(57)【要約】セレクチン結合によって媒介される、インビトロおよびインビボでのプロセスを調節するための、化合物および方法が提供される。より詳細には、セレクチンモジュレーターおよびそれらの用途が記載されており、ここで、セレクチンにより媒介される機能を調節（例えば、阻害または増強）するモジュレーターは、炭水化物または糖模倣物に連結されたＢＡＳＡ（その一部分またはアナログを含む、ベンジルアミノスルホン酸）と呼ばれるクラスの化合物のクラスを含む。
2005526141.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式：
【化１】
2005526141.tif 000008
を有する、化合物またはその生理学的に受容可能な塩。
【請求項２】
以下の式：
【化２】
2005526141.tif 000009
を有する、化合物またはその生理学的に受容可能な塩。
【請求項３】
以下の式：
【化３】
2005526141.tif 000010
を有する、化合物またはその生理学的に受容可能な塩。
【請求項４】
以下の式：
【化４】
2005526141.tif 000011
を有する、化合物またはその生理学的に受容可能な塩。
【請求項５】
薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤と組み合わせて、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物を含む、組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の背景）
（発明の分野）
本発明は、一般に、セレクチン結合によって媒介されるプロセスを調節するための、化合物、組成物および方法に関し、より詳細には、セレクチンモジュレーターおよびそれらの使用に関し、ここで、セレクチンによって媒介される機能を調節するセレクチンモジュレーターは、炭水化物または糖模倣物（ｇｌｙｃｏｍｉｍｅｔｉｃ）に連結されたＢＡＳＡ（その一部分またはアナログを含め、ベンジルアミノスルホン酸）と呼ばれるクラスの化合物を含む。
【背景技術】
【０００２】
（関連技術の説明）
組織が感染されたかまたは損傷を受けた場合、炎症プロセスは、白血球および他の免疫系成分を感染または損傷の部位に指向する。このプロセスにおいては、白血球は、微生物の飲み込みおよび消化において重要な役割を果たす。従って、感染されたかまたは損傷を受けた組織に対する白血球の補充は、有効な免疫防御を開始するために重大である。
【０００３】
セレクチンは、内皮細胞に対する白血球の結合を媒介するために重要である、一群の構造的に類似した細胞表面レセプターである。これらのタンパク質は、１型膜タンパク質であり、そしてアミノ末端のレクチンドメイン、上皮増殖因子（ＥＧＦ）様ドメイン、可変の数の補体レセプター関連反復物、疎水性ドメインにまたがる領域および細胞質ドメインから構成される。結合相互作用は、セレクチンのレクチンドメインと、さまざまな炭水化物リガンドとの接触によって媒介されるようである。
【０００４】
以下の３つの公知のセレクチンが存在する：Ｅ−セレクチン、Ｐ−セレクチンおよびＬ−セレクチン。Ｅ−セレクチンは、活性化内皮細胞の表面に見出され、活性化内皮細胞は、毛細管の内部壁に沿って並ぶ。Ｅ−セレクチンは、炭水化物シアリル−Ｌｅｗｉｓｘ（ＳＬｅｘ）と結合し、シアリル−Ｌｅｗｉｓｘは、特定の白血球（単球および好中球）の表面上に糖タンパク質または糖脂質として提示されて、周囲の組織が感染されているかまたは損傷を受けている領域の毛管管壁に接着するのを助ける；そして、Ｅ−セレクチンはまた、シアリル−Ｌｅｗｉｓａ（ＳＬｅａ）に結合し、シアリル−Ｌｅｗｉｓａは、多くの腫瘍細胞上に発現される。Ｐ−セレクチンは、炎症を起こした内皮および血小板上に発現され、そしてまたＳＬｅｘおよびＳＬｅａを認識するが、また、硫酸塩チロシンと相互作用する第２の部位を含む。Ｅ−セレクチンおよびＰ−セレクチンの発現は一般に、毛細管に隣接した組織が感染されるかまたは損傷を受けた場合、増加する。Ｌ−セレクチンは、白血球上に発現される。セレクチンによって媒介される細胞間接着は、セレクチンにより媒介される機能の一例である。
【０００５】
セレクチンにより媒介される機能のモジュレーターとしては、ＰＳＧＬ−１タンパク質（およびより小さいペプチドフラグメント）、フコイダン（ｆｕｃｏｉｄａｎ）、グリチルリチン（および誘導体）、抗セレクチン抗体、硫酸化ラクトース誘導体ならびにヘパリンが挙げられる。全て、不十分な活性、毒性、特異性の欠如、乏しいＡＤＭＥ特徴および／または乏しい材料入手可能性に起因して、薬物開発に不適切であることが示されている。
【０００６】
セレクチンにより媒介される細胞接着は、感染と戦い、そして外来物質を破壊するために必要であるにもかかわらず、このような細胞接着が望ましくないかまたは過剰であって、修復の代わりに組織損傷をもたらす状況が存在する。例えば、多くの病理（例えば、自己免疾患および炎症性疾患、ショックおよび再灌流障害）は、異常な白血球接着を含む。このような異常な細胞接着はまた、移植および移植片拒絶において役割を果たし得る。さらに、いくつかの循環する癌細胞は、活性化された内皮に結合するために炎症機構を利用するようである。このような状況において、セレクチンにより媒介される細胞間接着の調節が所望され得る。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って、（例えば、セレクチン依存性の細胞接着の）セレクチンにより媒介される機能のインヒビターを識別することについての必要性、およびこのような化合物を用いて過剰なセレクチン活性に関連した状態を阻害する方法の開発についての必要性が当該分野に存在する。本発明は、これらの必要性を満たし、他の関連した利点をさらに提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の手短な要旨）
簡単に述べると、本発明は、セレクチンにより媒介されるプロセスを調節するための、化合物、組成物および方法を提供する。本発明の一つの局面では、セレクチンにより媒介される機能を調節（例えば、阻害または増強）する化合物は、ＢＡＳＡ（すなわち、ベンジルアミノスルホン酸もしくは部分またはいずれかのアナログ）および炭水化物または糖模倣物を含む。このような化合物は、薬学的組成物を形成するために、薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤と合わされ得る。化合物または組成物は、セレクチンにより媒介される機能（例えば、セレクチンにより媒介される細胞間接着を阻害すること）を調節（例えば、阻害または増強）する方法で用いられ得る。
【０００９】
本発明の一つの局面では、以下の少なくとも２つの成分を含む化合物が提供される：（１）ＢＡＳＡ、および（２）炭水化物または糖模倣物（またはいずれかの複合糖質）。ＢＡＳＡの例は、以下に示される。好ましいのは、図１Ａ〜図１Ｈに示されるＢＡＳＡである。炭水化物または糖模倣物の例は、以下に示され、そしてシアリルＬｅｘ、シアリルＬｅａおよびいずれかの糖模倣物を包含する。好ましいのは、図１１に示される炭水化物または糖模倣物である。本発明の１つの化合物は、セレクチンにより媒介される機能を調節（例えば、阻害または増強）する化合物を生じる、ＢＡＳＡと炭水化物または糖模倣物との組合せである。セレクチンにより媒介される機能の例は、セレクチンにより媒介される細胞間接着である。好適な化合物は、それぞれ、図４、図５、図６および図７で示される、化合物６０、化合物６１、化合物６２および化合物６５である。本発明の化合物は、その生理学的に受容可能な塩を包含する。薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤と組み合わせた本発明の化合物は、本発明の１つの組成物を提供する。
【００１０】
