(57)【要約】本発明は、眼における少なくとも１つの組織の少なくとも一部の物理的特性および／または化学的特性を変更することに関する。特定の実施形態では、本発明は、任意の眼の障害の処置に関するが、特定の実施形態では、この個体は、肥厚化したブルッフ膜を有する。活性化エネルギー源は、脈絡膜と網膜との間の改善された拡散輸送を可能にする、ブルッフ膜の制御された拡散増強および／またはブルッフ膜の分解をもたらすために利用される。この個体には、不活化された拡散増強分子が投与され、この分子は、膜と会合し、次いで、活性化エネルギー源（例えば、光または超音波）に正確に曝露される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
眼の障害を処置する方法であって、該眼におけるブルッフ膜を通した拡散を増加させる工程を包含する、方法。
【請求項２】
前記増加した拡散が、前記膜の厚さの減少、組成の変化またはその両方の結果である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
個体の少なくとも１つの眼におけるブルッフ膜を通した拡散を増加させるための方法であって、以下の工程：
該ブルッフ膜に、不活性形態の拡散増強分子を、ブルッフ膜／不活性拡散増強分子複合体を形成するために充分な量で投与する工程；および
該複合体を活性化源に曝露する工程であって、ここで該活性化源が、該不活性拡散増強分子を活性形態の該拡散増強分子へと活性化し、該活性化が、該膜を通しての拡散の増加をもたらす、工程
を包含する、方法。
【請求項４】
拡散における前記増加が、前記膜の厚さ、前記膜の組成の変化、またはその両方の結果である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
拡散における前記増加が、前記膜における、脂質、タンパク質またはその両方の変化の結果である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記個体が、眼の障害を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記眼の障害が、加齢性黄斑変性、若齢性黄斑変性、ソルビー眼底ジストロフィー、または黄斑変性とは無関係の、視覚機能における加齢性低下である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記不活性拡散増強分子が、前記膜に直接的に結合する、請求項３に記載の方法。
【請求項９】
前記不活性拡散増強分子が、タンパク質、洗剤、または界面活性剤である、請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
前記タンパク質が、酵素である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記不活性酵素が、該酵素のアミノ酸側鎖上の少なくとも１つの光除去可能な保護基によってケージングされているとさらに規定される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記保護基が、ｏ−ニトロベンジル、デシル、フェナシル、トランス−ｏ−シンナモイル、クマリニル、キノリン−２−オニル、キサンテニル、チオキサンテニル、セレノキサンテニルおよびアントラセニル、スチルベニル、またはそれらの組み合わせである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記保護基が、ｏ−ニトロベンジル、デシル、フェナシル、トランス−ｏ−シンナモイル、クマリニル、キノリン−２−オニル、キサンテニル、チオキサンテニル、セレノキサンテニルおよびアントラセニル、スチルベニル、またはそれらの組み合わせである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記アミノ酸が、システイン、アスパルテート、グルタメート、ヒスチジン、リジン、アスパラギン、グルタミン、アルギニン、セリン、トレオニン、チロシン、またはそれらの組み合わせである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記洗剤が、少なくとも１つのｏ−ニトロベンジル基、デシル基、フェナシル基、トランス−ｏ−シンナモイル基、クマリニル基、キノリン−２−オニル基、キサンテニル基、チオキサンテニル基、セレノキサンテニル基およびアントラセニル基、またはスチルベニル基を含む化合物によってケージングされているとさらに規定される、請求項９に記載の方法。
【請求項１６】
前記タンパク質が、超音波造影剤によってケージングされているとさらに規定される、請求項９に記載の方法。
【請求項１７】
前記超音波造影剤が、微小な泡またはリポソームである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記タンパク質が、タンパク質結合ドメインをさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１９】
前記タンパク質結合ドメインが、ヘテロダイマードメインである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記タンパク質結合ドメインが、ロイシンジッパードメイン、キチン結合ドメイン、またはＳｒｃ相同性２（ＳＨ２）ドメインである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記不活性拡散増強分子が、前記個体に、薬理学的に受容可能な組成物中で投与される、請求項３に記載の方法。
【請求項２２】
前記不活性拡散増強分子が、薬理学的に受容可能な組成物中で、前記個体に全身投与される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記不活性拡散増強分子が、薬理学的に受容可能な組成物中で、前記個体に、経口的に、注射により、直腸に、膣に、または局所的に投与される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記注射が、眼内または眼周囲の注射である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記酵素が、マトリックスメタロプロテイナーゼ、コレステロールエステラーゼ、リパーゼ、カテプシン、プロテアーゼ、またはそれらの組み合わせである、請求項１０に記載の方法。
【請求項２６】
前記プロテアーゼが、セリンプロテアーゼである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記活性化源が、エネルギーである、請求項３に記載の方法。
【請求項２８】
前記エネルギーが、光または超音波である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記活性化源が、２光子照射である、請求項３に記載の方法。
【請求項３０】
前記曝露工程が、前記複合体を、焦点レーザー源からの光エネルギーへと曝露するとさらに規定される、請求項３に記載の方法。
【請求項３１】
前記拡散増強分子が、蛍光分子で標識される、請求項３に記載の方法。
【請求項３２】
前記方法が、前記膜を可視化する工程をさらに包含する、請求項３に記載の方法。
【請求項３３】
前記膜の可視化が、前記膜についての標的化蛍光標識の送達、前記膜の固有の自己蛍光の同定、または光学干渉断層撮影法（ＯＣＴ）ドップラーによる、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
個体の少なくとも１つの眼における加齢性黄斑変性を処置する方法であって、該黄斑変性は、肥厚化したブルッフ膜によって特徴付けられ、該方法は、以下：
該個体に、不活化された拡散増強分子を、該分子が該膜と会合してブルッフ膜／不活性拡散増強分子複合体を形成するに充分な量で投与する工程であって、ここで該不活化された拡散増強分子は、薬理学的に受容可能な組成物中で提供される、工程；および
該膜を活性化源に曝露する工程であって、ここで、該曝露工程の後に、該眼の膜を通しての拡散が改善される、工程
を包含する、方法。
【請求項３５】
