(57)【要約】式(Ｉ)[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｑ、Ｔ、Ｕ、Ｘ、Ｙ、Ｖ、およびＷは、明細書中で定義した通りである]の化合物、およびその薬学的に許容される塩、エナンチオマー、およびラセミ体；その製造方法、それらを含む組成物、および治療におけるそれらの使用を提供する。本化合物は、一酸化窒素合成酵素の阻害剤であり、従って特に炎症性疾患および疼痛の処置または予防に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(Ｉ)：
【化１】
2005501834.tif 000014
[式中、
Ｘは、Ｈ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨＲ９、ＣＮ、Ｃ≡ＣＨ、ＮＯ２、ＣＨＯ、ＣＯＣＨ３、またはＮＨＣＨＯを表し；
該アルキルもしくはアルコキシは、所望により、１個以上のフッ素原子もしくは１個のＯＨによって、さらに置換されており；
Ｙは、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロゲン、ＯＨ、ＣＮ、Ｃ≡ＣＨ、ＮＯ２、ＣＨＯ、ＣＯＣＨ３、またはＮＨＣＨＯを表し；
該アルキルもしくはアルコキシは、所望により、１個以上のフッ素原子によって、さらに置換されており；
Ｔ、Ｕ、およびＷのうちの１つは、Ｎを表し、その他の２つは、独立に、ＣＲ４を表し；ここで、それぞれのＲ４は、独立に、Ｈ、Ｆ、またはＣＨ３を表し；
Ｖは、ＯまたはＳ(Ｏ)ｎを表し；
ｎは、０、１、または２の整数を表し；
Ｑは、ＣＨ２、または(ＣＨ２)２を表し；
Ｒ１は、フェニル、または Ｏ、Ｓ、およびＮから独立に選択される１から３個のヘテロ原子を含む、５員環もしくは６員環の芳香族複素環式環を表し；
該フェニルもしくは芳香族複素環式環は、ハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、またはＮＲ５Ｒ６から独立に選択される１個以上の置換基によって、所望により置換されており；
該アルキルもしくはアルコキシは、所望により、１個以上のフッ素原子によって、さらに置換されており；
Ｒ２とＲ３は、独立に、Ｈ、Ｃ１−４アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルを表し；
該アルキルは、Ｃ１−４アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、−Ｚ−ＮＲ７Ｒ８、フェニル、または Ｏ、Ｓ、およびＮから独立に選択される１から３個のヘテロ原子を含む５員環もしくは６員環の芳香族性もしくは飽和の複素環式環によって、所望により置換されており；
該フェニルもしくは芳香族複素環式環は、所望により、ハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＣＮ、またはＮＯ２によって、さらに置換されており；
Ｚは、−ＣＯ−、または結合を表し；
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は、独立に、ＨまたはＣ１−４アルキルを表し；
Ｒ９は、ＨまたはＣ１−４アルキルを表し；
該アルキルは、所望により、１個以上のフッ素原子によって、さらに置換されている]の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
式中、ＶがＯを表す、請求項１に記載の式(Ｉ)の化合物。
【請求項３】
式中、ＶがＳ(Ｏ)ｎを表し、かつｎが０を表す、請求項１に記載の式(Ｉ)の化合物。
【請求項４】
式中、ＸとＹが、独立に、Ｂｒ、Ｃｌ、ＣＨ３、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、ＣＨ３ＣＨ２、ＮＨ２、ＯＣＨ３、ＣＯＣＨ３、またはＣＮを表す、請求項１から３の何れか１つに記載の式(Ｉ)の化合物。
【請求項５】
式中、ＹがＣＮを表す、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
２−[[(１Ｒ)−３−(メチルアミノ)−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−フェニルプロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−フェニルプロピル]チオ]−６−(フルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−フェニルプロピル]チオ]−６−(ジフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)プロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(３−チエニル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−[(３−ヒドロキシプロピル)アミノ]−１−(３−チエニル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
３−[[(３Ｒ)−３−[[３−シアノ−６−(トリフルオロメチル)−２−ピリジニル]オキシ]−３−(３−チエニル)プロピル]アミノ]−Ｎ−メチルプロパンアミド；
２−[[３−アミノ−１−(５−イソチアゾリル)プロピル]チオ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(３−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(２−チアゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
(Ｒ)−２−(３−ジメチルアミノ−１−イソオキサゾール−５−イル−プロポキシ)−６−トリフルオロメチル−ニコチノニトリル；
６−アミノ−４−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)プロピル]チオ]−３−ピリジンカルボニトリル；
γ−[(５−クロロ−２−メトキシ−４−ピリジニル)チオ]−(γ５Ｒ)−５−イソオキサゾールプロパンアミン；
４−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)プロピル]チオ]−６−メトキシ−３−ピリジンカルボニトリル；
４−[[(１Ｒ)−３−[(２−ヒドロキシエチル)アミノ]−１−(５−イソオキサゾリル)プロピル]チオ]−６−メトキシ−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(３−クロロ−５−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(３−クロロ−５−イソオキサゾリル)プロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[３−アミノ−１−(３−メチル−４−イソオキサゾリル)プロポキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[３−アミノ−１−(５−イソチアゾリル)プロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[３−アミノ−１−(５−イソチアゾリル)プロポキシ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[３−アミノ−１−(３−イソチアゾリル)プロポキシ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(５−メチル−３−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
４−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(３−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−メトキシ−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[３−アミノ−１−(４−メチル−３−イソオキサゾリル)プロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[３−アミノ−１−(２−オキサゾリル)プロポキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
４−[[３−アミノ−１−(４−クロロ−５−チアゾリル)プロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[１−(４−クロロ−１,３−チアゾール−５−イル)−３−(メチルアミノ)プロポキシ]−６−メチルニコチノニトリル；
２−[[１−(３−フルオロフェニル)−３−(メチルアミノ)プロピル]オキシ]ピリジン−３−カルボニトリル；
６−アセチル−２−[[３−(メチルアミノ)−１−フェニルプロピル]チオ]−３−ピリジンカルボニトリル；
５−フルオロ−６−メチル−２−[[(１Ｒ)−３−(メチルアミノ)−１−フェニルプロピル]チオ]−３−ピリジンカルボニトリル；
６−エチル−５−フルオロ−２−[[(１Ｒ)−３−(メチルアミノ)−１−フェニルプロピル]チオ]−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−[(２−ヒドロキシエチル)メチルアミノ]−１−フェニルプロピル]チオ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−[(２−ヒドロキシエチル)プロピルアミノ]−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−[(３−ヒドロキシプロピル)アミノ]−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−(メチルプロピルアミノ)−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−[[(２Ｓ)−２−ヒドロキシプロピル]アミノ]−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−１−フェニル−３−[(フェニルメチル)アミノ]プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−[(１,１−ジメチルエチル)アミノ]−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−[[２−(４−ヒドロキシフェニル)エチル]アミノ]−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[４−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)ブトキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[４−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)ブチル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル；
４−[[４−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)ブチル]チオ]−６−メトキシ−３−ピリジンカルボニトリル；
またはその薬学的に許容される塩、エナンチオマー、もしくはラセミ体である、請求項１に記載の式(Ｉ)の化合物。
【請求項７】
医薬として使用するための、請求項１から６の何れか１つに記載の式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項８】
薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤、または担体と混合した、請求項１から６の何れか１つに記載の式(Ｉ)の化合物を含む医薬組成物。
【請求項９】
一酸化窒素合成酵素活性の阻害が有益である、ヒトの疾患もしくは状態を処置する もしくは予防する医薬の製造における、請求項１から６の何れか１つに記載の式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１０】
炎症性疾患の処置もしくは予防のための医薬の製造における、請求項１から６の何れか１つに記載の式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１１】
ＣＮＳ疾患の処置もしくは予防のための医薬の製造における、請求項１から６の何れか１つで定義した通りの式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１２】
該疾患が炎症性腸疾患である、請求項１０に記載の使用。
【請求項１３】
該疾患がリウマチ性関節炎である、請求項１０に記載の使用。
【請求項１４】
該疾患が骨関節炎である、請求項１０に記載の使用。
【請求項１５】
疼痛の処置もしくは予防のための医薬の製造における、請求項１から６の何れか１つに定義した通りの式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１６】
該疾患が偏頭痛である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１７】
炎症性疾患の処置もしくは予防のための医薬の製造における、ＣＯＸ−２阻害剤と組み合わせた、請求項１から６の何れか１つに定義した通りの式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１８】
一酸化窒素合成酵素活性の阻害が有益である、ヒトの疾患もしくは状態を処置する、またはそのリスクを減少させる方法であって、請求項１から６の何れか１つに定義した通りの式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩を、該疾患もしくは状態に罹患している、もしくはそのリスクが増大しているヒトに、治療上効果的な量で投与することを含む方法。
【請求項１９】
炎症性疾患に罹患している もしくはそのリスクがあるにおいて、炎症性疾患を処置する またはそのリスクを減少させる方法であって、請求項１から６の何れか１つに定義した通りの式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩を、治療上効果的な量で、該ヒトに投与することを含む方法。
【請求項２０】
ＣＮＳ疾患に罹患している もしくはそのリスクがあるヒトにおいて、ＣＮＳ疾患を処置する またはそのリスクを減少させる方法であって、請求項１から６の何れか１つに定義した通りの式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩を、治療上効果的な量で、該ヒトに投与することを含む方法。
【請求項２１】
請求項１から６で定義した通りの式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エナンチオマー、もしくはラセミ体、またはその互変異体の製造方法であって、
(ａ)式(II)：
【化２】
2005501834.tif 000015
[式中、Ｔ、Ｕ、Ｘ、Ｙ、およびＷは、請求項１で定義した通りであり；そして
Ｌ１は、脱離基を表す]の化合物と、式(III)：
【化３】
2005501834.tif 000016
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｑ、およびＶは、請求項１で定義した通りである]の化合物とを反応させる；または
(ｂ)式(IV)：
【化４】
2005501834.tif 000017
[式中、Ｔ、Ｕ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、およびＶは、請求項１で定義した通りである]の化合物と、式(Ｖ)：
【化５】
2005501834.tif 000018
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＱは、請求項１で定義した通りであり；そして
Ｌ２は、脱離基である]の化合物とを反応させる；または
(ｃ)式(VI)：
【化６】
2005501834.tif 000019
[式中、Ｒ１、Ｑ、Ｔ、Ｕ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、およびＶは、請求項１で定義した通りであり；そしてＬ３は、脱離基である]の化合物と、式(VII)：
【化７】
2005501834.tif 000020
[式中、Ｒ２とＲ３は、請求項１で定義した通りである]の化合物とを反応させる；または
(ｄ)式(VIII)：
【化８】
2005501834.tif 000021
[式中、Ｒ１、Ｑ、Ｔ、Ｕ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、およびＶは、請求項１で定義した通りであり；
そしてＰは、アジド(Ｎ３)を表す]の化合物を還元する；または
(ｅ)式(VIII)：
【化９】
2005501834.tif 000022
[式中、Ｒ１、Ｑ、Ｔ、Ｕ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、およびＶは、請求項１で定義した通りであり；
そしてＰは、イミドである]の化合物を加水分解する；
ここで、望ましい場合もしくは必要な場合は、
得られた式(Ｉ)の化合物、または別のその塩を、薬学的に許容される塩に変換する；
または式(Ｉ)の化合物を別の式(Ｉ)の化合物に変換する；および
望ましい場合は、得られた式(Ｉ)の化合物をその光学異性体に変換する；
ことを含む製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明の分野
本発明は、新規へテロアリール ヘテロアルキルアミン誘導体、その製造方法、それらを含む医薬組成物、および治療におけるその使用に関する。
【０００２】
本発明の背景
一酸化窒素は、哺乳動物の細胞中で、特定の一酸化窒素合成酵素の作用によって、Ｌ−アルギニンから生成される。これらの酵素は、２つの別個のクラス、すなわち構成型ＮＯＳ(constitutive NOS)(ｃＮＯＳ)と、誘導型ＮＯＳ(inducible NOS)(ｉＮＯＳ)に分類される。現在、２つの構成型ＮＯＳと、１つの誘導型ＮＯＳが、同定されている。構成型ＮＯＳのうち、内皮型酵素(ｅＮＯＳ)は、平滑筋弛緩、および血圧と血流の制御に関するが、神経型酵素(ｎＮＯＳ)は、様々な生物学的機能に関すると見られている。誘導型ＮＯＳは、特に炎症性疾患の病状に関与している。従って、これらの酵素の制御は、広く様々な疾患状態の処置において、多くの可能性を提供する(J. E. Macdonald, Ann. Rep. Med. Chem., 1996, 31, 221 - 230)。
【０００３】
１個以上の一酸化窒素合成酵素のアイソフォームの特異的阻害剤として作用する化合物を同定するために、多くの努力が費やされている。治療における該化合物の使用もまた、広く要請されている。
【０００４】
本発明の開示
本発明によって、式(Ｉ)：
【化１】
2005501834.tif 000002
[式中、
Ｘは、Ｈ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨＲ９、ＣＮ、Ｃ≡ＣＨ、ＮＯ２、ＣＨＯ、ＣＯＣＨ３、またはＮＨＣＨＯを表し；
該アルキルもしくはアルコキシは、所望により、１個以上のフッ素原子もしくは１個のＯＨによって、さらに置換されており；
Ｙは、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロゲン、ＯＨ、ＣＮ、Ｃ≡ＣＨ、ＮＯ２、ＣＨＯ、ＣＯＣＨ３、またはＮＨＣＨＯを表し；
該アルキルもしくはアルコキシは、所望により、１個以上のフッ素原子によって、さらに置換されており；
Ｔ、Ｕ、およびＷのうちの１つは、Ｎを表し、その他の２つは、独立に、ＣＲ４を表し；
ここで、それぞれのＲ４は、独立に、Ｈ、Ｆ、またはＣＨ３を表し；
Ｖは、ＯまたはＳ(Ｏ)ｎを表し；
ｎは、０、１、または２の整数を表し；
Ｑは、ＣＨ２、または(ＣＨ２)２を表し；
Ｒ１は、フェニル、またはＯ、Ｓ、およびＮから独立に選択される１から３個のヘテロ原子を含む、５員環もしくは６員環の芳香族複素環式環を表し；
該フェニルもしくは芳香族複素環式環は、ハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、またはＮＲ５Ｒ６から独立に選択される１個以上の置換基によって、所望により置換されており；
該アルキルもしくはアルコキシは、所望により、１個以上のフッ素原子によって、さらに置換されており；
Ｒ２とＲ３は、独立に、Ｈ、Ｃ１−４アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルを表し；
該アルキルは、Ｃ１−４アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、−Ｚ−ＮＲ７Ｒ８、フェニル、または Ｏ、Ｓ、およびＮから独立に選択される１から３個のヘテロ原子を含む５員環もしくは６員環の芳香族性もしくは飽和の複素環式環によって、所望により置換されており；
該フェニルもしくは芳香族複素環式環は、所望により、ハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＯＨ、ＣＮ、またはＮＯ２によって、さらに置換されており；
Ｚは、−ＣＯ−、または結合を表し；
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は、独立に、ＨまたはＣ１−４アルキルを表し；
Ｒ９は、ＨまたはＣ１−４アルキルを表し；
該アルキルは、所望により、１個以上のフッ素原子によって、さらに置換されている]の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【０００５】
ＷがＮを表し、かつＸがＯＨを表す式(Ｉ)の化合物は、別の互変異体の式(Ia)：
【化２】
2005501834.tif 000003
の形態で存在し得ることが認識される。
【０００６】
類似の互変異体の構造はまた、ＴがＮを表し、かつＸがＯＨを表す式(Ｉ)の化合物；またはＵがＮを表し、かつＹがＯＨを表す化合物において存在する。全ての可能な式(Ｉ)の化合物の互変異体、およびその混合物は、本発明の範囲に含まれる。
【０００７】
式(Ｉ)の化合物は、エナンチオマーの形態で存在し得る。全てのエナンチオマー、ジアステレオマー、ラセミ体、およびその混合物は、本発明の範囲に含まれる。
【０００８】
１つの特定の具体的態様において、本発明は、式(Ｉ)：
[式中、Ｘは、Ｈ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロゲン、ＯＨ、ＣＮ、Ｃ≡ＣＨ、ＮＯ２、ＣＨＯ、ＣＯＣＨ３、またはＮＨＣＨＯを表し；
該アルキルまたはアルコキシは、所望により、１個以上のフッ素原子もしくは１個のＯＨによって、さらに置換されており；
Ｑは、ＣＨ２を表し；
Ｒ２とＲ３は、独立に、Ｈ、Ｃ１−４アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルを表し；
該アルキルは、Ｃ１−４アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、−Ｚ−ＮＲ７Ｒ８、フェニル、またはＯ、Ｓ、およびＮから独立に選択される１から３個のヘテロ原子を含む５員環もしくは６員環の芳香族もしくは飽和の複素環式環によって、所望により置換されており；
該フェニルまたは芳香族複素環式環は、所望により、ハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＣＮ、またはＮＯ２によって、さらに置換されており；
そしてＲ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、ｎ、Ｔ、Ｕ、Ｙ、Ｖ、およびＷは、上記で定義した通りである]の化合物を提供する。
【０００９】
式(Ｉ)の化合物およびその薬学的に許容される塩は、それらが一酸化窒素合成酵素(ＮＯＳ)の阻害剤であるという利点を有する。一般的に、式(Ｉ)の化合物およびその薬学的に許容される塩は、それらが誘導型一酸化窒素合成酵素のアイソフォーム(ｉＮＯＳ)の阻害剤であるという利点を有する。式(Ｉ)の特定の化合物およびその薬学的に許容される塩は、それらがさらに またはあるいは神経型一酸化窒素合成酵素のアイソフォーム(ｎＮＯＳ)の阻害剤であるという利点を有する。一般的に、式(Ｉ)の化合物およびその薬学的に許容される塩は、それらが、内皮型のアイソフォームｅＮＯＳの阻害よりも、ｉＮＯＳ および／または ｎＮＯＳの阻害に対して選択性を示すという利点を有する。
【００１０】
本発明は、さらに式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エナンチオマー、もしくはラセミ体の製造方法を提供する。
本発明によって、医薬として使用するための、式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【００１１】
本発明の別の態様は、一酸化窒素合成酵素活性の阻害が有益である疾患もしくは状態の、処置または予防における、式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００１２】
本発明のより特定の態様は、炎症性疾患の処置または予防のための医薬の製造における、式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
本発明の別のより特定の態様は、ＣＮＳ疾患の処置または予防のための医薬の製造における、式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００１３】
本発明によって、一酸化窒素合成酵素活性の阻害が有益である疾患もしくは状態を、処置する またはそのリスクを減少させる方法であって、該疾患もしくは状態に罹患している またはそのリスクがあるヒトに、治療上効果的な量の式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。
【００１４】
より特定的には、炎症性疾患に罹患している もしくはそのリスクがあるヒトにおいて、炎症性疾患を処置する またはそのリスクを減少させる方法であって、該ヒトに、治療上効果的な量の式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む方法を提供する。
【００１５】
より特定的には、ＣＮＳ疾患に罹患している もしくはそのリスクがあるヒトにおいて、ＣＮＳ疾患を処置する またはそのリスクを減少させる方法であって、該ヒトに、治療上効果的な量の式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む方法を提供する。
【００１６】
本発明の化合物はまた、第２の薬学的に活性な物質と組み合わせて、特にシクロオキシゲナーゼ阻害剤と組み合わせて、より特定的には誘導型シクロオキシゲナーゼ(ＣＯＸ−２)のアイソフォームの選択的阻害剤と組み合わせて、有利に用いられ得る。従って、本発明のさらなる態様において、炎症、炎症性疾患、および炎症関連疾患の処置における、ＣＯＸ−２阻害剤と組み合わせた、式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。そして、炎症、炎症性疾患、および炎症関連疾患に罹患している もしくはそのリスクがあるヒトにおいて、炎症、炎症性疾患、および炎症関連疾患を、処置する またはそのリスクを減少させる方法であって、該ヒトに、ＣＯＸ−２阻害剤と組み合わせた、治療上効果的な量の式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与する方法もまた、提供する。
【００１７】
１つの具体的態様において、ＶはＳ(Ｏ)ｎを表し、ｎは０を表す。
別の具体的態様において、ＶはＯを表す。
別の具体的態様において、ＸとＹは、独立に、Ｂｒ、Ｃｌ、ＣＨ３、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、ＣＨ３ＣＨ２、ＮＨ２、ＯＣＨ３、ＣＯＣＨ３、またはＣＮを表す。さらに別の具体的態様において、ＹはＣＮを表す。
【００１８】
さらなる具体的態様において、Ｒ１は、フェニル、ピリジル、チエニル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、またはチアゾリルを表し、
これらは、ハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、またはＮＲ５Ｒ６から独立に選択される１個以上の置換基によって所望により置換されており、
該アルキルもしくはアルコキシは、所望により、１個以上のフッ素原子によって、さらに置換されている。
【００１９】
