(57)【要約】本発明は、腸病態の処置のための組成物及び方法に関するものである。本発明は、腸上皮の傍細胞透過性の制御を可能にする組成物及び方法にも関する。本発明の組成物及び方法は、腸上皮のタイトジャンクションの開放を調整する薬剤又は条件の使用に基づく。本発明は、哺乳動物、特にヒトにおける、痛覚過敏をもたらす腸機能障害（ＩＦＤ）及び過敏性腸症候群（ＩＢＳ）のような多様な病態の予防的又は治療的な処置のために使用され得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
痛覚過敏の状態を特徴とする腸病理の予防的又は治療的な処置のための医薬品を調製するための、腸上皮のタイトジャンクションの開放を調節する化合物の使用。
【請求項２】
腸上皮のタイトジャンクションの開放を調節する化合物が、腸上皮細胞の細胞骨格の緊張を調整する化合物、又は腸上皮のタイトジャンクションの開放を減少させ、阻止すらする化合物である、請求項１記載の使用。
【請求項３】
化合物が、腸上皮のタイトジャンクションの開放を直接的に調整する、請求項１又は２のいずれかに記載の使用。
【請求項４】
化合物が、腸上皮細胞の細胞骨格の収縮を調整する、請求項１記載の使用。
【請求項５】
化合物が、腸上皮細胞の細胞骨格の収縮を阻害する、請求項１、２又は４のいずれかに記載の使用。
【請求項６】
化合物が、タイトジャンクションを構成しているタンパク質の構造に直接的に影響を与えない、請求項１〜５のいずれかに記載の使用。
【請求項７】
化合物が、ミオシン及び／もしくはアクチンのＬ鎖の収縮もしくは緊張の阻害剤、又はアクチン分解の阻害剤である、請求項１〜６のいずれかに記載の使用。
【請求項８】
化合物が、ＭＬＣＫの阻害剤である、請求項７記載の使用。
【請求項９】
化合物が、ミオシン結合タンパク質又はジャンクション分子の活性又は発現の阻害剤である、請求項１〜８のいずれかに記載の使用。
【請求項１０】
痛覚過敏の状態を特徴とする腸機能障害を有する対象における腸上皮の傍細胞透過性を調節するための医薬品を調製するための、請求項１〜９のいずれかに記載の使用。
【請求項１１】
痛覚過敏の状態を特徴とする腸機能障害を有する対象における腸上皮の傍細胞透過性を減少させるための医薬品を調製するための、請求項１０記載の使用。
【請求項１２】
痛覚過敏の状態を特徴とする腸機能障害を有するか又はそれらに罹患しやすい対象における疼痛に対する感受性を減少させるための医薬品を調製するための、請求項１〜１１のいずれかに記載の使用。
【請求項１３】
腸機能障害（ＩＦＤ）の予防的又は治療的な処置のための医薬品を調製するための、請求項１〜９のいずれかに記載の使用。
【請求項１４】
腸機能障害が、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、排便障害を伴わない機能性腹痛及び食物不耐に関連した疼痛からなる群より選択される、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
化合物が、経口経路又は直腸経路により投与される、請求項１〜１４のいずれかに記載の使用。
【請求項１６】
組み合わせ使用、別々の使用、又は経時的な塗布を考慮した、腸上皮のタイトジャンクションの開放を調整する化合物少なくとも一つと、抗コリン作動性化合物、運動促進剤、止瀉薬、緩下薬、運動性又は腹部感受性の変更薬からなる群より選択される他の活性薬剤少なくとも一つとを含む医薬生成物。
【請求項１７】
経口経路又は直腸経路による投与のために製剤化された、腸上皮のタイトジャンクションの開放を調整する化合物少なくとも一つと、医薬的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腸病態を処置するための組成物及び方法に関するものである。本発明は、腸上皮の傍細胞透過性の制御を可能にする組成物及び方法にも関する。本発明の組成物及び方法は、特に、腸上皮のタイトジャンクションの開放を調整する薬剤又は条件の使用に基づく。本発明は、哺乳動物、特にヒトにおける、消化機能障害（ＤＦＤ）、より具体的には腸機能障害（ＩＦＤ）、特に過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、痛覚過敏及びその他の腹痛症候群等のような様々な病態の予防的又は治療的な処置のために使用され得る。
【０００２】
