(57)【要約】【課題】褐色脂肪細胞に対し高い活性化効果を有する製剤を提供する。【解決手段】甘草（Glycyrrhiza glabra）の抽出物を有効成分として含有する褐色脂肪細胞活性化剤を提供する。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
甘草（Glycyrrhiza glabra）の抽出物を有効成分として含有する褐色脂肪細胞活性化剤。
【請求項２】
熱産生によるエネルギーの消費を促進するための、請求項１に記載の褐色脂肪細胞活性化剤。
【請求項３】
前記熱産生が寒冷誘導熱産生又は食事誘導熱産生である、請求項２に記載の褐色脂肪細胞活性化剤。
【請求項４】
安静時代謝を促進するための、請求項１〜３のいずれか１項に記載の褐色脂肪細胞活性化剤。
【請求項５】
UCP1の発現を亢進させることにより褐色脂肪細胞を活性化する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の褐色脂肪細胞活性化剤。
【請求項６】
甘草の抽出物を有効成分として含有するエネルギー消費促進剤。
【請求項７】
褐色脂肪細胞を活性化することによりエネルギーの消費を促進する、請求項６に記載のエネルギー消費促進剤。
【請求項８】
甘草の抽出物を有効成分として含有するUCP1発現亢進剤。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の薬剤を含む組成物。
【請求項１０】
甘草の抽出物を有効成分として含有する褐色脂肪細胞活性化用組成物。
【請求項１１】
熱産生によるエネルギーの消費を促進するための、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記熱産生が寒冷誘導熱産生又は食事誘導熱産生である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
安静時代謝を促進するための、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
UCP1の発現を亢進させることにより褐色脂肪細胞を活性化する、請求項１０〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
甘草の抽出物を有効成分として含有するエネルギー消費促進用組成物。
【請求項１６】
褐色脂肪細胞を活性化することによりエネルギーの消費を促進する、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記組成物が食品組成物である、請求項９〜１６のいずれか１項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、褐色脂肪細胞活性化剤に関する。更に詳しくは、甘草抽出物を含有する褐色脂肪細胞活性化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、肥満に悩む者は多く、大きな社会問題となっている。肥満は、多くの病気の要因となり得る。例えば、メタボリックシンドローム、脂質異常症、糖尿病、高血圧などの生活習慣病と密接に関係しており、生活習慣病から、心筋梗塞、脳卒中、肝硬変、膵炎、痛風、癌等、様々な疾患へ進行するリスクも高くなる。更に、肥満により関節や骨への負担が増えることから腰痛、膝痛、関節炎、骨折なども起こしやすく、喉が圧迫されることにより睡眠時無呼吸症候群にもなりやすい。また、肥満は、家計の負担になるのみならず、医療費の増加をもたらすので各国の治療費や対策費がかかり経済への影響も多大になる。
【０００３】
肥満と脂肪には密接な関係がある。哺乳動物の脂肪組織は、その機能と組織学的特性により、白色脂肪組織（white adipose tissue：WAT）と、褐色脂肪組織（brown adipose tissue：BAT）の２つに大きく分類される。白色脂肪組織ではその中に存在する白色脂肪細胞が、余剰エネルギーを中性脂肪（トリアシルグリセロール）の形で貯蔵し、単房性の大きな脂肪滴を形成する。一方、褐色脂肪組織の生理的役割は全く逆で、交感神経の刺激等により、エネルギーを熱として消費・散逸する部位である。褐色脂肪組織には、多房性の脂肪滴や豊富なミトコンドリアを有することを特徴とする褐色脂肪細胞が存在しており、褐色脂肪細胞のミトコンドリアに存在するUCP1（uncoupling protein 1、脱共役蛋白質１）がエネルギーを熱として散逸させる機能を担っている（非特許文献１〜３）。
【０００４】
