(57)【要約】本発明は、インスリン、インスリン代謝産物、インスリン類似体、インスリン誘導体又はその組み合わせからなる群から選択されるポリペプチドを含み、そしてまた界面活性剤または数種の界面活性剤の組み合わせ、場合により保存剤または数種の保存剤の組み合わせ、および場合により等張化剤、緩衝剤または他の助剤またはその組み合わせを含む医薬製剤に関する。本発明によれば、該医薬製剤は酸性ｐＨ値を有する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
インスリン（ウシ、ブタまたはヒト）、インスリン類似体、インスリン誘導体、活性インスリン代謝産物又はその組み合わせからなる群から選択されるポリペプチド；
界面活性剤または２種またはそれ以上の界面活性剤の組み合わせ；
場合により保存剤または２種またはそれ以上の保存剤の組み合わせ；および
場合により等張化剤、緩衝剤または他の添加剤またはその組み合わせ、
を含む、医薬製剤であって、酸性範囲（ｐＨ１〜６.８）のｐＨを有する透明溶液である医薬製剤。
【請求項２】
ｐＨ３.５〜６.８のｐＨ範囲を有する、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項３】
ｐＨ３.５〜４.５のｐＨ範囲を有する、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項４】
界面活性剤が、多価アルコール、グリセロール、ソルビトールおよびショ糖、ポリオールの部分および脂肪酸エステルならびにエーテルからなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項５】
多価アルコール、グリセロールおよびソルビトールの部分および脂肪酸エステルならびにエーテルが、Ｓｐａｎ（登録商標）、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）（ポリソルベート）、Ｍｙｒｊ（登録商標）、Ｂｒｉｊ（登録商標）、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）からなる群から選択される、請求項４に記載の医薬製剤。
【請求項６】
多価アルコール、グリセロールおよびソルビトールの部分および脂肪酸エステルならびにエーテルが、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０およびＴｗｅｅｎ（登録商標）８０からなる群から選択される、請求項５に記載の医薬製剤。
【請求項７】
ポリオールが、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ポロクサマー、プルロニクス、テトロニクスからなる群から選択される、請求項４に記載の医薬製剤。
【請求項８】
保存剤が、フェノール、クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、パラベンからなる群から選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項９】
等張化剤が、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、デキストロース、トレハロース、塩化ナトリウム、グリセロールからなる群から選択される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項１０】
添加剤が、例えばＴＲＩＳ、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、グリシルグリシンのような緩衝物質、または酸、アルカリ、塩のような他の物質からなる群から選択される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項１１】
インスリン類似体が、Ｇｌｙ（Ａ２１），Ａｒｇ（Ｂ３１），Ａｒｇ（Ｂ３２）−ヒトインスリン、Ｌｙｓ（Ｂ３），Ｇｌｕ（Ｂ２９）−ヒトインスリン、Ａｓｐ（Ｂ２８）−ヒトインスリン、Ｌｙｓ（Ｂ２８）Ｐｒｏ（Ｂ２９）−ヒトインスリン、ｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリンからなる群から選択される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項１２】
