(57)【要約】高いタンパク質含有量を有するＢｏｗｍａｎ−Ｂｉｒｋインヒビタ−濃縮物（ＢＢＩＣ）。限外ろ過法を用い、酸抽出法もしくはアルコ−ル抽出法またはアセトン沈殿法を用いずに、ありふれたダイズからこのＢＢＩＣを作製する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
無水ベ−スで約６５重量％を超えるダイズタンパク質および少なくとも１１０ｍｇ／ｇの濃度のキモトリプシンインヒビタ−を有するＢｏｗｍａｎ−Ｂｉｒｋインヒビタ−産物。
【請求項２】
アセトンを含まない、請求項１に記載の産物。
【請求項３】
アルコ−ルでは抽出されていない、請求項１に記載の産物。
【請求項４】
無水ベ−スで約７０〜８５重量％のダイズタンパク質を有する、請求項１に記載の産物。
【請求項５】
約１５０ｍｇ／ｇを超える濃度のキモトリプシンインヒビタ−を有する、請求項１に記載の産物。
【請求項６】
少なくとも約１９重量％のルナシンを含む請求項１に記載の産物。
【請求項７】
請求項１の産物から作られる医薬組成物。
【請求項８】
請求項１の産物から作られる栄養補助食品。
【請求項９】
請求項１の産物から得られるルナシンの供給源。
【請求項１０】
（ａ）十分に脱脂されたダイズ原料のスラリ−を供給する工程
（ｂ）該スラリ−から不溶性物質を除去して溶液を作製する工程、および、
（ｃ）該溶液を限外ろ過して、無水ベ−スで約６５重量％を超えるタンパク質含有量および少なくとも１１０ｍｇ／ｇの濃度のキモトリプシンインヒビタ−を有する、高タンパク質のＢｏｗｍａｎ−Ｂｉｒｋインヒビタ−産物を製造する工程、
を含む、アルコ−ル抽出を行うことなく、高タンパク質のＢｏｗｍａｎ−Ｂｉｒｋインヒビタ−産物を製造するための方法。
【請求項１１】
さらに、工程（ｃ）の産物を乾燥させる工程を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１０の産物から作られる医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１０の産物から作られる栄養補助食品。
【請求項１４】
請求項１０の産物から得られるルナシンの供給源。
【請求項１５】
（ａ）少なくとも４５重量％のタンパク質、約１重量％未満の脂質、および少なくとも約８５％のタンパク質分散性指数を有するダイズ原料を供給する工程
（ｂ）水を用いて該ダイズ原料をスラリ−状にし、固体の含有量が約５〜１５重量％のスラリ−を作製する工程
（ｃ）スラリ−のｐＨを約７〜７．５に調整する工程
（ｅ）該ｐＨ調整されたスラリ−を遠心分離に付して、それに由来する溶液を得る工程
（ｆ）該溶液を限外ろ過して、総乾燥物の約７０〜８５重量％のタンパク質および約１５０ｍｇ／ｇを超える濃度のキモトリプシンインヒビタ−を有する保持液を作製する工程
（ｇ）該限外ろ過された溶液を低温殺菌に付する工程、および
（ｈ）該低温殺菌された溶液を噴霧乾燥に付して、Ｂｏｗｍａｎ−Ｂｉｒｋインヒビタ−濃縮産物を作製する工程、
を含む、酸抽出法およびアルコ−ル抽出法ならびにアセトン処理法を用いることなく、Ｂｏｗｍａｎ−Ｂｉｒｋインヒビタ−濃縮産物を製造するための方法。
【請求項１６】
請求項１５の産物から作られる医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１５の産物から作られる栄養補助食品。
【請求項１８】
乾燥物の約６５重量％を超えるダイズタンパク質および少なくとも１１０ｍｇ／ｇの濃度のキモトリプシンインヒビタ−を含むダイズタンパク質濃縮物。
【請求項１９】
さらに、少なくとも約８０％の窒素溶解率を有する、請求項１８に記載のダイズタンパク質濃縮物。
【請求項２０】
乾燥物の少なくとも約８０重量％のタンパク質を含む、請求項１８に記載のダイズタンパク質濃縮物。
【請求項２１】
少なくとも約１９重量％のルナシンを含む、請求項１８に記載のダイズタンパク質濃縮物。
【請求項２２】
少なくとも１５０ｍｇ／ｇの濃度のキモトリプシンインヒビタ−を含む、請求項２１に記載のダイズタンパク質濃縮物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高いタンパク質含有量を有するＢｏｗｍａｎ−Ｂｉｒｋインヒビタ−濃縮物（ＢＢＩＣ）に関する。酸抽出法もしくはアルコ−ル抽出法またはアセトン沈殿法を用いることなく、限外ろ過法を用いて、ありふれたダイズからＢＢＩＣを作る。
【背景技術】
【０００２】
ダイズタンパク質の利点は広範囲にわたって報告されている。先進国の全体において、コレステロ−ルは消費者の主要な関心事の一つである。植物性産物がコレステロ−ルを含まないことは、よく知られている。数十年間の栄養学の研究から、食事にダイズタンパク質を含めることによって、人の血清コレステロ−ル濃度を実際に低下させることが示されてきた。コレステロ−ルが多ければ多いほど、ダイズタンパク質はその濃度をより効率的に低下させる。
【０００３】
