(57)【要約】ＣｐＧオリゴヌクレオチドとポリマー微粒子の組み合わせは、ナイセリア抗原の極めて有効なアジュバントである。従って、本発明は、（ａ）ナイセリア抗原、（ｂ）ＣｐＧオリゴヌクレオチド、および（ｃ）生体分解性ポリマー微粒子を含む組成物を提供する。ナイセリア抗原は、タンパク質抗原、タンパク質抗原をコードする核酸、またはサッカリド抗原であり得る。抗原は、好ましくは、レシピエント哺乳動物において、殺菌性または保護免疫応答（例えば、抗体応答）を生じる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下を含む免疫原性組成物：
（ａ）ナイセリア抗原；
（ｂ）ＣｐＧオリゴヌクレオチド；および
（ｃ）生体分解性ポリマー微粒子。
【請求項２】
前記ナイセリア抗原がタンパク質抗原である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ナイセリア抗原が、レシピエント哺乳動物におけるＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに対する殺菌性免疫応答を誘導し得る、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ナイセリア抗原が、Ｎａｄ  Ａタンパク質またはその改変体；２８７タンパク質またはその改変体；７４１タンパク質またはその改変体；９５３タンパク質またはその改変体；およびタンパク質またはその改変体からなる群より選択されるＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓタンパク質を含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ＣｐＧオリゴヌクレオチドが、約６と約１００との間のデオキシリボヌクレオチドを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記生体分解性ポリマー微粒子が、ポリ（α−ヒドロキシ酸）を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記微粒子が、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）を含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
ナイセリア抗原が前記微粒子中に捕捉されている、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
ナイセリア抗原が前記微粒子に吸着されている、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
ＣｐＧオリゴヌクレオチドが前記微粒子中に捕捉されている、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
ＣｐＧオリゴヌクレオチドが前記微粒子に吸着されている、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
アジュバントをさらに含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
ＭＦ５９アジュバントを含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
アルミニウム塩アジュバントを含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
少なくとも１つの非ナイセリア抗原をさらに含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
薬学的に受容可能なキャリアをさらに含む、請求項１〜１５のいずれかに記載の組成物。
【請求項１７】
医薬として使用するための、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
哺乳動物における抗体応答を惹起する方法であって、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の組成物を該哺乳動物に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１９】
ナイセリア感染および／または疾患に罹患した哺乳動物を処置する方法であって、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の組成物を患者に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２０】
ナイセリア感染および／または疾患に対して哺乳動物を保護する方法であって、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の組成物を患者に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２１】
哺乳動物における疾患および／または感染を予防または処置するための医薬の製造における、（ａ）ナイセリア抗原、（ｂ）ＣｐＧオリゴヌクレオチド、および（ｃ）生体分解性ポリマー微粒子の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（技術分野）
本明細書中に引用される全ての文書は、その全体を参考として援用される。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、ワクチンに関し、より詳細には、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに対するワクチンに関する。
【背景技術】
【０００３】
（背景技術）
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ（髄膜炎菌）血清群Ａ（１）およびＢ（２，３）に対するゲノム配列が報告された。血清群Ｂは、ワクチン抗原（例えば、参考４〜９）を同定するために研究されてきており、候補抗原は、異種発現を改善するように操作される（例えば、参考１０〜１２）。
【０００４】
一般的に、抗原は、ワクチン中のこれらの免疫原性を増強するために、アジュバントの同時投与を必要とする（１３）。フロイントのアジュバントは、血清群Ｂの髄膜炎菌について使用されており（９）、ライセンス発行された血清群Ｃに対するワクチン（ＭｅｎｊｕｇａｔｅＴＭ）は、水酸化アルミニウムを使用する（１４）。ナイセリア抗原の殺菌活性の増強はまた、ＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドアジュバントを使用することによって報告された（１５）。
【０００５】
ナイセリア抗原に対するさらなるアジュバントまたは改善されたアジュバントを提供することは、本発明の目的である。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