前記ブルッフ膜が、可視化される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記可視化する工程が、前記個体に、蛍光分子を、ブルッフ膜の可視化のために該膜と会合するために充分な量で投与する工程として規定される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記可視化する工程が、前記膜の自己蛍光を同定することとして規定される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記可視化する工程が、光学干渉断層撮影法（ＯＣＴ）ドップラーによる、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
発光した蛍光の量が、前記ブルッフ膜における脂質の量と比例する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
前記可視化する工程が、前記個体に、可視光または赤外光を投与することとして規定される、請求項３５に記載の方法。
【請求項４１】
前記可視光または赤外光を投与することが、光学干渉断層撮影法を用いることを包含する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記方法が、外因性色素を投与する工程をさらに包含する、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
適切な容器中に収容されたキットであって、不活化されたブルッフ膜拡散増強分子を備える、キット。
【請求項４４】
前記不活化されたブルッフ膜分解分子の活性化のための活性化源をさらなる備える、請求項４３に記載のキット。
【請求項４５】
蛍光分子をさらに備える、請求項４３に記載のキット。
【請求項４６】
個体の少なくとも１つの眼における眼の障害を診断する方法であって、以下：
該個体に、蛍光分子を、該蛍光分子が該眼におけるブルッフ膜と会合するに充分な量で投与する工程；
ブルッフ膜を照射に曝露して蛍光を見る工程であって、ここで蛍光の量が、該眼の障害の重篤度の指標である、工程
を包含する、方法。
【請求項４７】
前記方法が、前記膜を可視化する工程をさらに包含する、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記膜を可視化する工程が、前記膜についての標的化蛍光標識の送達、膜の固有の自己蛍光の同定、または光学干渉断層撮影法（ＯＣＴ）ドップラーによる、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記眼の障害が、黄斑変性である、請求項４６に記載の方法。
【請求項５０】
前記照射が、２光子照射である、請求項４６に記載の方法。
【請求項５１】
個体の眼の障害を処置する方法であって、以下：
該眼におけるブルッフ膜を可視化する工程；
該個体に、不活性形態の光活性拡散増強分子を、ブルッフ膜／不活性光活性拡散増強分子複合体を形成するに充分な量で投与する工程；および
該複合体を活性化源に曝露する工程であって、ここで該活性化源が、該不活性光活性拡散増強分子を活性化して、活性形態の該光活性拡散増強分子にし、該活性化が、ブルッフ膜を通しての拡散における増加、ブルッフ膜の組成の変化、またはその両方をもたらす、工程
を包含する、方法。
【請求項５２】
前記可視化する工程が、前記膜についての標的化蛍光標識の送達、前記膜の固有の自己蛍光の同定、または光学干渉断層撮影法（ＯＣＴ）ドップラーによる、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記蛍光標識が、前記不活性形態の光活性分子に結合している、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記不活性光活性分子が、ブルッフ膜中の脂質と会合する、請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
個体における眼組織を変化させるための方法であって、以下の工程：
該眼組織に、不活性形態の組織変更分子を、該分子を該組織に標的化するために充分な量で投与する工程；および
該分子を活性化源に曝露する工程であって、ここで該活性化源が、該不活性組織変更分子を活性化して、活性形態の該組織変更分子にし、該活性化が、該眼組織の少なくとも一部の変化をもたらす、工程
を包含する、方法。
【請求項５６】
前記方法が、前記個体における眼の障害についての治療を提供する、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記方法が、前記組織を可視化する工程をさらに包含する、請求項３に記載の方法。
【請求項５８】
前記組織を可視化する工程が、前記組織についての標的化蛍光標識の送達、前記組織の固有の自己蛍光の同定、または光学干渉断層撮影法（ＯＣＴ）ドップラーによる、請求項３２に記載の方法。
【請求項５９】
前記眼の障害が、加齢性黄斑変性、若齢性黄斑変性、ソルビー眼底ジストロフィー、黄斑変性とは無関係の、視覚機能における加齢性低下、または緑内障である、請求項５６に記載の方法。
【請求項６０】
前記不活性組織変更分子が、前記個体に、薬理学的に受容可能な組成物中で投与される、請求項５５に記載の方法。
【請求項６１】
前記不活性組織変更分子が、薬理学的に受容可能な組成物中で前記個体に全身投与される、請求項５５に記載の方法。
【請求項６２】
前記不活性組織変更分子が、薬理学的に受容可能な組成物中で、前記個体に、経口的に、注射により、直腸に、膣に、または局所的に投与される、請求項５５に記載の方法。
【請求項６３】
前記注射が、眼内または眼周囲の注射である、請求項６２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、２００２年７月２日出願の米国仮特許出願第６０／３９３，５０５号に対する優先権を主張する。米国仮特許出願第６０／３９３，５０５号は、その全体が本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、一般に、眼科学および細胞生物学の分野に関する。特に、本発明は、眼組織の物理的特性および／または化学的特性を変化させることに関する。より詳細には、本発明は、眼の障害（例えば、黄斑変性）に関連したブルッフ膜の厚さを検出および／もしくは低減するため、および／またはブルッフ膜の透過性を変化するための手段を記載する。さらにより詳細には、本発明は、ブルッフ膜への不活化拡散増強分子の投与、続いてエネルギー源による拡散増強分子の活性化に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）は、１０００万人ものアメリカ人に罹患している進行性の眼の状態である。ＡＭＤは、米国において６０年間以上、成人における視力低下および法的盲の第１位の原因である。人口の高齢化が進み、そして「ベビーブーマー」が６０歳代および７０歳代になるにつれ、ＡＭＤの仮想流行が蔓延している。この疾患は眼の黄斑に罹患し、ここでは、最も鋭い中心視力が生じる。ＡＭＤは完全な盲目を稀にもたらすが、ＡＭＤは、個体から、最も外側の周辺視力以外の全てを奪い、視力の中心には、ごくぼんやりとした視力または黒い孔を残す。
【０００４】
黄斑変性は、乾燥型（萎縮性）または滲出型（血管新生）のいずれかと分類される。乾燥型形態は、滲出型形態よりも一般的であり、ＡＭＤ患者のうちの約９０％が、乾燥型ＡＭＤと診断される。この疾患の滲出型形態は通常、より深刻な視力低下となる。
【０００５】
乾燥型形態では、黄斑における網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ）の崩壊または薄層化、それゆえ、用語「萎縮」が存在する。これらのＲＰＥ細胞は、盲目の機能にとって重要である。なぜなら、これらは、上にある光受容体を代謝的に支持するからである。
【０００６】
