(57)【要約】本発明は、腫瘍崩壊性ウイルス、特にレオウイルスを使用することで、放射線に対して新生物細胞を感作する方法に関する。この方法は、（ａ）新生物細胞に有効量のレオウイルスを投与する工程、および（ｂ）その細胞を有効用量の照射因子に供する工程を包含する。また、腫瘍崩壊性ウイルスおよび放射線療法を組み合わせて使用することで腫瘍を処置または改善する方法を提供する。この方法も同様に、（ａ）新生物細胞に有効量のレオウイルスを投与する工程、および（ｂ）その細胞を有効用量の照射因子に供する工程を包含する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
新生物細胞を照射に対して感作する方法であって、以下の工程：
（ａ）該新生物細胞に有効量のレオウイルスを投与する工程；および
（ｂ）該細胞を有効用量の照射因子に供し、それによって、該新生物細胞の該照射因子に対する感受性が、レオウイルスによって増大される工程を包含する、方法。
【請求項２】
前記レオウイルスが、照射の前に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記新生物細胞が、哺乳動物内にある、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記哺乳動物が、イヌ、ネコ、げっ歯類、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒトおよび非ヒト霊長類からなる群から選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記照射因子が、電子、Ｘ線およびγ線からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記照射因子が、γ線である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記レオウイルスが、哺乳動物のレオウイルスである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記哺乳動物のレオウイルスが、ヒトのレオウイルスである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ヒトのレオウイルスが、血清型３のレオウイルスである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記血清型３のレオウイルスが、Ｄｅａｒｉｎｇ株レオウイルスである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記レオウイルスが、組換えレオウイルスである、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
被験体中の腫瘍を処置または改善する方法であって：
（ａ）該被験体に、該腫瘍中の細胞のレオウイルスによる感染が生じるような条件で、有効量の該レオウイルスを投与する工程；および
（ｂ）該被験体を有効用量の照射因子で照射する工程、
を包含する、方法。
【請求項１３】
前記レオウイルスが、前記照射の前に投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記レオウイルスが、複数の用量で投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記被験体が、哺乳動物である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
前記哺乳動物が、イヌ、ネコ、げっ歯類、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒトおよび非ヒト霊長類からなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
前記腫瘍が、固形腫瘍である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
前記固形腫瘍が、肺癌、前立腺癌、結腸直腸癌、甲状腺癌、腎臓癌、副腎癌、肝臓癌、膵臓癌、乳癌ならびに中枢神経系および末梢神経系の癌からなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記レオウイルスが、前記固形腫瘍内または前記固形腫瘍の近傍に投与される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記レオウイルスが、全身的に投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項２１】
前記腫瘍が、造血細胞の癌である、請求項１２に記載の方法。
【請求項２２】
前記造血細胞の癌が、リンパ腫および白血病からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記腫瘍が、転移性の腫瘍である、請求項１２に記載の方法。
【請求項２４】
前記レオウイルスが、組換えレオウイルスである、請求項１２に記載の方法。
【請求項２５】
被験体において腫瘍が放射線に対する耐性を発症することを予防する方法であって、該被験体に有効量のレオウイルスを投与する工程を包含する、方法。
【請求項２６】
前記レオウイルスが、組換えレオウイルスである、請求項２５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本出願は、米国仮特許出願番号第６０/３７８，９４８号（２００２年５月１０日提出）；および同６０/４４３，１８９号（２００３年１月２９日提出）の利益を主張する。これらの先願の全開示が、本明細書によって参考として援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、腫瘍崩壊性ウイルス、特にレオウイルスを使用することで、放射線に対して新生物細胞を感作する方法に関する。
【０００３】
（参考文献）
米国特許第６，１３６，３０７号
米国特許第６，１００，２４３号
米国特許出願公報第２００２００３７５７６号
【０００４】
【化１】
2005526125.tif 000002
【０００５】
【化２】
2005526125.tif 000003
本出願の上記または別の場所において引用する刊行物、特許および特許出願の全ては、その全体があたかも、個々の刊行物、特許出願および特許の各々の開示が詳細かつ個々にその全体で参考として援用され示されるのと同程度で、本明細書において参考として援用されている。
【背景技術】
【０００６】
（発明の背景）
放射線療法（Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ）（放射線療法（ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ）とも呼ばれる）は、放射線、代表的には電離放射線による癌および他の疾患の処置である。放射線療法は、局所的な固形腫瘍（例えば、皮膚、舌、喉頭、脳、乳房、または子宮頚の癌）を処置するために使用され得る。それはまた、白血病およびリンパ腫を処置するためにも使用され得る。一般的に使用される放射線療法の１つの型は、光子（電磁気的エネルギー）を伴う。Ｘ線は、癌を処置するために使用された光子放射線の最初の形態であった。それらが有するエネルギー量に依存して、光線は、体の表面またはより深くの癌細胞を破壊するために使用され得る。直線型加速器およびベータトロンは、漸次増加するより大きなエネルギーを有するＸ線を生成する機械である。癌部位に放射線（例えば、Ｘ線）を集束させるための機械の使用は、外部ビーム放射線療法（ｅｘｔｅｒｎａｌ  ｂｅａｍ  ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ）と呼ばれる。
