(57)【要約】  哺乳動物、特にヒトにおけるＯＡＢまたはＵＩの治療または防止に有用な構造式（Ｉ）に記載のＮＫ２Ｒ結合化合物が開示され、該化合物におけるＤ、Ａ、Ｒ1、Ｒ3およびＲ4は明細書中に定義される。該化合物の薬学的に有利な塩、単独または他の薬理学的薬剤と組み合わせるいずれかの該化合物の使用の方法、本発明の方法を実施する際に有用な医薬組成物もまた開示される。  【化１】2005511571.tif 000007
2005511571.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造式Ｉ：
【化１】
2005511571.tif 000005
（式中、
ＡはＯまたはＳであり；
ＤはＣＨまたはＮＨであり；
Ｒ1はＨまたはＣ(Ｏ)ＮＨＲ2であり；
Ｒ2はＣ1-4アルキルから選択され；
Ｒ3はＨまたはＣ1-4アルキルから選択され、そして
Ｒ4部分はハロゲン、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4アルコキシまたはシアノから選択される）
の化合物であって、
ただし、（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−チオ−ピペリジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチルベンズアミド、（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−オキソ−ピペリジン−１−イル）−４−カルボキシアミノエチル−ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチルベンズアミド、または（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−チオペルヒドロ−ピリミジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチルベンズアミドでない、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
ＡがＯであり、ＤがＣＨであり、Ｒ1がＨであり、Ｒ3がＣＨ3でありそして、Ｒ4がＨまたはハロから選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
ＡがＯであり、Ｒ1がＣＨ3でありそしてＲ2がフルオロである、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−オキソ−ピペリジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチル−２−フルオロベンズアミド；
（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−オキソ−ピペリジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチル−３−フルオロベンズアミド；
（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−オキソ−ピペリジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチル−４−フルオロベンズアミド、および
（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−オキソ−ピペリジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチルベンズアミド
から選択される請求項１記載の化合物。
【請求項５】
（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−オキソ−ピペリジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチル−２−フルオロベンズアミドである
請求項４記載の化合物。
【請求項６】
治療的有効量の、構造式Ｉ：
【化２】
2005511571.tif 000006
（式中、
ＡはＯまたはＳであり；
ＤはＣＨまたはＮＨであり；
Ｒ1はＨまたはＣ(Ｏ)ＮＨＲ2であり；
Ｒ2はＣ1-4アルキルであり；
Ｒ3はＨまたはＣ1-4アルキルから選択され、そして
Ｒ4部分はハロゲン、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4アルコキシまたはシアノから選択される）
の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象者に投与することからなる、該対象者における過活動膀胱または尿失禁を治療または予防する方法。
【請求項７】
ＡがＯであり、ＤがＣＨであり、Ｒ1がＨであり、Ｒ3がＣＨ3でありそしてＲ4がＨまたはハロから選択される、化合物の投与からなる請求項６記載の方法。
【請求項８】
ＡがＯであり、Ｒ1がＣＨ3でありそしてＲ2がフルオロである、化合物の投与からなる請求項６記載の方法。
【請求項９】
（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−オキソ−ピペリジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチル−２−フルオロベンズアミド；
（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−チオ−ピペリジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチルベンズアミド；
（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−オキソ−ピペリジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチル−３−フルオロベンズアミド；
（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−オキソ−ピペリジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチル−４−フルオロベンズアミド；
（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−オキソ−ピペリジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチルベンズアミド；
（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−オキソ−ピペリジン−１−イル）−４−カルボキシアミノエチル−ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチルベンズアミド、および
