(57)【要約】本発明は、細胞毒性作用物質に抱合された抗体ｈｕＣ２４２−ＤＭ１のための安定な処方に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
約５．８ないし６．２の範囲のｐＨに維持されたバッファー中約１ないし２０ｍｇ／ｍＬの濃度範囲のｈｕＣ２４２−ＤＭ１、および約５％ ｗ／ｖのショ糖を含む、後の凍結乾燥に適したｈｕＣ２４２−ＤＭ１の安定な水性処方。
【請求項２】
１ないし１００ｍＭのコハク酸でもってｐＨが６に維持された請求項１の処方。
【請求項３】
コハク酸の濃度が５０ｍＭである請求項２の処方。
【請求項４】
約５．８ないし６．５の範囲のｐＨに維持されたバッファー中約１ないし３０ｍｇ／ｍＬの濃度範囲のモノクローナル抗体Ｃ２４２、および約５％ ｗ／ｖのショ糖を含む、モノクローナル抗体Ｃ２４２のための安定な凍結処方。
【請求項５】
１ないし１００ｍＭのコハク酸でもってｐＨが６に維持された請求項４の処方。
【請求項６】
コハク酸の濃度が５０ｍＭである請求項５の処方。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、細胞毒性作用物質に抱合された抗体ｈｕＣ２４２−ＤＭ１のための安定な処方に関する。
【０００２】
（発明の背景）
過去１０年間で、ＤＮＡ組み換え法を用いて医薬用途の種々の蛋白を製造することがバイオテクノロジーの進歩により可能となった。蛋白は伝統的な有機および無機薬剤よりも大きく複雑なので（すなわち、複雑な３次元構造に加えて多数の官能基を有するので）、かかる蛋白の処方は特別な問題を有する。蛋白が生物学的活性を保持するためには、処方は、蛋白の少なくとも１つのアミノ酸コア配列のコンホーメーション上の完全性を無傷に保ちつつ、同時に蛋白の多数の官能基を変質から保護する必要がある。蛋白の変質経路は化学的不安定性（すなわち、新たな化学的部分を生じる結合形成または開裂による蛋白の修飾を包含するプロセス）または物理的不安定性（すなわち、蛋白の高次構造の変化）を包含しうる。化学的不安定性は、脱アミノ化、ラセミ化、加水分解、酸化、ベータ脱離またはジスルフィド交換から生じうる。物理的不安定性は、例えば、変性、凝集、沈殿または吸着から生じうる。３つの最も普通の蛋白分解経路は、蛋白凝集、脱アミノ化および酸化である。Cleland et al Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 10(4): 307-377 (1993)。
【０００３】
抗体は医薬用途の蛋白に包含される。治療に有用な抗体の一例はネズミ抗体Ｃ２４２である。ＥＰ ５２８，５２７Ｂ１参照。ｈｕＣ２４２−ＤＭ１は、抗原発現腫瘍タイプ（リードインジケーション（lead indication）膵臓癌またはＰＭＰ癌）の治療用としてGlaxoSmithKline plcにより開発中の腫瘍により活性化されるイムノトキシンである。それは、メイタンシノイド（maytansinoid）の新たな誘導体であるＤＭ１に抱合したＣ２４２のヒト化抗体ｈｕＣ２４２からなる。Ｃ２４２−ＤＭ１およびｈｕＣ２４２−ＤＭ１の両方に関する多くの報告がある。例えば、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 93, pp 8618-8623, 1996; Current Opinion in Molecular Therapeutics 3(2):198-203, 2001参照。
【０００４】
（発明の概要）
したがって、本発明は、ｈｕＣ２４２−ＤＭ１（イムノコンジュゲート（immunoconjugate））用の安定な水性医薬処方を提供し、該処方は、ｐＨ範囲を〜５．８ないし６．２に維持するバッファー（５０ｍＭコハク酸，ｐＨ６．０）中のイムノコンジュゲート（濃度範囲〜１ないし２０ｍｇ／ｍＬ）を含み、さらにショ糖（〜５％ ｗ／ｖ）を含む。この処方は、後で凍結乾燥して安定な剤形を作製することに適している。
【０００５】
モノクローナル抗体Ｃ２４２のための安定な凍結処方も提供され、該処方は、ｐＨ範囲を〜５．８ないし６．５に維持するバッファー（５０ｍＭコハク酸，ｐＨ６．０）中該モノクローナル抗体蛋白（濃度範囲〜１ないし３０ｍｇ／ｍＬ）を含み、さらにショ糖（〜５％ ｗ／ｖ）を含む。
【０００６】
各製品の出発溶液にさらなる安定性を付与して、それらがその後凍結条件または凍結乾燥条件での保存を必要としないように、上記処方中に安定化界面活性剤が含有されることが、さらに企図される。
【０００７】
本発明のこれらの態様およびさらなる態様は当業者に明らかであろう。
【０００８】
（詳細な説明）
「安定な」処方は、抗体またはイムノコンジュゲート（両方とも、単に蛋白という）が存在する場合には、その物理的安定性および／または化学的安定性および／または生物学的安定性が保存された場合に本質的に保持される処方をいう。蛋白の安定性を測定するための種々の分析方法が当該分野において利用でき、例えば、Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991) および Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993)においてレビューされている。
【０００９】
色および／または透明度を目で検査した場合、あるいはＵＶ光散乱またはサイズ排除クロマトグラフィーにより測定した場合に、蛋白が凝集、沈殿および／または変性の兆候を示さない場合、蛋白は医薬処方中において「物理的安定性を保持」している。
【００１０】