【０００７】
γ線は、放射線療法で使用される光子の別の形態である。γ線は、特定の元素（例えば、ラジウム、ウラン、およびコバルト６０）が、それが崩壊する際に放射線を放出するのと同時に生成される。各元素は、特定の速度で崩壊し、ガンマ線および他の粒子の形態でエネルギーを放出する。Ｘ線およびγ線は、癌細胞に対して同じ効果を有する。
【０００８】
癌細胞に放射線を送達するための別の技術は、腫瘍または体腔に放射性のインプラントを直接的に配置することである。これは、内部放射線療法（ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ）と呼ばれ、近接照射療法、介在性照射（ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ  ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ）、および腔内性照射（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔａｒｙ  ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ）は、内部放射線療法の型である。この処置において、放射線用量は、小さな領域に集中される。内部放射線療法は、頻繁に、舌、子宮、および頚の癌のために使用される。放射線治療に対するいくつかの新しいアプローチが、癌を処置する際のそれらの有効性を決定するため評価されている。１つのこのような技術が、手術内照射（ｉｎｔｒａｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ）であり、この技術では、大用量の外部放射線が、手術の間に腫瘍およびその周囲の組織へと指向される。別の調査されているアプローチは、粒子ビーム放射線療法（ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｂｅａｍ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ）である。この型の治療は、これが局所的な癌を処置するために高速の亜原子粒子を使用するという点で、光子放射線療法とは異なる。非常に複雑な機械が、この手順のために必要とされる粒子を生成し、かつ加速させるために必要である。いくつかの粒子（中性子、イオン（ｐｉｏｎｓ）、および重イオン）は、Ｘ線またはγ線よりも、それらが組織を通る経路に沿ってより大きなエネルギーを与え、それ故、それらが当たった細胞に傷害を引き起こす。この型の放射線は、しばしば高阻止能（高ＬＥＴ）放射線といわれる。別の最近の放射線療法の研究は、放射線用量を直接的に癌部位に送達するための放射性標識した抗体の使用（放射性免疫療法（ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ））に焦点を当てている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
放射線療法の有効性を増大させる方法が、活発に調査されてきた。２つの型の調査されている薬物は、放射線を受けている細胞に対するそれらの効果について研究されている。放射線増感剤は、腫瘍細胞をより傷害を受けやすくし、放射線防護剤は、正常な組織を放射線の影響から防護する。湿熱療法（熱の使用）もまた、組織を放射線に対して感作する際の有効性について研究されている。理想的には、放射線増感剤は、標的細胞に対してのみ機能を発揮する。使用の容易さのために、放射線増感剤はまた、全身投与された場合でさえも、標的細胞を見出し得るべきである。しかし、現在の放射線増感剤は、代表的には、腫瘍細胞に対して選択的ではなく、それらは拡散によってのみ動物内で分布する。そのため、よりよい放射線増感剤に対する必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
（発明の要旨）
本発明は、特に、レオウイルスが、腫瘍細胞の放射線に対する感受性を増大させ得るという予期せぬ発見に関する。レオウイルスは、高度に選択的な抗腫瘍因子であり、ｒａｓで活性化された新生物細胞のみで複製し、それを殺す。本発明において、本発明者らは、レオウイルス処置と組合わせて照射した場合、腫瘍が効果的に縮小し得ることを実証する。さらに、レオウイルスは、照射される腫瘍に直接的に投与されることを必要としない。そのために、レオウイルスは、選択的な放射線増感剤であるのみならず、「遠隔効果」をも有し、それによって、各腫瘍塊および全腫瘍塊に対してレオウイルスを投与する必要性が取り除かれる。
【００１１】
従って、本発明の１つの局面は、新生物細胞を照射に対して感作する方法を提供し、この方法は、以下の工程を包含する：
（ａ）この新生物細胞に有効量のレオウイルスを投与する工程；および
（ｂ）この細胞を有効用量の照射因子に供し、それによって、新生物細胞の照射因子への感受性が、上記レオウイルスによって増大される工程。
【００１２】
レオウイルスは、好ましくは、照射の前または照射と同時に投与される。レオウイルスは、任意のレオウイルス、好ましくは哺乳動物のレオウイルスまたは鳥類のレオウイルスであり得る。哺乳動物のレオウイルスは、好ましくはヒトのレオウイルス、より好ましくは血清型３のレオウイルス、そして最も好ましくはＤｅａｒｉｎｇ株の血清型３のレオウイルスである。照射因子は、当該分野で公知の任意の照射因子（Ｘ線、γ線（例えば、ラジウム、ウラン、またはコバルト６０から生成されるγ線）、および粒子ビーム（例えば、電子、中性子、イオン（ｐｉｏｎ）、および重イオン）が挙げられるが、これらに限定されない）であり得る。照射は、外部放射線療法または内部放射線療法（近接照射療法、介在性照射、および腔内性照射が挙げられる）の形態であり得る。照射因子は、放射免疫療法として抗体と結合し得るか、または手術内放射線療法として手術中に使用される。
【００１３】
新生物細胞は、好ましくは哺乳動物、特にイヌ、ネコ、げっ歯類、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒトおよび非ヒト霊長類の中に位置する。最も好ましくは、哺乳動物はヒトである。本発明において有用であるレオウイルスは、組換えレオウイルスであり得る。組換えレオウイルスは、異なるサブタイプのレオウイルスとの哺乳動物細胞への同時感染によって生成され得る。組換えレオウイルスは、自然に存在するかもしれないし、または自然には存在しないかもしれない。組換えレオウイルスは、２種類以上のレオウイルス株、好ましくはＤｅａｒｉｎｇ株、Ａｂｎｅｙ株、Ｊｏｎｅｓ株、およびＬａｎｇ株からなる群から選択される２種類以上のレオウイルス株に由来し得る。組換えレオウイルスはまた、異なる血清型のレオウイルス（例えば、血清型１のレオウイルス、血清型２のレオウイルスおよび血清型３のレオウイルスからなる群から選択される）の再組合せから生じ得る。組換えレオウイルスは、天然に存在する改変体コートタンパク質をコードする配列または変異したコートタンパク質をコードする配列を含み得る。
