(57)【要約】本発明は、酵母もしくは真菌と関連する疾病を処置するためのまたは増殖性疾患の処置のためのまたはある種の疾病におけるアポトーシスを防ぐための薬剤の製造のための酵母もしくは真菌のプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路に関与する核酸及びポリペプチドの使用を記述する。同じもしくは匹敵する経路における該ポリペプチドの発現もしくは機能性を選択的に調節する化合物を同定する方法が提供される。また、化合物並びに製薬学的組成物、薬剤及びワクチンも提供される。本発明はまた、新規な核酸配列、それから得られるプローブ及びプライマー、発現ベクター及び該ベクターで形質転換した宿主細胞、ポリペプチド及び該ポリペプチドに対して作製した抗体も含んでなる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）配列番号１によって示すとおりの配列を含んでなる核酸、
ｂ）配列番号１の配列のフラグメントを含んでなりそして配列番号２によって示す配列の機能性フラグメントをコードする核酸、
ｃ）配列番号３〜１０のいずれかにおいて示すとおりの配列を含んでなる核酸、
ｄ）配列番号１によって示すとおりの核酸に、またはｂ）もしくはｃ）において特定するとおりの核酸に基づく核酸に７５％より多く同一である核酸、及び、
ｅ）介在するＤＮＡ配列によって遮られる（ａ）〜（ｉ）のいずれか一つにおいて特定するとおりの核酸、
あるいは（ａ）〜（ｄ）において特定するとおりの該核酸のいずれかの相補物に相当する核酸、
よりなる群から選択される合成ＢＡＸ遺伝子に相当する単離された核酸。
【請求項２】
ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、合成ＤＮＡ、もしくはＴがＵで置換されているＲＮＡである請求項１に記載の単離された核酸。
【請求項３】
請求項１もしくは２において特定するとおりの核酸を含んでなるベクター。
【請求項４】
原核及び／もしくは真核宿主細胞における発現を可能にする一つもしくはそれ以上の制御配列に該核酸配列が操作可能に連結されている発現ベクターである請求項３に記載のベクター。
【請求項５】
誘導性プロモーターを含んでなる請求項４に記載の発現ベクター。
【請求項６】
レポーター分子をコードする配列を含んでなる請求項４もしくは５に記載の発現ベクター。
【請求項７】
カンジダ種（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．）におけるプログラムされた細胞死を誘導するための請求項３〜６のいずれかに記載のベクター。
【請求項８】
請求項３〜７のいずれかに記載のベクターで形質転換、トランスフェクションもしくは感染した宿主細胞。
【請求項９】
細菌、酵母もしくは真菌細胞である請求項８の宿主細胞。
【請求項１０】
該細胞がカンジダ種細胞である請求項８もしくは９に記載の宿主細胞。
【請求項１１】
プログラムされた細胞死を最終的にもたらす少なくとも一つの経路の開始が改変によってもたらされる、請求項９に記載の遺伝子的に改変された酵母もしくは真菌細胞。
【請求項１２】
プログラムされた細胞死を最終的にもたらす少なくとも一つの経路の開始が改変によってもたらされる、請求項１０に記載の遺伝子的に改変されたカンジダ種細胞。
【請求項１３】
ａ）請求項１１に記載の遺伝子的に改変された酵母もしくは真菌（一つもしくは複数）を準備すること、
ｂ）該遺伝子的に改変された酵母もしくは真菌を突然変異誘発物質で処理すること、
ｃ）耐性酵母もしくは真菌細胞を単離すること、並びに、
ｄ）場合により、該耐性酵母もしくは真菌細胞における突然変異遺伝子を同定及び／もしくは特性化すること、
の工程を含んでなるＢａｘ耐性酵母もしくは真菌を同定する方法。
【請求項１４】
請求項１もしくは２において特定するとおりの核酸、請求項３〜７のいずれかに記載のベクターまたは請求項１０に記載の遺伝子的に改変された宿主細胞を用いてプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路において差次的に発現されるカンジダ種配列を同定する方法。
【請求項１５】
ａ）餌（ｂａｉｔ）として請求項１に記載の核酸もしくは請求項３〜７のいずれかに記載のベクターによってコードされるポリペプチド、そして餌食（ｐｒｅｙ）としてカンジダ種ｃＤＮＡライブラリーを発現する２ハイブリッド系を準備すること、
ｂ）該ポリペプチド及び該ｃＤＮＡライブラリーによってコードされるカンジダ種ポリペプチド間の相互作用を検出すること、並びに
ｃ）該カンジダ種ポリペプチドもしくはｃＤＮＡを同定すること、
の工程を含んでなるプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路に関与するカンジダ種配列を取得及び同定する方法。
【請求項１６】
ａ）請求項１０に記載の遺伝子的に改変された生物体を準備すること、
ｂ）該遺伝子的に改変された生物体においてｃＤＮＡライブラリーを発現させること、及び、
ｃ）該遺伝子的に改変された生物体の生存及び／もしくは増殖に発現が有益な効果を有するポリペプチドもしくはｃＤＮＡを同定すること、
の工程を含んでなるＢａｘで誘導される細胞死のインヒビター（もしくはインヒビター配列）を同定する方法。
【請求項１７】
該遺伝子的に改変された生物体がカンジダ種である請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
請求項１２〜１７のいずれかの方法のいずれかによって同定できる単離されたカンジダ種核酸。
【請求項１９】
ａ）配列番号４３４、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２のいずれかにおいて示すとおりのアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするか、または該タンパク質の機能性同等物、誘導体もしくは生物学的前駆体（ｂｉｏｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）をコードする核酸、
ｂ）配列番号４３４、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２において示すアミノ酸配列のいずれかに７０％より多く類似するアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする核酸、
ｃ）配列番号４３４、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２において示すアミノ酸配列のいずれかに７０％より多く同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする核酸、
ｄ）配列番号４３３、３９７、３９９、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、４１５、４１７、４１９、４２１、４２３、４２５、４２７、４２９、４３１、４３５、４３７、４３９、４４１、４４３、４４５、４４７、４４９、４５１、４５３、４５５、４５７、４５９、４６１、４６３、４６５、４６７、４６９、４７１、４７３、４７５、４７７、４７９、４８１、４８３、４８５、４８７、４８９、４９１、４９３、４９５、４９７、４９９、５０１、５０３、５０５、５０７、５０９、５１１、５１３、５１５、５１７、５１９、５２１、５２３、５２５、５２７、５２９、５３１、５３３、５３５、５３７、５３９、５４１、５４３、５４５、５４７、５４９、５５１、５５３、５５５、５５７、５５９、５６１、５６３、５６５、５６７、５６９、５７１、５７３、５７５、５７７、５７９、５８１、５８３、５８５、５８７、５８９、５９１、５９３、５９５、５９７、５９９、６０１、６０３、６０５、６０７、６０９、６１１、６１３、６１５、６１７、６１９、６２１、６２３、６２５、６２７、６２９、６３１、６３３、６３５、６３７、６３９、６４１、６４３、６４５、６４７、６４９、６５１、６５３、６５５、６５７、６５９、６６１、６６３、６６５、６６７、６６９、６７１、６７３、６８７、７１７、７１９、７２１、７２３、７２５、７２７、７２９及び７３１のいずれかにおいて示すとおりの配列を含んでなる核酸、
ｅ）配列番号４３３、３９７、３９９、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、４１５、４１７、４１９、４２１、４２３、４２５、４２７、４２９、４３１、４３５、４３７、４３９、４４１、４４３、４４５、４４７、４４９、４５１、４５３、４５５、４５７、４５９、４６１、４６３、４６５、４６７、４６９、４７１、４７３、４７５、４７７、４７９、４８１、４８３、４８５、４８７、４８９、４９１、４９３、４９５、４９７、４９９、５０１、５０３、５０５、５０７、５０９、５１１、５１３、５１５、５１７、５１９、５２１、５２３、５２５、５２７、５２９、５３１、５３３、５３５、５３７、５３９、５４１、５４３、５４５、５４７、５４９、５５１、５５３、５５５、５５７、５５９、５６１、５６３、５６５、５６７、５６９、５７１、５７３、５７５、５７７、５７９、５８１、５８３、５８５、５８７、５８９、５９１、５９３、５９５、５９７、５９９、６０１、６０３、６０５、６０７、６０９、６１１、６１３、６１５、６１７、６１９、６２１、６２３、６２５、６２７、６２９、６３１、６３３、６３５、６３７、６３９、６４１、６４３、６４５、６４７、６４９、６５１、６５３、６５５、６５７、６５９、６６１、６６３、６６５、６６７、６６９、６７１、６７３、６８７、７１７、７１９、７２１、７２３、７２５、７２７、７２９及び７３１のいずれかによって示すとおりの核酸配列のいずれかに７０％より多く同一である核酸、並びに
ｆ）ａ）〜ｄ）のいずれかにおいて特定するとおりの核酸配列のいずれかの機能性フラグメントをコードする核酸、
から選択される請求項１８に記載の単離されたカンジダ種核酸。
【請求項２０】
ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、合成ＤＮＡ、もしくはＴがＵで置換されているＲＮＡである請求項１９において特定するとおりの単離された核酸。
【請求項２１】
請求項１８〜２０のいずれかにおいて特定するとおりの核酸もしくはその相補物に選択的にハイブリダイズすることができる単離された核酸。
【請求項２２】
請求項１８〜２１のいずれかにおいて特定するとおりの核酸に選択的にハイブリダイズすることができる核酸を含んでなるアンチセンス分子。
【請求項２３】
請求項１８もしくは１９において特定するとおりの核酸分子のいずれかと選択的にハイブリダイズする核酸プローブ。
【請求項２４】
請求項１８もしくは１９において特定する核酸分子のいずれかを選択的に増幅する核酸プライマー。
【請求項２５】
請求項１８〜２２のいずれかに記載の核酸を含んでなる発現ベクター。
【請求項２６】
原核及び／もしくは真核宿主細胞における発現を可能にする一つもしくはそれ以上の制御配列に該核酸が操作可能に連結されている発現ベクターである請求項２５に記載の発現ベクター。
【請求項２７】
誘導性プロモーターを含んでなる請求項２５もしくは２６に記載の発現ベクター。
【請求項２８】
レポーター分子をコードする配列を含んでなる請求項２５〜２７のいずれかに記載の発現ベクター。
【請求項２９】
請求項２５〜２８のいずれかのベクターで形質転換、トランスフェクションもしくは感染した宿主細胞。
【請求項３０】
薬剤としての使用のための請求項１８〜２２のいずれかに記載の単離された核酸。
【請求項３１】
（ａ）配列番号４３４、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２のいずれかにおいて示すとおりのアミノ酸配列を有するポリペプチド、または該タンパク質の機能性同等物、誘導体もしくは生物学的前駆体をコードするポリペプチド、
（ｂ）配列番号４３４、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２のいずれかによって示すとおりのアミノ酸配列のいずれかに７０％より多く類似するアミノ酸配列を有するポリペプチド、
（ｃ）配列番号４３４、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２のいずれかによって示すとおりのアミノ酸配列のいずれかに７０％より多く同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチド、並びに
（ｄ）ａ）〜ｃ）において特定するとおりの該ポリペプチドのいずれかの機能性フラグメント、
から選択される、カンジダ種のプログラムされた細胞死の経路に関与しそして請求項１８もしくは１９において特定するとおりの核酸によってコードされる単離されたポリペプチド。
【請求項３２】
薬剤としての使用のための請求項３１に記載のポリペプチド。
【請求項３３】
請求項３０のポリペプチドにもしくは該ポリペプチドの特定のエピトープに特異的に結合することができる抗体。
【請求項３４】
薬剤としての使用のための請求項３３に記載の抗体。
【請求項３５】
請求項３３もしくは３４の抗体を含んでなる製薬学的組成物。
【請求項３６】
酵母もしくは真菌と関連する疾病を処置する薬剤の製造のための、酵母もしくは真菌のプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路に関与するポリペプチドをコードしそして
（ａ）配列番号１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４、２２６、２２８、２３０、２３２、２３４、２３６、２３８、２４０、２４２、２４４、２４６、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３２４、３２６、３２８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、６９２、６９４、６９６、６９８、７００、７０２、７０４、７０６、７０８、７１０、７１２、７１４、７１６、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２のいずれかにおいて示すとおりのアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするか、または該タンパク質の機能性同等物、誘導体もしくは生物学的前駆体をコードする核酸；
（ｂ）配列番号１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４、２２６、２２８、２３０、２３２、２３４、２３６、２３８、２４０、２４２、２４４、２４６、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３２４、３２６、３２８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、６９２、６９４、６９６、６９８、７００、７０２、７０４、７０６、７０８、７１０、７１２、７１４、７１６、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２のいずれかによって示すとおりのアミノ酸配列のいずれかに７０％より多く類似するアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする核酸、
