(57)【要約】本明細書中に提供される発明は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ莢膜多糖（ＰＰＳ−３）に特異的に結合する、非ヒト動物中で産生されたヒト抗体を提供する。本発明はさらに、非ヒト動物中で抗体を作製するための方法、ならびにハイブリドーマおよび組換え宿主細胞系を含む細胞中で抗体を発現するための方法を提供する。この抗体を含む、キットおよび薬学的組成物もまた、本明細書中に記載される薬学的組成物を患者に投与することによって、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染またはこのような感染によって引き起こされる状態もしくは障害を処置、阻害または予防する方法に加えて提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清型３（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３）の莢膜多糖を特異的に結合する、抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ここで、該抗体またはフラグメントは、以下：
（ａ）配列番号１に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号１に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列の残基３１〜１０４のアミノ酸配列；ならびに
（ｃ）配列番号１に示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖アミノ酸配列を含む、抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項２】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清型３（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３）の莢膜多糖を特異的に結合する、抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ここで、該抗体またはフラグメントは、以下：
（ａ）配列番号２に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号２に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列の残基２４〜９７のアミノ酸配列；ならびに
（ｃ）配列番号２に示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖アミノ酸配列を含む、抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項３】
軽鎖アミノ酸配列をさらに含み、該軽鎖アミノ酸配列が、以下：
（ａ）配列番号２に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号２に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列の残基２４〜９７のアミノ酸配列；ならびに
（ｃ）配列番号２に示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項４】
核酸分子であって、以下：
（ａ）配列番号１に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号１に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列の残基３１〜１０４のアミノ酸配列；ならびに
（ｃ）配列番号１に示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項５】
核酸分子であって、以下：
（ａ）配列番号１に示されるＤＮＡ配列；
（ｂ）配列番号１のうちのＣＤＲ１〜ＣＤＲ３をコードするＤＮＡ配列；ならびに
（ｃ）配列番号１のうちのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３をコードするＤＮＡ配列
からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項６】
核酸分子であって、以下：
（ａ）配列番号２に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号２に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列の残基２４〜９７のアミノ酸配列；ならびに
（ｃ）配列番号２に示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項７】
核酸分子であって、以下：
（ａ）配列番号２に示されるＤＮＡ配列；
（ｂ）配列番号２のうちのＣＤＲ１〜ＣＤＲ３をコードするＤＮＡ配列；ならびに
（ｃ）配列番号２のうちのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３をコードするＤＮＡ配列
からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項８】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清型３（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３）の莢膜多糖を特異的に結合する、抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ここで、該抗体またはフラグメントは、以下：
（ａ）配列番号３に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号３に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列の残基３１〜１０８のアミノ酸配列；ならびに
（ｃ）配列番号３に示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖アミノ酸配列を含む、抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項９】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清型３（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３）の莢膜多糖を特異的に結合する、抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ここで、該抗体またはフラグメントは、以下：
（ａ）配列番号４に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号４に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列の残基２４〜９７のアミノ酸配列；ならびに
（ｃ）配列番号４に示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖アミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１０】
軽鎖アミノ酸配列をさらに含み、該軽鎖アミノ酸配列が、以下：
（ａ）配列番号４に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号４に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列の残基２４〜９７のアミノ酸配列；ならびに
（ｃ）配列番号４に示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１１】
核酸分子であって、以下：
（ａ）配列番号３に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号３に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列の残基３１〜１０８のアミノ酸配列；ならびに
（ｃ）配列番号３に示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項１２】
核酸分子であって、以下：
（ａ）配列番号３に示されるＤＮＡ配列；
（ｂ）配列番号３のうちのＣＤＲ１〜ＣＤＲ３をコードするＤＮＡ配列；ならびに
（ｃ）配列番号３のうちのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３をコードするＤＮＡ配列
からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項１３】
核酸分子であって、以下：
（ａ）配列番号４に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号４に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列の残基２４〜９７のアミノ酸配列；ならびに
（ｃ）配列番号４に示されるＤＮＡ配列によってコードされるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項１４】
核酸分子であって、以下：
（ａ）配列番号４に示されるＤＮＡ配列；
（ｂ）配列番号４のうちのＣＤＲ１〜ＣＤＲ３をコードするＤＮＡ配列；ならびに
（ｃ）配列番号４のうちのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３をコードするＤＮＡ配列
からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項１５】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清型３（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３）の莢膜多糖を特異的に結合する、抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ここで、該抗体またはフラグメントは、以下：
（ａ）配列番号５に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号５に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列の残基３１〜１０４のアミノ酸配列；ならびに
（ｃ）配列番号５に示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖アミノ酸配列を含む、抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１６】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清型３（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３）の莢膜多糖を特異的に結合する、抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ここで、該抗体またはフラグメントは、以下：
（ａ）配列番号６に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号６に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列の残基２４〜９７のアミノ酸配列；ならびに
（ｃ）配列番号６に示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖アミノ酸配列を含む、抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１７】
軽鎖アミノ酸配列をさらに含み、該軽鎖アミノ酸配列が、以下：
（ａ）配列番号６に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号６に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列の残基２４〜９７のアミノ酸配列；ならびに
（ｃ）配列番号６に示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項１８】
核酸分子であって、以下：
（ａ）配列番号５に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号５に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列の残基３１〜１０４のアミノ酸配列；ならびに
（ｃ）配列番号５に示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項１９】
核酸分子であって、以下：
（ａ）配列番号５に示されるＤＮＡ配列；
（ｂ）配列番号５のうちのＣＤＲ１〜ＣＤＲ３をコードするＤＮＡ配列；ならびに
（ｃ）配列番号５のうちの、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３をコードするＤＮＡ配列
からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項２０】
核酸分子であって、以下：
（ａ）配列番号６に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号６に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列の残基２４〜９７のアミノ酸配列；ならびに
（ｃ）配列番号６に示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項２１】
核酸分子であって、以下：
（ａ）配列番号６に示されるＤＮＡ配列；
（ｂ）配列番号６のうちのＣＤＲ１〜ＣＤＲ３をコードするＤＮＡ配列；ならびに
（ｃ）配列番号６のうちの、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３をコードするＤＮＡ配列
からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項２２】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清型３（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３）の莢膜多糖を特異的に結合する、抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ここで、該抗体またはフラグメントは、以下：
（ａ）配列番号７に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号７に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列の残基３１〜１０５のアミノ酸配列；ならびに
（ｃ）配列番号７に示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖アミノ酸配列を含む、抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項２３】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清型３（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３）の莢膜多糖を特異的に結合する、抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ここで、該抗体またはフラグメントは、以下：
（ａ）配列番号８に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号８に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列の残基２４〜９７のアミノ酸配列；ならびに
（ｃ）配列番号８に示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖アミノ酸配列を含む、抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項２４】
軽鎖アミノ酸配列をさらに含み、該軽鎖アミノ酸配列が、以下：
