(57)【要約】少なくとも１種の天然活性成分および製薬学的または化粧料学的に許容され得るビヒクルを有する局所的化粧品組成物が開示される。本発明の組成物を局所的に適用することを含む皮膚、毛髪および／または爪の審美的外観を向上させるための方法もある。
2005519058.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジノステマ、ココナッツ水、アザディラクタおよびロデオーラからなる群より選択される少なくとも１種の植物成分、および
製薬学的にまたは化粧料学的に許容可能なビヒクル
を含む局所用組成物であって、
前記植物成分がアザディラクタ種子由来であるとき、前記組成物は、ジノステマ、ココナッツ水およびロデオーラからなる群より選択される少なくとも１種の他の成分をさらに含む局所用組成物。
【請求項２】
前記少なくとも１種の植物成分が前記組成物の全重量の約０．０００１ｗｔ％から約５０ｗｔ％までの量で存在する請求項１記載の組成物。
【請求項３】
前記少なくとも１種の植物成分が前記組成物の全重量の約０．００１ｗｔ％から約１０ｗｔ％までの量で存在する請求項１記載の組成物。
【請求項４】
前記少なくとも１種の植物成分が前記組成物の全重量の約０．０１ｗｔ％から約５ｗｔ％までの量で存在する請求項１記載の組成物。
【請求項５】
前記少なくとも１種の植物成分が前記組成物の全重量の約０．１ｗｔ％から約３ｗｔ％までの量で存在する請求項１記載の組成物。
【請求項６】
前記少なくとも１種の植物成分がジノステマである請求項１記載の組成物。
【請求項７】
ジノステマが前記組成物の全重量の約０．００１ｗｔ％から約１０ｗｔ％までの量で存在する請求項６記載の組成物。
【請求項８】
前記少なくとも１種の植物成分がココナッツ水である請求項１記載の組成物。
【請求項９】
前記ココナッツ水が前記組成物の全重量の約０．００１ｗｔ％から約１０ｗｔ％までの量で存在する請求項８記載の組成物。
【請求項１０】
前記少なくとも１種の植物成分が前記組成物の全重量の約０．００１ｗｔ％から約１０ｗｔ％までの量で存在するニーム種子細胞培養またはその抽出物である請求項１記載の組成物。
【請求項１１】
前記少なくとも１種の植物成分がロデオーラである請求項１記載の組成物。
【請求項１２】
ロデオーラが前記組成物の全重量の約０．００１ｗｔ％から約１０ｗｔ％までの量で存在する請求項１１記載の組成物。
【請求項１３】
前記植物成分が、ジノステマ、ココナッツ水、アザディラクタおよびロデオーラである請求項１記載の組成物。
【請求項１４】
前記ビヒクルが、水性系、グリセリン、Ｃ1-4 アルコール、脂肪アルコール、脂肪エーテル、脂肪エステル、ポリオール、グリコール、植物油、鉱油、リポソーム、薄層状油脂材料、シリコーン油、水、およびそれらのいずれかの組み合わせからなる群より選択される１以上の成分である請求項１記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物が、エアロゾルスプレー、クリーム、エマルジョン、固体、液体、分散液、フォーム、ゲル、ローション、ムース、軟膏、粉末、パッチ、ポマード、溶液、ポンプスプレー、スティックおよびタオレットからなる群より選択される製品形態にある請求項１記載の組成物。
【請求項１６】
前記植物成分がジノステマ、ココナッツ水、およびロデオーラからなる群より選択される請求項１記載の組成物。
【請求項１７】
化粧料学的に有効量の請求項１の組成物を皮膚、毛髪および／または爪に局所的に適用することを含む皮膚、毛髪および／または爪の審美的外観を改善する方法。
【請求項１８】
前記改善が、年齢による老化、ホルモンによる老化、および／または光による老化の皮膚科学的徴候の減少；皮膚のもろさの減少；くぼみの大きさの減少；コラーゲンおよび／またはエラスチンの消失の防止および／または回復；エストロゲンの不均衡の影響の改善；皮膚の萎縮症の防止；しわおよび／またはくぼみの外観の防止および／または減少；色素過剰症の防止、減少および／または治療；皮膚の色調、輝き、透明さおよび／または張りの向上；皮膚のたるみの防止、減少および／または改善；アンチオキシダント活性の促進；皮膚の硬さ、肉付き、しなやかさおよび／またはやわらかさの改善；プロコラーゲンおよび／またはコラーゲン産生の改善；皮膚のテキスチャーの向上および／または再組織化の促進；皮膚障壁修復および／または機能の改善；皮膚輪郭の外観の改善；皮膚の光沢および／または輝きの回復；疲労および／またはストレスの皮膚科学的徴候の最小化；環境によるストレスに対する抵抗；老化および／または更年期により減少した皮膚内の栄養分の補充；皮膚細胞間の連絡状態の改善；細胞の増殖および／または増幅の向上；老化および／または更年期により減少した皮膚細胞代謝の向上；細胞の老化の遅延；皮膚細胞の老化を促進する皮膚中の酵素の阻害；皮膚の乾燥の最小化および／または皮膚の保湿の向上；皮膚の脱色の最小化；細胞交代の促進および／または加速；皮膚の厚さの増加；皮膚の弾性および／または弾力性の向上；剥脱の強化；グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）、コラーゲンおよび／またはエラスチンの消失の防止および回復；微小循環の向上；脂肪性浮腫形成の減少および／または防止；およびアクネ形成の減少；およびそれらのいずれかの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１種の改善である請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
前記改善が、年齢による老化、ホルモンによる老化、および／または光による老化の皮膚科学的徴候の減少；しわおよび／またはくぼみの外観および／または深さの防止および／または減少；皮膚の色調、輝き、透明さおよび／または張りの向上；皮膚の硬さ、肉付き、しなやかさおよび／またはやわらかさの改善；および皮膚のテキスチャーの向上および／または再組織化の促進；およびそれらのいずれかの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１種の改善である請求項１７記載の方法。
