(57)【要約】動物のＭｘタンパク質または他のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質のレベルを測定することによる、ウィルスまたは他の病気を引き起こす微生物に感染したことが分かっていない動物のウィルス感染の存在の決定方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
試験動物のＭｘタンパク質の発現のレベルを測定し、該動物のタンパク質の発現のレベルを、ウィルス感染状態が知られている同種の動物のレベルと比較することを有する動物のウィルス感染の存在を決定する方法であって、試験動物がウィルスまたは他の病気を引き起こす微生物に感染したことが知られていない方法。
【請求項２】
試験動物は、ウィルス感染に相応する臨床的徴候を示していない、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
試験動物は、哺乳動物である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
哺乳動物は、奇蹄目または偶蹄目の動物である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
哺乳動物は、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ブタ、及びラマからなる群より選ばれる、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
哺乳動物は、肉食動物である、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
肉食動物は、イヌ科またはネコ科の動物である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
哺乳動物は、霊長類である、請求項３に記載の方法。
【請求項９】
霊長類は、ヒトである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
Ｍｘタンパク質の発現のレベルは、Ｍｘタンパク質をコードするｍＲＮＡのレベルを測定することによって測定される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ｍＲＮＡの測定は、ノーザンブロット分析、スロット−ブロット分析、またはポリメラーゼ連鎖反応によるものである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
Ｍｘタンパク質の発現レベルは、Ｍｘタンパク質のレベルを測定することによって測定される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
Ｍｘタンパク質のレベルの測定は、該タンパク質への抗体の結合を評価することによるまたは該タンパク質の機能に基づくアッセイによるものである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
Ｍｘタンパク質のレベルは、比色アッセイによって検出される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
タンパク質の発現のレベルは、動物の細胞におけるタンパク質の発現を測定することによって測定される、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
タンパク質の発現のレベルは、動物の体液を分析することによって測定される、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
動物のタンパク質の発現のレベルがウィルスに感染していないことが知られている同種の動物のタンパク質の発現のレベルに比して有意に上昇していない場合には、その動物はウィルス感染に陰性であると決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
試験サンプルを保持するための容器、該容器中の試験サンプルと混合されると、オペレーターが試験サンプル中のＭｘタンパク質のレベルを目視で測定できるような、一以上の試薬、およびサンプル中のＭｘタンパク質のレベルに基づいて動物のウィルス感染状態を決定するための指示書を有する、動物のウィルス感染状態を決定するためのキット。
【請求項１９】
Ｍｘタンパク質のエピトープに結合する抗体が結合する試験表面、タンパク質の第二のエピトープに結合する標識された二次抗体を有する容器、タンパク質の基準濃度を有する標準サンプルを有する容器、標識された二次抗体と接触すると、存在するタンパク質の相対的な量が目視できるような試薬、および試験サンプルがウィルス感染を示すまたはウィルス感染状態を有さないことを示す量のタンパク質を含むかどうかを決定するためのキットの使用に関する指示書を有する、動物のウィルス感染状態を決定するためのキット。
【請求項２０】
試験動物のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質(Type I Interferon-induced protein)の発現のレベルを測定し、該動物のタンパク質の発現のレベルを、ウィルス感染状態が知られている同種の動物のレベルと比較することを有する動物のウィルス感染の存在を決定する方法であって、試験動物がウィルスまたは他の病気を引き起こす微生物に感染したことが知られていない方法。
