(57)【要約】本出願において、機能的および構造的に規定された少なくとも２つのドメインを有する、特定の種類の免疫刺激核酸が、提供される。この種類の組み合わせモチーフ免疫刺激核酸は、免疫応答を活性化する。この種類の組み合わせモチーフ免疫刺激核酸は、種々の免疫関連障害（例えば、癌、感染性疾患、およびアレルギー障害）を処置するために有用である。本発明の核酸はまた、ナチュラルキラー細胞の活性化を刺激し、そして１型インターフェロンの産生を刺激する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
５’Ｘ１ＤＣＧＨＸ２３’
を含み、そしてＸ１のすぐ５’側またはＸ２のすぐ３’側に位置するＰおよびＮからなる群より選択される核酸配列をさらに含む、長さ１４ヌクレオチド〜１００ヌクレオチドの免疫刺激核酸であって、
Ｘ１およびＸ２は、独立して０ヌクレオチド長〜１０ヌクレオチド長の任意の配列であり、ＤはＣ以外のヌクレオチドであり、Ｃはシトシンであり、Ｇはグアニンであり、ＨはＧ以外のヌクレオチドであり、そして
ＮはＢ細胞中和配列であり、Ｎは、ＣＧＧトリヌクレオチドで始まりかつ少なくとも１０ヌクレオチド長であり、そしてＰは、ＧＣリッチなパリンドロームを含む少なくとも１０ヌクレオチド長の配列である、
核酸。
【請求項２】
請求項１に記載の核酸であって、該免疫刺激核酸は、５’ＮＸ１ＤＣＧＨＸ２３’を含む、核酸。
【請求項３】
請求項１に記載の核酸であって、該免疫刺激核酸は、５’Ｘ１ＤＣＧＨＸ２Ｎ３’を含む、核酸。
【請求項４】
請求項１に記載の核酸であって、該免疫刺激核酸は、５’ＰＸ１ＤＣＧＨＸ２３’を含む、核酸。
【請求項５】
請求項１に記載の核酸であって、該免疫刺激核酸は、５’Ｘ１ＤＣＧＨＸ２Ｐ３’を含む、核酸。
【請求項６】
請求項１に記載の核酸であって、該免疫刺激核酸は、５’Ｘ１ＤＣＧＨＸ２ＰＸ３３’を含み、Ｘ３は、０ヌクレオチド長〜１０ヌクレオチド長の任意の配列である、核酸。
【請求項７】
請求項１に記載の核酸であって、該免疫刺激核酸は、５’Ｘ１ＤＣＧＨＰＸ３３’を含み、Ｘ３は、０ヌクレオチド長〜１０ヌクレオチド長の任意の配列である、核酸。
【請求項８】
請求項１に記載の核酸であって、該免疫刺激核酸は、５’ＤＣＧＨＸ２ＰＸ３３’を含み、Ｘ３は、０ヌクレオチド長〜１０ヌクレオチド長の任意の配列である、核酸。
【請求項９】
請求項１に記載の核酸であって、該免疫刺激核酸は、５’ＴＣＧＨＸ２ＰＸ３３’を含み、Ｘ３は、０ヌクレオチド長〜１０ヌクレオチド長の任意の配列である、核酸。
【請求項１０】
請求項１に記載の核酸であって、該免疫刺激核酸は、５’ＤＣＧＨＰＸ３３’を含み、Ｘ３は、０ヌクレオチド長〜１０ヌクレオチド長の任意の配列である、核酸。
【請求項１１】
請求項１に記載の核酸であって、該免疫刺激核酸は、５’ＤＣＧＨＰ３’を含む、核酸。
【請求項１２】
請求項１に記載の核酸であって、Ｄがチミン（Ｔ）である、核酸。
【請求項１３】
請求項１に記載の核酸であって、ＨがＴである、核酸。
【請求項１４】
請求項１に記載の核酸であって、ＨがＴであり、そしてＸ２が、ＣＧ、ＣＧＴ、ＣＧＴＴ、ＣＧＴＴＴ、およびＣＧＴＴＴからなる群より選択される、核酸。
【請求項１５】
請求項１に記載の核酸であって、ＨがＴであり、そしてＸ２がＣＧである、核酸。
【請求項１６】
請求項１に記載の核酸であって、ＨがＴであり、そしてＸ２がＣＧＴＴＴＴである、核酸。
【請求項１７】
請求項１に記載の核酸であって、Ｃがメチル化されていない、核酸。
【請求項１８】
請求項１に記載の核酸であって、Ｎが、少なくとも４つのＣＧジヌクレオチド、および２つ以下のＣＣＧトリヌクレオチドを含む、核酸。
【請求項１９】
請求項１に記載の核酸であって、Ｐが少なくとも１つのイノシンを含む、核酸。
【請求項２０】
請求項１に記載の核酸であって、該免疫刺激核酸は、ヌクレアーゼ耐性骨格を有する、核酸。
【請求項２１】
請求項１に記載の核酸であって、該免疫刺激核酸は、ホスホロチオエート骨格を有する、核酸。
【請求項２２】
請求項１に記載の核酸であって、５’末端にポリＴ配列をさらに含む、核酸。
【請求項２３】
請求項１に記載の核酸であって、３’末端にポリＴ配列をさらに含む、核酸。
【請求項２４】
請求項１に記載の核酸であって、該免疫刺激核酸は、長さが１４ヌクレオチド〜４０ヌクレオチドである、核酸。
【請求項２５】
請求項１に記載の核酸であって、該免疫刺激核酸は、長さが１４ヌクレオチド〜３０ヌクレオチドである、核酸。
【請求項２６】
式：
５’Ｎ１ＰｙＧＮ２Ｐ３’
を含む、長さ１３ヌクレオチド〜１００ヌクレオチドの免疫刺激核酸であって、
Ｎ１は１ヌクレオチド長〜６ヌクレオチド長の任意の配列であり、Ｐｙはピリミジンであり、Ｇはグアニンであり、Ｎ２は０ヌクレオチド長〜３０ヌクレオチド長の任意の配列であり、そしてＰは、ＧＣリッチなパリンドロームを含む少なくとも１０ヌクレオチド長の配列である、
核酸。
【請求項２７】
請求項２６に記載の核酸であって、Ｎ１が少なくとも５０％ピリミジンである、核酸。
【請求項２８】
請求項２６に記載の核酸であって、Ｎ１が少なくとも５０％Ｔである、核酸。
【請求項２９】
請求項２６に記載の核酸であって、Ｎ１が少なくとも１つのＣＧモチーフを含む、核酸。
【請求項３０】
請求項２６に記載の核酸であって、Ｎ１が少なくとも１つのＴＣＧモチーフを含む、核酸。
【請求項３１】
請求項２６に記載の核酸であって、Ｎ１が少なくとも１つのＣＩモチーフを含む、核酸。
【請求項３２】
請求項２６に記載の核酸であって、Ｎ１が少なくとも１つのＴＣＩモチーフを含む、核酸。
【請求項３３】
請求項２６に記載の核酸であって、Ｎ１が少なくとも１つのＩＧモチーフを含む、核酸。
【請求項３４】
請求項２６に記載の核酸であって、Ｎ１が少なくとも１つのＴＩＧモチーフを含む、核酸。
【請求項３５】
請求項２６に記載の核酸であって、Ｎ１がＴＣＧＧである、核酸。
【請求項３６】
請求項２６に記載の核酸であって、Ｎ１がＴＣＧＨであり、ＨがＧ以外のヌクレオチドである、核酸。
【請求項３７】
請求項２６に記載の核酸であって、Ｐｙが非メチル化Ｃである、核酸。
【請求項３８】
請求項２６に記載の核酸であって、Ｎ２が少なくとも５０％ピリミジンである、核酸。
【請求項３９】
請求項２６に記載の核酸であって、Ｎ２が少なくとも５０％Ｔである、核酸。
【請求項４０】
請求項２６に記載の核酸であって、Ｎ２がいかなるポリＧモチーフもポリＡモチーフも含まない、核酸。
【請求項４１】
請求項２６に記載の核酸であって、Ｎ１ＰｙＧＮ２が、ＴＴＴＴＴＣＧ、ＴＣＧ、ＴＴＣＧ、ＴＴＴＣＧ、ＴＴＴＴＣＧ、ＴＣＧＴ、ＴＴＣＧＴ、ＴＴＴＣＧＴ、およびＴＣＧＴＣＧＴからなる群より選択される配列である、核酸。
【請求項４２】
請求項２６に記載の核酸であって、該免疫刺激核酸は、完全にヌクレアーゼ耐性である骨格を有する、核酸。
【請求項４３】
請求項２６に記載の核酸であって、前記ヌクレアーゼ耐性骨格がホスホロチオエート結合から構成される、核酸。
【請求項４４】
請求項２６に記載の核酸であって、該免疫刺激核酸は、完全にホスホジエステルの骨格を有する、核酸。
【請求項４５】
請求項２６に記載の核酸であって、該免疫刺激核酸は、キメラ骨格を有する、核酸。
【請求項４６】
請求項４５に記載の核酸であって、該免疫刺激核酸は、ＣＧモチーフ間、ＣＩモチーフ間、またはＩＧモチーフ間に少なくとも１つのホスホジエステル結合を有する、核酸。
【請求項４７】
請求項２６に記載の核酸であって、Ｐが完全にパリンドロームである、核酸。
【請求項４８】
請求項２６に記載の核酸であって、Ｐが、１個と３個との間の個数連続する介在ヌクレオチドを有するパリンドロームである、核酸。
【請求項４９】
請求項４８に記載の核酸であって、前記介在ヌクレオチドがＴＧである、核酸。
【請求項５０】
請求項２６に記載の核酸であって、Ｐが、少なくとも３つのＣヌクレオチドおよび少なくとも３つのＧヌクレオチドを含む、核酸。
【請求項５１】
請求項２６に記載の核酸であって、Ｐが、少なくとも４つのＣヌクレオチドおよび少なくとも４つのＧヌクレオチドを含む、核酸。
【請求項５２】
請求項２６に記載の核酸であって、Ｐが、少なくとも５つのＣヌクレオチドおよび少なくとも５つのＧヌクレオチドを含む、核酸。
【請求項５３】
請求項２６に記載の核酸であって、Ｐが、少なくとも１つのイノシンを含む、核酸。
【請求項５４】
請求項２６に記載の核酸であって、該免疫刺激核酸は、長さが１３ヌクレオチド〜４０ヌクレオチドである、核酸。
【請求項５５】
請求項２６に記載の核酸であって、該免疫刺激核酸は、長さが１３ヌクレオチド〜３０ヌクレオチドである、核酸。
【請求項５６】
式：
５’Ｎ１ＰｙＧ／ＩＮ２Ｐ３’
を含む、長さ１３ヌクレオチド〜１００ヌクレオチドの免疫刺激核酸であって、
Ｎ１は１ヌクレオチド長〜６ヌクレオチド長の任意の配列であり、Ｐｙはピリミジンであり、Ｇ／Ｉは、ＧまたはＩのいずれかである単一のヌクレオチドを指し、Ｇはグアニンであり、そしてＩはイノシンであり、Ｎ２は０ヌクレオチド長〜３０ヌクレオチド長の任意の配列であり、そしてＰは、パリンドロームを含む少なくとも１０ヌクレオチド長の配列である、
核酸。
【請求項５７】
請求項５６に記載の核酸であって、Ｎ１ＰｙＩＮ２が、ＴＣＩＴＣＩＴＴＴＴ（配列番号４７）である、核酸。
【請求項５８】
請求項５６に記載の核酸であって、Ｐが、ＧＣリッチなパリンドロームである、核酸。
【請求項５９】
請求項５６に記載の核酸であって、Ｐが、ＩＣリッチなパリンドロームである、核酸。
【請求項６０】
請求項５６に記載の核酸であって、Ｇ／ＩがＧである、核酸。
【請求項６１】
請求項５６に記載の核酸であって、Ｇ／ＩがＩである、核酸。
【請求項６２】
請求項５６に記載の核酸であって、該免疫刺激核酸は、長さが１３ヌクレオチド〜３０ヌクレオチドである、核酸。
【請求項６３】
請求項１〜６２のうちのいずれか１項に記載の免疫刺激核酸と、薬学的に受容可能なキャリアとを含む、薬学的組成物。
【請求項６４】
１型インターフェロン（ＩＦＮ）の発現を誘導するための方法であって、該方法は、
１型ＩＦＮを発現可能な細胞を、１型ＩＦＮの発現を誘導するに有効な量の請求項１〜６２のうちのいずれか１項に記載の免疫刺激核酸と接触させる工程、
を包含する、方法。
【請求項６５】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化するための方法であって、該方法は、
ＮＫ細胞を、該ＮＫ細胞を活性化するに有効な量の請求項１〜６２のうちのいずれか１項に記載の免疫刺激核酸と接触させる工程、
を包含する、方法。
【請求項６６】
感染症を処置するための方法であって、該方法は、
感染症を有する被験体または感染症を発症するリスクを有する被験体に、該感染症を処置または予防するに有効な量の請求項１〜６２のうちのいずれか１項に記載の免疫刺激核酸を投与する工程、
を包含する、方法。
【請求項６７】
請求項６６に記載の方法であって、前記被験体が、ウイルス感染症、細菌感染症、真菌感染症、および寄生生物感染症からなる群より選択される感染症を有するか、または該感染症を発症するリスクを有する、方法。
【請求項６８】
アレルギー状態を処置するための方法であって、該方法は、
アレルギー状態を有する被験体またはアレルギー状態を発症するリスクを有する被験体に、該アレルギー状態を処置または予防するに有効な量の請求項１〜６２のうちのいずれか１項に記載の免疫刺激核酸を投与する工程、
を包含する、方法。
【請求項６９】
請求項６８に記載の方法であって、前記アレルギー状態が、アレルギー性喘息である、方法。
【請求項７０】
癌を処置するための方法であって、該方法は、
癌を有する被験体または癌を発症するリスクを有する被験体に、該癌を処置または予防するに有効な量の請求項１〜６２のうちのいずれか１項に記載の免疫刺激核酸を投与する工程、
を包含する、方法。
【請求項７１】
請求項７０に記載の方法であって、前記癌が、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨の癌、脳および中枢神経系の癌、乳癌、子宮頸部癌、絨毛癌、結腸および直腸の癌、結合組織の癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼の癌、頭部および頸部の癌、胃癌、上皮内癌、腎臓癌、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫を包含するリンパ腫、黒色腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、腎臓癌、呼吸器系の癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、泌尿器系癌、ならびに他の癌腫および他の肉腫からなる群より選択される、方法。
【請求項７２】
免疫刺激核酸であって、
ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ（配列番号１）、
ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＧ（配列番号４）、
ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＧＣＧ（配列番号５）、
ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＣＧ（配列番号６）、
ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＣＣＧＣＧＣＧＧ（配列番号７）、
ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴＴＴＴＴ（配列番号１２）、
ＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ（配列番号１３）、
ＴＺＧＴＺＧＴＴＴＴＺＧＧＺＧＺＧＺＧＺＺＧ（配列番号１４）、
ＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＣ（配列番号１９）、および
ＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴＣＧＴＣＧＴＴＴ（配列番号１１）、
からなる群より選択される配列を含み、
Ｚは、５−メチルシトシンである、核酸。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、一般的に、免疫刺激核酸、その組成物、およびその免疫刺激核酸を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（背景）
種々の免疫刺激活性プロフィールを有する主要な２つの種類の免疫刺激配列が、当該分野で公知である。Ｋｒｉｅｇ  ＡＭ（２００１）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ９：２４９−５２。これらは、いわゆるクラスＢ  ＣｐＧオリゴヌクレオチド（ＯＤＮ）（これは、Ｂ細胞の強力なアクチベーターである）、およびクラスＡ  ＣｐＧ  ＯＤＮ（これは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の強力なアクチベーターである）である。これらの免疫刺激配列に加えて、少なくとも２つの種類の中和配列が公知であり、この種類としては、ＣＧの前にＣがあるかまたはＣＧの後にＧがあるＣｐＧ配列（Ｋｒｉｅｇ  ＡＭら（１９９８），Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９５：１２６３１−１２６３６）、およびＣＧがメチル化されているＤＮＡ配列が、挙げられる。中和モチーフは、他の非刺激モチーフ中に存在する場合には特定の程度の免疫刺激能力を有するが、他の免疫刺激モチーフの状況に存在する場合にはその他のモチーフの免疫刺激能力を減少するように働く、モチーフである。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
（発明の要旨）
新規な種類の免疫刺激核酸が、本明細書中で提供される。いくつかの場合、これらの核酸は、ＣＧリッチなパリンドロームモチーフまたはＣＧリッチな中和モチーフを有する。本出願人は、配列ＣＧの反復からなる中和モチーフ（例えば、ＣＧＣＧＣＧ）または前にＣが存在するＣＧジヌクレオチドからなる中和モチーフ（すなわち、ＣＣＧ）および／もしくは後ろにＧが存在するＣＧジヌクレオチドからなる中和モチーフ（すなわち、ＣＧＧ、ＣＣＧＧ）を含む、オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）を以前に認識して記載した。これらの中和モチーフは、複数の読出し情報（例えば、ＩＬ−６の分泌、ＩＬ−１２の分泌、ＩＦＮ−γの分泌、ＴＮＦ−αの分泌、および抗原特異的免疫応答の誘導）に対する、ＣｐＧ含有ＯＤＮの刺激効果をいくらか減少させると考えられた。Ｋｒｉｅｇ  ＡＭら（１９９８）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９５：１２６３１−６。
【０００４】
本発明は、刺激モチーフと中和モチーフとの組み合わせを含む特定のＯＤＮが非常に免疫刺激性であるという、本出願による驚くべき発見に一部基づく。本発明はまた、特定のＣＧリッチなパリンドローム配列（中和モチーフを含むパリンドローム配列を含む）を有するＯＤＮが非常に免疫刺激性であるという、本出願による驚くべき発見にも基づく。従って、その中和モチーフは、パリンドローム配列が非常に免疫刺激性である状況において、存在し得るが、必ずしも存在する必要はない。
【０００５】
さらに、本発明の免疫刺激ＯＤＮは、異なる２つの種類のＣｐＧ  ＯＤＮ（Ｂ細胞を特徴的に活性化するＣｐＧ  ＯＤＮ（クラス  Ｂ  ＣｐＧ  ＯＤＮ）、およびＮＫ細胞を特徴的に活性化してインターフェロン（ＩＦＮ）−αの産生を誘導するＣｐＧ  ＯＤＮ（クラスＡ  ＣｐＧ  ＯＤＮ））の両方と以前に関係付けられた、免疫刺激効果を有する。従って、本発明の新規な免疫刺激ＯＤＮは、クラスＡ  ＣｐＧ  ＯＤＮまたはクラス  Ｂ  ＣｐＧ  ＯＤＮのいずれとも異なるスペクトルの免疫刺激効果を有する。本発明の新規な種類の免疫刺激ＯＤＮは、Ｃ型  ＣｐＧ  ＯＤＮと呼ばれる。以下により詳細に記載されるように、特定の実施形態において、本発明のＯＤＮは、モチーフの組み合わせを含み、その組み合わせにおいて、１つのモチーフは、ＣＧリッチなパリンドロームであるかもしく中和モチーフであり、そして別のモチーフは、刺激モチーフ（例えば、ＣｐＧモチーフ）であるかもしくは配列ＴＣＧＴＣＧである。
【０００６】
いくつかの局面において、長さが１４ヌクレオチド〜１００ヌクレオチドの免疫刺激核酸が、提供される。この核酸は、式５’Ｘ１ＤＣＧＨＸ２３’を有する。Ｘ１およびＸ２は、独立して０ヌクレオチド長〜１０ヌクレオチド長の任意の配列である。Ｄは、Ｃ以外のヌクレオチドである。Ｃは、シトシンである。Ｇは、グアニンである。Ｈは、Ｇ以外のヌクレオチドである。この核酸配列はまた、Ｘ１のすぐ５’側またはＸ２のすぐ３’側に位置する、ＰおよびＮからなる群より選択される核酸配列をさらに含む。Ｎは、Ｂ細胞中和配列である。Ｎは、ＣＧＧトリヌクレオチドで始まりかつ少なくとも１０ヌクレオチド長である。Ｐは、ＧＣリッチなパリンドロームを含む少なくとも１０ヌクレオチド長の配列である。
【０００７】
いくつかの実施形態において、その免疫刺激核酸は、５’ＮＸ１ＤＣＧＨＸ２３’、５’Ｘ１ＤＣＧＨＸ２Ｎ３’、５’ＰＸ１ＤＣＧＨＸ２３’、５’Ｘ１ＤＣＧＨＸ２Ｐ３’、５’Ｘ１ＤＣＧＨＸ２ＰＸ３３’、５’Ｘ１ＤＣＧＨＰＸ３３’、５’ＤＣＧＨＸ２ＰＸ３３’、５’ＴＣＧＨＸ２ＰＸ３３’、または５’ＤＣＧＨＰＸ３３’である。Ｘ３は、０ヌクレオチド長〜１０ヌクレオチド長の任意の配列である。他の実施形態において、その免疫刺激核酸は、５’ＤＣＧＨＰ３’である。
【０００８】
必要に応じて、Ｄおよび／またはＨは、チミン（Ｔ）である。
【０００９】
他の実施形態において、ＨはＴであり、そしてＸ２は、ＣＧ、ＣＧＴ、ＣＧＴＴ、ＣＧＴＴＴ、またはＣＧＴＴＴＴである。
【００１０】
他の実施形態によると、ＨはＴであり、そしてＸ２は、ＣＧまたはＣＧＴＴＴＴである。
【００１１】
他の実施形態によると、Ｃは、メチル化されていない。
【００１２】
いくつかの実施形態において、Ｎは、少なくとも４つのＣＧジヌクレオチド、および２つ以下のＣＣＧトリヌクレオチドを含む。
【００１３】
必要に応じて、Ｐは、少なくとも１つのイノシンを含む。
【００１４】
この核酸はまた、５’末端または３’末端にポリＴ配列を含み得る。
【００１５】
長さが１３ヌクレオチド〜１００ヌクレオチドの免疫刺激核酸が、本発明の他の局面に従って提供される。この核酸は、式５’Ｎ１ＰｙＧＮ２Ｐ３’を有する。Ｇは、グアニンである。
【００１６】
Ｎ１は、１ヌクレオチド長〜６ヌクレオチド長の任意の配列である。いくつかの実施形態において、Ｎ１は、少なくとも５０％ピリミジンであり、好ましくは、少なくとも５０％Ｔである。他の実施形態において、Ｎ１は、少なくとも１つのＣＧモチーフ、少なくとも１つのＴＣＧモチーフ、少なくとも１つのＣＩモチーフ、少なくとも１つのＴＣＩモチーフ、少なくとも１つのＩＧモチーフ、または少なくとも１つのＴＩＧモチーフを含む。他の実施形態において、Ｎ１は、ＴＣＧＧまたはＴＣＧＨである。Ｈは、Ｇ以外のヌクレオチドである。
【００１７】
Ｐｙは、ピリミジンである。いくつかの実施形態において、Ｐｙは、非メチル化Ｃである。
【００１８】
Ｎ２は、０ヌクレオチド長〜３０ヌクレオチド長の任意の配列である。いくつかの実施形態において、Ｎ２は、少なくとも５０％がピリミジンであるか、または少なくとも５０％がＴである。他の実施形態において、Ｎ２は、いかなるポリＧモチーフもポリＡモチーフも含まない。
【００１９】
Ｐは、少なくとも１０ヌクレオチド長の配列を含む、ＧＣリッチなパリンドロームである。いくつかの実施形態において、Ｐは、完全にパリンドロームである。他の実施形態において、Ｐは、１個と３個との間の個数連続する介在ヌクレオチドを有するパリンドロームである。必要に応じて、その介在ヌクレオチドは、ＴＧであり得る。他の実施形態において、Ｐは、少なくとも３つのＣヌクレオチド、少なくとも４つのＣヌクレオチド、もしくは少なくとも５つのＣヌクレオチド、および少なくとも３つのＧヌクレオチド、少なくとも４つのＧヌクレオチド、もしくは少なくとも５つのＧヌクレオチドを含む。他の実施形態によると、Ｐは、少なくとも１つのイノシンを含む。
【００２０】
１実施形態において、このＧＣリッチなパリンドロームは、少なくとも３分の２がＧおよびＣである塩基含量を有する。別の実施形態において、このＧＣリッチなパリンドロームは、少なくとも８１％がＧおよびＣである塩基含量を有する。いくつかの実施形態において、このＧＣリッチなパリンドロームは、少なくとも１２ヌクレオチド長である。このＧＣリッチなパリンドロームは、ＣおよびＧのみから構成され得る。いくつかの実施形態において、このＧＣリッチなパリンドロームは、ＣでもＧでもない少なくとも１つのヌクレオチドを含み得る。
【００２１】
いくつかの実施形態において、このＧＣリッチなパリンドロームは、少なくとも１つのＣＧＧトリマー、少なくとも１つのＣＣＧトリマー、または少なくとも１つのＣＧＣＧテトラマーを含む。いくつかの実施形態において、このＧＣリッチなパリンドロームは、少なくとも４つのＣＧジヌクレオチドを含む。特定の好ましい実施形態において、このＧＣリッチなパリンドロームは、中心にあるＣＧジヌクレオチドを有する。
【００２２】
特定の実施形態において、このＧＣリッチなパリンドロームは、ＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ（配列番号２３）、ＣＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＧ（配列番号２８）、ＣＧＡＣＧＡＴＣＧＴＣＧ（配列番号６８）またはＣＧＡＣＧＴＡＣＧＴＣＧ（配列番号６９）である。
【００２３】
特定の実施形態において、このＧＣリッチなパリンドロームは、ＣＧＣＧＣＧＣＧＣＧＣＧ（配列番号２９）でも、ＧＣＧＣＧＣＧＣＧＣＧＣ（配列番号３０）でも、ＣＣＣＣＣＣＧＧＧＧＧＧ（配列番号３１）でも、ＧＧＧＧＧＧＣＣＣＣＣＣ（配列番号３２）でも、ＣＣＣＣＣＧＧＧＧＧ（配列番号３３）でも、ＧＧＧＧＧＣＣＣＣＣ（配列番号３４）でもない。
【００２４】
いくつかの実施形態において、Ｎ１ＰｙＧＮ２は、ＴＴＴＴＴＣＧ、ＴＣＧ、ＴＴＣＧ、ＴＴＴＣＧ、ＴＴＴＴＣＧ、ＴＣＧＴ、ＴＴＣＧＴ、ＴＴＴＣＧＴ、およびＴＣＧＴＣＧＴからなる群より選択される、配列である。
【００２５】
長さが１３ヌクレオチド〜１００ヌクレオチドの免疫刺激核酸が、本発明の他の局面に従って提供される。この核酸は、式：５’Ｎ１ＰｙＧ／ＩＮ２Ｐ３’を有する。Ｇ／Ｉは、ＧまたはＩのいずれかである単一のヌクレオチドを指す。Ｇはグアニンであり、Ｉはイノシンである。
【００２６】
Ｎ１は、１ヌクレオチド長〜６ヌクレオチド長の任意の配列である。Ｐｙは、ピリミジンである。Ｎ２は、０ヌクレオチド長〜３０ヌクレオチド長の任意の配列である。
【００２７】
Ｐは、パリンドロームを含む少なくとも１０ヌクレオチド長の配列である。いくつかの実施形態において、Ｐは、ＧＣリッチなパリンドロームである。他の実施形態において、Ｐは、ＩＣリッチなパリンドロームである。
【００２８】
いくつかの実施形態において、Ｎ１ＰｙＩＮ２は、ＴＣＩＴＣＩＴＴＴＴ（配列番号４７）である。
【００２９】
本明細書中に記載される核酸分子は、任意の型の骨格組成を有し得る。いくつかの実施形態において、この免疫刺激核酸は、完全にヌクレアーゼ耐性である骨格を有する。このヌクレアーゼ耐性骨格は、ホスホロチオエート結合から構成され得る。他の実施形態において、この免疫刺激核酸は、完全にホスホジエステル骨格を有する。なお他の実施形態において、この免疫刺激核酸は、キメラ骨格を有する。１実施形態において、この免疫刺激核酸は、ＣＧモチーフ間、ＣＩモチーフ間、またはＩＧモチーフ間に少なくとも１つのホスホジエステル結合を有する。あるいは、本発明のＯＤＮは、微粒子、エマルジョン、または他の手段を用いて、インビボでの迅速な消化を回避するように処方される。