（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−チオペルヒドロ−ピリミジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチルベンズアミド
から選択される化合物の投与からなる請求項６記載の方法。
【請求項１０】
（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−オキソ−ピペリジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチル−２−フルオロベンズアミドの投与
からなる請求項６記載の方法。
【請求項１１】
対象者がヒトである請求項６記載の方法。
【請求項１２】
薬学的に許容される塩が塩化物、硫酸塩、トシレート、メシレート、ナプシレート、ベシレート、リン酸塩、サリチル酸塩、酒石酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、酢酸塩またはマレイン酸塩から選択される請求項６記載の方法。
【請求項１３】
１種またはそれ以上の他の医学的に適合性の治療剤を同時に投与することをさらに含む請求項６記載の方法。
【請求項１４】
他の治療剤がエストロゲン様薬剤、プロゲステロン様物質、α−アドレナリンアゴニスト、β−アドレナリン受容体遮断薬、コリン受容体遮断化合物またはコリン受容体刺激薬から選択される請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
化合物またはその薬学的に許容される塩が、局所適用、経口摂取、吸入、通気または注射から選択される生理的に許容される方法で投与される請求項６記載の方法。
【請求項１６】
化合物またはその薬学的に許容される塩が局所的に投与される請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
カプセル、錠剤、水溶液、水性懸濁液、非水溶性懸濁液、坐薬、エアゾールまたは粉剤により、一日量範囲５〜１００ｍｇの化合物またはその薬学的に許容される塩を、一回量でまたは一日量を２、３もしくは４回に分けて投与することからなる請求項１５記載の方法。
【請求項１８】
（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−オキソ−ピペリジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチル−２−フルオロベンズアミドまたはその薬学的に許容される塩および少なくとも１つの薬学的に許容される添加剤または希釈剤を含有する過活動膀胱または尿失禁を治療または予防するための医薬組成物。
【請求項１９】
過活動膀胱または尿失禁を治療または予防するための医薬の製造における（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−オキソ−ピペリジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチル−２−フルオロベンズアミドまたはその薬学的に許容される塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、過活動膀胱または尿失禁の治療および／または防止に有用な化合物、該化合物を使用する方法ならびに該方法における使用のための組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
過活動膀胱（「ＯＡＢ」）は、切迫失禁、緊急性（urgency）および頻発性（frequency）を含む症候群に対する名称である。尿失禁（「ＵＩ」）は、衝動（切迫失禁）または物理的もしくは精神的緊張（緊張性失禁）の結果として尿を貯留する膀胱の不能から生じる尿の非自発的漏出である。
【０００３】
通常の膀胱は、腎臓の機能によって命令された生理的速度で満ちる。膀胱は、神経抑制系だけでなく膀胱の物理的特性に起因して多量の尿を留めておくことができる。その抑制機構は、排尿筋の弛緩を生じて尿の貯留を生じさせるために副交感神経活動の抑制または交感神経緊張の増大が関係していると考えられている。満たされる際、膀胱および尿道の排出口頸部（outlet neck）は収縮し、漏出を防止する。排泄すなわち排尿は、排出口頸部および尿道の弛緩とそれに引き続く排尿筋の収縮によって特徴づけられる。膀胱が空の場合、排尿筋は弛緩し、排出口頸部および尿道は収縮して膀胱を密閉しそしてコンチネンスを維持する。
【０００４】
いつでも全人口の４〜８％が、ＵＩを患っていると推定されているが、大部分の国ではかかる患者の約１５％しか診断されていない。それら診断された患者のうち約７０％しか治療を受けていない。切迫失禁が年輩者においてより一般的であり、そしてその８０％のケースが女性である。パッドおよび他の物理的な手段が、治療を受けていない失禁患者の大多数によって通常使用されている。失禁パッドの米国市場は、１９９７年で１５億ドルと推定された。
【０００５】
ムスカリン拮抗薬、オキシブチンが、西側諸国でＯＡＢ治療に処方されており、第２世代、ムスカリン様Ｍ３受容体拮抗薬、トルテロジンもまたＯＡＢのために市場に出されている。プロピベリンおよびフラボキサートは日本において処方される。エストロゲンおよびプロゲステロン療法が研究されており、そして一部の女性には不完全ではあるが失禁を軽減すると考えられている。他の研究は、α−アドレナリンアゴニスト、β−アドレナリン受容体遮断薬、コリン受容体遮断化合物およびコリン受容体刺激薬が有益である可能性を示唆する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかし、既存の治療は便秘、視覚の調節異常、ドライアイ（xerothalmia）および「口内乾燥症」副作用を含む副作用とつながっていて、それは一部のユーザには耐え難く、したがって既存の治療の有効性にもかかわらず、ＵＩおよびＯＡＢのための有効かつ満足できる治療に対する大きな必要性は未だ満たされておらず増大しつつある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
ニューロキニン２受容体（「ＮＫ２Ｒ」）に結合する特定の化合物が過活動膀胱（「ＯＡＢ」）および尿または尿道失禁（「ＵＩ」）の治療および防止のために有用であることが現在発見された。
【０００８】
一つの態様において、ＯＡＢおよびＵＩの治療および防止に有用である、ＮＫ２Ｒ受容
体に結合する特定の新規な化合物が発見された。
【０００９】
かかる化合物またはその薬学的に許容される塩は構造式Ｉ：
【化１】
2005511571.tif 000003
（式中、
ＡはＯまたはＳであり；
ＤはＣＨまたはＮＨであり；
Ｒ1はＨまたはＣ(Ｏ)ＮＨＲ2であり；
Ｒ2はＣ1-4アルキルから選択され；
Ｒ3はＨまたはＣ1-4アルキルから選択され、そして
Ｒ4はハロゲン、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4アルコキシまたはシアノから選択される）
に記載の構造を有し、
