(57)【要約】グルタミン合成酵素の阻害に影響されやすい疾患及び症状を治療するためのＬ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの新規な投与形態が開示されている。新規な投与形態は、１週間の期間にわたって体重に基づいて１０ｍｇ／ｋｇを超えない、好ましくは８ｍｇ／ｋｇを超えない、より好ましくは５ｍｇ／ｋｇを超えない、最も好ましくは２．５ｍｇ／ｋｇを超えないようにすべきである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
霊長類の進行性高アンモニア血症性脳症を治療する方法であって、
治療が必要な霊長類に、腫脹を低減させ、発作を最小限に抑える又は予防するのに有効な量のＬ−メチオニンＳ−スルホキシイミンを投与することを含み、前記有効な量が１０．０ｍｇ／ｋｇ以下である方法。
【請求項２】
霊長類がヒトである請求項１に記載の方法。
【請求項３】
治療が必要な対象が脳腫脹に罹患している請求項２に記載の方法。
【請求項４】
Ｌ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの有効量が、１週間の期間にわたって投与される最大量である請求項２に記載の方法。
【請求項５】
Ｌ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの有効な量が８．０ｍｇ／ｋｇ以下である請求項４に記載の方法。
【請求項６】
Ｌ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの有効な量が、５ｍｇ／ｋｇ以下である請求項４に記載の方法。
【請求項７】
Ｌ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの有効な量が、２．５ｍｇ／ｋｇ以下である請求項４に記載の方法。
【請求項８】
霊長類対象の進行性高アンモニア血症性脳症を治療する方法であって、
症候性慢性低度高アンモニア血症の対象に、グルタミン合成酵素を阻害し、神経症状を最小限に抑える又は予防するのに有効な量のＬ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの用量を投与することを含み、前記有効な量が１０．０ｍｇ／ｋｇ以下である方法。
【請求項９】
霊長類がヒトである請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
Ｌ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの有効な量が、１週間の期間にわたって投与される最大量である請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
Ｌ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの有効な量が、８．０ｍｇ／ｋｇ以下である請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
Ｌ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの有効な量が、５ｍｇ／ｋｇ以下である請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
Ｌ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの有効な量が、２．５ｍｇ／ｋｇ以下である請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
霊長類対象の進行性高アンモニア血症性脳症を治療する方法であって、
血漿アンモニウムレベルが上昇した対象に、グルタミン合成酵素を阻害し、神経症状を最小限に抑える又は予防するのに有効な量のＬ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの用量を投与することを含み、前記量が１０．０ｍｇ／ｋｇ以下である方法。
【請求項１５】
霊長類がヒトである請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
Ｌ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの有効な量が、１週間の期間にわたって投与される最大量である請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
Ｌ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの有効な量が、８．０ｍｇ／ｋｇ以下である請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
Ｌ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの有効な量が、５．０ｍｇ／ｋｇ以下である請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
Ｌ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの有効な量が、２．５ｍｇ／ｋｇ以下である請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
霊長類対象の進行性高アンモニア血症性脳症を防止する方法であって、
高アンモニア血症を発症するリスクが高い対象に、グルタミン合成酵素を阻害し、神経症状を最小限に抑える又は予防するのに有効な量のＬ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの用量を投与することを含み、前記有効な量が１０．０ｍｇ／ｋｇ以下である方法。
【請求項２１】
霊長類がヒトである請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
Ｌ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの有効な量が、１週間の期間にわたって投与される最大量である請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
Ｌ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの有効な量が、８．０ｍｇ／ｋｇ以下である請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
Ｌ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの有効な量が、５．０ｍｇ／ｋｇ以下である請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
Ｌ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの有効な量が、２．５ｍｇ／ｋｇ以下である請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
