(57)【要約】表面への分子の固定化のための方法が提案されており、この場合、十分に平面である表面をポリマーで被覆し、続いて分子を該ポリマーによって該表面に固定化する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の処理ステップ：
−表面への疎水性ポリマー層の塗布、
−該層の表面での分子の固定化
を含む、表面への分子の固定化のための方法。
【請求項２】
前記ポリマーがポリイミドおよび／またはポリスチレンである、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記ポリマー層を前もって規定された領域内にのみ前記表面に塗布する、請求項１または２記載の方法。
【請求項４】
前記ポリマー層の表面を少なくとも部分的にプラズマ処理によって正もしくは負に帯電させる、前記請求項のうちのいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
紫外線反応性分子を紫外線の照射によって共有結合により固定化する、前記請求項のうちのいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記ポリマー層を少なくとも部分的に酸素プラズマ中で活性化させる、前記請求項のうちのいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記ポリマー層の表面の一部を、集積回路（インテグレーテッド・サーキット（ＩＣ））またはマイクロシステムを載せるために使用する、前記請求項のうちのいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、表面もしくは固体支持体への、特に分子、例えば生体分子の、化合物の固定化のための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
複数のＩＣ（集積回路）を１ケーシング中に収容するチップ・パッケージング技術は、従来技術で公知である。その際、例えばスタックド・ダイ構造の場合にはしばしばポリマーから成る中間層が使用され、この中間層によって相互に積み重ねられたチップの結合を生じさせ、かつ同時に下側のチップの場合によっては敏感な上面を機械的に保護するのを助ける。このような層の製造はいくつかの工場ではライン製造工程の一部であり、特にこのような層の厚さは数μｍ、さらにそれどころかそれ未満の範囲で正確に調整されることができる。
【０００３】
多くの生化学及びバイオテクノロジーの応用において、生体分子を固体支持体に固定化することは有意義である。無機支持体への生体複合には通常、架橋物質が使用され、この架橋物質によって無機層と生体分子の結合が成立する。例えば欧州特許第１１３２７３９号明細書では、生体複合によって分子を無機支持体に架橋物質を介して結合させるのに用いられる方法が開示されており、この場合、このような架橋物質は例えばシランであることができる。欧州特許第１１３２７３９号明細書にはさらに、生体分子の検出および単離に使用することができ、かつセンサ−もしくはバイオチップの構成部品として使用することができ、および／または診断機器として使用することができるリンカー・システムが提案されている。このようにして例えば、生化学的なプロセスの経過において１つの固定化酵素を何回も使用することができる。さらに酵素と他の生体分子の固定化は、生体適合インプラントの開発における主要技術である。
【０００４】
分子（例えば生体分子）を支持体の表面に結合させることは、全体として多くの方法が公知である。免疫学の分野では、生体分子を表面に結合もしくは複合させるのに、例えば、ポリソープおよびマキシソープのようなポリスチレン表面が使用される。
【０００５】
欧州特許第０６４６０３８号明細書から、不活性化されかつ安定化された多孔性支持体を製造しかつ生体複合に使用することが公知である。この支持体は、可逆的な高い吸収能を有し、この吸収能は本質的に、例えばタンパク質、多糖またはオリゴ−もしくはポリヌクレオチドのような分子の非特異的な吸着を伴わない。
