(57)【要約】本発明は、別の治療剤と組み合わせたイミダゾキノリン薬剤の投与を含む。薬物の組み合わせは、相乗作用量または種々の投薬量で、種々の時間スケジュールで投与され得る。本発明はまた、薬物の組み合わせに関係するキットおよび組成物に関する。この組み合わせは、ＡＤＣＣの増大、免疫応答および／または患者の刺激ならびに特定の障害の処置のために使用され得る。また、本発明は、被験体において抗原特異的免疫応答を誘導するための方法であって、抗原、イミダゾキノリン、および免疫刺激性核酸を、抗原特異的免疫応答を誘導するのに有効な量、被験体に投与する工程を包含する方法も開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体における抗体依存性細胞傷害性を刺激する方法であって、該方法は、抗体と、イミダゾキノリン薬剤およびＣ８置換グアノシンからなる群から選択される薬剤とを、抗体依存性細胞傷害性を刺激する処置を必要とする被験体における抗体依存性細胞傷害性を刺激するのに有効な量、該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２】
前記薬剤が、イミダゾキノリン薬剤である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記被験体にＣ８置換グアノシンを投与する工程をさらに包含する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記被験体にポリアルギニンを投与する工程をさらに包含する、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記被験体に免疫刺激性核酸をさらに投与する工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記免疫刺激性核酸が、ＣｐＧ核酸およびポリＧ核酸からなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記免疫刺激性核酸が、ポリＴ核酸、Ｔリッチ核酸、ＴＧ核酸、ＣｐＩ核酸およびメチル化ＣｐＧ核酸からなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記免疫刺激性核酸が、ホスホロチオエート改変およびペプチド改変からなる群から選択される骨格改変を有する、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記免疫刺激性核酸が、キメラである骨格を有する、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体が、抗癌抗体、抗ウイルス抗体、抗細菌抗体、抗真菌抗体、抗アレルゲン抗体、および抗自己抗原抗体からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記被験体が、喘息／アレルギー、感染性疾患、癌および疣贅からなる群から選択される障害を有するかまたは有する危険性がある、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記イミダゾキノリン薬剤が、前記抗体の前に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記イミダゾキノリン薬剤が、イミダゾキノリンアミンである、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記イミダゾキノリン薬剤が、Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ／Ｒ−８３７およびＳ−２８４６３／Ｒ−８４８からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗体依存性細胞傷害性を刺激するのに有効な量が、相乗作用量である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
被験体における免疫応答を調節するための方法であって、該方法は、免疫刺激性核酸と、イミダゾキノリン薬剤およびＣ８置換グアノシンからなる群から選択される薬剤とを、該免疫応答を調節するのに有効な量、免疫応答を調節する処置を必要とする被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１７】
前記薬剤が、イミダゾキノリン薬剤である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記被験体にＣ８置換グアノシンを投与する工程をさらに包含する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記免疫応答が、Ｔｈ１免疫応答である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記免疫応答が、抗体依存性細胞傷害性である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
前記免疫応答が、先天性免疫応答である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２２】
前記免疫刺激性核酸が、ＣｐＧ核酸およびポリＧ核酸からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２３】
前記免疫刺激性核酸が、ポリＴ核酸、Ｔリッチ核酸、ＴＧ核酸、ＣｐＩ核酸およびメチル化ＣｐＧ核酸からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２４】
前記免疫刺激性核酸が、ホスホロチオエート改変およびペプチド改変からなる群から選択される骨格改変を有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２５】
前記免疫刺激性核酸が、キメラ骨格を有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２６】
前記イミダゾキノリン薬剤が、イミダゾキノリンアミンである、請求項１６に記載の方法。
【請求項２７】
前記イミダゾキノリン薬剤が、Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ／Ｒ−８３７およびＳ−２８４６３／Ｒ−８４８からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２８】
前記免疫応答が、局所的免疫応答である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２９】
前記免疫応答が、粘膜免疫応答である、請求項１６に記載の方法。
【請求項３０】
前記免疫応答が、全身性免疫応答である、請求項１６に記載の方法。
【請求項３１】
前記薬剤が、前記免疫刺激性核酸より前に投与される、請求項１６に記載の方法。
【請求項３２】
前記免疫応答を調節するのに有効な量が、相乗作用量である、請求項１６に記載の方法。
【請求項３３】
前記被験体にポリアルギニンを投与する工程をさらに包含する、請求項１６に記載の方法。
【請求項３４】
前記被験体にＣ８置換グアノシンを投与する工程をさらに包含する、請求項１６に記載の方法。
【請求項３５】
前記被験体に障害特異的医薬を投与する工程をさらに包含する、請求項１６に記載の方法。
【請求項３６】
前記障害特異的医薬が、癌薬、喘息／アレルギー薬、感染性疾患薬、および疣贅薬からなる群から選択される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記癌薬が、化学療法剤、免疫療法剤、および癌ワクチンからなる群から選択される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記喘息／アレルギー薬が、ステロイド、免疫調節剤、抗炎症剤、気管支拡張剤、ロイコトリエン調節剤、β２アゴニスト、および抗コリン作用剤からなる群から選択される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
前記抗微生物薬が、抗細菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、および抗寄生生物剤からなる群から選択される、請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
前記被験体を抗原に曝露する工程をさらに包含し、前記免疫応答が、抗原特異的免疫応答である、請求項１６に記載の方法。
【請求項４１】
前記抗原が、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、寄生生物抗原、および真菌抗原からなる群から選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記被験体が、感染性疾患を有するかまたは感染性疾患を発症する危険性を有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項４３】
前記被験体が、癌を有するかまたは癌を発症する危険性を有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項４４】
前記被験体が、喘息／アレルギーを有するかまたは喘息／アレルギーを発症する危険性を有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項４５】
前記被験体が、免疫無防備状態の被験体である、請求項１６に記載の方法。
【請求項４６】
前記被験体が、高齢者であるか乳児である、請求項１６に記載の方法。
【請求項４７】
イミダゾキノリン薬剤および免疫刺激性核酸を含有する、組成物。
【請求項４８】
ポリアルギニンをさらに含有する、請求項４７に記載の組成物。
【請求項４９】
抗原をさらに含有する、請求項４７に記載の組成物。
【請求項５０】
Ｃ８置換グアノシンをさらに含有する、請求項４７に記載の組成物。
【請求項５１】
前記免疫刺激性核酸が、ＣｐＧ核酸である、請求項４７に記載の組成物。
【請求項５２】
前記免疫刺激性核酸が、ポリＧ核酸である、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５３】
前記免疫刺激性核酸が、Ｔリッチ核酸である、請求項４７に記載の組成物。
【請求項５４】
イミダゾキノリン薬剤および抗体を含有する、組成物。
【請求項５５】
さらにポリアルギニンを含有する、請求項５４に記載の組成物。
【請求項５６】
さらに免疫刺激性核酸を含有する、請求項５５に記載の組成物。
【請求項５７】
さらにＣ８置換グアノシンを含有する、請求項５４に記載の組成物。
【請求項５８】
イミダゾキノリン薬剤および障害特異的医薬を含有する、組成物。
【請求項５９】
前記障害特異的医薬が、喘息／アレルギー薬、癌薬、および抗微生物薬からなる群から選択される、請求項５８に記載の組成物。
【請求項６０】
さらにポリアルギニンを含有する、請求項５８に記載の組成物。
【請求項６１】
さらに免疫刺激性核酸を含有する、請求項５８に記載の組成物。
【請求項６２】
さらにＣ８置換グアノシンを含有する、請求項５８に記載の組成物。
【請求項６３】
前記喘息／アレルギー薬が、ステロイド、免疫調節剤、抗炎症剤、気管支拡張薬、ロイコトリエン調節剤、β２アゴニスト、および抗コリン作用薬からなる群から選択される、請求項５９に記載の組成物。
【請求項６４】
前記癌薬が、化学療法剤、免疫療法剤、および癌ワクチンからなる群から選択される、請求項５９に記載の組成物。
【請求項６５】
前記抗微生物薬が、抗細菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、および抗寄生虫剤からなる群から選択される、請求項５９に記載の組成物。
【請求項６６】
被験体において抗原特異的免疫応答を誘導するための方法であって、該方法は、抗原、イミダゾキノリン、および免疫刺激性核酸を、抗原特異的免疫応答を誘導するのに有効な量、被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項６７】
前記抗原が、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、寄生生物抗原、および真菌抗原からなる群から選択される、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
試験化合物のＴｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲ）シグナル伝達活性を、イミダゾキノリンのＴＬＲシグナル伝達活性と比較するためのスクリーニング方法であって、該方法は：
Ｔｏｌｌ様レセプター７（ＴＬＲ７）およびＴｏｌｌ様レセプター８（ＴＬＲ８）からなる群から選択される機能性ＴＬＲを、参照イミダゾキノリンと接触させ、ＴＬＲシグナル伝達経路によって媒介される参照応答を検出する工程；
ＴＬＲ７およびＴＬＲ８からなる群から選択される機能性ＴＬＲを、試験化合物と接触させ、ＴＬＲシグナル伝達経路によって媒介される試験応答を検出する工程；ならびに、
該試験応答を該参照応答と比較し、該試験化合物のＴＬＲシグナル伝達活性を該イミダゾキノリンのＴＬＲシグナル伝達活性と比較する工程、
を包含する、方法。
【請求項６９】
前記機能性ＴＬＲが、ＴＬＲ８である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記機能性ＴＬＲが、ＴＬＲ７である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７１】
前記機能性ＴＬＲを、前記参照イミダゾキノリンおよび前記試験化合物と独立に接触させる、請求項６８に記載の方法。
【請求項７２】
前記スクリーニング方法が、イミダゾキノリン類似物を同定するための方法であり、ここで前記試験応答が前記参照応答と類似している場合、該試験化合物がイミダゾキノリン類似物である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記機能性ＴＬＲを、前記参照イミダゾキノリンおよび前記試験化合物と同時に接触させて、ＴＬＲシグナル伝達経路によって媒介される試験−参照応答を生じさせ、ここで該試験−参照応答が前記参照応答に対して比較され得る、請求項６８に記載の方法。
【請求項７４】
前記スクリーニング方法が、イミダゾキノリンアゴニストを同定するための方法であり、ここで前記試験−参照応答が前記参照応答より大きい場合、前記試験化合物がイミダゾキノリンアゴニストである、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記スクリーニング方法が、イミダゾキノリンアンタゴニストを同定するための方法であり、ここで前記試験−参照応答が前記参照応答より小さい場合、前記試験化合物がイミダゾキノリンアンタゴニストである、請求項７３に記載の方法。
【請求項７６】
前記機能性ＴＬＲが、細胞内で発現される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７７】
前記細胞が、機能性ＴＬＲ８を天然に発現する単離された哺乳動物細胞である、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記細胞が、インターロイキン８（ＩＬ−８）、インターロイキン１２のｐ４０サブユニット（ＩＬ−１２  ｐ４０）、核因子κＢ−ルシフェラーゼ（ＮＦ−κＢ−ｌｕｃ）、インターロイキン１２−ルシフェラーゼのｐ４０サブユニット（ＩＬ−１２  ｐ４０−ｌｕｃ）、および腫瘍壊死因子−ルシフェラーゼ（ＴＮＦ−ｌｕｃ）からなる群から選択されるレポーター構築物をコードする単離された核酸を含む発現ベクターを含む、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記機能性ＴＬＲが、無細胞系の一部である、請求項６８に記載の方法。
【請求項８０】
前記機能性ＴＬＲが、別のＴＬＲとの複合体の一部である、請求項６８に記載の方法。
【請求項８１】
前記機能性ＴＬＲが、骨髄分化因子８８（ＭｙＤ８８）、ＩＬ−１レセプター関与キナーゼ（ＩＲＡＫ）、腫瘍壊死因子レセプター関与因子６（ＴＲＡＦ６）、ＩκＢ、ＮＦ−κＢ、ならびにこれらの機能性ホモログおよび誘導体からなる群から選択される非ＴＬＲタンパク質との複合体の一部である、請求項６８に記載の方法。
【請求項８２】
前記参照イミダゾキノリンが、Ｒ−８４８（Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）である、請求項６８に記載の方法。
【請求項８３】
前記参照イミダゾキノリンが、Ｒ−８４７（Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）である、請求項６８に記載の方法。
【請求項８４】
前記試験化合物が、核酸分子でない、請求項６８に記載の方法。
【請求項８５】
前記試験化合物が、ポリペプチドである、請求項６８に記載の方法。
【請求項８６】
前記試験化合物が、Ｒ−８４８またはＲ−８４７以外のイミダゾキノリンである、請求項６８に記載の方法。
【請求項８７】
前記試験化合物が、化合物のコンビナトリアルライブラリーの一部である、請求項６８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
（発明の背景）
癌は、２番目に多い死因であり、米国では、死者４人のうちの１人がこれに起因する。１９９７年には、肺癌、乳癌、前立腺癌、結腸直腸癌および卵巣癌と新たに診断された数は推計約２００万人であった。米国で絶えず増え続ける老齢集団に起因して、癌の発生率はますます増え続けると予想することが合理的である。
【０００２】
喘息は、米国だけで１４００〜１５００万人に罹患している慢性炎症性疾患である。
【０００３】
感染性疾患は、世界中での主な死因の１つである。米国単独では、感染性疾患に起因した死亡率は、１９８０年と１９９２年との間で５８％上昇した。この時期の間に、感染性疾患と戦う抗感染治療の使用は、有意に増大しており、そして現在、１年間に数百万ドルの産業である。抗感染薬剤の使用におけるこれらの増加を用いてさえ、感染性疾患の処置および予防は、世界中の医学界に対する挑戦のままである。
【０００４】
種々の免疫刺激核酸の免疫刺激能力は、充分に実証されている。それらの性質および組成物および投与に依存して、免疫刺激核酸は、Ｔヘルパー１（Ｔｈ１）応答を誘導し得、Ｔヘルパー２（Ｔｈ２）応答を抑制し得、そしていくつかの場合には、Ｔｈ２応答を誘導し得る。
【０００５】
イミダゾキノリン薬剤は、Ｂリンパ球を活性化する能力、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）産生を誘導する能力、ならびに腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターロイキン１（ＩＬ−１）およびインターロイキン６（ＩＬ−６）をアップレギュレートする能力を含め、免疫調節活性を保有することが同様に報告されている。ウイルス感染および腫瘍の処置におけるイミダゾキノリン薬剤の有用性もまた示唆されている。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の要旨）
本発明は、イミダゾキノリン薬剤を他の治療薬剤（例えば、抗体、免疫刺激核酸、抗原、Ｃ８置換グアノシド、および障害特異的医薬）とともに用いた場合、いくつかの予想外でかつ改善された結果が観察されるという知見に部分的に基づく。例えば、イミダゾキノリン薬剤と他の治療薬剤との組み合わせの効力は、いずれかの化合物単独での使用と比較して大いに改善される。
【０００７】
この結果は、部分的に、驚くべきである。なぜなら、イミダゾキノリン薬剤および他の治療薬剤は、いくつかの例では、異なった機構によって作用し、相乗作用様式で他方の効力を改善するとはかならずしも予想されないからである。
【０００８】
１つの局面では、本発明は、被験体における抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を刺激するための方法を提供する。この方法は、抗体と、イミダゾキノリン薬剤およびＣ８−置換グアノシンからなる群より選択される薬剤とを、被験体における抗体依存性細胞傷害性を刺激するに有効な量で、このような処置を必要とする被験体に投与する工程を包含する。いくつかの実施形態では、抗体依存性細胞傷害性を刺激するに有効な量は、相乗作用量である。
【０００９】
１つの実施形態では、このイミダゾキノリン薬剤は、この抗体の前に投与される。別の実施形態では、この抗体は、抗癌抗体、抗ウイルス抗体、抗細菌抗体、抗真菌抗体、抗アレルゲン抗体、および抗自己抗原抗体からなる群より選択される。関連の実施形態では、この被験体は、喘息／アレルギー、感染性疾患、癌および疣贅からなる群より選択される障害を有するかまたはこれらの障害を有する危険性がある。
【００１０】
以下の実施形態は、本発明のこの局面および他の局面に適用される。
【００１１】
１つの実施形態では、この薬剤は、イミダゾキノリン薬剤である。別の実施形態では、イミダゾキノリン薬剤およびＣ８−置換グアノシンは両方とも、この被験体に投与される。Ｃ８−置換グアノシドは、８−メルカプトグアノシン、８−ブロモグアノシン、８−メチルグアノシン、８−オキソ−７，８−ジヒドログアノシン、Ｃ８−アリールアミノ−２’−デオキシグアノシン、Ｃ８−プロピニル−グアノシン、Ｃ８−およびＮ７−置換グアニンリボヌクレオシド（例えば、７−アリル−８−オキソグアノシン（ロキソリビン（ｌｏｘｏｒｉｂｉｎｅ））および７−メチル−８−オキソグアノシン、８−アミノグアノシン、８−ヒドロキシ−２’−デオキシグアノシン、および８−ヒドロキシグアノシンからなる群より選択され得る。
【００１２】
イミダゾキノリン薬剤がこの被験体に投与されるいくつかの実施形態では、この被験体には、ポリ−アルギニンがさらに投与される。他の実施形態では、インターフェロン−α（例えば、Ｉｎｔｒｏｎ  Ａ）がこの被験体に投与される。
【００１３】
１つの実施形態では、このイミダゾキノリン薬剤は、イミダゾキノリンアミンである。別の実施形態では、このイミダゾキノリン薬剤は、Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ／Ｒ−８３７、Ｓ−２８４６３／Ｒ−８４８（Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）、イミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、１，２架橋イミダゾキノリンアミン、および４−アミノ−２エトキシメチル−α、α−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノールからなる群より選択される。
【００１４】
さらに他の実施形態では、この方法は、免疫刺激核酸をこの被験体に投与する工程をさらに包含する。特定の実施形態では、この薬剤は、免疫刺激核酸の前に投与される。この免疫刺激核酸は、ＣｐＧ核酸およびポリ−Ｇ核酸からなる群より選択され得る。特定の実施形態では、この免疫刺激核酸は、ポリ−Ｔ核酸、Ｔリッチ核酸、ＴＧ核酸、ＣｐＩ核酸およびメチル化ＣｐＧ核酸からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、この免疫刺激核酸は、骨格改変を有する。この骨格改変は、ホスホロチオエート改変およびペプチド改変（例えば、モルホリノ骨格改変）からなる群より選択され得るが、このようには限定されない。１つの実施形態では、この免疫刺激核酸は、キメラである骨格を有する。さらに別の実施形態では、この免疫刺激核酸は、ＣｐＧモチーフもＴリッチモチーフもポリＧモチーフも含まない核酸である。いくつかの実施形態では、ホスホロチオエート改変骨格を有する免疫刺激核酸は、ＣｐＧモチーフも、ＴリッチモチーフもポリＧモチーフも含まない。この免疫刺激核酸は、Ｔｈ１免疫応答を刺激する核酸であり得る。いくつかの実施形態では、Ｔｈ１免疫応答を刺激する免疫刺激核酸は、ＣｐＧ核酸ではない。他の実施形態では、Ｔｈ１免疫応答を刺激する免疫刺激核酸は、Ｔリッチ核酸ではない。
【００１５】
別の実施形態では、この方法は、この被験体を抗原に曝露する工程をさらに包含する。この抗原は、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、寄生生物抗原、および真菌抗原からなる群より選択され得る。
【００１６】
別の局面では、本発明は、被験体における免疫応答を調節するために提供する。この方法は、免疫刺激核酸と、イミダゾキノリン薬剤およびＣ８−置換グアノシンからなる群より選択される薬剤とを、免疫応答を調節するに有効な量で、このような処置を必要とする被験体に投与する工程を包含する。１つの実施形態では、免疫応答を調節するに有用な量は、相乗作用量である。重要な実施形態では、このイミダゾキノリン薬剤は、この免疫刺激核酸の前に投与される。特定の実施形態では、この免疫刺激核酸は、ＣｐＧ核酸である。他の実施形態では、この免疫刺激核酸は、（＃２００６）ＴＣＧ  ＴＣＧ  ＴＴＴ  ＴＧＴ  ＣＧＴ  ＴＴＴ  ＧＴＣ  ＧＴＴ（配列番号１）のヌクレオチド配列を有する。
【００１７】
１つの実施形態では、免疫応答を調節することは、Ｔｈ１免疫応答を誘導することを意味する。別の実施形態では、この免疫応答は、Ｔｈ１免疫応答である。別の実施形態では、この免疫応答は、抗体依存性細胞障害性を含む。別の実施形態では、この免疫応答は、先天免疫応答である。いくつかの実施形態では、この免疫応答は、局所免疫応答であり、一方、他の実施形態では、この免疫応答は、全身免疫応答である。特定の実施形態では、この免疫応答は、粘膜免疫応答である。
【００１８】
本発明のこの実施形態および他の実施形態では、この方法はさらに、障害特異的医薬をこの被験体に投与する工程を包含する。この障害特異的医薬は、癌医薬、喘息／アレルギー医薬、感染性疾患医薬、および疣贅医薬からなる群より選択され得る。この抗微生物医薬は、抗細菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、および抗寄生生物剤からなる群より選択され得る。この癌医薬は、化学療法剤、免疫治療剤および癌ワクチンからなる群より選択され得る。この喘息／アレルギー医薬は、ステロイド、免疫調節因子、抗炎症剤、気管支拡張剤、ロイコトリエン調節剤、β２アゴニスト、および抗コリン作用剤からなる群より選択され得る。
【００１９】
本発明のこの局面および他の局面では、この方法は、障害を有するかまたは障害を有する危険性がある被験体における障害を処置または予防するための方法である。この障害は、感染性疾患、癌および喘息またはアレルギーからなる群より選択され得る。この被験体は、免疫無防備状態の被験体であり得る。他の実施形態では、この被験体は、老人または乳児である。
【００２０】
本発明はさらに、組成物およびキットを提供する。１つの局面では、本発明は、イミダゾキノリン薬剤および免疫刺激核酸を含む組成物を提供する。１つの実施形態では、この免疫刺激核酸は、ＣｐＧ核酸である。重要な実施形態では、この免疫刺激核酸は、ヌクレオチド配列（＃２００６）ＴＣＧ  ＴＣＧ  ＴＴＴ  ＴＧＴ  ＣＧＴ  ＴＴＴ  ＧＴＣ  ＧＴＴ（配列番号１）を有する。
【００２１】
本発明は、別の局面において、イミダゾキノリン薬剤および抗体を含む別の組成物を提供する。１つの実施形態では、この組成物は、免疫刺激核酸をさらに含む。
【００２２】
さらに別の局面では、本発明は、イミダゾキノリン薬剤および障害特異的医薬を含む組成物を提供する。この障害特異的医薬は、喘息／アレルギー医薬、癌医薬、および抗微生物医薬からなる群より選択され得る。１つの実施形態では、この障害特異的医薬は、抗細菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、および抗寄生生物剤からなる群より選択される抗微生物医薬である。別の実施形態では、この障害特異的医薬は、化学療法剤、免疫治療剤および癌ワクチンからなる群より選択される癌医薬である。さらに別の実施形態では、この障害特異的医薬は、ステロイド、免疫調節因子、抗炎症剤、気管支拡張剤、ロイコトリエン調節剤、β２アゴニスト、および抗コリン作用剤からなる群より選択される喘息／アレルギー医薬である。１種以上の医薬が被験体に投与され得る。この組成物は、免疫刺激核酸をさらに含み得る。
【００２３】
この組成物は、ポリ−アルギニンをさらに含み得る。他の実施形態では、この組成物は、抗原をさらに含む。なお別の実施形態では、この組成物はさらに、Ｃ８−置換グアノシンを含む。好ましい実施形態では、この組成物は、イミダゾキノリン薬剤、免疫刺激核酸、抗原およびポリ−アルギニンを含む。必要に応じて、この後者の組成物はまた、Ｃ８−置換グアノシンを含み得る。
【００２４】
別の局面では、本発明は、イミダゾキノリン薬剤と治療薬剤とを同時投与することによって障害（例えば、感染性疾患、癌または喘息／アレルギー）を有する被験体を予防的または治療的に処置するために必要とされる治療薬剤の投薬量を変更するための方法を提供する。この治療薬剤は、抗体、抗原、免疫刺激核酸、Ｃ８−置換グアノシン、および障害特異的医薬からなる群より選択され得るが、このようには限定されない。本発明は、このような処置の必要がある被験体に投与され得る治療薬剤の用量を増大させるための方法を提供する。この方法は、通常は副作用を誘導する用量の治療薬剤を、このような処置の必要がある被験体に投与する工程、およびこの副作用を阻害するに有効な量のイミダゾキノリン薬剤をこの被験体に投与する工程を包含する。一例として、この治療薬剤が障害特異的医薬（例えば、抗癌治療（例えば、癌医薬））である場合、通常の副作用としては、骨髄抑制および微生物感染が挙げられる。従って、１つの実施形態では、この副作用は骨髄抑制であり、別の実施形態では、この副作用は微生物感染である。なお別の実施形態では、この副作用は、有害なアレルギー反応である。
【００２５】
別の局面では、本発明は、被験体に投与され得る治療薬剤の用量を低下させるための方法を提供する。この方法は、治療投薬量未満の治療薬剤およびイミダゾキノリン薬剤を、このような処置を必要とする被験体に投与する工程を包含し、ここで、この治療投薬量未満の治療薬剤およびイミダゾキノリン薬剤の組み合わせは、治療結果を生じる。この方法は、必要とされる治療薬剤の量の低下に起因したより低いコスト、およびこの治療薬剤に起因した副作用を誘導する可能性の低下（使用される用量がより低いことによる）を含めて、いくつかの利点を提供する。
【００２６】
他の局面によれば、本発明は、異なる投与スケジュールにおいてイミダゾキノリン薬剤および治療薬剤を投与することによって、障害を有するかまたは障害を有する危険性のある被験体を処置するための方法を包含する。１つの局面では、本発明は、このような処置を必要とする被験体に有効量のイミダゾキノリン薬剤を投与し、続いてこの被験体に治療薬剤を投与することによって、被験体を処置するための方法である。関連の局面では、この方法は、治療薬剤を被験体に投与し、続いてイミダゾキノリン薬剤を投与する工程を包含する。１つの実施形態では、このイミダゾキノリン薬剤は、慣用的スケジュールで投与される。この慣用スケジュールは、１日１回のスケジュール、１週間に１回のスケジュール、１ヶ月に１回のスケジュール、２ヶ月に１回のスケジュール、四半期に１回のスケジュール、および半年に１回のスケジュールからなる群より選択され得る。別の実施形態では、このイミダゾキノリン薬剤は、可変スケジュールで投与される。このイミダゾキノリン薬剤は、持続放出ビヒクル中で投与され得る。
【００２７】
他の局面では、本発明は、いくらかの症候軽減を提供するに有効な量の治療薬剤を、このような処置を必要とする被験体に投与し、続いてイミダゾキノリン薬剤をこの被験体に投与することによって、障害を有する被験体を処置するための方法である。いくつかの実施形態では、このイミダゾキノリン薬剤は、免疫応答をアップレギュレート、増強または活性化するために有効な量で投与される。いくつかの実施形態では、このイミダゾキノリン薬剤は、この免疫応答をＴｈ１免疫応答に再度導くに有効な量で投与される。さらに他の実施形態では、複数のイミダゾキノリン薬剤が投与される。
【００２８】
別の局面では、本発明は、このような処置の必要がある被験体に、イミダゾキノリン薬剤および治療薬剤を投与することによって、障害を有するかまたは障害を発症する危険性のある被験体を処置するための方法を提供し、ここで、このイミダゾキノリン薬剤は全身投与され、そしてこの治療薬剤は局所投与される。
【００２９】
なお別の局面では、本発明は、被験体に慣用的スケジュールにてイミダゾキノリン薬剤および治療薬剤を投与することによって、障害を有するかまたは障害を発症する危険性を有する被験体を処置するための方法を提供する。他の実施形態では、このイミダゾキノリン薬剤および／またはこの治療薬剤は、２以上の用量で投与される。あるいは、このイミダゾキノリン薬剤は、不定期に（例えば、症状開始時に）投与され得る。
【００３０】
別の局面によれば、本発明は、試験化合物のＴｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲ）シグナル伝達活性を、イミダゾキノリンのＴＬＲシグナル伝達活性と比較するためのスクリーニング方法を提供する。この方法は、Ｔｏｌｌ様レセプター７（ＴＬＲ７）およびＴｏｌｌ様レセプター８（ＴＬＲ８）からなる群より選択される機能的ＴＬＲを、参照イミダゾキノリンと接触させる工程、ならびにＴＬＲシグナル伝達経路によって媒介される参照応答を検出する工程；ＴＬＲ７およびＴＬＲ８からなる群より選択される機能的ＴＬＲを、試験化合物と接触させる工程、ならびにＴＬＲシグナル伝達経路によって媒介される試験応答を検出する工程；ならびにこの試験応答を、参照応答と比較して、試験化合物のＴＬＲシグナル伝達活性とイミダゾキノリンのＴＬＲシグナル伝達活性とを比較する工程を包含する。好ましい実施形態では、この機能的ＴＬＲはＴＬＲ８である。別の好ましい実施形態では、この機能的ＴＬＲはＴＬＲ７である。
【００３１】
特定の実施形態では、この機能的ＴＬＲを、参照イミダゾキノリンおよび試験化合物と独立して接触させる。好ましい実施形態では、このスクリーニング方法は、イミダゾキノリン模倣物を同定するための方法であり、ここで、この試験応答が参照応答に類似する場合、この試験化合物は、イミダゾキノリン模倣物である。
【００３２】
特定の他の実施形態では、この機能的ＴＬＲを、同時に参照イミダゾキノリンおよび試験化合物と接触させて、ＴＬＲシグナル伝達経路によって媒介される試験−参照応答を生じさせる；この試験−参照応答は、参照応答と比較され得る。好ましい実施形態では、このスクリーニング方法は、イミダゾキノリンアゴニストを同定するための方法であり、ここで、この試験−参照応答がこの参照応答よりも大きい場合、この試験化合物は、イミダゾキノリンアゴニストである。好ましい実施形態では、このスクリーニング方法は、イミダゾキノリンアンタゴニストを同定するための方法であり、ここで、この試験−参照応答がこの参照応答よりも小さい場合、この試験化合物は、イミダゾキノリンアンタゴニストである。
【００３３】
特定の実施形態では、この機能的ＴＬＲは、細胞中で発現される。好ましくは、この細胞は、機能的ＴＬＲ８を天然で発現する、単離された哺乳動物細胞である。別の好ましい実施形態では、この細胞は、機能的ＴＬＲ７を天然で発現する、単離された哺乳動物細胞である。この方法の実施を容易にするために、特定の実施形態では、機能的ＴＬＲ７または機能的ＴＬＲ８を発現する細胞は、レポーター構築物をコードする、インターロイキン８（ＩＬ−８）、インターロイキン１２のｐ４０サブユニット（ＩＬ−１２  ｐ４０）、核因子κＢ−ルシフェラーゼ（ＮＦ−κＢ−ｌｕｃ）、インターロイキン１２のｐ４０サブユニット−ルシフェラーゼ（ＩＬ−１２  ｐ４０−ｌｕｃ）、および腫瘍壊死因子−ルシフェラーゼ（ＴＮＦ−ｌｕｃ）からなる群より選択される単離された核酸を含む発現ベクターを含む。
【００３４】
特定の他の実施形態では、この機能的ＴＬＲは、無細胞系の一部分である。
【００３５】
いくつかの実施形態では、この機能的ＴＬＲは、別のＴＬＲとの複合体の一部分であり、この別のＴＬＲとしては、例えば、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、またはＴＬＲ１０が挙げられる。この複合体は、２以上のＴＬＲを含み得る。
【００３６】
特定の実施形態では、この機能的ＴＬＲは、非ＴＬＲタンパク質との複合体の一部分であり、この非ＴＬＲタンパク質は、骨髄分化因子８８（ＭｙＤ８８）、ＩＬ−１レセプター関連キナーゼ（ＩＲＡＫ）、腫瘍壊死因子レセプター関連因子６（ＴＲＡＦ６）、ＩκＢ、ＮＥ−κＢ、ならびにそれらの機能的ホモログおよび誘導体からなる群より選択される。
【００３７】
好ましい実施形態では、この参照イミダゾキノリンはＲ−８４８（Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）である。別の好ましい実施形態では、この参照イミダゾキノリンはＲ−８４７（Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）である。
【００３８】
特定の実施形態では、この試験化合物は、核酸分子ではない。例えば、１つの実施形態では、この試験化合物はポリペプチドである。好ましい実施形態では、この試験化合物は、Ｒ−８４８でもＲ−８４７でもないイミダゾキノリンである。
【００３９】
特定の実施形態では、この試験化合物は、化合物のコンビナトリアルライブラリーの一部分である。
【００４０】
本発明の限定の各々は、本発明の種々の実施形態を包含し得る。それゆえ、任意の１つの要素または要素の組み合わせを含む本発明の限定の各々が、本発明の各局面に含まれ得ることが認識される。
【００４１】
本発明を可能にするために図面が必要とされないことが理解されるべきである。
【００４２】
（配列表の簡単な説明）
配列番号１は、免疫刺激性ＣｐＧ核酸のヌクレオチド配列（＃２００６）である。
【００４３】
配列番号２は、免疫刺激性Ｔリッチ核酸のヌクレオチド配列（＃２１８３）である。
【００４４】
配列番号３は、コントロール非ＣｐＧ核酸のヌクレオチド配列（＃１９８２）である。
【００４５】
配列番号４は、免疫刺激性ＣｐＧ核酸のヌクレオチド配列（＃８９５４）である。
【００４６】
配列番号５は、ネガティブコントロール核酸のヌクレオチド配列（＃５１７７）である。
【００４７】
配列番号６は、ヒトＴＬＲ９  ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＦ２４５７０４）である。
【００４８】
配列番号７は、ヒトＴＬＲ９タンパク質のアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＦ７８０３７）である。
【００４９】
配列番号８は、マウスＴＬＲ９  ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＦ３４８１４０）である。
【００５０】
配列番号９は、マウスＴＬＲ９タンパク質のアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＫ２９６２５）である。
【００５１】
配列番号１０は、コントロールＧｐＣ核酸のヌクレオチド配列（＃２００６−ＧＣ）である。
【００５２】
配列番号１１は、メチル化ＣｐＧ核酸のヌクレオチド配列（＃２００６（メチル化））である。
【００５３】
配列番号１２は、免疫刺激性核酸のヌクレオチド配列（＃１６６８）である。
【００５４】
配列番号１３は、ＧｐＣ核酸のヌクレオチド配列（＃１６６８−ＧＣ）である。
【００５５】
配列番号１４は、メチル化ＣｐＧ核酸のヌクレオチド配列（＃１６６８（メチル化））である。
【００５６】
配列番号１５は、ヒトＴＬＲ７  ｃＤＮＡを増幅するために使用される第一のプライマーのヌクレオチド配列である。
【００５７】
配列番号１６は、ヒトＴＬＲ７  ｃＤＮＡを増幅するために使用される第二のプライマーのヌクレオチド配列である。
【００５８】
配列番号１７は、ヒトＴＬＲ７  ｃＤＮＡのヌクレオチド配列である。
【００５９】
配列番号１８は、ヒトＴＬＲ７タンパク質のアミノ酸配列である。
【００６０】
配列番号１９は、マウスＴＬＲ７  ｃＤＮＡを増幅するために使用される第一のプライマーのヌクレオチド配列である。
【００６１】
配列番号２０は、マウスＴＬＲ７  ｃＤＮＡを増幅するために使用される第二のプライマーのヌクレオチド配列である。
【００６２】
配列番号２１は、マウスＴＬＲ７  ｃＤＮＡのヌクレオチド配列である。
【００６３】
配列番号２２は、マウスＴＬＲ７  ｃＤＮＡのアミノ酸配列である。
【００６４】
配列番号２３は、ヒトＴＬＲ８  ｃＤＮＡを増幅するために使用される第一のプライマーのヌクレオチド配列である。
【００６５】
配列番号２４は、ヒトＴＬＲ８  ｃＤＮＡを増幅するために使用される第二のプライマーのヌクレオチド配列である。
【００６６】
配列番号２５は、ヒトＴＬＲ８  ｃＤＮＡのヌクレオチド配列である。
【００６７】
配列番号２６は、ヒトＴＬＲ８  ｃＤＮＡのアミノ酸配列である。
【００６８】
配列番号２７は、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＦ２４６９７１に対応するヒトＴＬＲ８におけるＮ末端挿入のアミノ酸配列である。
【００６９】
配列番号２８は、マウスＴＬＲ８  ｃＤＮＡを増幅するために使用される第一のプライマーのヌクレオチド配列である。
【００７０】
配列番号２９は、マウスＴＬＲ８  ｃＤＮＡを増幅するために使用される第二のプライマーのヌクレオチド配列である。
【００７１】
配列番号３０は、マウスＴＬＲ８  ｃＤＮＡのヌクレオチド配列である。
【００７２】
配列番号３１は、マウスＴＬＲ８タンパク質のアミノ酸配列である。
【００７３】
（発明の詳細な説明）
本発明は、イミダゾキノリン薬剤および抗体を被験体に投与することによって、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）が増強されるという驚くべき発見に一部基づく。従って、１つの局面において、本発明は、ＡＤＣＣの全身性活性化を誘導するのに十分な用量のイミダゾキノリン薬剤を用いて、ヒトおよび動物を処置するための方法を提供する。いかなる特定の理論によっても拘束されることを意図しないが、イミダゾキノリン薬剤は、Ｆｃレセプターの発現をアップレギュレートすることによって、ならびに単球およびマクロファージのようなエフェクター細胞の機能的活性を改善することによって、全身性ＡＤＣＣを増強すると仮定される。治療抗体が、イミダゾキノリン薬剤とともに被験体に同時投与される場合、その増強されたＡＤＣＣ活性によって、治療効果は劇的に向上される。
【００７４】
イミダゾキノリンは、数種のサイトカイン（インターフェロン（例えば、ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−α）、ＴＮＦ−αおよび数種のインターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−６およびＩＬ−１２）を含む）の発現を誘導すると考えられている、免疫応答変更薬剤である。イミダゾキノリンは、ＩｇＧ２ａレベルの増加を誘導するその能力によって一部証明されているように、Ｔｈ１免疫応答を刺激し得る。イミダゾキノリン薬剤はまた、報告によると、Ｔｈ２サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１３）の産生を阻害し得る。イミダゾキノリンによって誘導される数種のサイトカインは、マクロファージおよび樹状細胞によって産生される。イミダゾキノリンのうちの数種は、ＮＫ細胞溶解活性を増強し、そしてＢ細胞増幅およびＢ細胞分化を刺激し、それによって抗体産生および抗体分泌を誘導することが報告されている。
【００７５】
本明細書中で使用される場合、イミダゾキノリン薬剤は、イミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、および１，２架橋イミダゾキノリンアミンを含む。これらの化合物は、以下に記載されている：米国特許第４６８９３３８号、同第４９２９６２４号、同第５２３８９４４号、同第５２６６５７５号、同第５２６８３７６号、同第５３４６９０５号、同第５３５２７８４号、同第５３８９６４０号、同第５３９５９３７号、同第５４９４９１６号、同第５４８２９３６号、同第５５２５６１２号、同第６０３９９６９号、および同第６１１０９２９。イミダゾキノリン薬剤の特定の種としては、以下が挙げられる：Ｒ−８４８（Ｓ−２８４６３）；４−アミノ−２エトキシメチル−α，α−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール；および１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（Ｒ−８３７またはＩｍｉｑｕｉｍｏｄ）。Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄは、いぼ（例えば、性器いぼおよび肛門いぼ）の局所的処置において現在使用されており、そしてまた、基底細胞癌の局所的処置においても試験されている。
【００７６】
本発明において有用な抗体としては、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、マウス抗体、ヒト抗体、キメラマウス−ヒト抗体などが挙げられる。いくつかの実施形態において、抗体フラグメントが使用され得るが、但し、このようなフラグメントは、Ｆｃ部分と少なくとも１つのＦａｂ部分との両方を保有する。
【００７７】
いくつかの実施形態において、イミダゾキノリンは、抗体と同時に投与されるが、他の実施形態において、イミダゾキノリンは、抗体投与の前または抗体投与の後に投与される。抗体の投与前に送達される場合、イミダゾキノリン薬剤は、抗体の投与の１日前、２日前、３日前、４日前、５日前、６日前、７日前またはそれより前に投与され得る。抗体の投与後に投与される場合、イミダゾキノリン薬剤は、抗体の投与の１日後、２日後、３日後、４日後、５日後、６日後、７日後、またはそれより後に投与され得る。いくつかの好ましい実施形態において、イミダゾキノリン薬剤は、抗体がイミダゾキノリン薬剤の投与前に投与されるか投与後に投与されるかに関わらず、この抗体の投与から４８時間以内、３６時間以内、２４時間以内、１２時間以内、６時間以内、または４時間以内に投与される。