１つの具体的態様において、Ｒ２は、ＨまたはＣ１−４アルキルを表し；該アルキルは、ヒドロキシによって、所望により置換されている。別の具体的態様において、Ｒ２は、ＨまたはＣＨ３を表す。
【００２０】
１つの具体的態様において、Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３を表す。
１つの具体的態様において、Ｒ４は、ＨまたはＦを表す。
別の具体的態様において、Ｔ、Ｕ、およびＷのうちの１つはＮを表し、他の２つは、独立に、ＣＨまたはＣＦを表す。特定の具体的態様において、ＷはＮを表し、ＴとＵは、それぞれＣＨを表す。
【００２１】
特定の具体的態様において、式(Ｉ)の化合物は、式(Ib)：
【化３】
2005501834.tif 000004
で示された絶対配置を有する。
【００２２】
１つの特定の態様において、本発明は、式(Ｉ)：
[式中、ＶはＯまたはＳを表し；
ＸとＹは、独立に、Ｂｒ、Ｃｌ、ＣＨ３、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、ＣＨ３ＣＨ２、ＮＨ２、ＯＣＨ３、ＣＯＣＨ３、またはＣＮを表し；
Ｒ１は、所望により置換されているフェニル、ピリジル、チエニル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、またはチアゾリルを表し；
Ｒ２は、Ｈ、またはＣ１−４アルキルを表し；
該アルキルは、ヒドロキシによって、所望により置換されており；
Ｒ３は、ＨまたはＣＨ３を表し；
Ｒ４は、ＨまたはＦを表し；
Ｔ、Ｕ、およびＷのうちの１つはＮを表し、他の２つは独立にＣＨまたはＣＦを表す]の化合物、およびその薬学的に許容される塩に関する。
【００２３】
本発明の特定の化合物は、
２−[[(１Ｒ)−３−(メチルアミノ)−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−フェニルプロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−フェニルプロピル]チオ]−６−(フルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−フェニルプロピル]チオ]−６−(ジフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)プロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(３−チエニル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−[(３−ヒドロキシプロピル)アミノ]−１−(３−チエニル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
３−[[(３Ｒ)−３−[[３−シアノ−６−(トリフルオロメチル)−２−ピリジニル]オキシ]−３−(３−チエニル)プロピル]アミノ]−Ｎ−メチルプロパンアミド；
２−[[３−アミノ−１−(５−イソチアゾリル)プロピル]チオ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(３−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(２−チアゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
(Ｒ)−２−(３−ジメチルアミノ−１−イソオキサゾール−５−イル−プロポキシ)−６−トリフルオロメチル−ニコチノニトリル；
６−アミノ−４−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)プロピル]チオ]−３−ピリジンカルボニトリル；
γ−[(５−クロロ−２−メトキシ−４−ピリジニル)チオ]−(γ５Ｒ)−５−イソオキサゾールプロパンアミン；
４−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)プロピル]チオ]−６−メトキシ−３−ピリジンカルボニトリル；
４−[[(１Ｒ)−３−[(２−ヒドロキシエチル)アミノ]−１−(５−イソオキサゾリル)プロピル]チオ]−６−メトキシ−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(３−クロロ−５−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(３−クロロ−５−イソオキサゾリル)プロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[３−アミノ−１−(３−メチル−４−イソオキサゾリル)プロポキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[３−アミノ−１−(５−イソチアゾリル)プロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[３−アミノ−１−(５−イソチアゾリル)プロポキシ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[３−アミノ−１−(３−イソチアゾリル)プロポキシ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(５−メチル−３−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
４−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(３−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−メトキシ−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[３−アミノ−１−(４−メチル−３−イソオキサゾリル)プロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[３−アミノ−１−(２−オキサゾリル)プロポキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
４−[[３−アミノ−１−(４−クロロ−５−チアゾリル)プロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[１−(４−クロロ−１,３−チアゾール−５−イル)−３−(メチルアミノ)プロポキシ]−６−メチルニコチノニトリル；
２−[[１−(３−フルオロフェニル)−３−(メチルアミノ)プロピル]オキシ]ピリジン−３−カルボニトリル；
６−アセチル−２−[[３−(メチルアミノ)−１−フェニルプロピル]チオ]−３−ピリジンカルボニトリル；
５−フルオロ−６−メチル−２−[[(１Ｒ)−３−(メチルアミノ)−１−フェニルプロピル]チオ]−３−ピリジンカルボニトリル；
６−エチル−５−フルオロ−２−[[(１Ｒ)−３−(メチルアミノ)−１−フェニルプロピル]チオ]−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−[(２−ヒドロキシエチル)メチルアミノ]−１−フェニルプロピル]チオ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−[(２−ヒドロキシエチル)プロピルアミノ]−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−[(３−ヒドロキシプロピル)アミノ]−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−(メチルプロピルアミノ)−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−[[(２Ｓ)−２−ヒドロキシプロピル]アミノ]−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−１−フェニル−３−[(フェニルメチル)アミノ]プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−[(１,１−ジメチルエチル)アミノ]−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[(１Ｒ)−３−[[２−(４−ヒドロキシフェニル)エチル]アミノ]−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[４−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)ブトキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル；
２−[[４−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)ブチル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル；
４−[[４−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)ブチル]チオ]−６−メトキシ−３−ピリジンカルボニトリル；
およびこれらの薬学的に許容される塩を含む。
【００２４】
別記しない限り、本明細書中で記載される“Ｃ１−４アルキル”という用語は、１から４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖のアルキルを表す。このような基の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、およびｔ−ブチルを含む。
【００２５】
別記しない限り、本明細書中で記載される“Ｃ３−６シクロアルキル”という用語は、３から６個の炭素原子を有するシクロアルキルを表す。このような基の例は、シクロプロピル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルを含む。
【００２６】
別記しない限り、本明細書中で記載される“Ｃ１−４アルコキシ”という用語は、１から４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖のアルコキシを表す。このような基の例は、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、およびｔ−ブトキシを含む。
“Ｃ１−４アルキルチオ”という用語も、同様に解釈される。
【００２７】
別記しない限り、本明細書中で記載される“ハロゲン”という用語は、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードを表す。
【００２８】
Ｏ、Ｓ、およびＮから独立に選択される１から３個のヘテロ原子を含む ５員環もしくは６員環の芳香族複素環式環の例は、フラン、チオフェン、ピリジン、チアゾール、イミダゾール、オキサゾール、トリアゾール、オキサジアゾール、チアジアゾール、およびピリミジンを含む。
【００２９】
Ｏ、Ｓ、およびＮから独立に選択される１から３個のヘテロ原子を含む ５員環もしくは６員環の飽和複素環式環は、モルホリン、ピロリジン、テトラヒドロフラン、ピペリジン、およびピペラジンを含む。
【００３０】
“所望により１個以上のフッ素原子によってさらに置換されているＣ１−４アルキルもしくはＣ１−４アルコキシ”の例は、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、ＣＦ３ＣＦ２、ＣＦ３ＣＨ２、ＣＨ２ＦＣＨ２、ＣＨ３ＣＦ２、ＣＦ３ＣＨ２ＣＨ２、ＯＣＦ３、およびＯＣＨ２ＣＦ３を含む。
【００３１】
本発明によって、我々は、さらに、式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エナンチオマー、もしくはラセミ体の製造方法であって、
(ａ)式(II)：
【化４】
2005501834.tif 000005
[式中、Ｔ、Ｕ、Ｘ、Ｙ、およびＷは、式(Ｉ)で定義した通りであり；そして
Ｌ１は、脱離基を表す]の化合物と、式(III)：
【化５】
2005501834.tif 000006
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｑ、およびＶは、式(Ｉ)で定義した通りである]の化合物とを反応させる；または
(ｂ)式(IV)：
【化６】
2005501834.tif 000007
[式中、Ｔ、Ｕ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、およびＶは、式(Ｉ)で定義した通りである]の化合物と、式(Ｖ)：
【化７】
2005501834.tif 000008
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＱは、式(Ｉ)で定義した通りであり；そして
Ｌ２は、脱離基である]の化合物とを反応させる；または
(ｃ)式(VI)：
【化８】
2005501834.tif 000009
[式中、Ｒ１、Ｑ、Ｔ、Ｕ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、およびＶは、式(Ｉ)で定義した通りであり；そしてＬ３は、脱離基である]の化合物と、式(VII)：
【化９】
2005501834.tif 000010
[式中、Ｒ２とＲ３は、式(Ｉ)で定義した通りである]の化合物とを反応させる；または
(ｄ)式(VIII)：
【化１０】
2005501834.tif 000011
[式中、Ｒ１、Ｑ、Ｔ、Ｕ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、およびＶは、式(Ｉ)で定義した通りであり；
そしてＰは、アジド(Ｎ３)を表す]の化合物を還元する；または
(ｅ)式(VIII)：
【化１１】
2005501834.tif 000012
[式中、Ｒ１、Ｑ、Ｔ、Ｕ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、およびＶは、式(Ｉ)で定義した通りであり；
そしてＰは、イミドである]の化合物を加水分解する；
ここで、望ましい場合もしくは必要な場合は、
得られた式(Ｉ)の化合物、または別のその塩を、薬学的に許容される塩に変換する；
または式(Ｉ)の化合物を別の式(Ｉ)の化合物に変換する；および
望ましい場合は、得られた式(Ｉ)の化合物をその光学異性体に変換する；
ことを含む製造方法を提供する。
【００３２】
方法(ａ)において、反応は、不活性溶媒中で、式(III)の求核性化合物を、式(II)の求電子性化合物で処置することによって実施される。適切な脱離基Ｌ１は、スルホネートおよびハライドを含み、特にフルオライドまたはクロライドである。該反応は、一般的に、非求核性塩基、例えば水素化ナトリウムまたは炭酸セシウムの存在下で行われる。適切な有機溶媒は、例えばＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリジノン、テトラヒドロフラン、およびジメチルスルホキシドである。該反応は、一般的に、０℃から溶媒の沸点の間の温度で実施される。
【００３３】
方法(ｂ)において、反応物(IV)および(Ｖ)は、適切な不活性溶媒中、例えばテトラヒドロフラン中で、例えば Mitsunobu 条件を用いて、一緒にカップリングされる。従って、例えば反応物を、適切な温度で、一般的に０℃から溶媒の沸点の間の温度で、ホスフィン誘導体とアゾ誘導体で処置される。適切なホスフィン誘導体は、トリフェニルホスフィンおよびトリブチルホスフィンを含む。適切なアゾ誘導体は、ジエチル アゾジカルボキシレート、ジイソプロピル アゾジカルボキシレート、および１,１'−(アゾジカルボニル)ジピペリジンを含む。適切な脱離基Ｌ２は、ヒドロキシを含む。
【００３４】
あるいは、方法(ｂ)において、反応は、式(IV)の求核性化合物を、不活性溶媒中、式(Ｖ)の求電子性化合物で処理することによって実施される。適切な脱離基Ｌ２は、スルホネートおよびハライドを含み、特にクロライドまたはブロマイドである。該反応は、一般的に、非求核性塩基、例えば水素化ナトリウムまたは炭酸セシウムの存在下で実施される。適切な有機溶媒は、例えばＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリジノン、テトラヒドロフラン、およびジメチルスルホキシドである。該反応は、一般的に、０℃から溶媒の沸点の間の温度で実施される。
【００３５】
方法(ｃ)において、式(VI)および(VII)の化合物を、適切な不活性溶媒中、例えばジメチルスルホキシドまたはテトラヒドロフラン中で、一緒に反応させる。該反応は、一般的に、塩基の存在下で実施される。該塩基は、さらなる成分であっても、または過剰量の式(VII)のアミンであってもよい。適切な脱離基Ｌ３は、ヨウ化物(iodide)およびｐ−トルエンスルホネートを含む。
【００３６】
方法(ｄ)および(ｅ)において、該反応は、当業者に周知の標準的な条件を用いて実施される。
【００３７】
上記の方法において、アミンまたはヒドロキシルまたは他の可能性ある反応基を保護することが望ましい または必要であることは、当業者に明らかである。適切な保護基、および保護基の付加および除去の方法の詳細は、標準的なテキストである“Protective Groups in Organic Synthesis”, 3rd Edition (1999) by Greene and Wuts を参照することによって見出され得る。
【００３８】
１つの望ましい具体的態様において、アミンは、カルバメート誘導体として、例えばｔ−ブチルオキシカルバメートとして保護される。
保護基の使用の特定の例は、実施例の章で示されている。
【００３９】
本発明は、塩の形態、特に酸付加塩の式(Ｉ)の化合物を含む。適切な塩は、有機酸および無機酸と形成される塩を含む。このような酸付加塩は、薬学的に許容されない塩は問題の化合物の製造および生成に有用であり得るが、一般的には薬学的に許容される。従って、望ましい塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、ピルビン酸、酢酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、およびベンゼンスルホン酸から形成される塩を含む。
【００４０】
式(Ｉ)の化合物の塩は、遊離塩基、またはその塩、エナンチオマー、もしくはラセミ体を、１当量以上の適切な酸と反応させることによって形成され得る。該反応は、塩が不溶な溶媒もしくは媒体中、または塩が可溶な溶媒中で、例えば水、ジオキサン、エタノール、テトラヒドロフラン、またはジエチルエーテル中で、または溶媒の混合物中で実施され、該溶媒は、真空下で、または凍結乾燥によって除去され得る。該反応はまた、複分解反応であり得、またはイオン交換樹脂上で実施され得る。
【００４１】
式(III)の化合物は、式(IX)：
【化１２】
2005501834.tif 000013
[式中、Ｒ２、Ｒ３、およびＱは、式(Ｉ)で定義した通りであり；そして
Ｇは、Ｈ、Ｃｌ、またはＮＣＨ３(ＯＣＨ３)を表す]の化合物と、有機金属誘導体：Ｒ１−Ｍ [式中、Ｒ１は式(Ｉ)で定義した通りであり、そしてＭは金属性基、例えばリチウムもしくはマグネシウム−ハライドを表す]とを反応させ、必要であればその後還元することによって、製造され得る。Ｖが酸素を表す 得られた式(III)の化合物は、次に、Ｖが硫黄を表す式(III)の化合物に変換され得る。
【００４２】
式(II)、(IV)、(Ｖ)、(VI)、(VIII)、および(IX)の化合物は、既知であるか、または当業者に容易に明らかである慣用の方法によって製造され得るかの何れかであり得る。
【００４３】
中間体化合物は、そのままで、または保護された形態で用いられ得る。保護基およびその除去方法の詳細は、標準的なテキスト "Protective Groups in Organic Synthesis", 3rd Edition (1999) by Greene and Wuts を参照することによって見出され得る。
【００４４】
本発明の化合物およびその中間体は、その反応混合物から、標準的な方法によって、単離され得、必要であればさらに精製され得る。
式Ｉの化合物は、エナンチオマーの形態で存在し得る。従って、全てのエナンチオマー、ジアステレオマー、ラセミ体、およびそれらの混合物は、本発明の範囲に含まれる。様々な光学異性体は、慣用の方法(例えば分別結晶化またはＨＰＬＣ)を用いて、本化合物のラセミ混合物の分割によって単離され得る。
【００４５】
中間体化合物はまた、エナンチオマーの形態で存在し得、精製したエナンチオマー、ジアステレオマー、ラセミ体、または混合物として用いられ得る。
【００４６】
式(Ｉ)の化合物およびその薬学的に許容される塩は、動物において薬理学的活性を有するために、有用である。特に、本化合物は、一酸化窒素合成酵素の阻害剤として活性である。さらに特定的には、本化合物は、誘導型一酸化窒素合成酵素のアイソフォームの阻害剤であり、そして治療において、例えば抗炎症剤として有用であると予測される。あるいは、本化合物はまた、神経型一酸化窒素合成酵素のアイソフォームの阻害剤として有用性を有し、そしてＣＮＳ疾患の処置に有用性を有すると予測される。
【００４７】
本化合物およびその薬学的に許容される塩は、一酸化窒素合成酵素の合成または過剰合成が寄与する部分がある疾患もしくは状態の、処置または予防に使用するために適応される。１つの態様において、本化合物は、ヒトを含む哺乳動物における炎症状態の処置の使用に適応される。別の態様において、本化合物は、ヒトを含む哺乳動物におけるＣＮＳ疾患の処置の使用に適応される。
【００４８】
特に記載され得る状態は、
骨関節炎、リウマチ性関節炎、リウマチ性脊椎炎、痛風性関節炎、および他の関節炎状態、炎症性関節；
湿疹、乾癬、皮膚炎、または他の炎症性皮膚状態、例えば日焼け；
ブドウ膜炎、緑内障、および結膜炎を含む炎症性眼状態；
炎症を伴う肺疾患、例えば、喘息、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患、ハト飼育者疾患(pigeon fancier's disease)、農夫肺、急性呼吸窮迫症候群；
菌血症、内毒血症(endotoxaemia) (敗血症ショック)、アフタ性潰瘍、歯肉炎、麻痺(pyresis)、疼痛、髄膜炎、および膵炎；
炎症性腸疾患を含む胃腸管の状態、クローン病、萎縮性胃炎、変形性胃炎(gastritis varialoforme)、潰瘍性大腸炎、セリアック病、限局性回腸炎(regional ileitis)、消化性潰瘍、過敏性腸症候群、逆流性食道炎、例えば Helicobacter pylori の感染に起因する、または非ステロイド性抗炎症剤での処置に起因する胃腸管の損傷；および
炎症を伴う他の状態；
である。
【００４９】
本化合物はまた、急性疼痛、または持続性炎症性疼痛、または神経因性疼痛、または中枢器官の疼痛の、処置および緩和に有用である。
本化合物はまた、癌の処置にも有用であり得る。
【００５０】
我々は、特に、炎症性腸疾患、リウマチ性関節炎、骨関節炎、慢性閉塞性肺疾患、癌、および疼痛の状態に関心がある。
【００５１】
式(Ｉ)の化合物およびその薬学的に許容される塩、エナンチオマー、およびラセミ体はまた、さらに上記の疾患もしくは状態の処置または予防にも有用であり得る。例えば、本化合物は、アテローム硬化症、嚢胞性線維症、敗血症ショック および／または 毒素ショックに伴う低血圧の処置に、そして臓器移植治療における短期免疫抑制のためのアジュバントとして免疫系の機能不全の処置に、糖尿病の発症の制御に、糖尿病におけるすい臓の機能の維持に、糖尿病に伴う血管合併症の処置に、およびサイトカイン(例えばＴＮＦまたはインターロイキン)との併用治療において、有用であり得る。
【００５２】
式(Ｉ)の化合物は、あるいは、例えば心停止や卒中の場合における低酸素症、神経変性および／または神経壊死を含む神経変性疾患、例えば虚血、低酸素症、低血糖、癲癇、および外傷(例えば脊髄や頭部の損傷)、高圧酸素痙攣および毒、痴呆、例えば初老性痴呆、アルツハイマー病、およびＡＩＤＳ関連痴呆、シドナム舞踏病、パーキンソン病、トゥーレット症候群、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、筋ジストロフィー、コルサコフ病、大脳血管障害に関する虚弱、睡眠障害、統合失調症、鬱病、疼痛、自閉症、季節性情動障害、時差ぼけ、鬱病、または 月経前症候群(ＰＭＳ)や不安や敗血症ショックに伴う別の症状の処置に有用であり得る。式(Ｉ)の化合物はまた、薬物中毒または薬物抵抗性、例えばアヘン剤やジアゼピンに対する抵抗性の予防や回復、薬物中毒の処置、偏頭痛や他の血管性頭痛、神経因性炎症の処置、胃腸運動障害の処置、および分娩の誘発において、活性を示すと期待され得る。
【００５３】
我々は、特に、卒中、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、統合失調症、偏頭痛、敗血症ショック、および疼痛、より特定的には偏頭痛の状態に関心がある。
【００５４】
予防は、特に、問題の疾患もしくは状態の病歴があるか、または罹患のリスクが増大していると考えられるヒトの処置に関する。特定の疾患もしくは状態にかかるリスクのあるヒトは、一般的に、該疾患もしくは状態の家族の病歴があるヒト、または該疾患もしくは状態に特にかかりやすいことが遺伝子試験もしくはスクリーニングによって分かっているヒトを含む。
【００５５】
上記の治療の適応において、投与される用量は、用いられる化合物、投与方法、および望ましい処置に伴って、当然に変化する。しかし、一般的に、本化合物が、１日当たり１ｍｇから２０００ｍｇの間で、固体の形態の投与形で投与された場合に、満足のいく結果が得られる。
【００５６】
式(Ｉ)の化合物およびその薬学的に許容される誘導体は、それ自身で、または 本化合物もしくは誘導体を、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤、もしくは担体と混合した、適切な医薬組成物の形態で用いられ得る。本発明のさらなる態様は、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤、もしくは担体と混合した、式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物を提供する。投与は、経腸(経口、舌下、または直腸を含む)、経鼻、吸入、静脈内、局所、またはその他の非経腸の経路(これらに制限されない)によって、行われ得る。適切な医薬製剤の選択および製造のための慣用の手順は、例えば“Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs”, M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988 において記載される。医薬組成物は、好ましくは８０％未満の、より好ましくは５０％未満の式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む。
【００５７】
該成分を混合することを含む、該医薬組成物の製造方法もまた、提供する。
式(Ｉ)の化合物およびその薬学的に許容される誘導体はまた、便宜的に、ＣＯＸ阻害剤と組み合わせて、より特定的にはＣＯＸ−２阻害剤と組み合わせて用いられ得る。特に望ましいＣＯＸ−２阻害剤は、Celecoxib および MK-966 である。ＮＯＳ阻害剤とＣＯＸ−２阻害剤は、単回用量単位で投与するための同一の医薬組成物中で、一緒に製剤化されてもよく、またはそれぞれの成分が個別に製剤化され、別個の投与形で同時にもしくは連続的に投与されてもよい。
本発明は、以下の実施例によって例示されるが、これらは本発明を制限するものではない。
下記の略号を用いる：
ＤＭＳＯ  (ジメチルスルホキシド)；
ＤＭＦ  (Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド)；
ＴＨＦ  (テトラヒドロフラン)；
ＮＭＰ  (Ｎ−メチルピロリジノン).
【実施例】
【００５８】
実施例１
２−[[(１Ｒ)−３−(メチルアミノ)−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル塩酸塩
ａ)[(３Ｒ)−３−[[３−シアノ−６−(トリフルオロメチル)−２−ピリジニル]オキシ]−３−フェニルプロピル]メチルカルバミン酸 １，１−ジメチルエチル
[(３Ｒ)−３−ヒドロキシ−３−フェニルプロピル]メチルカルバミン酸１，１−ジメチルエチル(２６５mg)と２−クロロ−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル(２０７mg)をＤＭＦ(１０ml)に溶解した。水素化ナトリウム(油中６０％懸濁液、８０mg)を添加し、その混合液を２日間攪拌した。反応混合物を水の中に注ぎ、ジエチルエーテルで３回抽出した。合わせた有機抽出物を洗い(塩水)、乾燥し(硫酸マグネシウム)、濃縮した。精製(シリカ、溶出剤として２０％酢酸エチル／ヘキサン)により、副題化合物(１６０mg)が得られた。
MS APCI +ve m/z 336 ([M-100+H]+).
