(57)【要約】アンサマイシン製剤およびその製造および使用方法を説明し、クレームする。該製剤は患者に直接使用できるか、または凍結乾燥および/または凍結し、後で再度もしくはさらに水和もしくは処置して用いることができるエマルジョンである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
(a) エタノール溶液に溶解したアンサマイシンまたはその医薬的に許容される塩を得、
(b) 該アンサマイシンまたはその医薬的に許容される塩を中鎖トリグリセリドと混合して第一混合物を形成し、
(c) エタノールが存在するときは該第一混合物からエタノールを本質的に除去し、
(d) 工程(c)の生成物を乳化剤および安定化剤と混合して第二混合物を形成し、
(e) 該第二混合物を乳化し、
(f) 所望により工程(e)の生成物を凍結乾燥し、
(g) 所望により工程(f)の生成物を水和する
ことを含むアンサマイシンエマルジョンの製造方法。
【請求項２】
該アンサマイシまたはその医薬的に許容される塩が、ゲルダナマイシン、ゲルダナマイシンの医薬的に許容される塩、ゲルダナマイシン誘導体、およびゲルダナマイシン誘導体の医薬的に許容される塩の群から選ばれるメンバーから選ばれる請求項1記載の方法。
【請求項３】
該アンサマイシンまたはその医薬的に許容される塩が、
【化１】
2005528390.tif 000005
およびその医薬的に許容される塩からなる群から選ばれる請求項1記載の方法。
【請求項４】
該中鎖トリグリセリドが1またはそれ以上のカプリル酸およびカプリン酸を含み、該乳化剤がホスファチジルコリンを含み、該安定化剤がショ糖を含む請求項1記載の方法。
【請求項５】
該乳化第二混合物の平均油滴サイズが約400nmまたはそれ以下である請求項1記載の方法。
【請求項６】
該第二混合物がろ過滅菌されている請求項1記載の方法。
【請求項７】
該乳化第二混合物中の該薬剤が約3mg/mlまたはそれ以下の濃度で存在する請求項1記載の方法。
【請求項８】
該乳化工程が機械的混合、超音波照射、マイクロ流動化装置を通し、そして1またはそれ以上の膜を通過させることからなる群から選ばれる1またはそれ以上のメンバーを用いることを含む請求項1記載の方法。
【請求項９】
工程(e)の生成物を凍結乾燥する工程(f)をさらに含む請求項1記載の方法。
【請求項１０】
工程(f)の生成物が工程(g)を用いて実質的に水和される請求項9記載の方法。
【請求項１１】
さらに、工程(g)または(f)の生成物を容器に包装することを含む請求項10記載の方法。
【請求項１２】
該容器が耐光性である請求項11記載の方法。
【請求項１３】
1またはそれ以上の該工程を減光下で行う請求項1記載の方法。
【請求項１４】
1またはそれ以上の該工程を不活性ガス下で行う請求項1記載の方法。
【請求項１５】
(a) アンサマイシンまたはその医薬的に許容される塩を、中鎖トリグリセリド溶液に溶解した乳化剤を含む予め形成された溶液に溶解し(該溶解には所望により熱を適用する)、
(b) 工程(a)の生成物を安定化剤と混合し、
(c) 工程(b)の生成物を乳化し、
(d) 所望により工程(c)の生成物を凍結乾燥し、
(e) 所望により工程(d)の生成物を水和する
ことを含むアンサマイシンエマルジョンの製造方法。
【請求項１６】
該アンサマイシンまたはその医薬的に許容される塩が、ゲルダナマイシン、ゲルダナマイシンの医薬的に許容される塩、ゲルダナマイシン誘導体、およびゲルダナマイシン誘導体の医薬的に許容される塩の群から選ばれるメンバーから選ばれる請求項15記載の方法。
【請求項１７】
該アンサマイシンまたはその医薬的に許容される塩が、
【化２】
2005528390.tif 000006
およびその医薬的に許容される塩からなる群から選ばれる請求項15記載の方法。
【請求項１８】
該中鎖トリグリセリドが1またはそれ以上のカプリル酸およびカプリン酸を含み、該乳化剤がダイズホスホレシチンを含み、該安定化剤がショ糖を含む請求項15記載の方法。
【請求項１９】
該乳化第二混合物の平均油滴サイズが約400nmまたはそれ以下である請求項15記載の方法。
【請求項２０】
該乳化第二混合物中の該薬剤が約2mg/mlまたはそれ以下の濃度で存在する請求項14記載の方法。
【請求項２１】
該乳化工程(c)が機械的混合、超音波照射、マイクロ流動化装置を通すこと、そして1またはそれ以上の膜を通過させることからなる群から選ばれる1またはそれ以上のメンバーを用いることを含む請求項15記載の方法。
【請求項２２】
1またはそれ以上の該工程が不活性雰囲気条件下で行われる請求項15記載の方法。
【請求項２３】
請求項1〜22のいずれかに記載の方法を用いて製造されるエマルジョン。
【請求項２４】
油相がアンサマイシンまたはその医薬的に許容される塩、中鎖トリグリセリド、およびレシチンを含み、水性相が1またはそれ以上の安定化剤を含み、エマルジョンが所望により凍結乾燥および凍結されている(1またはそれ以上)、油相および水性相を含むエマルジョン。
【請求項２５】
該アンサマイシまたはその医薬的に許容される塩が、ゲルダナマイシン、ゲルダナマイシンの医薬的に許容される塩、ゲルダナマイシン誘導体、およびゲルダナマイシン誘導体の医薬的に許容される塩の群から選ばれるメンバーから選ばれる請求項24記載のエマルジョン。
【請求項２６】
該アンサマイシンまたはその医薬的に許容される塩が、
【化３】
2005528390.tif 000007
およびその医薬的に許容される塩からなる群から選ばれる請求項24記載のエマルジョン。
【請求項２７】
該アンサマイシンまたはその医薬的に許容される塩が濃度範囲約5-30mg/ml(含む)の該油相に可溶性である請求項24記載のエマルジョン。
【請求項２８】
該アンサマイシンまたはその医薬的に許容される塩がエマルジョン中に約3mg/mlまでの濃度で存在する請求項24記載のエマルジョン。
【請求項２９】
平均滴サイズが約400nmまたはそれ以下であることを特徴とする請求項24記載のエマルジョン。
【請求項３０】
医薬的有効量の、請求項24の記載に従って製造されるエマルジョンを哺乳動物対象に投与することを含む哺乳動物の障害を治療または予防する方法。
【請求項３１】
医薬的有効量の、請求項24-29のいずれかに記載のエマルジョンを哺乳動物対象に投与することを含む哺乳動物の疾患を治療または予防する方法。
【請求項３２】
該疾患が虚血、増殖性疾患、感染症、神経学的疾患、腫瘍、白血病、新生物、癌、カルチノーマ、および悪性疾患からなる疾患の群から選ばれる請求項30記載の方法。
【請求項３３】
該増殖性疾患が腫瘍、炎症性疾患、真菌感染症、酵母感染症、およびウイルス感染症からなる群から選ばれる請求項31記載の方法。
【請求項３４】
該乳化第二混合物の平均油滴サイズが約200nmまたはそれ以下である請求項1記載の方法。
【請求項３５】
該乳化第二混合物の平均油滴サイズが約200nmまたはそれ以下である請求項15記載の方法。
【請求項３６】
平均油滴サイズが約200nmまたはそれ以下であることを特徴とする請求項24記載のエマルジョン。
【請求項３７】
該アンサマイシンが
【化４】
2005528390.tif 000008
またはその医薬的に許容される塩である請求項1、15、または30記載の方法。
【請求項３８】
該アンサマイシンが
【化５】
2005528390.tif 000009
またはその医薬的に許容される塩である請求項1、15、または30記載の方法。
【請求項３９】
該アンサマイシンが
【化６】
2005528390.tif 000010
またはその医薬的に許容される塩である請求項24記載のエマルジョン。
【請求項４０】
該アンサマイシンが
【化７】
2005528390.tif 000011
またはその医薬的に許容される塩である請求項24記載のエマルジョン。
【請求項４１】
該エマルジョンがマンニトール、1またはそれ以上の緩衝剤、および所望によりデキストロースを含む請求項38記載の方法。
【請求項４２】
該エマルジョンが約1-1.5%(w/v)アンサマイシン、約5%(w/v)マンニトール、および約10-20mM酢酸ナトリウム(pH〜5)を含む請求項41記載の方法。
【請求項４３】
該エマルジョンが約1〜10mg/ml(含む)の該アンサマイシンを含む請求項38記載の方法。
【請求項４４】
該所望による凍結乾燥の前に、該エマルジョンがマンニトール、1またはそれ以上の緩衝剤、および所望によりデキストロースを含む請求項40記載のエマルジョン。
【請求項４５】
約1-1.5%(w/v) アンサマイシン、約5%(w/v)マンニトール、および約10-20mM酢酸ナトリウム(pH〜5)を含む請求項44記載のエマルジョン。
【請求項４６】
約1〜10mg/ml(含む)の該アンサマイシンを含む請求項40記載のエマルジョン。
【請求項４７】
該中鎖トリグリセリドが短および長鎖トリグリセリドからなる群から選ばれる1またはそれ以上のメンバーを伴う請求項1または15記載の方法。
【請求項４８】
請求項47記載の方法に従って製造されるエマルジョン。
