(57)【要約】    本発明は慢性疼痛の処置のための２−インダニルアミノ誘導体の使用に関する。特に、本発明は神経障害性疼痛、すなわち疱疹後神経痛、三叉神経痛、糖尿病性神経障害およびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）による神経破壊に関連する疼痛の処置のための２−（２−インダニルアミノ）−アセトアミドの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
慢性疼痛の処置のための製薬学的組成物の製造のための、一般式Ｉ：
【化１】
2005513101.tif 000010
［式中、
Ｒは水素またはＣ１−Ｃ４アルキル基であり；
Ｒ１は水素、アルキルまたは場合によってはアシル化したＣ１−Ｃ４ヒドロキシアルキルであり；
Ｒ２は水素；アルキル；フェニル；フェニルアルキルである］
によって表される化合物およびそれらの塩の使用。
【請求項２】
ＲがＨであり、Ｒ１がＨまたはアルキルであり、Ｒ２がＨまたはアルキルである、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項３】
Ｒ、Ｒ１およびＲ２が水素である、請求項１および２に記載の化合物の使用。
【請求項４】
神経障害性疼痛、すなわち疱疹後神経痛、三叉神経痛、糖尿病性神経障害およびヒト免疫不全ウイルスによる神経破壊に関連する疼痛の処置のための、請求項１〜３に記載の化合物の使用。
【請求項５】
該化合物の用量が１〜１０００ｍｇの間を占める、製薬学的に許容しうる添加物と組み合わせて請求項１〜４の化合物を含んでなる慢性疼痛の処置のための組成物。
【請求項６】
用量が５０〜５００ｍｇの間を占める、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
用量が１００〜３５０ｍｇの間を占める、請求項５および６に記載の組成物。
【請求項８】
該組成物の必須成分として一般式Ｉによって表される化合物の使用を特徴とする、慢性疼痛の処置のための組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、慢性疼痛の処置のための一般式Ｉ：
【０００２】
【化１】
2005513101.tif 000002
【０００３】
［式中、
Ｒは水素またはＣ１−Ｃ４アルキル基であり；
Ｒ１は水素、アルキルまたは場合によってはアシル化したＣ１−Ｃ４ヒドロキシアルキルであり；
Ｒ２は水素；アルキル；フェニル；フェニルアルキルである］
によって表される化合物およびどれらの塩の使用に関する。
【０００４】
好適な化合物は、
ＲがＨであり、
Ｒ１がＨまたはアルキルであり、
Ｒ２がＨまたはアルキルである、
それらの化合物である。
【０００５】
より好適な態様では、本発明は、慢性疼痛、すなわち疱疹後神経痛、三叉神経痛、糖尿病性神経障害およびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）による神経破壊に関連する疼痛の処置のための２−（２−インダニルアミノ）−アセトアミドもしくは［Ｎ−（２−インダニル）−グリシンアミド］の使用に関する。
【背景技術】
【０００６】
慢性疼痛は、一般に、急性疾患の通常の経過以上または治癒すべき傷害に相応する時間以上持続するか、あるいは数カ月もしくは数年の間隔で再発する疼痛として定義される広範な用語である。それは多くの異なる形態において存在することがあり、そして病因、臨床経過および応答においては有意に異なり得るが、あらゆる種類の慢性疼痛は中枢および／または抹消神経系の体性感覚プロセッシングにおける基礎的迷錯を伴う。
【０００７】
研究者らは一般に、少なくとも３つの別個な疼痛の部類において同定する：
−  侵害受容性疼痛、または体性疼痛、これは疼痛に対する正常な生理的応答である。この疼痛形態は抹消の組織および器官に位置する一次求心性神経繊維である侵害受容器を介して中枢神経系（ＣＮＳ）に中継される。これらの例は急性外傷［ｔｒａｕｍａ（炎症が確立される前の）］に起因する疼痛および器官に侵入し、かつ拡張するがん性腫瘍に起因する疼痛を含む。
