(57)【要約】皮膚被覆材、特に、傷被覆材はオキシドリダクターゼ酵素と、任意により、ペルオキシダーゼとを含み、該酵素は水和状態下、例えば、１以上の水和ヒドロゲル中に存在する。被覆材は、ヒトまたは動物の皮膚上、たとえば傷上に配置されて使用する。オキシドリダクターゼ酵素は、適当な基質から過酸化水素を産出する反応を触媒し、基質は、体液内に自発的に存在するもの、および／または分離して提供する、および／または被覆材内に組み込まれたものである。現在好ましいオキシドリダクターゼ酵素はグルコースオキシダーゼである。β−Ｄ−グルコース基質の触媒反応は、過酸化水素およびグルコン酸を与える。オキシドリダクターゼ酵素の混合物は、（任意によりペルオキシダーゼ酵素で触媒された）反応を受け、抗細菌特性を有し、傷の治癒の促進を補助する活性酸素中間体を含む、種々の種を産出可能である。
2005533534.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
オキシドリダクターゼ酵素を含む皮膚被覆材であって、該酵素が水和状態にて存在する、皮膚被覆材。
【請求項２】
オキシドリダクターゼ酵素がグルコースオキシダーゼを含む、請求項１に記載の被覆材。
【請求項３】
被覆材が、水和状態下で存在するペルオキシダーゼ酵素をさらに含む、請求項１または２に記載の被覆材。
【請求項４】
ペルオキシダーゼ酵素がラクトペルオキシダーゼを含む、請求項３に記載の被覆材。
【請求項５】
被覆材が１以上の水和ヒドロゲルを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の被覆材。
【請求項６】
ゲルが親水性ポリマー材料を含む、請求項５に記載の被覆材。
【請求項７】
酵素または酵素群が１以上の水和ヒドロゲル中に存在する、請求項５または６に記載の被覆材。
【請求項８】
酵素または酵素群が不活性支持体上に位置する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の被覆材。
【請求項９】
不活性支持体が、酵素または酵素群が不可逆的に付着したコットンまたはセルロース織りガーゼを含む、請求項８に記載の被覆材。
【請求項１０】
被覆材が層構造である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の被覆材。
【請求項１１】
水和ゲル形態の下層と、オキシドリダクターゼ酵素および、任意により、ペルオキシダーゼ酵素を担持する不活性支持体形態の上層とを含む、請求項１０に記載の被覆材。
【請求項１２】
ヒドロゲルが、オキシドリダクターゼ酵素に対する基質の供給源を含む、請求項１１に記載の被覆材。
【請求項１３】
使用に際して、皮膚との界面にて、バリア材料の層を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の被覆材。
【請求項１４】
オキシドリダクターゼ酵素に対する基質の供給源を含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の被覆材。
【請求項１５】
基質が水和ヒドロゲル中に位置する、請求項１４に記載の被覆材。
【請求項１６】
ヨウ化物の供給をさらに含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の被覆材。
【請求項１７】
ヨウ化物の供給が水和ヒドロゲル中に位置する、請求項１６に記載の被覆材。
【請求項１８】
被覆材を、ヒトまたは動物対象の皮膚に接着させるためのカバーまたは外層を含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の被覆材。
【請求項１９】
カバーが、被覆材化学物質が活性である場合に示唆される指示手段を見ることが可能である窓を含む、請求項１８に記載の被覆材。
【請求項２０】
固定化カタラーゼ酵素が、カバーの内表面上で提供される、請求項１８または１９に記載の被覆材。
【請求項２１】
多重部分系形態で、異なる要素が別々にパックされる、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の被覆材。
【請求項２２】
オキシドリダクターゼ酵素、およびオキシドリダクターゼ酵素に対する基質の供給源が、別のパッケージにて存在する、請求項２１に記載の被覆材。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、皮膚を治療するためにヒトまたは動物の体の一部に適用される皮膚被覆材に関し、特に（ただし限定はされないが）、損傷した皮膚、特に皮膚障害、すなわち、皮膚の潰瘍、火傷、切傷、刺傷、裂傷、鈍的外傷、座瘡障害、腫れもの等を含む創傷または病気により引き起こされた皮膚表面のあらゆる傷害を治療するための傷被覆材に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
創傷はしばしば感染となる。創傷被覆材は消毒基質を担持してもよく、これによって提供される物理的保護が、この細菌排除が決して完全ではないが過剰な感染細菌の侵入を予防する。被覆材パッド上に含まれる消毒基質は、通常非常に効果的ではなく、これはおそらく、これらが一定の速度で創傷内に簡単に拡散しないからである。さらに、もっとも効果的な基質である抗生物質は、薬剤耐性が現れるという、絶えず存在する問題のために通常の使用に適切ではない。
【０００３】
過酸化水素（Ｈ2Ｏ2）は、多くの利点を有する公知の抗細菌基質である。これは、感染への応答にて免疫予防活性の一部分として白血球細胞によって体内で自発的に産出される。細菌が、その効果を逃れることが可能で、短い存続期間を持ち、組織内で、水および酸素へ、非常に簡単に分解されるような、公知の細菌防衛機構は存在しない。したがって、危険なレベルまで蓄積しない。局所（たとえばニキビを処置するために）に適用した場合、その効果は、感染の潜在的な部位へ達するように、皮膚表面を簡単に浸透するという事実によって増強される。
【０００４】
過酸化水素が非常に優良であるので、長年、すべての種類の創傷を洗浄するための抗細菌基質として、および生物学的に適合可能な一般消毒剤として、使用されてきた。とりわけ、過酸化水素含有軟膏が、たとえば、脚潰瘍、圧力痛、軽傷な傷および感染の処置のために、使用されてきた。しかしながら、過酸化水素の使用に付随した問題が存在する。過酸化水素溶液は、非常に不安定であり、簡単に水と酸素に酸化され、さらに、高濃度の過酸化水素は、正常皮膚および、創傷ベッド内の治癒を担う細胞に障害を与えうる。過酸化水素を、先行投薬創傷被覆材の一部として使用することは、非常に難しいか、不可能である。その不安定さのために、不可能で短寿命の棚に用いる製品に供し、適用時点での投棄は、有用な延長期間にわたって安定した伝達をなお提供しない。（たとえば、英国薬局方（Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）にて記述されたように）創傷処置にて使用した場合、非常に短時間の間隔にて、強力な抗細菌効果を達成するために、非常に高い濃度（典型的には３％）が必要である。過酸化水素の大きな効果により、この型の短い裂傷にさえも効果的でありうるが、そのような高濃度が、宿主細胞に相対的に障害を与え、治癒工程を遅らせうるというさならる不利益が存在する。この理由のために、過酸化水素の使用は、傷の初期洗浄および滅菌に制限される傾向にある。そうであっても、（低濃度で）体の自己細胞によって産出される、自発的な保護基質であり、細胞−細胞分子シグナル伝達および調節に関わる、細胞内および細胞間メッセンジャー分子として、次第に認識されている。疑いなく、正しい濃度で、適切な時間クールで使用可能である場合に、過酸化水素は、本質的に非常に有用な分子である。
【０００５】
米国特許第４，５７６，８１７号は、たとえば血清との接触において、過酸化水素および過酸化ヨウ素を産出するために、グルコースオキシダーゼおよびラクトペルオキシダーゼのような、乾燥酵素を含む、静菌性繊維状傷被覆材を提案している。
【０００６】
国際特許第ＷＯ０１／２８６００号は、重合体マトリックス中の乾燥グルコースオキシダーゼ、乾燥ラクトペルオキシダーゼおよびヨウ化塩を含む、傷被覆材を開示している。グルコースオキシダーゼは、傷部位の体液中に存在するグルコースの酸化反応を触媒して、過酸化水素を産出する。過酸化水素およびヨウ素におけるラクトペルオキシダーゼの作用によって、元素ヨウ化物が産出され、これが、強力な抗感染剤である。
【０００７】
効率的な傷治癒は、いくつかの因子によって促進され、これには、湿った環境、および吸収による傷滲出液の除去が含まれる。これらの基質が高い効率で傷から滲出する液体を簡単に取り除け、保持することから、滲出液除去の利点を得るために、乾燥超吸収物質がしばしば使用されてきた。しかしながら、高効率乾燥吸収物質は、湿度の助けとならない欠如を導きえ、そのような物質から構成された創傷被覆材は、少なくとも、被覆材が、傷流体によって完全に湿るまで、抗細菌酵素型とはよく働かない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
発明の概要
本発明は、オキシドリラクターゼ酵素および任意にペルオキシダーゼ酵素を含む皮膚被覆材を提供し、ここで、酵素（類）は、水和状態で存在する。酵素（類）は、被覆材の使用前、すわなち、皮膚への被覆材の適用前に、被覆材中、そしてまた、パッケージ中に密封した場合に、被覆被覆材中で、水和状態である。
【０００９】
水和状態の、酵素（類）を提供することによって、酵素は、被覆材中、湿った活性状態で存在し、被覆材の使用に際し、適切な基質と接触させるようにした場合に、即時に機能し始めうる。これは、酵素が乾燥状態にあり、使用に際して、初期水和反応を必要とし、したがって、酵素の機能化および続く抗細菌効果が遅延する、先行技術被覆材と対称的である。酵素の水和状態はまた、被覆材が、乾燥した傷に湿気を供給可能である方法で、湿ったヒドロゲルまたは他の湿った被覆材物質中に、処方可能にする。
【００１０】