ＣｐＧオリゴヌクレオチドとポリマー微粒子との組み合わせが、ナイセリア抗原に対する極端に有効なアジュバントであり、この組み合わせが、ここの成分のいずれかよりはるかに良好な結果を提供することが見出された。従って、本発明は、以下を含有する組成物を提供する：（ａ）ナイセリア抗原；（ｂ）ＣｐＧオリゴヌクレオチド；および（ｃ）生体分解性ポリマー微粒子。
【０００７】
（ナイセリア抗原）
ナイセリア抗原は、タンパク質抗原、タンパク質抗原をコードする核酸、またはサッカリド抗原であり得る。抗原は、好ましくは、レシピエント哺乳動物において、殺菌性または保護免疫応答（例えば、抗体応答）を生じる。
【０００８】
抗原は、Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎ．ｌａｃｔａｍｉｃａおよびＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓを含むナイセリアの任意の種に由来し得る。これは、好ましくは、Ｎ，ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ抗原であり、任意の血清群由来であり得る。抗原が血清群Ｂに由来する場合、タンパク質抗原の使用が好ましく、抗原が血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５またはＹに由来する場合、サッカリド抗原の使用が好ましい。サッカリド抗原が使用される場合、代表的に、細菌性莢膜サッカリド（例えば、オリゴサッカリド（例えば、加水分解によって得られるオリゴサッカリド））に由来し、これらは、代表的に、キャリアタンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７に）に結合される。
【０００９】
血清群Ｂ  Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ由来の好ましいタンパク質抗原は、以下である：
参考文献４、５、６、７、８または９のいずれか１つに開示されるタンパク質（特に、参考文献４に開示される４４６個の偶数配列番号（すなわち、２、４、６、．．．、８９０、８９２）、参考文献５に開示される４５個の偶数配列番号（すなわち、２、４、６、．．．、８８、９０）および参考文献６に開示される１６７４個の偶数配列番号２〜３０２０、偶数配列番号３０４０〜３１１４、および全ての配列番号３１１５〜３２４１）；
・参考文献４、５、６、７、８または９のいずれか１つに開示される１つ以上のタンパク質の免疫原性フラグメントを含む、タンパク質；
・参考文献４、５、６、７、８または９のいずれか１つに開示される１つ以上のタンパク質に対して配列同一性（好ましくは、５０％より高い（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上））を有する配列を含むタンパク質；
・参考文献１０、１１または１２のいずれか１つに開示されるタンパク質；
・参考文献１０、１１または１２のいずれか１つに開示される１つ以上のタンパク質に対して配列同一性（好ましくは、５０％より高い（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上））を有する配列を含むタンパク質。
【００１０】
血清群Ｂ  Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ由来の特に好ましいタンパク質抗原は、タンパク質「２８７」である。このタンパク質は、野生型形態［例えば、ＧｅｎＢａｎｋ登録ｇｉ：７２２８６９０；２８７の多型形態のアライメントは、参考文献８の図５および１５に示される］で使用され得るが、野生型タンパク質の誘導体が使用され得る。例えば、ｇｉ：７２２８６９０に対して５０％以上の配列同一性（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上）を有するタンパク質が使用され得る。タンパク質の短縮形態または欠失形態を含むタンパク質（例えば、参考文献１０〜１２に開示されるＮ末端短縮形態（特に、「ΔＧ２８７」（６個の反復グリシン残基までを含むタンパク質のＮ末端を欠失している）））が使用され得る。このような２８７配列を含む融合タンパク質が使用され得る。２８７のこれらの形態の全て、およびより詳細には、野生型２８７タンパク質の免疫原性を保持する形態は、本明細書中で使用される場合、「２８７」の意味に含まれる。
【００１１】
血清群Ｂ  Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ由来の別の特に好ましいタンパク質抗原は、タンパク質「９６１」（「ＮａｄＡ」としても公知）である［１６］。このタンパク質は、野生型形態［例えば、ＧｅｎＢａｎｋ登録ｇｉ：７２２７２５６；９６１の対立遺伝子は、参考文献１７に開示される］で使用され得るが、野生型タンパク質の誘導体が使用され得る。例えば、ｇｉ：７２２７２５６に対して５０％以上の配列同一性（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上）を有するタンパク質が使用され得る。タンパク質の短縮改変体または欠失改変体を含むタンパク質（例えば、参考文献１０〜１２に開示されるタンパク質（特に、「９６１ｃ」（Ｃ末端膜アンカーを欠失している）））が使用され得る。このような９６１配列を含む融合タンパク質が使用され得る。９６１のこれらの形態の全て、および詳細には、野生型９６１タンパク質の免疫原性を保持する形態は、本明細書中で使用される場合、「９６１」または「ＮａｄＡ」の意味に含まれる。
【００１２】
他の好ましいタンパク質抗原は、タンパク質「７４１」およびタンパク質「ＯＲＦ４６．１」、ならびにタンパク質「ＯＲＦ１」、「ＯＲＦ４」、「ＯＲＦ２５」、「ＯＲＦ４０」、「ＯＲＦ８３」、「ＮＭＢ１３４３」、「２３０」、「２３３」、「２９２」、「５９４」、「６８７」、「７３６」、「９０７」、「９１９」、「９３６」、「９５３」、および「９８３」である。他の好ましいタンパク質抗原は、参考文献１０〜１２に開示されるハイブリッドタンパク質であり、特に、以下のうちの１つ以上を含むタンパク質である：２８７タンパク質、９５３タンパク質、９３６タンパク質および／または７４１タンパク質。
【００１３】
タンパク質抗原は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの任意の株から誘導され得る。２９９６、ＭＣ５８、９５Ｎ４７７および３９４／９８由来の抗原を使用することが好ましい。
【００１４】
株改変体と同様に、単一または複数の保存アミノ酸置換が、本発明に従って使用される抗原の免疫原性を変更しながらなされ得る。
【００１５】
タンパク質抗原に加えて、またはタンパク質抗原の代わりに、タンパク質抗原をコードする核酸が本発明の組成物内に含まれ得る。この核酸は、一旦哺乳動物レシピエントに投与されると発現され、そしてこのタンパク質抗原が産生される。このような核酸免疫化は、周知である［例えば、参考文献１８〜２３など］。この核酸は、典型的には、ＤＮＡプラスミドである。
【００１６】
