(57)【要約】本発明は、ＩＩ型糖尿病の予防または処置を目的とした草本医薬組成物に関するものである。本組成物は、プテロカルプス(Pterocarpus marsupium)、クワ(Morus alba)、クミスクチン(Orthosiphon aristatus)、オピオホゴン  ジャポニカス(Opiophogon japonicus)、ハマナス(Rosa rugosa)、ツユクサ(Commelina communis)、キカラスウリ(Trichosanthis kirilowii)及びハナスゲ(Anemarrhena asphodeloides)の抽出物から構成される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
プテロカルプス(Pterocarpus marsupium)、クワ(Morus alba)、クミスクチン(Orthosiphon aristatus)、オピオホゴン  ジャポニカス(Opiophogon japonicus)、ハナスゲ(Anemarrhena asphodeloides)、またはキカラスウリ(Trichosanthis kirilowii)の抽出物を、ハマナス(Rosa rugosa)および／またはツユクサ(Commelina communis)の抽出物、ならびに製薬上許容できる担体と組み合わせて含む、血糖低下に有効な組成物。
【請求項２】
該抽出物は、
約３重量％〜約９０重量％のプテロカルプス(Pterocarpus marsupium)、
約３重量％〜約９０重量％のクワ(Morus alba)、
約３重量％〜約９０重量％のクミスクチン(Orthosiphon aristatus)、
約３重量％〜約９０重量％のオピオホゴン  ジャポニカス(Opiophogon japonicus)、
約３重量％〜約９０重量％のハマナス(Rosa rugosa)、
約３重量％〜約９０重量％のツユクサ(Commelina communis)、
約３重量％〜約９０重量％のキカラスウリ(Trichosanthis kirilowii)、及び
約３重量％〜約９０重量％のハナスゲ(Anemarrhena asphodeloides)
の相互に対する相対的な割合で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
該抽出物は、
約５重量％〜約５０重量％のプテロカルプス(Pterocarpus marsupium)、
約５重量％〜約５０重量％のクワ(Morus alba)、
約５重量％〜約５０重量％のクミスクチン(Orthosiphon aristatus)、
約５重量％〜約５０重量％のオピオホゴン  ジャポニカス(Opiophogon japonicus)、
約３重量％〜約５０重量％のハマナス(Rosa rugosa)、
約３重量％〜約５０重量％のツユクサ(Commelina communis)、
約３重量％〜約５０重量％のキカラスウリ(Trichosanthis kirilowii)、及び
約３重量％〜約５０重量％のハナスゲ(Anemarrhena asphodeloides)
の割合で存在する、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
該抽出物は、
約２０重量％のプテロカルプス(Pterocarpus marsupium)、
約１５重量％のクワ(Morus alba)、
約２０重量％のクミスクチン(Orthosiphon aristatus)、
約１０重量％のオピオホゴン  ジャポニカス(Opiophogon japonicus)、
約８重量％のハマナス(Rosa rugosa)、
約７重量％のツユクサ(Commelina communis)、
約１０重量％のキカラスウリ(Trichosanthis kirilowii)、及び
約１０重量％のハナスゲ(Anemarrhena asphodeloides)
の割合で存在する、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
該担体は、ベリー若しくは果物の基剤、野菜スープ若しくはブイヨンの基剤、大豆乳飲料(soya-milk drink)、または栄養サプリメントである、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
該ベリーまたは果物の基剤は、ロサ  カニナ(Rosa canina)、ビルベリー(Vaccinum myrtillus)またはコケモモ(Vaccinum vitis-idea)の抽出物を含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
該野菜スープまたはブイヨンの基剤は、イラクサ(Vaccinum vitis-idea)の葉、タマネギ(Allium cepa)またはバジルホーリー(Ocimum sanctum)の抽出物を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
ゴボウ(Arctium lappa)の根、ジャンボラン(Eugenia jambolana)の種子、ファセウス  ブルガリス(Phaseus vulgaris)の殻、コロハ(Trigonella foenum graeam)の種子、またはビルベリー(Vaccinum myrtillus)の葉の抽出物をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
該抽出物は、
約５重量％〜約２０重量％のゴボウ(Arctium lappa)の根、
約５重量％〜約７０重量％のジャンボラン(Eugenia jambolana)の種子、
約５重量％〜約２０重量％のファセウス  ブルガリス(Phaseus vulgaris)の殻、
約１０重量％〜約３０重量％のコロハ(Trigonella foenum graeam)の種子、および
約２０重量％〜約６０重量％のビルベリー(Vaccinum myrtillus)の葉の割合で存在し、該割合は、ゴボウ(Arctium lappa)の根、ジャンボラン(Eugenia jambolana)の種子、ファセウス  ブルガリス(Phaseus vulgaris)の殻、コロハ(Trigonella foenum graeam)の種子、及びビルベリー(Vaccinum myrtillus)の葉の抽出物のそれぞれに対するものである、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
クロム、マンガン、亜鉛、ナイアシン、ビタミンＢ６またはビタミンＢ１２をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
１回の投与当たり、該クロムは約２０〜約５００μｇの量で存在し、該マンガンは約１〜約１０ｍｇの量で存在し、該亜鉛は約２〜約１０ｍｇの量で存在し、該ナイアシンは約５０〜約５００ｍｇの量で存在し、該ビタミンＢ６は約１〜約５０ｍｇの量で存在し、または該ビタミンＢ１２は約５〜約１００μｇの量で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
ウコギ(Acanthopanax)、シサンドラ(Schizandra)、及び必要であればロジオラ(Rhodiola)の抽出物をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
クロム、マンガン、亜鉛、ナイアシン、ビタミンＢ６またはビタミンＢ１２をさらに含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１４】
ウコギ(Acanthopanax)、シサンドラ(Schizandra)、及び必要であればロジオラ(Rhodiola)の抽出物をさらに含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１５】
ウコギ(Acanthopanax)、シサンドラ(Schizandra)、及び必要であればロジオラ(Rhodiola)の抽出物をさらに含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１６】
ウコギ(Acanthopanax)、シサンドラ(Schizandra)、及び必要であればロジオラ(Rhodiola)の抽出物をさらに含む、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１７】
エゾウコギ(Acanthopanax senticosus)の根、チョウセンゴミシ(Schizandra chinensis)の果実及び種子、ならびにロジオラロゼア(Rhodiola rosea)の根の抽出物が、約４：２：１の比で存在する、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１８】
ＩＩ型糖尿病の治療が必要な人に、血糖低下に有効な量の請求項１に記載の組成物を投与することを有する、ＩＩ型糖尿病の治療方法。
【請求項１９】
臨床上のＩＩ型糖尿病の発症の予防が必要な人に、血糖低下に有効な量の請求項１に記載の組成物を投与することを有する、臨床上のＩＩ型糖尿病の発症の予防方法。
【請求項２０】
治療の開始時に約２００〜約３００ｍｇ／ｄｌの血中グルコースレベルを有する患者に、血糖低下に有効な量の請求項１に記載の組成物を投与することを有する、治療の開始時に約２００〜約３００ｍｇ／ｄｌの血中グルコースレベルを有する患者の血中グルコースレベルの減少方法。
【請求項２１】
有効量の請求項１に記載の組成物を個体に投与することを有する、膵臓β細胞からのインスリンの分泌を向上させる方法。
【請求項２２】
請求項１に記載の組成物を個体に投与することを有する、複合炭水化物の単糖類への分解の阻害方法。
【請求項２３】
ハマナス(Rosa rugosa)および／またはツユクサ(Commelina communis)の抽出物、ならびに製薬上許容できる担体と組み合わせて、プテロカルプス(Pterocarpus marsupium)、クワ(Morus alba)、クミスクチン(Orthosiphon aristatus)、オピオホゴン  ジャポニカス(Opiophogon japonicus)、ハナスゲ(Anemarrhena asphodeloides)の抽出物を含む血糖低下に有効な組成物、またはゴボウ(Arctium lappa)の根、ジャンボラン(Eugenia jambolana)の種子、ファセウス  ブルガリス(Phaseus vulgaris)の殻、コロハ(Trigonella foenum graeam)の種子、及びビルベリー(Vaccinum myrtillus)の葉の抽出物を含む組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、糖尿病の予防及び治療を目的とする医薬草本組成物に関するものである。本発明はまた、当該組成物を個体に投与することによる糖尿病の予防または治療方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