【０００６】
リンカー類似の基を用いて表面に生体分子を取り付けるための方法が独国特許第１０００４８８４号明細書に記載されている。この方法は、リンカー類似の基を有するポリマーを水酸イオン源と接触させることを内容とし、このことによって生体分子、例えばヘパリン、は支持体表面に取り付けることができる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
当業者にとって生体複合に関連して次のような２つの本質的な問題提起が重要である：
（ｉ）合計でどれくらいの数の分子が１つの規定された表面に結合するのか、そして
（ｉｉ）結合プロセス後にどれくらいの数の分子がまだ活性を示すのか。
上記生体複合の公知方法の欠点は、分子を支持体に結合するのにリンカーが使用されることである。リンカーの存在が、結合された分子の活性を不利に減少させる。さらにこの公知方法は時間がかかり、かつリンカーもしくは相応の類似物の使用によって費用が高い。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の基本となる技術的な課題は、表面への生体分子の簡単かつ経済的な複合もしくは固定化を可能にしかつ結合された分子の活性が十分に保たれたままである方法を提供することである。
【０００９】
上記目的は、請求項１の特徴に従った方法によって達成される。本発明の有利な態様は、従属請求項の対象である。
本発明による、表面への分子の固定化のための方法の場合には、疎水性でありかつ殊に膨潤不可能であるポリマーの層を該表面に塗布し、かつ分子を該ポリマー層の表面に固定化することが企図されている。
このような疎水性ポリマーは、例えばポリイミドまたはポリスチレンである。ポリマー層が塗布される表面は好ましくは、無機材料、例えば半導体材料、特にケイ素、半導体の酸化物、特に二酸化ケイ素、ガラス、窒化物またはセラミックスから成る。
疎水性ポリマー、例えばポリイミドまたはポリスチレン、には、それらが半導体技術において公知である通常の方法を用いて無機支持体の表面に塗布されることができるという利点がある。さらに疎水性ポリマーは、該ポリマー層の表面に施与された分子または該分子に関連して存在する物質に対して該支持体を電気的に絶縁する。従って、例えば半導体材料から成る支持体に電気的なセンサおよび評価回路を、これらの機能にポリマー層の表面に施与された分子および物質によって不利な影響を及ぼすことなく組み込むことができる。
【００１０】
支持体の表面は、本発明による方法の場合には疎水性の有機ポリマーで完全に被覆することもできるし、部分的にのみ被覆することもでき、その際、半導体工業で通常のマスキング工程を用いて表面の一部を残しておくことができる。このことによって後から電気的な接点（ボンド）を支持体、例えばチップ、に施与することができる。他の理由から表面の一部を残し、その場合によっては無機の表面の部分をそのまま被覆しないでおくことも可能であるし、あるいはその逆に表面のこのような特定の箇所のみを、後で分子、例えば生体分子、が付着することができるポリマーで被覆することも可能である。
固定化のためにポリマー層を、該ポリマー層と結合することができる有機分子と接触させる。この接触は、分子が位置に関して特異的に結合されるように行われる。
支持体におけるセンサ素子は、ポリマー層の表面に固定化された分子において測定が行われることができるように、ポリマー層が塗布されている表面の下に組み込まれることが好ましい。この測定は、例えば生体分子の性質または該生体分子の周囲で発生する化学反応を特性決定するのに役立つことができる。
例えば、抗体は、支持体として使用される半導体本体もしくは半導体膜を容易に被覆することができる、例えばポリイミドまたはポリスチレンから成る、疎水性のポリマー層の表面に良好に結合させることができ、その結果、引き続き典型的な検出反応、例えばＥＬＩＳＡ反応を実施することができる。
【００１１】
