(57)【要約】本発明は、基質への酸化ストレスの影響を予防または減少する方法を提供する。前記方法は、化学式（I）の化合物またはその薬学的に許容される塩により前記基質を処理する工程を含む。ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ(モノ-、ジ-およびトリ-置換)、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、R2は、-H、-アルキル、-(CH2CH2O)n-R5、糖残基から選択される1以上の置換基であり、R3は、-H、-アルキル、-アリール、-アルキルOR6、-アルキルC(O)R6であり、R5は、-H、-アルキル、-アリールから選択され、R4およびR6は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから独立して選択される。
2005533030.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
基質への酸化ストレスの影響を予防または減少する方法であって、化学式(I)の化合物、またはその薬学的に許容できる塩により前記基質を処理する工程を含む方法。
【化１】
2005533030.tif 000027
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ(モノ-、ジ-およびトリ-置換)、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、
R2は、-H、-アルキル、-(CH2CH2O)n-R5、糖残基から選択される1以上の置換基であり、
R3は、-H、-アルキル、-アリール、-アルキルOR6、-アルキルC(O)R6であり、
R5は、-H、-アルキル、-アリールから選択され、および
R4およびR6は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから独立して選択される。
【請求項２】
R5が、以下の化学式を有する、請求項1記載の方法。
【化２】
2005533030.tif 000028
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、および
R4は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから選択される。
【請求項３】
前記化学式(I)の化合物において、R2が-CH2CH2O-R5であり、R3が-CH2C(O)R6であり、R4およびR6が1以上の-O-メチル、-O-エチル、-OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH3または-OC(O)CH3である、請求項2記載の方法。
【請求項４】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する、請求項1記載の方法。
【化３】
2005533030.tif 000029
【請求項５】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する、請求項1記載の方法。
【化４】
2005533030.tif 000030
【請求項６】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する、請求項1記載の方法。
【化５】
2005533030.tif 000031
【請求項７】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する、請求項2記載の方法。
【化６】
2005533030.tif 000032
【請求項８】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する、請求項1記載の方法。
【化７】
2005533030.tif 000033
ただし、R1およびR2は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-COアルキル、-CNから独立して選択され、および
R3は、-OH、-Oアルキル、-Oアリール、-Sアルキル、アミノ、糖残基、-ポリアルキレンオキシ、および水溶性基から選択される。
【請求項９】
前記基質が、生物システムである、上記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記方法が、神経変性障害の予防または治療に用いられる、請求項9記載の方法。
【請求項１１】
前記神経変性障害が、脳卒中、てんかん、パーキンソン病、ハンチントン疾患、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症またはアルツハイマー病である、請求項10記載の方法。
【請求項１２】
前記神経変性障害の治療が、神経変性障害を治療する第2薬剤の投与を含む、請求項11記載の方法。
【請求項１３】
前記第2薬剤が、ペプチド核酸である、請求項12記載の方法。前記ペプチド核酸が、N-TCC GTG AGA ATG-CまたはN-GTG AGA ATG-Cである、請求項13記載の方法。
【請求項１４】
前記第2薬剤が、神経栄養因子である、請求項12記載の方法。
【請求項１５】
前記神経栄養因子が、白血病抑制因子である、請求項15記載の方法。
【請求項１６】
酸化ストレスに関する疾患状態の治療のための薬剤の調製における、化学式(I)の化合物の使用。
【化８】
2005533030.tif 000034
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ(モノ-、ジ-およびトリ-置換)、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、
R2は、-H、-アルキル、-(CH2CH2O)n-R5、糖残基から選択される1以上の置換基であり、
R3は、-H、-アルキル、-アリール、-アルキルOR6、-アルキルC(O)R6であり、
R5は、-H、-アルキル、-アリールから選択され、および
R4およびR6は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから独立して選択される。
【請求項１７】
R5が、下記の化学式を有する、請求項17記載の化合物の使用。
【化９】
2005533030.tif 000035
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、および
R4は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから選択される。
【請求項１８】
前記化学式(I)の化合物において、R2が-CH2CH2O-R5、R3が-CH2C(O)R6、R4およびR6が1以上の-O-メチル、-O-エチル、-OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH3または-OC(O)CH3である、請求項18記載の化合物の使用。
【請求項１９】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する、請求項17記載の化合物の使用。
【化１０】
2005533030.tif 000036
【請求項２０】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する、請求項17記載の化合物の使用。
【化１１】
2005533030.tif 000037
【請求項２１】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する、請求項17記載の化合物の使用。
【化１２】
2005533030.tif 000038
【請求項２２】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する、請求項18記載の化合物の使用。
【化１３】
2005533030.tif 000039
【請求項２３】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する、請求項17記載の化合物の使用。
【化１４】
2005533030.tif 000040
ただし、R1およびR2は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-COアルキル、-CNから独立して選択され、および
R3は、-OH、-Oアルキル、-Oアリール、-Sアルキル、アミノ、糖残基、-ポリアルキレンオキシ、および水溶性基から選択される。
【請求項２４】
酸化ストレスに関する前記疾患状態が、神経変性障害である、請求項17〜24いずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項２５】
前記神経変性障害が、脳卒中、てんかん、パーキンソン病、ハンチントン疾患、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症またはアルツハイマー病である、請求項25記載の化合物の使用。
【請求項２６】
カルシウム毒性および酸化ストレスに関する疾患状態の治療方法であって、治療上効果的な量のフリーラジカル補集剤およびカルシウムバッファーを投与する工程を含む方法。
【請求項２７】
カルシウム毒性および酸化ストレスに関する前記疾患状態が、神経変性障害である、請求項27記載の方法。
【請求項２８】
前記神経変性障害が、脳卒中、てんかん、パーキンソン病、ハンチントン疾患、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、およびアルツハイマー病である、請求項28記載の方法。
【請求項２９】
前記方法が、フリーラジカル補集剤である第1薬剤およびカルシウムバッファーである第2薬剤を投与する工程を含む、請求項29記載の方法。
【請求項３０】
前記フリーラジカル補集剤が、リポ酸、2,3-ジヒドロ-1-ベンゾフラン-5-オール、クロマノン、troloxまたはビタミンEである、請求項30記載の方法。
【請求項３１】
前記カルシウムバッファーが、15-クラウン-5、18-クラウン-6またはビス(o-アミノフェノキシ)エタン-N,N,N',N'-四酢酸である、請求項31記載の方法。
【請求項３２】
前記第1および第2薬剤が、前記フリーラジカル補集剤およびカルシウムバッファーの両方と同様の化合物である、請求項30記載の方法。
【請求項３３】
前記単一の薬剤が、化学式(I)の化合物である、請求項33記載の方法。
【化１５】
2005533030.tif 000041
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ(モノ-、ジ-およびトリ-置換)、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、
R2は、-H、-アルキル、-(CH2CH2O)n-R5、糖残基から選択される1以上の置換基であり、
R3は、-H、-アルキル、-アリール、-アルキルOR6、-アルキルC(O)R6であり、
R5は、-H、-アルキル、-アリールから選択され、および
R4およびR6は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから独立して選択される。
【請求項３４】
R5が、以下の化学式を有する、請求項34記載の方法。
【化１６】
2005533030.tif 000042
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、および
R4は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから選択される。
【請求項３５】
前記化学式(I)の化合物において、R2が-CH2CH2O-R5、R3が-CH2C(O)R6、R4およびR6が1以上の-O-メチル、-O-エチル、-OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH3または-OC(O)CH3である、請求項35記載の方法。
【請求項３６】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する請求項34記載の方法。
【化１７】
2005533030.tif 000043
【請求項３７】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する請求項34記載の方法。
【化１８】
2005533030.tif 000044
【請求項３８】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する請求項34記載の方法。
【化１９】
2005533030.tif 000045