ただし該化合物は、（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−チオ−ピペリジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチルベンズアミド、（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−オキソ−ピペリジン−１−イル）−４−カルボキシアミノエチル−ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチルベンズアミド、または（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−チオペルヒドロ−ピリミジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチルベンズアミドでない。
【００１０】
別の態様において、ＯＡＢおよびＵＩの治療および防止のために有用な化合物は構造式Ｉに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＡはＯまたはＳであり；
ＤはＣＨまたはＮＨであり；
Ｒ1はＨまたはＣ(Ｏ)ＮＨＲ2であり；
Ｒ2はＣ1-4アルキルから選択され；
Ｒ3はＨまたはＣ1-4アルキルから選択され、そして
Ｒ4部分はハロゲン、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4アルコキシまたはシアノから選択される。
【００１１】
より特定の態様において、ＡがＯであり、ＤがＣＨであり、Ｒ1がＨであり、Ｒ3がＣＨ3でありそしてＲ4がＨまたはハロから選択される化合物は、ＯＡＢおよびＵＩの治療および防止に有用であることが認められた。
【００１２】
さらにより詳しくは、ＡがＯであり、Ｒ1がＣＨ3でありそしてＲ2がフルオロである構造式Ｉに記載の化合物は、ＯＡＢおよびＵＩの治療および防止に有用である。
【００１３】
ＯＡＢおよびＵＩの治療および防止に有用である最も特有の化合物が、本願明細書において例証される化合物である。
【００１４】
本発明の化合物はＮＫ２Ｒ結合特性を有し、そして特定のかかる化合物は膀胱組織の収縮を選択的に阻害する。驚くべきことに、構造式Ｉに記載の特定の化合物はＢＡＮＫによって誘導される膀胱組織の収縮を活性化することが見出された。かかる一化合物は、ＡがＳであり、ＤがＮＨであり、Ｒ1がＨであり、Ｒ3がＣＨ3でありそしてＲ4がＨである化合物である。別のかかる化合物は、ＡがＯであり、ＤがＣ(Ｏ)ＮＨＣ2Ｈ5であり、Ｒ1がＨであり、Ｒ3がＣＨ3であり、そしてＲ4がＨである化合物である。
【００１５】
一態様において、本発明は、構造式Ｉに記載の化合物を用いて対象者、特にヒトにおけるＯＡＢまたはＵＩを治療または防止することからなる方法、より詳細には構造式Ｉに記載の構造を有する治療的有効量の化合物を用いて治療することからなる方法を提供する。
【００１６】
第２の態様において、本発明は哺乳動物特にヒトにおけるＯＡＢまたはＵＩの治療および防止のための本発明の化合物を提供する。
【００１７】
第３の態様において、本発明は、本発明の化合物の薬学的に許容される塩および該化合物またはその薬学的に許容される塩を含有する組成物を提供する。
【００１８】
特定の態様において、本発明は膀胱収縮を阻害する構造式Ｉに記載の構造を有する治療的有効量の化合物を用いて、対象者、特にヒトにおけるＯＡＢまたはＵＩを治療または防止することからなる方法を提供する。
【００１９】
別の態様において、本発明は、哺乳動物および特にヒトにおけるＯＡＢまたはＵＩを治療および防止する方法を提供し、該方法は治療的有効量のＮＫ２Ｒ結合化合物を他の治療剤と組み合わせて用いてその必要のある対象者を治療することからなる。
【００２０】
さらにもう一つの態様において、本発明は、哺乳動物および特にヒトにおけるＯＡＢまたはＵＩを治療および防止する方法を提供し、該方法はエストロゲン様薬剤および／またはプロゲステロン様物質と組み合わせて、ならびにα−アドレナリンアゴニスト、β−アドレナリン受容体遮断薬、コリン受容体遮断化合物またはコリン受容体刺激薬の補充を伴うか伴わないで、治療的有効量のＮＫ２Ｒ拮抗薬を用いてその必要のある対象者を治療することからなる。
【００２１】
更なる態様において、本発明は構造式Ｉに記載の化合物および薬学的に許容される添加剤または希釈剤を含有する本発明の方法の実施に有用な医薬組成物を提供する。
【００２２】
本発明の全ての局面において、本発明の範囲内にあると意図される薬学的に許容される塩は、塩酸塩、硫酸塩、トシラート、メシレート、ナプシレート（napsylate）、ベシレート（besylate）、リン酸塩、サリチル酸塩、酒石酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩（fumerate）、酢酸塩またはマレイン酸塩のような塩である。
【００２３】
上記の構造式Ｉに記載の構造を有する化合物の使用からなる、ＯＡＢまたはＵＩの治療方法を提供することは本発明の目的である。
【００２４】
ＯＡＢまたはＵＩの防止のための本発明の化合物の使用からなる方法を提供することが本発明の別の目的である。
【００２５】
本発明の方法は一般に哺乳動物に適用できるが、それらは特にヒトに適用できる。
【００２６】
従って、ＯＡＢまたはＵＩを患いかつその治療の必要なヒト患者を治療的有効量の本発
明化合物を用いて治療することからなる方法を提供することが本発明の目的である。
【００２７】
本発明の他の目的は、ＯＡＢまたはＵＩの治療または防止に有用である構造式Ｉに記載の化合物を提供することにある。
【００２８】
本発明のさらなる目的は、ＯＡＢまたはＵＩの治療または防止に有用な上記化合物の、薬学的に許容される塩、組成物、混合物等を提供することにある。
【００２９】
本発明の特定の目的は、ＯＡＢまたはＵＩ治療に有効な量の構造式Ｉに記載の構造を有する化合物を患者に投与することからなる、ＯＡＢまたはＵＩを有するヒト患者を治療する方法を提供することにある。
【００３０】
本発明の他の特定の目的は、構造式Ｉに記載の構造を有する化合物が薬学的に許容される塩の形態である方法を提供することにある。
【００３１】
本発明の方法において、治療は生理的に許容される任意の方法で、例えば局所適用、経口摂取、吸入、通気または注射によって投与されることが意図される。
【００３２】
本発明の方法において、本発明の化合物は、カプセル、錠剤、水溶液、水性の懸濁液、非水溶性懸濁液、坐薬、エアゾールまたは粉剤のような形態であることが意図される。
【００３３】
過活動膀胱（「ＯＡＢ」）（泌尿器の、切迫失禁、緊急性かつ頻発性を含む症候群に対して一般に使用されかつ本明細書中で使用される名称である）または尿失禁（「ＵＩ」）（衝動（切迫失禁）または物理的もしくは精神的緊張（緊張性失禁）の結果として、尿を貯留する膀胱の不能から生じる尿の非自発的漏出）、の治療が本発明の目的である。
【００３４】
したがって、ＯＡＢまたはＵＩを患うヒト患者を治療する方法を提供することが本発明の目的である。
【００３５】