成人のヒトの進行性高アンモニア血症性脳症を治療するのに適した薬剤単位用量であって、
（１）７００ｍｇ以下の量のＬ−メチオニンＳ−スルホキシイミン、及び、
（２）許容される薬理学的賦形剤、
を含み、腫脹を低減させ、発作を最小限に抑える又は予防するのに有効な薬剤単位用量。
【請求項２７】
５６０ｍｇ以下の量のＬ−メチオニンＳ−スルホキシイミンを含む請求項２６に記載の単位用量。
【請求項２８】
３５０ｍｇ以下の量のＬ−メチオニンＳ−スルホキシイミンを含む請求項２６に記載の単位用量。
【請求項２９】
１７５ｍｇ以下の量のＬ−メチオニンＳ−スルホキシイミンを含む請求項２６に記載の単位用量。
【請求項３０】
腫脹を低減させ、発作を最小限に抑える又は予防するのに有効な量でＬ−メチオニンＳ−スルホキシイミンを投与することによって、脳腫脹に罹患している成人のヒトの進行性高アンモニア血症性脳症を治療するための薬剤組成物を調製するためのＬ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの使用方法であって、
Ｌ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの前記有効な量が７００ｍｇ以下である使用。
【請求項３１】
薬剤組成物が、５６０ｍｇ以下のＬ−メチオニンＳ−スルホキシイミンを含有する請求項２２に記載の使用方法。
【請求項３２】
薬剤組成物が、３５０ｍｇ以下のＬ−メチオニンＳ−スルホキシイミンを含有する請求項２２に記載の使用方法。
【請求項３３】
薬剤組成物が、１７５ｍｇ以下のＬ−メチオニンＳ−スルホキシイミンを含有する請求項２２に記載の使用方法。
【請求項３４】
グルタミン合成酵素の阻害に影響されやすい疾患を治療する方法であって、
かかる治療が必要な対象に薬剤有効量のＬＳＭＳＯを投与することを含み、
ＬＳＭＳＯの前記薬剤有効量が１週間の期間にわたって１０ｍｇ／ｋｇを超えない方法。
【請求項３５】
ＬＳＭＳＯの薬剤有効量が１週間の期間にわたって８ｍｇ／ｋｇを超えない請求項４３に記載の方法。
【請求項３６】
ＬＳＭＳＯの薬剤有効量が１週間の期間にわたって５ｍｇ／ｋｇを超えない請求項４３に記載の方法。
【請求項３７】
ＬＳＭＳＯの薬剤有効量が１週間の期間にわたって２．５ｍｇ／ｋｇを超えない請求項４３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、霊長類の進行性高アンモニア血症性脳症を治療するためのＬ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの新規な投与形態に関する。
【背景技術】
【０００２】
「Ｔｈｅ  Ｒｅｌａｔｉｖｅ  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ  Ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ  ｏｎ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  Ａｎｉｍａｌ  Ｓｐｅｉｃｉｅｓ」と題するＧｅｒｓｏｆｆの参考文献には、ラットへのメチオニンスルホキシイミン（以下「ＭＳＯ」）の腹腔内注射、雑種仔犬へのＭＳＯの皮下注射、及びサルへのＭＳＯの腹腔内注射に関する実験の結果が報告されている。実験から、イヌ、ラット及びサルに対するＭＳＯの最小中毒量が決定された。ラット及びサルは、イヌよりも約１００倍ＭＳＯに対する耐性があることがさらに明らかになった。ＭＳＯで誘発された発作は、メチオニンの投与によって抑制できることも発見された。ＭＳＯ（発作を引き起こす）に対するメチオニン（発作を防止する）の量の比は、サル及びイヌで決定された。上述のように、Ｇｅｒｓｈｏｆｆは、毒性に対する種特異性を示し、イヌは特に敏感であるがサル（霊長類）はそうでないことも示している。５０及び１００ｍｇ／ｋｇの用量のＭＳＯの異性体混合物に耐え得ることも示された。
【非特許文献１】Ｇｅｒｓｈｏｆｆ、「Ｔｈｅ  Ｒｅｌａｔｉｖｅ  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ  Ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ  ｏｎ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  Ａｎｉｍａｌ  Ｓｐｅｉｃｉｅｓ」、Ｊ  Ｎｕｔｒ  ４５：４５１〜４５８頁（１９５１年）。
【０００３】
「Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ  Ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ  ｉｎ  Ｍａｎ」と題するＫｒａｋｏｆｆの参考文献は、高度進行型の切除不可能な癌に罹患している入院患者へのＭＳＯの投与に関する。ＭＳＯは、６又は８時間毎に分割量で投与した。この実験の結果では、肝及び腎機能ならびに血液学的状態に変化がなかった。さらに、腫瘍縮退の証拠は発見されなかった。ＭＳＯは、幻覚、失見当識、及び著しい興奮の形で中枢神経系に影響を与えることが指摘された。著者により、症状は累積量よりも１日量のサイズに関連していることが示唆された。報告された実験では、実験を開始する前に、各患者について、それらの肝臓、腎臓、及び血液学的状態の臨床検査評価を行った。これらの評価は、実験の経過中、一定の間隔で続けられ、各対象は、腸性造影的に、又は腫瘤の直接観察によって測定可能な腫瘍退縮の証拠について監視された。腫瘍退縮の証拠は指摘されなかった。
【０００４】
異常な精神状態がそれ自体に、かつメチオニンを追加しないで治ったことも指摘された。この参考文献では、試験対象が痙攣を起こさなかった、可能性が最も高い理由が、痙攣状態に達する前にＭＳＯをやめたことであることも開示された。メチオニン類似体がそれらの毒作用をもたらす正確なメカニズムは知られてないことが述べられていたが、この論文では、ＭＳＯがタンパク質への他のアミノ酸の取り込みを抑制するようであり、この抑制がグルタミンによって妨げられることが開示された。この論文では、グルタミン酸からのグルタミンの合成及びグルタミル基の移動がＭＳＯによって抑制されることが続けて開示された。しかし、この文献は、グルタミンに対するＭＳＯの関係がＭＳＯの神経毒性又はグルタミン拮抗薬アザセリン及びＤＯＮの腫瘍抑制作用の強化を引き起こすかどうか開示することができなかった。最後に、ヒトでのＭＳＯ及びメチオニンの作用が同一ではないことが指摘された。
【非特許文献２】Ｋｒａｋｏｆｆ、「Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ  Ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ  ｉｎ  Ｍａｎ」、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒ．、２：５９９〜６０４頁（１９６１年）。
【０００５】
