(57)【要約】本発明は、式Ｉ【化１】2005519908.tif 000023のＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体（少なくとも１個の窒素原子が酸素原子と結合して、対応するＮ−オキシドを形成している）、その製造方法、該化合物を含む医薬組成物、およびヒトを含む温血動物の治療的処置用医薬組成物の製造でのその使用に関する。
2005519908.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2005519908.tif 000018
［式中、
Ｒ１は、水素またはヒドロキシであり、
Ｒ２は、水素、低級アルキル、またはヒドロキシ−低級アルキルであり、
Ａは、−ＮＲ５Ｒ６、−ＣＲ５Ｒ６、または−ＯＲ５Ｒ６であり、
Ｒ５とＲ６は一体となって、４、５、または６個の炭素原子を有するアルキレン、１個の酸素原子、および３または４個の炭素原子を有するオキサ−低級アルキレン、または１または２個の窒素原子（窒素原子は非置換であるか、または低級アルキル、ヒドロキシ−低級アルキル、またはアセチルで置換されている）、および２、３、または４個の炭素原子を有するアザ−低級アルキレン（ここで、それぞれの場合の低級アルキレンは、部分的または全体的に不飽和であってもよく、および／または低級アルキレンの炭素原子は、低級アルキル、ヒドロキシル、低級アルコキシ、またはオキソ基（低級アルキレンが全体的に不飽和でない場合）で置換されていてもよい）であり、そして、
ここで、少なくとも１個の窒素原子が酸素原子と結合して、対応するＮ−オキシドを形成するか、あるいは窒素原子が酸素原子と結合しない場合、Ａがオキソで置換されている。］の化合物、または該化合物の医薬的に許容される塩。
【請求項２】
式Ｉにおいて、
Ａが、ピロリジノ、ピペリジル、ピペリジノ、ピペラジニル、ピリジル、ピロリジノ、ピロリジニル、モルホリノ、低級アルキルピペラジノ、Ｎ−メチルピペラジノ、４−メチル−３−オキソ−１−ピペラジニル、３−オキソ−１−ピペラジニル、１Ｈ−イミダゾリル、１Ｈ−２−メチルイミダゾリル、１Ｈ−４−メチルイミダゾリル、１Ｈ−２，４−ジメチルイミダゾリル、シクロヘキシル、またはフェニルであり、必要に応じて環の炭素上でオキソで置換されている、請求項１に記載の化合物、または該化合物の医薬的に許容される塩。
【請求項３】
式Ｉにおいて、
Ａが、次の式Ａ’
【化２】
2005519908.tif 000019
（式中、
必要に応じて環の炭素上でオキソで置換され、そして
Ｒ３は、水素、低級アルキル、またはアセチルである）のピペラジニル基である、請求項１に記載の化合物、または該化合物の医薬的に許容される塩。
【請求項４】
式Ｉにおいて、
Ｒ１が、水素であり、
Ｒ２が、水素、メチル、またはヒドロキシメチルであり、
Ｒ３が、メチル、または水素である、
請求項３に記載の化合物、または該化合物の医薬的に許容される塩。
【請求項５】
式Ｉの化合物が、４−［（３−オキソ−１−ピペラジニル）メチル］−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］アミノ］フェニル］ベンズアミドである、請求項１に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項６】
式Ｉの化合物が、４−［（４−メチル−３−オキソ−１−ピペラジニル）メチル］−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］アミノ］フェニル］ベンズアミドである、請求項１に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項７】
式ＩＩ
【化３】
2005519908.tif 000020
［式中、
Ｒ１は、水素またはヒドロキシであり、
Ｒ２は、低級アルキル、またはヒドロキシ−低級アルキルであり、
Ｒ３は、水素、メチル、またはアセチルであり、そして
星印は、必要に応じて酸素原子と結合して、対応するＮ−オキシドを形成する窒素原子を示す（ただし、Ｒ１が水素であり、Ｒ２がメチルであり、そしてＲ３が水素またはメチルの場合、星印の３個の窒素原子のうち少なくとも１個が酸素原子と結合している）。］の化合物、またはその塩。
【請求項８】
式ＩＩにおいて、
Ｒ１が、水素であり、
Ｒ２が、メチルまたはヒドロキシメチルであり、
Ｒ３が、メチルであり、そして
星印が、必要に応じて酸素原子と結合して、対応するＮ−オキシドを形成する窒素原子を示す（ただし、Ｒ２がメチルである場合、星印の３個の窒素原子のうちの少なくとも１個が酸素原子と結合している）、請求項７に記載の化合物、またはその塩。
【請求項９】
式ＩＩにおいて、
Ｒ１が、水素であり、
Ｒ２が、ヒドロキシ−低級アルキルであり、
Ｒ３が、メチルであり、そして
星印が、必要に応じて酸素原子と結合して、対応するＮ−オキシドを形成する窒素原子を示す、請求項７に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１０】
式ＩＩの化合物が、
４−［（４−メチル−４−オキシド−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−｛４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル｝−ベンズアミドである、請求項７に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１１】
式ＩＩの化合物が、
４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（１−オキシド−３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル］−ベンズアミドである、請求項８に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１２】
式ＩＩの化合物が、
４−［（４−メチル−１，４−ジオキシド−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−｛４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル｝−ベンズアミドである、請求項８に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１３】
式ＩＩの化合物が、
４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−｛４−ヒドロキシメチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル｝−ベンズアミドである、請求項８または９に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１４】
ヒトを含む温血動物の治療的処置方法での使用のための、請求項１から１３のいずれか１項に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１５】
請求項１から１３のいずれか１項に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩を、医薬的に許容される担体と共に含む医薬組成物。
【請求項１６】
請求項１から１３のいずれか１項に記載の化合物、または該化合物の医薬的に許容される塩を有効成分として、医薬的に許容される担体と共に含む、ヒトを含む温血動物の増殖性疾患を処置するための医薬組成物。
【請求項１７】
増殖性疾患の処置用の医薬組成物の製造のための、請求項１から１３のいずれか１項に記載の化合物、または該化合物の医薬的に許容される塩の使用。
【請求項１８】
増殖性疾患の処置のための、請求項１から１３のいずれか１項に記載の化合物、または該化合物の医薬的に許容される塩の使用。
【請求項１９】
ヒトを含む温血動物の処置方法であって、増殖性疾患に罹患している該温血動物に、該疾患に対して有効な用量で、請求項１から１３のいずれか１項に記載の化合物、または該化合物の医薬的に許容される塩を投与することを含む、方法。
【請求項２０】
式ＩＩ
【化４】
2005519908.tif 000021
（式中、Ｒ１およびＲ２は、請求項１に記載の式Ｉの化合物について定義された意味を有し、星印は、必要に応じて酸素原子と結合する窒素原子を示す）の化合物を、
式ＩＩＩ
【化５】
2005519908.tif 000022
（式中、Ｒ３は、請求項１に記載の式Ｉの化合物について定義された意味を有し、星印は、必要に応じて酸素原子と結合する窒素原子を示す）の化合物と反応させ；
そして得られた化合物を、必要に応じて適当な酸化剤で式ＩのＮ−オキシドに転換し；
ここで、
式ＩＩおよびＩＩＩの化合物に存在し、反応に関与することが意図されていない官能基は、所望なら保護された形で存在し、そして存在する保護基が切断され、さらに、式ＩＩおよびＩＩＩの化合物は塩の形でも存在してもよく（ただし、塩形成基が存在し、塩の形での反応が可能であるものとする）；
そして、所望なら、得られた式Ｉの化合物は、式Ｉの別の化合物に変換され、得られた式Ｉの遊離化合物は、塩に転換され、得られた式Ｉの化合物の塩は、遊離化合物または別の塩に転換され、そして／または式Ｉの異性体混合物は、個々の異性体に分けられることで特徴付けられる、
請求項７に記載の式ＩＩの化合物、またはその塩の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、Ｎ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体（少なくとも１個の窒素原子が酸素原子と結合して、対応するＮ−オキシドを形成している）、その製造方法、該化合物を含む医薬組成物、およびヒトを含む温血動物の治療的処置用医薬組成物の製造におけるその使用に関する。
【０００２】
本発明は、特に、式Ｉ
【化１】
2005519908.tif 000003
［式中、
Ｒ１は、水素またはヒドロキシであり、
Ｒ２は、水素、低級アルキル、またはヒドロキシ−低級アルキルであり、
Ａは、−ＮＲ５Ｒ６、−ＣＲ５Ｒ６、または−ＯＲ５Ｒ６であり、
Ｒ５とＲ６は一体となって、４、５、または６個の炭素原子を有するアルキレン、１個の酸素原子、および３または４個の炭素原子を有するオキサ−低級アルキレン、１または２個の窒素原子（ここで、窒素原子は非置換であるか、または低級アルキル、ヒドロキシ−低級アルキル、またはアセチルで置換されている）、および２、３、または４個の炭素原子を有するアザ−低級アルキレン（ここで、それぞれの場合の低級アルキレンは部分的または全体的に不飽和であってもよく、および／または低級アルキレンの炭素原子は低級アルキル、ヒドロキシル、低級アルコキシ、またはオキソ（低級アルキレンが全体的に不飽和でない場合）で置換されていてもよい）を表し、そして、
ここで、少なくとも１個の窒素原子が酸素原子を結合して、対応するＮ−オキシドを形成するか、あるいは窒素原子が酸素原子と結合していない場合、Ａは環の炭素上でオキソで置換されている。］の化合物、または該化合物の医薬的に許容される塩に関する。
【０００３】
好ましくは、Ａは、環の炭素上のオキソで置換されている。
好ましくは、Ａは、ピロリジノ、ピペリジル、ピペリジノ、ピペラジニル、ピリジル、ピロリジノ、ピロリジニル、モルホリノ、低級アルキルピペラジノ、Ｎ−メチルピペラジノ、４−メチル−３−オキソ−１−ピペラジニル、３−オキソ−１−ピペラジニル、１Ｈ−イミダゾリル、１Ｈ−２−メチルイミダゾリル、１Ｈ−４−メチルイミダゾリルまたは１Ｈ−２，４−ジメチルイミダゾリル、シクロヘキシル、またはフェニルであり、必要に応じて環の炭素上でオキソで置換されている；
最も好ましくは、「Ａ」は、次の式Ａ’
【化２】
2005519908.tif 000004
（式中、Ｒ３は、水素、低級アルキル、またはアセチルを表す）のピペラジノ基を表す。
【０００４】
式Ｉ
（式中、Ｒ１が、水素であり、
Ｒ２が、水素、メチル、またはヒドロキシメチルであり、
ＡがＡ’であり、必要に応じて環の炭素上でオキソで置換され、
Ｒ３が、メチル、または水素である）の化合物、または該化合物の塩が好ましい。
【０００５】
「Ａ」が環の炭素上でオキソで置換されている場合、「Ａ］は好ましくは、４−メチル−３−オキソ−１−ピペラジニルの様な低級アルキル−オキソ−ピペラジノまたは３−オキソ−１−ピペラジニルの様なオキソ−ピペラジノ、オキソ−ピロリジン、オキソ−ピペリジノ、オキソ−ピペリジル、オキソ−モルホリノ、オキソ−シクロヘキシル、スクシンイミド、またはグルタルイミドから選択される。
【０００６】
酸素原子と結合して、対応するＮ−オキシドを形成している窒素原子は、好ましくは、ピリミジン、ピリンジニル、「Ａ」、または式Ａ’のピペラジノ基に位置する環の窒素原子である。
【０００７】
「Ｒ５とＲ６を一体として」を定義することで、本発明者は、ＮＲ５Ｒ６、ＣＲ５Ｒ６、またはＯＲ５Ｒ６で表される窒素、酸素、または炭素基を番号付ける際に含めない。
【０００８】
接頭語「低級」は、最大値７個以下、特に最大値４個以下の炭素原子を有するラジカルを示し、該ラジカルは直鎖、または１または複数の枝を有する分枝のいずれかである。
【０００９】
低級アルキルは、好ましくは、１個以上７個以下、好ましくは１個以上４個以下の炭素を有するアルキルであり、そして直鎖または分枝である；好ましくは、低級アルキルは、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチルの様なブチル、ｎ−プロピルまたはイソプロピルの様なプロピル、エチル、またはメチルである。好ましくは、低級アルキルは、メチル、プロピル、またはｔｅｒｔ−ブチルである。
【００１０】
ヒドロキシ−低級アルキルは、好ましくはヒドロキシメチル、２−ヒドロキシエチル、または２−ヒドロキシ−２−プロピルである。
低級アルコキシは、特にメトキシ、エトキシ、イソプロピルオキシ、またはｔｅｒｔ−ブチルオキシである。
【００１１】
好ましい態様において、本発明は、式ＩＩ
【化３】
2005519908.tif 000005
［式中、
Ｒ１は、水素またはヒドロキシであり、
Ｒ２は、低級アルキル、またはヒドロキシ−低級アルキルであり、,
Ｒ３は、水素、メチル、またはアセチルであり、そして
星印は、必要に応じて酸素原子と結合して、対応するＮ−オキシドを形成する窒素原子を示す（ただし、Ｒ１が水素であり、Ｒ２がメチルであり、そしてＲ３が水素またはメチルである場合、星印の３個の窒素原子のうち少なくとも１個が酸素と結合している）。］の化合物、または該化合物の塩に関する。