すべての穀物および豆類の中で、ダイズは最も高いタンパク質含有量を有する。特に、ダイズはその約４０重量％がタンパク質であり、それに対して他の豆類は２０〜３０重量％であり、そして穀物は約８〜１５重量％がタンパク質である。ダイズはさらに、その約２０重量％が油であり、そしてである残りの乾燥物のほとんどは糖質（３５重量％）である。（未加工の）湿潤ベ−スでは、ダイズはその約３５重量％がタンパク質、１７重量％が油、３１重量％が糖質であり、そして４．４重量％が灰分である。
【０００４】
ダイズにおいて、貯蔵タンパク質および脂質体の両方が、ダイズの食用とされる中身（子葉と呼ばれる）に含まれる。複合糖質（または食物繊維）はさらに、子葉の細胞壁の中に含まれる。（種皮と呼ばれる）細胞の外層は、ダイズの総重量の約８重量％を占める。未加工の種皮を除去した  だけのダイズは、品種にもよるが、約１８重量％が油、１５重量％が可溶性の糖質、１５重量％が不溶性の糖質、１４重量％が水分および灰分であり、３８重量％がタンパク質である。
【０００５】
加工時には、ダイズを色およびサイズについて注意深く選択する。次いで、このダイズを洗浄し、（種皮をより簡単に除去するために）適切な状態にし、そして砕き、種皮を除去し、そして延ばしてフレ−クとする。このフレ−クを油を除去する溶媒槽に入れる。溶媒を除去し、そしてフレ−クを乾燥させて、ほとんどのダイズタンパク質製品の基礎原料である脱脂ダイズフレ−クを作製する。多数の製品が販売されているのにも関わらず、わずかに三タイプのダイズタンパク質：粉末、単離物、および濃縮物しか存在しない。
【０００６】
ダイズ粉はダイズタンパク質の最も単純な形態であり、タンパク質含有量は約５０重量％である。脱脂フレ−クをただ単に粉砕してふるい分けることにより、ダイズ粉を生産する。この単純な加工は、ダイズの持つ特性の多くをダイズ粉に残すことができる。加工を行わないと、品質が極めて変化しやすいダイズ粉となってしまう。
【０００７】
それでもなお、ダイズ粉およびダイズの粗粉は広範に生産されており、そして多くの場合、強いにおいという特徴が問題とならないような焼いた食品、スナック食品およびペットフ−ドに使用されている。食感を出すように加工されたダイズ粉は、肉製品の食感をまねる、または強調するという初期の試みであった。食感を出すような加工はダイズ粉の組成を変えずに、においの特徴をわずかではあるが減少させる。これらの初期の応用例は、あまり高価ではない肉製品またはペットフ−ドである。
【０００８】
ダイズ濃縮物は、少なくとも６０重量％のタンパク質を有し、そして通常は約７０重量％のタンパク質を有する。ダイズ濃縮物および食感を出すように加工された濃縮物については、加工食品、肉、鳥、魚、穀物および酪農製品において、数え切れないほどの応用例が開発されてきた。
【０００９】
脱脂ダイズ粉から可溶性の糖質成分を除去することによって、ダイズタンパク質の濃縮物を作製する。アルコ−ル水溶液抽出法（６０〜８０％のエタノ−ル）または酸浸出法（等電ｐＨは４．５）は、最も一般的な糖質の除去方法である。しかしながら、アルコ−ル水溶液抽出法および酸浸出法の両方においては、すべてのタンパク質が基本的に不溶性になってしまう。酸浸出法による産物では、中和することによってタンパク質の溶解性が回復する可能性がある。
【００１０】
等電沈殿の前の（ｐＨ７〜１０でのアルカリ抽出による）可溶化と分離とを経て、脱脂フレ−クからタンパク質を取り出すような、標準的な化学的単離法により、単離物を生産する。その結果、単離物は、無水ベ−スでその９０重量％がタンパク質である。可溶性タンパク質のパ−センテ−ジが高く、かつにおいの特徴が弱い単離物を作製することも可能である。単離物は食物繊維を含まず、そして多くの場合はナトリウムを多く含むという特性を有し、この特性は、単離物の応用を制限する可能性がある。単離物は主に、乳児用人工乳および代用乳などの酪農製品代替物に応用されてきた。
【００１１】
ある特定の条件下で、Ｂｏｗｍａｎ−Ｂｉｒｋインヒビタ−濃縮物（ＢＢＩＣ）が細胞の悪性転換に対する阻害活性を示すことが明らかにされており、そしてその投与が様々な形態のガンに作用することが示されている。
【００１２】
後にＢｏｗｍａｎ−Ｂｉｒｋインヒビタ−（ＢＢＩ）と呼ばれる、Ｂｏｗｍａｎ（Ｂｏｗｍａｎ）（Ｐｒｏｃ． Ｓｏｃ． Ｅｘｐｄ． ｍｅｄ, ６３: ５４７（１９４６））およびＢｉｒｋら（Ｂｕｌｌ． Ｒｅｓ． Ｃｏｕｎｃｉｌ Ｉｓｒａｅｌ, Ｓｅｃ． Ａ １１: ４８（１９６２）およびＢｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ, ６７: ３２６（１９６３））によって説明された酵素インヒビタ−が、培養液内および実験動物内で、放射性物質によってまたは化学的に誘発される細胞の悪性転換を妨げるかまたはかなりの程度減少させることができることが示されている。
【００１３】