被覆材は、ヒトまたは動物の皮膚上、たとえば傷上、または化粧または治療目的で、たとえばにきびまたは他の皮膚状態の処置のために、処置すべき皮膚の領域上に局在させることによって使用する。オキシドリラクターゼ酵素は、適切な基質の酸素との反応を触媒し、過酸化水素を産出する。基質は、体液中に自発的に存在するか、および／または別々に供給されるか、および／または被覆材中に含まれるかいずれかであってよい。本発明での使用に好適なオキシドリダクターゼ酵素および相当する基質（血液および組織液中に存在する）には、以下が含まれる。
【００１１】
【表１】
2005533534.tif 000003
【００１２】
現在好ましいオキシドリダクターゼ酵素は、グルコースオキシダーゼである。これは、β−Ｄ−グルコース基質の、過酸化水素およびグルコン酸を与える反応を触媒する。
【００１３】
オキシドリダクターゼ酵素の混合物を使用しうる。
【００１４】
皮膚上および皮膚の周辺で反応が起こる場合、そのようにして産出された過酸化水素が、局所抗細菌効果を持ちうる。
【００１５】
あるいは、またはさらに、この方法にて産出された過酸化水素を、二ステージ配置にて使用してもよく、ここで、過酸化水素は、抗細菌特性を持ち、したがって、傷治癒の促進を補助可能である、反応性酸素中間体を含む種々の種を産出するために、ペルオキシダーゼ酵素によって触媒される反応を受けている。そのような実施様態に関して、被覆材には、ペルオキシダーゼ酵素、好ましくは水和状態で存在するものが含まれる。さらなる可能性として、過酸化水素は、非触媒様式で、ヨウ化物イオンなどの基質と直接反応して、分子ヨウ素を産出可能である。
【００１６】
本発明で有用なペルオキシダーゼ酵素には、ラクトペルオキシダーゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、ヨウ化物ペルオキシダーゼ、塩化物ペルオキシダーゼおよびミエロペルオキシダーゼが含まれ、ここでは、ラクトペルオキシダーゼが好ましい。
【００１７】
ペルオキシダーゼ酵素の混合液を使用しうる。
【００１８】
ペルオキシダーゼの活性によって産出される活性種を定義することは難しく、ある程度、問題の特定のペルオキシダーゼに依存する。たとえば、ホースラディッシュ  ペルオキシダーゼは、ラクトペルオキシダーゼと非常に異なって作用する。詳細な化学反応は、産物が、これもまた非常に活性な、他の、関連した産物に急速に生み出すように、活性である事実により、裏付けられる。ヒト体の好中球とマクロファージ白血球中に同定される「酸化裂傷（ｏｉｄａｔｉｖｅ  ｂｕｒｓｔ）」中、および、鉄イオンの触媒効果に基づく周知の「Ｆｅｎｔｏｎ」反応中でのように、ハイドロキシラジカル、一重項酸素およびスーパーオキシドが産出される。
【００１９】
被覆材には、酵素または酵素類が、水和状態にて存在するように、水供給源が含まれる。被覆材は、たとえば湿った木綿被覆材の形態であってよく、または湿った成分と、構造化された芯物質を含みうる。しかしながら、好ましくは、被覆材には、１または複数の水
をもとにした、または水性ゲルが含まれ、また、水和ヒドロゲルとして呼ばれる。そのようなゲルは、種々の物質の形態であり得、以下で議論するように、種々の試薬を含みうる。
【００２０】
水和ヒドロゲルは、酵素または酵素類を水和するため、急速な反応および続く抗細菌基質の放出を促進するために、水の供給源を提供する。ゲルはまた、傷部位から滲み出る水および他の物質を吸着するために働き、被覆材が、傷部位からそのような物質を除去することによって有益で有用な機能を達成可能になる。水和ヒドロゲルはまた、湿気の供給源を使用の際提供し、これは、酵素または酵素類を、水和状態での被覆材中に保持するように機能し、治癒を補助する、傷部位湿気を保持するように作用しうる。
【００２１】
このまたはそれぞれの水和ヒドロゲルは、都合良く、親水性ポリマー物質を含む。好適な親水性ポリマー物質には、ポリ−２−メチルプロパンスルホン酸（ポリＡＭＰＳ）またはその塩（たとえば国際特許第ＷＯ０１／９６４２２号に記述されたような）、たとえばポリサッカライドガム、とりわけキサンタンガム（たとえばＫｅｌｔｒｏｌの商標名で入手可能）のようなポリサッカライド類、種々の糖類、（たとえばＩＳＰ  ヨーロッパ（ＩＳＰ  Ｅｕｒｏｐｅ）から、Ｇａｎｔｒｅｚ  ＡＮ−１６９  ＢＦの登録商標で入手可能な）ポリカルボン酸、（２０，０００〜４０，０００の範囲の分子量を持つ、Ｇａｎｔｒｅｚ  ＡＮ１３９の登録商標で入手可能な）ポリ（メチルビニルエーテルコマレイン酸無水物）、（たとえば、ＰＶＰ  Ｋ−３０およびＰＶＰ  Ｋ−９０として知られる商業的に入手可能な等級での形態での）ポリビニルピロリドン、（たとえば、Ｐｏｌｙｏｘ  ＷＳＲ−３０１の登録商標にて入手可能な）ポリエチレンオキシド、（たとえばＥｌｖａｎｏｌの登録商標によって入手可能な）ポリビニルアルコール、（たとえばＣａｒｂｏｐｏｌ
ＥＺ−１に登録商標いて入手可能な）架橋ポリアクリルポリマー、（たとえば、Ｋｌｕｃｅｌ  ＥＥＦの登録商標によって入手可能な）ヒドロキシプロピルセルロース、（たとえばＣｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ｇｕｍ  ７ＬＦの登録商標によって入手可能な）ナトリウムカルボキシメチルセルロース、および（Ｎａｔｒｏｓｏｌ  ２５０  ＬＲの登録商標によって入手可能な）ヒドロキシエチルセルロースを含む、セルロース類および改変セルロースを含む、ポリアクリレート類およびメタクリレート類、たとえば、適切なヒドロゲルの形態で、Ｆｉｒｓｔ  Ｗａｔｅｒ  Ｌｔｄによって供給されるようなものを含む。
【００２２】
親水性ポリマー物質の混合液をゲル中で使用しうる。
【００２３】
親水性ポリマー物質の水和ヒドロゲル中で、親水性ポリマー物質は、望ましくは、ゲルの総重量に基づく重量にて、少なくとも１％、好ましくは少なくとも２％、より好ましくは少なくとも５％、可能であれば少なくとも１０％の濃度で存在する。
【００２４】
比較的高濃度（重量にて少なくとも２％）の親水性ポリマー物質を含むゲルを使用することによって、ゲルが、被覆材の使用の際に、たとえば傷に接触している間血清からの、水を取り込むために、とりわけ効率的に機能可能である。ゲルが水系であるので、被覆材の使用は、望まれない可能性のある、傷全体の乾燥を誘導する効果を持たない。これは、水蒸気圧が、被覆材の使用の際に、皮膚の周りの囲まれた環境の中で維持されるからである。したがって、ゲルは、湿気、たとえばまた、湿気の有益な基準レベルを提供する傷滲出液の除去のための、吸着物として働く。
【００２５】
高濃度ゲルを含む水和ヒドロゲルの水取り込み能力により、被覆材は、滲出液の十分な量の除去、そうであるようふくらむことによって、傷の治癒を補助可能である。即座の水和により、また、被覆材と傷の間の液体表面の迅速な形成が補償され、したがって、接着が予防され、そうでなければ、取り替えなければならないときに、被覆の簡単な浮揚と相互作用する。傷と被覆材間の良い液体表面はまた、酵素の抗細菌産物が、可能な表面全て
を通して、傷に入ることを可能にすることにおいて、重要でもある。
【００２６】
そのまたは各ゲルには、種々の試薬が含まれ、以下の１つまたはそれ以上が含まれる。
【００２７】
１以上のオキシドリダクターゼ酵素、
１以上のペルオキシダーゼ酵素、
（以下で議論される）前記オキシドリダクターゼ酵素に対する基質、
（以下で議論される）ヨウ化物イオンの供給源、
（保湿剤および湿潤剤として働く）グリセロール、典型的には、ゲルの重量あたり、２０％までの量。
【００２８】
とりわけ、酵素または酵素類は、１以上の水和ヒドロゲル中に存在しうる。
【００２９】
たとえば、酵素の１つ、オキシドリダクターゼ酵素またはペルオキシダーゼ酵素は、ゲル、たとえば水性高濃度親水性ポリマー物質ゲル中に存在しうる。さらなる可能性として、両方の酵素が、ゲル、たとえばそのような高濃度ゲル中に存在しうる。 さらなる選択肢として、各酵素が、それぞれのゲル、たとえば、水性高濃度親水性ゲル中に存在する。
【００３０】
さらなる可能性として、被覆材に、酵素は含まれないが、おそらくオキシリダクターゼ酵素のための基質（たとえばグルコースオキシダーゼのためのグルコースの供給源）が含まれ、さらに、またはあるいは、ヨウ化物イオン（たとえば１以上のヨウ化物塩の形態で）の供給が含まれ、任意にまたグリセロールも含まれる。
【００３１】
そのまたは各ゲルは架橋してよい。たとえば、ゲルは、たとえば公知の様式、たとえば塩化カルシウムを使用することによって架橋した、アルギン酸から形成される、アルギン酸塩ゲルを含みうる。架橋ゲルは、架橋の程度が十分きつい場合に、ゲル内に酵素を維持可能であり、したがって、被覆材の使用にて、傷ベッド内への酵素の放出を防止する、取り込みバイオポリマーマトリックスを形成する。ゲルは、ビードレット、ビーズ、スラブまたは押し出しスレッドのような形態であり得る。
【００３２】
水和ヒドロゲル、とりわけ架橋ゲルは、たとえば構造的に補強されたヒドロゲル層またはスラブを提供するために、木綿ガーゼのシート、または不活性柔軟性メッシュのような、物理的に補強された構造の周りに位置づけることが可能である。
【００３３】
水和ヒドロゲルは、あるいは、たとえば（たとえばＫｅｌｔｒｏｌの登録商標で入手可能な）キサンタンガムのような好適なガムの、非架橋剪断間伐ゲルの形態であり得、この場合、好ましくは、物理的に補強された構造を持たない。そのようなゴムは、剪断ストレスに適用したとき（たとえば、ノズルを通して注ぐまたはスクイーズした場合）には液体であるが、定常時は凝固する。したがって、ゲルは、注入可能な成分の形態であり得、被覆材中のゲルの産出を促進する。そのような剪断間伐ゲルはまた、以上で議論したような、先に形成された、物理的に補強されたゲルとの組み合わせで使用して良い。
【００３４】
水吸収ゲルは、高濃度の親水性基質を使用してよく、実際のゲル形成ポリマー物質、たとえばポリサッカライド、それ自身、または水を吸収する目的のみで、この混合液に加えられた、さらなる基質であり得る。この型の機能的混合物の１つの例は、ゲルの総重量あたりを基準とした、約２重量％の架橋アルギン酸、および約５〜１０重量％のキサンタンガムの組み合わせによって形成されるものである。とりわけ好ましい形は、ポリＡＭＰＳのような、共有結合重合化ヒドロゲルであり、これは、非常に強く水を吸収し、大容量の水または水溶液を取り込むことが可能である。