血清群ＣのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ由来の好ましい糖抗原は、ＭｅｎｊｕｇａｔｅＴＭ［２４、２５］において使用されるオリゴ糖結合体であり、これは、血清群Ｃのカプセル多糖からの１２〜２２個の単糖単位を含む。
【００１７】
血清群Ａ由来の好ましい糖抗原は、オリゴ糖であり、このオリゴ糖中で、構成単糖単位上の１つ以上のヒドロキシル基は、保護基［２６］によって置換されている。
【００１８】
血清群Ａ、Ｗ１３５およびＹ由来のさらなるオリゴ糖抗原は、参考文献２７に開示される。
【００１９】
本発明の組成物は、１つより多いナイセリア抗原を含み得る。血清群ＡおよびＣの両方のＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ由来の糖が含まれる場合、ＭｅｎＡ糖：ＭｅｎＣ糖の比（ｗ／ｗ）は、１より大きい（例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、１０：１またはそれ以上）であることが好ましい。
【００２０】
本発明の組成物は、好ましくは、免疫原性組成物またはワクチンである。このような組成物は、免疫学的に有効量の抗原を含む。「免疫学的に有効量」は、（単回投与でかまたは一連の一部としてのいずれかでの）その量の抗原を含む本発明の組成物の個体に対する投与が、治療応答または予防免疫応答を生じるために有効であることを意味する。この量は、処置される個体の健康状態および身体的状態、年齢、処置される個体の分類群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、個体の免疫系が抗体を合成する能力、所望の保護の程度、ワクチンの処方、処置する医師の医療状況の評価、および他の関連する要因に依存して変化する。この量は、比較的広い範囲にわたり得、この量は、日常的な試行によって決定され得る。抗原は、典型的には、それぞれ少なくとも１μｇ／ｍｌの濃度で存在する。
【００２１】
投薬処置は、単回用量スケジュールであっても複数用量スケジュール（例えば、ブースター用量を含む）であってもよい。
【００２２】
（ＣｐＧオリゴヌクレオチド）
ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、ワクチンアジュバントとしての使用により公知であり［例えば、参考文献２８］、そしてこれらは、強力なＴｈ１免疫応答を誘導する。これらは、非経口アジュバントおよび粘膜アジュバントとして有用である［２９］。
【００２３】
本発明に従って使用されるＣｐＧオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのＣＧジヌクレオチド（すなわち、グアノシンヌクレオチドが続くシトシンヌクレオチド）を含む核酸である。このオリゴヌクレオチドは、複数のＣＧジヌクレオチドを含み得る。
【００２４】
このオリゴヌクレオチドにおけるＣＧ配列は、５’側において２つのプリン、および３’側において２つのピリミジンに隣接され得る（すなわち、ＲＲＣＧＹＹ）。
【００２５】
ＣｐＧオリゴヌクレオチドにおけるシトシンヌクレオチドは、メチル化され得るが、これらはメチル化されない場合に好ましい。
【００２６】
シトシンヌクレオチドおよびグアノシンヌクレオチドは、好ましくは、デオキシヌクレオチドであり、そして核酸は、好ましくは、ＤＮＡである。ヌクレアーゼ耐性を増強するために、このオリゴヌクレオチドは、改変された骨格（例えば、ホスホロチオエート骨格）を含み得る。ＤＮＡを使用することの代替として、ＰＮＡ（ペプチド核酸）を使用することが可能である。さらに、このオリゴヌクレオチドは、糖部分および窒素塩基部分の置換を含み得る。
【００２７】
このオリゴヌクレオチドは、好ましくは、約６個と約１００個との間のヌクレオチド、より好ましくは、約８個と約５０個との間のヌクレオチド、最も好ましくは、約１０個と約４０個との間のヌクレオチドを含む。
【００２８】
少なくとも１個のＣＧジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドは、従来のオリゴヌクレオチド合成を使用して、好都合に調製され得る。
ＣｐＧオリゴヌクレオチドアジュバントの例は、参考文献３０〜５５に見出される。
【００２９】
（生分解性ポリマー微粒子）
生分解性ポリマー微粒子は、ワクチンアジュバントとしての使用により公知である［例えば、参考文献５６］。これらは、非経口アジュバントおよび粘膜アジュバントとして有用である。
【００３０】
生分解性であることと同様に、微粒子を作製するために使用されるポリマーは、一般に、滅菌可能かつ非毒性（生体適合性）である。適切な生分解性ポリマーは、容易に市販されており、そしてポリヒドロキシ酪酸；ポリカプロラクトン；ポリオルトエステル；ポリ無水物；ポリ（ヒドロキシブチレート）；およびポリ（α−ヒドロキシ酸）に由来のものが挙げられる。好ましいポリマーは、１種以上のポリ（α−ヒドロキシ酸）から形成される（例えば、ポリ（Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）、Ｄ，Ｌ−ラクチドとグリコリドとのコポリマー（例えば、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド））、またはＤ，Ｌ−ラクチドとカプロラクトンとのコポリマー）。ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド（「ＰＬＧ」）から形成された微粒子が、好ましい。
【００３１】
これらのポリマーは、種々の分子量において利用可能であり、所定の抗原についての適切な分子量は、容易に決定されうる。ポリ（Ｌ−ラクチド）については、適切な分子量は、約２０００〜２５０，０００の大きさである。ＰＬＧについては、適切な分子量は、一般には、約１０，０００〜約２００，０００の範囲、好ましくは、約１５，０００〜約１５０，０００の範囲、および最も好ましくは、約５０，０００〜約１００，０００の範囲である。
【００３２】
ＰＬＧ微粒子については、種々のラクチド：グリコリド比が使用され得、その比は、主に選択の問題であり、一部分は、同時に投与される抗原および所望の分解速度に依存する。例えば、５０：５０  ＰＬＧポリマー（５０％  Ｄ，Ｌ−ラクチドおよび５０％  グリコリドを含有する）は、速い吸収のコポリマーを提供する一方で、ラクチド成分の増大に起因して、７５：２５  ＰＬＧは、よりゆっくりと分解し、そして８５：１５および９０：１０は、なおよりゆっくりと分解する。ラクチド：グリコリドの適切な比は、抗原の性質および問題の障害に基づいて、容易に決定される。さらに、変動性のラクチド：グリコリドの比を有する微粒子の混合物は、所定の抗原についての所望の放出動力学を達成し、一次免疫応答および二次免疫応答の両方を提供するために、処方物における使用が見いだされる。本発明の微粒子の分解速度はまた、ポリマー分子量およびポリマー結晶性のような要因によって制御されうる。
【００３３】
