(57)【要約】液状食品からの１種類以上の化学及び／又は生物汚染物質の汚染除去手順であり、前記液体と前記汚染物質に特異的な抗体と共有結合した、少なくとも１種類の生体適合膜との接触に基づく汚染除去法である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学及び／又は生物汚染物質の液状食品からの除去のための、生体適合重合体から成る膜であって、該生体適合重合体が織布または不織布状であり、該汚染物質に特異的な抗体が該膜に共有結合していることを特徴とする膜。
【請求項２】
前記生体適合重合体が、ナイロン、セルロース、ポリアクリレート、ポリエステル、ポリプロピレン、それらの誘導体およびそれらの混合物から成る群から選択される請求項１に記載の膜。
【請求項３】
前記生体適合重合体がナイロン、セルロースおよびそれらの誘導体であり、前記抗体が、ＣＨ２−ＣＨ２−ＳＯ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−（ＣＨ２）４−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨ２）３−ＣＨ＝Ｏ、またはジアミノ−モノカルボキシルアミノ酸またはモノアミノ−ジカルボキシルアミノ酸を含むペプチドから成る群から選択されるリンカーによって前記膜に結合される請求項２に記載の膜。
【請求項４】
前記ジアミノ−モノカルボキシルアミノ酸がアルギニンとリジンの中から選択され、前記モノアミノ−ジカルボキシルアミノ酸がグルタミン酸とアスパラギン酸の中から選択される請求項３に記載の膜。
【請求項５】
前記汚染物質が、殺寄生虫剤、除草剤、殺虫剤、薬物およびその代謝物、ホルモンおよびその代謝物、ワインのマロラクティック発酵生成物、および毒素から成る群から選択される請求項１〜４のいずれかに記載の膜。
【請求項６】
前記汚染物質が、アトラジン、アフラトキシン、オクラトキシン、フモニシン、カダベリン、プトレセイン、ウレタン、プロゲステロンおよびサルモネラ抗原から成る群から選択される請求項５に記載の膜。
【請求項７】
前記生体適合重合体がナイロン６６である請求項３に記載の膜。
【請求項８】
前記抗体がポリクロナール抗体である請求項１〜７のいずれかに記載の膜。
【請求項９】
生体適合重合体から成る膜との接触に基づいた、液状食品からの１種類以上の化学及び／又は生物汚染物質の除去プロセスであって、該汚染物質に特異的な抗体が該膜または該膜表面に共有結合していることを特徴とするプロセス。
【請求項１０】
前記接触が、汚染除去対象液体への前記膜の浸漬によって行われる請求項９に記載のプロセス。
【請求項１１】
前記生体適合重合体が、ナイロン、セルロース、ポリアクリレート、ポリエステルまたはビスコース、それらの誘導体またはそれらの混合物から選択される請求項９または１０に記載のプロセス。
【請求項１２】
前記重合体が織布または不織布状である請求項１１に記載のプロセス。
【請求項１３】
前記膜が請求項１〜８のいずれかに記載の膜である請求項１２に記載のプロセス。
【請求項１４】
前記汚染物質が、殺寄生虫剤、除草剤、殺虫剤、薬物およびその代謝物、ホルモンおよびその代謝物、ワインのマロラクティック発酵生成物、および毒素から成る群から選択される請求項９〜１３のいずれかに記載のプロセス。
【請求項１５】
前記汚染物質が、さらに、アトラジン、アフラトキシン、オクラトキシン、フモニシン、カダベリン、プトレセイン、ウレタン、プロゲステロンおよびサルモネラ抗原から成る群から選択される請求項１４に記載のプロセス。
【請求項１６】
前記膜が１〜２４時間の範囲の時間中前記液体に浸される請求項１０に記載のプロセス。
【請求項１７】
前記膜が１〜６時間の範囲の時間中前記液体に浸される請求項１６に記載のプロセス。
【請求項１８】
攪拌せずに実施される請求項９〜１７のいずれかに記載のプロセス。
【請求項１９】
前記液状食品が、ワイン、ミルク、フルーツジュース、野菜ジュース、ビール、及び水から選択される請求項９〜１８のいずれかに記載のプロセス。
【請求項２０】
汚染物質に対する前記膜の総表面積は、固定された抗体と該抗体に向かう前記汚染物質のモル比が≧１である程度である請求項９〜１９のいずれかに記載のプロセス。
【請求項２１】
前記モル比が１〜５の範囲である請求項２０に記載のプロセス。
【請求項２２】
前記モル比が１〜２の範囲である請求項２１に記載のプロセス。
【請求項２３】
化学及び／又は生物汚染物質に特異的な抗体を共有結合によって保持する生体適合重合体膜の使用であって、該生体適合重合体が、液状食品の汚染除去用として、ナイロン、セルロース、ポリエステル、ポリアクリレート、それらの誘導体、またはそれらの混合物から成る群から選択されることを特徴とする膜の使用。
【請求項２４】
前記使用が、除去対象液体への前記膜の浸漬による接触からなる請求項２３に記載の膜の使用。
【請求項２５】
前記汚染物質が、殺寄生虫剤、除草剤、殺虫剤、薬物およびその代謝物、ホルモンおよびその代謝物、ワインのマロラクティック発酵生成物、および毒素から成る群から選択される請求項２４に記載の膜の使用。
【請求項２６】
前記汚染物質が、さらに、アトラジン、アフラトキシン、オクラトキシン、フモニシン、カダベリン、プトレセイン、ウレタン、プロゲステロンおよびサルモネラ抗原から成る群から選択される請求項２６に記載の膜の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、汚染物質に特異的な抗体を共有結合した生体適合膜の使用に基づいた液状食品の新規汚染除去法に関する。
【背景技術】
【０００２】
液状食品、例えばワイン、ミルク、フルーツおよび野菜ジュース、ビール、及び水は、化学汚染物質または生物汚染物質を含む場合がある。
【０００３】
化学汚染物質の中で、最も多いのは、以下のとおりである：
・殺寄生虫剤、除草剤、殺虫剤、それらは、土壌から、原料として使用する果物や野菜を経て、あるいは、ミルクに関しては、生産動物中に餌と共に導入される食物を経て、食品に達すると思われ；
・薬物、ホルモンおよびその代謝物：それらは、ミルクの生産サイクルの中で、動物の無統制な処理、あるいは、ホルモンについては、搾乳の際の生理的時期に由来する；
・工程汚染物質：例えばワインのマロラクティック発酵に由来する。
【０００４】
最も多発する生物汚染物質は、例えば細菌または真菌に由来する毒素で、原料として使用する果物や野菜を経て食品に達する可能性があり、あるいは、液状食品調製工程中に発生する可能性がある。
【０００５】
可能性のある汚染量と、汚染源から汚染を監視するのが困難なために、液状食品汚染の問題が話題性のある懸念事項になっている。それは、監視が消費者のリスク因子の防止に最も重要だからである。
【０００６】
例えば、真菌毒素が誘発する腎毒性は周知である（非特許文献１）。そこで、該問題には、抗生物質の無統制な使用後の薬物耐性と、食品中のグルココルチコイドおよび生物由来アミンなどの薬理学的に活性な代謝物が存在する影響（特に、リスク集団に対する）が伴う。
【０００７】
そのため、前述の汚染物質の液状食品からの完全汚染除去を可能にする技術が急務である。
【０００８】
これまでのところ、前記汚染除去は、活性炭、ゲル、セルロースおよびその誘導体などの不活性基質による物理的吸着を利用する技術によって実施されている。しかし、前記技術の使用は、該技術の汚染除去が不十分であり、非特異的な物理的プロセスに基づいているため、食品の主要な特徴を実質的に決定する種々の物質、例えば色素、着香料、あるいは栄養素さえ除去してしまう。
【０００９】
本出願人による特許出願は、液状食品中に存在する有毒汚染物質の対応する不溶化特異的ポリクロナール抗体による複合化（排除）を想定した、革新的な改良された汚染除去技術について説明している（特許文献１）。
【００１０】
特に、排除対象の汚染物質に特異的なイムノグロブリンは、ガラスまたはプラスチック小球、あるいは、任意に化学的に被覆可能な重合体でコートした磁気金属小球に付着させて不溶化し、正確な予定モル濃度比で汚染液に加える。培養後、生じる有毒残渣−イムノグロブリン複合体を濾過で排除する。
【００１１】
しかし、前記技術の産業応用には、いくつかの欠点がある：
ａ．固定および汚染除去剤利用の手段として使用する小球は、沈殿する可能性がある。そのため、液状食品を勢いよく攪拌しなければならない。さらに、必ずしも技術的に応用可能でない方法であるため、変更にかなりの費用がかかる、ということになる；
ｂ．イムノグロブリンと汚染除去対象の液体の間の接触面は少ないので、汚染除去時間は比較的長く、必ずしも生産工程に適さない；