【００３５】
酵素または酵素類は、溶液中での遊離分子を含む、多くの可能な形態で、ゲル中に存在しうる。ゲル中の酵素の保持効率を改善するために、酵素を互いに化学的に結合する、他の分子（たとえばポリエチレンイミン）へ化学的に結合する、またはビーズのような固体支持体に組み込むことが可能である。
【００３６】
異なる型のゲル、たとえば架橋アルギン酸および剪断間伐を、単一被覆材中で一緒に使用しうる。良い結果が、使用に際し、皮膚に一番近い剪断間伐ゲル、および皮膚から遠い、架橋された構造的に補強されたゲルで観察されてきた。
【００３７】
酵素または酵素類は、傷内へ放出されることを防止可能であるように、固定化されてよく、そこでこれらは、（一般的に、非ヒト供給源から由来し、たとえば、真菌アスペルギリウスニーガーから誘導された、市販されたグルコースオキシダーゼと、および、典型的に牛乳から抽出されたラクトペルオキシダーゼと）望まないアレルギー応答を引き起こす能力を持ち、傷中に存在するプロテアーゼの効果によって分解を受けやすい可能性がある。
【００３８】
酵素は、公知の様式、当業者に公知の結合方法を用いて、たとえば、セルロース、シリカ、ポリマーなどのような、たとえば粒子、ビーズまたは線維のような固体に化学的に結合させることによって、固体化されうる。たとえば、ベッドレット、スラブまたは押し出しスレッドの形態で、以上で議論したような、架橋アルギン酸に酵素を組み込みことでまた、酵素の固定化に影響を与える。ポリアミドを用いた公知のカプセル封入技術もまた好ましい。
【００３９】
オキシドリダクターゼ酵素およびペルオキシダーゼ酵素を用いた実施様態において、２つの酵素は、オキシドリダクターゼ酵素が第１水和ゲル中に位置し、ペルオキシダーゼが、第２水和ゲル中に局在する、分離水和ヒドロゲル中に局在可能である。前記第１および第２水和ゲルは、必要に応じて、被覆材の異なる領域に局在可能である。被覆材は、好ましくは、たとえば１つのゲルの上部（外部）層および他のゲルの底部（内部）層を含む、層化、階層化構造を持つ。
【００４０】
たとえば、それによって産出された抗細菌種（少なくともそのいくつかは、その極端な活性のために、非常に短い生存である）が、望む活性部位に到達する前に、皮膚の近くにあるか、または拡散しないように、（オキシドリダクターゼ酵素を含む）第１ゲルは、被覆材の多数の外部分中に局在可能であり、すなわち、使用に際して、皮膚より除去しえ、そこで酸素レベルが最も高く、また（ペルオキシダーゼ酵素を含む）第２ゲルが被覆材の多数の内部部分に局在し、すなわち使用に際して皮膚に接着する。この場合に、被覆材はしたがって、第１ゲルの上部（外部）層および第２ゲルの底部（内部）層を含む、層化、階層化構造を持つ。しかしながら、実験によって、２つの酵素の相対的な局在は、重要ではないことが示唆された。
【００４１】
いくつかの型の被覆材は、使用に際して、皮膚との境界にある、バリア物質の層を含み、たとえば、以上の配置にて、（ペルオキシダーゼ酵素を含む）第２ゲルに接着し、たとえば傷流体から、またはその領域に生息している微生物からのカタラーゼの被覆材への望まない侵入を防ぐ。カタラーゼ酵素が、過酸化水素との反応に関してペルオキシダーゼと競合することから、カタラーゼの被覆材への侵入は望まれず、したがって効率が減少する。好適なバリア物質には、たとえば、ペルオキシド性ペルオキシダーゼによって産出された抗細菌種を透過させるが、カタラーゼを透過させない、比較的低分子のカットオフを持つ半透過性シートまたは膜が含まれる。好適な膜は、当業者に公知であり、約１５ｋＤの分子量カットオフを持つ、透析膜を作製するために使用するような、セルロース酢酸フィルムが含まれる。
【００４２】
以上で言及したように、被覆材は、望ましくは、オキシドリダクターゼ酵素のための基質、たとえばグルコースオキシダーゼのためのグルコースの供給源を含む。好ましくは、グルコースは、純粋な、薬理学的等級物質の形態である。グルコースはまた、治癒および抗細菌因子のような他の利点を自発的に提供する、蜂蜜の形態で供給されうる。基質は好ましくは、酸素の供給が制限される反応に関して、酸素が必要であるので、ほとんどの反応が起こりえないけれども、未熟な反応を防止するために、被覆材の使用の前に、オキシドリダクターゼ酵素から物理的に隔離される。半透過性膜物質、たとえば（「ビスキングチュービング（ｖｉｓｋｉｎｇ  ｔｕｂｉｎｇ）」としてもしばしば知られる）セルロース酢酸のような、透析膜として使用されるような物質の封入物内、または、たとえばアガロースなどのゲルスラブまたはパッド内で含まれうる。そのようなゲルスラブまたはパッドは、望ましくは、以上で議論したような、木綿ガーゼなどのシートのような物理的補強構造の周りに配置される。基質は、一般的に、好ましくは、注入可能産出のために、物理的に補強された構造を持たないシート−すきゲル、たとえば、以上で議論したようなキサンタンガムのような好適のガムの形態であってよい。基質はあるいは、以上で議論したような、たとえば親水性ポリマー物質の、水和ゲル中に存在して良い。基質、たとえばグルコースは、典型的には、被覆材の重量の約２５重量％までの量で存在する。
【００４３】
ラクトペルオキシダーゼ活性の産物はほとんど効力がないが、より活性な種よりもより遠くで働きうるけれども、過剰な過酸化水素が存在するように、酵素および基質の相対量のバランスを取ることが有用である。過酸化水素が、回復している傷における新しい血管の形成を刺激すること（血管新生または新血管新生）、新規形成細胞の増殖を刺激すること、および発達している新規組織を再形成することを補助することに関連する活性酵素（プロテアーゼ）を活性化することも信じられている。
【００４４】
基質、たとえばグルコースは、水和ヒドロゲル構造内で溶解したものを含む種々の形態で存在して、ゆっくりと溶解する固体として、または遅延放出のための他の構造内にカプセル封入して存在しうる。
【００４５】
以上で言及したような、層化構造の被覆材の実施様態において、基質の供給源は、オキシドリダクターゼ酵素を含む第１ゲルの上層と、ペルオキシダーゼ酵素を含む、第２ゲルの下層間に挟まれて（被覆材の使用に際し）局在可能である。この場合、オキシドリダクターゼ酵素はまた任意に、第２ゲルに向かって拡散しやすい基質を酸化するために、第２ゲル内に含まれて良い。そのような酸化は、酸素の存在に依存し、酸化反応が、利用可能な酸素に比例して、この局所で、供給が制限される。
【００４６】
他の配置において、ペルオキシダーゼ酵素および基質は、両方とも第２水和ゲル中に存在する。この場合、（オキシドリダクターゼ酵素を含む）第１水和ゲルは、望ましくは、層化配置中の第２ゲルの上、および／または下に局在する。
【００４７】
また他の選択肢は、（使用に際して皮膚と接着する）底での、第２水和ゲル層を覆う、第１水和ゲルのさらなる層を覆う、基質の層を覆う、第１水和ゲルの（皮膚から離れた）上層という、４つの層化構造を持つものである。
【００４８】
過剰な基質を提供することによって、したがって、被覆材が、長期間、典型的には少なくとも２日間に渡り、抗細菌種を産出するために、使用に際して機能可能であり、そこで、基質を含む水和ゲルまたはゲル類は、たとえば、本来供給されたヒドロゲルを通して、またはヒドロゲルからの拡散を妨害するために、結合している多量な水素によって、酵素への基質の流れを遅らせるように処方される。
【００４９】
本系の抗細菌効率はさらに、触媒効果あり、またはなしで、過酸化水素の活性によって、（たとえば国際特許第ＷＯ０１／２８６００号にて議論されたような、公知の強力な抗細菌剤である）元素ヨウ素に酸化されうる、ヨウ化物イオンの含有によって増強されうる。したがって、被覆材は、望ましくは、ヨウ化物イオン、たとえばヨウ化カリウムまたはヨウ化ナトリウムの供給が含まれる。ヨウ素はまた、傷中の宿主細胞（たとえば、上皮細胞、ケラチン生成細胞、白血球）に対して、比較的毒性であるので、処方が、皮膚との接触で使用される間中、高濃度で一定に、ヨウ素を産出することは都合が良くない可能性がある。したがって、好ましい実施様態において、ヨウ化物イオン、たとえばヨウ化物塩の供給は、比較的急速放出形態、基質ゲルで、または追加膜またはガーゼまたは他の好適な層でのいずれかで実施される。この方法にて、活性の第１相で産出される過酸化水素は、本質的に、ヨウ化物産出反応で消費され、皮膚（たとえば傷）がヨウ化物のサージへの暴露され、その期間は、ヨウ化物供給の量、放出速度および位置によって制御可能である。そのようなヨウ化物サージは、細菌負荷の傷を素早く除去するのに非常に有用であり得、その比較的短い期間により、増殖細胞へのダメージおよびその回復活性を最小化することによって治癒が可能になる。いったんヨウ化物が消費されたならば、系は、続く活性相にて、自動的に過酸化水素および関連活性酸素種（ＲＯＳ）の産出へ元に戻り、これらが、無菌を維持し、皮膚の近く、たとえば傷表面の侵入細菌を殺傷する。しかしながら、他の実施様態において、ヨウ化物イオンの供給源に関して、使用に際し、過酸化水素に加えて（および比例して）、傷内への放出に関して、ヨウ素（および／または低ヨード酸）の維持された流体を提供するようなものが望ましい可能性がある。ヨウ化物の供給は、あるいは、たとえば、水和ゲル中で、以上で議論したように、オキシドリダクターゼ酵素に関する基質の供給源とともに局在してよい。ヨウ化物は、水和ゲル構造内へ溶解した物、ゆっくりと溶解する固体として存在する、またはゆっくりした放出のために、他の構造内にカプセル封入されたものを含む種々の形態で存在しうる。ヨウ化物塩は、たとえば約２重量％までの量で存在しうる。しかしながら、ヨウ化物がない場合でも、以上で議論したように、抗細菌活性中間体がまだ形成される。
【００５０】