「Ｆｒｅｅ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  Ｌｅｖｅｌ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｒａｔ  Ｂｒａｉｎ  ＩｎＶｉｖｏ  Ａｆｔｅｒ  Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ  Ｓｕｌｐｈｏｘｉｍｉｎｅ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ」と題するＦｏｌｂｅｒｇｒｏｖａの参考文献は、脳内の遊離グルタミン合成の抑制がＭＳＩ（この文献でのＭＳＯの略語）の神経毒性作用及び発作の発症に関連している可能性があるかどうか研究した。ＭＳＩの投与により、てんかんと特徴付けることができる状態が生じることが開示された。しかし、この状態を引き起こすメカニズムは、依然として不明であった。ＭＳＩは脳組織内の遊離グルタミンの合成を抑制し、ＭＳＩ発作時の動物の脳組織ではグルタミンのレベルが著しく低下していることが開示された。ＭＳＩを１００ｍｇ／ｋｇ及び５０ｍｇ／ｋｇの用量で注射した場合、用量が両方とも閾下であるため、ラットは発作性症状を２０時間示さず、対照動物と全く異ならないことが指摘された。グルタミンのレベルが、発作量を与えたラット脳と同じ程度まで低下したのは、ＭＳＩの投与から２０時間後であったことがさらに指摘された。この論文では、発作量を用いた結果に基づき、発作の発症が障害性グルタミン合成に関連している可能性があるようであることが結論付けられた。
【非特許文献３】Ｆｏｌｂｅｒｇｒｏｖａ、「Ｆｒｅｅ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  Ｌｅｖｅｌ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｒａｔ  Ｂｒａｉｎ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ａｆｔｅｒ  Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ  Ｓｕｌｐｈｏｘｉｍｉｎｅ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ」、Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉａ  Ｂｏｈｅｍｏｓｌｏｖｅｎｉｃａ  １３：２１〜２６頁（１９６３年）。
【０００６】
「Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ  Ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ）ｏｎ  Ａｍｍｏｎｉａ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ」と題するＷａｒｒｅｎの参考文献では、グルタミン形成が肝臓以外の組織におけるアンモニア解毒の主な経路であり、ＭＳＯをマウスに投与したとき、ｉｎ  ｖｉｖｏのアンモニア毒性が著しく低下することが開示された。ＭＳＯはまた、その投与の２時間後に脳アンモニア濃度が倍増することによって示されるように、内因性アンモニア代謝に対して影響を及ぼすことが示された。この増加は２４時間持続した。予想に反して、ＭＳＯによってマウスはアンモニア毒性から保護されたことが発見された。
【非特許文献４】Ｗａｒｒｅｎ、「Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ  Ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ）ｏｎ  Ａｍｍｏｎｉａ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ」、Ｊ．Ｌａｂ．＆  Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．６４：３、４４２〜４４９頁（１９６４年）。
【０００７】
「Ｔｈｅ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  Ａｕｄｉｔｏｒｙ  Ｓｔｉｍｕｌｉ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌｓ  Ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ  Ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ」と題するＷａｄａの参考文献では、ＭＳＯを投与した、反復音にさらされたネコ及びラットは、音に対して不規則なランニング挙動で応じ、ＭＳＯの最も有効な投与量が７．５ｍｇ／ｋｇであることが開示された。これらの作用は、完全に可逆的であることも開示された。５ｍｇ／ｋｇ未満の量では、ネコは影響を受けやすくはならなかったが、１０ｍｇ／ｋｇでは、しばしばてんかん重積状態を招く初期痙攣発症がもたらされる傾向があったことが指摘された。
【非特許文献５】Ｗａｄａ、「Ｔｈｅ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  Ａｕｄｉｔｏｒｙ  Ｓｔｉｍｕｌｉ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌｓ  Ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ  Ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ」、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  １５：１５７〜１６３頁（１９６６年）。
【０００８】
「Ｔｈｅ  Ｄｕｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  ｂｙ  Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ  Ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ」と題するＬａｍａｒの参考文献では、ＭＳＯを１回注射した後の肝臓、脳及び腎臓細胞中のグルタミン合成酵素活性及びグルタミン転移酵素活性の阻害期間が開示された。Ｌａｍａｒにより、脳内での阻害が最大なのは２４時間であったが、７２時間かなり抑制されたままであり、１週間経過した後に活性が正常レベルに戻らなかったことが開示された。
【非特許文献６】Ｌａｍａｒ、「Ｔｈｅ  Ｄｕｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  ｂｙ  Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ  Ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ」、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １７：６３６〜６４２頁（１９６８年）。
【０００９】