【請求項２０】
前記改善が、疲労および／またはストレスの皮膚科学的徴候の最小化；環境によるストレスに対する抵抗；皮膚の伝染病発生に対する抵抗；汚染および／または温度変化に対する抵抗；皮膚の乾燥の最小化および／または皮膚の保湿の改善；皮膚の弾性および／または弾力性の向上；および汚染の皮膚に対する、皮膚の伝染病の発生に対する、温度変化および／または太陽の照射に対する効果の改善；およびそれらのいずれかの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１種の改善である請求項１７記載の方法。
【請求項２１】
前記組成物がジノステマ、ココナッツ水、アザディラクタ、およびロデオーラを有する請求項１７記載の方法。
【請求項２２】
化粧料学的に有効量の請求項１６記載の組成物を皮膚、毛髪および／または爪に局所的に適用することを含む皮膚、毛髪および／または爪の審美的外観を改善する方法。
【請求項２３】
前記改善が、疲労および／またはストレスの皮膚科学的徴候の最小化；環境によるストレスに対する抵抗；皮膚の伝染病発生に対する抵抗；汚染および／または温度変化に対する抵抗；皮膚の乾燥の最小化および／または皮膚の保湿の改善；皮膚の弾性および／または弾力性の向上；汚染の皮膚に対する、皮膚の伝染病の発生に対する、温度変化および／または太陽の照射に対する効果の改善；およびいずれかの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１種の改善である請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
前記少なくとも１種の植物成分が、前記組成物の全重量の約０．０００１ｗｔ％から約５０ｗｔ％までである請求項２２記載の方法。
【請求項２５】
皮膚科学的老化の徴候を防止し、改善し、阻害し、および／または減少させるのに有効な量の請求項１の組成物を皮膚、毛髪および／または爪に局所的に適用することを含む皮膚、毛髪および／または爪を治療する方法。
【請求項２６】
前記老化の徴候が、疲労、生理学的ストレス、環境上のストレス、汚染、温度変化、皮膚の伝染病発生、日光の照射およびそれらのいずれかの組み合わせからなる群由来の１以上に関連する請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
前記老化の徴候が、疲労、生理学的ストレス、および環境上のストレスからなる群より選択される１以上の徴候である請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
前記老化の徴候が、汚染、皮膚の伝染病発生、温度変化および／または日光の照射からなる群より選択される１以上の徴候と関連する請求項２６記載の方法。
【請求項２９】
有効量の請求項１記載の組成物を皮膚に局所的に適用することを含むストレスを受けた皮膚を治療する方法。
【請求項３０】
有効量の請求項１６記載の組成物を皮膚に局所的に適用することを含むストレスを受けた皮膚を治療する方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
発明の分野
本発明は、天然植物材料に由来する活性成分を有する局所的組成物に関する。特に、本発明は、皮膚、毛髪および／または爪の審美的外観を改善する局所的組成物に関する。とりわけ、本発明は、局所的組成物を用いる方法に関する。
【０００２】
先行技術の記載
植物および植物の種子由来の活性成分が、一般的に、多数の医療用、治療用および化粧用の目的のために局所的組成物において用いられている。そのような活性成分は、種子、針葉、葉、根、樹皮、球果、茎、根茎、カルス細胞、プロトプラスト、器官および器官系、および分裂組織のような植物の様々の部分から獲得され得る。活性成分は、様々の形態のそのような構造に含まれる。そのような形態には、純粋かまたは半純粋な成分、固体または液体の抽出物または誘導体、または固体の植物体が含まれる。植物体には、全体か、切り刻まれているか、粉砕されているか、または破砕されているか、のような様々の従属的形態が含まれ得る。
【０００３】
植物および植物の種子から誘導される活性成分を用いるとき一般的に遭遇する問題は、それら成分が天然に存在するレベルが比較的低いことである。そのような低いレベルでは、しばしば、所望されるか有用な量の活性成分を獲得するために処理される植物の葉／組織または種子の量は、比較的多量に必要である。希少な植物または植物の種子については、そのような多くの量は、獲得するのに利用性を欠くかまたは困難であり得る。
【０００４】
老化を抑え、水和させ、皮膚の質感を高める利益を提供する皮膚に対して局所的に適用され得る製品を開発することについて、化粧品産業では、現在活発な関心が存在する。皮膚の外観を良好にする化粧品の需要は高まっている。消費者は、小じわ、（目立つ）しわ、皮膚した乾燥およびたるんだ皮膚のような、年齢により、ホルモンのために、および／または光により老化した皮膚の徴候を和らげ、または遅延させることに関心を持っている。老化のプロセスの間、皮膚のつや、すなわち皮膚の色調および外観は、内発的な老化および／または日光への暴露のためにゆっくりと劣化する。老化した皮膚のための治療として美容整形が用いられ得るが、しかし、そのような処置は、費用がかかり、通常、麻酔と手術に関連するリスクを伴う。代わりに、老化防止の利益を提供することが可能である化粧品は、製造者と消費者の両方に極めて望ましい。
【０００５】