【請求項２１】
試験動物は、ウィルス感染に相応する臨床的徴候を示していない、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
試験動物は、哺乳動物である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
哺乳動物は、奇蹄目または偶蹄目の動物である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
哺乳動物は、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ブタ、及びラマからなる群より選ばれる、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
哺乳動物は、肉食動物である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
肉食動物は、イヌ科またはネコ科の動物である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
哺乳動物は、霊長類である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２８】
霊長類は、ヒトである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
該タンパク質の発現のレベルは、タンパク質をコードするｍＲＮＡのレベルを測定することによって測定される、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
ｍＲＮＡの測定は、ノーザンブロット分析、スロット−ブロット分析、またはポリメラーゼ連鎖反応によるものである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
該タンパク質の発現レベルは、タンパク質のレベルを測定することによって測定される、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
Ｍｘタンパク質のレベルの測定は、該タンパク質への抗体の結合を評価することによるまたは該タンパク質の機能に基づくアッセイによるものである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
該タンパク質のレベルは、比色アッセイによって検出される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
該タンパク質の発現のレベルは、動物の細胞におけるタンパク質の発現を測定することによって測定される、請求項２０に記載の方法。
【請求項３５】
該タンパク質の発現のレベルは、動物の体液を分析することによって測定される、請求項２０に記載の方法。
【請求項３６】
動物のタンパク質の発現のレベルがウィルスに感染していないことが知られている同種の動物のタンパク質の発現のレベルに比して有意に上昇していない場合には、ウィルス感染に陰性であると決定される、請求項２０に記載の方法。
【請求項３７】
タンパク質は、Ｍｘタンパク質、２’，５’−オリゴアデニレートシンテターゼ、β２−ミクログロブリン、ＩＦＮ調節因子１、及びユビキチン交差反応性タンパク質（ＩＳＧ−１７）からなる群より選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項３８】
タンパク質は、２’，５’−オリゴアデニレートシンテターゼ、β２−ミクログロブリン、ＩＦＮ調節因子１、及びユビキチン交差反応性タンパク質（ＩＳＧ−１７）からなる群より選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
タンパク質は、ＩＳＧ−１７である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
試験サンプルを保持するための容器、該容器中の試験サンプルと混合されると、オペレーターが試験サンプル中のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質のレベルを目視で測定できるような、一以上の試薬、およびサンプル中のタンパク質のレベルに基づいて動物のウィルス感染状態を決定するための指示書を有する、動物のウィルス感染状態を決定するためのキット。
【請求項４１】
タンパク質は、Ｍｘタンパク質、２’，５’−オリゴアデニレートシンテターゼ、β２−ミクログロブリン、ＩＦＮ調節因子１、及びユビキチン交差反応性タンパク質（ＩＳＧ−１７）からなる群より選択される、請求項４０に記載のキット。
【請求項４２】
タンパク質は、２’，５’−オリゴアデニレートシンテターゼ、β２−ミクログロブリン、ＩＦＮ調節因子１、及びユビキチン交差反応性タンパク質（ＩＳＧ−１７）からなる群より選択される、請求項４１に記載のキット。
【請求項４３】
タンパク質は、ＩＳＧ−１７である、請求項４２に記載のキット。
【請求項４４】
タイプＩインターフェロン誘導タンパク質のエピトープに結合する抗体が結合する試験表面、タンパク質の第二のエピトープに結合する標識された二次抗体を有する容器、タンパク質の基準濃度を有する標準サンプルを有する容器、標識された二次抗体と接触すると、存在するタンパク質の相対的な量が目視できるような試薬、および試験サンプルがウィルス感染を示すまたはウィルス感染状態を有さないことを示す量のタンパク質を含むかどうかを決定するためのキットの使用に関する指示書を有する、動物のウィルス感染状態を決定するためのキット。