−  炎症性疼痛、これは炎症組織に囲まれた場合に刺激性になる侵害受容性求心（ａｆｆｅｒｅｎｔｓ）によって惹起される。炎症性疼痛は、関節炎を有する患者、背部傷害後の炎症を体験している患者および閉塞性腫瘍の周囲に炎症を示すがん患者の中に通常観察される。
−  神経障害性疼痛、これは具体的には神経傷害から生じ、そして傷害した神経が治癒した後でさえ持続することがある。ほとんどの罹患患者は標準的な鎮痛薬物に対して無反応であるので、それは特に潜行性であると考えられる。神経病性疼痛は慢性の低背部疼痛またはがん疼痛を有する患者の有意な割合において存在しているであろう。また、それは疱疹後神経痛、三叉神経痛、糖尿病性神経障害およびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）による神経破壊に関連する疼痛の病因でもある。
【０００８】
慢性疼痛を惹起するか、永続させるか、または悪化させるいくつかの要因が存在する。第１には、もちろん患者は、特徴的に疼痛性であり、そしてその時点で治癒していない関節炎、がん、偏頭痛性頭痛、線維筋痛症および糖尿病性神経病のような疾病を単純に有していることもある。第２には、体性疾患によって開始され、そして疾患が消散した後も持続する二次的永続性要因であることもある。この例は損傷した知覚神経、交感神経遠心活性および疼痛性反射筋収縮を含む。最後に、種々の生理的状態が疼痛を悪化させるか、または惹起させることさえできる。
【０００９】
鎮痛性、抗痙攣性および抗うつ性薬物に基づく現在の薬物学的処置は、完全な有効性を与えるものではなく、かつ多くは面倒な副作用を有する。
【００１０】
したがって、より有効かつ寛容性のある鎮痛療法が必要とされ、専門家が信じている空虚感は、新規な、そしてより特異的な作用機構を特徴とする作用物質によってのみ満たすことができる。
【００１１】
より特異的な薬物への満たされない（ｕｎｍｅｔ）要求に対する当然の結果として、糖尿病性神経障害もしくは疱疹後神経痛のような神経障害の症候（神経障害性疼痛）に関連する慢性疼痛の処置のために的確に開発された有効かつ安全な作用物質への要求が存在する。
【００１２】
神経障害性疼痛の罹患人口の大きさは、特に慢性がんおよび低背部疼痛において未知ではあるが有意である。
【００１３】
したがって、高度に特異的な標的へのより大きな選択性によって、身体の正常な生理に影響を与えないで該疼痛症候を効果的に除去できる作用物質を提供することは特に有利であろう。
【００１４】
式（Ｉ）の化合物は本出願者名の特許文献１に初めて記述されていて、多数のα−アミノ酸アミド誘導体の中でも、慢性の神経変性疾患、例えばアルツハイマー病、種々の形態の痴呆、パーキンソン病、ハンチントン病、または卒中および頭部傷害のような急性の神経変性障害の処置のため、ならびに癲癇および鬱病の処置のための可能性のある治療剤として研究された。
【００１５】
該化合物、特にＮ−２（インダニル）−グリシンアミド塩酸塩、３−ヒドロキシ−２−（２−インダニルアミノ）−プロパンアミド塩酸塩、Ｎ−２（インダニル）−Ｎ−メチルグリシンアミド塩酸塩および２−（２−インダニルアミノ）−プロパンアミド塩酸塩は、ラットのＭＥＳモデルにおいて抗痙攣活性を備えていることが分かった。Ｖｉｌｌｅｔｔｉら（非特許文献１）は、その抗癲癇特性を綿密に検討することを目的とした研究において、特に、Ｎ−２（インダニル）−グリシンアミド塩酸塩（これ以降、実験コードＣＨＦ３３８１で指示される）が、癲癇発作モデルにおいて最大電気ショックの癲癇発作、ピクロトキシン（ｐｉｃｒｏｔｏｘｉｎ）−およびＮ−メチル−Ｄ−アスパルテート（ＮＭＤＡ）−誘導の後肢の緊張性伸展に対して非常に有効であるが、４−アミノピリジン−およびビククリン（ｂｉｃｕｃｕｌｌｉｎｅ）−誘導の緊張性癲癇発作の比較的弱いアンタゴニストであり、そしてペンチレンテトラゾール−およびピクロトキシン−誘導の間代性癲癇発作に対して無効であることを特に報告している。さらにまた、ＣＨＦ３３８１は系統的に投与されたＮＭＤＡの挙動効果および致死率に拮抗することが報告され、このことはこの化合物が機能的ＮＭＤＡアンタゴニストとして働けることを示している。この考えを維持することには、ＣＨＦ３３８１はＮＭＤＡ受容体チャンネルへの結合から［３Ｈ］−ＴＰＣを弱く置換した（Ｋｉ＝８．８μＭ）。