本明細書中で使用される場合、用語「微粒子」とは、直径が約１００ｎｍ〜約１５０μｍ、より好ましくは、直径が約２００ｎｍ〜約３０μｍ、および最も好ましくは、直径が約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子をいう。好ましくは、微粒子は、針およびキャピラリーを閉塞することなく、非経口投与を可能にする直径である。微粒子サイズは、当該分野で周知の技術（例えば、光子相関分光法、レーザー回折法、および／または走査型電子顕微鏡）によって容易に決定されうる。用語「微粒子」は、その範囲内に「ナノ粒子」［５７］を含む。好ましい微粒子は、マイクロスフェアであるが、ラメラ粒子［５８］もまた使用されうる。
【００３４】
微粒子は、当該分野で周知の任意のいくつかの方法を使用して調製されうる［例えば、文献５９］。例えば、二重エマルジョン／溶媒エバポレーション技術［例えば、文献６０および６１］は、微粒子を形成するために使用されうる。これらの技術は、抗原を含有するポリマー溶液の小滴からなる最初のエマルジョンの形成（抗原が、微粒子中に捕捉されるべき場合）を包含し、次いで、これは、粒子安定化剤／界面活性剤を含有する連続水層と混合される。
【００３５】
より具体的には、水中油中水（ｗ／ｏ／ｗ）型溶媒エバポレーションシステムは、文献６２、６３、および６４に記載されるように、微粒子を形成するために使用されうる。この技術において、特定のポリマーは、有機溶媒（例えば、酢酸エチル、ジメチルクロリド（塩化メチレンおよびジクロロメタンともいわれる）、アセトニトリル、アセトン、クロロホルムなど）と混合される。そのポリマーは、有機溶媒中で、約２〜１５％の溶液になるように提供される。ほぼ等量の抗原溶液（例えば、水中）が添加され、ポリマー／抗原溶液は、例えば、ホモジナイザーを使用して乳化される。次いで、そのエマルジョンは、エマルジョン安定剤（例えば、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）またはポリビニルピロリドン）の大量の水溶液と合わされる。エマルジョン安定化剤は、代表的には、約２〜１５％溶液、より代表的には、約４〜１０％溶液で提供される。次いで、その混合物は、ホモジナイズされて、安定なｗ／ｏ／ｗ型二重エマルジョンを生じる。次いで、有機溶媒は、エバポレートされる。
【００３６】
処方物パラメータは、小さい粒子（＜５μｍ）および大きい粒子（＞３０μｍ）の調製を可能にするように操作され得る［例えば、６３、６５］。例えば、攪拌を減少させた結果、内部相容量が増加されるにつれて、より大きい粒子が生じる。小さい粒子は、高濃度のＰＶＡを有する低い水相容量によって、作製される。
【００３７】
微粒子はまた、噴霧乾燥およびコアセルベーション［例えば、引用文献６６、６７および６８］；エアサスペンションコーティング技術（例えば、パンコーティングおよびＷｕｒｓｔｅｒコーティング［６９、７０］；イオンゲル化［７１］を使用して形成され得る。
【００３８】
微粒子を使用する前に、抗原含量は、一般に、適切な量の微粒子が被験体に送達されて適切な免疫応答を誘発し得るように、決定される。
【００３９】
微粒子の抗原含量は、当該分野で公知の方法に従って（例えば、微粒子を壊すことによって、および捕捉された抗原を抽出することによって）、決定され得る。例えば、微粒子は、塩化ジメチル中に溶解され得、そしてタンパク質は、蒸留水中に抽出され得る［例えば、引用文献７２、７３、７４］。あるいは、微粒子は、５％（ｗ／ｖ）のＳＤＳを含有する０．１Ｍ  ＮａＯＨ中に分散され得る。サンプルは、攪拌され、遠心分離され、そしてその上清は、適切なアッセイを使用して、抗原についてアッセイされる［７５］。
【００４０】
抗原および／またはＣｐＧ−オリゴヌクレオチドは、微粒子内または微粒子上に配置され得る。捕捉は、一般に、抗原／オリゴヌクレオチドを微粒子の形成の間存在させることによって達成されるが、表面吸着は、抗原／オリゴヌクレオチドを予め形成された微粒子に加えることによって達成される。
【００４１】
調製された微粒子上に抗原／オリゴヌクレオチドを吸着させるための１つの方法は、以下の通りである：透析可能なアニオン性界面活性剤またはカチオン性界面活性剤を使用して、微粒子を、本質的に単量体の微粒子の懸濁液に再水和しそして分散する。有用な界面活性剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：種々のＮ−メチルグルカミド（ＭＥＧＡとして知られている）（例えば、ヘプタノイル−Ｎ−メチルグルカミド（ＭＥＧＡ−７）、オクタノイル−Ｎ−メチルグルカミド（ＭＥＧＡ−８）、ノナノイル−Ｎ−メチルグルカミド（ＭＥＧＡ−９）、およびデカノイル−Ｎ−メチルグルカミド（ＭＥＧＡ−１０））；コール酸；コール酸ナトリウム；デオキシコール酸；デオキシコール酸ナトリウム；タウロコール酸；タウロコール酸ナトリウム；タウロデオキシコール酸；タウロデオキシコール酸ナトリウム；３−［（３−コールアミドプロピル（ｃｈｏｌａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ））ジメチルアンモニオ］−１−プロパン−スルホネート（ＣＨＡＰＳ）；Ｎ−オクチルグルコシド；３−［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−２−ヒドロキシ−１−プロパン−スルホネート（ＣＨＡＰＳＯ）；Ｎ−ドデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパン−スルホネート（ＺＷＩＴＴＥＲＧＥＮＴ  ３−１２）；Ｎ，Ｎ−ビス−（３−Ｄ−グルコンアミドプロピル）−デオキシコールアミド（ＤＥＯＸＹ−ＢＩＧＣＨＡＰ）；モノラウリン酸スクロース；グリココール酸／グリココール酸ナトリウム；ラウロサルコシン（ｌａｕｒｏｓａｒｃｏｓｉｎｅ）（ナトリウム塩）；グリコデオキシコール酸／グリコデオキシコール酸ナトリウム；ドデシル硫酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｄｏｄｃｅｙｌ  ｓｕｌｆａｔｅ）（ＳＤＳ）；およびヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロミド（ＣＴＡＢ）；ドデシルトリメチルアンモニウムブロミド；ヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロミド；テトラデシルトリメチルアンモニウムブロミド；ベンジルジメチルドデシルアンモニウムブロミド；ベンジルジメチル−ヘキサデシルアンモニウムクロリド；ベンジルジメチルテトラ−デシルアンモニウムブロミド、のいずれか。上記の界面活性剤は、市販されている。当該分野で公知の種々のカチオン性脂質もまた、界面活性剤として使用され得る［７６、７７］。
【００４２】
次いで、微粒子／界面活性剤混合物を、例えば、セラミックの乳鉢および乳棒を使用して、滑らかなスラリーが形成されるまで物理的に粉砕する。次いで、適切な水性緩衝液（例えば、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）またはＴｒｉｓ緩衝化生理食塩水）を添加し、そして得られた混合物を、この微粒子が完全に懸濁されるまで、超音波処理するかまたはホモジナイズする。次いで、抗原／オリゴヌクレオチドを、この微粒子懸濁液に添加し、そしてこの系を透析して、界面活性剤を除去する。このポリマー微粒子および界面活性剤系は、好ましくは、抗原／オリゴヌクレオチドが、活性をなお維持しつつ、微粒子表面に吸着するように選択される。表面吸着抗原／オリゴヌクレオチドを含む得られた微粒子を洗浄して、未結合の抗原／オリゴヌクレオチドを除去し、そして適切な緩衝処方物中の懸濁液として保存するか、または以下にさらに記載されるように、適切な賦形剤と共に凍結乾燥する。
