(57)【要約】【課題】生物学的活性を有し、坑骨粗しょう症活性を有するユーパルチン 3‐Ｏ‐β‐D‐ガラクトピラノシドをナハカノコソウ（Boerhaavia  diffusa）から分離する方法を提供する。【解決手段】ナハカノコソウの気中部分を粉末にし、プロトン性溶媒を用いて粉末の抽出物を得て、得られた抽出物を濃縮し、濃縮抽出物を有機溶媒とともに摩砕し、メタノールを用いて生物学的活性成分を結晶化または再結晶化させてユーパルチン3‐Ｏ‐β‐D‐ガラクトピラノシドを得る。
2005519975.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナハカノコソウ（Boerhavia diffusa）から分子構造式１の３‐ｏ‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシドを分離する方法であって、
（ａ）植物原料を粉末化する、
（ｂ）粉末化した植物原料からプロトン性溶媒により抽出物を調製する、
（ｃ）ステップ（ｂ）で得られた抽出物を濃縮し、
（ｄ）続いて、生物学的活性に富む成分を得るべく極性を増加するため、前記濃縮抽出物を有機溶媒と共に摩砕し、
（ｅ）生物学的活性成分をメタノールで結晶または再結晶させ３‐O‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシドを得る、上記ステップからなることを特徴とする分離方法。
【分子構造式１】2005519975.tif 000007
【請求項２】
前記植物原料は、当該植物の気中部分から選択することを特徴とする請求項１記載の分離方法。
【請求項３】
前記植物原料は、ナハカノコソウの葉、茎及びその混合物からなる群から選択することを特徴とする請求項１記載の分離方法。
【請求項４】
前記ステップ（ｂ）の抽出に用いるプロトン性溶媒は、精留アルコール、メタノール及びメタノール水から選択されることを特徴とする請求項１記載の分離方法。
【請求項５】
前記ステップ（ｄ）ので用いる有機溶媒は、ヘキサン、クロロフォルム、エチルアセテート、メタノール、エタノール及びメタノール水からなる群から選択されることを特徴とする請求項１記載の分離方法。
【請求項６】
前記ナハカノコソウから分子式１の３‐O‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシドを分離する方法は、ナハカノコソウの葉の粉末をガラス・パーコレータまたはソックスレー抽出器を用いて精留アルコール、メタノール及びメタノール水からなる群から選択した極性溶媒により抽出するステップ、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロフォルム及びエチルアセテートから選択された有機溶媒中で摩砕することにより脂質非極性成分を除去して生物学的活性に富む成分を得るステップ、極性溶媒を用いて結晶化し０．２５〜０．５％ｗ／ｗの収率で３‐O‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシド１を得るステップ、からなることを特徴とする請求項１記載の分離方法。
【分子構造式１】2005519975.tif 000008
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明はナハカノコソウからユーパルチンを分離する方法に関し、特に生物学的活性を有し、坑骨粗鬆活性を有する下記分子構造式１のユーパルチン（Eupalitin、３‐Ｏ‐β−D‐グルコピラノシド）をナハカノコソウ（Boerhavia Diffusa）の葉の粉末から高い収率で抽出により分離する方法に関する。
【０００２】
【分子構造式１】
2005519975.tif 000003
【０００３】
【従来の技術】
ナハカノコソウ（Syn. Boerhaavia repens Linn., Boerhaavia procumbens Roxb. オシロイバナ科）は‘プナルナヴァ’として知られており、アーユルヴェーダで用いられる重要な若返り薬である。この植物はインドに広く分布しており、雨季に繁茂する。気中部分は枯渇するが翌年に再生し芽を吹く（資料１）。成熟した全体を乾燥させたものはインド生薬薬局方で薬とされている（資料２）。同資料には顕著な巨視的及び微視的特徴も記載されている。ナハカノコソウの生物学的多様性、同種属（資料３、４）、変種（資料５、６、７、８）、オシロイバナ科の化学成分による分類所見（資料９）については議論されてきた。