【請求項４９】
さらに短および長鎖トリグリセリドからなる群から選ばれる1またはそれ以上のメンバーを含む請求項24記載のエマルジョン。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、Ulmら、NOVEL ANSAMYCIN FORMULATIONS AND METHODS FOR PRODUCING AND USING SAME, 米国仮出願No.60/371,668,(2002年、4月10日出願)の優先権を主張する(この内容は本明細書の一部を構成する。)。
【０００２】
本発明は、一般的にはアンサマイシン、例えば17-AAGの医薬製剤および方法、より具体的な態様においてエマルジョン製剤に関する。
【背景技術】
【０００３】
以下の説明には、本発明を理解するのに有用と思われる情報が含まれる。本明細書に記載のあらゆる情報が、先行技術であるか、本発明に関連があるか、または具体的もしくは暗に参照しているあらゆる刊行物が先行技術であることを承認しない。
【０００４】
17-アリルアミノ-ゲルダナマイシン(17-AAG)は、合成ゲルダナマイシン類似体(GDM)である。両分子はアンサマイシンとして知られる抗生物質分子の広いクラスに属する。微生物のStreptomyces hygroscopicusから最初に単離されたGDMは、最初はある種のキナーゼの強力な阻害剤として同定され、後にキナーゼの分解を促進することにより、具体的には、「分子シャペロン」、例えば熱ショックタンパク質90(HSP90)を標的とすることにより作用することが示された。次いで、種々の他のアンサマイシンが多かれ少なかれそのような活性を示し、最も有望なものに17-AAGがあり、現在National Cancer Institute(NCI)により集中的に臨床試験が行われている。例えば、Federal Register, 66(129): 35443-35444; Erlichmanら、Proc. AACR (2001), 42, 要約4474参照。
【０００５】
HSP90は、シグナル伝達、細胞周期制御、および転写調節に関与するキータンパク質を含む広範囲のタンパク質のホールディング、活性化、および構築に関与する遍在性シャペロンタンパク質である。HSP90シャペロンタンパク質は、例えば、Raf-1、EGFR、v-Srcファミリーキナーゼ、Cdk4、およびErbB-2を含むステロイドホルモンレセプターおよびタンパク質キナーゼのような重要なシグナリングタンパク質と関連すると研究者が報告している(Buchner J.、1999、TIBS、24:136-141; Stepanova、L.ら、1996、Genes Dev. 10:1491-502; Dai,K.ら、1996、J. Biol. Chem. 271:22030-4)。研究はさらに、ある種のコシャペロン(co-chaperone)、例えば、Hsp70、p60/Hop/Stil、Hip、Bagl、HSP40/Hdj2/Hsj1、イムノフィリン、p23、およびp50がその機能においてHSP90を補助するかも知れないことを示唆している(例えば、Caplan、A.、Trends in Cell Biol.、9: 262-68(1999)参照)。
【０００６】
アンサマイシン抗生物質、例えばヘルビマイシンA(HA)、ゲルダナマイシン(GM)、および17-AAGは、HSP90のN末端ATP結合ポケットと堅く結合することによりその抗癌効果を発揮すると考えられる(Stebbins、C.ら、1997、Cell、89: 239-250)。このポケットは高度に保存されており、DNAギラーゼのATP結合部位と弱い相同性を有する(Stebbins、C.ら、上記; Grenert、J. P.ら、1997、J. Biol. Chem.、272: 23843-50)。さらに、ATPおよびADPは共に、このポケットと低親和性に結合し、弱いATPアーゼ活性を有することが示されている(Proromou、C.ら、1997、Cell、90: 65-75; Panaretou、B.ら、1998、EMBO J.、17: 4829-36)。in vitroおよびin vivo試験は、このN末端ポケットをアンサマイシンおよび他のHSP90阻害剤(インヒビター)が占有するとHSP90機能が変化し、タンパク質のホールディングを阻害することを示した。より高濃度でアンサマイシンおよび他のHSP90阻害剤は、タンパク質基質のHSP90への結合を妨げることが示された(Scheibel、T.H.ら、1999、Proc. Natl. Acad. Sci. U S A 96: 1297-302; Schulte、T. W.ら、1995、J. Biol. Chem. 270: 24585-8; Whitesell、L.ら、1994、Proc. Natl. Acad. Sci. U S A 91: 8324-8328)。アンサマイシンが、シャペロン関連タンパク質基質のATP依存性放出を阻害することも立証されている(Schneider、C.L.ら、1996、Proc. Natl. Acad. Sci.U S A、93: 14536-41; Sepp-Lorenzinoら、1995、J. Biol. Chem. 270:16580-16587)。いずれにおいても、該基質はプロテオソーム中でユビキチン依存性プロセスにより分解する(Schneider、C.、L.、上記; Sepp-Lorenzino、L.ら、1995、J. Biol. Chem.、270: 16580-16587; Whitesell、L.ら、1994、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、91: 8324-8328)。
【０００７】
この基質の不安定化は腫瘍および非形質転換細胞などに生じ、シグナリング調節物質のサブセット、例えばRaf(Schulte、T. W.ら、1997、Biochem. Biophys. Res. Commun. 239: 655-9; Schulte、T. W.ら、1995、J. Biol. Chem. 270:24585-8)、核ステロイドレセプター(Segnitz、B.、およびU. Gehring. 1997、J. Biol. Chem. 272: 18694-18701; Smith、D. F.ら、1995、Mol. Cell. Biol. 15: 6804-12)、v-src(Whitesell、L.ら、1994、Proc. Natl. Acad. Sci. U S A 91: 8324-8328)、およびある種の貫膜チロシンキナーゼ(Sepp-Lorenzino、L.ら、1995、J. Biol. Chem. 270:16580-16587)、例えばEGFレセプター(EGFR)およびHer2/Neu(Hartmann、F.ら、1997、Int. J. Cancer 70: 221-9; Miller、P.ら、1994、Cancer Res. 54: 2724-2730; Mimnaugh、E. G.ら、1996、J. Biol. Chem. 271:22796-801; Schnur、R.ら、1995、J. Med. Chem. 38: 3806-3812)、CDK4、および突然変異体p53.(Erlichmanら、Proc. AACR(2001)、42、要約4474)に対して特に有効であることが示されている。これらタンパク質のアンサマイシン誘発性損失は、ある種の調節経路の選択的崩壊をもたらし、そのように処理した細胞の細胞周期の特定の期での増殖停止(Muise-Heimericks、R. C.ら、1998、J. Biol. Chem. 273: 29864-72)、およびアポプトーシス、および/または分化(Vasilevskaya、A.ら、1999、Cancer Res.、59: 3935-40)をもたらす。
【０００８】
最近、Nicchittaら、WO 01/72779 (PCT/US01/09512)は、HSP90が熱ショックおよび/またはフルオロフォアのビス-ANSによる結合によって種々のコンフォメーション(構造)をとりうることを明らかにした。具体的には、Nicchittaらは、この誘導された構造が正常細胞に優勢な異なる形のHSP90よりある種のHSP90リガンドにより高い親和性を示すことを明らかにした。同一出願人の出願である(Commonly-owned application)PCT/US02/39993は、高親和性HSP90の優れた供給源としての癌細胞溶解物の有用性および使用を示すことによりさらにこの発見を支持する。
【０００９】