【００４３】
（抗原／ＣｐＧ／微粒子の組合せ）
種々の物理的関係が、本発明の組成物の３つの基本成分の間で可能である。これらは、微粒子が内部容量および表面を有し、これらのいずれかがＣｐＧ−オリゴヌクレオチドおよび／または抗原を位置決めするために使用され得ることに起因して、生じる。
【００４４】
従って、抗原は、微粒子内に捕捉され得、この抗原は、微粒子に吸着され得るか、またはこの抗原は、捕捉も吸着されることなく、微粒子と単に混合され得る。吸着が好ましい。
【００４５】
同様に、ＣｐＧ−オリゴヌクレオチドは、微粒子内に捕捉され得、このＣｐＧ−オリゴヌクレオチドは、微粒子に吸着され得るか、またはこのＣｐＧ−オリゴヌクレオチドは、微粒子と単に混合され得る。ＣＴＡＢのような界面活性剤を使用して、吸着が達成され得る。
【００４６】
ＣｐＧ−オリゴヌクレオチドおよび抗原の両方は、互いに、微粒子に対して同じ物理的関係を有し得るか、またはこれらは、異なり得る。同様に、ＣｐＧ−オリゴヌクレオチドおよび抗原は、同じ微粒子に吸着され得るか、またはこれらのＣｐＧ−オリゴヌクレオチドおよび抗原は、異なる微粒子に吸着され得る。全ての可能な組合せが、本発明に包含される。
【００４７】
【表１】
2005526697.tif 000002
本発明の組成物は、上記の混合物を含み得る。例えば、この組成物内のいくつかの微粒子は、捕捉された抗原を有し、いくつかの微粒子は、吸着された抗原を有する。
【００４８】
（薬学的組成物）
薬学的使用のために、本発明の組成物は、一般的に、薬学的に受容可能なキャリアを含む。これにより、本発明の薬学的組成物が与えられる。薬学的に受容可能なキャリアは、それ自体、この組成物を受容する患者に対して有害な抗体の産生を誘導せず、かつ過度の毒性を伴わずに投与され得る任意の物質であり得る。適切なキャリアは、大きく、徐々に代謝される高分子（例えば、タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマーアミノ酸、アミノ酸コポリマー、および不活性ウイルス粒子）であり得る。そのようなキャリアは、当業者に周知である。薬学的に受容可能なキャリアとしては、液体（例えば、水、生理食塩水、グリセロール、およびエタノール）が挙げられ得る。補助的物質（例えば、湿潤剤もしくは乳化剤、ｐＨ緩衝物質など）もまた、そのようなビヒクル内に存在し得る。リポリームは、適切なキャリアである。薬学的キャリアの徹底的な議論は、参考文献７８において利用可能である。
【００４９】
本発明の組成物は、種々の形態で調製され得る。例えば、これらの組成物は、液体の溶液または懸濁液のいずれかとしての注射可能物質として調製され得る。注射前に液体ビヒクル中に溶解または懸濁するのに適する固体形態もまた、調製され得る。この組成物は、局所投与用に（例えば、軟膏、クリーム剤、または散剤として）調製され得る。この組成物は、経口投与用に（例えば、錠剤もしくはカプセル剤、またはシロップ剤（必要に応じて香味を付けられている））として調製される。この組成物は、経肺投与用に（例えば、微細な散剤またはスプレー剤を用いる吸入器として）調製され得る。この組成物は、坐剤またはペッサリーとして調製され得る。この組成物は、鼻腔投与用、経口投与用、または経眼投与用に（例えば、点滴剤として、スプレーとして、または散剤として）調製され得る（例えば、７９）。
【００５０】
好ましくは、この薬学的組成物は、滅菌されている。発熱物質を含まないことが好ましい。例えば、ｐＨ６〜ｐＨ８、一般的には、ｐＨ７の周辺で、緩衝化されていることが好ましい。
【００５１】
この薬学的組成物は、凍結乾燥され得る。
【００５２】
本発明はまた、本発明の薬学的組成物を含む送達デバイスを提供する。このデバイスは、例えば、注射器であり得る。
【００５３】
（医学的処置および使用）
本発明の組成物は、治療的に（すなわち、既存のナイセリア感染を処置するために）または予防的に（すなわち、未来のナイセリア感染を予防するために）用いられ得る。
【００５４】
本発明は、医薬として使用するための本発明の組成物を提供する。
【００５５】
本発明はまた、抗体応答を哺乳動物において惹起するための方法を提供し、この方法は、本発明の薬学的組成物をこの哺乳動物に投与する工程を包含する。この抗体応答は好ましくは、ＩｇＡ応答またはＩｇＧ応答であり、これは好ましくは殺菌性である。
【００５６】
本発明はまた、ナイセリア感染および／またはナイセリア疾患に罹患した哺乳動物を処置するための方法を提供し、この方法は、本発明の薬学的組成物を患者に投与する工程を包含する。
【００５７】
本発明はまた、ナイセリア感染および／またはナイセリア疾患に対して哺乳動物を防御するための方法を提供し、この方法は、本発明の薬学的組成物をこの哺乳動物に投与する工程を包含する。
【００５８】
本発明はまた、哺乳動物の疾患および／または感染を予防または処置するための医薬の製造における、（ａ）ナイセリア抗原、（ｂ）ＣｐＧオリゴヌクレオチド、および（ｃ）生体分解性ポリマー微粒子の使用を提供する。
【００５９】
この哺乳動物は、好ましくはヒトである。ヒトは、成人であり得るが、好ましくは小児であり得る。本発明の組成物は、小児およびティーンエージャーを免疫するために特に有用である。
【００６０】
本発明の使用および方法は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの感染に対して処置／防御するために特に有用である。これらの使用および方法は、細菌髄膜炎を含む疾患を予防／処置するために特に有用である。
【００６１】
治療処置の効力は、本発明の組成物の投与後、ナイセリア感染をモニタリングすることによって試験され得る。予防的処置の効力は、この組成物の投与後、抗ナイセリア免疫応答をモニタリングすることによって試験され得る。本発明の組成物は一般に、患者に直接的に投与される。直接送達は、非経口注射（例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、または組織の間質間隙へと）によって、直腸、経口、膣、局所、経皮、眼内、鼻腔内、耳に、または肺への投与によって、達成され得る。注射または鼻腔内投与が好ましい。
【００６２】
投薬処置は、単回用量スケジュールまたは複数回用量スケジュールであり得る。
【００６３】
（さらなる成分）