【請求項４５】
タンパク質は、Ｍｘタンパク質、２’，５’−オリゴアデニレートシンテターゼ、β２−ミクログロブリン、ＩＦＮ調節因子１、及びユビキチン交差反応性タンパク質（ＩＳＧ−１７）からなる群より選択される、請求項４４に記載のキット。
【請求項４６】
タンパク質は、２’，５’−オリゴアデニレートシンテターゼ、β２−ミクログロブリン、ＩＦＮ調節因子１、及びユビキチン交差反応性タンパク質（ＩＳＧ−１７）からなる群より選択される、請求項４５に記載のキット。
【請求項４７】
タンパク質は、ＩＳＧ−１７である、請求項４６に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、個体がウィルスに感染しているか否かを決定するための診断試験分野に関するものである。より詳細には、本発明は、臨床上は病気ではないまたはウィルスに感染していることが分かっていない無症状の個体がウィルスに感染したかどうかを決定するための診断試験分野に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
世界中で、動物は、農場から農場へと日常的に出荷されている。動物はまた、州の境界あるいは国境を越えて定期的に輸入あるいは輸出されている。これらの動物は病気の兆候がなく臨床上は健常に見えるものの、これらのうちの多くの動物が潜在的に重篤なウィルス感染を有する可能性が存在する。このような動物は、いずれ病気にかかるであろう。経済的な観点からより重大なこととしては、ウィルスに感染している多くの無症状の保有者は病気の兆候を示していないが、他の動物の群れ(herd)またはフロック(flock)にウィルスを撒き散らし続けるであろうことがある。これらのウィルスに感染している無症状の保有者は、新たな群れまたはフロックに入れられると、新たな環境で他の動物に感染させる危険性が有意に高い。
【０００３】
現在、新しい環境で脅威が生じないように、少数の試験が定常的に見かけは健常である動物に行なわれている。これらの試験のうち最も注目すべきものとしては、ウマが、吸血昆虫によりウマからウマへと伝染する病気である、ウマ伝染性貧血に感染していないことを確かめるために、出荷前にウマに行なうコギンズテスト(Coggins test)がある。しかしながら、このような試験は、特定のウィルス疾患に特異的であり、たとえ可能であったとしても、出荷前にすべての既知のウィルス疾患に対して動物を試験することは経済的にも物理的にも実施不可能である。さらに、試験は、ほとんどのウィルス疾患の検出に利用できない。
【０００４】
したがって、動物のウィルス感染状態は出荷前には分からない。ただし、出荷される無症状な動物のウィルス感染状態を知ることは、おそらく、病気の大発生を予防するのに最も重要な側面である。出荷される前に動物のウィルス感染状態を決定する手段に対する必要性が非常にある。
【０００５】
また、ウィルス感染状態を知ることは、病気が現在大発生している場合にも重要である。近年、伝染性の高いウィルス疾患が幾つか大発生している。これらのうち最も顕著なものとしては、英国で２００１年に始まった口蹄疫（ＦＭＤ）の大発生がある。この大発生によって、数千の農場が影響を受け、さらに数千の動物がＦＭＤウィルスに感染していることが分かった。
【０００６】
主としてウィルスによるこれらのような大発生では、ウィルスに感染したことが疑われる動物は、病気をコントロールするために処分される。さらに、処分された動物は、本当にウィルスを持っていたかどうかを決定するために試験される。ウィルス陽性の動物がいる農場の無症状の動物はウィルスに曝されていた可能性があるため、これらの他の動物は同様にして処分される。
【０００７】
動物が感染したか否かを決定するには試験は現在不十分であるため、ウィルスに暴露された可能性のある無症状の動物は予防策としてこのように処分される。非常に多くの場合、すべてとはいわないがほとんどの処分された動物は感染しておらず、本当は病気を広げる危険性はなかった可能性がある。残念なことに、動物がウィルスに感染しているか否かを決定する信頼性の高い試験方法がないために、処分プログラムは、ウィルスのさらなる広がりを予防するために必要なステップである。
【０００８】
動物の生命が粗末にかつ不必要に失われていることに加えて、このような無差別な処分プログラムは、すべての家畜を失ってしまう農場主にとって及びその地域またはその国の農業経済にとって打撃が非常に大きい。さらに、このような処分プログラムのコストは高く、動物の破棄に対する農場の補償を含む。しかしながら、このような補償は、通常、失ってしまった群れを回復し、農場をもう一度経済的に発展させるためには数年かかることが多いため、農場主を真に補償するには不十分である。
【０００９】
動物が感染したか否かを決定するためにウィルスに感染していることが疑われている無症状の動物をスクリーニングする方法に対する必要性がかなりある。
【００１０】