Ｙａｖｅｌｏｗら（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ, ＵＳＡ ８２: ５３９５〜５３９９（１９８５））は、アセトンで脱脂すると、ダイズの粗抽出物が、インビトロで細胞形質転換を効果的に妨害することを報告した。この粗抽出物の有効成分はＢＢＩである。これらの観察結果は、疫学的デ−タとともに、ＢＢＩが食事性抗発ガン物質、特に、結腸ガンに関する食事性抗発ガン物質と推定されることを示唆した。
【００１４】
ウィ−ド（Ｗｅｅｄ）ら（Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ, ６: １２３９〜１２４１（１９８５））は、ジメチルヒドラジン（ＤＭＨ）で処理したマウスの食餌にＢｏｗｍａｎ−Ｂｉｒｋプロテア−ゼインヒビタ−を含むダイズの抽出物を添加すると、結腸粘膜の腺腫様腫瘍を顕著に抑制したことを開示している。ヒトの結腸で生じる腫瘍に類似する結腸および直腸の腺ガンを誘発する発ガン性物質での処理によって、研究した種類の食品添加物が、望ましくない副作用を伴うことなくヒトの結腸ガンの進行に対していくらかの予防効果を付与する可能性が示唆されているので、マウスのＤＭＨ誘発性結腸ガンは、ヒトの疾患についての優れた動物モデルであると一般的にみなされている。ＢＢＩ抽出物とその調製方法は、Ｙａｖｅｌｏｗら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．, ４３: ２４５４〜２４５９（１９８３）； Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．, ＵＳＡ ８２: ５３９５〜５３９９（１９８５）およびＨｗａｎｇら、Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ, ４９５: ３６９〜３８２（１９７７）によって説明されている。
【００１５】
Ｍｅｓｓａｄｉら（ＪＮＣＬ ７６: ４４７〜４５２（１９８６））は、プロテア−ゼインヒビタ−ＢＢＩを含むダイズの抽出物が、ハムスタ−の頬袋における、７，１２−ジメチル−ベンズ［ａ］アントラセン（ＤＭＢＡ）に誘発される発ガンを抑制することを実証した。ハムスタ−の頬袋発ガン系を利用するこの口腔ガンのモデルは、ヒトの口腔ガン、扁平上皮ガンの最も一般的な形態と同じ組織病理、成長パタ−ン、および前ガン性病変を有する。この研究においては、ＢＢＩによって、ハムスタ−の頬袋の発ガンを阻害できることが示され、そして類似の様式で、ヒトの口腔ガンの発生がＢＢＩの影響を受ける可能性を示唆した。この研究では、ＢＢＩの調製品は、Ｙａｖｅｌｏｗら（Ｐｒｏｃ． Ｎａｄ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．, ＵＳＡ ８２: ５３９５〜５３９９（１９８５））によって記述されたようにして調製されたインヒビタ−の粗抽出物が使用された。
【００１６】
Ｂａｔｕｒａｙら（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ, ２: ２１〜３２（１９８６））は、ＢＢＩ調製品−ここではアセトンで脱脂したダイズの粗抽出物である−が、発ガン補助物質のピレンの増加の有無に関わらず、放射性物質によってまたは化学的に誘発される形質転換をインビトロで抑制することを開示している。Ｙａｖｅｌｏｗら（１９８５、上掲）は、純粋なＢＢＩまたはこれらの方法に基づいて調製されたＢＢＩ抽出物のいずれもが、Ｃ３Ｈ１０ＴＩ１２細胞における放射性物質によって誘発される形質転換を抑制することを示している。Ｋｅｎｎｅｄｙら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ'ｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ １９８４, ８１, １８２７〜３９は、純粋なＢＢＩまたはこれらの方法に従って調製されたＢＢＩ抽出物のいずれもが、ブル−ム症候群（高レベルの染色体異常によって、健常者よりも発病率が高くなる傾向があると考えられる患者の遺伝病）の患者の細胞内の染色体異常のレベルが減少することを報告している。さらに、その他の研究から、ダイズに由来するプロテア−ゼインヒビタ−類が、皮膚ガン、乳ガンおよび肝臓ガンの発生をインビボで抑制する効果を有する可能性があることが示唆されている。
【００１７】
Ａｎｔｉｃａｒｃｉｎｏｏｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ、Ｃｅｒｕｔｔｉら編（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｕｂ． Ｃｏ．）第２８５〜２９５頁（１９８７）において、Ｋｅｎｎｅｄｙらは、アセトンでダイズを脱脂して調製されるＢＢＩの粗抽出物を用いる様々な系において、ＢＢＩがガンの発生を抑制することを開示した。これらの結果から、極めて低濃度のＢＢＩタイプのプロテア−ゼインヒビタ−調製物が結腸ガンについての化学予防剤として有効であることが示唆された。潜在的な毒性の問題によりプロテア−ゼインヒビタ−を化学予防剤として用いることが困難であることを示唆する証拠は存在しなかった。
