(57)【要約】本発明は、薬剤により誘導されるCYP450生理活性肝毒性に対する肝臓治療効果に有用な組成物、アムラの抽出物と任意の薬学上許容しうる添加物とを含む前記組成物および肝毒性を誘導する治療薬の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アムラ(Emblica officinalis)からの抽出物および任意の薬学上許容しうる添加物を含む、薬剤により誘導されるCYP450生理活性肝毒性に対する肝臓治療効果に有用な組成物。
【請求項２】
前記添加物が、タンパク質を含む栄養素、炭水化物、糖、タルク、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、炭酸カルシウム、デンプン-ゼラチンペースト、および／または薬学上許容しうるキャリアー、賦形剤、希釈剤、または溶媒からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物が、経口投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記抽出物と添加物との比が、1:1〜1:10の間の範囲である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記添加物が、前記抽出物の肝臓治療効果に影響を与えない、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記抽出物が、水性、水性-エタノール性、エタノール性、ケトン性、エーテル性、ハロゲン化溶媒を含む群から選択される溶媒中で調製される、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記組成物が、8.5〜15%の範囲のタンニン含有量を示す、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
経口経路用の組成物が、カプセル、錠剤、シロップ剤、濃縮物、粉末、顆粒剤、煙霧質、および／またはビーズの形態である、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
アムラ(Emblica officinalis)の抽出物および任意の薬学上許容しうる添加物を含む組成物の調製の使用であって、前記抽出物を得る為に、極性溶媒を果実アムラに加え、薬学上許容しうる添加物を任意に加える工程を含む使用。
【請求項１０】
前記果実を、極性溶媒中、室温で約15-25時間インキュベートする、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
前記抽出物が、アムラの生および／または半乾燥果実由来である、請求項９に記載の使用。
【請求項１２】
前記抽出物と添加物との比が、1:1〜1:10の範囲である、請求項９に記載の使用。
【請求項１３】
前記抽出物が、水性、水性-エタノール性、エタノール性、ケトン性、エーテル性、ハロゲン化溶媒を含む群から選択される溶媒中で調製される、請求項９に記載の使用。
【請求項１４】
経口経路用の組成物が、カプセル、錠剤、シロップ剤、濃縮物、粉末、顆粒剤、煙霧質、および／またはビーズの形態である、請求項９に記載の使用。
【請求項１５】
薬剤によって誘導される肝毒性を媒介するCYP450およびフリーラジカルに対して、患者を治療するための、アムラ(Emblica officinalis)の抽出物および任意の薬学上許容しうる添加物を含む組成物の使用であって、以下の工程を含む使用。
(a)肝細胞へ薬剤毒性を誘導する工程、
(b)前記組成物を薬剤肝毒性に曝された前記肝細胞に添加する工程、
(c)前記組成物の肝臓治療効果を判断する為に、肝臓/血清マーカーレベルの変化を測定する工程。
【請求項１６】
前記使用が、抗-TB薬剤によって生じる肝毒性に対して特に有効である、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
前記組成物が、CYP 450による生理活性に非依存性である肝毒性に対しては、有効でない、請求項１５に記載の使用。
【請求項１８】
前記組成物が、経口投与される、請求項１５に記載の使用。
【請求項１９】
前記経口経路用の組成物が、カプセル、錠剤、シロップ剤、濃縮物、粉末、顆粒剤、煙霧質、および／またはビーズの形態である、請求項１５に記載の使用。
【請求項２０】
前記組成物が、動物およびヒトの治療に有用である、請求項１５に記載の使用。
【請求項２１】
前記組成物が、健康への有害反応を有しない、請求項１５に記載の使用。
【請求項２２】
前記薬剤が、アセトアミノフェン、CCl4および抗-TB薬剤を含む群から選択される、請求項１５に記載の使用。
【請求項２３】
前記抗-TB薬剤が、リファンピシン、ピラジンアミドおよびイソニアジドを含む群から選択される、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
前記組成物が、ビルリビンの高レベルのコントロールに加えて、肝臓障害指数としての役割を果たす、血清/肝臓マーカーにより示される、臨床病理学上の症状の異常な上昇をコントロールする、請求項１５に記載の使用。
【請求項２５】
理想的な洞察の為の肝細胞培養である、請求項１５に記載の使用。
【請求項２６】
前記薬剤が、肝細胞において有効で再現できる結果を示す細胞毒素のレベルで使用される、請求項１５に記載の使用。
【請求項２７】
前記組成物が、動物およびヒトの治療に有用である、請求項１５に記載の使用。
【請求項２８】
前記組成物が、健康への有害反応を有しない、請求項１５に記載の使用。
【請求項２９】
前記組成物が、肝細胞増殖力の回復を示す、請求項１５に記載の使用。
【請求項３０】
前記使用が、細胞膜漏出の防止を示す、請求項１５に記載の使用。
【請求項３１】
前記組成物が、リファンピシンおよびイソニアジドの抗-TB薬剤の組み合わせ効果に対して、約96%の肝臓治療効果を示す、請求項１５に記載の使用。
【請求項３２】
前記組成物が、肝細胞からのグルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ(GPT)の漏出を逆転させる、請求項１５に記載の使用。
【請求項３３】
前記組成物が、リファンピシン、イソニアジドおよびピラジンアミドの抗-TB薬剤の組み合わせ効果に対して、約96%の肝臓治療効果を示す、請求項１５に記載の使用。