（ｃ）配列番号１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４、２２６、２２８、２３０、２３２、２３４、２３６、２３８、２４０、２４２、２４４、２４６、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３２４、３２６、３２８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、６９２、６９４、６９６、６９８、７００、７０２、７０４、７０６、７０８、７１０、７１２、７１４、７１６、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２のいずれかによって示すとおりのアミノ酸配列のいずれかに７０％より多く同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする核酸、
（ｄ）配列番号１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、１８１、１８３、１８５、１８７、１８９、１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、２３９、２４１、２４３、２４５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３７９、３８１、３８３、３８５、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、４１５、４１７、４１９、４２１、４２３、４２５、４２７、４２９、４３１、４３３、４３５、４３７、４３９、４４１、４４３、４４５、４４７、４４９、４５１、４５３、４５５、４５７、４５９、４６１、４６３、４６５、４６７、４６９、４７１、４７３、４７５、４７７、４７９、４８１、４８３、４８５、４８７、４８９、４９１、４９３、４９５、４９７、４９９、５０１、５０３、５０５、５０７、５０９、５１１、５１３、５１５、５１７、５１９、５２１、５２３、５２５、５２７、５２９、５３１、５３３、５３５、５３７、５３９、５４１、５４３、５４５、５４７、５４９、５５１、５５３、５５５、５５７、５５９、５６１、５６３、５６５、５６７、５６９、５７１、５７３、５７５、５７７、５７９、５８１、５８３、５８５、５８７、５８９、５９１、５９３、５９５、５９７、５９９、６０１、６０３、６０５、６０７、６０９、６１１、６１３、６１５、６１７、６１９、６２１、６２３、６２５、６２７、６２９、６３１、６３３、６３５、６３７、６３９、６４１、６４３、６４５、６４７、６４９、６５１、６５３、６５５、６５７、６５９、６６１、６６３、６６５、６６７、６６９、６７１、６７３、６８７、６９１、６９３、６９５、６９７、６９９、７０１、７０３、７０５、７０７、７０９、７１１、７１３、７１５、７１７、７１９、７２１、７２３、７２５、７２７、７２９及び７３１のいずれかにおいて示すとおりの配列を含んでなる核酸、
（ｅ）配列番号１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、１８１、１８３、１８５、１８７、１８９、１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、２３９、２４１、２４３、２４５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３７９、３８１、３８３、３８５、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、４１５、４１７、４１９、４２１、４２３、４２５、４２７、４２９、４３１、４３３、４３５、４３７、４３９、４４１、４４３、４４５、４４７、４４９、４５１、４５３、４５５、４５７、４５９、４６１、４６３、４６５、４６７、４６９、４７１、４７３、４７５、４７７、４７９、４８１、４８３、４８５、４８７、４８９、４９１、４９３、４９５、４９７、４９９、５０１、５０３、５０５、５０７、５０９、５１１、５１３、５１５、５１７、５１９、５２１、５２３、５２５、５２７、５２９、５３１、５３３、５３５、５３７、５３９、５４１、５４３、５４５、５４７、５４９、５５１、５５３、５５５、５５７、５５９、５６１、５６３、５６５、５６７、５６９、５７１、５７３、５７５、５７７、５７９、５８１、５８３、５８５、５８７、５８９、５９１、５９３、５９５、５９７、５９９、６０１、６０３、６０５、６０７、６０９、６１１、６１３、６１５、６１７、６１９、６２１、６２３、６２５、６２７、６２９、６３１、６３３、６３５、６３７、６３９、６４１、６４３、６４５、６４７、６４９、６５１、６５３、６５５、６５７、６５９、６６１、６６３、６６５、６６７、６６９、６７１、６７３、６８７、６９１、６９３、６９５、６９７、６９９、７０１、７０３、７０５、７０７、７０９、７１１、７１３、７１５、７１７、７１９、７２１、７２３、７２５、７２７、７２９及び７３１のいずれかによって示すとおりの核酸配列のいずれかに７０％より多く同一である核酸、
（ｆ）ａ）〜ｅ）において特定するとおりの核酸配列のいずれかの機能性フラグメントをコードする核酸、並びに
（ｇ）ａ）〜ｆ）において特定するとおりの核酸分子のいずれかの相補物、
から選択される単離された核酸の使用。
【請求項３７】
酵母もしくは真菌と関連する疾病を処置する薬剤の製造のための、
（ａ）配列番号１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４、２２６、２２８、２３０、２３２、２３４、２３６、２３８、２４０、２４２、２４４、２４６、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３２４、３２６、３２８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、６９２、６９４、６９６、６９８、７００、７０２、７０４、７０６、７０８、７１０、７１２、７１４、７１６、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２のいずれかにおいて示すとおりのアミノ酸配列を有するポリペプチド、または該タンパク質の機能性同等物、誘導体もしくは生物学的前駆体をコードするポリペプチド、
（ｂ）配列番号１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４、２２６、２２８、２３０、２３２、２３４、２３６、２３８、２４０、２４２、２４４、２４６、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３２４、３２６、３２８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、６９２、６９４、６９６、６９８、７００、７０２、７０４、７０６、７０８、７１０、７１２、７１４、７１６、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２のいずれかによって示すとおりのアミノ酸配列のいずれかに７０％より多く類似するアミノ酸配列を有するポリペプチド、
（ｃ）配列番号１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４、２２６、２２８、２３０、２３２、２３４、２３６、２３８、２４０、２４２、２４４、２４６、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３２４、３２６、３２８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、６９２、６９４、６９６、６９８、７００、７０２、７０４、７０６、７０８、７１０、７１２、７１４、７１６、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２のいずれかによって示すとおりのアミノ酸配列のいずれかに７０％より多く同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチド、並びに
（ｄ）ａ）〜ｃ）において特定するとおりの該ポリペプチドのいずれかの機能性フラグメント、
から選択される、酵母もしくは真菌のプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路に関与する単離されたポリペプチドの使用。
【請求項３８】
請求項３６において特定するとおりの核酸もしくは請求項３７において特定するとおりのポリペプチドをその製薬学的に許容しうる担体、希釈剤もしくは賦形剤と一緒に含んでなる製薬学的もしくは殺菌・殺カビ組成物。
【請求項３９】
製薬学的に許容しうる担体中に請求項３６において特定するとおりの少なくとも一つの核酸もしくは請求項３７において特定するとおりの少なくとも一つのポリペプチドを含んでなる酵母もしくは真菌感染に対して哺乳動物を免疫するためのワクチン。
【請求項４０】
請求項３６において特定するとおりの核酸もしくは請求項３７において特定するとおりのポリペプチドの少なくとも一つの過剰発現もしくは不十分な発現が改変によってもたらされる遺伝子的に改変された酵母もしくは真菌であって、該核酸もしくはポリペプチドのこの過剰発現もしくは不十分な発現は、該遺伝子的に改変された酵母もしくは真菌のアポトーシスを防止、遅延もしくは感作する遺伝子的に改変された酵母もしくは真菌。
【請求項４１】
（ａ）試験する化合物と野生型細胞とを接触させることに加えて、該化合物を請求項４０に記載の遺伝子的に改変された酵母もしくは真菌と接触させること、
（ｂ）該野生型細胞と比較した該遺伝子的に改変された細胞の増殖及び／もしくは死亡率及び／もしくは活性をモニターすること；ここで、該遺伝子的に改変された酵母もしくは真菌細胞の差次的増殖もしくは活性は、同じもしくは匹敵する経路におけるポリペプチドに対する該化合物の選択的作用を示す、
（ｃ）あるいはまた、試験する化合物と接触させなかった遺伝子的に改変された細胞と比較した該遺伝子的に改変された細胞の増殖及び／もしくは死亡率及び／もしくは活性をモニターすること；ここで、該遺伝子的に改変された酵母もしくは真菌細胞の差次的増殖もしくは活性は、同じもしくは匹敵する経路におけるポリペプチドに対する該化合物の選択的作用を示す、
（ｄ）あるいはまた、試験する化合物の添加によって引き起こされる該遺伝子的に改変された細胞における成分の形態学的及び／もしくは機能的性質の変化をモニターすること、並びに、
（ｅ）化合物を同定すること
を含んでなる、酵母もしくは真菌のプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路に関与するポリペプチドまたは該ポリペプチドが関与する代謝経路に関与するポリペプチドの発現もしくは機能性を選択的に調節する化合物を同定する方法。
【請求項４２】
（ａ）試験する化合物と一つもしくはそれ以上の野生型細胞とを接触させることに加えて、請求項３６において特定するとおりの核酸の少なくとも一つのアンチセンス配列を含んでなりその発現が該ポリペプチドの不十分な発現をもたらす発現ベクターで形質転換、トランスフェクションもしくは感染した酵母もしくは真菌細胞と該化合物とを接触させること、
（ｂ）該野生型細胞と比較した該形質転換、トランスフェクションもしくは感染細胞の増殖及び／もしくは死亡率及び／もしくは活性をモニターすること；ここで、該形質転換、トランスフェクションもしくは感染酵母もしくは真菌細胞の差次的増殖もしくは活性は、同じもしくは匹敵する経路におけるポリペプチドに対する該化合物の選択的作用を示す、
（ｃ）あるいはまた、試験する化合物と接触させなかった形質転換、トランスフェクションもしくは感染細胞と比較した該形質転換、トランスフェクションもしくは感染細胞の増殖及び／もしくは死亡率及び／もしくは活性をモニターすること；ここで、該突然変異酵母もしくは真菌細胞の差次的増殖もしくは活性は、同じもしくは匹敵する経路におけるポリペプチドに対する該化合物の選択的作用を示す、
（ｄ）あるいはまた、試験する化合物の添加によって引き起こされる該形質転換、トランスフェクションもしくは感染細胞における成分の形態学的及び／もしくは機能的性質の変化をモニターすること、並びに、
（ｅ）化合物を同定すること
を含んでなる、酵母及び真菌のプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路に関与するポリペプチドまたは該ポリペプチドが関与する代謝経路に関与するポリペプチドの発現もしくは機能性を選択的に調節する化合物を同定する方法。
【請求項４３】
（ａ）試験する化合物もしくはポリペプチドを請求項３７において特定するとおりのポリペプチドの少なくとも一つと接触させること、
（ｂ）試験する化合物もしくはポリペプチドと該ポリペプチド間で形成される複合体を検出すること、
（ｃ）あるいはまた、試験する化合物もしくはポリペプチドの添加によって引き起こされる、該ポリペプチドと結合相手間の複合体形成の減少を調べること、
（ｄ）あるいはまた、試験する化合物もしくはポリペプチドの添加によって引き起こされる、ポリペプチドの機能活性の改変を調べること、及び、
（ｅ）化合物もしくはタンパク質を同定すること、
を含んでなる、酵母もしくは真菌のプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路に関与するポリペプチドに結合するかもしくはその性質を調節する化合物もしくはポリペプチドを同定する方法。
【請求項４４】
（ａ）請求項３７のポリペプチド及び該ポリペプチドと相互作用するタンパク質もしくは請求項４１の方法によって得ることができる相互作用するポリペプチドを発現する２ハイブリッドスクリーニング系を準備すること、
（ｂ）ａ）において特定するとおりの発現タンパク質によって形成される複合体と化合物とを相互作用させること、
（ｃ）第二の複合体を検出すること、ここで、該第二の複合体の存在により、該ポリペプチドの一つにもしくは該第二の複合体に特異的に結合する化合物が同定される、並びに、
（ｄ）化合物を同定すること、
の工程を含んでなる酵母及び真菌のプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路に関与するポリペプチドと相互作用する化合物を同定する方法。
【請求項４５】
（ａ）レポーター遺伝子とインフレームで連結した請求項３６において特定するとおりの核酸のプロモーター配列を含んでなる発現ベクターを形質転換、トランスフェクションもしくは感染した宿主細胞を接触させること、