抗癌および抗腫瘍作用に加え、HSP90阻害剤は、抗炎症剤、抗感染性疾患剤、自己免疫治療剤、卒中、虚血、心臓疾患の治療剤、および神経再生を促進するのに有用な薬剤としての使用を含む広範囲の他の有用性にも関与していた(例えば、Rosenら、WO02/09696(PCT/US01/23640)、Degrancoら、WO99/51223(PCT/US99/07242)、Gold、米国特許6,210,974 B1、DeFrancoら、米国特許6,174,875参照)。上記と幾分重複するが、限定されるものではないが、強皮症、多発性筋炎、全身性エリテマトーデス、リウマチ性関節炎、肝硬変、ケロイド形成、間質性腎炎、および肺繊維症を含む繊維形成誘導性障害も治療可能であるかもしれないことが文献に報告されている(Strehlow、WO 02/02123;PCT/US01/20578)。さらなるHSP90調節、モジュレーターおよびその使用は、PCT/US03/04283、PCT/US02/35938、PCT/US02/16287、PCT/US02/06518、PCT/US98/09805、PCT/US00/09512、PCT/US01/09512、PCT/US01/23640、PCT/US01/46303、PCT/US01/46304、PCT/US02/06518、PCT/US02/29715、PCT/US02/35069、PCT/US02/35938、PCT/US02/39993、60/293,246、60/371,668、60/331,893、60/335,391、06/128,593、60/337,919、60/340,762、および60/359,484に記載されている。
【００１０】
現在、医薬適用、特に静脈内注射用製剤用の、アンサマイシンのような多くの他の脂質親和性薬剤を製造するのは難しい。今日まで、脂質小胞、および油中水タイプのエマルジョンの使用が試みられてきたが、これらはきわめて複雑な製造工程、不快または臨床的に許容されない溶媒を必要とし、そして/または製剤の不安定性を生じた。一般的には、Vemuri, S.およびRhodes, C. T., Preparation and characterization of liposomes as therapeutic delivery systems:総説、Pharmaceutica Acta Helvetiae 70, pp.95-111(1995)参照。PCT/US99/30631(2000年、6月29日にWO00/37050として公開)も参照のこと。
【００１１】
1またはそれ以上のこれら欠陥を改善する別の製剤化方法および製品の必要性がある。
(発明の要約)
【００１２】
本発明は新規医薬製剤およびその製造および使用方法を特徴とする。第一の側面において、本発明は以下の工程を含む方法を特徴とする：
(a) エタノールに溶解した薬剤を得、
(b) 工程(a)の生成物を中鎖トリグリセリドおよびレシチンと混合して第一混合物を形成し、
(c) 実質的にエタノールを除去し、
(d) 工程(c)の生成物を安定化剤と混合して第二混合物を形成し、
(e) 第二混合物を乳化する。乳化第二混合物を好都合にろ過滅菌し、そして/または例えば、乳化滴サイズまたはサイズ範囲を減少または選択するためさらなるろ過工程にかけることができる。乳化混合物を凍結乾燥し、次いで対象に例えば静脈内に投与するための適切な水性溶液に自由に再水和することもできる。
【００１３】
第二の側面において、該方法は、薬剤を溶解するのにエタノールに依存しない。第一の工程(a)および(b)を効率的に1工程にまとめて実質的にエタノールを含まなくし、第一の側面の工程(c)のエタノールを除去する必要性もなくなる。第二の側面において、薬剤を予め形成した乳化剤/中鎖トリグリセリド溶液、例えばMiglyol中のPhospholiponに加えることにより薬剤を油相溶液とする。該溶液を予備加熱し、そして/または薬剤導入時に加熱することができる。範囲40-80℃の温度が特に有用であることがわかった。所望の溶解を保証するために加熱混合物をボルテックスにかけ、そして/または超音波処理する。そのような側面において、該薬剤は好ましくは例えば約175℃またはそれ以下の低融点を有する。
【００１４】
別の側面において、本発明は、
(a)中鎖トリグリセリド溶液に溶解した乳化剤を含む予め形成した溶液に薬剤、例えばアンサマイシンを溶解し、(b)工程(a)の生成物を安定化剤と混合し、(c)工程(b)の生成物を乳化し、(d)所望により工程(c)の生成物を凍結乾燥し、(e)所望により工程(d)の生成物を水和することを含むエマルジョンの製造方法を特徴とする。
【００１５】
以下の態様を本発明のあらゆる側面に適切に適用することができよう。
【００１６】
ある態様において、該薬剤は脂質親和性薬剤、例えばアンサマイシン、例えば17-AAG(CNF-101)である。
【００１７】
ある態様において、中鎖トリグリセリドはMiglyol(登録商標)、例えばMiglyol(登録商標)812である。
【００１８】
ある態様において、該中鎖トリグリセリドは、好ましくは個々の範囲が20-80%の、1またはそれ以上のカプリル酸およびカプリン酸を含む。
【００１９】
ある態様において、該乳化剤は、リン脂質、例えばダイズホスファチジルコリン、例えばPhospholipon 90Gであるか、またはそれを含む。
【００２０】
ある態様において、好ましい乳化工程には、1またはそれ以上の機械的混合、超音波照射、マイクロ流動化装置の通過、および例えば適切なサイズの多孔性膜を通す強制加圧がある。
【００２１】
ある態様において、安定化剤には、凍結乾燥または0℃以下の温度での保存の厳しさに対する安定化を助ける充填剤、例えばショ糖がある。
【００２２】
ある態様において、乳化混合物は、平均滴直径サイズが約400nmまたはそれ以下、好ましくは約200nmまたはそれ以下であり、1またはそれ以上のフィルター膜を1回またはそれ以上通過させることにより達成することができる。ある態様において、本発明は1またはそれ以上のフィルター膜を連続的に通過させることを予期する。該膜は同じかまたは異なるポア直径サイズあり得、種々のポア直径サイズ、例えば1-500ミクロンを有する。ある態様において、例えば通過は、0.4ミクロンのポア直径のフィルター、次いで0.2ミクロンのポア直径のフィルターを通して行い、後者はろ過滅菌の機能にも役立つかもしれない。
【００２３】
ある態様において、例えば0.2ミクロンのフィルターを通すろ過滅菌は必須の工程である。
【００２４】
ある態様において、乳化混合物の薬剤濃度は約3mg/mlまたはそれ以下である。「約3mg/ml」は2.7〜3.3mg/mlの数値を表す。
【００２５】
ある態様において、製剤の製造は減光下で行われる。
【００２６】
ある態様において、凍結乾燥または水和した製剤を耐光容器または包装、例えばアンプルまたはバイアルに包装する。
【００２７】
ある態様において、アンサマイシンは1またはそれ以上の以下のものから選ばれる。
【００２８】
【化１】
2005528390.tif 000002
本発明の方法およびエマルジョンに使用できる他の多くのアンサマイシンは、PCT/US03/04283および本願の背景技術に記載の他の特許および特許出願に記載されているか、または当該分野で知られている。
【００２９】
ある態様において、アンサマイシンは、医薬的に許容される塩の形で存在する。1またはそれ以上の医薬的に許容される賦形剤、例えばマンニトール、ショ糖、および/またはデキストロース、種々の緩衝剤、例えば酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、および/またはマレイン酸ナトリウム、アミノ酸、糖酸(例えばグルココルネートおよび/またはグルコネート)、およびチキソトロープ(揺変性)剤、例えばポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、および/またはポロキサマー(コポリマー)も存在するかもしれない。ある好ましい特定の態様は、さらに約5%マンニトール、約10-20mM酢酸ナトリウム(x3H2O)(pH〜5)、および無菌水を含む約1〜1.5% 237メシレート塩基(w/v)を特徴とする。この特定の製剤は、アンサマイシンのあらゆる濃度範囲、例えば約1〜約10mg/ml(含む)を達成するよう調整することができる。酢酸ナトリウム緩衝組成物を調整するため、適切な酸および塩基、例えば塩化水素酸および水酸化ナトリウムを用いてpHを操作することができる。酢酸ナトリウムの使用に加えて、またはその代わりに、他の緩衝剤、例えばヒスチジン(NMT 5mM；pH〜5)、乳酸(〜10-20mM；pH〜4)、バリン(〜10-50mM；pH〜3)などを用いることができる。
【００３０】
別の側面において、本発明は、医薬的有効量の生成物を生物に投与することにより生物、例えば哺乳動物の疾患を治療または予防するための医薬組成物、製剤、または製品の使用方法を特徴とする。少なくとも哺乳類の治療では疾患は、好ましくは虚血、増殖性疾患、および神経損傷からなる疾患の群から選ばれる。増殖性疾患には、限定されるものではないが、腫瘍および癌、炎症性疾患、真菌感染症、酵母感染症、およびウイルス感染症が含まれる。ある好ましい態様において、哺乳動物はヒトである。ある好ましい態様において、投与方法は、静脈内であり、以下により詳細に説明するが他の投与方法も予期される。本発明の利点には、製造しやすさ、臨床的に許容される試薬(例えば環境および/または患者に対する毒性が低下した)の使用、製剤安定性の増大、輸送および倉庫保管の簡単さ、および薬局および臨床での取り扱いの簡単さ(1つまたはそれ以上)がある。他の利点、側面、および態様は、以下の図面、詳細な説明、および特許請求の範囲から明らかであろう。
