(57)【要約】本発明は、標的組織へのＴ細胞移動を促進または減少させるのに有用な組成物および方法を提供する。抗原提示細胞（ＡＰＣ）活性化の促進または阻害に有用な組成物および方法もまた、提供される。本発明は、Ｔｈ１細胞表面上に優先的に発現する分子であるＴＩＭ−３の機能的特徴の発見に関する。これらの方法は、癌、感染症、アレルギー、喘息、および自己免疫疾患等の障害の処置に有用である。この方法は、標的組織へのＴ細胞移動を促進させるために、有効量のＴＩＭ−３結合分子を被験体に投与することを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的組織の免疫応答増強を必要としている被験体を処置する方法であって、
標的組織へのＴ細胞移動を促進させるために、有効量のＴＩＭ−３結合分子を前記被験体に投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記ＴＩＭ−３結合分子は、ＴＩＭ−３に特異的な抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＴＩＭ−３結合分子は、ハイブリドーマ８Ｂ．２Ｃ１２によって発現される抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＴＩＭ−３結合分子は、ハイブリドーマ２５Ｆ．１Ｄ６によって発現される抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ＴＩＭ−３結合分子は、ＴＩＭ−３に特異的な抗体のフラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ＴＩＭ−３結合分子は、ＴＩＭ−３の細胞外領域に結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記ＴＩＭ−３の細胞外領域は、ＩｇＶドメインまたはそのフラグメントである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ＴＩＭ−３の細胞外領域は、ムチンドメインまたはそのフラグメントである、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記被験体は、癌に罹っているか、もしくは癌に罹る危険性がある、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記被験体は、感染症に罹っているか、もしくは感染症に罹る危険性がある、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記標的組織は、脳、胸部、肺、腎臓、肝臓、膵、胃、腸、卵巣、子宮、精巣、前立腺、骨髄、骨、筋、および皮膚からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記標的組織が中枢神経系である、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記被験体がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記投与が前記標的組織部位以外の部位に対しておこなわれる、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記投与が前記標的組織に関連するリンパ節以外の部位に対しておこなわれる、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記投与が全身投与である、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記投与が静脈内投与である、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記被験体に対するアジュバントの投与をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記被験体に対する抗腫瘍剤の投与をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗腫瘍剤が腫瘍特異的抗体またはその腫瘍特異的フラグメントを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記被験体に対するサイトカインの投与をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記被験体に対する抗菌薬の投与をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
前記被験体に対する抗ウイルス薬の投与をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記被験体に対する抗真菌薬の投与をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記被験体に対する駆虫剤の投与をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
腫瘍の処置を必要としている被験体を処置する方法であって、
該腫瘍へのＴ細胞移動を促進させるために、有効量のＴＩＭ−３結合分子を該被験体に投与することを含む、方法。
【請求項２７】
前記ＴＩＭ−３結合分子は、ハイブリドーマ８Ｂ．２Ｃ１２によって発現された抗体である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＴＩＭ−３結合分子は、ハイブリドーマ２５Ｆ．１Ｄ６によって発現された抗体である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
感染症に対する処置を必要としている被験体を処置する方法であって、
該感染症へのＴ細胞移動を促進させるために、有効量のＴＩＭ−３結合分子を該被験体に投与することを含む、方法。
【請求項３０】
前記ＴＩＭ−３結合分子は、ハイブリドーマ８Ｂ．２Ｃ１２によって発現された抗体である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＴＩＭ−３結合分子は、ハイブリドーマ２５Ｆ．１Ｄ６によって発現された抗体である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
被験体の標的組織へのＴ細胞移動を減少させる方法であって、
該被験体の標的組織へのＴ細胞移動を減少させるために、有効量のＴＩＭ−３リガンド結合分子を該被験体に投与することを含む、方法。
【請求項３３】
前記ＴＩＭ−３リガンド結合分子は、ＴＩＭ−３の細胞外領域にある少なくとも１つのドメインを含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記少なくとも１つのドメインがＩｇＶドメインである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＴＩＭ−３リガンド結合分子が可溶性ＴＩＭ−３である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
前記可溶性ＴＩＭ−３は、ＴＩＭ−３の細胞外領域にある少なくとも１つのドメインと、免疫グロブリンの定常重鎖またはその一部とを含む融合タンパク質である請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記少なくとも１つのドメインは、ＩｇＶドメインである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記被験体は、前記標的組織の自己免疫疾患に対する処置を必要としている、請求項３２に記載の方法。
【請求項３９】
前記標的組織は、中枢神経系、膵島、および関節滑液からなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項４０】
前記自己免疫疾患は、多発性硬化症、１型真性糖尿病、および慢性関節リウマチからなる群から選択される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
喘息またはアレルギーを処置または予防する方法であって、喘息またはアレルギーを処置または予防するために、被験体のＴ細胞でのＴＩＭ−３の活性または発現を高めることを含む、方法。
【請求項４２】
前記Ｔ細胞がＴｈ２細胞である、請求項４１の方法。
【請求項４３】
被験体のＴｈ２媒介障害を処置する方法であって、
Ｔｈ２媒介障害に罹った被験体のＴｈ２細胞の表面上で、Ｔｈ２媒介障害を処置するのに有効な量のＴＩＭ−３を発現させることを含む、方法。
【請求項４４】
前記Ｔｈ２媒介障害が喘息である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
抗原提示細胞（ＡＰＣ）活性化を促進させる方法であって、ＡＰＣを活性化させるために、有効量のＴＩＭ−３リガンド結合分子を前記ＡＰＣに接触させることを含む、方法。
【請求項４６】
前記ＡＰＣがマクロファージである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記ＡＰＣが樹状細胞である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
前記ＴＩＭ−３リガンド結合分子がＴＩＭ−３の細胞外領域を含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】
前記ＴＩＭ−３リガンド結合分子が可溶性ＴＩＭ−３である、請求項４５に記載の方法。
【請求項５０】
前記可溶性ＴＩＭ−３は、ＴＩＭ−３の細胞外領域にある少なくとも１つのドメインと、免疫グロブリンの定常重鎖またはその一部とを含む融合タンパク質である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記少なくとも１つのドメインがＩｇＶドメインである、請求項求５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記方法が細胞内感染を処置または予防する方法である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５３】
前記方法が癌を処置または予防する方法である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５４】
ＡＰＣ活性化を促進させる方法であって、
Ｔ細胞にＴＩＭ−３結合分子を接触させる工程、
ＡＰＣに該Ｔ細胞を接触させて該ＡＰＣを活性化させる工程、
を含む、方法。
【請求項５５】
前記ＴＩＭ−３結合分子がＴＩＭ−３に特異的な抗体である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記ＴＩＭ−３結合分子がハイブリドーマ８Ｂ．２Ｃ１２によって発現される抗体である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
前記ＴＩＭ−３結合分子がハイブリドーマ２５Ｆ．１Ｄ６によって発現される抗体である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５８】
前記ＴＩＭ−３結合分子は、ＴＩＭ−３に特異的な抗体のフラグメントである、請求項５４に記載の方法。
【請求項５９】
前記ＴＩＭ−３結合分子がＴＩＭ−３の細胞外領域に結合する、請求項５４に記載の方法。
【請求項６０】
前記Ｔ細胞のＴ細胞抗原受容体によって特異的に結合した抗原を、Ｔ細胞に接触させることをさらに含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項６１】
ＴＩＭ−３に特異的な抗体を、前記ＡＰＣに接触させることを、さらに含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項６２】
前記Ｔ細胞と前記ＡＰＣとの接触がエキソビボでおこなわれる、請求項５４に記載の方法。
【請求項６３】
前記抗原が腫瘍抗原である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６４】
マクロファージ活性化を阻害する方法であって、ＡＰＣの活性化を阻害するために、ＴＩＭ−３の活性または発現を減少させる薬剤を有効量で該ＡＰＣに接触させることを含む、方法。
【請求項６５】
前記ＴＩＭ−３の活性または発現を減少させる薬剤は、可溶性ＴＩＭ−３である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記ＴＩＭ−３の活性または発現を減少させる薬剤は、ＴＩＭ−３の細胞外領域にある少なくとも１つのドメインを含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
前記少なくとも１つのドメインがＩｇＶドメインである、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記ＴＩＭ−３の活性または発現を減少させる薬剤は、ＴＩＭ−３の細胞外領域にある少なくとも１つのドメインと免疫グロブリンの定常重鎖またはその一部とを含む融合タンパク質である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６９】
前記少なくとも１つのドメインがＩｇＶドメインである、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
細胞内感染を処置または予防する方法であって、
マクロファージ上のＴＩＭ−３リガンド結合分子にＴＩＭ−３発現細胞を接触させることで、マクロファージの活性化を促進させることを含む、方法。
【請求項７１】
癌を処置または治療する方法であって、
前記ＡＰＣ上のＴＩＭ−３リガンドにＴＩＭ−３発現細胞を接触させ、前記ＡＰＣに癌抗原を接触させることで、該ＡＰＣの活性化を促進させることを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、概ね免疫応答の調節に有用な組成物および方法に関する。より詳細には、本発明は、Ｔｈ１特異的細胞表面分子、すなわちＴ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有分子−３（Ｔ  ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ａｎｄ  Ｍｕｃｉｎ  ｄｏｍａｉｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ−３）（ＴＩＭ−３）の機能に関係し、かつ本明細書でともに開示される標的組織へのＴ細胞移動およびマクロファージ活性のレベルでの免疫エフェクター細胞機能を促進および阻害する方法に関する。また、本発明は疾患、例えば癌、感染性疾患、アレルギー、喘息、および自己免疫疾患を処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
ナイーブＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞の活性化によって、少なくとも２種類の異なったエフェクター集団、Ｔｈ１細胞およびＴｈ２細胞の分化が生ずる。Ｍｏｓｍａｎｎ  ＴＲら  （１９８６）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３６：２３４８−５７；  Ｍｏｓｍａｎｎ  ＴＲら  （１９９６）  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  １７：１３８−４６；  およびＡｂｂａｓ  ＡＫら  （１９９６）  Ｎａｔｕｒｅ  ３８３：７８７−７９３。Ｔｈ１細胞は、細胞内病原体に対する細胞媒介免疫応答、遅延型過敏反応（Ｓｈｅｒ  Ａ  ら  （１９９２）  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０：３８５−４０９）、および器官特異的自己免疫疾患の誘導に、一般に関連しているサイトカイン（インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）、およびリンホトキシン）を産生する。Ｌｉｂｌａｕ  ＲＳら  （１９９５）  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  １６：３４−３８。Ｔｈ２細胞は、細胞外寄生虫感染の制御に欠かすことができず、かつアトピー性およびアレルギー性疾患を促進させるサイトカイン（ＩＬ−４、ＩＬ−１０、およびＩＬ−１３）を産生する。Ｓｈｅｒ  Ａら  （１９９２）  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０：３８５−４０９。疾患でのそれらの異なった役割に加えて、Ｔｈ１およびＴｈ２細胞は互いの増殖および機能を相互に調節し合う。従って、Ｔｈ２細胞の優先誘導が自己免疫疾患を抑制し（Ｋｕｃｈｒｏｏ  ＶＫら  （１９９５）  Ｃｅｌｌ  ８０：７０７−１８；  Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ  ＬＢら  （１９９５）  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ３：３９７−４０５）、Ｔｈ１細胞の優先誘導が喘息、アトピー、およびアレルギーの誘導を制御することができる。Ｌａｃｋ  Ｇら  （１９９４）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５２：２５４６−５４；  Ｈｏｆｓｔｒａ  ＣＬら（１９９８）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６１：５０５４−６０。
【０００３】
これらのＴ細胞サブセットの機能について多くの知見が得られている一方で、それらを区別する表面分子についての知見はわずかしかない。Ｓｙｒｂｅ  Ｕ  ら  （１９９９）  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｅｍｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ  ２１：２６３−８５。いくつかのグループは、特定のケモカインおよび共起刺激分子受容体とＴｈ１細胞との結合を報告している。Ｌｏｅｔｓｃｈｅｒ  Ｐら  （１９９８）  Ｎａｔｕｒｅ  ３９１：３４４−４５；  Ｂｏｎｅｃｃｈｉ  Ｒら  （１９９８）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８７：１２９−３４；  Ｓａｌｌｕｓｔｏ  Ｆら  （１９９８）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８７：８７５−８３；  Ｖｅｎｋａｔａｒａｍａｎ  Ｃら  （２０００）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６５：６３２−３６。同様に、いくつかのグループは特定のケモカインおよび共起刺激分子受容体とＴｈ２細胞との結合を報告している。Ｂｏｎｅｃｃｈｉ  Ｒら  （１９９８）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８７：１２９−３４；  Ｓａｌｌｕｓｔｏ  Ｆら  （１９９８）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８７：８７５−８３；  Ｊｏｕｒｄａｎ  Ｐら  （１９９８）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６０：４１５３−５７；  Ｚｉｎｇｏｎｉ  Ａら  （１９９８）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６１：５４７−５１；  ＭｃＡｄａｍ  Ａ  Ｊら  （２０００）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６５：５０３５−４０；  Ｌｏｈｎｉｎｇ  Ｍら  （１９９８）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９５：６９３０−３５。しかし、それらの分子の大部分の発現に定量的な差がある。
【０００４】
Ｌｅｖｉｎｓｏｎに発行された米国特許第６，０８４，０８３号は、「２００遺伝子産物（２００  ｇｅｎｅ  ｐｒｏｄｕｃｔ）」と呼ばれるマウスＴｈ１制限細胞表面分子を、そのヒトホモログととともに開示している。そこでは、マウス２００遺伝子産物が免疫ブロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーの２８０アミノ酸膜結合要素として開示されている。マウス２００遺伝子産物のヒトホモログは、そこでは免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーの３０１アミノ酸膜結合メンバーとして開示されている。２００遺伝子および２００遺伝子産物のマウスおよびヒト形態の全長ヌクレオチドおよびアミノ酸配列、２００遺伝子産物に特異的な抗体、ならびに２００遺伝子産物の可溶形態が開示されている。Ｔｈ１制限細胞表面分子として同定されるにもかかわらず、２００遺伝子の機能および２００遺伝子の内因性リガンドは、米国特許第６，０８４，０８３号では開示されていない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
（発明の要約）
本発明は、分化したＴｈ１細胞で優先的に発現する膜貫通タンパク質ＴＩＭ−３の同定ならびに構造的特徴付けおよび機能的特徴付けに部分的に基づいている。ＴＩＭ−３のヒト形態およびマウス形態の両方の全長ヌクレオチドおよびアミノ酸配列を開示する。これらの配列を、米国特許第６，０８４，０８３号に開示されている独自に発見された２００遺伝子および２００遺伝子産物の対応配列と比較することで、それらの同一性が明らかとなる。しかし、驚くべきことに、ＴＩＭ−３に対する抗体のインビボ投与は、ヒトの脱髄疾患である多発性硬化症のモデルとして幅広く認知されているＴｈ１依存自己免疫疾患である実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）の臨床的重症度および病理学的重症度を高める。ＴＩＭ−３に対する抗体の生体内投与はまた、マクロファージの数および活性レベルをも高める。ＴＩＭ−３は、マクロファージ活性化および／または機能を調整することで、自己免疫疾患の誘導に重要な役割を果たし得る。従って、ＴＩＭ−３は、末梢リンパ球組織でのマクロファージの活性化および増殖に重要な役割を果たす。さらに、この明細書で開示されるように、Ｔ細胞とマクロファージとのあいだの同族相互作用は、このマクロファージの増殖および活性化に関わっている。マクロファージの増殖および活性化は、Ｔｈ１細胞によって誘導され、かつＴＩＭ−３依存型である。
【０００６】
本発明は、エフェクターＴｈ１細胞上でのＴＩＭ−３発現により、標的組織へのＴｈ１細胞移動が促進されて感染症および免疫応答が調整されるという思いがけない知見にも部分的に基づいている。この明細書でさらに開示されるように、エフェクターＴｈ１細胞によるＴＩＭ−３依存的輸送が、ＴＩＭ−３に対する抗体によって増強され得、可溶形態のＴＩＭ−３により阻害され得る。
【０００７】
全長ＴＩＭ−３は、ＩｇＶドメインおよびムチンドメインを含む細胞外領域、膜貫通領域、および細胞質領域を有する膜結合型タンパク質として発現すると考えられている。本発明はまた、ムチン領域および膜貫通領域が欠如しているＴＩＭ−３の二者択一的接合（ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｌｙ  ｓｐｌｉｃｅｄ）変異体の発明者による驚くべき発見にも部分的に基づいている。このＴＩＭ−３二者択一的接合変異体は、可溶性ＴＩＭ−３の天然に生ずる形態を表していると考えられている。
【０００８】
本発明の一態様では、ＴＩＭ−３に特異的に結合するモノクローナル抗体８Ｂ．２Ｃ１２が提供される。本発明の別の態様では、モノクローナル抗体８Ｂ．２Ｃ１２を発現するハイブリドーマ８Ｂ．２Ｃ１２がまた、提供される。
【０００９】
本発明の別の態様では、本発明はＴＩＭ−３に対して特異的に結合するモノクローナル抗体２５Ｆ．１Ｄ６を提供する。本発明の別の態様に基づいて、本発明はモノクローナル抗体２５Ｆ．１Ｄ６を発現するハイブリドーマ２５Ｆ．１Ｄ６も提供する。
【００１０】
他の態様では、本発明は、ＴＩＭ−３に特異的な前述のモノクローナル抗体を含む医薬組成物を提供する。一態様では、医薬組成物は、モノクローナル抗体８Ｂ．２Ｃ１２と薬理学的に許容される担体とを含む。別の態様では、医薬組成物はモノクローナル抗体２５Ｆ．１Ｄ６と薬理学的に許容される担体とを含む。
【００１１】
また、ＴＩＭ−３に特異的な前述のモノクローナル抗体を含む医薬組成物を調整する方法も提供する。一態様では、本発明は医薬組成物を調製する方法を提供する。この方法は、モノクローナル抗体８Ｂ．２Ｃ１２を薬学的に許容される担体に配置する工程を包含する。別の態様では、本発明は医薬組成物を調製する方法を提供する。この方法は、モノクローナル抗体２５Ｆ．１Ｄ６を薬学的に許容される担体に配置する工程を包含する。
【００１２】
別の態様では、本発明は、標的組織で免疫応答の増強を必要としている被験体を処置する方法を提供する。この方法は、標的組織へのＴ細胞移動を促進させるために、有効量のＴＩＭ−３結合分子を前記被験体に投与する工程を包含する。いくつかの実施形態では、ＴＩＭ−３結合分子はＴＩＭ−３に特異的な抗体である。いくつかの実施形態では、ＴＩＭ−３結合分子は、ＴＩＭ−３に特異的な抗体のフラグメントである。
【００１３】
一実施形態では、ＴＩＭ−３結合分子は、ハイブリドーマ８Ｂ．２Ｃ１２によって発現される抗体である。別の実施形態では、ＴＩＭ−３結合分子は、ハイブリドーマ２５Ｆ．１Ｄ６によって発現される抗体である。
【００１４】
いくつかの実施形態では、ＴＩＭ−３結合分子はＴＩＭ−３の細胞外領域に結合する。この明細書で開示するＴＩＭ−３の構造に従って、いくつかの実施形態では、ＴＩＭ−３の細胞外領域はＩｇＶドメインまたはそのフラグメントであり、さらにいくつかの実施形態でＴＩＭ−３の細胞外ドメインはムチンドメインまたはそのフラグメントである。
【００１５】
好ましい実施形態では、被験体は癌に罹っているか、または癌に罹る危険性がある。いくつかの好ましい実施形態では、被験体は感染症に罹っているか、または感染症に罹る危険性がある。
【００１６】
本発明のこの態様に基づくいくつかの実施形態において、標的組織は、脳、胸部、肺、腎臓、肝臓、膵臓、胃、腸、卵巣、子宮、精巣、前立腺、骨髄、骨、筋、および皮膚からなる群から選択される。好ましい実施形態では、標的組織は中枢神経系である。
【００１７】
好ましい実施形態では、被験体はヒトである。
【００１８】
また、本発明のこの態様に基づいて、いくつかの実施形態では、投与は標的組織以外の部位に対しておこなわれる。いくつかの実施形態では、投与は標的細胞に関連したリンパ節以外の部位に対しておこなわれる。
【００１９】
いくつかの実施形態では、投与は全身である。好ましい実施形態において、投与は静脈内投与である。
【００２０】
また、いくつかの実施形態において、本発明のこの態様によれば、この方法は、被験体に対するアジュバントの投与をさらに包含する。
【００２１】
いくつかの実施形態では、本発明のこの態様に基づく方法は、被験体に対する抗腫瘍剤の投与をさらに包含する。いくつかの好ましい実施形態では、抗腫瘍剤が腫瘍特異的抗体またはその腫瘍特異的フラグメントを含む。
【００２２】
この態様に基づく方法の一部として、他の薬剤を投与することができる。例えば、いくつかの実施形態では、方法はまた、被験体に対するサイトカインの投与をも包含する。いくつかの実施形態では、本発明のこの態様に基づく方法は、被験体に対する抗菌薬の投与をさらに包含する。いくつかの実施形態では、方法は被験体に対する抗ウイルス薬の投与をさらに包含する。いくつかの実施形態では、本発明のこの態様に基づく方法は、被験体に対する抗真菌薬の投与をさらに包含する。いくつかの実施形態では、方法は被験体に対する駆虫剤の投与をさらに包含する。