（ｂ）試験する化合物の添加によって引き起こされる該レポーター遺伝子の増加もしくは減少した発現をモニターすること、及び、
（ｃ）化合物を同定すること、
を含んでなる酵母もしくは真菌のプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路に関与するポリペプチドの発現を選択的に調節する化合物を同定する方法。
【請求項４６】
（ａ）餌として請求項３６に記載の核酸もしくは請求項３〜７のいずれかに記載のベクターによってコードされるポリペプチド及び餌食として酵母もしくは真菌ｃＤＮＡライブラリーを用いる２ハイブリッド系を準備すること、
（ｂ）該ポリペプチドと該ｃＤＮＡライブラリーによってコードされる酵母もしくは真菌ポリペプチド間の相互作用を検出すること、並びに、
（ｃ）該酵母もしくは真菌ポリペプチドを同定すること、
の工程を含んでなるプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路に関与するポリペプチドを同定する方法。
【請求項４７】
該酵母もしくは真菌が、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、シゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）もしくはアスペルギルス・フミガーツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）から選択される請求項４１〜４６のいずれかに記載の方法。
【請求項４８】
請求項４１〜４７のいずれかの方法に従って同定できる化合物もしくはポリペプチド。
【請求項４９】
薬剤としての使用のための請求項４８に記載の化合物もしくはポリペプチド。
【請求項５０】
請求項４９に記載の化合物もしくはポリペプチドを適当な製薬学的に許容しうる担体と混合することを含んでなる酵母もしくは真菌と関連する疾病を処置するための製薬学的組成物を製造する方法。
【請求項５１】
請求項４９に記載の化合物もしくはポリペプチドを適当な製薬学的に許容しうる担体と一緒に含んでなる製薬学的組成物。
【請求項５２】
酵母及び真菌と関連する疾病を処置する薬剤の製造のための請求項４８もしくは４９に記載の化合物もしくはポリペプチドまたは請求項５１に記載のもしくは請求項５０の方法によって得ることができる製薬学的組成物の使用。
【請求項５３】
防御抗体もしくは防御Ｔ細胞応答の生成を刺激するために有効な量で請求項５１に記載のもしくは請求項５０の方法によって得ることができる組成物を哺乳動物に投与することを含んでなる酵母もしくは真菌の感染を防ぐ方法。
【請求項５４】
酵母及び真菌と関連する疾病を処置する薬剤の製造のための、請求項３７において特定するとおりのポリペプチドの少なくとも一つにもしくは該ポリペプチドの特定のエピトープに特異的に結合することができる抗体の使用。
【請求項５５】
該疾病が、カンジダ種、アスペルギルス種（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．）、ミクロスポルム種（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ  ｓｐｐ．）、トリコフィトン種（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｓｐｐ．）、フサリウム種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐｐ．）、ザイゴミケス種（Ｚｙｇｏｍｙｃｅｔｅｓ  ｓｐｐ．）、ボトリティス種（Ｂｏｔｒｉｔｉｓ  ｓｐｐ．）、クラドスポリウム種（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｓｐｐ．）、マラセチア種（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｓｐｐ．）、エピデルモフィトン・フロコサム（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ  ｆｌｏｃｃｏｓｕｍ）、ブラストミセス・デルマティティジス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、コクシジオイデス・イミティス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ）、ヒストプラスマ・カプスラツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、クリプトコックス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）及びスポロトリクス・シェンキイ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ  ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ）から選択される酵母もしくは真菌と関連する請求項５２〜５４のいずれかに記載の使用。
【請求項５６】
ヒト及び他の哺乳動物の内因性微生物叢を調節する薬剤の製造のための請求項４８もしくは４９に記載の化合物もしくはポリペプチドまたは請求項５１に記載の製薬学的組成物または請求項４０において特定するとおりの遺伝子的に改変された生物体の使用。
【請求項５７】
請求項３６において特定するとおりの核酸の少なくとも一つもしくはそのヒト相同物または請求項３７において特定するとおりのポリペプチドの少なくとも一つもしくはそのヒト相同物の過剰発現もしくは不十分な発現が改変によってもたらされる遺伝子的に改変された哺乳動物細胞もしくは非ヒト生物体であって、該核酸もしくはポリペプチドのこの過剰発現もしくは不十分な発現は、該遺伝子的に改変された哺乳動物細胞のもしくは該遺伝子的に改変された非ヒト生物体におけるアポトーシスを防止、遅延もしくは感作する遺伝子的に改変された哺乳動物細胞もしくは非ヒト生物体。
【請求項５８】
該改変が、請求項３６において特定するとおりの核酸の少なくとも一つに対するアンチセンス分子もしくは該核酸の哺乳動物相同物に対するアンチセンス分子の発現を含んでなる、請求項５７に記載の遺伝子的に改変された哺乳動物細胞もしくは非ヒト生物体。
【請求項５９】
請求項３６において特定するとおりの核酸の少なくとも一つもしくはそのヒト相同物及び／または請求項３７において特定するとおりのポリペプチドの少なくとも一つもしくはそのヒト相同物及び／または請求項５７もしくは５８に記載の遺伝子的に改変された哺乳動物細胞もしくは非ヒト生物体の使用を含んでなるアポトーシスを刺激もしくは阻害する化合物を同定する方法。
【請求項６０】
請求項５９の方法に従って同定できる化合物。
【請求項６１】
薬剤としての使用のための請求項６０に記載の化合物。
【請求項６２】
請求項６０もしくは６１に記載の化合物を適当な製薬学的に許容しうる担体と混合することを含んでなる増殖性疾患を処置するためのまたはある種の疾病におけるアポトーシスを防ぐための製薬学的組成物を製造する方法。
【請求項６３】
増殖性疾患を処置するためのもしくはある種の疾患におけるアポトーシスを防ぐための薬剤の製造のための請求項６０もしくは６１に記載の化合物の使用。
【請求項６４】
増殖性疾患を処置及び／もしくは防止及び／もしくは軽減するためのまたはある種の疾病におけるアポトーシスの防止のための請求項３６において特定するとおりの核酸のいずれかから選択される核酸もしくはそのヒト相同物の使用。
【請求項６５】
増殖性疾患を処置及び／もしくは防止及び／もしくは軽減するためのまたはある種の疾病におけるアポトーシスの防止のための薬剤の製造のための請求項３６において特定するような核酸のいずれかから選択される核酸もしくはそのヒト相同物の使用。
【請求項６６】
増殖性疾患を処置及び／もしくは防止及び／もしくは軽減するためのまたはある種の疾患におけるアポトーシスを防止するための請求項３６において特定するとおりの核酸の少なくとも一つに対するアンチセンス分子もしくは該核酸の哺乳動物相同物に対するアンチセンス分子の使用。
【請求項６７】
増殖性疾患を処置及び／もしくは防止及び／もしくは軽減するためのまたはある種の疾患におけるアポトーシスを防ぐための薬剤の製造のための請求項３６において特定するとおりの核酸の少なくとも一つに対するアンチセンス分子もしくは該核酸の哺乳動物相同物に対するアンチセンス分子の使用。
【請求項６８】
増殖性疾患を処置及び／もしくは防止及び／もしくは軽減するためのまたはある種の疾病におけるアポトーシスの防止のための請求項３７において特定するとおりのポリペプチドのいずれかから選択されるポリペプチドもしくはそのヒト相同物の使用。
【請求項６９】
請求項３６において特定するとおりの核酸分子もしくはそのヒト相同物または請求項３６において特定するとおりの核酸の少なくとも一つに対するアンチセンス分子もしくは該核酸の哺乳動物相同物に対するアンチセンス分子または請求項３７において特定するとおりのポリペプチドもしくはそのヒト相同物をその製薬学的に許容しうる担体、希釈剤もしくは賦形剤と一緒に含んでなる、増殖性疾患を処置するためのもしくはある種の疾病におけるアポトーシスの防止のための薬剤としての使用のための製薬学的組成物。
【請求項７０】
製薬学的に許容しうる担体中に請求項３６において特定するとおりの少なくとも一つの核酸もしくはそのヒト相同物または請求項３７において特定するとおりの少なくとも一つのポリペプチドもしくはそのヒト類似体を含んでなる、増殖性疾患に対してもしくはある種の疾病におけるアポトーシスを防ぐために哺乳動物を免疫するためのワクチン。
【請求項７１】
増殖性疾患を処置するためのもしくはある種の疾病におけるアポトーシスの防止のための薬剤の製造のための、請求項３７において特定するとおりのポリペプチドの少なくとも一つにまたはそのヒト相同物にまたは該ポリペプチドもしくは該ヒト相同物の特定のエピトープに特異的に結合することができる抗体の使用。
【請求項７２】
請求項３６において特定するとおりの核酸のヒト相同物を含んでなる発現ベクター。
【請求項７３】
原核及び／もしくは真核宿主細胞における発現を可能にする一つもしくはそれ以上の制御配列に該核酸配列が操作可能に連結されている発現ベクターである請求項７２に記載の発現ベクター。
【請求項７４】
誘導性プロモーターを含んでなる請求項７２もしくは７３に記載の発現ベクター。
【請求項７５】
レポーター分子をコードする配列を含んでなる請求項７２〜７４のいずれかに記載の発現ベクター。
【請求項７６】
請求項７２〜７５のいずれかのベクターで形質転換、トランスフェクションもしくは感染した宿主細胞。
【請求項７７】
請求項３６において特定するとおりの核酸の少なくとも一つのヒト相同物を含んでなる単離された核酸。
【請求項７８】
請求項７７の核酸分子に選択的にハイブリダイズすることができる核酸配列を含んでなるアンチセンス分子。
【請求項７９】
請求項７７の核酸によってコードされるポリペプチド。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、プログラムされた細胞死の際に発現が調節される酵母及び真菌からの遺伝子及びそのコードされるタンパク質の同定に関し、そしてこれらの遺伝子、タンパク質もしくはその機能性フラグメント及び同等物は、酵母及び真菌によって引き起こされるもしくはそれらと関連する感染を処置するためのまたは増殖性疾患の処置のためのまたはある種の疾病におけるアポトーシスの防止のための薬剤の選択的標的として用いることができる。
発明の背景
侵襲性真菌感染（例えば、カンジダ種、アスペルギルス種、フサリウム種、ザイゴミケス種）（Ｗａｌｓｈ，１９９２）は、ますます多様なそして次第に拡大する免疫無防備状態患者集団において驚異的な罹患率及び死亡率をもたらす重大な病原体として過去２０年の間に出現してきた。後天性免疫不全症候群（エイズ）にかかっている人々は、生命にかかわる真菌症の危険にさらされた患者の最も急速に増大する群を構成する。しかし、真菌感染はまた、極小未熟児、化学療法を受けている癌患者、臓器移植レシピエント、熱傷患者、及び合併症にかかっている外科患者を包含する他のかかりやすい宿主のいくつかの集団においても頻度が増している。
【０００２】
これらの真菌感染は、ヒト及び他の哺乳動物に限定されず、植物においても重大であり、その場合、それらは疾病を引き起こすかもしくは好ましくない化合物の生産を引き起こすことができる（例えば、フサリウム種、アスペルギルス種、ボトリティス種、クラドスポリウム種）。
【０００３】
抗真菌化学療法における最近の進歩は、これらの真菌症に影響を与えているが、拡大する免疫無防備状態患者集団は、抗真菌治療へのさらに新しい方法を必要とする。従って、新規な抗真菌薬の発見は、あらゆる新しい抗真菌治療の必須要素である。
【０００４】
抗真菌化合物を同定する古典的な方法は、ほぼ例外なく終点として真菌もしくは酵母増殖の阻害に依存している。天然物、半合成もしくは合成の化学薬品のライブラリーを、標的病原体もしくは関連する非病原性モデル生物体を殺すかもしくはその増殖を止めるそれらの能力に関してスクリーニングする。これらの試験は面倒であり、そして化合物の作用機構についていかなる情報も提供しない。次にそのようなスクリーニングから明らかになる有望なリード化合物を潜在的宿主毒性に関して試験しなければならず、そして影響を受ける分子標的を同定するために続いて詳細な作用機構研究を行わなければならない。
【０００５】
多細胞生物からの細胞は、細胞死の固有のプログラムによって特定のシグナルもしくは損傷に応答して自殺することができる。アポトーシスは、不必要なもしくは損傷を受けた細胞の除去をもたらすプログラムされた細胞死の形態である。生物体にとって好ましくないもしくは潜在的に有害ないずれかの細胞はアポトーシスプロセスを受け、そして細胞縮小、クロマチン凝縮、細胞質凝縮、核ＤＮＡの消化、ミトコンドリアの膜電位の喪失、形質膜泡状化及び細胞残屑の食作用のような事象を示す（Ｓｃｈｗａｒｔｚ，ｅｔ  ａｌ．１９９３）。タンパク質のＢｃｌ−２ファミリーは、プログラムされた細胞死プロセス（ＰＣＤ）の制御に中心的に関与する。この群のタンパク質は、細胞死のインヒビター（Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ＸＬ）もしくはアポトーシスを促進するタンパク質の群（Ｂａｘ、Ｂａｋ）のいずれかに属する（Ｏｌｔｖａｉ  ａｎｄ  Ｋｏｒｓｍｅｙｅｒ  １９９４；Ｋｎｕｄｓｏｎ  ａｎｄ  Ｋｏｒｓｍｅｙｅｒ  １９９７；Ｒｅｅｄ  ｅｔ  ａｌ．１９９８）。細胞の生死を調節するタンパク質のＢｃｌ−２ファミリーの能力は、進化を越えて保存されている。植物及び動物におけるＰＣＤ調節遺伝子の相同物の発見は、このプロセスに関与するある機能が、植物及び動物界の間の分岐発生が起こる前に、最初に単細胞生物において進化したかもしれない可能性を示唆する（Ａｐｔｅ  ｅｔ  ａｌ．１９９５）。
【０００６】
