(57)【要約】マグネシウムを用いる処置によって、いかなる止血性合併症も有意な血流力学的合併症も伴うことなく、高剪断血流条件下での急性ステント血栓症の阻害がもたらされる。本出願において、高剪断血流条件下でのステント血栓症を阻害するための方法、高剪断血流条件下でのステント血栓症を減少させるための方法、および高剪断血流条件下で血栓症を阻害するための方法が提供される。また、本願は、身体の脈管中に挿入するように構成された医療器具に関する。
2005500330.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
高剪断血流条件下でのステント血栓症を阻害するための方法であって、該方法は、
トロンボゲン形成刺激に対して被験体が曝される約１５分前と約９０分前との間に、有効量のマグネシウムベースの化合物を該被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記マグネシウムベースの化合物が、硫酸マグネシウム、酸化マグネシウム、および塩化マグネシウムからなる群より選択される、方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法であって、前記マグネシウムベースの化合物が、静脈内投与される、方法。
【請求項４】
請求項１に記載の方法であって、前記マグネシウムベースの化合物が、経口投与される、方法。
【請求項５】
請求項１に記載の方法であって、前記マグネシウムベースの化合物が、注射として投与される、方法。
【請求項６】
請求項１に記載の方法であって、前記マグネシウムベースの化合物が、トロンボゲン形成刺激に対して前記被験体が曝される３０分前と６０分前との間に、該被験体に投与される、方法。
【請求項７】
請求項１に記載の方法であって、
前記被験体の心血管領域中にステントを挿入し、それにより該被験体をトロンボゲン形成刺激に対して曝す工程、
をさらに包含する、方法。
【請求項８】
請求項１に記載の方法であって、有効量のヘパリンを前記被験体に投与する工程をさらに包含する、方法。
【請求項９】
高剪断血流条件下でのステント血栓症を減少させるための方法であって、該方法は、
有効量のマグネシウムベースの化合物を用いてステントをコーティングする工程；および
該ステントを身体通路中に挿入する工程；
を包含する、方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法であって、前記マグネシウムベースの化合物が、硫酸マグネシウム、酸化マグネシウム、および塩化マグネシウムからなる群より選択される、方法。
【請求項１１】
請求項９に記載のステント血栓症を減少させるための方法であって、前記マグネシウムベースの化合物が、静脈内投与される、方法。
【請求項１２】
請求項９に記載の方法であって、
前記ステントを、該ステントを身体通路中に挿入するための器具に結合させる工程、
をさらに包含する、方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の方法であって、前記器具が、マグネシウム含有化合物でコーティングされている、方法。
【請求項１４】
請求項９に記載の方法であって、
ステント誘導性のトロンボゲン形成刺激に対して被験体を曝す前に、３ｍＥｑ／Ｌと５ｍＥｑ／Ｌとの間の血清中マグネシウムレベルが達成されるように、該被験体にマグネシウムベースの化合物を投与する工程、
をさらに包含し、該投与する工程は、前記ステントを身体通路中に挿入する工程の前に実行される、方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載のステント血栓症を減少させるための方法であって、前記被験体が前記ステント誘導性のトロンボゲン形成刺激に対して曝される少なくとも１５分間前〜２０分間前に、前記血清中マグネシウムレベルが達成される、方法。
【請求項１６】
高剪断血流条件下で血栓症を阻害するための方法であって、該方法は、
トロンボゲン形成刺激に対して曝される前に２ｇのボーラスとしてマグネシウムベースの化合物を投与する工程、
その後、マグネシウムベースの化合物の１ｇ／時間〜１．５ｇ／時間の維持輸液を投与する工程、
を包含する、方法。
【請求項１７】
請求項１６に記載の方法であって、前記ボーラスが、１０分間〜２０分間の期間にわたって投与される、方法。
【請求項１８】
請求項１６に記載の方法であって、トロンボゲン形成刺激に対して曝された後に、前記維持輸液が投与される、方法。
【請求項１９】
請求項１６に記載の方法であって、前記維持輸液が、８時間〜１２時間の期間にわたって投与される、方法。
【請求項２０】
請求項１６に記載の方法であって、前記マグネシウムベースの化合物が、硫酸マグネシウム、酸化マグネシウム、および塩化マグネシウムからなる群より選択される、方法。
【請求項２１】
身体の脈管中に挿入するために構成された医療器具であって、該医療器具は、心臓領域における血栓症の発生率を低下するに有効な量のマグネシウム含有化合物でコーティングされている、医療器具。
【請求項２２】
請求項２１に記載の医療器具であって、前記心臓領域中に挿入するために構成されたステントである、医療器具。
【請求項２３】
請求項２１に記載の医療器具であって、前記心臓領域に挿入するために構成されたカテーテルである、医療器具。
【請求項２４】
請求項２１に記載の医療器具であって、前記マグネシウム含有化合物が、硫酸マグネシウム、酸化マグネシウム、および塩化マグネシウムからなる群より選択される、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（１．発明の分野）
本発明は、血栓症を処置する方法、そしてより詳細には、ステント内血栓症のような状態を予防するためのマグネシウムの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
（２．関連技術の討論）
冠状動脈疾患は、国の最大の健康関心事の１つである。アメリカ心臓協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｅａｒｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）によれば、この疾患は、１３５０万人のアメリカ人を冒している。これら人々のほぼ百万人が心臓発作を経験している。その他の人々は、アンギナを経験し、冠状動脈バイパス手術を受け、および／または心臓移植を受けた。冠状動脈疾患の後期段階、またはより重篤な段階にある人々は、うっ血性心不全の種々の段階にいる。