【０００４】
この植物の根から多くのロテノン類化合物（Ｒｏｔｅｎｏｉｄｓ）が分離されてきた（資料１０、１１，１２，１３）。これらには一連のボエラヴィノン類（Ｂoeravinone）、即ち,Ｂoeravinone A、Ｂoeravinone B、Ｂoeravinone C、Ｂoeravinone D、Ｂoeravinone E、Ｂoeravinone Fを含んでいる。プナルナヴォシド（Punarnavoside）、フェノールグリコシドが根に含まれていることも報告されている（資料１４、１５）。ナハカノコソウ（Boerhavia repens）の全植物体から3種のフラボノール・グリコシド、即ちユーパルチン３‐Ｏ‐β‐Dガラクトピラノシル‐（１--＞２）‐β‐D‐グルコピラノシド、ユーパルチン３‐Ｏ‐β‐Dガラクトピラノシド及び６‐メトキシカエンフェロール３‐Ｏ‐β‐D‐（１--＞６）ロビノシドが分離されており（資料１６）、ナハカノコソウ（Boerhavia diffusa）の根からC-メチルフラボンが分離されている（資料１７）。
【０００５】
また、ナハカノコソウの根から２つのリグナン、即ちリリオデンドリンとシリンガレシノール・モノ‐β‐D‐グルコシドが分離されている（資料１８）。この植物には、プリン・ヌクレオシド・ヒポキサンチン９‐L‐アラビノースの存在と（資料１９）、ディヒドロイソフロキサントン‐ボルハヴィンの存在と（資料２０）、フィトステロールの存在が（資料２１，２２）報告されている。ナハカノコソウの肝臓保護特性が種々の研究者により研究され確認されている（資料２３，２４，２５，２６）。この植物は坑線溶及び坑炎症作用を有し、ＩＵＤ挿入時の過多月経の治療に推奨されている（資料２７、２８）。
【０００６】
ナハカノコソウは、またアンギオテンシン変換酵素阻害効果（資料２９、３０）、またはCa2+チャンネル・ブロッキング効果（資料３１）によると思われているが、坑高血圧特性を有していることが報告されている（資料３２）。この薬品の腎炎症候群に対する有用性はシロネズミで示されており（資料３３）、ヒトでも同様に示されている（資料３４）。この植物の精製した抽出物は、試験管内においてカタラーゼ活性が減少し、アミラーゼ活性及びＡＰＴアーゼ（アデノシントリフォスファターゼ）活性は増加する（資料３５、３６）。この植物の根も坑痙攣特性を示す（資料３７、３８）。この薬品は胎生期の催奇作用を消去することが知られている（資料３９）。プナルナヴォシドはサルでは坑線溶活性を有している（資料４０）。リリオデンドリンは蛙の心臓の単細胞においてCa2+チャンネルをブロックし（資料４１）、ハイポキサンチン９‐L‐アラビノシドはラットや猫において降圧効果や陰性変周期効果を有する（資料４２）。
【０００７】
ナハカノコソウ全植物体からのメタノール抽出成分は、組織培養において副甲状腺ホルモンにより引起される骨吸収を阻害することが判っている（資料４３）。メタノール抽出成分の分留成分による生物学的活性度はｎ‐ブタノール溶解成分の活性濃度を示す。ｎ‐ブタノール溶解成分からユーパルチン 3‐Ｏ‐β‐D-ガラクトピラノシドが分離され、組織培養において副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）により引起される骨吸収を顕著に阻害（ｐ＜０．００１）することが判明した。ユーパルチン 3‐Ｏ‐β‐D‐ガラクトピラノシドの活性度は、日本やイタリアにおいて同じような状況で骨粗鬆症の治療に臨床的に使用されている自然品からの誘導体であるイプリフラヴォン（Ipriflavone）が示すものより大きい。
【０００８】
ユーパルチン 3‐Ｏ‐β‐D‐ガラクトピラノシド混合物は、Ｌｉ等により下記の方法で分離されている（資料４３）。陰干しにしたナハカノコソウ（Boerhavia repens）全植物体（１．２ｋｇ）を小片に裁断し、メタノール（９００ｍｌ×２）を３時間還流させる。全濾過液を減圧して蒸発させ暗緑色の物体を得る。この抽出物を蒸留水に懸濁し、クロロフォルム及びｎ‐ブタノールを順次もちいて分離抽出する。ｎ‐ブタノール溶解成分を分離用薄層クロマトグラフィーにより繰り返し精製し、ユーパルチン 3‐Ｏ‐β‐D‐ガラクトピラノシド（１４．４ｍｇ、０．００１２％）を収量する。
【０００９】
