいて中程度の高血糖症（ＦＢＧ７．４ｍＭ）のみが、１２〜１５週齢の間に観察された。さらに、血糖が３０ｍＭを超えて上昇した場合、観察された膵臓インスリン含量は、正常な膵臓インスリン含量の０．１％未満であった。
【００９３】
これらのデータは、血糖における非常に大きな減少が、中程度の量のβ細胞再生のみの結果として得られ、その結果、自己免疫破壊に起因するβ細胞欠失がまた捕捉され得る場合、再生がわずか３％だけ膵臓インスリン含量を増加することを示す。
【００９４】
【表４】
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表５は、インスリン治療の中止後の実施例１のマウスの膵臓インスリン含量を示す。生存しているマウスは、３週間目で屠殺されるか（群１における生存しているマウスｎ＝５）、または高血糖症糖尿病ケトアシドーシスに起因して瀕死である場合、その前に屠殺された（群１で生存しているマウスなし、全てのマウスは群２および３由来）。
【００９５】
表５におけるデータは、群１の生存していないマウスにおける膵臓インスリン含量を示し、そして群２および群３は、処置されない動物についての開始値、４４ｎｇ／ｇから増加を示さなかった（１２〜１５週齢の糖尿病ＮＯＤ動物のＦＢＧレベル、ＦＢＧ＞３０ｍＭ）。しかし、Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭの同時免疫抑制薬との投与を受ける群における生き残っているマウスにおける膵臓インスリン含量における有意な（約３０倍）増加があった（群１）。
【００９６】
【表５】
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生存しているマウスの中で、膵臓インスリン含量において観察される増加は、血糖値において観察される減少と相関している（図３）。最も高い膵臓インスリンレベル（＞１０００ｎｇ／ｇ）を有する２匹の別個の被験体マウスが、各々非糖尿病範囲（３〜６．６ｍＭ）における空腹時血糖値レベルを達成した。
【００９７】
（実施例３：島新生組成物（ｉｓｌｅｔ  ｎｅｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）での、かつ免疫抑制のための組成物での処置後の最近の発症の糖尿病マウスの膵臓インスリン含量および血漿Ｃペプチドレベル。）
従って、非肥満糖尿病マウスを、毎日の朝の試験を含む方法により、糖尿病の最初の様子についてモニタリングし、糖尿の証拠を得た。モニタリングは、１０週齢にて開始され、糖尿の徴候が、Ｋｅｔｏ−Ｄｉａｓｔｉｘ（Ｂａｙｅｒ）を使用して評価された。さらに、糖尿の開始の時間にて、被験体を、空腹時血糖（ＦＢＧ）のレベルを測定することにより糖尿病の発症についてさらにモニタリングした。このアッセイを使用して、２つの連続日における被験体についての６．６ｍｍｏｌ／ｌより大きなＦＢＧのレベルを達成することが、この被験体における糖尿病の発症を規定するように達成された。
【００９８】
８００〜１０００匹の雌のＮＯＤマウス中の糖尿病を同時に毎日モニタリングするこのアプローチを使用して、ＮＯＤマウスが、糖尿病の発症後２〜５日以内に集められた。１６〜２２週齢であり、１５〜１７ｍｍｏｌ／ｌ（平均１５ｍｍｏｌ／ｌ）のＦＢＳレベルを有するこれらのマウスを４つの処置群中に無作為に分配した。次いで、これらの群は、以下のような処置を受けた：
群１：ビヒクル（処置されないコントロール、ｎ＝９）
群２：ＩＳ（免疫抑制薬物ＳｉｒｏｌｉｍｕｓおよびＴａｃｒｏｌｉｍｕｓ、ｎ＝１２１）
群３：Ｉ．Ｎ．Ｔ．（ＥＧＦおよびガストリン、ｎ＝８）
群４：Ｉ．Ｎ．Ｔ．およびＩＳ（ＥＧＦおよびガストリン；ならびにＳｉｒｏｌｉｍｕｓおよびＴａｃｒｏｌｉｍｕｓ、ｎ＝７）
Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ（０．１ｍｇ／ｋｇ／日）およびＴａｃｒｏｌｉｍｕｓ（０．１ｍｇ／ｋｇ／日）を、ＭＣＴオイル（中鎖トリグリセリドオイル、栄養補助食品として入手可能）における胃間栄養法により、１日１回朝に投与した。処置プロトコルを、糖尿病の開始にて始め、１４日後に終えた。０．１％ＢＳＡを含む滅菌ＰＢＳにおけるＥＧＦ（ＥＧＦ５１Ｎ、３μｇ／ｋｇ／日）およびガストリン（ガストリン１７ｌｅｕ１５、１０μｇ／ｋｇ／日）の各々を、１４日間の間、腹腔内経路（ｉ．ｐ．）を介して、２つの各々の半分量（１．５μｇ／ｋｇ／日および５μｇ／ｋｇ／日）で与えた。処置を、糖尿病の発症から１４日間の間投与し、次いで中止した。この研究の間にインスリン療法は投与されなかった。
【００９９】
血漿Ｃ−ペプチドレベルおよび膵臓インスリン含量の各々の測定が、各々の処置群において被験体について行なわれた。データの分析は、ＥＧＦおよびガストリンでの処置がビヒクル処置された群またはＳｉｒｏｌｉｍｕｓ／Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ処置された群におけるＣ−ペプチドレベルおよび膵臓インスリンの両方のレベルよりも有意に大きくこれらのレベルを増大することを引き起こす一方、ＥＧＦおよびガストリンならびにＳｉｒｏｌｉｍｕｓおよびＴａｃｒｏｌｉｍｕｓの組み合わせでの処置は、糖尿病発症後のこれらのＮＯＤマウスにおける血漿Ｃ−ペプチドレベルおよび膵臓インスリンレベル含量の両方においての増大に最も効果的であった２−１を示す。図４を参照のこと。
【図面の簡単な説明】
【０１００】
【図１】図１は、縦軸上の実施例１に記載の４つの群の各々におけるＮＯＤマウスの生存率％を、横軸上の時間（日）の関数として示す線グラフである。４週目から初めて、群１の動物（黒丸）に、Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ組成物（ガストリンおよびＥＧＦ）および免疫抑制薬（シロリムスおよびタクロリムス）を同時に投与した；群２の動物（黒四角）に、Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ組成物のみを投与した；群３の動物（白四角）に、免疫抑制薬のみを投与した；そして群４の動物（白丸）に、ビヒクルのみを投与した。
【図２】図２は、実施例１に記載されるような生存している群１の動物の、７週目および９週目における空腹時の血中グルコース（ＦＢＧ）の減少を示す線グラフである。各線は、個々の生存マウスからのデータを表わす。
【図３】図３は、膵臓インシュリンのレベル（ｎｇ／ｇ体重）を示すグラフであり、実施例１からの生存マウスの血中グルコース濃度（ｍＭ）の関数としてプロットされている（黒四角）。コントロールデータ点は、インシュリン処置された非糖尿病ＮＯＤマウスからの４週点、急性前糖尿病ＮＯＤマウスから１２〜１５週、および慢性糖尿病マウスからの１５週点（黒三角）を含む。このデータは、単位体重あたりのＩ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ／免疫抑制されたマウスにおける血中グルコースレベルが、慢性糖尿病マウスの血中グルコースレベルよりも低いことを示す。
【図４】図４は、それぞれ、実施例３に記載されるように処置された４群の各々の最近糖尿病を発症したＮＯＤマウスにおいて、０日目および２８日目のマウスから採取したサンプルにおける、血漿Ｃペプチドおよび膵臓インシュリンのレベルを示す２つの棒グラフのセットである。群１の動物に、Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ組成物（ガストリン／ＥＧＦ）および免疫抑制薬（シロリムスおよびタクロリムス）を同時に投与した；群２の動物に、Ｉ．Ｎ．Ｔ．ＴＭ組成物のみを投与した；群３の動物に、免疫抑制剤のみを投与した；そして群４の動物に、ビヒクルのみを投与した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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