【００３０】
本明細書中に記載される免疫刺激核酸は、種々の長さを有する。いくつかの実施形態において、この免疫刺激核酸は、長さが１３ヌクレオチド〜１００ヌクレオチド、１３ヌクレオチド〜４０ヌクレオチド、１３ヌクレオチド〜３０ヌクレオチド、１４ヌクレオチド〜１００ヌクレオチド、１４ヌクレオチド〜４０ヌクレオチド、または１４ヌクレオチド〜３０ヌクレオチドであるか、またはこれらの間の任意の整数個のヌクレオチドである。
【００３１】
以下の配列のうちの１つを有する免疫刺激核酸もまた、提供される：ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ（配列番号１）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＧ（配列番号４）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＧＣＧ（配列番号５）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＣＧ（配列番号６）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＣＣＧＣＧＣＧＧ（配列番号７）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴＴＴＴＴ（配列番号１２）、ＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ（配列番号１３）、ＴＺＧＴＺＧＴＴＴＴＺＧＧＺＧＺＧＺＧＺＺＧ（配列番号１４）（Ｚは、５−メチルシトシンである）、ＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＣ（配列番号１９）、ＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴＣＧＴＣＧＴＴＴ（配列番号１１）、ＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＣ（ＯＤＮ  ２１３６、配列番号１９）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＡＣＧ（ＯＤＮ  ５５１３、配列番号６４）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＴＣＧＧＣＣＧＣＣＧ（ＯＤＮ  ５５１４、配列番号６５）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＡＣＧＧＣＣＧＣＣＧ（ＯＤＮ  ５５１５、配列番号６６）、およびＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＴＣＧ（ＯＤＮ  ５５１６、配列番号６７）。
【００３２】
さらに本発明の他の実施形態に従って、この免疫刺激核酸は、以下の配列のうちの１つである：ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ（ＯＤＮ  ２３９５）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＧ（ＯＤＮ  ２４２９）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＧＣＧ（ＯＤＮ  ２４３０）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＣＧ（ＯＤＮ  ２４３１）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＣＣＧＣＧＣＧＧ（ＯＤＮ  ２４３２）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴＴＴＴＴ（ＯＤＮ  ２４５２）、ＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ（ＯＤＮ  ５３１５）、ＴＺＧＴＺＧＴＴＴＴＺＧＧＺＧＺＧＺＧＺＺＧ（ＯＤＮ  ５３２７、Ｚは、５−メチルシトシンである）、ＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＣ（ＯＤＮ  ２１３６）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＡＣＧ（ＯＤＮ  ５５１３）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＴＣＧＧＣＣＧＣＣＧ（ＯＤＮ  ５５１４）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＡＣＧＧＣＣＧＣＣＧ（ＯＤＮ  ５５１５）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＴＣＧ（ＯＤＮ  ５５１６）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ（ＯＤＮ  ２３９５）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＧ（ＯＤＮ  ２４２９）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＧＣＧ（ＯＤＮ  ２４３０）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＣＧ（ＯＤＮ  ２４３１）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＣＣＧＣＧＣＧＧ（ＯＤＮ  ２４３２）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴＴＴＴＴ（ＯＤＮ  ２４５２）、ＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ（ＯＤＮ  ５３１５）、ＴＺＧＴＺＧＴＴＴＴＺＧＧＺＧＺＧＺＧＺＺＧ（ＯＤＮ  ５３２７、Ｚは、５−メチルシトシンである）、ＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＣ（ＯＤＮ  ２１３６）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＡＣＧ（ＯＤＮ  ５５１３）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＴＣＧＧＣＣＧＣＣＧ（ＯＤＮ  ５５１４）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＡＣＧＧＣＣＧＣＣＧ（ＯＤＮ  ５５１５）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＴＣＧ（ＯＤＮ  ５５１６）、ＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴＣＧＴＣＧＴＴＴ（ＯＤＮ  ２４５１）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＣＧＡＣＧＧＣＣＧＴＣＧ（ＯＤＮ  ２０１７３、配列番号７１）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＣＧＡＣＧＡＴＣＧＴＣＧ（ＯＤＮ  ２０１７６、配列番号７２）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＣＧＡＣＧＴＡＣＧＴＣＧ（ＯＤＮ  ２０１７７、配列番号７３）、ＴＣＧＴＣＧＣＧＡＣＧＧＣＣＧＴＣＧ（ＯＤＮ  ２０１７８、配列番号７４）、ＴＣＧＴＣＧＣＧＡＣＧＡＴＣＧＴＣＧ（ＯＤＮ  ２０１７９、配列番号７５）、ＴＣＧＴＣＧＣＧＡＣＧＴＡＣＧＴＣＧ（ＯＤＮ  ２０１８０、配列番号７６）、ＴＣＧＴＴＴＴＴＴＴＣＧＡＣＧＧＣＣＧＴＣＧ（ＯＤＮ  ２０１８４、配列番号７７）、ＴＣＧＴＴＴＴＴＴＴＣＧＡＣＧＡＴＣＧＴＣＧ（ＯＤＮ  ２０１８５、配列番号７８）、およびＴＣＧＴＴＴＴＴＴＴＣＧＡＣＧＴＡＣＧＴＣＧ（ＯＤＮ  ２０１８６、配列番号７９）。
【００３３】
特定の実施形態によると、この免疫刺激核酸は、配列ＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴＣＧＴＣＧＴＴＴ（ＯＤＮ  ２４５１，配列番号１１）を含む。特定の実施形態において、この免疫刺激核酸は、配列ＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴＣＧＴＣＧＴＴＴ（ＯＤＮ  ２４５１）である。
【００３４】
本明細書中に記載される免疫刺激核酸と薬学的受容可能なキャリアとを含む、薬学的組成物が、本発明の他の局面に従って提供される。
【００３５】
本発明の他の局面において、１型インターフェロン（ＩＦＮ）の発現を誘導するための方法が、提供される。この方法は、１型ＩＦＮを発現可能な細胞を、１型ＩＦＮの発現を誘導するに有効な量の本明細書中に記載の免疫刺激核酸と接触させる工程を包含する。
【００３６】
本発明は、他の局面において、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化するための方法である。この方法は、ＮＫ細胞を、そのＮＫ細胞を活性化するに有効な量の本明細書中に記載の免疫刺激核酸と接触させる工程を包含する。
【００３７】
なお他の局面において、本発明は、感染症を処置するための方法であり、この方法は、感染症を有する被験体または感染症を発症するリスクを有する被験体に、その感染症を処置または予防するに有効な量の本明細書中に記載の免疫刺激核酸を投与する工程による。いくつかの実施形態において、その被験体は、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、および寄生生物感染からなる群より選択される感染症を有するか、またはその感染症を発症するリスクを有する。
【００３８】
特定の実施形態において、この方法は、本発明の免疫刺激核酸単独を、上記感染症を処置または予防するために投与する工程を包含する。特定の実施形態において、本発明のこの局面による方法は、その被験体に抗生物質を投与する工程をさらに包含し、この抗生物質は、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、または抗寄生生物剤であり得る。
【００３９】
他の局面において、本発明は、アレルギー状態を処置するための方法であり、この方法は、アレルギー状態を有する被験体またはアレルギー状態を発症するリスクを有する被験体に、そのアレルギー状態を処置または予防するに有効な量の本明細書中に記載の免疫刺激核酸を投与する工程による。いくつかの実施形態において、そのアレルギー状態は、アレルギー性喘息である。１実施形態において、そのアレルギー状態は、喘息である。特定の実施形態において、この方法は、本発明の免疫刺激核酸単独を、上記アレルギー状態を処置または予防するために投与する工程を包含する。特定の実施形態において、本発明のこの局面による方法は、喘息治療薬／アレルギー治療薬（例えば、ステロイド、抗ヒスタミン剤、およびプロスタグランジン誘導剤）を、上記非検体に投与する工程をさらに包含する。
【００４０】
癌を処置するための方法が、本発明の他の局面によって提供される。この方法は、癌を有する被験体または癌を発症するリスクを有する被験体に、その癌を処置または予防するに有効な量の本明細書中に記載の免疫刺激核酸を投与する工程を包含する。いくつかの実施形態において、その癌は、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨の癌、脳および中枢神経系の癌、乳癌、子宮頸部癌、絨毛癌、結腸および直腸の癌、結合組織の癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼の癌、頭部および頸部の癌、胃癌、上皮内癌、腎臓癌、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌および非小細胞肺癌）、リンパ腫（ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫を包含する）、黒色腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、口腔癌（例えば、口唇の癌、舌の癌、口の癌、および咽喉癌）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、腎臓癌、呼吸器系の癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、泌尿器系癌、ならびに他の癌腫および他の肉腫からなる群より選択される。
【００４１】
特定の実施形態において、この方法は、本発明の免疫刺激核酸単独を、上記癌を処置または予防するために投与する工程を包含する。特定の実施形態において、本発明のこの局面による方法は、抗癌剤または抗癌処置（例えば、化学療法剤、放射線）を上記被験体に投与する工程をさらに包含する。
【００４２】
本発明の限定は各々、本発明の種々の実施形態を包含し得る。従って、他の任意の要素または要素の組み合わせを包含する本発明の制限の各々が、本発明の各局面に包含され得ることが、認識される。
【００４３】
（発明の詳細な説明）
特定のオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）（これは、少なくとも２つの別個のモチーフを含む）が、免疫系の細胞に対して、独特で望ましい刺激効果を有することが、発見された。これらのＯＤＮのうちのいくつかは、従来の「刺激」ＣｐＧ配列および「ＧＣリッチな」モチーフまたは「Ｂ細胞中和」モチーフの両方を有する。これらの組み合わせモチーフ核酸は、従来の「クラスＢ」ＣｐＧ  ＯＤＮ（これは、Ｂ細胞活性化および樹状細胞（ＤＣ）活性化の強力な誘導物質である）に関係する効果と、より最近記載された種類の免疫刺激核酸（「クラスＡ」ＣｐＧ  ＯＤＮ（これは、ＩＦＮ−αおよびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性化の強力な誘導物質であるが、Ｂ細胞活性化およびＤＣ活性化の比較的弱い誘導物質である）に関係する効果との間のどこかに入る、免疫刺激効果を有する。Ｋｒｉｅｇ  ＡＭら（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ  ３７４：５４６−９；Ｂａｌｌａｓ  ＺＫら（１９９６）Ｊ  ｌｍｍｕｎｏｌ  １５７：１８４０−５；Ｙａｍａｍｏｔｏ  Ｓら（１９９２）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４８：４０７２−６。好ましいクラスＢ  ＣｐＧ  ＯＤＮは、しばしばホスホロチオエート骨格を有し、好ましいクラスＡ  ＣｐＧ  ＯＤＮは、混合骨格もしくはキメラ骨格を有するが、この新規な種類の組み合わせモチーフ免疫刺激核酸は、いずれかの安定化された骨格（例えば、ホスホロチオエート骨格、キメラ骨格、またはホスホジエステル骨格）を有し得る。
【００４４】
１局面において、本発明は、この新規な組み合わせモチーフ免疫刺激核酸のクラスに属する、免疫刺激核酸を提供する。そのＢ細胞刺激ドメインは、式：５’Ｘ１ＤＣＧＨＸ２３’により規定される。ＤはＣ以外のヌクレオチドである。Ｃは、シトシンである。Ｇは、グアニンである。Ｈは、Ｇ以外のヌクレオチドである。
【００４５】
Ｘ１およびＸ２は、０ヌクレオチド長〜１０ヌクレオチド長の任意の配列である。Ｘ１は、ＣＧを含み得、この場合、好ましくは、このＣＧの直前にあるＴが存在する。いくつかの実施形態において、ＤＣＧは、ＴＣＧである。Ｘ１は、好ましくは、長さが０ヌクレオチド〜６ヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、Ｘ２は、いかなるポリＧモチーフもポリＡモチーフも含まない。他の実施形態において、この免疫刺激核酸は、５’末端または３’末端にポリＴ配列を有する。本明細書中で使用される場合、「ポリＡ」または「ポリＴ」とは、それぞれ、４個以上連続して延びるＡまたは４個以上連続して延びるＴ（例えば、５’ＡＡＡＡ３’または５’ＴＴＴＴ３’）を指す。
【００４６】
本明細書中で使用される場合、「ポリＧ末端」とは、核酸の５’末端または３’末端から始まって４個以上連続して延びるＧ（例えば、５’ＧＧＧＧ３’）を指す。本明細書中で使用される場合、「ポリＧ核酸」とは、式５’Ｘ１Ｘ２ＧＧＧＸ３Ｘ４３’を有する核酸を指し、この式において、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、およびＸ４は、ヌクレオチドであり、好ましくは、Ｘ３およびＸ４のうちの少なくとも１つが、Ｇである。
【００４７】
この式の下でＢ細胞刺激ドメインのために好ましいいくつかの設計は、ＴＴＴＴＴＣＧ、ＴＣＧ、ＴＴＣＧ、ＴＴＴＣＧ、ＴＴＴＴＣＧ、ＴＣＧＴ、ＴＴＣＧＴ、ＴＴＴＣＧＴ、ＴＣＧＴＣＧＴを含む。
【００４８】
この核酸の第２モチーフは、ＰまたはＮのいずれかと呼ばれ、Ｘ１のすぐ５’側またはＸ２のすぐ３’側に位置する。
【００４９】
Ｎは、Ｂ細胞中和配列であり、このＮは、ＣＧＧトリヌクレオチドで始まりかつ少なくとも１０ヌクレオチド長である。Ｂ細胞中和モチーフは、ＣＧの前にＣがあるかまたはＣＧの後にＧがある、少なくとも１つのＣｐＧ配列（Ｋｒｉｅｇ  ＡＭら（１９９８）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９５：１２６３１−１２６３６）およびＣＧのうちのＣがメチル化されているＣＧ含有ＤＮＡ配列が、挙げられる。本明細書中で使用される場合、「ＣｐＧ」とは、後に３’グアニン（Ｇ）が続きかつリン酸結合により連結している、５’シトシン（Ｃ）を指す。その５’ＣＧ３’の少なくともＣは、非メチル化状態でなければならない。中和モチーフとは、他の非刺激モチーフ中に存在する場合には特定の程度の免疫刺激能力を有するが、他の免疫刺激モチーフの状況に存在する場合にはその他のモチーフの免疫刺激能力を減少するように働く、モチーフである。
【００５０】
Ｐは、ＧＣリッチなパリンドロームを含む少なくとも１０ヌクレオチド長の配列である。本明細書中で使用される場合、「パリンドローム」および等価には「パリンドローム配列」とは、逆方向反復（すなわち、ＡＢＣＤＥＥ’Ｄ’Ｃ’Ｂ’Ａ’（ＡとＡ’と、ＢとＢ’と、などは、通常のワトソン−クリック塩基対を形成可能な塩基である）のような配列）を指す。
【００５１】
本明細書中で使用される場合、「ＧＣリッチなパリンドローム」とは、少なくとも３分の２がＧおよびＣの塩基組成を有する、パリンドロームを指す。いくつかの実施形態において、このＧＣリッチなドメインは、好ましくは、「Ｂ細胞刺激ドメイン」の３’側にある。従って、１０塩基長のＧＣリッチなパリンドロームの場合、このパリンドロームは、少なくとも８個のＧおよびＣを含む。１２塩基長のＧＣリッチなパリンドロームの場合、このパリンドロームはまた、少なくとも８個のＧおよびＣを含む。１４マーのＧＣリッチなパリンドロームにおいて、このパリンドロームのうちの少なくとも１０塩基が、ＧおよびＣである。いくつかの実施形態において、このＧＣリッチなパリンドロームは、ＧおよびＣのみから構成される。
【００５２】
いくつかの実施形態において、このＧＣリッチなパリンドロームは、少なくとも８１パーセントがＧおよびＣの塩基組成を有する。従って、そのような１０塩基長のＧＣリッチなパリンドロームの場合、このパリンドロームは、ＧおよびＣのみから構成される。そのような１２塩基長のＧＣリッチなパリンドロームの場合、このパリンドロームのうちの少なくとも１０塩基（８３パーセント）がＧおよびＣであることが、好ましい。いくつかの好ましい実施形態において、１２塩基長のＧＣリッチなパリンドロームが、ＧおよびＣのみから構成される。１４マーのＧＣリッチなパリンドロームの場合、このパリンドロームのうちの少なくとも１２塩基（８６パーセント）が、ＧおよびＣである。いくつかの好ましい実施形態において、１４塩基長のＧＣリッチなパリンドロームが、ＧおよびＣのみから構成される。ＧＣリッチなパリンドロームのＣは、メチル化されていない状態であり得るか、またはそれらのＣは、メチル化状態であり得る。
【００５３】
一般に、このドメインは、少なくとも３つのＣおよびＧを有し、より好ましくは各々４つを有し、最も好ましくは各々５つ以上を有する。このドメイン中のＣおよびＧの数は、同一である必要はない。これらのＣおよびＧは、それらのＣおよびＧが自己相補的二重鎖を形成可能である（すなわち、パリンドロームである）ように整列されること（例えば、ＣＣＧＣＧＣＧＧ）が、好ましい。これは、ＡまたはＴによって中断され得るが、自己相補性が、例えば、モチーフＣＧＡＣＧＴＴＣＧＴＣＧ（配列番号８０）またはＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧ（配列番号８１）中のように少なくとも部分的に保存されていることが、好ましい。相補性が保存されない場合、非相補的塩基対はＴＧであることが、好ましい。好ましい実施形態において、このパリンドローム一部ではない３個以下（好ましくは２個以下、最も好ましくは１個だけ）連続する塩基が存在する。いくつかの実施形態において、このＧＣリッチなパリンドロームは、少なくとも１つのＣＧＧトリマー、少なくとも１つのＣＣＧトリマー、または少なくとも１つのＣＧＣＧテトラマーを含む。他の実施形態において、このＧＣリッチなパリンドロームは、ＣＣＣＣＣＣＧＧＧＧＧＧ（配列番号３１）でも、ＧＧＧＧＧＧＣＣＣＣＣＣ（配列番号３２）でも、ＣＣＣＣＣＧＧＧＧＧ（配列番号３３）でも、ＧＧＧＧＧＣＣＣＣＣ（配列番号３４）でもない。
【００５４】
このＧＣリッチな領域のＧのうちの少なくとも１つは、イノシン（Ｉ）で置換され得る。いくつかの実施形態において、Ｐは、１個より多くのＩを含む。
【００５５】
特定の実施形態において、この免疫刺激核酸は、以下の式のうちの１つを有する：５’ＮＸｌＤＣＧＨＸ２３’、５’ＸｌＤＣＧＨＸ２Ｎ３’、５’ＰＸｌＤＣＧＨＸ２３’、５’ＸｌＤＣＧＨＸ２Ｐ３’、５’ＸｌＤＣＧＨＸ２ＰＸ３３’、５’ＸｌＤＣＧＨＰＸ３３’、５’ＤＣＧＨＸ２ＰＸ３３’、５’ＴＣＧＨＸ２ＰＸ３３’、５’ＤＣＧＨＰＸ３３’または５’ＤＣＧＨＰ３’。
【００５６】
他の局面において、本発明は、式５’Ｎ１ＰｙＧＮ２３’により規定される免疫刺激核酸を提供する。Ｎ１は、１ヌクレオチド長〜６ヌクレオチド長の任意の配列である。Ｐｙは、ピリミジンである。Ｇは、グアニンである。Ｎ２は、０ヌクレオチド長〜３０ヌクレオチド長の任意の配列である。Ｐは、ＧＣリッチなパリンドロームを含む少なくとも１０ヌクレオチド長の配列である。
【００５７】
Ｎ１およびＮ２は、５０％より多くのピリミジンを含み得、より好ましくは、５０％より多いＴを含み得る。Ｎ１は、ＣＧを含み得、この場合、好ましくは、このＣＧの直前にあるＴが存在する。いくつかの実施形態において、Ｎ１ＰｙＧは、ＴＣＧであり（例えば、ＯＤＮ  ５３７６（これは、５’ＴＣＧＧを有する））、最も好ましくはＴＣＧＮ２（Ｎ２はＧではない）である。
【００５８】
Ｎ１ＰｙＧＮ２Ｐは、１つ以上のイノシン（Ｉ）ヌクレオチドを含み得る。Ｎ１中のＣまたはＧのいずれかが、イノシンによって置換され得るが、ＣｐＩは、ＩｐＧであることが好ましい。イノシン置換（例えば、ＩｐＧ）のために、その最適な活性は、「セミソフトな（ｓｅｍｉ−ｓｏｆｔ）」骨格またはキメラ骨格の使用によって達成され得、この骨格において、そのＩＧ間またはＣＩ間の結合は、ホスホジエステル結合である。Ｎ１は、少なくとも１つのＣＩモチーフ、ＴＣＩモチーフ、ＩＧモチーフまたはＴＩＧモチーフを含み得る。
【００５９】
特定の実施形態において、Ｎ１ＰｙＧＮ２は、ＴＴＴＴＴＣＧ、ＴＣＧ、ＴＴＣＧ、ＴＴＴＣＧ、ＴＴＴＴＣＧ、ＴＣＧＴ、ＴＴＣＧＴ、ＴＴＴＣＧＴ、およびＴＣＧＴＣＧＴからなる群より選択される、配列である。
【００６０】
他の局面において、本発明は、式５’Ｎ１ＰｙＧ／ＩＮ２Ｐ３’により規定される免疫刺激核酸を提供する。Ｎ１は、１ヌクレオチド長〜６ヌクレオチド長の任意の配列である。Ｐｙは、ピリミジンである。Ｇ／Ｉは、ＧまたはＩのいずれかである単一のヌクレオチドを指す。Ｇはグアニンであり、Ｉはイノシンである。Ｎ２は、０ヌクレオチド長〜３０ヌクレオチド長の任意の配列である。Ｐは、少なくとも１０ヌクレオチド長の配列を含む、ＧＣリッチなパリンドロームであるかまたはＩＣリッチなパリンドロームである。いくつかの実施形態において、Ｎ１ＰｙＩＮ２は、ＴＣＩＴＣＩＴＴＴＴ（配列番号４７）である。
【００６１】