世界中を人々が移動することに関して、同様の必要性がある。今日の世界では、人々は、人々が致命的なウィルス感染を潜在的に持っているか否かに関する知識がほとんどないまたは全くない状態で、一つの国から別の国に移動している。すべての人々に旅行前に感染に関する試験を定常的に行なうことは実施不可能であるが、ウィルス感染に関する試験法が存在したならば、ウィルス疾患が大発生している国から旅行する人々には試験できるであろう。このような試験は、例えば、エボラウィルスの場合には、このウィルスによって引き起こされる恐ろしい病気が、このウィルスが現在存在しない国に広がらないようにするために、使用できるであろう。したがって、動物と同様、ヒトのウィルス感染状態を決定するのに使用できる試験法に対する必要性がかなりある。
【００１１】
Ｍｘタンパク質は、単量体のＧＴＰａｓｅであり、動物の種及びウィルスのタイプによって、ウィルスの複製の強力な阻害剤となる(Samuel, Virology 183:1-11 (1991))。ヒツジ、ウシ、ブタ、及びウマ等の、様々な種由来のＭｘタンパク質の配列がＧｅｎＢａｎｋにより公的に利用でき、それぞれ、ＧｅｎＢａｎｋの受託番号Ｘ６６０９３、Ｕ８８３２９、Ｍ６５０８７、及びＵ５５２１６で寄託されている。Ｍｘの抗ウィルス効果は、通常、マイナス鎖ＲＮＡウィルス（例えば、オルトミキソウィルス(orthormyxovirus)）に対するものであるが、その発現はタイプＩ  インターフェロン（ＩＦＮ）レセプターを有する全ての細胞中で誘導される。
【００１２】
Ｍｘタンパク質の遺伝子は、初期はウィルス感染に応答せず、むしろウィルスで誘導されたＩＦＮの上昇に応答して二次的に誘導されることが報告された。Bazzigher, L., et al., Virology, 186:154-160 (1992)。Ｍｘタンパク質の上昇は、急性及び慢性のウィルス感染症双方で存在する。Fernandez, M., et al., J. Infectious Diseases, 180:262-267 (1999)。Ｍｘタンパク質の誘導は、病気がウィルスの感染によるかまたは細菌の感染によるものかを決定するために感染症を患っている患者で使用されてきた。Halminen, M, et al., Pediatric Research, 41(5):647-650 (1997); Forster, J., et al., Acta Paediatr., 85:163-167 (1996); Chieux V., J. Virological Methods, 70:183-191 (1998);及びHaller et al., Rev. Sci. Tech. 17:220-230 (1998)、ならびに米国特許第５，１９８，３５０号(Horisberger)及び第６，１８０，１０２号(Hanai)。Ｍｘタンパク質の測定は、感染疾患を患っていることが知られている患者のインターフェロンのレベルを測定する方法として使用されてきた。米国特許第６，２００，５５９号(von Wussow)；von Wussow, P., et al., AIDS, 4(2):119-124 (1990), Nieforth, KA, et al., Clinical Pharmacology & Therapeutics, 59(6):636-646 (1996);及びOh, SK, J. Immunological Methods, 176:79-91 (1994)。Ｍｘタンパク質はまた、ワクチン接種に対する応答を決定するのにインターフェロン産生に関するマーカーとして使用されてきた。Roers, A., et al., J. Infectious Diseases, 169:807-813 (1994)。また、Ｍｘタンパク質レベルは自己免疫性による病気の際に上昇することが報告された。Rump, JA, Clin. Exp. Immunol., 101:89-93 (1995)。
【００１３】
このように、従来技術では、病気の兆候を示す患者ではまたはウィルス若しくはワクチンに暴露されたことが分かっている患者ではＭｘタンパク質のレベルが上昇することが開示される。従来技術では、Ｍｘタンパク質の測定が、最近ウィルスに暴露されたことが知られていなかったまたは最近ワクチン接種していなかった、ウィルス疾患の兆候のない動物での診断道具として有用であるかもしれないという示唆はない。
【発明の開示】
【００１４】
発明の要約
ここで、Ｍｘタンパク質が動物のウィルス感染の検出のためのスクリーニングパラメーターとして有用であることが見出された。一実施態様においては、本発明は、動物のウィルス感染の存在を決定する方法である。この実施態様によると、動物は、ウィルスまたは他の病気を引き起こす微生物に感染したことが分かっておらず、好ましくは、動物は、ウィルス感染に相応する臨床的徴候を示していない。動物のＭｘタンパク質のレベルを測定し、ウィルスを持たないことが知られている同種の動物のレベルと比較する。被検動物のＭｘタンパク質のレベルがウィルス感染がないことが知られている同種の動物で見出されるレベルを超えると、その被検動物にはウィルス感染が存在することが示される。
【００１５】
本発明の方法によるウィルス感染の検出は、Ｍｘレベルが非感染の、妊娠していない動物またはヒトでは非常に低く、感染してから数週間ではＭｘレベルが非常に高いという事実によって容易である。一般的に、動物の生産者は、存在するであろう疾患の症状を決定する期間、新たに到着した動物を隔離する。本発明の方法による試験により、感染の証拠が一般的に感染してから３〜４週間残るので、新たに到着した動物が到着前３〜４週間の期間中にウィルス感染したかどうかの目安が提供される。
【００１６】