上記Ｌｉ等の方法は下記のような重大な欠点を有している。
１．含有量の少ないナハカノコソウ（Boerhavia repens）の全植物体を使用する方法である。
２．ユーパルチン 3‐Ｏ‐β‐D‐ガラクトピラノシドを完全に抽出するためにはメタノールを６時間還流するだけでは不充分である。
３．メタノール抽出物は蒸留水に懸濁されクロロフォルムとｎ‐ブタノールを順次用いて分離される。クロロフォルムで分離される間、ユーパリチン 3‐Ｏ‐β‐D‐ガラクトピラノシドもクロロフォルムの層中に希釈され、ブタノール溶解成分から得られる分子式１の化合物の収量は減少する。
４．当該化合物は高価且つ冗長で時間のかかる分離用薄層クロマトグラフィーにより精製され、僅かな収量（１４．４ｍｇ、０．００１２％）となる。かかる冗長で不経済な分離方法はユーパルチン 3‐Ｏ‐β‐D‐ガラクトピラノシドの商業的製造には適用できない。
【００１０】
骨粗しょう症は現在の社会において重大な問題の一つである。骨粗しょう症は老年人口、特に閉経後の婦人の骨折を招く。従来の医療においては、多くの未加工の自然薬品が骨の病気の治療に有効として使用されている。ユーパルチン 3‐β‐D‐ガラクトピラノシドは、同目的のため臨床的に使用されてきた自然品誘導体製品のイプリフラヴォンより大きな坑骨粗しょう活性を示すため、大量のユーパルチン 3‐Ｏ‐β‐D‐ガラクトピラノシドが必要となる。
【００１１】
Ｌｉ等によって開発された方法では前記化合物は僅かの量（乾燥Boerhavia repens全体１．２ｋｇから１４．４ｍｇ）しか分離できない（資料４３）。そのため、更なる研究のために容易に使用できるように、効果的且つ短時間で大量の分離が可能な方法の開発が緊急に必要となっている。
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の主たる目的は、生物学的活性を有する分子構造式１のユーパルチン 3‐Ｏ‐β‐D‐ガラクトピラノシドをナハカノコソウ（Boerhaavia  diffusa）から分離する方法を提供するにある。本発明の他の目的はナハカノコソウ（Boerhavia  diffusa）の植物部分を特定することにより分子構造式１の3‐Ｏ‐β‐D‐ガラクトピラノシドを最大収量で得るにある。更に本発明の他の目的は簡単且つ迅速に望みの産物を分離できるユーパルチン（3‐Ｏ‐β‐D‐ガラクトピラノシド）の分離方法を提供するにある。豊富に自然に産出する高度に経済的な原料を用いる方法を提供することも本発明の他の目的である。更に、高価且つ冗長で時間を浪費する分離用薄層クロマトグラフィーを必要とする先行技術とは異なり、前記化合物の精製及び分離に冗長なクロマトグラフィー処理を必要とせず、量的拡大が理想的に行える方法を提供することも本発明の他の目的である。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
本発明の上記及びその他の目的は、ここに記載するユーパルチン（3‐Ｏ‐β‐D‐ガラクトピラノシド）の新しい抽出方法によって達成される。当該方法によれば、ナハカノコソウの葉の粉末から、先行技術に報告されている方法の略３００倍の収量を得る。そのため、本発明が提供するナハカノコソウから分子構造式１の3‐Ｏ‐β‐D‐ガラクトピラノシドを分離する方法は下記ステップからなる。（ａ）植物材料を粉末にする、（ｂ）プロトン性溶媒を用いて葉粉末の抽出物の調製を行う、（ｃ）上記ステップ（ｂ）で得られた抽出物を濃縮する、（ｄ）生物学的活性に富む成分を得るべく極性成分を増加させるため、上記濃縮抽出物を有機溶媒とともに摩砕し、（ｅ）メタノールを用いて生物学的活性成分を結晶化または再結晶化させユーパルチン（分子構造式１の3‐Ｏ‐β‐D‐ガラクトピラノシド）を得る。
【００１４】
【分子構造式１】
2005519975.tif 000004
【００１５】
本発明の１実施形態においては、植物材料は植物の気中の部分から選択する。本発明の他の実施形態においては、植物材料はナハカノコソウの葉、茎及びその混合物からなる群より選択する。本発明の他の実施形態においては、ステップ（ｂ）において抽出に用いるプロトン性溶媒は精留アルコール、メタノール及びメタノール水からなる群より選択される。本発明の更なる他の実施形態においては、ステップ（ｄ）で用いる有機溶媒は、へキサン、クロロフォルム、エチルアセテート、メタノール、エタノール及びメタノール水からなる群から選択される。