【００１４】
本発明の別の局面は、被験体の腫瘍を処置または改善する方法を提供し、この方法は、以下の工程を包含する：
（ａ）腫瘍中の細胞のレオウイルスによる感染を生じる条件下で、被験体に有効量のレオウイルスを投与する工程；および
（ｂ）有効用量の照射因子によって被験体を照射する工程。
特に、腫瘍が、レオウイルスの非存在下において放射線に対して耐性である場合である。
【００１５】
レオウイルスは、好ましくは、照射因子の前または照射因子と同時、特に照射因子の前に投与される。レオウイルスおよび照射因子は両方とも、１度の用量または複数の用量で被験体に投与され得る。被験体は、好ましくは哺乳動物、より好ましくはイヌ、ネコ、げっ歯類、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒトおよび非ヒト霊長類からなる群から選択される哺乳動物である。最も好ましくは、被験体はヒトである。
【００１６】
任意の腫瘍（固形腫瘍および造血細胞の腫瘍（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｔｕｍｏｒ）が挙げられる）が、主張する方法に供され得る。固形腫瘍は、好ましくは、肺癌、前立腺癌、結腸癌および直腸癌、甲状腺癌、腎臓癌、副腎癌、肝臓癌、膵臓癌、乳癌ならびに中枢神経系および末梢神経系の癌からなる群から選択される。造血細胞の腫瘍は、好ましくは、リンパ腫および白血病からなる群から選択される。腫瘍は、転移性の腫瘍であり得る。レオウイルスは、究極的にレオウイルスの標的腫瘍との接触を生じる任意の様式で、投与され得る。例えば、レオウイルスは、全身的または局所的（例えば、固形腫瘍内またはその近く）に投与され得る。
【００１７】
本発明の別の局面は、被験体において、腫瘍が放射線への耐性を発症することを予防する方法を提供し、この方法は、有効量のレオウイルスをこの被験体に投与する工程を包含する。
【００１８】
本発明のなお別の局面は、動物を有効量の照射因子に曝露することによって、腫瘍を有する動物におけるレオウイルス治療の有効性を増大させる方法を提供する。レオウイルスおよび照射因子は、別々に、すなわち異なる時間および／または異なる部位で投与され得る。例えば、ウイルスは全身的に投与され得、そして照射因子は局所的な腫瘍に投与され得る。結果として、放射される腫瘍および同じ動物の他の腫瘍は、ウイルスまたは照射因子が単独で使用される場合よりも、より大きな程度でサイズの減少または成長の遅延化が起こる。同様に、ウイルスが局所的腫瘍に投与され得、その一方、他の局所的腫瘍が照射され得、同じ動物中の全ての腫瘍が処置または軽減される。ウイルスおよび照射の組合せ効果は、代表的には、相加効果よりも大きい。
【００１９】
レオウイルスに加えて、他の腫瘍崩壊性ウイルスが、レオウイルスと同じ様式で本発明を実施するために使用され得る。例示的な腫瘍崩壊性ウイルスとしては、二本鎖ＲＮＡ活性化タンパク質キナーゼ（ＰＫＲ）を阻害しないような変異または欠失を有するウイルス、デルタ２４（Ｄｅｌｔａ２４）、小水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）、ワクシニアウイルス、脳炎ウイルス、帯状疱疹ウイルス、肝炎ウイルス、インフルエンザウイルス、水痘ウイルス（ｖａｒｉｃｅｌｌａ  ｖｉｒｕｓ）、および麻疹ウイルス挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、腫瘍崩壊性ウイルスは、（ａ）遺伝子送達のためのウイルスビヒクルではない；（ｂ）アデノウイルスのＥ１Ａ遺伝子を発現しない；および／または（ｃ）疱疹ウイルスではない。
【００２０】
特に、腫瘍崩壊性ウイルスおよび放射線は、処置される被験体の異なる部位に投与され得る。従って、本発明の１つの局面は、動物内の新生物細胞を照射に対して感作する方法を提供し、この方法は、以下の工程を包含する：
（ａ）この動物に有効量の腫瘍崩壊性ウイルスを投与する工程；および
（ｂ）この細胞を有効用量の照射因子に供し、それによって、腫瘍崩壊性ウイルスによって新生物細胞の照射因子への感受性が増大する工程であって、ここで、腫瘍崩壊性ウイルスおよび照射因子が動物の異なる部位に投与される。
【００２１】
腫瘍崩壊性ウイルスは、任意の経路（全身投与が挙げられる）で投与され得る。
【００２２】
必要に応じて、動物は、治療的に投与するウイルスに対する免疫応答を避けるために、免疫抑制され得る。免疫抑制は、特異的であり得るし、非特異的であり得る。従って、本発明の方法は、以下の工程の少なくとも１つと連結され得る：
ｉ）動物に有効量の免疫抑制剤を投与する工程；
ｉｉ）動物からＢ細胞またはＴ細胞を除去する工程；
ｉｉｉ）動物から抗ウイルス抗体を除去する工程；
ｉｖ）動物から抗体を除去する工程；
ｖ）動物に抗−抗ウイルス抗体を投与する工程；および
ｖｉ）動物の免疫システムを抑制する工程。
【００２３】
（発明の詳細な説明）
本発明は、特に、レオウイルスが、腫瘍細胞の放射線に対する感受性を増大させ得るという予期せぬ発見に関する。レオウイルスは、高度に選択的な抗腫瘍因子であり、ｒａｓで活性化された新生物細胞のみで複製し、そしてそれを殺す。本発明において、本発明者らは、レオウイルス処置と組合わせて照射した場合、腫瘍が効果的に縮小し得ることを実証する。さらに、レオウイルスは、照射される腫瘍に直接的に投与されることを必要としない。そのために、レオウイルスは、選択的な放射線増感剤であるのみならず、「遠隔効果」をも有し、それによって、各腫瘍塊および全腫瘍塊に対してレオウイルスを投与する必要性が取り除かれる。他の腫瘍溶解性ウイルスも同様に使用され得る。
【００２４】
本発明をより詳細に説明する前に、本出願中で使用される用語は、他に示さない限り、以下のように定義される。
【００２５】
（定義）
本明細書で使用される場合、新生物細胞を放射線に対して「感作する」とは、放射線に対する新生物細胞の感受性を増強する行動をいう。
【００２６】
放射線に対する新生物細胞の「感受性」とは、放射線の阻害効果に対する新生物細胞の影響の受けやすさである。例えば、放射線に対する新生物細胞の感受性は、放射線に応答した細胞の増殖速度の減少によって示され得る。感受性はまた、新生物細胞によって引き起こされる症状の減少によっても実証される。
【００２７】
放射線に対して「耐性」である新生物細胞は、放射線によって殺されないか、または成長が阻害されない新生物細胞である。新生物細胞が成長阻害されているか否かを決定するために、放射線の存在下または非存在下での細胞の増殖速度が、当該分野において確立された方法（例えば、細胞数の計測）によって決定される。成長速度が放射線の有無で有意な差がない場合には、新生物細胞は、放射線によって成長阻害されていない。
【００２８】
放射線に対して「耐性」である腫瘍は、サイズの増大または重量の増大の速度が、放射線の存在下で変化しない腫瘍である。あるいは、被験体が放射線を受容しているか否かに関わらず、腫瘍を有する被験体が、腫瘍の同様の症状または指標を示している場合、その腫瘍は、放射線に対して耐性である。例えば、白血球数が、白血病の指標として一般的に使用される。白血病患者の白血球数が、放射線の受容の後で有意に変化しない場合、この患者の白血病は放射線に対して耐性である。
【００２９】
