(57)【要約】β−アミロイド生成の阻害剤としてのらせん形擬似ぺプチド化合物を提供する。これらの阻害剤は、好ましくは膜内プロテアーゼ、特にアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）を酵素的に切断し、β−アミロイドを産生するアスパルチルセクレターゼを阻害する。該化合物を含有する医薬の製造方法とβ−アミロイド関連疾患、特にアルツハイマー病を処置する方法を提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
Ｒ１−(Ｒ２)ｎ−Ｒ３
式中、Ｒ１は水素、アシル、アルコキシカルボニル及びアミノカルボニルからなる群から選ばれ；
(Ｒ２)ｎはアミノ酸Ｒ２、それぞれ互いに独立して選択される、のオリゴマーであり；
各Ｒ２は独立してアキラルのＬ−又はＤ−アミノ酸であり；
ｎは５〜３０の整数であり；及び
Ｒ３はヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アミノ、アミノアルキル及びアミノアリールからなる群から選ばれ；そして
(Ｒ２)ｎは、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）のセクレターゼ切断部位を模した少なくとも一つのジペプチドを含有する、
で表される化合物。
【請求項２】
化合物が溶液中で実質的にらせん形の立体構造をとる、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ジペプチドがＡｌａ−Ｔｈｒである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ジペプチドがＶａｌ−Ｉｌｅである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
ジペプチドがＡｌａ−Ｒ４であり、Ｒ４が疎水性アミノ酸である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
ジペプチドがＡｌａ−Ｒ４であり、Ｒ４がグリシン、アラニン、バリン、イソロイシン、フェニルアラニン、４−ベンゾイルフェニルアラニン、及びトリプトファンからなる群から選ばれた、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
ジペプチドがＡｌａ−Ｒ４であり、Ｒ４が親水性アミノ酸である、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
ジペプチドがＡｌａ−Ｒ４であり、Ｒ４がセリン及びトレオニンからなる群から選ばれた、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
ジペプチドがＡｌａ−Ｒ４であり、Ｒ４がトレオニン誘導体である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
トレオニン誘導体がＯ−ベンジルトレオニンである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
ジペプチドがＡｌａ−Ｒ５であり、Ｒ５が嵩高い疎水性アミノ酸である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ５がイソロイシン、ロイシン、及びフェニルアラニンからなる群から選ばれた、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
ジペプチドがＲ６−Ｉｌｅであり、Ｒ６が嵩高い疎水性アミノ酸である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ６がイソロイシン、ロイシン、及びフェニルアラニンからなる群から選ばれた、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
少なくとも一つのＲ２がＬ−アミノ酸である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
少なくとも一つのＲ２がＤ−アミノ酸である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ２が疎水性アミノ酸である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ２がグリシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、４−ベンゾイルフェニルアラニン、及びトリプトファンからなる群から選ばれた、請求項１に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ２が親水性アミノ酸である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ２がセリン及びトレオニンからなる群から選ばれた、請求項１に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ２がアルファ，アルファ−二置換アミノ酸である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ２がアミノイソ酪酸（Ａｉｂ）である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ２が低級アルキル基及びアリール基からなる群から独立して選ばれた第一の官能基及び第二の官能基を含有するアルファ，アルファ−二置換アミノ酸である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２４】
第一の官能基及び第二の官能基が、メチル、エチル、フェニル及びベンジルからなる群から独立して選ばれた、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２５】
化合物が：
【化１】
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式中、Bocはｔ−ブチロキシカルボニル；OBzはＯ−ベンジルエステル；OMeはＯ−メチルエステル；及びAibはアミノイソ酪酸を表す、からなる群から選ばれた、請求項１に記載の化合物。
【請求項２６】
配列番号１〜１０の少なくとも一つのアミノ酸がＤ−アミノ酸である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
配列番号１〜１０の少なくとも一つのアミノ酸がＬ−アミノ酸である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２８】
配列番号１〜１０に含まれる、各キラルアミノ酸及びすべてのキラルアミノ酸がＤ−アミノ酸である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２９】
配列番号１〜１０に含まれる、各キラルアミノ酸及びすべてのキラルアミノ酸がＬ−アミノ酸である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項３０】
化合物が、Boc-D-Val-Gly-Aib-D-Val-D-Val-D-BPA-Aib-D-Thr(OBz)-D-Val-Aib-OMe (配列番号:11),
式中、Bocはｔ−ブチロキシカルボニル；OBzはＯ−ベンジルエステル；OMeはＯ−メチルエステル； Aibはアミノイソ酪酸；及びBPAは４−ベンゾイルフェニルアラニンを表す、である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３１】
化合物が、式Ｉで表される化合物の薬学上許容し得る塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３２】
請求項１に記載の化合物及び薬学上許容し得る担体を含有する組成物。
【請求項３３】
さらに式Ｉで表される化合物の脳への送達を促進する担体を含有する、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３４】
β−アミロイド関連疾患を有する、又は有する危険性のある対象を処置するための医薬の調製において使用する式Ｉで表される化合物であって、式Ｉで表される化合物が構造：
Ｒ１−(Ｒ２)ｎ−Ｒ３
式中、Ｒ１は水素、アシル、アルコキシカルボニル及びアミノカルボニルからなる群から選ばれ；
(Ｒ２)ｎはアミノ酸Ｒ２、それぞれ互いに独立して選択される、のオリゴマーであり；
各Ｒ２は独立してアキラルのＬ−又はＤ−アミノ酸であり；
ｎは５〜３０の整数であり；及び
Ｒ３はヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アミノ、アミノアルキル及びアミノアリールからなる群から選ばれる、
を有する、前記化合物。
【請求項３５】
(Ｒ２)ｎが、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）のセクレターゼ切断部位を模した少なくとも一つのジペプチドを含有する、請求項３４に記載の使用。
【請求項３６】
β−アミロイド関連疾患を有する、又は有する危険性のある対象を処置するための方法であって：
β−アミロイド関連疾患を有する、又は有する危険性のある対象に治療上有効な量の式Ｉで表される化合物を投与する、前記方法。
【請求項３７】
β−アミロイド関連疾患が神経変性疾患である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
β−アミロイド関連疾患がアルツハイマー病である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