ｃ．抗体を、付着、即ち、弱い結合によって固体支持体に結合させるので、連続プロセスでの使用を可能にするために実施する、洗浄および再活性化工程中、かなりの量が該支持体から剥離する傾向がある。このため、生産コストに大きく影響しないために必要な何回もの再利用ができない、ということになる。
ｄ．方法の最後に必要な液体濾過によって、生産の時間と費用が決まってしまう。
【００１２】
様々な性質の基質、例えば、ニトロセルロースや付着によってイムノグロブリンを結合する他の物理的反応性重合体から得られる膜が既知で、特に、診断目的で臨床生化学検査で使用される。最近、それらは、食品や体液中のマイコトキシンの検出にも使用されている。例として言及するのは、次のとおりである（非特許文献２−４）。
【特許文献１】ＭＩ９９Ａ００２６２２
【非特許文献１】Ｉ．Ｂａｕｄｒｉｍｏｎｔ，  Ａ．Ｍ．Ｂｅｔｂｅｄｅｒ，  Ａ．Ｇｈａｒｂｉ，  Ａ．Ｐｆｏｈｌ−Ｌｅｓｚｋｏｗｉｃｚ，  Ｇ．Ｄｉｒｈｅｉｍｅｒ  ａｎｄ  Ｅ．Ｅ．Ｃｒｅｐｐｙ，  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ  ｄｉｓｍｕｔａｓｅ  ａｎｄ  ｃａｔａｌａｓｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｎｅｐｈｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｃｈｒａｔｏｘｉｎ  Ａ  ｉｎ  ｒａｔｓ（ラットにおけるオクラトキシンＡの摂取により誘導される腎臓毒性に対するスーパーオキシド・ジスムターゼの効果），  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，  １９９４，  ８９（２），  １０１
【非特許文献２】Ｅ．Ｕｓｌｅｂｅｒ，  Ｅ．Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ  ａｎｄ  Ｇ．Ｔｅｒｐｌａｎ，  Ｄｉｒｅｃｔ  ｅｎｚｙｍｅ  ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  ｉｎ  ｍｉｃｒｏｔｉｔｒａｔｉｏｎ  ｐｌａｔｅ  ａｎｄ  ｔｅｓｔ  ｓｔｒｉｐ  ｆｏｒｍａｔ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓａｘｉｔｏｘｉｎ  ｉｎ  ｓｈｅｌｌｆｉｓｈ（甲殻類中のサキシトキシンを検出するための微量滴定および試験片構成による直接酵素免疫検定），  Ｌｅｔｔ．  ｉｎ  Ａｐｐｌ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，  １９９１，  １３，  ２７５
【非特許文献３】Ｓ．Ｄｅ  Ｓａｅｇｅｒ  ａｎｄ  Ｃ．Ｖａｎ  Ｐｅｔｅｇｈｅｍ，  Ｄｉｐｓｔｉｃｋ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  ｔｏ  Ｄｅｔｅｃｔ  Ｆｕｓａｒｉｕｍ  Ｔ−２  Ｔｏｘｉｎ  ｉｎ  Ｗｅａｔｈ（ＷｅａｔｈにおけるフザリウムＴ−２毒素を検出するための浸漬型酵素免疫検定），  Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，  １９９６，  ６２（６），  １８８０
【非特許文献４】Ｅ．Ｕｓｌｅｂｅｒ，  Ｅ．Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ  ａｎｄ  Ｇ．Ｔｅｒｐｌａｎ  ａｎｄ  Ｍ．Ｖ．Ｌａｙｃｏｃｋ，  Ｔｗｏ  ｆｏｒｍａｔｓ  ｏｆ  ｅｎｚｙｍｅ  ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓａｘｉｔｏｘｉｎ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｐａｒａｌｙｔｉｃ  ｓｈｅｌｌｆｉｓｈ  ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ  ｔｏｘｉｎｓ（サキシトキシンおよび他の麻痺性甲殻類の毒素を検出するための酵素免疫検定の２つの構成体），  Ｆｏｏｄ  Ａｄｄｉｔｉｖ．  ａｎｄ  Ｃｏｎｔａｍｉｎａｎｔｓ，１９９５，１２（３），  ４０５
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
驚くべきことに、汚染物質に特異的な抗体を共有結合する生体適合膜、好ましくは重合体の性質のもの、を液状食品の汚染除去に使用すると有利であることが見いだされた。該膜は、当分野で既知の汚染除去技術に伴う問題を解決でき、効率と応用簡便性に関して驚くべき結果を生じる。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
液状食品から１種類以上の化学及び／又は生物汚染物質を除去するプロセスで、前記液体と、表面に前記汚染物質に特異的な抗体を共有結合する、少なくとも１種類の生体適合膜との接触から成るプロセスを提供するのが、本発明の目的である。
【００１５】
本発明のプロセスで使用するために、液状食品からの化学及び／又は生物汚染物質除去膜を提供するのが、本発明のさらなる目的である。前記膜は、生体適合材料から成り、前記汚染物質に特異的な抗体がそれに、またはその表面に共有結合されている点を特徴とする。
【発明の効果】
【００１６】
当分野で既知の液状食品の汚染除去技術と比較して、本発明の手法は、多数のかつ予想外の長所を提供する。
【００１７】
特に、以下の実施例で証明するように、本発明の手法は、液体の攪拌をなんら必要としないので、応用がさらに容易である。さらに、前記手法は、汚染除去のために小球に固定した抗体を利用した、特許出願ＭＩ９９Ａ００２６２２で説明する手法に必要な時間よりもはるかに短い時間内で完全な汚染除去を行う。実施例１８でさらに詳細に示すとおり、本手法のさらなる長所は、例えば０．１Ｎ  ＨＣｌで洗浄して汚染物質を除去することによって、特許請求の範囲に記載の膜を再生でき、汚染除去力を失わずに、連続汚染除去手法で再利用できる点である。それは、プロセス費用に関して重要な長所となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
本発明の特に好ましい実施態様によれば、好ましくは切片状の膜を汚染除去対象の液体に浸す。前記切片を該液体中で、一方の端に何らかの浮き、例えば中空プラスチックボールを、他方の端に重りを付けてぴんと張った状態にする。該膜は、汚染物質濃度、温度、攪拌の要否に応じて、好ましくは、１時間から２４時間の範囲の間、汚染除去対象の液体に浸す。液体の汚染除去は、攪拌すると、さらに早まる。本発明によれば、液状食品は、攪拌しない場合でも、完全に、かつ、急速に汚染除去できる。汚染除去対象の液体の攪拌が、望ましくない場合や、非常に費用がかかる場合、これは特に有利である。
【００１９】
さらに、汚染除去は、室温未満の温度よりも室温の方が速やかである。事実上、室温で、汚染除去に１〜６時間かかるのが好ましい。
【００２０】
いったん、処理が完了すると、本発明の膜あるいは複数種の膜は、単に取り除くことによって、即ち、当分野で既知の技術が要求する濾過などの分離手法を使用せずに、液体から分離する。これは、費用と安全性の点で重要な長所となる。
【００２１】
本発明記載の手法によって汚染除去できる液状食品は、例えばワイン、ミルク、フルーツおよび野菜ジュース、ビールおよび水である。本発明の特に好ましい実施態様では、膜あるいは複数種の膜は、抗体と化学共役した生体適合重合体から成る。生体適合重合体は、合成、半合成もしくは天然品であり、特許請求の範囲に記載されている手法での同使用に十分な機械抵抗性を持った膜の調製に適している。
【００２２】