【請求項３４】
前記組成物が、抗-TB薬剤であるリファンピシン、イソニアジドおよびピラジンアミドの組み合わせによって誘導される脂質過酸化(LPO)の上昇に対して、約94%の肝臓治療効果を示す、請求項１５に記載の使用。
【請求項３５】
前記組成物が、抗-TB薬剤であるリファンピシン、イソニアジドおよびピラジンアミドの組み合わせに対して、肝臓治療効果としての血清ビルリビンの約96%の減少を示す、請求項１５に記載の使用。
【請求項３６】
前記使用が、肝臓機能を正常に回復するのに役立つ、請求項１５に記載の使用。
【請求項３７】
前記組成物の投薬の範囲が、50-250mg/kgの範囲である、請求項１５に記載の使用。
【請求項３８】
前記使用が、抗-TB薬剤を含む肝臓機能障害を誘導する薬剤に対する肝臓治療効果の為の使用である、請求項１５に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬剤によって誘導されるCYP450生理活性肝毒性に対する肝臓治療効果に有用な組成物、アムラ(Emblica officinalis)の抽出物と薬学上許容しうる任意の添加物とを含む、前記組成物および肝毒性を誘導する治療薬の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
肝臓異常は、世界の都会および田舎の地域の両方において、未だ主な健康災害である。我々の肝毒性への知識の科学的進歩および指導は、医療の従来のシステムにより提供していたにもかかわらず、我々は、薬剤の種類によって生じる、より重大な肝臓障害を治癒する、いかなる有効な存在を未だ有していない。The Indian Council of Medical Researchは、ニューデリーの従来の医療における調査プログラムを訂正、複合基準研究の為の6つの主なエリアのうちの一つとして、肝臓疾患を採用した。
【０００３】
前記肝臓異常は、急性または慢性肝炎(炎症性肝臓疾患)、肝臓症(非炎症性異常)に分類される。前記急性条件は、しばしば重症の予後の肝性昏睡だけでなく肝硬変によっても起こる。肝硬変は、世界における上位10個の致命的な疾患の一つとされている。付随の素因を与えやすい条件において、化学薬剤および薬剤(生体外物質)、多くの天然化合物、ウイルス性および細菌性病原等の様々な医薬剤の人への暴露は、肝臓不全の原因と考えられる。
【０００４】
投与の繰り返しにより肝臓毒性を生成する薬剤の大きなグループが存在する。前記親薬剤の生成物は有毒なので、これらは、主として生理活性により伝達される。他の薬剤は、膜断裂またはDNA破壊の原因により、また、タンパク質合成の妨害により、毒性を誘導する。重要な薬剤のカテゴリーの一つは、定期的な摂取により肝毒性の原因となる抗-TB薬剤である。
【０００５】
結核は、熱帯、亜熱帯および寒冷地域等の世界中で流行している。前記疾患はしばしば慢性であり、抗-TB薬剤が原因の前記毒性が治療上の問題を誘導するので、結核の化学療法は、重要であり興味深いものである。黄疸から前記肝臓の線維化まで及ぶ従来の抗−微生物医薬剤により、前記肝臓異常は、結核治療の間に誘導される。様々な症状が疾患の慢性型へ進行し、または激症の過程を有し、および致命的となる。３つの薬剤、すなわち、リファンピシン、ピラジンアミドおよびイソニアジドは、第１に選択される結核の治療に含まれる。これらは、長期間投与しなければならず、毒性に至る肝臓機能障害を誘導する。
【０００６】
黄疸は、それらの有害反応が最も顕著に発生するものである。特有の病理は、架橋および多小葉性ネクロシスである。これら薬剤の過敏症反応は、肝炎を導く。多薬剤治療もまた、特有の問題を引き起こす。リファンピシンは、肝臓障害の原因となる。肝臓機能における疾患は、イソニアジドと結合した場合により大きくなる。ピラジンアミドは、前記３つの抗-TB薬剤において最も有毒である。肝臓の機能障害症状後、前記薬剤の組み合わせを継続することは、さらに前記障害の程度を増加させる傾向を示した。死に至る酷い肝臓障害が、これらの薬剤を投与された患者において報告されている(非特許文献1)。
【０００７】
我々の従来の医療システムにおいて(Ayurveda)、様々な薬用植物の使用が、肝臓異常の軽減に処方されている。肝防護の効果を有する100以上の植物由来の40近くの土着の多草(polyherbal)製剤が存在する。しかし、抗-TB薬剤の処方による障害から肝臓を守ることが可能な治療医薬剤として、明記されたものは無い。これは、生理活性の結果として毒性を生じる薬剤により誘導される肝臓障害に対して、特に焦点を当てられるように見える植物/植物産物の評価に関する報告が不十分であると言う事実をある程度負っている。
【０００８】
従って、特に前記抗-TB薬剤によって誘導される肝臓異常の軽減に、比較的安全とみなされる草の存在の発展に、非常に興味がもたれている。
【０００９】
Emblica officinalis Gaertn.(ヒンディー語:アムラ)(トウダイグサ科)は、インド、セイロン、マラヤおよび中国において普及している。この木は、インドの混合落葉性森林において一般的であり、丘、耕作された庭および家庭の庭において、4500フィートまで高くなる。それは、小型から中型の落葉樹であり、果実は、くぼんだ球状であり、直径１/２から1インチ、多肉質で６つのトリゴノウス(trigonows)種を含む。前記果実はすっぱく、時折生で食される。前記果肉は、水分81.2％、タンパク質0.5％、脂肪0.1％、鉱物質0.7％、Ca0.005％、リン0.02％および鉄1.2mg/100gm、ニコチン酸0.2mg/100gm、ビタミンC600mg/100mgを含む(非特許文献２)。強力なビタミンCのような活性は、低分子量加水分解性(hydrolysable)タンニンに見られる。エンブリカニン(emblicanin)-A、エンブリカニン-B、プニグルコニン(punigluconin)およびペダンクラギン(pedunculagin)のような４つの化合物は、前記果実の果皮から単離される。はじめの２つの化合物は、ガロエラジ(galloellagi)-タンニンに天然に存在している(非特許文献３、非特許文献４)。
【００１０】