化合物をβ−アミロイド関連疾患の処置に有用な第２剤の有効量との組み合わせにより対象に投与する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
第２剤がアセチルコリンエステラーゼ阻害剤である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
化合物を経口投与する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４２】
膜内プロテアーゼの活性を阻害する方法であって、膜内プロテアーゼの活性を阻害するために、膜内プロテアーゼの酵素として活性な条件下で、膜内プロテアーゼを有効量の請求項１に記載の式Ｉで表される化合物と接触させることを含む、前記方法。
【請求項４３】
膜内プロテアーゼがγ−セクレターゼである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
接触によりアミロイド−βペプチドの生成が減少する、請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
接触が生体外で起きる、請求項４２に記載の方法。
【請求項４６】
接触が生体内で起きる、請求項４２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
技術分野
本発明は、膜内プロテアーゼを阻害するための組成物及び方法に関し、特にアミロイド前駆体タンパク質からアミロイド−βペプチドへの転換に含まれるセクレターゼの酵素活性を阻害するための化合物及び方法に関する。本発明の化合物及び方法は、神経変性疾患、特にアルツハイマー病の治療に用いることができる。
【０００２】
背景技術
生化学的、組織学的、及び遺伝学的な証拠の蓄積は、４ｋＤaのβ−アミロイドタンパク質（Ａβ）がアルツハイマー病（ＡＤ）の病因となる本質的成分であるとする仮説を支持している。Selkoe DJ (1997) Science 275 : 630−631；Hardy J (1997) Proc Natl Acad Sci USA 94 : 2095−2097。病因論としてＡβの役割に強い関心が持たれているにもかかわらず、Ａβ生合成の分子メカニズムはほとんど理解されていない。Ａβの３９〜４３残基が、β−及びγ−セクレターゼによる完全な膜アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の逐次的な切断によって生成される。Selkoe DJ (1994) Annu Rev Cell Biol 10 : 373−403。ＡＰＰのβ−セクレターゼ切断は膜の近くで起こり、可溶性のＡＰＰｓ−β及び１２ｋＤａのＣ−末端膜関連フラグメント（ＣＴＦ）を生成する。後者は基質の膜貫通領域内を切断するγ−セクレターゼにより処理され、Ａβを生成する。α−セクレターゼによる他のタンパク質分解現象は、ＡＰＰのＡβ部位内で起こり、ＡＰＰｓ−αを遊離し、次いで残存する膜結合１０ｋＤａ ＣＴＦはγ−セクレターゼにより処理され、ｐ３と呼ばれる３ｋＤａのＮ−末端を切り詰めたＡβ種を生成する。
【０００３】
γ−セクレターゼによる１２ｋＤａ ＣＴＦの不均質タンパク質分解で、主に２つのＡβのＣ−末端変種（バリアント）、４０−及び４２−アミノ酸種（Ａβ４０及びＡβ４２）、及び１０ｋＤａ ＣＴＦの並行した処理により、ｐ３の対応するＣ−末端バリアントを生成する。Ａβ４２は分泌したＡβの１０％を表すのみであるが、このより長く、より疎水的なバリアントは、死後のＡＤ患者に観察されるアミロイドプラーク中に不相応に存在し（Roher AE等 (1993) Proc Natl Acad Sci USA 90 : 10836−40 ; Iwatsubo T等 (1994) Neuron 13 : 45−53）、Ａβ４０と比較したＡβ４２の動態学的不溶性を示す体外研究と整合する。Jarrett JT等 (1993) Biochemistry 32 : 4693−4697。重要なことに、家族性アルツハイマー病（ＦＡＤ）の早期発症（＜６０歳）と関連するすべての遺伝子突然変異は、Ａβ４２の生成が増大する結果となる。Selkoe DJ (1997) Science 275 : 630−631；Hardy J (1997) Proc Natl Acad Sci USA 94 : 2095−2097。一般のＡβ生成及び特別のＡβ４２生成に対する理解は、ＡＤの病因の分子メカニズムを解明するのに重要であり、またこの病気の病因の核心を突く新しい化学療法剤の開発に導くことができる。
【０００４】
γ−セクレターゼ及びβ−セクレターゼは共に、Ａβの生成を阻害する目的で設計される阻害剤の魅力的な標的である。γ−セクレターゼは、阻害剤設計の魅力的な標的であるが、構造、メカニズム、又はこの同定されていないプロテアーゼに結合するのに必要な条件はあまり知られていない。過去数年間の研究は、γ−セクレターゼが、プレセニリン（presenilin）と呼ばれる多貫通膜タンパク質内に膜内活性部位を有する、珍しいアスパルチルプロテアーゼであることを示唆している。Wolfe MS (2002) Nat Rev Drug Discov 1 : 859−866；Wolfe MS等 (2002) Science 296 : 2156−2157。
以上の観点から、β−アミロイドの生成と沈着により特徴付けられる疾患を治療するための、組成物及び方法をさらに開発する必要がある。
【０００５】
発明の要約
本発明は、ある種の膜内プロテアーゼを阻害するのに有用な新規な化合物、特にＡＰＰからのβ−アミロイドの生成に関連するアスパルチルプロテアーゼ、及びそれを生体内(in vivo)及び生体外(in vitro)で用いる方法に関する。該化合物は、例えばβ−アミロイド関連疾患を有する、又は有する危険性のある対象を処置するために有用である。
【０００６】
本発明の第一の面によれば、式Ｉ：Ｒ１−(Ｒ２)ｎ−Ｒ３
式中、Ｒ１は水素、アシル、アルコキシカルボニル及びアミノカルボニルからなる群から選ばれ；
(Ｒ２)ｎはアミノ酸Ｒ２、それぞれ互いに独立して選択される、のオリゴマーであり；
各Ｒ２は独立してアキラルのＬ−又はＤ−アミノ酸であり；
ｎは５〜３０の整数であり；及び
Ｒ３はヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アミノ、アミノアルキル及びアミノアリールからなる群から選ばれる。
【０００７】
好ましくは、(Ｒ２)ｎは、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）のセクレターゼ切断部位を模した少なくとも一つのジペプチドを含有する、すなわち、(Ｒ２)ｎを含有する化合物は少なくとも一つのジペプチドを含み、ＡＰＰを切断することができるセクレターゼ（例えばγ−セクレターゼ）は、ＡＰＰのセクレターゼ切断部位を模したジペプチドを切断することができる。実施例に、配列番号:13を有するＡＰＰのセクレターゼ切断部位を表す、ジペプチド配列を示す。典型的なジペプチドは、Ａｌａ−Ｔｈｒ；Ｖａｌ−Ｉｌｅ；Ａｌａ−Ｒ４、Ｒ４は（１）疎水性アミノ酸（例えばグリシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、４−ベンゾイルフェニルアラニン、トリプトファン）、（２）親水性アミノ酸（例えばセリン、トレオニン）又は（３）トレオニン誘導体（例えばＯ−ベンジルトレオニン）；Ｖａｌ−Ｒ５、Ｒ５は嵩高い疎水性アミノ酸（例えば、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン）；及びＲ６−Ｉｌｅ、Ｒ６は嵩高い疎水性アミノ酸（例えばイソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン）である。
【０００８】
好ましくは、本発明の化合物は溶液中、例えば水溶液中でらせん形の立体構造をとる。したがって、いくつかの実施態様においては、(Ｒ２)ｎは少なくとも一つのらせん誘導アミノ酸を含む。いくつかの実施態様においては、(Ｒ２)ｎは少なくとも二つのらせん誘導アミノ酸を含む。このようならせん誘導アミノ酸は、アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）を含む、アルファ，アルファ−二置換アミノ酸であることができる。ある実施態様においては、少なくとも一つのＲ２はＬ−アミノ酸である。他の実施態様においては、少なくとも一つのＲ２はＤ−アミノ酸である。これらの及び／又は他の実施態様において、少なくとも一つのＲ２は疎水性アミノ酸、例えばグリシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、４−ベンゾイルフェニルアラニン、トリプトファンである。他のＲ２は親水性アミノ酸、例えばセリン、トレオニンである。特に好ましい実施態様においては、少なくとも一つのＲ２は、Ａｉｂ等のアルファ，アルファ−二置換アミノ酸である。
【０００９】
式Ｉで表される化合物は以下の特定の実施態様を含む：
【化１】
2005532264.tif 000003
式中、Bocはｔ−ブチロキシカルボニル；OBzはＯ−ベンジルエステル；OMeはＯ−メチルエステル； Aibはアミノイソ酪酸；及びBPAは４−ベンゾイルフェニルアラニンを表す。
【００１０】
上記の実施態様は、少なくとも一つのアミノ酸がＤ−アミノ酸である化合物を含む。さらに又は代わりに、上記の実施態様は、少なくとも一つのアミノ酸がＬ−アミノ酸である化合物を含む。
【００１１】