別の実施態様においては、動物のＭｘタンパク質のレベルを、ウィルス感染していることが分かっている同種の動物のレベルと比較する。試験される動物のＭｘタンパク質のレベルが同種のウィルス感染した動物で見出されたレベルより低いと、被検動物のウィルス感染が存在しないことが示される。
【００１７】
他の実施態様においては、本発明は、被検動物のウィルス感染の存在または不存在を決定するためのキットである。この実施態様によると、キットは、試験サンプルを保持するための容器、試験サンプルと混合されると、オペレーターが試験サンプル中のＭｘタンパク質のレベルを目視で測定できるような、一以上の試薬、およびサンプル中のＭｘタンパク質を測定するための指示書を有する。好ましくは、指示書は、試験サンプル中のＭｘタンパク質のレベルに基づいてどのようにして動物のウィルス感染の存在または不存在を決定するかをさらに示す。
【００１８】
また、予想されなかったことに、Ｍｘタンパク質に加えてタイプＩインターフェロン誘導タンパク質(Type I Interferon-induced protein)が動物のウィルス感染の検出用のスクリーニングパラメーターとして有用であることが見出された。一実施態様においては、本発明は、動物のウィルス感染の存在を決定する方法である。この実施態様によると、動物は、ウィルスまたは他の病気を引き起こす微生物に感染したことが分かっておらず、好ましくは、動物は、ウィルス感染に相応する臨床的徴候を示していない。動物のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質のレベルを測定し、ウィルスを持たないことが知られている同種の動物のレベルと比較する。被検動物のタンパク質のレベルがウィルス感染がないことが知られている同種の動物で見出されるレベルを超えると、その被検動物ではウィルス感染が存在することが示される。
【００１９】
別の実施態様においては、動物のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質のレベルを、ウィルス感染していることが分かっている同種の動物のレベルと比較する。試験される動物のタンパク質のレベルが同種のウィルス感染した動物で見出されるレベルより低いと、被検動物のウィルス感染が存在しないことが示される。
【００２０】
他の実施態様においては、本発明は、被検動物のウィルス感染の存在または不存在を決定するためのキットである。この実施態様によると、キットは、試験サンプルを保持するための容器、試験サンプルと混合されると、オペレーターが試験サンプル中のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質のレベルを目視で測定できるような、一以上の試薬、およびサンプル中の当該タンパク質のレベルを測定するための指示書を有する。好ましくは、指示書は、試験サンプルのこのタンパク質のレベルに基づいてどのようにして動物のウィルス感染の存在または不存在を決定するかをさらに示す。
【００２１】
発明の詳細な説明
本発明の第一の態様は、動物のウィルス感染状態の決定方法である。本発明のこの態様によると、生体サンプルを試験動物から得、動物のＭｘタンパク質発現のレベルを、サンプル中のＭｘタンパク質のまたはＭｘタンパク質発現の指標のレベルを測定することによって測定する。試験動物のＭｘタンパク質発現のレベルを、同種のコントロール動物のレベルと比較する。この際、コントロール動物の感染状態は分かっている。試験動物のウィルス感染状態をこの比較によって決定する。
【００２２】
または、本発明は、試験動物から生体サンプルを得、さらにサンプル中のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質のまたは当該タンパク質の発現の指標のレベルを測定することによる動物のウィルス感染状態の決定方法である。試験動物の当該タンパク質のレベルを、同種のコントロール動物のレベルと比較する。この際、コントロール動物の感染状態は分かっている。試験動物のウィルス感染状態をこの比較によって決定する。
【００２３】
Ｍｘタンパク質に加えて、ウィルス感染の存在により上昇するいずれのタイプＩインターフェロン誘導タンパク質も本発明に適する。好ましくは、タイプＩインターフェロン誘導タンパク質は、下記タンパク質：２’，５’−オリゴアデニレートシンテターゼ、β２−ミクログロブリン、ＩＦＮ調節因子１、ユビキチン交差反応性タンパク質（「インターフェロン刺激遺伝子因子１７(interferon stimulated gene factor 17)」（「ＩＳＧ−１７」）としても知られている）の一である。最も好ましくは、Ｍｘタンパク質以外のタイプＩ誘導タンパク質は、ＩＳＧ−１７である。
【００２４】
実施例を含む、本発明の下記説明は、Ｍｘタンパク質によって詳述される。しかしながら、この説明は、前記段落で列挙したタンパク質を含む、他のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質に、一括して及びそれぞれ、適用できると理解されるべきである。
【００２５】
ゆえに、以下の説明で特記しない限り、Ｍｘタンパク質に関する説明は、「Ｍｘタンパク質または他のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質」であると解される。しかしながら、下記説明の後の特許請求の範囲は限定的なものである。ゆえに、特許請求の範囲でＭｘタンパク質に関する説明はＭｘタンパク質のみを意味し、特許請求の範囲でタイプＩインターフェロン誘導タンパク質に関する説明はＭｘタンパク質を包含し、さらに、特許請求の範囲でＭｘタンパク質以外のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質に関する説明はＭｘタンパク質を除外する。