【請求項３９】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する請求項35記載の方法。
【化２０】
2005533030.tif 000046
【請求項４０】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する請求項34記載の方法。
【化２１】
2005533030.tif 000047
ただし、R1およびR2は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-COアルキル、-CNから独立して選択され、および
R3は、-OH、-Oアルキル、-Oアリール、-Sアルキル、アミノ、糖残基、-ポリアルキレンオキシ、および水溶性基から選択される。
【請求項４１】
化学式(II)の化合物、またはその薬学的に許容できる塩。
【化２２】
2005533030.tif 000048
ただし、R1およびR2は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基から互いに独立して選択され、
R1およびR2は、それぞれの芳香環において独立してテトラ-、トリ-、ジ-またはモノ-置換され、
R3およびR4は、-H、-アルキル、-CH2OH、-アリール、糖残基、-ポリアルキレンオキシ、水溶性基、抗酸化剤から互いに独立して選択され、
R5およびR6は、-O-アルキル、-O-アリール、-S-アルキルおよび-アミノから独立して選択され、
R7は、-H(各N原子上)、-アルキル、アリール、-(CH2O)n-、-(CH2CH2O)n-(n=1-5)であり、
R8およびR9は、-H、-アルキル、-COOH、-COOアルキルから互いに独立して選択される。
【請求項４２】
化学式(II)の前記化合物が、金属塩またはアルカリ土類金属錯体の形態である、請求項42記載の化合物。
【請求項４３】
基質への酸化ストレスの影響を予防または減少する方法であって、化学式(II)の化合物またはその薬学的に許容できる塩により前記基質を治療する工程を含む方法。
【化２３】
2005533030.tif 000049
ただし、R1およびR2は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基から互いに独立して選択され、
R1およびR2は、それぞれの芳香環において独立してテトラ-、トリ-、ジ-またはモノ-置換され、
R3およびR4は、-H、-アルキル、-CH2OH、-アリール、糖残基、-ポリアルキレンオキシ、水溶性基、抗酸化剤から互いに独立して選択され、
R5およびR6は、-O-アルキル、-O-アリール、-S-アルキルおよび-アミノから独立して選択され、
R7は、-H(各N原子上)、-アルキル、アリール、-(CH2O)n-、-(CH2CH2O)n-(n=1-5)であり、
R8およびR9は、-H、-アルキル、-COOH、-COOアルキルから互いに独立して選択される。
【請求項４４】
前記基質が、生物システムである、請求項44記載の方法。
【請求項４５】
前記方法が、神経変性障害の予防または治療に用いられる、請求項45記載の方法。
【請求項４６】
前記神経変性障害が、脳卒中、てんかん、パーキンソン病、ハンチントン疾患、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症またはアルツハイマー病である、請求項46記載の方法。
【請求項４７】
フリーラジカルを捕集するための製剤であって、効果的な量の化学式(I)または(II)の化合物を含む製剤。
【化２４】
2005533030.tif 000050
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ(モノ-、ジ-およびトリ-置換)、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、
R2は、-H、-アルキル、-(CH2CH2O)n-R5、糖残基から選択される1以上の置換基であり、
R3は、-H、-アルキル、-アリール、-アルキルOR6、-アルキルC(O)R6であり、
R5は、-H、-アルキル、-アリールから選択され、および
R4およびR6は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから独立して選択される。
【化２５】
2005533030.tif 000051
ただし、R1およびR2は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基から互いに独立して選択され、
R1およびR2は、それぞれの芳香環において独立してテトラ-、トリ-、ジ-またはモノ-置換され、
R3およびR4は、-H、-アルキル、-CH2OH、-アリール、糖残基、-ポリアルキレンオキシ、水溶性基、抗酸化剤から互いに独立して選択され、
R5およびR6は、-O-アルキル、-O-アリール、-S-アルキルおよび-アミノから独立して選択され、
R7は、-H(各N原子上)、-アルキル、アリール、-(CH2O)n-、-(CH2CH2O)n-(n=1-5)であり、
R8およびR9は、-H、-アルキル、-COOH、-COOアルキルから互いに独立して選択される。
【請求項４８】
化学式(II)の化合物を含む、製薬組成物。
【化２６】
2005533030.tif 000052
ただし、R1およびR2は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基から互いに独立して選択され、
R1およびR2は、それぞれの芳香環において独立してテトラ-、トリ-、ジ-またはモノ-置換され、
R3およびR4は、-H、-アルキル、-CH2OH、-アリール、糖残基、-ポリアルキレンオキシ、水溶性基、抗酸化剤から互いに独立して選択され、
R5およびR6は、-O-アルキル、-O-アリール、-S-アルキルおよび-アミノから独立して選択され、
R7は、-H(各N原子上)、-アルキル、アリール、-(CH2O)n-、-(CH2CH2O)n-(n=1-5)であり、
R8およびR9は、-H、-アルキル、-COOH、-COOアルキルから互いに独立して選択され、
および、薬学的に許容できる医薬品添加物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経変性障害のような酸化ストレスに関係する障害の治療方法に関する。本発明はまた、酸化ストレスに関係する障害の治療に用いられる新しい化学物質、特にビス(o-アミノフェノキシ)エタン-N,N,N',N'-四酢酸(BAPTA)類似体およびそれらの神経変性障害治療への使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
フリーラジカルは、生物システムにおいて重大な破壊を引き起こす、非常に反応活性な化学種である。フリーラジカルの生物分子との無差別反応は、細胞および細胞成分(例えばミトコンドリア)を破壊に至らせ、それによって、細胞にそれらの構造および／または機能を消失させる、生理的なプロセスに影響を及ぼす。
【０００３】
生物システムにおいて、フリーラジカルは、一般的に反応性酸素種(ROS)と呼ばれている。ROSは、酸素含有種の代謝をする内因性源、および毒素や大気の汚染物質のような外因性源から誘導される。
【０００４】
生物分子に対するROSの攻撃は、酸化ストレスと呼ばれる。酸化ストレスは、ハンチントン舞踏病、糖尿病、フリードライヒ運動失調症および老化を蓄積する非特異性損傷だけでなく、パーキンソン病、アルツハイマー病、運動神経疾患のような老化に関する数々の退行性疾患を引き起こす因子として関係している。それはまた、脳卒中および心発症において、また臓器移植および外科手術の間の炎症および虚血性-再潅流組織損傷の一因となる。
【０００５】
過剰のROS、抗酸化剤レベルの減少またはそれらの両方が存在する時、酸化ストレスが起こる。さらに、ROSの生成を妨害またはROSを除去する薬剤は、アルツハイマーおよびパーキンソン病のような神経変性(神経変性障害)に関係する多くの障害の治療に用いられる。例えば、ビタミンEのようなフリーラジカル捕集剤(FRS)は、神経変性の減少および運動神経疾患を生じているトランスジェニックマウスの生存の延長を示した。
【０００６】
この明細書の至る所に、本発明の様々な捉え方を記載することを目的とした文献が参照されている。しかし、この明細書において引用されるいずれの引例も先行技術とすることが認められない。特に、これらの記載のいずれもが、オーストラリアまたは他の国における当業者の一般的な知識であると認められた事実を成していないことが理解されるであろう。前記引例の記載は、著者が主張することを述べており、出願人は、ここに引用する前記文献のいずれの正確さや適切さを求める権利を保有する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、発明者による新しい種類の抗酸化化合物の発見から生じる。これら化合物は、望ましくは、前記ROSの形成を予防または減少させるための応用に用いられる。これらの応用は、酸化ストレスから生じる障害を予防または治療するための、動物または植物の治療を含む。ヒトおよび他の動物における神経変性障害治療は、これら化合物の応用の一例である。また、ROSが介在する細胞損傷は、老化に関連しているため、本発明の化合物の抗酸化性質は、化粧品における抗老化薬剤として有用である。さらに、化学工業のような他の産業は、基質酸化を予防することが好ましいため、本発明の抗酸化剤は、これらの産業に関する応用に用いられる。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
したがって、本発明は、基質への酸化ストレスの影響を予防または減少する方法を提供し、前記方法は、以下の化学式（I）の化合物またはその薬学的に許容される塩により前記基質を処理する工程を含む。
【０００９】
【化１】
2005533030.tif 000003
【００１０】
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ(モノ-、ジ-およびトリ-置換)、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、
R2は、-H、-アルキル、-(CH2CH2O)n-R5、糖残基から選択される1以上の置換基であり、
R3は、-H、-アルキル、-アリール、-アルキルOR6、-アルキルC(O)R6であり、
R5は、-H、-アルキル、-アリールから選択され、および
R4およびR6は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから独立して選択される。
【００１１】
R5は、以下の化学式を有することが好ましい。
【００１２】
【化２】
2005533030.tif 000004
【００１３】
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、および
R4は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから選択される。
【００１４】
本発明は、また、生物システムへの酸化ストレスの影響を予防または減少する方法を提供し、前記方法は、化学式(I)の化合物、またはその薬学的に許容できる塩により前記生物システムを治療する工程を含む。
【００１５】
【化３】
2005533030.tif 000005
【００１６】
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ(モノ-、ジ-およびトリ-置換)、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、
R2は、-H、-アルキル、-(CH2CH2O)n-R5、糖残基から選択される1以上の置換基であり、
R3は、-H、-アルキル、-アリール、-アルキルOR6、-アルキルC(O)R6、
R5は、-H、-アルキル、-アリールから選択され、および
R4およびR6は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから独立して選択される。
【００１７】
R5は、以下の化学式を有することが好ましい。
【００１８】
【化４】
2005533030.tif 000006
【００１９】
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、および
R4は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから選択される。
【００２０】