ある時点において下記に定義されるように蛋白がやはりその生物学的活性を保持していると考えられる場合に、蛋白は医薬処方中において「化学的安定性を保持」している。化学的に変化した蛋白を検出および定量することにより、化学的安定性を評価することができる。化学的変化はサイズの変化（例えば、クリッピング（clipping））を含み、それは、例えばサイズ排除クロマトグラフィー、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび／またはマトリックスによりアシストされるレーザーデソープションイオン化／タイム−オブ−フライト（laser desorption ionization/time-of-flight）質量スペクトル分析（MALDI/TOF MS）により評価することができる。他のタイプの化学的変化は電荷の変化（例えば、脱アミノ化の結果として起こる）を包含し、それは、例えばイオン交換クロマトグラフィーにより評価することができる。
【００１１】
ある時点において、例えば、抗原結合アッセイにて決定した場合に、抗体の生物学的活性が医薬処方調製時に示した生物学的活性の約２０％の範囲内（アッセイ誤差の範囲内）である場合に、抗体は医薬処方中において「その生物学的活性を保持」している。
【００１２】
非ヒト（例えば、ネズミ）抗体の「ヒト化」形態はキメラ抗体であり、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含むものである。大部分において、ヒト化抗体はヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であり、レシピエントの超可変領域由来の残基が、所望特異性、アフィニティーおよびキャパシティーを有するマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類のごとき非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基に置き換えられている。いくつかの場合において、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残基が対応非ヒト残基に置き換えられる。さらにそのうえ、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体中に見出されない残基を含んでいてもよい。これらの修飾を行って抗体の品質をさらにリファインしてもよい。一般的には、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、その中で、すべてまたは実質的にすべての超可変領域は非ヒト免疫グロブリンのそれらに対応している。
【００１３】
ＦＲ領域はヒト免疫グロブリン配列のＦＲ領域である。ヒト化抗体は免疫グロブリン不変領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのそれを含んでいてもよい。さらに詳細には、Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al, Nature 332:323-329 (1988); および Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992); 米国特許第５，６３９，６４１号参照。
【００１４】
本明細書の用語「超可変領域」は、抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基をいう。超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」（例えば、基本的には軽鎖可変ドメイン中の残基２４−３４（Ｌ１）、５０−５６（Ｌ２）および８９−８７（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメイン中の３１−３５（Ｈ１）、５０−６５（Ｈ２）および９５−１０２（Ｈ３）; Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)）および／または「超可変ループ」（例えば、基本的には軽鎖可変ドメイン中の残基２６−３２（Ｌ１）、５０−５２（Ｌ２）および９１−９６（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメイン中の２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）および９６−１０１（Ｈ３）; Chothia Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）由来のアミノ酸残基を含む。「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義した超可変領域の残基以外の可変ドメインの残基である。
【００１５】
ヒト化Ｃ２４２は、以下に示す可変重鎖および軽鎖アミノ酸配列（それぞれ配列番号：１および２）を有する。
【００１６】
配列番号：１
QVQLVQSGAEVKKPGETVKISCKASDYTFTYYGMNWVKQAPGQGLKWMGWIDTTTGEPTYAQKFQGRIAFSLETSASTAYLQIKSLKSEDTATYFCARRGPYNWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK.
配列番号：２
DIVMTQSPLSVPVTPGEPVSISCRSSKSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLVSGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCLQHLEYPFTFGPGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC.