「新生物細胞」、「腫瘍細胞」、または「増殖性障害を伴う細胞」とは、異常な高速度で増殖する細胞をいう。新生物細胞を含む新しい増殖が、新生物（「腫瘍」としても公知）である。腫瘍は、異常な組織成長であり、一般的に、異なる塊を形成し、正常な組織成長よりもより速い細胞増殖によって成長する。腫瘍は、構造的組織および正常な組織との機能的協調の部分的または全体的な欠如を示し得る。本明細書で使用する場合、腫瘍は、造血細胞の腫瘍および固形腫瘍を含むことを意図する。
【００３０】
腫瘍は、良性（良性腫瘍）または悪性（悪性腫瘍または悪性癌）であり得る。悪性腫瘍は、広く３つの主要な型に分類され得る。上皮構造から生じた悪性腫瘍は、癌腫と呼ばれ、結合組織（例えば、筋肉、軟骨、脂肪または骨）を起源とする悪性腫瘍は、肉腫と呼ばれ、そして免疫系の成分を含む造血組織構造（血液細胞の形成に関連する構造）に影響する悪性腫瘍は、白血病およびリンパ腫と呼ばれる。他の腫瘍としては、神経線維腫症が挙げられるが、これに限定されない。
【００３１】
「病巣」とは、傷害、創傷または構造的に異常な領域である。腫瘍を有する被験体の文脈において、病巣は、他に記載がない限り、腫瘍塊である。
【００３２】
「ｒａｓ活性化新生物細胞」または「ｒａｓ媒介性新生物細胞」とは、少なくとも部分的には、ｒａｓ経路の活性化に起因する異常な高速度で増殖する細胞をいう。ｒａｓ遺伝子の変異、ｒａｓ遺伝子の発現のレベルの増大、ｒａｓ遺伝子メッセージの安定性の増大、あるいは、ｒａｓまたはｒａｓ経路においてｒａｓの下流または上流の因子（単独または複数）の活性化を誘導し、それによってｒａｓ経路の活性を増大させる任意の変異または他の機構によって、ｒａｓ経路が活性化され得る。例えば、ＥＧＦレセプター、ＰＤＧＦレセプターまたはｓｏｓの活性化により、ｒａｓ経路の活性化が生じる。ｒａｓ媒介性新生物細胞としては、ｒａｓ経路の活性化に起因して悪性の様式で増殖する細胞であるｒａｓ媒介性癌細胞が挙げられるが、これに限定されない。
【００３３】
「レオウイルスによる感染」とは、細胞へのレオウイルスの進入および増幅をいう。同様に、「腫瘍のレオウイルスによる感染」とは、腫瘍中の細胞へのレオウイルスの進入および増幅をいう。
【００３４】
「レオウイルス」とは、レオウイルス属に分類される任意のウイルスをいい、天然に存在するか、改変されているか、または組換え体である。レオウイルスは、二本鎖の分節したＲＮＡゲノムを有するウイルスである。ビリオンは、直径が６０〜８０ｎｍの寸法であり、それぞれが正二十面体である２つの同心性のカプシドの殻を有する。ゲノムは、１０〜１２の異なる節の二本鎖ＲＮＡからなり、全ゲノムサイズは１６〜２７ｋｂｐである。個々のＲＮＡ節はサイズが変化する。異なるが、関連する３つの型のレオウイルスが、多くの種から得られている。３つの型は全て、共通の補体固定性抗原を共有する。
【００３５】
ヒトレオウイルスは、３つの血清型からなる：１型（Ｌａｎｇ株、すなわちＴ１Ｌ）、２型（Ｊｏｎｅｓ株、Ｔ２Ｊ）および３型（Ｄｅａｒｉｎｇ株またはＡｂｎｅｙ株、Ｔ３Ｄ）。３つの血清型は、中和アッセイおよび血球凝集素アッセイに基づいて、容易に同定可能である（例えば、Ｆｉｅｌｄｓ、Ｂ．Ｎ．ら、１９９６を参照のこと）。
【００３６】
レオウイルスは、天然に存在するものであり得るか、または改変されたものであり得る。天然の供給源から単離され得、研究室でヒトによって意図的に改変されていない場合に、レオウイルスは「天然に存在する」。例えば、レオウイルスは、「野外供給源」、つまりレオウイルスに感染したヒトに由来し得る。
【００３７】
レオウイルスは、改変されたが、まだ活性なｒａｓ経路を有する哺乳動物細胞に崩壊的に感染し得るウイルスであり得る。レオウイルスは、増殖する細胞への投与の前に、化学的にまたは生化学的に前処理され得る（例えば、プロテアーゼ（例えば、キモトリプシンまたはトリプシン）による処理）。プロテアーゼによる前処理によって、ウイルスの外側のコートまたはカプシドが除去され、ウイルスの感染性が増大し得る。レオウイルスは、リポソームまたはミセル中にコーティングされ得る（ＣｈａｎｄｒａｎおよびＮｉｂｅｒｔ、１９９８）。例えば、ビリオンは、硫酸アルキル洗浄剤の濃縮物を形成するミセルの存在下でキモトリプシンにより処理され得、新しい感染性サブビリオン粒子を生成する。
【００３８】
レオウイルスは、２種類以上の遺伝学的に異なるレオウイルス由来のゲノム節の遺伝子組換え／再組合せによって生じた、組換えレオウイルスであり得る。レオウイルスのゲノム節の組換え／再組合せは、少なくとも２種類の遺伝学的に異なるレオウイルスによる宿主生物体の感染の後で、自然に生じ得る。組換えビリオンもまた、細胞培養物において、例えば、遺伝学的に異なるレオウイルスによる許容性の宿主細胞の同時感染（Ｎｉｂｅｒｔら１９９５）によって、生成され得る。
【００３９】
従って、本発明は、２種類以上の遺伝学的に異なるレオウイルス（ヒトレオウイルス（例えば、１型（例えば、Ｌａｎｇ株）、２型（例えば、Ｊｏｎｅｓ株）、および３型（例えば、Ｄｅａｒｉｎｇ株またはＡｂｎｅｙ株）、非ヒト哺乳動物レオウイルス、鳥類レオウイルス）が挙げられるが、これらに限定されない）由来のゲノム節の再組合せから生じた組換えレオウイルスの使用を意図する。本発明はさらに、２種類以上の遺伝学的に異なるレオウイルス由来のゲノム節の再組合せから生じた組換えレオウイルスの使用を意図し、ここで、少なくとも１つの親ウイルスが、遺伝学的に操作され、１つ以上の化学的に合成されたゲノム節を含み、化学的突然変異原または物理的突然変異原で処理されているか、あるいはそれ自身が組換え事象の結果物である。本発明はさらに、化学的突然変異原（硫酸ジメチルおよびエチジウムブロマイドが挙げられるが、これらに限定されない）または物理的突然変異原（紫外線および他の形態の放射線が挙げられるが、これらに限定されない）の存在下での組換えを経験した組換えレオウイルスの使用を意図する。
【００４０】
本発明はさらに、１つ以上のゲノム節の欠失または重複を含むか、宿主細胞ゲノムとの組換えの結果としてのさらなる遺伝的情報を含むか、または合成遺伝子を含む、組換えレオウイルスの使用を意図する。
【００４１】
レオウイルスは、変異コートタンパク質の取り込み（例えば、ビリオン外側カプシドへの取り込み）によって改変され得る。タンパク質は、置換、挿入または欠失によって変異され得る。置換としては、ネイティブなアミノ酸の位置での異なるアミノ酸の挿入が挙げられる。挿入としては、１つ以上の位置でのタンパク質へのさらなるアミノ酸残基の挿入が挙げられる。欠失としては、タンパク質中の１つ以上のアミノ酸の欠失が挙げられる。このような変異は、当該分野で公知の方法によって生成され得る。例えば、１種類のコートタンパク質をコードする遺伝子のオリゴヌクレオチドの特定部位の突然変異誘発によって、所望の変異コートタンパク質の生成が生じ得る。インビトロでレオウイルスに感染した哺乳動物細胞（例えば、ＣＯＳ１細胞）中の変異タンパク質の発現によって、レオウイルスのビリオン粒子への変異タンパク質の取り込みが生じる（ＴｕｒｎｅｒおよびＤｕｎｃａｎ、１９９２；Ｄｕｎｃａｎら、１９９１；Ｍａｈら、１９９０）。
【００４２】
レオウイルスは、好ましくは、レオウイルスに対する免疫応答を減少または除去するように改変されたレオウイルスである。このような改変レオウイルスを「免疫保護されたレオウイルス」と名付ける。このような改変としては、レオウイルスをリポソーム、ミセルまたは他のビヒクルにパッケージングし、免疫系からレオウイルスを隠すことが挙げられ得る。あるいは、外側カプシドに存在するタンパク質が、宿主の体液性応答および細胞性応答の主要な決定因子であるので、レオウイルスのビリオン粒子の外側カプシドが取り除かれ得る。
