(57)【要約】  本発明は、ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体（例えば、抗体１１Ｄ１０）と、ＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体（例えば、抗体３Ｈ１）と組み合わせて使用して、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに関連する腫瘍を処置するための、方法および組成物を提供する。本発明はまた、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに関連する腫瘍の発症を遅延させるための方法を提供する。本発明はさらに、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに関連する腫瘍を処置する方法ならびにそのような腫瘍の発症を遅延させる方法に適した個体を同定するための方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体におけるＨＭＦＧおよびＣＥＡに関連する腫瘍の発症を遅延させる方法であって、該方法は、ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体である第１抗体と、ＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体である第２抗体との有効量を、該個体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記第１抗体が、配列番号２および配列番号４にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域ＣＤＲおよび重鎖可変領域ＣＤＲを含み、そして前記第２抗体が、配列番号６および配列番号８にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域ＣＤＲおよび重鎖可変領域ＣＤＲを含む、方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法であって、前記第１抗体が、配列番号２および配列番号４にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域配列および重鎖可変領域配列を含み、そして前記第２抗体が、配列番号６および配列番号８にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域配列および重鎖可変領域配列を含む、方法。
【請求項４】
請求項１に記載の方法であって、前記第１抗体が、抗体１１Ｄ１０であり、該抗体１１Ｄ１０は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２０２０として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される、方法。
【請求項５】
請求項１に記載の方法であって、前記第２抗体が、抗体３Ｈ１であり、該抗体３Ｈ１は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２００３として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される、方法。
【請求項６】
請求項１に記載の方法であって、前記第１抗体が、抗体１１Ｄ１０であり、該抗体１１Ｄ１０は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２０２０として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生され、そして前記第２抗体が、抗体３Ｈ１であり、該抗体３Ｈ１は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２００３として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される、方法。
【請求項７】
請求項１に記載の方法であって、前記個体が、低腫瘍負荷を有する、方法。
【請求項８】
請求項１に記載の方法であって、前記個体が、高リスク個体である、方法。
【請求項９】
請求項８に記載の方法であって、前記個体が、アジュバント設定にある、方法。
【請求項１０】
請求項１に記載の方法であって、前記第１抗体が、アジュバントとともに投与される、方法。
【請求項１１】
請求項１に記載の方法であって、前記第２抗体が、アジュバントとともに投与される、方法。
【請求項１２】
請求項１に記載の方法であって、前記第１抗体および前記第２抗体が、アジュバントとともに投与される、方法。
【請求項１３】
請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の方法であって、前記アジュバントが、水酸化アルミニウムである、方法。
【請求項１４】
請求項１に記載の方法であって、前記腫瘍が、胃腸起源である、方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載の方法であって、前記腫瘍が、結腸直腸腫瘍である、方法。
【請求項１６】
請求項１に記載の方法であって、前記腫瘍が、肺腫瘍である、方法。
【請求項１７】
請求項１６に記載の方法であって、前記腫瘍が、非小細胞肺癌腫である、方法。
【請求項１８】
請求項１６に記載の方法であって、前記腫瘍が、小細胞肺癌腫である、方法。
【請求項１９】
請求項１に記載の方法であって、前記腫瘍が、卵巣腫瘍である、方法。
【請求項２０】
請求項１に記載の方法であって、前記腫瘍が乳房腫瘍である、方法。
【請求項２１】
請求項１に記載の方法であって、前記第１抗体および前記第２抗体が、各々、約１ｍｇ〜約４ｍｇの量で投与される、方法。
【請求項２２】
請求項２１に記載の方法であって、前記第１抗体および前記第２抗体が、各々、約２ｍｇの量で投与される、方法。
【請求項２３】
請求項１に記載の方法であって、前記第１抗体および前記第２抗体が、各々、１週間間隔で投与される、方法。
【請求項２４】
請求項１に記載の方法であって、前記第１抗体および前記第２抗体が、各々、２週間毎に投与される、方法。
【請求項２５】
請求項１に記載の方法であって、前記第１抗体および前記第２抗体が、投与前に加熱処理される、方法。
【請求項２６】
請求項１に記載の方法であって、前記個体が、約５０ｎｇ／ｍｌ未満の循環ＣＥＡレベルを有する、方法。
【請求項２７】
個体におけるＨＭＦＧおよびＣＥＡに関連する腫瘍を処置する方法であって、該方法は、ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体である第１抗体と、ＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体である第２抗体との有効量を、該個体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２８】
請求項２７に記載の方法であって、前記第１抗体が、配列番号２および配列番号４にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域ＣＤＲおよび重鎖可変領域ＣＤＲを含み、そして前記第２抗体が、配列番号６および配列番号８にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域ＣＤＲおよび重鎖可変領域ＣＤＲを含む、方法。
【請求項２９】
請求項２７に記載の方法であって、前記第１抗体が、配列番号２および配列番号４にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域配列および重鎖可変領域配列を含み、そして前記第２抗体が、配列番号６および配列番号８にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域配列および重鎖可変領域配列を含む、方法。
【請求項３０】
請求項２７に記載の方法であって、前記第１抗体が、抗体１１Ｄ１０であり、該抗体１１Ｄ１０は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２０２０として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される、方法。
【請求項３１】
請求項２７に記載の方法であって、前記第２抗体が、抗体３Ｈ１であり、該抗体３Ｈ１は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２００３として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される、方法。
【請求項３２】
請求項２７に記載の方法であって、前記第１抗体が、抗体１１Ｄ１０であり、該抗体１１Ｄ１０は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２０２０として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生され、そして前記第２抗体が、抗体３Ｈ１であり、該抗体３Ｈ１は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２００３として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される、方法。
【請求項３３】
請求項２７に記載の方法であって、前記個体が、低腫瘍負荷を有する、方法。
【請求項３４】
請求項２７に記載の方法であって、前記第１抗体および第２抗体が、１ヶ月間隔で投与される、方法。
【請求項３５】
請求項２７に記載の方法であって、前記個体が、高リスク個体である、方法。
【請求項３６】
請求項３５に記載の方法であって、前記個体が、アジュバント設定にある、方法。
【請求項３７】
請求項２７に記載の方法であって、前記第１抗体が、アジュバントとともに投与される、方法。
【請求項３８】
請求項２７に記載の方法であって、前記第２抗体が、アジュバントとともに投与される、方法。
【請求項３９】
請求項２７に記載の方法であって、前記第１抗体および前記第２抗体が、アジュバントとともに投与される、方法。
【請求項４０】
請求項３７〜３９のいずれか１項に記載の方法であって、前記アジュバントが、水酸化アルミニウムである、方法。
【請求項４１】
請求項２７に記載の方法であって、前記腫瘍が、胃腸起源である、方法。
【請求項４２】
請求項４１に記載の方法であって、前記腫瘍が、結腸直腸腫瘍である、方法。
【請求項４３】
請求項２７に記載の方法であって、前記腫瘍が、肺腫瘍である、方法。
【請求項４４】
請求項４３に記載の方法であって、前記腫瘍が、非小細胞肺癌腫である、方法。
【請求項４５】
請求項４３に記載の方法であって、前記腫瘍が、小細胞肺癌腫である、方法。
【請求項４６】
請求項２７に記載の方法であって、前記腫瘍が、卵巣腫瘍である、方法。
【請求項４７】
請求項２７に記載の方法であって、前記腫瘍が乳房腫瘍である、方法。
【請求項４８】
請求項２７に記載の方法であって、前記第１抗体および前記第２抗体が、各々、約１ｍｇ〜約４ｍｇの量で投与される、方法。
【請求項４９】
請求項４８に記載の方法であって、前記第１抗体および前記第２抗体が、各々、約２ｍｇの量で投与される、方法。
【請求項５０】
請求項２７に記載の方法であって、前記第１抗体および前記第２抗体が、各々、１週間間隔で投与される、方法。
【請求項５１】
請求項２７に記載の方法であって、前記第１抗体および前記第２抗体が、各々、２週間毎に投与される、方法。
【請求項５２】
請求項２７に記載の方法であって、前記第１抗体および前記第２抗体が、各々、１ヶ月間隔で投与される、方法。
【請求項５３】
請求項２７に記載の方法であって、前記第１抗体および前記第２抗体が、投与前に加熱処理される、方法。
【請求項５４】
請求項２７に記載の方法であって、前記個体が、約５０ｎｇ／ｍｌ未満の循環ＣＥＡレベルを有する、方法。
【請求項５５】
請求項１または請求項２７に記載の方法であって、前記個体が、ヒトである、方法。
【請求項５６】
ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体である第１抗体と、ＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体である第２抗体とを含む、組成物。
【請求項５７】
請求項５６に記載の組成物であって、前記第１抗体が、配列番号２および配列番号４にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域ＣＤＲおよび重鎖可変領域ＣＤＲを含み、そして前記第２抗体が、配列番号６および配列番号８にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域ＣＤＲおよび重鎖可変領域ＣＤＲを含む、組成物。
【請求項５８】
請求項５６に記載の組成物であって、前記第１抗体が、配列番号２および配列番号４にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域配列および重鎖可変領域配列を含み、そして前記第２抗体が、配列番号６および配列番号８にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域配列および重鎖可変領域配列を含む、組成物。
【請求項５９】
請求項５６に記載の組成物であって、前記第１抗体が、抗体１１Ｄ１０であり、該抗体１１Ｄ１０は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２０２０として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される、組成物。
【請求項６０】
請求項５６に記載の組成物であって、前記第２抗体が、抗体３Ｈ１であり、該抗体３Ｈ１は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２００３として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される、組成物。
【請求項６１】
請求項５６に記載の組成物であって、前記第１抗体が、抗体１１Ｄ１０であり、該抗体１１Ｄ１０は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２０２０として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生され、そして前記第２抗体が、抗体３Ｈ１であり、該抗体３Ｈ１は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２００３として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される、組成物。
【請求項６２】
請求項１または請求項２７に記載の方法に適した個体を同定する方法であって、該方法は、個体中の同じ腫瘍の細胞中または同じ細胞上にＨＭＦＧおよびＣＥＡの両方を検出する工程を包含し、ＨＭＦＧおよびＣＥＡの存在は、請求項１または請求項２７に記載の方法に適した個体の指標である、方法。
【請求項６３】
ＨＭＦＧおよびＣＥＡに関連する腫瘍の発症を遅延させる方法であって、該方法は、以下：
（ａ）請求項６２に記載の方法に従って適切な個体を同定する工程；ならびに
（ｂ）ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体である第１抗体と、ＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体である第２抗体との有効量を、該個体に投与する工程、
を包含する、方法。
【請求項６４】
請求項６３に記載の方法であって、前記第１抗体が、配列番号２および配列番号４にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域ＣＤＲおよび重鎖可変領域ＣＤＲを含み、そして前記第２抗体が、配列番号６および配列番号８にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域ＣＤＲおよび重鎖可変領域ＣＤＲを含む、方法。
【請求項６５】
請求項６３に記載の方法であって、前記第１抗体が、配列番号２および配列番号４にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域配列および重鎖可変領域配列を含み、そして前記第２抗体が、配列番号６および配列番号８にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域配列および重鎖可変領域配列を含む、方法。
【請求項６６】
請求項６３に記載の方法であって、前記第１抗体が、抗体１１Ｄ１０であり、該抗体１１Ｄ１０は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２０２０として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される、方法。
【請求項６７】
請求項６３に記載の方法であって、前記第２抗体が、抗体３Ｈ１であり、該抗体３Ｈ１は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２００３として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される、方法。
【請求項６８】
請求項６３に記載の方法であって、前記第１抗体が、抗体１１Ｄ１０であり、該抗体１１Ｄ１０は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２０２０として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生され、そして前記第２抗体が、抗体３Ｈ１であり、該抗体３Ｈ１は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２００３として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される、方法。
【請求項６９】
ＨＭＦＧおよびＣＥＡに関連する腫瘍の処置方法であって、該方法は、以下：
（ａ）請求項６２に記載の方法に従って適切な個体を同定する工程；ならびに
（ｂ）ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体である第１抗体と、ＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体である第２抗体との有効量を、該個体に投与する工程、
を包含する、方法。
【請求項７０】
請求項６９に記載の方法であって、前記第１抗体が、配列番号２および配列番号４にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域ＣＤＲおよび重鎖可変領域ＣＤＲを含み、そして前記第２抗体が、配列番号６および配列番号８にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域ＣＤＲおよび重鎖可変領域ＣＤＲを含む、方法。
【請求項７１】
請求項６９に記載の方法であって、前記第１抗体が、配列番号２および配列番号４にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域配列および重鎖可変領域配列を含み、そして前記第２抗体が、配列番号６および配列番号８にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域配列および重鎖可変領域配列を含む、方法。
【請求項７２】
請求項６９に記載の方法であって、前記第１抗体が、抗体１１Ｄ１０であり、該抗体１１Ｄ１０は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２０２０として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される、方法。
【請求項７３】
請求項６９に記載の方法であって、前記第２抗体が、抗体３Ｈ１であり、該抗体３Ｈ１は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２００３として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される、方法。
【請求項７４】
請求項６９に記載の方法であって、前記第１抗体が、抗体１１Ｄ１０であり、該抗体１１Ｄ１０は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２０２０として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生され、そして前記第２抗体が、抗体３Ｈ１であり、該抗体３Ｈ１は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２００３として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される、方法。
【請求項７５】
ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体である第１抗体と、ＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体である第２抗体とを、適切な包装中に含む、キット。
【請求項７６】
請求項７５に記載のキットであって、前記第１抗体が、抗体１１Ｄ１０であり、該抗体１１Ｄ１０は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２０２０として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生され、そして前記第２抗体が、抗体３Ｈ１であり、該抗体３Ｈ１は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２００３として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（連邦政府により後援された研究の下でなされた発明に対する権利の陳述）
本研究は、以下の政府助成金によって後援された：Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＣＩ）Ｐｒｏｇｒａｍ  Ｇｒａｎｔ  Ｕ０１−ＣＡ−６５７４８；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ＮＩＨ  Ｒ０１  ＣＡ−６００００。連邦政府は、本発明において特定の権利を有し得る。
（技術分野）
本発明は、抗イディオタイプ抗体の使用に関する。より詳細には、本発明は、ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体およびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体（例えば、イディオタイプ抗体１１Ｄ１０および３Ｈ１９）を使用する処置方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
広範な医学的研究および多大の進歩にも関わらず、癌は、米国における死亡の二番目に主要な原因のままである。乳癌は、女性における癌死亡の最も一般的な原因であり、毎年１５０，０００件を超える新しい症例が診断される。結腸直腸癌は、三番目に一般的な癌であり、癌死亡の二番目に主要な原因である。伝統的な治療様式（例えば、手術、放射線療法、および化学療法）が、広範に使用され、そして多くの場合成功する一方で、今だ存在する癌（例えば、乳癌）に由来する高死亡率は、代替的治療様式またはさらなる治療様式の必要性を強いる。
【０００３】
患者が伝統的な治療様式に応答する場合でさえ、しばしば、その疾患の有意な再発リスクが存在する。これは、その疾患が診断されたときに蔓延していた場合に、特に当てはまる。寛解が観察される「成功した」処置の後でさえ、患者は、高い再発リスクを有し得、そして「見守って待つ」ことのみをし得る。再発を遅延または予防するためのさらなる行動過程は、現在存在しない。
【０００４】
癌治療のための１つのアプローチは、免疫療法である。しかし、腫瘍細胞または腫瘍由来ワクチンを使用するヒト癌の免疫療法は、いくつかの理由のために期待はずれである。精製した大量の腫瘍関連抗原を得ることは、一貫して困難であり、その腫瘍関連抗原は、しばしば、化学的に曖昧でありかつ精製が困難である。さらに、腫瘍抗原に対する免疫学的応答能力の問題、すなわち、換言すると、癌患者が、その腫瘍に対する免疫応答を有効に開始し得るか否かという問題が、残ったままである。腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）は、しばしば、「自己」の一部であり、そして通常は、その抗原に対する寛容（例えば、Ｔ細胞媒介抑制）に起因して、腫瘍を保有する宿主において非常に貧弱な免疫応答しか惹起しない。さらに、癌患者は、免疫抑制状態である傾向があり、特定のＴ依存性抗原にしか応答しない傾向がある。
【０００５】
免疫学者は、（免疫応答を惹起することに関して）貧弱な抗原は、その分子環境を変化させることによって強力な抗原へと変わらせ得ることを学習している。ハプテンキャリアの変化によって、Ｔ細胞ヘルパー細胞が活性になり、全体的な免疫応答をより強くすることが可能になる。従って、そのキャリアを変えることもまた、免疫寛容を生じる抗原を有効な抗原へと変え得る。ＭｃＢｒｉｄｅら（１９８６）Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ５３：７０７。しばしば、癌患者の免疫学的状態は、その患者が、特定のＴ依存性抗原にのみ応答可能であり他の抗原形態には応答可能ではないように、抑制される。これらの考慮事項から、腫瘍関連抗原をワクチンとして使用する前に、その腫瘍関連抗原に分子変化を導入することは、意味をなす。不幸なことに、これは、ほとんどの腫瘍抗原について達成することは不可能である。なぜなら、それらの腫瘍抗原は、十分には規定されておらず、そして非常に精製し難いからである。
【０００６】
Ｌｉｎｄｅｍａｎｎ（（１９７３）Ａｎｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２４：１７１−１８４）およびＪｅｒｎｅ（（１９７４）Ａｎｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２５：３７３−３８９）のネットワーク仮説は、エピトープ構造を、抗体の表面上で発現されるイディオタイプ決定基に変換するための優れたアプローチを提供する。このネットワーク概念によれば、所定の腫瘍関連抗原での免疫は、この腫瘍関連抗原に対する抗体（Ａｂ１という）の産生を生じる；次いでこのＡｂ１は、Ａｂ１に対する一連の抗イディオタイプ抗体（Ａｂ２という）を生成するために使用される。これらのＡｂ２分子のいくつかは、Ａｂ１により同定された腫瘍関連抗原の三次元構造を有効に模倣し得る。Ａｂ２βと呼ばれるこれらの特定の抗イディオタイプは、Ａｂ１のパラトープに適合し、そして腫瘍関連抗原の内部イメージを発現する。Ａｂ２βは、もとの腫瘍関連抗原によって誘導される免疫応答と類似する特異的な免疫応答を誘導し得、それゆえ、代理の腫瘍関連抗原として使用され得る。Ａｂ２βでの免疫は、Ａｂ１によって同定される対応するもとの腫瘍関連抗原を認識する、抗抗イディオタイプ抗体（Ａｂ３）の生成を導き得る。このＡｂ１様の反応性が原因で、Ａｂ３は、Ａｂ３がＡｂ１由来の他のイディオタイプと異なり得ることを示すために、Ａｂ１’とも呼ばれる。
【０００７】
癌処置に対する可能性のある有望なアプローチは、抗イディオタイプ抗体を使用する免疫療法である。この治療の形態では、腫瘍関連タンパク質を介して腫瘍に対する患者の免疫系を刺激するために、腫瘍関連タンパク質のエピトープを模倣する抗体が投与される。ＷＯ  ９１／１１４６５は、霊長類の抗イディオタイプ抗体を使用して、ヒトにおいて、悪性腫瘍細胞または感染性因子に対する免疫応答を刺激する方法を記載している。しかし、腫瘍に対する治療レジメにおいて、全ての抗イディオタイプ抗体が使用され得るわけではない。第１に、Ａｂ１に対して惹起された抗体はほんの一部のみが、その反応性がＡｂ１のパラトープに制限されている（すなわち、宿主中の他の可能な抗体と共有される特徴に対して非反応性である）。第２に、抗イディオタイプ抗体は、必ずしも免疫原性ではない。第３に、たとえ抗イディオタイプが免疫応答を惹起しても、これらの免疫原性抗イディオタイプのほんの一部のみが、腫瘍抗原に対して免疫応答を惹起し、そしてより低い特異性の他の抗原に対しては惹起しない。さらに、異なる癌は、広範に変化する分子および臨床的特徴を有するので、抗イディオタイプ治療は、場合に応じて、腫瘍の起源および発現される抗原の点で評価されるべきであることが示唆されている。