【００２６】
試験される動物は、ウィルス感染に応答して、直接的または間接的に、Ｍｘタンパク質または他のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質が増加する種であればいずれのものでもよい。本発明の方法に適する動物としては、哺乳類、爬虫類、両生類、鳥類、及び魚類等の脊椎動物が挙げられる。本発明の方法に従ってウィルス状態について試験される哺乳類の例としては、ヒト、サル及び類人猿等の霊長目、ウマ及びサイ等の奇蹄目、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、ラマ、及びカバ等の偶蹄目、イヌ、ネコ、クマ、及びイタチ等の食肉目、アザラシ、アシカ等の鰭脚目、ウサギ及びノウサギ等のウサギ目、リス、ラット及びマウス等の齧歯目、クジラ、イルカ、及びネズミイルカ等のクジラ目、ならびにゾウ等の長鼻目の動物が挙げられる。
【００２７】
得られる生体サンプルは、Ｍｘタンパク質または他のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質のレベルが、ウィルス感染に応答して、直接的または間接的に、上昇する体液または組織であればいずれでもよい。適当な体液は、試験される動物のタイプによって異なるが、一般的に、乳汁、唾液、尿または鼻、眼、若しくは膣の分泌物、または全血、血漿若しくは血清等の体液が挙げられる。体液は、皮膚、胸腔若しくは腹腔、口腔由来の、または消化、呼吸、若しくは生殖系由来などの、滲出液または漏出液などの発病過程の一部として生産されるものを包含する。好適な組織の例としては、血球、生検サンプル、皮膚、及び口腔、泌尿生殖器系、呼吸系、または消化系由来等の細胞滲出液もまた挙げられる。
【００２８】
生体サンプルは、動物が、増加したレベルのＭｘタンパク質または他のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質を発現できるように十分遅いが、動物が、増加したレベルのＭｘタンパク質または他のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質をウィルス感染に応答してそれ以上は発現し続けないくらいには遅すぎないようなウィルスへの暴露後の期間で試験動物から得ることが好ましい。しかしながら、実際には、通常、試験動物がウィルスに暴露されたどうかは分からないので、試験時間は重要ではない。したがって、好ましい試験時間は決定することができないであろう。ウィルスに暴露した日が疑わしい場合には、Ｍｘタンパク質またはタイプＩインターフェロン誘導タンパク質の発現の増加が生じるように、試験日がその疑わしい日から十分たっているべきである。この日は、動物の種によって及び試験動物に感染したと疑われるウィルスによって異なるであろう。
【００２９】
サンプル中のＭｘタンパク質または他のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質の発現のレベルは、この測定がなされるものであればいずれの方法によって測定されてもよい。適当な方法としては、ＥＬＩＳＡ試験、Ｍｘタンパク質の機能によるアッセイ、またはウェスタンブロット等による、Ｍｘタンパク質自体を検出するものがある。また、適当な方法としては、ノーザンブロット、スロットブロット、またはＰＣＲ等による、Ｍｘまたは他のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質のｍＲＮＡの増加レベルを検出することがある。好ましい実施態様においては、Ｍｘまたは他のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質の発現のレベルを、例えば、ヒトの家庭用の妊娠診断キットで使用される方法と同様にして、Ｍｘタンパク質に対する抗体の結合性に基づいた、比色アッセイによってサンプル中に存在するＭｘタンパク質または他のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質のレベルを検出することによって測定する。
【００３０】
試験動物におけるＭｘタンパク質または他のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質の発現のレベルを、ウィルスの感染状態が分かっている同種のコントロール動物でのＭｘタンパク質または他のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質の発現のレベルと比較する。好ましくは、コントロール動物は、ウィルスに感染しておらず、妊娠の初期段階になく、したがって、Ｍｘタンパク質またの他のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質の発現が低い基準レベルである。好ましくは、コントロール動物は、履歴の分かっている(historic)コントロールである。
【００３１】