【００１２】
必要に応じて、２−ピリミジンの窒素原子も１または２個の酸素原子と結合して、対応するＮ−オキシドを形成する。
好ましくは、式ＩＩの化合物は、少なくとも１個の酸素原子と結合して、対応するＮ−オキシドを形成する。
【００１３】
必要に応じて、ピペラジニルはオキソで置換され、４−メチル−３−オキソ−１−ピペラジニルの様な低級アルキル−オキソ−ピペラジノ、または３−オキソ−１−ピペラジニルの様なオキソ−ピペラジノで置換されている。
式ＩＩの化合物の範囲において、用語「低級」は、７個以下、好ましくは４個以下の炭素原子を有するラジカルを示す。
【００１４】
Ｒ１がヒドロキシである場合、３−ピリジニル部分は、２、４、５、または６位の環の炭素原子上でヒドロキシで置換されている。
Ｒ２の低級アルキルは、好ましくはメチルである。
Ｒ２のヒドロキシ−低級アルキルは、好ましくはヒドロキシメチルである。
【００１５】
塩は特に、式ＩまたはＩＩの化合物の医薬的に許容される塩である。
該塩は、例えば、塩基性窒素原子を有する式ＩまたはＩＩの化合物から、好ましくは有機酸または無機酸との酸付加塩、特に医薬的に許容される塩として形成される。
【００１６】
単離または精製の目的上、医薬的に許容されない塩、例えば、ピクリン酸塩または過塩素酸塩を使用することも可能である。医薬的に許容される塩または遊離化合物（医薬組成物の形で生じる場合）のみが治療上の使用を達成する。それゆえこれらが好ましい。
【００１７】
新規化合物における、遊離形と塩の形（例えば、新規化合物の精製または同定において中間体として用いられ得る塩を含む）との密接な関連を考慮し、上記および下記の遊離化合物へのいずれかの言及は、必要性および目的に応じて対応する塩にも言及していると解されるべきである。
【００１８】
式ＩまたはＩＩの化合物は価値ある医薬特性を有し、例えば、抗腫瘍薬剤として、アテローム性動脈硬化症を処置するための薬剤として、再狭窄を処置するための薬剤として、抗白血病薬剤として、閉塞性細気管支炎の様な移植誘発性疾患を予防するためおよび／またはPorphyromonas gingivalisの様なある種の細菌が温血動物に侵入するのを予防するために用いられる。
【００１９】
タンパク質のリン酸化は長い間、細胞の分化および分裂における必須の段階として知られてきた。リン酸化は、セリン／スレオニンおよびチロシンキナーゼにさらに分けられるタンパク質キナーゼにより触媒される。該チロシンキナーゼは、ＰＤＧＦ（血小板由来成長因子）受容体チロシンキナーゼを含む。
【００２０】
ＰＤＧＦは、正常成長、および発癌および血管平滑筋細胞の疾病（例えば、アテローム性動脈硬化症および血栓症）で見られる病的細胞増殖において重要な働きをする、非常に一般的に生じる成長因子である。
【００２１】
試験管内でのＰＤＧＦ刺激性受容体チロシンキナーゼ活性の阻害は、Ａ４３１細胞のＰＤＧＦ受容体免疫複合体において測定される（E. Andrejauskas-Buchdunger and U. Regenass in Cancer Research 52, 5353-5358 (1992)に記載）。式ＩまたはＩＩの化合物は、ＰＤＧＦ依存性無細胞受容体リン酸化を阻害する。ＰＤＧＦ受容体チロシンキナーゼの阻害は、マイクロタイターＥＬＩＳＡアッセイで測定される（Trinks et al., J. Med. Chem. 37, 1015-27 (1994)を参照）。
【００２２】
ＰＤＧＦ受容体チロシンキナーゼの阻害は、式ＩまたはＩＩの化合物を、神経膠腫、肉腫、前立腺腫瘍、および大腸腫瘍、乳房腫瘍、および卵巣腫瘍の様な腫瘍性疾病の処置にも適当なものとする。
【００２３】
式ＩまたはＩＩの化合物は、ＳＣＦ受容体（Ｋｉｔ）自己リン酸化の様ないわゆる幹細胞因子（ＳＣＦ、ｃ−Ｋｉｔリガンドまたはスチール因子としても既知）およびＭＡＰＫキナーゼ（マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ）のＳＣＦ刺激性活性化を含む細胞過程も阻害する。
【００２４】
特に、式ＩまたはＩＩの化合物は、ｃ−Ｋｉｔのチロシンキナーゼ活性を阻害する。このことは、ｃ−Ｋｉｔの細胞質キナーゼドメインを用いるチロシンキナーゼ阻害アッセイにおいて示される。該アッセイは、次の様に行われる：バキュロウイルス宿主ベクターｐＦｂａｃＧ０１（GIBCO）を用いて、ヒトｃ−Ｋｉｔの細胞質キナーゼドメインのアミノ酸５４４〜９７６のアミノ酸領域を発現する組換えバキュロウイルスを作成する。ｃ−Ｋｉｔの細胞質ドメインのコード配列は、ヒト子宮ｃ−ＤＮＡライブラリー（Clontech）からＰＣＲで増幅される。増幅ＤＮＡフラグメントおよびｐＦｂａｃＧ０１ベクターは共に、ＢａｍＨ１およびＥｃｏＲＩでの切断により、ライゲーションに適したものとされる。該ＤＮＡフラグメントのライゲーションにより、バキュロウイルス宿主プラスミドｃ−Ｋｉｔを得る。ウイルス産物である、Ｓｆ９細胞でのタンパク質の発現、およびＧＳＴ融合タンパク質の精製は、次のように行われる：
ウイルス産物：ｃ−Ｋｉｔキナーゼドメイン含有トランスファーベクター（ｐＦｂａｃＧ０１−ｃ−Ｋｉｔ）がＤＨ１０Ｂａｃ細胞株（GIBCO）にトランスフェクションされ、該トランスフェクション細胞は寒天プレートにまかれる。ウイルスゲノムへの融合配列の挿入がないコロニー（細菌によりもたらされる）は青色である。単一の白色コロニーがつつかれ、そしてウイルスＤＮＡ（bacmid）が標準的プラスミド精製方法により細菌から単離される。続いて、２５ｃｍ２フラスコにおいて、Ｓｆ９細胞またはＳｆ２１細胞（American Type Culture Collection）が、セルフェクチン（Cellfectin）試薬を用いて、ウイルスＤＮＡでトランスフェクションされる。
【００２５】
Ｓｆ９細胞でのスモールスケールのタンパク質発現の測定：ウイルス含有培地がトランスフェクション細胞培養物から集められ、力価を増加させるための感染用に用いられる。２回の感染後に得られたウイルス含有培地が、ラージ−スケールタンパク質発現用に用いられる。ラージ−スケールタンパク質発現のために、細胞が、１００ｃｍ２の円形組織培養プレートに５×１０７細胞／プレートでまかれ、１ｍｌのウイルス含有培地（約５ｍｏｌ）で感染させられる。３日後、該細胞はプレートからかき取られ、５００ｒｐｍで５分間遠心される。１０〜２０枚の１００ｃｍ２プレートからの細胞ペレットが、氷冷可溶化バッファー（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、１％  ＮＰ−４０、１ｍＭ  ＤＴＴ、１ｍＭ  ＰＭＳＦ）５０ｍｌに再懸濁される。該細胞は氷上で１５分間攪拌され、続いて５０００ｒｐｍで２０分間遠心される。
【００２６】
ＧＳＴ標識タンパク質の精製：遠心された細胞可溶化物が、２ｍｌのグルタチオンセファロースカラム（Pharmacia）に充填され、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＤＴＴ、２００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍｌで３回洗浄される。ＧＳＴ標識タンパク質が、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１０ｍＭ  還元型グルタチオン、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＤＴＴ、１０％  グリセロールを１０回適用により（各１ｍｌ）溶出され、−７０℃で保存される。
【００２７】
キナーゼアッセイ：精製ＧＳＴ−ｃ−Ｋｉｔでのチロシンタンパク質キナーゼアッセイは、最終容量３０μｌ（２００〜１８００ｎｇ  酵素タンパク質（特異的活性に依存する）、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．６、３ｍＭ  ＭｎＣｌ２、３ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＤＴＴ、１０μＭ  Ｎａ３ＶＯ４、５μｇ／ｍｌ  ポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１、１％  ＤＭＳＯ、１．０μＭ  ＡＴＰ、および０．１μＣｉ［γ３３Ｐ］ＡＴＰ含有）で行われる。活性は、阻害剤の存在または非存在下で、ポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１基質への［γ３３Ｐ］ＡＴＰ由来の３３Ｐの結合を測定することで、アッセイされる。該アッセイ（３０μｌ）は、９６ウェルプレートにおいて、外界温度で２０分間、下記条件下で行われ、１２５ｍＭ  ＥＤＴＡ２０μｌの添加により終結される。続いて、事前にメタノールで５分間浸漬され、水で洗浄された後、０．５％  Ｈ３ＰＯ４で５分間浸漬されたイモビロンＰＶＤＦ膜（Millipore, Bedford, MA, USA）に、該反応混合物４０μｌが移され、真空源から切断するように弁操作をした真空装置にに取り付けられる。全試料をスポッティング後に真空装置をつなぎ、そして各ウェルが０．５％  Ｈ３ＰＯ４２００μｌで洗浄される。該膜が取り出され、シェカー上で、１．０％  Ｈ３ＰＯ４で４回、そしてエタノールで１回洗浄される。外界温度で乾燥後、該膜は、Packardのトップカウント９６ウェルフレームに取り付られ、そしてMicroscint［登録商標］（Packard）を１０μｌ／ウェルで添加され、カウントされる。４種類の濃度（一般に０．０１、０．１、１、および１０μＭ）での各化合物（デュプリケート）の阻害率の線形回帰分析により、ＩＣ５０値が計算される。１単位のタンパク質キナーゼ活性は、３７℃において、［γ３３Ｐ］ＡＴＰから基質タンパク質へ、タンパク質１ｍｇ当たり、１分間に転移した１ｎｍｏｌの３３Ｐ  ＡＴＰとして定義される。
【００２８】
式ＩまたはＩＩの化合物は、ＳＣＦ受容体（およびｃ−Ｋｉｔ、プロトオンコジーン）の自己リン酸化も阻害する。ＳＣＦ受容体の自己リン酸化の阻害は、例えば、増殖がＳＣＦに依存するヒト前巨核球白血病細胞株であるＭｏ７ｅ細胞を用いて測定され得る。それは、Grover Bagby, Oregon Health Sciences University, USAから入手される。該細胞は、１０％  ＦＢＳおよび２．５ｎｇ／ｍｌ  ＧＣ−ＣＭＦを添加したＲＰＭＩ  １６４９培地において培養される。ＧＭ−ＳＣＦおよびＳＣＦは市販されている。脱血清したＭＯ７ｅ細胞が用意され、試験物質と共に３７℃で９０分間インキュベートされ、組換えＳＣＦで、３７℃で１０分間刺激される。同量の細胞可溶化物が、抗ホスホチロシン抗体（Buchdunger et al., Proc. Natl. Acad. Sci (USA) 92, 2558-62 (1995)）を用いたウエスタンブロットで分析される。抗体修飾（immunodecorated）タンパク質は、Amersham（Amersham, UK）のＥＣＬウエスタンブロット分析システムで検出される。
【００２９】
上記特性に基づき、式ＩまたはＩＩの化合物は、例えば、小細胞肺癌における腫瘍阻害物質としてだけでなく、アテローム性動脈硬化症、血栓症、乾癬、強皮症、および線維症の様な非悪性増殖性疾患を処置するため、ならびに幹細胞の保護のため（例えば、５−フルオロウラシルの様な化学療法薬剤の血液毒性（haemotoxic）作用に対抗するため）、および喘息における薬剤としても用いられる。これは特に、ＰＤＧＦ受容体キナーゼの阻害に応答する疾病の処置用に用いられる。
【００３０】
さらに、式ＩまたはＩＩの化合物は、他の化学療法薬剤での癌療法における多種薬剤耐性の発生を予防するか、または既に存在する、他の化学療法薬剤に対する抵抗性を取り除く。上記効果に関わらず、他の抗腫瘍薬剤（例えば、特に他のｃ−Ｋｉｔ阻害剤）および血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）受容体またはｃ−Ｓｒｃ活性化の阻害剤と組み合わせて、式ＩまたはＩＩの化合物を用いることも利点がある。
【００３１】
Ａｂｌキナーゼ、特にｖ−Ａｂｌキナーゼも、式ＩまたはＩＩの化合物で阻害される。ｖ−Ａｂｌチロシンキナーゼの阻害は、N. Lydon et al., Oncogene Research 5, 161-173 (1990)およびJ. F. Geissler et al., Cancer Research 52, 4492-8 (1992)の方法で測定される。該方法において、［Ｖａｌ５］−アンギオテンシンＩＩおよび［γ−３２Ｐ］−ＡＴＰが基質として用いられる。
【００３２】
類推するに、式ＩまたはＩＩの化合物は、Ｂｃｒ−Ａｂｌキナーゼも阻害し（Nature Medicine 2, 561-566 (1996)参照）、それゆえＢｃｒ−Ａｂｌ陽性の癌および白血病（特に、アポトーシス機序の作用が見出されている、慢性骨髄性白血病および急性リンパ性白血病）の様な腫瘍性疾病の処置に適し、かつ白血病性幹細胞のサブグループへの作用、ならびに該細胞の除去（例えば、骨髄除去）後に試験管内で該細胞を精製し、そして癌細胞を取り除いた後、細胞を再移植（例えば、精製した骨髄細胞の再移植）する可能性も示す。
【００３３】
ｃ−Ａｂｌタンパク質チロシンキナーゼに対する活性試験。該試験は、次のフィルター結合アッセイとして行われる：ｃ−ＡｂｌのＨｉｓ標識キナーゼドメインがクローン化され、Bhat et al., J. Biol. Chem. 272, 16170-5 (1997)に記載のバキュロウイルス／Ｓｆ９システムで発現される。コバルト金属キレートカラム、続いて陽イオン交換カラムでの２段階方法により、３７ｋＤのタンパク質（ｃ−Ａｂｌキナーゼ）が１〜２ｍｇ／ｌ（Ｓｆ９細胞）の収集率で精製される。ｃ−Ａｂｌキナーゼの純度は９０％より高く、これはＳＤＳ−ＰＡＧＥ後のクーマシーブルー染色により判断される。該アッセイは：ｃ−Ａｂｌキナーゼ（５０ｎｇ）、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０μＭ  Ｎａ３ＶＯ４、１ｍＭ  ＤＴＴ、および１％  ＤＭＳＯの存在下で、３０μｇ／ｍｌのポリ−Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｔｙｒ−６：２：５：１（ポリ−ＡＥＫＹ、Sigma  Ｐ１１５２）を用いた０．０６μＣｉ／アッセイ［γ３３Ｐ］−ＡＴＰ（５μＭ  ＡＴＰ）である、全容量３０μｌで行った。反応は、２５０ｍＭ  ＥＤＴＡ１０μｌの添加により終結される。そして事前にメタノールで５分間浸漬され、水で洗浄後０．５％  Ｈ３ＰＯ４で５分間浸漬されたイモビロンＰＶＤＦ膜（Millipore, Bedford, MA, USA）に、該反応混合物３０μｌが移され、真空源から切断するように弁操作をした真空装置に取り付けられる。全試料をスポッティング後、真空装置をつなぎ、各ウェルが、０．５％  Ｈ３ＰＯ４２００μｌで洗浄される。膜が取り出され、シェカー上で０．５％  Ｈ３ＰＯ４で４回、そしてエタノールで１回洗浄される。外界温度で乾燥後、該膜は、Packardのトップカウンター９６ウェルフレームに取り付られ、そしてMicroscint［登録商標］（Packard）を１０μ／ウェルで添加され、カウントされる。