前記果実は、苦く、冷却性および利尿性がある。乾燥果実は、出血、下痢および赤痢に有用である。それは、貧血、肝臓疾患および消化不良に広く用いられている。前記果実から調製される発酵液は、黄疸に用いられる。果実は、アユルヴェディックラサヤン(Ayurvedic rasayan)とされている(回復剤、生物反応調節剤)(非特許文献５)。様々な薬理学特性も報告されている。葉のエキスには、抗炎症性(非特許文献６)、酸化防止剤 (非特許文献７)、脂質低下(非特許文献８)、細胞発育抑圧(非特許文献９)が発見されている。薬剤、すなわち、肝臓毒性を誘導する四塩化炭素に対する、アムラ抽出物の肝保護活性が証明されている(非特許文献１０、非特許文献１１)。
【００１１】
Sharma等による論文(非特許文献１２)は、アムラがベンゾピリン(benzopyrines)によって誘導された遺伝子毒性を防ぐことを示唆している。ベンゾピレンは、CYP 450の1A1に対する特定の基質である環境上の顕著な発癌物質の１つである。両方が染色体異常誘発性(clastogenic)である。しかし、抗-TB薬剤を含む前記薬剤によって発生した前記肝臓毒性は、多数のCYPイソ形、最も顕著であるCYP450 3A4を通じて、それらの生理活性に大きくに依存する。CYPレベルを減少する、または小核形成を逆転させるいくつかの医薬剤があるが、肝保護性ではない。例をあげる為に、出願人は、CYP 450 1A1の特別なインヒビターであるピペリン分子を開発したが、肝保護性ではない。同様に、遺伝子毒性を後退させるいくつかの公知化合物があるが、肝保護性ではない。従って、CYP 1A1における減少または染色体異常誘発能(clastrogencity)の後退は、肝保護として解釈できない。例えば、黄疸(肝-胆汁機能障害)は、遺伝子毒性とは関連しておらず、むしろ、肝臓毒性の開始における初期事象である。本論においては、CYP減少または遺伝子毒性との偶然の関係は、肝毒性の症状で通常見られる臨床病理学のアテニュエーションと関係を有しない。
【００１２】
本発明において、出願人は、血清/肝臓中の臨床パラメーターによって示される、多数のCYPイソ形による生理活性化された、全ての薬剤によって発生する肝毒性に対する保護を提供する。さらに、我々は、遺伝子毒性の症状が現れなかったとしても、毒性を示す前記臨床パラメーターを逆転させることを請求する。例えば、肝臓細胞の一次単層培養に現れるように、血清ビリルビンの異常上昇における減少は、膜安定化のような他の細胞因子が原因となる予防効果の結果である、
このように、我々は、肝保護性のプロフィールに相互に関連する臨床プロフィール(血清/肝臓パラメーター)において明らかとなる系統的な効果に関して、優れているアムラからの調製を請求する。
【非特許文献１】Slivka, IL, Farmakol Toksikol-1989: 52;82-85
【非特許文献２】Satyavati et al (ed.), Medicinal plants of India, ICMR, new Delhi, 1976, p 377
【非特許文献３】Ghosal等, IndJChem, 1996:353:941-948
【非特許文献４】Bhattacharya等, Phytomedicine, 2000: 7: 173-175
【非特許文献５】Sharma P.V. Dravyaguna vijnana, Chaukhamba Sanskrit Sansthan, Varanasi, 1978
【非特許文献６】Summanen等, planta Medica, 1993:59: 666
【非特許文献７】Jose.and Kuttan, Clin. Biochem. Nutr, 1995:19:63-70
【非特許文献８】Mathw:eta,JEthnopharmacol, 1996:50 :61-68
【非特許文献９】Psatima等, ACS Symp. Ser, 1998, p701)
【非特許文献１０】Jose JK & Kutten R, J. Ethnopharmacology 2000:72:135-40
【非特許文献１１】Bhattacharya等, Phytomerdicine 2000:7:173-5
【非特許文献１２】SharmaHum Exp. toxicol 2000:19; 337-84
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明の目的
本発明の主な目的は、薬剤から誘導されるCYP450生理活性肝毒性に対する、肝臓治療組成物を開示することである。
【００１４】
本発明の他の主な目的は、抗-TB薬剤から誘導されるCYP450生理活性肝毒性に対する、肝臓治療組成物を開示することである。
【００１５】
更なる本発明の他の目的は、肝臓治療効果の為の、果実アムラ(Emblica officinalis)からの組成物を開示することである。
【００１６】
更なる本発明の他の目的は、CYP 450生理活性肝毒性に対する肝臓治療効果の為の、果実アムラ由来組成物を開示することである。
【００１７】
更なる本発明の他の目的は、果実アムラの抽出物の調製の使用を開示することである。
【００１８】
更なる本発明の他の目的は、アムラの抽出物を含む組成物を用いて、薬剤によって誘導される肝毒性を媒介するCYP450およびフリーラジカルに対して、患者を治療するための使用を開示することである。
【００１９】
更なる本発明の他の目的は、果実アムラの抽出物の効果を理解する為に、肝細胞を用いる使用を開示することである。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
発明の概要
本発明は、薬剤によって誘導されるCYP 450生理活性肝毒性に対する肝臓治療効果に有用な組成物、アムラの抽出物と任意の薬学上許容しうる添加物とを含む前記組成物、および肝毒性を誘導する治療薬の使用に関する。
【００２１】
本発明の詳細
さらに、本発明は、薬剤によって誘導されるCYP 450生理活性肝毒性に対する肝臓治療効果に有用な組成物、アムラの抽出物と任意の薬学上許容しうる添加物とを含む前記組成物、および肝毒性を誘導する治療薬の使用に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
本発明の一実施形態において、前記組成物は、薬剤によって誘導されるCYP 450生理活性肝毒性に対する肝臓治療効果に有用な組成物であり、アムラの抽出物と任意の薬学上許容しうる添加物とを含む。
【００２３】