糖尿病は、高血糖の特徴を有する一般的な重篤な病気である。この病気は、２つの主要なサブクラスに分けられる：Ｉ型糖尿病としても知られている、インスリン依存型糖尿病（ＩＤＤＭ）、及びＩＩ型糖尿病としても知られている、非インスリン依存型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）(World Health Organization Study Group. Diabetes mellitus. WHO Tech. Rep. Ser. 727:1-113, 1985)。ＩＤＤＭは、膵臓のβ細胞の細胞媒介自己免疫破壊によって引き起こされるインスリン欠乏により生じ、通常、幼体で発症する(Yoon JW., Insulin-dependent diabetes mellitus. In: Roitt IM and Delves PJ. (Eds.) Encyclopedia of Immunology, Second Edition. Academic Press Ltd., London, pp. 1390-1398, 1998; Bach JF., Insulin-dependent diabetes mellitus as a beta cell targeted disease of immunoregulation. J. Autoimm. 8:439-463, 1995)。ＩＤＤＭは、世界中の糖尿病集団の約１０〜１５％を占める(World Health Organization Study Group. Diabetes mellitus. WHO Tech. Rep. Ser. 727:1-113, 1985)。これに対して、ＮＩＤＤＭは、インスリン耐性及びインスリン欠損の様々な組み合わせから生じ、通常、成体で発症する(Jun HS, et al., Pathogenesis of non-insulin-dependent (Type II) diabetes mellitus (NIDDM) - Genetic predisposition and metabolic abnormalities.  Advanced Drug Delivery Reviews 35:157-177, 1999; DeFronzo RA., The triumvirate: β-cell, muscle, liver: a collusion responsible for NIDDM. Diabetes 37:667-687, 1988)。しかしながら、ＮＩＤＤＭは、幼体の成人発症型糖尿病で見られるように、より若い年齢でも発症しうる(Pirart J., Diabetes mellitus and its degenerative complications: a prospective study of 4400 patients observed between 1947 and 1973.  Diabetes Care 1:168-188, 1978)。ＮＩＤＤＭは、世界中の糖尿病集団の８５％以上を占める。ＩＤＤＭ及びＮＩＤＤＭは双方とも、微小血管及び大血管(macrovascular)の合併症を引き起し、これにより罹患率及び死亡率が上昇する(Fajans SS, et al., Prediabetes, subclinical diabetes, and latent clinical diabetes: interpretation, diagnosis and treatment. In: Leibel DS, Wrenshall GS. (Eds.) On the Nature and Treatment of Diabetes. Excerpta Medica, Amsterdam, pp. 641-656, 1965)。
【０００３】
ＮＩＤＤＭは、一般的に、一超の遺伝子または環境因子の影響を受けると考えられる複合的な病気である(Ghosh S, et al., Genetic analysis of NIDDM. Diabetes 45:1-14, 1995; Kobberling J.  Studies on the genetic heterogeneity of diabetes mellitus. Diabetologia 7:46-49, 1971; Rotter JL, et al., Genetics of diabetes mellitus. In: Rifkin H, Porte D (Eds.) Diabetes Mellitus Theory and Practice. Elsevier, New York, pp. 378-413, 1990)。家族集積性(familial aggregation)及び１卵性双生児における高い発病の一致率（６０〜１００％）から、遺伝的な因子がＮＩＤＤＭの病因に重要な役割を果たすことが示唆される(O’Rahilly S, et al., Type 2 (noninsulin dependent) diabetes mellitus.  New genetics for old nightmares. Diabetologia 31:407-414, 1988; Barnett AH, et al., Diabetes in identical twins. A study of 200 pairs. Diabetologia 20:87-93, 1981)。加えて、肥満、身体活動及び食事等の環境因子もまた、この病気の発達に強力な役割を果たす(Knowler WC, et al., Gm and type 2 diabetes mellitus: an association in American Indians with genetic admixture. Am. J. Hum. Genet. 43:520-526, 1988; Bennett PH, et al., Epidemiology and natural history of NIDDM: non-obese and obese. In: Alberti KGMM, DeFronzo RA, Keen H, Zimmett P (Eds.) International Textbook of Diabetes Mellitus. Wiley, New York, pp. 147-176, 1992; Helmrich SP, et al., Physical activity and reduced occurrence of NIDDM. N. Engl. J. Med 325:147-152, 1991)。ＮＩＤＤＭの発達への遺伝的及び環境因子の相対的な寄与が個体で異なるものの、患者は、通常、病態を引き起こす、２つの共通した代謝異常である、インスリン耐性及びグルコースで刺激されるインスリン分泌の欠損を有する(Saad MF, et al., A two step model for development of non-insulin-dependent diabetes. Am. J. Med. 90:229-235, 1991; DeFronzo RA, et al., Pathogenesis of NIDDM: A balanced overview. Diabetes Care 15:318-368, 1992; Lillioja S, et al., Insulin resistance and insulin secretory dysfunction as precursors of non-insulin-dependent diabetes mellitus. N. Engl. J. Med. 329:1988-1992, 1993)。
【０００４】
インスリンに応答する標的組織の不感受性（インスリン耐性）は、必要な環境因子の存在下で遺伝的に罹りやすい被検者で最初に発現すると考えられる(Jun HS, et al., Pathogenesis of non-insulin-dependent (Type II) diabetes mellitus (NIDDM) - Genetic predisposition and metabolic abnormalities. Advanced Drug Delivery Reviews 35:157-177, 1999)。これを補うために、すなわち、血中グルコースを下げて正常血糖を維持するために、β細胞からのインスリンの分泌を増加させて、高インスリン血になるようにする。経時的に、インスリン耐性は悪化し、補償作用が衰えて、やがてグルコース耐性が損なわれる。インスリンの分泌はプラトーに達し、β細胞の機能が低下し、これによりインスリン欠乏になり、最後に高血糖性ＮＩＤＤＭになる。加えて、高血糖症自体は、インスリン耐性及びインスリン分泌を損なわせて、病気を悪化させる。
【０００５】
食事及び運動の調節および／またはインスリン若しくは血糖降下剤による治療が糖尿病の制御に使用されてきた。これらの薬剤による治療はうまくいく場合もあるが、死亡率は上昇し続けている。インスリン治療では、ＮＩＤＤＭに関しては治癒というよりむしろ症状の緩和となっている。スルホニル尿素及びビグアニド（メトホルミン）等の血糖降下剤は血中グルコースを下げるが、繰り返すが、単に症状を緩和するのみである。スルホニル尿素は、膵臓β細胞からのインスリンの放出を刺激することによって血中グルコースレベルを下げる。これらの薬剤は、アデノシル３リン酸（ＡＴＰ）感受性カリウムチャンネルを閉じて、細胞膜を脱分極することによってインスリンの放出を直接刺激する (Aguilar-Bryan L, et al., Cloning of the beta cell high-affinity sulfonylurea receptor: a regulator of insulin secretion. Science 268:423-426, 1995; Tan GH, et al., Pharmacologic treatment options for non-insulin-dependent diabetes mellitus. Mayo Clinic Proceedings 71:763-768, 1996; Lubbos H, et al., Oral hypoglycemic agents in type II diabetes mellitus. American Family Physician. 52:2075-2078, 1995)。スルホニル尿素の副作用としては、低血糖症、腎及び肝疾患、胃腸障害、心臓血管系の致死率の増加、皮膚の反応、眩暈、嗜眠及び頭痛がある。ビグアニドは、インスリンの分泌を刺激するのではなく、腸のグルコースの吸収及び肝臓のグルコースを抑制することによって血中グルコースレベルを下げる。ビグアニドの主な副作用としては、乳酸アシドーシス及び心臓血管系の致死率の増加がある。アルファグルコシダーゼ阻害剤は、腸のアルファグルコシダーゼを阻害し、その結果、スクロース及び複合炭水化物の消化を遅延する。アルファグルコシダーゼ阻害剤の副作用としては、胃腸の副作用及び低血糖症がある。チアゾリジンジオン類(thiazolidinediones)は、直接、インスリン耐性を改善し、循環インスリンの効果を向上し、末梢のグルコースの取り込みを直接刺激し、肝臓でのグルコースの生産を阻害する。チアゾリジンジオン類は、インスリンの存在下でのみ有効であり、赤血球の異常、及び頭痛を引き起こしうる。
【０００６】