【００２３】
別の態様では、本発明は腫瘍の処置を必要としている被験体を処置する方法を提供する。この態様に基づく方法は、腫瘍へのＴ細胞移動を促進させるために、有効量のＴＩＭ−３結合分子を被験体に投与する工程を包含する。
【００２４】
一実施形態では、ＴＩＭ−３結合分子は、ハイブリドーマ８Ｂ．２Ｃ１２によって発現された抗体である。別の実施形態では、ＴＩＭ−３結合分子は、ハイブリドーマ２５Ｆ．１Ｄ６によって発現された抗体である。
【００２５】
別の態様では、本発明は、感染症に対する処置を必要としている被験体を処置する方法を提供する。この態様に基づく方法は、感染症へのＴ細胞移動を促進させるために、有効量のＴＩＭ−３結合分子を前記被験体に投与する工程を包含する。
【００２６】
一実施形態では、ＴＩＭ−３結合分子はハイブリドーマ８Ｂ．２Ｃ１２によって発現された抗体である。別の実施形態では、ＴＩＭ−３結合分子はハイブリドーマ２５Ｆ．１Ｄ６によって発現された抗体である。
【００２７】
別の態様では、本発明は被験体の標的組織へのＴ細胞移動を減少させる方法を提供する。この態様に基づく方法は、被験体の標的組織へのＴ細胞移動を減少させるために、有効量のＴＩＭ−３リガンド結合分子を被験体に投与する工程を包含する。いくつかの実施形態では、ＴＩＭ−３リガンド結合分子は、ＴＩＭ−３の細胞外領域にある少なくとも１つのドメインを含む。一実施形態では、少なくとも１つのドメインはＩｇＶドメインである。いくつかの実施形態では、ＴＩＭ−３リガンド結合分子は可溶性ＴＩＭ−３である。好ましくは、前記可溶性ＴＩＭ−３は、ＴＩＭ−３の細胞外領域にある少なくとも１つのドメインと、免疫グロブリンの定常部Ｈ鎖またはその一部とを含む融合タンパク質である。一実施形態では、少なくとも１つのドメインはＩｇＶドメインである。
【００２８】
いくつかの実施形態において、被験体は標的組織の自己免疫疾患に対する処置を必要としている。特定の好ましい実施形態では、標的組織は、中枢神経系、膵島、および関節滑液からなる群から選択される。特定の好ましい実施形態では、自己免疫疾患は、多発性硬化症、１型真性糖尿病、および慢性関節リウマチからなる群から選択される。
【００２９】
さらに別の態様では、本発明は喘息またはアレルギーを処置または予防する方法を提供する。本発明のこの態様に基づく方法は、喘息またはアレルギーを処置または予防するために、被験体のＴ細胞でのＴＩＭ−３の活性または発現を高める工程を包含する。１実施形態において、Ｔ細胞はＴｈ２細胞である。
【００３０】
さらなる態様によれば、本発明は被験体のＴｈ２媒介疾患を処置する方法を提供する。この方法は、Ｔｈ２媒介疾患に罹った被験体のＴｈ２細胞の表面上で、Ｔｈ２媒介疾患を処置するのに有効な量のＴＩＭ−３を発現させる工程を包含する。好ましい実施形態では、Ｔｈ２媒介疾患は喘息である。
【００３１】
本発明の別の態様では、抗原提示細胞（ＡＰＣ）活性化を促進させる方法を提供する。この方法は、ＡＰＣを活性化させるために、有効量のＴＩＭ−３リガンド結合分子をＡＰＣに接触させる工程を包含する。
【００３２】
いくつかの実施形態では、ＡＰＣはマクロファージである。いくつかの実施形態では、ＡＰＣは樹状細胞である。
【００３３】
いくつかの実施形態では、ＴＩＭ−３リガンド結合分子はＴＩＭ−３の細胞外領域の少なくとも１つのドメインを含む。一実施形態では、少なくとも１つのドメインはＩｇＶドメインである。いくつかの実施形態で、ＴＩＭ−３リガンド結合分子は可溶性ＴＩＭ−３である。好ましくは、可溶性ＴＩＭ−３は、ＴＩＭ−３の細胞外領域にある少なくとも１つのドメインと、免疫グロブリンの定常部Ｈ鎖またはその一部とを含む融合タンパク質である。一実施形態では、少なくとも１つのドメインは、ＩｇＶドメインである。
【００３４】
別の態様によれば、本発明はＡＰＣ活性化を促進させる方法を提供する。この態様に基づく方法は、Ｔ細胞にＴＩＭ−３結合分子を接触させ、さらにＡＰＣにＴ細胞を接触させてＡＰＣを活性化させる工程を包含する。
【００３５】
いくつかの実施形態では、ＡＰＣはマクロファージである。いくつかの実施形態では、ＡＰＣは樹状細胞である。
【００３６】
いくつかの実施形態では、ＴＩＭ−３結合分子は、ＴＩＭ−３に特異的な抗体である。一実施形態では、ＴＩＭ−３結合分子は、ハイブリドーマ８Ｂ．２Ｃ１２によって発現される抗体である。別の実施形態ではＴＩＭ−３結合分子は、ハイブリドーマ２５Ｆ．１Ｄ６によって発現される抗体である。
【００３７】
いくつかの実施形態では、ＴＩＭ−３結合分子は、ＴＩＭ−３に特異的な抗体のフラグメントである。いくつかの実施形態では、ＴＩＭ−３結合分子は、ＴＩＭ−３の細胞外領域に結合する。
【００３８】
いくつかの実施形態では、この方法は、Ｔ細胞のＴ細胞抗原受容体によって特異的に結合した抗原をＴ細胞に接触させることをさらに包含する。
【００３９】
いくつかの実施形態では、この方法は、ＴＩＭ−３に特異的な抗体をＡＰＣに接触させることを、さらに包含する。
【００４０】
本発明のこの態様に基づくいくつかの実施形態では、Ｔ細胞とＡＰＣとの接触がエキソビボでおこなわれる。
【００４１】
１つの好ましい実施形態では、抗原は腫瘍抗原である。
【００４２】
本発明のさらに別の態様に基づいて、ＡＰＣ活性を阻害する方法が提供される。この方法は、ＡＰＣの活性化を阻害するために、ＴＩＭ−３の活性または発現を減少させる薬剤を有効量でＡＰＣに接触させる工程を包含する。
【００４３】
いくつかの実施形態では、ＡＰＣはマクロファージである。いくつかの実施形態では、ＡＰＣは樹状細胞である。
【００４４】
いくつかの実施形態では、ＴＩＭ−３の活性または発現を減少させる薬剤は、可溶性ＴＩＭ−３である。
【００４５】
いくつかの実施形態では、ＴＩＭ−３の活性または発現を減少させる薬剤は、ＴＩＭ−３の細胞外領域の少なくとも１つのドメインを含む。一実施形態では、少なくとも１つのドメインはＩｇＶドメインである。
【００４６】
いくつかの実施形態では、ＴＩＭ−３の活性または発現を減少させる薬剤は、ＴＩＭ−３の細胞外領域にある少なくとも１つのドメインと免疫グロブリンの定常部Ｈ鎖またはその一部とを含む融合タンク質である。一実施形態では、少なくとも１つのドメインはＩｇＶドメインである。
【００４７】
いくつかの実施形態では、ＴＩＭ−３の活性または発現を減少させる薬剤は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でＴＩＭ−３をコードする核酸とハイブリダイゼーションする能力のあるアンチセンスポリヌクレオチドである。
【００４８】
別の態様によれば、本発明は細胞内感染を処置または予防する方法をさらに提供する。この態様に基づく方法は、マクロファージ上のＴＩＭ−３リガンドにＴＩＭ−３発現細胞を接触させることで、マクロファージの活性化を促進させる工程を包含する。
【００４９】
さらに別の態様によれば、本発明は癌を処置または予防する方法を提供する。この態様に基づく方法は、ＡＰＣ上のＴＩＭ−３リガンドにＴＩＭ−３発現細胞を接触させ、さらにＡＰＣに癌抗原を接触させることで、前記ＡＰＣの活性化を促進させる工程を包含する。
【００５０】
（発明の詳細な説明）
本発明は、活性化Ｔｈ１細胞の表面で選択的に発現する分子の機能的特徴の新たな認識に関する。特定の分子（ここではＴＩＭ−３と称する）のヌクレオチドおよびアミノ酸一次配列は、すでに米国特許第６，０８４，０８３号に記載されている。ＴＩＭ−３が予測外にもマクロファージの活性化および増殖化に重要な役割を果たしていることが本発明によって発見された。また、驚くべきことに、マクロファージのＴＩＭ−３依存活性および拡大が予測外にもＴＩＭ−３発現Ｔ細胞とマクロファージとの間で同族の相互作用に関わっていることが、本発明によって発見された。この知見と一致して、マクロファージおよび樹状細胞を含む抗原提示細胞（ＡＰＣ）がＴＩＭ−３のリガンドまたは受容体を発現することが、本発明によってさらに発見された。
【００５１】
ＴＩＭ−３に結合する分子、例えばＴＩＭ−３に対する抗体は、驚くべきことに、マクロファージの活性化および増殖を誘導することが、本発明によって発見された。ＴＩＭ−３を指向する分子の結合により誘導されたマクロファージの活性化によって、例えば、中枢神経系（ＣＮＳ）内の組織を含む標的組織内へのマクロファージの移動が促進される。例えば、実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）が遺伝的に発症しやすいマウス（ヒトの脳のＴｈ１型自己免疫疾患である多発性硬化症のインビボモデル）を抗ＴＩＭ−３で処置すると、結果として大量の活性化マクロファージがＣＮＳに浸潤することを特徴とする非常に重症型のＥＡＥを招くことが、本発明によって発見された。このように、ＴＩＭ−３に対する抗体の投与は、この自己免疫疾患を改善するよりはむしろ、予想外にも悪化させた。
【００５２】
従って、いくつかの局面では、本発明はＡＰＣ活性化の促進（例えば、細胞内感染、癌、および自己免疫疾患の処置または予防）に有用な方法を提供する。
【００５３】
さらに意外にも、本発明に基づいてさらに発見されたことは、エフェクターＴｈ１細胞上でＴＩＭ−３が発現することによって、標的組織へのＴｈ１細胞の移動が促進されるということである。予測外にも、ＴＩＭ−３に依存した、標的組織へのＴｈ１細胞移動は、ＴＩＭ−３に対する抗体によって増進することができる。従って、いくつかの局面では、本発明は、例えば標的組織での免疫応答の増強が求められているような場合に、該標的組織内へのＴ細胞の移動を促進させるのに有用な方法を提供する。
【００５４】
さらに、また重要なこととして、本発明によれば、標的細胞に対するＴＩＭ−３依存性のＴＨ１細胞移動を可溶性ＴＩＭ−３によって阻害することができることを、驚くべきことに発見した。従って、いくつかの他の局面では、本発明は、標的組織、例えば自己免疫疾患の被験体の標的組織へのＴ細胞移動を減少させるのに有用な方法を提供する。
【００５５】
本明細書で用いられるように、「ＴＩＭ−３」は配列番号１（マウス）、配列番号３（ヒト）、同様にそれらのホモログ、対立遺伝子、および機能変異体、例えば配列番号５のヌクレオチド配列によってコードされる遺伝子産物を示す。配列番号１のマウスのヌクレオチド配列に対応する遺伝子産物は、配列番号２である。配列番号３のヒトのヌクレオチド配列に対応する遺伝子産物は、配列番号４であり、配列番号５のヒトのヌクレオチド配列に対応する遺伝子産物は、配列番号６である。配列番号３のヌクレオチド配列は、一つの塩基、４７６（配列番号３ではＴ、また配列番号５ではＧ）によって、別々に決定された配列番号５のヌクレオチド配列とは異なる。このようなたった一つヌクレオチドの違いによって、コードされたアミノ酸が１４０番目の位置で配列番号４のＬ（ロイシン）から配列番号６のＲ（アルギニン）に変化する。図１Ｂに示すように、ＴＩＭ−３は、膜貫通タンパク質であり、細胞外領域（シグナルペプチド、ＩｇＶドメイン、およびムチンドメインを含むもので、各々については後述する）、膜貫通領域、および細胞質領域を有する。通常、ＴＩＭ−３は、活性化Ｔｈ１細胞の表面で優先的に発現する。本発明のＴＩＭ−３ｃＤＮＡは、以下の配列番号１、３、および５にそれぞれ示すように、寄託番号ＡＦ４５０２４１〜ＡＦ４５０２４３として、ＧｅｎＢａｎｋデータベースに寄託されている。本発明のＴＩＭ−３アミノ酸配列は、寄託番号ＡＡＬ６５１５６−ＡＡＬ６５１５８でＧｅｎＢａｎｋデータベースに寄託されており、以下の配列番号２、４、および６にそれぞれ示す。
配列番号１−−マウスＴＩＭ−３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列
ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号ＡＦ４５０２４１
【００５６】
【化１】
2005526018.tif 000002
2005526018.tif 000003
配列番号３−−ヒトＴＩＭ−３ｃＤＮＡ、クローン１のヌクレオチド配列
ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号ＡＦ４５０２４２
【００５７】
【化２】
2005526018.tif 000004
配列番号５−−ヒトＴＩＭ−３ｃＤＮＡ、クローン２のヌクレオチド配列
ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号ＡＦ４５０２４３
【００５８】
【化３】
2005526018.tif 000005
配列番号２−−マウスＴＩＭ−３のアミノ酸配列
ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号ＡＡＬ６５１５６
【００５９】
【化４】
2005526018.tif 000006
配列番号４−−ヒトＴＩＭ−３、クローン１のアミノ酸配列
ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号ＡＡＬ６５１５７
【００６０】
【化５】
2005526018.tif 000007
配列番号６−−ヒトＴＩＭ−３、クローン２のアミノ酸配列
ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号ＡＡＬ６５１５８
【００６１】
【化６】
2005526018.tif 000008
ＴＩＭ−３の機能変異体として、分子が全長ＴＩＭ−３の少なくとも一つの機能的特徴を保持しているという条件で、全長ＴＩＭ−３の変異、付加、欠失、および短縮（トランケーション）を示す分子が挙げられる。例えば、細胞質ドメインの大部分または全てが欠けるようにして短縮されたＴＩＭ−３分子は、ＴＩＭ−３に対するリガンドまたは受容体と結合する能力を保持すると思われる。
【００６２】
本発明の特定の局面は、選択された組織へのＴ細胞の移動を促進する方法を含む。
【００６３】
本発明の一局面では、標的組織の免疫応答増強を必要としている被験体を処置する方法を提供する。この方法は、被験体に対して有効量のＴＩＭ−３結合分子を投与して標的組織へのＴ細胞移動を促進することを含む。
【００６４】
本発明の別の局面では、腫瘍の処置を必要としている被験体を処置する方法を提供する。本発明のこの局面に基づく方法は、腫瘍の処置を必要としている被験体に、有効量のＴＩＭ−３結合分子を投与することでその腫瘍へのＴ細胞の移動を促進することを含む。
【００６５】
さらに別の局面では、本発明は、感染の処置を必要としている被験体を処置する方法を提供することである。本発明のこの局面に基づく方法は、感染の処置を必要としている被験体に、有効量のＴＩＭ−３結合分子を投与することでその感染へのＴ細胞の移動を促進することを含む。
【００６６】
本明細書中で用いられるように、「処置する」および「処置」は、被験体で処置される障害または疾患の発症を防ぐために、その症状を改善するために、あるいはその進行を遅らせるかもしくは停止させるために、被験体に対して治療的介入をおこなうことを意味する。治療的介入は、処置される障害または疾患の発症を防ぐため、症状を緩和するため、またはその進行を遅らせるかもしくは停止させるために、治療上有効量の物質を投与することができる。
【００６７】
本明細書中で用いられるように「被験体」は、任意の脊椎動物、好ましくはほ乳類、より好ましくはヒトを意味している。被験体の例として、ヒト、ヒト以外の霊長類、齧歯類動物、モルモット、ウサギ、羊、豚、山羊、牛、馬、犬、猫、鳥、および魚が挙げられる。
【００６８】
本明細書中で用いられるように、「免疫応答の増強を必要としている被験体」とは、免疫応答の不全または欠如に関連している疾患、障害、または状態を呈するか、もしくはなり得る危険性のある被験体、あるいは免疫応答を増すことによって軽減され得る被験体をいう。免疫応答の増強を必要としている被験体は、一般的であり、当業者によって容易に認識される。若年および熟年の、慢性疾患または急性増悪（ａｃｕｔｅ−ｏｎ−ｃｈｒｏｎｉｃ）慢性疾患の被験体、易感染性障壁であることから感染症に罹りやすい被験体（嚢胞性線維症の被験体を含む）、薬物誘発性免疫不全症の被験体、危篤状態の被験体、外科手術間近の被験体、先天性または遺伝性免疫不全症の被験体、後天性免疫不全症の被験体（ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の被験体を含む）、持続感染症の被験体、細胞内感染症の被験体、および癌の被験体は、すべて免疫応答の増強を必要としている被験体である。ここに羅列したものは、代表的なものであって、いかなるかたちであれ制限するものではない。
【００６９】
本明細書中で用いられるように「標的組織」とは、免疫エフェクター活性の部位を表している組織をいう。被験体のいかなる組織であっても標的組織となり得る。標的組織の例として、脳または中枢神経系、胸部、肺、腎臓、肝臓、膵（特に膵島を含む）、胃、腸、卵巣、子宮、精巣、前立腺、骨髄、骨、関節滑液、筋、および皮膚が挙げられる。代表的に、標的組織は、癌、感染症、および該組織の炎症状態に関わる状況を除けば、リンパ組織とは本来関連性のない組織である。従って、代表的ではないが、標的組織として、リンパ節、脾臓、粘膜リンパ組織（例えばパイエル斑が含まれる）、または胸腺が挙げられる。
【００７０】
本明細書中で用いられるように、「ＴＩＭ−３結合分子」はＴＩＭ−３に対して特異的に結合する任意の分子である。ＴＩＭ−３結合分子は、低分子、ポリペプチド、抗体または抗体フラグメント、ポリヌクレオチド、多糖類を含む炭水化物、脂質、薬物、ならびにそれらの模倣体、誘導体、およびそれらの組み合わせとすることができる。ＴＩＭ−３結合分子は、自然界で見つけることができ、あるいは当業者に公知の適切なインビトロ法および合成法によって誘導または合成するこができる。例えば、ＴＩＭ−３結合分子は、低分子ライブラリーをＴＩＭ−３との結合能についてスクリーニングすることで同定される低分子であり得る。
【００７１】
ＴＩＭ−３結合分子は、ペプチドのファージディスプレイを用いての生成および同定され得る。さらに別の例として、ＴＩＭ−３結合分子は、可溶性ＴＩＭ−３リガンドを含むＴＩＭ−３リガンドであり得る。本明細書中で用いられるように「ＴＩＭ−３リガンド」とは、ＴＩＭ−３の細胞外領域に特異的に結合する一種のＴＩＭ−３結合分子をいう。ＴＩＭ−３リガンドは、自然に生ずるＴＩＭ−３受容体またはＴＩＭ−３カウンターレセプターであり、免疫系の特定の細胞、例えばマクロファージおよび樹状細胞で発現されると考えられている。また、ＴＩＭ−３リガンドは、Ｔ細胞上に発現したＴＩＭ−３と接触する他の特定の細胞（例えば、内皮細胞および粘膜上皮細胞など）でも発現され得ると考えられている。ＴＩＭ−３によるＴＩＭ−３リガンドの結合は、ＴＩＭ−３リガンドを表面に発現している細胞および／またはＴＩＭ−３を表面に発現している細胞の内部へ、信号を伝達することができる。また、ＴＩＭ−３リガンドは、ＴＩＭ−３への結合について、天然に生ずるＴＩＭ−３リガンドと競合する任意のＴＩＭ−３結合分子を称する。従って、ＴＩＭ−３リガンドとして、限定されるものではないが、ＴＩＭ−３に結合する天然型のＴＩＭ−３リガンドが含まれる。
【００７２】
「可溶性ＴＩＭ−３リガンド」とは、細胞膜から分離される任意の形態のＴＩＭ−３リガンドをいう。可溶性ＴＩＭ−３リガンドは、Ｃ末端短縮形の全長可溶性ＴＩＭ−３リガンドまたはＴＩＭ−３リガンドの膜貫通欠損型であってもよい。一実施形態では、可溶性ＴＩＭ−３リガンドとは、ＴＩＭ−３リガンドの少なくとも細胞外ドメインと別のポリペプチドとを含む融合タンパク質をいう。一実施形態では、可溶性ＴＩＭ−３リガンドは、例えばペプチド結合を介して、ＩｇＧ等の免疫グロブリンのＦｃフラグメントに共有結合したＴＩＭ−３リガンドの細胞外領域を含む融合タンパク質である。
【００７３】
いくつかの実施形態では、ＴＩＭ−３結合分子はＴＩＭ−３に特異的な抗体またはＴＩＭ−３に特異的な抗体のフラグメントである。本明細書中で用いられるように、「ＴＩＭ−３に特異的な抗体」とは、ＴＩＭ−３エピープに特異的に結合する免疫グロブリンであり、この結合はＴＩＭ−３エピトープと免疫グロブリンの可変ドメインとの相互作用を介しておこなわれる。「ＴＩＭ−３に特異的な抗体のフラグメント」とは、そのフラグメントが由来するインタクトな免疫グロブリンの可変ドメインとエピトープとの相互作用を介して、ＴＩＭ−３エピトープに特異的に結合するＴＩＭ−３に特異的なインタクトな抗体の一部をいうこととする。また、エピトープと可変ドメインとの相互作用を介してＴＩＭ−３エピトープに特異的に結合するＴＩＭ−３に特異的なインタクトな抗体の一部分の操作された等価物も、「ＴＩＭ−３に特異的な抗体のフラグメント」ということとする。当技術分野で周知のように、インタクトな抗体は、一般に、可変ドメインと少なくとも１つの定常ドメインとを有する。可変ドメインでは、重鎖および軽鎖が寄与しており、重鎖および軽鎖がともに抗原と抗体との結合に特異的な接触残基の範囲を提供している。定常ドメインは、抗原に特異的なものではなく、むしろ特定のアイソタイプの抗体すべてに多少なりとも共通しており、すなわち特定の免疫エフェクター細胞で発現するＦｃ受容体に対する補体の結合または抗原とは無関係な抗体結合にかかわるものであってもよい。抗体は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体である。さらに、抗体は、ネイティブのもの、または部分的もしくは全体的に操作されて、処置される宿主の潜在的な免疫原性を減少させるものとすることができる。所定の抗原に特異的なポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の生成および単離の方法は、当技術分野でかなり記載されている。例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ  （１９７５）  Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−７；  Ｈａｒｌｏｗ  およびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ、現行版を参照のこと。
【００７４】
ＴＩＭ−３に特異的な抗体は、任意の適切な種に由来する抗体を包含することが意味される。例えば、特定の抗原に対する抗体は、適切な宿主をその抗原で免疫することで産生される。免疫される宿主は、例えば、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ウマ、サル、およびヒトを含む様々な種から選択できる。キメラおよびヒト化モノクローナル抗体を生成する方法も当技術分野では周知であり、そのような抗体の例が今日臨床で用いられている。当業者は、抗体の産生元となる種に加えて、免疫グロブリンの様々なアイソタイプまたはクラスが存在することを認識している。それらの例として、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、およびＩｇＤが挙げられる。これらのクラスのなかで、さらにサブクラスまたはサブタイプが存在し、例えばヒトＩｇＧサブタイプとしてＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４が挙げられ、一方マウスＩｇＧサブタイプとしてＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、およびＩｇＧ３が挙げられる。ＴＩＭ−３に特異的な抗体とは、任意のアイソタイプおよびサブタイプを含むことを意味している。いくつかの実施形態では、抗体はＩｇＧである。
【００７５】
いくつかの実施形態で、ＴＩＭ−３結合分子はＴＩＭ−３の細胞外領域に結合する。用語「ＴＩＭ−３の細胞外領域」とは、ＴＩＭ−３遺伝子産物を発現する細胞の細胞外表面に、通常は実質的に存在している発現ＴＩＭ−３遺伝子産物の一部分をいう。本発明によれば、ＴＩＭ−３の予測アミノ酸配列は、細胞外領域、膜貫通領域、および細胞質または細胞内領域を含む。細胞外領域は、マウスＴＩＭ−３のＮ末端側の１９１個のアミノ酸残基とヒトＴＩＭ−３のＮ末端側の２００個のアミノ酸残基とを含むと予測され、各々に２１アミノ酸からなる信号ペプチドが１つ含まれる。この信号ペプチドを、マウスＴＩＭ−３の細胞外領域は長さが１７０アミノ酸、またヒトＴＩＭ−３の細胞外領域は長さが１７９アミノ酸となるように、発現タンパク質産物から開裂することができる。
【００７６】
ＴＩＭ−３の細胞外領域は、少なくとも２のドメイン、すなわちＩｇＶドメインとムチンドメインとを含むと考えられている（図１Ｂ参照）。ＴＩＭ−３のＩｇＶドメインは、免疫グロブリン可変ドメインと構造的類似性を共有しており、マウスＴＩＭ−３のアミノ酸２２〜１３２およびヒトＴＩＭ−３のアミノ酸２２〜１３１を占めていると考えられている。ムチンドメインは、マウスＴＩＭ−３のアミノ酸１３３〜１９１およびヒトＴＩＭ−３のアミノ酸１３２〜２００を占めると考えられている。
【００７７】
本明細書中で用いられるように、用語「ＩｇＶドメインまたはそのフラグメント」とは、ＴＩＭ−３の細胞外領域の全長ＩｇＶドメイン、または宿主の免疫のための抗原として使用されるのに十分な長さのＴＩＭ−３細胞外領域の全長ＩｇＶドメインの一部分をいう。特異的抗体と接触するタンパク質抗原の線状決定基の長さが約６アミノ酸であると、一般に考えられている。このように、代表的に、フラグメントは、上述のように特定したＩｇＶドメインに含まれる配列番号２または配列番号４にもとづいた少なくとも６個の連続したアミノ酸を含む。
【００７８】
本明細書中で用いられるように、用語「ムチンドメインまたはそのフラグメント」とは、ＴＩＭ−３細胞外領域の全長ムチンドメイン、または宿主を免疫する抗原として用いられるのに十分な長さのＴＩＭ−３細胞外領域の全長ムチンドメインの一部分をいう。フラグメントは、代表的に、上述のように特定したムチンドメインに含まれる配列番号２または配列番号４にもとづいた少なくとも６個の連続したアミノ酸を含む。
【００７９】
本明細書中で用いられるように「有効量」とは、所望の結果または状態の発生を促進、または望まない結果または状態の発生を減少または阻害するかのいずれかにとって十分な任意の量である。いくつかの例では、所望の結果または状態は、可能な結果または状態の範囲の一端を表す理想である。そのような例で、有効量は、この有効量なしで達成または観察されるものよりも所望の理想に近い結果または状態に関連する任意の量である。従って、有効量は、所望の結果または状態の発生を促進するが、最終点を成し遂げる必要はない。
【００８０】
本明細書中で用いられるように「Ｔ細胞移動」とは、Ｔリンパ球が免疫応答活性の部位に移動することをいう。ナイーブＴ細胞は、非自己抗原または「危険」信号の存在に対してそのナイーブＴ細胞の環境をサンプリングしながら、身体全体を循環してリンパ組織を出たり入ったりする。リンパ組織は、Ｔ細胞上に発現している抗原特異的Ｔ細胞受容体と、この受容体の同族抗原との遭遇促進を助けるのに特に適している。特化した抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、リンパ組織内に集中し、抗原との相互作用およびＴ細胞への抗原提示に特に適応して、特定の抗原を認識するように遺伝的にプログラムされたＴ細胞による免疫応答を開始させる。特定の抗原との遭遇に応答してＴ細胞が活性化した後、Ｔ細胞が増殖して分化が起こり、サイトカイン等の種々の分泌産物および細胞関連産物を生成し、さらにその抗原に関連した組織部位に移動する。このプロセスの結果として、活性化Ｔ細胞が増殖して特定組織部位に戻る間、ナイーブＴ細胞がランダムに循環する。
【００８１】
いくつかの実施形態では、被験体は癌に罹っているか、癌にかかる危険性がある。本明細書中で用いられるように「癌」とは、身体諸器官および系の正常な機能を妨げる制御されない細胞増殖をいう。癌に罹っている被験体は、被験体の身体に存在する客観的に測定可能な癌細胞を持つ被験体である。癌に罹る危険性のある被験体は、癌を発症しやすい被験体である。このような被験体として、癌の発症の家族歴または癌の発症に対する遺伝的素因を持つ被験体を挙げることができる。また、癌に罹る危険性のある被験体として、発癌物質に曝された事実または疑いのある被験体も挙げられ得る。
【００８２】
元の場所から移動して生体器官に蔓延する癌は、罹患した器官の機能的悪化を介して被験体の死を最終的にもたらし得る。造血系の癌（例えば白血病）は、被験体の正常な造血系コンパートメントを打ち負かすことができ、それによって最終的に死をもたらす造血系障害（貧血、血小板減少、および好中球減少のかたちで）に至る。
