(57)【要約】式(I)で表される化合物及びそれらの塩、溶媒和物、又は水和物。2005501090.tif 000006（式中、R1又はR2のうち１つが水素原子であって、他方がCF3、CF2H、CFH2基である条件で、R1及びR2は同一でも異なっていてもよく、各々水素原子、CF3、CF2H、CFH2基を表す。）本化合物は、強力なMMP阻害剤であり、該当する動物モデルにおいて有利に腱炎を引き起こさない。本化合物は、医薬に使用されることを期待でき、特に関節痛のような副作用の回避を期待できる。
2005501090.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(I)で表される化合物、又はその塩、溶媒和物、もしくは水和物。
2005501090.tif 000005
（式中、R1及びR2は、同一でも異なっていてもよく、各々水素原子、CF3、CF2H、又はCFH2基を表し、但し、R1又はR2のうち一方が水素原子である場合には、他方がCF3、CF2H、CFH2基である。）
【請求項２】
式中、R1が水素原子であり、R2が、CF3、CF2H、又はCFH2基である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式中、R2が水素原子であり、R1が、CF3、CF2H、又はCFH2基である請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
4-[4-(4-トリフルオロメチルフェノキシ)ピペリジン-1-スルフォニルメチル]テトラヒドロピラン-4-カルボン酸ヒドロキシアミドである化合物、又はその塩、溶媒和物、もしくは水和物。
【請求項５】
請求項1乃至請求項4のいずれかに記載の化合物と、医薬的に許容される希釈液又は担体とを含有することを特徴とする医薬組成物。
【請求項６】
癌、炎症、自己免疫症、感染症、又は眼の疾患の治療に用いられる、請求項1乃至請求項4のいずれかに記載の化合物。
【請求項７】
移植片対宿主反応、乾癬、アトピー性皮膚炎、鼻炎、湿疹、全身性紅斑性狼瘡、固体臓器移植、又は嚢胞性線維症の治療に用いられる、請求項1乃至請求項4のいずれかに記載の化合物。
【請求項８】
リウマチ様関節炎、変形性関節症、骨粗鬆症、クローン病、潰瘍性大腸炎、多重硬化症、歯周病、骨吸収、細菌感染、表皮水疱症、腫瘍成長、脈管形成、眼科疾患、網膜症、喘息、気腫、気管支炎、又は慢性閉塞性肺疾患(COPD)の治療に用いられる、請求項1乃至請求項4のいずれかに記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（本発明の分野）
本発明はヒドロキサム酸誘導体、及びそれらの医薬的使用に関する。
（本発明の背景）
マトリックスメタロプロテイナーゼ(MMP)は細胞外マトリックスのタンパク質の元素を退化させる構造上関連するエンドペプチダーゼの群である。数多くの重要な性質がMMPファミリーのメンバーによって共有されており、これらは触媒部位に亜鉛原子を含み、中性pHにおいて触媒活性を有し、最初は非活性なプロ酵素として存在し、N-末端ドメインの再生を含む活性化、カルシウムによる構造的安定化、及びメタロプロテイナーゼの組織阻害剤(TIMP)と呼ばれる特定のタンパク阻害剤のファミリーによる触媒的に活性な形態の阻害を有する。伝統的なMMPファミリーは、現在、コラゲナーゼ、ゼラチナーゼ、ストロメライシン、及びメンブレイン型MMPを含む少なくとも２０種のメンバーから成る。
MMPは亜鉛含有プロテイナーゼのより大きい群のサブファミリーであり、これはレプロリシン(Reprolysin)及びセラリシン(Serralysin)、並びにアスタシン(Astacin)ファミリーを含む。
伝統的MMPsを阻害する化合物はまた、非マトリックスメタロプロテイナーゼ(MP)により媒介される、数多くの他の事象（TNF-a、CSF-1及びTGFaの放出、L-セレクチン、IL-6、TNF-R1、及びTNF-RII受容体の発散を含む。）を阻害する能力を有することが証明されている。Hooper et al(1997),Biochem.J.,321:265-279を参照されたい。
マトリックスメタロプロテイナーゼは、多くの疾患状態に関連する。従って、１以上のMMPの活性阻害は、これらの疾患状態に恩恵をもたらし得る。そのような状態は、癌、炎症、自己免疫感染又は眼科の疾患を含む。Whittaker M.et al,(1999) Chem.Rev.,99,2735-2776及び(1994)Annals of the New York Academy of Sciences,Vol 732を参照されたい。