本発明の別の局面では、セレクチンにより媒介される機能を調節するために本発明の化合物または組成物を使用するための方法が提供される。このような化合物または組成物は例えば、セレクチンにより媒介される機能（例えば、セレクチンにより媒介される細胞間相互作用）を阻害または増強するために用いられ得る。化合物または組成物は、セレクチンを発現している細胞をセレクチンの機能を調節するのに有効な量で接触させるための方法において用いられ得る。化合物または組成物は、セレクチンにより媒介される過剰な機能（例えば、セレクチンにより媒介される過剰な細胞間接着）と関連する状態の発達が阻害されることを必要とする患者に、このような状態の発達を阻害するのに有効な量で投与するための方法において用いられ得る。このような状態の例としては、炎症性疾患、自己免疫疾患、感染、癌、ショック、血栓症、創傷、熱傷、再灌流障害、血小板により媒介される疾患、白血球により媒介される肺傷害、脊髄損傷、消化管粘膜障害、骨粗鬆症、関節炎、喘息およびアレルギー反応が挙げられる。化合物または組成物は、移植された組織のレシピエントである患者に、移植された組織の拒絶を阻害するのに有効な量で投与する方法において用いられ得る。化合物または組成物は、セレクチンを発現する細胞を、この化合物または組成物に連結された薬剤と接触させることによって、このような細胞に対して薬剤を標的化するのに有効な量の方法で用いられ得る。化合物または組成物は、例えば、上記に記載した用途のいずれかのための薬剤の製造において用いられ得る。
【００１１】
本発明の別の局面では、以下の構造のうちの１以上を有する化合物（ならびに、それらの薬学的組成物、上記に示す用途におけるこのような化合物または組成物の使用、ならびに薬剤の製造における使用）が提供される：
【００１２】
【化５】
2005526141.tif 000003
Ｒ５およびＲ６は、−Ｈ、−ＣＯ２−Ｒ７および−ＮＨ−Ｒ８から独立して選択され、ここで、Ｒ７およびＲ８は、水素、およびアルキル基、芳香族部分、アミノ基またはカルボキシ基のうちの１以上を含む部分から独立して選択され；
Ｒ９およびＲ１０は、−Ｈ、−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ３；−ＣＨ２−Ａｒ、−ＣＯ−Ａｒから独立して選択され、ここで、ｍ＝０〜３およびＡｒ＝芳香族部分であり；そして
Ｍは、水素、ナトリウム、カリウム、および薬学的に受容可能な他の対イオンから選択される；
【００１３】
【化６】
2005526141.tif 000004
ここで、Ｒ１およびＲ２は、（ｉ）水素、（ｉｉ）アルキル基、芳香族部分、アミノ基またはカルボキシ基のうちの１以上を含む部分、および（ｉｉｉ）−ＣＯ−Ｒ３（ここで、Ｒ３は、芳香族部分を含む）からなる群から独立して選択され；そして
Ｍは、水素、ナトリウム、カリウム、および薬学的に受容可能な他の対イオンから選択される。
【００１４】
本発明のこれらおよび他の局面は、以下の詳細な説明および添付の図面を参照すると明らかになる。本明細書において開示される全ての参考文献は、あたかも各々が個々に援用されたかのように、それらの全体が本明細書中に参考として援用される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
（発明の詳細な説明）
上記のように、本発明は、一つの局面では、セレクチンモジュレーター、それらの組成物、およびセレクチンにより媒介される機能を調節するための方法を提供する。このようなモジュレーターは、以下でさらに詳細に考察する、様々な状況において、セレクチンにより媒介される機能をインビトロでまたはインビボで調節（例えば、阻害または増強）するために用いられ得る。セレクチンにより媒介される機能の例としては、細胞間接着および血管新生の間の新しい毛細管の形成が挙げられる。
【００１６】
（セレクチンモジュレーター）
本明細書中で用いられる場合、用語「セレクチンモジュレーター」とは、セレクチンにより媒介される機能（例えば、セレクチンにより媒介される細胞間相互作用）を調節（例えば、阻害または増強）し、かつ以下のＢＡＳＡのうちの少なくとも１つを含む、分子をいう：
（ａ）ＢＡＳＡ（またはその塩）；
（ｂ）セレクチンにより媒介される機能を調節（例えば、阻害または増強）する能力を保持する、ＢＡＳＡの一部分；または
（ｃ）セレクチンにより媒介される機能を調節（例えば、阻害または増強）する能力を有する、ＢＡＳＡのアナログもしくはＢＡＳＡの一部分のアナログ；
ここで、（ａ）、（ｂ）または（ｃ）のうちの少なくとも１つは、１以上のセレクチン結合性の、炭水化物または糖模倣物（またはいずれかの複合糖質）に連結されている。
【００１７】
セレクチンモジュレーターは、一つ以上の炭水化物もしくは糖模倣物に連結される上記のＢＡＳＡエレメントのうちの一つ以上から全体が構成されてもよく、または一つ以上のさらなる分子構成要素を含んでもよい。特定の好ましい実施形態では、以下でより詳細に記載する通り、セレクチンモジュレーターは、炭水化物部分（例えば、シアリル−Ｌｅｗｉｓｘ（ＳＬｅｘ）またはシアリル−Ｌｅｗｉｓａ（ＳＬｅａ））に連結された、または糖模倣物（例えば、ＳＬｅｘまたはＳＬｅａの糖模倣物）に連結された、上記のＢＡＳＡエレメントのうちの１つを含む。本発明のセレクチンモジュレーターは、驚くべきことに、単独でまたは付加的に、個々の成分よりも有意に強力である。
【００１８】
本発明の範囲内では、ＢＡＳＡは、セレクチンと相互作用する能力を有する低分子量硫酸塩化合物である。この相互作用は、セレクチンにより媒介される機能（例えば、細胞間相互作用）の調節（例えば、抑制または増強）を調節または補助する。それらは、それらのプロトン化された酸形態またはナトリウム塩のいずれかとして存在するが、ナトリウムは、カリウムまたは任意の他の薬学的に受容可能な対イオンで置換され得る。代表的なＢＡＳＡは、以下の構造を有する：
【００１９】
【化７】
2005526141.tif 000005
セレクチンと相互作用する能力を保持するＢＡＳＡ部分（この相互作用は、本明細書中に記載される通りのセレクチンにより媒介される機能の調節を調節または補助する）もまた、本発明の状況の範囲内のセレクチンモジュレーターである。このような部分は、一般に、ＢＡＳＡ構造内に存在する少なくとも一つの芳香族環を含む。特定の実施形態では、一部分は、単一の芳香族環、複数のこのような環または対称的なＢＡＳＡ分子の半分を含み得る。
【００２０】
上記のように、ＢＡＳＡのアナログおよびその一部分（その両方は、上記の生物学的特徴を保有する）はまた、本発明において、（例えば、セレクチンモジュレーターのＢＡＳＡ成分により）含まれる。本明細書中で使用する場合、「アナログ」は、このアナログがセレクチンにより媒介される相互作用を阻害する能力は減少しないように、化学部分の一つ以上の付加、欠失および／または置換に起因して、ＢＡＳＡまたはその一部分とは異なる、化合物である。例えば、アナログは、ＳからＰへの置換（例えば、硫酸基は、リン酸基で置換される）を含み得る。他の可能な改変としては、以下が挙げられる：（ａ）環サイズの変更（例えば、いかなる環も、４と７との間の炭素原子を含み得る）；（ｂ）縮合環の数のバリエーション（例えば、単一の環は、３つまでの縮合環を含む多環式部分で置換され得、多環式部分は、単一の非縮合環または多環式部分が変更され得る数の縮合環で置換され得る）；
（ｃ）芳香族環内の炭素原子に共有結合した水素原子または他の部分における環の置換は、種々の部分（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、Ｏ−アルキル（Ｃ１〜８）、ＳＨ、ＮＯ２、ＣＮ、ＮＨ２、ＮＨ−アルキル（Ｃ１〜８）、Ｎ−（アルキル）２、ＳＯ３Ｍ（ここで、Ｍ＝Ｈ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋または他の薬学的に受容可能な対イオン）、ＣＯ２Ｍ、ＰＯ４Ｍ２、ＳＯ２ＮＨ２、アルキル（Ｃ１〜８）、アリール（Ｃ６〜１０）、ＣＯ２−アルキル（Ｃ１〜８）、−ＣＦ２Ｘ（ここで、Ｘは、Ｈ、Ｆ、アルキル基、アリール基またはアシル基であり得る）および炭水化物のうちのいずれかにより置換され得る）；ならびに（ｄ）基（例えば、アルキル基、エステル基、アミド基、無水物基およびカルバミン酸基）が互いに置換され得る、連結部分（すなわち、ＢＡＳＡ分子中の環の間に存在する部分）に対する改変。
【００２１】
特定のＢＡＳＡ部分およびアナログは、以下の一般構造のうちの１つを含む：
【００２２】
【化８】
2005526141.tif 000006