本発明に関連する分子は、殊にペプチド、タンパク質、遺伝子およびそのフラグメント、核酸、炭水化物構造体、例えば糖、細胞およびそのフラグメント、細胞膜成分および／またはホルモンである。当然のことながら、微生物、細胞抽出物、リガンド、抗原、抗体、レセプター、レクチン、グリコペプチドおよび／または脂質もまた分子としてポリマー層の表面に固定化することができる。微生物は、生きた微生物でも死んだ微生物でもよく、その際、生きた微生物には、本発明の主旨に従えば、増殖している細胞ならびに休止細胞が該当する。微生物は、支持体への細胞の細胞内の架橋によって前固定化されることができ、その際、前固定化とは、本発明による方法に従った固定化の前に分子もしくは細胞の固定を生じさせることができる全ての方法のことである。微生物の前固定化のための高分子マトリックス中への閉込めの場合には、好ましくは生体高分子、例えば多糖もしくはタンパク質、あるいはまた合成高分子が使用される。
【００１２】
さらに当然のことながら、リガンドもまた分子としてポリマー層の表面に固定化することが可能である。本発明の主旨によるリガンドは、例えば、中心構造の周りに集めていることができる分子、例えばタンパク質、もしくはイオンである。リガンドは単座であってもよいし、多座であってもよい。しかしながら、リガンドとは、巨大分子の特定の部位に結合した分子、例えばタンパク質に対する基質もしくは補酵素、のことと理解することもできる。本発明の主旨によれば、分子もしくは生体分子とは抗原および／または抗体のことと理解することもできる。本発明の主旨による抗原は、免疫応答を引き起こすことができるあらゆる物質である。それは、２キロダルトンを超える分子量を有する外来、天然もしくは合成の高分子、特にタンパク質もしくは多糖、ならびに体外粒子の表面構造でありうる。本発明による抗原は、免疫応答の特異性および対応する免疫グロブリンとの抗原の反応の決め手となるたいてい複数の低分子の基の支持体として役立てられるポリマーの部分から成ることができる。抗原は多価および一価であることができ、かつ従って１種類および／または数種類の抗体と相互に作用することができる。
【００１３】
抗原の代わりに抗体を支持体に固定化することが意図されていてもよい。抗体とは、特に、特異的に抗原と相互に作用する糖タンパク質のことである。その相互効果によって抗原抗体複合体が形成される。抗体は、例えば免疫グロブリンの種々のクラスであることができる。抗体は、無傷の抗体として固定することもできるし、例えば種々のペプチダーゼによる分裂によって製作されうる種々のフラグメントとして固定することもできる。抗体は、支持体への固定化前もしくは固定化中および／または固定化後に例えば還元、酸化またはオリゴマー形成によって修飾されてもよい。さらに、生体分子としてレセプターを使用することも可能である。レセプターは例えば、細胞外のシグナル分子、例えばリガンド、と相互に作用しかつ配座変化によって特定の機能を、特に二次メッセンジャー物質を介して、活性化もしくは不活化させるタンパク質である。しかしながら、本発明の主旨によるレセプターは、刺激を受けてその相応する情報を伝達する特別な細胞でもよく；これについての例は、光受容器、化学受容器、温度受容器および圧受容器が考えられる。
ポリマー層が塗布される表面は十分に平面であることが好ましく、すなわち粗さの低い表面、例えば集積回路を備えた半導体膜もしくは半導体本体の表面（ＩＣ表面）、が重要であるが、しかしながら、その表面は局所的に、例えば生体分子の受容に適当であるかもしれない微視的な構造を有していてもよい。
【００１４】