サッカロミセス・セレビシエにおけるアポトーシス促進（ｐｒｏ−ａｐｏｐｔｏｔｉｃ）ヒトもしくはマウスＢａｘタンパク質の発現は、この出芽酵母における細胞死を誘導した（Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．１９９４；Ｇｒｅｅｎｈａｌｆ  ｅｔ  ａｌ．１９９６；Ｚｈａ  ｅｔ  ａｌ．１９９６）。最初にそれは、内部細胞小器官の消失及び空胞変性を有する自食作用に類似しているプロセスと記述された。核の形状の形態学的変化及びクロマチン凝縮のような多細胞真核細胞に特有のアポトーシスの特徴は、この酵母において認められなかった（Ｚｈａ  ｅｔ  ａｌ．１９９６）。従って、サッカロミセス・セレビシエにおけるＢａｘで誘導される細胞死は、死プログラムのいかなる関与もなしに仮説の孔形成によってもたらされる、Ｂａｘタンパク質それ自体の毒性のためであることが示唆された（Ｍｕｃｈｍｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．１９９６）。
【０００７】
それに反して、分裂酵母シゾサッカロミセス・ポンベにおけるＢａｘ発現は、ＤＮＡ断片化、クロマチン凝縮、核エンベロープの消失及びサイトゾル空胞変性のような典型的なアポトーシス変化のいくつかを示し、この単細胞真核生物における進化的保存されたＰＣＤ経路の存在を示唆した（Ｉｎｋ  ｅｔ  ａｌ．１９９７；Ｊｕｒｇｅｎｓｍｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９９７）。Ｂａｘタンパク質の毒性の種依存的な違いがこの２種の酵母間で認められた相違の理由であるとあまり考えられないので、真正の細胞死経路がサッカロミセス・セレビシエに存在する可能性がある。
【０００８】
細胞分裂周期遺伝子ＣＤＣ４８における酵母突然変異体の最近の研究結果は、後生動物細胞におけるアポトーシスマーカーの典型的指標と考えられる多数の形態学的及び分子的特徴：細胞質膜の外側リーフレット上のホスファチジルセリンの露出、ＤＮＡ切断並びにクロマチン凝縮及び断片化を示し、この単細胞酵母における基本的ＰＣＤ機構の存在を裏付ける。この理論は、ヒトＢａｘタンパク質を発現する野生型酵母細胞の分析によって立証された。アポトーシスの形態学的マーカーの包括的試験により、アポトーシスを特定する形態学的マーカーと同一である一連の変化が示された（Ｌｉｇｒ，Ｍａｄｅｏ  ｅｔ  ａｌ．１９９８）。同じグループからの最近の研究結果（Ｍａｄｅｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）は、酵母におけるアポトーシスの一般的調節因子として酸素ストレスを関係していると見なすが、サッカロミセス・セレビシエにおけるＢａｘ致死性の実際の機構は、はっきりしないままである。
【０００９】
酵母及び真菌における発現のための新規なｂａｘ配列、並びにプログラムされた細胞死をもたらす経路における酵母及びカンジダ機能を同定するための手段を提供することは、本発明の目的である。
【００１０】
酵母もしくは真菌感染と関連する疾病もしくは症状を軽減することにおいて用いることができる新規な化合物の同定のための潜在的分子標的に相当する核酸並びにポリペプチドを提供することは、本発明の目的である。
【００１１】
酵母もしくは真菌と関連する疾病を処置するためのもしくは該疾病を処置する薬剤（１つもしくは複数）の製造のためのこれらの核酸及びポリペプチド分子の使用を提供することは、本発明のさらなる目的である。
【００１２】
これらの核酸もしくはポリペプチドを含んでなる製薬学的組成物及びワクチンを提供することもまた本発明の目的である。
【００１３】
これらの核酸を含んでなるベクター、並びに該ベクターでトランスフェクションもしくは形質転換した宿主細胞を提供することもまた本発明の目的である。
【００１４】
酵母及び真菌と関連する疾病を処置するための薬剤としてそれ自体でもしくは組成物において用いることができる、これらのポリペプチドに対する抗体を提供することもまた本発明の目的である。
【００１５】
本発明のポリペプチドの発現を阻害もしくは活性化することができるまたはそのようなポリペプチドの発現もしくは機能性を選択的に調節することができる化合物もしくはポリペプチドを選択的に同定する方法を提供することは、本発明の別の目的である。あるいはまた、核酸及びポリペプチド分子は、これらの化合物もしくはポリペプチドを同定するためにアッセイもしくはキットに導入することができる。
【００１６】
酵母もしくは真菌の感染を防ぐ方法を提供することもまた本発明の目的である。
【００１７】
癌のような増殖性疾患を処置することにおける使用のための、またはある種の疾病におけるアポトーシスの防止のための、またはそのような疾患もしくは疾病を処置する薬剤の製造のための本発明の核酸及びポリペプチドのヒト相同物を提供することは、本発明のさらなる目的である。
【００１８】
本発明の全ての目的は、以下に提示するとおりの態様によって達成されている。
発明の要約
哺乳動物ｂａｘ遺伝子は、酵母においてアポトーシス変化を引き起こすことが見出されているので（Ｌｉｇｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）、これは、プログラムされた細胞死を最終的にもたらす分子経路が酵母細胞及び他の単細胞真核生物にもある程度存在し得るという示唆であることができる。このプロセスに関与する遺伝子の同定は、新規な抗真菌治療の開発にとって重要であり得る。
【００１９】
本発明者等は、病原性酵母カンジダ・アルビカンスにおいてＢａｘタンパク質を過剰発現させ、そしてこれが同様の表現型をもたらすことを見出した。しかしながら、これらの結果は、この病原性生物体において適切に発現させることができる新規な合成ＢＡＸ遺伝子を構築した後にのみ認めることができた。
【００２０】
さらに、本発明者等は、プログラムされた細胞死を最終的にもたらす分子経路に関与する各種の特定の核酸を同定した。本発明者等は、酵母サッカロミセス・セレビシエにおいてプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路に関与する各種の遺伝子をマクロアレイスクリーニングによって同定することができた。Ｂａｘ発現後の異なる時点で差次的に発現された遺伝子（ＰａｔｈｗａｙｓＴＭソフトウェアを用いて分析する）は、本発明における候補遺伝子と予想される。
【００２１】
さらに、本発明はまた、サッカロミセス・セレビシエ候補遺伝子のカンジダ種相同物にも関し、そして酵母及び真菌、特に病原性酵母及び真菌において細胞死を刺激もしくは防止することにおけるそれらの使用がこれとともに予想される。
【００２２】
さらに、これらのアポトーシスに関連するサッカロミセス・セレビシエ核酸及びポリペプチドのヒト相同物並びにヒト及び他の哺乳動物において増殖性疾患を処置することにおけるそれらの潜在的使用もまた本発明の一部である。
発明の詳細な記述
本発明は、酵母もしくは真菌と関連する疾病を処置する薬剤の製造のための、酵母もしくは真菌のプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路に関与するポリペプチドをコードする核酸分子の使用に関し、そしてその核酸配列は：
（ａ）配列番号１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４、２２６、２２８、２３０、２３２、２３４、２３６、２３８、２４０、２４２、２４４、２４６、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３２４、３２６、３２８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、６９２、６９４、６９６、６９８、７００、７０２、７０４、７０６、７０８、７１０、７１２、７１４、７１６、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２のいずれかにおいて示すとおりのアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするか、または該タンパク質の機能性同等物、誘導体もしくは生物学的前駆体をコードする核酸、
（ｂ）配列番号１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４、２２６、２２８、２３０、２３２、２３４、２３６、２３８、２４０、２４２、２４４、２４６、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３２４、３２６、３２８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、６９２、６９４、６９６、６９８、７００、７０２、７０４、７０６、７０８、７１０、７１２、７１４、７１６、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２のいずれかによって示すとおりのアミノ酸配列のいずれかに７０％より多く類似する、好ましくは７５％もしくは８０％より多く類似する、より好ましくは８５％、９０％もしくは９５％より多く類似する、そして最も好ましくは９７％より多く類似するアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする核酸、
（ｃ）配列番号１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４、２２６、２２８、２３０、２３２、２３４、２３６、２３８、２４０、２４２、２４４、２４６、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３２４、３２６、３２８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、６９２、６９４、６９６、６９８、７００、７０２、７０４、７０６、７０８、７１０、７１２、７１４、７１６、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２のいずれかによって示すとおりのアミノ酸配列のいずれかに７０％より多く同一である、好ましくは７５％もしくは８０％より多く同一である、より好ましくは８５％、９０％もしくは９５％より多く同一である、そして最も好ましくは９７％より多く同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする核酸、
（ｄ）配列番号１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、１８１、１８３、１８５、１８７、１８９、１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、２３９、２４１、２４３、２４５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３７９、３８１、３８３、３８５、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、４１５、４１７、４１９、４２１、４２３、４２５、４２７、４２９、４３１、４３３、４３５、４３７、４３９、４４１、４４３、４４５、４４７、４４９、４５１、４５３、４５５、４５７、４５９、４６１、４６３、４６５、４６７、４６９、４７１、４７３、４７５、４７７、４７９、４８１、４８３、４８５、４８７、４８９、４９１、４９３、４９５、４９７、４９９、５０１、５０３、５０５、５０７、５０９、５１１、５１３、５１５、５１７、５１９、５２１、５２３、５２５、５２７、５２９、５３１、５３３、５３５、５３７、５３９、５４１、５４３、５４５、５４７、５４９、５５１、５５３、５５５、５５７、５５９、５６１、５６３、５６５、５６７、５６９、５７１、５７３、５７５、５７７、５７９、５８１、５８３、５８５、５８７、５８９、５９１、５９３、５９５、５９７、５９９、６０１、６０３、６０５、６０７、６０９、６１１、６１３、６１５、６１７、６１９、６２１、６２３、６２５、６２７、６２９、６３１、６３３、６３５、６３７、６３９、６４１、６４３、６４５、６４７、６４９、６５１、６５３、６５５、６５７、６５９、６６１、６６３、６６５、６６７、６６９、６７１、６７３、６８７、６９１、６９３、６９５、６９７、６９９、７０１、７０３、７０５、７０７、７０９、７１１、７１３、７１５、７１７、７１９、７２１、７２３、７２５、７２７、７２９及び７３１のいずれかにおいて示すとおりの配列を含んでなる核酸、
（ｅ）配列番号１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、１８１、１８３、１８５、１８７、１８９、１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、２３９、２４１、２４３、２４５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３７９、３８１、３８３、３８５、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、４１５、４１７、４１９、４２１、４２３、４２５、４２７、４２９、４３１、４３３、４３５、４３７、４３９、４４１、４４３、４４５、４４７、４４９、４５１、４５３、４５５、４５７、４５９、４６１、４６３、４６５、４６７、４６９、４７１、４７３、４７５、４７７、４７９、４８１、４８３、４８５、４８７、４８９、４９１、４９３、４９５、４９７、４９９、５０１、５０３、５０５、５０７、５０９、５１１、５１３、５１５、５１７、５１９、５２１、５２３、５２５、５２７、５２９、５３１、５３３、５３５、５３７、５３９、５４１、５４３、５４５、５４７、５４９、５５１、５５３、５５５、５５７、５５９、５６１、５６３、５６５、５６７、５６９、５７１、５７３、５７５、５７７、５７９、５８１、５８３、５８５、５８７、５８９、５９１、５９３、５９５、５９７、５９９、６０１、６０３、６０５、６０７、６０９、６１１、６１３、６１５、６１７、６１９、６２１、６２３、６２５、６２７、６２９、６３１、６３３、６３５、６３７、６３９、６４１、６４３、６４５、６４７、６４９、６５１、６５３、６５５、６５７、６５９、６６１、６６３、６６５、６６７、６６９、６７１、６７３、６８７、６９１、６９３、６９５、６９７、６９９、７０１、７０３、７０５、７０７、７０９、７１１、７１３、７１５、７１７、７１９、７２１、７２３、７２５、７２７、７２９及び７３１のいずれかによって示すとおりの核酸配列のいずれかに７０％より多く同一である、好ましくは７５もしくは８０％より多く同一である、より好ましくは８５％、もしくは９０％もしくは９５％より多く同一である、そして最も好ましくは９７％より多く同一である核酸、
（ｆ）ａ）〜ｅ）において特定するとおりの核酸のいずれかの機能性フラグメントをコードする核酸；並びに