【０００８】
腫瘍関連抗原に構造的に類似している抗Ｉｄモノクローナル抗体は、癌患者における抗原置換物として使用されている。Ｈｅｒｌｙｎら、（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８４：８０５５−８０５９；Ｍｉｔｔｌｅｍａｎら、（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：４６６−４７０；Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅら、（１９９３）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６９０：３７６−２７８。これらの研究の全ては、進行した疾患を有する患者を用いて行われた。その患者のうちの少なくとも何人かにおいて観察された免疫応答に基づいて、抗Ｉｄは、免疫原性の状況において、腫瘍関連抗原の部分的アナログを提供することが提唱されている。
【０００９】
ヒト乳脂肪球（ＨＭＦＧ）は、乳房上皮細胞によって母乳に分泌される乳脂肪球であり、そしてこのＨＭＦＧは、形質膜により包まれた脂肪滴から構成される。このように、ＨＭＦＧは、上皮膜関連抗原の豊富な供給源である。ＨＭＦＧの抗原成分の１つは、乳癌ならびに卵巣癌、肺癌、および膵臓癌のような他の癌に関連する、高分子量の膜結合型ムチンである。このムチンは、ｃＤＮＡ由来の既知のアミノ酸配列を有するタンパク質を含む。半精製ＨＭＦＧは、いくつかの供給源から少量が入手可能であり、そして血清学的アッセイにおいて使用され得る。Ｐｅｔｅｒｓｏｎら、（１９９０）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ９：２２１−２３５。しかし、ＨＭＦＧは、単離および精製することが非常に困難であり、そして精製ＨＭＦＧは、患者の免疫のためにも動物実験のためにも利用可能ではない。さらに、ＨＭＦＧ上のエピトープのうちのいくつかが正常の組織（特に、非貫通型糖タンパク質）と共通であるので、インタクトなＨＭＦＧ分子での免疫は、潜在的に有害な自己免疫応答を惹起し得る。他方で、腫瘍関連エピトープに対する免疫応答は、はるかにより望ましい。
【００１０】
ＨＭＦＧの構成成分を認識する一連のマウスモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、主としてヒト乳癌腫に関連し、ほとんどの正常な組織には関連しないことが、記述されてきた。Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅら（１９９３）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６９０：３７６−３７７；Ｃｅｒｉａｎｉら（１９８３）Ｓｏｍａｔｉｃ  Ｃｅｌｌ  Ｇｅｎｅｔ．９：４１５−４２７。これらのｍＡｂの中でも、ＭＣ−１０（ＢｒＥ−１）が、高密度で８０％を超える乳癌細胞上に存在する高分子量（分子量４００，０００）のムチン様タンパク質と、最も制限されかつ特異的に反応し、そして、少数の正異常な組織（例えば、肺上皮内層および腎細管）上で最小限にしか発現されない。Ｃｅｒｉａｎｉら（１９８３）；Ｃｅｒｉａｎｉら（１９９０）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ３：１８１−１９８。
【００１１】
癌胎児性抗原（ＣＥＡ）は、胃腸管の内胚葉由来新生物（例えば、結腸直腸癌および膵臓癌）ならびに他の腺癌（例えば、乳癌および肺癌）上に存在する、１８０，０００キロダルトンの糖タンパク質腫瘍関連抗原である。ＣＥＡはまた、ヒト胎児の消化器官において見出される。循環ＣＥＡは、ＣＥＡ陽性腫瘍を有する患者の非常に大多数において検出され得る。特異的なモノクローナル抗体が、ＣＥＡに対して惹起されており、そしていくつかが、診断研究および臨床研究のために放射標識されている。Ｈａｎｓｅｎら（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  ７１：３４７８−３４８５；Ｋａｒｏｋｉら（１９９２）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １１：３９１−４０７；Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ（１９９３）Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．９４：２９７−３１２。ほとんどの腫瘍関連抗原が免疫系により自己抗原と見なされるので、癌患者は、ＣＥＡに対して免疫学的に「寛容」である（それが腫瘍胎児起源であることにおそらく起因する）。ＣＥＡ陽性腫瘍を有する患者に対する今日までの研究は、ＣＥＡに対して免疫を生じる能力を示さなかった。従って、ＣＥＡに基づく免疫療法を、これまで可能にしなかった。
【００１２】
それにもかかわらず、ＣＥＡは、いくつかの理由のために、抗イディオタイプ抗体を用いる能動免疫療法のための優れた腫瘍関連抗原である。ＣＥＡは、代表的には、腫瘍細胞表面上に高レベルで存在する。ＣＥＡはまた、その遺伝子配列が既知であり、そしてその３次元構造が同定されているので、最も十分に特徴づけられた抗原の１つである。ＣＥＡは、細胞−細胞相互作用に関与すると考えられる、第１９番染色体上に位置する免疫グロブリンスーパー遺伝子ファミリーのメンバーである。
【００１３】
ＣＥＡ上のエピトープのいくつかが正常組織と共有されるので、インタクトなＣＥＡ分子での免疫は、潜在的に有害な自己免疫反応を誘発し得る。一方、腫瘍関連エピトープに対する免疫反応が、所望される。適切な抗イディオタイプ抗体は、ＣＥＡ陽性癌患者において抗腫瘍免疫を誘導するための優れた候補である。多くの研究者が、ラット、マウス、ヒヒ、およびヒトにおいて、ＣＥＡを模倣する抗イディオタイプ抗体を生成した。例えば、Ｈｉｎｏｄａら（１９９５）Ｔｕｍｏｒ  Ｂｉｏｌ．１６：４８−５５；Ｌｏｓｍａｎら（１９９４）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ５６：５８０−５８４；Ｉｒｖｉｎｅら（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３６：２８１−２９２を参照のこと。しかし、ＣＥＡ（およびおそらく多くのエピトープ）のサイズ、およびＣＥＡがいくつかの正常組織で発現される事実を考えると、抗イディオタイプ抗体が、抗腫瘍免疫をもたらす抗ＣＥＡ応答の惹起に効果的であるか否かは知られていなかった。
【００１４】
癌の状況における抗イディオタイプ抗体に関する他の考察については、一般的には、Ｔｕｍｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ（１９９４），ｐ．２８１−２９２（Ｇｏｌｄｆａｒｂ  ＆  Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅ編）中のＦｏｏｎおよびＢｈａｔｔａｃｈａｒｙａ−Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅ，Ａｎｔｉ−ｉｄｉｏｔｙｐｅ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｎｏｖｅｌ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ；Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙａ−Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．（２０００），４９：１３３−１４１；Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙａ−Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅら，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（２０００），７４：５１−５８；Ｌｅｗｉｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８７），２３７：１５７０；Ｒｅｅｃｋら，Ｃｅｌｌ（１９８７），５０：６６７；Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏ．Ｉｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．（１９９４），３８：７５−８２；Ｒｕｄｉｋｏｆｆら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９８２），７９：１９７９；Ｐａｎｋａら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９８８），８５：３０８０−３０８４；Ａｍｉｔら，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８６），２３３：７４７−７５３；Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８８），１４１：１３９８−１４０３；Ｂｒｏｗｎｉｎｇら，Ｃｅｌｌ（１９９３），７２：８４７−８５６；Ｍｏら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ．（１９９３），２３：２５０３−２５１０；Ｌｉｕら，Ｊ．ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８７），１３９：３５２１−３５２６；Ｆｏｏｎら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（１９９５），９６：３３４−３４２；Ｈｉｎｏｄａら，Ｔｕｍｏｒ  ｂｉｏｌ．（１９９５），１６：４８−５５；Ｈｅｒｌｙｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９８７），８４：８０５５−８０５９；Ｍｉｔｔｅｌｍａｎら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（１９９４），５４：４１５−４２１；Ｅｒｌｉｃｈｍａｎら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．（１９８８），６：４６９−４７５；Ｊｏｈｎｓｏｎら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｒｅｖｉｅｗ（１９７５），２：１−３１；米国特許第５，８０８，０３３号；同第５，３３４，７０８号および同第５，８４０，２９９号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９７／２２６９９，９８／５６４１９，９６／２０２７７，９６／０２０１９，９７／３８７２５，９１／０９９６７を参照のこと。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１５】
胃腸管の癌腫および再発性乳癌は、しばしば、標準的治療によって治癒可能ではない。患者が伝統的な治療に応答する場合でさえ、しばしば、有意な再発リスクが存在する。従って、これらの疾患に対する新規な治療アプローチが、必要とされている。本発明は、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに関連する腫瘍の処置方法を提供することによって、従来技術における不足を克服する。この方法は、免疫寛容を避けかつ抗ＨＭＦＧ免疫応答および抗ＣＥＡ免疫応答を誘導する、抗イディオタイプ抗体の組み合わせを使用する。
【００１６】
本明細書中で引用されるすべての参考文献は、その全体が参考として援用される。
（発明の開示）
本発明は、ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体とＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体とを使用し（すなわち、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに基づき）、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに関連する疾患状態（特に、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに関連する腫瘍（ＨＭＦＧおよびＣＥＡを保有する腫瘍））を処置することに関する。本発明はまた、これらの抗イディオタイプ抗体の組み合わせを含む、組成物を提供する。
【００１７】
従って、１つの局面において、本発明は、個体におけるＨＭＦＧおよびＣＥＡに関連する腫瘍を処置する（これは、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに関連する腫瘍の発症および／または再発を遅延させることを包含し得る）方法を提供し、上記方法は、ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体の有効量を、ＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体の有効量と組み合わせて投与する工程を包含する。１つの実施形態において、上記方法は、図３Ａおよび３Ｂに示される（配列番号２および配列番号４にそれぞれ含まれる）軽鎖可変領域ＣＤＲおよび重鎖可変領域ＣＤＲを含む第１抗体と、図６Ａおよび６Ｂに示される（配列番号６および配列番号８にそれぞれ含まれる）軽鎖可変領域ＣＤＲおよび重鎖可変領域ＣＤＲを含む第２抗体との有効量を、上記個体に投与する工程を包含し、ここで、上記投与は、上記個体におけるＨＭＦＧおよびＣＥＡに関連する腫瘍の処置（これは、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに関連する腫瘍の発症および／または再発を遅延させることを包含し得る）を生じる。別の実施形態において、上記第１抗体は、配列番号２および配列番号４にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域配列および重鎖可変領域配列を含み、そして上記第２抗体は、配列番号６および配列番号８にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域配列および重鎖可変領域配列を含む。いくつかの実施形態において、上記第１抗体および／または第２抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの実施形態において、上記第１抗体および／または第２抗体は、ヒト抗体である。いくつかの実施形態において、上記第１抗体は、抗体１１Ｄ１０であり、この抗体１１Ｄ１０は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２０２０として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される。なお別の実施形態において、上記第２抗体は、抗体３Ｈ１であり、この抗体３Ｈ１は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２００３として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される。なお別の実施形態において、上記第１抗体は、抗体１１Ｄ１０であり、この抗体１１Ｄ１０は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２０２０として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生され、そして、上記第２抗体は、抗体３Ｈ１であり、この抗体３Ｈ１は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２００３として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される。本発明のために有用な他の抗体は、本明細書中に提供される。
【００１８】
特定の実施形態において、本発明の方法は、抗イディオタイプ抗体１１Ｄ１０の免疫学的活性を有する第１ポリペプチドを、抗イディオタイプ抗体３Ｈ１の免疫学的活性を有する第２ポリペプチドと組み合わせて、処置される個体に投与する工程を包含し、ここで、この第１ポリペプチドは、（図３Ａに示される）抗体１１Ｄ１０の少なくとも１つ（好ましくは、１つ、２つ、もしくは３つ）の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む免疫グロブリン可変領域および／または（図３Ｂに示される）抗体１１Ｄ１０の少なくとも１つ（好ましくは、１つ、２つ、もしくは３つ）の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む免疫グロブリン可変領域を含み、この第２ポリペプチドは、（図６Ａに示される）抗体３Ｈ１の少なくとも１つ（好ましくは、１つ、２つ、もしくは３つ）の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む免疫グロブリン可変領域および／または（図６Ｂに示される）抗体３Ｈ１の少なくとも１つ（好ましくは、１つ、２つ、もしくは３つ）の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む免疫グロブリン可変領域を含み、そしてこの第１ポリペプチドの免疫学的活性は、ＨＭＦＧに対する特異的免疫応答を刺激する能力であり、そしてこの第２ポリペプチドの免疫学的活性は、ＣＥＡに対する特異的免疫応答を刺激する能力である。これらの実施形態のうちのいくつかにおいて、上記第１ポリペプチドは、抗体１１Ｄ１０である。いくつかの実施形態において、上記第２ポリペプチドは、抗体３Ｈ１である。いくつかの実施形態において、上記第１ポリペプチドは、抗体１１Ｄ１０であり、そして上記第２ポリペプチドは、抗体３Ｈ１である。
【００１９】
本発明の方法のいくつかの実施形態において、処置される個体は、高リスク個体である。特定の実施形態において、その個体は、アジュバント設定にある。他の実施形態において、その個体は、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに関連する腫瘍について低腫瘍負荷を有する。
【００２０】
本発明の方法のなお他の実施形態において、上記抗体（もしくはポリペプチド）のいずれかまたは両方は、アジュバントとともに投与される。そのアジュバントは、当該分野で公知のいずれか（好ましくは、水酸化アルミニウム）であり得る。
【００２１】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、他の治療形態（例えば、化学療法、ホルモン療法（一般的には、最も重要なホルモン療法）、および放射線治療（例えば、アジュバント設定患者における）が挙げられる）と組み合わせて実施される。
【００２２】
本発明の方法は、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに関連する任意の腫瘍を処置するために使用され得る。このＨＭＦＧおよびＣＥＡに関連する腫瘍は、好ましくは、胃腸起源（好ましくは、結腸直腸腫瘍）、肺腫瘍（好ましくは、非小細胞肺癌腫および小細胞肺癌腫）、卵巣起源、または乳房起源である。
【００２３】
本発明のいくつかの実施形態において、上記第１抗体および上記第２抗体は、各々、約１ｍｇ〜約４ｍｇの量で投与される。他の実施形態において、上記第１抗体および上記第２抗体は、各々、約２ｍｇの量で投与される。他の実施形態において、上記第１抗体および上記第２抗体は、各々、１週間間隔、２週間毎、または１ヶ月毎に投与され得る。上記第１抗体および上記第２抗体は、投与前に加熱処理され得る。
【００２４】
いくつかの実施形態において、処置される個体は、約５０ｎｇ／ｍｌ未満の循環ＣＥＡレベルを有する。いくつかの実施形態において、処置される個体は、ヒトである。
【００２５】
別の局面において、本発明は、本発明の方法を使用する処置に適した個体を同定する方法を提供し、この方法は、個体中の同じ腫瘍の細胞中または同じ細胞上にＨＭＦＧおよびＣＥＡの両方を検出する工程を包含し、ＨＭＦＧおよびＣＥＡの存在は、本発明の処置方法による処置に適した個体の指標である。いくつかの実施形態において、ＨＭＦＧの存在は、ＨＭＦＧについての免疫試薬（例えば、ＨＭＦＧについて免疫特異的な（すなわち、ＨＭＦＧに特異的に結合する）抗体）を使用して検出され、そしてＣＥＡの存在は、ＣＥＡについての免疫試薬（例えば、ＣＥＡについて免疫特異的な（すなわち、ＣＥＡに特異的に結合する）抗体）を使用して検出される。好ましくは、上記ＨＭＦＧについての免疫試薬は、抗イディオタイプ抗体１１Ｄ１０が免疫応答を惹起可能であるエピトープについて免疫特異的であり、そして上記ＣＥＡについての免疫試薬は、抗イディオタイプ抗体３Ｈ１が免疫応答を惹起可能であるエピトープについて免疫特異的である。他の実施形態において、ＨＭＦＧおよびＣＥＡの存在は、ＨＭＦＧ抗原をコードする遺伝子の転写産物およびＣＥＡ抗原をコードする遺伝子の転写産物それぞれの分析によって、検出される。
【００２６】
別の局面において、本発明は、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに関連する腫瘍の発症を遅延させる方法を提供し、この方法は、（ａ）ＨＭＦＧおよびＣＥＡに関連する腫瘍の発症を遅延するために本発明の方法を使用するために適した個体を同定する工程；ならびに（ｂ）ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体である第１抗体と、ＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体である第２抗体との有効量を、その個体に投与する工程；を包含する。いくつかの実施形態において、上記第１抗体は、抗体１１Ｄ１０の軽鎖可変領域ＣＤＲおよび重鎖可変領域ＣＤＲを含み、そして上記第２抗体は、抗体３Ｈ１の軽鎖可変領域ＣＤＲおよび重鎖可変領域ＣＤＲを含む。他の実施形態において、上記第１抗体は、配列番号２および配列番号４にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域配列および重鎖可変領域配列を含み、そして上記第２抗体は、配列番号６および配列番号８にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域配列および重鎖可変領域配列を含む。いくつかの実施形態において、上記第１抗体は、抗体１１Ｄ１０であり、この抗体１１Ｄ１０は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２０２０として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される。なお別の実施形態において、上記第２抗体は、抗体３Ｈ１であり、この抗体３Ｈ１は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２００３として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される。なお別の実施形態において、上記第１抗体は、抗体１１Ｄ１０であり、この抗体１１Ｄ１０は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２０２０として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生され、そして上記第２抗体は、抗体３Ｈ１であり、この抗体３Ｈ１は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２００３として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される。特定の実施形態において、工程（ｂ）は、抗イディオタイプ抗体１１Ｄ１０の免疫学的活性を有する第１ポリペプチドを、抗イディオタイプ抗体３Ｈ１の免疫学的活性を有する第２ポリペプチドと組み合わせて、上記個体に投与する工程を包含し、ここで、この第１ポリペプチドは、（図３Ａに示される）抗体１１Ｄ１０の少なくとも１つ（好ましくは、１つ、２つ、もしくは３つ）の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む免疫グロブリン可変領域および／または（図３Ｂに示される）抗体１１Ｄ１０の少なくとも１つ（好ましくは、１つ、２つ、もしくは３つ）の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む免疫グロブリン可変領域を含み、この第２ポリペプチドは、（図６Ａに示される）抗体３Ｈ１の少なくとも１つ（好ましくは、１つ、２つ、もしくは３つ）の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む免疫グロブリン可変領域および／または（図６Ｂに示される）抗体３Ｈ１の少なくとも１つ（好ましくは、１つ、２つ、もしくは３つ）の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む免疫グロブリン可変領域を含み、そしてこの第１ポリペプチドの免疫学的活性は、ＨＭＦＧに対する特異的免疫応答を刺激する能力であり、そしてこの第２ポリペプチドの免疫学的活性は、ＣＥＡに対する特異的免疫応答を刺激する能力である。いくつかの実施形態において、発症を遅延させる方法は、上記工程（ｂ）の実施形態のいずれかを包含する（すなわち、上記個体は同定されており、従って、その方法は、適した個体を同定する工程を包含しない）。
【００２７】
なお別の局面において、本発明は、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに関連する腫瘍の処置方法を提供し、この方法は、（ａ）ＨＭＦＧおよびＣＥＡに関連する腫瘍を処置するために本発明の方法を使用するために適した個体を同定する工程；ならびに（ｂ）ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体である第１抗体と、ＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体である第２抗体との有効量を、その個体に投与する工程；を包含する。いくつかの実施形態において、上記第１抗体は、抗体１１Ｄ１０の軽鎖可変領域ＣＤＲおよび重鎖可変領域ＣＤＲを含み、そして上記第２抗体は、抗体３Ｈ１の軽鎖可変領域ＣＤＲおよび重鎖可変領域ＣＤＲを含む。他の実施形態において、上記第１抗体は、配列番号２および配列番号４にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域配列および重鎖可変領域配列を含み、そして上記第２抗体は、配列番号６および配列番号８にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域配列および重鎖可変領域配列を含む。いくつかの実施形態において、上記第１抗体は、抗体１１Ｄ１０であり、この抗体１１Ｄ１０は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２０２０として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される。なお別の実施形態において、上記第２抗体は、抗体３Ｈ１であり、この抗体３Ｈ１は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２００３として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される。なお別の実施形態において、上記第１抗体は、抗体１１Ｄ１０であり、この抗体１１Ｄ１０は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２０２０として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生され、そして上記第２抗体は、抗体３Ｈ１であり、この抗体３Ｈ１は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２００３として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される。特定の実施形態において、工程（ｂ）は、抗イディオタイプ抗体１１Ｄ１０の免疫学的活性を有する第１ポリペプチドを、抗イディオタイプ抗体３Ｈ１の免疫学的活性を有する第２ポリペプチドと組み合わせて、上記個体に投与する工程を包含し、ここで、この第１ポリペプチドは、（図３Ａに示される）抗体１１Ｄ１０の少なくとも１つ（好ましくは、１つ、２つ、もしくは３つ）の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む免疫グロブリン可変領域および／または（図３Ｂに示される）抗体１１Ｄ１０の少なくとも１つ（好ましくは、１つ、２つ、もしくは３つ）の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む免疫グロブリン可変領域を含み、この第２ポリペプチドは、（図６Ａに示される）抗体３Ｈ１の少なくとも１つ（好ましくは、１つ、２つ、もしくは３つ）の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む免疫グロブリン可変領域および／または（図６Ｂに示される）抗体３Ｈ１の少なくとも１つ（好ましくは、１つ、２つ、もしくは３つ）の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む免疫グロブリン可変領域を含み、そしてこの第１ポリペプチドの免疫学的活性は、ＨＭＦＧに対する特異的免疫応答を刺激する能力であり、そしてこの第２ポリペプチドの免疫学的活性は、ＣＥＡに対する特異的免疫応答を刺激する能力である。