インスリン誘導体が、Ｂ２９−Ｎ−ミリストイル−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−パルミトイル−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−ミリストイルヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−パルミトイルヒトインスリン、Ｂ２８−Ｎ−ミリストイ
ル−ＬｙｓB28ＰｒｏB29ヒトインスリン、Ｂ２８−Ｎ−パルミトイル−ＬｙｓB28ＰｒｏB29ヒトインスリン、Ｂ３０−Ｎ−ミリストイル−ＴｈｒB29ＬｙｓB30ヒトインスリン、Ｂ３０−Ｎ−パルミトイル−ＴｈｒB29ＬｙｓB30ヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−（Ｎ−パルミトイル−γ−グルタミル）−ｄｅｓ（Ｂ３９）ヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−（Ｎ−リトコリル−γ−グルタミル）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−（ω−カルボキシヘプタデカノイル）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンおよびＢ２９−Ｎ−（ω−カルボキシヘプタデカノイル）ヒトインスリンからなる群から選択される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項１３】
インスリン、インスリン類似体および／またはインスリン誘導体が、６０〜６０００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度で存在する、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項１４】
インスリン、インスリン類似体および／またはインスリン誘導体が、２４０〜３０００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度で存在する、請求項１３に記載の医薬製剤。
【請求項１５】
界面活性剤が、５〜２００μｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項１６】
界面活性剤が、５〜１２０μｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求項１５に記載の医薬製剤。
【請求項１７】
界面活性剤が、２０〜７５μｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求項１６に記載の医薬製剤。
【請求項１８】
グリセロールおよび／またはマンニトールが、１００〜２５０ｍＭの濃度で存在する、請求項１０〜１７のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項１９】
ＮａＣｌが、１５０ｍＭまでの濃度で存在する、請求項１８に記載の医薬製剤。
【請求項２０】
緩衝物質が、５〜２５０ｍＭの濃度で存在する、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インスリン、インスリン代謝産物、インスリン類似体、インスリン誘導体又はその組み合わせからなる群から選択されるポリペプチド；界面活性剤または２種またはそれ以上の界面活性剤の組み合わせ；場合により保存剤または２種またはそれ以上の保存剤の組み合わせ；および場合により等張化剤、緩衝剤または他の添加剤またはその組み合わせを含み、医薬製剤が酸性範囲のｐＨを有する、医薬製剤に関する。これらの製剤は、糖尿病の処置に使用することができ、そして熱的および／または物理機械的ストレスに対して高い安定性が要求される調製物のために特に適している。同様に本発明は、このような製剤を含み、糖尿病に使用することができる非経口用調製物、ならびにこの調製物の製造のための、およびインスリン調製物の安定性を改善するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
世界中で約１２,０００万の人々が糖尿病を患っている。そのうち約１,２００万人がＩ型糖尿病であり、彼らに対しては欠乏したホルモン性インスリン分泌の置換が現在可能な唯一の治療法である。罹患した人々の寿命は、原則として毎日数回のインスリン注射に依存する。Ｉ型糖尿病に対して、ＩＩ型糖尿病では基本的にインスリン欠乏はないが、多くの場合、特に進行した状態では、場合により経口抗糖尿病剤と組み合わせたインスリンによる処置が最も好ましい治療形態と考えられる。
【０００３】