【００３１】
あらゆる上記側面および態様は、さらに以下の特許請求の範囲に記載するように、本発明の精神内で適切な目的を達成するように適切に組み合わせることができる。
(発明の詳細な説明)
【００３２】
本発明の製剤は、水に不溶性の薬剤を患者に静脈内および他の種類の投与を行うのに適したものにするのに特に利点がある。製剤化の方法は、比較的単純であり、典型的には臨床的に許容される試薬を利用し、既存の方法および製品より保存および安定性の利点をもたらす。
【００３３】
ある態様において、該方法は、目的の医薬化合物、すなわち薬剤を含むエマルジョンの凍結乾燥ケーキの製造を特徴とし、凍結乾燥形は保存および安定性の持続のために用いることができ、患者に静脈内または他の方法で投与するために必要に応じて容易に再水和することができる。
【００３４】
ある方法には、エタノールまたは同等の溶媒に溶解した医薬化合物を得、中鎖脂肪酸溶液と混合し、エタノールまたは同等の溶媒を実質的に蒸発させて除去し、乳化剤および/または充填剤を加え、次いで乳化することが含まれる。これはマイクロチャンネルフィルターの助けにより、これにエマルジョンを高圧下で通して一定の直径の乳化生成物を選択することにより行うことができよう。
【００３５】
別の方法はエタノール非存在下で行い、これには、薬剤を予め形成した乳化剤/中鎖トリグリセリド溶液に加え、熱および/または超音波処理の助けによりその中に薬剤を加え、溶解することが含まれる。
【００３６】
前記方法に次いで適切な時点で凍結乾燥および再水和を行うことができよう。凍結乾燥は、保存、輸送、および取り扱いに比較的安定で好都合な生成物をもたらす。水和し、適切な濃度に調整したら患者に静脈内またはその他の方法で好都合に投与することができよう。本発明はアンサマイシン 17-AAG(CNF-101)の使用を明らかにする。しかしながら、本明細書に記載の新規薬剤製剤化方法は、多くの他のアンサマイシン薬、およびアンサマイシン以外の化合物、特に水とは反対にエタノールに高溶解性の化合物に応用することができよう。
【００３７】
用語「薬剤」は、培養細胞または生物に投与した時in vitroまたはin vivoで直接または間接的に生物学的効果をもたらすあらゆる化合物を意味する。該薬剤はリポソームに詰め込み、そして/または乳化することができるべきであり、典型的には、必ずしもではないが脂質親和性であろう。
【００３８】
用語「アンサマイシンをエタノールに溶解する」または「エタノールに溶解したアンサマイシンを得る」とは、エタノールがそれ自身いくらかの水または他の溶液または溶質を含む水性溶液の部分である可能性を排除しない。さらに、必ずしも溶解した薬剤でエタノールが飽和している(可能ではあるが)ことを意味しない。
【００３９】
用語「該エタノールを実質的に除去する」は、第一混合物中に存在するエタノールのすべて、ほとんど、または大部分を除去することを意味する。90%またはそれ以上のエタノールを除去することが好ましい。これは、1またはそれ以上の手段、例えば減圧、不活性ガス流、デカンティング、および熱適用により達成することができ、典型的には蒸発が含まれる。減圧の増大と組み合わせて、より低温度を用いてエタノール蒸発させることもできよう。
【００４０】
用語「蒸発させる」および「凍結乾燥する」は、必ずしも溶媒および溶液を100%除去することを意味せず、より低パーセンテージの除去を含むかもしれない。実質的な除去が好ましく、約95%の除去が好ましい。
【００４１】
「不活性雰囲気条件」は、標準的雰囲気条件の空気より比較的反応性が低いものである。純粋または実質的に純粋な窒素ガスの使用はそのような不活性雰囲気条件の一例である。当業者は他のものにも精通している。
【００４２】
用語「水和する」または「再水和する」は、水性溶液、例えば水、または生理学的に適合性の緩衝液、例えばハンクス溶液、リンゲル溶液、または生理食塩水緩衝液を加えることを意味する。
【００４３】
用語「安定化剤」は、必ずしもではないが「充填剤」または「凍結乾燥剤」と同義であり得る(その逆もある)。
【００４４】
「医薬的に許容される塩」には、医薬的に許容される無機および有機の酸および塩基から誘導されるものが含まれる。適切な酸の例には、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン-p-スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン-2-スルホン酸、ベンゼンスルホン酸、1,2-エタンスルホン酸(エジシレート)、ガラクトシル-d-グルコン酸などがある。シュウ酸のような他の酸はそれ自身医薬的に許容されるものではないが、本発明化合物およびその医薬的に許容される酸付加塩を得る際の中間体として有用な塩を製造するのに用いることができよう。適切な塩基から誘導される塩には、アルカリ金属(例えばナトリウム)、アルカリ土類金属(例えばマグネシウム)、アンモニウム、およびN-(C1-C4)4+塩などが含まれる。これらのあるものの具体例には、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化コリン、炭酸ナトリウムなどがある。特許請求の範囲で「化合物(例えば化合物「x」)またはその医薬的に許容される塩」と記載し、化合物のみを表示している場合は、それら特許請求の範囲は選択肢または接続においてそのような化合物の医薬的に許容される塩または塩類を含むと解釈すべきである。
【００４５】
「生理学的に許容される担体」は、生物に有意な刺激をもたらさず、投与した化合物の生物活性および特性を排除しない担体または希釈剤を表す。
【００４６】
「賦形剤」は、化合物の投与をさらに容易にするために医薬組成物に加える不活性物質を表す。賦形剤の例には、限定されるものではないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖およびデンプン類、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、およびポリエチレングリコールがある。
【００４７】
用語「約」は、記載したものからの20%の偏差を含むことを意味する。用語「含む」は、用語「〜の間」または「約〜の間」と組み合わせて用いるとき記載した範囲の終点を含むことを意味する。
アンサマイシンおよびベンゾキノンアンサマイシン
【００４８】
用語「アンサマイシン」は、天然のアンサ構造(長鎖脂肪族橋により架橋された発色体ナフトヒドロキノン基)を特徴とするリファマイシン群の抗生物質を含む広い用語である。この広いクラスにはサブクラスのベンゾキノンアンサマイシンが含まれる。請求の範囲で用いている「ベンゾキノンアンサマイシン」には、ゲルダナマイシン、ジヒドロゲルダナマイシン、ヘルバマイシン(herbamycin)、マクベシンなどを含む当該分野で知られたあらゆるベンゾキノンアンサマイシンが含まれる。反応の結果は「ベンゾキノンアンサマイシン誘導体」の形成である。本発明のアンサマイシンおよびベンゾキノンアンサマイシンは合成、天然、または2つの組み合わせ、すなわち半合成であってよく、またダイマー(二量体)、コンジュゲート変種、およびプロドラッグ形が含まれよう。本発明の方法に有用ないくつかの典型的ベンゾキノンアンサマイシンおよびその製造方法には、限定されるものではないが、米国特許3,595,955(ゲルダナマイシンの製造方法を記載)、4,261,989、5,387,584、および5,932,566に記載のものが含まれる。ゲルダナマイシンは、例えばCN Biosciences (Merck KGaA, Darmstadt, Germanyの関連会社で、San Diego, California, USAに本社がある)からも市販されている(cat.no.345805)。Streptomyces hygroscopicus (ATCC 55256)の培養液由来の4,5-ジヒドロゲルダナマイシンおよびそのヒドロキノンの生化学的精製は、国際出願PCT/US92/10189(Pfizer Inc.に譲渡、WO93/14215：1993年7月22日公開、発明者：Cullenら)に記載されており、ゲルダナマイシンの触媒的水素添加による4,5-ジヒドロゲルダナマイシンの別の合成方法も知られている。例えば、Progress in the Chemistry of Organic Natural Products, Chemistry of the Ansamycin Antibiotics, 33：278(1976)参照。
溶媒の添加および除去
【００４９】