酵素または酵素類が、１以上の水和ゲル中で存在しない実施様態において、酵素または酵素類は、都合良くは、不活性担体または基質に不可逆的に結合する。支持体は好適には、たとえば、木綿または他の適切なセルロースの形態などのような、織った物質のガーゼを含む。支持体は、公知の様式で、安定なイミン結合を形成するために、タンパク質（酵素）と反応可能であるように、活性化しえ、前記酵素は、支持体に保持される。接着した酵素は任意に、酵素活性を維持することを助けるために、保護剤、たとえば５％での、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、たとえば１０％でのスクロース、たとえば２％でのゼラチンおよび／またはグルコースで、たとえばコートしてよい。被覆材は、酵素または酵素類が、水和状態にて被覆材が存在するように、設計する。
【００５１】
ポリＡＭＰＳのような共有架橋ゲルは、過酸化水素およびヨウ素を透過可能な一方で、酵素分子を除外するために簡単に作製可能である。この性質のゲル中で、酵素または酵素類は、水性溶液として、基質を含むヒドロゲルの最表面上へ投与すること、および液体をゲル中にしみこませることによって、組み込ませることが可能である。水がゲルを透過するけれども、酵素運分子は最表面に残る。酵素溶液がＰＶＡ（たとえば６％ｗ／ｖ）を含む場合、酵素／ＰＶＡ混合液が、水がゲル中に引かれるので、薄い水和膜を形成する。さらに、ＰＶＡマトリックスが、結合する酵素を安定化させる。
【００５２】
本発明にしたがった被覆材が、傷部位への大気からの酸素の十分なトランスポーターとして働くことが発見されてきた。とりわけ、本発明にしたがった被覆材を通してトランスポートされた酸素の率は、オキシドリダクターゼ酵素無しの同様に被覆材のものよりも大きい。この理由、および得られる利点は、以下で議論する。
【００５３】
従来の被覆材を、傷表面に適用した場合、外気からの酸素の供給は一般的に阻害され、傷は、酸素が比較的使用できない状態にある（低酸素または無酸素）。治癒に関与する細胞（ケラチン生成細胞および上皮細胞）および感染と戦い処理を制御する白血球すべてが、成長する場合に、酸素を必要とするので、低酸素または悪くは無酸素は、しばしば、傷治癒に関して非常に悪いと知られている、しばしば遭遇する条件である。ファゴサイトーシス白血球は、その「呼吸器バースト（ｒｅｐｉｒｔｏｒｙ  ｂｕｒｓｔ）」生化学反応を操作する場合に、多量の酸素を必要とする。コラーゲンが、ダメージを受けた組織を再構築するため、および新規の血管を作製するため（血管新生）に重要であり、キャピラリー壁を構築することにおいて、コラーゲン繊維が必要である。コラーゲン合成は、ヒドロキシラーゼ酵素が、リシンおよびプロリンをヒドロキシル化可能であり、その両方が、コラーゲンの重要な構築ブロックである、ヒドロキシ−リシンおよびヒドロキシ−プロリンを与える場合にのみ実施されうる。ヒドロキシラーゼ酵素は、その十分な機能を発するために、多量の酸素供給を必要とする。これらの理由のために、十分治癒する場合に、よく酸素化されるべきであり、酸素供給が、傷治癒における速度制限因子であり得ることが、しばしば主張される。治癒の失敗はしばしば、十分な酸素の欠如によって引き起こされる。さらに、傷中の高酸素圧力が、リン酸から乳酸への変化産出にも関与する、病原性嫌気性細菌の増殖を阻害する。
【００５４】
これらの理由のために、３Ｍヘルスケア社（３Ｍ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｔｄ）からのＴｅｇａｄｅｒｍ、またはスミス＆ネフュー（Ｓｍｉｔｈ  ＆  Ｎｅｐｈｅｗ）からのＯｐＳｉｔｅ（ＴｅｇａｄｅｒｍおよびＯｐＳｉｔｅは商標名である）のような、ある第２被覆材を、一端を接着層によってコートした、薄ポリウレタンフィルムより作製する。これらは、その特定の分子構造および薄クロス切片のために、酸素（および水蒸気）を比較的透過する物として市販されている。これは、純粋に受動効果であり、酸素透過の効率は、フィルムの厚さに逆相関する。
【００５５】
主要な部分が水で構成され、酸素が水に非常に溶けないので、ヒドロゲルは、酸素に対して非常に透過性ではない。酸素へのその透過性はまた、被覆材の厚さに逆相関しうる。本発明の出現まで、傷中の酸素のレベルを増加する唯一の方法が、血液量を増加させることによって（たとえば患者に酸素が豊富な空気を呼吸させること、または加圧チャンバー内で入手可能なように、高圧の酸素環境中に患者を配置することのいずれかによって）、または傷それ自身に、気体酸素を適用することによってのいずれかで、患者に酸素を投与することであった。
【００５６】
以上で言及したように、本発明にしたがった被覆材は、特に、外温と関連して、外部表面上で、オキシドリダクターゼ酵素、たとえばグルコースオキシダーゼの層を含む場合に、傷外部の大気から、傷ベッドへ酸素を伝達する効率能力を持つ。大気からの酸素は、（オキシドリダクターゼ酵素によって触媒された）過酸化水素に変換される。過酸化水素は、分子酸素よりも、非常に水溶性であり、（典型的に１以上の水和ヒドロゲルを介した）被覆材を介したそのような過酸化水素伝達が、分子酸素のそれよりも、非常に効率的で迅速である。過酸化水素はしたがって、被覆材を介して迅速に分散する。過酸化水素が（傷中に自発的に存在する、または被覆材の成分として含まれうる）カタラーゼに遭遇したときに、酸素と水になる。この経路で、酸素は、過酸化水素の形態で、被覆材を通して伝達され、分子酸素の伝達よりも非常に効率的である。実験により、酸素の伝達速度が、オキシドリダクターゼ酵素を含まない同様の被覆材と比較して、本発明にしたがった被覆材にて、二倍以上であり得ることが示されてきた。得られた増強された酸素レベルが、以上で記述したように、治癒工程を増強する。
【００５７】
被覆材は、都合良く、（公知の様式にて）被覆材をヒトまたは動物対照の皮膚に接着させるための、カバーまたは外部層を含むか、または一緒に使用する。少なくともカバーの
一部が、外部気体から、酸素を、カバーを通して通過させ、使用中被覆材の体内へ入るように、酸素透過物質であるべきであり、オキシドリダクターゼ触媒反応の共基質として要求される。酸素透過物質は、他の比較的酸素不透過カバー内へ設定された「窓（ｗｉｎｄｏｗ）」の、たとえばあるいはより強固な物質の形態であり得る。
【００５８】
任意に、カバーには、その中、またはそれを介して、指示法、たとえば、被覆剤化学反応が活性な場合に（たとえば色が変化することによって）指示する、指示シートまたは同様の構造が見られる、窓（またはさらなる窓）を含む。さらなる指示が任意に供給され、被覆材化学反応が終了したときに（たとえば、色が変化することによって）指示する。
【００５９】
さらに有用な選択肢は、カバーの内部表面上に固定化カタラーゼ酵素を供給することである（たとえばその接着性を補償する）。これは、傷領域から逃げうる、過剰な過酸化水素を破壊するために、迅速に機能する。この特性は、正常のダメージを受けていない皮膚の領域中の、過酸化水素の潜在的なダメージの蓄積を防止しうる。
【００６０】
被覆材は、組み立ておよび、提供される説明書に関連して、エンドユーザーによって使用されるために、異なる要素を別々にパッケージした、多重部分系として提供しうる。とりわけ、基質、たとえばグルコースの供給源を含む実施様態において、未熟な酸化反応を防止するために、他の構成要素、とりわけオキシドリダクターゼ酵素から分離したパッケージにて供給しうる。あるいは、被覆材は折り畳み可能であり得る。この種類の典型的な実施様態には、それぞれのヒンジ部分によって結合した近接スラブを持つ、結合スラブまたは第１水和ゲルのスラブ、第２水和ゲルのスラブおよび基質のスラブを含むパネルの直線配置が含まれる。疎水性バリア物質、たとえばロウが、致死的な拡散を防止するために、ヒンジ部分内へ、望ましくは埋め込まれる。良い結果が、連続して、基質スラブ、（ペルオキシダーゼ酵素を含む）第２水和ヒドロゲルのスラブ、および（オキシドリダクターゼ酵素を含む）第１水和ヒドロゲルを含み、それぞれ折り畳み可能ヒンジ部分によって結合した隣接スラブを持つ実施様態で得られた。使用のためにそのような被覆材を調製するために、２つの外部スラブを折り畳み、第２ゲルのスラブを上に重ねるように、基質のスラブを運び、基質のスラブを重ねるように、第１ゲルのスラブを運ぶ、したがって、以上で記述したような、層化配置を形成する。得られた層化配置を、第２ゲルのスラブを皮膚に接触させて、皮膚上、たとえば傷上に置き、たとえば接着カバーの使用によって、その場所に維持させうる。
【００６１】
被覆材の１以上の構成要素は、酸素、水および過酸化水素に対して透過性であるが、物質の望まない動きを予防する、バリア物質のサシェまたはバッグのような、封入物を含む。そのような封入物は、とりわけ、傷部位から被覆材内へ組み込まれる、カタラーゼ、鉄イオンなどのような可能性のある干渉基質を防止する効果を持つ。前記封入物はまた、傷内への酵素（類）の望まない移動を予防しうる。好適なバリア物質には、たとえば（３５０Ｄａ以下の分子量の分子のみを透過させる物（５００Ｄａの名目分子量カットオフを持つが、実際は３５０Ｄａ以下の制限がある可能性がある）のような、たとえば、半透過性シートまたは膜、たとえばセルロース酢酸またはセルロースエステルのものが含まれる。好適な膜には、シグマ（Ｓｉｇｍａ）によって供給されるセルロース酢酸膜コードＺ３６８０２４、ＮＢＳバイオロジカルズ社（ＮＢＳ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）によって供給されるＳｐｅｃｔｒｕｍ  ＳｐｅｃｔｒａＰｏｒセルロースエステル膜コード１３１０５４が含まれ、最近とりわけ、たとえば３ＭからのＴｅｇａｄｅｒｍフィルムのような、抗挫瘡被覆材、ポリウレタンが好ましい（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ、ＳｐｅｃｔｒａＰｏｒおよびＴｅｇａｄｅｒｍは、商標名である）。
【００６２】
被覆材の水吸収成分は、とりわけ、作動可能または流動可能形態に処方された場合に、傷または感染部位に簡単に適用可能である。この効果を達成するための多くの可能性のあ