腸上皮は、極めて重要な外部媒体と身体との間の交換の部位である。そのような交換は、上皮の細胞を横切って、又は平行なネットワークにより、起こり得る。例えば、胃、腸又は結腸の粘膜による水及び電解質の輸送又は低分子（一般におよそ１０００Da未満の分子量）の吸収は、上皮細胞又は腸細胞を通した経細胞経路によって起こる。他方、高分子の吸収及び抗原、毒素又は免疫細胞の通過は、主として、上皮細胞間に位置する「タイトジャンクション」のレベルで、傍細胞経路によって起こる。
【０００３】
上皮タイトジャンクション（ＴＪ）とは、粘膜上皮（胃腸管、肺）を裏打ちしている細胞を連結している構造である。該構造は、様々な巨大分子（アレルゲン、刺激物、毒素、微生物）の外部から粘膜下への上皮を横切った傍細胞輸送を保証し調節する。該構造は、免疫細胞（例えば、イムノサイト）の外部（消化管）への遊走も可能にする。タイトジャンクションは、細胞骨格の成分（アクチン、ミオシンフィラメント等）と会合した、膜貫通タンパク質（オクルディン、クローディン）及び細胞質タンパク質（ゾナオクルデンス（zona occludens）タンパク質ＺＯ−１、ＺＯ−２、ＺＯ−３、ＡＦ７タンパク質、チングリン（cingulin）又は７Ｈ６等）の複雑な集合から構成された可動性の構造である。
【０００４】
消化機能障害のうち、排便障害を伴わない腹痛は、腸機能障害と区別され得る。排便障害を伴わない腹痛は、アレルギー又は食物不耐によって引き起こされ得、例えば腹腔疾患において起こり得る。腸機能障害は、人口の１５〜２０％に影響を与えており、器質的な原因が未だ同定されておらず特別な処置を必要とする消化不良及び／又は腸症状として現れる。ローマ基準（Rome criteria）に適合する消化機能障害は、全て、上腹部（消化不良）又は下腹部に位置しようとも、食後腹痛という共通の特質を共有している。下腹部に影響を与える一つの特定の障害は、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）である。腸機能障害の疼痛は、通常、排便によって緩解する。
【０００５】
消化機能障害（ＤＦＤ）の病態生理学は充分には理解されていないが、最近の臨床調査は、これらの患者が、消化器過敏の状態をもたらす膨満に対する比較的低い痛覚閾値（内臓痛覚過敏）を有していることを示している。これは、炎症誘発性メディエーターによる壁機械的受容器の感作に第一に関連していると考えられる。実際、粘膜下、特に結腸におけるある種の免疫細胞の構造又は密度の変更の存在は、常在菌叢による改変された免疫平衡の証である。この消化器微小炎症状態が、一次求心性神経終末の感作を促進し、それが、脳への侵害受容メッセージの伝達を助長しているのかもしれない。
【０００６】
疼痛に対する腸の感作のこのような過程は、ストレス、病原体、アレルゲン、例えばトリプシンもしくはトリプターゼのような酵素、胆汁酸塩、生体異物、例えばグリセロール、ＴＮＢＳもしくはタウロコール酸のような化学分子、及び／又は感染もしくは手術の後遺症などの因子などの因子により誘導され得る。しかしながら、該因子が感作現象を誘発し得るメカニズムは、ｉｎ  ｖｉｖｏで明確には立証されていない。例えばアレルゲン、病原体及び／又は化学分子が吸収される際、それらは、それらが体内に侵入し免疫細胞と接触するのを防止する腸上皮壁と接触するようになる。しかしながら、感作が発生するためには、これは、何らかのアレルゲン、病原体及び／又は化学分子が、この上皮を横切り、免疫細胞と相互作用することができなければならないことを意味する。ｉｎ  ｖｉｖｏでこの移動が可能になる条件は、未だ不明である。このように、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの細胞培養物における研究は、この過程におけるタイトジャンクションの役割を示唆しているが、感作の発生におけるタイトジャンクションのｉｎ  ｖｉｖｏの役割の証拠は存在しない。同様に、コレマンス（Coremans）ら（Ital.J.Gastroenterol.1991;(8)S1:39-40）は、胆汁酸塩の結腸内投与と、過敏性腸症候群を有する患者における腹痛との関連を示唆しているが、タイトジャンクションと、疼痛に対する腸上皮の感作の過程との相関を証明する結果は提示されていない。
【０００７】
胆汁酸塩の吸収不良は、過敏性腸症候群を有する個体のうち極一部にのみ観察されており、経上皮透過性の改変は、胃腸炎により二次的にＩＢＳを発症する対象において記載されているが（Spillerら、Gut 2000;47:804-11）、調査されていない傍細胞透過性の変更についての言及は存在しない。