【００２８】
なお別の局面において、本発明は、ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体と、ＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体との組み合わせを含む、組成物を提供する。いくつかの実施形態において、上記ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体は、抗体１１Ｄ１０の軽鎖可変領域ＣＤＲおよび重鎖可変領域ＣＤＲを含み、そして上記ＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体は、抗体３Ｈ１の軽鎖可変領域ＣＤＲおよび重鎖可変領域ＣＤＲを含む。他の実施形態において、上記ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体は、配列番号２および配列番号４にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域配列および重鎖可変領域配列を含み、そして上記ＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体は、配列番号６および配列番号８にそれぞれ含まれる軽鎖可変領域配列および重鎖可変領域配列を含む。いくつかの実施形態において、上記ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体は、抗体１１Ｄ１０であり、この抗体１１Ｄ１０は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２０２０として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される。なお他の実施形態において、上記ＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体は、抗体３Ｈ１であり、この抗体３Ｈ１は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に受託番号１２００３として寄託されたハイブリドーマ細胞株またはその子孫により産生される。いくつかの実施形態において、上記組成物は、１１Ｄ１０と３Ｈ１との組み合わせを含む。
【００２９】
（本発明を実施するための形態）
本発明は、ＨＭＦＧ−関連疾患の再発の危険性が高い患者において、ＨＭＦＧ特異的免疫応答を産生する、（１１Ｄ１０のような）ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体の能力に基づく。本発明はまた、ＣＥＡ−関連疾患である患者において、ＣＥＡ特異的免疫応答を産生する、（３Ｈ１のような）ＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体の能力に基づく。種々の癌が、ＨＭＦＧおよびＣＥＡの両方と関連することまたはＨＭＦＧおよびＣＥＡの両方を発現することが公知である。出願人らは、扁平上皮細胞および（非小細胞肺癌のような）腺癌、小細胞肺癌、卵巣癌、乳癌ならびに結腸直腸癌を含む種々の癌のうちの高い割合が、ＨＭＦＧおよびＣＥＡの両方を有することを見出した。ＢｒＥ１（ＨＭＦＧに対して指向されたマウスモノクローナル抗体）および抗体８０１９（ヒトＣＥＡに対して指向されたマウスモノクローナル抗体）の両方の結合について研究された腫瘍としては、非小細胞肺癌（１６／２０）、小細胞肺癌（８／１０）、卵巣癌（５／１３）、乳癌（５／５）、黒色腫（０／１９）および結腸直腸癌（１１／１２）が挙げられる（陽性の数／総数）。出願人らは、（３Ｈ１のような）ＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体と併用した（１１Ｄ１０のような）ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体の投与が、例えば、アジュバント設定（ａｄｊｕｖａｎｔ  ｓｅｔｔｉｎｇ）条件下で高リスク個体において、ＨＭＦＧ抗原およびＣＥＡ抗原の両方を発現する腫瘍の処置を生じ得るとを考える。
【００３０】
１１Ｄ１０は、腫瘍関連抗原の一つであるヒト乳脂肪球（ｈｕｍａｎ  ｍｉｌｋ  ｆａｔ  ｇｌｏｂｕｌｅ）（ＨＭＦＧ）の明確な特異的エピトープに対する特異的な免疫応答を誘導するマウス抗イディオタイプ（Ｉｄ）抗体（Ａｂ２）である。１１Ｄ１０の産生および特徴づけならびに１１Ｄ１０の可変領域（軽鎖および重鎖）をコードするＤＮＡ配列は、共有に係るＰＣＴ出願番号ＷＯ  ９７／２２６９９）中に記載されている。１１Ｄ１０を産生するハイブリドーマは、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）（１２３０１  Ｐａｒｋｌａｗｎ  Ｄｒｉｖｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，Ｕ．Ｓ．Ａ．２０８５２）に１９９６年１月１７日に、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約（Ｂｕｄａｐｅｓｔ  Ｔｒｅａｔｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｄｅｐｏｓｉｔ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｐｕｒｐｏｓｅ  ｏｆ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）の条款のもとで寄託されている。これは、受託番号ＨＢ１２０２０を与えられた。
【００３１】
以前の第１相臨床試験において、進行型ＨＭＦＧ−関連疾患を有する１２人の乳癌患者（全ての以前の治療に失敗しており、なお高い全身腫瘍組織量を有していた）は、１１Ｄ１０を投与された。Ｃｈａｋｒａｂｏｒｔｙら、（１９９７）Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ａｓｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ：４１３９。１２人の患者のうち５人は、Ａｂ２のＡｂ１への結合またはその逆を阻害し得る、有意なレベルの特異的抗抗Ｉｄ（Ａｂ３）抗体を生成した。このことは、これらの患者の多くが、以前の処置もしくはその疾患またはその両方の性質のいずれかに起因して、中度から重度に易感染性であり、そしてしばしば最終選択として１１Ｄ１０を受けたので、特に意義深い。３人の患者の血清からアフィニティー精製したＡｂ３は、精製ＨＭＦＧ抗原に特異的に結合し、そして乳癌組織切片を免疫染色した。抗体のイソタイプ（Ａｂ３／Ａｂ１’）は、主にＩｇＧであった。１２人の免疫した患者のうちの３人から単離された末梢血リンパ球（ＰＢＬ）は、インビトロで、イディオタイプ特異的Ｔ細胞増殖応答を示した。結果は、抗ＩＤ  １１Ｄ１０が、重く予め処置された何人かの進行型乳癌患者において、体液性免疫応答および細胞性免疫応答の両方を誘導し得ることを示唆する。毒性は最小であり、注射部位で穏和な紅斑および硬結のみを伴った。しかし、これらの患者の全ては、通常の疾患進行を提示した。
【００３２】
３Ｈ１（この可変配列は、ＰＣＴ公開において以前に開示された。ＷＯ  ９６／２０２７７およびＷＯ  ９６／０２０１９は、共に１９９６年７月４日に公開され、本明細書中に参考として全体が援用される）は、腫瘍関連抗原の一つである癌胎児抗原（ＣＥＡ）の明確な特異的エピトープに対する特異的な免疫応答を誘導するマウスモノクローナル抗イディオタイプ抗体である。このエピトープは、ＣＥＡ特有であり、（正常組織または顆粒球を含む造血細胞でも見られる）このファミリーの他のＣＥＡに関係した低分子量メンバーには存在しない。Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉら、（１９７９）Ｓｏｍａｔｉｃ  Ｃｅｌｌ  Ｇｅｎｅｔ．５：９５７；Ｍｉｔｃｈｅｌｌ（１９８０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．１０：１。（３Ｈ１を惹起した）モノクローナル抗体８０１９（Ａｂ１）により規定されるような抗原決定基は、免疫ペルオキシダーゼ染色および造血分析により実証されたように、正常成体組織に存在しない。３Ｈ１の産生および特徴づけならびに３Ｈ１の可変領域（軽鎖および重鎖）をコードするＤＮＡ配列は、共有に係る米国特許第５，９７７，３１５号中（これは、本明細書中に参考として全体が援用される）に記載されている。３Ｈ１を産生するハイブリドーマは、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）１２３０１  Ｐａｒｋｌａｗｎ  Ｄｒｉｖｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，Ｕ．Ｓ．Ａ．２０８５２に１９９５年１２月１５日に、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約の条款のもとで寄託されている。これは、受託番号ＨＢ１２００３を与えられた。３Ｈ１ポリペプチドは、共有に係るＰＣＴ出願番号ＷＯ  ９６／２０２７７中に記載されている。
【００３３】
この開示全体を通して、使用、調製、投与などに言及する際、「１１Ｄ１０」および「３Ｈ１」は、本発明を例示するために提供される。これらの記載はまた、文脈が明らかに他を示す場合を除き、ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体およびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体のような、本明細書中に記載される任意の実施形態に言及および適用することが理解される。
【００３４】
（定義）
本明細書中で使用される場合、用語「１１Ｄ１０」「１１Ｄ１０抗体」および「１１Ｄ１０モノクローナル抗イディオタイプ抗体」は、ヒト乳房腫瘍細胞中で主に発現されるヒト乳脂肪球（ＨＭＦＧ）の明確な特異的エピトープに少なくとも部分的に類似するエピトープを含む抗イディオタイプ抗体（Ａｂ２）をいうために、相互交換可能に使用される。１１Ｄ１０の産生および特徴付けは、共有に係る特許出願番号０８／７６６，３５０において記載される。Ｍｕｋｅｒｊｅｅら、（１９９２）ＦＡＳＥＢ  Ｊ．Ａ２０５９（Ａｂｓ．６５０５）；Ｍｕｒｋｅｒｊｅｅら、（１９９２）ＦＡＳＥＢ  Ｊ．Ａ１７１３（Ａｂｓ．７７９２）；Ｃｈａｒａｂｏｒｔｙら、（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．３５：２９６３；Ｃｈａｋｒａｂｏｒｔｙら、（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５：１５２５−１５３０；Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙａ−Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅら、（１９９４）Ａｎｔｉｇｅｎ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｌｅ．Ｅｎｇ．Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，（Ｃｅｒｉａｎｉ編）１３９−１４８もまた参照のこと。異なる生物学的機能が１１Ｄ１０に関連し、これにはＡｂ１（ＭＣ−１０）および／またはＡｂ３への結合、ならびに進行したＨＭＦＧ−関連疾患、特にＨＭＦＧ関連腫瘍を有するマウス、ウサギ、サル、およびヒトにおいて、ならびにＨＭＦＧ−関連疾患の病歴を有するが、検出可能な疾患を有さないヒトにおいて、ＨＭＦＧに対する（体液性および／または細胞性）免疫応答を誘導する能力が含まれるが、これらには限定されない。Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）．ｓｕｂ．２、およびＦ（ａｂ’）のような、１１Ｄ１０の完全な重鎖および軽鎖可変領域の両方を含み、標準的なイムノアッセイにおいて、ＭＣ−１０（Ａｂ１）に結合し得るインタクト抗体の、酵素的切断および／または化学的処理により生成されるフラグメントもまた、１１Ｄ１０の定義に含まれる。
【００３５】
「ＨＭＦＧ」は、ヒト乳脂肪球の略語である。ＨＭＦＧは、いくつかのタンパク質様の（従って、抗原性の）成分を有する。本明細書で使用する場合、ＨＭＦＧは、抗原性に関連する物質と共に、Ｃｅｒｉａｎｉら（（１９７７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７４：５８２−５８６）の方法により調製されるような、ＨＭＦＧ発現乳癌細胞株の半精製された抽出物をいい、これは、乳癌細胞で発現されたＨＭＦＧおよびより高度に精製された調製物を含む。ＨＭＦＧには、高分子量ムチンの既知アミノ酸配列（そのエピトープは、１１Ｄ１０の惹起の際にＡｂ１として使用されるモノクローナル抗体ＭＣ−１０により認識される）が含まれる。従って、１１Ｄ１０を用いて動物を免疫することにより誘導した抗ＨＭＦＧの免疫学的反応性は、好ましくは、ポリペプチドエピトープまたはＭＣ−１０により認識されるポリペプチドエピトープに関連する抗原決定基に結合する。
【００３６】
ＭＣ−１０は、ヒト乳脂肪球（ＨＭＦＧ）の高分子量ムチンの独特かつ特定的なエピトープを規定するので、抗Ｉｄの産生のために選択された。このエピトープは主に、ヒト乳癌およびいくつかの他の腫瘍細胞によって、高密度で発現されるが、免疫ペルオキシダーゼ染色によって正常な成体組織においては見出されず、フローサイトメトリー分析によって造血細胞（顆粒球を含む）にも見出されない。ＭＣ−１０（ＢｒＥ１とも呼ばれる）は、ヒト乳房上皮細胞において微量しか存在しない高い分子量（ＭＷ  ４００，０００）ムチンと反応し、そして乳癌細胞で少なくとも１０倍まで増加するという意味で、完全に制限的であり、かつ特異的である。ＷＯ  ８９０７２６８；ＥＰ  ４０１２４７。この抗体は、インビトロ研究において、乳癌細胞に対して細胞傷害性である。Ｃｅｒｉａｎｉら、（１９８３）；Ｐｅｔｅｒｓｏｎら、（１９９０）。
【００３７】
ＭＣ−１０は、正常組織において、非常に制限された組織病理学的な分布を有する。ＭＣ−１０は、正常な乳房上皮および多くの他の正常な上皮（結腸、膵臓、胃、甲状腺、膀胱、肝臓）ならびに他の正常組織（副腎、脳、リンパ節、心筋、卵巣、脾臓、精巣）への明確な組織病理学的結合なしで、肺の上皮の裏層および散在する遠位の腎臓の曲尿細管のいくつかの領域に結合するのみである。一方、高い割合の異なるヒト腫瘍（乳房、子宮内膜、肺、卵巣、および膵臓を含む）は、ｍＡｂ  ＭＣ−１０に強く結合する。ＭＣ−１０結合について研究されるホルマリン固定された腫瘍（陽性の数／総数）は以下を含む：乳癌（ＣＡ）（１４４／１８２）、結腸ＣＡ（３／２７）、十二指腸ＣＡ（０／１）、子宮内膜ＣＡ（７／１４）、腎臓ＣＡ（０／１１）、肺ＣＡ（４１／４７）、卵巣ＣＡ（２０／２６）、膵臓ＣＡ（９／１５）、前立腺ＣＡ（０／２）、唾液腺ＣＡ（０／３）、胃ＣＡ（２／７）、甲状腺ＣＡ（０／７）、肝臓胆管ＣＡ（８／３３）、島細胞ＣＡ（０／２）、リンパ腫（０／２０）、黒色腫（０／２３）、髄膜腫（０／５）、メルケル細胞ＣＡ（４／９）、中皮腫（１／１１）、神経芽細胞腫（０／２）、膨大細胞種（１／１）、パラガングリオーマ（０／１０）、プレオアデノーマ（ｐｌｌｅｏａｄｅｎｏｍａ）（０／７）。肉腫の中には、未分類（０／１）、肺胞（０／１）、血管肉腫（０／１）、明細胞（０／２）、嚢腫状肉腫（０／１）、類上皮細胞（５／１２）、ユーイング肉腫（０／１）、線維肉腫（０／１）、平滑筋腫（０／２）、脂肪肉腫（０／１）、悪性線維組織球腫（０／２）、滑膜中皮腫（０／７）、紡錘細胞ＣＡ（５／１６）；未分化（１／９）、神経鞘腫（０／３）、精上皮腫（０／４）、奇形腫（０／３）、胸腺腫（０／８）、移行性ＣＡ（５／１０）、未分化ＣＡ（７／２９）、ウォーシン腫（０／１）がある。Ｃｅｒｉａｎｉら、（１９９０）。本発明者らはまた、本発明者の研究室において、ＦＡＣＳ分析によってＭＣ−１０抗原の存在について造血細胞を研究し、そして顆粒球および血小板を含むこれらの細胞が、抗原に対して陰性であることを見い出した。陽性コントロールＭＣＦ−７細胞は、ＭＣ−１０で強く染まった。
【００３８】
本明細書中で使用される「ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体」は、ヒト乳房腫瘍細胞中で主に発現されるヒト乳脂肪球（ＨＭＦＧ）の明確かつ特異的エピトープに少なくとも部分的に類似するエピトープを含む抗イディオタイプ抗体（Ａｂ２）をいう。このような抗体は、一般に抗ＨＭＦＧ免疫応答を誘発し得る。
【００３９】
「ＨＭＦＧ関連腫瘍」は、（特に腫瘍細胞表面上で発現される）ＨＭＦＧ抗原を含む腫瘍であり、好ましくは、ＭＣ−１０（Ａｂ１）に結合する腫瘍である。上記のように、この抗原は、広範な種々の腫瘍、特に乳癌で見出される（９０％を超える乳癌患者が、ＭＣ−１０と反応する腫瘍を有する）。従って、１１Ｄ１０は、ＨＭＦＧが検出される広範の種々の癌において使用される可能性を有する。ＨＭＦＧを検出する方法は当該分野で公知であり、そして実施例が本明細書中に記載される。本明細書中で使用される「進行性の」ＨＭＦＧ関連腫瘍は、検出可能な転移、すなわち腫瘍の原発性の位置以外の位置に、検出可能な腫瘍塊が存在することを意味する。塊は、好ましくは、Ｘ線またはＣＴスキャンのような当該分野で公知の画像化技術により検出される。
【００４０】
本明細書中で使用される場合、用語「３Ｈ１」「３Ｈ１抗体」および「３Ｈ１モノクローナル抗イディオタイプ抗体」は、ＡＴＣＣに寄託された３Ｈ１ハイブリドーマ細胞株により産生される免疫グロブリンをいうために、相互交換可能に使用される。Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）．ｓｕｂ．２、およびＦ（ａｂ’）のような、３Ｈ１の完全な重鎖および軽鎖可変領域の両方を含み、標準的なイムノアッセイにおいて、８０１９（Ａｂ１）に結合し得るインタクト抗体の、酵素的切断および／または化学的処理により生成されるフラグメントもまた、３Ｈ１の定義に含まれる。
【００４１】
３Ｈ１は、抗イディオタイプ応答のための免疫原として８０１９抗体を使用して得られた。８０１９は、ＣＥＡファミリーの他のメンバーに存在しないＣＥＡ特有のエピトープに結合し、正常成体組織とも顆粒球を含む造血細胞とも交差反応性を実質的に有さない。Ｋｏｐｒｏｗｓｋｉら、（１９７９）Ｓｏｍａｔｉｃ  Ｃｅｌｌ  Ｇｅｎｅｔ．５：９５７；Ｍｉｔｃｈｅｌ（１９８０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．１０：１。モノクローナル抗イディオタイプハイブリドーマの作製のための手順および３Ｈ１の選択は、全体が本明細書中に参考として援用される米国特許第５，９７７，３１５号中に記載される。
【００４２】
本発明者らは、進行性ＣＥＡ関連腫瘍を有する個体において、３Ｈ１が（体液性および／または細胞性）免疫応答の誘発において有効であることを見出した。特定の理論に拘束されることを望まないが、これが起こりうる一つの方法は、３Ｈ１連結部位が、より免疫原性にする他のエピトープとの関係において、ＣＥＡ中のエピトープに部分的に類似した領域を与え得るというものである。従って、本発明のこの抗体は、これらの個体におけるＣＥＡ関連腫瘍の処置に有用である。また、Ａｂ１またはＡｂ３の検出のためにも有用である。
【００４３】
本明細書中で使用される場合、「ＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体」は、（本明細書中に記載されるような）多種の腫瘍で発現される抗原であるＣＥＡの明確かつ特異的なエピトープに少なくとも部分的に類似するエピトープを含む抗イディオタイプ抗体（Ａｂ２）をいう。このような抗体は、一般に抗ＣＥＡ免疫応答を誘発し得る。
【００４４】
本明細書中で使用される場合、「ヒト化」抗体は、実質的に非ヒト種由来の免疫グロブリンに由来する抗原結合部位（例えば、相補性決定領域またはＣＤＲ）およびヒト免疫グロブリンの構造および／または配列に基づく分子の残りの免疫グロブリン構造を有する分子である。抗原結合部位は、定常ドメインに融合される完全な可変ドメインまたは可変ドメイン中の適切なフレームワーク領域に移植される相補性決定領域（ＣＤＲ）のみのいずれかを含み得る。抗原結合部位は、野生型であり得るし、または１以上のアミノ酸置換により改変され得る（例えば、より密接にヒト免疫グロブリンに類似させるために改変され得る）。
【００４５】
本明細書中で使用される場合、「ＣＥＡ関連腫瘍」は、ＣＥＡ抗原を（一般には、腫瘍細胞の表面に）発現する腫瘍である。本明細書中で使用される場合、「進行性の」ＣＥＡ関連腫瘍は、検出可能な転移、すなわち腫瘍の原発性の位置以外の位置に、検出可能な腫瘍塊が存在することを意味する。塊は、好ましくはＸ線またはＣＴスキャンのような当該分野で公知の画像化技術により検出される。
【００４６】
本明細書中で使用される場合、「ＨＭＦＧ−およびＣＥＡ−関連腫瘍」は、ＨＭＦＧ抗原（一般に、腫瘍細胞表面上で発現され、好ましくは、ＭＣ−１０に結合する）およびＣＥＡ抗原（一般に、腫瘍細胞表面上で発現される）の両方を発現する腫瘍である。ＨＭＦＧおよびＣＥＡは、腫瘍中の同じ細胞により発現されてもよく（すなわち、両方の抗原を発現する単一細胞）腫瘍中の異なる細胞により発現されてもよい（すなわち、１つの抗原を発現するが、他方を発現しない細胞）。
【００４７】
本明細書で用いる「処置」は、有利なまたは所望の結果を得るためのアプローチである。本発明の目的では、有利なまたは所望の結果は、以下の１つ以上を含むが、これらに限定されない：症状の改善、疾患の程度の減少、疾患の安定化された（すなわち、悪化しない）状態、疾患の拡大（すなわち、転移）の防止、疾患の発生または再発の防止、疾患進行の遅延または緩徐化、疾患状態の回復、および（部分的または全体的を問わず）軽減。「処置」はまた、ＨＭＦＧ−およびＣＥＡ−関連腫瘍の病理学的な結果の減少も包む。
【００４８】
本明細書中で使用される、ＨＭＦＧ−およびＣＥＡ−関連腫瘍の発達を「遅延させること」は、疾患の発達を延ばし、妨害し、遅らせ、遅延させ、安定化させ、および／または延期させることを意味する。この遅延は、時間の長さを変化させることであり得、疾患の病歴および／または処置される個体に依存する。当業者に明らかなように、十分なまたは有意な遅延は、事実上、個体が疾患を発達させない予防を含み得る。ＨＭＦＧ−およびＣＥＡ−関連腫瘍の発達を「遅延させる」方法は、その方法を使用しない場合と比較した場合、所定の時間の枠内で疾患の発達の可能性を減少させるか、および／または所定の時間の枠内で疾患の程度を減少させる方法である。このような比較は、代表的には、統計学的に有意な数の被験体を使用する臨床的研究に基づく。
【００４９】
ＨＭＦＧ−およびＣＥＡ−関連腫瘍の「発達」は、腫瘍の進行を意味する。腫瘍の発達は、本明細書中に記載される標準的な臨床的技術を使用して検出され得る。しかし、発達はまた、検出不可能であり得る疾患の進行もいう。本発明の目的のために、進行は、疾患状態の生物学的過程、この場合（すなわち、ＨＭＦＧ−およびＣＥＡ−関連腫瘍）、細胞分裂および／またはＨＭＦＧ−およびＣＥＡ−関連腫瘍の転移をいう。「発達」は、出現、再発、および開始を含む。本明細書で使用されるＨＭＦＧ−およびＣＥＡ−関連疾患の「開始」または「出現」は、最初の開始および／または再発を含む。
【００５０】
本明細書中で使用される「低全身腫瘍組織量」は、個体がＨＭＦＧ−およびＣＥＡ−関連腫瘍を進行させないことを意味する。「進行した」ＨＭＦＧ−およびＣＥＡ−関連腫瘍は、検出可能な転移が存在する、すなわち検出可能な腫瘍塊が、腫瘍の原発部位以外の部位に存在することを意味する。腫瘍塊は、一般的に、当該分野で公知の画像化技術（例えば、Ｘ線、ＣＴスキャン、またはＭＲＩ、ならびにＸ線、ＣＴスキャン、またはＭＲＩによって検出される腫瘍塊を検出する、画像化および診断技術）によって検出される。本明細書中で使用される「進行した」疾患は、リンパ節の関与を含まない。「低全身腫瘍組織量」はまた、Ｘ線、ＣＴスキャン、またはＭＲＩのような従来の診断技術を使用して検出可能な腫瘍を含まないことが理解される。好ましくは、低全身腫瘍組織量を有する個体は、ステージＩＩＩ、好ましくはステージＩＩ、さらにより好ましくはステージＩ疾患を有するとして評価されている。下記のように、外科手術、放射治療、および／または化学療法によって処置され、そしてもはや従来の診断技術および／または画像化技術によって検出し得ない疾患もまた好ましい。別の好ましい例として、「低全身腫瘍組織量」を有する個体はまた、検出可能な疾患が残存しないか、または、例えば、検出可能な疾患をすべて切除することが不可能であったこと、またはさほど広範ではない疾患に起因して、いくらかの疾患が残存する、原発性腫瘍の外科的切除を受けた個体もまた含む。他の低全身腫瘍組織量の範疇の例は、以下に提供される。
【００５１】
本明細書で使用される「高リスク」の個体は、ＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍の発症の大きな危険性がある個体である。「高リスク」の個体は、検出可能な疾患を有しても有さなくてもよく、そして本明細書に記載される処置方法に先立って検出可能な疾患を示していても示していなくてもよい。「高リスク」は、個体が、ＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍の発症と相関する測定可能なパラメーターである、１つ以上のいわゆる危険因子を有することを意味する。１つ以上のこれらの危険因子を有する個体は、これらの危険因子を有さない個体より高い、ＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍を発症させるより可能性を有する。これらの危険因子は、年齢、性別、人種、食餌、疾患の前歴、前駆疾患の存在、遺伝的（ｇｅｎｅｔｉｃ）（すなわち、遺伝的（ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ））考慮事項、および環境的曝露を含むが、これらに限定されない。高リスクのグループの例（すなわち、範疇）は以下で議論する。
【００５２】
高リスクの評価の基礎および状況に依存して、疾患もしくは腫瘍の発症、進行、および／または開始の可能性がおそらく起こる時間枠は、変化する。例えば、乳癌を有する、アジュバント設定に置かれている高リスクの患者では、発症の危険性は、代表的には１〜５年以内に測定される。アジュバント設定に置かれる、非小細胞肺癌を有する患者について、発症の危険性は代表的には１〜２年以内に測定される。前駆疾患を示す患者について、発症の危険性はより長い時間枠で測定され得る。例えば、遺伝的（ｇｅｎｅｔｉｃ）または遺伝的（ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ）考慮事項に起因して高リスクだと考えられている個体について、発症の危険性は、なおより長い時間枠（個体の予測される寿命を含む）で測定され得る。
【００５３】
「低リスク」を有する個体は、「高リスク」とはみなされない個体である。
【００５４】