萎縮性ＡＭＤの臨床的に顕著な特徴は、網膜色素上皮（「ＲＰＥ」）に対してやや深い、黄色がかった沈着物である黄斑ドルーゼンの蓄積である。萎縮性ＡＭＤを有する眼の組織病理学的検査は、ブルッフ膜中のＲＰＥに対して深い脂質およびタンパク質性物質の沈着を示す。ＡＭＤを有する高齢者の眼において、ブルッフ膜はしばしば、正常よりも約３倍厚い。この肥厚化は、脂質ならびに修飾および架橋されたタンパク質から構成されると考えられる。このことは、脈絡毛細管板からブルッフ膜を通った外側網膜への栄養素の輸送を妨害する。脂質および架橋されたタンパク質から構成された、この肥厚化した障壁は、脈絡毛細管板からブルッフ膜を通った外側網膜への栄養素の輸送を妨害する。現在、マルチビタミンおよび微量栄養素の使用以外に、乾燥型ＡＭＤについて有効な処置であると証明された処置はない。
【０００７】
滲出型ＡＭＤは、新たな血管が形成されてブルッフ膜を通ってＲＰＥ下腔および網膜下腔内に増殖する場合に生じる。この血管新生組織は、非常に脆弱であり、過剰透過性である。頻繁に、これは出血して、上にある網膜に対する損傷を引き起こす。血液が組織化されるにつれて、機能的黄斑組織が、瘢痕組織によって置き換えられる。視覚低下を防止するために、血管新生の発生の前に治療的に介入することが所望される。
【０００８】
ＡＭＤの正確な病因は未知であるが、いくつかの危険因子が重要なようである。例えば、ＡＲＭＤは、光に対する網膜の慢性曝露によって引き起こされ得る。食事中に特定の栄養素（例えば、抗酸化剤ビタミンＥおよびビタミンＣ）が存在するかまたは存在しないかもまた、ＡＲＭＤについての素因に影響を与え得る。他の状態（例えば、高血圧および喫煙）もまた、この疾患の発生についての重要な危険因子であると考えられる。
【０００９】
ＡＭＤは、患者および医師の両方にとって取り組みがいのある疾患である。なぜなら、処置選択肢が非常に少なく、好酸化剤を除いて、証明された予防治療が存在しないからである。何人かの個体は黄斑変性によるほんのわずかな不便を経験しているが、より重篤な形態の黄斑変性を有する多くの個体は、無能にされている。レーザー凝固、光力学療法、および抗脈管形成治療を含め、現行の治療は、混合された結果を有しており、特定の例では、有害な副作用を引き起こした。それゆえ、黄斑変性の影響を低減するかまたは制限する処置についての必要性が存在する。
【００１０】
レーザー凝固は、臨床試験においては有効であるが、ＡＭＤを有する少数の患者のみが、処置の良好な候補である。さらに、レーザー処置を用いた脈絡膜血管新生の成功裏の剥離後でさえ、再発性の血管新生組織が頻繁に増殖する。光力学療法、すなわちＰＤＴである、Ｖｉｓｕｄｙｎｅ（登録商標）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃｓ；Ｄｕｌｕｔｈ，ＧＡ）は、異常な細胞増殖を潜在的に停止させるかまたは緩慢にさせるために、光活性化薬物を使用する。この治療は、脈絡膜血管新生によって特徴付けられる後期段階の疾患を処置する。手短に述べると、光増感剤は、静脈内に投与されて、リポタンパク質レセプター（特に、迅速に増殖している細胞中に見出されるリポタンパク質レセプター）に結合する。投与のすぐ後に、この化合物は、特定の波長において、予め計算された線量の光で活性化されて、正常な酸素のフリーラジカル一重項酸素への変換をもたらし、このことは次いで、血管新生組織の閉鎖を引き起こす。特定の実施形態では、この治療は、血管増殖を処置する。しかし、黄斑変性の基礎となる原因が、光力学療法を用いた脈絡膜血管新生の処置によっては取り組まれていないので、再発性の血管新生が、通常、処置の数ヶ月以内に生じる。
【００１１】
米国特許第５，７５６，５４１号は、光活性化合物を、標的眼組織へと局在させるために充分な量で投与し、そしてこの標的組織をレーザー由来の光で照射する工程を包含する、視力を改善する方法に関し、ここで、照射の波長は、この光活性化合物によって吸収され、そして照射は、視力を改善するために充分な時間でかつ強度において行われる。特定の実施形態では、この光活性化合物は、緑色ポルフィリンである。米国特許第５，９１０，５１０号は、特定の照射タイミングを有する同一の方法に関する。
【００１２】
米国特許第５，７９８，３４９号は、新生脈管構造体中に局在させるために充分な量および時間で、緑色ポルフィリンのリポソーム処方物を投与し、続いてこの新生脈管構造体をレーザー光で照射することにより、望ましくない新生脈管構造体（ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ）によって特徴付けられる眼の状態（例えば、ＡＭＤ）を処置するための方法に関し、ここで、この緑色ポルフィリンによって吸収された光は、この新生脈管構造体を塞ぐ。関連した米国特許第６，２２５，３０３号において、この放射度は、約３００ｍＷ／ｃｍ２〜約９００ｍＷ／ｃｍ２の範囲にある。
【００１３】
米国特許第６，１２８，５２５号は、光力学療法の線量測定を制御する、方法および装置に関する。
【００１４】
米国特許第５，９３５，９４２号は、熱感受性リポソーム中に封入された蛍光色素および照射によって活性化される組織反応性薬剤を静脈内に共投与することを包含する、哺乳動物の眼における脈管構造体を閉塞する方法に関する。このリポソームは、眼の中で加熱されて、その内容物を放出し、ここで、この組織反応性薬剤は、不活性なままであり、その後、脈管構造体内での蛍光色素の流れがモニタリングされる。この組織反応性薬剤は、正常以下の血流を有する脈管構造体中で活性化され、その結果、この活性化薬剤は、この脈管構造体を化学的に閉塞する。この関連した米国特許第６，１４０，３１４号の方法は、血管の増殖または再生を損なうに有効な、組織特異的因子の共投与をさらに包含する。この関連した米国特許第６，２４８，７２７号は、関連した診断試薬およびキットに関する。
【特許文献１】米国特許第５，７５６，５４１号
【特許文献２】米国特許第５，９１０，５１０号
【特許文献３】米国特許第５，７９８，３４９号
【特許文献４】米国特許第６，２２５，３０３号
【特許文献５】米国特許第６，１２８，５２５号
【特許文献６】米国特許第５，９３５，９４２号
【特許文献７】米国特許第６，１４０，３１４号
【特許文献８】米国特許第６，２４８，７２７号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
従って、眼の障害についての代替の方法が存在する場合、本発明は、例えば、（特に、組織（例えば、ブルッフ膜）の病理を逆転させる際に）眼組織の血管新生の点の前に、当該分野におけるこの障害についての治療の必要性に取り組む。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
（発明の要旨）
本発明は、眼組織の物理的特性および／または化学的特性を変化させるための、方法および組成物に関する。特定の実施形態では、これは、組織を通したかまたは組織をまたがった拡散の増強、細胞の標的化破壊、および／または個体における少なくとも１つの眼組織の少なくとも一部の標的化された変更をいう。これは、特定の実施形態では、拡散の制御された増強および／または例えば、光もしくは超音波を用いた他の制御された変更をもたらすための手段を用いて達成され得る。本発明のいくつかの局面は、眼の障害を初期段階で処置することに関し、当業者は、このような目的に関する本発明の有用性を認識する。
【００１７】
本発明の特定の、例示に過ぎない実施形態では、ブルッフ膜は、標的化される組織である。年をとると、特に黄斑変性では、ブルッフ膜は、脂質および架橋したタンパク質の障壁を発達させる。黄斑変性を有する患者におけるブルッフ膜をまたがった損なわれた拡散は、栄養が枯渇した網膜による脈管形成因子の放出を促進する。次いで、このことは、ブルッフ膜を通した血管新生組織の増殖を引き起こし、その後、出血、漿液の漏出、および重篤な視覚低下を引き起こす。本発明のいくつかの局面は、脈絡膜血管新生が発生する前または発生直後の処置／投与の可能にする。
【００１８】