本明細書に意図されるように、ＯＡＢまたはＵＩを治療する方法の特定の目的は、治療的有効量の構造式Ｉに記載の化合物の投与である。
【００３６】
本発明の別の目的は、ＯＡＢまたはＵＩの治療または防止に有用な構造式Ｉに記載の化合物を提供することにある。
【００３７】
本発明のさらなる目的は、ＯＡＢまたはＵＩの治療または防止に有用な上記化合物の、薬学的に許容される塩、組成物、混合物等を提供することにある。
【００３８】
本発明の特定の目的は、ＯＡＢまたはＵＩの治療に有効な量の（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−オキソペルヒドロピリミジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−エチルベンズアミドを、ＯＡＢまたはＵＩを有するヒト患者に投与することからなる、該患者の治療方法を提供することにある。
【００３９】
本発明の他の特定の目的は、（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−オキソペルヒドロピリミジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−エチルベンズアミドがその薬学的に許容される塩の形態である方法を提供することにある。
【００４０】
本発明の方法において、治療は、任意の生理的に許容される経路により、例えば真皮、舌下、または直腸の局所適用によって；腹膜内、非経口、皮内、または皮下の注射によって；あるいはカプセル、錠剤または溶液もしくは懸濁液の経口摂取によって、投与される
ことが意図される。
【００４１】
一般に、本発明の医薬組成物は生理的に許容される経路による投与を可能にするよう処方されることが意図される。本発明の方法において、化合物は例えばカプセル、錠剤、水溶液、水性懸濁液、非水溶性懸濁液、坐薬、エアゾールまたは粉剤のような形態で投与されることが意図される。
【００４２】
本発明の特定の方法において、化合物は一つまたはそれ以上の他の治療剤と組み合わせて投与されることが意図される。かかる薬剤は、エストロゲン様薬剤、プロゲステロン様物質、α−アドレナリンアゴニスト、β−アドレナリン受容体遮断薬、コリン受容体遮断薬またはコリン受容体刺激薬であることが意図される。しかし、本発明の化合物が、医学的に適合性の任意の治療剤もしくは予防剤および／または医薬あるいはそれらの組み合わせと同時に投与され得ることは当業者に明らかである。
【００４３】
本発明は、少なくとも一つの薬学的に許容される添加剤または希釈剤と共に本発明の化合物を含有する医薬組成物を含むことが意図される。
【００４４】
本発明はまた、薬剤、例えばエストロゲン様薬剤、プロゲステロン様物質、αアドレナリンアゴニスト、β−アドレナリン受容体遮断薬、コリン受容体遮断薬またはコリン受容体刺激薬を含有する医薬組成物を包含する。
【００４５】
本発明の範囲内に入る医薬組成物は、カプセル、錠剤、水溶液、水性懸濁液、非水溶性懸濁液、坐薬、エアゾールおよび粉剤のような形態を有する組成物を含む。
【００４６】
本発明の更なる態様、目的および効果は、明細書および添付の請求の範囲の内容から当業者に明らかである。
【００４７】
しかし、ＯＡＢ、ＵＩまたは関連した疾患の治療に使用される場合、本発明の化合物は適当な医薬組成物として投与されるものであり、当該組成物は、本発明の化合物または該化合物の薬学的に許容される塩、例えば塩化物、硫酸塩、トシラート、メシレート、ナプシレート（napsylate）、ベシラート（besylate）、リン酸塩、サリチル酸塩、酒石酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩等を、薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含有する。かかる塩は、当業者に公知の方法によって製造される。医薬組成物の形態は、選択される特定の投与経路に適応させる。かかる型は、例えば、経口投与のための錠剤、カプセル、溶液もしくは懸濁液；局所投与のための溶液もしくは懸濁液；直腸投与のための坐薬；静脈もしくは筋肉内注入もしくは注射による投与のための滅菌溶液もしくは懸濁液；吸入による投与のためのエアゾールもしくはネブライザー溶液もしくは懸濁液；または吸入による投与のためのラクトースのような薬学的に許容される固体希釈剤を伴なった粉剤を含む。
【００４８】
経口投与のために、治療的有効量０.１ｍｇ〜２５０ｍｇまで（および典型的には５〜１００ｍｇ）の本発明の化合物を含有する錠剤またはカプセルが都合よく使用され得る。吸入による投与のために、本発明の化合物は、一日量範囲例えば５〜１００ｍｇにおいて、一回量でまたは一日量を２〜４回に分けて、ヒトに投与される。同様に、静脈または筋肉内の注射または注入のために、１０％ｗ／ｗまで（および典型的には０.０５〜５％ｗ／ｗ）の本発明の化合物を含有する滅菌溶液または懸濁液を都合よく使用することができる。
【００４９】
投与されるべき本発明化合物の用量はもちろん、投与経路ならびに治療下の患者の状態の重さおよび体格および年齢を考慮して、当該分野で周知の原理に従って変更される。一
般に、本発明の化合物は約０.０１〜約２５ｍｇ／ｋｇの範囲内の用量として、およびより詳細には約０.１〜５ｍｇ／ｋｇの範囲内の用量として投与される。一般的に、本発明の化合物のＮ−オキシドまたは薬学的に許容される塩または４級アンモニウム塩の相当する量が使用され得る。
【実施例】
【００５０】
本明細書中に使用される場合、別途述べない限り：
（ｉ）温度は、摂氏温度（「℃」）で与えられ；操作は室温または周囲温度、すなわち１８〜２５℃の範囲の温度で実施され；
（ii）有機溶液は無水ＭｇＳＯ4上で乾燥させ；溶媒の蒸発は、減圧下（６００〜４０００パスカル；４.５〜３０ｍｍＨｇ）、６０℃までの浴槽温度により回転蒸発器を使用して実施され；
（iii）クロマトグラフィはフラッシュクロマトグラフィを意味し；逆相クロマトグラフィは３２〜７４μの粒子直径を有するオクタデシルシラン（「ＯＤＳ」）でコートされた支持体上でのフラッシュクロマトグラフィを意味し、これは「ＰＲＥＰ−４０−ＯＤＳ」（Bodman Chemicals, Aston, PA, USAからのArt 731740-100）として公知であり；薄層クロマトグラフィ（「ＴＬＣ」）は、シリカゲルプレートにおいて実施され；
（iv）一般に、反応のコースの後にはＴＬＣが続き、そして反応時間は例証のためにのみに与えられ；
（ｖ）融点は補正されておらず、そして「ｄｅｃ」は分解を示し；与えられた融点は記載の通りに製造された物質に関して得られたもので；多形はいくつかの製造において異なる融点を有する物質が単離され得るものであり；
（vi）最終生成物は、納得できる陽子核磁気共鳴（「ＮＭＲ」）スペクトルを有し；
（vii）収率は例証のためにのみ記載されており、そして必ずしも入念なプロセス開発により得られ得るものではなく；より多くの物質が必要な場合、製造が繰り返され；