（ａ）配列番号８に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号８に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列の残基２４〜９７のアミノ酸配列；ならびに
（ｃ）配列番号８に示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項２５】
核酸分子であって、以下：
（ａ）配列番号７に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号７に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列の残基３１〜１０５のアミノ酸配列；ならびに
（ｃ）配列番号７に示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項２６】
核酸分子であって、以下：
（ａ）配列番号７に示されるＤＮＡ配列；
（ｂ）配列番号７のうちのＣＤＲ１〜ＣＤＲ３をコードするＤＮＡ配列；ならびに
（ｃ）配列番号７のうちの、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３をコードするＤＮＡ配列
からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項２７】
核酸分子であって、以下：
（ａ）配列番号８に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号８に示されるＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列の残基２４〜９７のアミノ酸配列；ならびに
（ｃ）配列番号８に示されるＤＮＡ配列によってコードされる、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項２８】
核酸分子であって、以下：
（ａ）配列番号８に示されるＤＮＡ配列；
（ｂ）配列番号８のうちのＣＤＲ１〜ＣＤＲ３をコードするＤＮＡ配列；ならびに
（ｃ）配列番号８のうちの、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３をコードするＤＮＡ配列
からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項２９】
発現制御配列に作動可能に連結された、請求項４〜７、１１〜１４、１８〜２１または２５〜２８のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項３０】
請求項２９に記載の核酸分子で形質転換された、宿主細胞。
【請求項３１】
Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３を特異的に結合する、抗体またはその抗原結合フラグメントを産生するための方法であって、請求項３０に記載の宿主細胞を培養する工程を包含する、方法。
【請求項３２】
請求項４〜７、１１〜１４、１８〜２１または２５〜２８のいずれか１項に記載の核酸分子で形質転換された、宿主細胞。
【請求項３３】
Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３を特異的に結合する、抗体またはその抗原結合フラグメントを産生するための方法であって、請求項３２に記載の宿主細胞を培養する工程を包含する、方法。
【請求項３４】
組成物であって、請求項１〜３、８〜１０、１５〜１７または２２〜２４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、組成物。
【請求項３５】
以下：
（ａ）診断剤；および
（ｂ）治療剤
からなる群より選択される成分をさらに含む、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
１以上のさらなる抗体またはその抗原結合フラグメントをさらに含み、ここで該さらなる抗体が、血清型３以外のＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清型を特異的に結合する、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３７】
キットであって、請求項１〜３、８〜１０、１５〜１７または２２〜２４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、キット。
【請求項３８】
被験体における、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清型３感染によって引き起こされる状態もしくは障害を予防するかまたは該状態もしくは障害の重篤度を低減するための方法であって、請求項１〜３、８〜１０、１５〜１７もしくは２２〜２４のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは請求項３４〜３６のいずれか１項に記載の組成物の有効量を投与する工程を包含する、方法。
【請求項３９】
前記被験体が、免疫無防備状態にある、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記被験体が、ＨＩＶ−１に感染している、請求項３８または３９に記載の方法。
【請求項４１】
Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清型３による感染またはこのような感染によって引き起こされる状態もしくは障害に対する被験体の耐性を増大させるための方法であって、請求項１〜３、８〜１０、１５〜１７もしくは２２〜２４のいずれか１項に記載の抗体もしくはそのフラグメントまたは請求項３４〜３６のいずれか１項に記載の組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項４２】
被験体におけるＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清型３細胞に対する補体の沈着を増強するための方法であって、請求項１〜３、８〜１０、１５〜１７もしくは２２〜２４のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは請求項３４〜３６のいずれか１項に記載の組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項４３】
被験体におけるＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清型３の貪食作用を増大させるための方法であって、請求項１〜３、８〜１０、１５〜１７もしくは２２〜２４のいずれか１項に記載の抗体もしくはそのフラグメントまたは請求項３４〜３６のいずれか１項に記載の組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項４４】
前記抗Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３抗体またはその抗原結合フラグメントが、別の治療剤の投与とともに投与される、請求項３８〜４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清型３感染を検出するための方法であって、感染した疑いのある被験体由来のサンプルを、請求項１〜３、８〜１０、１５〜１７または２２〜２４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントと接触させる工程、およびＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清型３に対する該抗体またはフラグメントの結合を検出する工程を包含する、方法。
【請求項４６】
Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに感染した被験体におけるＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清型を決定するための方法であって、該被験体から単離されたＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅを、請求項１〜３、８〜１０、１５〜１７または２２〜２４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合部分と接触させる工程、および結合の存在または不存在を検出する工程を包含する、方法。
【請求項４７】
Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清型３（ＰＰＳ−３）を莢膜多糖を特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ここで、該抗体または抗原結合フラグメントは、請求項３、１０、１７または２４のいずれか１項に記載の抗体と同じＰＰＳ−３エピトープを結合する、抗体または抗原結合フラグメント。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の技術分野）
本発明は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染およびこのような感染によって引き起こされる状態を処置または予防するための組成物および方法に関する。特に、本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ莢膜多糖（ＰＰＳ−３）に特異的に結合するヒト抗体およびこの抗体をコードする核酸分子に関する。本発明はまた、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に対するヒト抗体の、単離された重鎖免疫グロブリン分子および単離された軽鎖免疫グロブリン分子に関する。本発明はさらに、このような重鎖免疫グロブリン分子および軽鎖免疫グロブリン分子をコードする核酸分子に関する。本発明はさらに、キメラ抗体、二重特異性抗体、誘導体化抗体、単鎖抗体または融合タンパク質の一部分である、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に対するヒト抗体を含む。本発明はまた、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染を検出またはモニタリングする方法に関する。本発明はさらに、非ヒト動物中でこの抗体を作製するための方法、ならびにハイブリドーマおよび組換え宿主細胞系を含む細胞株中でこの抗体を発現するための方法に関する。本発明はまた、この抗体を含む、キットおよび薬学的組成物に関する。本発明はさらに、本明細書中に記載の組成物のいずれかを患者に投与することによって、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染およびこのような感染によって引き起こされる状態を処置または予防する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、重要なヒト病原体であり、そしてヒトにおける罹病率および死亡率の主な原因である。入手可能な肺炎球菌ワクチンは、大人および小児に疾患を引き起こす、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの最も一般的な血清型の精製されたＰＰＳからなる。肺炎球菌ワクチン接種の基礎的な理論は、肺炎球菌莢膜多糖（ＰＰＳ）に対する型特異的抗体が防御のために必要とされるということである。
【０００３】
しかし、ＰＰＳは、侵襲性の肺炎球菌疾患を発症する危険性が最も高い多くの個体（例えば、幼い小児および免疫無防備状態の個体）において免疫原性に乏しい。乳児および幼い小児においてＰＰＳの免疫原性が乏しいことは、ＰＰＳ−タンパク質結合体ワクチンによって部分的に克服されているが、結合体化肺炎球菌ワクチンおよび非結合体化肺炎球菌ワクチンは両方とも、多くの成人において免疫原性に乏しい。肺炎球菌ワクチンの応答が乏しいことは、抗体の欠損または不全を有する個体において最も一般的であるが、この現象を担う機構は、未知である。従って、このような個体の受動免疫のためのヒト抗体についての差し迫った必要性が存在する。
【０００４】
現在、限定された数のＰＰＳ血清型に対する限定された数のヒトモノクローナル抗体が、ワクチン接種したレシピエント由来のリンパ球のエプスタイン−バーウイルス形質転換によって作製されている。エプスタイン−バーウイルス形質転換は困難であり、予測不可能である。
【０００５】
本発明者らは、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的なヒト抗体を提供する。特に、本発明者らは、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３を認識するモノクローナル抗体１Ｆ１０／７Ｃ５、３Ｈ１、１Ａ２およびＡ７を提供する。モノクローナル抗体１Ｆ１０／７Ｃ５、１Ａ２およびＡ７は、受動免疫において、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅチャレンジを有効に防御する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の簡単な要旨）
本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ莢膜多糖（ＰＰＳ−３）に特異的に結合する単離されたヒト抗体を提供する。本発明はさらに、非ヒト動物中でこの抗体を作製するための方法、ならびにハイブリドーマおよび組換え宿主細胞系を含む細胞系におけるこの抗体の発現によってこの抗体を作製するための方法を提供する。本発明はまた、この抗体を含む、キットおよび薬学的組成物を提供する。さらに、本発明は、本明細書中に記載される薬学的組成物を患者に投与することによって、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染およびこのような感染によって引き起こされる状態を処置または予防する方法を提供する。
【０００７】
（発明の詳細な説明）
本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合する完全ヒト抗体またはその抗原結合部分を提供する。好ましい実施形態において、完全ヒト抗体は、モノクローナルである。他の好ましい実施形態としては、この抗体の重鎖および軽鎖の可変領域の全てまたは一部をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子、ならびに抗体の重鎖および軽鎖のこれらの領域を含むアミノ酸配列、そして特に、相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖および軽鎖配列に対応する配列が挙げられる。本明細書中に開示される抗体と同様の結合特性を有する抗体および同様の機能性を有する抗体（または他のアンタゴニスト）もまた提供される。このような免疫グロブリン分子およびモノクローナル抗体を発現するハイブリドーマもまた提供される。
【０００８】
本明細書中で他に規定されない限り、本発明に関して使用される科学用語および技術用語は、当業者に一般的に理解されている意味を有する。さらに、文脈からそうでないことが必要とされない限り、単数形の用語は複数を含み、そして複数形の用語は、単数の用語を含む。一般的に、本明細書中に記載される細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、ならびにタンパク質および核酸化学およびハイブリダイゼーションに関連して使用される専門用語およびそれらの技術は、当該分野で周知でありかつ通常使用されているものである。本発明の方法および技術は、一般的に、そうでないことが示されない限り、当該分野で周知の従来法に従って、そして本明細書を通して列挙および議論される種々の全体的な参考文献およびより詳細な参考文献に記載されるように実施される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９８９）、ならびにＡｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（１９９２）、ならびにＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９９０）を参照のこと（これらは、本明細書中で参考として援用される）。酵素反応および精製技術は、当該分野で一般的に達成されるかまたは本明細書中に記載されるように、製造者の指示書に従って実施される。本明細書中に記載される分析化学、合成有機化学、ならびに医化学および薬化学に関連して使用される専門用語、それらの研究手順、およびそれらの技術は、当該分野で周知であり一般的に使用されているものである。化学合成、化学分析、薬学的調製物、処方物、および送達、ならびに患者の処置についての標準的な技術が使用される。