（ｇ）ａ）〜ｆ）において特定するとおりの核酸のいずれかの相補物、
から選択される。
【００２３】
配列類似性検索は、ＢＬＡＳＴソフトウェアパッケージバージョン２を用いて行った。同一性及び類似性パーセンテージは、スコアリングマトリックスとしてＢＬＯＳＵＭ６２を用いて計算した。
【００２４】
当該技術分野において既知であるように、２つのポリペプチド間の「類似性」は、一方のポリペプチドのアミノ酸配列及びその保存アミノ酸置換をもう一方のポリペプチドの配列と比較することによって決定する。さらに、「同一性」もまた当該技術分野において既知であり、それは、２列のそのような配列間の一致の同一性によって決定されるような２つのポリペプチドもしくは２つのポリヌクレオチド配列間の配列関連性の程度を意味する。同一性及び類似性の両方とも容易に計算することができる。２つのポリヌクレオチドもしくはポリペプチド配列間の同一性及び類似性を測定するための多数の方法が存在するが、「同一性」及び「類似性」という用語は当業者に周知である（Ｃａｒｉｌｌｏ  ａｎｄ  Ｌｉｐｔｏｎ，１９８８）。２つの配列間の同一性もしくは類似性を決定するために一般に用いられる方法には、Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｈｕｇｅ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒｓ（Ｂｉｓｈｏｐ，１９９４）及びＣａｒｉｌｌｏ  ａｎｄ  Ｌｉｐｔｏｎ（１９８８）に開示されているものが包含されるが、これらに限定されるものではない。同一性を決定するための好ましい方法は、試験する２つの配列間の最大の一致を与えるように設計される。同一性及び類似性を決定する方法は、コンピュータープログラムに体系化される。２つの配列間の同一性及び類似性を決定するための好ましいコンピュータープログラム法には、ＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ及びＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ，１９９０）が包含されるが、これらに限定されるものではない。
【００２５】
「核酸の機能性フラグメント」という表現は、本明細書において用いる場合、機能性タンパク質（もしくはポリペプチド）をコードするために必要な最小限の核酸を意味する。例えば、５’末端及び３’末端で実際のオープンリーディングフレームより多くのヌクレオチドを含んでなる核酸が提供される状況では、本発明は、より小さいが機能するオープンリーディングフレームをなお含有する核酸のフラグメントにも関する。また、完全なオープンリーディングフレームによってコードされるポリペプチドと同じ性質を有するポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームの部分も意味する。
【００２６】
「プログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路」という表現は、細胞死を最終的にもたらす一連の工程をさし、そしてそれはＢａｘ、Ｂａｋ、ＣＥＤ４、過酸化水素、ジアミド及びファルネソールのような様々な作用因子によってこの経路の様々な工程で引き起こすことができる。サッカロミセス・セレビシエからの本発明のこの態様に従って用いる核酸配列を配列番号１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、１８１、１８３、１８５、１８７、１８９、１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、２３９、２４１、２４３、２４５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３７９、３８１、３８３、３８５、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、６９１、６９３、６９５、６９７、６９９、７０１、７０３、７０５、７０７、７０９、７１１、７１３及び７１５において；カンジダ・アルビカンスからを配列番号３９７、３９９、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、４１５、４１７、４１９、４２１、４２３、４２５、４２７、４２９、４３１、４３３、４３５、４３７、４３９、４４１、４４３、４４５、４４７、４４９、４５１、４５３、４５５、４５７、４５９、４６１、４６３、４６５、４６７、４６９、４７１、４７３、４７５、４７７、４７９、４８１、４８３、４８５、４８７、４８９、４９１、４９３、４９５、４９７、４９９、５０１、５０３、５０５、５０７、５０９、５１１、５１３、５１５、５１７、５１９、５２１、５２３、５２５、５２７、５２９、５３１、５３３、５３５、５３７、５３９、５４１、５４３、５４５、５４７、５４９、５５１、５５３、５５５、５５７、５５９、５６１、５６３、５６５、５６７、５６９、５７１、５７３、５７５、５７７、５７９、５８１、５８３、５８５、５８７、５８９、５９１、５９３、５９５、５９７、５９９、６０１、６０３、６０５、６０７、６０９、６１１、６１３、６１５、６１７、６１９、６２１、６２３、６２５、６２７、６２９、６３１、６３３、６３５、６３７、６３９、６４１、６４３、６４５、６４７、６４９、６５１、６５３、６５５、６５７、６５９、６６１、６６３、６６５、６６７、６６９、６７１、６７３、６８７、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２において特定する。
【００２７】
本発明による酵母もしくは真菌は、病原性酵母もしくは真菌であることができるが、これらに限定されるものではない。そのようなものとして、酵母もしくは真菌は、健康な個体において並びに免疫無防備状態患者において感染を引き起こすことができる。
【００２８】
「酵母及び真菌と関連する疾病を処置する」という表現は、該生物体によって引き起こされる疾病もしくは感染をさすだけでなく、例えばパン屋及び醸造所におけるいわゆる「職業病」のような、該生物体によって引き起こされるそして一般に「非病原性」として知られている酵母もしくは真菌によって引き起こされるアレルギー反応もさす。酵母もしくは真菌と関連する特定の疾病のいくつかの例をさらに例示する。
【００２９】
本発明はさらに、プログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路に同様に関与する配列番号１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、１８１、１８３、１８５、１８７、１８９、１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、２３９、２４１、２４３、２４５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３７９、３８１、３８３、３８５、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、４１５、４１７、４１９、４２１、４２３、４２５、４２７、４２９、４３１、４３３、４３５、４３７、４３９、４４１、４４３、４４５、４４７、４４９、４５１、４５３、４５５、４５７、４５９、４６１、４６３、４６５、４６７、４６９、４７１、４７３、４７５、４７７、４７９、４８１、４８３、４８５、４８７、４８９、４９１、４９３、４９５、４９７、４９９、５０１、５０３、５０５、５０７、５０９、５１１、５１３、５１５、５１７、５１９、５２１、５２３、５２５、５２７、５２９、５３１、５３３、５３５、５３７、５３９、５４１、５４３、５４５、５４７、５４９、５５１、５５３、５５５、５５７、５５９、５６１、５６３、５６５、５６７、５６９、５７１、５７３、５７５、５７７、５７９、５８１、５８３、５８５、５８７、５８９、５９１、５９３、５９５、５９７、５９９、６０１、６０３、６０５、６０７、６０９、６１１、６１３、６１５、６１７、６１９、６２１、６２３、６２５、６２７、６２９、６３１、６３３、６３５、６３７、６３９、６４１、６４３、６４５、６４７、６４９、６５１、６５３、６５５、６５７、６５９、６６１、６６３、６６５、６６７、６６９、６７１、６７３、６８７、６９１、６９３、６９５、６９７、６９９、７０１、７０３、７０５、７０７、７０９、７１１、７１３、７１５、７１７、７１９、７２１、７２３、７２５、７２７、７２９及び７３１のしかし他の酵母及び真菌株から単離される核酸配列相同物の使用に関する。さらに特定の態様によれば、これらの核酸配列はアスペルギルス・フミガーツスから得られる。
【００３０】
さらに特定の態様として、本発明は：
（ａ）配列番号３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２のいずれかにおいて示すとおりのアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするか、または該タンパク質の機能性同等物、誘導体もしくは生物学的前駆体をコードする核酸；
（ｂ）配列番号３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２のいずれかによって示すとおりのアミノ酸配列のいずれかに７０％より多く類似する、好ましくは７５％もしくは８０％より多く類似する、より好ましくは８５％、９０％もしくは９５％より多く類似する、そして最も好ましくは９７％より多く類似するアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする核酸、
（ｃ）配列番号３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２のいずれかによって示すとおりのアミノ酸配列のいずれかに７０％より多く同一である、好ましくは７５％もしくは８０％より多く同一である、より好ましくは８５％、９０％もしくは９５％より多く同一である、そして最も好ましくは９７％より多く同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする核酸、
（ｄ）配列番号３９７、３９９、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、４１５、４１７、４１９、４２１、４２３、４２５、４２７、４２９、４３１、４３３、４３５、４３７、４３９、４４１、４４３、４４５、４４７、４４９、４５１、４５３、４５５、４５７、４５９、４６１、４６３、４６５、４６７、４６９、４７１、４７３、４７５、４７７、４７９、４８１、４８３、４８５、４８７、４８９、４９１、４９３、４９５、４９７、４９９、５０１、５０３、５０５、５０７、５０９、５１１、５１３、５１５、５１７、５１９、５２１、５２３、５２５、５２７、５２９、５３１、５３３、５３５、５３７、５３９、５４１、５４３、５４５、５４７、５４９、５５１、５５３、５５５、５５７、５５９、５６１、５６３、５６５、５６７、５６９、５７１、５７３、５７５、５７７、５７９、５８１、５８３、５８５、５８７、５８９、５９１、５９３、５９５、５９７、５９９、６０１、６０３、６０５、６０７、６０９、６１１、６１３、６１５、６１７、６１９、６２１、６２３、６２５、６２７、６２９、６３１、６３３、６３５、６３７、６３９、６４１、６４３、６４５、６４７、６４９、６５１、６５３、６５５、６５７、６５９、６６１、６６３、６６５、６６７、６６９、６７１、６７３、６８７、７１７、７１９、７２１、７２３、７２５、７２７、７２９及び７３１のいずれかにおいて示すとおりの配列を含んでなる核酸；
（ｅ）配列番号３９７、３９９、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、４１５、４１７、４１９、４２１、４２３、４２５、４２７、４２９、４３１、４３３、４３５、４３７、４３９、４４１、４４３、４４５、４４７、４４９、４５１、４５３、４５５、４５７、４５９、４６１、４６３、４６５、４６７、４６９、４７１、４７３、４７５、４７７、４７９、４８１、４８３、４８５、４８７、４８９、４９１、４９３、４９５、４９７、４９９、５０１、５０３、５０５、５０７、５０９、５１１、５１３、５１５、５１７、５１９、５２１、５２３、５２５、５２７、５２９、５３１、５３３、５３５、５３７、５３９、５４１、５４３、５４５、５４７、５４９、５５１、５５３、５５５、５５７、５５９、５６１、５６３、５６５、５６７、５６９、５７１、５７３、５７５、５７７、５７９、５８１、５８３、５８５、５８７、５８９、５９１、５９３、５９５、５９７、５９９、６０１、６０３、６０５、６０７、６０９、６１１、６１３、６１５、６１７、６１９、６２１、６２３、６２５、６２７、６２９、６３１、６３３、６３５、６３７、６３９、６４１、６４３、６４５、６４７、６４９、６５１、６５３、６５５、６５７、６５９、６６１、６６３、６６５、６６７、６６９、６７１、６７３、６８７、７１７、７１９、７２１、７２３、７２５、７２７、７２９及び７３１のいずれかによって示すとおりの核酸配列のいずれかに７０％より多く同一である、好ましくは７５％もしくは８０％より多く同一である、より好ましくは８５％、９０％もしくは９５％より多く同一である、そして最も好ましくは９７％より多く同一である核酸、
（ｆ）ａ）〜ｅ）において特定するとおりの核酸配列のいずれかの機能性フラグメントをコードする核酸、並びに、
（ｇ）ａ）〜ｆ）において特定するとおりの核酸のいずれかの相補物、
から選択される、酵母もしくは真菌のプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路に関与するポリペプチドをコードする核酸に関する。
【００３１】
好ましい態様として、本発明は配列番号３９７、３９９、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、４１５、４１７、４１９、４２１、４２３、４２５、４２７、４２９、４３１、４３３、４３５、４３７、４３９、４４１、４４３、４４５、４４７、４４９、４５１、４５３、４５５、４５７、４５９、４６１、４６３、４６５、４６７、４６９、４７１、４７３、４７５、４７７、４７９、４８１、４８３、４８５、４８７、４８９、４９１、４９３、４９５、４９７、４９９、５０１、５０３、５０５、５０７、５０９、５１１、５１３、５１５、５１７、５１９、５２１、５２３、５２５、５２７、５２９、５３１、５３３、５３５、５３７、５３９、５４１、５４３、５４５、５４７、５４９、５５１、５５３、５５５、５５７、５５９、５６１、５６３、５６５、５６７、５６９、５７１、５７３、５７５、５７７、５７９、５８１、５８３、５８５、５８７、５８９、５９１、５９３、５９５、５９７、５９９、６０１、６０３、６０５、６０７、６０９、６１１、６１３、６１５、６１７、６１９、６２１、６２３、６２５、６２７、６２９、６３１、６３３、６３５、６３７、６３９、６４１、６４３、６４５、６４７、６４９、６５１、６５３、６５５、６５７、６５９、６６１、６６３、６６５、６６７、６６９、６７１、６７３、６８７、７１７、７１９、７２１、７２３、７２５、７２７、７２９及び７３１によって示すとおりの、カンジダ・アルビカンスからの核酸に関する。