さらに最近の研究により、褐色脂肪細胞は胎児期から存在する古典的褐色脂肪細胞と、長期の低温刺激等の環境要因によって白色脂肪組織中に出現する誘導性の褐色脂肪様細胞（ベージュ脂肪細胞とも呼ばれる）とに分けられることがわかった。これらは、どちらも多房性の脂肪滴をもち、ミトコンドリアに富み、UCP1等の熱産生に関わる蛋白を発現するなどの共通の特徴をもつが、その発生学的特徴や発現遺伝子プロファイルが大きく異なっていることが明らかとなってきた（非特許文献１及び２）。さらに、ヒト成人で検出されるBATは、ベージュ脂肪細胞の特色をもつことが報告されている（非特許文献４〜６）。
【０００５】
解剖組織学的検討によると、ヒトでは、乳幼児期などには褐色脂肪細胞が存在するが、成人以降では見いだし難くなる。他の大型哺乳動物でも同様の傾向が見られる。一方、マウスなどのげっ歯類では成獣になっても褐色脂肪細胞が見られる。よって、ヒト等の大型哺乳動物では、成長するにつれて褐色脂肪細胞が消失し、成人には褐色脂肪細胞が存在しないもしくは極微量しか存在しないという説が存在しており、成人のBATの存在や生理的な意義は否定的であった（非特許文献７、８及び１０）。しかし、近年、陽電子放射断層撮影法(PET)を用いたグルコース代謝活性を指標としてヒトのBATを評価することが可能になった（非特許文献９）ことにより、成人にも代謝活性のあるBATが存在し、寒冷暴露時や食事摂取時の熱産生・エネルギー消費や体脂肪の調節に寄与しており、その機能低下が肥満、特に加齢に伴う体脂肪蓄積の一因になること等が明らかとなった（非特許文献１０）。また、加齢により、寒冷誘導熱産生も低下することから、肥満のみでなく体が冷えやすくなるという弊害も出るようになる。例えば、健常人を対象に、寒冷刺激とPETを組み合わせた評価では、20歳代では約60%でBAT活性が検出されるが、加齢に伴い出現率は低下し、50歳代では10%以下に激減する（非特許文献１１）。
【０００６】
動物は、生命を守るために環境の変化に反応する必要がある。例えば、外気の温度が低下すると体内温度が低下して低体温状態になることを防ぐために、交感神経が刺激されて熱を産生し体内の温度を維持するという機構を有する。ここで、褐色脂肪組織は、このような寒冷刺激熱産生と深く関与していることが報告されている。例えば、全身のエネルギー消費量を室温２７℃の温暖条件で測定すると、体重（特に除脂肪体重）に比例して増えるが、BAT活性化の代表的刺激である寒冷刺激（19℃、2時間）を加えるとさらに増加する。両条件での差を寒冷誘導熱産生(CIT：cold-induced thermogenesis)として算出すると、除脂肪体重とは無関係で、BAT活性と高い正の相関を示し、さらにBAT活性が高い被験者の方が寒冷刺激時の体温の低下が少なかった。以上のことから、寒冷誘導熱産生を測定することで、BAT活性の評価が可能であることが明らかとなった（非特許文献１２〜１４）。
【０００７】
また、食事を摂ると食品自体の温度に由来する熱量以上に体温が上昇する。これは、体内に吸収された栄養素が分解される際に消費されるエネルギーや、味覚・嗅覚などの感覚神経の刺激によるものである。このため食事後は、安静にしていても代謝量が増える。食事をした後、身体が暖かくなるのはこの熱産生によるものである（非特許文献１５及び１６）。この食事摂取による熱産生は、食事誘導熱産生(DIT：diet-induced thermogenesis)と呼ばれ、褐色脂肪組織と深く関与していることが分かってきた（非特許文献１６）。
【０００８】
また、褐色脂肪組織は、安静時代謝量の増加をもたらすことも報告されている（非特許文献１７及び１８）。
【０００９】
ヒト成人においてBATを増加させたり活性化することができれば、CIT、DIT、及びREEを増やし、全身のエネルギー消費を亢進させることが可能になると期待されている（非特許文献１、２、９及び１０）。
【００１０】
従って、現在、ベージュ脂肪細胞（褐色脂肪様細胞）を特異的に誘導することでBATを増やしたり、ベージュ脂肪細胞や褐色脂肪細胞を活性化してエネルギー代謝を改善することにより肥満を予防及び／又は抑制する試みがされつつある。例えば、お茶等に含まれるカテキン類やトウガラシ等に含まれるカプサイシン類については、褐色脂肪組織の活性化作用があることが報告されている（非特許文献１９及び２０）。また、ショウガ等に含まれるパラドールについても褐色脂肪細胞の活性化作用との関連が示唆されている。ハッカ等に含まれるメントール、ワサビ等に含まれるアリルイソチオシアネート、シナモン等に含まれるシナモンアルデヒド等について褐色脂肪細胞の活性化作用との関連が示唆されており（非特許文献１）、その効果の確認が行われている。そこで、褐色脂肪細胞を活性化させる効果の高い更なる物質が望まれている。
【００１１】