「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌ−Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ−Ｓ−Ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ  ａｓ  ｔｈｅ  Ｃｏｎｖｕｌｓａｎｔ  Ｉｓｏｍｅｒ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ  Ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ」と題するＲｏｗｅの参考文献では、ＭＳＯは脳のグルタミン合成を不可逆的に阻害し、阻害剤はメチオニンスルホキシイミンリン酸塩として酵素の活性部位に結合することが開示された。Ｌ−メチオニン−Ｓ−スルホキシイミンはまた、グルタミン合成酵素を阻害し、痙攣を誘発するものとして開示された。アンモニア及びＭＳＯは、脳の異なる領域に影響を与える異なるメカニズムによって発作をもたらすようであることが結論付けられた。
【非特許文献７】Ｒｏｗｅ、「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌ−Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ−Ｓ−Ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ  ａｓ  ｔｈｅ  Ｃｏｎｖｕｌｓａｎｔ  Ｉｓｏｍｅｒ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ  Ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ」、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ６６：２、５００〜５０６頁（１９７０年）。
【００１０】
「Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  γ−Ｇｌｕｔａｍｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  ｂｙ  Ｌ−Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ−Ｓ−Ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ」と題するＲｉｃｈｍａｎの参考文献では、ＭＳＯがγ−グルタミルシステイン合成酵素の有効な阻害剤であることが開示された。ＭＳＯは、酵素のグルタミン酸部位に結合し、ＡＴＰ及びＭｇ２＋イオン又はＭｎ２＋イオンのいずれかの存在下でメチオニンスルホキシイミンリン酸塩に転換すると開示されている。Ｌ−メチオニン−Ｓ−スルホキシイミンだけがマウス中で酵素を阻害し、痙攣を引き起こすこともこの参考文献で教示されていた。この論文ではまた、６６８５頁に各メチオニン誘導体に対するγ−グルタミルシステイン合成酵素の阻害率が記載された表が開示された。ＭＳＯによるγ−グルタミルシステイン合成酵素の阻害に関して特に重要なのは、その短い持続期間である。日単位のグルタミン合成酵素の阻害と比べて、この場合の阻害は時間単位の問題である。
【非特許文献８】Ｒｉｃｈｍａｎ、「Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  γ−Ｇｌｕｔａｍｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  ｂｙ  Ｌ−Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ−Ｓ−Ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ」、Ｊ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２４８：１９、６６８４〜６６９０頁（１９７３年）。
【００１１】
「Ｈｙｐｅｒａｍｍｏｎａｅｍｉａ  Ｄｏｅｓ  Ｎｏｔ  Ｉｍｐａｉｒ  Ｂｒａｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ａｂｓｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｎｅｔ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」と題するＨａｗｋｉｎｓの参考文献では、５〜２００ｍｇ／ｋｇ体重の異なる用量のＭＳＯをラットの腹膜腔内に注射する一連の実験が開示された。ウレアーゼの注射又は門脈大静脈吻合によって引き起こされる高アンモニア血症で見られる物質代謝が最初の２日以内に生じたことが指摘された。ＭＳＯを１回腹腔内注射すると、２時間以内に脳のアンモニア濃度が高まることも指摘された。用量範囲に対する応答は、Ｈａｗｋｉｎｓの参考文献の図１に開示された。このデータは、正常率ではなく阻害率として、添付の図３に転載されている。グルタミン合成酵素活性は、用量に比例して低下し、酵素活性の低下は、脳のグルタミン含有量の平行低下を伴うことが指摘された。仮定したように、血漿のアンモニア値は用量に応じて増加し、２００ｍｇ／ｋｇ体重の最大用量時を除いて毒性の証拠はなかった。静脈内に投与すると、より少ない用量のＭＳＯでより多い腹腔内用量と同じ程度に脳のグルタミン合成酵素活性が低下することも開示された。
【００１２】
最後に、この論文でラットに投与したＩＶ薬物は、３０ｍｇ／ｋｇの投与量であり、その霊長類への毒性は不明であることが認められるはずである。Ｇｅｒｓｈｏｆｆの参考文献に見られるように、霊長類への１００及び５０ｍｇ／ｋｇの投与では、試験対象に対する副作用はなかった。しかし、より少ない投与量（３０ｍｇ／ｋｇなど）における作用はＧｅｒｓｈｏｆｆによって開示されておらず、Ｈａｗｋｉｎｓのラットの試験はこの判断に役立たない。さらに、Ｈａｗｋｉｎｓの参考文献では使用したＭＳＯ異性体が開示されていないが、通常の技術の１つにより、使用したＬＳＭＳＯ異性体はＨａｗｋｉｎｓのデータ及び本発明のデータと適合性があると結論付けることができる。この参考文献は、ラットのＬＳＭＳＯ用量が２０ｍｇ／ｋｇ未満では、グルタミン合成酵素の阻害が劇的に低減することを示す。さらに、Ｈａｗｋｉｎｓが使用したＩＶプロトコルでは、本発明で開示した投与量より著しく高い３０ｍｇ／ｋｇのＬＳＭＳＯ（推定）が使用されたことが指摘された。
【非特許文献９】Ｈａｗｋｉｎｓ、「Ｈｙｐｅｒａｍｍｏｎａｅｍｉａ  Ｄｏｅｓ  Ｎｏｔ  Ｉｍｐａｉｒ  Ｂｒａｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ａｂｓｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｎｅｔ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．２７７：６９７〜７０３頁（１９９１年）。
【００１３】
「Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｒａｉｎ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  Ｐｒｅｖｅｎｔｓ  Ｃｅｒｅｂｒａｌ  Ｅｄｅｍａ  ｉｎ  Ｈｙｐｅｒａｍｍｏｎｅｍｉｃ  Ｒａｔｓ」と題するＴａｋａｈａｓｈｉの参考文献では、Ｌ−メチオニンＳ−スルホキシイミンを用いた前処理によるグルタミン合成酵素活性の阻害により、高い血漿アンモニウムレベルにもかかわらず脳のグルタミンレベルの増大も脳の含水量の増加も防止されたことが開示された。高アンモニア血症の期間の脳浮腫は、グルタミンの蓄積に関係することが明らかになった。他と一致して、脳内では、ＭＳＯ前処理により、グルタミン合成酵素活性の６４％が阻害されたことも開示された。グループＩの対照ラットと比べてグループＩＩＩの高アンモニア血症ラットでは、皮質のグルタミンレベルが３．３倍増大したことも指摘された。それとは対照的に、グループＩＶの高アンモニア血症ラットでは、ＭＳＯ前処理によって皮質のグルタミンレベルは増大しなかった。皮質のグルタミン酸レベルは、ＭＳＯで処理していない高アンモニア血症ラットにおいてのみわずかに低下した。さらに、試験対象をＭＳＯで前処理した場合に皮質組織の比重は減少しなかった。加えて、対象をＭＳＯで前処理することによって脳水の増加も防止された。ＭＳＯ前処理の結果、皮質のグルタミン増加が防止され、脳内でのＭＳＯの作用は、グルタミン合成酵素に対して特異的なようであることが結論付けられた。この論文のＨ８２７頁の表１で報告されたデータは、参照によりここに組み込まれている。
【非特許文献１０】Ｔａｋａｈａｓｈｉ、「Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｒａｉｎ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  Ｐｒｅｖｅｎｔｓ  Ｃｅｒｅｂｒａｌ  Ｅｄｅｍａ  ｉｎ  Ｈｙｐｅｒａｍｍｏｎｅｍｉｃ  Ｒａｔｓ」、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ２６１：Ｈ８２５〜Ｈ８２９頁（１９９１年）。
【００１４】
「Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｒｅｄｕｃｉｎｇ  Ｂｒａｉｎ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｎ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ｏｆ  Ｈｅｐａｔｉｃ  Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ」と題するＨａｗｋｉｎｓの参考文献では、門脈大静脈吻合の２４時間後、吻合したラットは特徴的な代謝異常を示したことが開示された。手術時におけるＭＳＯの処理は、未処理のラットの値と比べて、脳又は血漿のアンモニア濃度に影響しなかった。高アンモニア血症性のＭＳＯ未処理動物で増加した脳のグルタミン含有量は、高アンモニア血症のＭＳＯ処理動物では増加しなかった。これは、脳のグルタミン合成酵素の活性が処理したラット中で低下したことを示唆するとこの論文では結論付けた。この論文はまた、推定されたグルタミン合成酵素がＭＳＯによって阻害されたときに改善の徴候が見られたが、これはその治療的使用を推奨するものとして解釈できないことを結論付けた。
【非特許文献１１】Ｈａｗｋｉｎｓ、「Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｒｅｄｕｃｉｎｇ  Ｂｒａｉｎ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｎ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ｏｆ  Ｈｅｐａｔｉｃ  Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ６０：３、１０００〜１００６頁（１９９３年）。
【００１５】
「Ａｍｍｏｎｉａ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｂｒａｉｎ  Ｅｄｅｍａ  ａｎｄ  Ｉｎｔｒａｃｒａｎｉａｌ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｒａｔｓ  Ａｆｔｅｒ  Ｐｏｒｔａｃａｖａｌ  Ａｎａｓｔｏｍｏｓｉｓ」と題するＢｌｅｉの参考文献では、門脈大静脈吻合ラットに酢酸アンモニウムを注入し、１５０ｍｇ／ｋｇのＭＳＯで前処理すると、脳浮腫が改善され、頭蓋内圧が上がらないことが開示された。ＭＳＯの用量増加に伴って、脳のグルタミンレベルの用量依存的な低下が見られたが、１５０ｍｇ／ｋｇを超える用量では脳浮腫が低減しなかった。この論文は、脳水の増加がグルタミン蓄積単独の結果ではないことを断定した。
【非特許文献１２】Ｂｌｅｉ、「Ａｍｍｏｎｉａ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｂｒａｉｎ  Ｅｄｅｍａ  ａｎｄ  Ｉｎｔｒａｃｒａｎｉａｌ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｒａｔｓ  Ａｆｔｅｒ  Ｐｏｒｔａｃａｖａｌ  Ａｎａｓｔｏｍｏｓｉｓ」、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  １９：６、１４３７〜１４４４頁（１９９４年）。
【００１６】
「Ｕｒｅａ  Ｃｙｃｌｅ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ：Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ」と題するＢｒｕｓｉｌｏｗの参考文献では、高アンモニア血症ラットをＭＳＯで前処理することによって脳のグルタミン蓄積が防止でき、それによって脳浮腫が防止されることが開示された。星状細胞初代培養物のアンモニア誘発腫脹をＭＳＯが防止することも指摘された。
【非特許文献１３】Ｂｒｕｓｉｌｏｗ、「Ｕｒｅａ  Ｃｙｃｌｅ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ：Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ  ４３：１２７〜１７０頁（１９９６年）。
【００１７】
「Ｉｍｐａｉｒｅｄ  Ｐｉａｌ  Ａｒｔｅｒｉｏｌａｒ  Ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ  ｔｏ  Ｈｙｐｅｒｃａｐｎｉａ  Ｄｕｒｉｎｇ  Ｈｙｐｅｒａｍｍｏｎｅｍｉａ  Ｄｅｐｅｎｄｓ  ｏｎ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」と題するＨｉｒａｔａの参考文献では、高二酸化炭素血症に対するＣＢＦ応答の低下が、ＭＳＯを用いたグルタミン合成酵素阻害によって防止できることが開示された。ＭＳＯは、γ−グルタミルシステイン合成酵素を可逆的に阻害できることも確認された。だが、これは脳内のグルタチオンを低下させないはずである。ＭＳＯは、この急性高アンモニア血症モデルにおいて、皮質のグルタミン合成酵素を６４％阻害し、皮質のグルタミン濃度の１３ｍｍｏｌ／ｋｇの増加を防止し、組織含水量の増加を防止し、大槽圧の増大を防止し、高二酸化炭素血症に対するＣＢＦ応答の低下を防止することも実証された。ＭＳＯは、高二酸化炭素血症に対する軟膜細動脈拡張薬応答の低下を防止することも実証された。