該膜は、織布または不織布の形態であるのが好ましい。該重合体は、好ましくは、ナイロンおよびその誘導体、セルロース誘導体およびポリアクリレートから成る群から選択し、ニトロセルロースおよびナイロン６６が特に好ましい。該膜は、これらの材料の中の１種類のみから成ること、あるいは、それらの混合物（例、ポリエステル６０％とポリウレタン４０％から成るアルカンタラ）で調製することができる。排除対象の汚染物質に特異的な抗体を本発明の膜に固定する。好ましくは、前記抗体は、当分野で既知の方法に従って中〜大型動物の免疫化によって入手するポリクロナール抗体である（Ａ．Ｊｏｎｓｔｏｎｅ  ａｎｄ  Ｔｈｏｒｐｅ，  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｉｎ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ（免疫化学の実務），  １９８２，  ２７〜３０，  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉ．  Ｐｕｂｌ．，  Ｏｘｆｏｒｄ参照）。該抗体は、当分野で既知の化学共役反応によって、特にその目的のために至適化した同反応によって本発明の膜に固定する。該抗体との化学共役は、リンカーを使って行うのが好ましく、該リンカーは、その機能が立体障害を減じることであり、結果的に、膜との抗体共役および抗体と汚染物質の間の相互作用に有利に働く。さらに、リンカーによる共役は、膜表面上の抗体の密度を高める。これらの性質によって、効率的な汚染除去増強が可能である。
【００２３】
ジアミノ−モノカルボキシルアミノ酸またはモノアミノ−ジカルボキシルアミノ酸、特にアルギニン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸をリンカーとして使用できる。
【００２４】
別の、特に好ましいリンカーは、次のとおりである：
−ＣＨ２−ＣＨ２−ＳＯ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−（ＣＨ２）４−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨ２）３−ＣＨ＝Ｏ
【００２５】
本発明のプロセスによって、特異的抗体を産生できる、任意の汚染物質の液状食品からの排除が可能である。
【００２６】
特に、前記の汚染物質は、化学的性質のもの、例えば殺寄生虫剤、除草剤、殺虫剤、薬物およびそれらの代謝物、ホルモンおよびそれらの代謝物、並びに、液状食品生産プロセス中に発生する望ましくない物質、もしくは、生物由来のもの、例えば毒素であることができる。
【００２７】
特に、以下の実施例で詳細に説明するように、本発明の手法は、液状食品からの以下の汚染物質の排除に非常に有効である：
−アトラジン、アフラトキシン、オクラトキシン、フモニシン、カダベリン、プトレセイン、ウレタン、プロゲステロンおよび不活性化サルモネラ。
【００２８】
本発明に記載のプロセスは、各種汚染物質に対抗する抗体を結合した膜を使用し、単一操作で液体からの数種の汚染物質の除去が可能である。そのため、本発明に従った汚染除去手法において、１種の汚染物質当たり１個以上の膜を使用する。
【００２９】
汚染物質１種当たりの膜の総表面積は、抗体が認識する汚染物質に対する固定された抗体のモル比が好ましくは≧１である面積である。特に好ましい実施態様によれば、前記比は、１から５までの範囲、好ましくは１から２までの範囲である。
【実施例１】
【００３０】
アトラジン−ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）共役体の調製
１．ジアゾ誘導体の調製
アトラジン１０ｍｇ（４．６ｘ１０−６ｍｏｌ）に１０μｌの１Ｎ  ＨＣｌ（５ｘ１０−６ｍｏｌ）を添加した。スパーテルを使って得られた混合物を望みの硬さにし、試験管に注ぎ、これを沸騰水中に静置し、蒸留水９００μｌを添加した。生じたアトラジン・ＨＣｌ溶液に０．５ｍｌの１Ｎ  ＨＣｌを添加し、氷浴中で冷却した。いったん１ｍｇのＮａＢｒを添加し、攪拌しながら、１ｍｇ／ｍｌ（２６０ｍｇ；４．４ｘ１０−６ｍｏｌ）の濃度の２６０μｌの冷ＮａＮＯ２溶液を滴下した。氷中で攪拌を１時間継続し、表題のジアゾ誘導体を得た。
【００３１】
２．ＢＳＡとの共役
０．１Ｍホウ酸緩衝液、ｐＨ９中８．４ｍｇ／ｍｌの濃度のＢＳＡ溶液に、攪拌しながら、第１項のとおりに調製したジアゾ誘導体を１５分間かけて滴下した；１Ｎ  ＮａＯＨを添加してｐＨを一定に保った。混合液を氷中で２時間反応させ、ＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）で透析した。
【実施例２】
【００３２】
アフラトキシン−ＢＳＡ共役体の調製
１．ベンジジンビス−ジアゾ誘導体の調製
ベンジジン・２ＨＣｌ（２６ｍｇ）を４．５ｍｌの０．２Ｎ  ＨＣｌに溶解し、０．５ｍｌの蒸留水に溶解した１８ｍｇのＮａＮＯ２を添加した。氷浴中で攪拌しながら反応を１時間実施した；直ちにオレンジ色を呈した。
【００３３】
２．ＢＳＡとの共役
０．１６Ｍホウ酸緩衝液−１．３Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ＝９中１０ｍｇ／ｍｌの濃度のＢＳＡ溶液（５０μｌ）に５０μｇの凍結乾燥アフラトキシンを添加した。得られた混合物に、第１項のとおりの１７μｌのビス−ジアゾ−ベンジジン溶液と３３μｌのホウ酸緩衝液から成る混合液を添加した。褐色に変色し、４℃で２時間ゆっくりと攪拌しながら反応を継続した。反応混合液をＰＢＳで透析した。
【実施例３】
【００３４】
オクラトキシン−ＢＳＡ共役体の調製
０．１Ｍ  酢酸緩衝液、ｐＨ＝５．５中１０ｍｇ／ｍｌの濃度のＢＳＡ溶液（３０ｍｌ）に、水／メタノール９：１中５ｍｇ／ｍｌの濃度のオクラトキシン９．３２ｍｌを添加した。混合液に７５０ｍｇのＥＤＡＣ（Ｓｉｇｍａ  Ｅ１７６９）を添加し、室温で２時間反応させた；最初の３０分間、ｐＨを５分毎に調整した。
【００３５】
反応混合液を、１０Ｋｄカットオフチューブ中、ＰＢＳ、ｐＨ７．４で透析した。ＢＳＡ対オクラトキシン共役比は、ミリモルで１：２５であった。
【実施例４】
【００３６】
フモニシン−ＢＳＡ共役体の調製
１．フモニシンＢ１−グルタールアルデヒド−ＢＳＡの調製
０．１Ｍ  ＰＢＳ、ｐＨ７．４中に蛋白１ｍｇ／ｍｌを含むＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ  Ａ７９０６）（１５ｍｌ）溶液を４℃、０．２％グルタールアルデヒド溶液（Ｓｉｇｍａ  Ｇ５８８２）２００ｍｌで一晩透析した。活性化ＢＳＡ溶液を、ＰＢＳ５００ｍｌ（３分間交換）でさらに透析し、過剰の未反応グルタールアルデヒドを除去した。
【００３７】
活性化ＢＳＡ溶液に、１ｍｌの０．０６Ｍ  ＤＭＳＯに溶解したフモニシンＢ１（Ｓｉｇｍａ  Ｆ１１４７）２５ｍｇを添加した。得られた混合液を、攪拌しながら、実験室温度で３時間、次に、４℃で一晩反応させ、最後にＰＢＳで透析した。
【００３８】
得られた共役体は、０．９３ｍｇのＢＳＡと０．１５ｍｇのフモニシンＢ１／ｍｌから成った。
【００３９】
２．フモニシンＢ１−ＣＤＩ−ＢＳＡの調製
０．１Ｍ酢酸緩衝液、ｐＨ６．５中に１ｍｇ／ｍｌの蛋白を含むＢＳＡ溶液（Ｓｉｇｍａ  Ａ７９０６）（１５ｍｌ）を調製した。混合液に最終濃度０．０６ＭとしたＤＭＳＯを含む前記緩衝液１ｍｌに溶解した２．５ｍｇのフモニシンＢ１を添加し、攪拌しながら、粉末カルボジイミド（ＣＤＩ）（Ｓｉｇｍａ  Ｅ１７６９）２５ｍｇを添加した。攪拌を実験室温度で１時間継続し、その間、ｐＨを１０分毎に調節し、必要な限り５．５に調整した。該混合液を４℃で一晩反応させ、引き続いてＰＢＳで透析し、過剰の未反応の試薬を除去した。
【００４０】
０．９３ｍｇのＢＳＡと０．１５ｍｇのフモニシンＢ１／ｍｌを含む共役体を得た。
【実施例５】
【００４１】
カダベリン−アゾ−ＢＳＡ共役体の調製
カダベリン：１，５−ジアミノペンテン［Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）５−ＮＨ２］
共役体：Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）５−Ｎ＝Ｎ−ＢＳＡ
【００４２】
１．カダベリンモノ−ジアゾ誘導体の調製
反応は、氷浴中で実施した。
【００４３】
カダベリン２塩酸塩（３５ｍｇ：０．２ｍｍｏｌ）を０．３ｍｍｏｌ  ＨＣｌと４ｍｇのＮａＢｒ（０．０４ｍｍｏｌ）を含む水５ｍｌに溶解した。
【００４４】
該溶液に、攪拌しながら約１０分かけて氷水１ｍｌに溶解した１４．５ｍｇの（０．２１ｍｍｏｌ）ＮａＮＯ２を添加した。
【００４５】
いったん、過剰のＨＮＯ２の存在をヨード−デンプン処理紙で検査し、反応をさらに１０分間継続し、［ＮＨ２−（ＣＨ２）５−Ｎ＝Ｎ−ＯＨ］を生成した。
【００４６】
２．カダベリン−アゾ−ＢＳＡ共役体の調製
０．１３Ｍ  ＮａＣｌを含む０．１Ｍ  ホウ酸緩衝液、ｐＨ＝９．０中１０ｍｇ／ｍｌの濃度のＢＳＡ溶液（１０ｍｌ）に、攪拌しながら氷浴中で上記のとおりに調製したカダベリンジアゾ誘導体溶液２ｍｌを添加した。
【００４７】
生じた溶液を４℃でゆっくりと攪拌しながら２時間反応させた後、１０  Ｋｄ  カットオフチューブ内でＰＢＳで透析した。次に、ｐＨを９．０に調整した。