一方、甘草（Glycyrrhiza glabra）は、古来より料理用や薬用等に用いられてきたマメ科カンゾウ属の多年草である。解毒作用、抗酸化作用、鎮痛作用、消炎作用等があると言われている。近年では、甘草抽出物に脂肪分解を促進する効果があることがわかってきた（特許文献１）。また、甘草エキスは、レンギョウ葉エキス、シトラスエキス、サンシンエキス等と混合すると褐色脂肪細胞の量を増加させることも知られていた（特許文献２）。しかしながら、甘草抽出物単体で、ベージュ脂肪細胞（褐色脂肪様細胞）を分化誘導したり、ベージュ脂肪細胞や褐色脂肪細胞でのエネルギー消費を促進する作用(以下、包括的に褐色脂肪細胞の活性化と呼ぶ)を有することがあることは一切報告されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】国際公開第２００８／１４３１８２号
【特許文献２】特開２００９-２９２８０５号公報
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】大野晴也、梶村真吾、医学の歩み Vol. 250 No.9, 2014, 8.30, p811-815
【非特許文献２】斉藤昌之、松下真美、医学の歩み Vol. 250 No.9, 2014, 8.30, p806-810
【非特許文献３】R. Burcelin et. al., Biochem. J. (1993) 291, pp. 109-113
【非特許文献４】Wu J. et. al., Cell, 150, July 20, 2012, pp. 366-376
【非特許文献５】Sharp LZ et. al., PLos One, November 2012, Volume 7, Issue 11, e49452
【非特許文献６】Lidell E M. et. al., Nature Medicine (2013), Volume 19, Number 5, May 2012
【非特許文献７】Ito T, Arch Histol. Cytol. (1991) Mar; 54(1):1-39
【非特許文献８】Heaton J. M. J. Anat. (1972) 112, 1, pp. 35-39
【非特許文献９】Saito M et. al., Diabetes, July (2009), Vol 58, pp. 1526-1531
【非特許文献１０】ここまでわかった燃える褐色脂肪の不思議 (2013)斉藤昌之編, NAP Limited
【非特許文献１１】Yoneshiro T, Obesity (Silver Spring). 2011 Sep;19(9):1755-60
【非特許文献１２】Yoneshiro T, J Clin Invest. 2013 Aug;123(8):3404-8
【非特許文献１３】Yoneshiro T, Obesity (Silver Spring). 2011 Jan;19(1):13-6.
【非特許文献１４】Kajimura S, Saito M., Annu Rev Physiol. 2014;76:225-49
【非特許文献１５】河田照雄、坂本智弥、医学の歩み 2012；242(12)：942-946
【非特許文献１６】会田さゆり他，肥満研究 2011；17：41-48
【非特許文献１７】Bakker LE et. al., Lancet Diabetes Endocrinol. 2014 Mar;2(3):210-7.
【非特許文献１８】Vieira-Potter VJ et. al., Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2015 Mar 15;308(6):R530-42.
【非特許文献１９】http://www.kao.com/jp/corp_news/2014/20140826_001.html
【非特許文献２０】T. Yoneshiro et. al., The American Journal of Clinical Nutrition 2012; 95:845-850
【非特許文献２１】Jeukendrup AE et. al., Obes Rev.  2011；12(10) 841-851
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明の課題は、甘草抽出物を含有する褐色脂肪細胞活性化剤の提供にある。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者らは、褐色脂肪細胞の活性化効果が高い物質を得るために鋭意研究した結果、甘草の抽出物の褐色脂肪細胞の活性化効果が非常に高いことを発見した。
【００１６】
甘草（Glycyrrhiza glabra）（英名Licorice)は、マメ科カンゾウ属の多年草で、甘味料、菓子、スパイス等の料理用、および漢方薬やハーブなどの薬用に用いられる。薬用としては、根や根茎を乾燥したものを生薬として用いたり、煎じたり、煮出、絞出、又は抽出したエキス等を服用する。解毒作用、鎮痛作用、抗炎症作用等があると言われている。
【００１７】
