(57)【要約】本発明は、ＭＨＣリガンド、例えばＭＨＣ結合ペプチド、を体臭を変更する薬剤の製造のために使用することに関する。特に、本発明は化粧品及び医薬品の分野に適用できる。
2005532299.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
体臭を変更する薬剤の製造のためのＭＨＣリガンドの使用。
【請求項２】
化粧品の組成物の製造のための請求項１記載の使用。
【請求項３】
化粧品の組成物が香料である請求項２記載の使用。
【請求項４】
治療用組成物の製造のための請求項１記載の使用。
【請求項５】
治療用組成物が生殖医薬における使用のための組成物である請求項４記載の使用。
【請求項６】
ヒト又は動物用医薬における使用のための請求項４又は５記載の使用。
【請求項７】
ＭＨＣリガンドがＭＨＣクラスＩリガンド又はＭＨＣクラスＩＩリガンドである請求項１から６までのいずれか１項記載の使用。
【請求項８】
ＭＨＣリガンドが、ＭＨＣ分子に結合可能なペプチド又はペプチド誘導体又は合成非ペプチド化合物である請求項１から７までのいずれか１項記載の使用。
【請求項９】
体臭を変更する対象に、少なくとも１つのＭＨＣリガンドを活性薬剤として含む組成物を適用することを含む体臭を変更する方法。
【請求項１０】
局所的な方法による適用を含む請求項９記載の方法。
【請求項１１】
エアロゾルとしての適用を含む請求項９記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも１つのＭＨＣリガンドを活性薬剤として含む体臭を変更する組成物。
【請求項１３】
化粧品の組成物である請求項１２記載の組成物。
【請求項１４】
治療用組成物である請求項１２記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＭＨＣリガンド、例えばＭＨＣ結合ペプチドの、体臭を変更する薬剤の製造のための使用に関する。特に、本発明は化粧品及び医薬品の分野に適用できる。
【０００２】
主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子はＴリンパ球による認識のために細胞表面に、自己又は非自己のペプチドを提示している。天然の母集団では、ＭＨＣ遺伝子は非常に多型である（１）；ＭＨＣ分子の変異性は著しく異なったリガンドの特異性（２）をもたらし、その結果病原体及び寄生虫に対する耐性を制御している。いくつかの機構がＭＨＣ遺伝子における、高度な対立遺伝子の多様性の維持を説明するために提唱されている（３−５）。ＭＨＣに基づいた性的な選別戦略（６）が、魚類（７、８）、マウス（９）、及び殊によるとヒト（１０）において、嗅覚の機構に関与していることが知られている。パートナーの選択を誘導するために、オスの匂いを利用し、イトヨ（Gasterosteus aculeatus）のメスは子孫のＭＨＣの多形性の程度を最適化している（７、８）；しかしながら、匂いのシグナルの分子の性質は明らかでない。
【０００３】
体臭及び生殖行動は多くの種において、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）の高度に多型的な遺伝子によって影響されている（１１、１２）。ＭＨＣ分子は細胞表面に提示するために細胞内ペプチドの所定のサブセットを試す；結合ペプチドの母集団の化学的な多様性は、直接的にリガンドが結合するＭＨＣ分子の溝の分子構造によって決定される（２）。この結果、個々の認識のための情報は、多型的なＭＨＣ分子そのもの、又は、そのリガンドの化学的な特性によって付与される。その分子の性質に関わらず、実験的状況においては、ＭＨＣに関連した性的選別の際に機能する匂い物質は、すくなくとも２つの特性を有すると予想することができる。第１に、それらはパートナーの選択結果を変更できると予想される。第２に、この効果は交配するパートナーのＭＨＣの状態に依存すると予想される。マウス（９）及びヒト（１０）におけるＭＨＣに関連した交配の選択性は、以前より知られてきたが、この現象はつい最近になって、魚類でも説明されるようになった（７、８）。我々はこの実験システム及び上記の基準を、潜在的匂いシグナルを同定するために用いた。