【００３２】
さらにより好ましい態様として、本発明は、配列番号１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、１８１、１８３、１８５、１８７、１８９、１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、２３９、２４１、２４３、２４５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３７９、３８１、３８３、３８５、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１、４０３、４０５、４０７、４０９、４１１、４１３、４１５、４１７、４１９、４２１、４２３、４２５、４２７、４２９、４３１、４３３、４３５、４３７、４３９、４４１、４４３、４４５、４４７、４４９、４５１、４５３、４５５、４５７、４５９、４６１、４６３、４６５、４６７、４６９、４７１、４７３、４７５、４７７、４７９、４８１、４８３、４８５、４８７、４８９、４９１、４９３、４９５、４９７、４９９、５０１、５０３、５０５、５０７、５０９、５１１、５１３、５１５、５１７、５１９、５２１、５２３、５２５、５２７、５２９、５３１、５３３、５３５、５３７、５３９、５４１、５４３、５４５、５４７、５４９、５５１、５５３、５５５、５５７、５５９、５６１、５６３、５６５、５６７、５６９、５７１、５７３、５７５、５７７、５７９、５８１、５８３、５８５、５８７、５８９、５９１、５９３、５９５、５９７、５９９、６０１、６０３、６０５、６０７、６０９、６１１、６１３、６１５、６１７、６１９、６２１、６２３、６２５、６２７、６２９、６３１、６３３、６３５、６３７、６３９、６４１、６４３、６４５、６４７、６４９、６５１、６５３、６５５、６５７、６５９、６６１、６６３、６６５、６６７、６６９、６７１、６７３、６８７、６９１、６９３、６９５、６９７、６９９、７０１、７０３、７０５、７０７、７０９、７１１、７１３、７１５、７１７、７１９、７２１、７２３、７２５、７２７、７２９及び７３１において示す配列の少なくとも一つの哺乳動物もしくはヒト相同物に相当する哺乳動物もしくはヒト起源からの単離された核酸に関する。
【００３３】
従って、さらに好ましい態様によれば、本発明は、酵母もしくは真菌と関連する疾病を処置する薬剤の製造のための、哺乳動物もしくはヒト起源からの単離された核酸に関し、その核酸配列は：
（ａ）配列番号６７６、６７８、６８０、６８２、６８４及び６８６のいずれかにおいて示すとおりのアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするか、または該タンパク質の機能性同等物、誘導体もしくは生物学的前駆体をコードする核酸；
（ｂ）配列番号６７６、６７８、６８０、６８２、６８４及び６８６のいずれかによって示すとおりのアミノ酸配列のいずれかに７０％より多く類似する、好ましくは７５％もしくは８０％より多く類似する、より好ましくは８５％、９０％もしくは９５％より多く類似する、そして最も好ましくは９７％より多く類似するアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする核酸；
（ｃ）配列番号６７６、６７８、６８０、６８２、６８４及び６８６のいずれかによって示すとおりのアミノ酸配列のいずれかに７０％より多く同一である、好ましく７５％もしくは８０％より多く同一である、より好ましくは８５％、９０％もしくは９５％より多く同一である、そして最も好ましくは９７％より多く同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする核酸；
（ｄ）配列番号６７５、６７７、６７９、６８１、６８３及び６８５のいずれかにおいて示すとおりの配列を含んでなる核酸；
（ｅ）配列番号６７５、６７７、６７９、６８１、６８３及び６８５のいずれかによって示すとおりの核酸配列のいずれかに７０％より多く同一である、好ましくは７５もしくは８０％より多く同一である、より好ましくは８５％もしくは９０％もしくは９５％より多く同一である、そして最も好ましくは９７％より多く同一である核酸；
（ｆ）ａ）〜ｅ）において特定するとおりの核酸のいずれかの機能性フラグメントをコードする核酸；並びに
（ｇ）ａ）〜ｆ）において特定するとおりの核酸のいずれかの相補物、
から選択される。
【００３４】
本発明はまた、増殖性疾患を処置及び／もしくは防止及び／もしくは軽減するためのまたはある種の疾患もしくは疾病におけるアポトーシスの防止のための該核酸の使用にも関する。
【００３５】
「増殖性疾患」もしくは「増殖性疾病」という表現は、癌のような患者もしくは動物内の異常をさす。正常な細胞は、ＤＮＡのコーディングもしくは非コーディング配列における変異のために増殖し始め、肥大したもしくは膨張した組織をもたらす。突然変異は、明白な原因なしに起こり得る。炎症性ではない組織の異常な良性もしくは悪性の塊が形成される。あらかじめ存在する組織の細胞は不意に分裂し始め、そして結果として生じる細胞塊は、いかなる生理学的機能ももたない。
【００３６】
「アポトーシス」もしくは「アポトーシス関連疾病」という表現には、自己免疫疾患、虚血、ウイルス感染と関連する疾病もしくは神経変性のような疾病が包含される。
【００３７】
本発明はまた、本発明による、そして特に上に記述する、そしてＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、合成ＤＮＡ、もしくはＴがＵで置換されているＲＮＡであることができる全ての核酸にも関することが明らかであるはずである。本発明による核酸はまた、当該技術分野において既知である任意の改変されたヌクレオチドを含んでなることもできる。
【００３８】
「核酸配列」という用語にはまた、既定の任意の一本鎖配列に対する相補的配列も包含される。
【００３９】
本発明によれば、これらの配列並びに他の酵母及び真菌におけるまたはヒトもしくは他の哺乳動物におけるそれらの相同物並びにそれらがコードするポリペプチドは、そのようなポリペプチドの発現を阻害もしくは活性化することができる化合物を選択的に同定するアッセイに導入することができる新規な分子標的に相当する。さらに、本発明はまた、
−カンジダ症（ｃａｎｄｉｄｏｓｉｓ）、モニリア疹及び鵞口瘡とも呼ばれる、一次もしくは二次真菌感染である、カンジダ・アルビカンス及びカンジダ属の他のメンバーによって引き起こされるカンジダ症（ｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ）；
−一連の疾病を構成する、アスペルギルス属のメンバーによって引き起こされるアスペルギルス症：
−ＨＩＶ陽性もしくは他の免疫無防備状態個体において常に認められる肺疾患である、ヒストプラスマ・カプスラツムによって引き起こされるヒストプラスマ症；
−肺疾患として起こる肉芽腫性疾患である、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシスによって引き起こされるパラコクシジオイドミコーシス；
−シカゴ病もしくはギルクリスト病とも呼ばれる、良性及び自己限定感染もしくは慢性肉芽腫性及び化膿性真菌症であることができる、ブラストミセス・デルマティティジスによって引き起こされるブラストミセス症；
−コクシジオイデス・イミティスによって引き起こされ、そして典型的には急速に消散する呼吸器感染であるコクシジオイデス真菌症、しかし、この真菌症は急性、慢性、重症もしくは致命的になることができる；サン・ホアキン渓谷熱もしくは渓谷熱とも呼ばれる；
−トルローシス症とも呼ばれる、慢性、亜急性ないし急性の肺性、全身性もしくは髄膜炎性疾患である、クリプトコックス・ネオフォルマンスによって引き起こされるクリプトコックス症；
−化膿し、潰瘍化しそして流出する皮膚もしくは皮下組織及び隣接するリンパ管の結節性損傷を特徴とする慢性感染である、スポロトリクス・シェンキイによって引き起こされるスポロトリクス症、
のような、しかしこれらに限定されるものではない、カンジダ種、アスペルギルス種、ミクロスポルム種、トリコフィトン種、フサリウム種、ザイゴミケス種、ボトリティス種、クラドスポリウム種、マラセチア種、エピデルモフィトン・フロコサム、ブラストミセス・デルマティティジス、コクシジオイデス・イミティス、ヒストプラスマ・カプスラツム、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシス、クリプトコックス・ネオフォルマンス及びスポロトリクス・シェンキイによって引き起こされる疾病のような、酵母もしくは真菌感染と関連する疾病もしくは症状を軽減することにおける該配列の潜在的使用にも関する。
【００４０】
アポトーシスをもたらす経路のいくつかは、哺乳動物細胞及び酵母もしくは真菌間で保存されている。従って、本発明はまた、細胞のアポトーシスもしくは非アポトーシスが正常に機能しない、例えば増殖性疾患において疾病もしくは症状を防止及び／もしくは軽減するためのヒトもしくは哺乳動物起源からの相同配列の潜在的使用にも関する。この点で癌もまた増殖性疾患と考えることができる。さらに、そのような保存された経路の一部である標的は、哺乳動物細胞におけるアポトーシスを刺激もしくは阻害するために用いることができる。例えば、アポトーシスの刺激は、腫瘍細胞／組織の処置において望ましい。
【００４１】
本発明によるヒト相同物は、当該技術分野において周知である方法（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）に従ってヒトゲノムもしくはｃＤＮＡライブラリーに対する本発明の酵母及びカンジダ核酸分子の選択的ハイブリダイゼーションによって得ることができる。ヒトポリペプチド相同物は、対応するヒト核酸相同ヌクレオチド配列から得られる。
【００４２】
本発明はさらに、本発明による核酸分子の少なくとも一つに選択的にハイブリダイズすることができる核酸もしくはその相補物に関する。「選択的にハイブリダイズする」もしくは「特異的にハイブリダイズする」という用語は、本発明の配列の相同物であるが例えば異種起源の細胞もしくは生物体から得られる配列を検出することができ、そして該配列が既知の配列とハイブリダイズしない条件下でハイブリダイズすることを意味する。好ましい態様として、哺乳動物相同物を検出することができる。ハイブリダイゼーションのどの方法を使用できるか及びどの条件が選択的もしくは特異的にハイブリダイズするのに必要かは当業者に周知である。好ましくは、高いストリンジェンシーの条件下のハイブリダイゼーションを適用することができる（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）。
【００４３】
そのようなものとして、本発明はまた、哺乳動物生物体が包含されるがこれらに限定されるものではない異種起源の生物体における相同物を検出するための本発明の核酸配列の使用にも関する。
【００４４】
本発明はまた、先に記述する酵母もしくはカンジダ核酸の少なくとも一つのヒト相同物を含んでなる単離された核酸にも関する。本発明はまた、該核酸の該ヒト相同物によってコードすることができるポリペプチドにも関する。
【００４５】
さらなる態様として、本発明はまた、本明細書に記述する酵母もしくはカンジダ核酸の少なくとも一つのヒト相同物を含んでなる発現ベクターにも関する。該発現ベクターは、原核及び／もしくは真核宿主細胞における発現を可能にする一つもしくはそれ以上の制御配列に該核酸配列が操作可能に連結されている発現ベクターであることができる。さらなる態様によれば、発現ベクターは、誘導性プロモーター及び／もしくはレポーター分子を含んでなる。
【００４６】
本発明はまた、上記のベクターのいずれかで形質転換、トランスフェクションもしくは感染した宿主細胞にも関する。
【００４７】
好ましい態様によれば、本発明は、本発明及び上記の核酸のいずれかのアンチセンスバージョンに関する。
【００４８】
本発明はさらに特に、本発明の核酸の少なくとも一つに選択的にハイブリダイズすることができる核酸を含んでなるアンチセンス分子に関する。興味深い態様として、本発明は、本明細書に記述する少なくとも一つの酵母もしくはカンジダ核酸のヒト相同物に選択的にハイブリダイズすることができる核酸に関する。
【００４９】
本発明によるポリヌクレオチドは、アンチセンスＲＮＡの生産を与えるためにアンチセンスの向きにベクターに挿入することができる。アンチセンスＲＮＡもしくは他のアンチセンス核酸はまた、合成手段によって製造することもできる。
【００５０】
本発明はまた、本発明による核酸の少なくとも約１０個の連続したヌクレオチドそして好ましくは１０〜５０個のヌクレオチドの核酸分子を都合よく提供する。これらの配列は、複製を開始するためのプローブもしくはプライマーなどとして都合よく用いることができる。そのような核酸配列は、組換えもしくは合成手段によるような、当該技術分野において周知である技術に従って製造することができる。プローブは、本発明の核酸分子のいずれかと特異的にハイブリダイズする。プライマーは、本発明の核酸分子のいずれかを特異的に増幅する。本発明によるプローブもしくはプライマーはまた、本発明による核酸の存在を検出するために診断キットなどにおいて用いることもできる。これらの試験は、一般に、ハイブリダイズする条件下でプローブをサンプルと接触させること及びプローブとサンプル中の任意の核酸間の任意の二本鎖もしくは三本鎖形成の存在を検出することを含んでなる。
【００５１】
本発明によれば、これらのプローブを固体支持体に固定することができる。好ましくは、それらは、複数のプローブが単一の生物学的サンプルに同時にハイブリダイズできるようにアレイ上に存在する。プローブは、アレイ上にスポットするかもしくはアレイ上でインサイチューで合成することができる（Ｌｏｃｋｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。単一のアレイは、別個の位置に１００、５００もしくはさらに１０００より多くの異なるプローブを含有することができる。そのようなアレイは、該プローブと相互作用する化合物に関してスクリーニングするために用いることができる。
【００５２】
本発明による核酸配列は、都合よく、例えば、クローン化することが所望される遺伝子の領域に対する約１０〜５０ヌクレオチドであることができる一対のプライマーを製造すること、これらのプライマーを酵母もしくは真菌細胞からのｍＲＮＡ、ｃＤＮＡもしくはゲノムＤＮＡと接触させること、所望される領域の増幅をもたらす条件下でポリメラーゼ連鎖反応を行うこと、増幅された領域もしくはフラグメントを単離すること及び増幅されたＤＮＡを回収することを一般に含むＰＣＲクローニング機構を用いるような、組換えもしくは合成手段を用いて製造することができる。一般に、本明細書において特定するような技術は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）に記述されているように、当該技術分野において周知である。これらの技術は、他の生物体における本発明の核酸配列の相同物をクローン化するために用いることができる。