本発明の別の面によれば、本発明の化合物を含む医薬組成物及び薬学上許容し得る担体、並びに本発明の化合物及び薬学上許容し得る担体を組み合わせる医薬組成物の調製方法を提供する。したがって、また本発明の化合物の薬学上許容し得る塩を提供する。随意的に、医薬組成物はさらに本発明の化合物の脳への送達を促進する担体を含有する。このように、本発明は、β−アミロイド関連疾患を有する、又は有する危険性のある対象を処置するための医薬の調製における本発明の化合物の使用を包含する。
【００１２】
本発明のさらに別の面によれば、β−アミロイド関連疾患を有する、又は有する危険性のある対象を処置するための方法を提供する。該方法は、β−アミロイド関連疾患を有する、又は有する危険性のある対象に、治療上有効な量のβ−アミロイド関連疾患を処置するための式Ｉで表される化合物を投与することを含む。ある実施態様によれば、β−アミロイド関連疾患は神経変性疾患である。これらの及び／又は他の実施態様によれば、β−アミロイド関連疾患がアルツハイマー病である。随意的に、本発明の化合物はβ−アミロイド関連疾患の処置に有用な第２剤、例えばアセチルコリンエステラーゼ阻害剤の有効量との組み合わせにより対象に投与する。ある好ましい実施態様においては、該化合物を経口投与する。
【００１３】
本発明のさらに別の面によれば、膜内プロテアーゼの活性を阻害する方法を提供する。該方法は、膜内プロテアーゼの活性を阻害するために、膜内プロテアーゼの酵素として活性な条件下で、膜内プロテアーゼを有効量の式Ｉで表される化合物と接触させることを含む。ある実施態様においては、膜内プロテアーゼはγ−セクレターゼ又はβ−セクレターゼである。活性阻害は、例えばアミロイド−βペプチドの生成の減少を観察することにより決定することができる。このような方法は、生体内又は生体外で実施することができる。
【００１４】
クレームされた本発明の化合物は、Brainsted等の米国特許第6,271,198号明細書に記載されているように、らせん性が環化を通して誘導されるらせん形化合物、及びKarle IL等のBiochemistry 29 : 6747−56 (1990)に開示された化合物を特異的に除外する；しかし、医薬の調製における、あるいはβ−アミロイド関連疾患を有する、又は有する危険性のある対象の処置におけるこのような化合物の使用は、本発明の方法に包含される。
【００１５】
ある実施態様においては、対象は式Ｉで表される化合物による処置が必要である以外に症状はない。好ましくは、対象はレトロウイルス感染の症状がない。より好ましくは、対象はヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染の症状がない。
【００１６】
本発明のこの面によれば、式Ｉで表される化合物は、上記のように好ましい実施態様を含む。式Ｉで表される化合物は、投与に便利な単位投与形態に包装されていてよい。好ましくは、式Ｉで表される化合物は経口投与される。
【００１７】
詳細な説明
Ｉ．定義
本明細書に使用される化学用語は、以下に示す定義により説明される通常の意味を有する。
アルキル基は直鎖又は分枝鎖、飽和又は不飽和であってよく、炭素原子は約１０まで有していてよい。また１個又は２個以上の水素原子はアシル、アミノ、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミド、シアノ、ハロゲン(halo)、ヒドロキシ、ニトロ、チオ、アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、スルホキシ及びグアニド基から選ばれた置換基で置き換えられていてよい。好ましいアルキル基は、炭素原子数１〜約４の「低級アルキル」基である。同様に好ましいアルキル基は、不飽和又はアミノ、カルボキシ、カルボキシアミド、ヒドロキシ、チオ及びグアニド基を含むアルキル基である。より好ましいアルキル基は、メチル、イソプロピル、イソブチル、１−メチルプロピル、チオメチルエチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、チオメチル、カルボキシアミドメチル、カルボキシアミドエチル、カルボキシメチル、カルボキシエチル、アミノブチル及びグアニドである。
【００１８】
シクロアルキルは、好ましくは飽和又は部分不飽和環系を有し、それぞれは、３〜１５員環を有する単一又は縮合した炭素環又は複素環系における、酸素、窒素及び硫黄から選ばれた０〜４個のヘテロ原子を含有する。シクロアルキル基は、単一、縮合又は単一と縮合が組み合わされていてもよい、２、３又はそれより多くの飽和又は部分不飽和環を有する多環式基を含む。また１個又は２個以上の水素原子はアシル、アミノ、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミド、シアノ、ハロゲン(halo)、ヒドロキシ、ニトロ、オキソ、チオ、アルキル、アリール、シクロアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、及びグアニド基から選ばれた置換基、又は互いに縮合してシクロアルキル環を形成する２つの置換基で置き換えられていてよい。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、モルホリニル、ピペリジニル、及びピロロリジニルを含む。多環式シクロアルキル基の一つの例はアダマンチルである。アルコキシ基は、アシル、アルキル又はシクロアルキル基で置換された酸素原子を意味する。例としては、メトキシ、ｔｅｒｔ−ブチロキシ（butyloxy）、ベンジルオキシ、及びシクロヘキシルオキシを含む。アリールオキシ基は、アリール基で置換された酸素原子を意味する。アリールオキシ基の例としては、フェノキシ、４−カルボベンジルオキシフェノキシ、４−フェノキシフェノキシが挙げられる。スルホキシ基は、オキソ、アルキル、アリール及びシクロアルキル基からなる群から選ばれた２又は３個の置換基、少なくとも一つの該置換基はオキソである、に結合した六価の硫黄原子を含有する。
【００１９】
芳香族基は、５〜１５員環の単一又は縮合した炭素環システムを含むことができる。また１個又は２個以上の水素原子はアシル、アミノ、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミド、シアノ、ハロゲン(halo)、ヒドロキシ、ニトロ、チオ、アルキル、アリール、シクロアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、スルホキシ、及びグアニド基から選ばれた置換基で置き換えられていてよい。アリールアルキル基は、アリール置換アルキル基を包含する。好ましいアリールアルキル基としては、ベンジル、３−インドリルメチル、４−ヒドロキシルベンジル、５−イミダゾリルメチルを含む。
【００２０】
複素環式芳香族基は、酸素、窒素及び硫黄から選ばれた１〜４個のヘテロ原子を、５〜１５員環を有する単一又は縮合した複素環システムに含有することができる。また１個又は２個以上の水素原子はアシル、アミノ、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミド、シアノ、ハロゲン(halo)、ヒドロキシ、ニトロ、チオ、アルキル、アリール、シクロアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、スルホキシ、及びグアニド基から選ばれた置換基で置き換えられていてよい。アリールアルキル基は、アリール置換アルキル基を包含する。好ましいアリールアルキル基としては、ベンジル、３−インドリルメチル、４−ヒドロキシルベンジル、５−イミダゾリルメチルを含む。
【００２１】
ペプチジル基は、１〜１０個のアミノ酸残基、アミノ酸側鎖、又はアミノ酸類似残基を含んでいてよく、通常、常にではなく、ペプチド結合によって直鎖又は環型に接合することができる。アミノ酸残基は、天然に生成するアミノ酸及び非天然に生成するアミノ酸、例えば当該技術分野において周知のアミノ酸を含有することができる。ある実施態様においては、アミノ酸残基又はペプチジル基はＯ−メチルエステル結合によって終了することができる。他の実施態様においては、隣接するアミノ酸残基はペプチド結合によって互いに接合することができる。ある好ましい実施態様においては、ペプチジル基は１〜４個のアミノ酸残基を含む。あるより好ましい実施態様においては、ペプチジル基は２個のアミノ酸残基を含む。あるより好ましい実施態様においては、ペプチジル基は３個のアミノ酸残基を含む。あるより好ましい実施態様においては、ペプチジル基はアラニン、ロイシン、フェニルアラニン、バリン、アラニン−フェニルアラニン、ロイシン−アラニン、ロイシン−ロイシン、ロイシン−フェニルアラニン、ロイシン−バリン、バリン−フェニルアラニン、ロイシン−バリン−アラニン、ロイシン−バリン−ロイシン、ロイシン−バリン−フェニルアラニン、及びロイシン−バリン−バリンの群から選ばれる。
【００２２】