【０００３】
食餌中のコレステロールおよび飽和脂肪の増加と関連している冠状動脈疾患は、処置可能である。冠状動脈疾患の１つの主要な症状は、動脈壁のような血管壁に沿うこれらの脂質材料の沈着である。これは、管腔の進行性狭窄、および動脈硬化症を生じる。このような沈着は、血管形成術と呼ばれる手順を通じて処置され得る。血管形成術の間、医師は、動脈（代表的には、鼠径部動脈）中にカテーテルを挿入し、そしてプラークにより引き起こされた狭窄部位または妨害部位にカテーテルが位置決めされるまで、動脈を通じてカテーテルを上に操縦する。次いで、このプラークは、カテーテルの先端の周りに位置したバルーンを膨張することにより平坦化され得る。バルーンが膨張するとき、バルーンは、脂質沈着物を動脈の壁に対して圧縮する。
【０００４】
この可能な生命救済手順の間に、医師は、遮断部位にて脈管中にステントを挿入し得る。この小さな、代表的には、金属製のデバイスは、脈管を開いて保持し、そして血流を改善することを補助する。これは、冠状動脈疾患の症状を軽減するため役立つ。
【０００５】
不幸なことに、ステントは、この問題の絶対的な解決を提供しない。動脈損傷の部位における血小板接着および血小板凝集により開始され得る通路の狭窄である再狭窄、ならびに血栓症が、しばしば、ステントの部位で生じる。「血栓症」は、血管内の血栓の形成、または血餅の形成をいう。血栓症は、ステント上の血流からの連続的なストレスにより引き起こされ得る。ステントの長軸方向管腔は、通常（常にというわけではないが）乱れた流体流れを生成し得る、管腔中に突出する不規則表面または不規則領域を有する。あるいは、この血栓症は、ステントに対する外来物の反応の結果であり得る。血管内の血餅の形成は、組織損傷を生じ得る。このような血餅は、特に、その血餅が血管を通る血液の流れを部分的または完全にブロックするとき、生命を脅かし得る。血栓症が、ステント配置の結果として生じるとき、二次的な手順または外科的バイパス手術が必要である。
【０００６】
このような血餅を溶解するために、アスピリンおよびジピリダモールヘパリンのような製品が当該分野で公知である。これらの製品は、血餅を除去し得るが、これらは、長期の出血を生じるという潜在的で重篤な副作用をもっている。さらに、このような製品の投与の影響は、新たな血小板の形成または付加によってのみ元に戻り得る。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
ステント内血栓症のリスクなしに皮下経管腔送達によって脈管内にステントを配置し得ることが所望される。ステント内血栓症のリスクのないそのようなステントの配置は、多くの患者の生命の質を多いに増大する。従って、ステント内血栓症の形成を予防するための、患者にとって有害でない方法が所望されている。
【０００８】
（詳細な説明）
本発明は、マグネシウムの投与が、高剪断流れ条件下での急性血小板依存性ステント血栓症の有意な時間依存性阻害、および可能な予防を生じるという発見である。血清マグネシウムイオンレベルと直接相関するこの抗血栓症効果は、血小板に対するマグネシウムの効果、凝固および線維素溶解に対するマグネシウムの効果に主に起因する。
【０００９】
本発明のさらなる特徴は、急性の血小板依存性ステント血栓症の阻害がいかなる止血薬も有意な血流力学合併症もなく達成され得るということである。重要なことに、血小板−血栓形成の有意な阻害が、血小板凝集または出血時間に対するいかなる影響もなく、マグネシウム処置で示された。その安全性、投与の容易性，および低コストとともに、マグネシウムの強力な抗トロンボゲン形成効果は、このマグネシウム処置を、皮下冠状介入（ＰＣＩ）の間の有望な処置にする。
【００１０】
本発明によるマグネシウム投与のタイミングは、ステント血栓症の阻害のために重要である。Ｍｇの最大抗血栓症効果は、血小板がトロンボゲン形成刺激に曝される前に処置されるとき明瞭である。このようなトロンボゲン形成刺激としては、カテーテル、血管内デバイス、ステントを備えたカテーテル、血管形成術、ステント、レーザーカテーテル、アテレクトミー、放射線照射、（例えば経管腔抽出アテレクトミーのための）抽出デバイス、アンギオジェット、および局所薬物送達カテーテルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００１１】
この時間依存性効果は図４に観察され得る。この図４は、本発明の１つの実施形態に従って行われた実験からのデータを提供する。図４に示されるように、マグネシウムの抗血栓症効果は、Ｍｇが、ステント灌流の開始４０分前で与えられたとき、開始２０分前に対してより有意に顕著であった。適切なタイミングでのマグネシウムに対して十分に曝されると、マグネシウムの投与を用いて、ステント血栓症の予防を支援し得る。
【００１２】
本発明の効果は、マグネシウムがトロンボゲン形成刺激の約３０〜６０分前の間に投与されるとき最良に観察される。しかし、マグネシウムがこの範囲外の合理的な時間内で投与され得ることは、理解されるべきである。例えば、マグネシウムは、トロンボゲン形成刺激の１５分前と９０分前との間で投与され得る。マグネシウムは、身体通路中への挿入前に、ステントまたはその他の血管内補綴具を、少なくとも部分的に、マグネシウム含有化合物でコーティングすることにより投与され得る。マグネシウムの投与は、手術の後、約８時間〜１２時間の間継続されるべきである。
【００１３】
本発明の１つの実施形態では、マグネシウムは静脈内に投与される。静脈内投与は、血液中のマグネシウムのレベルのより大きな制御を可能にする。しかし、当業者によって認識されるべきであるように、マグネシウムの投与は、静脈内投与に制限されない。投与のその他の方法は、制限されないで、経口摂取および注入の投与を含む。マグネシウムの経口投与は、一度血栓症が除かれた患者におけるステント血栓症を処置（または予防）するために特に有利であり得る。あるいは、マグネシウムは、皮下に挿入されるカテーテルまたはその他の器具を通じ、またはこのような器具に取り付けられたチューブを通じて、患者に供給され得る。あるいは、このような器具は、マグネシウム含有化合物でコーティングされ得る。本発明のさらなる実施形態では、ステントは、マグネシウム含有化合物でコーティングされ得る。
【００１４】
本明細書に開示されるマグネシウムの使用は、これまで、ステント血栓症の阻害の論議に制限されてきた。しかし、本発明は、そのように制限されない。マグネシウムは、本発明によって教示されるように、血管形成術およびパイパス手術およびその他の手術の間の血栓症を予防するために投与され得る。