ブルッフ膜をまたがる拡散を改善し、そして視覚低下の発生を予防するために、視覚低下に関連した組織の物理化学的特性を改変する（例えば、年をとるにつれて、そしてＡＭＤを有する患者において、ブルッフ膜中に蓄積する脂質および架橋したタンパク質の障壁を減少させる）ことが所望される。本発明は、脈絡膜と網膜との間の改善された拡散輸送を可能にする、拡散の制御された増強および／またはブルッフ膜の部分的分解をもたらす、光または超音波を用いてこれを達成するための手段および組成物に関する。エネルギー（例示的な形態は、光または超音波である）を利用して、組織変更物質（これはまた、脂質分解物質および／またはタンパク質分解物質とも呼ばれ得る）の選択的活性化を達成する。なぜなら、この使用は、隣接組織への影響を最小にしながらも、ブルッフ膜に対する変更を標的とするからである。活性な組織変更分子が全身投与された場合、これらは、ブルッフ膜について選択的ではなく、他の組織に潜在的に損傷を与える。所望の組織（例えば、ブルッフ膜）を特異的に標的化するためには、この組織変更分子は、例えば、全身注射もしくは摂取、または局所（眼内、眼周囲）注射によって、不活性形態で投与される。特定の実施形態では、この分子は、親油性である。これは、不活性形態で複数の組織に結合し、その後、これは、徐々に除去される。これは、眼に正確に適用されるエネルギー源（例えば、光、超音波、またはその両方）によってのみ活性化されて、ブルッフ膜における組織変更物質の優先的活性化を達成する。一旦活性化されると、この組織変更分子は、ブルッフ膜中の脂質および／または架橋したタンパク質を改変して、膜内外の拡散を改善する。特定の実施形態では、活性化の位置における精度を得るために、光化学的活性化工程は、２光子光化学を含む。
【００１９】
本発明の目的では、眼におけるブルッフ膜を通した拡散を増加させる工程を包含する、眼の障害を処置する方法が存在する。特定の実施形態では、この増加した拡散は、この膜の、厚さの減少、組成の変化、またはその両方の結果である。
【００２０】
本発明のさらなる目的では、個体の少なくとも１つの眼におけるブルッフ膜を通した拡散を増加させるための方法が存在し、この方法は、このブルッフ膜に、不活性形態の分解分子を、ブルッフ膜／不活性分解分子複合体を形成するために充分な量で投与する工程；およびこの複合体を活性化源に曝露する工程であって、ここでこの活性化源が、この不活性分解分子を活性形態のこの分解分子へと活性化し、この活性化が、この膜を通しての拡散の増加をもたらす、工程を包含する。特定の実施形態では、この拡散における増加は、この膜の、厚さの減少または組成の変化の結果である。別の特定の実施形態では、この拡散における増加は、この膜における、脂質、架橋したタンパク質またはその両方の変化の結果である。さらなる特定の実施形態では、この個体は、眼の障害（例えば、ＡＭＤ、若齢性黄斑変性、ソルビー眼底ジストロフィー（Ｓｏｒｂｙ’ｓ  ｆｕｎｄｕｓ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、または黄斑変性とは無関係の、視覚機能における加齢性低下）を有する。特定の実施形態では、この不活性分解分子は、この膜に直接的に結合する。
【００２１】
本発明の別の特定の実施形態では、この不活性分解分子は、（シクロデキストリンをケージングするために有用な）タンパク質、洗剤（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ）、界面活性剤である。さらなる特定の実施形態では、このタンパク質は、酵素である。さらなる特定の実施形態では、この不活性酵素は、この酵素のアミノ酸側鎖上での少なくとも１つの光除去可能な保護基の取り込みによってケージングされているとさらに規定される。特定の実施形態では、この保護基は、ｏ−ニトロベンジル、デシル、フェナシル、トランス−ｏ−シンナモイル、クマリニル、キノリン−２−オニル（ｑｕｉｎｏｌｉｎｅ−２−ｏｎｌｙ）、キサンテニル、チオキサンテニル、セレノキサンテニルおよびアントラセニル、スチルベニル、またはそれらの組み合わせである。別の特定の実施形態では、この保護基は、ｏ−ニトロベンジル、デシル、フェナシル、トランス−ｏ−シンナモイル、クマリニル、キノリン−２−オニル、キサンテニル、チオキサンテニル、セレノキサンテニルおよびアントラセニル、スチルベニルまたはそれらの誘導体である。特定の実施形態では、このアミノ酸は、システイン、アスパルテート、グルタメート、ヒスチジン、リジン、アスパラギン、グルタミン、アルギニン、セリン、トレオニン、チロシン、またはそれらの組み合わせである。特定の実施形態では、この洗剤は、少なくとも１つのｏ−ニトロベンジル基、デシル基、フェナシル基、トランス−ｏ−シンナモイル基、クマリニル基、キノリン−２−オニル基、キサンテニル基、チオキサンテニル基、セレノキサンテニル基およびアントラセニル基、またはスチルベニル基を含む化合物によってケージングされているとさらに規定される。別の特定の実施形態では、このタンパク質は、超音波造影剤中にケージングされているとさらに規定される。特定の実施形態では、この超音波造影剤は、微小な泡またはリポソームである。別の特定の実施形態では、このタンパク質は、タンパク質結合ドメインをさらに含む。さらなる特定の実施形態では、このタンパク質結合ドメインは、ヘテロダイマードメインである。さらなる特定の実施形態では、このタンパク質結合ドメインは、ロイシンジッパードメイン、キチン結合ドメイン、またはＳｒｃ相同性２（ＳＨ２）ドメインである。
【００２２】
本発明の別の特定の実施形態では、この不活性分解分子は、個体に、薬理学的に受容可能な組成物中で投与される。別の特定の実施形態では、この不活性分解分子は、薬理学的に受容可能な組成物中でこの個体に全身投与される。さらなる特定の実施形態では、この不活性分解分子は、薬理学的に受容可能な組成物中で、この個体に、経口的に、注射により（例えば、眼周囲または眼内）、直腸に、膣に、または局所的に投与される。特定の実施形態では、この酵素は、マトリックスメタロプロテイナーゼ、コレステロールエステラーゼ、リパーゼ、カテプシン、プロテアーゼ、またはそれらの組み合わせである。特定の実施態様において、このプロテアーゼは、セリンプロテアーゼである。特定の実施形態では、この活性化源は、エネルギーである。さらなる特定の実施形態では、このエネルギーは、光または超音波である。さらなる特定の実施形態では、この曝露工程は、この複合体を焦点レーザー源からの光エネルギーに曝露するとさらに規定される。別の特定の実施形態では、この分解分子は、蛍光標識されている。
【００２３】
本発明の別の実施形態では、個体の少なくとも１つの眼における加齢性黄斑変性を処置する方法が存在し、この黄斑変性は、肥厚化したブルッフ膜によって特徴付けられ、この方法は、以下の工程を包含する：この個体に、不活化された分解分子を、この分子がこの膜と会合してブルッフ膜／不活性分解分子複合体を形成するに充分な量で投与する工程；およびこの膜を活性化源に曝露する工程であって、ここで、この曝露工程の後に、この眼の膜を通しての拡散が改善される、工程。特定の実施形態では、この方法は、この個体に、蛍光分子を、ブルッフ膜の可視化のためにこの膜と会合するために充分な量で投与する工程をさらに包含する。特定の実施形態では、この発光した蛍光の量は、このブルース膜中での脂質の量または変更されたタンパク質の量と比例する。別の特定の実施形態では、この色素を励起するために必要とされる光の波長、色素によって発光される光の波長、または色素の寿命は、ブルッフ膜中での脂質または変更されたタンパク質の量によって検出可能な様式で変更される。さらなる特定の実施形態では、この不活化された分解分子は、薬理学的に受容可能な組成物中で投与される。
【００２４】
本発明のさらなる実施形態では、適切な容器中に収容されたキットが存在し、このキットは、不活化されたブルッフ膜分解分子を備える。特定の実施形態では、このキットは、この不活化されたブルッフ膜分解分子の活性化のための活性化源をさらに備える。さらなる特定の実施形態では、このキットは、蛍光分子をさらに備える。
【００２５】
本発明のいくつかの実施形態では、標的化された眼組織は、この不活性組織変更分子の活性化の前および／または活性化の間に可視化される。例えば、ブルッフ膜は、以下により可視化され得る：ブルッフ膜を標的とする蛍光分子の送達による；隣接組織および周囲の組織とそれ自体とを識別する、ブルッフ膜自体の特有の成分からの自己蛍光の特徴を（当該分野で周知の手段により）検出することによる；および／または（これもまた当該分野で周知の手段により）ＯＣＴドップラーを用いて膜の特定の機械的特性を同定することによる。
【００２６】
本発明の別の実施形態では、個体の少なくとも１つの眼における眼の障害を診断する方法が存在し、この方法は、以下の工程を包含する：この個体に、蛍光分子を、該蛍光分子がこの眼におけるブルッフ膜と会合するに充分な量で投与する工程；ブルッフ膜を照射に曝露して蛍光を見る工程であって、ここで蛍光の量が、この眼の障害の重篤度の指標である、工程。特定の実施形態では、この眼の障害は、黄斑変性である。別の特定の実施形態では、この照射は、２光子照射である。