（viii）ＮＭＲデータが与えられる場合、ＮＭＲデータは主要な特徴的陽子に関するδ値の形で、内部標準としてのテトラメチルシラン（「ＴＭＳ」）と比較した百万分率（「ｐｐｍ」）で与えられ、溶剤として過重水素化（perdeuterio）ジメチルスルホキシド（DMSO-d6）を使用して３００ＭＨｚで測定され；シグナル形状の従来の省略形が使用され；結合定数（Ｊ）はＨｚで与えられ；Ａｒは、かかる指示がなされる場合、芳香族の陽子を示し；
（ix）化学記号はそれらの通常の意味を有し；SI単位およびシンボルが使用され；
（ｘ）減圧はパスカル（「Ｐａ」）の絶対圧として与えられ；高圧はバールのゲージ圧として与えられ；
（xi）溶媒比率は体積：体積（「ｖ／ｖ」）関係で与えられ；そして
（xii）ＬＣ／ＭＳはダイオード線検出器によって検出された。この分析は、Zorbax 50mm×2.1mm stable bond C8分析カラムによって実施された。溶媒Ａは、水における０.０５％のトリフルオロ酢酸であった。溶媒Ｂは、９０％のアセトニトリル、９.９５％の水および０.０５％のトリフルオロ酢酸であった。流速は１.４ｍＬ／分であり、３分で５％Ｂ〜９０％Ｂまで傾斜していた。保持時間は分で与えられる。イオン化方法はＡＰＣＩ、すなわち気圧化学イオン化であった。通常、親イオンを示すイオンだけが報告される。
【００５１】
化学物質の実施例：
実施例１：（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロ−フェニル）−４−（２−オキソ−［１，４’］ビピペリジニル−１’−イル）−ブチル］−２−フルオロ−Ｎ−メチル−ベンズアミド
０℃のジクロロメタン（７ｍＬ）中の（Ｓ）−１’−［３−（３，４−ジクロロ−フェニル）−４−メチルアミノ−ブチル］−［１，４’］ビピペリジニル−２−オン（０.３ｇ）の溶液に、ニートな２−フルオロベンゾイルクロリドを添加した。周囲温度で４５分後、溶液を重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥させて、真空排気して油状物にし、こ
れをクロマトグラフィによって精製し、メタノール：ジクロロメタン（勾配３：９７、６：９４）により溶離した。高真空下で粘性の油状物になるまで濃縮し、表題化合物を提供した（０.３ｇ）。ＭＳ：ｍ／ｚ＝５３４（Ｍ＋１）。
【００５２】
（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロ−フェニル）−４−（２−オキソ−［１，４’］ビピペリジニル−１’−イル）−ブチル］−２−フルオロ−Ｎ−メチル−ベンズアミドのマレイン酸塩
遊離塩基として（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロ−フェニル）−４−（２−オキソ−［１，４’］ビピペリジニル−１’−イル）−ブチル］−２−フルオロ−Ｎ−メチル−ベンズアミド（１１.７ｇ）をイソプロパノール（８０ｍｌ）中に取り、イソプロパノール（８０ｍｌ）中のマレイン酸（２.５４ｇ）の溶液と混合し、そして還流直前まで加熱した。混合物を冷却し、周囲温度で一晩攪拌した。生じた固体をろ過し、真空下で乾燥させた（回収物１、１０.２ｇ）。
【００５３】
回収物１をイソプロパノール（２５０ｍＬ）中に取り、溶液になるまで還流して、それから一晩周囲温度で撹拌した。固体沈殿物を濾過し、そして高真空下（回収物２、７.１ｇ）で乾燥させた。回収物１からの母液を蒸発させ、そして残留物をイソプロパノール（５０ｍＬ）中に取り、そして一晩撹拌した。形成された結晶を濾過し、そして真空下（回収物３、１.７ｇ）で乾燥させた。回収物１および回収物３は両方とも吸湿性が高かった。回収物１および回収物３を加熱によりエタノール（８０ｍＬ）中に溶解し、そして周囲温度で一晩撹拌した。翌日、結晶ははっきりとわからなかった。ジエチルエーテルを添加し、総容積５００ｍＬまで希釈した。１５分後、固体が現れ始めた。５時間後に固体をろ過し、５０：５０のジエチルエーテル：エタノールによって洗浄して、そして６５℃の高真空下で乾燥させた（７.５ｇ）。MS:m/z=534(M+1)。C28H34Cl2FN3O2.1.0 C4H4O4.0.1 H2Oの分析：計算値：C, 58.92;H, 5.902；N, 6.44；実験値：C, 58.35-58.54, H 5.51-5.47, N 6.38-6.41。
【００５４】
中間体（Ｓ）−１’−［３−（３，４−ジクロロ−フェニル）−４−メチルアミノ−ブチル］−［１，４’］ビピペリジニル−２−オンを以下のように製造した。
【００５５】
１ａ.（Ｓ）−［２−（３，４−ジクロロ−フェニル）−４−ヒドロキシ−ブチル］−メチル−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
ジクロロメタン（１２５ｍＬ）中の３−（３，４−ジクロロ−フェニル）−４−メチルアミノ−ブタン−１−オール（２５.０ｇ）の溶液に、ジクロロメタン（１２５ｍＬ）中の溶液としてジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネートを滴下により添加した。３時間撹拌した後、反応混合物を希塩酸、希釈した重炭酸ナトリウムによって洗浄し、乾燥させ、そして蒸発させた。生じた油状物をクロマトグラフにかけ、ジクロロメタン：エーテル（２：１）により溶離した。
【００５６】
１ｂ.（Ｓ）−［２−（３，４−ジクロロ−フェニル）−４−オキソ−ブチル］−メチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
ジクロロメタン（７０ｍＬ）中の塩化オキサリル（２.８４ｍＬ）の溶液、−７８℃に、ジクロロメタン（３５ｍＬ）中のジメチルスルホキシド（４.６ｍＬ）を添加した。この混合物を−７８℃で約７分間攪拌し、（Ｓ）−［２−（３，４−ジクロロ−フェニル）−４−ヒドロキシ−ブチル］−メチル−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（９.１ｇ）をジクロロメタン（２５ｍＬ）中の溶液として添加した。この混合物を３０分間、−７８℃で撹拌し、適切にトリエチルアミン（１８.１ｍＬ）を添加した。次いでこの混合物を−７８℃で３０分間攪拌し、０℃で４５分間攪拌し、次いで周囲温度に温めた。溶液をジクロロメタンで希釈し、希塩酸、重炭酸ナトリウム水溶液によって洗浄し、乾燥させそして蒸発させた。MS:m/z=346(M+1)。この生成物を更なる精製なしで使用した。
【００５７】
１ｃ.（Ｓ）−［２−（３，４−ジクロロ−フェニル）−４−（２−オキソ−［１，４’］ビピペリジニル−１’−イル）−ブチル］−メチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