【００１８】
Ｓｔ． Ｃｌａｉｒら（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．, ５０: ５８０〜５８６（１９９０））は、０．５％もしくは０．１％のある程度精製されたＢＢＩ、または０．１％もしくは０．０１％の精製ＢＢＩをＤＭＨで処理したマウスの食餌に添加すると、血管肉腫および肝臓の結節性過形成ならびに結腸でのガン発生が、統計的に有意な程度に抑制されることを報告している。この研究結果も、０．５％以下で食餌に含まれるＢＢＩがマウスの健康に有害な作用は示さず、肝臓および結腸での発ガンを抑制する能力を持つことを示している。
【００１９】
Ｐｅｒｌｍａｎｎら（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ, １９: ８６０〜８６１（１９７０））は、脱脂ダイズ抽出物からＢＢＩを得るための方法を詳細に説明している。
【００２０】
Ｋｅｎｎｅｄｙらの米国特許第４,７９３,９９６号は、アセトンでダイズを処理し、次いでエタノ−ル抽出およびアセトン沈殿法にてＢＢＩを得る方法を開示している。アセトン処理の前に、ダイズを脱脂しておいてもよい。さらに、従来技術によって、ＢＢＩをさらに精製してもよい。Ｋｅｎｎｅｄｙらは、Ｐｅｒｌｍａｎｎらによって教示されるエタノ−ル沈殿工程の前にアセトンでダイズを処理することによって、得られるＢＢＩの、細胞の悪性転換を阻害する効果がより強くなることを見出した。
【００２１】
Ｋｅｎｎｅｄｙらの米国特許第４,７９３,９９６号は、ダイズを脱脂する工程および脱脂ダイズからインヒビタ−を抽出する工程と、そしてＢＢＩインヒビタ−の有効性を大幅に高める改良点としての、少なくとも等重量のアセトンをダイズと接触させることによってダイズを脱脂する工程を含む、細胞の悪性転換についてのＢＢＩインヒビタ−を含むダイズの粗抽出物を調製するための方法を教示している。したがって、この方法によって、インヒビタ−の粗抽出物が生産される。この方法は、アセトンとの接触によるのにも関わらず、大幅に高い有効性を示す。
【００２２】
Ｋｅｎｎｅｄｙらの米国特許第５,２１７,７１７号は、乳清タンパク質を含むダイズの水溶性成分を限外ろ過してＢＢＩＣを作製することを教示している。限外ろ過法のプロセスは単独で実施してもよく、または限外ろ過法の前もしくは後で、アセトン沈殿法を組み合わせて実施してもよい。
【００２３】
Ｋｅｎｎｅｄｙらの米国特許第５,２１７,７１７号は、限外ろ過法を採用せずに、ダイズの水溶性成分を二回のアセトン抽出に付してＢＢＩＣを得ることも教示している。この特許権者は、噴霧乾燥はＢＢＩの回収に影響を与えないことを見出した。このことは、ＢＢＩの存在の指標として用いるキモトリプシンの阻害（ＣＩ）によって測定した。
【００２４】
ルナシンは、ダイズに由来するＢｏｗｍａｎ−Ｂｉｒｋプロテア−ゼインヒビタ−の主要成分である。カリフォルニア大学バ−クレ−校で行われた研究から、ルナシンは、それ自体がＤＮＡと結合するタンパク質と結合し、そして通常であればガン細胞の増殖を導く工程を妨害することが見出された。ルナシンが結合したタンパク質を細胞内に注入すると、正常細胞およびガン細胞の両方において細胞分裂が停止する。この発見から、ヒトの乳ガン細胞およびマウスの皮膚ガンの治療にルナシンが効果的に使用され、そしてガンの予防と治療のためのルナシンについての送達システムの開発を対象とする研究が盛んになった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２５】
従来技術には、酸抽出法もしくはアルコ−ル抽出法、またはアセトン沈殿法を用いずにダイズタンパク質の供給源から得られる高濃度ＢＢＩを有する高タンパク質の濃縮物は記載されていない。従来技術には、繊維を除去したダイズタンパク質の供給源から得られる高濃度ＢＢＩを有する高タンパク質の濃縮物も記載されていない。従来技術には、アセトンを含まないＢＢＩを含む高タンパク質の濃縮物も記載されていない。本発明においては、酸抽出法もしくはアルコ−ル抽出法、またはアセトン沈殿法を用いることなく、ダイズタンパク質の供給源から、高濃度ＢＢＩを有する高タンパク質の濃縮物を生産する。
【課題を解決するための手段】
【００２６】
本発明は、（ｉ）総乾燥物の６５重量％を超えるダイズタンパク質および（ｉｉ）少なくとも１１０ｍｇ／ｇの濃度のキモトリプシンインヒビタ−（ＣＩ）を有するアセトンを含まないＢｏｗｍａｎ−Ｂｉｒｋインヒビタ−産物に関する。別の実施形態において、本発明は、（ａ）十分に脱脂されたダイズ原料を供給する工程；（ｂ）当該原料から繊維を除去する工程、および（ｃ）限外ろ過法によって、所望のＣＩ含有量を得る工程、を包含する、タンパク質産物を製造するための方法に関する。得られる産物−乾燥可能である−を次いで医薬組成物または栄養補助食品に用いる。「アセトンを含まない」との記載は、製品が加工の間にアセトン処理を受けないことを意味する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