【００４３】
被験体へのウイルスの「投与」とは、ウイルスが標的新生物細胞と接触するような様式で、ウイルスを被験体に投与する行動をいう。ウイルス、および処方物、キャリアまたはビヒクルを投与する経路は、標的細胞の位置および種類に依存する。広範囲の種類の投与経路が使用され得、以下でさらに詳細に考察される。
【００４４】
「腫瘍崩壊性ウイルス」とは、新生物細胞において優先的に増殖し、そしてそれを殺すウイルスである。腫瘍崩壊性ウイルスは、天然に存在するウイルスであり得るか、または操作されたウイルスであり得る。腫瘍崩壊性ウイルスはまた、レオウイルスについて詳細に記載したような免疫防護されたウイルスおよび再組合せウイルスを含む。天然の供給源から単離され得、研究室でヒトによって意図的に改変されていない場合に、ウイルスは「天然に存在する」。例えば、ウイルスは、「野外供給源」、つまり感染した動物に由来し得る。ヒトの介入によって改変されている場合に、ウイルスは「操作されている」
「腫瘍を処置または軽減する」とは、腫瘍の症状を軽減または除去すること、あるいは腫瘍の進行を遅延させることを意味する。軽減は、好ましくは少なくとも約１０％、より好ましくは少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％である。
【００４５】
「転移性の腫瘍」とは、同じ動物の別の場所に位置する腫瘍から転移している腫瘍である。
【００４６】
「有効量」とは、企図する効果を生じるために十分である、照射因子またはレオウイルスの量である。腫瘍を処置または改善するために使用される照射因子について、有効量は、腫瘍の症状を軽減または除去するか、あるいは腫瘍の進行を遅延させるために十分である、照射因子の量である。腫瘍を照射因子に対して感作するためのレオウイルスについて、有効量は、腫瘍の照射因子に対する感受性を増大させるために十分であるレオウイルスの量である。
【００４７】
（方法）
レオウイルスは、活性化されたｒａｓ経路を有する細胞において選択的に複製するので、ｒａｓ活性化新形成に対して有効な治療的因子である。（米国特許第６、１３６、３０７号）。ｒａｓ経路は、正常な細胞では活性化されておらず、そのため、レオウイルスは、高い選択性で新生物細胞を殺す。１つの理論に限定されないが、正常な細胞におけるウイルス遺伝子の転写は、ｒａｓ活性化細胞においては観察されない、およそ６５ｋＤａの細胞内タンパク質（二本鎖ＲＮＡ活性化タンパク質キナーゼ（ＰＫＲ）であることが決定されている）のリン酸化と相関すると考えられる。ＰＫＲのリン酸化は、転写の阻害を誘導し、そのため、ウイルスの複製は完成され得ない。しかし、ｒａｓ活性化細胞では、ｒａｓまたはその下流の因子が、ＰＫＲのリン酸化を阻止し、それによってウイルスの翻訳および複製が続行することが可能となる。
【００４８】
本発明において、本発明者らは、予期せぬことに、レオウイルスが新生物細胞の放射線に対する感受性を増大し得ることを発見した。首領域にいくつかの病巣を有する頭部および首の癌患者を放射線療法で処置したが、処置した病巣は、適度の応答の後で再び迅速に拡大した。その後、レオウイルスを病巣の１つに注入し、５０日後に異なる病巣を照射した。この時、照射は、腫瘍塊の顕著な減少を生じ、このことは、レオウイルスが、腫瘍細胞を放射線に対して感作し得ることを示す。さらに、これらの結果はまた、レオウイルスおよび放射線が、同時または同じ位置で投与されなけらばならないわけではないことを示す。これは、レオウイルスの局所的投与が、全身性の感作効果を誘導し得るためである（実施例１）。
【００４９】
本発明において、レオウイルスが、レオウイルスの非存在下での放射線の効果と比較して少なくとも約２０％は、細胞または動物の放射線に対する感受性を増大させることが好ましい。感受性の増大は、より好ましくは、少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、またはそれよりも大きい。最も好ましい実施形態において、レオウイルスは、レオウイルスの非存在下では放射線に対して耐性である腫瘍を感作するために有用であり、そしてその感作効果は数字では表現され得ない。
【００５０】
細胞または腫瘍の放射線への感受性は、当該分野で確立された方法に従って観察または測定され得、疾患の性質によって変化し得る。例えば、新生物細胞の放射線への感受性は、腫瘍のサイズまたは新生物細胞の成長速度によって決定され得る（例えば、実施例１を参照のこと）。感受性はまた、同種の症状または疾患指標（例えば、白血病患者における血液細胞数または肝癌患者における肝機能）の減少として観察され得る。あるいは、感受性は、照射された腫瘍が、再度拡大し始めるか、あるいは元のサイズにまで戻る能力を有さないこととして評価され得る。このような不能は、照射された腫瘍が、照射後に、再度拡大し始めるか、あるいは元のサイズにまで戻るために経過する時間によって、決定され得る。この時間が長いほど、処置への感受性がより高いことが示される。
【００５１】
本発明は、新生物細胞の任意の照射因子（Ｘ線、γ線（例えば、ラジウム、ウラン、またはコバルト６０から生成されるγ線）、および粒子ビーム（例えば、電子、中性子、イオン（ｐｉｏｎ），および重イオン）、が挙げられるが、これらに限定されない）に対する感受性を増大させるために使用され得る。照射は、外部放射線療法または内部放射線療法（近接照射療法、介在性照射、および腔内性照射が挙げられる）の形態であり得る。照射因子は、放射免疫療法として抗体と結合し得るか、または手術内放射線療法として手術中に使用される。
【００５２】
標的新生物細胞と最終的に接触し得るような様式で、レオウイルスは投与される。ウイルス、および処方物、キャリアまたはビヒクルを投与する経路は、標的細胞の位置および型に依存する。広範囲の種類の投与経路が使用され得る。例えば、アクセス可能な固形新生物について、レオウイルスは、新生物への直接的な注射によって投与され得る。造血細胞の新生物については、例えば、レオウイルスは、静脈内または脈菅内に投与され得る。体内の容易にアクセスできない新生物（例えば、転移性新生物）について、哺乳動物の体を通って全身的に輸送され得、それによって新生物に到達するような様式で（例えば、静脈内または筋肉内に）、レオウイルスが投与される。あるいは、レオウイルスは、１つの固形の新生物に直接的に投与され得、次いで、体を通って転移性新生物へと全身的に運ばれる。レオウイルスはまた、皮下に、腹膜内に、包膜内に（例えば、脳腫瘍に対して）、局所的（例えば、黒色腫に対して）、経口的に（例えば、口腔の新生物または食道の新生物に対して）、直腸へ（例えば、結腸直腸の新生物に対して）、膣へ（例えば、頚部の新生物または膣の新生物に対して）、鼻腔内へ、または吸入スプレーによって（例えば、肺の新生物に対して）投与され得る。
【００５３】
レオウイルスまたは照射因子は、１度の投薬または複数の投薬（すなわち、１度以上の投薬）で投与され得る。複数の投薬は、異なる部位または異なる経路で同時に投与され得るか、あるいは継続的に（例えば、数日または数週間の期間にわたって）投与され得る。レオウイルスは、好ましくは、放射線の前に、または放射線と同時に投与される。
【００５４】
レオウイルスは、好ましくは、単位投薬形態で処方され、各投薬は、約１０２ｐｆｕ〜約１０１３ｐｆｕのレオウイルスを含む。用語「単位投薬形態」とは、ヒト被験体および他の哺乳動物への単位的投薬に適した物理的に別個の単位をいい、各単位は、適切な薬学的賦形剤と共同で、所望の治療効果を生じるように計算された所定の量のレオウイルスを含む。