式Ｉで表される化合物の薬学上許容し得る塩は、酸付加塩又は塩基付加塩を含む。用語「薬学上許容し得る塩」はアルカリ金属塩を形成するために一般に用いられる塩、及び遊離の酸又は遊離の塩基の付加塩（addition salts）を形成するために一般に用いられる塩を包含する。塩の性質は重要ではなく、薬学上許容し得る塩が提供される。式Ｉで表される化合物の薬学上許容し得る適当な酸付加塩は、無機酸又は有機酸から調製することができる。このような無機酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、炭酸、硫酸及びリン酸が挙げられる。適当な有機酸は、脂肪酸、環式脂肪酸、芳香族酸、芳香族脂肪酸、複素環酸、カルボン酸及びスルホン酸の有機酸種から選択することができ、その例としてはギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、グルコン酸、マレイン酸、エンボニック酸（パモイック酸；pamoic）、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、パントテン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、スルファニル酸、メシル酸（mesylic）、シクロヘキシルアミノスルホン酸、ステアリン酸、アルギン酸、β-ヒドロキシ酪酸、マロン酸、ガラクタル酸、及びガラクツロン酸が挙げられる。式Ｉで表される化合物の薬学上し得る適当な塩基付加塩は、限定されるものではないが、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム及び亜鉛から形成される金属塩又はＮ,N’−ジベンジルエチレン−ジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、N−メチルグルカミン及びプロカインから形成される有機塩を含む。これらの塩のすべては、例えば式Ｉで表される化合物と適当な酸又は塩基により、対応する式Ｉで表される化合物から通常の手段により調製することができる。
【００２３】
式Ｉで表される化合物は、不斉中心、すなわちキラル中心を有することができる。これらの中心の絶対配置は、立体化学表記Ｒ及びＳ、このＲ及びＳ表記法はPure Appl Chem 45 : 11−30 (1976)に記載された規則に対応する、により指定することができる。本明細書で使用される化合物の化学名称は、別途指示されていなければ、立体化学異性体のすべての可能な形態を含む。
【００２４】
ある実施態様においては、式Ｉで表される個々の化合物は、Ａｉｂ及び他のアルファ，アルファ−二置換アミノ酸、及び複数のキラルアミノ酸、本明細書でさらに議論するようにこれらのすべて又は実質的にこれらのすべては単一のキラリティからなる、すなわち、すべてＤ−アミノ酸又はすべてＬ−アミノ酸、から選ばれた少なくとも２つのアキラルアミノ酸を含有する実質的にらせん形領域を含む。このような、単一のキラリティからなる式Ｉで表される個々の化合物は、単独で又は他の個々の化合物との組合せで用いることができる。特に、単一のキラリティからなる、式Ｉで表される第一の個々の化合物は、単一で第一の化合物とは反対のキラリティからなる、式Ｉで表される第二の個々の化合物との組合せで用いることができる。
【００２５】
このように式Ｉで表される化合物は、ラセミ又はその非ラセミ混合物の形態と同様に、光学異性体の形態で存在することができる。式Ｉで表される化合物は、単一のジアステレオマー又は立体化学異性体の形態による混合物として本発明に適用することができる。本発明の化合物は、典型的には、まずキラリティを限定したアミノ酸の構成単位を選択することにより合成することができる。ジアステレオマーは、クロマトグラフィー、蒸留、結晶化、昇華等の通常の手段により分離することができる。光学異性体は通常の方法により、例えば光学活性な酸又は塩基で処理してジアステレオマーの塩を形成することにより、ラセミ混合物を分離にして得られる。適当な酸の例としては、酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジトルオイル酒石酸、及びカンファースルホン酸が挙げられる。ジアステレオマーの混合物は、結晶化してこれらの塩から光学的に活性な塩基を遊離させることにより分離することができる。光学異性体の他の分離方法としては、エナンチオマーの分離を最大にするように最適に選択されたキラルクロマトグラフィーカラムの使用を含む。他の適用可能な方法としては、式Ｉで表される化合物と、活性な形態での光学的に純粋な酸又は光学的に純粋なイソシアネートとを反応させることにより、共有結合のジアステレオマー分子を合成する方法を含む。合成されたジアステレオマーは、クロマトグラフィー、蒸留、結晶化、昇華等の通常の手段により分離することができ、さらに加水分解してエナンチオマーの純粋な化合物を得る。式Ｉで表される光学的に活性な化合物は、同様に光学的に活性な出発材料を用いることにより得ることができる。これらの異性体は、遊離酸、遊離塩基、エステル又は塩の形態で存在することができる。
【００２６】
本発明は、また単離された化合物を包含する。単離された化合物は、混合物中に化合物が少なくとも１０％の存在し、本明細書に記載されているような、通常の生物学的分析において検出可能な（すなわち、統計学的に有意な）生物活性を示す化合物に関する。好ましくは、単離された化合物は混合物の少なくとも５０％；より好ましくは混合物の少なくとも８０％；最も好ましくは混合物の少なくとも９０％又は少なくとも９５％である。
【００２７】
本発明は、所定の膜内プロテアーゼの酵素活性を阻害するのに有用な化合物及び方法を含む。膜内プロテアーゼは、細胞膜内に活性部位が埋め込まれた酵素に関し、プロテアーゼは複数の膜貫通領域から構成されている。Wolfe MS (1999) Biochemistry 38 : 11223−11230。
【００２８】
本明細書の他の箇所で述べているように、ある実施態様においては、対象はレトロウイルス感染、特にヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染を含む、がない。レトロウイルスは、レトロウイルス科ファミリーに属するＲＮＡウイルスである。これらのウイルスは、宿主細胞の感染後、ウイルスのゲノムのＤＮＡを合成するよう指示するＲＮＡ依存−ＤＮＡポリメラーゼ（逆転写酵素）を特性として含有する。レトロウイルス科はサブファミリーの腫瘍ウイルス亜科（腫瘍ウイルス）、例えばヒトＴリンパ球向性ウイルス（ＨＴＬＶ）、ラウス肉腫ウイルス（Rous sarcoma virus）、アベルソン白血病ウイルス（Abelson leukemia virus）、マウス乳腺腫瘍ウイルス（murine mammary tumor virus）、及びメゾン−ファイザー サルウイルス（Mason−Pfizer monkey virus）；ＨＩＶ−1、ＨＩＶ−2、ビスナウイルス（Visna−virus）及びネコ免疫不全ウイルス（feline immunodeficiency virus）を含むレンチウイルス亜科（Lentivirinae、遅発性ウイルス）、；及びスプマウイルス亜科（Spumavirinae）、例えばサル泡沫状ウイルス（Simian foamy virus）及びヒト泡沫状ウイルス（human foamy virus）を含む。それらの名前が示唆するように、これらのウイルスの多くが、感染細胞の悪性転化（malignant transformation）に関する症状及び日和見感染に導く免疫不全の誘発の原因となる。特定のレトロウイルス感染の症状は、当該技術分野において周知であり、例えばHarrison’s Principles of Internal Medicine, 14th Ed., Fauci AS et al.., eds, New York : McGraw−Hill, 1998, Chapters 192 and 308。本明細書で使用されているように、ＨＩＶ感染の症状は急性ＨＩＶ症候群、無症候段階、早期症候性疾患（early symptomatic disease）、神経疾患、二次感染、腫瘍、及び臓器特異症候群（organ−specific syndrome）を含むＨＩＶ病の段階に関連した臨床症状及びウイルス血症のレベルの両方を含む。
【００２９】
II. 詳細な説明
本発明の第一の面によれば、式Ｉ：Ｒ１−(Ｒ２)ｎ−Ｒ３で表される化合物を提供する。式中、
Ｒ１は水素、アシル、アルコキシカルボニル及びアミノカルボニルからなる群から選ばれ；
(Ｒ２)ｎはアミノ酸Ｒ２、それぞれ互いに独立して選択される、のオリゴマーであり；
各Ｒ２は独立してアキラルのＬ−又はＤ−アミノ酸であり；
ｎは５〜３０の整数であり；及び
Ｒ３はヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アミノ、アミノアルキル及びアミノアリールからなる群から選ばれる。
【００３０】
好ましくは、(Ｒ２)ｎはアミロイド前駆体タンパク質のセクレターゼ切断部位を模した少なくとも一つのジペプチドを含有する、すなわち、(Ｒ２)ｎを含む化合物が少なくとも一つのジペプチドを含有する、ここでＡＰＰを切断可能なセクレターゼ（例えば、γ−セクレターゼ）は、ＡＰＰ中のセクレターゼ切断部位を模したジペプチドを切断することができる。実施例に、(配列番号:13)を有するＡＰＰ中のセクレターゼ切断部位が存在するジペプチド配列を記載する。典型的なジペプチドは、Ａｌａ−Ｔｈｒ；Ｖａｌ−Ｉｌｅ；Ａｌａ−Ｒ４、Ｒ４は（１）疎水性アミノ酸（例えばグリシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、４−ベンゾイルフェニルアラニン、トリプトファン）、（２）親水性アミノ酸（例えばセリン、トレオニン）又は（３）トレオニン誘導体（例えばＯ−ベンジルトレオニン）；Ｖａｌ−Ｒ５、Ｒ５は嵩高い疎水性アミノ酸（例えば、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン）；及びＲ６−Ｉｌｅ、Ｒ６は嵩高い疎水性アミノ酸（例えばイソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン）である。
【００３１】