本発明の他の実施形態において、前記添加物は、タンパク質を含む栄養素、炭水化物、糖、タルク、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、炭酸カルシウム、デンプン-ゼラチンペースト、および／または薬学上許容しうるキャリアー、賦形剤、希釈剤、または溶媒からなる群から選択される。
【００２４】
さらに本発明の他の実施形態において、前記組成物は経口投与される。
【００２５】
さらに本発明の他の実施形態において、前記抽出物と添加物との比は、1:1〜1:10の範囲である。
【００２６】
さらに本発明の他の実施形態において、前記添加物は、前記抽出物の肝臓治療効果に影響を与えない。
【００２７】
さらに本発明の他の実施形態において、前記抽出物は、水性、水性-エタノール性、エタノール性、ケトン性、エーテル性、ハロゲン化溶媒を含む群から選択される溶媒中で調製される。
【００２８】
さらに本発明の他の実施形態において、前記組成物は、8.5〜15%の割合のタンニン含有量を示す。
【００２９】
さらに本発明の他の実施形態において、前記経口経路用の組成物は、カプセル、錠剤、シロップ剤、濃縮物、粉末、顆粒剤、煙霧質、および／またはビーズの形態である。
【００３０】
さらに本発明の実施形態において、アムラ抽出物と任意の薬学上許容しうる添加物とを含む組成物の調製の使用であり、前記使用は、前記抽出物を得る為に、極性溶媒を果実アムラに加る工程、および、薬学上許容しうる添加物を任意に加える工程を含む。
【００３１】
さらに本発明の他の実施形態において、前記果実は、極性溶媒中、室温で約15-25時間インキュベートする。
【００３２】
さらに本発明の他の実施形態において、前記抽出物は、アムラの生および／または半乾燥果実由来である。
【００３３】
さらに本発明の他の実施形態において、前記抽出物と添加物との比は、1:1〜1:10の範囲である。
【００３４】
さらに本発明の他の実施形態において、前記抽出物は、水性、水性-エタノール性、エタノール性、ケトン性、エーテル性、ハロゲン化溶媒を含む群から選択される溶媒中で調製される。
【００３５】
さらに本発明の他の実施形態において、前記経口経路用の組成物は、カプセル、錠剤、シロップ剤、濃縮物、粉末、顆粒剤、煙霧質、および／またはビーズの形態である。
【００３６】
さらに本発明の実施形態において、アムラの抽出物と任意の薬学上許容しうる添加物とを含む組成物を使用して、薬剤によって誘導される肝毒性を媒介するCYP450およびフリーラジカルに対して、患者を治療するための使用である。
【００３７】
本発明の他の実施形態において、肝細胞における薬剤毒性を誘導する。
【００３８】
さらに本発明の他の実施形態において、前記組成物を薬剤肝毒性にさらされた前記肝細胞に添加する。
【００３９】
さらに本発明の他の実施形態において、前記組成物の肝臓治療効果を評価する為に、肝臓/血清マーカーのレベルの変化を測定する。
【００４０】
さらに本発明の他の実施形態において、前記使用は、抗-TB薬剤によって生じる肝毒性に対して特に有効である。
【００４１】
さらに本発明の他の実施形態において、前記組成物は、CYP 450による生理活性に非依存である肝毒性に対しては有効でない。
【００４２】
さらに本発明の他の実施形態において、前記組成物は、経口投与される。
【００４３】
さらに本発明の他の実施形態において、前記経口経路用の組成物は、カプセル、錠剤、シロップ剤、濃縮物、粉末、顆粒剤、煙霧質、および／またはビーズの形態である。
【００４４】
さらに本発明の他の実施形態において、前記組成物は、動物およびヒトの治療に有用である。
【００４５】
さらに本発明の他の実施形態において、前記組成物は、健康への有害反応を有しない。
【００４６】
さらに本発明の他の実施形態において、前記薬剤は、アセトアミノフェン、CCl4および抗-TB薬剤を含む群から選択される。
【００４７】
さらに本発明の他の実施形態において、前記抗-TB薬剤は、リファンピシン、ピラジンアミドおよびイソニアジドを含む群から選択される。
【００４８】
さらに本発明の他の実施形態において、前記組成物は、高レベルのビルリビンのコントロールに加えて、肝臓障害指数としての役割を果たす血清/肝臓マーカーにより示される臨床の病理学上の症状における異常上昇をコントロールする。
【００４９】
さらに本発明の他の実施形態において、前記使用は、理想的な洞察の為の肝細胞培養である。
【００５０】
さらに本発明の他の実施形態において、前記薬剤は、肝細胞において有効で再現できる結果を示す細胞毒素レベルで使用される。
【００５１】
さらに本発明の他の実施形態において、前記組成物は、動物およびヒトの治療に有用である。
【００５２】
さらに本発明の他の実施形態において、前記組成物は、健康への有害反応を有しない。
【００５３】
さらに本発明の他の実施形態において、前記組成物は、肝細胞増殖力の回復を示す。
【００５４】
さらに本発明の他の実施形態において、前記使用は、細胞膜漏出の防止を示す。
【００５５】
さらに本発明の他の実施形態において、前記組成物は、リファンピシンおよびイソニアジドの抗-TB薬剤の組み合わせ効果に対して、約96%の肝臓治療効果を示す。
【００５６】
さらに本発明の他の実施形態において、前記組成物は、肝細胞からのグルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ(GPT)の漏出を後退させる。
【００５７】
さらに本発明の他の実施形態において、前記組成物は、リファンピシン、イソニアジドおよびピラジンアミドの抗-TB薬剤の組み合わせ効果に対して、約96%の肝臓治療効果を示す。
【００５８】
さらに本発明の他の実施形態において、前記組成物は、リファンピシン、イソニアジドおよびピラジンアミドの抗-TB薬剤の組み合わせによって誘導される脂質過酸化(LPO)の上昇に対して、約94%の肝臓治療効果を示す。
【００５９】
さらに本発明の他の実施形態において、前記組成物は、リファンピシン、イソニアジドおよびピラジンアミドの抗-TB薬剤の組み合わせに対する肝臓治療効果として、血清ビルリビンの約96%の減少を示す。
【００６０】
さらに本発明の他の実施形態において、前記使用は、肝臓機能を正常に回復するのに役立つ。
【００６１】
さらに本発明の他の実施形態において、前記組成物の投薬の範囲は、50-250 mg/kgである。
【００６２】
さらに本発明の他の実施形態において、前記使用は、抗-TB薬剤を含む、肝臓機能障害を誘導する薬剤に対する肝臓治療効果の為の使用である。
【００６３】
