(57)【要約】  本発明は、医薬用品質の生成物を得るために、触媒としてイソブチルアミン、吸着剤として活性炭を使用してフルフラールとニトロメタンを反応させることからなる、２−（２−ニトロビニル）フランを得て精製する方法に関する。上記の技術は、水中で吸収することによって系から出る排ガスを除くことにより環境への影響をかなり低減する。本発明の薬剤組成物は２−（２−ニトロビニル）フランを含み、低濃度のコクシジウムに対して強力な作用を有する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
２−（２−ニトロビニル）フランを得るための方法であって、
触媒としての第１級アミンと予め接触させたニトロメタンを、極性溶媒の混合物中で１〜２．５時間、浴温度１１０〜１３０℃で反応させるステップ；
フルフラールを、フルフラール−ニトロメタンのモル関係１：１〜１：２．５、同じ温度で、攪拌又は混合速度１００〜４００ｒｐｍ、還流条件で３〜５時間加えるステップ；
反応混合物を−１５〜＋１０℃に冷却させ、このように得られた原料を固体−液体方法で分離するステップ；
活性炭及び極性溶媒により、温度４０〜６５℃、接触時間１０〜３０分間で精製するステップ；
活性炭を分離するステップ；
精製した液体を、−１５〜＋１０℃に冷却させ、遠心分離又は真空濾過で結晶を回復させるステップ；及び
最終生成物を温度２０〜５５℃で１〜３．５時間乾燥するステップ、
を特徴とする方法。
【請求項２】
ニトロメタンと第１級アミンの反応混合物に入れた溶媒が好ましくはアルコールである請求項１記載の２−（２−ニトロビニル）フランを得るための方法。
【請求項３】
第１級アミンが好ましくはイソブチルアミンである請求項１記載の２−（２−ニトロビニル）フランを得るための方法。
【請求項４】
液体と固体の分離が好ましくは遠心分離又は真空濾過で実施される請求項１記載の２−（２−ニトロビニル）フランを得るための方法。
【請求項５】
精製で使用される極性溶媒が好ましくはエタノールである請求項１記載の２−（２−ニトロビニル）フランを得るための方法。
【請求項６】
活性成分を含む液体からの活性炭の分離が、好ましくは遠心分離又は真空濾過で実施される請求項１記載の２−（２−ニトロビニル）フランを得るための方法。
【請求項７】
純度が少なくとも９８％である請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法によって得られる２−（２−ニトロビニル）フラン。
【請求項８】
純度が９９％又はそれ以上である請求項７記載の２−（２−ニトロビニル）フラン。
【請求項９】
純度が９９％又はそれ以上である２−（２−ニトロビニル）フラン。
【請求項１０】
活性成分として２−（２−ニトロビニル）フランを含む薬剤組成物。
【請求項１１】
薬物としての２−（２−ニトロビニル）フランの使用。
【請求項１２】
コクシジウムを処置するための２−（２−ニトロビニル）フランの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、動物及びヒトのセクター（ｓｅｃｔｏｒ）、特に強力な抗コクシジウム活性を有する生成物に関する。これは、実験及び食物源として使用する産業利用動物において非常に満足できる結果を示した。
【背景技術】
【０００２】
科学論文及び情報特許では、フラン生成物、特にニトロフラン化合物がコクシジウムに対して活性を示すことが報告されている。これらの化合物は依然市販されているにも拘らず、フラン環の５位の炭素のニトロ基の位置のために毒性を有するので、その消費は減少してきている。これらの生成物は、とりわけフラゾリドン（ＦＵＲＯＢＡＣ）及びニトロフラゾンである。