【０００８】
実験的研究は、慢性腸炎症障害又は腸機能障害と、腸管内腔の免疫活性化（炎症）の程度の変化との間に関係が観察されたことによってのみ、過敏性腸症候群と、粘膜下における増加した微生物の存在との間の相関を見出した（AGA.1999）。しかしながら、これらの予備的な所見は、確認されておらず、新規の治療アプローチも生もたらしていない。
【０００９】
本発明は、疼痛に対する感作の過程における腸上皮のタイトジャンクションのｉｎ  ｖｉｖｏの役割の証明に起因する。種々の分子又はストレスによる結腸上皮のタイトジャンクションの開放は、自発的な痛覚過敏又は膨満に対する過敏（ＩＢＳの特徴的な特質）をもたらす。従って、本発明者らによって得られた結果は、初めて、そして驚くべきことに、タイトジャンクションの開放が、慢性的な二次痛覚過敏状態を誘導することを示している。本発明は、腸上皮の傍細胞透過性の調整に基づく、腸病態を処置するための新規の治療戦略の開発にも起因する。特に、本発明は、初めて、腸上皮のタイトジャンクションの開放の調節を可能にする化合物又は条件の使用に基づく、腸病理の治療アプローチを提唱する。従って、該化合物又は条件は、腸上皮細胞の細胞骨格の緊張の調整、又は腸上皮のタイトジャンクションの開放の直接的な制御、好ましくは減少、さらには阻止を可能にするものである。従って、該アプローチは、ｄｅ  ｎｏｖｏタンパク質合成及び／又は重要タンパク質及び／又は上皮における構造的分解を用いる必要なしに、腸上皮タイトジャンクションの開閉を調節することを可能にする。該戦略は、特異的で、微細で、かつ反応性の腸上皮透過性の制御を可能にし、従って、アレルゲン、病原体及び／又は化学分子の免疫細胞への移動に対する作用を可能にする。該戦略は、経時的に調節され得る（可逆的な）迅速な生物学的効果を得るのに特に適している。
【００１０】
これに関して、下記の結果は、上皮タイトジャンクションを弛緩させ得る物質（ＰＡＲ−２受容体活性化ペプチド）が、二次痛覚過敏及び膨満に対する過敏を誘発することを示している。同様に、胆汁酸塩（例えば、タウロコール酸塩）の結腸内注入は、タイトジャンクションを開放させることにより巨大分子の通過を増加させ、同じ二次痛覚過敏状態を伴う。最後に、圧迫ストレスは、タイトジャンクションの透過性を増加させ、直腸痛覚過敏の状態をもたらす。実施例に提示された結果は、さらに、全ての場合（ＰＡＲ−２活性化ペプチド、タウロコール酸塩又はストレス）で、タイトジャンクションに結合しそれをブロックする化学的薬剤（例えば、ＴＡＰ）による、又は上皮細胞細胞骨格を弛緩させる分子（ＭＬ−７、ＰＤ９８０５９）による、この傍細胞透過性の増加の阻害が、ＤＦＤ、特にＩＢＳに特徴的なこの痛覚過敏を防止するか又は減少させることを示している。
【００１１】
従って、本発明の第一の目的は、より具体的には、痛覚過敏の状態を特徴とする腸病態の予防的又は治療的な処置のための医薬品を調製するための、腸上皮のタイトジャンクションの開放を調節する化合物の使用に基づく。
【００１２】
本発明のもう一つの目的は、腸上皮のタイトジャンクションの開放を調節する化合物を、有効量、対象に投与することを含む、痛覚過敏の状態を特徴とする腸病態の予防的又は治療的な処置のための方法に基づく。
【００１３】
特に、腸上皮のタイトジャンクションの開放を調節する化合物は、腸上皮細胞の細胞骨格の緊張を調整する化合物、又は腸上皮のタイトジャンクションの開放を減少させ、阻止すらする化合物である。
【００１４】
従って、本発明は、腸上皮細胞の細胞骨格の緊張及び収縮の状態を調整するか、又は痛覚過敏もしくは腸膨満に対する過敏をもたらすタイトジャンクションの過度の開放を防止する化合物の使用に基づく。
【００１５】
タイトジャンクションを構成しているタンパク質は、それらがつなぎ合わせている細胞の細胞骨格と会合している。本発明は、腸の疾患又は障害を有する対象において、細胞骨格の緊張又はタイトジャンクションの開放が、腸上皮の透過性に対して非破壊的かつ一時的に作用するよう調整され得ることを提唱する。従って、細胞骨格の収縮は、タイトジャンクションの開放を促進し、細胞骨格の弛緩（又は収縮の阻害）は、タイトジャンクションの閉鎖を促進するはずである。それらの開放を減少させるか又は阻止することにより、特にそれらを構成しているタンパク質において、タイトジャンクションを直接的に調整することも可能である。
【００１６】