さらに本発明の実施形態において、出願人は、血清/肝臓中の臨床のパラメーターによって示される多数のCYPイソ形により生理活性化される、全ての薬剤によって生成される肝毒性に対する保護を提供する。さらに、遺伝子毒性の症状が現れなかった場合でも、毒性を示す前記臨床のパラメーターを後退させることを請求する。例えば、肝臓細胞の一次単層培養に現れるように、血清ビリルビンの異常上昇における減少は、膜安定化のような他の細胞因子が原因となる予防効果の結果である。
【００６４】
さらに、出願人は、アムラが、CYP450生理活性肝毒性に限定される、薬剤に誘導される肝毒性を治療することを証明する調査に、専門的知識および長い年月を費やした。
【００６５】
従って、出願人は、肝保護性のプロフィールに相互に関連する臨床プロフィール(血清/肝臓パラメーター)において明らかとなる系統的な効果に関して、優れているアムラからの調製を請求する。
【００６６】
さらに本発明の実施形態において、それは、肝臓毒性を誘導する抗-TB薬剤に特に関連する適切な薬剤の生理活性の結果として、毒性を誘導する薬剤に対する正常な肝臓機能を回復するような調製物、調製の使用および生成物の使用に関する。本発明の組成物および方法は、組織の生物学的防御機構を増加し、抗-TB薬剤の長引いた投与の後における肝臓の機能障害状態からの回復を改善する。
【００６７】
本発明の他の実施形態において、本発明の前記組成物および使用は、必須要素として、アムラ果実の抽出物/果実分画の一つを含む。これらの抽出物/分画物は、アムラの生または半乾燥果実から得られる。前記組成物は、一つ以上の抽出物で処方され、どのような重量比でも組み合わせる。前記好ましい重量比としては、1:1、1:2、1:1:1:、1:2:2.2:1:2:、2:2:1を含む。
【００６８】
さらに本発明の他の実施形態において、肝臓毒性を誘導する抗-TB薬剤に特に関連する適切な薬剤の生理活性の結果として、毒性を誘導する薬剤に対する正常な肝臓機能を回復する、アムラの生成物の調製および使用に関する。本発明の生成物は、生または半乾燥果実のどちらか一方から得られる、アムラの水性、水性-エタノール性、エタノール性、ケトン性、エーテル性、ハロゲン化溶媒抽出物/分画物を含む。これらは、8.5-15%のタンニンを含む。また、一つ以上の成分の割合を変えた生成物の組成物調製に関する。単独または組み合わせのいずれかである生成物は、一見あいまいなはっきりした特異な肝臓異常メカニズムにより表わされ、また肝臓機能障害の臨床状態において明らかとされた、肝臓毒性を誘導する薬剤に対して使用される。
【００６９】
さらに本発明の他の実施形態において、単独または組成物のいずれかである調製物は、抗-TB薬剤に対して使用される。本発明において開示されるこのような生成物の使用は、高レベルのビルリビンの制御に加えて、肝臓障害指標となる血清/肝臓マーカーにより表される臨床病理学上の症状における異常上昇を制御する。
【００７０】
さらに本発明の他の実施形態において、本発明の発展の十分な情報が、薬剤による肝有毒障害に寄与するメカニズムついての我々の理解において発展を考慮して利用される。任意の基質の抗-有毒プロフィールの評価に対して適切なモデルの選択は、さらに重大である。
【００７１】
さらに本発明の他の実施形態において、情報の広い具現化は、肝-胆汁機能障害の毒-誘発損傷メカニズムへの洞察を理想的に提供する、肝臓細胞(肝細胞)培養を用いることによって、本発明のために得られる。なぜなら、このモデルは、有効で再現できる毒性が発生するような、細胞毒素のレベルで使用する、試験化合物(抗-TB薬剤のような)の使用を許すからである。in vitro細胞培養モデルは、毒性のメカニズムおよび保護医薬剤による逆転を確かめることにおいて重大性がある。
【００７２】
さらに本発明の他の実施形態において、肝臓細胞は、化学薬剤および薬剤のcyto- cum遺伝子毒性評価において広い応用を発見した選択のシステムと考えられ(Nakagawa and Tayama, Arch Toxicol, 1995:69:208)、本発明の肝保護性プロフィール評価に用いられる。前記メカニズムは、薬剤毒性の感受性指標である、肝臓細胞の重要大な生化学的機能において明らかにされる(Tomasi et al, Toxicol /Vtf/zo/:15:178-183)。細胞の溶解(細胞からのアミノ基転移酵素および乳酸脱水素酵素の漏出によって測定された)と、組織の代謝能力との両方は、前記薬剤の持続と濃度の両方の機能として変化する(Goethals et al Fundm Appl Toxicol 1984:4:441-450)。
【００７３】
さらに本発明の他の実施形態において、調製物(単独または組み合わせ)は、特定の方法で作用する。これらは、混合機能オキシダーゼに依存する肝臓のチトクロムP 450による生理活性を必要とする、抗-TB薬剤を含む薬剤によって生産される毒性に対して作用する。チトクロムP450は、前記肝臓毒性に関係することが示されている(Anundi I, Lindros KO, Pharmacol Toxicol 1992; 70;453-458)。肝臓における抗-結核薬剤であるリファンピシン、イソニアジド、ピラジンアミドを含む薬剤の酸化に依存する、CYP450の関与が報告される(Ono et al, Biol Pharm Bull 1998:21:421-425)。
【００７４】
さらに本発明の他の実施形態において、本発明の前記調製物が特定の方法で働くということは、さらに、これら調製物が、混合機能オキシダーゼの介入に依存しない毒性を誘導するガラクトサミンに対する効果が見られていないという観察によって証明される。重大な懸念は、抗-結核薬剤のような組み合わせにおいて、いくつかの薬剤の使用により生成される毒性である。単独または組み合わせの調製物は、毒性を誘導する(a)リファンピシン(b)イソニアジド(c)ピラジンアミドだけでなく、(a)リファンピシン+イソニアジド(b)リファンピシン+ピラジンアミド(c)イソニアジド+ピラジンアミドおよび(d)リファンピシン+イソニアジド+ピラジンアミドのような、様々な組み合わせの毒性をも妨げる。抗-TB薬剤単独または組み合わせを含む薬剤の代謝活性化は、様々な細胞の酸化力のある代謝性経路を通るフリーラジカル/活性代謝物/酸素フリーラジカルである、反応性中間体が伴う。変化した酸化/抗酸化のプロフィールは、肝臓障害を誘導する薬剤の生成と厳密に関係する(Sodhi et al, Hum Exp Toxicol 1997; 16;315-321)。本発明の生成物の効力は、さらにそれらの抗-リポペルオキシダント(抗-オキシダント)プロフィールによって示される。本発明の調製物の使用により、酸素代謝の生成物の超過レベル蓄積の減少が、明らかにされた。