好ましくは、化合物は溶液中で実質的にらせん形の立体構造をとる。したがって、いくつかの実施態様においては、(Ｒ２)ｎは少なくとも一つのらせん誘導アミノ酸を含む。いくつかの実施態様においては、(Ｒ２)ｎは少なくとも二つのらせん誘導アミノ酸を含む。このようならせん誘導アミノ酸は、アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）を含む、アルファ，アルファ−二置換アミノ酸であってよい。ある実施態様においては、(Ｒ２)ｎはＡｉｂ−Ｘ−Ｘ−Ａｉｂを含む、ここでＸは、それぞれの例において非らせん誘導アミノ酸を含むアミノ酸である。ある実施態様においては、(Ｒ２)ｎはＡｉｂ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ａｉｂを含む、ここでＸは、それぞれの例において非らせん誘導アミノ酸を含むアミノ酸である。本明細書では「実質的にらせん形の立体構造」は、少なくとも２５％のらせん性を意味するものとして用いる。らせん性のパーセントは、円偏光二色性（ＣＤ）及び二次元核磁気共鳴（２−Ｄ ＮＭＲ）を含む当該技術分野において周知の技術を用いて測定することができる。
【００３２】
ある実施態様においては、少なくとも一つのＲ２はキラルアミノ酸である。ある実施態様においては、少なくとも一つのＲ２はＬ−アミノ酸である。他の実施態様においては、少なくとも一つのＲ２はＤ−アミノ酸である。(Ｒ２)ｎが一つ以上のキラルアミノ酸を含有するある実施態様においては、すべてのキラルアミノ酸はＤ−アミノ酸である。驚くべきことに、実施例に記載された、Ｄ−アミノ酸を含有するすべての実施態様は、それらのＬ−アミノ酸を含有するすべての対応する化合物と比較し、Ａβ生成の阻害に対して等価である。事実、すべてのＬ−形態の化合物及びすべてのＤ−形態の化合物の活性は、組合せて用いる場合、相加的である。しかし、対照的にＤ−及びＬ−アミノ酸の混合物を含む所定の化合物の活性が、所定の分子内のキラリティの均一性が失われることにより減少することが、本発明によって見出された。
【００３３】
これらの及び他の実施態様のいくつかにおいては、キラルアミノ酸はＤ−アミノ酸である。Ｄ−アミノ酸を用いる実施態様は、対応するＬ−アミノ酸を用いる実施態様に比べてプロテアーゼ分解に対してより安定であると考えられる。
【００３４】
これらの及び／又は他の実施態様において、少なくとも一つのＲ２は疎水性アミノ酸、例えばグリシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、４−ベンゾイルフェニルアラニン、トリプトファンである。それに加えて又はそれとは別に、Ｒ２は親水性アミノ酸、例えばセリン、トレオニンである。特に好ましい実施態様においては、少なくとも一つのＲ２は、Ａｉｂ等のアルファ，アルファ−二置換アミノ酸である。
【００３５】
式Ｉで表される化合物は、以下の特別の実施態様を含む。
【化２】
2005532264.tif 000004
式中、Bocはｔ−ブチロキシカルボニル；OBzはＯ−ベンジルエステル；OMeはＯ−メチルエステル；及びAibはアミノイソ酪酸；及びBPAは４−ベンゾイルフェニルアラニンを表す。
【００３６】
このように、前述の実施態様は、少なくとも一つの挙げられたアミノ酸がＤ−アミノ酸である化合物を含む。それに加えて又はそれとは別に、前述の実施態様は、少なくとも一つの挙げられたアミノ酸がＬ−アミノ酸である化合物を含む。
【００３７】
本発明の化合物は、所定のアスパルチルプロテアーゼ類の酵素活性を生体内及び生体外で阻害するのに有用である。該化合物は、特にＡＰＰからアミロイド−β ペプチドを生成する最終段階で触媒する、γ−セクレターゼの強力な阻害剤である
【００３８】
γ−セクレターゼは、ＡＰＰからのＡβ生成の最終段階で触媒し、アルツハイマー病の病因の中心的役割を演ずる。らせん形擬似ペプチドによるこの酵素の阻害は、膜内タンパク質分解の阻害、後者はγ−セクレターゼの特徴である、と一致する。
【００３９】
本発明のこの面は、特定のらせん形擬似ペプチド（実施例に記載されている）が、溶液中で実質的にらせん形の立体構造をとり、ＡＰＰからのＡβ生成を阻害できることの発見に部分的に基づいている。特別の理論又はメカニズムと結びつけることを意図するものではないが、式Ｉで表される化合物は、生体内及び生体外で膜内プロテアーゼ阻害のための擬似ペプチドとして機能する。この型の化合物は、過度の実験を行うことなしに、市販されている材料から簡単な数工程で容易に合成することができる。式Ｉで表される化合物は、マイクロモル以下の濃度でγ−セクレターゼ活性を非常に阻害することができる。総Ａβ及びＡβ４２繊維の生成はこれらの化合物により効果的に阻害され、かつ膜関連ＡＰＰのＣ末端フラグメント（すなわち、γ−セクレターゼの基質）はこれらの化合物の添加に依存して上昇する。
【００４０】
式Ｉで表される化合物の好ましい組は、Ｒ２が少なくとも一つのＤ−アミノ酸を含有する化合物を含む。驚くべきことに、実施例に記載された、Ｄ−アミノ酸を含有するすべての実施態様は、それらのＬ−アミノ酸を含有するすべての対応する場合と比較し、Ａβ生成の阻害に対して等価である。実施例に記載するように、Ｄ−アミノ酸を含有する本発明の化合物を使用する治療上の利点は、例えば代謝における安定性の向上である。
【００４１】
ある実施態様においては、式Ｉで表される化合物は、純粋なＲ立体異性体であることができる。別の実施態様においては、式Ｉで表される化合物は、純粋なＳ立体異性体であることができる。さらに別の実施態様においては、式Ｉで表される化合物は、Ｒ及びＳ立体異性体の混合物を含むことができ、一つの立体異性体の他の立体異性体に対する寄与率は、約１：９９〜約９９：１である。
【００４２】
ある実施態様は、式Ｉで表される化合物の塩を包含する。好ましい実施態様においては、化合物の塩は上で定義した薬学上許容し得る塩である。本発明の別の面によれば、本発明の化合物を含む医薬組成物及び薬学上許容し得る担体、並びに本発明の化合物及び薬学上許容し得る担体を組み合わせる医薬組成物の調製方法を提供する。したがって、また本発明の化合物の薬学上許容し得る塩を提供する。随意的に、医薬組成物はさらに本発明の化合物の脳への送達を促進する担体を含有する。
【００４３】
薬学上許容し得る塩は、要求される化合物の投与経路に基づいて選択することができる。例えば、好ましい実施態様においては、担体は経口投与に適している。より好ましい実施態様においては、組成物は化合物の脳への送達を促進するのに適した担体又は追加剤を含む。脳への化合物の送達を促進できる担体は、血液脳関門を通過して移動を促進する担体及び神経細胞による化合物の摂取を促進する担体を含む。このような担体の例としてして、米国特許第5,604,198号（Poduslo等）、第5,827,819号（Yatvin等）、及び第5,919,815号（Bradley等）に開示された例を含む。
【００４４】
本発明のさらに別の面によれば、β−アミロイド関連疾患を有する、又は有する危険性のある対象を処置する方法を提供する。該方法は、β−アミロイド関連疾患を有する、又は有する危険性のある対象に、β−アミロイド関連疾患を治療するための治療上有効な量の式Ｉで表される化合物を投与する。ある実施態様によれば、β−アミロイド関連疾患は神経変性疾患である。所定のこれらの及び／又は他の実施態様によれば、β−アミロイド関連疾患はアルツハイマー病である。随意的に、本発明の化合物をβ−アミロイド関連疾患の処置に有用な第２剤、例えばアセチルコリンエステラーゼ阻害剤、の有効量との組み合わせにより対象に投与する。ある好ましい実施態様においては、該化合物を経口投与する。
【００４５】
このように、本発明の化合物は、例えばアルツハイマー病及びダウン症候群からなる痴呆症を含む種々のβ−アミロイド関連疾患に対して活性である。神経変性疾患は、神経組織におけるアミロイド−βペプチドに関連して発症し、アミロイド−βペプチドの沈着、すなわち、β−アミロイドプラークが原因となると考えられている。
【００４６】
ＡＰＰに加えて、セクレターゼ類はレセプターのノッチファミリー（Notch family）の構成部分をそれらの基質としている。De Strooper B等 (1999) Nature 398 : 518−522。ノッチタンパク質は、発育を通して細胞運命の選択に関係する、リガンドにより活性化される膜貫通受容体である。ノッチ活性化（Notch activation）は、ＤＮＡ結合タンパク質のＣＳＬファミリー構成部分（ＣＳＬはＣＢＦ１、Ｓｕ（Ｈ）、Ｌａｇ−１を表す）との関連を通して、核内の転写に変化を生じさせる。ノッチはプロテアーゼにより切断され、切断されたフラグメントの核内への挿入を可能にすると考えられている。本質的に活性な膜結合ノッチ−１タンパク質によるシグナルは、優先してＣＳＬと相互作用するノッチの細胞内領域（ＮＩＣＤ）のタンパク質分解による遊離を要求する。Schroeter EH等 (1998) Nature 393 : 382−386。
【００４７】
特別の理論又はメカニズムと結びつけることを意図するものではないが、γ−セクレターゼの阻害は、皮質下梗塞及び白質脳症（leucoencephalopathy）を伴う染色体優性脳動脈症（cerebral autosomal dominant arteriopathy）（ＣＡＤＳＩＬ）を含むノッチ関連疾患の処置に有用であると出願人は考えている。ノッチ関連疾患は、異常ノッチ関連タンパク質分解又はシグナリングを原因とする疾患に関する。例えば、ノッチ関連疾患は、不適切なノッチ活性の原因となる、ノッチ受容体中の突然変異により発症し得る。Schroeter EH等, Nature 393 : 382−386 (1998)。家族性血管性痴呆の最も通常な形態であるＣＡＤＳＩＬは本質的に、クロモソーム１９上のノッチ３遺伝子座内の単一のミスセンス突然変異に関連する動脈の疾患であることが明らかである。Ruchoux MM 及び Maurage CA, J Neuropathol Exp Neurol 56 : 947−964 (1997) ; Thomas NJ等, Ann N Y Acad Sci 903 : 293−8 (2000)。他のノッチ関連疾患は、例えば急性リンパ性Ｔ細胞白血病（acute lymphoblastic T−cell leukemia）を含む特定の新生物を含有する。Selkoe DJ, Curr Opin Neurobiol 10 : 50−7 (2000) ; Deftos ML 及び Bevan MJ, Curr Opin Immunol 12 : 166−72 (2000) ; Jeffries S 及び Capobianco AJ等, Mol Cell Biol 17 : 6265−6273 (1973) ; Zagouras P等, Proc Natl Acad Sci USA 92 : 6414−6418 (1995)。