【００２７】
本発明の別の実施形態では、標的化組織（例えば、ブルッフ膜）からの固有の光散乱に基づく、個体の少なくとも１つの眼における眼の障害を診断する方法が存在する。可視光または赤外光を用いた光学干渉断層撮影法（ｏｐｔｉｃａｌ  ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ；ＯＣＴ）の技術は、この眼のブルッフ膜の物理的性質または化学的性質における変更を検出するために用いられる。ＯＣＴは、ヒトの眼についてのいくつかの以前の研究において用いられたような眼における構造をみるために用いられ得るだけでなく、ＯＣＴと外因性色素とを合わせることにより、ドップラーＯＣＴによる構造の移動度および化学的性質を研究するためにも用いられ得る。この実施形態では、ＯＣＴおよび／またはその改変版は、導かれた処置を可能にするために、変更された性質を有するブルッフ膜の性質を決定するために用いられる。処置は、ブルッフ膜内またはブルッフ膜付近での内因性物質または外因性物質の、光ケージングされていない（ｐｈｏｔｏ−ｕｎｃａｇｉｎｇ）かまたは光活性化もしくは光剥離であり得る。
【００２８】
本発明のさらなる実施形態では、個体の眼の障害を処置する方法が存在し、この方法は、以下の工程を包含する：この個体に、可視化分子を、この眼におけるブルッフ膜の可視化を可能にするに充分な量で投与する工程；この個体に、不活性形態の光活性分解分子を、ブルッフ膜／不活性光活性分解分子複合体を形成するに充分な量で投与する工程；およびこの複合体を活性化源に曝露する工程であって、ここで、この活性化源は、この不活性光活性分解分子を活性形態のこの光活性拡散増強分子へと活性化し、この活性化は、ブルッフ膜を通しての拡散、組成の変更、またはその両方の増加をもたらす。特定の実施形態では、この可視化分子は、蛍光分子である。別の特定の実施形態では、この蛍光分子は、不活性形態の光活性分子に連結される。代替の実施形態では、この膜は、その特有の自己蛍光特性によって、またはＯＣＴドップラー法によって可視化される。さらなる特定の実施形態では、この不活性光活性分子は、ブルッフ膜中の脂質と会合する。
【００２９】
本発明の１つの実施形態では、個体中の眼組織を変化させるための方法が存在し、この方法は、以下の工程を包含する：この眼組織に、不活性形態の組織変更分子を、この分子をこの組織に標的化するために充分な量で投与する工程；およびこの分子を活性化源に曝露する工程であって、ここでこの活性化源が、この不活性組織変更分子を活性化して、活性形態の組織変更分子にし、この活性化が、この眼組織の少なくとも一部の変化をもたらす、工程。特定の実施形態では、この方法は、この個体における眼の障害についての治療を提供する。別の特定の実施形態では、この眼の障害は、加齢性黄斑変性、若齢性黄斑変性、ソルビー眼底ジストロフィー、黄斑変性とは無関係の、視覚機能における加齢性低下、または緑内障である。特定の実施形態では、この不活性組織変更分子は、この個体に、薬理学的に受容可能な組成物中で投与される。さらなる特定の実施形態では、この不活性組織変更分子は、薬理学的に受容可能な組成物中で、この個体に全身投与される。さらなる特定の実施形態では、この不活性分解分子は、薬理学的に受容可能な組成物中で、この個体に、経口的に、注射により、直腸に、膣に、または局所的に投与される。この投与が注射による場合、この注射は、眼内または眼周囲であり得るが、他の経路が適用可能である。
【００３０】
特定の実施形態では、光学干渉断層撮影法（ＯＣＴ）は、標的化された組織または細胞における検出（例えば、組成における変化（例えば、散乱または特定の薬剤での標識）または組織（この一例は、ブルッフ膜である）の組織化の検出）のために利用される。ドップラーＯＣＴは、例えば、標的化された組織中の散乱物（ｓｃａｔｔｅｒｅｒ）の運動性に関する、および／または固定領域（化学的に改変された領域など）の標的化に関する、有意義な情報を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３１】
（例示的な実施形態の説明）
種々の置換および改変が、本発明の範囲および精神から逸脱することなく、本明細書中に開示された本発明に行われ得ることを当業者にことが容易に明らかである。
【００３２】
（Ｉ．定義）
本明細書中で用いられる場合、「ａ」または「ａｎ」は、１以上を意味し得る。特許請求の範囲において用いられる場合、用語「を含む」とともに用いられるならば、用語「ａ」または「ａｎ」は、１以上を意味し得る。本明細書中で用いられる場合、「別の」は、少なくとも第２またはそれ以降を意味し得る。
【００３３】
用語「加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）」は、本明細書中で用いられる場合、約５０歳を超えた個体における黄斑変性をいう。１つの特定の実施形態では、これは、低下した中心視力、そして進行した症例では法的盲をもたらす、網膜の黄斑領域における光受容体の破壊および減少に関連する。特定の実施形態では、他の変性（例えば、ソルビー眼底ジストロフィー）は、この用語の範囲に含まれる。
【００３４】
用語「ブルッフ膜」は、本明細書中で用いられる場合、脈絡毛細管板をＲＰＥから隔てる５層構造体をいう。
【００３５】
用語「ケージングされた（ｃａｇｅｄ）」とは、本明細書中で用いられる場合、別の分子／部分によって保護された、組織変更分子の官能基をいう。特定の実施形態では、この用語は、不活性形態の組織変更分子を活性化源なしに維持することをいう。
【００３６】
用語「ドルーゼン」は、本明細書中で用いられる場合、ブルッフ膜の内面のＲＰＥの深部に位置する、黄色がかった沈着物と定義される。
【００３７】
用語「眼の障害」は、本明細書中で用いられる場合、個体の少なくとも１つの眼に関連して正常未満の健康を有する状態をいう。好ましい実施形態では、この眼の障害は、肥厚化したブルッフ膜を含む。特定の実施形態では、ブルッフ膜は、その正常な厚さの約２倍に肥厚化している。他の特定の実施形態では、この膜は、その正常な厚さの約３倍〜約１０倍に肥厚化している。ブルッフ膜が異常に肥厚化している特定の眼の障害としては、少なくとも加齢性黄斑変性、若齢性黄斑変性、ソルビー眼底ジストロフィー、または暗順応に対する能力が低下した正常な加齢が挙げられる。他の眼の障害は、肥厚化したブルッフ膜によっては特徴付けられないかもしれないが、眼組織の変更（例えば、緑内障における流出能力を増大させる、小柱網の変更）によって利益を受け得る。２光子照射を用いた標的化された組織変更もまた、糖尿病性の眼疾患（糖尿病性黄斑水腫および血管新生が挙げられる）における微小血管異常を処置するために用いられ得る。全身投与または局所投与後の、選択的２光子照射および不活性薬物の解放（ｕｎｃａｇｉｎｇ）は、薬物の効果を、眼における特定の組織に対して標的化するために用いられ得る。この形態の選択的解放は、眼球外組織において、選択的効果を達成するために用いられ得る。
【００３８】
用語「黄斑」は、本明細書中で用いられる場合、網膜の中心領域の光感知細胞を含め、網膜の中心領域をいう。
【００３９】
用語「黄斑変性」は、本明細書中で用いられる場合、網膜の中心部分である黄斑の悪化をいう。
【００４０】
用語「網膜」は、本明細書中で用いられる場合、杆状体および網膜錐体を含む、光を受け取って、視神経を経て脳への伝達のためにこれを電気信号に変換する、眼の項部にある神経学的組織をいう。
【００４１】
用語「組織変更薬剤」とは、本明細書中で用いられる場合、組織の物理的特性、化学的特性、またはその両方を変更する、少なくとも１つの分子をいう。特定の実施形態では、この用語は、組織を通るかまたはまたがる拡散が少なくとも部分的に改善されるように組織を変更する薬剤をいう。他の特定の実施形態では、この用語は、組織成分を少なくとも部分的に（少なくとも部分的には望ましくない）分解し得る薬剤をいう。さらなる特定の実施形態では、この用語は、組織（例えば、ブルッフ膜）中の脂質および／または架橋したタンパク質を減少させ得る薬剤をいう。特定の実施形態では、この用語は、その成分のうちの１以上を分解することに関する。他の特定の実施形態では、この組織変更分子は、組織（例えば、ブルッフ膜）から脂質性沈着物および非脂質性沈着物を抽出し得る洗剤である。