【００１６】
本発明の他の実施形態においては、ナハカノコソウから分子構造式１を有する3‐Ｏ‐β‐D‐ガラクトピラノシドを分離する方法は、精留アルコール、メタノール及びメタノール水からなる群より選択される極性溶媒を用いて、ガラス・パーコレータまたはソックスレー抽出器を使用して粉末状の葉から抽出し、へキサン、クロロフォルム、エチルアセテートからなる群から選択される有機溶媒と共に摩砕することにより油脂性非極成分を除去し生物学的活性に富む成分を得、極性溶媒を用いて結晶化させ０．２５〜０．５％ｗ／ｗの範囲の収率で3‐Ｏ‐β‐D‐ガラクトピラノシド（１）を得るステップからなる。
【００１７】
【分子構造式１】
2005519975.tif 000005
【００１８】
【発明の実施の形態】
本発明にかかる方法は、下記ステップからなることにより先行技術の欠陥を克服する。
１．特定の地方から収集されたナハカノコソウの葉のような気中部分（３年間に亘り収集した前記植物サンプルの分析によれば前記化合物の含有量が最大である）を使用する。
２．方法は加熱連続抽出（ソックスレー抽出器）で行い分子構造式１の化合物の完全な抽出を確実にする。分子構造式１の化合物は先行技術に報告されているメタノールには高い溶解性を示さないので不完全な抽出に終わる。
３．精留アルコール抽出によって得られた残留物をヘキサンまたはクロロフォルム中で摩砕する。分子構造式１の化合物はクロロフォルムの層中には分離されず、摩砕後、分子構造式１の化合物の全抽出分は精留アルコール中に分離される。
４．前項３に記載した摩砕の後に得られた残留物から直接結晶化により前記化合物を精製する。上記方法は簡単であり、迅速であり、高度な経済的発展を期待でき、商業的利用のための規模拡大にも両立し得る分子構造式１の化合物の新規な分離方法である。本方法は収率０．４％にも達し、Ｌｉ等によって報告されている収率の３００倍以上の収率が得られる。
【００１９】
骨粗しょう症は老年社会の重大問題の一つである。骨粗しょう症は老齢人口、特に閉経後の婦人の骨折を招く結果となる。従来の医療においては、多くの未加工の自然薬品が骨の病気の治療に有効として使用されている。3‐Ｏ‐β‐D‐ガラクトピラノシドは、同目的のため臨床的に使用されてきた自然品誘導体調製薬のイプリフラボンより大きな坑骨粗しょう活性を示すため、大量のユーパルチン 3‐Ｏ‐β‐D‐ガラクトピラノシドが要求されている。Ｌｉ等によって開発された方法では僅かの量の前記化合物（乾燥ナハカノコソウ全植物体１．２ｋｇから１４．４ｍｇ）しか分離できない（資料４３）。
【００２０】
ユーパルチン3‐Ｏ‐β‐D‐ガラクトピラノシドのナハカノコソウ（Boerhavia diffusa）全植物体中含有量の予備調査においては、インドの８つの植物地理学的に異なる領域から収集されたナハカノコソウ全植物体中の含有量はかなりの差異を示す（表１参照）。
【００２１】
異なる地域から採取したナハカノコソウのサンプル及びジャンム地域で採取したサンプルの異なる部位の高性能液体クロマトグラフィーによるユーパルチン3‐O‐β‐D‐ガラクトピラノシドの含有量。
【００２２】
【表１】
2005519975.tif 000006
【００２３】
aｎ＝３，平均値の標準偏差は０．０００〜０．００５の範囲、ＮＤ＝不検知。
【００２４】
面白いことにジャンムのサンプルが最大の含有量を有することが判明した（次に大きな量を含有するラムガール地方で採取されたサンプルの殆ど倍の含有量）。加えて、前記化合物は葉に集中しており（茎に含有する量の５倍）、根にはないことが判った。
【００２５】
この結果は、副甲状腺ホルモンの刺激による骨吸収を防止するためのナハカノコソウの更なる研究において、分子構造式１の化合物の含有量が既知である標準化抽出物の必要性を強調するものである。更に、葉の抽出が、活性成分であるユーパルチン3‐O‐β‐D‐ガラクトピラノシドに富むので植物全体から抽出するより好ましい。
【００２６】
ナハカノコソウから生物学的活性を示す分子構造式１のユーパルチン3‐O‐β‐D‐ガラクトピラノシドを分離する方法は、（ａ）植物材料を公知の方法で粉末にする、（ｂ）慣例的方法を用いてアルコール抽出成分を濃縮する、（ｃ）生物学的活性に富む有極成分を増加する為、上記抽出物を引き続き有機溶媒と共に摩砕する、（ｄ）慣例的方法によりメタノールを用いて結晶化または再結晶化を行いユーパルチン3‐O‐β‐D‐ガラクトピラノシドを得る、のステップからなる。