【００４８】
上記の面において、本発明の化合物は、またＣＡＤＳＩＬ及び所定の型の新生物、例えば所定の白血病を含むノッチ関連疾患に有用であると考えられる。この面によれば、ノッチ関連疾患を有する、又は有する危険性のある対象を処置する方法は、ノッチ関連疾患を有する、又は有する危険性のある対象に治療上有効な量の式Ｉで表される化合物を投与することを含む。
【００４９】
このように、本発明の方法は、β−アミロイド関連疾患、ノッチ関連疾患等のセクレターゼによって媒介される疾患に苦しめられる又は罹りやすい対象の処置を含む。該方法は、かかる疾患を有する、又は有する危険性のある対象に治療上有効な量の式Ｉで表される化合物を投与することを含む。本発明の対象となる好ましい対象は、β−アミロイド関連疾患を有する。本発明の対象となるより好ましい対象は、アルツハイマー病を有し、かつ他のβ−アミロイド関連疾患を有しない。
【００５０】
β−アミロイド関連疾患を有する対象は、少なくとも一つの同定し得る徴候、症状、又はかかる疾患を同定するための当該技術分野で公知の臨床標準に従う、β−アミロイド関連疾患の診断をするための十分な分析結果を有する対象である。ある場合においては、診断をするために必要な同定し得る徴候、症状、又は分析結果がない。例えば、アルツハイマー病の診断は、大部分は他の原因を除外する認識テストにおける陽性の検出に基づいて、除外の診断としてなされる。例えば、Bird TD, In : Harrison’s Principles of Internal Medicine, 14th Ed., Fauci AS等, eds, New York : McGraw−Hill, 1998, Chapters 26 及び 367を参照することができる。ある場合においては、組織診断をすることが可能である。
【００５１】
β−アミロイド関連疾患を有する危険性のある対象は、β−アミロイド関連疾患を発病するための同定し得る危険因子を有する対象である。例えば、β−アミロイド関連疾患を有する危険性のある対象は、家族性アルツハイマー病を有する構成員を家族に含むことができる。β−アミロイド関連疾患を有する危険性のある対象の別の例は、ダウン症候群を有する４０歳以上の対象である。
【００５２】
本発明のこの面によれば、本明細書で開示する新規な組成物は、薬学上許容し得る担体中に配置され、薬剤送達の公知の方法に従って受容者である対象（好ましくはヒト）に送達される。本発明の化合物は、単独であるいは公知の又は出願人によってβ−アミロイド関連疾患の処置に有用であると考えられている少なくとも一種の他の剤との組み合わせで投与することができる。一般に、式Ｉで表される化合物を生体内で送達するための本発明の方法は、当業者に認知されたプロトコール中の薬剤を式Ｉで表される化合物で置き換える、実質的に手続き上の修正のみにより剤送達のための当業者に認知されたプロトコールに適用する。
【００５３】
β−アミロイド関連疾患の処置に有用であると知られている他の剤は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、特にテトラヒドロアミノアクリジン（タクリン塩酸塩、ＣＯＧＮＥＸ（登録商標、Ｐａｒｋｅ−Ｄａｖｉｓ））を含む。
【００５４】
語句「治療上有効な量」は、疾患又は病気の発症を阻止し、症状を緩和し、進行を止める化合物の量を意味する。語句「治療上有効な量」は、β−アミロイド関連疾患に関しては、β−アミロイド関連疾患の発症を阻止し、症状を緩和し、進行を止める式Ｉで表される化合物の量を意味する。一般にこのような症状は、少なくとも部分的には増量したアミロイド−βペプチドの蓄積の結果である。このように、「β−アミロイド関連疾患」は所定の臨床的所見により特徴付けられ、過剰量のアミロイド−βペプチドに関連すると一般に考えられている。アミロイド−βペプチドの量に関して「過剰」は、（１）正常で健康な対象において生成するアミロイド−βペプチドの量より多く、及び（２）不利な医学的状態を生じるアミロイド−βペプチドの量に関する。用語「処置」は、発症を阻止し、症状を緩和し、進行を止めるために十分な、化合物（例えば式Ｉで表される）の治療上有効な量を対象に投与することとして定義する。用語「対象」は、本明細書に記載されているように、哺乳類として定義する。好ましい実施態様においては、対象はヒトである。
【００５５】
本明細書に開示された製剤は、標準操作に従って調製され、病状を軽減し、阻止し又は除去するため、あるいは病状の進行を遅らせ、停止するために選択された投与量で投与される（例えば、Remington’s Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton, PA, 及び Goodman and Gilman’s The Pharmaceutical Basis of Therapeutics, Pargamon Press, New York, N.Y., ヒトの治療のための種々の剤の投与方法の一般的な記載に関するこれらの内容は、参照によって本明細書に組み込まれる）。式Ｉで表される化合物は、放出が制御され又は持続される送達システム（例えばカプセル、生分解(ｂｉｏｅｒｏｄａｂｌｅ)マトリックス）を用いて送達する。式Ｉで表される化合物の投与に適する、薬剤送達のための典型的な遅放送達システム（delayed−release delivery system）は、U.S. Patent Nos. US 5,990,092 (Walsh) ; 5,039,660 (Leonard) ; 4,452,775 (Kent) ; 及び 3,854,480 (Zaffaroni)に記載されている。
【００５６】
本発明の薬学上許容し得る組成物は、１又は２以上の無毒で薬学上許容し得る担体及び／又は希釈剤及び／又はアジュバント及び／又は賦形剤、本明細書では全体として「担体」材料と呼ぶ、とともに用いる式Ｉで表される１又は２以上の化合物、並びに所望する場合は他の成分を含有する。
【００５７】
本発明の化合物は、いかなる経路によっても、好ましくはその経路に採用される医薬組成物の形態で、かつ病状に応じて投与することができる。化合物及び組成物は、例えば経口、血管内、筋肉内、皮下、腹膜内、局所により投与することができる。好ましい投与方法は経口投与である。投与方法の一つには脳への直接投与が含まれる。
【００５８】
経口投与のために医薬組成物は、例えば錠剤、カプセル、懸濁液又は液体の形態とすることができる。医薬組成物は、好ましくは治療上有効な量の活性成分を含有する投与量単位の形態で調製されている。このような投与量単位の例としては、錠剤及びカプセルが挙げられる。治療目的のために錠剤及びカプセルは、活性成分に加えて、結合剤、例えばアカシアガム、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ソルビトール、又はトラガカントゴム；増量剤、例えばリン酸カルシウム、グリシン、ラクトース、トウモロコシ澱粉、ソルビトール、又はサッカロース；潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、シリカ、又はタルク；崩壊剤、例えばポテト澱粉、香料、着色剤、又は湿潤剤を含有することができる。経口液剤は、一般に水溶液、油性溶液、懸濁液、エマルション、シロップ又はエリキシルの形態であり、通常懸濁剤、乳化剤、非水剤、防腐剤、着色剤、芳香剤等の添加剤を含有することができる。液体製剤のための添加剤の例としては、アカシア、アーモンドオイル、エチルアルコール、ココナツオイル分画、ゼラチン、グルコースシロップ、グリセリン、水素化食用油、レシチン、メチルセルロース、メチル又はプロピル パラ−ヒドロキシベンゾエート、プロピレングリコール、ソルビトール、又はソルビン酸を含む。
【００５９】
医薬組成物は、また非経口的な注射により投与することができる。非経口投与の製剤は、水又は非水等張無菌注射液又は懸濁液の形態とすることができる。これらの溶液又は懸濁液は、経口投与の製剤で用いた１種又は２種以上の担体を有する無菌粉末又は顆粒から調製することができる。該化合物は、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール、コーンオイル、ベンジルアルコール、塩化ナトリウム及び／又は種々の緩衝液に溶解することができる。
【００６０】
局所的に使用するために、本発明の化合物を皮膚、又は鼻及び喉の粘膜への使用に適した形態に調製することができ、クリーム、軟膏、液体スプレー又は吸入剤、トローチ、又は湿布剤の形態することができる。このような局所製剤は、さらに活性成分の表面浸透を促進するために、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等の化学物質を含有することができる。局所投与に適した担体としては、鉱油、ワセリン等を用いる水中油形乳剤又は油中水乳剤、ヒドロゲル等のゲルを含む。別の局所製剤は、シャンプー、歯磨き、うがい薬を含む。