一つの実施形態によれば、本発明は、（ｉ）総乾燥物の６５重量％を超えるダイズタンパク質および（ｉｉ）少なくとも１１０ｍｇ／ｇの濃度のキモトリプシンインヒビタ−（ＣＩ）を有するアセトンを含まないＢｏｗｍａｎ−Ｂｉｒｋインヒビタ−産物を提供する。
【００２８】
別の実施形態によれば、本発明は、（ａ）十分に脱脂されたダイズ原料を供給する工程；（ｂ）上記原料から繊維を除去する工程；および（ｃ）限外ろ過法によって、所望のＣＩ含有量を得る工程を包含する、タンパク質産物を製造するための方法を提供する。必要に応じて乾燥させることが可能である、得られる産物を、次いで医薬組成物または栄養補助食品に用いることができる。
【００２９】
本発明の方法は通常、１）ダイズ全体から種皮を除去する工程；２）種皮を除去したダイズをフレ−ク状にする工程；３）ヘキサンまたは同様の溶媒で、フレ−ク状のダイズからダイズ油を抽出する工程；４）高温で加熱することなく、すなわち焼くことなく脱脂ダイズフレ−クから溶媒を除去し、「白色」フレ−クを生産する工程；５）白色フレ−クを粉砕してダイズ粉を生産する工程；６）ダイズ粉から繊維を除去する工程；７）ＢＢＩを保持しつつ、スタキオ−スおよびラフィノ−スを限外ろ過法によって除去する工程；および８）必要に応じて、得られる濃縮物を噴霧乾燥する工程を含む。
【００３０】
上記の工程１から４は通常、ひとまとめにしてダイズの抽出プロセスと言われている。上記の工程１から４についての一般的な手順は、Ｋｏｎｗｉｎｓｋｉの米国特許第５,０９７,０１７号およびＰａｓｓの第３,８９７,５７４号、ならびにセラ−ト（Ｓｅｒｒａｔｏ）、「Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｏｉｌ ｆｒｏｍ Ｓｏｙｂｅａｎｓ」、Ｊ． Ａｍ． Ｏｉｌ Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． , ５８,１５７（１９８１）およびＢｅｃｋｅｒ、「Ｓｏｌｖｅｎｔ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｏｙｂｅａｎｓ」、Ｊ． Ａｍ． Ｏｉｌ Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．, ５５,７５４（１９７８）によって例示されているように、周知である。
【００３１】
上記の第一工程には、ダイズの種皮を除去することが含まれる。種皮を除去することとは、ダイズ全体からダイズの種皮を除去するプロセスである。種皮を除去する前にダイズを注意深く洗浄し、そして着色した物体が生成物に混入しないように、糟を除去する。種皮を除去する前に、ダイズをさらに約６から８の小片に砕くことが普通である。
【００３２】
通常、種皮はダイズ全体の重量の約８％を占める。種皮を除去したダイズは、約１０重量％が水、４０重量％がタンパク質、２０重量％が脂質であり、残りは主に糖質、繊維およびミネラルである。
【００３３】
上記の第二工程には、フレ−ク化プロセスが含まれる。フレ−ク化を行う前に、水分と温度とを調整してダイズを適切な状態にして、十分な可塑性を示すダイズの小片とする。適切な状態としたダイズの小片をフレ−ク用のロ−ラ−に通して、約０．２５〜０．３０ｍｍ（０．０１〜０．０１２インチ）の厚さのフレ−クを作製する。
【００３４】
上記の第三工程には、フレ−クからダイズ油を除去することが含まれる。ヘキサンと接触させてダイズ油を除去することによって、このダイズフレ−クを「脱脂」する。ダイズ油はマ−ガリン、ショ−トニングおよびその他の食品に用いられ、レシチンの優れた供給源である。レシチンには、乳化剤としての多数の有用な応用例がある。
【００３５】
上記の第四工程において、焼くことなく、ヘキサンで脱脂されたダイズフレ−クから溶媒を除去する−−ヘキサンを除去する−−ことで、白色フレ−クを得る。これは、フレ−クを焼き、動物の飼料として用いる従来のダイズ油・ヘキサンプロセスとは異なる。
【００３６】
上記の第五工程において、白色フレ−クを粉砕してダイズ粉を作製する。別の実施形態においては、ダイズ粉に粉砕しないままに、白色フレ−クを用いることができる。白色フレ−クには、約１〜２％の範囲で収率がより低くなる傾向がある。というのは、下記の繊維除去工程において、損失がより多く発生する傾向があるからである。しかしながら、フレ−クを用いる場合、液体画分中の繊維の繰り越し量が顕著に低減する。
【００３７】
本発明に出発原料として用いることができるダイズ粉は、市販により容易に入手できる。市販のダイズ粉は通常、少なくとも５０重量％（５２．５重量％）のタンパク質（Ｎ Ｘ ６．２５）；約３０〜４０重量％（３４．６重量％）の糖質；約５〜１０重量％（６重量％）の水分；約５〜１０重量％（６重量％）の灰分；約２〜３重量％（２．５重量％）の粗繊維および約１重量％未満（０．９重量％）の脂質（エ−テル抽出物）を含む。