【００７５】
さらに本発明の他の実施形態において、含有されるものは、有毒なmenifestationsの結果もたらされる、障害のある肝臓組織における、細胞膜漏出および細胞生存能力回復に対する、ここに説明された生成物の役割を妨げるものである。調製物は、前述の技術に記載されるような薬剤および薬剤組み合わせの生理活性により生成される毒性を妨げるのと同様に、特定の方法で作用する。前記生成物は、細胞毒性を有しておらず、他方、全面的な生物学の防御システムをそれ自身で増強する。
【実施例１】
【００７６】
実施例
本願の発明は、さらに以下の例によって説明される。しかし、これは、発明の範囲の制限とみなされるべきではない。以下に本発明の好ましい実施形態のいくつかを示すが、これらの方法には限定されない。当業者は、薬剤に誘導される毒性に対して、本発明の一部と見なされる、さらなる有用な組み合わせを設計できる。
【００７７】
実施例1
表１は、植物生成物が、CYP450により媒介される生理活性メカニズムに対して主に依存性であるアセトアミノフェン肝毒性に対して有効であることを示している。%保護は、血清中のLDHおよびGPTの放出の複合効果として示している。
（表１）
アセトアミノフェンによって生成される肝毒性に対する植物生成物の効果
処理                                      アセトアミノフェン
毒性                                        93%
LDHおよびGPT漏出に対する複合効果によって測定される％保護
抽出物                                      97%の保護
分画                                        96%の保護
【実施例２】
【００７８】
表２は、本発明の調整物が、CYP 450による生理活性に本質的に非依存である薬剤によって生成された肝臓毒性に対して効果を示さないことを示している。
（表２）
ガラクトサミンによって生成される肝毒性に対する植物生成物の効果。
処理                                        ガラクトサミン
毒性                                        93%
LDHおよびGPT漏出に対する複合効果によって測定される％保護
抽出物                                        3%
分画物                                        7%
【実施例３】
【００７９】
植物抽出物が、肝臓機能を正常に回復することにより、肝毒性を誘導するリファンピシンを弱毒化する(95%の効果)。図１に示す前記細胞毒性指標は、毒素の攻撃および抽出物による逆転後の、無損傷細胞からの乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)の漏出である。(モデル;肝臓細胞の一次単層培養)
【実施例４】
【００８０】
組み合わせにおける植物抽出物が、肝臓機能を正常に回復することにより、肝毒性を誘導するリファンピシン + イソニアジドを弱毒化する(96%)。図２に示される前記細胞毒性指標は、毒素の攻撃および前記組み合わせにおける抽出物による逆転後の無損傷細胞からのグルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ(GPT)の漏出である。(モデル:肝臓細胞の一次単層培養)。
【実施例５】
【００８１】
アムラが、肝臓毒性を誘導するリファンピシン + イソニアジド +ピラジンアミドを逆転し、肝臓機能を正常に回復する(96%)。図3に示される前記細胞毒性指標は、毒素の攻撃およびアムラ分画物による逆転後の、血清グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ(GPT)の漏出である。
【実施例６】
【００８２】
組み合わせにおけるアムラ分画物が、毒性を誘導するリファンピシン + イソニアジドを妨げる。図4は、血清GPTレベルおよび細胞防御の増加により測定されるように、分画物が、細胞漏出に対する96%の保護を与えることを示す。グルタチオン・レベル(肝臓)の75%の増加が観察される。
【実施例７】
【００８３】
アムラ抽出物が、毒性を誘導するリファンピシン + イソニアジド + ピラジンアミドを逆転する。図5は、本発明の抽出物による処理に応じて、脂質過酸化(LPO、肝臓)上昇に対する94%の保護および血清ビルリビンの96%の減少を示す。
【図面の簡単な説明】
【００８４】
【図１】図1は、植物抽出物が、肝臓機能を正常に回復することにより、肝毒性を誘導するリファンピシンを弱毒化する、肝臓毒性を示す(95%の効果)。前記図１において示される細胞毒性指標は、毒素の攻撃および抽出物による逆転後の、無損傷細胞からの乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)の漏出である。
【図２】図2は、組み合わせにおいて、前記植物抽出物が、肝臓機能を正常に回復することにより、肝毒性を誘導するリファンピシン + イソニアジドを弱毒化する、グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼの漏出を示す(96%)。図２に示される前記細胞毒性指標は、毒素の攻撃および前記組み合わせにおける抽出物による逆転後の、無損傷細胞からの前記グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ(GPT)の漏出である。(モデル:肝臓細胞の一次単層培養)。
【図３】図3は、アムラが、肝毒性を誘導するリファンピシン + イソニアジド +ピラジンアミドを逆転することおよび肝臓機能を正常に回復すること(96%)による、毒素攻撃およびアムラ分画物による逆転後の血清グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ(GPT)の漏出を示す。図3に示される前記細胞毒性指標は、毒素の攻撃およびアムラ分画物による逆転後の、血清グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ(GPT)の漏出である。