「アジュバント設定」は、個体が、ＨＭＦＧ関連疾患およびＣＥＡ関連疾患（特にＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍）の病歴を有しており、そして治療に応答性であった設定をいう。先の治療は、外科的切除、放射線治療、および化学療法を含み得るが、これらに限定されない。この先の治療の結果として、これらの個体は、従来の診断技術（例えば、Ｘ線、ＣＴスキャン、またはＭＲＩ、あるいはＸ線、ＣＴスキャン、またはＭＲＩによって検出可能な腫瘍を検出する技術）によって検出されるような、臨床的に測定可能な腫瘍を有さない。しかし、彼らのＨＭＦＧ関連疾患およびＣＥＡ関連疾患の病歴により、これらの個体は、この疾患の発症のリスクを有すると考えられる。「アジュバント設定」における処置または投与は、後の処置の様式をいう。リスクの程度（すなわち、アジュバント設定にある個体が、「高リスク」であると考えられるか、または「低リスク」であると考えられるか）は、いくつかの因子に依存し、最も通常には、最初に処置されたときの疾患の程度に依存する。
【００５５】
本明細書で使用される「アジュバント設定」は、「アジュバント」とは区別され、「アジュバント」は、因子（例えば、抗体、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド）の免疫原性を増強するために、その因子と組み合わせて与えられる薬学的調製物中の化学的因子または生物学的因子をいう。アジュバントの例は、本明細書中に開示される。
【００５６】
「新規な（ｎｅｏ）アジュバント設定」は、診断後であるが１１Ｄ１０および３Ｈ１の投与以外の処置様式の開始前の、期間をいう。例えば、個体がＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍（例えば、乳癌）を有すると診断され、そのために外科手術が示される場合、新規なアジュバント設定における１１Ｄ１０および３Ｈ１の投与は、１１Ｄ１０および３Ｈ１の投与が手術前に始まることを意味する。
【００５７】
「有効量」は、有益な結果または所望の結果を遂げるために十分な量であり、好ましくは、臨床的な設定の範囲内である。有効量は、１回以上の投与において投与され得る。本発明の目的のために、１１Ｄ１０および３Ｈ１の有効量は、ＨＭＦＧ関連疾患状態およびＣＥＡ関連疾患状態（特にＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍）の発症または再発を改善、安定、または遅延させるのに十分な１１Ｄ１０および３Ｈ１の量である。「有益な結果または所望される」結果はまた、体液性および／または細胞性のいずれにせよ、免疫応答の誘発であり得る。好ましくは、この免疫応答は、抗ＣＥＡおよび／または抗ＧＭＦＧの産生である。これらの効力の指標の検出および測定は、以下で議論する。
【００５８】
本明細書中で使用される場合、「抗イディオタイプ抗体１１Ｄ１０の免疫学的活性」は、以下の活性のうちのいずれかをいう：（ａ）Ａｂ１（ＭＣ−１０）に結合する能力；（ｂ）ＭＣ−１０（Ａｂ１）に対する１１Ｄ１０の結合、またはＨＭＦＧに対するＭＣの結合を特異的な様式で阻害する能力；あるいは（ｃ）特異的な免疫応答（特に、抗体（体液性）応答、および／またはＴ細胞応答）、およびこの免疫応答から生じるエフェクター機能を惹起する能力。抗体応答には、抗体媒介機能（例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ））が包含される。Ｔ細胞応答としては、Ｔヘルパー細胞機能、細胞傷害性Ｔ細胞機能、炎症、インデューサＴ細胞、およびＴ細胞抑制が挙げられる。免疫学的活性は、当該分野で公知の標準的な方法（例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、補体結合、オプソニン作用、Ｔ細胞増殖の検出、および種々の５１Ｃｒ放出アッセイ）を使用することによって、測定可能である。これらの方法は、当該分野で公知であり、本明細書中で特に記載されている。これらの基準のいずれかに従って特異的な免疫応答を惹起する化合物は、「免疫原」と呼ばれる。「免疫原性である」は、特異的な体液性免疫応答および／または細胞免疫応答を惹起可能な能力をいう。
【００５９】
本明細書中で使用される場合、「抗イディオタイプ抗体３Ｈ１の免疫学的活性」は、以下の活性のうちのいずれかをいう：（ａ）Ａｂ１（８０１８）に結合する能力；（ｂ）特異的な免疫応答（特に、抗体（体液性）応答、および／またはＴ細胞応答）、およびこの免疫応答から生じるエフェクター機能を惹起する能力。抗体応答には、抗体媒介機能（例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ））が包含される。Ｔ細胞応答としては、Ｔヘルパー細胞機能、細胞傷害性Ｔ細胞機能、炎症、インデューサＴ細胞、およびＴ細胞抑制が挙げられる。免疫学的活性は、当該分野で公知の標準的な方法（例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、補体結合、オプソニン作用、Ｔ細胞増殖の検出、および種々の５１Ｃｒ放出アッセイ）を使用することによって、測定可能である。これらの方法は、当該分野で公知であり、本明細書中で特に記載されている。これらの基準のいずれかに従って特異的な免疫応答を惹起する化合物は、「免疫原性である」と呼ばれる。「免疫原性」は、特異的な体液性免疫応答および／または細胞免疫応答を惹起する能力をいう。
【００６０】
「個体」は、脊椎動物であり、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。哺乳動物には、家畜、競技用動物、およびペットが含まれるが、これらに限定されない。
【００６１】
本明細書中で使用される場合、「〜と組み合わせて（ｉｎ  ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ）」とは、一般に、〜と組み合わせていること（ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ）をいう（これは、同時、前、または後を意味し得る）。従って、本明細書中で使用される場合、「３Ｈ１と組み合わせた１１Ｄ１０の使用」、または「１１Ｄ１０と組み合わせた３Ｈ１の使用」、または１１Ｄ１０および３Ｈ１の「組み合わせ」とは、１１Ｄ１０および３Ｈ１（本明細書中で記載される抗イディオタイプの種々の形態のうちのいずれかを含む）の同一の個体への投与をいう。両方の抗体（例えば、１１Ｄ１０および３Ｈ１）の投与は、同時であり得るか、または一方の抗体が、他方の抗体と異なる時間に投与され得る。この抗体（例えば、１１Ｄ１０および３Ｈ１）が、同時に投与される場合、これらの抗体は、単一組成物中で一緒に投与され得るか、またはこれらの抗体が、別個の組成物中で投与され得る。任意の順序または組み合わせで、一方の抗体は、他方の抗体より頻繁に投与され得る。例示のみの目的で、個体への最初の投与は、同時投与の形態であり得るが、続く投与は、一方または両方の抗体（例えば、１１Ｄ１０および／または３Ｈ１）であり得る。１１Ｄ１０および／または３Ｈ１（または本明細書中に記載されるような種々の形態）は、個体に、抗体（例えば、１１Ｄ１０および／または３Ｈ１）が、他の治療と同時、その前、またはその後に与えられる場合、他の治療の形態「と組み合わせて」投与される。
【００６２】
（発明の実施形態）
１つの実施形態において、本発明は、個体（好ましくは、低腫瘍負荷を有する個体）に、有効量の、ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体（例えば、１１Ｄ１０）、およびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体（例えば、３Ｈ１）を投与する、ＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍の発症を遅延させる方法を提供する。ＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍の例には、乳癌、卵巣癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、および結腸直腸が挙げられるが、これらに限定されない。ＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍を検出する方法は、当該分野において公知であり、これには、標準的なイムノアッセイおよび／または画像化技術（腫瘍の凍結断片の免疫染色を含む）が挙げられる。１つの例として、ＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍が、例えば、間接的な免疫蛍光アッセイ、ＦＡＣＳ分析、または免疫ペルオキシダーゼ染色アッセイにおいて、ＨＭＦＧに対する一次抗体としてＢｒＥ１（Ｍｃ１０）を使用し、そしてＣＥＡに対する一次抗体として抗体８０１９を使用して、羅患組織の標準的な免疫組織学的試験によって検出され得る。
【００６３】
１つの実施形態において、本発明は、低腫瘍負荷を有する高リスクの個体に対する、ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体（例えば、１１Ｄ１０）と、ＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体（例えば、３Ｈ１）との組み合わせの投与を含む。上記で議論したように、高リスクの個体は、ＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍の発症と相関する１つ以上の危険因子を示す。高リスク（すなわち、増加した）リスクは、例えば、個体の遺伝型（例えば、ＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍の発症に関連した遺伝子または変異の存在）、腫瘍関連遺伝子の発現の増加または腫瘍抑制遺伝子の発現の減少、前駆疾患（例えば、非浸潤性の塊）の存在、ＨＭＦＧ関連癌およびＣＥＡ関連癌の家族の病歴、発癌性または催奇性であることが公知であるかまたは疑われている環境物質または放射形態（特に、ＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍を引き起こすことが疑われているもの）への曝露歴、レトロウイルスのような潜在的に発癌性の病原体への曝露、あるいは他の型の癌または他の型の異常な組織増殖もしくは調節されていない組織増殖の病歴に基づいて示され得る。抗ＨＭＦＧ免疫学的反応性および／または抗ＣＥＡ免疫学的反応性についての陽性試験に基づいてＨＭＦＧ陽性腫瘍およびＣＥＡ陽性腫瘍を有することが疑われる個体もまた、高リスクとして含まれる。このような個体には、原発性腫瘍を外科的に除去されているかもしれず、そして原発性腫瘍のサイズまたは陽性リンパ節の存在が原因で高リスクにある個体が含まれる。
【００６４】
ＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍の発症についての全ての危険因子が知られておらず、そして（危険全体に関する）これらの因子間の相互作用が完全には理解されていないことから、本発明の目的のための、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体（例えば、１１Ｄ１０および３Ｈ１）の組み合わせの投与について適切である個体は、共通の特性を有し得、それでもなお上記に記載のカテゴリーに明確に入らない個体が、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体の組み合わせの投与について適切な候補であるとみなされ得ることは、当業者に明らかである。熟練した臨床医は、個体がこの組み合わせ処置について適切であるか否かの経験的な決定をなし得る。例えば、乳癌の家族（つまり、遺伝）歴を有する個体は、この個体において以前に疾患が観察されていなくても、「高リスク」であるとみなされ得る。この文脈において、このような個体への、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体（例えば１１Ｄ１０および３Ｈ１）の組み合わせの投与は、その個体の生存期間内に、個体が疾患を発症させない（つまり、予測されたよりも後にその疾患を発症させる）程度にまで、疾患の発症の遅延を生じ得る。別の例は、伝統的な治療様式を使用して処置されつつあり、かつその治療に対する応答性（つまり、寛解）を示す個体である。このような個体は、治療の管理者による進行計画に起因して治療の最初の過程が未だ完了していなくても、「高リスク」として判定され得、そして最初の治療の完了前にこれらの抗体の組み合わせを受けるのに適切な候補であり得る。ＨＭＦＧおよびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体（例えば、１１Ｄ１０および３Ｈ１）の組み合わせを使用する処置が望ましくあり得るか否かを決定するための裁量は、治療の責任者の裁量である。
【００６５】
個体が、同時の危険評価基準に従って高リスクであると判定されない（つまり「低リスク」である）としても、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体（例えば、１１Ｄ１０および３Ｈ１）の組み合わせの投与が望ましくあり得ることもまた、明らかである。例えば、首尾良く処置されていて、そして（例えば、診断時における検出可能な浸潤性疾患の欠如に起因して）高リスクであるとはみなされない個体は、それにも係わらず、特にこれまでに１１Ｄ１０および３Ｈ１の組み合わせから観察される禁忌の欠如および所望されない副作用の欠如を考慮すると、予防手段としてこれらの抗体の組み合わせを受けることについての候補であり得る。従って、疾患の進行の危険性は、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体の組み合わせの投与によりなおさらなる低減され得る。別の例としては、個体は、その個体が疾患の発症の危険にあると考え得、そしてＨＭＦＧおよびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体の組み合わせの受容がこの危険性を減少させることを決定し得る。異常レベルのＨＭＦＧ発現および／またはＣＥＡ発現を有する個体もまた適切である。ＨＭＦＧ発現のレベルは、例えば、間接的な免疫蛍光アッセイにおける一次抗体として、例えば、ＢｅＥ１（ＭＣ−１０）を使用して、例えば、罹患した組織の免疫組織学的試験により決定され得る。ＣＥＡ発現のレベルは、例えば、抗体８０１９を使用して、例えば、罹患した組織の免疫組織学的試験により決定され得る。
【００６６】
本発明の別の実施形態では、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体（例えば、１１Ｄ１０および３Ｈ１）の組み合わせは、アジュバントの設定における高リスクの個体に投与される。アジュバントの設定における高リスクの個体の指標として代表的な因子は、近接組織への腫瘍による浸潤（すなわち広範な疾患）および／またはリンパ節の関与である。アジュバントの設定における高リスクの個体の例は、以下を含むがこれらに限定されない。（ａ）第ＩＩ病期または第ＩＩＩＡ病期の非小肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有し、そして腫瘍が摘除されているが陽性の領域性リンパ節を有する患者（これらの患者は、最初の２年間で６０〜８０％の再発率を有する）；ならびに（ｂ）好ましくは、少なくとも５個、より好ましくは少なくとも１０個の陽性リンパ節において陽性リンパ節を有する乳癌の患者（少なくとも１０個の陽性リンパ節を有する患者について、最初の２年間における７０〜８０％の再発率）。アジュバントの設定における高リスクの個体の別の例は、ＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍である卵巣癌を有し、かつ手術後の検出可能な疾患を有する、個体である。この手術後の検出可能な疾患は、一般には切除不能の疾患に起因し、一般には可視化的に検出されるが（例えば、患者が手術中の場合）、その存在は、他の検出方法（例えば、ＣＴスキャン）に基づき得る。アジュバンドの設定における高リスクの個体のなお別の例は、少なくとも４個の陽性リンパ節を有する結腸癌を有する個体（最初の２年間における７０〜８０％の再発率）である。アジュバンドの設定における高リスクの個体のなお別の例は、切除された小細胞肺癌を有する個体である。
【００６７】
別の実施形態では、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体（例えば、１１Ｄ１０および３Ｈ１）の組み合わせが、新規の（ｎｅｏ）アジュバントの設定において投与される。本発明の目的のために、新規のアジュバントの設定における個体は、低腫瘍負荷を有することが理解される。好ましくは、新規のアジュバントの設定において投与される場合、個体は小さな腫瘍塊を有する。
【００６８】
本発明において記載されるようなＨＭＦＧおよびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体（例えば、１１Ｄ１０および３Ｈ１）を用いた組み合わせ治療について適切な個体の別の例は、低腫瘍負荷を有する個体である。従って、本発明は、ＨＭＦＧおよびＣＥＡの有効量を投与する工程を包含する、低腫瘍負荷を有する個体におけるＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍の処置の方法を包含する。上記で定義したように、「低」腫瘍負荷は、疾患が進展しているとはみなされないことを意味する。例えば、低腫瘍負荷は、臨床開業医により判定された場合に部分的または完全に寛解した疾患であり得る。「低」腫瘍負荷はまた、疾患の程度が進行しているとは、もはやみなされないほどの、進行した疾患の腫瘍負荷の減少により発生し得る。低腫瘍負荷の他の例は、制限されたリンパ節の関与に抑制される疾患を含む。低腫瘍負荷を有する個体は、個体の病歴および処置歴に依存して「高リスク」または「低リスク」としてさらに分類され得る。当業者が容易に認識するように、低腫瘍負荷を有する個体は、非アジュバント、新規（ｎｅｏ）アジュバントおよび／またはアジュバントの設定で処置され得る。
【００６９】
本発明はまた、個体（好ましくは、残留疾患（特に最小限の残留疾患）を有する個体）についてＨＭＦＧおよびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体（例えば、１１Ｄ１０および３Ｈ１）の組み合わせを使用する処置の方法を含む。「残留」疾患は、治療後に残る任意のＨＭＦＧ関連疾患およびＣＥＡ関連疾患（特にＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍）であるが、残留疾患は慣用診断技術（例えば、Ｘ線、ＣＴスキャン、またはＭＲＩ、あるいはＸ線、ＣＴスキャンまたはＭＲＩにより検出可能な腫瘍を検出する技術）によっては検出不可能である。従って、「残留疾患」とは、検出可能な疾患へと発達し得る疾患の存在の可能性をいい、そしてアジュバントの設定でなされる予後および／または仮定をいう。ＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍のタイプ、および例えば、診断における疾患の程度に依存して、個体は、検出可能な疾患が存在しないとしても、残留疾患を有すると判定され得る。例えば、切除可能なＮＳＣＬＣを有する個体は、見かけ上完全な寛解が生じたとしても、手術（つまり、切除）後に残留疾患を有する。同様に、乳癌を有する個体は、化学療法後に微小転移性の残留疾患を有し得る。あるいは、ＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍についての治療を現在受けている個体もまた、「残留」疾患を有する。本明細書で使用される場合、「残留」疾患は、進行した疾患を含まないことが理解される。本明細書で使用される場合、「残留」疾患および「最小限の残留」疾患はともに、従来の診断技術（例えば、Ｘ線、ＣＴスキャン、またはＭＲＩ、あるいはＸ線、ＣＴスキャンまたはＭＲＩによって検出可能な腫瘍を検出する技術）を使用して検出不可能ではあるが、様々の範囲または程度のその疾患を言う。
【００７０】
本発明はまた、ＨＭＦＧ関連疾患およびＣＥＡ関連疾患（特にＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍）の発症の危険を減少させる方法を含む。これらの方法において、有効量の、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体（例えば、１１Ｄ１０および３Ｈ１）の組み合わせが、ＨＭＦＧ関連疾患およびＣＥＡ関連疾患の発症の危険がある個体に投与される。「発症の危険を減少させる」とは、ＨＭＦＧ関連疾患およびＣＥＡ関連疾患の発症および／または再発の危険が、これらの抗イディオタイプ抗体の組み合わせを受ける個体において、受けない（同じ発症の危険を有する）個体よりも低いことを意味する。ＨＭＦＧ関連疾患およびＣＥＡ関連疾患を発症させる「危険がある」個体は、個体の臨床歴および遺伝歴ならびに状態に依存して高リスクまたは低リスクであり得る。
【００７１】
別の実施形態において、本発明は、ＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍（特に乳癌）を処置する方法を提供し、この方法は、特定の化学療法剤ならびにＨＭＦＧおよびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体（例えば、１１Ｄ１０および３Ｈ１）の組み合わせの投与を含む。本発明者らは、特定の化学療法剤が、これらの抗体と相乗的に作用して免疫応答を増幅させ得ると考える。適切な化学療法剤は、化学療法剤が免疫応答を刺激し得るかまたは免疫応答を減少しないかもしれないことを示すデータに基づいて決定され得る。免疫応答を測定する方法は、当該分野で公知であり、そして本明細書中で記載される。これらの化学療法剤の投与は一般に、承認された臨床プロトコルに従う。
【００７２】
上記に記載された本発明の実施形態の全てについて、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体（例えば、１１Ｄ１０および３Ｈ１）の組み合わせは、以下の節に記載されるように調製され得、投与され得、そしてモニターされ得る。
【００７３】
本発明のいくつかの実施形態は、有効量の１１Ｄ１０および３Ｈ１（本明細書中に記載される抗イディオタイプ抗体の種々の形態のうちのいずれかを含む）の投与を包含する。この投与は、例えば、１１Ｄ１０と３Ｈ１との両方を含む単一の組成物の形態、またはそれぞれ別個の組成物の投与の形態のいずれかで、同時であり得る。あるいは、両方の抗体（例えば、１１Ｄ１０および３Ｈ１）の投与は、同時でなくてもよいか、または投与の過程の一部分のみに関して同時であり得る。２種の抗イディオタイプ抗体のうちの一方の抗体は、他方の抗体よりも頻繁に、そして／または多くの量で投与され得る。本発明は、両方の抗体（例えば、１１Ｄ１０および３Ｈ１）の別個および同時投与の、全順序および全組み合わせを含む。
【００７４】
（ＨＭＦＧおよびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体の調製）
抗イディオタイプ抗体を作製する方法は、当該分野で公知である。このような抗体は、抗体（Ａｂ１）（例えば、抗ＨＭＦＧまたは抗ＣＥＡ）で未刺激マウスを免疫して、抗イディオタイプ応答を得ることによって、得られ得る。Ａｂ１でマウスを数回免疫した後、これらの脾臓細胞を、非分泌性マウス骨髄腫細胞（例えば、Ｐ３−６５３細胞）とともに融合して、ハイブリドーマを産生させる。以下の工程を含む、広範なスクリーニングプロセスが、利用され得る：（１）Ａｂ１への抗体結合についてのポジティブセレクション；（２）アイソタイプ決定基またはアロタイプ決定基を認識する抗体に対するネガティブセレクション；（３）Ａｂ１によって認識される抗原（例えば、ＨＭＦＧまたはＣＥＡ）へのＡｂ１の結合を阻害する能力に関するポジティブセレクション；（４）哺乳動物（例えば、マウスおよびウサギ）において元の腫瘍関連抗原（ＨＭＦＧ）に対して体液性免疫応答を誘導する能力に関するポジティブセレクション。
【００７５】
上記のようにスクリーニングされ、そしていかなるアイソトピック決定基ともアロタイプ決定基とも反応しない、抗イディオタイプ抗体（Ａｂ２）産生ハイブリドーマは、競合アッセイを使用して、これらのＡｂ２がＡｂ１のパラトープに対するか否かを決定するために、さらにスクリーングされ得る。Ａｂ１によって認識される抗原（例えば、ＨＭＦＧまたはＣＥＡ）を発現する腫瘍細胞株への放射標識したＡｂ１の結合は、種々の量のＡｂ２ハイブリドーマ培養物の上清の存在下でアッセイされ得る。この細胞へのＡｂ１結合を阻害し得るＡｂ２が増殖され、さらなる研究のために腹水から精製される。精製されたＡｂ２は、哺乳動物（例えば、マウスまたはウサギ）に注射され得る。数回の注射後、血清サンプルを、免疫化Ａｂ２に結合するだけでなく、Ａｂ１により認識される抗原（例えば、ＨＭＦＧまたはＣＥＡ）にも結合するＡｂ３の存在について、力価測定する。哺乳動物へのＡｂ２の投与は、体液性免疫応答（例えば、抗Ａｂ２抗体の産生）および細胞性免疫応答（例えば、Ｔ細胞の増殖）の両方を惹起する。
【００７６】
免疫化抗体として抗ＨＭＦＧ抗体または抗ＣＥＡ抗体を使用して、ＨＭＦＧまたはＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体をそれぞれ産生し、そして抗ＨＭＦＧ免疫応答または抗ＣＥＡ免疫応答（Ｂ細胞（体液性応答）および／またはＴ細胞（細胞性応答）を含む）を惹起し得る、ハイブリドーマが、産生され得る。
【００７７】
（抗イディオタイプ抗体１１Ｄ１０の調製）
１１Ｄ１０は、幾つかの方法で入手され得る。例えば、１１Ｄ１０は、本明細書に記載されるハイブリドーマ（ＡＴＣＣ番号．ＨＢ１２０２０）、またはその子孫から産生され得る。本明細書中で使用される場合、ハイブリドーマの「子孫」は、変異または他の適応に起因して元の（親の）細胞と完全に同一であり得るか、または完全に同一であってもそうでなくてもよいが、免疫寛容を逃れる（すなわち、ＨＭＦＧに対して免疫反応を生じさせる）能力を維持するモノクローナル抗体を産生する、ハイブリドーマの子孫である。抗体の単離方法は、当該分野で周知である。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  およびＳａｍｂｒｏｏｋら、（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙを参照のこと。この抗体は、組織培養物を介したハイブリドーマからかまたはマウス腹水から得られ得る。これらの技術は当該分野で公知である。例えば、その細胞は、適切な培地で培養され得、そして使用済みの培地が抗体供給源として使用され得る。必要に応じて、マトリックスコートチャンネルまたはビーズおよび細胞同時培養物が、抗体産生細胞の増殖を増強するために含まれ得る。大量の抗体の産生については、一般には、腹水を入手することがより好都合である。このような方法は当該分野で公知であり、そして一般には、ハイブリドーマ細胞を免疫学的に未処置である組織適合性のまたは免疫寛容性の哺乳動物（特にマウス）へ注入することを含む。この哺乳動物は、必要に応じて、適切な組成物（例えば、プリスタン）の先行投与によって、腹水産生について刺激される。好ましくは、１１Ｄ１０は、組換えタンパク質Ｇ−アガロースクロマトグラフィー、引き続いてプロテイン−Ａ−ＣＬ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ４Ｂクロマトグラフィーを使用して、ＢＡＬＢ／ｃの腹水から精製される。
【００７８】
あるいは、１１Ｄ１０は、当該分野で公知の技術、例えば、市販の自動ペプチド合成機（例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｉｎｃ．（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，  ＣＡ）により製造される機器）を使用して、化学的に合成され得る。
【００７９】
１１Ｄ１０はまた、慣用な組換え方法（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、（１９８９）に記載される方法）を使用することにより入手され得る。例えば、１１Ｄ１０重鎖または１１Ｄ１０軽鎖のいずれかをコードするポリヌクレオチドが、適切な発現ベクター（これは転写の制御配列（例えば、プロモーター）を含む）にクローニングされ得る。次いで、この発現ベクターは、宿主細胞に導入される。この宿主細胞は、適切な条件下で増殖され、その結果、ポリヌクレオチドが転写され、そしてタンパク質に翻訳される。１１Ｄ１０重鎖および１１Ｄ１０軽鎖は、別々に産生され得、次いでジスルフィド結合の再構成により組み合わされ得る。あるいは、１１Ｄ１０の各鎖をコードする別個のポリヌクレオチドを有するベクター、または別個の転写産物として両鎖をコードする単一のポリヌクレオチドを有するベクターが、単一の宿主細胞にトランスフェクトされ得、次いでこの宿主細胞が、分子全体を産生し得、分子に組み立て得る。好ましくは、宿主細胞は、分子の通常の糖質の補充物を提供し得る高等真核細胞である。宿主細胞中で、このように産生される１１Ｄ１０は、当該分野での標準的技術を使用して精製され得る。