【００６１】
目又は耳に応用するために、本発明の化合物は、軟膏、クリーム、ローション、塗布剤、又は粉末に基づく疎水性又は親水性に調剤した液体又は半液体の形態とすることができる。
【００６２】
直腸投与のために、本発明の化合物をココアバター、ワックス、他のグリセリド等の通常の担体と混合した坐薬の形態で投与することができる。
【００６３】
他の形態として、本発明の化合物は、送達時に再構成するために粉末の形態にすることができる。
【００６４】
本発明の化合物及び／又は組成物を用いるβ−アミロイド関連疾患を処置するための投与量計画（dosage regimen）は、患者のタイプ、年齢、体重、性別、医学的状態、β−アミロイド関連疾患の重さ、投与経路及び頻度、並びに使用する特定の化合物、を含む要因の種類に従って選択する。一般に投与量は、β−アミロイド関連疾患の処置のための投与量を最適化する標準実施に従って決定する。
【００６５】
投与量計画は、例えば以下の認識研究に関する処置に対する応答によって決定する。このような認識研究は、当該技術分野において周知であり、それらはミニ知的状態試験（mini-mental status examination）を含む。例えば、Bird TD, In : Harrison’s Principles of Internal Medicine, 14th Ed., Fauci AS等, eds, New York : McGraw−Hill, 1998, Chapter 26を参照することができる。加えて、本発明の化合物が生体内でβ−アミロイドの合成を阻害すると考えられているため、投与量計画はβ−アミロイドを測定することによっても決定することができる。β−アミロイドが血中及び脳脊髄液（ＣＳＦ）中に放出され、神経組織に限定されないことに注意すべきである。したがって投与量計画は、本発明の組成物の投与量に相関する血中又はＣＳＦ中のβ−アミロイドを経時的に測定することによっても決定することができる。血中又はＣＳＦ中に存在するβ−アミロイドの測定方法は、例えばＡβ特異ＥＬＩＳＡに基づく方法を含めることができる。
該組成物は、投与方法に依存して活性成分の重量で０．０１〜９９％含有することができる。
【００６６】
本発明の他の面においては、膜内プロテアーゼの活性を阻害する方法を提供する。この方法は、膜内プロテアーゼ活性の阻害を検出できる量の式Ｉで表される化合物と膜内プロテアーゼとを、該化合物が存在しないときに膜内プロテアーゼが基質に対する酵素活性を有する条件下で接触させることを含む。この方法はまた、膜内プロテアーゼと式Ｉで表される化合物の２種又はそれ以上の組み合わせとを、膜内プロテアーゼを阻害するために接触させることを含む。本発明のこの面による好ましい実施態様においては、膜内プロテアーゼはγ−セクレターゼである。式Ｉで表される化合物は、単独でもアスパルチルプロテアーゼ活性を阻害する他の化合物との組み合わせでも用いることができる。ある実施態様においては、本発明の化合物と膜内プロテアーゼとを生体外で接触させる。膜内プロテアーゼは、生体外アッセイ(in vitro assays)のために単離され、または細胞性であることができる。ある他の実施態様においては、本発明の化合物と膜内プロテアーゼとを生体内で接触させる。
【００６７】
阻害活性が未知の化合物の阻害効果は、例えば標準的技術に従って膜内プロテアーゼ活性をモニタリングしながら評価することができる。例えば、γ−セクレターゼをβ−アミロイドの生成に適した条件に維持し、該酵素を試験する化合物と接触させ、β−アミロイドの生成をＥＬＩＳＡ等の標準的な分析方法で観察する。γ−セクレターゼの減少がγ−セクレターゼの基質を増大させるため、γ−セクレターゼにより特異的な方法は、γ−セクレターゼをβ−アミロイドの生成に適した条件に維持し、該酵素を試験する化合物と接触させ、γ−セクレターゼの基質の蓄積又は濃度をウエスタンブロッティング等の標準的な分析方法で観察する。該化合物の存在下で測定した酵素活性の減少は、該化合物が存在しない場合の酵素活性と比較するとき、該化合物によるγ−セクレターゼの阻害を表す。分析の完全性を保証するため、既知の阻害活性により式Ｉで表される化合物の阻害活性を評価する、平行分析を実施することができる。式Ｉで表される化合物は、γ−セクレターゼの阻害剤であることが示されているため、それらは、未知の阻害活性を有する化合物の分析のために陽性のコントロールを提供することができる。式Ｉで表される化合物を用いる分析で阻害がないことは、分析自体に問題があることを示す。
【００６８】
実施例
以下の例は単なる例示であり、いかなる意味においても本発明の範囲を限定するものではない。
【００６９】
実施例の序文
現在相当数の証拠が、β−アミロイドタンパク質（Ａβ）の凝集が最終的に神経変性及び痴呆に導くカスケードを開始する第一の分子障害であるとする、アルツハイマー病（ＡＤ）のアミロイド仮説を支持している。Ａβは、アミロイド−β前駆体タンパク質（ＡＰＰ）と呼ばれる、より大きなタンパク質からスプライシングしたものであり、Ａβ生成の最終段階は、γ−セクレターゼ、重要なＡＤ治療の標的と考えられた酵素、による切断である。我々は研究室において、このタンパク質切断酵素又はプロテアーゼを特徴づけるための分子プローブとしてγ−セクレターゼの阻害剤を開発した。これらの阻害剤研究は、コンピュータモデリング、分子生物学、生化学的精製とともにγ−セクレターゼが、細胞内の脂質環境中で切断する非常に珍しいプロテアーゼであることを示唆する。我々は、プロテアーゼのこの固有の性質を利用する新規な化合物を同定した。脂質環境において、タンパク質は渦巻き状又はらせん形の形状をとり、このことはγ−セクレターゼによって切断されるＡＰＰの部位にとっても真実である。我々は、小さなペプチドも同様のらせん形及びＡＰＰを模した形をとり、これらの化合物がγ−セクレターゼを阻害し、Ａβ生成をブロックすることを発見した。重要なことに、我々はペプチドの鏡像体に同じ潜在能力があることを発見した。何故なら、かかるペプチドの鏡像体は体内で非常に安定であり、これらの化合物は薬剤開発の新たな手掛かりとなるからである。
【００７０】
ＡＤ患者の脳の検死解剖による解析は、死んだ及び死にかかっている神経単位に会合した多数のアミロイドプラーク、タンパク質性凝集塊を明らかにする(1)。これらのプラークの第一のタンパク質成分は、アミロイドβ−前駆体タンパク質（ＡＰＰ）と呼ばれる、機能が未知なより大きな膜タンパク質から誘導される４ｋＤaタンパク質のアミロイドβ−タンパク質（Ａβ）である(2)。Ａβは、２つのプロテアーゼ活性を介してタイプＩの一体化した膜タンパク質から生成される(3)。まず、β−セクレターゼがＡβＮ末端においてＡＰＰを切断し、ＡＰＰ（β−ＡＰＰ２）及び９９残基、１２ｋＤaのＣ末端フラグメントの可溶性の形態を生成する（Ｃ９９；図１参照）。このＣ末端フラグメントはγ−セクレターゼによってさらにプロセスが進行し、単一の膜貫通領域内で起きる異常な切断を介してＡβを生成する。加えて、α−セクレターゼはＡβ形態内でＡＰＰを切断する。このα−セクレターゼは、同様にＡＰＰの可溶性の形態（α−ＡＰＰｓ）及び８３残基、１０ｋＤaのＣ末端フラグメント（Ｃ８３）を遊離させる。また、Ｃ８３はγ−セクレターゼの基質としての役割を果たし、ＡβのＮ末端を切り詰めた３ｋＤaのタンパク質（ｐ３）を生成する。
【００７１】
Ａβの２つの主要な形態は、４０−及び４２−アミノ酸Ｃ末端変種のＡβ４０及びＡβ４２である。より長くより疎水的なＡβ４２は、アミロイドプラークの構成及びＡＤの病因(4‐6)に特に関係している。重要なことに、家族性早期発症（＜６０歳）常染色体優性ＡＤ（ＦＡＤ）と関連する遺伝子突然変異は、すべてＡβ２産生を増大させている(4‐6)。このようなＦＡＤ原因突然変異はＡＰＰ遺伝子それ自体に含まれ、β−及びγ−セクレターゼ切断部位の近くにこれらの突然変異が存在する。しかし、ＡＰＰ内の突然変異はＦＡＤの症例の小さな割合に対してのみの原因となる。大部分はプレセニリン１及び２と呼ばれる一体化した膜タンパク質内の突然変異が原因となる(4‐6)。これらのプレセニリン突然変異は、トランスフェクトした細胞系内(7, 8)及びトランジェニックマウス内(7, 9)のＡβ４２形態の特異的増加をもたらす。また、プレセニリン１（ＰＳ１）、プレセニリン２（ＰＳ２）、又はＡＰＰ突然変異関連ＦＡＤの対象では、血漿中のＡβ４２が上昇し、一次線維芽細胞培養液中のＡβ４２が増加した(10)。プレセニリン遺伝子中の突然変異が大多数のＦＡＤ症例の原因となることの発見は、対応するタンパク質の正常な生物学的役割及びこれらのタンパク質がいかにＡβ４２産生に影響するかを決定する作業に混乱を生じさせた。
【００７２】