本発明の主旨による固定化もしくは前固定化とは、分子の移動性および溶解性を化学的、生物学的および／または物理的な方法で制限するためのあらゆる方法のことと理解することができ、この場合、前固定化は、本発明による方法に従った固定化の前に実施される分子の固定のためのあらゆる方法に関する。固定化および／または前固定化は、種々の方法によって、例えば、分子を相互にかもしくは支持体に結合することによって、高分子マトリックスの網状構造で保持することかまたは膜で包むことによって、行うことができる。固定化によって分子は再使用可能になるばかりではなく、試料との相互作用の過程の後で容易に再び分離することができる。該分子は著しく一層高められた局所的な濃度で連続的な流れの系で使用されることができる。支持体への分子の結合および／または固定化は、直接の支持体結合および架橋によって行うことができる。支持体結合は、本発明によれば特にイオン結合、吸着結合によってかもしくは共有結合によって行われる。本発明の主旨による架橋は、分子が相互にかもしくは他のポリマーと架橋することである。閉込めによる固定化の場合には、分子が支持体表面で固定化される前に、分子はゲル構造体ないしは膜中に閉じ込められる。
当業者には、分子を支持体に固定化するための数多くの方法が公知である。この場合には固定化は、各プローブもしくは分子を支持体上の規定された位置に割り当てることができ、かつ支持体上のその各位置を独立して評価することができるように行われるべきであると考えられる。しかし、種々の分子もしくはプローブの施与箇所が部分的もしくは完全に重複すること、あるいは生体分子の混合物が施与されることもまた望ましいといえる。固定化は、例えば半導体技術に依拠した方法を用いて行うことができる。原則的に分子もしくは生体分子を次の２つの原理的に異なる方法で支持体に固定化させることができる：  （ａ）  一方では支持体の規定された位置での分子のインシトゥ合成が単量体の合成単位の逐次的な結合によって可能であり、（ｂ）他方では前もって合成された、または諸ライブラリーに由来する生体分子もしくは他の分子を特に官能化された支持体材料の規定された位置に置くことおよび固定化することが可能である。このためにスポッティング法ならびにプリント法を使用することができる。スポッティング法とは、前記分子が入れられている液滴を支持体上に置き、その際、表面の相互作用および乾燥によってほぼ丸いスポットが得られる方法のことである。しかし他のプリント法もまた、分子を支持体表面上の規定された領域内に置くことを可能にし、これにより分子の支持体表面への試料の安定した結合が高い結合効率をもって行われることができる。当業者に公知の全ての、例えばカラム材料への、生体分子の固定化の措置は、分子を支持体に固定化するのに同様に使用することができる。
固定化もしくは前固定化のための選り抜かれた方法は、例えばコンタクト・ティップ・プリンティング、リング・アンド・ピン・プリンティング、ナノエレクトリック・プリンティング・アンド・ナノピペッティング、バブルジェット（登録商標）プリンティング、トップ・スポット・プリンティング、マイクロ・コンタクト・プリンティング、マイクロ・フルイディク・ネットワーク法、フォトリソグラフィック活性化法、フォトレジスト・リソグラフィ、エレクトロケミカル・フォーカシング法およびマイクロ・ウェット・プリンティングである。本発明によれば、これら全ての方法を適用することができる。
【００１５】
本発明の主旨によれば、支持体として金属、ポリプロピレン、テフロン（登録商標）、ポリエチレン、ポリエステル、ポリスチレン、窒化物、セラミックスおよび／またはガラスを含む無機表面あるいはＩＣ（集積回路）の表面、ケイ素、二酸化ケイ素もしくはその他を使用することができる。本発明の主旨による金属は、その結合力が結晶格子によって生じる全ての化合物である。金属と非金属との境界というものは流動的であり、従って元素Ｃｅ、Ｓｎ、ＡｓおよびＳｂも本発明の主旨によれば金属である。本発明による金属には、金属ガラス、すなわち準安定な、十分に無定形な状態にある物質も属する。当然のことながら、金属的な伝導性のポリマーもまた本発明の主旨による金属である。本発明の主旨による金属は、好ましいことに殊に良好な強度、良好な硬度および耐摩耗性、高い靱性ならびに良好な電気および熱の伝導性を示す。本発明の主旨によるポリプロピレンは、プロピレンの熱可塑性ポリマーである。ポリプロピレンは、殊に硬度、反発弾性、剛性および耐熱性が高いことが特徴である。本発明によるテフロン（登録商標）は、好ましいことに良好な熱可塑性の性質を有するポリテトラフルオロエチレンである。