【００８０】
次いで、これらの方法のいずれかによる１１Ｄ１０の生成での使用のための１１Ｄ１０をコードするポリヌクレオチドは、１１Ｄ１０産生ハイブリドーマから入手され得るか、または当該分野における標準的技術を使用して、共有の特許出願第０８／７６６，３５０号（代理人整理番号  ３０４１４／２０００３２１）に記載されるＤＮＡ配列から合成にまたは組換え的に生成され得る。図１は、１１Ｄ１０の軽鎖可変領域のｃＤＮＡ配列（配列番号１）を示し；図２は、１１Ｄ１０の重鎖可変領域のｃＤＮＡ配列（配列番号３）を示す。１１Ｄ１０の軽鎖および重鎖の定常領域の完全な配列は決定されてはいないが、他のマウスの免疫グロブリン分子の配列と同一かまたは実質的に同一であることが予測される。マウスのκ軽鎖定常領域について、２個のタンパク質のアロタイプをコードする４個の遺伝的アロタイプが、Ｓｏｌｉｎら、（１９９３）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ３７：４０１−４０７（これは、これにより本明細書中で参考として援用される）により公開されている。Ｓｏｌｉｎらの図１は、マウスおよびラットの免疫グロブリンκ鎖の遺伝子配列を示し、異なる系統についてのκ鎖定常領域内部の配列を比較し、アロタイプ差異を強調する。ＢＡＬＢ／ｃ、ＰＬ、ＳＪＬおよびＭ．ｓｐｒｅｔｕｓについてのκ鎖定常領域配列が含まれている。他の天然に存在するアロタイプもあり得る。新生マウス由来のマウスγ１重鎖定常領域のＤＮＡ配列は、Ｈｏｎｊｏら、（１９７９）  Ｃｅｌｌ  １８：５５９−５６８（これはこれにより本明細書中で参考として援用される）により公開されている。Ｈｏｎｊｏらの図５は、コードされたタンパク質配列と共に生殖系列のＤＮＡ配列を示す。上記の系統において示されるのは、マウスのミエローマであるＭＯＰＣ  ２１から得られた別のタンパク質配列である。他の天然に存在するアロタイプもあり得る。
【００８１】
１１Ｄ１０をコードするポリヌクレオチドはまた、１１Ｄ１０のアミノ酸配列に由来し得、この可変領域は、図１（軽鎖；配列番号２）および図２（重鎖；配列番号４）に提供される。１１Ｄ１０のアミノ酸配列を与えられると、当業者は、１１Ｄ１０をコードするポリヌクレオチドを設計し得る。
【００８２】
ハイブリドーマ（ＡＴＣＣ番号ＨＢ１２０２０）から単離された１１Ｄ１０抗体は、ＩｇＧ１マウスサブクラスの抗体であり、そしてこのアイソタイプの免疫グロブリンに適した任意の技術によって単離され得る。精製方法としては、塩沈降（例えば、硫酸アンモニウムを用いて）、イオン交換クロマトグラフィー（例えば、カチオン性交換カラムまたはアニオン性交換カラム上で中性のｐＨで実行し、そしてイオン強度を増加させる段階勾配によって溶出する）、ゲルろ過クロマトグラフィー（ゲルろ過ＨＰＬＣを含む）およびプロテインＡ、プロテインＧ、ヒドロキシアパタイト、および抗免疫グロブリンのような親和性樹脂上でのクロマトグラフィーが挙げられ得る。１１Ｄ１０はまた、ＭＣ−１０（ＢｒＥ１）パラトープ（例えば、精製された形態のＡｂ１またはＡｂ３）を含むアフィニティーカラム上で精製され得る。
【００８３】
当業者に明白であるように、ＨＭＦＧに対する他の抗イディオタイプ抗体は、１１Ｄ１０を生成するために本明細書中に記載される方法を用いて生成され得る。
【００８４】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、図１Ｂ（配列番号２）に記載される配列に同一の軽鎖可変領域アミノ酸配列、および図２Ｂ（配列番号４）に記載される配列に同一の重鎖可変領域アミノ酸配列を有するＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体を利用する。本発明はまた、図１Ａ（配列番号１）に記載される配列に同一のポリヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖可変領域、および図２Ａ（配列番号３）に記載される配列に同一のポリヌクレオチド配列によってコードされる重鎖可変領域を有する、ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体を包含する。これらの抗体は、１１Ｄ１０を調製するために上記される方法を用いて調製され得る。
【００８５】
他の実施形態において、１１Ｄ１０のＣＤＲを少なくとも１個、２個、３個、４個または５個含む抗体が、使用される、他の実施形態において、１１Ｄ１０のＣＤＲを６個含む抗体が使用される。なお他の実施形態において、ヒト化された抗体（例えば、ヒト化１１Ｄ１０）が、使用される。抗体をヒト化する方法（ＣＤＲ配列を保存しても、しなくてもよい）が、当該分野において公知である。
【００８６】
他の実施形態において、本発明の方法は、図１Ｂ（配列番号２）に記載される配列に同一のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖可変領域、および図２Ｂ（配列番号４）に記載される配列と同一のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドによってコードされる重鎖可変領域を有する、ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体を利用する。アミノ酸配列を与えられると、アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを推測することは、十分に当業者の範囲内である。
【００８７】
なお他の実施形態において、ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体（例えば、１１Ｄ１０）の免疫学的活性を有するポリペプチドが、使用される。１つの実施形態において、このようなポリペプチドは、好ましくは、抗体１１Ｄ１０のＣＤＲ（図３Ａおよび３Ｂに記載される）を１つ以上含む。別の実施形態において、ポリペプチドは、好ましくは、配列番号２および／または配列番号４の少なくとも約１０個、２０個、２５個、３０個、４０個もしくは５０個のアミノ酸を含む。
【００８８】
「同一の」ポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列は、配列が整列される場合、塩基（ポリヌクレオチド）またはアミノ酸の間で正確な一致があるることを意味する。
【００８９】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、１１Ｄ１０の免疫学的活性を有するポリペプチドを利用し、ここで、このポリペプチドは、１１Ｄ１０の少なくとも１つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む免疫グロブリン可変領域、および／または１１Ｄ１０の少なくとも１つの重鎖ＣＤＲを含む免疫グロブリン可変領域を含み、ここで、このポリペプチドの免疫学的活性は、ＨＭＦＧに対する特異的な免疫応答を刺激する能力である。これらのポリペプチドを調製する方法は、１１Ｄ１０を調製するために上記された方法を含む、当該分野において公知の方法を用いて調製され得る。
【００９０】
（抗イディオタイプ抗体３Ｈ１の調製）
３Ｈ１抗体は、いくつかの方法で入手され得る。３Ｈ１は、本明細書中に記載されるハイブリドーマ（ＡＴＣＣ番号ＨＢ１２００３）またはその子孫から生成され得る。本明細書中で使用される場合、ハイブリドーマの「子孫」は、ハイブリドーマの末裔であり、これらは、変異または他の順応に起因して、元（親）の細胞に完全に同一でも、同一でなくてもよいが、免疫耐性から逃れる（すなわち、ＣＥＡに対する免疫反応を生じる）能力を維持するモノクローナル抗体を産生する。抗体単離の方法は、当該分野において周知である。例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ａｎｄ  Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙを参照のこと。この抗体は、組織培養を介してハイブリドーマからか、またはマウスの腹水から得られ得る。これらの技術は、当該分野で公知である。例えば、細胞は、適切な培地で培養され得、そして使用済みの培地が、抗体供給源として使用され得る。必要に応じて、基質でコーティングしたチャネルまたはビーズおよび細胞同時培養物が、抗体産生細胞の増殖の増強に関し得る。大量の抗体の産生のために、一般に腹水を得ることがより便利である。このような方法は、当該分野において公知であり、そして一般に、ハイブリドーマ細胞を、免疫学的にネイティブな組織適合または免疫耐性動物（特に、マウス）へ注射することを包含する。この哺乳動物は、適切な組成物（例えば、プリスタン）の先行投与によって、腹水産生について必要に応じてプライムされる。好ましくは、３Ｈ１は、組換えプロテイン質Ｇ−アガロースクロマトグラフィー、これに続くプロテイン−Ａ−ＣＬ−セファロース４Ｂクロマトグラフィーを用いてＢＡＬＢ／ｃの腹水から精製される。
【００９１】
あるいは、３Ｈ１は、当該分野において公知の技術を用いて（例えば、市販の自動ペプチド合成機（例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆ）によって製造される装置）を用いて）、化学的に合成され得る。３Ｈ１はまた、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）に記載されるような慣用的な組換え方法を用いることによって入手され得る。例えば、３Ｈ１重鎖または軽鎖のいずれかをコードするポリヌクレオチドは、適切な発現ベクター（このベクターは、プロモーターのような転写制御配列を含む）中にクローン化され得る。次いで、この発現ベクターは、宿主細胞中に導入される。宿主細胞は、適切な条件下で増殖され、その結果、ポリペプチドは、転写され、そしてタンパク質に翻訳される。３Ｈ１の重鎖および軽鎖は、別々に生産され得、次いで、ジスルフィド結合の再構成によって組み合わされ得る。あるいは、３Ｈ１の各鎖をコードするポリヌクレオチドを別々に有するベクター、または別々の転写物として両方の鎖をコードする単独のポリヌクレオチドを有するベクターは、単独の宿主細胞中にトランスフェクトされ得、次いで、この宿主細胞は、分子を産生し、そして分子全体を組立て得る。好ましくは、宿主細胞は、高等真核生物細胞であり、この細胞は、この分子の通常の炭水化物補体を提供し得る。従って、宿主細胞中で産生された３Ｈ１は、当該分野において標準的な技術を用いて精製され得る。次いで、任意のこれらの方法による３Ｈ１の生成における使用のための３Ｈ１をコードするポリヌクレオチドは、３Ｈ１を生成するハイブリドーマから入手され得るか、または本明細書中で提供されたＤＮＡ配列から合成的または組換え的に産生され得る。
【００９２】
３Ｈ１抗体は、ＩｇＧ１マウスサブクラスの抗体であり、そしてこのアイソタイプの免疫グロブリンに適した任意の技術によって単離され得る。精製方法としては、塩沈降（例えば、硫酸アンモニウムを用いて）、イオン交換クロマトグラフィー（例えば、カチオン性交換カラムまたはアニオン性交換カラム上で中性のｐＨで実行し、そしてイオン強度を増加する段階勾配で溶出される）、ゲルろ過クロマトグラフィー（ゲルろ過ＨＰＬＣを含む）、ならびに親和性樹脂（例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、ヒロドキシアパタイト、および抗免疫グロブリン）上でのクロマトグラフィーが挙げられ得る。３Ｈ１はまた、８０１９パラトープ（例えば、精製された形態のＡｂ１またはＡｂ３）を含むアフィニティーカラム上で精製され得る。
【００９３】
当業者に明らかなように、ＣＥＡに対する他の抗イディオタイプ抗体は、３Ｈ１を産生するために本明細書中に記載される方法を用いて産生され得る。
【００９４】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、図４Ｂ（配列番号６）に記載される配列に同一の軽鎖可変領域アミノ酸配列、および図５Ｂ（配列番号８）に記載される配列に同一の重鎖可変領域アミノ酸配列を有するＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体を利用する。本発明はまた、図４Ａ（配列番号５）に記載される配列に同一のポリヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖可変領域、および図５Ａ（配列番号７）に記載される配列に同一のポリヌクレオチド配列によってコードされる重鎖可変領域を有するＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体を包含する。これらの抗体は、３Ｈ１の調製について上記された方法を用いて調製され得る。
【００９５】
他の実施形態において、３Ｈ１のＣＤＲの少なくとも１個、２個、３個、４個、または５個を含む抗体が、使用される。他の実施形態において、３Ｈ１のＣＤＲを６個含む抗体が使用される。なお他の実施形態において、ヒト化された抗体（例えば、ヒト化３Ｈ１）が使用される。抗体をヒト化する方法（これは、ＣＤＲ配列を保存しても、しなくてもよい）が、当該分野において公知である。
【００９６】
他の実施形態において、本発明の方法は、図１Ｂ（配列番号２）に記載される配列に同一のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖可変領域、および図２Ｂ（配列番号４）に記載される配列に同一のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドによってコードされる重鎖可変領域を有する、ＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体を利用する。アミノ酸配列を提供されると、アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを推測することは、十分に当業者の範囲内である。
【００９７】
なお他の実施形態において、ＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体の免疫学的活性を有するポリペプチド（例えば、３Ｈ１）が、使用される。１つの実施形態において、このようなポリペプチドは、好ましくは、抗体３Ｈ１の１つ以上のＣＤＲ（図６Ａおよび図６Ｂに記載される）を含む。別の実施形態において、好ましくは、このポリペプチドは、配列番号６および／または配列番号８の少なくとも約１０個、２０個、２５個、３０個、４０個、または５０個のアミノ酸を含む。
【００９８】
「同一の」ポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列は、配列が整列される場合に、塩基（ポリヌクレオチド）またはアミノ酸の間で完全な一致があることを意味する。
【００９９】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、３Ｈ１の免疫学的活性を有するポリペプチドを利用し、ここで、このポリペプチドは、３Ｈ１の少なくとも１つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む免疫グロブリン可変領域、および／または３Ｈ１の少なくとも１つの重鎖ＣＤＲを含む免疫グロブリン可変領域を含み、ここで、ポリペプチドの免疫学的活性は、ＣＥＡに対して特異的な免疫応答を刺激する能力である。これらのポリペプチドを調製する方法は、当該分野において公知の方法を用いて調製され得、これらの方法としては、３Ｈ１を調製するための上記の方法が挙げられる。
【０１００】
（３Ｈ１と組み合わせた１１Ｄ１０の投与）
ＨＭＦＧおよびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体（例えば、１１Ｄ１０および３Ｈ１）が、個体に投与される場合、別個の調製物として、または１つの調製物で組み合わせた抗体は、好ましくは少なくとも８０％純粋であり、より好ましくは少なくとも９０％純粋であり、なおより好ましくは少なくとも９５％純粋であり、なおより好ましくは、少なくとも９８％純粋であり、そして発熱物質および他の混入物を含まない。この文脈において、純度のパーセントは、調製物の総タンパク質含量の重量％として計算される。免疫化のための１１Ｄ１０および３Ｈ１の調製は、実施例１に記載される。
【０１０１】
好ましくは、１１Ｄ１０および３Ｈ１は、薬学的に受容可能な賦形剤と共に投与される。薬学的に受容可能な賦形剤は、比較的不活性な物質であり、これは薬理学的に有効な物質の投与を容易にする。例えば、賦形剤は、ワクチン組成物に対して形態もしくはコンシステンシーを与え得るか、または希釈剤として作用し得る。適切な賦形剤としては、安定剤、湿潤剤および乳化剤、容量オスモル濃度を改変する塩、カプセル化剤、緩衝液および皮膚浸透増強剤が挙げられるが、これらに限定されない。薬学的に受容可能な賦形剤の例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ（編）第１８版，１９９０）に記載される。
【０１０２】
好ましくは、１１Ｄ１０および３Ｈ１は、アジュバント共に使用され、このアジュバントは、１１Ｄ１０および３Ｈ１の提示を増強するか、さもなくば１１Ｄ１０および３Ｈ１に対する免疫応答を増強する。適切なアジュバントとしては、水酸化アルミニウム、明礬、ＱＳ−２１（米国特許第５，０５７，５４０号）、ＤＨＥＡ（米国特許第５，４０７，６８４号および同第５，０７７，２８４号）およびその誘導体（塩を含む）および前駆体（例えばＤＨＥＡ−Ｓ）、β−２ミクログロブリン（ＷＯ９１／１６９２４）、ムラミルジペプチド、ムラミルトリペプチド（米国特許第５，１７１，５６８号）、モノホスホリルリピドＡ（米国特許第４，４３６，７２８号；ＷＯ９２／１６２３１）およびその誘導体（例えば、ＤＥＴＯＸＴＭ）、ならびにＢＣＧ（米国特許第４，７２６，９４７号）が挙げられる。他の適切なアジュバントとしては、アルミニウム塩、スクアレン混合物（ＳＡＦ−１）、ムラミルペプチド、サポニン誘導体、ミコバクテリア壁調製物、ミコール酸誘導体、非イオン性ブロックコポリマー界面活性剤、Ｑｕｉｌ  Ａ、コレラ毒素Ｂサブユニット、ポリホスホスファゼンおよび誘導体、ならびに免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）（例えば、Ｔａｋａｈａｓｈｉら、（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４４：８７３〜８７５によって記載される複合体）が挙げられるが、これらに限定されない。獣医学的使用および動物における抗体の産生のために、フロイントのアジュバントのマイトジェンの成分が、使用され得る。アジュバントの選択は、アジュバントの存在下でのワクチンの安定性、投与の経路、およびアジュバントの規制的な受容可能性（特に、ヒトへの使用が意図される場合）に一部依存する。例えば、明礬は、ヒトにおけるアジュバントとしての使用について米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって認められている。好ましくは、明礬沈降１１Ｄ１０および３Ｈ１が使用される。水酸化アルミニウム沈降１１Ｄ１０および３Ｈ１の調製は、実施例１に記載される。好ましくは、ＱＳ−２１（すなわち、ＳＴＩＭＵＬＯＮＴＭＱＳ−２１，Ａｃｑｕｉｌａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ，ＭＡ）またはＤＥＴＯＸＴＭＰＣ（Ｒｉｂｉ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＭＴ）が、使用される。
【０１０３】
Ａｃｑｕｉｌａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（以前のＣａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｃｏｒｐ．）Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ，ＭＡ，から入手されるＳＴＩＭＵＬＯＮＴＭＱＳ−２１は、３つのＱｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａからの抽出成分である。ＱＳ−２１分子（Ｃ９２Ｈ１４８Ｏ４６、Ｍ．Ｗ．１９９０）は、キライク酸（ｑｕｉｌｌａｉｃ  ａｃｉｄ）３，２８−Ｏ−ｈｉｓグリコシドの一般構造を有するトリテルペングリコシドからなる。これは、Ｖ１およびＶ２といわれる２つの構造的アイソマーから、約２：１のＶ１：Ｖ２の代表的な比で構成される。好ましくは、１００μｇのＳＴＩＭＵＬＯＮＴＭＱＳ−２１が、１１Ｄ１０および／または３Ｈ１の１回の投与当たりに使用される。
【０１０４】
Ｒｉｂｉ  Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｃｈｅｍ（Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＭＴ）から市販されているＤＥＴＯＸＴＭＰＣは、スクアレン、Ｔｗｅｅｎ−８０生理食塩水、卵ホスファチジルコリン、ならびにα−トコフェロールを用いて安定なｏ／ｎ乳濁物として調製される、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｈｌｅｉ由来の細胞壁骨格（ＣＷＳ）とＳａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｍｉｎｎｅｓｏｔａ  Ｒｅ５９５由来のモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ（登録商標））の混合物である。ＤＥＴＯＸＴＭＰＣ中のＭＰＬ（登録商標）に対するＣＷＳの比は、１０：１（ｗ／ｗ）である。各バイアルは、３００μｇのＣＷＳ、３０μｇのＭＰＬ（登録商標）、４．５ｍｇのスクアレン、０．６ｍｇのＴＷＥＥＮ  ８０、１．８ｍｇの卵ホスファチジルコリン、および６０μｇのα−トコフェロールを含む。２〜８℃でのＤＥＴＯＸＴＭＰＣの保存が推奨され、そして滅菌水が、希釈剤として使用される。好ましくは、一回の投与当たり２５０μｇのＣＷＳおよび２５μｇのＭＰＬ（登録商標）が使用される。
【０１０５】
１１Ｄ１０および３Ｈ１は、２つが同じ調製において使用される場合に、同じアジュバントを用いて調製され得るか、または２つが別々に投与される場合に、同じかもしくは異なるアジュバントを用いて調製され得る。
【０１０６】
１１Ｄ１０および３Ｈ１は、他の免疫モジュレーター（例えば、インターロイキン２（ＩＬ−２）、ＩＬ−４、ＩＬ−３、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロンおよびキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ））と組み合わせて使用され得る。
【０１０７】
１１Ｄ１０および３Ｈ１はまた、３Ｈ１の有効性および１１Ｄ１０の有効性を増強および／または完全にする他の薬剤と組み合わせて使用され得る。このような薬剤の例としては、ＣＥＡ、ＨＭＦＧ、３Ｈ１、または１１Ｄ１０由来のペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。好ましいＨＭＦＧおよび１１Ｄ１０ペプチドは、１１Ｄ１０とＨＭＦＧとの間の相同性に基づくペプチドである。好ましいＣＥＡおよび３Ｈ１ペプチドは、３Ｈ１とＣＥＡとの間の相同性に基づくペプチドである。
【０１０８】
あるいは、１１Ｄ１０および／または３Ｈ１は、リポソーム中にカプセル化され得る。細胞に送達するためにポリペプチドを封入するのに適したリポソームは、当該分野において公知である。
【０１０９】
１１Ｄ１０および／または３Ｈ１は、投与の前に熱処理され得、そして熱処理は、アジュバント（例えば、明礬）の存在下であり得る（熱処理が、アジュバントの活性を損なわない限り）。次いで、ＱＳ−２１が使用される場合、アジュバントのＩｇ部分が、加熱され得る。一般に、ＤＥＴＯＸＴＭＰＣは、加熱されない。例えば、１１Ｄ１０および／または３Ｈ１は、約５分〜２時間、好ましくは１５分〜１時間の間、約４０℃から８０℃、好ましくは４５°〜６０℃で加熱され得る。熱処理は、好ましくは、湯浴中の滅菌バイアル中で４５℃で３０分間である。熱処理は、投与前の任意の時間に生じ得る。好ましくは、熱処理は、投与の７日以内である。１１Ｄ１０および／または３Ｈ１の所望の活性が、有意に損なわれない限り、他の熱処理手順が使用され得る。次いで、熱処理された１１Ｄ１０および／または３Ｈ１は、本明細書中に記載されるとおりに投与される。
【０１１０】
１１Ｄ１０および３Ｈ１を用いる処置のために、有効量の１１Ｄ１０および３Ｈ１が、個体に非経口（好ましくは、皮内（ｉｎｔｒａｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ）または皮下）投与される。投与の他の経路としては、筋内および皮内（ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌ）が挙げられるが、これらに限定されない。１１Ｄ１０および３Ｈ１が別々に投与される場合、２つの抗体についての投与の経路は、同じであっても、異なっていてもよい。明礬（または水酸化アルミニウム）沈降１１Ｄ１０および／または３Ｈ１が使用される場合、１１Ｄ１０および／または３Ｈ１は、好ましくは皮内投与される。ＱＳ−２１またはＤＥＴＯＸＴＭＰＣが使用される場合、３Ｈ１および／または１１Ｄ１０は、好ましくは皮下投与される。使用された特定のアジュバントに依存して、製造者は、示唆される投与の経路および示唆される使用されるアジュバントの量を提供し得る。１１Ｄ１０および／または３Ｈ１はまた、培養細胞の処理、これに続くこれらの培養された細胞を個体に導入することによって、間接的に投与され得る。投与の経路はまた、処置の経過の間に変化し得る。例えば、個体は、１１Ｄ１０および／または３Ｈ１を静脈内投与に続いて腹腔内へ投与を受け得る。
【０１１１】
個体へ与えられる１１Ｄ１０の量は、いくつかの因子（例えば、個体の状態、個体の体重、処置される障害または疾患の性質、疾患の程度、投与の経路、何回用量が投与されるか、および所望の目的）に依存する。好ましくは、１１Ｄ１０の１回の投与当たりの用量は、約１０μｇ〜２０ｍｇ、好ましくは２００μｇ〜１５ｍｇ、より好ましくは５００μｇ〜１０ｍｇ、なおより好ましくは１ｍｇ〜約４ｍｇ、なおより好ましくは２ｍｇの範囲である。好ましくは、この用量は、２ｍｇの明礬沈降１１Ｄ１０、２ｍｇのＱＳ−２１含有１１Ｄ１０、または２ｍｇのＤＥＴＯＸＴＭＰＣ含有１１Ｄ１０である。
【０１１２】
個体に与えられる３Ｈ１の量は、いくつかの因子（例えば、個体の状態、個体の体重、処置される障害または疾患の性質、疾患の程度、投与の経路、何回用量が投与されるか、ならびに所望の目的）に依存する。好ましくは、１回の投与当たりの用量は、約１０μｇ〜２０ｍｇ、好ましくは２００μｇ〜１５ｍｇ、より好ましくは５００μｇ〜１０ｍｇ、なおより好ましくは１ｍｇ〜約４ｍｇ、なおより好ましくは２ｍｇの範囲である。好ましくは、この用量は、２ｍｇの明礬沈降３Ｈ１である。
【０１１３】
１１Ｄ１０および／または３Ｈ１の投与の間の間隔は、処置される障害および個体の応答性に依存して変化し得る。単独での調製または組み合わせた調製のいずれかにおいて、１１Ｄ１０と３Ｈ１の両方が、好ましくは、最初、初回プライム投与として投与され、続いて１１Ｄ１０および３Ｈ１のいずれか、または両方の少なくとも１回、好ましくは２回、より好ましくは３回ブースター投与を投与される。さらなるブースター投与は、周期的基準における増強応答または回復応答を提供し得る。１１Ｄ１０および／または３Ｈ１は、所望の測定可能なパラメーター（例えば、免疫応答の誘発）が検出されるまで、毎週、好ましくは隔週（二週間毎）に投与され得る。次いで、投与は適切な場合、より短い周期基準（例えば、隔月（２ヶ月毎）または毎月）で続けられ得る。その後の注射（すなわち、維持用量）の時間は、特に、処置される個体の状態および応答に依存する。両方の抗体に対するＡｂ３レベルが、好ましくは、本明細書中に記載される診断方法によってモニターされ得、維持（ブースター）投与が与えられるべき時期（一般に約２ヵ月〜３ヶ月毎）を決定する。１つの実施形態において、始めの一連の投与は、合計で４回の注射を二週間毎の間隔で与えられ、続いて毎月注射される。
【０１１４】