エタノールへの溶解性は、その中に溶解している化合物の特性、および他の変数、例えば温度および圧力にも依存する。エタノールは海水面雰囲気条件下で沸点が約78.5℃である。エタノール中に水が含まれると溶液の沸点が上昇する。
【００５０】
蒸発は、必ずしもではないが減圧下、すなわち真空下で行うのが好ましく、その方法が医薬品の機能的完全性を保存するのに適している限り、室温で窒素流を用いることを含むあらゆる適切な温度および圧力で行うことができよう。溶媒の除去を達成するための市販のロータリー蒸発装置が存在する。他の装置および方法が当業者に知られている。
結晶化
【００５１】
結晶化はある物質の溶液または融解物から結晶を析出させる。結晶形成過程中に同種の化合物は、同じ構造の分子は他の分子より結晶格子により適合するため同じタイプの分子からなる成長中の結晶に結合する傾向がある。結晶化過程がほぼ平衡条件下で生じることができれば、同種の分子からなる表面上に沈着する分子の選択性は結晶物質の純度の増大をもたらすであろう。すなわち、結晶化の過程は、重要な精製方法である。結晶化は、溶解した化合物が溶解を止め、「結晶」か否かに関わらず溶液から事実上固体の形をとることを示すより広い用語「沈殿(析出)」に含まれる。沈殿または結晶化は、長時間、例えば数秒〜数時間、または数日かけて生じるかもしれない。これらの過程は温度にも依存し、さらに用いる特定の溶媒および溶質の暖かい温度とより冷たい温度で溶解性に差があるという特性にも依存する。
【００５２】
17-AAGのような脂質親和性化合物の低融点アイソフォームを生じる能力については、同一出願人の米国特許出願No60/331,893(2001年11月21日出願)に記載し、クレームしている。17-AAGが示すような融点の差(約155℃および207℃の融点を示す)は、本発明のある態様において好ましいより低融点のアイソフォームを用い、本願特許請求の範囲に記載の薬剤溶解工程に関してほぼうまく利用することができる。17-AAGの低融点のアイソフォームはエタノールベースの結晶化/沈殿よりイソプロパノール結晶化を用いて達成される。この技術を用い、低くて153℃、高くて212℃の融点が17-AAGで測定され、高レベルの純度が実質的に維持された。
エマルジョン
【００５３】
油相および水性相を含むエマルジョンは、治療的活性成分の担体または非経口栄養の供給源として当該分野で広く知られている。エマルジョンは油中水または水中油形で存在しうる。本例の場合のように治療的成分が特に油相に可溶性である場合、油中水タイプが好ましい態様である。単純なエマルジョンは油相と水性相が分離する(油滴の融合)熱力学的に不安定な系である。乳化剤のエマルジョンへの取り込みは、融合過程をわずかなレベルに減らすのに重要である。
油
【００５４】
あらゆる無毒性油/脂質を本発明に用いることができるが、モノ−、ジ−、およびトリグリセリド、特にトリグリセリドが好ましく、中鎖トリグリセリドが最も好ましい。「中鎖トリグリセリド」は、主要成分が長さ7-11炭素原子、より好ましくは長さ8-10炭素原子の範囲の脂肪酸を有する種であるトリグリセリド組成物である。脂肪酸は必ずしもではないが飽和していることが好ましい。より長いおよびより短い長さのトリグリセリドが存在してよいが、典型的には中鎖種より少なく存在する。個々のトリグリセリドは、個々のトリグリセリド分子の同一性について天然、合成、半合成、荷電、中性、同種、または異種であってよい。本発明は、例示的態様としてCONDEA (Cranford, NJ, USA)提供のMiglyol(登録商標)812を用いて示される。Miglyol(登録商標)812は、約50-65%カプリル酸(8炭素)および30-45%カプリン酸(10炭素)を含む。カプロン酸(6炭素原子)もラウリン酸(12炭素)のように最大約2%まで存在する。ミリスチン酸(14炭素)もより少ない量で存在する(1%max)。CondeaもMygliol(登録商標)810、818、829、および840を提供し、1またはそれ以上のこれら他のMygliol(登録商標)溶液および他の中鎖トリグリセリド溶液も本発明の種々の側面および態様にほぼうまく用いることができると予想される。後者に関して、当業者はその同一性、供給源、および/または製造方法を知っており、過度な研究や実験を行うことなくそれらを製造するか得ることができる。
【００５５】
酸化分解または脂質過酸化を抑制または最小化するため、抗酸化剤、例えばα-トコフェロールおよびブチル化ヒドロキシトルエンを酸素妨害(deprivation)(例えば、窒素およびアルゴンのような不活性ガス存在下で製剤化および/または耐光性容器の使用)に加えて、またはその代わりに加えることができよう。
乳化剤
【００５６】
好ましい乳化剤は、リン酸のコリンエステルと結合した、ステアリン酸、パルミチン酸、およびオレイン酸のジグリセリドの天然の混合物であるレシチンである。他の乳化剤は、種々の界面活性剤(例えば陰イオン、陽イオン、および非イオン界面活性剤)を含んでよい。界面活性剤/乳化剤は、リン脂質、例えば卵もしくは植物油リン脂質またはホスファチジルコリンであってよい。本発明の方法に用いるには、ダイズホスホレシチン、例えばPhopholipon 90G(American Lecithen Company (Oxford, CT, USA)が供給)が好ましい。
【００５７】
界面活性剤/乳化剤は、典型的には界面活性剤が溶解する水および/または他の成分の量に基づいて約0.5-25%w/vの濃度で存在する。好ましくは、界面活性剤は約0.5-10%w/v、最も好ましくは約1-8%w/vの濃度で存在する。
【００５８】
陰イオン界面活性剤の例には、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸トリエタノールアミン、ナトリウムポリオキシエチレンラウリルエーテルサルフェート、ナトリウムポリオキシエチレンノニルフェニルエーテルサルフェート、ポリオキシエチレンラウリルエーテルサルフェートトリエタノールアミン、ナトリウムココイルサルコシン、ナトリウムN-ココイルメチルタウリン、ナトリウムポリオキシエチレン(ココナッツ)アルキルエーテルサルフェート、ナトリウムジエーテルヘキシルスルホスクシネート、ナトリウムa-オレフィンスルホネート、ナトリウムラウリルホスフェート、ナトリウムポリオキシエチレンラウリルエーテルホスフェート、パーフルオロアルキルカルボキシレート塩(Daikin Industries Ltd.製造、登録商標UNIDINE DS-101および102)がある。
【００５９】
陽イオン界面活性剤の例には、ジアルキル(C12-C22)ジメチルアンモニウムクロリド、アルキル(ココナッツ)ジメチルベンジルアンモニウムクロリド、オクタデシルアミン酢酸塩、テトラデシルアミンア酢酸塩、タローアルキルプロピレンジアミン酢酸塩、オクタデシルトリメチルアンモニウムクロリド、アルキル(タロー)トリメチルアンモニウムクロリド、ドデシルトリメチルアンモニウムクロリド、アルキル(ココナッツ)トリメチルアンモニウムクロリド、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムクロリド、ビフェニルトリメチルアンモニウムクロリド、アルキル(タロー)イミダゾリン第4級塩、テトラデシルメチルベンジルアンモニウムクロリド、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ジオレイルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ポリオキシエチレンドデシルモノメチルアンモニウムクロリド、ポリオキシエチレンアルキル(C12-C22)ベンジルアンモニウムクロリド、ポリオキシエチレンラウリルモノメチルアンモニウムクロリド、1-ヒドロキシエチル-2-アルキル(タロー)イミダゾリン第4級塩、および疎水性基としてシロキサン基を有するシリコン陽イオン界面活性剤、疎水性基としてフルオロアルキル基を有するフッ素含有陽イオン界面活性剤(Daikin Industries Ltd.製造、登録商標UNIDINE DS-202)がある。
【００６０】
非イオン界面活性剤の例には、ポリオキシエチレンラウリルエーテル、ポリオキシエチレントリデシルエーテル、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンステアリールエーテル、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンモノラウレート、ポリオキシエチレンモノステアレート、ポリオキシエチレンモノオレエート、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、ソルビタンセスキオレート、ソルビタントリオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリエーテル修飾シリコン油(Toray Dow Corning Silicone Co., Ltd.製造、登録商標SH3746、SH3748、SH3749、およびSH3771)、パーフルオロアルキルエチレンオキシドアダクト(Daikin Industries Ltd.製造、登録商標UNIDINE DS-401およびDS-403)、フルオロアルキルエチレンオキシドアダクト(Daikin Industries Ltd.製造、登録商標UNIDINE DS-406)、およびパーフルオロアルキルオリゴマー(Daikin Industries Ltd.製造、登録商標UNIDINE DS-451)がある。