【００８３】
転移は、原発腫瘍から身体の他の部分にまで癌細胞が蔓延することで生ずる原発腫瘍の位置とは異なる癌細胞の領域である。原発腫瘍塊の診断時に、転移の存在について被験体の観察をおこなうことができる。転移は、特定の症状の観察に加え、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）走査、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）走査、血球数および血小板数、肝機能検査、胸部Ｘ線、および骨走査を単独または組み合わせて使用することで、最もよく検出される。
【００８４】
癌は、限定されるものではないが、例えば基底細胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脳およびＣＮＳ癌；乳癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸および直腸癌；結合組織癌；消化器系癌；子宮体癌；食道癌；眼癌；頭部および頸部の癌；胃癌；上皮内腫瘍；腎臓癌；喉頭癌；白血病；肝癌；肺癌（例えば小細胞癌および非小細胞癌）；ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫；メラノーマ；骨髄腫；神経芽細胞腫；口腔癌（例えば唇、舌、口、および咽頭）；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；直腸癌；呼吸器系の癌；肉腫；皮膚癌；胃癌；精巣癌；甲状腺癌；子宮癌；泌尿器系の癌、同様に他の癌腫および肉腫が挙げられる。
【００８５】
いくつかの好ましい実施形態では、被験体は感染症に罹っているか、もしくは感染症に罹る危険性がある。本明細書中で用いられるように「感染症」とは、宿主内で複製する外来の生物または因子が宿主内に存在することに起因し得る疾患または症状をいう。感染症は、感染性生物または因子によって、一般に正常な粘膜または他の組織のバリアが破られることを意味する。感染症に罹った被験体は、被験体の身体に存在する客観的に測定可能な感染性生物または因子を持つ被験体である。感染症に罹る危険性のある被験体は、感染症が発症しやすい被験体である。そのような被験体は、例えば、感染性生物または因子に曝されたことを知っているか、もしくは疑いのある被験体である。また、感染症に罹る危険性のある被験体として、感染性生物または因子に対して免疫応答する能力が損なわれることに関連した症状を呈する被験体が含まれ、例えば先天性または後天性免疫欠乏の被験体、放射線療法または化学療法を受けている被験体、熱傷を負った被験体、外傷を負った被験体、外科手術または他の侵襲性の医療的または歯科的手順を受けた被験体が挙げられる。
【００８６】
感染症は、関係する感染性生物または因子のカテゴリーに基づいて、細菌、ウイルス、真菌、または寄生生物に幅広く分類される。他のあまり一般的ではない種類の感染症も当技術分野で知られており、例えばリケッチア、マイコプラズマが関与する感染症、ならびにスクラピー、牛スポンジ様脳症（ＢＳＥ）、およびプリオン病（クール病およびクロイツフェルト−ヤーコプ病）を引き起こす因子が挙げられる。感染を引き起こす細菌、ウイルス、真菌、および寄生生物の例は、当技術分野で周知である。感染は、急性、亜急性、慢性、または潜伏性であり、さらに限局性または全身性であり得る。さらに、感染症は、宿主内での感染生物または因子のライフサイクルの少なくとも１フェーズのあいだ、主に細胞内または細胞外のものであり得る。
【００８７】
細菌は、グラム陰性細菌およびグラム陽性細菌の両方を含む。グラム陽性細菌の例として、限定されるものではないが、パスツレラ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）種、スタヒロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）種、およびストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）種が挙げられる。グラム陰性細菌の例として、限定されるものではないが、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、およびサルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）種が挙げられる。感染性細菌の具体例として、それに限定されるものではないが、ヘリコバクターピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉｓ）、ライム病ボレリア（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、レジオネラ菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ）、ミコバクテリア（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）種（例えば、Ｍ．ツベクロシス（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、Ｍ．アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）、Ｍ．イントラセルラ（Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、Ｍ．カンサシイ（Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ）、Ｍ．ゴルドナエ（Ｍ．ｇｏｒｄｏｎａｅ））、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、化膿レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（Ａ群レンサ球菌）、ストレプトコッカスアガラクティエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群レンサ球菌）、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）（ビリダン（ｖｉｒｉｄａｎｓ）群）糞便連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、ストレプトコッカスボビス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｂｏｖｉｓ）、レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）（嫌気性種）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、病原性カンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）種、エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）種、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、豚丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ  ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）、エンテロバクターエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、肺炎杆菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、パスツレラムルトシダ（Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、（バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）種、フゾバクテリウムヌクレエータム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、ストレプトバシラスモニリフォルミス  （Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕ��）、フランベジアトレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐｅｒｔｅｎｕｅ）、レプトスピラ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）、リケッチア（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ）、およびイスラエル放線菌（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｉｓｒａｅｌｉｉ）が挙げられる。
【００８８】
ヒトに感染症を引き起こすことがわかっているウイルスの例として、限定されるものではないが、レトロウイルス科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、ＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−ＩＩＩともいう）、ＨＩＶ−２、ＬＡＶもしくはＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、またはＨＩＶ−ＩＩＩ等のヒト免疫不全ウイルス、さらにＨＩＶ−ＬＰ等の他の分離株；ピコルナウイルス科（Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）；カルシウイルス科（Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、胃腸炎を引き起こす株）；トガウイルス科（Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、ウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）；  フラビウイルス科（Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、デング熱ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱ウイルス）；コロナウイルス科（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ）（例えばコロナウイルス）；ラブドウイルス科（Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；フィロウイルス科（Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、エボラウイルス）；パラミクソウイルス科（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、パラインフルエンザウイルス、おたふくかぜウイルス、はしかウイルス、呼吸器合胞体ウイルス）；オルソミクソウイルス科（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、インフルエンザウイルス）；ブンガウイルス科（Ｂｕｎｇａｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、ハンターンウイルス、ブンガウイルス、フレボウイリス、およびナイロウイルス）；アレナウイルス科（Ａｒｅｎａｖｉｒｉｄａｅ）（出血熱ウイルス）；レオウイルス科（Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、レオウイルス、オルビウイルス、およびロタウイルス）；ビルナウイルス科（Ｂｉｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）；  ヘパドナウイルス科（Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）（Ｂ型肝炎ウイルス）；パルボウイルス科（Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ）（パルボウイルス）；パポバウイルス科（Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ）（乳頭腫ウイルス、ポリオーマウイルス）；アデノウイルス科（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）（大部分のアデノウイルス）；  ヘルペスウイルス科（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１および２、水痘帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（ヘルペスウイルス）；ポックスウイルス科（Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ）（痘瘡ウイルス、ワクシニアウイルス、痘瘡ウイルス）；およびイリドウイルス科（Ｉｒｉｄｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、アフリカブタコレラウイルス）；さらに、未分類のウイルス（例えば、スポンジ様脳症の病原因子、デルタ型肝炎の因子（Ｂ型肝炎ウイルスの欠損不随体と思われる）、非Ａ、非Ｂ型肝炎の因子（クラスＩ＝経腸的に伝達される；クラス２＝非経口的に伝達される（すなわち、Ｃ型肝炎）、ノーウォークおよび関連ウイルス、さらにアストロウイルス）が挙げられる。
【００８９】
真菌の例として、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、ブラストミセスデルマティティディス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、カンジダアルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、他のカンジダ種、コクシジオイデスイミティス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ）、クリプトコックスネオホルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、ヒストプラスマカプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、クラミジアトラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、ノルカジア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）種、ニューモシスチスカリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ）が挙げられる。
【００９０】
寄生生物は、限定されるものではないが、血液由来および／または組織寄生生物、例えばバーベシアミクロチ（Ｂａｂｅｓｉａ  ｍｉｃｒｏｔｉ）、バーベシアダイベーゲンス（Ｂａｂｅｓｉａ  ｄｉｖｅｒｇｅｎｓ）、赤痢アメーバ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、ランブル鞭毛虫（Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｌｉａ）、熱帯リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｔｒｏｐｉｃａ）、リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）種、ブラジルリーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｉｓ）、ドノバンリーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ）、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、四日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｍａｌａｒｉａｅ）、卵形マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｏｖａｌｅ）、三日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）、およびトキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、ガンビアトリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｇａｍｂｉｅｎｓｅ）およびローデシアトリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｒｈｏｄｅｓｉｅｎｓｅ）（アフリカの睡眠病）、クルーズトリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ（シャーガス病））、およびトキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、扁虫、線形動物が挙げられる。
【００９１】
本明細書中で用いられるように、「標的組織と関連するリンパ節」とは、組織から循環しているリンパが戻ると予期されるかまたは戻ると示された任意のリンパ節または他のリンパ組織をいう。上記のように、血液内のリンパ球は、その循環をサンプル組織に残す。循環に戻るために、組織内のリンパ球はリンパ内皮を進んでリンパ循環に入り、輸入リンパ管を介して流入領域リンパ節へと流れる。リンパ節と該リンパ節が働く組織との解剖学および関連は、当業者に周知である。所定の標的組織は、複数の流入領域リンパ節を持つことができる。リンパ節の非限定的な例として、大動脈、腋窩、気管支肺、頬側、腹腔、頸部、嚢胞性、三角筋胸筋、腸骨、鎖骨下、鼡径部、肋間、内胸、頚静脈二腹筋、頚静脈肩甲舌骨筋、腰部、乳様突起、縦隔、腸間膜、後頭、傍大動脈、直腸傍、耳下腺、胸部、膝窩、大動脈前、肺、耳介後方、咽頭後方、下顎骨下、顎下、肩甲下、滑車上、扁桃、および気管支のリンパ節が挙げられる。
【００９２】
同様に本発明のこの態様に基づいて、いくつかの実施形態では、上記方法は被験体に対してさらにアジュバントの投与を伴う。本明細書中で用いられるように「アジュバント」とは、免疫応答の抗原非特異性の刺激物質をいう。アジュバントの使用は、可溶性抗原に対して強い抗体応答を誘発する上で不可欠なものである（Ｈａｒｌｏｗ  およびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ、現行版、本明細書により援用される）。アジュバントの全体的な作用は劇的であり、その重要性は過度に強調されることはない。アジュバントの作用は、使用される抗原の投与量をかなり少なくすることを可能とし、より持続的である抗体反応を生ずる。免疫応答の非特異的活性化は、免疫応答を得る上での成功と失敗との違いをしばしば意味する。避けるべき理由が特にない限り、アジュバントは初回注射の際に用いるべきである。ほとんどのアジュバントは、２種類の成分を取り込む。一方の成分は、急速な異化作用（例えば、リポソームまたは合成界面活性剤（Ｈｕｎｔｅｒら、１９８１））から抗原を保護するように設計される。リポソームの効果は、トラップされた分子を免疫系が認識できないことから、イムノゲンが外側の脂質層に取り込まれた場合にのみ生ずる。他方の成分は、非特異的に免疫応答を刺激する物質である。これらの物質は、リンフォカイン濃度の上昇によって作用する。リンフォカインは、抗原処理細胞の活性を直接刺激して、注射部位で局所炎症性反応を引き起こす。初期のころの研究は、加熱殺菌された菌（Ｄｉｅｎｅｓ  １９３６）またはリポポリサッカライド（ＬＰＳ）（Ｊｏｈｎｓｏｎら  １９５６）に完全に依存していた。ＬＰＳは、かなり有毒であり、その構成成分の分析から、アジュバントとしてのその特性のほとんどがリピドＡとして知られている部分であることが示されている。リピドＡは、親ＬＰＳ分子のより良いアジュバント特性のほとんどを保持したままでＬＰＳよりもかなり毒性が低い合成および天然の形態で、多く入手することができる。リピドＡ化合物の送達は、リポソームを用いてしばしばおこなわれる。
【００９３】
アジュバントとして、限定されるものではないが、ミョウバン（例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム）；石鹸木（キラヤ）（Ｑ．ｓａｐｏｎａｒｉａ）の樹皮から精製したサポニン、例えばＱＳ２１（ＨＰＬＣ分画による２１番目にピークに溶出する糖脂質）；アクイラバイオファーマシューティカルズ社（Ａｑｕｉｌａ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｉｎｃ．、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ、ＭＡ））；ポリ（ジ（カルボキシルアトフェノキシ）ホスファゼン（ＰＣＰＰポリマー；米国ウイルス研究所（Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、ＵＳＡ）；モノホスホリルリピッドＡ等のリポ多糖類誘導体（ＭＰＬ；リビイムノケムリサーチ社（Ｒｉｂｉ  ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｉｎｃ．、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、ＭＴ）、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ；リビ（Ｒｉｂｉ））およびスレオニル−ムラミルジペプチド（ｔ−ＭＤＰ；リビ（Ｒｉｂｉ））；ＯＭ−１７４（リピドＡに関連したグルコサミン二糖；ＯＭファーマＳＡ（ＯＭ  Ｐｈａｒｍａ  ＳＡ、Ｍｅｙｒｉｎ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ））、およびリーシュマニア伸長生長因子（精製されたリーシュマニア属（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）タンパク質；コリクサコーポレーション（Ｃｏｒｉｘａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、  Ｓｅａｔｔｌｅ、  ＷＡ）、エマルジョン系製剤、例えば、鉱油、非鉱油、油中水形（Ｗ／Ｏ）または油中水中油形（Ｏ／Ｗ／Ｏ）エマルジョン、水中油形（Ｏ／Ｗ）エマルジョン（例えば、モンタニデ（Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ）アジュバントのセピックＩＳＡシリーズ（Ｓｅｐｐｉｃ  ＩＳＡ  ｓｅｒｉｅｓ））；さらにＰＲＯＶＡＸ、ＩＳＣＯＭ（混合サポニン類および脂質を含み、抗原を保持することができる細孔でウイルスサイズの粒子を形成する免疫賦活性複合体；ＳＢ−ＡＳ２）（ＭＰＬおよびＱＳ２１を含む水中油（Ｏ／Ｗ）形エマルジョンであるスミスクラインビーチャム（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ）アジュバントシステムＮｏ．２；スミスクラインビーチャムバイオロジカルズ（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ［ＳＢＢ］、Ｒｉｘｅｎｓａｒｔ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）；ＳＢ−ＡＳ４（ミョウバンおよびＭＰＬを含むスミスクラインビーチャムアジュバントシステムＮｏ．４、ＳＢＢ、ベルギー）；ミセルを形成する非イオン性ブロック共重合体、例えばＣＲＬ１００５（ポリオキシエチレンの鎖によって隣接された疎水性ポリオキシプロピレンの直鎖を含む；ベクセル社（Ｖａｘｃｅｌ、Ｉｎｃ．、Ｎｏｒｃｒｏｓｓ、ＧＡ）；およびシンテックスアジュバント製剤（ＳＡＦ、Ｔｗｅｅｎ８０および非イオン性ブロック共重合体を含む水中油（Ｏ／Ｗ）形エマルジョン；シンテックスケミカルズ社（Ｓｙｎｔｅｘ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｉｎｃ．、Ｂｏｕｌｄｅｒ、ＣＯ）が挙げられる。
【００９４】
いくつかの実施形態では、本発明のこの態様に基づく方法は、被験体への抗腫瘍剤の投与を伴う。本明細書中で用いられるように、「抗腫瘍剤」、または同等に「制癌剤」は、癌の処置を目的として被験体に投与され因子をいう。本明細書中で用いられるように、「癌を処置する」ことは、癌発生を予防すること、癌の症状を緩和すること、および／または樹立した癌の増殖を阻害することを含んでいる。別の態様では、癌が発症する危険性を減らすことを目的として、癌を発症する危険性のある被験体に対して制癌剤を投与する。この明細書では、癌治療を目的とした様々な種類の薬剤について説明する。この明細書において、制癌剤は、化学療法剤、免疫療法剤、癌ワクチン、ホルモン療法、および生体応答修飾物質として分類される。それに加えて、本発明の方法は、本発明のＴＩＭ−３結合分子とともに複数の制癌剤を使用することを、取り入れることを意図する。一例として、必要に応じて、ＴＩＭ−３結合分子を化学療法剤および免疫療法剤の両方とともに投与することができる。あるいは、制癌剤は免疫療法剤および癌ワクチン、または化学療法剤および癌ワクチン、または化学療法剤、免疫治療剤、および癌ワクチンを包含することができ、これらは癌に罹っているか、もしくは癌を発症する危険性がある一被験体を処置するために被験体に、すべて投与され得る。
【００９５】
制癌剤は、様々な方法で機能する。いくつかの制癌剤は、腫瘍細胞に特有の生理学的機能を標的にして作用する。例として、癌によって変異した特定の遺伝子またはその遺伝子産物（例えば、主にタンパク質）を標的とすることが挙げられる。そのような遺伝子として、限定されるものではないが、癌遺伝子（例えば、Ｒａｓ、  Ｈｅｒ２、  ｂｃｌ−２）、癌抑制遺伝子（例えばＥＧＦ、ｐ５３、Ｒｂ）、および細胞周期標的（例えばＣＤＫ４、ｐ２１、テロメラーゼ）が挙げられる。制癌剤は、癌細胞によって変えられた信号伝達経路および分子機構を交互に標的とすることができる。細胞表面上に発現したエピトープを介した癌細胞のターゲッティングは、モノクローナル抗体の使用を通じて達成される。このような後者の種類の制癌剤を、この明細書では一般的に免疫療法と呼ぶ。
【００９６】
他の制癌剤は、癌細胞以外の細胞を標的とする。例えば、いくつかの薬剤（すなわち、癌ワクチン）は、免疫系が癌細胞を攻撃するように初回刺激を与える。さらに別の薬剤（脈管形成抑制薬と呼ばれる）は、固形腫瘍の血液供給を攻撃することによって機能する。最も悪性の癌が転移することができる（すなわち、原発腫瘍部位から離れ、遠位組織に播種されることで、二次性腫瘍を形成する）ので、この転移を妨げる薬剤もまた癌の処置に有用である。脈管形成抑制剤として、ベーシックＦＧＦ（ｂ−ＦＧＦ）、ＶＥＧＦ、アンジオポエチン、アンジオスタチン、エンドスタチン、ＴＮＦ−α、ＴＮＰ−４７０、トロンボスポンジン−１、血小板第４因子、ＣＡＩ、およびインテグリンファミリータンパク質に属する特定のものが挙げられる。この種の薬剤の１つのカテゴリーは、メタロプロテイナーゼ抑制剤であり、この薬剤は、癌細胞が原発腫瘍部位を出て別の組織に滲出する際に使用する酵素を阻害する。
【００９７】
本明細書中で用いられるように、化学療法剤は、免疫療法剤または癌ワクチンのカテゴリーには分類されない他の形態の制癌剤すべてを包含する。本明細書中で用いられる化学療法剤は、化学剤および生物剤の両方を包含する。これらの薬剤の機能は、癌細胞が延命していく際に依存する細胞活性を阻害することである。化学療法剤のカテゴリーに、アルキル化／アルカロイド剤、代謝拮抗剤、ホルモンまたはホルモン類似体、および種々雑多な抗悪性腫瘍剤を含む。ほとんどは、全てではないにしても、これらの薬剤は癌細胞に対して直接毒性を示し、免疫刺激を必要としない。
【００９８】