次いで、好ましくは、本発明は、腸上皮細胞（特に、ヒト）の細胞骨格の収縮を調整するか、又は腸上皮（特に、ヒト）のタイトジャンクションの開放を直接的に調節する化合物（もしくは条件）の使用を提供する。処置される状態に応じて、腸上皮細胞の細胞骨格の収縮を阻害する化合物、又はそれを活性化もしくは促進する化合物、又はタイトジャンクションの開放を直接的に減少させるかもしくは阻止する化合物、又はそれらの開放を増加させる化合物が使用される。
【００１７】
特に、細胞骨格の緊張を調整することにより、腸上皮のタイトジャンクションの開放を調整する化合物の活性は、直接的であっても又は間接的であってもよく、即ち細胞骨格の成分そのものに対するものであってもよいし、又は細胞骨格の緊張の制御因子に対するものであってもよい。非制限的に、好ましい化合物は、細胞骨格の緊張に対して直接的に作用するものである。さらに、細胞骨格の緊張に対する選択的な活性を示す化合物、即ち、典型的には、タイトジャンクションを構成しているタンパク質の構造には直接的に影響を与えない化合物が好ましい。
【００１８】
タイトジャンクションの開放を調整する場合、その化合物は、細胞骨格の緊張を調整すると見なされる。アクチン及び／又はミオシンフィラメントの収縮又は緊張に対する阻害効果は、必ずしも完璧又は完全でなくてもよいが、タイトジャンクションの開放を減少させるために十分な程度に、細胞骨格の収縮又は緊張を減少させるべきである。
【００１９】
タイトジャンクションの開放の減少は、好ましくは、腸上皮の傍細胞透過性の少なくとも２５％、有利にはおよそ３０％、さらに好ましくはおよそ５０％の減少に相当する。傍細胞透過性は、血中への通過後、２４時間にわたり尿中でアッセイされる、５１Ｃｒ−ＥＤＴＡのようなトレーサーによって測定され得る（実施例１参照）。
【００２０】
種々の型の化合物が、本発明の範囲内で使用され得る。例えば、本発明の本質において、「化合物」という用語は、広義に、即ち、腸上皮のタイトジャンクションの開放の調整を可能にする任意の薬剤、物質、組成物、条件、処置又は方法をさすものと理解されなければならない。有利には、それは、薬剤（例えば、分子）又は薬剤の組み合わせもしくは併用である。
【００２１】
第一の実施態様によると、特に、タイトジャンクションを構成しているタンパク質と好ましくは可逆的に結合することにより、タイトジャンクションの開放を直接的に調整する化合物が使用される。特定の例は、ＴＡＰ（２，４，６−トリアミノピリミジン）である。
【００２２】
もう一つの実施態様によると、ミオシン及び／もしくはアクチンのＬ鎖の収縮もしくは緊張を阻害（もしくは調整）する化合物、又はアクチンの分解を阻害（もしくは調整）する化合物が、使用される。
【００２３】
そのような化合物の例は、特に、ミオシンＬ鎖キナーゼ（ＭＬＣＫ）の阻害剤を含む。先行技術において報告された研究は、高分子の通過を促進するため腸タイトジャンクションを開放させるために設計された化合物の使用に、より多く適用されているが、本発明は、より好ましくは、タイトジャンクションの透過性を減少させることを意図した、反対の作用を発揮することを目標としていることが指摘されるべきである。
【００２４】
選択的ＭＬＣＫ阻害剤の特定の例は、化合物ＭＬ−７｛１−（５−ヨードナフタレン−１−スルホニル）−１Ｈ−ヘキサヒドロ−１，４−ジアゼピン｝（Makishima M.ら、FEBS Lett.1991;287:175）である。そのような阻害剤の他の特定の例は、化合物ＭＬ−９（Wilson DP.ら、J Biol Chem.2001;13:165）又はその他の非選択的化合物：ワートマニン（wortmannin）（Warashima A.、Life Sci.2000;13:2587-93）、Ｈ−７（Piao Zfら、Mol.Cell.Biol.Res.Commun.2001;4:307-12）及びＫＴ７６９２（Warashima A.、Life Sci.2000;13:2587-93）である。
【００２５】
細胞骨格の緊張に対して作用する他の標的は、特に、例えばチングリンのようなミオシン結合タンパク質、又はカドヘリン−Ｅ、カテニン−αもしくはデスモソームのようなジャンクション分子である。該タンパク質の活性又は発現の調整は、本発明の範囲における、細胞骨格の緊張の制御を許容する。
【００２６】
従って、本発明の特定の目的は、細胞骨格分子の活性又は構造又は発現の調整剤（特に、阻害剤）の使用である。例えば、化合物は、とりわけ、アンチセンス核酸、合成分子、抗体断片であり得る。