組み合わせモチーフ免疫刺激核酸（これは、上記の式によって記載される）の非限定的ないくつかの例としては、以下が挙げられる：ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ（ＯＤＮ  ２３９５）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＧ（ＯＤＮ  ２４２９）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＧＣＧ（ＯＤＮ  ２４３０）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＣＧ（ＯＤＮ  ２４３１）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＣＣＧＣＧＣＧＧ（ＯＤＮ  ２４３２）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴＴＴＴＴ（ＯＤＮ  ２４５２）、ＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ（ＯＤＮ  ５３１５）、ＴＺＧＴＺＧＴＴＴＴＺＧＧＺＧＺＧＺＧＺＺＧ（ＯＤＮ  ５３２７、Ｚは、５−メチルシトシンである）、ＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＣ（ＯＤＮ  ２１３６）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＡＣＧ（ＯＤＮ  ５５１３）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＴＣＧＧＣＣＧＣＣＧ（ＯＤＮ  ５５１４）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＡＣＧＧＣＣＧＣＣＧ（ＯＤＮ  ５５１５）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＴＣＧ（ＯＤＮ  ５５１６）、ＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴＣＧＴＣＧＴＴＴ（ＯＤＮ  ２４５１）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＣＧＡＣＧＧＣＣＧＴＣＧ（ＯＤＮ  ２０１７３），ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＣＧＡＣＧＡＴＣＧＴＣＧ（ＯＤＮ  ２０１７６）、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＣＧＡＣＧＴＡＣＧＴＣＧ（ＯＤＮ  ２０１７７）、ＴＣＧＴＣＧＣＧＡＣＧＧＣＣＧＴＣＧ（ＯＤＮ  ２０１７８），ＴＣＧＴＣＧＣＧＡＣＧＡＴＣＧＴＣＧ（ＯＤＮ  ２０１７９）、ＴＣＧＴＣＧＣＧＡＣＧＴＡＣＧＴＣＧ（ＯＤＮ  ２０１８０），ＴＣＧＴＴＴＴＴＴＴＣＧＡＣＧＧＣＣＧＴＣＧ（ＯＤＮ  ２０１８４）、ＴＣＧＴＴＴＴＴＴＴＣＧＡＣＧＡＴＣＧＴＣＧ（ＯＤＮ  ２０１８５）、ＴＣＧＴＴＴＴＴＴＴＣＧＡＣＧＴＡＣＧＴＣＧ（ＯＤＮ  ２０１８６），ＴＩＧＴＩＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＧ（ＯＤＮ  ５５６９、配列番号６３）およびＴＣＩＴＣＩＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＧ（ＯＤＮ  ５５７０、配列番号７０）。
【００６２】
本明細書中で使用される場合、「核酸」および「オリゴヌクレオチド」は、互換可能に使用される。そして「核酸」および「オリゴヌクレオチド」は、複数のヌクレオチド（すなわち、リン酸基に結合しかつ交換可能な有機塩基（これは、置換ピリミジン（例えば、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）、もしくはウラシル（Ｕ））または置換プリン（例えば、アデニン（Ａ）もしくはグアニン（Ｇ））のいずれかである）に結合した、糖（例えば、リボースもしくはデオキシリボース）を含む分子）を意味することを指す。本明細書中で使用される場合、これらの用語は、オリゴデオキシヌクレオチドならびにオリゴデオキシリボヌクレオチド（ＯＤＮ）を指す。これらの用語はまた、ポリヌクレオシド（すなわち、ポリヌクレオチド−リン酸基）および他の任意の有機塩基含有ポリマーも包含する。核酸分子は、既存の核酸供給源（例えば、ゲノム核酸またはｃＤＮＡ）から得られ得るが、好ましくは合成分子である（たとえば、核酸合成によって生成される）。
【００６３】
用語核酸および用語オリゴヌクレオチドはまた、例えば塩基および／または糖において置換もしくは改変を含む、核酸またはオリゴヌクレオチドも包含する。例えば、これらの用語は、３’位置でヒドロキシル基以外の低分子量有機基に共有結合し、かつ５’位置でリン酸基以外の低分子量有機基に共有結合している、骨格糖を有する核酸を包含する。そのように改変された核酸としては、２’−Ｏ−アルキル化リボース基が挙げられ得る。さらに、改変核酸は、リボースの代わりにアラビノースのような糖を含み得る。そのように改変された核酸は、骨格組成が不均質であり得、それにより、ともに連結したポリマー単位の可能なすべての組み合わせ（例えば、ペプチド核酸（これは、核酸塩基を含むアミノ酸骨格を有する）を含み得る。いくつかの実施形態において。この核酸は、骨格組成が均質である。核酸はまた、置換プリンおよび置換ピリミジン（例えば、Ｃ−５プロピン改変塩基）を包含する。Ｗａｇｎｅｒ  ＲＷら（１９９６）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １４：８４０−４。プリンおよびピリミジンとしては、アデニン、シトシン、グアニン、チミジン、５−メチルシトシン、２−アミノプリン、２−アミノ−６−クロロプリン、２，６−ジアミノプリン、ヒポキサンチン、ならびに天然に存在する他の核酸塩基（ｎｕｃｌｅｏｂａｓｅ）および天然に存在しない他の核酸塩基、置換芳香族部分および非置換芳香族部分が挙げられるが、これらに限定されない。他のこのような改変は、当業者に周知である。
【００６４】
本発明の免疫刺激オリゴヌクレオチドは、天然のＲＮＡおよびＤＮＡ（これらは、ヌクレオシド間ホスホジエステル結合、β−Ｄ−リボース単位および／または天然のヌクレオシド塩基（アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル）を含む）と比較して種々の化学的改変および置換を包含し得る。化学的改変の例は、当業者に公知であり、そして例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ  Ｅら（１９９０）Ｃｌｉｅｍ  Ｒｅｖ  ９０：５４３；「Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｓ」，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ＆  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ編，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＵＳＡ  １９９３；Ｃｒｏｏｋｅ  ＳＴら（１９９６）Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  ３６：１０７−１２９；およびＨｕｎｚｉｋｅｒ  Ｊら（１９９５）Ｍｏｄ  Ｓｙｎｔｈ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ７：３３１−４１７に記載される。本発明によるオリゴヌクレオチドは、１つ以上の改変を含み得、各改変は、天然のＤＮＡまたはＲＮＡから構成される同じ配列のオリゴヌクレオチドと比較して、特定のヌクレオシド間ホスホジエステル結合および／または特定のβ−Ｄ−リボース単位および／または特定の天然ヌクレオシド塩基位置に位置する。
【００６５】
例えば、本発明は、１つ以上の改変を含み得かつ各改変が、
ａ）その糖リン酸骨格からの糖リン酸単位を別の単位によって置換すること、
ｂ）β−Ｄ−リボース単位を改変糖単位により置換すること、および
ｃ）天然ヌクレオシド塩基を改変ヌクレオシド塩基により置換すること、
から独立して選択される、オリゴヌクレオチドに関する。
【００６６】
そのオリゴヌクレオチドの化学的改変のより詳細な例は、以下の通りである。
【００６７】
糖リン酸骨格からの糖リン酸単位（すなわち、一緒になって糖リン酸単位を形成するβ−Ｄ−リボースおよびヌクレオシド間ホスホジエステル架橋）（すなわち、糖リン酸骨格は糖リン酸単位から構成されている）は、別の単位によって置換され得、ここで、他の単位は、例えば、「ホルホリノ誘導体」オリゴマー（例えば、Ｓｔｉｒｃｈａｋ  ＥＰら（１９８９）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  １７：６１２９−４１に記載される）を構成するのに適切である（すなわち、例えば、ホルホリノ誘導体単位による置換）か、またはポリアミド核酸（「ＰＮＡ」、Ｎｉｅｌｓｅｎ  ＰＥら（１９９４）Ｂｉｏｃｏｎｉｊｕｇ  Ｃｈｅｍ  ５：３−７に記載される）を構成するのに適切である（すなわち、ＰＮＡ骨格単位（例えば、２−アミノエチルグリシン）による置換）。
【００６８】
β−リボース単位またはβ−Ｄ−２’−デオキシリボース単位は、改変糖単位によって置換され得、この改変糖単位は、例えば、β−Ｄ−リボース、α−Ｄ−２’−デオキシリボース、Ｌ−２’−デオキシリボース、２’−Ｆ−２’−デオキシリボース、２’−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−リボース（好ましくは、２’−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルリボースは、２’−Ｏ−メチルリボースである）、２’−Ｏ−（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル−リボース、２’−［Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル］−リボース、２’−ＮＨ２−２’−デオキシリボース、β−Ｄ−キシロ−フラノース、α−アラビノフラノース、２，４−ジデオキシ−β−Ｄ−エリスロ−ヘキソ−ピラノース、および炭素環式糖アナログ（例えば、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ  Ｊ（１９９２）Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １１４：８３２０に記載される）および／または鎖状糖アナログ（例えば、Ｖａｎｄｅｎｄｒｉｅｓｓｃｈｅら（１９９３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４９：７２２３に記載される）および／またはビシクロ糖アナログ（例えば、Ｔａｒｋｏｖ  Ｍら（１９９３）Ｈｅｌｖ  Ｃｈｉｍ  Ａｃｔａ  ７６：４８１に記載される）から選択される。
【００６９】
天然ヌクレオシドは、改変ヌクレオシド塩基によって置換され得、その改変ヌクレオシド塩基は、例えば、ヒポキサンチン、ウラシル、ジヒドロウラシル、プソイドウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−アミノウラシル、５−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルウラシル、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルケニルウラシル、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキニルウラシル、５−（ヒドロキシメチル）ウラシル、５−クロロウラシル、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−ヒドロキシシトシン、５−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルシトシン、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルケニルシトシン、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキルシトシン、５−クロロシトシン、５−フルオロシトシン、５−ブロモシトシン、Ｎ２−ジメチルグアノシン、２，４−ジアミノ−プリン、８−アザプリン、置換７−デアザプリン（好ましくは、７−デアザ−７置換プリンおよび／もしくは７−デアザ−８置換プリン）、または天然ヌクレオシド塩基の他の改変から選択される。このリストは、例示であるようになっており、限定するものと解釈されるべきではない。
【００７０】
本明細書中で使用される場合、「免疫刺激核酸（ｉｍｍｕｎｅ  ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）」および等価には「免疫刺激核酸（ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）」は、免疫系の細胞の機能的局面を誘導する能力によって特徴付けられる、リボヌクレオ核酸またはデオキシリボ核酸、それらの誘導体もしくはアナログを指す。免疫系の細胞のそのような機能的局面としては、例えば、サイトカインもしくはケモカインの加工（ｅｌａｂｏｒａｔｉｏｎ）、細胞表面マーカーの発現、抗体の分泌、または抗原もしくは抗原保有膜結合標的に応答した他の活性もしくは抗原もしくは抗原保有膜結合標的に対する他の活性が挙げられる。
【００７１】
本発明における使用のために、本発明の核酸は、当該分野で周知の多数の手順のいずれか、例えば、β−シアノエチルホスホロアミダイト法（Ｂｅａｕｃａｇｅ  ＳＬおよびＣａｒｕｔｈｅｒｓ  ＭＨ（１９８１）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ  ２２：１８５９）；およびヌクレオシドＨ−ホスホネート法（Ｇａｒｅｇｇら（１９８６）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ  ２７：４０５１−４；Ｆｒｏｅｈｌｅｒら（１９８６）Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ  １４：５３９９−４０７；Ｇａｒｅｇｇら（１９８６）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ  ２７：４０５５−８；Ｇａｆｆｎｅｙら（１９８８）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ  ２９：２６１９−２２）を使用して、新規に合成され得る。これらの化学物質は、市場において入手可能な種々の自動核酸合成機によって実施され得る。これらの核酸は、合成核酸と呼ばれる。あるいは、本発明の核酸は、プラスミド中にて大規模に生成され得（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｔら，「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９を参照のこと）、そしてより小さい片へと分離され得るか、または全体として投与され得る。核酸は、公知技術（例えば、制限酵素、エキソヌクレアーゼ、またはエンドヌクレアーゼを使用する技術）を使用して、既存の核酸配列（例えば、ゲノム配列またはｃＤＮＡ配列）から調製され得る。このようにして調製された核酸は、単離された核酸と呼ばれる。単離された核酸とは、一般的には、天然で通常関連している成分から分離された、核酸を指す。例として、単離された核酸は、細胞から分離された核酸、核から分離された核酸、ミトコンドリアから分離された核酸、またはクロマチンから分離された核酸であり得る。本発明の組み合わせモチーフ核酸は、合成した組み合わせモチーフ核酸および単離された組み合わせモチーフ核酸の両方を包含する。
【００７２】
インビボ用途のために、この組み合わせモチーフ免疫刺激核酸は、必要に応じて、分解に対して比較的耐性であり得る（例えば、安定化されている）。「安定化された核酸分子」とは、インビボでの分解（例えば、エキソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼ）に対して比較的耐性である、核酸分子を意味する。核酸安定化は、リン酸骨格改変を介して達成され得る。本発明の好ましい安定化された核酸は、改変された骨格を有する。この核酸骨格の改変は、インビボで投与された場合のこの組み合わせモチーフ免疫刺激核酸の活性の増加を提供する。いくつかの場合、ホスホロチオエート結合を有する組み合わせモチーフ免疫刺激核酸は、最大の活性を提供し、そして細胞内エキソヌクレアーゼおよび細胞内エンドヌクレアーゼによる分解からその核酸を保護する。他の改変された核酸としては、改変されたホスホジエステル核酸、ホスホジエステル核酸とホスホロチオエート核酸の組み合わせ（すなわち、キメラ）、メチルホスホネート、メチルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ｐ−エトキシ、およびそれらの組み合わせが、挙げられる。
【００７３】
改変された骨格（例えば、ホスホロチオエート）は、ホスホロアミデート化学またはＨ−ホスホネート化学のいずれかを使用する自動技術を使用して、合成され得る。アリール−ホスホネートおよびアルキル−ホスホネートは、例えば、米国特許第米国特許４，４６９，８６３号に記載されるようにして、生成され得る；そしてアルキルホスホトリエステル（米国特許第５，０２３，２４３号および欧州特許第０９２，５７４号に記載されるように、荷電した酸素部分が、アルキル化されている）は、市販の試薬を使用して、自動固相合成によって調製され得る。他のＤＮＡ骨格の改変および置換を行うための方法は、記載されている。Ｕｈｌｍａｎｎ  Ｅ  ａｎｄ  Ｐｅｙｍａｎ  Ａ（１９９０）Ｃｈｅｍ  Ｒｅｖ  ９０：５４４；Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ  Ｊ（１９９０）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ  １：１６５。
【００７４】
他の安定化された核酸としては、非イオン性ＤＮＡアナログ（例えば、アルキル−ホスフェートおよびアリール−ホスフェート（荷電した酸素が、アルキル基またはアリール基により置換されている）、ホスホジエステルおよびアルキルホスホジエステル（荷電した酸素部分が、アルキル化されている）が、挙げられる。いずれかの末端または両方の末端にジオール（例えば、テトラエチレングリコールまたはヘキサエチレングリコール）を含む核酸もまた、ヌクレアーゼ分解に対して実質的に抵抗性であることが示されている。
【００７５】
他の実施形態において、この免疫刺激核酸は、ホスホジエステル骨格またはキメラ（例えば、ソフト（ｓｏｆｔ）またはセミソフト（ｓｅｍｉ−ｓｏｆｔ）な）骨格を有し得る。キメラ骨格としては、ホスホジエステル骨格結合と改変された骨格結合との組み合わせが挙げられる。例えば、キメラオリゴヌクレオチドは、ソフトなオリゴヌクレオチドであっても、またはセミソフトなオリゴヌクレオチドであってもよい。
【００７６】
ソフトなオリゴヌクレオチドは、部分的に安定化された骨格を有する免疫刺激オリゴヌクレオチドであり、その骨格において、ヌクレオシド間ホスホジエステル結合またはヌクレオシド間ホスホジエステル様結合が、少なくとも１つの内部ピリミジンヌクレオシド−グアノシン（ＹＧ）ジヌクレオチドの内部およびそのすぐ隣接した位置のみにしか存在しない。その少なくとも１つの内部ＹＧジヌクレオチド自体は、ヌクレオシド間ホスホジエステル結合またはヌクレオシド間ホスホジエステル様結合を有する。少なくとも１つの内部ＹＧジヌクレオチドにすぐ隣接して存在するヌクレオシド間ホスホジエステル結合またはヌクレオシド間ホスホジエステル様結合は、その少なくとも１つの内部ＹＧジヌクレオチドの５’側、３’側、または５’側および３’側の両方にあり得る。好ましくは、その少なくとも１つの内部ＹＧジヌクレオチドにすぐ隣接して存在するヌクレオシド間ホスホジエステル結合またはヌクレオシド間ホスホジエステル様結合自体が、内部ヌクレオシド結合である。従って、配列Ｎ１ＹＧＮ２（Ｎ１およびＮ２は各々、互いに対して独立している、任意の単一ヌクレオチドである）について、このＹＧジヌクレオチドは、ホスホジエステル結合またはホスホジエステル様結合を有し、そしてさらに、（ａ）Ｎ１が内部ヌクレオチドである場合に、Ｎ１およびＹが、ホスホジエステル結合またはホスホジエステル様結合によって結合しているか、（ｂ）Ｎ２が内部ヌクレオチドである場合に、ＧおよびＮ２が、ホスホジエステル結合またはホスホジエステル様結合によって結合しているか、あるいは（ｃ）Ｎ１が内部ヌクレオチドである場合に、Ｎ１およびＹが、ホスホジエステル結合またはホスホジエステル様結合によって結合しており、かつＮ２が内部ヌクレオチドである場合に、ＧおよびＮ２が、ホスホジエステル結合またはホスホジエステル様結合によって結合している。
【００７７】
セミソフトなオリゴヌクレオチドとは、部分的に安定化された骨格を有する免疫刺激オリゴヌクレオチドであり、その骨格において、ヌクレオシド間ホスホジエステル結合またはヌクレオシド間ホスホジエステル様結合が、少なくとも１つの内部ピリミジンヌクレオシド−グアノシン（ＹＧ）ジヌクレオチドの内部のみにしか存在しない。セミソフトなオリゴヌクレオチドは、完全に安定化された骨格を有する免疫刺激オリゴヌクレオチドを上回る多数の利点を有し得る。例えば、セミソフトなオリゴヌクレオチドは、対応する完全に安定化された免疫刺激オリゴヌクレオチドと比較して増加した免疫刺激能力を有し得る。
【００７８】
この免疫刺激核酸は、免疫応答を誘導するため、または免疫関連疾患（例えば、感染症、癌、およびアレルギー障害）を処置するために、被験体を処理するために使用され得る。本明細書中で使用される場合、「被験体」とは、ヒトまたは脊椎動物（イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、サル、ウサギ、ラット、マウスなどが挙げられるが、これらに限定されない）を指す。
【００７９】
本明細書中で使用される場合、用語「処置する」、「処置」、および「処置された」とは、疾患の発症に対する被験体の抵抗性を増加させる予防処置、または換言すると、その被験体が疾患を発症する可能性を減少させるかもしくはその疾患の発症を遅延させる予防処置、ならびにその被験体がその疾患を発症した後にその疾患と闘病するため（例えば、その疾患を減少させるかもしくはその疾患を全く排除するか、またはその疾患が悪化するのを防ぐため）の処置を指す。例えば、感染症の処置に関して使用される場合、この用語は、微生物に対する被験体の抵抗性を増加させる予防処置、または換言すると、その被験体がその微生物に対する感染症を発症する可能性を減少させる予防処置、ならびにその被験体が感染した後にその感染症と闘病するため（例えば、その感染症を減少させるかもしくはその感染症を全く排除するか、またはその感染症が悪化するのを防ぐため）の処置を指す。癌のような疾患に関して使用される場合、この用語は、癌の発症の予防または癌の発症の遅延、癌の症状の低減、および／あるいは確立された癌の増殖を阻害または遅延させることを指す。
【００８０】
従って、この核酸は、感染性生物による感染症を発症するリスクがある被験体またはアレルギー障害もしくは癌を発症するリスクがある被験体の免疫を誘導するための予防薬として有用である。本明細書中で使用される「リスクがある被験体」とは、感染症を引き起こす感染性病原体に対する曝露、アレルゲンに対する曝露、または癌の発症についての何らかのリスクを有する被験体である。例えば、リスクがある被験体は、特定の型の感染因子またはアレルゲンが見出されている領域に旅行しようと計画している被験体であり得る。またはリスクがある被験体は、生活様式または医療手順を会して、感染生物を含み得る体液に曝露されている被験体であり得る。またはリスクが被験体は、感染生物もしくはアレルゲンが同定されている領域に生活しておりそして感染因子もしくはアレルゲンに直接曝露されるすべての被験体でさえあり得る。リスクがある被験体はまた、軍人のような細菌戦のリスクがある被験体またはテロリストによる攻撃の危険がある領域に住んでいる被験体でもあり得る。感染症を発症するリスクがある被験チアはまた、特定の感染生物抗原によるワクチン接種を医療機関が推奨する一般的集団を包含する。その抗原がアレルゲンでありその被験体がその特定の抗原に対してアレルギー性応答を発生し、そしてその被験体がその抗原に対して曝露される場合（すなわち、花粉の季節の間）、その被験体は、その抗原に対する曝露のリスクがある。癌を発症するリスクがある被験体は、癌についての遺伝的素因を有するかまたは以前に癌について処置された被験体、ならびに発癌物質（例えば、タバスコ、アスベスト、および他の化学的毒素もしくは過剰な日光および他の型の放射線）に対して曝露される被験体を包含する。この核酸はまたは、感染症、癌、およびアレルギー障害の処置における治療剤として有用である。
【００８１】
「感染症を有する被験体」とは、感染性病原体に曝露されておりかつ身体において急性もしくは慢性の検出可能なレベルのその病原体を有する、被験体である。この核酸は、単独でか、または他の治療剤（例えば、抗原もしくは抗微生物医薬）とともに、その感染性病原体のレベルを減少可能であるかもしくはその感染性病原体を根絶可能である、免疫応答を惹起するために使用され得る。この方法は、感染症を有する被験体もしくは感染症を発症するリスクがある被験体に、その感染症を処置するに有効な量の本発明の組み合わせモチーフ免疫刺激核酸を、投与する工程を包含する。この方法は、ヒト被験体および非ヒト脊椎動物被験体において、ウイルス感染症、細菌感染症、真菌感染症、および寄生生物感染症を処置するために使用され得る。
【００８２】
本明細書中で使用される場合、「感染症」および等価には「感染性疾患」とは、被験体の身体において外来微生物の存在から生じる疾患を指す。外来微生物とは、ウイルスでも、細菌でも、真菌でも、寄生生物でもあり得る。
【００８３】