この構造では、ｎは、０または１であり得、Ｘ１は、−ＰＯ２Ｍ、−ＳＯ２Ｍまたは−ＣＦ２−（ここで、Ｍは、薬学的に受容可能な対イオン（例えば、水素、ナトリウムまたはカリウム）である）であり得、Ｒ１は、−ＯＨ、−Ｆまたは−ＣＯ２Ｒ４（ここで、Ｒ４は、−Ｈまたは−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ３であり得、ｍは、０〜３の範囲の数である）であり得、Ｒ２は、−Ｈ、−ＰＯ３Ｍ２、−ＳＯ３Ｍ２、−ＣＨ２−ＰＯ３Ｍ２、−ＣＨ２−ＳＯ３Ｍ２、−ＣＦ３または−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（Ｒ６）Ｈ−Ｒ５またはＲ９−Ｎ（Ｒ１０）−であり得、Ｒ３は、−Ｈ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（Ｒ６）Ｈ−Ｒ５またはＲ９−Ｎ（Ｒ１０）−（ここで、Ｒ５およびＲ６は、−Ｈ、−ＣＯ２−Ｒ７および−ＮＨ−Ｒ８から独立して選択され得、Ｒ７およびＲ８は、水素およびアルキル基、芳香族部分、アミノ基、またはカルボキシ基のうちの１以上を含む部分から独立して選択され得る）、そしてＲ９およびＲ１０は、−Ｈ、−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ３；−ＣＨ２−Ａｒ、−ＣＯ−Ａｒから独立して選択され得、ここで、ｍは、０〜３の範囲の数であり、Ａｒは、芳香族部分（すなわち、少なくとも１つの置換また非置換の芳香属環を含む任意の部分、ここで、この環は、上記の−ＣＨ２−基または−ＣＯ−基に直接結合している）である。
【００２３】
ＢＡＳＡの他の部分およびアナログは、以下の一般構造を含む：
【００２４】
【化９】
2005526141.tif 000007
この構造では、Ｒ１およびＲ２は、（ｉ）水素、（ｉｉ）アルキル基、芳香族部分、アミノ基またはカルボキシ基のうちの１以上を含む部分、および（ｉｉｉ）−ＣＯ−Ｒ３（ここで、Ｒ３は上記のアルキルまたは芳香族部分を含む）から独立して選択され得、そしてＭは、薬学的に受容可能な対イオンである。
【００２５】
本明細書中に記載の構造および置換基の種々の組み合わせに由来する個々の化合物または化合物群は、おのおのの化合物または化合物群が、個々に記載されたのと同じ程度に本願により開示される。従って、特定の構造および／または特定の置換基の選択は、本発明の範囲内にある。
【００２６】
代表的ＢＡＳＡ部分およびＢＡＳＡアナログは、図１Ａ〜図１Ｈに示される化合物に含まれる。セレクチンモジュレーターとして機能する能力に対して有害な影響を与えることなく、これらの図に示される化合物に対して改変が行われ得ることが当業者に明らかである。このような改変は、上記の通りの欠失、付加および置換を包含する。
【００２７】
特定のセレクチンモジュレーター成分は、例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｔｏｒｏｎｔｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍなどから市販されている。他は、利用可能な化合物から周知の化学合成技術を使用して調製され得る。セレクチンモジュレーターの合成のための一般的合成方法は以下を包含する：１級アミンもしくは２級アミンまたは１級アニリンもしくは２級アニリンのアミド形成は、ハロゲン化アシルまたはカルボン酸を用いた反応を経て達成され得る（図２および図３を参照のこと）。Ｎ連結型アルキル化合物は、アルデヒドを用いたアミン／アニリンの還元的アミノ化、続いてシアノ水素化ホウ素ナトリウムによるイミン還元によって調製される（図６を参照のこと）。ビフェニル化合物は、Ｓｕｚｕｋｉ／Ｎｅｇｉｓｈｉ条件による、適切な臭化アリール／ヨウ化アリールと、適切なボロン酸との反応によって、容易に調製される（図２を参照のこと）。ニトロ基の還元は、パラジウム触媒水素化によって、他の感受性基質の存在下で選択的に達成され得る（図２および３を参照のこと）。
【００２８】
ＢＡＳＡ成分（例えば、上記のＢＡＳＡ成分）は、一つ以上のセレクチン結合炭水化物部分または糖模倣物（またはいずれかの複合糖質）に対して連結（例えば、スペーサ基を伴ってまたは伴わずに、共有結合）されて、本発明のセレクチンモジュレーターを形成する。選択される炭水化物部分としては、シアリル−Ｌｅｗｉｓｘ（ＳＬｅｘ）シアリル−Ｌｅｗｉｓａ（ＳＬｅａ）、ならびにこれらおよび関連した炭水化物の糖模倣物および複合糖質が挙げられる。セレクチンモジュレーターに含まれ得る、シアル酸含有糖模倣物を含む炭水化物部分は、米国特許第６，１８７，７５４Ｂ１号および同第６，１６９，０７７Ｂ１号に見出される（いくつかの構造については、図１１における化合物５７および５９を参照のこと）。これらとしては、親化合物を超える、セレクチンに対する増加した結合親和性を有するＳＬｅｘおよびＳＬｅａの糖模倣物が挙げられる。非シアル酸含有糖模倣物は、Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｅｍｉｃａ  Ａｃｔａ第８３巻（２０００）の２８９７頁の表において、そして、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．第４０巻，第１９号（２００１）の３６４６頁の表１によって提供される化合物によって例示される。これらの糖模倣物としては、さらなるグリカンに導入されるシクロヘキシル乳酸でのシアル酸の置換ならびにさらなる官能基の変化が挙げられる（いくつかの構造については、図１１における化合物５５、化合物５６および化合物５８を参照のこと）。
【００２９】
炭水化物部分に対するＢＡＳＡの結合は、様々な方法で達成されて、セレクチンモジュレーターを形成し得る。最も単純な炭水化物部分結合方法は、炭水化物部分の還元末端（アノマー性ヒドロキシル／アルデヒド−図６を参照のこと）に対するＢＡＳＡの還元的アミノ化である。これは、還元炭水化物部分に対するＢＡＳＡの単純な反応、続いて形成されたイミンの還元によって達成される。反応する糖の環状性質の喪失は、この方法の有用性を制限する。最も一般的なアプローチは、グリカンのアノマー位置での、Ｏ、ＳまたはＮというヘテロ原子（またはＣ結合型グリコシドについてはＣ原子）を介しての炭水化物部分への、活性化されたリンカーの単純な結合を含む。このような結合の方法論は広範囲に調査されており、そしてアノマー選択性は、方法論および／または保護基の適切な選択によって容易に達成される。潜在的グリコシド合成方法の例としては、ハロゲンまたは過アセチル化糖を用いたＬｅｗｉｓ酸触媒結合形成（Ｋｏｅｎｉｇｓ  Ｋｎｏｒｒ）、トリクロロアセトアミデート結合形成、チオグリコシド活性化およびカップリング、グルカール（ｇｌｕｃａｌ）活性化およびカップリング、ｎ−ペンテニルカップリング、ホスホン酸エステル同族体化（Ｈｏｒｎｅｒ−Ｗａｄｓｗｏｒｔｈ−Ｅｍｍｏｎｓ反応などが挙げられる。あるいは、リンカーは、アノマー性以外の炭水化物部分上の位置へとカップリングされ得る。結合のために最も利用しやすい部位は、糖／糖模倣物（１級アルコール）の６ヒドロキシル（６−ＯＨ）位置にある。６−ＯＨでのリンカーの結合は、様々な手段によって容易に達成され得る。例としては、オキシ−アニオン（塩基を用いた脱プロトン化によって形成されたアルコールアニオン）と適切な求電子剤（例えば、臭化アルキル／アシルエステル、塩化アルキル／アシルエステルまたはスルホン酸アルキル／アシルエステル）との反応、スルホン酸エステル塩化物またはＰＯＣｌ３との反応およびその後の求核剤との置換によるアルコールの活性化、カップリングのためのアルデヒドまたはカルボン酸へのアルコールの酸化、またはさらには、異なる官能性を導入するＭｉｔｓｕｎｏｂｕ反応の使用が挙げられる。一旦結合されると、次いで、炭水化物リンカーは、セレクチンモジュレーター上の適切な求核剤との反応のために官能化される（またはその逆も同様）。これはしばしば、チオホスゲンおよびアミンの使用により達成されて、チオ尿素が結合されたヘテロ二官能性リガンド（図４を参照のこと）、スクエア酸ジエチル結合（再度、アミンを用いて−図５を参照のこと）および／または単純なアルキル／アシル化反応が作製される。利用され得るさらなる方法としては、炭水化物およびペプチドのカップリングに影響を受けるＦＭＯＣ固相合成技術またはＦＭＯＣ液相合成技術（新規なグリコペプチドおよびグリコペプチド模倣物について）およびグリコシル／フコシルトランスフェラーゼおよび／もしくはオリゴサッカリルトランスフェラーゼ（ＯＳＴ）をおそらく利用する化学−酵素合成技術が挙げられる。