【００７８】
本発明において有用な治療抗体は、微生物抗原（例えば、細菌抗原、ウイルス抗原または真菌抗原）、癌関連抗原または腫瘍関連抗原、および自己抗原に特異的であり得る。好ましい抗体は、細胞上または細胞内に存在する抗原を認識しかつこの抗原に結合する抗体である。適切な抗体の例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ＲｉｔｕｘａｎＴＭ（リツキシマブ、抗ＣＤ２０抗体）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（トランスツズマブ（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ））、Ｑｕａｄｒａｍｅｔ、Ｐａｎｏｒｅｘ、ＩＤＥＣ−Ｙ２Ｂ８、ＢＥＣ２、Ｃ２２５、Ｏｎｃｏｌｙｍ、ＳＭＡＲＴ  Ｍ１９５、ＡＴＲＡＧＥＮ、Ｏｖａｒｅｘ、Ｂｅｘｘａｒ、ＬＤＰ−０３、ｉｏｒ  ｔ６、ＭＤＸ−２１０、ＭＤＸ−１１、ＭＤＸ−２２、ＯＶ１０３、３６２２Ｗ９４、抗ＶＥＧＦ、Ｚｅｎａｐａｘ、ＭＤＸ−２２０、ＭＤＸ−４４７、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−２、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−１、ＣＥＡＣＩＤＥ、Ｐｒｅｔａｒｇｅｔ、ＮｏｖｏＭＡｂ−Ｇ２、ＴＮＴ、Ｇｌｉｏｍａｂ−Ｈ、ＧＮＩ−２５０、ＥＭＤ−７２０００、ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ、ＣＭＡ６７６、Ｍｏｎｏｐｈａｒｍ−Ｃ、４Ｂ５、ｉｏｒ  ｅｇｆ．ｒ３、ｉｏｒ  ｃ５、ＢＡＢＳ、抗ＦＬＫ−２、ＭＤＸ−２６０、ＡＮＡ  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  １Ｄ１０  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  ＡＢＬ  ３６４  Ａｂ、ＣＣ４９（ｍＡｂ  Ｂ７２．３）、ＩｍｍｕＲＡＩＴ−ＣＥＡ、抗ＩＬ−４抗体、抗ＩＬ−５抗体、抗ＩＬ−９抗体、抗Ｉｇ抗体、抗ＩｇＥ抗体、血清由来Ｂ型肝炎抗体、組換えＢ型肝炎抗体など。
【００７９】
本発明のために同様に有用な他の抗体としては、以下が挙げられる：アレンツズマブ（ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ）（Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病）、ゲンツズマブオゾガミシン（ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ  ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）（ＣＤ３３＋急性骨髄性白血病）、ｈＰ６７．６（ＣＤ３３＋急性骨髄性白血病）、インフリキシマブ（ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）（炎症性腸疾患および慢性関節リウマチ）、エタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）（慢性関節リウマチ）、トシツモマブ、ＭＤＸ−２１０、オレゴボマブ（ｏｒｅｇｏｖｏｍａｂ）、抗ＥＧＦレセプターｍＡｂ、ＭＤＸ−４４７、抗組織因子タンパク質（ＴＦ）、（Ｓｕｎｏｌ）；ｉｏｒ−ｃ５、ｃ５、エドレコロマブ（ｅｄｒｅｃｏｌｏｍａｂ）、イブリツモマブ（ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ  ｔｉｕｘｅｔａｎ）、ガングリオシドＧＤ３エピトープの抗イディオタイプｍＡｂ模倣物、抗ＨＬＡ−Ｄｒ１０  ｍＡｂ、抗ＣＤ３３ヒト化ｍＡｂ、抗ＣＤ５２  ｈｕｍＡｂ、抗ＣＤ１  ｍＡｂ（ｉｏｒ  ｔ６）、ＭＤＸ−２２、セロゴバブ（ｃｅｌｏｇｏｖａｂ）、抗１７−１Ａ  ｍＡｂ、ベバシツマブ（ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、ダシリツマブ（ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）、抗ＴＡＧ−７２（ＭＤＸ−２２０）、高分子量プロテオグリカンの抗イディオタイプｍＡｂ模倣物（Ｉ−Ｍｅｌ−１）、高分子量プロテオグリカンの抗イディオタイプｍＡｂ模倣物（Ｉ−Ｍｅｌ−２）、抗ＣＥＡ  Ａｂ、ｈｍＡｂＨｌｌ、抗ＤＮＡまたはＤＮＡ関連タンパク質（ヒストン）ｍＡｂ、Ｇｌｉｏｍａｂ−Ｈ  ｍＡｂ、ＧＮＩ−２５０  ｍＡｂ、抗ＣＤ２２、ＣＭＡ  ６７６）、ＧＤ２ガングリオシドに対する抗イディオタイプヒトｍＡｂ、ｉｏｒ  ｅｇｆ／ｒ３、抗ｉｏｒ  ｃ２糖タンパク質ｍＡｂ、ｉｏｒ  ｃ５、抗ＦＬＫ−２／ＦＬＴ−３  ｍＡｂ、抗ＧＤ−２二特異的ｍＡｂ、抗核自己抗体、抗ＨＬＡ−ＤＲ  Ａｂ、抗ＣＥＡ  ｍＡｂ、パリビズマブ（ｐａｌｉｖｉｚｕｍａｂ）、ベバシズマブ（ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、アレムツズマブ（ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ）、ＢＬｙＳ−ｍＡｂ、抗ＶＥＧＦ２、抗Ｔｒａｉｌレセプター；Ｂ３  ｍＡｂ、ｍＡｂ  ＢＲ９６、乳癌；ならびにＡｂｘ−Ｃｂｌ  ｍＡｂ。
【００８０】
以下のような抗体もまた含まれており、これら全てが、市販されている：
アポトーシス抗体：ＢＡＸ抗体：抗ヒトＢａｘ抗体（モノクローナル）、抗ヒトＢａｘ抗体（ポリクローナル）、抗マウスＢａｘ抗体（モノクローナル）、抗マウスＢａｘ抗体（ポリクローナル）；Ｆａｓ／Ｆａｓリガンド抗体：抗ヒトＦａｓ／Ｆａｓリガンド抗体、抗マウスＦａｓ／Ｆａｓリガンド抗体グランザイム抗体グランザイムＢ抗体；ＢＣＬ抗体：抗シトクロムＣ抗体、抗ヒトＢＣＬ抗体（モノクローナル）、抗ヒトｂｃｌ抗体（ポリクローナル）、抗マウスｂｃｌ抗体（モノクローナル）、抗マウスｂｃｌ抗体（ポリクローナル）；
雑多アポトーシス抗体：抗ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＦＦ、ＤＲ３抗体抗ヒトＦａｓ／Ｆａｓリガンド抗体抗マウスＦａｓ／Ｆａｓリガンド抗体；
雑多アポトーシス関連抗体：ＢＩＭ抗体：抗ヒト、マウスｂｉｍ抗体（ポリクローナル）、抗ヒト、マウスｂｉｍ抗体（モノクローナル）；
ＰＡＲＰ抗体：抗ヒトＰＡＲＰ抗体（モノクローナル）抗ヒトＰＡＲＰ抗体（ポリクローナル）抗マウスＰＡＲＰ抗体；
カスパーゼ抗体：抗ヒトカスパーゼ抗体（モノクローナル）、抗マウスカスパーゼ抗体；
抗ＣＤ抗体：抗ＣＤ２９、ＰＬ１８−５  ＰａｎＶｅｒａ、抗ＣＤ２９、ＰＬ４−３  ＰａｎＶｅｒａ、抗ＣＤ４１ａ、ＰＴ２５−２  ＰａｎＶｅｒａ、抗ＣＤ４２ｂ、ＰＬ５２−４  ＰａｎＶｅｒａ、抗ＣＤ４２ｂ、ＧＵＲ２０−５  ＰａｎＶｅｒａ、抗ＣＤ４２ｂ、ＷＧＡ−３  ＰａｎＶｅｒａ抗ＣＤ４３、１Ｄ４  ＰａｎＶｅｒａ、抗ＣＤ４６、ＭＣＰ７５−６  ＰａｎＶｅｒａ、抗ＣＤ６１、ＰＬ１１−７  ＰａｎＶｅｒａ、抗ＣＤ６１、ＰＬ８−５  ＰａｎＶｅｒａ、抗ＣＤ６２／Ｐ−ｓｌｃｔｎ、ＰＬ７−６  ＰａｎＶｅｒａ、抗ＣＤ６２／Ｐ−ｓｌｃｔｎ、ＷＧＡ−１  ＰａｎＶｅｒａ、抗ＣＤ１５４、５Ｆ３  ＰａｎＶｅｒａ；
ヒトケモカイン抗体：ヒトＣＮＴＦ抗体、ヒトエオタキシン（Ｈｕｍａｎ  Ｅｏｔａｘｉｎ）抗体、ヒト上皮好中球活性化ペプチド−７８、ヒトエキソダス（Ｈｕｍａｎ  Ｅｘｏｄｕｓ）抗体、ヒトＧＲＯ抗体、ヒトＨＣＣ−１抗体、ヒトＩ−３０９抗体、ヒトＩＰ−１０抗体、ヒトＩ−ＴＡＣ抗体、ヒトＬＩＦ抗体、ヒト肝臓発現ケモカイン抗体、ヒトリンホタキシン（Ｈｕｍａｎ  Ｌｙｍｐｈｏｔａｘｉｎ）抗体、ヒトＭＣＰ抗体、ヒトＭＩＰ抗体、ＩＦＮ−γ抗体によって誘導されるヒトモノカイン、ヒトＮＡＰ−２抗体、ヒトＮＰ−１抗体、ヒト血小板因子−４抗体、ヒトＲＡＮＴＥＳ抗体、ヒトＳＤＦ抗体、ヒトＴＥＣＫ抗体；
マウスケモカイン抗体：ヒトＢ細胞誘引マウスケモカイン抗体、ケモカイン−１抗体、マウスエオタキシン抗体、マウスエキソダス抗体、マウスＧＣＰ−２抗体、マウスＫＣ抗体、マウスＭＣＰ抗体、マウスＭＩＰ抗体、マウスＲＡＮＴＥＳ抗体、ラットケモカイン抗体、ラットケモカイン抗体、ラットＣＮＴＦ抗体、ラットＧＲＯ抗体、ラットＭＣＰ抗体、ラットＭＩＰ抗体、ラットＲＡＮＴＥＳ抗体；
サイトカイン／サイトカインレセプター抗体：ヒトビオチン化サイトカイン／サイトカインレセプター抗体、ヒトＩＦＮ抗体、ヒトＩＬ抗体、ヒトレプチン抗体、ヒトオンコスタチン抗体、ヒトＴＮＦ抗体、ヒトＴＮＦレセプターファミリー抗体、マウスビオチン化サイトカイン／サイトカインレセプター抗体、マウスＩＦＮ抗体、マウスＩＬ抗体、マウスＴＮＦ抗体、マウスＴＮＦレセプター抗体；
ラットサイトカイン／サイトカインレセプター抗体：ラットビオチン化サイトカイン／サイトカインレセプター抗体、ラットＩＦＮ抗体、ラットＩＬ抗体、ラットＴＮＦ抗体；
ＥＣＭ抗体：コラーゲン／プロコラーゲン、ラミニン、コラーゲン（ヒト）、ラミニン（ヒト）、プロコラーゲン（ヒト）、ビトロネクチン／ビトロネクチンレセプター、ビトロネクチン（ヒト）、ビトロネクチンレセプター（ヒト）、フィブロネクチン／フィブロネクチンレセプター、フィブロネクチン（ヒト）、フィブロネクチンレセプター（ヒト）；
増殖因子抗体：ヒト増殖因子抗体、マウス増殖因子抗体、ブタ増殖因子抗体；
雑多な抗体：バキュロウイルス抗体、カドヘリン抗体、相補抗体、Ｃｌｑ抗体、フォン・ビルブラント因子抗体、Ｃｒｅ抗体、ＨＩＶ抗体、インフルエンザ抗体、ヒトレプチン抗体、マウスレプチン抗体、マウスＣＴＬＡ−４抗体、Ｐ４５０抗体、ＲＮＡポリメラーゼ抗体；
神経生物的（Ｎｅｕｒｏｂｉｏ）抗体：アミロイド抗体、ＧＦＡＰ抗体、ヒトＮＧＦ抗体、ヒトＮＴ−３抗体、ヒトＮＴ−４抗体。
【００８１】
なお別の抗体が、本発明において使用され得、これらとしては、ＭＳＲＳ  Ｃａｔａｌｏｇ  ｏｆ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａｎｄ  Ｌｉｎｓｃｏｔｔ’ｓ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙのような参考文献において列挙されている抗体が挙げられる。
【００８２】
イミダゾキノリン薬剤はまた、正常な免疫グロブリン療法および過剰免疫グロブリン療法とともに使用され得る。正常な免疫グロブリン療法は、正常な血液ドナーの血清から調製されそしてプールされた抗体産物を利用する。このプールされた産物は、感染性病原体（例えば、細菌、ウイルス（例えば、Ａ型肝炎ウイルス）、パルボウイルス、エンテロウイルス、真菌および寄生生物）の抗原のような広範囲の抗原に対して低い力価の抗体を含む。過剰免疫グロブリン療法は、特定の抗原に対して高い力価の抗体を有する個体の血清から調製された抗体を利用する。過剰免疫グロブリンの例としては、以下が挙げられる：帯状ヘルペス免疫グロブリン（免疫無防備状態の子供および新生児における水痘を予防するのに有用である）、ヒト狂犬病免疫グロブリン（狂犬病の動物に噛まれた被験体の曝露後予防において有用である）、Ｂ型肝炎免疫グロブリン（Ｂ型肝炎ウイルスの予防において、特に、ウイルスに曝された被験体において有用である）、およびＲＳＶ免疫グロブリン（シンシチウム（ｓｙｎｃｉｔｉａｌ）ウイルス感染の処置において有用である）。
【００８３】
数種の市販の抗癌抗体が、それらの商業的供給業者とともに以下で列挙される。
【００８４】
【表１】
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。
【００８５】
本発明は、イミダゾキノリン薬剤および治療剤を投与することによって、いずれかの化合物単独の投与を超える予測不可能な利点が与えられるという驚くべき発見に、一部基づく。免疫刺激性核酸、Ｃ８置換グアノシン、抗原、および障害特異的医薬を治療剤として使用することが、特に重要である。１つの重要な実施形態において、イミダゾキノリン薬剤、免疫刺激性核酸、抗原およびアルギニンリッチなポリマー（例えば、ポリアルギニン）、ならびに必要に応じて、Ｃ８置換グアノシンを含有する組成物が、本発明の免疫調節方法において使用される。
【００８６】
イミダゾキノリン剤はまた、免疫応答をＴｈ１免疫応答に向け直すために有用である。免疫応答をＴｈ１免疫応答へ向け直すことは、（例えば、Ｔｈ１サイトカイン（ＩＬ−１２、ＩＦＮ−αおよびＧＭ−ＣＳＦを含む）を産生するために単球細胞および他の細胞を誘導することによって）核酸に応答して産生されたサイトカインのレベルを測定することによって評価され得る。免疫応答のＴｈ１応答への向け直しまたは再バランス（ｒｅｂａｌａｎｃｅ）は、喘息の処置または予防のために特に有用である。例えば、喘息を処置するための有効量は、喘息に関連するＴｈ２型免疫応答を、Ｔｈ１型免疫応答に向け直すために有用な量であり得る。Ｔｈ２サイトカイン（特に、ＩＬ−４およびＩＬ−５）は、喘息被験体の気道で上昇する。これらのサイトカインは、喘息炎症応答（ＩｇＥアイソタイプ切換え、好酸球走化性および活性化ならびに肥胖細胞増殖を含む）の重要な局面を促進する。Ｔｈ１サイトカイン（特に、ＩＦＮ−αおよびＩＬ−１２）は、Ｔｈ２クローンの形成およびＴｈ２サイトカインの産生を抑制し得る。本発明のイミダゾキノリン剤は、Ｔｈ１サイトカインの増加をもたらし、これは、免疫系を再バランスし、優勢なＴｈ２免疫応答と関連する有害な影響を阻害または減少する。Ｔｈ２をＴｈ１免疫応答へ向け直すことは、Ｔｈ１サイトカインおよびＴｈ２サイトカインのバランスのとれた発現を生じ得るか、またはＴｈ２サイトカインより多くのＴｈ１サイトカインの誘導を生じ得る。
【００８７】
本発明はまた、イミダゾキノリン剤を使用して、抗原非特異的な生得の免疫活性化および感染チャレンジに対する幅広いスペクトルの耐性を誘導する方法を含む。本明細書中で使用される場合、用語、抗原非特異的な生得の免疫活性化とは、Ｂ細胞以外の免疫細胞の活性化をいい、例えば、ＮＫ細胞、Ｔ細胞または抗原非依存的な様式で応答し得る他の免疫細胞、あるいはこれらの細胞の組合せの活性化を含み得る。免疫細胞が、活性形態にあり、そして任意の侵入化合物または微生物に対する応答に対してプライムされるので、感染チャレンジに対する幅広いスペクトルの耐性が誘導される。細胞は、特定の抗原に対して特異的にプライムされる必要はない。これは、細菌戦および他の上記の環境（例えば、旅行者）において有用である。
【００８８】
特定のイミダゾキノリン剤の刺激指数は、種々の免疫細胞アッセイにおいて試験され得る。好ましくは、Ｂ細胞増殖に関するイミダゾキノリン剤の刺激指数は、少なくとも約５、好ましくは、少なくとも約１０、より好ましくは、少なくとも約１５、そして最も好ましくは少なくとも約２０であり、これは、マウスＢ細胞培養における３Ｈウリジンの取り込みによって決定され、これは、免疫刺激核酸に関して、米国特許第６，２０７，６４６Ｂ１号および同第６，２３９，１１６Ｂ１号に詳細に記載されるように、３７℃で２０時間、２０μＭの核酸と接触され、１μＣｉの３Ｈウリジンでパルスされ；そして４時間後に収集され、計数される。例えば、インビボで使用するために、イミダゾキノリン剤は、免疫応答（例えば、抗体産生）を効率的に誘導し得ることが重要である。
【００８９】
現在、特定の障害（例えば、癌）についてのいくつかの処置プロトコルが、ＩＦＮ−αの使用を求める。１つの実施形態において、本発明の方法は、特定の障害の処置におけるα−インターフェロン（ＩＦＮ−α）治療の使用の代わりとして、イミダゾキノリン剤を使用する。イミダゾキノリン剤は、ＩＦＮ−αを内生的に生成するために使用され得る。なお他の実施形態において、イミダゾキノリン剤は、ＩＦＮ−αとともに投与され得る。いくつかの実施形態において、本発明の治療剤または障害特異的医薬はまた、イミダゾキノリン剤およびＩＦＮ−αとともに被験体に投与され得る。
【００９０】
本発明は、本発明の方法においてイミダゾキノリン剤の代わりにまたはイミダゾキノリン剤とともにのいずれかでの、Ｃ８置換グアノシンの投与を包含する。Ｃ８−置換グアノシンは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびマクロファージの両方を活性化することが公知である。Ｃ８位置において、臭素またはチオール基のいずれかで置換されたグアニンリボヌクレオチドは、Ｂ細胞マイトジェンであり、Ｂ細胞分化因子として作用し得る（Ｆｅｌｄｂｕｓｈら、１９８５  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３４：３２０４；Ｇｏｏｄｍａｎ  １９８６  Ｊ．Ｉｍｍａｎｏｌ．１３６：３３３５）。これらの化合物は、ＮＫ細胞活性化についてのＩＬ−２要件を低下させることが報告されている。Ｃ８置換グアノシンのＮＫ増強活性およびＬＡＫ増強活性は、ＩＦＮの誘導に起因するようである（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｒ．Ａ．ら、１９９０．上で引用される）。Ｃ８置換グアノシンの例としては、限定しないが、８−メルカプトグアノシン、８−ブロモグアノシン、８−メチルグアノシン、８−オキソ−７，８−ジヒドロジェングアノシン、８−アリールアミノ−２’−デオキシグアノシン、Ｃ８−プロピニル−グアノシン、Ｃ８−およびＮ７−置換グアニンリボヌクレオシド（例えば、７−アリル−８−オキソグアノシン（ロキソリビン（ｌｏｘｏｒｉｂｉｎｅ）および７−メチル−８−オキソグアノシン）、８−アミノグアノシン、８−ヒドロキシ−２’−デオキシグアノシン、および８−ヒドロキシグアノシンが挙げられる。８−メルカプトグアノシンおよび８−ブロモグアノシンはまた、ＭＨＣ制限ＣＴＬの産生に対するサイトカイン要件を置換し得（Ｆｅｌｄｂｕｓｈ  １９８５、上に引用される）、マウスＮＫ活性を増強し得（Ｋｏｏら、１９８８．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：３２４９）、そしてマウスＬＡＫ産生の誘導において、ＩＬ−２と共同し得る（Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、１９９０．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４５：３５２４）。本発明のいくつかの重要な実施形態において、Ｃ８置換グアノシンは、ＡＤＣＣを含む免疫応答を誘導または増強するために、イミダゾキノリン剤とともにまたはイミダゾキノリン剤の代わりに使用され得る。
【００９１】
本発明の特定の方法および組成物は、ポリアルギニンの投与または追加を含む。本明細書中で使用される場合、ポリアルギニンは、アルギニンモノマーの相同なポリマーである。ポリアルギニンは、種々の長さであり得、ペプチド骨格を有し得るが、このように制限されない。他の実施形態において、アルギニンリッチなポリマーはまた、アルギニンの同種ポリマーの代わりに使用され得る。アルギニンリッチなポリマーは、少なくとも２個の連続したアルギニン、少なくとも３個の連続したアルギニン、少なくとも４個の連続したアルギニン、および少なくとも５個の連続したアルギニンを有するポリマーであり得るか、あるいはそのモノマーの少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％がアルギニン残基であるポリマーであり得る。従って、ポリアルギニンがまたアルギニンリッチなポリマーであることが理解されるべきである。アルギニンの正電荷に起因して、アルギニンリッチなポリマー（ポリアルギニンを含む）は、いくつかのイミダゾキノリン剤および免疫刺激核酸に関連する負電荷を中和するように作用する。
【００９２】
「免疫刺激核酸」は、本明細書中で使用される場合、免疫刺激モチーフまたは免疫応答を誘導する骨格を含む任意の核酸である。免疫応答は、限定しないが、Ｔｈ１型免疫応答またはＴｈ２型免疫応答として特徴付けられ得る。このような免疫応答は、活性化免疫細胞によって惹起されるサイトカインおよび抗体産生プロフィールによって規定される。１つの好ましい実施形態において、ｐａｎ活性化免疫刺激核酸（例えば、＃２００６（ＴＣＧ  ＴＣＧ  ＴＴＴ  ＴＧＴ  ＣＧＴ  ＴＴＴ  ＧＴＣ  ＧＴＴ））は、本発明の方法におけるイミダゾキノリン剤と組み合わせて使用される。
【００９３】
ヘルパー（ＣＤ４＋）Ｔ細胞は、他の免疫系細胞（他のＴ細胞を含む）に対して作用する可溶性因子の産生を介して哺乳動物の免疫応答を調節する。ヘルパーＣＤ４＋、およびいくつかの場合、ＣＤ８＋、Ｔ細胞は、それらのサイトカイン産生プロフィールに依存して、マウス系およびヒト系の両方においてＴｈ１細胞およびＴｈ２細胞（ならびにＣＤ８＋の場合、Ｔｃ１細胞およびＴｃ２細胞）として特徴付けられる（Ｒｏｍａｇｎａｎｉ，１９９１，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  １２：２５６−２５７，Ｍｏｓｍａｎｎ，１９８９，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，７：１４５−１７３）。Ｔｈ１細胞は、インターロイキン２（ＩＬ−２）、ＩＬ−１２、腫瘍壊死因子（ＴＮＦα）およびインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）を産生し、そしてそれらは、主に、細胞媒介免疫（例えば、遅延型過感受性）を担う。免疫刺激核酸の投与によって誘導されるサイトカインは、主に、ＴＨ１クラスのサイトカインである。Ｔｈ１応答に関連するこの型の抗体は、一般的に、より保護性である。なぜなら、これらは、高度な中和およびオプソン化能力を有するからである。Ｔｈ２細胞は、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、およびＩＬ−１３を産生し、そして主に、体液性免疫応答に最適な補助を提供することに関与する（例えば、ＩｇＥおよびＩｇＧ４抗体アイソタイプ切換）（Ｍｏｓｍａｎｎ，１９８９，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，７：１４５−１７３）。Ｔｈ２応答は、主に、感染に対してあまり保護的でない効果を有する抗体を含む。
【００９４】
用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」は、リン酸基および交換可能な有機塩基に連結された複数のヌクレオチド（すなわち、糖（例えば、リボースまたはデオキシリボース）を含む分子）を意味するように相互交換可能に使用され、これらの塩基は、置換ピリミジン（例えば、シトシン（Ｃ）、チミジン（Ｔ）、またはウラシル（Ｕ））、あるいは置換プリン（例えば、アデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ））のいずれかである。本明細書中で使用される場合、この用語は、オリゴヌクレオチドおよびオリゴデオキシリボヌクレオチドをいう。この用語はまた、ポリヌクレオシド（すなわち、ポリヌクレオチドからリン酸を除いた）および任意の他の塩基含有ポリマーを含む。核酸分子は、既存の核酸供給源（例えば、ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡ）から得られ得るが、好ましくは、合成（例えば、核酸合成によって作製される）である。
【００９５】
免疫刺激核酸は、ＣｐＧ、ポリ−Ｇ、ポリ−Ｔ、ＴＧ、メチル化ＣｐＧ、ＣｐＩ、およびＴリッチモチーフのような免疫刺激モチーフを有し得る。本発明のいくつかの実施形態において、識別可能なモチーフを有するか否かに関わらず、任意の核酸が、免疫応答を調節するために、併用療法において使用され得る。免疫刺激骨格としては、限定しないが、リン酸改変骨格（例えば、ホスホロチオエート骨格）が挙げられる。免疫刺激核酸は、先行技術において広範囲に記載されており、これらの核酸の簡単な要旨が以下に提示される。
【００９６】
いくつかの実施形態において、ＣｐＧ免疫刺激核酸は、本発明の方法において使用される。ＣｐＧ免疫刺激核酸は、ＣＧジヌクレオチド、メチル化されてないＣ残基を含む核酸である。免疫調節に対するＣｐＧ核酸の効果は、米国特許第６，１９４，３８８  Ｂ１号、同第６，２０７，６４６  Ｂｌ号、同第６，２３９，１１６  Ｂ１号および同第６，２１８，３７１  Ｂ１号、ならびに公開特許出願、例えば、ＰＣＴ／ＵＳ９８／０３６７８、ＰＣＴ／ＵＳ９８／１０４０８、ＰＣＴ／ＵＳ９８／０４７０３、およびＰＣＴ／ＵＳ９９／０９８６３に広範囲に記載されている。これらの特許および特許出願の各々の全内容は、本明細書によって、参考として援用される。
【００９７】
用語、ＣｐＧ核酸またはＣｐＧオリゴヌクレオチドは、本明細書中で使用される場合、他に示さない限り、免疫刺激ＣｐＧ核酸をいう。免疫刺激核酸全体が、非メチル化であり得るか、または一部が、非メチル化であり得るが、少なくとも５’ＣＧ３’のＣが、非メチル化でなければならない。
【００９８】
本発明のＣｐＧ核酸配列は、上記に幅広く開示されるもの、ならびに発行された米国特許第６，２０７，６４６Ｂ１号および同第６，２３９，１１６Ｂ１号に開示されるものが挙げられる。
【００９９】
本発明の他の実施形態において、非ＣｐＧ免疫刺激核酸が使用される。非ＣｐＧ免疫刺激核酸は、その配列においてＣｐＧモチーフを有さない核酸、またはメチル化Ｃ残基を含むＣｐＧを有する核酸のいずれかである。いくつかの例において、ＣｐＧモチーフを欠くキメラオリゴヌクレオチドは、免疫刺激性であり、ＣｐＧオリゴヌクレオチドと同じ多くの予防的活性および治療的活性を有する。非ＣｐＧ免疫刺激核酸は、それらの配列、送達の様式、およびそれらが投与される用量に依存して、Ｔｈ１免疫応答またはＴｈ２免疫応答を誘導し得る。
【０１００】
標的化剤として本発明において有用な他の免疫刺激核酸は、Ｐｙリッチ核酸である。ｐｙリッチ核酸は、ＣｐＧモチーフが存在するか否かに関わらず、ＣｐＧオリゴヌクレオチドに対して類似の免疫刺激特性を有する。Ｐｙリッチ核酸は、Ｔリッチ免疫刺激核酸またはＣリッチ免疫刺激核酸である。
【０１０１】
重要なサブセットの非ＣｐＧ免疫刺激核酸は、Ｔリッチ免疫刺激核酸である。本発明のＴリッチ免疫刺激核酸としては、公開されたＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／ＵＳ００／２６３８３に開示されるものが挙げられ、この内容全体が、本明細書中において参考として援用される。いくつかの実施形態において、Ｔリッチ核酸２４塩基長が使用される。Ｔリッチ核酸は、少なくとも１つのポリＴを含み、そして／または２５％より多いＴヌクレオチド残基のヌクレオチド組成を有する核酸である。ポリＴ配列を有する核酸は、列内に少なくとも４つのＴを含む（例えば、５’ＴＴＴＴ３’）。好ましくは、Ｔリッチ核酸としては、１つより多くのポリＴ配列を含む。好ましい実施形態において、Ｔリッチ核酸は、２個、３個、４個などのポリＴ配列を有し得る（例えば、＃２００６（ＴＣＧ  ＴＣＧ  ＴＴＴ  ＴＧＴ  ＣＧＴ  ＴＴＴ  ＧＴＣ  ＧＴＴ）（配列番号１）。本発明に従って開示される最も高度に免疫刺激性のＴリッチオリゴヌクレオチドのうちの１つが、全体的に、Ｔヌクレオチド残基から構成される核酸である（例えば、オリゴヌクレオチド＃２１８３（ＴＴＴ  ＴＴＴ  ＴＴＴ  ＴＴＴ  ＴＴＴ  ＴＴＴ  ＴＴＴ  ＴＴＴ）（配列番号２）。本発明に従う他のＴリッチ核酸は、２５％より高いＴヌクレオチド残基のヌクレオチド組成を有するが、必ずしもポリＴ配列を含まない。これらのＴリッチ核酸において、Ｔヌクレオチド残基は、他の型のヌクレオチド残基（すなわち、Ｇ、Ｃ、およびＡ）によって互いから分離され得る。いくつかの実施形態において、Ｔリッチ核酸は、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、および９９％より高いＴヌクレオチド残基（およびそれらの間の全ての整数％）のヌクレオチド組成を有する。好ましくは、Ｔリッチ核酸は、少なくとも１つのポリＴ配列および２５％より高いＴヌクレオチド残基のヌクレオチド組成を有する。
【０１０２】
Ｃリッチ核酸は、少なくとも１つまたは好ましくは、少なくとも２つのポリＣ領域を有するか、または、少なくとも５０％のＣヌクレオチドから構成される核酸分子である。ポリＣ領域は、列に少なくとも４つのＣ残基がある。従って、ポリＣ領域は、式５’ＣＣＣＣ３’によって包含される。いくつかの実施形態において、ポリＣ領域が、式５’ＣＣＣＣＣＣ３’を有することが好ましい。本発明に従って、他のＣリッチ核酸は、５０％より高いＣヌクレオチド残基のヌクレオチド組成を有するが、必ずしもポリＣ配列を含まない。これらのＣリッチ核酸において、Ｃヌクレオチド残基は、他のタイプのヌクレオチド残基（すなわち、Ｇ、Ｔ、およびＡ）によって互いから分離され得る。いくつかの実施形態において、Ｃリッチ核酸は、６０％、７０％、８０％、９０％、および９９％より高いＣヌクレオチド残基（およびそれらの間の全ての整数％）のヌクレオチド組成を有する。好ましくは、Ｃリッチ核酸は、少なくとも１つのポリＣ配列および５０％より高いＴヌクレオチド残基のヌクレオチド組成を有し、いくつかの実施形態において、Ｔリッチでもある。
【０１０３】
ＴＧ核酸はまた、免疫系を調節するために本発明のイミダゾキノリン剤とともに使用され得る。適切なＴＧ核酸は、公開されたＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／ＵＳ００／２６３８３に記載される。本明細書中で使用される場合、「ＴＧ核酸」は、少なくとも１つのＴｐＧジヌクレオチド（チミジン−グアニンジヌクレオチド配列、すなわち、「ＴＧ  ＤＮＡ」または５’チミジン、続いて３’グアノシンを含み、リン酸結合によって連結されるＤＮＡ）を含む核酸であり、免疫系の成分を活性化する。
【０１０４】
１５〜２５ヌクレオチド長の長さの範囲のＴＧ核酸が、増加した免疫刺激を示し得ることが示されている。従って、１つの局面において、本発明は、１５〜２７ヌクレオチド長であるオリゴヌクレオチド（すなわち、１５ヌクレオチド長、１６ヌクレオチド長、１７ヌクレオチド長、１８ヌクレオチド長、１９ヌクレオチド長、２０ヌクレオチド長、２１ヌクレオチド長、２２ヌクレオチド長、２３ヌクレオチド長、２４ヌクレオチド長、２５ヌクレオチド長、２６ヌクレオチド長、または２７ヌクレオチド長であるヌクレオチド）を提供し、これは、Ｔリッチ核酸であり得るか、またはＴＧ核酸であり得るか、またはＴリッチ核酸およびＴＧリッチ核酸の両方であり得る。好ましくは、ＴＧオリゴヌクレオチドは、１５〜２５ヌクレオチドの大きさの範囲である。
【０１０５】
別の重要なサブセットの非ＣｐＧ免疫刺激核酸は、ポリＧ免疫刺激核酸である。種々の参考文献（Ｐｉｓｅｔｓｋｙ  ａｎｄ  Ｒｅｉｃｈ，１９９３  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｏｒｔｓ，１８：２１７−２２１；Ｋｒｉｅｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｅｒｚ，１９９４，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６３：６０１−６３７；Ｍａｃａｙａら，１９９３，ＰＮＡＳ，９０：３７４５−３７４９；Ｗｙａｔｔら，１９９４，ＰＮＡＳ，９１：１３５６−１３６０；Ｒａｎｄｏ  ａｎｄ  Ｈｏｇａｎ，１９９８，Ｉｎ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｅｄ．Ｋｒｉｅｇ  ａｎｄ  Ｓｔｅｉｎ，ｐ．３３５−３５２；およびＫｉｍｕｒａら，１９９４，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１６，９９１−９９４が挙げられる）もまた、ポリＧ核酸の免疫刺激特性を記載する。本発明に従って、ポリＧ含有ヌクレオドは、細菌感染、ウイルス感染、および真菌感染を処置および予防するのに有用であり、これによって、癌患者の処置に対するこれらの感染の影響を最小限にするために使用され得る。
【０１０６】
ポリＧ核酸は、好ましくは、以下の式：
５’Ｘ１Ｘ２ＧＧＧＸ３Ｘ４３’
を有する核酸であり、ここで、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、およびＸ４は、ヌクレオチドである。好ましい実施形態において、Ｘ３およびＸ４のうちの少なくとも１つは、Ｇである。他の実施形態において、Ｘ３およびＸ４の両方が、Ｇである。なお他の実施形態において、好ましい式は、５’ＧＧＧＮＧＧＧ３’、または５’ＧＧＧＮＧＧＧＮＧＧＧ３’であり、ここで、Ｎは、０個〜２０個の間のヌクレオチドを表す。他の実施形態において、ポリＧ核酸は、非メチル化ＣＧジヌクレオチドを含まない。他の実施形態において、ポリＧ核酸は、少なくとも１つの非メチル化ＣＧジヌクレオチドを含む。
【０１０７】
本発明の免疫刺激核酸はまた、ＣｐＧ、ポリＧ、またはＴリッチモチーフを有さない核酸であり得る。
【０１０８】
免疫刺激核酸へのポリＡテールの付加は、核酸の活性を増強し得る。高度に免疫刺激性のＣｐＧ核酸（ＴＣＧ  ＴＣＧ  ＴＴＴ  ＴＧＴ  ＣＧＴ  ＴＴＴ  ＧＴＣ  ＧＴＴ）（配列番号１）が、ポリＡテール（ＡＡＡＡＡＡ）またはポリＴテール（ＴＴＴＴＴＴ）の付加で改変され、得られるオリゴヌクレオチドは、免疫刺激活性を増加したことを発見した。ポリＡテールおよびポリＴテールが、オリゴヌクレオチドの免疫刺激特性を増加する能力は、非常に類似する。上記の高度に免疫原性のＣｐＧ核酸は、Ｔリッチオリゴヌクレオチドである。ポリＡテールおよびポリＴテールがＴリッチではない核酸に添加される場合、核酸の免疫刺激能力に対してより有意な影響を有するようである。ポリＴテールが、すでに高度にＴリッチである核酸に付加されたので、ポリＴ付加の免疫刺激特性は、いくぶん希釈されたが、完全ではない。この発見は、ポリＡ領域の使用について重要な意味を有する。従って、いくつかの実施形態において、免疫刺激核酸は、ポリＡ領域を含み、他の実施形態において、免疫刺激核酸は、ポリＡ領域を含まない。
【０１０９】
例示的な免疫刺激核酸配列としては、米国非仮特許出願番号０９／６６９，１８７号（２０００年９月２５日に出願された）、および対応する公開されたＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／ＵＳ００／２６３８３に記載および列挙される免疫刺激配列が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１０】
免疫刺激核酸は、二本鎖であり得るかまたは一本鎖であり得る。一般的に、二本鎖分子は、インビボにおいてより安定であるが、一本鎖分子は、増加した免疫活性を有する。従って、本発明のいくつかの局面において、核酸が一本鎖であることが好ましく、そして他の局面において、核酸が二本鎖であることが好ましい。特定の実施形態において、核酸が一本鎖である場合、二次構造および三次構造を（例えば、折り畳むことによって、またはその長さの全体にわたってまたは選択されたセグメントにおいてハイブリダイズすることによって）形成し得る。従って、このような核酸の一次構造は、一本鎖であり得るが、その高次構造は、二本鎖または三本鎖であり得る。
【０１１１】
細胞への取り込みを促進するために、免疫刺激核酸は、好ましくは、６〜１００塩基長の範囲である。しかし、６ヌクレオチドより大きい任意のサイズの核酸（さらに大きなｋｂの長さ）は、十分な免疫刺激モチーフが存在する場合、本発明に従って、免疫応答を誘導し得る。好ましくは、免疫刺激核酸は、大きさが、８ヌクレオチドと１００ヌクレオチドとの間の範囲、いくつかの実施形態において、８ヌクレオチドと５０ヌクレオチドとの間の範囲、または８ヌクレオチドと３０ヌクレオチドとの間の範囲である。
【０１１２】
改変骨格（例えば、ホスホロチオエート骨格）を有する核酸はまた、免疫刺激核酸のクラスに入る。Ｈｕｔｃｈｅｒｓｏｎらに対する米国特許第５，７２３，３３５号および同第５，６６３，１５３号および関連するＰＣＴ公報Ｗ０９５／２６２０４は、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドアナログを使用する免疫刺激を記載する。これらの特許は、ホスホロチオエート骨格が、非配列特異的様式で免疫応答を刺激する能力を記載する。
【０１１３】
免疫刺激核酸が核酸ベクター（例えば、抗原をコードするベクター）とともに投与される場合、免疫刺激核酸の骨格は、ホスホジエステルおよびホスホロチオエート（または他のリン酸改変）のキメラ組合せであることが好ましい。これは、細胞によるプラスミドベクターの取り込みが、完全なホスホロチオエートオリゴヌクレオチドの存在によって妨害されるからである。従って、ベクターおよびオリゴヌクレオチドの両方が、被験体に送達される場合、オリゴヌクレオチドがキメラまたはホスホロチオエートを有すること、およびプラスミドが、それを細胞に直接送達するビヒクルと会合し、これによって細胞取り込みの必要性を避けることが好ましい。このようなビヒクルは、当該分野で公知であり、例えば、リポソームおよび遺伝子銃が挙げられる。
【０１１４】
用語、核酸およびオリゴヌクレオチドはまた、置換または改変を有する核酸またはオリゴヌクレオチド（例えば、塩基および／または糖において）を含む。例えば、これらは、３’位におけるヒドロキシル基以外かつ５’位におけるリン酸基以外の低分子量有機基に共有結合された骨格糖を有する核酸を含む。従って、改変核酸は、２’−Ｏ−アルキル化リボース基を含み得る。さらに、改変核酸は、リボースの代わりに、アラビノースのような糖を含み得る。従って、核酸は、骨格組成において異種であり得、これによって、例えば、ペプチド核酸（核酸塩基を有するアミノ酸骨格を有する）と一緒に連結されたポリマーの任意の可能な組合せを含む。いくつかの実施形態において、核酸は、骨格組成において均一である。核酸はまた、置換されたプリンおよびピリミジン（例えば、Ｃ−５プロピン改変塩基）を含む（Ｗａｇｎｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８４０−８４４，１９９６）。プリンおよびピリミジンとしては、アデニン、シトシン、グアニン、チミジン、５−メチルシトシン、２−アミノプリン、２−アミノ−６−クロロプリン、２，６−ジアミノプリン、ヒポキサンチン、ならびに天然に存在する核酸塩基および非天然の核酸塩基（置換および非置換の芳香族部分）が挙げられるが、これらに限定されない。他のこのような改変は、当業者に周知である。
【０１１５】
本発明における使用について、本発明の核酸は、当該分野で周知の多数の手順のいずれかを使用して、デノボ合成され得る。例えば、β−シアノエチルホスホルアミダイト法（Ｂｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．およびＣａｒｕｔｈｅｒｓ，Ｍ．Ｈ．，Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２２：１８５９，１９８１）；ヌクレオシドＨホスホネート法（Ｇａｒｅｇｇら，Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２７：４０５１−４０５４，１９８６；Ｆｒｏｅｈｌｅｒら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１４：５３９９−５４０７，１９８６；Ｇａｒｅｇｇら，Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２７：４０５５−４０５８，１９８６，Ｇａｆｆｎｅｙら，Ｔｅｔ．Ｌｅｔ．２９：２６１９−１６２２，１９８８）。これらの化学は、種々の市販の自動化核酸合成機によって実施され得る。これらの核酸は、合成核酸と称される。あるいは、これらの核酸は、大スケールで、プラスミド中で生成され得（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｔ．ら、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９）、そしてより小さい小片に分離され得るか、またはその全体が投与され得る。核酸は、公知の技術（例えば、制限酵素、エキソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼを使用する技術）を使用して、現存の核酸配列（例えば、ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡ）から調製され得る。この様式で調製された核酸は、単離された核酸と称される。単離された核酸とは、一般に、天然で通常会合している成分から分離されている核酸をいう。例として、単離された核酸は、細胞から、核から、ミトコンドリアからまたはクロマチンから分離された核酸であり得る。用語「核酸」は、合成核酸および単離された核酸の両方を包含する。
【０１１６】
インビボにおける使用について、核酸は、必要に応じて、分解に対して比較的耐性であり得る（すなわち、安定化されている）。「安定化された核酸分子」とは、インビボの分解（例えば、エキソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼによる）に対して比較的耐性である核酸分子を意味するべきである。安定化は、長さまたは二次構造の関数であり得る。数十〜数百ｋｂ長の核酸は、インビボの分解に対して比較的耐性である。より短い核酸に付いて、二次構造は、この効果を安定化し、そして増加し得る。例えば、核酸の３’末端が、上流領域に対する自己相補性を有し、その結果、この３’末端が、折り畳まれて、一連の幹ループ構造を形成する場合、この核酸は、安定化され、従って、より大きな活性を示す。
【０１１７】
あるいは、核酸の安定化は、リン酸骨格の改変によって達成され得る。本発明の好ましい安定化された核酸は、改変された骨格を有する。核酸骨格の改変は、インビボで投与された場合、核酸の活性の増加を提供することが示されている。改変された骨格の１つのタイプは、リン酸骨格の改変である。オリゴヌクレオチドの５’末端における少なくとも２つのホスホロチオエート結合および３’末端における複数の（好ましくは５個の）ホスホロチオエート結合を、免疫刺激核酸に含めることは、いくつかの場合において、最大の活性を提供し得、かつこの核酸を、細胞内エキソヌクレアーゼおよびエンドヌクレアーゼによる分解から保護し得る。他の改変された核酸としては、ホスホジエステル改変核酸、ホスホジエステルとホスホロチオエート核酸との組合せ、アルキルホスホネートおよびアリールホスホネート、アルキルホスホロチオエートおよびアリールホスホロチオエート、メチルホスホネート、メチルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ｐ−エトキシ、モルホリノ、ならびにそれらの組合せが挙げられる。ホスホロチオエート結合を有する核酸は、最大の活性を提供し、そして細胞内エキソヌクレアーゼおよびエンドヌクレアーゼ、ならびにそれらの組合せによる分解から核酸を保護する。これらの組合せおよび免疫細胞に対するこれらの特定の効果の各々は、発行された米国特許第６，２０７，６４６  Ｂ１および同第６，２３９，１１６  Ｂ１（これらの内容全体は本明細書中で参考として援用される）において、ＣｐＧ核酸に関してより詳細に考察されている。これらの改変された核酸は、増大したヌクレアーゼ耐性、増加した細胞取込み、増加したタンパク質結合および／または変化した細胞内局在化に起因して、より大きな刺激活性を示し得る。
【０１１８】
本発明の組成物は、必要に応じて、キメラオリゴヌクレオチドであり得る。このキメラオリゴヌクレオチドは、式：５’Ｙ１Ｎ１ＺＮ２Ｙ２３’を有するオリゴヌクレオチドである。Ｙ１およびＹ２は、１と１０との間のヌクレオチドを有する核酸分子である。Ｙ１およびＹ２の各々は、少なくとも１つの改変されたヌクレオチド間結合を含む。これらのキメラオリゴヌクレオチドのうち少なくとも２つのヌクレオチドは、骨格改変を含むので、これらの核酸は、「安定化された免疫刺激核酸」の１つのタイプの例である。キメラオリゴヌクレオチドに関して、Ｙ１およびＹ２は、互いに独立しているとみなされる。これは、Ｙ１およびＹ２の各々が、同じ分子中で互いに異なる配列および異なる骨格結合を有しても有さなくても良いことを意味する。これらの配列は、異なるが、いくつかの場合において、Ｙ１およびＹ２は、１つのポリ−Ｇ配列を有する。ポリＧ配列とは、少なくとも３個の連続したＧをいう。他の実施形態において、このポリＧ配列とは、少なくとも４、５、６、７または８個の連続したＧをいう。他の実施形態において、Ｙ１およびＹ２は、ＴＣＧＴＣＧ、ＴＣＧＴＣＧＴまたはＴＣＧＴＣＧＴＴであり得る。Ｙ１およびＹ２はまた、ポリＣ配列、ポリＴ配列またはポリＡ配列を有し得る。いくつかの実施形態において、Ｙ１および／またはＹ２は、３個と８個との間のヌクレオチドを有する。Ｎ１およびＮ２は、Ｎ１ＺＮ２が、合計少なくとも６個のヌクレオチドを有する限り、０と５との間のヌクレオチドを有する。Ｎ１ＺＮ２のヌクレオチドは、ホスホジエステル骨格を有し、改変された骨格を有する核酸を含まない。Ｚは、免疫刺激核酸モチーフであるが、ＣＧは含まない。例えば、Ｚは、例えば、ＴＴＴＴモチーフを含むＴリッチな配列の核酸、または配列の塩基の５０％がＴである配列であり得るか、またはＺは、ＴＧ配列であり得る。
【０１１９】
式Ｙ１Ｎ１ＺＮ２Ｙ２の中心ヌクレオチド（Ｎ１ＺＮ２）は、ホスホジエステルヌクレオチド間結合を有し、そしてＹ１およびＹ２は、少なくとも１つの改変されたヌクレオチド間結合を有するが、１つより多い改変されたヌクレオチド間結合を有しても、全ての改変されたヌクレオチド間結合を有してもよい。好ましい実施形態において、Ｙ１および／またはＹ２は、少なくとも２個、または２個と５個との間の改変されたヌクレオチド間結合を有するか、またはＹ１が、２つの改変されたヌクレオチド間結合を有し、かつＹ２が、５個の改変されたヌクレオチド間結合を有するか、またはＹ１が、５個の改変されたヌクレオチド間結合を有し、かつＹ２が、２個の改変されたヌクレオチド間結合を有する。いくつかの実施形態において、これらの改変されたヌクレオチド間結合は、改変されたホスホロチオエート結合、改変されたホスホロジチオエート結合または改変されたｐ−エトキシ結合である。