消費者の皮膚をより若く、よりしわが少なく見せるのに役に立つことに関する化粧品の数は、堅実に増加している。通常、そのような製品は、活性成分として有機酸を含む。そのような老化防止活性成分には、例えば、α−ヒドロキシ酸（すなわち、乳酸塩、グリコール酸塩、クエン酸塩）、β−ヒドロキシ酸（すなわち、サリチル酸塩、５−ｎ−オクタノイルサリチル酸塩）およびレチノイド（レチノイン酸、レチノール）が含まれる。それらの老化防止活性成分は、それらがしばしば、適用後の茶色への変色、痛み、かゆみまたは窮屈感により特徴付けられる消費者の不快感と関連することにおいて顕著な不利益を有することが知られている。化粧品産業においては、皮膚に対する老化効果を遅くするかまたは阻止する製品についての、より具体的には、望ましからぬ副作用無しにそのような効果を産み出す製品についての一般的な必要性が残っている。
【０００６】
特に、化粧品産業における需要と制限の前述の検討の観点において、活性成分として天然成分を用いる、老化防止と皮膚の質感向上の利益を有する局所的に適用される化粧品組成物についての必要が残っている。
【０００７】
植物エキスは通常、治療用途を有する様々の薬草組成で用いられる。例えば、特許文献１は、ジノステマ・ペンタフィラムのエキスおよび他の植物エキスを有する薬草エキス系組成物を投与することを含む抗癌治療に関する。ヂャンに対する特許文献２もまた、ジノステマ・ペンタフィラムのエキスを含む薬草エキス系組成物に関する。
【０００８】
アザディラクタ・インディカ、すなわち、ニームノキならびにセンダン科の他の植物のエキスは、殺昆虫活性を有することが知られている。それらのエキスの多くの主たる活性成分であるアザディラクチンは、潜在的な昆虫成長調節剤であり、抑止力を提供することが示されている市販の殺昆虫剤において有用なテトラノルトリテルペノイドタイプのリミノイドである。ニーム種子材料からアザディラクチン濃縮物を製造するための方法は、当該技術において公知である。ホロバック−ケラーらに対する特許文献３は、アザディラクタ・インディカの細胞培養によりアザディラクチンを製造するための方法に関する。
【０００９】
皮膚の治療のために市販されている様々の老化防止化粧品にもかかわらず、活性成分として天然成分を用いる皮膚、毛髪および／または爪に対する老化防止または若返りの利益を提供する有効な局所的に適用される化粧品組成物についての必要が存在する。
【特許文献１】米国特許第６，１６８，７９５号
【特許文献２】米国特許第５，９１０，３０８号
【特許文献３】米国特許第５，６９８，４２３号  発明の概要  本発明の目的は、天然の植物材料から有効なレベルの活性成分を与える局所用化粧品組成物を提供することである。
【００１０】
本発明のもう１つの目的は、製薬学的に、または化粧料学的に（ｃｏｓｍｅｔｉｃａｌｌｙ）許容され得るビヒクル中に天然植物活性成分または天然植物活性成分の混合物を有する局所的化粧品組成物を提供することである。
【００１１】
本発明のさらなる目的は、そのような組成物を局所的に適用するための方法を提供することである。
【００１２】
本発明のさらなる目的は、１以上の天然植物活性成分を有する組成物を局所的に適用することにより皮膚、爪および／または毛髪に一定レベルの活性成分を与えるための方法を提供することである。
【００１３】
本発明の以上のおよび他の目的および利点ならびにその均等の対象は、単一の天然植物成分または天然植物成分の混合物を有する化粧品組成物および局所的適用のためのそのような組成物の使用により達成される。本発明の化粧品組成物は、以下の群：ジノステマ；ココナッツ水；アザディラクタ；またはロデオーラ由来の活性植物性成分および製薬学的にまたは化粧料学的に許容され得るビヒクルを有する。好ましくは、本発明の組成物がニーム種子培養細胞としてアザディラクタを有するとき、組成物はまた、以下の：ジノステマ、ロデオーラおよびココナッツ水から選択される少なくとも１種の付加的な活性成分も有する。本発明の付加的な組成物は、以下の群：ジノステマ、ココナッツ水およびロデオーラ由来の植物成分および製薬学的または化粧料学的に許容可能なビヒクルを有する。本発明の組成物を局所的に適用することにより皮膚、毛髪および／または爪の審美的外観を改善する方法が提供される。
【００１４】
発明の詳細な説明
本発明は、ストレスタンパク質、特に熱ショックタンパク質に対して皮膚、毛髪および／または爪での細胞の応答を変えることにより皮膚、毛髪および／または爪を若返らせるかまたは亢進させる天然植物成分または天然植物成分の混合物を有する局所的組成物を提供する。本発明の組成物は、様々の老化防止および皮膚の質感向上の利益を提供する。
【００１５】
皮膚、毛髪および／または爪の審美的外観の向上は、本発明の組成物の局所的適用により達成される。そのような組成物は、単一の天然植物成分かまたは天然植物成分の混合物を有する。
【００１６】
植物成分は、好ましくは、以下の：ジノステマ；ココナッツ水；アザディラクタ（細胞培養、培養液および／またはエキスを含むニーム）；およびロデオーラを含む。植物成分の特に好ましい混合物は、アザディラクタおよび他の成分特にジノステマ、ココナッツ水および／またはロデオーラの１以上である。本発明の組成物中の活性植物性成分の量は、組成物の全重量の約０．０００１重量パーセンテージすなわち重量パーセント（ｗｔ％）から約５０ｗｔ％まで、好ましくは約０．００１ｗｔ％から約１０ｗｔ％まで、より好ましくは約０．０１ｗｔ％から約５ｗｔ％までおよびさらにより好ましくは約０．１ｗｔ％から約３ｗｔ％までである。
【００１７】