【００４８】
得られたカダベリン／ＢＳＡ共役比は２３．５：１であった。
【実施例６】
【００４９】
プトレセイン−アゾ−ＢＳＡ共役体の調製
実施例６の記述とおりに、同一反応モル比で（カダベリンの指示量に０．９２をかける）プトレセイン−アゾ−ＢＳＡ免疫原を合成した。
【００５０】
構造類似性があるため、カダベリンに対して生じた抗体は、プトレセインに対して十分に反応し、同物質の複合体を形成した。
【実施例７】
【００５１】
エチル−カルバメート−Ｎ＝Ｎ−ＢＳＡ共役体の調製
１．エチルカルバメート（ウレタン）ジアゾ化
ウレタン（３５．６ｍｇ；０．４ｍｏｌ）を０．１Ｎ  ＨＣｌ４ｍｌに溶解した。該溶液を氷中で冷却、攪拌しながら、氷水２ｍｌに溶解した２４．８ｍｇのＮａＮＯ２を攪拌しながら添加した。攪拌は、氷中で１時間継続した。
【００５２】
２．ＢＳＡとの共役体の形成
１３ｍｌの０．１６Ｍホウ酸緩衝液−０．１３Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ＝９．０中に１３０ｍｇのＢＳＡを含有する溶液を氷中で冷却し、攪拌しながらゆっくりと１ｍｌのジアゾ−エチル−カルバメート溶液を添加した。得られた溶液を２時間反応させた後、１０ｋＤカットオフチューブ中、同緩衝液で透析した。得られたエチルカルバメート／ＢＳＡ比はモルにして４０：１であった。
【実施例８】
【００５３】
プロゲステロン−ＢＳＡ共役体の調製
１．プロゲステロン活性化
プロゲステロン−３（Ｏ−カルボキシメチル）オキシム（６０ｍｇ；０．１５Ｍ）（Ｓｉｇｍａ  Ｐ３２７７）と３７．５μｌ（０．１５Ｍに相当）のトリ−ｎ−ブチルアミンを１．５ｍｌのジオキサンに溶解した。
【００５４】
該溶液を８℃まで冷却し、２０μｌ（０．１５ｍＭ）のイソブチルクロロカーボネートを添加し、３５分間反応させた。
【００５５】
２．ＢＳＡとの共役
ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ）（２１０ｍｇ）を水５．５ｍｌに可溶化し、ジオキサン４ｍｌと１Ｎ炭酸ナトリウム２４０μｌを添加した。
【００５６】
該混合液を８℃まで冷却し、全活性化プロゲステロン溶液（ｐＨを７．５に調整）を添加し、３０分間反応させた。次に、そこに２５μｌの１Ｎ  ＮａＯＨを添加し、４時間３０分の間反応させた。該溶液を一晩水で透析した。
【００５７】
ｐＨは、１Ｍ  ＨＣｌで４．５とした。生成した沈殿を４℃で放置し、遠心分離で回収し、１０ｍｌの水に可溶化し、その間、ｐＨを１Ｍ炭酸ナトリウムで７．０に調整し、最後に、酸性ｐＨでアセトン（１回の通過当たり１５ｍｌ）に連続通過させて精製した。
【実施例９】
【００５８】
サルモネラ不活性化
サルモネラに対する抗体の産生のため、適切な抗原を使って動物を感作した。
【００５９】
臨床病理材料から採取したサルモネラエンテリテディス病原体から該抗原を産生し、サルモネラに特異的な培地上の発酵経路によって増殖させた。
【００６０】
該抗原を既知の方法（Ｍ．Ｒａｙｎａｕｄ，  Ａ．Ｔｕｒｐｉｎ，  Ｒ．Ｍａｎｇａｌｏ  ａｎｄ  Ｂ．Ｂｉｚｚｉｎｉ，  Ｃｒｏｉｓｓａｎｃｅ  ｅｔ  ｔｏｘｉｎｏｇｅｎｅｓｅ，  Ａｎｎ．  Ｉｎｓｔ．  Ｐａｓｔｅｕｒ，  １９５５，  ８８，  ２４）に従い、溶菌によって抽出した。
【００６１】
該抗原の精製と免疫原への形質転換は、従来法（Ｂ．Ｂｉｚｚｉｎｉ，  Ａ．Ｔｕｒｐｉｎ  ａｎｄ  Ｍ．Ｒａｙｎａｕｄ，Ｂｕｌｌ．Ｉｎｓｔ．Ｐａｓｔｅｕｒ，  １９７４，  ７２，  １７７）で実施した。
【実施例１０】
【００６２】
ポリクロナール抗体産生のための動物の免疫化
実施例１〜９で合成した各種免疫原に対応するポリクロナール抗体を、既述の方法（Ａ．Ｊｏｈｎｓｔｏｎｅ  ａｎｄ  Ｒ．Ｔｈｏｒｐｅ，  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｉｎ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，  １９８２，  ２７−３０，  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉ．  Ｐｕｂｌ．，  Ｏｘｆｏｒｄ）に従ってヒツジに産生させた。
【００６３】
特に、採用した免疫化プロトコルは次のとおりである：
ａ．ＰＢＳ、ｐＨ７．４とフロイント完全アジュバント（Ｓｉｇｍａ  Ｆ５８８１）の１：１混合液（ｖ／ｖ）２ｍｌに懸濁した、１０ｍｇの免疫原／動物の皮下（ｃｓ）投与による動物の感作処置；ｓｃ注射液を動物投与部分の５箇所（０．４ｍｌ／箇所）の異なる部位に投与した；
ｂ．ＰＢＳ、ｐＨ７．４とフロイント不完全アジュバント（Ｓｉｇｍａ  Ｆ５５０６）の１：１混合液（ｖ／ｖ）１ｍｌに懸濁した、２．５ｍｇの免疫原／動物の筋肉内（ｉｍ）注入（大腿部）によるブースター処置；
ｃ．３０日間隔のブースター処置、抗体応答が陽性になるまで、上述の条件と同一の実験条件下で実施。
【００６４】
抗体応答陽性は、ＥＬＩＳＡ法によって検定した：対照免疫原、即ち、被験免疫原（投与品）の合成に使用したものとは異種の蛋白（例、ＨＳＡ；ＯＶＡ）と共役した同一ハプテンの免疫原でマイクロプレートの穴をコートした。産生された抗体の感受性と特異性を、酵素ＨＲＰ（西洋ワサビパーオキシダーゼ−Ｓｉｇｍａ  Ａ３４１５）と共役したヒツジ抗体抗−抗体を使って分析した；
ｄ．抗体精製用の血液は、各ブースターから１５日目に動物の頚静脈から採取した。
【実施例１１】
【００６５】
特異的イムノグロブリン（ＩｇＧ）の精製
動物の血液を３，０００ｒｐｍで１５分間遠心分離して、血清を収集した；文献（Ｋ．Ｈｅｉｄｅ  ａｎｄ  Ｈ．Ｇ．Ｓｃｈｗｉｃｋ，  Ｓａｌｔ  ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（イムノグロブリンの塩分別、免疫化学中），  ｖｏｌ．１，１９７８，  ｃｈａｐｔｅｒ  ７，  Ｅｄ．Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉ．Ｐｕｂｌ．，  Ｏｘｆｏｒｄ）の記述のとおりに、硫酸アンモニウム飽和溶液処理によって、そこからイムノグロブリンを沈殿させた。
【００６６】
過剰の塩は、１０ｋＤカットオフチューブ中、ＰＢＳ、ｐＨ７．４による透析で除去した。
【００６７】
ハプテン（抗原）に特異的なＩｇＧは、文献（Ｓ．Ｆｕｃｈｓ  ａｎｄ  Ｍ．Ｓｅｌａ，  Ｉｍｍｕｎｏａｄｓｏｒｂｅｎｔｓ，  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ｖｏｌ．１，  １９７８，  ｃｈａｐｔｅｒ  １０，  Ｅｄ．Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ，  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉ．Ｐｕｂｌ．，Ｏｘｆｏｒｄ）の記述のとおりに、特異的免疫原で活性化したセファロース４Ｂによるアフィニティークロマトグラフィーによって全イムノグロブリンから分離した。
【実施例１２】
【００６８】
ニトロセルロース基質（シート）への特異的ＩｇＧ固定
１．ニトロセルロースの活性化
反応方式：
ニトロセルロース−ＯＨ ＋ Ｈ２Ｃ＝ＣＨ−ＳＯ２−ＣＨ＝ＣＨ２→
ニトロセルロース−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＳＯ２−ＣＨ＝ＣＨ２
【００６９】
ジビニルスルフォン（ＤＶＳ−Ｓｉｇｍａ  Ｖ３７００）（１０ｍｌ）を２０ｍｌのジメチルホルムアミド、１７０ｍｌの０．５Ｍ  ＮａＨＣＯ３／ＮａＣＯ３緩衝液、ｐＨ１０に溶解した。ニトロセルロースシートを前記溶液に浸し、そこで、２１℃で１０分間保ち、蒸留水でゆすぎ、乾燥した。
【００７０】
得られたニトロセルロースシートは、４℃の乾燥状態で、少なくとも１ヶ月保存できた。
【００７１】
活性化ニトロセルロースへのリンカー攻撃
前記攻撃の目的は、イムノグロブリン攻撃への立体障害を排除することである。
反応方式：
ニトロセルロース−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＳＯ２−ＣＨ＝ＣＨ２＋ Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）４−ＮＨ２→
ニトロセルロース−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＳＯ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−（ＣＨ２）４−ＮＨ２