したがって、糖尿病の治療のためにより有効な薬剤が明らかに必要である。我々は、長い間、血糖降下剤の開発のための可能性のある源として薬草に興味があり、様々な薬草の抽出物を用いて患者のＮＩＤＤＭの重篤な長期の合併症を止めることを試みてきた。我々は、多くの植物をスクリーニングし、特定の植物の抽出物の組み合わせが血糖低下効果を有することを見出した。特に、以下に説明されるように、我々は、プテロカルプス(Pterocarpus marsupium)(Lodha R, et al. Traditional Indian systems of medicine. Ann. Acad. Med. Singapore 29:37-41, 2000; Sheehan EW,et al., A constituent of Pterocarpus marsupium, (-)-epicatechin, as a potential antidiabetic agent. J. Nat. Prod. 46:232-234, 1983; Manickam M, et al., Antihyperglycemic activity of phenolics from Pterocarpus marsupium. J. Nat. Prod. 60:609-610, 1997)、クワ(Morus alba)(Chen F, et al., Hypoglycemic activity and mechanisms of extracts from mulberry leaves (folium mori) and cortex mori radicis in streptozotocin-induced diabetic mice. Yakugaku Zasshi 115:476-482, 1995; Hikino H, et al., Isolation and hypoglycemic activity of moran A, a glycoprotein of Morus alba root barks. Planta Med. 2:159-160, 1985; Fukai T, et al., Structures of two natural hypotensive Diels-Alder type adducts, mulberrofurans F and G, from the cultivated mulberry tree (Morus lhou KOIDZ.).  Chem Pharm Bull (Tokyo). 33:3195-3204, 1985; Nikaido T, et al., Inhibition of adenosine 3',5'-cyclic monophosphate phosphodiesterase by phenolic constituents of mulberry tree. Chem. Pharm. Bull. (Tokyo). 32:4929-4934, 1984)、クミスクチン(Orthosiphon aristatus)(Hsu HY. Oriental Materia Medica: A Concise Guide. Oriental Healing Art Institute, Long Beach, CA. p. 297)、オピオホゴン  ジャポニカス(Opiophogon japonicus)、ハマナス(Rosa rugosa)、ツユクサ(Commelina communis)、キカラスウリ(Trichosanthis kirilowii)及びハナスゲ(Anemarrhena asphodeloides)(Ichik H, et al., New antidiabetic compounds, mangiferin and its glucoside. Biol. Pharm. Bull 21:1389-1390, 1998; Miura T, et al., Antidiabetic effect of seishin-kanro-to in KK-Ay mice. Planta Med. 63:320-322, 1997; Nakashima N, et al., Isolation of pseudoprototimosaponin AIII from rhizomes of Anemarrhena asphodeloides and its hypoglycemic activity in streptozotocin-induced diabetic mice. J. Nat. Prod. 56:345-350, 1993)の、ＩＩ型糖尿病の治療を目的とした医薬草本化合物(medicinal herbal compounds for treatment of type 2 diabetes)（ＭＨＣＴＤ）と称される、混合抽出物が、動物モデル、ゴトウ−カキザキ(Goto-Kakizaki)（ＧＫ）ラットで強力な抗糖尿病効果を示すことを見出した。加えて、３ヶ月から１年間、上記混合抽出物でＮＩＤＤＭ患者を処置したところ、血中グルコースレベルが有意に減少した。
【発明の開示】
【０００７】
発明の要約
本発明は、前記の必要性を満たすものである。
【０００８】
本発明の目的は、プテロカルプス(Pterocarpus marsupium)、クワ(Morus alba)、クミスクチン(Orthosiphon aristatus)、オピオホゴン  ジャポニカス(Opiophogon japonicus)、ハナスゲ(Anemarrhena asphodeloides)、またはキカラスウリ(Trichosanthis kirilowii)の抽出物を、ハマナス(Rosa rugosa)および／またはツユクサ(Commelina communis)の抽出物、ならびに製薬上許容できる担体と組み合わせて含む、血糖低下に有効な組成物を提供することである。
【０００９】
当該抽出物は、
約３重量％〜約９０重量％のプテロカルプス(Pterocarpus marsupium)、
約３重量％〜約９０重量％のクワ(Morus alba)、
約３重量％〜約９０重量％のクミスクチン(Orthosiphon aristatus)、
約３重量％〜約９０重量％のオピオホゴン  ジャポニカス(Opiophogon japonicus)、
約３重量％〜約９０重量％のハマナス(Rosa rugosa)、
約３重量％〜約９０重量％のツユクサ(Commelina communis)、
約３重量％〜約９０重量％のキカラスウリ(Trichosanthis kirilowii)、及び
約３重量％〜約９０重量％のハナスゲ(Anemarrhena asphodeloides)
の相互に対する相対的な割合で存在してもよい。
【００１０】
好ましくは、当該抽出物は、
約５重量％〜約５０重量％のプテロカルプス(Pterocarpus marsupium)、
約５重量％〜約５０重量％のクワ(Morus alba)、
約５重量％〜約５０重量％のクミスクチン(Orthosiphon aristatus)、
約５重量％〜約５０重量％のオピオホゴン  ジャポニカス(Opiophogon japonicus)、
約３重量％〜約５０重量％のハマナス(Rosa rugosa)、
約３重量％〜約５０重量％のツユクサ(Commelina communis)、
約３重量％〜約５０重量％のキカラスウリ(Trichosanthis kirilowii)、及び
約３重量％〜約５０重量％のハナスゲ(Anemarrhena asphodeloides)
の割合で存在する。
【００１１】
さらにより好ましくは、当該抽出物は、
約２０重量％のプテロカルプス(Pterocarpus marsupium)、
約１５重量％のクワ(Morus alba)、
約２０重量％のクミスクチン(Orthosiphon aristatus)、
約１０重量％のオピオホゴン  ジャポニカス(Opiophogon japonicus)、
約８重量％のハマナス(Rosa rugosa)、
約７重量％のツユクサ(Commelina communis)、
約１０重量％のキカラスウリ(Trichosanthis kirilowii)、及び
約１０重量％のハナスゲ(Anemarrhena asphodeloides)
の割合で存在する。
【００１２】
本発明の他の目的は、当該担体が、好ましくは、ベリー若しくは果物の基剤(base)、野菜スープ若しくはブイヨンの基剤、大豆乳飲料(soya-milk drink)、または栄養サプリメントである、上記組成物を提供することである。ベリーまたは果物の基剤を使用する場合には、基剤は、好ましくは、ロサ  カニナ(Rosa canina)、ビルベリー(Vaccinum myrtillus)および／またはコケモモ(Vaccinum vitis-idea)の抽出物から作製される。基剤が野菜スープまたはブイヨンから作製される場合には、当該基剤は、好ましくは、イラクサ(Vaccinum vitis-idea)の葉、タマネギ(Allium cepa)および／またはバジルホーリー(Ocimum sanctum)の抽出物から作製される。
【００１３】
上記組成物は、ゴボウ(Arctium lappa)の根、ジャンボラン(Eugenia jambolana)の種子、ファセウス  ブルガリス(Phaseus vulgaris)の殻、コロハ(Trigonella foenum graeam)の種子、またはビルベリー(Vaccinum myrtillus)の葉の抽出物をさらに含んでもよい。好ましくは、当該抽出物は、
約５重量％〜約２０重量％のゴボウ(Arctium lappa)の根、
約５重量％〜約７０重量％のジャンボラン(Eugenia jambolana)の種子、
約５重量％〜約２０重量％のファセウス  ブルガリス(Phaseus vulgaris)の殻、
約１０重量％〜約３０重量％のコロハ(Trigonella foenum graeam)の種子、および
約２０重量％〜約６０重量％のビルベリー(Vaccinum myrtillus)の葉
の割合で存在してもよく、この際、割合は、ゴボウ(Arctium lappa)の根、ジャンボラン(Eugenia jambolana)の種子、ファセウス  ブルガリス(Phaseus vulgaris)の殻、コロハ(Trigonella foenum graeam)の種子、及びビルベリー(Vaccinum myrtillus)の葉の抽出物のそれぞれに対するものである。
【００１４】
本発明の他の実施態様においては、上記組成物は、クロム、マンガン、亜鉛、ナイアシン、ビタミンＢ６またはビタミンＢ１２をさらに含んでもよい。このような組成物では、１回の投与当たり、クロムは約２０〜約５００μｇの量で存在し、マンガンは約１〜約１０ｍｇの量で存在し、亜鉛は約２〜約１０ｍｇの量で存在し、ナイアシンは約５０〜約５００ｍｇの量で存在し、ビタミンＢ６は約１〜約５０ｍｇの量で存在し、またはビタミンＢ１２は約５〜約１００μｇの量で存在する。
【００１５】
上記組成物は、ウコギ(Acanthopanax)、シサンドラ(Schizandra)、及び必要であればロジオラ(Rhodiola)の抽出物をさらに含んでもよい。好ましくは、エゾウコギ(Acanthopanax senticosus)の根、チョウセンゴミシ(Schizandra chinensis)の果実及び種子、ならびにロジオラロゼア(Rhodiola rosea)の根の抽出物が、約４：２：１の比で存在する。シサンドラ(Schizandra)を固定した組み合わせの一例が、Swedish Medical Product Agency, "the Swedish FDA"の前の薬草医薬製品申請番号(Herbal Medicinal Product application nos.)ｄｎｒ  ９６−００４５及びｄｎｒ  ９６−００４６に開示される。これらの申請の内容は、全体として本明細書中に参考として引用される。