ニームは、センダン科の植物アザディラクタ・インディカに由来する。ニーム種子細胞は、本発明での使用にとって特に好ましい。と言うのは、それは多果結実性であり、広い範囲の活性成分を産生するからである。本発明において、ニーム種子細胞は、一般的に、種子、好ましくは種子胚由来の細胞を抽出し、次いで培養し、インビトロでそれをホモジナイズすることにより得られる。このプロセスは、種子細胞の量と数を顕著に増加させる。好ましくは、種子細胞は、未分化状態を促進する培地中で培養される。より好ましくは、ホモジナイジングの後、種子細胞および植物細胞構成成分は保存される。ニーム種子細胞により産生される活性成分の例には、限定されないが、１７−ベータ−ヒドロキシアザディラジオン（ｈｙｄｒｏｘｙａｚａｄｉｒａｄｉｏｎ）；１７−エピアザディラジオン；１アルファ−メトキシ−１，２−ジヒドロアザディラジオン；１ベータ，２ベータ−ジエポキシ−アザディラジオン；２２，２３−ジヒドロ−２３ベータ−メトキシ−アザディラジオン，７−デスアセチル−ゲデュニン；アザディラクチン（ａｚａｄｉｒａｃｈｔｉｎ）；アザディロン（ａｚａｄｉｒｏｎｅ）；エポキシアザディラジオン；メルデニン（ｍｅｌｄｅｎｉｎ）；メリアントリオール（ｍｅｌｉａｎｔｒｉｏｌ）；ニモリシノール（ｎｉｍｏｌｉｃｉｎｏｌ）；およびベピニン（ｖｅｐｉｎｉｎ）が含まれる。１以上のニーム種子細胞およびニーム種子細胞培養液を有する局所用組成物に対する教示は、２００１年１１月９日に出願されたともに係属する「皮膚を若返らせる利点を有する局所用化粧品組成物」という表題の出願において示され、それは、参照により本明細書に組み込まれる。
【００１８】
ニーム種子細胞培養液は、ニーム種子から単離された細胞の組織培養により調製される。ニーム種子細胞は、適切な栄養および成分を含む組織培養培地中で培養される。このプロセスは、高速の細胞の生長およびニーム種子細胞由来の重要な活性化合物の産生を提供する。植物組織培養の形態の細胞生物工学の使用は、本発明のその成分の標準化された予測可能に高い潜在力の供給を提供する。本発明のインビトロでの研究は、ニーム種子細胞培養液がケラチノサイトの細胞増殖を向上させ、繊維芽細胞の代謝を増加させ、皮膚の色素沈着を減少させ、前膠原質合成を増加させ、エストロゲンレセプターに有効に結合することを示した。ニーム種子培養／培養液またはその抽出液の好ましい量は、組成物の全重量の約０．００１ｗｔ％から約１０ｗｔ％までである。ニーム種子細胞培養液は、組織培養されたニーム種子細胞および培養培地を有する。
【００１９】
ジノステマは、キュウリの科の成員である。それはまた、五葉ヤクヨウニンジン、ジャオグラン（Ｊｉａｏｇｕｌａｎ）または南方ヤクヨウニンジンとしても知られる。それは、伝統的に、中国華南中央部（Ｓｏｕｔｈ  Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｃｈｉｎａ）の山岳領域で成長してきた。この薬草は、ヤクヨウニンジンとして一般的に知られているものとは異なる植物である。それは、ヤクヨウニンジンにおいて見出されるニンジンサポニン（ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）と同様で、ある種の場合には同一であるが、ヤクヨウニンジンにおいて見出されるレベルより数倍高いレベルで見出される「ジペノシド（ｇｙｐｅｎｏｓｉｄｅ）」と称されるサポニンの豊富な供給源である。それらのサポニンは、アンチオキシダント効果または細胞保護効果を有することが示されている。ジノステマ（ジャオグラン）は、粉末形態として購入される。本発明の化粧品組成物において、ジノステマの好ましい量は、組成物の全重量に基づいて約０．００１ｗｔ％から約１０ｗｔ％までである。
【００２０】
ココナッツ水は、液体または粉末形態、特に凍結乾燥された形態で存在し得る。本発明の化粧品組成物において、ココナッツ水の好ましい量は、組成物の全重量に基づいて約０．００１ｗｔ％から約１０ｗｔ％である。ココナッツ水は、ココナッツの中央に存在する水である。ココナッツ果実が熟すると、その水は、「乾ききってしまう」すなわち、植物／果実により利用されてしまう。
【００２１】
ロデオーラは、粉末形態として購入される。本発明の化粧用組成物において、ロデオーラの好ましい量は、組成物の全重量に基づいて約０．００１ｗｔ％から約１０ｗｔ％までである。
【００２２】
本発明は、植物の種子を含む上記植物供給源に由来する医療用、治療用および化粧用活性成分の有効なデリバリーを提供する。種子は、典型的には、種皮、および胚乳により取り囲まれている胚を有する。植物種子細胞は、主に、胚の組織から取り出される。植物の「種子でない」部分（すなわち根茎）に位置する胚細胞もまた本発明における使用について想定されている。種子細胞の全体（すなわち、全構成体（ｅｎｔｉｒｅ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｃｙ））を提供することが好ましい。全種子細胞は、広い範囲の植物細胞構成要素をもたらすために細胞壁の破壊すなわち破砕を通して全壊される。次いで、植物種子細胞ならびに他の植物体または植物体の混合物は、製薬学的にまたは化粧料学的に許容可能なビヒクルおよび／または局所的組成物に含まれる。
【００２３】
植物種子細胞は、しばしば、その植物のいずれの治療用、化粧用または医療用活性成分も含む全ての植物細胞構成成分を有するかまたは獲得する、最も高い潜在力を有する。最も高い潜在力を有する植物種子細胞は、実質的に分化していないものである。本明細書で用いられる、「実質的に分化していない」という用語には、特定の機能または化学成分を有する葉細胞、根細胞、木部および／または師部細胞のような特定の植物細胞にこれから分化しなければならない種子細胞（未分化種子細胞）；種子細胞が、分化していないものと実質的に等価である広い範囲の植物細胞構成成分を保持するような限定された程度まで分化した細胞（近似未分化細胞（ｎｅａｒ  ｕｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ  ｃｅｌｌｓ））；および未分化種子細胞に脱分化した種子細胞（脱分化種子細胞）が含まれる。言い換えれば、「実質的に分化していない」植物種子細胞と言う用語には、未分化種子細胞、近似未分化種子細胞および脱分化種子細胞が含まれる。基本的には、それら３つのタイプの種子細胞は多能性であり、広い範囲の植物細胞構成成分を示す。本発明において、「植物的（ｂｏｔａｎｉｃａｌ）」および「植物（ｐｌａｎｔ）」と言う用語は、同義に用いられる。
【００２４】
脱分化とは、分化した種子細胞が未分化または近似未分化したとみなされ得る程度までの分化した種子細胞における分化のレベルの逆行を称する。分化の逆行は、一般的に、種子細胞内の治療用、化粧用および医療用活性成分を含む植物種子構成成分の範囲および出現レベルを高める。