本発明の方法は、ヒトまたは動物における酸化ストレスに関する障害または病気の治療に用いられる。ある特定の形態において、前記方法は、神経変性障害の予防または治療に用いられる。神経変性障害の前記治療は、任意に、本発明の抗酸化化合物と、神経変性障害を治療する他の薬剤(例えばRiluzole、ペプチド核酸のようなアンチセンスDNAまたはその類似体、白血病抑制因子のような神経栄養因子、神経成長因子(NGF、BDNF、NT-3、NT 4/5)、神経栄養因子由来神経膠(GDNF)、リポ酸またはニコチン誘導体)とを同時に投与することを含む。
【００２１】
化学式(I)の抗酸化化合物は、また、酸化ストレスに関する疾患状態の治療ための薬剤の調製に用いられる。
【００２２】
虚血、損傷および神経変性障害に関する神経変性プロセスに追い込む正確なトリガーおよび分子カスケードは、ほとんど理解されていない。しかし、本発明者らは、酸化ストレス経路もまた、多くの神経学上の障害をCa2+恒常性の制御不調を介して開始させるという事を提案する。したがって、本発明は、また、カルシウム毒性および酸化ストレスに関係する疾患状態の治療方法を提供し、前記方法は、治療上効果的な量のフリーラジカル補集剤およびカルシウムバッファーを投与する工程を含む。
【００２３】
好ましくは、カルシウム毒性および酸化ストレスに関する前記疾患状態は、脳卒中、てんかん、パーキンソン病、ハンチントン疾患、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、老化、乏血およびアルツハイマー病のような神経変性障害である。
【００２４】
前記方法は、フリーラジカル補集剤である第1薬剤およびカルシウムバッファーである第2薬剤の投与を含んでもよい。適切なフリーラジカル捕集剤は、リポ酸、2,3-ジヒドロ-1-ベンゾフラン-5-オール、クロマノン誘導体、trolox、ブチルヒドロキシルトルエン(BHT)およびビタミンEを含む。適切なカルシウムバッファーは、15-クラウン-5、18-クラウン-6、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、エチレングリコール四酢酸(例えばTA)、シクロヘキサン-1,2-ジアミン四酢酸(CDTA)およびビス(o-アミノフェノキシ)エタン-N,N,N',N'-四酢酸(BAPTA)の誘導体を含む。しかし、前記方法は、好ましくは、フリーラジカル補集剤およびカルシウムバッファーの両方である単一薬剤の投与を含む。最も好ましくは、前記単一薬剤は、化学式(I)の化合物である。
【００２５】
化学式(I)のビス(o-アミノフェノキシ)エタン-N,N,N',N'-四酢酸(BAPTA)誘導体は、本発明者らによって調製され、これらの誘導体は、フリーラジカル捕集剤およびカルシウムバッファーを示す。さらに、本発明はまた、化学式(II)の化合物またはそれらの薬学的に許容できる塩を提供する。
【００２６】
【化５】
2005533030.tif 000007
【００２７】
ただし、R1およびR2は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基から互いに独立して選択され、
R1およびR2は、独立した芳香環のテトラ-、トリ-、ジ-またはモノ-置換基であり、
R3およびR4 は、-H、-アルキル、-CH2OH、-アリール、糖残基、-ポリアルキレンオキシ、水溶性基、抗酸化剤から互いに独立して選択され、
R5およびR6は、-O-アルキル、-O-アリール、-S-アルキルおよび-アミノから独立して選択され、
R7は、-H(各N原子上)、-アルキル、アリール、-(CH2O)n-、-(CH2CH2O)n-(n=1-5)であり、
R8およびR9は、-H、-アルキル、-COOH、-COOアルキルから互いに独立して選択される。
【００２８】
化学式(II)の化合物は、また、例えば、アルカリ(Na+)およびアルカリ土類(Ca2+)金属錯体のような金属塩の形態を含んでもよい。
【００２９】
本発明者らは、化学式(II)の化合物が抗酸化性質を有する事を発見した。さらに、本発明は、また、基質への酸化ストレスの影響を予防または減少する方法を提供し、前記方法は、化学式(II)の化合物またはその薬学的に許容できる塩により前記基質を処理する工程を含む。
【００３０】
化学式(I)または(II)の化合物は、フリーラジカルの捕集によって、基質への酸化ストレスの影響を予防または減少できる。さらに、本発明は、また、フリーラジカル捕集剤を提供し、前記製剤は、効果的な量の化学式(I)または(II)の化合物を含む。
【００３１】
本発明は、また、化学式(II)の化合物および薬学的に許容できる医薬品添加物を含む製薬組成物を提供する。前記製薬組成物は、神経変性障害の治療に用いられる。
【００３２】
本発明は、また、化学式(II)の化合物の調製方法、および／または化学式(II)の化合物を含む組成物の調製方法を提供する。
【００３３】
本発明の全体的な説明
本明細書に用いられる様々な用語は、当業者によって十分理解できる意味を有する。しかし、参照を容易にするために、これらの用語のいくつかをここで定義する。
【００３４】
本明細書で用いられる"基質"の用語は、生物システム(例えば、細胞、皮膚)、または化学基質(例えば、酸素感応性化学品)の意味として理解される。
【００３５】
本明細書で用いられる"生物システム"の用語は、細胞または多細胞システムの意味として理解され、完全有機体から単離された細胞を含む。例えば、前記生物システムは、酸化ストレスの影響を受ける動物またはヒト患者における組織であり、または酸化ストレスの影響を受ける動物またはヒト患者全体である。
【００３６】
本明細書で用いられる“神経変性障害”の用語は、神経性細胞の機能の早期死亡または消失により特徴付けられる障害の意味として理解される。退行性プロセスによる神経性細胞機能の死亡または消失は、多くのヒト神経上障害の主な病的特徴である。神経性細胞の死亡は、外傷性の損傷、乏血、てんかん、神経変性障害(例えば、パーキンソン病、ハンチントン疾患、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、多発性硬化症、脳卒中、または外傷)を含む様々な病気の結果として、または正常な組織の一部の進化および維持の結果として起こる。遺伝したいくつかの障害は、特別の神経性細胞種に特異性を有する、後期開始神経消失を生成する。
【００３７】
本明細書で用いられる“アルキル”の用語は、分枝または直鎖の非環状、1価の飽和炭化水素ラジカルの意味として理解され、好ましくは1〜20の炭素原子を有し、より好ましくは1〜10の炭素原子を有する。
【００３８】
本明細書で用いられる“アルコキシ”の用語は、"アルキル-O-"基の意味として理解される。好ましいアルコキシ基は、例えば、メトキシ、エトキシ、n-プロポキシ、イソ-プロポキシ、n-ブトキシ、tert-ブトキシ、sec-ブトキシ、n-ペントキシ、n-ヘキサオキシ、1,2-ジメチルブトキシ等を含む。
【００３９】
本明細書で用いられる“アルケニル”の用語は、少なくとも一つの炭素−炭素二重結合を含み、直鎖、分鎖、環状ラジカルを含む、不飽和炭化水素ラジカルの意味として理解される。
【００４０】
本明細書で用いられる"アミノ"の用語は、任意のモノ-、ジ-またはトリ-置換窒素の意味として理解される。
【００４１】
本明細書で用いられる“アリール”の用語は、芳香環の1以上のポジションが任意に置換されている、単一環(例えば、フェニル)または二縮合環(例えば、ナフチル)を有する芳香族１価炭素環状ラジカルの意味として理解される。
【００４２】
本明細書で用いられる“ヘテロアリール”の用語は、芳香環の1以上のポジションが任意に置換されており、環内に、例えば、窒素、酸素または硫黄のような少なくとも一つのヘテロ原子を有する芳香族１価モノ-またはポリ-環状ラジカルの意味として理解される。
【００４３】
本明細書で用いられる“アシル”の用語は、アルキル-C(O)-、置換アルキル-C(O)-、環状アルキル-C(O)-、置換環状アルキル-C(O)-、アリール-C(O)-、ヘテロアリール-C(O)-およびヘテロ環状-C(O)-置換基の意味として理解される。
【００４４】
本明細書で用いられる“ハロ”または“ハロゲン”の用語は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素の意味として理解される。
【００４５】
本明細書で用いられる"ポリアルキレンオキシ"の用語は、好ましくは前記アルキルが2または3の炭素原子を有する、1以上の-(アルキル-O)-基の繰り返しを有するポリアルキルエーテル基の意味として理解される。
【００４６】
本明細書で用いられる"糖残基"の用語は、直鎖または環状単糖類の意味として理解され、特にグルコース、フルクトース、マンノース、およびガラクトースまたはそれらの誘導体のようなペントースまたはヘキソースの意味として理解される。
【００４７】
本明細書で用いられる“薬学的に許容できる塩”の用語は、化学式(I)および(II)の化合物の薬学的に許容できる塩の意味として理解される。前記塩は、当業者によく知られている様々な有機および無機対イオン誘導体である。前記誘導体は、単一では、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウム等を含み、前記分子が塩基性官能性を含むときは、塩酸塩、水素酸塩、酒石酸塩、メシラート、酢酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩などのような薬学的に許容できる塩として使用できる有機または無機酸塩である。
【００４８】
ここに記載される前記化合物と中間体との単離および精製は、必要に応じて、例えば、濾過、抽出、結晶化、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、厚層(予備の)クロマトグラフィー、蒸留、またはこれら工程の組み合わせ等の適切な分離または精製工程によってもたらすことができる。特定の適切な分離および単離工程の例示が以下に示されている。しかし、他の同等な分離および単離工程を用いることができる。
【発明の効果】
【００４９】
化学式(I)または(II)による1、2-ビス(2-アミノフェノキシ)エタン-N,N,N',N'-四酢酸(BAPTA)誘導体を合成し、フリーラジカル捕集性能を有することが見出された。これら誘導体は、生理学的に活性な酸またはBAPTA塩の前駆薬として作用できる。化学式(I)または(II)の化合物の作用様式についての明確な理論に束縛されることなく、本発明者らは、BAPTAの細胞透過膜共役コンジュゲートとして作用することを仮定する。細胞内酵素活性への暴露おいて、1以上の共有結合が、BAPTAまたは塩であると考えられる活性種を放出するコンジュゲート内で破壊される。
【００５０】
発明者の最良の知識において、前記化学式(I)または(II)の化合物のフリーラジカル捕集性能は、従来、研究または同定されていなかった。したがって、これら化合物は、酸化ストレスに関する神経学上のおよび他の障害の治療に利用できる、フリーラジカル捕集化合物または抗酸化化合物の新しい種類を表わしている。
【００５１】
酸化ストレスの関連の根拠は、多くの医療条件において得られた。酸化ストレスは、特に、老化プロセスに付随する慢性の退行性障害または健康状態において重要な役割を果たす。これらは、神経変性障害(例えば、アルツハイマー、パーキンソン、ハンチントン等)、腫瘍性疾患、中枢神経システム障害、血管障害、糖尿病合併症、老化および虚血性組織損傷等の病気を含む。
【００５２】
運動神経内のフリーラジカル捕集酵素Cu/Znスーパオキシドジスムターゼ(SOD)の遺伝または翻訳後改変は、その機能を妨害し、攻撃を受けやすい運動神経に対してフリーラジカル攻撃を行う。ビタミンEのようなフリーラジカル捕集剤は、従来、神経変性の減少および運動神経疾患を生じているトランスジェニックマウスの生命の延長を示した。したがって、前記化学式(I)または(II)のフリーラジカル捕集化合物は、前記神経システムの神経学上の障害および外傷的障害の治療に使用できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５３】
前述した本発明は、基質への酸化ストレスの影響を予防または減少する方法を提供し、前記方法は、化学式(I)の化合物または薬学的に許容できる塩により基質を治療する工程を含む。
【００５４】
【化６】
2005533030.tif 000008
【００５５】
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ(モノ-、ジ-およびトリ-置換)、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、
R2は、-H、-アルキル、-(CH2CH2O)n-R5、糖残基から選択される1以上の置換基であり、
R3は、-H、-アルキル、-アリール、-アルキルOR6、-アルキルC(O)R6であり、
R5は、-H、-アルキル、-アリールから選択され、および