【００１５】
マグネシウムは、硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）の形態、または被験体に非毒性であることが当業者に知られる他の任意のマグネシウム形態で投与され得る。このようなマグネシウムの非毒性形態は、制限されないで、リン酸マグネシウム（ＭｇＰＯ４）、塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ）および酸化マグネシウム（ＭｇＯ）を含む。
【００１６】
マグネシウムは、主に、血小板におけるカルシウム移動を低減することにより達成される、血小板に対する抗接着効果をもつ。これはまた、糖タンパク質ＩＩｂ〜ＩＩＩａのカルシウム結合部位におけるカルシウムの競争阻害を介して、血小板とのフィブリノーゲンの相互作用を抑制し得る。Ｇａｗａｚ  Ｍ、Ｏｔｔ  Ｉ、Ｒｅｉｎｉｎｇｅｒ  ＡＪ、Ｎｅｕｍａｎｎ  ＦＪ、Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ｏｎ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｄｈｅｓｉｏｎ：ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｎ  ｐｌａｔｅｌｅｔｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｅｘ  ｖｉｖｏ，Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ、１９９４；７２：９１２〜９１８を参照のこと。本明細書で論議される例で達成される血清Ｍｇレベル（ヘパリン＋初期Ｍｇについて３．７±０．３およびヘパリン＋後期Ｍｇについて３．８±０．４）は、抗凝集効果と比較して、抗接着効果がより明瞭である範囲であった。
【００１７】
血小板接着／血栓形成および血小板凝集に対する矛盾する効果は、Ｍｇの抗接着効果が、抗凝集効果（＞５ｍＥｑ／Ｌ）と比較して低い濃度（＜４ｍＥｑ／Ｌ）で生じ得るという事実に関連し得る。Ｒａｖｎ  ＨＢ、Ｋｒｉｓｔｅｎｓｅｎ  ＳＤ、Ｈｊｏｒｔｄａｌ  ＶＥ、Ｔｈｙｇｅｓｅｎ  Ｋ、Ｈｕｓｔｅｄ  ＳＥ、Ｅａｒｌｙ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  Ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ａｒｔｅｒｉａｌ  Ｔｈｒｏｍｂｕｓ  Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ、Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ、１９９７；１７：３６２０〜３６２５；およびＧａｗａｚ  Ｍ、Ｏｔｔ  Ｉ、Ｒｅｉｎｉｎｇｅｒ  ＡＪ、Ｎｅｕｍａｎｎ  ＦＪ、Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ｏｎ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｄｈｅｓｉｏｎ：ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｎ  ｐｌａｔｅｌｅｔｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｅｘ  ｖｉｖｏ、Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ、１９９４；７２：９１２〜９１８を参照のこと。血栓重量は、同じ大動脈片を利用する処置後のコントロール灌流実験の間に処置前の値に戻ったので、ブタ大動脈片の変動するトロンボゲン形成能が処置効果に寄与し得たことはありそうもない。
【００１８】
マグネシウムが心臓血管疾患の処置を取り入れるという役割は、決定されていない。例えば、最近の臨床試験は、矛盾する証拠を提示しており、ＩＳＩＳ−４試行（梗塞生存の国際研究）での急性心筋梗塞におけるマグネシウムの役割について、利益なし（ＩＳＩＳ−４：Ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｆａｃｔｏｒｉａｌ  ｔｒｉａｌ  ａｓｓｅｓｉｎｇ  ｅａｒｌｙ  ｏｒａｌ  ｃａｐｔｏｐｒｉｌ，ｏｒａｌ  ｍｏｎｏｎｉｔｒａｔｅ，ａｎｄ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ｓｕｌｆａｔｅ  ｉｎ  ５８，０５０  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｕｓｐｅｃｔｅｄ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ、Ｌａｎｃｅｔ、１９９５；３４５：６６９〜６８５）を示し、そしてＬＩＭＩＴ−２（Ｌｅｉｃｅｓｔｅｒ静脈内マグネシウム介入試行）研究は、生存利益のために強力な証拠を提供した。Ｗｏｏｄｓ  ＫＬ、Ｆｌｅｔｃｈｅｒ  Ｓ、Ｒｏｆｆｅ  Ｃ、Ｈａｉｄｅｒ  Ｙ、Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ｓｕｌｐｈａｔｅ  ｉｎ  ｓｕｓｐｅｃｔｅｄ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ：ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ：ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｅｃｏｎｄ  Ｌｅｉｃｅｓｔｅｒ  Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  Ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ  Ｔｒｉａｌ（ＬＩＭＩＴ−２）、Ｌａｎｃｅｔ、１９９２：３３９；１５５３〜８、を参照のこと。
【００１９】
（実験モデル）
本発明の１つの実施形態による実験は、剪断で媒介される血小板依存性血栓形成を主に調べるエキソビボモデルを用いて実施された。この実験は、高剪断血流のエキソビボのブタ動静脈シャントモデルにおける急性血小板依存性ステント血栓形成に対する、マグネシウムの効果、およびその時間依存性性質の効果の評価を可能にする。