【００２５】
脱分化に影響し得る条件は、養分組成（上記参照）、温度、光または光の欠如、ガス空間（ｇａｓ  ｈｅａｄｓｐａｃｅ）組成、操作方式および持続時間が含まれる。光条件には、天然光（広い波長または周波数のスペクトル）、限定されているかもしくは狭い波長または周波数のスペクトル、または無光（暗黒）が含まれ得る。光はまた、強度でも変化し得る。ガス空間組成は、酸素、二酸化炭素およびエチレン（ならびに他のガス）の含有量またはそれらの欠如について変化し得る。操作モードは、バッチ相、半バッチ相、連続相およびそれらの複相のようなプロセス操作について変化し得る。例えば、細胞生長／増殖と活性成分の生合成のための分離相が可能である。持続時間は、時間に従って変化し得る。
【００２６】
培養とは、一般的に、適切な養分培地への植物種子細胞の暴露を称する。培養は、養分培地に種子全体または胚乳および胚のような種子の部分を加えることにより実施され得る。細胞は、液体、半固体および固体養分培地内で培養され得る。養分培地は、細胞の生長、細胞の代謝および増殖、細胞の維持、活性成分の生合成または前述の組み合わせを高めるための塩、養分、ホルモンおよび誘発剤（ｅｌｉｃｉｔｏｒ）により製剤され得る。有用な培地組成の例は、米国特許第６，１２７，１８１号の表４および米国特許第５，４０７，８１６号の例１から９に記載され、それらの例は、参照により本明細書に組み込まれている。
【００２７】
植物種子細胞を培養し、脱分化するための方法は、米国特許第５，４０７，８１６号、第５，８８５，８２６号および第６，１２７，１８１号に開示され、それらは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【００２８】
ホモジナイジングとは一般的に、植物種子細胞の壁の破壊または破砕を称する。ホモジナイジングは、種子細胞からの放出を促進することにより治療用、化粧用および医療用活性成分を含む種子細胞構成成分の利用性を高める。ホモジナイジングは、当該技術で公知のいずれかの手段もしくは方法により、またはやはり当該技術において公知の凍結−解凍技術により細胞を機械的に破砕することにより実施され得る。
【００２９】
植物種子細胞を保存するとは、一般的に、所望の活性成分の効能が本発明の局所的組成物に組み込む前に実質的になくなってしまわないような条件の下で種子細胞を維持することを称する。保存は、本発明には必須ではない。と言うのは、養分培地、すなわち、培養液中の種子細胞は、直接局所的に適用され得るからである。実際的な問題として、保存は、品質を保証し、製造規模での培養後で局所的組成物の製造前の損傷を防止ために重要である。
【００３０】
保存は、冷凍、低いｐＨ、すなわち約４未満、好ましくは約３．６から約４．０での貯蔵のような当該技術で公知のいずれかの手段により達成され得る。好ましくは、種子細胞は、低いｐＨの養分培養液中で維持し、冷凍することにより保存される。
【００３１】
有利には、実質的に分化していない植物種子細胞は、本発明の組成物を形成するために化粧料学的に許容され得るビヒクルと混合される。細胞は、養分培地から分離され、ビヒクルと混合されうるものであり、より好ましくは、本発明の細胞および／または他の天然植物活性成分と養分培地は、ビヒクル内で一緒に混ぜ合わせられる。代わりに、本発明の組成物は、種子細胞を含む養分培養液が直接局所的に適用され得るように追加のビヒクル無しの養分培地中の細胞の形態をとり得る。培養液は、好ましくは、２０ｗｔ％植物種子細胞である。しかしながら、より高いかより低い植物種子細胞含有量を有する培養液も本発明の範囲にある。
【００３２】
本発明の活性成分の使用は、個々にまたは呼応して、多数の経路によりストレスに対する身体の天然の防御機構を高める。ストレスにより誘発される損傷から皮膚、毛髪および爪に対する保護が提供され、自然な再生による回復を通して真の老化防止の利益が得られる。本発明の植物性活性成分を有する組成物は、ストレスに耐久するかまたはストレスを均衡させる利益を提供し、そのようにして、皮膚、毛髪および爪のストレスに誘発された早期の老化を防止し、同時に、真の老化を防止する皮膚、毛髪および爪のケアの利益を提供する。
【００３３】
インビトロでの研究は、個別にか組み合わせでかのいずれかで、ジノステマ、アザディラクタ、ロデオーラおよびココナッツ水を含む本発明の組成物が、天然のストレス防御機構により皮膚、毛髪および爪に対して回復効果を提供することを示した。より具体的には、それらの活性成分は、インビトロでのレポーター系細胞アッセイ（ｒｅｐｏｒｔｅｒ  ｂａｓｅｄ  ｃｅｌｌ  ａｓｓａｙ）で、ストレスタンパク質、特に熱ショックタンパク質の産生を増加させる。しかしながら、それらは、天然で高いレベルの熱ショックタンパク質を有する細胞内の熱ショックタンパク質のレベルを増加させない。本発明の活性成分はまた試験される量で毒性がなく、アポトーシスを誘発しない。研究は、熱ショックタンパク質は、ストレスに対する応答において制御を超えて増加することを示した。活性成分は、生理学的な必要への応答においてストレスに対する自然な防御としてストレスタンパク質を上方に調節する。加えて、ジノステマは、予想外にも、インビトロで細胞のＡＴＰレベルの上昇をもたらし、したがって、活性化効果をもたらす。したがって、細胞は、攻撃される前にストレスに対する状態調整を通して保護され得るし、および／または、細胞は、先にあった攻撃から回復するように刺激され得る。言い換えれば、本発明が、例えば、皮膚のケアと連結して用いられるとき、本発明はストレスを受けた皮膚のトリートメントを提供するのみならず、毎日の皮膚のケアの養生法の一部ともなり、本発明はまた、ストレス誘発因子に反応しないように皮膚を「予め状態調整もする」。「ストレス」は、汚染、温度変化、およびＵＶ照射のような内因性および／または外因性要因により引き起こされるバランスの崩れも含むことを意図している。ストレスを受けた皮膚の状態の例には、限定されないが、まだらの皮膚、目の下の黒ずみ、敏感になっている皮膚および伝染病の発生が含まれる。敏感になっている皮膚は、ストレスおよび他の外傷に対して特により反応性になっている。