R4およびR6は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから独立して選択される。
【００５６】
本発明はまた、生物システムにおける酸化ストレスの影響を予防または減少する方法を提供し、前記方法は、化学式(I)の化合物または薬学的に許容できる塩により生物システムを処理する工程を含む。
【００５７】
【化７】
2005533030.tif 000009
【００５８】
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ(モノ-、ジ-およびトリ-置換)、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、
R2は、-H、-アルキル、-(CH2CH2O)n-R5、糖残基から選択される1以上の置換基であり、
R3は、-H、-アルキル、-アリール、-アルキルOR6、-アルキルC(O)R6であり、
R5は、-H、-アルキル、-アリールから選択され、および
R4およびR6は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから独立して選択される。
【００５９】
双方の方法で、前記化学式(I)の化合物において、R2は、好ましくは-CH2CH2O-R5、R3は好ましくは-CH2C(O)R6、R4およびR6は好ましくは1以上の-O-メチル、-O-エチル、-OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH3または-OC(O)CH3である。
【００６０】
選択的にまたは付随して、双方の方法において、R5は、好ましくは以下の化学式を有する。
【００６１】
【化８】
2005533030.tif 000010
【００６２】
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、および
R4は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから選択される。
【００６３】
表1による化学式(I)および(II)の化合物を合成し、ここに記載の方法を用いて評価を行ったとき、全てが抗酸化能を有することが示された。
【００６４】
【化９】
2005533030.tif 000011
【００６５】
本発明の他の実施形態において、化学式(I)の化合物は、以下の化学式を有する。
【００６６】
【化１０】
2005533030.tif 000012
【００６７】
ただし、R1およびR2は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-COアルキル、-CNから独立して選択され、および
R3は、-OH、-Oアルキル、-Oアリール、-Sアルキル、アミノ、糖残基、-ポリアルキレンオキシ、および水溶性基から選択される。
【００６８】
さらに、化学式(II)の化合物またはその薬学的に許容できる塩が、本発明の方法に用いられる。
【００６９】
【化１１】
2005533030.tif 000013
【００７０】
ただし、R1およびR2 は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基から互いに独立して選択され、
R1およびR2は、独立してそれぞれの芳香環においてテトラ-、トリ-、ジ-、またはモノ-置換であり、
R3およびR4 は、-H、-アルキル、-CH2OH、-アリール、糖残基、-ポリアルキレンオキシ、水溶性基、抗酸化剤から互いに独立して選択され、
R5およびR6は、-O-アルキル、-O-アリール、-S-アルキルおよび-アミノから独立して選択され、
R7は、-H(各N原子上)、-アルキル、アリール、-(CH2O)n-、-(CH2CH2O)n-(n=1-5)であり、
R8およびR9は、-H、-アルキル、-COOH、-COOアルキルからそれぞれ独立して選択される。
【００７１】
いくつかの場合において、本発明の化合物の水溶性を増加させることが好ましい。水溶液への応用において、前記R基の少なくとも一つ(例えば、化学式(I)の化合物におけるR4、または化学式(II)の化合物におけるR3/R4)は、制御製剤の溶解度または輸送の増進のために、スルホン酸塩、硫酸塩、カルボン酸塩、水酸基、アミノ、アンモニウム、糖類、直鎖または環状単糖類、アスコルビン酸塩基、いずれかの部位が-OH置換されたアルキル鎖、ポリエチレングリコールを含むグリコール、ポリエーテル、ボロン酸塩等のような水溶性基を含むことが好ましい。
【００７２】
特有の化合物のフリーラジカル捕集能力は、試験化合物による3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-yl)-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロマイド(MTT)の還元を測定する方法を用いて決定できる。
【００７３】
選択的にまたは付随して、特有の化合物のフリーラジカル捕集能力は、試験化合物存在下の過酸化水素によるリノール酸の酸化における試験化合物の能力を測定することで決定できる。結果は、化学式(I)および(II)の化合物が、ビタミンE(抗酸化剤として知られる)によって示された効力と同様の強力な抗酸化剤として作用するという事を示す。類似の結果が、前記分析内に様々な濃度のカルシウムイオンを加えることで得られた。
【００７４】
記載されたBAPTA類似体の前記フリーラジカル捕集作用に加えて、前記化合物は、また、カルシウムバッファーとして作用する。さらに、これら類似体は、カルシウムバッファーと同様の一対のフリーラジカルを捕集作用を有する。
【００７５】
経路に基づく酸化ストレスに加え、毒性経路も、神経変性を引き起こすと言う重要な根拠がある。神経細胞の機能およびシナプス活性は、カルシウムイオンに非常に依存している。毒性は、Ca2+の過度の流入を引き起こす刺激過度イオン好性(ionotropic)レセプターである過度のグルタミン酸塩レベルによって誘発される。この過剰負荷カルシウムは、神経性死亡に帰着するプロテアーゼおよびヌクレアーゼを活性化する。病的細胞内Ca2+負荷を扱う内因性Ca2+バッファータンパク質の不能性は、神経細胞に対するカルシウム毒性からの攻撃を特に受けやすくさせる。虚血、損傷および神経変性障害に関する様々な障害は、Ca2+恒常性の律動異常を経由して開始される。
【００７６】
さらに、齧歯動物種からの証拠は、前記神経性カルシウム恒常性の変化が、一般に脳の老化と一致し、年齢に関する認識機能の低下と関連があるという事を示唆する。前記実験的証拠は、年をとった神経細胞におけるカルシウム恒常性の変化が、老化により引き起こされるいくつかの記憶欠損に寄与する要因であるという提案を導いた。
【００７７】
本発明によると、治療上効果的な量のフリーラジカル補集剤およびカルシウムバッファーは、カルシウム毒性および酸化ストレスに関する疾患状態の治療のために動物またはヒトへ投与できる。これらの目的のために、化学式(I)または(II)の化合物が、いくつかの適切な投与プロトコルを用いて投与される。
【００７８】
化学式(I)または(II)の化合物(もしくはその薬学的に許容できる塩)は、薬学的に許容できる医薬品添加物、キャリアー、希釈剤、浸透性エンハンサー、可溶化剤および補助剤とともに製薬組成物として調製される。適切な薬学的に許容できる医薬品添加物は、それらの意図された機能の性能促進のために化学式(I)または(II)の化合物と共に投与できる、賦形剤およびキャリアーを含む。薬学的に活性な基質のための、そのような媒質の前記使用は、技術分野において知られている。
【００７９】
適切な医薬品添加物の例は、ラクトース、ブドウ糖、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、でんぷん類、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカントゴム、ゼラチン、カルシウムシリケート、微結晶性セルロース、PEG、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、無菌塩、糖乳液、およびメチルセルロースを含む。前記製剤は、さらに、タルク、ステアリン酸マグネシウム、およびミネラル・オイルのような潤滑薬剤;湿潤薬剤;乳化および懸架薬剤;メチル-およびプロピルヒドロキシ-安息香酸塩のような保存薬剤;甘味薬剤;および芳香薬剤を含むことができる。前記成分は、患者への投与後、前記活性処方成分を迅速に、持続または遅延して放出するように、処方できる。
【００８０】
化学式(I)または(II)の1以上の化合物は、単独または他の治療薬剤(例えば、神経変性障害治療の他の薬剤)、キャリアー、補助薬、浸透性エンハンサー等との組み合わせで投与される。前記成分は、'Remingtonの製薬の科学'、メース出版社(Mace Publishing Co.)、フィラデルフィア、Pa.17thed.(1985)および'現代の製薬学'、マルセルデッカー(Marcel Dekker)、Inc.3rd Ed.(G.S.Banker & C.T.Rhodes、Eds.)に記載されているような従来の技術を用いて処方される。化学式(I)の化合物の薬学的に許容できる塩は、製剤化学の当業者に知られる一般的な手順を用いて調製される。
【００８１】
前記化学式(I)または(II)の化合物は、治療上許容される薬剤投与のいずれかの形態、例えば、経口、非経口によって、スプレー吸入法によって、吸着、吸入、局所的、直腸、鼻、口内(bucally)、膣内、脳室内で、従来の非毒性の薬学的に許容できるキャリアーを含む投薬製剤に挿入された貯蔵器を経由して、または他の容易な投薬形態によって投与される。最も適切なルートは、治療される健康状態の活力および発病度に依存する。ここで用いられる非経口の用語は、皮下の、静脈内の、筋肉内の、腹腔内の、鞘内の、脳室内の、胸骨内、および頭蓋内の注射または点滴技術を含む。非経口投薬において、前記成分は、無菌の注射可能な溶液および無菌の包装された粉末形態であってもよい。
【００８２】
経口投与する場合、前記成分は、一般に、従来公知の装置および技術を用いた錠剤、カシェ剤、粉末、顆粒剤、ビーズ、咀嚼されるトローチ、カプセル剤、液体、水性懸濁液または溶液、もしくは類似形態のような投薬形態ユニットで処方される。そのような製剤は、一般的に固体、半固体、または液体キャリアを含む。典型的なキャリアは、ラクトース、ブドウ糖、スクロース、ソルビトール、マンニトール、でんぷん類、アラビアゴム、リン酸カルシウム、ミネラル・オイル、カカオバター、カカオ脂、アルギン酸塩、トラガカントゴム、ゼラチン、シロップ、メチルセルロース、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウリン酸塩、メチルヒドロキシ安息香酸エステル、プロピルヒドロキシ安息香酸エステル、タルク、ステアリン酸マグネシウム等を含む。
【００８３】
前記成分は、好ましくは、ヒト患者および他の哺乳類への単一の投薬として適切な物理的に分離したユニットとして処方され、いずれのユニットも、適切な製薬の医薬品添加物と共に、所望の治療上の効果を奏するために、計算された所定量の活性物質を含む。
【００８４】
化学式(I)または(II)の化合物、もしくはその薬学的に許容できる塩は、治療上効果的な量が投与される。実際に投与された前記化合物の量は、治療される健康状態、選択した投与ルート、実際の投与された化合物およびその相対活性、年齢、体重ならびに個々の患者の反応や患者の症状の酷さ等を含む関連した状況を考慮して、医師によって決定される。
【００８５】
化学式(I)または(II)の化合物は、1〜50mg/kgの投薬量で投与される。1、10、100および1000mg/kgの投薬量は、腹腔内で1週当たり3回投与される。前記化学式(I)または(II)の化合物製剤を含む製剤は、経口的に投与できることも考えられる。
【００８６】
化学式(I)または(II)の抗酸化化合物は、抗-老化薬剤として用いることができるため、一つ以上のこれら化合物を含む組成物は、化粧品として使用でき、また、適切な局所に供給してもよい。局所的な使用において、前記組成物は、例えば、5重量％以内の前記活性化合物を含み、乳剤、クリーム、ゼリー、溶液、軟こう剤の形態であってもよい。
【００８７】
化学式(I)または(II)の化合物による治療に加えて、本発明の方法は、フリーラジカル補集剤である第１薬剤およびカルシウムバッファーである第２薬剤の投与を含む。適切なフリーラジカル捕集剤は、カロテノイド、リモノイド、植物ステリン、フラボノイド、アントシアニジン、カテキン、イソフラボン類、オリゴマーのプロアントシアニジン、イソチオシアネート、ジチオールチオネス、スルフォラフアン、イソプレノイド、トコトリエノール、トコフェロール(例えばビタミンE)、リポ酸、ユビキノン、アスコビル酸塩(例えばビタミンC)、2、3-ジヒドロ-1-ベンゾフラン-5-オール、クロマノン誘導体、C60およびtroloxを含む。適切なカルシウムバッファーは、15-クラウン-5、18-クラウン-6、EDTAおよびBAPTAの誘導体を含む。