【００２０】
このようなモデルは、制御され、かつ良好に規定された条件下で、血液要素のステントとトロンボゲン形成表面との相互作用を調べるために有用である。このエキソビボの系は、その再現性および単純さのために選択された。このエキソビボの系は、抗血栓治療介入の臨床前の効力を評価するための高感度ツールである。
【００２１】
（動物手術）
本発明の１つの実施形態に従って実施された、本明細書で論議される実験と組み合わせて行われた動物手術のすべての手順は、施設動物擁護および使用委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）により認可され、そして動物研究のための米国心臓協会カイドラインに合致していた。実験は、２５〜３０ｋｇ体重の１０匹のブタで実施した。一晩絶食した後、ブタをフェノバルビタール（５ｍｇ／ｋｇ）で鎮静し、そして麻酔を、気管内挿管後の１％イソフルランで維持した。右頚動脈および右頚静脈を隔離し、そして８Ｆシースのカニューレを挿入し、先に記載のように体外回路を確立した。Ｋａｕｌ  Ｓ、Ｍａｋｋａｒ  ＲＲ、Ｎａｋａｍｕｒａ  Ｍ、Ｌｉｔｖａｃｋ  Ｆ、Ｓｈａｈ  ＰＫ、Ｆｏｒｒｅｓｔｅｒ  ＪＳ、Ｈｕｔｓｅｌｌ  Ｔ、Ｅｉｇｌｅｒ  ＮＬ、Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｃｕｔｅ  Ｓｔｅｎｔ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ｕｎｄｅｒ  Ｈｉｇｈ−Ｓｈｅａｒ  Ｆｌｏｗ  Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ  ｂｙ  ａ  Ｎｉｔｒｉｃ  Ｏｘｉｄｅ  Ｄｏｎｏｒ．ＤＭＨＤ／ＮＯ：Ａｎ  Ｅｘ  ｖｉｖｏ  Ｐｏｒｃｉｎｅ  Ａｒｔｅｒｉｏｖｅｎｏｕｓ  Ｓｈｕｎｔ  Ｓｔｕｄｙ、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、１９９６、９４：２２２８〜３４を参照のこと。動脈血ガスおよびｐＨを定期的にモニターし、そして換気速度および一回換気量の調節により正常レベルに維持した。侵襲的動脈圧測定、酸素飽和、ＥＣＧ、および直腸温度を、連続的にモニターした。定温に制御した毛布を用いて温度を３７℃に維持した。静脈血を、ベースライン血小板凝集、総血球計数、および活性化凝固時間（ＡＣＴ）測定のために収集した。
【００２２】
すべての動物に、カテーテルおよび管材の血栓閉塞を防ぐため、試験前に、ヘパリンを、１０Ｕ／ｋｇの投与量でボーラスとして投与した。各ブタは、平均２００Ｕのヘパリンを受け、これは、この実験モデルにおける高剪断条件における血栓形成に対して無視できる効果しか生じない量である。Ｋａｕｌ  Ｓ、Ｍａｋｋａｒ  ＲＲ、Ｎａｋａｍｕｒａ  Ｍ、Ｌｉｔｖａｃｋ  Ｆ、Ｓｈａｈ  ＰＫ、Ｆｏｒｒｅｓｔｅｒ  ＪＳ、Ｈｕｔｓｅｌｌ  Ｔ、Ｅｉｇｌｅｒ  ＮＬ、Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｃｕｔｅ  Ｓｔｅｎｔ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ｕｎｄｅｒ  Ｈｉｇｈ−Ｓｈｅａｒ  Ｆｌｏｗ  Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ  ｂｙ  ａ  Ｎｉｔｒｉｃ  Ｏｘｉｄｅ  Ｄｏｎｏｒ．ＤＭＨＤ／ＮＯ：Ａｎ  Ｅｘ  ｖｉｖｏ  Ｐｏｒｃｉｎｅ  Ａｒｔｅｒｉｏｖｅｎｏｕｓ  Ｓｈｕｎｔ  Ｓｔｕｄｙ、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、１９９６、９４：２２２８〜３４を参照のこと。実験の終わりにおいて、総血球計数のために血液を収集し、冠状動静脈を結紮し、そして動物を、動物施設に戻される前に、麻酔から回復させた。各動物について、各実験の間に最小２週間の間隔で２回調べた。
【００２３】
（冠状血管ステント）
試験されたステントは、ニッケル−チタン合金であるＮＩＴＩＮＯＬ（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｏｒｏｎａｒｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ、ＣＡ）（１０匹のブタにおいて、ｎ＝１５６ステント）７ｍｍ長のスロットをもつチューブ形状デバイスであった。各ステントの重量は２４±３ｍｇで、そして０．００６インチのステント（ｓｔｒｕｔ）厚さを有した。それらは、シリコンカーバイド砂で研磨された表面仕上をもち、この仕上げは、このモデルで高度にトロンボゲン形成性であることが知られる均一な粗面化表面を生成する。Ｋａｕｌ  Ｓ、Ｍａｋｋａｒ  ＲＲ、Ｎａｋａｍｕｒａ  Ｍ、Ｌｉｔｖａｃｋ  Ｆ、Ｓｈａｈ  ＰＫ、Ｆｏｒｒｅｓｔｅｒ  ＪＳ、Ｈｕｔｓｅｌｌ  Ｔ、Ｅｉｇｌｅｒ  ＮＬ、Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｃｕｔｅ  Ｓｔｅｎｔ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ｕｎｄｅｒ  Ｈｉｇｈ−Ｓｈｅａｒ  Ｆｌｏｗ  Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ  ｂｙ  ａ  Ｎｉｔｒｉｃ  Ｏｘｉｄｅ  Ｄｏｎｏｒ．ＤＭＨＤ／ＮＯ：Ａｎ  Ｅｘ  ｖｉｖｏ  Ｐｏｒｃｉｎｅ  Ａｒｔｅｒｉｏｖｅｎｏｕｓ  Ｓｈｕｎｔ  Ｓｔｕｄｙ、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、１９９６、９４：２２２８〜３４；およびＭａｋｋａｒ  ＲＲ、Ｅｉｇｌｅｒ  ＮＬ、Ｋａｕｌ  Ｓ、Ｎａｋａｍｕｒａ  Ｍ、Ｆｏｒｒｅｓｔｅｒ  ＪＳ、Ｈｅｒｂｅｒｔ  Ｊ−Ｍ、Ｌｉｔｖａｃｋ  ＦＩ、Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ，ａｓｐｉｒｉｎ  ａｎｄ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ａ  ｐｏｒｃｉｎｅ  ｅｘ  ｖｉｖｏ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｈｉｇｈ−ｓｈｅａｒ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｓｔｅｎｔ  ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ、Ｅｕｒ  Ｈｅａｒｔ  Ｊ、１９９８；１９：１５３８〜１５４６を参照のこと。ステントを、灌流チャンバー中に取り付けられる前に、テーパー状マンドレル上で、２．０ｍｍの開放直径まで拡張した。