ポリエチレンは特に、本質的に２つの異なる方法、高圧法および低圧法、によるエチレンの重合によって得られる。高圧法で製造されたポリエチレンは、好ましいことに小さい密度を有する。ポリプロピレンを含む支持体の性質は、部分的に結晶質の炭化水素としてのポリエチレンの性質によって本質的に決定される。好ましいことにポリエチレンは６０度まで全ての常用の溶剤中で実質的に不溶性である。好ましいことに有極性液体、例えばアルコール、エステルおよびケトン、は室温でポリエチレン、ひいては支持体の被覆の膨張をほとんど誘起しない。水、アルカリ液および食塩水ならびに無機酸に対してポリエチレンは好ましいことにまったく反応しない。ポリエチレンを含む支持体は、例えば著しく低い水蒸気透過性を示す。しかしながら、支持体は有利なことにポリエステルも含むことができる。本発明の主旨によるポリエステルは、ラクトンの開環重合によってか、あるいはヒドロキシカルボン酸の重縮合またはジオールとジカルボン酸もしくはジカルボン酸誘導体との重縮合によって製造される化合物である。本発明の主旨によるポリエステルには、ポリエステル樹脂、ポリエステルイミド、ポリエステルゴム、ポリエステルポリオールおよびポリエステルポリウレタンも含まれる。ポリエステルは好都合にも熱可塑性物質であり、かつ顕著な材料特性を有する。ポリエステルは、例えば熱安定性が高いことが特徴であり、例えば銅、アルミニウムおよびマグネシウムといった金属との合金にすることができる。
【００１６】
しかしながら、支持体にセラミックスが含まれることが企図されていてもよい。本発明の主旨によるセラミックスとは、３０容量％を超える結晶材料を含む特に無機質の、主として非金属の化合物に対する総称である。当業者には、支持体として使用することができる種々のセラミックスまたはセラミック材料が知られている。それは例えばいわゆる陶磁器類、タイル、実験室用化学磁器、アルミナ系セラミックス、永久磁石材料および珪石れんがであることができる。粘土系セラミック材料の場合には、本発明の主旨によれば、きめの粗い材料ときめの細かい材料とに区別され、その際、きめの細かい粘土系セラミック材料には、土器、陶器、せっ器および磁器が含まれる。しかしながら、有利に特殊セラミック材料、例えばガラスセラミックス、酸化物セラミックス、ＳｉＣれんがおよび溶融鋳込みれんが、も支持体として使用することができる。支持体にガラスも含まれうることは有利である。本発明の主旨によるガラスは無定形の、非晶質の固体状態にある物質であり、すなわちこのガラス状態は、本発明の主旨によれば、凝固され、過冷却された液体もしくは溶融物のことであると理解することができる。したがってガラスは無機質もしくは有機質の、たいてい酸化物の溶融生成物であり、この溶融生成物は、溶融相成分の結晶化を伴わない導入プロセスによって固体状態に変換されたものである。当然のことながら、本発明の主旨によれば結晶、溶融物および過冷却された溶融物もガラスであると理解することができる。ガラスは、例えば板ガラス、実験室用ガラス器具、鉛クリスタルガラス、繊維ガラスおよび光ファイバーなどが可能である。当然のことながら、ケイ酸塩不含ガラス、例えばリン酸塩ガラス、を使用することも可能である。しかしながら、該支持体は、光学ガラス、すなわち、例えば特別な光屈折率をもつガラス、が使用される構成であってもよい。
【００１７】
本発明の主旨によれば、支持体の表面が改質されてもよいことは自明のことである。支持体の改質は、殊に生物学的、物理的および／または化学的な影響の作用によって行われることができる。物理的な作用は、例えば研磨、エッチング、酸洗い、サンドブラスト、しかしまた硬化、被覆、反射防止および保護皮膜コーティングなどをもたらす物理的な方法が考えられる。生物学的な作用による表面処理には、例えば微生物でおおうことが含まれることが可能である。支持体の表面の化学的な改質には、例えば酸、塩基および金属酸化物などによる処理がある。支持体の表面は、支持体上の分子が特に良好に保持されるように、あるいは分子の活性が不利に変更されぬよう保持されるように改質することが可能である。