メタノール（１００ｍＬ）中の［１，４’］ビピペリジニル−２−オン（４.５ｇ）の溶液に、酢酸（１.４９ｍＬ）を添加した。この溶液を数分間攪拌し、メタノール（２５ｍＬ）中の（Ｓ）−［２−（３，４−ジクロロ−フェニル）−４−オキソ−ブチル］−メチル−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２６ｍｍｏｌｅ）を添加した。攪拌を２０分間続けた後、次いでメタノール（５ｍＬ）中のナトリウムシアノボロヒドリド（１.６４ｇ）を添加した。この混合物を２日間撹拌し、次いで重炭酸ナトリウム水溶液で希釈してそして濃縮した。次いで、水とジクロロメタンの層間に分配した。水層をジクロロメタンで洗浄し、有機相を合わせて乾燥させ、真空排気して粘性油状物にし、これをフラッシュクロマトグラフィによって精製し、メタノール：ジクロロメタン（５：９５）により溶離した。この物質は真空下での乾燥において白色泡状物を形成した（９.４ｇ）。MS:m/z=512(M+1)。
【００５８】
１ｄ.（Ｓ）−１’−［３−（３，４−ジクロロ−フェニル）−４−メチルアミノ−ブチル］−［１，４’］ビピペリジニル−２−オン
トリフルオロ酢酸（１３.１ｍＬ）を、ジクロロメタン（３００ｍＬ）中の（Ｓ）−［２−（３，４−ジクロロ−フェニル）−４−（２−オキソ−［１，４’］ビピペリジニル−１’−イル）−ブチル］−メチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（８.７３ｇ）の溶液に添加した。３０分間の撹拌後、さらにトリフルオロ酢酸（１３.１ｍＬ）を添加した。１.５時間後に反応物を水酸化ナトリウム水溶液で希釈し、そして層を分離した。有機層を水によって洗浄し、乾燥させ、真空排気して粘性油状物にし、これをさらには精製しなかった。MS:m/z=412(M+1)。
【００５９】
実施例２：（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−チオ−ピペリジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチルベンズアミド
メタノール（２ｍｌ）中の（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−オキソブチル］−Ｎ−メチルベンズアミド（０.５０ｇ）を、メタノール（６ｍｌ）中の［１，４’］ビピペリジニル−２−チオン（０.３４ｇ）および酢酸（０.１０ｍｌ）溶液に添加した。５分後に、メタノール（２ｍＬ）中のナトリウムシアノボロヒドリド（０.１０８ｇ）を一度に添加した。一晩撹拌した後、反応混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液で希釈し、３０分間撹拌して、そしてジクロロメタン（３×５０ｍＬ）によって抽出した。この有機抽出物を乾燥させ、蒸発させて、そして溶離剤としてジクロロメタン：メタノール（勾配９８：２、９５：５）を用いてクロマトグラフィにより精製した。生じた物質をジクロロメタン中に溶解し、エーテルを含んだ塩化水素を用いて塩酸塩として沈殿させ、蒸発させ、そして高真空下に一晩置いて白色固体として表題化合物（０.４９０ｇ）を与えた。MS:m/z=532(M+)。
【００６０】
中間体［１，４’］ビピペリジニル−２−チオンを次のように製造した：
【００６１】
２ａ.４−（５−クロロ−ペンタノイルアミノ）−ピペリジン−１−カルボン酸ベンジルエステル
ジクロロメタン（１００ｍＬ）中の４−アミノ−ピペリジン−１−カルボン酸ベンジルエステル（１２.０ｇ）を、ピリジン（７.２ｍＬ）に添加した。
溶液を０℃まで冷却し、次いで５−クロロバレリルクロリド（７.３ｇ）を滴下により反応物に添加した。反応物を室温まで温めた。５時間後、反応物をジクロロメタンで希釈し、そして水（１×）、飽和硫酸銅水溶液（２×）および水（１×）で洗浄した。有機抽出物を乾燥させ、そして蒸発させた。生じた固体をエーテル中に懸濁し、ろ過し、次いで高真空下に置いて白色固体として表題化合物（１５.６ｇ）を与えた。酢酸エチルにおいてRf=0.60。
【００６２】
２ｂ.２−オキソ−［１，４’］ビピペリジニル−１’−カルボン酸ベンジルエステル
４−（５−クロロ−ペンタノイルアミノ）−ピペリジン−１−カルボン酸ベンジルエステル（１５.６ｇ）を、テトラヒドロフラン（１７５ｍＬ）中の水素化ナトリウム（２.１２ｇ）の懸濁液に添加した。一晩撹拌した後、反応を水でクエンチし、次いでテトラヒドロフランを減圧下で除去した。水溶液を水で希釈し、そして塩化メチレン（４×５０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を乾燥させ、蒸発させて表題化合物（１５ｇ）を与えた。酢酸エチルにおいてRf=0.30。MS:m/z=317(M+H)。
【００６３】
２ｃ.２−チオキソ−［１，４’］ビピペリジニル−１’−カルボン酸ベンジルエステル
テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中の２−オキソ−［１，４’］ビピペリジニル−１’−カルボン酸ベンジルエステル（３.１ｇ）を、テトラヒドロフラン（４０ｍＬ）中のＬａｗｅｓｓｏｎ’ｓ試薬（１.９８ｇ）の懸濁液に添加した。２０分後、反応物を濃縮し、そして生じたガムを溶離剤として塩化メチレン：エーテル（勾配１０：１、５：１）を用いてクロマトグラフィにかけた。白色泡状物として表題化合物（２.９ｇ）を得た。塩化メチレン：エーテル（１０：１）においてRf=0.42。MS:m/z=333(M+H)。
【００６４】
２ｄ.［１，４’］ビピペリジニル−２−チオン
アニソール（２.５ｍＬ）を、０℃の塩化メチレン（４０ｍＬ）中の２−チオキソ−［１，４’］ビピペリジニル−１’−カルボン酸ベンジルエステル（２.４ｇ）の溶液に添加し、その後トリフルオロスルホン酸（３.４ｍＬ）を添加した。３０分後、固体の炭酸カリウムを添加し、次いで硫酸ナトリウムおよびメタノールを添加した。固体を濾過により除去し、そして濾液を濃縮した。その残留物をメタノール中に溶解し、Amberlyst A-21（僅かに塩基性）樹脂のカラムに通して中和した。濾液を回収しそして濃縮し、溶離液として塩化メチレン：メタノール（勾配９５：５、９０：１０）を用いてクロマトグラフィにより精製した。白色固体として表題化合物（０.９３ｇ）を得た。MS:m/z=199(M+H)。
【００６５】
実施例３：（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−オキソ−ピペリジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチル３−フルオロベンズアミド
３−フルオロベンゾイルクロリド（０.０８８ｍＬ）を、ジクロロメタン（７８ｍＬ）中の（Ｓ）−１’−［３−（３，４−ジクロロ−フェニル）−４−メチルアミノ−ブチル］−［１，４’］ビピペリジニル−２−オン（０.３０ｇ）と共に一晩反応させた。反応物をジクロロメタンで希釈し、そして飽和重炭酸ナトリウム水溶液によって洗浄した。有機抽出物を乾燥させ、蒸発させて、そして溶離液としてジクロロメタン：メタノール（勾配９７：３、９４：６）を用いてクロマトグラフィによって精製し、表題化合物（０.２８ｇ）を得た。塩化メチレン：メタノール（９５：５）においてRf＝０.３６。ＭＳ：ｍ／ｚ＝５３４（Ｍ＋）。
【００６６】
生成物をメタノール（２ｍＬ）中に溶解し、クエン酸を加えた。溶液を濃縮し、そして残留物をエーテルを用いて摩砕した。この生成物を白色泡状物として得た（０.０９３ｇ）。