【００７２】
上述のとおりに調製した活性化ニトロセルロースシートを２１℃で、１，４−ジアミノブタン（Ｓｉｇｍａ  Ｐ７５０５）の１％（ｗ／ｖ）水溶液に３０分間浸し、そこから取り出し、蒸留水で洗浄した。
【００７３】
３．セルロースへのイムノグロブリンの結合
イムノグロブリンを、上述のとおりに処理したニトロセルロースに以下の２種類の技術のいずれかによって結合させた：
３ａ）ＩｇＧの過ヨウ素酸酸化とリンカーのＮＨ２基への結合
０．１Ｍクエン酸／クエン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５．０中ＩｇＧ溶液（２０ｍｇ／ｍｌ）１０ｍｌを３７℃まで加熱し、１：１５に相当するＩｇＧ／メタ過ヨウ素酸ナトリウムモル比で、メタ過ヨウ素酸ナトリウム溶液（ＮａＩＯ４、３０ｍｇ／ｍｌ水）を添加した。該酸化は、攪拌、遮光しながら、３７℃で５分間実施し、最終濃度０．０１Ｍとするエチレングリコール（Ｓｉｇｍａ  Ｅ９１２９）を添加して停止した。
【００７４】
第２項のとおりに調製した結合ニトロセルロースシートを、４０ｍｌの１Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３緩衝液、ｐＨ１０．０に浸し、酸化ＩｇＧ溶液を添加した。反応は、４℃で一晩実施した。
【００７５】
１Ｍ  ＮａＨ２ＰＯ４を添加して、ｐＨを６．０に調整した。次に、新鮮０．２６Ｍ  ＮａＢＨ４溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）を添加して、最終濃度を０．００１Ｍとした。室温で３０分間還元反応を実施した。ニトロセルロースシートをＰＢＳ、ｐＨ７．４で洗浄し、乾燥した。
【００７６】
３ｂ）結合ニトロセルロースでのアルデヒド基の導入とＩｇＧの固定
反応方式：
ニトロセルロース−Ｏ（ＣＨ２）２−ＳＯ２−（ＣＨ２）２−ＮＨ２＋ −ＣＨＯ−（ＣＨ２）３−ＣＨＯ→
ニトロセルロース−Ｏ−（ＣＨ２）２−ＳＯ２−（ＣＨ２）２−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨ２）３−ＣＨＯ
【００７７】
第２項のとおりに調製したニトロセルロース−ＮＨ２シートを、０．５Ｍ  ＮａＨＣＯ３／Ｎａ２ＣＯ３緩衝液、ｐＨ１０．０中１％（ｖ／ｖ）グルタールアルデヒド溶液に浸し、そこで２１℃で１５分間保ち、蒸留水で洗浄し、乾燥した。
【００７８】
得られたニトロセルロースシートは、４℃の乾燥状態で、反応性を損失せずに１ヶ月保存できた。
【００７９】
ニトロセルロース−ＣＨＯシートを、０．５Ｍ  ＮａＨＣＯ３／Ｎａ２ＣＯ３緩衝液、ｐＨ１０．０中ＩｇＧ溶液１００ｍｌに浸し、それを４℃で一晩保持した。該シートをＰＢＳ、ｐＨ７．４でゆすぎ、ＰＢＳ、ｐＨ６．０中０．００１Ｍ  ＮａＢＨ４新鮮溶液に浸した。実験室温度で３０分間還元反応を実施した。次に、該シートをＰＢＳ、ｐＨ７．４でゆすいだ。
【実施例１３】
【００８０】
ナイロン基質（布）への特異的ＩｇＧ固定
・方式Ｎｏ．１
１．ナイロン活性化
ナイロン６６［ポリ（Ｎ，Ｎ’−ヘキサメチレンアジピンジアミド）−Ｆｌｕｋａ−７４７１２］布を、３．５Ｍ  ＨＣｌ中に浸し、それを２４時間保持し、蒸留水で洗浄した。
【００８１】
−ＮＨ２および−ＣＯＯＨ反応性基曝露によるナイロン活性化を得た。
【００８２】
２．イムノグロブリンとの共役
３通りの異なる手法に従って、イムノグロブリンをＨＣｌ−前処理したナイロンと共役させた：
【００８３】
２ａ）
反応方式：
ナイロン−ＣＯＯＨ ＋ ＣＭＣ→ナイロン−ＣＯＣＭＣ
濃無水酢酸を用いた１分間処理によって、−ＮＨ２基を遮断した。該布を最初に蒸留水で、次に０．１Ｍ炭酸緩衝液、ｐＨ９．５で洗浄し、最後にＰＢＳでゆすいだ。
【００８４】
室温で１０分間、水中４％１−シクロヘキシル−３−（２−モルフォリノエチル）−カルボジイミドメタ−ｐ−トルエンスルフォネート（ＣＭＣ）で上述のとおりに前処理した材料の処理によって−ＣＯＯＨ基を活性化した。ＩｇＧとナイロン−ＣＭＣを、ＰＢＳ中、室温で２時間、その後、４℃で一晩反応させた。
【００８５】
該布をＰＢＳで洗浄し、室温、ＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）ＯＶＡ（卵白アルブミン）で処理し、ＰＢＳ−ツイーン２０（０．０５％）でさらに洗浄し、最後に乾燥した。
【００８６】
２ｂ）
反応方式：
ナイロン−ＮＨ２＋ −ＣＨＯ−（ＣＨ２）３−ＣＨＯ→ナイロン−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨ２）３−ＣＨＯ
ＨＣｌで前活性化したナイロン布を、室温、蒸留水中２％グルタールアルデヒド溶液で２時間処理した。
【００８７】
蒸留水で洗浄した後、該ナイロン布を、室温、１ｍｇ／ｍｌの濃度のＰＢＳ中ＩｇＧ溶液で４時間処理した。その後、該布をＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）ＯＶＡ溶液で１時間処理し、室温、ＰＢＳ−ツイーン２０（０．０５％）でさらに洗浄し、乾燥した。
【００８８】
２ｃ）
反応方式：
ナイロン−ＮＨ２ ＋ ＣＨ２＝ＣＨ−ＳＯ２−ＣＨ＝ＣＨ２→
ナイロン−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＳＯ２−ＣＨ＝ＣＨ２
反応性基曝露のためにＨＣｌで前処理したナイロン布を２０ｍｌのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）および１７０ｍｌの０．５Ｍ  ＮａＨＣＯ３／Ｎａ２ＣＯ３緩衝液、ｐＨ９．０に溶解した１０ｍｌのジビニルスルフォン（ＤＶＳ）に浸し、それを２１℃で１時間保持し、蒸留水で洗浄した。
【００８９】
１００ｍｇのＩｇＧを２０ｍｌの０．５Ｍ  ＮａＨＣＯ３／Ｎａ２ＣＯ３緩衝液、ｐＨ９．０に溶解した。ナイロン-ＤＶＳ布を前記溶液に浸し、それを室温で一晩保持した。
【００９０】
いったん、反応が完了すると、ナイロンをＰＢＳでゆすぎ、乾燥した。
【実施例１４】
【００９１】
オクラトキシンのワインからの汚染除去
本実験の目的は、ワインから毒素の汚染除去のために、抗−オクラトキシン−特異的イムノグロブリン（ＩｇＧ）の複合化（除去）能−および関連する速度−を同時に分析することであった。ＩｇＧは、以下の形態で使用した：
ａ．遊離型−そのままで、いかなる支持体にも結合していない；
ｂ．１級アミン基を含むガラス製小球に結合（ガラス−アミノプロピル−Ｓｉｇｍａ  Ｇ４６４３−２００／４００メッシュ）；
ｃ．本発明に従いナイロン布に結合
【００９２】
イムノグロブリンＩｇＧは、以下の反応方式に従ってガラス小球に結合させた：
５ｍｇの抗−オクラトキシン特異的ＩｇＧを２ｍｌの０．０１Ｍ酢酸緩衝液、ｐＨ５．５に希釈し、前記緩衝液で透析した（精製塩除去）。
【００９３】
溶液を氷浴に置き、５３．５ｍｇのＮａＩＯ４を添加し、遮光、攪拌しながら２０分間反応させ、４０μｌのエチレングリコールを添加し、５分間反応させた後、０．１Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３緩衝液、ｐＨ９．５で透析した。
【００９４】
採取し、前記緩衝液で１０ｍｌとした溶液に、１ｇの小球−ＮＨ２を添加し、室温で一晩反応させた。小球懸濁液に、８００μｌのＮａＢＨ４（４ｍｇ／ｍｌ）溶液を添加し、実験室温度で２時間反応させた。
【００９５】
ＩｇＧと共役した小球をＰＢＳで洗浄した。以下の共役比を得た：１．８４ｘ１０−６ｍｏｌ  ＩｇＧ／ｇ小球−ＮＨ２
【００９６】
以下の実験手順に従って、ワインの汚染除去を実施した。
【００９７】
使用したワインは、技術の現状によって毒素含量が高い（０．４μｇ／ｌまで）赤ワインであった。ＨＰＬＣから明らかなように、３００ｌのワイン中のオクラトキシン含量は、０．２６５μｇ／ｌであった。
【００９８】
ワインを５０ｌずつ６等分し、これを以下のとおりに処理した：
アリコートＮｏ．１：１５０ｒｐｍで攪拌しながら、遊離抗−オクラトキシンＩｇＧを、ＩｇＧ１モル：存在する毒素１モルの比率で添加した；
アリコートＮｏ．２：  １５０ｒｐｍで攪拌しながら、ガラス小球と共役した遊離抗−オクラトキシンＩｇＧをＩｇＧ１モル：存在する毒素１モルの比率で添加した；
アリコートＮｏ．３：１５０ｒｐｍで攪拌しながら、ナイロン布と共役した抗−オクラトキシンＩｇＧをＩｇＧ１モル：存在する毒素１モルの比率で添加した。使用した該布は、短冊状であった。短冊は、一端をピンポン玉で浮遊させ、他端に重り（鉛の重り）をつけて張らせたが、いずれにしても液体中を自由に動いた。