感染性ウイルスの例としては、レトロウイルス科（例えば、ヒト免疫不全ウイルス（例えば、ＨＩＶ−１（ＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶもしくはＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、もしくはＨＩＶ−ＩＩＩとも呼ばれる）；および他の単離株（例えば、ＨＩＶ−ＬＰ））；ピコルナウイルス科（例えば、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス；エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、リノウイルス、エコーウイルス）；カルシウイルス科（例えば、胃腸炎を引き起こす株）；トガウイルス科（例えば、ウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）；フラビウイルス（例えば、デング熱ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）；コロナウイルス科（例えば、コロナウイルス）；ラブドウイルス科（例えば、水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；フィロウイルス科（例えば、エボラウイルス）；パラミクソウイルス科（例えば、パラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、ＲＳウイルス）；オルソミクソウイルス科（例えば、インフルエンザウイルス）；ブンヤウイルス科（例えば、ハンターンウイルス、ブンガウイルス、フレボウイルスおよびナイロウイルス）；アレナウイルス科（出血熱ウイルス）；レオウイルス科（例えば、レオウイルス、オルビウイルスおよびロタウイルス）；ビルナウイルス科のメンバー；ヘパドナウイルス科のメンバー（Ｂ型肝炎ウイルス）；パルボウイルス科（パルボウイルス）；パポバウイルス科（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）；アデノウイルス科（ほとんどのアデノウイルス）；ヘルペスウイルス科（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１および単純ヘルペスウイルス２、水痘−帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス）；ポックスウイルス科（痘瘡ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）；およびイリドウイルス科（例えば、アフリカ豚コレラウイルス）；ならびに未分類のウイルス（例えば、海綿状脳障害の病因因子、デルタ型肝炎の病因因子（Ｂ型肝炎ウイルスの欠損サテライトであると考えられる）、非Ａ型非Ｂ型肝炎の病因因子（クラス１＝内部感染型；クラス２＝非経口感染型（すなわち、Ｃ型肝炎ウイルス）；ノーウォークウイルスおよび関連ウイルス、ならびにアストロウイルス）が挙げられる。
【００８４】
感染性細菌の例としては、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｉｓｒａｅｌｉｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｓｐｐ．、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｐ．、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ  ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ、Ｆｚｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ  ｓｐｐ．（例えば、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍ．ａｖｉｕｍ、Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ、Ｍ．ｇｏｒｄｏｎａｅ）、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ、病原性Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（ａｎａｅｒｏｂｉｃ  ｓｐｐ．）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（ｖｉｒｉｄａｎｓ型）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群連鎖球菌）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｂｏｖｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｌｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ（Ａ群連鎖球菌）、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｉｕｍおよびＴｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐｅｒｔｅｎｕｅが挙げられる。
【００８５】
感染性真菌の例としては、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｎｍｍｉｔｉｓ、およびＢｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓが挙げられる。
【００８６】
他の感染性生物（すなわち、原生生物）としては、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｐ．（例えば、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｍａｌａｒｉａｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｏｖａｌｅ、およびＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）、ならびにＴｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉが挙げられる。血液媒介（Ｂｌｏｏｄ−ｂｏｒｎｅ）寄生生物および／または組織寄生生物としては、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｐ．、Ｂａｂｅｓｉａ  ｍｉｃｒｏｔｉ、Ｂａｂｅｓｉａ  ｄｉｖｅｒｇｅｎｓ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｔｒｏｐｉｃａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｓｐｐ．、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｇａｍｂｉｅｎｓｅおよびＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｒｈｏｄｅｓｉｅｎｓｅ（アフリカ睡眠病）、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ（シャーガス病）およびＴｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉが挙げられる。
【００８７】
ウイルス、細菌、真菌、および他の感染性生物ついての上記のリストは、例示であって限定ではないことが理解される。他の医学的関連する微生物が、文献に広範に記載されている。例えば、Ｃ．Ｇ．Ａ  Ｔｈｏｍａｓ、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｂａｉｌｌｉｅｒｅ  Ｔｉｎｄａｌｌ，Ｇｒｅａｔ  Ｂｒｉｔａｉｎ  １９８３（その内容全体が、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。
【００８８】
上記の微生物の多くはヒト障害に関連するが、本発明は、非ヒト脊椎動物を処置するためにも有用である。非ヒト脊椎動物はまた、本明細書中に開示される免疫核酸を用いて予防または処置され得る感染症を発症可能である。例えば、感染性ヒト疾患の処置に加えて、本発明の方法は、動物の感染症を処置するために有用である。
【００８９】
ヒトおよび非ヒト脊椎動物の感染性ウイルスとしては、レトロウイルス、ＲＮＡウイルスおよびＤＮＡウイルスが挙げられる。この群のレトロウイルスとしては、単純レトロウイルスおよび複合レトロウイルスの両方が挙げられる。単純レトロウイルスとしては、Ｂ型レトロウイルス亜群、Ｃ型レトロウイルス亜群、およびＤ型レトロウイルス亜群が挙げられる。Ｂ型レトロウイルスの例は、マウス乳腺癌ウイルス（ＭＭＴＶ）である。Ｃ型レトロウイルスの例としては、Ｃ型Ａ群亜群（ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）、鳥類白血病ウイルス（ＡＬＶ）および鳥類骨髄芽球症ウイルス（ＡＭＶ）を含む）、ならびにＣ型Ｂ群亜群（ネコ白血病ウイルス（ＦｅＬＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧＡＬＶ）、ヒツジ壊死ウイルス（ＳＮＶ）、細網内皮症ウイルス（ＲＶ）およびサル肉腫ウイルス（ＳＳＶ）を含む）が挙げられる。Ｄ型レトロウイルスとしては、マソン−ファイザーウイルス（ＭＰＭＶ）およびサルレトロウイルス１型（ＳＲＶ−１）が挙げられる。複合レトロウイルスとしては、レンチウイルス亜群、Ｔ細胞白血病ウイルス亜群、および泡沫状ウイルス亜群が挙げられる。レンチウイルスとしては、ＨＩＶ−１が挙げられ、またＨＩＶ−２、ＳＩＶ、ビスナウイルス、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、およびウマ感染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）も挙げられる。Ｔ細胞白血病ウイルスとしては、ＨＴＬＶ−１、ＨＴＬＶ−ＩＩ、サルＴ細胞白血病ウイルス（ＳＴＬＶ）、およびウシ白血病ウイルス（ＢＬＶ）が挙げられる。泡沫状ウイルスとしては、ヒト泡沫状ウイルス（ＨＦＶ）、サル泡沫状ウイルス（ＳＦＶ）およびウシ泡沫状ウイルス（ＢＦＶ）が挙げられる。
【００９０】
脊椎動物における感染性因子である他のＲＮＡウイルスの例としては、レオウイルス科のメンバー（オルトレオウイルス属（哺乳動物レトロウイルスおよび鳥類レトロウイルスの両方の複数の血清型）、オルビウイルス属（ブルータングウイルス、ユージナンジー（Ｅｕｇｅｎａｎｇｅｅ）ウイルス、ケメロボ（Ｋｅｍｅｒｏｖｏ）ウイルス、アフリカウマ病ウイルスおよびコロラドダニ熱ウイルス）、ロタウイルス属（ヒトロタウイルス、ネブラスカ子ウシ下痢ウイルス、サルロタウイルス、ウシロタウイルスもしくはヒツジロタウイルス、鳥類ロタウイルス）を含む）；ピコルナウイルス科のメンバー（エンテロウイルス属（ポリオウイルス、コクサッキーウイルスＡおよびコクサッキーウイルスＢ、エコー（ｅｎｔｅｒｉｃ  ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ  ｈｕｍａｎ  ｏｒｐｈａｎ）（ＥＣＨＯ）ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、サルエンテロウイルス、マウス脳脊髄炎（ＭＥ）ウイルス、Ｐｏｌｉｏｖｉｒｕｓ  ｍｕｒｉｓ、ウシエンテロウイルス、ブタエンテロウイルス、カーディオウイルス属（脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣ）、メンゴウイルス）、リノウイルス属(ヒトリノウイルス属（少なくとも１１３個の亜型を含む；他のリノウイルス）、アフトウイルス（口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ））を含む）；カルシウイルス科のメンバー（ブタ小水疱性発疹ウイルス、サンミグエルアザラシウイルス、ネコピコルナウイルスおよびノーウォークウイルスを含む）；トガウイルス科のメンバー（アルファウイルス属（東部ウマ脳脊髄炎ウイルス、セムリキ森林ウイルス、シンドビスウイルス、チクングニヤウイルス、オニョンニョン熱ウイルス、ロス川ウイルス、ベネズエラウマ脳脊髄炎ウイルス、西部ウマ脳脊髄炎ウイルス）、フラビウイルス属（蚊媒介性黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、日本脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、マリーバレー脳炎ウイルス、西ナイルウイルス、クンジンウイルス、中部ヨーロッパダニ媒介性脳炎ウイルス、極東ダニ媒介性脳炎ウイルス、キャサヌール森林病ウイルス、跳躍病ウイルス、ポーワッサンウイルス、オムスク出血熱ウイルス）、ルビウイルス属（風疹ウイルス）、ペスチウイルス属（粘膜病ウイルス、豚コレラウイルス、ボーダーウイルス）を含む）；ブンヤウイルス科のメンバー（ブンヤウイルス属（ブンヤムウェラ熱ウイルスおよび関連ウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス群）、フレボウイルス属（サシチョウバエ熱シチリア（Ｓａｎｄｆｌｙ  ｆｅｖｅｒ  Ｓｉｃｉｌｉａｎ）ウイルス、リフトバレー熱ウイルス）、ナイロウイルス属（クリミア−コンゴ出血熱ウイルス、ナイロビヒツジ病ウイルス）、およびウウクウイルス（Ｕｕｋｕｖｉｒｕｓ）属（ウウクウイルス（Ｕｕｋｕｎｉｅｍｉ）ウイルスおよび関連ウイルス）を含む）；オルトミクソウイルス科のメンバー（インフルエンザウイルス属（インフルエンザウイルスＡ型、多くのヒト亜型）；ブタインフルエンザウイルス、および鳥類インフルエンザウイルスおよびウマインフルエンザウイルス；インフルエンザウイルスＢ型（多くのヒト亜型）、およびインフルエンザウイルスＣ型（可能な別の属）を含む）；パラミクソウイルス科のメンバー（パラミクソウイルス属（パラミクソウイルス１型、セン��イウイルス、血球吸着性ウイルス（Ｈｅｍａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｖｉｒｕｓ）、パラインフルエンザウイルス２型〜５型、ニューカッスル病ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス）、麻疹ウイルス属（麻疹ウイルス、亜急性硬化性汎脳炎ウイルス、ジステンパーウイルス、牛疫ウイルス）、肺炎ウイルス属（ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ウシの呼吸器性シンシチアルウイルスおよび肺炎ウイルス）を含む）；ラブドウイルス科のメンバー（ベシクロウイルス属（ＶＳＶ）、チャンディプラ（Ｃｈａｎｄｉｐｕｒａ）、フランダース−ハートパーク（Ｆｌａｎｄｅｒｓ−Ｈａｒｔ  Ｐａｒｋ）ウイルス）、リッサウイルス属（狂犬病ウイルス）、魚類ララブドウイルス、および２種の有望なラブドウイルス（マルブルクウイルスおよびエボラウイルス）を含む）；アレナウイルス科のメンバー（リンパ球脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭ）、タカリベウイルス複合体（ｃｏｍｐｌｅｘ）、およびラッサ熱ウイルスを含む）；コロナウイルス科のメンバー（伝染性気管支炎ウイルス（ＩＢＶ）、肝炎ウイルス、ヒト腸管コロナウイルス（Ｈｕｍａｎ  ｅｎｔｅｒｉｃ  ｃｏｒｏｎａ  ｖｉｒｕｓ）、およびネコ伝染性腹膜炎ウイルス（ネココロナウイルスを含む）が、挙げられるが、これらに限定されない。
【００９１】
脊椎動物における感染性因子である例示的ＤＮＡウイルスとしては、ポックスウイルス科（オルトポックスウイルス属（大痘瘡ウイルス、小痘瘡ウイルス、サル痘ワクシニアウイルス、牛痘ウイルス、水牛痘ウイルス、家兎痘ウイルス、エクトロメリアウイルス）、レポリポックスウイルス属（粘液腫症ウイルス、線維腫ウイルス）、アヴィポックスウイルス属（鶏痘ウイルス、他の鳥類ポックスウイルス）、カプリポックスウイルス属（羊痘ウイルス、ヤギ痘ウイルス）、スイポックスウイルス属（豚痘ウイルス）、パラポックスウイルス属（感染性膿疱性皮膚炎ウイルス、偽牛痘ウイルス、ウシ丘疹性口内炎ウイルス）を含む）；イリドウイルス科（アフリカ豚コレラウイルス、カエルウイルス２型およびカエルウイルス３型、魚類リンパ嚢腫病ウイルス）；ヘルペスウイルス科、アルファ−ヘルペスウイルス(単純疱疹ウイルス１型および２型、水痘−帯状疱疹ウイルス、ウマ流産ウイルス、ウマヘルペスウイルス２型および３型、仮性狂犬病ウイルス、ウシ伝染性角膜炎ウイルス、ウシ伝染性鼻気管炎ウイルス、ネコ鼻気管炎ウイルス、伝染性喉頭気管炎ウイルス）、ベータ−ヘルペスウイルス（ヒトサイトメガロウイルス、ブタサイトメガロウイルスおよびサルサイトメガロウイルス）；ガンマ−ヘルペスウイルス（エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、マレク病ウイルス、Ｈｅｒｐｅｓ  ｓａｉｍｉｒｉ、Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ  ａｔｅｌｅｓ、Ｈｅｌｐｅｓｖｉｒｕｓ  ｓｙｌｖｉｌａｇｕｓ、モルモットヘルペスウイルス、リュッケ癌ウイルス）を含む）；アデノウイルス科（マストアデノウイルス属（ヒト亜群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅおよび未分類型；サルアデノウイルス（少なくとも２３個の血清型）、イヌ伝染性肝炎ウイルス、およびウシアデノウイルス、ブタアデノウイルス、ヒツジアデノウイルス、カエルアデノウイルス、および他の多くの種のアデノウイルス）、アヴィアデノウイルス属（鳥類アデノウイルス）；および培養不可能な（ｎｏｎ−ｃｕｌｔｉｖａｔａｂｌｅ）アデノウイルスを含む）；パポバウイルス科（乳頭腫ウイルス属（ヒト乳頭腫ウイルス、ウシ乳頭腫ウイルス、ショープウサギ乳頭腫ウイルス、および他の種の種々の病原体乳頭腫ウイルス）、ポリオーマウイルス属（ポリオーマウイルス、サル空胞形成ウイルスＮｏ．４０（ＳＶ−４０）、ウサギ空胞形成ウイルス（ＲＫＶ）、Ｋウイルス、ＢＫウイルス、ＪＣウイルス、および他の霊長類ポリオーマウイルス（リンパ腫（Ｌｙｍｐｈｏｔｒｏｐｈｉｃ）乳頭腫ウイルス）を含む）；パルボウイルス科（アデノ随伴ウイルス属、パルボウイルス属（ネコ白血病（ｐａｎｌｅｕｋｏｐｅｎｉａ）ウイルス、ウシパルボウイルス、イヌパルボウイルス、アリューシャンミンク病ウイルスなど）を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。最後に、ＤＮＡウイルスとしては、上記の科に適合しないウイルス（例えば、クールーウイルスおよびクロイツフェルト−ヤーコプ病ウイルス、ならびに慢性感染性神経障害因子（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ  ａｇｅｎｔ）（ＣＨＩＮＡウイルス））であり得る。
【００９２】
この核酸は、抗微生物剤とともに被験体に投与され得る。本明細書中で使用される場合、抗微生物剤とは、感染性微生物を死滅可能または阻害可能である、天然に存在する化合物、合成化合物、もしくは半合成化合物をさす。本発明に従って有用な抗微生物剤の型は、その被験体が感染しているかまたは感染するリスクがある、微生物の型に依存する。抗微生物剤としては、抗細菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、および抗寄生生物剤が挙げられるが、これらに限定されない。「抗感染性因子」、「抗細菌剤」、「抗ウイルス剤」、「抗真菌剤」、「抗寄生生物剤」および「殺寄生生物薬」のような句は、当業者にとって十分に確立された意味を有し、そしてこれらの句は、標準的な医学の教科書にて規定されている。簡単に述べると、抗細菌剤は、細菌を死滅または阻害する。抗細菌剤としては、抗生物質、ならびに類似する機能を有する他の合成化合物もしくは天然化合物が挙げられる。抗生物質とは、細胞（例えば、微生物）による二次代謝物として生成される低分子量分子である。一般的には、抗生物質は、その微生物に特異的でありかつ宿主細胞中には存在しない、１つ以上の細菌機能もしくは細菌構造を妨害する。抗ウイルス剤は、天然供給源から単離され得るかまたは合成され得る。抗ウイルス剤は、ウイルスを死滅または阻害するために有用である。抗真菌剤は、表面真菌感染症ならびに日和見真菌感染症および現発性全身真菌感染症を処置するために使用される。抗寄生生物剤は、寄生生物を死滅または阻害する。
【００９３】
抗細菌剤は、細菌を死滅させるか、または細菌の増殖もしくは機能を阻害する。抗細菌剤の大きな種類は、抗生物質である。広範な細菌を死滅または阻害するのに有効である抗生物質は、広域抗生物質と呼ばれる。他の型の抗生物質は、グラム陽性である種類の細菌またはグラム陰性である種類の細菌に対して主に有効である。これらの型の抗生物質は、狭域抗生物質と呼ばれる。単一の生物または疾患に対して有効であり他の型の細菌に対しては有効ではない他の抗生物質は、限定域抗生物質と呼ばれる。抗細菌剤は、時に、その主要作用様式に基づいて分類される。一般的に、抗細菌剤は、細胞壁合成インヒビター、細胞膜インヒビター、タンパク質合成インヒビター、核酸合成インヒビターもしくは核酸機能インヒビター、および競合インヒビターである。
【００９４】
抗ウイルス剤は、ウイルスによる細胞関連を防ぐかまたは細胞内でのウイルス複製を防ぐ、化合物である。抗細菌剤よりはかなり少ない抗ウイルス剤が存在する。なぜなら、ウイルス複製プロセスは、宿主におけるＤＮＡ複製と非常に関連しており、非特異的抗ウイルス剤は、その宿主にとってしばしば毒性であるからである。抗ウイルス剤によって遮断または阻害され得るいくつかの段階が、ウイルス感染プロセス中に存在する。これらの段階としては、宿主細胞へのウイルスの付着（免疫グロブリンまたは結合ペプチドによって遮断または阻害され得る）、ウイルスの脱被膜（例えば、アマンタジンによって遮断または阻害され得る）、ウイルスｍＲＮＡの合成もしくは翻訳（例えば、インターフェロンによって遮断または阻害され得る）、ウイルスＲＮＡもしくはＤＮＡの複製（例えば、ヌクレオシドアナログによって遮断または阻害され得る）、新規なウイルスタンパク質の成熟（例えば、プロテアーゼインヒビターによって遮断または阻害され得る）、ならびにウイルスの出芽および放出が、挙げられる。
【００９５】
ヌクレオチドアナログは、ヌクレオチドと類似するが、不完全であるかもしくは異常なデオキシリボース基もしくはリボース基を有する、合成化合物である。一旦そのヌクレオチドアナログが細胞中に存在すると、そのヌクレオチドアナログは、リン酸化され、清浄なヌクレオチドがウイルスＤＮＡもしくはウイルスＲＮＡ中に取り込まれるのと競合する、トリホスフェート形態を生成する。一旦そのヌクレオチドアナログのトリホスフェート形態が、伸長中の核酸鎖に取り込まれると、そのヌクレオチドアナログのトリホスフェート形態は、ウイルスポリメラーゼとの不可逆的会合を引き起こし、そのようにして鎖終結を引き起こす。ヌクレオチドアナログとしては、アシクロビル（単純疱疹ウイルスおよび水痘−帯状疱疹ウイルスの処置のために使用される）、ガンシクロビル（サイトメガロウイルスの処置のために有用である）、イドクスウリジン、リバビリン（ＲＳウイルスの処置のために有用である）、ジデオキシイノシン、ジデオキシシチジン、およびジドブジン（アジドチミジン）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９６】
抗真菌剤は、感染性真菌の処置および予防のために有用である。抗真菌剤は、時には、その作用機構によって分類される。いくつかの抗真菌剤は、グルコースシンターゼを阻害することによって細胞壁インヒビターとして機能する。これらとしては、バシウンジン（ｂａｓｉｕｎｇｉｎ）／ＥＣＢが挙げられるが、これらに限定されない。他の抗真菌剤は、膜完全性を破壊することによって機能する。これらとしては、イミダゾール類（例えば、クロトリマゾール、セルタコンゾール（ｓｅｒｔａｃｏｎｚｏｌｅ）、フルコナゾール（ｆｌｕｃｏｎａｚｏｌｅ）、イトラコナゾール（ｉｔｒａｃｏｎａｚｏｌｅ）、ケトコナゾール、ミコナゾールおよびボリコナコール（ｖｏｒｉｃｏｎａｃｏｌｅ）ならびにＦＫ４６３、アンホテリシンＢ、ＢＡＹ３８−９５０２、ＭＫ９９１、プラジミシン（ｐｒａｄｉｍｉｃｉｎ）、ＵＫ  ２９２、ブテナフィン（ｂｕｔｅｎａｆｉｎｅ）およびテルビナフィン（ｔｅｒｂｉｎａｆｉｎｅ）が挙げられるが、これらに限定されない。他の抗真菌剤は、キチンを破壊することによって機能する（例えば、キチナーゼ）か、または免疫抑制によって機能する（５０１クリーム）。
【００９７】
この免疫刺激核酸は、単独でか、または抗癌療法と組み合わせて、癌の処置のために使用され得る。この方法は、癌を有する被験体または癌を発症するリスクがある被験体に、癌を処置するに有効な量の本発明の組み合わせ免疫刺激核酸を投与する工程を包含する。
【００９８】
「癌を有する被験体」とは、検出可能な癌性細胞を有する被験体である。この癌は、悪性癌であっても、非悪性癌であってもよい。癌または腫瘍としては、胆管癌、脳の癌、乳癌、子宮頸部癌（ｃｅｒｖｉｃａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、絨毛癌、結腸癌、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、上皮内新生物、リンパ腫、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌および非小細胞肺癌）、黒色腫、神経芽細胞腫、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、直腸癌、肉腫、皮膚癌、精巣癌、甲状腺癌、および腎臓癌、ならびに他の癌腫および肉腫が挙げられるが、これらに限定されない。１実施形態において、この癌は、ヘアリーセル白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚Ｔ細胞白血病、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、悪性骨髄腫、扁平上皮癌、腎臓細胞癌腫、前立腺癌腫、膀胱細胞癌腫、または結腸癌腫である。
【００９９】