ここで、甘草抽出物に白色脂肪細胞に蓄積された中性脂肪の脂肪酸への分解を促進する効果があることは知られていた（特許文献１）。また、甘草由来のグラブリジンは、肝臓で脂肪分解系酵素の働きを亢進したり、脂肪合成系酵素の働きを抑制することも知られている。しかし、白色脂肪細胞に蓄積された中性脂肪の分解を促進する効果があるからといって必ずしもヒトの褐色脂肪活性化効果があるわけではない。例えば、フォルスコリンには白色脂肪細胞に蓄積された中性脂肪の分解を促進する効果ががあることが知られているが、ヒトの安静時代謝量には影響しないことから（非特許文献２１）、ヒト褐色脂肪活性化効果はないと考えられる。
【００１８】
また、甘草エキスは、レンギョウ葉エキス、シトラスエキス、サンシンエキス等との混合物との形態で褐色脂肪細胞の量を増加させることは知られていた（特許文献２）。しかし、甘草抽出物単体でベージュ脂肪細胞や褐色脂肪細胞でのエネルギー消費を促進する作用はこれまでに報告されていなかった。
【００１９】
従って、本願は、以下の発明を提供する。
（１）甘草（Glycyrrhiza glabra）の抽出物を有効成分として含有する褐色脂肪細胞活性化剤。
（２）熱産生によるエネルギーの消費を促進するための、（１）に記載の褐色脂肪細胞活性化剤。
（３）前記熱産生が寒冷誘導熱産生又は食事誘導熱産生である、（２）に記載の褐色脂肪細胞活性化剤。
（４）安静時代謝を促進するための、（１）〜（３）のいずれか１項に記載の褐色脂肪細胞活性化剤。
（５）UCP1の発現を亢進させることにより褐色脂肪細胞を活性化する（１）〜（４）のいずれか１項に記載の褐色脂肪細胞活性化剤。
（６）甘草の抽出物を有効成分として含有するエネルギー消費促進剤。
（７）褐色脂肪細胞を活性化することによりエネルギーの消費を促進する（６）に記載のエネルギー消費促進剤。
（８）甘草の抽出物を有効成分として含有する体温低下抑制剤。
（９）褐色脂肪細胞を活性化することにより体温の低下を抑制する（８）に記載の体温低下抑制剤。
（１０）甘草の抽出物を有効成分として含有するUCP1発現亢進剤。
（１１）（１）〜（１０）のいずれか１項に記載の薬剤を含む組成物。
（１２）甘草の抽出物を有効成分として含有する褐色脂肪細胞活性化用組成物。
（１３）熱産生によるエネルギーの消費を促進するための、（１２）に記載の組成物。
（１４）前記熱産生が寒冷誘導熱産生又は食事誘導熱産生である、（１３）に記載の組成物。
（１５）安静時代謝を促進するための、（１２）〜(１４）のいずれか１項に記載の組成物。
（１６）UCP1の発現を亢進させることにより褐色脂肪細胞を活性化する（１２）〜(１５）のいずれか１項に記載の組成物。
（１７）甘草の抽出物を有効成分として含有するエネルギー消費促進用組成物。
（１８）褐色脂肪細胞を活性化することによりエネルギーの消費を促進する（１７）に記載の組成物。
（１９）甘草の抽出物を有効成分として含有する体温低下抑制用組成物。
（２０）褐色脂肪細胞を活性化することにより体温の低下を抑制する（１９）に記載の組成物。
（２１）前記組成物が食品組成物である、（１１）〜（２０）のいずれか１項に記載の組成物。
【発明の効果】
【００２０】
本発明の褐色脂肪細胞活性化剤は、褐色脂肪細胞を活性化して寒冷誘導熱産生や食事誘導熱産生を増やし、安静時代謝を促進し、全身のエネルギー消費を促進することができる。全身のエネルギー消費が上昇すると、肥満を予防又は抑制することができる。また、本発明の褐色脂肪細胞活性化剤の有効成分である甘草は、従来から食用や薬用として用いられているハーブであり安全性の面でも好ましい。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１は、実施例２における、甘草抽出物摂取から0〜120分後の安静時代謝量（REE=resting energy expenditure)の変化を、試験試料摂取時（0時点）におけるベースラインと各時点におけるREEの差であるΔREE（kcal/day）として示す。左図がBAT低活性者、右図がとBAT高活性者の平均値のグラフである。■が甘草抽出物を摂取した場合、○がプラセボを摂取した場合である。*及び**は、steel testにより0時点に対し有意差があることを示す（*p＜0.05, **p＜0.01）。#は、paired t-testによりプラセボに対し有意差があることを示す（#p＜0.05）。
【図２】図２は、図１のΔREEの試験試料摂取から0〜120分までの時間曲線下面積（AUC：area under the curve）を示す。左図は0〜60分、中央図は0〜90分、右図は0〜120分における累積値である。各図において、網掛けが甘草抽出物を摂取した場合（右側）、白抜きがプラセボを摂取した場合(左側）である。*は、paired t-testによりプラセボに対し有意差があることを示す（*p＜0.05）。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明の褐色脂肪細胞活性化剤、体温低下抑制剤、エネルギー消費促進剤、UCP1発現亢進剤、および当該褐色脂肪細胞活性化剤等を含む組成物は、甘草（Glycyrrhiza glabra）の抽出物を有効成分として含有する。