【０００９】
以下の用語は、本明細書中で使用されている以下の一般的な意味を有することが意図される。
【００１０】
「Ｂリンパ球細胞またはその子孫」は、Ｂリンパ球系統に由来するかまたはそれらになることが運命づけられた任意の細胞をいう。例としては、最初期Ｂリンパ球幹細胞から始まってメモリーＢ細胞、プラズマ細胞、およびインビトロで生成される任意のハイブリドーマを通るＢ細胞発達経路における全てのＢリンパ球が挙げられるがこれらに限定されない。
【００１１】
「二特異性抗体」は、２つの別々の抗原に対する親和性を有する単一の抗体である。例えば、二特異性抗体は、重鎖および軽鎖の１つの組み合わせを用いて、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３を認識し得、そして第１の組み合わせに結合された重鎖および軽鎖の第２の組み合わせを用いて白血球細胞表面マーカーを認識し得る。例えば、ＭｃＣｏｒｍｉｃｋら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８：３４７４−８２（１９９７）を参照のこと。
【００１２】
「キメラ抗体」は、別のタンパク質由来のアミノ酸配列を含むようそれらの当初の形態から変更された抗体である。キメラ抗体は、当初の抗体アミノ酸配列の少なくとも一部（代表的に、抗原結合領域（Ｆａｂ）を含む部分）を保持する。キメラ抗体の例としては、二特異性抗体および他の非免疫グロブリンタンパク質配列との融合体が挙げられるがこれらに限定されない。
【００１３】
「サイトカイン」は、一般的に、免疫系のシグナル伝達分子をいう。サイトカインとしては、インターロイキン（ＩＬ）、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、リンホトキシン（ＬＴ）、インターフェロン、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、マクロファージＣＳＦ、顆粒球ＣＳＦ、および遊走阻害因子が挙げられるがこれらに限定されない。
【００１４】
「誘導体化する」は、非免疫グロブリン剤に免疫グロブリン分子を結合するプロセスをいう。誘導体化剤の例としては、毒素、補体、抗体、ペプチド、多糖、脂質、有機ポリマー、放射標識、および無機化合物が挙げられるがこれらに限定されない。
【００１５】
「発現制御配列」は、特定の条件下または特定の細胞における遺伝子配列の誘導性発現または構成性発現を可能にする配列をいう。発現制御配列の調節する細胞プロセスの例としては、遺伝子の転写、タンパク質の翻訳、メッセンジャーＲＮＡのスプライシング、免疫グロブリンアイソタイプのスイッチング、タンパク質のグリコシル化、タンパク質の切断、タンパク質の分泌、細胞内タンパク質局在化、および細胞外タンパク質ホーミングが挙げられるがこれらに限定されない。
【００１６】
「融合タンパク質」は、２つ以上の異なるタンパク質のアミノ酸配列を含むキメラタンパク質をいう。代表的に、融合タンパク質は、当該分野で周知のインビトロ組換え技術により生じる。しかし、融合タンパク質は、インビボのクロスオーバー現象または他の組換え現象から生じ得る。
【００１７】
本明細書中で使用される場合、用語「ポリペプチドフラグメント」は、アミノ末端欠失および／またはカルボキシ末端欠失を有するが、残りのアミノ酸配列は、天然に存在する配列における対応する位置と同一であるポリペプチドをいう。フラグメントは、代表的に、少なくとも５、６、８、または１０アミノ酸長、好ましくは、少なくとも１４アミノ酸長、より好ましくは、少なくとも２０アミノ酸長、通常は、少なくとも５０アミノ酸長、そしてさらにより好ましくは、少なくとも７０アミノ酸長である。
【００１８】
抗体または免疫グロブリン分子のフラグメントまたはアナログは、本明細書の教示に従って、当業者により容易に調製され得る。フラグメントまたはアナログの好ましいアミノ末端およびカルボキシ末端は、機能的ドメインの境界付近に生じる。構造的ドメインおよび機能的ドメインは、公開されている配列データベースかまたは独自の配列データベースとのヌクレオチドおよび／またはアミノ酸配列のデータ比較により同定され得る。好ましくは、コンピューターによる比較方法が、公知の構造および／または機能の他のタンパク質において生じる配列モチーフまたは推定タンパク質コンホメーションドメインを同定するために使用される。公知の三次元構造にフォールディングされるタンパク質配列を同定するための方法は、公知である（Ｂｏｗｉｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５３：１６４（１９９１））。
【００１９】
好ましいアミノ酸置換は、（１）タンパク質分解に対する感受性を減少する置換、（２）酸化に対する感受性を減少する置換、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変更する置換、および（４）このようなアナログの他の生理化学的特性または機能的特性を与えるかまたは改変する置換である。アナログとしては、天然に存在するペプチド配列以外の配列の種々のムテインが挙げられ得る。例えば、単一または複数のアミノ酸置換（好ましくは、保存的アミノ酸置換）が、天然に存在する配列（好ましくは、分子内接触を形成するドメインの外側のポリペプチドの一部分）になされ得る。保存的アミノ酸置換は、親配列の構造的特徴を実質的に変更するべきではない（例えば、置換アミノ酸は、親配列において生じるヘリックスを破壊するか、または親配列を特徴付ける他の型の二次構造を破壊する傾向を有するべきではない）。当該分野で認識されているポリペプチドの二次構造および三次構造の例は、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ編、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４））；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｃ．Ｂｒａｎｄｅｎ  ａｎｄ  Ｊ．Ｔｏｏｚｅ編、Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（１９９１））；ならびにＴｈｏｒｎｔｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：１０５（１９９１）に記載される（これらは各々、本明細書中に参考として援用される）。
【００２０】
本明細書中で使用される場合、２０個の慣用アミノ酸およびそれらの略号は、従来の使用法に従う。例えば、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−Ａ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（第２版、Ｅ．Ｓ．ＧｏｌｕｂおよびＤ．Ｒ．Ｇｒｅｎ編、Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ、Ｍａｓｓ．（１９９１））を参照のこと（これは、本明細書中で参考として援用される）。２０個の慣用アミノ酸、非天然アミノ酸（例えば、α−，α−二置換アミノ酸）、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸、および他の慣用とは異なるアミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ−アミノ酸）もまた、本発明のポリペプチドに適切な成分であり得る。従来とは異なるアミノ酸の例としては：４−ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタメート、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリジン、ε−Ｎ−アセチルリジン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリジン、ｓ−Ｎ−メチルアルギニン、ならびに他の同様のアミノ酸およびイミノ酸（例えば、４−ヒドロキシプロリン）が挙げられる。標準的な用法および慣習に従って、本明細書中で使用されるポリペプチド表記において、左手方向がアミノ末端方向であり、そして右手方向がカルボキシ末端方向である。
【００２１】
「ヒト免疫グロブリン分子」は、ヒト免疫グロブリン遺伝子配列によりコードされる免疫グロブリンタンパク質をいう。
【００２２】
「ヒトモノクローナル抗体」は、同一の特異性を有するヒト抗体の集団のメンバーである抗体をいう。ヒト抗体の集団は、ハイブリドーマまたは他の不死化細胞株において、ならびに外因性ヒト抗体遺伝子配列を発現する組換え細胞株において産生され得る。
【００２３】
「免疫無防備状態の患者」は、外来抗原または因子に対するその免疫応答が、例えば、疾患（例えば、ＡＩＤＳ）によって、侵襲性の外科手術によって、または他の状態の処置と組み合わせた薬物治療によって損傷している患者をいう（例えば、器官移植患者）。
【００２４】
「標識」は、上記免疫グロブリンに結合された、免疫グロブリンとは通常関係しない機能的特徴を融合させた任意の分子をいう。標識は、免疫グロブリンの化学的改変、二特異性免疫グロブリンの２つのＦａｂ領域のうちの１つによる標識の認識、第３の薬剤に対する親和性（例えば、アビジン／ビオチン相互作用）、放射標識を介して、または組換え発現される融合タンパク質として結合され得る。標識は、臨床目的または研究目的のための分子または放射性タグとして、あるいはＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染と戦う薬剤（例えば、毒素または補体タンパク質）として機能し得る。標識の他の例としては、酵素、蛍光分子、磁気標識、エピトープタグ（例えば、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａヘマグルチニン）、抗体、補体タンパク質、およびサイトカインが挙げられ得る。
【００２５】
「外科手術患者」は、代表的に真皮の穿刺または切開を伴う侵襲性の外科手術手順に供される任意の患者をいう。
【００２６】
「毒素」は、抗体が結合する細胞を死滅させる目的で、抗体に結合され得るタンパク質または非タンパク質化合物をいう。毒素の例としては、補体、抗体、ペプチド、多糖、脂質、有機ポリマー、放射標識、および無機化合物が挙げられるがこれらに限定されない。
【００２７】
「ベクター」は、目的の核酸配列を、それらのネイティブ細胞の外側でクローニング、増殖、変異、または発現することを可能にする核酸分子をいう。しばしば、ベクターは、特定の条件下または特定の細胞において、遺伝子配列の発現を制御することを可能にする配列を有する。
【００２８】
本発明の抗体または抗体部分を発現するために、上記で記載されるようにして獲得される、部分長または全長の軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡは、その遺伝子が、転写制御配列および翻訳制御配列に作動可能に連結されるように発現ベクターに挿入される。発現ベクターとしては、プラスミド、レトロウイルス、コスミド、ＹＡＣ、ＥＢＶ由来エピソームなどが挙げられる。抗体遺伝子は、ベクター中の転写制御配列および翻訳制御配列が、抗体遺伝子の転写および翻訳を調節する、それらの意図する機能を提供するよう、ベクター中に連結される。発現ベクターおよび発現制御配列は、使用される発現宿主細胞と適合するよう選択される。抗体軽鎖遺伝子および抗体重鎖遺伝子は、別個のベクターに挿入され得る。好ましい実施形態において、両方の遺伝子は、同一の発現ベクターに挿入される。抗体遺伝子は、標準的な方法（例えば、抗体遺伝子フラグメントおよびベクター上の相補的制限部位の連結、または制限部位が存在しない場合は、平滑末端連結）によって発現ベクターに挿入される。
【００２９】
便利なベクターは、機能的に完全なヒトＣＨまたはＣＬ免疫グロブリン配列をコードし、適切な制限部位が、任意のＶＨ配列またはＶＬ配列が上記のように容易に挿入および発現され得るように操作されたベクターである。このようなベクターにおいて、スプライシングは、通常、挿入されたＪ領域におけるスプライスドナー部位とヒトＣドメインの前に存在するスプライスアクセプター部位との間、およびヒトＣＨエキソン中に生じるスプライス領域にも生じる。ポリアデニル化および転写終結は、コード領域の下流のネイティブの染色体部位で生じる。組換え発現ベクターはまた、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を容易にするシグナルペプチドをコードし得る。抗体鎖の遺伝子は、ベクター中にクローニングされ、その結果、シグナルペプチドは、免疫グロブリン鎖のアミノ末端にインフレームで連結され得る。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチドまたは異種シグナルペプチド（すなわち、非免疫グロブリンタンパク質由来のシグナルペプチド）であり得る。
【００３０】
抗体鎖遺伝子に加えて、本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞における抗体鎖遺伝子の発現を制御する調節配列を有する。発現ベクターの設計（調節配列の選択を含む）は、形質転換される宿主細胞の選択、所望されるタンパク質の発現レベルなどのような因子に依存し得ることが、当業者により理解される。哺乳動物宿主細胞発現に好ましい調節配列としては、哺乳動物細胞において高レベルのタンパク質発現を指向するウイルスエレメント（例えば、レトロウイルスＬＴＲ由来のプロモーターおよび／またはエンハンサー、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）由来のプロモーターおよび／またはエンハンサー（例えば、ＣＭＶプロモーター／エンハンサー）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）由来のプロモーターおよび／またはエンハンサー（例えば、ＳＶ４０プロモーター／エンハンサー）、アデノウイルス由来のプロモーターおよび／またはエンハンサー（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））、ポリオーマ由来のプロモーターおよび／またはエンハンサー、ならびにネイティブ免疫グロブリンおよびアクチンプロモーターのような強力な哺乳動物プロモーターが挙げられる。ウイルス調節エレメントおよびその配列のさらなる詳細については、例えば、Ｓｔｉｎｓｋｉによる米国特許第５，１６８，０６２号、Ｂｅｌｌらによる米国特許第４，５１０，２４５号、およびＳｃｈａｆｆｎｅｒらによる米国特許第４，９６８，６１５号を参照のこと。
【００３１】
抗体鎖遺伝子および調節配列に加えて、本発明の組換え発現ベクターは、さらなる配列（例えば、宿主細胞におけるベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）および選択マーカー遺伝子）を有し得る。選択マーカー遺伝子は、ベクターが組み込まれた宿主細胞の選択を容易にする（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，６３４，６６５号、および同第５，１７９，０１７号、全てＡｘｅｌらを参照のこと）。例えば、代表的には、選択マーカー遺伝子は、ベクターが組み込まれた宿主細胞における薬物（例えば、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、またはメトトレキセート）に対する耐性を与える。好ましい選択マーカー遺伝子としては、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキセート選択／増幅を有するｄｈｆｒ−宿主細胞における使用のため）、ｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のため）、およびグルタメートシンセターゼ遺伝子が挙げられる。
【００３２】
抗ＰＰＳ−３抗体をコードする核酸分子およびこれらの核酸分子を含むベクターは、適切な哺乳動物宿主細胞のトランスフェクションのために使用され得る。形質転換は、ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための任意の公知の手段により得る。異種ポリヌクレオチドを哺乳動物細胞に導入するための方法は、当該分野で周知であり、これらとしては、デキストラン媒介トランスフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ポリブレン媒介トランスフェクション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、ポリヌクレオチドのリポソーム中へのカプセル化、および核へのＤＮＡの直接マイクロ注入が挙げられる。さらに、核酸分子は、ウイルスベクターによって哺乳動物細胞に導入され得る。細胞を形質転換する方法は、当該分野で周知である。例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，９１２，０４０号、同第４，７４０，４６１号、および同第４，９５９，４５５号を参照のこと（これらの特許は、本明細書中に参考として援用される）。