【特許文献１】ＷＯ９８／０３４７２
【非特許文献１】Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ２００１，４０，８６６
【発明の開示】
【００１６】
ＣＨＦ３３８１がＭＡＯ（モノアミノオキシダーゼ）およびＮＭＤＡ受容体に連携したイオンチャンネルに対して独特な二重のインヒビター作用を発揮し、そしてそのような二重の作用によって、それは急性および慢性疼痛の動物モデルにおいて鎮痛活性を保有することがここに見い出された。
【００１７】
事実、ＣＨＦ３３８１は疼痛状態の若干の薬理学的モデルにおいて効果的であることが分かった。これらのモデルが３部類の疼痛、すなわち慢性、炎症性および急性疼痛を調査し、そしてそれらは鎮痛剤の有効性を調査するために広く使用される。
【００１８】
炎症性疼痛のホルマリンモデルにおいて、ＣＨＦ３３８１は両マウスおよびラットの初期および後期の侵害受容期中に尻込みしたり、なめたりする挙動を明らかに抑制した。ラットでは、試験した最高用量、ｏｓ当たり（ｐ．ｏ．）１００ｍｇ／ｋｇにおいて、これらの効果は６４ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．のモルフィンを用いて観察された効果に類似していた。マウスでは、ＣＨＦ３３８１は両急性および緊張性のホルマリン−誘導のなめる応答を１００ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．および６０ｍｇ／ｋｇ  腹腔内（ｉ．ｐ．）においてほとんど完全に遮断した。その他の炎症性疼痛のモデル、カラギーナンモデルでは、ＣＨＦ３３８１は１００ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．および６０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．において、カラギーナンによって誘導される温熱性痛覚過敏のほぼ完全な反転を与えた。慢性疼痛のラットモデル（坐骨神経の結紮）では、１０〜６０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．のＣＨＦ３３８１は、運動反射には影響することなく温熱性痛覚過敏および低温異痛を反転した。糖尿病性神経病のラットモデルでは、ＣＨＦ３３８１は経口投与後の機械的痛覚過敏を有意に反転した。
【００１９】
最後に、ＣＨＦ３３８１が抗痛覚過敏効果を付与される用量よりも実質的に高い用量で鎮静および運動失調を誘導することが例証され、これはその鎮痛活性が重篤な副作用によって影響されないことを示している。
【００２０】
これらの知見に鑑みて、式（Ｉ）の化合物は、すべての形態の慢性疼痛の処置のため、特に神経障害性疼痛、すなわち疱疹後神経痛、三叉神経痛、糖尿病性神経障害およびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）による神経破壊に関連する疼痛の処置のための製薬学的組成物の製造に有利に使用することができる。
［発明が解決しようとする課題］
【００２１】
本発明は、すべての形態の慢性疼痛の処置のため、特に神経障害性疼痛、すなわち疱疹後神経痛、三叉神経痛、糖尿病性神経障害およびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）による神経破壊に関連する疼痛の処置のための一般式Ｉ：
【００２２】
【化２】
2005513101.tif 000003
【００２３】
［式中、
Ｒは水素またはＣ１−Ｃ４アルキル基であり；
Ｒ１は水素、アルキルまたは場合によってはアシル化したＣ１−Ｃ４ヒドロキシアルキルであり；
Ｒ２は水素；アルキル；フェニル；フェニルアルキルである］
によって表される化合物およびどれらの塩の使用に関する。
【００２４】
好適な化合物は、
ＲがＨであり、