現在開発途上にあるか、もしくは臨床で使用されている化学療法剤として、限定されるものではないが、５−ＦＵエンハンサー、９−ＡＣ、ＡＧ２０３７、ＡＧ３３４０、アグリカネース阻害剤、アミノグルテチミド、アムサクリン（Ａｍｓａｃｒｉｎｅ）（ｍ−ＡＭＳＡ）、脈管形成阻害剤、抗−ＶＥＧＦ（Ａｎｔｉ−ＶＥＧＦ）、アスパラギナーゼ、アザシチジン（Ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、バチマスタート（Ｂａｔｉｍａｓｔａｔ）（ＢＢ９４）、ＢＡＹ  １２−９５６６、ＢＣＨ−４５５６、ビス−ナフタルイミド、ブスルファン（Ｂｕｓｕｌｆａｎ）、カペシタビン（Ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、カルボプラチン（Ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）、カルムスタイン（Ｃａｒｍｕｓｔａｉｎｅ）＋ポリフェプルオサン（Ｐｏｌｉｆｅｐｒ  Ｏｓａｎ）、ｃｄｋ４／ｃｄｋ２阻害剤、クロロブシル（Ｃｈｌｏｒｏｍｂｕｃｉｌ）ＣＩ−９９４、シスプラチン（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、クラドリビン（Ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）、ＣＳ−６８２、シタラビン（Ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）  ＨＣｌ、Ｄ２１６３、ダクチノマイシン（Ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、ダウノルビシン（Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）  ＨＣｌ、デポサイト（ＤｅｐｏＣｙｔ）、デキシホサミド（Ｄｅｘｉｆｏｓａｍｉｄｅ）、ドセタタキセル（Ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、ドラスタイン（Ｄｏｌａｓｔａｉｎ）、ドキシフルリジン（Ｄｏｘｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）、ドキソルブシン（Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ＤＸ８９５１ｆ、Ｅ  ７０７０、ＥＧＦＲ、エピルビシン（Ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）、エリスロポイエチン（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ）、エストラムスチン（Ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）リン酸ナトリウム、エトポシド（Ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）  （ＶＰ１６−２１３）、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ＦＫ  ３１７、フラボピリドール（Ｆｌａｖｏｐｉｒｉｄｏｌ）、フロキシウリジン（Ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）、フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、フルオロウラシル  （５−ＦＵ）、フルタミド、フラジリン（Ｆｒａｇｙｌｉｎｅ）、ゲムシタビン（Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、ヘキサメチルメラミン  （ＨＭＭ）、ヒドロキシウレア（ヒドロキシカルバミド）、イホスファミド（Ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、インターフェロンアルファ２ａ、インターフェロンアルファ２ｂ、インターロイキン２、イリノテカン（Ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）、ＩＳＩ６４１、クレスチン（Ｋｒｅｓｔｉｎ）、レモナール（Ｌｅｍｏｎａｌ）ＤＰ２２０２、酢酸ロイプロリド（Ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ  ａｃｅｔａｔｅ）（ＬＨＲＨ放出因子類似体）、レバミゾール（Ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ）、ＬｉＧＬＡ（リチウム−ガンマ−リノレート）、ロジンシーズ（Ｌｏｄｉｎｅ  Ｓｅｅｄｓ）、ロメテクソール、ロムスチン（Ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ）（ＣＣＮＵ）マリミスタット（Ｍａｒｉｍｉｓｔａｔ）、塩酸メクロレタミン（窒素マスタード）、酢酸メゲステロール、メグラミン（Ｍｅｇｌａｍｉｎｅ）  ＧＬＡ、メルカプトプリン、メスナ（Ｍｅｓｎａ）、ミトグアゾン（Ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ（メチルＧＡＧ；メチルグリオキサール  ビスーグアニルヒドラゾン；ＭＧＢＧ）、ミトタン（Ｍｉｔｏｔａｎｅ）（ｏ．ｐ’−ＤＤＤ）、ミトキサントロン���Ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、ミトキサントロンＨＣｌ、ＭＭＩ  ２７０、ＭＭＰ、ＭＴＡ／ＬＹ  ２３１５１４、オクトレオチド（Ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ）、ＯＤＮ  ６９８、ＯＫ−４３２、オーラルプラチナム（Ｏｒａｌ  Ｐｌａｔｉｎｕｍ）、オーラルトキソイド（Ｏｒａｌ  Ｔａｘｏｉｄ）、パクリタキセル（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）（タキソール（ＴＡＸＯＬ）（登録商標））、ＰＡＲＰ  阻害剤、ＰＤ  １８３８０５、ペントスタチン（Ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎ）（２’デオキシコフォルミシン）、ＰＫＣ  ４１２、プリカミシン（Ｐｌｉｃａｍｙｃｉｎ）、プロカルバジン（Ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ）ＨＣｌ、ＰＳＣ  ８３３、ラリトレキセド（Ｒａｌｉｔｒｅｘｅｄ）、ＲＡＳ  ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ＲＡＳ癌遺伝子阻害剤、セムスチン（Ｓｅｍｕｓｔｉｎｅ）（メチル−ＣＣＮＵ）、ストレプトゾシン（Ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ）、スラミン（Ｓｕｒａｍｉｎ）、クエン酸タモキシフェン、タキサン（Ｔａｘａｎｅ）類似体、テモゾロミド（Ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）、テニポシド（Ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）（ＶＭ−２６）、チオグアニン（Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ）、チオテパ（Ｔｈｉｏｔｅｐａ）、トポテカン（Ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、チロシンキナーゼ、ＵＦＴ（テガフル／ウラシル）、バルルビシン（Ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ）、ＶＥＧＦ／ｂ−ＦＧＦ阻害剤、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンデシン、ＶＸ−７１０、ＶＸ−８５３、ＹＭ  １１６、ＺＤ０１０１、ＺＤ０４７３／アノルムド（Ａｎｏｒｍｅｄ）、ＺＤ１８３９、ＺＤ９３３１が挙げられる。
【００９９】
免疫療法剤は、特異的に癌抗原と結合またはそれを認識する抗体または抗体フラグメントに由来する薬剤である。免疫療法の目的は、樹立した腫瘍に対して患者の免疫応答を高めることである。免疫療法の一方法は、アジュバントの使用を含む。微生物（例えば、カルメット−ゲラン杆菌（ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ））由来のアジュバント物質は、動物の腫瘍に対する免疫応答を高め、抵抗を高める。
【０１００】
いくつかの癌細胞は、抗原性であり、免疫系の標的となりうる。一態様では、ＴＩＭ−３結合分子と制癌剤（特に、癌免疫治療として分類されたもの）との併用投与は、腫瘍抗原に対する特異的な免疫応答の刺激に有用である。
【０１０１】
本明細書中で用いられるように、用語「腫瘍抗原」および「癌抗原」とは、置き換え自在に用いられ、癌細胞によって異なる発現を示すとともに、それによって癌細胞の標的化に利用可能な抗原をいう。癌抗原は、明らかに腫瘍特異的免疫応答を潜在的に刺激しうる抗原である。それらの抗原のいくつかは、必ずしも発現されるわけではないが、正常な細胞によってコードされている。これらの抗原は、通常は正常細胞でサイレントな状態にある（すなわち、発現していない）抗原、分化の特定の段階でのみ発現する抗原、および一時的に発現される抗原（例えば、胚性または胎児性抗原）によって特徴づけられる。他の癌抗原は、変異細胞遺伝子によってコードされるもので、例えば癌遺伝子（例えば、活性化ｒａｓ癌遺伝子）、サプレッサー遺伝子（例えば、変異体ｐ５３）、内部欠失または染色体転座の結果生ずる融合タンパク質が挙げられる。さらに別の癌抗原は、ＲＮＡおよびＤＮＡ腫瘍ウイルスに運ばれる遺伝子等のウイルス遺伝子によってコードされ得る。
【０１０２】
腫瘍抗原は、一般に腫瘍または癌細胞の表面に結合するペプチドであり、ＭＨＣ分子との関連でＡＰＣの表面で発現した場合に、免疫応答を引き起こす能力がある。癌抗原は、例えば癌ワクチンに存在するもの、または癌免疫治療の調製に使用されるものは、Ｃｏｈｅｎ  ＰＡら（１９９４）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５４：１０５５−８に記載されているように、癌細胞粗抽出物から部分的に抗原を精製することによって、または組み換え技術、または既知の抗原のデノボ（ｄｅ  ｎｏｖｏ）合成によって、調製することができる。癌抗原は、特定の抗原の免疫原性部分の形で用いることができ、またはいくつかの例では、細胞全体または腫瘍腫瘤を抗原として用いることができる。そのような抗原は、組み換え技術によって、または当技術分野において公知の任意の手段によって、単離または合成することができる。
【０１０３】
免疫監視機構の理論は、免疫系の主要機能が腫瘍形成前に腫瘍性細胞を検出および除去することである。この理論の基本原理は、癌細胞が正常細胞と抗原的に異なることから、免疫学的に不適合の同種移植片の拒絶を引き起こす拒絶と類似する免疫反応が誘発されるということである。研究によって、腫瘍細胞が抗原の発現において質的または量的に異なることが確認されている。例えば、「腫瘍特異的抗原」は、正常細胞ではなく腫瘍細胞に特異的に結合する抗原である。腫瘍特異的抗原の例は、ＤＮＡウイルスまたはＲＮＡウイルスによって誘発される腫瘍のウイルス抗原である。「腫瘍関連」抗原は、腫瘍細胞および正常細胞の両方に存在するが、腫瘍細胞では異なる量で、または異なる形状で存在する。そのような抗原の例は、腫瘍胎児性抗原（例えば、癌胎児抗原）、分化抗原（例えば、ＴおよびＴｎ抗原）、および癌遺伝子産物（例えば、ＨＥＲ／ｎｅｕ）である。
【０１０４】
すでに指摘したように、腫瘍特異的遺伝子のポリペプチド産物は、宿主免疫監視機構の標的であり、腫瘍得的遺伝子産物に特異的なＣＴＬのクローンの１つ以上の選択および増大を引き起こし得る。この現象の例として、ＭＡＧＥ遺伝子ファミリーによってコードされるタンパク質およびそのフラグメントが挙げられる。ＰＣＴ出願（ＰＣＴ／ＵＳ９２／０４３５４、１９９２年１１月２６日発行）では、「ＭＡＧＥ」ファミリー（腫瘍特異的遺伝子ファミリー）が開示されている。これらの遺伝子の発現産物は、次に細胞表面上に発現されるペプチドにプロセシングされる。このことは、特異的ＣＴＬによる腫瘍細胞の溶解をもたらすことができる。上記遺伝子は、「腫瘍拒絶抗原先駆体」または「ＴＲＡＰ」分子をコードすると言われており、さらにそれから誘導されるペプチドは「腫瘍拒絶抗原」または「ＴＲＡ」と呼ばれる。この遺伝子ファミリーに関するさらなる情報については、Ｔｒａｖｅｒｓａｒｉ  Ｃら（１９９２）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ３５：１４５−５２；  ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｂｒｕｇｇｅｎ  Ｐら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５４：１６４３−４７を参照のこと。また、米国特許第５，３４２，７７４号も参照されたい。
【０１０５】
ＭＡＧＥ遺伝子ファミリーに加えて、腫瘍抗原もまたＭＡＧＥ−Ｘｐ遺伝子ファミリー（米国特許第５，５８７，２８９号）、チロシナーゼ遺伝子（ＰＣＴ公報ＷＯ９４／１４４５９）、メラン（Ｍｅｌａｎ）−Ａ遺伝子（ＰＣＴ公報ＷＯ９４／２１１２６）、ＢＡＧＥ遺伝子（米国特許第５，５７１，７１１号およびＰＣＴ公報ＷＯ９５／００１５９）、ＧＡＧＥ遺伝子（米国特許第５，６１０，０１３号およびＰＣＴ公報ＷＯ９５／０３４２２）、ＲＡＧＥ遺伝子ファミリー（米国特許第５，９３９，５２６号）、ＰＲＡＭＥ（元はＤＡＧＥ）遺伝子（ＰＣＴ公報ＷＯ９６／１０５７７）、ＭＵＭ−１／ＬＢ−３３Ｂ遺伝子（米国特許第５，５８９，３３４号）、ＮＡＧ遺伝子（米国特許第５，８２１，１２２号）、ＦＢ５（エンドシアリン（ｅｎｄｏｓｉａｌｉｎ））遺伝子（米国特許第６，２１７，８６８号）、およびＰＭＳＡ遺伝子（米国特許第５，９３９，８１８号）によってコードされる。前述のリストは、あくまでも典型例を挙げたものであって、それによって制限されるように理解されるべきではない。
【０１０６】
インビトロおよびインビボで腫瘍標的を殺傷することができる異なる種類の細胞、すなわちナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、リンホカイン活性化キラー細胞（ＬＡＫ細胞）、および活性化マクロファージが同定されている。ＮＫ細胞は、特定の抗原に対して事前に感作することなく腫瘍細胞を殺すことができ、その活性は標的細胞上の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）によってコードされるクラスＩ抗原の存在を必要としない。ＮＫ細胞は、発生期の腫瘍の制御および転移性増殖の制御に関係していると考えられている。ＮＫ細胞とは対照的に、ＣＴＬは、腫瘍抗原に対する感作後およびＭＨＣクラスＩも発現する腫瘍細胞上で標的抗原が発現される場合にのみに、腫瘍細胞を殺すことができる。ＣＬＴは、移植された腫瘍およびＤＮＡウイルスによって引き起こされた腫瘍の拒絶におけるエフェクター細胞であると考えられている。ＬＡＫ細胞は、ＮＫ細胞およびＣＴＬ群とは異なったヌルリンパ球のサブセットである。活性化マクロファージは、抗原非依存的でもなく、一旦制限されたＭＨＣが活性化することもない様式において、腫瘍細胞を殺すことができる。活性化マクロファージは、該マクロファージが浸潤した腫瘍の増殖速度を減少させると考えられる。インビトロアッセイによって、別の免疫機構、例えば、抗体依存性反応、細胞媒介性細胞傷害性反応および抗体＋補体による溶解が確認されている。しかし、これらの免疫エフェクター機構は、インビボでのＮＫ細胞、ＣＴＬ、ＬＡＫ細胞、およびマクロファージの機能よりも、インビボでの重要性が劣るものと考えられる（総説として、Ｐｉｅｓｓｅｎｓ  ＷＦ  およびＤａｖｉｄ  Ｊ、「Ｔｕｍｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第２巻、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｏｏｋｓ、Ｎ．Ｙ．、ｐｐ．１−１３、１９９６を参照のこと）。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、抗腫瘍剤は、腫瘍特異的抗体またはその腫瘍特異的フラグメントを含む。用語「腫瘍特異的抗体」とは、腫瘍抗原に特異的に結合する抗体をいう。本明細書で用いられ場合、「腫瘍特異的抗体フラグメント」とは、腫瘍特異的抗原に特異的に結合する腫瘍特異的抗体のフラグメントをいう。一般に、フラグメントは、抗原特異性および結合に寄与する超可変ドメインを持つ可変領域の少なくとも一部分を含む。腫瘍特異的抗体フラグメントの例として、限定されるものではないが、腫瘍特異的抗体由来のＦａｂ、Ｆｖ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２フラグメントが挙げられる。
【０１０８】
好ましくは、腫瘍抗原は癌細胞の細胞表面に発現される。さらにより好ましくは、抗原は、正常細胞では発現されないか、または少なくとも癌細胞で発現されるレベルと同じレベルでは発現されない抗原である。抗体に基づく免疫治療は、癌細胞の細胞表面に結合させ、それによって内因性の免疫系を刺激して癌細胞を攻撃することによって機能し得る。抗体に基づく治療が機能する別の方法は、癌細胞に対して毒性のある物質の特異的標的化のための送達系としてである。抗体は、一般に毒素（例えば、リシン（例えば、トウゴマの実由来）、カリーチアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ））、およびメータシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）、ヨウ素１３１およびイットリウム９０等の放射性同位元素、化学療法剤（本明細書での記載通り）、または生物的反応修飾物質と結合する。このように、毒性物質を癌の領域に集中させ得、正常細胞に対する非特異的毒性を最小化することができる。
【０１０９】
癌抗原に特異的な抗体の使用に加えて、血管系に結合する抗体（例えば内皮細胞に結合するもの）もまた本発明では有用である。固形腫瘍は、一般に新しく形成された血管に依存して生存するので、ほとんどの腫瘍は新たな血管の生長を強化し、かつ刺激する能力がある。その結果、多くの制癌剤の戦略の１つは、腫瘍を養っている血管および／またはそのような血管を支持する結合組織（または間質）に攻撃を加えることである。
【０１１０】
現在用いられているか、もしくは開発されている癌免疫治療剤の例としては、限定されるものではないが、リツキサン（Ｒｉｔｕｘａｎ）、ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８、抗ＣＤ２０  Ｍａｂ、パノレックス（Ｐａｎｏｒｅｘ）、３６２２Ｗ９４、腺癌ハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）上の抗ＥＧＰ４０（１７−１Ａ）膵癌腫（ｐａｎｃａｒｃｉｎｏｍａ）抗原、抗Ｈｅｒ２、抗ＥＧＦｒ、ＢＥＣ２、抗イデオタイプＧＤ３エピトープ、オバレックス（Ｏｖａｒｅｘ）、Ｂ４３．１３、抗イデオタイプＣＡ１２５、４Ｂ５、抗ＶＥＧＦ、ＲｈｕＭＡｂ、ＭＤＸ−２１０、抗ＨＥＲ−２、ＭＤＸ−２２、ＭＤＸ−２２０、ＭＤＸ−４４７、ＭＤＸ−２６０、抗ＧＤ−２、クアドラメット（Ｑｕａｄｒａｍｅｔ）、ＣＹＴ−４２４、ＩＤＥＣ−Ｙ２Ｂ８、オンコリム（Ｏｎｃｏｌｙｍ）、Ｌｙｍ−１、ＳＭＡＲＴ  Ｍ１９５、ＡＴＲＡＧＥＮ、ＬＤＰ−０３、抗ＣＡＭＰＡＴＨ、ｉｏｒ  ｔ６、抗ＣＤ６、ＭＤＸ−１１、ＯＶ１０３、ゼナパックス（Ｚｅｎａｐａｘ）、抗Ｔａｃ、抗ＩＬ−２レセプター、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−２、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−１、ＣＥＡＣＩＤＥ、プレターゲット（Ｐｒｅｔａｒｇｅｔ）、ノボ（Ｎｏｖｏ）ＭＡｂ−Ｇ２、ＴＮＴ、抗ヒストン、グリオーマブ（Ｇｌｉｏｍａｂ）−Ｈ、ＧＮＩ−２５０、ＥＭＤ−７２０００、リンホシド（ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ）、ＣＭＡ  ６７６、モノファーム（Ｍｏｎｏｐｈａｒｍ）−Ｃ、ｉｏｒ  ｅｇｆ／ｒ３、ｉｏｒ  ｃ５、抗ＦＬＫ−２、ＳＭＡＲＴ  １Ｄ１０、ＳＭＡＲＴ  ＡＢＬ  ３６４、およびＩｍｕＲＡＩＴ−ＣＥＡが挙げられる。
【０１１１】
癌ワクチンは、癌細胞に対して内因性の免疫応答を刺激することを目的とする薬である。現在、生産されたワクチンは、主に体液免疫系（すなわち抗体依存的免疫応答）を活性化させる。現在開発中の他のワクチンは、腫瘍細胞を殺すことができる細胞傷害性リンパ球を含む細胞媒介性免疫系を活性化させることに重点を置いている。癌ワクチンは、一般に、両方のＡＰＣ（例えば、マクロファージおよび樹状細胞）に対して、および／または他の免疫細胞（例えばＴ細胞、Ｂ細胞、およびＮＫ細胞）に対して、癌抗原の提示を強化する。
【０１１２】
癌ワクチンはいくつかの形態のうちの１つをとることができるけれども、後述するように、癌ワクチンの目的は、ＡＰＣによるそのような抗原の内因性プロセッシングと、ＭＨＣクラスＩ分子との関連で細胞表面上での抗原掲示の最終的な掲示を促進するために、癌抗原および／または癌関連抗原をＡＰＣに送達することである。癌ワクチンの１つの形態は、被験体から除去され、エキソビボで処理され、さらに全細胞として被験体に再び導入された癌細胞調製物である全細胞ワクチンである。腫瘍細胞の溶解物もまた、免疫応答を引き起こす癌ワクチンとして用いることができる。癌ワクチンの別の形態は、癌特異的または癌関連の小さなタンパク質を用いてＴ細胞を活性化させるペプチドワクチンである。癌関連タンパク質は、癌細胞によって単独に発現されないタンパク質である（すなわち、他の正常細胞はこれらの抗原をなおも発現し得る）。しかし、癌関連抗原の発現は、一般に特定の種類の癌によって一貫して上方制御される。癌ワクチンの別の形態では、インビトロで癌抗原または癌関連抗原に曝された全樹状細胞を含む樹状細胞ワクチンである。樹状細胞の溶解物または膜画分もまた、癌ワクチンとして用いることができる。樹状細胞ワクチンは、ＡＰＣを直接活性化することが可能である。他の癌ワクチンとして、ガングリオシドワクチン、熱ショックタンパク質ワクチン、ウイルスワクチンおよび細菌ワクチン、ならびに核酸ワクチンが挙げられる。
【０１１３】
いくつかの実施形態で、この方法は被験体にサイトカインを投与することを含む。本明細書で用いられる場合、「サイトカイン」とは、ナノモルからピコモルの濃度でヒト調節因子として作用し、また正常状態または病的状態のいずれかで個々の細胞および組織お機能的活性を調節する可溶性タンパク質およびペプチドの多様な群のいずれかをいう。これらのタンパク質もまた、細胞間の相互作用を直接媒介し、細胞外環境でおこなわれるプロセスを調節する。サイトカインの例として、限定されるものではないが、インターロイキンＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８；顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）；顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）；インターフェロン−α（ＩＦＮ−α）、インターフェロン−β（ＩＦＮ−β）、およびインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）を含むインターフェロン；腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、トランスホーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）；ＦＬＴ−３リガンド；およびＣＤ４０リガンドが挙げられる。
【０１１４】
サイトカインは、Ｔ細胞応答に関して役割を果たす。ヘルパー（ＣＤ４＋）Ｔ細胞は、他のＴ細胞を含む他の免疫系細胞に作用する可溶因子の産生を通して、哺乳類の免疫応答を組織化する。大部分の成熟したＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞は、２つあるサイトカインの性質、すなわちＴｈ１またはＴｈ２のうちの１つを表す。マウスのＴｈ１サブセットは、遅延型過敏反応、細胞媒介性免疫、および免疫グロブリンのＩｇＧ２ａへのクラススイッチを促進する。マウスのＴｈ２サブセットは、Ｂ細胞を活性化させ、抗体産生を促進させ、さらにＩｇＧ１およびＩｇＥへのクラススイッチングを誘導して、液性免疫を誘発する。いくつかの実施形態では、サイトカインがＴｈ１サイトカインであることが好ましい。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、本発明のこの局面に従う方法は、さらに被験体に抗菌剤を投与することを含む。「抗菌剤」とは、細菌を殺すか、または細菌の増殖あるいは機能を阻害する薬剤をいいう。広範囲の細菌を殺すか、または阻害するのに有効な抗菌剤は、しばしば広域性抗生物質と呼ばれる。抗菌剤の別の種類は、グラム陽性細菌またはグラム陰性細菌に対して、主に効果的である。これらの種類の抗菌剤は、しばしば狭域性抗生物質と呼ばれる。単一の微生物または疾患に対して効果的であり、他の種類の細菌に対しては効果的ではない他の抗菌剤は、しばしば制限域性抗生物質と呼ばれる。抗菌剤は、しばしば作用の主な形態に基づいて分類される。一般に、抗菌剤は、細胞壁合成阻害剤、細胞膜阻害剤、タンパク質合成阻害剤、核酸合成阻害剤または機能阻害剤、および拮抗阻害剤である。
【０１１６】