【００８８】
発明の好ましい実施形態
参考文献は、本発明の上記一般的法則を具体的に示す実施例である。しかし、以下の記載は上記の概論を限定しないと理解できる。
【００８９】
化学式(I)または(II)の化合物の合成
【実施例１】
【００９０】
ビス[2-(ビス-エトキシカルボニルメチル)アミノフェノキシ]エタン(化合物(3))およびビス(o-アミノフェノキシ)エタン-N,N,N',N'-四酢酸(BAPTA)(化合物(4))の合成
ビス[2-(ビス-エトキシカルボニルメチル)アミノフェノキシ]エタン(3)およびビス(o-アミノフェノキシ)エタン-N,N,N',N'-四酢酸(4)は、文献の工程に基づいて調製された(Tsien,R. Y.,J. Am. Chem. Soc.,1980,19,2396-2404 およびGrynkiewicz,G.; Poenie,M.、Tsien,R. Y.,J. Biol. Chem.,1985,260(6),3440-3460参照)。
【実施例２】
【００９１】
N,N-ビス(酢酸)o-アニシジン(5)の合成
【００９２】
【化１２】
2005533030.tif 000014
【００９３】
N,N-ビス(エチルカルボニルメチル)o-アニシジン(5)の合成
0.92mL(8.12mmol)のo-アニシジンを、乾燥アセトニトリル中で1.2等量のプロトンスポンジ(2.09g)、0.14等量のヨウ化カリウム(189mg)および2.4等量のエチルブロモアセテート(2.16mL)と混合し、一晩還流した。前記反応混合物をトルエンで希釈し濾過を行い、前記濾液を2M HCl(x2)およびH2Oで洗浄し、過剰のNa2SO4で乾燥させ、濾過を行い、前記溶媒を減圧下で除去した。前記粗生成物を、カラムクロマトグラフィー(30%EtOAc/ヘキサン)によって精製し、1.10g(3.69mmol)の(5)を黄色オイル(収率45%)として得た。1H NMR ((300 MHz、CDCl3): 6.88、m、4H、Ar-H; 4.18、q、4H、J 7.17 Hz、-O-CH2-CH3; 4.13、s、4H、N-CH2-; 3.80、s、3H、-O-CH3; 1.25、t、6H、J 7.17 Hz、-O-CH2-CH3。13C NMR ((75MHz、CDCl3): 171.2、C=O; 151.2、C1; 138.6、C2; 122.2/120.8/119.0/111.9、C3/C4/C5/C6; 60.6、-O-CH2-CH3; 55.5、-O-CH3; 54.0、N-CH2-; 14.3、-O-CH2-CH3。MS (ESI、+ve): m/z 296.1 [M プラス H]+、318.1 [M プラス Na] +、613.3 [2M プラス Na] +。
【００９４】
N,N-ビス(酢酸)o-アニシジン(6)
空気中、200mg(0.677mmol)の(5)を最少量の熱エタノール(7mL)に溶かし、2.1等量の濃水酸化カリウム水溶液(80mg)で処理した。穏やかに15分間加熱後、エタノールを減圧下で除去し、前記残渣をH2O(20mL)に再溶解させアイスバス中で冷却させた。濃HClをpH2になるまでゆっくり加えた。HCl添加による沈殿形成はなかったため、前記生成物をEtOAcで抽出し、前記溶媒を減圧下で除去した。粗生成物をEtOAc/ヘキサン(ｘ2)から再結晶して40mg(0.207mmol)の(6)を淡黄褐色固体として得た(収率31%)。1H NMR ((300 MHz、CDCl3/DMSO): 6.77、m、4H、Ar-H; 3.90、s、4H、N-CH2-; 3.68、s、3H、-O-CH3。13C NMR ( (75MHz、CDCl3/DMSO): 173.5、C=O; 151.5、C1; 138.0、C2; 122.9/120.7/119.7/111.7、C3/C4/C5/C6; 55.5、N-CH2-; 55.3、-O-CH3。MS (ESI、+ve): m/z 240.1 [M プラス H] +、262.1 [M プラス Na] +。
【実施例３】
【００９５】
4-アミノ-1,2-ジメトキシベンゼン-N,N-ジアセチルエチルエステル(10)および4-アミノ-1,2-ジメトキシベンゼン-N,N-二酢酸(11)の合成
【００９６】
4-ニトロ-1,2-ジメトキシベンゼン(8)の合成
【００９７】
【化１３】
2005533030.tif 000015
【００９８】
濃硝酸(2 ml)をベラトロール(7)(2.5 ml、19.6 mmol)およびジクロロメタン(50 ml)溶液に加え、室温で24時間撹拌した。有機層を水で洗浄し(3×50 ml)、過剰の硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過を行い、前記溶媒を減圧下で除去した。単離された生成物を静置して凝固させ、3.5 gの(8)を黄色結晶として得た(0.02 mol、収率98%)。
【００９９】
融点:90-94 ℃ (文献の融点: 97-98 ℃) 29。1H NMR. (300 MHz、CDCl3): δ
( 7.92 (dd、1H、J 8.9 Hz、J 2.6 Hz、Ar-H); 7.75 (d、1H、J 2.6 Hz、Ar-H); 6.91 (d、1H、J 8.9 Hz、Ar-H); 3.98 (s、3H、[C2]-OCH3); 3.97 (s、3H、[C1]-OCH3)。13C NMR (75 MHz、CDCl3): ( 153.6、(C4); 147.9、(C2); 140.6、(C1); 116.8、(C5); 108.9、(C6); 105.5、(C3); 55.5、([C2]-OCH3); 55.3、([C1]-OCH3).  IR (Nujol): 1586、m; 1500、s; 1345、s; 1280、s; 804、m。MS(ESI、+ve): m/z 183.8 [M]+。
【０１００】
4-アミノ-1,2-ジメトキシベンゼン(9)の合成
【０１０１】
【化１４】
2005533030.tif 000016
【０１０２】
4-ニトロ-1,2-ジメトキシベンゼン(8)(1.03 g、5.62 mmol)を95%(v/v)エタノール(60 ml)に溶解させ、ヒドラジン水和物(30 ml)、木炭(0.11 g)上に担持された過剰のパラジウムで水素化した。前記反応は、24時間還流させた。前記熱溶液を、セライトを通して濾過し、溶媒を減圧下で除去した。水を加え、前記生成物をジクロロメタンで抽出し、過剰の硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、粘性の液体を得るために溶媒を減圧下で除去し、前記粘性の液体を氷上に置くことで、白色粉末として0.80gの(9)を得た(5.22 mmol、収率93%)。
【０１０３】
融点:82-85℃(文献mp: 83-87℃)30。分解温度:205℃。1H NMR.(300 MHz、CDCl3): ( 6.66 (d、1H、J 8.4 Hz、Ar-H); 6.26 (d、1H、J 2.6 Hz、Ar-H); 6.18 (dd、1H、J 8.4 Hz、2.6 Hz、Ar-H); 3.77 (s、3H、[C1]-OCH3)、3.76 (s、3H、[C2]-OCH3)、3.38 (br s、2H、NH2)。13C NMR. (75 MHz、CDCl3): ( 148.9、(C1); 141.1、(C2); 139.8、(C4); 112.3、(C6); 105.5、(C5); 99.8、(C3); 55.7、([C1]-OCH3); 54.7、([C2]-OCH3)。IR (Nujol): 3380、br s; 1596、m; 1514、s; 11463、s; 1236、s; 849、m。MS (ESI、+ve): m/z 153.8 [M]+。
【０１０４】
4-アミノ-1,2-ジメトキシベンゼン-N,N-ジアセチルエチルエステル(10)の合成
【０１０５】
【化１５】
2005533030.tif 000017
【０１０６】
4-アミノ-1,2-ジメトキシベンゼン(9)(0.15 g、0.95 mmol)、ヨウ化カリウム(0.32 g)およびエチルブロモ酢酸(0.5 ml)の混合物を、乾燥アセトニトリル(5 ml)中、窒素雰囲気下で48時間還流させた。その後、前記溶液を冷却し、トルエン(5 ml)で希釈し、濾過を行った。集めた濾液を2Mの塩酸(2 × 20 ml)および水(2 × 20 ml)で洗浄し、過剰の硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過を行い、減圧下で溶媒を除去し、0.14gの(10)を褐色オイルとして得た(0.43 mmol、収率45 %)。
【０１０７】
1H NMR. (300 MHz、CDCl3): ( 6.74 (d、1H、J 8.7 Hz、Ar-H); 6.34 (d、1H、J 2.8 Hz、Ar-H); 6.20 (dd、1H、J 8.7 Hz、2.8 Hz、Ar-H); 4.21 (q、4H、J 7.1 Hz、-O-CH2-CH3); 4.12 (s、4H、-N-CH2-); 3.81 (s、3H、[C1]-O-CH3); 3.77 (s、3H、[C2]-O-CH3); 1.25 (t、6H、J 7.1 Hz、-O-CH2-CH3)。13C NMR. (75 MHz、CDCl3): ( 169.9、(C=O); 148.8、(C1); 141.7、(C2); 141.6、(C4); 112.0、(C6); 104.4、(C5); 98.7、(C3); 60.2、(-O-CH2-CH3); 55.6、([C1]-OCH3); 54.9、([C2]-OCH3); 53.5、(-N-CH2-); 13.3、(-O-CH2-CH3)。IR (Nujol): 2978、m; 2853、w; 1744、s; 1520、s; 1189、s。MS(ESI、+ve): m/z 326.3 [M]+; 348.3 [M + Na]+。
【０１０８】
4-アミノ-1,2-ジメトキシベンゼン-N,N-二酢酸(11)の合成
【０１０９】
【化１６】
2005533030.tif 000018
【０１１０】
前記エステル化合物(10)を、熱エタノール(10 ml)に溶解させ、水酸化カリウムの希釈水溶液(20 ml中0.2 g)5 mlを加えることでそれぞれのカリウム塩にケン化した。前記溶液を5分間加熱し、前記エタノールを減圧下で除去した。6M塩酸を撹拌しながら滴下することで、前記カルボン酸を得た。前記生成物を酢酸エチル(20 ml)で抽出し、減圧下で溶媒を除去し、30.2 mgの(11)を暗赤/褐色固体として得た(0.11 mmol、24%)。
【０１１１】
1H NMR. (300 MHz、d6-DMSO): ( 6.79 (d、1H、J 8.8 Hz、Ar-H); 6.21 (d、1H、J 2.9 Hz、Ar-H); 6.01 (dd、1H、J 8.8 Hz、3.0 Hz、Ar-H); 4.07 (s、4H、-N-CH2-); 3.70 (s、3H、[C1]-OCH3); 3.62 (s、3H、[C2]-OCH3)。13C NMR. (75 MHz、d6-DMSO): ( 172.1、(C=O); 149.1、(C2); 142.5、(C1); 140.5、(C4); 113.8、(C6); 102.8、(C5); 97.9、(C3); 56.0、([C1]-OCH3); 54.9、([C2]-OCH3); 52.9、(-N-CH2-)。
【実施例４】
【０１１２】
4-アミノ[N,N-ジアセチルエチルエステル]ベンゾ-18-クラウン-6(15)および4-アミノ[N,N-二酢酸]ベンゾ-18-クラウン-6(16)の合成
【０１１３】
4-ニトロベンゾ-18-クラウン-6(13)の合成
【０１１４】
【化１７】
2005533030.tif 000019
【０１１５】
濃硝酸(0.25 ml)を、ベンゾ-18-クラウン-6(12)(0.25 g、0.81 mmol)のジクロロメタン(15 ml)の撹拌している溶液に加えた。前記溶液を、室温で24時間撹拌した。前記有機層を水(3 × 30 ml)で洗浄し、過剰の硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過を行い、減圧下で溶媒を除去した。前記単離された油状生成物を静置して凝固させ、0.28 gの(13)を黄色結晶として得た(0.78 mmol、収率96 %)。前記粗生成物の1H NMRは、生成物およびジクロロメタンの存在を示した。前記生成物を、続く反応に用いる前にさらに24時間乾燥させた。
【０１１６】