コントロール動物がウィルス陰性である、即ち、ウィルスに感染しておらず、ゆえにＭｘタンパク質または他のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質の発現のレベルが低いという好ましい場合には、陰性の試験結果は、その試験動物のＭｘタンパク質または他のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質の発現のレベルがコントロールのレベルを超えて有意に上昇しないというものである。このような場合の陰性の試験結果は、試験動物ではウィルス感染は存在しないことを示す。これに対して、Ｍｘタンパク質または他のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質の発現のレベルがコントロールのレベルを超えて有意に上昇するということは、試験動物がウィルスに感染していることを示す陽性の試験結果である。
【００３２】
本願の目的に対して、「Ｍｘタンパク質の発現または他のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質の発現のレベルがコントロールのレベルを超えて有意に上昇する」ということは、Ｍｘタンパク質のレベルが非感染動物で存在するレベルの少なくとも２倍であることである。多くの動物種では、Ｍｘタンパク質はウィルス感染が存在しない場合には発現しない。これらの動物では、Ｍｘタンパク質のレベルが検出されるということは有意な上昇であると考えられる。同様にして、多くの動物種では、Ｍｘタンパク質以外の一以上のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質も、ウィルス感染が存在しない場合には発現しない。ゆえに、このようなタンパク質のレベルが検出されるということは有意な上昇であると考えられる。
【００３３】
コントロール動物がウィルス陽性である、即ち、Ｍｘタンパク質発現の増加を刺激するウィルスに感染していることが分かっているというあまり好ましくない場合には、陰性の試験結果は、その試験動物のＭｘタンパク質発現のレベルがコントロールのレベルより有意に低くないという結果である。同様にして、ウィルス陽性のコントロール動物は、Ｍｘタンパク質以外のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質で使用されてもよい。このような場合の陰性の試験結果は、試験動物がウィルスに感染していることを示す。これに対して、Ｍｘタンパク質または他のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質の発現のレベルがコントロールのレベルより有意に低いということは、その試験動物がウィルス感染がないということを示す陽性の試験結果である。
【００３４】
Ｍｘタンパク質、さらには一以上の他のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質のレベルは、動物種によっては、妊娠期間中で及び自己免疫疾患の存在下で上昇することが決定された。これらの状態のいずれかの存在は、偽陽性の結果を引き起こす、即ち、Ｍｘタンパク質または他のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質が上昇して、ウィルス感染を示すことがある。
【００３５】
本発明のキットは、「免疫測定(immunometric)」または「サンドイッチ」アッセイとして知られているもの等の、酵素結合アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によることが好ましい。このようなアッセイは、リガンド（抗原など）を、干渉しないように異なるエピトープ部位でリガンドと複合体を形成する２以上のレセプター分子（抗体など）で「サンドイッチ」することを含む。このようなアッセイの例は、David et al.の米国特許第４，４８６，５３０号に記載される。他の好ましい別の実施態様においては、キットは、化学発光アッセイ、強化発光アッセイ(enhanced luminescence assay)、及びラジオイムノアッセイに基づくものであってもよい。好ましい実施態様においては、キットは、Ｍｘタンパク質等の、有益なタンパク質のエピトープに結合する抗体に結合する、スライドまたは複数の試験ウェル等の、試験表面を有するパッケージ、タンパク質の第二のエピトープに結合する標識された二次抗体を有する容器、タンパク質の基準濃度を有する標準サンプルを有する容器、標識された二次抗体と接触すると、存在するタンパク質の相対的な量が目視できるような試薬、および試験サンプルがウィルスが感染したまたは感染していない状態を示す量のＭｘタンパク質を含むかどうかを決定するためのキットの使用に関する指示書を有する。
【００３６】
コントロールに対する、試験サンプル中の、Ｍｘタンパク質または他のタイプＩインターフェロン誘導タンパク質の相対的なレベルを測定することによるウィルス感染状態を測定するための本発明のキットは、多くの異なる方法で配合されてもよく、これらの方法は本明細書の記載を読めば当業者には明らかであろう。本発明のキットのこれらの様々な配合は本発明に包含されると解される。
【００３７】
本願で列挙されたすべての文献及び特許は、参考によって本明細書中に引用される。
【００３８】
本明細書に記載される本発明のさらなる修飾、使用、および用途は、当業者には明らかであろう。このような修飾は下記特許請求の範囲に包含されるものである。
【国際調査報告】
2005529599.tif 000002
2005529599.tif 000003