【０００２】
従って、MMP阻害特性を有する化合物は、数多くの異なる疾患の治療に用いられてもよい。特別な利点はまた、これらの化合物が良好な薬物動態特性を有することにある。
しかしながら、非マトリックスメタロプロテイナーゼ(MP)の、これらの化合物による阻害は、何の治療上の利点も出さず、実際は有毒であり得る。例えば、TNFaの放出も阻害するMMP阻害剤は、肝疾患を悪化させる役割を有するかもしれないと示唆されている。Solorzano at al(1997),J.Immunol.,158:414-419を参照されたい。
同様に、伝統的MMP単独に対して選択的でないMMP阻害剤の使用から得た初期の臨床証明は、これらを使用すると多くの患者において関節痛（腱炎）に関連することを示唆した。Wojtowicz-Praga et al,Lombardi Cancer Center,Georgetown University Hospital DC&BBL Anapolis MD.Am.Soc.Clin.Oncol.(May 1996)”The Phaemacokinetics(PK) of Marimastat(BB-2516),A Novel Metalloproteinase Inhibitor (MMPI) administered orally to patients with metastastic lung cancer”を参照されたい。関節痛の開発は投与量限度であり、また治療方針の50%までもが休日の治療を必要とし、又は非ステロイド性の抗炎症剤(NSAID)の投与を必要になるかもしれない。
それゆえに選択的なMMP阻害剤であり、関節痛などの望まない副作用を引き起こさない用量で医薬に使用され得ることが必要とされている。
WO 99/24399はMMP阻害剤としてヒドロキサム酸誘導体の部類を開示する。
【０００３】
（発明の概要）
我々はここで、強力なMMP阻害剤であり、関連する動物モデルにおいて有利なことに腱炎を引き起こさない多くの化合物を見出した。これらの化合物は医薬、特に関節痛などの副作用の回避が望まれているものへの使用を期待できるかもしれない。従って本発明の化合物は、投与量制限効果と関連することで公知なMarimastat（登録商標）などの化合物と比較して優れた副作用の性質を有すると期待されるかもしれない。
【０００４】
従って我々は式(I)で表される化合物、及びそれらの塩、溶媒和物、又は水和物を提供する。
2005501090.tif 000003
（式中、R1及びR2は、同一でも異なっていてもよく、各々水素原子、CF3、CF2H、又はCFH2基を表し、但し、R1又はR2のうち一方が水素原子である場合には、他方がCF3、CF2H、CFH2基である。）
（発明の詳細な説明）
本発明の化合物のある特定の置換基において、R1は水素原子、及びR2は、CF3、CF2H又はCFH2基である。本発明の化合物の別の特定の置換基において、R2は水素原子、及びR1は、CF3、CF2H又はCFH2基である。
【０００５】
本発明の特に好ましい化合物は、実施例に記載したものである。
本発明の特に好ましい化合物は、式1の化合物であり、式中、R2はCF3基であり、及びR1は水素原子であり、すなわち、4-[4-(4-トリフルオロメチルフェノキシ)ピペリジン-1-スルフォニルメチル]テトラヒドロピラン-4-カルボン酸ヒドロキシアミドである。
本発明の望ましい化合物がプロドラッグ形態、例えば、ヒドロキサム酸誘導体で保護され、O-ベンジル、又はO-tert-ブチルなどのN又はO置換誘導体として保護されて、投与され得る場合であることが認められるだろう。さらに該プロドラッグが式(I)で表される活性化合物に、in vivoで変換され、本発明がそのようなプロドラッグへの拡張を意図することが認められるだろう。
式(I)の化合物の塩は、医薬的に許容可能な塩、例えば無機又は有機塩基由来の塩基付加塩、例えばマグネシウム又はカルシウム塩などのアルカリ金属塩、及びモルフォリン、ピペリジン、ジメチルアミン、又はジエチルアミン塩などの有機アミンを包含する。
一般式(I)の化合物は、当業界で既知の好適な方法、及び/又は以下の方法で製造される。以下の記載及び式において、R1及びR2の基は、他で特に示されない限り上記で定義されたとおりである。官能基、例えば、アミノ基、水酸基、カルボキシル基が、以下に記載の種々の化合物に存在し、これを保持することが好ましく、反応が始まる前には保護した形態にあることが必要であることが認められるであろう。そのような場合において、保護基の除去は、特定の反応順序の最終段階であってもよい。そのような官能性の好適な保護基は当業者に明らかであろう。特に詳細についてはGreene T.W.et al “Protective Groups in Organic Synthesis”(1999)を参照されたい。