表面改質には、ポリ−Ｌ−リジン、アミノシラン、アルデヒドシラン、エポキシ基、金、ストレプタビジン、反応基、ポリアクリルアミドのパッド、固定化したニトロセルロースおよび／または活性化アルデヒドないしはアガロース−アルデヒド基による被覆も含まれ、このことによって特に次のものが結合される：  ＤＮＡ、ＣＯＯ-基、ＮＨ2基、ビオチンおよびチオール基など。支持体の表面改質には自明のことながら、高められた安定および破壊強さをもたらす処理も含められる。自明のことながら、特に生体分子の固定化の場合には、組織学で典型的な表面改質が行われてもよい。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
本発明の一実施態様では、ポリマー層の表面の特定のセクションに、集積回路を有するさらなる半導体本体もしくは半導体膜または付加的なマイクロシステムを載せることが企図されている。ポリマー層としてこの場合には特に、このような適用のために半導体技術では知られているポリイミドが適当である。ポリイミドは特に高温に耐えるポリマーであり；  有利に該ポリマーは優れた機械的、熱的および電気的特性を示す。半導体技術におけるポリイミドのこれまでに公知の適用には、支持体上の、殊に緩衝層、不活性化層、結合層および誘電体中間膜が含まれる。ポリイミドは殊に液状で塗布され、そして硬化される。この硬化段階の際にこのポリイミドは有利に所望の性質を維持する。この適用のために該ポリイミドは、リソグラフィによりパターン形成されることができる。ポリイミドは、自明のことながら、注型用材料のための接着促進剤として、かつ緩衝層として使用することもできる。ポリマー層は例えば、被膜で包むことによって引き起こされるケイ素における応力を減少させ、かつその稜の亀裂を防止する。ポリイミドにおける亀裂の形成および色むらを防止するために、殊にポリイミドはきわめて均一な温度条件下で硬化されなければならない。例えば、低い酸素の値は、良好な付着を達成するために好ましい。
同様に本発明による分子の固定化のためのポリマー層として使用可能なポリスチレンは、特にスチレンのラジカル重合によって得られる熱可塑性プラスチックである。成長する重合鎖のラジカル末端基はその環の二重結合を決して攻撃しない、というのも、そのベンゼン環が非常に安定した構造であるからである。このことから、ポリスチレンが使用される場合の多くの利点が導き出され、例えば、ポリスチレンは酸、アルカリ液およびアルコールに対して耐性がある。
本発明の別の有利な実施態様の場合には疎水性ポリマーが前記表面の前もって規定された領域内にのみ塗布される。
さらに別の特に有利な実施態様の場合には前記表面はプラズマ処理によって正および／または負に帯電し、すなわち、表面は異なる箇所では異なった電荷を有する。殊にポリマー材料は種々の形状で存在する。個々の形状は、加工法に種々の条件を求める。表面の形状に応じて、例えばプラズマはその表面に種々の方法で到達可能である。ポリマー表面のプラズマ処理は、好ましいことに表面エネルギーを著しく高めることができ、かつ他の処理方法を可能にすることができる。プラズマ処理の場合にはプラズマの特にイオンおよび遊離基がポリマー表面と反応し、そしてそこに、ポリマーの望ましい表面特性の決め手となる官能基を生成させる。正もしくは負の電荷によって生体分子の、殊に、改善された湿潤性および／または改善された結合性が達成される。
【００１９】
本発明のさらに別の有利な実施態様の場合には、紫外線反応性分子が紫外線の照射によって共有結合により固定化される。例えばガラス上の感光性の保護基を、フォトマスクにより選択的に輻射する光によって場所を限定してオリゴ合成に対して活性化させることが企図されていてもよい。この場合にはガラスに感光性の分子、例えばＤＮＡ塩基、が流し込まれ、該分子は前もって照射されたアレイの箇所に結合する。そして配列内の次のオリゴ塩基には、相応する他のフォトマスクが使用され、そのプロセスが繰り返される。つまり、プローブのオリゴにおける各塩基に対して（１つの位置につき）４つのマスクが必要である。例えば、公知の配列データベースからの直接の製造を行うことができることは有利であり、その際、均一標準化が達成される。