【００３４】
Ｂｃｒ−Ａｂｌに対する活性試験。ｐ２１０  Ｂｃｒ−Ａｂｌ発現ベクターｐＧＤｐ２１０Ｂｃｒ／Ａｂｌでトランスフェクションされたマウス骨髄前駆細胞の細胞株３２Ｄｃｌ３（３２Ｄ−ｂｃｒ／ａｂｌ）は、J. Griffin （Dana Faber Cancer Institute, Boston, MA, USA）から入手した。該細胞は、常時活性Ａｂｌキナーゼとの融合Ｂｃｒ−Ａｂｌタンパク質を発現し、成長因子非依存性に増加する。該細胞は、ＲＰＭＩ  １６４０（AMIMED）、１０％  ウシ胎児血清、２ｍＭ  グルタミン（Gibco）（「完全培地」）で培養され、研究用ストックは、凍結培地（９５％  ＦＣＳ、５％  ＤＭＳＯ（SIGMA））中、１バイアル当たり２×１０６細胞数で等分て凍結することで、調製される。解凍後、該細胞は、最大でも１０〜１２継代で実験に用いられる。
【００３５】
細胞アッセイ用に、化合物がＤＭＳＯ中に溶解され、完全培地で希釈されて開始時濃度である１０μＭを得、続いて完全培地中連続３倍希釈液が調製される。完全培地５０μｌ中の２００’０００  ３２Ｄ−Ｂｃｒ／Ａｂｌ細胞が、９６ウェル丸底組織培養プレートの各ウェルにまかれる。連続３倍希釈した試験化合物が、５０μｌ／ウェルで細胞に添加される（トリプリケート）。無処理の細胞が対照として用いられる。該化合物は、細胞と共に３７℃、５％  ＣＯ２で９０分間インキュベートされ、続いて、組織培養プレートが１３００ｒｐｍで遠心され（BeckmanのＧＰＲ遠心機）、ペレットとなった細胞を取り除かないように注意して吸引され、上清が取り除かれる。該細胞ペレットは、可溶化バッファー（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  塩化ナトリウム、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１％  ＮＰ−４０、２ｍＭ  オルトバナジン酸ナトリウム、１ｍＭ  ＰＭＳＦ、５０μｇ／ｍｌ  アプロチニン、および８０μｇ／ｍｌ  ロイペプチン）１５０μｌの添加により可溶化され、すぐにＥＬＩＳＡに用いられるか、または使用までプレート中で−２０℃で凍結保存される。
【００３６】
黒色ＥＬＩＳＡプレート（PackardのＨＴＲＦ９６黒色プレート）は、ＰＢＳ５０μｌ中、５０ｎｇ／ウェルのUpstateのウサギポリクローナル抗ａｂｌ−ＳＨ３ドメインＡｂ０６−４６６で、４℃で一晩、事前にコートされる。２００μｌ／ウェルの０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０含有ＰＢＳＴ（ＰＢＳＴ）および０．５％  ＴｏｐＢｌｏｃｋ（Juro）で３回洗浄後、残ったタンパク質結合部位は、２００μｌ／ウェルのＰＢＳＴ、３％  ＴｏｐＢｌｏｃｋで４時間、室温にてブロックされ、続いて、無処理または化合物処理細胞の可溶化物５０μｌ（２０μｇ  合計タンパク質／ウェル）と共に４℃で３〜４時間インキュベートされる。３回洗浄後、ブロッキングバッファー中に０．２μｇ／ｍｌまで希釈されたアルカリホスファターゼ（Zymed）標識抗ホスホチロシンＡｂ  ＰＹ２０（ＡＰ）が、５０μｌ／ウェルで添加され、一晩（４℃）インキュベートされる。全インキュベーション段階で、プレートはプレートシール（Costar）で覆われる。最後に、該プレートは、洗浄バッファーでもう３回、そして脱イオン水で１回洗浄された後、エメラルドＩＩを有するＡＰ基質  ＣＤＰＳｔａｒ  ＲＴＵを９０μｌ／ウェルで添加される。PackardのTopSeal［登録商標］Ａプレートシールで覆われたプレートが、暗所にて室温で４５分間インキュベートされ、そしてPackardのトップカウントマイクロプレートシンチレーションカウンター（トップカウント）で１秒当たりのカウント数（ＣＰＳ）を測定することで、発光量が定量される。無処理の３２Ｄ−Ｂｃｒ／Ａｂｌ細胞の可溶化物で得られたＥＬＩＳＡ測定値（ＣＰＳ）と、アッセイのバックグランド（細胞可溶化物以外の全成分）の測定値との差が計算されて、該細胞に存在する恒常的リン酸化Ｂｃｒ−Ａｂｌタンパク質が１００％反映される。Ｂｃｒ−Ａｂｌキナーゼ活性に対する該化合物の活性は、Ｂｃｒ−Ａｂｌリン酸化の減少率として表される。ＩＣ５０およびＩＣ９０の値は、グラフ外挿法により用量応答曲線から決定される。
【００３７】
変異型Ｂｃｒ−Ａｂｌに対する活性試験：Ｍ３５１Ｔ変異型Ｂｃｒ−Ａｂｌキナーゼ活性に対する該化合物の活性は、ｐ２１０Ｂｃｒ−Ａｂｌの代わりに変異型Ｂｃｒ−Ａｂｌでトランスフェクションされた３２Ｄｃｌ３細胞が用いられること以外は、上記の方法で評価される。
【００３８】
ｃ−Ｒａｆ−１タンパク質キナーゼアッセイ：組換えｃ−Ｒａｆ−１タンパク質は、活性ｃ−Ｒａｆ−１キナーゼ産生に必要とされる、ｖ−Ｓｒｃおよびｖ−Ｒａｓ組換えバキュロウイルスと共に、ＧＳＴ−ｃ−Ｒａｆ−１組換えバキュロウイルスでＳｆ２１細胞を３回感染させて、得られる（Williams et al., PNAS 1992； 89:2922-6）。活性Ｒａｓ（ｖ−Ｒａｓ）は、細胞膜へｃ−Ｒａｆ−１を動員し、そして、完全にそれを活性化するためにｖ−Ｓｒｃがｃ−Ｒａｆ−１をリン酸化することを必要とする。細胞は、１５０ｍｍディッシュ当たり２．５×１０７細胞でまかれ、１５０ｍｍディッシュに接着させるために、室温で１時間そのままにされる。培地（１０％  ＦＢＳ含有ＳＦ９００ＩＩ）が吸飲され、組換えバキュロウイルスＧＳＴ−ｃ−Ｒａｆ−１、ｖ−Ｒａｓ、およびｖ−Ｓｒｃが、それぞれ３．０、２．５、および２．５ｍｏｌで添加され、全用量が４〜５ｍｌとなる。該細胞は室温で１時間インキュベートされ、続いて１５ｍｌの培地が添加される。感染細胞は、２７℃で４８〜７２時間インキュベートされる。感染Ｓｆ２１細胞が掻き取られ、５０ｍｌチューブに集められ、Sorvall遠心機において、４℃で１０分間、１１００ｇで遠心される。細胞ペレットは、氷冷ＰＢＳで１回洗浄され、２．５×１０７細胞当たり可溶化バッファー０．６ｍｌで可溶化される。必要に応じてピペッティングされながら、氷上に１０分間置き、細胞は完全に可溶化される。該細胞可溶化物は、ＳＳ−３４ローターを有するSorvall遠心機において、４℃で１０分間、１４，５００ｇで遠心され、そして上清が新しいチューブに移されて−８０℃で保存される。２．５×１０７細胞当たり、氷冷ＰＢＳ中で平衡化されたパッケージ化グルタチオン−セファロース４Ｂビーズ１００μｌを用いて、該細胞可溶化物から、ｃ−Ｒａｆ−１が精製される。ＧＳＴ−ｃ−Ｒａｆ−１は、ビーズと結合するように、揺り動かされながら４℃で１時間置かれる。ビーズと結合したＧＳＴ−ｃ−Ｒａｆ−１がカラムに移される。該カラムは、可溶化バッファーで１回、そして氷冷Ｔｒｉｓ緩衝食塩水で２回洗浄されている。氷冷溶出バッファーが添加され、そしてカラムの流れが止められて、遊離グルタチオンが、グルタチオン−セファロースビーズとＧＳＴ−ｃ−Ｒａｆ−１の相互作用を阻止するのが可能となる。分画（１ｍｌ）が、事前に冷却されたチューブに集められる。各チューブは、凍結解凍サイクル中、キナーゼ活性を維持するために１０％  グリセロール（最終濃度）を含有する。ＧＳＴ−ｃ−Ｒａｆ−１キナーゼタンパク質の精製分画が、−８０℃で保存される。
【００３９】
ＩκＢがｃ−Ｒａｆ−１キナーゼの基質として用いられる。ＩκＢは、Ｈｉｓ標識タンパク質ＢＬ２１として細菌中で発現する。ＩκＢプラスミド含有ＬｙｓＳ細菌を、ＬＢ培地中で０．６ＯＤ（６００ｎｍ）まで成長させ、続いて３７℃で３時間、ＩＰＴＧ（最終濃度１ｍＭ）でＩκＢの発現が誘導される。続いて、該細菌は、超音波処理用バッファー［５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．０、１ｍＭ  ＤＴＴ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ］中での超音波処理（マイクロチップの限界を１分当たり３回の設定とする）により可溶化され、１０，０００ｇで１５分間遠心される。上清が硫酸アンモニウムと混合され、最終濃度３０％とされる。該混合物が４℃で１５分間揺り動かされ、続いて１０，０００ｇで１５分間遠心される。ペレットは、１０ｍＭ  ＢＳＡ含有結合バッファー（Novagen）に再懸濁される。該溶液が、Ｎｉ−アガロース（Novagen）に適用され、Novagenのマニュアルに従い洗浄される。溶出バッファー（０．４Ｍ  イミダゾール、０．２Ｍ  ＮａＣｌ、８ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．９）を用いて、ＩκＢがカラムから溶出される。タンパク質含有分画が、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８、１ｍＭ  ＤＴＴ中で透析される。
【００４０】
阻害剤の存在下または非存在下の存在下で、ＩκＢへの［γ３３Ｐ］ＡＴＰ由来３３Ｐ結合を測定することで、ｃ−Ｒａｆ−１タンパク質キナーゼの活性がアッセイされる。該アッセイは、９６ウェルプレートにおいて、外界温度で６０分間行われる。これは、ｃ−Ｒａｆ−１キナーゼ（４００ｎｇ）、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５ｍＭ  ＭｎＣｌ２、１０μＭ  Ｎａ３ＶＯ４、１ｍＭ  ＤＴＴ、および１％  ＤＭＳＯの存在下で６００ｎｇのＩκＢを用いた０．３μＣｉ／アッセイ［γ３３Ｐ］−ＡＴＰ（１０μＭ  ＡＴＰ）（全量３０μｌ）で行われる。該反応は、２５０ｍＭ  ＥＤＴＡ１０μｌの添加により終結され、事前にメタノールで５分間浸漬され、水で洗浄後０．５％  Ｈ３ＰＯ４で５分間浸漬されたイモビロンＰＶＤＦ膜（Millipore, Bedford, MA, USA）に、該反応混合物３０μｌが移され、真空源から切断するように弁操作をした真空装置に取り付けられる。全試料をスポッティング後、真空装置をつなぎ、各ウェルは、０．５％  Ｈ３ＳＯ４２００μｌで洗浄される。膜が取り出され、シェーカー上で、０．５％  Ｈ３ＰＯ４で４回、エタノールで１回洗浄される。乾燥後、該膜はPackardのトップカウンター９６ウェルフレームに取り付けられ、そしてMicroscint［登録商標］（Packard）を１０μｌ／ウェルで添加され、外界温度にてカウントされる。
【００４１】
驚くべきことに、式ＩまたはＩＩの化合物は予期しない可能性を有し、特に腫瘍および脳における生体内還元（脱酸素化）により、低酸素選択的産物として働くこともわかった。深刻な低酸素状態が固形腫瘍組織または脳において生じるため、低酸素活性化前薬剤が癌治療において特に有用である。低酸素の細胞が、毒性のない低酸素活性化前薬剤による治療に開発され得る。従って、Ｎ−オキシド部分が完全還元されるため、腫瘍または脳における式ＩまたはＩＩの化合物の取り込みは高く、かつ腫瘍または脳における式ＩまたはＩＩの化合物の還元型の蓄積も生じる。
【００４２】
式ＩまたはＩＩの化合物の別の利点は、化合物Ａの担体介在性拡散（efflux）より優れた効果である（飽和システム、おそらくＰ−ｇｐによる）。このほとんど明らかでない拡散の結果は；
−より大きな吸収量、
−脳におけるより高薬剤レベル、および
−腫瘍におけるより高薬剤レベル、
である。
【００４３】
Ｐ−ｇｐおよび輸送機序への該効果が次に示される；
２１〜２５日間、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルター（Falcon［登録商標］）上で単層培養させたＣａｃｏ−２細胞が、輸送実験に用いられる。ＰＥＴフィルター上単層培養Ｃａｃｏ−２細胞、ならびにＣａｃｏ−２細胞のないＰＥＴフィルターのみ（システムの確認のため）を横切る化合物の拡散は、それぞれ強力な拡散ポンプ阻害剤であるＣｓＡおよびベラパミルの存在下または非存在下で、次の様に測定される：輸送実験に先立ち、アクセプターコンパートメント中の培地（底面用０．２ｍｌおよび基底膜側面用１．０ｍｌ）が、３７℃で事前にインキュベートされたアクセプター溶液（ＨＢＳＳ、興味ある阻害剤含有相当物）で置き換えられる。実験を開始するために、ドナーコンパートメント中の培地（底面用０．３５ｍｌおよび基底膜側面用１．１５ｍｌ）が、３７℃で事前にインキュベートされたドナー溶液（ＨＢＳＳ中の化合物、興味ある阻害剤含有相当物）で置き換えられる。等量の１５０μｌが、約１分後および１２０分後に、ドナーおよびアクセプター側から取り出される。底面から側面、および側面から底面への輸送実験は、３７℃のインキュベーター中で振盪しないで行われる（トリプリケート）。
【００４４】
さらに、式ＩまたはＩＩの化合物の血漿タンパク質結合は、化合物Ａで観察されるものより、遊離分画および／または血漿タンパク質（例えば、アルブミン、α−１酸性糖タンパク質（ＡＡＧ））結合分画で優れている。ＡＡＧとの結合の程度が低くなると、Ｎ−オキシドの遊離分画の明確な変動をほとんど生じず、化合物Ａの遊離分画の影響も有する。臨床的に適切な用量である４００ｍｇ１日用量（９００〜２６００ｎｇ／ｍｌ濃度の化合物Ａ）で、化合物Ａの遊離分画は４から５％の範囲となる。赤血球分配を用いて、化合物Ａは主に、アルブミンおよびα−１酸性糖タンパク質（ＡＡＧ）と結合すると見出された。リポタンパク質およびγグロブリンとの結合分画は、５％未満であった。式ＩまたはＩＩの化合物の血漿タンパク質結合の減少は、次の例で示される。
【００４５】