【００３０】
本明細書において記載されるセレクチンモジュレーターは、インビボで所望の部位を十分に標的とし得るが、特定の適用については、１以上の特定の組織への標的化を促進するためにさらなる標的化部分を含むことは、有益であり得る。本明細書中で使用する場合、「標的化部分」は、調節薬剤に連結した場合に、標的組織に対するモジュレーターの輸送を増強し、それによりこのモジュレーターの局所濃度を上昇させる、任意の物質（例えば、化合物または細胞）であり得る。標的化部分としては、抗体またはそのフラグメント、レセプター、リガンド、および標的組織の細胞または標的組織付近の細胞と結合する他の分子が挙げられる。結合は、一般に、共有結合であり、例えば、直接縮合もしくは他の反応によって、または二官能性リンカーもしくは多官能性リンカーによって、達成され得る。
【００３１】
特定の実施形態については、セレクチンモジュレーターに対して薬物をまた、あるいは代わりに連結することは有益であり得る。本明細書中で使用する場合、用語「薬物」とは、疾患または他の望ましくない状態を予防または処置するために哺乳動物への投与が意図される任意の生体活性薬剤をいう。薬物としては、ホルモン、増殖因子、タンパク質、ペプチドおよび他の化合物が挙げられる。潜在的薬物の例としては、抗新生物薬剤（例えば、５−フルオロウラシルおよびジスタマイシン）、インテグリンアゴニスト／アンタゴニスト（例えば、環状ＲＧＤペプチド）、サイトカインアゴニスト／アンタゴニスト、ヒスタミンアゴニスト／アンタゴニスト（例えば、ジフェンヒドラミンおよびクロルフェニラミン）、抗生物質（例えば、アミノグリコシドおよびセファロスポリン）、およびレドックス活性生物学的薬剤（例えば、グルタチオンおよびチオレドキシン）が挙げられる。他の実施形態では、診断用放射性核種または治療用放射性核種は、セレクチンモジュレーターへと連結され得る。多くの実施形態において、この薬剤は、セレクチンモジュレーターへと直接的または間接的に連結され得る。
【００３２】
（セレクチンにより媒介される細胞間接着の阻害評価）
上記の通りの調節薬剤は、例えば、セレクチンにより媒介される細胞接着を阻害し得る。この能力は、セレクチンを発現する細胞間の接着（例えば、白血球と血小板または内皮細胞との間の接着）に対する効果を測定するために設計される様々なインビトロアッセイのいずれかを使用して、一般に評価され得る。例えば、このような細胞は、モジュレーターの不存在下で、細胞接着を可能にする標準条件下に配置され得る。一般に、試験細胞とモジュレーターとの接触が、細胞接着の認識可能な破壊をもたらす場合、このモジュレーターは、セレクチンにより媒介される細胞接着のインヒビターである。例えば、モジュレーターの存在下（例えば、マイクロモル濃度レベル）では、互いに相互作用している細胞の減少を観察することによって、白血球と血小板および／または内皮細胞との間の接着の破壊は、約数分以内に視覚的に決定され得る。
【００３３】
（セレクチンモジュレーター処方物）
本明細書中に記載される通りのモジュレーターは、薬学的組成物内に存在し得る。薬学的組成物は、一つ以上の薬学的または生理学的に受容可能な、キャリア、希釈剤または賦形剤と組み合わせて、一つ以上のモジュレーターを含む。このような組成物は、緩衝剤（例えば、中性緩衝化生理食塩水またはリン酸緩衝化生理食塩水）、炭水化物（例えば、グルコース、マンノース、スクロースまたはデキストラン）、マンニトール、タンパク質、ポリペプチドまたはアミノ酸（例えば、グリシン）、抗酸化剤、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡまたはグルタチオン）、アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）および／または保存剤を含み得る。なお他の実施形態では、本発明の組成物は、凍結乾燥物として処方され得る。本発明の組成物は、例えば、局所投与、経口投与、鼻投与、静脈内投与、頭蓋内投与、腹腔内投与、皮下投与または筋肉内投与を包含する、任意の適切な投与様式のために処方され得る。
【００３４】
薬学的組成物はまた、またはあるいは、モジュレーターに連結され得るかまたは組成物内で遊離であり得る、一つ以上の活性薬剤（例えば、上記に記載の活性薬剤）を含み得る。
【００３５】
本明細書中に記載されている組成物は、徐放性処方物（すなわち、投与後に調節薬剤の遅い放出をもたらす、カプセルまたはスポンジのような処方物）の一部として投与され得る。このような処方物は、一般に、周知の技術を使用して調製され得、そして例えば、経口、直腸もしくは皮下移植によって、または所望の標的部位での移植によって、投与され得る。このような処方物内で使用するためのキャリアは、生体適合性であり、そしてまた、生分解性でもあり得る；好ましくは、この処方物は、比較的一定のレベルの調節薬剤の放出を提供する。徐放性処方物内で含まれる調節薬剤の量は、移植部位、放出速度および期待される放出持続時間、ならびに処置または予防される状態の性質に依存する。
【００３６】
セレクチンモジュレーターは、一般に、薬学的組成物内に、治療有効量で存在する。治療有効量は、識別可能な患者利益（例えば、下記の通りの過剰なセレクチン媒介機能（例えば、細胞間接着）と関連した状態の治癒の増加）をもたらす量である。
【００３７】
（セレクチンモジュレーターの使用方法）
一般に、本明細書中に記載される調節薬剤および組成物は、セレクチンにより媒介される機能を増強または阻害するために用いられ得る。このような増強または抑制は、インビトロでおよび／またはインビボで、温血動物（好ましくは哺乳動物（例えばヒト））において達成され得る。但し、セレクチンを発現する細胞は、セレクチンにより媒介される機能を増強または阻害するのに十分な量でかつ充分な時間にわたって、モジュレーターと最終的に接触する。
【００３８】
特定の局面では、本発明は、セレクチンにより媒介される機能（例えば、細胞間接着）と関連した状態の発達を阻害するための方法を提供する。一般に、このような方法は、このような状態を予防、遅延または処置するために用いられ得る。換言すれば、本明細書において提供される治療方法は、疾患を処置するために用いられ得るか、または疾患を含まないかもしくはセレクチンにより媒介される機能と関係していない疾患に罹患した患者におけるこのような疾患の発症を予防もしくは遅延させるために用いられ得る。
【００３９】
様々な状態は、セレクチンにより媒介される機能と関係している。このような状態としては、例えば、組織移植拒絶、血小板媒介性疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症および凝固）、過活動性冠状動脈循環、急性白血球媒介性肺損傷（例えば、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ））、クローン病、炎症性疾患（例えば、炎症性腸疾患）、自己免疫疾患（ＭＳ、重症筋無力症））感染、癌（および転移）、血栓症、創傷（および創傷関連の敗血症）、熱傷、脊髄損傷、消化管粘膜疾患（胃炎、潰瘍）、骨粗鬆症、慢性関節リウマチ、骨関節症、喘息、アレルギー、乾癬、敗血症性ショック、外傷ショック、発作、腎炎、アトピー性皮膚炎、凍傷性損傷、成人呼吸困難症候群、潰瘍性大腸炎、全身性エリテマトーデス、糖尿病および虚血エピソード後の再灌流障害が挙げられる。セレクチンモジュレーターはまた、回復を増強するために、心臓手術の前に患者に投与され得る。他の投与としては、疼痛管理および望ましくない（例えば、癌に関連した）血管新生が挙げられる。
【００４０】
本発明のセレクチンモジュレーターは、処置される（または予防される）疾患に適切な様式で投与され得る。適切な投薬量および適切な投与持続期間および投与頻度は、患者の状態、患者の疾患の型および重篤度、ならびに投与方法などの要因によって決定され得る。一般に、適切な投薬量および処置レジメンは、治療効果および／または予防効果を提供するに充分な量の調節薬剤を提供する。本発明の特に好ましい実施形態では、セレクチンモジュレーターは、一回または多数回の毎日の用量のレジメンで、０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の投薬量で投与され得る。適切な投薬量は、一般に、実験モデルおよび／または臨床試験を使用して決定され得る。一般に、効果的な治療を提供するのに十分である最小の投薬量の使用が好ましい。患者は一般に、処置または予防される状態に適切なアッセイ（これは、当業者に周知である）を用いて治療有効性に関してモニタリングされ得る。