【０１２０】
ホスホロチオエートのような改変された骨格は、ホスホロアミデート化学またはＨ−ホスホネート化学のいずれかを使用する自動化技術を使用して、合成され得る。アリールホスホネートおよびアルキルホスホネートが、例えば、米国特許第４，４６９，８６３号に記載されるようにして作製され得；そしてアルキルホスホトリエステル（ここで、荷電した酸素部分は、米国特許第５，０２３，２４３号および欧州特許番号第０９２，５７４号に記載されるようにして、アルキル化される）は、市販の試薬を使用して、自動化固相合成によって調製され得る。他のＤＮＡ骨格の改変および置換を作製する方法が、記載されている（Ｕｈｌｍａｎｎ，Ｅ．およびＰｅｙｍａｎ，Ａ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９０：５４４，１９９０；Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ，Ｊ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１：１６５，１９９０）。
【０１２１】
他の安定化された核酸としては、以下が挙げられる：非イオン性ＤＮＡアナログ（例えば、アルキルホスフェートおよびアリールホスフェート（ここで、荷電したホスホネート酸素は、アルキル基またはアリール基で置換されている））、ホスホジエステルおよびアルキルホスホトリエステル（ここで、荷電した酸素部分がアルキル化される）。いずれかの末端または両方の末端にジオール（例えば、テトラエチレングリコールまたはヘキサエチレングリコール）を含む核酸もまた、ヌクレアーゼ分解に対して実質的に耐性であることが示された。
【０１２２】
免疫刺激モチーフを含むホスホロチオエート核酸およびホスホジエステル核酸の両方は、免疫細胞中で活性である。しかし、免疫刺激核酸に特異的な効果を引き起こすために必要な濃度に基づいて、このヌクレアーゼ耐性ホスホロチオエート骨格免疫刺激核酸は、ホスホジエステル骨格免疫刺激核酸よりも強力である。例えば、２μｇ／ｍｌのホスホロチオエートは、９０μｇ／ｍｌのホスホホジエステルと同じ免疫刺激を生じることが示された。
【０１２３】
本発明に従って有用な別のタイプの改変された骨格は、ペプチド核酸である。この骨格は、アミノエチルグリシンから構成され、そしてＤＮＡ特性を提供する塩基を支持する。この骨格は、いずれのホスフェートも含まず、従って、必要に応じて正味の電荷を有さないかもしれない。電荷を有さないことにより、より強力なＤＮＡ−ＤＮＡ結合が可能となる。なぜなら、２つの鎖の間の電荷反発力が存在しないからである。さらに、この骨格は、メチレン基を有するので、オリゴヌクレオチドは、酵素／プロテアーゼ耐性である。ペプチド核酸は、種々の商業的供給源（例えば、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）から購入され得るか、またはデノボ合成され得る。
【０１２４】
別のクラスの骨格改変としては、２’−Ｏ−メチルリボヌクレオシド（２−Ｏｍｅ）が挙げられる。これらのタイプの置換は、従来技術で、特に、それらの免疫刺激特性に関して、広く記載されている（Ｚｈａｏら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９９９，９：２４：３４５３．Ｚｈａｏらは、２’−Ｏｍｅ改変を核酸に調製する方法を記載する。
【０１２５】
本発明の核酸分子は、天然に存在すかまたは合成のプリン複素環式塩基およびピリミジン複素環式塩基、ならびに改変された骨格を含み得る。プリン複素環式塩基またはピリミジン複素環式塩基としては、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシルおよびイノシンが挙げられるが、これらに限定されない。他の例示的な複素環式塩基は、Ｍｅｒｉｇａｎらに発行された米国特許第３，６８７，８０８号に開示される。用語「プリン」もしくは「ピリミジン」、または「塩基」は、天然に存在するかまたは合成の両方のプリン、ピリミジンまたは塩基をいうために、本明細書中で使用される。
【０１２６】
本発明に従って有用な骨格改変を有する免疫刺激核酸は、いくつかの実施形態において、Ｓキラル免疫刺激核酸またはＲキラル免疫刺激核酸である。「Ｓキラル免疫刺激核酸」は、本明細書中で使用される場合、少なくとも２つのヌクレオチドがキラル中心を形成する骨格改変を有し、かつ複数のキラル中心がＳキラリティーを有する免疫刺激核酸である。「Ｒキラル免疫刺激核酸」は、本明細書中で使用される場合、少なくとも２つのヌクレオチドがキラル中心を形成する骨格改変を有し、複数のキラル中心がＲキラリティーを有する免疫刺激核酸である。この骨格改変は、キラル中心を形成する任意のタイプの改変であり得る。この改変としては、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、メチルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、２’−Ｏｍｅおよびそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２７】
キラル免疫刺激核酸は、骨格改変を有する核酸内に少なくとも２つのヌクレオチドを有さなければならない。しかし、この核酸中のヌクレオチドの全てまたはほとんどが、改変された骨格を有し得る。改変された骨格（キラル中心と呼ばれる）を有するヌクレオチドの中で、複数のヌクレオチドが、単一のキラリティー（ＳまたはＲ）を有する。「複数」とは、本明細書中で使用される場合、７５％より多い量をいう。従って、キラル中心のほとんどは、複数のキラル中心がＳキラリティーまたはＲキラリティーを有する限り、ＳキラリティーまたはＲキラリティーを有し得る。いくつかの実施形態において、キラル中心の少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％または１００％が、ＳキラリティーまたはＲキラリティーを有する。他の実施形態において、ヌクレオチドの少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％または１００％が、骨格改変を有する。
【０１２８】
Ｓキラル免疫刺激核酸およびＲキラル免疫刺激核酸は、キラル純粋なオリゴヌクレオチドを生成するための当該分野で公知の任意の方法によって、調製され得る。Ｓｔｅｃらは、オキサチアホスホランを使用して立体純粋な（ｓｔｅｒｅｏｐｕｒｅ）ホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチドを生成するための方法を教示している。Ｓｔｅｃ  ＷＪら（１９９５）Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １１７：１２０１９。キラル純粋なオリゴヌクレオチドを作製するための他の方法は、ＩＳＩＳ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓのような会社により記載されている。立体純粋なオリゴヌクレオチドを作製するための方法を開示している米国特許としては、５８８３２３７、５８３７８５６、５５９９７９７、５５１２６６８、５８５６４６５、５３５９０５２、５５０６２１２、５５２１３０２および５２１２２９５が挙げられ、これらの各々は、その全体が本明細書中で参考として援用される。
【０１２９】
プロフィール、配列、骨格改変および生物学的効果において異なり得るかまたは異なり得ない１つ以上の免疫刺激核酸が、被験体に投与され得る。例として、ＣｐＧ核酸およびＴリッチな核酸が、イミダゾキノリン剤と共に単一の被験体に投与され得る。別の例において、ヌクレオチド配列が異なる複数のＣｐＧ核酸もまた、イミダゾキノリン剤と共に被験体に投与され得る。
【０１３０】
免疫刺激核酸は、プラスミドベクターの形態で被験体に送達され得る。いくつかの実施形態において、１つのプラスミドベクターは、免疫刺激核酸ならびに障害特異的医薬および／または抗原をコードする核酸（いずれかが核酸によりコードされ得る場合）の両方を含み得る。さらに他の実施形態において、プラスミドは、免疫応答の刺激または調節に関与するタンパク質またはポリペプチド（例えば、ＩＦＮ−α、ＣＤ８０など）をコードし得る。免疫刺激核酸は、プラスミドのコード配列中に存在し得るが、これらの位置は、それほど制限されていない。他の実施形態において、別個のプラスミドが使用され得る。さらに他の実施形態において、プラスミドは使用され得ない。
【０１３１】
イミダゾキノリン剤、抗原、免疫刺激核酸、抗体、Ｃ８リッチなグアノシンおよびアルギニンを多く含むポリマーを含有する、本明細書中で記載される治療剤は、本発明の方法で使用される場合、それらの置換基の間を共有結合する必要性なく、物理的に結合され得る。あるいは、この治療剤はまた、以下に記載されるように、連結分子を使用して、直接的または間接的のいずれかで、種々の組み合わせで結合体化され得る。
【０１３２】
使用され得る適切な連結分子の例としては、二官能性架橋剤分子が挙げられる。この二官能性架橋剤分子は、結合体化される分子の性質に依存して、ホモ二官能性（ｈｏｍｏｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ）であってもヘテロ二官能性（ｈｅｔｅｒｏｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ）であってもよい。ホモ二官能性架橋剤は、２つの同一の反応性基を有する。ヘテロ二官能性架橋剤は、連続した結合体化反応を可能にする２つの異なる反応性基を有するとして定義される。種々のタイプの市販の架橋剤は、以下の基の１つ以上と反応性である：１級アミン、２級アミン、スルフヒドリル、カルボキシル、カルボニルおよび糖。アミン特異的架橋剤の例は、ビス（スルホスクシンイミジル）スベラート、ビス［２−（スクシンイミドオキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン、ジスクシンイミジルスベラート、ジスクシンイミジルタータレート、ジメチルアジピメート・２ＨＣｌ、ジメチルピメリジデート・２ＨＣｌ、ジメチルスベリミデート・２ＨＣｌ、およびエチレングリコールビス−［スクシンイミジル−［スクシネート］］である。スルフヒドリル基に反応性の架橋剤としては、ビスマレイミドヘキサン、１，４−ジ−［３’−（２’−ピリジルジチオ）−プロピオンアミド）］ブタン、１−［ｐ−アジドサリチルアミド］−４−［ヨードアセトアミド］ブタン、およびＮ−［４−（ｐ−アジドサリチルアミド）ブチル］−３’−［２’−ピリジルジチオ］プロピオンアミドが挙げられる。糖と優先的に反応性の架橋剤としては、アジドベンゾイルヒドラジンが挙げられる。カルボキシル基と優先的に反応性の架橋剤としては、４−［ｐ−アジドサリチルアミド］ブチルアミンが挙げられる。アミンおよびスルフヒドリルと反応するヘテロ二官能性架橋剤としては、Ｎ−スクシンイミジル−３−［２−ピリジルジチオ］プロピオネート、スクシンイミジル［４−ヨードアセチル］アミノベンゾエート、スクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、スルホスクシンイミジル６−［３−［２−ピリジルジチオ］プロピオンアミド］ヘキサノエート、およびスルホスクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレートが挙げられる。カルボキシル基およびアミン基と反応するヘテロ二官能性架橋剤としては、１−エチル−３−［［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミドヒドロクロリドが挙げられる。糖およびスルフヒドリルと反応するヘテロ二官能性架橋剤としては、４−［Ｎ−マレイミドメチル］−シクロヘキサン−１−カルボキシルヒドラジド・２ＨＣｌ、４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド・２ＨＣｌ、および３−［２−ピリジルジチオ］プロピオニルヒドラジドが挙げられる。これらの架橋剤は、ビス［β−４−アジドサリチルアミド）エチル］ジスルフィドおよびグルタルアルデヒドである。アミノ基またはチオール基は、二官能性架橋剤分子の結合点を提供するように、合成核酸分子の任意のヌクレオチドにおいて付加され得る。この核酸分子は、結合体化コンピテント試薬（例えば、Ｕｎｉ−Ｌｉｎｋ  ＡｍｉｎｏＭｏｄｉｆｉｅｒ、３’−ＤＭ��−Ｃ６−アミン−ＯＮ  ＣＰＧ、ＡｍｉｎｏＭｏｄｉｆｉｅｒ  ＩＩ、Ｎ−ＴＦＡ−Ｃ６−ＡｍｉｎｏＭｏｄｉｆｉｅｒ、Ｃ６−ＴｈｉｏＭｏｄｉｆｉｅｒ、Ｃ６−Ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ  ＰｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅおよびＣ６−Ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ  ＣＰＧ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ））を組み込んで合成され得る。
【０１３３】
本発明のいくつかの局面において、イミダゾキノリン剤と本明細書中で記載される他の剤との組合せは、障害を有するかまたは障害を発症する危険性のある（すなわち、障害を有する危険性のある）被験体の予防および処置において有用である。一般に、本明細書中で提供される方法により予防および／または処置される障害は、刺激された免疫応答から恩恵を受ける障害である。重要な実施形態において、本発明の方法および組成物により標的化される障害としては、癌、感染性疾患ならびに喘息およびアレルギーが挙げられる。この障害はまた、疣贅であり得る。
【０１３４】
本発明は、特定の障害（例えば、感染性疾患、癌、喘息、アレルギーおよび疣贅により特徴付けられる障害）を発症する危険性のある被験体、およびこのような障害を有する被験体を処置することを意図する。本明細書中で使用される場合、用語処置する（ｔｒｅａｔ）、処置された（ｔｒｅａｔｅｄ）または処置（ｔｒｅａｔｉｎｇ）は、本明細書中で記載される障害の１つに関して使用される場合、被験体が障害を発症する可能性を軽減する予防的処置、および被験体が障害を発症した後に、この障害を軽減もしくは排除するか、またはこの障害が悪化するのを防止する処置をいう。危険性のある被験体とは、通常の危険性よりも高い障害を発症する危険性を有する被験体として定義される。この通常の危険性は、一般に、障害を有さず、かつ障害を発症する危険性を有さない正常な個体集団の危険性である。
【０１３５】
従って、本発明の予防方法において、処置される被験体としては、感染性疾患を発症する危険性のある被験体、癌を発症する危険性のある被験体、および喘息またはアレルギーを発症する危険性のある被験体が挙げられる。障害を発症する危険性のある被験体とは、一般に、平均的な集団よりも、障害を有する可能性が高い被験体をいう。
【０１３６】
被験体とは、ヒトまたは動物（イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、げっ歯類（例えば、ラットおよびマウス）、霊長類（例えば、サル）、ならびに魚および養殖魚（例えば、フィンフィッシュ（例えば、サケ））および甲殻類（例えば、エビおよびホタテ貝）を含むが、これらに限定されない）を意味するべきである。治療方法または予防方法に適切な被験体としては、脊椎動物種および無脊椎動物種が挙げられる。被験体は、家庭用のペット（例えば、イヌ、ネコ、魚など）、農業用の牧畜動物（例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ニワトリなど）、研究用動物（例えば、マウス、ラット、ウサギなど）、動物園の動物（例えば、ライオン、キリンなど）であり得るが、このように限定されない。本明細書中に記載される実施形態の多くは、ヒト障害に関するが、本発明はまた、他の非ヒト脊椎動物を処置するために有用である。非ヒト脊椎動物はまた、本明細書中に記載されるイミダゾキノリン剤で処置され得る。
【０１３７】
「感染性疾患」とは、本明細書中で使用される場合、感染性生物による、皮相的、経口的または全身的な宿主の侵入から生じる障害をいう。感染性生物としては、細菌、ウイルス、真菌および寄生生物が挙げられる。従って、「感染性疾患」としては、細菌感染、ウイルス感染、真菌感染および寄生生物感染が挙げられる。
【０１３８】
細菌は、二分裂によって無性生殖的に増殖する単細胞生物である。これらは、その形態学、染色反応、栄養要件および代謝要件、抗原構造、化学組成および遺伝子相同性に基づいて、分類および命名される。細菌は、その形態学的形態に基づいて、３つの群：球状体（球菌）、線形杆状体（杆菌）および湾曲またはらせんの杆状体（ビブリオ、キャンピロバクター、スピリルムおよびスピロヘータ）に分類され得る。細菌は、より一般的には、その染色反応に基づいて、２種類の生物（グラム陽性およびグラム陰性）に特徴付けされる。グラムとは、形態学研究で一般的に行われる染色方法をいう。グラム陽性生物は、染色手順後に染色されたままであり、深紫色を示す。グラム陰性生物は、染色を保持しないが、対比染色を取込み、従って、ピンク色を示す。米国非仮特許出願第０９／８０１，８３９号（２００１年３月８日出願）は、多数の細菌を列挙し、本発明はこれらの感染を予防および処置することを意図する。
【０１３９】
ウイルスは、一般的にアミノ酸コアおよびタンパク質被覆を含むが、独立して生存しない生物である、小さな感染性因子である。ウイルスはまた、タンパク質を欠く感染性核酸の形態をとり得る。ウイルスは、このウイルスが複製し得る生きた細胞の非存在下では、生存し得ない。ウイルスは、エンドサイトーシスまたはＤＮＡ（ファージ）の直接感染のいずれかによって、特定の生きた細胞に侵入し、そして増殖し、疾患を生じる。次いで、増殖したウイルスは、放出され、さらなる細胞を感染させる。あるウイルスは、ＤＮＡ含有ウイルスであり、あるウイルスは、ＲＮＡ含有ウイルスである。
【０１４０】
ウイルスとしては、エンテロウイルス（ｉｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ）（ポリオウイルス、コクサッキーウイルス、エコーウイルスのようなピコルナウイルス科が挙げられるが、これに限定されない）、ロタウイルス、アデノウイルス、肝炎ウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４１】
ヒトおよび非ヒト脊椎動物の両方の感染性ウイルスとしては、レトロウイルス、ＲＮＡウイルスおよびＤＮＡウイルスが挙げられる。この群のレトロウイルスとしては、単純レトロウイルスおよび複雑レトロウイルスの両方を含む。単純レトロウイルスとしては、亜群のＢ型レトロウイルス、Ｃ型レトロウイルスおよびＤ型レトロウイルスが挙げられる。
【０１４２】
米国非仮特許出願第０９／８０１，８３９号（２００１年３月８日出願）は、多数のウイルスを列挙し、本発明は、このウイルスの感染を予防および処置することを意図する。
【０１４３】
真菌および真核生物は、このうちの数種しか脊椎哺乳動物における感染を引き起こさない。真菌は、真核生物なので、これらは、サイズ、構造的構成、ライフサイクルおよび増殖機構において、原核生物細菌とは有意に異なる。真菌は、一般に、形態学的特徴、生殖様式および培養特性に基づいて分類される、真菌は、被験体において異なるタイプの疾患を（例えば、真菌抗原の吸入後の呼吸性アレルギー、毒性基質（例えば、毒キノコにより産生されるアマタトキシンおよびフェロトキシン、ならびにアスペルギルス種により産生されるアフラトキシン）の摂取に起因する真菌中毒）引き起こし得るが、全ての真菌が、感染性疾患を引きおこすわけではない。
【０１４４】
感染性真菌は、全身または表在的な感染を引き起こし得る。初生の全身感染は正常な健常被験体において生じ得、日和見感染は免疫無防備状態被験体において最も頻繁に見出される。初生の全身感染を引き起こす最も一般的な真菌性因子としては、ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ、ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ、およびｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａが挙げられる。免疫無防備状態被験体または免疫抑制被験体において日和見感染を引き起こす一般の真菌としては、ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、および種々のａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種が挙げられるが、これらに限定されない。全身性真菌感染は、内部器官の侵襲性感染である。生物は、通常、肺、胃腸管、または静脈内系統を通じて身体に侵入する。これらの感染のタイプは、初生の病原性真菌または日和見真菌によって引き起こされ得る。
【０１４５】
表在性真菌感染は、内部組織の侵襲のない外部表面における真菌の増殖を包含する。代表的な表在性真菌感染としては、皮膚、毛髪、または爪を包含する皮膚真菌感染が挙げられる。
【０１４６】
真菌感染と関連した疾患としては、アスペルギルス症、ブラストミセス症、カンジダ症（ｃａｍｄｉｄｉａｉｓ）、クロモブラストミコーシス、コクシジオイデス真菌症、クリプトコックス症、真菌類眼感染症、真菌類毛髪感染症、真菌類爪感染症、真菌類皮膚感染症、ヒストプラスマ症、ロボ真菌症、菌腫、耳真菌症、パラコクシジオイドミコーシス、ペニシリウム症（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｏｓｉｓ，ｍａｒｎｅｆｆｅｉｉ）、フェオフィホ真菌症、リノスポリジウム症、スポロトリクス症、および接合真菌症が挙げられる。
【０１４７】
米国（非暫定）特許出願番号第０９／３０６，２８１号（２００１年３月８日出願）は多くの真菌を列挙しており、それらの感染は、本発明が予防および処置を意図するものである。
【０１４８】
寄生生物は、生存するために他の生物に依存し、そしてそれらの生活周期を継続するために別の生物に侵入、または感染しなければならない生物である。感染された生物（すなわち、宿主）は、寄生生物に、栄養摂取および居住環境の両方を提供する。その最も広範な意味では、用語「寄生生物」は、全ての感染性因子（すなわち、細菌、ウイルス、真菌、原生動物類、および蠕虫）を含み得るが、一般的に言えば、この用語は、もっぱら原生動物類、蠕虫、および外寄生節足動物（例えば、マダニ、ダニなど）を指すために使用される。原生動物類は、特に血液、腸管、または組織の細胞外基質中において、細胞内および細胞外の両方で複製し得る単細胞生物である。蠕虫は、ほとんど常に細胞外である（例外は、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ  ｓｐｐ．である）多細胞生物である。蠕虫は、通常、複製するために、一次宿主からの退去および二次宿主への伝播を必要とする。これらの上述の分類に対して、外寄生節足動物は、宿主身体の外部表面と寄生関係を形成する。
【０１４９】
寄生生物は、細胞内寄生生物および偏性細胞内寄生生物を含む。寄生生物の例としては、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｏｖａｌｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｍａｌａｒｉａｅ、Ｐｌａｓｍｄｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｋｎｏｗｌｅｓｉ、Ｂａｂｅｓｉａ  ｍｉｃｒｏｔｉ、Ｂａｂｅｓｉａ  ｄｉｖｅｒｇｅｎｓ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ  ｓｐｉｒａｌｉｓ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｍａｊｏｒ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｉｓおよびＬｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｔｒｏｐｉｃａ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｇａｍｂｉｅｎｓｅ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍｏｍａ  ｒｈｏｄｅｓｉｅｎｓｅ、およびＳｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５０】
米国（非暫定）特許出願番号第０９／３０６，２８１号（１９９９年５月６日出願）は、多数の他の寄生生物を列挙し、それらの感染は、本発明が予防および処置を意図するものである。
【０１５１】
他の医学的に関連した微生物は、文献に包括的に記載されている（例えば、Ｃ．Ｇ．Ａ  Ｔｈｏｍａｓ，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｂａｉｌｌｉｅｒｅ  Ｔｉｎｄａｌｌ，Ｇｒｅａｔ  Ｂｒｉｔａｉｎ  １９８３（その全体の内容は、本明細書を参照することによって援用される）を参照のこと）。前述の列挙の各々は、例示であり、限定を意図しない。
【０１５２】
いくつかの局面において、本発明はまた、プリオンが疾患の進行に関係している疾患（例えば、ウシの海綿状脳症（すなわち、狂牛病）または動物におけるスクラピー感染、またはヒトにおけるクロイツフェルト−ヤーコプ病のような）を処置することを意図する。
【０１５３】
いくつかの重要な実施形態において、本発明の方法は、感染症（例えば、小痘（ｓｍａｌｌ  ｐｏｘ）または炭疽感染）を処置または予防することが意図される。
【０１５４】
感染性疾患を有する被験体は、感染性生物に曝露され、そして身体内に急性または慢性の検出可能なレベルの生物を有する被験体である。感染性生物への曝露は、一般に、被験体の外部表面（例えば、皮膚または粘膜）と共に生じ、かつ／または、感染性生物による被験体の外部表面の貫入をいう。
【０１５５】
感染性疾患を発症する危険性のある被験体は、感染の原因となる病原体への曝露の危険性が通常よりも高い被験体である。例えば、危険性のある被験体は、特定のタイプの感染性因子が見出される区域に旅行する予定のある被験体であり得、あるいはそれは、生活様式もしくは医療手順を通じて、感染性生物を含み得る体液に、または直接的に生物に曝露される被験体、または感染性生物が同定されている区域で生活している被験体であり得る。感染性疾患を発症する危険性のある被験体はまた、医療機関が特定の感染性生物に対するワクチン接種を推奨する一般の集団を含む。
【０１５６】
感染症を発症する危険性のある被験体としては、微生物（例えば、インフルエンザ）への曝露の通常の危険性を有するが、本発明の処置の間、活発な疾患を有さない被験体、ならびに特定の微生物に曝露する医学的要因または環境要因のために感染性疾患を発症する特定の危険性を有すると考えられる被験体が挙げられる。
【０１５７】
癌は、制御されない細胞増殖（すなわち、分裂）が関係する疾患である。癌細胞の制御されない増殖に寄与する既知の機構のいくつかとしては、増殖因子の独立、ゲノム変異の検出不全、および不適切な細胞シグナル伝達が挙げられる。癌細胞が正常な増殖制御を無視できることにより、増大した増殖速度が生じ得る。癌の原因は堅固には確立されていないが、癌に寄与するか、または少なくとも被験体に素因を与えるいくつかの要因が知られている。このような要因としては、特定の遺伝子変異（例えば、乳癌についてのＢＲＣＡ遺伝子変異、結腸癌についてのＡＰＣ）、疑わしい癌原因因子または発癌物質（例えば、アスベスト、ＵＶ照射）への曝露、および特定の癌（例えば、乳癌）についての家族的素質が挙げられる。
【０１５８】
癌は、悪性または非悪性の癌であり得る。癌または腫瘍としては、胆道癌；脳癌；乳癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸癌；子宮内膜癌；食道癌；胃癌；上皮内新生物；リンパ腫；肝臓癌；肺癌（例えば、小細胞および非小細胞）；黒色腫；神経芽細胞腫；口腔癌；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；直腸癌；肉腫；皮膚癌；精巣癌；甲状腺癌；および腎臓癌、ならびに他の癌腫および肉腫が挙げられるが、これらに限定されない。１つの実施形態では、癌は、毛様細胞性白血病；慢性骨髄性白血病；皮膚Ｔ細胞白血病；多発性骨髄腫；濾胞性リンパ腫；悪性黒色腫；扁平上皮癌；腎細胞癌；前立腺癌腫；膀胱細胞癌、または結腸癌腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５９】
癌を有する被験体は、検出可能な癌性細胞を有する被験体である。
【０１６０】
癌を発症する危険性のある被験体は、癌を発症する確率が正常より高い被験体である。これらの被験体としては、例えば、癌を発症する確率がより高いことと関連していることが示されている遺伝子異常を有する被験体、癌への家族的素質を有する被験体、癌原因因子（すなわち、発癌物質）（例えば、タバコ、アスベスト、または他の化学毒素）に曝露された被験体、および癌について以前治療され、そして見かけ上の寛解傾向にある被験体が挙げられる。
【０１６１】
「アレルギー」とは、物質（アレルゲン）に対する後天性の過敏性を指す。アレルギー状態としては、湿疹、アレルギー性鼻炎、または鼻感冒、枯草熱、結膜炎、気管支喘息、蕁麻疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）（蕁麻疹（ｈｉｖｅｓ））および食物アレルギー、ならびに他のアトピー性状態（アトピー性皮膚炎；アナフィラキシー；薬物アレルギー；血管性水腫；およびアレルギー性結膜炎が挙げられるが、これらに限定されない。イヌにおけるアレルギー性疾患としては、季節性皮膚炎；多年生皮膚炎；鼻炎；結膜炎；アレルギー性喘息；および薬物反応が挙げられるが、これらに限定されない。ネコにおけるアレルギー性疾患としては、皮膚炎および呼吸障害および食物アレルゲンが挙げられるが、これらに限定されない。ウマにおけるアレルギー性疾患としては、呼吸障害（例えば、「ウマの慢性肺気腫（ｈｅａｖｅｓ）」および皮膚炎が挙げられるが、これらに限定されない。非ヒト霊長類におけるアレルギー性疾患としては、アレルギー性喘息およびアレルギー性皮膚炎が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６２】
アレルギーは、アレルゲンに対する特定のクラスの免疫グロブリン（ＩｇＥ）からの抗体の産生と関連した疾患である。一般的な空気アレルゲンに対するＩｇＥ媒介応答の発達もまた、喘息の発達に対する素因を示す要因である。アレルゲンが、好塩基球（血液中を循環する）または肥満細胞（固形組織じゅうに分散される）の表面上でＦｃ  ＩｇＥレセプターに結合される特定のＩｇＥに遭遇すると、これらの細胞が活性化されるようになり、メディエーター（例えば、ヒスタミン、スクロトニン、および脂質メディエーター）の産生および放出を生じる。アレルギー性疾患としては、鼻炎（枯草熱）喘息、蕁麻疹、およびアトピー性皮膚炎が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６３】
アレルギーを有する被験体は、アレルゲンに応答してアレルギー反応を現在経験しているか、または以前に経験した被験体である。
【０１６４】
アレルギーまたは喘息を発症する危険性のある被験体は、過去においてアレルギーまたは喘息を有するとして同定されたが、現時点では活発な疾患を受けていない被験体、ならびに遺伝的要因または環境要因のために喘息またはアレルギーを発症する危険性があると考えられる被験体である。アレルギーまたは喘息を発症する危険性のある被験体としては、また、アレルゲンへの曝露の危険性を有する被験体または喘息を発症する危険性のある被験体（すなわち、以前に喘息発作を受けたか、または喘息発作に対する素因を有するもの）が挙げられ得る。例えば、危険性のある被験体は、特定のタイプのアレルゲンまたは喘息イニシエーターが見出される区域に旅行する予定のある被験体であり得るか、あるいはそれは、アレルゲンが同定されている区域で生活している任意の被験体ですらあり得る。被験体が特定の抗原に対するアレルギー応答を発症する、および被験体が抗原に曝露され得る（すなわち、花粉期の間）場合、その被験体は、抗原に対する曝露の危険性がある。
【０１６５】
近年、アレルギー性疾患は、一般に、少用量の抗原の注入後、続く増大する投薬量の抗原によって処置される。この手順は、アレルゲンに対する寛容化を誘導し、さらなるアレルギー反応を予防すると考えられている。しかし、これらの方法は、有効であるためには数年かかり得、そして副作用（例えば、アナフィラキシーショック）の危険性を伴う。本発明の方法は、これらの問題を回避する。
【０１６６】
アレルギーは、一般に、有害なアレルゲンに対するＩｇＥ抗体生成により引き起こされる。イミダゾキノリン剤の全身または粘膜投与によって誘導されるサイトカインは、主に、Ｔｈ１（例は、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−α、およびＩＦＮ−γである）と呼ばれるクラスに属し、そしてこれらは、体液性免疫応答および細胞性免疫応答の両方を誘導する。Ｔｈ１応答と関連した抗体のタイプは、一般に、それらが高い中和能およびオプソニン化能を有するので、より防御的である。免疫応答の他の主要なタイプ（ＩＬ−４サイトカイン、ＩＬ−５サイトカインおよびＩＬ−１０サイトカインの産生と関連した）は、Ｔｈ２免疫応答と称される。Ｔｈ２応答は、主に抗体が関与し、そしてこれらは、感染に対してやや防御効果が低く、そしていくつかのＴｈ２アイソタイプ（例えば、ＩｇＥ）は、アレルギーと関連している。一般に、アレルギー疾患は、Ｔｈ２型免疫応答によって媒介されるようである。一方、Ｔｈ１応答は感染に対して最良の応答を提供するが、過剰のＴｈ１応答は自己免疫疾患と関連する。イミダゾキノリン剤が被験体における免疫応答をＴｈ１応答（これは、アレルギー反応に対して防御的である）にシフトする能力に基づいて、イミダゾキノリン剤の免疫応答を誘導するのに有効な用量が、アレルギーを処置または予防するために被験体に投与され得る。
【０１６７】
アレルギー反応を引き起こす分子の総称はアレルゲンである。多数種のアレルゲンが存在する。アレルギー反応は、ＩｇＥタイプの組織感作免疫グロブリンが外来アレルゲンと反応した場合に生じる。ＩｇＥ抗体は、肥満細胞および／または好塩基球に結合され、そしてこれらの分化した細胞は、抗体分子の末端を架橋するアレルゲンによってそうするように刺激された場合に、アレルギー反応の化学メディエーター（血管作用性アミン）を放出する。ヒスタミン、血小板活性化因子、アラキドン酸代謝物、およびセロトニンは、ヒトにおけるアレルギー反応の最もよく知られたメディエーターに属する。ヒスタミンおよび他の血管作用性アミンは、通常、肥満細胞および好塩基性白血球中に貯蔵される。肥満細胞は、動物組織じゅうに分散され、そして好塩基球は、血管系内を循環する。これらの細胞は、ＩｇＥ結合が関与する特殊化された順序の事象がその放出を引き起こすように生じない限り、細胞内でヒスタミンを製造して貯蔵する。
【０１６８】
アレルギー反応の症状は、ＩｇＥが抗原と反応する身体内の位置に依存して変動する。その反応が呼吸上皮に沿って生じる場合、その症状は、くしゃみ反応、咳反応、および喘息反応である。食物アレルギーの場合のように消化管で相互作用が生じる場合、腹痛および下痢が一般的である。例えば、蜂に刺された後の全身反応は、重篤であり得、そしてしばしば生命を脅かし得る。
【０１６９】
遅延型過敏性（ＩＶ型アレルギー反応としても知られる）は、炎症または免疫反応の出現までアレルギー被験体への抗原の侵襲から少なくとも１２時間の遅延期間があることによって特徴付けられるアレルギー反応である。アレルギー状態における個体のＴリンパ球（感作Ｔリンパ球）は、抗原と反応し、Ｔリンパ球にリンホカイン（マクロファージ遊走阻害因子（ＭＩＦ）、マクロファージ活性化因子（ＭＡＦ）、マイトジェン因子（ＭＦ）、皮膚反応性因子（ＳＲＦ）、走化因子、新血管新生促進因子など）（これらは、炎症メディエーターとして機能する）を放出させ、そしてこれらのリンホカインの生物学的活性は、局所的に出現するリンパ球および他の炎症性免疫細胞の直接的および間接的な効果と共に、ＩＶ型アレルギー反応を生じる。遅延型アレルギー反応としては、ツベルクリン型反応、同種移植片拒絶反応、細胞依存型防御反応、接触皮膚炎過敏反応などが挙げられ、これらは、ステロイド剤によって最も強く抑制されることが知られている。従って、ステロイド剤は、遅延型アレルギー反応によって引き起こされる疾患に対して有効である。しかし、現在使用されている濃度でのステロイド剤の長期使用は、ステロイド依存として知られる深刻な副作用に至り得る。本発明の方法は、投与されるべき用量をより低く、少なくすることによってこれらの問題のいくつかを解決する。
【０１７０】
即時型過敏反応（またはアナフィラキシー応答）は、非常に迅速に（すなわち、原因アレルゲンへの患者の曝露の数秒または数分以内に）発症するアレルギー反応形態であり、そしてそれは、Ｂリンパ球によって作製されるＩｇＥ抗体によって媒介される。非アレルギー患者においては、臨床関連のＩｇＥ抗体は存在しない；しかし、アレルギー疾患を罹患する患者においては、ＩｇＥ抗体は、皮膚、リンパ器官中で、眼、鼻、および口腔の膜において、ならびに気道および腸において豊富である肥満細胞を感作することによって即時型過敏反応を媒介する。
【０１７１】
肥満細胞は、ＩｇＥに対する表面レセプターを有し、アレルギー罹患患者中のＩｇＥ抗体は、それらに結合される。上記で簡潔に説明したように、結合型ＩｇＥが適切なアレルゲンによって続いて接触された場合、肥満細胞は、生物活性メディエーターと呼ばれる種々の物質（例えば、ヒスタミン）を脱顆粒し、そして周囲組織に放出するようにされる。即時型過敏反応を代表する臨床症状（すなわち、気道または腸における平滑筋の収縮、小血管の拡張ならびに水および血漿タンパク質に対するそれらの浸透性の増加、濃粘液の分泌、ならびに皮膚において、赤色化、腫脹、および、かゆみまたは疼痛を生じる神経終末の刺激）を担うのは、これらの物質の生物学的活性である。
【０１７２】
イミダゾキノリン剤は、特に他の治療剤（例えば、炎症誘発性サイトカインのレベルを調節するために使用される治療剤）と合わせて使用される場合、アレルギー状態および非アレルギー状態（例えば、喘息）の処置において、有意な治療効用を有する。Ｔｈ２サイトカイン（特にＩＬ−４およびＩＬ−５）は、喘息被験体の気道において増大する。これらのサイトカインは、喘息性炎症応答（ＩｇＥアイソトープ転換、好酸球走化性および活性化、ならびに肥満細胞増殖を含む）の重要な局面を促進する。Ｔｈ１サイトカイン（特にＩＦＮ−γおよびＩＬ−１２）は、Ｔｈ２クローンの形成およびＴｈ２サイトカインの産生を抑制し得る。喘息とは、炎症、気道の狭小化、および吸入された薬剤に対する気道の反応性の増大によって特徴付けられる呼吸系の障害をいう。喘息は、絶対的にではないが、頻繁に、アトピー性症状またはアレルギー性症状を伴う。喘息およびアレルギーに関連した本発明の前述の局面のいくつかにおいては、本発明のイミダゾキノリン剤は、直接に被験体の肺に投与されない。
【０１７３】
喘息の症状は、喘鳴、息切れ、および胸苦しさ、および咳の再発的な発症を含み、これらは気道収縮から生じる。喘息と関連した気道炎症は、多数の生理的変化（例えば、気道上皮の裸出、基底膜の下のコラーゲン沈着、浮腫、肥満細胞活性化、炎症細胞浸潤（好中球、好酸球、およびリンパ球を含む）の観察によって検出され得る。気道炎症の結果として、喘息患者は、しばしば、気道過敏応答性、通気制限、呼吸症状、および疾患慢性を受ける。通気制限は、急性気管支収縮、気道浮腫、粘液栓形成、および気道再造形を含み、これらの特徴は、しばしば気管支閉塞に至る。喘息のいくつかの場合においては、基底膜下線維症が生じ得、これは、肺機能の持続的な異常に至る。
【０１７４】
過去数年にわたる研究は、同様に、喘息が、炎症細胞、メディエーター、ならびに気道に常在する他の細胞および組織間の複雑な相互作用から生じるようであることを明らかにした。肥満細胞、好酸球、上皮細胞、マクロファージ、および活性化Ｔ細胞は全て、喘息に関連した炎症プロセスにおいて重要な役割を果たす（Ｄｊｕｋａｎｏｖｉｃら、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ；１４２：４３４−４５７；１９９０）。これらの細胞は、予め形成されたメディエーターおよび新たに合成されたメディエーター（これらは、局所組織において直接または間接に作用し得る）の分泌を通じて、気道機能に影響し得ると考えられている。Ｔリンパ球の亜集団（Ｔｈ２）が、選択的サイトカインの放出による気道におけるアレルギー性炎症の調節、および疾患慢性の樹立において、重要な役割を果たすこともまた認識されている（Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．；３２６：２９８−３０４；１９９２）。
【０１７５】
喘息は、異なる発達段階で生じる複雑な障害であり、そして急性、亜急性、または慢性の症状の度合いに基づいて分類され得る。急性炎症応答は、気道への早期の細胞補充と関連する。亜急性炎症応答には、細胞の補充ならびにより持続した炎症パターンを引き起こす常在細胞の活性化が関与する。慢性炎症応答は、不変レベルの細胞傷害および進行中の修復プロセスによって特徴付けられ、これは、気道において永続的な異常を生じ得る。
【０１７６】
「喘息を有する被験体」は、炎症、気道の狭小化、および吸入された薬剤に対する気道の反応性の増大によって特徴付けられる呼吸系の障害を有する被験体である。喘息は、絶対的にではないが、頻繁に、アトピー性症状またはアレルギー性症状を伴う。本明細書中で使用される「イニシエーター」は、喘息を引き起こす組成物または環境状態をいう。イニシエーターとしては、アレルゲン、低温、運動、ウイルス感染、ＳＯ２が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７７】
別の局面においては、本発明は、低応答性（ｈｙｐｏ−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ）被験体において障害を処置または予防するための方法を提供する。本明細書中で使用されるように、低応答性被験体とは、障害の処置または予防に対して向けられる処置に以前応答しなかった被験体、またはこのような処置に応答しない危険性を有する被験体である。
【０１７８】
低応答性である他の被験体としては、障害特有の医薬に不応である被験体が挙げられる。本明細書中で使用されるように、用語「不応」は、処置が生じにくいこと、または処置を生じ得ないことを意味する。このような被験体は、これまで医薬に応答しなかった被験体（すなわち、非応答者である被験体）であり得るか、またはあるいは、それらは、一時は医薬に応答したが、その時以来、それに対して不応性になった被験体であり得る。いくつかの実施形態においては、被験体は、医薬のサブセットに対して不応である被験体である。医薬のサブセットは、少なくとも１つの医薬である。いくつかの実施形態においては、サブセットとは、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０の医薬をいう。
【０１７９】
他の実施形態においては、低応答性被験体は、以前に障害の処置または予防に向けられた処置に応答したかしなかったかに関わらず、老年の被験体である。老年被験体は、このような処置に以前に応答した被験体ですら、この処置の将来的な投与に応答しない危険性があると考えられる。同様に、新生児の被験体もまた、障害の処置または予防に向けられた処置に応答しない危険性があると考えられる。重要な実施形態においては、障害は、喘息またはアレルギーである。
【０１８０】
いくつかの局面においては、本発明の方法は、イミダゾキノリン剤の投与の前、その投与と同時、その投与後に、抗原で処置される被験体を曝露する工程を包含する。
【０１８１】
本明細書中で使用されるように、用語「〜に曝露される」とは、抗原と被験体とを接触させる能動的な工程、またはインビボで被験体を抗原に受動的に曝露することのいずれかをいう。被験体を抗原に能動的に曝露するための方法は、当該分野で周知である。一般に、抗原は、静脈内投与、皮内投与、経口投与、経皮投与、粘膜投与、鼻内投与、気管内投与、または皮下投与のような任意の手段によって、直接に被験体に投与される。抗原は、全身または局所に投与され得る。抗原およびイミダゾキノリン剤を投与するための方法は、以下により詳細に記載される。
【０１８２】
被験体は、抗原が身体内で免疫細胞に曝露するのに有効になる場合、抗原に受動的に曝露される。被験体は、例えば、身体への外来病原体の侵入によって、またはその表面に外来抗原を発現する腫瘍細胞の発生によって、抗原に受動的に曝露され得る。
【０１８３】
被験体が抗原に受動的に曝露される方法は、イミダゾキノリン剤の投与のタイミングに特に依存し得る。例えば、癌または感染性疾患またはアレルギーもしくは喘息応答を発生する危険性のある被験体において、被験体は、その危険性が最も高いとき（すなわち、アレルギーの季節の間、または癌原因因子への曝露の後）、定期的にイミダゾキノリン剤が投与され得る。さらに、イミダゾキノリン剤は、感染性因子に曝露する危険性のある外地に旅行する前に、旅行者に投与され得る。同様に、イミダゾキノリン剤は、被験体が曝露されたとき、またそのようなことがあれば、抗原に対する全身免疫応答または粘膜免疫応答を誘導する生物戦争（ｂｉｏｗａｒｆａｒｅ）に曝露される危険性のある兵士または市民に投与され得る。
【０１８４】