本発明の組成物は、ＣｐＧ−オリゴヌクレオチドおよびポリマー微粒子に加えてアジュバントを含み得る。好ましいさらなるアジュバントとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：（Ａ）アルミニウム化合物（例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、アルミニウムヒドロキシホスフェート、オキシヒドロキシド、オルトホスフェート、スルフェートなど（例えば、参考文献１３の第８章および第９章を参照のこと））、または異なるアルミニウム化合物の混合物であり、この化合物は任意の適切な形態（例えば、ゲル、結晶、非結晶など）をとり、そして吸着性（ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ）であることが好ましい、化合物；（Ｂ）ＭＦ５９（マイクロフルイダイザーを用いてサブミクロン粒子へと処方される、５％  Ｓｑｕａｌｅｎｅ、０．５％  Ｔｗｅｅｎ  ８０、および０．５％  Ｓｐａｎ  ８５）（１３の第１０章を参照のこと；参考文献８０もまた参照のこと）；（Ｃ）リポソーム（参考文献１３の第１３章および第１４章を参照のこと）；（Ｄ）ＩＳＣＯＭ（参考文献１３の第２３章を参照のこと）、これは、さらなる界面活性剤が全くなくてもよい（８１）；（Ｅ）１０％  Ｓｑｕａｌａｎｅ、０．４％  Ｔｗｅｅｎ  ８０、５％プルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）ブロックポリマーＬ１２１、およびサブミクロン乳濁液にマイクロフルイダイズされるかまたはより大きな粒子サイズの乳濁液を作製するようにボルテックスされたかのいずれかのｔｈｒ−ＭＤＰを含む、ＳＡＦ（参考文献１３の第１２章を参照のこと）；（Ｆ）２％  Ｓｑｕａｌｅｎｅ、０．２％  Ｔｗｅｅｎ  ８０、および以下：モノリン脂質Ａ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）（好ましくは、ＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤｅｔｏｘＴＭ））からなる群、からの細菌細胞壁成分の１つ以上を含む、ＲｉｂｉＴＭアジュバント系（ＲＡＳ））（Ｒｉｂｉ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ）；（Ｇ）ＱｕｉｌＡまたはＱＳ２１（参考文献１３の第２２章を参照のこと）（ＳｔｉｍｕｌｏｎＴＭとしても公知である）のようなサポニンアジュバント（８２）；（Ｈ）キトサン（例えば、８３）；（Ｉ）フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）およびフロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）；（Ｊ）インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２など）、インターフェロン（例えば、インターフェロンγ）、マクロファージコロニー刺激因子、腫瘍壊死因子などのようなサイトカイン（参考文献１３の第２７章および第２８章を参照のこと）；（Ｋ）モノリン脂質Ａ（ＭＰＬ）または３−Ｏ−デアシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）（例えば、参考文献１３の第２１章）；（Ｌ）３ｄＭＰＬと、例えば、ＱＳ２１および／または水中油乳濁液との組み合わせ（８４）；（Ｍ）ポリオキシエチレンエーテルまたはポリオキシエチレンエステル（８５）；（Ｎ）オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（８６）または少なくとも１つの追加の非イオン性界面活性剤（例えば、オクトキシノール）と組み合わせたポリオキエチレンアルキルエーテル界面活性剤またはポリオキエチレンアルキルエステル界面活性剤（８７���；（Ｎ）金属塩の粒子（８８）；（Ｏ）サポニンおよび水中油乳液（８９）；（Ｐ）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ−１２（必要に応じて＋ステロール）（９０）；（Ｑ）Ｅ．ｃｏｌｉ熱不安定性腸毒素（「ＬＴ」）、またはＫ６３もしくはＲ７２変異体のようなそれらの無毒化変異体（例えば、参考文献９１の第５章）；（Ｒ）コレラ毒素（「ＣＴ」）またはその無毒化変異体（例えば、参考文献９１の第５章）；（Ｓ）二本鎖ＲＮＡならびに（Ｔ）組成物の効果を増強するような免疫刺激因子として作用する他の物質（例えば、参考文献１３の第７章を参照のこと）。ミョウバン（ａｌｕｍ）（特に、リン酸アルミニウムおよび／または水酸化アルミニウム）ならびにＭＦ５９は、非経口的免疫化にとって好ましいさらなるアジュバントである。変異体毒素は、好ましい粘膜アジュバントである。
【００６４】
ムラミルペプチドとしては、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミンＭＴＰ−ＰＥ）などが挙げられる。
【００６５】
ナイセリア抗原と同様に、組成物は、さらなる抗原性成分を含み得る。本発明の組成物に含まれ得る抗原としては、以下が挙げられる：
−ＣａｇＡ（９２〜９５）、ＶａｃＡ（９６、９７）、ＮＡＰ（９８、９９、１００）、ＨｏｐＸ（例えば、１０１）、ＨｏｐＹ（例えば、１０１）および／もしくはウレアーゼのようなＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ由来の抗原。
【００６６】
−参考文献１０２、１０３、１０４、１０５などにおいて開示されるような、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｂ由来の膜外小胞（ＯＭＶ）調製物。
【００６７】
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来のサッカリド抗原（例えば、１０６、１０７、１０８）
−不活化ウイルスのような、Ａ型肝炎ウイルス由来の抗原（例えば、１０９、１１０）。
【００６８】
−表面抗原および／もしくはコア抗原のような、Ｂ型肝炎ウイルス由来の抗原（例えば、１１０、１１１）。
【００６９】
−Ｃ型肝炎ウイルス由来の抗原（例えば、１１２）。
【００７０】
−Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来の抗原（例えば、Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ由来の破傷風ホロ毒素（ＰＴ）および繊維状赤血球凝集素（ＦＨＡ））（これはまた、必要に応じて、ペルタクチンおよび／またはアグルチノーゲン２およびアグルチノーゲン３（例えば、参考文献１１３および１１４）と組み合わされる）。
【００７１】
−ジフテリア抗原（例えば、ジフテリアトキソイド（例えば、参考文献１１５第３章）（例えば、ＣＲＭ１９７変異体（例えば、参考文献１１６）））。
【００７２】
−破傷風抗原（例えば、破傷風トキソイド（例えば、参考文献１１５第４章））。
【００７３】
−Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  Ｂ由来の糖質抗原（例えば、参考文献２３）。
【００７４】
−Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の抗原（例えば、参考文献１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３）。