【００３４】
本発明の活性成分は、皮膚、爪、口唇および／または毛髪の医療の必要な状態および／または化粧の必要な状態を防止し、阻止し、改善し、減少させ、または減衰させることを含む治療においてさらに有用である。そのような状態には、一般的には、限定されないが、アクネ、乾癬、湿疹、脂漏、皮膚炎、もろい皮膚と毛髪、毛髪の消失、多毛、酒さ、かゆみ、べんち、いぼ、うおのめ、乾燥した皮膚、あかぎれのある皮膚、ふけ、皮膚の傷、老齢によるしみ、敏感になっている皮膚、色素過剰症または色素欠乏症、薄い皮膚（ｔｈｉｎ  ｓｋｉｎ）、脂肪性浮腫、皮膚線条、目の下のくま、そばかす、黄化、はだあれ、角化症、炎症、脱色、皮膚の萎縮症、皮膚のくぼみ、しわ、過形成、クモ脈（毛細血管拡張症）、毛髪の消失、あざ、大きくなったくぼみ、繊維症、ひやけ、皮膚科学的老化（年齢による老化、ホルモンによる老化および／または化学性の老化）、ウイルスの感染、真菌の感染、細菌の感染、およびそれらのいずれかの組み合わせが含まれる。本発明の活性成分はまた、皮膚、爪、および毛髪の一般的健康、活力および外観を高めることについても有用であり得る。
【００３５】
活性成分を有する局所的組成物は、皮膚の審美的および／または化粧による外観を向上させ得る。そのような改善は、以下のいずれかにおいて明示され得る：例えば、年齢による老化、ホルモンによる老化、および光による老化による老化の皮膚科学的徴候の減少；皮膚のもろさの減少；くぼみの大きさの減少；コラーゲンおよび／またはエラスチンの消失の防止および／または回復；エストロゲンの不均衡の影響の改善；皮膚の萎縮症の防止；小じわおよび／または小さなくぼみを含むしわおよび／またはくぼみの防止および／または外観および／または深さの減少；色素過剰症の防止、減少および／または治療；皮膚の色調、輝き、透明さおよび／または張りの向上；皮膚のたるみの防止、減少および改善；アンチオキシダント活性の促進；皮膚の硬さ、肉付き、しなやかさおよび／またはやわらかさの改善；プロコラーゲンおよび／またはコラーゲン産生の改善；皮膚のテキスチャーの向上および／または再組織化の促進；皮膚障壁修復および／または機能の改善；皮膚輪郭の外観の改善；皮膚の光沢および／または輝きの回復；例えば、皮膚の伝染病発生のような疲労とストレスの皮膚科学的徴候の最小化および／または、例えば汚染および／または温度変化のような環境によるストレスに対する抵抗；老化および／または更年期により減少した皮膚内の必須栄養分および／または構成成分の補充；皮膚細胞間の連絡状態の改善；細胞の増殖および／または増幅の向上；老化および／または更年期により減少した皮膚細胞代謝の向上；細胞の老化の遅延；皮膚細胞の老化を促進する皮膚中の酵素の阻害；皮膚の乾燥の最小化および／または皮膚の保湿の向上；目のくまを含む皮膚の脱色の最小化；細胞交代の促進および／または加速；皮膚の厚さの増加；皮膚の弾性および／または弾力性の向上；アルファヒドロキシ酸または他の剥脱剤を使用するかしない剥脱の強化；グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）、コラーゲンおよび／またはエラスチンの消失の防止および回復；微小循環の向上；脂肪性浮腫形成の減少および／または防止；およびアクネ形成の減少。
【００３６】
特に、本発明の植物活性成分を有する局所的組成物は、皮膚の審美的外観、健康および活力を向上させ得る。そのような向上は、以下の少なくとも１つで明示され得る：コラーゲンおよび／またはエラスチンの消失の防止および／または回復；皮膚の質感の向上；皮膚の色調、透明感および／または張りの向上；細胞交代の促進／加速；および皮膚の厚さの強化。
【００３７】
本発明の局所的組成物は、いずれか適切な製品形態で製剤化され得る。そのような製品形態には、限定されないが、エアロゾルスプレー、クリーム、分散液、エマルジョン、フォーム、ゲル、液体、ローション、ムース、軟膏、パッチ、ポマード、粉末、ポンプスプレー、固体、溶液、スティック、およびタオレットが含まれる。
【００３８】
本発明の組成物は好ましくはビヒクルを含む。有用なビヒクルは、局所的適用にとって製薬学的または化粧料学的に許容され得るものである。有用なビヒクルには、限定されないが、１以上の水性系、グリセリン、Ｃ1-4 アルコール、脂肪アルコール、脂肪エーテル、脂肪エステル、ポリオール、グリコール、植物油、鉱油、リポソーム、薄層状油脂材料、シリコーン油、水またはそれらのいずれかの組み合わせが含まれる。
【００３９】
加えて、本発明による組成物のビヒクルは、均質相製剤の形態で、または限定されないが、水中油型、油中水型および３相を含む多相エマルジョンを含むエマルジョンの形態で存在し得る。それらのエマルジョンは、薄いローション（それはまたスプレーまたはエアロゾルデリバリーにとっても適切であり得る）、クリーム状ローション、薄いクリームおよび濃いクリームを含む広い範囲のコンシステンシーをカバーし得る。他の適切な局所的キャリヤには、油およびアルコールのような無水液体溶媒；水性単一相液体溶媒（例えば、水−アルコール溶媒系）；無水固体および半固体（ゲルおよびスティックのような）；および水性ゲルおよびムース系が含まれる。本発明において有用なビヒクル系の例は、以下の４つの参照文献に記載され、それらの全ては参照によりその全体が本明細書に組み込まれる：「日光向け製品処方集」、化粧品＆トイレタリー、第１０５巻、１２２〜１３９ページ（１９９０年１２月）；「日光向け製品処方集」、化粧品＆トイレタリー、第１０２巻、１１７〜１３６ページ（１９９７年３月）；１９９０年１０月２日に発行されたフィグエロアらに対する米国特許第４，９６０，７６４号；および１９８１年３月３日に発行されたフクダらに対する米国特許第４，２５４，１０５号。
【００４０】