健康人では、膵臓によるインスリンの放出は、血糖濃度と厳密に結びついている。食後に起きるような高まった血糖レベルは、インスリン分泌の相当する増加により迅速に代償される。絶食状態では、血漿インスリンレベルは、インスリン感受性器官および組織がグルコースを連続的に供給するのを保証し、かつ肝グルコース生成を夜間に低く保つために十分である基底値に低下する。内因性インスリン分泌を、外因性インスリン、大部分はインスリンの皮下投与で置き換えても、原則として上記の血糖の生理的調節の質は概して達成されない。血糖の上下の偏りがしばしば起こり、これは、その最も重篤な形態では生命を脅かすことがある。しかしながら、加えて、初期症状なしに数年間上昇した血糖レベルは、かなりの健康リスクである。アメリカにおける大規模なＤＣＣＴ研究（Ｔｈｅ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｔｒｉａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｇｒｏｕｐ（１９９３）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２９，９７７−９８６）は、慢性的に高まった血糖レベルが、糖尿病性後発損傷の発展が原因であることを明確に実証した。糖尿病性後発損傷は、一定の状況下で網膜症、腎障害または神経障害として示される微小血管および巨大血管の損傷であり、視覚の喪失、腎不全および四肢の喪失をもたらし、さらに心臓血管病の増大したリスクを伴う。これから導かれるべきことは、糖尿病の改善された治療法が血糖を可能な限り生理的範囲付近に保つことを主として目指すことである。強化インスリン療法の概念によれば、これは、急速および緩徐作用性インスリン調製物を毎日反復注射することによって達成されるべきである。急速作用性製剤は、血糖の食後上昇をなくすために食事のときに与えられる。緩徐作用性基礎インスリンは、低血糖に導くことなく、特に夜間のインスリンの基本的供給を保証すべきである。
【０００４】
インスリンは、５１のアミノ酸のポリペプチドであり、これらは２つのアミノ酸鎖：２１のアミノ酸を有するＡ鎖および３０のアミノ酸を有するＢ鎖に分けられる。これらの鎖は、２つのジスルフィド橋により互いに結合されている。インスリン調製物は糖尿病治療のために長年採用されている。この場合に天然インスリンが用いられるだけでなく、最近はインスリンの誘導体および類似体も用いられる。
【０００５】
インスリン類似体は、天然インスリン、すなわちヒトインスリンまたは動物インスリン
の類似体であり、これらは、少なくとも１個の天然アミノ酸残基が他のアミノ酸で置換されていること、そして／またはその他の点では同一の相当する天然インスリンに、またはそれから、少なくとも１個のアミノ酸残基が付加または除去されていることによって異なる。また、この場合のアミノ酸は天然に存在しないものであってもよい。
【０００６】
インスリン誘導体は、化学改変により得られる天然インスリンまたはインスリン類似体の誘導体である。化学改変は、例えば、１個またはそれ以上のアミノ酸への１個またはそれ以上の特定の化学基の付加からなることができる。原則として、インスリン誘導体およびインスリン類似体は、ヒトインスリンと比べて幾分改変された作用を有する。
【０００７】
促進された作用の発生を有するインスリン類似体は、ＥＰ  ０  ２１４  ８２６、ＥＰ
０  ３７５  ４３７およびＥＰ  ０  ６７８  ５２２に記載されている。ＥＰ  ０  １２４  ８２６は、特にＢ２７およびＢ２８の置換に関する。ＥＰ  ０  ６７８  ５２２は、Ｂ２９位に種々のアミノ酸、好ましくはプロリンを有するが、グルタミン酸を有さないインスリン類似体を記載している。
【０００８】
ＥＰ  ０  ３７５  ４３７は、Ｂ２８にリジンまたはアルギニンを有するインスリン類似体を包含し、これらは場合によりＢ３および／またはＡ２１がさらに改変されていてもよい。
【０００９】
ＥＰ  ０  ４１９  ５０４には、化学改変に対して保護されたインスリン類似体が開示されており、この場合、Ｂ３のアスパラギンおよびＡ５、Ａ１５、Ａ１８またはＡ２１位の少なくとも１個の他のアミノ酸が改変されている。
【００１０】
原則として、インスリン誘導体およびインスリン類似体は、ヒトインスリンと比べて幾分改変された作用を有する。
【００１１】
ＷＯ  ９２／００３２１には、Ｂ１〜Ｂ６位の少なくとも１個のアミノ酸がリジンまたはアルギニンで置換されたインスリン類似体が記載されている。ＷＯ  ９２／００３２１によれば、この種のインスリンは延長した作用を有する。ＥＰ−Ａ  ０  ３６８  １８７に記載されたインスリン類似体も遅延作用を有する。
【００１２】