1H NMR 300MHz (CDCl3) 8.00 (1H, d), 7.47 (1H, d), 7.35 (4H, m), 6.13 (1H, m), 3.20-3.40 (2H, m), 2.85 (3H, s), 2.40 (1H, m), 2.16 (1H, m), 1.37 (9H, s).
【００５９】
ｂ)２−[[(１Ｒ)−３−(メチルアミノ)−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル塩酸塩
ステップ(ａ)からの生成物(１５５mg)を、ジオキサン(１０ml)中４Ｍ  ＨＣｌの中で１時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を少量のエタノールを含むジエチルエーテルから再結晶すると、表題化合物(８０mg)が得られた。
MS APCI +ve m/z 336 ([M+H]+).
1H NMR 300MHz (d6-DMSO) 8.76 (2H, bs), 8.59 (1H, d), 7.67 (1H, d), 7.30-7.48 (5H, m) 6.20 (1H, m), 3.02 (2H, m), 2.56 (3H, s), 2.45 (1H, m), 2.30 (1H, m).
【００６０】
実施例２
(Ｅ)−ブテン二酸２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−フェニルプロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)(α１Ｓ)−α−(２−アジドエチル)ベンゼンメタノール
ＤＭＳＯ(１５ml)と水(０．５ml)の中で(α１Ｓ)−α−(２−クロロエチル)ベンゼンメタノール(１．６８ｇ)とアジ化ナトリウム(９６０mg)を攪拌し、５０℃で１７時間加熱した。反応混合液を水(３００ml)で希釈し、生成物をジエチルエーテル(２×２００ml)中に抽出した。合わせた抽出物を乾燥し(硫酸マグネシウム)、油状物になるまで濃縮した。精製(シリカ、溶出剤として１０％アセトン／イソヘキサン)により、副題化合物が無色の油状物(１．６ｇ)として得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3) 7.41-7.27 (5H, m), 4.88-4.82 (1H, m), 3.55-3.35 (2H, m), 2.11-1.89 (3H, m).
【００６１】
ｂ)ベンゼンカルボチオ酸Ｓ−[(１Ｒ)−３−アジド−１−フェニルプロピル]
０℃の乾燥ＴＨＦ(２５ml)中のアゾジカルボン酸ジイソプロピル(１．３３ml)の溶液をトリフェニルホスフィン(１．４８ｇ)で処理し、その混合液を２０分間攪拌した。次いで、生成した懸濁液を、(α１Ｓ)−α−(２−アジドエチル)ベンゼンメタノール(１ｇ)で、次にベンゼンカルボチオ酸(０．６６ml)で処理した。懸濁液は、ベンゼンカルボチオ酸の添加で素早く黄色の溶液に変わり、２．５時間後に反応が完了した。反応混合物を濃縮乾固し、残渣をクロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてイソヘキサン／ジエチルエーテル(９８：２))により精製すると、副題化合物(８００mg)(琥珀色の油状物として)が得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3) 7.94 (2H, m), 7.6-7.2 (8H, m), 4.91 (1H, dd), 3.4-3.2 (2H, m), 2.4-2.2 (2H, m).
【００６２】
ｃ)２−[[(１Ｒ)−３−アジド−１−フェニルプロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル
２−クロロ−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル(１５２mg)、ステップ(ｂ)からの生成物(３００mg)及び炭酸カリウム(１５０mg)のメタノール(２ml)中の混合物を攪拌し、１．５時間還流した。冷却した反応混合液を水(５０ml)でクエンチし、生成物をジエチルエーテル(２×１００ml)中に抽出した。有機抽出物を乾燥し(硫酸マグネシウム)、濃縮して油状物とした。粗生成物を、クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてイソヘキサン／ジエチルエーテル  １：１)により精製すると、約３０％までの出発物質クロロピリジンが混入した副題化合物(２８０mg)が得られた。
MS APCI +ve m/z 282 ([M+H-N2]+).
【００６３】
ｄ)(Ｅ)−ブテン二酸２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−フェニルプロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル
ステップ(ｃ)からの粗生成物(２８０mg)をＴＨＦ(１０ml)に溶解し、その溶液を水(０．１ml)とトリフェニルホスフィン(３６０mg)で処理した。混合液を還流下で１時間加熱し、次いで、濃縮乾固した。残渣を、クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤として１００％酢酸エチル、次にメタノール／ジクロロメタン中１０％７Ｍアンモニア)により精製し、続いてエタノール中のアミンを(Ｅ)−ブテン二酸(１当量)で処理すると、その塩(１７０mg)が得られた。
MS APCI +ve m/z 284 ([M+H]+).
1H NMR 300MHz (d6-DMSO) 8.05 (1H, d), 7.49-7.15 (6H, m), 6.34 (2H, s), 5.19 (1H, dd), 2.73-2.5 (2H, m), 2.56 (3H, s), 2.3-2.15 (2H, m).
【００６４】
実施例３
エタン二酸２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−フェニルプロピル]チオ]−６−(フルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)６−(フルオロメチル)−２−(メチルチオ)−３−ピリジンカルボニトリル
６−ホルミル−２−(メチルチオ)−３−ピリジンカルボニトリル(１ｇ)のエタノール(１２ml)溶液に水素化ホウ素ナトリウム(２１２mg)を添加した。２時間後、揮発性物質を除去し、酢酸エチルと水を添加した。有機層を分離し、水層をさらに酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を乾燥し(硫酸ナトリウム)、溶媒を除去すると、６−(ヒドロキシメチル)−２−(メチルチオ)−３−ピリジンカルボニトリル(１ｇ)が黄色の固体として得られた。この物質を窒素下でジクロロメタン(１０ml)中に溶解させ、ジクロロメタン(３ml)中の三フッ化[ビス(メトキシエチル)アミノ]硫黄(１ml)を添加した。１６時間後、反応混合物を、飽和重炭酸ナトリウム水溶液に慎重に注いだ。有機層を分離し、乾燥し(硫酸ナトリウム)、溶媒を除去した。残渣は、メタノールに溶解し、ＳＣＸイオン交換樹脂に通し、メタノールで溶出した。溶媒を除去すると、副題生成物(０．８８ｇ)が黄色の固体として得られた。
1H NMR  400MHz  (CDCl3) 7.85 (1H, d), 7.23 (1H, d), 5.48 (2H, d), 2.60 (3H, s).
【００６５】
ｂ)６−(フルオロメチル)−２−(メチルスルホニル)−３−ピリジンカルボニトリル
上記ステップ(ａ)の生成物と３−クロロペルオキシ安息香酸を用いて、実施例４のステップ(ｂ)の方法により表題化合物を製造した。生成物は淡緑色の油状物として得られ、それは放置すると固化した。
1H NMR 400MHz  (CDCl3) 8.33 (1H, d), 7.87 (1H, d), 5.60 (2H, d), 3.37 (3H, s).
【００６６】
ｃ)エタン二酸２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−フェニルプロピル]チオ]−６−(フルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ベンゼンカルボチオ酸Ｓ−[(１Ｒ)−３−アジド−１−フェニルプロピル](０．２２ｇ)を、アンモニアのメタノール溶液(１０ml、７Ｍ)に溶解し、窒素雰囲気下で３時間攪拌した。揮発性物質を真空で除去し、残渣をＤＭＦ(６ml)に溶解した。固体炭酸セシウム(０．４８ｇ)と６−(フルオロメチル)−２−(メチルスルホニル)−３−ピリジンカルボニトリル(０．１６ｇ)を添加し、反応物を室温で１６時間攪拌した。酢酸エチルと水を添加し、有機層を分離した。それを、水、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液／塩水(１：１)で洗浄し、乾燥し(硫酸ナトリウム)、蒸発させて、クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてイソヘキサン中５〜１０％酢酸エチル)により精製すると、結合した生成物が油状物として得られた。これをＴＨＦ(３ml)に溶解し、トリフェニルホスフィン(０．１３ｇ)を添加し、その溶液を１時間攪拌した。水(１ml)を添加し、攪拌を１６時間続けた。溶媒を真空で除去し、残渣をＳＣＸイオン交換樹脂に通すことにより精製した。表題生成物の遊離塩基をジエチルエーテルに溶解し、ジエチルエーテル中のエタン二酸(１当量)を添加した。生成した結晶を濾取し、真空で乾操すると、表題生成物が白色の固体(０．１１ｇ)として得られた。
1H NMR 400MHz  (CD3OD)  8.06 (1H, d), 7.47 (2H, d), 7.39-7.27 (4H, m), 5.64-5.42 (2H, m), 5.17 (1H, dd), 3.03 (1H, ddd), 2.87 (1H, ddd), 2.52-2.35 (2H, m).
【００６７】
実施例４
エタン二酸２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−フェニルプロピル]チオ]−６−(ジフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)６−(ジフルオロメチル)−２−(メチルチオ)−３−ピリジンカルボニトリル
６−ホルミル−２−(メチルチオ)−３−ピリジンカルボニトリル(１ｇ)のジクロロメタン溶液に窒素下、三フッ化[ビス(メトキシエチル)アミノ]硫黄(２ml)を、次に、エタノール(０．０５ml)を添加した。１６時間後、反応混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液に慎重に注いだ。有機層を分離し、水層を更なるジクロロメタンで抽出した。合わせた有機層を乾燥し(硫酸ナトリウム)、溶媒を除去した。残渣は、メタノールに溶解し、ＳＣＸイオン交換樹脂に通してメタノールで溶出した。溶媒を除去すると、表題生成物(１．２ｇ)が黄色の固体として得られた。
1H NMR 400MHz  (CDCl3) 7.93 (1H, d), 7.38 (1H, d), 6.59 (1H, t), 2.65 (3H, s).
【００６８】
ｂ)６−(ジフルオロメチル)−２−(メチルスルホニル)−３−ピリジンカルボニトリル
上記ステップ(ａ)からの生成物(１．２ｇ)の０℃のジクロロメタン(１２ml)溶液に、３−クロロペルオキシ安息香酸(最低限５７％の純度の６．８ｇ)を添加した。反応物を室温まで温め、２時間攪拌した。反応物を重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥した(硫酸ナトリウム)。溶媒を蒸発させ、残渣をジエチルエーテルに溶解した。この有機溶液を、メタ重亜硫酸ナトリウム水溶液、氷冷した０．５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液、塩水で洗浄し、次いで乾燥した(硫酸ナトリウム)。溶媒を除去すると、副題化合物(０．５８ｇ)が淡黄色の油状物として得られた。
1H NMR 400MHz  (CDCl3) 8.44 (1H, d), 8.03 (1H, d), 6.72 (1H, t), 3.42 (3H, s).
【００６９】
ｃ)エタン二酸２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−フェニルプロピル]チオ]−６−(ジフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ベンゼンカルボチオ酸Ｓ−[(１Ｒ)−３−アジド−１−フェニルプロピル]エステルと６−(ジフルオロメチル)−２−(メチルスルホニル)−３−ピリジンカルボニトリルを用いて、実施例３のステップ(ｃ)の方法により表題化合物を製造し、エタン二酸塩生成後、表題化合物(０．１３ｇ)が白色の固体として得られた。
1H NMR  400MHz  (CD3OD)  8.18 (1H, d), 7.50 (3H, m), 7.36 (2H, m), 7.30 (1H, m), 6.81 (1H, t), 5.21 (1H, dd), 3.05 (1H, ddd), 2.88 (1H, ddd), 2.55-2.37 (2H, m).
【００７０】
実施例５
エタン二酸２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−５−イソオキサゾールカルボキサミド
イソオキサゾール−５−カルボン酸(２．８１ｇ)、Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルアミン塩酸塩(２．４９ｇ)、ＥＤＣＩ(４．９６ｇ)、ＤＭＡＰ(３．１５ｇ)及び４−メチルモルホリン(２．８ml)のジクロロメタン(２０ml)溶液を１８時間攪拌した。２Ｍ塩酸を添加し、混合液をジクロロメタンで抽出した(３回)。有機層を、炭酸水素ナトリウム水溶液、次いで塩水で洗浄し、合わせて、乾燥し(硫酸マグネシウム)、蒸発させ、クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤として石油エーテル)により精製することにより、副題化合物が無色の油状物(２．９４ｇ)として得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.35 (1H, d), 6.89 (1H, d), 3.83 (3H, s), 3.39 (3H, s).
【００７１】
ｂ)３−クロロ−１−(３−イソオキサゾリル)−１−プロパノン
臭化ビニルマグネシウム(２０ml、ＴＨＦ中１Ｍ)を、ステップ(ａ)からの生成物(２．５９ｇ)のＴＨＦ(３５ml)溶液に−７８℃で添加し、２．５時間かけて０℃に加温した。−５０℃に冷却した後、混合物を過剰の氷冷した２Ｍ塩酸にゆっくり注いだ。混合物をエーテルで抽出した(５回)。有機抽出物を乾燥し(硫酸マグネシウム)、蒸発させると、茶色の油状物が得られた。塩化水素のジエチルエーテル溶液(２０ml、１Ｍ)を添加し、その混合物を４０分間攪拌した。溶媒を真空で除去すると、副題化合物(２．０ｇ)が得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3) 8.39 (1H, s), 6.96 (1H, s), 3.91 (2H, t), 3.49 (2H, t).
【００７２】
ｃ)(α５−Ｒ)α−(２−クロロエチル)−５−イソオキサゾールメタノール
ボラン(４．２ml、ＴＨＦ中１Ｍ)を、(３ａＳ)−テトラヒドロ−１−メチル−３，３−ジフェニル−３Ｈ−ピロロ[１，２−ｃ][１，３，２]オキサザボロール(oxazaborole)(０．０６ml、トルエン中１Ｍ)のＴＨＦ(５ml)溶液に０℃で添加した。ステップ(ｂ)からの生成物(９９８mg)のＴＨＦ(５ml)溶液をゆっくり添加し、次いで、その混合物を２０℃で４時間攪拌した。メタノールを添加し、溶液を蒸発させ、残渣をメタノールと共沸させた。クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤として石油エーテル)による精製により、副題化合物が無色の油状物(５６２mg)として得られた。
MS APCI +ve m/z 162 ([M+H]+).
【００７３】
ｄ)(α５−Ｒ)α−(２−アジドエチル)−５−イソオキサゾールメタノール
ステップ(ｃ)からの生成物(１．６２ｇ)とアジ化ナトリウム(７２６mg)の乾燥ＤＭＳＯ(１１ml)溶液を４０℃で２４時間攪拌し、次いで６０℃で１時間攪拌した。水を添加し、その混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を水で洗浄し、乾燥し(硫酸マグネシウム)、蒸発させ、クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤として石油／ジエチルエーテル)により精製すると、副題化合物が無色の油状物(１．１６ｇ)として得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.22 (1H, d), 6.25 (1H, d), 5.13 - 5.01 (1H, m), 3.66 - 3.45 (2H, m), 2.54 (1H, d), 2.22 - 2.02 (2H, m).
【００７４】
ｅ)[(３Ｒ)−３−ヒドロキシ−３−(５−イソオキサゾリル)プロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
トリフェニルホスフィン(１．８０ｇ)と水(３ml)をステップ(ｄ)からの生成物(１．１５ｇ)のＴＨＦ(１６ml)溶液に添加し、１８時間攪拌した。ジ−ｔ−ブチルジカーボネート(１．６４ｇ)を添加し、その混合物を２時間攪拌した。溶媒を真空で除去し、残渣をジクロロメタンで抽出し、有機層を蒸発させ、クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤として石油／ジエチルエーテル(１：３))により精製すると、副題化合物が無色の油状物(１．４３ｇ)として得られた。
MS APCI +ve m/z 243 ([M+H]+).
【００７５】
ｆ)[(３Ｒ)−３−[[３−シアノ−６−(トリフルオロメチル)−２−ピリジニル]オキシ]−３−(５−イソオキサゾリル)プロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
ステップ(ｅ)からの生成物(１．４０ｇ)と２−クロロ−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル(１．４７ｇ)のＤＭＦ(１５ml)溶液に０℃で炭酸セシウム(５．６７ｇ)を添加し、その混合物を２０℃で１時間攪拌した。２Ｍ塩酸及び塩化アンモニウム水溶液を添加し、混合物をエーテルで抽出した(３回)。有機層を水で洗浄し、乾燥し(硫酸ナトリウム)、蒸発させ、クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤として石油／ジエチルエーテル)により精製すると、副題化合物が白色の固体(１．７０ｇ)として得られた。キラルＨＰＬＣ(Chiralpak(登録商標) AD、溶出剤としてイソヘキサン／エタノール)を使用する更なる精製により、副題化合物(１．１０ｇ)が無色の油状物として得られた。
MS APCI +ve m/z 413 ([M+H]+).
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.22 (1H, s), 8.11 (1H, d), 7.41 (1H, dd), 6.46 (1H, dt), 6.42 (1H, s), 4.76 (1H, s), 3.49-3.27 (2H, m), 2.56-2.27 (2H, m), 1.40 (9H, s).
更なる溶出により、(３Ｓ)異性体が無色の油状物(４０５mg)として得られた。
MS APCI +ve m/z 413 ([M+H]+).
【００７６】
ｇ)エタン二酸２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ジオキサン(９ml)中４Ｍ塩化水素を、ステップ(ｆ)からの生成物(７７９mg)のジオキサン溶液に添加し、１．２５時間攪拌した。炭酸カリウム水溶液を添加し、その混合物を酢酸エチル(３回)とジクロロメタンで抽出した。有機抽出物を乾燥し(硫酸ナトリウム)、蒸発させ、アセトニトリル(１０ml)に溶解し、エタン二酸のメタノール溶液の添加によりエタン二酸塩を製造すると、表題化合物が白色固体(５５２mg)として得られた。
融点１７９〜１８０℃；
MS APCI +ve m/z 313 ([M+H]+).
1H NMR 400MHz (d6-DMSO)  8.65 (2H, d), 8.60 (1H, d), 7.76 (1H, d), 6.60 (1H, d), 6.43 (1H, dd), 3.01 (2H, t), 2.49 - 2.32 (6H, m).
【００７７】
実施例６
エタン二酸２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)プロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)(α５−Ｓ)α−(２−クロロエチル)−５−イソオキサゾールメタノール
実施例５のステップ(ｂ)の生成物及び触媒として(３ａＲ)−テトラヒドロ−１−メチル−３，３−ジフェニル−３Ｈ−ピロロ[１，２−ｃ][１，３，２]オキサザボロールを使用して、実施例５ステップ(ｃ)の方法により副題化合物を製造した。
MS APCI +ve m/z 162 ([M+H]+).
【００７８】
ｂ)(α５−Ｓ)α−(２−アジドエチル)−５−イソオキサゾールメタノール
副題化合物を、上記のステップ(ａ)の生成物を使用して実施例５ステップ(ｄ)の方法により製造した。
1H NMR 300MHz (CDCl3)   8.22 (1H, d), 6.25 (1H, d), 5.13 - 5.01 (1H, m), 3.66 - 3.45 (2H, m), 2.54 (1H, d), 2.22 - 2.02 (2H, m).
【００７９】
ｃ)[(３Ｓ)−３−ヒドロキシ−３−(５−イソオキサゾリル)プロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
副題化合物は、上記のステップ(ｂ)の生成物を使用して、実施例５ステップ(ｅ)の方法により製造した。
MS APCI +ve m/z 243 ([M+H]+).
【００８０】
ｄ)[(３Ｒ)−３−(ベンゾイルチオ)−３−(５−イソオキサゾリル)プロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
アゾジカルボン酸ジイソプロピル(０．５２ml)を、乾燥ＴＨＦ(１０ml)中トリフェニルホスフィン(６９５mg)に０℃で滴下した。０．５時間後、ステップ(ｃ)からの生成物(３１７mg)とベンゼンカルボチオ酸(３５９mg)のＴＨＦ(７ml)溶液をゆっくり添加し、冷却浴を取り外し、攪拌を一晩中続けた。溶媒を真空で除去し、残渣をクロマトグラフィー(シリカ、溶出剤として石油／ジエチルエーテル(１：３))により精製すると、副題化合物が固体(８６４mg)として得られた。
MS APCI +ve m/z 363 ([M+H]+).
【００８１】
ｅ)[(３Ｒ)−３−[(３−シアノ−６−メチル−２−ピリジニル)チオ]−３−(５−イソオキサゾリル)プロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
ステップ(ｄ)からの生成物(４３１mg)をメタノール(５ml)中７Ｍアンモニアに溶解し、窒素下、室温で３時間攪拌し、次いで溶媒を蒸発させた。残渣をＤＭＦ(３ml)に溶解し、炭酸セシウム(４１０mg)と２−クロロ−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル(１４４mg)の混合物を添加した。１．７５時間撹拌した後、２Ｍ塩酸と水を添加し、混合物をエーテルで抽出した(３回)。有機層を水で洗浄し、乾燥し(硫酸マグネシウム)、蒸発させ、クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤として石油／ジエチルエーテル)により精製すると、副題化合物が白色固体(１８６mg)として得られた。
MS APCI +ve m/z 375 ([M+H]+).
【００８２】
ｆ)２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)プロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル
表題化合物は、実施例５ステップ(ｇ)の方法を使用して、ステップ(ｅ)の生成物から製造した。
融点１６５〜１６７℃；
MS APCI +ve m/z 275 ([M+H]+).
1H NMR 400MHz (d6-DMSO)   8.55 (1H, d), 8.15 (1H, d), 7.27 (1H, d), 6.57 (1H, d), 5.55 (1H, t), 3.00 - 2.83 (2H, m), 2.57 (3H, s), 2.47 - 2.32 (2H, m).