本発明で有用な殺菌剤として、限定されるものではないが、天然ペニシリン、半合成ペニシリン、クラブラン酸、セファロスポリン、バシトラシン、アンピシリン、カルベニシリン、オキサシリン、アズロシリン、メズロシリン、ピぺラシリン、メチシリン、ジクロキサシリン、ナフシリン、セファロシン、セファピリン、セファレキシン、セファマンドール、セファクロール、セファゾリン、セフロキシン、セフォキシチン、セフォタキシーム、セフスロジン、セフェタメト、セフィキシーム、セフトリアキソン（ｃｅｆｔｒｉａｘｏｎｅ）、セフォペラゾン、セフタジジン、モキサラクタム、カルバペネム、イミペネム、モノバクテム（ｍｏｎｏｂａｃｔｅｍ）、スズトレオナム（ｅｕｚｔｒｅｏｎａｍ）、バンコマイシン、ポリミキシン、アムホテリシンＢ、ナイスタチン、イミダゾール、クロトリマゾール、ミコナノゾール、ケトコナゾール、イトラコナゾール、フルコゾナール、リファンピン）、エタンブートル、テトラサイクリン、クロラムフェニコール、マクロライド系、アミノグリコシド系、ストレプトマイシン、カナマイシン、トブラマイシン（ｔｏｂｒａｍｙｃｉｎ）、アミカシン、ゲンタマイシン、テトラサイクリン、ミノサイクリン、ドキシサイクリン、クロロテトラサイクリン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、クラリスロマイシン、オレアンドマイシン（ｏｌｅａｎｄｏｍｙｃｉｎ）、アジスロマイシン、クロラムフェニコール、キノロン系、ｃｏ−トリモキサゾール（ｃｏ−ｔｒｉｍｏｘａｚｏｌｅ）、ノルフロキサシン、シプロキサシン、エノキサシン、ナリジクス酸、テマフロキサシン、スルホンアミド、ガントリシン、およびトリメトプリム；アセダプソン（Ａｃｅｄａｐｓｏｎｅ）；アセトスルホンナトリウム；アラメシン（Ａｌａｍｅｃｉｎ）；アレキシジン；アムジノシリン；アムジノシリンピボキシル（Ａｍｄｉｎｏｃｉｌｌｉｎ  Ｐｉｖｏｘｉｌ）；アミサイクリン；アミフロキサシン；メシル酸アミフロキサシン；アミカシン；硫酸アミカシン；アミノサリチル酸；アミノサリチル酸ナトリウム；アモキシシリン；アンフォマイシン；アンピシリン；アンピシリンナトリウム；アパルシリンナトリウム（Ａｐａｌｃｉｌｌｉｎ  Ｓｏｄｉｕｍ）；アパラマイシン；アスパルトシン：硫酸アストロマイシン；アビラマイシン（Ａｖｉｌａｍｙｃｉｎ）；アボパルシン（Ａｖｏｐａｒｃｉｎ）；アジスロマイシン；アズロシリン；アズロシリンナトリウム；塩酸バカンピシリン；バシトラシン；パシトラシンメチレンジスアリシレート（Ｂａｃｉｔｒａｃｉｎ  Ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ  Ｄｉｓａｌｉｃｙｌａｔｅ）；バシトラシン亜鉛（Ｂａｃｉｔｒａｃｉｎ  Ｚｉｎｃ）；バンベルマイシン（Ｂａｍｂｅｒｍｙｃｉｎｓ）；ベンゾイルパスカルシウム（Ｂｅｎｚｏｙｌｐａｓ  Ｃａｌｃｉｕｍ）；ベリスロマイシン；硫酸ベタマイシン；ビアペネム；ビニラマイシン；塩酸ビフェナミン；ビスピリチオンマグスルフェクス；ブチカシン；硫酸ブチロシン；硫酸カプレオマイシン；カルバドクス；カルベニシリン二ナトリウム；カルベニシリンインダニルナトリウム；カルベシリンフェニルナトリウム；カルベニシリンカリウム；カルモナムナトリウム；セファクロール；セファドロキシル；セファマンドール；セファマンドールナフェート（Ｃｅｆａｍａｎｄｏｌｅ  Ｎａｆａｔｅ）；セファマンドールナトリウム；セファパロール；セファトリジン；セファザフルールナトリウム；セファゾリン；セファゾリンナトリウム；セフブペラゾン；セフジニル；セフェピム（Ｃｅｆｅｐｉｍｅ）；塩酸セフェピム；セフェテコール（Ｃｅｆｅｔｅｃｏｌ）；セフィキシム；塩酸セフメノキシム；セフメタゾール；セフメタゾールナトリウム；セフォニシド一ナトリウム；セフォニシドナトリウム；セフォペラゾンナトリウム；セフォラニド；セフォタキシムナトリウム；セフォテタン；セフォテタン二ナトリウム；セフォテタン二ナトリウム；塩酸セフォチアム；セフォキシチン；セフォキシチンナトリウム；セフピミゾール；セフピミゾールナトリウム；セフピラミド；セフピラミドナトリウム；セフピロムナトリウム；セフポドキシムプロキセチル；セフプロジル；セフロキサジン；セフスロジンナトリウム；セフタジジム；セフチブテン；セフチゾキシムナトリウム；セフトリアキソンナトリウム；セフロキシム；セフロキシムアキセチル；セフロキシムピボキセチル；セフロキシムナトリウム；セファセトリルナトリウム（Ｃｅｐｈａｃｅｔｒｉｌｅ  Ｓｏｄｉｕｍ）；セファレキシン；塩酸セファレキシン；セファログリシン；セファロリジン；セファロチンナトリウム；セファピリンナトリウム；セフラジン；塩酸セトサイクリン；セトフェニコール；クロラムフェニコール；クロラムフェニコールパルミチン酸塩；クロラムフェニコールパントテン酸塩複合体（Ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ  Ｐａｎｔｏｔｈｅｎａｔｅ  Ｃｏｍｐｌｅｘ）；クロラムフェニコールコハク酸ナトリウム；クロルヘキシジンホスファニレート；クロロキシレノール；クロルテトラサイクリン重硫酸塩；塩酸クロルテトラサイクリン；シノキサシン；シプロフロキサシン；塩酸シプロフロキサシン；シロレマイシン；クラリスロマイシン；塩酸クリナフロキサシン；クリンダマイシン；塩酸クリンダマイシン；クリンダマイシンパルミテート塩酸塩（Ｃｌｉｎｄａｍｙｃｉｎ  Ｐａｌｍｉｔａｔｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；クリンダマイシンリン酸塩；クロファジミン；クロキサシリンベンザチン；クロキサシリンナトリウム；クロキシキン（Ｃｌｏｘｙｑｕｉｎ）；コリスチンメタナトリウム；硫酸コリスチン；クメルマイシン；クメルマイシンナトリウム；シクラシリン（Ｃｙｃｌａｃｉｌｌｉｎ）；サイクロセリン；ダルフォプリスチン；ダプソン；ダプトマイシン；デメクロサイクリン；塩酸デメクロサイクリン；デメサイクリン；デノファンジン；ジアベリジン；ジクロキサシリン；ジクロキサシリンナトリウム；硫酸ジヒドロストレプトマイシン；ジピリチオン；ジリスロマイシン；ドキシサイクリン；ドキシサイクリンカルシウム；ドキシサイクリンフォスファテックス（Ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ  Ｆｏｓｆａｔｅｘ）；ドキシサイクリンヒクレート（Ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ  Ｈｙｃｌａｔｅ）；ドロキサシンナトリウム；エノキサシン；エピシリン；塩酸エピテトラサイクリン；エリスロマイシン；エリスロマイシンアシストレート（Ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ  Ａｃｉｓｔｒａｔｅ）；エリスロマイシンエストレート（Ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ  Ｅｓｔｏｌａｔｅ）；エリスロマイシンエチル酢酸塩（Ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ  Ｅｔｈｙｌｓｕｃｃｉｎａｔｅ）；エリスロマイシングルセプテート（Ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ  Ｇｌｕｃｅｐｔａｔｅ）；エリスロマイシンラクトビオネート（Ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ  Ｌａｃｔｏｂｉｏｎａｔｅ）；エリスロマイシンプロピロネート；エリスロマイシンステアリン酸塩；塩酸エタンブトール；エチオナミド；フレロキサシン；フロキサシリン；フルダラニン；フルメキン（Ｆｌｕｍｅｑｕｉｎｅ）；ホスホマイシン；ホスホマイシントロメタミン；フモキシシリン；フラゾリウムクロリド；酒石酸フラゾリウム；フシジン酸ナトリウム；フシジン酸；硫酸ゲンタマイシン；グロキシモナム；グラミシジン；ハロプロジン；ヘタシリン；ヘタシリンカリウム；ヘキセジン；イバフロキサシン；イミペネム；イソコナゾール；イセパマイシン；イソニアジド；ジョサマイシン；硫酸カナマイシン；キタサマイシン；レボフラルタドン；レボプロピルシリンカリウム（Ｌｅｖｏｐｒｏｐｙｌｃｉｌｌｉｎ  Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ）；レキシスロマイシン；リンコマイシン；塩酸リンコマイシン塩酸塩；ロメフロキサシン；塩酸ロメフロキサシン；ロメフロキサシンメシレート；口ラカルベフ（Ｌｏｒａｃａｒｂｅｆ）；マフェニド；メクロサイクリン；スルホサリチル酸メクロサイクリン；メガロミシンリン酸カリウム（Ｍｅｇａｌｏｍｉｃｉｎ  Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）；メキドクス；メロペネム；メタサイクリン；塩酸メタサイクリン；メテナミン；メテナミン馬尿酸塩；メテナミンマンデル酸塩（Ｍｅｔｈａｎａｍｉｎｅ  Ｍａｎｄｅｌａｔｅ）；メチシリンナトリウム；メチオプリム；塩酸メトロニダゾール；リン酸メトロニダゾール；メズロシリン；メズロシリンナトリウム；ミノサイクリン；塩酸ミノサイクリン；塩酸ミリカマイシン；モネンシン；モネンシンナトリウム；ナフシリンナトリウム；ナリジクセートナトリウム；ナリジクス酸；ナタマイシン；ネブラマイシン；ネオマイシンパルミチン酸塩；硫酸ネオマイシン；ネオマイシンウンデシレン酸塩；硫酸ネチルミシン；ニュートラマイシン；ニフラデン；ニフラルデゾン；ニフラテル；ニフラトロン；ニフラダジル；ニフルイミド；ニフルピリノール；ニフルキナゾール；ニフルチアゾール；ニトロサイクリン；ニトロフラントイン；ニトロミド；ノルフロキサシン；ノボビオシンナトリウム；オフロキサシン；オルメトプリム；オキサシリンナトリウム；オキシモナム；オキシモナムナトリウム；オキソリン酸；オキシテトラサイクリン；オキシテトラサイクリンカルシウム；塩酸オキシテトラサイクリン；パルジマイシン；パラクロロフェノール；パウロマイシン；ペフロキサシン；ペフロキサシンメシレート；ペナメシリン；ペニシリンＧベンザチン；ペニシリンＧカリウム；ペニシリンＧプロカイン；ペニシリンＧナトリウム；ペニシリンＶ；ペニシリンＶベンザチン；ペニシリンＶヒドラバミン；ペニシリンＶカリウム；ペンチジドンナトリウム；フェニルアミノサリチル酸塩；ピペラシリンナトリウム；ピルベニシリンナトリウム；ピリジシリンナトリウム；塩酸ピリミシン；��バンピシリン塩酸塩（Ｐｉｖａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ピバンピシリンパモエート；ピバンピシリンプロベネート；硫酸ポリミキシンＢ；ポルフィロマイシン；プロピカシン；ピラチナミド；ピリチオン亜鉛（Ｐｙｒｉｔｈｉｏｎｅ  Ｚｉｎｅ）；キンデカミン酢酸塩（Ｑｕｉｎｄｅｃａｍｉｎｅ  Ａｃｅｔａｔｅ）；キヌプリスチン；ラセフェニコール；ラモプラニン；ラニマイシン；レロマイシン；レプロマイシン（Ｒｅｐｒｏｍｉｃｉｎ）；リファブチン；リファメタン；リファメキシル；リファミド；リファンピン；リファペンチン；リファキシミン；ロリテトラサイクリン；硝酸ロリテトラサイクリン；ロサラマイシン（Ｒｏｓａｒａｍｉｃｉｎ）；ロサラミマインブチル酸塩；ロサラマイシンプロピオン酸塩；ロサラマイシンリン酸ナトリウム；ロサラマイシンステアリン酸塩；ロソキサシン；ロキサルソン；ロキシスロマイシン；サンサイクリン；サンフェトリネムナトリウム；サルモキシシリン；サルピシリン；スコパファンジン；シソマイシン；硫酸シソマイシン；スパルフロキサシン；塩酸スペクチノマイシン；スピラマイシン；塩酸スタリマイシン；ステフィマイシン；硫酸ストレプトマイシン；ストレプトニコジド（Ｓｔｒｅｐｔｏｎｉｃｏｚｉｄ）；スルファベンズ；スルファベンズアミド；スルファセタミド；スルファセタミドナトリウム；スルファサイチン（Ｓｕｌｆａｃｙｔｉｎｅ）；サルファジアジン；サルファジアジンナトリウム；スルファドキシン；スルファレン；スルファメラジン；スルファメーテル（Ｓｕｌｆａｍｅｔｅｒ）；スルファメタジン；スルファメチゾール；スルファメトキサゾール；スルファモノメトキシン；スルファモキソール；スルファニレート亜鉛（Ｓｕｌｆａｎｉｌａｔｅ  Ｚｉｎｃ）；スルファニトラン；スルファサラジン；スルファソミゾール；スルファチアゾール；スルファザメト（Ｓｕｌｆａｚａｍｅｔ）；スルフィソキサゾール；アセチルスルフィソキサゾール；スルフィソキサゾールジオラミン；スルホミキシン；スロペネム；スルタミシリン；サンシリンナトリウム；塩酸タランピシリン；テイコプラニン；塩酸テマフロキサシン；テモシリン；テトラサイクリン；塩酸テトラサイクリン；テトラサイクリンリン酸塩複合体（Ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ  
Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｃｏｍｐｌｅｘ）；テトロキソプリム；チアンフェニコール；チフェンシリンカリウム；チカルシリンクレシルナトリウム；チカルシリン二ナトリウム；チカルシリン一ナトリウム；チクラトン；チオドニウムクロリド；トブラマイシン；硫酸トブラマイシン；トスフロキサシン；トリメトプリム；硫酸トリメトプリム；トリスルファピリミジン；トロールアンドマイシン（Ｔｒｏｌｅａｎｄｏｍｙｃｉｎ）；硫酸トロスペクトロマイシン；チロトリシン；バンコマイシン；塩酸バンコマイシン；バージニアマイシン；およびゾルバマイシンが挙げられる。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、本方法は被験体に抗ウイルス剤を投与する工程をさらに包含する。本明細書中で用いられるように、「抗ウイルス剤」は、ウイルスによる細胞の感染症または細胞内でのウイルスの複製を防ぐ化合物をいう。抗ウイルス剤は、抗菌剤よりもかなり少ない。なぜなら、ウイルス複製のプロセスは宿主細胞のＤＮＡ複製とかなり密接に関連しており、非特異的な抗ウイルス剤がしばしば宿主に対して毒性を示すことがあるからである。抗ウイルス剤によって遮断または阻害することができるウイルス感染症のプロセスにはいくつかの段階がある。これらの段階には、宿主細胞に対するウイルスの付着（免疫グロプリンまたは結合ペプチド）、ウイルスの脱殻（例えば、アマンタジン）、ウイルスｍＲＮＡの合成または翻訳（例えば、インターフェロン）、ウイルスＲＮＡまたはＤＮＡの複製（例えば、ヌクレオシド類似体）、新たなウイルスタンパク質の突然変異（例えば、プロテアーゼインヒビター）、ならびにウイルスの出芽および放出が含まれる。
【０１１８】
ヌクレオチド類似体は、ヌクレオチドに類似ているが、不完全な、または異常なデオキシリボース基もしくはリボース基を持っている合成化合物である。いったんヌクレオチド類似体が細胞に入ると、類似体はリン酸化を受けて三リン酸塩を生じ、ウイルスＤＮＡまたはＲＮＡへの取り込みにおいて正常なヌクレオチドと拮抗する。いったん、ヌクレオチド類似体の三リン酸塩形態が成長中の核酸鎖に取り込まれると、それによってウイルスポリメラーゼとの不可逆的な会合が生じて連鎖停止となる。ヌクレオチド類似体としては、限定されるものではないが、アシクロビル（単純ヘルペスウイルスおよび水痘帯状疱疹ウイルスの処置に用いられる）、ガンシクロビル（サイトメガロウイルスの処置に用いられる）、イドクスウリジン、リバビリン（呼吸合胞体肺炎ウイルスの処置に用いられる）、ジデオキシイノシン、ジデオキシシチジン、およびジドブジン（アジドチミジン）が挙げられる。
【０１１９】
インターフェロンは、免疫細胞と同様にウイルス感染細胞によって分泌されるサイトカインである。インターフェロンは、感染細胞に隣接する細胞上の特異的レセプターに結合することによって作用し、ウイルスによる感染症から細胞を守る細胞の変化を引き起こす。ＩＮＦ−αおよびＩＮＦ−βはまた、感染細胞の表面でＭＨＣクラスＩ分子およびＭＨＣクラスＩＩ分子の発現を誘導することによって、宿主免疫細胞認識のための抗原提示の増加をもたらす。これらのインターフェロンは、組み換え体の形で入手可能であり、Ｂ型およびＣ型慢性肝炎感染症の処置に利用されている。抗ウイルス療法で効果的である投薬量で、ときどきインターフェロンによる激しい副作用（例えば発熱、倦怠感、および体重減少）が生じる。
【０１２０】
免疫グロブリン療法は、ウイルス感染症予防のために用いられる。ウイルス感染症のための免疫グロブリン療法は、細菌感染症とは異なる。なぜなら、抗原特異的であるよりはむしろ、細胞外ビリオンと結合し、ウイルス感染症に罹りやすい細胞にビリオンが付着して入るのを防ぐことで、免疫グロブリン治療が機能するためである。この治療は、抗体が宿主に存在している期間、ウイルス感染症の予防にとって有用である。一般に、免疫グロブリン療法には２種類ある。すなわち、通常の免疫グロブリン療法と超免疫グロブリン療法とである。通常の免疫グロブリン療法は、正常血液提供者の血清から調製してプールされる抗体産物を利用する。このプールされた産物は、Ａ型肝炎、パルボウイルス、エンテロウイルス等、広範囲のヒトウイルスに対して抗体価の低い抗体（特に新生児（仔）において）を含む。超免疫グロブリン療法は、特定のウイルスに対して抗体価の高い抗体を持つ個体の血清から調製した抗体を利用する。それらの抗体は、次いで、特定のウイルスに対して用いられる。超免疫グロブリンの例として、帯状ヘルペス免疫グロブリン（免疫無防備状態の小児および新生児での水痘の予防に有用）、ヒト狂犬病免疫グロブリン（狂暴な動物に噛まれた被験体の暴露後予防投与に有用）、Ｂ型肝炎免疫グロブリン（Ｂ型肝炎ウイルスの予防、特にこのウイルスに曝された被験体で有用）、およびＲＳＶ免疫グロブリン（呼吸器合胞体ウイルス感染症の処置に有用）が挙げられる。
【０１２１】
従って、本発明に有用な抗ウイルス剤には、限定されるものではないが、免疫グロブリン、アマンタジン、インターフェロン、ヌクレオシド類似体、およびタンパク質分解酵素阻害剤が含まれる。抗ウイルス剤の具体的な例として、限定されるものではないが、アセマナン（Ａｃｅｍａｎｎａｎ）；アシクロビル（Ａｃｙｃｌｏｖｉｒ）；アシクロビルナトリウム（Ａｃｙｃｌｏｖｉｒ  Ｓｏｄｉｕｍ）；アデホビル（Ａｄｅｆｏｖｉｒ）；アロブジン（Ａｌｏｖｕｄｉｎｅ）；アルビルセプトスドトクス（Ａｌｖｉｒｃｅｐｔ  Ｓｕｄｏｔｏｘ）；アマンタジン塩酸塩（Ａｍａｎｔａｄｉｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；アラノチン（Ａｒａｎｏｔｉｎ）；アリルドン（Ａｒｉｌｄｏｎｅ）；アテビルジンメシレート（Ａｔｅｖｉｒｄｉｎｅ  Ｍｅｓｙｌａｔｅ）；アブリジン（Ａｖｒｉｄｉｎｅ）；シドホビル；シパムフィリン（Ｃｉｐａｍｆｙｌｌｉｎｅ）；シタラビン塩酸塩（Ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；デルビルジンメシレート（Ｄｅｌａｖｉｒｄｉｎｅ  Ｍｅｓｙｌａｔｅ）；デシクロビル（Ｄｅｓｃｉｃｌｏｖｉｒ）；ジダノシン（Ｄｉｄａｎｏｓｉｎｅ）；ジソキサリル（Ｄｉｓｏｘａｒｉｌ）；エドクスウジン（Ｅｄｏｘｕｄｉｎｅ）；エンビラデン（Ｅｎｖｉｒａｄｅｎｅ）；エンビロキシム（Ｅｎｖｉｒｏｘｉｍｅ）；ファムシクロビル（Ｆａｍｃｉｃｌｏｖｉｒ）；ファモチン塩酸塩（Ｆａｍｏｔｉｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；フィアシタビン（Ｆｉａｃｉｔａｂｉｎｅ）；フィアルリジン（Ｆｉａｌｕｒｉｄｉｎｅ）；フォサリレート（Ｆｏｓａｒｉｌａｔｅ）；フォスカーネットナトリウム（Ｆｏｓｃａｒｎｅｔ  Ｓｏｄｉｕｍ）；フォスホネットナトリウム（Ｆｏｓｆｏｎｅｔ  Ｓｏｄｉｕｍ）；ガンシクロビル（Ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）；ガンシクロビルナトリウム（Ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ  ｓｏｄｉｕｍ）；イドクスウリジン（Ｉｎｄｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）；ケトキサール（Ｋｅｔｈｏｘａｌ）；ラミブジン（Ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）；ロブカビル（Ｌｏｂｕｃａｖｉｒ）；メモチン塩酸塩（Ｍｅｍｏｔｉｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；メチサゾン（Ｍｅｔｈｉｓａｚｏｎｅ）；ネビラピン（Ｎｅｖｉｒａｐｉｎｅ）；ペンジクロビル（Ｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）；ピロダビル（Ｐｉｒｏｄａｖｉｒ）；リバビリン（Ｒｉｂａｖｖｉｒｉｎ）；リマンタジン塩酸塩（Ｒｉｍａｎｔａｄｉｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；サキナビルメシレート（Ｓａｑｕｉｎａｖｉｒ  Ｍｅｓｙｌａｔｅ）；ソマタジン塩酸塩（Ｓｏｍａｎｔａｄｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ソリブジン（Ｓｏｒｉｖｕｄｉｎｅ）；スタトロン（Ｓｔａｔｏｌｏｎ）；スタブジン（Ｓｔａｖｕｄｉｎｅ）；チロロン塩酸塩（Ｔｉｌｏｒｏｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；トリフルリジン（Ｔｒｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）；バラシクロビル塩酸塩（Ｖａｌａｃｙｃｌｏｖｉｒ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ビダラビン（Ｖｉｄａｒａｂｉｎｅ）；ビダラビンリン酸塩（Ｖｉｄａｒａｂｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）；ビダラビンリン酸ナトリウム（Ｖｉｄａｒａｂｉｎｅ  Ｓｏｄｉｕｍ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）；ビロキシム（Ｖｉｒｏｘｉｍｅ）；ザルシタビ���（Ｚａｌｃｉｔａｂｉｎｅ）；ジドブジン（Ｚｉｄｏｖｕｄｉｎｅ）；およびジンビロキシム（Ｚｉｎｖｉｒｏｘｉｍｅ）が挙げられる。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、本発明のこの局面に基づく方法は、被験体に対する抗真菌剤の投与がさらに含まれる。「抗真菌剤」は、感染性の真菌を殺すか、または増殖あるいは機能を阻害する薬剤である。抗真菌剤は、しばしばその作用機序によって分類される。いくつかの抗真菌剤は、グルコースシンターゼを阻害することで細胞壁阻害剤として機能する。これらの薬剤として、限定されるものではないが、バシウンギン（ｂａｓｉｕｎｇｉｎ）／ＥＣＢが挙げられる。他の抗真菌剤は、膜の完全性を不安定にすることによって機能する。そのようなものとして、限定されるものではないが、イミダゾール類、例えば、クロトリマゾール（ｃｌｏｔｒｉｍａｚｏｌｅ）、セルタコゾール（ｃｅｒｔａｃｏｚｏｌｅ）、フルコナゾール（ｆｌｕｃｏｎａｚｏｌｅ）、イトラコナゾール（ｉｔｒａｃｏｎａｚｏｌｅ）、ケトコナゾール（ｋｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ）、ミコナゾール（ｍｉｃｏｎａｚｏｌｅ）、およびボリコナコール（ｖｏｒｉｃｏｎａｃｏｌｅ）、ならびに、ＦＫ  ４６３、アンホテリシン（ａｍｐｈｏｔｅｒｉｃｉｎ）Ｂ、ＢＡＹ  ３８−９５０２、ＭＫ  ９９１、プラディマイシン（ｐｒａｄｉｍｉｃｉｎ）、ＵＫ２９２、ブテナフィン（ｂｕｔｅｎａｆｉｎｅ）、およびテルビナフィン（ｔｅｒｂｉｎａｆｉｎｅ）が挙げられる。他の抗真菌剤は、キチン（例えば、キチナーゼ）または免疫抑制（５０１クリーム）を壊すことによって作用する。
【０１２３】
従って、本発明に有用な抗真菌剤として、以下が挙げられるが、これらに限定されない：イミダゾール類、５０１クリーム、およびアクリソルシン（Ａｃｒｉｓｏｒｃｉｎ）、アンブルチシン（Ａｍｂｒｕｔｉｃｉｎ）、アモロルフィン（Ａｍｏｒｏｌｆｉｎｅ）、アンホテリシン（Ａｍｐｈｏｔｅｒｉｃｉｎ）Ｂ、アザコナゾール（Ａｚａｃｏｎａｚｏｌｅ）、アザセリン（Ａｚａｓｅｒｉｎｅ）、バシフジン（Ｂａｓｉｆｕｎｇｉｎ）、ＢＡＹ  ３８−９５０２、ビフォナゾール（Ｂｉｆｏｎａｚｏｌｅ）、ピフェナミン塩酸塩（Ｂｉｐｈｅｎａｍｉｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、  ビスフィルチオンマグスルフェクス（Ｂｉｓｐｙｒｉｔｈｉｏｎｅ  Ｍａｇｓｕｌｆｅｘ）、ブテナフィン（Ｂｕｔｅｎａｆｉｎｅ）、ブトコナゾール硝酸塩（Ｂｕｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ  Ｎｉｔｒａｔｅ）、ウンデシレン酸カルシウム（Ｃａｌｃｉｕｍ  Ｕｎｄｅｃｙｌｅｎａｔｅ）、カンジシジン（Ｃａｎｄｉｃｉｄｉｎ）、カルボル−フクシン（Ｃａｒｂｏｌ−Ｆｕｃｈｓｉｎ）、キチナーゼ（Ｃｈｉｔｉｎａｓｅ）、クロルダントイン（Ｃｈｌｏｒｄａｎｔｏｉｎ）、シクロピロクス（  Ｃｉｃｌｏｐｉｒｏｘ）、シクロピロクスオラミン（Ｃｉｃｌｏｐｉｒｏｘ  Ｏｌａｍｉｎｅ）、シロファンジン（Ｃｉｌｏｆｕｎｇｉｎ）、シスコナゾール（Ｃｉｓｃｏｎａｚｏｌｅ）、クロトリマゾール（Ｃｌｏｔｒｉｍａｚｏｌｅ）、クプリミキシン（Ｃｕｐｒｉｍｙｘｉｎ）、デノファンジン（Ｄｅｎｏｆｕｎｇｉｎ）、ジピリチオン（Ｄｉｐｙｒｉｔｈｉｏｎｅ）、ドコナゾール（Ｄｏｃｏｎａｚｏｌｅ）、エコナゾール（Ｅｃｏｎａｚｏｌｅ）、エコナゾール硝酸塩（Ｅｃｏｎａｚｏｌｅ  Ｎｉｔｒａｔｅ）、エニルコナゾール（Ｅｎｉｌｃｏｎａｚｏｌｅ）、エトナム硝酸塩（Ｅｔｈｏｎａｍ  Ｎｉｔｒａｔｅ）、フェンチコナゾール硝酸塩（Ｆｅｎｔｉｃｏｎａｚｏｌｅ  Ｎｉｔｒａｔｅ）、フィリピン（Ｆｉｌｉｐｉｎ）、ＦＫ  ４６３、フルコナゾール（Ｆｌｕｃｏｎａｚｏｌｅ）、フルシトシン（Ｆｌｕｃｙｔｏｓｉｎｅ）、ファンギマイシン（Ｆｕｎｇｉｍｙｃｉｎ）、グリセオフルビン（Ｇｒｉｓｅｏｆｕｌｖｉｎ）、ハミシン（Ｈａｍｙｃｉｎ）、イソコナゾール（Ｉｓｏｃｏｎａｚｏｌｅ）、イトラコナゾール（Ｉｔｒａｃｏｎａｚｏｌｅ）、カラファンジン（Ｋａｌａｆｕｎｇｉｎ）、ケトコナゾール（Ｋｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ）、ロモファンジン（Ｌｏｍｏｆｕｎｇｉｎ）、リジマイシン（Ｌｙｄｉｍｙｃｉｎ）、メパルトリシン（Ｍｅｐａｒｔｒｉｃｉｎ）、ミコナゾール（Ｍｉｃｏｎａｚｏｌｅ）、ミコナゾール硝酸塩（Ｍｉｃｏｎａｚｏｌｅ  Ｎｉｔｒａｔｅ）、ＭＫ  ９９１、モネンシン（Ｍｏｎｅｎｓｉｎ）、モネンシンナトリウム（Ｍｏｎｅｎｓｉｎ  Ｓｏｄｉｕｍ）、ナフチフィンン塩酸塩（Ｎａｆｔｉｆｉｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ネオマイシンウンデシレン酸塩（Ｎｅｏｍｙｃｉｎ  Ｕｎｄｅｃｙｌｅｎａｔｅ）、ニフラテル（Ｎｉｆｕｒａｔｅｌ）、ニフルメロン（Ｎｉｆｕｒｍｅｒｏｎｅ）、ニトラルアミン塩酸塩（Ｎｉｔｒａｌａｍｉｎｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ナイステイン（Ｎｙｓｔａｔｉｎ）、オクタン酸、オロコナゾール硝酸塩（Ｏｒｃｏｎａｚｏｌｅ  Ｎ���ｔｒａｔｅ）、オキシコナゾール硝酸塩（Ｏｘｉｃｏｎａｚｏｌｅ  Ｎｉｔｒａｔｅ）、オキシファンジン塩酸塩（Ｏｘｉｆｕｎｇｉｎ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、パラコナゾール塩酸塩（Ｐａｒｃｏｎａｚｏｌｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、パルトリシン（Ｐａｒｔｒｉｃｉｎ）、ヨウ化カリウム、プラジミシン（Ｐｒａｄｉｍｉｃｉｎ）、プロコロノール（Ｐｒｏｃｌｏｎｏｌ）、ピリチオン亜鉛（Ｐｙｒｉｔｈｉｏｎｅ  Ｚｉｎｃ）、ピロルニトリン（Ｐｙｒｒｏｌｎｉｔｒｉｎ）、ルタマイシン（Ｒｕｔａｍｙｃｉｎ）、サングイナリウムクロリド（Ｓａｎｇｕｉｎａｒｉｕｍ  Ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、サペルコナゾール（Ｓａｐｅｒｃｏｎａｚｏｌｅ）、スコパファンジン（Ｓｃｏｐａｆｕｎｇｉｎ）、硫化セレニウム（Ｓｅｌｅｎｉｕｍ  Ｓｕｌｆｉｄｅ）、セルタコナゾール（Ｓｅｒｔａｃｏｎａｚｏｌｅ）、シネファンジン（Ｓｉｎｅｆｕｎｇｉｎ）、スルコナゾール硝酸塩（Ｓｕｌｃｏｎａｚｏｌｅ  Ｎｉｔｒａｔｅ）、テルビナフィン（Ｔｅｒｂｉｎａｆｉｎｅ）、テルコナゾール（Ｔｅｒｃｏｎａｚｏｌｅ）、チラム（Ｔｈｉｒａｍ）、チクラトン（Ｔｉｃｌａｔｏｎｅ）、チオコナゾール（Ｔｉｏｃｏｎａｚｏｌｅ）、トルシクレート（Ｔｏｌｃｉｃｌａｔｅ）、トリンデート（Ｔｏｌｉｎｄａｔｅ）、トルナフテート（Ｔｏｌｎａｆｔａｔｅ）、トリアセチン（Ｔｒｉａｃｅｔｉｎ）、トリアファンジン（Ｔｒｉａｆｕｎｇｉｎ）、ＵＫ  ２９２、ウンデシレン酸、ビリドフルビン（Ｖｉｒｉｄｏｆｕｌｖｉｎ）、ボリコナゾール（Ｖｏｒｉｃｏｎａｚｏｌｅ）、ウンデシレン酸亜鉛、およびジノコナゾール塩酸塩（Ｚｉｎｏｃｏｎａｚｏｌｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、この方法は、被験体に駆虫剤の投与を含む。「駆虫剤」とは、感染性の寄生虫を殺すか、もしくは寄生虫の増殖または機能を阻害する薬剤をいう。本発明において有用な駆虫剤（殺寄生虫薬ともいう）の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：アルベンダゾール（ａｌｂｅｎｄａｚｏｌｅ）、アンホテリシン（ａｍｐｈｏｔｅｒｉｃｉｎ）Ｂ、ベンズニダゾール（ｂｅｎｚｎｉｄａｚｏｌｅ）、ビチオノール（ｂｉｔｈｉｏｎｏｌ）、クロロキン（ｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ）ＨＣｌ、クロロキンリン酸塩（ｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、クリンダマイシン（ｃｌｉｎｄａｍｙｃｉｎ）、デヒドロエメチン（ｄｅｈｙｄｒｏｅｍｅｔｉｎｅ）、ジエチルカルバマジン（ｄｉｅｔｈｙｌｃａｒｂａｍａｚｉｎｅ）、ジロキサニドフロエート（ｄｉｌｏｘａｎｉｄｅ  ｆｕｒｏａｔｅ）、ドキシサイクリン（ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ）、エフロルニチン（ｅｆｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）、フラゾリドン（ｆｕｒａｚｏｌｉｄａｏｎｅ）、糖質コルチコイド、ハロファントリン（ｈａｌｏｆａｎｔｒｉｎｅ）、ヨードキノール（ｉｏｄｏｑｕｉｎｏｌ）、アイバルメクチン（ｉｖｅｒｍｅｃｔｉｎ）、メベンダゾール（ｍｅｂｅｎｄａｚｏｌｅ）、メフロキン（ｍｅｆｌｏｑｕｉｎｅ）、メグルミンアンチモン酸塩（ｍｅｇｌｕｍｉｎｅ  ａｎｔｉｍｏｎｉａｔｅ）、メラルソプロール（ｍｅｌａｒｓｏｐｒｏｌ）、メトリフォネート（ｍｅｔｒｉｆｏｎａｔｅ）、メトロニダゾール（ｍｅｔｒｏｎｉｄａｚｏｌｅ）、ニクロサミド（ｎｉｃｌｏｓａｍｉｄｅ）、ニフルチモクス（ｎｉｆｕｒｔｉｍｏｘ）、オキサムニキン（ｏｘａｍｎｉｑｕｉｎｅ）、パロモマイシン（ｐａｒｏｍｏｍｙｃｉｎ）、ペンタミジンイセチオン酸塩（ｐｅｎｔａｍｉｄｉｎｅ  ｉｓｅｔｈｉｏｎａｔｅ）、ピペラジン（ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ）、プラジカンテル（ｐｒａｚｉｑｕａｎｔｅｌ）、プリマキンリン酸塩（ｐｒｉｍａｑｕｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、プログアニル（ｐｒｏｇｕａｎｉｌ）、ピランテルパモエート（ｐｙｒａｎｔｅｌ  ｐａｍｏａｔｅ）、ピリメタンミンスルホンアミド（ｐｙｒｉｍｅｔｈａｎｍｉｎｅ−ｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅｓ）、ピリメタミンスルファドキシン（ｐｙｒｉｍｅｔｈａｎｍｉｎｅ−ｓｕｌｆａｄｏｘｉｎｅ）、キナクリン（ｑｕｉｎａｃｒｉｎｅ）ＨＣｌ、キニーネ硫酸塩（ｑｕｉｎｉｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）、キニジングルコン酸塩（ｑｕｉｎｉｄｉｎｅ  ｇｌｕｃｏｎａｔｅ）、スピラマイシン（ｓｐｉｒａｍｙｃｉｎ）、スチボグルコネートナトリウム（ｓｔｉｂｏｇｌｕｃｏｎａｔｅ  ｓｏｄｉｕｍ）（ナトリウムアンチモングルコン酸塩（ｓｏｄｉｕｍ  ａｎｔｉｍｏｎｙ  ｇｌｕｃｏｎａｔｅ））、スラミン（ｓｕｒａｍｉｎｎ）、テトラサイクリン（ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ）、チアベンダゾール（ｔｈｉａｂｅｎｄａｚｏｌｅ）、チニダゾール（ｔｉｎｉｄａｚｏｌｅ）、トリメスロプリムスルファメトオキサゾール（ｔｒｉｍｅｔｈｒｏｐｒｉｍ−ｓｕｌｆａｍｅｔｈｏｘａｚｏｌｅ）、およびトリパルサミド（ｔｒｙｐａｒｓａｍｉｄｅ）（これらのうちのいくつかは、単独で、あるいは他のものと組み合わせて用いられる）��
【０１２５】
本発明の特定の局面は、選択された組織へのＴ細胞移動を阻害する方法を含む。
【０１２６】
従って、本発明の別の局面では、被験体の標的組織へのＴ細胞移動を少なくする方法を提供する。この局面に基づく方法は、有効量のＴＩＭ−３リガンド結合分子を被験体に投与して、被験体の標的細胞へのＴ細胞移動を少なくすることを含む。本明細書で用いられる場合、「ＴＩＭ−３リガンド結合分子」とは、ＴＩＭ−３リガンドに結合する任意の分子（ＴＩＭ−３も含まれる）をいう。
【０１２７】
ＴＩＭ−３自体に加えて、ＴＩＭ−３リガンド結合分子は、低分子、ポリペプチド、抗体または抗体のフラグメント、ポリヌクレオチド、多糖類を含む炭水化物、脂質、薬物、ならびにそれらの模倣体、誘導体、および組み合わせであり得る。ＴＩＭ−３結合分子は、天然に見いだすことできるか、あるいは当業者に公知の適当なインビトロ法および合成方法を用いて、誘導または合成することができる。例えば、ＴＩＭ−３リガンド結合分子は、ＴＩＭ−３リガンドに結合する能力について低分子のライブラリーをスクリーニングすることで同定される低分子である。別の例として、ペプチドのファージディスプレイを用いて、ＴＩＭ−３リガンド結合分子の生成および同定をおこなうことができる。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、ＴＩＭ−３リガンド結合分子は、可溶性ＴＩＭ−３である。「可溶性ＴＩＭ−３」とは、ＴＩＭ−３の任意の形態をいい、細胞膜から解離したＴＩＭ−３の機能的改変体を含む。可溶性ＴＩＭ−３は、全長ＴＩＭ−３のＣ末端側が切断された形態またはＴＩＭ−３の膜貫通欠失バージョンである。いくつかの実施形態では、ＴＩＭ−３リガンド結合分子は、ＴＩＭ−３の細胞外領域のシグナルドメインを有する（すなわち、ＩｇＶドメインまたはムチンドメイン）。一実施形態では、可溶性ＴＩＭ−３は、全長ＴＩＭ−３の選択的スプライシング改変体であり、ムチンドメンも膜貫通領域も含まないが、ＩｇＶドメインおよび細胞内領域を含む。いくつかの実施形態では、ＴＩＭ−３リガンド結合分子は、ＴＩＭ−３の細胞該領域を含む。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、可溶性ＴＩＭ−３は融合タンパク質であり、ＴＩＭ−３の細胞外領域にある少なくとも１つのドメインと免疫グロブリンの定常重鎖またはその一部とを含んでいる。一実施形態では、可溶性ＴＩＭ−３とは、ＴＩＭ−３の細胞外ドメインにある少なくとも１つのドメインと別のポリペプチドとを含む融合タンパク質をいう。一実施形態において、可溶性ＴＩＭ−３は、ペプチド結合等を介して、ＩｇＧ等の免疫グロブリンのＦｃフラグメントに共有結合したＴＩＭ−３の細胞外領域を含む融合タンパク質であり、そのような融合タンパク質は一般にホモ二量体である。一実施形態において、可溶性ＴＩＭ−３は、ペプチド結合等を介して、ＩｇＧ等の免疫グロブリンのＦｃフラグメントに共有結合したＴＩＭ−３の細胞外領域のＩｇＶドメインだけを含む融合タンパク質であり、そのような融合タンパク質は一般にホモ二量体である。当技術分野で周知なように、Ｆｃフラグメントは２本の部分的定常重鎖のホモ二量体である。各々の定常重鎖は、すくなくともＣＨ１ドメインと、ヒンジと、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインとを含む。そのようなＦｃ融合タンパク質の各々の単量体は、免疫グロブリンの定常重鎖またはその一部分（例えば、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン）に結合したＴＩＭ−３の細胞外領域を含む。いくつかの実施形態で定常重鎖は、免疫グロブリンのヒンジ領域に対してＮ末端であるＣＨ１ドメインの一部または全てを含む。別の実施形態では、定常重鎖はヒンジを含むがＣＨ１ドメインは含まない。さらに別の実施形態では、定常重鎖はヒンジおよびＣＨ１ドメインを除き、例えばＩｇＧのＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインのみを含む。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、被験体は標的組織の自己免疫疾患に対する処置を必要とする。「自己免疫疾患」は、被験体自身の抗体が宿主組織と反応するか、もしくは免疫エフェクターＴ細胞が内因性の自己ペプチドに対して自己反応性を示し、組織の破壊を生ずる疾患の１つのクラスである。従って、免疫応答は、自己抗原と呼ばれる被験体自身の抗原に対して開始される。自己免疫疾患として、限定されるものではないが、慢性関節リウマチ、クローン病、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫脳脊髄炎、重症筋無力症（ＭＧ）、橋本病、グッドパスチャー症候群、天疱瘡（例えば尋常天疱瘡）、グレーヴズ病、自己免疫溶血性貧血、自己免疫血小板減少性紫斑病、抗コラーゲン抗体による強皮症、混合型結合組織病、多発筋炎、悪性貧血、特発性アジソン病、自己免疫関連不妊症、糸球体腎炎（例えば半月状の糸球体腎炎、増殖性糸球体腎炎）、水疱性類天疱瘡、シェーグレン症候群、インスリン耐性、および自己免疫真性糖尿病（真性１型糖尿病；インスリン依存型糖尿病）が挙げられる。最近、自己免疫疾患としてアテローム硬化およびアルツハイマー病が含まれることがわかった。
【０１３１】
本明細書で用いられる場合、「自己抗原」とは、正常宿主組織の抗原を言う。正常宿主組織は、癌細胞を含まない。このように、自己免疫疾患との関連において、自己抗原に対して開始される免疫応答は望ましくない免疫応答であり、正常組織の破壊および損傷に関わり、その一方で癌抗原に対して開始される免疫応答は望ましい免疫応答であって、腫瘍または癌の破壊に貢献する。
【０１３２】
さらに別の態様では、本発明は、喘息またはアレルギーの処置または予防のための方法を提供する。本発明の局面に従う方法は、被験体のＴ細胞においてＴＩＭ−３の活性または発現を増加させて、喘息またはアレルギーを処置または予防することを含む。
【０１３３】
本明細書で用いられる場合、「喘息」とは、炎症によって特徴づけられ、また気道を狭くし、吸入された薬剤に対する気道の反応性が高まることによって特徴づけられる呼吸器系の障害をいう。喘息は頻繁であり、限られはしないが、アトピーおよびアレルギー症状に関連している。
【０１３４】
本明細書で用いられる場合、「アレルギー」とは、物質（アレルゲン）に対する後天性過敏症をいう。アレルギー症状として、湿疹、アレルギー性鼻炎または鼻感冒、花粉症、気管支炎族、蕁麻疹（発疹）、および食物アレルギー、ならびに他のアトピー症状が含まれる。「アレルギーを持つ被験体」とは、アレルゲンに対して反応してアレルギー反応を生ずるか、もしくはその危険性を持つ被験体をいう。「アレルゲン」とは、罹りやすい被験体でアレルギー反応または喘息反応を誘発しうる物質をいう。アレルゲンのリストは、莫大で、花粉、昆虫毒液、動物の鱗屑、ダスト、菌類胞子、および薬剤（例えばペニシリン）を含むことができる。
【０１３５】
自然の動物および植物のアレルゲンの例として、以下の属に特異的なタンパク質が含まれる
【０１３６】
【数１】
2005526018.tif 000009
さらに別の態様によれば、本発明は被験体のＴｈ２媒介障害を処置する方法を提供する。この方法は、Ｔｈ２媒介障害を処置するために、Ｔｈ２媒介障害を持つ被験者のＴｈ２細胞の表面にＴＩＭ−３を有効量発現させることを含む。ここで用いられるように「Ｔｈ２媒介障害」とは、Ｔｈ２免疫応答の発生関連した疾患をいう。ここで用いられる「Ｔｈ２免疫応答」とは、少なくとも１種類のＴｈ２サイトカインまたはＴｈ２抗体の誘導をいう。好ましい実施形態では、複数のＴｈ２サイトカインまたはＴｈ２抗体が誘導される。従って、Ｔｈ２媒介障害は、Ｔｈ２応答の誘導に関連した疾患であり、少なくとも１種類のＴｈ２サイトカインまたはＴｈ２抗体を部分的または完全に誘導すること、あるいは少なくとも１種類のＴｈ２サイトカインまたはＴｈ２抗体のレベルを増加することをいう。これらの障害は当該技術分野において公知であり、例えば、限定されるものではないが、喘息およびアレルギー等のアトピー症状（アレルギー性鼻炎を含む）、胃腸アレルギー（食物アレルギー、好酸球増加、結膜炎、糸球体腎炎）、特定の病原（例えば駆虫薬）に対する感受性（例、リーシュマニア症）および特定のウイルス感染症（ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）を含む）、および特定の細菌感染（例えば結核とらい腫らい）が挙げられる。
【０１３７】
Ｔｈ２媒介障害とは対照的に、ここで用いられるように「Ｔｈ１媒介障害」とは、Ｔｈ１免疫応答の発生に関連した疾患をいう。ここで用いられる「Ｔｈ１免疫応答」とは、少なくとも１種類のＴｈ１サイトカインまたはＴｈ１抗体の誘導をいう。好ましい実施形態では、複数のＴｈ１サイトカインまたはＴｈ１抗体が誘導される。従って、Ｔｈ１媒介疾患は、Ｔｈ１応答の誘導に関連した疾患であり、少なくとも１種類のＴｈ１サイトカインまたはＴｈ１抗体を部分的または完全に誘導すること、あるいは少なくとも１種類のＴｈ１サイトカインまたはＴｈ１抗体のレベルを増加することをいう。これらの障害は当該技術分野において公知であり、例えば、限定されるものではないが、自己免疫（特に臓器特異的）障害、乾癬、Ｔｈ１炎症性障害、細胞外寄生体（例えば蠕虫に対する反応）による感染、固形臓器同種異系移植片拒絶反応（例えば急性の腎臓同種異系移植片拒絶反応）、Ｂ型肝炎（ＨＢＶ）感染（例えばＨＢＶ急性相または回復位相）と関連する症候、慢性Ｃ型肝炎（ＨＣＶ）感染、インスリン依存型糖尿病（ＩＤＤＭ）、多発硬化（ＭＳ）、亜急性リンパ球性甲状腺炎（無症状の甲状腺炎）、クローン病、原発性胆汁性肝硬変症、原発性硬化性胆管炎、サルコイドーシス、アテローム硬化、急性の対宿主性移植片病（ＧｖＨＤ）、糸球体腎炎、反糸球体基底膜疾患、ヴェゲナー肉芽腫症、炎症性ミオパチー、シェーグレン症候群、ペーチェット症候群、リウマチ様関節炎、ライム関節炎、および原因不明の反復流産が挙げられる。いくつかの実施形態では、Ｔｈ１媒介障害は、アテローム性動脈硬化症、細胞外寄生体による感染症、Ｂ型肝炎（ＨＢＶ）感染（例えばＨＢＶ急性相または回復位相）と関連する症候、慢性Ｃ型肝炎（ＨＣＶ）感染、無症状の甲状腺炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、糸球体腎炎、反糸球体基底膜疾患、ヴェゲナー肉芽腫症、炎症性ミオパチー、シェーグレン症候群、ペーチェット症候群、リウマチ様関節炎、および原因不明の反復流産からなる群から選択される。
【０１３８】
別の態様によれば、本発明は、ＡＰＣ活性化を促進する方法を提供する。この態様に基づく方法は、ＴＩＭ−３リガンド結合分子をＴ細胞に接触させ、Ｔ細胞にＡＰＣを接触させてＡＰＣを活性化することを含む。
【０１３９】
ここで用いられるように「抗原提示細胞」、またはそれに等しく「ＡＰＣ」とは、特化した細胞をいう。免疫系に属すか、もしくは免疫系に属する細胞と相互作用することができるかのいずれかである、その細胞表面に、抗原と主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子との間の複合体を提示する特化した細胞をいう。また、自己の状況において抗原特異的リンパ球に対して抗原（すなわち、自己ＭＨＣ）を提示することに加えて、ＡＰＣも頻繁に、追加的な細胞表面レセプター／カウンターレセプターとの対の間の同族の相互作用を介して、そして例えば、サイトカインおよびケモカインの分泌産物を介して、追加的な共刺激信号を、そのように連動するリンパ球に与える。ＡＰＣは、単核食細胞（例えば単球／マクロファージ）、Ｂリンパ球、樹状細胞、ランゲルハンス細胞、および特定の内皮細胞を含むと考えられている。特定の実施形態例では、ＡＰＣはマクロファージである。特定の実施形態では、ＡＰＣは樹状細胞である。例えば、マクロファージと樹状細胞とを含む特定のＡＰＣがそれらの細胞表面でＴＩＭ−３リガンドを提示することが、本発明によって発見された。
【０１４０】
本発明のさらにもう１つの態様によれば、ＡＰＣ活性化を阻害する方法を提供する。方法は、ＡＰＣの活性を阻害するために、ＴＩＭ−３の活性または発現を減少させる有効量の薬剤をＡＰＣに接触させることを含む。「ＴＩＭ−３の活性または発現を減少させる薬剤」は、ここで用いられるように、ＴＩＭ−３とそのリガンドとの相互作用を効果的に遮断すること、またはＴＩＭ−３の発現を妨害することのいずれかによって、ＴＩＭ−３の機能を減少させる薬剤をいう。そのような薬剤は、ＴＩＭ−３結合分子、ＴＩＭ−３リガンド結合分子、およびＴＩＭ−３のアンチセンスの形態をとることができる。
【０１４１】
本発明の別の態様によれば、細胞内感染症を処置または予防するための方法をさらに提供する。この態様に基づく方法では、マクロファージ上のＴＩＭ−３リガンドをＴＩＭ−３発現細胞と接触させ、マクロファージ活性化を促進することが含まれる。ここで用いられるように「細胞内感染症」とは、感染宿主の細胞内で感染性微生物または因子が生き残り、かつ複製する感染性微生物または因子による感染症をいう。多くの細菌、真菌、寄生虫、および全てのウイルスが細胞内感染症に関与する。リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）および種々のミコバクテリア（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓを含む）等の細胞内細菌は、マクロファージ内での分解に耐性であり、それによって食細胞内で生存および複製し得る。そのような細胞内細菌は、普通に、感染微生物を根絶しようとうする免疫系の能力にとっては特に攻撃性がある。細胞内感染症の重要な別の例は、リーシュマニア属の偏性細胞内原生動物を含む。
【０１４２】
被験体に投与する場合、本発明のＴＩＭ−３結合分子およびＴＩＭ−３リガンド結合分子を薬学的に許容可能な製剤の状態で投与する。そのような製剤は、通常、塩、緩衝剤、保存剤、互換性のある担体、補助的な薬剤（例えば、アジュバンドおよびサイトカイン）、さらに任意に他の治療薬を薬学的に許容される濃度で含むことが可能である。従って、ＴＩＭ−３結合分子およびＴＩＭ−３リガンド結合分子と任意の補助薬とを含む「カクテル」が企図される。補助薬はそれ自体でＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子と共役して補助薬の送達を高めることができる。
【０１４３】
本発明に基づいて作られるすべての薬学的試料に含まれるＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子の好ましい量は、治療上有効な量であって、またその医学的に許容される量とするべきである。本発明の医薬組成物に含まれるＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子の実際の投与量は、特定の患者に対して所望の治療上の応答を達成するのに有効な量からなるＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子、ＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子の医薬組成物、および患者に対する毒性のない投与形態が得られるように、変えることができる。
【０１４４】
選択された投与量および投与頻度は、様々な要因、例えばＴＩＭ−３結合分子およびＴＩＭ−３リガンド結合分子を含む治療薬の投与経路、投与時間、および排出率、処置の持続時間、ＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子と組み合わせた他の薬物、化合物、および／または材料、処置を施されている患者の年齢、性別、体重、状態、身体全体の健康、および病歴、さらに当医療分野で周知の同様の要因に依存する。例えば、投与計画は健康な成人を基準にして妊娠女性、授乳婦、および小児によって変化するようである。
【０１４５】
当技術の通常の技術を持っている医師は、容易に、必要とする医薬組成物の治療上有効な量を決定し、かつ処方することができる。例えば、医師は、本発明の医薬組成物で用いられるＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子の用量を、所望の治療効果が得られるのに必要とされる量よりも低い濃度で用い、所望の効果が達成されるまで投与量を徐々に増加させることができる。
【０１４６】
治療に用いるために、ＴＩＭ−３結合分子およびＴＩＭ−３リガンド結合分子は、医薬組成物として処方することができる。本発明の医薬組成物は、有効量のＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子と、任意の他の医薬とを薬学的に許容される担体に含む。用語「薬学的に許容される担体」とは、ヒトまたは他の脊椎動物に投与するのに適した１種類以上の適合性の固形または液体状のフィラー、希釈剤、または封入剤を意味する。用語「担体」は、天然または合成の有機成分または無機成分を意味しており、それによって活性成分が組み合わさり、応用を容易にする。また、医薬組成物の成分も、所望の薬学的効果を実質的に損なうような相互作用が存在しないような様式で、本発明のＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子と混合することが可能であり、またお互いに混合することも可能である。
【０１４７】
適当な液状または固形の医薬組成物の形態は、例えば、吸入のための水溶液または塩溶液、マイクロカプセル化、エンコリエート化（ｅｎｃｈｃｈｌｅａｔｅｄ）、微小金粒子上への塗布、リポソームへの含有、噴霧化、エアゾール、皮膚への埋め込み用ペレット、または皮膚を引っ掻く鋭い物体上に乾燥させたものである。また、医薬組成物は、顆粒、散剤、錠剤、被覆錠剤、カプセル（マイクロカプセル）、坐剤、シロップ、エマルジョン、懸濁液、クリーム、活性化合物を遅延性放出する滴剤または製剤も含み、また製剤の賦形剤および添加剤ならびに／または補助剤（例えば、崩壊剤、結合剤、コーティング剤、膨潤剤、滑沢剤、調味料、甘味料または可溶化剤）が、先に述べたように慣習的に使われる。医薬組成物は、種々の薬物送達系での使用に適している。薬物送達法についての簡単な総説は、この明細書で参考として援用されるＬａｎｇｅｒ  Ｒ  （１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−３３を見よ。
【０１４８】
治療に用いるために、有効量のＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子を、全身的に、または皮膚もしくは粘膜等の所望の面のいずれかに、ＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子を送達する任意の様式によって被験体に投与することができる。本発明の医薬組成物を「投与すること」は、当業者に公知のいかなる手段によっても行える可能性がある。投与の好ましい経路として、限定されるものではないが、経口、非経口、静脈内、筋肉内、皮内（ｉｎｔｒａｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、皮下（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、皮内（ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌ）、皮下（ｓｕｂｄｅｒｍａｌ）、経皮、局所、鼻腔内、気管内、吸入、眼、膣、および直腸が挙げられる。特定の好ましい実施形態では、好ましい投与経路は、全身または静脈内である。
【０１４９】
全身的に送達することが望ましい場合、ＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子を注射（例えば、ボーラス注入法または持続注入）による非経口投与用に製剤化してもよい。注射用の剤形は、保存剤を添加し、１回用量の形態（例えばアンプル）であってもよく、あるいは複数回投与容器の形態であってもよい。ＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子は、油性もしくは水性のビヒクル中の懸濁液、溶液、またはエマルジョンといった形態をとることが可能であり、懸濁剤、安定化剤、および／または分散剤等の製剤設計用薬剤を含むものであってもよい。
【０１５０】
非経口投与用の医薬剤形として、ＴＩＭ−３結合分子の水溶液または水溶性剤形のＴＩＭ−３リガンド結合分子が挙げられる。さらに、ＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子の懸濁液を、適当な油性注射懸濁液として調製してもよい。適当な親油性溶媒またはビヒクルとして、ゴマ油等の脂肪油またはエチルオレイン酸塩またはトリグリセリド等の合成脂肪酸エステル、またはリポソームが挙げられる。注射用水性懸濁液は、この懸濁液の粘性を高める物質、例えばカルボキシルメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランを含むものであってもよい。必要に応じて、上記懸濁液はまた、適当な安定剤、または高濃度溶液の調製を可能とする化合物の溶解性を高める薬剤を含むものであってもよい。
【０１５１】
あるいは、ＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子は、使用前に、適当なビヒクル（例えば、発熱物質を含まない滅菌水）とともに構成するために粉末状の形態であってもよい。
【０１５２】
当該分野で周知の薬学的に許容される担体と活性化合物とを組み合わせることによって、ＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子を経口投与用として容易に処方することができる。処置すべき被験体が経口摂取するために、そのような担体によって、本発明の化合物を、錠剤、丸薬、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液、その他に製剤化することが可能である。経口用途のための医薬製剤を、固形の賦形剤として得ることができ、得られた混合物を任意に磨り潰し、必要に応じて適当な補助剤を加えた後に、顆粒混合物を処理して錠剤または糖衣剤のコアを得る。特に、適当な賦形剤は、ラクトース、ショ糖、マンニトール、またはソルビトールを含む糖類等のフィラー、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース等のセルロース製剤、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ））である。必要に応じて、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩類（例えばアルギン酸ナトリウム）等の崩壊剤を添加してもよい。任意に、経口用の剤形も、内部酸状態を中和するために生理食塩水または緩衝液に配合してもよく、あるいは担体をいっさい含まずに投与することも可能である。
【０１５３】
糖衣剤のコア部は、適当なコーティングが施されている。この目的のために、濃縮糖液を使用してもよい。この場合、任意にアラビアゴム、滑石、ポリビニルピロリドン、カーボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、および適当な有機溶媒または溶媒混合物を含有するものであってもよい。識別用に染料または顔料を錠剤または糖衣錠のコーティングに加えてもよく、またそれによって活性化合物用量の異なる組み合わせを特徴づけることも可能である。
【０１５４】
経口的に用いることができる医薬製剤として、ゼラチンから作られているプッシュフィット型（ｐｕｓｈ−ｆｉｔ）カプセル、同様に、ゼラチンと可塑剤（例えば、グリセロールまたはソルビトール）とから作られる密閉型のソフトカプセルが挙げられる。プッシュフィット型カプセルは活性成分を含み、該活性成分はラクトース等のフィラー、デンプン等の結合剤、および／またはタルクもしくはマグネシウムステアリン酸塩等の滑沢剤、さらに状況に応じて安定剤と混和した状態にある。ソフトカプセルの場合、活性化合物を適当な液体、例えば脂肪油、流動パラフィン、または液状ポリエチレングリコールに溶解または懸濁してもよい。それに加えて、安定剤を添加してもよい。経口投与用に処方されたマイクロスフェアも用いることができる。そのようなマイクロフェアについては、当技術分野において十分に規定されている。経口投与用の全ての剤形は、そのような投与に適した用量でなければならない。
【０１５５】
頬投与の場合、組成物は、従来通りに配合された錠剤またはトローチ剤の形状をとることが可能である。
【０１５６】