【００２３】
本発明で用いられる甘草（Glycyrrhiza glabra）は、マメ科カンゾウ属の多年草である。原産地は中国であるが、中国のみならずヨーロッパでも甘味料や民間薬として古くから知られている。
【００２４】
本発明において、甘草の抽出物とは、根及び／又は根茎の抽出物のことを指す。抽出物の抽出方法は溶媒抽出により行うことができる。溶媒抽出の場合、甘草の根及び／又は根茎を必要に応じて乾燥させ、更に必要に応じて細断又は粉砕した後、水性抽出剤、例えば冷水、温水、又は沸点若しくはそれより低温の熱水、あるいは含水有機溶媒、有機溶媒、極性溶媒、例えばメタノール、エタノール、１，３−ブタンジオール、エーテル等を常温で又は加熱して用いることにより抽出される。しかし、抽出方法は溶媒抽出に限定されず、当業界で知られている常用の手法によってもよい。また、本発明の効果を損なわない限り、上記抽出物の形態は、抽出液自体だけでなく、常用の手法により適宜希釈又は濃縮したものであってもよく、更に、抽出液を乾燥することによって得られる粉状あるいは塊状の固体であってもよい。
【００２５】
本発明に用いられる抽出溶媒は、含水量が高いと例えば親水性成分であるグリルリチンが含まれることがある。甘草抽出物を長期に摂取する際、安全性の観点からグリチルリチンの含有量は少ない方が好ましいため、含水割合の低い抽出溶媒を用いることがある。
【００２６】
本発明において褐色脂肪細胞とは、胎児期に形成される古典的褐色脂肪細胞および白色脂肪組織中に分化誘導される褐色脂肪様細胞（ベージュ脂肪細胞又はブライト細胞と呼ぶこともある）の両方を指す。つまり、本発明では、狭義の古典的褐色脂肪細胞のみならず、白色脂肪組織中に誘導された褐色様の脂肪細胞も褐色脂肪細胞と呼ぶ。また、白色脂肪組織中に誘導される褐色様の脂肪細胞を特にベージュ脂肪細胞または褐色脂肪様細胞と呼ぶこともある。
【００２７】
白色脂肪細胞は、単房性の大型な脂肪滴を有し細胞質が少ない。一方、褐色脂肪細胞は、小型の多房性脂肪滴を有し、この多房性脂肪滴の周りに多数のミトコンドリアが存在して、そのため特有の褐色を帯び、交感神経や血管が豊富であるという形態学的・組織学的な特徴を持つ。従って、白色脂肪細胞と褐色脂肪細胞は、形態学的・組織学的に細胞を観察することにより区別できる。また、白色脂肪はエネルギーを貯蔵するが褐色脂肪細胞はエネルギーを熱として消費・散逸するという違いがある。また、褐色脂肪細胞は白色脂肪細胞よりもエネルギーの代謝が高く、エネルギーを熱として放出するためにグルコースの取込みが増加する。したがって、褐色脂肪細胞の存在は、例えば、18Ｆで標識したグルコースの集積をＰＥＴ（陽電子放射断層撮影）で測定することにより評価できる。さらに、褐色脂肪細胞では、脱共役蛋白質１(UCP1、uncoupling protein 1）と呼ばれる33KDaの蛋白質が細胞中のミトコンドリア内膜に特異的に発現しているので、UCP1 mRNAの発現やUCP1タンパク質を測定することにより褐色脂肪細胞の存在を確認できる。更に、褐色脂肪細胞は寒冷刺激により活性化されるので、寒冷誘導による熱産生を測定することでも評価できる。また、エネルギー消費量は、例えば、メタボリックチャンバーや簡易呼気分析装置などによる測定値からO2消費量やCO2排出量をもとに算出することによって評価できる。さらに、上述のように、BATの存在がCITと正の相関を示すことにより、CITを測定することによっても評価できる。
【００２８】
本願において、褐色脂肪細胞の活性化とは、白色脂肪組織中に褐色脂肪様細胞（ベージュ細胞）が分化誘導されることを促進する作用、及び／又はベージュ脂肪細胞や褐色脂肪細胞におけるエネルギー消費を促進する作用のことを言う。褐色脂肪細胞の活性化は、特に、ベージュ脂肪細胞や褐色脂肪細胞における代謝を上げること、エネルギー消費を促進すること、脂肪酸を熱エネルギーに変換することもある。脂肪酸から熱エネルギーへの変換はUCP1により行われることもある。
【００２９】
褐色脂肪細胞活性化剤とは、上述のような褐色脂肪細胞の活性化作用を有する物質を指す。上述のように、褐色脂肪細胞の存在および／または褐色脂肪細胞のエネルギー代謝量の上昇は、UCP1 mRNA発現やUCP1タンパク質を測定すること、組織学的に細胞を観察すること、18Ｆ標識グルコースの集積をＰＥＴで測定すること、寒冷誘導熱産生を測定すること等で評価できる。また、白色脂肪組織中に褐色脂肪様細胞（ベージュ脂肪細胞）が分化誘導されることを特に褐色脂肪細胞の再活性化と呼ぶこともある。