【００７５】
−Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ由来の抗原（例えば、参考文献１２４）。
【００７６】
−Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ（例えば、参考文献１２５）。
【００７７】
−ポリオ抗原（例えば、参考文献１２６、１２７）（例えば、ＩＰＶまたはＯＰＶ）。
【００７８】
−狂犬病抗原（例えば、参考文献１２８）（例えば、凍結乾燥不活化ウイルス（例えば、参考文献１２９のＲａｂＡｖｅｒｔＴＭ））。
【００７９】
−麻疹抗原、流行性耳下腺炎抗原、および／または風疹抗原（例えば、参考文献１１５第９章、第１０章および第１１章）。
【００８０】
−インフルエンザウイルス由来の抗原（例えば、参考文献１１５第１９章）（例えば、赤血球凝集素タンパク質および／またはノイラミニダーゼ表面タンパク質）。
【００８１】
−パラミクソウイルス（例えば、ＲＳウイルス（ＲＳＶ（参考文献１３０、１３１））および／またはパラインフルエンザウイルス（ＰＩＶ３（参考文献１３２））由来の抗原。
【００８２】
−Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ由来の抗原（例えば、参考文献１３３）。
【００８３】
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群ストレプトコッカス）由来の抗原（例えば、参考文献１３４、１３５）。
【００８４】
−Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ（Ａ群ストレプトコッカス）由来の抗原（例えば、参考文献１３５、１３６、１３７）。
【００８５】
−Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ由来の抗原（例えば、参考文献１３８）。
【００８６】
−Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ由来の抗原（例えば、１３９、１４０、１４１）。
【００８７】
−フラビウイルス科（フラビウイルス属）のウイルス（例えば、黄熱病ウイルス、日本脳炎ウイルス、４種の血清群のデング熱ウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、西ナイルウイルス）由来の抗原。
【００８８】
−ペスチウイルス抗原（例えば、古典的ブタ熱ウイルス、ウシウイルス性下痢性ウイルス、および／またはボーダー病ウイルスに由来する抗原）。
【００８９】
−パルボウイルス（例えば、パルボウイルスＢ１９由来の）抗原。
【００９０】
−プリオンタンパク質（例えば、ＣＩＤプリオンタンパク質）。
【００９１】
−アミロイドタンパク質（例えば、βペプチド（参考文献１４２））。
【００９２】
−癌抗原（例えば、参考文献１４３表１に列挙される抗原または参考文献１４４表３および４に列挙される抗原）。
【００９３】
本組成物は、これらのさらなる抗原のうちの１つ以上を含み得る。
【００９４】
毒性タンパク質抗原は、必要な場合は無毒化され得る（例えば、化学的手段および／または遺伝的手段による破傷風毒素の無毒化（参考文献１１４））。
【００９５】
ジフテリア抗原がこの組成物中に含まれる場合、破傷風抗原および百日咳抗原を含めることもまた、好ましい。同様に、破傷風抗原が含まれる場合、ジフテリア抗原および百日咳抗原を含めることもまた、好ましい。同様に、百日咳抗原が含まれる場合、ジフテリア抗原および破傷風抗原を含めることもまた、好ましい。
【００９６】
抗原は、好ましくは、アルミニウム塩に吸着される。
【００９７】
組成物中の抗原は、代表的に、各々少なくとも１μｇ／ｍｌの濃度で存在する。一般に、任意の所定の抗原の濃度は、この抗原に対する免疫応答を惹起するために充分である。
【００９８】
本発明の組成物中でタンパク質抗原を使用することの代替として、この抗原をコードする核酸が使用され得る。従って、本発明の組成物のタンパク質成分は、このタンパク質をコードする核酸（好ましくは（例えば、プラスミド形態の）ＤＮＡ）によって置換され得る。
【００９９】
（定義）
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を意味する。例えば、Ｘを「含む」組成物は、排他的にＸからなり得るか、またはさらなる何かを含み得る（例えば、Ｘ＋Ｙ）。
【０１００】
２つのアミノ酸配列間の配列同一性％に対する言及は、整列された場合に、その２つの配列を比較する場合にその％のアミノ酸が同じであることを意味する。このアラインメントおよび相同性％または配列同一性％は、例えば、参考文献１４５のセクション７．７．１８に記載される、当該分野で公知のソフトウェアプログラムを使用して、決定され得る。好ましいアラインメントは、ギャップオープンペナルティ１２およびギャップ伸長ペナルティ２、ＢＬＯＳＵＭマトリックス６２と共に、擬似変換ギャップ検索を使用して、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムによって決定される。このＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、参考文献１４６に教示される。
【０１０１】
（発明を実施するための様式）
（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｂ抗原を用いる、非経口プライムおよび粘膜ブースト）
参考文献６は、血清群ＢのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ由来のタンパク質（「２８７」と称される）を開示する。参考文献１０〜１２は、その発現を改善する方法を開示する。１つの方法は、このタンパク質のＮ末端を６つの反復グリシン残基まで（その反復グリシン残基を含む）を欠失させることを包含する。このタンパク質は、「ΔＧ２８７」と称される。
【０１０２】
マウスを、ＣｐＧオリゴヌクレオチド（これもまた、ＰＬＧ微粒子に吸着される）を有するかまたは有さないＰＬＧ微粒子への吸着により筋内（ＩＭ）投与のために処方された、２９９６株由来のＭｅｎＢ  ΔＧ２８７抗原（２０μｇ／用量）を用いてプライムおよびブーストした。鼻腔内（ＩＮ）投与のためのさらなる処方物は、ＬＴ−Ｋ６３アジュバントを使用した。マウスは、３回のＩＭ投与、または２回のＩＭ投与、次いで２回のＩＮ投与のいずれかを受けた（０日目；２８日目；８４日目；および必要に応じて９８日目での投薬）。
【０１０３】
【表２】
2005526697.tif 000003
2005526697.tif 000004
従って、ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含めることは、筋内投与されたＭｅｎＢタンパク質２８７に対する抗体力価を増強した（群１および２を比較）。力価は、３回目の筋内投薬を２回の鼻腔内投与で置換することによって、増強され得た（群１および３を比較）。ＣｐＧ増強がまた、筋内／鼻腔内レジメンにおいて見られた（群３および４を比較）。