式ＩまたはＩＩの化合物の遊離（または非結合）分画は、化合物Ａについても用いられた超遠心分離法により測定される（欧州特許出願番号第１２５０１４０号、または２０００年１２月２２日に出願された国際特許出願ＷＯ０１／４７５０７を参照）。ヒト血清アルブミン（４０ｇ／ｌ）およびα−１酸性糖タンパク質（１ｇ／ｌ）溶液が、０．９％  ＮａＣｌ（ｗ／ｖ）含有ソレーセン（Soerensen）緩衝液中で調製される。式ＩまたはＩＩの化合物のストック溶液３０μｌが、タンパク質溶液３ｍｌに直接混合され、目的の最終濃度３００〜５０００ｎｇ／ｍｌの式ＩまたはＩＩの化合物（エタノール最終濃度０．５％、因子１：２００）が得られる。一定に軽く攪拌されながら、３７℃で３０分間インキュベーション後、該混合タンパク質試料（ｎ＝３／４）は、壁のぶ厚いポリカーボネート遠心チューブを用いて、３７℃で少なくとも５時間、２００’０００ｇで遠心（固定角ローターで遠心）される。回転はブレーキをかけないで止められる。式ＩまたはＩＩの化合物の濃度が、インキュベーション後（遠心前）、および遠心後の上清中で測定される。
【００４６】
式ＩまたはＩＩの化合物の薬物動態は、輸送機序の問題（例えば、Ｐ−ｇｐ）として血漿における、Ｃｍａｘ（血漿中で観察された最も高濃度（質量／用量単位））、半減期（測定された薬理応答の半分の減少を観察する、薬剤投与後の時間を意味する；１つの実施態様において、半減期が少なくとも５０％延びた場合、半減期が増強される）、またはＡＵＣ（曲線下面積（ＡＵＣ）で定義される、時間当たりの血漿濃度（質量−時間／用量の単位））について、化合物Ａより利点がある。該利点のある薬物動態は、動物（例えば、ラット）に、１用量の式ＩまたはＩＩの化合物を投与（一方の群の動物は静脈内投与され、もう一方の群の動物は経口投与される）することで示される。選択された時間点（例えば、０．０８３分（ｉｖ：静脈内注射））、およびｉｖまたはｐｏ（経口投与）の０．２５、０．５、１、２、４、６、８、１０、１２、２４、および４８時間後で、血液が採取される。血漿は、直ちに血液を遠心して、調製される。ＨＰＬＣ／ＵＶ検出法またはＬＣ−ＭＳを用いて、未変化の式ＩまたはＩＩの化合物および化合物Ａが、血漿中で測定される。
【００４７】
さらに、血漿タンパク質との式ＩまたはＩＩの化合物の低血漿タンパク質結合は、非結合薬剤の分画（ｆｕ）が高くなることにより、分布の見かけ上の量的増加を引き起こし得る。有利に、器官および組織（脳を含む）への式ＩまたはＩＩの化合物の分布は、化合物Ａのものと異なる。これは、次で示され得る。
【００４８】
−非放射標識Ｎ−オキシドを投与されたマウスまたはラットの脳における、式ＩまたはＩＩの化合物および化合物Ａ
動物（例えば、マウスまたはラット）は、１用量の式ＩまたはＩＩの化合物を投与される（一方の群の動物は静脈内投与され、もう一方の群の動物は経口投与される）。該動物は、選択された時間点（例えば、０．０８３分（ｉｖ）、およびｉｖまたはｐｏ投与の１、８、２４、および４８時間後）で屠殺される。処置動物の脳が取り出され、脳のホモジェネートが調製され、そして式ＩまたはＩＩの化合物、および化合物Ａの分析（ＨＰＬＣ／ＵＶまたはＬＣ−ＭＳ）用に、試料が調製される（例えば、メタノール、アセトニトリル等の様な、有機溶媒でホモジェネートして抽出される）。脳および血漿中の式ＩまたはＩＩの化合物、および化合物Ａの濃度が、脳／血漿比のために測定される。
【００４９】
−放射標識Ｎ−オキシドを投与されたマウスまたはラット中の放射物質の分布
組織分布研究のため、放射標識Ｎ−オキシド１０ｍｇ／ｋｇ（ｐｏ）（例えば、［１４Ｃ］標識；１００μＣｉ／ｋｇ体重）が、動物に投与される。該動物の体中への放射物質の取り込み／分布が、定量的全身自動ラジオイムノグラフィー（ＱＷＡＢＬ）を用いて、調べられる。該動物は、選択された時間点で屠殺され、約−７５℃のドライアイスとヘキサンの混合物中で凍結される。該凍結動物は、約−７５℃の事前に冷却された２％  Ｎａ−ＣＭＣ水性ゲル中に埋め込まれる；４０μｍのぶ厚い切片は、CryoMacrocut寒冷ミクロトーム（Leica Instr. GmbH, D-Nussloch）において、約−２０℃で得られる。切片の脱水は、寒冷ミクロトームにおいて、−２３℃で２４〜６０時間で行われる。該切片は、バックグランドの増加を最小にするために、鉛製シールドボックス中で、室温にて１時間、ＢＡＳ  ＩＩＩイメージングプレート（Fuji Photo Film Co., Ltd., J-Tokyo）に露光される。放射能が体中に均等に分布された場合、該露光時間により、約２ｄｐｍ／ｍｇ、すなわち、全放射性用量の約０．２〜０．４％に対応する放射能濃度の検出が可能となる。スキャンは、露光が終わった後直ちに、制御された光条件下で、１０２４段階の１００μｍのスキャン段階で、富士ＢＡＳ２０００ＲＥホスホイメージャー中で行われる。イメージ解析は、次のように行われる：生じた光刺激性発光データファイルは、バックグランドを引くことにより補正され、ＭＣＩＤ／Ｍ４（３．０Ｒｅｖ．１．３）イメージ解析機（Imaging Research, St. Catherines, Ontario, Canada）の助けを借りて、電気的に処理され、そして試料と同じ条件下で処理された、放射性血液スケールから得られた第１の多項式検量線を用いて、放射能濃度に自動的に変換される。検出値（ＬＤ）および定量値（ＱＬ）限度は、ＬＤ＝バックグランドの平均値（ｎ＝１０）＋３ＳＤ；ＱＬ＝３ＬＤにより、決定される。
【００５０】
測定範囲の大きさは、検量線を設定するために用いられた血液スケールの各血液標準のものと同じである。イメージファイルは、Adobe Photoshop［登録商標］ソフトウエアを用いて処理された。
【００５１】
ＱＷＡＢＬを用いた全放射活性物質の分布について、ＨＰＬＣ／ＵＶまたはＨＰＬＣ放射能、および／またはＬＣ−ＭＳを用いた、選択試料中の未変化のＮ−オキシドおよび／または化合物Ａの測定のために、器官または組織を用いることが可能とされた、処理動物の半分だけが用いられる。
【００５２】
式ＩまたはＩＩの化合物は、Ｎ−オキシドの極性が高いため、ＣＹＰ４５０［１，２］との親和性も低くなる。該酵素は、市販の薬剤のほとんどを代謝させる。親和性が低くなると、薬剤／薬剤相互作用の可能性も小さくなる。特に、ピペラジン／ピリジン部分の様な塩基性窒素のブロックが、特に、ピペラジン環系の窒素原子の様な塩基性部分を必要とするアスパラギン酸塩残基とのイオン結合により、物質を結合する酵素であるＣＹＰ２Ｄ６との親和性を減少させる。プールから取り出した、１０人の違うヒトの肝ミクロソームが、それぞれのＣＹＰ４５０アイソザイム特異的活性の所定のマーカー基質でのその代謝活性（ＮＡＤＰＨ）に必要な、全補助因子と共にインキュベートされる。可能性のある阻害剤が濃度を増加しつつ添加され、代謝反応が、対応する分析方法（ＬＣ／ＭＳ、ＨＰＬＣ、蛍光法）により評価される。阻害剤なしでの転換率が１００％とされ、阻害率は、転換の５０％を抑制するのに必要な阻害剤の濃度として評価される（ＩＣ５０）。次のマーカー基質を用いる：
【００５３】
【表１】
2005519908.tif 000006
【００５４】
さらに、式ＩまたはＩＩの化合物は、移植、例えば、同種間移植の結果として起こる疾患、特に、閉塞性細気管支炎（ＯＢ）（すなわち、同種間肺移植の慢性拒絶反応）の様な組織拒絶反応の処置において、有用な効果を示す。ＯＢのない患者と対照的に、ＯＢのある患者はしばしば、気管支肺胞洗浄液中のＰＤＧＦ濃度の上昇を示す。式ＩまたはＩＩの化合物が、気管の同種間移植を受けたラットに例えば、５０ｍｇ／体重でｉ．ｐ．投与されると、それは、１０日および３０日後に１グループ当たり１０個の移植片を取り除いた後に、可能性のある上皮性病変および気道の閉塞の形態学的分析について、および式ＩまたはＩＩの化合物は、上皮壊死または炎症性細胞による浸潤に有意な影響をしないが、対照と比較して管腔の線維増殖および閉塞を顕著に減少させる、作用の免疫組織化学経路の調査について、示され得る。他の免疫調節性または抗炎症性物質との共同効果は、例えば、シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）、ラパマイシン、またはアスコマイシン、またはその免疫抑制剤類似体、例えば、シクロスポリンＧ、ＦＫ−５０６、または両立性化合物；コルチコステロイド；シクロホスファミド；アザチオプリン；メトトレキサート；ブレクナー；レフルノミド；ミゾリビン；ミコフェノール酸；ミコフェノール酸モフェチル；１５−デオキシスペルグアリン；免疫抑制剤抗体、特に、白血球受容体、例えば、ＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２５、ＣＤ２８、Ｂ７、ＣＤ４５、ＣＤ５８、または他のリガンドのモノクローナル抗体；または、ＣＴＬＡ４Ｉｇの様な免疫調節性化合物と組み合わせて、用いられるとき、可能となる。例えば、ＣｓＡ（１ｍｇ／ｋｇ  ｓ．ｃ．）が、式ＩまたはＩＩの化合物（５０ｍｇ／ｋｇ）と組み合わせられる場合、共同作用が観察される。
【００５５】
式ＩまたはＩＩの化合物は、再狭窄およびアテローム性動脈硬化症の様な、血管平滑筋細胞遊走および増殖と関連する疾病（ＰＤＧＦおよびＰＤＧＦ受容体もしばしば作用する）においても有効である。該効果、および試験管内および生体内での血管平滑筋細胞の増殖または遊走に関するその結果は、式ＩまたはＩＩの化合物の投与により、および血管内膜の肥厚、続いて生体内での機械的障害への効果を調べることによっても、示され得る。
【００５６】
式ＩまたはＩＩの化合物は、０．１Ｎ  ＨＣｌ、または試験管内研究用に１０ｍＭ濃度のＤＭＳＯ中で用いられる。ストック溶液が細胞培地でさらに希釈され、実験用に１０から０．１μＭ濃度で用いられる。生体内投与のため、式ＩまたはＩＩの化合物は、例えば、ＤＭＳＯ中に２００ｍｇ／ｍｌ濃度で溶解され、続いて０．９％  食塩水中の１％  Ｔｗｅｅｎと１：２０で希釈される。超音波処理後、透明溶液が得られる。ストック溶液は、投与の前日にそれぞれ新たに調製される（式ＩまたはＩＩの化合物は、経口投与用に脱イオン水に、非経腸投与用に０．９％  食塩水に簡単に溶解されてもよい）。投与は、操作の２４時間前に行われる。式ＩまたはＩＩの化合物は、観察全期間中、１日当たり１回用量５０ｍｇ／ｋｇｉ．ｐ．でラットに投与される。対照のラットは、同じだが、式ＩまたはＩＩの化合物が存在しない製剤を投与される。経口投与も可能である。
【００５７】
大動脈平滑筋細胞の初代培養は、Thyberg et al.（Differentiation 25, 156-67 (1983)参照）に記載の方法の変法を用いて、９から１１日齢のＤＡ（ＡＧ−Ｂ４、ＲＴ１ａ）のラット大動脈から単離される。該大動脈は縦切開により開けられ、内皮が注意深く取り除かれる。外膜および中膜が分けられ、そして該中膜が、リン酸緩衝生理食塩水中０．１％  コラーゲナーゼおよびＤＮＡｓｅで、３７℃で３０分間切断される。細胞は遠心され、培地に懸濁され、続いてプラスチックバイアルで増殖させられる。初代細胞は、２から６継代後、実験に用いられる。継代培養は、１０％  ウシ胎児血清、２ｍｍｏｌ／ｍｌ  グルタミン、１００ｍｍｏｌ／ｍｌ  ストレプトマイシン、および１００Ｕ／ｍｌ  ペニシリンを添加した、ＤＭＥＭ（ダルベッコ変法イーグル培地）中で維持される。同定目的上、該細胞は、ガラススライドカバー上で増殖させられ、平滑筋細胞由来の抗αアクチン抗体を用いて免疫組織化学染色される（以下参照）。
【００５８】
平滑筋細胞の遊走は、上方と下方のコンパートメントが、８μｍの孔径のポリエチレンカーボネート膜で分けられている、トランスウェル細胞培養挿入物（Costar, Cambridge, MA）を用いて、試験管内で定量される。該細胞（１００万細胞／ｍｌ濃度、１００μｌ）は、上方コンパートメントに入れられる。２時間後、０．５％  ウシ胎児血清および０．１％  ウシ血清アルブミンを添加された６０ｎｇ／ｍｌ  ＰＤＧＦ−ＢＢまたはＰＤＧＦ−ＡＡ（Upstate Biotechnology Inc., Lake Placid, NY）が、下方コンパートメントに添加され、そして式ＩまたはＩＩの化合物が、３、１、０．３、０．１、０．０３、０．０１、および０．００３μＭ濃度で添加される。フィブロネクチン依存性遊走を測定するために、トランスウェルチャンバーは４℃、２４時間で、１０μｇ／ｍｌ濃度のフィブロネクチン（ヒト細胞フィブロネクチン、Upstate Biotechnology Inc.）で覆われる。２４時間遊走後、フィルターが取り出され、エタノール中で固定され、そしてマリーのヘマトキシリン・エオジン染色される。フィルター膜の下側の遊走細胞が、４００×拡大した光学顕微鏡の助けで、フィルターの特定化された部分をカウントすることで、決定される。遊走の阻害は、細胞の割合対対照での割合により、定量される。毒性効果の可能性を除外するため、１０％  ウシ胎児血清を添加したＤＭＥＭ中での３Ｈ−チミジン取り込みにより、細胞の生存力が調べらる。ＰＤＧＦ−ＡＡ、そして特にＰＤＧＦ−ＢＢにより誘導される遊走の阻害は、式ＩまたはＩＩの化合物でも観察される。
【００５９】
実験動物：オスウィスターラット（the Laboratory Animal Centre of the University of Helsinki, Finlandより購入）の大動脈および頸動脈が、裸出される。該ラットは、２４０ｍｇ／ｋｇ  抱水クロラールをｉ．ｐ．投与され、そしてブプレノルフィン（Temgesic, Reckitt & Coleman, Hull, UK）が、手術前後、および手術後の痛みの緩和のため投与される。全動物に、「Principles of Laboratory Animal Care」およびＮＩＨ（NIH Publication 86-23, revised 1985）の「Guide for the Care and Use of Laboratory Animals」と調和した、ヒトケアが行われる。２００〜３００ｇの重さのラットが、裸出法に用いられる。左総頚動脈は、２Ｆ塞栓摘除カテーテル（Baxter Healthcare Corporation, Santa Ana, CA, 27）の腔内通過を介して、内皮を取り除かれる。内皮を取り除くために、カテーテルは、腔内を３回通され、空気０．２ｍｌで膨らまされる。カテーテルの除去後、外頚動脈が縛られ、傷がふさがれる。形態学的変化は、裸出の４日後の頸動脈の真ん中部分と比べて、評価される。胸大動脈は、２Ｆフォーガティー動脈閉塞摘除カテーテルを用いて、内皮を取り除かれる。該カテーテルは、左腸骨動脈を介して胸大動脈に挿入され、空気０．２ｍｌで膨らませられ、腔内を５回通して、内皮が取り除かれる。続いて、腸骨動脈が縛られる。形態学的変化の評価のために、３回（３、７、および１４日）選択される。
【００６０】