ある場合においては、イミダゾキノリン剤と共に抗原を投与することが望ましく、そして他の場合においては、いかなる抗原も送達されない。抗原は、免疫応答を惹起し得る分子である。用語抗原は、広範には、宿主系によって異物であるとして認識される任意のタイプの分子を含む。抗原としては、細菌抗原、癌抗原、およびアレルゲンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８５】
抗原としては、細胞、細胞抽出物、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、多糖、多糖結合体、多糖および他の分子のペプチドおよび非ペプチド模倣物、低分子、脂質、糖脂質、および炭水化物が挙げられるが、これらに限定されない。多くの抗原は、本質的には、タンパク質またはポリペプチドである。これは、一般に、タンパク質およびポリペプチドが炭水化物または脂肪よりも抗原性であるためである。
【０１８６】
本明細書中で使用されるような用語、実質的に精製されたとは、天然にはそれに付随している他のタンパク質、脂質、炭水化物、または他の物質を実質的に含まないポリペプチドをいう。当業者は、タンパク質精製のための標準的な技術を使用して、ウイルス性または細菌性ポリペプチドを精製し得る。実質的に純粋なポリペプチドは、しばしば、非還元ポリアクリルアミドゲル上に１つの主要なバンドを生じる。部分的にグリコシル化されたポリペプチドまたはいくつかの開始コドンを有するポリペプチドの場合、非還元ポリアクリルアミドゲル上にいくつかのバンドが存在し得るが、これらは、そのポリペプチドについての特有のパターンを形成する。ウイルス性または細菌性ポリペプチドの純度はまた、アミノ末端アミノ酸配列分析によって決定され得る。核酸ベクターによってコードされない他のタイプの抗原（例えば、多糖、低分子、模倣物など）は、上述され、そして本発明内に含まれる。
【０１８７】
本明細書中で使用される細菌性抗原は、微生物の抗原であり、そしてこれらとしては、ウイルス、細菌、寄生生物、および真菌が挙げられるが、これらに制限されない。このような抗原は、インタクトな生物、ならびに天然の単離物およびそれらのフラグメントまたは誘導体、およびまた、天然微生物抗原に同一であるかまたは類似し、かつその微生物に対して特異的な免疫応答を誘導する合成化合物を含む。化合物は、天然微生物抗原に対する免疫応答（体液性および／または細胞性）を誘導する場合、天然微生物抗原に類似である。このような抗原は、当該分野において慣用的に使用され、当業者に周知である。
【０１８８】
細菌病原体のポリペプチドとしては、Ａｅｒｏｍｏｎｉｓ  ｓａｌｍｏｎｉｃｉｄａの鉄制御外膜タンパク質（ＩＲＯＭＰ）、外膜タンパク質（ＯＭＰ）、およびＡタンパク質（これは、せつ腫症を引き起こす）、Ｒｅｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓａｌｍｏｎｉｎａｒｕｍのｐ５７タンパク質（これは、細菌性腎疾患（ＢＫＤ）を引き起こす）、Ｙｅｒｓｉｎｉｏｓｉｓの主要表面関連抗原（ｍｓａ）、表面発現細胞毒素（ｍｐｒ）、表面発現溶血素（ｉｓｈ）、および鞭毛性抗原；Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌｏｓｉｓの細胞外タンパク質（ＥＣＰ）、鉄制御外膜タンパク質（ＩＲＯＭＰ）および構造タンパク質；Ｖｉｂｒｏｓｉｓ  ａｎｇｕｉｌｌａｒｕｍおよびＶ．ｏｒｄａｌｉｉのＯＭＰおよび鞭毛性タンパク質；Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌｏｓｉｓ  ｉｃｔａｌｕｒｉおよびＥ．ｔａｒｄａの鞭毛性タンパク質、ＯＭＰタンパク質、ａｒｏＡ、およびｐｕｒＡ；ならびにＩｃｈｔｈｙｏｐｈｔｈｉｒｉｕｓの表面抗原；ならびにＣｙｔｏｐｈａｇａ  ｃｏｌｕｍｎａｒｉの構造タンパク質および制御タンパク質；ならびにＲｉｃｋｅｔｔｓｉａの構造タンパク質および制御タンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８９】
寄生生物病原体のポリペプチドとしては、Ｉｃｈｔｈｙｏｐｈｔｈｉｒｉｕｓの表面抗原が挙げられるが、これに限定されない。
【０１９０】
イミダゾキノリン剤とともに使用され得る他の微生物抗原は、米国（非暫定）特許出願番号第０９／８０１，８３９号（２００１年３月８日出願）に提供される。
【０１９１】
本明細書中で使用されるような癌抗原は、腫瘍または癌細胞表面と関連し、そしてＭＨＣ分子の背景において抗原提示細胞の表面で発現された場合に免疫応答を惹起し得る、化合物（例えば、ペプチドまたはタンパク質）である。癌抗原は、癌細胞の粗抽出物を調製する（例えば、Ｃｏｈｅｎら、１９９４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５４：１０５５に記載のように）ことにより、抗原を部分的に精製することにより、組換え技術により、または公知の抗原の新規合成により、癌細胞から調製され得る。癌抗原は、組換え発現された抗原、その免疫原性部分、または腫瘍全体または癌全体を含むが、それらに限定されない。このような抗原は、組換えまたは当該分野で公知の任意の他の手段によって単離または調製され得る。
【０１９２】
用語「癌抗原」および「腫瘍抗原」は、相互に交換可能に使用され、そしてこれらは、癌細胞によって示差的に発現され、それによって癌細胞を標的するために利用され得る抗原をいう。癌抗原は、見かけ上腫瘍に特異的な免疫応答を潜在的に刺激し得る抗原である。これらの抗原のいくつかは、正常細胞によって、必ずしも発現されないが、コードされている。これらの抗原は、正常細胞において通常サイレントである（すなわち、発現されない）抗原、特定の分化時期でのみ発現される抗原、および一時的に発現される抗原（例えば、胚性抗原および胎児性抗原）として特徴付けられ得る。他の癌抗原は、変異型細胞遺伝子（例えば、癌遺伝子（例えば、活性型ｒａｓ癌遺伝子）、抑制遺伝子（例えば、変異型ｐ５３）、内部欠失または染色体転位から生じる融合タンパク質）によってコードされる。なお他の癌抗原は、ウイルス遺伝子（例えば、ＲＮＡ腫瘍ウイルスおよびＤＮＡ腫瘍ウイルスが保持した遺伝子）によってコードされ得る。腫瘍抗原の例としては、以下が挙げられる：ＭＡＧＥ、ＭＡＥＲ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ、ｇｐ１００、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連抗原（ＣＲＣ）−−Ｃ０１７−１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児抗原（ＣＥＡ）ならびにその免疫原性エピトープＣＡＰ−１およびＣＡＰ−２、ｅｔｖ６、ａｍ１１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）ならびにその免疫原性エピトープＰＳＡ−１、ＰＳＡ−２およびＰＳＡ−３、前立腺特異膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｔ細胞レセプター／ＣＤ３−ζ鎖、腫瘍抗原のＭＡＧＥファミリー（例えば、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ５、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ７、ＭＡＧＥ−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１１、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ｘｐ２（ＭＡＧＥ−Ｂ２）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ３（ＭＡＧＥ−Ｂ３）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ４（ＭＡＧＥ−Ｂ４）、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＭＡＧＥ−Ｃ３、ＭＡＧＥ−Ｃ４、ＭＡＧＥ−Ｃ５）、腫瘍抗原のＧＡＧＥファミリー（例えば、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７、ＧＡＧＥ−８、ＧＡＧＥ−９）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ−１、ＮＡＧ、ＧｎＴ−Ｖ、ＭＵＭ−１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ，ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α−フェトプロテイン、Ｅ−カドヘリン、α−カテニン、β−カテニンおよびγ−カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｃｄｃ２７、腺腫様結腸ポリポーシスタンパク質（ＡＰＣ）、ホドリン、コネキシン３７、Ｉｇ−イディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２ガングリオシドおよびＧＤ２ガングリオシド、ウイルス産物（例えば、ヒトパピローマウイルスタンパク質）、腫瘍抗原のＳｍａｄファミリー、ｌｍｐ−１、Ｐ１Ａ、ＥＢＶにコードされる核抗原（ＥＢＮＡ）−１、脳グリコゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−１およびＣＴ−��、ならびにｃ−ｅｒｂＢ−２。
【０１９３】
癌または腫瘍、およびこのような腫瘍に関連する腫瘍抗原としては（排他的ではないが）、以下が挙げられる：急性リンパ芽球性白血病（ｅｔｖ６；ａｍ１１；シクロフィリンｂ）、Ｂ細胞リンパ腫（Ｉｇ−イディオタイプ）、神経膠腫（Ｅ−カドヘリン；α−カテニン；β−カテニン；γ−カテニン；ｐ１２０ｃｔｎ）、膀胱癌（ｐ２１ｒａｓ）、胆管癌（ｐ２１ｒａｓ）、乳癌（ＭＵＣファミリー；ＨＥＲ２／ｎｅｕ；ｃ−ｅｒｂＢ−２）、頸部の癌（ｐ５３；ｐ２１ｒａｓ）、結腸癌（ｐ２１ｒａｓ；ＨＥＲ２／ｎｅｕ；ｃ−ｅｒｂＢ−２；ＭＵＣファミリー）、結腸直腸癌（結腸直腸関連抗原（ＣＲＣ）−−Ｃ０１７−１Ａ／ＧＡ７３３；ＡＰＣ）、絨毛癌（ＣＥＡ）、上皮細胞癌（シクロフィリンｂ）、胃癌（ＨＥＲ２／ｎｅｕ；ｃ−ｅｒｂＢ−２；ｇａ７３３糖タンパク質）、肝細胞癌（α−フェトプロテイン）、ホジキンリンパ腫（ｌｍｐ−１；ＥＢＮＡ−１）、肺癌（ＣＥＡ；ＭＡＧＥ−３；ＮＹ−ＥＳＯ−１）、リンパ系細胞由来白血病（シクロフィリンｂ）、黒色腫（ｐ１５タンパク質、ｇｐ７５、腫瘍胎児抗原、ＧＭ２ガングリオシドおよびＧＤ２ガングリオシド）、骨髄腫（ＭＵＣファミリー；ｐ２１ｒａｓ）、非小細胞肺癌（ＨＥＲ２／ｎｅｕ；ｃ−ｅｒｂＢ−２）、鼻咽頭癌（ｌｍｐ−１；ＥＢＮＡ−１）、卵巣癌（ＭＵＣファミリー；ＨＥＲ２／ｎｅｕ；ｃ−ｅｒｂＢ−２）、前立腺癌（前立腺特異抗原（ＰＳＡ）ならびにその免疫原性エピトープＰＳＡ−１、ＰＳＡ−２およびＰＳＡ−３；ＰＳＭＡ；ＨＥＲ２／ｎｅｕ；ｃ−ｅｒｂＢ−２）、膵臓癌（ｐ２１ｒａｓ；ＭＵＣファミリー；ＨＥＲ２／ｎｅｕ；ｃ−ｅｒｂＢ−２；ｇａ７３３糖タンパク質）、腎臓（ＨＥＲ２／ｎｅｕ；ｃ−ｅｒｂＢ−２）、頸部および食道の扁平上皮癌（ヒトパピローマウイルスタンパク質のようなウイルス産物）、精巣癌（ＮＹ−ＥＳＯ−１）、Ｔ細胞白血病（ＨＴＬＶ−１エピトープ）、ならびに黒色腫（Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１；ｃｄｃ２７；ＭＡＧＥ−３；ｐ２１ｒａｓ；ｇｐ１００Ｐｍｅｌ１１７）。
【０１９４】
ＭＨＣクラスＩ分子およびＭＨＣクラスＩＩ分子のいずれかまたは両方に結合する腫瘍抗原の例は、当該分野において公知である。これらの抗原および他の抗原は、ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９８／１８６０１に開示されている。
【０１９５】
イミダゾキノリン薬剤と一緒に使用され得る他の癌抗原は、２００１年３月５日に出願された、米国特許出願番号０９／８００，２６６に提供されている。
【０１９６】
「アレルゲン」とは、本明細書中において使用される場合、ＩｇＥの産生によって特徴付けられる免疫応答を引き起こし得る分子である。アレルゲンとは、感受性の被験体において、アレルギー応答または喘息応答を誘導し得る物質である。従って、本発明の文脈において、用語アレルゲンとは、ＩｇＥ抗体によって媒介されるアレルギー応答を誘発し得る抗原の特定の型を意味する。本発明の方法および調製物は、このようなアレルゲン、およびアレルゲンのフラグメントまたはアレルゲンとして働くハプテンの、広範なクラスにわたる。アレルゲンの列挙は膨大であり、そして花粉、昆虫毒液、動物ふけ埃、真菌胞子および薬物（例えば、ペニシリン）を含み得る。
【０１９７】
イミダゾキノリン薬剤と一緒に使用され得る他のアレルゲンは、２００１年２月２日に出願された、米国特許出願番号０９／７７６，４７９に提供されている。
【０１９８】
抗原は、核酸ベクターによってコードされる抗原であり得るか、または核酸ベクター中にコードされないかもしれない。前者の場合において、この核酸ベクターは、被験体に投与され、そしてこの抗原は、インビボで発現される。後者の場合において、この抗原は、被験体に直接投与され得る。核酸ベクター中にコードされない抗原とは、本明細書中において使用される場合、核酸ではない任意の型の抗原をいう。例えば、本発明のいくつかの局面において、核酸ベクター中にコードされない抗原は、ペプチドまたはポリペプチドである。ペプチド抗原またはポリペプチド抗原の一次アミノ酸配列の少しの改変はまた、改変されていない対応ポリペプチドと比較して、実質的に等価な抗原活性を有するポリペプチドを生じ得る。このような改変は、部位特異的変異誘発によってのように故意であり得るか、または自発的であり得る。これらの改変によって産生されるポリペプチドの全ては、抗原性がなお存在する限り、本明細書中に包含される。ペプチドまたはポリペプチドは、例えば、ウイルス由来であり得る。本発明において有用な抗原は、全長タンパク質またはポリペプチドの小さなペプチドフラグメントから全長形態までの範囲の、任意の長さであり得る。例えば、抗原は、５アミノ酸残基長未満、８アミノ酸残基長未満、１０アミノ酸残基長未満、１５アミノ酸残基長未満、２０アミノ酸残基長未満、３０アミノ酸残基長未満、５０アミノ酸残基長未満、７０アミノ酸残基長未満、１００アミノ酸残基長未満、またはより多くのアミノ酸残基長であり得、但し、本発明のイミダゾキノリン薬剤および／または他の薬剤と組み合わせて使用される場合に、特異的免疫応答を刺激する。
【０１９９】
抗原をコードする核酸は、真核生物細胞において抗原核酸の発現を指向する遺伝子発現配列に、作動可能に連結される。遺伝子発現配列は、任意の調節ヌクレオチド配列であり得、例えば、プロモーター配列またはプロモーター−エンハンサーの組み合わせであり、これは、それが作動可能に連結された抗原核酸の効率的な転写および翻訳を容易にする。遺伝子発現配列は、例えば、哺乳動物プロモーターまたはウイルスプロモーター（例えば、構成プロモーターまたは誘導性プロモーター）であり得る。構成哺乳動物プロモーターとしては、以下の遺伝子に対するプロモーターが挙げられるが、これらに限定されない：ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、アデノシンデアミナーゼ、ピルビン酸キナーゼ、ｂ−アクチンプロモーターおよび他の構成プロモーター。真核生物細胞において構成的に機能する、例示的なウイルスプロモーターとしては、例えば、以下が挙げられる：サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、シミアンウイルス（例えば、ＳＶ４０）、パピローマウイルス、アデノウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ラウス肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、モロニー白血病ウイルスおよび他のレトロウイルスの長い末端反復（ＬＴＲ）、ならびに単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーター由来のプロモーター。他の構成プロモーターは、当業者に公知である。本発明の遺伝子発現配列として有用なプロモーターはまた、誘導性プロモーターを含む。誘導性プロモーターは、誘導薬剤の存在下で発現される。例えば、メタロチオネインプロモーターは、特定の金属イオンの存在下で、転写および翻訳を促進するように誘導される。他の誘導性プロモーターは、当業者に公知である。
【０２００】
一般に、遺伝子発現配列は、必然的に、５’非転写配列および５’非翻訳配列を含むべきであり、これらは、それぞれ転写および翻訳の開始に関与し、例えば、ＴＡＴＡボックス、キャッピング配列、ＣＡＡＴ配列などである。特に、このような５’非転写配列は、プロモーター領域を含み、この領域は、作動可能に結合した抗原核酸の転写制御のためのプロモーター領域を含む。遺伝子発現配列は、必要に応じて、望ましいように、エンハンサー配列または上流アクチベーター配列を含む。
【０２０１】
抗原核酸は、遺伝子発現配列に作動可能に連結される。本明細書中において使用される場合、抗原核酸配列および遺伝子発現配列は、これらが、抗原コード配列の発現あるいは転写および／または翻訳を、遺伝子発現配列の影響下または制御下に置く様式で共有結合する場合に、作動可能に連結されるといわれる。２つのＤＮＡ配列は、５’遺伝子発現配列におけるプロモーターの誘導が、抗原配列の転写を生じ、そして２つのＤＮＡ配列間の結合の性質が：（１）フレームシフト変異の導入を生じない、（２）プロモーター領域が抗原配列の転写を指向する能力を妨害しない、または（３）対応するＲＮＡ転写産物がタンパク質に翻訳される能力を妨害しない場合に、作動可能に連結されているといわれる。従って、遺伝子発現配列は、得られる転写産物が所望のタンパク質またはポリペプチドに翻訳されるように、遺伝子発現配列が抗原核酸配列の転写をもたらし得る場合に、この抗原核酸配列に作動可能に連結される。
【０２０２】
本発明の抗原核酸は、単独でかまたはベクターと組み合わせて、免疫系に送達され得る。この最も広い意味において、ベクターとは、抗原が免疫細胞の表面に発現および提示され得るように、抗原核酸の、免疫系の細胞への移入を容易にし得る任意のビヒクルである。ベクターは、一般に、ベクターの非存在下で生じる分解の程度に対して減少した分解で、核酸を免疫細胞に運ぶ。ベクターは、必要に応じて、上記遺伝子発現配列を含み、免疫細胞において抗原核酸の発現を増強する。一般に、本発明において有用なベクターとしては、プラ膿度、ファージミド、ウイルス、抗原核酸配列の挿入または組み込みによって操作されたウイルス表面または細菌表面由来の他のビヒクルが挙げられるが、これらに限定されない。ウイスルベクターは、ベクターの好ましい型であり、そして以下のウイルス由来の核酸配列が挙げられるが、これらに限定されない：レトロウイルス（例えば、モロニーマウス白血病ウイルス、Ｈａｒｖｅｙマウス肉腫ウイルス、マウス乳腺癌ウイルス、およびラウス肉腫ウイルス）；アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス；ＳＶ４０型ウイルス；ポリオーマウイルス；エプスタイン−バーウイルス；パピローマウイルス；ヘルペスウイルス；ワクシニアウイルス；ポリオウイルス；ならびにＲＮＡウイルス（例えば、レトロウイルス）。名称を列挙しないが当該分野において公知の他のベクターを、容易に使用し得る。
【０２０３】
好ましいウイルスベクターは、非必須遺伝子が目的の遺伝子で置き換えられている、非細胞障害性真核生物ウイルスに基づく。非細胞障害性ウイルスとしては、レトロウイルスが挙げられ、その生活環は、ゲノムウイルスＲＮＡからＤＮＡへの逆転写、引き続く宿主細胞ＤＮＡへのプロウイルス取り込みを包含する。レトロウイルスは、ヒト遺伝子療法試行が認められている。最も有用なものは、複製欠損であるレトロウイルスである（すなわち、所望のタンパク質の合成を指向し得るが、感染性粒子の製造が不可能である）。このような遺伝子的に変更されたレトロウイルス発現ベクターは、インビボでの遺伝子の高効率の形質導入のための、一般的な有用性を有する。複製欠損レトロウイルスを産生するための標準的なプロトコル（外因性遺伝材料の、プラスミドへの取り込み、プラスミドでのパッケージング細胞株の形質転換、パッケージング細胞株による組換えレトロウイルスの産生、組織培養培地からのウイルス粒子の収集、およびウイルス粒子での標的細胞の感染の工程を包含する）は、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｍ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｃ．Ｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９０）およびＭｕｒｒａｙ，Ｅ．Ｊ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，第７巻、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｃｌｉｆｆｔｏｎ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ（１９９１）に提供される。
【０２０４】
特定の適用のための好ましいウイルスは、アデノ随伴ウイルス（二本鎖ＤＮＡウイルス）である。アデノ随伴ウイルスは、複製欠損になるように操作され得、そして広範な細胞型および種を感染し得る。これはさらに、以下のような利点を有する：熱および脂質溶媒に対する安定性；様々な系統の細胞（造血細胞が挙げられる）における高い形質導入頻度；および重複感染阻害の欠如、従って、複数のシリーズの形質導入を可能にすること。報告されるように、野生型アデノ随伴ウイルスは、ヒト細胞ＤＮＡ内への取り込み部位に対していくらか優先を示し、これによって、挿入変異誘発の可能性およびレトロウイルス感染に特徴的な挿入遺伝子発現の多様性を最小にする。さらに、野生型アデノ随伴ウイルス感染は、選択的圧力の非存在下で、組織培養において１００継代を超えて持ち越され、アデノ随伴ウイルスゲノムの取り込みは、比較的安定な事象であることを示唆する。アデノ随伴ウイルスはまた、染色体外の様式で機能し得る。レプリカーゼタンパク質を欠く組換えアデノ随伴ウイルスは、明らかに、この取り込み配列特異性を欠く。
【０２０５】
他のベクターとしては、プラスミドベクターが挙げられる。プラスミドベクターは、当該分野において広範に記載されており、そして当業者に周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９を参照のこと。最近数年において、プラスミドベクターは、宿主ゲノム中での複製および宿主ゲノム内への取り込みが不可能であることに起因して、インビボで遺伝子を細胞に送達するために特に有利であることが見出された。しかし、これらのプラスミドは、宿主細胞と適合性のプロモーターを有するので、このプラスミド中に作動可能にコードされる遺伝子からペプチドを発現し得る。通常使用されるプラスミドのいくつかとしては、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ＳＶ４０、およびｐＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔが挙げられる。他のプラスミドが、当業者に周知である。さらに、プラスミドは、制限酵素およびライゲーション反応を使用して、特定のＤＮＡフラグメントを除去および付加することによって、あつらえて設計され得る。
【０２０６】
プラスミドを保有する遺伝子は、細菌を使用して免疫系に送達され得ることが、最近発見された。Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａのような細菌の改変形態は、プラスミドでトランスフェクトされ得、そして送達ビヒクルとして使用され得る。細菌送達ビヒクルは、宿主被験体に、経口投与され得るか、または他の投与手段によって投与され得る。細菌は、プラスミドを、おそらく腸障壁を通過することによって、免疫細胞（例えば、Ｂ細胞、樹状細胞）に送達する。高レベルの免疫保護が、この方法論を使用して確立されている。このような送達方法は、抗原、イミダゾキノリン薬剤および／または他の治療剤の全身送達を利用する本発明の局面に有用である。
【０２０７】
本発明のいくつかの局面において、イミダゾキノリン薬剤は、治療剤（例えば、障害特異的医薬）と共に投与される。本明細書中において使用される場合、障害特異的医薬とは、障害の処置または予防において主として使用される治療または薬剤である。１つの局面において、イミダゾキノリン薬剤は、被験体に、抗菌剤と共に投与され得る。抗菌剤とは、本明細書中において使用される場合、感染性生物を殺傷または阻害し得る、天然に存在する化合物または合成化合物をいう。本発明に従って有用な抗菌剤の型は、被験体が感染されるかまたは感染される危険のある生物の型に依存する。
【０２０８】
１つの局面において、本発明は、障害を処置または予防する方法を提供する。この方法は、このような処置を必要とする被験体に、障害を予防または処置するための有効量での、イミダゾキノリン薬剤と障害特異的医薬との相乗的な組み合せの投与に関する。
【０２０９】
１つの局面において、イニダゾキノリン薬剤とこのような障害特異的処置医薬との組み合せは、これらの高い用量で通常経験されるのと同じように多くの副作用もなく、より高い用量の障害特異的医薬の投与を可能にする。別の局面において、イミダゾキノリン薬剤と障害特異的医薬との組み合せは、いずれかの化合物の低い、準治療的（ｓｕｂ−ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）用量の投与を可能にするが、より高い効果は、このような低い用量を使用して他に達成される。１つの例として、イミダゾキノリン薬剤と医薬との組み合せを投与することによって、この医薬が単独では治療的利益を提供しない用量（すなわち、準治療的用量）で投与されるとしても、有効な応答を達成することを可能にする。別の例として、イミダゾキノリン薬剤が、単独では治療的利益を提供しない用量で投与されるとしても、組み合わせの投与は、応答を達成する。
【０２１０】
イミダゾキノリン薬剤はまた、固定されたスケジュールまたは互いに異なる時間的関係で投与され得る。種々の組み合せは、免疫応答の調節あるいは障害を予防するまたは処置する先行技術の方法を超えて、特に、正常な組織に対する減少した非特異的毒性に関して、多くの利点を有する。
【０２１１】
本発明は、障害の予防および／または処置に有用な相乗効果を提供するために、障害特異的医薬を伴うイミダゾキノリン薬剤の投与を包含する。イミダゾキノリン薬剤の有益な効果は、これらの薬剤によるＴｈ１免疫応答の調節および刺激に一部起因する。本発明のイミダゾキノリンは、以下に挙げられるが、これらに限定されない多数の機構を介して相乗応答を提供し得る：癌治療の最中またはその後の造血回復（ｈｅｍｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ）の刺激、抗微生物感染活性、免疫細胞および非免疫細胞による（医薬の性質に依存する）障害特異的医薬の取り込みの増強、ならびに一般的にアレルゲンおよびより具体的には医薬に対するアレルギー応答の阻害または予防。
【０２１２】
イミダゾキノリン薬剤は、細菌感染、真菌感染、寄生生物感染およびウイルス感染に対する防御機構を増強するように機能する。免疫無防備状態の癌患者におけるこのような感染の予防および制御は、疾患の処置および管理における主な挑戦である。このような感染は、通常、癌患者の処置の過程を不利に遅延し得るかまたは改変し得る。核酸によって刺激された細胞性免疫応答および体液性免疫応答は、侵入してくる病原体に対する身体自身の天然の防御システムを示す。イミダゾキノリン薬剤は、微生物感染の除去において最も有効であることが公知の生得的免疫の活性化を通してこの機能を行う。生得的免疫の増強が、特に、増加したＩＦＮ−α生産および増加したＮＫ細胞活性（これらの両方が微生物感染の処置に有効である）を介して生じる。イミダゾキノリン薬剤はまた、抗体依存性細胞傷害の増強によって機能する。後者の機構は、核酸の持続性効果を提供し、それによって、投薬レジームを減少し、コンプライアンスおよび維持療法を改善し、緊急の状況を減少し；そして生活の質を改善する。癌患者における一般的な日和見感染のいくつかの例は、以下によって引き起こされる：Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ、サイトメガロウイルス、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｎｏｃａｒｄｉａ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓおよび疱疹ウイルス（例えば、単純疱疹ウイルス）。
【０２１３】
癌の処置が行なわれている被験体は、投与される癌医薬処方物に対する有害なアレルギー反応を経験する場合が時々ある。この反応は、癌医薬自体に対して、または癌医薬処方物内に含まれる他の物質（例えば、処方物内のキャリア物質、安定剤または滅菌剤）に対して、特異的であり得る。投与の際に、しばしばアレルギー反応の引き金となる医薬の例は、タキソールの処方物である。反応は、このような医薬の使用をより所望でなくするので、最低限、アレルギー反応を避けるために、治療的用量未満の医薬の投与の原因になり得る。本発明は、イミダゾキノリン薬剤の投与によってこのような有害な反応を避けるための方法を提供する。アレルギー反応の完全な減少または除去はまた、治療的用量よりも多い、または少なくとも現在投与される用量よりも多い用量での障害特異的医薬の投与を可能にし得る。
【０２１４】
本発明のイミダゾキノリン薬剤はまた、輸血を受けている被験体における有害なアレルギー反応の調節に有用である。癌の処置を受けている被験体は、しばしば、赤血球および／または血小板を輸血する必要がある。他からのこれらの細胞型の不完全な分離またはこれらの血液産物のドナーとレシピエントとの間の副組織適合性の遺伝子型の違いのいずれかに起因して、注入された被験体は、輸血に対する急性のアレルギー反応を経験し得る。主にＴｈ２型応答であるこの反応に対抗するために、患者は、抗ヒスタミンのようなアレルギー薬剤を投与される。イミダゾキノリン薬剤は、Ｔｈ１応答を誘発するので、被験体は、他に生じ得るＴｈ２アレルギー反応を予防または減少するために、輸血の前または同時にイミダゾキノリン薬剤を投与され得る。
【０２１５】
喘息／アレルギー医薬と組合わされる場合、イミダゾキノリン薬剤は、喘息およびアレルギーの処置のための単独の各組成物を超える多くの利点を有する。イミダゾキノリン薬剤は、いくつかの局面において、気道炎症および気管支痙攣（ｂｒｏｎｃｈｉａｌ  ｓｐａｓｍ）を生じ得るＴｈ２型免疫応答（ＩＬ−４、ＩｇＥ生産、ヒスタミン放出）を同時に抑制することによって、および／または無害の抗体および細胞応答を促進するＴｈ１型免疫応答（ＩＦＮ−γおよびＩＬ−１２生産）を誘導することによって機能する。これは、過敏感反応が発生することを安全にかつ効果的に予防し、それによって症状を除去する身体の内側の環境を創造する。
【０２１６】
本発明の方法に使用される場合、イミダゾキノリン薬剤は、気管支高反応性、気管支収縮、気管支閉塞、気道炎症およびアトピーを除去／減少し得（これは、喘息制御を改善し、肺機能を正常化し、不可逆的な気道損傷を予防する）、そしてまた、運動、冷たく乾燥した空気およびＳＯ２に対する急性応答を阻害し得る。イミダゾキノリン薬剤は、持続性の効果を提供し、従って、投薬レジームを減少し、コンプライアンスおよび維持療法を改善し、緊急の状況を減少し；そして生活の質を改善する。これらの化合物はまた、有用である。なぜならこれらは初期の抗感染活性（感染のエピソードの減少をもたらし、さらに高反応性免疫応答を減少する）を提供するからである。このことは、子供または免疫無防備状態の被験体のような被験体において特にあてはまる。さらに、イミダゾキノリン薬剤の使用は、より単純でかつより安全な送達を提供し、そして使用されるべき薬剤をより少なくすることによって、高感受性反応を悪化させ得る吸入器の使用を減少／除去する。
【０２１７】
抗微生物剤としては、限定されないが以下が挙げられる：抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤および抗寄生生物剤。「抗感染剤」、「抗菌剤」、「抗ウイルス剤」、「抗真菌剤」、「抗寄生生物剤」および「殺寄生生物薬」のような句は、当業者に十分に確立された意味を有し、そして標準の医療用テキストに定義される。抗微生物剤は、細菌を殺傷するかまたは阻害し、そして抗生物質ならびに類似の機能を有する他の合成化合物または天然の化合物を含む。抗生物質は、細胞（例えば、微生物）による二次代謝物として生成される低分子量分子である。一般的に、抗生物質は、微生物に対して特異的であり、そして宿主細胞に存在しない、１つ以上の細菌性機能または構造を妨害する。天然の供給原から単離され得るかまたは合成され得る抗ウイルス剤は、ウイルスを殺傷するかまたは阻害するのに有用である。抗真菌剤を使用して、表在性の真菌感染ならびに日和見性感染および原発性の全身性真菌感染（ｐｒｉｍａｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｆｕｎｇａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）を処置する。抗寄生生物剤は、寄生生物を殺傷するかまたは阻害する。
【０２１８】
抗感染治療での問題の１つは、抗感染剤で処置される宿主に生じる副作用である。例えば、多くの抗感染剤は、広域スペクトルの微生物を殺傷し得るかまたは阻害し得、そして種の特定の型に対して特異的でない。これらの型の抗感染剤を用いた処置は、宿主中の生きた通常の微生物叢ならびに感染性の微生物の殺傷を生じる。微生物叢は、感染性病原体と競合しそしてそれらに対するバリアとして機能するので、微生物叢の損失は、疾患の合併症をもたらし得、そして他の病原体による感染に対して宿主を感染しやすくする。他の副作用は、非微生物細胞または宿主の組織上のこれらの化学実体の特異的または非特異的効果の結果として生じ得る。
【０２１９】
抗感染剤の広範の使用での別の問題は、微生物の抗生物質耐性株の発生である。すでに、バンコマイシン耐性ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ株、ペニシリン耐性ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｉ株、多剤耐性Ｓ．ａｕｒｅｕｓ株、および多剤耐性ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ株発生し、そして主な臨床的問題になっている。抗感染剤の広範の使用は、細菌の多くの抗生物質耐性株を生成するようである。結果として、新しい抗感染ストラテジーは、これらの微生物と戦うために必要である。
【０２２０】
抗菌剤の大きなクラスが、抗生物質である。広範の細菌を殺傷するかまたは阻害するのに効果的な抗生物質は、広域スペクトルの抗生物質という。抗生物質の他の型は、グラム陽性またはグラム陰性のクラスの細菌に対して優勢に効果的である。抗生物質のこれらの型は、狭いスペクトルの抗生物質という。単一の生物または疾患に対して有効であり、そして他の型の細菌に対して有効でない他の抗生物質は、限定されたスペクトルの抗生物質という。
【０２２１】
抗菌剤は、時々、それらの主な作用様式に基づいて分類される。一般的に、抗菌剤は、細胞壁合成インヒビター、細胞膜インヒビター、タンパク質合成インヒビター、核酸合成インヒビターまたは機能的インヒビターおよび競合的インヒビターである。細胞壁合成インヒビターは、細胞壁合成のプロセス、および一般的に、細菌ペプチドグリカンの合成における工程を阻害する。細胞壁合成インヒビターとしては、β−ラクタム抗生物質、天然のペニシリン、半合成ペニシリン、アンピシリン、クラブラン酸、セファロスポリンおよびバシトラシンが挙げられる。
【０２２２】
β−ラクタムは、ペプチドグリカン合成の最後の工程を阻害する４員のβ−ラクタム環を含む抗生物質である。ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍによって生成されたβ−ラクタム抗生物質は、天然のペニシリン（例えば、ペニシリンＧまたはペニシリンＶ）である。天然のペニシリンは、狭いスペクトルの活性を有し、そして一般的にＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、ＧｏｎｏｃｏｃｃｕｓおよびＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓに対して有効である。グラム陽性菌に対してもまた有効である天然のペニシリンの他の型としては、ペニシリンＦ、ペニシリンＸ、ペニシリンＫおよびペニシリンＯが挙げられる。
【０２２３】
半合成ペニシリンは、一般的に、カビによって生成された分子６−アミノペニシラン酸の改変体である。６−アミノペニシラン酸は、側鎖の付加によって改変され得、これにより天然のペニシリンよりも広域スペクトルの活性または種々の他の有利な特性を有するペニシリンが生成される。半合成ペニシリンのいくつかの型は、グラム陽性菌およびグラム陰性菌に対して広域スペクトルを有するが、ペニシリナーゼによって不活性化される。これらの半合成ペニシリンとしては、アンピシリン、カルベニシリン、オキサシリン、アズロシリン、メズロシリンおよびピペラシリンが挙げられる。半合成ペニシリンの他の型は、グラム陽性菌に対して狭い活性を有するが、ペニシリナーゼによって不活性化されないような開発された特性を有する。これらとしては、例えば、メチシリン、ジクロキサシリンおよびナフシリンが挙げられる。広域スペクトルの半合成ペニシリンのいくつかは、β−ラクタマーゼインヒビター（例えば、クラブラン酸（ｃｌａｖｕｌａｍｉｃ）およびスルバクタム）と組み合せて使用され得る。β−ラクタマーゼインヒビターは、抗菌作用を有さないが、これらはペニシリナーゼを阻害するように機能し、従って、分解から半合成ペニシリンを保護する。
【０２２４】
天然および半合成の両方のペニシリンに関連する重篤な副作用の１つは、ペニシリンアレルギーである。ペニシリンアレルギーは非常に重篤であり、そして急速に死亡を引き起こし得る。ペニシリンに対してアレルギー性である被験体において、β−ラクタム分子は、ＩｇＥ媒介炎症性応答を開始する血清タンパク質に結合する。炎症性応答は、アナフィラキシーおよびおそらく死をもたらす。
【０２２５】
β−ラクタム抗生物質の別の型は、セファロスポリン（ｃｅｐｈａｌｏｌｓｐｏｒｉｎ）である。これらは、細菌性β−ラクタマーゼによる分解に感受性であり、従って、以前から単独では有効でない。しかし、セファロスポリンはペニシリナーゼに耐性である。これらは、種々のグラム陽性菌およびグラム陰性菌に対して有効である。セファロスポリンとして以下が挙げられるが、これらに限定されない：セファロチン、セファピリン、セファレキシン、セファマンドール、セファクロール、セファゾリン、セフロキシン（ｃｅｆｕｒｏｘｉｎｅ）、セフォキシチン、セフォタキシム、セフスロジン（ｃｅｆｓｕｌｏｄｉｎ）、セフェトメット（ｃｅｆｅｔａｍｅｔ）、セフィキシム（ｃｅｆｉｘｉｍｅ）、セフトリアキソン、セフォペラゾン、セフタジジムおよびモキサラクタム。
【０２２６】
バシトラシンは、細胞壁合成を阻害する抗生物質の別のクラスである。バシトラシンは，グラム陽性菌に対して有効であるが、その使用は、一般的にその高い毒性に起因して局所的な投与に限定される。より低い有効用量のバシトラシンは、この化合物が本発明のイミダゾキノリン薬剤と共に投与される場合に使用され得るので、この化合物は、全身に使用され得、そして毒性を減少する。
【０２２７】
カルバペネム（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ）は、別の広域スペクトルのβ−ラクタム抗生物質であり、細胞壁合成を阻害し得る。カルバペネムの例としてはイミペネムが挙げられるが、これらに限定されない。モノバクタムはまた、広域スペクトルのβ−ラクタム抗生物質であり、そしてこれにはユーズトレオナム（ｅｕｚｔｒｅｏｎａｍ）が挙げられる。ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓによって生成される抗生物質（バンコマイシン）はまた、細胞膜合成を阻害することによってグラム陽性菌に対して有効である。
【０２２８】
抗菌剤の別のクラスは、細胞膜インヒビターである抗菌剤である。これらの化合物は、細菌性膜の構造を乱すか、またはその機能を阻害する。細胞膜インヒビターである抗菌剤の１つの問題は、細菌および真核生物の膜におけるリン脂質の類似性に起因して、これらが真核生物細胞ならびに細菌において効果を生じ得ることである。従って、これらの化合物は、これらの化合物を全身に使用されることを許容するのに十分に特異的であることは稀であり、そして局所的投与のための高い用量での使用を防止する。
【０２２９】
臨床的な細胞膜インヒビターの１つは、ポリミキシンである。ポリミキシンは、グラム陰性菌に対して主に有効であり、そして一般的に、低い毒性の抗生物質に耐性である重篤なＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ感染またはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ感染において使用される。この化合物の全身投与に関連する重篤な副作用としては、腎臓および他の器官に対する損傷が挙げられる。
【０２３０】
他の細胞膜インヒビターとしては、アンホテリシンＢおよびナイスタチンが挙げられ、これらはまた、それぞれ全身性真菌感染およびＣａｎｄｉｄａ酵母感染の処置に主に使用される抗真菌剤である。イミダゾールは、細胞膜インヒビターである抗生物質の別のクラスである。イミダゾールは、細菌剤（ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ａｇｅｎｔ）ならびに抗真菌剤として使用される（例えば、酵母感染、皮膚糸状菌（ｄｅｒｍａｔｏｐｈｙｔｉｃ）感染、および全身性真菌感染の処置にために使用される）。イミダゾールとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：クロトリマゾール、ミコナゾール、ケトコナゾール、イトラコナゾールおよびフルコナゾール。
【０２３１】
多くの抗菌剤は、タンパク質合成インヒビターである。これらの化合物は、細菌が、構造タンパク質および酵素を合成するのを防止し、従って、細菌の細胞増殖または機能の阻害あるいは細胞死を引き起こす。転写をブロックする抗菌剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：リファンピンおよびエタンブトール。酵素ＲＮＡポリメラーゼを阻害するリファンピンは、広域スペクトル活性を有し、そしてグラム陽性菌およびグラム陰性菌ならびにＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに対して有効である。エタンブトールは、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに対して有効である。
【０２３２】
転写をブロックする抗菌剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：テトラサイクリン、クロラムフェニコール、マクロライド系抗生物質（例えば、エリスロマイシン）およびアミノ配糖体（例えば、ストレプトマイシン）。
【０２３３】
アミノ配糖体は、細菌Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓによって生成される抗生物質のクラスである（例えば、ストレプトマイシン、カナマイシン、トブラマイシン、アミルカシン、ゲンタマイシン）。アミノ配糖体は、グラム陽性菌およびグラム陰性菌によって引き起こされる広範な種々の細菌感染に対して使用されている。ストレプトマシンは、結核症の処置における主な薬物として広範に使用されている。ゲンタマイシンは、多くの株のグラム陽性菌およびグラム陰性菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ感染を含む）に対して、特にトブラマイシンと組み合せて使用される。カナマイシンは、多くのグラム陽性菌（ペニシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉを含む）に対して使用される。臨床的に使用が限定されたアミノ配糖体の副作用の１つは、効力に必要である投薬量での、長期の使用は、腎臓機能を損なうことが示され、そして聴覚消失症をもたらす聴神経に対する損傷を引き起こす。
【０２３４】
翻訳インヒビターの抗菌剤の別の型は、テトラサイクリンである。テトラサイクリンは、広域スペクトルである抗生物質のクラスであり、そして広範のグラム陽性菌およびグラム陰性菌に対して有効である。テトラサイクリンの例としては、テトラサイクリン、ミノサイクリン、ドキシサイクリンおよびクロルテトラサイクリンが挙げられる。これらは、多くの型の細菌の処置に重要であるが、ライム病の処置において特に重要である。これらの低い毒性および最小の直接的な副作用の結果として、テトラサイクリンは、医学界によって乱用されそして誤用されており問題をもたらしている。例えば、これらの乱用は、耐性の広範な発達をもたらす。本発明のイミダゾキノリン薬剤と組み合せて使用される場合、これらの問題は、最小化され得、そしてテトラサイクリンは、多くの細菌の広域スペクトルの処置について有効に使用され得る。
【０２３５】