【００２７】
化合物１の特徴
【００２８】
化合物１は黄色の非晶質固体として得られ、［α］D−２６．６（ｃ０．０３，メタノール）である。化合物１の紫外吸収スペクトルはフラボノイドの特徴を示す帯域（バンドＩ‐３４２ｎｍ、バンドＩＩ‐２７０ｎｍ）を有する。ナトリウムメトキシドを添加したときのバンドＩの深色移動（＋４５ｎｍ）は３位置にヒドロキシル基が存在することを示す。1Ｈ核磁気共鳴信号が６．８８（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ）と８．１１（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）にあり、Ｂ環に４個の−ＯＨ基があり他の置換基は存在しないことを強く示唆する。
【００２９】
1Ｈ核磁気共鳴スペクトルは２つのメトキシル基（δ３．７５、３．９３、各３Ｈ、ｓ）の存在と、５位置にヒドロキシル基（δ１２．５６、ｂｒｓ）の存在、及びアノマー糖質プロトン（δ５．４１、１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）の存在を示す。糖質の13Ｃ信号を文献により比較するとガラクト−スと特定できる（資料４４）。化合物１の分子量は４９２（ＦＡＢ質量解析法による）であり、分子量３３０（ＥＩ質量解析法による）のアグリコルであることが判明した。かくして、このアグリコンは３つのヒドロキシ基を有し、その一つはガラクトースと結合し、ヘキサアセテートの形成により確認された２つのメトキシル基を有する。５及び４位置のフリーなヒドロキシル基はすでに確認されているので、グリコシド結合は３位置であることが明らかになった。２つのメトキシル基の位置はプロトン核磁気共鳴信号（δ６．８６，１Ｈ，ｓ）によりＣ‐６，７位置とされ、５位置の−ＯＨ基のアセチル化によってシフトを示さない。かくして、６位置に存在する可能性が確認された。更に、13Ｃ核磁気共鳴信号δ９２．０（Ｃ‐６）、δ６０．９（６‐ＯＣＨ3）及びδ５７．３（７‐ＯＣＨ3）はＢ環における同じ置換基で提案された値と一致する（資料４５）。
【００３０】
かくして、化合物１の分子構造は、５，４‐ジヒドロキシ６，７‐ジメトキシ‐フラボノール‐３‐O‐β‐Ｄ‐ガラクトシド（ユーパルチンまたは３‐O‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシド）と推論できる。ジャンム地域のサンプルの葉から分子構造式１の化合物を高収率で抽出出きることは、更に確認され、化合物１の同様の収率（〜０．２から０．４％までの）が１９９６年、１９９８年、１９９９年にジャンムで収集された植物から得られた事実により基準化された。この植物は雨季中または雨季の後（７月〜９月）にジャンム地方において豊富に入手出きる。一方、インドの他の地域から収集されたサンプルは、高性能液体クロマトグラフィーにより決定されたように（表一）化合物１の含有量が少なく、化合物１を分離するにはあまり適さず、経済的原料とはならない。
【００３１】
かくして、原材料（ナハカノコソウ）の収集地域、抽出及び分離方法は化合物１の最大収率を得るため基準化された。簡単且つ新規性のある当該方法は、特に、あらゆる目的のための前記植物からの化合物１の迅速な分離に有用である。
【００３２】
ナハカノコソウから生物学的活性のユーパルチン３‐O‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシドの分離方法は、下記ステップからなる。
（ａ）植物材料を粉末化する、
（ｂ）ソックスレー装置を使用して加熱連続抽出により植物材料のアルコール抽出物を調製する、
（ｃ）アルコール抽出物を濃縮する、
（ｄ）続いてアルコール抽出物をヘキサン、ジクロロメタン、クロロフォルムまたはエチルアセテート共に摩砕（加振攪拌する意を含む）し、生物学的活性に富んだ成分を得る、
（ｅ）極性溶媒中で結晶化または再結晶化してユーパルチン３‐ｏ‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシドを得る。
【００３３】
本発明による方法で得られる収率は、適当な地域からの収集原料を使用し、化合物１を最大に含有する植物の部位を使用し、冗長なクロマトグラフィー法を使用しないことにより、冗長で時間を浪費し大量の成分分離には適さない分離用薄層クロマトグラフィーを使用した文献に報告された収率の略３００倍に達する。