従って、例えば本発明の化合物は、スキーム１に示すような以下の一般ルートにより製造される。
【０００６】
2005501090.tif 000004
式(iii)の化合物は、式(i)の化合物（式中、Xは、例えば、水酸基又は脱離基、例えば、フッ素原子である。）と式(ii)で表される化合物（式中、PG1は好適な保護基、例えば、tert-ブトキシカルボニルエステルである。）とを、標準的なエーテル結合形成方法を用いて反応させることにより製造される。例えば、Xが、式(i)で表される化合物において、フッ素原子の場合、そのような式(i)の化合物は、好適な塩基、例えば、tert-ブトキシドカリウムが適切な溶媒、例えば、N,N-ジメチルホルムアミド(DMF)中に存在下で、式(ii)の化合物と反応させて、式(iii)の化合物を生成してもよい。
【０００７】
保護基であるPG1は、当業者に既知の標準的な方法を用いて除去して、式(iv)の化合物を得てもよい。従って、例えば、PG1がtert-ブトキシカルボニルエステル基である場合、これは、酸性条件下、トリフルオロ酢酸の下で例えば塩化メチレンのようなハロゲン性溶媒中除去されてもよい。
式(vi)の化合物は、式(iv)の化合物と式(v)の化合物との反応により、好ましくはハロゲン性溶媒、例えば、塩化メチレン中トリエチルアミンのような塩基存在下において製造できる。式(v)の化合物が、文献記載の方法に類似した仕方で製造されてもよいことが認められるだろう。
式(vi)の化合物は、その後、例えば水酸化リチウムなどの塩基を用いてメタノール及び水などの適した溶媒系で、例えば還流温度などの適した温度下、カルボン酸に変換されてもよい。このようにして形成されたカルボン酸は、その後文献で周知な条件を用いて、式(I)の化合物に変換されてもよい。例えば、不活性溶媒（例えば塩化メチレン）中、触媒量のDMF存在下、オキサリルクロライドによって酸を処理することによって、酸クロライド中間体を得、それは単離出来、又は出来なくともよく、しかし次には室温のような適温下、ヒドロキシルアミンと反応させることにより、所望のヒドロキサム酸(I)が得られる。
【０００８】
得られた最終生成物又は中間体のすべての混合物は、成分の物理化学的差異に基づき、公知方法で、純粋な最終生成物、又は中間体に例えばクロマトグラフィー、蒸留、分別晶出、又はもしこの条件で適切又は可能であれば塩形成によって分離可能である。
本化合物のMMPを阻害する能力は、例えば実施例Aに記載されたような適当な酵素阻害試験を使用することによって決定されてもよい。
【０００９】
有利なことに、本発明の化合物での我々の試験では、腱炎が観察されなかった。実施例Bに記載のラットモデルを用いて本発明の化合物関節痛を引き起こす傾向を予測してもよい。
有利なことに、本発明の化合物は、有用な薬物動態特性、例えば良好なバイオアベイラビリティを有する。本化合物の薬物動態学的プロファイルは、例Cに記載の評価方法を用いて決定されてもよい。
この発明はまた、前記MMPに起因し得る疾患又は病気にかかった患者（ヒト及び/又は乳業、肉、もしくは毛皮産業で、又はペットとして飼育された哺乳動物を含む）の治療方法、及び特に、活性成分として式(I)のマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤の投与を含む治療方法に関する。
よって、式(I)の化合物は骨関節症、リウマチ様関節炎の治療、及び、これらのマトリックスメタロプロテイナーゼの過発現に起因する病気及び前兆、例えば転移性腫瘍細胞株においてみられるようなもの、又は眼科新血管形成を含む状況において、他のものと共に用いられ得る。
上で言及されたように、式(I)の化合物は、MMP阻害剤であるため、ヒト、又は獣医薬として有用である。その結果、別の観点において本発明は以下に関する。
哺乳類、特にヒトにおいてMMPによって媒介される疾患又は状況の対応方法（治療又は予防方法によるもの）であり、この方法は哺乳類への効果的な量の上記式(I)の化合物、又は医薬的に許容可能なそれらの塩の投与を含む；及び
【００１０】
特にMMPによって媒介される疾患又は状況の対応方法（治療又は予防方法によるもの）において、ヒト又は獣医の医薬における使用のための式(I)の化合物；及び
MMPによって媒介される疾患又は状況の対応方法（治療又は予防方法によるもの）に用いる薬剤の調製における式(I)の化合物の使用。