【００２７】
もう一つの実施態様によると、細胞骨格のタンパク質とタイトジャンクションのタンパク質との結合を保証するタンパク質又はその他の分子の合成を阻害する化合物を使用することが可能である。タイトジャンクションのタンパク質のうち、特定の例は、オクルディン、クローディン、ＺＯ−１、ＺＯ−２、ＺＯ−３、ＡＦ７及び７Ｈ６を含む。従って、本発明は、細胞骨格とタイトジャンクションのタンパク質との間の結合タンパク質の合成の制御に基づく、タイトジャンクションの開閉を調整する手段を開示する。該合成を刺激することにより、タイトジャンクションと細胞骨格との連結は、強化され、上皮の透過性をより低くすると予想される。
【００２８】
本発明において使用され得る他の化合物は、例えば、化合物ＰＤ０９８，０５９｛２−（アミノ−３−メトキシフェニル）−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン｝（Alessiら、J.Biol.Chem.1995;270:275589）又はＬＹ２９４００２｛２−（４−モルホリニル）−８−フェニル−１（４Ｈ）−ベンゾピラン−４−オン｝（Vlahosら、J.Biol.Chem.1994;269:5241）のような、マイトジェン活性化キナーゼ（ＭＡＰＫＫ）、特にＭＥＫ１キナーゼ又はキナーゼ−ＰＩ３の阻害剤である。
【００２９】
細胞骨格の緊張を間接的に制御するために使用され得る他の分子は、肝（hepatic）増殖因子（ＨＧＦ）、内皮増殖因子（ＥＧＦ）のような増殖因子、又はインターロイキン−１、−４、−１３のような免疫細胞により放出され得るある種のサイトカイン、又はＩＧＦ−１もしくはインターフェロンガンマのような因子である。
【００３０】
細胞骨格の緊張を間接的に制御するためのもう一つのアプローチは、細胞骨格の収縮に対する間接的な効果により腸上皮透過性を修飾し得る、ＧＬＰ２ペプチド（「グルカゴン様ペプチド２」）又はその誘導体の使用に基づく。同様に、上皮細胞の頂端に位置する受容体（例えば、プロテイナーゼ受容体、ＰＡＲ−２）に対して作用するいくつかの分子は、細胞骨格に対して間接的に作用し得る。
【００３１】
本発明の好ましい実施態様は、細胞骨格の緊張に対して直接的に作用する薬剤、特に細胞骨格の収縮を阻害する分子、特にミオシン及び／もしくはアクチンのＬ鎖の収縮もしくは緊張を阻害するか、又はアクチン分解を阻害する分子の使用を含む。
【００３２】
前述のように、使用される化合物は、有利には、単独であっても又は組み合わせられていてもよい分子、生物学的抽出物等である。該分子は、合成、半合成、又は特に動物、ウイルス、植物もしくは細菌に由来する生物学的なものであり得る。
【００３３】
本発明は、痛覚過敏の状態を特徴とする消化器系の病態又は障害、特に、慢性腹痛を特徴とする腸機能障害、慢性腸炎症性疾患（ＣＩＩＤ）、食物不耐（アレルギー、処方）を処置又は管理するために有用である。それは、特に、その型（便秘優位型、下痢優位型又はその二つの組み合わせ）に関わらず、痛覚過敏、特に過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の予防的又は治療的な処置に適しているのみならず、排便障害を伴わない機能性腹痛（ＦＡＰＳ：機能性腹痛症候群）及び食物不耐及び内腔疾患に関連した疼痛のようなＩＢＳとして分類されない慢性腹痛の予防的又は治療的な処置にも適している。それは、この型の障害に対する素因もしくは感受性を有する対象において予防的に使用されてもよいし、又は例えば急性発作中もしくは比較的長期間にわたり治療的処置として使用されてもよい。本発明の組成物及び方法は、患者の苦痛を軽減し、これらの障害の症状又は原因を減弱させることを可能にする。
【００３４】
事実、本発明は、驚くべきことに、タイトジャンクションの開放に関連した傍細胞透過性の増加の抑制が、腹部痛覚過敏の発生を防止することを示している。
【００３５】
本発明の特定の目的は、痛覚過敏の状態を特徴とする腸疾患、特に粘膜下へのイムノサイト（例えば、肥満細胞及び／又は腸クロム親和性細胞）の蓄積、壁機械的受容器の感受性の亢進を特徴とし、粘膜下層への結腸細菌の浸潤も特徴とするかもしれない慢性炎症性疾患、例えば痛覚過敏、特に過敏性腸症候群を有する対象における腸上皮の傍細胞透過性を調節する、特に減少させるための医薬品を調製するための、前記定義のような化合物の使用に基づく。
【００３６】