【００３３】
発現のために宿主として利用可能な哺乳動物細胞株は、当該分野で周知であり、これらとしては、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な多くの不死化細胞株が挙げられる。これらとしては、特に、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ、ＳＰ２細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ  Ｇ２）、Ａ５４９細胞、および多くの他の細胞株が挙げられる。特に好ましい細胞株は、どの細胞株が高い発現レベルを有するかの決定を通して選択される。使用され得る他の細胞株は、昆虫細胞株（例えば、Ｓｆ９細胞）である。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが哺乳動物宿主細胞中に導入される場合、抗体は、宿主細胞中での抗体の発現を可能にするのに十分な期間、宿主細胞を培養することによるか、または、より好ましくは、宿主細胞が培養される培養培地への抗体の分泌により産生される。抗体は、標準的なタンパク質精製方法を用いて培養培地から回収され得る。
【００３４】
さらに、産生細胞株からの本発明の抗体（またはそれ由来の部分）の発現は、多くの公知の技術を用いて増強され得る。例えば、グルタミンシンセターゼ遺伝子発現系（ＧＳ系）は、特定の条件下で発現を増強するための一般的なアプローチである。ＧＳ系は、全体または一部が、欧州特許第０２１６８４６号、同第０２５６０５５号、および同第０３２３９９７号、ならびに欧州特許出願第８９３０３９６４．４号と組み合わせて、議論される。
【００３５】
「作動可能に連結された」配列としては、目的の遺伝子を制御するために、目的の遺伝子と連続する発現制御配列およびイントランスまたは離れて作用する発現制御配列の両方を含む。本明細書中で使用される場合、用語「発現制御配列」は、それらが連結されたコード配列の発現およびプロセシングをもたらすのに必要とされるポリヌクレオチド配列をいう。発現制御配列としては、適切な転写開始配列、終止配列、プロモーター配列、およびエンハンサー配列：効果的なＲＮＡプロセシングシグナル（例えば、スプライシングおよびポリアデニル化シグナル）；細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列；翻訳効率を増強する配列（すなわち、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列）；タンパク質の安定性を増強する配列；および所望の場合、タンパク質の分泌を増強する配列が挙げられる。このような制御配列の性質は、宿主生物に依存して変化し；原核生物において、このような制御配列としては、一般的に、プロモーター、リボソーム結合部位、および転写終止配列が挙げられ；真核生物においては、一般的に、このような制御配列としては、プロモーターおよび転写終止配列が挙げられる。用語「制御配列」は、最小限で、その存在が発現およびプロセシングのために必須である全ての成分を含むことが意図され、そしてまた、その存在が有利となる付加的成分（例えば、リーダー配列および融合パートナー配列）が挙げられ得る。
【００３６】
本明細書中で使用される場合、用語「組換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）は、組換え発現ベクターが導入された細胞をいうことが意図される。このような用語は、特定の対象の細胞だけでなく、このような細胞の子孫もいうことが意図されることが理解されるべきである。特定の改変が、変異または環境的影響のいずれかに起因して、その後の世代において生じ得るので、このような子孫は、実際は、親細胞と同一でないかもしれないが、本明細書中で使用される場合、なおも、用語「宿主細胞」の範囲内に含まれる。
【００３７】
「ＸｅｎｏＭｏｕｓｅＴＭ」は、相同的に標的化された内因性免疫グロブリン遺伝子座を有し、内因性マウス免疫グロブリンを発現しないようにされているが、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の実質的に一部分を保有するマウスをいう。ＸｅｎｏＭｏｕｓｅＴＭ系統のマウスは、ヒト免疫グロブリン遺伝子の体細胞再構成、ヒト免疫グロブリン可変領域の超変異、および免疫グロブリンアイソタイプのスイッチングが可能である。従って、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅＴＭ系統のマウスは、ヒト免疫グロブリン遺伝子配列を用いた抗原性チャレンジに対する有効な液性応答をマウントし得る。得られる抗体は、完全ヒト抗体であり、そしてそれら動物自体から、この動物から抽出された培養細胞から、またはＸｅｎｏＭｏｕｓｅＴＭ  Ｂリンパ球株またはその子孫から作製されたハイブリドーマから単離され得る。さらに、特異的な抗原性チャレンジに対して惹起された免疫グロブリンをコードする、再配置されたヒト遺伝子配列は、当該分野で公知の組換え手段により単離され得る。
【００３８】
（抗体構造）
基本的な抗体構造単位は、テトラマーを構成する。各テトラマーは、ポリペプチド鎖の２つの対で構成され、各々の対は、１つの「軽鎖」（約２５ｋＤａ）および１つの「重鎖」（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識を担う約１００〜１１０またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能を担う定常領域を規定する。ヒト軽鎖は、κ軽鎖およびλ軽鎖として分類される。重鎖は、μ、δ、γ、α、またはεとして分類され、そしてそれぞれ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥとして抗体のアイソタイプを規定する。軽鎖および重鎖において、可変領域および定常領域は、約１２以上のアミノ酸の「Ｊ」領域により連結され、重鎖はまた、約１０以上のアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。一般的には、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｃｈ．４（Ｒｏｉｔｔ，Ｉら編、第６版、Ｈａｒｃｏｕｒｔ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  Ｌｔｄ．、Ｌｏｎｄｏｎ（２００１）を参照のこと）（全ての目的のために、その全体が参考として援用される）。各軽鎖／重鎖対の可変領域は、抗体結合部位を形成する。従って、インタクトなＩｇＧ抗体は、２つの結合部位を有する。二機能性抗体または二特異性抗体における場合を除いて、２つの結合部位は、同一である。
【００３９】
全ての鎖は、３つの超可変領域によって連結された、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同一の一般的な構造（ＣＤＲとも呼ばれる）を示す。各々の対の２つの鎖由来のＣＤＲは、フレームワーク領域により整列され、特異的なエピトープへの結合が可能になる。Ｎ末端からＣ末端に向かって、軽鎖および重鎖の両方は、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ  Ｄａｔａｂａｓｅ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔの定義に従う（Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＆  Ｗｕ、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２９：２０５−０６（２００１）；またはＣｈｏｔｈｉａ  ＆  Ｌｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−１７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８３（１９８９））。
【００４０】
二特異性抗体または二機能性抗体は、２つの異なる重鎖／軽鎖対および２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である。二特異性抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’フラグメントの連結を含む種々の方法によって生成され得る。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ  ＆  Ｌａｃｈｍａｎｎ、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−２１（１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−５３（１９９２）を参照のこと。さらに、二特異性抗体は、「ダイアボディ（Ｄｉａｂｏｄｙ）」（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６４４４−４８（１９９３））；または「Ｊａｎｕｓｉｎｓ」（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５−５９（１９９１）およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｉｎｔｌ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  捕遺７：５１−５２（１９９２））として形成され得る。二特異性抗体の生成は、従来の抗体の生成と比較して、比較的労力の要するプロセスであり得、そして収率および純度は、一般的に、二特異性抗体についてより低い。二特異性抗体は、単一の結合部位を有するフラグメントの形態（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ）では存在し得ないを含み得る。
【００４１】
（非ヒト動物由来のヒト抗体）
マウスまたはラットの可変領域および／または定常領域を有する抗体は、特定の治療要とについてヒト抗体よりも有用性が低い。このようなマウスまたはラット由来タンパク質の存在は、抗体の迅速なクリアランスを誘導し得るか、または患者による抗体に対する免疫応答の生成を誘導し得る。マウスまたはラット由来抗体によるこれらの問題を回避するために、例えば、げっ歯類へのヒト抗体機能の導入を通してヒト化抗体が開発され得るか、または完全ヒト抗体が生成され得、その結果、そのげっ歯類は、完全ヒト抗体を生成し得る。
【００４２】
ＹＡＣ中にメガ塩基サイズのヒト遺伝子座をクローニングおよび再構成する能力、ならびにそれらをマウス生殖細胞に導入する能力は、非常に大きなまたは大ざっぱにマップされた遺伝子座の機能的成分を解明するため、およびヒト疾患の有用なモデルを生成するための強力なアプローチを提供する。さらに、マウス遺伝子座の、それらのヒト等価物による置換のためのこのような技術の利用は、発達中のヒト遺伝子産物の発現および調節、他の系とのそれらのコミュニケーション、ならびに疾患の誘導および進行におけるそれらの関連への特有の洞察を提供し得る。
【００４３】
このようなストラテジーの重要な実際の適用は、マウス体液性免疫系の「ヒト化」である。内因性Ｉｇ遺伝子が不活性化されたマウスへのヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子座の導入は、プログラムされた抗体の発現および集合ならびにＢ細胞発達における、それらの役割の根底にある機構を研究する機会を提供する。さらに、このようなストラテジーは、ヒト疾患における抗体治療の見込みを完全に満たすための重要なマイルストーンである完全ヒトモノクローナル抗体（Ｍａｂ）の生成のための理想的な供給源を提供し得る。完全ヒト抗体は、マウスＭａｂまたはマウス由来Ｍａｂに特有の免疫原性応答およびアレルギー性応答を最小限に抑え、従って、投与された抗体の効果および安全性を増大させると考えられる。従って、完全ヒト抗体の使用は、潜在的に、反復的な抗体投与が必要とされる、慢性ヒト疾患または再発性ヒト疾患（例えば、炎症、自己免疫、癌、および細菌感染）の処置における、実質的な利点を提供すると考えられる。
【００４４】
この目的に対する１つのアプローチは、マウス系統を、ヒトＩｇ遺伝子座の大きなフラグメントを用いるマウス抗体産生において欠損性となるよう操作することであり、それによって、このようなマウスは、マウス抗体の非存在下でヒト抗体の大きなレパートリーを生成する。大きなヒトＩｇフラグメントは、大きな可変性の遺伝子多様化ならびに抗体産生および発現の適切な調節を保存している。抗体の多様化および選択についてのマウス機構、ならびにヒトタンパク質に対する免疫学的寛容の欠如についてのマウス機構を研究することにより、これらのマウス系統において再生成されたヒト抗体レパートリーは、目的の任意の抗原（ヒト抗原を含む）に対する高親和性抗体を生じるはずである。ハイブリドーマ技術を用いて、所望の特異性を有する抗原特異的ヒトＭａｂは、容易に生成および選択され得る。
【００４５】
この一般的なストラテジーを、最初のＸｅｎｏＭｏｕｓｅＴＭ系統の生成と関連して実証した。Ｇｒｅｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．７：１３−２１（１９９４）を参照のこと。ＸｅｎｏＭｏｕｓｅＴＭ系統を、ヒト重鎖遺伝子座およびκ軽鎖遺伝子座の、ぞれぞれ、２４５ｋｂおよび１９０ｋｂの大きさの生殖系列構成フラグメントを含む酵母人工染色体（ＹＡＣ）で操作した。これらは、コア可変領域配列および定常領域配列を含んだ。同書。ヒトＩｇを含むＹＡＣは、抗体の再構成および発現の両方のためのマウス系と適合性であり、そして不活性化マウスＩｇ遺伝子に置換し得た。このことを、Ｂ細胞発達を誘導する能力、完全ヒト抗体の成体様ヒトレパートリーを産生する能力、および抗原特異的ヒトモノクローナル抗体を生成する能力により実証した。これらの結果はまた、多数のＶ遺伝子、付加的な調節エレメント、およびヒトＩｇ定常領域を含むヒトＩｇ遺伝子座のより大きな部分の導入が、感染および免疫に対するヒト体液性応答を特徴とする実質的に完全なレパートリーを再利用し得ることを示唆した。
【００４６】
Ｇｒｅｅｎらの研究は、最近、新規のＸｅｎｏＭｏｕｓｅＴＭを作製するために、それぞれ、ヒト重鎖遺伝子座およびκ軽鎖遺伝子座のメガ塩基サイズの生殖系列構成ＹＡＣフラグメントを通じたヒト抗体レパートリーの約８０％より多くの誘導に拡大された。Ｍｅｎｄｅｚら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．１５：１４６−５６（１９９７）およびＧｒｅｅｎ＆Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：４８３−９５（１９９８）を参照のこと（これらの開示は、本明細書中で参考として援用される）。
【００４７】
このようなアプローチはさらに、米国特許第５，９１６，７７１号、同第５，９３９，５９８号、同第５，９８５，６１５号、同第、５，９９８，２０９号、同第６，０７５，１８１号、同第６，０９１，００１号、同第６，１１４，５９８号および同第６，１３０，３６４号において議論および記載されている。１９９１年７月２５日に公開されたＷＯ９１／１０７４１、１９９４年２月３日に公開されたＷＯ９４／０２６０２、共に１９９６年１０月３１日に公開されたＷＯ９６／３４０９６およびＷＯ９６／３３７３５、１９９８年４月２３日に公開されたＷＯ９８／１６６５４、１９９８年６月１１日に公開されたＷＯ９８／２４８９３、１９９８年１１月１２日に公開されたＷＯ９８／５０４３３、１９９９年９月１０日に公開されたＷＯ９９／４５０３１、１９９９年１０月２１日に公開されたＷＯ９９／５３０４９、２０００年２月２４日に公開されたＷＯ００  ０９５６０、および２０００年６月２９日に公開されたＷＯ００／０３７５０４もまた参照のこと。上記特許、出願、および参考文献の各々の開示は、それらの全体において本明細書中で参考として援用される。
【００４８】
本発明に従う抗体は、好ましくは、挿入されたヒト抗体産生ゲノムの実質的な部分を有するが、内因性のマウス抗体の産生における欠失されているトランスジェニックマウスの利用を通じて調製される。次いで、このようなマウスは、ヒト免疫グロブリン分子および抗体を産生し得、そしてマウス免疫グロブリン分子および抗体の産生が欠失している。同じことを達成するために使用される技術は、上記特許、出願、および参考文献に開示されている。