【００４２】
用語「超音波造影剤」は、本明細書中で用いられる場合、外因性造影剤を保有し得る微細構造体をいう。これらの微細構造体は、超音波照射の集束した適用によって破壊され得る。例としては、微小な泡（懸濁物中の、超音波を強く分散し得る小さい気泡）リポソームが挙げられる。
【００４３】
（ＩＩ．本発明）
本発明は、（特に、この障害に関連した眼組織の変更をもたらすことにより）眼の障害の処置に関する。この変更は、この組織が変更される限り、任意の種類の変更であり得るが、特定の実施形態では、これは、本明細書中に記載される方法および組成物を用いた、組織の拡散の増強をいう。特定の実施形態では、この方法および組成物は、眼の障害を改善するために、ブルッフ膜に影響を与える。
【００４４】
この眼の障害は、任意の種類の障害であり得るが、特定の実施形態では、この眼の障害は、ＡＭＤもしくは他の黄斑変性（例えば、ソルビー眼底ジストロフィー）またはブルッフ膜の肥厚化をもたらす任意の状態である。別の特定の実施形態では、加齢性肥厚化は、黄斑変性の不存在下でさえも、処置される。高齢者における肥厚化は、加齢性の視覚変化（例えば、暗順応における困難性）の原因である。従って、本発明の方法および組成物は、ＡＭＤ（高齢ではない患者では、例えば、若齢性黄斑変性）を有するかまたは有さない高齢の患者における、視覚機能の改善のための、眼組織の物理的構造および／または化学的構造の変化に関し、特定の実施形態では、この組織は、ブルッフ膜である。特定の実施形態では、本発明は、少なくとも１つの組織変更薬剤の局所投与を用いた、緑内障の処置に関する。このような処置は、緑内障について（例えば、緑内障の病因における目詰まりした小柱網を改善するという特定の実施形態について）有用である。
【００４５】
別の特定の実施形態では、本発明は、乾燥型または滲出型のいずれかの黄斑変性についての処置に関する。当業者は、現在公知の方法による滲出型黄斑変性の処置後に、この状態が通常再発する（再発性の脈絡膜血管新生）ことを考慮して、滲出型ＡＭＤが、本発明の方法を用いて処置され得ることを認識する。さらなる特定の実施形態では、本明細書中に記載される治療は、このような再発を予防し、そして既存の脈絡膜血管新生の程度（増殖）を制限し得、従って、より良好な視力を維持し得る。本発明の特定の実施形態では、網膜への栄養送達を増加させることにより、この処置は、既存の脈絡膜血管新生の後退を引き起こす。
【００４６】
従って、本発明は、多くの眼の障害に関連した肥厚化したブルッフ膜に焦点を合わせて、眼の障害（例えば、黄斑変性）を処置することを目的する。この肥厚化は、脂質および架橋したタンパク質の異常沈着の結果であり、ブルッフ膜を通した血管新生に先行し、続いて、出血、漿液の漏出および重篤な視覚低下が起こる。本明細書中に記載されるように、ブルッフ膜をまたがっての拡散における改善が達成され、それにより、眼の障害を有する個体において蓄積する脂質および架橋したタンパク質の障壁が低下して、シック低下の発生を防止する。特定の実施形態では、この膜の化学的組成が変更される。例えば、洗剤は、この膜における脂質を洗い流す。酵素は、この膜内のタンパク質を分解する。特定の実施形態では、本発明の方法は、ブルッフ膜をまたがった透過係数における増加、ならびに／またはブルッフ膜の高分子透過性および／もしくは酸素透過性をもたらす。
【００４７】
一般に、加齢したブルッフ膜の徴候または症状を有する個体は、不活性組織変更分子が例えば、全身的または局所的に投与される。いくつかの実施形態では、この不活性分子は、例えば蛍光性であることにより、活性化の前に、可視化可能である。この不活性分子の適切な分布に充分な時間の後に、この分子は、複数の組織（ブルッフ膜を含む）内に蓄積する。ブルッフ膜において一旦充分な量に達すると、この分子の可視化可能性は、組織変更分子を選択的に活性化するエネルギー源（例えば、光または超音波）を用いてブルッフ膜を正確に標的化するために用いられる。
【００４８】
特定の実施形態では、本発明は、（例えば、診断技術のための）ブルッフ膜の可視化のために有用である。すなわち、不活性蛍光化合物は、個体に投与され、そして（例えば、ブルッフ膜中の脂質を結合することにより）ブルッフ膜と会合する。（例えば、光の形態、またはより詳細には２光子照射の形態の）エネルギーは、不活性光活性化合物／ブルッフ膜の複合体に集束され、次いでこの不活性光活性化合物が活性化される。光活性化合物から放射されるエネルギー（例えば、光）は、ブルッフ膜の可視化を可能にする。特定の実施形態では、放出される光の量は、ブルッフ膜中の脂質の量に比例する。蛍光分子が、ケージングされた組織変更薬剤中に取り込まれている場合、ブルッフ膜の可視化の後に、分解物質の活性化が起こって、ブルッフ膜の制御された部分的分解がもたらされ得る。代替の実施形態では、可視化は、ブルッフ膜の構成要素の天然の自己蛍光活性を通して生じるか、および／またはＯＣＴドップラー法を通して生じる。
【００４９】
（ＩＩＩ．組織変更分子）
本発明は、（特定の実施形態では、眼における処置のための）眼組織への送達のために、組織変更分子を利用する。この組織変更分子は、拡散増強性、分解性、またはその両方であり得、そしてこれは好ましくは、この組織の物理的特性、化学的特性、またはその両方を変更する。拡散増強分子は、以下のいずれかにより、ブルッフ膜をまたがった拡散を増加させるように作用する：ａ）膜の厚さ自体を低下させること；および／またはｂ）ブルッフ膜内の沈着物の量を減少させること、および／もしくはブルッフ膜の化学的性質を変更することによる。これは、好ましくは、個体への投与の際には不活性であり、そしてエネルギー源へと曝露されると活性である。特定の実施形態では、この組織変更分子は、ケージングされている。他の特定の実施形態では、この組織変更分子は、分解酵素（例えば、コレステロールエステラーゼ、リパーゼ、マトリックスメタロプロテイナーゼ、または任意の酵素）、またはタンパク質（特に、好ましくはその成分のうちの１以上を分解することにより、例えば、ブルッフ膜をまたがった拡散を増加させ得るタンパク質）である。他の特定の実施形態では、この組織変更分子は、脂質沈着物および非脂質沈着物をブルッフ膜内から抽出し得る洗剤であり、この抽出は、ブルッフ膜をまたがった拡散を増加させる。
【００５０】
いくつかの組織変更分子は、少なくとも１つのアミノ酸残基を含み、そしてケージングによって不活性形態にあり、ここで、少なくとも１つのアミノ酸側鎖（例えば、システイン、アスパルテート、グルタメート、ヒスチジン、リジン、アスパラギン、グルタミン、アルギニン、セリン、トレオニン、チロシン、またはそれらの組み合わせ由来）は、光除去可能な保護基（例えば、少なくとも１つのクマリニル基、キノリン−２−オニル基、キサンテニル基、チオキサンテニル基、セレノキサンテニル基およびアントラセニル基、ならびに／またはスチルベニル基）を含む。別の実施形態では、この組織変更分子は、超音波造影剤（例えば、微小な泡またはリポソーム）中でのケージングを通して不活化される。アミノ酸残基を有さない他の組織改変分子（例えば、界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ））が当該分野で公知である。
【００５１】
この組織変更分子は、所望の組織において有効な濃度を提供するように処方される。いくつかの実施形態では、この組織変更分子は、非罹患組織中に蓄積するが、これは、この個体にとっては問題ではない。なぜなら、ブルッフ膜への活性化エネルギー源の正確な標的化により、この膜内で選択的に活性化されるからである。ケージングされた組織変更分子が蓄積する他の領域は、活性化エネルギーで処置されない；それゆえ、このケージングされた組織変更分子は不活性なままであり、腎臓および／または肝臓を介して除去される。特定の実施形態では、このケージングされた分子は、どのような様式でも、有害でも毒性でもなく、それにもかかわらず、身体から、好ましくは投与後約４８時間未満で、より好ましくは投与後約２４時間未満で、排出される。
【００５２】