アリコートＮｏ．４（遊離ＩｇＧ）、Ｎｏ．５（ガラス小球固定ＩｇＧ）およびＮｏ．６（ナイロン布固定ＩｇＧ）は、攪拌を１，０００ｒｐｍで行った点を除いて、上述のとおりに処理した。
【００９９】
全汚染除去実験は室温で実施した。１、３、６時間の接触後、各小分けワインから１００ｍｌ分を採取し、非取り込み（遊離）オクラトキシン含量を測定した。
【０１００】
アリコートＮｏ．１および４（遊離ＩｇＧ添加）中の毒素含量測定に関して、分析前に、１０Ｋｄカットオフチューブ中で透析し、存在するＩｇＧ−オクラトキシン複合体を保持した。
【０１０１】
下表は、前記の実験条件下で得られた結果を示し、ワイン中の遊離毒素濃度の減少％で表す（特異的ＩｇＧによる各種毒素除去系の汚染除去能）。
【０１０２】
【表１】
2005528902.tif 000002
【０１０３】
得られた結果は、以下のことを示す：
ａ．特異的ＩｇＧを使うことによって、ワインからオクラトキシンを完全に除去できる；
ｂ．遊離ＩｇＧを使うと、全毒素を複合化する時間が比較的長い（ワイン中に存在する干渉物質の作用によると思われる）；
ｃ．ガラス小球に結合したＩｇＧを使うと、完全複合化を得るために、かなり勢いよく攪拌することが必要である。理由は、攪拌しない、あるいは、ゆっくりと攪拌すると、小球が底に沈着する傾向があるためのようだ。しかし、勢いのよい攪拌は、工業的ワイン製造プロセスとは相容れないと思われる；
ｄ．驚くべきことに、布と共役したＩｇＧを使用すると、ワイン中に存在する全毒素を短時間、低速攪拌レベルで完全に複合化でき、工業的プロセスに適応している。
【実施例１５】
【０１０４】
生物由来アミン（プトレセイン）のワインからの汚染除去
本実験の目的は、予定濃度でワインに即席で添加した生物由来アミンをワインから汚染除去するための、特異的イムノグロブリン（ＩｇＧ）の複合化（除去）能−および関連する速度−を分析することであった。ＩｇＧは、以下の形態で使用した：
ａ．遊離型−そのまま、支持体に結合していない；
ｂ．ガラス製小球（Ｓｉｇｍａ  Ｇ４６６３）に固定；
ｃ．本発明に従いナイロン６，６布に固定；
さらに、異なる実験条件下で操作した。
【０１０５】
ガラス小球への特異的ＩｇＧの固定は、実施例１４で述べた手順に従って実施した。ワイン中のプトレセイン含量は、既知法に従ってＨＰＬＣで評価した。
【０１０６】
この場合も、使用したワインは赤ワインであった。該ワインを分析し、存在する場合は、生物由来アミンを測定し、ついで、攪拌しながら最終濃度４ｍｇ／ｌまでのプトレセインを添加した。
【０１０７】
以下の実験手順に従って、ワインの汚染除去を実施した。
【０１０８】
ワインを５０ｌずつ６等分し、以下のとおりに処理した：
アリコートＮｏ．１：放置（すなわち攪拌せず）後、遊離（非固定）抗−プトレセインＩｇＧを、ＩｇＧ１モル対添加アミン１モルの比率で添加した；
アリコートＮｏ．２：同一条件下で放置した後、ガラス小球に固定した抗−プトレセインＩｇＧを、ＩｇＧ１モル対添加アミン１モルの比率で添加した；
アリコートＮｏ．３：同一条件下で放置した後、本発明に従いナイロン布に固定した抗−プトレセインＩｇＧを、ＩｇＧ１モル対添加アミン１モルの比率で添加した。
【０１０９】
アリコートＮｏ．４（遊離ＩｇＧ）、Ｎｏ．５（小球固定ＩｇＧ）およびＮｏ．６（ナイロン布固定ＩｇＧ）は、１５０ｒｐｍでの攪拌を試験中終始継続した点を除いて、上述のとおりに処理した。
【０１１０】
全汚染除去実験は室温で実施した。１、３、６時間の接触後、各小分けワインから１００ｍｌ分を採取し、プトレセイン含量（程度の差はあるが固定された特異的抗体によって非複合化）を測定した。
【０１１１】
アリコートＮｏ．１および４（遊離−非固定−ＩｇＧで処理）中の毒素含量測定に関しては、分析前に、１００Ｋｄカットオフチューブ中で透析し、存在するＩｇＧ−プトレセイン複合体を保持した。
【０１１２】
下表は、前記の実験条件下で得られた結果を示し、ワイン中の遊離生物由来アミン濃度の減少％で表す（異なる形態の特異的ＩｇＧによる各種アミン除去系の汚染除去能）。
【０１１３】
【表２】
2005528902.tif 000003
【０１１４】
得られた結果は以下のことを示す：
ａ．驚くべきことに、ナイロン布に固定したＩｇＧを使用すると、液状食品（ワイン）は、生産プロセスに応用しにくいと思われる攪拌を行わずに放置した場合でも、完全に汚染除去される；
ｂ．ガラス小球に固定したＩｇＧは、最適な汚染除去力を発揮できない。それは、完全複合化前に、該小球が底に沈着する傾向があるからである。
【実施例１６】
【０１１５】
カルバメート（エチルカルバメートまたはウレタン）のワインからの汚染除去
遊離、または、各種濃度レベルで不活性物質に様々に固定されたＩｇＧの、即席で添加したカルバメートのワインからの汚染除去能を評価した。
【０１１６】
その目的で、以下の特異的抗ウレタンイムノグロブリンを使用した：
ａ．遊離型−いかなる支持体にも固定されていない；
ｂ．先の実施例で述べたとおりにガラス小球（Ｓｉｇｍａ  Ｇ４６４３）に固定；
ｃ．本発明に従いナイロン６，６布に固定。
【０１１７】
エチルカルバメート（ウレタン）含量は、文献に記載されている方法（Ｈ．Ｍ．Ｓｔａｈｒ，  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ(毒物検査における分析法)，  １９９１，  ｐ．１５７，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｎ．Ｙ．）に従ってガスクロマトグラフィーで測定した。
【０１１８】
以下の手順に従って、ワインの汚染除去を実施した。あるロットの白ワインを調べ、あるとすれば、エチルカルバメートの存在を確認した：検出量は、５μｇ／ｌに相当した。該ワインに、最終濃度５００μｇ／ｌまでのエチルカルバメートをさらに添加した後、５０ｌずつに４等分し、これらを次のとおりに処理した：
アリコートＮｏ．１：１５０ｒｐｍで攪拌しながら、遊離−非固定−抗−ウレタンＩｇＧを０．５モルＩｇＧ対１モルウレタンの比率で添加；
アリコートＮｏ．２：１５０ｒｐｍで攪拌しながら、前実施例に述べたとおりに、ナイロン布に固定した抗−ウレタンＩｇＧを０．５モルＩｇＧ対１モルウレタンの比率で添加；
アリコートＮｏ．３（遊離ＩｇＧ）とＮｏ．４（ナイロン布固定ＩｇＧ）は、ＩｇＧ／ウレタンモル比が１：１に相当した以外、上述のとおりに処理した。
【０１１９】
全汚染除去実験は室温で実施した。１、３、６時間の接触後、各小分けワインから１００ｍｌ分を採取し、溶液中の（非取り込み）カルバメート含量を測定した。
【０１２０】
この場合も、遊離（非固定）ＩｇＧで処理したアリコートを予め透析し、ＩｇＧ−カルバメート複合体を保持した。
【０１２１】
下表は、前記の実験条件下で得られた結果を示し、ワイン中の化学汚染物質濃度の減少％で表す。
【０１２２】
【表３】
2005528902.tif 000004
【０１２３】
特異的抗体が、一般に、１モル当たり２モルの抗原と複合体を形成できることを考慮すると、上記の結果は、ナイロン布へのＩｇＧ固定によって、ＩｇＧが抗原結合に驚くほど生物利用可能であることを証明している；一つの証拠は、理論値に近い濃度ですでに、ワインからの汚染物質除去がほぼ完全である点である。
【実施例１７】
【０１２４】
アフラトキシンのミルクからの汚染除去
本実験の目的は、ミルクからの、異なる不活性支持対に固定した抗−アフラトキシン特異的イムノグロブリン（ＩｇＧ）のアフラトキシンＡ１汚染除去能−および関連する速度−を分析することであった。ＩｇＧは、以下の形態で使用した：
ａ．先の実施例で述べた手順に従ったガラス小球に固定した抗−アフラトキシン特異的ＩｇＧ；
ｂ．本発明に従ったナイロン布に固定した同一ＩｇＧ
【０１２５】
汚染除去実験は、４℃、即ち通常のミルク保存温度で維持したサンプルについて実施した。
【０１２６】
汚染除去は、以下の実験手順に従って実施した。
【０１２７】
ミルク中のアフラトキシンＡ１含量は、当分野で既知のＨＰＬＣによって測定した（Ｓ．Ｍ．Ｌａｍｐｌｕｇｈ，Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｔｈｒｅｅ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｆｌａｔｏｘｉｎｓ  ｆｒｏｍ  ｈｕｍａｎ  ｓｅｒｕｍ  ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ａ  ｈｉｇｈ−ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ  ａｓｓａｙ（ＨＰＬＣ検査と組み合わせたヒト血清からのアフラトキシン抽出に関する三方法の比較），  Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．，  １９８３，  ２７３，  ４４２）。サンプルの性質に応じて、方法を調整した。