【００５５】
本発明は、任意の動物被験体、好ましくは哺乳動物に適用され得る。哺乳動物は、好ましくは、イヌ、ネコ、げっ歯類、家畜（例えば、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマ、およびブタ）、ヒトならびに非ヒト霊長類からなる群から選択される。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
【００５６】
本発明は、他の腫瘍療法（例えば、化学療法、手術、および／または免疫療法）と組合わせられ得る。
【００５７】
本発明はさらに、被験体を放射線に曝露する前に有効量のレオウイルスを被験体に投与することによって、被験体の腫瘍が放射線に対する耐性を発症することを予防する方法を提供する。既に考察したように、レオウイルスは、腫瘍のレオウイルスとの接触を究極的に誘導する任意の様式で（例えば、静脈内に、筋肉内に、および皮下的に）投与され得る。好ましくは、レオウイルスは標的腫瘍内に投与される。
【００５８】
レオウイルスに加えて、他の腫瘍崩壊性ウイルスが、レオウイルスと同じ様式で本発明を実施するために使用され得る。特に、腫瘍崩壊性ウイルスは、放射線とは異なる部位または異なる時点で投与され得る。例えば、ウイルスが全身的に投与され、そして放射線が１つの局所的な腫瘍に与えられる。結果として、照射された局所的な腫瘍は、ウイルスの非存在下よりも放射線に対してより高い感受性を示す。さらに、ウイルスまたは照射を受容していない同じ被験体の他の腫瘍もまた、ウイルスの非存在下よりも放射線に対してより感受性となり得る。同様に、ウイルスが局所的な腫瘍に投与され得、その一方、別の局所的な腫瘍が照射され、そして、これらの両方の腫瘍、および同じ動物の他の腫瘍が、ウイルスの非存在下よりも放射線によってより効果的に処置され得る。
【００５９】
数種類の腫瘍崩壊性ウイルスが、以下で考察され、当業者は、本明細書の開示および当該分野の利用可能な知識に従って、同様にさらなる腫瘍崩壊性ウイルスを使用して本発明を実施し得る。腫瘍崩壊性ウイルスは、ｍｙｏｖｉｒｉｄａｅ、ｓｉｐｈｏｖｉｒｉｄａｅ、ｐｏｄｐｖｉｒｉｄａｅ、ｔｅｃｉｖｉｒｉｄａｅ、ｃｏｒｔｉｃｏｖｉｒｉｄａｅ、ｐｌａｓｍａｖｉｒｉｄａｅ、ｌｉｐｏｔｈｒｉｘｖｉｒｉｄａｅ、ｆｕｓｅｌｌｏｖｉｒｉｄａｅ、ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、ｉｒｉｄｏｖｉｒｉｄａｅ、ｐｈｙｃｏｄｎａｖｉｒｉｄａｅ、ｂａｃｕｌｏｖｉｒｉｄａｅ、ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ、ａｄｎｏｖｉｒｉｄａｅ、ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ、ｐｏｌｙｄｎａｖｉｒｉｄａｅ、ｉｎｏｖｉｒｉｄａｅ、ｍｉｃｒｏｖｉｒｉｄａｅ、ｇｅｍｉｎｉｖｉｒｉｄａｅ、ｃｉｒｃｏｖｉｒｉｄａｅ、ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ、ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ、ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ、ｃｙｃｔｏｖｉｒｉｄａｅ、ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ、ｂｉｒｎａｖｉｒｉｄａｅ、ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ、ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ、ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ、ａｒｅｎａｖｉｒｉｄａｅ、ｌｅｖｉｖｉｒｉｄａｅ、ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ、ｓｅｑｕｉｖｉｒｉｄａｅ、ｃｏｍｏｖｉｒｉｄａｅ、ｐｏｔｙｖｉｒｉｄａｅ、ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅ、ａｓｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ、ｎｏｄａｖｉｒｉｄａｅ、ｔｅｔｒａｖｉｒｉｄａｅ、ｔｏｍｂｕｓｖｉｒｉｄａｅ、ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ、ｇｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、またはｂａｒｎａｖｉｒｉｄａｅのファミリーのメンバーであり得る。レオウイルスのように、他の腫瘍崩壊性ウイルスの免疫防護されたウイルスまたは再組合せされたウイルスもまた、本発明に含まれる。さらに、少なくとも２種類の腫瘍崩壊性ウイルス（レオウイルスを含む）の組合せもまた、本発明を実施するために使用され得る。
【００６０】
通常は、ウイルスが細胞内に入る場合、二本鎖ＲＮＡキナーゼ（ＰＫＲ）が活性化され、タンパク質合成を阻止し、ウイルスは、この細胞において複製し得ない。いくつかのウイルスは、ＰＫＲを阻害し、ウイルスタンパク質およびウイルス複製を容易にするシステムを開発している。例えば、アデノウイルスは、小さなＲＮＡであるＶＡ１  ＲＮＡを大量に作製する。ＶＡ１  ＲＮＡは、拡張的な二次構造を有し、通常はＰＫＲを活性化する二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）と競合してＰＫＲに結合する。ＰＫＲを活性化するためには、最小限の長さのｄｓＲＮＡが必要であるので、ＶＡ１  ＲＮＡは、ＰＫＲを活性化しない。その代わりに、ＶＡ１  ＲＮＡは、その大量さによってＰＫＲを隔離する。結果として、タンパク質合成は阻害されず、アデノウイルスは、細胞内で複製し得る。
【００６１】
ｒａｓはＰＫＲを不活性化するので、ｒａｓ活性化新生物細胞は、ＰＫＲによるタンパク質合成の阻害の対象ではない。そのため、これらの細胞は、ウイルスがＰＫＲ阻害システムを有さない場合でさえも、ウイルス感染を受けやすい。従って、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、単純疱疹ウイルスまたはパラポックスウイルスｏｒｆウイルス中のＰＫＲインヒビターが、ＰＫＲ機能をもはや阻止しないように変異している場合、生じるウイルスは、ＰＫＲによるタンパク質合成の阻害に起因して正常な細胞には感染しないが、それらは、ＰＫＲ活性を欠如したｒａｓ活性化新生物細胞では複製する。
【００６２】
従って、ＰＫＲの機能を阻害しないように改変または変異させたウイルスは、ｒａｓ活性化新生物細胞において選択的に複製し、正常な細胞は耐性である。好ましくは、ウイルスは、ＶＡ１領域で変異させたアデノウイルス、Ｋ３Ｌ領域および／またはＥ３Ｌ領域で変異させたワクシニアウイルス、ＯＶ２０．０Ｌ遺伝子において変異させたパラポックスウイルスのｏｒｆウイルス、またはＮＳ−１遺伝子において変異させたインフルエンザウイルスである。ウイルスは、好ましくは、γ１３４．５遺伝子において変異させた疱疹ウイルスではない。
【００６３】