癌は、コンパニオンアニマル（ｃｏｍｐａｎｉｏｎ  ａｎｉｍａｌ）（すなわち、ネコおよびイヌ）における主要な死亡原因のうちの１つである。イヌおよびネコにおいて一般的に診断される悪性障害としては、リンパ肉腫、骨肉腫、乳腺癌、肥満細胞腫、脳腫瘍、黒色腫、腺扁平上皮癌、肺カルチノイド、気管支腺腫、細気管支癌、線維腫、粘液軟骨腫、肺肉腫、神経肉腫、骨腫、乳頭腫、網膜芽細胞腫、ユーイング肉腫、ウィルムス腫瘍、バーキットリンパ腫、神経膠細胞腫、神経芽細胞腫、骨巨細胞腫、口腔新形成、線維肉腫、骨肉腫および横紋筋肉腫があげられるが、これらに限定さらない。イヌにおける他の新生物としては、生殖器扁平上皮癌、伝染性性病腫瘍、精巣腫瘍、セミノーマ、セルトーリ細胞腫、血管周囲細胞腫、組織球腫、緑色腫（顆粒球性肉腫）、角膜乳頭腫、角膜扁平上皮癌、血管肉腫、胸膜中皮腫、基底細胞腫瘍、胸腺腫、胃腫瘍、副腎癌腫、口腔乳頭腫症、血管内皮腫および嚢胞腺腫があげられる。ネコにおけるさらなる悪性腫瘍としては、濾胞性リンパ腫、腸リンパ肉腫、線維肉腫および肺扁平上皮癌が挙げられる。常に人気のある屋内ペットであるフェレットは、インスリノーマ、リンパ腫、肉腫、神経腫、ランゲルハンス島細胞腫瘍、胃ＭＡＬＴリンパ腫および胃腺癌を発症することが公知である。
【０１００】
この免疫刺激核酸はまた、抗癌療法と組み合わせて投与され得る。抗癌療法としては、癌治療薬、放射線、および外科手術が挙げられる。本明細書中で使用される場合、「癌治療薬」とは、癌を処置するために被験体に投与される薬剤を指す。癌の処置のための種々の型の医薬が、本明細書中に記載される。本明細書の目的のためには、癌治療薬は、化学療法剤、免疫治療剤、癌ワクチン、ホルモン療法、および生物学的応答改変剤として分類される。
【０１０１】
免疫療法剤（例えば、モノクローナル抗体）と組み合わせた免疫刺激核酸の使用は、多数の機構（抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の有意な増強、ＮＫ細胞の活性化、およびＩＦＮ−αレベルの増加が挙げられる）を介して長期生存を増加可能である。ＡＤＣＣは、細胞標的（例えば、癌細胞）に特異的な抗体と組み合わせて免疫抑制拡散を使用することによって、実施される。この免疫刺激核酸がその抗体と組み合わせて被験体に投与される場合、その被験体の免疫系は、その腫瘍細胞を死滅するように誘導される。このＡＤＣＣ手順において有用な抗体としては、身体中の細胞と相互作用する抗体が挙げられる。細胞標的に特異的な多くのそのような抗体が、当該分野において記載されており、そして多くが市販されている。モノクローナル抗体と組み合わせて使用された場合にこの核酸は、生物学的結果を達成するために必要なその抗体の量を減少するために役立つ。
【０１０２】
本発明に従って使用され得る他の型の化学療法剤としては、アミノグルテチミド、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、クロラムブシル、塩酸シタラビン、ダクチノマイシン、塩酸ダウノルビシン、エストラムスチンリン酸ナトリウム、エトポシド（ＶＰ１６−２１３）、フロクスウリジン、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フルタミド、ヒドロキシ尿素（ヒドロキシカルバミド）、イフォスファミド（Ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、インターフェロンα−２ａ、インターフェロンα−２ｂ、酢酸ロイプロリド（ＬＨＲＨ放出因子アナログ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、塩酸メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、メルカプトプリン、メンサ（Ｍｅｓｎａ）、ミトーテン（ｏ．ｐ’−ＤＤＤ）、塩酸ミトザントロン、オクトレオチド（Ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ）、プリカマイシン（Ｐｌｉｃａｍｙｃｉｎ）、塩酸プロカルバジン、ストレプトゾシン、クエン酸タモキシフェン、チオグアニン、チオテパ、硫酸ビンブラスチン、アムサクリン（Ａｍｓａｃｒｉｎｅ）（ｍ−ＡＭＳＡ）、アザシチジン（Ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、エリトロポイエチン、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、インターロイキン２、ミトグアゾン（Ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）（メチル−ＧＡＧ；メチルグリオキサルビス−グアニルヒドラゾン；ＭＧＢＧ）、ペントスタチ（２’デオキシコホルマイシン）、セムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）、テニポシド（Ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）（ＶＭ−２６）および硫酸ビンデシンが挙げられる。
【０１０３】
癌ワクチンは、癌細胞に対する内因性免疫応答を刺激することが意図される医薬である。現在生産されているワクチンは、体液性免疫応答（すなわち、抗体依存性免疫応答）を活性化する。現在開発中の他のワクチンは、細胞媒介性免疫系（腫瘍細胞を死滅させることが可能である細胞傷害性Ｔリンパ球を含む）を活性化することに焦点を当てている。癌ワクチンは、一般的に、抗原提示細胞（例えば、マクロファージおよび樹状細胞）および／または他の免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびＮＫ細胞）の療法に対する癌抗原の提示を増強する。いくつかの場合において、癌ワクチンは、アジュバント（例えば、上記のアジュバント）とともに使用され得る。
【０１０４】
いくつかの癌細胞は、抗原性であり、従って、免疫系により標的とされ得る。１局面において、免疫刺激核酸と癌治療薬（特に、癌免疫療法剤として分類される癌治療薬）との併用投与は、癌抗原に対して特異的免疫応答を刺激するために有用である。本明細書中で使用される場合、用語「癌抗原」および「腫瘍抗原」は、癌細胞により差次的に発現されそれにより癌細胞を標的とするために利用され得る、抗原を指すために互換可能に使用される。癌抗原は、明白に腫瘍特異的な免疫応答を強力に刺激し得る、抗原である。これらの抗原のうちのいくつかは、正常細胞によりコードされるが、必ずしも発現はされない。これらの抗原は、正常細胞において通常はサイレントである（すなわち、発現されない）抗原として、特定の分化段階においてのみ発現される抗原、そして一時的に発現される抗原（例えば、胚性抗原および胎児性抗原）として分類され得る。他の癌抗原は、変異体細胞遺伝子（例えば、オンコジーン（例えば、活性化ｒａｓオンコジーン）、サプレッサー遺伝子（例えば、変異体ｐ５３）、内部欠失もしくは染色体転移から生じる融合タンパク質）によってコードされる。なお他の癌抗原は、ウイルス遺伝子（例えば、ＲＮＡ腫瘍ウイルスおよびＤＮＡ腫瘍ウイルス上に保有される遺伝子）によってコードされ得る。「腫瘍関連」抗原は、腫瘍細胞および正常細胞の両方において存在するが、腫瘍細胞において異なる量または異なる形態で存在する。そのような抗原の例は、腫瘍胎児抗原（例えば、癌胎児抗原）、分化抗原（例えば、Ｔ抗原およびＴｎ抗原）、ならびにオンコジーン生成物（例えば、ＨＥＲ／ｎｅｕ）である。
【０１０５】
癌抗原（例えば、癌ワクチン中に存在する癌高原または癌免疫療法剤を調製するために使用される癌抗原）は、Ｃｏｈｅｎ  ＰＡら（１９９４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５４：１０５５−８に記載されるように、粗細胞抽出物から調製され得るか、または組換え技術を使用してその抗原を部分精製することにより調製され得るか、または既知の抗原の新規合成によって調製され得る。癌抗原は、特定の抗原の免疫原性部分の形態で使用され得るか、またはいくつかの場合は、細胞全体もしくは腫瘍塊が、癌抗原として使用され得る。そのような抗原は、単離され得るか、組換え調製され得るか、または当該分野で公知の他の任意の手段により調製され得る。
【０１０６】
他のワクチンは、インビトロで癌抗原に曝露され、その抗原をプロセシングし、そして他の免疫系細胞に対して有効な抗原提示のためにＭＨＣ分子の状況で細胞表面に癌抗原を発現可能な、樹状細胞の形態を採る。樹状細胞は、抗原を提示しその局所環境におけるＬＰＳのような微生物分子を検出するパターン認識レセプターの発現を介して、先天免疫系と後天免疫系との間に関連を形成する。
【０１０７】
この組み合わせモチーフ免疫刺激核酸は、アレルギー（喘息を含む）の処置のために有用である。この組み合わせモチーフ免疫刺激核酸は、単独でか、またはアレルギー治療薬／喘息治療薬と組み合わせるかのいずれかで、アレルギーを処置するために使用され得る。この方法は、アレルギー状態もしくは喘息状態を有する被験体またはアレルギー状態もしくは喘息状態のリスクを有する被験体に、そのアレルギー状態もしくは喘息状態を処置するに有効な量の本発明の組み合わせモチーフ免疫刺激核酸を投与する工程を包含する。
【０１０８】
本明細書中で使用される場合、「アレルギー」とは、物質（アレルゲン）に対する後天的過敏症を指す。アレルギー状態としては、湿疹、アレルギー性鼻炎もしくはコリーザ、枯草熱、気管支喘息、じんま疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）（じんま疹（ｈｉｖｅｓ））および食物アレルギー、ならびに他のアトピー性状態が挙げられる。「アレルギーを有する被験体」とは、アレルゲンに応答したアレルギー反応を有する被験体またはアレルゲンに応答したアレルギー反応を発症するリスクがある被験体を指す。「アレルゲン」とは、感受性被験体におけるアレルギー応答または喘息応答を誘導し得る物質を指す。アレルゲンのリストは、膨大である。アレルゲンのリストとしては、花粉、昆虫の毒物、動物のふけ、塵埃、真菌の胞子、および薬物（例えば、ペニシリン）が挙げられる。
【０１０９】
天然の動物抗原および植物抗原の例としては、以下の属に特異的なタンパク質が挙げられる：イヌ（Ｃａｎｉｓ  ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）；Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ（例えば、Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｆａｒｉｎａｅ）；ネコ（Ｆｅｌｉｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）；Ａｍｂｒｏｓｉａ（Ａｍｂｒｏｓｉａ  ａｒｔｅｍｉｉｓｆｏｌｉａ；Ｌｏｌｉｕｍ（例えば、Ｌｏｌｉｕｍ  ｐｅｒｅｎｎｅまたはＬｏｌｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ）；Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ（Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）；アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ａｌｔｅｒｎａｔａ）；ハンノキ；ハンノキ属（Ａｌｎｕｓ  ｇｕｌｔｉｎｏｓａ）；カバノキ属（Ｂｅｔｕｌａ  ｖｅｒｒｕｃｏｓａ）；Ｑｕｅｒｃｕｓ（Ｑｕｅｒｃｕｓ  ａｌｂａ）；Ｏｌｅａ（Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐａ）；Ａｒｔｅｍｉｓｉａ（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）；Ｐｌａｎｔａｇｏ（例えば、Ｐｌａｎｔａｇｏ  ｌａｎｃｅｏｌａｔａ）；Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ（例えば、Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓまたはＰａｒｉｅｔａｒｉａ  ｊｕｄａｉｃａ）；Ｂｌａｔｔｅｌｌａ（例えば、Ｂｌａｔｔｅｌｌａ  ｇｅｒｍａｎｉｃａ）；ミツバチ属（例えば、Ａｐｉｓ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ）；Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ（例えば、Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ  ｓｅｍｐｅｒｖｉｒｅｎｓ、Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ  ａｒｉｚｏｎｉｃａおよびＣｕｐｒｅｓｓｕｓ  ｍａｃｒｏｃａｒｐａ）；Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ（例えば、Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｓａｂｉｎｏｉｄｅｓ、Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ、Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓおよびＪｕｎｉｐｅｒｕｓ  ａｓｈｅｉ）；Ｔｈｕｙａ（例えば、Ｔｈｕｙａ  ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）；Ｃｈａｍａｅｃｙｐａｒｉｓ（例えば、Ｃｈａｍａｅｃｙｐａｒｉｓ  ｏｂｔｕｓａ）；Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ（例えば、Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）；Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ（例えば、Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ  ｒｅｐｅｎｓ）；Ｓｅｃａｌｅ（例えば、Ｓｅｃａｌｅ  ｃｅｒｅａｌｅ）；Ｔｒｉｔｉｃｕｍ（例えば、Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ）；Ｄａｃｔｙｌｉｓ（例えば、Ｄａｃｔｙｌｉｓ  ｇｌｏｍｅｒａｔａ）；Ｆｅｓｔｕｃａ（例えば、Ｆｅｓｔｕｃａ  ｅｌａｔｉｏｒ）；Ｐｏａ（例えば、Ｐｏａ  ｐｒａｔｅｎｓｉｓまたはＰｏａ  ｃｏｍｐｒｅｓｓａ）；  カラスムギ属（例えば、Ａｖｅｎａ  ｓａｔｉｖａ）；Ｈｏｌｃｕｓ（例えば、Ｈｏｌｃｕｓ  ｌａｎａｔｕｓ）；Ａｎｔｈｏｘａｎｔｈｕｍ（例えば、Ａｎｔｈｏｘａｎｔｈｕｍ  ｏｄｏｒａｔｕｍ）；Ａｒｒｈｅｎａｔｈｅｒｕｍ（例えば、Ａｒｒｈｅｎａｔｈｅｒｕｍ  ｅｌａｔｉｕｓ）；Ａｇｒｏｓｔｉｓ（例えば、Ａｇｒｏｓｔｉｓ  ａｌｂａ）；Ｐｈｌｅｕｍ（例えば、Ｐｈｌｅｕｍ  ｐｒａｔｅｎｓｅ）；Ｐｈａｌａｒｉｓ（例えば、Ｐｈａｌａｒｉｓ  ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ）；Ｐａｓｐａｌｕｍ（例えば、Ｐａｓｐａｌｕｍ  ｎｏｔａｔｕｍ）；Ｓｏｒｇｈｕｍ（例えば、Ｓｏｒｇｈｕｍ  ｈａｌｅｐｅｎｓｉｓ）；ならびにＢｒｏｍｕｓ（例えば、Ｂｒｏｍｕｓ  ｉｎｅｒｍｉｓ）が挙げられる。
【０１１０】
本明細書中で使用される場合、「喘息」とは、炎症、気道の狭窄、および吸入された因子に対する気道の反応性の増加によって特徴付けられる、呼吸器系の障害を指す。喘息は、頻繁には、アトピー性症状もしくは喘息症状と関連するが、それらのみと関連するわけではない。
【０１１１】
「喘息治療薬／アレルギー治療薬」は、本明細書中で使用される場合、その症状を減少させるか、喘息反応またはアレルギー反応を阻害するか、あるいは喘息反応またはアレルギー反応を予防する、組成物である。喘息およびアレルギーの処置のための種々の型の医薬が、ｔｈｅ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｓｔｈｍａ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｐａｎｅｌ  Ｒｅｐｏｒｔ  ２，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ９７／４０５１，Ｊｕｌｙ  １９，１９９７（その内容全体が本明細書中に参考として援用される）に記載される。このＮＩＨの刊行物に記載される医薬の要約は、下記に提示される。
【０１１２】
ほとんどの実施形態において、この喘息治療薬／アレルギー治療薬は、喘息およびアレルギーの両方を処置するためにある程度有用である。いくつかの喘息治療薬／アレルギー治療薬は、好ましくは、喘息を治療するためにこの免疫刺激核酸と組み合わせて使用される。これらは、喘息治療薬と呼ばれる。喘息治療薬としては、ＰＤＥ−４インヒビター、気管支拡張薬／β−２アゴニスト、Ｋ＋チャンネル開口薬、ＶＬＡ−４アンタゴニスト、ニューロキン（ｎｅｕｒｏｋｉｎ）アンタゴニスト、ＴＸＡ２合成インヒビター、キサンタニン（ｘａｎｔｈａｎｉｎｅｓ），アラキドン酸アンタゴニスト、５−リポキシゲナーゼインヒビター、トロンボキシン（ｔｈｒｏｍｂｏｘｉｎ）Ａ２レセプターアンタゴニスト、トロンボキサン（ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ）Ａ２アンタゴニスト、５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質インヒビター、ならびにプロテアーゼインヒビターが、あげられる。
【０１１３】
他の喘息治療薬／アレルギー治療薬は、好ましくは、アレルギーを処置するためにこの免疫刺激核酸と組み合わせて使用される。これらは、アレルギー治療薬と呼ばれる。アレルギー治療薬としては、抗ヒスタミン剤、ステロイド類、免疫調節剤、およびプロスタグランジン誘導物質が挙げられるが、これらに限定されない。抗ヒスタミン剤は、肥胖細胞または好塩基球により放出されるヒスタミンを相殺する、化合物である。これらの化合物は、当該分野で周知であり、そしてアレルギーの処置のために一般的に使用される。抗ヒスタミン剤としては、ロラチジン（ｌｏｒａｔｉｄｉｎｅ）、セルチナジン（ｃｅｔｉｒｉｚｉｎｅ）、ブクリジン、セルチナジン（ｃｅｔｅｒｉｚｉｎｅ）アナログ、フェキソフェナジン（ｆｅｘｏｆｅｎａｄｉｎｅ）、テルフェナジン、デスロラタジン（ｄｅｓｌｏｒａｔａｄｉｎｅ）、ノルアステミゾール（ｎｏｒａｓｔｅｍｉｚｏｌｅ）、エピナスチン（ｅｐｉｎａｓｔｉｎｅ）、エバスチン（ｅｂａｓｔｉｎｅ）、エバスチン（ｅｂａｓｔｉｎｅ）、アステミゾール、レボカバスチン（ｌｅｖｏｃａｂａｓｔｉｎｅ）、アゼラスチン（ａｚｅｌａｓｔｉｎｅ）、トラニラスト（ｔｒａｎｉｌａｓｔ）、テルフェナジン、ミゾラスチン（ｍｉｚｏｌａｓｔｉｎｅ）、ベタタスチン（ｂｅｔａｔａｓｔｉｎｅ）、ＣＳ５６０、およびＨＳＲ６０９が挙げられるが、これらに限定されない。プロスタグランジン誘導物質は、プロスタグランジン活性を誘導する化合物である。プロスタグランジン誘導物質としては、Ｓ−５７５１が挙げられるが、これに限定されない。
【０１１４】
ステロイド類としては、ベクロメタゾン、フルチカゾン（ｆｌｕｔｉｃａｓｏｎｅ）、トラシノロン（ｔｒａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ）、ブデソニド（ｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅ）、コルチコステロイドおよびブデソニド（ｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅ）が挙げられるが、これらに限定されない。免疫刺激核酸とステロイド類との組み合わせは、若齢の被験体（例えば、小児）の処置に特に良好に適合する。今日まで、小児におけるステロイド類の使用は、いくつかのステロイド処置が成長の遅延に関連すると報告された知見によって、制限されている。従って、本発明に従って、この免疫刺激核酸が、成長遅延ステロイド類と組み合わせて使用され得、それにより、「ステロイド節約効果」を提供し得る。これら２つの薬剤の組み合わせは、より少量のステロイド類必要量をもたらし得る。
【０１１５】
免疫調節剤としては、抗炎症剤、ロイコトリエンアンタゴニスト、ＩＬ−４ムテイン、可溶性ＩＬ−４レセプター、免疫抑制剤（例えば、寛容化（ｔｏｌｅｒｉｚｉｎｇ）ペプチドワクチン）、抗ＩＬ−４抗体、ＩＬ−４アンタゴニスト、抗ＩＬ−５抗体、可溶性ＩＬ−１３レセプター−Ｆｃ融合タンパク質、抗ＩＬ−９抗体、ＣＣＲ３アンタゴニスト、ＣＣＲ５アンタゴニスト、ＶＬＡ−４インヒビター、およびＩｇＥ下流調節剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１６】
本発明の免疫刺激核酸は、１型ＩＦＮ（すなわち、ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−β）を誘導するために使用され得る。この方法は、１型ＩＦＮを発現可能な細胞を、その細胞による１型ＩＦＮ発現を誘導するに有効な量の本発明の組み合わせモチーフ免疫刺激核酸と接触させる工程を包含する。ヒトにおける主要なＩＦＮ−αプロデューサー細胞型は、プラスマ細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）であることが、最近認識された。この細胞型は、ＰＢＭＣ中に非常に低頻度（０．２〜０．４％）で存在し、そしてこの細胞型は、直系ネガティブ（すなわち、ＣＤ３についても、ＣＤ１４についても、ＣＤ１９についても、ＣＤ５６についても染色しない）およびＣＤ１１ｃネガティブである一方でＣＤ４、ＣＤ１２３（ＩＬ−３Ｒα）およびクラスＩＩ主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣクラスＩＩ）についてポジティブである、表現型によって特徴付けられる。Ｇｒｏｕａｒｄ  Ｇら（１９９７）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８５：１１０１−１１；Ｒｉｓｓｏａｎ  Ｍ−Ｃら（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８３：１１８３−６；Ｓｉｅｇａｌ  ＦＰら（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８４：１８３５−７；Ｃｅｌｌａ  Ｍら（１９９９）Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ５：９１９−２３。１型ＩＦＮを測定する方法は、当業者に周知であり、そしてそのような方法としては、例えば、酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）、バイオアッセイ、および蛍光細胞分析（ＦＡＣＳ）が挙げられる。この種のアッセイは、容易に入手可能な市販の試薬およびキットを使用して、実施され得る。
【０１１７】
本発明の免疫刺激核酸は、ＮＫ細胞を活性化するために使用され得る。この方法は、ＮＫ細胞を、そのＮＫ細胞を活性化するに有効な量の本発明の組み合わせモチーフ免疫刺激核酸と接触させる工程を包含する。このＮＫ細胞の活性化は、直接的活性化であっても、間接的活性化であってもよい。間接的活性化とは、後にそのＮＫ細胞の活性化を引き起こすサイトカインまたは他の因子の誘導を指す。ＮＫ細胞の活性化は、種々の方法（細胞溶解活性の測定、活性化マーカー（例えば、ＣＤ６９）の誘導の測定、および特定のサイトカインの誘導の測定が挙げられる）によって、評価され得る。自発的に特定の腫瘍標的を死滅させる特徴的能力に加えて、ＮＫ細胞は、ＡＤＣＣに関与し、かつＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＩＬ−３の主要なプロデューサーである。
【０１１８】
マウスＮＫ細胞についての原型のＮＫ感受性細胞標的は、酵母人工染色体（ＹＡＣ）−１、モロニーウイルス感染Ａ系統間得る由来の胸腺腫である。ヒトＮＫ細胞について、標準的標的は、Ｋ５６２（赤白血病系統由来の細胞株）である。マイクロタイタープレートにおいて、一定数の放射性標識標的（例えば、５１−Ｃｒ標識Ｋ５６２）が、単独でか（自発的）、界面活性剤とともに（最大）か、または種々の数のエフェクター細胞とともに（実験的）、のいずれかでインキュベートされる。このエフェクター細胞対標的細胞比は、Ｅ：Ｔ比と呼ばれる。富化された活性化ＮＫ細胞は、代表的には、Ｅ：Ｔ比１０：１未満で有効であるが、未分画ＰＢＭＣまたは脾細胞は、Ｅ：Ｔ比１００：１以上を必要とする。
【０１１９】
この免疫刺激核酸はまた、全身免疫応答および／または粘膜性免疫応答を誘導するためのアジュバントとして有用である。本発明の組み合わせモチーフ免疫刺激核酸は、抗原に対する免疫応答の増強を誘導するように、抗原に曝露された被験体に送達され得る。従って、例えば、組み合わせモチーフ免疫刺激核酸は、ワクチンアジュバントとして有用である。
【０１２０】
この免疫刺激核酸は、非核酸アジュバントと組み合わせて投与され得る。非核酸アジュバントとは、体液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を刺激し得る、本明細書中に記載される免疫刺激核酸以外の任意の分子または化合物である。非核酸アジュバントとしては、例えば、デポー（ｄｅｐｏｔ）効果を生じるアジュバント、免疫刺激アジュバント、およびデポー効果を生じかつ免疫系を刺激するアジュバントが、挙げられる。非核酸粘膜アジュバントは、本明細書中で使用される場合、抗原とともに粘膜表面に投与された場合に被験体において粘膜性免疫応答を誘導可能である、免疫刺激核酸以外のアジュバントである。
【０１２１】