【００３０】
本発明の褐色脂肪細胞活性化剤は、熱産生によるエネルギーの代謝を促進し得る。エネルギーの代謝には、基礎代謝によるもの、運動によるもの、日常の生活活動によるもの、そして熱産生によるものがある。一日のエネルギー消費量の約60％は基礎代謝、約5％は運動、約25％は日常の生活活動、そして約10％が熱産生によるものである。筋肉を増やすことにより基礎代謝量を上げる、運動や日常の生活活動を活発に行うことによりエネルギー代謝を上げるといった試みは多くされている。一方、熱産生によるエネルギー消費は、身体が急激な温度変化に対応し得るためのもので、例えば寒冷刺激により上昇する。また、食事摂取により熱産生を増やすことや、感染や炎症などに対抗すべく発熱するために熱産生することも知られている。従って、本願において、熱産生によるエネルギー消費とは、基礎代謝や筋肉運動等によらない、寒冷刺激や食事摂取等に対応する熱産生のために消費される代謝性のエネルギー消費のことをいう。本願の褐色脂肪細胞活性化剤は、特に、交感神経を刺激することによりベージュ脂肪細胞や褐色脂肪細胞における熱産生を上昇させてエネルギーの代謝を促進することもある。このような熱産生は、脂肪酸を熱エネルギーに変換することにより起こることもあり、脂肪酸から熱エネルギーへの変換はUCP1により行われることもある。
【００３１】
本発明の褐色脂肪細胞活性化剤、エネルギー消費剤等、及びそれらを含む組成物は肝臓や筋肉内ではなく、褐色脂肪組織におけるエネルギー代謝を高めることもあり、UCP1の発現を亢進させることもある。
【００３２】
本願において、寒冷誘導熱産生(CIT：cold-induced thermogenesis)とは、対象が温度の低下した外気に暴露されたときに，熱を生産することをいう。上述のように、動物は、外気の温度が低下すると、体内の温度を維持するために交感神経が刺激されて熱を産生する。褐色脂肪組織は、このような寒冷刺激に応答して熱を生産する役割を有することが報告されている（非特許文献１２）。本願の褐色脂肪細胞活性化剤は、このような褐色脂肪組織における寒冷誘導熱産生によるエネルギーの代謝を促進し得る。
【００３３】
本願において、食事誘導熱産生(DIT：diet-induced thermogenesis)とは、対象が食事を摂ることにより、熱を生産することをいう。この食事摂取により味覚等の感覚神経が刺激されることや食品を消化吸収するため等の理由で、エネルギーが消費され体温が上昇する。ここで、褐色脂肪組織はDITと深く関与していることが分かってきた（非特許文献１６）。本願の褐色脂肪細胞活性化剤は、このような褐色脂肪組織における食事誘導熱産生によるエネルギーの代謝を促進し得る。
【００３４】
本願において、安静時代謝とは、安静時に消費されるエネルギーのことである。安静時代謝量（resting energy expenditure (REE))は、安静座位又は仰臥位にて測定される。褐色脂肪組織は、安静時代謝量の増加をもたらすことが報告されている（非特許文献１７及び１８）。本発明の褐色脂肪細胞活性化剤は、安静時代謝を促進し得る。
【００３５】
本発明の褐色脂肪細胞活性化剤またはUCP1発現亢進剤等における甘草抽出物の含有量は特に限定されないが、乾燥重量換算で１日あたり好ましくは10〜3000ｍｇ、摂取される量で配合され、場合により10〜200ｍｇ、50〜150ｍｇ、100〜200ｍｇ、100〜300ｍｇ、100〜3000ｍｇ、又は300〜1000ｍｇ等の量で配合されることもある。また、本発明の効果を高めるために、他の褐色脂肪細胞活性化剤、体温低下抑制剤、エネルギー消費促進剤、UCP1発現亢進剤、代謝促進剤等を併用してもよい。
【００３６】
甘草抽出物の摂取量は特に限定されないが、体重60ｋｇのヒトでは、１日あたり、乾燥重量換算で10〜3000ｍｇ摂取するのが好ましい。また、10〜200ｍｇ、50〜150ｍｇ、100〜200ｍｇ、100〜300ｍｇ、100〜3000ｍｇ、又は300〜1000ｍｇ等の量を摂取するのが好ましい場合もある。
【００３７】
本発明の褐色脂肪細胞活性化剤の製造方法は、甘草の根及び／又は根茎から抽出物を抽出する工程を含んでもよい。本発明で用いる抽出物の抽出方法や抽出物の形態は上記と同様に本発明の効果を損なわない限り、任意である。
【００３８】
また、本発明は、上記の褐色脂肪細胞活性化剤、体温低下抑制剤、エネルギー消費促進剤、又はUCP1発現亢進剤を含む組成物も提供する。本発明の組成物は、粉末状、液状、固形状、顆粒状、錠剤状、ペースト状、ゲル状、乳液状、クリーム状、シート状、スプレー状、泡状等の様々な形態であり得る。
【００３９】