細胞増殖を定量するために、ラット頸動脈の裸出の後のブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）での細胞標識のために、３つの異なる方法が用いられる。該モデルにおいて、中膜細胞増殖は、裸出の２４時間後に始まる；内膜の細胞は、７２〜９６時間後に最初に明らかとなる。内膜の細胞が明らかになる前の平滑筋細胞の増殖を定量するために、ＢｒｄＵ標識試薬（ZYMED, San Francisco, CA）０．１ｍｌが、裸出後０から７２時間の手術後の期間に、ｉ．ｖ投与される（計０．１ｍｌで６回）。遊走の最初の波の間の増殖を定量するために、ラットは、手術後７２〜９６時間中８時間の間隔で、ＢｒｄＵ標識試薬０．１ｍｌを３回投与される。遊走の最初の波の終わりでの増殖を定量するために、第３群のラットは、屠殺の３時間前に、パルス用量であるＢｒｄＵ０．３ｍｌを投与される。
【００６１】
形態学的試料は、パラフィン抱埋のため、３％  パラホルムアルデヒド溶液中で４時間固定される。形態学的変化は、マリーのヘマトキシリン・エオジン染色されたパラフィン切片から評価される。異なる管部分の細胞数が、４００×拡大で算定される。培養細胞、および裸出損傷の４日以内の新内膜で明らかとなった細胞を同定するために、アセトン固定した試料の免疫組織化学染色が、平滑筋細胞由来の抗αアクチン抗体（Bio-Makor, Rehovot, Israel）を用いて行われる。初代平滑筋細胞は、同じ染色方法を用いて、アセトン固定ガラスカバー上で同定される。該切片は、１次抗体（希釈率１：２０００）と共にインキュベートされ、洗浄後、続いてペルオキシダーゼ結合ウサギ抗マウスＩｇおよびヤギ抗ウサギＩｇと共にインキュベートされ、続いて色原体３−アミノ−９−エチルカルバゾールおよび過酸化水素を有する基質溶液で処理される。ＢｒｄＵ染色は、１次マウス抗体（Bu20a, Dako, A/S, Denmark）およびベクタステインエライトＡＢＣキット（Vector Laboratories, Burliname, CA）を用いて、パラフィン切片から調製される。該切片は、脱パラフィンされ、５００Ｗのマイクロ波（０．１Ｍ  クエン酸バッファー、ｐＨ６において、５分間を２回）により、続いて、０．１５Ｍ  クエン酸三ナトリウム中９５％  ホルムアミドで、７０℃４５分間処理される。抗体希釈液は、製造元の説明書に従い調製される。切片は、マレーのヘマトキシリン・エオジン染色されてカウントされ、陽性細胞は、内膜、中膜、および外膜について別々にカウントされる。
【００６２】
処置された動物の頸動脈において、平滑筋細胞の細胞数での有意な増加が見られる。外膜および中膜は、細胞数での有意な減少を示した。式ＩまたはＩＩの化合物の結果として、ＢｒｄＵ標識細胞の絶対数の有意な増加は、最初の２回標識期間（０〜７２、および７２〜９６時間）中に、内膜、中膜、および外膜において見られ、９３〜９６時間後、標識細胞数の増加は、全コンパートメントで見られる。平滑筋細胞数の減少は、同様に大動脈裸出動物で見られる。
これらの発見により、式ＩまたはＩＩの化合物は、増殖、そして特に血管の遊走を阻害可能である。
【００６３】
式ＩまたはＩＩの化合物は、血管新生を阻害することも可能である。このことは次で示される：寒天（０．８％）およびヘパリン（２Ｕ／ｍｌ）を、成長因子（ＶＥＧＦ３μｇ／ｍｌ、ＰＤＧＦ１μｇ／ｍｌ、またはｂＦＧＦ０．３μｇ／ｍｌ）ありまたはなしで、含有するチャンバーが、正常マウス（Ｃ５７  ＢＬ／６）の皮下に移植される。ヌードマウスの異物移植モデルにおいて良好な抗腫瘍活性を示す用量で、式ＩまたはＩＩの化合物が経口投与される。該投与は、チャンバーの移植の１日前に開始される。該チャンバーは、５日後に取り出される。血管新生した組織（移植物周辺で伸長したもの）、および該組織の血液容量（外部血液）を測定することにより、血管新生効果が量られる。該血液は、ヘモグロビンを測定されることで決定される。管は寒天中で伸長されないが、該寒天は、血管新生効果が存在すると強烈に赤くなる。化合物が、成長因子により誘導される血管の増大を阻害する場合は、該化合物が、成長因子関連の血管新生効果をブロックすることが示されている。血液の重量は阻害するが、容量は阻害しないことにより、線維芽細胞の増殖への影響が示される。対照応答の抑制は創傷治癒の阻害を示す。１日当たり５０ｍｇ／ｋｇの経口用量の式ＩまたはＩＩの化合物が、３つの成長因子（ＶＥＧＦ、ＰＤＦＧ、ｂＦＧＦ）の血管新生効果を阻害する。
【００６４】
興味深いことに、４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−｛４−ヒドロキシメチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル｝−ベンズアミド、４−［（４−メチル−４−オキシド−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−｛４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル｝−ベンズアミド、および４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（１−オキシド−３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル］−ベンズアミドが、Ｎ−［４−メチル−３−（４−ピリジン−３−イル−ピリミジン−２−イルアミノ）−フェニル］−４−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ベンズアミド（ＳＴＩ５７１またはイマチニブ、以下化合物Ａ）の代謝産物（化合物Ａを投与したヒト体内で見いだされる）を表すことが分かった。該化合物Ａは、ＥＰ  ０５６４４０９Ｂ１に記載され、メタンスルフォン酸塩の形が、ＷＯ  ９９／０３８５４に記載されている。
【００６５】
上記の代謝産物に加えて、さらに化合物Ａの代謝産物がサルにおいて同定された。例えば、４−［（４−メチルカルボニル−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−｛４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル｝−ベンズアミド、４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−｛４−カルボキシ−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル｝−ベンズアミド、４−カルボキシ−Ｎ−｛４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル｝−ベンズアミド、４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル］−ベンズアミド（ピリジニル部分は環の炭素上でヒドロキシで置換されている）、および４−［（１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル］−ベンズアミド（ピリジニル部分は環の炭素上でヒドロキシで置換されている）。
【００６６】
好ましくは、式ＩＩ
（式中、Ｒ１が、水素であり、
Ｒ２が、メチルまたはヒドロキシメチルであり、
Ｒ３が、メチルであり、そして
星印が、必要に応じて酸素原子と結合して、対応するＮ−オキシドを形成する、窒素原子を示す（ただし、Ｒ２がメチルである場合、星印の３個の窒素原子のうち少なくとも１個が酸素原子と結合している）の化合物、または該化合物の塩が与えられる。
【００６７】
特に好ましくは、式ＩＩ
（式中、Ｒ１が、水素であり、
Ｒ２が、ヒドロキシ−低級アルキルであり、
Ｒ３が、メチルであり、そして
星印が、必要に応じて酸素原子と結合して、対応するＮ−オキシドを形成する窒素原子を示す）化合物、または該化合物の塩がさらに与えられる。
【００６８】
特に好ましくは、４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−｛４−ヒドロキシメチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル｝−ベンズアミド、４−［（４−メチル−４−オキシド−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−｛４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル｝−ベンズアミド、および４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（１−オキシド−３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル］−ベンズアミドから選択される化合物、および該化合物の医薬的に許容される塩である。
【００６９】
非常に好ましいのは、以下の実施例で示される式ＩまたはＩＩの化合物、またはその塩、特に医薬的に許容される塩である。
【００７０】
式ＩまたはＩＩの化合物の製造についての記載はないが、式ＩまたはＩＩの化合物、またはその塩は、それ自体既知の方法で製造される。特に、
ａ）式ＩＩＩ
【化４】
2005519908.tif 000007
（式中、Ｒ１およびＲ２は、式Ｉで与えられた意味を有する）の化合物が、式ＩＶ
【化５】
2005519908.tif 000008
（式中、Ａは式Ｉで与えられた意味を有する）の化合物と反応させられ、
そして、生じた化合物が、適当な酸化剤で式ＩのＮ−オキシドに転換されるか、あるいは、Ｎ−オキシドに転換されない場合は、Ａが環の炭素上のオキソで置換されるはずであり；
好ましくは、式ＩＩＩ
【化６】
2005519908.tif 000009
（式中、Ｒ１およびＲ２は、式ＩＩで与えられた意味を有し、星印は、必要に応じて酸素原子と結合する窒素原子を示す）の化合物が、式ＩＶ
【化７】
2005519908.tif 000010
（式中、Ｒ３は、式ＩＩで与えられた意味を有し、星印は、必要に応じて酸素原子と結合する窒素原子を示す）の化合物と反応させられ；
従って、生じた化合物は、必要に応じて、適当な酸化剤でＮ−オキシドに転換され；あるいは、
ｂ）式Ｖ
【化８】
2005519908.tif 000011
（式中、Ｒ１およびＲ２は、式Ｉで与えられた意味を有し、Ｈａｌは、ハロ（例えば、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｆ、−Ｉ）である）の化合物が、式ＶＩ
【化９】
2005519908.tif 000012
（式中、Ａは、式Ｉで与えられた意味を有する）の化合物と反応させられ、
従って、生じた化合物は、必要に応じて、安定な酸化剤で式ＩのＮ−オキシドに転換され；
好ましくは、式Ｖ
【化１０】
2005519908.tif 000013
（式中、Ｒ１およびＲ２は、式ＩＩで与えられた意味を有し、Ｈａｌは、ハロ（例えば、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｆ、−Ｉ）であり、星印は、必要に応じて酸素原子と結合する窒素原子を示す）の化合物が、式ＶＩ
【化１１】
2005519908.tif 000014
（式中、Ｒ３は、式ＩＩで与えられた意味を有し、星印は、必要に応じて酸素原子と結合する窒素原子を示す）の化合物と反応させられ；
従って、生じた化合物は、必要に応じて、適当な酸化剤で式ＩＩのＮ−オキシドに転換されることにより、
方法ａ）またはｂ）の出発化合物中に存在し、反応で加わることを意図されない官能基は、必要なら保護された形で存在し、該存在する保護基が切断され、これにより、該出発化合物が塩の形でも存在し（ただし、塩形成基が存在し、塩の形での反応が可能である）；
および、所望なら、方法ａ）またはｂ）で生じた式ＩまたはＩＩの化合物は、式ＩまたはＩＩの別の化合物に転換され、生じた式ＩまたはＩＩの遊離化合物は塩に転換され、生じたＩまたはＩＩの化合物の塩は、遊離化合物または別の塩に転換され、そして／または式ＩまたはＩＩの化合物の異性体混合物は、個々の異性体に分けられる。
【００７１】
最も好ましい実施態様において、式ＩまたはＩＩの化合物は、実質的に純粋な形である。
用語「実質的に純粋」は、本発明において、血中で見出される、実質的に遊離の生物学的材料、本質的には１０％未満、好ましくは１％未満、そして最も好ましくは、遊離の該生物学的材料を意味する。
【００７２】
変法の説明
方法ａ）またはｂ）で生じた化合物を、式ＩまたはＩＩの化合物のＮ−オキシドに転換するのに適当な酸化剤は、好ましくは、過酸化水素または適当な過酸であり、例えば、特に、ｍ−クロロ−過安息香酸の様な適当な過安息香酸である。反応は、不活性溶媒、例えば、ジクロロメタンの様なハロゲン化炭化水素中で、約−２０℃から該溶媒の沸点までの温度で、一般には＋１００℃以下で行われる。過酸化水素が酸化剤として用いられる場合、反応は、好ましくは水中で、およそ室温で行われる。続いて、所望のＮ−オキシドが、例えば、カラムクロマトグラフィーまたは再結晶の様な通常の方法を用いて精製され得る。
【００７３】
一方、式ＩまたはＩＩのＮ−オキシドは、上記段落に記載の方法に従い、酸化済みの、式ＩまたはＩＩの化合物の合成において用いられた出発化合物により、製造されてもよい。
【００７４】
方法a）について：
式ＩＩＩの化合物と、式ＩＶの化合物との反応は、好ましくは、適当な不活性溶媒、特に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中、プロピルホスホン酸無水物（Fluka, Buchs, Switzerland）、および特にトリエチルアミンの様な塩基の存在下で、好ましくは室温で行われる。
【００７５】
方法ｂ）について：
式Ｖの化合物と、式ＩＶの化合物との反応は、好ましくは、適当な不活性溶媒、特にアルコール（例えば、特にエタノールの様な低級アルコール）中、上昇温度、好ましくは、利用された溶媒の沸点近くで行われる。
式Ｖの化合物中に存在するハロは、例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨード、好ましくは、クロロである。
【００７６】
追加方法の段階
所望なら行われる追加方法段階において、反応で加わらない出発化合物の官能基は、非保護の形で存在するか、または例えば、１以上の保護基で保護される。続いて、該保護基が、既知の方法の１つにより、全体的または部分的に除去される。
【００７７】