Ｒ１がＨまたはアルキルであり、
Ｒ２がＨまたはアルキルである、
それらの化合物である。
【００２５】
別に特定しなければアルキル基は、好ましくはＣ１−Ｃ１０アルキル基、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、２−エチルペンチル、１−エチルヘプチル、１−メチルオクチルである。
【００２６】
アシル化Ｃ１−Ｃ４ヒドロキシアルキル基は、好ましくはアセチルオキシアルキル、プロパノイルオキシアルキル、２−メチルプロパノイルオキシアルキル、ベンゾイルオキシアルキル基である。
【００２７】
もっとも好適な化合物は、Ｒ、Ｒ１およびＲ２が水素［２−（２−インダニルアミノ）アセトアミド］である化合物である。
【００２８】
期待される治療用途では、化合物Ｉは本発明のさらなる目的である適当な製薬学的組成物に製剤化できる。
【００２９】
該組成物は典型的には、患者の疾病および状態（体重、性別、年齢）に応じて、有効成分１〜１０００ｍｇ、好ましくは５０〜５００ｍｇ、より好ましくは１００〜３５０ｍｇを含有でき、そして１日に１回以上、好ましくは１回に２回投与できる。
【００３０】
組成物は慣用の技術ならびにＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｍａｃｋ．Ｐｕｂ．，Ｎ．Ｙ．，ＵＳＡに例として記述される製薬学的に許容しうる添加物を使用して製造することができ、そして経口、非経口もしくは直腸経路によって投与できる。製剤の例は錠剤、カプセル剤、シロップ剤、顆粒剤、無菌注射用液剤もしくは懸濁剤、坐剤およびそれに類するものを含む。
【００３１】
次の実施例は本発明をさらに具体的に説明する。
【実施例１】
【００３２】
慢性狭窄傷害モデルにおける鎮痛活性
ＣＨＦ３３８１の潜在的鎮痛活性をＢｅｎｎｅｔｔら（Ｐａｉｎ  １９８８，３３：８７−１０７）によって記述されている慢性狭窄傷害（ＣＣＩ）モデルで評価した。簡単に言えば、ラットの左側共通（ｃｏｍｍｏｎ）坐骨神経を露出し、そして神経の坐骨三分枝に近い約１０ｍｍを接着している組織から遊離させ、そして４カ所の結紮（４．０シルク）をその周囲に約１ｍｍの空間を保ってゆるく結んだ。
【００３３】
温熱および低温刺激に対する後肢の撤退という２試験がこの研究では使われた。各試験を手術した後ろ足（ｈｉｎｄ  ｐａｗ）と反対側（ｃｏｎｔｒｏｌａｔｅｒａｌ）の後ろ足において繰り返した。
【００３４】
ラットを市販の無痛覚計（Ｐｌａｎｔａｒ  ｔｅｓｔ，Ｕｇｏ  Ｂａｓｉｌｅ，Ｃｏｍｅｒｉｏ  Ｉｔａｌｙ）を用いて各後ろ足の足底表面に対向した温熱刺激（５０Ｗ，８Ｖ）を適用することによって温熱性痛覚過敏について試験し、そして足撤退の潜伏時間（ｌａｔｅｎｃｙ）を測定した。４個の潜伏時間測定値を各後ろ足について取り、そして平均した。装置は約１０秒の足撤退潜伏時間を示すように校正された。結果は結紮側の潜伏時間から対照側の潜伏時間を引くことによって差異スコア（ＤＳ）として表した；この差異が１．５秒未満であった場合、動物は実験群に含めなかった。ＣＨＦ３３８１（１０−３０−６０ｍｇ／ｋｇ腹腔内−ｉ．ｐ．−）または媒質を結紮後１４〜２１日に動物に投与し、そして痛覚過敏について処置後１，２および４時間目に試験した。ＣＨＦ３３８１はＣＣＩによって生じた温熱性痛覚過敏を投与後６０分に最大効果を有して用量−および時間−依存様式で反転した。有意な効果は３０および６０ｍｇ／ｋｇ用量において観察され；効果に対する非有意な傾向は１０ｍｇ／ｋｇにおいて観察された（表１）。
【００３５】
低温異痛は、下に敷いた水浴で冷却した金属床の上に置いた透明なプラスチック円筒中に動物を閉じ込めて、手術したラットで調査した。床上に置いたサーミスターは約５℃の表面温度を指示した。この実験条件では、結紮後、手術したラットは床の上方へ揚げられた影響を受けた後ろ足を持ち上げることによって応答する。偽手術した動物はいかなる時も低温表面から足を撤退しない。最大２０秒の中止時間を設定して、その後の低温刺激への曝露に応答する動物の感度を妨害する何かの可能性を排除した。低温異痛の明瞭な兆候を示す動物、すなわち両試行において結紮側で１３秒以下の足撤退潜伏時間を有する動物を選択するために、動物を試験の間に２０分間隔で２回予備選別した。