任意に、本発明の局所的組成物は、１以上の麻酔剤、抗アレルギー剤、抗真菌剤、抗微生物剤、抗炎症剤、アンチオキシダント、防腐剤、キレート剤、着色料、脱色剤、エモリエント剤、乳化剤、剥脱剤、皮膜形成剤、香料、保湿剤、虫除け、潤滑剤、保水剤、薬剤、光安定化剤、保存料、皮膚保護剤、皮膚貫通促進剤、日焼け止め、安定化剤、界面活性剤、増粘剤、粘度改変剤、ビタミンまたはそれらのいずれかの組み合わせを含み得る。
【００４１】
本発明の組成物は、皮膚、爪および／または毛髪の状態を改善する製品、特に化粧品を提供する。本発明によれば、より高い純度およびより治療上特異的で標準化された活性成分の供給を有する組成物を提供することもまた可能である。さらに、本発明の組成物は、所望の化粧上の効果が、特に市販する製品のバッチからバッチへの生産において達成されるような活性成分または成分の混合物の一定レベル（ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ  ｌｅｖｅｌ）をデリバーするように製剤化され得る。
【００４２】
本発明の組成物は、スキンケア、メーキャップ、パーソナルケア、ヘアケアまたはネイルケアのためのいずれかの化粧品において都合よく用いられ得る。
【００４３】
以下は、本発明の非限定的な例である。別段の指示のない限り、全ての比とパーセンテージは重量による。
【実施例】
【００４４】
例１
バイオアッセイにおける熱ショックタンパク質の産生
バイオアッセイにおいて熱ショックタンパク質の産生についての様々の物質の効果を評価した。熱ショック７０タンパク質レベルを、市販のアッセイキットＥＳＫ−７００（ストレスジェン  バイオテクノロジーズ，カナダ、ブリティッシュコロンビア州、ビクトリア）を利用することにより測定した。１次（ｐｒｉｍａｒｙ）ケラチノサイト細胞をほぼ１８時間試験製品により処理した。次いで、細胞を溶解した。細胞溶解物を、提供されたＥＬＩＳＡ  ＨＳＰ−７０イムノアッセイプレートで２回操作し、２時間インキュベートした。プレートを洗浄し、抗ＨＳＰ−７０：ビオチン抗体を加えた。次いでプレートを、さらに１時間インキュベートした。プレートを洗浄し、アビジン−ＨＲＰ（セイヨウワサビペルオキシダーゼ）複合タンパク質を加え、１時間インキュベートした。プレートを再び洗浄した。ＴＭＢ（テトラメチルベンゼン）基質を加え、１０分間インキュベートさせ、続いて停止溶液を加えた。プレートを４５０ｎｍで光度測定により測定し、Ｈｓｐ７０タンパク質を定量した。
【００４５】
熱ショックタンパク質の産生を培養媒地中のケラチノサイト細胞の対照に対して比較した。以下の試験試料を評価した：亜ヒ酸ナトリウム（０．００１％ｗｔ．／ｖｏｌ．＋対照）；紫外光（＋対照）；ジノステマ（０．０１％ｗｔ．／ｖｏｌ．＋対照）；ロデオーラ（０．０１％ｗｔ．／ｖｏｌ．＋対照）；およびココナッツ水（０．０１％ｗｔ．／ｖｏｌ．＋対照）。％ｗｔ．／ｖｏｌ．として与えられる濃度は、培地の体積当りの成分の全重量に基づいている。亜ヒ酸ナトリウムは、熱ショックタンパク質の産生を刺激することが知られている。この実験の結果は、図１に示されている。それらのデータは、本発明の植物成分は、亜ヒ酸ナトリウムにより産生される熱ショックタンパク質と比較してインビトロで１次ヒトケラチノサイト細胞に対して０．０１％ｗｔ．／ｖｏｌ．の濃度で無毒であることを示す。
【００４６】
例２
バイオアッセイでのアポトーシス生成
バイオアッセイにおけるアポトーシスに対する様々の物質の効果を評価した。１次ケラチノサイト細胞を様々の試験製品で処理した。アポトーシスは、細胞生理学において重要な事象である。細胞のストレスまたは損傷の間、アポトーシスと呼ばれるプログラム細胞死の複雑なカスケードプロセスが起こる。アポトーシスは、プログラム細胞死として記載される一連の形態と分子の変化により特徴付けられる。アポトーシスにおける初期の事象の１つは、カスパーゼと呼ばれる特定のプロテアーゼの活性化である。
【００４７】
健康な細胞においては、ミトコンドリアは、その外膜上に２つのタンパク質Ｂｃｌ−２およびＡｐａｆ−１を発現している。Ｂｃｌ−２タンパク質は、通常タンパク質Ａｐａｆ−１に結合している。細胞の危機の開始時に、Ｂｃｌ−２およびＡｐａｆ−１タンパク質が分離する。加えて、ミトコンドリア膜は、サイトゾルにチトクロムＣを漏出し始める。放出されたＡｐａｆ−１タンパク質およびチトクロムＣは、カスパーゼ、具体的にはカスパーゼ９として知られる他のサイトゾル分子に結合する。カスパーゼ（システイン−アスパラギン酸−プロテアーゼ）は、ほとんどの細胞中で不活性な酵素前駆体の形態で広く発現する。カスパーゼ９、チトクロムＣおよびＡｐａｆ−１は、アポトソームと呼ばれる複合体を形成するように結合する。この複合体において、カスパーゼ９は活性となり、カスパーゼ８のような他のカスパーゼのタンパク質分解による活性化のカスケードを開始させる。このカスケードは可能である。というのは、活性カスパーゼはしばしば他のカスパーゼ前駆体を活性化させ得るからである。結局、このカスケードを通してカスパーゼ３が活性化される。カスパーゼ３の初期活性化は、タンパク質分解の主たるエフェクターであり、細胞の死に向けての不可逆的な連関であるように思われる。
【００４８】
アポトーシス（カスパーゼ３）測定を、市販のアッセイキット（Ｅ−１３１８３；モレキュラー・プローブズ・ユージーン、オレゴン州）を利用することにより行った。１次ヒトケラチノサイト細胞を、溶解バッファー内での溶解および１回の「凍結−解凍」サイクルの前に１時間処理した。細胞溶解物を遠心分離し、上清を分析のために除去した。上清を基質ストック溶液に加え、覆いをし、室温で３０分間インキュベートし、続いて、蛍光プレート読み取り機（励起／発光  ３４２／４４１ｎｍ）により測定した。増加した蛍光は、増加したカスパーゼ３活性化の表示である。
【００４９】