【非特許文献１４】Ｈｉｒａｔａ、「Ｉｍｐａｉｒｅｄ  Ｐｉａｌ  Ａｒｔｅｒｉｏｌａｒ  Ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ  ｔｏ  Ｈｙｐｅｒｃａｐｎｉａ  Ｄｕｒｉｎｇ  Ｈｙｐｅｒａｍｍｏｎｅｍｉａ  Ｄｅｐｅｎｄｓ  ｏｎ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｓｔｒｏｋｅ  ２７：４、７２９〜７３６頁（１９９６年）。
【００１８】
「Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  Ｒｅｄｕｃｅｓ  Ａｍｍｏｎｉａ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ａｓｔｒｏｃｙｔｅ  Ｓｗｅｌｌｉｎｇ  ｉｎ  Ｒａｔ」と題するＷｉｌｌａｒｄ−Ｍａｃｋの参考文献では、グルタミン合成酵素によってフラックスを低減させ、有効グルタミン酸を低減させることにより、またアンモニアを増加させることにより、グルタミナーゼによって間接的にグルタミンフラックスを低減させ得ることが開示された。ＭＳＯを用いたグルタミン合成酵素の阻害により、細胞質の電子密度の低下、含水量の増加、核の周径の増加、ならびに神経網の小突起及び血管周囲のエンドフィートの膨張が弱まることも示された。ＭＳＯは、細胞小器官数の増加と関連する核周部及びその大突起の拡大を防止しないことも開示された。最後に、Ｗｉｌｌａｒｄ−Ｍａｃｋの参考文献では、γ−グルタミルシステイン合成酵素の阻害剤であるブチオニンスルホキシイミンが高アンモニア血症性脳腫脹を防止しないことを示すことにより、γ−グルタミルシステイン合成酵素に対するＭＳＯの阻害作用の役割も論じられた。この参考文献によって５９４〜５９６頁に開示されているデータは、参照により本明細書に組み込まれている。
【非特許文献１５】Ｗｉｌｌａｒｄ−Ｍａｃｋ、「Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  Ｒｅｄｕｃｅｓ  Ａｍｍｏｎｉａ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ａｓｔｒｏｃｙｔｅ  Ｓｗｅｌｌｉｎｇ  ｉｎ  Ｒａｔ」、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ７１：２、５８９〜５９９頁（１９９６年）。
【００１９】
「Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ  Ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ，Ａ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，Ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ  Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｄｕｒｉｎｇ  Ａｃｕｔｅ  Ｈｙｐｅｒａｍｍｏｎｅｍｉａ」と題するＳｕｇｉｍｏｔｏの参考文献では、高アンモニア血症がグルタミンの蓄積及び星状細胞の腫脹を引き起こし、グルタミン合成の阻害によりアンモニアに誘発される浮腫形成及び星状細胞突起における水腫脹が低減することが開示された。この論文は、急性高アンモニア血症により［Ｋ＋］ｅの星状細胞性制御が損なわれ、この障害がアンモニウムイオン自体よりも、グルタミンの蓄積と関連があることを結論付けた。
【非特許文献１６】Ｓｕｇｉｍｏｔｏ、「Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ  Ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ，Ａ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，Ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ  Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｄｕｒｉｎｇ  Ａｃｕｔｅ  Ｈｙｐｅｒａｍｍｏｎｅｍｉａ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｒｅｂｒａｌ  Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ＆Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  １７：４４〜４９頁（１９９７年）。
【００２０】
「Ｃｅｒｅｂｒａｌ  Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｍｍｏｎｉａ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｂｒａｉｎ  Ｅｄｅｍａ  ｉｎ  Ｒａｔｓ  Ａｆｔｅｒ  Ｐｏｒｔａｃａｖａｌ  Ａｎａｓｔｏｍｏｓｉｓ」と題するＭａｓｔｅｒの参考文献では、ＭＳＯにより、脳浮腫の程度もアンモニアを注入したＰＣＡラットで見られたＣＢＦの増加も改善されたことが開示された。それにより、正常な高アンモニア血症性動物の脳血管ＣＯ２応答性も回復した。
【非特許文献１７】Ｍａｓｔｅｒ、「Ｃｅｒｅｂｒａｌ  Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｍｍｏｎｉａ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｂｒａｉｎ  Ｅｄｅｍａ  ｉｎ  Ｒａｔｓ  Ａｆｔｅｒ  Ｐｏｒｔａｃａｖａｌ  Ａｎａｓｔｏｍｏｓｉｓ」、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ３０：４、８７６〜８８０頁（１９９９年）。
【００２１】
脳浮腫、脳幹圧迫及び死は、制御されていない臨床的な高アンモニア血症の避けられない結果である。高アンモニア血症性脳症の病態生理は、脳浮腫からなることが十分に確立されている。脳浮腫は、すべて腫脹性星状細胞からなることを示唆する多くの証拠もある。星状細胞は、高アンモニア血症に誘発されたグルタミン合成の結果膨脹し、蓄積されたグルタミンは、細胞内に水を移動させる細胞内オスモライトとして働くことが分かっている。
【００２２】