【００３６】
次いで、動物を１群当たり少なくとも１０動物からなる群に割り当てた。ＣＨＦ３３８１（１０−３０−６０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）または媒質を結紮後７〜１４日に動物に投与し、そして低温異痛を処置後１および２時間目に試験した。ＣＨＦ３３８１はまた、ＣＣＩによって生じた低温異痛を反転した。この効果は温熱性痛覚過敏の研究からの結果と一般に一致する結果をもつ両時間−および用量−依存的であることが再び観察された。効果は投与後６０〜１２０分に最大であり、そして２つの比較的高い試験用量において有意であった（表１）。
【００３７】
【表１】
2005513101.tif 000004
【実施例２】
【００３８】
ＣＨＦ３３８１の抗侵害受容性効果の調査
ラットにおけるストレプトゾトシン−誘導糖尿病性神経病
この研究の目的はラットにおけるストレプトゾトシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ）（ＳＴＺ）−誘導糖尿病性神経障害での機械的痛覚過敏に及ぼすＣＨＦ３３８１（２５、５０および１００ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．）およびガバペンチン（ｇａｂａｐｅｎｔｉｎ）（１００ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．）の抗侵害受容性効果を調査することであった。糖尿病はＳＴＺ（７５ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射によって誘導し、そして２３日後に、その存在を尾静脈血のグルコースレベルの測定によって確認し、そしてその最終グルコースレベルを有するラットのみを研究に含めた。
【００３９】
２５日後、蒸留水、ＣＨＦ３３８１およびガバペンチンを疼痛測定６０分前に投与した。侵害受容の閾値は機械的侵害受容性刺激（足の圧迫試験）を用いて全群において評価した。
【００４０】
増加的圧力（接触圧力のグラム数）を侵害受容性反応（鳴き声発声または足の撤退）が決定されるまで動物の両後ろ足に適用した。その結果は、媒質処置した糖尿病群の平均値に比較して算出された侵害受容閾値の変動パーセンテージとして表現され、表２において報告される。
【００４１】
侵害受容閾値は媒質処置した非糖尿病性群と比較して糖尿病性対照群において有意に減少した。
【００４２】
ＣＨＦ３３８１は機械的痛覚過敏を有意に反転した。５０および１００ｍｇ／ｋｇの用量では、侵害受容閾値の有意な増加が観察された（それぞれ、１３４％および１１０％）。
【００４３】
結論として、この研究ではＣＨＦ３３８１がＳＴＺ−誘導糖尿病性神経病を有するラットにおいて侵害受容閾値を回復することが示された。
【００４４】
【表２】
2005513101.tif 000005
【実施例３】
【００４５】
マウスの足のホルマリンモデルにおける鎮痛活性
ＣＨＦ３３８１の抗痛覚過敏効果をホルマリンで誘導した炎症性疼痛モデルにおいて研究した。
【００４６】
マウスの足のホルマリン試験はＷｈｅｅｌｅｒ−Ａｃｅｔｏら（Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １０４：３５−４４，１９９１）によって記述されたように実施した。簡単に言えば、ホルマリン注射前日に、マウスを個々に透明なプラスチック円筒中に入れて３０分間適応させた。試験当日に１％ホルマリン２０μｌを左の後ろ足の足底表面中に注射し、そして行動観察のために動物を再びプラスチック円筒中に入れた。ホルマリン注射後最初の５分間（初期）、次いで１０〜４０分間（後期）に、動物が注射した足をなめたり、尻込みすることに費やした時間量（秒）（Ｌ／Ｆ）を疼痛の強さの測定値として使用した。ＣＨＦ３３８１  １０〜１００ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．および２５〜２００ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．または対応する媒質をホルマリン注射前それぞれ１５および３０分に投与した。