【００４９】
このような技術の使用を通して、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に対する完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分を調製した。本質的に、本発明者らは、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３によってマウスのＸｅｎｏＭｏｕｓｅＴＭ系統を免疫し、Ｓ．ｐｅｎｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３抗体を発現するマウス由来の脾臓細胞およびリンパ節細胞（例えば、Ｂ細胞）を回収し、このように回収した細胞を、非分泌性骨髄腫細胞と融合して不死化ハイブリドーマ細胞株を調製し、そしてハイブリドーマ細胞株をスクリーニングしてＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的な抗体を産生する細胞を同定した。
【００５０】
本発明に従う抗体はまた、ハイブリドーマ細胞株以外の細胞株において発現され得る。特定の抗体をコードする配列は、適切な宿主細胞の形質転換のために使用され得る。形質転換は、宿主細胞にポリヌクレオチドを導入するための任意の公知の方法（例えば、ポリヌクレオチドのウイルス中での（またはウイルスベクター中への）パッケージングおよびウイルス（またはベクター）を用いた宿主細胞の形質導入）により得るか、または米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，９１２，０４０号、同第４，７４０，４６１号、および同第４，９５９，４５５号（これらの特許は、本明細書中に参考として援用される）に例示されるような、当該分野で公知のトランスフェクション手順により得る。所定の例において使用される形質転換手順は、形質転換される宿主に依存する。例えば、哺乳動物細胞に異種ポリヌクレオチドを導入するための方法は、当該分野で周知であり、これらとしては、デキストラン媒介トランスフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ポリブレン媒介トランスフェクション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、ポリヌクレオチドのリポソーム中でのカプセル化、および核へのＤＮＡの直接注入が挙げられる。
【００５１】
発現のために宿主として利用可能な哺乳動物細胞株は、当該分野で周知であり、これらとしては、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な多くの不死化細胞株が挙げられる。これらとしては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳ／Ｏ、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ  Ｇ２）、および多くの他の細胞株が挙げられるが、これらに限定されない。特に好ましい細胞株は、どの細胞株が高い発現レベルを有し、そして所望のＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３結合特性を有する抗体を産生するかの決定を通して選択される。
【００５２】
さらに、産生細胞株由来の本発明の抗体（またはその抗体由来の他の部分）の発現は、多数の公知の技術を用いて増強され得る。例えば、増強された発現が、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）またはグルタミンシンテターゼ遺伝子発現系（ＧＳ系）を利用する同時増幅（ｃｏａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）発現系により実現され得る。例えば、ＫａｕｆｍａｎおよびＳｈａｒｐ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−２１（１９８２）；欧州特許番号第０  ２１６  ８４６号、同第０  ２５６  ０５５号、および同第０  ３２３  ９９７号；および欧州特許出願番号第８９３０３９６４．４号を参照のこと。
【００５３】
本発明の抗体はまた、目的の免疫グロブリンの重鎖配列および軽鎖配列についてのトランスジェニックである動物または植物の作製ならびにそこから回収可能な形態での抗体の産生を通して産生され得る。動物におけるトランスジェニック産生に関連して、例えば、抗体は、ヤギ、ウシ、または他の哺乳動物からの乳汁中に産生され得、そしてそこから回収され得る。例えば、米国特許第５，８２７，６９０号、同第５，７５６，６８７号、同第５，７５０，１７２号、および同第５，７４１，９５７号を参照のこと。
【００５４】
本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分を企図する。好ましい実施形態において、単離されたヒト抗体は、モノクローナル抗体である。
【００５５】
本発明は、さらに、補体の活性化を媒介する単離されたヒト抗体を企図する。１つの実施形態において、単離されたヒト抗体は、古典経路による補体の活性化を媒介する。別の実施形態において、単離されたヒト抗体は、第二経路による補体活性化を媒介する。
【００５６】
本発明はまた、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分が、被験体のＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに対する耐性を増強することを企図する。
【００５７】
本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分を企図し、ここでこの抗体またはその抗原結合部分は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染により引き起こされる状態もしくは障害を予防するかまたはそれらの状態もしくは障害の重篤度を軽減させる。
【００５８】
本発明のＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分は、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡまたはＩｇＤであり得る。いくつかの実施形態において、ＩｇＡは、ＩｇＡ１サブタイプまたはＩｇＡ２サブタイプであり得、そしてＩｇＧは、ＩｇＧ１サブタイプ、ＩｇＧ２サブタイプ、ＩｇＧ３サブタイプまたはＩｇＧ４サブタイプであり得る。
【００５９】
本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合しかつ標識されている、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分を企図する。好ましい実施形態において、標識は、放射標識、酵素標識、蛍光標識、毒素、磁性因子（ｍａｇｎｅｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）、第二の抗体、親和性標識、エピトープタグ、抗生物質、補体タンパク質またはサイトカインである。
【００６０】
本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合しかつκ軽鎖を含む単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分を企図する。好ましい実施形態において、κ軽鎖の可変（Ｖ）領域は、ヒトＶκ１５／Ａ１９遺伝子、ヒトＶκ１９／Ａ１遺伝子、ヒトＶκ２６／Ａ２６遺伝子またはヒトＶκ５／Ｌ５遺伝子によりコードされる。別の好ましい実施形態において、κ軽鎖の連結（Ｊ）領域は、ヒトＪκ１遺伝子によりコードされる。
【００６１】
本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合し、そして表２に示されるＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号１３；配列番号１４；配列番号１５；配列番号１６）を含むκ軽鎖を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分を企図する。本発明はまた、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合し、表２にＭａｂ  ３Ｈ１について示されるＣＤＲ２アミノ酸配列およびＣＤＲ３アミノ酸配列（各々、配列番号１７；配列番号１６）を含むκ軽鎖を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部位を企図する。本発明はさらに、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合し、そして図６ａ〜ｃに示される核酸配列（配列番号２；配列番号４；配列番号６；または配列番号８）によりコードされるアミノ酸配列を含むκ軽鎖を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分を企図する。シグナル配列は、本発明の抗体のいずれかに存在しても存在しなくてもよい。本発明はまた、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合しかつλ軽鎖を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分を企図する。
【００６２】
本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合し、可変（Ｖ）領域、多様性（Ｖ）領域、および連結（Ｊ）領域から構成される重鎖を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分を企図する。好ましい実施形態において、重鎖の可変領域は、ヒトＶＨ３遺伝子により一部コードされる。好ましい実施形態において、重鎖の可変領域は、ＤＰ−３８／Ｖ３−１５、ＤＰ−５０／Ｖ３−３３およびＤＰ−４７／Ｖ３−２３からなる群より選択されるヒトＶＨ３遺伝子によりコードされる。別の好ましい実施形態において、重鎖の分散性領域は、Ｄ１−２６、Ｄ６−１３およびＤ７−２７からなる群より選択されるヒトＤ遺伝子によりコードされる。別の好ましい実施形態において、重鎖の連結領域は、ＪＨ１、ＪＨ４ｂおよびＪＨ６ｂからなる群より選択されるヒトＪ遺伝子によりコードされる。
【００６３】
本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合し、そして表２に示されるような重鎖由来のＣＤＲ３領域（配列番号９；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１２）を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分を企図する。本発明はさらに、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合し、図６ａ〜ｃに示される核酸配列（配列番号１；配列番号３；配列番号５；配列番号７）によりコードされるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分を企図する。
【００６４】
本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合し、そしてＦａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントおよびＦｖフラグメントからなるリストより選択される抗原結合ドメインを含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分を企図する。
【００６５】
本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分であって、そしてその抗体が単鎖抗体である、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分を企図する。
【００６６】
本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、そしてその抗体がキメラ抗体である、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分を企図する。好ましい実施形態において、キメラ抗体は、異なるヒト抗体由来のフレームワーク領域およびＣＤＲ領域を含む。より好ましい実施形態において、このキメラ抗体は、二重特異的（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）である。より好ましい実施形態において、このキメラ抗体は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３と、放射標識した分子、酵素標識、蛍光標識、毒素、磁性因子、第二の抗体、親和性標識、エピトープタグ、抗生物質、補体タンパク質およびサイトカインからなるリストより選択される標識とについて二重特異的である。
【００６７】
本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分を企図し、ここでこの抗体またはその部分は、誘導体化されている。好ましい実施形態において、抗体またはその部分は、ポリエチレングリコール、少なくとも１つのメチル基もしくはエチル基または少なくとも１つの糖鎖部分を用いて誘導体化されている。
【００６８】
本発明の核酸分子を使用し、当業者に公知の技術および方法を用いて抗体誘導体を作製し得る。
【００６９】
別の実施形態において、核酸分子、ベクター、および宿主細胞が、変異した抗ＰＰＳ−３抗体を作製するために用いられ得る。これらの抗体は、重鎖および／または軽鎖の種々の可変ドメインにおいて変異されて、この抗体の結合特性が変化し得る。例えば、変異は、１つ以上のＣＤＲ領域においてなされて、ＰＰＳ−３について抗体のＫｄを増大もしくは減少させ得るか、Ｋｏｆｆを増加もしくは減少させ得るか、またはこの抗体の結合特異性を変化させ得る。部位特異的変異誘発における技術は、当該分野において周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、およびＡｕｓｕｂｅｌら、前出を参照のこと。好ましい実施形態において、変異は、生殖系列と比較して、抗ＰＰＳ−３抗体の可変領域において変化することが知られているアミノ酸残基でなされる。より好ましい実施形態において、１つ以上の変異が、生殖系列と比較して、本発明の抗ＰＰＳ−３抗体の１つの可変領域において変化することが知られているアミノ酸残基でなされる。別の実施形態において、核酸分子が、１つ以上のフレームワーク領域において変異され得る。変異は、抗ＰＰＳ−３抗体の半減期を増大させるようにフレームワーク領域または定常ドメインにおいてなされ得る。フレームワーク領域または定常ドメインにおける変異はまた、抗体の免疫原性を変化させるためにか、別の分子に対する共有結合もしくは非共有結合のための部位を提供するためにか、または補体結合のような特性を変化させるためになされ得る。変異は、１つの変異抗体において、フレームワーク領域、定常ドメイン、および可変領域の各々においてなされ得る。あるいは、変異は、１つの変異抗体において、フレームワーク領域、可変領域、または定常ドメインのうち１つにおいてのみなされ得る。
【００７０】
別の実施形態において、別のポリペプチドに連結された抗ＰＰＳ−３抗体の全てまたは一部を含む融合抗体または免疫付着因子が作製され得る。好ましい実施形態において、抗ＰＰＳ−３抗体の可変領域のみが、このポリペプチドに連結されている。別の好ましい実施形態において、抗ＰＰＳ−３抗体のＶＨドメインは、第１のポリペプチドに連結されており、一方で抗ＰＰＳ−３抗体のＶＬドメインは、ＶＨドメインとＶＬドメインとが互いに相互作用して抗体結合部位を形成し得るような様式で第１のポリペプチドと会合する第２のポリペプチドに連結されている。別の好ましい実施形態において、このＶＨドメインは、これらのＶＨドメインとＶＬドメインとが互いに相互作用し得るようにリンカーによりＶＬドメインと隔てられている（単鎖抗体も参照のこと）。次いで、ＶＨ−リンカー−ＶＬ抗体は、目的のポリペプチドに連結される。この融合抗体は、ＰＰＳ−３を検出するのに有用である。さらに、２つ（またはそれより多く）の単鎖抗体が互いに連結されている融合抗体が、作製され得る。これは、１つのポリペプチド鎖上に二価抗体もしくは多価抗体を作製することを望む場合、または二重特異的抗体を作製することを望む場合に有用である。１つの実施形態において、この融合抗体または免疫付着因子は、抗ＰＰＳ−３抗体由来の１つ以上のＣＤＲ領域を用いて調製される。