吸入による投与の場合、本発明に基づいて使用されるＴＩＭ−３結合分子およびＴＩＭ−３リガンド結合分子は、適当な推進剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の適当な気体の使用とともに、加圧パックまたはネブライザーからエアゾール噴霧製剤のかたちで簡便に送達されてもよい。加圧したエアゾールの場合、バルブを設けることによって用量単位を定め、測定量を送達するようにしてもよい。吸入器または注入器に用いるゼラチン等のカプセルおよびカートリッジは、化合物と適切な粉末ベース（例えばラクトースまたはデンプン）との粉末混合物を含有させて処方するものであってもよい。エアロゾル送達系を調製するための技術は、当業者に周知である。一般に、そのような系は、治療の生物学的特性、例えばＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子の免疫調節能を有意に損なうことがない成分を利用すべきである。例えば、ＳｃｉａｒｒａおよびＣｕｔｉｅ、「エアロゾル」（“Ａｅｒｏｓｏｌｓ”）、  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、  第１８版、  １９９０、  ｐｐ  １６９４−１７１２を見よ（参考として援用される）。当業者は、過度の実験法に頼らずにエアロゾル生成のための種々のパラメータおよび条件を容易に決定することができる。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、局所投与が好ましい。皮膚に対して局所投与する場合、本発明に基づくＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子を軟膏、ゲル、クリーム、ローション、またはイオン導入用経皮貼布（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ  ｐａｔｃｈ  ｆｏｒ  ｉｏｎｔｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）として処方することが可能である。局所投与を達成する１つの方法として、経皮投与、例えばイオン導入によるものが含まれる。イオン導入による透過は、市販のパッチを用いて達成することができる。このパッチは、特定のパッチに応じて、数時間乃至数日間、あるいは数週間にわたる間、完全な皮膚を介して連続的に化合物を送達する。この方法は、比較的に高濃度で皮膚を通してＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子ならびに／あるいはさらなる医薬の送達を制御することを可能とする。イオン導入パッチの一例は、米国カリフォルニア州ロスアンゼルスのジェネラルメディカル社（Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃoｍｐａｎｙ）より販売されるＬＥＣＴＲＯ  ＰＡＴＣＨＴＭである。このパッチによって、ＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子および／もしくは追加薬物を含むレザバーの電子刺激を用いて、皮膚を介した連続的または周期的に投与され得る異なる濃度の投与量が与えられる。
【０１５８】
皮膚に局所投与するために、軟膏、ゲル、クリームおよびローションを水溶性または油性の基剤単独と、あるいは適当な増粘剤および／またはゲル化剤とともに処方することができる。ローションは、水溶性または油性の基剤とともに処方され得、代表的に、さらに１種類以上の乳化剤、安定化剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤、または着色剤を含む（例えば、薬学的に許容されるゲルを主成分とした局所担体の概要に関して、Ｍｕｅｌｌｅｒ  Ｄ．らに発行され、「局所麻酔用無菌ゲル（Ｓｔｅｒｉｌｅ  Ｔｏｐｉｃａｌ  Ａｎｅｓｔｈｅｔｉｃ  Ｇｅｌ）」と題する米国特許第５，５６３，１５３号）を見よ）。上記軟膏、ゲル、クリーム、またはローションは、任意に、日焼け止め化合物、香料、保湿剤、または着色剤を含むように処方することができる。日焼け止め化合物として、紫外線を阻止するために用いられる有機および無機の物質が挙げられる。実例となる有機日焼け止め化合物は、パラアミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、ケイ皮酸塩、サリチル酸塩、ベンゾフェノン、アントラニル酸塩、ジベンゾイルメタン、およびカンフル（ｃａｍｐｈｏｒｅ）の誘導体である。例えば、日焼け止め無機化合物の例として、酸化亜鉛および二酸化チタニウムが挙げられる。例えば、オクチルメトキシシナメートおよび２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン（オキシベンゾンとも知られている）を用いることができる。オクチルメトキシナメートおよび２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノンは、Ｐａｒｓｏｌ  ＭＣＸおよびＢｅｚｏｐｈｅｎｏｎｅ−３という商標で、それぞれ市販される。他の例として、２−フェニルベンズイミダゾール−５−スルホン酸（ＲｏｎａからＥｕｓｏｌｅｘ２３２として市販されている）およびオクチルジメル−ｐ−アミノ安息香酸（Ｈａａｒｍａｎｎ  ＆  Ｒｅｉｍｅｒから市販されているオクチルジメチルＰＡＢＡ）が挙げられる。エマルジョンに用いられる日焼け止め剤の正確な量は、太陽のＵＶ照射から所望される保護の度合いに応じて変えられ得る。
【０１５９】
ＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子を、経直腸または経膣組成物、例えば坐剤または停留浣腸（例えば、カカオバターまたは他のグリセリドのような従来の坐剤主成分を含む）にも処方することが可能である。
【０１６０】
すでに説明した剤形に加えて、ＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子を蓄積製剤として処方することも可能である。そのような長時間作用性の剤形を、適当な高分子材料または疎水性材料（例えば、許容可能な油中のエマルジョン）またはイオン交換樹脂、またはやや溶けにくい誘導体（例えば、やや溶けにくい塩類）とともに処方してもよい。
【０１６１】
医薬組成物もまた、適当な固形またはゲル相担体あるいは賦形剤を含むことができる。そのような担体または賦形剤の例として、限定されるものではないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖類、デンプン類、セルロース誘導体、ゼラチン、および重合体（例えば、ポリエチレングリコール）が挙げられる。
【０１６２】
ＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子と追加の薬剤とをそれ自体（混ぜもの無しで）投与してもよいし、薬学的に許容される塩の形態で投与してもよい。医薬で使用する場合、塩は薬学的に許容されるものでなければならない。しかし、薬学的に許容されない塩を、その薬学的に許容される塩を調製するために都合よく用いることも可能である。そのような塩として、限定されるものではないが、以下の酸から調製される塩が挙げられる。すなわち、酢酸、ベンゼンスルホン酸、クエン酸、蟻酸、臭化水素、塩化水素、マレイン酸、マロン酸、メタンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、硝酸、ｐ−トルエンスルホン酸、リン酸、サリチル酸、コハク酸、硫酸、および酒石酸である。また、そのような塩類は、アルカリ金属またはアルカリ土属塩類（例えば、カルボン酸基のナトリウム、カリウム、またはカルシウム塩）として調製することもできる。
【０１６３】
適当な緩衝剤として、酢酸および塩（１〜２％  ｗ／ｖ）；クエン酸および塩（１〜３％  ｗ／ｖ）；ホウ酸および塩（０．５〜２．５％  ｗ／ｖ）；さらにリン酸および塩（０．８〜２％  ｗ／ｖ）が挙げられる。適当な保存剤として、ベンズアルコニウム塩化物（０．００３〜０．０３％  ｗ／ｖ）；クロロブタノール（０．３〜０．９％  ｗ／ｖ）；パラベン類（０．０１〜０．２５％  ｗ／ｖ）；およびチメロサール（０．００４〜０．０２％  ｗ／ｖ）が挙げられる。
【０１６４】
医薬組成物は、都合よく単位投薬形態で存在することが可能であり、また製薬学分野において周知の方法のいずれかによって調製することが可能である。全ての方法は、ＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子を、１種類以上の副成分を構成する担体と会合させる工程を含む。一般に、組成物は、一様に、かつ密接にＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子と液状担体、微細に分かれた固形担体、あるいはそれら両方とを会合させ、必要に応じて産物を成形することによって調製される。
【０１６５】
他の送達系は、持続放出性、遅延放出性、または，徐放性の送達系を含み得る。そのような系は、本発明のＴＩＭ−３結合分子またはＴＩＭ−３リガンド結合分子が繰り返して投与されるのを避けることができ、被験体および医師にとって利便性が高まる。多くの型の放出性送達系が利用可能であり、また当業者に公知である。それらは、ポリタクティックおよびポリグリコール酸、ポリ無水物、およびポリカプロラクトン等のポリマーを主成分とする系；ワックスコーティング、従来の結合剤および賦形剤等を用いた圧縮錠剤を含む。腸上皮への材料送達を高めるための生体粘着性ポリマー系が公知であり、公表ＰＣＴ出願ＷＯ９３／２１９０６に記載されている。薬剤を腸上皮に送達するためのカプセルもまた、公表ＰＣＴ出願ＷＯ９３／１９６６０に記載されている。
【０１６６】
上記組成物は、必要に応じて、活性成分を含有する１種類以上の単位投薬形態を含むことが可能なパックまたはディスペンサー装置の中に含まれていてもよい。例えば、パックは金属箔またはプラスチック箔を含むもので、例えばブリスターパックであってもよい。パックまたはディスペンサー装置は、投薬指示が添えられることもある。
【０１６７】
本発明を、以下の実施例によってさらに説明するが、それらがさらに制限を受けるものと決して解釈してはならない。この出願の至る所で引用された全ての参照（引用文献、発行された特許、公開特許出願、および同時係属中の特許出願）の内容全体を、本明細書では参考として明確に援用する。
【実施例】
【０１６８】
（実施例１）
Ｔｈ１特異的ｍＡｂの産生。新規なＴｈ１特異的細胞表面タンパク質を同定するため、ルイスラット（Ｌｅｗｉｓ  ｒａｔ）およびＬｏｕ／Ｍラットに、樹立Ｔｈ１特異的クローンＡＥ７および生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）で分化させた５Ｂ６由来Ｔｈ１細胞系（Ｗａｌｄｎｅｒ  Ｈら（２０００）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９７：３４１２−１７）とＤＯ１１．１０  ＴＣＲトランスジェニックマウス由来Ｔｈ１細胞系とを含むＴｈ１Ｔ細胞クローンおよび細胞系を接種した。メスのルイスラットおよびＬｏｕ／Ｍラット（ハーランスプラーグ−ドーリー社（Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ、Ｉｎｃ．））は、１〜５×１０７個のＴｈ１極性分化（Ｔｈ１−ｐｏｌａｒｉｚｅｄ）Ｔ細胞クローンおよび／または細胞系の皮下（ｓ．ｃ．）注射の組み合わせによって３回接種された。これらのラットを追加免疫し、その４日後、ポリエチレングリコール１４５０を用い、ＨＡＴ培養液中で選別することによって、脾臓細胞を骨髄腫細胞（受託番号ＡＴＣＣ  ＣＲＬ８００６）と融合した（Ｋｏｈｌｅｒ  Ｇら（１９７５）  Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−９７）。約２０，０００のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）からなるパネルを作製した。融合プレートのウェルからとった上清を、Ｔｈ１Ｔ細胞およびＴｈ２Ｔ細胞のフローサイトメトリーによってスクリーニングした。Ｔｈ１Ｔ細胞で陽性のシフトを示したがＴｈ２Ｔ細胞では示さなかったハイブリドーマウェルの全てで、クローンを増殖させ、２回限界希釈してサブクローニングを行った。Ｔｈ１細胞を選択的に染色した２種のｍＡｂ、すなわち８Ｂ．２Ｃ１２および２５Ｆ．１Ｄ６の特徴づけをさらに行った。これらのｍＡｂは、細胞表面のあるタンパク質を認識するが、そのタンパク質は、樹立ＣＤ４＋Ｔｈ１細胞およびＣＤ８＋Ｔｃ１細胞上には存在するが、ＣＤ４＋Ｔｈ２細胞およびＣＤ８＋Ｔｃ２細胞上には存在しない（図１Ａ）。
【０１６９】
（実施例２）
（ＴＩＭ−３のクローニング）  ＡＥ７Ｔｈ１クローンのｍＲＮＡとｐＡＸＦベクターとを用いて、真核細胞発現ライブラリーを作製した。Ｓｅｅｄによって開発された方法に基づく発現クローニング（Ｓｅｅｄ  Ｂら（１９８７）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８４：３３６５−６９））によってライブラリーのスクリーニングを行った。免疫選択された個々のプラスミドをＣＯＳ細胞へトランスフェクトし、その後、抗ＴＩＭ−３抗体を用いて間接免疫蛍光染色した。陽性のクローンを配列決定した。この方法により、２８１アミノ酸からなり、以下のドメインをもつＩ型膜タンパク質をコードするマウスｃＤＮＡを同定した。すなわち、ＩｇＶ様ドメインと、それに続く、３１％のセリン残基およびトレオニン残基を含むムチン様ドメインとからなる細胞外ドメイン；膜貫通ドメイン；ならびに細胞質領域である（図１Ｂ）。ｃＤＮＡによって発現されるこの遺伝子産物をＴＩＭ−３、すなわちＴ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有分子と名付けた。細胞質領域は６つのチロシンを有し、そのうちの１つはチロシンリン酸化モチーフＲＳＥＥＮＩＹ（配列番号７）の一部である。細胞外ドメインは４カ所のＮ結合型グリコシル化部位、および５カ所のＯ結合型グリコシル化部位を有す。
【０１７０】
ゲノムデータベースサーチと逆転写酵素−ポリメラ−ゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）とによって、ＴＩＭ−３のヒトホモログを同定した。それはマウスＴＩＭ−３と、全体で６３％のアミノ酸同一性を、細胞質ドメイン内では７７％の同一性を有し、そのなかには上述のチロシンリン酸化部位の保存が含まれる（図１Ｂ）。データベースサーチによって、ＴＩＭ−３が腎傷害分子（Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｊｕｒｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ−１（ＫＩＭ−１））／ＨＣＶｃｒ−１、ヒトＡ型肝炎ウイルス（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ａ  ｖｉｒｕｓ）に対する受容体、およびＴＩＭ−２と近縁であることが判明した。これら３つのファミリーメンバー（ＫＩＭ−１、ＴＩＭ−２およびＴＩＭ−３）すべてが類似のＩｇ／ムチン構造を有し、さらにこれらの遺伝子はヒト染色体の５ｑ３３．２、およびマウス染色体１１に位置する（ＭｃＩｎｔｉｒｅ  ＪＪら（２００１）Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２：１１０９−１１１６）。
【０１７１】
（実施例３）
（ＴＩＭ−３のインビトロ発現）  ＴＩＭ−３ｃＤＮＡ発現構築物を用いて、チャイニーズハムスター卵巣（Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｈａｍｓｔｅｒ  Ｏｖａｒｙ（ＣＨＯ））細胞の安定したトランスフェクトを行った。安定したトランスフェクト体をフローサイトメトリーおよび免疫沈降で分析し、クローニングしたタンパク質がＴＩＭ−３であり、さらにそれが細胞表面に発現されていることを確認した（図１Ｃ）。
【０１７２】
様々な細胞系（Ｔｈ１、Ｔｈ２、樹状細胞、マクロファージ、およびＢ細胞）ならびにＳＪＬ  Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびＣＤ１１ｂ＋細胞におけるこの遺伝子の発現を、定量的ＲＴ−ＰＣＲによって測定した。ＴＩＭ−３の転写産物は、インビボ由来ＣＤ１１ｂ＋細胞でも低レベルの発現がみられたが、Ｔｈ１細胞においてのみ最高レベルで存在した（図１Ｄ）。抗ＴＩＭ−３抗体を用いたフローサイトメトリー分析を行い、ＴＩＭ−３がナイーブＴ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、または樹状細胞では発現していないことを確認した。これらのデータは、これらの抗体によって認識される分子が主として、分化したＴｈ１細胞またはＴｃ１細胞で発現され、少なくともタンパク質レベルにおいては、他の造血性細胞型では発現されないことを示唆する。
【０１７３】
（実施例４）
（ＴＩＭ−３発現の動態）  Ｔ細胞分化におけるＴＩＭ−３タンパク質の発現動態を調べるため、Ｔｈ１分化誘導条件（Ｔｈ１−ｐｏｌａｒｉｚｉｎｇ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ）またはＴｈ２分化誘導条件下で、ナイーブＤＯ１１．１０  ＴＣＲトランスジェニックＴ細胞のインビトロ活性化を行った。各回の再刺激の後、サイトカインを誘導するために、Ｔｈ１およびＴｈ２細胞をＰＭＡ／イオノマイシン（ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ）で刺激し、その後ＴＩＭ−３およびＣＤ４に対するｍＡｂで染色し、さらに細胞内染色によってサイトカイン発現の検出を行った。この実験において、Ｔｈ２細胞ではＴＩＭ−３がみられなかったが、Ｔｈ１細胞では、３回目のインビトロ分化誘導（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）の後で検出された（図２）。従って、ＴＩＭ−３の発現はＴ細胞分化の後期であり、このことは、ＴＩＭ−３がそれ自体ではＴ細胞分化に寄与していないかもしれないが、Ｔｈ１細胞の移動および／またはエフェクター機能に役割を持つ可能性があることを示唆している。
【０１７４】
（実施例５）
（ＥＡＥにおけるＴＩＭ−３の発現）  次いで、ＣＮＳのＴｈ１媒介自己免疫疾患であるＥＡＥの、進行期におけるＴＩＭ−３発現を調べた。ＥＡＥ感受性であるＳＪＬマウスを脳炎誘発性プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）の１３９〜１５１ペプチドＨＳＬＧＫＷＬＧＨＰＤＫＦ（配列番号８；クオリティー  コントロールド  バイオケミカルズ（Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ））で免疫した。ＥＡＥを誘導するため、メスのＳＪＬマウス（生後４〜８週）（ジャクソンラボラトリー（Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ））の各側部に、４００μｇの結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ；ディフコ（Ｄｉｆｃｏ））を含む完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ；ディフコ）に乳状化した５０μｇのＰＬＰ１３９〜１５１ペプチドを皮下（ｓ．ｃ．）注射した。以下のように段階付けされたＥＡＥの兆候について、マウスを毎日検査した。すなわち、弛緩した尾、１；不均一な足並みおよび立ち直り反射異常、２；完全後肢麻痺、３；前後肢麻痺、４；瀕死状態、５である。マウスは、病状を記録し、免疫後の様々な時点で屠殺し、脾臓、脳、およびリンパ節を取り除き、ＴＩＭ−３の発現を調べた。
【０１７５】
タックマン（Ｔａｑｍａｎ（登録商標））ストラテジー（アプライドバイオシステムズ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ））を用い、リアルタイム逆転写酵素−定量的ポリメラ−ゼ連鎖反応（ＲＴ−ＱＰＣＲ）を行った。総ＲＮＡをトリゾール（ＴＲＩｚｏｌ）によって単離し、ＤＮａｓｅＩで処理した。逆転写によってＲＮＡをｃＤＮＡに変換し、１０ｎｇのｃＤＮＡをＴａｑｍａｎ（登録商標）ＰＣＲに用いた。ＴＩＭ−３、および内部参照であるグリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）の発現レベルを、それぞれ６−カルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ）またはＶＩＣ（登録商標；アプライドバイオシステムズ）で標識したプローブを用いた多重ＰＣＲによって測定した。ＴＩＭ−３のプライマーおよびプローブは、プライマーエクスプレスソフトウェア（Ｐｒｉｍｅｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  ｖ１．０、アプライドバイオシステムズ）を用いて、２．８ｋｂ転写産物の３’ＵＴＲ内に設計した。ＧＡＰＤＨのプライマー／プローブセットはアプライドバイオシステムズから購入した。以下に示すＴＩＭ−３特異的プライマーおよびプローブをＴＩＭ−３用に使用した。すなわち、
順方向プライマー：ＣＡＡＧＣＣＧＧＴＧＧＡＣＣＴＣＡＧＴ  （配列番号９）；
逆方向プライマー：ＡＧＡＴＧＧＧＡＧＣＣＡＧＣＡＣＡＧ  （配列番号１０）；
プローブ：ＡＧＣＴＧＣＣＴＧＣＣＣＡＧＴＧＣＣＣＴＴ  （配列番号１１）
である。
【０１７６】
ＴＩＭ−３−ＦＡＭおよびＧＡＰＤＨ−ＶＩＣの同時測定によって、試料当たりに添加されたｃＤＮＡの量を正規化する（ｎｏｒｍａｌｉｚｅ）ことが可能になった。ＰＣＲは、タックマン（登録商標）標準ＰＣＲマスターミックス（Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ）と、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ７７００シークエンス  ディテクション  システム（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ）とを用いて行った。比較閾値サイクル（ＣＴ）を用いて、無組織対照群（標準物質（ｃａｌｉｂｒａｔｏｒ））に対する遺伝子発現を決定した。従って、定常状態のｍＲＮＡレベルは、標準物質に対してｎ倍の差異があるとして表現される。各試料に対し、ＴＩＭ−３のＣＴ値を式ΔＣ＝ＣＴＩＭ−３−ＣＴＧＡＰＤＨを用いて正規化した。相対的発現レベルを決定するには、以下の式を用いた。すなわち、
ΔΔＣＴ＝ΔＣＴ（１）試料−ΔＣＴ（１）標準物質、
であり、相対的ＴＩＭ−３発現量をグラフにするのに用いた値は、式２−ΔΔＣＴを用いて算出した。
【０１７７】
図３Ａは、対照群であるＧＡＰＤＨの発現に対する、ＴＩＭ−３ＲＮＡの発現を示す。免疫後、ＴＩＭ−３  ｍＲＮＡがリンパ節でアップレギュレートされ、ＥＡＥ発症の直前である免疫後７日目に発現ピークになることを、定量的ＲＴ−ＰＣＲを用いて示した。リンパ節での発現は、その疾患が進行するにともなってダウンレギュレートされた。脳では、ＴＩＭ−３  ｍＲＮＡ発現は着実に増加し、疾患の初期（１０〜１３日目あたり）にピークになった。ＴＩＭ−３  ｍＲＮＡの発現は、その後ダウンレギュレートされ、疾患スコアの最大時には基礎レベル近くにまでなる（図３Ａ）。この発現パターンは、タンパク質レベルでも、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）分析によって確認された（図３Ｂ）。１０日目に、脳、脾臓、およびリンパ節から取った細胞を、ＴＩＭ−３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１９およびＢ２２０によりｍＡｂで染色した。ヒストグラムは、異なる細胞集団におけるＴＩＭ−３の発現を表す（点線、アイソタイプ対照群；実線、特異的染色）。免疫後、周辺細胞では非常に少数のＣＤ４＋Ｔ細胞（＜２％）でＴＩＭ−３が発現されているのに対して、ＣＮＳでは、疾患の臨床的症状の発症時に存在するＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の大部分でＴＩＭ−３が特異的に発現された（図３Ｂ）。ＣＮＳにおけるＴＩＭ−３＋Ｔ細胞の数は、疾患が進行するのにしたがい減少した。これらのデータは、インビボで、ＴＩＭ−３がＴ細胞上で発現され、ＥＡＥの発症に重要な役割を果たしていることを示唆する。さらにこれのデータは、ＴＩＭ−３が、分化したＴｈ１細胞で発現することにより、Ｔｈ１細胞が優先的にＣＮＳ組織に浸潤すること、およびＴＩＭ−３を発現する細胞は、ＣＮＳで増殖するうえでの優位性を有することを可能にする。
【０１７８】
（実施例６）
（抗ＴＩＭ−３投与に続く超急性のＥＡＥ）  ＴＩＭ−３のインビボでの機能をさらに調べるため、ＥＡＥの進行に対する抗ＴＩＭ−３抗体投与の影響をテストした。ＰＬＰ１３９〜１５１ペプチドにより前もって免疫したＳＪＬマウスに、抗ＴＩＭ−３抗体またはアイソタイプの一致した対照群ラットＩｇ（ｒＩｇＧ２ａ）を投与し、ＥＡＥの進行を観察した。メスのＳＪＬマウス（生後４〜８週間）（ジャクソンラボラトリー（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ））の各側部に、４００μｇの結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）を含んだＣＦＡ中にある２５〜７５μｇのＰＬＰ１３９〜１５１ペプチドを皮下（ｓ．ｃ．）注射した。さらに各マウスに、０．１ｍｌのＰＢＳ中にある１００ｎｇの百日咳毒素（ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ  ｔｏｘｉｎ）（リストバイオロジカルラボラトリーズ（Ｌｉｓｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ））を静脈（ｉ．ｖ．）注射した。１００μｇの抗ＴＩＭ−３抗体（０．２〜０．８ＥＵ／ｍｇの毒素活性）もしくは１００μｇの対照ｒＩｇＧまたはＰＢＳを、０日目にから１日おきに１０〜１６日間、マウスに腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。上述のように段階付けされたＥＡＥの兆候について、マウスを毎日検査した。疾患のピーク時または実験の最後に、脳と脊髄を取り出して１０％ホルマリンで固定し、炎症および脱随についての病理組織学的検査をおこなった。
【０１７９】
抗ＴＩＭ−３で処置されたマウスは、超急性で特殊なＥＡＥを進行させ、体重減少の増大、倦怠、および運動失調を示し、さらに後肢麻痺をともなわず、時には尾も正常でありながら前肢麻痺を示した。抗ＴＩＭ−３抗体で処置された群は、疾患の発症時には正常であったが、ｒＩｇＧ２ａで処置された対照群と比較して、疾患の進行が加速され、その結果はっきりとより重篤な臨床症状を示し、死亡率も増大している（表１）。
【０１８０】
組織学的には、抗ＴＩＭ−３抗体で処置されたマウスは、概ね典型的な急性ＥＡＥの所見を示したが、ｒＩｇＧ２ａで処置された対照群と比較して、髄膜および柔組織の両方で炎症性の病巣の増加が認められた（表１）。
【０１８１】
【表１】
2005526018.tif 000010
また抗ＴＩＭ−３抗体で処置された動物で、臨床兆候の発症直後に屠殺した動物では、血管周囲の局所的フィブリン沈着とともにＣＮＳ炎症湿潤している好中球および単核球の数が多いことが示され、このことにより、血管傷害および超急性炎症性応答が示唆された（図４Ａおよび４Ｂ）。さらに、抗ＴＩＭ−３抗体で処置された動物で、３０日目に屠殺した動物は、ｒＩｇＧ２ａで処置された動物と比較して、より広範囲の脱髄病変を示した（図４Ｃおよび４Ｄ  対  図４ＥおよびＦ）。抗ＴＩＭ−３抗体で処置された動物の脱髄病変部に、検出可能なファゴサイトーシスされたミエリン断片を含む活性化マクロファージが満たされていた（図４Ｄ、挿入図）。活性化マクロファージが、ＥＡＥにおいて脱髄を引き起こす主要細胞であること（Ｇｏｒｄｏｎ  ＥＪら（１９９５）Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ  ６２：１５３−６０）と、活性化マクロファージを減少させることにより、ＥＡＥが阻害されること（Ｔｒａｎ  ＥＨら（１９９８）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６１：３７６７−７５）が以前に示されている。従って本願出願人は、活性化マクロファージが抗ＴＩＭ−３抗体処置で誘導されたことにより、超急性の疾患表現型ならびに炎症およびに脱髄の促進が引き起こされたと考える。
【０１８２】
（実施例７）