【０１２８】
あるロットのミルクを検討し、あるとすれば、毒素の存在を確認した。次に、該ミルクに最終濃度０．３μｇ／ｌまでのアフラトキシンを添加し、１０ｌずつ小分けし、これを以下のとおりに処理した：
アリコートＮｏ．１：１５０ｒｐｍで攪拌しながら、ＩｇＧ１モル対存在する毒素１モルの比率でガラス小球に固定した抗−アフラトキシンＩｇＧを添加；
アリコートＮｏ．２：１５０ｒｐｍで攪拌しながら、ＩｇＧ１モル対存在する毒素１モルの比率でナイロン布に固定した抗−アフラトキシンＩｇＧを添加；
アリコートＮｏ．３：１５０ｒｐｍで攪拌しながら、ＩｇＧ２モル対存在する毒素１モルの比率でガラス小球に固定した抗−アフラトキシンＩｇＧを添加；
アリコートＮｏ．４：１５０ｒｐｍで攪拌しながら、ＩｇＧ２モル対存在する毒素１モルの比率でナイロン布に固定した抗−アフラトキシンＩｇＧを添加。
【０１２９】
この実験で、高めのイムノグロブリン濃度を試験することが便利であると分かった。その理由は、低温で実施する免疫反応が有意に鈍化するからである。
【０１３０】
１、３、６時間の接触後、該ミルクから１００ｍｌずつを採取し、アフラトキシン含量（イムノグロブリンによる取り込みせず）を測定した。
【０１３１】
下表は、前記の実験条件下で得られた結果を示し、ミルク中の毒素濃度の減少％で表す（抗毒素特異的ＩｇＧによる各種毒素除去系の汚染除去力）。
【０１３２】
【表４】
2005528902.tif 000005
【０１３３】
上記の結果は、他の固定系に比較して、ナイロンでのイムノグロブリン固定が、驚くほど改良された汚染除去力を確保していることを証明している。さらに、ミルク汚染物質は、前記方法によって、低温でも完全に除去できる。
【実施例１８】
【０１３４】
ミルクからのサルモネラ抗原の汚染除去
本実験の目的は、不活性物質に固定した特異的イムノグロブリンの、ミルクからの細菌汚染物質除去能、並びに、工業的プロセスへの連続応用を考慮した固定法の合理性と簡易性を評価することであった。
【０１３５】
本実験のさらなる目的は、連続処理における、いったん十分に洗浄した固定ＩｇＧの再利用の適切性を評価することであった。
【０１３６】
この目的のために、以下の形態のＩｇＧで、ミルクからのサルモネラ抗原の汚染除去の分析を実施した：
ａ．遊離型−そのままで、いかなる支持体にも固定されていない；
ｂ．ガラス小球（Ｓｉｇｍａ  Ｇ４６４３）に固定
ｃ．本発明に従ってナイロン布に固定
【０１３７】
以下の実験手順に従って、ミルクの汚染除去を実施した。
【０１３８】
液状食品中のサルモネラ抗原の存在を、マイクロプレートに付着させた特異的抗体を使って、サンプル上に存在する抗原と検出酵素（パーオキシダーゼ）と共役させた同一抗原の間の抗体結合について競合を分析し、競合的ＥＬＩＳＡによって検定した。
【０１３９】
あるロットのミルクに、最終濃度２０μｇ／ｌまでのサルモネラ抗原を添加した後、該ミルクを１０ｌずつに小分けし、これを以下のとおりに処理した：
アリコートＮｏ．１：１５０ｒｐｍで攪拌しながら、ＩｇＧ１モル対存在する抗原１モルの比率で遊離−非固定−サルモネラ抗−抗原特異的ＩｇＧを添加；
アリコートＮｏ．２：１５０ｒｐｍで攪拌しながら、ＩｇＧ１モル対存在する抗原１モルの比率でガラス小球に固定した抗−抗原特異的ＩｇＧを添加；
アリコートＮｏ．３：１５０ｒｐｍで攪拌しながら、ＩｇＧ１モル対存在する抗原１モルの比率でナイロン布に固定した抗−抗原特異的ＩｇＧを添加。
【０１４０】
全汚染除去実験を室温で実施した。
【０１４１】
３時間接触後、以下の手順に従って、液体からＩｇＧを取り出した：
アリコートＮｏ．１（遊離ＩｇＧ）は０．４５μｍ膜での濾過による；
アリコートＮｏ．２（ガラス小球固定ＩｇＧ）はワットマンＮＯ．１濾紙での濾過による；
アリコートＮｏ．３（ナイロン固定ＩｇＧ）は液体からの布の簡単な取り出し。
【０１４２】
ミルク中の、あるとすれば、抗原残渣を測定した。
【０１４３】
ミルク中の抗原濃度の減少％で表した結果（各種固定イムノグロブリンの汚染除去力）を下表に示す。
【０１４４】
【表５】
2005528902.tif 000006
【０１４５】
上記の結果は、本質的に、他の固定系に関して、ナイロン布に固定したＩｇＧの汚染除去力を示す。
【０１４６】
ガラス小球やナイロン布は、ゆっくりと攪拌しながら０．１Ｎ  ＨＣｌ溶液で３０分間処理することによって、抗体に結合した汚染物質を除去して再生した。該布または該小球は、ＰＢＳでゆすぎ、上述の手順に従って、連続汚染除去プロセスで使用した。
【０１４７】
ほとんど回収できないことから、非固定ＩｇＧで実験を実施しなかった。
【０１４８】
下表は、連続処理で得られた結果を示す；該結果は、サルモネラ抗原によるミルク汚染の減少％で表す。
【０１４９】
【表６】
2005528902.tif 000007
【０１５０】
得られた結果は、汚染除去の再生および再利用の点で、ナイロンへの固定が、他の固定系よりも驚くほど良好な結果を生じることを示している。製品原価に対する汚染除去費は、かなり低減される結果になる。
【実施例１９】
【０１５１】
ミルクからのプロゲステロン汚染除去
本実験の目的は、不活性支持体に固定したイムノグロブリンの、液状食品からの過剰のステロイドホルモン汚染除去能を評価することであった。
【０１５２】
ミルクが、搾乳の生理的時期に応じて様々な量の前記ホルモンを含有することから、ミルクについて本実験を実施した。一例として、ミルクからのプロゲステロン除去の可能性を検討した。
【０１５３】
以下のＩｇＧの汚染除去力を検討した：
ａ．磁性小球に固定した抗−プロゲステロン特異的ＩｇＧ、該小球は化学共役に適した合成重合体でコートされている。
ｂ．本発明の手順に従った短冊状ニトロセルロース片に固定した抗−プロゲステロン特異的ＩｇＧ
【０１５４】
磁性小球の固定は、ガラスへの固定に使用したものと同じ手順に従って実施した。
【０１５５】
ミルクの汚染除去は、以下の実験手順に従って実施した。
【０１５６】
ミルク中のプロゲステロン含量は、既知法（Ｊ．Ａ．Ｄｅｍｅｔｒｉｏｕ，  ｉｎ  Ｍｅｔｈ．  ｉｎ  Ｃｌｉｎ．  Ｃｈｅｍ．，  １９８７，  ｐ．２５３，  Ａ．Ｊ．Ｐｅｓｃｅ  ａｎｄ  Ｌ．Ａ．Ｋａｐｌａｎ，  Ｅｄｓ．，  Ｃ．Ｖ．Ｍｏｓｂｙ，  Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，  ＵＳＡ）に従ってＥＬＩＳＡによって評価した。
【０１５７】
いったんプロゲステロン含量を調べ、ミルクを１０Ｌずつ小分けし、これを以下のとおりに処理した：
アリコートＮｏ．１：マグネットでゆっくりと攪拌し、小球を連続して動かしながら、ＩｇＧ１モル対プロゲステロン１モルの比率とする濃度で磁性小球に固定したＩｇＧを使用：
アリコートＮｏ．２：静かに攪拌し、液体中のセルロース片をわずかに動かしながら、ＩｇＧ１モル対プロゲステロン１モルの比率とする濃度でニトロセルロース片に固定したＩｇＧを使用。
【０１５８】
全汚染除去実験は、室温で実施した。
【０１５９】
１および３時間の接触後、１００ｍｌ分を各ミルクのアリコートから採取し、該液体中のプロゲステロン含量（非取り込み）を測定した。
【０１６０】
磁性小球を濾過により除去し、セルロース片を用手にて取り出した。
【０１６１】
下表は、前記実験条件下で得られた結果を示し、ミルク中のプロゲステロンの減少％（各種不活性支持体に固定した抗−プロゲステロン特異的ＩｇＧの汚染除去力）として表す。
【０１６２】
【表７】
2005528902.tif 000008
【０１６３】
結果は、ナイロン以外の繊維、例えばニトロセルロースに共役したＩｇＧの汚染除去効率を示す。
【０１６４】
結果は、また、大量で作業することによって、布への固定は、磁性小球への固定よりも有意に良好で、収益性の高い結果を生じることを示している。
【実施例２０】
【０１６５】
フルーツジュースからのアトラジン汚染除去
本実験の目的は、不活性相に固定した特異的ＩｇＧの、フルーツジュースのような濃厚な液状食品からの例えばアトラジンなどの化学汚染除去物質の汚染除去能を分析することであった。
【０１６６】