【００７１】
本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物を企図する。本発明は、さらに、この抗体またはその抗原結合部分、その薬学的に受容可能なキャリア、および容器を備えるキットを企図する。好ましい実施形態において、このキットは、使用のための指示書をさらに備える。
【００７２】
本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染を処置もしくは予防もしくは阻害するか、またはそのような感染により引き起こされる状態もしくは障害の重篤度を軽減するための方法を企図し、この方法は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに感染する危険があるか、またはこれに現在感染している患者に、本発明の抗体を含む薬学的組成物を投与する工程を包含する。
【００７３】
好ましい実施形態において、ヒト抗体は、非ヒト動物から得られる。より好ましい実施形態において、抗体は、モノクローナル抗体である。別の好ましい実施形態において、薬学的組成物は、注射、経粘膜の、経口の、吸入の、眼の、直腸の、長期作用する（ｌｏｎｇ  ａｃｔｉｎｇ）移植物、リポソーム、エマルジョン、クリーム、局所、または持続放出手段を介して投与される。別の好ましい実施形態において、抗体は、第二のタンパク質との融合物である。より好ましい実施形態において、この第二のタンパク質は、毒性ペプチド部分、補体タンパク質、放射標識タンパク質、サイトカインまたは抗生物質タンパク質からなるリストより選択される。別の好ましい実施形態において、この抗体は、放射標識、毒素、補体タンパク質、サイトカインまたは抗生物質で標識されている。別の好ましい実施形態において、患者は、免疫無防備状態の患者である。別の好ましい実施形態において、薬学的組成物は、毒素、補体タンパク質、放射標識タンパク質、サイトカイン、抗生物質、またはこれらの任意の組み合わせをさらに含む。
【００７４】
本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分を産生する単離された細胞を企図する。好ましい実施形態において、細胞は、細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、両生類細胞、哺乳動物細胞からなるリストより選択される。より好ましい実施形態において、哺乳動物細胞は、ヒト細胞、マウス細胞、ラット細胞、イヌ細胞、サル細胞、ヤギ細胞、ブタ細胞、ウシ細胞、およびハムスター細胞からなるリストより選択される。より好ましい実施形態において、哺乳動物細胞は、ＨｅＬａ細胞、ＮＩＨ  ３Ｔ３細胞、ＣＨＯ細胞、ＢＨＫ細胞、ＶＥＲＯ細胞、ＣＶ−１細胞、ＮＳ／０細胞、およびＣＯＳ細胞からなるリストより選択される。より好ましい実施形態において、細胞株は、ハイブリドーマである。
【００７５】
本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合するヒト抗体またはその抗原結合部分を産生する方法を企図し、この方法は、ａ）この抗体を産生し得る非ヒト細胞をこの抗体が産生される条件下で培養する工程；ｂ）細胞培養物からこの抗体を単離する工程、を包含する。
【００７６】
好ましい実施形態において、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分を産生する方法は、ハイブリドーマを利用する。
【００７７】
本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合するさらなるヒト抗体またはその抗原結合部分の産生を企図し、この産生は：ａ）Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ抗原組成物を用いて、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含む非ヒト動物を免疫する工程；ｂ）非ヒト動物に、この抗原組成物に対する体液性応答を開始することを可能にする工程；およびｃ）非ヒト動物からヒト抗体を単離する工程を包含する。
【００７８】
本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合するヒト抗体重鎖またはその部分をコードするヌクレオチド配列を含む、非ヒト動物から単離された核酸分子を企図する。好ましい実施形態において、核酸分子は、ヒト抗体を産生するハイブリドーマから単離される。
【００７９】
本発明は、図６ａ〜ｃに示されるようなヌクレオチド配列（配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７）を含み、ヒト抗体の重鎖またはその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子、またはそのフラグメントを企図し、ここでヒト抗体は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合する。好ましい実施形態において、単離された核酸分子は、ヒト抗体のうちの１〜３つの間のＣＤＲ領域をコードする配列を含む。本発明は、表２に示されるようなＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２）を含むヒト抗体重鎖またはその抗原結合部分をコードする核酸配列を含む、単離された核酸分子またはそのフラグメントをさらに企図し、ここでヒト抗体は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合する。
【００８０】
本発明は、ヒト抗体重鎖もしくはその抗原結合部分をコードする核酸分子またはそのフラグメントを含むベクターを企図し、ここでこの抗体は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに特異的に結合する。好ましい実施形態において、ベクターは、この核酸に作動可能に連結された発現制御配列をさらに含む。
【００８１】
本発明は、図６ａ〜ｃに示す通りのヌクレオチド配列（配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８）を含む、ヒト抗体軽鎖またはその抗原結合部分をコードする単離された核酸分子（またはそのフラグメント）を意図し、ここで、この抗体は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合する。好ましい実施形態では、単離された核酸分子は、ヒト抗体のうちの１〜３の間のＣＤＲ領域をコードする配列を含む。本発明はさらに、表２に示す通りのＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６）を含むヒト抗体軽鎖またはその抗原結合部分をコードする核酸配列を含む、単離された核酸分子（またはそのフラグメント）を意図し、ここで、このヒト抗体は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合する。本発明は、Ｍａｂ  ３Ｈ１について表２に示す通りのＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列（配列番号１７；配列番号１６）を含むヒト抗体軽鎖またはその抗原結合部分をコードする核酸配列を含む、単離された核酸分子（またはそのフラグメント）を意図し、ここで、このヒト抗体は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合する。
【００８２】
本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに特異的に結合する、ヒト抗体軽鎖またはその抗原結合部分をコードする、核酸分子（またはそのフラグメント）を含むベクターを意図する。好ましい実施形態では、このベクターは、この核酸に作動可能に連結された発現制御配列をさらに含む。
【００８３】
本発明は、以下を含む単離された宿主細胞を意図する：ａ）非ヒト動物から単離され、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合する、ヒト抗体の軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする、核酸分子；またはｂ）この核酸分子を含むベクター。
【００８４】
本発明は、以下を含む単離された宿主細胞を意図する：ａ）非ヒト動物から単離され、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合する、ヒト抗体の重鎖もしくはその抗原結合部分をコードする、核酸分子；またはｂ）この核酸分子を含むベクター。
【００８５】
本発明は、以下を含む単離された宿主細胞を意図する：ａ）非ヒト動物から単離され、重鎖もしくはその抗原結合部分をコードする核酸分子、およびＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合するヒト抗体の軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする、単離された核酸分子；またはｂ）これらの核酸分子を含むベクター。
【００８６】
本発明は、非ヒト動物から同定され、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合するヒト抗体の、重鎖もしくはその抗原結合部分、軽鎖もしくはその抗原結合部分、または軽鎖および重鎖の両方もしくはそれらの抗原結合部分を組換え産生する方法を意図し、この方法は、上記の宿主細胞を、この核酸分子が発現される条件下で培養する工程を包含する。
【００８７】
本発明は、上記の重鎖をコードする核酸分子のうちのいずれかによってコードされるか、または上記の宿主細胞のうちのいずれかから単離された、単離されたヒト抗体重鎖またはその抗原結合部分を意図し、ここで、この抗体は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合する。
【００８８】
本発明は、上記の重鎖をコードする核酸分子のいずれかによってコードされるか、または上記の宿主細胞のうちのいずれかから単離された、単離されたヒト抗体軽鎖またはその抗原結合部分を意図し、ここで、この抗体は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合する。
【００８９】
本発明は、上記の核酸分子のうちのいずれかを含む非ヒトトランスジェニック動物を意図する。好ましい実施形態では、この非ヒトトランスジェニック動物は、この核酸分子またはこれらの核酸分子を発現する。より好ましい実施形態では、この非ヒトトランスジェニック動物は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合するヒト抗体の、重鎖またはその抗原結合部分をコードする単離された核酸分子および軽鎖またはその抗原結合部分をコードする単離された核酸分子を含み、そしてこの非ヒト動物は、両方の核酸分子を発現する。より好ましい実施形態では、非ヒト動物は、マウス、ラット、ハムスター、ウシ、ヒツジ、霊長類、ウマおよびブタからなるリストより選択される。より好ましい実施形態では、単離された核酸分子またはその部分の発現から生じるヒト抗体は、動物のＢリンパ球またはその子孫から誘導された細胞の表面に発現される。別の好ましい実施形態では、単離された核酸分子またはその部分の発現から生じるヒト抗体は、その動物のリンパ、血液、乳汁、唾液または腹水中に分泌される。
【００９０】
本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分および第二のポリペプチド配列を含む、融合タンパク質を意図する。好ましい実施形態では、第二のポリペプチド配列は、エピトープタグ、アフィニティータグ、毒性ポリペプチド、抗生物質、酵素、第二の抗体配列、補体タンパク質、およびサイトカインからなるリストより選択される。
【００９１】
本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分を意図し、この抗体の重鎖アイソタイプは、μ、γ、δ、εまたはαである。
【００９２】
本発明は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分を意図し、ここで、この抗体またはその抗原結合部分は、以下の工程を包含するプロセスによって産生される：ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含む非ヒト動物を、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３調製物、ビルレントＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ細胞抽出物、弱毒化Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ細胞調製物、および殺傷Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ細胞調製物からなる群より選択される抗原で免疫する工程；ｂ）この非ヒト動物に、この抗原に対する免疫応答を開始させる工程；ならびにｃ）この抗体をこの非ヒト動物から単離する工程。
【００９３】
本発明は、夾雑ヒト生物物質を含まない動物または細胞から単離された、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分を意図する。好ましい実施形態では、生物物質は、ウイルス、酵素、ホルモン、サイトカイン、レセプター、レセプターリガンド、免疫グロブリン、補体、核タンパク質、および細胞質シグナル伝達タンパク質である。より好ましい実施形態では、ウイルスは、エプスタイン−バーウイルスまたはレトロウイルスである。
【００９４】
薬学的組成物は、従来の混合プロセス、溶解プロセス、造粒プロセス、糖衣丸作製プロセス、溶離プロセス、乳化プロセス、カプセル化プロセス、捕捉プロセスまたは凍結乾燥プロセスによって製造され得る。
【００９５】
従って、本発明に従って使用するための薬学的組成物は、活性な化合物を、薬学的に使用され得る調製物へと加工するのを容易にする、１以上の生理学的に受容可能なキャリア（賦形剤および補助剤を含む）を用いて、従来の様式で処方され得る。適切な処方は、選択される投与経路に依存する。
【００９６】
注射のために、本発明の薬剤は、水溶液中に、好ましくは、生理学的に適合性の緩衝液（例えば、Ｈａｎｋｓ溶液、Ｒｉｎｇｅｒ溶液、または生理学的食塩水緩衝液）中に処方され得る。経粘膜投与のために、透過すべき障壁に適切な浸透剤が、処方物中で用いられる。このような浸透剤は一般に、当該分野で公知である。眼での投与のために、適切な生理学的食塩水溶液中での懸濁物が、当該分野で周知であるように用いられる。
【００９７】
経口投与のために、化合物は、活性な化合物を、当該分野で周知の薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせることによって容易に処方され得る。このようなキャリアは、本発明の化合物が、処置されるべき患者による経口摂取のための錠剤、丸剤、糖衣丸、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁剤などとして処方されるのを可能にする。経口用途のための薬学的調製物は、所望の場合、適切な補助剤を添加した後、得られる混合物を必要に応じて粉砕し、そして顆粒の混合物を処理して、錠剤または糖衣丸の核を得ることによって、固体賦形剤として入手され得る。適切な賦形剤としては、以下が挙げられる：フィラー（例えば、糖（ラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトールを含む）；セルロース調製物（例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、イネデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ））。所望の場合、崩壊剤（例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、もしくはアルギン酸またはそれらの塩（例えば、アルギン酸ナトリウム））が添加され得る。
【００９８】
糖衣丸核には、適切なコーティングが提供される。この目的のために、濃縮した糖溶液が用いられ得る。この糖溶液は、アラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポール（ｃａｒｂｏｐｏｌ）ゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液および適切な有機溶媒もしくは溶媒混合物を必要に応じて含み得る。染料または色素は、活性化合物の用量の種々の組合せの同定のため、またはこれを特徴付けるために、錠剤または糖衣丸コーティングに添加され得る。