【００３８】
本発明の一つの実施形態によれば、タンパク質分散性指数（ＰＤＩ）が９０％であり、粒子サイズが８０メッシュのダイズ粉を用いた。米国油化学会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｏｉｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｓ' Ｓｏｃｉｅｔｙ）（ＡＯＣＳ）のＢａ １０〜６５の方法によって、ＰＤＩを測定する。９０％のＰＤＩは、加熱処理を行わないダイズ粉であって、酵素が活性を有するものを表すことになる。粒子サイズが８０メッシュとは、９５％を超えるダイズ粉が、８０メッシュの番号の合衆国標準ふるいを通過することを意味する。
【００３９】
第六工程において、ダイズ粉を水でスラリ−状にする。一つの実施形態によれば、スラリ−は約５〜１５重量％の含有量の固体を有する。しかしながら、本発明にしたがえば、固体の含有量がさらに少ないスラリ−を得ることも可能である。
【００４０】
本発明の一つの実施形態によれば、ダイズ粉をスラリ−状にするために用いる水を、予め約９４℃の温度に加熱しておく。
【００４１】
多くの場合、ダイズ粉をスラリ−状にするために、ある程度撹拌するかまたは混合することが必要である。必要である撹拌または混合を行う一つの手段としては、プロペラ型撹拌装置の使用がある。
【００４２】
ダイズ粉をスラリ−状にした後、水酸化ナトリウムにてスラリ−のｐＨを約７〜７．５に調整し、そしてスラリ−をケ−キと溶液に分離することによって、繊維を除去することが可能である。別の実施形態においては、水酸化カリウムを用いてスラリ−のｐＨを調整し、そして必要であれば、ナトリウムが少ない産物を得ることが可能である。
【００４３】
多数の物理的な分離手段によって、分離を実施することが可能である。しかしながら、遠心分離が、効率的かつ効果的であるという条件を満たす手段である。本発明の一つの実施形態によれば、スクロ−ル型の遠心分離装置を用いて所望の分離を行うことが可能である。本発明のさらに別の実施形態によれば、ディスク型または管状の遠心分離装置を用いて分離を実施することが可能である。
【００４４】
第七工程において、繊維が除去された溶液を限外ろ過に付してオリゴ糖、その他の糖類および小分子量の成分を除去し、そして少なくとも約８０重量％がタンパク質である産物を作製する。限外ろ過プロセスの間、ＣＩの測定によって示されるように、ＢＢＩは保持されている。
【００４５】
カットオフ分子量（ＭＷＣＯ）が１,０００〜２００,０００のスパイラル形状の任意の膜が、限外ろ過工程での使用に好ましい。ＭＷＣＯが１０,０００の膜が、本発明の目的に特に適していることを見出した。通常、限外ろ過の間に、供給された体積の約７５％が透過液として除去される。
【００４６】
必要に応じて乾燥させる前に、限外ろ過を経た産物を低温殺菌する。ジェットクッキングによって低温殺菌を実施することが可能である。あるいは、加温したジャケット付きスチ−ムケトル内にスラリ−を保持することによって、低温殺菌を実施することが可能である。産物についてもサルモネラ菌のテストが陰性で、かつ許容できる程度の微生物学的特徴を有するように、低温殺菌を実施する。
【００４７】
繊維を除去し、限外ろ過を経た材料（保持液）を乾燥させて、高いタンパク質含有量のＢＢＩ濃縮物を作ることが可能である。高圧ノズルを備えた縦型噴霧乾燥装置、またはその他のあらゆる適切な乾燥装置を用いて乾燥を実施することが可能である。
【００４８】
キモトリプシンインヒビタ−（ＣＩ）の分析に用いる方法は、用いる酵素および基質は異なるが、米国油化学会（ＡＯＣＳ）のダイズ製品のトリプシンインヒビタ−活性についての公式の方法Ｂａ−１２〜７５に基づく。ＣＩ分析に用いる基質は、Ｎ−グルタリル−Ｌ フェニルアラニン−ｐ−ニトロアニリド（ＧＰＮＡ）であり、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社から６２５０５として入手できる。用いる酵素はＬ−キモトリプシンであるＩＩ型のウシ膵臓αキモトリプシンであり、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社からＣ４１２９として入手できる。ＡＯＣＳの方法はＫａｋａｄｅら（Ｃｅｒｅａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ, ５１． ３７６（１９７４））に基づく。
【００４９】
キモトリプシンは、過剰に存在する基質のグルタリル−Ｌ−フェニルアラニン−ｐ−ニトロアニリドを加水分解する。黄色色素のｐ−ニトロアニリドの遊離を分光光度法で測定する。ダイズタンパク質産物が存在していると、ｐ−ニトロアニリドの放出は、活性を有するキモトリプシンインヒビタ−の濃度に反比例して変化する。
【００５０】