該保護基、およびそれらを導入し、そして除去する方法は、例えば、「Protective Groups in Organic Chemistry」Plenum Press, London, New York 1973、「Methoden der organischen Chemie」Houben-Weyl, 4th edition, Vol. 15/1, Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart 1974 およびTheodora W. Greene「Protective Groups in Organic Synthesis」John Wiley & Sons, New York 1981に記載されている。該保護基の特徴は、容易に、すなわち、不所望の２次反応を生じることなく、例えば、加溶媒分解、還元、光分解、または代わりのものにより、生理学的条件下で除去され得ることである。
【００７８】
しかしながら、式ＩまたはＩＩの最終生成物は、式ＩまたはＩＩの別の最終生成物の製造用の出発物質においては、保護基として用いられない置換基も含有する。従って、本発明の範囲において、式Ｉの特定の所望の最終生成物の構成要素ではない、容易に除去可能な基のみが、本明細書が別段に指示していない限り、「保護基」として示される。
【００７９】
一般的方法条件
本明細書で記載の方法全てが、既知の反応条件下、好ましくは、特異的に表された条件下で、溶媒または希釈剤、好ましくは、用いられた試薬と不活性であり、かつそれらを溶解可能なものの非存在下または一般的存在下で、触媒の存在下または非存在下、縮合剤または中和剤、例えば、イオン交換体、典型的には、陽イオン交換体、例えば、反応および／または反応物質の種類に依存して、プロトン化（Ｈ＋−）の形で、下降、正常、または上昇温度で、例えば、−１００°Ｃから約１９０°Ｃの範囲、好ましくは、約−８０°Ｃから約１５０°Ｃ、例えば、−８０℃から−６０°Ｃ、室温、−２０℃から４０℃、０℃から１００°Ｃ、または用いられた溶媒の沸点、雰囲気圧下または密閉容器中で、必要なら加圧下、および／または不活性、例えば、アルゴンまたは窒素雰囲気下で、行われ得る。
【００８０】
本発明は、中間体として、任意のステージで入手可能な化合物から出発し、省略した段階を行うか、または任意のステージで中止するか、または反応条件下で出発物質を形成するか、または反応誘導体または塩の形の該出発物質を用いるか、または本発明による方法により該方法の条件下で入手可能な化合物を製造する方法の該実施態様、およびインサイツでの該化合物の製造方法にも関する。好ましい実施態様において、好ましいものとして上で記載の化合物を生じる出発化合物から出発する。
【００８１】
好ましい実施態様において、式ＩまたはＩＩの化合物は、実施例１で定義される方法および方法段階により、製造される。
【００８２】
塩を含む、式ＩまたはＩＩの化合物は水和物の形でも生じうるし、あるいは、その結晶は、例えば、結晶用に用いられた溶媒を含み得る（溶媒和物として存在）。
【００８３】
出発物質
新たな出発物質および／または中間体、ならびにその製造方法は、同様に本発明の対象である。好ましい実施態様において、該出発物質が用いられ、反応条件は、好ましい化合物を生じることが可能となるように選択される。
【００８４】
上記方法で用いられる出発物質は既知であり、既知の方法により製造されることが可能であり（ＥＰ  ０  ５６４  ４０９  Ｂ１も参照）、あるいは市販されている。特に、それらは、実施例で記載の方法を用いて製造され得る。
【００８５】
出発物質の製造において、反応に参加しない、存在する官能基は、所望なら保護されるべきである。好ましい保護基、その導入、および除去が、上でまたは実施例で記載される。それぞれの出発物質および一過性物質の代わりに、その塩も反応用に用いられ（ただし、塩形成基が存在する）、塩との反応も可能となる。用語出発物質が上でまたは以下で用いられる場合、その塩が、妥当でかつ可能な限りいつでも含まれる。
【００８６】
式ＩＩＩ（式中、Ｒ２は、低級アルキルであり、星印をつけられた窒素原子は、置換基としての酸素原子と結合しない）の化合物は、ＥＰ０  ５６４  ４０９  Ｂ１に記載の方法で製造され得る。続いて、該化合物は、「方法の変形についての記載」で記載の適当な酸化剤を用いて、対応するＮ−オキシドに転換される。
【００８７】
式ＩＩＩ（式中、Ｒ２は、ヒドロキシ−低級アルキルである）の化合物は、実施例１の様に、次の式ＶＩＩ
【化１２】
2005519908.tif 000015
の化合物で出発することにより、製造され得る。
【００８８】
残った出発物質は既知であり、例えば、ＥＰ  ０  ５６４  ４０９  Ｂ１に記載される既知の方法により、製造されることが可能であり、また市販されている；あるいは、特に、それらは、実施例に記載の方法を用いて製造され得る。対応するＮ−オキシドを形成するための適当なＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体も、例えば、ＥＰ  ０  ５６４  ４０９  Ｂ１に記載されている。
【００８９】
本発明は、該疾病、特に腫瘍性疾病に罹患しているヒトを含む、温血動物の処置方法にも関し、関係疾病に対して有効な式ＩまたはＩＩの化合物の量、特に、抗増殖性および特に腫瘍阻害効果を有する量が、かかる処置が必要なヒトを含む温血動物に投与される。本発明は、さらに、上記のチロシンキナーゼ、特にＰＤＧＦ受容体キナーゼ、ｖ−Ａｂｌキナーゼ、および／またはｃ−Ｋｉｔ受容体キナーゼの阻害のため、または神経膠腫、卵巣腫瘍、前立腺腫瘍、大腸腫瘍、および肺腫瘍、特に小細胞肺癌腫、および乳房腫瘍または他の婦人科系腫瘍の様な、腫瘍の処置のための、式ＩまたはＩＩの化合物の使用にも関する。種、年齢、個々の状態、投与形態、および当該臨床状況、有効量、例えば、約１〜２５００ｍｇ、好ましくは１〜１０００ｍｇ、特に５〜５００ｍｇの１日用量が、体重約７０ｋｇのヒトを含む温血動物に投与される。
【００９０】
従って、さらなる態様において、本発明は、増殖性疾患の処置のための医薬組成物の製造のための、Ｎ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体（ここで、少なくとも１個の窒素原子が酸素原子と結合して、対応するＮ−オキシドを形成している）、または該化合物の医薬的に許容される塩の使用に関する。
【００９１】
好ましくは、本発明は、増殖性疾患の処置のための医薬組成物の製造のための、式ＩまたはＩＩの化合物または該化合物の医薬的に許容される塩の使用に関する。
【００９２】
最も好ましくは、該増殖性疾患は、腫瘍または脳増殖性疾患から選択される。
本発明は、ヒトを含む温血動物を処置する方法に関し、これは、増殖性疾患に罹患しているかかる温血動物に、該疾患に対して有効な用量で、式ＩまたはＩＩの化合物または該化合物の医薬的に許容される塩を投与することを含む。
【００９３】
なお別の実施態様において、本発明は、少なくとも１つのＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体（ここで、少なくとも１個の窒素原子が酸素原子と結合して、対応するＮ−オキシドを形成している）またはその医薬的に許容される塩を、医薬的に許容される担体と共に含む、医薬組成物を提供する。
【００９４】
好ましくは、本発明は、式ＩまたはＩＩの化合物、またはそれらの医薬的に許容される塩を医薬的に許容される担体と共に含む、医薬組成物を提供する。
【００９５】
本発明の組成物は、４−（４−メチルピペラジン−１−イルメチル）−Ｎ−［４−メチル−３−（４−ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］−ベンズアミドの様な少なくとも１つの追加の医薬的に活性な化合物を含有してもよい。
【００９６】
好ましくは、ヒトを含む温血動物の増殖性疾患の処置のための医薬組成物は、式ＩまたはＩＩの化合物または該化合物の医薬的に許容される塩を有効成分として、医薬的に許容される担体と共に含む。
【００９７】
従って、本発明は、有効成分として式ＩまたはＩＩの化合物を、医薬的に許容される担体と共に含む医薬組成物にも関し、特に該疾病の１つの予防または処置のため、該医薬組成物は、例えば、局所、経腸、例えば経口または直腸、または非経腸投与に適している。特に、活性物質を、希釈剤、例えば、ラクトース、ブドウ糖、スクロース、マンニトールソルビトール、セルロース、および／またはグリセリン、および／または滑沢剤、例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸またはその塩、典型的には、ステアリン酸マグネシウムまたはカルシウム、および／またはポリエチレングリコールと共に含有する、錠剤またはゼラチンカプセル剤が経口投与用に用いられる。該錠剤は同様に、結合剤、例えば、マグネシウムケイ酸アルミニウム、スターチ、典型的にはコーン、ウィート、またはライススターチ、ゼラチン、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースおよび／またはポリビニルピロリドン、および所望なら、崩壊剤、例えば、スターチ、寒天、アルギン酸またはその塩、典型的には、アルギン酸ナトリウム、および／または発泡性混合物、または吸着剤、着色剤、香味剤、および甘味剤を含有してもよい。本発明の医薬的に活性な化合物は、さらに、非経腸投与または輸液用の製剤形でも用いられる。該輸液は、懸濁剤は、好ましくは、等調性水溶剤または懸濁剤であり、例えば、活性物質を単独で、または担体、例えば、マンニトールと共に含有する凍結乾燥製剤の場合、使用前に調製されることも可能である。該医薬物質は滅菌され、かつ／または添加剤、例えば、保存剤、安定剤、湿潤剤、および／または乳化剤、可溶化剤、浸透圧の調製用の塩、および／またはバッファーを含有してもよい。所望なら、他のｃ−Ｋｉｔ阻害剤、またはＶＥＧＦ受容体またはｃ−Ｓｒｃ活性の阻害剤の様な医薬的に活性な物質を含有する本医薬組成物が、それ自体既知の方法、例えば、通常の混合、造粒、被覆、溶解、または凍結乾燥により、製造され、約１％から１００％、特に約１％から約２０％の活性物質または物質を含有する。
【００９８】
実施例：
以下の実施例は本発明を例示するものであり、決してその範囲を制限しない。
略号：
ＤＭＦ  Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ｈ  時間
ｍｉｎ  分
ｍ．ｐ．  融点
ＲＴ  室温
ＴＨＦ  テトラヒドロフラン
【００９９】
実施例１：４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−｛４−ヒドロキシメチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル｝−ベンズアミド
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（Fluka, Buchs, Switzerland；５０％、０．６ｍｍｏｌ、３５０μｌ）中のプロピルホスホン酸無水物溶液を、乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍｌ）中のＮ−（５−アミノ−２−ヒドロキシメチル−フェニル）−４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジンアミン（１１７ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）−メチル］−安息香酸二塩酸塩（１２３ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（４４５μｌ、３．２ｍｍｏｌ）の攪拌混合物に、２０分間で添加する。該混合物を室温で２４時間攪拌する。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２０ｍｌ）で処理し、酢酸エチル（２×２０ｍｌ）で抽出する。合併した抽出物を、飽和塩化ナトリウム水溶液（１５ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を減圧下で蒸発させて粗生成物を得る。そしてこれを、０．１％  水中トリフルオロ酢酸と０．１％  アセトニトリル中トリフルオロ酢酸を溶出剤として、逆相高速液体クロマトグラフィー（Nagel Polygoprep Ｃ１８、７μｍ、３００Å；Macherey-Nagel, Duaren, Germany）で精製する。純粋な生成物を含有する分画を合併し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で塩基性化し、減圧下で蒸発させて乾燥させる。残渣を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で処理し、酢酸エチル（５×）で抽出する。合併した抽出物を水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過し、そして溶媒を減圧下で蒸発させて、生成物を得る。これを、メタノール−酢酸エチルから再結晶し、黄白色の結晶固体として表題化合物を得る。融点１９６〜１９８℃。
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δ):2.14 (s, 3H), 2.25-2.45 (m, 8H), 3.52 (s, 2H), 4.56 (s, 2H), 5.50 (br.s, 1H), 7.29 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.41 (dd, J = 2.0, 8.3 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.50 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.52 (dd, J = 3.3, 8.1 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 8.56 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.57 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.59 (ddd, J = 1.4, 2.1, 8.1 Hz, 1H), 8.69 (dd, J = 1.4, 3.3 Hz, 1H), 9.10 (s, 1H), 9.33 (d, J = 2.1 Hz, 1H) and 10.22 (s, 1H).