【００２４】
（体外シャントおよび灌流プロトコール）
この研究で利用された体外シャントは、広範に特徴付けられ、そして先に記載されている。Ｋａｕｌ  Ｓ、Ｍａｋｋａｒ  ＲＲ、Ｎａｋａｍｕｒａ  Ｍ、Ｌｉｔｖａｃｋ  Ｆ、Ｓｈａｈ  ＰＫ、Ｆｏｒｒｅｓｔｅｒ  ＪＳ、Ｈｕｔｓｅｌｌ  Ｔ、Ｅｉｇｌｅｒ  ＮＬ、Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｃｕｔｅ  Ｓｔｅｎｔ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ｕｎｄｅｒ  Ｈｉｇｈ−Ｓｈｅａｒ  Ｆｌｏｗ  Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ  ｂｙ  ａ  Ｎｉｔｒｉｃ  Ｏｘｉｄｅ  Ｄｏｎｏｒ．ＤＭＨＤ／ＮＯ：Ａｎ  Ｅｘ  ｖｉｖｏ  Ｐｏｒｃｉｎｅ  Ａｒｔｅｒｉｏｖｅｎｏｕｓ  Ｓｈｕｎｔ  Ｓｔｕｄｙ、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、１９９６、９４：２２２８〜３４；Ｍａｋｋａｒ  ＲＲ、Ｌｉｔｖａｃｋ  Ｆ、Ｅｉｇｌｅｒ  ＮＬ、Ｎａｋａｍｕｒａ  Ｍ、Ｉｖｅｙ  ＰＡ、Ｆｏｒｒｅｓｔｅｒ  ＪＳ、Ｓｈａｈ  ＰＫ、Ｊｏｒｄａｎ  ＲＥ、Ｋａｕｌ  Ｓ、Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ＧＰ  ＩＩｂ／ＩＩＩａ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎｅｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ（７Ｅ３），Ｈｅｐａｒｉｎ，ａｎｄ  Ａｓｐｉｒｉｎ  ｉｎ  ａｎ  Ｅｘ  Ｖｉｖｏ  Ｃａｎｉｎｅ  Ａｒｔｅｒｉｏｖｅｎｏｕｓ  Ｓｈｕｎｔ  Ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  Ｓｔｅｎｔ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、１９９７；９５（４）：１０１５〜１０２１；Ｍａｋｋａｒ  ＲＲ、Ｅｉｇｌｅｒ  ＮＬ、Ｋａｕｌ  Ｓ、Ｎａｋａｍｕｒａ  Ｍ、Ｆｏｒｒｅｓｔｅｒ  ＪＳ、Ｈｅｒｂｅｒｔ  Ｊ−Ｍ、Ｌｉｔｖａｃｋ  ＦＩ、Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ，ａｓｐｉｒｉｎ  ａｎｄ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ａ  ｐｏｒｃｉｎｅ  ｅｘ  ｖｉｖｏ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｈｉｇｈ−ｓｈｅａｒ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｓｔｅｎｔ  ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ、Ｅｕｒ  Ｈｅａｒｔ  Ｊ、１９９８；１９：１５３８〜１５４６を参照のこと。６０分間の安定化期間の後、ステントを管状チャンバー内に取り付け、そして通常の生理食塩水で６０分間３７℃で灌流した。うっ血を防ぐためにスイッチバルブを用い、血液をこの系を通じて循環させ、そして流れを、灌流チャンバーの遠位方向で回路内に配置したペリスタポンプ（Ｍａｓｔｅｒｆｉｅｘ、Ｃｏｌｅ−Ｐａｌｍｅｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏ．）を用いることにより、２０分間、１００ｍＬ／分に調節した。
【００２５】
選択された流速は、ステント表面で２１００ｓ−１の壁剪断速度を生成する。剪断速度は、円筒形チューブ内の均一なニュートン流体の層流についての式：剪断速度＝４・Ｑ／π・Ｒ３、ここで、Ｑは容積流れ、そしてＲは半径である、に従って算出した。Ｇｏｌｄｓｍｉｔｈ  ＨＬ、Ｔｕｒｉｔｔｏ  ＶＴ、Ｒｈｅｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｓｐｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ、ｂａｓｉｃ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ、１９８６；５５：４１５〜４３５を参照のこと。本研究で用いられたような、高剪断速度では、血液は、本質的にニュートン流体であると考えられる。
【００２６】
灌流期間の終わりに、チャンバーおよびエキソビボの系を通じて生理食塩水を４０ｍＬ／分で数分間循環し、別のステントが取り付けられる前に目に見えるすべての血液を取り除いた。各灌流期間の終わりに、ステント（灌流の前に秤量した）をチャンバーから取り除き、乾燥し、そしてすぐに秤量した。血栓重量を、灌流前ステント重量と灌流後ステント重量との差異として算出した。
【００２７】
各ステントの頂部を、ステント移植にともなう血管損傷により誘導されるトロンボゲン形成状態を刺激するために内膜層が除去された異種ブタ大動脈片（Ｐｅｌ  Ｆｒｅｅｚｅ  Ｋａｎｓａｓ）で覆った。各実験の間、調べたステント灌流回数は、６回から８回まで変化した。ステントのデジタルイメージを、Ｎｉｋｏｎ  ９５０デジタルカメラを用いて得、ＰＣにダウンロードし、イメージ分析ソフトウェア（ＰｈｏｔｏＳｈｏｐ  Ａｄｏｂｅ５．０）を用いて処理した。このようなイメージのサンプルが、図２（ｂ）に見られ得る。
【００２８】
各処置の終わりに、コントロールステントを灌流し、ベースライン処置前値に向かうステント血栓重量の回復を確実にした。血栓重量（ＴＷ）、全血血小板凝集（ＰＡ）、出血時間（ＢＴ）、活性化凝固時間（ＡＣＴ）、血清マグネシウムレベル、および総血液カウント（ＣＢＣ）に対する影響を、図示のプロトコールに示したように種々の時点で定量した。平均動脈血圧（ＭＡＢＰ）および心拍数（ＨＲ）をモニターし、そしてこのプロトコールを通じて記録した。