【００４１】
セレクチンモジュレーターはまた、セレクチンを発現する細胞に対して物質を標的化するために用いられ得る。このような物質としては、治療薬剤および診断薬剤が挙げられる。治療薬剤は、標的細胞の特性を改変して、患者の障害の処置もしくは予防または患者の生理機能の調節に関する利点を提供することが実証され得る、分子、ウイルス、ウイルス成分、細胞、細胞成分または他の任意の物質であり得る。治療薬剤はまた、インビボにて生物学的活性を有する薬剤を生成するプロドラッグであり得る。治療薬剤であり得る分子は、例えば、ポリペプチド、アミノ酸、核酸、ポリヌクレオチド、ステロイド、多糖または無機化合物であり得る。このような分子は、様々な方法のいずれかにおいて（例えば、酵素、酵素インヒビター、ホルモン、レセプタ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、触媒ポリヌクレオチド、抗ウイルス剤、抗腫瘍剤、抗細菌剤、免疫調節剤および細胞傷害性剤（例えば、放射性核種（例えば、ヨウ素、臭素、鉛、パラジウムまたは銅））としてが挙げられる）機能し得る。診断薬剤としては、画像化剤（例えば、金属および放射性薬剤（例えば、ガリウム、テクネチウム、インジウム、ストロンチウム、ヨウ素、バリウム、臭素およびリンを含む化合物）、造影剤、色素（例えば、蛍光色素および発色団）、および比色反応または蛍光測定反応を触媒する酵素が挙げられる。一般に、治療薬剤および診断薬剤は、上記の技術のような様々な技術を使用してセレクチンモジュレーターへと結合され得る。標的化目的のために、セレクチンモジュレーターは、本明細書において記載される通りに、患者に投与され得る。セレクチンは、血管新生の間の新しい毛細管の形成に関与する内皮細胞についての走化性分子であるので、セレクチンモジュレーターは、腫瘍の脈管構造を殺傷するために治療薬剤を標的とするために用いられ得る。セレクチンモジュレーターはまた、遺伝子標的化のために用いられ得る。
【００４２】
セレクチンモジュレーターはまた、インビトロで（例えば、様々な周知の細胞培養および細胞分離方法において）用いられ得る。例えば、モジュレーターは、スクリーン、アッセイおよび培養における増殖用の、セレクチンを発現する細胞を固定化する際に使用するために、組織培養プレートまたは他の細胞培養支持体の内部表面に連結され得る。このような連結は、任意の適切な技術（例えば、上記の方法）ならびに他の標準の技術によって実施され得る。モジュレーターはまた、例えば、インビトロでの細胞識別および選別を容易にし、セレクチン（または異なるセレクチンレベル）を発現している細胞の選択を可能にするために用いられ得る。好ましくは、このような方法において使用するためのモジュレーターは、検出可能なマーカーに連結される。適切なマーカーは、当該分野で周知であり、そして放射性核種、発光性基、蛍光基、酵素、色素、免疫グロブリン定常ドメインおよびビオチンが挙げられる。１つの好ましい実施形態では、蛍光マーカー（例えば、フルオレセイン）に連結されたモジュレーターを、細胞と接触させ、次いでこれを、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によって分析する。
【００４３】
それほど好ましくないが、セレクチンモジュレーターのＢＡＳＡ成分（すなわち、ＢＡＳＡ、ＢＡＳＡの一部分、ＢＡＳＡのアナログまたはＢＡＳＡの一部分のアナログ）は、薬学的組成物として単独で調製され得、そして独立してまたは本発明のセレクチンモジュレーターとの組合せで、化合物（または組成物）として、上記の方法で用いられ得る。上記の説明は、ＢＡＳＡ成分に適用される。
【００４４】
本発明の全ての化合物または本発明に有用な化合物の全ては、それらの生理学的に受容可能な塩を包含する。
【００４５】
以下の実施例は、説明として提供され、決して限定としては提供されない。
【実施例】
【００４６】
（実施例１：代表的セレクチンモジュレーターの調製）
この実施例は、代表的セレクチンモジュレーターまたはその成分（特に、化合物３９、化合物２２、化合物６０、化合物６１、化合物６２および化合物６５（それぞれ、図２〜図７））の合成を例示する。
【００４７】
（３９の合成（図２））
（Ｓｕｚｕｋｉカップリング）
４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−安息香酸（０．００４ｍｏｌ、１ｅｑ）およびＫＯＡｃ（０．０１２ｍｏｌ、３ｅｑ）を、ＴＨＦ（２５ｍｌ）中に配置して、スラリーを作製する。次いで、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）（０．０００１２ｍｏｌ、３ｍｏｌ  ％）およびｐ−ブロモ−ニトロベンゼン（０．００５ｍｏｌ、１．２ｅｑ）を攪拌しながら溶液に添加し、そしてこの溶液を穏やかに８０℃まで加熱する。６時間後、反応は、ＴＬＣ（２０：１のＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ）によれば完全である。反応混合物をエバポレートして乾固し、ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）中に溶解し、そして蒸留水および飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄する。得られるビフェニル化合物は、直接次の工程に利用する。
【００４８】
（カルボジイミドカップリング）
４’−ニトロ−ビフェニル−４−カルボン酸（０．００４ｍｏｌ、１ｅｑ）、ジメチルアミノピリジン（１結晶、触媒量）およびＥＤＣｌ（０．００４１ｍｏｌ、１．０５ｅｑ）をＤＭＦ（またはＴＨＦ、２０ｍｌ）中に溶解して、室温で１０分間反応させる。８−アミノ−ナフタレン−１，３，５−トリスルホン酸を、攪拌しながら反応混合物に添加し、そして反応を窒素下で室温で４８時間進行させる。次いで、反応混合物をエバポレートして乾固し、そして逆相クロマトグラフィー（Ｃ１８カラム、８０／２０  ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−１％  ＴＦＡ〜５０／５０  ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ）によって精製する。
【００４９】
（水素化）
８−［（４’−ニトロ−ビフェニル−４−カルボニル）−アミノ］−ナフタレン−１，３，５−トリスルホン酸（１ｅｑ）および１０％炭素担持Ｐｄ（１０ｍｏｌ  ％）を、ＥｔＯＡｃ（またはＣＨ３ＯＨ）中に配置する。この溶液を脱気し、そしてＨ２雰囲気を反応容器内に生成させる。Ｈ２の取り込みが終了するまで反応を進行させ、そしてＴＬＣは、出発物質の消失を示す（約１２時間）。パラジウム沈澱物をセライト床を通した濾過により除去し、そして濾液をエバポレートして乾固して、化合物３９を得る。
【００５０】
（２２の合成（図３））
（酸塩化物のカップリング）
８−アミノ−ナフタレン−１，３，５−トリスルホン酸（０．００４ｍｏｌ、１ｅｑ）およびジイソプロピルエチルアミン（６ｅｑ）を、ＤＭＦ（２０ｍｌ）中に配置し、そして０℃まで冷却する。塩化３−ニトロ−４−メチルベンゾイル（０．００５ｍｏｌ、１．２ｅｑ）をＤＭＦ中に溶解し、そして冷却した溶液に１０分間かけて滴下する。反応を０℃にて３時間進行させる。反応混合物を０．１Ｍ  ＨＣｌ（２５ｍｌ）で洗浄し、凍結し、そしてエバポレートして乾固する。得られたシロップを、精製せずに次の工程において用いる。
【００５１】
（水素化）
８−（４−メチル−３−ニトロ−ベンゾイルアミノ）−ナフタレン−１，３，５−トリスルホン酸（１ｅｑ）および１０％炭素担持Ｐｄ（１０ｍｏｌ  ％）を、ＣＨ３ＯＨ中に配置する。溶液を脱気し、そしてＨ２雰囲気を反応容器内に生成させる。Ｈ２の取り込みが終了するまで反応を進行させ、そしてＴＬＣは、出発物質の消失を示す（１２時間）。パラジウム沈澱物をセライト床を通した濾過により除去し、そして濾液をエバポレートして乾固して、還元された化合物８−（３−アミノ−４−メチル−ベンゾイルアミノ）−ナフタレン−１，３，５−トリスルホン酸を得る。