【００４７】
媒質処置群では、ホルマリンの皮下注射は顕著な自然の侵害受容行動を誘導した。ＣＨＦ３３８１は経口および腹腔内いずれの処置後の両期においても侵害受容応答の用量に関係した抑制を誘導した。ＣＨＦ３３８１腹腔内処置後には、抗痛覚過敏効果は両初期および後期において３０，６０および１００ｍｇ／ｋｇで有意であった。ＣＨＦ３３８１による経口処置後には、抗痛覚過敏効果はそれぞれ初期および後期において５０，１００および２００ｍｇ／ｋｇ、そして２５，５０，１００および２００ｍｇ／ｋｇで有意であった（表３）。
【００４８】
さらに、ホルマリン試験を使用し、慢性処置後のＣＨＦ３３８１の抗痛覚過敏効果に関して寛容性が現れるか否かを標準のオピオイド・モルフィンと比較して試験した。簡単に言えば、マウスを任意に５群（１群当たり１２マウス）に分け、そして次のように８日間毎日１回投与した：生理食塩水ｉ．ｐ．を３群、ＣＨＦ３３８１  ６０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．を１群、およびモルフィン２０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．を１群。９日目にこれらの群を次のように処置した：１つの生理食塩水で前処置した群を生理食塩水ｉ．ｐ．で処置（ｇ１）；２つの生理食塩水前処置群をＣＨＦ３３８１  ３０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．（ｇ２）およびモルフィン６ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．（ｇ３）でそれぞれ処置；ＣＨＦ３３８１  ６０ｍｇ／ｋｇで前処置した群をＣＨＦ３３８１  ３０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．（ｇ４）で処置し、そしてモルフィン２０ｍｇ／ｋｇで前処置した群をモルフィン６ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．（ｇ５）で処置したが、用量はホルマリン試験において活性があることが前以て分かっていた。ＣＨＦ３３８１およびモルフィンはホルマリン注射前それぞれ１５および３０分に投与した。
【００４９】
モルフィン（６ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）は慢性的に生理食塩水で処置した動物における両初期および後期のホルマリン応答に拮抗した。しかしながら、同用量のモルフィンは慢性的にモルフィン処置を受けた動物ではそのような作用を示すことはなかった。これに対して、ＣＨＦ３３８１（３０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）はＣＨＦ３３８１（６０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）または媒質のいずれの慢性的投与を受けたマウスでも匹敵する抗痛覚過敏活性をなお例証し、このことは寛容性の発達の欠如を示している（表４）。
【００５０】
【表３】
2005513101.tif 000006
【００５１】
【表４】
2005513101.tif 000007
【実施例４】
【００５２】
カラギーナン−誘導温熱性痛覚過敏モデルにおける鎮痛活性