融点: 82-83 ℃ (文献mp: 80-81 ℃)31。分解温度:312 ℃。1H NMR. (300 MHz、CDCl3): ( 7.88 (dd、1H、J 8.9 Hz、2.6 Hz、Ar-H); 7.74 (d、1H、J 2.6 Hz、Ar-H); 6.89 (d、1H、J 8.9 Hz、Ar-H); 4.24 (m、4H、OCH2); 3.95 (m、4H、OCH2); 3.77 (m、4H、OCH2); 3.72 (m、4H、OCH2); 3.68 (s、4H、OCH2)。13C NMR. (75 MHz、CDCl3): ( 154.3、(C4); 148.4、(C2); 141.3、(C1); 117.9、(C5); 111.2、(C6); 108.1、(C3); 70.99、(OCH2); 70.98、(OCH2); 70.8、(OCH2); 70.7、(OCH2); 70.60、(OCH2); 70.57、(OCH2); 69.23、(OCH2); 69.17、(OCH2); 69.1、(OCH2)。IR (Nujol): 1587、m; 1520、s; 1464、s; 1338、s; 1276、s; 1128、s; 864、w。MS (ESI、+ve): m/z 358.1 [M]+; 381.1 [M + Na]+。
【０１１７】
4-アミノベンゾ-18-クラウン-6(14)の合成
【０１１８】
【化１８】
2005533030.tif 000020
【０１１９】
4-ニトロベンゾ-18-クラウン-6(13)(0.40 g、1.11 mmol)を95 %(v/v)エタノール(25 ml)に溶解させ、ヒドラジン水和物(12 ml)、木炭(40 mg)上に担持された過剰のパラジウムで水素化した。前記反応は24時間撹拌した。前記熱溶液を、セライトに通して濾過し、減圧下で溶媒を除去した。水を加え、前記生成物をジクロロメタンで抽出し、過剰の硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、粘性の液体を得るために溶媒を減圧下で除去し、前記粘性の液体を氷上に置くことで、白色粉末として0.28 gの(14)を得た(0.86 mmol、収率84 %)。
【０１２０】
1H NMR. (300 MHz、CDCl3): ( 6.74 (d、1H、J 8.4 Hz、Ar-H); 6.29 (d、1H、J 2.6 Hz、Ar-H); 6.21 (dd、1H、J 8.4 Hz、2.6 Hz、Ar-H); 4.09 (m、4H、OCH2); 3.89 (m、4H、OCH2)、3.73 (m、8H、OCH2); 3.68 (s、4H、OCH2)、3.46 (br s、2H、NH2)。13C NMR. (75 MHz、CDCl3): ( 149.0、(C1); 140.7、(C2); 140.4、(C4); 115.5、(C6); 106.1、(C5); 101.5、(C3); 69.7、(OCH2); 69.6、(OCH2); 69.6、(OCH2); 69.5、(OCH2); 69.0、(OCH2); 68.8、(OCH2); 68.6、(OCH2); 67.5、(OCH2)。IR (Nujol): 3585、m; 3362、m; 1622、m; 1594、m; 1100、s。MS (ESI、+ve): m/z 328.1 [M]+; 351.1 [M + Na]+。
【０１２１】
4-アミノ[N,N-ジアセチルエチルエステル]ベンゾ-18-クラウン-6(15)の合成
【０１２２】
【化１９】
2005533030.tif 000021
【０１２３】
4-アミノベンゾ-18-クラウン-6(14)(0.28 g、0.84 mmol)、ヨウ化カリウム(0.28 g)およびブロモ酢酸エチル(0.2 ml)の混合物を、窒素雰囲気下、乾燥アセトニトリル(6 ml)中で48時間還流させた。前記溶液を冷却し、トルエン(10 ml)で希釈し、濾過を行った。集めた濾液を2M塩酸 3 × 20 ml)および水(2 × 20 ml)で洗浄し、過剰の硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過を行い、減圧下で溶媒を除去し、84 mgの(15)を褐色オイルとして得た(0.17 mmol、収率20 %)。
【０１２４】
1H NMR. (300 MHz、CDCl3): ( 6.79 (d、1H、J 8.7 Hz、Ar-H); 6.29 (d、1H、J 2.9 Hz、Ar-H); 6.16 (dd、1H、J 8.7、2.7 Hz、Ar-H); 4.20 (q、4H、J 7.1 Hz、-OCH2-CH3); 4.10 (m、4H、OCH2); 4.08 (s、4H、N-CH2-); 3.89 (m、4H、OCH2); 3.72 (m、8H、OCH2); 3.67 (s、4H、OCH2); 1.26 (t、6H、J 7.1 Hz、-O-CH2-CH3)。13C NMR. (75 MHz、CDCl3): ( 170.0、(C=O); 148.7、(C1); 142.7、(C2); 140.7、(C4); 115.3、(C6); 104.7、(C5); 100.5、(C3); 69.7、(OCH2); 69.6、(OCH2); 69.6、(OCH2); 69.5、(OCH2); 69.5、(OCH2); 68.7、(OCH2); 68.6、(OCH2); 67.8、(OCH2); 60.1、(-O-CH2-CH3); 53.1、(N-CH2-); 13.3、(-O-CH2-CH3)。IR (Nujol): 2876、m; 2362、w; 1744、s; 1615、m; 1520、s; 1452、m; 1183、m。MS (ESI、+ve): m/z 500.4 [M]+; 522.5 [M + Na]+。
【０１２５】
4-アミノ[N,N-二酢酸]ベンゾ-18-クラウン-6(16)の合成
【０１２６】
【化２０】
2005533030.tif 000022
【０１２７】
前記エステル化合物(10)を、熱エタノール(10 ml)に溶解させ、水酸化カリウムの希釈水溶液(20 ml中0.2 g) 5 mlを加えることでそれぞれのカリウム塩にケン化した。前記溶液を5分間加熱し、前記エタノールを減圧下で除去した。撹拌しながら6M塩酸を滴下することで前記カルボン酸を得た。前記生成物を酢酸エチル(20 ml)で抽出し、減圧下で溶媒を除去し、12.5 mgの(16)を暗赤/褐色固体として得た(0.03 mmol、収率21 %)。
【０１２８】
1H NMR. (300 MHz、d6-DMSO): ( 6.83 (d、1H、J 8.7 Hz、Ar-H); 6.25 (d、1H、J 2.4、Ar-H); 6.03 (dd、1H、J 8.7 Hz、2.8 Hz、Ar-H); 4.07 (s、4H、N-CH2-); 4.01 (m、4H、OCH2); 3.77 (m、4H、OCH2); 3.58 (m、8H、OCH2); 3.55 (s、4H、OCH2)。
【０１２９】
化学式(I)または(II)の化合物の使用
【実施例５】
【０１３０】
化学式(I)または(II)の化合物のin vitroでの抗酸化分析
脂質酸化は、一般的に抗酸化剤として知られるフリーラジカル捕集剤(FRS)を加えることで予防できる。それらの役割は、ヒドロキシ、ニトロキシおよびスーパーオキサイドラジカルのような有害な反応性分子を、生物学的方法によって通過または変換できるような無害な分子に変化させることである。細胞内のアポプトーシスを引き起こす主な経路の一つは、酸化ストレスである。この事象は、細胞壁および膜上で、それらの破壊を引き起こす、これらの有害なラジカル作用の生成である。抗酸化剤の評価(スキーム1)において、AAPHは、スーパーオキサイドを生じるフリーラジカル開始剤として利用され、その効率は、フリーラジカル補集剤の存在下および非存在下における、リノール酸の酸化を通して生成する共役ジエンヒドロペルオキシドの形成に基づいて計算された。前記共役ジエンヒドロペルオキシドは、前記細胞壁に課す細胞酸化ストレスの生成物に酷似している。前記抗酸化剤は、適切なラジカルと反応することにより前記共役ジエンの形成を停止または遅延させる反応のいずれの段階においても作用できる(スキーム1)。
【０１３１】
水系における前記抗酸化効力を決定する簡便なテストは、フリーラジカル開始剤として2,2`-アゾビス(2-アミジノプロパン).2HCl(AAPH)を用いた機構である(スキーム1)。37℃の水系における、前記リノール酸の酸化を通して生成される前記共役ジエンヒドロペルオキシド(LOOH)の生成は、Cary 100 UV-Vis分光光度計を用いて234nmで15分間モニターされる。前記抗酸化効力は、フリーラジカルを消滅させ、リノール酸の酸化を遅延または停止する能力によって測定された。
【０１３２】
【化２１】
2005533030.tif 000023
【０１３３】
前記効力は、抗酸化剤非存在下での前記フリーラジカル生成を基準にして決定する。効力は、下記式を用いて計算される。
効力(%)=1-[K2/K1]x100
前記式において、
K1 =基準の酸化比率(抗酸化剤なし)=[吸光度の差]/[時間(秒)]
K2 =抗酸化剤を伴う酸化比率=[吸光度の差]/[時間(秒)]。
【０１３４】
前述した前記プロセスは、身体が生成するのと同じ遊離基の生成を設定した擬生物的なプロセスである。酸化は、過酸化水素の追加を通じては起こらない。
【０１３５】
本発明の化合物の効力をテストするに先立ち、ビタミンEおよびアスコルビン酸を含む多くの周知な抗酸化剤をテストした。ビタミンEおよびアスコルビン酸に対する各テストは、文献に示されたものと類似の結果を示した。他の多くの変数が、抗酸化剤、基質(リノール酸)および開始剤(AAPH)の量を含めてテストされた。最適の量を、以下に示す。
【０１３６】
2.78ml 0.05Mリン酸バッファー pH 7.4
30ulリノール酸分散液ストック
10ul 0.01M 抗酸化剤ストック
150ul 40mM AAPHストック
【０１３７】
【表１】
2005533030.tif 000024
【０１３８】
Ca2+の存在および非存在下において、本発明の化合物の効力をテストする時、HEPES生理食塩水バッファーを標準リン酸バッファーの代わりに使用し、CaCl2をカルシウムイオン源として使用した。
【０１３９】
【表２】
2005533030.tif 000025
【０１４０】
実施例5
in vitroでの神経性生存の実験
NSC34細胞(神経芽細胞腫x脊髄セルライン)の細胞生存度を、3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-yl)-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロマイド(MTT)の還元(Cheung NS等(1998)神経薬理学37、1419-1429を参照)、および損傷細胞において傷つけられたミトコンドリア機能の測定(Kroemer等(1998) Ann Rev Phy60、619-642を参照)によって、損傷の24時間後に決定した。MTTは、前記神経とともに37℃で30分間培養し、還元されたホルマザン生成物は、20%ナトリウムドデシル硫酸塩および40%ジメチルホルムアミド中の前記細胞から溶解させ、吸光度を590nmで読み取った(Ceres UV900C microplate reader; Biotek Instruments、USA)。過剰の過酸化水素またはトリトンX-100で処理された倍養液が、100%細胞死として得られ、結果は、媒体コントロールの%として表された。
【実施例６】
【０１４１】
in vitroでの神経性生存の実験
我々は、酸化ストレス(図3、モデルA)および興奮毒性(図4、モデルB)により誘導される細胞死を予防する遮蔽薬に使用できる2つの細胞培養システムを開発した。モデルAにおいて、我々は、10μMで重大な死を誘導するパラコートに暴露された培養された線維芽細胞を利用する(図3を参照)。モデルBにおいて、我々は、特定のアゴニスト フルオロウィラージン(fluorowillardiine)またはFWを用いてグルタミン酸塩興奮毒性経由の退化を誘導される、前記NSC-34運動神経神経セルラインを利用する(図4を参照)。
【実施例７】
【０１４２】
in vivoでの神経性生存の実験
共同療法としてペプチド核酸(PNAG3と呼ばれ、N-TCC GTG AGA ATG-CまたはN-GTG AGA ATG-C構造を有する)および白血病抑制因子(LIF)と共に投与される時の、前記化合物の耐性および効力が決定された。これら実験は、化合物(3)との共同治療が、前記化合物(3)の抗酸化およびカルシウムバッファー作用を経由する相乗効果を有するか否かを決定するために行われた。SOD1G93Aマウスは、行動への重大な悪影響および体重の減少なしに、VEH、PNAG3 + 化合物(3)、LIF + 化合物(3)およびPNAG3 + LIF + 化合物(3)での治療に耐性があった(図5)。すべてのグループにおいて、筋萎縮に関する疾患が原因となる予想された体重の減少が観察された。ロータロッド装置(図6A)を用いた移動行動の分析およびバーグラブタスク(bar grab task)(図6B)を、重大な改善を示した前記VEHグループ、PNAG3 + 化合物(3)、LIF+ 化合物(3)およびPNAG3 + LIF + 化合物(3)グループと比較して示す。これらマウスの生存を、図6CおよびTable 1に表わした。これらデータは、生存度に改善が見られたことを示す。