【００１６】
本発明の他の目的は、ＩＩ型糖尿病の治療が必要な人に、抗糖尿病または血糖低下に有効な量の上記組成物のいずれかを投与することを有する、ＩＩ型糖尿病の治療方法を提供することである。
【００１７】
本発明のさらなる他の目的では、臨床上のＩＩ型糖尿病の発症の予防方法が提供される。当該方法は、上記が必要である人に、抗糖尿病または血糖低下に有効な量の上記組成物のいずれかを投与することを有する。
【００１８】
本発明のさらなる別の目的では、治療の開始時に約２００〜約３００ｍｇ／ｄｌの血中グルコースレベルを有する患者の血中グルコースレベルの減少方法が提供される。当該方法は、患者に有効量の上記組成物のいずれかを投与することを有する。
【００１９】
他の実施態様においては、有効量の上記組成物のいずれかを患者に投与することを有する、膵臓β細胞からのインスリンの分泌を向上させる方法が提供される。上記組成物のいずれかを患者に投与することを有する、複合炭水化物の単糖類への分解の阻害方法もまた提供される。
【００２０】
本発明の他の実施態様においては、本出願は、ハマナス(Rosa rugosa)および／またはツユクサ(Commelina communis)の抽出物、ならびに製薬上許容できる担体と組み合わせて、プテロカルプス(Pterocarpus marsupium)、クワ(Morus alba)、クミスクチン(Orthosiphon aristatus)、オピオホゴン  ジャポニカス(Opiophogon japonicus)、ハナスゲ(Anemarrhena asphodeloides)の抽出物を含む血糖低下に有効な組成物、またはゴボウ(Arctium lappa)の根、ジャンボラン(Eugenia jambolana)の種子、ファセウス  ブルガリス(Phaseus vulgaris)の殻、コロハ(Trigonella foenum graeam)の種子、及びビルベリー(Vaccinum myrtillus)の葉の抽出物を含む組成物を提供するものである。
【００２１】
本発明のこれら及び他の目的は、本発明の下記説明、添付の参照用の図面及び添付の特許請求の範囲からより詳細に理解されるであろう。
【００２２】
図面の簡単な説明
本発明は、下記詳細な説明、及び添付の図面からより詳細に理解されるであろうが、これらは詳細に説明するためのものであり、本発明を限定するものではない。
【００２３】
図１は、肝細胞及び筋肉レセプターへのインスリンの結合に関するＭＨＣＴＤの効果を示すものである。インスリンレセプターは、５ヶ月間、ＭＨＣＴＤまたは水で処置したＧＫラットの肝細胞（Ａ）または後脚の骨格筋（Ｂ）から部分的に精製され、これらのレセプターへのインスリンの結合率を測定した。
【００２４】
図２は、膵臓β細胞からのインスリンの分泌に関するＭＨＣＴＤの効果を示すものである。５ヶ月間、ＭＨＣＴＤまたは水で処置したＧＫラットにフェノバルビタールで麻酔をかけた。膵臓を、１６ｍＭグルコースを含む緩衝液で灌流して、流出液を２分間隔で集めて、インスリンの分泌を測定した。
【００２５】
図３は、炭水化物の単糖への分解に関するＭＨＣＴＤの効果を示すものである。ＷＦラットを、２週間、ＭＨＣＴＤまたは水で処置して、一晩、絶食させた。次に、これらのラットに、水（２ｇ／２０ｍｌ）における加水分解デンプン(hydrolyzed starch)（２ｇ／ｋｇ）を挿管し、血中グルコースレベルを挿管してから５０分後に測定した。
【００２６】
図４は、グルコーストランスポーターの発現に関するＭＨＣＴＤの効果を示すものである。膵島をＭＨＣＴＤまたは水で処置したＧＫラットから単離した。細胞抽出物を調製した後、ウェスタンブロッティングを、抗Ｇｌｕｔ２抗体を用いて行ない、Ｇｌｕｔ２の発現レベルをデンシトメトリーで分析し、ＧＡＰＤＨタンパク質のバンドの強度によって標準化した。
【００２７】
図５は、様々な器官に関するＭＨＣＴＤの非毒性効果を示すものである。正常なＷＦラットに、３ヶ月齢で開始して５ヶ月間、毎日、通常の投与量（５０ｇ／ｋｇ体重）より１０倍高い投与量でＭＨＣＴＤを投与し、様々な器官を組織学的に試験した。（Ａ）リンパ球浸潤、壊死または核内グリコーゲン浸潤の兆候を示さない肝臓の切片；（Ｂ）間質性リンパ球浸潤または壊死のない無損傷の糸球体、細管及び管を示す腎臓の切片。（Ｃ）無損傷の粘膜を示し、炎症細胞の浸潤または他の細胞損傷の兆候を示さない胃の切片；（Ｄ）病変や細胞変化を示さない睾丸の切片；（Ｅ）正常な気胞、細気管支及び気管支を示す肺の切片；（Ｆ）大脳皮質において無損傷の神経及びグリア細胞を示す脳の切片；（Ｇ）観察できる病変を示さない胸腺の切片；（Ｈ）リンパ球浸潤または壊死の徴候がない内分泌性島(endocrine islet)及び外分泌性腺房細胞(exocrine acinar cell)双方の無損傷の形態を示す膵臓の切片；（Ｉ）観察できる病変を示さない甲状腺の切片；（Ｊ）観察できる病変を示さない副腎の切片；ならびに（Ｋ）正常な心内膜及び心筋層を示す心臓の切片。
【００２８】
発明の詳細な説明
本発明は、患者の血中グルコースレベルを下げる、糖尿病、好ましくはＩＩ型糖尿病の患者に投与されうる草本医薬組成物に関するものである。患者への本組成物の投与は、臨床上の糖尿病の発病を予防し、治療する。
【００２９】
本明細書中で使用される、「抗糖尿病」または「血糖降下」化合物または組成物は、通常、血中グルコースレベルを下げる薬剤を意味する。一般的なガイドラインとしては、本明細書中で示唆される値に制限されるものではないが、血中グルコースレベルが少なくとも約１００ｍｇ／ｄｌ下がると、その化合物は血糖降下剤であると考えられる。例えば、患者が処置前は３８０ｍｇ／ｄｌの血中グルコースレベルであり、処置後に２８０ｍｇ／ｄｌに下がった場合には、その処置剤は血糖降下剤であると考えられる。このような薬剤または血糖降下効果を有する他の許容される標準値まで血中グルコースレベルを下げる他の薬剤は、糖尿病を治療するのにまたは糖尿病の発病を予防するのに使用される。血糖降下または抗糖尿病効果は、以下に制限されないが、血中グルコースレベル、インスリンのそのレセプターへの結合の割合、膵臓β細胞からのインスリン分泌のレベル及びグルコヒドロラーゼ(glucohydrolase)活性の阻害を測定するなどの、様々な方法によって測定できる。
【００３０】
本明細書中で使用される、「抽出物」は、薬草のエキスの構成成分の濃縮調製物を意味する。具体的には、抽出物は、植物を乾燥及び粉末化することによって調製される。必要であれば、植物、乾燥植物または粉末化植物を、溶液中で煮沸してもよい。抽出物は、液状で使用されてよく、または他の液体若しくは固体医薬薬草抽出物と混合されてもよい。または、医薬薬草抽出物は、液体形態から固体抽出物をさらに沈殿させることによって得てもよい。
【００３１】
より詳細におよび／またはあるいは、「抽出物」は、薬草のエキスの構成成分の濃縮調製物を意味する。具体的には、抽出物は、乾燥した後、乾燥材料を切断または粉砕することによって調製される。次に、抽出プロセスは、浸軟、パーコレーション、再パーコレーション、向流抽出、ターボ抽出(turbo-extraction)によって、または二酸化炭素超臨界（温度／圧力）抽出によって、適切に選択される溶剤、例えば、エタノール／水混合液、メタノール、ブタノール、イソブタノール、アセトン、ヘキサン、石油エーテルまたは他の有機溶剤を用いて行なわれてもよい。次に、抽出物は、さらに蒸発させることにより濃縮して、軟質抽出物（エキス濃縮物(extractum spissum)）および／または噴霧乾燥、真空オーブン乾燥、流動床乾燥または凍結乾燥によって、最終的には乾燥抽出物、エキス濃縮物を得てもよい。
【００３２】
草本組成物は、プテロカルプス(Pterocarpus marsupium)、クワ(Morus alba)、クミスクチン(Orthosiphon aristatus)、オピオホゴン  ジャポニカス(Opiophogon japonicus)、ハナスゲ(Anemarrhena asphodeloides)、キカラスウリ(Trichosanthis kirilowii)、ハマナス(Rosa rugosa)、及びツユクサ(Commelina communis)から選ばれる様々な草本を乾燥及び粉砕することによって作製される。最も好ましくは、すべての草本を様々な割合で一緒に使用する。しかし、これらの草本のすべてが患者の血中グルコースレベルを減少させる所望の効果に必要なわけではないと解される。組成物が患者に投与されると患者の血中グルコースレベルを下げるものであれば、これらの草本のいずれの組み合わせを用いてもよい。
【００３３】
本発明の一実施態様においては、本発明の草本組成物は、ハマナス(Rosa rugosa)、および／またはツユクサ(Commelina communis)と組み合わせて使用される抗糖尿病、降圧性の植物抽出物を含んでもよい。好ましくは、上記プテロカルプス(Pterocarpus marsupium)、クワ(Morus alba)、クミスクチン(Orthosiphon aristatus)、オピオホゴン  ジャポニカス(Opiophogon japonicus)、ハナスゲ(Anemarrhena asphodeloides)、キカラスウリ(Trichosanthis kirilowii)の植物抽出物を、ハマナス(Rosa rugosa)、および／またはツユクサ(Commelina communis)と組み合わせて使用して、抗糖尿病組成物を形成する。好ましくは、ハマナス(Rosa rugosa)、および／またはツユクサ(Commelina communis)を含むこのような組成物は、相乗的な抗糖尿病活性を有するであろう。より好ましくは、抗糖尿病組成物は、プテロカルプス(Pterocarpus marsupium)、クワ(Morus alba)、クミスクチン(Orthosiphon aristatus)、オピオホゴン  ジャポニカス(Opiophogon japonicus)、ハナスゲ(Anemarrhena asphodeloides)、キカラスウリ(Trichosanthis kirilowii)、ハマナス(Rosa rugosa)、及びツユクサ(Commelina communis)のすべての植物抽出物を含んでもよい。さらに、この組成物において、キカラスウリ(Trichosanthis kirilowii)の代わりに、ゴボウ(Arctium lappa)の根、ジャンボラン(Eugenia jambolana)の種子、ファセウス  ブルガリス(Phaseus vulgaris)の殻、コロハ(Trigonella foenum graeam)の種子、及びビルベリー(Vaccinum myrtillus)の葉の抽出物を含む組成物を使用してもよい。
【００３４】
草本組成物における抽出物の割合は、相互に対する以下のような相対比であってもよい：
約３重量％〜約９０重量％、好ましくは約５重量％〜約５０重量％、さらにより好ましくは約６重量％〜約３０重量％、及び最も好ましくは約２０重量％のプテロカルプス(Pterocarpus marsupium)、