本発明の免疫刺激核酸は、薬学的に受容可能なキャリア中て薬学的組成物として処方され得る。この免疫刺激核酸は、被験体に直接投与され得るか、または核酸送達複合体と組み合わせて投与され得る。核酸送達複合体とは、標的化手段（例えば、標的細胞（例えば、Ｂ細胞表面）へのより高親和性の結合および／または標的細胞による細胞取り込みの増加を生じる分子）と会合（例えば、イオン性結合もしくは共有結合、またはその手段にカプセル化）された、核酸分子を意味する。核酸送達複合体の例としては、ステロール（例えば、コレステロール）と会合した核酸、脂質（例えば、カチオン性脂質、ビロゾーム、またはリポソーム）と会合した核酸、または標的細胞特異的結合因子（例えば、標的細胞特異的レセプターにより認識されるリガンド）と会合した核酸が、挙げられる。好ましい複合体は、その標的細胞によるインターナリゼーションの前の有意な脱カップリングを防ぐために十分にインビボで安定であり得る。しかし、その複合体は、その核酸が機能的形態で放出されるように、その細胞中で適切な条件下で切断可能である。
【０１２２】
この免疫刺激核酸および／または抗原および／または他の治療剤は、単独で（例えば、生理食塩水もしくは緩衝液中）で投与され得るか、または当該分野で公知の任意の送達ビヒクルを使用して投与され得る。例えば、以下の送達ビヒクルが、コキリエート（Ｃｏｃｈｌｅａｔｅｓ）（Ｇｏｕｌｄ−Ｆｏｇｅｒｉｔｅら，１９９４，１９９６）；エマルソーム（Ｅｍｕｌｓｏｍｅｓ）（Ｖａｎｃｏｔｔら，１９９８，Ｌｏｗｅｌｌら，１９９７）；ＩＳＣＯＭ（Ｍｏｗａｔら，１９９３，Ｃａｒｌｓｓｏｎら，１９９１，Ｈｕら，１９９８，Ｍｏｒｅｉｎら，１９９９）；リポソーム（Ｃｈｉｌｄｅｒｓら，１９９９，Ｍｉｃｈａｌｅｋら，１９８９，１９９２，ｄｅ  Ｈａａｎ  １９９５ａ，１９９５ｂ）；ミクロスフェア（Ｇｕｐｔａら，１９９８，Ｊｏｎｅｓら，１９９６，Ｍａｌｏｙら，１９９４，Ｍｏｏｒｅら，１９９５，Ｏ’Ｈａｇａｎら，１９９４，Ｅｌｄｒｉｄｇｅら，１９８９）；ポリマー（例えば、カルボキシメチルセルロース、キトサン）（Ｈａｍａｊｉｍａら，１９９８，Ｊａｂｂａｌ−Ｇｉｌｌら，１９９８）；ポリマー環（Ｗｙａｔｔら，１９９８）；プロテオソーム（Ｖａｎｃｏｔｔら，１９９８，Ｌｏｗｅｌｌら，１９８８，１９９６，１９９７）；ビロゾーム（Ｖｉｒｏｓｏｍｅ）（Ｇｌｕｃｋら，１９９２，Ｍｅｎｇｉａｒｄｉら，１９９５，Ｃｒｙｚら，１９９８）；ウイルス様粒子（Ｊｉａｎｇら，１９９９，Ｌｅｉｂｌら，１９９８）に記載されている。他の送達ビヒクルが、当該分野で公知である。
【０１２３】
粘膜送達もしくは局所送達のための本明細書中に記載される化合物の被験体用量は、代表的には、約０．１μｇ／投与〜１０ｍｇ／投与の範囲であり、これは、その適用が毎日、毎週、または毎月投与、およびその間の他の任意の時間にされ得るかに依存する。より代表的には、粘膜用量または局所用量は、約１０μｇ／投与〜５ｍｇ／投与の範囲であり、最も代表的には、約１００μｇ／投与〜１ｍｇ／投与であり、２回の投与〜４回の投与が、数日間または数週間の間隔を空けられる。より代表的には、免疫刺激用量は、約１μｇ／投与〜１０ｍｇ／投与の範囲であり、最も代表的には、約１０μｇ／投与〜１ｍｇ／投与の範囲であり、毎日または毎週投与される。抗原特異的免疫応答を誘導するために非経口送達のための本明細書中に記載の化合物の被験体用量（この化合物は、抗原とともに送達されるが、別の治療剤とは送達されない）は、代表的には、ワクチンアジュバントまたは免疫刺激適用のための有効粘膜用量の５倍〜１０，０００倍多く、より代表的には１０倍〜１，０００倍多く、最も代表的には２０倍〜１００倍多い。この免疫刺激核酸が他の治療剤と組み合わせでかもしくは特殊な送達ビヒクル中で投与される場合に、先天免疫応答を誘導するためまたはＡＤＣＣを増加するためまたは抗原特異的免疫応答を誘導するための、非経口送達のための本明細書中に記載される化合物の用量は、代表的には、約０．１μｇ／投与〜１０ｍｇ／投与の範囲であり、これは、その適用が毎日、毎週、または毎月投与、およびその間の他の任意の時間にされ得るかに依存する。より代表的には、これらの目的のための非経口用量は、約１０μｇ／投与〜５ｍｇ／投与の範囲であり、最も代表的には、約１００μｇ／投与〜１ｍｇ／投与であり、２回の投与〜４回の投与が、数日間または数週間の間隔を空けられる。しかし、いくつかの実施形態において、これらの目的のための非経口用量は、上記の代表的用量よりも５倍〜１０，０００倍多い範囲で使用され得る。
【０１２４】
本明細書中で使用される場合、「有効（な）量」とは、所望される生物学的効果を実現するために必要であるかまたは十分である、量を指す。例えば、感染症を処置するために有効な量の免疫核酸は、その感染症を処置するのに必要な量である。本明細書中に提供される教示と組み合わせると、種々の活性化合物および重み付け因子（例えば、効力、相対的バイオアベイラビリティー、患者の体重、有害な副作用の重篤度、および好ましい投与様式）を選択することによって、実質的な毒性を引き起こさないが特定の被験体を処置するに完全に有効である、有効な予防処置レジメンもしくは有効な治療処置レジメンが計画され得る。任意の特定の適用のための有効量は、処置される疾患もしくは状態、投与される特定の免疫刺激核酸、抗原、被験体の大きさ、またはその疾患もしくは状態の重篤度のような要因に依存して、変化し得る。当業者は、特定の免疫刺激核酸および／または抗原および／または他の治療剤の有効量を、過度の実験を必要とすることなく経験的に決定し得る。
【０１２５】
本明細書中に記載される任意の化合物について、その治療上有効な量は、動物モデルからまず決定され得る。治療上有効な用量はまた、ヒトにおいて試験された（ヒト臨床試験が開始された）ＣｐＧオリゴヌクレオチドについてのヒトデータから、および同様の薬理学的活性を示すことが公知である化合物（例えば、他の粘膜アジュバント（例えば、ＬＴおよびワクチン接種用の他の抗原））について粘膜投与もしくは局所投与についてのデータから、決定され得る。より高用量が、非経口投与のために必要である。適用される用量は、投与される化合物の相対的バイオアベイラビリティーおよび効力に基づいて、調整され得る。その用量を、上記の方法および他の方法に基づいて最大効力を達成するように調整することは、当該分野で周知であり、当業者の能力の範囲内に十分に存在する。
【０１２６】
本発明の処方物は、薬学的に受容可能な溶液中で投与され、この溶液は、慣用的には、薬学的に受容可能な濃度の塩、緩衝化剤、保存剤、適合性キャリア、アジュバント、および必要に応じて他の治療成分を含み得る。
【０１２７】
治療における使用のために、有効量のこの免疫刺激核酸が、所望される表面（例えば、粘膜表面、全身表面）にその核酸を送達する任意の様式によって、被験体に投与され得る。本発明の薬学的組成物を投与することは、当業者に公知の任意の手段によって達成され得る。好ましい投与経路としては、経口経路、非経口経路、筋肉内経路、鼻内経路、気管内経路、吸入経路、眼内経路、舌下経路、膣内経路、および直腸経路が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２８】
経口投与のために、この化合物（すなわち、免疫刺激核酸、抗原、および他の治療剤）は、その活性化合物を、当該分野で周知の薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせることによって、容易に処方され得る。そのようなキャリアは、本発明の化合物が、標的とされる被験体による経口摂取のための錠剤、ピル、糖剤、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁剤などとして処方されるのを可能にする。経口用途のための薬学的調製物は、必要に応じて、望まれる場合は適切な助剤を添加した後に、生じた混合物を粉砕し、その顆粒混合物を処理して錠剤コアまたは糖剤コアを得ることによって、固体賦形剤として入手され得る。適切な賦形剤は、特に、充填剤（例えば、糖（ラクトース、スクロース、マンニトール、もしくはソルビトールが挙げられる）；セルロース調製物（例えば、トウモロコシスターチ、コムギスターチ、イネスターチ、ジャガイモスターチ、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム）、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ））である。望まれる場合、崩壊剤（例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩（例えば、アルギン酸ナトリウム））が、添加され得る。必要に応じて、その経口処方物はまた、内部酸性状態を中和するための生理食塩水もしくは緩衝液中で処方され得るか、またはいかなるキャリアも含まずに投与され得る。
【０１２９】
糖剤コアは、適切なコーティングを備える。この目的のために、濃縮糖溶液が、使用され得、これは、必要に応じて、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、および適切な有機溶媒もしくは溶媒混合物を含み得る。染料または色素が、異なる活性化合物用量の組み合わせを同定または特徴付けるために、錠剤または糖剤コーティングに添加され得る。
【０１３０】
経口的に使用され得る薬学的調製物としては、ゼラチンから作製された押込みばめカプセル、およびゼラチンと可塑剤（例えば、グリセロールまたはソルビトール）とから作製された軟らかい密封カプセルが、挙げられる。この押込みばめカプセルは、充填剤（例えば、ラクトース）、結合剤（例えば、スターチ）、および／または滑沢剤（例えば、タルクまたはステアリン酸マグネシウム）、および必要に応じて安定化剤と混合して、活性成分を含み得る。この軟らかいカプセルにおいて、活性化合物は、適切な液体（例えば、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコール）中に溶解または懸濁され得る。さらに、安定化剤が添加され得る。経口投与のために処方されたミクロスフェアもまた、使用され得る。このようなミクロスフェアは、当該分野で十分に規定されている。経口投与のためのすべての処方物は、このような投与に適切な投与量である。
【０１３１】
経頬投与のために、この組成物は、従来の様式で処方された、錠剤またはロゼンジの形態を採り得る。
【０１３２】
吸入による投与のために、本発明に従う使用のための化合物は、加圧パックまたは噴霧器からエアロゾル噴霧提示の形態で、適切な推進剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切な気体）を使用して、従来のように送達され得る。加圧エアロゾルの場合、その投与単位は、計量した量を送達するための弁を提供することによって、決定され得る。吸入器または注入器において使用するための例えば、ゼラチンのカプセルおよびカートリッジが、その化合物と適切な粉末基剤（例えば、ラクトースまたはスターチ）との粉末混合物を含んで、処方され得る。
【０１３３】
この化合物は、全身送達することが望ましい場合に、注入（例えば、ボーラス注入または連続注入）による非経口投与のために処方され得る。注入のための処方物は、単位投与形態で（例えば、アンプル中にかまたは多用量容器にて）、添加された保存剤とともに提示され得る。その組成物は、油状ビヒクルもしくは水性ビヒクル中の懸濁物、溶液、またはエマルジョンのような形態を採り得、そして処方剤（例えば、懸濁剤、安定化剤、および／もしくは分散剤）を含み得る。
【０１３４】
非経口投与のための薬学的処方物としては、水溶性形態のその活性化合物の水性溶液が挙げられる。さらに、その活性化合物の懸濁物が、適切な油状注入懸濁物として調製され得る。適切な親油性溶媒または親油性ビヒクルとしては、脂肪油（例えば、ゴマ油）または合成脂肪酸エステル（例えば、オレイン酸エチルもしくはトリグリセリド）、またはリポソームが挙げられる。水性注入懸濁物は、その懸濁物の粘度を増加する物質（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストラン）を含み得る。必要に応じて、その懸濁物はまた、非常に濃縮された溶液の調製を可能にするために、適切な安定化剤またはその化合物の溶解度を増加する薬剤を含み得る。
【０１３５】
あるいは、その活性化合物は、適切なビヒクル（例えば、発熱物質を含まない滅菌した水）を用いて使用前に構成するための、散剤形態であり得る。
【０１３６】
この化合物はまた、直腸組成物または膣内組成物（例えば、（例えば、従来の坐剤基剤（例えば、ココアバターまたは他のグリセリド）を含む）坐剤または貯留浣腸）の状態で処方され得る。
【０１３７】
上記の処方物に加えて、この化合物はまた、デポー（ｄｅｐｏｔ）調製物として処方され得る。そのような長期作用処方物は、適切なポリマー物質もしくは疎水性物質を用いて（例えば、受容可能な油中のエマルジョンとして）か、またはイオン交換樹脂を用いてか、または溶解性が乏しい誘導体（例えば、溶解性が乏しい塩）として、処方され得る。
【０１３８】
この薬学的組成物はまた、適切な固相もしくはゲル相の、キャリアもしくは賦形剤を含み得る。そのようなキャリアまたは賦形剤の例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖、スターチ、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３９】
適切な液体薬学的調製物形態または固体薬学的調製物形態は、例えば、マイクロカプセル化されるか、キレート化されるか、微視的金粒子上にコーティングされるか、リポソーム中に含まれるか、噴霧されるエアロゾル中に含まれるか、皮膚への移植用のペレット中に含まれるか、または皮膚中を引っ掻く鋭い物体上に乾燥された、吸入用の水性溶液もしくは生理食塩水溶液である。この薬学的組成物はまた、活性化合物を長期放出する、顆粒、散剤、錠剤、コーティングした錠剤、（マイクロ）カプセル剤、坐剤、シロップ剤、エマルジョン、懸濁剤、クリーム、ドロップ、または調製物を含み、その調製物において、賦形剤および添加剤および／もしくは補助剤（例えば、崩壊剤、結合剤、コーティング剤、甘味剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、甘味料、または可溶化剤が、上記のように慣用的に使用される。この薬学的組成物は、種々の薬物送達系における使用のために適切である。薬物送達のための方法の簡単な概説について、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−３３（これは、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。
【０１４０】
この免疫刺激核酸および必要に応じて他の治療剤および／または抗原は、それ自体が（そのまま）投与され得るか、または薬学的に受容可能な塩の形態で投与され得る。薬物中で使用される場合、その塩は、薬学的に受容可能であるべきであるが、薬学的に受容可能ではない塩が、その薬学的に受容可能な塩を調製するために簡便に使用され得る。そのような塩としては、以下の酸から調製された塩が挙げられるが、それらに限定されない：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸、ナフタレン−２−スルホン酸、およびベンゼンスルホン酸。また、そのような塩は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩（例えば、カルボン酸基のナトリウム塩、カリウム塩、もしくはカルシウム塩）として調製され得る。
【０１４１】
適切な緩衝化剤としては、酢酸および塩（１〜２％ｗ／ｖ）；クエン酸および塩（１〜３％ｗ／ｖ）；ホウ酸および塩（０．５〜２．５％ｗ／ｖ）；およびリン酸および塩（０．８〜２％ｗ／ｖ）が挙げられる。適切な保存剤としては、塩化ベンザルコニウム（０．００３〜０．０３％ｗ／ｖ）；クロロブタノール（０．３〜０．９％ｗ／ｖ）；パラベン類（０．０１〜０．２５％ｗ／ｖ）、およびチメロサール（０．００４〜０．０２％ｗ／ｖ）が挙げられる。
【０１４２】
本発明の薬学的組成物は、有効量の免疫刺激核酸、そして必要に応じて抗原および／または他の薬剤を、必要に応じて薬学的に受容可能なキャリア中に含んで、含む。用語「薬学的に受容可能なキャリア」とは、ヒトまたは他の脊椎動物への投与に適切な、１つ以上の適合性の、固体もしくは液体の、充填剤、希釈剤、もしくはカプセル化剤を意味する。用語「キャリア」とは、活性成分がその適用を容易にするために合わせられる、天然もしくは合成の、有機成分もしくは無機成分を示す。その薬学的組成物の成分はまた、相互作用が存在しない様式で、本発明の化合物と、および互いと、混合可能である。
【０１４３】
被験体の処置のために、その化合物の活性、投与様式、その免疫の目的（すなわち、予防免疫または治療免疫）、その障害の性質および重篤度、患者の年齢および体重に依存して、異なる用量が必要であり得る。所定の用量の投与は、個々の投与単位での単回投与によってかまたはより少量のいくつかの投与単位で他のようにの両方で、実行され得る。特定の数週間間隔または数ヶ月間隔での複数回投与は、この抗原特異的応答をブーストするために有用である。
【０１４４】
他の送達系としては、時間放出（ｔｉｍｅ−ｒｅｌｅａｓｅ）系、遅延放出（ｄｅｌａｙｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ）系、または徐放（ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ）系が挙げられ得る。そのような系は、その化合物の反復投与を回避し得、被験体および医師に対する簡便性を増加し得る。多くの型の放出送達系が、利用可能であり、そして等業者にとって公知である。それらとしては、ポリマーベースの系（例えば、ポリ（ラクチド−グリコリド）、コポリオキサレート、ポリカプロラクトン、ポリエステルアミド、ポリオルトエステル、ポリヒドロキシ酪酸、およびポリ無水物が挙げられる。薬物を含む上記ポリマーのマイクロカプセルが、例えば、米国特許第５，０７５，１０９号に記載される。送達系としてはまた、非ポリマー系も挙げられ、これは、脂質（ステロール（例えば、コレステロール、コレステロールエステル）、および脂肪酸もしくは天然脂肪（例えば、モノグリセリド、ジグリセリド、およびトリグリセリド）が挙げられる）；ヒドロゲル放出系；シラスティック（ｓｉｌａｓｔｉｃ）系；ペプチドベースの系；ロウコーティング；従来の結合剤および賦形剤を使用する圧縮錠剤；部分融合した移植物などである。特定の例としては、（ａ）本発明の薬剤がマトリックス中にある形態で含まれる、侵食系（米国特許第４，４５２，７７５号、同第４，６７５，１８９号および同第５，７３６，１５２号に記載される系）；ならびに（ｂ）ポリマーから制御された速度で活性成分が浸透する、拡散系（米国特許第３，８５４，４８０号、同第５，１３３，９７４号および同第５，４０７，６８６号に記載される）が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、ポンプベースのハードウェア送達系が使用され得、そのうちのいくつかは、移植のために適合される。
【０１４５】
本発明は、本発明は、以下の実施例によってさらに例証される。以下の実施例は、いかようにも、さらなる限定として解釈されるべきではない。本明細書全体を通して引用された参考文献（文献参照物、発行された特許、公開された特許出願、および同時係属中の特許出願）のすべての内容全体が、本明細書中に参考として明示的に援用される。
【実施例】
【０１４６】
（実施例１．ＯＤＮ２３９５は、ＮＫ細胞およびＩＦＮ−α産生の顕著に強力なアクチベータである）
本発明者らは、配列ＣＧの反復からなる（例えば、ＣＧＣＧＣＧ）かまたはＣがＣＧに先行するかそして／もしくはＧがＣＧの後に続く中和モチーフを含む、オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）を以前に認識および記載した。これらの中和モチーフは、複数の読出し（例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αの分泌）および抗原特異的免疫応答の誘導に対するＯＤＮの刺激効果を低減すると考えられた。Ｋｒｉｅｇ  ＡＭら、（１９９８）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９５：１２６３１−６。
【０１４７】
多くの場合、刺激モチーフとのオリゴデオキシヌクレオチド中の中和モチーフとの共存は、免疫活性化を予防すると考えられた。刺激モチーフおよび中和モチーフの両方を含む１つのこのようなＯＤＮは、ＯＤＮ２１３６であり、これは、配列ＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＣ（配列番号１９）を有する。このＯＤＮの３’末端は、かなり代表的な中和モチーフＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＣ（配列番号３７）を含み、これは、阻害的ＯＤＮ２０１０（ＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＣ，配列番号３８）の３’末端に由来する。驚くべきことに、ＯＤＮ２１３６は、ＮＫ細胞溶解活性（溶解単位、Ｌ．Ｕ．）の誘導について強力な活性を有した。表１に示されるように、３μｇ／ｍｌの濃度のＯＤＮ２１３６は、本発明者らの標準的Ｂ細胞およびＮＫ細胞刺激ホスホチオエートＯＤＮ２００６（ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ，配列番号３９）よりも、Ｌ．Ｕ．の誘導について実質的に強力であった。より著しく、ＯＤＮ２００６は、２，３９６ｐｇ／ｍｌのＩＦＮ−αの産生のみを誘導したが、ＯＤＮ２１３６は、１４，２７８ｐｇ／ｍｌの産生を誘導した（図１）。このことは、驚くべきことに、この中和配列の存在が、必ずしも回避されなくてよいことを示した。
【０１４８】
（表１．種々のＯＤＮと共に一晩培養されたヒトＰＢＬ）
【０１４９】
【表１−１】
2005502338.tif 000002
【０１５０】
【表１−２】
2005502338.tif 000003
しかし、この観察を理解するための試みにおいて、さらに強力なＮＫアクチベータおよびＩＦＮ−α誘導物質を、ＯＤＮ２１３６の３’末端をＯＤＮ２００６の５’末端と合わせることによって、作製した。得られたＯＤＮ２３９５（ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ，配列番号１）は、思いがけず、３’末端の最後の塩基のＣからＧへの変化を取り込んだ。この単一塩基変化は、完全な１２塩基長のパリンドロームをＯＤＮ２３９５の３’末端に作製する効果を有するが、ＯＤＮ２１３６においては、このパリンドロームはたった１０塩基長である。
【０１５１】
表２は、ＯＤＮ２３９５が、ほとんどの他の全てのホスホロチオエート骨格ＯＤＮと比較して、ＮＫ細胞のＬ．Ｕ．を誘導する際に顕著に強力であるデータの、別の例を示す。このアッセイにおいて、ＯＤＮ２３９５は、ポジティブコントロールのＯＤＮ１５８５（これは、キメラホスホロチオエート／ホスホジエステル（ＳＯＳ）骨格を有する）よりも弱い。ＯＤＮ１５８５（ｇｇＧＧＴＣＡＡＣＧＴＴＧＡｇｇｇｇｇＧ、配列番号３５）は、公開されたＰＣＴ出願ＷＯ  ０１／２２９９０に記載されている。この実験において試験した０．６μｇ／ｍｌの低濃度で、ＯＤＮ２１３６は、非ＯＤＮコントロール中の０．０３のバックグラウンドを超えるＬ．Ｕ．を誘導しなかった。図２および図３は、表２中のＮＫ細胞培養物からの上清中の、単球走化性タンパク質（ＭＣＰ）−１およびＩＦＮ誘導性タンパク質（ＩＰ）１０のレベルをそれぞれ示す。ＭＣＰ−１は、ＣＣＲ２のリガンドであるケモカインであり、そしてＴｈ１型およびＴｈ２型の免疫応答の両方に関連する。ＩＰ−１０は、ＣＸＣＲ３のリガンドであるＣＸＣケモカインであり、そしてＴｈ１応答に関連する。Ｌｏｅｔｓｃｈｅｒ  Ｐら（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６：２９８６−９１。これらのデータは、ＯＤＮ２３９５が、ＩＰ−１０産生の比較的強力な誘導物質であるが、平均レベルのＭＣＰ−１しか誘導しないことを示す。
【０１５２】
（表２．種々のＯＤＮと共に一晩培養したヒトＰＢＬ）
【０１５３】
【表２−１】
2005502338.tif 000004
【０１５４】
【表２−２】
2005502338.tif 000005
これらおよび他のデータに基づいて、本発明者らは、ＯＤＮ２３９５配列が、ＮＫ細胞およびＩＦＮ−α産生の顕著に強力なアクチベータであると結論付けた。
【０１５５】
（実施例２．ＯＤＮ２３９５に関連するＯＤＮもまた、ＮＫ細胞およびＩＦＮ−α産生の強力なアクチベータである）
さらなるＯＤＮ２４２７〜２４３３（配列番号２〜８）を、ＯＤＮ２３９５の３’末端のパリンドロームが、その免疫刺激活性において重要であり得るという可能性を試験するために、設計および合成した。表３は、これらの異なるＯＤＮがＮＫのＬ．Ｕ．を活性化する能力を比較した。これらのデータから明らかなように、１μｇ／ｍｌの濃度で最も強力なＯＤＮは、ＯＤＮ２４２９（ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＧ，配列番号４）であり、これは、ＮＫ活性の２．８５Ｌ．Ｕ．を誘導した。ＯＤＮ２００６は、この実験において非常に弱く、そしてＣＧを有さないコントロールＯＤＮ２１１８（ＧＧＧＧＴＣＡＡＧＣＴＴＧＡＧＧＧＧＧＧ，配列番号３６）を除いて、試験した他の全てのオリゴで、２００６よりも強力なものは存在しなかった。ＯＤＮ２４２９は、これだけが１２塩基のパリンドロームを維持したので、注目に値するが、これは、２３９５中に存在したパリンドロームとは異なるパリンドロームである。ＯＤＮ２４３０（ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＧＣＧ，配列番号５）（これは、１μｇ／ｍｌの濃度で二番目に強力なＯＤＮである）は、類似であるが、このパリンドロームは、１０塩基長まで僅かに短縮されていた。残りのＯＤＮは、パリンドローム配列を有さないかまたはより短いパリンドロームを有し、そしてＮＫ活性をあまり誘導しない。