インスリン置換のために市販されている天然インスリンのインスリン調製物は、インスリンの起源（例えばウシ、ブタ、ヒトインスリン）、そしてまた組成が異なり、これにより作用のプロフィール（作用の開始および作用の持続時間）に影響を与えることができる。種々のインスリン調製物を組み合わせることにより、極めて異なる作用プロフィールを得ることができ、そして可能な限り生理的である血糖値を得ることができる。今日、組換えＤＮＡ技術は、このような改変インスリンの製造を可能にしている。これらは、延長した作用持続時間を有するインスリングラルギン（ｇｌａｒｇｉｎｅ）（Ｇｌｙ（Ａ２１）−Ａｒｇ（Ｂ３１）−Ａｒｇ（Ｂ３２）−ヒトインスリン）を包含する。インスリングラルギンは酸性透明溶液として注射され、皮下組織の生理的ｐＨ範囲でのその溶液性質のために安定な６量体会合物として沈殿する。インスリングラルギンは１日１回注射され、長期作用性インスリンと比較して、その平坦な血清プロフィールおよびそれに関連する夜間低血糖の危険を減少することが異なる（Ｓｃｈｕｂｅｒｔ−Ｚｓｉｌａｖｅｃｚら，２；１２５−１３０（２００１））。
【００１３】
延長した作用持続時間をもたらすインスリングラルギンの特定の調製物は、上記の調製物に対して、酸性ｐＨを有する透明溶液であることを特徴とする。しかしながら、特に酸性ｐＨで、インスリンは熱的および物理機械的ストレスにおいて低下した安定性および増大した凝集傾向を示し、これは濁りおよび沈殿の形に感じさせることがある（粒子の形成
）（Ｂｒａｎｇｅら，Ｊ．Ｐｈ．Ｓｃｉ  ８６：５１７−５２５（１９９７））。
【００１４】
凝集傾向は、溶液と接触する疎水性表面によってさらに促進されることがある（Ｓｌｕｚｋｙら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８８：９３７７−９３８１（１９９１））。疎水性と考えることのできる表面は、調製物のガラス容器、密閉キャップの栓材料または溶液と空気上清との境界面である。加えて、極めて微小なシリコーン油滴は、普通のシリコーン処理インスリンシリンジにより毎日のインスリン投与を行う際に、追加の疎水性凝集核として機能することがあり、その経過を促進することがある。
【００１５】
ＷＯ  ０１／４３７６２は、ポリペプチドおよびグリセロールを含む水性非経口医薬調製物を記載しており、この場合、調製物の安定化はグリセロールの脱安定化成分の精製除去によって達成しようとしている。ＷＯ  ００／２３０９８は、肺投与のためにポリソルベート２０またはポロクサマー（ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）１８８を用いて安定化したインスリン調製物を記載しているが、酸性溶液中での凝集核に対する安定化を記載していない。
【００１６】
国際特許出願ＰＣＴ／ＥＰ０２／０２６２５（未公開）は、界面活性剤の添加により室温および体温ならびに機械的ストレスに対して改善された安定性を有する亜鉛不含および低亜鉛インスリン調製物を記載しているが、酸性溶液中での疎水性凝集核に対する安定化を記載していない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
従って、本発明の課題は、熱的または物理機械的応力負荷のためのストレスに対して高い長期安定性によって優れており、かつ疎水性凝集核による高いストレスに耐える、界面活性剤を含む酸可溶性インスリンの調製物を見出すことに基づいている。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
驚くべきことに、界面活性剤の添加が酸性インスリン調製物の安定性を大きく高めることができ、従って疎水性凝集核に対して熱的ストレス下で数ヵ月間の優れた安定性を保証する調製物をも製造できることを見出した。
【００１９】
本医薬調製物は、６０〜６０００ｎｍｏｌ／ｍｌ、好ましくは２４０〜３０００ｎｍｏｌ／ｍｌのインスリン、インスリン代謝産物、インスリン類似体またはインスリン誘導体を含む。
【００２０】
使用できる界面活性剤は、特に非イオン界面活性剤である。特に、例えば：多価アルコール、例えばグリセロール、ソルビトールなどの部分および脂肪酸エステルおよびエーテル（Ｓｐａｎ（登録商標）、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）、特にＴｗｅｅｎ（登録商標）２０およびＴｗｅｅｎ（登録商標）８０、Ｍｙｒｊ（登録商標）、Ｂｒｉｊ（登録商標））、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）またはポリオキサマーのような製薬上慣用の界面活性剤が好ましい。界面活性剤は、医薬組成物中に５〜２００μｇ／ｍｌ、好ましくは５〜１２０μｇ／ｍｌ、特に好ましくは２０〜７５μｇ／ｍｌの濃度で存在する。