ウイルスは、ウイルスのＰＫＲインヒビターの既知の構造−機能関係に従って改変または変異され得る。例えば、Ｅ３タンパク質のアミノ末端領域は、ＰＫＲのカルボキシル末端領域と相互作用するので、このドメインの欠失または点変異によって、抗ＰＫＲ機能が防止される（Ｃｈａｎｇら、１９９２、１９９３、１９９５；Ｓｈａｒｐら、１９９８；Ｒｏｍａｎｏら、１９９８）。ワクシニアウイルスのＫ３Ｌ遺伝子は、ＰＫＲの偽基質（ｐｓｅｕｄｏｓｕｂｓｔｒａｔｅ）であるｐＫ３をコードする。Ｋ３Ｌ内での機能損失型の変異が存在する。ｅＩＦ−２の残基７９〜残基８３と相同であるＫ３Ｌタンパク質のＣ末端部分内での切断または点変異は、ＰＫＲ阻害活性を失くす（Ｋａｗａｇｉｓｈｉ−Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、１９９７）。
【００６４】
別の例が、Ｅ１Ａ領域での２４塩基対の欠失を有する変異アデノウイルスである、デルタ２４ウイルスである（Ｆｕｅｙｏら、２０００）。この領域は、細胞内の腫瘍サプレッサーであるＲｂに結合してＲｂ機能を阻害することの原因であって、この阻害によって、細胞内増殖機構、従ってウイルス複製が制御できない様式で進行することを可能にする。デルタ２４は、Ｒｂ結合領域において欠失を有し、Ｒｂに結合しない。そのため、変異ウイルスの複製は、正常な細胞ではＲｂによって阻害される。しかし、Ｒｂが不活性化されれおり、そして細胞が新生物となっている場合、デルタ２４はもはや阻害されない。代わりに、変異ウイルスは、Ｒｂ欠失細胞で効果的に複製し、それを崩壊する。
【００６５】
さらに、小水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）は、特異的に新生物細胞を殺す（そして、インターフェロンが、必要に応じて添加され得る）。リボヌクレオチドリダクターゼの発現を欠失する単純疱疹ウイルス１（ＨＳＶ−１）変異体であるｈｒＲ３は、結腸癌細胞では複製するが、正常な肝臓細胞では複製しないことが示された（Ｙｏｏｎら、２０００）。ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）は、悪性腫瘍において優先的に複製し、最も一般的に使用される株は７３−Ｔである（Ｒｅｉｃｈａｒｄら、１９９２；Ｚｏｒｎら、１９９４；Ｂａｒ−Ｅｌｉら、１９９６）。ワクシニアウイルスは、いくつかの悪性腫瘍細胞株において増殖した。脳炎ウイルスは、マウス肉腫腫瘍において腫瘍崩壊性効果を有することが示されたが、正常な細胞でのその感染性を減少させるために弱毒化が必要である。腫瘍の退行が、帯状疱疹、肝炎ウイルス、インフルエンザ、水痘、および麻疹ウイルスに感染した腫瘍患者において、記載されている（総説については、Ｎｅｍｕｎａｉｔｉｓ、１９９９を参照のこと）。
【００６６】
腫瘍崩壊性ウイルスは、天然に存在するウイルスであり得るか、または改変したウイルスであり得る。ウイルスは、新生物細胞への投与の前に、化学的にまたは生化学的に前処理され得る（例えば、プロテアーゼ（例えば、キモトリプシンまたはトリプシン）による処理）。プロテアーゼによる前処理によって、ウイルスの外側のコートまたはカプシドが除去され、ウイルスの感染性が増大し得る。ウイルスは、ウイルスに対する免疫を開発した哺乳動物の免疫応答を減少または防ぐために、リポソームまたはミセル中にコーティングされ得る（ＣｈａｎｄｒａｎおよびＮｉｂｅｒｔ、１９９８）。例えば、ビリオンは、ミセル形成濃度の硫酸アルキル洗浄剤の存在下でキモトリプシンにより処理され得、新しい感染性サブビリオン粒子を生成する。腫瘍崩壊性ウイルスはまた、再組合せしたウイルスであり得る。
【００６７】
ウイルスは、遺伝子治療の目的のための遺伝子を送達するためのビヒクルでないことが、好ましい。例えば、ウイルスは、アデノウイルスのＥ１Ａ遺伝子、ｐ５３腫瘍サプレッサー遺伝子、プロドラッグコード遺伝子（Ｃｈｍｕｒａら、１９９９；２００１）または放射線誘導性プロモーターの制御下の遺伝子を送達するように操作されている。実際には、これらのウイルスは、通常は新生物細胞において優先的に複製せず、従って腫瘍崩壊性ウイルスではない。ウイルスは、操作されたアデノウイルスまたは疱疹ウイルス、あるいは機能的なＥ１Ａタンパク質を発現するウイルスではないことがまた、好ましい。
【００６８】
ウイルスが、免疫応答性の哺乳動物に全身的に投与された場合、哺乳動物は、ウイルスに対して免疫応答を生じ得る。ウイルスが、哺乳動物が免疫を開発していないサブタイプである場合、またはウイルスが、本明細書に既に記載したように免疫保護されるように（例えば、外側カプシドのプロテアーゼ消化、またはミセル中のパッケージングによって）改変されている場合に、このような免疫応答は避けられ得る。
【００６９】
あるいは、哺乳動物のウイルスに対する免疫応答性が、一般的に免疫系を抑制するための当該分野で公知の薬物の同時投与（Ｃｕｆｆら、１９９８）、または抗−抗ウイルス抗体の代替的な投与のいずれかによって、抑制され得ることが企図される。哺乳動物のウイルスに対する体液性免疫もまた、抗ウイルス抗体を除去するための血液のプラズマフォレシス（ｐｌａｓｍａｐｈｏｒｅｓｉｓ）によって、一時的に減少または抑制され得る。哺乳動物のウイルスに対する体液性免疫はさらに、非特異性免疫グロブリンの哺乳動物への静脈内投与によって、一時的に減少または抑制され得る。
【００７０】
ウイルスは、抗−抗ウイルス抗体の投与と組合わせて、免疫応答性の哺乳動物に投与され得ることが企図される。本発明において使用される抗−抗ウイルス抗体は、例えば、抗−抗レオウイルス抗体、抗−抗アデノウイルス抗体、抗−抗ＨＳＶ抗体、抗−抗ワクシニアウイルス抗体、抗−抗インフルエンザ抗体および抗−抗パラポックスｏｒｆウイルス抗体から選択される。このような抗体は、当該分野で公知の方法によって製造され得る（例えば、Ｈａｒｌｏｗら、１９８８を参照のこと）。このような抗−抗ウイルス抗体は、ウイルスの投与の前に、同時に、またはすぐ後に投与され得る。好ましくは、有効量の抗−抗ウイルス抗体が、哺乳動物によるウイルスへの免疫応答を減少または除去するために十分な時間で投与される。
【００７１】
本発明の１つの実施形態において、ウイルス治療の計画は、１回以上投与される。ウイルス治療の最初の投与の後で、後のウイルスの投与を妨害し得る特定の免疫構成成分が、患者から除去される。これらの免疫構成成分としては、Ｂ細胞、Ｔ細胞、抗体などが挙げられる。
【００７２】
Ｂ細胞集団またはＴ細胞集団のいずれかの除去は、いくつかの方法によって達成され得る。１つの方法において、血液が濾過され、血液透析（ｈｅｍｅ−ｄｉａｌｙｓｉｓ）が行われ得る。別の方法は、細胞集団を除去し得る体外化合物と（例えば、除去される細胞集団上の特定のレセプターを認識する固定化した抗体と）組合せた、血液の濾過である。細胞集団の除去のためのなお別の方法は、免疫抑制によるものである。これは、ファーストライン（ｆｉｒｓｔ  ｌｉｎｅ）放射線療法または環状ステロイド（例えば、シクロスポリン）によって行われ得る。
【００７３】
抗ウイルス抗体の選択的除去はまた、患者の免疫系が治療的に投与したウイルスが除去されることを予防する。抗体は、いくつかの方法によって除去され得る。その方法としては、以下が挙げられる：血液透析し、血液を、固定化したウイルスに通すこと（選択的に抗体を除去する）；血液透析し、血液を、固定化したプロテインＡ（ＰＲＯＳＯＲＢＡ（Ｃｙｐｒｅｓｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）として市販）に通すことによる、全てのＩｇＧ抗体の除去による；または、ヒト化した抗イディオタイプ抗体の投与（ここで、このイディオタイプは、投与されるウイルスに対するものである）による。