いくつかの実施形態では、この組織変更分子は、ブルッフ膜内の特異的標的分子に結合し得る特異的結合リガンドにカップリングされる。この標的分子は、ブルッフ膜に対して内因性であってもよく、２光子照射を用いて標的分子を架橋することにより、ブルッフ膜へと選択的に送達されてもよい。これらの実施形態では、この組織変更分子は、より高濃度で標的組織へと送達される。特定の実施形態では、種々のタンパク質結合ドメイン（例えば、ロイシンジッパードメイン）は、組織変更分子と会合する。
【００５３】
（ＩＶ．処方物）
この組織変更分子は、所望の組織において有効濃度を提供するように処方される。いくつかの実施形態では、この組織変更分子は非罹患組織中に蓄積するが、これは、この個体にとっては問題ではない。なぜなら、ブルッフ膜へのこの活性化エネルギー減の正確な標的化により、この組織内で選択的に活性化されるからである。ケージングされた組織変更分子が蓄積する他の領域は、活性化エネルギーで処置されない；それゆえ、このケージングされた組織変更分子は不活性のままであり、腎臓および／または肝臓を介して除去される。いくつかの実施形態では、この組織変更分子は、この組織変更分子は、標的ブルッフ膜の特異的表面成分に結合し得る特異的結合リガンドにカップリングされるか、または所望により、標的組織へとより高濃度に送達するキャリアを用いて処方される。特定の実施形態では、種々のタンパク質結合ドメイン（例えば、ロイシンジッパードメイン）が、組織変更分子と会合される。
【００５４】
この処方物の性質は、投与形態および選択された分解分子の性質に、部分的に依存する。特定の組織変更化合物に適切な、任意の薬学的に受容可能な賦形剤またはそれらの組み合わせが用いられ得る。従って、この化合物は、水性組成物として、局所組成物として、経粘膜組成物または経皮組成物として、経口処方物または静脈内処方物中で、局所注射（例えば、眼周囲または眼内の）またはそれらの組み合わせにおいて、投与され得る。この処方物はまた、リポソームを含み得る。
【００５５】
（Ｖ．投与および投薬量）
この組織変更分子化合物は、広範な種々の方法のいずれかにおいて（例えば、経口的に、非経口的に、または直腸に）投与されてもよく、またはこの化合物は、（例えば、局所注射または眼周囲注射によって）眼内に直接的に配置されてもよい。非経口投与（例えば、静脈内、筋肉内、または皮下）が有用である。静脈内注射、眼周囲注射および眼内注射は、本発明またはその成分の送達のための特定の実施形態である。
【００５６】
組織変更分子の用量は、以下に依存して広範囲に変動し得る；投与形態；（例えば、リポソームの形態の）この分子が運ばれる処方物；またはこの分子が標的特異的リガンド（例えば、抗体または免疫学的に活性なフラグメント）に結合するか否か。一般的に認識されるように、組織変更分子の型、処方物、投与形態、および投薬量レベルの間には、関係が存在する。特定の組み合わせを合わせるためのこれらのパラメーターの調整が可能であり、慣用的である。
【００５７】
（ＶＩ．エネルギー源）
このエネルギー源は、不活性組織変更分子を活性にする任意の刺激を含む。これは、好ましくは、この不活性組織変更分子の活性化をもたらす。エネルギー源が当該分野で周知であるが、例示的な形態のエネルギー源としては、光または超音波が挙げられる。特定の実施形態では、２光子光化学が利用される。特定の実施形態では、単色光が利用される。
【００５８】
本発明におけるこの組織変更分子の有効な、選択的光活性化に使用される種々のパラメーターは、相互に関連している。それゆえ、この線量はまた、他のパラメーター（例えば、流束量、放射度、処置の持続時間、および用量の投与と治療照射との間の時間間隔）に関して調整されるべきである。これらのパラメーターの全ては、眼組織に対する顕著な損傷を伴わずに、視覚機能の増強を生じるように調整されるべきであり、当業者はどのようにしてそれを行うかを周知である。
【００５９】
２光子吸収に関連した組成物および方法は、当該分野で周知であるが、例示的な方法は、米国特許第６，２６７，９１３号、米国特許第６，４７２，５４１号、およびＷＯ  ００／３１５８８に記載される。これらはその全体が、本明細書中に参考として全て援用される。
【００６０】
（ＶＩＩ．光除去可能な保護基を有する側鎖を有するタンパク質の生成）
タンパク質は、多数のストラテジーを用いてケージングされ得る。ケージングは、ネイティブの、ケージングされていない分子を、ケージング基に対する反応性前駆体で処理することにより達成され得る。例えば、アミノ酸システインの側鎖は、システイン含有タンパク質をｏ−ニトロベンジルブロミドで処理することにより、光除去可能なｏ−ニトロベンジル基でケージングされ得る。ケージングタンパク質についての代替ストラテジーとしては、適切なケージングされるアミノ酸で出発する固相ペプチド合成を用いるか、ナンセンス抑制に基づく方法を用いたタンパク質への直接的翻訳取り込みによるか、または栄養要求性株の細菌にケージングされるアミノ酸を補充することによる、タンパク質の化学合成が挙げられる。
【００６１】
特定の実施形態では、組織変更分子は、ブルッフ膜への局在の前に不活性になるようにして、そしてエネルギー源への曝露により活性化されるように、ケージングされる。特定の実施形態では、この組織変更分子は、アミノ酸側鎖を有するタンパク質である。保護基（例えば、光除去可能な保護基）を用いた改変に従うアミノ酸としては、システイン、アスパルテート、グルタメート、ヒスチジン、リジン、アスパラギン、グルタミン、アルギニン、セリン、トレオニン、またはチロシンが挙げられる。光除去可能な保護基の例としては、ｏ−ニトロベンジル、デシル、フェナシル、トランス−ｏ−シンナモイル、クマリニル、キノリン−２−オニル、キサンテニル、チオキサンテニル、セレノキサンテニルおよびアントラセニル、スチルベニル、ならびに／またはそれらの誘導体が挙げられる。これらの保護基は、本明細書中の他の箇所に記載されるような側鎖に付加される。
【００６２】
（ＶＩＩＩ．黄斑変性）
光は、眼の透明な前表面（角膜）を通って入り、瞳孔の開口部を通って通過し、水晶体を通り、そして最終的に、眼の後部の網膜によって受け取られる。網膜は、眼球の内側に並んだ複層構造体である。網膜は、光を電気的インパルスに変換して脳に伝えて視力を生じる特化細胞から構成される。
【００６３】
網膜の中心には、黄斑と呼ばれる、小さな、極めて特化した領域が存在する。これは、直径が約１／８インチであり、ほぼ、この文字「Ｏ」のサイズである。黄斑は、最も高密に詰められた光受容体を有し、これは、光を集める細胞である。これらは、杆状体および網膜錐体から構成され、これらはまた、色を知覚する。この黄斑には、酸素が豊富な血液が供給され、この血液は、細胞に栄養を与える。
【００６４】
黄斑がインタクトな場合、個体は、その自体の前にあるあらゆるものの微細な詳細を直接見る。黄斑変性は、この小さい構造体の悪化または破壊を含む。中心視力は、不鮮明または消失し、そしてまっすぐの線が、波形または破線に見える。画像の縁部は見られるが、この画像の中央にあるものは見られない。そのうち、色覚は低下する。なぜなら、この網膜錐体は損傷を受けるからである。しかし、この患者は、全盲を経験せず、たいていは周辺視力の環が存在する。
【００６５】
（ＩＸ．ドルーゼン）
萎縮性ＡＭＤの主な特徴は、ブルッフ膜の局在した肥厚化である、黄斑ドルーゼンの蓄積である。ブルッフ膜（基底線形沈着物）のびまん性肥厚化は、脈絡膜血管新生の最良の組織病理学的予測物である。このドルーゼンは、小胞物質（脂質）および架橋されたタンパク質から主に構成される。
【００６６】
ドルーゼンの存在は、黄斑変性の一般的特徴である。特定の実施形態では、ドルーゼンまたは肥厚化したブルッフ膜を有する少なくとも１つの眼を有する個体は、本明細書中に記載される方法で処置される。
【実施例】
【００６７】
以下の実施例は、例示のために提供され、決して本発明の範囲を限定することを意図しない。
【００６８】
（実施例１：ケージングされた組織変更分子）