【００２９】
ヘパリン（ヘパリン単独において）またはマグネシウムの投与の３０分後、３ｍＬの静脈血を、０．３ｍＬの０．１２９モル濃度のクエン酸ナトリウムまたはヘパリンナトリウム（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍ）を含む、シリコン処理した試験管中に収集した。全血凝集法（Ｃｈｒｏｎｏｌｏｇ  Ｃｏｒｐ．）を用いて、コラーゲン（２および５μｇ／ｍＬ）誘導血小板凝集およびアデノシン２リン酸（２．５μＭ）誘導血小板凝集を測定した。凝集は、アゴニストの添加６分後で測定された電気インピーダンス（オーム）における最大増加として表した。ベースライン血小板凝集は、２５±３オームであった。後期Ｍｇ単独およびヘパリン単独の添加後の血小板凝集は、それぞれ、２２±３オームおよび２４±６オームであった。上記のように、Ｍｇ処置動物におけるデータ点は、ボーラス後２０分以内（初期Ｍｇ）およびボーラス後＞４０分（後期Ｍｇ）で調べた。ボーラス後２０分以内で得た血小板凝集は、２３±４オームであった。ボーラス後＞４０分で得た血小板凝集は、２１．０±５オームであった。
【００３０】
出血時間は、切開の生成から切開からの出血が止る点までの時間として規定される。本明細書で論議される本発明の１つの実施形態による実験において、出血時間は、大腿のＮｏ．１１外科ナイフによる腹側表面上の切開から測定された。
【００３１】
本発明の１つの実施形態に従って行われた本明細書で論議される実験では、ＡＣＴは、Ｈｅｍｏｃｈｒｏｎ４００（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｄｙｎｅ  Ｃｏｒｐ．）器具を標準様式で用いて測定した。Ｍａｋｋａｒ  ＲＲ、Ｌｉｔｖａｃｋ  Ｆ、Ｅｉｇｌｅｒ  ＮＬ、Ｎａｋａｍｕｒａ  Ｍ、Ｉｖｅｙ  ＰＡ、Ｆｏｒｒｅｓｔｅｒ  ＪＳ、Ｓｈａｈ  ＰＫ、Ｊｏｒｄａｎ  ＲＥ、Ｋａｕｌ  Ｓ、Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ＧＰ  ＩＩｂ／ＩＩＩａ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ（７Ｅ３），Ｈｅｐａｒｉｎ，ａｎｄ  Ａｓｐｉｒｉｎ  ｉｎ  ａｎ  Ｅｘ  Ｖｉｖｏ  Ｃａｎｉｎｅ  Ａｒｔｅｒｉｏｖｅｎｏｕｓ  Ｓｈｕｎｔ  Ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  Ｓｔｅｎｔ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、１９９７；９５（４）：１０１５〜１０２１；およびＭａｋｋａｒ  ＲＲ、Ｅｉｇｌｅｒ  ＮＬ、Ｋａｕｌ  Ｓ、Ｎａｋａｍｕｒａ  Ｍ、Ｆｏｒｒｅｓｔｅｒ  ＪＳ、Ｈｅｒｂｅｒｔ  Ｊ−Ｍ、Ｌｉｔｖａｃｋ  ＦＩ、Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ，ａｓｐｉｒｉｎ  ａｎｄ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ａ  ｐｏｒｃｉｎｅ  ｅｘ  ｖｉｖｏ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｈｉｇｈ−ｓｈｅａｒ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｓｔｅｎｔ  ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ、Ｅｕｒ  Ｈｅａｒｔ  Ｊ、１９９８；１９：１５３８〜１５４６を参照のこと。
【００３２】
試験被験体の血清マグネシウムレベルは、マゴン色素法を用いて分光光学的に測定した。Ｅｌｍ  ＲＪ、Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｒｕｍ  ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｍａｇｎｅｓ  Ｔｒａｃｅ  Ｅｌｅｍ、１９９１〜９２：６０〜６を参照のこと。
【００３３】
図１は、本発明の実施形態による、エキソビボブタシャントモデルで行われた灌流プロトコールを図示する。図１で用いられる場合、ＰＡは血小板凝集を意味し、ＡＣＴは活性化凝固時間を意味し、ＢＰは動脈血圧を意味し、そしてＣＢＣは総血液カウントを意味する。コントロール血栓重量を得るために、任意の試薬の投与前に、各動物において、２個〜３個のステントを灌流した。
【００３４】
これらステントを、ヘパリンまたはマグネシウムでの処置前および処置後にランダム様式で灌流した。ヘパリンは、５０Ｕ／ｋｇＩＶボーラス、次いで２５〜５０Ｕ／ｋｇ／時間ＩＶで投与され、ＡＣＴ＞１５０秒を保持した。硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）を２０分に亘る２ｇボーラスＩＶとして投与し、次いで２ｇ／時間の維持注入を行った。マグネシウムの潜在的な時間依存性抗血栓効果を評価するために、データ点は、ボーラス後２０分以内（初期Ｍｇ）およびボーラス後＞４０分（後期Ｍｇ）で調べた。
【００３５】
図１に示されるように、「処置前」の読み取り値は、系中にいかなるマグネシウムもヘパリンもなく、シャント中に配置された管状灌流チャンバー中で直径２ｍｍに拡張され、そして２０分間２１００Ｓ−１の剪断速度で血液を灌流されたステントから、取られた。「ヘパリン単独」の読み取り値は、動物が上記のように静脈内ヘパリンで処置されたとき、２０分間血液で灌流されたステントから取られた。この「ヘパリン単独」読み取りのための灌流研究は、ヘパリンの投与後２０分〜３０分の間実施した。「ヘパリン＋初期Ｍｇ」読み取りおよび「ヘパリン＋後期Ｍｇ」読み取りは両方とも、上記のように、動物が静脈内ヘパリンおよびマグネシウムで処置された後２０分間血液を灌流したステントから取られた。ヘパリン＋初期Ｍｇ読み取り値のための灌流期間は、ＭｇＳＯ４ボーラスの投与後２０分以内に開始した。ヘパリン＋後期Ｍｇ読み取り値のための灌流期間は、ＭｇＳＯ４ボーラスの投与後４０分を越えて開始した。
【００３６】
本発明の１つの実施形態では、マグネシウムボーラスの後、１〜２ｇ／時間維持注入を行う。例えば、本明細書の図１で論議される実験では、３０ｋｇのブタにおいて、２ｇボーラスＩＶが２０分に亘って試験被験体を投与し、次に、９ｇの平均マグネシウム投与量のための２ｇ／時間維持注入を続けた（５〜１３ｇの範囲の投与量）。