【００７４】
本発明の別の方法は、ウイルスをマスクすることまたはウイルスの免疫認識を損傷させることによって、正常な免疫機能を損傷させることなく、ウイルスが全身的に作用することを可能とすることである。患者の免疫系が、投与したウイルスを認識するのを防ぐために、ウイルスは、非ウイルス毒性（ｎｏｎ−ｖｉｒｏｔｏｘｉｃ）のヒト化抗体でコーティング（例えば、抗体のＦａｂ部分によるコーティング）され得るか、またはミセル中にコーティングされ得る。さらに、ウイルスは、キモトリプシンで処理され得、感染性のサブウイルス粒子（ＩＳＶＰ）を生じる。ＩＳＶＰは、単独でか、またはウイルス全体と組合わせるかのいずれかによって使用され得、弱く認識されるか、または患者の免疫系によって先には防がれていない、いずれかの因子を提供する。
【００７５】
本発明の別の実施形態は、投与の後における患者からのウイルスの除去を含む。本方法は、免疫抑制されているか、または免疫不全であるかのいずれかの患者において使用されるので、処置経過の後でウイルスを血流中から除去することは重要であり得る。ウイルスは、血液透析、Ｂ細胞増殖性薬剤、またはウイルスに対する免疫応答を刺激するためのアジュバント（例えば、ＵＶで不活性化したウイルス、またはフロイントアジュバント）、と組合せた体外の抗ウイルス抗体を使用する、アフィニティクロマトグラフィーによって除去され得る。
【００７６】
以下の実施例は、本発明を例示するために提示され、いかなる様式であっても本発明の範囲を限定するように解釈されるべきではない。
【実施例】
【００７７】
以下の実施例において、以下の略語は以下の意味を有する。定義されていない略語は、一般的に受け入れられている意味を有する。
【００７８】
ＯＣ＝摂氏温度
ｈｒ＝時間
ｍｉｎ＝分
μＭ＝マイクロモル濃度
ｍＭ＝ミリモル濃度
Ｍ＝モル濃度
ｍｌ＝ミリリットル
μＬ＝マイクロリットル
ｍｇ＝ミリグラム
μｇ＝マイクログラム
ＦＢＳ＝仔ウシ血清
ＤＴＴ＝ジチオトレイトール
ＰＢＳ＝リン酸緩衝生理食塩水
ＤＭＥＭ＝ダルベッコ改変イーグル培地
ＭＥＭ＝改変イーグル培地
ＭＯＩ＝感染多重度
ＰＦＵ＝プラーク形成単位
ＰＫＲ＝二本鎖ＲＮＡ活性化プロテインキナーゼ
ＥＧＦ＝上皮増殖因子
ＰＤＧＦ＝血小板由来増殖因子
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド
ＣＰＥ＝細胞変性効果
ｃＧＹ＝センチグレイ
（実施例１）
（レオウイルスおよび放射線療法との組合せ）
４８歳の女性患者は、頭部および頚部の腫瘍（鼻咽頭腫瘍）を有していた。頚部領域に３つの大きな病変があり、１つは右側に、１つは顎の下に、そして３つ目は左側にあった。右側の１つが最も大きく、ほぼ彼女の耳から肩まで覆っていた。この患者を化学療法および放射線療法のいずれかで処置したが、効果がないか、または適切な応答のすぐ後で再発した。
【００７９】
化学療法および放射線療法の後で、この患者をレオウイルス治療で処置した。従って、それぞれ０日目、２日目および４日目に、１×１０９個のＤｅａｒｉｎｇ株レオウイルスを左側の病変内に注射した。レオウイルスは、以前に記載したように調製した（米国特許出願公開第２００２００３７５７６号）。各腫瘍のベースラインレベルとして、０日目に腫瘍を測定した。表１に示すように、左側の病変および顎の下の病変は、それぞれ、０日目には約４ｃｍ２および１９ｃｍ２と測定された。右側の病変は、大きすぎて意味ある測定ができないので、測定しなかった。
【００８０】
【表１】
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他のベースライン測定のために、血液を患者から得て、レオウイルス特異的なプライマーを使用する逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴＰＣＲ）によって、レオウイルスの存在を決定した。さらに、患者血清中の抗レオウイルス中和抗体の力価も同様に決定した。この決定は、希釈した血清サンプルをＬ９２９細胞およびレオウイルスを含む培養物とインキュベートすることによって行った。Ｌ９２９細胞のレオウイルスによる感染は、感染した細胞において細胞変性効果（ＣＰＥ）を生じるが、ＣＰＥは、抗レオウイルス中和抗体によって阻害され得る。従って、血清中の中和抗体の存在が、このアッセイでのＣＰＦの阻害によって示され、そして細胞の５０％がＣＰＥを発生することを阻害し得る血清の最も高い希釈係数が、抗体の推定力価であった。表１に示すように、レオウイルスは、０日目ではＲＴＰＣＲによって検出でき得ず、抗レオウイルス中和抗体のレベルは、無視し得る程低いものであった。
【００８１】
次いで、腫瘍サイズ、レオウイルスおよび抗レオウイルス抗体が周期的に測定され、その結果を表１に示す。左側の腫瘍および顎の下の病変の両方が、数週間は拡大し続けた。しかし、２８日目において、腫瘍の測定により、左側の病変（注射部位）サイズが減少しており、明白に柔らかかった。顎の下の病変もまた、少し減少していた。右側の病変は、大きすぎて正確に測定できなかったが、変化していないようであった。有意なレベルの抗レオウイルス抗体が、レオウイルス注射後に血清中に現れ、このことは、レオウイルスが、患者内で複製し、免疫系によって認識されたことを示す。しばしば、ウイルス粒子が、ＲＴ−ＰＣＲによって血液中で検出され得ることさえあった。そのため、レオウイルスは、注射部位を越えて広がっていた。
【００８２】
５０日目において、患者は、電子ビームを使用のみで、右側の腫瘍塊に対して放射線療法を受けた。治療は、１つの腫瘍用量につき３０００ｃＧｙ（１００％の等線量で定義した）で、１日１０回に分割して１４日間行った。驚くべきことに、７０日目の視覚による評価によって、照射がただの２０日間開始された場合でさえ、この腫瘍がいくらかの縮小を示すことが明らかになった。９８日目までに、この腫瘍は、ベースラインサイズの約１０〜２５％まで減少した。従って、レオウイルスは、腫瘍細胞を放射線療法に対して感作し得る。右側の腫瘍塊中の細胞は、レオウイルスで注射されていないので、この効果は、レオウイルスに直接接触した細胞に限定されない。この現象は、レオウイルスによる被験体中の１つの腫瘍の処置が、同じ被験体中の別の腫瘍の減少を誘導し得るという本発明者らの以前の観察と一致する。
【００８３】
さらに、レオウイルスで注射されたが、照射はされなかった左側の病変は、右側の病変の照射の２０日後に（７０日目）、ベースラインサイズの４分の１にまで縮小し、これは、照射およびレオウイルス投与が、互いに対して巻き添え効果を誘導し得ることを示す。巻き添え効果の別の推定される結果として、照射領域でもなく、レオウイルスによって注射されてもいない顎の下の病変が、９８日目においてベースラインサイズの４分の１まで縮小していた。
【００８４】
これらの結果の観点から、レオウイルス治療と放射線療法との組合せは、驚くほどに有効な処置養生法であって、その効果は、レオウイルスまたは放射線のいずれかを受容する病変に限られない。代わりに、同じ被験体の全ての腫瘍（転移性の腫瘍を含む）が、レオウイルスと放射線の組み合わせによって阻害される。
【国際調査報告】
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