本発明のもう一つの特定の目的は、腸機能障害、特に粘膜下へのイムノサイト、例えば、肥満細胞及び／又は腸クロム親和性細胞の蓄積、壁機械的受容器の感受性の亢進を特徴とし、粘膜下層への結腸細菌の浸潤も特徴とするかもしれない腸病態、例えば痛覚過敏、特に過敏性腸症候群を有するか又はそれらに罹患しやすい対象におけるアレルゲン、病原体及び／又は化学分子に対する感作を減少させるための医薬品を調製するための、前記定義のような化合物の使用に基づく。
【００３７】
本発明のもう一つの特定の目的は、腸機能病態、特に腹部痛覚過敏を引き起こす腸病態、例えば、粘膜下へのイムノサイト、特に肥満細胞及び／又は腸クロム親和性細胞の蓄積、壁機械的受容器の感受性の亢進を特徴とし、粘膜下層への結腸細菌の浸潤も特徴とするかもしれない過敏性腸症候群を有する対象におけるイムノサイトの経上皮遊走及び粘膜下層へのイムノサイトの蓄積を減少させるための医薬品を調製するための、前記定義のような化合物の使用に基づく。
【００３８】
本発明は、腸病態を有するか又は腸病態に罹患しやすい対象に、前記定義のような化合物又は処置を投与することを含む、上記状態を処置するための方法にも関する。好ましくは、化合物又は処置は、腸上皮の傍細胞透過性を低下させ、かつ／又は疼痛に対する感受性を減少させ、かつ／又はアレルゲン、毒素、刺激物もしくは微生物の経上皮遊走及びその結果としての腸粘膜下へのイムノサイトの蓄積を減少させるために有効な用量で、投与される。
【００３９】
化合物は、種々の経路により、種々の形態で投与され得る。例えば、化合物は、液状又は固形であり得、典型的には、錠剤、カプセル剤、アンプル剤、又は内用液剤、注射用液剤等の形態をとり得る。経口投与（内用液剤、錠剤、アンプル剤、シロップ剤等）又は直腸投与のために製剤化された化合物が、好ましい。可能である場合には、坐剤が特に好ましい。当然、注射剤（腹腔内、皮内、皮下、筋肉内、静脈内、動脈内等）、パスタ剤、ゲル剤等のようなその他の製剤も可能である。
【００４０】
化合物は、単独で使用されても、又は組み合わせられて使用されてもよく、かつ／又は例えば過敏性腸症候群の処置において使用される他の活性物質のような他の活性薬剤と併せて使用されてもよい。例は、抗コリン作動性、運動促進性、止瀉性の化合物、腸運動性の修飾薬等である。これらの種々の薬剤は、組み合わせ療法において使用され得、別々に投与されても、組み合わせられて投与されてもよく、経時的にもしくは同時に拡散させられてもよい。
【００４１】
本発明のもう一つの目的は、組み合わせ使用、別々の使用又は経時的な塗布を考慮した、腸上皮のタイトジャンクションの開放を調整する化合物少なくとも一つと、抗コリン作動性化合物、運動促進物質、止瀉薬、緩下薬又は運動性、腹部感受性（もしくは消化器感受性）の修飾薬からなる群より選択される他の活性薬剤少なくとも一つとを含む医薬的な併用又は生成物に基づく。
【００４２】
本発明のもう一つの目的は、好ましくは経口投与又は直腸投与のために製剤化された、腸上皮のタイトジャンクションの開放を調整する化合物少なくとも一つと、医薬的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物である。好ましくは、組成物は、坐剤又は内用液剤の形態をとる。
【００４３】
本発明の他の面及び利点は、例示の目的のため与えられ、制限的なものではない以下の実施例において明らかになるであろう。
【００４４】
図面の説明
図１：ラットの２４時間尿中の回収率（％）として表された巨大分子（５１Ｃｒ−ＥＤＴＡ）の吸収に対する、増加する用量のＰＡＲ−２受容体活性化ペプチド（ＳＬＩＧＲＬ）の効果。
図２：ＳＬＩＧＲＬ（０．５mg／匹）の結腸内注射により誘導される５１Ｃｒ−ＥＤＴＡに対する傍細胞透過性の増加に対する、タイトジャンクションブロッカー（ＴＡＰ−１００mM）の同時投与の効果。この増加は、タイトジャンクション（ＴＪ）をブロックする２，４，６−トリアミノピリミジン（ＴＡＰ）の１０h注入により消失した。
図３：ＳＬＩＧＲＬ（０．２mg）により誘導される膨満に対する直腸過敏の、ＴＪブロッカー（ＴＡＰ−１００mM）による抑制。
図４：雌ラットにおける圧迫ストレスにより誘導される膨満に対する直腸過敏に対する、ＴＪブロッカーの結腸内注入の効果。
図５：ラットにおけるＳＬＩＧＲＬ（２００μg）の結腸内投与により誘導される直腸痛覚過敏に対する、ＭＬＣＫ阻害剤の反復投与の効果。ＳＬＩＧＲＬにより誘導される痛覚過敏に関しては、ＭＬ−７の反復投与（１２h間隔で１mg/kgを３回）のみが、全ての膨満体積で痛覚過敏を減少させた。