本発明の食品組成物は、粉末、飲料、または錠剤であってもよい。また、本発明の食品組成物は、乾燥粉末、お茶や清涼飲料水などの飲料、サプリメントなどの錠剤及びカプセル剤、レトルト食品等の加工食品、デザート等の嗜好品、調味料、乳製品、油脂加工品等であってもよく、粉末状、液状、固形状、顆粒状、粒状、ペースト状、ゲル状等の様々な形態であり得る。更に、本発明の食品組成物は、ヒト用の食品等のみならず、家畜等他の動物用の餌も含む。
【００４０】
本発明の組成物における褐色脂肪細胞活性化剤の含有量は特に限定されないが、甘草抽出物の乾燥重量換算で１日あたり好ましくは10〜3000ｍｇ摂取される量で配合されている。10〜200ｍｇ、50〜150ｍｇ、100〜200ｍｇ、100〜300ｍｇ、100〜3000ｍｇ、又は300〜1000ｍｇ等の量で配合される場合もある。また、本発明の組成物は、褐色脂肪細胞活性化作用、体温低下抑制作用やエネルギー消費促進作用等を一層高めるために、褐色脂肪細胞活性化作用、体温低下抑制作用やエネルギー消費促進作用等がある他の物質を添加してもよい。
【００４１】
更に、本発明の組成物は、必要に応じて添加剤を任意に選択し併用することができる。添加剤としては賦形剤等を含ませることができる。
【００４２】
賦形剤としては、所望の形態としたときに通常用いられるものであれば何でも良く、例えば、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、デキストリン、シクロデキストリンなどのでんぷん類、結晶セルロース類、乳糖、ブドウ糖、砂糖、還元麦芽糖、水飴、フラクトオリゴ糖、乳化オリゴ糖などの糖類、ソルビトール、エリスリトール、キシリトール、ラクチトール、マンニトールなどの糖アルコール類が挙げられる。これら賦形剤は、単独で又は二種以上組み合わせて使用できる。
【００４３】
また、本発明の組成物は、必要に応じて、その他の成分、例えば、着色剤、保存剤、増粘剤、結合剤、崩壊剤、分散剤、安定化剤、ゲル化剤、酸化防止剤、界面活性剤、保存剤、ｐＨ調整剤、油分、粉末、色材、水、アルコール類、増粘剤、キレート剤、シリコーン類、酸化防止剤、紫外線吸収剤、保湿剤、香料、各種薬効成分、防腐剤、ｐＨ調整剤、中和剤等、公知のものを適宜選択して使用できる。
【００４４】
本発明の褐色脂肪細胞活性化剤は、白色脂肪組織中に褐色脂肪様細胞（ベージュ細胞）を分化誘導すること、及び／又はベージュ脂肪細胞や褐色脂肪細胞を活性化し、特に熱産生による全身のエネルギー消費を促進するというアプローチにより代謝を促進することで、肥満を予防及び／又は抑制することができる。従って、肥満に起因する疾患の治療及び／又は予防にも有効である。また、褐色脂肪細胞を活性化させ、寒冷誘導熱産生を増やすことで身体が冷えるのを防いだり、食事誘導熱産生を増やすことで、食事によるエネルギー代謝を亢進させることもできる。さらに、本発明の有効成分である甘草は古来から利用されてきた天然物であり安全性の面でも好ましい。
【実施例】
【００４５】
次に実施例によって本発明を更に詳細に説明する。なお、本発明はこれにより限定されるものではない。
【実施例１】
【００４６】
PETによる、ヒトBAT活性のin vivo評価
PET（Positron Emission Tomography、陽電子放射断層撮影）を用いて褐色脂肪細胞の活性化を評価した。褐色脂肪細胞が活性化するとグルコースが取り込まれる。そこで、フッ素の放射性同位元素(18F)で標識した非代謝性FDG（フルオロデオキシグルコース）を利用して、PETにより糖の利用を可視化することで褐色脂肪細胞（brown adipose tissue: BAT）の活性の程度が評価できる（非特許文献９）。また、寒冷刺激は、褐色脂肪を活性化して、寒冷誘導熱産生を増加させる。そこで、健康な成人を対象として、低温負荷により寒冷刺激を与えた後でFDG(2-fluoro-2-deoxyglucose)-PETにより褐色脂肪組織の代謝活性を評価した。評価は、非特許文献９に記載の方法に基づいて行った。
【００４７】
被験者は20〜30歳代の健康成人男性19名である。被験者は6〜12時間の絶食後に、低温負荷をかけた。すなわち、Tシャツと短パン等の薄着となり、室温19℃に管理された部屋で椅子に座り、5分間に2〜3分間程度の頻度で間歇的にタオルを巻いた氷ブロックの上に足を置いた。
【００４８】
この条件で１時間経過した後、18F-FDG(1.7〜5.4MBq/kg体重)を静脈注射し、更に同じ寒冷暴露を継続した。18F-FDG注射から1時間後、24℃の部屋で、PET/CTシステム（Aquiduo、東芝メディカルシステム、栃木）を用いて約30分間の全身スキャンを行った。CTのパラメータは、管電圧120kV、可変管電流制御システム、造影剤不使用低線量CTとし、axia面、スライス厚2mmの並行画像を得た。
【００４９】