【００５２】
（酸塩化物カップリング）
８−（３−アミノ−４−メチル−ベンゾイルアミノ）−ナフタレン−１，３，５−トリスルホン酸（０．００４ｍｏｌ、１ｅｑ）およびジイソプロピルエチルアミン（６ｅｑ）を、ＤＭＦ（１５ｍｌ）中に配置し、そして０℃まで冷却する。塩化３−ニトロ−ベンゾイル（０．００５ｍｏｌ、１．２ｅｑ）をＤＭＦ（５ｍｌ）中に溶解し、そして冷却した溶液に１０分間かけて滴下する。反応を０℃にて３時間進行させる。反応混合物を０．１Ｍ  ＨＣｌ（２５ｍｌ）で洗浄し、そしてエバポレートして乾固する。この化合物を、逆相クロマトグラフィー（Ｃ１８カラム，８０／２０  ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−１％  ＴＦＡ〜５０／５０  ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ）により精製する。
【００５３】
（６０の合成（図４））
（活性化エステルの合成）
ＳＬｅｘのＬｅｍｉｅｕｘエステル（１ｅｑ）をＨ２Ｏ中に溶解し、そして１，２−ジアミノエタン（３ｅｑ）を、攪拌しながら添加する。溶液を、窒素下で５０時間、７０℃まで加熱する。この溶液をエバポレートして乾固し、そして化合物を逆相クロマトグラフィー（Ｃ１８カラム、８０／２０  ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−１％  ＴＦＡ〜５０／５０  ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ）によって精製する。
【００５４】
（チオイソシアネート形成）
このＬｅｍｉｅｕｘエステル−アミン（１ｅｑ）をＨ２Ｏ中に溶解し、そしてチオホスゲン（３ｅｑ−高度に毒性であることが警告される）と３時間にわたって反応させる。次いで、この溶液をＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、未反応のチオホスゲンを除去し、そして水層を収集し、そしてエバポレートして乾固する。この化合物を次の反応のためにそのまま使用する。
【００５５】
（６０の形成）
活性化チオイソシアネート（１ｅｑ）をｐＨ９のＮＨ４ＯＡｃ緩衝溶液中に溶解し、そして８−（２−アミノ−アセチルアミノ）−ナフタレン−１，３，５−トリスルホン酸（１．２ｅｑ）を攪拌しながら添加する。反応物を、窒素下で室温で６時間攪拌させる。次いで、化合物を逆相クロマトグラフィー（Ｃ１８カラム、８０／２０  ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−１％  ＴＦＡ〜５０／５０  ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ）により精製する。
【００５６】
（６１の合成（図５））
（活性化エステルの合成）
ＳＬｅｘ（１ｅｑ）のＬｅｍｉｅｕｘエステルをＨ２Ｏ中に溶解し、そして１，２−ジアミノエタン（３ｅｑ）を、攪拌しながら添加する。溶液を、窒素下で５０時間、８０℃まで加熱する。溶液をエバポレートして乾固し、そして化合物を逆相クロマトグラフィー（Ｃ１８カラム、８０／２０  ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−１％  ＴＦＡ〜５０／５０  ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ）により精製する。
【００５７】
（スクエア酸エステルの形成）
このＬｅｍｉｅｕｘエステル−アミン（１ｅｑ）を、ｐＨ７の０．１Ｍ  Ｈｅｐｅｓ緩衝液に溶解し、そしてスクエア酸ジエチルエステル（３ｅｑ）と３時間にわたって反応させる。次いで、溶液をＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、そして水層を収集し、そしてエバポレートして乾固させる。得られた粉末を、次の工程においてそのまま使用する。
【００５８】
（６１の形成）
活性化スクエア酸エステル−糖（１ｅｑ）を、ｐＨ９．５の緩衝液中に溶解し、そして８−（３−アミノ−ベンゾイルアミノ）−ナフタレン−１，３，５−トリスルホン酸（１．２ｅｑ）を、攪拌しながら添加する。反応物を、窒素下で室温で６時間攪拌させる。溶液をエバポレートして乾固し、そして化合物を逆相クロマトグラフィー（Ｃ１８カラム、８０／２０  ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−１％  ＴＦＡ〜５０／５０  ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ）により精製する。
【００５９】
（６２の合成（図６））
（還元的アミノ化）
ＳＬｅａ（２０μｏｌ、１ｅｑ）を、ＢＡＳＡ  ４１（２０μｍｏｌ、１ｅｑ）を含むｐＨ４の酢酸緩衝化Ｈ２Ｏ（１００μｌ）中に溶解する。反応を、窒素下で１２時間、室温にて進行させる。次いで、形成される、得られるイミンを、ＣＨ３ＣＨ２ＯＨ／Ｈ２Ｏ（２：１）中のＮａＣＮＢＨ３（３０μｍｏｌ、１．５ｅｑ）との反応により還元する。次いで、溶液をエバポレートして乾固し、そして逆相クロマトグラフィー（Ｃ１８カラム、８０／２０  ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−１％  ＴＦＡ〜５０／５０  ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ）により精製する。
【００６０】
（６５の合成（図７））
（活性化エステルの合成）
化合物６３（１．８μｍｏｌ、１ｅｑ）を、１，２−ジアミノエタン（５０μｌ、ＸＳ）中に、攪拌しながら溶解する。溶液を、窒素下で５０時間、７０℃まで加熱する。次いで、溶液をエバポレートして乾固し、そして化合物を逆相クロマトグラフィー（Ｃ１８カラム、８０／２０  ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ−１％  ＴＦＡ〜５０／５０  ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ）により精製する。
【００６１】
（スクエア酸エステルの形成）
６３−アミン（５．４０μｍｏｌ、１ｅｑ）を、ｐＨ７の０．１Ｍ  Ｈｅｐｅｓ緩衝液中に溶解し、そしてスクエア酸ジエチルエステル（８０μｍｏｌ、ＸＳ）と２４時間反応させる。次いで、溶液をＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、そして水層を収集し、そしてエバポレートして乾固する。得られる粉末をカラムクロマトグラフィー（Ｓｅｐｈａｄｅｘ−Ｇ２５、１００％Ｈ２Ｏ）により精製する。
【００６２】
（６５の形成）
この活性化された６３−スクエア酸エステル−糖（５．４０μｍｏｌ、１ｅｑ）を、ｐＨ９．５のＮａＨＣＯ３緩衝液（２ｍｌ）中に溶解し、そしてＢＡＳＡ  ６４（６．４８μｍｏｌ、１．２ｅｑ）を、攪拌しながら添加する。反応物を、窒素下で室温にて３時間攪拌させる。溶液をエバポレートして乾固し、そして化合物６５をカラムクロマトグラフィー（Ｓｅｐｈａｄｅｘ−Ｇ２５、１００％  Ｈ２Ｏ）により精製する。
【００６３】
（実施例２：ＢＡＳＡアナログによるＰ−セレクチンの阻害）
本実施例は、種々のＢＡＳＡアナログが、ＥＬＩＳＡおよび細胞ベースのアッセイにおいてＰ−セレクチン機能を阻害する能力を例示する。
【００６４】
（Ｐ−セレクチンについてのリガンド結合アッセイ）
ＳＬｅａ−ＨＳＡ（ＩｓｏＳｅｐ  ＡＢ，Ｔｕｌｌｉｎｇｅ，Ｓｗｅｄｅｎ）中の新糖タンパク質を、９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｆａｌｃｏｎ  ｐｒｏｂｉｎｄ）のウェル中で、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＣａＣｌ２（ｐＨ７．５）（ＴＢＳ）中、１００ｎｇ／ウェルにて４℃にて一晩インキュベートする。コーティングインキュベーションの後、これらのウェルを、１００μＬ／ウェルの２％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を室温にて２時間用いてブロックする。