【００５３】
本発明による核酸もしくはオリゴヌクレオチドは、顕示標識（ｒｅｖｅａｌｉｎｇ  ｌａｂｅｌ）を保有することができる。適当な標識には、３２Ｐ、３３Ｐもしくは３５Ｓのような放射性同位体、酵素標識もしくはビオチンのような他のタンパク質標識または蛍光マーカーが包含される。そのような標識は、本発明の核酸もしくはオリゴヌクレオチドに付加することができ、そして当該技術分野において既知である技術を用いて検出することができる。
【００５４】
本発明の別の態様によれば、上記に特定するとおりの本発明による核酸配列は、適当なベクター、好ましくは宿主細胞に形質転換、トランスフェクションもしくは感染させることができる発現ベクターに都合よく含むことができる。そのような発現ベクターにおいて、核酸は、適当な原核もしくは真核宿主細胞における本発明によるタンパク質の発現を保証するために、適当なプロモーターなどのような、宿主細胞における発現を可能にする一つもしくはそれ以上の制御配列に操作可能に連結される。該プロモーターは、構成的、誘導性、または細胞もしくは組織もしくは器官特異的のいずれかであることができる。発現ベクターは、都合よく、プラスミド、コスミド、ウイルス、もしくは当業者に既知である他の適当なベクターであることができる。本明細書において特定する発現ベクター及び宿主細胞もまた、本発明の一部をなす。該宿主細胞は、細菌、酵母、真菌、昆虫、哺乳動物もしくはヒト起源、または当該技術分野において既知である方法の少なくとも一つによって該ベクターを導入することができる任意の他の宿主からであることができる。しかしながら、好ましい宿主細胞は、酵母細胞もしくは真菌細胞のような下等真核細胞である。酵母及び真菌細胞は、本発明の発現タンパク質にそれらが由来する天然のタンパク質のものと同様の必要な翻訳後修飾を与えるので特に都合がよい。これらの修飾は、単離した場合にキット、方法などにおいて都合よく用いることができる該タンパク質の最適な構造を与える。
【００５５】
さらなる態様として、発現ベクターはさらに誘導性プロモーター及び／もしくはさらにレポーター分子を含んでなることができる。
【００５６】
本発明はさらに、薬剤としての使用のための上記に特定するとおりの核酸のいずれか一つに関する。
【００５７】
本発明によるヌクレオチド配列は、酵母もしくは真菌に関連する感染を処置するための選択的治療標的を提供するために特に都合がよい。例えば、本発明による核酸配列に結合することができるアンチセンス核酸は、対応するポリペプチドの発現を選択的に阻害するために用いることができ、関連する疾患もしくは疾病を減少して酵母及び真菌の低下した増殖もしくは死をもたらす。
【００５８】
本発明の核酸内に含んでなるプロモーターもしくは他の制御配列もまた本発明において予想され、該核酸制御配列はまた、下流のコードされるポリペプチドの発現の制御を妨げる化合物もしくはタンパク質の同定のための標的として用いることもできる。
【００５９】
さらに、酵母及びカンジダ核酸のヒト相同物はまた、（特定の）細胞のアポトーシスが所望されるもしくは所望されない状況の両方で、細胞のアポトーシスが実質的な役割を果たす疾病において有用であることもできる。
【００６０】
従って、本発明はまた、増殖性疾患を処置するためのまたはある種の疾患もしくは疾病におけるアポトーシスの防止のための本発明の核酸のいずれかもしくはそのヒト相同物の使用にも関する。上記のように、本発明はまた、増殖性疾患を処置するためのまたはある種の疾患もしくは疾病におけるアポトーシスの防止のための本発明の核酸のアンチセンス分子もしくはヒト相同物のいずれかのアンチセンスの使用にも関する。
【００６１】
該核酸、ヒト相同物及びアンチセンス分子はまた、上記の疾病を処置もしくは防止するための薬剤の製造に用いることもできる。
【００６２】
さらに別の態様によれば、本発明は、本発明の核酸によってコードすることができる少なくとも一つのポリペプチドに関する。
【００６３】
本発明はまた、酵母もしくは真菌と関連する疾病を処置する薬剤の製造のための、酵母もしくは真菌のプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路に関与するポリペプチドの使用にも関し、該ポリペプチドは、
（ａ）配列番号１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４、２２６、２２８、２３０、２３２、２３４、２３６、２３８、２４０、２４２、２４４、２４６、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３２４、３２６、３２８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、６９２、６９４、６９６、６９８、７００、７０２、７０４、７０６、７０８、７１０、７１２、７１４、７１６、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２のいずれかにおいて示すとおりのアミノ酸配列を有するタンパク質、または該タンパク質の機能性同等物、誘導体もしくは生物学的前駆体をコードするタンパク質；
（ｂ）配列番号１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４、２２６、２２８、２３０、２３２、２３４、２３６、２３８、２４０、２４２、２４４、２４６、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３２４、３２６、３２８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、６９２、６９４、６９６、６９８、７００、７０２、７０４、７０６、７０８、７１０、７１２、７１４、７１６、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２のいずれかによって示すとおりのアミノ酸配列のいずれかに７０％より多く類似する、好ましくは７５％もしくは８０％より多く類似する、より好ましくは８５％、９０％もしくは９５％より多く類似する、そして最も好ましくは９７％より多く類似するアミノ酸配列を有するタンパク質、
（ｃ）配列番号１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４、２２６、２２８、２３０、２３２、２３４、２３６、２３８、２４０、２４２、２４４、２４６、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３２４、３２６、３２８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、６９２、６９４、６９６、６９８、７００、７０２、７０４、７０６、７０８、７１０、７１２、７１４、７１６、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２のいずれかによって示すとおりのアミノ酸配列のいずれかに７０％より多く同一である、好ましくは７５％もしくは８０％より多く同一である、より好ましくは８５％、９０％もしくは９５％より多く同一である、そして最も好ましくは９７％より多く同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質、並びに
（ｄ）ａ）〜ｃ）において特定するとおりの該タンパク質のいずれかの機能性フラグメント、
から選択される。
【００６４】
タンパク質の「機能性フラグメント」という用語は、言及する元のタンパク質もしくはポリペプチドの欠失バージョンを意味する。欠失タンパク質配列は、長さが幅広く異なることができ；最小限のサイズは、言及する元の配列の少なくとも匹敵する機能及び／もしくは活性を有する配列を与えるために十分なサイズの配列であり、一方、最大のサイズは重要ではない。ある適用として、最大のサイズは、通常、元の配列の所望の活性及び／もしくは機能（一つもしくは複数）を与えるために必要とされるものより実質上大きくない。機能性フラグメントはまた、該タンパク質と同様の機能を有するサブユニットに関することもできる。典型的には、欠失アミノ酸配列は、約５〜約６０アミノ酸の長さの範囲である。しかしながら、さらに典型的には、配列は、最高約５０アミノ酸の長さ、好ましくは最高約６０アミノ酸である。通常、少なくとも約１０、１２もしくは１５アミノ酸の配列を選択することが望ましい。
【００６５】
機能性フラグメントには、本発明によるタンパク質に特異的なもしくは特有のエピトープを含んでなるものが包含される。エピトープは、例えば、Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）に記述されているようなペプチド走査技術を用いて決定することができる。好ましい機能性フラグメントは、少なくとも例えば５、１０、２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５もしくは２００アミノ酸の長さを有する。
【００６６】
サッカロミセス・セレビシエからの本発明に従って用いるポリペプチドを配列番号１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４、２２６、２２８、２３０、２３２、２３４、２３６、２３８、２４０、２４２、２４４、２４６、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３２４、３２６、３２８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、６９２、６９４、６９６、６９８、７００、７０２、７０４、７０６、７０８、７１０、７１２、７１４及び７１６によって示す。また、本発明によるのは配列番号３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２によって示すとおりのカンジダ・アルビカンスからのポリペプチドの使用；並びに配列番号６７６、６７８、６８０、６８２、６８４および６８６によって示すとおりのヒトポリペプチドの使用である。
【００６７】
従って、好ましい態様によれば、本発明は：
（ａ）配列番号３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２のいずれかにおいて示すとおりのアミノ酸配列を有するポリペプチド、または該タンパク質の機能性同等物、誘導体もしくは生物学的前駆体をコードするポリペプチド；
（ｂ）配列番号３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２のいずれかによって示すとおりのアミノ酸配列のいずれかに７０％より多く類似する、好ましくは７５％もしくは８０％より多く類似する、より好ましくは８５％、９０％もしくは９５％より多く類似する、そして最も好ましくは９７％より多く類似するアミノ酸配列を有するポリペプチド；
（ｃ）配列番号３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２のいずれかによって示すとおりのアミノ酸配列のいずれかに７０％より多く同一である、好ましくは７５％もしくは８０％より多く同一である、より好ましくは８５％、９０％もしくは９５％より多く同一である、そして最も好ましくは９７％より多く同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチド；
ｄ）ａ）〜ｃ）において特定するとおりの該ポリペプチドのいずれかの機能性フラグメント、
から選択される、酵母もしくは真菌、例えばカンジダ種のプログラムされた細胞死の経路に関与する単離されたポリペプチドに関する。
【００６８】
さらに好ましい態様によれば、本発明は：
（ａ）配列番号６７６、６７８、６８０、６８２、６８４及び６８６のいずれかにおいて示すとおりのアミノ酸配列を有するポリペプチド、または該タンパク質の機能性同等物、誘導体もしくは生物学的前駆体をコードするポリペプチド；
（ｂ）配列番号６７６、６７８、６８０、６８２、６８４及び６８６のいずれかによって示すとおりのアミノ酸配列のいずれかに７０％より多く類似する、好ましくは７５％もしくは８０％より多く類似する、より好ましくは８５％、９０％もしくは９５％より多く類似する、そして最も好ましくは９７％より多く類似するアミノ酸配列を有するポリペプチド；
（ｃ）配列番号６７６、６７８、６８０、６８２、６８４及び６８６のいずれかによって示すとおりのアミノ酸配列のいずれかに７０％より多く同一である、好ましくは７５％もしくは８０％より多く同一である、より好ましくは８５％、９０％もしくは９５％より多く同一である、そして最も好ましくは９７％より多く同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチド；並びに
ｄ）ａ）〜ｃ）において特定するとおりの該ポリペプチドのいずれかの機能性フラグメント、
から選択される、哺乳動物細胞のプログラムされた細胞死の経路に関与する単離されたポリペプチドに関する。
【００６９】
本発明はまた、薬剤としての使用のための本発明及び上記のポリペプチドにも関する。
【００７０】
本発明の核酸、アンチセンス分子、ポリペプチドの少なくとも一つを場合によりその製薬学的に許容しうる担体、希釈剤もしくは賦形剤と一緒に含んでなる製薬学的もしくは殺菌・殺カビ組成物もまた本発明の一部である。
【００７１】
上記のポリペプチドまたはそのヒトもしくは哺乳動物相同物はまた、増殖性疾患を処置するためにもしくはある種の疾病におけるアポトーシスの防止のために用いることもできる。
【００７２】
本発明はさらに、本発明の核酸分子もしくはそのヒト相同物、本発明の核酸の少なくとも一つに対するアンチセンス分子もしくは該核酸の哺乳動物相同物に対するアンチセンス分子、または本発明のポリペプチドもしくはそのヒト相同物をその製薬学的に許容しうる担体、希釈剤もしくは賦形剤と一緒に含んでなる、増殖性疾患を処置するためのもしくはある種の疾病におけるアポトーシスの防止のための薬剤としての使用のための製薬学的組成物に関する。
【００７３】
本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質はまた、保存的アミノ酸変異を有する上記に特定するとおりの本発明のポリペプチドのいずれかの変異体を包含することもできる。
【００７４】
本発明はまた、製薬学的に許容しうる担体中に本発明の少なくとも一つの（組換え）核酸分子もしくは少なくとも一つの（組換え）ポリペプチドを含んでなる哺乳動物を免疫するためのワクチンにも関する。好ましいワクチンは、酵母及び真菌によって引き起こされる感染に対する免疫に用いることができるものである。他の好ましいワクチンは、増殖性疾患に対してもしくはある種の疾病におけるアポトーシスを防ぐために哺乳動物を免疫するのに用いることができる。