【０００４】
パートナーの選択は実験的に、ＭＨＣリガンドに相似した合成ペプチドにより変更されうることが示された。ほとんどの場合、産卵期のメスのトゲウオは、ペプチドが添加されたオスの水を、添加されていないオスの水よりも好んだ。しかし、オスの水へのペプチドの添加が、メスにより拒絶された場合には、組み合わせＭＨＣの多様性は（クラスＩＩＢ対立遺伝子によって判断された所によると）、ペプチドが添加された水を好んだペアよりも有意に高かった。このようにペプチドは、潜在的パートナーのＭＨＣの多型性の程度を評価するときに、メスのトゲウオの匂いシグナルとして機能する。
【０００５】
ＭＨＣリガンド、特にペプチドのＭＨＣリガンドが体臭を変更する能力があるというこの結果は、全く意外である。これまでペプチドはその質量のために、可能性のある匂い物質として考慮されてこなかった。その代わりに、個体の相応する微生物のフローラは、ＭＨＣの構造により影響され、従って、微生物のＭＨＣ特異的な低分子代謝産物の製造を介して産生され、この代謝産物が体臭の一部を示すと仮定されてきた（１０、１７、１８）。
【０００６】
このように、本発明の対象は、体臭を変更する薬剤の製造のためのＭＨＣリガンドの使用である。本発明は動物、特に脊椎動物、例えば、魚類、両生類、爬虫類、鳥類、及びヒトを含む哺乳類の体臭を変更させることに適している。体臭の変更はパートナーの選択を変更するという結果になる可能性がある。ＭＨＣリガンドはＭＨＣクラスＩ又はクラスＩＩリガンドであってもよい。有利には、ＭＨＣはＭＨＣクラスＩＩリガンドである。ＭＨＣリガンドはペプチド、特に合成ペプチドであってもよい。このペプチドは有利には、５−２０アミノ酸、より有利には、６−１５アミノ酸の長さを有する。更に、このペプチドは、有利には、対立遺伝子特異的なＭＨＣ分子に結合するのに必要なアンカーアミノ酸残基を示す（２）。更に、ＭＨＣリガンドはペプチド誘導体、すなわちペプチドのようなＭＨＣ結合特性を有するが、化学修飾された物質であってもよい。ＭＨＣリガンドとして作用することができるペプチド誘導体の製造方法は、参考文献（２）及びその中の引用に記載されている。そのうえ、ＭＨＣリガンドはＭＨＣ分子に結合できる合成の非ペプチド化合物であってもよい。
【０００７】
本発明の有利な実施態様は化粧品分野、殊に香料の製造に関する。現在まで、香料の調合は天然、又は合成基礎物質で、経験主義上の知識をもとに実施されている。本発明の基礎を成す発見の観点から、規定されたＭＨＣリガンド、又はむしろいくつかのＭＨＣリガンドの組合せを香料に添加することにより、体臭は予定されたように影響されうる。更に、合成ペプチドは完全に又は少なくとも部分的に、現在まで香料に存在する高価な物質を、より安価で化学的に確定された香料の組成物を実現するために置き換えることができる。
【０００８】
本発明による化粧品の組成物には、ＭＨＣリガンド以外に通常の化粧品の成分、例えば他の活性物質、キャリアー、希釈剤、及び／又は助剤を含む。例えば、化粧品の組成物は液体、ゲル、クリーム、スラリー、軟膏、エアロゾル、スプレー、懸濁液、パウダー等として他の成分、例えば更なる着臭剤、助剤、キャリアー及び／又は希釈剤と一緒に調製することができる。この組成物は局所的に、経口的に又は鼻に、又はその他の適した手段で与えられることができる。有利には、組成物は個体の皮膚及び／又は洋服に、この化合物を個体を取り囲む周囲、例えば空間に、達するような方法で用いられる。この活性物質の化粧品の組成物中の濃度は、有利にはサブナノからマイクロモーラーの範囲で、より有利には、０．０１ｎＭ〜１００μＭの範囲内である。
【０００９】
更なる本発明の実施態様では、体臭を変更する組成物、これはＭＨＣリガンドを活性薬剤として含む、はヒト又は動物用医薬における治療用の適用としても、例えば、生殖医薬における使用にも使用される可能性がある。例えば、初期流産の多いカップルでは彼らのＭＨＣ型の多くが高い同一性を示すことが知られている（参考文献１２及びその中の引用）。従って、異なった合成ＭＨＣペプチドを、一方のパートナーに使用すると、流産の割合は減少する可能性がある。更に、ヒト医薬及び動物用医薬における更なる適用、例えば選択された育種における交配の成功の増加などが考えられる。