いくつかの状況について、３Ｈ１／１１Ｄ１０の組み合わせを受けた個体は、事前の処置の性質、疾患自体の性質、または両方のいずれかに起因して中程度に、重篤な免疫無防備状態になり得ることが理解される。従って、免疫応答、および／または３Ｈ１／１１Ｄ１０組み合わせの注射回数、ならびに／あるいは一回投与当たりの１１Ｄ１０および／または３Ｈ１の量を上昇させるために必要とされる時間は、変化し得る。例えば、個体は、一旦、３Ｈ１／１１Ｄ１０組み合わせが投与されると免疫応答を誘発するためにより長い時間を必要とし得る。この場合において、たとえ、何の初回（すなわち、１ヶ月以内）免疫応答が検出されなくても、個体は免疫応答についてモニターされ続けることが推奨される。別の実施例として、個体は、免疫応答を誘発するために平均数よりも多い回数の注射を必要とし得る。あるいは、例えば、免疫応答（例えば、Ｔ細胞応答）を最適化するために、１１Ｄ１０および３Ｈ１の１つまたは両方について毎月よりも長い間隔での注射を有することが所望され得る。免疫応答を上昇させることは、有益なまたは所望の結果を得る点で、１１Ｄ１０および３Ｈ１の組み合わせの有効性を少なくとも部分的に示し、好ましくは完全に示すと考えられ、従って、１１Ｄ１０および３Ｈ１の有効量の決定において有用な指標であり得る。
【０１１５】
本発明の抗イディオタイプ抗体の投与の有効性の１つの可能性のある指標は、腫瘍細胞におけるその個々のＴＡＡの密度である。１１Ｄ１０の有効性、または１１Ｄ１０の投与が示されるか否かを決定するために、腫瘍細胞上のＨＭＦＧの密度が、指標として使用され得る。この密度は、個体間で広く異なり、そして１１Ｄ１０の投与経路および／または疾患の経過に渡って変化し得る。本明細書中で使用される場合、ＨＭＦＧの「密度」は、以下のいずれか、または両方をいい得る：（ａ）その表面上にＨＭＦＧを有する所定の生物学的サンプルにおける全細胞当たりの細胞数；（ｂ）各細胞の表面上のＨＦＭＧの量。密度（ａ）は、細胞の総数によって除されたサンプル中の細胞数に注目することによって計算され、この細胞は染色されるか、さもなくば、ＨＭＦＧが存在することを示す。この密度は、好ましくは約２０％よりも多く、より好ましくは約３０％よりも多く、より好ましくは約５０％よりも多く、なおより好ましくは約７０％よりも多く、なおより好ましくは約８０％よりも多く、最も好ましくは約９０％よりも多い。従って、本発明は、約２０％よりも多く、好ましくは３０％よりも多く、より好ましくは７０％よりも多く、なおより好ましくは約８０％よりも多く、最も好ましくは約９０％よりも多いＨＭＦＧの密度を有する個体への１１Ｄ１０の投与を包含する。
【０１１６】
密度（ｂ）は、例えば、別の個体由来のサンプルに対する１つの個体由来のサンプル中の細胞の染色の相対強度（またはＨＭＦＧの存在を示す任意の測定値の強度）によって示される。この密度について、当業者は、密度の経験的な決定を行い得る。密度（ｂ）は、正常な組織（すなわち、ＨＭＦＧ欠損細胞、または非感染細胞）に関し、好ましい範囲は、免疫組織化学的染色密度によって検出される場合、非感染細胞に渡って約１．５倍、好ましくは約３倍、より好ましくは約１０倍高い発現の範囲であり得る。非感染細胞もまた、同じ個体由来であり得た。
【０１１７】
これは、より低い密度（例えば、約５０％未満）を有する個体は、１１Ｄ１０の投与について示されないわけではない。単一の理論によって縛られることが望まれない一方で、１１Ｄ１０の投与は、一連の免疫反応を誘発し得、これはＨＭＦＧ関連腫瘍に対して効果的なより一般的な応答（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞応答）を生じることが可能である。しかし、より低い密度は、さらなる治療が所望されることを示し得る。
【０１１８】
密度はまた、疾患の程度および１１Ｄ１０の投与に対する応答の指標として用いられ得ることが、理解される。例えば、１１Ｄ１０投与の発生で個体から得られるサンプルは、約８０％の密度（すなわち、約８０％の細胞がＨＭＦＧを示す）を示し得る。１１Ｄ１０を受けた後、同じ位置から得られたサンプルは、約５０％の密度のみを示し得、ＨＭＦＧ発現細胞が破壊されていることを示す。同様に、１１Ｄ１０を受けた個体由来のサンプルの染色の強度が、１１Ｄ１０を受ける再に減少する場合、これは、ＨＭＦＧ保有腫瘍細胞が破壊されたことを示す。
【０１１９】
本明細書中に記載されるようなＴＡＡの同様の試験は、３Ｈ１投与の有効性を決定するためか、または３Ｈ１投与が示されるか否かを決定するために使用され得；３Ｈ１の場合
、評価されたＴＡＡはＣＥＡである。ＣＥＡ密度に対するこのような試験は、当業者の範囲内である。２つのＴＡＡ（ＨＭＦＧおよびＣＥＡ）の開始密度は、その各抗イディオタイプ抗体の開始投薬用量を決定するために使用され得；その後の密度が、後の投与におけるそれぞれの抗イディオタイプ抗体の投薬量を決定するために使用され得る。免疫応答を高める目的で、１１Ｄ１０および／または３Ｈ１は、非改変型で投与され得る。その免疫原性を改善するために１１Ｄ１０および／または３Ｈ１を改変することが時折好まれ得る。本明細書中で使用される場合、「免疫原性」は、特定の抗体応答または細胞の免疫応答、または両方を誘発する能力をいう。免疫原性を改善する方法としては、特に、薬剤との架橋（例えば、グルタルデヒドまたは二官能性カプラー）、または多価プラットフォーム分子への結合が挙げられる。免疫原性はまた、タンパク質キャリア、特にＴ細胞エピトープを含むキャリアに結合することよって改善され得る。
【０１２０】
１１Ｄ１０および３Ｈ１の併用投与は、確立されていても、実験的でも、単独で生じ得るか、または他の形態の治療と組合わせてさらに生じ得る。例えば、１１Ｄ１０および３Ｈ１の組み合わせは、他の治療と同時または連続して、外科手術、放射線療法、化学療法、ホルモン療法、および／または薬物療法を補うために用いられ得る。１１Ｄ１０および３Ｈ１と組合わせて用いられ得る化学療法剤の例としては、アントラサイクリン、タキサン、およびハーセプチンが挙げられる。１１Ｄ１０および３Ｈ１と組合わせて用いられ得るホルモン療法剤の例としては、フェマラ（Ｆｅｍａｒａ）、アリジメックス（Ａｒｉｄｉｍｅｘ）、アロマシン、およびタモキシフェンが挙げられる。あるいは、１１Ｄ１０および３Ｈ１の投与は、第一線の転移の処置として用いられ得る。これらの投与の順序およびタイミング、ならびに各時間での１１Ｄ１０と３Ｈ１との適切な組み合わせは、経験的に決定され、そして処置される疾患、患者の状態、既往歴および症状、ならびに／または種々の治療に対する反応性のような、変動するものに依存する。このような投与は、当業者の範囲内である。
【０１２１】
好ましくは、１１Ｄ１０および３Ｈ１は、他の付加療法が用いられる場合、これらの付加治療（例えば、化学療法および／または放射線）の投与の前に投与される。好ましくは、１１Ｄ１０および３Ｈ１は、第１の過程の化学療法および／または放射線療法の１日前、好ましくは、３〜５日前に、ならびに化学療法および／または放射線療法の各周期の１日前、好ましくは、３〜５日前に投与される。これにより、個体に免疫応答をより多く獲得させることが可能である。
【０１２２】
１１Ｄ１０および／または３Ｈ１の投与を、処置されるべき個体および疾患に依存して、種々の過程について続け得る。好ましくは、個体が、体液性および／または細胞性の免疫応答を獲得することが出来るかぎり、１１Ｄ１０および／または３Ｈ１の投与は続けられる。１１Ｄ１０および／または３Ｈ１の投与は、個体が、１１Ｄ１０および／または３Ｈ１の投与と関係する受容できない異常な反応を示す場合、中断されるべきであり、そして個体が進行性疾患を示す場合、続けても良いし、続けなくてもよい。進行性疾患の事象における１１Ｄ１０および／または３Ｈ１の投与の継続は、１１Ｄ１０および／または３Ｈ１の連続した投与が、他に示される治療を補い得るか否かに少なくとも一部依存する。
【０１２３】
（ＨＭＦＧおよびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体の投与の効果の決定）
ＨＭＦＧおよびＣＥＡ（例えば、１１Ｄ１０および３Ｈ１）に対する抗イディオタイプ抗体の投与の効果を決定するために、個体は、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに対する抗体（体液性）または細胞性免疫応答のいずれか、あるいはこれらの組み合わせについてモニターされ得る。個体はまた、疾患の進行についてモニターされ得る。
【０１２４】
（ＨＭＦＧに対する抗イディオタイプ抗体の投与の効果）
生物学的サンプルにおけるＨＭＦＧ抗体（Ａｂ３）のレベルを決定するために、例えば、血清または血漿が、個体から得られる。このサンプルは、必要に応じて、アッセイが実施される前に免疫グロブリンについて濃縮され得るが、これは、通常は必要とされない。マウスの免疫グロブリン（例えば、１１Ｄ１０）が、アッセイ試薬として用いられる場合、サンプルは、好ましくは、抗マウス免疫グロブリン活性を除去するために前処理される。これは、例えば、マウス免疫グロブリンカラムにおける枯渇によってか、または非特異的マウス免疫グロブリンをサンプルに混合し、そして形成された任意の免疫沈澱物を除去することにより実施され得る。
【０１２５】
アッセイを行うために、サンプル中に存在し得る抗ＨＭＦＧは、無限の量のＨＭＦＧの抗原性等価物と接触させられる。これは、単離されたＨＭＦＧ、直接的なブロッティングまたはポリアクリルアミドゲルからの転写によって固定されたＨＭＦＧを有するニトロセルロース、ＨＭＦＧを発現する細胞（例えば、ＭＣＦ−７またはＳＫＢＲ３細胞、これらは、ヒト乳癌腫細胞株である）、このような細胞に由来する膜調製物、またはＨＭＦＧを含有する固定された組織切片であり得る。あるいは、抗イディオタイプ（特に、１１Ｄ１０）が使用され得る。
【０１２６】
一旦、免疫複合体が形成されると、これは、一般的には、複合体化していないＨＭＦＧアナログから分離され、そして存在する複合体の量が決定される。複合体は、例えば、細胞を回収するための遠心分離もしくは免疫沈降、または固相による捕捉によって分離され得る。存在する複合体の量は、直接的にか、または二次的な試薬とともにインキュベートすることによるかのいずれかで、標識を有するＨＭＦＧアナログを提供することによって測定され得る。あるいは、競合アッセイが行われ得、ここではサンプルは、ＨＭＦＧアナログとともに最初にインキュベートされ、次いで、サンプル中に存在し得る抗ＨＭＦＧと競合する、無限の量の標識した抗ＨＭＦＧ試薬が添加される。適切な標識としては、放射性標識、酵素標識、蛍光標識、および化学発光標識が挙げられる。標準曲線が、抗ＨＭＦＧを含有しないことが既知の溶液、およびサンプルの代わりに種々の相対的な濃度の抗ＨＭＦＧを含有する溶液を使用して構築される。未知の量の抗ＨＭＦＧを含有するサンプルは、一般的には、同時にアッセイされ、そしてその中に含まれる抗ＨＭＦＧの相対的な量が、標準曲線との比較によって決定される。ＨＭＦＧ抗体を使用して抗ＨＭＦＧレベルを決定するための好ましいアッセイは、ラジオイムノアッセイ（実施例２）である。
【０１２７】
抗ＨＭＦＧ抗体のアイソタイプは、分離段階または標識段階のいずれかで、イムノアッセイにおいてアイソタイプ特異的試薬を含むことによって決定され得る。例えば、抗ヒトＩｇＧは、ヒト起源の臨床的なサンプル中に存在するＩｇＧのクラスの抗体を分離または検出するために使用され得る。ＩｇＧのクラスの特異的抗ＨＭＦＧの存在は、一般的には、メモリー応答を示す。ＩｇＭクラスの抗ＨＭＦＧの存在は、一般的には、進行中の免疫刺激（例えば、ＨＭＦＧを発現する腫瘍の存在に起因し得る）または１１Ｄ１０での進行中の処置を示す。
【０１２８】
所望される場合は、生物学的サンプル中で検出される抗ＨＭＦＧ抗体はさらに、例えば、それらがＨＭＦＧ上の関連するエピトープについて特異的であるかどうかを決定するために、抗ＭＣ−１０（Ａｂ１）との競合によって、特徴付けられ得る。Ａｂ１とＡｂ３との間での競合アッセイは、実施例２に記載される。
【０１２９】
抗ＨＭＦＧ抗体はまた、それが細胞傷害性であるかどうかを決定するために、試験され得る。補体媒介性細胞傷害（ＣＭＣ）は、例えば、５１Ｃｒで標識されたＨＭＦＧを発現する標的細胞（例えば、ＭＣＦ−７またはＳＫＢＲ−３）を使用することによって決定される。標識は、約２００μＣｉのＮａ２５１ＣｒＯ４とともに約１０６個の細胞を、３７℃にて６０分間インキュベートし、続いて洗浄することによって達成され得る。アッセイは、標的細胞とともに抗体（または、抗体を含有する臨床的サンプル）をインキュベートすることによって行われる。次いで、オプソニン化細胞は洗浄され、そして補体の供給源（例えば、内因性の抗体活性を除去するために予め吸着させられたモルモットの血清）とともにインキュベートされる。３７℃での適切なインキュベーション時間後、５１Ｃｒの培地中への放出が決定され、そして非オプソニン化コントロール細胞によるものと比較される。５１Ｃｒの放出は、ＣＭＣ活性と相関する。
【０１３０】
抗ＨＭＦＧ抗体を特徴付ける別の方法は、ＡＤＣＣ応答に関与するその能力を試験することによる（Ｃｈｅｒｅｓｈら（１９８６）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ４６：５１１２−５１１８）。放射標識されたＨＭＦＧを発現する標的細胞は、抗ＨＭＦＧ（熱不活化された血清の形態）およびエフェクター細胞とともにインキュベートされる。正常なヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）が適切なエフェクター細胞であり、そして好ましくは、約１００のエフェクター：標的の比で使用される。３７℃で約４時間後、放出された５１Ｃｒの割合が、ＡＤＣＣ活性の測定として決定される。
【０１３１】
１１Ｄ１０のような、ＨＭＦＧについての抗イディオタイプ抗体を投与された被験体中での細胞性の免疫応答は、特定のＴ細胞活性についての標準的な機能的アッセイを行うことによって定量され得る。
【０１３２】
１つの型のアッセイは、Ｔ細胞の増殖を測定する。この試験において、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、処置された個体から回収された全血サンプルから得られる。実験動物については、脾臓細胞もまた使用され得る。Ｔ細胞は、例えば、ＦＩＣＯＬＬＴＭのような勾配での遠心分離によって濃縮され得る。次いで、細胞は、種々の濃度の、抗イディオタイプ抗体（例えば、１１Ｄ１０）またはＨＭＦＧまたは（より通常は）照射されたＨＭＦＧ発現細胞の存在下で培養される。好ましくは、刺激性細胞は応答性細胞とともに、特に、組織適合型クラスＩＩ抗原に関して自己由来である。次いで、増殖の程度が、未刺激の細胞との比較において、（しばしば、３Ｈ−チミジンの取り込みに関して）測定される。高い危険性の患者の血清中のＴ細胞の増殖活性が、実施例２に示される。
【０１３３】
別の型のアッセイは、Ｔ細胞の細胞傷害性を測定する。この試験において、濃縮されたＴ細胞の集団は、上記のように調製された、５１Ｃｒ標識されたＨＭＦＧを発現する標的細胞の溶解を行うために使用する。好ましくは、エフェクター細胞は標的細胞とともに、特に、組織適合性のクラスＩ抗原に関して自己由来である。Ｔ細胞の集団は、必要に応じて、ＨＭＦＧまたは関連する細胞株で予め刺激され得る。次いで、Ｔ細胞は、約１０４個の標識された標的細胞と；例えば、マイクロタイタープレートのウェル中で、種々の比で組み合わせられる。プレートは、必要に応じて、細胞の接触を開始するために遠心分離され、そして細胞は、４〜１６時間、３７℃にてともに培養される。培地中への５１Ｃｒの特異的放出の割合は、単独で培養された標識された標的（ネガティブコントロール）、および０．１％のＴＲＩＴＯＮＴＭ  Ｘ−１００のような界面活性剤で溶解させられた標的（ポジティブコントロール）との比較において測定される。
【０１３４】
１１Ｄ１０の投与の効果を決定するための他の関連する測定としては、疾患の進行の直接的または間接的な指標であるかどうかにかかわらず、疑われる型の癌の発達（すなわち、進行）を決定することにおいて適切であり得る、臨床的な試験が挙げられる。このような試験としては、血液試験、マンモグラフィー、ラジオシンチグラフィー、ＣＴスキャン、およびＭＲＩが挙げられ得る。疾患の進行に関連する任意の測定可能な変数が適切である。任意の他の腫瘍関連マーカーが、治療の経過（例えば、胎児癌抗原（ＣＥＡ）またはＣＡ−１２５のモニタリングに適切である。
【０１３５】
（ＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体の投与の効果）
生物学的サンプルにおけるＣＥＡ抗体（Ａｂ３）のレベルを決定するために、例えば、血清または血漿が、個体から得られる。このサンプルは、必要に応じて、アッセイが実施される前に免疫グロブリンについて濃縮され得るが、これは、通常は必要とされない。マウスの免疫グロブリン（例えば、３Ｈ１）が、アッセイ試薬として用いられる場合、サンプルは、好ましくは、抗マウス免疫グロブリン活性を除去するために前処理される。これは、例えば、マウス免疫グロブリンカラムにおける枯渇によってか、または非特異的マウス免疫グロブリンをサンプルに混合し、そして形成された任意の免疫沈澱物を除去することにより実施され得る。
【０１３６】
アッセイを行うために、サンプル中に存在し得る抗ＣＥＡは、無限の量のＣＥＡの抗原性等価物と接触させられる。これは、単離されたＣＥＡ、直接的なブロッティングまたはポリアクリルアミドゲルからの転写によって固定されたＣＥＡを有するニトロセルロース、ＣＥＡを発現する細胞（例えば、ＬＳ１７４−Ｔ細胞）、このような細胞に由来する膜調製物、またはＣＥＡを含有する固定された組織切片であり得る。あるいは、抗イディオタイプ（特に、３Ｈ１）が使用され得る。
【０１３７】
一旦、免疫複合体が形成されると、これは、一般的には、複合体化していないＣＥＡアナログから分離され、そして存在する複合体の量が決定される。複合体は、例えば、細胞を回収するための遠心分離もしくは免疫沈降、または固相による捕捉によって分離され得る。存在する複合体の量は、直接的にか、または二次的な試薬とともにインキュベートすることによるかのいずれかで、標識を有するＣＥＡアナログを提供することによって測定され得る。あるいは、競合アッセイが行われ得、ここではサンプルは、ＣＥＡアナログとともに最初にインキュベートされ、次いで、サンプル中に存在し得る抗ＣＥＡと競合する無限の量の標識した抗ＣＥＡ試薬が添加される。適切な標識としては、放射性標識、酵素標識、蛍光標識、および化学発光標識が挙げられる。標準曲線が、抗ＣＥＡを含有しないことが既知の溶液、およびサンプルの代わりに種々の相対的な濃度の抗ＣＥＡを含有する溶液を使用して構築される。未知の量の抗ＣＥＡを含有するサンプルは、一般的には、同時にアッセイされ、そしてその中に含まれる抗ＣＥＡの相対的な量が、標準曲線との比較によって決定される。３Ｈ１抗体を用いて抗ＣＥＡレベルを決定するための好ましいアッセイは、ラジオイムノアッセイである。
【０１３８】
抗ＣＥＡ抗体のアイソタイプは、分離段階または標識段階のいずれかで、イムノアッセイにおいてアイソタイプ特異的試薬を含むことによって決定され得る。例えば、抗ヒトＩｇＧは、ヒト起源の臨床的なサンプル中に存在するＩｇＧのクラスの抗体を分離または検出するために使用され得る。ＩｇＧのクラスの特異的抗ＣＥＡの存在は、一般的には、メモリー応答を示す。ＩｇＭクラスの抗ＣＥＡの存在は、一般的には、進行中の免疫刺激（例えば、ＣＥＡを発現する腫瘍の存在に起因し得る）または３Ｈ１での進行中の処置を示す。
【０１３９】
所望される場合は、生物学的サンプル中で検出される抗ＣＥＡ抗体はさらに、例えば、それらがＣＥＡ上の関連するエピトープについて特異的であるかどうかを決定するために、抗８０１９（Ａｂ１）との競合によって、特徴付けられ得る。
【０１４０】
抗ＣＥＡ抗体はまた、それが細胞傷害性であるかどうかを決定するために、試験され得る。補体媒介性細胞傷害（ＣＭＣ）は、例えば、５１Ｃｒで標識されたＣＥＡを発現する標的細胞（例えば、ＬＳ１７４−Ｔ）を使用することによって決定される。標識は、約２００μＣｉのＮａ２５１ＣｒＯ４とともに約１０６個の細胞を、３７℃にて６０分間インキュベートし、続いて洗浄することによって達成され得る。アッセイは、標的細胞とともに抗体（または、抗体を含有する臨床的サンプル）をインキュベートすることによって行われる。次いで、オプソニン化細胞は洗浄され、そして補体の供給源（例えば、内因性の抗体活性を除去するために予め吸着させられたモルモットの血清）とともにインキュベートされる。３７℃での適切なインキュベーション時間後、５１Ｃｒの培地中への放出が決定され、そして非オプソニン化コントロール細胞によるものと比較される。５１Ｃｒの放出は、ＣＭＣ活性と相関する。
【０１４１】
抗ＣＥＡ抗体を特徴付ける別の方法は、ＡＤＣＣ応答に関与するその能力を試験することによる（Ｃｈｅｒｅｓｈら（１９８６）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ４６：５１１２）。放射標識されたＣＥＡを発現する標的細胞は、抗ＣＥＡ（熱不活化された血清の形態）およびエフェクター細胞とともにインキュベートされる。正常なヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）が適切なエフェクター細胞であり、そして好ましくは、約１００のエフェクター：標的の比で使用される。３７℃で約４時間後、放出された５１Ｃｒの割合が、ＡＤＣＣ活性の測定として決定される。
【０１４２】
３Ｈ１のような、ＣＥＡについての抗イディオタイプ抗体を投与された被験体中での細胞性の免疫応答は、特定のＴ細胞活性についての標準的な機能的アッセイを行うことによって定量され得る。
【０１４３】
１つの型のアッセイは、Ｔ細胞の増殖を測定する。この試験において、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、処置された個体から回収された全血サンプルから得られる。実験動物については、脾臓細胞もまた使用され得る。Ｔ細胞は、例えば、ＦＩＣＯＬＬＴＭのような勾配での遠心分離によって濃縮され得る。次いで、細胞は、種々の濃度のＣＥＡまたは（より通常は）照射されたＣＥＡ発現細胞の存在下で培養される。好ましくは、刺激性細胞は応答性細胞とともに、特に、組織適合型クラスＩＩ抗原に関して自己由来である。次いで、増殖の程度が、未刺激の細胞との比較において、（しばしば、３Ｈ−チミジンの取り込みに関して）測定される。
【０１４４】
別の型のアッセイは、Ｔ細胞の細胞傷害性を測定する。この試験において、濃縮されたＴ細胞の集団は、上記のように調製された、５１Ｃｒ標識されたＣＥＡを発現する標的細胞の溶解を行うために使用される。好ましくは、エフェクター細胞は標的細胞とともに、特に、組織適合性のクラスＩ抗原に関して自己由来である。Ｔ細胞の集団は、必要に応じて、ＣＥＡまたは関連する細胞株で予め刺激され得る。次いで、Ｔ細胞は、約１０４個の標識された標的細胞と；例えば、マイクロタイタープレートのウェル中で、種々の比で組み合わせられる。プレートは、必要に応じて、細胞の接触を開始するために遠心分離され、そして細胞は、４〜１６時間、３７℃にてともに培養される。培地中への５１Ｃｒの特異的放出の割合は、単独で培養された標識された標的（ネガティブコントロール）、および０．１％のＴｒｉｔｏｎＴＭ  Ｘ−１００のような界面活性剤で溶解させられた標的（ポジティブコントロール）との比較において測定される。
【０１４５】
３Ｈ１のようなＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体の投与の効果を決定するための他の関連する測定としては、疾患の進行の直接的または間接的な指標であるかどうかにかかわらず、疑われる型の癌の発達（すなわち、進行）を決定することにおいて適切であり得る、臨床的な試験が挙げられる。このような試験としては、血液試験、マンモグラフィー、ラジオシンチグラフィー、ＣＴスキャン、およびＭＲＩが挙げられ得る。疾患の進行に関連する任意の測定可能な変数が適切である。例えば、血液中の測定可能なＣＥＡに関係するＣＥＡ関連腫瘍または障害について、ＣＥＡレベルが測定され得る。ＣＥＡの血清レベルを測定するための方法は、当該分野で公知であり、そして診断キット（Ｈｙｂｒｙｔｅｃｈ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）として市販されている。この試験について、血清を以下のように調製する：ＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体を用いて処置した個体は、１ｍｌの酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）で処理され、次いで９０℃にて１５分間加熱された０．５ｍｌの血清を有する。２０００ｒｐｍにて１０分間の遠心分離の後、透明な上清を、当該分野で公知の方法を用いてＣＥＡについて試験する。この血清は、記載されるように試験するする前に、熱不動化されるべきである。なぜならば、市販のＣＥＡキットは、マウス抗ＣＥＡ抗体を含み、そしてマウスハイブリドーマから産生された、ＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体を受けた個体は、通常、ヒトマウス抗体（ＨＡＭＡ）を有するからである。任意の他の腫瘍に関係するマーカーは、例えば、ＣＡ−１２５のような治療の過程をモニタリングするのに適切である。
【０１４６】
本発明はまた、ＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍（特に、低腫瘍負荷を有する個体におけるもの）の処置における使用のための医薬品の調製のための１１Ｄ１０および３Ｈ１のようなＨＭＦＧおよびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体の使用を含む。
【０１４７】
（ＨＭＦＧおよびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体を含むキット）
本発明はまた、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体（例えば、抗体１１Ｄ１０および３Ｈ１）、またはポリペプチドおよび／あるいはそのポリヌクレオチドを含むキットを包含する。本発明のキットは、診断手順に使用され得るか、ＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍の処置に使用するためのキット（またはＨＭＦＧ関連腫瘍およびＣＥＡ関連腫瘍の処置に使用するための医薬の調製のためのキット）であり得る。
【０１４８】
本発明のキットは、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに対する抗イディオタイプ抗体、抗体１１Ｄ１０、１１Ｄ１０ポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチド、ならびに／あるいは抗体３Ｈ１、３Ｈ１ポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチドを、適切な容器中に含む。この構成要素は、同じまたは異なる容器中にあり得る。このキットは、必要に応じて、本発明の手順において有用であるさらなる構成要素を提供する。これらの任意の構成要素としては、以下があげられるが、これらに限定されない：緩衝液、捕捉試薬、発色試薬、標識、反応表面、検出するための手段、コントロールサンプル、アジュバント、指示書、および解説情報。この指示書は、一般的に、書面であるが、電子記憶媒体でもあり得る。
【０１４９】
以下の実施例は、本発明を制限ではなく例示するために提供される。
【実施例】
【０１５０】
（実施例１）
（免疫のための１１Ｄ１０抗イディオタイプ抗体および３Ｈ１抗イディオタイプ抗体の産生）
（１１Ｄ１０の産生）
マウスモノクローナル抗体ＭＣ−１０（ＨＭＦＧの異なるエピトープを認識する）を、共有に係るＰＣＴ出願公開ＷＯ９７／２２６９９および米国特許出願番号０８／７６６，３５０（代理人整理番号３０４１４／２０００３２１）に記載されるように、抗イディオタイプ抗体１１Ｄ１０（ＩｇＧ１−κ）の産生のために、同系ＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫するために使用した。ＢＡＬＢ／ｃマウスの免疫、ハイブリドーマの融合、およびクローニング、抗イディオタイプ（Ａｂ２）の選択、およびマウス中のバルク量での腹水の産生を、以前に記載されているように行った。Ａｂ２抗イディオタイプ１１Ｄ１０（ＩｇＧ１）を、プロテインＡ−ＣＬ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ４Ｂカラムでのアフィニティークロマトグラフィー、次いでＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅイオン交換クロマトグラフィーによって、腹水から精製した。単離した免疫グロブリン（＞９５％）の純度を、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）および高速液体クロマトグラフィー技術によって決定した。滅菌性、発熱性、ポリヌクレオチド、マイコプラズマ、および外因性のウイルスの混入、ならびにレトロウイルスの除去の確認試験を、米国食品医薬品局（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）の指針に従って行った。