先に述べられた疾患又は状況は炎症疾患、自己免疫疾患、癌、心疾患、及び組織破壊に関与する疾患を含む。適応症は、リウマチ様関節炎、変形性関節症、骨粗鬆症、神経変性、アルツハイマー疾患、脳梗塞、血管炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、多重硬化症、歯周病、歯肉炎、組織破壊に関連する疾患（例えば骨吸収、出血、血液凝固、急性位相反応、悪液質及び摂食障害）、急性感染症、HIV感染症、発熱、ショック状態、移植片対宿主反応、皮膚の状態、手術創治療、乾癬、アトピー性皮膚炎、表皮水疱症、腫瘍成長、脈管形成、及び２次転移による浸潤、眼科疾患、網膜症、角膜の潰瘍形成、再灌流傷害、片頭痛、髄膜炎、喘息、鼻炎、アレルギー性結膜炎、湿疹、アナフィラキシー、再狭窄、うっ血性心不全、子宮内膜症、アテローム性動脈硬化症、エンドスクレロシス（endosclerosis）、アスピリン非依存性抗血栓症、全身性紅斑性狼瘡、固体臓器移植及び眼科疾患を含む。
式(I)の化合物は、骨盤内炎症性疾患(PID)及び癌に誘起される骨吸収の治療においても有用であろう。さらに、それらは肺疾患、例えば、嚢胞性線維症、成人呼吸窮迫症候群(ARDS)、肺気腫、気管支炎オブリテランス-オルガナイジング（obliterans-organising）肺炎(BOOP)、特発性肺線維症(PIF)、びまん性肺胞障害、肺ランゲルハンス細胞グラニュラマトシス(granulamatosis)、肺リンパ管平滑筋腫(LAM)、又は慢性閉塞性肺疾患(COPD)から選択されるものの治療に使用されうる。
【００１１】
本発明の化合物は、特に炎症疾患、自己免疫疾患、癌、及び眼科疾患の治療に有用である。従って、例えば、化合物は、移植片対宿主反応、乾癬、アトピー性皮膚炎、鼻炎、湿疹、全身性紅斑性狼瘡、固体臓器移植、嚢胞性線維症、及び特にリウマチ様関節炎、変形性関節症、骨粗鬆症、クローン病、潰瘍性大腸炎、多重硬化症、歯周病、骨吸収、バクテリア感染症、表皮水疱症、腫瘍成長、脈管形成、眼科疾患、網膜症、喘息、肺気腫、気管支炎、及び慢性閉塞性肺疾患(COPD)の治療及び/又は予防に使用されてもよい。
眼科新血管形成に関連する疾患又は状態は、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症(ROP)又は年齢相関の(agerelated)黄斑変性症(ARMD)を含むが、これに限定されない。
【００１２】
先に記載した総ての疾患の治療において、式(I)の化合物は、経口、局所的に、非経口で、吸入スプレーによって又は直腸に、投与量単位の、無毒の医薬的に許容可能な担体、補助剤及び媒体を含有する製剤によって、投与してよい。ここで用いられている非経口の語は、皮下注射、静脈注射、筋肉内、胸骨内注射又は注入技術を含む。眼注射は、例えば、硝子体内のサブテノンス(subtenons)、結膜下、眼周囲及び延髄後が眼内遅延放出装置、及び移植組織と同様に使用されてもよい。マウス、ラット、馬、ウシ、羊、イヌ、ネコ等の定温動物の治療に加えて、本発明の化合物は、ヒトの治療に効果的である。
活性成分を含有する本医薬組成物は、例えば、錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性、又は脂性の懸濁液、分散性粉末又は顆粒剤、乳剤、硬又は軟カプセル、若しくはシロップ剤又はエリキシル剤等の経口使用に適した形態であろう。経口使用に企図された組成物は、医薬組成物製造業界で既知の方法で製造されるであろう。また、そのような組成物は、甘味剤、香料添加剤、着色剤及び保存剤を含む群から選択された１以上の薬剤を含み、医薬的に洗練され、また口当たりがよい調製物を提供してもよい。錠剤は、混合剤中に活性成分と、無毒な医薬的に許容可能な賦形剤であって、錠剤製造に適当なものとを含む。これらの賦形剤は、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、リン酸カルシウム又はリン酸ナトリウムのような不活性な希釈剤であってもよく；例えば、コーンスターチ又はアルギン酸のような顆粒化剤及び崩壊剤であってもよく；例えば、でんぷん、ゼラチン又はアカシアのような接着剤であってもよく、及び例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸又はタルクのような滑剤であってもよい。錠剤は、コーティングを施してなくてもよく、又はそれらを、胃腸管系における分解と吸収を遅延させて、公知技術でコーティングしてもよく、それによって、長期間に渡る持続作用を提供する。例えば、モノステアリン酸グリセリン、ジステアリン酸グリセリンのような時間遅延物質を用いてもよい。さらにこれらを米国特許第4,256,108号明細書、4,166,452号明細書、4,265,874号明細書に記載された技術によりコーティングし、オスミウムの治療上の錠剤を形成して制御放出してもよい。