安定化剤/充填剤
【００６１】
賦形剤の定義にはさらに充填剤も含まれる。充填剤は、一般に乾燥製剤マトリックスの構造を維持することにより凍結乾燥製剤の機械的支持体となる。糖が好ましい。本明細書で用いている糖には、限定されるものではないが、単糖類、二糖類、オリゴ糖類、多糖類が含まれる。具体例には、限定されるものではないが、フラクトース、グルコース、マンノース、トレハロース、ソルボース、キシロース、マルトース、ラクトース、ショ糖、デキストロース、およびデキストランがある。糖には、糖アルコール、例えばマンニトール、ソルビトール、イノシトール、ダルシトール、キシリトール、およびアラビトールも含まれる。本発明には糖混合物も用いることができよう。種々の充填剤、例えばグリセロール、糖、糖アルコール、および単糖類および二糖類は、等張化剤の機能を果たすこともある。
【００６２】
本発明に用いる充填剤は、物理化学的考慮、例えば溶解性、凍結、乾燥、保存、および再水和時の油滴サイズおよびエマルジョンの完全性を保つ能力、および活性薬剤/化合物との反応性の欠如によってのみ限定され、また投与経路によっても限定される。充填剤は薬剤に対して化学的に不活性であり、使用条件下で有害な副作用や毒性がないかきわめてわずかであることが好ましい。充填剤担体に加え、充填剤の目的に適合するか適合しない他の担体には、例えば当該分野でよく知られ、容易に利用可能なアジュバント、賦形剤、および希釈剤がある。
【００６３】
本発明の好ましい充填剤はショ糖である。理論に縛られることなく、ショ糖は凍結、次いで凍結乾燥時に非晶質ガラスを形成し、硬いガラス中に活性成分を含む油滴分散物を形成することにより製剤の潜在的安定性を増大させることができると考えられる。安定性は、糖が凍結乾燥時の水の損失に置き換わるものとして作用することによっても増大するかもしれない。糖分子は水分子より水素結合を通して界面リン脂質と結合するようになる。これらの特性を有し、置き換えられるかもしれない他の充填剤には、限定されるものではないが、セルロース調製物、例えばトウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、および/またはポリビニルピロリドン(PVP)が含まれる。所望により、崩壊剤、例えば架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸またはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムも加えることができよう。
乳化
【００６４】
乳化は種々のよく知られた技術、例えば機械的混合、ホモゲナイゼーション(例えば、ポリトロンまたはGaulin高エネルギー型器具を用いる)、ボルテキシング(vortexing)、および超音波処理により行うことができる。超音波処理は浴槽型またはプローブ型器具を用いて行うことができる。マイクロ流動化装置は、例えばMicrofluidics Corp., Newton, Mass.から市販されており、さらに米国特許4,533,254に記載されており、例えば種々の市販のポリカーボネート膜中に含まれるような狭い穴を加圧して通過させる。使用可能な低圧装置も存在する。これら高および低圧装置を用いて小胞サイズを選択および/または調節することができる。
【００６５】
ろ過技術による滅菌。ろ過には、より直径の大きいフィルター、例えば0.45ミクロンフィルター、次いでより小さいフィルター、例えば0.2ミクロンフィルターを通す予備ろ過を含むことができる。好ましいフィルター媒質はセルロースアセテート(Sartorius-Sartobran(登録商標))である。
凍結乾燥
【００６６】
凍結乾燥は、例えば昇華により、上記「溶媒除去」の項に記載のごとく試料から液体を除去または実質的に除去する。
物理化学的安定性の特徴付けおよび評価
【００６７】
リン脂質および分解産物はエマルジョンから抽出後に測定することができよう。次に、脂質混合物は、二次元薄層クロマトグラフィ(TLC)系または高速液体クロマトグラフィ(HPLC)を用いて分離することができる。TLCにおいて、単一成分に対応するスポットを除去し、リンについてアッセイすることができる。試料中の総リンは、例えば分光光度計を用いる方法により定量的に測定し、水に対して825nmで発現した青色の強度を測定することができる。HPLCにおいて、ホスファチジルコリン(PC)およびホスファチジルグリセロール(PG)を分離し、正確および精密に定量することができる。脂質は203-205nmの領域に検出することができる。飽和脂肪酸はUVスペクトルの200nm波長領域で低い吸光度を示すが、不飽和脂肪酸は高い吸光度を示す。例として、上記VemuriおよびRhodesは、Licrosorb DiolおよびLicrosorb S1-60を用いた卵黄PCおよびPGの分離を記載した。分離には、アセトニトリル-メタノールおよび1%ヘキサン-水(74:16:10v/v/v)の移動相を用いる。8分間で、PGのPCからの分離が観察された。保持時間はそれぞれ約1.1および3.2分であった。
【００６８】
エマルジョンの外観、平均滴サイズ、およびサイズ分布が観察および維持すべき重要なパラメータである。これらパラメーターを評価するには多くの方法がある。例えば、動的光散乱および電子顕微鏡が使用できる2つの技術である。例えば、SzokaおよびPapahadjopoulos, Annu. Rev. Biophys. Bioeng., 9:467-508(1980)参照。特に、形態的特性は、フリーズフラクチャー電子顕微鏡法を用いて達成することができる。性能は劣るが光学顕微鏡も使用できる。
【００６９】
エマルジョン滴サイズ分布は、例えば粒度分布分析装置、例えばCAPA-500(Horiba Limited (Ann Arbor, MI, USA)製造)、コールターカウンター(Coulter counter)(Beckman Coulter Inc., Brea, CA, USA)、またはZetasizer(Malvern Instruments, Southborough, MA, USA)を用いて測定することができる。
HPLCを用いる安定性の測定
【００７０】
該エマルジョンの脂質成分に関する上記方法と同様に、治療的活性成分、例えば17-AAGの化学安定性は、エマルジョンの抽出後にHPLCにより評価することができる。治療的に活性なアンサマイシンをその分解産物から分離するのを可能にする特異的なアッセイ方法を開発することができる。分解の程度は、治療的に活性なアンサマイシンに関連するHPLCのピークの信号の低下および/または分解産物に関連するHPLCピークの信号の増加により評価することができる。エマルジョン成分の他の成分に対してアンサマイシンは、その吸光度が最大の345nmで容易に全く特異的に検出される。
製剤および投与方法
【００７１】
静脈内投与が本発明の種々の側面および態様で好ましいが、当業者は該方法を他の投与方法、例えば、経口、エアロゾル、非経口、皮下、筋肉内、腹腔内、直腸内、膣内、腫瘍内、または腫瘍周囲、に適合させるために修飾または容易に適合させることができると認識するだろう。以下の考察は当業者に大体知られているが、それにもかかわらず、本発明の他の可能性を示す背景として提供する。下記の種々の解説はすでに上記したものと重複することは理解されよう。
【００７２】
医薬組成物は、常套的混合、溶解、顆粒化、糖衣錠作製、研和(levigating)、乳化、カプセル化、エントラッピング、または凍結乾燥処理を用いて製造することができよう。
【００７３】
医薬的に許容される組成物は、活性化合物の医薬的に用いることができる製剤への加工を促す賦形剤および補助剤を含む1またはそれ以上の医薬的に許容される担体を用いて常套的方法で製剤化することができよう。適切な製剤は選んだ投与経路に依存する。いくつかの賦形剤および製剤の製造におけるその使用についてはすでに記載した。他のものは当該分野で知られており、例えばPCT/US99/30631、Remmington's Pharmaceutical Sciences, Meade Publishing Co. , Easton, PA(最新版)、およびGoodman and Gilman's The Pharmaceutical Basis of Therapeutics, Pergamon Press, New York, N.Y.(最新版)に記載されている。
【００７４】