（ＦＵＲＯＢＡＣ  ｈｔｔｐ：／／ｔｅｒｒａ．ｃｏｍ．ｍｘ／−ｒｃａｍａｃｈｏ／ｇｅｓ／ｇｅｓ−ｆｕｒｏ．ｈｔｍｌ）、Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  ５：７４５〜７６５頁（１９８３年）、Ｃｏｍ．Ｒｅｇ．１９．０３．９２（Ｌ７３）、Ｃｏｍ．Ｒｅｇ．１５．１０．９３（Ｌ２６４）
【０００３】
化学的実体としての２−（２−ニトロビニル）フランの取得は、これまで実験室レベルでのみ報告されており、これらはヒト又は動物の薬物としての使用の先例ではない。その合成はいずれの場合も医薬品品質を有する活性成分としては報告されていない。
【０００４】
実験室レベルでのその合成を記載している文献では化合物の純度は報告しておらず、薬物として使用するのに必要な要件を満たしているかについては評価していない。以下の文献から理解できる通り、合成の結果の再現性についての研究もモル分率数値の異なる反応も報告していない。
１．Ａ．Ｌ．ＭＮＯＡＺＨＯＹＡＮＡＮ編、ＡＲＭＥＮＩＡＮ、Ｅｒｅｖａｎ、１９６０。
２．Ｏ．ＭＯＬＤＥＮＨＡＵＥＲ、Ｗ．ＩＲＩＯＮ、Ｄ．ＭＯＳＴＡＬＧＬＩＯ、Ｒ．ＰＦＬＵＧＥＲ、Ｈ．ＤＯＳＥＲ、Ａ．５８３，３７（１９５３）、［ｐａｔ］．Ｇｅｒｍａｎ  ９１８．１４８（１９５４）［ＣＡ．５２．１５５９０ｈ（１９５８）］。
３．Ｂ．ＰＲＩＥＢ、ＢＥＲ  １８１３６２（８８５）
４．Ｌ．ＢＯＵＶＥＡＵＬＴ、Ａ．ＷＡＨＬ、ＢＵＬＬ．ＳＯＣ．ＣＨＩＭ［３］２９．５２５（１９０３）。
５．Ｍ．ＯＫＡＷＡＲＡ．Ｊ．ＣＨＥＭ．ＳＯＣ．ＪＡＰＡＮ  ５６，９０（１９５３）Ｃ．Ａ４９，４６１８ｄ（１９５５）。
６．Ｈ．ＳＡＩＫＡＣＨＩ  Ｈ．ＨＯＳＨＩＤＡ、ＹＡＫＵＧＡＫＵ、７８．９１７（１９５８）Ｃ．Ａ５２  ２１１３６ｂ（１９５８）
【０００５】
２−（２−ニトロビニル）フランを産業的な抗微生物適用のための共働（ｓｙｎｅｒｇｉｃ）混合物の一部として使用する特許もいくつか存在するが、これらはその合成に関する態様は記載していない。これらは、とりわけＮｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｍｐａｎｙ  Ｇｒｅａｔ  Ｌａｋｅｓ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．の特許である（米国特許第５，４１６，１０７号、米国特許第５，４１６，１０８号、米国特許第５，３５８，９６３号、米国特許第５，２４６，９６３号及びＷＯ９４／０２０１７）。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、フランベースの単純な化合物、２−（２−ニトロビニル）フランに基づいている。２−（２−ニトロビニル）フランは構造にニトロ基を有するが、環の５位ではなく、環外の二重結合中に有する。予測的及び実験的方法により、この族のニトロ基の位置を変化させると、その薬理学的及び毒物学的特性の両方が好都合に変化することが実証されている。
【０００７】
本発明は、２−（２−ニトロビニル）フランを得るための新規な方法も含む。この方法は、ニトロメタンとフルフラールをエタノールの存在下、モル反応１：１から１：２．５、３から５時間、温度範囲１１０から１３０℃で、フルフラール１モル当たりイソブチルアミン（ＩＢＡ）１から２．５ｍｌを使用し、１００から４００ｒｐｍの攪拌速度で反応させることからなる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
反応装置の冷却器は、環境汚染を回避するために亜硝酸ガスを吸収する水を含む吸収トラップに連結されている。
【０００９】
これらの条件で得た反応混合物を−１５から＋１０℃で「冷却」プロセスにかける。次いで、固体を真空下の遠心分離又は濾過方法によって分離する。
【００１０】