カラギーナン−誘導温熱性痛覚過敏モデルでは、オスのラットをラットの足底試験装置に慣らせ、次いで温熱性痛覚過敏をＣＣＩモデルに関する節で記述したように調査した。簡単に言えば、基線になる足撤退潜伏時間を決定した後、動物は右後ろ足にカラギーナン（２０ｍｇ／ｍｌ溶液１００μｌ）の足底内注射を受けた。足撤退の潜伏時間（ＰＷＬ）をカラギーナン後２．５時間目（この時点は最高の痛覚過敏の開始を表した）に上記と同じプロトコールにしたがって再調査して痛覚過敏が出現したことを確認した。次いで、ＣＨＦ３３８１（３−１０−３０−６０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．および１０−３０−６０−１００ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．）をカラギーナン後の３時間目に投与し、そしてカラギーナン後３．５、４および５時間目に足撤退潜伏時間を再び測定した。カラギーナンは注射後２．５時間に全動物において足撤退潜伏時間の有意な低下を誘導した。この痛覚過敏はカラギーナン後少なくとも５時間媒質−処置動物において維持された。カラギーナン後３時間目のＣＨＦ３３８１のｉ．ｐ．およびｐ．ｏ．投与は、それぞれ１０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．および３０ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．の最小有効用量によって温熱性痛覚過敏の維持を用量に依存して拮抗した（表５）。
【００５３】
【表５】
2005513101.tif 000008
【実施例５】
【００５４】
ホットプレートモデルにおける鎮痛活性
ＣＨＦ３３８１の効果をＥｄｄｙら（１９５３）によって記述されているホットプレート試験によって急性疼痛において研究した。試験は電気的に加熱し、そしてマウスおよびラットを用いてそれぞれ５５もしくは５１℃の温度に設定されるよう温度調節計で制御した銅板面上で実施した。
【００５５】
動物を透明な観察用チャンバーによってホットプレートに拘束し、そして後ろ足をなめることでなる応答までの潜伏時間を測定した。６０秒の中止時間を用いて組織の損傷を避けた。
【００５６】
最高効果の時間を用量−応答曲線を実施する前に決定し、そして両マウスおよびラットにおいてｉ．ｐ．投与後１５分であることが分かった。ｉ．ｐ．投与後、ＣＨＦ３３８１（マウスで３０−４５−６０および１００ｍｇ／ｋｇ；ラットで３０−３７−４５および６０ｍｇ／ｋｇ）は、媒質処置動物に較べて後ろ足をなめるという応答の潜伏時間において有意な、用量依存的増加を生じた（表６）。
【００５７】
【表６】
2005513101.tif 000009
【実施例６】
【００５８】
ロータロッド（ｒｏｔａｒｏｄ）試験における副作用の評価
次に、ＣＨＦ３３８１の副作用プロファイルを両マウスおよびラットにおいてロータロッド試験で評価した。試験の実施前日に、マウスとラットを試験装置でそれらの平衡を維持するべく訓練した。マウスでは、３分続いて２分からなる訓練を４．５ｒ．ｐ．ｍ．〜１６．５ｒ．ｐ．ｍ．で回転する棒の上で試み；ラットでは、３分続いて１分からなる訓練を８ｒｐｍにおいて試みる（Ｋｉｎｎａｒｄ  ａｎｄ  Ｃａｒｒ，１９５７）。試験日の朝、マウスとラットをロータロッドで再試験し、棒上で平衡を維持できる動物のみを実験操作のために保有した。ＣＨＦ３３８１は試験実施前１５分（神経毒性にとってもっとも影響する時間）に少なくとも８匹の群にｐ．ｏ．またはｉ．ｐ．投与した。全対照は対応する媒質を受けた。２分の試験期間中に落ちるマウスの数および３分続いて１分の試行で落ちるラットの数を動物の５０％が神経毒性を示すそれぞれの用量（ＴＤ５０）の算出に使用した。経口投与後、ＣＨＦ３３８１は高用量でロータロッド試験において運動障害を生じ、ＴＤ５０値はマウスおよびラットにおいてそれぞれ２３３ｍｇ／ｋｇおよび２９９ｍｇ／ｋｇと計算された。ｉ．ｐ．投与後には、ＣＨＦ３３８１は比較的低用量で神経毒効果を発揮し、ＴＤ５０値はマウスおよびラットにおいてそれぞれ９６ｍｇ／ｋｇおよび１１３ｍｇ／ｋｇであった。
【００５９】
これらの結果は、ＣＨＦ３３８１は鎮静および運動失調を誘導するが抗痛覚過敏活性を与える用量よりも実質的に高い用量で誘導するので、ＣＨＦ３３８１の抗痛覚過敏作用が重篤な副作用によって影響されないと考えられることを明らかに示している。
【国際調査報告】
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