抗菌剤（例えば、マクロライド）は、５０ｓリボソームサブユニットに可逆的に結合し、そしてペプチジルトランスフェラーゼによるタンパク質の伸長を阻害するか、または細菌性リボソームからの荷物を持っていない（ｕｎｃｈａｒｇｅｄ）いないｔＲＮＡの放出を阻止するか、あるいは両方を行う。これら化合物としては、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、クラリスロマイシン、オレアンドマイシンおよびアジスロマイシンが挙げられる。エリスロマシンは、ほとんどのグラム陽性菌、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、ＬｅｇｉｏｎｅｌｌａおよびＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓに対して活性であるが、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅに対して活性ではない。タンパク質合成の間、ペプチド結合形成をブロックするリンコマイシンおよびクリンダマイシンは、グラム陽性菌に対して使用される。
【０２３６】
翻訳インヒビターの別の型は、クロラムフェニコールである。クロラムフェニコールは、７０Ｓリボソームを結合して細菌性酵素のペプチジルトランスフェラーゼを阻害し、それによって、タンパク質合成の間、ポリペプチド鎖の成長を阻止する。クロラムフェニコールに関連する重篤な副作用の１つは、再生不良性貧血である。再生不良性貧血は、患者の小さい割合（１／５０，０００）において細菌を処置するために有効なクロラムフェニコールの用量で発症する。かつて高く処方された抗生物質であるクロラムフェニコールは、貧血から死を引き起こすとして現在では滅多に使用されない。その有効性に起因にして、生命を危うくする状況（例えば、腸チフス）において、未だに使用される。イミダゾキノリン薬剤とクロラムフェニコールとを組み合せることによって、これらの化合物は、抗菌剤として再び使用され得る。なぜなら、イミダゾキノリン薬剤は、使用されるべきクロラムフェニコールの低い用量（副作用を発症しない用量）を可能にするからである。
【０２３７】
いくつかの抗菌剤は、核酸の合成または機能を破壊する（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡに結合し、その結果これらのメッセージを読み得ない）。これらとして、以下が挙げられるが、これらに限定されない：キノロン類およびコトリモキサゾール、合成化学物質およびリファマイシンの両方、天然または半合成化学物質。キノロン類は、ＤＮＡジャイレース（この酵素は、これらの環状ＤＮＡを生成するために細菌に必要である）を阻害することによって細菌のＤＮＡ複製をブロックする。これらは広域スペクトルであり、そして例として、ノルフロキサシン、シプロフロキサシン、エノキサシン、ナリジクス酸およびテマフロキサシン（ｔｅｍａｆｌｏｘａｃｉｎ）が挙げられる。ナリジクス酸は、ＤＮＡジャイレース酵素（トポイソメラーゼ）（これはＤＮＡ複製に必須であり、スーパーコイルが緩和され、そして再形成されるのを可能にする）に結合し、ＤＮＡジャイレース活性を阻害する殺菌剤である。ナリジクス酸の主な使用は、低部尿路感染症（ＵＴＩ）の処置においてである。なぜなら、いくつかの型のグラム陰性菌（例えば、ＵＴＩの一般的な原因であるＥ．ｃｏｌｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ、Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅおよびＰｒｏｔｅｕｓ種）に対して有効であるからである。コトリモキサゾールは、スルファメトキサゾールおよびトリメトプリムの組み合わせであり、ＤＮＡヌクレオチドを作製するのに必要な葉酸の細菌性合成をブロックする。リファンピシンは、グラム陽性菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓおよびＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓによって引き起こされた髄膜炎を含む）およびいくつかのグラム陰性菌に対して活性であるリファマイシンの誘導体である。リファンピシンは、ポリメラーゼのβサブユニットに結合し、そしてポリメラーゼを活性化するのに必要な第１のヌクレオチドの付加をブロックし、それによってｍＲＮＡ合成をブロックする。
【０２３８】
抗菌剤の別のクラスは、細菌性酵素の競合的インヒビターとして機能する化合物である。これらの競合的インヒビターは、細菌性の増殖因子にほぼ全てが構造的に類似し、そして結合について競合するが、細胞中で代謝機能を行なわない。これらの化合物としては、スルホンアミド、およびなおより高くかつ広範の抗菌活性を有するスルホンアミドの化学的に改変された形態が挙げられる。スルホンアミド（例えば、ガントリシン（ｇａｎｔｒｉｓｉｎ）およびトリメトプリム）は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、β−溶血性ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉおよびＥ．ｃｏｌｉの処理に有用であり、Ｅ．ｃｏｌｉによって引き起こされた無併発性のＵＴＩの処置、および髄膜炎菌性髄膜炎の処置に使用されている。
【０２３９】
本発明の方法および組成物に使用され得る他の抗菌剤は、米国（非暫定）特許出願第０９／８０１，８３９（２００１年３月８日に出願された）に列挙される。
【０２４０】
抗ウイルス剤は、ウイルスによる細胞の感染または細胞内でのウイルスの複製を予防する化合物である。抗菌薬物よりも少ない多数の抗ウイルス剤が存在する。これは、ウイルス複製のプロセスが、宿主細胞内のＤＮＡ複製に非常に密接に関連しているので、非特異的抗ウイルス剤が、しばしば宿主に対して毒性であることに起因する。抗ウイルス剤によって遮断または阻害され得る、ウイルス感染のプロセス内のいくつかの段階が存在する。これらの段階としては、以下が挙げられる：宿主細胞へのウイルスの結合（免疫グロブリンまたは結合ペプチド）、ウイルスの脱外被（例えば、アマンタジン）、ウイルスｍＲＮＡの合成または翻訳（例えば、インターフェロン）、ウイルスのＲＮＡまたはＤＮＡの複製（例えば、ヌクレオシドアナログ）、新規ウイルスタンパク質の成熟（例えば、プロテアーゼインヒビター）ならびにウイルスの出芽および放出。
【０２４１】
別のカテゴリーの抗ウイルス剤は、ヌクレオチドアナログである。ヌクレオチドアナログは、ヌクレオチドに類似するが、不完全または異常なデオキシリボース基またはリボース基を有する、合成化合物である。一旦ヌクレオチドアナログが細胞中に入ると、これらは、リン酸化されて、ウイルスのＤＮＡまたはＲＮＡ中への取り込みについて正常なヌクレオチドと競合する形態の三リン酸を生成する。一旦ヌクレオチドアナログの三リン酸形態が成長する核酸鎖に取り込まれると、これは、ウイルスポリメラーゼとの不可逆的な会合を引き起こし、従って、鎖の終結を引き起こす。ヌクレオチドアナログとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：アシクロビル（単純疱疹ウイルスおよび水痘−帯状疱疹ウイルスの処置に使用される）、ガンシクロビル（サイトメガロウイルスの処置に有用である）、イドクスウリジン、リバビリン（ＲＳウイルスの処置に有用である）、ジデオキシイノシン、ジデオキシシチジンおよびジドブジン（アジドチミジン）。
【０２４２】
別のクラスの抗ウイルス剤は、インターフェロンのようなサイトカインである。インターフェロンは、ウイルス感染細胞ならびに免疫細胞によって分泌されるサイトカインである。インターフェロンは、感染細胞に隣接する細胞上の特異的レセプターに結合し、ウイルスによる感染から細胞を保護する細胞内の変化を引き起こすことによって、機能する。αインターフェロンおよびβインターフェロンは、感染細胞の表面上でのクラスＩおよびクラスＩＩのＭＨＣ分子の発現を誘導し、宿主免疫細胞認識についての抗原提示の増大を生じる。αインターフェロンおよびβインターフェロンは、組換え形態として入手可能であり、そして慢性のＢ型肝炎感染およびＣ型肝炎感染の処置のために使用されてきた。抗ウイルス治療について有効な投薬量にて、インターフェロンは、重篤な副作用（例えば、熱、倦怠感および体重減少）を有する。
【０２４３】
免疫グロブリン治療剤は、ウイルス感染の予防に使用される。ウイルス感染についての免疫グロブリン治療剤は、細菌感染とは異なる。なぜなら、抗原特異的であるのではなく、免疫グロブリン治療剤は、細胞外ビリオンに結合し、そしてこれらのビリオンがウイルス感染に対して感受性の細胞に結合および侵入することを予防することによって機能するからである。この治療剤は、宿主中に抗体が存在する期間にわたるウイルス感染の予防のために有用である。一般に、２つの型の免疫グロブリン治療剤（正常免疫グロブリン治療剤および超免疫グロブリン治療剤）が存在する。正常免疫グロブリン治療剤は、正常な血液ドナーの血清から調製され、そしてプールされる抗体産物を利用する。このプールされた産物は、広範なヒトウイルス（例えば、Ａ型肝炎ウイルス、パルボウイルス、エンテロウイルス（特に新生児における））に対する、低力価の抗体を含む。超免疫グロブリン治療剤は、特定のウイルスに対する高力価の抗体を有する個体の血清から調製される抗体を利用する。次いで、これらの抗体を、特定のウイルスに対して使用する。超免疫グロブリンの例としては、帯状ヘルペス免疫グロブリン（免疫無防備状態の小児および新生児における水痘の予防のために有用である）、ヒト狂犬病免疫グロブリン（狂犬病動物に噛み付かれた被験体の曝露後予防において有用である）、Ｂ型肝炎免疫グロブリン（特にウイルスに曝露された被験体における、Ｂ型肝炎ウイルスの予防において有用である）、およびＲＳＶ免疫グロブリン（ＲＳウイルス感染の処置において有用である）が挙げられる。
【０２４４】
別の型の免疫グロブリン治療剤は、能動免疫法である。これは、ウイルス表面タンパク質に対する抗体または抗体フラグメントの投与を包含する。Ｂ型肝炎の能動免疫のために利用可能な２つの型のワクチンとしては、血清由来のＢ型肝炎抗体および組換えＢ型肝炎抗体が挙げられる。両方とも、ＨＢｓＡｇから調製される。これらの抗体は、Ｂ型肝炎ウイルスによる感染の危険性が高い被験体（例えば、医療従事者、慢性キャリアの性的パートナーおよび乳児）に、３回の用量で投与される。
【０２４５】
免疫グロブリン治療剤とのイミダゾキノリン薬剤の併用はまた、本明細書中に考察されるように、イミダゾキノリン薬剤がＡＤＣＣを増強する能力を介して、利益を提供する。
【０２４６】
本発明の方法および組成物において使用され得る他の抗ウイルス剤は、米国特許出願番号０９／８０１，８３９（２００１年３月８日出願）に列挙される。
【０２４７】
抗真菌剤は、感染性真菌の処置および予防のために有用である。抗真菌剤は、しばしば、その作用機構によって分類される。いくつかの抗真菌剤は、グルコース合成を阻害することによって、細胞壁インヒビターとして機能する。他の抗真菌剤は、膜の完全性を不安定化することによって機能する。
【０２４８】
抗真菌剤は、感染性真菌の処置および予防のために有用である。抗真菌剤は、しばしば、その作用機構によって分類される。いくつかの抗真菌剤は、グルコースシンターゼを阻害することによって、細胞壁インヒビターとして機能する。これらとしては、バシウンギン（ｂａｓｉｕｎｇｉｎ）／ＥＣＢが挙げられるが、これらに限定されない。他の抗真菌剤は、膜の完全性を不安定化することによって機能する。これらとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：イミダゾール類（例えば、クロトリマゾール、セルタコナゾール（ｓｅｒｔａｃｏｎｚｏｌｅ）、フルコナゾール、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ミコナゾールおよびボリコナゾール（ｖｏｒｉｃｏｎａｃｏｌｅ））、ならびにＦＫ  ４６３、アンホテリシンＢ、ＢＡＹ  ３８−９５０２、ＭＫ  ９９１、プラディマイシン（ｐｒａｄｉｍｉｃｉｎ）、ＵＫ  ２９２、ブテナフィンおよびテルビナフィン。他の抗真菌剤は、キチンを分解すること（例えば、キチナーゼ）または免疫抑制（５０１クリーム）によって機能する。
【０２４９】
本発明の方法および組成物において使用され得る他の抗真菌剤は、米国特許出願番号０９／８０１，８３９（２００１年３月８日出願）に列挙される。
【０２５０】
本発明の方法および組成物において使用され得る抗寄生生物剤は、米国特許出願番号０９／３０６，２８１（１９９９年５月６日出願）に列挙される。
【０２５１】
イミダゾキノリン薬剤はまた、抗癌治療と組み合わせて投与され得る。抗癌治療は、癌医薬、放射線および外科的手順を含む。本明細書中で使用する場合、用語「癌医薬」は、癌を処置する目的で被験体に投与される薬剤をいう。癌の処置のための種々の型の医薬は、本明細書中に記載される。本明細書の目的のために、癌医薬は、化学療法剤、免疫治療剤、癌ワクチン、ホルモン療法剤および生物学的応答調節剤として、分類される。
【０２５２】
癌は、最近、手術、放射線療法および化学療法を含む種々の様式を使用して処置されている。処置様式の選択は、癌の型、位置および散在度に依存する。例えば、手術および放射線療法は、固形の充分に規定された腫瘍塊の場合により適切であり得、そして非固形腫瘍癌（例えば、白血病およびリンパ腫）の場合には、あまり実用的ではないかもしれない。手術および放射線療法の利点の１つは、治療の影響を一定の程度まで制御する能力、従って、身体中の正常組織に対する毒性を制限する能力である。しかし、手術および放射線療法の後には、しばしば、任意の残留癌細胞または放射線耐性癌細胞に対して保護するために、化学療法が行われる。化学療法はまた、白血病およびリンパ腫のような散在性の癌、ならびに転移について、最も適切な処置である。
【０２５３】
化学療法とは、癌細胞を攻撃するために、化学的薬剤および／または生物学的薬剤を使用する治療をいう。局在化される手術とも放射線とも異なり、化学療法は、一般に、全身様式で投与され、従って、正常組織に対する毒性が、主要な考慮事項である。多くの化学療法剤が、それらの増殖プロフィールに基づいて癌細胞を標的化するので、通常増殖的な組織（例えば、胃腸管および骨髄）もまた、化学療法剤の影響に感受性である。化学療法剤の主要な副作用の１つは、正常な造血前駆体の死から生じる骨髄抑制（貧血、抗中球減少症および血小板減少症を含む）である。
【０２５４】
多くの化学療法剤が、癌の処置のために開発されてきた。しかし、全ての腫瘍が化学療法剤に応答するわけではなく、化学療法剤に対して最初に応答性であった腫瘍といえども、耐性を生じ得る。結果として、有効な抗癌薬物についての探索は、より少ない非特異的毒性を有する、さらにより有効な薬剤を見出すための試みにおいて、過熱している。
【０２５５】
癌医薬は、種々の方法で機能する。いくつかの癌医薬は、腫瘍細胞に特異的な生理学的機構を標的化することによって、作用する。例としては、癌において変異している特定の遺伝子およびそれらの遺伝子産物（すなわち、主にタンパク質）の標的化が挙げられる。このような遺伝子としては、癌遺伝子（例えば、Ｒａｓ、Ｈｅｒ２、ｂｃｌ−２）、癌抑制遺伝子（例えば、ＥＧＦ、ｐ５３、Ｒｂ）および細胞周期標的（例えば、ＣＤＫ４、ｐ２１、テロメラーゼ）が挙げられるが、これらに限定されない。癌医薬は、代替的に、癌細胞において変更されているシグナル伝達経路および分子機構を標的化し得る。これらの細胞表面上に発現されるエピトープを介した癌細胞の標的化は、モノクローナル抗体の使用によって達成される。後者の型の癌医薬は、一般に、本明細書中で免疫療法剤といわれる。
【０２５６】
他の癌医薬は、癌細胞以外の細胞を標的化する。例えば、いくつかの医薬は、腫瘍細胞を攻撃するために、免疫系をプライムする（例えば、癌ワクチン）。なお他の医薬（新脈管形成インヒビターと称される）は、固形腫瘍の血液供給を攻撃することによって機能する。ほとんどの悪性癌は、転移できる（すなわち、原発性腫瘍部位を出て、遠位の組織に播種し、それにより、二次的腫瘍を形成する）ので、この転移を妨害する医薬もまた、癌の処置において有用である。新脈管形成媒介物質としては、塩基性ＦＧＦ、ＶＥＧＦ、アンギオポエチン、アンギオスタチン、エンドスタチン、ＴＮＦα、ＴＮＰ−４７０、トロンボスポンジン−１、血小板因子４、ＣＡＩおよびインテグリンファミリーのタンパク質の特定のメンバーが挙げられる。この型の医薬の１つのカテゴリーは、メタロプロテイナーゼインヒビターであり、これは、原発性腫瘍部位を出て、そして別の組織へと管外遊出するために癌細胞によって使用される酵素を阻害する。
【０２５７】
いくつかの癌細胞は抗原性であり、従って、免疫系によって標的化され得る。１つの局面において、イミダゾキノリン薬剤および癌医薬（特に、癌免疫療法剤として分類されるもの）の併用投与は、癌抗原に対する特異的免疫応答を刺激するために有用である。
【０２５８】
免疫系の第一の機能は、腫瘍形成前に新生物細胞を検出および排除することである、というのが、免疫監視機構の理論である。この理論の基本的原理は、癌細胞が正常細胞とは抗原的に異なり、従って、免疫学的に非適合性の同種移植片の拒絶を引き起こす免疫応答と類似の免疫応答を誘発する、ということである。研究により、腫瘍細胞が、それらの抗原の発現において、質的にかまたは量的にかのいずれかで異なることが確認されている。例えば、「腫瘍特異的抗原」は、腫瘍細胞に特異的に関連するが、正常細胞には関連しない抗原である。腫瘍特異的抗原の例は、ＤＮＡウイルスまたはＲＮＡウイルスによって誘導された腫瘍中のウイルス抗原である。「腫瘍関連」抗原は、腫瘍細胞および正常細胞の両方に存在するが、腫瘍細胞においては異なる量または異なる形態で存在する。このような抗原の例は、腫瘍胎児性抗原（例えば、癌胎児性抗原）、分化抗原（例えば、Ｔ抗原およびＴｎ抗原）、ならびに癌遺伝子産物（例えば、ＨＥＲ／ｎｅｕ）である。
【０２５９】
腫瘍標的をインビトロおよびインビボで殺傷し得る異なる型の細胞が同定されている：ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、細胞溶解性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、リンホカイン活性化キラー細胞（ＬＡＫ）および活性化マクロファージ。ＮＫ細胞は、特定の抗原に対して前もって感作されることなく、腫瘍細胞を殺傷し得、そしてその活性は、標的細胞上の主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）によってコードされるクラスＩ抗原の存在を必要としない。ＮＫ細胞は、新生腫瘍の制御および転移性増殖の制御に関与すると考えられる。ＮＫ細胞とは対照的に、ＣＴＬは、腫瘍抗原に対して感作された後、かつ標的抗原がＭＨＣクラスＩをまた発現する腫瘍細胞上で発現される場合にのみ、腫瘍細胞を殺傷し得る。ＣＴＬは、移植された腫瘍およびＤＮＡウイルスによって引き起こされた腫瘍の拒絶における、エフェクター細胞であると考えられる。ＬＡＫ細胞は、ＮＫ集団およびＣＴＬ集団とは別個のヌルリンパ球のサブセットである。活性化マクロファージは、抗原依存的でも一旦活性化されたＭＨＣ拘束でもない様式で、腫瘍細胞を殺傷し得る。活性化マクロファージは、これらが浸潤する腫瘍の増殖速度を低下させると考えられる。インビボアッセイにより、他の免疫機構（例えば、抗体依存的、細胞媒介性細胞傷害性反応および抗体＋補体による溶解）が同定されている。しかし、これらの免疫エフェクター機構は、インビボのＮＫ、ＣＴＬ、ＬＡＫおよびマクロファージの機能ほどには、インビボでそれほど重要ではないと考えられる（総説については、Ｐｉｅｓｓｅｎｓ，Ｗ．Ｆ．およびＤａｖｉｄ，Ｊ．「Ｔｕｍｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｖｏｌ．２、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｏｏｋｓ，Ｎ．Ｙ．、ｐｐ．１−１３、１９９６を参照のこと）。
【０２６０】
免疫療法の目的は、確立された腫瘍に対する患者の免疫応答を増大させることである。免疫療法の１つの方法は、アジュバントの使用である。微生物（例えば、カルメット−ゲラン杆菌）由来のアジュバント物質は、免疫応答を高め、そして動物において腫瘍に対する耐性を増強する。
【０２６１】
免疫療法剤は、癌抗原に特異的に結合するかまたは癌抗原を特異的に認識する抗体または抗体フラグメントに由来する医薬である。抗体ベースの免疫療法剤は、癌細胞の細胞表面に結合することによって機能し、それによって、癌細胞を攻撃するように、内因性の免疫系を刺激し得る。抗原ベースの治療剤が機能する別の方法は、癌細胞に対して毒性物質を特異的に標的化するための送達系としてである。抗体は、通常、毒素（例えば、リシン（例えば、トウゴマ由来）、カリキアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）およびメイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ））、放射性同位体（例えば、ヨウ素−１３１およびイットリウム−９０）、化学療法剤（本明細書中に記載されるような）または生物学的応答調節因子に、結合体化される。この方法で、毒性物質は、癌の領域で濃縮され得、そして正常細胞に対する非特異的毒性が最小化され得る。癌抗原に特異的な抗体の使用に加えて、血管系に結合する抗体（例えば、内皮細胞に結合する抗体）もまた、本発明において有用である。これは、一般に、固形腫瘍が、生存するために新たに形成された血管に依存し、従って、ほとんどの腫瘍が、新たな血管の増殖を補強および刺激し得るからである。結果として、多くの癌医薬の１つのストラテジーは、腫瘍および／またはこのような血管を支持する結合組織（または間質）に供給する血管を攻撃することである。
【０２６２】
モノクローナル抗体のような免疫療法剤と組み合わせたイミダゾキノリン薬剤の使用は、ＡＤＣＣの有意な増強（上記で考察されたような）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の活性化、およびＩＦＮαレベルの増大を含む多数の機構によって、長期生存率を増大させ得る。イミダゾキノリン薬剤は、モノクローナル抗体と組み合わせて使用される場合、生物学的結果を達成するために必要な抗体の用量を減少させるように働く。
【０２６３】
癌ワクチンは、癌細胞に対する内因性免疫応答を刺激することが意図される医薬である。現在製造されているワクチンは、体液性免疫系（すなわち、抗体依存的免疫応答）を主に活性化する。現在開発中の他のワクチンは、腫瘍細胞を殺傷し得る細胞傷害性Ｔリンパ球を含む細胞媒介性免疫系を活性化することに焦点を当てている。癌ワクチンは、一般に、抗原提示細胞（例えば、マクロファージおよび樹状細胞）および／または他の免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞およびＮＫ細胞）の両方に対する癌抗原の提示を増強する。
【０２６４】
癌ワクチンは、以下に考察するような、いくつかの形態の１つを取り得るが、それらの目的は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）によるこのような抗原の内因性プロセシングおよびＭＨＣクラスＩ分子との関連での細胞表面での最終的な抗原提示を促進するために、癌抗原および／または癌関連抗原をＡＰＣに送達することである。１つの形態の癌ワクチンは、被験体から取り出され、エクスビボで処理され、次いで被験体において全細胞として再導入された癌細胞の調製物である、全細胞ワクチンである。腫瘍細胞の溶解物もまた、免疫応答を誘発するための癌ワクチンとして使用され得る。別の形態の癌ワクチンは、Ｔ細胞を活性化するために、癌特異的小タンパク質または癌関連小タンパク質を使用する、ペプチドワクチンである。癌関連タンパク質は、癌細胞によって排他的に発現されるわけではないタンパク質である（すなわち、他の正常細胞は、これらの抗原をなお発現し得る）。しかし、癌関連抗原の発現は、一般に、特定の型の癌と一貫してアップレギュレートされる。なお別の型の癌ワクチンは、癌抗原または癌関連抗原にインビトロで曝露された全樹状細胞を含む、樹状細胞ワクチンである。樹状細胞の溶解物または膜画分もまた、癌ワクチンとして使用され得る。樹状細胞ワクチンは、抗原提示細胞を直接活性化することができる。他の癌ワクチンとしては、ガングリオシドワクチン、ヒートショックタンパク質ワクチン、ウイルスワクチンおよび細菌ワクチン、ならびに核酸ワクチンが挙げられる。
【０２６５】
癌ワクチンと組み合わせたイミダゾキノリン薬剤の使用は、ＮＫ細胞および内因性樹状細胞を活性化すること、ならびにＩＦＮαレベルを増大することに加えて、改善された抗原特異的な体液性免疫応答および細胞媒介性免疫応答を提供する。この増強は、同じ有益な効果を達成するために使用される抗原用量が減少したワクチンを可能にする。いくつかの例において、癌ワクチンは、アジュバント（例えば、上記のような）と共に使用され得る。
【０２６６】
他のワクチンは、インビトロで癌抗原に曝露され、抗原をプロセシングし、そして他の免疫系細胞への有効な抗原提示のために、ＭＨＣ分子に関してその細胞表面に癌抗原を提示し得る、樹状細胞（ＤＣ）の形態を取る。１実施形態において、イミダゾキノリン薬剤およびＤＣワクチンは、被験体への再注入の際に混合される。あるいは、このイミダゾキノリン薬剤は、ワクチンの（例えば、培養物中での）インビトロ調製、ＤＣの成熟または活性化において使用され得る。特に、単球ＤＣ（ｍＤＣ）は、イミダゾキノリン薬剤の併用使用から利益を受け得る。ＣＤの混合集団（すなわち、プラズマ細胞ＤＣ（ｐＤＣ）およびｍＤＣの組み合わせ）を使用する場合、相乗効果もまた想定される。
【０２６７】
このイミダゾキノリン薬剤は、樹状細胞ベースの癌ワクチンと組み合わせて、本発明の１局面において使用される。樹状細胞は、専門の抗原提示細胞である。樹状細胞は、抗原を提示することにより、そしてそれらの局所的環境においてＬＰＳのような微生物分子を検出するパターン認識レセプターの発現を介して、生得的な免疫系と獲得性の免疫系との間にリンクを形成する。樹状細胞は、樹状細胞が曝露される可溶性の特定の抗原を、効率的に内在化し、プロセシングし、そして提示する。抗原を内在化および提示するプロセスは、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）および同時刺激分子の発現の迅速なアップレギュレーション、サイトカインの産生、ならびにリンパ器官（ここで、樹状細胞は、Ｔ細胞の活性化に関与すると考えられる）への移動を引き起こす。
【０２６８】
本明細書中で使用される場合、化学療法剤は、免疫療法剤または癌ワクチンのカテゴリーに入らない、全ての他の形態の癌医薬を包含する。本明細書中で使用される場合、化学療法剤は、化学的薬剤および生物学的薬剤の両方を包含する。これらの薬剤は、癌細胞が継続的な生存のために依存する細胞活性を阻害するように機能する。化学療法剤のカテゴリーとしては、アルキル化剤／アルカロイド剤、代謝拮抗物質、ホルモンまたはホルモンアナログ、および多様な抗新生物薬物が挙げられる。これらの薬剤のうち全てではないにしてもほとんどが、癌細胞に対して直接的に毒性であり、そして免疫刺激を必要としない。化学療法剤およびイミダゾキノリン薬剤の併用投与は、化学療法剤の最大耐用量を増大させる。
【０２６９】
本発明の方法および組成物において使用され得る癌医薬のさらなる例は、米国特許出願番号０９／８００，２６６（２００１年３月５日出願）に列挙される。
【０２７０】
イミダゾキノリン薬剤はまた、喘息医薬またはアレルギー医薬と組み合わせて投与され得る。「喘息医薬／アレルギー医薬」は、本明細書中で使用される場合、症状を低減するか、喘息反応もしくはアレルギー反応を阻害するか、またはアレルギー反応もしくは喘息反応の発生を予防する、重要な組成物である。喘息およびアレルギーの処置のための種々の型の医薬は、Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  ＤｉａｇｎｏｓｉｓおよびＭａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｓｔｈｍａ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｐａｎｅｌ  Ｒｅｐｏｒｔ  ２，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９７／４０５１、１９９７年７月１９日に記載され、これらの全内容は、本明細書中で参考として援用される。ＮＩＨの刊行物に記載されるような医薬の概要は、以下に示される。ほとんどの実施形態において、喘息医薬／アレルギー医薬は、ある程度まで、喘息およびアレルギーの両方を処置するために有用である。
【０２７１】
喘息の処置のための薬物は、一般的に、２つのカテゴリー（迅速緩和（ｑｕｉｃｋ−ｒｅｌｉｅｆ）薬物および長期制御薬物）に分けられる。喘息患者は、持続性の喘息の制御を達成および持続するために、毎日の長期制御薬物を行う。長期制御薬物としては、抗炎症性因子（例えば、コルチコステロイド、クロモリン（ｃｈｒｏｍｏｌｙｎ）ナトリウムおよびメダクロミル（ｍｅｄａｃｒｏｍｉｌ））；長期作用性気管支拡張薬（例えば、長期作用性β２アンタゴニストおよびメチルキサンチン）；およびロイコトリエン改変因子が挙げられる。迅速緩和薬物としては、短期作用性β２アゴニスト、抗コリン作用薬、および全身性コルチコステロイドが挙げられる。これらの薬物の各々に関連する多くの副作用が存在し、そしてこれらの薬物単独またはその組み合わせは、どれも喘息を予防または完全に処置することはできない。
【０２７２】
喘息用医薬としては、ＰＤＥ−４インヒビター、気管支拡張薬／β２アゴニスト、Ｋ＋チャネルオープナー、ＶＬＡ−４アンタゴニスト、ニューロキンアンタゴニスト、ＴＸＡ２合成インヒビター、キサンタニン（Ｘａｎｔｈａｎｉｎｅ）、アラキドン酸アンタゴニスト、５リポキゲナーゼインヒビター、トロンボキシン（Ｔｈｒｏｍｂｏｘｉｎ）Ａ２レセプターアンタゴニスト、トロンボキサンＡ２アンタゴニスト、５−リポックス（ｌｉｐｏｘ）活性化タンパク質のインヒビター、およびプロテアーゼインヒビターが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２７３】
気管支拡張薬／β２アゴニストは、気管支拡張および平滑筋弛緩を引き起こす化合物のクラスである。気管支拡張薬／β２アゴニストとしては、サルメテロール（ｓａｌｍｅｔｅｒｏｌ）、サルブタモール、アブテロール、テルブタリン、Ｄ２５２２／フォルモテロール（ｆｏｒｍｏｔｅｒｏｌ）、フェノテロール、ビトルテロール、ピルブエロール（ｐｉｒｂｕｅｒｏｌ）メチルキサンチンおよびオルシプレナリンが挙げられるが、これらに限定されない。長期作用性β２アゴニストおよび気管支拡張薬は、抗炎症性治療に加えて、症状の長期予防のために用いられる化合物である。長期作用性β２アゴニストとしては、サルメテロールおよびアルブテロールが挙げられるが、これらに限定されない。これらの化合物は、通常、コルチコステロイドと組み合わせて用いられ、一般的には、任意の炎症治療を伴わずに使用される。これらは、頻脈、骨格筋振せん、低カリウム血症、および過剰容量におけるＱＴｃ間隔の延長のような副作用に関連する。
【０２７４】
メチルキサンチン（例えば、テオフィリンを含む）は、症状の長期制御および予防のために用いられてきた。これらの化合物は、ホスホジエステラーゼ阻害および可能性としてのアデノシン拮抗作用から生じる気管支拡張を引き起こす。容量関連性急性毒性は、これらの型の化合物について、特に問題である。結果として、慣用的な血清濃度は、毒性について考慮するためにモニターされなくてはならず、このことは、代謝のクリアランスにおける個々の差異から生じる治療の範囲を狭める。副作用としては、頻脈、悪心および嘔吐、頻拍性不整脈、中枢神経系刺激、頭痛、発作、吐血、高血糖症および低カリウム血症が挙げられる。短期作用性β２アゴニストとしては、アルブテロール、ビトルテロール、ピリブテロールおよびテルブタリンが挙げられるが、これらに限定されない。短期作用性β２アゴニストの投与に関連するいくつかの有害な影響としては、頻脈、骨格筋振せん、低カリウム血症、増加した乳酸、頭痛、および高血糖症が挙げられる。
【０２７５】
アレルギーを処置または予防するための従来の方法は、抗ヒスタミン療法または脱感作療法の使用に関連していた。アレルギー反応の化学的メディエーターの影響をブロックする抗ヒスタミンおよび他の薬物は、アレルギー症状の重篤度を調節することを助けるが、アレルギー反応を予防せず、そして次のアレルギー反応に対する効果を有さない。脱感作療法は、通常、皮下注射により、少量のアレルゲンを与えて、アレルゲンに対するＩｇＧ型応答を誘導することによって実施される。ＩｇＧ抗体の存在は、ＩｇＥ抗体の誘導から生じるメディエーター産生の中和を補助すると考えられている。最初に、被験体は、非常に低容量のアレルゲンを用いて処置されて、重篤な反応が誘導されることを防ぎ、そして容量を、徐々に増加させる。被験体に、アレルギー反応を引き起こす化合物を実際に投与され、重篤なアレルギー反応が生じ得るので、この型の治療は、危険である。
【０２７６】
アレルギー用医薬としては、抗ヒスタミン、ステロイド、およびプロスタグランジン誘導因子が挙げられるが、これらに限定されない。抗ヒスタミンは、肥満細胞または抗塩基球により放出されるヒスタミンを中和する化合物である。これらの化合物は、当該分野において周知であり、そして一般的に、アレルギーの処置のために用いられる。抗ヒスタミンとしては、ロラチジン（ｌｏｒａｔｉｄｉｎｅ）、セチリジン（ｃｅｔｉｒｉｚｉｎｅ）、ブクリジン、セテリジンアナログ、フェキソフェナジン、テルフェナジン、デスロラタジン、ノルアステミゾール、エピナスチン、エバスチン、エバスチン、アステミゾール、レボカバスチン、アゼラスチン、トラアニラスト（ｔｒａｎｉｌａｓｔ）、テルフェナジン、ミゾラスチン（ｍｉｚｏｌａｓｔｉｎｅ）、βタスチン（ｂｅｔａｔａｓｔｉｎｅ）、ＣＳ  ５６０、およびＨＳＲ６０９が挙げられるが、これらに限定されない。プロスタグランジン誘導因子は、プロスタグランジン活性を誘導する化合物である。プロスタグランジンは、平滑筋弛緩を調節することにより機能する。プロスタグランジン誘導因子としては、Ｓ−５７５１が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２７７】
イミダゾキノリン薬剤の組み合わせにおいて有用である喘息／アレルギー用医薬もまた、ステロイドおよび免疫調節薬を含む。ステロイドとしては、ベクロメタゾン、フルチカゾン（ｆｌｕｔｉｃａｓｏｎｅ）、トラムシノロン（ｔｒａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ）、ブデソニド（ｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅ）、コルチコステロイド、およびブデソニドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２７８】
コルチコステロイドとしては、ジプロピオン酸ベクロメタゾン（ｂｅｃｌｏｍｅｔｈａｓｏｍｅ  ｄｉｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）、ブデソニド、フルニソリド、フルチカオゾン（ｆｌｕｔｉｃａｏｓｏｎｅ）、プロピオネート、およびトリアムシノロンアセトニド（ｔｒｉａｍｃｉｎｏｏｎｅ  ａｃｅｔｏｎｉｄｅ）が挙げられるが、これらに限定されない。デキサメタゾンは、抗炎症性作用を有するコルチコステロイドであるが、これは、通常、吸入形態において喘息／アレルギーの処置のために用いられない。なぜなら、デキサメタゾンは、高度に吸収され、そのデキサメタゾンが、有効な容量で長期間の抑制的な副作用を有するからである。しかし、ドキサメタゾンは、イミダゾキノリン薬剤と組み合わせて投与される場合、副作用を軽減するような低用量で投与され得るので、本発明に従い、喘息／アレルギーの処置のために用いられ得る。さらに、イミダゾキノリン薬剤は、より高濃度でのデキサメタゾンの副作用を軽減するために投与され得る。コルチコステロイドに関連するいくつかの副作用としては、咳、発声障害、鵞口瘡（カンジダ症）、およびより高い用量では、全身性の作用（例えば、副腎抑制、骨粗鬆症、成長抑制、皮膚が薄くなること（ｓｋｉｎ  ｔｈｉｎｎｉｎｇ）、および容易に挫傷すること）が挙げられる（Ｂａｒｎｅｓ  ＆  Ｐｅｔｅｒｓｏｎ、Ａｍ、Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．；１４８：Ｓ１−Ｓ２６、１９９３；およびＫａｍａｄａら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．；１５３：１７３９〜４８、１９９６）。
【０２７９】
全身性コルチコステロイドとしては、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロンおよびプレドニゾンが挙げられるが、これらに限定されない。コルチコステロイドは、グルコース代謝の可逆性の異常、食欲の増加、流体遺残、体重増加、気分の変化、高血圧、消化性潰瘍、およびまれに大腿の無菌壊死に関連する。これらの化合物は、不適切に制御された持続性喘息における炎症反応の短期間（３〜１０日間）の予防に有用である。これはまた、重篤な持続性喘息における症状の長期間の予防においても、炎症を抑制および制御しそして実質上逆転させるように機能する。長期間の使用に関連するいくつかの副作用としては、副腎軸（ａｄｒｅｎａｌ  ａｘｉｓ）抑制、成長抑制、皮膚が薄くなること、高血圧、糖尿病、クッシング症候群、白内障、筋肉の虚弱化、およびまれな例において、減損した免疫機能が挙げられる。これらの型の化合物が、これらの最小限の有効な用量で用いられることが推奨されている（喘息の診断と管理のためのガイドライン；専門委員会報告；ＮＩＨ公報Ｎｏ．９７〜４０５１；１９９７年７月）。
【０２８０】
免疫調節薬としては、抗炎症性因子、ロイコトリエンアンタゴニスト、ＩＬ−４ムテイン、可溶性ＩＬ−４レセプター、免疫抑制剤（例えば、寛容化ペプチドワクチン）、抗ＩＬ−４抗体、ＩＬ−４アンタゴニスト、抗ＩＬ−５抗体、可溶性ＩＬ−１３レセプターＦｃ融合タンパク質、抗ＩＬ−９抗体、ＣＣＲ３アンタゴニスト、ＣＣＲ５アンタゴニスト、ＶＬＡ−４インヒビター、およびＩｇＥのダウンレギュレーターからなる群が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２８１】
ロイコトリエン調節薬は、しばしば、中程度の持続性喘息における症状の長期制御および予防のために用いられる。ロイコトリエン調節薬は、ＬＴＤ−４レセプターおよびＬＴＥ−４レセプターについて選択的に競合することによってロイコトリエンレセプターアンタゴニストとして機能する。これらの化合物としては、ザフィルルーカスト錠剤およびジロウトン（ｚｉｌｅｕｔｏｎ）錠剤が挙げられるが、これらに限定されない。ジロウトン錠剤は、５−リンポキシゲナーゼインヒビターとして機能する。これらの薬物は、肝臓酵素の上昇およびいくつかの場合における可逆性肝炎および高ビリルビン血症に関連していた。ロイコトリエンは、肥満細胞、好酸球、および好塩基球から放出される生化学的メディエーターであり、これは、気道平滑筋の収縮を引き起こし、そして血管浸透性、粘液分泌を増加させ、そして喘息を有する患者の気道において炎症性細胞を活性化する。
【０２８２】
他の免疫調節薬としては、免疫調節特性を有することが示されている神経ペプチドが挙げられる。機能的研究は、例えば、物質Ｐが、特異的レセプター媒介性の機構により、リンパ球の機能に影響を及ぼし得ることを示した。物質Ｐはまた、粘膜肥満細胞由来のアラキドン酸誘導性メディエーターの産生を刺激することによって、別個の即時型過敏応答を調節することが示されている（Ｊ．ＭｃＧｉｌｌｉｅｓら、Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  Ｐ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ、Ｆｅｄ．Ｐｒｏｃ．４６：１９６−９（１９８７））。物質Ｐは、１９３１年にＶｏｎ  ＥｕｌｅｒおよびＧａｄｄｕｍにより最初に同定された神経ペプチドである。特定の組織抽出物中の同定されていない抑制物質（Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．（Ｌｏｎｄｏｎ）７２：７４−８７（１９３１））。そのアミノ酸配列（Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ．ｓｕｂ．２（配列番号１））が、１９７１年にＣｈａｎｇらにより報告されている。物質Ｐのアミノ酸配列、Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）Ｎｅｗ  Ｂｉｏｌ．２３２：８６−８７（１９７１）。物質Ｐのフラグメントの免疫調節活性は、Ｓｉｅｍｉｏｎら、Ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  Ｐ  Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：８８７−８９０（１９９０）により研究されている。
【０２８３】
別のクラスの化合物は、ＩｇＥのダウンレギュレーターである。これらの化合物としては、ＩｇＥレセプターに結合し、それにより抗原特異的ＩｇＥの結合を防ぐ能力を有するペプチドまたは他の分子が挙げられる。別の型のＩｇＥのダウンレギュレーターは、ヒトＩｇＥ分子のＩｇＥレセプター結合領域に対して指向されるモノクローナル抗体である。従って、１つの型のＩｇＥのダウンレギュレーターは、抗ＩｇＥ抗体または抗ＩｇＥ抗体フラグメントである。抗ＩｇＥは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈにより開発されている。当業者は、同じ機能を有する結合ペプチドの機能的に活性な抗体フラグメントを調製し得る。１つの型のＩｇＥダウンレギュレーターは、細胞表面上でのＦｃレセプターへのＩｇＥ抗体の結合をブロックし得、かつＩｇＥがすでに結合している結合部位からＩｇＥを除去し得るポリペプチドである。
【０２８４】
ＩｇＥのダウンレギュレーターに関連する１つの問題は、多くの分子が、ネイティブＩｇＥ分子とそのレセプターとの間の非常に強力な相互作用に対応するレセプターに対する結合強度を有さないことである。この強度を有する分子は、非可逆的にレセプターに結合する傾向にある。しかし、このような物質は、体内の他の構造的に類似する分子に共有結合し、そしてそれらの分子をブロックし得るので、これらの物質は、相対的に毒性である。この文脈において、ＩｇＥレセプターのα鎖がより大きい遺伝子ファミリーに属すること（すなわち、ここで、複数の異なるＩｇＧ  Ｆｃレセプターが含まれる）が目的である。これらのレセプターは、細菌感染に対する身体の防御のために絶対的に重要である。共有結合について活性化された分子は、さらに、しばしば、比較的不安定であり、従って、これらは、恐らく、１日に複数回投与し、そして肥満細胞および好塩基球上のＩｇＥレセプターの連続的に再生するプールを完全にブロックすることを可能にするために、相対的に高濃度でなくてはならない。
【０２８５】
これらの型の喘息／アレルギー用医薬は、しばしば、長期制御薬物または迅速緩和薬物として分類される。長期制御薬物としては、コルチコステロイド（グルコステロイドともいわれる）、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、クロモリンナトリウム、ネドクロミル、長期作用性β２アゴニスト、メチルキサンチン、およびロイコトリエン調節薬のような化合物が挙げられる。迅速緩和薬物は、アレルギー応答または喘息応答から生じる症状の迅速緩和を提供するために有用である。迅速緩和薬物としては、短期作用性β２アゴニスト、抗コリン作用薬および全身性コルチコステロイドが挙げられる。
【０２８６】
クロモリンナトリウムおよびメドクロミルは、運動から生じる初期の喘息の症状アレルゲンから生じるアレルギー症状を予防するための長期制御薬物として用いられる。これらの化合物は、クロリドチャネル機能を妨害することによってアレルゲンに対する初期および後期の反応をブロックすると考えられる。これらはまた、肥満細胞膜を安定化し、そして好塩基球および上皮細胞からのメディエーターの活性化および放出を阻害する。４週間〜６週間の期間の投与が、一般的に、最大限の利益を達成するために必要とされる。
【０２８７】
抗コリン作用薬は、一般的に、急性気管支痙攣の緩和のために用いられる。これらの化合物は、ムスカリン様コリン作用性レセプターの競合的阻害により機能すると考えられている。抗コリン作用薬としては、イプラトロピウム（ｉｐｒａｔｒａｐｏｉｕｍ）ブロミドが挙げられるが、これらに限定されない。これらの化合物は、コリン作用媒介性気管支痙攣のみを逆転させ、そして抗原に対する任意の反応を調節しない。副作用としては、口腔および呼吸器の分泌物の乾燥、何人かの個体における増加した喘息、目に噴霧した場合の霞んだ視野が挙げられる。
【０２８８】
標準的な喘息／アレルギー用医薬に加えて、喘息／アレルギーを処置するための他の方法が、単独でかまたは確立された医薬と組み合わせてかのいずれかで用いられた。アレルギーを緩和するための、１つの好ましいが、しばしば不可能な方法は、アレルゲンまたはイニシエーターの除去である。アレルギー性疾患を処置するために現在用いられている別の方法としては、アレルゲンに対する寛容を誘導して、そしてさらなるアレルギー反応を防ぐための漸増用量のアレルゲンの注射が挙げられる。
【０２８９】
アレルゲン注射療法（アレルゲン免疫療法）は、アレルギー性鼻炎の重篤度を軽減することが知られている。この処置は、異なる形態の抗体、「ブロッキング抗体」と称される保護抗体の産生を含むことが理論付けられている（Ｃｏｏｋｅ，ＲＡら、Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃ  Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｗｉｔｈ  Ｃｏｅｘｉｓｔｉｎｇ  Ｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａ  Ｔｙｐｅ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ａｌｌｅｒｇｙ，Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．６２：７３３（１９３５）。アレルギーを処置するための他の試みとしては、患者において免疫応答を引き起こすための抗原の能力は変化しないが、一方でアレルギー反応を引き起こすその能力が実質的に変更されるように、その抗原を化学的に改変することが挙げられる。