ヒトのBATは主に鎖骨上部、頸部脊椎周囲等に局在し、これらの局在部位から遠い抹消部などでは褐色脂肪組織は非常に少ない（非特許文献１１、１２、及び１３）。よって、ヒトにおいてBATが多いと報告のある肩部位へのFDG集積を定量的に評価するために、肩周辺を対象領域とし、SUV（standardised uptake values）を以下の式のように算出した。SUVとは、投与した全放射能が全身に均一に分布したときのSUVを１とした場合の相対的濃度値のことであり、PET等において放射性薬剤の腫瘍や臓器への集積の強さを表すための指標となる。具体的にはSUVは以下の式で求める。
【００５０】
SUV（組織放射能[Bq/g]/投与量[Bq/g体重]）=画像で測定した臓器の放射能濃度（Bq/g）÷（放射能投与量÷体重）
【００５１】
対象領域のSUV最大値をSUVmaxとした。このSUVmaxの値をもとに、9名のBAT低活性者(平均SUVmax2.1)および10名のBAT高活性者(平均SUVmax11.7)に群分けした。BAT高活性者では肩周辺におけるFDG集積が多く見られたが、BAT低活性者では肩周辺におけるFDG集積は検出限界以下であった。
【実施例２】
【００５２】
甘草抽出物がBAT低活性およびBAT高活性群の代謝量に及ぼす作用
上記のように分けたBAT低活性群とBAT高活性群を対象に、単回クロスオーバー試験により、甘草抽出物の安静時代謝量に対する作用を検討した。
【００５３】
本実験では、甘草抽出物として、甘草の根茎部にエタノールを添加して抽出し濾過、濃縮後に、中鎖脂肪酸トリグリセライド（ＭＣＴ；Ｃ８：Ｃ１０＝９９：１理研ビタミン）を混合して、グラブリジン濃度が３．０％±０．５％になるよう調製したもの（カネカ・グラボノイドTM）を含有するディアナチュラゴールド甘草グラボノイド（アサヒフードアンドヘルスケア株式会社）を１回あたり２粒用いた。
【００５４】
実施例１のBAT測定とは別の日に、各群の甘草抽出物の摂取前後の安静時代謝量を測定した。被験者は、実施例１によりBAT低活性およびBAT高活性群に分けた同じ男性19名である。被験者は、6〜12時間の絶食後、薄着（Tシャツ、短パン）に着替えてもらい室温27℃の部屋で30分安静に過ごし27℃の状態に順化させた。その後、安静時代謝量を測定しこれをベースラインとした。
【００５５】
ベースラインの安静時代謝量の測定は、ポータブルガスモニターAR-10 Type4（アルコシステム）と専用の仰臥位フードを用いて20分間呼気分析することにより実施した。この安静時代謝は、既報（非特許文献１３）を参考に、付属のソフトを用いて、測定開始10分後以降で5分間以上数値が安定した部分の平均値として求めた。
【００５６】
ベースライン測定後、甘草抽出物100mg摂取し、10分間安静に過ごした後、20分間安静時代謝を測定した。この測定は、摂取10分〜30分後、摂取40分〜60分後、摂取70分〜90分後、および100分〜120分後に、各20分間ずつ計4回行った。1週間のウォッシュアウト後、各被験者は同様な手順で、安静時代謝のベースラインおよびプラセボ摂取10分〜120分後までの変動も測定した。
【００５７】
図１は、甘草抽出物摂取から0〜120分における安静時代謝量（REE=resting energy expenditure)の変化をΔREEとして示す。図１より、甘草抽出物を摂取すると、プラセボ摂取に比べ摂取から30分後の安静時代謝量を有意に亢進することが明らかとなった。
【００５８】
さらに、摂取0〜120分までのΔREEの時間曲線下面積（AUC）を求めた。その結果を図２に示す。ΔREEのAUCを比較すると、甘草抽出物摂取は、プラセボ摂取に比べ、ΔREEのAUC、つまり、エネルギー消費が有意に高いことが分かる。
【００５９】
以上の結果により、褐色脂肪細胞の活性が高い個体に甘草抽出物を投与すると、単回投与であっても少なくとも30分後にはエネルギー消費がプラセボに比べ促進されていた。これにより、甘草抽出物は、褐色脂肪細胞におけるエネルギー消費に対し即効性があることが示唆される。
【００６０】
従って、甘草抽出物を含有する本願の褐色脂肪細胞活性化剤を摂取することにより、褐色脂肪細胞やベージュ脂肪細胞を活性化して、寒冷誘導熱産生や食事誘導熱産生を増やしたり、安静時代謝を促進することで全身のエネルギー消費を促進することにより、脂肪量を減少させひいては肥満を解消することが期待される。また、一般に加齢により代謝が低下し身体の冷えが感じられるようになるが、甘草抽出物の摂取によりエネルギー代謝（熱産生）を上げることで身体の冷えを予防・改善することも期待される。更に、甘草抽出物の褐色脂肪細胞活性化作用により、白色脂肪組織中に褐色様脂肪細胞（ベージュ脂肪細胞）を分化誘導することも期待される。
【図１】
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【図２】
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