【００６５】
試験化合物を、第２の９６ウェルプレート（プレート２；Ｕ字底型、低結合プレート）中で、ＤｕｌｂｅｃｃｏのＰＢＳ（ｐＨ７．０）（ＤＰＢＳ，Ｂｉｏｆｌｕｉｄｓ，Ｉｎｃ．）中にて連続希釈する。プレート１をＤＰＢＳで５回洗浄し、そしてプレート２の内容物をプレート１に移す。等しい容積のＰ−セレクチン／ｈＩｇキメラ（ＧｌｙｃｏＴｅｃｈ  Ｃｏｒｐ．）をこれらのウェルに、１％  ＢＳＡ、ＤＰＢＳ（ｐＨ７．０）中で４μｇ／ｍｌにて添加し、そしてこのプレートを室温にて２時間インキュベートする。インキュベーション後、このプレートを５回洗浄し、そして１００μｌ／ウェルの１μｇ／ｍｌのペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ヒトＩｇ（ＫＰＬ  ｌａｂｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）をプレート１に添加する。室温にて１時間のインキュベーション後、このプレートを５回洗浄し、そしてＴＭＢ基質（ＫＰＬ  ｌａｂｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を各ウェルに添加する。５分後、反応を、１００μｌ／ウェルの１Ｍ  Ｈ３ＰＯ４の添加により停止させ、そして４５０ｎｍでの光吸光度を、マイクロタイタープレートリーダーにより読み取る。
【００６６】
（Ｐ−セレクチンについての高感度リガンド結合アッセイ）
５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＣａＣｌ２（ｐＨ７．５）（ＴＢＳ）中のＰ−セレクチン／ｈＩｇキメラ（ＧｌｙｃｏＴｅｃｈ  Ｃｏｒｐ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を、マイクロタイタープレート（プレート１、Ｆａｌｃｏｎ  ｐｒｏｂｉｎｄ）中で３７℃にて２時間インキュベートする。インキュベーション後、このプレートを５回洗浄し、そしてＴＢＳ中の１００μｌ／ウェルの１％  ＢＳＡを各ウェルに添加し、そしてこのプレートを室温にて１時間インキュベートする。
【００６７】
試験化合物を、第２の丸底低結合プレート（プレート２）中に連続希釈する。等しい容積の結合体ＳＬｅｘＰＡＡビオチン−ストレプトアビジンＨＲＰを各ウェルに添加する。ＳＬｅｘＰＡＡ−ビオチン（ＧｌｙｃｏＴｅｃｈ  Ｃｏｒｐ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）とストレプトアビジンＨＲＰ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）とを混合することにより、このＳＬｅｘＰＡＡビオチン−ストレプトアビジンＨＲＰを予め作製する。
【００６８】
プレート１を５回洗浄し、そしてプレート２の内容物をプレート１に移す。２時間のインキュベーション後、このプレートを５回洗浄し、そして１００μｌ／ウェルのＴＭＢ基質（ＫＰＬ  ｌａｂｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を添加する。１０分後、反応を、１００μｌ／ウェルの１Ｍ  Ｈ３ＰＯ４の添加により停止させ、そして４５０ｎｍでの光吸光度を、マイクロタイタープレートリーダーにより読み取る。
【００６９】
（細胞ベースのアッセイ）
ヒト臍静脈内皮細胞（ｈｕｖｅｃ）を、臍帯から単離する。ｈｕｖｅｃがＴ−１７５フラスコ中でコンフルエンスに達したとき、これらを、フィブロネクチン（ＦＮ）でコーティングされた３５ｍｍ組織培養ディッシュ（Ｇｉｂｃｏ  ３３０１６−０２３）に継代する。一旦コンフルエントな単層が得られたら、３〜５日以内にこれらのディッシュを用いる。
【００７０】
好中球を各実験の日に新鮮な血液から単離し、そして単離の５時間以内に用いる。単離したＰＭＮを、ＣａおよびＭｇ（Ｓｉｇｍａ  Ｈ９２６９）ならびに１２ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ（Ｂｉｏｆｌｕｉｄｓ，ＭＤ＃３０５）を含むＨＢＳＳ中に１０７細胞／ｍｌにて、フローアッセイにおける使用のために懸濁する。
【００７１】
並行プレートフローチャンバを用いて、回転挙動を研究する。回転挙動は、流体力学的流動の存在下でセレクチンと接触した細胞の特徴である。シリコンゴムガスケットを備えたこの並行プレート流動チャンバ（ＧｌｙｃｏＴｅｃｈ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）は、バキュームにより適所に保持される３５ｍｍ組織培養ディッシュ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に適合するように円形の設計のものである。壁剪断応力（τｗ、ダイン／ｃｍ２）は、τｗ＝６μＱ／ａ２ｂにより得られ、ここで、μは、培地の見かけ粘度（３７℃にてＨ２Ｏ＝０．００７６Ｐ）であり、ａは、チャネル高さ（すなわち、２５４μｍのガスケット厚さ）であり、ｂは、チャネル幅（すなわち、０．２５ｃｍのガスケット幅）、そしてＱは、体積流量（ｍｌ／分）である。
【００７２】
流動アッセイの前に、コンフルエントなｈｕｖｅｃ単層を、ＩＬ−４とともにインキュベートする。Ｐ−セレクチンアンタゴニストおよびヒスタミンを、流動の前にＰＭＮに添加する。アンタゴニストを含むＰＭＮの細胞懸濁物（１０６細胞／ｍｌ）を、０．９ダイン／ｃｍ２の壁剪断応力に対応する剪断速度でチャンバを通して灌流する。細胞懸濁物を、３分間にわたって、チャンバを通して流動させ、その後、ディジタル画像を収集する。
【００７３】
ディジタル画像系は、Ｉｎｏｖｉｓｉｏｎｉｓ  ＩＣ３００ディジタル画像系にインターフェースするＳｉｌｉｃｏｎ  Ｇｒａｐｈｉｃｓ  Ｉｎｄｉｇｏ２ワークステーションからなる。ｈｕｖｅｃと相互作用するＰＭＮを、１０倍対物レンズを用い、位相差モードで作動させたＺｅｉｓｓ倒置型顕微鏡（ＩＣＭ  ４０５）を用いて可視化する。ＣＣＤカメラを、この顕微鏡に取り付けて、ディジタル画像系にシグナルを提供する。実験を、ビデオレコーダに記録する。流動チャンバを通しての細胞の３分間の灌流後、ディジタル画像を、全ての実験条件につき、３つのディッシュの各々において７〜１０個の異なる位置で獲得する。
【００７４】
相互作用する細胞の数（ＮＩＣ）および静止細胞の数（ＮＡＣ）を、ピクセル強度およびサイズに基づいて分割プログラムにより決定する。回転挙動の定量を、回転する細胞を垂直の筋として含む画像の分析により実施する。回転の尺度は、各画像における全ての垂直の筋の総面積（すなわち、総ピクセル数）として定義される回転指数（ＲＩ）である。流動アッセイからの結果を、図９にまとめる。アンタゴニストは、低いμＭ範囲で活性であることが見出される。これらのデータは、ＢＡＳＡアナログがＰ−セレクチン機能を阻害する能力を確認する。
【００７５】
（実施例３）
（マウスにおいてチオグリコレートによって誘発される腹膜炎）
腹膜炎は、マウスにおいて、チオグリコレートの腹腔内（ｉ．ｐ．）注射（時間０、ｔ＝０）により誘発される。腹膜炎を、４時間にわたって発達させた。試験化合物を、ｔ＝０での腹腔内注射により投与した。Ｐ−セレクチンに対する抗体を、ポジティブコントロールとして用い、そして滅菌生理食塩水をネガティブコントロールとして用いた。４時間後、細胞を腹膜腔からシリンジにより取り出し、そして好中球の数を決定した。糖模倣物（化合物６３）およびＢＡＳＡアナログ（化合物６４）の両方を含むヘテロ二官能性化合物（化合物６５）による、マウスにおけるチオグリコレート誘発性腹膜炎の阻害は、いずれの化合物単独よりもずっと良好である。
【００７６】
上記から、本発明の特定の実施形態が、例示の目的で本明細書中に記載されているが、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、種々の改変が行われ得ることが理解される。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１Ａ】図１Ａは、本明細書中に開示される通りのセレクチンモジュレーターの代表的ＢＡＳＡ成分の構造を示す。この図において例示される化合物は、ＢＡＳＡ部分およびアナログを含む。
