(57)【要約】本発明は、（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌおよび添加剤を含有する新規な薬学的組成物に関する。これは、抗酸化剤として使用され、そして新規な供給源、すなわち、Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍから得られる。本発明はまた、植物供給源、すなわち、Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍから活性化合物（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌを単離する方法および化合物（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌの抗酸化剤としての使用を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗酸化剤として使用される薬学的組成物であって、有効量の（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌを、薬学的に受容可能な添加剤とともに含む、薬学的組成物。
【請求項２】
前記添加剤は、（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌの効力に影響を与えないか、または妨害しないように選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記添加剤は、栄養分である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記栄養分は、炭水化物であり得る、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記栄養分は、糖であり得る、請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
前記栄養分は、タンパク質であり得る、請求項３に記載の組成物。
【請求項７】
前記栄養分は、脂肪であり得る、請求項３に記載の組成物。
【請求項８】
前記栄養分は、適切な薬学的に受容可能な担体であり得る、請求項３に記載の組成物。
【請求項９】
（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌは、公知の抗酸化剤と比較して低用量で、抗酸化剤／フリーラジカル捕捉剤として有効である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
投与される（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌの量は、一日に少なくとも２回の投与で、一投与あたり約３００ｍｇ〜３８０ｍｇの範囲である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物は、錠剤、カプセル、シロップ、または粉末の形態で投与され得る、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
植物Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍからの、請求項１に記載の組成物において使用される有効成分（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌの単離方法であって、
ａ）Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍの乾燥木粉をヘキサンで抽出する工程；
ｂ）工程ａ）からの残渣をクロロホルムでさらに抽出する工程；
ｃ）工程ｂ）のクロロホルム溶液を減圧下で濃縮して、暗褐色の抽出物を得る工程；
ｄ）シリカゲル（６０〜１２０メッシュ）カラム上に充填したシリカゲル（６０〜１２０メッシュ）上に工程ｃ）の暗褐色の抽出物を吸着させる工程；
ｅ）工程ｄ）の生成物を、クロロホルム−メタノール混合物の勾配で溶出する工程；および
ｆ）溶出した画分をクロロホルム中の５％メタノールで回収し、当該回収した画分を濃縮することにより、純粋な（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌを得る工程を包含する、方法。
【請求項１３】
使用された溶媒は、ヘキサン、クロロホルム、および／またはメタノールである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌの収率は、前記乾燥植物材料の約０．０６１％である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
（＋）−Ｏｌｉｖｉｌは、新たな供給源であるＳｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍから得られる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
動物および哺乳動物のための抗酸化剤またはフリーラジカル捕捉剤としての（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌの使用。
【請求項１７】
抗酸化剤として有用な組成物の製造のための、（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌの使用。
【請求項１８】
（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌを含有する組成物は、経口投与される、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記組成物は、栄養分である添加剤を含む、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
前記栄養分は、炭水化物であり得る、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
前記栄養分は、糖であり得る、請求項１９に記載の使用。
【請求項２２】
前記栄養分は、タンパク質であり得る、請求項１９に記載の使用。
【請求項２３】
前記栄養分は、脂肪であり得る、請求項１９に記載の使用。
【請求項２４】
前記栄養分は、薬学的に受容可能なキャリアであり得る、請求項１９に記載の使用。
【請求項２５】
（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌを含有する組成物は、一日に少なくとも２回の投与で、一投与あたり３００ｍｇ〜３８０ｍｇの範囲で投与される、請求項１７に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新たな植物供給源であるＳｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍからの化合物、すなわち、（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌの好収率での単離に関する。現在使用されている医薬として重要な親油性の抗酸化剤、すなわち、プルブコール（Ｐｒｕｂｕｃｏｌ）およびα−トコフェロール（Ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ）よりも良好な抗酸化剤分子であり、有用であることが証明されている。炎症性疾患状態、アテローム性動脈硬化症、糖尿病性合併症、癌、肝毒症、ならびに酸化ストレスによって、および／もしくはフリーラジカルの生成の増大に起因する過酸化負荷によって、またはフリーラジカルの捕捉下で媒介または促進される種々の疾患状態において、より良好な治療力を有し得る。
【背景技術】
【０００２】
くだものおよび野菜の豊富な食事と心血管疾患および特定の形態の癌の危険性の減少との間の関連を示すかなりの量の病理学的証拠が存在する。これらの保護効果に寄与する有効成分は、基本的に抗酸化剤植物化学物質以外にはないと一般的に考えられている。
【０００３】