【００８３】
実施例７
エタン二酸２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(３−チエニル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−３−チオフェンカルボキサミド
３−チオフェンカルボン酸(１０．７８ｇ)をジクロロメタン(２５０ml)に溶解し、４−ジメチルアミノピリジン(１０．２８ｇ)、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩(８．２１ｇ)、Ｎ−メチルモルホリン(８．５１ｇ)及び１−(３−ジメチルアミノプロピル)−３−エチルカルボジイミド塩酸塩(ＥＤＣＩ)(１６．１２ｇ)を添加し、得られた溶液を室温で２４時間攪拌した。反応混合物をジクロロメタン(１００ml)で希釈し、２Ｍ塩酸水溶液(３×３０ml)、重炭酸ナトリウム水溶液(２×３０ml)及び水(３×３０ml)で洗浄した。有機相を乾燥し(硫酸マグネシウム)、濾過し、蒸発させると、副題化合物が無色の油状物(１３．３５ｇ)として得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3) 8.07 (1H, dd), 7.58 (1H, dd), 7.29 (1H, dd), 3.66 (3H, s), 3.37 (3H, s).
【００８４】
ｂ)１−(３−チエニル)−２−プロペン−１−オン
ステップ(ａ)からの生成物(２．０７ｇ)を無水ＴＨＦ(３０ml)に溶解し、その溶液を−１０℃に冷却した。温度を０℃以下に保持しつつ、臭化ビニルマグネシウム(１Ｍ、１４．５ml)を滴下した。得られた溶液を０℃で２．５時間攪拌し、次いで室温まで温めた。反応混合物を氷の入った２Ｍ塩酸水溶液(２００ml)にゆっくり注いだ。混合物を酢酸エチル(３×７０ml)で抽出し、合わせた抽出物を水(２×３０ml)及び塩水(２０ml)で洗浄し、乾燥し(硫酸マグネシウム)し、真空で蒸発することにより、副題化合物(１．２９ｇ)が得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.11 (1H, dq), 7.61 (1H, td), 7.41 - 7.30 (1H, m), 7.06 (1H, dd), 6.46 (1H, dd), 5.89 (1H, dd).
【００８５】
ｃ)３−クロロ−１−(３−チエニル)−１−プロパノン
ステップ(ｂ)からの生成物(１．２９ｇ)をジエチルエーテル(３０ml)とジクロロメタン(２０ml)の混合液に溶解し、次いでジエチルエーテル(２５ml)中１Ｍ塩化水素を添加した。反応混合液を室温で１８時間攪拌した。溶媒を真空で除去することにより、副題化合物(１．４８ｇ)が得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.09 (1H, dd), 7.56 (1H, dd), 7.35 (1H, dd), 3.90 (2H, t), 3.37 (2H, t).
【００８６】
ｄ)(Ｒ)−α−(２−クロロエチル)−３−チオフェンメタノール
上記のステップ(ｃ)の生成物及び触媒として(３ａＳ)−テトラヒドロ−１−メチル−３，３−ジフェニル−３Ｈ−ピロロ[１，２−ｃ][１，３，２]オキサザボロールを使用して、実施例５ステップ(ｃ)の方法により副題化合物を製造した。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  7.33 (1H, dd), 7.24 (1H, dt), 7.09 (1H, dd), 5.06 (1H, quintet), 3.75 (1H, ddd), 3.62 - 3.54 (1H, m), 2.31 - 2.11 (2H, m).
【００８７】
ｅ)２−[[(１Ｒ)−３−クロロ−１−(３−チエニル)−プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
(Ｒ)−α−(２−クロロエチル)−３−チオフェンメタノール(１．０５ｇ)及び２−クロロ−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル(１．２３ｇ)をＤＭＦ(２０ml)に溶解し、水素化ナトリウムを添加した(２８６mg、油中６０％分散液)。反応物を室温で２時間攪拌し、その後塩化アンモニウム溶液でクエンチし、酢酸エチルで抽出した(３×５０ml)。合わせた有機抽出物を水(３×３０ml)で洗浄し、乾燥し(硫酸マグネシウム)し、真空で蒸発させた。残渣を、クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてヘキサン／酢酸エチル)により精製すると、副題化合物(１．５５ｇ、７５％)が得られた。
1H NMR 400MHz (CDCl3)  8.03 (1H, d), 7.45 (1H, t), 7.35 - 7.28 (2H, m), 7.20 (1H, d), 6.57 - 6.51 (1H, m), 3.77 - 3.68 (1H, m), 3.62 - 3.54 (1H, m), 2.76 - 2.65 (1H, m), 2.45 - 2.35 (1H, m).
【００８８】
ｆ)２−[[(１Ｒ)−３−ヨード−１−(３−チエニル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ステップ(ｅ)からの生成物(１．１３ｇ)を、アセトン(１００ml)中ヨウ化ナトリウムの飽和溶液に溶解し、２０時間還流し、次いで冷却し、溶媒を真空で除去した。残渣を水(５０ml)に溶解し、酢酸エチル(３×６０ml)で抽出した。合わせた抽出物を水(３０ml)で洗浄し、乾燥し(硫酸マグネシウム)、真空で蒸発させた。残渣をクロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてヘキサン／酢酸エチル)により精製すると、副題化合物(９５％、１．３５ｇ)が油状物として生成したが、これは放置すると結晶化した。
1H NMR 400MHz (CDCl3)  8.03 (1H, dd), 7.45 (1H, dd), 7.34 - 7.29 (2H, m), 7.20 (1H, dd), 6.44 (1H, dd), 3.28 (1H, dt), 3.17 (1H, dddd), 2.78 - 2.68 (1H, m), 2.52 - 2.42 (1H, m).
【００８９】
ｇ)２−[[(１Ｒ)−３−アジド−１−(３−チエニル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ステップ(ｆ)からの生成物(３００mg)をＤＭＳＯ(１０ml)に溶解し、アジ化ナトリウム(７１mg)を添加し、反応混合物を６５℃まで加熱し、２４時間攪拌した。冷却後、水(３０ml)を添加し、混合物を酢酸エチル(３×５０ml)で抽出した。合わせた抽出物を、水(３×２０ml)で洗浄し、乾燥し(硫酸マグネシウム)、真空で蒸発させると、副題化合物(１８０mg)が得られた。
MS APCI +ve  m/z 325 ([M-N2]+).
【００９０】
ｈ)エタン二酸２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(３−チエニル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ステップ(ｇ)からの生成物(１８０mg)をＴＨＦ(２０ml)に溶解し、溶液をトリフェニルホスフィン(２１３mg)で処理し、室温で１時間攪拌した。水(４ml)を添加し、反応液を４８時間攪拌した。水(３０ml)を添加し、反応液を酢酸エチル(３×５０ml)で抽出した。合わせた抽出物を水(３×２０ml)で洗浄し、乾燥し(硫酸マグネシウム)、真空で蒸発させた。残渣をクロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてメタノール／ジクロロメタン中７Ｍアンモニア)により精製すると、遊離の塩基が得られ、これをエタン二酸塩に変換すると、表題化合物(１２０mg、５６％)が得られた。
1H NMR 300MHz (d6-DMSO)  8.59 (1H, d), 7.69 (1H, d), 7.60 - 7.54 (2H, m), 7.20 (1H, dd), 6.36 - 6.29 (1H, m), 2.91 (2H, t), 2.42 (1H, quintet), 2.35 - 2.22 (1H, m).
【００９１】
実施例８
エタン二酸２−[[(１Ｒ)−３−[(３−ヒドロキシプロピル)アミノ]−１−(３−チエニル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
実施例７ステップ(ｆ)の生成物(２５０mg)と３−アミノ−１−プロパノール(２５７mg)をＴＨＦ(２５ml)に溶解し、室温で４８時間攪拌した。水(３０ml)を添加し、混合物を酢酸エチル(３×５０ml)で抽出した。合わせた抽出物を水(４×２０ml)で洗浄し、乾燥し(硫酸マグネシウム)、真空で蒸発させた。残渣をクロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてメタノール／ジクロロメタン中７Ｍアンモニア)により精製すると、遊離の塩基が得られた。これをエタン二酸塩に変換すると、表題化合物(１０１mg、３７％)が得られた。
1H NMR 300MHz (d6-DMSO)  8.59 (1H, d), 7.69 (1H, d), 7.61 - 7.55 (2H, m), 7.21 (1H, dd), 6.33 (1H, dd), 3.46 (2H, t), 3.07 - 2.92 (4H, m), 2.40 - 2.26 (2H, m), 1.77 - 1.65 (2H, m).
【００９２】
実施例９
エタン二酸３−[[(３Ｒ)−３−[[３−シアノ−６−(トリフルオロメチル)−２−ピリジニル]オキシ]−３−(３−チエニル)プロピル]アミノ]−Ｎ−メチルプロパンアミド
実施例７ステップ(ｆ)の生成物(２５０mg)、３−アミノ−Ｎ−メチルプロパンアミド塩酸塩(４７５mg)とトリエチルアミン(０．１５ml)をＴＨＦ(２５ml)に溶解し、室温で４８時間攪拌した。水(３０ml)を添加し、混合物を酢酸エチル(３×５０ml)で抽出した。合わせた抽出物を水(４×２０ml)で洗浄し、乾燥し(硫酸マグネシウム)、真空で蒸発させた。残渣をクロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてメタノール／ジクロロメタン中７Ｍアンモニア)により精製して、遊離の塩基が得られ、これをエタン二酸塩に変換すると、表題化合物(４９mg、１７％)が得られた。
1H NMR 300MHz (d6-DMSO)  8.60 (1H, d), 8.04 (1H, d), 7.69 (1H, d), 7.60 - 7.55 (2H, m), 7.21 (1H, dd), 6.33 (1H, dd), 3.18 - 2.97 (4H, m), 2.58 (3H, d), 2.49 - 2.42 (3H, m), 2.40 - 2.30 (2H, m).
【００９３】
実施例１０
エタン二酸２−[[３−アミノ−１−(５−イソチアゾリル)プロピル]チオ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)[３−(５−イソチアゾリル)−３−オキソプロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
イソチアゾール(８６０mg)のＴＨＦ(１５ml)溶液にブチルリチウム(３．３ml、ヘキサン中２．５Ｍ)を−７８℃で添加し、その暗赤色の溶液を−７８℃で１．５時間攪拌した。[３−(メトキシメチルアミノ)−３−オキソプロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル(１．０９ｇ)のＴＨＦ(５ml)溶液をゆっくり添加した。アミドの３／４の添加後、更なるブチルリチウム(０．７ml)を添加し、その混合物を、アミド添加が完了する前１０分間攪拌した。混合物を２０時間で２０℃に温め、次いで塩化アンモニウム水溶液でクエンチした。混合物をジエチルエーテルで抽出し、有機層を乾燥し(硫酸マグネシウム)、蒸発させ、クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤として石油／ジエチルエーテル)により精製すると、副題化合物が無色の油状物(７２５mg)として得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.58 (1H, d), 7.68 (1H, d), 5.07 (1H, s), 3.61 - 3.48 (2H, m), 3.24 - 3.13 (2H, m), 1.48 (7H, s).
【００９４】
ｂ)[３−ヒドロキシ−３−(５−イソチアゾリル)プロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
上記のステップ(ａ)の生成物を使用して、実施例５ステップ(ｃ)の方法により副題化合物を製造した。
MS APCI +ve m/z 259 ([M+H]+).
【００９５】
ｃ)[３−[[３−シアノ−６−(トリフルオロメチル)−２−ピリジニル]オキシ]−３−(５−イソチアゾリル)プロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
上記のステップ(ｂ)の生成物を使用して、実施例１ステップ(ａ)の方法により、ただし反応時間は１時間にして、副題化合物を製造した。
MS APCI +ve m/z 429 ([M+H]+).
【００９６】
ｄ)エタン二酸２−[[３−アミノ−１−(５−イソチアゾリル)プロピル]チオ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
実施例５ステップ(ｇ)の方法を使用して上記のステップ(ｃ)の生成物から表題化合物を製造し、クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてジクロロメタン／メタノール中７Ｍアンモニア)により粗アミンを精製し、続いてイソプロパノール−メタノール中でその塩を製造した。
融点２２３〜２２５℃；
MS APCI +ve m/z 329 ([M+H]+).
1H NMR 300MHz (d6-DMSO)  8.64 (1H, d), 8.53 (1H, d), 7.75 (1H, d), 7.51 (1H, d), 6.66 (1H, dd), 3.96 (3H, s), 2.86 (2H, t), 2.45 - 2.21 (2H, m).
【００９７】
実施例１１
(Ｅ)−ブテン二酸２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(３−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−３−イソオキサゾールカルボキサミド
ジクロロメタン(３５０ml)中の、３−イソオキサゾールカルボン酸(９．６ｇ)(Micetich,R.G.,Can.J.Chem.,1970,48,467-476)、４−ジメチルアミノピリジン(１１．７ｇ)、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩(９．１ｇ)、Ｎ−メチルモルホリン(９．６ｇ)及び１−(３−ジエチルアミノプロピル)−３−エチルカルボジイミド塩酸塩(１７．１ｇ)の混合物を２０℃で一晩中攪拌した。次いで、反応混合物を、２Ｍ塩酸(２００ml)、飽和重炭酸ナトリウム(２００ml)、塩水で洗浄し、乾燥し(硫酸マグネシウム)、蒸発させると、副題化合物(８．５ｇ)が暗橙色の油状物として得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.03 (1H, t), 7.42 (1H, t), 6.87 (1H, dd), 3.72 (3H, s), 3.34 (3H, s).
【００９８】
ｂ)３−クロロ−(３−イソオキサゾリル)−１−プロパノン
上記のステップ(ａ)の生成物を使用して、実施例５ステップ(ｂ)の方法により副題化合物を製造した。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.51 (1H, d), 6.79 (1H, d), 3.92 (2H, t), 3.57 (2H, t).
【００９９】
ｃ)(α３−Ｒ)−α−(２−クロロエチル)−３−イソオキサゾールメタノール
上記のステップ(ｂ)の生成物を使用して、実施例５ステップ(ｃ)の方法により副題化合物を製造した。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.39 (1H, s), 6.41 (1H, s), 5.21-5.16 (1H, m), 3.84-3.78 (1H, m), 3.72-3.66 (1H, m), 2.31-2.25 (2H, m).
【０１００】
ｄ)(α３−Ｒ)−(２−アジドエチル)−３−イソオキサゾールメタノール
上記のステップ(ｃ)の生成物を使用して、実施例５ステップ(ｄ)の方法により副題化合物を製造した。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.39 (1H, s), 6.41 (1H, s), 5.07 (1H, bd s), 3.62-3.48 (2H, m), 2.12-2.07 (2H, m).
【０１０１】
ｅ)[(３Ｓ)−３−ヒドロキシ−３−(３−イソオキサゾリル)プロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル、及び[(３Ｒ)−３−ヒドロキシ−３−(３−イソオキサゾリル)プロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
上記のステップ(ｄ)の生成物を使用して、実施例５ステップ(ｅ)の方法により副題化合物を製造した。キラルＨＰＬＣ(Chiralpak(登録商標) AD、溶出剤としてイソヘキサン／エタノール)を用いて精製することにより、(３Ｓ)副題化合物(１７５mg)が無色の油状物として得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.35 (1H, s), 6.46 (1H, s), 4.99-4.91 (1H, m), 4.88 (1H, bd s), 4.20 (1H, s), 3.68-3.56 (1H, m), 3.23-3.16 (1H, m), 2.00-1.90 (2H, m), 1.45 (9H, s).
更なる溶出により、(３Ｒ)副題化合物が無色の油状物(１．２５ｇ)として得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.35 (1H, s), 6.46 (1H, s), 4.99-4.91 (1H, m), 4.88 (1H, bd s), 4.20 (1H, s), 3.68-3.56 (1H, m), 3.23-3.16 (1H, m), 2.00-1.90 (2H, m), 1.45 (9H, s).
【０１０２】
ｆ)[(３Ｒ)−[[３−シアノ−６−(トリフルオロメチル)−２−ピリジニル]オキシ]−３−(３−イソオキサゾリル)プロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
上記のステップ(ｅ)の(３Ｒ)生成物を使用して、実施例５ステップ(ｆ)の方法により副題化合物を製造した。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.40 (1H, s), 8.11 (1H, d), 7.40 (1H, d), 6.51-6.47 (2H, m), 4.86 (1H, bd s), 3.39-3.31 (2H, m), 2.48-2.26 (2H, m), 1.40 (9H, s).
MS APCI +ve m/z 313 ([M+H][-Boc]+).
【０１０３】
ｇ)(Ｅ)−ブテン二酸２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(３−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ジオキサン(９ml)中４Ｍ塩化水素を、ステップ(ｆ)からの生成物(１．０ｇ)のジオキサン溶液に添加し、６時間攪拌した。水性の炭酸カリウムを添加し、その混合物を酢酸エチル(３回)及びジクロロメタンで抽出した。有機抽出物を乾燥し(硫酸ナトリウム)、次いで蒸発させた。残渣をアセトニトリル(１０ml)に溶解し、(Ｅ)−ブテン二酸のメタノール溶液の添加により(Ｅ)−ブテン二酸塩を製造すると、表題化合物が白色固体(８５０mg)として得られた。
融点１６０〜１６１℃；
1H NMR 300MHz (d6-DMSO)  8.93 (1H, d), 8.63 (1H, d), 7.72 (1H, d), 6.66 (1H, d), 6.40 (2H, s), 6.39-6.34 (1H, m), 3.07-2.92 (2H, m), 2.46-2.32 (2H, m).
MS APCI +ve m/z 313 ([M+H]+).
【０１０４】
実施例１２
２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(２−チアゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル塩酸塩
ａ)[３−オキソ−３−(２−チアゾリル)プロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
イソチアゾールの代わりに２−ブロモチアゾールを使用して、実施例１０ステップ(ａ)の方法により副題化合物を製造した。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.01 (1H, m), 7.69 (1H, m), 5.05 (1H, br s), 3.57 (2H, q), 3.39 (2H, t), 1.46 (9H, s).
【０１０５】
ｂ)[(３Ｒ)−３−ヒドロキシ−３−(２−チアゾリル)プロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
上記のステップ(ａ)の生成物を使用して、実施例５ステップ(ｃ)の方法により副題化合物を製造した。
MS APCI +ve m/z 259 ([M+H]+).
1H NMR 300MHz (CDCl3)  7.72 (1H, d), 7.29 (1H, d), 5.06-5.02 (1H, m), 4.92 (1H, bd s), 4.71 (1H, s), 3.70-3.58 (1H, m), 3.25-3.16 (1H, m), 2.24-2.216 (1H, m), 1.93-1.87 (1H, m), 1.44 (9H, s).
【０１０６】
ｃ)[(３Ｒ)−[[３−シアノ−６−(トリフルオロメチル)−２−ピリジニル]オキシ]−３−(２−チアゾリル)プロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
上記のステップ(ｂ)の生成物を使用して、実施例１ステップ(ａ)の方法により副題化合物を製造した。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.11 (1H, d), 7.79 (1H, d), 7.41 (1H, d), 7.34 (1H, d), 6.62 (1H, dd), 4.86 (1H, bd s), 3.43-3.25 (2H, m), 2.55-2.35 (2H, m), 1.39 (9H, s).
MS APCI+ve m/z 429 ([M+H]+).
【０１０７】
ｄ)２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(２−チアゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル塩酸塩
ステップ(ｃ)からの生成物(１３５mg)のジオキサン溶液にジオキサン(１ml)中４Ｍ塩化水素を添加し、その混合物を１８時間攪拌した。白色沈殿を採取し、酢酸エチルで洗浄し、真空乾燥すると、表題化合物が白色の吸湿性固体(１０５mg)として得られた。
融点１５１〜１５３℃；
MS APCI +ve m/z 329 ([M+H]+).
1H NMR 300MHz (d6-DMSO)  8.67 (1H, d), 8.16 (3H, bd s), 7.85 (1H, d), 7.80 (1H, d), 7.77 (1H, d), 6.56-6.51 (1H, m), 3.11-3.00 (2H, m), 2.63-2.43 (2H, m).
【０１０８】
実施例１３
エタン二酸(Ｒ)−２−(３−ジメチルアミノ−１−イソオキサゾール−５−イル−プロポキシ)−６−トリフルオロメチル−ニコチノニトリル
１０％トリフルオロ酢酸中、実施例５ステップ(ｆ)からの生成物(５０mg)のジクロロメタン(１０ml)溶液を２０分間攪拌し、次いで濃縮し、残渣を炭酸水素ナトリウム希薄水溶液(８ml)で処理した。酢酸エチル(３×１０ml)への抽出と乾燥(Ｎａ２ＳＯ４)により、淡黄色の油状物が濃縮で得られた。この物質をアセトニトリル(２ml)に溶解し、これに、周辺温度で過剰の３７％ｗ／ｗ水性ホルムアルデヒド(１５０μｌ)を急速に撹拌しながら添加した。５分後、シアノボロ水素化ナトリウム(１６mg)を添加し、更なる２０分間の撹拌の後、酢酸の滴下により混合物をｐＨ約５まで酸性化した。１６時間撹拌した後、溶液を真空で濃縮し、続いて０．５Ｍ水酸化ナトリウム溶液で処理し、ジクロロメタン(３×１０ml)に、次いで酢酸エチル(１×１０ml)に抽出した。合わせた有機抽出物を飽和塩水(１×１５ml)で洗浄し、乾燥し(Ｎａ２ＳＯ４)、濃縮した。無色の残渣をジクロロメタン(３ml)に溶解させ、激しい窒素ガス攪拌をしながら、周辺温度で２時間マクロポーラスポリスチレン樹脂結合トルエンスルホン酸(約３６０mg、１．４ｍｍｏｌ／ｇのローディング))で処理した。メタノール(２×３ml)による洗浄、メタノール中７Ｍアンモニア(３×２ml、５分間攪拌)による遊離、続いての濃縮により、表題化合物(３１mg)の遊離塩基が得られた。
MS APCI +ve m/z 341 ([M+H]+).
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.21 (1H, d), 8.09 (1H, d), 7.39 1H, (d), 6.50 (1H, t),  6.37 (1H, d), 2.49-2.21 (4H, m), 2.21 (6H, s).