【００１３】
経口使用の製剤は、さらに、硬ゼラチンカプセルとして存在し、ここで活性成分が例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウム又はカオリンの不活性な固体の希釈剤に混合され、又は、軟ゼラチンカプセルとして存在し、ここで活性成分が水又は例えばピーナッツ油、流動パラフィン、オリーブ油などの油溶剤に混合されてもよい。
水溶性の懸濁液は、混合物中の活性原料と、水溶性懸濁液の製造に適した賦形剤とを含む。そのような賦形剤、懸濁剤は例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピル・メチルセルロース、ポリビニル-ピロリドンアルギン酸ナトリウム、トラガカントゴム、アラビアゴムであり；分散又は湿潤剤は、天然に生じるホスファチド、例えばレシチン、又はアルキレン・オキシドと脂肪酸との濃縮生成物、例えばステアリン酸ポリオキシエチレン、又はエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの濃縮生成物、例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール、又はエチレンオキシドと脂肪酸並びにヘキシトールから由来する部分エステル例えば、ポリオキシエチレンと脂肪酸並びに無水ヘキシトールから由来する部分エステル、例えばポリオキシエチレンとソルビタンモノオレートとの濃縮生成物である。水溶性懸濁液はまた１種以上の防腐剤、例えばエチル、n-プロピル、p-ヒドロキシベンゾエート、防腐剤、１種以上の着色剤、１種以上の香剤、１種以上のサッカロース、サッカリンのような甘味剤を含んでもよい。
【００１４】
油性懸濁液は、活性成分を植物油、例えばラッカセイ油、オリーブ油、ごま油、ココナッツ油、又は流動パラフィンのような鉱油中に、懸濁させることにより形成してもよい。油性懸濁液は、増粘剤、例えば蜜蝋、固形パラフィン、セチルアルコールを含んでもよい。上述されているような甘味剤、及び香剤を添加して口当たりの良い経口製剤を提供しても良い。これらの組成物は、アスコルビン酸のような抗酸化剤を添加することにより保存されてよい。
水の添加により水性懸濁液の調製に適した分散粉末及び顆粒は、分散又は湿潤剤、懸濁剤及び１以上の保存剤に混合される活性成分を提供する。適した分散又は湿潤剤及び懸濁剤が例証され、例えば甘味剤、香剤及び着色剤もまた存在してよい。
【００１５】
本発明の医薬組成物はまた、水中油乳濁液を形成してよい。油相は、植物油、例えばオリーブ油、ラッカセイ油、又は流動パラフィンのような鉱油、又はそれらの混合物でもよい。好適な乳濁剤は、天然に生じるゴム、例えばアラビアゴム又はトラガカントゴム、天然に生じるホスファチド、例えば大豆、レシチン、及び脂肪酸と、ヘキシトール無水物とから由来するエステル又は部分エステル、例えば、ソルビタンモノオレート及び前記部分エステルと、エチレンオキサイドとの濃縮生成物、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレートでもよい。乳濁液は、さらに甘味剤及び香剤を含んでいてよい。
シロップ及びエリキシルは、甘味剤例えばグリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール又はスクロースとともに処方してよい。そのような製剤は、さらに緩和薬、保存剤及び芳香並びに着色剤を含んでもよい。本医薬組成物は、殺菌した注射用の水性又は油脂性懸濁液の形態でもよい。この懸濁液を、先に述べられたこれらの分散又は湿潤剤及び懸濁剤を用いる当業界に既知な技術に従って処方してもよい。殺菌した注射用の製剤は、殺菌した注射用溶液又は懸濁液中、無毒な非経口で許容可能な希釈剤又は懸濁液、例えば1,3-ブタジオール中の溶液としてであってもよい。使用され得る許容可能な担体及び溶媒は、水、リンガー溶液及び塩化ナトリウム等張液である。さらに、殺菌した不揮発性油は、溶媒又は懸濁媒体として慣習的に使用してよい。本目的の為に、合成モノ又はジグリセリドを含むいかなるブランドの不揮発性油を使用してもよい。さらに、オレイン酸のような脂肪酸は、注射可能物質の調製における用途がある。