【００２１】
本調製物は、保存剤（例えばフェノール、クレゾール、パラベン）、等張化剤（例えばマンニトール、ソルビトール、ラクトース、デキストロース、トレハロース、塩化ナトリウム、グリセロール）、緩衝物質、塩、酸およびアルカリ、そしてまた他の添加剤をさらに含むことができる。これらの物質は、それぞれの場合に単独でまたは混合物として存在することができる。
【００２２】
グリセロール、デキストロース、ラクトース、ソルビトールおよびマンニトールは、通
常は医薬組成物中に１００〜２５０ｍＭの濃度で、ＮａＣｌは１５０ｍＭまでの濃度で存在する。例えばリン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、アルギニン、グリシルグリシンまたはＴＲＩＳ（すなわち、２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロパンジオール）緩衝剤および相当する塩のような緩衝物質は、５〜２５０ｍＭ、好ましくは１０〜１００ｍＭの濃度で存在する。他の添加剤、特に塩またはアルギニンが存在していてもよい。
【００２３】
従って、本発明は、インスリン、インスリン類似体、インスリン誘導体、活性インスリン代謝産物又はその組み合わせからなる群から選択されるポリペプチド；界面活性剤または２種またはそれ以上の界面活性剤の組み合わせ；場合により保存剤または２種またはそれ以上の保存剤の組み合わせ；および場合により等張化剤、緩衝剤および／または他の添加剤またはその組み合わせを含み、医薬製剤が酸性範囲のｐＨ（ｐＨ１〜６.８）、好ましくはｐＨ３.５〜６.８、実に特に好ましくはｐＨ３.５〜４.５を有する透明溶液である、医薬製剤に関する。
【００２４】
このような医薬製剤は、次の場合が好ましい。すなわち、界面活性剤が、多価アルコール、例えばグリセロールおよびソルビトールの部分および脂肪酸エステルおよびエーテル、ポリオールからなる群から選択される；グリセロールおよびソルビトールの部分および脂肪酸エステルおよびエーテルが、Ｓｐａｎ（登録商標）、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）、Ｍｙｒｊ（登録商標）、Ｂｒｉｊ（登録商標）、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）からなる群から選択される；ポリオールが、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ポロクサマー、プルロニクス（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ）、テトロニクス（Ｔｅｔｒｏｎｉｃｓ）からなる群から選択される；保存剤が、フェノール、クレゾール、パラベンからなる群から選択される；等張化剤が、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウム、グリセロールからなる群から選択される；添加剤が、緩衝物質、酸、アルカリからなる群から選択される；
インスリン類似体が、Ｇｌｙ（Ａ２１）−Ａｒｇ（Ｂ３１）−Ａｒｇ（Ｂ３２）−ヒトインスリン；Ｌｙｓ（Ｂ３）−Ｇｌｕ（Ｂ２９）−ヒトインスリン；ＬｙｓB28ＰｒｏB29ヒトインスリン、Ｂ２８Ａｓｐ−ヒトインスリン、Ｂ２８位のプロリンがＡｓｐ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、ＶａｌまたはＡｌａで置換されており、かつＢ２９位のＬｙｓがＰｒｏで置換されていてもよいヒトインスリン；ＡｌａＢ２６−ヒトインスリン；ｄｅｓ（Ｂ２８−Ｂ３０）−ヒトインスリン；ｄｅｓ（Ｂ２７）−ヒトインスリンまたはｄｅｓ（Ｂ３０）−ヒトインスリンからなる群から選択される；
インスリン誘導体が、Ｂ２９−Ｎ−ミリストイル−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−パルミトイル−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−ミリストイルヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−パルミトイルヒトインスリン、Ｂ２８−Ｎ−ミリストイル−ＬｙｓB28ＰｒｏB29ヒトインスリン、Ｂ２８−Ｎ−パルミトイル−ＬｙｓB28ＰｒｏB29ヒトインスリン、Ｂ３０−Ｎ−ミリストイル−ＴｈｒB29ＬｙｓB30ヒトインスリン、Ｂ３０−Ｎ−パルミトイル−ＴｈｒB29ＬｙｓB30ヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−（Ｎ−パルミトイル−γ−グルタミル）−ｄｅｓ（Ｂ３９）ヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−（Ｎ−リトコリル−γ−グルタミル）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン、Ｂ２９−Ｎ−（ω−カルボキシヘプタデカノイル）−ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンおよびＢ２９−Ｎ−（ω−カルボキシヘプタデカノイル）ヒトインスリンからなる群から選択される。