図６：ラットにおけるＳＬＩＧＲＬ（２００μg）の結腸内投与により誘導される直腸痛覚過敏に対する、ＭＬＣＫ阻害剤の反復投与の効果。ＳＬＩＧＲＬにより誘導される痛覚過敏に関しては、ＰＤ０９８０５９の投与（３mg/kgを１回）のみが、全ての膨満体積で痛覚過敏を減少させた。
図７：ラットにおけるＰＡＲ−２受容体活性化剤（ＳＬＩＧＲＬ）により誘導される上皮タイトジャンクション透過性の増加に対する、ＭＬ−７及びＰＤ０９８０５９の比較効果。６つのラット群における、実施例１に記載された方法及び条件による結腸透過性の測定は、腹痛を減少させる用量において、直接ＭＬＣＫ阻害剤（ＭＬ−７）及び間接阻害剤（ＰＤ０９８０５９）が、ＳＬＩＧＲＬにより誘導されるタイトジャンクション透過性の増加を抑制することを示した。
図８：ラットにおけるタウロコール酸塩の結腸内投与により誘導される侵害受容応答の増加に対する、ＭＬＣＫ阻害剤（ＭＬ−７）の単回投与の効果。
図９：ラットにおけるタウロコール酸塩により誘導される上皮タイトジャンクション透過性の増加に対する、ＭＬ−７の効果。６つのラット群における、実施例１に記載された方法及び条件による結腸透過性の測定は、腹痛を減少させる用量において、ＭＬ−７（直接ＭＬＣＫ阻害剤）が、タウロコール酸塩により誘導されるタイトジャンクション透過性の増加を抑制することを示した。
図１０：ラットにおける圧迫ストレスにより誘導される膨満に対する結腸過敏に対する、ＭＬＣＫに対して作用する結腸上皮細胞の細胞骨格の収縮の阻害剤（ＭＬ−７）の効果（平均値±ＳＥＭ、ｎ＝８）。
図１１：ミオシンＬ鎖キナーゼ（ＭＬＣＫ）及びミオシンホスファターゼ（ＭＰ）は、上皮細胞細胞骨格のミオシンＬ鎖の収縮、次いで弛緩を可能にする反対の作用を有する（Fukataら、2001）。
図１２：上皮細胞におけるミオシンＬ鎖（ＭＬＣ）の収縮を減少させるための分子標的（Fukataら、2001）。ＣＰＩ：リン酸化状態のミオシンホスファターゼのタンパク質阻害剤。ＭＢＳ：ミオシン結合サブユニット。ＭＰ：ミオシンホスファターゼ。Ｍ２０：２０Kdaサブユニット。Ｃａｔ：ミオシンホスファターゼの触媒性サブユニット。ＧＥＦ：グアニンヌクレオチド交換因子。ＡＡ：アラキドン酸。Ｉｎｓ（１，４，５）Ｐ３：イノシトール（１，４，５）三リン酸。ＰＬＣ：ホスホリパーゼＣ。ＳＲ：筋小胞体。
【００４５】
実施例
実施例１：タイトジャンクションのブロッカーによる直腸痛覚過敏の減少
腸上皮は、イムノサイトの腸粘膜下への調節された通過を保証する、上皮細胞を連結している構造を保有している。この実施例は、ＳＬＩＧＲＬのような腸傍細胞透過性を増加させることが知られているある種の分子が、腸粘膜下へのイムノサイト（肥満細胞、腸クロム親和性細胞）の蓄積を促進すること、及びこの効果が、タイトジャンクションのブロッカーの結腸内投与によって防止（例えば、阻害、減少）され得ることを示す。
【００４６】
雄ウィスター（Wistar）ラット（２００〜２５０g）８匹の６つの群を、この研究に使用した。動物には、近位結腸（盲腸結腸連結部から３cm）に留置結腸内カテーテルを与えた。これらの研究において、４つのラット群には、５１Ｃｒ−ＥＤＴＡ溶液（０．５μC/h)の１０時間結腸内注入を与えた。動物を個々のケージに収容し、全２４時間尿を収集した。５１Ｃｒ−ＥＤＴＡに対する結腸粘膜の透過性を評価するため、放射能を測定した。ｔ＝０（５１Ｃｒ−ＥＤＴＡ注入の開始時）の時点で、０．０５、０．２及び０．５mg／匹の用量で、増加する用量のＰＡＲ−２活性化ペプチド（ＳＬＩＧＲＬ）を結腸内腔に注射した（群２、３及び４）。群１には、溶媒を与えた。図１は、傍細胞透過性を増加させる能力を証明する、ＳＬＩＧＲＬにより誘導される５１Ｃｒ−ＥＤＴＡの透過性の用量依存的な増加を例示している。
【００４７】
実施例２：ＴＡＰによる直腸痛覚過敏の減少
２時間圧迫ストレスを受けた雌ラットは、膨満に対する直腸過敏を発症する。そのような圧迫ストレスは、巨大分子に対する結腸の透過性（傍細胞透過性）を増加させることも知られている。
【００４８】
この研究は、腹部収縮を記録するため腹部横紋筋に植え込まれた電極が取り付けられた雌ウィスターラット（２２５〜２５０g）８匹の３つの群に対して実施した。動物には、結腸内カテーテルも与えた。ｔ＝０の時点で、動物に２時間の圧迫ストレスを与え、その間、溶媒（トリス（Ｔｒｉｓ）−群１）もしくはＴＡＰ（１００mM、群２）のいずれかの結腸内注入も与えるか、又は架空のストレスと共にトリスを与えた（群３）。