【００１６】
式(I)に表される化合物はまた、薬物の直腸投与として座剤の形態で投与しても良い。これらの組成物は、薬物と、常温では固体であるが直腸温では液体となり、よって直腸で溶解し、薬物を放出するという適当な非刺激性の賦形剤とを混合して調製されうる。そのような材料はココアバター及びポリエチレングリコールである。
局所的な使用として、式(I)の化合物を含むクリーム、軟膏、ゼリー、溶液又は懸濁液などが採用される。局所的な眼科投与として、医薬的に許容可能な、式(I)の化合物を含む溶液、懸濁液又はゲルを使用してよい。溶液及び懸濁液は、また、硝子体内の又は前眼房内使用に適応されてもよい。
１日にkg体重当たり約0.05mg〜約140mgのオーダーの投与量レベルが前記状況（１日に患者一人当たり約2.5mg〜約7g）の治療において有用である。
担体物質と結合し単一投与量を形成する活性成分の量は、治療を受けているホスト及び特別な投与形態に依存して変化するであろう。例えば、ヒトへの経口投与を企図した製剤は、組成物合計の約5%〜約95%で変化してもよい。投与量単位形態は、一般的に約1mg〜約500mgの活性成分を含むであろう。
しかし、特別な患者のための特定な投与量は、使用する特定の化合物の活性、年齢、体重、身体全体の健康、性別、投与節食時間、投与経路、排泄率、薬物の組み合わせ、治療を受けている特定の疾患の重症度などを含む様々な因子に依存するであろう。
【００１７】
式(I)の化合物の塩は、式(I)の化合物と、適当な酸との、好適な溶媒又は溶媒の混合物、例えば従来の方法により用いられるエーテル、例えばジエチルエーテル、又はアルコール、例えばエタノールのような有機溶媒中における反応によって調製してもよい。
クロマトグラフィー、再結晶及び他の従来の単離方法は、さらに中間体又は最終生成物とともに用いられてよく、ここで本発明の特定の構造異性体を得ることが望ましい。
以下の実施例は、本発明の化合物の調製を説明する。すべての温度は℃である。以下の略語を用いた。
NMP- 1-メチル-2-ピロリジノン
TNFa=腫瘍壊死因子α
ELISA=酵素免疫測定法
PBMC=末梢血単核細胞
PMA=ホルボール12-ミリスチン酸13-アセテート (Phorbol 12-myristate 13-acetate)
DCM- ジクロロメタン
LPS=リポ多糖類
h=時間
すべてのNMRは300MHz又は400MHzで測定した。
すべての中間体、及び実施例は、Beilstein Autonom(MDL Information System GmbH,Therdor-Heuss-Allee 108D 60486,Frankfurt,Germanyから入手可能)の援助により命名し、又は一貫して命名した。
【実施例１】
【００１８】
実施例A MMP阻害活性-蛍光定量的評価法
式(I)の化合物がゼラチナーゼA(MMP-2)、及びゼラチナーゼB(MMP-9)の阻害剤として作用する能力を、以下の手段を用いて決定した。
阻害剤を0.02%のb-メルカプトエタノールを含むジメトキシスルフォキシドに溶解し、連続希釈法を準備した。活性化した酵素を阻害剤の存在下又は不存在下、50mMのTris、pH7.4、5mMのCaCl2、0.002%のNaN3、及びBrij35を含有するアッセイバッファー中でインキュベートした。蛍光定量的基質(Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2)を最終濃度10mMまで添加する前に37℃、15分間、試料をインキュベートした。このアッセイを20〜30分間、37℃の下インキュベートし、その後フルオロスキャン(Fluoroscan)IIでλex(340nm)及びλem(405nm)において読んだ。
酵素活性は、阻害剤抜きの参照の活性と比較し、結果を50%酵素阻害をもたらす阻害剤濃度(IC50)としてレポートした。
【００１９】
実施例B  ラット腱炎モデル
腱炎をWO-A-9925693に記載のモデルを用いて決定し得る。
実施例C  薬物動態特性の決定
本発明の化合物の薬物動態的特性を、血液採取のため右頸動脈にカニューレを挿入したラットにより決定した。iv投与において、化合物を、例えば水中、10%v/vDMSO、50%v/vPEG400の好適な製剤に調製され、頸静脈のカニュレーションにより行った。試料を投与後5分、0.5、1、2、4、6及び8時間で採集した。経口投与において、化合物を水中0.4%w/vメチルセルロースのような好適な製剤に調製した。試料を、投与後0.5、1、2、4、6、8時間で採集した。いくつかの場合、試料を、さらに投与後12時間で採取した。血漿を血液サンプルの遠心沈殿法により得、その後薬物濃度を、液相クロマトグラフィーマス分光分析と、その後のタンパク沈殿のような標準的方法で決定した。