【００９９】
経口的に使用され得る薬学的調製物としては、ゼラチンから作製された押し込みばめカプセル剤、ならびにゼラチンおよび可塑剤（例えば、グリセロールまたはソルビトール）から作製された、軟質のシールされたカプセル剤が挙げられる。押し込みばめカプセル剤は、活性成分をフィラー（例えば、ラクトース）、バインダー（例えば、デンプン）および／または滑沢剤（例えば、タルクまたはステアリン酸マグネシウム）および必要に応じて安定剤と混合して含み得る。軟カプセル剤では、活性な化合物は、適切な液体（例えば、脂肪油、液体パラフィン、または液体ポリエチレングリコール）中に溶解または懸濁され得る。さらに、安定剤が添加され得る。経口投与のための全ての処方物は、このような投与に適切な投薬量であるべきである。
【０１００】
頬投与のために、組成物は、重要の様式で処方された錠剤または菓子錠剤の形態を採り得る。
【０１０１】
吸入による投与のために、本発明に従って使用するための化合物は、適切なプロペラント（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切なガス）を使用して、加圧パックまたはネブライザーからのエアゾールスプレー提示の形態で便利に送達される。加圧エアゾールの使用の場合、投薬量単位は、決まった（ｍｅｔｅｒｅｄ）量を送達するためのバルブを提供することによって決定され得る。化合物の粉末混合物および適切な粉末基剤（例えば、ラクトースまたはデンプン）を含む、吸入器または注入器における使用のための（例えば、ゼラチンの）カプセル剤またはカートリッジが処方され得る。
【０１０２】
これらの化合物は、注射による（例えば、ボーラス注射または連続注入による）非経口投与のために処方され得る。注射のために処方物は、添加された保存剤を伴って、単位投薬量形態で（例えば、アンプルまたは複数用量容器中で）提示され得る。組成物は、油性ビヒクルまたは水性ビヒクル中での懸濁剤、液剤または乳剤のような形態を採り得、そして懸濁化剤、安定剤および／または分散剤のような処方剤を含み得る。
【０１０３】
非経口投与のための薬学的処方物は、水溶性形態の活性な化合物の水溶液を含む。さらに、活性な化合物の懸濁物は、適切な油性注射懸濁物として調製され得る。適切な親油性溶媒またはビヒクルとしては、脂肪油（例えば、ゴマ油）または合成脂肪酸エステル（例えば、オレイン酸エチルまたはトリグリセリド）またはリポソームが挙げられる。水性注射懸濁物は、懸濁物の粘度を増大させる物質（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデキストラン）を含み得る。必要に応じて、懸濁物はまた、適切な安定剤または非常に濃縮された溶液の調製を可能にする化合物の溶解度を増大させる薬剤を含み得る。
【０１０４】
あるいは、活性成分は、使用前に適切なビヒクル（例えば、無菌の発熱物質を含まない水を用いて再構成するための粉末形態であり得る。
【０１０５】
これらの化合物はまた、例えば、従来の坐剤基剤（例えば、カカオ脂または他のグリセリド）を含む、直腸組成物（例えば、坐剤または保持浣腸）に処方され得る。
【０１０６】
先に記載された処方物に加えて、これらの化合物はまた、蓄積調製物として処方され得る。このような長期作用性処方物は、（例えば、皮下または筋肉内に）移植によって、または筋内注射によって投与され得る。従って、例えば、これらの化合物は、適切なポリマー材料または疎水性材料を用いて（例えば、受容可能な油中の乳剤として）もしくはイオン交換樹脂を用いて、または溶解性の不足した誘導体として（例えば、溶解性の不足した塩として）、処方され得る。
【０１０７】
本発明の疎水性化合物についての薬学的キャリアは、ベンジルアルコール、非極性界面活性剤、水混和性有機ポリマー、および水相を含む、共溶媒系である。共溶媒系は、ＶＰＤ共溶媒系であり得る。ＶＰＤは、無水エタノールで容量になるようにした、３％  ｗ／ｖベンジルアルコール、８％  ｗ／ｖ非極性界面活性剤ポリソルベート８０、および６５％  ｗ／ｖポリエチレングリコール３００の溶液である。ＶＰＤ共溶媒系（ＶＰＤ：５Ｗ）は、水溶液中の５％デキストロースで１：１希釈したＶＰＤからなる。この共溶媒系は、疎水性化合物をよく溶解し、そしてそれ自体、全身投与の際に低い毒性を生じる。当然、共溶媒系の比率は、その溶解性および毒性の特徴が破壊されることなく、大きく変動し得る。さらに、共溶媒成分の正体は、変動し得る：例えば、他の低毒性非極性界面活性剤を、ポリソルベート８０の代わりに用い得る；ポリエチレングリコールの画分は変動し得る；他の生体適合性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）は、ポリエチレングリコールの代わりとなり得る；そして他の糖または多糖は、デキストロースの代わりになり得る。
【０１０８】
あるいは、疎水性薬学的化合物のための他の送達システムが使用され得る。リポソームおよびエマルジョンは、疎水性薬物のための送達ビヒクルまたは送達キャリアの周知な例である。通常はより大きな毒性を有するが、ジメチルスルホキシドのような特定の有機溶媒もまた、使用され得る。
【０１０９】
さらに、化合物は、持続性放出系（例えば、治療剤を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリクス）を使用して送達され得る。種々の持続性放出物質が確立されており、そして当業者に周知である。持続性放出カプセルは、それらの化学的性質に依存して、数週間から１００日以上までにわたって、化合物を放出する。
【０１１０】
治療的試薬の化学的性質および生化学的安定性に依存して、タンパク質安定化のためのさらなるストラテジーが使用され得る。
【０１１１】
薬学的組成物もまた、適切な固相またはゲル相のキャリアまたは賦形剤を含み得る。そのようなキャリアまたは賦形剤の例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリエチレングリコールのようなポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１２】
本発明のＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的に結合する、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分は、薬学的に適合性の対イオンとの塩として提供され得る。薬学的に適合性の塩は、多くの酸（塩酸、硫酸、酢酸、酪酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸などが挙げられるがこれらに限定されない）と共に形成され得る。塩は、対応する塩基を含まない形態である水性溶媒中または他のプロトン性溶媒中でより可溶性である傾向がある。
【０１１３】
本発明のキットは、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの感染の阻害、予防もしくは処置、またはＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの感染により引き起こされる状態もしくは障害のために本発明の組成物を利用するための、手引書を含む。キットについて印刷された手引書により、当業者は本発明の方法を実施するためにキットを利用し得る。
【０１１４】
以下の例は例示的のみの目的によって提供される。これらは本明細書において開示された本発明の範囲を限定するよう意図されるものではない。
【実施例】
【０１１５】
（実施例１−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの莢膜多糖（ＰＰＳ−３）に対するモノクローナル抗体の作製）
本発明者らはヒト免疫グロブリン遺伝子座を有するトランスジェニックマウス（ＸｅｎｏＭｏｕｓｅＴＭ；Ｍｅｎｄｅｚら、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．１５、１４６〜５６頁（１９９７））を、精製ＰＰＳ−３（１０８１３株、ＡＴＣＣ）から作製されたＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３結合体を用いてワクチン接種した。例えば、Ｒｕｓｓｅｌｌら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ６８：１８２０−２６（２０００）を参照のこと。この実験において、本発明者らはＰＰＳ−３−破傷風トキソイド結合体（ＰＰＳ−３−ＴＴ）を使用し、そしてコントロールとして、本発明者らはＸｅｎｏＭｏｕｓｅＴＭマウスに市販のＴＴをワクチン接種した。本発明者らは総用量２．５μｇのＰＰＳ−３−ＴＴまたはＴＴを用いて、尾底部に皮下でワクチン接種した。本発明者らは、ワクチン接種の７〜１４日後にワクチン接種したＸｅｎｏＭｏｕｓｅＴＭマウスから脾臓を摘出し、そして脾細胞のマウス骨髄腫細胞株ＮＳＯとの融合によってハイブリドーマを作出し、そして製造業者の手引書に従いＣｌｏｎａＣｅｌｌＴＭ−ＨＹ（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ，．Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａ）を使用して細胞を増殖させた。
【０１１６】
次いで本発明者らは、以下のようにＰＰＳ−３と反応するＭａｂの分泌について、約１００個のハイブリドーマ細胞株を試験した。最初に、精製したｐｎｅｕｍｏｃａｃｃａｌ細胞壁多糖（ＣＷＰＳ；Ｓｔａｔｅｎｓ  Ｓｅｒｕｍｉｎｓｔｉｕｔ，Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）を用いて、ハイブリドーマ細胞株からの上清を吸収させた。次いで、１０μｇ／ｍｌのＰＰＳ−３（ＡＴＣＣ  ６３０３）でコーティングされたポリスチレンＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｇｌａｓｓ  Ｗｏｒｋｓ，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）において、この上清の系列希釈をインキュベートし、そして３７℃で１時間インキュベートした。このプレートを洗浄し、そして、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡおよびκ軽鎖に対するアルカリホスファターゼ（ＡＰ）結合体化ヤギ抗ヒト試薬、ならびにλ軽鎖に特異的なヤギ抗マウス試薬（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）と一緒に３７℃で１時間インキュベートした。次いで、ｐ−ニトロフェニルホスフェート基質（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を用いてプレートを８色させ、そしてＭＲＸ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｄｙｎａｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｃｈａｎｔｉｌｌｙ，ＶＡ）を用いて、４０５ｎｍで光学密度を測定することによって、抗体の結合を検出した。この実験においてコントロールとして、ＰＰＳワクチンを接種した個体由来のヒト血清標準（ポジティブコントロール；Ａｂａｄｉら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１７８：７０７−１６（１９９８））およびＩｇＭ骨髄腫抗体（ネガティブコントロール；Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｓｉｓｃｏ，ＣＡ）を使用した。また、Ｒｕｓｓｅｌら、Ｐｒｉｏｆｓｋｉら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｍ．６３：３００５−１４（１９９５）およびＩｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６８：１８２０−２６（２０００）に記載されるような、当該分野の標準的な技術を使用して、ブドウ球菌タンパク質Ａ（ＳＰＡ；Ｓｉｇｍａ）、ＴＴ、ＢＳＡ、ＣＷＰＳおよび二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）への結合について、ハイブリドーマ上清をスクリーニングした。
【０１１７】
（実施例２−Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に対するＭａｂの特徴付け）
本発明者らは、これらのハイブリドーマ由来の４つのヒトＭａｂを、１Ｆ１０／７Ｃ５、３Ｈ１１、１Ａ２およびＡ７と名付けた。各々のこれらＭａｂはＩｇＭであり、そしてＰＰＳ−３およびＳＰＡと反応するが、ＴＴにも、ＢＳＡにも、ＣＷＰＳにもｄｓＤＮＡにも有意な結合を示さなかった。
【０１１８】
本発明者らは、これらの抗体がＰＰＳ−３に特異的であるかどうかを決定した。１０μｇ／ｍｌのＰＰＳ−３でプレートをコーティングし、５μｇ／ｍｌのＭａｂ  １Ｆ１０／７Ｃ５、３Ｈ１１、１Ａ２およびＡ７を添加し、そして可溶性ＰＰＳ−３の漸増する濃度（０．１〜１００μｇ／ｍｌ）が抗体結合を阻害する能力をモニターすることによりＥＬＩＳＡを実施した。また、一定量のビオチン化Ｍａｂに、無標識Ｍａｂの連続希釈を添加して、ＰＰＳ−３でコーティングしたプレート中でインキュベートするリバースアッセイを実施した。両方の場合において、また、ポジティブコントロールとしてインヒビターを含まないプレートをインキュベートした。ＨＲＰ標識ストレプトアビジンを添加し、そしてペルオキシダーゼ基質を用いて発色させることによってビオチン化Ｍａｂの結合を検出した（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ＆Ｐｅｒｒｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）。ＭＲＸ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒを用いて、４５０ｎｍで光学密度を測定した。
【０１１９】
本発明者らは、Ｍａｂ  Ａ７、１Ｆ１０／７Ｃ５および１Ａ２は可溶性ＰＰＳ−３によって阻害されるが、３Ｈ１は阻害されないことを観察した（図１を参照のこと）。Ｍａｂ  Ａ７、１Ａ２、３Ｈ１および１Ｆ１０／７Ｃ５による、固相ＰＰＳ−３への５０％結合を付与する可溶性ＰＰＳ−３の濃度は、それぞれ、０．０７７ｆｍｏｌ、０．２３１ｆｍｏｌ、２．５７７ｆｍｏｌおよび０．１０３ｆｍｏｌだった。これらのデータから、相対的な見かけの親和性定数（ａＫａ）を計算し、これは最大の結合の５０％で、可溶性ＰＰＳ−３抗原濃度の逆数である。Ｍａｂ  Ａ７、１Ａ２および１Ｆ１０／７Ｃ５のａＫａ値は、それぞれ、１．７２×１０７Ｍ−１、２．５８×１０７Ｍ−１、１．５５×１０７Ｍ−１である。ＰＰＳ−３はＭａｂ  ３Ｈ１の結合を阻害しないので、Ｍａｂ  ３Ｈ１のａＫａを決定できなかった。
【０１２０】
（実施例３−エピトープの特異性）
本発明者らは、競合結合アッセイを実施し、Ｍａｂのエピトープ特異性を比較する。Ｍａｂのモル濃度を測定し、そしてＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ；Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）を用いてＥＺ−ｌｉｎｋ  ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ＬＣビオチン（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）の０．１Ｍ溶液を調製することによって、１つの試験  Ｍａｂをビオチン化する。次いで、溶液を同時にボルテックスしながら、１ｍｇのビオチンを徐々に添加する。この反応物を、室温で１時間インキュベートし、次いでこのビオチン化ＭａｂをＰＢＳ中で一晩透析する。ＰＰＳ−３でコーティングされたプレート上の各ＭａｂのＥＬＩＳＡ結合曲線を作成し、５０％飽和を生じるビオチン化Ｍａｂの濃度を決定し、そしてビオチン化Ｍａｂが非標識Ｍａｂと同様にＰＰＳ−３に結合することを確認する。
【０１２１】