【００１７】
ｈｕＣ２４２−ＤＭ１の製造方法は米国特許第５，２０８，０２０号、第５，５５２，２９３号、第５，６３９，６４１号およびＥＰ５２８，５２７号に記載されている。
【００１８】
処方される抗体は、好ましくは本質的に純粋で、望ましくは本質的に均質（すなわち、混入蛋白等を含まない）である。「本質的に純粋」な抗体は、組成物の全重量を基準にして少なくとも９０重量％、好ましくは９５重量％の抗体を含む組成物を意味する。「本質的に均質」な抗体は、組成物の全重量を基準にして少なくとも９９重量％の抗体を含む組成物を意味する。
【００１９】
”〜”は「約」を意味する。
【００２０】
処方されるｈｕＣ２４２−ＤＭ１は前もって凍結乾燥に供されたものでなく、目的とする処方は水性処方である。ｐＨ−緩衝化溶液中に〜１ないし３０ｍｇ／ｍＬのｈｕＣ２４２−ＤＭ１を含む、ｈｕＣ２４２−ＤＭ１のための水性処方が調製される。本発明のバッファーは約５．８ないし約６．２のｐＨ範囲、好ましくはｐＨ約６．０を有する。ｐＨをこの範囲に制御するバッファーは酢酸バッファー（例えば、酢酸ナトリウム）、コハク酸バッファー（コハク酸ナトリウムのごとき）、グルコン酸バッファー，ヒスチジンバッファー、クエン酸バッファーおよび他の有機酸バッファーを包含する。バッファー濃度は約１ｍＭないし約１００ｍＭ、好ましくは約５０ｍＭでありうる。好ましいバッファーはコハク酸（約５０ｍＭ），ｐＨ６．０である。
【００２１】
浸透圧調節剤として作用し、ｈｕＣ２４２−ＤＭ１を安定化させうるポリオールが処方中に含有される。好ましい具体例において、ポリオールはショ糖またはトレハロースのごとき非還元性糖である。好ましいポリオールは約５％ ｗ／ｖのショ糖である。
【００２２】
界面活性剤をｈｕＣ２４２−ＤＭ１処方に添加することもできる。典型的な界面活性剤は、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０、８０等）またはポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）のごとき非イオン性界面活性剤を包含する。添加される界面活性剤の量は、処方されたイムノコンジュゲートの凝集を減少させ、そして／あるいは処方中の粒子形成を最小化し、そして／あるいは吸着を減少させるような量である。例えば、界面活性剤は処方中に約０．００１％ないし約０．５％、好ましくは約０．００５％ないし約０．２％、最も好ましくは約０．０１ないし約０．１％の量で存在しうる。溶液剤形が望ましい場合には、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８を添加してもよい。
【００２３】
ｐＨ−緩衝化溶液中〜１ないし３０ｍｇ／ｍＬのＣ２４２を含む、抗体Ｃ２４２のための安定化処方を調製する。本発明のバッファーは約５．８ないし約６．５の範囲のｐＨ、好ましくはｐＨ約６．０を有する。この範囲内にｐＨを制御するバッファーの例は酢酸バッファー（例えば、酢酸ナトリウム）、コハク酸バッファー（コハク酸ナトリウムのごとき）、グルコン酸バッファー，ヒスチジンバッファー、クエン酸バッファーおよび他の有機酸バッファーを包含する。バッファーにもよるが、バッファー濃度は約１ｍＭないし約１００ｍＭ、好ましくは約５０ｍＭでありうる。好ましいバッファーはコハク酸（約５０ｍＭ），ｐＨ６．０である。浸透圧調節剤として作用し、Ｃ２４２を安定化させうるポリオールが処方中に含有される。好ましい具体例において、ポリオールはショ糖またはトレハロースのごとき非還元性糖である。好ましいポリオールは約５％ ｗ／ｖのショ糖である。好ましくは、処方は、最初の抗体製造とｈｕＣ２４２−ＤＭ１を得るための抱合との間に、−７０℃の凍結保存において２年間またはそれ以上の間、Ｃ２４２を安定化させるであろう。
【００２４】
本発明は、下記実施例を参照することにより、より完全に理解されるであろう。しかしながら、実施例は、本発明の範囲を限定するものと解されるべきではない。本明細書に引用されたすべての文献および特許を、参照により本明細書に一体化させる。
【実施例】
【００２５】
（詳細な具体例）
新規治療用モノクローナル抗体（ｍＡｂ）Ｃ２４２（イムノコンジュゲート）およびそのイムノコンジュゲートｈｕＣ２４２−ＤＭ１の開発の間に安定性に対する種々の問題があった。これらの問題は、主に、溶液中の蛋白の凝集体（可溶性および不溶性）への劣化に関するものであり、処方の研究および剤形の設計により解決された。処方前の研究は、処方の賦形剤の添加を最小にしてｍＡｂの安定性に関する適切なｐＨ環境を確認するために設計された。界面活性剤を含有させることにつき試験して、安定性に対する影響を評価した。ショ糖はバルキング剤として役立ち、同様に、凍結乾燥サイクルの開発のための凍結保護剤としても役だった。見込みのある溶液処方を試験して、凍結／融解サイクリング、激しい振盪、保存の際のせん断力、および光に対する感受性を調べた。とりわけ、ｐＨ、外観、ＵＶ／ＶＩＳ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＳＥＣ、ＥＬＩＳＡ、バイオアッセイ、およびｃＩＥＦを包含する一連の分析に蛋白処方を供して、物質の有効性、純度、および品質を確認した。５．０％ショ糖を含有する５０ｍＭコハク酸，ｐＨ６．０の最終処方は、凍結乾燥されたイムノコンジュゲート剤形に十分に安定な環境を付与した。しかしながら、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８のごとき界面活性剤の添加は、溶液剤形が望まれる場合に考慮されるべきであることがわかった。
【配列表】
2005532395.tif 000002
2005532395.tif 000003
2005532395.tif 000004
【手続補正書】
【提出日】平成17年1月28日(2005.1.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2005532395000001.app
【国際調査報告】
2005532395.tif 000005
2005532395.tif 000006