【０２９０】
しかし、これらの方法は、有効となるまで数年かかり得、そして過敏性ショックのような副作用の危険性に関連する。アレルゲンと組み合わせたイミダゾキノリン薬剤および喘息／アレルギー医薬の使用は、多くの副作用などを避ける。本発明の方法および組成物において用いられ得る他の喘息／アレルギー用医薬は、２００１年２月２日に出願された米国特許非仮出願番号０９／７７６，４７９に列挙される。
【０２９１】
イミダゾキノリン薬剤は、なお他の治療薬（例えば、免疫応答を増強するためのアジュバント）と組み合わせられ得る。このイミダゾキノリン薬剤および他の治療薬は、同時にかまたは経時的に投与され得る。他の治療薬が同時に投与される場合、これらは、同じ処方物中または別個の処方物中で投与され得るが、同時に投与される。他の治療薬は、他の治療薬およびイミダゾキノリン薬剤の投与が時間的に別々である場合、互いに、そしてイミダゾキノリン薬剤と連続的に投与される。これらの化合物の投与の間の時間の間隔は、数分でも、それより長くてもよい。他の治療薬としては、アジュバント、サイトカイン、抗体、抗原などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２９２】
イミダゾキノリン薬剤は、全身性免疫応答を誘導するためのアジュバントとして有用である。従って、いずれもが、抗原に曝される被験体に送達されて、抗原に対する増強された免疫応答を発生させ得る。
【０２９３】
イミダゾキノリン薬剤に加えて、本発明の組成物はまた、非核酸アジュバントと共に投与され得る。非核酸アジュバントは、体液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を刺激し得る、本明細書中で記載されるイミダゾキノリン薬剤を除く任意の分子または化合物である。非核酸アジュバントとしては、例えば、貯蔵効果を引き起こすアジュバント、免疫刺激アジュバント、および貯蔵効果を引き起こしかつ免疫系を刺激するアジュバントが挙げられる。
【０２９４】
本明細書中で使用される貯蔵効果を発生させるアジュバントは、体内に徐放され、従って、抗原への免疫細胞の曝露を延長する抗原を引き起こすアジュバントである。このクラスのアジュバントとしては、ミョウバン（例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム）；乳濁液ベースの処方物（鉱油、非鉱油、油中水乳濁液または水中油乳濁液、Ｓｅｐｐｉｃ  ＩＳＡシリーズのＭｏｎｔａｎｉｄｅアジュバント（例えば、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ７２０、ＡｉｒＬｉｑｕｉｄｅ、Ｐａｒｉｓ、Ｆｒａｎｃｅ）のような水中油乳濁液）が挙げられる）；ＭＦ−５９（Ｓｐａｎ  ８５およびＴｗｅｅｎ８０で安定化した水中スクアレン乳濁液；Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ）；およびＰＲＯＶＡＸ（安定化界面活性剤およびミセル形成剤を含む水中油乳濁液；ＩＤＥＣ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）；ポリアルギニンまたはポリリジンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２９５】
免疫刺激アジュバントは、免疫系細胞の活性化を引き起こすアジュバントである。例えば、それは、免疫細胞に、サイトカインを産生および分泌させ得る。このクラスのアジュバントとしては、Ｑ．ｓａｐｏｎａｒｉａツリー（ｔｒｅｅ）の樹皮から精製されるサポニン（例えば、ＱＳ２１）（ＨＰＬＣ分別における２１番目のピークにおいて溶出する糖脂質；Ａｑｕｉｌａ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ、ＭＡ）；ポリ［ジ（カルボキシレート（ｃａｒｂｏｃｙｌａｔｏ）フェノキシ）ホスファジン（ｐｈｏｓｐｈａｚｅｎｅ）（ＰＣＰＰポリマー；Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、ＵＳＡ）；リポ多糖の誘導体（例えば、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ；Ｒｉｂｉ  ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、ＭＴ）、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ；Ｒｉｂｉ）およびスレオニルムラミルジペプチド（ｔ−ＭＤＰ；Ｒｉｂｉ））；ＯＭ−１７４（脂質Ａに関連するグルコサミン二糖；ＯＭ  Ｐｈａｒｍａ  ＳＡ、Ｍｅｙｒｉｎ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）；およびリーシュマニア伸長因子（精製リーシュマニアタンパク質；Ｃｏｒｉｘａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓｅａｔｔｌｅ、ＷＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２９６】
貯蔵効果をなし、かつ免疫系を刺激するアジュバントは、上で同定される機能の両方を有する化合物である。このクラスのアジュバントとしては、ＩＳＣＯＭＳ（混合サポニン、脂質を含み、そして抗原を保持し得る孔を有するウイルスサイズの粒子を形成する免疫刺激複合体）；ＣＳＬ、Ｍｅｌｂｏｕｒｎｅ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）；ＳＢ−ＡＳ２（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍアジュバントシステム番号２（これは、ＭＰＬおよびＱＳ２１を含む水中油乳濁液である）：ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ［ＳＢＢ］，Ｒｉｘｅｎｓａｒｔ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）；ＳＢ−ＡＳ４（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍアジュバントシステム番号４（これは、ミョウバンおよびＭＰＬを含む）；ＳＢＢ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）；ミセル形成非イオン性ブロックコポリマー（例えば、ＣＲＬ  １００５（これらは、ポリオキシエチレン鎖に隣接する疎水性ポリオキシプロピレンの直鎖を含む；Ｖａｘｃｅｌ，Ｉｎｃ．、Ｎｏｒｃｒｏｓｓ，ＧＡ）；およびＳｙｎｔｅｘ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ（ＳＡＦ、Ｔｗｅｅｎ  ８０および非イオン性ブロックコポリマーを含む水中油乳濁液；Ｓｙｎｔｅｘ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｂｏｕｌｄｅｒ、ＣＯ）。
【０２９７】
イミダゾキノン因子はまた、粘膜アジュバントとして有用である。
【０２９８】
他の粘膜アジュバント（核酸粘膜アジュバントおよび非核酸粘膜アジュバントを含む）はまた、イミダゾキノリン薬剤と共に投与され得る。本明細書中で使用される非核酸粘膜アジュバントは、抗原と共に粘膜表面に投与された場合、被験体において粘膜性免疫応答を誘導し得る、免疫刺激核酸以外のアジュバントである。粘膜アジュバントとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：細菌毒素（例えば、コレラ毒素（ＣＴ）、ＣＴ  誘導体（ＣＴ  Ｂサブユニット（ＣＴＢ）（Ｗｕら、１９９８、Ｔｏｃｈｉｋｕｂｏら、１９９８）；ＣＴＤ５３（ＶａｌからＡｓｐ）（Ｆｏｎｔａｎａら、１９９５）；ＣＴＫ９７（ＶａｌからＬｙｓ）（Ｆｏｎｔａｎａら、１９９５）；ＣＴＫ１０４（ＴｙｒからＬｙｓ）（Ｆｏｎｔａｎａら、１９９５）；ＣＴＤ５３／Ｋ６３（ＶａｌからＡｓｐ、ＳｅｒからＬｙｓ）（Ｆｏｎｔａｎａら、１９９５）；ＣＴＨ５４（ＡｒｇからＨｉｓ）（Ｆｏｎｔａｎａら、１９９５）；ＣＴＮ１０７（ＨｉｓからＡｓｎ）（Ｆｏｎｔａｎａら、１９９５）；ＣＴＥ１１４（ＳｅｒからＧｌｕ）（Ｆｏｎｔａｎａら、１９９５）；ＣＴＥ１１２Ｋ（ＧｌｕからＬｙｓ）（Ｙａｍａｍｏｔｏら、１９９７ａ）；ＣＴＳ６１Ｆ（ＳｅｒからＰｈｅ）（Ｙａｍａｍｏｔｏら、１９９７ａ，１９９７ｂ）；ＣＴＳ１０６（ＰｒｏからＬｙｓ）（Ｄｏｕｃｅら、１９９７，Ｆｏｎｔａｎａら、１９９５）；およびＣＴＫ６３（ＳｅｒからＬｙｓ）（Ｄｏｕｃｅら、１９９７，Ｆｏｎｔａｎａら、１９９５）が挙げられるがこれらに限定されない）、閉鎖帯毒素（ｚｏｔ）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ非耐熱性エンテロトキシン、非耐熱性毒素（ＬＴ）、ＬＴ誘導体（ＬＴ  Ｂサブユニット（ＬＴＢ）（Ｖｅｒｗｅｉｊら、１９９８）；ＬＴ７Ｋ（ＡｒｇからＬｙｓ）（Ｋｏｍａｓｅら、１９９８，Ｄｏｕｃｅら、１９９５）；ＬＴ６１Ｆ（ＳｅｒからＰｈｅ）（Ｋｏｍａｓｅら、１９９８）；ＬＴ１１２Ｋ（ＧｌｕからＬｙｓ）（Ｋｏｍａｓｅら、１９９８）；ＬＴ１１８Ｅ（ＧｌｙからＧｌｕ）（Ｋｏｍａｓｅら、１９９８）；ＬＴ１４６Ｅ（ＡｒｇからＧｌｕ）（Ｋｏｍａｓｅら、１９９８）；ＬＴ１９２Ｇ（ＡｒｇからＧｌｙ）（Ｋｏｍａｓｅら、１９９８）；ＬＴＫ６３（ＳｅｒからＬｙｓ）（Ｍａｒｃｈｅｔｔｉら、１９９８，Ｄｏｕｃｅら、１９９７，１９９８，Ｄｉ  Ｔｏｍｍａｓｏら、１９９６）；およびＬＴＲ７２（ＡｌａからＡｒｇ）（Ｇｉｕｌｉａｎｉら、１９９８）が挙げられるが、これらに限定されない）、百日咳毒素（ＰＴ）（Ｌｙｃｋｅら、１９９２、Ｓｐａｎｇｌｅｒ  ＢＤ、１９９２、ＦｒｅｙｔａｇおよびＣｌｅｍｍｅｎｔｓ、１９９９、Ｒｏｂｅｒｔｓら、１９９５、Ｗｉｌｓｏｎら、１９９５）（ＰＴ−９Ｋ／１２９Ｇ（Ｒｏｂｅｒｔｓら、１９９５，Ｃｒｏｐｌｅｙら、１９９５）を含む）；毒素誘導体（以下を参照のこと）（Ｈｏｌｍｇｒｅｎら、１９９３、Ｖｅｒｗｅｉｊら、１９９８、Ｒａｐｐｕｏｌｉら、１９９５、ＦｒｅｙｔａｇおよびＣｌｅｍｅｎｔｓ，１９９９）；脂質Ａ誘導体（例えば、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）（Ｓａｓａｋｉら、１９９８、Ｖａｎｃｏｔｔら、１９９８）；ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）誘導体（Ｆｕｋｕｓｈｉｍａら、１９９６、Ｏｇａｗａら、１９８９、Ｍｉｃｈａｌｅｋら、１９８３、Ｍｏｒｉｓａｋｉら、１９８３）；細菌外膜タンパク質（例えば、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉの外側表面（ｏｕｔｅｒ  ｓｕｒｆａｃｅ）プロテインＡ（ＯｓｐＡ）リポタンパク質、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｚｇｉｔｉｄｉｓの外膜タンパク質）（Ｍａｒｉｎａｒｏら、１９９９、Ｖａｎ  ｄｅ  Ｖｅｒｇら、１９９６）；水中油乳濁液（例えば、ＭＦ５９）（Ｂａｒｃｈｆｉｅｌｄら、１９９９、Ｖｅｒｓｃｈｏｏｒら、１９９９、Ｏ’Ｈａｇａｎ、１９９８）；アルミニウム塩（Ｉｓａｋａら、１９９８，１９９９）；およびサポニン（例えば、ＱＳ２１）Ａｑｕｉｌａ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ、ＭＡ）（Ｓａｓａｋｉら、１９９８、ＭａｃＮｅａｌら、１９９８）、ＩＳＣＯＭＳ、ＭＦ−５９（Ｓｐａｎ  ８５およびＴｗｅｅｎ  ８０で安定化した水中スクアレン乳濁液；Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ）；ｔｈｅ  Ｓｅｐｐｉｃ  ＩＳＡシリーズのＭｏｎｔａｎｉｄｅアジュバント（例えば、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ７２０；ＡｉｒＬｉｑｕｉｄｅ、Ｐａｒｉｓ、Ｆｒａｎｃｅ）；ＰＲＯＶＡＸ（安定化界面活性剤およびミセル形成因子を含む水中油乳濁液；ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）；Ｓｙｎｔｅｘｔアジュバント処方物（ＳＡＦ；Ｓｙｎｔｅｘ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｂｏｕｌｄｅｒ、ＣＯ）；ポリ［ジ（カルボキシレートフェノキシ）ホスファジン（ＰＣＰＰポリマー；Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、ＵＳＡ）およびリーシュマニア伸長因子（Ｃｏｒｉｘａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓｅａｔｔｌｅ、ＷＡ）。
【０２９９】
免疫応答はまた、イミダゾキノリン薬剤を伴う、サイトカイン（Ｂｕｅｌｅｒ  ＆  Ｍｕｌｌｉｇａｎ、１９９６；Ｃｈｏｗら、１９９７；Ｇｅｉｓｓｌｅｒら、１９９７；Ｉｗａｓａｋｉら、１９９７；Ｋｉｍら、１９９７）またはＢ−７同時刺激分子（Ｉｗａｓａｋｉら、１９９７；Ｔｓｕｊｉら、１９９７）の同時投与または同時線形発現誘導により増加または増強され得る。これらのサイトカインは、イミダゾキノリン薬剤と共に直接的に投与され得るか、またはサイトカインがインビボで発現され得るようにサイトカインをコードする核酸ベクターの形態で投与され得る。１つの実施形態において、サイトカインは、プラスミド発現ベクターの形態で投与される。用語サイトカインは、ナノモーラー濃度からピコモーラー濃度で体液性調節因子として作用し、そして正常な状態または病理学的状態のいずれにおいても、個々の細胞および組織の機能的活性を調節する種々の群の可溶性タンパク質およびペプチドについての属名として用いられる。これらのタンパク質はまた、細胞間の相互作用を直接的に媒介し、そして細胞外環境において生じるプロセスを調節する。サイトカインの例としては、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、顆粒状マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒状コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−γ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β）、ＦＬＴ−３リガンド、およびＣＤ４０リガンドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３００】
本発明の組成物および方法を使用して、免疫応答を調節し得る。免疫応答を調節する能力によって、免疫系調節を介して罹患され得る特定の障害の予防および／または処置が可能になる。
【０３０１】
障害後の処置は、その障害および／またはそれに関連する症状を低減、緩和もしくは完全に排除し、または障害が悪化することを防止することを目的として開始する。障害前の被験体の処置は、障害が発生する危険性を低下させる目的で開始（すなわち、予防的処置）する。本明細書で使用される場合、用語「防止する」は、障害を発生する危険性のある患者の予防的処置（被験体が障害を発生する可能性における減少を生じる）、およびすでに確立された障害のさらなる発生の阻害をいう。
【０３０２】
本明細書で提供される教示と組合わせて、種々の活性化合物を選択し。そして因子（例えば、潜在能力、相対バイオアベイラビリティ、患者の体重、有害な副作用の重症度および好ましい投与様式）に重み付けすることによって、有効な予防レジメンまたは治療処置レジメンが、計画され得、このレジメンは、実質的な毒性を引き起こさず、そしてなお、特定の被験体を処置するのに全体として有効である。任意の特定の適用についての有効量は、処置される疾患または状態、投与される特定のイミダゾキノリン薬剤または他の治療的薬剤（例えば、免疫刺激核酸の場合において、核酸の型（すなわち、ＣｐＧ核酸）、核酸における非メチル化ＣｐＧモチーフの数またはそれらの位置、オリゴヌクレオチドに対する骨格の改変の度合いなど）、被験体の大きさ、または疾患もしくは状態の重症度のような因子に依存して変化し得る。当業者は、過度の実験を必要とすることなく、特定のイミダゾキノリン薬剤および／または他の治療的薬剤の有効量を経験的に決定し得る。
【０３０３】
用語、イミダゾキノリン薬剤の「有効量」は、所望の生物学的作用を実現するのに必要な、または十分な量をいう。一般的に、イミダゾキノリン薬剤の有効量は、免疫系の活性化を引き起こし、抗原特異的免疫応答の発生を潜在的に生じるのに必要量である。幾つかの実施形態において、イミダゾキノリン薬剤は、Ｔｈ１免疫応答または一般的な免疫応答を刺激または誘導するのに有効な量で投与される。Ｔｈ１免疫応答を刺激するのに有効な量は、１以上のＴｈ１型サイトカイン（例えば、インターロイキン２（ＩＬ−２）、ＩＬ−１２、腫瘍壊死因子（ＴＮＦα）およびインターフェロンγ（ＩＦＮγ）の産生、および／または１以上のＴｈ１型抗体の産生を刺激する量として規定され得る。
【０３０４】
本明細書に記載される化合物の被験体用量は、代表的に、約０．１μｇ〜１０，０００ｍｇ、より代表的には、約１μｇ／日〜８０００ｍｇ、および最も代表的には、約１０μｇ〜１００μｇの範囲である。被験体の体重の点で述べると、代表的な投薬量は、約０．１μｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ／日、より代表的には、約１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日、ならびに最も代表的には、約１〜５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。
【０３０５】
イミダゾキノリン薬剤は、それらの潜在能力を大きく変化させ、そうして、本明細書に記載される方法において使用される用量は、数オーダーの幅で変化し得、おそらく、使用される他の治療的薬剤および所望の治療効果に依存する。例としては、以前に記載された化合物Ｓ−２８４６３（Ｔｏｍａｉら、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ．２８：２５３、１９９５）は、約０．１〜１．０ｍｇ／ｋｇの間の用量で投与された場合、ヒトの被験体において、ＡＤＣＣを誘導するのに有効である。Ｓ−２８４６３（Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）は、Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄの増強されたバージョンであるので、このクラス内の他の薬剤は、免疫刺激については能力がより低くあり得るが、それにもかかわらず、治療的薬剤としては依然として有用であり、そして、おそらくより有用である。あるいは、他のイミダゾキノリン薬剤は、Ｓ−２８４６３より数オーダーの幅で能力を上回り得る。
【０３０６】
イミダゾキノリン薬剤が、他の治療的薬剤または特別な送達ビヒクルと組み合わせて投与される場合、先天性の免疫応答を誘導し、または、ＡＤＣＣを増加させ、あるいは、抗原特異的免疫応答を誘導するという目的について、非経口送達のための本明細書に記載される化合物の用量は、代表的に、１投与あたり約０．１μｇ〜１０ｍｇの範囲であり、その適用に依存して、この用量は、１日に１回、週に１回、または月に１回の割合で与えられ得、そして、これらの時間の間の他の量であり得る。より代表的には、これらの目的のための非経口用量は、１投与あたり約１０μｇ〜５ｍｇの範囲であり、そして、最も代表的には、約１００μｇ〜１ｍｇの範囲であり、１日間隔か、または１週間間隔で、２回〜４回で投与される。しかし、幾つかの実施形態において、これらの目的のための非経口用量は、上記の代表的な用量より、５〜１０，０００倍高い範囲で使用され得る。
【０３０７】
本発明の幾つかの局面に従って、有効量は、合わせられるか、または、同時投与された場合に、相乗的応答を生じるイミダゾキノリン薬剤の量、および、別の治療的薬剤（例えば、抗体、抗原、免疫刺激核酸または障害に特異的な医薬品）の量である。相乗的な量は、イミダゾキノリン薬剤および他の治療的薬剤単独の個々の効果の合計よりも高い応答を生成する量である。
【０３０８】
例としては、イミダゾキノリン薬剤および癌用医薬品の相乗的な組み合わせは、各々の成分（すなわち、薬剤および医薬品）を別個に使用して達成され得る組み合わされた生物学的作用よりも高い生物学的作用を提供する。生物学的作用は、癌から生じる症状の緩和または完全は排除であり得る。別の実施形態において、生物学的作用は、癌の完全な廃棄であり、このことは、例えば、腫瘍の非存在、または癌細胞のない生検もしくは血液塗沫によって証明される。
【０３０９】
別の例としては、イミダゾキノリン薬剤および喘息医薬品／アレルギー医薬品の有効量は、アレルゲンまたは開始因子に応答して、ＩｇＥの発生を防止するか、またはＩｇＥレベルの減少を引き起こすか、あるいは、Ｔｈ１応答の転換を引き起こすのに必要な量である。他の実施形態において、生理学的な結果は、Ｔｈ２サイトカイン（例えば、ＩＬ−４およびＩＬ−５）からＴｈ１サイトカイン（例えば、ＩＦＮγおよびＩＬ−１２）への転換である。
【０３１０】
イミダゾキノリン薬剤の有効量を決定するために、インビトロでの刺激アッセイ使用により決定され得る。イミダゾキノリン薬剤の刺激係数は、以前に試験された免疫刺激酸の刺激係数に匹敵し得る。刺激係数を使用して、特定の被験体に対する特定のイミダゾキノリン薬剤の有効量を決定し得、そしてこの投薬量を上方または下方に調節し、被験体における所望のレベルを達成し得る。イミダゾキノリン薬剤の有効量はまた、動物モデル、またはイミダゾキノリン薬剤を使用するヒトでの臨床試験から、そして、類似の薬理学的活性（例えば、免疫刺激核酸およびアジュバント（例えば、ワクチン化目的のためのＬＴおよび他の抗原））を示すことが知られている化合物について、決定され得る。
【０３１１】
幾つかの例において、イミダゾキノリン薬剤または他の治療的薬剤のいずれかの部分治療的用量、またはそれら両方の部分治療的用量は、障害を有するか、または障害を発生する危険性のある被験体の処置において使用される。例として、２つのクラスの薬物が、一緒に使用される場合、医薬品は、部分治療的用量で投与され得、そして、依然として所望の治療的結果を生成し得ることが、本発明に従って発見されている。本明細書で使用される場合、「部分治療的用量（ｓｕｂ−ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｄｏｓｅ）」とは、他の薬剤の非存在下において投与された場合、被験体において治療的結果を生成する用量より低い用量をいう。特定の医薬品の治療的用量は、医薬の分野では周知であり、これらの用量は、参考文献（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、１９９０）；ならびに、手引きとして医療専門家によって依存されている他の多くの医療の参考文献において広く記載されている。イミダゾキノリン薬剤の治療的用量はまた、当該分野において記載されており、そして、被験体の治療的用量を同定するための方法は、本明細書においてより詳細に記載される。
【０３１２】
他の局面において、本発明の方法は、副作用を誘導することなく、高用量の障害特異的医薬品を被験体に投与する工程を包含する。従来は、医薬品が、高用量で投与された場合、上記でより詳細に論じられたように、ならびに、医学文献において論じられるように、種々の副作用が生じ得る。これらの副作用の結果として、医薬品は、このような高用量では投与されず、もはや治療の利益はもたらされない。本発明に従って、従来では副作用を引き起こすような高用量の医薬品が、その被験体がまた、イミダゾキノリン薬剤を受けている限り、副作用を引き起こすことなく投与され得ることが、発見された。医薬品によって引き起こされた従来の副作用の型および程度は、使用される特定の医薬品に依存する。
【０３１３】
イミダゾキノリン薬剤の投与は、抗体の投与より前、投与と同時に、あるいは投与後に実施され得る。イミダゾキノリン薬剤が、抗体より前に投与される場合、代表的には、投与の間に１〜７日のインターバルをおく。イミダゾキノリン薬剤が、抗体に続いて投与される場合は、代表的には、投与の間に２〜３日のインターバルをおく。
【０３１４】
本発明の実施形態において、イミダゾキノリン薬剤が定期スケジュールで投与される。他の治療剤（抗体、抗原、免疫刺激性核酸および障害特異的医薬を含む）もまた、定期スケジュールで投与されるが、代替的には、症状が生じた場合に投与され得る。
【０３１５】
本明細書中で使用される場合、「定期スケジュール」は、予め決定された、指定された期間のことをいう。この定期スケジュールは、スケジュールが予め決定される限り、長さが同一であるかまたは異なる期間を包含し得る。例えば、この定期スケジュールは、１日毎、２日毎、３日毎、４日毎、５日毎、６日毎、１週毎、１月毎かまたはその間の設定された任意の数の日または週、２月毎、３月毎、４月毎、５月毎、６月毎、７月毎、８月毎、９月毎、１０月毎、１１月毎、１２月毎、などでの投与を包含し得る。あるいは、この予め決定された定期スケジュールは、最初の週は日毎に、その後数ヶ月間は月毎に、そして次いで、その後は３月毎での投与を包含し得る。任意の特定の組み合わせは、適切なスケジュールが、特定の日での投与を包含することを前もって決定されている限り、その定期スケジュールによってカバーされる。
【０３１６】
障害を発症する危険性のある被験体に向けられる特定の方法において、イミダゾキノリン薬剤および障害特異的医薬の投与のタイミングはまた、特に重要であり得る。例えば、癌に対する遺伝的素因を有する被験体において、このイミダゾキノリン薬剤および癌医薬は、好ましくは、免疫療法または癌医薬の形態であり、定期的に被験体に投与され得る。
【０３１７】
本発明のいくつかの局面において、このイミダゾキノリン薬剤は、喘息またはアレルギー事象を予防するために、喘息またはアレルギー事象を予測して、被験体に投与される。この喘息またはアレルギー事象は、以下であり得るが、これらに限定する必要はない：喘息発作、季節性アレルギー性鼻炎（例えば、枯草熱、花粉、ブタクサ過敏症）または通年性アレルギー性鼻炎（例えば、本明細書中に記載されるようなアレルゲンのようなアレルゲンに対する過敏症）。いくつかの例において、このイミダゾキノリン薬剤は、喘息またはアレルギー事象の実質的に前に、投与される。本明細書中で使用される場合、「実質的に前」とは、喘息またはアレルギー事象の、少なくとも６ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも１ヶ月、少なくとも３週間、少なくとも２週間、少なくとも１週間、少なくとも５日間、または少なくとも２日間前のことを意味する。
【０３１８】
同様に、喘息／アレルギー医薬は、喘息またはアレルギー事象の直前（例えば、喘息またはアレルギー事象の、４８時間以内、２４時間以内、１２時間以内、６時間以内、４時間以内、３時間以内、２時間以内、１時間以内、３０分または１０分以内）、喘息またはアレルギー事象と実質的に同時に（例えば、被験体が、アレルゲンと接触しているかまたは喘息またはアレルギー症状を経験している間）、または喘息またはアレルギー事象後に投与され得る。
【０３１９】
本発明の組成物は、特定の組織もしくは細胞型に送達され得るかまたは免疫系に送達され得るかあるいはその両方であり得る。その最も広範な意味において、「ベクター」は、その組成物の標的細胞への輸送を容易にし得る任意のビヒクルである。このベクターは、一般的には、ベクターの非存在を生じる分解の程度に対して減少された分解を伴って、イミダゾキノリン薬剤、抗体、抗原、免疫刺激性核酸および／または障害特異的医薬を標的細胞に輸送する。
【０３２０】
一般に、本発明において有用なベクターは、以下の２つのクラスに分けられる：生物学的ベクターおよび化学的／物理的ベクター。生物学的ベクターおよび化学的／物理的ベクターは、本発明の治療剤の送達および／または取りこみに有用である。
【０３２１】
ほとんどの生物学的ベクターは、核酸の送達に使用され、イミダゾキノリン薬剤および免疫刺激性核酸である標的薬剤の送達に最も適切である。
【０３２２】
本明細書中で議論される生物学的ベクターに加えて、化学的／物理的ベクターを使用して、イミダゾキノリン薬剤および標的薬剤、抗体、抗原、および障害特異的医薬が送達され得る。本明細書中で使用される場合、「化学的／物理的ベクター」は、細菌学的供給源またはウイルス供給源由来の分子以外の、天然分子または合成分子をいい、核酸および／または癌医薬を送達し得る。
【０３２３】
本発明の好ましい化学的／物理的ベクターは、コロイド分散系である。コロイド分散系としては、脂質ベースの系（水中油系エマルジョンを含む）、ミセル、混合ミセル、およびリポソームが挙げられる。本発明の好ましいコロイド系は、リポソームである。リポソームは、人工膜脈管であり、この人工膜脈管は、インビボまたはインビトロの送達ベクターとして有用である。大単層脈管（ｌａｒｇｅ  ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｓｅｌ）（ＬＵＶ）は、大きい高分子をカプセル化し得る、０．２〜４．０μｍの範囲のサイズであることが示されている。ＲＮＡ、ＤＮＡおよびインタクトなビリオンは、水性の内部内にカプセル化され得、そして生物学的に活性な形態で、細胞に送達され得る（Ｆｒａｌｅｙら、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．、（１９８１）６：７７）。
【０３２４】
リポソームは、リポソームを特定のリガンド（例えば、モノクローナル抗体、糖、糖脂質またはタンパク質）にカップリングすることによって、特定の組織対して標的化され得る。免疫細胞にリポソームを標的化するのに有用であり得るリガンドとしては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：免疫細胞特異的レセプターと相互作用するインタクトな分子または分子のフラグメント、および免疫細胞の細胞表面マーカーと相互作用する分子（例えば、抗体）。このようなリガンドは、当業者に周知の結合アッセイによって容易に同定され得る。なお他の実施形態において、このリポソームは、先に議論された免疫治療抗体のうちの１つにこのリポソームをカップリングさせることによって、癌に標的され得る。さらに、このベクターは、核標的ペプチドにカップリングされ得、このベクターを宿主細胞の核に指向させる。
【０３２５】
トランスフェクションのための脂質処方物は、例えば、ＥＦＦＥＣＴＥＮＥＴＭ（特殊なＤＮＡ凝縮エンハンサーを有する非リポソーム脂質）およびＳＵＰＥＲＦＥＣＴＴＭ（新規の作用デンドリマー技術（ａｃｔｉｎｇ  ｄｅｎｄｒｉｍｅｒｉｃ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ））として、ＱＩＡＧＥＮから市販されている。
【０３２６】
リポソームは、例えば、例えば、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮＴＭおよびＬＩＰＯＦＥＣＴＡＣＥＴＭとしてＧｉｂｃｏ  ＢＲＬから市販されており、これらは、Ｎ−［１−（２，３ジオレイルオキシ）−プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）およびジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）のようなカチオン性脂質から形成される。リポソームの作成方法は当該分野において公知であり、多くの刊行物に記載されている。リポソームはまた、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ、Ｇ．、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、（１９８５）３：２３５−２４１にも総説されている。
【０３２７】
１つの実施形態において、このビヒクルは、生体適合性の微粒子またはインプラントであり、哺乳動物レシピエントへの移植または投与のために適切である。本発明の方法に従って有用である、例示的な生体侵食性（ｂｉｏｅｒｏｄｉｂｌｅ）インプラントは、ＰＣＴ国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ／０３３０７（公開番号Ｗ０９５／２４９２９、表題「Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｇｅｎｅ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ」に記載される。ＰＣＴ／ＵＳ／０３０７は、適切なプロモーターの制御下で外来性遺伝子を含むための、生体適合性（好ましくは生分解性）のポリマーマトリクスを記載する。このポリマーマトリクスを使用して、被験体へのイミダゾキノリン薬剤および／または癌医薬の持続性放出が達成され得る。
【０３２８】
このポリマーマトリクスは、好ましくは、ミクロスフェアのような微粒子（ここで、このイミダゾキノリン薬剤および／または他の治療剤は、固体ポリマーマトリクス全体に分散される）またはマイクロカプセル（ここで、イミダゾキノリン薬剤および／または他の治療剤は、ポリマー殻のコア内に貯蔵される）の形態である。イミダゾキノリン薬および／または他の治療剤を含有するためのポリマーマトリクスの他の形態としては、フィルム、被膜、ゲル、インプラント、およびステントが挙げられる。ポリマーマトリクスデバイスのサイズおよび組成は、マトリクスが導入される組織中で好ましい放出動力学を生じるように選択される。ポリマーマトリクスのサイズは、使用される送達方法（典型的には、組織への注入またはエアロゾルによる鼻および／または肺領域への懸濁液の投与）に従って、さらに選択される。好ましくは、エアロゾル経路が使用される場合、ポリマーマトリクスおよび核酸および／または他の治療薬は、界面活性剤ビヒクル内に包含される。このポリマーマトリクス組成物は、好ましい分解速度を有するように、また生体接着性である物質から形成されるように選択され、このマトリクスが持続性の損傷を有する鼻および／または肺表面に投与される場合の移送の効率をさらに高め得る。このマトリクス組成物はまた、分解しないようにというよりはむしろ、延長された時間にわたる拡散によって放出されるように選択され得る。いくつかの好ましい実施形態において、このイミダゾキノリン薬剤は、インプラントを介して被験体に投与されるが、一方、他の治療剤は、急性的に投与される。送達（例えば、経口送達または粘膜送達）に適切な生体適合性ミクロスフェアは、Ｃｈｉｃｋｅｒｉｎｇら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ａｎｄ  Ｂｉｏｅｎｇ、（１９９６）５２：９６−１０１およびＭａｔｈｉｏｗｉｔｚら、Ｎａｔｕｒｅ、（１９９７）３８６：４１０−４１４およびＰＣＴ特許出願Ｗ０９７／０３７０２に開示される。
【０３２９】
非生分解性ポリマーマトリクスおよび生分解性ポリマーマトリクスの両方を使用して、イミダゾキノリン薬剤および／または他の治療剤を被験体に送達し得る。生体分解性マトリクスが好ましい。このようなポリマーは、天然ポリマーまたは合成ポリマーであり得る。このポリマーは、所望される放出期間（一般的には、数時間〜１年間またはより長く）に基づいて選択される。典型的には、数時間と３〜１２ヶ月間との間の範囲の期間にわたる放出が最も望ましい（特に、イミダゾキノリン薬剤にとって）。このポリマーは、必要に応じて、水中でその重量の約９０％まで吸収し得るヒドロゲルの形態であり、さらに、必要に応じて、多価イオンまたは他のポリマーと架橋される。
【０３３０】
特に目的の生体接着性ポリマーとしては、Ｈ．Ｓ．Ｓａｗｈｎｅｙ、Ｃ．Ｐ．ＰａｔｈａｋおよびＪ．Ａ．Ｈｕｂｅｌｌ、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ、（１９９３）２６：５８１−５８７（この教示は、本明細書中に援用される）に記載される生体侵食性（ｂｉｏｅｒｏｄｉｂｌｅ）ヒドロゲルである、ポリヒアルロン酸、カゼイン、ゼラチン、グルチン（ｇｌｕｔｉｎ）、ポリ無水物、ポリアクリル酸、アルギナート、キトサン、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、およびポリ（オクタデシルアクリレート）が挙げられる。
【０３３１】
治療剤が核酸である場合、圧縮剤（ｃｏｍｐａｃｔｉｏｎ  ａｇｅｎｔ）の使用もまた、所望され得る。圧縮剤はまた、単独でかまたは生物学的ベクターもしくは化学的／物理的ベクターと組み合わせて使用され得る。「圧縮剤」は、本明細書中で使用される場合、ヒストンのような薬剤を意味し、これは、核酸上の負電荷を中和し、その結果微細顆粒中への核酸の圧縮を可能にする。核酸の圧縮は、標的細胞による核酸の取りこみを容易にする。圧縮剤は、単独で（すなわち、細胞によってより効率的に取りこまれる形態で核酸を送達するために）使用され得るかまたは、より好ましくは、１つ以上の上記のベクターと組み合わせて使用され得る。
【０３３２】
核酸の取りこみを容易にするために使用され得る他の例示的な組成物としては、（例えば、標的細胞染色体内の所定の位置への核酸の組みこみのために）リン酸カルシウムおよび細胞内輸送の他の化学メディエーター、マイクロインジェクション組成物、エレクトロポレーション組成物および相同組換え組成物が挙げられる。
【０３３３】
この化合物は、単独で（例えば、生理食塩水または緩衝液中）または当該分野で公知の任意の送達ベクターを使用して投与され得る。例えば、以下の送達ビヒクルが記載されている：ココレエート（ｃｏｃｈｌｅａｔｅ）（Ｇｏｕｌｄ−Ｆｏｇｅｒｉｔｅら、１９９４，１９９６）；Ｅｍｕｌｓｏｍｅ（Ｖａｎｃｏｔｔら、１９９８、Ｌｏｗｅｌｌら、１９９７）；ＩＳＣＯＭ（Ｍｏｗａｔら、１９９３、Ｃａｒｌｓｓｏｎら、１９９１、Ｈｕら、１９９８、Ｍｏｒｅｉｎら、１９９９）；リポソーム（Ｃｈｉｌｄｅｒｓら、１９９９、Ｍｉｃｈａｌｅｋら、１９８９，１９９２、ｄｅ  Ｈａａｎ  １９９５ａ、１９９５ｂ）；生存細菌ベクター（例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｌｍａｔｔｅ−ｇｕｅｒｉｎ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）（Ｈｏｎｅら、１９９６、Ｐｏｕｗｅｌｓら、１９９８、Ｃｈａｔｆｉｅｌｄら、１９９３、Ｓｔｏｖｅｒら、１９９１、Ｎｕｇｅｎｔら、１９９８）；生存ウイルスベクター（例えば、Ｖａｃｃｉｎｉａ、ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ、Ｈｅｒｐｅｓ  Ｓｉｍｐｌｅｘ）（Ｇａｌｌｉｃｈａｎら、１９９３，１９９５、Ｍｏｓｓら、１９９６、Ｎｕｇｅｎｔら、１９９８、Ｆｌｅｘｎｅｒら、１９８８、Ｍｏｒｒｏｗら、１９９９）；ミクロスフェア（Ｇｕｐｔａら、１９９８、Ｊｏｎｅｓら、１９９６、Ｍａｌｏｙら、１９９４、Ｍｏｏｒｅら、１９９５、Ｏ’Ｈａｇａｎら、１９９４、Ｅｌｄｒｉｄｇｅら、１９８９）；核酸ワクチン（Ｆｙｎａｎら、１９９３、Ｋｕｌｃｌｉｎら、１９９７、Ｓａｓａｋｉら、１９９８、Ｏｋａｄａら、１９９７、Ｉｓｈｉｉら、１９９７）；ポリマー（例えば、カルボキシメチルセルロース、キトサン）（Ｈａｍａｊｉｍａら、１９９８、Ｊａｂｂａｌ−Ｇｉｌｌら、１９９８）；ポリマー環（Ｗｙａｔｔら、１９９８）；プロテオソーム（Ｖａｎｃｏｔｔら、１９９８、Ｌｏｗｅｌｌら、１９８８，１９９６、１９９７）；フッ化ナトリウム（Ｈａｓｈｉら、１９９８）；トランスジェニック植物（Ｔａｃｌｃｅｔら、１９９８、Ｍａｓｏｎら、１９９８、Ｈａｑら、１９９５）；ビロゾーム（Ｇｌｕｃｋら、１９９２、Ｍｅｎｇｉａｒｄｉら、１９９５、Ｃｒｙｚら、１９９８）；およびウイルス様粒子（Ｊｉａｎｇら、１９９９、Ｌｅｉｂｌら、１９９８）。
【０３３４】
本発明の処方物は、薬学的に受容可能な溶液で投与され、この溶液は、通常、薬学的に受容可能な濃度の塩、緩衝剤、保存剤、適合性（ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ）キャリア、アジュバント、および必要に応じて他の治療成分を含み得る。
【０３３５】
薬学的に受容可能なキャリアという用語は、１種以上の適合性の固体もしくは液体充填材、希釈剤もしくはカプセル化物質を意味し、これらは、ヒトまたは他の脊椎動物に投与するために適切である。キャリアという用語は、有機成分または無機成分を示し、天然または合成であり、活性成分と合わせられて、適用を容易にする。薬学的組成物の成分はまた、本発明の化合物と、および互いに、所望の薬学的効果を実質的に損なう相互作用が存在しないような様式で混合され得る。
【０３３６】
本発明において有用なイミダゾキノリン薬剤は、さらなるアジュバント、他の治療剤、または抗原と混合して送達され得る。混合物は、イミダゾキノリン薬剤またはいくつかの抗原もしくは他の治療剤に加えて、いくつかのアジュバンドからなり得る。
【０３３７】
イミダゾキノリン剤および他の化合物は、医薬を投与するための任意の通常の経路によって投与され得る。多様な投与経路が利用可能である。選択された特定の様式は、当然、選択された特定のアジュバントまたは抗原、処置される特定の状態および治療効果のために必要とされる投薬量に依存する。本発明の方法は、一般的に、医学的に受容可能な任意の投与様式を使用して実施され得、これは、臨床的に受け入れられない有害な効果を引き起こすことなく効果的な免疫応答レベルを生じる任意の様式を意味する。好ましい投与様式が、本明細書中で議論される。治療における使用について、有効量のイミダゾキノリン剤が、所望される表面（例えば、粘膜、全身）にこの薬剤を送達する任意の様式によって被験体に投与され得る。
【０３３８】
本発明の薬学的組成物を投与することは、当業者に公知の任意の手段によって達成され得る。好ましい投与経路としては、経口、非経口、筋肉内、鼻腔内、気管内、吸入、眼内、膣内、および直腸内が挙げられるが、これらに限定されない。喘息またはアレルギーの処置または予防のために、このような組成物は、好ましくは、吸入、摂取または全身経路によって投与される。全身経路には、経口および非経口が含まれる。いくつかの実施形態では、主として喘息患者における炎症部位である肺への直接的な送達という理由から、吸入医薬が好ましい。いくつかの種類の定量吸入器は、吸入による投与のために一般的に使用される。これらの種類のデバイスとしては、定量吸入器（ＭＤＩ）、呼吸作動式ＭＤＩ（ｂｒｅａｔｈ−ａｃｔｕａｔｅｄ  ＭＤＩ）、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）、ＭＤＩと組み合わせたスペーサー／ホールディングチャンバ、およびネブライザーが挙げられる。
【０３３９】
経口投与のために、この化合物（すなわち、イミダゾキノリン剤、イミダゾキノリン抗原、イミダゾキノリン抗体、および他の治療剤）は、この活性化合物と、当該分野で周知の薬学的に受容可能なキャリアとの組み合わせによって容易に処方され得る。処置される被験体による経口摂取のために、このようなキャリアによって、本発明の化合物は、錠剤、ピル、糖剤、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液として処方することが可能になる。経口用途のための薬学的調製物は、固形賦形剤として得られ得、所望ならば、必要に応じて、得られた混合物を粉砕して、適切な助剤を添加した後で顆粒の混合物を処理し、錠剤または糖剤コアを得る。適切な賦形剤は、特に、糖のような充填剤であり、これらとしては、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトール；セルロース調製物（例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロプルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）が挙げられる。所望であれば、崩壊剤（例えば、架橋化ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウムのようなその塩）が添加され得る。必要に応じて、これらの経口処方物はまた、体内の酸性状態を中和するために生理食塩水または緩衝液中に処方され得るか、あるいはどのようなキャリアも含まずに投与され得る。
【０３４０】
糖剤コアは適切なコーティングを提供する。この目的のために、濃縮された糖溶液が使用され得、これらは必要に応じて、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル（ｃａｒｂｏｐｏｌ  ｇｅｌ）、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに適切な有機溶剤または溶剤混合物を含み得る。染料または色素は、活性化合物投与量の異なる組み合わせを識別または特徴付けるために、錠剤または糖剤に添加され得る。
【０３４１】
経口的に使用され得る薬学的調製物としては、ゼラチンで作られた押し込み合せカプセル（ｐｕｓｈ−ｆｉｔ  ｃａｐｓｕｌｅ）、ならびにゼラチンおよび可塑剤（例えば、グリセロールまたはソルビトール）で作られたソフト密閉カプセルが挙げられる。押し込み合せカプセルは、充填剤（例えば、ラクトース）、結合剤（例えば、デンプン）、および／または潤滑剤（例えば、タルクもしくはステアリン酸マグネシウム）、そして必要に応じて安定化剤との混合物中に活性成分を含み得る。ソフトカプセルにおいて、活性化合物は、適切な液体（例えば、脂肪油、液体パラフィン、または液体ポリエチレングリコール）中に溶解または懸濁され得る。さらに、安定化剤が添加され得る。経口投与用に処方されたミクロスフィアもまた使用され得る。このようなミクロスフィアは、当該分野で十分に定義されている。経口投与用の全ての処方物は、このような投与にとって適切な投薬量であるべきである。