る処方が存在し、単純な実験によって簡単に決定可能である。そのような処方は、特定の容易さ、及び便利さを持って、約３ｍｍ直径のノズルで、圧縮可能チューブまたは（ピストン付き）シリンジ用チューブから適用可能である。望むゲルの混合物は、単一活性で、特定の位置上で放出されうるように、使用における特定の処方によって要求されるように、２つまたはそれ以上のチューブの簡単な組み立てにて、要素を提供することがとりわけ有用であり得る。そのような多重チューブ構成はよく公知であり、しばしば他の適用で、本工業分野で使用される。この構成は、完全にそして都合良く、使用の時点まで、互いにゲルを分離したままである必要性を充たす。また、１以上の要素を、ゲルが泡、スプレーまたはエアゾルとして適用されるように、加圧容器から適用可能であることも明らかになった。本明細書で与えられるガイドライン内で、伝達の本様式に必要な特定の物理特性（粘着性など）を与える処方は、簡単な実験で簡単に決定可能である。チューブまたは加圧伝達ゲルからの、動作可能なプラスチックゲルを、構造化されたスラブと組み合わせて使用して、基本的な成分の適切な組み立てを与えうる。
【００６３】
剪断間伐ゲルを含む層化構造の被覆材は、たとえばエンドユーザーによって、１つのゲルを、ゲルの望む層化組み立てを産出するために適切な順番で、他の上部へ注ぐか、または滴下することによって、簡単に産出されうる。したがって、異なる被覆材成分ゲルを、別々の容器、たとえばチューブまたはボトル、またはあるいは、多重コンパートメントジャーなど中に供給しうる。異なるゲルを、同定が簡単なように、適切な着色ラテックスで着色コード化しうる。ゲルを、ユーザーの皮膚に直接適用しうる。カバーまたは外層が、このような実施様態で必要ではない可能性がある。
【００６４】
本発明にしたがった被覆材（またはその成分）は、無菌、密封、水不透過性パッケージ、たとえばラミネートアルミニウムホイールピーチ中に適切に適用される。
【００６５】
本発明にしたがった被覆材は、皮膚の領域、たとえば異なるサイズおよび形の傷を処置するために、異なるサイズおよび形の幅で製造可能である。特定に被覆材に関する、適切な量の酵素、および基質、もし存在するならばヨウ化物は、実験によって簡単に決定可能である。
【００６６】
本発明は、以下の実施例中の例図によって、および付随する図面を参照に、さらに記述される。
【００６７】
実施例の詳細な説明
図を参照に、図１〜４は、本発明にしたがった傷被覆材の種々の異なる実施様態を略図的に示している。これらの図の全てにおいて、交差平行線要素は、半透過性膜、たとえばセルロース酢酸の小袋、またはグルコールおよびヨウ化カリウムの水溶液を含むゲルスラブを示し、上左から下右にのびる太い平行線での要素は、ゲル中にトラップされた、グルコースオキシダーゼを含む水和ヒドロゲルスラブを示し、上右から下左にのびる太い平行線での要素は、ゲル中にトラップされたラクトペルオキシダーゼを含む水和ヒドロゲルスラブを示している。
【００６８】
黒丸は、閉じこめられたグルコースオキシダーゼを含む、アルギン酸ゲル（典型的には約２ｍｍの直径）のヘッドレットを示している。あるいは、他のゲル（たとえばアガロース）またはポリマーを使用して、ヘッドレットを形成可能である。グルコースは、これらのヘッドレット内に拡散可能であり、過酸化水素は拡散出可能である。
【００６９】
白丸は、閉じこめられたラクトペルオキシダーゼを含む、アルギン酸ゲル（典型的には約２ｍｍの直径）のヘッドレットを示している。あるいは、他のゲル（たとえばアガロース）またはポリマーを使用して、ヘッドレットを形成可能である。過酸化水素は、これら
のヘッドレット内に拡散可能であり、活性酸素種は拡散出可能である。
【００７０】
影円は、閉じこめられたグルコースおよびヨウ化カリウムを含む、アルギン酸ゲル（典型的には約２ｍｍの直径）のヘッドレットを示している。あるいは、他のゲル（たとえばアガロース）またはポリマーを使用して、ヘッドレットを形成可能である。グルコースは、これらのヘッドレットの拡散出可能である。
【００７１】
図１は、本発明に関連した傷被覆材の１つの好ましい実施様態を例示している。被覆材は、層化構造のものであり、傷１４を覆うように、対象の皮膚１２への接触に好適な、酸素透過性自己接着プラスターの形態での、外部層またはカバー１０を含む。カバー１０は、固定化グルコースオキシダーゼを含む、第１湿潤パッド１６を含む上部層、半透過性小袋またはゲルスラブ１８中の、グルコースおよびヨウ化カリウムの溶液を含む中間層、および固定化ラクトペルオキシダーゼを含む、第２湿潤パッド２０を含む下層を封入している。下パッド２０は、傷１４との接触のための、ガーゼのシート２２である。パッドおよび小袋は、一般的に以下で記述するようなものであり得る。
【００７２】
被覆材はまず、個々の要素が、それぞれ密封された無菌パッケージとして別々にまとめられた多重部位系として適用される。使用に際して必要な場合に、被覆材成分は、パッケージから取りだし、適切な様式および順番で傷に適用し、示すように最終被覆材を産出する。
【００７３】
図２は、一般的に図１と同様に、同様の参照番号によって同様の要素が同定される、傷被覆材の他の好ましい実施様態を例示している。この実施様態においては、上層に、閉じこめられたグルコースオキシダーゼを含む、アルギン酸カルシウムビーズを持つ、第１湿潤パッド２４が含まれる。中間層は、グルコースとヨウ化カリウムを含むゲルビーズを持つ、パッド２６を含み、下層は、閉じこめられたラクトペルオキシダーゼを含むアルギン酸カルシウムビーズを持つ、第２湿潤パッド２８を含む。
【００７４】
図３は、さらに一般的には同様の実施例を例示しているが、ただし、グルコースおよびヨウ化カリウムを含むゲルビーズを含むパッド３０の形態での上層、および閉じこめられたグルコースオキシダーゼを含むアルギン酸カルシウムビーズおよびラクトペルオキシダーゼを含むアルギン酸カルシウムビーズを持つ、湿潤パッド（またはゲルスラブ）３２を含む下層が含まれる。
【００７５】
図４は、上層が、グルコースおよびヨウ化カリウムを含む、半透過性小袋またはゲルスラブ３４を含む、図３の変化体である。
【実施例】
【００７６】
グルコースオキシダーゼおよびラクトペルオキシダーゼベッドレットの構築
（シグマ（Ｓｉｇｍａ）、カタログ番号Ｌ２００５からの）ラクトペルオキシダーゼ（ＬＰＯ）または（べーリンガーマンハイム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ）、カタログ番号１０５１４７からの）グルコースオキシダーゼ（ＧＯＸ）いずれかの率を、１マイクログラム／ｍｌ（ＬＰＯ）または１０マイクログラム／ｍｌ（ＧＯＸ）の速度で、純粋な水中に溶解させる。アルギン酸（ＣＰケルコ（Ｃ  Ｐ  Ｋｅｌｃｏ））からのＭａｎｕｃｏｌ  ＤＭ（Ｍａｎｕｃｏｌ  ＤＭは商標名である）（１グラム／１００ｍｌ水）を、高温で調製し、冷却する。酵素溶液を、適切な温度で冷却アルギン酸と混合する。ついで、得られたアルギン酸／酵素溶液を、煽動ポンプを介して、塩化カルシウム溶液（１０％ｗ／ｖ）の凝固浴上に配置した、標準の実験室ガラスパスツールピペットによって都合良く形成された出口ノズルへとつながるチューブ内へポンプした。ポンプの流れと出口ノズルの高さを、アルギン酸／酵素溶液の流出気体が、塩化カリウム溶液に侵入した
ときに、分離小滴を形成するように調節する。各小滴は、迅速に、カルシウムがアルギン酸分子と架橋を始める際に固体化をはじめ、最後の小滴の伝達の１０分後に、凝固工程を完了する。全ての新規に形成されたベッドレットを、全てを、好適なメッシュサイズのシーブを介して注ぐことによって、塩化カリウム溶液から除去した。残余塩化カルシウムを、純水でリンスすることによって除去した。ベッドレットを、水中または水密容器内、またはリン酸緩衝化食塩水のような生理学的緩衝溶液中に保存する。あるいは、グリセロールまたは水中グリセロール溶液中に置き、含まれる水成分を減少させることが可能である。どのような保存状態を使用しても、または水またはグリセロールのない状態で乾燥させるか、硬化しないようにしなければならない。
グルコースベッドレットの構築
酵素を加えず、グルコースを、純水および塩化カルシウム凝固浴両方にて、１００ｍｌあたり１２．５ｇの率でグルコースを含めることを除いて、以上で記述した方法にしたがう。ゲルヘッドレットを、カルシウムを含まないグルコース溶液で洗浄して、グルコースを枯渇せずに過剰なカルシウムの除去を許容する。
酵素ベッドレット含有パッドの調製
適切な大きさの木綿リントを、それを介して水が流れることが可能な好適な表面（たとえばフラットプラスチックメッシュ）上に配置する。酵素ベッドレットの懸濁液を、水流を停止したときに、ベッドレットが、線維の上昇ナップ中に閉じこめられるようになる方法にて、前記木綿リント上に注ぐ。ついでリントの第２部分を第１リント上に置き、酵素デッドレットを、２つの線維層間でサンドイッチする。接着またはステッチングまたはステープリングを使用して、上層から下層を確立する。過剰な流体を乾燥させるが、ただしパッドは乾燥しないようにする。
【００７７】
パッドあたりに含まれるベッドレットの数は、各オキシダーゼパッドが、約１００ｍｇのＧＯＸを持つべきであり、各ペルオキシダーゼパッドが、約１０ｍｇのＬＰＯを持つべきであるという基準において決定されるべきである。
グルコースベッドレットおよびヨウ化物を含むパッドの調製
工程の最後にパッドを、ヨウ化カリウム（１０ｍＭ）の溶液中に浸たすさらなる段階を含めることを除いて、以上で記述した方法を、グルコース含有ベッドレットと共に使用して、取り込まれたグルコースを含むパッドを調製する。
グルコース／ヨウ化物含有小袋の調製
グルコースを、１００ｍｌあたり１２．５ｇの率で、ヨウ化カリウムの５ｍＭ水溶液中に溶解する。この溶液をついで、約４０×２０ｍｍのアッセンブル領域をもって、（先に１０分間沸騰水中におき、リンスした）透析バッグ中に入れ、密封した。
組み立てた混合物被覆材の酸化活性の立証