１９８５年に、Ｂｒｕｓｉｌｏｗは、高アンモニア血症に伴う脳浮腫が、グルタミン合成酵素によって触媒された星状細胞による脳のグルタミン蓄積の結果であり、その主な脳部位が星状細胞であるという仮説を提案した。したがって、脳のグルタミン合成酵素の阻害により、星状細胞によるグルタミン蓄積が防止され、それによって星状細胞の腫脹及び高アンモニア血症状態における脳浮腫が防止されるはずである。ＭＳＯは、７日もの間脳内で持続し得る阻害作用を有する、グルタミン合成酵素のよく知られている強力な阻害剤である（Ｌａｍａｒの６３８ページ）。しかし、霊長類におけるグルタミン合成酵素に対するＬ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの作用に関する用量応答研究は公表されていない。
【００２３】
高アンモニア血症によって誘発される脳浮腫は、グルタミン合成を阻害し、それによって星状細胞内でのグルタミン蓄積を防止することによって防止できることが実証されている。この阻害は、グルタミン合成酵素阻害剤であるＬ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの非経口投与によってもたらすことができる。
【００２４】
別の研究は、脳症を生じる際のグルタミン蓄積の役割を裏付けている。この研究から、ＭＳＯは、高アンモニア血症ラットの脳血管ＣＯ２応答性を回復させ（非特許文献１８を参照のこと）、グルタミン合成の阻害を引き起こして、ラットのアンモニアに誘発される星状細胞腫脹の低下を引き起こし（Ｗｉｌｌａｒｄ−Ｍａｃｋの参考文献（非特許文献１５）を参照のこと）、グルタミン合成の阻害を引き起こして、急性高アンモニア血症の間の細胞外カリウム活性の増大を弱め（非特許文献１６を参照のこと）、グルタミン合成の阻害を引き起こして、高アンモニア血症の間の高二酸化炭素血症に対する障害性軟膜細動脈活性を正す（非特許文献１９を参照のこと）ことが明らかになった。
【非特許文献１８】Ｔａｋａｈａｓｈｉ  Ｈ、Ｋｏｅｈｌｅｒ  ＲＣ、Ｈｉｒａｔａ  Ｔ、Ｂｒｕｓｉｌｏｗ  ＳＷ「Ｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃｕｌａｒ  ＣＯ２  Ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｉｔｙ  ｂｙ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｈｙｐｅｒａｍｍｏｎｅｎｉｃ  Ｒａｔｓ」、Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ  ７１：１２２０〜１２３０頁、１９９２年
【非特許文献１９】Ｈｉｒａｔａ  Ｔ、Ｋａｗａｇｕｃｈｉ  Ｔ、Ｂｒｕｓｉｌｏｗ  ＳＷ、Ｔｒａｙｓｔｍａｎ  ＲＪ、Ｋｏｅｈｌｅｒ  ＲＣ「Ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ  Ｈｙｐｏｃａｐｎｉｃ  Ｐｉａｌ  Ａｒｔｅｒｉｏｌａｒ  Ｃｏｎｓｔｒｉｃｔｉｏｎ  Ｄｕｒｉｎｇ  Ｈｙｐｅｒａｍｍｏｎｅｍｉａ  ｂｙ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ」、Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２７６（２の２）：Ｈ４５６〜４６３、１９９９年
【００２５】
ＭＳＯの痙攣性作用は、そのＧＳ阻害作用と関連があると考えられているが、２つの作用は無関係であり、ＭＳＯは有用な薬物である可能性があることを示唆する説得力のある証拠がある。例えば、ラット脳の平均グルタミンレベル（ＧＳ活性の間接測定）は、ＭＳＯ用量（ｍｇ／ｋｇ）２００、１００、及び５０で同じ程度まで低下するが、低い方の２用量を与えたラットは、「対照動物と全く異ならなかった」が、最高量を与えた動物は発作を起こした（非特許文献３参照のこと）。
【００２６】
しかし、投与した立体異性体が充分に説明されていないので、これら及び他の多くの研究におけるＭＳＯの正確な投与量は不明である。Ｓｅｌｌｉｎｇｅｒの参考文献でも、Ｌ−メチオニンは、ＭＳＯの痙攣作用からラットを保護したが、ＭＳＯによるＧＳの阻害に影響を与えなかったことが実証された。さらに、Ｓｅｌｌｉｎｇｅｒは、脳室内に投与した場合のＭＳＯの作用について開示した。ＭＳＯの異性体混合物の臨床効果は、２種類の霊長類試験で評価されている。サルは、ＭＳＯ異性体混合物の５０及び１００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量に「観察可能な作用なしで」耐えることが分かっているが、ＧＳ活性は測定されなかった（Ｋｒａｋｏｆｆを参照のこと）。さらに、ＭＳＯの異性体混合物を末期症状の癌患者に１日量で与えた場合、２日後に興奮、失見当識及び幻覚などの著しい副作用が確認された（Ｋｒａｋｏｆｆを参照のこと）。この研究の判断は、患者の悲惨な状態及び１日量の潜在的な累積作用によって妨げられた。少なくとも７日間の阻害期間があるグルタミン合成酵素の不可逆的な阻害剤には、レジメンはおそらく必要ではない（Ｌａｍａｒ及びＦｏｌｂｅｒｇｒｏｖａの参考文献を参照のこと）。ＭＳＯに対して種特異的応答があるので、霊長類でのＧＳ活性及び臨床症状に対する活性異性体、Ｌ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの用量応答評価から、てんかん発作作用なしにＧＳ活性を阻害し、それによって病因に関係なく高アンモニア血症性脳症を治療するのに有用な用量が明らかになるだろう。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２７】
高アンモニア血症における脳浮腫は、高アンモニア血症によって誘発される細胞内グルタミン合成の結果である。グルタミンはオスモライト（ｏｓｍｏｌｙｔｅ）として働き、細胞に水を浸入させ、脳腫脹（脳浮腫）を引き起こす。
【００２８】
ＭＳＯを用いてグルタミン合成を阻害することにより、高アンモニア血症の間にグルタミンが蓄積されないことが知られている。その結果、グルタミンは細胞内有機オスモライトとして働くことができず、それによって脳浮腫が防止される。
【００２９】
上述のように、ＭＳＯの１つの残念な副作用は、その既知の痙攣薬としての特性である。十分な量では、この化合物はヒト、ならびに他の動物で痙攣を引き起こすことが証明されている。しかし今回、ＬＳＭＳＯは、脳腫脹を防止し低減させる能力を依然として維持しながら、限られた量で投与できることが発見された。これらの限られた用量の結果、腫脹が低減され、痙攣性の副作用が無くなる。今回特許請求しているＭＳＯの活性ＬＳ異性体の投与量は、グルタミン合成酵素の必要な阻害をもたらし、発作などの有害な神経性の徴候を生じない。この作用をもたらすＬ−メチオニンＳ−スルホキシイミンの新規な投与量が、本出願の主題である。
【課題を解決するための手段】
【００３０】
本発明は、進行性高アンモニア血症性脳症に罹患している霊長類、特にヒトを治療する方法を開示する。特許請求する方法には、ＭＳＯによって生じる痙攣性の副作用なしで脳の腫脹を緩和し低減させるのに十分な１０ｍｇ／ｋｇ以下の投与量でＬ−メチオニンＳ−スルホキシイミン（以下「ＬＳＭＳＯ」）を投与することが含まれる。
【００３１】