【０１５１】
ミョウバンで沈殿させた１１Ｄ１０の使用のために、１ｍｌの２％  Ａｌｕ−Ｇｅｌ  Ｓ（Ｓｅｒｖａ  Ｆｉｎｅ  Ｂｉｏｃｈｅｍ，Ｉｎｃ．，Ｇａｒｄｅｎ  Ｃｉｔｙ，Ｌｏｎｇ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）を、精製したｍＡｂ抗Ｉｄ（１１Ｄ１０）の５ｍｇのアリコートに添加する。次いで、容量を、Ｄ−ＰＢＳで１０．０ｍｌに調節し、そして混合物を室温にて１時間ボルテックスでインキュベートする。次いで、混合物を、２４℃にて、２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離する。ゲル層に結合したｍＡｂの量を、上清中の未結合の抗体の量を分光光学的に測定することによって決定する。Ａｌｕ−Ｇｅｌで沈殿させた抗体を、使用するまで４℃で保存する。これらの手順を、薄層の流量のフード（ｌａｍｉｎａｒ  ｆｌｏｗ  ｈｏｏｄ）中で無菌的に行い、そして最終的な産物は無菌状態であり、そして抗Ｉｄ  １１Ｄ１０  Ａｌｕ−Ｇｅｌとして明らかに標識され、そして発熱物質を含まない無菌ガラス製バイアル中に等分した。
【０１５２】
ＱＳ−２１またはＤＥＴＯＸ（ＴＭ）ＰＣとともに使用するために、１１Ｄ１０を、２ｍｇ／ｍｌで単独で発熱物質を含まない無菌バイアルに入れる。
【０１５３】
（３Ｈ１の産生）
マウスモノクローナル抗体８０１９（ＣＥＡの異なるエピトープを認識する）を、共有に係るＰＣＴ出願公開ＷＯ９６／２０２７７および米国特許第５，９７７，３１５号に記載されるように、抗イディオタイプ抗体３Ｈ１（ＩｇＧ１−κ）の産生のために、同系ＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫するために使用した。Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙａ−Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅら（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５６２−５７３；Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙａ−Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅら（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：１３９８−１４０３を参照のこと。ＢＡＬＢ／ｃマウスの免疫、ハイブリドーマの融合、およびクローニング、抗イディオタイプ（Ａｂ２）の選択、およびマウス中のバルク量での腹水の産生を、以前に記載されているように行った。Ａｂ２抗イディオタイプ３Ｈ１（ＩｇＧ１）を、プロテインＡ−ＣＬ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ４Ｂカラムでのアフィニティークロマトグラフィー、次いでＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅイオン交換クロマトグラフィーによって、腹水から精製した。単離したイムノグロブリン（＞９５％）の純度を、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）および高速液体クロマトグラフィー技術によって決定した。滅菌性、発熱性、ポリヌクレオチド、マイコプラズマ、および外因性のウイルスの混入、ならびにレトロウイルスの除去の確認試験を、米国食品医薬品局の指針に従って行った。
【０１５４】
１ｍｌの２％  Ａｌｕ−Ｇｅｌ  Ｓ（Ｓｅｒｖａ  Ｆｉｎｅ  Ｂｉｏｃｈｅｍ，Ｉｎｃ．，Ｇａｒｄｅｎ  Ｃｉｔｙ，Ｌｏｎｇ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）を、精製したｍＡｂ抗Ｉｄ（３Ｈ１）の５ｍｇのアリコートに添加する。次いで、容量を、Ｄ−ＰＢＳで１０．０ｍｌに調節し、そして混合物を室温にて１時間ボルテックスでインキュベートする。次いで、混合物を、２４℃にて、２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離する。ゲル層に結合したｍＡｂの量を、上清中の未結合の抗体の量を分光光学的に測定することによって決定する。Ａｌｕ−Ｇｅｌで沈殿させた抗体を、使用するまで４℃で保存する。これらの手順を、薄層の流量のフード中で無菌的に行い、そして最終的な産物は無菌状態であり、そして抗Ｉｄ  ３Ｈ１  Ａｌｕ−Ｇｅｌとして明らかに標識され、そして発熱物質を含まない無菌ガラス製バイアル中に等分した。
【０１５５】
（実施例２）
（アジュバントセッティングにおける高い危険性の個体の処置のための１１Ｄ１０の使用）
（患者の選択）
ＨＭＦＧ陽性腫瘍を有する高い危険性の患者を、この研究のために選択する。これらの患者は、進行した疾患を有さない、すなわち、検出可能な転移を有さない。一般的には、患者には、乳癌、非小細胞肺癌、または卵巣癌についてのアジュバント化学療法および／または放射線治療を受けさせる。これらの患者には、通常は、処置の完了時点で１１Ｄ１０を受けさせる（代表的には、処置の完了後少なくとも４週間）。ホルモン治療中の患者には、処置と同時に１１Ｄ１０を受けさせる。ここまでで、４人の患者をこの研究のために集めた。ベースライン研究には、完全な身体検査、胸部のレントゲン撮影、腹部のコンピューター体軸断像撮影試験、日常的な血液の計数および化学的性質が挙げられる。
【０１５６】
（Ａｂ２の調製）
１１Ｄ１０を得、そしてミョウバン沈殿させるか、または実施例１に記載するように、ＱＳ−２１もしくはＤＥＴＯＸＰＣと混合する。最終的な産物を、使用の前に、モルモットでの滅菌性、発熱性、および一般的な安全性について試験する。新薬の適用の検査（Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ）は、米国食品医薬品局（ＢＢ−ＩＮＤ  ５７４５）によって承認された。投与の前に、１１Ｄ１０を、４５℃で３０分間、水浴中でアジュバントの存在下で加熱処理する。ミョウバンがアジュバントである場合、１１Ｄ１０を、ミョウバンの存在下で加熱処理する。
【０１５７】
（処置スケジュール）
全ての患者に、２ｍｇの１１Ｄ１０をアジュバントとともに受容させる。患者に、３つのレジメのうちの１つを入れる：（ａ）２ｍｇの水酸化アルミニウム（ミョウバン）で沈殿させた１１Ｄ１０；（ｂ）１００ｇのＱＳ−２１と混合した２ｍｇの１１Ｄ１０；（ｃ）ＤＥＲＴＯＸ（２５０ｇのＣＷＳ＋２５ｇのＭＰＬ（登録商標））と混合した２ｍｇの１１Ｄ１０。レジメ（ｃ）について、１．０８ｍｌの１１Ｄ１０溶液を、０．１２ｍｌのＤＥＴＯＸ  ＰＣと混合し、そして１．０ｍｌを注射のために採取する。
【０１５８】
注射は、水酸化アルミニウムで沈殿させた１１Ｄ１０を使用する場合には、皮内である。注射は、ＱＳ−２１またはＤＥＴＯＸＴＭＰＣを使用する場合には、皮下である。４回の注射を２週間毎に与え、続いて、１ヶ月毎に全部で２４ヶ月間、免疫学的応答が存在し、そして進行性の疾患の証拠が存在しない限りは、注射を与える。患者を、１２週間毎に評価する。患者を、彼らが進行性の疾患を示す場合には、この研究からはずす。
【０１５９】
（毒性および応答）
造血細胞、腎機能、および肝機能の分析を含む毒性を、各患者についてモニターする。患者をまた、疾患の活性について非常に厳密にモニターする。
【０１６０】
（体液性の免疫についてのアッセイ）
（（ａ）全抗１１Ｄ１０応答）
１１Ｄ１０での免疫によって誘導された体液性の免疫の発生を、治療前およびワクチンでの各処置後に患者から得た血清を試験することによって評価する。血清を、Ｋｈａｊａｅｌｉら（１９８８）Ｊ．Ｎａｔ’ｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８０：９３７−９４２によって記載されているようなサンドイッチラジオイムノアッセイによって、抗イソ／アロ／および抗−抗イディオタイプ抗体を含む、全ヒト抗マウス抗体応答について最初に試験する。簡潔には、マイクロタイタープレートを１１Ｄ１０でコートし、そして患者の血清の異なる希釈物とともにインキュベートする。洗浄後、抗原−抗体反応を、１２５Ｉ標識した抗Ｉｄ  １１Ｄ１０を使用して、均質なサンドイッチラジオイムノアッセイにおいてタグ化した。１１Ｄ１０をインタクトなＩｇＧ１として注射するので、患者が、ヒト抗マウス抗体応答を開始することが予想される。
【０１６１】
（（ｂ）Ａｂ２に対する特異的Ａｂ３応答）
陽性のＨＡＭＡ応答を有する免疫した患者由来の血清を、以下のように抗−抗イディオタイプ抗体の存在について試験する。血清を、イソタイプおよびアロタイプ決定基に対するヒト抗体をブロックするために、正常なマウスイムノグロブリンとともに予めインキュベートし、次いで、ＲＩＡにより、マイクロタイタープレート上にコートされた１１Ｄ１０との反応による、抗−抗Ｉｄ（Ａｂ３）の存在について確認する。無関係のＡｂ２を、コントロールとして提供する。洗浄後、抗原−抗体反応を、上記のような均質なサンドイッチＲＩＡにおいて１２５Ｉ標識した１１Ｄ１０を使用してタグ化する。予備処理非免疫血清および正常なドナー由来の血清を、コントロールとして提供する。
【０１６２】
陽性反応が得られる場合、血清を、ラジオイムノアッセイによってプレート上のＡｂ２（１１Ｄ１０）に対する１２５Ｉ標識したＡｂ１（ＭＣ−１０）の結合を阻害する能力、またはその逆（プレート上のＡｂ１に対する放射標識したＡｂ２の結合の阻害）について確認する。これらの反応を、イソタイプおよびアロタイプ決定基に対するヒト抗体をブロックする、過剰の正常なマウスイムノグロブリンの存在下で行う。
【０１６３】
（（ｃ）腫瘍抗原へのＡｂ３の結合）
ネガティブな標的抗原に対して指向される体液性の免疫応答を評価するために、患者のＡｂ３血清を、ＲＩＡにおいて、およびＦＡＣＳ分析によってもまた、ＭＣＦ−７細胞のようなＭＣ−１０抗原を発現することが既知の細胞株との反応性について試験する。ＭＣＦ−７細胞は、ＡＴＣＣから入手可能である。さらに、血清を、ＭＣ−１０抗原（すなわち、ＨＭＦＧ）の可溶化した半精製した調製物に対する反応性を確認し、そしてマイクロタイタープレート上にコーティングする。抗原−抗体反応を、１２５Ｉ標識した抗ヒトＩｇ試薬を使用することによって検出する。予備免疫血清を、コントロールとして使用する。無関係な抗原もまた、アッセイにおいて使用する。ＭＣ−１０抗原のヒトＡｂ３血清のイソタイプの結合を、抗ヒトイソタイプ特異的試薬を使用して、ＥＬＩＳＡによって決定する。
【０１６４】
（（ｄ）Ａｂ３のエピトープ分析）
処置した患者中で生成されるＡｂ３およびＡｂ１（ＭＣ−１０）が、同じ抗原決定基に結合することを実証するために、Ａｇ陽性腫瘍細胞株に対するＭＣ−１０の阻害またはＡｂ３血清によるＭＣ−１０抗原の阻害を、ＲＩＡによって確認する。一定量の放射性標識したＭＣ−１０（約９０，０００ｃｐｍ）を、種々の濃度の患者の精製したＡｂ３調製物またはＡｂ１調製物、およびＭＣＦ−７細胞とともに同時インキュベートする。
【０１６５】
Ａｂ３を、以下のように患者の血清から精製する。１５ミリリットルの過免疫血清を、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ４Ｂに結合させた免疫化抗イディオタイプイムノグロブリン（１１Ｄ１０）からなる免疫吸着カラムを通過させる。カラムに結合した抗−抗イディオタイプ抗体（Ａｂ３）を、０．１Ｍのグリシン−塩酸緩衝液（ｐＨ２．４）で溶出する。溶出した抗体を、３ＭのＴｒｉｓで中和し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）に対して透析し、次いで、抗イソタイプ反応物および抗アロタイプ反応物を除去するために、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ４Ｂに結合させたアロタイプ適合性の正常なマウスイムノグロブリンからなる免疫吸着カラムを通過させる。通過させた抗体を濃縮し、そして精製したＡｂ３として使用する。Ａｂ３のイソタイプを、ヒト抗イソタイプ特異的試薬（Ｔａｇｏ）を使用して、ＥＬＩＳＡによって決定する。
【０１６６】
Ａｂ１およびＡｂ３を用いて得られた阻害曲線（これは、種々の希釈物で非常に類似している）は、患者のＡｂ３がＡｂ１と同じ抗原性エピトープに結合し、従ってＡｂ１特性を有する抗体分子を含むことを示す。
【０１６７】
（（ｅ）Ａｂ３の細胞傷害活性）
患者の血清中のＡｂ３が腫瘍細胞に特異的に結合する場合、エフェクター細胞および／または相補物と組み合わせにおいてこれらの細胞を溶解するＡｂ３の能力を、標準化されたＡＤＣＣ（Ｃｈｅｒｅｓｈら（１９８６））またはＣＭＣアッセイ（Ｈｅｒｌｙｎら（１９８１）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ２７：７６９）によって試験する。しかし、Ａｂ３の細胞傷害活性は、ＡＤＣＣにおいて有効であるそのイソタイプＩｇＧ１、ならびにＣＭＣにおいてはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＭに依存し得る。
【０１６８】
患者の血清を、抗体依存性の細胞性の細胞傷害性を媒介する能力（ＡＤＣＣ）について試験する。Ｃｈｅｒｅｓｈら（１９８６）。このアッセイのために、培養したヒトＭＣＦ−７細胞（これは、細胞表面にＨＭＦＧを発現する）を標的細胞として使用し、そして５１Ｃｒで標識した。正常なヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をエフェクター細胞として使用する。ＡＤＣＣアッセイを、１００：１の標的細胞に対するエフェクターの比を有する、熱不活化した患者の血清の存在下で４時間行い、続いて、放出された５１Ｃｒの量の測定を行う。
【０１６９】
（（ｆ）Ａｂ３応答およびＡｂ１応答の定量）
患者の血清中の抗−抗−Ｉｄ抗体（Ａｂ３）の発現を、以下のようにＲＩＡ阻害研究によって定量する。簡潔には、マイクロタイタープレートを、ＭＣ−１０  ＩｇＧ１（Ａｂ１）でコートし、そして一定量の１２５Ｉ標識した１１Ｄ１０と反応させる。標準的な阻害曲線を、精製したＭＣ−１０  ＩｇＧ１をインヒビターとして使用して作成する。次に、種々の希釈で抗−イソ−アロタイプ活性を除去した患者の血清を、Ａｂ１−Ａｂ２反応を阻害するその能力について確認し、そして血清中のＡｂ１様抗体の量を、標準的な阻害曲線から概算する。Ａｂ３応答の誘導および持続時間を、種々のアジュバント間で比較する。多数の用量についてＡｂ３応答または持続時間の間に統計学的な差異が存在しない場合、ＥＬＩＳＡアッセイによる血清中の特異的な抗腫瘍応答（Ａｂ１’）の力価を、半精製したＭＣ−１０抗原でコートしたプレートに対して比較する。
【０１７０】
（（ｇ）インビトロでの研究）
循環しているＡｂ１’がＡｂ３陽性である患者の血清においては検出されない場合、このことは、これらが、患者の腫瘍細胞もしくは循環している腫瘍抗原に結合され得るか、またはこれらが低親和性であることを示し得る。これらの患者のＰＢＭＣを、腫瘍特異的抗体の誘導のために、抗原またはＡｂ２を用いてインビトロで刺激する。このために、治療前、３ヶ月毎、最後の免疫後１ヶ月、および最後の免疫後３ヶ月で回収した血液から得たＰＢＭＣを、種々の濃度の１１Ｄ１０、または無関係のＡｂ２、またはＭＣ−１０抗原（１０μｇから１００ｎｇ）とともに、改変したＭｉｓｈｅｌｌ−Ｄｕｔｔｏｎ培養物中で培養する。培養上清を回収し、そしてＥＬＩＳＡアッセイによって特異的なヒトイムノグロブリンの産生について、およびラジオイムノアッセイによってＡｂ２の不溶化調製物に対する結合について最初に確認する。さらに、上清を、１１Ｄ１０に対する１２５Ｉ標識したＭＣ−１０（Ａｂ１）の間の反応を阻害するそれらの能力によってイディオトープ保有分子の含量を試験する。上清をまた、ＭＣ−１０  Ａｇ陽性ＭＣＦ−７細胞およびＡｇ陰性細胞（例えば、Ｍ２１／Ｐ６またはＭＯＬＴ−４）とのそれらの反応性について、Ａｂ１’抗体の評価のためのＲＩＡまたはＥＬＩＳＡアッセイ（感受性＞１ｎｇ）による１２５Ｉ標識した抗ヒトＩｇ試薬を用いる結合アッセイにおいて確認する。
【０１７１】
１１Ｄ１０の効果の特異性を、同じイソタイプの無関係なＡｂ２とともにＰＢＭＣをインキュベートすることによってモニターする。Ａｂ３陽性患者のみがこのインビトロの研究において含まれるので、１１Ｄ１０で刺激されたＰＢＭＣは、１１Ｄ１０に結合する抗体を分泌し、そしてポジティブコントロールとして提供される。
【０１７２】
（細胞媒介性免疫についてのアッセイ）
目的は、ミョウバン中の抗イディオタイプ抗体１１Ｄ１０、またはＱＳ−２１もしくはＤＥＴＯＸＴＭＰＣと混合した抗イディオタイプ抗体１１Ｄ１０での一連の免疫後に、腫瘍関連ＭＣ−１０抗原に対する特異的なＴ細胞応答が、ＨＭＦＧに関連する腫瘍（特に、乳ガン）を有する患者中で生成されるかどうかを試験することである。ワクチンでの免疫によって、単独でＴ細胞の機能をブロックし得る抗体の生成を生じ得る。それにもかかわらず、抗腫瘍応答（特に、ＣＴＬ）におけるＴ細胞の重要性を考慮すると、この免疫原性機能が存在するかどうかを試験することが必要である。
【０１７３】
Ｔ細胞媒介性の免疫を、以下によって確認する：１）腫瘍細胞上のＭＣ−１０抗原を標的化する、Ｔ細胞応答が存在するかどうかを試験すること、および２）この応答が繰り返しの免疫で増大するかどうかを試験すること。この分析を、２段階で行う。第１段階は、得られた全てのＰＢＭＣサンプルに由来するＴ細胞が、１１Ｄ１０抗Ｉｄ抗体に対するインビトロでの免疫後に特異的に拡大され得るかどうかを決定することである。これを行う場合、これらのＴ細胞が溶解し得るか、または、自己由来のＣＴＬと共通の単一のクラスＩ  ＨＬＡ抗原を共有する、自己由来のＭＣ−１０抗原を保有する乳房の腫瘍細胞および／もしくは同種異系のＭＣ−１０抗原を発現するガン細胞に対してサイトカインを放出し得るかどうかを決定する。
【０１７４】
全ての患者を、最初の免疫の前に全血の１ユニットを回収するための静脈切開を受けさせる試験を行う。ＰＢＭＣを、標準的なＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ分離によって単離し、そして全ての将来の研究のために凍結保存する。これらのＰＢＭＣは、１）続く研究のために抗原を提示するフィーダー細胞を提供し、そして２）Ｔ細胞応答についてのベースラインとして提供する。さらに、各免疫後に、６０ｍｌの末梢血を採取し、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ分離し、そしてＴ細胞応答の決定のために凍結保存する。
【０１７５】
研究したＴ細胞応答は、特異的細胞傷害性および／またはサイトカイン産生性Ｔ細胞の生成、ならびに抗原に対して応答するＴ細胞培養物の増殖である。利用可能である場合には、リンパ節の生検を、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の供給源を提供するために、患者から得る。同様の研究を、可能である場合には、腫瘍の生検がＭＣ−１０抗原特異的細胞の供給源となるかどうかを決定するために、ＴＩＬを使用して行う。Ｋｈａｚａｅｌｉら（１９８８）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８０：９３７−９４２；Ｃｈｅｒｅｓｈら（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２：５１５。また、腫瘍の生検は、細胞傷害性アッセイ、サイトカインの産生、および増殖アッセイのための重要な自己由来の標的として作用するように、腫瘍細胞の供給源を提供する。
【０１７６】
（（ａ）Ｔ細胞のインビトロでの機能的活性）
Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅで分離したＰＢＭＣ（１〜３×１０６）を：ＩＬ−２のみ（１０  Ｃｅｔｕｓユニット／ｍｌ）、０．１から１００μｇ／ｍｌの抗Ｉｄ  １１Ｄ１０抗体またはＨＭＦＧの存在下でインキュベートする。細胞培養培地は、１０％のヒトＡＢ血清、ゲンタマイシン、ピルビン酸ナトリウム、非必須アミノ酸、Ｌ−グルタミン、および１０  Ｃｅｔｕｓユニット／ｍｌの組換えＩＬ−２を補充したＩｓｃｏｖｅｓ培地からなる。７日おきに、培地を、０日に使用した適切な抗原で予め感作した、照射した自己由来のＰＢＬで刺激する。インビトロでの感作の方法は、最近記載された方法と同様である（Ｓｔｅｖｅｎら（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：７６２）。２１日目に開始しそして１週間毎に繰り返した、増殖中の細胞を、細胞表面の表現形、および細胞傷害性、およびサイトカインの産生能力について評価する。最初に、全てのＴ細胞を、４時間の５１Ｃｒ放出アッセイにおいて、自己由来のＥＢＶ細胞のみ、および１１Ｄ１０抗Ｉｄ分子の配列を含有するｃＤＮＡを有する、自己由来のＥＢＶでトランスフェクトしたＢ細胞を、認識しそして溶解するそれらの能力について試験する。１０％未満の１１Ｄ１０でトランスフェクトした自己由来ＥＢＶ細胞を溶解する培養物を、さらに、ＮＫ感受性株Ｋ５６２、ＬＡＫ感受性株Ｄａｕｄｉ、入手可能である場合は自己由来の腫瘍、ならびに他のＨＬＡ適合性および非適合性ＨＭＦＧを保有する乳房腫瘍細胞に対して、試験する。さらに、ＧＭ−ＣＳＦを、特異的細胞傷害性に加えてまたはその代わりにサイトカインの特異的放出が存在するかどうかを決定するために、アッセイする。試薬に対する培養物の増殖を、インビトロでの刺激後の細胞数の増大によって決定する。
【０１７７】
（生存性の結果）
生存性のデータを、患者が検出可能な疾患を有さない時間の長さ（すなわち、進行までの時間の長さ）に基づいて計算する。この時間の長さを、研究での記録データに基づいて決定する。なおさらに意味のある統計は、最後の処置のデータからの測定とした場合の、検出可能な疾患を有さない時間の長さである。
【０１７８】
（研究からの最初のデータ）
この実施例で記載する研究を開始した。このデータは、この研究で登録した全１４人の患者からの、１９９８年５月の結果を示す。１４人の患者のうち、１１人が、現在１１Ｄ１０を受容している。研究からはずされた３人の患者のうち、２人は、進行性の疾患の後にはずした（他の患者は研究からはずした）。患者のうちの６人には、ＱＳ−２１を受容させ；患者のうちの３人にはミョウバンを受容させる（残りの２人の患者についてのアジュバントデータは入手できなかった）。
【０１７９】
抗体応答について試験した１０人の患者のうち、１０人全てが、Ａｂ３の産生を示した。Ｔ細胞増殖について試験した全７人の患者が、１１Ｄ１０抗体の投与の際に、この最初の増大に続いて種々のパターンのレベルで、ベースラインを超える増大を示した。
【０１８０】
６人の患者を、３００日以上にわたって研究し続け、これらの患者のうちの２人を、４００日以上にわたって研究している。進行性の疾患を示した２人の患者について、進行のための時間は、１人の患者については９２日であり、もう一人の患者については１１９日であった（これらの患者の両方に、ＱＳ−２１を受容させていた）。死亡したものはなかった。
【０１８１】
（実施例３）
（低い腫瘍負荷を有する個体を処置するための１１Ｄ１０および３Ｈ１の使用）
ＨＭＦＧに関連する腫瘍およびＣＥＡに関連する腫瘍（例えば、乳ガン）を有すると診断されている個体を、ＣＴスキャンのような標準的な診断用画像化技術を使用して、疾患の程度について評価する。評価が、個体が進行していない疾患を有すること、好ましくは、リンパ節が関与していないことを示す場合は、個体に、実施例２に示すものと同じレジメで１１Ｄ１０および３Ｈ１を与える。個体を、免疫応答について（実施例２を参照のこと）、および疾患の程度についてモニターする。処置を、たとえ疾患が本明細書中に記載する方法によっては検出不可能になっても、免疫応答が維持される限りは継続する。投与間隔を、免疫応答が維持され、そして疾患が進行しないようである限りは、増大し得る（すなわち、１ヶ月よりも長く）。
【０１８２】
（実施例４）
（ＨＭＦＧに関連する腫瘍を発達する危険性を有するかまたは残っている疾患を有する個体への１１Ｄ１０および３Ｈ１の投与）
例えば、ＨＭＦＧに関連する腫瘍およびＣＥＡに関連する腫瘍の家族歴に起因する、ＨＭＦＧに関連する腫瘍およびＣＥＡに関連する腫瘍を発達する危険性を有すると診断された個体に、免疫応答が観察されるまで隔週で（または週に２度も）１１Ｄ１０および３Ｈ１を投与する（実施例２を参照のこと）。免疫応答の誘発の際に、投与間隔を、免疫応答の減少が開始するまで、各投与について１週間ずつ増大させる。次いで、この投与間隔を、免疫応答が一定のままになるまで（すなわち、それ以上減少させない）、以前の間隔に経時的に調節する。この投与を、その間隔で維持する。個体を、１から２年毎に、疾患の進行についてモニターする。
【０１８３】
この手順のより特定の例として、３３歳の女性を、ＨＭＦＧに関連する乳癌およびＣＥＡに関連する乳癌の彼女の家族歴（母親、祖母、および伯母が疾患を発達した）に基づいて、１１Ｄ１０および３Ｈ１の投与を開始するように選択する。注射を、免疫応答が検出されるまで（通常は、１から４ヶ月）隔週の基準で開始する。次の注射を、１週間後に与える。その後の注射を、以下のように与える：（ａ）２週間後、次いで（ｂ）３週間後、次いで（ｃ）４週間後、次いで（ｄ）５週間後、次いで（ｅ）６週間後、次いで（ｆ）７週間後、次いで（ｇ）８週間後。注射を、１ヶ月毎に免疫応答をモニターしながら２ヶ月毎で維持する。免疫応答が一定である場合には、注射を以下のように与える：（ａ）９週間毎、次いで（ｂ）１０週間毎、次いで（ｃ）１１週間毎、次いで（ｄ）１２週間毎。注射を、免疫応答をモニターしながら３ヶ月毎で維持する。免疫応答が一定である場合は、注射間隔を、注射が６ヶ月毎に与えられるまで、１週間ずつ増大する。免疫応答が低下する場合は、応答がそのもとのレベルに回復するまで、間隔を短くする。個体を、彼女の生存期間の間１１Ｄ１０および３Ｈ１の投与を維持する。次いで、ＨＭＦＧに関連する腫瘍およびＣＥＡに関連する腫瘍が進行する場合、他の治療を、１１Ｄ１０および３Ｈ１と組み合わせてまたは１１Ｄ１０および３Ｈ１の代わりに投与し得る。
【０１８４】
別の特定の実施例として、ＨＭＦＧに関連する乳癌およびＣＥＡに関連する乳癌を有する個体は、切除された腫瘍を有し、そしてリンパ節の関与が知られていない。外科手術後には，疾患は、検出可能ではない。１１Ｄ１０および３Ｈ１の投与を開始し、そして上記のように調節し、そして個体を疾患の進行についてモニターする。
【０１８５】
（実施例５）
（ネオアジュバントセッティングにおける１１Ｄ１０および３Ｈ１の投与）
ＨＭＦＧに関連する腫瘍およびＣＥＡに関連する腫瘍（例えば、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに関連する、乳癌、卵巣癌、非小細胞肺癌、または結腸直腸癌）を有すると診断されている個体を、処置（例えば、外科手術および／または化学療法）をするために予定に組み入れる。診断と処置の開始との間の時間の間（すなわち、患者がこれらの処置が開始されるのを待っている間）、１１Ｄ１０および３Ｈ１を、実施例２に記載するように投与する。この投与を、これらの処置の開始後、およびこれらの処置の経過後に継続する。１１Ｄ１０および３Ｈ１の投与間隔を、個体が免疫応答を維持するように調節する。
【０１８６】
（実施例６）
（低い腫瘍負荷を有する個体を処置するための１１Ｄ１０および３Ｈ１の使用）
乳癌を有するが、転移性（進行性）疾患を有さないと診断された２人の個体に、Ａｌｕｇｅｌ中で共に調製した１１Ｄ１０および３Ｈ１の各々を、２ｍｇ投与した。投与の各回において、１１Ｄ１０および３Ｈ１の皮下注射を、別個の部位に与えた（例えば、一方の腕に１１Ｄ１０を与え、脚に３Ｈ１を与えた）。４回の投与を、２週毎に与え、続いて毎月注射した。１人の個体に、約２５ヶ月の期間にわたって両方の抗体を投与した。もう１人の個体に、約２１ヶ月の期間にわたって両方の抗体を投与した。血清サンプルを、最初の投与前、および一定期間投与を続けた後に各個体から得た。以下のアッセイの全てまたはいくつかにより、血清サンプルを、１１Ｄ１０および３Ｈ１に対する免疫応答について分析した：
（ｉ）サンドイッチアッセイ（ＨＡＭＡ）：プレートを、１１Ｄ１０（１１Ｄ１０の投与に対する免疫応答をアッセイするため）、または３Ｈ１（３Ｈ１の投与に対する免疫応答をアッセイするため）のいずれか（５μｇ／ｍｌ、５０μｌ／ウェル）でコーティングし、そして室温にて一晩インキュベートした。その後、プレートを、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中で１時間、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）でブロックした。次いで、処置された個体の血清の異なる希釈液を加え、そして室温にて２時間インキュベートした。次いで、このプレートをＰＢＳで洗浄し、そして１２５Ｉ−１１Ｄ１０（５０μｌ／ウェル、約９０，０００ｃｐｍ）かまたは１２５Ｉ−３Ｈ１（５０μｌ／ウェル、約９０，０００ｃｐｍ）のいずれかを加え、そして１．５時間インキュベートした。洗浄後、このウェルを、ガンマカウンターで計数した。