【０１５６】
（表３．種々のＯＤＮと共に一晩培養したヒトＰＢＬ）
【０１５７】
【表３−１】
2005502338.tif 000006
【０１５８】
【表３−２】
2005502338.tif 000007
図４は、これらのオリゴが、ポジティブコントロールＳＯＳ  ＯＤＮ２２１６（ＧＧＧＧＧＡＣＧＡＴＣＧＴＣＧＧＧＧＧ，配列番号５５）、ＯＤＮ２３３４（ＧＧＧＧＴＣＧＡＣＧＴＣＧＡＣＧＴＣＧＡＧＧＧＧＧＧＧ，配列番号５６）およびＯＤＮ２３３６（ＧＧＧＧＡＣＧＡＣＧＴＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧ，配列番号５７）と比較した、ＩＦＮ−α産生を誘導する能力を示す。２３９５関連ＯＤＮの全てが、ＯＤＮ２００６よりも高いレベルのＩＦＮ−α産生を誘導するが、そのレベルは、キメラＳＯＳ  ＯＤＮによって誘導されるレベルよりも低い。ＩＦＮ−α発現の誘導のランキング順序は、ＮＫ  Ｌ．Ｕ．の順序とほぼ類似し、最も強力な効果は、ＯＤＮ２３９５および２４２９によって観察された。
【０１５９】
（実施例３．ＮＫ細胞およびＩＦＮ−α産生に対する強力な刺激効果は、Ｂ細胞効果に対応しない）
図５Ａに示されるように、ＯＤＮ２３９５およびその関連物質は、４８時間でのＣＤ８６のＢ細胞産生を誘導するそれらの能力に関して、ＯＤＮ２００６またはその関連物質２３９７よりも、０．２５μｇ／ｍｌの濃度で有意に弱かった。本発明者らが以前に注目したように、より高いＯＤＮ濃度（例えば、１μｇ／ｍｌ）では、種々のＯＤＮ間にあまり差異は見られなかった（図５Ｂ）。同じ実験において、本発明者らはまた、増殖アッセイによってＢ細胞の活性化を測定した（３Ｈチミジン取り込み；図６）。再び、０．２５μｇ／ｍｌの濃度のＯＤＮ２００６およびＯＤＮ２３９７（配列番号４４）は、群を抜いて最も強力であった（図６Ａ）。しかし、より高い濃度では、２３９５関連ＯＤＮは、その効力において類似であった（図６Ｂ）。
【０１６０】
（実施例４．ＯＤＮ２３９５および関連ＯＤＮは、ＩＬ−１０の弱い誘導物質である）
本発明者らの以前の研究は、ＣｐＧによって誘導されるＩＬ−１０産生のほとんどが、Ｂ細胞由来であることを示唆した。図７に示されるように、ＩＬ−１０発現は、Ｂ細胞増殖によく相関した。再び、ＯＤＮ２００６およびその関連のＯＤＮ２３９７は、０．２５μｇ／ｍｌの低濃度で最も強力であった。ＯＤＮ２３９５およびその関連物質は、この濃度でＩＬ−１０産生をあまり誘導しなかった。
【０１６１】
（実施例５．免疫刺激効果の濃度依存性）
このクラスのオリゴヌクレオチドおよびその誘導体に対するさらなる研究は、ＯＤＮ番号２４２７〜２４３３（配列番号２〜８）を含んだ。これらのＯＤＮについてのデータは、図８に示される。これは、ＯＤＮ２００６が、１μｇ／ｍｌまたは６μｇ／ｍｌのいずれの濃度でも、ＩＦＮ−α産生の誘導において非常に弱かったことを再び実証する。しかし、ＯＤＮ  ２３９５は、特に１μｇ／ｍｌのより低い濃度で、かなりの量のＩＦＮ−αを誘導した。本発明者らは、より低い濃度（例えば、１μｇ／ｍｌ）で見られる効果と比較して、より高い濃度（例えば、６μｇ／ｍｌ）で刺激活性が低減した、ＯＤＮを時折観察した。図８に示される実験において、ＯＤＮ２３９５は、より高い濃度よりも、より低い濃度においてより強力であったが、ＯＤＮ２４２９は、より高い濃度でより強力であった。この実験におけるホスホロチオエートＯＤＮの一般的な逆用量応答曲線とは対照的に、キメラＯＤＮ（例えば、ＯＤＮ２３３６）は、代表的に、より高い濃度での免疫刺激効果の増加を示した。図８に示されるこの実験におけるＯＤＮ２４３２の刺激効果は、このＯＤＮが良好なパリンドロームを有さないことを考慮すると、興味深い。比較的弱いＢ細胞刺激活性を有するこの系は、図５および図６に示される。
【０１６２】
（実施例６．Ｂ細胞刺激とＮＫ細胞刺激およびＩＦＮ−α分泌との間の相互関係）
図９は、別の実験を示し、ここで、０．４μｇ／ｍｌの低濃度でのＯＤＮ２３９５は、ＣＤ８６のＢ細胞発現の誘導において、ＯＤＮ２００６よりも有意に弱かった。２３９５の他の関連物質は、Ｂ細胞刺激のあまり顕著ではない喪失を示す。興味深いことに、ＮＫ刺激の獲得について以前に観察されたＢ細胞刺激の喪失についての、同じランキング順序の示唆が存在する（ＯＤＮ２４２９、その次にＯＤＮ２４３０が、２３９５関連物質間で、最も弱いＢ細胞刺激物質である）。このことは、２３９５様ＯＤＮによるＢ細胞刺激の喪失が、ＮＫ刺激およびＩＦＮ−α分泌の獲得に密接に関連するという可能性を生じる。図１０および図１１は、ＩＦＮ−α分泌が、ＯＤＮ２３９５およびＯＤＮ２４２９、次にＯＤＮ２４３０によって見られたことを示す。別個の実験からの表４および図１２もまた、ＯＤＮ２３９５およびＯＤＮ２４２９が、２つの異なるヒトドナー（Ｄ１４１およびＤ１４２）においてＩＦＮ−α分泌を誘導する強力な能力を示す。
【０１６３】
（表４．種々のＯＤＮ２３９５１によるＩＦＮ−α分泌）
【０１６４】
【表４】
2005502338.tif 000008
１平均±標準偏差として、ｐｇ／ｍｌの単位で示されたデータ。
表４についてのＯＤＮ配列
【０１６５】
【化１】
2005502338.tif 000009
（実施例７．ＧＣリッチドメインの特徴）
驚くべきことに、ＯＤＮ５２９３〜５２９７はいずれも、強力な免疫刺激応答を実証しなかった。ＯＤＮ５２９３は、１０塩基のパリンドロームを含むが、このパリンドロームは、中心ＣＧがＧＣに逆転している２３９５のパリンドロームとは異なるパリンドロームである。しかし、ＯＤＮ２４２９もまた、このような逆転を有するので、この変化自体は、活性の喪失を説明できないと考えられる。むしろ、パリンドローム中に中心ＣＧが存在しない限り、より高いレベルの活性が、１２塩基のパリンドロームで生じ得る。しかし、ＯＤＮ２４３０はまた、中心のＧＣジヌクレオチドを有する１０塩基のパリンドロームのみを有する。ＯＤＮ２４３０の免疫刺激活性は、３’末端に５つのＣｐＧジヌクレオチドを含むという事実によって増強され得るが、一方でＯＤＮ５２９３は、３つしか含まない。
【０１６６】
ＯＤＮ５２９４は、６塩基のパリンドロームのみを含み、これはおそらく、その低い活性に関連し得る。ＯＤＮ５２９５も同様に、良好なパリンドロームを有さない。ＯＤＮ５２９６の低い活性は、ＣＣＧの単純な反復では、ＯＤＮ２３９５の免疫刺激効果を付与するには不十分であることを示唆する。ＯＤＮ２３９７は、その３’末端に完全な１２塩基のパリンドロームを有するが、その５’末端にＣｐＧモチーフを有さない。ＯＤＮ５２９７中の１２塩基のパリンドロームは、ＯＤＮ２４２９中のパリンドロームと同じであるので、ＯＤＮ２４２９の５’ＴＣＧＴＣＧモチーフは、その免疫刺激活性に重要であることが結論付けられ得る。すなわち、オリゴヌクレオチドの一端におけるＯＤＮ２４２９の中和パリンドロームの存在は、他方の末端における少なくとも１つの刺激モチーフの非存在下で免疫刺激活性を提供するには不十分であると考えられる。
【０１６７】
（実施例８．ＩＦＮ−γ産生に対する効果）
いくつかのさらなる型のアッセイが、この新規クラスの免疫刺激核酸の免疫刺激効果の範囲をよりよく理解するために実施された。図１３は、ヒトＰＢＭＣの上清からのＩＦＮ−γ産生に対するこれらのＯＤＮの効果のいくつかを示す。これらの細胞は、表３に示される実験において使用された細胞と同じであったが、それらの培養物由来の上清を、そのＩＦＮ−γレベルについてアッセイした。図１３のパネルＣは、ＳＯＳ  ＣｐＧ  ＯＤＮ（例えば、ＯＤＮ１５８５）が、いくらかのＩＦＮ−γ産生を誘導するが、ＣｐＧモチーフを有さないＯＤＮ（例えば、コントロールＯＤＮ２１１８）は誘導しないことを示す。図１３のパネルＡおよびＢは、ＯＤＮ２００６が、ＩＦＮ−γ産生の誘導において比較的弱く、一方でＯＤＮ２３９５およびその類縁物質（ｃｏｕｓｉｎ）がいくらかより強力であることを示す。
【０１６８】
別のセットの研究を、樹状細胞に対するこれらの異なるＯＤＮの効果を試験するために実施した。形質細胞様ＤＣ（ｐＤＣ）は、ＯＤＮ２３９５およびその関連物質に応答して産生されるＩＦＮ−αの供給源である。骨髄様ＤＣ（ｍＤＣ）に対する種々のＯＤＮの効果は、全てのＯＤＮが、部分的に精製されたｍＤＣを、ＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化してＩＦＮ−γを産生するように誘導する点において、比較的類似である（図１４および図１５）。骨髄様ＤＣを、バフィーコートから単離し、そしてＧＭ−ＣＳＦ（４．４ｎｇ／ｍｌ）および種々のＯＤＮと共に２日間インキュベートした。次いで、ＣＤ４＋ナイーブＴ細胞を、異なるドナーから単離し、そして選択されたエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比でＤＣと混合し、そしてさらに６日間インキュベートした。次いで、細胞を染色し、そして蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）によって分析した。結果を、ＩＦＮ−γについて染色されたＣＤ３＋細胞の割合に関して測定した。図１４は、ＩＦＮ−γについてポジティブに染色されたＴ細胞の割合を示し、そして図１５は、これらのＴ細胞中のＩＦＮ−γ染色の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。
【０１６９】
（実施例９．全てのＧＣリッチパリンドロームが有効であるわけではない）
いくつかのさらなるＯＤＮを、この新規クラスのＯＤＮについての構造的要件をよりよく理解するために合成した。本発明者らは、強力な免疫刺激的ＯＤＮがＧＣリッチパリンドロームを含んでいることに注目したので、ＯＤＮ２４４９（ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＧＧＧＧＣＣＣＣＣ、配列番号９）およびＯＤＮ２４５０（ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＣＣＣＣＣＧＧＧＧＧＧ、配列番号１０）を、単純な連続的Ｇとそれに続くＣ、または連続的Ｃとそれに続く連続的ＧであるＧＣリッチなパリンドロームを有するように、合成した。図１６に示されるように、これらのＯＤＮのいずれも、ＩＦＮ−α産生を誘導しなかった。
【０１７０】
（実施例１０．免疫刺激配列および中和モチーフの配向の影響）
ＯＤＮ２４５１（ＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴＣＧＴＣＧＴＴＴ、配列番号１１）を、「刺激」ＴＣＧＴＣＧモチーフおよび「中和」ＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ（配列番号２３）パリンドロームの５’および３’配向が、免疫刺激活性を喪失せずに逆転され得るという可能性を試験するために合成した。実際、ＯＤＮ２４５１は、高度に刺激性であった（図１６）。ＯＤＮ２４５２（ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴＴＴＴＴ，配列番号１２）を、さらなる配列が、免疫刺激活性を低減せずにＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ（配列番号２３）パリンドロームの３’末端に付加され得るかどうかを決定するために合成した。但し、この刺激ＴＣＧＴＣＧモチーフは、５’末端に存在した。実際、このＯＤＮもまた、高度に免疫刺激性であった（図１６）。
【０１７１】
（実施例１１．種々のＯＤＮ２３９５およびそれらのＩＦＮ−α誘導）
この新規クラスのＯＤＮがＩＦＮ−α分泌を誘導するための構造的要件をより詳細に研究するために、種々のＯＤＮ  ２３９５を合成し、そしてそれらの免疫刺激活性について試験した。表５は、ＩＦＮ−α産生に関するデータを要約する。
【０１７２】
（表５．種々のＯＤＮ２３９５およびそれらのＩＦＮ−α誘導１、２）
【０１７３】
【表５】
2005502338.tif 000010
ｌ下線は、２３９５とは異なるヌクレオチドであり；パリンドローム配列はイタリック体である。
２ＯＤＮ２３３６（これは、キメラ骨格ＯＤＮ（大文字は、ホスホジエステル結合を示し、小文字は、ホスホロチオエート結合を示す）を示す）以外全ては、完全にホスホロチオエートＯＤＮである。
【０１７４】
ホスホロチオエートＯＤＮである２３９５および２４２７〜２４３３を使用する実験の第一セットから、ＯＤＮの３’末端のパリンドローム配列が、樹状細胞（これは、ＩＦＮ−αの主要なプロデューサーである）によるＩＦＮ−α分泌の誘導について重要な役割を有するが（２３９５および２４２９を参照のこと）、３’末端にこのようなパリンドロームを有さないいくつかのＯＤＮ（例えば、ＯＤＮ２４３０およびＯＤＮ２４３２）もまた、いくらか低い量でＩＦＮ−αを誘導した（図１７Ａの実施例）ことが明らかとなった。ＯＤＮ２３９５およびＯＤＮ２４２９は、最も高い量のＩＦＮ−αを誘導したが、一方で２００６（クラスＢのＯＤＮ）は、全くない〜最少量を誘導し、そしてＯＤＮ２３３６（クラスＡのＯＤＮ）は、大量のこのサイトカインを誘導した。ほとんどの実験は、ＯＤＮ２４２９が、さらに高い量のこのサイトカインを誘導したことを実証した（図１７Ｂ）。さらなるＴＣＧモチーフの導入（例えば、ＯＤＮ２４２７およびＯＤＮ２４２８）は、ＩＦＮ−α分泌に対してネガティブな効果を有するようであった。ＯＤＮ２１８６のこれらおよび他の研究からのデータに基づき、３’末端のｇｃｃは、観察された効果において可能性のある役割を果たすようであった。
【０１７５】
従って、本発明者らは、別のセットのＯＤＮ（全てその３’末端にＧＣＣ配列を有する）を試験した。これらのＯＤＮのいずれも、ＩＦＮ−αを誘導しないことが観察された。従って、パリンドローム中のＧＣＣ自体だけでは、観察された効果について不十分であるようである。
【０１７６】
さらに、その５’末端にＴＧＣを有するＯＤＮ５２９７は、パリンドローム３’配列を保有するにもかかわらず、ＩＦＮ−αを全く誘導しなかった。このことから、３’パリンドローム配列のみならず５’ＴＣＧモチーフもまた、これらのＯＤＮの活性に重要であるという結論が導かれた。
【０１７７】
このことを、ＯＤＮ５３２８（５’ＴＧＣモチーフを有する２３９５）を用いて確認した。クラスＡのＯＤＮのメチル化とは対照的に、少なくとも５’モチーフのメチル化は減少したが、ＩＦＮ−α分泌は抑制しなかった。この知見は、クラスＢのＯＤＮを用いて得られた結果と一致する。それにもかかわらず、３’パリンドロームの部分を有するが、５’末端での１つだけのＣｐＧジヌクレオチドで異なる配列を有するＯＤＮ（ＯＤＮ２１３６）もまた、ＩＦＮ−αを誘導した。このＯＤＮおよび完全な３’パリンドロームを有するＯＤＮ（ＯＤＮ５３１５）を用いた予備的結果において、ＯＤＮ５３１５は、ＯＤＮ２１３６よりも良好であったが、ＯＤＮ２３９５ほどには良好でなかった。
【０１７８】
ＯＤＮ５３２９が、その３’末端に完全なＣＧパリンドロームを有するにもかかわらず、全くない〜非常に低い量だけのＩＦＮ−αを誘導するようであるという事実は、特定のパリンドローム配列がＩＦＮ−α活性のために好ましいことを示す。
【０１７９】
（実施例１２．Ｂ細胞活性化とＩＦＮ−α誘導との間の相互関係）
さらなるＢ細胞活性化実験を、実施例１１のＯＤＮのうちのいくつかのパネルを用いて実施した（図１８）。これらの結果は、ＯＤＮがＩＦＮ−αの誘導について良好になるほど、それがＢ細胞に対して活性でなくなることを示した（特に、ＯＤＮ２００６、ＯＤＮ２３３６、ＯＤＮ２９９５およびＯＤＮ２４２９を比較のこと）。それにもかかわらず、このことは、これらＯＤＮの全てがＢ細胞刺激においてＯＤＮ２３３６（クラスＡのＯＤＮ）よりも優れることもまた示した。
【０１８０】
（実施例１３．ＩＦＮ−γ分泌に対する効果）
本発明者らはまた、異なる時点で、異なる濃度のＯＤＮとの、ＰＢＭＣのインキュベーションに対するＩＦＮ−γの分泌を決定した（図１９Ａ〜Ｃ）。試験したＯＤＮは、ランク順序２３３６＞２３９５、２４２９＞２００６でＩＦＮ−γ分泌を誘導した。それにもかかわらず、ＯＤＮの間の差異は、読み出し（リードアウト）としてＩＦＮ−αを使用することによる差異ほどは明らかではなかった。
【０１８１】
（実施例１４．ＭＬＲにおけるＩＦＮ−γに対する効果）
本発明者らはまた、混合リンパ球反応物（ＭＬＲ）において、ＩＦＮ−γの誘導に対するこれらＯＤＮの効果を決定した。この設定において、あるドナーのリンパ球は、別のドナーの細胞上に発現される抗原に対して応答する。これらの結果は、ＯＤＮ２００６、ＯＤＮ２３３６およびＯＤＮ２３９５が、このような抗原特異的応答の間のＩＦＮ−γ分泌を増強し得ることを実証した（図２０）。このことは、全てのこれらＯＤＮが特定の抗原に対する反応性を増強し得ることを示した。
【０１８２】
（実施例１５．ＯＤＮ２３９５は、ＯＤＮ２００６ほどＩＬ−１０を誘導しない）
さらなる実験設定は、炎症誘発性サイトカインＩＬ−１０の誘導に着目した。再度、ＩＦＮ−γについての前出のように、ＰＢＭＣを異なる時間にわたり、そして異なる濃度のＯＤＮと共にインキュベートした（図２１Ａ〜Ｃ）。これらの結果は、前に示すように、ＯＤＮ２００６が、最少量〜少量のみのＩＬ−１０を誘導するＯＤＮ２３３６とは対照的に、比較的高い量のＩＬ−１０を誘導することを実証する。対照的に、ＯＤＮ２３９５およびＯＤＮ２４２９は、ＯＤＮ２３３６より多いがＯＤＮ２００６ほどではないＩＬ−１０を誘導する。このことは再度、この新規クラスの免疫刺激性ＯＤＮのうちのＯＤＮが、クラスＡのＯＤＮについて記載された刺激活性と、クラスＢのＯＤＮについて記載された刺激活性との間にＯＤＮを位置づける刺激活性を有することを確実にする。
【０１８３】
（実施例１６．ＯＤＮ２３９５はＯＤＮ２００６ほどではないがＯＤＮ８９５４より多くのＴＮＦ−αを誘導する）
ヒトＰＢＭＣを、１．６μｇ／ｍｌのＯＤＮ２００６、ＯＤＮ８９５４、ＯＤＮ２３９５、ＯＤＮ２４２９またはＬＰＳと共に６時間培養し、次いで上清を収集し、そして特異的なＥＬＩＳＡによってＴＮＦ−αを測定した。結果を表６に示す。
【０１８４】
（表６．異なるクラスの代表的なＯＤＮによるＴＮＦ−αの誘導）
【０１８５】
【表６】
2005502338.tif 000011
さらなる実験により、サイトカインのＩＬ−５およびＩＬ−１５がこれらＯＤＮとのＰＢＭＣのインキュベーションに対する本発明者らの実験設定において検出され得ないことが、示された。
【０１８６】
（実施例１７．ＩＰ−１０の誘導）
ヒトＰＢＭＣを、単独、ＩＬ−２の存在下、１０μｇ／ｍｌのコントロールＯＤＮ１５８５もしくはコントロールＯＤＮ２１１８の存在下、または０．６μｇ／ｍｌもしくは３．０μｇ／ｍｌの様々なＯＤＮの存在下のいずれかで、培養した。２４時間後に上清を収集し、そして特異的な酵素連結免疫固定化アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によってＩＰ−１０を測定した。結果を図２２に示す。３．０μｇ／ｍｌのＯＤＮ２３９５、ＯＤＮ２４２９、ＯＤＮ２４３０、ＯＤＮ２４３２およびＯＤＮ２４５１、ならびに０．６μｇ／ｍｌのＯＤＮ２４５２は、全て多量のＩＰ−１０を誘導した。
【０１８７】
（実施例１８．ＩＦＮ−αの誘導）
ヒトＰＢＭＣを、単独、ＩＬ−２の存在下、１０μｇ／ｍｌのコントロールＯＤＮ１５８５もしくはコントロールＯＤＮ２１１８の存在下、または０．６μｇ／ｍｌもしくは３．０μｇ／ｍｌの様々なＯＤＮの存在下のいずれかで、培養した。２４時間後に上清を収集し、そして特異的なＥＬＩＳＡによってＩＦＮ−αを測定した。結果を図２３Ａ（０．６μｇ／ｍｌのＯＤＮ）および図２３Ｂ（３．０μｇ／ｍｌのＯＤＮ）に示す。３．０μｇ／ｍｌのＯＤＮ２３９５、ＯＤＮ２４２７、ＯＤＮ２４２９、ＯＤＮ２４３０、ＯＤＮ２４３１、ＯＤＮ２４３２およびＯＤＮ２４５１、ならびに０．６μｇ／ｍｌのＯＤＮ２４５２は、全て多量のＩＦＮ−αを誘導した。
【０１８８】
（実施例１９．ＩＦＮ−γの誘導）
ヒトＰＢＭＣを、単独、ＩＬ−２の存在下、１０μｇ／ｍｌのコントロールＯＤＮ１５８５もしくはコントロールＯＤＮ２１１８の存在下、または０．６μｇ／ｍｌもしくは３．０μｇ／ｍｌの様々なＯＤＮの存在下のいずれかで、培養した。２４時間後に上清を収集し、そして特異的なＥＬＩＳＡによってＩＦＮ−γを測定した。結果を図２４に示す。３．０μｇ／ｍｌのＯＤＮ２３９５、ＯＤＮ２４２７、ＯＤＮ２４２９、ＯＤＮ２４３０、ＯＤＮ２４３１、ＯＤＮ２４３２、ＯＤＮ２４５１およびＯＤＮ２４５２、ならびに０．６μｇ／ｍｌのＯＤＮ２３５２は、全て多量のＩＦＮ−γを誘導した。
【０１８９】
（実施例２０．ＩＬ−６の誘導）
ヒトＰＢＭＣを、単独、ＩＬ−２の存在下、１０μｇ／ｍｌのコントロールＯＤＮ１５８５もしくはコントロールＯＤＮ２１１８の存在下、または０．６μｇ／ｍｌもしくは３．０μｇ／ｍｌの様々なＯＤＮの存在下のいずれかで、培養した。２４時間後に上清を収集し、そして特異的なＥＬＩＳＡによってＩＬ−６を測定した。結果を図２５に示す。０．６μｇ／ｍｌのＯＤＮ２３９５、ＯＤＮ２４３０、ＯＤＮ２４３１、ＯＤＮ２４３２、ＯＤＮ２４３３、ＯＤＮ２１３６、ＯＤＮ２４４９、ＯＤＮ２４５０、ＯＤＮ２４５１およびＯＤＮ２４５２、ならびに３．０μｇ／ｍｌのＯＤＮ２４４９およびＯＤＮ２４５１は、全て多量のＩＬ−６を誘導した。
【０１９０】
（実施例２１．ＩＦＮ−αの誘導）
ヒトＰＢＭＣを、単独、または３．０μｇ／ｍｌもしくは６．０μｇ／ｍｌの様々なＯＤＮの存在下のいずれかで、培養した。ＯＤＮは、ＯＤＮ２００６、ＯＤＮ８９５４、ＯＤＮ２３９５、ＯＤＮ２４４９、ＯＤＮ２４５０、ＯＤＮ２４５１、ＯＤＮ２４５２、ＯＤＮ５３７３（ＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ、配列番号２３）、ＯＤＮ５３７４（ＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ、配列番号２４）、ＯＤＮ５３７５（ＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴＣＧＴＣＧＴＴＴ、配列番号２５）、ＯＤＮ５３７６（ＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＴＴＴ、配列番号２６）、およびＯＤＮ５３７７（ＣＣＧＣＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ、配列番号２７）を含んだ。２４時間後に上清を収集し、そして特異的なＥＬＩＳＡによってＩＦＮ−αを測定した。結果を図２６に示す。ＯＤＮ２３９５、ＯＤＮ２４５１、ＯＤＮ２４５２ならびにＯＤＮ５３７６は全てＩＦＮ−αを誘導した。
【０１９１】
（実施例２２．ＯＤＮ５５１５およびＯＤＮ５５１６によるＩＦＮ−αの誘導）
２人のドナーより獲得したヒトＰＢＭＣ（Ｄ３４６およびＤ２４０）を、単独、または０．８μｇ／ｍｌ、２．４μｇ／ｍｌもしくは６．０μｇ／ｍｌのＯＤＮ２００６、ＯＤＮ５５１５もしくはＯＤＮ５５１６の存在下のいずれかで、培養した。２４時間後に上清を収集し、そして特異的なＥＬＩＳＡによってＩＦＮ−αを測定した。結果を表７に示す。特にＯＤＮ濃度２．４μｇ／ｍｌおよび６．０μｇ／ｍｌで、ＯＤＮ５５１５およびＯＤＮ５５１６は、ＯＤＮ２００６よりも効果的にＩＦＮ−αを誘導した。
【０１９２】
（実施例２３．ＯＤＮ２０１８４、ＯＤＮ２０１８５およびＯＤＮ２０１８６によるＩＦＮ−αの誘導）
３人のドナーより獲得したヒトＰＢＭＣ（Ｄ４４５、Ｄ４４６およびＤ４４８）を、単独、または０．０５μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．２μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌもしくは１．０μｇ／ｍｌのＯＤＮ２００６、ＯＤＮ２０１８４、ＯＤＮ２０１８５もしくはＯＤＮ２０１８６の存在下のいずれかで、培養した。２４時間後に上清を収集し、そして特異的なＥＬＩＳＡによってＩＦＮ−αを測定した。結果を表８に示す。特に０．２〜０．５μｇ／ｍｌで、ＯＤＮ２０１８４、ＯＤＮ２０１８５およびＯＤＮ２０１８６は、ＯＤＮ２００６よりも効果的にＩＦＮ−αを誘導した。
【０１９３】
（表７．ＯＤＮ５５１５およびＯＤＮ５５１６によるＩＦＮ−αの誘導（ｐｇ／ｍｌ））
【０１９４】
【表７】
2005502338.tif 000012
（表８．ＯＤＮ２０１８４、ＯＤＮ２０１８５およびＯＤＮ２０１８６によるＩＦＮ−αの誘導（ｐｇ／ｍｌ））
【０１９５】
【表８】
2005502338.tif 000013
（実施例２４．ＯＤＮ８９５４、ＯＤＮ５５６９およびＯＤＮ５５７０によるによるＩＦＮ−αの誘導）
３人のドナーより獲得したヒトＰＢＭＣ（Ｄ５２１、Ｄ５２５およびＤ５２６）を、単独、または０．０３μｇ／ｍｌ、０．０６μｇ／ｍｌ、０．１２５μｇ／ｍｌ、０．２５μｇ／ｍｌもしくは１．０μｇ／ｍｌのＯＤＮ２００６（配列番号３９）、ＯＤＮ８９５４、ＯＤＮ５５６９（ＴＩＧＴＩＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＧ、配列番号６３）もしくはＯＤＮ５５７０（ＴＣＩＴＣＩＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＧ、配列番号７０）の存在下のいずれかで、培養した。２４時間後に上清を収集し、そして特異的なＥＬＩＳＡによってＩＦＮ−αおよびＩＬ−１０を測定した。結果を表９および表１０に示す。
【０１９６】
（表９．ＯＤＮ８９５４、ＯＤＮ５５６９およびＯＤＮ５５７０によるによるＩＦＮ−α（ｐｇ／ｍｌ）の誘導）
【０１９７】
【表９】
2005502338.tif 000014
（表１０．ＯＤＮ８９５４、ＯＤＮ１０１０１−２、ＯＤＮ５５６９およびＯＤＮ５５７０によるによるＩＬ−１０の誘導）
【０１９８】
【表１０】
2005502338.tif 000015