【０３４２】
口腔投与のために、この組成物は、従来の様式で処方された錠剤または舐剤の形態をとり得る。
【０３４３】
吸入による投与のために、本発明の従う使用のための組成物は、適切なプロペラント（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロメタン、二酸化炭素もしくは他の適切なガス）を使用して、圧縮パックもしくはネブライザーからエアロゾルスプレーの形態で都合よく送達され得る。圧縮エアロゾルの場合において、投薬単位は、定量を送達するためのバルブを提供することによって決定され得る。カプセルおよびカートリッジ（例えば、吸入器または吹入器において使用するためのゼラチン）は、化合物の粉末混合物および適切な粉末基剤（例えば、ラクトースまたはデンプン）を含むように処方され得る。
【０３４４】
化合物を全身に送達することが望ましい場合、これらの化合物は、注入（ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）（例えば、ボーラス注入もしくは連続注入（ｉｎｆｕｓｉｏｎ））による非経口投与のために処方され得る。注入用の処方物は、保存剤を添加して、単位投薬形態（例えば、アンプル）または複数用量の容器が提供され得る。これらの組成物は、油性ビヒクルまたは水性ビヒクル中で懸濁液、溶液またはエマルジョンのような形態をとり得、そして懸濁剤、安定化剤および／もしくは分散剤のような処方剤を含み得る。
【０３４５】
非経口投与のための薬学的処方物は、水溶性形態で活性化合物の水溶液を含む。さらに、活性化合物の懸濁液は、適切な油性注入懸濁液として調製され得る。適切な脂溶性溶媒またはビヒクルとしては、脂肪油（例えば、ゴマ油）、合成脂肪酸エステル（例えば、オレイン酸エチルもしくはトリグリセリド）、またはリポソームが挙げられる。水性注入懸濁液は、懸濁液の粘度を高める物質（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、もしくはデキストラン）を含み得る。必要に応じて、この懸濁液はまた、適切な安定化剤または化合物の溶解性を高めて高濃度溶液の調製を可能にする薬剤を含み得る。
【０３４６】
あるいは、これらの活性化合物は、使用の前に、適切なビヒクル（例えば、発熱物質を含まない滅菌水）とともに構成するための粉末形態であり得る。
【０３４７】
これらの化合物はまた、座剤もしくは保持性浣腸（ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｅｎｅｍａ）のような直腸用組成物もしくは膣用組成物において、例えば、ココアバターもしくは他のグリセリドのような従来の座剤基剤を含んで処方され得る。
【０３４８】
上記の処方物に加えて、これらの化合物はまた、貯蔵調製物として処方され得る。このような長期作用性処方物は、適切なポリマー物質もしくは疎水性物質（例えば、受容可能な油中のエマルジョンとして）またはイオン交換樹脂を用いて処方されるか、あるいは溶けにくい誘導体（例えば、溶けにくい塩として）として処方され得る。
【０３４９】
薬学的組成物はまた、適切な固形またはゲル相のキャリアまたは賦形剤を含み得る。このようなキャリアまたは賦形剤の例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３５０】
適切な液体または固形の薬学的調製物形態は、例えば、吸入用の水溶液もしくは生理食塩水、マイクロカプセル化した渦巻き型（ｅｎｃｏｃｈｌｅａｔｅｄ）のコートされた微細な金粒子、リポソーム中に含まれる形態、霧状エアロゾル、皮膚に移植するためのペレット、または引っ掻いて皮膚に入れるための乾燥した鋭い形状が挙げられるが、これらに限定されない。これらの薬学的組成物はまた、顆粒、粉末、錠剤、コートされた錠剤、（マイクロ）カプセル、座剤、シロップ、エマルジョン、懸濁剤、クリーム、点滴剤または活性化合物の遅延性放出を伴う調製剤が挙げられ、調製賦形剤ならびに添加剤および／または助剤（例えば、崩壊剤、結合剤、コーティング剤、膨張剤、潤滑剤、風味剤、甘味剤もしくは可溶化剤）が、上記のように慣習的に使用される。薬学的組成物は、種々の薬物送達系における使用に適している。薬物送達の方法の簡単な総説については、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７〜１５３３，１９９０（これは、本明細書中に参考としてその全体が援用される）を参照のこと。
【０３５１】
イミダゾキノリン薬剤および必要に応じて他の治療剤および／または抗原は、それ自体で（ニートで）、または薬学的に受容可能な塩の形態で投与され得る。医薬において使用される場合、塩は、薬学的に受容可能であるべきであるが、薬学的に受容可能でない塩は、その薬学的に受容可能な塩を調製するために都合よく使用され得る。このような塩としては、以下の酸から調製される塩が挙げられるが、これらに限定されない：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸、ナフタレン−２−スルホン酸、およびベンゼンスルホン酸。また、このような塩は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類塩（例えば、カルボン酸基のナトリウム塩、カリウム塩、またはカルシウム塩として調製され得る。
【０３５２】
適切な緩衝剤としては、以下が挙げられる：酢酸および塩（１〜２％ｗ／ｖ）；クエン酸および塩（１〜３％ｗ／ｖ）；ホウ酸および塩（０．５〜２．５％ｗ／ｖ）；ならびにリン酸および塩（０．８〜２％ｗ／ｖ）。適切な保存剤としては、塩化ベンザルコニウム（０．００３〜０．０３％ｗ／ｖ）；クロロブタノール（０．３〜０．９％ｗ／ｖ）；パラベン（０．０１〜０．２５％ｗ／ｖ）およびチメロサール（０．００４〜０．０２％ｗ／ｖ）が挙げられる。
【０３５３】
組成物は、単位投与形態で都合よく与えられ得、そして薬学分野で周知の任意の方法により調製され得る。全ての方法は、化合物を、１つ以上の補助的成分を構成するキャリアと配合させる工程を包含する。一般的に、組成物は、均一にかつ完全に化合物を液体キャリア、微粉化された固形キャリア、またはその両方と配合し、ついで必要な場合にその生成物を成形することにより調整される。液体用量単位は、バイアルまたはアンプルである。固形用量単位は、錠剤、カプセルおよび座剤である。患者の処置のために、化合物の活性、投与様式、免疫の目的（すなわち、予防的または治療的）、障害の性質および重篤度、患者の年齢および体重に依存して、種々の用量が必要であり得る。所定の用量の投与は、個々の用量単位の形態または他の数個のより小さな用量単位の形態の両方で単回投与により実施され得る。数週間または数ヶ月の特定の間隔での用量の複数回投与は、抗原特異的応答を増加させる（ｂｏｏｓｔ）ためには通常である。
【０３５４】
他の送達系としては、経時放出、遅延放出または持続性放出の送達系が挙げられ得る。このような系は、化合物の繰り返し投与を回避し得、被験体および医師の利便性を増大する。多くの型の放出送達系が、当業者に利用可能で公知である。これらとしては、ポリ（ラクチド−グリコリド）、コポリオキサレート、ポリカプロラクトン、ポリエステルアミド、ポリオルトエステル、ポリヒドロキシ酪酸、およびポリアンヒドリドのようなポリマーベースの系が挙げられる。薬物を含む前述のポリマーのミクロカプセルは、例えば、米国特許第５，０７５，１０９号に記載される。送達系はまた、以下の非ポリマー系を含む：ステロール類（例えば、コレステロール）、コレステロールエステルおよび脂肪酸または中性脂肪（例えば、モノグリセリド、ジグリセリド、およびトリグリセリド）を含む脂質類；ヒドロゲル放出系；シラスチック（ｓｙｌａｓｔｉｃ）系；ペプチドベースの系；ワックスコーティング；従来の結合剤および賦形剤を使用した圧縮錠剤；部分的に融合したインプラントなど。具体例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：（ａ）侵食性の系（本発明の薬剤は、米国特許第４，４５２，７７５号、同第４，６７５，１８９号、および同第５，７３６，１５２号に記載されるようなマトリックス内に含まれる形態である）、ならびに（ｂ）拡散系（活性成分が、制御された速度でポリマーから浸透する）（例えば、米国特許第３，８５４，４８０号、同第５，１３３，９７４号および同第５，４０７，６８６号に記載されるもの）。さらに、ポンプベースのハードウェア送達系が使用され得、これらのいくつかは、移植用に適合される。
【０３５５】
本発明の他の局面において、組成物が提供される。この組成物は、薬学的に受容可能なキャリア中に処方されたイミダゾキノリン薬剤および別の治療的因子を含み、これらは、この組成物中に有効量で存在する。
【０３５６】
他の局面において、本発明は、キットに関する。本発明の１つのキットは、イミダゾキノリン薬剤を含む持続性放出ビヒクル、および別の治療剤を収容する容器、および化合物の投与のタイミングに関する指示書を備える。持続性放出ビヒクルは、そのビヒクル中に含まれる化合物をゆっくりと放出する任意のデバイスという先行技術の意味に従って、本明細書中で使用される。
【０３５７】
この容器は、全ての医薬を一緒に収容する単一の容器であり得るか、または医薬の個々の投薬量を収容する複数の容器もしくはチャンバ（例えば、ブリスターパック）であり得る。このキットはまた、医薬の投与のタイミングに関する指示書を有する。この指示書は、被験体が適切な時間に医薬を摂取するように指示する。例えば、医薬の送達に適切な時間は、症状が発生するときであり得る。あるいは、医薬の投与に適切な時間は、月一度または年一度のような定期的なスケジュールであり得る。
【０３５８】
本発明の別のキットは、イミダゾキノリン薬剤を収容する少なくとも１つの容器および別の治療剤を収容する少なくとも１つの容器、および被験体における相乗免疫応答を誘導するための有効量で組成物を投与するための指示書を備える。このキットにおける指示書は、相乗免疫応答を生じる量の化合物を摂取するように被験体を指示し得る。薬物は、相乗応答を生じるために十分近い時間で投与される限り、同時でも別々に投与されてもよい。
【０３５９】
Ｒ−８４８（Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）およびＲ−８４７（Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）は、抗ウイルス活性および抗腫瘍活性を有することが示された免疫応答変更因子のクラスである、イミダゾキノリンのファミリーに属する。Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄは、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連性器いぼの処置に関して既に臨床的に承認されている。Ｒ−８４８およびＲ−８４７は、サイトカイン（ＩＦＮ−α、ＩＬ−１２およびＩＦＮ−γを含む）の強力な誘発因子である。ＣｐＧ  ＯＤＮ  ２００６のように、これらは、Ｔｈ２応答を阻害しながら、Ｔｈ１媒介免疫応答を増強する。Ｒ−８４８およびＣｐＧ  ＯＤＮの両方が、マクロファージおよびＤＣを活性化して、多くの同じサイトカインを分泌させる。しかし、Ｒ−８４８およびＣｐＧ  ＯＤＮは、マウスにおける研究で示されたように、異なる速度論および相対量でほとんど同じサイトカインを誘発する。Ｖａｓｉｌａｋｏｓ  ＪＰら（２０００）Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０４：６４−７４。本発明者らは、ここで、Ｒ−８４８がＣｐＧ  ＯＤＮ  ２００６よりも実質的に多く、プロ炎症性サイトカイン（ＴＮＦ−αおよびＩＬ−６）をＰＢＭＣにおいて誘導することを示した。
【０３６０】
Ｒ−８４８活性化およびＣｐＧ  ＯＤＮ活性化の機構は、異なるようである。クロロキンは、ＣｐＧ  ＯＤＮ  ２００６の効果を完全になくし得るが、クロロキンは、Ｒ−８４８媒介シグナル伝達を低下させ得るが、なくすことはないようである。ＣｐＧ  ＯＤＮ  ２００６が、２つの細胞型（Ｂ細胞およびｐＤＣ）を直接活性化することが示されている。Ｋｒｕｇ  Ａら（２００１）（未公開の知見）。Ａｈｏｎｅｎらの研究により、Ｒ−８４８が、ｍＤＣを直接活性化し得ることが明らかとなった。Ａｈｏｎｅｎ  ＣＬら（１９９９）Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９７：６２−７２。
【０３６１】
Ｒ−８４８およびＣｐＧ−ＯＤＮの両方が、ＮＦ−κＢ活性化を刺激するが、活性化の機構は異なるようである。ＣｐＧ−ＯＤＮは、Ｔｏｌｌ様レセプター９（ｈＴＬＲ９）を活性化する。Ｈｅｍｍｉ  Ｈら（２０００）Ｎａｔｕｒｅ  ４０８：７４０−５  ；  Ｂａｕｅｒ  Ｓら（２００１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８：９２３７−４２。ＴＬＲ９は、病原体由来のリガンドの認識に関して先天免疫のメディエーターとして機能する免疫レセプターのファミリーに属する。現在まで、１０種のＴＬＲタンパク質が公知である。種々のＴＬＲの全部ではないが一部のリガンドも特徴付けされる。例えば、リポポリサッカリド（ＬＰＳ）（グラム陰性細菌の構成要素）は、ＴＬＲ４により認識される。Ｃｈｏｗ  ＪＣら（１９９９）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７４：１０６８９−９２。全ての公知のＴＬＲタンパク質の発現パターンは複雑である。ｈＴＬＲ１は、遍在して発現されるが、ｈＴＬＲ２、ｈＴＬＲ４およびｈＴＬＲ５は、単球、多形核食細胞および樹状細胞中に存在する。Ｍｕｚｉｏ  Ｍら（２０００）Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ  ６７：４５０−６。Ｇ．Ｈａｒｔｍａｎｎのグループにおいてなされた研究（Ｋｒｕｇ  Ａら（２００１）；Ｈｏｍｕｎｇ  Ｖら（２００１）、両方とも未公開の知見）は、ｈＴＬＲ７およびｈＴＬＲ９が、Ｂ細胞およびｐＤＣ中に存在するが、ｍＤＣは、ｈＴＬＲ７およびｈＴＬＲ８を発現するがｈＴＬＲ９を発現しないことを示した。しかし、ヒトＴＬＲ８は、ｐＤＣにおいて発現されないようである。
【０３６２】
本発明の１局面によれば、出願人らは、ヒト胚腎細胞におけるＲ−８４８媒介ＮＦ−κＢ活性化が、ヒトＴｏｌｌ様レセプターファミリーであるｈＴＬＲ８のメンバーにより媒介されることが発見された。２９３Ｔ細胞は、Ｒ−８４８に応答してｈＴＬＲ８  ｃＤＮＡ発現ベクター活性化ＮＦ−κＢシグナル伝達で一時的にトランスフェクトされるが、ＣｐＧ−ＯＤＮではトランスフェクトされない。ｈＴＬＲ８による活性化は、用量依存性様式でＲ−８４８により変化することが観察された。
【０３６３】
出願人はまた、ｈＴＬＲ７  ｃＤＮＡ発現ベクターと一過性にトランスフェクトした２９３Ｔ細胞が、Ｒ−８４８と接触した場合、ＮＦ−κＢシグナル伝達の活性化を観察した。ＴＬＲ８を有する状態と対照的に、ＴＬＲ７による活性化は、濃度依存性であることが観察され、（１）ｈＴＬＲ７がｈＴＬＲ８よりＲ−８４８になおより感受性であり得、そして（２）試験された濃度は、ｈＴＬＲ７シグナル伝達を飽和するのに十分であったことを示唆する。ＣｐＧ  ＯＤＮ  ２００６によるＮＫ−κＢ活性化は、ｈＴＬＲ９によって媒介されるが、Ｒ−８４８は、ｈＴＬＲ９を単独で発現する細胞中で任意のＮＦ−κＢシグナル伝達を活性化しないと考えられた。ｈＴＬＲ８を発現する２９３Ｔ細胞はまた、Ｒ−８４８に応答してＩＬ−８を生成した。
【０３６４】
イミダゾキノリンＲ−８４８についてのレセプターとしてＴＬＲ８およびＴＬＲ７の出願人による同定は、本明細書中に記載のスクリーニング方法についての基礎の一部を形成する。本発明のスクリーニング方法は、ＴＬＲ８またはＴＬＲ７によるイミダゾキノリンの結合がＴＬＲ媒介シグナル伝達活性に生じる事実を利用する。イミダゾキノリンのＴＬＲ７またはＴＬＲ８のシグナル伝達活性は、試験化合物のＴＬＲシグナル伝達活性が本明細書中に記載される種々のスクリーニングアッセイにおいて比較され得る基準応答として使用され得る。
【０３６５】
特定のスクリーニングアッセイの基礎は、機能的ＴＬＲ（例えば、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８，またはＴＬＲ９）の存在である。機能的ＴＬＲは、ＴＬＲリガンドとの相互作用に応答してシグナルを誘導し得る全長ＴＬＲポリペプチドまたはそのフラグメントである。例えば、ＴＬＲ４および他のＴＬＲは、細胞質Ｔｏｌｌ／ＩＬ−１レセプター（ＴＩＲ）相同性ドメインを有する。このドメインは、ＴＩＲドメインの同種の相互作用によってＴＬＲ４と相互作用するアダプタタンパク質（ＭｙＤ８８）上の類似のドメインと連絡する。次の相互作用は、それぞれの「デスドメイン（ｄｅａｔｈ  ｄｏｍａｉｎ）」を介して、アダプタとキナーゼとの間に存在する。次いで、キナーゼは腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）レセプター関連因子−６（ＴＲＡＦ６）と相互作用する。Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ  Ｒら、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  ２：２５３（１９９８）；Ｋｏｐｐ  ＥＢら、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １１：１５（１９９９）。ＴＲＡＦ６の後、２つの一連のキナーゼ活性化工程が、インヒビタータンパク質ＩκＢのリン酸化およびＮＦ−κＢからのその解離をもたらす。第１のキナーゼは、ＮＦ−κＢ誘導キナーゼに対する、ＮＩＫとして公知のマイトジェン活性化キナーゼキナーゼキナーゼ（ＭＡＰＫＫＫ）である。このキナーゼの標的は、２つの鎖で作製される別のキナーゼであり、ＩκＢキナーゼα（ＩＫＫα）およびＩκＢキナーゼβ（ＩＫＫβ）と呼ばれ、これらは一緒になって、ＩκＢをリン酸化するＩＫＫα：ＩＫＫβのヘテロダイマーを形成する。ＮＦ−κＢは、核に転移し、それらのプロモーターおよびエンハンサー（例えば、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２のサブユニットｐ４０ならびに同時刺激分子ＣＤ８０および同時刺激分子ＣＤ８６をコードする）におけるκＢ結合部位を有する遺伝子を活性化する。
【０３６６】
いくつかの実例において、機能的ＴＬＲは、細胞によって自然に発現される。別の実例において、機能的ＴＬＲの発現は、ＴＬＲを他に欠失するか、またはＴＬＲの認識リガンドに対する応答を欠失する細胞または細胞株に、種特異的ＴＬＲの導入または再構成を含み得、適切なリガンドとの接触に応答して、ＴＬＲ／ＩＬ−１Ｒシグナル伝達経路を活性化し得る細胞または細胞株を生じる。ＴＬＲ９または免疫刺激核酸応答を欠失する細胞株の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：２９３線維芽細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５７３）、ＭｏｎｏＭａｃ−６、ＴＨＰ−１、Ｕ９３７、ＣＨＯおよび任意のＴＬＲ９ノックアウト。細胞または細胞株への種特異的ＴＬＲの導入は、遺伝子発現配列に作動可能に連結されるＴＬＲコード核酸配列を用いて、細胞または細胞株の一過性または安定性トランスフェクションによって好ましくは達成される。
【０３６７】
機能的ＴＬＲ（ＴＬＲ７、ＴＬＲ８，およびＴＬＲ９を含む）はヒトＴＬＲに限定されないが、ヒト供給源または非ヒト供給源に由来するＴＬＲを含み得る。非ヒト供給源の例として以下が挙げられるが、これらに限定されない：マウス、ウシ、イヌ、ネコ、ヒツジ、ブタおよびウマ。他の種としては、ニワトリおよび魚（例えば、養殖魚）が挙げられる。
【０３６８】
機能的ＴＬＲ（ＴＬＲ７、ＴＬＲ８，およびＴＬＲ９を含む）はまた、ネイティブなＴＬＲポリペプチドに限定されない。特定の実施形態において、ＴＬＲは、例えば、細胞外ドメインおよび細胞質ドメインが異なる種由来のＴＬＲポリペプチドに由来する、キメラＴＬＲであり得る。上記のこのようなキメラＴＬＲポリペプチドとしては、例えば、ヒトＴＬＲ細胞外ドメインおよびマウスＴＬＲ細胞質ドメイン（各ドメインは、各種の対応するＴＬＲ７、ＴＬＲ８またはＴＬＲ９に由来する）が挙げられ得る。代替の実施形態において、このようなキメラＴＬＲポリペプチドとしては、異なるＴＬＲスプライス改変体またはアロタイプで作製されたキメラが挙げられ得る。ＩＳＮＡ模倣物、アゴニストおよびアンタゴニストをスクリーニングする目的のために有用な他のキメラＴＬＲポリペプチドは、第１の型のＴＬＲ（例えば、ＴＬＲ９）および第１の型のＴＬＲとして同じ種または別の種の別のＴＬＲ（例えば、ＴＬＲ７またはＴＬＲ８）で作製されたキメラポリペプチドが挙げられ得る。ＴＬＲ７ポリペプチド、ＴＬＲ８ポリペプチドまたはＴＬＲ９ポリペプチドに由来する少なくとも１つのこのようなドメインを提供する２つ以上のポリペプチド（例えば、全て異なるポリペプチド供給源に由来する細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞質ドメイン）に由来する配列を取り込むキメラポリペプチドもまた意図される。さらなる例として、１つのＴＬＲ９の細胞外ドメイン、別のＴＬＲ９の細胞内ドメインおよびルシフェラーゼ、ＧＦＰなどのような非ＴＬＲレポーターを含むような構築物もまた意図される。当業者は、このようなキメラＴＬＲポリペプチドをコードするＤＮＡ配列の設計および生成の方法を認識する。
【０３６９】
スクリーニングアッセイは、ＴＬＲ／ＩＬ−１Ｒシグナル伝達経路またはＴＬＲシグナル伝達活性をアッセイするのに適切な他のアッセイのいずれかに基づく任意の多数の可能性のある読み出しシステムを有し得る。好ましい実施形態において、スクリーニングアッセイのための読み出しは、ネイティブの遺伝子、あるいは、同時トランスフェクションされたレポーター遺伝子構成物またはそうでなければ同時導入されたレポーター遺伝子構成物の使用に基づき、これらは、ＴＬＲ／ＩＬ−１Ｒシグナル伝達系路（ＭｙＤ８８、ＴＲＡＦ６、ｐ３８、および／またはＥＲＫを含む）に応答する（Ｈａｃｋｅｒ  Ｈら、ＥＭＢＯ  Ｊ  １８：６９７３〜６９８２（１９９９））。これらの経路は、κＢキナーゼ複合体およびｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼを含むキナーゼを活性化する。従って、このアッセイに特に有用なレポーター遺伝子およびレポーター遺伝子構成物としては、ＮＦ−κＢに対して感受性のあるプロモーターに作動可能に連結されたレポーター遺伝子が挙げられ得る。このようなプロモーターの例としては、ＮＦ−κＢ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２ｐ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、およびＴＮＦαに対するプロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。ＴＬＲ７感受性プロモーター、ＴＬＲ８感受性プロモーター、またはＴＬＲ９感受性プロモーターに作動可能に連結されたレポーター遺伝子としては、酵素（例えば、ルシフェラーゼ、アルカリフォスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）など）、生物発光マーカー（例えば、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ、米国特許第５，４９１，０８４号）など）、表面発現分子（例えば、ＣＤ２５）、および分泌分子（例えば、ＩＬ−８、ＩＬ−１２ｐ４０、ＴＮＦα）が挙げられ得るが、これらに限定されない。好ましい実施形態において、レポーターは、ＩＬ−８、ＴＮＦα、ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼ（ＮＦ−κＢ−ｌｕｃ；Ｈａｃｋｅｒ  Ｈら、ＥＭＢＯ  Ｊ  １８：６９７３〜６９８２（１９９９））、ＩＬ−１２ｐ４０−ｌｕｃ（Ｍｕｒｐｈｙ  ＴＬら、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １５：５２５８〜５２６７（１９９５））、およびＴＮＦ−ｌｕｃ（Ｈａｃｋｅｒ  Ｈら、ＥＭＢＯ  Ｊ  １８：６９７３〜６９８２（１９９９））から選択される。酵素活性読み出しに依存するアッセイにおいて、基質は、アッセイの部分として供給され得、そして検出としては、化学ルミネセンス、蛍光、発色現象、放射性標識の組み込み、薬物耐性、または酵素活性の他のマーカーを挙げられ得る。分子の表面発現に依存するアッセイについて、検出は、ＦＡＣＳ分析または機能的アッセイを用いて達成され得る。分泌分子は、酵素結合免疫吸着剤アッセイ（ＥＬＩＳＡ）またはバイオアッセイを用いてアッセイされ得る。多数のこのような読み出しシステムが、当該分野で周知であり、そして、市販されている。
【０３７０】
上記のように、１つの局面において、本発明は、ＴＬＲシグナル伝達活性または試験化合物を、参照イミダゾキノリンの対応するＴＬＲシグナル伝達活性に対して比較するためのスクリーニング方法を提供する。一般的に、この方法は、ＴＬＲ７およびＴＬＲ８からなる群より選択される機能的ＴＬＲと、参照イミダゾキノリンとを接触させる工程、およびＴＬＲシグナル伝達系路によって媒介される参照応答を検出する工程；ＴＬＲ７およびＴＬＲ８からなる群より選択される機能的ＴＬＲと、試験化合物とを接触させる工程、およびＴＬＲシグナル伝達系路によって媒介される試験応答を検出する工程；ならびに、試験応答と参照応答とを比較して、試験化合物のＴＬＲシグナル伝達活性とイミダゾキノリンとを比較する工程、を包含する。試験化合物および参照イミダゾキノリンが、ＴＬＲに独立して接触するアッセイを使用し、イミダゾキノリン模倣体である試験化合物を同定し得る。試験化合物および参照イミダゾキノリンが、ＴＬＲに同時に接触するアッセイを使用して、イミダゾキノリンアゴニストおよびイミダゾキノリンアンタゴニストである試験化合物を同定し得る。
【０３７１】
本明細書で使用されるようなイミダゾキノリン模倣体は、ＴＬＲシグナル伝達系路によって媒介される応答を引き起こす化合物である。本明細書で使用される場合、用語「ＴＬＲシグナル伝達系路によって媒介される応答」は、イミダゾキノリン−ＴＬＲ相互作用の特徴である応答をいう。本明細書で示されるように、イミダゾキノリン−ＴＬＲ相互作用の特徴である応答としては、イミダゾキノリン特異的プロモーター（例えば、ＮＦ−κＢプロモーター）の制御下での遺伝子の誘導、Ｔｈ１サイトカインレベルにおける増加などが挙げられる。ＮＦ−κＢプロモーターの制御下の遺伝子は、ＮＦ−κＢプロモーターを天然で含む遺伝子であり得るか、または、ＮＦ−κＢプロモーターが挿入された構築体中の遺伝子であり得る。ＮＦ−κＢプロモーターを天然に含む遺伝子としては、ＩＬ−８、ＩＬ−１２ｐ４０、ＮＦ−κＢ−ｌｕｃ、ＩＬ−１２ｐ４０−ｌｕｃ、およびＴＮＦ−ｌｕｃが挙げられるが、これらに限定されない。Ｔｈ１サイトカインレベルにおける増加は、イミダゾキノリン−ＴＬＲ相互作用の別の測定特徴である。Ｔｈ１サイトカインレベルにおける増加は、イミダゾキノリン−ＴＬＲ相互作用に応答した、Ｔｈ１サイトカインの増加した産生または増加した安定性または増加した分泌から生じる。Ｔｈ１サイトカインとしては、ＩＬ−２、ＩＦＮ−α、およびＩＬ−１２が挙げられるが、これらに限定されない。イミダゾキノリン−ＴＬＲ相互作用の特徴である他の応答としては、Ｔｈ２サイトカインレベルにおける減少が挙げられるが、これに限定されない。Ｔｈ２サイトカインとしては、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、およびＩＬ−１３が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３７２】
イミダゾキノリン−ＴＬＲ相互作用の特徴である応答は、直接的な応答または間接的な応答であり得る。直接的な応答は、イミダゾキノリン−ＴＬＲ相互作用の結果として直接的に生じる応答である。間接的な応答は、それが生じる前の他のパラメータの変更を包含する応答である。
【０３７３】
本明細書で使用されるようなイミダゾキノリンアゴニストは、ＴＬＲシグナル伝達系路によって媒介されるイミダゾキノリンに対する増強された応答を引き起こす化合物である。従って、本明細書で使用されるようなイミダゾキノリンアゴニストは、参照イミダゾキノリンによって通常誘導される免疫応答の少なくとも１つの局面における増加を引き起こす化合物である。例えば、イミダゾキノリンによって通常誘導される免疫応答は特に、イミダゾキノリンに応答したＴＬＲ７媒介シグナル伝達またはＴＬＲ８媒介シグナル伝達を含む。幾つかの実施形態において、イミダゾキノリンアゴニストは、ＴＬＲ７またはＴＬＲ８への結合についてイミダゾキノリンと競合する。他の実施形態において、イミダゾキノリンアゴニストは、イミダゾキノリンと結合するための部位とは区別されるＴＬＲ７またはＴＬＲ８上の部位に結合する。なお他の実施形態において、イミダゾキノリンアゴニストは、別の分子、またはＴＬＲ７もしくはＴＬＲ８と区別される経路を介して作用する。
【０３７４】
本明細書で使用されるイミダゾキノリンアンタゴニストは、ＴＬＲシグナル伝達系路によって媒介されるイミダゾキノリンに対する減少した応答を引き起こす化合物である。従って、本明細書で使用されるイミダゾキノリンアンタゴニストは、参照イミダゾキノリンによって通常誘導される免疫応答の少なくとも１つの局面における減少を引き起こす化合物である。例えば、イミダゾキノリンによって通常誘導される免疫応答は、イミダゾキノリンに応答したＴＬＲ７媒介シグナル伝達またはＴＬＲ８媒介シグナル伝達を特に含み得る。幾つかの実施形態において、イミダゾキノリンアンタゴニストは、ＴＬＲ７またはＴＬＲ８への結合についてイミダゾキノリンと競合する。他の実施形態において、イミダゾキノリンアンタゴニストは、イミダゾキノリンと結合するための部位とは区別されるＴＬＲ７またはＴＬＲ８上の部位に結合する。なお他の実施形態において、イミダゾキノリンアンタゴニストは、別の分子、またはＴＬＲ７もしくはＴＬＲ８とは区別される経路を介して作用する。
【０３７５】
試験化合物のＴＬＲシグナル伝達活性と、イミダゾキノリンのシグナル伝達活性とを比較するスクリーニング方法は、試験化合物の非存在下において、参照イミダゾキノリンが、免疫応答の少なくとも１つの局面を誘導し得る条件下で、少なくとも１つの試験化合物と、ＴＬＲ７またはＴＬＲ８から選択される機能的ＴＬＲとを接触させる工程を包含する。機能的ＴＬＲは、細胞によって発現され得るか、または、ＴＬＲは、無細胞系の部分であり得る。機能的ＴＬＲを発現する細胞は、ＴＬＲを天然に発現する細胞であるか、または、ＴＬＲ発現ベクターを導入された細胞であるかのいずれかであり、あるいは、ＴＬＲが細胞によって発現されることを可能にする様式でＴＬＲを発現し、そして、ＴＬＲのシグナル伝達部分によってシグナル伝達を通常可能にする条件化でシグナルを伝達するように操作された細胞である。上記のように、ＴＬＲは、ネイティブのＴＬＲであり得るか、または、そのフラグメントもしくは変異体であり得る。これらの方法に従って、試験化合物は、参照イミダゾキノリンと機能的ＴＬＲまたはＴＬＲ発現細胞とを接触させるより前に、接触させるより後に、または接触と同時に機能的ＴＬＲまたはＴＬＲ発現細胞と接触される。機能的ＴＬＲまたはＴＬＲ発現細胞の応答は、試験化合物の非存在下における同じ条件下で生じる対応する応答により測定され、そして比較される。応答が適切な場合、試験化合物の非存在下における応答は、同時制御または履歴制御として決定され得る。このような応答の例としては、ＴＬＲシグナル伝達系路、サイトカインの分泌、細胞増殖、および細胞活性化を通じて媒介される応答が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施形態において、応答の測定は、ＩＬ−８分泌の検出（例えば、ＥＬＩＳＡによって）を包含する。別の好ましい実施形態において、応答の測定は、ルシフェラーゼ活性（例えば、ＮＦ−κＢ−ｌｕｃ、ＩＬ−１２ｐ４０−ｌｕｃ、またはＴＮＦ−ｌｕｃ）の検出を包含する。
【０３７６】
試験化合物としては、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、抗体、ポリペプチド、炭水化物、脂質、ホルモン、ならびに低分子（特に、Ｒ−４８４およびＲ−４８７以外のイミダゾキノリン）が挙げられ得るが、これらに限定されない。試験化合物は、参照イミダゾキノリンの改変体をさらに含み得る。試験化合物は、化合物のコンビナトリアルライブラリーのメンバーとして生成され得る。
【０３７７】
好ましい実施形態において、試験化合物、試験核酸分子、試験イミダゾキノリン、および候補薬理学的薬剤をスクリーニングする方法は、例えば、アレイを基礎とするアッセイ系および少なくとも１つの自動化工程または半自動化工程を組み込むことによって、大きいスケールで、そして高スループットで実行され得る。例えば、このアッセイは、細胞が、個々のウェルに分配される複数ウェルプレートを使用して設定され得、そして、試薬は、複数ウェルプレートの形状に適した複数ウェル送達システムを使用して、系統的な様式にて添加される。高スループットスクリーニングアッセイにおける使用において適切な、手動複数ウェル送達デバイスおよび自動複数ウェル送達デバイスは、当業者により周知である。各ウェルまたは各アレイ要素は、１対１の様式で、特定の試験状態（例えば、試験化合物）に対してマッピングされ得る。読み出しはまた、好ましくは、複数プレート読み出しデバイスなどを使用して、この複数ウェルアレイにおいて実行され得る。このようなデバイスの例は、当該分野において周知であり、市販のものを通じて入手可能である。サンプル操作および試薬操作は、自動化され、１０個、１００個、１，０００個、または１００万個の並列アッセイを、１日に、または１週間で実行し得るように、スクリーニングアッセイのスループット能力をさらに増強し得る。完全自動化システムは、合成化合物のコンビナトリアルライブラリーの生成および分析のような適用について、当該分野で公知である。例えば、米国特許第５，４４３，７９１号および同第５，７０８，１５８号を参照のこと。
【実施例】
【０３７８】
（方法）
他に示されている場合を除いて、以下の一般的な方法を使用した。
【０３７９】
トランスフェクションのために使用する細胞は、２９３Ｔ（ヒト胎児腎臓細胞、Ｔ抗原トランスフェクションされた）または２９３−ＴＬＲ９−Ｌｕｃ（安定なトランスフェクション体、ヒトＴＬＲ９レセプターを発現し、そしてゲノムＮＦ−κＢルシフェラーゼカセットを含むヒト胎児腎臓細胞）であった。
【０３８０】
トランスフェクションを、６ウェルプレートにおいて実施した。細胞を、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＣＳ中の４×１０５／ウェルでトランスフェクションする前に、１日プレートに置いた。トランスフェクションを、製造者の指示書に従って、カチオン性脂質（ＥＦＦＥＣＴＥＮＥＴＭ試薬、ＱＩＡＧＥＮ）を用い、１ウェルあたり１μｇのＤＮＡおよび１０μｌのＥＦＦＥＣＴＥＮＥＴＭを用いて、実施した。
【０３８１】
構築物：ＴＬＲまたはｃＤＮＡをｐｃＤＮＡ３．１へクローン化させた。ＮＦ−κＢ活性化は、５×ＮＦ−κＢルシフェラーゼ構築物（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を用いることによって測定した。トランスフェクション効率は、β−ガラクトシダーゼ（β−ｇａｌ）レポーター構築物（ｐβ−ｇａｌコントロール、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いることによって測定した。
【０３８２】
刺激を、トランスフェクション後２４時間行った。細胞の培地を１ｍｌにまで低下させ（培地変化を伴わずに）、そして、細胞を、示された量のＲ−８４８、ＬＰＳ、ＯＤＮ８９５４、２００６およびＩＬ−１βで１６時間刺激した。
【０３８３】
細胞抽出物を、凍結融解方法を使用して、１００μｌのレポーター溶解緩衝液中で細胞を溶解させることによって調製した。ＮＦ−κＢ刺激を、ルシフェラーゼ活性（Ｐｒｏｍｅｇａ）を介して測定した。全てのデータをβ−ｇａｌ発現に対して正規化した。刺激係数は、ＯＤＮの添加を伴わない培地のルシフェラーゼ活性に対する基準ルシフェラーゼにおいて計算した。
【０３８４】
（実施例１．Ｒ−８４８は、ｈＴＬＲ９媒介ＮＦ−κＢ活性化を刺激しない）
Ｒ−８４８は、免疫調節特性を有するので、この実験により、Ｒ−８４８媒介免疫応答が、ｈＴＬＲ−９依存性か否かを試験した。ｈＴＬＲ９およびＮＦ−κＢレポーター構築物を用いてトランスフェクトされた細胞安定性（２９３−ＴＬＲ−Ｌｕｃ細胞）を、ＩＬ−１、ＣｐＧ  ＯＤＮ２００６を用い、コントロール非ＣｐＧ  ＯＤＮ１９８２（５’ＴＣＣＡＧＧＡＣＴＴＣＴＣＴＣＡＧＧＴＴ３’、配列番号３）、または増加する量のＲ−８４８と共に、１６時間インキュベートした。ＮＦ−κＢ活性を、ルシフェラーゼ活性の測定により決定した。結果を図１に示す。活性は、培地コントロールにおけるルシフェラーゼ活性と比較して、Ｘ倍活性化と与えられる。１〜１２μｇ／ｍｌの濃度範囲でのＣｐＧ−ＯＤＮ２００６が、ＮＦ−κＢ活性化を１０〜３０倍刺激し、一方、５μｇ／ｍｌのＲ−８４８は、ＮＦ−κＢ活性化をもたらさなかった。
【０３８５】
（実施例２．Ｒ−８４８による２９３Ｔ細胞におけるＮＦ−κＢの活性化は、ＴＬＲ８およびＴＬＲ７を介して媒介される）
ＮＦ−κＢルシフェラーゼレポーター構築物を用いて安定にトランスフェクションされた２９３Ｔ細胞を、全長ｈＴＬＲ２、全長ｈＴＬＲ７、全長ｈＴＬＲ８および全長ｈＴＬＲ９をコードするプラスミド（ｐｃＤＮＡ３．１構築物）を用いて一時的にトランスフェクションした。全てのトランスフェクションを、β−ガラクトシダーゼ活性に対して正規化した。トランスフェクションに続いて２４時間、細胞を、Ｒ−８４８、ＬＰＳ、ＣｐＧ  ＯＤＮ８９５４（５’ＧＧＧＧＡＣＧＡＣＧＴＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧ３’、配列番号４）、ＣｐＧ−ＯＤＮ２００６、またはＩＬ−１を用いて刺激し、次いで、刺激後１６時間でルシフェラーゼ活性についてアッセイした。各実験を、同様の結果を伴って、少なくとも２回行った。
【０３８６】
図２Ａに示されるように、Ｒ−８４８は、ルシフェラーゼレポーター遺伝子のＮＦ−κＢ依存性転写を２．５〜４．５倍に刺激した。ポジティブコントロールＩＬ−１は、ＴＬＲ依存性様式において、ＮＦ−κＢルシフェラーゼレポーター遺伝子を活性化した。ｈＴＬＲ９のトランスフェクションについてのポジティブコントロールは、ＮＦ−κＢ活性化を３倍刺激した２００６の添加物であった。Ｒ−８４８に対する応答をまた、ｈＴＬＲ７を用いてトランスフェクションした細胞において見出した。ＬＰＳもＣｐＧ  ＯＤＮ８９５４も、ｈＴＬＲ７またはｈＴＬＲ８を活性するようではなかった。さらなるコントロールとして、ｈＴＬＲ２トランスフェクションされた２９３Ｔ細胞を（Ｃｈｏｗらによってなされた早期の研究と同様に）、ＬＰＳによって活性化した。Ｃｈｏｗ  ＪＣら、（１９９９）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７４：１０６８９〜９２。
【０３８７】
図２Ｂは、Ｒ−８４８の濃度に対して用量依存性様式で変化する、ｈＴＬＲ８媒介ＮＦ−κＢ活性化を示す。細胞を、トランスフェクション後２４時間刺激し、１６時間後にルシフェラーゼ活性についてアッセイした。Ｒ−８４８の量を増化させることによって（１〜１０μｇ／ｍｌ）、１．８倍〜４．７倍の刺激範囲の増加を生じた。対照的に、Ｒ−８４８媒介ｈＴＬＲ７活性は、この範囲においては濃度依存性であるようではなく、このことは、ｈＴＬＲシグナル伝達は、試験された濃度のＲ−８４８で飽和であることを示唆する。同様の結果を、ろ過によって精製されたＲ−８４８について得た。
【０３８８】
Ｒ−８４８媒介活性化におけるｈＴＬＲ８の役割を確認するために、安定にトランスフェクションされた２９３−ＴＬＲ９−Ｌｕｃ細胞を、ｈＴＬＲ−ｃＤＮＡ構築物を用いてトランスフェクションし、そして、ルシフェラーゼ活性を決定した。２９３−ＴＬＲ９−Ｌｕｃ細胞は、ｈＴＬＲ９オープンリーディングフレームおよびＮＦ−κＢルシフェラーゼカセットのゲノムコピーを含む。実験を、二連で行い、そして、ＴＬＲ９を構成的に発現するという理由で、ＣｐＧ  ＯＤＮ２００６をポジティブコントロールとして使用した。図３Ａに示されるように、ｈＴＬＲ８を発現する構築物を用いてトランスフェクションされた細胞は、Ｒ−８４８に応答するＮＦ−κＢ活性化をもたらした。対照的に、空のベクターを有する細胞またはｈｔＬＲ７を発現する構築物は、この実験において、Ｒ−８４８に応答するＮＦ−κＢ活性化をもたらさなかった。
【０３８９】
上記（図２）の一時的トランスフェクション実験の結果と同様に、観測された応答は、Ｒ−８４８濃度依存性であった。２．５μｇ／ｍｌのＲ−８４８を用いた刺激により、活性化において５倍の増加が生じ、一方、１０μｇ／ｍｌのＲ−８４８を用いた刺激は、活性の１０倍の増加を生じた。ｈＴＬＲ９を構造的に発現するという理由で、これらの実験におけるポジティブコントロールは、６μｇ／ｍｌのＣｐＧ  ＯＤＮ２００６を用いた刺激であった。これらの実験において、ｈＴＬＲ７は、予想外に、Ｒ−８４８刺激に対しては不活性であるようであった。全てのトランスフェクション実験において、ｈＴＬＲ２およびｈＴＬＲ６をまた、試験したが、これらのいずれもが、Ｒ−８４８に対する応答を示さなかった。図１にすでに示したように、ｈＴＬＲ９は、Ｒ−８４８とは反応しなかった。これは、ｐｃＤＮＡ（空のベクター）単独での２９３−ＴＬＲ−Ｌｕｃのトランスフェクションが、いかなる活性化をも生じなかったためである。
【０３９０】
なお他の実験において、Ｒ−８４８とＣｐＧ  ＯＤＮとを組み合わせた効果を、ＴＬＲ９を発現する細胞、および、ＴＬＲ７またはＴＬＲ８のいずれかに対して試験した。（図３Ｂを参照のこと）。同時刺激を、ｈＴＬＲ９およびｈＴＬＲ７（各組の第１のバー）、または、ｈＴＬＲ９およびｈＴＬＲ８（各組の第２のバー）を用いてトランスフェクションした２９３−ＴＬＲ９−Ｌｕｃ細胞におけるＮＦ−κＢ活性化によって測定した。上記のように、Ｒ−８４８に対する応答における活性化は、ｈＴＬＲ９およびｈＴＬＲ８を同時発現する細胞において濃度依存性であった。ｈＴＬＲ７およびｈＴＬＲ９を発現する細胞は、Ｒ−８４８に対する応答において活性化されなかった。Ｒ−８４８およびＣｐＧ  ＯＤＮ＃２００６の添加物により、ｈＴＬＲ８におけるいずれかの化合物単独では、より高い活性化レベルを生じたが、ｈｔＬＲ７発現細胞では生じなかった。
【０３９１】
（実施例３．Ｒ−８４８は、ｈＴＬＲ８の存在下においてＩＬ−８を誘導する）
ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｈＴＬＲ９を用いてトランスフェクションされた２９３細胞において、ＩＬ−８産生を誘導し得ることが公知である。Ｂａｕｅｒ  Ｓら、（２００１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８：９２３７〜４２。同様のことが、この実験において観測され、ここで、ｈＴＬＲ８を用いてトランスフェクションされた２９３Ｔ細胞を、Ｒ−８４８を用いて刺激した。細胞を、トランスフェクションの２４時間後で、Ｒ−８４８、ＬＰＳ、ＯＤＮ８９５４、またはＩＬ−１を用いて刺激した。上澄みを、刺激後１６時間で回収し、そして上澄み中のＩＬ−８の量を、ＥＬＩＳＡ（ＯｐｔＥＬＡ、Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）によって決定した。図４に示されるように、１０μｇ／ｍｌのＲ−８４８を用いた、ｈＴＬＲ８トランスフェクションされた２９３Ｔ細胞の刺激により、刺激の１６時間後に、１６００ｐｇ／ｍｌのＩＬ−８より多く生じた。ｈＴＬＲ７を用いたトランスフェクションは、バックグランドと比較して、ＩＬ−８産生のわずかな増加をしか生じなかった。
【０３９２】
（実施例４．Ｒ−８４８は、ＩＦＮαを誘導する）
Ｒ−８４８は、単球誘導された樹状細胞（ｍＤＣ）において、ＩＦＮαを産生することが記載されており、一方、ＣｐＧ  ＯＤＮは、プラズマ細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）由来のＩＦＮαの分泌を誘導すると記載されている（Ｋｒｕｇ  Ａら、（２００１）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３１：２１５４〜６３）。この実験において、ｍＤＣおよびｐＤＣを含む、非分画ヒトＰＢＭＣを、種々の濃度のＲ−８４８（０．０１〜１．０μｇ／ｍｌ）、種々の濃度のＣｐＧ  ＯＤＮ２００６（０．２〜３．０μｇ／ｍｌ）、種々の濃度のネガティブコントロールＯＤＮ５１７７（５’ＴＣＣＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＴＧＣＡＴＴ３’；配列番号５；０．２〜３．０μｇ／ｍｌ）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ  ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎＢ（ＳＥＢ、５０ｎｇ／ｍｌ）、または培地単独の存在下で、４８時間インキュベートし、次いで、上澄み中のＩＦＮαの濃度を、ＥＬＩＳＡによって測定した。Ｒ−８４８は、Ｂ型ＣｐＧ  ＯＤＮ２００６より、ヒトＰＢＭＣのインキュベーションに対して、より高い量のＩＦＮαを誘導した（図５Ａ）。
【０３９３】