ケージングされた組織変更酵素を、このタンパク質内の種々のアミノ酸側鎖を、光除去可能な保護基を用いてマスクすることにより構築する。このような基の例は、ｏ−ニトロベンジル、デシル、フェナシル、トランス−ｏ−シンナモイル、クマリニル、キノリン−２−オニル、キサンテニル、チオキサンテニル、セレノキサンテニルおよびアントラセニル、スチルベニルならびにそれらの誘導体である。これらの基は、総化学合成（ネイティブな化学連結を含む）、ナンセンス抑制法、または翻訳後修飾によって、これらのタンパク質に導入される。ブルッフ膜の既知のマトリックス成分に基づいて、コレステロールエステラーゼ、リパーゼ、マトリックスメタロプロテイナーゼは、ブルッフ膜の一部を分解し、そして膜内外での拡散を改善する。これらの酵素の「ケージング」は、これらを不活化する。従って、全身投与後、これらは循環し、組織に結合し、次いでそれらの不活性形態で除去される。ブルッフ膜への正確に集束させた光エネルギーの適用（２光子光化学）は、「ケージ保護基」の除去およびブルッフ膜内の酵素の選択的活性化を可能にする。一旦活性化されると、制御された分解が生じ、そして膜内外の拡散が増強される。このことは、脈絡膜血管新生の発生の確率を低下させる。これはまた、肥厚化したブルッフ膜を有する高齢の個体における、暗順応および夜間視力を改善し得る。これはまた、確立された脈絡膜血管新生の後退を引き起こし得る。
【００６９】
あるいは、温和な洗剤分子（例えば、界面活性剤）は、例えば、ｏ−ニトロベンジル、デシル、フェナシル、トランス−ｏ−シンナモイル、クマリニル、キノリン−２−オニル、キサンテニル、チオキサンテニル、セレノキサンテニルおよびアントラセニル、ならびに／またはスチルベニル部分およびそれらの誘導体を用いて「ケージング」されており、照射（例えば、２光子照射）によって同様に活性化されて、ブルッフ膜の選択的生化学的改変をもたらす。酵素処置と同様に、これらの活性化された洗剤分子は、加齢したブルッフ膜の拡散障壁を変更して、視覚低下の確率を低下させ、そして／または視覚機能を改善する。
【００７０】
（実施例２：代替の不活化実施形態）
分解酵素（マトリックスメタロプロテイナーゼ、コレステロールエステラーゼ、リパーゼ、セリンプロテアーゼ）はまた、超音波造影剤（例えば、微小な泡およびリポソーム）中に取り込まれ得る。これらの造影剤内に保持されると、これらの分解分子は不活性である。ブルッフ膜への超音波エネルギーの正確な適用により、造影剤の空洞形成が引き起こされ、そして分解酵素がブルッフ膜内に放出される。上記の実施例と同様に、酵素放出は、膜内外の拡散を改善し、そして視覚機能を潜在的に改善する。超音波によって活性化されなければ、眼球外の残りの封入された不活性酵素は、副次的な組織変更を引き起こさずに、身体から除去される。
【００７１】
（実施例３：標的化の改善）
上記の実施例において投与される酵素の多くは、ブルッフ膜および／またはＲＰＥ中に全て存在する。さらに、これらは、循環中に存在する。ブルッフ膜内のこれらの酵素の局所濃度を上昇させるために、これらの酵素を、種々のタンパク質結合ドメイン（例えば、ロイシンジッパードメイン、キチン結合ドメイン、またはＳｒｃ相同性２（ＳＨ２）ドメイン）に融合し得る。当業者は、ヘテロダイマージッパーが、酸性パートナーおよび塩基性パートナーからなり、そしてダイマーおよびより高次の凝集物として存在するコイルドコイルへと自己アセンブリし得ることを認識する。従って、いくつかの実施形態では、酸性（塩基性）ロイシンジッパードメインは、２光子照射によって開始される光架橋を介してブルッフ膜へと選択的に送達され得る。特定の実施形態では、この酵素を、塩基性（酸性）ロイシンジッパードメインへと融合させ、例えば、全身的に（例えば、経口的にまたは静脈内に）、または注射（例えば、眼内および／または眼周囲の注射）により投与して、ブルッフ膜を含む細胞外組織へと分布させる。ブルッフ膜内でのヘテロダイマーの形成は、分解酵素の局初濃度を上昇させ、次いで、膜内外の拡散特性を増強する。これらの分解酵素の濃度は他の組織内では低いままであるので、所望でない副次的な組織変更は存在しない。さらに、実施例１において概説される方法を用いて、光活性基（例えば、ベンゾフェニル、フェニルアジド、トリフルオロメチルフェニルジアジリニル、およびそれらの誘導体）を含む酵素が生成され得る。このような酵素の全身投与、続いてブルッフ膜の選択的照射は、これらの酵素とブルッフ膜との間の光架橋を開始し、これらの分解酵素の濃度を上昇させる。他の実施形態では、タンパク質結合ドメインは、例えば、組織上または組織内のタンパク質へと結合することにより、標的化組織変更分子と、標的化されるべき組織との会合を促進する。
【００７２】
（実施例４：眼の障害の処置）
眼の障害（例えば、（例示的な実施形態において）萎縮性加齢性黄斑変性）を有する患者に、光活性化によってブルッフ膜を変更し得る、ケージングされた、不活化酵素を投与する。特定の実施形態では、この投与は、全身投与（例えば、静脈内または経口的）、または注射（例えば、眼内および／または眼周囲での注射）による投与である。他の特定の実施形態では、このケージングされた、不活化酵素を、標識する（例えば、蛍光標識する）が、代替の実施形態では、このケージングされた不活化酵素は標識されない。
【００７３】
例示の目的のみでは、このケージングされた不活化分子は、蛍光性である。投与の数分後、ケージングされた分解複合体を、２光子照射により、黄斑ブルッフ膜において見る。黄斑ブルッフ膜中の蛍光標識に焦点を合わせた後、より高線量の２光子照射を適用して、この酵素を解放し、そしてブルッフ膜の部分的分解を開始させる。全身に分布した、勝者されていないケージングされた酵素は、その不活性形態で排出される。標識されたブルッフ膜の２光子照射による観察および分解物質の光活性化を、眼の構造体に対して無毒性のレベルで両方とも実施する。
【００７４】
あるいは、このケージングされた分解酵素複合体に結合していない蛍光標識を、全身投与する。約１０〜６０分後、このケージングされた分解性分子複合体を投与する。約５分後、ブルッフ膜を、蛍光標識の２光子照射によって可視化する。次いで、より高用量の２光子照射を用いて、ケージングされた分解分子複合体を活性化する。
【００７５】
別の実施形態では、ケージングされた分解酵素複合体に結合していない蛍光標識を全身投与する。約１０〜６０分後、２光子照射を用いて、ブルッフ膜内の蛍光の量を可視化する。蛍光の定量は、萎縮性黄斑変性の重篤度の診断指標である。
【００７６】
本発明の別の実施形態では、標的化された組織（例えば、ブルッフ膜）からの固有の光散乱に基づく、処置されるべき組織を同定する方法が存在する。可視光または赤外光を用いた光学干渉断層撮影法（ＯＣＴ）を用いて、眼におけるブルッフ膜の物理的性質または化学的性質における変更を検出する。ＯＣＴと外因性色素とを合わせることにより、ＯＣＴを用いて、眼内の構造体だけでなく、ドップラーＯＣＴによる構造体の移動度および化学的性質をも見ることができる。この実施形態では、ＯＣＴおよび／またはその改変版を用いて、ガイドされた処置を許容する、改変された特性を有するブルッフ膜の性質を決定する。処置は、ブルッフ膜内またはこの膜の付近の内因性物質または外因性物質の、光ケージングされていないか、または光活性化もしくは光剥離であり得る。
【００７７】
ブルッフ膜を標的化する例示的な実施形態を、図１に示す。
【００７８】
（参考文献）
本明細書中で言及した全ての特許および刊行物は、本発明の関係する分野の当業者のレベルを示す。全ての特許および刊行物は、あたかも各個々の刊行物が、参考として援用されると具体的および個々に示されたのと同じ程度に、本明細書中に参考として援用される。
【００７９】
米国特許第５，７５６，５４１号；
米国特許第５，７９８，３４９号；
米国特許第５，９１０，５１０号；
米国特許第５，９３５，９４２号；
米国特許第６，１２８，５２５号；
米国特許第６，１４０，３１４号；
米国特許第６，２２５，３０３号；
米国特許第６，２４８，７２７号；
米国特許第６，２６７，９１３号；
米国特許第６，４７２，５４１号；
ＷＯ  ００／３１５８８。
【図面の簡単な説明】
【００８０】
【図１】図１は、本発明の例示的な実施形態における、ブルッフ膜脂質の光誘導性の組織変更を例示する。これは、全身投与後に、ケージングされた拡散増強分子が、脈絡毛細管板からブルッフ膜へと拡散することを示す。２光子照射は、保護基を正確に脱保護し、そしてこの拡散増強分子は、ブルッフ膜内で特異的に活性化される。
【図１】
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【国際調査報告】
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