以下の複数の実施例を参照することによって、本発明のこれらの側面およびその他の側面をより簡単に理解できるであろう。特に記載がない限り、実施例および明細書全体を通して、パ−センテ−ジは重量によるものである。特に記載がない限り、すべての結果は無水ベ−スである。
【実施例１】
【００５１】
８６％のタンパク質分散性指数（ＰＤＩ）を有する約２２．５ｋｇ（５０ポンド）のダイズ粉を、約６０℃の約２４５Ｌ（６５ガロン）の水に分散させ、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを約７．５に調整した。この懸濁液を約６０℃で３０分間撹拌し、次いで、デカンテ−ション用遠心分離装置にて遠心分離した。この不溶性遠心分離ケ−キを廃棄し、そして上清を約１２１℃、滞留時間が１５秒間のジェットクッカ−内に通すことによって、上清の加熱処理を行った。次いで、この懸濁液をジャケット付き容器内で約３８℃に冷却した。カットオフ分子量（ＭＷＣＯ）が１０,０００のスパイラル形状の膜を用いて、冷却された懸濁液の限外ろ過を行って、透過液として供給された体積の約７５％を除去した。膜による保持液を、約９３℃、滞留時間が１５秒間のジェットクッカ−内に通すことによって、この保持液を加熱処理した。次いで、この保持液をジャケット付き容器内で６０℃に冷却し、そして噴霧乾燥を行った。この同じ手順を二回繰り返して、下記の表１に記載した結果を確認した。
【００５２】
【表１】
2005500331.tif 000002
【００５３】
この実施例に関連して、再び同じ手順を繰り返し、ルナシンの含有量について、得られた産物を分析した。この産物が１９重量％のルナシンを含むことが分かった。このことは、本発明のＢＢＩ産物が細胞の悪性転換を効果的に阻害するルナシンの実施可能な供給源であることを示唆している。
【実施例２】
【００５４】
約２２７Ｌ（６０ガロン）の水を混合タンクに注入し、６０℃に加熱した。次いで、約４５ｋｇ（１００ポンド）のダイズフレ−クをこの混合タンクに添加してスラリ−を作製した。約１４００ｍＬの４．５％のＮａＯＨ水溶液を用いて、このスラリ−のｐＨを約７．１に調整した。このスラリ−を約５５〜約５８℃にて１０分間混合し、次いで遠心分離装置の供給タンクに移した。このタンクには、予め約６０℃に加熱した約３０３Ｌ（８０ガロン）の水が含まれていた。希釈されたスラリ−を約５５〜約５８℃の温度で約２０分間混合し、その後Ｓｈａｒｐｌｅｓ社製のスクロ−ル型の遠心分離装置に、分速約７．６Ｌ（２ガロン）で供給した。上清（懸濁液）を約１２７℃の温度でジェットクッキングした。ジェットクッキング後の懸濁液を１００メッシュのストレ−ナ−を介して膜供給タンクに移した。約１０ｇのメタ重亜硫酸ナトリウムを膜供給タンクに添加した。ＭＷＣＯが１０,０００のスパイラル形状の膜を備える限外ろ過膜システムに、この懸濁液を供給した。膜処理の間、懸濁液の温度を約２６．５〜２６．８℃に維持した。膜供給タンクに添加した、もとの供給体積の約７５％が、透過液として除去された。膜システムによる保持液を約７６．７℃で低温殺菌し、そして縦型噴霧乾燥装置内の噴霧ノズルに供給する高圧ポンプを用いて、噴霧乾燥に付した。乾燥産物を分析して、その含有量を求めた。分析結果を下記の表２に示す。
【００５５】
【表２】
2005500331.tif 000003
【実施例３】
【００５６】
約２２７Ｌ（６０ガロン）の水を混合タンクに注入し、６０℃に加熱した。次いで、約４５ｋｇ（１００ポンド）のダイズの白色フレ−クをこの混合タンクに添加してスラリ−を作製した。約１４００ｍＬの４．５％のＮａＯＨ水溶液を用いて、このスラリ−のｐＨを約７．０８に調整した。このスラリ−を約５５〜約５８℃にて１０分間混合し、次いで遠心分離装置の供給タンクに移した。このタンクには、予め約６０℃に加熱した約３０３Ｌ（８０ガロン）の水が含まれていた。希釈されたスラリ−を約５５〜約５８℃の温度で約２０分間混合し、その後Ｓｈａｒｐｌｅｓ社製のスクロ−ル型の遠心分離装置に、分速約７．６Ｌ（２ガロン）で供給した。上清（懸濁液）を約１２７℃の温度でジェットクッキングした。ジェットクッキング後の懸濁液を１００メッシュのストレ−ナ−を介して膜供給タンクに移した。ＭＷＣＯが１０,０００のスパイラル形状の膜を備える限外ろ過膜システムに、この懸濁液を供給した。膜処理の間、懸濁液の温度を約４８．８から約４９℃に維持した。膜供給タンクに添加した、もとの供給体積の約７５％が、透過液として除去された。膜システムによる保持液を約７６．７℃で低温殺菌し、そして縦型噴霧乾燥装置内の噴霧ノズルに供給する高圧ポンプを用いて、噴霧乾燥に付した。乾燥産物を分析して、その含有量を求めた。分析結果を下記の表３に示す。
【００５７】
【表３】
2005500331.tif 000004
【実施例４】
【００５８】