図５Ｂにおいて、ＩＦＮα分泌に対するＲ−８４８とＣｐＧ  ＯＤＮ（例えば、２００６番）とを組み合わせた効果が、示される。３人の異なるドナーからのヒトＰＢＭＣを、誘導された濃度のＯＤＮおよびＲ−８４８を別個か、または一緒かのいずれかを用いて、４８時間インキュベートした。上澄み回収し、そして、ＩＦＮαをＥＬＩＳＡによって測定した。データは、平均サイトカイン量を示す。このデータは、ＩＦＮα分泌の用量依存性ネガティブ効果が、Ｒ−８４８と一緒に、特定のＣｐＧ  ＯＤＮを使用することによって生じることを示唆する。
【０３９４】
（実施例５．Ｒ−８４８は、ＩＰ−１０およびＩＦＮγを誘導する）
この実験により、Ｔｈ１サイトカインＩＦＮγならびにＴｈ１関連ケモカインＩＰ−１０（ＩＦＮγ誘導的タンパク質）の誘導を調査した。３人のドナーからの非分画ヒトＰＢＭＣを、種々の濃度のＲ−８４８（０．０１〜１．０μｇ／ｍｌ）、種々の濃度のＣｐＧ  ＯＤＮ２００６（０．２〜３．０μｇ／ｍｌ）、種々の濃度のネガティブコントロールＯＤＮ５１７７（０．２〜３．０μｇ／ｍｌ）、ＳＥＢ（５０ｎｇ／ｍｌ）、または培地単独の存在下において、４８時間インキュベートし、次いで、上澄み中のＩＰ−１０およびＩＦＮγの濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。ＣｐＧ  ＯＤＮ２００６は、Ｒ−８４８と比較して、同様の量のＩＰ−１０を誘導したがネガティブコントロールＯＤＮ５１７７は誘導しなかった（図６Ａ）。同様の結果を、ＩＦＮγについて得た（示さず）。
【０３９５】
図６Ｂに、ＩＰ−１０分泌に対する、Ｒ−８４８とＣｐＧ  ＯＤＮ（例えば、＃２００６）とを組み合わせた効果が、示される。３人の異なるドナーからのヒトＰＢＭＣを、誘導された濃度のＯＤＮおよびＲ−８４８を別個か、または一緒かのいずれかを用いて、４８時間インキュベートした。上澄み回収し、そして、ＩＰ−１０をＥＬＩＳＡによって測定した。データは、平均サイトカイン量を示す。このデータは、ＩＰ−１０分泌の用量依存性ネガティブ効果が、Ｒ−８４８と一緒に、特定のＣｐＧ  ＯＤＮを使用することによって生じることを示唆する。
【０３９６】
（実施例６．Ｒ−８４８は、ＣｐＧ  ＯＤＮよりも強力な炎症促進性サイトカインの誘導物質である）
ＣｐＧ  ＯＤＮは、低量ではあるが有意な量の炎症促進性サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−６）を誘導することが記載されている。３人のドナー由来の未分画ヒトＰＢＭＣを、種々の濃度のＲ−８４８（０．０１〜１．０μｇ／ｍｌ）、種々の濃度のＣｐＧ  ＯＤＮ２００６（０．４〜４．８μｇ／ｍｌ）、ＳＥＢ（５０ｎｇ／ｍｌ）または培地単独の存在下で４８時間インキュベートし、その後、上清中のＴＮＦ−α濃度およびＩＬ−６濃度をＥＬＩＳＡにより測定した。Ｒ−８４８は、非常に大量のＴＮＦ−αを誘導する際（図７Ａ）そして大量のＩＬ−６を誘導する際にも（図９）、どのＣｐＧ  ＯＤＮよりもかなり強力であった。この特徴は、ＣｐＧ  ＯＤＮの活性およびイミダゾキノリンの活性の有意な差異を示す。
【０３９７】
図７Ｂにおいて、ＴＮＦ−α分泌に対するＲ−８４８とＣｐＧ  ＯＤＮ（例えば、＃２００６）とを組み合わせた効果が、示される。２人の異なるドナー由来のヒトＰＢＭＣを、示される濃度のＯＤＮおよびＲ−８４８（個別または一緒のいずれかで）とともに１６時間インキュベートした。上清を採取し、ＴＮＦ−αをＥＬＩＳＡにより測定した。データは、平均サイトカイン量を示す。このデータは、ＣｐＧ  ＯＤＮおよびＲ−８４８の両方とのインキュベーション後に分泌されたＴＮＦ−αの量としての相乗的応答が、いずれかの化合物単独により分泌された相加量よりも大きいことを示唆する。
【０３９８】
（実施例７．Ｒ−８４８は、ＩＬ−１０を誘導する）
ＩＬ−１０は、免疫刺激の負の推定調節因子を示し、そしてＩＬ−１０は、Ｔｈ１サイトカインＩＦＮ−γおよびＩＬ−１２の生成をアンタゴナイズすると広範に考えられている。３人のドナー由来の未分画ヒトＰＢＭＣを、種々の濃度のＲ−８４８（０．０１〜１．０μｇ／ｍｌ）、種々の濃度のＣｐＧ  ＯＤＮ２００６（０．４〜４．８μｇ／ｍｌ）、ＳＥＢ（５０ｎｇ／ｍｌ）または培地単独の存在下で４８時間インキュベートし、その後、上清中のＩＬ−１０濃度をＥＬＩＳＡにより測定した。Ｒ−８４８は、ＣｐＧ  ＯＤＮ  ２００６よりも多量のＩＬ−１０を誘導した（図８Ａ）。
【０３９９】
図８Ｂにおいて、ＩＬ−１０分泌に対するＲ−８４８とＣｐＧ  ＯＤＮ（例えば、＃２００６）とを組み合わせた効果が、示される。２人の異なるドナー由来のヒトＰＢＭＣを、示される濃度のＯＤＮおよびＲ−８４８（個別または一緒のいずれかで）とともに４８時間インキュベートした。上清を採取し、ＩＬ−１０をＥＬＩＳＡにより測定した。データは、平均サイトカイン量を示す。このデータは、ＣｐＧ  ＯＤＮおよびＲ−８４８の両方とのインキュベーション後に分泌されたＩＬ−１０の量としての相乗的応答が、いずれかの化合物単独により分泌された相加量よりも大きいことを示唆する。
【０４００】
（実施例８．Ｒ−８４８ではなくＢ型ＣｐＧ  ＯＤＮは、クロロキンにより完全に阻害され得る）
Ｖａｓｉｌａｋｏｓらは、Ｒ−８４８の活性が、クロロキン（エンドソーム成熟をブロックする化合物）により阻害され得ないことを、報告した。Ｖａｓｉｌａｋｏｓ  ＪＰら（２０００）Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０４：６４〜７４。ヒトＰＢＭＣ（ｎ＝３）を、種々の濃度のＲ−８４８（０．０５〜０．１μｇ／ｍｌ）、種々の濃度のＣｐＧ  ＯＤＮ２００６（０．８〜６．０μｇ／ｍｌ）、ＳＥＢ（５０ｎｇ／ｍｌ）または培地単独とともに２４時間培養した。さらに、ＰＢＭＣを、１０μｇ／ｍｌクロロキンの存在下でＲ−８４８またはＯＤＮとともにインキュベートした。上清中のＩＬ−６をＥＬＩＳＡにより測定した。クロロキンは、Ｂ型ＣｐＧ  ＯＤＮ（これは、ＴＬＲ９と相互作用する）の活性のうちの９０％を超える活性をブロックした。ＴＬＲ９は、細胞間発現のみを有すると考えられる。これらの結果は、Ｖａｓｉｌａｋｏｓらの報告とは対照的に、Ｒ−８４８の活性が、Ｒ−８４８濃度に依存して、クロロキンにより強力に（しかし、完全にではなく）阻害され得る（図９）ことを示す。同様の結果が、Ｂ細胞活性についても得られた（示さず）。
【０４０１】
（実施例９．２９３線維芽細胞においてシグナル伝達するＴＬＲ９の再構築）
マウスＴＬＲ９およびヒトＴＬＲ９をクローニングする方法が、２００１年９月１７日出願の係属中の米国特許出願番号０９／９５４，９８７と、公開されたＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ０１／２９２２９とに記載されており、この２つの出願の内容が、参考として援用される。ｐＴ−Ａｄｖベクター（Ｃｌｏｎｔｅｃｈより得た）中にあるヒトＴＬＲ９  ｃＤＮＡ（配列番号６、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＦ２４５７０４）およびマウスＴＬＲ９  ｃＤＮＡ（配列番号８、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＦ３４８１４０）を、ＥｃｏＲＩ部位を使用することによって、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから得た発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（−）中に個別にクローニングした。「機能獲得」アッセイを使用して、ＣｐＧ−ＤＮＡ非応答性ヒト２９３線維芽細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ−１５７３）においてシグナル伝達するヒトＴＬＲ９（ｈＴＬＲ９）およびマウスＴＬＲ９（ｍＴＬＲ９）を再構築することが可能であった。上記の発現ベクターを、リン酸カルシウム法を使用して２９３線維芽細胞中にトランスフェクトした。ヒトＴＬＲ９のアミノ酸配列は、配列番号７（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＦ７８０３７）として提供される。マウスＴＬＲ９のアミノ酸配列は、配列番号９（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＫ２９６２５）として提供される。
【０４０２】
ＮＦ−κＢ活性化は、ＩＬ−１／ＴＬＲシグナル伝達経路の要である（Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ  Ｒら（１９９８）Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  ２：２５３〜２５８（１９９８）；Ｍｕｚｉｏ  Ｍら（１９９８）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８７：２０９７〜１０１）ので、細胞を、ｈＴＬＲ９でトランスフェクトしたか、またはｈＴＬＲ９と、ＮＦ−κＢ駆動ルシフェラーゼレポーター構築物とで同時トランスフェクトした。ヒト線維芽細胞２９３細胞を、ｈＴＬＲ９と６倍ＮＦ−κＢ−リスフェラーゼレポータープラスミド（ＮＦ−κＢ−ｌｕｃ、Ｐａｔｒｉｃｋ  Ｂａｅｕｅｒｌｅ，Ｍｕｎｉｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙにより好意により提供された腎臓）とで一過性トランスフェクトした（図１０Ａ）か、またはｈＴＬＲ９単独で一過性トランスフェクトした（図１０Ｂ）。ＣｐＧ−ＯＤＮ（２００６、２μＭ、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ、配列番号１）、ＧｐＣ−ＯＤＮ（２００６−ＧＣ、２μＭ、ＴＧＣＴＧＣＴＴＴＴＧＴＧＣＴＴＴＴＧＴＧＣＴＴ、配列番号１０）、ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）または培地による刺激の後、ルシフェラーゼ読出しによってＮＦ−κＢ活性化をモニターした（８時間、図１０Ａ）か、またはＥＬＩＳＡによりＩＬ−８産生をモニターした（４８時間、図１０Ｂ）。結果は、３回の独立実験を代表する。図１０は、ｈＴＬＲ９を発現する細胞がＣｐＧ−ＤＮＡに応答したがＬＰＳには応答しなかったことを示す。
【０４０３】
図１１は、ｍＴＬＲ９のトランスフェクションについて同じ原理を示す。ヒト線維芽細胞２９３細胞を、ｍＴＬＲ９およびＮＦ−κＢ−ｌｕｃ構築物で一過性トランスフェクトした（図１１）。ＩＬ−８産生について、類似するデータが得られた（示さず）。従って、２９３細胞におけるＴＬＲ９の発現（ヒトまたはマウス）は、ＬＰＳ応答のｈＴＬＲ４再構築と類似するＣｐＧ−ＤＮＡ刺激についての機能獲得を生じる。
【０４０４】
ヒトＴＬＲ９を発現する安定なクローン、マウスＴＬＲ９を発現する安定なクローン、またはいずれかのＴＬＲ９とＮＦ−κＢ−ｌｕｃレポータープラスミドとを発現する安定なクローンを作製するために、２９３細胞を、１６μｇのＤＮＡを用いて１０ｃｍプレート中（２×１０６細胞／プレート）でトランスフェクトし、そして０．７ｍｇ／ｍｌ  Ｇ４１８（ＰＡＡ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ＧｍｂＨ，Ｃｏｅｌｂｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて選択した。クローンを、例えば、図１２に示されるように、ＲＴ−ＰＣＲによってＴＬＲ９発現について試験した。これらのクローンをまた、ＯＤＮによる刺激後のＩＬ−８産生またはＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼ活性についてスクリーニングした。４種の異なる型のクローンを作製した。
【０４０５】
２９３−ｈＴＬＲ９−Ｌｕｃ：ヒトＴＬＲ９および６倍ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーターを発現する
２９３−ｍＴＬＲ９−Ｌｕｃ：マウスＴＬＲ９および６倍ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーターを発現する
２９３−ｈＴＬＲ９：ヒトＴＬＲ９を発現する
２９３−ｍＴＬＲ９：マウスＴＬＲ９を発現する。
【０４０６】
図１３は、ＣｐＧ−ＯＤＮ（２００６、２μＭ）、ＧｐＣ−ＯＤＮ（２００６−ＧＣ、２μＭ）、Ｍｅ−ＣｐＧ−ＯＤＮ（メチル化２００６、２μＭ；ＴＺＧＴＺＧＴＴＴＴＧＴＺＧＴＴＴＴＧＴＺＧＴＴ、Ｚ＝５−メチルシチジン、配列番号１１）、ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）または培地による刺激後の、安定２９３−ｈＴＬＲ９−Ｌｕｃクローンの応答性を示し、これらは、ＮＦ−κＢ活性化をモニターすることにより測定した。同様の結果が、安定クローン２９３−ｈＴＬＲ９を用いてＩＬ−８産生を使用して得られた。２９３−ｍＴＬＲ９−Ｌｕｃを、ＣｐＧ−ＯＤＮ（１６６８、２μＭ；ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＴＧＣＴ、配列番号１２）、ＧｐＣ−ＯＤＮ（１６６８−ＧＣ、２μＭ；ＴＣＣＡＴＧＡＧＣＴＴＣＣＴＧＡＴＧＣＴ、配列番号１３）、Ｍｅ−ＣｐＧ−ＯＤＮ（メチル化１６６８、２μＭ；ＴＣＣＡＴＧＡＺＧＴＴＣＣＴＧＡＴＧＣＴ、Ｚ＝５−メチルシチジン、配列番号１４）、ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）または培地を用いて刺激し、ＮＦ−κＢ活性化をモニターすることにより測定した（図１４）。同様の結果が、安定クローン２９３−ｍＴＬＲ９を用いてＩＬ−８産生を使用して得られた。結果は、少なくとも２つの独立実験を代表する。これらの結果は、ＣｐＧ−ＤＮＡ非応答性細胞株が、ＴＬＲ９により安定に遺伝的に相補されて、モチーフ特異的様式でＣｐＧ−ＤＮＡに対して応答性になり得ることを示す。これらの結果を、複数の種においてＴＬＲ９により駆動される先天性免疫応答について最適なリガンドのスクリーニングのために使用し得る。
【０４０７】
（実施例１０．ヒトＴＬＲ７のクローニング方法）
ＧｅｎＢａｎｋデータベース中の２つの登録番号ＡＦ２４５７０２およびＡＦ２４０４６７は、ヒトＴＬＲ７についてのＤＮＡ配列を記載する。ヒトＴＬＲ７についての発現ベクターを作製するために、ヒトＴＬＲ７  ｃＤＮＡを、ヒト末梢単核血球（ＰＢＭＣ）から生成したｃＤＮＡから、プライマー５’−ＣＡＣＣＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＴＧＣＴＣＴＣＴＴＣ−３’（配列番号１５）および５’−ＧＣＴＡＧＡＣＣＧＴＴＴＣＣＴＴＧＡＡＣＡＣＣＴＧ−３’（配列番号１６）を使用することにより増幅した。そのフラグメントを、ｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ）中にクローニングし、制限酵素ＮｏｔＩを用いて切断し、そしてＮｏｔＩ消化ｐＣＤＮＡ３．１発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に連結した。その挿入物を完全に配列決定し、タンパク質へと翻訳した。ｈＴＬＲ７についてのｃＤＮＡ配列を、配列番号１７として提供する。そのオープンリーディングフレームは、塩基１２４にて開始し、塩基３２７３にて終了し、１０４９アミノ酸（配列番号１８、表６）のタンパク質をコードする。
【０４０８】
クローン化したｈＴＬＲ７  ｃＤＮＡのタンパク質配列は、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＦ２４０４６７の下に記載される配列と一致する。ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＦ２４５７０２の下に寄託された配列は、７２５位（Ｌ→Ｈ）および７３８位（Ｌ→Ｐ）に２つのアミノ酸変化を含む。
【０４０９】
（実施例１１．マウスＴＬＲ７のクローニング方法）
ｔｆａｓｔａを使用してマウスＥＳＴデータベースとヒトＴＬＲ７タンパク質配列とをアライメントすると、マウスＥＳＴ配列ＢＢ１１６１６３、ＡＡ２６６７４４、ＢＢ２１０７８０およびＡＡ２７６８７９との４つのヒットを生じた。マウスＴＬＲ７  ｃＤＮＡの５’末端および３’末端を増幅するためのＲＡＣＥ−ＰＣＲにおける使用のために、ＡＡ２６６７４４配列に結合する２つのプライマーを設計した。このＲＡＣＥ  ＰＣＲのために使用したライブラリーは、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから市販されるマウス脾臓ｍａｒａｔｈｏｎ−ｒｅａｄｙ  ｃＤＮＡであった。この方法により得た長さ３０００ｂｐの５’フラグメントを、Ｐｒｏｍｅｇａ  ｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙベクター中にクローニングした。５’末端の配列決定の後、さらなるプライマーを、完全マウスＴＬＲ７  ｃＤＮＡの増幅のために設計した。その５’末端のためのプライマーを、５’ＲＡＣＥ産物の配列から得、一方、その３’末端のためのプライマーを、マウスＥＳＴ配列ａａ２６６７４４から選択した。
【０４１０】
３回の独立したＰＣＲ反応を、マウスマクロファージＲＡＷ２６４．７（ＡＴＣＣ  ＴＩＢ−７１）ｃＤＮＡをテンプレートとして使用し、プライマー５’−ＣＴＣＣＴＣＣＡＣＣＡＧＡＣＣＴＣＴＴＧＡＴＴＣＣ−３’（配列番号１９）および５’−ＣＡＡＧＧＣＡＴＧＴＣＣＴＡＧＧＴＧＧＴＧＡＣＡＴＴＣ−３’（配列番号２０）を用いて始動した。生じた増幅産物を、ｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙベクター中にクローニングし、完全に配列決定した（配列番号２１）。ｍＴＬＲ７のオープンリーディングフレームは、塩基４９にて開始し、塩基３２０１にて終了し、１０５０アミノ酸（配列番号２２）のタンパク質をコードする。マウスＴＬＲ７  ｃＤＮＡのための発現ベクターを作製するために、ｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙベクター＋ｍＴＬＲ７挿入物をＮｏｔＩで切断し、そのフラグメントを単離し、そしてＮｏｔＩ消化したｐＣＤＮＡ３．１発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に連結した。
【０４１１】
（実施例１２．ヒトＴＬＲ８のクローニング方法）
ＧｅｎＢａｎｋデータベース中の２つの登録番号ＡＦ２４５７０３およびＡＦ２４６９７１は、ヒトＴＬＲ８についてのＤＮＡ配列を記載する。ヒトＴＬＲ８についての発現ベクターを作製するために、ヒトＴＬＲ８  ｃＤＮＡを、ヒト末梢単核血球（ＰＢＭＣ）から生成したｃＤＮＡから、プライマー５’−ＣＴＧＣＧＣＴＧＣＴＧＣＡＡＧＴＴＡＣＧＧＡＡＴＧ−３’（配列番号２３）および５’−ＧＣＧＣＧＡＡＡＴＣＡＴＧＡＣＴＴＡＡＣＧＴＣＡＧ−３’（配列番号２４）を使用することにより増幅した。そのフラグメントを、ｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ）中にクローニングし、制限酵素ＮｏｔＩを用いて切断し、そしてＮｏｔＩ消化ｐＣＤＮＡ３．１発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に連結した。その挿入物を完全に配列決定し、タンパク質へと翻訳した。ｈＴＬＲ８についてのｃＤＮＡ配列を、配列番号２５として提供する。そのオープンリーディングフレームは、塩基８３にて開始し、塩基３２０８にて終了し、１０４１アミノ酸（配列番号２６）のタンパク質をコードする。
【０４１２】
クローン化したｈＴＬＲ８  ｃＤＮＡのタンパク質配列は、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＦ２４５７０３の下に記載される配列と一致する。ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＦ２４６９７１の下に寄託された配列は、Ｎ末端に１５アミノ酸（ＭＫＥＳＳＬＱＮＳＳＣＳＬＧＫＥＴＫＫ；配列番号２７）の挿入を含み、２１７位（Ｐ→Ｓ）、２６６位（Ｌ→Ｐ）および８６７位（Ｖ→Ｉ）に３つの単一アミノ酸変化を含む。
【０４１３】
（実施例１３．マウスＴＬＲ８のクローニング方法）
ｔｆａｓｔａを使用してマウスＥＳＴデータベースとヒトＴＬＲ８タンパク質配列とをアライメントすると、マウスＥＳＴ配列ＢＦ１３５６５６との１つのヒットを生じた。マウスＴＬＲ８  ｃＤＮＡの５’末端および３’末端を増幅するためのＲＡＣＥ−ＰＣＲにおける使用のために、ＢＦ１３５６５６配列に結合する２つのプライマーを設計した。このＲＡＣＥ  ＰＣＲのために使用したライブラリーは、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから市販されるマウス脾臓ｍａｒａｔｈｏｎ−ｒｅａｄｙ  ｃＤＮＡであった。この方法により得た長さ２９００ｂｐの５’フラグメントおよび長さ２９００ｂｐの３’フラグメントを、Ｐｒｏｍｅｇａ  ｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙベクター中にクローニングした。各フラグメントの５’末端および３’末端の配列決定の後、ｍＴＬＲ８の部分配列を取得し、それにより、完全マウスＴＬＲ８  ｃＤＮＡの増幅のためのプライマー設計が可能になった。
【０４１４】
３回の独立したＰＣＲ反応を、プライマー５’−ＧＡＧＡＧＡＡＡＣＡＡＡＣＧＴＴＴＴＡＣＣＴＴＣ−３’（配列番号２８）および５’−ＧＡＴＧＧＣＡＧＡＧＴＣＧＴＧＡＣＴＴＣＣＣ−３’（配列番号２９）を用い、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから得たマウス脾臓ｃＤＮＡをテンプレートとして使用して始動した。生じた増幅産物を、ｐＧＥＭ−Ｔ  Ｅａｓｙベクター中にクローニングし、完全に配列決定し、タンパク質へと翻訳し、ヒトＴＬＲ８タンパク質配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＦ２４５７０３）とアライメントした。ｍＴＬＲ８についてのｃＤＮＡ配列を、配列番号３０として提供される。ＴＬＲ８のオープンリーディングフレームは、塩基５９にて開始し、塩基３１５７にて終了し、１０３２アミノ酸（配列番号３１）のタンパク質をコードする。マウスＴＬＲ８  ｃＤＮＡのための発現ベクターを作製するために、ｍＴＬＲ８挿入物を含むｐＧＥＭ−Ｔ  ＥａｓｙベクターをＮｏｔＩで切断し、そのフラグメントを単離し、そしてＮｏｔＩ消化したｐＣＤＮＡ３．１発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に連結した。
【０４１５】
（実施例１４．ＴＬＲ８を発現する一過性トランスフェクタントおよびＴＬＲ７を発現する一過性トランスフェクタント）
クローン化したヒトＴＬＲ７  ｃＤＮＡおよびヒトＴＬＲ８  ｃＤＮＡを、ＮｏｔＩ部位を使用して、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから得た発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（−）中にクローニングした。「機能獲得」アッセイを使用して、ｈＴＬＲ７発現ベクターおよびｈＴＬＲ８発現ベクターを、リン酸カルシウム法を使用して、ヒト２９３線維芽細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ−１５７３）中で一過性発現させた。ＣｐＧ−ＯＤＮ（２００６または１６６８、２μＭ）またはＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）による刺激後のＩＬ−８産生によって、活性化をモニターした。使用したどの刺激も、ｈＴＬＲ７またはｈＴＬＲ８のいずれかでトランスフェクトした２９３細胞を活性化しなかった。
【０４１６】
（実施例１５．ＣｐＧ  ＯＤＮおよびＲ−８４８のインビボ比較）
ＣｐＧ  ＯＤＮ（例えば、＃７９０９）とイミダゾキノリン化合物（例えば、Ｒ−８４８）とを、抗原特異的免疫応答を増強する能力について比較した。イミダゾキノリン化合物であるＩｍｉｑｕｉｍｏｄ（Ｒ−８４７）およびＲｅｓｉｑｕｉｍｏｄ（Ｒ−８４８）は、局所的に活性な免疫応答改変因子であることが示され、そして培養ヒト血液単核細胞におけるＩＦＮ−α、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１２の産生を誘導することが示された。これらはまた、抗ウイルス特性および抗腫瘍特性の両方を保有することも示された。Ｖａｓｉｌａｋｏｓら（２０００）による最近の研究は、Ｒ−８４８が強力なＴｈ１偏向アジュバントであること、そしてＣｐＧ  ＯＤＮと同様に、Ｒ−８４８がミョウバンにより確立されたＴｈ２偏向免疫応答を再指向し得ることを示した。この研究は、ＣｐＧ  ＯＤＮ（７９０９）およびＲ−８４８を、ワクチンアジュバントとして可能な使用について比較することを目的とし、そしてこの２つのアジュバントを比較することによってより強力な免疫応答を得ることが可能な否かを決定するためであった。この研究は、モデル抗原としてＨＢｓＡｇを使用し、抗原特異的体液（すなわち、抗体）媒介性免疫応答および抗原特異的細胞媒介（すなわち、ＣＴＬ、ＩＦＮ−γ分泌）免疫応答の両方の増強を評価した。
【０４１７】
（核酸およびイミダゾキノリン化合物）  ＣｐＧ  ＯＤＮ  ７９０９（ＧＭＰ量）および非ＣｐＧコントロールＯＤＮ２１３７を使用した。全てのＯＤＮを、ｐＨ８．０にて内毒素を含まない滅菌ＴＥ（ＯｍｎｉＰｅｒ（登録商標）；ＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ）中に再懸濁し、そして無菌条件下で貯蔵および取扱いをして、微生物および内毒素の両方の混入を防いだ。Ｒ−８４８は、ＧＬ合成（Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）により製造された。このＲ−８４８を、１０％  ＤＭＳＯを含むＴＥ緩衝液（ｐＨ８．０）中に溶解した。アッセイ用のＯＤＮおよびＲ−８４８の希釈は、ｐＨ７．２にて内毒素を含まない滅菌したＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｌｏｉｓ，ＭＯ）中で実行した。
【０４１８】
（動物）  雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（６〜８週齢）を全ての実験のために使用した。動物は、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｃａｎａｄａ（Ｑｕｅｂｅｃ，Ｃａｎａｄａ）から購入した。その動物を、Ｏｔｔａｗａ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃｉｖｉｃ  Ｓｉｔｅの動物管理施設の微小単離器中に収容した。
【０４１９】
（マウスの免疫）  ＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝１０匹／群）に、１μｇのＨＢｓＡｇサブタイプアジュバント（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｎｚｙｍｅｓ，ＣＡ）単独で免疫したか、またはＣｐＧ  ＯＤＮ  ７９０９（１０μｇ）、コントロールＯＤＮ  ２１３７（１０μｇ）、Ｒ−８４８（０．１μｇ、１．０μｇ、１０μｇまたは２０μｇ）もしくはＲ−８４８（２０μｇ）＋ＯＤＮ（１０μｇ）の組み合わせと組み合わせて、免疫した。一次免疫の４週間後に動物から採血し、そしてブーストした。この時点で、各グループからの５匹の動物を安楽死させ、ＣＴＬアッセイのために脾臓を取り出した。ブーストの２週間後にもまた、動物から採血した。
【０４２０】
（抗体応答の測定）  ＨＢｓＡｇ（抗ＨＢ）に特異的な抗体（全ＩｇＧ、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａ）を検出し、終点希釈ＥＬＩＳＡアッセイにより定量した。この終点希釈ＥＬＩＳＡアッセイは、個々の動物由来のサンプルに対して三連で実施した。Ｄａｖｉｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６０：８７０（１９９８）。終点力価を、カットオフ値０．０５の非免疫血漿の吸光度値（ＯＤ４５０）より２倍大きな吸光度値（ＯＤ４５０）を生じる最も高い血漿希釈として定義した。これらを、群平均力価±標準平均誤差として報告した。
【０４２１】
（ＣＴＬ応答の評価）  ＣＴＬアッセイを、以前に記載されたように実施した。ＭｃＣｌｕｓｋｉｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：４４６３（１９９８）。簡単に述べると、脾臓を免疫後４週間目に取り出した。その脾臓を、１０％胎仔ウシ血清（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）とペニシリン−ストレプトマイシン溶液（それぞれ最終濃度１０００Ｕ／ｍｌおよび１ｍｇ／ｍｌ；Ｓｉｇｍａ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＵＫ）と５×１０−５Ｍ  β−メルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ）（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ＲＰＭＩ  １６４０）とを補充したＲＰＭＩ  １６４０（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）組織培養培地中にホモジナイズし、単一細胞懸濁物にした。脾細胞懸濁物（３×１０６細胞／ｍｌ）中のＨＢｓＡｇ特異的リンパ球を、ＨＢｓＡｇを発現するマウス細胞株（ｐ８１５−Ｓ）とともにインキュベートすることによって５日間再刺激した。再刺激後、ＨＢｓＡｇを発現する細胞をその脾細胞が死滅させる能力を、５１Ｃｒ放出アッセイを使用することによって測定した。その結果を、種々のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比での特異的溶解％として表す。
【０４２２】
（サイトカイン分泌プロフィール）  サイトカイン分泌プロフィールを、免疫した動物からの脾細胞を抗原で再刺激した後に測定した。脾細胞懸濁物を調製し、そしてそれを、２％正常マウス血清（Ｃｅｄａｒｌａｎｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）とペニシリン−ストレプトマイシン溶液（それぞれ最終濃度１０００Ｕ／ｍｌおよび１ｍｇ／ｍｌ；Ｓｉｇｍａ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＵＫ）と５×１０−５Ｍ  β−メルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ）（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ＲＰＭＩ  １６４０）とを補充したＲＰＭＩ  １６４０（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）組織培養培地中に、最終濃度５×１０６細胞／ｍｌに調整した。脾細胞懸濁物を、９６ウェルＵ底組織培養プレート（１００μｌ／ウェル）上に、完全ＲＰＭＩ  １６４０中にて適切な濃度まで希釈した各刺激物質１００μｌとともにプレーティングした。使用した刺激物質は、５μｇ／ｍｌおよび２．５μｇ／ｍｌのＨＢｓＡｇであった。コンカナバリンＡ（１０μｇ／ｍｌ，Ｓｉｇｍａ）をポジティブコントロールとして使用し、培地単独を用いて培養した細胞を、ネガティブコントロールとして使用した。各脾細胞サンプルを三連でプレーティングし、そしてその細胞を、３７℃にて４８時間および７２時間、加湿した５％ＣＯ２インキュベーター中でインキュベートした。そのインキュベーション時間の最後に、９６ウェルプレートを１２００ｒｐｍにて５分間遠心分離し、そして細胞上清を収集し、アッセイするまで−８０℃で保存した。市販のアッセイキット（マウスＩＬ−４  ＯｐｔＥＩＡおよびマウスＩＦＮ−γ  ＯｐｔＥＩＡ；ＰｈａＭｉｎｇｅｎ，Ｍｉｓｓｉｓｓａｕｇａ，ＯＮ）を製造業者の指示に従って使用して、４８時間目（ＩＬ−４）および７２時間目（ＩＦＮ−γ）にて得た培養上清中のサイトカインレベルをアッセイした。
【０４２３】
（統計分析）  ＩｎＳｔａｔプログラム（Ｇｒａｐｈ，ＰＡＤ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）を使用して統計分析を実施した。群間の統計的差異を、生データまたは変換済みデータ（異分散集団について、ｌｏｇ１０）に関する、スチューデントｔ検定（２つの群について）によってか、または１因子ＡＮＯＶＡの後のＴｕｒｋｅｙ検定（３つ以上の群について）によって、決定した。
【０４２４】
（結果）
ＣｐＧ  ＯＤＮおよびＲ−８４８を、インビボで抗原（例えば、ＨｂｓＡｇ）に対する細胞傷害性Ｔリンパ球応答を増強する能力について、一緒にかまたは個々にかのいずれかで試験した。ＣＴＬ活性を、プライミングの４週間後に測定した。Ｒ−８４８は、抗原単独を超えるＣＴＬ応答を増強し得たが、Ｒ−８４８は、ＣｐＧ  ＯＤＮ（例えば、＃７９０９）程度には有効ではなかった。Ｒ−８４８とＣｐＧ  ＯＤＮとの一緒の組み合わせは、少なくとも相加効果を生じた。抗原単独を超えるＣＴＬ応答の増強が、コントロールＯＤＮ単独またはコントロールＯＤＮとＲ−８４８とを使用して観察された。（図１５を参照のこと）。図１５のデータを、図１６においてエフェクター対標的比の関数としてプロットする。
【０４２５】
ＣｐＧ  ＯＤＮおよびＲ−８４８を、インビボで抗原（例えば、ＨｂｓＡｇ）に対する抗体応答を増強する能力について、一緒にかまたは個々にかのいずれかで試験した。抗ＨｂｓＡｇ抗体レベルを、プライミングの４週間後に測定した。ＣｐＧ  ＯＤＮおよびＲ−８４８またはＣｐＧ  ＯＤＮのいずれかの存在下での抗体応答は、同様であった。
【０４２６】
図１８において、抗体アイソタイプの分布が示される。抗原単独はより高いＩｇＧ１抗体レベルを生成した（コントロールＯＤＮ＋抗原が同様に生成した）一方で、Ｒ−８４８が存在するか否かに関わらず、ＣｐＧ  ＯＤＮはより高いＩｇＧ２ａ抗体レベルを生成した。Ｒ−８４８は、抗原単独応答と比較して、ＩｇＧ２ａレベルを上昇させＩｇＧ１レベルを減少させるようであった。より高いＩｇＧ２Ａ／ＩｇＧ１比が、より高用量のＲ−８４８を使用して（例えば、０．０１μｇと０．１μｇと１０．０μｇとを比較して）、プライミングの６週間後に観察された（データは示さず）。
【０４２７】
免疫した動物由来の脾細胞を、ＩＦＮ−γ（Ｔｈ１様）およびＩＬ−４（Ｔｈ２様）サイトカインの抗原特異的分泌についてアッセイした。ＩＬ−４は、どの脾細胞培養物からも検出されなかった。しかし、ＣｐＧ  ＯＤＮ  ７９０９をアジュバントとして使用してＨＢｓＡｇで免疫した動物からの脾細胞は、高レベルのＩＦＮ−γ分泌を誘導した（データは示さず）。
【０４２８】
図１９において、抗原（例えば、ＨｂｓＡｇ）に対する抗体応答の増強に対するＲ−８４８、モンタニドＩＳＡ  ７２０およびＣｐＧ  ＯＤＮの効果を、比較する。６〜８週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスを、１μｇ  ＨｂｓＡｇ単独でか、または漸増用量のＲ−８４８、１０μｇ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、７０：３０（ｖ／ｖ）の抗原：モンタニドＩＳＡ  ７２０、モンダニドおよびＣｐＧ  ＯＤＮ、またはモンタニドおよびＲ−８４８と組み合わせて免疫した。抗ＨｂｓＡｇレベルを、プライミングの４週間後およびブーストの２週間後（すなわち、プライミングの６週間後）に測定した。モンタニドＩＳＡ  ７２０は、ＣｐＧ  ＯＤＮ効果を増強しないようであった。Ｒ−８４８の存在は、モンタニドＩＳＡ  ７２０応答を増強しないようであった。
【０４２９】
図２０において、抗原（例えば、ＨｂｓＡｇ）に対するＣＴＬ応答の増強に対するＲ−８４８、モンタニドＩＳＡ７２０およびＣｐＧ  ＯＤＮの効果を、比較する。６〜８週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスを、１μｇ  ＨｂｓＡｇ単独でか、または漸増用量のＲ−８４８、１０μｇ  ＣｐＧ  ＯＤＮ、７０：３０（ｖ／ｖ）の抗原：モンタニドＩＳＡ  ７２０、モンダニドおよびＣｐＧ  ＯＤＮ、またはモンタニドおよびＲ−８４８と組み合わせて免疫した。ＣＴＬレベルを、プライミングの４週間後に測定した。モンタニドＩＳＡ  ７２０応答が、Ｒ−８４８の存在下で減少された。モンタニドＩＳＡ  ７２０は、ＣｐＧ  ＯＤＮ応答をわずかに増強した。
【０４３０】
最近の研究により、イミダゾキノリン化合物であるＲ−８４８およびＲ−８４７は、Ｔｏｌｌ様レセプター７および８（ＴＬＲ７およびＴＬＲ８）を介して免疫系の細胞を活性化することが示された。Ｊｕｎｋら、Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３：４９９（２００２）。ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＴＬＲ９を介して作用することが示されている。Ｔａｋｅｓｈｉｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：３５５５（２００１）；Ｃｈｕａｎｇら、Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ  ｂｉｏｌ  ７１：５３８（２００２）。ヒトにおいて、ＴＬＲ７およびＴＬＲ９は、プラズマ細胞様樹状細胞（ＰＤＣ）上に局在化され、一方ＴＬＲ８は、単球由来樹状細胞（ＭＤＣ）上に局在化される。
【０４３１】
ＴＬＲ８が欠損していると報告されたマウスにおいて、ＴＬＲ７およびＴＬＲ９の両方が、同じ細胞型上に同時局在化する。これは、Ｒ−８４８およびＣｐＧ  ＯＤＮがマウス系において組み合わせアジュバントとして使用された場合に観察される相加効果を説明し得る。Ｒ−８４８およびＣｐＧ  ＯＤＮが組み合わせアジュバントとして使用された場合に、ヒトにおいて、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８およびＴＬＲ９の機能性が原因で、相乗的活性が予期される。さらに、Ｒ−８４８は、ヒトにおいてより強力なアジュバントであり得る。なぜなら、ＴＬＲ７およびＴＬＲ８の両方が、ヒト細胞において完全に機能性であるからである。
【０４３２】
（等価物）
上記の記載は、当業者が本発明を実施可能であるに十分であると考えられる。本発明は、提供される実施例によって範囲が限定されない。なぜなら、本実施例は、本発明の１局面の一例示として意図され、機能的に等価な他の実施形態が、本発明の範囲内にある。本明細書中に示されそして記載されるものに加えて本発明の種々の改変が、上記記載から当業者には明らかになり、そしてそれらの改変は、添付の特許請求の範囲内に入る。本発明の利点および目的は、本発明の各実施形態により必ずしも包含されない。
【０４３３】
本願において記載される全ての参考文献、特許および特許刊行物は、その全体が本明細書により参考として援用される。
【図面の簡単な説明】
【０４３４】
【図１】図１は、ＣｐＧ  ＯＤＮ  ２００６によるが、Ｒ−８４８にはよらない、ＮＦ−κＢのｈＴＬＲ９媒介活性化を示す棒グラフである。
【図２Ａ】図２Ａは、種々のｈＴＬＲ発現ベクターで一過性にトランスフェクトした２９３Ｔ細胞の、Ｒ−８４８、ＬＰＳ、コントロールＯＤＮ  ８９５４、ＩＬ−１、およびＣｐＧ  ＯＤＮ  ２００６への曝露に応じての刺激指数を示す棒グラフである。細胞をトランスフェクションの２４時間後に刺激し、そして１６時間後にルシフェラーゼ活性についてアッセイした。
【図２Ｂ】図２Ｂは、種々のＴＬＲ発現構築物で一過性にトランスフェクトした２９３Ｔ細胞のＲ−８４８の用量依存性応答を示す棒グラフである。
【図３Ａ】図３Ａは、ＴＬＲ９と、ｈＴＬＲ７またはｈＴＬＲ８のいずれかとを同時発現する２９３−ＴＬＲ９−Ｌｕｃ細胞のＲ−８４８に対する応答を示す棒グラフである。
【図３Ｂ】図３Ｂは、ｈＴＬＲ９と、ｈＴＬＲ７またはｈＴＬＲ８のいずれかとを同時発現する２９３−ＴＬＲ９−ＬＵＣ細胞の、個別または一緒のいずれかのＲ−８４８およびＣｐＧ  ＯＤＮに対する応答を示す棒グラフである。
【図４】図４は、異なるＴＬＲ構築物で一過性にトランスフェクトした２９３Ｔ細胞中でのＩＬ−８産生を示す棒グラフである。
【図５Ａ】図５Ａは、ＣｐＧ  ＯＤＮまたはＲ−８４８とともにインキュベートした際の、ヒトＰＢＭＣによるＩＦＮ−α分泌を示す棒グラフである。
【図５Ｂ】図５Ｂは、個別かまたは一緒のいずれかのＣｐＧ  ＯＤＮおよびＲ−８４８とともにインキュベートした後のヒトＰＢＭＣによるＩＦＮ−α分泌を示すグラフである。
【図６Ａ】図６Ａは、ＣｐＧ  ＯＤＮまたはＲ−８４８とともにインキュベートした際のヒトＰＢＭＣによるＩＰ−１０分泌を示す棒グラフである。
【図６Ｂ】図６Ｂは、個別かまたは一緒のいずれかのＣｐＧ  ＯＤＮおよびＲ−８４８とともにインキュベートした後のヒトＰＢＭＣによるＩＰ−１０分泌を示すグラフである。
【図７Ａ】図７Ａは、ＣｐＧ  ＯＤＮまたはＲ−８４８とともにインキュベートした際のヒトＰＢＭＣによるＴＮＦ−α分泌を示す棒グラフである。
【図７Ｂ】図７Ｂは、個別かまたは一緒のいずれかのＣｐＧ  ＯＤＮおよびＲ−８４８とともにインキュベートした後のヒトＰＢＭＣによるＴＮＦ−α分泌を示すグラフである。
【図８Ａ】図８Ａは、ＣｐＧ  ＯＤＮまたはＲ−８４８とともにインキュベートした際のヒトＰＢＭＣによるＩＬ−１０分泌を示す棒グラフである。
【図８Ｂ】図８Ｂは、個別かまたは一緒のいずれかのＣｐＧ  ＯＤＮおよびＲ−８４８とともにインキュベートした後のヒトＰＢＭＣによるＩＰ−１０分泌を示すグラフである。
【図９】図９は、ヒトＰＢＭＣによるＩＬ−６分泌が、クロロキンによって部分的に阻害され得ることを示す棒グラフである。
【図１０Ａ】図１０は、ヒトＴＬＲ９でトランスフェクトされた２９３線維芽細胞によって、種々の刺激（ＣｐＧ−ＯＤＮ、ＧｐＣ−ＯＤＮ、ＬＰＳ、および培地を含む）への曝露に応じて産生される、（Ａ）ＮＦ−κＢの誘導、および（Ｂ）ＩＬ−８の量を示す一対の棒グラフである。
【図１０Ｂ】図１０は、ヒトＴＬＲ９でトランスフェクトされた２９３線維芽細胞によって、種々の刺激（ＣｐＧ−ＯＤＮ、ＧｐＣ−ＯＤＮ、ＬＰＳ、および培地を含む）への曝露に応じて産生される、（Ａ）ＮＦ−κＢの誘導、および（Ｂ）ＩＬ−８の量を示す一対の棒グラフである。
【図１１】図１１は、マウスＴＬＲ９でトランスフェクトした２９３線維芽細胞によって、種々の刺激（ＣｐＧ−ＯＤＮ、メチル化ＣｐＧ−ＯＤＮ（Ｍｅ−ＣｐＧ−ＯＤＮ）、ＧｐＣ−ＯＤＮ、ＬＰＳ、および培地を含む）への曝露に応じて産生されるＮＦ−κＢの誘導を示す、棒グラフである。
【図１２】図１２は、トランスフェクトされていないコントロール２９３細胞、ｍＴＬＲ９でトランスフェクトされた２９３細胞（２９３−ｍＴＬＲ９）、およびｈＴＬＲ９でトランスフェクトされた２９３細胞（２９３−ｈＴＬＲ９）における、マウスのＴＬＲ９（ｍＴＬＲ９）、ヒトＴＬＲ９（ｈＴＬＲ９）、およびグリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）についての逆転写酵素−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイの結果を示す、一連のゲル画像である。
【図１３】図１３は、安定にトランスフェクトされた２９３−ｈＴＬＲ９細胞における、種々の刺激によるＮＦ−κＢ−ｌｕｃの誘導程度を示すグラフである。
【図１４】図１４は、安定にトランスフェクトされた２９３−ｍＴＬＲ９細胞における、種々の刺激によるＮＦ−κＢ−ｌｕｃの誘導程度を示すグラフである。
【図１５】図１５は、ＣｐＧ核酸およびＲ−８４８が、マウスモデルにおいて抗原（例えば、ＨＢｓＡｇ）に対する細胞溶解性Ｔリンパ球応答を増強する能力を比較する棒グラフである。
【図１６】図１６は、ＣｐＧ核酸およびＲ−８４８が、マウスモデルにおいて抗原（例えば、ＨＢｓＡｇ）に対する細胞溶解性Ｔリンパ球応答を増強する能力を、エフェクター対標識の比の関数として示すグラフである。
【図１７】図１７は、ＣｐＧ核酸およびＲ−８４８が、マウスモデルにおいて抗原（例えば、ＨＢｓＡｇ）に対する抗体応答を増強する能力を比較する棒グラフである。
【図１８】図１８は、ＣｐＧ核酸およびＲ−８４８が、マウスモデルにおいて抗原（例えば、ＨＢｓＡｇ）に対するＩｇＧ１抗体応答およびＩｇＧ２ａ抗体応答を増強する能力を比較する棒グラフである。
【図１９】図１９は、ＣｐＧ核酸、Ｒ−８４８およびＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ７２０が、マウスモデルにおいて抗原（例えば、ＨＢｓＡｇ）に対する抗体応答を増強する能力を比較する棒グラフである。
【図２０】図２０は、ＣｐＧ核酸、Ｒ−８４８およびＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ７２０が、マウスモデルにおいて抗原（例えば、ＨＢｓＡｇ）に対する細胞溶解性Ｔリンパ球応答を増強する能力を比較する棒グラフである。
【配列表】
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【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図６Ａ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【国際調査報告】
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