競合実験のために、ビオチン化試験Ｍａｂの等容量の希釈液に、５０％飽和を生じる濃度で他のＭａｂの各々を添加し、そしてＰＰＳ−３でコーティングされたＥＬＩＳＡプレートを用いてインキュベートする。また、一定量のビオチン化Ｍａｂを非標識Ｍａｂの連続希釈物に添加し、そしてＰＰＳ−３でコーティングされたＥＬＩＳＡプレートを用いてインキュベートすることにより、リバースアッセイを実施する。また、両方のアッセイにおいて、このＭａｂがＰＰＳ−３でコーティングされたプレートに結合することの確認するために、インヒビターを使用せずにプレートをインキュベートした。ＨＲＰ−標識ストレプトアビジンを使用してビオチン化Ｍａｂの結合を検出し、次いでこの標識をペルオキシダーゼ基質を用いて発色させる（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ＆Ｐｅｒｒｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）。ＭＲＸ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒを用いて、４０５ｎｍで光学密度を測定する。
【０１２２】
本発明者らは、試験Ｍａｂとしてビオチン化Ｍａｂ  Ａ７を使用して、これらの実験を実施し、そしてＡ７が、１Ａ２、３Ｈ１および１Ｆ１０／７Ｃ５とは異なるエピトープ特異性を有することを実証した（図２）。他のＭａｂの濃度を増加させずに、ビオチン化Ｍａｂ  Ａ７の濃度を増加させることが、結果としてＰＰＳ−３結合の増加を生じることを観察し、このことは、他のＭａｂがＭａｂ  Ａ７の結合を変更しないことを確認した。同様に、一定濃度のビオチン化Ｍａｂ  Ａ７を使用し、そして他のＭａｂの濃度を増加させた場合、結合の変化は全く観察されなかった。これらの実験は、Ａ７によって認識されるエピトープが他のＭａｂによって認識されるエピトープとは異なることを示唆した。しかし、非常に高濃度のＭａｂ  ７Ｃ５（＞２５μｇ／ｍｌ）またはＭａｂ  ３Ｈ１（＞１２．５μｇ／ｍｌ）では、ビオチン化Ｍａｂ  Ａ７による結合のいくらかの阻害を観察し、このことはこれらのＭａｂが、Ｍａｂ  Ａ７によって認識されるエピトープと物理的に近いかまたは重複するエピトープを認識し得ることを示唆する。他のＭａｂのエピトープ特異性を比較するために、他のＭａｂの各々を用いてこれらの実験を行う。
【０１２３】
（実施例４−Ｓ．Ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に対するＭａｂの配列分析）
Ｍａｂ  １Ｆ１０／７Ｃ５、３Ｈ１１、１Ａ２およびＡ７を産生するハイブリドーマ由来のＰＣＲ増幅された重鎖（ＶＨ）ｃＤＮＡおよび軽鎖（ＶＬ）ｃＤＮＡを使用する配列決定のために、ＶＨおよびＶＬをコードする核酸分子を獲得した。ＶＨ定常領域プライマーおよびＶＬ定常領域を使用するＲＮＡの逆転写によって、ＶＨ  ｃＤＮＡおよびＶＬ  ｃＤＮＡを生成した。次いで、以下のようなＶＨ特異的およびＶＬ特異的なプライマーを使用するＰＣＲによって、ＶＨ領域およびＶＬ領域を増幅した：ＶＨセンス、５’−ＧＡＧＴＴＴＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧ−３’（配列番号１８）；ＶＨアンチセンス、５’−ＧＧＡＡＴＴＣＴＣＡＣＡＧＧＡＧＡＣＧＡＧ−３’（配列番号１９）、Ｖκセンス、５’−ＧＡＨＡＴＹＧＡＧＣＴＣＡＣＢＣＡＧＴＣＴＣＣＡ−３’（配列番号２０；ＨはＡ、ＣまたはＴを表し；ＹはＣまたはＴを表し；ＢはＣ、ＧまたはＴを表す）；Ｖκアンチセンス、５’−ＣＣＴＧＴＴＧＡＡＧＣＴＣＴＴＴＧＴＧＡＣ−３’（配列番号２１）。ＶＨＰＣＲ産物およびＶκＰＣＲ産物をゲル精製し、そしてこれらを製造業者の指示書に従って、ＴＡクローニングシステム（ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＴＭ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）のｐＣＲ１０００プラスミドにクローニングした。Ｍａｘｉプラスミドプロトコル（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ）を使用して、プラスミドＤＮＡを単離し、ジデオキシ鎖終結によって配列決定した。ＤＮＡ  ＰＬＯＴ（Ｖ  Ｂａｓｅ  Ｉｎｄｅｘ；ＭＲＣ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ；Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７７：１１０５−１６（１９９３））を使用して、ヒト免疫グロブリン配列のデータベースと、可変領域の配列を比較した。２つの独立した実験からクローニングしたＰＣＲ産物の核酸配列を決定し、そしてこれらは同一であった。これらの抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域の配列を、図６ａ〜ｃに示す。
【０１２４】
これらの核酸配列を分析して、そして表１および表７において示すように、本発明のＭａｂにおいて、どの遺伝子セグメントが使用されるかを決定した。４つ全てのＭａｂは、ヒトの重（ＶＨ）鎖可変領域遺伝子転写物および軽（ＶＬ）鎖可変領域遺伝子転写物の両方を表す。Ｍａｂの全てはＶＨ３遺伝子エレメントを使用する：Ｍａｂ  Ａ７および１Ａ２はＤＰ−３８／Ｖ３−１５遺伝子を使用し、１Ｆ１０／７Ｃ５はＤＰ−４７／Ｖ３−２３遺伝子を使用し、そして３Ｈ１はＤＰ−５０／Ｖ３−３３を使用するが、これらのＤＨ遺伝子セグメントおよびＪＨ遺伝子セグメントの使用が異なっている。Ｍａｂ  Ａ７および１Ａ２は同一のＶＨを表すが、異なるＣＤＲ３領域を有する。Ｍａｂ  ３Ｈ１は１４アミノ酸長のＣＤＲ３領域を有し、一方で他のＭａｂ  Ａ７、７Ｃ５および１Ａ２のＣＤＲ３は１０または１１のアミノ酸のみである。これらのＭａｂのＣＤＲ３領域は全て、それらの最も近縁の生殖細胞系列の遺伝子配列と比較して、１つまたは２つの体細胞変異を明らかにする（表２）。Ｍａｂ  １Ｆ１０／７Ｃ５、Ａ７および３Ｈ１は全て、９４位に正電荷残基を有するが、Ｍａｂ  １Ａ２はそうではない。Ｍａｂ  Ａ７については、ＣからＡへの塩基の変更が存在し、９４位においてスレオニン（Ｔ）からリジン（Ｋ）への変更を生じた。４つ全てのＭａｂは、Ｊｋ１軽鎖遺伝子エレメントを使用し（Ａ７はＤＰＫ１５を使用し、１Ａ２はＤＰＫ２６を使用し、１Ｆ１０／７Ｃ５はＤＰＫ１９を使用し、そして３Ｈ１はＤＰＫ５を使用する）、そして最も近縁の生殖細胞系列の配列におけるトリプトファン（Ｗ）と比較して、Ｊｋ１軽鎖における９６位にアルギニン（Ｒ）を有する。Ｍａｂ  ３Ｈ１は、最も近縁の生殖細胞系列の遺伝子と比較して、Ｖｋ１  ＣＤＲ２領域２つの置換変異を有する（表２）。
（実施例５−Ｍａｂは補体活性化を媒介する）
補体は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染に対する抗体媒介性保護のために非常に重要である。本発明者らは、ＥＬＩＳＡを実施して、これらのＭａｂがヒトの補体経路を活性化し得、そしてＰＰＳ−３に対してＣ３を堆積（ｄｅｐｏｓｉｔ）させ得るかどうかを決定した。１０μｇ／ｍｌのＭａｂまたは骨髄腫ＩｇＭ（ネガティブコントロール）およびＣ２欠損のヒト血清、Ｂ因子欠損のヒト血清、または正常なヒト血清（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から選択した、４％の補体供給源からなる溶液を含む、１０μｇ／ｍｌのＰＰＳ−３を用いて、ＥＩＳＡプレートをコーティングした。次いで、これらのプレートを３７℃で１時間インキュベートし、洗浄し、ヤギ抗ヒトＣ３（Ｓｉｇｍａ）と共に、３７℃で１時間インキュベートし、そして再度洗浄した。これらのプレートを、ｐ−ニトロフェニルホスフェート基質（Ｓｉｇｍａ）と共にインキュベートすることによって、抗体のＣ３への結合を検出した。ＭＲＸ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒを用いて、４０５ｎｍで光学密度を測定した。
【０１２５】
また、ＦＡＣＳによってＣ３堆積物をモニターした。加熱殺傷したＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅを、上記の補体供給源の各々１％と共に、８ｍｇ／ｍｌのＭａｂまたはＩｇＭコントロールと共に３７℃で３０分間インキュベートした。次いで、ＨＢＳＳでサンプルを洗浄し、そしてＦＩＴＣ標識したヤギ抗ヒトＣ３（Ｃａｐｐｅｌ，Ｄｕｒｈａｍ，ＮＣ）と共に室温で１時間インキュベートした。ＰＢＳで洗浄して、そして冷ＮａＣｌ−ＥＧＴＡ中に再懸濁した。ＦＡＣＳにてＣ３堆積を分析し、そしてフローサイトメトリー分析をＦＡＣＳｃａｎにて実施した（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）。
【０１２６】
古典的補体経路の影響を、Ｂ因子欠損血清を使用する結果から決定し得、そして代替補体経路の影響を、Ｃ２欠損血清を使用する結果から決定し得る。任意の補体供給源を使用した場合、Ｍａｂが固相ＰＰＳ−３へのＣ３の堆積を促進することを観察した（図４）。これらのデータは、４つ全てのＭａｂが、ＰＰＳ−３への補体の結合を促進し得ることを示す。Ｂ因子欠損血清またはＣ２欠損血清のどちらかを使用する場合、Ｍａｂ  Ａ７および１Ｆ１０／７Ｃ５が、Ｍａｂ  １Ａ２または３Ｈ１よりも、より大いにＣ３堆積を媒介することを示した。これらの結果をインビボで確認した（データは示さず）。
【０１２７】
（実施例６−マウス保護実験）
本発明者らは、本発明のモノクローナル抗体の保護効果を評価した。Ｍａｂまたはコントロールを、滅菌したＰＢＳ中に、１０μｇ／ｍｌまたは１μｇ／ｍｌのどちらかの濃度に希釈した。１ｍｌの希釈したＭａｂ、またはコントロールとして、ヒト骨髄腫ＩｇＭ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）もしくは滅菌生理食塩水のみを、マウスのいくつかの系統に腹腔内注射した。Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）より、６〜８週齢のメスＢａｌｂ／ｃマウスを入手した。側方尾静脈に、Ｍａｂ注射の１時間後に、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの５０コロニー形成単位を含有する、０．２ｍｌのトリプシン大豆ブロスを注射することによって、マウスをチャレンジした。細菌の無毒性をプレートすることによって確認した。この接種用量を、注射後の４８時間までに５０％のマウスを殺す用量（４８時間のＬＤ５０）よりも１０倍多い。あるいは、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅで、マウスに腹腔内接種した。次いで、マウスを日毎に観察し、そいて生存をモニターする。Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ対数ランクの生存テストを使用して、各々の群における生存マウスの数を比較する。
【０１２８】
マウスの群に、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの５ＣＦＵ、５０ＣＦＵまたは５００ＣＦＵで腹腔内接種し、そして２日毎にそれらの生存をモニターした。いずれかのネガティブコントロール（骨髄腫ＩｇＭまたはＰＢＳ；図５）で注射したマウスにおいて、全てのマウスの系統へのＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの接種が、４８時間以内の致死の感染を生じることを観察した。Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅでの接種についてのＬＤ５０が、≦５ＣＦＵであることを決定した。さらに、これらのマウスは全て、感染の２４時間以内に明らかに病気であった。
【０１２９】
本発明のＭａｂの、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅから野生型マウスを保護する能力を決定した。Ｍａｂ  Ａ７および１Ｆ１０／７Ｃ５の受動性投与が、１μｇ用量（５０％生存）および１０μｇ用量（８０〜９０％生存）の抗体の両方で、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに感染したＢａｌｂ／ｃマウスの生存を延ばすことを観察した（図５）。同様に、Ｍａｂ  １Ａ２の受動性投与が、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに感染したＢａｌｂ／ｃマウスの生存を有意に延ばすことを観察した（ただし、１０μｇ用量のみ）（生存率８０〜９０％；図５）。対照的に、Ｍａｂ  ３Ｈ１の１μｇまたは１０μｇのどちらかを受動性投与した場合、生存の延長を観察しなかった（図５）。
【０１３０】
全ての実験において、コロニー形成単位（ＣＦＵ）を計測することによって、無害性の生細菌数を確認した。これらの実験は、ヒト生殖細胞系列の遺伝子が、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に対して、保護的で血清型特異的なヒト抗体を産生するために使用され得ることを実証した。
【０１３１】
本明細書および特許請求の範囲の全体にわたって、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」のような変型は、ある定まった整数の包含、または整数群の包含を意味するが、任意の他の整数または整数群の除外を意味するものではないことが理解される。
【０１３２】
本明細書において記載された全ての刊行物および特許出願は、本明細書において、各々の刊行物または特許出願が特定かつ個々に参考として援用されることが示されるように、参考として援用される。前述の発明は、明解な理解の目的のために、例示および実施例の方法によっていくらか詳細に記載されているが、添付の特許請求の範囲の精神または範囲から逸脱することなしに特定の変更および改変がこれらになされ得ることが、本発明の教示を見ると当業者に直ちに明かである。
【０１３３】
【表１】
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【０１３４】
【表２】
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【図面の簡単な説明】
【０１３５】
【図１】図１は、Ｍａｂが、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３に特異的であることを実証する。ｙ軸は、ｘ軸に示される可溶性Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ＰＰＳ−３の濃度の存在下でのＭａｂのＯＤを表す。
【図２】図２は、Ｍａｂ  Ａ７が、Ｍａｂ  １Ａ２、３Ｈ１、および１Ｆ１０／７Ｃ５と異なるエピトープを認識すること実証する。四角は、固定された濃度の非標識Ｍａｂ  １Ａ２（Ａ）、３Ｈ１（Ｂ）、または１Ｆ１０／７Ｃ５（Ｃ）およびビオチン化Ｍａｂ  Ａ７の連続希釈物に起因するシグナルを表す。丸は、固定された濃度のビオチン化Ｍａｂ  Ａ７および非標識Ｍａｂ  １Ａ２（Ａ）、３Ｈ１（Ｂ）、または１Ｆ１０／７Ｃ５（Ｃ）の連続希釈物に起因するシグナルを表す。
【図３】図３は、相補性供給源としてＣ２枯渇ヒト血清（Ａ）およびＢ因子枯渇ヒト血清（Ｂ）を用いた、Ｍａｂにより媒介されるＣ３の堆積のＦＡＣＳ分析を示す。パネル（Ａ）において、ヒストグラムにおける中間チャネル蛍光強度の幾何学的平均値は、上から下に向かって、４．１、１１．９２、１０．５５、６．６、および６．３４であり；パネル（Ｂ）において、ヒストグラムにおける中間チャネル蛍光強度の幾何学的平均値は、上から下に向かって、２．５３、９．４８、１０．３４、４．４６、および４．５８であった。
【図４】図４は、Ｍａｂにより媒介されるＣ３の堆積のＥＬＩＳＡ決定を示す。薄い灰色のバーは、Ｃ２欠失ヒト血清を用いた結果を表し、そして濃い灰色のバーは、因子Ｂ欠失ヒト血清を用いた結果を表す。ｙ軸は、ｘ軸に示されるＭａｂを使用した場合に得られるＯＤを表す。
【図５】図５は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清型３による感染後のＢａｌｂ／ｃマウスの生存性を示す。左のグラフは、マウスに、示されるＭａｂを１０μｇ注射した場合の結果を示す。ｙ軸は、ｘ軸に示される感染後日数時に生存しているマウスの数を示す。右グラフは、マウスに、示されるＭａｂを１μｇ注射した場合の結果を示す。
【図６Ａ】図６Ａは、１Ｆ１０／７Ｃ５重鎖および軽鎖（それぞれ、配列番号１および配列番号２）ならびに３Ｈ１重鎖（配列番号３）の核酸配列を示す。
【図６Ｂ】図６Ｂは、３Ｈ１軽鎖（配列番号４）ならびに１Ａ２重鎖および軽鎖（それぞれ、配列番号５および配列番号６）の核酸配列を示す。
【図６Ｃ】図６Ｃは、Ａ７重鎖および軽鎖（それぞれ、配列番号７および配列番号８）の核酸配列を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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