【００２０】
疎水性分子、特に生体分子が上記方法の１つ、例えばプリント法で疎水性ポリマー層の表面に施与される場合には、該分子はよく知られた相互作用によって該表面に付着する。
ポリマー層の表面への分子の固定化のために、本発明による方法の一実施態様の場合には、ポリマー層の表面を、例えば従来のマスキング技術の使用下に、少なくとも部分的に酸素プラズマ中で活性化させることが企図されている。これによりポリマー層の表面にアルデヒド基、カルボキシ基または水酸基が形成される。これら基は親水性であり、かつ、生体分子を含有する溶液が、例えばプリントされることによって、活性化された領域に施与されたその生体分子との共有結合を可能にする。この共有結合は、該ポリマー層がこれに固定化された分子とともに引き続き、結合が壊されることなく石けん中で煮沸することができる程度に安定している。有利に該表面は島状にのみ酸素プラズマ処理によって活性化され、その際、その「島」を取り囲む疎水性のままのポリマー層の領域が該表面での塗布された前記溶液の流れを制限する。
【００２１】
次に本発明を実施例につき詳説するが、この実施例だけに限定するものではない。
［実施例１］
ＣＭＯＳフォトダイオードを備えたシリコン−センサチップにスピンコータのポリスチレンを用いて約１００２００ｎｍのポリスチレンの層で被覆する。さらに該チップをトルエン中の０．１％（ｗ／ｖ）のポリスチレン溶液２００μｌを用いて３０００ｒｐｍで１分間スピンコータで被覆する。引き続き、センサ領域（フォトダイオード）にタンパク質溶液を網目スクリーン状の配置でプリントする。ＰＢＳ緩衝液中の抗体を使用する。この抗体をそれぞれ５μｇ／ｍｌの濃度で使用する。網目スクリーンの一部に、蛍光色素と複合させてある抗体をプリントする。抗体を湿気がある庫内で４℃で一晩インキュベートし、結合していない抗体を引き続きＰＢＳ緩衝液ですすぎ流す。蒸留水で洗浄した後に固定化の結果を蛍光光度計を用いて検査する。センサ領域への抗体の成功した結合を抗体の蛍光によって検出する。引き続き、ＰＭＭＡから成る反応室の施与（Ａｕｆｂｒｉｎｇｅｎ）によって該チップを密封する。反応室の施与は、ポリスチレン層へのＰＭＭＡの結合によって行われる。完成した構成物をなおタンパク質のための市販の安定化試薬の使用によって安定化させ、そして使用準備が完了する。
【００２２】
［実施例２］
ＣＭＯＳフォトダイオードを備えたシリコン−センサチップをすでにウェーハ上で５μｍの層のポリイミドで被覆する。引き続き、このポリイミドをベンゾフェノンメタクリレートとアクリル酸の共重合体で被覆する。次にこの支持体に生体分子、例えばＤＮＡ（ＰＢＳ緩衝液中の５μＭのオリゴヌクレオチド）、を簡単な方法でプリントすることができる。固定化を３００ｎｍで約１０分間の紫外線暴露によって行う。これにより共重合体のベンゾフェノンが、ポリイミド被覆ならびにＤＮＡに共有結合する遊離基を生成する。同じ手順を他のすべての生体分子、例えばタンパク質、特に抗体、ペプチド、糖、脂質およびトリグリセリドならびにまたこれらの複合構造を用いても実施することができる。
【手続補正書】
【提出日】平成16年5月18日(2004.5.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１】
電気センサと評価回路が組み込まれた支持体の表面に分子を固定化するための方法であって、該方法は、
−表面への疎水性ポリマー層の塗布と、
−該層の表面での分子の固定化と、
の処理ステップを含む、電気センサと評価回路が組み込まれた支持体の表面に分子を固定化するための方法。


【国際調査報告】
2005527807.tif 000002
2005527807.tif 000003
2005527807.tif 000004
2005527807.tif 000005
2005527807.tif 000006
2005527807.tif 000007