約２２７Ｌ（６０ガロン）の水を混合タンクに注入し、６０℃に加熱した。次いで、約４５ｋｇ（１００ポンド）のダイズ粉をこの混合タンクに添加してスラリ−を作製した。約１４００ｍＬの４．５％のＮａＯＨ水溶液を用いて、このスラリ−のｐＨを約７．０８に調整した。このスラリ−を約５５〜約５８℃にて１０分間混合し、次いで遠心分離装置の供給タンクに移した。このタンクには、予め約６０℃に加熱した約３０３Ｌ（８０ガロン）の水が含まれていた。希釈されたスラリ−を約５５〜約５８℃の温度で約２０分間混合し、その後Ｓｈａｒｐｌｅｓ社製のスクロ−ル型の遠心分離装置に、分速約７．６Ｌ（２ガロン）で供給した。上清（懸濁液）を約１２７℃の温度でジェットクッキングした。ジェットクッキング後の懸濁液を１００メッシュのストレ−ナ−を介して膜供給タンクに移した。ＭＷＣＯが３０,０００のスパイラル形状の膜を備える限外ろ過膜システムに、この懸濁液を供給した。膜処理の間、懸濁液の温度を約４８．８〜約４９℃に維持した。膜供給タンクに添加した、もとの供給体積の約７５％が、透過液として除去された。膜システムによる保持液を約７６．７℃で低温殺菌し、そして縦型噴霧乾燥装置内の噴霧ノズルに供給する高圧ポンプを用いて、噴霧乾燥に付した。乾燥産物を分析して、その含有量を求めた。分析結果を下記の表４に示す。
【００５９】
【表４】
2005500331.tif 000005
【実施例５】
【００６０】
約２２７Ｌ（６０ガロン）の水を混合タンクに注入し、６０℃に加熱した。次いで、約４５ｋｇ（１００ポンド）のダイズ粉をこの混合タンクに添加してスラリ−を作製した。約１４００ｍＬの４．５％のＮａＯＨ水溶液を用いて、このスラリ−のｐＨを約７．０に調整した。このスラリ−を約５５〜約５８℃にて１０分間混合し、次いで遠心分離装置の供給タンクに移した。このタンクには、予め約６０℃に加熱した約３０３Ｌ（８０ガロン）の水が含まれていた。希釈されたスラリ−を約５５〜約５８℃の温度で約２０分間混合し、その後Ｓｈａｒｐｌｅｓ社製のスクロ−ル型の遠心分離装置に、分速約７．６Ｌ（２ガロン）で供給した。上清（懸濁液）を約１２７℃の温度でジェットクッキングした。ジェットクッキング後の懸濁液を１００メッシュのストレ−ナ−を介して膜供給タンクに移した。ＭＷＣＯが１,０００,０００のスパイラル形状の膜を備える限外ろ過膜システムに、この懸濁液を供給した。膜処理の間、懸濁液の温度を約４８．８〜約４９℃に維持した。膜供給タンクに添加したもとの供給体積の約７５％が、透過液として除去された。膜システムによる保持液を約７６．７℃で低温殺菌し、そして縦型噴霧乾燥装置内の噴霧ノズルに供給する高圧ポンプを用いて、噴霧乾燥に付した。乾燥産物を分析して、その含有量を求めた。分析結果を下記の表５に示す。
【００６１】
【表５】
2005500331.tif 000006
【００６２】
実施例１〜５の結果から、出発原料としてダイズ粉またはダイズフレ−クを用いて本発明の方法によって生産された産物は、約８５％以上の窒素溶解率かつイソフラボン含有量が約２．００ｍｇ／ｇを一般的に超えるだけでなく、７９重量％以上のタンパク質含有量であり、そして１５０ｍｇ／ｇ以上のＣＩ含有量であることを明らかにできる。
【００６３】
したがって、本発明によって生産された産物は、高タンパク質のダイズ単離物という所望の特性を、ＣＩ値によって示される高ＢＢＩ含有量とともに有することが明らかにできる。
【００６４】
上記の説明から、特定の手段、材料および実施形態を参照しつつ本発明を説明してきたが、当業者であれば、本発明の本質的な特徴を容易に確認することが可能であり、かつ添付の請求の範囲に示された本発明の精神および範囲から逸脱することなく、種々の使用および特徴に合わせて種々の変形、修飾を行うことが可能である。
【国際公開パンフレット】
2005500331.tif 000007
2005500331.tif 000008
2005500331.tif 000009
2005500331.tif 000010
2005500331.tif 000011
2005500331.tif 000012
2005500331.tif 000013
2005500331.tif 000014
2005500331.tif 000015
2005500331.tif 000016
2005500331.tif 000017
2005500331.tif 000018
2005500331.tif 000019
2005500331.tif 000020
2005500331.tif 000021
2005500331.tif 000022
2005500331.tif 000023
2005500331.tif 000024
2005500331.tif 000025
2005500331.tif 000026
2005500331.tif 000027
2005500331.tif 000028
2005500331.tif 000029
2005500331.tif 000030
2005500331.tif 000031
2005500331.tif 000032
2005500331.tif 000033
【国際調査報告】
2005500331.tif 000034