【図４】図4は、毒性を誘導するリファンピシン + イソニアジドを妨げる組み合わせにおけるアムラ分画物による、細胞漏出対する保護を示す。図4は、血清GPTレベルおよび細胞防御の増加によって測定されるように、分画物が細胞漏出に対する96%の保護を与えることを示している。グルタチオンレベル(肝臓)の75%の増加が観察される。
【図５】図5は、アムラ抽出物が、毒性を誘導するリファンピシン + イソニアジド + ピラジンアミドを逆転することを示す。図5は、本発明の抽出物での処理に応じて、脂質過酸化(LPO、肝臓)の上昇に対する94%の保護および血清ビルリビンの96%の減少を示す。
【図６】図6は、果実アムラの抽出物調製のフローチャートを示す。
【図１】
2005526792.tif 000002
【図２】
2005526792.tif 000003
【図３】
2005526792.tif 000004
【図４】
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【図５】
2005526792.tif 000006
【図６】
2005526792.tif 000007
【手続補正書】
【提出日】平成16年4月21日(2004.4.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リファンピシン、ピラジンアミドおよびイソニアジドからなる群から選択される、少なくとも一つの抗−TB薬剤により誘導されるCYP450生理活性肝毒性に対する肝臓治療効果に有用な経口投与される組成物であり、前記組成物がアムラ(Emblica officinalis)の抽出物および任意の薬学上許容しうる添加物を含み、前記抽出物が8.5〜15重量%のタンニンを含み、前記抽出物及び添加物の比が1:1〜1:10であり、前記添加物が、タンパク質を含む栄養素、炭水化物、糖、タルク、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、炭酸カルシウム、デンプン-ゼラチンペースト、および／または薬学上許容しうるキャリアー、賦形剤、希釈剤、または溶媒からなる群から選択され、前記組成物がリファンピシン、ピラジンアミドおよびイソニアジドからなる群から選択される、少なくとも一つの抗−TB薬剤により誘導されるCYP450生理活性肝毒性に対する肝臓治療効果を示すが、CYP 450による生理活性に非依存である肝毒性に対しては有効でない組成物。
【請求項２】
前記添加物が、前記抽出物の肝臓治療効果に影響を与えない、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記抽出物を得るために、アムラを室温で約15-25時間、極性溶媒でインキュベートすることにより前記抽出物が調製され、前記抽出物が8.5〜15重量%のタンニンと、任意の薬学上許容しうる添加物とを含み、前記極性溶媒が、(i)水、(ii)水およびエタノール、または(iii)からなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記経口経路用の組成物が、カプセル、錠剤、シロップ剤、濃縮物、粉末、顆粒剤、煙霧質、および／またはビーズの形態である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
リファンピシン、ピラジンアミドおよびイソニアジドからなる群から選択される、少なくとも一つの抗−TB薬剤により誘導されるCYP450生理活性肝毒性に対する肝臓治療効果に有用な経口投与される組成物の調製の使用であり、前記組成物がアムラ由来抽出物と任意の薬学上許容しうる添加物とを含み、前記抽出物が8.5〜15重量%のタンニンを含み、前記抽出物及び添加物の比が1:1〜1:10であり、前記添加物が、タンパク質を含む栄養素、炭水化物、糖、タルク、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、炭酸カルシウム、デンプン-ゼラチンペースト、および／または薬学上許容しうるキャリアー、賦形剤、希釈剤、または溶媒からなる群から選択され、前記組成物がリファンピシン、ピラジンアミドおよびイソニアジドからなる群から選択される、少なくとも一つの抗−TB薬剤により誘導されるCYP450生理活性肝毒性に対する肝臓治療効果を示すが、CYP 450による生理活性に非依存である肝毒性に対しては有効でなく、前記抽出物を得る為に、アムラを、室温で約15-25時間、極性溶媒でインキュベートする工程を含み、前記抽出物が、8.5〜15重量%のタンニンと、任意の薬学上許容しうる添加物とを含み、前記極性溶媒が(i)水、(ii)水およびエタノール、または(iii)エタノールからなる、調製の使用。
【請求項６】
抽出物が、アムラの新鮮および／または半乾燥果実由来である、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
前記組成物が、カプセル、錠剤、シロップ剤、濃縮物、粉末、顆粒剤、煙霧質、および／またはビーズの形態である、請求項５に記載の使用。
【請求項８】
以下を含む、リファンピシン、ピラジンアミドおよびイソニアジドからなる群から選択される少なくとも一つの抗−TB薬剤によって誘導される、CYP450およびフリーラジカルで媒介される肝毒性に対する患者の治療の使用であって、以下の工程を含む使用。
(a)アムラ抽出物および任意の薬学上許容しうる添加物を含み、前記抽出物が8.5〜15重量%のタンニンを含み、前記抽出物及び添加物の比が1:1〜1:10であり、前記添加物が、タンパク質を含む栄養素、炭水化物、糖、タルク、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、炭酸カルシウム、デンプン-ゼラチンペースト、および／または薬学上許容しうるキャリアー、賦形剤、希釈剤、または溶媒からなる群から選択され、前記組成物がリファンピシン、ピラジンアミドおよびイソニアジドからなる群から選択される少なくとも一つの抗−TB薬剤により誘導されるCYP450生理活性肝毒性に対する肝臓治療効果を示すが、CYP450による生理活性に非依存である肝毒性に対しては有効でない、経口投与用の組成物を供給する工程、