【００６７】
中間体、（Ｓ）−１’−［３−（３，４−ジクロロ−フェニル）−４−メチルアミノ−ブチル］−［１，４’］ビピペリジニル−２−オンを、実施例１に記載のとおり製造した。
【００６８】
実施例４：（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−オキソ
−ピペリジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチル−４−フルオロベンズアミ
４−フルオロベンゾイルクロリド（０.０９３ｍＬ）を、ジクロロメタン（８ｍＬ）中の（Ｓ）−１’−［３−（３，４−ジクロロ−フェニル）−４−メチルアミノ−ブチル］−［１，４’］ビピペリジニル−２−オン（０.３２５ｇ）と一晩反応させた。反応物をジクロロメタンで希釈し、そして飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機抽出物を乾燥させ、蒸発させて、そして溶離剤としてジクロロメタン：メタノール（勾配９７：３、９４：６）を用いてクロマトグラフィによって精製し、表題化合物（０.３３ｇ）を与えた。塩化メチレン：メタノール（９５：５）においてRf=0.41。MS:m/z=534(M+)。生成物をメタノール（２ｍＬ）に溶解し、そしてクエン酸を添加した。溶液を濃縮し、残留物をエーテルを用いて摩砕した。この生成物を白色泡状物（０.１１ｇ）として得た。
【００６９】
中間体（Ｓ）−１’−［３−（３，４−ジクロロ−フェニル）−４−メチルアミノ−ブチル］−［１，４’］ビピペリジニル−２−オンを、実施例１に記載のとおり製造した。
【００７０】
実施例５：（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−オキソ−ピペリジン−１−イル）ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチルベンズアミド
メタノール（３ｍｌ）中の（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−オキソブチル］−Ｎ−メチルベンズアミド（０.７８ｇ）を、メタノール（８ｍｌ）中の［１，４’］ビピペリジニル−２−オン（０.３４ｇ）および酢酸（０.１５ｍｌ）の溶液に添加した。１０分後、メタノール（４ｍＬ）中のナトリウムシアノボロヒドリド（０.１７ｇ）を一度に添加した。一晩撹拌した後、反応混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液で希釈し、３０分間撹拌し、そしてジクロロメタン（４×５０ｍＬ）によって抽出した。有機抽出物を乾燥させ、蒸発させて、そして溶離剤としてジクロロメタン：メタノール（勾配９５：５、９０：１０）を用いてクロマトグラフィによって精製し、表題化合物（０.９５ｇ）を与えた。MS:m/z=516(M+)。生成物をメタノール（２ｍＬ）中に溶解し、そしてクエン酸を添加した。溶液を濃縮し、残留物をエーテルを用いて摩砕した。生成物を白色泡状物として得た（１.２ｇ）。
【００７１】
中間体［１，４’］ビピペリジニル−２−オンを次のように製造した：
【００７２】
５ａ.［１，４’］ビピペリジニル−２−オン
２−オキソ−［１，４’］ビピペリジニル−１’−カルボン酸ベンジルエステル（２.５ｇ）およびＰｅａｒｌｍａｎ’ｓ触媒（０.５０ｇ）を、エタノール（３０ｍＬ）中で水素（１気圧）下において撹拌した。２０時間後、反応物をセライトによりろ過して濃縮した。表題化合物を白色固体として得た（１.４５ｇ）。MS:m/z=183(M+H)。
【００７３】
５ｂ.（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−オキソブチル］−Ｎ−メチルベンズアミド
ジクロロメタン（１００ｍＬ）中の塩化オキサリル（４.５ｍｌ）の溶液、−７８℃に、ジクロロメタン（４０ｍＬ）中のジメチルスルホキシド（７.４ｍＬ）を添加した。添加が完了した後、溶液を−７８℃でさらに３０分間攪拌した。次いでジクロロメタン（３５ｍＬ）およびジメチルスルホキシド（７ｍｌ）中の（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロ−フェニル）−４−ヒドロキシ−ブチル］−Ｎ−メチル−ベンズアミド（１４.６ｇ）溶液を、滴下により添加した。この溶液を１時間、−７８℃で攪拌した。トリエチルアミン（２９ｍＬ）を滴下により反応物に添加し、２０分後、氷浴を除き、溶液を周囲温度で３０分間攪拌した。反応混合物をジクロロメタン（２００ｍＬ）で希釈し、そして希塩酸水溶液（１５０ｍＬ）、水（１５０ｍＬ）および重炭酸ナトリウム水溶液（１５０ｍＬ）で洗浄した。分離後の有機層を乾燥させそして蒸発させ、次いでエーテル中に溶解した。形成された白色沈殿物をろ過し、そして乾燥させて表題化合物（９.１ｇ）を与えた。塩化メチレン：メタノール（９５：５）においてRf＝０.４１。
【００７４】
実施例６：（Ｓ）−Ｎ−［２−（３，４−ジクロロフェニル）−４−［４−（２−オキソ−ピペリジン−１−イル）−４−カルボキシアミノエチル−ピペリジノ］ブチル］−Ｎ−メチルベンズアミド
ジクロロメタン（２０ｍＬ）中の１−ベンジルオキシカルボニル−４−カルボキシ−４−（２−オキソピペリジノ）ピペリジン（１.４５ｇ）、エチルアミンヒドロクロリド（０.３２ｇ）、４−（ジメチルアミノ）−ピリジン（０.５９ｇ）、トリエチルアミン（０.６７ｍＬ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（０.９２ｇ）を一晩撹拌した。この反応混合物をジクロロメタンで希釈し、そして１.０Ｎ塩酸、飽和重炭酸ナトリウム水溶液および水で連続して洗浄した。分離後の有機層を乾燥させ、そして蒸発させて白色固体として表題化合物（１.３７ｇ）を与え、これは精製を要しなかった; NMR: 7.35(m,5), 6.71(m,1), 5.12(s,2), 3.56(m,4), 3.28(m,4), 2.43(m,2), 2.27(m,2), 2.20(m,2), 1.76(m,4), 1.11(t,3J=7.2)。
【００７５】
ＮＫ２受容体に結合する作用を介したＯＡＢまたはＵＩの治療の治療剤としての本発明化合物の作用は、最適に設計されたインビトロおよびインビボ試験を用いて示されている。
【００７６】
インビトロ結合アッセイ
クローン化ヒトＮＫ１またはＮＫ２受容体によってトランスフェクトされたＭＥＬ細胞由来の膜の調製：
Hopkins他, Biochem. Biophys. Res. Commun. 180: 1110-1117(1991), およびGraham他, Biochem. Biophys. Res. Commun. 177: 8-16(1991)によって記載されているように、ヒト肺ＮＫ１およびＮＫ２受容体のクローニングがなされた。ヒトタキキニン受容体によってトランスフェクトされたＭＥＬ細胞の異種発現およびスケールアップ増殖が、Aharony他, Mol. Pharmacol. 45: 9-19, 1994によりＮＫ２受容体に関して記載されるように実施された。