約３％〜約９０％、好ましくは約５％〜約５０％、さらにより好ましくは約６％〜約３０％、及び最も好ましくは約１５重量％のクワ(Morus alba)、
約３％〜約９０％、好ましくは約５％〜約５０％、さらにより好ましくは約６％〜約３０％、及び最も好ましくは約２０重量％のクミスクチン(Orthosiphon aristatus)、
約３％〜約９０％、好ましくは約５％〜約５０％、さらにより好ましくは約６％〜約３０％、及び最も好ましくは約１０重量％のオピオホゴン  ジャポニカス(Opiophogon japonicus)、
約３％〜約９０％、好ましくは約３％〜約５０％、さらにより好ましくは約６％〜約２０％、及び最も好ましくは約８重量％のハマナス(Rosa rugosa)、
約３％〜約９０％、好ましくは約３％〜約５０％、さらにより好ましくは約５％〜約２０％、及び最も好ましくは約７重量％のツユクサ(Commelina communis)、
約３％〜約９０％、好ましくは約３％〜約５０％、さらにより好ましくは約５％〜約２０％、及び最も好ましくは約１０重量％のキカラスウリ(Trichosanthis kirilowii)、および
約３％〜約９０％、好ましくは約３％〜約５０％、さらにより好ましくは約５％〜約２０％、及び最も好ましくは約１０重量％のハナスゲ(Anemarrhena asphodeloides)。
【００３５】
好ましい実施態様においては、ゴボウ(Arctium lappa)の根、ジャンボラン(Eugenia jambolana)の種子、ファセウス  ブルガリス(Phaseus vulgaris)の殻、コロハ(Trigonella foenum graeam)の種子、及びビルベリー(Vaccinum myrtillus)の葉の抽出物を含む組成物を、キカラスウリ(Trichosanthis kirilowii)の抽出物が使用される抗糖尿病草本混合物においてキカラスウリ(Trichosanthis kirilowii)の代わりに使用してもよい。
【００３６】
ゆえに、一態様によると、本発明は、抗糖尿病、血糖低下に有効な量の本発明の草本化合物を、適切な製薬上許容できる賦形剤と混合して含む、薬剤組成物に関するものである。
【００３７】
本発明の別の実施態様においては、草本組成物は、下記植物の抽出物を含んでもよい：ゴボウ(Arctium lappa)の根(Burdock)、ジャンボラン(Eugenia jambolana)の種子(Java plum, syn. Syzygium cuminii)、ファセウス  ブルガリス(Phaseus vulgaris)の殻(Bean husks)、コロハ(Trigonella foenum graeam)の種子(Fenugreek seeds)、及びビルベリー(Vaccinum myrtillus)の葉(Bilberry leaves)。これらの植物の抽出物は、抗糖尿病効果が維持される限り、個々にまたは組み合わせて使用されてもよい。これらの植物の抽出物の割合は、相互に対する以下のような相対比であってもよい：
約５％〜約２０％、好ましくは約７％〜約１５％、より好ましくは約１０重量％のゴボウ(Arctium lappa)の根、
約５％〜約７０％、好ましくは約７％〜約２５％、より好ましくは約２０重量％のジャンボラン(Eugenia jambolana)の種子、
約５％〜約２０％、好ましくは約７％〜約１５％、より好ましくは約１０重量％のファセウス  ブルガリス(Phaseus vulgaris)の殻、
約１０％〜約３０％、好ましくは約１５％〜約２５％、より好ましくは約２０重量％のコロハ(Trigonella foenum graeam)の種子、および
約２０％〜約６０％、好ましくは約３０％〜約５０％、より好ましくは約４０％重量％のビルベリー(Vaccinum myrtillus)の葉。
【００３８】
本発明のさらなる別の実施態様においては、医薬草本組成物は、エゾウコギ(Acanthopanax senticosus)の根、チョウセンゴミシ(Schizandra chinensis)の果実及び種子、および／またはロジオラロゼア(Rhodiola rosea)の根の抽出物を含んでもよい。これらの植物の抽出物は、抗糖尿病効果が維持される限り、個々にまたは組み合わせて使用されてもよい。これらの植物の抽出物の割合は、相互に対して、それぞれ、約４：２：１であってもよい。さらに、少なくともエレウゼロコッカスＢ及びＥ(Eleutherococcus B and E)、シュザンドリン(Schizandrine)、ａ−シュザンドリン(a-schizandrine)、サリドロサイド(salidroside)、および／またはロサヴァイン(rosavine)がこれらの植物の抽出物の活性成分である。
【００３９】
さらなる他の実施態様においては、活性組成物は、クロム、マンガン、亜鉛、ナイアシン、ビタミンＢ６またはビタミンＢ１２の混合物から作製されてもよい。好ましくは、１回の投与当たり、クロムは、約２０〜約５００μｇの量で存在し、マンガンは、約１〜約１０ｍｇの量で存在し、亜鉛は、約２〜約１０ｍｇの量で存在し、ナイアシンは、約５０〜約５００ｍｇの量で存在し、ビタミンＢ６は、約１〜約５０ｍｇの量で存在し、およびビタミンＢ１２は約５〜約１００μｇの量で存在する。
【００４０】
本明細書中で使用される、「投与量(dose)」は、一度にあるいは所定の間隔で摂取するように処方される治療剤の特定の量を意味する。
【００４１】
別の形態を有する上記組成物はすべて、患者に投与されると、糖尿病の予防または治療効果が得られる、抗糖尿病草本医薬を提供するのに、単独でまたは組み合わされて使用されてもよいことは容易に明らかであろう。
【００４２】
病気の特定の臨床状態によっては、投与は、許容される全身デリバリー系、例えば、錠剤、坐剤、ピル、カプセル、粉末、溶液、懸濁液、クリーム、ゲル、インプラント、パッチ、ペッサリー、エアロゾル、洗眼剤、エマルジョンなどの、固体、半固体または液体投与形態で、好ましくは所定の投与量を容易に投与するのに適した単位服用形態で、経口経路あるいは静脈内、筋肉内、皮下若しくは経皮経路、または経膣、経眼若しくは経鼻経路等の非経口経路を介してなされてもよい。薬剤組成物は、公知の担体またはベヒクルを含むであろうし、加えて、他の医薬(medicinal agent)、薬剤(pharmaceutical agent)、担体、アジュバントなどを含んでもよい、本発明では、草本組成物用の担体としては、好ましくは、ベリー若しくは果物の基剤(base)、野菜スープ若しくはブイヨンの基剤、大豆乳飲料(soya-milk drink)、または栄養サプリメントが挙げられる。
【００４３】
野菜スープ若しくはブイヨンの基剤を草本組成物の基剤として使用するのが望ましい際には、草本組成物の抗糖尿病効果が維持される限り、いずれの野菜スープ若しくはブイヨンの基剤が使用されてもよいことは容易に考えられる。好ましくは、野菜スープ若しくはブイヨンは、イラクサ(Vaccinum vitis-idea)の葉、タマネギ(Allium cepa)、および／またはバジルホーリー(Ocimum sanctum)の抽出物から作製される。しかしながら、これらの成分を単独であるいは組み合わせて本発明の組成物の基剤として使用してもよいと解される。
【００４４】
基剤がベリー若しくは果物の抽出物から作製されることが望ましい場合には、その使用が草本医薬組成物の抗糖尿病効果を干渉しない限り、いずれのベリー若しくは果物の基剤が使用されてもよいと解される。好ましくは、このようなベリー若しくは果物は、ロサ  カニナ(Rosa canina)(dog rose)、ビルベリー(Vaccinum myrtillus)(bilberry)、および／またはコケモモ(Vaccinum vitis-idea) (ligonberry)の抽出物を含む。しかしながら、これらの成分を単独であるいは組み合わせて本発明の組成物の基剤として使用してもよいと解される。
【００４５】
本発明の組成物が大豆乳飲料(soya-milk)中に仕込まれるのが望ましい場合には、このような飲料は、毒性効果を防止するために冷蔵される必要があるであろうと解される。さらに、本発明の組成物は、草本組成物の抗糖尿病効果が維持される限り、他の栄養サプリメントが仕込まれても、混合されても、添加されてもあるいは合わせられてもよい。
【００４６】
必要であれば、投与される薬剤組成物はまた、例えば、酢酸ナトリウム、ソルビタンモノラウレート、オレイン酸トリエタノールアミン等の、湿潤若しくは乳化剤、ｐＨ緩衝剤などの、少量の無毒な補助物質を含んでもよい。
【００４７】
配合物における草本医薬の量は、当業者によって使用される全範囲内で変化でき、例えば、全配合物に対して約０．０１重量％（ｗｔ％）〜約９９．９９ｗｔ％の医薬及び約０．０１ｗｔ％〜９９．９９ｗｔ％の賦形剤である。
【００４８】
上記条件に対して、好ましい投与形態は、病訴の度合いによって調節されうる簡便な毎日の投与レジメを用いた経口投与である。当該経口投与では、製薬上許容できる無毒の組成物が、例えば、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ソディウムサッカリン(sodium saccharine)、タルク、セルロース、グルコース、ゼラチン、スクロース、炭酸マグネシウム等の、一般的に使用される賦形剤中に草本組成物を入れることによって形成される。このような組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、ピル、カプセル、粉末、持続放出性配合物等の形態をとる。このような組成物は、０．０１ｗｔ％〜９９．９９ｗｔ％の本発明による活性化合物を含んでもよい。
【００４９】
一実施態様においては、組成物は糖で被覆されたピルまたは錠剤の形態を有しているであろうし、ゆえに活性成分のほかに、ラクトース、スクロース、リン酸２カルシウム等の希釈剤；デンプンまたはこの誘導体等の崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤；ならびにデンプン、ポリビニルピロリドン、アカシアゴム、ゼラチン、セルロース及びこれの誘導体等の結合剤を含むであろう。
【００５０】
「薬剤組成物(pharmaceutical composition)」または「草本医薬組成物(herbal medicinal composition)」は、草本組成物が個体の糖尿病、好ましくはＩＩ型糖尿病を治療または予防するために故意に投与される物質中に配合されることを意味すると解される。作用形式は、血中グルコースレベルの減少によると考えられる。しかしながら、草本組成物自体は毒性効果を持たないと解される。
【００５１】
本発明はまた、有効量の上記組成物をＩＩ型糖尿病の処置が必要な人に投与することを有するＩＩ型糖尿病の治療方法に関するものである。
【００５２】
さらに、本発明の他の実施態様においては、臨床上のＩＩ型糖尿病の発症の予防が必要な人に、抗糖尿病、血糖低下に有効な量の上記組成物を投与することを有する、臨床上のＩＩ型糖尿病(clinical type II diabetes)の発症の予防方法が開示される。
【００５３】