【００２５】
本発明のもう一つの課題は、インスリン、インスリン類似体、活性インスリン代謝産物および／またはインスリン誘導体が、６０〜６０００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度、好ましくは２４０〜３０００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度（これは１.４〜３５ｍｇ／ｍｌまたは４０〜５００単位／ｍｌの濃度にほぼ相当する）で存在し；
界面活性剤が、５〜２００μｇ／ｍｌ、好ましくは５〜１２０μｇ／ｍｌ、特に好ましくは２０〜７５μｇ／ｍｌの濃度で存在する、上記のような医薬製剤である。
【００２６】
本発明のもう一つの課題は、グリセロールおよび／またはマンニトールが、１００〜２５０ｍＭの濃度で存在し、そして／またはＮａＣｌが、好ましくは１５０ｍＭまでの濃度で存在する、上記のような医薬製剤である。
【００２７】
本発明のもう一つの課題は、緩衝物質が５〜２５０ｍＭの濃度で存在する、上記のような医薬組成物である。
【００２８】
本発明のもう一つの課題は、例えば、インスリンの放出を遅延させる塩のような他の添加物を含む、医薬インスリン製剤である。このような遅延放出インスリンと上記の製剤との混合物も包含される。
【００２９】
本発明のもう一つの課題は、このような医薬製剤の製造方法である。同様に、本発明のもう一つの課題は、糖尿病の処置のための、このような製剤の使用である。
【００３０】
本発明のもう一つの課題は、インスリン、インスリン類似体またはインスリン誘導体、またはそれらの調製物の製造工程中における、安定剤としての界面活性剤の使用または添加である。
【００３１】
本発明を若干の実施例により以下に記載するが、それらが限定的に機能することを決して意図するものではない。
【実施例】
【００３２】
下記の実施例は、限定的に機能することなしに本発明の概念をより詳細に説明することを意図している。
【００３３】
比較研究：  インスリン類似体であるインスリングラルギン（Ｇｌｙ（Ａ２１）、Ａｒｇ（Ｂ３１）、Ａｒｇ（Ｂ３２）−ヒトインスリン）を含む種々の調製物を製造する。この目的で、インスリングラルギン１部の注射用水に懸濁させ、ｐＨ３〜４で溶解し、他の成分を添加し、塩酸／ＮａＣｌを用いてｐＨを４.０＋／−０.２に調節し、この混合物を最終体積にする。以下に記載する実験のそれぞれにおけるインスリングラルギンの濃度は、３.６３７８ｍｇ／ｍｌである（１００単位／ｍｌに相当する）。第二の調製物を同様に製造するが、特定量の界面活性剤をさらに添加する。これらの溶液を１００ｍｌガラス容器（バイアル）に充填し、クリンプキャップで栓をする。これらの容器を、模倣した使用中または物理機械的ストレス条件に曝露する：
１．  使用中の試験：  容器を折り返し蓋付き箱に入れ、２８日の調査期間中＋２５℃および制御した室内湿度で遮光して貯蔵する。患者による投薬を模倣するために、普通のインスリンシリンジを用いて毎日１回、５ＩＵの溶液を抜き取って捨てる。週末の投薬を模倣するために、この操作を実験週間の初めと終わりに２回行う。それぞれ抜き取る前に、容器中の溶液の肉眼評価を濁りおよび／または粒子形成について行う。
２．  振盪試験：  インキュベーターおよびサーモスタットを有する実験室用振盪装置に載せた折り返し蓋付き箱に容器を入れ、２５℃で水平運動に対して平行に９０運動／分で１０日の期間振盪する。所定の時間の後、サンプルの濁度を実験室用濁り光度計（比濁計）によりホルマールダジン比濁計単位（ｆｏｒｍａｌｄａｚｉｎｅ  ｎｅｐｈｅｌｏｍｅｔｒｉｃ  ｕｎｉｔ＝ＦＮＵ）で測定する。濁度は、サンプル中の懸濁粒子への入射光の散乱輻射の強度に相当する。
【００３４】
実施例１：  ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）を用いるインスリングラルギンの使用期間中の安定化