過去数十年における研究により、フリーラジカル捕捉剤／抗酸化剤の、抗突然変異、抗炎症、抗アテローム硬化性（ａｎｔｉａｍｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ）、抗糖尿病性、抗肝毒性、抗老化性としての、および種々の神経性疾患における、有益な効果を示す十分な証拠が蓄積されている。それゆえ、新たな抗酸化剤の原理を探索することが、白内障、リウマチ疾患、アテローム性動脈硬化症、アルツハイマー病、およびその他の神経変性状態のような病理学的状態の薬理学的処置を改善するために必須になってきている。
【０００４】
従って、薬理学的なアプローチは、抗酸化剤成分に豊富な潜在的な資源の探索に集中してきた。それゆえ、抗酸化剤成分を豊富に含む植物の医薬的な重要性が注目されている。
【０００５】
Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍは、伝統的なインドの医療制度において使用される薬用植物であり、そして利尿剤、結石溶解剤、去痰薬、強心剤、催淫薬、食欲増進薬、抗炎症剤、抗菌剤、消化不良、下痢、腎結石、膀胱結石、咳、喘息、高度口渇、痔、および胃酸過多の疾患状態のための製剤において広範に支持されている（非特許文献１）。抗菌、抗真菌、低血糖活性を有し、そしてｐ３８８リンパ性白血病細胞に対抗することがさらに報告されている（非特許文献２）。従って、このような重要な生物学的特性を有する分子を探すことが適切となってきている。これに関連して、Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍの植物化学的調査が行われている。出願人らの努力によって、（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌを、良好な収率で単離することができた。（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌは、表１に示されるようないくつかの活性を有することが知られている。
【表１】
2005500343.tif 000002
【非特許文献１】
Indian Medicinal Plants, Vol. 5 p 192
【非特許文献２】
Ind. Jour, of Exp. Biol., 1971, 9, 100
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の主な目的は、抗酸化剤として使用される、（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌおよび添加剤を含有する新規な組成物を提供することである。
【０００７】
本発明の別の目的は、大きな収率で（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌを得るための新規な供給源を提供することである。
【０００８】
本発明のさらに別の目的は、植物供給源、すなわち、Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍから（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌを産生するための方法を提供することである。
【０００９】
本発明のさらに別の目的は、（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌを抗酸化剤として使用することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
従って、本発明は、抗酸化剤として有用な、（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌおよび添加剤を含有する新規な組成物を提供する。本発明はさらに、新たな供給源、すなわち、Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍから（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌを単離するための方法を提供する。
【００１１】
本発明により、（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌが新たな供給源であるＳｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍから、大きな収率で単離されることが見いだされた。さらに、（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌは、抗酸化特性を示すことが見いだされている。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
抗酸化剤組成物は、最近、様々な原因による疾患、すなわち、フリーラジカルが重要な役割を果たす、冠状動脈性心疾患、癌、糖尿病、リウマチ病、および炎症性状態におけるそれらの広範な種類の活性により注目を浴びるようになった。現在、天然資源から抗酸化物質を利用すること、および収穫することに、多大な注目が向けられている。
【００１３】
化合物（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌは、純粋な形態で使用される。従って、その使用は、現在使用されている類似した特性を有する化合物の混合物より有利であり得る。（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌの単離方法は非常に経済的であることに留意することもまた重要である。
【００１４】
従って、本発明は、抗酸化剤成分を含有する有用な供給源、Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍを提供する。この供給源から、（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌが純粋かつ強力な抗酸化分子として単離される。（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌは、現存する薬学的／治療的に受容された抗酸化剤であるプロブコールおよびαトコフェロールと比較された。（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌは、上記の参照薬物よりも優れており、従って、薬学的／治療的に受容可能な添加剤とともに使用され得ることが見いだされた。
【００１５】
本発明の１つの実施形態において、（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌは、上記の参照薬物よりも低用量で有効であり得る。
【００１６】
本発明の１つの実施形態は、抗酸化剤として有用な薬学的組成物に関する。この薬学的組成物は、有効量の（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌを、薬学的に受容可能な添加剤と組み合わせて、またはそれと関連して含有する。
【００１７】
本発明の別の実施形態において、その薬学的に受容可能な添加剤は、（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌの効力に影響を及ぼさないか、または妨害しないように選択される。
【００１８】
本発明のさらに別の実施形態において、添加剤は、炭水化物、糖、タンパク質、脂質、および薬学的に受容可能な担体のような栄養分から選択される。
【００１９】
本発明の１つの実施形態において、（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌの添加剤に対する比は、０．１：１０から３：１０の間、好ましくは、０．４：１０から２：１０の間の範囲である。
【００２０】
本発明のさらに別の実施形態において、投与される（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌの量は、一日に少なくとも２回の投与で、一投与あたり３００ｍｇから３８０ｍｇの間の範囲である。
【００２１】