未処理の生成物は、温度４０から６５℃で１０から３０分間、５から２５％の活性炭と共にエタノール４から１０体積に溶解させることにより精製する。その後、活性炭で濾過し、温度−１５から１０℃で沈殿させる。次いで、純粋な生成物を濾過し、真空乾燥室中１から３．５時間、２０から５０℃で変動する温度で乾燥させ、温度１０から２０℃で保存する。
【００１１】
試験工場規模で現在実施している本発明の方法により、２−（２−ニトロビニル）フランが、融点７４〜７５℃の黄色結晶形態、高収率、９９％を超える純度で得られるため、この活性物質を製薬業で使用することができる。この生成物の構造分析は、最新の分光技術すべてを使用して実施した。
【００１２】
ヒト及び動物薬でコクシジウムを処置するために使用する薬剤組成物中の２−（２−ニトロビニル）フランの濃度は、２から８０ｐｐｍの範囲で変化する。
【００１３】
この生成物の効果を研究するために必要な毒物学的研究により、数種の溶媒を使用する２−（２−ニトロビニル）フランの経口経路の半致死量（ＬＤ５０）は、成熟したレグホンメンドリでは体重１ｋｇ当たり１．０２ｇ、雌雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットでは体重１ｋｇ当たり１７１．９１ｍｇであることが示された。
【００１４】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏの変異誘発性研究は、細胞質分裂を遮断し、代謝活性化有り及び無しの微小核アッセイ、ならびに代謝活性化有り及び無しの姉妹染色分体交換アッセイを使用して実施した。変異原性活性を予測するためにコンピューター補助の理論的研究を実施した。すべてにおいて、これらの２−（２−ニトロビニル）フランは変異原性活性を示さなかった。
【００１５】
数種の動物種からのコクシジウムに対する効果を評価するために、ニワトリ盲腸コクシジウム（Ｅｉｍｅｒｉａ  ｔｅｎｅｌｌａ）を人工感染させた家禽及びこの原生動物に高度に自然感染したニワトリで実験を実施した。人工感染させたウサギ及び自然感染させたウサギの腸コクシジウムに対する効果も生成条件の最後に評価した。
【００１６】
本発明を実現する実施例を以下に記載する。
【実施例１】
【００１７】
数種の変数を報告した範囲内で変化させ、本発明の手順により２−（２−ニトロビニル）フランの合成を実施した。
【００１８】
表１は、６リットル反応器中、異なるアッセイ条件で実施した２−（２−ニトロビニル）フランの合成で得られた純度を示す。
【００１９】
【表１】
2005511789.tif 000002
（＊）純度パーセントの決定はＨＰＬＣで実施した。
【実施例２】
【００２０】
合成した生成物、２−（２−ニトロビニル）フランの作用のアッセイを実施するために、表２に示す通り数種の濃度（２、４、８μｇ／ｍｌ）のアルコール水溶液を使用して、その生成物をまず３％アルコール溶液、次いで水に溶解させた。
【００２１】
１日齢、雄性、コクシジウムを有さない、Ｆ１の肥育ヒヨコを使用した。これらのトリを２週齢までコクシジウムを有さない適切な条件で維持した。給餌には、ニワトリを飼育するのに使用したものと同じであるが抗コクシジウム剤を含まない飼料を使用した。
【００２２】
ニワトリ盲腸コクシジウムの接合子嚢１×１０５個を食道カニューレを使用して経口経路で接種した、体重が同じ家禽１２羽の群を５つ形成した。処置はヒヨコが１５日齢になり接種を受ける２４時間前から開始して、９日間継続した。
【００２３】
生成物の効果を評価するために、体重増加（初期体重に対する％）及び死亡数を用いる方法を各処置で使用した。
【００２４】
結果を表２に示す。
【００２５】
【表２】
2005511789.tif 000003
【００２６】
認められる通り、濃度４μｇ／ｍｌで満足のいく結果が得られた。ここでは死亡はなく、体重増加は接種無しの対照群と非常に似ていた。
【実施例３】
【００２７】