１０ｍＭの濃度で、ヨウ化カリウムを加え、１％ｗ／ｖの濃度で可溶性デンプンを含め、アガロースの１％水溶液を調製する。この溶液を溶解し、ペトリディッシュに分配させ、約５ｍｍの厚さの連続層を形成させ、凝固する。いったん凝固したならば、上述したようなペルオキシダーゼパッドを、表面上にのせ、続いて上述したようなグルコースパッドまたは小袋をその上部にのせ、最後に、上述したようなグルコースオキシダーゼパッドをこれら両方の上部にのせ、三層スタックを形成する。デンプンアガー中の青色の発達が、組成物被覆材の酸化活性を示唆する。
傷処置としての、組み立て組成物被覆材の使用
以上で記述したように調製した、本目的のためのパッドまたは小袋を、適切なポーチ中に密封し、ガンマ放射にかけ、本工業分野で公知で、通常使用される技術を用いて、細菌学的繁殖不能を確認する。
【００７８】
最初に、傷を無菌ガーゼの薄いシートで覆う。次に、無菌パッドの三層、まずペルオキシダーゼパッド、続いてグルコースパッドまたは小袋、最後にグルコースオキシダーゼパッドを薄いスタックとして加える。パッドを、開口傷をちょうど覆う大きさで切断する。
最後に、組成物被覆材を、通常「ばんそうこう」または「Ｍｉｃｒｏｐｏｒｅ」外科テープのような、接着フィルムによって、その場所に好ましく維持する。
他の実施形態
酵素を、当業者に公知の結合方法を用いて、種々の型の粒子または繊維上に固定化可能である。粒子は、セルロース、シリカまたは種々の粘着性ポリマーからできうる。アルギン酸は、凝固薬剤としてカルシウムを用いて、スラブまたは延長スレッドのような、ベッドレット以外の形態で使用可能である。ポリアミドで公知の技術によって作製したもののような微小カプセルを、各成分をカプセル封入するために使用可能である。
【００７９】
さらなる被覆組成物を、以下のように調製した。
酵素含有パッドの調製
ルーズに織った木綿ガーゼを、およそ１００ｍｍ×１００ｍｍの多数の小片に切断し、各小片を、それぞれ好適な平底容器内にしく。１％ｗ／ｖアルギン酸（また、たとえばＣＰケルコ（ＣＰ  Ｋｅｌｃｏ）からのＭａｎｕｃｏｌ  ＤＭ（Ｍａｎｕｃｏｌ  ＤＭは商標名）のような、「アルギン酸（ａｌｇｉｎａｔｅ）」と呼ばれる）を、ゲルを適切な、加熱水溶液中に溶解することによって調製する。冷却した後、酵素をアルギン酸に加え、最終濃度５μｇ／ｍｌグルコースオキシダーゼ（ＧＯＸ、べーリンガーマンハイムから、カタログ番号：１０５１４７）、または１０μｇ／ｍｌのラクトペルオキシダーゼ（ＬＰＯ、シグマから、カタログ番号：Ｌ２００５）を得る。１０ｍｏｌの各酵素−アルギン酸溶液を調製し、個々の木綿ガーゼパッドに均等に注ぐ。ゲルを、過剰な１０％ｗ／ｖ塩化カルシウム（ＣａＣｌ2）の添加で凝固させ、１０分間放置する。ついでこのパッドを２回、それぞれ５分間、過剰の蒸留／脱イオン水で洗浄し、ＣａＣｌ2を除去する。ついでこのパッドを、湿気環境中に保存して、乾燥するのを防ぎうる。
グルコース含有パッドの調製
ルーズに織った木綿ガーゼを、およそ１００ｍｍ×１００ｍｍの多数の小片に切断し、各小片を、それぞれ好適な平底容器内にしく。１％ｗ／ｖアガロースおよび４０％ｗ／ｖグルコースを、適切な水溶液中に溶解させ、融解させる一方で、ガーゼ上に注いだ。ゲルを冷却させることによって、固める。ついでゲルパッドを湿った環境中に保存して、乾燥するのを防ぐことが可能である。グルコースおよびヨウ化カリウム（ＫＩ）を含むパッドを産出するために、同様の手順にしたがうが、ただしグルコースおよびアガロースを溶解し、ヨウ化カリウム（ＫＩ）を最終濃度１０ｍＭまで加える。ついで溶液を注ぎ、固めて、上記のように保存する。
組み立て組成物被覆材の抗細菌特性の立証
（実施例１）
標準の実施を使用して、単独炭素供給源として、グルコースをフルクトースと置換し、１．５％アガロース細菌増殖プレートを準備する。プレートは典型的には、５ｍｍの厚さである。シュードモナスアエルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）を、「ローン（ｌａｗｎ）」中、プレートの表面上にまく。およそ２０ｍｍ2の（直前に記述したように調製した）ＬＰＯ−アルギン酸を含むパッドを、このプレートの表面上においた。このパッド上に直接、（直前に記述したように調製した）グルコース−アガーを含む２０ｍｍ2パッド（ＫＩ有無）を配置する。最後に、（直前に記述したように調製した）ＧＯＸ−アルギン酸を含む２０ｍｍ2パッドを、前記グルコース−アガーパッド上にのせた。パッドスタック周辺のクリアランスゾーンが、２４時間後に明らかにみられ、このことは、活性抗細菌特性の産出および分散を示し、適用した細菌の増殖を防止する。３つのうち任意の１つのパッドを除くこと（対照実験）によって、結果として、パッドスタック周辺のクリアゾーンは現れ、このことは、酵素およびグルコース両方が全て、効果的に進むカスケードに関して存在することが必要である。
【００８０】
（実施例２）
あるいは、スタック酵素系を介して、活性酸素種の産出を示すために、１％溶解デンプ
ン（たとえばＡＲＣＯＳ、カタログ番号第１７７１３２５００号）および１０ｍＭのＫＩを含む、１％ｗ／ｖアガープレートを作製する。このプレートを冷却して固める。ＬＰＯ−アルギン酸パッド、つづいてグルコース−アガーパッド、最後にＧＯＸ−アルギン酸パッドを、ついで実施例１にて記述したようにスタック可能である。ついで活性酸素種の産出を、元素ヨウ化物（活性種は、ヨウ化物をヨウ素に酸化する）とデンプンの良く記述された相互作用によって産出される、強い青色色原体によって視覚化可能である。この色は、５分後にはっきりと見られ、長時間強度および範囲が発展する。３０分後、色強度が、深い青色になるまで発達し、これによって連続した産物産出が示唆される。これによって、活性酸素種およびヨウ化物の両方が産出され、その両方が、組成物被覆材の抗細菌活性を補助する。
【００８１】
（実施例３）
実施例２のバリエーションとして、活性酸素種の初期産出を促進するために、ＬＰＯ−アルギン酸パッド中に低レベルのＧＯＸ（０．２５μｇ／ｍｌ）を含めることがある。これは、ゲル中で可能な酸素を利用し、ＬＰＯ−アルギン酸パッド中に拡散するグルコースによって開始される。この反応は、酸素の利用可能性によって制限され、酸素が枯渇したときに停止する。スタックした酵素系を介した、活性酸素種の産出を示すために、１％可溶性デンプン（たとえばＡＲＣＯＳ  カタログ番号第１７７１３２５００号）および１０ｍＭのＫＩを含む、１％ｗ／ｖアガープレートをキャストする。このプレートを冷却することによって固める。ＬＰＯとＧＯＸ−アルギン酸パッドをあわせ、続いて、グルコース−アガーパッド、最後にＧＯＸ−アルギン酸パッドをあわせて、上記のように重ねることが可能である。したがって、良く記述されている、元素ヨウ素（酸素種が、ヨウ化物をヨウ素に酸化する）およびデンプンの相互作用によって産出される、強度の青色色原体によって、活性酸素種の産出の促進を視覚化可能である。この着色は、１分以内にはっきりとみられ、強度と範囲が、長時間発達する。この着色は、上部ＧＯＸ−アルギン酸パッドを使用しない場合に、１５分後に著しくゆっくりになる。ＧＯＸ−アルギン酸パッドを上述のように使用する場合、着色は、上記実施例２で見られたように、強く連続する。３０分後、発達した色強度が、深青となり、連続した産物形成を示唆している。これは、活性酸素種とヨウ素両方が産出され、両方が、組成物被覆材の抗細菌活性を補助することを示している。
【００８２】
さらなる研究を、比較的高濃度キサンタンガムゲルを用いて実施した。
酵素含有キサンタンガム／アルギン酸ゲルの調製
キサンタンガム（Ｋｅｌｔｒｏｌ）の溶液シリーズを、適切な量のＫｅｌｔｒｏｌを、室温（約２０℃）にて、蒸留／脱イオン水中に溶解することによって、異なる濃度（５重量％、１０重量％および２０重量％）で調製した。異なる濃度（２重量％および４重量％）のアルギン酸（ＣＰ  ＫｅｌｃｏからのＭａｎｕｃｏｌ  ＤＭ（Ｍａｎｕｃｏｌ  ＤＭは商標名である））の溶液のシリーズを、適切な高温で、蒸留／脱イオン水内に、適切な量のＭａｎｕｃｏｌ  ＤＭを溶解することによって調製した。得られたアルギン酸溶液を冷却した。
【００８３】
異なる比で２つの物質を含む、キサンタンガム／アルギン酸ゲルのシリーズを、均質な混合液が得られるまで、適切な量で溶液を混合することで調製した。たとえば、ゲルを、必要に応じて、５：１（たとえば、当量の５％と１％溶液、または１０％と２％溶液を混合することによる）、５：２、１０：１のキサンタンガム：アルギン酸の重量比を持つように調製した。
【００８４】
酵素含有ゲルを、ゲル試料に、適切な量のグルコースオキシダーゼ（ＧＯＸ）またはラクトペルオキシダーゼ（ＬＰＯ）を加えることによって調製した。酵素溶液を、混合する前に、キサンタンガムまたはアルギン酸溶液に、または混合した後にキサンタンガム／ア
ルギン酸ゲルに、のいずれかに加えうる。実験は、１マイクログラム／ミリリットルの率で純水中に溶解した、シグマ（Ｓｉｇｍａ）（カタログ番号Ｌ２００５）からのＬＰＯ、および１０マイクログラム／ミリリットルの率で純水に溶解した、べーリンガーマンハイム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ）（カタログ番号第１０５１４７）からのＧＯＸを用いて実施した。
木綿ガーゼによって支持された、架橋キサンタンガム／アルギン酸ゲルの構築
１０％キサンタンガム２％アルギン酸ゲル混合物を、上述したように調製した、当量のストック２０％キサンタンガム溶液、および４％アルギン酸溶液を混合することによって調製した。ＬＰＯおよびＧＯＸを加えて、ＬＰＯ−含有ゲルおよびＧＯＸ−含有ゲルを産出するための、本ゲル混合液の試料を分離した。酵素レベルは、必要な活性レベルにしたがって変化可能である。この場合、使用した酵素レベルは、ＬＰＯに対して１００μｇ／ｍｌ、ＧＯＸに対して５０μｇ／ｍｌであった。
【００８５】
およそ５ｍｌのＬＰＯ−含有ゲルを、およそ４０ｍｍ×５０ｍｍの木綿ガーゼのストリップ上に平らにした。同様の大きさの第２ガーゼ層を、軽い圧力で、ＬＰＯゲルの上部に置き、ゲルの分布を確保した。ついでおよそ５ｍｌのＧＯＸ−含有ゲルを、木綿ガーゼの第２層の上部表面上に施し、さらに、ＧＯＸ−含有の上部に同様の大きさのガーゼ第３層をのせ、また、低圧でＧＯＸ−含有ゲルの分布を確保した。これにより、それぞれ、ＬＰＯ−含有ゲルの層およびＧＯＸ−含有ゲルの層により、分離した３つの木綿ガーゼのシートを含むサンドイッチ構造のパッドまたはスラブができた。