【０１００】
段階１．１：２−アミノ−４−ニトロベンゼンメタノール
２０℃の乾燥ＴＨＦ（５００ｍｌ）中の２−アミノ−４−ニトロ安息香酸（Aldrich；１８．２ｇ、１００ｍｍｏｌ）の攪拌溶液を、ボランＴＨＦ複合体（ＢＨ３・ＴＨＦ；Fluka；１．０Ｍ、１００ｍｌ）溶液を４５分間滴下して処理し、ガス発生を制御する。続いて、該混合物を６５℃で２時間温める。続いて、攪拌した混合物を０℃まで冷却し、水（２０ｍｌ）で処理し、室温まで温める。塩酸（１２Ｍ、２０ｍｌ）を添加してガス発生を止め、続いて該混合物を６５℃で３０分間温める。続いて、減圧下での回転式蒸発により、冷却した混合物をおよそ１５０ｍｌの容量に濃縮し、懸濁液を得る。該懸濁液を濾過し、沈殿物を酢酸エチル（５００ｍｌ）に再溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２×１５０ｍｌ）で洗浄する。該溶液を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、濾過して、溶媒を減圧下で蒸発させ、粗生成物を生じる。これを、酢酸エチル−ヘキサンからの再結晶で精製し、黄色の結晶固体として表題化合物を得る。融点１２６〜１２８℃。
【０１０１】
段階１．２：２−[（２−プロペニルオキシ）−メチル］−５−ニトロベンゼンアミン
アルゴン雰囲気下で０℃の乾燥ＴＨＦ（３５０ｍｌ）中２−アミノ−４−ニトロベンゼンメタノール（１４．３ｇ、８５ｍｍｏｌ）の攪拌溶液を、ＴＨＦ（Fluka；１．０Ｍ  ８５ｍｌ）中のｔｅｒｔ−ブチル酸カリウム溶液を３５分間滴下して、処理する。該混合物を０℃で１５分間攪拌し、続いて０℃の乾燥ＴＨＦ（８０ｍｌ）中の臭化アリル（７．９ｍｌ、９４ｍｍｏｌ）溶液を５０分間滴下して処理し、続いて２０℃で９０分間攪拌する。該混合物を酢酸エチル（８００ｍｌ）で希釈する。生じた溶液を飽和塩化アンモニウム水溶液（３×４００ｍｌ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させて、濾過し、そして溶媒を減圧下で蒸発させ、粗生成物を得る。これを、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、５０％  ヘキサン中の酢酸エチルで溶出し、茶色の油として表題化合物を得る。
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δ): 4.06 (d, J = 5.3 Hz, 2H)； 4.47 (s, 2H)； 5.22 and 5.34 (dd, J = 10.4, 17.3 Hz, 2H)； 5.65 (br.s, 2H)； 5.98 (m, J = 5.3, 10.4, 17.3 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.38 (dd, J = 2.0, 8.3 Hz, 1H) and 7.52 (d, J = 2.0 Hz, 1H).
【０１０２】
段階１．３:｛２−［（２−プロペニルオキシ）−メチル］−５−ニトロフェニル｝−グアニジン
硝酸（６５％１．０４ｍｌ、１５ｍｍｏｌ）を、２０℃で、エタノール（３０ｍｌ）中の２−［（２−プロペニルオキシ）−メチル］−５−ニトロベンゼンアミン（３．１５ｇ、１５ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に加える。続いて、水（１ｍｌ）中のシアナミド（０．９５ｇ、２２．５ｍｍｏｌ）溶液を、攪拌混合物に９５℃で６０分間滴下する。該混合物に、さらに等量のシアナミド（計２．２ｇ、５８ｍｏｌ）をこの間に加えながら、そして酸性度を硝酸（６５％）の添加により、ｐＨ３に定期的に調整しながら、９５℃で１４時間温める。生じた混合物を０℃まで冷却し、アンモニア水溶液（２５％、５ｍｌ）で塩基性化し、水（１５０ｍｌ）で希釈し、酢酸エチル（３×１００ｍｌ）で抽出する。合併した抽出物を飽和塩化アンモニウム水溶液（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を減圧下で蒸発させ、茶色の油として表題化合物を得る。これを、さらに精製することなく、次の段階で直接用いる。
【０１０３】
段階１．４：Ｎ−｛２−［（２−プロペニルオキシ）−メチル］−５−ニトロ−フェニル｝−４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジンアミン
１−ブタノール（５０ｍｌ）中の｛２−［（２−プロペニルオキシ）−メチル］−５−ニトロ−フェニル｝−グアニジン（３．７５ｇ、１５ｍｍｏｌ）、３−（ジメチルアミノ）−１−（３−ピリジニル）−２−プロペン−１−オン（２．６０ｇ、１５ｍｍｏｌ）、およびエチルジイソプロピルアミン（２．６ｍｌ、１５ｍｍｏｌ）攪拌混合物を、１２０℃で２０時間温める。続いて、溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣を酢酸エチル（１００ｍｌ）中に溶解する。生じた混合物を濾過し（celite）、飽和塩化ナトリウム水溶液（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させ、粗生成物を得る。これを、シリカカラムクロマトグラフィーで精製し、酢酸エチルで溶出し、酢酸エチル−ヘキサンから再結晶し、黄色の結晶固体として表題化合物を得る。融点２１３〜２１５℃。
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6,δ): 4.10 (d, J = 5.3 Hz, 2H)； 4.77 (s, 2H)； 5.22 and 5.35 (dd, J = 10.4, 17.3 Hz, 2H)； 5.96 (m, J = 5.3, 10.4, 17.3 Hz, 1H), 7.58 (dd, J = 4.8, 7.9 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.95 (ddd, J = 1.2, 1.2, 7.9 Hz, 1H), 8.51 (dd, J = 1.6, 8.4 Hz, 1H), 8.67 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.73 (dd, J = 1.2, 4.8 Hz, 1H), 9.05 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 9.23 (br.s, 1H) and 9.35 (d, J = 1.6 Hz, 1H).
【０１０４】
段階１．５：Ｎ−（２−ヒドロキシメチル−５−ニトロ−フェニル）−４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジンアミン
ポリメチルヒドロシロキサン（８６０ｍｇ）、テトラキス（トリフェニルホシン）パラジウム（７０ｍｇ）、および塩化亜鉛（ＴＨＦ中０．５Ｍ、２．６６ｍｌ、１．３３ｍｍｏｌ）を、乾燥ＴＨＦ（６０ｍｌ）中Ｎ−｛２−［（２−プロペニルオキシ）−メチル］−５−ニトロ−フェニル｝−４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジンアミン（２．６０ｇ、７．２ｍｍｏｌ）攪拌溶液に添加する。続いて、該混合物を、アルゴン雰囲気下で、３０℃で３０時間攪拌する。続いて、溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣を得る。これを、飽和塩化ナトリウム水溶液（５０ｍｌ）で処理し、酢酸エチル（３×５０ｍｌ）で抽出する。合併した抽出物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を減圧下で蒸発させ、粗生成物を得る。これを、ＴＨＦから再結晶し、黄白色の結晶固体をして表題化合物を得る。融点２４７〜２５０℃。
【０１０５】
段階１．６：Ｎ−（５−アミノ−２−ヒドロキシメチル−フェニル）−４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジンアミン
エタノール（２３０ｍｌ）中Ｎ−（２−ヒドロキシメチル−５−ニトロ-フェニル）−４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジンアミン（０．２３ｇ、０．７１ｍｍｏｌ）溶液を、２５℃で、ラネーニッケル（０．２ｇ）、大気圧下で水素化する。予測量の水素を１３時間で得る。続いて、混合物を濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させ、粗生成物を得る。これを、シリカカラムクロマトグラフィーで精製し、２５％アンモニア−エタノール−ジクロロメタン（１：９：９０）水溶液で溶出し、黄色の結晶固体として表題化合物を得る。融点２１３〜２１５℃。
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δ): 4.42 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 5.05 (br.s, 2H), 5.26 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 6.23 (dd, J = 2.1, 8.0 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 4.7, 8.0 Hz, 1H), 8.47 (ddd, J = 1.8, 1.8, 8.0 Hz, 1H), 8.53 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.70 (dd, J = 1.4, 4.7 Hz, 1H), 8.88 (s, 1H) and 9.29 (d, J = 2.4 Hz, 1H).
【０１０６】
実施例２：４−［（４−メチル−４−オキシド−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−｛４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル｝−ベンズアミド
３−クロロペルオキシ安息香酸（Fluka, Buchs, Switzerland；５５％、２．０６ｇ、４．２７ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（７０ｍｌ）中４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−｛４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル｝−ベンズアミド（ＥＰ  ０  ５６４  ４０９  Ｂ１の実施例２１に記載の方法で製造；２．００ｇ、４．０５ｍｍｏｌ）攪拌溶液に、−２０℃で添加する。続いて、生じた混合物を、室温で７２時間攪拌する。続いて、溶媒を減圧下で蒸発させ、混合物を得る。これを、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ジクロロメタン−メタノール−水（７０：３０：５）で溶出し、黄色の結晶固体として表題化合物を得る。融点１５４〜１５８℃。
【０１０７】
実施例３：４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（１−オキシド−３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル］−ベンズアミド
Ｎ−メチルピペラジン（９９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を、エタノール（５ｍｌ）中４−クロロメチル−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（１−オキシド−３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル］−ベンズアミド（２２０ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に添加する。続いて、混合物を１００℃で１５時間攪拌し、溶液を得る。続いてこれを室温まで冷却し、酢酸エチル（２００ｍｌ）で処理する。生じた溶液を、水酸化ナトリウム（２Ｍ、１００ｍｌ）および飽和塩化ナトリウム水溶液（１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させ、粗生成物を得る。これを、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、２５％  アンモニア−メタノール−ジクロロメタン（０．５：１０：９０）水溶液で溶出し、黄色の結晶固体として表題化合物を得る。融点２３２〜２３５℃。
【０１０８】
段階３．１：Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（１−オキシド−３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル］−ベンズアミド
実施例２に記載の方法を利用するが、４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−｛４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル｝−ベンズアミドの代わりに、Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル］−ベンズアミド（ＥＰ  ０  ５６４  ４０９  Ｂ１、実施例２０に記載の方法で製造される）を用いて、産出した表題化合物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、１０％  ジクロロメタン中のメタノールで溶出し、エタノールから再結晶し、黄白色の結晶固体として表題化合物を得る。融点２５８〜２６０℃。
【０１０９】
段階３．２：４−メチル−Ｎ−３−［４−（１−オキシド−３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−１，３−ベンゼンジアミン
塩酸（４Ｍ、９ｍｌ）を、ｎ−プロパノール（９ｍｌ）中Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（１−オキシド−３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル］−ベンズアミド（０．４３ｇ、１．０８ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加し、生じた混合物を、１００℃で３４時間温める。冷却した混合物を減圧下で蒸発させ、油を得る。これを、水（１０ｍｌ）に溶解し、濾過し、そして水酸化ナトリウム水溶液（４Ｍ）で塩基性化する。生じた沈殿物を濾過し、水で洗浄し、乾燥させて粗生成物を得る。これを、エタノールから再結晶し、黄色の結晶固体として表題化合物を得る。融点１０４〜１０６℃。
【０１１０】
段階３．３：４−クロロメチル−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（１−オキシド−３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル］−ベンズアミド
ジオキサン（２ｍｌ）中４−（クロロメチル）−塩化ベンゾイル（Fluka, Buchs, Switzerland；１８４ｍｇ、０．９７７ｍｍｏｌ）溶液を、ジオキサン中４−メチル−Ｎ−３−［４−（１−オキシド−３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−１，３−ベンゼンジアミン（２７５ｍｇ、０．９３７ｍｍｏｌ）溶液に滴下して添加し、該混合物を２０℃で７５分攪拌する。続いて、２度目のジオキサン（１ｍｌ）中に溶解の４−（クロロメチル）−塩化ベンゾイル（６０ｍｇ、０．３１７ｍｍｏｌ）を添加し、該混合物をさらに１２０分攪拌する。生じた懸濁液を、酢酸エチル（５０ｍｌ）で処理し、溶液を得る。これを、水酸化ナトリウム水溶液（２Ｍ、２×５０ｍｌ）で洗浄する。酢酸エチル水溶液を、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させ、粗生成物を得る。これを、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、５％  ジクロロメタン中のメタノールで溶出し、黄色の結晶固体として表題化合物を得る。融点２２４〜２２６℃。
【０１１１】
実施例４：４−［（４−メチル−１，４−ジオキシド−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−｛４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル｝−ベンズアミド
４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−｛４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル｝−ベンズアミドモノメタンスルホン酸塩（３．００ｇ、５ｍｍｏｌ；ＷＯ９９／０３８５４に記載の方法で製造される）を、過酸化水素溶液（３％、３０ｍｌ）に添加し、生じた溶液を２０℃で１６０時間攪拌する。続いて、該溶液のｐＨを、水酸化ナトリウム水溶液（４Ｍ）でｐＨ１４に調整し、生じた懸濁液を１．５時間攪拌する。粗生成物を濾去し、水で洗浄し、乾燥させ、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、２５％  アンモニア−エタノール−ジクロロメタン（５：３０：７０）水溶液で溶出し、黄色の結晶固体として表題化合物を得る。融点２４２〜２４４℃。
【０１１２】
実施例５：４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル］−Ｎ−［４−ヒドロキシメチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］アミノ］フェニル］ベンズアミド
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（Fluka, Buchs, Switzerland；５０％、３５０μｌ、０．６ｍｍｏｌ）中プロピルホスホン酸無水物溶液を、実施例１の段階１．６に記載のＮ−［２−［５−アミノ−（２−ヒドロキシ）メチル］フェニル］−４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジンアミン（１１７ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル]安息香酸、ジヒドロクロライド（１２３ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍｌ）中トリエチルアミン（４４５μｌ、３．２ｍｍｏｌ）に、２０分かけて添加する。混合物を、室温で２４時間攪拌する。溶媒を、減圧下で蒸発させ、残渣を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液溶液（２０ｍｌ）で処理し、酢酸エチル（２×２０ｍｌ）で抽出する。合併した抽出物を、飽和塩化ナトリウム水溶液（１５ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を減圧下で蒸発させ、粗生成物を得る。これを、逆相高速液体クロマトグラフィー（Nagel Polygoprep C18、７μｍ、３００Å；Macherey-Nagel, Dueren, Germany）で精製し、０．１％  水中トリフルオロ酢酸−０．１％  アセトニトリル中トリフルオロ酢酸で溶出する。純粋な生成物を含有する分画を合併し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で塩基性化し、減圧下で蒸発させる。残渣を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で処理し、酢酸エチル（５×）で抽出する。合併した抽出物を水で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして溶媒を減圧下で蒸発させ、生成物を得る。これを、メタノール−酢酸エチルから再結晶し、黄白色の結晶固体として表題化合物を得る。融点１９６〜１９８℃。
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δ):2.14 (s, 3H), 2.25-2.45 (m, 8H), 3.52 (s, 2H), 4.56 (s, 2H), 5.50 (br.s, 1H), 7.29 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.41 (dd, J = 2.0, 8.3 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.50 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.52 (dd, J = 3.3, 8.1 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 8.56 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.57 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.59 (ddd, J = 1.4, 2.1, 8.1 Hz, 1H), 8.69 (dd, J = 1.4, 3.3 Hz, 1H), 9.10 (s, 1H), 9.33 (d, J = 2.1 Hz, 1H) and 10.22 (s, 1H).