注射用の薬剤は、水性溶液中、好ましくは生理学的に適合性の緩衝液、例えばハンクス溶液、リンゲル溶液、または生理食塩水緩衝液中で処方することができよう。経粘膜投与には浸透すべきバリア(障壁)に適した浸透剤を製剤に用いる。そのような浸透剤は一般に当該分野で知られている。
【００７５】
本発明製剤は先に記載のように凍結乾燥ケーキを水和すると、注射、例えばボーラス注射または連続注入により急速またはほぼ急速に非経口投与するのに十分適している。注射用製剤は、保存料を加え、単位剤形で、例えばアンプルまたは多用量容器中に存在してよい。先に記載したように、凍結乾燥生成物は本発明の特に好ましい態様であり、所望により耐光性のアンプルまたは他の包装がこの凍結乾燥生成物を含み、次いでこれを患者に投与する前に好都合に(再)水和することができよう。
用量範囲
【００７６】
進行性固形腫瘍の成人患者における17-AAGの第I相薬理試験において、3週間ごとに1時間注入により5日間毎日投与したとき40mg/m2の最大耐量(MTD)が測定された。Wilsonら、Am. Soc. Clin. Oncol., 要約, Phase I Pharmacologic Study of 17-(Allylamino)-17-Demethoxygeldanamycin(AAG) in Adult Patients with Advanced Solid Tumors (2001)。この試験において、最終的半減期、クリアランス、および定常状態容量の平均±SD値は、2.5±0.5時間、41.0±13.5L/時、および86.6±34.6L/m2と測定された。血漿Cmaxレベルは、40および56mg/m2で1860±660nMおよび3170±1310nMと測定された。これら値を手引きに用いて、本発明の製剤の患者に対する有用な用量範囲には、活性成分約0.40mg/m2〜4000mg/m2が含まれよう。m2は表面積を表す。標準アルゴリズムは、mg/m2をmg薬剤/kg体重に変換するために存在する。
【００７７】
以下の実施例は単に例示のために提供するものであり、その中に含まれる成分および工程は、特許請求の範囲に特に示さない限り本発明を限定するものではない。実施例1-4は、同一出願人の仮出願No.60/326,639、表題「Process for Preparing 17-Allyl Amino Geldanamycin(17-AAG) and Other Ansamycins(2001年9月24日出願)、および同一出願人の仮出願No.60/331,893(2001年11月21日出願)から引用している。
【実施例】
【００７８】
実施例1: 17-AAGの製造
【００７９】
乾燥2Lフラスコ中の、1.45Lの乾燥THF中45.0g(80.4mmol)のゲルダナマイシンに、50mLの乾燥THF中の36.0mL(470mmol)のアリルアミンを30分間かけて滴加した。反応混合物を窒素下、室温で4時間撹拌し、その時点でTLC分析は反応が完結したことを示した[(GDM:明黄色：Rf=0.40; (5%MeOH-95% CHCl3);17-AAG:紫色:Rf=0.42(5% MeOH-95% CHCl3)]。溶媒をロータリー蒸発で除去し、粗物質を25℃で420mLのH2O:EtOH(90:10)中でスラリーとし、濾過し、45℃で8時間乾燥して紫色結晶の40.9g(66.4mmol)の17-AAGを得た(収率82.6%、純度>98%、HPLCにて254nmでモニターした)。MP206-212℃。1H NMRおよびHPLCは目的の生成物と一致する。
実施例2: 17-AAGの製造
【００８０】
別の精製方法では、実施例1で得られる粗17-AAGを80℃で800mLの2-プロピルアルコール(イソプロパノール)に溶解し、次いで室温に冷却する。ろ過し、次いで45℃で8時間乾燥して紫色結晶の17-AAG 44.6g(72.36mmol)を得る(収率90%、純度>99%、HPLCにて254nmでモニターした)。MP147-153℃。1H NMRおよびHPLCは目的生成物と一致する。
実施例3: 17-AAGの製造
【００８１】
別の精製方法では、実施例2で得られる17-AAGの生成物を25℃で400mLのH2O:EtOH(90:10)中でスラリーにし、ろ過し、次いで45℃で8時間乾燥して紫色結晶の17-AAG 42.4g(68.6mmol)を得る(収率95%、純度>99%、HPLCにて254nmでモニターする)、MP147-153℃。1H NMRおよびHPLCは、目的生成物と一致する。
実施例4: 17-AAGエマルジョンの製造
【００８２】
上記実施例1-4のいずれかから得られる17-AAGをエタノールに溶解する。以下の表は、本発明のある態様に従って製造した17-AAGの4000mgバッチ調製物を示す。当業者は該方法を拡大または縮小することができ、個々の成分量などを変動させることができ、記載していないさらなる成分も加えてよいことを認識するであろう。
2005528390.tif 000003
【００８３】
17-AAG(CNF-101)は、5Lポリエチレンビーカー中で計量する。エタノールを薬剤重量の約50x量で加え、溶液を水浴中で超音波処理して薬剤を分散させる。次に、Miglyol 812 (Sasol North America Inc ; Houston, TX, USA)およびPhospholipon 90G (American Lecithen Co. , Oxford, CT, USA)を分散液に加え、混合物を撹拌プレート上に置き、固体がほぼ完全に溶解するまで撹拌する。超音波処理浴および/または約45℃への加熱を用いて固体の溶解を助けてよい。目的とする溶解を確実にするため、溶液を光学顕微鏡を用いてチェックする。
【００８４】
エタノール含有量が好ましくは初期量の50%以下、より好ましくは10%以下、最も好ましくは約5%またはそれ以下(w/w)に減少するまで、エタノールを蒸発させるため勢いよく撹拌しながら液体表面に乾燥空気または窒素(National Formulary(国民医薬品集))ガスを強制的に流す。目的のレベルの溶解、好ましくは完全に溶解(結晶または沈殿なし)を確実にするため偏光フィルターを取り付けた光学顕微鏡下でチェックすることができる。
【００８５】
EDTA(二ナトリウム、二水和物、USP)、ショ糖、および注射用水(WFI)を5Lポリエチレンビーカー中で計量し、固体が溶解するまで撹拌する。次に、水性相を油相に加え、表面に付着した油が「取り除かれる」まで5000RPMのエマルジョンヘッドを取り付けた高速乳化装置を用いて完全に混合する。次に、剪断速度を2-5分間10000RPMに増加し、均質な一次エマルジョンを得る。レーザー光散乱(LLS)を用いて平均滴サイズを測定し、さらに溶液を例えば光学顕微鏡下でチェックし、結晶および固体の相対的存在の有無を測定することができよう。
【００８６】
エマルジョンのpHを0.2N NaOHで6.0±0.2に調整する。次に、一次エマルジョンを、平均滴サイズが<190nmになるまで75ミクロンエマルジョン相互作用チャンバー(F20Y)を用い約110psiの静圧(操作圧60-95psi)で6-8回、Model11 OSマイクロ流動化装置(Microfluidics Inc., Newton, MA, USA)を通す。個々の通過後にLLSを用いて進行状況を評価する。さらに、溶液を、光学顕微鏡下で偏光を用いて結晶の存在をチェックすることができよう。
【００８７】
次に、層流フード中でエマルジョンを0.45ミクロンGelmanミニカプセルフィルター(Pall Corp., East Hills, NY, USA)に通し、次いで無菌0.2ミクロンSartorius Sartobran Pカプセルフィルター(500cm2)(Sartorius AG, Goettingen, Germany)に通す。60PSIまでの圧を用いてスムーズで連続的な流れを維持する。ろ液を1またはそれ以上のポリプロピレンボトルに回収し、速やかに-20℃フリーザー中に置く。1mL部分標本をレーザー光分散(LLS)および/または高速液体クロマトグラフィ(HPLC)を用いて試験するためにとっておいてよい。
実施例5： 17-AAGエマルジョン製剤の別の製造方法
【００８８】
エタノールを用いて17-AAGのエマルジョンの油相への溶解を促進するときは、最初に超音波処理を用いて17-AAGをエタノールに溶解し、次いで該溶液に乳化剤および中鎖トリグリセリドを加えるのが最も一般的である。次に、超音波処理および撹拌を用いてすべての成分を溶液とする。
【００８９】
あるいはまた、トリグリセリド溶液中の予め形成された乳化剤、例えばMiglyol(登録商標) 812中のPhospholiponを、好ましくは65℃またはそれ以上に加熱し、これに薬剤、例えば17-AAGを加え、次いで撹拌および/または超音波処理して混合することによりエタノールが存在することなしに17-AAGを油相中の溶液とすることができる。エタノールより簡単にイソプロパノールから17-AAGの結晶化により製造した低融点形の17-AAGは、室温でMiglyol中Phospholipon溶液に溶解させることができることも発見した。この発見は、融点の異なる多くの「アイソフォーム」を有する他の薬剤に外挿することができる。