この目的のために、抗−アトラジンＩｇＧを以下のものに固定した：
ａ．ガラス小球（Ｓｉｇｍａ  ４６４３）
ｂ．本発明に従いナイロン布
【０１６７】
フルーツジュースの汚染除去を、以下の実験手順に従って実施した。
【０１６８】
フルーツジュース中のアトラジン含量を、一般的方法（Ｈ．Ｍ．Ｓｔａｈｒ，  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，  １９９１，  ｐａｇ．１８１，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｎ．Ｙ，）に従って、ガスクロマトグラフィーで評価した。
【０１６９】
販売されているオレンジジュースに、最終濃度５０μｇ／Ｌジュースまでのアトラジン溶液を即席で添加した。
【０１７０】
該ジュースを５Ｌずつ小分けし、これを以下のとおりに処理した：
アリコートＮｏ．１：１５０ｒｐｍで攪拌しながら、ＩｇＧ２モル対汚染物質１モルの比率で、ガラス小球に固定した抗−アトラジン特異的ＩｇＧを添加；
アリコートＮｏ．２：１５０ｒｐｍで攪拌しながら、ＩｇＧ１モル対汚染物質１モルの比率で、本発明に従ってナイロン布に固定した抗−アトラジン特異的ＩｇＧを添加；
アリコートＮｏ．３：１５０ｒｐｍで攪拌しながら、ＩｇＧ２モル対汚染物質１モルの比率で、ナイロン布に固定した抗−アトラジン特異的ＩｇＧを添加；
【０１７１】
他の全実験と同様に、ＩｇＧ活性化短冊状ナイロン片は、汚染除去対象液体に再浮遊させ、該ナイロン片の一方の端に中空プラスチックボールを付けて浮遊させ、他方の端に、小型の鉛の錘を付け、ナイロン片を攪拌中に張るようにして汚染除去した。
【０１７２】
全汚染除去実験を室温で実施した。
【０１７３】
２および４時間後、各ジュースのアリコートから１００ｍｌ分を採取し、該液体中の汚染物質であるアトラジン含量（非取り込み−遊離型）を測定した。
【０１７４】
下表は、前記の実験条件下で得られた結果を示し、フルーツジュース中の遊離アトラジン濃度の減少％（特異的ＩｇＧ汚染除去能）で表す。
【０１７５】
【表８】
2005528902.tif 000009
【０１７６】
これらの結果は、「濃厚な」液状食品も、除去反応媒体に対する抗体／物質の特定条件下で汚染除去できることを示している。
【０１７７】
結果は、汚染除去に際して、抗体固定手段として布を使用すると、反応条件と、その結果、汚染除去能が有意に改善されることも示している。
【手続補正書】
【提出日】平成17年2月7日(2005.2.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
アトラジン−ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）共役体の調製
１．ジアゾ誘導体の調製
アトラジン１０ｍｇ（４．６ｘ１０−６ｍｏｌ）に１０μｌの１Ｎ  ＨＣｌ（５ｘ１０−６ｍｏｌ）を添加した。スパーテルを使って得られた混合物を望みの硬さにし、試験管に注ぎ、これを沸騰水中に静置し、蒸留水９００μｌを添加した。生じたアトラジン・ＨＣｌ溶液に０．５ｍｌの１Ｎ  ＨＣｌを添加し、氷浴中で冷却した。いったん１ｍｇのＮａＢｒを添加し、攪拌しながら、１ｍｇ／ｍｌ（２６０ｍｇ；４．４ｘ１０−６ｍｏｌ）の濃度の２６０μｌの冷ＮａＮＯ２溶液を滴下した。氷浴中で攪拌を１時間継続し、表題のジアゾ誘導体を得た。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
２．ＢＳＡとの共役
０．１Ｍホウ酸緩衝液、ｐＨ９中８．４ｍｇ／ｍｌの濃度のＢＳＡ溶液に、攪拌しながら、第１項のとおりに調製したジアゾ誘導体を１５分間かけて滴下した；１Ｎ  ＮａＯＨを添加してｐＨを一定に保った。混合液を氷浴中で２時間反応させ、ＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）で透析した。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
反応混合液を、１０ｋＤカットオフチューブ中、ＰＢＳ、ｐＨ７．４で透析した。ＢＳＡ対オクラトキシン共役比は、ミリモルで１：２５であった。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４７】
生じた溶液を４℃でゆっくりと攪拌しながら２時間反応させた後、１０ｋＤカットオフチューブ内でＰＢＳで透析した。次に、ｐＨを９．０に調整した。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１００
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１００】
アリコートＮｏ．１および４（遊離ＩｇＧ添加）中の毒素含量測定に関して、分析前に、１０ｋＤカットオフチューブ中で透析し、存在するＩｇＧ−オクラトキシン複合体を保持した。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１１】
アリコートＮｏ．１および４（遊離−非固定−ＩｇＧで処理）中の毒素含量測定に関しては、分析前に、１００ｋＤカットオフチューブ中で透析し、存在するＩｇＧ−プトレセイン複合体を保持した。
【手続補正書】
【提出日】平成17年2月28日(2005.2.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
液状食品からの１種以上の化学及び／又は生物汚染物質の除去プロセスであって、該汚染物質に特異的な抗体がリンカーを介して化学的に共有結合している生体適合重合体膜を浸漬することを特徴とするプロセス。
【請求項２】
前記生体適合重合体が、ナイロン、セルロース、ポリアクリレート、ポリエステルまたはビスコース、それらの誘導体およびそれらの混合物から成る群から選択される請求項１に記載のプロセス。
【請求項３】
前記生体適合重合体がナイロンである請求項２に記載のプロセス。
【請求項４】
前記膜が織布または不織布状である請求項１に記載のプロセス。
【請求項５】
前記リンカーがＣＨ２−ＣＨ２−ＳＯ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−（ＣＨ２）４−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨ２）３−ＣＨ＝Ｏ、またはジアミノ−モノカルボキシルアミノ酸またはモノアミノ−ジカルボキシルアミノ酸を含むペプチドから成る群から選択される請求項１に記載のプロセス。
【請求項６】
前記ジアミノ−モノカルボキシルアミノ酸がアルギニンとリジンの中から選択され、前記モノアミノ−ジカルボキシルアミノ酸がグルタミン酸とアスパラギン酸の中から選択される請求項５に記載のプロセス。
【請求項７】
前記汚染物質が、殺寄生虫剤、除草剤、殺虫剤、薬物およびその代謝物、ホルモンおよびその代謝物、ワインのマロラクティック発酵生成物、および毒素から成る群から選択される請求項１〜６のいずれかに記載のプロセス。
【請求項８】
前記汚染物質が、さらに、アトラジン、アフラトキシン、オクラトキシン、フモニシン、カダベリン、プトレセイン、ウレタン、プロゲステロンおよびサルモネラ抗原から成る群から選択される請求項７に記載のプロセス。
【請求項９】
前記膜が１〜２４時間の範囲の時間中前記液体に浸される請求項１に記載のプロセス。
【請求項１０】
前記膜が１〜６時間の範囲の時間中前記液体に浸される請求項９に記載のプロセス。
【請求項１１】
攪拌せずに実施される請求項１〜１０のいずれかに記載のプロセス。
【請求項１２】
前記液状食品が、ワイン、ミルク、フルーツジュース、野菜ジュース、ビール、及び水から選択される請求項１〜１０のいずれかに記載のプロセス。
【請求項１３】
前記抗体がポリクロナール抗体である請求項１に記載のプロセス。
【請求項１４】
汚染物質に対する前記膜の総表面積は、固定された抗体と該抗体に向かう前記汚染物質のモル比が≧１である程度である請求項１〜１０のいずれかに記載のプロセス。
【請求項１５】
前記モル比が１〜５の範囲である請求項１４に記載のプロセス。
【請求項１６】
前記モル比が１〜２の範囲である請求項１５に記載のプロセス。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】削除
【補正の内容】
【国際調査報告】
2005528902.tif 000010
2005528902.tif 000011
2005528902.tif 000012
2005528902.tif 000013
2005528902.tif 000014