（インビトロにおけるＣＤ１１ｂ＋細胞の抗ＴＩＭ−３媒介活性化および増殖）  ＴＩＭ−３のインビボでの機能と、すでに観察されているＥＡＥでの役割とをさらに理解するため、ＥＡＥになりやすいメスのＳＪＬマウス（生後４〜８週間）の各側部に、ＣＦＡ中に乳状化された５０μｇのＰＬＰ１３９〜１５１を皮下（ｓ．ｃ．）注射し、１００μｇの抗ＴＩＭ−３抗体もしくは１００μｇの対照ｒＩｇＧまたはＰＢＳを、１日おきに腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。マウスを１０日目に屠殺して脾臓を取り出し、脾臓細胞の単離をおこなった。脾臓細胞を５ｘ１０５細胞／ｍｌで丸底９６穴プレートに入れ、ＰＬＰ１３９〜１５１、または対照抗原であるノイラミニダーゼ１０１〜１２０ペプチドＥＡＬＶＲＱＧＬＡＫＶＡＹＶＹＫＰＮＮＴ（配列番号１２；Ｎａｓｅ；クオリティー  コントロールド  バイオケミカルズ）の濃度を増大させながら（０−１００μｇ／ｍＬ）４８時間刺激した。１プレートあたり１μＣｉの３［Ｈ］チミジンを、プレートに１２時間パルス投与した。取り込まれた放射線標識チミジンを、ベータプレート（Ｂｅｔａ  Ｐｌａｔｅ）シンチレーションカウンター（ワラック（Ｗａｌｌａｃ））を用いて測定した。ｒＩｇＧ２ａで処置された対照群マウス由来の脾臓細胞は、低レベル（バックグラウンド）の増殖性反応（１０００−５０００ｃｐｍ）を示し、特異的抗原の添加とともに、用量依存的に増殖性を増大させた。一方、抗ＴＩＭ−３処置マウス由来の脾臓細胞は、特異的抗原に対する反応は同様であったが、抗原の非存在下で６〜１０倍の基礎反応を有した（図５Ａ）。抗ＴＩＭ−３処置マウス由来の脾臓細胞をフローサイトメトリー分析した結果、ＣＤ１１ｂ＋細胞集団、すなわち単球／マクロファージを主に含む細胞集団に、２〜３倍の増加が認められた。
【０１８３】
抗ＴＩＭ−３処置マウスからのＣＤ１１ｂ＋細胞の増殖を確かめ、それによる基礎増殖反応への貢献の可能性を確かめるため、５−ブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）を、上述のように抗ＴＩＭ−３またはｒＩｇＧ２ａ対照抗体で処置された免疫されたＳＪＬマウスの飲用水に投与した（８ｍｇ／ｍｌ）。マウスを１０日後に屠殺し、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１９、Ｂ２２０、およびＢｒｄＵに対するｍＡｂで、脾臓細胞を染色した。抗ＴＩＭ−３処置マウス由来の脾臓細胞を、ｒＩｇＧ２ａ処置マウス由来の脾臓細胞に対して、フローサイトメトリー分析した結果、ＣＤ１１ｂ＋細胞のみが、ＢｒｄＵ＋細胞およびＢｒｄＵ−細胞両方の細胞数を増加させていることが判明した（図５Ｂ）。これらＣＤ１１ｂ＋細胞の３分の２がＢｒｄＵを取り込み、かつＭＨＣクラスＩＩを高レベルで発現しており（図５Ｂ）、これらの活性化されたＣＤ１１ｂ＋細胞が、抗ＴＩＭ−３処置マウスの高い基礎反応において重要な役割を果たしているという考えと一致する。
【０１８４】
（実施例８）
（抗ＴＩＭ−３処置ＡＰＣ細胞およびＴ細胞の基礎増殖性反応における相乗効果）  基礎増殖性反応における、Ｔ細胞および非Ｔ細胞、特にＣＤ１１ｂ＋細胞の役割を明らかにするため、Ｔ細胞および非Ｔ細胞を、抗ＴＩＭ−３処置マウスおよびｒＩｇＧ２ａ処置マウスの脾臓から単離した。全脾臓細胞またはＴ細胞（１０５）のいずれかを、２×１０５個のＢ細胞、２×１０５個のＣＤ１１ｂ＋細胞、または紫外線照射された脾臓細胞の存在下あるいは非存在下で培養し、増殖性反応を測定した（３Ｈチミジンの取り込みを三連で測定）。抗ＴＩＭ−３処置マウスから単離したＴ細胞、Ｂ細胞、またはＣＤ１１ｂ＋単球の単独で示す基礎増殖性反応が穏やかなものでしかなかったのに対して、Ｂ細胞と、ＣＤ１１ｂ＋細胞との両方を抗ＴＩＭ−３処置Ｔ細胞と共培養したときに、高い基礎反応を再現した（図５Ｃ）。対照として、ｒＩｇＧ２ａ処置マウスからのＴ細胞に、Ｂ細胞、単球、またはＢ細胞と単球の両方を加えたときには、相加的な効果しか生み出されなかった（図５Ｃ（黒色棒））。交差増殖実験を行ったところ、抗ＴＩＭ−３処置Ｔ細胞をｒＩｇＧ２ａ処置Ｂ細胞およびＣＤ１１ｂ＋細胞に加えることにより、基礎増殖性反応の増大が認められた。しかし、最大の基礎増殖性反応を得るためには、抗ＴＩＭ−３処置Ｔ細胞と、抗ＴＩＭ−３処置非Ｔ細胞の両方が必要であった。脾臓細胞をＦｃ受容体（ＦｃＲ）阻害抗体とインキュベートしても、基礎増殖性反応の低下がみられず、従って、ＦｃＲ媒介の架橋の可能性を、この機構から排除可能であると示唆された。さらに、紫外線照射された非Ｔ細胞を抗ＴＩＭ−３処置Ｔ細胞に加えても、同様な高い基礎増殖性反応が再構成されなかったので、Ｔ細胞と非Ｔ細胞との相乗効果があらためて確認された。
【０１８５】
（実施例９）
（Ｔ細胞と非Ｔ細胞との同族的相互作用）  基礎反応の増大に、Ｔ細胞と非Ｔ細胞との同族的相互作用が必要であるかを明らかにするため、別々に設定した実験で、Ｔ細胞および非Ｔ細胞を、細胞接触を阻害する浸透性の０．２μｍアナポア（Ａｎａｐｏｒｅ）メンブレンで分離し、増殖性反応を測定した。同じく図５Ｃ（灰色の棒）に示されているように、抗ＴＩＭ−３処置Ｔ細胞を抗ＴＩＭ−３処置非Ｔ細胞から分離させたことにより、増殖性反応に劇的な低下が生じた。これは、Ｔ細胞と非Ｔ細胞との同族的相互作用が必須であることを示すものである。
【０１８６】
（実施例１０）
ＴＩＭ−３発現Ｔ細胞は、ＡＰＣの増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）および活性化を調節する。ＴＩＭ−３発現Ｔ細胞がマクロファージおよび他の非Ｔ細胞の増殖および活性化を調節するか、直接検討するため、５×１０６個のＴＩＭ−３＋  Ｔｈ１  ５Ｂ６トランスジェニックＴ細胞（ＰＬＰ１３９〜１５１に対する特異性を有する）を、ナイーブＳＪＬレシピエントに養子移植した。その後このレシピエントを、ＰＬＰ１３９〜１５１で免疫し、０日目および２日目に抗ＴＩＭ−３抗体または抗ＩＣＯＳ抗体（Ｔ細胞抗体結合対照群として）で処置した。３日目に脾臓細胞を取り出し、ＣＤ１１ｂ、Ｆ４／８０、Ｂ２２０、およびＭＨＣクラスＩＩに対するｍＡｂで細胞を染色した。移植から３日後に脾臓細胞をフローサイトメトリー分析した結果、抗ＴＩＭ−３処置群では、活性化されたＣＤ１１ｂ＋／Ｆ４／８０＋細胞の数に劇的な増加が認められたが、抗ＩＣＯＳ抗体処置マウスではみられなかった。サブセット２（図５Ｄ）では、ＣＤ１１ｂ＋／Ｆ４／８０＋マクロファージの数に２〜３倍の増加があった。これらのＦ４／８０＋マクロファージでは、ＭＨＣクラスＩＩも高いレベルで発現されており、これらの細胞がより活性化されていたことを示す。
【０１８７】
まとめると、これらの結果は、非Ｔ細胞とＴＩＭ−３発現Ｔｈ１細胞との間の同族的相互作用が、抗ＴＩＭ−３処置の影響を受け、その結果ＣＤ１１ｂ＋／Ｆ４／８０＋マクロファージが増殖し、かつ活性化されることを示す。この発見を説明するかもしれない、いくつかの潜在的メカニズムを以下に挙げる：ａ）抗ＴＩＭ−３が、分化したＴｈ１細胞表面上のＴＩＭ−３タンパク質をインビボで架橋し、炎症促進性サイトカイン（ＩＦＮ−γおよびＴＮＦなど）の産生を増幅し得、そのことにより次にマクロファージの活性化が誘導されうる；ｂ）抗ＴＩＭ−３抗体により、分化したＴｈ１細胞の脳への移動が促進され得、それらの細胞により、脳における循環系からのマクロファージの細胞流入が増大され得る；ｃ）抗ＴＩＭ−３によって、ＴＩＭ−３と、マクロファージ上に潜在的に存在する阻害性リガンドとの同族的相互作用がブロックされ得、こうして、Ｔｈ１細胞によって産生される炎症促進性サイトカインの存在下では、マクロファージの活性化が増強され得る。これらの異なった潜在的作用メカニズムは、必ずしも相互に排除するものではないと理解されるべきものであり、また、これらは他のいかなる作用メカニズムも除外するものではないと理解されるべきものである。
【０１８８】
加えて、Ｔｈ１細胞およびＴｈ２細胞は、お互いの機能を相互に調節するため、Ｔｈ１細胞でのＴＩＭ−３の発現、およびそれに続くＴＩＭ−３保有Ｔｈ１細胞の標的組織部位への移動は、喘息およびアトピーの調節にも役割をもつと考えられている。従って、ＴＩＭ−３は、Ｔｈ１細胞表面に選択的に発現されている分子であるのに加えて、マクロファージの活性化および自己免疫疾患の重篤性の増大に機能的役割を有する。これらのデータと、喘息耐性マウスでの結果とは、ともに、ＴＩＭ−３遺伝子ファミリーのメンバーが、自己免疫とアレルギーの調節とに重要な役割を果たしていることを示唆している。
【０１８９】
（実施例１１）
ＴＩＭ−３は、Ｔｈ１細胞の標的組織への移動を促進する。マクロファージの活性化における役割に加えて、ＴＩＭ−３はエフェクターＴｈ１細胞の移動にも役割をもつ。より具体的には、ＴＩＭ−３の発現は、Ｔｈ１細胞が炎症部位および標的組織へ移動するのを促進し、それらの場所でＴｈ１細胞は組織傷害および自己免疫を媒介し得る。従って、Ｔｈ１細胞表面のＴＩＭ−３の発現、またはＴＩＭ−３とそのリガンドとの相互作用に影響を与えると、Ｔｈ１細胞がそれらの標的組織部位へ移動し免疫応答および炎症を媒介するのを、促進または抑制することになり得る。
【０１９０】
ＴＩＭ−３の発現が分化したＴｈ１細胞の標的組織への移動を促進するという仮説を検証するため、以下の実験を行った。５Ｂ６トランスジェニックマウス由来の、ＰＬＰ１３９〜１５１特異的トランスジェニックＴ細胞を活性化し、Ｔｈ１条件下で極性化した。ＦＡＣＳ染色により、すべての細胞でのＴＩＭ−３の発現を検査した。活性化され、かつ極性化されたＴ細胞を、最後の活性化の後１０日目に回収し、色素である５，６−カルボキシフルオレセインジアセテートスクシニミジルエステル（ＣＦＳＥ）で染色した。細胞はこの色素で標識され、細胞が分裂するに従い色素が希釈される。簡単には、３μＭ  ＣＦＳＥ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）を補充されたＰＢＳに、５Ｂ６  Ｔｈ１細胞を１×１０７細胞／ｍｌで、室温で５〜１０分間インキュベートした。引き続いて細胞をＲＰＭＩで洗浄し、ＰＢＳに再懸濁し、同系のナイーブレシピエントに移植した（１×１０７細胞／マウス）。次いで、レシピエントを、ＣＦＡ中のＰＬＰ１３９〜１５１ペプチドで免疫し、さらに実験期間中１日おきに、１００μｇの抗ＴＩＭ−３または対照群抗体（抗ＩＣＯＳまたは抗ＩＣＯＳＬ）を投与した。マウスを３日目と７日目とに屠殺にし、被移植マウスのリンパ節、脾臓および脳におけるＣＦＳＥ標識細胞の存在と数（パーセンテージ）とを、フローサイトメトリーで分析した。移入後３日目には、ＣＦＳＥ標識細胞は、移入されるレシピエントの脾臓にのみ検出され、リンパ節、または脳では検出されなかった（図６Ａ）。しかし、７日目には、抗ＴＩＭ−３抗体で処置された群の大部分のＣＦＳＥ標識細胞は脳で検出され、脾臓におけるＣＦＳＥ標識細胞の数は減少していた（図６Ｂ）。対照的に、対照抗体で処置された群では、大部分のＣＦＳＥ標識細胞は依然としてこれらマウスの脾臓で検出され、非常に少数の細胞がこれらのマウスの脳で検出された（図６Ｂ）。この実験の結果は、ＴＩＭ−３発現Ｔ細胞の、ＣＮＳなどの組織部位への移動（ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ）が、インビボで抗ＴＩＭ−３抗体処置によって促進され、それによりＥＡＥ誘導が促進されることを示唆している。
【０１９１】
まとめると、このデータは、ＣＮＳ組織に浸潤するＴ細胞の大部分がＴＩＭ−３を発現していることと、抗ＴＩＭ−３処置に続いて、それらの細胞のＣＮＳへの移動が促進されることとを示し、従って、標的組織への移動におけるＴＩＭ−３の役割を強く支持するものである。
【０１９２】
（実施例１２）
（ＴＩＭ−３リガンドは、ＡＰＣで発現されている）  Ｔｈ１細胞上のＴＩＭ−３を架橋することによる、マクロファージおよびＣＤ１１ｂ＋細胞の活性化メカニズムをさらに解明するため、マクロファージおよび他のＣＤ１１ｂ＋細胞で発現される、ＴＩＭ−３に対する受容体またはリガンドの存在を立証するための実験を行った。ＴＩＭ−３を、遺伝的にヒト免疫グロブリンの定常領域に融合させ、可溶性ＴＩＭ−３Ｉｇ融合タンパク質を調製した。ＴＩＭ−３リガンドを様々な細胞型で同定するため、この可溶性タンパク質をビオチン化し、フローサイトメトリー実験に使用した。図７に示されているように、この因子を用いて、可溶性ＴＩＭ−３Ｉｇが樹状細胞（Ｄ２Ｓｃ１）細胞株およびマクロファージ（ＲＡＷ２６４．７）細胞株の細胞に結合するが、マウスＢ細胞株（ＬＳ１０２．９）の細胞には、全く結合しないか、結合しても弱く結合するのみであることが観察された。さらなる実験により、ＴＩＭ−３Ｉｇがインビトロでマウス正常細胞に結合することと、インビボでＣＤ１１ｂ＋細胞に結合することが示された。
【０１９３】
（実施例１３）
（可溶性ＴＩＭ−３）  マウスＴＩＭ−３の全長および選択的スプライシング型を、ＲＴ−ＰＣＲに基づく方法を用いて単離した。マウスＴＩＭ−３遺伝子の５’および３’非翻訳領域（ＵＴＲ）にプライマーを設計し、コンカナバリンＡ活性化脾臓細胞から調製したｃＤＮＡを用いたＰＣＲに使用した。大きさがおおよそ１ｋｂと８００ｂｐである２つのアンプリコンをクローニングし、配列決定した。１ｋｂアンプリコンの予測アミノ酸翻訳は、シグナルペプチドドメイン、ＩｇＶドメイン、ムチンドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインからなるオープンリーディングフレームを明らかにした。対照的に、８００ｂｐ産物からのオープンリーディングフレームを分析したところ、シグナルペプチドドメイン、ＩｇＶドメイン、および細胞質ドメインのみの存在を明らかにした。選択的にスプライシングされた可溶型ＴＩＭ−３の推定アミノ酸配列を、配列番号１３として提供する。
配列番号１３--ＴＩＭ−３の選択的にスプライシングされた形態のアミノ酸配列
【０１９４】
【化７】
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ムチンドメインおよび膜貫通領域が存在しないことは、マウスＴＩＭ−３遺伝子からのエクソン３、エクソン４、およびエクソン５のスプライシングと一致した。このデータは、８００ｂｐアンプリコンによってコードされる産物が、選択的にスプライシングされた可溶型ＴＩＭ−３に相当することと一致する。
【０１９５】
（実施例１４）
（可溶性ＴＩＭ−３融合タンパク質構築物）  潜在的ＴＩＭ−３リガンドを同定し、Ｔ細胞反応の調節におけるＴＩＭ−３リガンドの機能的役割を明らかにするために、ヒトＦｃテール（ｔａｉｌ）に融合したマウスＴＩＭ−３の細胞外部分を有する、２つの融合タンパク質を構築した。第１の構築物、すなわちｍＴＩＭ−３／ｈＦｃ融合タンパク質は、マウスＴＩＭ−３の細胞外領域全体（ＩｇＶドメインおよびムチンドメイン）を有し、それがヒトＦｃテールに融合している。第２の構築物、すなわちｍＴＩＭ−３Ｉｇ／ｈＦｃ融合タンパク質は、マウスＴＩＭ−３のＩｇＶドメインのみを有し、それがヒトＦｃテールに融合している。選択的スプライシング型のＴＩＭ−３がシグナルペプチド、ＩｇＶドメイン、および細胞質ドメインのみをもつことを示すデータから、この分泌型ＴＩＭ−３にＩｇ特異的なリガンドがある可能性が示唆されたので、この第２の融合タンパク質を構築した。これら２つの融合タンパク質は、ＴＩＭ−３リガンド結合分子であり、ＴＩＭ−３リガンドと相互作用し、またＴＩＭ−３リガンドの同定に利用することができる。
【０１９６】
（実施例１５）
（可溶性ＴＩＭ−３の投与に続く超急性ＥＡＥ）  これら可溶性ＴＩＭ−３融合タンパク質構築物の実験的自己免疫性脳髄膜炎（ＥＡＥ）の発生に対する影響を明らかにする、ＳＪＬマウスに、１００ｎｇの百日咳毒素を含んだ完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中にある５０μｇのＰＬＰ１３９〜１５１を静脈注射により免疫し、さらに０日目から１０日目まで１日おきに、１００μｇのＴＩＭ−３／ｈＦｃ、１００μｇのｍＴＩＭ−３Ｉｇ／ｈＦｃ、１００μｇのヒトＩｇＧ（対照群）、または１００μｌのＰＢＳを、腹腔内注射する処置をした。ｍＴＩＭ−３Ｉｇ／ｈＦｃまたはｍＴＩＭ−３／ｈＦｃのいずれかで処置されたマウスは、疾患の重篤性と死亡率の両方で明らかなように（表２参照）、より重篤なＥＡＥを進行させた。ｍＴＩＭ−３／ｈＦｃで処置されたマウスは平均疾患スコアが２．６９であり、それに対して対照群のｈＩｇＧ処置マウスは平均疾患スコアが１．８６、ＰＢＳ処置マウスは１．８９であった。ｍＴＩＭ−３／ｈＦｃで処置されたマウスは、死亡率でも、増大した値３１．３％を示し、それに対して対照群のｈＩｇＧ処置マウスは５．８％、ＰＢＳ処置マウスは５．６％であった。このような、ｍＴＩＭ−３／ｈＦｃ処置による重篤性および死亡率の増大は、抗ＴＩＭ−３抗体で処置したマウスでみられたＥＡＥの増大を想起させるものであり、ＴＩＭ−３リガンドのブロックまたは活性化により、ＴＩＭ−３それ自体をブロックまたは活性化するのと同じ効果が引き起こされることを示唆している。
【０１９７】
【表２】
2005526018.tif 000012
（実施例１６）
（脾臓細胞の、可溶性ＴＭ−３媒介活性化および増殖）  このＥＡＥ増大を引き起こすインビボ機構をさらに理解するため、実施例１５の記載のように、融合タンパク質または対照タンパク質で免疫および処置されたＳＪＬマウスを、１０日目に屠殺し、脾臓を除いた。全脾臓細胞を、チミジン取り込みによって測定された増殖アッセイを行うために、５×１０５細胞／ウェルでプレートに入れた。ｈＩｇＧ処置対照群およびＰＢＳ処置対照群の基礎増殖率が低かった（約１００００ｃｐｍ）のに対して、ｍＴＩＭ−３／ｈＦｃ（約６００００ｃｐｍ）またはｍＴＩＭ−３Ｉｇ／ｈＦｃ（約１４０，０００）で処置したマウスからの脾臓細胞は、ペプチドで再刺激しなくても非常に高いレベルで増殖した（図８Ａ）。この結果は、再び、マウスを抗ＴＩＭ−３抗体で処置したときにみられた結果を想起するものである。４８時間目にとった上清を用いてサンドイッチＥＬＩＳＡを行い、サイトカイン産生を測定した。ｍＴＩＭ−３／ｈＦｃで処置されたマウスはＩＦＮ−γ（４１１１ｐｇ／ｍｌ）、およびＩＬ−２（５９２ｐｇ／ｍｌ）を高いレベルで産生し、一方ｈＩｇＧ処置対照群およびＰＢＳ処置対照群はＩＦＮ−γまたはＩＬ−２を全く産生しなかった（図８Ｂ）。また、ｍＴＩＭ−３／ｈＦｃで処置されたマウスは、ＩＬ−４も、ｈＩｇＧ処置対照群より３倍多く産生した（図８Ｂ）。まとめると、ｍＴＩＭ−３Ｉｇ／ｈＦｃまたはｍＴＩＭ−３／ｈＦｃのいずれかで処置されたマウスからの全脾臓細胞は、高度に活性化されており、大量のＴｈ１サイトカイン（ＩＦＮ−γおよびＩＬ−２）を産生し、そしてＴｈ２サイトカインであるＩＬ−４を相当量産生することが、この結果により明らかになった。ＩＬ−１０またはＴＦＮ−αは検出されなかった。
【０１９８】
ｍＴＩＭ−３／ｈＦｃ処置マウスの活性化された脾臓環境がどのタイプの細胞で構成されているのかを調べるため、免疫および融合タンパク質処置の後１０日目に全脾臓細胞をとり、エキソビボで直接染色し、ＦＡＣＳ分析にかけた。ｍＴＩＭ−３／ｈＦｃ処置マウスの脾臓からとったＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞は、ネガティブ対照群であるＩｇＧまたはＰＢＳで処置されたマウスからの対応する細胞より、活性マーカーであるＣＤ２５およびＣＤ６９をかなり高いレベルで発現した。このデータは、ｍＴＩＭ−３／ｈＦｃで処置された、免疫されたＳＪＬマウスの脾臓からのＴ細胞が、ペプチドによる再刺激なしに、高度に活性化されていることを示す。
【０１９９】
（実施例１７）
（ＴＩＭ−３リガンドを同定するための可溶性ＴＩＭ−３の使用）  どのような細胞がＴＩＭ−３リガンドを発現するのかを明らかにするため、ＳＪＬマウス、ＮＯＤマウス、ＢＡＬＢ／ｃマウス、およびＣ５７ＢＬ／６マウスからとったナイーブ脾臓細胞を、ｍＴＩＭ−３Ｉｇ／ｈＦｃおよびｍＴＩＭ−３／ｈＦｃ融合タンパク質を用いて染色した。適切に選択された細胞表面マーカーを用いた共染色により、脾臓細胞の個々の集団を同定した。フローサイトメトリー分析の結果、ｍＴＩＭ−３Ｉｇ／ｈＦｃが、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞および活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞を特異的に染色することが判明した。従って、選択的スプライシング可溶型ＴＩＭ−３の潜在的リガンドの１つは、ＣＤ４＋Ｔ細胞で発現されていることが明らかになった。
【０２００】
本発明を、特定の実施形態に関して説明したが、これら実施形態の詳細は、限定として理解されるべきものではない。本発明の精神および範囲から逸脱することなく、様々な等価物、変化、および改変がなされ得、そのような等価な実施形態が本発明の一部であると理解される。本明細書で同定または引用されたすべての参考文献、特許および特許公報は、それらの全体が参考として援用される。
【図面の簡単な説明】
【０２０１】
以下の図面は、説明することのみを目的として提供され、本発明の理解または実施に必要とするものではない。
【図１Ａ】ＴＩＭ−３を発現するための図示した種々の細胞型のフローサイトメトリー分析を示す一連のグラフである。Ｔｈ１細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｃ１細胞、およびＴｃ２細胞は、ＴＩＭ−３（実線）またはイソタイプ対照群（点線）に対して、ラットのモノクローナル抗体（ｍＡｂ）で染色した。
【図１Ｂ】マウスＴＩＭ−３の推定アミノ酸配列（ｍＴＩＭ−３；配列番号２）およびヒトＴＩＭ−３の推定アミノ酸配列（ｈＴＩＭ−３；配列番号４）のグラフ表示および対比であり、それぞれＩｇＶ様ドメイン、ムチンドメイン、膜貫通領域、および細胞質領域が示されている。
【図１Ｃ】ｍＴＩＭ−３ｃＤＮＡ（ＣＨＯｍＴＩＭ−３）またはベクター単独のいずれかでトランスフェクションされたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞のフローサイトメトリー分析を示す一組のグラフである。安定なピューロマイシン耐性細胞を、ＴＩＭ−３（実線）またはイソタイプ対照群（点線）に対して、ｍＡｂで染色した。
【図１Ｄ】ＳＪＬマウスから分離された種々の図示細胞系統および細胞由来の全ＲＮＡを逆転写酵素−ポリメラーゼ鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）分析で測定した対照群のグリセルアクデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）ＲＮＡに対するＴＩＭ−３ＲＮＡの相対的発現を示す棒グラフである。
【図２】Ｔｈ１に傾いた条件およびＴｈ２に傾いた条件のもとで、図示した種々の回数繰り返して刺激を与えた後のＴｈ１ＤＯ１１．１０ＣＤ４＋Ｔ細胞の表面上でのＴＩＭ−３発現（実線、特異的染色；点線、イソタイプ対照群）にＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、およびＩＬ−１０の細胞内発現を加えたフローサイトメトリー分析を示す一連のグラフである。
【図３Ａ】時間経過に伴う対照群のＧＡＰＤＨ  ＲＮＡに対するＴＩＭ−３ＲＮＡの相対的発現を示す一組の棒グラフであり、ＥＡＥを誘導するためにペプチドＰＬＰ１３９−１５１で免疫した後の図示日数で、ＳＪＬマウスから取ったリンパ節（ＬＮ）および脳細胞由来の全ＲＮＡをＲＴ−ＰＣＲ分析で測定したものである。対応する臨床疾患スコアは、示したとおりである。
【図３Ｂ】ＥＡＥを誘導するためのＰＬＰ１３９−１５１による免疫後１０日目のＳＪＬマウスの脳、リンパ節（ＬＮ），および脾臓に由来する異なる細胞群（図示）でのＴＩＭ−３発現のフローサイトメトリー分析を示す一連のグラフである（実線、特異的染色；点線、イソタイプ対照群）。
【図４】ＥＡＥに対する抗ＴＩＭ−３抗体処置の効果を示す一連の顕微鏡写真である。パネルＡおよびパネルＢは、臨床疾患のピーク時に免疫化後１２日目の抗ＴＩＭ−３処置マウスの脊髄における炎症性／脱髄性病変を示す。浸潤物は、好中球と単核細胞との混合物からなる。血管周囲フィブリン析出（矢印）は血管炎および脈管損傷を示す。完全な末梢神経根（Ｂの中の暗く染色された部分）の一部は右側にあり、一方その領域の中枢神経系（ＣＮＳ）ミエリンの大部分は見あたらない。Ｍａｇ．＝４１１Ｘ。パネルＣおよびパネルＤは、移動後３０日目に犠牲になった抗ＴＩＭ−３処置マウスの脊髄後柱での血管周囲単核細胞浸潤に関連した広範囲な脱髄化を示す。挿入図（Ｄ）：貧食されたミエリンフラグメントを持つマクロファージ（暗い点）の図面である。Ｍａｇ．＝１３７Ｘ；挿入図＝４１１Ｘ。パネルＥおよびパネルＦは、免疫化後３０日目に殺したイソタイプ対照群ｍＡｂ処置マウスの後柱への同様な浸潤を示すもので、より少ないマクロファージとより広がった領域の完全な（暗く染色された）ミエリンとを持つ。Ｍａｇ．＝１３７Ｘ。パネルＡ、パネルＣ、およびパネルＥ、ヘマトキシリンおよびエオシン染色；パネルＢ、Ｄ、およびＦ、ミエリン用クルーヴァーバレラ染色。
【図５Ａ】ＰＬＰ１３９−１５１および所定の抗ＴＩＭ−３または対照群の抗原（ｒＩｇＧ）による免疫化後１０日目にＳＪＬマウスから採取した脾細胞の、種々の図示量からなるＰＬＰ１３９−１５９（ＰＬＰ）またはノイラミニダーゼ１０１−１２０（Ｎａｓｅ）ペプチドに反応した生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）増殖を示す一組のグラフである。
【図５Ｂ】ＰＬＰ１３９−１５１および所定の抗ＴＩＭ−３または対照群の抗体（ｒＩｇＧ）による免疫化後１０日目にＳＪＬマウスから採取し、かつ種々の図示個体群からなる脾臓細胞のフローサイトメトリー分析を示す一連のグラフである。
【図５Ｃ】ＰＬＰ１３９−１５１および所定の抗ＴＩＭ−３または対照抗体（ｒＩｇＧ２ａ）による免疫後１０日目にＳＪＬマウスから採取した混合および純化脾細胞の図示個体群の増殖応答を示す棒グラフである。灰色の棒、透過性０．２μｍ膜によって分離した純化Ｔ細胞および非Ｔ細胞；黒色の棒、膜なし。
【図５Ｄ】５ｘ１０６個のＴＩＭ−３発現ＰＬＰ１３９−１５１特異的Ｔｈ１  ５Ｂ６細胞を０日目に注射してＰＬＰ１３９−１５１により免疫したＳＪＬマウスから３日日に採取した脾細胞のフローサイトメトリー分析を示す一連のグラフである。レシピエントもまた、０および２日目に抗ＴＩＭ−３または抗ＩＣＯＳ（対照）抗体を注射した。ＦＳＣ、前方散乱；ＳＳＣ、側方散乱。
【図６Ａ】１×１０７個のＴＩＭ−３発現ＰＬＰ１３９−１５１特異的Ｔｈ１  ５Ｂ６細胞を０日目に注射してＰＬＰ１３９−１５１により免疫したＳＪＬマウスの脾および脳から３日日に採取したＣＦＳＥ標識Ｔ細胞のフローサイトメトリー分析を示す一連のグラフである。レシピエントもまた、０および２日目に抗ＴＩＭ−３、抗ＩＣＯＳ（対照）、または抗ＩＣＯＳＬ（対照）抗体を注射した。
【図６Ｂ】１ｘ１０７個のＴＩＭ−３発現ＰＬＰ１３９−１５１特異的Ｔｈ１  ５Ｂ６細胞を０日目に注射してＰＬＰ１３９−１５１により免疫したＳＪＬマウスの脾および脳から７日日に採取したＣＦＳＥ標識Ｔ細胞のフローサイトメトリー分析を示す一連のグラフである。レシピエントもまた、０、２、４、および５日目に抗ＴＩＭ−３、抗ＩＣＯＳ（対照）、または抗ＩＣＯＳＬ（対照）抗体を注射した。
【図７】ビオチン化した可溶性ＴＩＭ−３タンパク質（ＴＩＭ−３Ｉｇ−ビオチン）による染色を行った場合、種々の図示細胞株（樹状細胞（ＤＣ）、マクロファージ、およびＢ細胞）のフローサイトメトリー分析を示す一連のグラフである。
【図８Ａ】ＰＬＰ１３９−１５１ペプチドにより免疫し、ＰＢＳ、対照ｈＩｇＧ、または可溶性ＴＩＭ−３融合タンパク質（ｍＴＩＭ−３Ｉｇ／ｈＦｃまたはｍＴＩＭ−３／ｈＦｃ）で１０日間処置したＳＪＬマウスから得た脾細胞の増殖を示すグラフである。
【図８Ｂ】Ｔｈ１サイトカインＩＬ２およびＩＦＮ−γの分泌に対するｍＴＩＭ−３／ｈＦｃの刺激効果を示す一組のグラフである。
【配列表】
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【図１】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｄ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【国際調査報告】
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