【００９０】
実施例5および6の両生成物は、平均油滴サイズの範囲が約200nmまたはそれ以下の淡紫色乳白色エマルジョンを生じる。該滴サイズは-20℃、2-8℃、または室温で2ヶ月間以上の期間安定である。濃度は全体で3mg/mL、油相単独で20-30mg/mLにもなった。40℃で保存すると、17-AAGの分解は約2週間後に見られる。
【００９１】
薬剤の混合物溶媒溶液をエタノール成分の減圧蒸発にかけてMiglyol中17-AAG溶液を得る。乳化は、機械的混合、超音波照射処理、および最後にマイクロ流動化装置を通すことにより達成することができるが、用語「乳化する」および「乳化」はそれら処理事象に限定されるものではなく、他の乳化技術が存在し、代わりにかまたは1またはそれ以上の先の技術と組み合わせて用いることができると理解されよう。
実施例6：17-AAG以外のアンサマイシン
【００９２】
実質的にあらゆるアンサマイシンを17-AAGと置き換えて上記実施例に記載のごとく処方することができる。種々のそのようなアンサマイシンおよびその製造方法はPCT/US03/04283に記載されている。そのような2つの好ましいアンサマイシン、化合物563および237の製造方法を以下に繰り返す。
【００９３】
化合物563：17-(ベンゾイル)-アミノゲルダナマイシン。
【００９４】
EtOAc中の17-アミノゲルダナマイシン(1mmol)の溶液を室温でNa2S2O4(0.1M、300ml)で処理した。2時間後、水性層をEtOAcで2回抽出し、混合有機層をNa2SO4で乾燥し、次いで減圧下で濃縮して黄色固体の18,21-ジヒドロ-17-アミノゲルダナマイシンを得た。この後者を無水THFに溶解し、カニューレで塩化ベンゾイル(1.1mmol)およびMS4Å(1.2g)の混合物に移した。2時間後、EtN(i-Pr)2(2.5mmol)をさらに反応混合物に加えた。一夜撹拌した後、反応混合物をろ過し、次いで減圧下で濃縮した。次に、水を残渣に加え、これをEtOAcで3回抽出し、混合有機層をNa2SO4で乾燥し、次いで減圧下で濃縮して粗生成物を得、これをフラッシュクロマトグラフィで精製して17-(ベンゾイル)-アミノゲルダナマイシンを得た。Rf=0.50、80:15:5 CH2C12:EtOAc:MeOH中。Mp=218-220℃。1H NMR (CDCl3) 0.94 (t, 6H), 1.70 (br s, 2H), 1.79 (br s, 4H), 2.03 (s, 3H), 2.56 (dd, 1H), 2.64 (dd, 1H), 2.76-2.79(m, 1H), 3.33 (br s, 7H), 3.44-3.46 (m, 1H), 4.325 (d, 1H), 5.16 (s, 1H), 5.77 (d, 1H), 5.91 (t,1H), 6.57 (t, 1H), 6.94 (d, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.52 (t, 2H), 7.62 (t, 1H), 7.91 (d, 2H), 8.47 (s, 1H), 8.77 (s, 1H)。
【００９５】
化合物237:ダイマー(二量体)。3,3'-ジアミノ-ジプロピルアミン(1.32g, 9.1mmol)をN2下火炎乾燥フラスコ中の、DMSO(200mL)中ゲルダナマイシン(1Og、17.83mmol)の溶液に滴加し、室温で撹拌した。12時間後、反応混合物を水で希釈した。沈殿物が形成され、これをろ過して粗成生物を得た。粗成生物をシリカゲルクロマトグラフィ(5%CH3OH/CH2Cl2)でクロマトグラフィにかけて紫色固体の目的のダイマーを得た。フラッシュクロマトグラフィ(シリカゲル)後に純粋な紫色生成物を得た。収率：93%; mp165℃; 1H NMR (CDCl3) 0.97 (d, J = 6.6Hz, 6H, 2CH3), 1.0 (d, J = 6.6Hz, 6H, 2CH3), 1.72(m, 4H, 2CH2), 1.78(m, 4H, 2CH2), 1.80 (s, 6H, 2CH3), 1.85(m, 2H, 2CH), 2.0 (s, 6H, 2CH3), 2.4 (dd, J= 11Hz, 2H, 2CH), 2.67 (d, J = 15Hz, 2H, 2CH), 2.63 (t, J = 10HZ, 2H, 2CH), 2.78 (t, J = 6.5Hz, 4H, 2CH2), 3.26 (s, 6H, 2OCH3), 3.38 (s, 6H, 2OCH3), 3.40(m, 2H, 2CH), 3.60(m, 4H, 2CH2), 3.75(m, 2H, 2CH), 4.60 (d, J = 10Hz, 2H, 2CH), 4.65 (Bs, 2H, 2OH), 4.80 (Bs, 4H, 2NH2), 5.19 (s, 2H, 2CH), 5.83 (t, J = 15Hz, 2H, 2CH=), 5.89 (d, J = 10Hz, 2H, 2CH=), 6.58 (t, J = 15Hz, 2H, 2CH=), 6.94 (d, J = 10Hz, 2H, 2CH=), 7.17(m, 2H, 2NH), 7.24 (s, 2H, 2CH=), 9.20 (s, 2H, 2NH); MS (m/z) 1189 (M+H)。
【００９６】
対応するHCl塩を下記方法により製造した： EtOH (5ml、0.123N)中のHCl溶液を室温でTHF(15ml)およびEtOH (50ml)中の化合物#237(1gm、上記のごとく製造)の溶液を加えた。反応混合物を10分間撹拌した。塩を沈殿させ、ろ過し、大量のEtOHで洗浄し、次いで減圧下で乾燥させた。
実施例7：凍結乾燥
【００９７】
実施例5および6から得られるエマルジョンの凍結乾燥を下記表に含まれる1またはそれ以上のスキームに従って達成する。
2005528390.tif 000004
【００９８】
当業者は、上記表に記載のパラメーターは用いる条件、および用いる製剤化方法と物質量が拡大または縮小するかどうか、もしくはそれがどの程度かに応じて調整するか、または互いに変更することができることを認識するであろう。
*   *   *
【００９９】
前記実施例は本発明の種々の局面および態様を単に例示するものであって、限定するものではない。本明細書に記載のすべての文献は、本発明の属する技術分野の水準を示す。いずれの文献も先行技術であると認めるものではないが、各文献の開示は、その全体が個々に本明細書の一部を構成するのと同じ程度に本明細書の一部を構成する。
【０１００】
当業者は、本発明が対象を実施し、記載した目的および利点ならびにその中の固有のものを得るために十分適合していることを容易に理解するであろう。記載した方法および組成物は好ましい態様を示し、例示であって、本発明の範囲を限定することを意図しない。ある種の修飾および他の使用を当業者が思いつくであろうし、特許請求の範囲に定義した本発明の精神内に含まれる。
【０１０１】
本明細書に記載の試薬は、例えばSigma-Aldrichから市販されているか、または当業者に知られたルーチン的方法を用いて過度な実験を行うことなく容易に製造することができる。
【０１０２】
本発明の範囲と精神から離れることなく本発明に種々の置換および修飾を行ってよいことは当業者に容易にわかるであろう。すなわち、そのようなさらなる態様は本発明の範囲および以下の特許請求の範囲内である。
【０１０３】
本明細書に例示した本発明は、本明細書に具体的に開示していないあらゆる要素、限定なしに適切に実施することができよう。すなわち、例えば用語「含む(包含する)」、「実質的に〜からなる」、および「〜からなる」は、他の2つの用語のいずれかと置き換えてよく、それぞれ特許法内では異なる意味を持つ。用いている用語および表現は、説明の用語として用いており、限定ではなく、示し、記載した特徴のあらゆる等価物、またはその部分を除外するような用語および表現の使用を意図するものではない。本発明の範囲内で種々の修飾が可能であると認識される。すなわち、本発明を好ましい態様により具体的に開示したが、当業者は本明細書に記載した概念の所望の特徴、修飾、および変化を行ってよく、そのような修飾および変化は明細書および添付の特許請求の範囲に定義した本発明の範囲内にあると考えられると理解すべきである。
【０１０４】
さらに、本発明の特徴および局面はマーカッシュグループまたは代わりの他のグループ分けにより説明されている場合は、当業者は、本発明はマーカッシュグループまたは他のグループのあらゆる個々のメンバーもしくはメンバーのサブグループについてはそれによっても説明され、個々のメンバーが適切にもしくは但し書きにより除外されていると認識するであろう。
【０１０５】
他の態様は以下の特許請求の範囲内にある。
【国際調査報告】
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2005528390.tif 000013