【０１４３】
【表３】
2005533030.tif 000026
【０１４４】
最後に、本発明の記述された方法および構成の様々な修正および変更は、発明の範囲および精神を外れないことが当業者に明らかであることが認識される。本発明は、特定の好ましい実施形態に関して記述されたが、請求する発明が特定の実施形態に過度に制限されるべきでないことは理解されるべきである。確かに、本発明を行なうために記述された形態の当業者に明らかな様々な修正は、現在の発明の範囲内であるように意図される。
【図面の簡単な説明】
【０１４５】
【図１】図1は、本発明の抗酸化剤存在下でのリノール酸の酸化にに関する、時間と234nmでの吸光度のプロットである。前記プロットで用いるMJMカルボキシリックは化合物(4)を示し、MJMエステルは化合物(3)を示す。
【図２】図2は、パラコートに暴露された新生児マウスの線維芽細胞の酸化ストレスで誘導される細胞死のプロットである。細胞(ウェルあたり5x103個)は、新しく調製されたパラコートまたはペルオキシ亜硝酸塩により一晩処理された。ウェルの培養培地は、細胞毒性のマーカーとして乳酸塩脱水素酵素(LDH)放出について分析された。パラコートの高い投与量は重大な細胞死を誘導するが、ペルオキシ亜硝酸塩は細胞死を誘導しなかった。値は、同じ3個のウェルの平均+ SEMを示し、処理されていない細胞と*P <0.05の差を示す。x-軸は、パラコートおよびペルオキシ亜硝酸塩の濃度をμMの単位で示している。
【図３】図3は、NSC-34D運動神経セルラインの存続(MTT還元)に対する(S)-5-フルオロウィラージン(fluorowillardiine)((S)-5-FW)の影響を示すプロットである。これら細胞は、1%(v/v)FCSを含むDMEM/F-12において1x104細胞/ウェルで48時間培養され、それらは、様々な濃度の(S)-5-FWに72時間暴露された。MTT溶液(0.5 mg/ml)を2時間培養液に添加し、細胞を可溶性にし、処理された細胞の割合としてMTT還元を測定した。コントロール(ゼロ(S)-5-FW)との統計上の重大な差は、ワンウェイANOVA(*P<0.05、***P<0.001)を用いて定義された。(S)-5-FWは、1000μM[(S)-5-FW]の濃度で最大の効果を示す濃度依存法において重大な細胞死を誘発した事が判る。
【図４】図4は、化合物(3)と共に処理されたSODI693Aトランスジェニックマウスの体重を示すプロットである。筋萎縮に関連した体重の統計的に重大な減少(星印)は、媒体(A)群の出生116日後に観察された。これは、残りの群、すなわち、LIF+(3)(B)、PNAG3+(3)(C)およびLIF+PNAG3+(3)(D)においては、出生130日後に遅らせていた。各群は10匹(5匹の雄(5匹の雌))のマウスであり、平均+SEM*P<0.05で表わした。
【図５】図5は、媒体(VEH)、LIF+化合物(3)、PNAG3+化合物(3)およびLIF+PNAG3+化合物(3)群(1群あたりn=10)におけるSODI693Aトランスジェニックマウスの移動能力および生存度のプロットである。ヒストグラムAは、媒体群と比較して、LIF+化合物(3)、PNAG3+化合物(3)およびLIF+PNAG3+化合物(3)群における重大な違いを示している。これら3つの群の間には重大な差は無かった。前記3つの処理群において、類似の重大な向上が、前記バーグラブテスト(B)で観測された。処理されたマウスのカプラン-マイヤー(Kaplan-Meier)生存度カーブは、前記LIF+化合物(3)、PNAG3+化合物(3)およびLIF+PNAG3+化合物(3)群において前記媒体(C)群と比較して寿命の重大な増加を示す。
【図１】
2005533030.tif 000053
【図２】
2005533030.tif 000054
【図３】
2005533030.tif 000055
【図４】
2005533030.tif 000056
【図５】
2005533030.tif 000057
【手続補正書】
【提出日】平成16年8月9日(2004.8.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
基質への酸化ストレスの影響を予防または減少する方法であって、化学式(I)の化合物、またはその薬学的に許容できる塩による前記基質の処理によって、基質における活性酸素種の形成を予防または減少する工程を含む方法。
【化１】
2005533030.tif 000058
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ(モノ-、ジ-およびトリ-置換)、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、
R2は、-H、-アルキル、-(CH2CH2O)n-R5(n=1-5)、糖残基、-アルキルベンゾピラン(任意に置換)から選択される1以上の置換基であり、
R3は、-H、-アルキル、-アリール、-アルキルOR6、-アルキルC(O)R6であり、
R5は、-H、-アルキル、-アリール、化学式(Ｉ)に示される前記アリール環から選択され、および
R4およびR6は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから独立して選択される。
【請求項２】
R5が、以下の化学式を有する、請求項1記載の方法。
【化２】
2005533030.tif 000059
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、および
R4は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから選択される。
【請求項３】
前記化学式(I)の化合物において、R2が-CH2CH2O-R5であり、R3が-CH2C(O)R6であり、R4およびR6が1以上の-O-メチル、-O-エチル、-OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH3または-OC(O)CH3である、請求項2記載の方法。
【請求項４】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する、請求項1記載の方法。
【化３】
2005533030.tif 000060
【請求項５】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する、請求項1記載の方法。
【化４】
2005533030.tif 000061
【請求項６】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する、請求項1記載の方法。
【化５】
2005533030.tif 000062
【請求項７】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する、請求項2記載の方法。
【化６】
2005533030.tif 000063
【請求項８】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する、請求項1記載の方法。
【化７】
2005533030.tif 000064
ただし、R1およびR2は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-COアルキル、-CNから独立して選択され、および
R3は、-OH、-Oアルキル、-Oアリール、-Sアルキル、アミノ、糖残基、-ポリアルキレンオキシ、および水溶性基から選択される。
【請求項９】
前記基質が、生物システムである、上記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記方法が、神経変性障害の予防または治療に用いられる、請求項9記載の方法。
【請求項１１】
前記神経変性障害が、脳卒中、てんかん、パーキンソン病、ハンチントン疾患、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症またはアルツハイマー病である、請求項10記載の方法。
【請求項１２】
前記神経変性障害の治療が、神経変性障害を治療する第2薬剤の投与を含む、請求項11記載の方法。
【請求項１３】
前記第2薬剤が、ペプチド核酸である、請求項12記載の方法。
【請求項１４】
前記ペプチド核酸が、N-TCC GTG AGA ATG-CまたはN-GTG AGA ATG-Cである、請求項13記載の方法。
【請求項１５】
前記第2薬剤が、神経栄養因子である、請求項12記載の方法。
【請求項１６】
前記神経栄養因子が、白血病抑制因子である、請求項15記載の方法。
【請求項１７】
酸化ストレスに関する疾患状態の治療のための薬剤の調製における、化学式(I)の化合物の使用。
【化８】
2005533030.tif 000065
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ(モノ-、ジ-およびトリ-置換)、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、
R2は、-H、-アルキル、-(CH2CH2O)n-R5(n=1-5)、糖残基、-アルキルベンゾピラン(任意に置換)から選択される1以上の置換基であり、
R3は、-H、-アルキル、-アリール、-アルキルOR6、-アルキルC(O)R6であり、
R5は、-H、-アルキル、-アリール、化学式(Ｉ)に示される前記アリール環から選択され、および
R4およびR6は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから独立して選択される。
【請求項１８】
R5が、下記の化学式を有する、請求項17記載の化合物の使用。
【化９】
2005533030.tif 000066
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、および
R4は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから選択される。
【請求項１９】
前記化学式(I)の化合物において、R2が-CH2CH2O-R5、R3が-CH2C(O)R6、R4およびR6が1以上の-O-メチル、-O-エチル、-OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH3または-OC(O)CH3である、請求項18記載の化合物の使用。
【請求項２０】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する、請求項17記載の化合物の使用。
【化１０】
2005533030.tif 000067
【請求項２１】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する、請求項17記載の化合物の使用。
【化１１】
2005533030.tif 000068
【請求項２２】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する、請求項17記載の化合物の使用。
【化１２】
2005533030.tif 000069
【請求項２３】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する、請求項18記載の化合物の使用。
【化１３】
2005533030.tif 000070
【請求項２４】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する、請求項17記載の化合物の使用。
【化１４】
2005533030.tif 000071
ただし、R1およびR2は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-COアルキル、-CNから独立して選択され、および
R3は、-OH、-Oアルキル、-Oアリール、-Sアルキル、アミノ、糖残基、-ポリアルキレンオキシ、および水溶性基から選択される。
【請求項２５】
酸化ストレスに関する前記疾患状態が、神経変性障害である、請求項17〜24いずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項２６】
前記神経変性障害が、脳卒中、てんかん、パーキンソン病、ハンチントン疾患、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症またはアルツハイマー病である、請求項25記載の化合物の使用。