【００３７】
本発明の１つの実施形態の利益を達成するために必要なマグネシウム投与量は、一般に、体重１ｋｇあたり、０．１６ｇと０．４ｇとの間である。体重１００ｋｇのヒトは、好ましくは、約１０〜２０分の間に約２ｇのボーラスＩＶを静脈内に受ける。この後、好ましくは、約８〜１２時間の約２ｇ／時間の維持注入を続ける。しかし、これらの投与の投与量および時間は、被験体のサイズを含む（制限されない）多くの因子に依存して変動し得ることを、当業者は理解すべきである。すなわち、１０〜２０分に亘る１〜４ｇのボーラス用量、次いで１〜４ｇ／時間の維持用量で投与され得る。より高いボーラスおよび維持用量でより大きな抗血栓効果が観察されることに注意すべきである。しかし、より高い投与量はまた、心拍数および血圧に影響する傾向がある。
【００３８】
図２（ａ）は、本発明の１つの実施形態に従った実験における、異なる処置群での血栓重量に対する効果を示す棒グラフを提供する。図２ｂは、種々の処置条件下での血栓負荷を描くニチノールステントの側面図を提供する。値は平均±標準偏差として与えられる。８個〜１５個のステントをマグネシウム単独群で試験した。ステントの数は、２０個と３５個との間で変動した。
【００３９】
図２（ａ）から観察され得るように、「処置前」と標識されたカテゴリーのステントは、ステント血栓の最大量を有した。マグネシウム単独（初期群および後期群の両方）およびヘパリンは、血栓形成をわずかに低減した。初期マグネシウムをともなうヘパリンは、血栓をより有意に低減し、そして後期マグネシウムをともなうヘパリンは、血栓形成を実質的に防いだ。
【００４０】
図３は、心拍数および平均動脈血圧（ＭＡＢＰ）に対するマグネシウムの本発明の１つの実施形態による効果のグラフ表示を提供する。この実験では、硫酸マグネシウムの形態のマグネシウムを、被験体動物に静脈内投与した。ここで再び、値は平均±標準偏差で提供される。図３から観察され得るように、マグネシウムは、心拍数またはＭＡＢＰのいずれにも統計的に有意な効果を有さなかった。
【００４１】
図３中のグラフは、各時点における１０〜１４の観察を行うことにより作成した。ＭＡＢＰは、水銀ｍｍ（ｍｍＨｇ）で測定した。心拍数は、１分あたりの心拍（ＢＰＭ）で測定した。グラフから観察され得るように、心拍数および血圧に統計的に有意な変化は、ＡＮＯＶＡを用いて観されなかった。
【００４２】
図４は、本発明の１つの実施形態による、５つの異なる刺激を基づくステント血栓症における減少を詳述するチャートを提供する。詳細には、図４は、急性ステント血栓症に対する、マグネシウム単独、ヘパリン単独およびマグネシウムとヘパリンとの併用処置を用いた処置の効果を示す。図４に示されるデータは、図２（ａ）および（ｂ）で論議した実験に類似の実験から得た。
【００４３】
ヘパリンまたはマグネシウムの添加なくして血液で灌流されたステントの総重量は、２０±４ｍｇであった（ステントＴＷと称される）。図１に示されるように、この「処置前」ステントＴＷまたはベースラインステントＴＷは、読み取り値が、系中にいかなるマグネシウムもヘパリンもなく２０分間血液で灌流されたステントから取られた。この数値を用いて血栓形成における減少を算出した。血栓形成における減少は、ヘパリンまたはマグネシウムの添加なくして血液で灌流されたステントの平均重量から、処置後（ヘパリン処置後またはマグネシウム処置後）のステント重量を減じることにより算出した。
【００４４】
図４に示されるように、ステントＴＷは、初期Ｍｇ、後期Ｍｇおよびヘパリン処置群で、それぞれ、４２±２１％、４７±１９％、４８±１６％だけ減少した。ヘパリン＋初期Ｍｇ処置群では、この重量は６７±１２％減少した。ヘパリン＋後期Ｍｇ処置群では、さらに８６±８％血栓重量が減少した。これら５つの計算はすべて、処置前に対してＰ＜０．００１を有していた（ヘパリンおよび初期Ｍｇに対するヘパリン＋Ｍｇ後期  Ｐ＜０．０５；ヘパリン単独、初期Ｍｇ単独および後期Ｍｇ単独に対してヘパリン＋初期Ｍｇおよび後期Ｍｇ  Ｐ＜０．０１、ＡＮＯＶＡ）。マグネシウムは、血小板凝集、活性化凝固時間および出血時間に対して有意な効果を有さなかった。血清Ｍｇレベルは、ＴＷと相関した唯一の変数であった（ｒ＝−０．７０．  Ｐ．００２）。心拍数または平均動脈圧に対して有意な効果はなかった。
【００４５】
図４に見られ得るように、ヘパリンとＭｇとの併用処置の抗血栓形成効果は、マグネシウム単独またはヘパリン単独と比較して有意に顕著であった（Ｐ＜０．００１、ＡＮＯＶＡ）。ヘパリン＋後期Ｍｇは、ヘパリン＋初期Ｍｇ群と比較して、わずかにより大きく、そして統計的に有意なＴＷの減少を生じた（Ｐ＜０．０５、ＡＮＯＶＡ）。
【００４６】
図５は、本発明の１つの実施形態による実験において用いたときの、５μｇ／ｍＬコラーゲン誘導血小板凝集、出血時間およびＡＣＴに対する、ヘパリンおよびマグネシウムの効果の詳細を示すチャートを提供する。
【００４７】
図５に示されるように、２５±３〜２１±５オームである、マグネシウム添加での全血血小板凝集における減少は有意ではなかった。血小板凝集に対する最小のマグネシウム効果は用いたクエン酸塩抗凝固剤（これは、サンプル中のカルシウムキレート化が原因でイオン濃度に影響し得る）に関連し得るという可能性を排除するために、３匹のブタにおいて、凝集を、ヘパリン処理およびクエン酸処理した血液で試験した。マグネシウムは、ヘパリン安定化サンプルにおいて、血小板凝集に対する阻害効果（Ｍｇ前  ２６±２およびＭｇ後  ２７±２）は、クエン酸安定化血液（Ｍｇ前  ２５±３およびＭｇ後  ２２±３）と比較して有意ではなかった。しかし、血小板凝集は、ヘパリン処理サンプルでわずかに増大した。低濃度のコラーゲン（２μｇ／ｍｌ）または別の血小板アゴニスト（ＡＤＰ（２．５μＭ））のいずれかに応答する血小板凝集に対するマグネシウムの効果はなかった（データは示さず）。従って、マグネシウムは、血液を安定化するために用いた抗凝固剤にかかわらず、血小板凝集に対して有意な効果を有していなかった。
【００４８】
図５に示されるように、ヘパリンは、出血時間を、４．０±０．５から５．３±０．６まで増加させた。ヘパリンはまた、ＡＣＴを、１０９±８秒から１８５±３６秒まで延長した（Ｐ＜０．００１．ＡＮＯＶＡ）。マグネシウムは、出血時間またはＡＣＴのいずれに対しても、ヘパリンの効果を超える有意な効果を有さなかった。動物研究のいずれにおいても、顕著な出血エピソードはなかった。ヘパリンまたはマグネシウムでの処置は、血小板もしくは白血球カウントまたはヘマトクリットのいずれに対しても有意な影響を有していなかった（データは示さず）。