上記の明細書は、当業者に本発明の実施を可能とするのに十分であるとみなされる。本発明は、提供された実施例により範囲を限定されるべきではない。なぜなら、これら実施例は、本発明の１局面の単なる例示として意図され、そして他の機能的に等価な実施形態が本発明の範囲内であるからである。本明細書中に示されそして記載されたものに加えて、本発明の種々の改変が、上記説明より当業者に明らかとなり、そしてそれらは添付の特許請求の範囲の範囲内にある。本発明の利点および目的は、必ずしも本発明の各実施形態によって包含されるわけではない。
【０１９９】
本出願において引用される全ての参考文献、特許および特許刊行物は、本明細書中でその全体が参考として援用される。
【図面の簡単な説明】
【０２００】
以下の図面は、例示目的のためにのみ提供されており、本発明を理解または実施するためには必要とされない。
【図１】図１は、単独でか、ＩＬ−２とともにか、または示される濃度の示されるＯＤＮの存在下での２４時間の培養後に、ヒトＰＢＭＣにおいて誘導されたＩＦＮ−αの量（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。
【図２】図２は、単独でか、ＩＬ−２とともにか、または示される濃度の示されるＯＤＮの存在下での２４時間の培養後に、ヒトＰＢＭＣにおいて誘導されたＭＣＰ−１の量（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。
【図３】図３は、単独でか、ＩＬ−２とともにか、または示される濃度の示されるＯＤＮの存在下での２４時間の培養後に、ヒトＰＢＭＣにおいて誘導されたＩＰ−１０の量（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。
【図４】図４は、単独で（Ｎ／Ａ）か、または１．０μｇ／ｍｌの示されるＯＤＮの存在下での４８時間の培養後に、ヒトＰＢＭＣにおいて誘導されたＩＦＮ−αの量（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。
【図５】図５は、単独で（Ｎ／Ａ）か、または０．２５μｇ／ｍｌ（パネルＡ）もしくは１．０μｇ／ｍｌ（パネルＢ）の示されるＯＤＮの存在下での４８時間の培養後の、ＣＤ８６についてのＢ細胞における表面染色（ＭＦＩ）を示す一対の棒グラフである。
【図６】図６は、単独で（Ｎ／Ａ）か、または０．２５μｇ／ｍｌ（パネルＡ）もしくは１．０μｇ／ｍｌ（パネルＢ）の示されるＯＤＮの存在下での、７２時間のＢ細胞増殖アッセイの結果（ｃｐｍ  ３Ｈ−チミジン取込み）を示す一対の棒グラフである。
【図７】図７は、単独で（Ｎ／Ａ）か、または０．２５μｇ／ｍｌ（パネルＡ）もしくは１．０μｇ／ｍｌ（パネルＢ）の示されるＯＤＮの存在下のいずれかでの２４時間の培養後に、ヒトＰＢＭＣにおいて誘導されたＩＬ−１０の量（ｐｇ／ｍｌ）を示す一対の棒グラフである。
【図８】図８は、単独で（ｗ／ｏ）か、または示される濃度（１μｇ／ｍｌまたは６μｇ／ｍｌ）の示されるＯＤＮの存在下で２４時間の培養後に、２人のドナー（Ｄ１２７（黒い棒）およびＤ１２４（白い棒））由来のＰＢＭＣにおいて誘導されたＩＦＮ−αの量（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。
【図９】図９は、単独で（ｗ／ｏ）か、または示される濃度（０．４μｇ／ｍｌ、１．０μｇ／ｍｌまたは１０．０μｇ／ｍｌ）の示されるＯＤＮの存在下で２４時間培養されたヒトＰＢＭＣにおけるＣＤ８６陽性細胞のパーセントによって測定される、Ｂ細胞活性化を示す棒グラフである。
【図１０】図１０は、単独で（ｗ／ｏ）か、または示される濃度（１μｇ／ｍｌまたは６μｇ／ｍｌ）の示されるＯＤＮの存在下で２４時間の培養後に、２人のドナー（Ｄ１４１（白い棒）およびＤ１４２（黒い棒））由来のＰＢＭＣにより分泌されたＩＦＮ−αの量（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。
【図１１】図１１は、単独で（ｗ／ｏ）か、または示される濃度（１μｇ／ｍｌまたは６μｇ／ｍｌ）の示されるＯＤＮの存在下で４８時間の培養後に、２人のドナー（Ｄ１４１（白い棒）およびＤ１４２（黒い棒））由来のＰＢＭＣにより分泌されたＩＦＮ−αの量（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。
【図１２】図１２は、単独で（ｗ／ｏ）か、または６μｇ／ｍｌの示されるＯＤＮの存在下で２４時間の培養後に、２人のドナー（Ｄ１４１（影を付けた棒）およびＤ１４２（白い棒））由来のＰＢＭＣにより分泌されたＩＦＮ−αの量（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。
【図１３】図１３は、単独で（ｎ／ａ）か、または示される濃度（パネルＡ、パネルＢ、およびパネルＣにおいて、それぞれ、１μｇ／ｍｌ、３μｇ／ｍｌまたは１０μｇ／ｍｌ）の示されるＯＤＮの存在下で２４時間の培養後に、ＰＢＭＣにより分泌されたＩＦＮ−γの量（ｐｇ／ｍｌ）を示す一連の３つの棒グラフである。
【図１４】図１４は、単独で（ＮＡ）か、または示されるＯＤＮの存在下で４８時間の培養後に、ＩＦＮ−γについて陽性であるＣＤ３＋細胞染色のパーセンテージを示す棒グラフである。
【図１５】図１５は、単独で（ＮＡ）か、または示されるＯＤＮの存在下で４８時間の培養後に、Ｔ細胞におけるＩＦＮ−γ染色の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す棒グラフである。
【図１６】図１６は、単独で（Ｎ／Ａ）か、または１．０μｇ／ｍｌの示されるＯＤＮの存在下で２４時間の培養後に、ヒトＰＢＭＣにより分泌されたＩＦＮ−αの量（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。
【図１７Ａ】図１７は、単独で（ｗ／ｏ）か、または示される濃度（１μｇ／ｍｌもしくは６μｇ／ｍｌ）の示されるＯＤＮの存在下で２４時間もしくは４８時間の培養後に、ヒトＰＢＭＣにより分泌されたＩＦＮ−αの量（ｐｇ／ｍｌ）を示す一対の棒グラフである。パネルＡは、２人のドナーからプールされたＰＢＭＣについての結果を示す。パネルＢは、２人のドナー（Ｄ１４１およびＤ１４２）から得られたＰＢＭＣについての結果を示す。
【図１７Ｂ】図１７は、単独で（ｗ／ｏ）か、または示される濃度（１μｇ／ｍｌもしくは６μｇ／ｍｌ）の示されるＯＤＮの存在下で２４時間もしくは４８時間の培養後に、ヒトＰＢＭＣにより分泌されたＩＦＮ−αの量（ｐｇ／ｍｌ）を示す一対の棒グラフである。パネルＡは、２人のドナーからプールされたＰＢＭＣについての結果を示す。パネルＢは、２人のドナー（Ｄ１４１およびＤ１４２）から得られたＰＢＭＣについての結果を示す。
【図１８】図１８は、単独で（ｗ／ｏ）か、または示される濃度（０．４μｇ／ｍｌおよび１．０μｇ／ｍｌ）の示されるＯＤＮの存在下で２４時間の培養後の、ＣＤ８６陽性Ｂ細胞のパーセントを示す棒グラフである。
【図１９Ａ】図１９は、単独で（ｗ／ｏ）か、ＬＰＳとともにか、または示される濃度（０．２μｇ／ｍｌ〜１．０μｇ／ｍｌ）の示されるＯＤＮとともに、６時間（パネルＡ）、２４時間（パネルＢ）、もしくは４８時間（パネルＣ）インキュベーションした後の、ヒトＰＢＭＣの培養上清中のＩＦＮ−γの濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示す一連の３つの棒グラフである。
【図１９Ｂ】図１９は、単独で（ｗ／ｏ）か、ＬＰＳとともにか、または示される濃度（０．２μｇ／ｍｌ〜１．０μｇ／ｍｌ）の示されるＯＤＮとともに、６時間（パネルＡ）、２４時間（パネルＢ）、もしくは４８時間（パネルＣ）インキュベーションした後の、ヒトＰＢＭＣの培養上清中のＩＦＮ−γの濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示す一連の３つの棒グラフである。
【図１９Ｃ】図１９は、単独で（ｗ／ｏ）か、ＬＰＳとともにか、または示される濃度（０．２μｇ／ｍｌ〜１．０μｇ／ｍｌ）の示されるＯＤＮとともに、６時間（パネルＡ）、２４時間（パネルＢ）、もしくは４８時間（パネルＣ）インキュベーションした後の、ヒトＰＢＭＣの培養上清中のＩＦＮ−γの濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示す一連の３つの棒グラフである。
【図２０】図２０は、２人のドナーから得たリンパ球を、単独で（ｗ／ｏ）か、または６μｇ／ｍｌの示されるＯＤＮの存在下で２４時間培養しその後混合した、２様式混合リンパ球反応（ＭＬＲ）において生成したＩＦＮ−γの量（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。
【図２１Ａ】図２１は、単独で（ｗ／ｏ）か、ＬＰＳとともにか、または示される濃度（０．２μｇ／ｍｌ〜１．０μｇ／ｍｌ）の示されるＯＤＮとの、６時間（パネルＡ）、２４時間（パネルＢ）、もしくは４８時間（パネルＣ）のインキュベーションの後の、ヒトＰＢＭＣの培養上清中のＩＬ−１０の濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示す一連の３つの棒グラフである。
【図２１Ｂ】図２１は、単独で（ｗ／ｏ）か、ＬＰＳとともにか、または示される濃度（０．２μｇ／ｍｌ〜１．０μｇ／ｍｌ）の示されるＯＤＮとの、６時間（パネルＡ）、２４時間（パネルＢ）、もしくは４８時間（パネルＣ）のインキュベーションの後の、ヒトＰＢＭＣの培養上清中のＩＬ−１０の濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示す一連の３つの棒グラフである。
【図２１Ｃ】図２１は、単独で（ｗ／ｏ）か、ＬＰＳとともにか、または示される濃度（０．２μｇ／ｍｌ〜１．０μｇ／ｍｌ）の示されるＯＤＮとの、６時間（パネルＡ）、２４時間（パネルＢ）、もしくは４８時間（パネルＣ）のインキュベーションの後の、ヒトＰＢＭＣの培養上清中のＩＬ−１０の濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示す一連の３つの棒グラフである。
【図２２】図２２は、単独で（ｎ／ａ）か、またはコントロール（ＩＬ−２、ＯＤＮ  １５８５（ＧＧＧＧＴＣＡＡＣＧＴＴＧＡＧＧＧＧＧＧ、配列番号３５）およびＯＤＮ  ２１１８（ＧＧＧＧＴＣＡＡＧＣＴＴＧＡＧＧＧＧＧＧ、配列番号３６））または０．６μｇ／ｍｌ（白い棒）もしくは３．０μｇ／ｍｌ（黒い棒）のいずれかの種々の示されるＯＤＮの存在下での２４時間のインキュベーションの後の、ＰＢＭＣ上清中のＩＰ−１０の量（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。
【図２３】図２３は、単独で（ｎ／ａ）か、またはコントロール（ＩＬ−２、ＯＤＮ  １５８５およびＯＤＮ  ２１１８）または０．６μｇ／ｍｌ（パネルＡ）もしくは３．０μｇ／ｍｌ（パネルＢ）のいずれかの種々の示されるＯＤＮの存在下での２４時間のインキュベーションの後の、ＰＢＭＣ上清中のＩＦＮ−αの量（ｐｇ／ｍｌ）を示す一対の棒グラフである。
【図２４】図２４は、単独で（ｎ／ａ）か、またはコントロール（ＩＬ−２、ＯＤＮ  １５８５およびＯＤＮ  ２１１８）または０．６μｇ／ｍｌ（白い棒）もしくは３．０μｇ／ｍｌ（黒い棒）のいずれかの種々の示されるＯＤＮの存在下での２４時間のインキュベーションの後の、ＰＢＭＣ上清中のＩＦＮ−γの量（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。
【図２５】図２５は、単独で（ｎ／ａ）か、またはコントロール（ＩＬ−２、ＯＤＮ  １５８５およびＯＤＮ  ２１１８）または０．６μｇ／ｍｌ（白い棒）もしくは３．０μｇ／ｍｌ（黒い棒）のいずれかの種々の示されるＯＤＮの存在下での２４時間のインキュベーションの後の、ＰＢＭＣ上清中のＩＬ−６の量（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。
【図２６】図２６は、単独で（ｗ／ｏ）か、または示される濃度（３．０μｇ／ｍｌおよび６．０μｇ／ｍｌ）の示されるＯＤＮの存在下での２４時間の培養後の、ＰＢＭＣによるＩＦＮ−α分泌の量（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。
【図１】
2005502338.tif 000016
【図２】
2005502338.tif 000017
【図３】
2005502338.tif 000018
【図４】
2005502338.tif 000019
【図５】
2005502338.tif 000020
【図６】
2005502338.tif 000021
【図７】
2005502338.tif 000022
【図８】
2005502338.tif 000023
【図９】
2005502338.tif 000024
【図１０】
2005502338.tif 000025
【図１１】
2005502338.tif 000026
【図１２】
2005502338.tif 000027
【図１３】
2005502338.tif 000028
【図１４】
2005502338.tif 000029
【図１５】
2005502338.tif 000030
【図１６】
2005502338.tif 000031
【図１７Ａ】
2005502338.tif 000032
【図１７Ｂ】
2005502338.tif 000033
【図１８】
2005502338.tif 000034
【図１９Ａ】
2005502338.tif 000035
【図１９Ｂ】
2005502338.tif 000036
【図１９Ｃ】
2005502338.tif 000037
【図２０】
2005502338.tif 000038
【図２１Ａ】
2005502338.tif 000039
【図２１Ｂ】
2005502338.tif 000040
【図２１Ｃ】
2005502338.tif 000041
【図２２】
2005502338.tif 000042
【図２３】
2005502338.tif 000043
【図２４】
2005502338.tif 000044
【図２５】
2005502338.tif 000045
【図２６】
2005502338.tif 000046
【国際公開パンフレット】
2005502338.tif 000047
2005502338.tif 000048
2005502338.tif 000049
2005502338.tif 000050
2005502338.tif 000051
2005502338.tif 000052
2005502338.tif 000053
2005502338.tif 000054
2005502338.tif 000055
2005502338.tif 000056
2005502338.tif 000057
2005502338.tif 000058
2005502338.tif 000059
2005502338.tif 000060
2005502338.tif 000061
2005502338.tif 000062
2005502338.tif 000063
2005502338.tif 000064
2005502338.tif 000065
2005502338.tif 000066
2005502338.tif 000067
2005502338.tif 000068
2005502338.tif 000069
2005502338.tif 000070
2005502338.tif 000071
2005502338.tif 000072
2005502338.tif 000073
2005502338.tif 000074
2005502338.tif 000075
2005502338.tif 000076
2005502338.tif 000077
2005502338.tif 000078
2005502338.tif 000079
2005502338.tif 000080
2005502338.tif 000081
2005502338.tif 000082
2005502338.tif 000083
2005502338.tif 000084
2005502338.tif 000085
2005502338.tif 000086
2005502338.tif 000087
2005502338.tif 000088
2005502338.tif 000089
2005502338.tif 000090
2005502338.tif 000091
2005502338.tif 000092
2005502338.tif 000093
2005502338.tif 000094
2005502338.tif 000095
2005502338.tif 000096
2005502338.tif 000097
2005502338.tif 000098
2005502338.tif 000099
2005502338.tif 000100
2005502338.tif 000101
2005502338.tif 000102
2005502338.tif 000103
2005502338.tif 000104
2005502338.tif 000105
2005502338.tif 000106
2005502338.tif 000107
2005502338.tif 000108
2005502338.tif 000109
2005502338.tif 000110
2005502338.tif 000111
2005502338.tif 000112
2005502338.tif 000113
2005502338.tif 000114
2005502338.tif 000115
2005502338.tif 000116
2005502338.tif 000117
2005502338.tif 000118
2005502338.tif 000119
2005502338.tif 000120
2005502338.tif 000121
2005502338.tif 000122
2005502338.tif 000123
2005502338.tif 000124
2005502338.tif 000125
2005502338.tif 000126
2005502338.tif 000127
2005502338.tif 000128
2005502338.tif 000129
2005502338.tif 000130
2005502338.tif 000131
2005502338.tif 000132
2005502338.tif 000133
2005502338.tif 000134
2005502338.tif 000135
2005502338.tif 000136
2005502338.tif 000137
2005502338.tif 000138
2005502338.tif 000139
2005502338.tif 000140
2005502338.tif 000141
2005502338.tif 000142
2005502338.tif 000143
2005502338.tif 000144
2005502338.tif 000145
2005502338.tif 000146
2005502338.tif 000147
2005502338.tif 000148
2005502338.tif 000149
2005502338.tif 000150
2005502338.tif 000151
2005502338.tif 000152
2005502338.tif 000153
2005502338.tif 000154
2005502338.tif 000155
2005502338.tif 000156
2005502338.tif 000157
2005502338.tif 000158
2005502338.tif 000159
2005502338.tif 000160
2005502338.tif 000161
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2005502338.tif 000162
2005502338.tif 000163
2005502338.tif 000164
2005502338.tif 000165
2005502338.tif 000166
2005502338.tif 000167
2005502338.tif 000168
2005502338.tif 000169
2005502338.tif 000170
2005502338.tif 000171
2005502338.tif 000172
2005502338.tif 000173
2005502338.tif 000174
2005502338.tif 000175
2005502338.tif 000176
2005502338.tif 000177
2005502338.tif 000178
2005502338.tif 000179
2005502338.tif 000180
2005502338.tif 000181
2005502338.tif 000182
2005502338.tif 000183
2005502338.tif 000184
2005502338.tif 000185
2005502338.tif 000186
2005502338.tif 000187
2005502338.tif 000188
2005502338.tif 000189
2005502338.tif 000190
2005502338.tif 000191
2005502338.tif 000192
2005502338.tif 000193
2005502338.tif 000194
2005502338.tif 000195
2005502338.tif 000196
2005502338.tif 000197
2005502338.tif 000198
2005502338.tif 000199
2005502338.tif 000200
2005502338.tif 000201
2005502338.tif 000202
2005502338.tif 000203
2005502338.tif 000204
2005502338.tif 000205
2005502338.tif 000206
2005502338.tif 000207
2005502338.tif 000208
2005502338.tif 000209
2005502338.tif 000210
2005502338.tif 000211
2005502338.tif 000212
2005502338.tif 000213
2005502338.tif 000214
2005502338.tif 000215
2005502338.tif 000216
2005502338.tif 000217
2005502338.tif 000218
2005502338.tif 000219
2005502338.tif 000220
2005502338.tif 000221
2005502338.tif 000222
2005502338.tif 000223
2005502338.tif 000224
2005502338.tif 000225
2005502338.tif 000226
2005502338.tif 000227
2005502338.tif 000228
2005502338.tif 000229
2005502338.tif 000230
2005502338.tif 000231
2005502338.tif 000232
2005502338.tif 000233
2005502338.tif 000234
2005502338.tif 000235
2005502338.tif 000236
2005502338.tif 000237
2005502338.tif 000238
2005502338.tif 000239
2005502338.tif 000240
2005502338.tif 000241
2005502338.tif 000242
2005502338.tif 000243
2005502338.tif 000244
2005502338.tif 000245
2005502338.tif 000246
2005502338.tif 000247
2005502338.tif 000248
2005502338.tif 000249
2005502338.tif 000250
2005502338.tif 000251
2005502338.tif 000252
2005502338.tif 000253
2005502338.tif 000254
2005502338.tif 000255
2005502338.tif 000256
2005502338.tif 000257
2005502338.tif 000258
2005502338.tif 000259
2005502338.tif 000260
2005502338.tif 000261
2005502338.tif 000262
2005502338.tif 000263
2005502338.tif 000264
2005502338.tif 000265
2005502338.tif 000266
2005502338.tif 000267
2005502338.tif 000268
2005502338.tif 000269
2005502338.tif 000270
2005502338.tif 000271
2005502338.tif 000272
2005502338.tif 000273
2005502338.tif 000274
2005502338.tif 000275
2005502338.tif 000276
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2005502338.tif 000277
【国際調査報告】
2005502338.tif 000278
2005502338.tif 000279
2005502338.tif 000280
2005502338.tif 000281