【０１８７】
（ｉｉ）阻害アッセイ−１：プレートを、ＭＣ１０（１１Ｄ１０の投与に対する免疫応答をアッセイするため）、または８０１９（３Ｈ１の投与に対する免疫応答をアッセイするため）のいずれか（５μｇ／ｍｌ、５０μｌ／ウェル）でコーティングし、そして室温にて一晩インキュベートした。その後、このプレートを、ＰＢＳ中、１％ＢＳＡでブロックした。次いで、患者の血清の異なる希釈液を、１２５Ｉ−１１Ｄ１０または１２５Ｉ−３Ｈ１（５０μｌ／ウェル、約９０，０００ｃｐｍ）とともに加え、そして室温にて２時間インキュベートした。洗浄後、このウェルを、ガンマカウンターで計数した。アッセイの阻害％を、以下の式：
【０１８８】
【化１】
2005511483.tif 000002
に従って、算出した。
【０１８９】
この式中、ＲＴは、インヒビターを含む実験ウェルの平均ｃｐｍであり、ＲＣは、平均バックグラウンドｃｐｍであり、そしてＲｍａｘは、インヒビターを含まない平均最大結合であった。
【０１９０】
（ｉｉｉ）阻害アッセイ−２：プレートを、１１Ｄ１０（１１Ｄ１０の投与に対する免疫応答をアッセイするため）、または３Ｈ１（３Ｈ１の投与に対する免疫応答をアッセイするため）のいずれか（５μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌ）でコーティングし、そして室温にて一晩インキュベートした。その後、このプレートを、ＰＢＳ中、１％ＢＳＡでブロックした。次いで、患者の血清の異なる希釈液を、１２５Ｉ−ＭＣ１０（５０μｇ／ウェル、約９０，０００ｃｐｍ）または１２５Ｉ−８０１９とともに加え、そして室温にて２時間インキュベートした。洗浄後、このウェルを、ガンマカウンターで計数した。アッセイの阻害％を、以下の式：
【０１９１】
【化２】
2005511483.tif 000003
に従って、算出した。
【０１９２】
この式中、ＲＴは、インヒビターを含む実験ウェルの平均ｃｐｍであり、ＲＣは、平均バックグラウンドｃｐｍであり、そしてＲｍａｘは、インヒビターを含まない平均最大結合であった。
【０１９３】
（ｉｖ）Ｔ細胞増殖アッセイ：末梢血単核細胞を、標準的なＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離方法によって単離し、そして、１ウェルあたり２×１０５個の細胞を、異なる濃度の１１Ｄ１０  Ａｌｕｇｅｌおよび１１Ｄ１０  ＩｇＧ、４ＤＣ６  Ａｌｕｇｅｌおよび１Ａ７（２μｇ、１μｇ、１０ｎｇ、１００ｎｇ）（１１Ｄ１０の投与に対する免疫応答をアッセイするため）とともにか、または異なる濃度の３Ｈ１  Ａｌｕｇｅｌおよびコントロール４ＤＣ６  Ａｌｕｇｅｌ、４ＤＣ６（２μｇ、１μｇ、１０ｎｇ、１００ｎｇ）（３Ｈ１の投与に対する免疫応答をアッセイするため）とともに、５％正常プールヒト血清（加熱失活させたＡＢ型ドナー、Ｐｅｌ−Ｆｒｅｅｚｅ，ＷＩ，コード番号３４００４−１）を含むＲＰＭＩ培地中でインキュベートした。非特異的マイトジェン植物性赤血球凝集素（ｐｈｙｔｏｈｅｍａｇｌｕｔｉｎｉｎ）Ｐを、５μｇ／ウェル、２μｇ／ウェルおよび１μｇ／ウェルにて、ポジティブコントロールとして使用した。細胞を５％ＣＯ２を含む大気中で、３７℃にて５日間インキュベートした後、この細胞を、［３Ｈ］チミジンでパルスした（２０時間、１μＣｉ／ウェル）。データを、平均計数として表した（３連のウェル／分のチミジンの取り込み）。
【０１９４】
Ｔ細胞増殖指数（ＰＩ）を、以下の式：
ＰＩ＝抗原刺激性ウェルにおけるＣＰＭ／培地刺激性ウェルにおけるＣＰＭ
に従って算出した。
【０１９５】
（ｖ）ＣＥＡ結合阻害アッセイ：プレートを、ＣＥＡ（２μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ウェル）でコーティングし、そして室温（ＲＴ）にて一晩インキュベートした。次いで、このプレートを、ＰＢＳ中、１％ＢＳＡでブロックした。次いで、患者の血清の異なる希釈液を、１２５Ｉ−８０１９（５０μｇ／ウェル、約９０，０００ｃｐｍ）とともに加え、そして室温にて２時間インキュベートした。洗浄後、このウェルを、ガンマカウンターで計数した。アッセイの阻害％を、以下の式：
【０１９６】
【化３】
2005511483.tif 000004
に従って算出した。
【０１９７】
この式中、ＲＴは、インヒビターを含む実験ウェルの平均ｃｐｍであり、ＲＣは、平均バックグラウンドｃｐｍであり、そしてＲｍａｘは、インヒビターを含まない平均最大結合であった。
【０１９８】
患者１について得られたデータは以下のとおりである：
【０１９９】
【表１】
2005511483.tif 000005
【０２００】
【表２】
2005511483.tif 000006
患者２について得られたデータは以下のとおりである：
【０２０１】
【表３】
2005511483.tif 000007
【０２０２】
【表４】
2005511483.tif 000008
このデータは、どちらの患者も１１Ｄ１０および３Ｈ１両方の投与に起因する臨床的な合併症を有することを示す。両方の患者は、ＨＭＦＧおよびＣＥＡに対して活性な免疫を生じた。
【０２０３】
（実施例７）
（化学療法と組み合わせての１１Ｄ１０および３Ｈ１の使用）
（患者の選択）
ＨＭＦＧ陽性腫瘍およびＣＥＡ陽性腫瘍（一般的には転位性乳癌を含む乳癌）を有する患者を、この研究のために選択する。これらの患者は、一般的には、炎症性乳癌を除く転位性乳癌の組織学的徴候、細胞学的徴候、または放射学的徴候を示す。これらの患者はまた、一般的には、転位性疾患のための第一線の治療として、アントラサイクリンベースまたはタキサンベースの化学療法レジメンを受ける。患者は、ｉ）従来の手術および放射療法、ｉｉ）アジュバント／ネオアジュバント化学療法、ｉｉｉ）アジュバントおよび／または対期ホルモン治療のいずれかを受け得る。基礎研究は、完全な身体検査、胸部Ｘ線、腹部のコンピューター断層撮影、慣用的な血球算定および化学的性質を含む。
【０２０４】
（用量、投与および処置スケジュール）
水酸化アルミニウムに吸着された１１Ｄ１０を、２ｍｇ／ｍｌの濃度で提供する。水酸化アルミニウムに吸着された３Ｈ１をまた、２ｍｇ／ｍｌの濃度で提供する。患者は、２週間ごとに４用量の１１Ｄ１０および３Ｈ１投与を受け、次いでその後、２８日ごとに第一線の化学療法と合わせて１１Ｄ１０および３Ｈ１投与を受ける。この研究において、１１Ｄ１０および３Ｈ１を、２ｍｇの皮内（ＩＤ）注射として隔週で４用量投与し、その後２８日ごとの皮下（ＳＣ）維持注射を続ける。化学療法の最初のサイクルは、患者が１１Ｄ１０および３Ｈ１の２用量を受けた後に始める。化学療法を、３週目のはじめに始める。１１Ｄ１０および３Ｈ１を、化学療法投与および１１Ｄ１０／３Ｈ１投与が同日になされる場合、化学療法投与の前に投与する。第一線の治療は、ハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）によるかまたはハーセプチンを用いない、アントラサイクリンベースまたはタキサンベースの化学療法のいずれかからなり得る。
【０２０５】
一旦１１Ｄ１０および３Ｈ１の最初の４用量を投与すると、１１Ｄ１０および３Ｈ１のための事象のスケジュール（隔週の１１Ｄ１０および３Ｈ１の４回の注射、次いで１９ヶ月間は４週間ごと）を、化学療法の頻度、またはレジメンにおける変化にかかわらず行なう。１１Ｄ１０を、一般的には、防腐剤を含まない生理食塩水中の体積１ｍｌの１１Ｄ１０（２ｍｇ）（１１Ｄ１０  水酸化アルミニウム沈殿された抗イディオタイプモノクローナル抗体）として、そして３Ｈ１は、一般的には、防腐剤を含まない生理食塩水中の体積１ｍｌの３Ｈ１（２ｍｇ）（３Ｈ１  水酸化アルミニウム沈殿された抗イディオタイプモノクローナル抗体）として投与する。
【０２０６】
患者は、１９ヶ月目までの間１１Ｄ１０および３Ｈ１を続け、そして生きている間続けられる。患者は、それを治療する医師によって適切であると考えられるような化学療法または第二線の治療を受け続け得る。患者は、一般状態または疾患の進行が低下した場合に、化学治療または第二線の治療を中断した後、１１Ｄ１０および３Ｈ１を受けつづけ得る。
【０２０７】
（免疫応答のためのアッセイ）
血液サンプルを、ベースライン、１４週、３０週、５４週、７８週および８２週で収集し、免疫応答および臨床的利益の他の代替マーカーを評価する。種々のアッセイ使用して１１Ｄ１０および３Ｈ１の投与に対する免疫応答を決定し得る。このアッセイとしては、前出の実施例に記載されるアッセイ、およびＨＡＭＡ抗体応答、Ａｂ３抗体応答、抗ＣＥＡ抗体応答および抗ＨＭＦＧ抗体応答が挙げられる。細胞アッセイ（Ｔ−細胞増殖および逆エリスポット（Ｅｌｉｓｐｏｔ））もまた、行なうことができる。
【０２０８】
（ｉ）ＨＡＭＡ：このアッセイは、マウス免疫グロブリンに対する内因性抗体である、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）のレベルを測定する。１１Ｄ１０および３Ｈ１は、インタクトなマウスＩｇＧ１として注射されるので、患者は、ヒト抗マウス抗体応答を獲得することが予想される。
【０２０９】
（ｉｉ）Ａｂ３アッセイ（抗抗Ｉｄ）：このアッセイは、陽性Ａｂ３反応を有する患者中で産生されるＡｂ３が、Ａｂ１（ｍＡｂ  ＢｒＥ−１または８０１９）とイディオタイプを共有しているか否かを実証する。この非特異的イディオタイプアッセイは、適切な免疫化（６回の１１Ｄ１０および３Ｈ１免疫化の最小値）後の、患者の血清中のＡｂ２（１１Ｄ１０または３Ｈ１）に結合するＡｂ１（ＢｒＥ−１または８０１９）の２５％より大きい阻害として定義される陽性反応を用いる阻害アッセイである。
【０２１０】
（ｉｉｉ）抗ＨＭＦＧおよび抗ＣＥＡ抗体アッセイ：直接的な阻害アッセイおよび競合アッセイを使用して、Ａｂ３が、ＥＬＩＳＡ中で精製された標的として使用される１次抗原（ＨＭＦＧおよびＣＥＡ）に特異的に結合するか否かを実証する。
【０２１１】
（ｉｖ）Ｔ細胞増殖アッセイ：このアッセイは、患者のＰＢＭＣが、ＨＭＦＧおよびＣＥＡによってかまたはＡｂ２による増殖を特異的に刺激し得るか否かを実証する。
【０２１２】
（ｖ）逆ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ：このアッセイは、ＰＢＭＣが、ＣＥＡおよびＨＭＦＧまたはＡｂ２によって特異的に刺激され、ＩＬ−２またはＩＦＮγを産生し得るか否かを実証する。
【０２１３】
（生存結果）
生存データを、患者が検出可能な疾患を有さない時間の長さ（すなわち、進行までの時間の長さ）に基づいて計算する。この時間の長さを、研究へのデータの入力によって決定する。より意味のある統計値は、最後の処置の日から測定される検出可能な疾患がない（または進行までの）時間の長さである。疾患の進行をまた、特定の癌の型についての病期分類マーカーによって示されるような疾患の進行に基づいて測定し得る。
【０２１４】
（実施例８）
（第一線のホルモン治療と組み合わせた１１Ｄ１０および３Ｈ１の使用）
（患者の選択）
ＨＭＦＧ陽性腫瘍およびＣＥＡ陽性腫瘍（一般的には転位性乳癌を含む乳癌）を有する患者を、この研究のために選択する。これらの患者は、一般的には、（測定可能または評価可能な）転位性乳癌の組織学的徴候、細胞学的徴候、または放射学的徴候を示す。これらの患者はまた、一般的には、転位性疾患のための第一線の治療としての以下のホルモン治療薬うちの１つを受ける：フェメラ（Ｆｅｍｅｒａ）、アリジメックス（Ａｒｉｄｉｍｅｘ）、アロマシンまたはタモキシフェン。一般的には、これらのエストロゲンレセプターおよび／またはプロゲステロンレセプターの状態は、陽性であるかまたは未知であるかのいずれかである。患者は、ｉ）従来の手術および放射療法、ｉｉ）アジュバント／ネオアジュバント化学療法、ｉｉｉ）アジュバントおよび／または対期ホルモン治療のいずれかを受け得る。基礎研究は、完全な身体検査、胸部Ｘ線、腹部のコンピューター断層撮影、慣用的な血球算定および化学的性質を含む。
【０２１５】
（用量、投与および処置スケジュール）
１１Ｄ１０を、水酸化アルミニウム沈殿された懸濁液として、２ｍｇ／ｍｌの濃度で提供する。３Ｈ１を、２ｍｇ／ｍｌの水酸化アルミニウム沈殿された懸濁液として提供する。患者は、２週間ごとに４用量の１１Ｄ１０および３Ｈ１投与を受け、次いでその後、２８日ごとに第一線のホルモン治療と合わせて１１Ｄ１０および３Ｈ１投与を受ける。第一線の治療としては、例えば、フェメラ、アリジメックス、アロマシンまたはタモキシフェンを用いるようなホルモン治療が含まれる。この研究において、抗体を、２ｍｇの皮内（ＩＤ）注射として隔週で４用量投与し、その後２８日ごとの皮下（ＳＣ）維持注射を続ける。ホルモン治療を、抗体投与の前の２８日以内に始める。
【０２１６】
一旦抗体の最初の４用量を投与すると、抗体投与のための事象のスケジュール（隔週の抗体投与の４度の注射、次いで１９ヶ月間は４週間ごと）を、ホルモン療法の頻度、またはレジメンの変化にかかわらず行う。１１Ｄ１０を、一般的には、防腐剤を含まない生理食塩水中の体積１ｍｌの１１Ｄ１０（２ｍｇ）として、そして３Ｈ１は、防腐剤を含まない生理食塩水中の体積１ｍｌの３Ｈ１（２ｍｇ）として投与する。
【０２１７】
患者は、２１ヶ月目までの間１１Ｄ１０および３Ｈ１を続け、そして生きている間、続けられる。患者は、それを治療する医師によって適切であると考えられるようなホルモン治療または第二線の治療を受けつづけ得る。患者は、一般状態または疾患の進行が低下した場合に、ホルモン治療または第二線の治療を中断した後、２１ヶ月目まで抗体を受けつづけ得る。試験的な治療の２１ヶ月を超えて、完全応答（ＣＲ）、部分的応答（ＰＲ）または定常疾患／変化無し（ＳＤ）を示す患者は、必要な場合、試験薬物を続けられ得る。
（免疫応答のためのアッセイ）
血液サンプルを、ベースライン、１０週／中断、１４週／中断、３０週／中断、４２週／中断、５４週／中断、６６週／中断、７８週／中断、および８２週／中断で収集し、免疫応答および臨床的利益の他の代替マーカーを評価する。種々のアッセイを使用して、１１Ｄ１０および３Ｈ１の投与に対する免疫応答を決定し得る。このアッセイには、前出の実施例、およびＨＡＭＡ、患者血清由来のＡｂ３のＣＥＡへの結合、３Ｈ１に応答した末梢血単核細胞増殖、患者血清由来のＡｂ３のＨＭＦＧに対する結合、１１Ｄ１０に応答した末梢血単核細胞増殖が挙げられる。
【０２１８】
（ｉ）ＨＡＭＡ：このアッセイは、マウス免疫グロブリンに対する内因性抗体である、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）のレベルを測定する。１１Ｄ１０および３Ｈ１は、インタクトなマウスＩｇＧ１として注射されるので、患者は、ヒト抗マウス抗体応答を獲得することが予想される。
【０２１９】
（ｉｉ）患者血清由来のＡｂ３のＣＥＡへの結合：患者の全血清または部分的に精製された血清を、ＥＬＩＳＡまたは放射線免疫アッセイ（ＲＩＡ）によって、マイクロタイタープレート上にコーティングされた精製組換えＣＥＡに対する特異的免疫反応性について再試験して、ＣＥＡ腫瘍抗原に対する体液性免疫応答を評価する。この特異的抗原−抗体（Ａｂ３）複合体を、酵素結合体化抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ鎖）試薬を使用して検出するか、または１２５Ｉ標識化もしくは酵素結合体化３Ｈ１抗体（Ａｂ２）を使用して検出する。患者の免疫前血清および無関係な抗原を、アッセイのための独立したコントロールとして使用し得る。標準曲線を、精製した８０１９抗体（Ａｂ１）を使用して作成し、そしてＡｂ３抗体血清の量を、標準曲線から推定する。
【０２２０】
（ｉｉｉ）３Ｈ１に対して応答した増殖：静脈血からＦｉｃｏｌｌ  Ｈｙｐａｑｕｅ勾配遠心分離によって分離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、それぞれ１０７個の細胞を含む２ｍｌのバイアル中で、Ｃｒｙｏ  Ｍｅｄを使用して凍結保存する。この細胞をアッセイ直前に解凍し、トリパンブルー色素の存在下で計数し、そして１×１０５細胞／ウェルで９６ウェルプレートにプレートする。
【０２２１】
１０％のプールされたヒトＡＢ型血清および抗生物質を補充したＲＰＭＩ中の３Ｈ１抗体（Ａｂ２）（２〜１０μｇ／ウェル）、アイソタイプ抗体（２〜１０μｇ／ウェル）添加後、、または陽性コントロールとしてＰＨＡ−Ｐ（１、２および５μｇ／ウェル）を、そのプレートをＣＯ２インキュベーター中で５日間インキュベートする。５日目に、この培地を［３Ｈ］チミジン（１μＣｉ／ウェル）で２４時間パルスする。３連のウェルから得た１分あたりの数を平均化し、そしてその刺激指標を、全ての培養物について決定する。
【０２２２】
（ｉｖ）ヒト血清由来のＡｂ３のＨＭＦＧへの結合：ＨＭＦＧ腫瘍抗原に対する体液性免疫応答を評価するために、患者の全血清または部分的に精製された血清を、ＥＬＩＳＡまたは放射線免疫アッセイ（ＲＩＡ）によって、マイクロタイタープレート上にコーティングされた精製ＨＭＦＧの調製物に対する特異的免疫反応性について試験する。この特異的抗原抗体（Ａｂ３）複合体を、酵素結合体化抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ鎖）試薬を使用して検出するか、または１２５Ｉ標識化もしくは酵素結合体化１１Ｄ１０抗体（Ａｂ２）を使用して検出する。患者の免疫前血清および無関係な抗原を、アッセイのための独立したコントロールとして使用し得る。標準曲線を、精製されたＭＣ１０（ＢｒＥ−１）抗体（Ａｂ１）を使用して作成し、そしてＡｂ３抗体血清の量を、標準曲線から推定する。
【０２２３】
（ｖ）１１Ｄ１０に応答した増殖：静脈血からＦｉｃｏｌｌ  Ｈｙｐａｑｕｅ勾配遠心分離によって分離された末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）を、それぞれ１０７個の細胞を含む２ｍｌのバイアル中で、Ｃｒｙｏ  Ｍｅｄを使用して凍結保存する。この細胞をアッセイの直前に解凍し、トリパンブルー色素の存在下で計数し、そして９６ウェルプレートに１ウェルあたり１×１０５細胞でプレートする。１０％のプールされたヒトＡＢ型血清および抗生物質を補充したＲＰＭＩ中の１１Ｄ１０抗体（Ａｂ２）（２〜１０μｇ／ウェル）、コントロールのアイソタイプ抗体（２〜１０μｇ／ウェル）、または陽性コントロールとしてＰＨＡ−Ｐ（１、２および５μｇ／ウェル）の付加後を、そのプレートをＣＯ２インキュベーター中で５日間インキュベートする。５日目に、この培地を［３Ｈ］チミジン（１μＣｉ／ウェル）で２４時間パルスする。３連のウェルから得られた１分あたりの数を平均化し、そしてその刺激指標を、全ての培養物について決定する。
【０２２４】
（生存結果）
生存データを、患者が検出可能な疾患を有さない時間の長さ（すなわち進行までの時間の長さ）に基づいて計算する。この時間の長さを、研究への入力データに基づいて決定する。より意味のある統計値は、最後の処置の日から測定される検出可能な疾患のない（または進行までの）時間の長さである。疾患の進行はまた、特定の癌の型についての病期分類マーカーによって示されるような疾患における進行に基づいて測定され得る。
【０２２５】
（実施例９）
（１１Ｄ１０および３Ｈ１での術後アジュバント免疫療法ならびに照射の研究）
（患者の選択）
ＨＭＦＧ陽性腫瘍およびＣＥＡ陽性腫瘍（一般的には非小細胞肺癌を含む）を有する患者を、この研究のために選択する。これらの患者は、一般的には、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の組織学的記録を有する。これらの患者は、一般的には、第ＩＩ病期および第ＩＩＩＡ病期の疾患を有し；Ｎ１疾患を有する患者は、臍リンパ節の病理学的関係が存在する場合のみあてはまる。一般的には、第ＩＩ／ＩＩＩＡ病期の病理学的診断は、外科的切除の時になされている。一般的には、患者は、（研究に入る前の約７週間以内に）葉切除術、袖切除術、二葉切除術または肺切除術を含む手術を受けている。
【０２２６】
（用量、投与および処置スケジュール）
２ｍｇの３Ｈ１  Ａｌｕ−Ｇｅｌおよび２ｍｇの１１Ｄ１０  Ａｌｕ−Ｇｅｌを、術後２〜７週で始め、１週間に１度、３週間、別々の部位に皮内投与し、次いで１ヶ月ごとに２年間、経口投与する。抗体を、別々の腕など、異なる部位に投与する。生命徴候を、注射後、少なくとも３０分間、１５分ごとに得る。一般的には、ワクチンを術後４５日まで与える。同時に放射線療法を、術後の１週間ごとの３回のワクチン接種の後１週間以内、かつ術後９週間以内に、５０．４Ｇｙ／２８フラクション／５〜６週（１．８Ｇｙ／日、５日／週）で開始し、そして、リンパ節転位の関節外への拡張が存在する場合、１０．８  Ｇｙ／６フラクションを結節ステーション（ｎｏｄａｌ  ｓｔａｔｉｏｎ）に追加照射する。
【０２２７】
（免疫応答についてのアッセイ）
処置された個体由来の血清を試験して、免疫応答および臨床的利益のある他の代替マーカーを評価する。血清を処置期間の間、６ヶ月目、１２ヶ月目、１６ヶ月目、２４ヶ月目、３６ヶ月目および４８ヶ月目で収集し得る。種々のアッセイを使用して、１１Ｄ１０および３Ｈ１の投与に対する免疫応答を決定し得る。このアッセイとしては、前出の実施例、および、患者由来の抗体のＣＥＡへの結合、３Ｈ１に応答した増殖、患者血清由来の抗体のＨＭＦＧへの結合、および１１Ｄ１０に応答した増殖が挙げられ得る。
【０２２８】
（ｉ）患者由来血清のＡｂ３のＣＥＡへの結合：ＣＥＡ腫瘍抗原に対する体液性免疫応答を評価するために、患者の全血清または部分的に精製された血清を、ＥＬＩＳＡまたは放射線免疫アッセイ（ＲＩＡ）によってマイクロタイタープレート上にコーティングされた精製組換えＣＥＡに対する特異的免疫反応性について試験する。この特異的抗原抗体（Ａｂ３）複合体を、酵素結合体化抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ鎖）試薬を使用して検出するか、または１２５Ｉ標識化もしくは酵素結合体化３Ｈ１抗体（Ａｂ２）を使用して検出する。患者の免疫前血清および無関係な抗原は、アッセイのための独立したコントロールとして使用され得る。標準曲線を、精製した８０１９抗体（Ａｂ１）を使用して作成し、そしてＡｂ３抗体血清の量を、標準曲線から推定する。
【０２２９】
（ｉｉ）３Ｈ１に応答した増殖：静脈血からＦｉｃｏｌｌ  Ｈｙｐａｑｕｅ勾配遠心分離によって分離された末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）を、それぞれ１０７個の細胞を含む２ｍｌのバイアル中で、Ｃｒｙｏ  Ｍｅｄを使用して凍結保存する。この細胞をアッセイ直前に解凍し、トリパンブルー色素の存在下で計数し、そして１×１０５細胞／ウェルで９６ウェルプレートにプレートする。
【０２３０】
１０％のプールされたヒトＡＢ型血清および抗生物質を補充したＲＰＭＩ中の３Ｈ１抗体（Ａｂ２）（２〜１０μｇ／ウェル）、コントロールのアイソタイプ抗体（２〜１０μｇ／ウェル）、または陽性コントロールとしてＰＨＡ−Ｐ（１、２および５μｇ／ウェル）の付加後、そのプレートをＣＯ２インキュベーター中で５日間インキュベートする。５日目に、この培地を［３Ｈ］チミジン（１μＣｉ／ウェル）で２４時間パルスする。３連のウェルから得られた１分あたりの数を平均化し、そしてその刺激指標を、全ての培養物について決定する。
【０２３１】
（ｉｉｉ）ヒト血清由来のＡｂ３のＨＭＦＧへの結合：ＨＭＦＧ腫瘍抗原に対する体液性免疫応答を評価するために、患者の全血清または部分的に精製された血清を、ＥＬＩＳＡまたは放射線免疫アッセイ（ＲＩＡ）によって、マイクロタイタープレート上にコーティングされた精製ＨＭＦＧの調製物に対する特異的免疫反応性について試験する。この特異的抗原抗体（Ａｂ３）複合体を、酵素結合体化抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ鎖）試薬を使用して検出するか、または１２５Ｉ標識化もしくは酵素結合体化抗ｉｄ  １１Ｄ１０抗体（Ａｂ２）を使用して検出する。患者の免疫前血清および無関係な抗原は、アッセイのための独立したコントロールとして使用され得る。標準曲線を、精製したＭＣ−１０（ＢｒＥ−１）抗体（Ａｂ１）を使用して作成し、そしてＡｂ３抗体血清の量を、標準曲線から推定し得る。
【０２３２】
（ｉｖ）１１Ｄ１０に応答した増殖：静脈血からＦｉｃｏｌｌ  Ｈｙｐａｑｕｅ勾配遠心分離によって分離された末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）を、それぞれ１０７個の細胞を含む２ｍｌのバイアル中で、Ｃｒｙｏ  Ｍｅｄを使用して凍結保存する。この細胞をアッセイの直前に解凍し、トリパンブルー色素の存在下で計数し、そして９６ウェルプレートに１ウェルあたり１×１０５細胞でプレーとする。
【０２３３】
１０％のプールされたヒトＡＢ型血清および抗生物質を補充したＲＰＭＩ中の１１Ｄ１０抗体（Ａｂ２）（２〜１０μｇ／ウェル）、コントロールのアイソタイプ抗体（２〜１０μｇ／ウェル）、または陽性コントロールとしてＰＨＡ−Ｐ（１、２および５μｇ／ウェル）の付加後、そのプレートをＣＯ２インキュベーター中で５日間インキュベートする。５日目に、この培地を［３Ｈ］チミジン（１μＣｉ／ウェル）で２４時間パルスする。３連のウェルから得た１分あたりの数を平均化し、そしてその刺激指標を、全ての培養物について決定する。
【０２３４】
（生存結果）
再発、疾患のない生存および生存についてのデータを収集し得る。一般に、再発は、局所領域再発（ｌｏｃｏ−ｒｅｇｉｏｎａｌ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）および／または離れた場所での再発（ｄｉｓｔａｎｔ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）の発生が存在する場合生じる。一般的には、疾患のない生存は、最終的な切除の日から最初の処置の失敗（例えば再発または再発前の死）の日に基づいて決定される。一般的には、生存は、最終的な切除から死（一般的には、癌に関連した死）までの時間に基づいて決定される。
【０２３５】
前出の発明は、理解を明瞭にする目的のために図および実施例によっていくらか詳細に記載されるが、特定の変更および改変がなされ得ることは、当業者に明らかである。従って、詳細な説明および実施例は、添付の特許請求の範囲によって示される本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【図面の簡単な説明】
【０２３６】
【図１】図１は、１１Ｄ１０の軽鎖可変領域および隣接する残基のｃＤＮＡ配列（配列番号１）およびアミノ酸配列（配列番号２）を示す。ＣＤＲおよびフレームワーク領域が示される。
【図２】図２は、１１Ｄ１０の重鎖可変領域および隣接する残基のｃＤＮＡ配列（配列番号３）およびアミノ酸配列（配列番号４）を示す。ＣＤＲおよびフレームワーク領域が示される。
【図３Ａ】図３ＡおよびＢは、１１Ｄ１０の軽鎖可変領域（図３Ａ）および重鎖可変領域（図３Ｂ）のＣＤＲおよびフレームワーク領域のアミノ酸配列を示す。
【図３Ｂ】図３ＡおよびＢは、１１Ｄ１０の軽鎖可変領域（図３Ａ）および重鎖可変領域（図３Ｂ）のＣＤＲおよびフレームワーク領域のアミノ酸配列を示す。
【図４】図４は、３Ｈ１の軽鎖可変領域および隣接する残基のｃＤＮＡ配列（配列番号５；図４Ａ）およびアミノ酸配列（配列番号６；図４Ｂ）を示す。
【図５】図５は、３Ｈ１の重鎖可変領域および隣接する残基のｃＤＮＡ配列（配列番号７；図５Ａ）およびアミノ酸配列（配列番号８；図５Ｂ）を示す。
【図６Ａ】図６は、３Ｈ１の軽鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号６；図６Ａ）および重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号８；図６Ｂ）を示す。各可変領域は、４つのフレームワーク領域および３つのＣＤＲから成る。
【図６Ｂ】図６は、３Ｈ１の軽鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号６；図６Ａ）および重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号８；図６Ｂ）を示す。各可変領域は、４つのフレームワーク領域および３つのＣＤＲから成る。
【配列表】
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【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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