【０１０９】
メタノール(０．５ml)中のエタン二酸(８．１mg)にアセトニトリル(１ml)中の遊離塩基(３１mg)を添加した。濃縮及び一晩の真空乾燥により、エタン二酸塩(３８mg)が白色のゴム状物質として得られた。
MS APCI +ve m/z 341 ([M+1]+).
1H NMR 300MHz (MeOH-d4)  8.40 (2H, m), 7.61 (1H, d), 6.56 (2H, s), 3.31-3.42 (3H, m), 2.96 (6H, s), 2.68-2.96 (3H, m).
【０１１０】
実施例１４
(Ｅ)−ブテン二酸６−アミノ−４−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)プロピル]チオ]−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)２−クロロ−５−(４，５−ジヒドロ−４，４−ジメチル−２−オキサゾリル)−ピリジン
２−クロロピリジン−５−カルボン酸(１００ｇ)の塩化チオニル(３７０ml)懸濁液を８０℃で４時間加熱した。反応混合液を真空蒸発させ、残渣をトルエンと共沸させ、次いでジクロロメタン(３００ml)に溶解させた。その溶液を、２−アミノ−２−メチルプロパノール(１１８．８ｇ)のジクロロメタン(３００ml)溶液に０℃で１時間かけて滴下し、次いで２０℃で１６時間攪拌した。水(５００ml)を添加し、その混合液をジクロロメタン(５×５００ml)で抽出した。抽出の間に形成された固体の懸濁液は、必要な中間体アミドであり、大量の抽出を必要とする。有機層を乾燥し(ＭｇＳＯ４)、蒸発させると、中間体アミド(１２５．５ｇ)が残った。この物質を０℃でジクロロメタン(２００ml)中に懸濁し、塩化チオニル(１００ml)を滴下して、１時間攪拌した。多量の沈殿が生成し、更なるジクロロメタン(３００ml)を添加し、反応液を更に１時間攪拌した。溶媒を真空で除去すると、生成物が塩酸塩(１２０ｇ)として得られた。
1H NMR 300MHz (CD3OD)  9.03 (1H, t), 8.42 (1H, dd), 7.80(1H, dd), 4.96 (2H, s), 1.68 (6H, s).
【０１１１】
その固体を水(８００ml)の中に懸濁し、気体の発生が止まるまで、固形炭酸水素ナトリウム(約７０ｇ)で少しずつ処理した。この混合液をジクロロメタン(２×５００ml)で抽出し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、蒸発させると、副題化合物(９９．５ｇ)が得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.90 (1H, dd), 8.17 (1H, dd), 7.37 (1H, dd), 4.14 (2H, s), 1.39 (6H, s).
【０１１２】
ｂ)５−(４，５−ジヒドロ−４，４−ジメチル−２−オキサゾリル)−２−メトキシ−ピリジン
ステップ(ａ)からの生成物(９９．５ｇ)のメタノール(５００ml)溶液をナトリウムメトキシド(メタノール中２５重量％溶液０．６１mol)で処理し、１２時間還流下で加熱した。溶媒を減圧下で除去し、残渣を水(２００ml)に溶解し、ジクロロメタン(２×３００ml)で抽出した。抽出物を乾燥し(ＭｇＳＯ４)、蒸発乾固すると、副題化合物が橙色の油状物(８５ｇ)として得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3) 8.68 (1H, dd), 8.10 (1H, dd), 6.75 (1H, dd), 4.09 (2H, s), 3.98 (3H, s), 1.37 (6H, s).
【０１１３】
ｃ)５−(４，５−ジヒドロ−４，４−ジメチル−２−オキサゾリル)−２−メトキシ−４−(メチルチオ)−ピリジン
ＴＨＦ中の２，２，６，６−テトラメチルピペリジン(５１．２２ｇ)に、窒素下、０℃でｎ−ＢｕＬｉ(ヘキサン中１．６Ｍ溶液２２７ml)を滴下し、１５分間攪拌した。反応混合物を−７８℃に冷却し、ＴＨＦ(５０ml)中の上記のステップ(ｂ)からの生成物(４３．９７ｇ)を滴下した。冷却浴を取り外し、反応温度が−２０℃まで温め、その温度で３０分間保持した。次いで、それを−７８℃に冷却し、ジメチルジスルフィド(８０ml)を滴下した。この添加の間に、反応混合物の温度は−３０℃まで上昇した。冷却浴を取り外し、反応物を１２時間攪拌して室温とした。生成した赤色の溶液を水でクエンチし、ロータリーエバポレーターで約６００mlに濃縮した。水(５００ml)を添加し、混合物を酢酸エチル(２×６００ml)で抽出した。合わせた有機物をクエン酸(１Ｍ水溶液５００ml)で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、蒸発させると、副題化合物が淡黄色の固体(５８．５ｇ)として得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3) 8.50 (1H, s), 6.52 (1H, s), 4.04 (2H, s), 3.97 (3H, s), 2.40 (3H, s), 1.40 (6H, s).
【０１１４】
ｄ)６−メトキシ−４−(メチルチオ)−３−ピリジンカルボニトリル
上記ステップ(ｃ)からのオキサゾリン(４５ｇ)の攪拌したピリジン(３５０ml)溶液をオキシ塩化リン(６８ml)で処理し、混合物を４．５時間還流下で加熱した。暗褐色の溶液を室温まで冷却し、次いで、氷(１ｋｇ)の上に慎重に注いだ。生成した懸濁液を濾過し、固体を水(３００ml)、２Ｍ  ＨＣｌ(１００ml)、そして再び水(３００ml)で洗浄した。湿った生成物をジクロロメタン(６００ml)に溶解し、溶液を乾燥した(ＭｇＳＯ４)。活性炭(１５ｇ)を添加し、その懸濁液を濾過した。濾液の濃縮及び固体の４０−６０石油エーテルでの磨砕により、副題化合物が非常に淡いピンク色の固体(２６ｇ)として得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3) 8.31 (1H, s), 6.51 (1H, s), 3.98 (3H, s), 2.52 (3H, s).
【０１１５】
ｅ)６−メトキシ−４−(メチルスルホニル)−３−ピリジンカルボニトリル
上記ステップ(ｄ)からの生成物(１３ｇ)のジクロロメタン(１５０ml)溶液を、０℃に冷却し、１０分間かけて少しずつＭＣＰＢＡ(５７％までの純度の２１．７４ｇ)で処理した。混合物を２０℃までゆっくり温めた。８時間後、ＬＣ／ＭＳは、スルホキシド／スルホン生成物(７２：２８)の混合物を示した。更なるＭＣＰＢＡを添加し(７．２ｇ)、さらに４時間後、ＬＣ／ＭＳは生成物の５０：５０混合物を示した。さらにＭＣＰＢＡ(１２ｇ)を添加し、反応が完結する前にさらに２時間、撹拌を継続した。反応物を０℃に冷却し、過剰のメタ重亜硫酸ナトリウム水溶液で処理した。有機層を、飽和炭酸水素ナトリウム溶液(３×２００ml)で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、蒸発させると、副題化合物が白色の固体(１１．２ｇ)として得られた。
【０１１６】
ｆ)１，６−ジヒドロ−４−(メチルスルホニル)−６−オキソ−３−ピリジンカルボニトリル
ステップ(ｅ)からの６−メトキシ−４−(メチルスルホニル)−３−ピリジンカルボニトリル(５．１ｇ)をアセトニトリル(２００ml)に溶解し、ヨウ化ナトリウム(７．２８ｇ)と塩化トリメチルシリル(５．２８ｇ)を添加した。反応物を４８時間還流下で加熱し、次いで冷却し、溶媒を真空で蒸発させた。残渣を水(１２０ml)と酢酸エチル(１２０ml)の間に分配した。振盪後、その層を濾過し、固体を採取し、６０℃の真空炉中で乾燥すると、副題化合物が灰白色の固体(３．６ｇ)として得られた。
1H NMR 400MHz (d6-DMSO)  13.15 (1H, bs), 8.58 (1H, s), 6.89 (1H, s), 3.39 (3H, s).
【０１１７】
ｇ)トリフルオロメタンスルホン酸５−シアノ−４−(メチルスルホニル)−２−ピリジニル
ステップ(ｆ)からの生成物(１．８３ｇ)とトリエチルアミン(２．７ml)のアセトニトリル(５０ml)溶液にトリフルオロメタンスルホン酸無水物(３．１ml)を−２０℃で添加し、０℃で３時間攪拌した。水を添加し、その混合物をジクロロメタンで抽出した。有機抽出物を乾燥し(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させ、クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてイソヘキサン−ジクロロメタン)により精製すると、副題化合物(２．６０ｇ)が得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.94 (1H, s), 7.91 (1H, s), 3.37 (3H, s).
【０１１８】
ｈ)６−アミノ−４−(メチルスルホニル)−３−ピリジンカルボニトリル
上記ステップ(ｇ)からの生成物(１６４mg)のＴＨＦ(２ml)溶液にジオキサン(２ml)中０．５Ｍアンモニアを添加し、混合物を１６時間攪拌した。溶媒を真空で除去し、残渣をクロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてイソヘキサン／酢酸エチル)により精製すると、副題化合物(３３mg)が得られた。
1H NMR 300MHz (d6-DMSO) 8.57 (1H, s), 7.78 (2H, s), 7.05 (1H, s), 3.35 (3H, s).
【０１１９】
ｉ)[(３Ｒ)−３−[(２−アミノ−５−シアノ−２−ピリジニル)チオ]−３−(５−イソオキサゾリル)プロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
実施例６ステップ(ｄ)からの生成物(２８６mg)をメタノール(２ml)中７Ｍアンモニアに溶解し、窒素下室温で４時間攪拌し、次いで、溶媒を蒸発させた。残渣をアセトニトリル(３ml)に溶解し、炭酸セシウム(４１０mg)と上記ステップ(ｈ)からの生成物(１７８mg)の混合物を０℃で添加した。０℃で１時間、次いで２０℃で１時間、攪拌した後、水性塩化アンモニウムと水を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した(３回)。有機層を水で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、蒸発させ、クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてジエチルエーテル)により精製すると、副題化合物が白色の固体(１３２mg)として得られた。
MS APCI +ve m/z 376 ([M+H]+).
【０１２０】
ｊ)(Ｅ)−ブテン二酸６−アミノ−４−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)プロピル]チオ]−３−ピリジンカルボニトリル
メタノール(０．５ml)中の上記ステップ(ｉ)からの生成物(１３２mg)とジオキサン(１ml)中４Ｍ  ＨＣｌを２時間攪拌した。溶媒を真空で除去し、残渣を逆相ＨＰＬＣにより精製し、(Ｅ)−ブテン二酸塩をメタノール−酢酸エチル中で製造すると、表題化合物(７５mg)が得られた。
融点１６０〜１６３℃。
MS APCI +ve m/z 276 ([M+H]+).
1H NMR 400MHz (DMSO-d6)  8.57 (1H, d), 8.23 (1H, s), 7.23 (2H, s), 6.62 (2H, s), 6.45 (2H, s), 5.19 (1H, d), 2.87 (2H, t), 2.43 - 2.25 (2H, m).
【０１２１】
実施例１５
(Ｅ)−ブテン二酸γ−[(５−クロロ−２−メトキシ−４−ピリジニル)チオ]−(γ５Ｒ)−５−イソオキサゾールプロパンアミン
ａ)２，５−ジクロロ−４−(メチルチオ)−ピリジン
ＴＨＦ(２０ml)中ＤＭＦ(３．１ml)に、窒素下、０℃で、ｎ−ＢｕＬｉ(ヘキサン中２．５Ｍ溶液８．９ml)を滴下し、反応混合物を１５分間攪拌した。反応混合物を、２，５−ジクロロピリジン(３ｇ)のＴＨＦ(２０ml)溶液に−７８℃で滴下した。２時間後、ジメチルジスルフィド(２．４ml)を添加し、反応温度が０℃まで温めた。水を添加し、その混合物を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機物を乾燥し(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させると、副題化合物が黄色の固体(３ｇ)として得られた。
1H NMR 400MHz (CDCl3)  8.18 (1H, s), 7.02 (1H, s), 2.50 (3H, s).
【０１２２】
ｂ)５−クロロ−２−メトキシ−４−(メチルチオ)−ピリジン
メタノール(２０ml)中のステップ(ａ)の生成物(１．４ｇ)をナトリウムメトキシド(メタノール中２５重量％溶液８．２ml)で処理し、４８時間還流下で加熱した。溶媒を減圧下で除去し、残渣を水(５０ml)とジクロロメタン(５０ml)の間で分配した。有機相を乾燥し(ＭｇＳＯ４)、蒸発乾固させた。クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてジクロロメタン)による精製により、副題化合物(３４５mg)が白色の固体として得られた。
MS APCI +ve m/z 189 ([M+H]+).
【０１２３】
ｃ)５−クロロ−２−メトキシ−４−(メチルスルホニル)ピリジン
ステップ(ｂ)からの生成物を使用して、実施例４ステップ(ｂ)の方法により副題化合物を製造した。
MS APCI +ve m/z 222/224 ([M+H]+).
【０１２４】
ｄ)[(３Ｒ)−３−[(５−クロロ−２−メトキシ−４−ピリジニル)チオ]−３−(５−イソオキサゾリル)プロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
実施例６ステップ(ｅ)の方法を使用して、ステップ(ｃ)の生成物と実施例６ステップ(ｄ)の生成物から副題化合物を製造した。
MS APCI +ve m/z 400/2 ([M+H]+).
【０１２５】
ｅ)(Ｅ)−ブテン二酸γ−[(５−クロロ−２−メトキシ−４−ピリジニル)チオ]−(γ５Ｒ)−５−イソオキサゾールプロパンアミン
上記ステップ(ｄ)からの生成物を使用し、かつメタノール／アセトニトリル中で(Ｅ)−ブテン二酸塩を製造して、実施例５ステップ(ｇ)の方法により表題化合物を製造した。
融点１４２〜１４３℃；
MS APCI +ve m/z 300/2 ([M+H]+).
1H NMR 400MHz (DMSO-d6) 8.56 (1H, d), 8.16 (1H, s), 6.92 (1H, s), 6.60 (1H, d), 6.45 (2H, s), 5.33 (1H, t), 3.87 (3H, s), 2.89 - 2.76 (2H, m), 2.35 - 2.21 (2H, m).
【０１２６】
実施例１６
(Ｅ)−ブテン二酸４−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)プロピル]チオ]−６−メトキシ−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)[(３Ｒ)−３−[(５−シアノ−２−メトキシ−４−ピリジニル)チオ]−３−(５−イソオキサゾリル)プロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
実施例６ステップ(ｅ)の方法を使用して、実施例１４ステップ(ｅ)の生成物と実施例６ステップ(ｄ)の生成物から副題化合物を製造した。
MS APCI +ve m/z 391 ([M+H]+).
【０１２７】
ｂ)(Ｅ)−ブテン二酸４−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)プロピル]チオ]−６−メトキシ−３−ピリジンカルボニトリル
上記ステップ(ａ)からの生成物を使用し、かつメタノール／アセトニトリル中で(Ｅ)−ブテン二酸塩を製造して、実施例５ステップ(ｇ)の方法により、表題化合物を製造した。
融点１５２〜１５３℃；
MS APCI +ve m/z 291 ([M+H]+).
1H NMR 400MHz (DMSO-d6) 8.61 (1H, s), 8.57 (1H, d), 7.07 (1H, s), 6.62 (1H, d), 6.44 (2H, s), 5.49 (1H, t), 3.93 (3H, s), 2.90 - 2.81 (2H, m), 2.43 - 2.26 (2H, m).
【０１２８】
実施例１７
(Ｅ)−ブテン二酸４−[[(１Ｒ)−３−[(２−ヒドロキシエチル)アミノ]−１−(５−イソオキサゾリル)プロピル]チオ]−６−メトキシ−３−ピリジンカルボニトリル
実施例１６の生成物の遊離塩基(５３mg)、トリエチルアミン(２０μｌ)及びヨードエタノール(２５μｌ)のＴＨＦ(２ml)溶液を８時間還流した。溶媒を真空で除去し、残渣をクロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてジクロロメタン／メタノール中７Ｍアンモニア(１４：１))により精製し、(Ｅ)−ブテン二酸塩を製造すると、表題化合物が白色の固体(１１mg)として得られた。
MS APCI +ve m/z 335 ([M+H]+).
1H NMR 400MHz (DMSO-d6)  8.60 (1H, d), 8.56 (1H, d), 7.05 (1H, d), 6.61 (1H, d), 6.50 (2H, s), 5.42 (1H, t), 3.95 (3H, s), 3.53 (2H, t), 2.86 - 2.75 (4H, m), 2.39 - 2.24 (2H, m).
【０１２９】
実施例１８
(Ｅ)−ブテン二酸２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(３−クロロ−５−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−３−クロロ−５−イソオキサゾールカルボキサミド
実施例５ステップ(ａ)の方法により、３−クロロ−５−イソオキサゾールカルボン酸から副題化合物を製造した。
1H NMR 300MHz (CDCl3) 6.86 (1H, d), 3.82 (3H, s), 3.38 (3H, s).
【０１３０】
ｂ)３−クロロ−１−(３−クロロ−５−イソオキサゾリル)−１−プロパノン
実施例５ステップ(ｂ)の方法によりステップ(ａ)の生成物から副題化合物を製造した。
1H NMR 300MHz (CDCl3) 6.98 (1H, d), 3.87 (2H, t), 3.33 (2H, t).
【０１３１】
ｃ)(α５−Ｒ)α−(２−クロロエチル)−３−クロロ−５−イソオキサゾールメタノール
実施例５ステップ(ｃ)の方法によりステップ(ｂ)の生成物から副題化合物を製造した。
1H NMR 300MHz (CDCl3) 6.30 (1H, d), 5.14 (2H, t), 3.84-3.76 (1H, m), 3.72-3.63 (1H, m) 2.78 (2H, dq).
【０１３２】
ｄ)[(３Ｒ)−３−ヒドロキシ−３−(３−クロロ−５−イソオキサゾリル)プロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
中間体精製はしないで、実施例５ステップ(ｄ)及び(ｅ)の方法により、ステップ(ｃ)の生成物から副題化合物を製造した。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  6.30 (1H, s), 4.89 - 4.78 (2H, m), 4.69 - 4.64 (1H, m), 3.63 - 3.48 (1H, m), 3.28 - 3.15 (1H, m), 2.08 - 1.82 (2H, m), 1.45 (9H, s).
【０１３３】
ｅ)[(３Ｒ)−３−[[３−シアノ−６−(トリフルオロメチル)−２−ピリジニル]オキシ]−３−(３−クロロ−５−イソオキサゾリル)プロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
実施例５ステップ(ｆ)の方法によりステップ(ｄ)の生成物から副題化合物を製造した。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.13 (1H, d), 7.43 (1H, d), 6.42 (1H, s), 6.36 (1H, dd), 4.72 (1H, s), 3.41 - 3.27 (2H, m), 2.48  2.27 (2H, m), 1.39 (9H, s).
【０１３４】
ｆ)(Ｅ)−ブテン二酸２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(３−クロロ−５−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ステップ(ｅ)からの生成物を使用し、メタノール／アセトニトリル中で(Ｅ)−ブテン二酸塩を製造して、実施例５ステップ(ｇ)の方法により表題化合物を製造した。
融点１５１〜１５２℃；
MS APCI +ve m/z 347/9 ([M+H]+).
1H NMR 300MHz (DMSO-d6)  8.65 (1H, d), 7.75 (1H, d), 6.97 (1H, s), 6.42 (2H, s), 6.38 - 6.32 (1H, m), 3.00 (2H, t), 2.47 - 2.29 (2H, m).
【０１３５】
実施例１９
(Ｅ)−ブテン二酸２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(３−クロロ−５−イソオキサゾリル)プロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)(α５−Ｓ)α−(２−クロロエチル)−３−クロロ−５−イソオキサゾールメタノール
実施例６ステップ(ａ)の方法により、実施例１８ステップ(ｂ)の生成物から副題化合物を製造した。
1H NMR 300MHz (CDCl3) 6.30 (1H, d), 5.14 (2H, t), 3.84-3.76 (1H, m), 3.72-3.63 (1H, m) 2.78 (2H, dq).
【０１３６】
ｂ)[(３Ｓ)−３−ヒドロキシ−３−(３−クロロ−５−イソオキサゾリル)プロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
実施例５ステップ(ｄ)と(ｅ)の方法により、ステップ(ａ)の生成物から中間体精製なしで副題化合物を製造した。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  6.30 (1H, s), 4.89 - 4.78 (2H, m), 4.69 - 4.64 (1H, m), 3.63 - 3.48 (1H, m), 3.28 - 3.15 (1H, m), 2.08 - 1.82 (2H, m), 1.45 (9H, s).
【０１３７】
ｃ)[(３Ｒ)−３−(ベンゾイルチオ)−３−(３−クロロ−５−イソオキサゾリル)プロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
実施例６ステップ(ｄ)の方法によりステップ(ｂ)の生成物から副題化合物を製造した。
MS APCI +ve m/z 397/9 ([M+H]+).
【０１３８】
ｄ)[(３Ｒ)−３−[(３−シアノ−６−メチル−２−ピリジニル)チオ]−３−(３−クロロ−５−イソオキサゾリル)プロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
実施例６ステップ(ｅ)の方法により、ステップ(ｃ)の生成物と２−クロロ−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリルから副題化合物を製造した。
MS APCI +ve m/z 408/10 ([M+H]+).
【０１３９】
ｅ)(Ｅ)−ブテン二酸２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(３−クロロ−５−イソオキサゾリル)プロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル
上記ステップ(ｄ)からの生成物を使用し、メタノール／アセトニトリル中での(Ｅ)−ブテン二酸塩を製造して、実施例５ステップ(ｇ)の方法により表題化合物を製造した。
融点１８６〜１８７℃；
MS APCI +ve m/z 309/11 ([M+H]+).