本発明のさらに別の実施形態では、上記組成物は、錠剤、カプセル、シロップ、または粉末の形態において経口経路によって投与される。
【００２２】
本発明のもう一つの実施形態は、植物Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍから（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌを単離する方法に関する。この方法は、以下の工程を包含する：ａ）Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍの乾燥木粉をヘキサンで抽出する工程；ｂ）工程ａ）からの残渣をクロロホルムでさらに抽出する工程；ｃ）工程ｂ）のクロロホルム溶液を減圧下で濃縮して、暗褐色の抽出物を得る工程；ｄ）シリカゲル（６０〜１２０メッシュ）カラム上に充填したシリカゲル（６０〜１２０メッシュ）上に工程ｃ）の暗褐色の抽出物を吸着させる工程；ｅ）工程ｄ）の生成物を、クロロホルム−メタノール混合物の勾配で溶出する工程；およびｆ）溶出した画分をクロロホルム中の５％メタノールで回収し、そして当該回収した画分を濃縮することにより、純粋な（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌを得る工程。
【００２３】
本発明の別の実施形態において、使用される溶媒は、ヘキサン、クロロホルム、およびメタノールから選択される。
【００２４】
本発明の別の実施形態では、得られる（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌの収率は、前記乾燥植物材料の約０．０６１％である。
【００２５】
もう一つの実施形態は、動物および哺乳動物のための抗酸化剤またはフリーラジカル捕捉剤としての（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌの使用に関する。
【００２６】
さらに別の実施形態において、本発明は、抗酸化剤として有用な組成物の製造のための、（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌの使用に関する。
【００２７】
本発明のさらに別の実施形態において、本発明は、（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌは、経口投与される。
【００２８】
本発明のさらに別の実施形態は、フリーラジカル捕捉の処置のための方法に関する。この方法は、有効量の（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌを、それを必要とする被験者に投与する工程を包含する。好ましくは、（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌは、一日２回、一投与あたり３００ｍｇ〜３８０ｍｇの範囲で投与される。
【００２９】
それゆえ、Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍは、（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌの新規な供給源であり、この植物中において（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌが良好な収率で存在することにより、本発明がより重要なものとなる。（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌと異なる植物との収率の比較を表２に示す。
【表２】
2005500343.tif 000003
【００３０】
本発明は、新規な植物供給源からの抗酸化成分としての（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌの単離を組み込み、医薬として重要な抗酸化剤分子と比較したそのフリーラジカル捕捉特性を特定する。
【００３１】
本発明は、以下の実施例においてさらに説明される。本発明は、以下の実施例は例示として示されており、本発明を決して限定するものではない。
【実施例１】
【００３２】
（実験プロトコル：上記リグナンの単離方法）
Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍ（３Ｋｇ）の乾燥木粉末を、ソックスレー抽出器にかけた。その粉末を、まず、ヘキサンで抽出した。ヘキサンの抽出物からの残渣を、さらにクロロホルムで抽出した。クロロホルム溶液を、減圧下で濃縮した。暗褐色の抽出物（２２ｇ）を、シリカゲル（６０〜１２０メッシュ）に吸着させ、そしてシリカゲル（６０〜１２０メッシュ）カラム（直径４ｃｍ、高さ１００ｃｍ）に充填した。
【００３３】
このカラムを、クロロホルムメタノール勾配で溶出する。クロロホルムメタノール勾配は、特定の画分を得ることによって、所望の化合物が得られるように選択される。このケースでは、クロロホルム中５％メタノールで溶出した画分が分離して回収され、そして濃縮される。
【００３４】
上記の画分を、さらに、シリカゲルカラム（＞２００メッシュ、直径２．５ｃｍ、長さ５０ｃｍ）を使用し、クロロホルムメタノール勾配を使用して、さらに精製する。クロロホルム中５％メタノールでの溶出物から、純粋な（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌ（２．２ｇ）を得た。（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌの分光化学的データを以下に示す。
【化１】
2005500343.tif 000004
【実施例２】
【００３５】
（フリーラジカル捕捉抗酸化能のインビトロ評価）
この化合物の抗酸化活性を、最も広範に使用されるフリーラジカルである、１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジルラジカル（ＤＰＰＨ）を捕捉するその能力／効力について試験した。十分に受容され、試験された抗酸化剤（すなわち、プロブコールおよびα−トコフェロール）を参照化合物として用いた。１ｍｇ／ｍｌＤＭＳＯ濃度のその化合物を調製し、引き続いて、ＤＭＳＯでより低濃度に希釈した。２００μｌの試験化合物を、トリスＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．４）中で１ｍｌに再構築した。エタノールに溶解させた等容量の５００μＭのＤＰＰＨラジカルを、これと反応させた。暗室での４５分間のインキュベーション後、５１７ｎｍでの吸光度を記録した。ラジカル捕捉活性の割合（％）を、それに従って算出した。すべての読みを、３回とった。結果（図１／表３）は、考慮対象の化合物は、強力な抗酸化／フリーラジカル捕捉能を有することを示す。
【表３】
2005500343.tif 000005
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】図１は、Ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐｅｒｓｏｎａｔｕｍ由来の（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌおよび参照化合物の抗酸化剤（抗フリーラジカル、ＤＰＰＨ）活性を示す。
【図２】図２は、化合物（＋）−Ｃｙｃｌｏｏｌｉｖｉｌの分子構造を示す。
【図１】
2005500343.tif 000006
【国際公開パンフレット】
2005500343.tif 000007
2005500343.tif 000008
2005500343.tif 000009
2005500343.tif 000010
2005500343.tif 000011
2005500343.tif 000012
2005500343.tif 000013
2005500343.tif 000014
2005500343.tif 000015
2005500343.tif 000016
2005500343.tif 000017
【国際調査報告】
2005500343.tif 000018