【０１１３】
実施例６：４−［（３−オキソ−１−ピペラジニル）メチル］−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］アミノ］フェニル］ベンズアミド
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（Fluka, Buchs, Switzerland；５０％、１．３ｍｌ、２．２５ｍｍｏｌ）中プロピルホスホン酸無水物溶液を、乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４ｍｌ）中４−メチル−Ｎ−［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−１，３−ベンゼンジアミン（４１６ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、４−［（３−オキソ−１−ピペラジニル）メチル］安息香酸（３５１ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（１．７ｍｌ、１２ｍｍｏｌ）の攪拌混合物に滴下して添加する。該混合物を室温で１７時間攪拌し、続いて飽和炭酸水素ナトリウム水溶液溶液（１００ｍｌ）で処理する。生じた沈殿物を濾過し、水で洗浄し、乾燥させ、メタノールから再結晶し、クリーム色の結晶固体として表題化合物を得る。
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δ):ppm 2.21 (s, 3H), 2.63 (t, J = 5.49 Hz, 2H), 2.80 (s, 3H), 2.96 (s, 2H), 3.26 (t, J = 5.42 Hz, 2H), 3.60 (s, 2H), 7.19 (d, J = 8.39 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 5.19 Hz, 1H), 7.46 (m, 3H), 7.51 (dd, J = 7.93, 4.73 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 8.09, 1H), 8.06 (s, 1H), 8.47 (m, 1H), 8.50 (d, J = 5.04 Hz, 1H), 8.67 (dd, J = 4.73, 1.53 Hz, 1H), 8.99 (s, 1H), 9.26 (d, J = 1.98 Hz, 1H) and 10.18 (s, 1H).
【０１１４】
４−［（３−オキソ-１−ピペラジニル）メチル］安息香酸
メタノール（５０ｍｌ）中３−ブロモメチル安息香酸（４．３０ｇ、２０ｍｍｏｌ）、ピペラジン−２−オン（２．０ｇ、２０ｍｍｏｌ）、および粉末炭酸カリウム（２．７６ｇ、２０ｍｍｏｌ）混合物を、室温で１７時間攪拌する。生じた混合物を濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣を得る。これを、塩基（０．２５Ｍ、８０ｍｌ）で処理し、５分間攪拌する。沈殿生成物を濾過し、水で洗浄し、乾燥させ、メタノールから再結晶し、クリーム色の結晶固体として表題化合物を得る。
【０１１５】
実施例７：４−［（４−メチル−３−オキソ−１−ピペラジニル）メチル］−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］アミノ］フェニル］ベンズアミド
実施例６に記載の方法を利用するが、４−［（３−オキソ−１−ピペラジニル）メチル］安息香酸の代わりに、４−［（４−メチル−３−オキソ−１−ピペラジニル）メチル］安息香酸を用いて、黄色の結晶固体として表題化合物を得る。融点１８７〜１９２℃。
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, δ):2.21 (s, 3H), 2.55 (t, J = 5.34 Hz, 2H), 2.91 (s, 2H), 3.15 (m, 2H), 3.61 (s, 2H), 7.19 (d, J = 8.24 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 5.19 Hz, 1H), 7.46 (t, J = 8.01 Hz, 1H), 7.48 (m, 2H), 7.51 (dd, J = 7.86, 4.81 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.91 (d, J = 8.09 Hz, 2H), 8.07 (s, 1H), 8.47 (d, J = 7.94 Hz, 1H), 8.50 (d, J = 5.19 Hz, 1H), 8.67 (d, J = 3.36 Hz, 1H), 8.99 (s, 1H), 9.27 (s, 1H) and 10.18 (s, 1H). 
【０１１６】
４−［(４−メチル-３−オキソ-１−ピペラジニル）メチル］安息香酸
４−［（３−オキソ-１−ピペラジニル）メチル］安息香酸について記載の方法を用いるが、ピペラジン-２−オンの代わりに１−メチルピペラジン-２−オンを用いて、クリーム色の結晶固体として表題化合物を得る。
【０１１７】
実施例８：
式ＩＩの化合物、例えば、実施例１〜４に記載の式ＩＩの化合物の１つを１００ｍｇ含有する錠剤は、普通次の組成で製造する。
【０１１８】
組成物：
【表２】
2005519908.tif 000016
【０１１９】
製造：活性物質を担体材料と混合し、打錠機（Korsch EKO、打錠径１０ｍｍ）で圧縮する。
アビセルは、微結晶セルロース（FMC, Philadelphia, USA）である。
ＰＶＰＰＸＬは、架橋結合ポリビニルポリピロリドン（BASF, Germany）である。
アエロジルは、二酸化ケイ素（Degussa, Germany）である。
【０１２０】
実施例９：
式ＩＩの化合物、例えば、実施例１〜４に記載の式ＩＩの化合物の１つを１００ｍｇ含有するカプセル剤は、普通次の組成で製造する。
【０１２１】
組成物：
【表３】
2005519908.tif 000017
【０１２２】
製造：成分を混合し、該混合物を硬ゼラチンカプセル、サイズ１に充填し、カプセル剤を製造する。
【手続補正書】
【提出日】平成16年9月16日(2004.9.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2005519908.tif 000024
［式中、
Ｒ１は、水素またはヒドロキシであり、
Ｒ２は、水素、低級アルキル、またはヒドロキシ−低級アルキルであり、
Ａは、−ＮＲ５Ｒ６、または−ＣＲ５Ｒ６であり、
Ｒ５とＲ６は一体となって、４、５、または６個の炭素原子を有するアルキレン、１個の酸素原子、および３または４個の炭素原子を有するオキサ−低級アルキレン、または１または２個の窒素原子（窒素原子は非置換であるか、または低級アルキル、ヒドロキシ−低級アルキル、またはアセチルで置換されている）、および２、３、または４個の炭素原子を有するアザ−低級アルキレン（ここで、それぞれの場合の低級アルキレンは、部分的または全体的に不飽和であってもよく、および／または低級アルキレンの炭素原子は、低級アルキル、ヒドロキシル、低級アルコキシ、またはオキソ基（低級アルキレンが全体的に不飽和でない場合）で置換されていてもよい）であり、そして、
ここで、少なくとも１個の窒素原子が酸素原子と結合して、対応するＮ−オキシドを形成するか、あるいは窒素原子が酸素原子と結合しない場合、Ａがオキソで置換されている。］の化合物、または該化合物の医薬的に許容される塩。
【請求項２】
式Ｉにおいて、
Ａが、ピロリジノ、ピペリジル、ピペリジノ、ピペラジニル、ピリジル、ピロリジニル、モルホリノ、低級アルキルピペラジノ、Ｎ−メチルピペラジノ、４−メチル−３−オキソ−１−ピペラジニル、３−オキソ−１−ピペラジニル、１Ｈ−イミダゾリル、１Ｈ−２−メチルイミダゾリル、１Ｈ−４−メチルイミダゾリル、１Ｈ−２，４−ジメチルイミダゾリル、シクロヘキシル、またはフェニルであり、必要に応じて環の炭素上でオキソで置換されている、請求項１に記載の化合物、または該化合物の医薬的に許容される塩。
【請求項３】
式Ｉにおいて、
Ａが、次の式Ａ’
【化２】
2005519908.tif 000025
（式中、
必要に応じて環の炭素上でオキソで置換され、そして
Ｒ３は、水素、低級アルキル、またはアセチルである）のピペラジニル基である、請求項１に記載の化合物、または該化合物の医薬的に許容される塩。
【請求項４】
式Ｉにおいて、
Ｒ１が、水素であり、
Ｒ２が、水素、メチル、またはヒドロキシメチルであり、
Ｒ３が、メチル、または水素である、
請求項３に記載の化合物、または該化合物の医薬的に許容される塩。
【請求項５】
式Ｉの化合物が、４−［（３−オキソ−１−ピペラジニル）メチル］−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］アミノ］フェニル］ベンズアミドである、請求項１に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項６】
式Ｉの化合物が、４−［（４−メチル−３−オキソ−１−ピペラジニル）メチル］−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］アミノ］フェニル］ベンズアミドである、請求項１に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項７】
式ＩＩ
【化３】
2005519908.tif 000026
［式中、
Ｒ１は、水素またはヒドロキシであり、
Ｒ２は、低級アルキル、またはヒドロキシ−低級アルキルであり、
Ｒ３は、水素、メチル、またはアセチルであり、そして
星印は、必要に応じて酸素原子と結合して、対応するＮ−オキシドを形成する窒素原子を示す（ただし、Ｒ１が水素であり、Ｒ２がメチルであり、そしてＲ３が水素またはメチルの場合、星印の３個の窒素原子のうち少なくとも１個が酸素原子と結合している）。］の化合物、またはその塩。
【請求項８】
式ＩＩにおいて、
Ｒ１が、水素であり、
Ｒ２が、メチルまたはヒドロキシメチルであり、
Ｒ３が、メチルであり、そして
星印が、必要に応じて酸素原子と結合して、対応するＮ−オキシドを形成する窒素原子を示す（ただし、Ｒ２がメチルである場合、星印の３個の窒素原子のうちの少なくとも１個が酸素原子と結合している）、請求項７に記載の化合物、またはその塩。
【請求項９】
式ＩＩにおいて、
Ｒ１が、水素であり、
Ｒ２が、ヒドロキシ−低級アルキルであり、
Ｒ３が、メチルであり、そして
星印が、必要に応じて酸素原子と結合して、対応するＮ−オキシドを形成する窒素原子を示す、請求項７に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１０】
式ＩＩの化合物が、
４−［（４−メチル−４−オキシド−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−｛４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル｝−ベンズアミドである、請求項７に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１１】
式ＩＩの化合物が、
４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（１−オキシド−３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル］−ベンズアミドである、請求項８に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１２】
式ＩＩの化合物が、
４−［（４−メチル−１，４−ジオキシド−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−｛４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル｝−ベンズアミドである、請求項８に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１３】
式ＩＩの化合物が、
４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）−メチル］−Ｎ−｛４−ヒドロキシメチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］−アミノ］−フェニル｝−ベンズアミドである、請求項８または９に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１４】
精製形である、請求項１から１３のいずれか１項に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１５】
ヒトを含む温血動物の治療的処置方法での使用のための、請求項１から１４のいずれか１項に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１６】
請求項１から１４のいずれか１項に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩を、医薬的に許容される担体と共に含む、医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１から１４のいずれか１項に記載の化合物、または該化合物の医薬的に許容される塩を有効成分として、医薬的に許容される担体と共に含む、ヒトを含む温血動物の増殖性疾患を処置するための医薬組成物。
【請求項１８】
増殖性疾患の処置用の医薬組成物の製造のための、請求項１から１４のいずれか１項に記載の化合物、または該化合物の医薬的に許容される塩の使用。
【請求項１９】
増殖性疾患の処置のための、請求項１から１４のいずれか１項に記載の化合物、または該化合物の医薬的に許容される塩の使用。
【請求項２０】
ヒトを含む温血動物の処置方法であって、増殖性疾患に罹患している該温血動物に、該疾患に対して有効な用量で、請求項１から１４のいずれか１項に記載の化合物、または該化合物の医薬的に許容される塩を投与することを含む、方法。
【請求項２１】
式ＩＩ
【化４】
2005519908.tif 000027
（式中、Ｒ１およびＲ２は、請求項７に記載の式Ｉの化合物について定義された意味を有し、星印は、必要に応じて酸素原子と結合する窒素原子を示す）の化合物を、
式ＩＩＩ
【化５】
2005519908.tif 000028
（式中、Ｒ３は、請求項７に記載の式Ｉの化合物について定義された意味を有し、星印は、必要に応じて酸素原子と結合する窒素原子を示す）の化合物と反応させ；
そして得られた化合物を、必要に応じて適当な酸化剤で式ＩのＮ−オキシドに転換し；
ここで、
式ＩＩおよびＩＩＩの化合物に存在し、反応に関与することが意図されていない官能基は、所望なら保護された形で存在し、そして存在する保護基が切断され、さらに、式ＩＩおよびＩＩＩの化合物は塩の形でも存在してもよく（ただし、塩形成基が存在し、塩の形での反応が可能であるものとする）；
そして、所望なら、得られた式Ｉの化合物は、式Ｉの別の化合物に変換され、得られた式Ｉの遊離化合物は、塩に転換され、得られた式Ｉの化合物の塩は、遊離化合物または別の塩に転換され、そして／または式Ｉの異性体混合物は、個々の異性体に分けられることで特徴付けられる、
請求項７に記載の式ＩＩの化合物、またはその塩の製造方法。
【国際調査報告】
2005519908.tif 000029
2005519908.tif 000030