1H NMR 400MHz (DMSO-d6)  8.14 (1H, d), 7.25 (1H, d), 6.91 (1H, s), 6.39 (2H, s), 5.51 (1H, t), 2.90 - 2.81 (2H, m), 2.55 (3H, s), 2.42 - 2.25 (2H, m).
【０１４０】
実施例２０
(Ｅ)−ブテン二酸２−[３−アミノ−１−(３−メチル−４−イソオキサゾリル)プロポキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)Ｎ−メトキシ−Ｎ，３−ジメチル−４−イソオキサゾールカルボキサミド
実施例５ステップ(ａ)の方法により、３−メチル−４−イソオキサゾールカルボン酸から副題化合物を製造した。
MS APCI +ve m/z 171 ([M+H]+).
【０１４１】
ｂ)α−(２−クロロエチル)−３−メチル−４−イソオキサゾールメタノール
実施例５ステップ(ｂ)と(ｃ)の方法により、ステップ(ａ)の生成物から副題化合物を製造した。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.28 (1H, d), 4.95 (1H, dt), 3.79 (1H, ddd), 3.71 - 3.57 (1H, m), 2.39 (3H, s), 2.33 - 2.05 (2H, m), 2.02 (1H, d).
【０１４２】
ｃ)２−[[３−クロロ−１−(３−メチル−４−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
実施例５ステップ(ｆ)の方法により、ステップ(ｂ)の生成物と２−クロロ−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリルから副題化合物を製造した。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.45 (1H, s), 8.08 (1H, d), 7.39 (1H, d), 6.39 (1H, dd), 3.80 - 3.71 (1H, m), 3.60 (1H, ddd), 2.78 - 2.65 (1H, m), 2.46 (1H, s), 2.42 - 2.29 (3H, m).
【０１４３】
ｄ)２−[[３−ヨード−１−(３−メチル−４−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
実施例７ステップ(ｆ)の方法によりステップ(ｃ)の生成物から副題化合物を製造した。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.45 (1H, s), 8.08 (1H, d), 7.39 (1H, d), 6.39 (1H, dd), 3.35 - 3.17 (2H, m), , 2.71 (1H, quintet), 2.46 (1H, s), 2.48 - 2.37 (3H, m).
【０１４４】
ｅ)(Ｅ)−ブテン二酸２−[３−アミノ−１−(３−メチル−４−イソオキサゾリル)プロポキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ステップ(ｄ)からの生成物(１７８mg)とアジ化ナトリウム(４２mg)のＤＭＳＯ(２ml)溶液を２０℃で２日間攪拌した。トリフェニルホスフィン(３９３mg)、水(１ml)及びＴＨＦ(１ml)を添加し、２日間攪拌した。水を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した(３回)。有機層を、水で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、蒸発させ、ＳＣＸイオン交換樹脂に通すことにより精製した。表題生成物の遊離塩基をアセトニトリル／メタノールに溶解させ、(Ｅ)−ブテン二酸(１当量)を添加し、生成物を採取し、乾燥すると、表題生成物が白色の固体(３６mg)として得られた。
MS APCI +ve m/z 327 ([M+H]+).
1H NMR 400MHz (DMSO-d6)  8.98 (1H, s), 8.59 (1H, d), 7.68 (1H, d), 6.36 (2H, s), 6.13 (1H, dd), 2.94 - 2.83 (2H, m), 2.45 - 2.17 (5H, m).
【０１４５】
実施例２１
エタン二酸２−[[３−アミノ−１−(５−イソチアゾリル)プロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)ベンゼンカルボチオ酸Ｓ−[３−[[(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノ]−１−(５−イソチアゾリル)プロピル]
実施例１０のステップ(ｂ)の生成物を使用して、実施例６ステップ(ｄ)の方法により副題化合物を製造した。
1H NMR 300MHz (CDCl3) 8.38 (1H, d), 7.95 (1H, d), 7.93 (1H, d), 7.61 (1H, t), 7.47 (2H, t), 7.23 (1H, d), 5.25 (1H, d), 4.92 - 4.85 (1H, m), 3.45 - 3.32 (1H, m), 3.25 - 3.12 (1H, m), 2.46 - 2.18 (2H, m), 1.47 (9H, s).
【０１４６】
ｂ)[３−[(３−シアノ−６−メチル−２−ピリジニル)チオ]−３−(５−イソチアゾリル)プロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
実施例６ステップ(ｅ)の方法を使用して、ステップ(ａ)の生成物と２−クロロ−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリルから副題化合物を製造した。
MS APCI +ve m/z 391 ([M+H]+).
【０１４７】
ｃ)エタン二酸２−[[３−アミノ−１−(５−イソチアゾリル)プロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル
ステップ(ｂ)からの生成物を使用し、メタノール／アセトニトリル中で塩を製造して、実施例５ステップ(ｇ)の方法により表題化合物を製造した。
融点１０３〜１０４℃；
MS APCI +ve m/z 291 ([M+H]+).
1H NMR 300MHz (DMSO-d6)  8.48 (1H, d), 8.14 (1H, d), 7.49 (1H, d), 7.26 (1H, d), 5.63 (1H, t), 3.03 - 2.84 (2H, m), 2.62 (3H, s), 2.54 - 2.40 (2H, m).
【０１４８】
実施例２２
エタン二酸２−[３−アミノ−１−(５−イソチアゾリル)プロポキシ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)[３−[(３−シアノ−６−メチル−２−ピリジニル)オキシ]−３−(５−イソチアゾリル)プロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
実施例１０ステップ(ｂ)の生成物と２−クロロ−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリルを使用して、実施例１ステップ(ａ)の方法により副題化合物を製造した。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.40 (1H, d), 7.79 (1H, d), 7.27 (1H, d), 6.88 (1H, d), 6.65 (1H, dd), 5.01 (1H, s), 3.46 - 3.21 (2H, m), 2.43 - 2.25 (2H, m), 2.54 (3H, s), 1.43 (9H, s).
【０１４９】
ｂ)エタン二酸２−[３−アミノ−１−(５−イソチアゾリル)プロポキシ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル
上記ステップ(ａ)からの生成物を使用し、メタノール／アセトニトリル中で塩を製造して、実施例５ステップ(ｇ)の方法により表題化合物を製造した。
融点１７５〜１７７℃；
MS APCI +ve m/z 275 ([M+H]+).
1H NMR 300MHz (DMSO-d6)  8.52 (1H, d), 8.19 (1H, d), 7.49 (1H, t), 7.12 (1H, d), 6.67 (1H, dd), 2.89 (2H, t), 2.46 - 2.24 (2H, m), 2.50 (3H, s).
【０１５０】
実施例２３
エタン二酸２−[３−アミノ−１−(３−イソチアゾリル)プロポキシ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−３−イソチアゾールカルボキサミド
３−イソチアゾールカルボン酸(１．２１ｇ)をジクロロメタン(１５０ml)に懸濁させ、４−ジメチルアミノピリジン(１．１４ｇ)、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩(９１２mg)、Ｎ−メチルモルホリン(９４６mg)及び１−(３−ジメチルアミノプロピル)−３−エチルカルボジイミド塩酸塩(１．７９ｇ)を添加し、得られた溶液を室温で３日間攪拌した。反応物をジクロロメタン(１００ml)で希釈し、２Ｍ塩酸水溶液(３×４０ml)、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(３×４０ml)及び水(２０ml)で洗浄した。有機相を乾燥し(ＭｇＳＯ４)、真空で蒸発させると、副題化合物(１．４０６ｇ)が無色の油状物として得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.68 (1H, d), 7.69 (1H, d), 3.81 (3H, s), 3.47 (3H, s).
【０１５１】
ｂ)１−(３−イソチアゾリル)−２−プロペン−１−オン
ステップ(ａ)からの生成物(１．４ｇ)を無水ＴＨＦ(５０ml)に溶解し、その溶液を０℃に冷却した。塩化ビニルマグネシウム(ＴＨＦ中１．６Ｍ)(７．６ml)を滴下し、反応物を一晩中攪拌し、その間にゆっくりと室温に到達させた。反応混合物を２Ｍ塩酸水溶液(５０ml)に滴下し、次いで酢酸エチル(３×６０ml)で抽出した。合わせた有機抽出物を水(３×２０ml)で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、真空で蒸発させることにより、副題化合物(９５０mg)が麦わら色の油状物として得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.68 (1H, d), 7.91 (1H, d), 7.63 (1H, q), 6.64 (1H, dd), 5.97 (1H, dd).
【０１５２】
ｃ)α−(２−クロロエチル)−３−イソチアゾールメタノール
ステップ(ｂ)からの生成物(９４５mg)をジクロロメタン(８０ml)に溶解し、ジエチルエーテル(２０ml)中１Ｍ  ＨＣｌを添加した。反応物を室温で２時間攪拌した。溶媒を真空で除去し、残渣をエタノール(５０ml)に溶解した。水素化ホウ素ナトリウム(２５７mg)を一度に添加し、反応物を室温で１時間攪拌した。水(５０ml)を添加し、ロータリーエバポレーターで体積を減らした。残った水相を酢酸エチル(３×１００ml)で抽出し、合わせた抽出物を水(５０ml)で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、真空で蒸発させた。残渣をクロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてヘキサン／酢酸エチル(１：１))により精製すると、副題化合物(３５５mg)が淡色の油状物として得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.68 (1H, d), 7.23 (1H, d), 5.17-5.10 (1H, m), 3.86-3.77 (1H, m), 3.70-3.62 (1H, m), 3.03 (1H, d), 2.38-2.19 (2H, m).
【０１５３】
ｄ)α−(２−アジドエチル)−３−イソチアゾールメタノール
ステップ(ｃ)からの生成物(３５０mg)をＤＭＳＯ(１０ml)に溶解し、アジ化ナトリウム(１９２mg)を添加した。反応物を６５℃に加熱し、１８時間攪拌した。次いで、それを冷却し、水(５０ml)を添加した。混合物を酢酸エチル(４×６０ml)で抽出し、合わせた抽出物を水(３×３０ml)で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、真空で蒸発させると、副題化合物(３２５mg)が油状物として得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.68 (1H, d), 7.23 (1H, d), 5.07-5.01 (1H, m), 3.62-3.43 (2H, m), 3.07 (1H, d), 2.22-1.98 (2H, m).
【０１５４】
ｅ)２−[３−アジド−１−(３−イソチアゾリル)プロポキシ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル
ステップ(ｄ)からの生成物(１５８mg)と２−クロロ−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル(１３１mg)をＤＭＦ(５ml)に溶解した。炭酸セシウム(８４１mg)を添加し、反応物を室温で一晩中攪拌した。水(６０ml)を添加し、その混合物を酢酸エチル(３×６０ml)で抽出した。合わせた有機抽出物を水(３×２５ml)で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、真空で蒸発させた。残渣をクロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてヘキサン／酢酸エチル(４：１))により精製すると、副題化合物(１７４mg)が淡黄色の油状物として得られた。
MS APCI +ve  m/z 301  ([M+H]+).
【０１５５】
ｆ)シュウ酸２−[３−アミノ−１−(３−イソチアゾリル)プロポキシ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル
ステップ(ｅ)からの生成物(１７２mg)をＴＨＦ(２０ml)に溶解し、トリフェニルホスフィン(２４０mg)を添加した。混合物を室温で１５分間攪拌し、次いで、水(５ml)を添加し、撹拌を２４時間続けた。溶媒を真空で除去し、残渣をクロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてジクロロメタン中５％のメタノール中７Ｎアンモニア)により精製した。生成物を酢酸エチルに溶解し、１当量のエタン二酸で処理した。沈殿したエタン二酸塩を濾取し、高真空下で乾燥すると、表題化合物(１１１mg、５２％)が、白色の固体として得られた。
MS APCI +ve  m/z 275  ([M+H]+).
1H NMR 300MHz (DMSO-d6)  9.07 (1H, d), 8.16 (1H, d), 7.38 (1H, d), 7.07 (1H, d), 6.42 (1H, t), 3.04-2.89 (2H, m), 2.40 (3H, s), 2.40-2.31 (2H, m).
【０１５６】
実施例２４
エタン二酸２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(５−メチル−３−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)Ｎ−メトキシ−Ｎ，５−ジメチル−３−イソオキサゾールカルボキサミド
５−メチル−３−イソオキサゾールカルボン酸(４．３ｇ)を実施例５ステップ(ａ)に記載した操作手順にかけると、副題生成物が油状物(４．８ｇ)として得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3) δ6.33 (1H, s), 3.79 (3H, s), 3.40 (3H, bs), 2.48 (3H, s).
【０１５７】
ｂ)３−クロロ−１−(５−メチル−３−イソオキサゾリル)−１−プロパノン
ステップ(ａ)の生成物(４．２５ｇ)を実施例５ステップ(ｂ)に記載した操作手順にかけると、副題生成物が油状物(３．３ｇ)として得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3) 6.40 (1H, s), 3.90 (2H, t), 3.52 (2H, t), 2.50 (3H, s).
【０１５８】
ｃ)(α３−Ｒ)−(２−クロロエチル)−５−メチル−３−イソオキサゾールメタノール
ステップ(ｂ)の生成物(３．３ｇ)を実施例５ステップ(ｃ)に記載した操作手順にかけると、副題生成物を油状物(１．７ｇ)として得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3) 6.01 (1H, s), 5.06 (1H, m) 3.84-3.64 (2H, m), 2.43 (3H, s), 2.3-2.2 (2H, m).
【０１５９】
ｄ)(α３−Ｒ)−α−(２−アジドエチル)−５−メチル−３−イソオキサゾールメタノール
ステップ(ｃ)の生成物(１．０５ｇ)を実施例５ステップ(ｄ)に記載した操作手順にかけると、副題生成物が油状物(１．０ｇ)として得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  6.01 (1H, s), 5.0-4.94 (1H, m), 3.62-3.45 (2H, m), 2.52 (1H, d), 2.43 (3H, s), 2.09-2.02 (2H, m).
【０１６０】
ｅ)２−[[(１Ｒ)−３−アジド−１−(５−メチル−３−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ステップ(ｄ)の生成物(０．１９ｇ)と２−クロロ−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル(０．２５ｇ)をＤＭＦ(５ml)に溶解し、水素化ナトリウム(０．０５ｇ、６０％油中分散液)で処理し、窒素雰囲気下、周辺温度で１時間攪拌した。反応物を飽和塩化アンモニウム溶液(２５ml)でクエンチし、酢酸エチル(３×２５ml)で抽出した。合わせた有機抽出物を、水、塩水で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、蒸発乾固すると、副題生成物が油状物(０．４ｇ)として得られた。
MS APCI +ve m/z 324 ([M-28]+).
【０１６１】
ｆ)エタン二酸２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(５−メチル−３−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ステップ(ｅ)の生成物(４００mg)を実施例２ステップ(ｄ)に記載した操作手順にかけると、副題生成物が白色の固体(１９mg)として得られた。
融点１６３〜１６５℃；
MS APCI +ve m/z 327 ([M+H]+).
1H NMR 400MHz (d6-DMSO)  8.64 (1H, d), 7.73 (1H, d), 6.38 (1H, s), 6.33-6.31 (1H, dd),  6.3 (2H, s),  2.97 (2H, m), 2.38 (3H, s), 2.35-2.27 (2H, m).
【０１６２】
実施例２５
エタン二酸４−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(３−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−メトキシ−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)４−[[(１Ｒ)−３−アジド−１−(３−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−メトキシ−３−ピリジンカルボニトリル
実施例１１ステップ(ｄ)からの生成物(０．３４ｇ)と実施例１４ステップ(ｅ)の生成物(０．６４ｇ)をＤＭＦ(５ml)に溶解し、炭酸セシウム(１．０ｇ)で処理し、窒素雰囲気下、周辺温度で１８時間攪拌した。反応物を２Ｍ塩酸(５０ml)でクエンチし、酢酸エチル(３×２５ml)で抽出した。合わせた有機抽出物を水、塩水で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、蒸発乾固すると、副題生成物が油状物(０．９ｇ)として得られた。
MS APCI +ve m/z 300 ([M]+).
【０１６３】
ｂ)エタン二酸４−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(３−イソオキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−メトキシ−３−ピリジンカルボニトリル
ステップ(ａ)からの生成物(０．９ｇ)を実施例２ステップ(ｄ)に記載した操作手順にかけると、表題生成物が白色の固体(０．４１ｇ)として得られた。
融点１７３〜１７４℃；
MS APCI +ve m/z 275 ([M+H]+).
1H NMR 400MHz (d6-DMSO)  9.0 (1H, d), 8.55 (1H, s), 6.73 (1H, d), 6.58 (1H, s), 6.4 (2H, s), 6.11-6.08 (1H, dd), 3.88 (3H, s), 2.92 (2H, t), 2.41-2.22 (2H, m).
【０１６４】
実施例２６
エタン二酸２−[[３−アミノ−１−(４−メチル−３−イソオキサゾリル)プロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)Ｎ−メトキシ−Ｎ，４−ジメチル−３−イソオキサゾールカルボキサミド
４−メチル−３−イソオキサゾールカルボン酸を使用して、実施例１１ステップ(ａ)の方法により副題化合物を製造した。
MS APCI +ve m/z 336 ([M-100+H]+).
1H NMR 400MHz (CDCl3) 8.22 (1H, s), 3.77 (3H, s), 3.39 (3H, s), 2.12 (3H, s).
【０１６５】
ｂ)３−クロロ−１−(４−メチル−３−イソオキサゾリル)−１−プロパノン
ステップ(ａ)からの生成物を使用して、実施例５ステップ(ｂ)の方法により副題化合物を製造した。
1H NMR 400MHz (CDCl3) 8.27 (1H, s), 3.91 (2H, t), 3.55 (2H, t), 2.25 (3H, s).
【０１６６】
ｃ)α−(２−クロロエチル)−４−メチル−３−イソオキサゾールメタノール
上記ステップ(ｂ)の生成物と触媒として(３ａＲ)−テトラヒドロ−１−メチル−３，３−ジフェニル−３Ｈ−ピロロ[１，２−ｃ][１，３，２]オキサザボロールを使用して、実施例５ステップ(ｃ)の方法により副題化合物を製造した。
1H NMR 400MHz (CDCl3)  8.14 (1H, s), 5.11 (1H, ddd), 3.83 (1H, ddd), 3.70 (1H, quintet), 2.42 (1H, d), 2.30 (2H, m), 2.10 (3H, s).
【０１６７】
ｄ)α−(２−アジドエチル)−４−メチル−３−イソオキサゾールメタノール
上記ステップ(ｃ)の生成物を使用して、実施例２ステップ(ａ)の方法により副題化合物を製造した。
1H NMR 400MHz (CDCl3)  8.14 (1H, d), 5.00 (1H, dt), 3.61 (1H, dt), 3.52 (1H, dt), 2.39 (1H, d), 2.12 (1H, m), 2.10 (3H, d).
【０１６８】
ｅ)エタン二酸２−[[３−アミノ−１−(４−メチル−３−イソオキサゾリル)プロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル
上記ステップ(ｄ)からの生成物を使用して、実施例２ステップ(ｂ)、実施例６(ｅ)及び実施例２ステップ(ｄ)の方法により表題化合物を製造した。生成物を逆相ＨＰＬＣにより精製し、エタン二酸塩を製造することにより、表題化合物(１０mg)が得られた。
融点１３２〜１３４℃；
MS APCI +ve m/z 289 ([M+H]+).
1H NMR 400MHz (CD3OD)  8.43 (1H, s), 7.95 (1H, d), 7.20 (1H, d), 5.54 (1H, t), 3.23-3.12 (2H, m), 2.62 (4H, m), 2.51 (1H, m), 2.05 (3H, s).
【０１６９】
実施例２７
エタン二酸２−[３−アミノ−１−(２−オキサゾリル)プロポキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)３−クロロ−１−(２−オキサゾリル)−１−プロパノン
オキサゾール(２．９３ｇ)のＴＨＦ(１５０ml)溶液に、−７０℃、窒素雰囲気下でｎ−ブチルリチウム(ヘキサン中２．５Ｍ溶液１７ml)を滴下し、この溶液を２０分間攪拌した。塩化亜鉛(ジエチルエーテル中１Ｍ溶液８４．９ml)を添加し、その溶液を４５分かけて０℃まで加温した。固体のヨウ化第一銅(８．０９ｇ)を添加し、１０分後に塩化３−クロロプロピオニル(８．３８ml)を添加した。１時間後、酢酸エチル及び塩化アンモニウム水溶液を添加した。有機層を分離し、塩化アンモニウム水溶液、水及び塩水で、順次洗浄した。溶液を乾燥し(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させると、１５．５ｇの粗生成物が赤色の油状物として得られた。この混合液を、更なる精製なしで使用した。
1H NMR 300MHz (CDCl3) 7.86 (1H, s), 7.36 (1H, s), 3.93 (2H, t), 3.57 (2H, m).
【０１７０】
ｂ)Ｒ−α−(２−アジドエチル)−２−オキサゾールメタノール
(Ｓ)−２−メチル−ＣＢＳ−オキサザボロリジン(トルエン中１Ｍ溶液０．７２ml)を窒素雰囲気下でＴＨＦ(５ml)に添加し、その溶液を−５℃に冷却した。ボラン−ＴＨＦ錯体(ＴＨＦ中１Ｍ溶液７．２ml)を滴下し、その溶液を１０分間攪拌した。ステップ(ａ)からの粗生成物(約７．２４mmol)のＴＨＦ(７ml)溶液を滴下し、その反応物を１６時間かけて０℃までゆっくり加温した。メタノール(２０ml)を慎重に添加し、揮発性物質を真空で除去した。更に２回のメタノール添加／溶媒蒸発サイクルを行った。残渣を、溶出剤として１０〜４０％酢酸エチル／イソヘキサンを使用するフラッシュクロマトグラフィーにより精製すると、無色の油状物(７２４mg)が得られた。これをＤＭＳＯ(５ml)に溶解させ、固体のアジ化ナトリウム(４５０mg)を添加し、反応液を６５℃で１６時間加熱した。室温に冷却した後、水を添加し、その溶液をジエチルエーテルで３回抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥し(Ｎａ２ＳＯ４)、溶媒を真空除去すると、副題化合物(４９０mg)が橙色の油状物として得られ、これを、更なる精製なしで使用した。
1H NMR 300MHz (CDCl3) 7.65 (1H, s), 7.10 (1H, s), 4.97 (1H, dt), 3.63-3.47 (2H, m), 3.05 (1H, bs), 2.28-2.07 (2H, m).