【請求項２７】
カルシウム毒性および酸化ストレスに関する疾患状態の治療方法であって、治療上効果的な量のフリーラジカル補集剤およびカルシウムバッファーを投与する工程を含む方法。
【請求項２８】
カルシウム毒性および酸化ストレスに関する前記疾患状態が、神経変性障害である、請求項27記載の方法。
【請求項２９】
前記神経変性障害が、脳卒中、てんかん、パーキンソン病、ハンチントン疾患、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、およびアルツハイマー病である、請求項28記載の方法。
【請求項３０】
前記方法が、フリーラジカル補集剤である第1薬剤およびカルシウムバッファーである第2薬剤を投与する工程を含む、請求項29記載の方法。
【請求項３１】
前記フリーラジカル補集剤が、リポ酸、2,3-ジヒドロ-1-ベンゾフラン-5-オール、クロマノン、troloxまたはビタミンEである、請求項30記載の方法。
【請求項３２】
前記カルシウムバッファーが、15-クラウン-5、18-クラウン-6またはビス(o-アミノフェノキシ)エタン-N,N,N',N'-四酢酸である、請求項31記載の方法。
【請求項３３】
前記第1および第2薬剤が、前記フリーラジカル補集剤およびカルシウムバッファーの両方と同様の化合物である、請求項30記載の方法。
【請求項３４】
前記単一の薬剤が、化学式(I)の化合物である、請求項33記載の方法。
【化１５】
2005533030.tif 000072
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ(モノ-、ジ-およびトリ-置換)、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、
R2は、-H、-アルキル、-(CH2CH2O)n-R5(n=1-5)、糖残基、-アルキルベンゾピラン(任意に置換)から選択される1以上の置換基であり、
R3は、-H、-アルキル、-アリール、-アルキルOR6、-アルキルC(O)R6であり、
R5は、-H、-アルキル、-アリール、化学式(Ｉ)に示される前記アリール環から選択され、および
R4およびR6は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから独立して選択される。
【請求項３５】
R5が、以下の化学式を有する、請求項34記載の方法。
【化１６】
2005533030.tif 000073
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、および
R4は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから選択される。
【請求項３６】
前記化学式(I)の化合物において、R2が-CH2CH2O-R5、R3が-CH2C(O)R6、R4およびR6が1以上の-O-メチル、-O-エチル、-OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH3または-OC(O)CH3である、請求項35記載の方法。
【請求項３７】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する請求項34記載の方法。
【化１７】
2005533030.tif 000074
【請求項３８】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する請求項34記載の方法。
【化１８】
2005533030.tif 000075
【請求項３９】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する請求項34記載の方法。
【化１９】
2005533030.tif 000076
【請求項４０】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する請求項35記載の方法。
【化２０】
2005533030.tif 000077
【請求項４１】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する請求項34記載の方法。
【化２１】
2005533030.tif 000078
ただし、R1およびR2は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-COアルキル、-CNから独立して選択され、および
R3は、-OH、-Oアルキル、-Oアリール、-Sアルキル、アミノ、糖残基、-ポリアルキレンオキシ、および水溶性基から選択される。
【請求項４２】
化学式(II)の化合物、またはその薬学的に許容できる塩。
【化２２】
2005533030.tif 000079
ただし、R1およびR2は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基から互いに独立して選択され、
R1およびR2は、それぞれの芳香環において独立してテトラ-、トリ-、ジ-またはモノ-置換され、
R3およびR4は、-H、-アルキル、-CH2OH、-アリール、糖残基、-ポリアルキレンオキシ、水溶性基、抗酸化剤から互いに独立して選択され、
R5およびR6は、-O-アルキル(Ｃ3〜Ｃ10)、-O-アリール、-S-アルキルおよび-アミノから独立して選択され、
R8およびR9は、-H、-アルキル、-COOH、-COOアルキルから互いに独立して選択される。
【請求項４３】
化学式(II)の前記化合物が、金属塩またはアルカリ土類金属錯体の形態である、請求項42記載の化合物。
【請求項４４】
基質への酸化ストレスの影響を予防または減少する方法であって、化学式(II)の化合物またはその薬学的に許容できる塩による前記基質の治療によって、基質における活性酸素種の形成を予防または減少する工程を含む方法。
【化２３】
2005533030.tif 000080
ただし、R1およびR2は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基から互いに独立して選択され、
R1およびR2は、それぞれの芳香環において独立してテトラ-、トリ-、ジ-またはモノ-置換され、
R3およびR4は、-H、-アルキル、-CH2OH、-アリール、糖残基、-ポリアルキレンオキシ、水溶性基、抗酸化剤から互いに独立して選択され、
R5およびR6は、-O-アルキル(Ｃ3〜Ｃ10)、-O-アリール、-S-アルキルおよび-アミノから独立して選択され、
R8およびR9は、-H、-アルキル、-COOH、-COOアルキルから互いに独立して選択される。
【請求項４５】
前記基質が、生物システムである、請求項44記載の方法。
【請求項４６】
前記方法が、神経変性障害の予防または治療に用いられる、請求項45記載の方法。
【請求項４７】
前記神経変性障害が、脳卒中、てんかん、パーキンソン病、ハンチントン疾患、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症またはアルツハイマー病である、請求項46記載の方法。
【請求項４８】
フリーラジカルを捕集するための製剤であって、効果的な量の化学式(I)または(II)の化合物を含む製剤。
【化２４】
2005533030.tif 000081
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ(モノ-、ジ-およびトリ-置換)、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、
R2は、-H、-アルキル、-(CH2CH2O)n-R5(n=1-5)、糖残基、-アルキルベンゾピラン(任意に置換)から選択される1以上の置換基であり、
R3は、-H、-アルキル、-アリール、-アルキルOR6、-アルキルC(O)R6であり、
R5は、-H、-アルキル、-アリール、化学式(Ｉ)に示される前記アリール環から選択され、および
R4およびR6は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから独立して選択さる。
【化２５】
2005533030.tif 000082
ただし、R1およびR2は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基から互いに独立して選択され、
R1およびR2は、それぞれの芳香環において独立してテトラ-、トリ-、ジ-またはモノ-置換され、
R3およびR4は、-H、-アルキル、-CH2OH、-アリール、糖残基、-ポリアルキレンオキシ、水溶性基、抗酸化剤から互いに独立して選択され、
R5およびR6は、-O-アルキル(Ｃ3〜Ｃ10)、-O-アリール、-S-アルキルおよび-アミノから独立して選択され、
R8およびR9は、-H、-アルキル、-COOH、-COOアルキルから互いに独立して選択される。
【請求項４９】
化学式(II)の化合物を含む、製薬組成物。
【化２６】
2005533030.tif 000083
ただし、R1およびR2は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基から互いに独立して選択され、
R1およびR2は、それぞれの芳香環において独立してテトラ-、トリ-、ジ-またはモノ-置換され、
R3およびR4は、-H、-アルキル、-CH2OH、-アリール、糖残基、-ポリアルキレンオキシ、水溶性基、抗酸化剤から互いに独立して選択され、
R5およびR6は、-O-アルキル(Ｃ3〜Ｃ10)、-O-アリール、-S-アルキルおよび-アミノから独立して選択され、
R8およびR9は、-H、-アルキル、-COOH、-COOアルキルから互いに独立して選択され、
および、薬学的に許容できる医薬品添加物。
【手続補正書】
【提出日】平成17年5月25日(2005.5.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項２】
R5が、以下の化学式を有する、請求項1記載の方法。
【化２】
2005533030.tif 000084
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、および
R4は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから選択される。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項５】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する、請求項1記載の方法。
【化４】
2005533030.tif 000085
【手続補正３】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１８】
R5が、下記の化学式を有する、請求項17記載の化合物の使用。
【化９】
2005533030.tif 000086
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、および
R4は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから選択される。
【手続補正４】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項２１】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する、請求項17記載の化合物の使用。
【化１１】
2005533030.tif 000087
【手続補正５】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項３５】
R5が、以下の化学式を有する、請求項34記載の方法。
【化１６】
2005533030.tif 000088
ただし、R1は、-H、-アルキル、-アルコキシ、-アリール、-アリールオキシ、-ハロゲン、-アミノ、-アルキルチオ、-NO2、-COOH、-COOアルキル、-CO-アルキル、-CNから選択される1以上の置換基であり、および
R4は、-OH、-O-アルキル、-O-ポリアルキレンオキシ、-O-アリール、-OC(O)O-アルキル、-S-アルキルおよび-アミノから選択される。
【手続補正６】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項３８】
前記化学式(I)の化合物が、以下の化学式を有する請求項34記載の方法。
【化１８】
2005533030.tif 000089
【国際調査報告】
2005533030.tif 000090
2005533030.tif 000091
2005533030.tif 000092