【０１０４】
（ＭｅｎＢタンパク質２８７のためのアジュバントの比較）
ΔＧ２８７を種々のアジュバントと共に処方し、そしてマウスに投与した。マウスからの血清を殺菌抗体（ＢＣＡ）アッセイを用いて評価し、そして、力価は以下の通りであった：
【０１０５】
【表３】
2005526697.tif 000005
従って、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、ミョウバンとほぼ匹敵し、アジュバントとして穏やかにのみ効果的であった。ＰＬＧ微粒子は、ミョウバンおよびＣｐＧの両方より効果的であったが、フロイントアジュバントほど効果的ではなかった。しかし、著しく対照的に、ＣｐＧおよびＰＬＧの混合物は、２次免疫段階後においてフロイントアジュバントのアジュバント活性に匹敵し、３次免疫後ではフロイントアジュバントを超えた。
【０１０６】
ＣｐＧを用いることによるＰＬＧアジュバント活性の増強はまた、別個の研究においても見られた（０２〜０２７９）：
【０１０７】
【表４】
2005526697.tif 000006
（アジュバント活性に対する吸着の効果）
アジュバント活性に対する吸着の効果を試験した。タンパク質ΔＧ２８７を、ＤＳＳ界面活性剤またはＳＤＳを用いてＰＬＧ微粒子に吸着させるか、または、単に粒子と混合させた。免疫を０日目、２１日目および３５日目に実施し、そして力価を３５日目および４９日目に評価した。結果は以下の通りである：
【０１０８】
【表５】
2005526697.tif 000007
従って、ΔＧ２８７についてのＣｐＧおよび微粒子の混合物のアジュバント活性は、抗原が、微粒子に吸着された場合に、最適である。
【０１０９】
参考文献６は、「９６１」と呼ばれる血清群ＢのＮ．ｍｅｎｉｇｉｔｉｄｉｓ由来のタンパク質（「ＮａｄＡ」として現在公知である［１６、１７］）を開示する。参考文献１０〜１２は、ＮａｄＡの発現を改善する方法を開示する。１つの方法は、タンパク質のＣ末端を欠失させ、その膜アンカーを除去すること（すなわち、２９９６株についてのアミノ酸３５１〜４０５を除去すること）、ならびに、そのリーダーペプチドの天然の除去を包含する。このタンパク質は、「９６１ｃ」といわれる。ＣｐＧと同時投与される場合の、ＰＬＧアジュバント活性に対する吸着の効果を、２８７について上記したように、９６１ｃについて試験した。
【０１１０】
【表６】
2005526697.tif 000008
従って、ΔＧ２８７に関して、９６１ｃについての、ＣｐＧおよび微粒子混合物のアジュバント性は、この抗原が微粒子に吸着されるときに最適である。抗原そのままにとって、そして、ΔＧ２８７と併せたときの抗原にとって、このことは、確かである。
【０１１１】
従って、単一であっても併用されても、ΔＧ２８７および９６１ｃの両方にとって、ＣｐＧおよびＰＬＧ混合物についての最良のアジュバント性は、ＰＬＧ微粒子に対して抗原が吸着したときに、見出される。
【０１１２】
（ＰＬＧ、ＣｐＧ、ミョウバンおよびＭＦ５９）
ＰＬＧ、ＣｐＧおよびミョウバンの種々の組合せを、タンパク質ΔＧ２８７について試験し、Ｈｉｓタグ化産物として発現した。３つの免疫後の、血清殺菌力価は、以下である：
【０１１３】
【表７】
2005526697.tif 000009
類似の実験を、実施し、そして、その結果は以下のようであった：
【０１１４】
【表８】
2005526697.tif 000010
従って、ＭＦ５９およびミョウバンは、さらに、ＣｐＧ／ＰＬＧ混合物の効率を増強し得、ＰＬＧ微粒子に対するＣｐＧの吸着は、アジュバント性については必要ではないが、微粒子に対する抗原の吸着は、最適であると、再度、見出される。
【０１１５】
（抗原混合物）
アジュバント性に対する吸着の効果を、タンパク質ΔＧ２８７およびタンパク質９６１ｃについて、単独および合わせて研究した。３用量後の抗体力価は以下の通りであった：
【０１１６】
【表９】
2005526697.tif 000011
従って、ΔＧ２８７に関して、タンパク質９６１ｃについてのＣｐＧおよび微粒子混合物のアジュバント性は、抗原が微粒子に吸着するときに、最適である。
【０１１７】
ＰＬＧ微粒子とアジュバントとのさらなる併用を、タンパク質ΔＧ２８７およびタンパク質９６１ｃについて試験した。このＣｐＧは、可溶性であるか、またはＰＬＧ微粒子について吸着するかのいずれかであった。結果は、以下のようであった：
【０１１８】
【表１０】
2005526697.tif 000012
２０μｇ／ＰＬＧ吸着抗原／ＩＭ用量（日数、０日、２１日、および３５日）を使用して、同様の研究を、１０匹のＣＤ−１マウスの群について実施した。ＣｐＧが存在した場合、これを、１０μｇ／用量で与えた。ＥＬＩＳＡ力価（ＧＭＴ）を、ＯＤ４５０ｎｍ  ０．５を与える血清希釈の逆数をとって計算し、そして、血清を、両方の抗原について試験した。血清殺菌活性力価（ＳＢＡ）を、５０％の標的細菌を死滅させる血清希釈の逆数をとって計算し、そして、血清を、２９９６株およびＭＣ５８（異種由来株）に対する活性について試験した。第４９日目（３回用量の２週間後）における力価は、以下のとおりである：
【０１１９】
【表１１】
2005526697.tif 000013
【０１２０】
【表１２】
2005526697.tif 000014
参照１２は、以下の３つのタンパク質の組み合わせを開示し、このタンパク質の間に５つの異なるＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ抗原を含む：（１）９６１ｃ２９９６；（２）ΔＧ２８７Ｎ２−９５３２９９６；および（３）９３６２９９６−ΔＧ７４１ＭＣ５８。この抗原混合物を、水酸化アルミニウムアジュバントを使用して、参照１２において試験した。本発明に従って、抗原混合物は、生分解性ポリマー微粒子およびＣｐＧオリゴヌクレオチドに吸着することによって補助される。第３の用量の後、力価は、以下の通りであった：
【０１２１】
【表１３】
2005526697.tif 000015
参照１２において使用されたアルミニウムアジュバントと比較して、ＰＬＧ＋ＣｐＧ混合物は、全体として、より低い抗体力価に至るが（タンパク質２８７を除いて）、重要なことに、広範の株に対してより高い殺菌力価を与える。従って、絶対的力価は低いが、本発明のアジュバントは、殺菌抗体に関して抗体産生を有利に変化する。
【０１２２】
本発明は、例示のみの目的で記載され、そして改変は本発明の範囲および精神の範囲内に維持しつつなされ得ることが理解される。
【０１２３】
（参考文献：これらの内容は、本明細書により参考として援用される）
【０１２４】
【表１４】
2005526697.tif 000016
2005526697.tif 000017
2005526697.tif 000018
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【国際調査報告】
2005526697.tif 000021
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