【００７７】
ＮＫ１またはＮＫ２受容体を発現する組換えＭＥＬ細胞由来の膜を、Hopkins他, (1991)により記載されるように調製した。一時的に、細胞を４℃で（Brinkman PT-20 Polytron, 設定３、氷上で１回１５秒のバースト）、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７.４）、５ｍＭ  ＫＣｌ、１２０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＥＤＴＡからなり、かついくつかのプロテアーゼ阻害剤（１ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオリド；０.１ｍｇ／ｍｌ大豆−トリプシン阻害剤、および１ｍＭのヨードアセトアミド）を含む緩衝剤中で均質にした。このホモジェネートを、１２００ｘｇで４５分間、４℃で遠心分離させ、細胞破片を除去した。この上澄みを、４８，０００ｘｇで４５分間、４℃で遠心分離した。このペレットを、氷冷の５０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７.４）緩衝剤３０ボリューム中に、グラス−テフロンモーター付ホモジナイザによって再懸濁した。
【００７８】
受容体結合アッセイ：
クローン化ＮＫ２受容体を発現しているＭＥＬ細胞の［3Ｈ］ＮＫＡ、またはクローン化ＮＫ１受容体を発現しているＭＥＬ細胞の［3Ｈ］ＳＰを用いたリガンド結合アッセイが、Aharony他, Mol. Pharmacol. 45: 9-19, 1994, Aharony他, Neuropeptides 23: 121-130(1992)およびAharony他, J. Pharmacol. Exp. Ther. 259: 146-155(1991)により記載される方法で一般的に実施された。手短に言えば、インキュベーションは、膜、試験化合物および［3Ｈ］リガンド（１.０〜１.５ｎＭ）を含むアッセイ緩衝剤中で実施した。競合実験において、競合薬剤（アゴニスト、アンタゴニストまたはビヒクル）を種々の濃度で含む混合物（０.３１５ｍＬ）が、１μＭの標識されていない同種リガンド（ＮＫＡまたはＳＰ）と共にかまたはなしで、２５℃で３０分間インキュベートした。反応を膜（０.１〜０.１５ｍｇタンパク質／最終濃度）の添加により開始させ、そしてそれをもう一度行った。飽和実験および動態学的実験を３回行った。受容体結合リガンドおよび遊離リガンドの単離を、洗浄緩衝剤１ｍＬ（２０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７.５）の希釈と、そのすぐ後に総容積１０ｍＬの洗浄緩衝剤（０.１％ポリエチレンイミンに予め浸したWhatman GF/Bフィルタと共にBrandel Cell Harvester MB-48Rを利用）を用いた真空ろ過により達成した。
【００７９】
［3Ｈ］リガンドの結合を阻害する本明細書中に開示される化合物の能力が、表１に開示される結果により示される。
【００８０】
インビボアッセイ：
麻酔されたモルモットのＢＡＮＫ−誘導された膀胱収縮：
雌のモルモット（３００〜４５０ｇ）を、ケタミン／キシラジン混合物（それぞれ３／１０ｍｇ／ｋｇ）の筋肉内投与によって麻酔した。頸静脈にカテーテルを入れ、そのカテーテルの末端に、適当な場合、化合物の投与のためのシリンジを接続した。続いて、膀胱を正中線の開腹によって露出させ、尿管を膀胱より約２ｃｍ上で４−０絹糸縫合によって結び、そしてその結紮より上を切って、腎臓からの排水を可能にした。カニューレを近位の尿道および膀胱括約筋を通じて膀胱内腔に通した。膀胱を手動で空にし、そこに０.３ｍＬの生理食塩水を注いで、そして膀胱圧の変化を記録するためにGould p23 ID圧力トランスデューサにカテーテルを取り付けた。外科的準備の後、約１５分の平衡期間により動物を安定化させた。チオルファン（１０ｍｇ／ｋｇ  ｉｖ）を、アゴニストに曝露する１５分前に投与し、中性エンドペプチターゼ３.４.２４.１１.を阻害した。
【００８１】
試験化合物（０.２〜５ｍｍｏｌ／ｋｇ、５％  PEG 400−生理食塩水ビヒクル）の静脈投与の前１５分の平衡期間の間に、反応を減衰させた。等しい用量のＢＡＮＫの投与前に追加的な１５分の平衡期間を経過させることを繰り返した。ＢＡＮＫの複数回の投与に対する膀胱収縮応答の等しさを確かめるために、事前の研究を実施した。効果は、試験化合物の存在および非存在下でのＢＡＮＫに対する応答間の差異を百分率として算出した。
【００８２】
試験化合物の経口での効果を確かめるため、動物に、ＢＡＮＫの投与の１時間前に強制栄養によって試験化合物（５２ｎｍｏｌ／ｋｇ、５％  PEG 400−生理食塩水ビヒクル）を投与した。この後、ＢＡＮＫ（３ｎｍｏｌ／ｋｇ）の静脈投与を行った。試験化合物の有無で生じた膀胱収縮を、Grass 7D ポリグラフにおいて膀胱内の膀胱圧の増加として記録し、そしてＢＡＮＫ仲介効果の阻害を百分率として表した。作用の持続期間の研究を、ＢＡＮＫ投与前の時間を異ならせて試験化合物（１.２ｍｍｏｌ／ｋｇ、５％  PEG 400−生理食塩水ビヒクル）を経口投与した後に実施した。反応を、偽処理された対照と比較して試験化合物の存在下におけるＢＡＮＫへの反応間の違いを百分率として算出した。全ての研究に対し、各動物には一回量の試験化合物を投与した。実験結果を、基底レベルからの平均値±平均値の標準誤差（±Ｓ.Ｅ.Ｍ）百分率変化として表した。
【００８３】
ＢＡＮＫにより誘導される膀胱収縮を阻害する本明細書中で開示される化合物の能力は、表１において開示される結果により示される。
【００８４】
【表１】
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【００８５】
本発明の化合物は、ＮＫ２受容体に特異的である。本明細書中に開示される化合物は一般的に、表１に示される結果で示されるように、ヒトＮＫ１受容体と比較してヒトＮＫ２受容体に対して１００倍またはそれ以上のより優れた選択性を表す。
【００８６】
驚くべきことに、ヒトＮＫ２受容体に対する類似の結合親和性を有する化合物は、ＢＡＮＫによって誘導される膀胱収縮を阻害する能力について試験した場合、異なる効果を有することが見出された。例えば、表１に示されるように、クローン化されて発現されたｈＮＫ２受容体に対するトリチウム化されたＮＫＡの結合を阻害する能力について試験した場合、例証された化合物は一般的に約９対数モルのＫｉを有する。しかし、実施例１の化合物はＢＡＮＫ誘導された膀胱収縮を８０％阻害することがわかったが、予想外に、実施例４の化合物はＢＡＮＫにより誘導される膀胱収縮を２８％促進させることがわかった。
【００８７】
本発明の化合物は、最小有効用量の数倍を与えても検査動物にどのような不都合な副作用の徴候を全く示さないことがわかった。
【国際調査報告】
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