【０１７１】
ｃ)エタン二酸２−[[(１Ｒ)−３−アミノ−１−(２−オキサゾリル)プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ステップ(ｂ)からの生成物(１６０mg)のＤＭＦ(２ml)溶液に、水素化ナトリウム(鉱油中６０％分散液の７６mg)を添加し、反応物を１時間攪拌した。固体の２−クロロ−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル(３９３mg)を添加し、反応物を２時間攪拌した。水を添加し、その溶液をジエチルエーテルで抽出した。有機抽出物を分離し、乾燥し(Ｎａ２ＳＯ４)、溶媒を真空で除去した。残渣をＴＨＦ(４ml)に溶解させ、トリフェニルホスフィン(２８３mg)を添加した。５分後、水(１ml)を添加し、反応物を１６時間攪拌した。更なる水(２ml)を添加し、反応物を５５℃で３時間、次いで室温で４８時間、攪拌した。反応物を酢酸エチル／１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液に注いだ。有機抽出物を分離し、乾燥し(Ｎａ２ＳＯ４)、溶媒を真空で除去した。逆相−ＨＰＬＣによる精製及びジエチルエーテル／ジクロロメタン(１：１)中でのエタン二酸塩形成により、表題生成物が吸湿性(hydroscopic)の白色の固体として得られた。
MS APCI +ve m/z 313 [(M+H)+].
1H NMR 400MHz (d4-MeOH)  8.42 (1H, d), 7.94 (1H, s), 7.60 (1H, d), 7.19 (1H, s), 6.37 (1H, t), 3.26 (2H, t), 2.56 (2H, m).
【０１７２】
実施例２８
(Ｅ)−ブテン二酸４−[[３−アミノ−１−(４−クロロ−５−チアゾリル)プロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)[３−(２，４−ジクロロ−５−チアゾリル)−３−ヒドロキシプロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
３−(オキソプロピル)カルバミン酸１，１−ジメチルエチルと、イソチアゾールリチウムの代わりに２，４−ジクロロ−５−チアゾリルリチウムを使用して、実施例１０ステップ(ａ)の方法により副題化合物を製造した。クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤として２０％酢酸エチル／イソヘキサン)による精製により、副題化合物(２．０５ｇ)が橙色の油状物として得られた。
MS (APCI+ve) m/z  227/229/231 [M+H(-Boc)]+.
1H NMR 300MHz (CDCl3) 4.97 (1H, d), 4.88 (1H, bd s), 4.69 (1H, bd s), 3.64-3.56 (1H, m), 3.17-3.10 (1H, m), 2.02-1.93 (1H, m), 1.76-1.70 (1H, m), 1.46 (9H, s).
【０１７３】
ｂ)[３−(４−クロロ−５−チアゾリル)−３−ヒドロキシプロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
活性炭上のパラジウム(７５mg)と酢酸ナトリウム三水和物(３８０mg、１．５当量)の、攪拌したメタノール(１０ml)懸濁液に、メタノール(１５ml)中の[３−(２，４−ジクロロ−５−チアゾリル)−３−ヒドロキシプロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチルエステルの溶液を添加した。混合物を７２時間水素雰囲気(５ｂａｒ)下に置いた。混合液を濾過し、蒸発乾固した。残渣をジクロロメタン(２５ml)に溶解し、乾燥し(Ｎａ２ＳＯ４)、濾過し、真空で濃縮した。クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてイソヘキサン中２０％酢酸エチル)による精製により、副題化合物(１．１５ｇ)が無色のゴム状物質として得られた。
MS (APCI+ve) m/z  293/295 [M+H]+.
1H NMR 300MHz (CDCl3)   8.64 (1H, s), 5.08 (1H, d), 4.94 (1H, bd s), 4.58 (1H, bd s), 3.70-3.56 (1H, m), 3.22-3.10 (1H, m), 2.04-1.96 (1H, m), 1.86-1.74 (1H, m), 1.46 (9H, s).
【０１７４】
ｃ)エタンチオ酸Ｓ−[１−(４−クロロ−５−チアゾリル)−３−[[(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノ]プロピル]
[３−(４−クロロ−５−チアゾリル)−３−ヒドロキシプロピル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチルと、チオ安息香酸の代わりにチオ酢酸を使用して、実施例６ステップ(ｄ)の方法により副題化合物を作った。クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてイソヘキサン中５％〜１０％酢酸エチル)による精製により、副題化合物(４６０mg)が無色の油状物として得られた。
MS (APCI+ve) m/z  351/353 [M+H]+.
1H NMR 300MHz (CDCl3)   8.63 (1H, s), 4.88-4.80 (1H, m), 3.30-3.05 (2H, m), 2.36 (3H, s), 2.26-2.06 (2H, m), 1.44 (9H, s).
【０１７５】
ｄ)[３−(４−クロロ−５−チアゾリル)−３−[(５−シアノ−２−メチル−４−ピリジニル)チオ](プロピル)]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
４−クロロ−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル(７５mg)とＳ−[１−(４−クロロ−５−チアゾリル)−３−[[(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノ]プロピル]エステルエタンチオ酸(１５４mg)のメタノール(３ml)溶液にメタノール(３ml)中７Ｍアンモニアを添加した。混合物を室温で１８時間攪拌し、真空で濃縮し、ジクロロメタンに溶解し、シリカ上へ予備吸着させた。クロマトグラフィー(シリカ、イソヘキサン中３０％酢酸エチル)による精製により、副題化合物(１４５mg)が透明のゴム状物質として得られた。
MS (APCI+ve) m/z  425/427 [M+H]+.
1H NMR 300MHz (CDCl3)   8.61 (1H, s), 7.69 (1H, d), 6.96 (1H, d) 5.59  (1H, t), 5.04 (1H, bd s), 3.38-3.18 (2H, m), 2.26 (2H, q), 1.45 (9H, s).
【０１７６】
ｅ)(Ｅ)−ブテン二酸４−[[３−アミノ−１−(４−クロロ−５−チアゾリル)プロピル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル
実施例５(ｇ)の方法により表題化合物を合成すると、表題化合物(６２％、１２０mg)が淡黄色の固体として得られた。
融点１８０〜１８１℃；
MS (APCI+ve) m/z  325/327 [M+H]+.
1H NMR 300MHz (DMSO-d6)  9.12 (1H, s), 8.77 (1H, s), 7.48 (1H, m), 6.45 (2H, s), 5.41 (1H, t), 2.88-2.72 (2H, m), 2.50 (3H, s), 2.34-2.18 (2H, m).
【０１７７】
実施例２９
エタン二酸２−[１−(４−クロロ−１，３−チアゾール−５−イル)−３−(メチルアミノ)プロポキシ]−６−メチルニコチノニトリル
ａ)Ｎ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)−Ｎ１−メトキシ−Ｎ１，Ｎ３−ジメチル−β−アラニンアミド
Ｎ−[[(１，１−ジメチルエチル)オキシ]カルボニル]−β−アラニン(６３ｇ)、ＥＤＣＩ(５９．４ｇ)、ＤＭＡＰ(３７．８９ｇ)、ＮＭＭ(３４．１ｇ)及びＮ，Ｏ−(ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩(３１ｇ)をジクロロメタン(６００ml)中で７２時間攪拌し、その後２Ｍ塩酸(２５０ml)で洗浄した。水相をジクロロメタン(５００ml)で２回洗浄した。合わせた有機物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、次いで塩水で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で濃縮し、クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤として３３％酢酸エチル／イソヘキサン)による精製により、副題化合物(５６ｇ)が得られた。
1H NMR 400MHz (d6-DMSO)  3.66 (3H,s), 3.37(2H,t), 3.09(3H,s), 2.87 (3H, s), 2.58(2H,t), 1.39(9H,s).
【０１７８】
ｂ)３−(２，４−ジクロロ−１，３−チアゾール−５−イル)−３−オキソプロピル(メチル)カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
２，４−ジクロロ−チアゾール(４ｇ)を窒素雰囲気下、−７８℃でＴＨＦ(８０ml)に溶解し、その後、新たに製造した１ＭのＬＤＡのＴＨＦ(２６ml)溶液を添加した。混合物を２０分間放置し、その後、上記ステップ(ａ)からの生成物(６ｇ)を添加した。混合物を更に２０分間放置した後、水(５０ml)を添加し、反応物を室温まで温めた。ＴＨＦを真空での濃縮により除去した後、残渣を酢酸エチル中に抽出した。次いで、水相を濃塩酸で中和し、再度酢酸エチルで抽出した。合わせた有機抽出物を真空で濃縮し、精製(シリカ、溶出剤として２０％ジエチルエーテル／イソヘキサン)すると、副題化合物(４．６５ｇ)が得られた。
【０１７９】
ｃ)３−(４−クロロ−１，３−チアゾール−５−イル)−３−ヒドロキシプロピル(メチル)カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
Ｐｄ／Ｃ(１．６ｇ)のメタノール(３００ml)懸濁液に、ステップ(ｂ)からの生成物(５．９６ｇ)と酢酸ナトリウム(２．５５ｇ)を添加した。混合物を８４時間４ｂａｒの水素で処理した。次いで、混合物を、セライトに通して濾過し、エタノールで洗浄した。次いで、濾液を真空で濃縮し、エタノール(２００ml)に再度溶解し、その後水素化ホウ素ナトリウム(２．３５ｇ)で処理し、１６時間攪拌した。次いで、混合物を真空で濃縮し、酢酸エチルと水の間で分配した。有機物を集め、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、濾過して真空で濃縮した。精製(シリカ、溶出剤として２５％〜５０％酢酸エチル／イソヘキサン)により、副題化合物(１．８２ｇ)が得られた。
【０１８０】
ｄ)１−(４−クロロ−１，３−チアゾール−５−イル)−３−(メチルアミノ)プロパン−１−オール
ステップ(ｃ)からの生成物をＴＦＡ(１０ml)とジクロロメタン(１００ml)に溶解し、２１時間攪拌し、その後、真空で濃縮し、メタノールに再度溶解した。次いで、このメタノール溶液を、ＳＣＸ樹脂に通して精製すると、副題化合物(２．１５ｇ)が得られた。
1H NMR 400MHz (d6-DMSO)  9.03 (1H,s), 4.97 (2H,m), 2.58 (2H,m), 2.26 (3H, s), 1.75 (2H,m).
【０１８１】
ｅ)エタン二酸２−[１−(４−クロロ−１，３−チアゾール−５−イル)−３−(メチルアミノ)プロポキシ]−６−メチルニコチノニトリル
ステップ(ｄ)の生成物(２００mg)をＤＭＦ(３ml)に溶解し、少しずつの水素化ナトリウム(油中６０％分散液、７７．５mg)で処理した。混合物を２０分間攪拌した後、２−クロロ−６−メチルピリジン−３−カルボニトリル(２００mg)を固体として添加した。混合物を２０分間攪拌し、その後水(５００μｌ)を添加し、反応混合物を直接ＳＣＸ樹脂にかけた。樹脂をメタノールで洗浄し、次いで、メタノール中１０％の０．８８アンモニアでの洗浄により、生成物を樹脂から溶出させた。このメタノール性アンモニアを真空で濃縮し、残渣をＲＰＨＰＬＣにより精製した後、ジエチルエーテルに溶解して、エタン二酸(ジエチルエーテル中５０％飽和、２ml)で処理した。懸濁液を２時間超音波処理にかけた後、純粋な表題化合物を濾過により採取した(１１mg)。
MS APCI +ve m/z 323/325 ([M+H]+).
1H NMR 400MHz (d6-DMSO)  9.13 (1H ,s), 8.12 (1H ,d), 7.12 (1H ,d), 6.49 (1H, m), 3.18-3.02 (2H, m), 2.37-2.33 (2H, m), 2.62 (3H, s), 2.46 (3H, s).
【０１８２】
実施例３０
エタン二酸２−[[１−(３−フルオロフェニル)−３−(メチルアミノ)プロピル]オキシ]ピリジン−３−カルボニトリル
ａ)３−(３−フルオロフェニル)−３−オキソプロピル(メチル)カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
１−ブロモ−３−フルオロベンゼン(２．３ml)をＴＨＦ(３０ml)に−７８℃で溶解し、その後、ＢｕＬｉ(２．５Ｍ、８．２ml)で処理した。溶液を１０分間放置した後、Ｎ３−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)−Ｎ１−メトキシ−Ｎ１，Ｎ３−ジメチル−β−アラニンアミド(５ｇ)を添加した。１０分後、水を添加し、得られた氷スラリーを室温まで温めた。ＴＨＦを真空で除去し、水相を酢酸エチルで２回抽出した。有機物を合わせ、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で濃縮すると、副題化合物(５．４９ｇ)が得られた。
【０１８３】
ｂ)３−(３−フルオロフェニル)−３−ヒドロキシプロピル(メチル)カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
ステップ(ａ)からの生成物をエタノール(３０ml)に溶解し、水素化ホウ素ナトリウム(１．５２ｇ)で処理した。混合物を１時間攪拌し、その後水でクエンチした。エタノールを真空で除去し、残った水溶液を酢酸エチルで抽出した。混合物を真空で濃縮し、精製(シリカ、溶出剤として酢酸エチル)することにより副題化合物(２．５９ｇ)が得られた。
【０１８４】
ｃ)１−(３−フルオロフェニル)−３−(メチルアミノ)プロパン−１−オール
ステップ(ｃ)からの生成物をジクロロメタン(１０ml)に溶解し、ＴＦＡ(２ml)で処理した。反応物を１６時間攪拌した後、真空で、次いで高真空で、濃縮した。残渣をジクロロメタン(１０ml)に再度溶解し、トリエチルアミン(３ml)で処理した。次いで、溶液を真空で濃縮すると、副題化合物が黄色の油状物(１．７ｇ)として得られた。
【０１８５】
ｄ)エタン二酸  ２−[[１−(３−フルオロフェニル)−３−(メチルアミノ)プロピル]オキシ]ピリジン−３−カルボニトリル
ステップ(ｃ)の生成物(４２５mg)をＤＭＦ(４ml)に溶解し、水素化ナトリウム(鉱油中６０％、１１５mg)で処理した。１０分後、溶液を２−クロロピリジン−３−カルボニトリル(３１９mg)で処理し、反応物を１時間攪拌した後、水(１ml)で処理した。混合物を１６時間攪拌した後、ＳＣＸ樹脂で処理した。樹脂をメタノールで洗浄することにより不純物を除去した後、樹脂をメタノール中１０％の０．８８アンモニアで処理することにより生成物を採取した。次いで、樹脂から採取した物質をＲＰＨＰＬＣ(ＮＨ３緩衝液)に通して精製すると、純粋な生成物が遊離塩基として得られた。次いで、これをエーテルに溶解し、その後、エタン二酸のエーテル溶液(５０％飽和)で処理した。得られた固体をエーテルで洗浄すると、表題化合物(１１４mg)が得られた。
MS APCI +ve m/z 286 ([M+H]+).
1H NMR 400MHz (d6-DMSO) 8.38 (1H, m), 8.31 (1H, d), 7.46 (1H, m), 7.25 (2H, m), 7.17 (2H, m), 6.28 (1H, m), 3.00 (2H, m), 2.57 (3H, s), 2.38-2.21 (2H, m).
【０１８６】
実施例３１
(Ｅ)−ブテン二酸６−アセチル−２−[[３−(メチルアミノ)−１−フェニルプロピル]チオ]−３−ピリジンカルボニトリル
６−アセチル−２−メルカプト−３−ピリジンカルボニトリル(２４２mg)、ジイソプロピルエチルアミン(２ml)及びγ−クロロ−Ｎ−メチルベンゼンプロパンアミン塩酸塩(３００mg)のメタノール(２０ml)中の混合物を５０℃に２０時間加熱した。次いで、混合液を濃縮乾固し、残渣をメタノール(５０ml)に溶解した。その溶液をＳＣＸ樹脂(５ｇ)とともに５分間攪拌し、懸濁液を濾過した。樹脂をメタノールでよく洗浄し、濾液を廃棄した。次いで、樹脂をメタノール(５０ml)中７Ｍアンモニアで脱着し、そのアンモニア溶液を濃縮乾固した。粗生成物を逆相ＨＰＬＣにより精製し、(Ｅ)−ブテン二酸塩をメタノール−酢酸エチル中で製造すると、表題化合物(２５mg)が得られた。
1H NMR 300MHz (DMSO-d6) 8.40 (1H, d), 7.74 (1H, d), 7.55-7.28 (5H, m), 6.42 (2H, s), 5.28 (1H, t), 2.91-2.65 (5H, m), 2.5-2.3 (5H, m).
MS APCI +ve m/z 326 ([M+H]+).
【０１８７】
実施例３２
５−フルオロ−６−メチル−２−[[(１Ｒ)−３−(メチルアミノ)−１−フェニルプロピル]チオ]−３−ピリジンカルボニトリル塩酸塩
ａ)エタンチオ酸  Ｓ−[(１Ｒ)−３−[[(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル]メチルアミノ]−１−フェニルプロピル]
チオ酢酸と[(３Ｓ)−３−ヒドロキシ−３−フェニルプロピル]メチルカルバミン酸１，１−ジメチルエチルを使用して、実施例６ステップ(ｄ)の方法により副題化合物を製造した。
【０１８８】
ｂ)[(３Ｒ)−３−メルカプト−３−フェニルプロピル]メチルカルバミン酸１，１−ジメチルエチル
脱気したエタノール(５０ml)中のステップ(ａ)の生成物(５２０mg)及び１Ｍ水酸化ナトリウム溶液(２５ml)の溶液を、窒素下で１時間攪拌し、次いで、氷酢酸で酸性にした。エタノールを真空で除去し、水性懸濁液をジクロロメタン(２×５０ml)で抽出した。有機層を分離し、乾燥(ＣａＣｌ２)し、濃縮し、高真空下で乾燥すると、副題化合物が無色の油状物(４５５mg)として得られた。
MS APCI +ve m/z 282 ([M+H]+).
1H NMR 300MHz (C6D6) 65℃  7.25-7.09 (5H, m), 3.90-3.83 (1H, m), 3.27-3.17 (2H, m), 2.68 (3H, s),  2.17-2.03 (2H, m), 1.96 (1H, d), 1.54 (9H, s).
【０１８９】
ｃ)[(３Ｒ)−３−[(３−シアノ−５−フルオロ−６−メチル−２−ピリジニル)チオ]−３−フェニルプロピル]メチルカルバミン酸１，１−ジメチルエチル
ステップ(ｂ)からの生成物(４５１mg)の乾燥ＴＨＦ(１０ml)溶液を室温で水素化ナトリウム(７０mg、油中６０％分散)の懸濁液に滴下した。水素発生が止まった後、その溶液を２−クロロ−５−フルオロ−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル(２７３mg)に添加し、次いで、混合物を５０℃で１時間加熱した。反応物を氷酢酸(１００μｌ)でクエンチし、蒸発させ、クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてジクロロメタン中３％ジエチルエーテル)により精製すると、副題化合物が無色の油状物(２２０mg)として得られた。
MS APCI +ve m/z 316 ([M-BOC+2H]+).
1H NMR 300MHz (d6-DMSO) 65℃  8.10 (1H, d), 7.44-7.23 (5H, m), 4.98 (1H, dd), 3.20 (2H, dd), 2.52 (3H, s), 2.24 (2H, ddd), 1.33 (9H, s).
【０１９０】
ｄ)５−フルオロ−６−メチル−２−[[(１Ｒ)−３−(メチルアミノ)−１−フェニルプロピル]チオ]−３−ピリジンカルボニトリル塩酸塩
実施例１ステップ(ｂ)の方法により、ジクロロメタンと磨砕して、表題化合物を製造した。
MS APCI +ve m/z 316 ([M+H]+).
1H NMR 300MHz (d6-DMSO)  8.98 (2H, br s), 8.26 (1H, d), 7.51-7.27 (5H, m), 5.11 (1H, dd), 3.05-2.62 (2H, br m), 2.57 (3H, br s), 2.51-2.37 (2H, br m).
【０１９１】
実施例３３
６−エチル−５−フルオロ−２−[[(１Ｒ)−３−(メチルアミノ)−１−フェニルプロピル]チオ]−３−ピリジンカルボニトリル二塩酸塩
実施例３２ステップ(ａ)の生成物と２−クロロ−５−フルオロ−６−エチル−３−ピリジンカルボニトリルを使用して、実施例５ステップ(ｆ)と実施例１ステップ(ｂ)の方法により表題化合物を製造した。
MS (APCI+) m/z 330 (M+H+).
1H NMR 300MHz (D2O)  7.83 (1H, d), 7.47 (5H, m), 5.03 (1H, t), 3.27 (1H, m), 3.08 (1H, m), 2.95 (2H, m), 2.76 (3H, s), 2.54 (2H, m), 1.32 (3H, t).
【０１９２】
実施例３４
(Ｅ)−ブタン二酸２−[[(１Ｒ)−３−[(２−ヒドロキシエチル)メチルアミノ]−１−フェニルプロピル]チオ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)２−[[(１Ｒ)−３−クロロ−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
２−クロロ−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル(１２．１ｇ)と炭酸セシウム(５２．１ｇ、０．１７６mol)を、窒素雰囲気下(Ｒ)−３−クロロ−１−フェニルプロパン−１−オール(１０．０ｇ)のＤＭＦ(６００ml)溶液に添加し、その混合物を室温で２０時間攪拌した。その混合物を水(３００ml)に注ぎ、ジエチルエーテル(３×５００ml)で抽出した。合わせた有機抽出物を塩水(３００ml)で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、蒸発させた。クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてイソヘキサン：酢酸エチル＝２０：１〜１０：１)による精製により、副題化合物が茶色の油状物(１７．２ｇ)として得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.00 (d, 1H), 7.47 (d, 2H), 7.25-7.38 (m, 4H), 6.39 (dd, 1H), 3.68-3.76 (m, 1H), 3.52-3.60 (m, 1H), 2.62-2.73 (m, 1H), 2.30-2.41 (m, 1H).