γ−セクレターゼの同定は、この酵素がＡＤの病因及び処置に重要であることが明らかであるにもかかわらず、確実ではなかった。我々の研究室では、γ−セクレターゼを示す基質ベースの遷移状態類似体を開発し、これらの化合物をこの謎のプロテアーゼを理解するための有用なプローブとして提供した(11−13)。阻害剤研究は、γ−セクレターゼに関するアスパルチルプロテアーゼのメカニズムを支持する(12)。さらに、分子モデル(12)及び突然変異誘発実験(14)は、γ−セクレターゼに初期結合するＡＰＰ膜貫通領域に対し、らせん形モデルを示唆した。このことは、この酵素が膜内の異常タンパク質分解を触媒するとする我々の仮説と整合する。我々はまた、プレセニリンにおける経膜的な２つのアスパラギン酸塩がγ−セクレターゼの活性に重要であり、プレセニリン自体がγ−セクレターゼであり、膜内活性部位を含む新規なアスパルチルプロテアーゼを示唆することを見出した(15)。我々及び他の研究者は、これを支持するものとして、プレセニリンがアスパルチルプロテアーゼ遷移状態類似γ−セクレターゼ阻害剤の分子標的であり(16,17)、プロテアーゼの活性部位がプレセニリン中に存在する強力な証拠であると報告した。さらに最近、我々は修飾した遷移状態類似阻害剤を用い、プレセニリン及びニカストリン（プレセニリン親和性タンパク質）が、γ−セクレターゼに近い活性を記録することを示した(18)。さらに、我々はＣ８３、γ−セクレターゼの基質、がプレセニリン及びニカストリンとこの親和性マトリックス（affinity matrix）から定量的に共精製（copurify）されることを見出す。特別の理論又はメカニズムと結びつけることを意図するものではないが、この精製段階の間、活性部位が阻害剤により占領されているため、この発見は基質の初期の結合部位が分かれていることの証拠であると考えている。この初期の部位に結合した後、基質は空間配置の変化により活性部位に接近することができる。
【００７３】
モデル化(12)及び突然変異誘発(14)は、γ−セクレターゼと初期に相互作用する基質の膜貫通領域について、らせん形構造を示唆する。事実、我々はＡＰＰγ−セクレターゼ切断部位に基づくらせん形ペプチドが、細胞培養内でのプロテアーゼ活性を妨げることを見出した。重要なことに、らせん形Ｄ−ペプチドがそれらの対応するＬ−ペプチドと同じ効果でγ−セクレターゼ活性を妨げ、新たな治療剤及び薬剤開発への新たな手がかりを示すことが見出された。
【００７４】
例１
Ａ． 結果
ＡＰＰ膜貫通領域に対するらせん形モデルに基づき、我々はγ−セクレターゼ活性を妨げる立体構造と類似の立体構造を採用して設計した短いペプチドを同定した。ＡＰＰから誘導された短いペプチドの選択した残基を２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、公知のらせん誘導アミノ酸(19, 20)、により、適切に置換えることにより、原則としてらせん形の一つの面が擬似γ−セクレターゼ切断部位で、他の面にＡｉｂを有するペプチドを供給した。我々はＩＣ５０が２μＭの低さの、ＡＰＰトランスフェクト細胞中のＡβの産生を阻害するＡｉｂ含有ペプチド（下記参照）を同定した。この阻害はγ−セクレターゼレベルにおいて起きる：γ−セクレターゼ基質Ｃ９９及びＣ８３はＡｉｂ含有ペプチドの存在下で実質的に増加する。該化合物はα−又はβ−ＡＰＰｓレベルに影響しない。円偏光二色性（ＣＤ）による立体構造の研究は、これらのペプチドが実際に溶液中でらせん形の性質を示すことを証明した。
【００７５】
我々は、ＡＰＰ配列（参照文献１９のＶＩＩｂ：Boc-Aib-Ala-Leu-Aib-Ala-Leu-Aib-Ala-Leu-Aib-O-methylester (配列番号:13)）に基づかないＡｉｂデカペプチドも２μＭのＩＣ５０でＡβの産生を阻害することを発見した。この化合物の結晶構造が決定され、ペプチドは完全にらせん形である(19)。しかし、本発明の好ましい化合物は、生体内での特異性を増大させるため、部分的なＡＰＰ配列Val-Gly-Gly-Val-Val-Ile-Ala-Thr-Val-Ile-Val-Ile (配列番号:12 ; 図１参照)に基づく構造を有する。追加の利点として、我々は、これらの高度に疎水的なペプチドが合理的に可溶性であり、他方、それらの非Ａｉｂ対応物がＤＭＳＯにおいても不溶性であることを見出した。驚くべきことに、すべてのＤ−アミノ酸含有ペプチドの対応物は、Ａβ産生の阻害に対して等価である。これらのペプチドは、反対の意味（右手の代わりに左手）であるが同様にらせん形の立体構造をとる。このように、本発明は代謝安定性を向上させた有利な擬似らせん形ペプチドを提供する。
【００７６】
ＡＰＰ膜貫通領域内のγ−セクレターゼ切断部位の配列及び擬似ペプチド阻害剤を以下に示す（ＡＰＰ中の星印はＡβ４０及びＡβ４２を生成する切断部位を意味する）：
【化３】
2005532264.tif 000005
【００７７】
上の組の擬似ペプチド（１〜５）はＡβ４２を導く切断部位を考慮して設計し、下の組（６〜１０）はＡβ４０を導く切断部位を考慮して設計した。ＩＣ５０は、ヒトＡＰＰで安定にトランスフェクトしたＣＨＯ細胞を用いる細胞ベース分析において総Ａβの産生を５０％減少させる化合物の濃度である。すべてのＤ−ペプチドの化合物６〜１０は、すべてのＬ−ペプチドの化合物６〜１０と等価である。
【００７８】
上記のらせん形擬似ペプチドに加えて、以下のらせん形擬似ペプチド(配列番号:11)は、同じヒトＡＰＰで安定にトランスフェクトしたＣＨＯ細胞を用いる細胞ベース分析において、１００ｎＭ（０．１μＭ）のＩＣ５０を有することが見出された：
Boc-D-Val-Gly-Aib-D-Val-D-Val-D-BPA-Aib-D-Thr(OBz)-D-Val-Aib-OMe 。
【００７９】
Ｂ． 実験の設計及び方法 
関連するペプチドの平行合成は、各位置での構造と活性の関係をさらに明確にし、これらの化合物の効力を最適化するのに用いる。
【００８０】
この型の有力なペプチドをより迅速に同定するために、我々は新たに購入したArgonaunt Quest 210 半自動装置を用いる平行固相ペプチド合成を採用する。我々は、Ｄ−アミノ酸版のデカペプチド配列番号:10の各位置を系統的に変化させる。多様な疎水性Ｄ−アミノ酸（Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ（ＯＢｚ）、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｇｌｙ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ）は非Ａｉｂ位置で組み込む。疎水性残基は、その性質がγ−セクレターゼに一般に好ましいことを理由に選択する。Ｄ−Ｖａｌ、Ｄ−Ｌｅｕ、及びＤ−Ｐｈｅのα−メチルアミノ酸を各位置に組み込む。これらの市販されている、アルファ，アルファ−二置換アミノ酸は、ペプチドのらせん性を増加させ、γ−セクレターゼの大きな疎水性ポケットを満たす立体的な嵩を付加する。
【００８１】
Ａｉｂ等のアルファ，アルファ−二置換アミノ酸は、カップリングの立体障害のために固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）を困難にするが、Ｆｍｏｃアミノ酸フッ化物を使用することにより、このようなペプチドを容易に、全般的に構築することができる(21)。このように、複数のＡｉｂ（４個連続するＡｉｂであってもよい）を含有するペプチド類似体を高収率及び高純度で得ることができる。標準ｏ−クロロトリチル樹脂（o‐chlorotrityl resin）をＤ‐アミノアルコールとともに添加し、添加をＵＶ分析により決定する。添加した樹脂は、ＤＭＦ中の２０％ピペリジンにより保護を外し、Ｆｍｏｃ−Ａｉｂ−Ｆと結合させる。樹脂結合ペプチドは保護を外し、逐次的にＦｍｏｃ−アミノ酸フッ化物と結合させる。種々のアミノ酸残基と最後の結合を行う前に樹脂を分離し、最初の位置を最適化することが可能な化合物を提供する。これらの化合物は、アセチル基でＮ末端を保護し、樹脂から切断する。この合成方法を一つの立体的に混み合ったペプチド（Ac-Ile-Ile-Aib-Ile-Ile-Aib-Ile-ol, 配列番号:14）の合成を通して検証する。この方法は、有意にラセミ化することなく、種々のペプタイボール（peptaibols）、１０個までのＡｉｂを有する生理活性な２０−ｍｅｒペプチドを高収率、高純度で供給した(21)。
【００８２】
最初の位置が変化した１５のＤ−ペプチドを、以前に記載した(12,13)高感度、定量的、及び簡便なサンドイッチＥＬＩＳＡを用いて、ＡＰＰトランスフェクト細胞系中の総Ａβ生成阻害能に関し試験する。最もＡβ生成を減少させることができる化合物を二回目のペプチド合成の出発原料として用い、１５個の化合物のそれぞれは第二の位置で定義され、最適な最初の残基を含有する。この反復方式で、各位置の最適な残基を決定する。すべての化合物の最終的な精製は、分取（preparative）ＨＰＬＣにより行い、特性はアミノ酸分析及び質量分析により行った。他のＡＰＰタンパク質分解フラグメント（Ｃ９９、Ｃ８３、α−及びβ―ＡＰＰｓ）における最も有力なペプチドの効果を、これらの化合物がγ−セクレターゼレベルでＡβ生成を妨げる程度を決定するこれまでの方法(11,13)により調べる。
【００８３】
【表１】
2005532264.tif 000006
【００８４】
本発明を具体的な実施態様の面から記載してきたが、これらの実施態様の詳細は本発明を限定するものと解釈すべきでない。種々の均等、変更及び修正は本発明の思想及び範囲から離れることなしに行うことができ、かかる同等な実施態様は本発明の一部であると理解される。              
【図面の簡単な説明】
【００８５】
【図１】実施例は、説明の目的で提供され、本発明の理解又は実施するために要求されるものではない図面を含んでも含まなくてもよい。図１は、ＡＰＰの種々の切断部位及びフラグメントを示す概略図である。フラグメントの中にＡβがある（Ａβ４０及びＡβ４２を含む）。
【配列表】
2005532264.tif 000007
2005532264.tif 000008
2005532264.tif 000009
2005532264.tif 000010
2005532264.tif 000011
2005532264.tif 000012
2005532264.tif 000013
2005532264.tif 000014
2005532264.tif 000015
2005532264.tif 000016
【図１】
2005532264.tif 000018