(b)前記患者の肝細胞へ薬剤毒性を誘導する工程、
(c)薬剤肝毒性にさらされている前記肝細胞を有する前記患者に、前記組成物の肝治療用投薬を経口投与する工程、および
(d)前記組成物の肝臓治療効果を評価する為に、肝臓/血清マーカーのレベルの変化を測定する工程。
【請求項９】
前記組成物が、カプセル、錠剤、シロップ剤、濃縮物、粉末、顆粒剤、煙霧質、および／またはビーズの形態である、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記患者が、動物またはヒトである、請求項８に記載の使用。
【請求項１１】
前記組成物が、高レベルなビルリビンのコントロールに加えて、肝臓障害指数となる血清/肝臓マーカーにより示される、臨床の病理学上の症状の異常な上昇をコントロールする、請求項８に記載の使用。
【請求項１２】
理想的な洞察のための肝細胞培養である、請求項８に記載の使用。
【請求項１３】
前記薬剤が、肝細胞において有効で再現できる結果を示す細胞毒素のレベルで使用される、請求項８に記載の使用。
【請求項１４】
前記組成物が、肝細胞増殖力の回復を示す、請求項８に記載の使用。
【請求項１５】
前記組成物が、リファンピシンおよびイソニアジドの組み合わせ効果に対して、約96%の肝臓治療効果を示す、請求項８に記載の使用。
【請求項１６】
前記組成物が、リファンピシン、イソニアジドおよびピラジンアミドの組み合わせ効果に対して、約96%の肝臓治療効果を示す、請求項８に記載の使用。
【請求項１７】
前記組成物が、リファンピシン、イソニアジドおよびピラジンアミドの組み合わせによって誘導される脂質過酸化(LPO)の上昇に対して、約94%の肝臓治療効果を示す、請求項８に記載の使用。
【請求項１８】
前記組成物が、リファンピシン、イソニアジドおよびピラジンアミドの組み合わせに対して、肝臓治療効果として、血清ビルリビンの約96%の減少を示す、請求項８に記載の使用。
【請求項１９】
前記使用が、肝臓機能を正常に回復するのに役立つ、請求項８に記載の使用。
【請求項２０】
前記組成物の投薬の範囲が、50-250 mg/kgである、請求項８に記載の使用。
【手続補正書】
【提出日】平成17年2月28日(2005.2.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リファンピシン、ピラジンアミドおよびイソニアジドからなる群から選択される、少なくとも一つの抗−TB薬剤により誘導されるCYP450生理活性肝毒性に対する肝臓治療効果に有用な経口投与される組成物であり、前記組成物がアムラ(Emblica officinalis)の抽出物および任意の薬学上許容しうる添加物を含み、前記抽出物が8.5〜15重量%のタンニンを含み、前記抽出物及び添加物の比が1:1〜1:10であり、前記添加物が、タンパク質を含む栄養素、炭水化物、糖、タルク、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、炭酸カルシウム、デンプン-ゼラチンペースト、および／または薬学上許容しうるキャリアー、賦形剤、希釈剤、または溶媒からなる群から選択され、前記組成物がリファンピシン、ピラジンアミドおよびイソニアジドからなる群から選択される、少なくとも一つの抗−TB薬剤により誘導されるCYP450生理活性肝毒性に対する肝臓治療効果を示すが、CYP 450による生理活性に非依存である肝毒性に対しては有効でない組成物。
【請求項２】
前記添加物が、前記抽出物の肝臓治療効果に影響を与えない、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記抽出物を得るために、アムラを室温で約15-25時間、極性溶媒でインキュベートすることにより前記抽出物が調製され、前記抽出物が8.5〜15重量%のタンニンと、任意の薬学上許容しうる添加物とを含み、前記極性溶媒が、(i)水、(ii)水およびエタノール、または(iii)エタノールからなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記経口経路用の組成物が、カプセル、錠剤、シロップ剤、濃縮物、粉末、顆粒剤、煙霧質、および／またはビーズの形態である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
患者が、動物またはヒトである、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
リファンピシン、ピラジンアミドおよびイソニアジドからなる群から選択される、少なくとも一つの抗−TB薬剤により誘導されるCYP450生理活性肝毒性に対する肝臓治療効果に有用な経口投与される組成物の製造方法であり、前記組成物がアムラ由来抽出物と任意の薬学上許容しうる添加物とを含み、前記抽出物が8.5〜15重量%のタンニンを含み、前記抽出物及び添加物の比が1:1〜1:10であり、前記添加物が、タンパク質を含む栄養素、炭水化物、糖、タルク、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、炭酸カルシウム、デンプン-ゼラチンペースト、および／または薬学上許容しうるキャリアー、賦形剤、希釈剤、または溶媒からなる群から選択され、前記組成物がリファンピシン、ピラジンアミドおよびイソニアジドからなる群から選択される、少なくとも一つの抗−TB薬剤により誘導されるCYP450生理活性肝毒性に対する肝臓治療効果を示すが、CYP 450による生理活性に非依存である肝毒性に対しては有効でなく、前記抽出物を得る為に、アムラを、室温で約15-25時間、極性溶媒でインキュベートする工程を含み、前記抽出物が、8.5〜15重量%のタンニンと、任意の薬学上許容しうる添加物とを含み、前記極性溶媒が(i)水、(ii)水およびエタノール、または(iii)エタノールからなる、製造方法。
【請求項７】
抽出物が、アムラの新鮮および／または半乾燥果実由来である、請求項６に記載の製造方法。
【請求項８】
前記組成物が、カプセル、錠剤、シロップ剤、濃縮物、粉末、顆粒剤、煙霧質、および／またはビーズの形態である、請求項６に記載の製造方法。
【国際調査報告】
2005526792.tif 000008
2005526792.tif 000009
2005526792.tif 000010
2005526792.tif 000011
2005526792.tif 000012