【０１９３】
ｂ)２−[[(１Ｒ)−３−ヨード−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ステップ(ａ)からの生成物(１７．２ｇ)の、ヨウ化ナトリウム飽和アセトン(１６００ml)溶液を還流下４８時間加熱した。冷却後、混合物を水(５００ml)に注ぎ、ジエチルエーテル(３×５００ml)で抽出した。合わせた有機抽出物を塩水(５００ml)で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、濃縮した。クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてイソヘキサン：酢酸エチル＝２０：１〜１０：１)による精製により、副題化合物が茶色の油状物(１７．１ｇ)として得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.00 (d, 1H), 7.47 (d, 2H), 7.26-7.37 (m, 4H), 6.29 (dd, 1H), 3.13-3.34 (m, 2H), 2.65-2.76 (m, 1H), 2.35-2.50 (m, 1H).
【０１９４】
ｃ)(Ｅ)−ブタン二酸２−[[(１Ｒ)−３−[(２−ヒドロキシエチル)メチルアミノ]−１−フェニルプロピル]チオ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ステップ(ｂ)からの生成物(１５０mg)のＴＨＦ(２ml)溶液に２−メチルアミノエタノール(５４．３μｌ)を添加した。反応物を１４０℃で６分間マイクロ波照射にかけ、次いで、濃縮した。クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてジクロロメタン／７Ｍアンモニア含有メタノール(１０：１))による精製の後、(Ｅ)−ブテン二酸塩を製造することにより、表題化合物が白色の固体(４９．０mg)として得られた。
1H NMR 300MHz (d6-DMSO)  8.55 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.46 (d, 2H), 7.28-7.40 (m, 3H), 6.59 (s, 2H), 6.19 (t, 1H), 3.45 (t, 2H), 2.53-2.59 (m, 4H), 2.32 (m, 4H), 2.06-2.15 (m, 1H).
【０１９５】
実施例３５
(Ｅ)−ブタン二酸２−[[(１Ｒ)−３−[(２−ヒドロキシエチル)プロピルアミノ]−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
２−プロピルアミノエタノール(１１９μｌ)を使用して、実施例３４ステップ(ｃ)の方法により、表題化合物を製造することにより、白色の固体(５６．０mg)が得られた。
1H NMR 300MHz (d6-DMSO)   8.55 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.45 (d, 2H), 7.27-7.40 (m, 3H), 6.60 (s, 2H), 6.23 (dd, 1H), 3.40 (t, 2H), 2.45-2.74 (m, 6H), 2.24-2.30 (m, 1H), 2.03-2.10 (m, 1H), 1.32-1.39 (m, 2H), 0.78 (t, 3H).
【０１９６】
実施例３６
２−[[(１Ｒ)−３−[(３−ヒドロキシプロピル)アミノ]−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
実施例３４のステップ(ｂ)からの生成物(１５０mg)のＴＨＦ(２ml)溶液に３−アミノプロパン−１−オール(５３．６μｌ)を添加した。反応物を１４０℃で６分間マイクロ波照射にかけ、次いで、濃縮した。クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてジクロロメタン／７Ｍアンモニア含有メタノール(１０：１))による精製により、表題化合物が白色の固体(２１mg)として得られた。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  8.00 (d, 1H), 7.46 (d, 2H), 7.24-7.37 (m, 4H), 6.25 (dd, 1H), 3.78 (t, 2H), 2.84 (m, 2H), 2.74 (t, 2H), 2.30-2.42 (m, 1H), 2.08-2.20 (m, 1H), 1.67 (m, 2H).
【０１９７】
実施例３７
(Ｅ)−ブタン二酸２−[[(１Ｒ)−３−(メチルプロピルアミノ)−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
メチルプロピルアミン１(７２０μｌ)を使用して、実施例３４ステップ(ｃ)の方法により表題化合物を製造すると、白色の固体(２０．０mg)が得られた。
1H NMR 300MHz (d6-DMSO)  8.41 (d, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.42 (d, 2H), 7.27-7.37 (m, 3H), 6.62 (s, 2H), 6.25 (t, 1H), 2.27 (t, 4H), 2.18 (s, 3H), 2.04-2.14 (m, 2H), 1.35 (q, 2H), 0.79 (t, 3H).
【０１９８】
実施例３８
(Ｅ)−ブタン二酸２−[[(１Ｒ)−３−[[(２Ｓ)−２−ヒドロキシプロピル]アミノ]−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
(Ｓ)−１−アミノプロパン−２−オール(８２．２μｌ)を使用して、実施例３４ステップ(ｃ)の方法により表題化合物を製造すると、白色の固体(６３．１mg)が得られた。
1H NMR 300MHz (d6-DMSO)  8.56 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.30-7.46 (m, 5H), 6.48 (s, 2H), 6.22 (dd, 1H), 3.81 (m, 1H), 2.88 (t, 2H), 2.75-2.80 (m, 1H), 2.57-2.64 (m, 1H), 2.40-2.50 (m, 1H), 2.18-2.24 (m, 1H), 1.06 (d, 3H).
【０１９９】
実施例３９
(Ｅ)−ブタン二酸２−[[(１Ｒ)−１−フェニル−３−[(フェニルメチル)アミノ]プロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
アミンとしてベンジルアミン(１１４μｌ)を使用して、実施例３４ステップ(ｃ)の方法により表題化合物を製造すると、白色の固体(５５．３mg)が得られた。
1H NMR 300MHz (d6-DMSO)  8.54 (d, 1H), 7.63 (d, 1H), 7.22-7.44 (m, 10H), 6.53 (s, 2H), 6.27 (dd, 1H), 3.84 (s, 2H), 2.76 (t, 2H), 2.31-2.40 (m, 1H), 2.09-2.21 (m, 1H).
【０２００】
実施例４０
２−[[(１Ｒ)−３−[(１，１−ジメチルエチル)アミノ]−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
アミンとしてｔｅｒｔ−ブチルアミン(１１０μｌ)を使用して、実施例３６の方法により表題化合物を製造すると、白色の固体(２２．１mg)が得られた。
1H NMR 300MHz (d6-DMSO)  8.59 (d, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.30-7.48 (m, 5H), 6.19 (dd, 1H), 3.07 (m, 2H), 2.35-2.45 (m, 1H), 2.19-2.26 (m, 1H), 1.26 (s, 9H).
【０２０１】
実施例４１
２−[[(１Ｒ)−３−[[２−(４−ヒドロキシフェニル)エチル]アミノ]−１−フェニルプロピル]オキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
アミンとして４−(２−アミノエチル)フェノール(１４３mg)を使用して、実施例３６の方法により表題化合物を製造すると、白色の固体(３５．６mg)が得られた。
1H NMR 300MHz (d6-DMSO)  9.18 (s, 1H), 8.57 (d, 1H), 7.64 (d, 1H), 7.30-7.45 (m, 5H), 7.00 (d, 2H), 6.67 (d, 2H), 6.20 (dd, 1H), 2.92 (m, 4H), 2.68 (m, 2H), 2.36 (m, 1H), 2.19 (m, 1H).
【０２０２】
実施例４２
(Ｅ)−ブテン二酸２−[４−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)ブトキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)１−(５−イソオキサゾリル)−１，４−ブタンジオール
塩化イソプロピルマグネシウム(２５．３ml、ＴＨＦ中１．７Ｍ)を０℃でクロロプロパノール(３．６ml)のＴＨＦ(２０ml)溶液にゆっくり添加した。マグネシウム(１．４８ｇ)と１，２−ジブロモエタン(０．１ml)を添加し、混合物を還流下で３時間加熱した。この溶液をイソオキサゾール−５−カルボキシアルデヒド(２．６６ｇ)のＴＨＦ(９２０ml)溶液に０℃で添加し、１時間攪拌した。２Ｍ塩酸(３０ml)を添加し、混合物を酢酸エチル(６回)で抽出した。有機抽出物を乾燥し(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させ、クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤として石油／アセトン(３：２))により精製すると、副題化合物が無色の油状物(１．４０ｇ)として得られた。
MS APCI +ve m/z 158 ([M+H]+).
【０２０３】
ｂ)４−(４−メチルベンゼンスルホン酸)１−(５−イソオキサゾリル)−１，４−ブタンジオールイル
ステップ(ａ)からの生成物(１．３９ｇ)のピリジン(６ml)とジクロロメタン(５ml)の溶液にトシルクロリド(１．９５ｇ)を添加し、１６時間攪拌した。２Ｍ塩酸(２０ml)を添加し、その混合物をジクロロメタン(３回)で抽出した。有機抽出物を乾燥し(ＭｇＳＯ４)、蒸発させ、クロマトグラフィー(シリカ、溶出剤としてイソヘキサン／エーテル(３：２))により精製すると、副題化合物が橙色のゴム状物質(６６７mg)として得られた。
MS APCI +ve m/z 312 ([M+H]+).
【０２０４】
ｃ)[４−ヒドロキシ−４−(５−イソオキサゾリル)ブチル]−カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
実施例５ステップ(ｄ)と(ｅ)の方法により、ステップ(ｂ)の生成物から中間体精製なしで副題化合物を製造した。
MS APCI +ve m/z 257 ([M+H]+).
【０２０５】
ｄ)[４−[[３−シアノ−６−(トリフルオロメチル)−２−ピリジニル]オキシ]−４−(５−イソオキサゾリル)ブチル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
実施例５ステップ(ｆ)の方法によりステップ(ｃ)の生成物から副題化合物を製造した。
MS APCI +ve m/z 427 ([M+H]+).
【０２０６】
ｅ)(Ｅ)−ブテン二酸２−[４−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)ブトキシ]−６−(トリフルオロメチル)−３−ピリジンカルボニトリル
上記ステップ(ｄ)からの生成物を使用して、実施例５ステップ(ｇ)の方法により、メタノール／アセトニトリル中で(Ｅ)−ブテン二酸塩を製造することにより、表題化合物を製造した。
融点１５５〜１５７℃；
MS APCI +ve m/z 327 ([M+H]+).
1H NMR 300MHz (DMSO-d6)  8.65 (1H, d), 8.59 (1H, d), 7.76 (1H, d), 6.60 (1H, dd), 6.42 - 6.35 (3H, m), 2.84 (2H, t), 2.29 - 2.15 (2H, m), 1.76 - 1.58 (2H, m).
【０２０７】
実施例４３
(Ｅ)−ブテン二酸２−[[４−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)ブチル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル
ａ)ベンゼンカルボチオ酸  Ｓ−[４−[[(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノ]−１−(５−イソオキサゾリル)ブチル]
実施例６ステップ(ｄ)の方法により、実施例４２ステップ(ｃ)の生成物から副題化合物を製造した。
MS APCI +ve m/z 377 ([M+H]+).
【０２０８】
ｂ)[４−[(３−シアノ−６−メチル−２−ピリジニル)チオ]−４−(５−イソオキサゾリル)ブチル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
実施例６ステップ(ｅ)の方法を使用して、上記実施例１４ステップ(ｅ)の生成物とステップ(ａ)の生成物から副題化合物を製造した。
MS APCI +ve m/z 405 ([M+H]+).
【０２０９】
ｃ)(Ｅ)−ブテン二酸２−[[４−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)ブチル]チオ]−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリル
上記ステップ(ｂ)からの生成物を使用して、実施例５ステップ(ｇ)の方法により、メタノール／アセトニトリル中で(Ｅ)−ブテン二酸塩を製造して、表題化合物を製造した。
融点１５５〜１５７℃；
MS APCI +ve m/z 305 ([M+H]+).
1H NMR 300MHz (DMSO-d6)  8.60 (1H, d), 8.54 (1H, d), 7.06 (1H, s), 6.58 (1H, d), 6.41 (2H, s), 5.37 (1H, t), 3.92 (3H, s), 2.83 (2H, t), 2.18 - 2.06 (2H, m), 1.76 - 1.51 (2H, m).
【０２１０】
実施例４４
４−[[４−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)ブチル]チオ]−６−メトキシ−３−ピリジンカルボニトリル塩酸塩
ａ)[４−[(５−シアノ−２−メトキシ−４−ピリジニル)チオ]−４−(５−イソオキサゾリル)ブチル]カルバミン酸１，１−ジメチルエチル
実施例６ステップ(ｅ)の方法により、実施例４３ステップ(ａ)の生成物と２−クロロ−６−メチル−３−ピリジンカルボニトリルから副題化合物を製造した。
MS APCI +ve m/z 389 ([M+H]+).
【０２１１】
ｂ)４−[[４−アミノ−１−(５−イソオキサゾリル)ブチル]チオ]−６−メトキシ−３−ピリジンカルボニトリル塩酸塩
実施例１２ステップ(ｄ)の方法により、ステップ(ａ)の生成物から表題化合物を製造したところ、白色の固体が得られた。
融点１３６〜１３７℃；
MS APCI +ve m/z 289 ([M+H]+).
1H NMR 300MHz (DMSO-d6)  8.58 (1H, s), 8.15 (1H, d), 8.09 (2H, s), 7.46 (1H, s), 7.26 (1H, d), 6.57 (1H, d), 5.47 (1H, t), 2.91 - 2.77 (2H, m), 2.58 (3H, s), 2.29 - 2.07 (2H, m), 1.83 - 1.58 (2H, m).
【０２１２】
スクリーニング
本発明による化合物の薬理学的活性を以下のスクリーニングで試験した。
スクリーニング１
式(Ｉ)の化合物又はその薬学的に許容される塩の活性は、Foerstermann et al., Eur. J. Pharm., 1992, 225, 161-165 の方法に基づく方法により、一酸化窒素合成酵素阻害活性に関してスクリーニングし得る。一酸化窒素合成酵素は３Ｈ−Ｌ−アルギニンを３Ｈ−Ｌ−シトルリンに変換するが、後者は陽イオン交換クロマトグラフィーにより分離し、液体シンチレーションにより定量し得る。
【０２１３】
酵素は、培養したネズミマクロファージ細胞株Ｊ７７４Ａ−１(the laboratories of the Imperial Cancer Research Fund から入手した)から、誘発後、製造する。Ｊ７７４Ａ−１細胞は、１０％胎児ウシ血清、Ｌ−グルタミン ４ｍＭ及び抗生物質(ペニシリンＧ １００単位／ml、ストレプトマイシン １００mg／ml及びアムホテリシンＢ ０．２５mg／ml)を加えたダルベッコ変法イーグル培地(ＤＭＥＭ)で培養する。細胞は、通常の方法で、３７℃、ＣＯ２５％含有 加湿雰囲気に保った、培地３５mlの入った２２５ｃｍ３のフラスコで培養する。
【０２１４】
一酸化窒素合成酵素は、インターフェロン−ｇ(ＩＦＮｇ)及びリポ多糖(ＬＰＳ)に応答する細胞により産生される。コンフルエントな培養フラスコの培地を取り、ＬＰＳ １mg／ml 及び ＩＦＮｇ １０単位／ml を含む新しい培地２５ml(１フラスコ当り)に置き換える。１７〜２０時間の培養期間後、細胞の収穫は、培養培地に、フラスコ表面から細胞シートをかきとることにより達成される。細胞は、遠心(１０分間１０００Ｇ)により採集し、ライセートは、細胞ペレットに、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ５０ｍＭ(２０℃でｐＨ ７．５)、１０％(v/v)グリセロール、０．１％(v/v) Triton-X-100、ジチオトレイトール ０．１ｍＭ、並びに、ロイペプチン(２mg／ml)、大豆トリプシン阻害剤(１０mg／ml)、アプロチニン(５mg／ml)及びフッ化フェニルメチルスルホニル(５０mg／ml)からなるプロテアーゼ阻害剤のカクテルを含む溶液を添加することにより製造する。
【０２１５】
アッセイのために、基質カクテル(Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ(２０℃でｐＨ  ７．５)５０ｍＭ、ＮＡＤＰＨ ４００μＭ、フラビンアデニンジヌクレオチド ２０μＭ、フラビンモノヌクレオチド ２０μＭ、テトラヒドロビオプテリン ４μＭ、Ｌ−アルギニン １２μＭ、及びＬ−[３Ｈ]アルギニン ０．０２５ｍＣｉ)２５μｌを、試験化合物のＴｒｉｓ−ＨＣｌ５０ｍＭ溶液２５μｌを含む９６ウェルフィルタープレート(孔径０．４５μｍ)のウェルに添加する。反応は、(上記のように製造した)細胞ライセート５０μｌを添加することにより開始し、室温での１時間のインキュベーションの後、ニトロアルギニン３ｍＭとＥＤＴＡ ２１ｍＭの水溶液５０μｌの添加により終了する。
【０２１６】
Ｄｏｗｅｘ  ＡＧ−５０Ｗを使用して、標識Ｌ−アルギニンから標識Ｌ−シトルリンを分離する。Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ(Ｎａ＋型)の２５％水性スラリー１５０μｌをアッセイに添加し、その後、全体を濾過して９６ウェルプレートに入れる。濾液７５μｌをサンプリングし、固体シンチラントを含む９６ウェルプレートのウェルに添加する。試料を放置乾燥させた後、Ｌ−シトルリンをシンチレーション計数法により定量する。
【０２１７】
通常の実験では、基礎活性(basal activity)は、７５μｌの試料につき３００ｄｐｍであるが、試薬コントロールでは１９００ｄｐｍに増大する。化合物活性はＩＣ５０(アッセイで５０％酵素阻害を示す薬物の濃度)として表され、アミノグアニジン(１０μＭのＩＣ５０(５０％阻害濃度)を示す)が、操作手順を評価するための標準として試験される。化合物はある濃度範囲で試験し、得られた阻害からＩＣ５０値を計算する。１００μＭで少なくとも２５％酵素を阻害する化合物は、活性であるとみなされ、少なくとも１回の再試験にかける。
【０２１８】
上記のスクリーニングで、実施例１〜４４の化合物を試験したが、それらは、有用な治療活性を示すと期待されることを示す１０μＭ未満のＩＣ５０値を示した。
【０２１９】
スクリーニング２
リコンビナントのヒトＮＯ合成酵素(ｉＮＯＳ、ｅＮＯＳ、及びｎＮＯＳ)をＥ．ｃｏｌｉ中に発現させ、ライセートを、補因子(ＦＡＤ、ＦＭＮ、Ｈ４Ｂ)、プロテアーゼ阻害剤、リゾチーム及び界面活性剤ＣＨＡＰＳを含むＨＥＰＥＳ緩衝液(ｐＨ７．４)中で調製した。これらの調製物を、適当に希釈して、種々のアイソフォームの阻害を評価するために使用した。ＮＯＳの阻害は、Foerstermann et al. の方法９の翻案を使用して、Ｌ−[３Ｈ]アルギニンからのＬ−[３Ｈ]シトルリンの生成を測定することにより定量した。酵素アッセイは、[３Ｈ]アルギニン３μＭ、ＮＡＤＰＨ １ｍＭ及びＮＯＳ活性を維持するのに必要な他の補因子(ＦＡＤ、ＦＭＮ、Ｈ４Ｂ、カルモジュリン、Ｃａ２＋)の存在下で行った。種々のＮＯＳ阻害剤は、ゆっくりした結合速度を示すか、時間依存的に酵素を不活化すると報告されているため、酵素及び阻害剤は、反応を開始させるためのアルギニンの添加の前に、ＮＡＤＰＨの存在下で６０分間プレインキュベートした。インキュベーションをさらに６０分間続け、その後アッセイをクエンチして、[３Ｈ]シトルリンを、未反応の基質から、９６ウェルフォーマット中のＤｏｗｅｘ−５０Ｗ樹脂上のクロマトグラフィーにより分離した。
【０２２０】
上記のスクリーニングで、実施例１〜４４の化合物を試験したが、それらは、有用な治療活性を示すと期待されることを示す、ｉＮＯＳ酵素に対する１０μＭ未満のＩＣ５０値を示した。
【０２２１】
スクリーニング３
以下のアッセイで示されるように、化合物はまた、ヒト型の誘導型一酸化窒素合成酵素に対抗する活性を示している。
ヒト結腸直腸癌細胞株 ＤＬＤ−１(European Collection of Animal Cell Culture から入手した。細胞株番号９０１０２５４０)を、通常の方法で、５％ＣＯ２中３７℃の、１０％(ｖ／ｖ)胎児ウシ血清及びＬ−グルタミン２ｍＭを加えた ＲＰＭＩ  １６４０の中で培養した。
【０２２２】
ヒトのリコンビナントのγ−ＩＦＮ(１０００単位／ml)、ＴＮＦ−α(２００Ｕ／ml)、ＩＬ−６(２００Ｕ／ml)及びＩＬ−１−β(２５０Ｕ／ml)を含む培地の添加により、一酸化窒素合成酵素を細胞内に誘発した。３７℃での１８時間のインキュベーションの後、培地を除去し、細胞を、温リン酸塩緩衝食塩水で洗浄した。細胞を、試験化合物の存在下及び不在下で、Ｌ−アルギニン１００μＭと塩酸ベラパミル１００μＭを含むＲＰＭＩ  １６４０中で３７℃／５％ＣＯ２でさらに５時間インキュベートした。
【０２２３】
Griess 試薬(スルファニルアミド１０mg／ml、２．５％(v/v)リン酸１ml中Ｎ−(１−ナフチル)エチレンジアミン１mg)と同体積の培地とを混合することにより亜硝酸塩蓄積を測定した。化合物の存在下での阻害は、非処理の細胞により生産された亜硝酸塩濃度と比較して計算した。ＩＣ５０値は、％阻害対化合物濃度の半対数プロットから見積もった。
【０２２４】
このスクリーニングで、実施例１〜４４の化合物は、１００μＭ未満のＩＣ５０値を示し、それらが有用な治療活性を示すと予測されることを示した。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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