【００２０】
中間体１  4-(4-トリフルオロメチルフェノキシ)ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル
4-ヒドロキシピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(134.8g)のN,N-ジメチルホルムアミド(850ml)攪拌溶液を窒素雰囲気下、氷浴にて冷却した。tertブトキシカリウム(75.2g)を温度が22℃を超えないように徐々に添加し、得られた混合物を0℃でさらに1.5時間維持しこのとき4-フルオロベンゾトリフルオリド(100g)を15分間で滴下した。反応混合物を室温まで暖め、終夜攪拌した。水(200ml)を加え、混合物をtertブチルメチルエーテル(1x400ml,1x300ml,1x200ml)で抽出した。混合した有機抽出物を水洗(2x400ml)し、飽和食塩水で(200ml)洗浄し、リン酸マグネシウムで乾燥し、真空中で蒸発後、オフホワイト/淡黄色固体(206.4g)として、標記化合物を残した。
マススペクトルm/z 331(M-14)+
【００２１】
以下同様に調製した。
中間体２  4-(3-トリフルオロメチルフェノキシ)ピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル
水素化ナトリウム(0.9g,鉱油中60%分散)を4-ヒドロキシピペリジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(4g)のNMP(40ml)溶液に加え、1時間攪拌し、その後3-フルオロベンゾトリフルオリド(3.5g)のNMP(10ml)溶液を加え、混合物を80℃で2時間攪拌した。混合物を水(200ml)に加え、ジエチルエーテル(2x100ml)で抽出し、溶媒を水、1M水酸化ナトリウム溶液、飽和食塩水で洗浄し、乾燥し、蒸発し、黄色油状物(5.2g)として標記化合物を得た。これは精製せずに次段階に続けた。
マススペクトルm/z 331(M-14)+
【００２２】
中間体３  4-(4-トリフルオロメチルフェノキシ)ピペリジン
中間体１(206g)の塩化メチレン(1236ml)攪拌溶液を氷浴で冷却し、0.5時間かけてトリフルオロ酢酸(365ml)を加えた。さらに4.5時間攪拌を続け、このとき混合物を氷浴で冷却しpH≧13になるまで4M水酸化ナトリウム水溶液を加えてクエンチした。相は分離し、水相を新しいジクロロメタン(125ml)で再抽出した。混合した有機抽出物を飽和食塩水(1x500ml,1x250ml)で洗浄し、リン酸マグネシウムで乾燥し、その後真空乾燥した。標記化合物をオフホワイト固体(101g)として得た。
マススペクトルm/z 246(M+1)+
【００２３】
同様に調製した
中間体４  4-(3-トリフルオロメチルフェノキシ)ピペリジン
中間体２(5.2g)から調製し、その後中間体３の手順をし、標記化合物をオフホワイト固体(4.2g)として得た。
TLC Rf0.3(1%NH4OH、酢酸エチル中)
中間体５  4-[4-(4-トリフルオロメチルフェノキシ)ピペリジン-1-スルホニルメチル]テトラヒドロピラン-4-カルボン酸メチルエステル
トリエチルアミン(12ml)を中間体３(9.6g)のジクロロメタン(50ml)攪拌溶液に加え、得られた混合物を窒素雰囲気下氷浴で冷却した。メチル4-(クロロスルホニル)メチルテトラヒドロピラン-4-カルボキシレート(CAS No.374822-74-9)(10g)のジクロロメタン(50ml)溶液をその後約５分間かけて滴下して加え、得られた混合物を室温まで暖め、終夜攪拌した。水(50ml)を加え、相を分離させた。水相を新しいDCM(30ml)で抽出し、混合した有機相を水(40ml)、希塩酸(3x40ml)、最後に水(40ml)で洗浄した。有機相をフラスコセットに移し常圧下で蒸留し容積50mlまで濃縮した。tertブチルメチルエステルを徐々に加え(1x50ml,1x30ml)、混合物を添加毎その後もとの50mlへ濃縮した。混合物を室温で終夜攪拌し、氷浴で冷却し生成物をろ過により回収した。固まりを冷tertブチルメチルエステル(20ml)で洗浄し、真空乾燥器で乾燥し、オフホワイト固体(12.5g)として標記化合物を得た。
マススペクトルm/z 466(M+1)+
【００２４】
中間体６  4-[4-(4-トリフルオロメチルフェノキシ)ピペリジン-1-スルホニルメチル]テトラヒドロピラン-4-カルボン酸