【００４９】
さらに図５に示されるように、血清マグネシウムレベルは、コントロールと比較して、マグネシウム処置動物においてより高かった。しかし、初期Ｍｇ群および後期Ｍｇ群ではこれらレベルは実質的に同様であった。血清マグネシウムは、血栓重量（ｒ＝−０．７０．Ｐ＝０．００２）、出血時間（ｒ＝０．５４、Ｐ＝０．０５）および心拍数（ｒ＝−０．５５、Ｐ＝０．００２）と有意に相関した。血清マグネシウムは、血栓重量と有意に相関した唯一の変数であった。血栓重量と血小板凝集との有意な相関は観察されなかった（ｒ＝０．４、Ｐ＝０．０７）。
【００５０】
先に注記したように、マグネシウムの投与のタイミングは、減少した血栓重量で見られた利益に対して有意に重みをつける。ヘパリン＋初期Ｍｇは、ヘパリン単独または処置前群の血栓重量と比較したとき、血栓重量における有意な減少を生じた。しかし、ヘパリン＋後期Ｍｇは、血栓重量において、なおより大きい減少を生成した。初期Ｍｇ群および後期Ｍｇ群における抗血栓効果の差異は、用量依存性効果のみによっては説明できない。なぜなら、血清マグネシウムレベルは有意には異ならないからである。しかし、血清マグネシウムは、マグネシウムの細胞内レベルを正確には反映していない。マグネシウムへの曝露の増加を考慮すると、類似の血清Ｍｇレベルにかかわらず、初期Ｍｇ試験と比較したとき、後期ＭｇではＭｇの細胞内レベルがより高くなり得る可能性がある。
【００５１】
（ヒトの試験）
本発明の１つの実施形態は、ヒト被験体で試験し、非常にポジティブな結果であった。これら試験を基に、マグネシウムの使用を、ステント内血栓症を予防するために利益があると決定した。この効果は、いかなる止血剤も血行合併症もなく、明瞭であった。
【００５２】
ステント移植で非急性皮下冠状血管介入を受けている２１人の低リスク患者に、静脈内ＭｇＳＯ４の２ｇのボーラス、次いで４時間の１．５ｇ／時間注入およびその次に８時間の１ｇ／時間注入を与えた。この試験は、合計１６ｇのマグネシウム投与を生じた。この実験の予備設定された終点は：急性血栓閉塞および血小板ＩＩｂ／ＩＩＩａインヒビター放出の必要性、死、心筋梗塞、再灌流虚血、ならびに４８時間および３０日における緊急の再血管形成の必要性であった。第２の安全性終点は、低血圧、徐脈、出血、合併症および２４時間以内の心臓ブロックを含めた。
【００５３】
すべての事例において、介入は、正常な冠状動脈血流（ＴＩＭＩ３流れ）で終了した。ＧＰ  ＩＩｂ／ＩＩＩａインヒビター放出の事例はなかった。死亡、心筋梗塞，および緊急再血管形成もまた観察されなかった。血清マグネシウムレベルは、２．１±０．３ベースラインからボーラス後３．２±０．３ｍｇ／ｄＬまで有意に増加した（Ｐ＜０．０００１）。さらに、マグネシウムは、心拍数または平均動脈血圧のいずれにも有意な影響を有さなかった。硫酸マグネシウム注入の終了後、マグネシウム濃度におけるさらなる有意な増加はなかった（注入後のマグネシウムレベルは、３．５±０．８ｍｇ／ｄＬであった）。
【００５４】
本明細書に提示したすべてのデータは平均±標準偏差として表した。平均間の統計的差異は、片側ＡＮＯＶＡにより決定した。平均が有意に異なっていることが示されたとき、対による複数比較を、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ検定により実施した（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖｅｒｓｉｏｎ３．０）。Ｓｐｅａｒｍａｎ相関分析を、血清マグネシウムとその他の変数との間、および血栓サイズとその他の変数との間の関係を調査するために実施した。Ｐ＜０．０５である値を有意であると考えた。
【００５５】
上記の記載は、本発明の特定の実施形態に言及しているが、本発明の趣旨から逸脱することなく、多くの改変がなされ得ることを理解すべきである。添付の特許請求の範囲は、本発明の真実の範囲および趣旨内に入るような改変を網羅することが意図される。したがって、現在開示されている実施形態は、すべての局面において、例示であって、かつ制限的でないと考慮されるべきであり、本発明の範囲は、先行する記載よりむしろ添付の特許請求の範囲により示され、そしてそれ故、特許請求の範囲の等価な意味および範囲内にあるすべての改変はその特許請求の範囲ｓに包含されることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【００５６】
【図１】図１は、本発明の実施形態による、エキソビボのブタのシャントモデルにおいて行われた灌流プロトコールを示す。
【図２ａ】図２ａは、本発明の１つの実施形態に従った実験における、異なる処置群での血栓重量に対する効果を示す棒グラフを提供する。
【図２ｂ】図２ｂは、種々の処置条件下での血栓負荷を描くニチノールステントの図（側面図）を提供する。
【図３】図３は、本発明の１つの実施形態に従って行われた実験により示したときの、心拍数および平均動脈血圧に対するマグネシウムの影響のグラフ表示を提供する。
【図４】図４は、本発明の１つの実施形態に従って行われた実験から収集された実験データの詳細を示すチャートを提供する。
【図５】図５は、本発明の１つの実施形態による実験において用いたときの、５μｇ／ｍＬコラーゲン誘導血小板凝集、出血時間およびＡＣＴに対する、ヘパリンおよびマグネシウムの効果の詳細を示すチャートを提供する。
【図１】
2005500330.tif 000003
【図２ａ】
2005500330.tif 000004
【図３】
2005500330.tif 000005
【図４】
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【図５】
2005500330.tif 000007
【国際公開パンフレット】
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2005500330.tif 000009
2005500330.tif 000010
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2005500330.tif 000033
【国際調査報告】
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