【００４９】
結果は、圧迫ストレス（ストレス）が、全ての膨満体積（０．４、０．６及び１．２ml）において腹部収縮の数（痛覚過敏）を有意に増加させたこと、及びこの効果が、ＴＡＰの同時結腸内注入によって消失したことを示している（図４）。
【００５０】
実施例３：ＭＬ−７による直腸痛覚過敏の減少
筋肉内経路によりＭＬ−７（ＭＬＣＫ阻害剤）で予め処理し、ＳＬＩＧＲＬ（２００μg）又はタウロコール酸塩（５mM）の結腸内注入を与えたラット７〜８匹の３×３群において、実施例１に記載されたプロトコルを使用した。図８及び９の結果は、１mg/kgの用量のＭＬ−７による単回処理が、タウロコール酸塩の結腸内投与により誘導される痛覚過敏を減少させたことを示している。図５及び７の結果は、１mg/kgの用量のＭＬ−７による単回処理が、ＳＬＩＧＲＬの結腸内投与により誘導される痛覚過敏を減少させたことを示している。
【００５１】
実施例４：ＰＤ９８０５９による直腸痛覚過敏の減少
筋肉内経路によりＰＤ９８０５９（ＭＥＫ阻害剤）で予め処理し、ＳＬＩＧＲＬ（２００μg）又はタウロコール酸塩（５mM）の結腸内注入を与えたラット７〜８匹の３×３群において、実施例１に記載されたプロトコルを使用した。図６に提示された結果は、３mg/kgの用量のＰＤ９８０５９による単回処理が、ＳＬＩＧＲＬの結腸内投与により誘導される痛覚過敏を減少させたことを示している。
【００５２】
実施例５：ストレスにより誘導される痛覚過敏のＭＬ−７による減少
実施例２は、ストレスにより誘導される直腸痛覚過敏に対する上皮タイトジャンクションの化学的ブロッカーの効果に関するものである。実施例５においては、実施例２と同じプロトコルを使用したが、細胞骨格の収縮を減少させるＭＬＣＫ阻害剤ＭＬ−７により動物を処理した。先の実施例と同様に、ストレス前３６時間にわたり１２時間間隔で３回（１mg/kg、ｉ．ｐ．）ＭＬ−７を与えた。結果は、ＭＬ−７が、ストレスにより誘導される痛覚過敏を阻害したことを示しており、これは、ヒトにおける結腸痛覚過敏の処置のため、ＭＬＣＫ酵素を標的とすることの妥当性を確認するものである（図１１）。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】ラットの２４時間尿中の回収率（％）として表された巨大分子（５１Ｃｒ−ＥＤＴＡ）の吸収に対する、増加する用量のＰＡＲ−２受容体活性化ペプチド（ＳＬＩＧＲＬ）の効果。
【図２】ＳＬＩＧＲＬ（０．５mg／匹）の結腸内注射により誘導される５１Ｃｒ−ＥＤＴＡに対する傍細胞透過性の増加に対する、タイトジャンクションブロッカー（ＴＡＰ−１００mM）の同時投与の効果。
【図３】ＳＬＩＧＲＬ（０．２mg）により誘導される膨満に対する直腸過敏の、ＴＪブロッカー（ＴＡＰ−１００mM）による抑制。
【図４】雌ラットにおける圧迫ストレスにより誘導される膨満に対する直腸過敏に対する、ＴＪブロッカーの結腸内注入の効果。
【図５】ラットにおけるＳＬＩＧＲＬ（２００μg）の結腸内投与により誘導される直腸痛覚過敏に対する、ＭＬＣＫ阻害剤の反復投与の効果。
【図６】ラットにおけるＳＬＩＧＲＬ（２００μg）の結腸内投与により誘導される直腸痛覚過敏に対する、ＭＬＣＫ阻害剤の反復投与の効果。
【図７】ラットにおけるＰＡＲ−２受容体活性化剤（ＳＬＩＧＲＬ）により誘導される上皮タイトジャンクション透過性の増加に対する、ＭＬ−７及びＰＤ０９８０５９の比較効果。
【図８】ラットにおけるタウロコール酸塩の結腸内投与により誘導される侵害受容応答の増加に対する、ＭＬＣＫ阻害剤（ＭＬ−７）の単回投与の効果。
【図９】ラットにおけるタウロコール酸塩により誘導される上皮タイトジャンクション透過性の増加に対する、ＭＬ−７の効果。
【図１０】ラットにおける圧迫ストレスにより誘導される膨満に対する結腸過敏に対する、ＭＬＣＫに対して作用する結腸上皮細胞の細胞骨格の収縮の阻害剤（ＭＬ−７）の効果（平均値±ＳＥＭ、ｎ＝８）。
【図１１】ミオシンＬ鎖キナーゼ（ＭＬＣＫ）及びミオシンホスファターゼ（ＭＰ）は、上皮細胞細胞骨格のミオシンＬ鎖の収縮、次いで弛緩を可能にする反対の作用を有する。
【図１２】上皮細胞におけるミオシンＬ鎖（ＭＬＣ）の収縮を減少させるための分子標的。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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