【００１０】
治療用の適用における組成物には、活性物質を有利にはサブナノからマイクロモーラーの範囲で、より有利には、０．０１ｎＭ〜１００μＭの範囲内の濃度で含む。この他に、この組成物は、薬理学的に許容できるキャリアー、希釈剤、及び／又は助剤も含みうる。この治療用組成物は、例えば、この化合物を個体を取り囲む周囲、例えば空間に、達するような方法で、例えば化粧品の組成物について前記したように適用することができる。
【００１１】
更に、本発明は次の図面及び実施例によって詳細に説明される。
【００１２】
図１
ペプチドは匂いの合図として、パートナーの選択において認識される。ａ、ＭＨＣリガンドの構造的特徴を有するペプチドはパートナーの選択を変更する。産卵期のメスのトゲウオをオスの水で合成ペプチドの添加あり（左パネル）又は、なし（右パネル）でテストした。それぞれのカテゴリーで余計に費やされた時間（秒）が示されている（０は魚が３００秒ずつ流室の２つのカラムにいたことを示す）。５つのペプチド（ＦＡＰＧＮＹＰＡＬ、ＡＳＮＥＮＭＥＴＭ、ＡＡＰＤＮＲＥＴＦ、ＳＹＦＰＥＩＴＨＩ及びＳＹＩＰＳＡＥＫＩ）を終濃度５ｎＭで添加した。全体で、メス（ｎ＝２４）は平均で３６８．９＋／−３６．５秒ペプチドの混合物を含んだカラムで過ごした。ｂ、交配するペアのＭＨＣの多様性は、ペプチドを添加した後のパートナーの選択の結果を決定した。メスとオスの魚のペアにおける異なるＭＨＣクラスＩＩＢ対立遺伝子の総数を、ペプチドを添加されたオスの水を好んだ、又は拒絶したメスのグループと比較した。ＭＨＣの多様性は、メスがペプチドを添加された水を拒絶したペアでより高かった。箱ヒゲ図は中央値、４分位数、及び１０分位数を表す。
【００１３】
表１
天然のオスの匂いと合成のペプチドは類似した特性をパートナーの選択実験において示した。
【００１４】
実施例
１．方法
１．１ＭＨＣの特性決定
ＭＨＣクラスＩＩＢ遺伝子の特性決定を記載された通りに実施した（７、２９）。
【００１５】
１．２性的な選別実験
トゲウオの供給源は記載されている（７）。パートナーの選択を評価するための流路装置は、パートナーの選択の前段階としての、匂いの選択性を測定する。一匹のオスのタンクから一回の実験ごとに水を取り出し、刺激水（ペプチド添加後）、及び対照水（溶媒添加後）として両方を使用した。ペプチドは刺激水の入ったビンに、実験の直前に終濃度１ｍＭで添加した；これは実験隔室を通り抜ける水柱カラム中で５ｎＭにまで希釈される。次のノナペプチドを使用した。ＭＨＣの特異性は括弧内に示した：ＦＡＰＧＮＹＰＡＬ（Ｈ２−Ｋｂ）；ＡＳＮＥＮＭＥＴＭ及びＡＡＰＤＮＲＥＴＦ（Ｈ２−Ｄｂ）；ＳＹＦＰＥＩＴＨＩ及びＳＹＩＰＳＡＥＫＩ（Ｈ２−Ｋｄ）。ペプチドは固相９−フルオレニルメトキシカルボニルケミストリーにより合成した。１種類のペプチドを用いた実験には、ＡＡＰＤＮＲＥＴＦを使用した。全ての実験は記載したように、二重盲検法で実施した。統計的解析をＪＭＰ４によって実施した。
【００１６】
２．結果
トゲウオのＭＨＣ分子のペプチドの結合選択性については知られていない；従って、異なるマウスＭＨＣ分子のリガンドである内因性のマウス及びウィルス性タンパク質由来の合成ペプチドが使用された。このようなペプチドはほぼ確かにＭＨＣの遺伝子型に関わらず、トゲウオに対して異質であることは明らかである。産卵期のメスはオスがいたタンクからの水を、新鮮な水が入ったタンクから取られた水よりも好む（実験Ａ、表１）。この結果、個々のオスから取られた水へのペプチド添加がパートナーの選択の結果を変化させるかを実験した。産卵期のメスを一匹のオスからの水に、５種類の異なるペプチドの混合物の添加あり、なしで流路の２つのカラムの中に入れた。