【図１Ｂ】図１Ｂは、本明細書中に開示される通りのセレクチンモジュレーターの代表的ＢＡＳＡ成分の構造を示す。この図において例示される化合物は、ＢＡＳＡ部分およびアナログを含む。
【図１Ｃ】図１Ｃは、本明細書中に開示される通りのセレクチンモジュレーターの代表的ＢＡＳＡ成分の構造を示す。この図において例示される化合物は、ＢＡＳＡ部分およびアナログを含む。
【図１Ｄ】図１Ｄは、本明細書中に開示される通りのセレクチンモジュレーターの代表的ＢＡＳＡ成分の構造を示す。この図において例示される化合物は、ＢＡＳＡ部分およびアナログを含む。
【図１Ｅ】図１Ｅは、本明細書中に開示される通りのセレクチンモジュレーターの代表的ＢＡＳＡ成分の構造を示す。この図において例示される化合物は、ＢＡＳＡ部分およびアナログを含む。
【図１Ｆ】図１Ｆは、本明細書中に開示される通りのセレクチンモジュレーターの代表的ＢＡＳＡ成分の構造を示す。この図において例示される化合物は、ＢＡＳＡ部分およびアナログを含む。
【図１Ｇ】図１Ｇは、本明細書中に開示される通りのセレクチンモジュレーターの代表的ＢＡＳＡ成分の構造を示す。この図において例示される化合物は、ＢＡＳＡ部分およびアナログを含む。
【図１Ｈ】図１Ｈは、本明細書中に開示される通りのセレクチンモジュレーターの代表的ＢＡＳＡ成分の構造を示す。この図において例示される化合物は、ＢＡＳＡ部分およびアナログを含む。
【図１Ｉ】図１Ｉは、本明細書中に開示される通りのセレクチンモジュレーターの代表的な炭水化物成分または糖模倣物成分の構造を示す。
【図２】図２は、代表的ＢＡＳＡの合成を例示する図である。
【図３】図３は、代表的ＢＡＳＡの合成を例示する図である。
【図４】図４は、本発明のセレクチンモジュレーターを形成する、炭水化物部分に連結されたＢＡＳＡアナログの合成を例示する図である。
【図５】図５は、本発明のセレクチンモジュレーターを形成する、炭水化物部分に連結されたＢＡＳＡアナログの合成を例示する図である。
【図６】図６は、本発明のセレクチンモジュレーターを形成する、炭水化物部分に連結されたＢＡＳＡアナログの合成を例示する図である。
【図７】図７は、本発明のセレクチンモジュレーターを形成する、糖模倣物に連結されたＢＡＳＡアナログの合成を例示する図である。
【図８】図８は、ＢＡＳＡアナログがＰ−セレクチン機能を阻害する能力を例示する棒グラフである。阻害は、ＥＬＩＳＡアッセイにおいてＰ−セレクチン結合を５０％阻害するために必要とされるＢＡＳＡアナログの量（ＩＣ５０）として示される。
【図９】図９は、ＢＡＳＡアナログがＥＬＩＳＡおよび細胞ベースのアッセイにおいてＰ−セレクチン機能を阻害する能力を例示する表である。
【図１０】図１０は、シアリルＬｅａに連結されたＢＡＳＡアナログ（化合物６２）による流動の下で、Ｐ−セレクチンによって媒介される細胞接着の阻害を例示する表である。
【図１１】図１１は、シアリルＬｅｘの糖模倣部分に連結されたＢＡＳＡアナログ（化合物６５）が、マウスモデルにおいてチオグリコール酸によって誘発された腹膜炎を阻害する能力を例示する棒グラフである。
【図１Ａ】
2005526141.tif 000012
【図１Ｂ】
2005526141.tif 000013
【図１Ｃ】
2005526141.tif 000014
【図１Ｄ】
2005526141.tif 000015
【図１Ｅ】
2005526141.tif 000016
【図１Ｆ】
2005526141.tif 000017
【図１Ｇ】
2005526141.tif 000018
【図１Ｈ】
2005526141.tif 000019
【図１Ｉ】
2005526141.tif 000020
【図２】
2005526141.tif 000021
【図３】
2005526141.tif 000022
【図４】
2005526141.tif 000023
【図５】
2005526141.tif 000024
【図６】
2005526141.tif 000025
【図７】
2005526141.tif 000026
【図８】
2005526141.tif 000027
【図９】
2005526141.tif 000028
【図１０】
2005526141.tif 000029
【図１１】
2005526141.tif 000030
【手続補正書】
【提出日】平成16年11月18日(2004.11.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物またはその生理学的に受容可能な塩であって、炭水化物または糖模倣物に連結されたベンジルアミノ硫酸（ＢＡＳＡ）を含み、ここで、該炭水化物または該糖模倣物が、セレクチンを結合する、化合物またはその生理学的に受容可能な塩。
【請求項２】
前記ＢＡＳＡが、前記糖模倣物に連結している、請求項１に記載の化合物またはその生理学的に受容可能な塩。
【請求項３】
以下の式：
【化１】
2005526141.tif 000031
を有する、請求項１に記載の化合物またはその生理学的に受容可能な塩。
【請求項４】
以下の式：
【化２】
2005526141.tif 000032
を有する、請求項１に記載の化合物またはその生理学的に受容可能な塩。
【請求項５】
以下の式：
【化３】
2005526141.tif 000033
を有する、請求項１に記載の化合物またはその生理学的に受容可能な塩。
【請求項６】
以下の式：
【化４】
2005526141.tif 000034
を有する、請求項１に記載の化合物またはその生理学的に受容可能な塩。
【請求項７】
薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤と組み合わせて、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物を含む、組成物。
【請求項８】
診断薬剤または治療薬剤をさらに含む請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物を含む、化合物またはその生理学的に受容可能な塩。
【請求項９】
薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤と組み合わせて、請求項８に記載の化合物を含む、組成物。
【請求項１０】
セレクチン媒介機能を調節するための方法において使用するための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物または請求項７に記載の組成物。
【請求項１１】
セレクチン媒介機能を調節するための薬の調製における、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物または請求項７に記載の組成物の使用。
【請求項１２】
過剰のセレクチン媒介機能に関連した状態の発症を阻害するための方法において使用するための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物または請求項７に記載の組成物。
【請求項１３】
過剰のセレクチン媒介機能に関連した状態の発症を阻害するための薬の調製における、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物または請求項７に記載の組成物の使用。
【請求項１４】
移植された組織の拒絶を阻害するための方法において使用するための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物または請求項７に記載の組成物。
【請求項１５】
移植された組織の拒絶を阻害するための薬の調製における、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物または請求項７に記載の組成物の使用。
【請求項１６】
診断薬剤または治療薬剤を、セレクチンを発現する細胞へと標的化するための方法において使用するための、請求項８に記載の化合物または請求項９に記載の組成物。
【請求項１７】
治療薬剤を、セレクチンを発現する細胞へと標的化するための薬の調製における、請求項８に記載の化合物または請求項９に記載の組成物の使用。
【国際調査報告】
2005526141.tif 000035
2005526141.tif 000036
2005526141.tif 000037