１次ケラチノサイトバイオアッセイにおいて、試験物質によるアポトーシスの誘導を培養培地中のケラチノサイト細胞の対照に対して比較した。以下の試験試料を評価した：亜ヒ酸ナトリウム（０．００１％ｗｔ．／ｖｏｌ．＋対照）；紫外光（＋対照）；ジノステマ（０．０１％ｗｔ．／ｖｏｌ．＋対照）；ロデオーラ（０．０１％ｗｔ．／ｖｏｌ．＋対照）；およびココナッツ水（０．０１％ｗｔ．／ｖｏｌ．＋対照）。濃度は、培地の全体積に基づいて植物成分の％ｗｔとして与えられる。紫外線照射は、アポトーシスを誘導することが知られている。この実験の結果を図２に示す。これらのデータは、本発明の植物成分が、紫外線照射により誘導されるアポトーシスに比較されるとき、アポトーシスの誘導により決定されるものとして、インビトロでの１次ヒトケラチノサイト細胞に対して０．０１％ｗｔ．／ｖｏｌ．の濃度で無毒であることを示す。
【００５０】
例３
バイオアッセイにおけるＡＴＰ生成
細胞培養バイオアッセイでのＡＴＰの生成に対するジノステマの効果を評価した。細胞のＡＴＰレベルをコネチカット州メリデンのパッカード・バイオサイエンスから入手可能である市販のキット（ＡＴＰＬｉｔｅ−Ｍ）を利用することにより測定した。１次ヒトケラチノサイトを試験材料または培地のみにより１８時間処理した。細胞を溶解溶液中で溶解させ、９６穴マイクロプレートに配置した。基質溶液（ルシフェリン）を加え、プレートを１分間振盪した。プレートを光の入らないボックスに配置することにより１０分間「暗黒」適合させ、続いてルミノメーターで測定した。測定されるルミネッセンスの量が大きいほどＡＴＰのレベルも大きい。
【００５１】
培地の全体積に基づいて０．００１％ｗｔ．／ｖｏｌ．および０．０１％ｗｔ．／ｖｏｌの植物成分の濃度でジノステマをヒトケラチノサイト細胞培養バイオアッセイで試験し、培養培地中のケラチノサイト細胞の対照に対して比較した。バックグラウンドルミネッセンスを定量した。この実験の結果を図３に示す。それらのデータは、０．００１％ｗｔ．／ｖｏｌおよび０．０１％ｗｔ／ｖｏｌ．の量でジノステマは、対照の培養と比較してインビトロでヒトケラチノサイト細胞においてＡＴＰ生成を有意に増加させることを示す。
【００５２】
例４
バイオアッセイにおける熱ショックタンパク質７０レポーター活性化
本発明の組成物による熱ショック７０タンパク質（Ｈｓｐ７０）プロモーター活性化の効果を１次ヒトケラチノサイト細胞培養バイオアッセイで評価した。１次ヒトケラチノサイト細胞にレポーターとして機能するルシフェラーゼ酵素をコードする遺伝子に結合したＨｓｐ７０プロモーターを含むプラスミド（ｐＣＭＶ／Ｂｓｄ）レポーターシステムを電気穿孔により形質移入した。形質移入の後、プラスミドを含む細胞をブラスチシジンへの暴露により選択した。形質移入された細胞は、ブラスチシジンに対して耐性である。形質移入していないケラチノサイト細胞は、殺傷される。ブラスチシジンに対する耐性は、形質移入を確固としたものにし、プラスミドの中に見出されるブラスチシジンデアミナーゼ遺伝子の発現による。次いで、形質移入されたケラチノサイト細胞を、２４時間試験材料により処理した。ケラチノサイト細胞培養を、ＮａＡｓＯ2 （１３μｇ／ｍｌ）、ロデオーラ（０．１０μｇ／ｍｌ；１．０μｇ／ｍｌ；および１００μｇ／ｍｌ）、ココナッツ水（０．１０μｇ／ｍｌ；１．０μｇ／ｍｌ；および１００μｇ／ｍｌ）、アザディラクタ（０．１０μｇ／ｍｌ；１．０μｇ／ｍｌ；および１００μｇ／ｍｌ）およびジノステマ（０．１０μｇ／ｍｌ；１．０μｇ／ｍｌ；および１００μｇ／ｍｌ）に対して試験した。次いで細胞を洗浄し、ルシフェリンに暴露した。Ｈｓｐ７０プロモーターの活性化により転写され、続いて酵素学的に活性なタンパク質に翻訳されたルシフェラーゼ酵素は、基質のルシフェリンと反応する。ルシフェラーゼタンパク質はルシフェリンを酸化し、ルミノメーターにより測定される光エネルギーを作り出す。測定されるルミネッセンスの量が大きいほど、Ｈｓｐ７０プロモーターの活性が大きい。Ｈｓｐ７０プロモーターの検出およびルシフェラーゼ活性由来の光検出は、熱ショック７０タンパク質の産生の指標である。培養培地中のケラチノサイト細胞は対照（ビヒクル）としての役目をする。この実験の結果は、図４（ロデオーラ）、図５（ココナッツ水）、図６（アザディラクタ）、および図７（ジノステマ）に示されている。それらのデータは、本発明の植物成分は、ケラチノサイト細胞培養中の熱ショックタンパク質７０の産生を有意に引き起こすことを明らかに示す。
【００５３】
前述の記載は、本発明の単なる例示であることが理解されるべきである。様々の代替および変更が、本発明から逸脱することなく当業者により考案され得る。したがって、本発明は、特許請求の範囲に当てはまる全てのそのような代替、変更および変形を包含することを意図する。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】図１は、インビトロでのケラチノサイト細胞中の熱ショックタンパク質の産生についての様々の試験試料の効果を示す。
【図２】図２は、ケラチノサイト培養細胞中でのアポトーシスについての様々の試験試料の効果を示す。
【図３】図３は、ケラチノサイト培養細胞中でのＡＴＰの産生についてのジノステマの効果を示す。
【図４】図４は、ケラチノサイト培養細胞中の熱ショックタンパク質の産生についてのロデオーラの効果を示す。
【図５】図５は、ケラチノサイト培養細胞中の熱ショックタンパク質の産生についてのココナッツ水の効果を示す。
【図６】図６は、ケラチノサイト培養細胞中の熱ショックタンパク質の産生についてのアザディラクタの効果を示す。
【図７】図７は、ケラチノサイト培養細胞における熱ショックタンパク質の産生についてのジノステマの効果を示す。
【図１】
2005519058.tif 000003
【図２】
2005519058.tif 000004
【図３】
2005519058.tif 000005
【図４】
2005519058.tif 000006
【図５】
2005519058.tif 000007
【図６】
2005519058.tif 000008
【図７】
2005519058.tif 000009
【国際調査報告】
2005519058.tif 000010
2005519058.tif 000011