ほとんどのメスはペプチド添加されたオスの水を、溶媒が添加されたバージョンと比べてより好み（図１ａ）、合成ペプチドはパートナーの選択を変更できることを示した。全体では、ペプチドが添加されたオスの水への選択性は極めて有意であった（３６８．９＋／−３６．５秒対２３１．１＋／−３６．５秒；マッチドペアｔ検定：ｔ＝３．８、ｎ＝２４、ｐ＝０．００１、両側検定）（表１）。しかし、特定のオスとメスの組合せでは、メスはペプチドを添加したオスの水を拒絶した（図１ａ）。メスのトゲウオは、そのパートナーの選択を子孫のＭＨＣの多型性の程度を最適化するように誘導するため（７、８）、実験的な干渉は、もしもメスが合成ペプチドを匂いのシグナルとして受け取っていれば、パートナー選択の間に、有利なＭＨＣの多様性の程度をゆがめることになる。ＭＨＣクラスＩＩＢの遺伝子座（７、１３）における、既知の遺伝子型がこの仮説をテストするために使用された。図１ｂに示された結果は、何も添加されていないオスの水を好んだペアで提示された、組み合わせＭＨＣの多型性は、ペプチドが添加された水の試料を好んだペアよりも有意に高かったことを示す（１１．５（１０、１２．２５）異なる対立遺伝子対９（７、１０）異なる対立遺伝子；中央値（４分位数）；Wilcoxon  マッチドペア  正確確率検定：ｚ＝１．９６、ｎ＝２１、ｐ＝０．０４６、両側検定）。添加された水を拒絶したグループの交配ペアは、平均で、ペプチド添加を好んだグループのペアよりも、野生で捕まえられた魚の母集団で観察された平均の数に近い、多数の検出できる異なるクラスＩＩＢ対立遺伝子を彼らの子孫に受け渡していることに注意すべきである（５．８＋／−０．１３；参考文献７）。後者はこのように、ペプチドを添加された水に引きつけられた。というのもこのペプチドがオスにおけるＭＨＣの多様性を擬似的に増加させたからである。これは合成ペプチドと天然の匂いシグナルの相互作用を示す。異なるＭＨＣクラスＩＩＢ対立遺伝子の最適な数が９〜１１．５であることも、パートナー選択の際に、トゲウオによって用いられた最適化戦略（７、８）に対する更なる証拠である。
【００１７】
上記の実験を１種類のペプチドで繰り返した時（実験Ｃ、表１）、メスのトゲウオは再度ペプチド添加されたオスの水を好んだ（３２７．７＋／−２４．８秒対２７２．３＋／−２４．８秒；マッチドペアｔ検定：ｔ＝２．２、ｎ＝２５、ｐ＝０．０３５、両側検定）。重要なことに、１種類のペプチドを添加されたオスの水の側で余計に費やされた時間は、５種類のペプチドを添加された水の側よりも少ない、という強い傾向があった（２７．７＋／−１２．４秒対６８．９＋／−１８．２秒；マッチドペアｔ検定：ｔ＝１．９、ｎ＝４９、ｐ＝０．０６６、両側検定）。交配するペアにおけるＭＨＣの多様性の類似した分布によれば、これは予想されるべきであり、というのも１種類のペプチドでは推定される匂いの複雑さを、わずかに増加させたに過ぎない。
【００１８】
メスのトゲウオによって認識されるペプチドシグナルの性質は、匂いに関連したパートナー選択において、次のような実験により更に調べられた。第１に、タンクの普通の水にペプチドが及ぼす効果が測定された。この結果はタンクの普通の水にペプチドを添加しても、メスのトゲウオを引きつけないことを示した（実験Ｂ、表１）。むしろ、ペプチドはオスの水と共にあるときのみ認識され（実験Ｃ及びＤ、表１）、他の、殊によると一定のオスの匂いシグナルの存在を示している。産卵期でない魚がオスの水にペプチド存在下、又は非存在下で入れられると、選択性は観察されず（実験Ｅ、表１）、産卵期が認識システムを活性化させる重要なパラメーターであることを示唆している。重要なことに、実験Ｂ及びＥ（表１）もまた、メスがパートナーの選択に関連せずにペプチドを認識している（例えば、食物シグナルなど）、という可能性を排除している。
【００１９】
トゲウオによって用いられる対立遺伝子の計算戦略（７）及び異種交配戦略（８）の両方は、ＭＨＣペプチドリガンドの多様性の評価を必要とする。現在は、ペプチドが嗅覚システムによって認識されるかは、知られていないが、嗅覚受容体の特殊な種類（マウスにおいてＶ２Ｒと名付けられている）は、構造的に小さなペプチドが結合する候補となっている（１４）。確かに、予備的な証拠が、マウスのＶ２Ｒの種類の受容体が、未定のタンパク質の性質を有するフェロモン構成要素と相互作用することを示す（１５）。魚類におけるＶ２Ｒホモログの１つが、アミノ酸アルギニンに高い結合親和性を有することが発見された（１６）が、ペプチド又はタンパク質の効果はこの実験では調べられていない。それらの大きな化学的多様性のために、これまでにシグナル分子として考えられてきた小さな化合物（例えばアミノ酸の代謝物）と比較して（１７、１８）、ペプチドは個々に特異的な情報を、より有する可能性がある。嗅覚の受容体は精巧に敏感で、そのリガンドをサブナノモーラーの濃度範囲で認識する（１４）。数千もの化学的に異なるペプチドが、特有のＭＨＣ分子によって細胞表面において提示されているにも関わらず（１９）、いくつかのペプチドは他のペプチドに比べてより数が多く（２０）、嗅覚の検出に従った濃度で存在している可能性がある。ＭＨＣの多様性の認識には、そのように有力なペプチドの嗅覚の識別は、十分である可能性がある。