ａ）溶液を、０.２μｍおよび０.１μｍフィルターの組み合わせに通して滅菌濾過する。次いで、それを１０ｍｌ注射バイアルに注ぎ、差込み密閉ディスクを有するクリンプキャップを用いて密封する。
ｂ）比較溶液を同様に製造するが、最初に適量の界面活性剤（１０〜３０ｐｐｍのポリソルベート２０）を注射用水に懸濁させる。
サンプルを＋５℃、２５℃および３７℃で所定の時間貯蔵する。次いで、それぞれの場合に１０個のサンプルを、使用中の試験に供する。結果を下記の表に示す。
【００３５】
【表１】
2005532365.tif 000002
【００３６】
【表２】
2005532365.tif 000003
【００３７】
【表３】
2005532365.tif 000004
【００３８】
【表４】
2005532365.tif 000005
【００３９】
【表５】
2005532365.tif 000006
【００４０】
【表６】
2005532365.tif 000007
【００４１】
【表７】
2005532365.tif 000008
【００４２】
ポリソルベート２０を添加しないと、使用中の７日後でも粒子形成が溶液中で生じることがある。ポリソルベート２０の添加により、粒子形成を使用期間中に著しく抑制することができる。
【００４３】
ポリソルベート２０の安定化作用は、高められた温度で３ヶ月間の貯蔵においても保持される。
【００４４】
溶液の酸性媒質中でのポリソルベートの加水分解の可能性による安定化作用の低下は、１ヵ月の貯蔵後のデータと比較して、測定することができない。
【００４５】
実施例２：  物理機械的ストレス負荷においてポリソルベート２０を用いるインスリングラルギンの安定化
ａ）溶液を、０.２μｍおよび０.１μｍフィルターの組み合わせに通して滅菌濾過する。次いで、それを１０ｍｌ注射バイアルに注ぎ、差込み密閉ディスクを有するクリンプキャップを用いて密封する。
ｂ）比較溶液を同様に製造するが、最初に適量の界面活性剤（０.０１０〜０.０３０ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０）を注射用水に懸濁させる。
サンプルを＋５℃、２５℃および３７℃で所定の時間貯蔵する。次いで、それぞれの場合に５個のサンプルを振盪試験に供する。結果を下記の表に示す。限界１５ＦＮＵは、日光で認識できる濁りに相当する。
【００４６】
【表８】
2005532365.tif 000009
【００４７】
【表９】
2005532365.tif 000010
【００４８】
【表１０】
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【００４９】
ポリソルベート２０を添加しないと、過酷な物理機械的ストレスの２日後でも、目に見える粒子形成が溶液中で生じることがある。ポリソルベート２０の添加により、物理機械的ストレス負荷中の濁り生成を著しく遅らせることができる。
【００５０】
ポリソルベート２０の安定化作用は、高められた温度での貯蔵においても保持される。
【００５１】
溶液の酸性媒質中でのポリソルベートの加水分解の可能性による安定化作用の低下は、検出することができない。
【００５２】
実施例３：  ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）およびポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０）を用いるインスリングラルギンの使用期間中の安定化の比較
それぞれの場合に１０本のバイアルを開封して、５mlのインスリングラルギンの注射溶液とし、
ａ）０.００１ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０を添加し、
ｂ）０.０１ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０を添加し、
ｃ）０.００１ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０を添加し、
ｄ）０.０１ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０を添加する。
次いで、サンプルを使用中の試験に供する。
結果を下記の表に示す
【表１１】
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【００５３】
０.０１ｍｇ／ｍｌの濃度でのポリソルベート２０またはポリソルベート８０の添加は、試用期間中の粒子形成に対して溶液を同様に安定化することができる。
【国際調査報告】
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