【００８６】
得られたパッドを、１０分間、塩化カルシウム溶液（１０％  ｗ／ｖ）の浴中においた。このパッドを、浴より取り出し、ついで、蒸留／脱イオン水中での１０分間洗浄にて、洗浄して、残余塩化カルシウムを除去した。過剰の水を、吸収組織中で、何回もパッドを乾燥させて、除去した。
架橋キサンタンガム／アルギン酸ゲルパッドの活性の立証
（実施例４）
デンプン／ヨウ化物複合体反応を使用して、先に記述したように調製した、架橋キサンタンガム／アルギン酸ゲルパッドからの活性酸素種（ＲＯＳ）の酵素的産出を視覚化した。ＲＯＳの存在下、ヨウ化物が酸化され、元素ヨウ化物が産出され、これは、デンプンと複合体形成して、きわめて強い青色色原体を産出する。
【００８７】
実験を、１％可溶性デンプン（ＡＲＣＯＳカタログ番号第１７７１３２５００）および１０ｍＭのヨウ化カリウムを含む、１％ｗ／ｖアガープレートを用いて実施した。以上で記述したようなキサンタンガム／アルギン酸パッド（およそ２０ｍｍ×１０ｍｍ×４ｍｍ）のスライスを、ＧＯＸ層を最上にして、デンプン／ヨウ化物プレート上に配置した。この上に、１％アガー中の４０％グルコースを含むゲルのパッドを置き、反応を開始した。約３０分後、下パッドが黄色になり、明らかに、要素ヨウ化物の産出を示した（ヨウ化物は、ゲルへのプレートからの分散によって存在する）。約１時間後、青色着色が、パッドの真下で現れ、これは、デンプン／ヨウ化物プレート内でのＲＯＳの存在を示唆している。開始２４時間で、プレートの大きな領域が、青色になり、これはＲＯＳの連続した産出を示している。
【００８８】
（実施例５）
２つの同様の実験を、グルコースパッドを、架橋キサンタンガム／アルギン酸パッドの下にする以外、実施例４で一般的に上記したような配置を用いて実施した。異なる濃度での、キサンタンガム／アルギン酸ゲルパッドで、２つの実験を実施し、１つの場合は、ＧＯＸ層を最上にし、多の場合は、ＬＰＯを最上にした。
【００８９】
グルコースパッドの次に、ＧＯＸ層を最下に位置させたパッドで、およそ１時間後に、
青色着色がパッド下で見られた。グルコースパッドの次に、ＬＰＯを最下にした、他の実験にて、約２時間後に、青色着色が、パッド下で見られうる。これは、最適ではない配列で、酵素を含むパッドを用いた配置でさえも、ＲＯＳが、指示プレート中での酸化効果を産出するために十分な量で、産出されうることを示している。
【００９０】
両方の実験で、黄色着色が、両方のゲル、ＬＰＯ層で見られた。２４時間後、両方の場合で、多くのデンプン／ヨウ化物が青くなり、これは再びＲＯＳの産出を示している。
キサンタンガムゲルの、湿気吸収性の立証
水中、Ｋｅｌｔｒｏｌの１０重量％調製物を、以上で記述したように調製した。１．０６ｇの１０％ゲルを、１０．２２ｇの蒸留／脱イオン水に加え、２１℃に保ち、密封して、蒸発の影響を最小にした。水をデカントし、重量を測定して、吸収度合いを査定した。
【００９１】
１５分後、８．３４ｇの水が残っており、４５分後、７．５６ｇが残っており、２時間後には６．５１ｇが残っており、１８時間後には２．１ｇが残っている。
【００９２】
この実験により、１０％Ｋｅｌｔｒｏｌゲルは、少なくともその水中重量の８倍吸収可能であることを示している。
架橋キサンタンガム／アルギン酸混合物の水分吸収の立証
５重量％のＫｅｌｔｒｏｌゲルおよび１重量％のアルギン酸を、上記したように調製した。ゲルの２つの層を、木綿ガーゼの２つの層間にキャストして、上述したように、１０％塩化カルシウム溶液を用いて架橋し、水中で１０分間２回洗浄して、パッドを産出した。このパッドを、吸収性組織紙を用いてふきとり、乾燥させた。
【００９３】
パッド１０ｍｍ×１０ｍｍ×３ｍｍの部分を定量して、初期重量（０．２８ｇ）を確定した。１ｍｌの水をこのパッドに加えた。種々の時間後にこのパッドを取り出し、定量して、（水の吸収による）重量の減少を査定した。１時間後、パッドの質量は０．３７ｇであり、２時間後は０．４４ｇであり、３時間後は、０．４９ｇであり、６時間後は０．５ｇであった。
【００９４】
この実験により、架橋キサンタンガム／アルギン酸ゲルは、まだ水を吸収可能であることが示唆された。１０％Ｋｅｌｔｒｏｌを使用した上記の実施例と比較して、より低い濃度のＫｅｌｔｒｏｌおよび架橋アルギン酸の使用により、水の吸収が少なくなる。
【００９５】
以上で記述したように調製した、架橋キサンタンガム／アルギン酸ゲルを、図１で略図的に示したように、本発明にしたがったように調製した。このようなゲルを、以上で記述したように調製した、デンプンを含むグルコース／ヨウ化物ととも使用可能である。とりわけ、グルコースは、１２．５ｇ／１００ｍｌの率で、ヨウ化物カリウムの５ｍＭ水溶液中に溶解した。ついでこの溶液を、約４０×１２０ｍＭの利用しやすい領域を持つ、（先に１０分間熱湯中に置き、リンスしておいた）透析袋中にいれた。
【００９６】
成分を組み合わせて、図１にて示したような構造の被覆材を形成した。この被覆材は層化したものであり、酸素透過自己接着プラスターの形態での、傷を覆うために、対象の皮膚１２への接着に好適な、外層またはカバー１０が含まれる。カバー１０は、上述したような、グルコースオキシダーゼ含有架橋キサンタンガム／アルギン酸ゲルを含む、上層、上述したように調製した、半透過性小袋１８中の、グルコースおよびヨウ化カリウムの溶液を含む中間層、および、上述したように調製した、ラクトペルオキシダーゼ含有架橋キサンタンガム／アルギン酸ゲルのスラブを含む下層を含む。パッド２０の下は、傷１４と接触するための、ガーゼのシート２２である。
【００９７】
被覆材は、当初は、個々の成分が、それぞれ密封された、滅菌パッケージ中にパッケー
ジされた、多重部分系として供給される。使用のために必要な場合に、被覆材成分をパッケージから取り出し、示したような最終被覆材をつくるために、適切な様式で、傷に適用する。
【００９８】
図５は、本発明にしたがった、被覆材のさらなる実施様態を、略図的に図示している。この被覆材の形態が、現在好ましい。被覆材は、正方形の形態で、１００ｍｍ×１００ｍｍの主要寸法である。
【００９９】
図示した被覆材は、（ファースト  ウォーター社（Ｆｉｒｓｔ  Ｗａｔｅｒ  Ｌｔｄ．）によって供給された、国際特許第ＷＯ０１／９６４２２号にて記述されたような）ポリＡＭＰＳからなる、軟、水和ヒドロゲルスラブ５０を含む。ヒドロゲルは、２３％までの（オキシドリダクターゼ酵素のための基質として働く）グルコース、および（ヨウ化物への前駆体である）たとえば、１．６％ｗ／ｖヨウ化カリウムのようなヨウ化塩を含む。ヒドロゲルはまた、（保湿剤および湿潤剤として働く）２０％ｗ／ｖまでのグリセロールを含んでよい。ヒドロゲルスラブ５０は、被覆材の下層を形成する。
【０１００】
被覆材はまた、不可逆的に（共有的に）グルコースオキシダーゼおよびラクトペルオキシダーゼに結合する、セルロース織りガーゼ５２によって構築される上層を含む。ガーゼ５２は、以下のように調製される。
【０１０１】
ガーゼを、好適な大きさおよび形（１００ｍｍ×１００ｍｍ平方）に切断し、水で洗浄して、任意の溶媒または粒子を除去する。過剰な液体を除去する。ついでガーゼを、１０ｍＭ  メタ−過ヨウ素酸ナトリウムの溶液中に、６０分間、２５℃で浸した。この酸化段階の後、活性アルデヒド基が形成され、ガーゼを水中で十分洗浄して、過ヨウ素酸を除去する。洗浄段階の後、ガーゼを、ｐＨ９．０にて、５０ｍＭ炭酸水素ナトリウムｍｌあたり１００μｇ粉末にて、グルコースオキシダーゼ（バイオカタリスト（Ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｔｓ）−コードＧ６３８Ｐ）の溶液中に浸した。これは、７０００Ｕ／ｍｌに相当する。ラクトペルオキシダーゼ（ＤＭＶインターナショナル（ＤＭＶ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ））もまた、ｐＨ９．０にて、炭酸水素ナトリウム５０ｍＭあたり、１００μｌにて組み込む。これらの用量は、これらが過剰な活性量を示すので、減少可能である。ガーゼを、約２０℃にて、４時間、酵素溶液と反応させたままにし、その後、ガーゼを取り除いて、低イオン強度溶液（脱イオン水）と、高イオン強度緩衝液（５０ｍＭ  ＮａＨ２ＣＯ３、ｐＨ９．０＋１Ｍ  ＮａＣｌ）間で頻繁に洗浄して、ゆるく結合した酵素を除去する。ついでガーゼを、保存剤、たとえば５％ＰＶＡ、１０％スクロースまたは２％ゼラチン中でコートし、室温（およそ２１℃）または好ましくは４０℃のいずれかで乾燥させた。
【０１０２】
下層および上層を、窒素大気中互いに組み立て（未熟な反応を防止し）、たとえば、シグマ（Ｓｉｇｍａ）（コードＺ１８３４０７）によって供給されるような、ラミネートしたアルミニウムホイールポーチでできた、酸素−不透過性ポーチまたは封入中で密封することで、互いにパッケージする。ゲル中のグルコースの、固定グルコースオキシダーゼとの相互作用は、グルコースが、固定化酵素層内へ分散可能である速度によって制限される。この遅延が、２つの層が、酸素の存在下で一緒に組み立てられることを可能にするのに十分であり、ついで十分な反応を実施可能な前に、酸素のないパッケージ中におく。一旦酸素を組み立てた産物から除去したならば、反応がいずれにしても停止し、酸素の供給が再開されたときにのみ、反応が再開する（たとえば、産物が、傷上での使用のために、パッケージングから除去される時）。このパッケージング内の酸素削除は、グルコースを、未熟なペルオキシド産出中に使用されることから守る。当初、乾燥形態で、組み立てのガーゼ上である、酵素は、ヒドロゲルスラブ５２からの水と水和し始め、使用前に、ポーチまたは封入中に密封される一方で、ヒドロゲルスラブ５２からの水による水和状態中で保
持される。
【０１０３】
使用において、被覆材をポーチまたは封入から取り出し、皮膚との接触で、下層水和層５０で、５４にて例示的に示した、傷部位上で、患者の皮膚におく。（被覆材の部分を形成するか、またはしない）酸素透過および湿気透過カバーまたはオーバーレイヤー５６を、上層５２上に配置し、オーバーレイヤー５６の下表面上で提供される、好適な接着方法によって、傷部位周辺の皮膚へ接着させる。この方法で、被覆材を、皮膚の部分に残し、傷部位を覆う。