【００２０】
ＭＨＣ結合ペプチドは、少なくとも２つの方法で嗅覚受容体のリガンドとなる可能性がある。それらはＭＨＣ分子から放出されて、そして非特異的な担体タンパク質に結合する可能性がある（２１）；そのような方法では、それらは細胞外液中及び体の分泌における移行の間の、酵素による分解を免れる可能性がある（２２、２３）。ペプチドの多様性の一時的な決定子としての多型のＭＨＣ分子に加えて、ＭＵＰｓ（２４）のような多型の担体タンパク質はさらに、嗅覚受容体に提示されたリガンドのレパートリーを変更する可能性がある（２５、２６）。代替的ではあるが、限定的ではない可能性は、ペプチドが可溶性ＭＨＣ分子又は、血精（２７）及び尿（２８）に発見されている、そのフラグメントに結合したままになっていると言うことである。担体分子の分子的な性質にも関わらず、嗅覚受容体による担体結合ペプチドの認識は、Ｔ細胞受容体による認識と似た方法で起こっている可能性がある。
【００２１】
結論として、この結果はＭＨＣリガンドの構造的特徴を有するペプチドは、オスの匂いの個々に特異的な部分を、トゲウオにおいて担っており、またＭＨＣに関連した生殖行動の、げっ歯類やヒトなどの他の種における、これまでの実験結果を説明する概念的な構想を提供するものである。
【００２２】
【表１】
2005532299.tif 000003
【００２３】
【表２】
2005532299.tif 000004
【００２４】
【表３】
2005532299.tif 000005
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】Ａはそれぞれのカテゴリーで余計に過ごされた時間をプロットした図であり、Ｂはメスのパートナー選択において、組み合わせＭＨＣの多様性を示す箱ヒゲ図である。
【図１】
2005532299.tif 000006
【手続補正書】
【提出日】平成16年5月6日(2004.5.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
体臭を変更する薬剤の製造のためのＭＨＣリガンドの使用。
【請求項２】
薬剤が化粧品の組成物である、請求項１記載の使用。
【請求項３】
化粧品の組成物が香料である、請求項２記載の使用。
【請求項４】
薬剤が治療用組成物である、請求項１記載の使用。
【請求項５】
治療用組成物が生殖医薬としての使用のための組成物である、請求項４記載の使用。
【請求項６】
ヒト又は動物用医薬における使用のための請求項４又は５記載の使用。
【請求項７】
ＭＨＣリガンドがＭＨＣクラスＩリガンド又はクラスＩＩリガンドである、請求項１から６までのいずれか１項記載の使用。
【請求項８】
ＭＨＣリガンドが、ＭＨＣ分子に結合可能なペプチド又はペプチド誘導体又は合成非ペプチド化合物である、請求項１から７までのいずれか１項記載の使用。
【請求項９】
体臭を変更する対象に、少なくとも１つのＭＨＣリガンドを活性薬剤として含む組成物を適用することを含む体臭を変更する方法。
【請求項１０】
局所的な方法による適用を含む請求項９記載の方法。
【請求項１１】
エアロゾルとしての適用を含む請求項９記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも１つのＭＨＣリガンドを活性薬剤として含む体臭を変更する組成物。
【請求項１３】
化粧品の組成物である、請求項１２記載の組成物。
【請求項１４】
治療用組成物である、請求項１２記載の組成物。
【国際調査報告】
2005532299.tif 000007
2005532299.tif 000008
2005532299.tif 000009