中間体５(5g)と、水酸化リチウム一水和物(0.9g)のメタノール(25ml)、水(25ml)混合物を4.5時間加熱還流した。反応を常圧での蒸留用にセットし、水(33.5ml)を「プットアンドテイク」('put-and-take')法で加えた。蒸留を加熱温度が≧90℃になるまで続けた。得られた溶液を60-70℃まで冷却し、その時濃塩酸(1.8ml)を滴下して加えた。混合物を室温まで冷却し、終夜攪拌した。生成物を濾過により回収し、水(4x10ml)で洗浄し、真空乾燥器で乾燥し、標記化合物をオフホワイト固体(4.42g)として得た。
マススペクトルm/z 450(M-1)-
中間体８  4-[4-(3-トリフルオロメチルフェノキシ)ピペリジン-1-スルホニルメチル]テトラヒドロピラン-4-カルボン酸
【００２５】
中間体４(0.50g)をメチル4-(クロロスルホニル)メチルテトラヒドロピラン-4-カルボキシレート(0.60g)のDCM溶液に加え、トリエチルアミン(0.5ml)を加えた。溶液を２時間攪拌し、その後クエン酸水溶液(10%aq,20ml)、水、飽和食塩水で洗浄し、乾燥し、濃縮した。残渣をメタノール(20ml)で溶解し水酸化リチウム(250mg)の水(20ml)溶液を加えた。溶液を２時間、加熱還流しながら攪拌し、冷却し、半分の容積に濃縮した。水溶液を無水エーテルで洗浄し、pH4までクエン酸を加えることにより酸性にし、DCMで抽出した。溶媒を水及び飽和食塩水で洗浄し、乾燥し、及び蒸発して標記化合物を白色固体(0.65g)として得た。
TLC Rf0.42（ジエチルエーテル）
【００２６】
実施例１  4-[4-(4-トリフルオロメチルフェノキシ)ピペリジン-1-スルホニルメチル]テトラヒドロピラン-4-カルボン酸ヒドロキシアミド
オキサリルクロリド(0.65ml)を、中間体６(2.25g)及びN,N-ジメチルホルムアミド(39ml)のテトラヒドロフラン(35ml)溶液に滴下して加えた。得られた混合物を、室温で、窒素雰囲気下、約３時間攪拌し、その時溶媒を真空中で除去した。トルエン(1x20ml、1x10ml)を残渣に加え、その後溶媒の添加毎後に再蒸発した。テトラヒドロフラン(27ml)を残渣に加え、得られた溶液を氷浴で冷却し、その時ヒドロキシルアミン(50% w/w水溶液、1.5ml)を加えた。混合物を室温まで暖め、2.5時間攪拌した。その後、反応混合物を常圧で蒸留し、最高温度>65℃に達するまで、‘プットアンドテイク法’で水(23.5ml)を加えた。混合物を室温まで冷却し、希アンモニア水でpH8-8.5に調節した。室温で終夜攪拌した後、生成物を濾過により単離し、水(3x10ml)で洗浄し、真空乾燥器で乾燥し、標記化合物をオフホワイト/淡茶褐色固体(1.98g)として得た。
マススペクトルm/z 467(M+1)+
1H NMR(d6-DMSO,400MHz):d1.72(m,4H)、1.98(m,4H)、3.15(m,2H)、3.35(m,2H)、3.46(m,2H)、3.65(m,2H)、4.67(m,1H)、7.17(d,2H)、7.65(d,2H)、8.87(br s,1H)、10.58(br s,1H)
【００２７】
同様に調製した。
実施例２  4-[4-(3-トリフルオロメチルフェノキシ)ピペリジン-1-スルホニルメチル]テトラヒドロピラン-4-カルボン酸ヒドロキシアミド
中間体７(0.65g)から実施例１のように合成し、標記化合物をベージュ固体(450mg)として得た。
TLC Rf0.44（7% メタノール/塩化メチレン）
マススペクトルm/z 465(M-1)-
【国際公開パンフレット】
2005501090.tif 000007
2005501090.tif 000008
2005501090.tif 000009
2005501090.tif 000010
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2005501090.tif 000014
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2005501090.tif 000018
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2005501090.tif 000022
2005501090.tif 000023
【国際調査報告】
2005501090.tif 000024
2005501090.tif 000025
2005501090.tif 000026