【０１０４】
（水和状態での）上層中のグルコースオキシダーゼは、周辺物から、オーバーレイヤー５６を介して通過する酸素との、下層中のグルコースの反応を触媒し、以上で議論したように、過酸化水素を産出する。過酸化水素それ自身は、以上で議論したように、有用な抗細菌効果をもつ。過酸化水素はまた、ラクトペルオキシダーゼによって触媒される、さらなる反応を受け、以上で議論したように、抗細菌特性を持つ種々の種を産出する。加えて、下層中のヨウ化塩が反応して、以上で議論したように、さらに強力な抗細菌剤である、ヨウ素ヨウ化物、およびあるいは次亜ヨウ素酸を産出する。したがって、被覆材は、傷治癒を促進するのに非常に効果的であり得る、抗細菌剤のｉｎ−ｓｉｔｕ産出に関する多数の非常の効果的な機構を持つ。
【０１０５】
さらに、下層のヒドロゲルは、高い液体吸湿性であり、傷からの多量の滲出液の取り込みを可能にする。したがって、潜在的に有害な細菌などを含む、傷から滲出した液体を、被覆材に吸着させ、そこで発生する抗細菌種によって殺すことが可能である。したがって、被覆材は、自己滅菌可能である。ヒドロゲルはまた、傷が必要である、液体を提供可能であり、治癒部位で、いつの時点でも治癒工程を助ける、湿気を保持することが可能である。
【０１０６】
上記図５実施様態の改変では、ラクトペルオキシダーゼが存在しない。この場合、グルコースオキシダーゼによって触媒される反応によって産出される過酸化水素は、ラクトペルオキシダーゼ−触媒反応を受けないが、それにもかかわらず、有用な量の過酸化水素が、突発的に、ヨウ化物イオンとの非触媒反応を受け、分子ヨウ化物を産出し、いずれにしろ、価値ある抗細菌効果がまだ得られる。
【０１０７】
図６は、本発明にしたがった、被覆材のさらに他の実施様態を略図的に示している。この被覆材の形態が現在好ましい。被覆材は、正方形の形態で、１００ｍｍ×１００ｍｍの主要寸法を持つ。
【０１０８】
図示した抗細菌および抗真菌傷被覆材は、被覆材の下層として、グルコース−含有ヒドロゲルスラブ６０を含む。スラブ６０の上表面上への配置は、グルコースオキシダーゼを含む、ＰＶＡ（ポリビニルアルコール）のフィルム６２である。
【０１０９】
ヒドロゲル下層６０を、以下の試薬、２０重量％ナトリウムＡＭＰＳ（２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸、ナトリウム塩（Ｌｕｂｒｉｚｏｌ、コード２４０５））、２０重量％グルコース（フィッシャー（Ｆｉｓｈｅｒ）、解析グレード）、１０重量％グリセロール（フィッシャー、解析グレード）、５０重量％脱イオン水、０．１重量％ポリエチレングルコール４００ジアクリレート（ＵＣＢケミカルズ（ＵＣＢ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ））、および０．０１重量％光開始剤（１−ヒドロキシシクロヘキシルフェニルケトン（アルドリッチ（Ａｌｄｒｉｃｈ））、を含むように処方した。混合液を、キャスティングトレイ中に施し、２〜３ｍｍの深さにした。ついでヒドロゲルを、ＵＶランプ下で、６０秒間まで、およそ１００ｍＶ／ｃｍ2の範囲の出力で、放射することによって固めた。ついでヒドロゲルを３０℃以下に冷却した。
【０１１０】
酵素含有ＰＶＡフィルム６２を、混合液を熱することによって、高分子量ＰＶＡ（１２４，０００〜１８６，０００ｍｗ、アルドリッチ（Ａｌｄｒｉｃｈ））を水中に溶解することで調製した。ＰＶＡを、６％ｗ／ｖの最終濃度まで組み込んだ。いったん溶解したならば、酵素（グルコースオキシダーゼ（ＧＯＸ、バイオカラリスツ（Ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｔｓ）Ｇ６３８Ｐ））を、１００ｕｇ／μｌ（用量あたりの凍結乾燥粉末重量）の濃度まで、加える前に、溶液を、３０℃以下まで冷却した。ついで、５０〜１００μｌのＰＶＡ／ＧＯＸ混合液を、冷却ヒドロゲルの２０ｍｍ2表面に加え、固めた。およそ３０分後、薄膜が形成された。酵素活性化を防ぐために、グルコースヒドロゲルへのＰＶＡ／ＧＯＸ溶液の添加を、酸素がない大気（たとえば窒素下）で実施しうる。フィルム６２が、ヒドロゲル６０に接触するときに、フィルムからのほとんどの水が、ヒドロゲルより抜け、ＰＶＡが、水和状態での酵素を含む、湿った膜として残る。水和され、柔軟なまま残るのに十分な水が、ＰＶＡに対するフィルム中に残る。
【０１１１】
得られた被覆材を、たとえばシグマ（コードＺ１８３４０７）によって供給されるような、ラミネートされたアルミニウムホイールポーチのような、酸素不透過性ポーチまたは封入中にパッケージする。固定化グルコースオキシダーゼとの、ゲル中のグルコースの相互作用は、グルコースが、固定化−酵素層内へ分散可能な速度によって制限される。この遅延は、２つの層が、酸素の存在下で、一緒に組み立てられ、ついで、任意の続く反応が起こりうる前に、酸素のないパッケージ内に入れることを可能にするのに十分である。一旦酸素が組み立て産物より除外されたならば、反応がいずれにしても停止し、酸素の供給が再開されたときにのみ、反応が再開する（たとえば、産物が、傷上での使用のために、パッケージングから除去される時）。このパッケージング内の酸素削除は、グルコースを、未熟なペルオキシド産出中に使用されることから守る。酵素は、使用前に、ポーチまたは封入中に密封される一方で、水和状態中で保持される。
【０１１２】
使用において、被覆材をポーチまたは封入から取り出し、皮膚との接触で、下層水和層６０で、６４にて例示的に示した、傷部位上で、患者の皮膚におく。（被覆材の部分を形成するか、またはしない）酸素透過および湿気透過カバーまたはオーバーレイヤー６６を、上層６２上に配置し、オーバーレイヤー６６の下表面上で提供される、好適な接着方法によって、傷部位周辺の皮膚へ接着させる。この方法で、被覆材を、皮膚の部分に残し、傷部位を覆う。
【０１１３】
（水和状態での）フィルム中のグルコースオキシダーゼは、周辺物から、オーバーレイヤー６６を介して通過する酸素との、下層中のグルコースの反応を触媒し、以上で議論したように、過酸化水素を産出する。過酸化水素それ自身は、以上で議論したように、有用な抗細菌効果をもつ。過酸化水素は、以上で議論したように、有用な抗細菌効果を持ち、内因性カタラーゼによって分解されたときに放出された酸素が、細胞代謝を支持すること、アミノ酸水酸化を増強すること、および嫌気性細菌の増殖を阻害することによって、注油工程を補助する。
【０１１４】
酸化種の生成を立証するために、１％デンプン（アルドリッチ（Ａｌｄｒｉｃｈ））、１００ｍＭヨウ化カリウム（フィッシャー（Ｆｉｓｈｅｒ））、および１％アガー（シグマ（Ｓｉｇｍａ）からなる指示プレートを使用した。ＰＶＡ／ＧＯＸフィルム６２でのヒドロゲル６０を含む被覆材を、空気中で、前記指示プレート上に置き、したがって、ＧＯＸが、利用可能な酸素を介して活性化される。過酸化水素が、ヒドロゲルを介して分散し、その下の指示プレートに達するのに十分な量で、産出される。ついで過酸化水素の酸化力により、ヨウ化物がヨウ素に酸化され、デンプンと複合体形成をして、強い暗青色複合体を形成する。活性化したヒドロゲル被覆材を除去し、２５時間感覚で、新規の指示プレート上におくことによって、過酸化水素放出の持続が、少なくとも５日間にわたり立証可
能である。
【０１１５】
さらに、ＰＶＡフィルム中でのＧＯＸ酵素の安定性を立証するために、フィルムを、４日間の使用の後に、ヒドロゲルより除去し、新鮮な２０ｍｍ2グルコースヒドロゲル上に置き、また、指示プレート上におく。２４時間後、強い青色デンプン／ヨウ化複合体がはっきりとみられ、これは、酵素活性が、ＰＶＡフィルム中でまだ存在していることを示唆している。
【０１１６】
グルコースの存在しないヒドロゲル中の、局在化ＧＯＸ活性を立証するために、ＰＶＡ／ＧＯＸフィルムを、以上で記述したように産出した。ヒドロゲルを、ＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）飽和木綿ガーゼのベッド上に置き、２４時間にわたってゆっくりとふくらませた。ついで、ヒドロゲルを水平板を通して、２つにスライスし、１％デンプン＋１００ｍＭヨウ化カリウム＋１％ｗ／ｖグルコース＋５ｍＭ  ＥＤＴＡ＋５μｇ／ｍｌラクトペルオキシダーゼの溶液中に浸した。過酸化水素を検出することによって、非常に素早く、ＧＯＸの存在が局在か可能である。ＧＯＸ活性は、ＰＶＡフィルムに明らかに局在しており、ＰＶＡフィルムが位置するヒドロゲルの表面に局在している。この真下で、色の発生はなく、したがって、ＧＯＸが、膨張状態でさえ、ＡＭＰＳヒドロゲル中で移動しないことが示されている。
【０１１７】
ヒドロゲルスラブ６０は、非常に流体吸収性であり、したがって、図５実施様態と関連して、以上で記述した特性および利点を持つ。
【図面の簡単な説明】
【０１１８】
【図１】図１は、本発明にしたがった、傷被覆材の６つの異なる実施様態の図解部分図である。
【図２】図２は、本発明にしたがった、傷被覆材の６つの異なる実施様態の図解部分図である。
【図３】図３は、本発明にしたがった、傷被覆材の６つの異なる実施様態の図解部分図である。
【図４】図４は、本発明にしたがった、傷被覆材の６つの異なる実施様態の図解部分図である。
【図５】図５は、本発明にしたがった、傷被覆材の６つの異なる実施様態の図解部分図である。
【図６】図６は、本発明にしたがった、傷被覆材の６つの異なる実施様態の図解部分図である。
【図１】
2005533534.tif 000004
【図２】
2005533534.tif 000005
【図３】
2005533534.tif 000006
【図４】
2005533534.tif 000007
【図５】
2005533534.tif 000008
【図６】
2005533534.tif 000009
【国際調査報告】
2005533534.tif 000010
2005533534.tif 000011
2005533534.tif 000012