実施例２で記載したものと同様の配合物中の２−（２−ニトロビニル）フランを、ニワトリ盲腸コクシジウムに自然感染させた５６〜８４日齢の産卵能のあるレグホンメンドリ２０００羽の飲料水に１日２回（午前８時及び正午）５日間加えた。ハウス当たり５日間で平均１１９羽が死亡した、各２０００羽のトリが盲腸コクシジウム症に高度に感染した２つのハウスを選択した。血性下痢の存在、盲腸の典型的病変の観察、及び盲腸内容物中の寄生接合子嚢の過剰存在により診断した。ハウス中の感染したトリは非処置対照とし、年齢が同じもう１つは感染も処置もしていない非感染対照とした。
【００２８】
生成物の効果を評価するために、体重対照とした以外は実施例２で記載した方法を使用した。体重対照として、各畜舎から１０羽を無作為に選択し、処置の始めと終りに体重を計測したことが異なる。得られた結果を表３に示す。
【００２９】
【表３】
2005511789.tif 000004
【００３０】
感染した非処置群と比較すると、用量４μｇ／ｍｌでは体重減少を伴わずに死亡率が顕著に減少したことが認められる。
【実施例４】
【００３１】
実施例２で記載したものと同様の配合物中の２−（２−ニトロビニル）フランを、ウサギの飲料水に溶解させ、毎日自由に５日間投与した。それぞれウサギ９匹で、２つの実験（Ｉ、ＩＩ）を実施した。各実験では、それぞれ動物３匹ずつ３つの処置をした。処置では、感染させた非処置群及び感染も処置もしない群を考慮した。第１の実験では腸コクシジウムの接合子嚢６１×１０３個、第２の実験では１１６×１０３個を各ウサギに与えた。この種は、胞子形成９７．３％で、イーパーフォランス（Ｅ．ｐｅｒｆｏｒａｎｓ）３８％、イーマグナ（Ｅ．ｍａｇｎａ）３０％、イーメディア（Ｅ．ｍｅｄｉａ）２２％、及びイーエクシグア（Ｅ．ｅｘｉｇｕａ）１０％であった。初期体重と最終体重の差及び処置７日後の動物の死亡を評価基準として使用した。
【００３２】
得られた結果を表４及び５に示す。
【００３３】
【表４】
2005511789.tif 000005
【００３４】
【表５】
2005511789.tif 000006
【００３５】
接合子嚢６１×１０３個を接種した後、用量４μｇ／ｍｌでは死亡はなく、接種し処置しなかった群とは体重増加に差があった。接合子嚢１１６×１０３個を接種した用量４μｇ／ｍｌでは死亡はなく、体重も増加した。この濃度では、接種し処置しなかった群では既に死亡があった。
【実施例５】
【００３６】
実施例２で記載したものと同様の配合物中の２−（２−ニトロビニル）フランをウサギの飲料水に溶解させ、毎日自由に５日間濃度４μｇ／ｍｌで投与した。３つのウサギ群に属する、チンチラ、ニューホワイトゼランダ（Ｎｅｗ  Ｗｈｉｔｅ  Ｚｅｌａｎｄａ）、及びニューレッドゼランダ（Ｎｅｗ  Ｒｅｄ  Ｚｅｌａｎｄａ）種の新生児ウサギ、仔ウサギ、成体ウサギ１２４６匹を処置した。存在したコクシジウムの種は、イーパーフォランス３４％、イーマグナ３２％、イーメディア２３％、及びイーエクシグア１１％であった。処置の７日前及び７日後の糞１グラム当たりの接合子嚢量は、処置動物すべての２０％で決定した。処置の７日前及び７日後の接合子嚢の数の差は接合子嚢減少のパーセントとして表し、効果の基準とした。
【００３７】
得られた結果を表６に示す。
【００３８】
【表６】
2005511789.tif 000007
【００３９】
実験で得られた結果から、殆どの動物では接合子嚢の平均減少は９７％と考えられる。実際、ある群では９９％であり、これは非常に満足のいく結果である。
【国際調査報告】
2005511789.tif 000008
2005511789.tif 000009
2005511789.tif 000010
2005511789.tif 000011
2005511789.tif 000012
2005511789.tif 000013
2005511789.tif 000014
2005511789.tif 000015