【００３４】
以下に実施例を参照して本発明を説明するが、かかる実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
【００３５】
実施例１
【００３６】
陰干しし、粉末化したナハカノコソウの葉（１ｋｇ）を、ソックスレー装置を使用して、精留アルコールによる加熱連続抽出により３２時間抽出した。精留アルコールを減圧して蒸発させ暗緑色の物質を得た。この抽出物をヘキサン、クロロフォルム及びエチルアセテート中で摩砕し、残留物をメタノールに溶解し一晩冷蔵庫中に放置した。固形物を濾過して分離したのち、メタノール中で結晶化させユーパルチン３‐O‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシド（４．０ｇ）を得た。
【００３７】
実施例２
【００３８】
陰干しし、粉末化したナハカノコソウの葉（１ｋｇ）を、ソックスレー装置を使用して、メタノールによる加熱連続抽出により３２時間抽出した。メタノールを減圧して蒸発させ暗緑色の物質を得た。この抽出物をヘキサン、クロロフォルム及びエチルアセテート中で摩砕し、残留物をメタノールに溶解し一晩冷蔵庫中に放置した。固形物を濾過して分離したのち、メタノール中で結晶化させユーパルチン３‐O‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシド（３．５ｇ）を得た。
【００３９】
実施例３
【００４０】
陰干しし、粉末化したナハカノコソウの葉（１ｋｇ）を、パーコレーターを用いて精留アルコールで６４時間抽出した。精留アルコールを減圧して蒸発させ暗緑色の物質を得た。この抽出物をヘキサン、クロロフォルム及びエチルアセテート中で摩砕し、残留物をメタノールに溶解し一晩冷蔵庫中に放置した。固形物を濾過して分離したのち、メタノール中で結晶化させユーパルチン３‐O‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシド（２．８ｇ）を得た。
【００４１】
実施例４
【００４２】
陰干しし、粉末化したナハカノコソウの葉（１ｋｇ）を、ソックスレー装置を使用して、精留アルコールによる加熱連続抽出により３２時間抽出した。精留アルコールを減圧して蒸発させ暗緑色の物質を得た。この抽出物をヘキサン、クロロフォルム及びエチルアセテート中で摩砕し、残留物をメタノールに溶解し一晩冷蔵庫中に放置した。固形物を濾過して分離したのち、メタノール中で結晶化させユーパルチン３‐O‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシド（０．７ｇ）を得た。
【００４３】
実施例５
【００４４】
陰干しし、粉末化したナハカノコソウの葉（１ｋｇ）を、ソックスレー装置を使用して、精留アルコールによる加熱連続抽出により３２時間抽出した。精留アルコールを減圧して蒸発させ暗緑色の物質を得た。この抽出物をヘキサン、クロロフォルム及びエチルアセテート中で摩砕し、残留物をメタノールに溶解し一晩冷蔵庫中に放置した。固形物を濾過して分離したのち、メタノール中で結晶化させユーパルチン３‐O‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシド（３．０ｇ）を得た。
【００４５】
【発明の効果】
１．ユーパルチン３‐O‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシドを分離できる新規な方法である。
２．本方法は簡単で、特に、あらゆる目的のために前記植物から前記化合物を迅速に分離するのに有用である。
３．本方法は自然界に豊富に存在する経済性の高い原材料を使用する。
４．本方法のコンセプトは規模拡大にとって理想的であり容易である。
５．本方法は、植物原料の収集地域を基準化することにより収率を保証することができる。
６．本方法は、分子構造式１の化合物を僅かな収量でしか得られない、高価且つ冗長で時間を浪費する分離用薄層クロマトグラフィーを用いる公知の方法のように、化合物の分離及び精製に如何なる冗長なクロマトグラフィー法も使用しない。
７．本方法は、文献に記載された方法の３００倍の収率を得られる。
【００４６】
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