さらなる他の実施態様においては、治療の開始時に約２００〜約３００ｍｇ／ｄｌの血中グルコースレベルを有する患者に、抗糖尿病、血糖低下に有効な量の上記組成物を投与することを有する、治療の開始時に約２００〜約３００ｍｇ／ｄｌの血中グルコースレベルを有する患者の血中グルコースレベルの減少方法が記載される。
【００５４】
他の実施態様においては、本願は、患者に有効量の上記草本組成物を投与することを有する、患者の膵臓β細胞からのインスリンの分泌を向上させる方法を開示する。
【００５５】
さらなる他の実施態様においては、本発明は、患者に有効量の上記草本医薬組成物を投与することを有する、複合炭水化物(complex carbohydrate)の単糖類への分解の阻害方法に関するものである。
【００５６】
本発明を以下にさらに詳細に説明する。
【００５７】
ＮＩＤＤＭは、しばしば中年の間に徐々に発達する穏やかな形態の糖尿病である。しかしながら、この病気の後期は非常に重篤であり、腎臓、心臓、眼、神経及び他の器官の病気等の長期の合併症を引き起こす。ＩＤＤＭとは異なり、糖尿病は膵臓のβ細胞の破壊から発症しないが、むしろＮＩＤＤＭはインスリン耐性、インスリンレセプターのダウンレギュレーション、膵臓のβ細胞からのインスリン分泌の異常及びグルコーストランスポーターシステムの他の変化等のメカニズムによって発症する。インスリン、スルホニル尿素及びメトホルミン等の多くの血糖降下剤がＮＩＤＤＭの治療に使用されてきたが、様々な副作用が観察され、これらの薬剤はＮＩＤＤＭの永久的な治療として作用するのではなくむしろ症状を緩和するものである。したがって、この研究は薬用植物の抽出物を用いたＮＩＤＤＭの治療を目的とした有意な副作用を伴わない抗糖尿病剤を開発するために開始された。
【００５８】
我々は、血中グルコースの制御を改善すると考えられる幾つかの薬用植物及び薬用植物の組み合わせをスクリーニングしたところ、ＭＨＣＴＤがＮＩＤＤＭの動物モデルである、ＧＫラットで強力な血中グルコースを下げる効果を示すことを見出した。
【００５９】
我々はまた、３〜６ヶ月間、ＭＨＣＴＤで、血中グルコースレベルの異なる初期範囲（２００〜６００ｍｇ／ｄｌ）を有する６５人の任意に選択されたＮＩＤＤＭヒト患者を処置したところ、ＭＨＣＴＤは明らかに血中グルコースレベルを下げ、糖尿病の長期の合併症を防止することを見出した。ＭＨＣＴＤによる処置は、通常、より高い血中グルコースレベル（４００〜６００ｍｇ／ｄｌ）を有する患者に比して処置の始めにより低い血中グルコースレベル（２００〜３００ｍｇ／ｄｌ）を有する患者でより有効であった。加えて、血中グルコースレベルの低下はＭＨＣＴＤによる処置を終了してから２ヶ月後まで維持された。これらの結果から、ＭＨＣＴＤはＮＩＤＤＭ患者で抗糖尿病効果を有することが示される。
【００６０】
インスリンにより刺激されるグルコースの取り込みの減少は、ＮＩＤＤＭのインスリン耐性の特徴である。インスリンレセプターの数の減少および／またはインスリンレセプターのチロシンキナーゼ活性の減少は、このインスリン耐性にかかわりのあるメカニズムであるかもしれない。ゆえに、我々は、ＭＨＣＴＤで処置されたＧＫラットにおけるインスリンレセプターに対するインスリンの結合の割合を調べて、インスリンレセプター結合の促進が動物及びヒトのＮＩＤＤＭへの血中グルコースレベルを低下する効果のメカニズムであるかどうかを決定した。我々は、肝細胞及び平滑筋の双方のインスリンレセプターに対するインスリンの結合の割合が、水で処置されたＧＫラットに比べてＭＨＣＴＤで処置されたＧＫラットで有意に増加することを見出し、これからＭＨＣＴＤによる処置がインスリンレセプターをアップレギュレートできることが示された。
【００６１】
グルコースレベルは、膵臓のβ細胞からのインスリン分泌ならびに内臓（肝臓及び腸）及び末梢（筋肉及び脂肪）組織でのインスリンの作用との間のバランスによって正常な被検者では維持される。このバランスが損傷を受けたβ細胞機能および／または異常なインスリンの作用によって破壊されると、ＮＩＤＤＭが発症する。したがって、膵臓のβ細胞からのインスリンの分泌の減少は、ＮＩＤＤＭの発症に関わるメカニズムの一つである。ＭＨＣＴＤが膵臓のβ細胞でのインスリンの分泌に好ましい効果を及ぼすかどうかを決定するために、我々は、ＧＫラットでのインスリン分泌に対するＭＨＣＴＤの効果を調べた。我々は、ＭＨＣＴＤによる処置がＧＫラットの膵臓のβ細胞からのインスリンの分泌を増加させることを見出した。この結果から、ＭＨＣＴＤは、インスリンの分泌を促進し、これにより血中グルコースレベルを下げることができる成分を含むことが示唆される。
【００６２】
食物における複合炭水化物は、単糖に分解され、胃腸管で吸収される。生物学的な活性の低いインスリンがＮＩＤＤＭ患者で生産されるので、グルコースが適切に利用されない。したがって、複合炭水化物からのグルコースの生産が阻害されると、より少ない量のインスリンがグルコースを利用するのに必要であろう。アルファ−グルコヒドロラーゼは複合炭水化物の単糖（グルコース）への酵素による分解を触媒する。ＭＨＣＴＤはアルファ−グルコヒドロラーゼ活性を阻害して、血中グルコースレベルを減少させることが可能である。我々は、デンプンを与えた後正常なＭＨＣＴＤで処置されたＷＦラットでの血中グルコースレベルを測定したところ、血中グルコースレベルは水で処置され、デンプンを与えられたＷＦラットより低いことが分かった。これは、複合炭水化物の単糖への分解の阻害によるものであり、これからインスリン分泌及びインスリン作用双方がＷＦラットで正常であるため、アルファ−グルコヒドロラーゼはＭＨＣＴＤで処置されたＷＦラットで阻害されることが示唆された。
【００６３】
血糖上昇動物モデルでは、膵臓のβ細胞でのＧｌｕｔ２の発現が顕著に抑制された。ＮＩＤＤＭ患者におけるグルコースにより誘導されるインスリンの分泌の減量はβ細胞への損傷を受けたグルコースの侵入によって引き起こされることが報告された。したがって、我々は、膵臓のβ細胞でのＧｌｕｔ２タンパク質のレベルがＭＨＣＴＤで処置されたＧＫラットで変化するかどうかを測定した。我々は、Ｇｌｕｔ２タンパク質の発現が水で処置されたコントロールのＧＫラットに比べて約２倍増加することを見出した。この結果から、ＭＨＣＴＤによる処置はまたＧｌｕｔ２の発現を高めてグルコースの取り込みを向上し、さらにインスリンの分泌を増加し、血中グルコースを下げることが示唆される。
【００６４】
ＩＩ型糖尿病は、遺伝及び環境因子の影響を受ける複雑な病気である。病気の発症時の症状は穏やかであるが、病気の重篤度は徐々に上がる。長期の糖尿病は、神経症、網膜症、腎臓病及び感染等の合併症の危険性が上がることが示される。したがって、初期段階での適切な処置によって、これらの長期の合併症が防止できる。これまで、多くの血糖降下剤が血中グルコースレベルの制御に使用されてきた。しかしながら、これらの薬剤の多くがかなりの副作用を有する。したがって、副作用のない有効な抗糖尿病剤が、糖尿病の制御にさらには長期の合併症の予防に絶対的に必要である。この化合物が投与された多くの糖尿病患者が副作用なく血中グルコースの良好な制御及び長期の合併症の予防を報告するので、我々が新たに開発した医薬草本化合物は理想的な抗糖尿病剤であると考えられる。加えて、この医薬草本混合物（ＭＨＣＴＤ）で長期の合併症を持つかなり多くの患者を処置することによって、長期の合併症がかなり改善または軽減した。
【００６５】
下記実施例により、本発明を詳細に説明するが、これらは限定するものではない。
【００６６】
実施例
実施例１−材料および方法−薬用植物の抽出
プテロカルプス(Pterocarpus marsupium)をインドで栽培した；樹幹の内部を集めて乾燥した。クワ(Morus alba)は韓国及び中国北部で栽培した；葉及び根を集めて乾燥した。クミスクチン(Orthosiphon aristatus)はベトナムで栽培した；根、枝及び葉を含む、すべての植物を集めて乾燥した。オピオホゴン  ジャポニカス(Opiophogon japonicus)、ハマナスバルティピカ(Rosa rugose var typica)(Regel)及びキカラスウリ(Trichosanthis kirilowii)(Maxim)及びハナスゲ(Anemarrhena asphodeloides)(Bunge)は韓国及び中国北部で栽培した；根を集めて乾燥した。ツユクサ(Commelina communis)(L.)は韓国及び中国で栽培した；葉、幹及び花を集めて乾燥した。各乾燥成分を粉末化して、混合した（プテロカルプス(P. marsupium)（約２０％）、クミスクチン(O. aristatus)（約２０％）、クワ(M. alba)（約１５％）、オピオホゴン  ジャポニカス(O. japonicus)（約１０％）、キカラスウリ(T. kirilowii)（約１０％）、ハナスゲ(A. asphodeloides)（約１０％）、ハマナス(R. rugosa)（約８％）及びツユクサ(C. communis)（約７％）ｗ／ｗ。２００ｍｌの水における４０ｇの混合した植物粉末を容積が１００ｍｌに減少するまでスロークッカー(slow cooker)で煮沸した。この混合物をＩＩ型糖尿病の処置用の医薬草本化合物（ＭＨＣＴＤ）と称した。
【００６７】
実施例２−ゴトウ−カキザキ(Goto-Kakizaki)（ＧＫ）ラット
ＧＫラット(Goto Y, et al., Spontaneous diabetes produced by selective breeding of normal Wistar rats. Proc. Japan. Acad. 51:80-85, 1975; Sugiyama Y, et al., Role of hepatic insulin sensitivity in development of hyperglycemia of spontaneously diabetic GK rats. J. Japan. Diab. Soc. 32:593-599, 1989)は、これらの動物のほとんどが約３ヶ月齢で糖尿病を発症し、糖尿病の症状はヒトのＮＩＤＤＭと多くの病理学的な特徴を共有するため、ＮＩＤＤＭの研究の最良の動物の一つである。ＧＫラットは、インスリンの分泌及び末梢インスリン耐性が損なわれている。ＧＫラットの肝細胞におけるインスリンの応答、グリコーゲン合成の感受性、脂質生成及びＤＮＡ合成は、糖尿病ではないコントロールのラットに比べると顕著に減少する。ＧＫラットでは、島の構造が破壊され、明白な線維形成の領域が間質で見られる。病気が進行すると、β細胞の顆粒消失が観察されるが、島のリンパ球の浸潤は観察されない。神経症及び腎症等の糖尿病の合併症がこれらのラットでは見られる。我々は、日本からＧＫラットを得、高血糖症へのＭＨＣＴＤの効果を試験するのにこれらの動物を使用した。
【００６８】
実施例３−ＧＫラットへのＭＨＣＴＤの投与
糖尿病のＧＫラットでの血中グルコースの制御へのＭＨＣＴＤの効果を研究するために、３ヶ月齢のラットを、上記と同様にして調製されたＭＨＣＴＤで５ヶ月間処置した。動物に、毎日（１０：００ａｍ）２．５ｍｌ（５ｇ／ｋｇ体重）を挿管した。齢及び性が一致したＧＫラットにコントロールとして等容の水を挿管した。血中グルコースレベルを１年齢までワンタッチグルコメーター(One Touch glucometer)を用いて毎週測定した。
【００６９】