上述のように、ＭＳＯの１つのよく知られている残念な副作用は、それが痙攣性であることである。この特性により、脳症の治療に使用しないことになっている。今回、ＬＳＭＳＯを単独で、低用量で投与した場合、発作が生じないことを発見した。これらのより低用量のＬＳＭＳＯはまた、その投与により脳のグルタミンレベルが低下したので、脳のグルタミン合成酵素を阻害すると考えられる。同様に、これらの発作を引き起こさない用量のＬＳＭＳＯは、高アンモニア血症状態の対象における脳浮腫を治療又は防止するのに使用することができる。
【００３２】
特許請求する本発明には、様々な段階の進行性高アンモニア血症性脳症の対象を、１０ｍｇ／ｋｇ以下、好ましくは８ｍｇ／ｋｇ以下、より好ましくは５ｍｇ／ｋｇ以下、最も好ましくは２．５ｍｇ／ｋｇ以下の低用量のＬＳＭＳＯを用いて治療することが含まれる。ＬＳＭＳＯは、対象、例えば、症候性慢性低度高アンモニア血症の患者、血漿のアンモニウムレベルが上昇した対象、さらに高アンモニア血症を発生するリスクが高い対象に投与することができる。この治療は、任意のさらなる脳のグルタミン蓄積を防止し、したがって脳浮腫の任意のさらなる増加を防止すると考えられる。本明細書において報告する進行性高アンモニア血症性脳症の治療で得られた結果から、グルタミン合成酵素の阻害が有益となる他の疾患に罹患している患者にもＬＳＭＳＯを本明細書で指定した量で投与できることが示唆される。但し、本発明は、高度進行型の切除不可能な癌に罹患している患者への使用を対象としていない。
【００３３】
特許請求する本発明はまた、脳腫脹の低減、発作の最小化又は防止、グルタミン合成酵素の阻害、及び神経症状の最小化又は防止をもたらす。
【００３４】
ＬＳＭＳＯは、対象に経口的、静脈内、又は皮下に投与することができる。ＩＶ製剤は、無菌の緩衝生理食塩水として投与できるが、経口製剤は、標準的な薬剤製造技術によって標準的な薬剤として許容される賦形剤を用いて調製することになる。
【００３５】
本発明の化合物を含む薬剤組成物を調製する場合、不活性な薬剤として許容される担体を使用する。薬剤用担体は、固体でも液体でもよい。固体形態の製剤には、例えば、散剤、錠剤、分散性顆粒、カプセル剤、及びカシェ剤がある。
【００３６】
固体担体は、希釈剤、矯味剤、可溶化剤、滑剤、懸濁化剤、結合剤、又は錠剤崩壊剤としても働き得る１種又は複数の物質であってよい。これは封入物質であってもよい。
【００３７】
散剤の場合、担体は一般に、微粉砕した有効成分との混合物である微粉砕した固体である。錠剤の場合、活性化合物を適切な割合で必要な結合特性を有する担体と混合し、所望の形状及びサイズに成形する。
【００３８】
散剤及び錠剤は、有効成分約５％〜約７０重量％を含むことが好ましい。適当な担体には、例えば、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ラクトース、糖、ペクチン、デキストリン、デンプン、トラガカントゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点蝋、ココアバターなどがある。
【００３９】
薬剤組成物には、活性化合物の製剤を、有効成分（他の担体を含んで又は含まずに）が担体で囲まれそれと会合した状態のカプセル剤をもたらす担体としての封入物質と一緒に含めることができる。類似の方法で、カシェ剤も含まれている。錠剤、散剤、カシェ剤、及びカプセル剤は、経口投与に適した固体投与形態として使用することができる。
【００４０】
液体薬剤組成物には、例えば、経口もしくは非経口投与に適した液剤、又は経口投与に適した懸濁剤及び乳剤がある。有効成分の無菌水剤又は水、エタノール、もしくはプロピレングリコールを含む溶媒中の有効成分の無菌液剤は、非経口投与に適した液体組成物の例である。
【００４１】
無菌液剤は、有効成分を所望の溶媒系に溶解し、次いで得られた溶液をメンブレンフィルターに通してそれを滅菌することによって、あるいは、無菌条件下で無菌の化合物をあらかじめ滅菌した溶媒に溶解することによって調製することができる。
【００４２】
経口投与のための水性液剤は、有効成分を水又は他の適切な溶媒に溶解し、要望通りに適当な香料、着色剤、安定剤、及び増粘剤を加えることによって調製することができる。経口使用のための水性懸濁剤は、天然又は合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどの粘性物質、及び製剤技術分野で周知の他の懸濁化剤と一緒に、微粉砕した有効成分を水に分散させることによって作製することができる。
【００４３】
薬剤組成物は、単位投与形態であることが好ましい。こうした形態では、組成物を、適切な量の活性ＬＳＭＳＯを含む１回分に分割する。単位投与形態は、包装した製剤、例えば、小包にした錠剤、カプセル剤、及びバイアル又はアンプルに入れた散剤であってよく、包装には分離量の製剤が含まれる。単位投与形態は、カプセル剤、カシェ剤、又は錠剤自体であってもよく、あるいはこれらの包装した形態のいずれかの適切な個数であってよい。
【００４４】
脳浮腫を治療するための薬剤組成物として、本発明の化合物は一般に、体重約７０ｋｇの正常なヒトの成人に対して１日当たり１０．０ｍｇ／ｋｇ以下、好ましくは１日当たり８．０ｍｇ／ｋｇ以下、より好ましくは１日当たり５．０ｍｇ／ｋｇ以下、最も好ましくは１日当たり２．５ｍｇ／ｋｇ以下の投与量レベルで対象に投与できるような薬剤組成物である。こうした正常なヒトの成人の場合、これらの量は、それぞれ７００ｍｇ、５６０ｍｇ、３５０ｍｇ、及び１７５ｍｇの投与量に相当する。しかし、使用した特定の投与量は、患者の要求及び治療対象の症状の重症度に応じて異なっていてよい。特定の状況に対する最適投与量の決定は、当技術分野の技術の範囲内である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４５】
実施例１
グルタミン合成酵素の阻害に対する低用量静脈内Ｌ−メチオニンＳ−スルホキシイミン（ＬＳＭＳＯ）の作用を、ラット脳及びアカゲザル脳で試験し、Ｈａｗｋｉｎｓ（１９９１年）のデータと比較した。屠殺前の２４時間、薬物を注射可能にするための短時間の麻酔以外、ラットは覚醒しており無症状であった。ＬＳＭＳＯを５及び１０ｍｇ／ｋｇの用量で与えたサルは、屠殺前に４時間麻酔をかけた。１匹のサルに、２．５ｍｇ／ｋｇ用量のＭＳＯを与え、薬物を注射可能にするために短時間麻酔をかけたが屠殺前の２４時間覚醒した。このサルの活動性及び食欲は、屠殺前の２４時間正常であった。この試験の結果を図１に示す。しかし、霊長類は、低用量のＭＳＯのグルタミン合成酵素阻害作用に対して感受性がより高いことが図１に表される結果から明らかである。これは、ＭＳＯのてんかん発作作用の最小化又は防止を可能にする有利な作用であり得る。
【００４６】
図面の簡単な説明
図１は、ラットと比較して霊長類に対するＬＳＭＳＯの阻害作用における種差を表す図である。グルタミン合成酵素の阻害に対する低容量静脈内Ｌ−メチオニンＳ−スルホキシイミン（ＬＳＭＳＯ）の作用の比較をラット脳及びアカゲザル脳で試験し、Ｈａｗｋｉｎｓ（１９９１年）のデータと比較した。Ｈａｗｋｉｎｓのデータを黒丸で表すが、比較試験を行ったラットを「＋」及び白丸記号で表す。サルの結果を三角で示す。Ｎは、試験した動物の数を表す。
【国際調査報告】
2005516976.tif 000002