糖尿病の予防へのＭＨＣＴＤの効果を研究するために、ＧＫラットのＭＨＣＴＤによる処置を、ＮＩＤＤＭが発症する前に、３週齢で開始した。ラットに、１３週齢まで上記と同様にして毎日ＭＨＣＴＤ（５ｇ／ｋｇ体重）または水を挿管し、血中グルコースレベルを１３週齢まで毎週測定した。
【００７０】
実施例４−インスリンレセプターの発現の分析
インスリンレセプターを、麦芽アグルチニンアガロース(Klein HH, et al., Insulin activation of insulin receptor tyrosine kinase in intact rat adipocytes. An in vitro system to measure histone kinase activity of insulin receptors activated in vivo. J. Biol. Chem. 261:4691-4697, 1986; Burant CF, et al., Diabetes-induced functional and structural changes in insulin receptors from rat skeletal muscle. J. Clin. Invest. 77:260-270, 1986; Venkatesan N, et. at., Antidiabetic action of vanadyl in rats independent of in vivo insulin-receptor kinase activity. Diabetes 40:492-498, 1991)を用いて３ヶ月齢で開始して、５ヶ月間ＭＨＣＴＤで処置したＧＫラットの肝細胞及び骨格筋から精製した。可溶化レセプターへのインスリンの結合の割合を、［１２５Ｉ］で標識されたインスリンを用いて測定した。簡単にいうと、肝細胞または筋肉組織を４倍容積の２５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ  ７．４）、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ＴＩＵ／ｍｌアプロチニン、２ｍＭ  フェニルメチルスルホニルフッ化物（ＰＭＳＦ）及び１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００中で均質化した。ホモジネートを１０，０００ｇで１０分間遠心し、上清を室温で１時間攪拌した。次に、この混合物を１５０，０００ｇで９０分間遠心した。レセプターをアガロース結合ＷＧＡへの吸着及びこれからの溶出によってさらに精製した。レセプターを、０．３Ｍ  Ｎ−アセチルグルコサミンを含む２５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ  ７．４）、０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００でＷＧＡカラムから溶出した。ＷＧＡ溶出液（５０μｌ）を、２５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ、０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．１％ウシ血清アルブミン及び１００Ｕ／ｍｌバシトラシンを含む緩衝液中で４℃で１６時間、１０，０００ｃｐｍ［１２５Ｉ］で標識されたインスリン（比活性：１２５〜１７５μＣｉ／μｇ）とおよび濃度を増やした非標識のインスリンとインキュベートした。レセプター及び結合したインスリンを、１００μｌの０．３％ウシγ−グロブリン及び３００μｌの２５％ポリエチレングリコールの添加によって沈殿させて、遠心によって集めた。得られたペレットを１２％ポリエチレングリコールで洗浄して、ベックマンインストラメンツガンマカウンター(Beckman Instruments gamma counter)で計測した。結合は、ＷＧＡ溶出液におけるタンパク質濃度と関連した。コントロールとして、インスリンレセプターを水で処置したＧＫラットから精製した。
【００７１】
実施例５−膵臓のβ細胞でのインスリンの分泌の分析
３ヶ月齢で開始して５ヶ月間ＭＨＣＴＤでおよび水で処置したＧＫラットに、フェノバルビタールで麻酔をかけた。膵臓を、１６ｍＭグルコースを含むクレブス−リンガー重炭酸緩衝液（１１８ｍＭ  ＮａＣｌ、４ｍＭ  ＫＣｌ、２．５ｍＭ  ＣａＣｌ２、１．２ｍＭ  ＭｇＳＯ４、１．２ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４、２５ｍＭ  ＮａＨＣＯ３、１．２ｇ／Ｌウシ血清アルブミン及び４０ｇ／Ｌデキストラン)を用いて従来記載される(Portha B, et al., Beta-cell insensitivity to glucose in the GK rat, a spontaneous nonobese model for type II diabetes. Diabetes 40:486-491, 1991; Giroix MH, et a., Glucose insensitivity and amino-acid hypersensitivity of insulin release in rats with non-insulin-dependent diabetes.  A study with the perfused pancreas. Diabetes 32:445-451, 1983)のと同様にして潅流した。流出液を２分間隔で門脈に入れたカニューレから集め、−２０℃で貯蔵した。インスリンの分泌を測定し、従来記載される(Venkatesan N, et al., Antidiabetic action of vanadyl in rats independent of in vivo insulin-receptor kinase activity. Diabetes 40:492-498, 1991; Portha B, et al., Beta-cell insensitivity to glucose in the GK rat, a spontaneous nonobese model for type II diabetes. Diabetes 40:486-491, 1991)のと同様にして算出した。簡単にいうと、血漿の免疫反応性インスリンを、標準物質としての精製ラットインスリンを用いて評価した。全膵臓当たりのインスリンの分泌速度を流速を用いて算出し、ｎＭ／分で表した。
【００７２】
実施例６−アルファ−グルコヒドロラーゼ反応の分析
我々は、アルファ−グルコヒドロラーゼが触媒する酵素反応による複合炭水化物の単糖への分解が混合植物抽出物による処置によって阻害されるかどうかを試験した。２週間、ＭＨＣＴＤ（５ｇ／ｋｇ体重）または水で処置されたウィスターヒュルト(Wistar Furth)（ＷＦ）ラットを一晩絶食させ、水中に懸濁された（２ｇ／２０ｍｌ）熱−加水分解デンプン（２ｇ／ｋｇ）を挿管した。血液サンプルを挿管から５０分後に集め、血中グルコースレベルを測定した。
【００７３】
実施例７−グルコーストランスポーターの発現の分析
膵臓のβ細胞でのグルコーストランスポーター２（Ｇｌｕｔ２）の発現レベルをウェスタンブロットによって測定した。３ヶ月齢で開始してＭＨＣＴＤまたは水で処置されたＧＫラットを処置してから５ヶ月後に剖検した。膵島細胞及び筋肉組織の抽出物を調製し、ウェスタンブロットを抗Ｇｌｕｔ２及び抗Ｇｌｕｔ４抗体(Santa Cruz Biotech. Inc., Santa Cruz, CA)を用いて行なった。反応性のバンドを強化化学発光系(enhanced chemoluminescence system)(Amersham, Oakville, Ontario)を用いて可視化した。シグナルをデンシトメトリー分析によって分析し、抗グリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）抗体に反応性のバンドのシグナルによって標準化した。
【００７４】
実施例８−毒性の試験
正常なＷＦラット（ｎ＝４０）に、３ヶ月齢で開始して５ヶ月間毎日ＭＨＣＴＤ（１０倍に濃縮された抽出物を５０ｇ／ｋｇ体重）を挿管した。各動物を、ＣＯ２吸入によって剖検した。胃、睾丸、副腎、甲状腺、胸腺、肺、心臓、腎臓、肝臓、脳及び膵臓を除去し、ホルマリンで固定し、パラフィンに埋設した。パラフィンに埋設されたブロックを切片化し、従来記載される(Baek HS, et al., Direct involvement of macrophages in destruction of beta-cells leading to development of diabetes in virus-infected mice.  Diabetes 40:1586-1597, 1991; Yoon JW, et al., Control of autoimmune diabetes in NOD mice by GAD expression or suppression in beta cells. Science 284:1183-1187, 1999)のと同様にしてヘマトキシリン及びエオジンで染色した。
【００７５】
実施例９−混合植物抽出物、ＭＨＣＴＤによるＮＩＤＤＭ患者の処置
ＮＩＤＤＭ患者に関する混合植物抽出物の効果を試験するために、４０ｇの実施例１に記載される割合で合わされた抽出物を、８００ｍｌの水と混合し、容積が半分になるまで６〜１２時間ゆっくり煮沸した。上清を瀘過して、沈殿物を除去し、瀘過された抽出物を４つに分けた；各アリコートは１００ｍｌの混合植物抽出物を含んでいた。この抽出物を、３ヶ月から１年間、朝食の１時間前、食事の間及び寝る前にＮＩＤＤＭ患者に経口投与した。血中グルコースレベルを、処置開始前、処置の３ヶ月後及び処置が終了してから２ヵ月後に測定した。
【００７６】
実施例１０−結果−ＧＫラットにおける血中グルコースレベルに関する混合植物抽出物（ＭＨＣＴＤ）の効果
ＮＩＤＤＭの動物モデルである、ＧＫラットにおける血中グルコースレベルの制御に関する混合植物抽出物の効果を調べるために、ＧＫラットを、実施例１で記載されるのと同様にして調製された抽出物で処置した。我々は、３ヶ月齢で開始して、５ヶ月間ＭＨＣＴＤで毎日処置されたＧＫラットが水で処置されたコントロールＧＫラットに比べて糖尿病の発症率が有意に減少することを知得した。３ヶ月後、ＭＨＣＴＤで処置されたＧＫラットは、平均の血中グルコースレベルが２２３ｍｌ／ｄｌで、病気の発症率が４０％にまで減少した。ＭＨＣＴＤによる処置の５ヶ月後では、ＧＫラットは病気の発症率が１３％にまで減少したが、水で処置したコントロールＧＫラットは９３％の発症率であった（表１）。我々がＭＨＣＴＤによる処置が終了してからさらに４ヶ月後に血中グルコースレベルをモニターしたところ、若干増加したものの、血中グルコースレベルは正常範囲内であったことが分かった（表２）。
【００７７】
実施例１１−ＧＫラットにおける糖尿病の予防に関するＭＨＣＴＤの効果
初期年齢でＭＨＣＴＤでＧＫラットを処置すると臨床上の糖尿病の発症を予防できるかどうかを見るために、我々は、ＭＨＣＴＤで３週齢の糖尿病を発症する前のＧＫラットを処置して、血中グルコースレベルを調べた。我々は、ＭＨＣＴＤで処置されたラットのうち１０％のみが９または１３週齢までに糖尿病になったが、水で処置されたコントロールラットは６５％が９週で血糖値が上昇し、また、これらの動物の８５％が１１〜１３週齢までに糖尿病になったことが分かった（表３）。
【００７８】
実施例１２−インスリンレセプターの発現に関するＭＨＣＴＤの効果
インスリンレセプターの発現に関するＭＨＣＴＤの効果を測定するために、我々は、インスリンがＭＨＣＴＤで処置されたＧＫラットのレセプターに結合する割合を測定した。肝細胞及び筋細胞の精製されたインスリンレセプターへのインスリンの結合の割合は、水で処置されたコントロールに比べてＭＨＣＴＤで処置されたＧＫラットで有意に増加した（図１Ａ、１Ｂ）。これらの結果から、ＭＨＣＴＤはインスリンレセプターの発現を促進することが示される。
【００７９】
実施例１３−膵臓のβ細胞でのインスリン分泌に関するＭＨＣＴＤの効果
ＭＨＣＴＤが膵臓のβ細胞からのインスリンの分泌に効果を有するかどうかを見るために、血液中のインスリンレベルを測定した。我々は、ＭＨＣＴＤで処置されたＧＫラットからのインスリンの分泌が、水で処置されたコントロールＧＫラットに比べて明らかに向上していることが分かった（図２）。この結果から、ＭＨＣＴＤは、おそらくインスリン合成の増加の結果、膵臓のβ細胞からのインスリンの分泌を促進することが示唆される。
【００８０】
実施例１４−アルファ−グルコヒドロラーゼの阻害に関するＭＨＣＴＤの効果
食物中の炭水化物は、胃腸管で吸収されるためにアルファ−グルコヒドロラーゼによって単糖に分解されなければならない。ＮＩＤＤＭ患者では、グルコースの取り込みを容易にするインスリンの生物学的な活性が低い。したがって、複合炭水化物の単糖への分解の阻害により、吸収可能なグルコースの量が減少し、これによりインスリンの必要が抑制される。ＭＨＣＴＤによる処置がアルファ−グルコヒドロラーゼの阻害によって複合炭水化物の単糖への分解を阻害するかどうかを決定するために、我々は、ＭＨＣＴＤ及びデンプン、水及びデンプン、または水単独をＷＦラットに投与して、血中グルコースレベルを測定した。我々は、ＭＨＣＴＤ及びデンプンが投与されたＷＦラットの血中グルコースレベルは、水及びデンプンが投与されたＷＦラットの値より低いが、デンプンなして水が投与されたＷＦラットの値よりも高いことが分かった（図３）。インスリン分泌及びインスリン作用の双方がＷＦラットでは正常であるので、これらの結果から、複合炭水化物の分解が抑制されることによりＭＨＣＴＤで処置されたＧＫラットで血中グルコースレベルが低くなったことが示唆される。
【００８１】
実施例１５−グルコーストランスポーターへのＭＨＣＴＤの効果
グルコースは膜に結合した促進トランスポーター(membrane-bound facilitated transporter)である、Ｇｌｕｔ２を介してβ細胞に入る。β細胞へのグルコースの侵入が損なわれるとＮＩＤＤＭ患者でグルコースにより誘導されるインスリンの分泌が抑えられることが示唆されてきた。動物モデルでは、Ｇｌｕｔ２タンパク質の発現がβ細胞で顕著に減少することが報告された。したがって、我々は、ウェスタンブロッティングによって膵臓のβ細胞におけるＧｌｕｔ２タンパク質レベルを測定したところ、Ｇｌｕｔ２タンパク質の発現が水で処置されたＧＫラットに比べてＭＨＣＴＤで処置されたＧＫラットの膵臓のβ細胞で有意に増加した（約２倍）ことが分かった（図４）。
【００８２】
実施例１６−様々な器官へのＭＨＣＴＤの毒性効果
正常なＷＦラットに、３ヶ月齢で開始して５ヶ月間毎日通常の量（５０ｇ／ｋｇ体重）より１０倍高い量のＭＨＣＴＤを投与した。処置終了時に、動物を剖検し、胃、睾丸、副腎、甲状腺、胸腺、肺、心臓、腎臓、肝臓、脳及び膵臓等の主要な器官を除去した。各器官の切片をヘマトキシリン及びエオジンで染色して、顕微鏡下で調べた。胃の切片は、完全な粘膜を示し、炎症細胞の浸潤または他の細胞損傷の兆候はなかった。肺の切片は、正常に見える気胞、細気管支、気管支及び管を示した。心臓の切片は、正常な心内膜及び心筋を示した。腎臓の切片は、完全な糸球体、細管及び管を示した。間質性リンパ球浸潤または壊死はなかった。肝臓の小葉は、良好に規定され、肝細胞の索は吻合神経洞及び中心静脈によって明らかに分離していた。リンパ球の浸潤、壊死または核内グリコーゲンの浸潤の兆候はなかった。脳の切片は、大脳皮質で完全な神経及びグリア細胞を示した。壊死、出血または梗塞の証拠はなかった。膵臓の切片は、内分泌性島(endocrine islet)及び外分泌性腺房細胞(exocrine acinar cell)双方の無損傷の形態を示した。リンパ球の浸潤または壊死の証拠はなかった。これらの結果から、高い投与量のＭＨＣＴＤによる処置では試験された主要な器官には有害な効果はなかったことが示される（図５）。
【００８３】
実施例１７−ＮＩＤＤＭ患者の血中グルコースの制御に関するＭＨＣＴＤの効果
ＭＨＣＴＤがＮＩＤＤＭの患者の血中グルコースを制御できるかどうかを決定するために、３〜７年間糖尿病であった任意に選択されたボランティアをＭＨＣＴＤで処置した。我々は、これらの患者すべてが血中グルコースを有意に減少したことが分かった（表４）。処置前の血中グルコースレベルが４００ｍｇ／ｄｌに近かった（３８２〜３９８ｍｇ／ｄｌ）これらの９人の患者のうち３人（ＹＷＢ、ＫＳＷ、ＯＳＷ）は、処置後では１４０ｍｇ／ｄｌ付近（１１４〜１６２ｍｇ／ｄｌ）の血中グルコースレベルを示した。加えて、処置前の血中グルコースレベルが４１２〜４６２ｍｇ／ｄｌであった４人の他の患者（ＬＴＷ、ＪＫＳ、ＹＣＳ、ＰＫＨ）は、処置後では１６０ｍｇ／ｄｌ付近（１２１〜１８４ｍｇ／ｄｌ）の血中グルコースレベルを示した。処置前の血中グルコースレベルが４７６〜５１０ｍｇ／ｄｌであった２人の患者（ＳＢＳ，ＣＳＳ）は、処置後では２００ｍｇ／ｄｌ付近（１９４〜２１４ｍｇ／ｄｌ）の血中グルコースレベルを示した。この結果から、ＭＨＣＴＤによる糖尿病患者の処置によって、すべての試験患者で血中グルコースレベルが有意に減少することが示される。
【００８４】
ＭＨＣＴＤによる処置の終了により血中グルコースのレベルが逆転するかどうかを決定するために、我々は、２ヶ月間患者のＭＨＣＴＤ処置を止めた後、血中グルコースレベルを測定した。我々は、すべての試験された糖尿病患者で血中グルコースが有意に変化しなかったことが分かった（表４）。
【００８５】
我々はまた、６５人のさらなる糖尿病患者を試験した。これらの患者を、ＭＨＣＴＤ処置前の血中グルコースレベルによって４群に分けた：Ａ群−２００〜３００ｍｇ／ｄｌの血中グルコースレベル、Ｂ群−３０１〜４００ｍｇ／ｄｌの血中グルコースレベル、Ｃ群−４０１〜５００ｍｇ／ｄｌの血中グルコースレベルおよびＤ群−５０１〜６００ｍｇ／ｄｌの血中グルコースレベル。Ａ群では、約６５％（１５／２３）のＭＨＣＴＤで処置された患者が、血中グルコースの減少を示し（１５０ｍｇ／ｄｌ以下）、約１３％（３／２３）が２００ｍｇ／ｄｌ以下の血中グルコースレベルの減少を示し、さらに残りの患者（２２％；５／２３）では有意な変化はなかった（２０１〜３００ｍｇ／ｄｌ）。Ｂ群では、４３％（１２／２８）のＭＨＣＴＤで処置された患者が、１５０ｍｇ／ｄｌ以下の血中グルコースレベルの減少を示し、３２％（９／２８）が１５１〜２００ｍｇ／ｄｌの血中グルコースレベルを示し、１４％（４／２８）が２０１〜３００ｍｇ／ｄｌの血中グルコースレベルを示し、さらに１１％（３／２８）が血中グルコースレベルの有意な変化を示さなかった（３０１〜４００ｍｇ／ｄｌ）。Ｃ群では、約１７％（２／１２）のＭＨＣＴＤで処置された患者が、１５０ｍｇ／ｄｌ以下の血中グルコースレベルの減少を示し、６７％（８／１２）が１５１〜２００ｍｇ／ｄｌの血中グルコースレベルを示し、さらに１７％（２／１２）が血中グルコースレベルの有意な変化を示さなかった（２５０〜５００ｍｇ／ｄｌ）。Ｄ群の患者では、ＭＨＣＴＤで処置した２人の患者のうち１人が１５０ｍｇ／ｄｌ以下の血中グルコースレベルを示し，さらに他方は２９１ｍｇ／ｄｌの血中グルコースレベルを示した（表５）。
【００８６】
本明細書で挙げられたすべての引用文献は、完全に本明細書中に引用される。
【００８７】
当業者は、定常的な実験を超えずに、本明細書に詳細に記載される本発明の特定の実施態様と等価の多くを認識するであろうし、あるいは確認できるであろう。このような等価なものは下記特許請求の範囲の概念に包含されるものである。
【００８８】
【表１】
2005500263.tif 000002
【００８９】
【表２】
2005500263.tif 000003
【００９０】
【表３】
2005500263.tif 000004
【００９１】
【表４】
2005500263.tif 000005
【００９２】
【表５】
2005500263.tif 000006
【図面の簡単な説明】
【００９３】
【図１】肝細胞及び筋肉レセプターへのインスリンの結合に関するＭＨＣＴＤの効果を示すものである。インスリンレセプターは、５ヶ月間、ＭＨＣＴＤまたは水で処置したＧＫラットの肝細胞（Ａ）または後脚の骨格筋（Ｂ）から部分的に精製され、これらのレセプターへのインスリンの結合率を測定した。
【図２】膵臓β細胞からのインスリンの分泌に関するＭＨＣＴＤの効果を示すものである。５ヶ月間、ＭＨＣＴＤまたは水で処置したＧＫラットにフェノバルビタールで麻酔をかけた。膵臓を、１６ｍＭグルコースを含む緩衝液で灌流して、流出液を２分間隔で集めて、インスリンの分泌を測定した。
【図３】炭水化物の単糖への分解に関するＭＨＣＴＤの効果を示すものである。ＷＦラットを、２週間、ＭＨＣＴＤまたは水で処置して、一晩、絶食させた。次に、これらのラットに、水（２ｇ／２０ｍｌ）における加水分解デンプン(hydrolyzed starch)（２ｇ／ｋｇ）を挿管し、血中グルコースレベルを挿管してから５０分後に測定した。
【図４】グルコーストランスポーターの発現に関するＭＨＣＴＤの効果を示すものである。膵島をＭＨＣＴＤまたは水で処置したＧＫラットから単離した。細胞抽出物を調製した後、ウェスタンブロッティングを、抗Ｇｌｕｔ２抗体を用いて行ない、Ｇｌｕｔ２の発現レベルをデンシトメトリーで分析し、ＧＡＰＤＨタンパク質のバンドの強度によって標準化した。
【図５】様々な器官に関するＭＨＣＴＤの非毒性効果を示すものである。正常なＷＦラットに、３ヶ月齢で開始して５ヶ月間、毎日、通常の投与量（５０ｇ／ｋｇ体重）より１０倍高い投与量でＭＨＣＴＤを投与し、様々な器官を組織学的に試験した。（Ａ）リンパ球浸潤、壊死または核内グリコーゲン浸潤の兆候を示さない肝臓の切片；（Ｂ）間質性リンパ球浸潤または壊死のない無損傷の糸球体、細管及び管を示す腎臓の切片。（Ｃ）無損傷の粘膜を示し、炎症細胞の浸潤または他の細胞損傷の兆候を示さない胃の切片；（Ｄ）病変や細胞変化を示さない睾丸の切片；（Ｅ）正常な気胞、細気管支及び気管支を示す肺の切片；（Ｆ）大脳皮質において無損傷の神経及びグリア細胞を示す脳の切片；（Ｇ）観察できる病変を示さない胸腺の切片；（Ｈ）リンパ球浸潤または壊死の徴候がない内分泌性島(endocrine islet)及び外分泌性腺房細胞(exocrine acinar cell)双方の無損傷の形態を示す膵臓の切片；（Ｉ）観察できる病変を示さない甲状腺の切片；（Ｊ）観察できる病変を示さない副腎の切片；ならびに（Ｋ）正常な心内膜及び心筋層を示す心臓の切片。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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