【００７５】
製薬学的に許容しうる担体には、組成物を与える個体にとって有害な抗体の生産をそれ自体が誘導しない任意の担体が包含される。適当な担体は、典型的には、タンパク質、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマーアミノ酸、アミノ酸コポリマーのような大きいゆっくり代謝する高分子；及び不活性ウイルス粒子である。そのような担体は、当業者に周知である。
【００７６】
「ワクチン」は、部分的であろうと完全であろうと、酵母もしくは真菌によって引き起こされる感染に対する防御を引き出すことができる免疫原性組成物である。
【００７７】
該ワクチン組成物は、予防並びに治療ワクチン組成物を包含することができる。ワクチンをある種の感染もしくは疾病に対して個体を防御するために用いる場合、それを予防ワクチンと呼ぶ。ワクチンはまた、個体の処置にも有用であることができ、この場合、それを治療ワクチンと呼ぶ。
【００７８】
「治療」という用語は、酵母もしくは真菌によって引き起こされる感染を処置することができるまたは増殖性疾患を処置することができる組成物をさす。
【００７９】
本発明のポリペプチドもしくはタンパク質の一つもしくはそれ以上のエピトープに特異的に結合することができるモノクローナルもしくはポリクローナルの抗体もまた本発明内に包含される。本発明のポリペプチドを配列番号１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４、２２６、２２８、２３０、２３２、２３４、２３６、２３８、２４０、２４２、２４４、２４６、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３２４、３２６、３２８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２、３８４、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００、４０２、４０４、４０６、４０８、４１０、４１２、４１４、４１６、４１８、４２０、４２２、４２４、４２６、４２８、４３０、４３２、４３４、４３６、４３８、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５２、４５４、４５６、４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７２、４７４、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８、４９０、４９２、４９４、４９６、４９８、５００、５０２、５０４、５０６、５０８、５１０、５１２、５１４、５１６、５１８、５２０、５２２、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、５３４、５３６、５３８、５４０、５４２、５４４、５４６、５４８、５５０、５５２、５５４、５５６、５５８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５６０、５６２、５６４、５６６、５６８、５７０、５７２、５７４、５７６、５７８、５８０、５８２、５８４、５８６、５８８、５９０、５９２、５９４、５９６、５９８、６００、６０２、６０４、６０６、６０８、６１０、６１２、６１４、６１６、６１８、６２０、６２２、６２４、６２６、６２８、６３０、６３２、６３４、６３６、６３８、６４０、６４２、６４４、６４６、６４８、６５０、６５２、６５４、６５６、６５８、６６０、６６２、６６４、６６６、６６８、６７０、６７２、６７４、６８８、６９２、６９４、６９６、６９８、７００、７０２、７０４、７０６、７０８、７１０、７１２、７１４、７１６、７１８、７２０、７２２、７２４、７２６、７２８、７３０及び７３２において示す。
【００８０】
「特異的結合」という用語は、他のタンパク質と抗体との交差反応が実質的にないことを意味する。
【００８１】
本発明による抗体は、当業者に既知である技術に従って製造することができる。モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７９）によって記述されているような通常のハイブリドーマ技術を用いて製造することができる。ポリクローナル抗体もまた、当業者に周知である通常の技術を用いて製造することができ、そしてそれはマウスのような宿主動物に本発明によるタンパク質もしくはエピトープを接種すること及び免疫血清を回収することを含んでなる。本発明にはまた、例えば、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）及びＦ（ａｂ’）２フラグメント並びに一本鎖抗体のような、全抗体の結合活性を維持するそのフラグメントが包含される。
【００８２】
本発明の抗体は、先に特定するとおりの酵母もしくはカンジダポリペプチドの少なくとも一つにまたはそのヒト相同物にまたは該ポリペプチドもしくは該ヒト相同物の特定のエピトープに特異的に結合することができる。本発明はまた、増殖性疾患を処置及び／もしくは防止及び／もしくは軽減することにおけるまたはある種の疾病におけるアポトーシスの防止のための該抗体の使用にも関する。該抗体はまた、増殖性疾患を処置及び／もしくは防止及び／もしくは軽減するためのまたはある種の疾病におけるアポトーシスの防止のための薬剤の製造に用いることもできる。
【００８３】
本発明による抗体はまた、本発明によるポリペプチドの存在を検出する方法において用いることもでき、この方法は、抗体をサンプルと反応させること及び該抗体に結合する任意のタンパク質を同定することを含んでなる。本発明による抗体及び抗体を該サンプルと反応させる手段を含んでなる該方法を行うためのキットもまた提供することができる。
【００８４】
本発明による抗体は、薬剤として用いることができ、または製薬学的組成物に含んでなることができる。さらに特定の態様によれば、抗体は、酵母及び真菌と関連する疾病を処置するための薬剤の製造において用いることができ、ここで、酵母もしくは真菌は、カンジダ種、アスペルギルス種、ミクロスポルム種、トリコフィトン種、フサリウム種、ザイゴミケス種、ボトリティス種、クラドスポリウム種、マラセチア種、エピデルモフィトン・フロコサム、ブラストミセス・デルマティティジス、コクシジオイデス・イミティス、ヒストプラスマ・カプスラツム、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシス、クリプトコックス・ネオフォルマンス及びスポロトリクス・シェンキイから選択されるが、これらに限定されるものではない。
【００８５】
本発明はまた、防御抗体もしくは防御Ｔ細胞応答の生成を刺激するために有効な量で本発明の少なくとも一つのポリペプチドを含有する組成物を哺乳動物に投与することを含んでなる、酵母もしくは真菌の感染を防ぐ方法にも関する。別の態様によれば、本発明は、本発明のヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドの発現／生産を選択的に阻害、誘導もしくは妨害する化合物もしくはポリペプチド、または本発明によるヌクレオチド配列から発現されるポリペプチドの機能性を選択的に阻害、活性化もしくは妨害する化合物、またはこれらのポリペプチドが関与する代謝経路を選択的に阻害、誘導もしくは妨害する化合物を同定する方法を提供する。化合物（もしくはポリペプチド）は、アゴニストもしくはアンタゴニスト特性を保有することができる。スクリーニングする化合物（及びポリペプチド）は、細胞外、細胞内、生物学的もしくは化学的起源であることができる。
【００８６】
該化合物もしくはポリペプチドの同定のための異なる代わりの方法は、本発明の一部をなす。
【００８７】
特定の態様によれば、本発明は、酵母及び真菌のプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路に関与するポリペプチドもしくは該ポリペプチドが関与する代謝経路に関与するポリペプチドの発現もしくは機能性を選択的に調節する化合物を同定する方法に関し、この方法は、（ａ）試験する化合物と一つもしくはそれ以上の野生型細胞とを接触させることに加えて、本発明の核酸配列の少なくとも一つのアンチセンス配列を含んでなりその発現が該ポリペプチドの不十分な発現をもたらす発現ベクターで形質転換、トランスフェクションもしくは感染した酵母もしくは真菌細胞と該化合物とを接触させること、（ｂ）該野生型細胞と比較した該形質転換、トランスフェクションもしくは感染細胞の増殖及び／もしくは死亡率もしくは活性をモニターすること；ここで、該形質転換、トランスフェクションもしくは感染酵母もしくは真菌細胞の差次的増殖もしくは活性は、同じもしくは匹敵する経路におけるポリペプチドに対する該化合物の選択作用を示す、（ｃ）あるいはまた、試験する化合物と接触させなかった形質転換、トランスフェクションもしくは感染細胞と比較した該形質転換、トランスフェクションもしくは感染細胞の増殖及び／もしくは死亡率及び／もしくは活性をモニターすること；ここで、該突然変異酵母もしくは真菌細胞の差次的増殖もしくは活性は、同じもしくは匹敵する経路におけるポリペプチドに対する該化合物の選択作用を示す、（ｄ）あるいはまた、試験する化合物の添加によって引き起こされる該形質転換、トランスフェクションもしくは感染細胞における成分の形態学的及び／もしくは機能的性質の変化をモニターすること、並びに、（ｅ）場合により化合物を同定することを含んでなる。
【００８８】
酵母もしくは真菌のプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路に関与するポリペプチドもしくは該化合物が関与する代謝経路に関与するポリペプチドの発現もしくは機能性を選択的に調節する化合物を同定する代わりの方法は、遺伝子活性化、遺伝子不活性化、遺伝子調節もしくは遺伝子抑制をもたらす当該技術分野において既知である任意の他の方法の使用を含んでなることができる。
【００８９】
上記の方法の別の代わりの方法は、（ａ）試験する化合物と野生型細胞とを接触させることに加えて、本発明の核酸もしくはポリペプチドの少なくとも一つの過剰発現もしくは不十分な発現が改変によってもたらされる遺伝子的に改変された酵母もしくは真菌と該化合物とを接触させること、ここで、該核酸もしくはポリペプチドの過剰発現もしくは不十分な発現は、該遺伝子的に改変された酵母もしくは真菌のアポトーシスを防止、遅延もしくは感作する、（ｂ）該野生型細胞と比較した該遺伝子的に改変された酵母もしくは真菌細胞の増殖及び／もしくは死亡率及び／もしくは活性をモニターすること；ここで、該遺伝子的に改変された酵母もしくは真菌細胞の差次的増殖もしくは活性は、同じもしくは匹敵する経路におけるポリペプチドに対する該化合物の選択作用を示す、（ｃ）あるいはまた、試験する化合物と接触させなかった遺伝子的に改変された細胞と比較した該遺伝子的に改変された細胞の増殖及び／もしくは死亡率及び／もしくは活性をモニターすること；ここで、該遺伝子的に改変された酵母もしくは真菌細胞の差次的増殖もしくは活性は、同じもしくは匹敵する経路におけるポリペプチドに対する該化合物の選択作用を示す、（ｄ）あるいはまた、試験する化合物の添加によって引き起こされる該遺伝子的に改変された細胞における成分の形態学的及び／もしくは機能的性質の変化をモニターすること、並びに、（ｅ）場合により化合物を同定することを含んでなる。
【００９０】
本発明はまた、酵母もしくは真菌のプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路に関与するポリペプチドの発現を選択的に調節する化合物を同定する方法にも関し、この方法は、（ａ）レポーター遺伝子とインフレームで連結した本発明の核酸分子のプロモーター配列を含んでなる発現ベクターで形質転換、トランスフェクションもしくは感染した宿主細胞を接触させること、及び（ｂ）試験する化合物の添加によって引き起こされる該レポーター遺伝子の増加もしくは減少した発現をモニターすることを含んでなる。これは、転写活性化の全て／大部分の面に対する化合物の影響を分析することを可能にする。あるいはまた、ｍＲＮＡの安定性、翻訳及びタンパク質の安定性に対する化合物の影響を試験するために追加の試験を通常行うことができる。全てのこれらの面は、対応するタンパク質の濃度に影響を与え、そしてその結果として細胞の代謝に対するこれらの作用に影響を及ぼす。
【００９１】
本発明はさらに、酵母もしくは真菌のプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路に関与するポリペプチドに結合するかもしくはその性質を調節する化合物もしくはポリペプチドを同定する方法に関し、この方法は、（ａ）試験する化合物もしくはポリペプチドを本発明のポリペプチドの少なくとも一つと接触させること、（ｂ）試験する化合物もしくはポリペプチドと該ポリペプチド間で形成される複合体を検出すること、（ｃ）あるいはまた、試験する化合物もしくはポリペプチドの添加によって引き起こされる、該ポリペプチドと受容体／結合相手間の複合体形成の減少／増加を調べること、（ｃ）あるいはまた、試験する化合物もしくはポリペプチドの添加によって引き起こされる、ポリペプチドの機能活性の改変を調べること、及び、（ｄ）場合により化合物もしくはポリペプチドを同定することを含んでなる。
【００９２】
本発明はまた、（ａ）本発明のポリペプチド及び該ポリペプチドと相互作用するタンパク質もしくは上記のような方法によって得ることができる相互作用するポリペプチドを発現する２ハイブリッドスクリーニング系を準備すること、（ｂ）ａ）において特定するとおりの発現タンパク質によって形成される複合体と化合物とを相互作用させること、（ｃ）第二の複合体を検出すること、ここで、該第二の複合体の存在によって、該ポリペプチドの一つにもしくは該第二の複合体に特異的に結合する化合物が同定される、及び場合により（ｄ）化合物を同定することの工程を含んでなる、酵母及び真菌のプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路に関与するポリペプチドと相互作用する化合物を同定する方法にも関する。
【００９３】
別の態様によれば、本発明は、酵母もしくは真菌のプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路に関与するポリペプチドの発現を選択的に調節する化合物を同定する方法に関し、この方法は：（ａ）レポーター遺伝子とインフレームで連結した本発明の核酸のプロモーター配列を含んでなる発現ベクターで形質転換、トランスフェクションもしくは感染した宿主細胞を接触させること、（ｂ）試験する化合物の添加によって引き起こされる該レポーター遺伝子の増加もしくは減少した発現をモニターすること、及び場合により（ｃ）化合物を同定することを含んでなる。
【００９４】
本発明のさらに別の態様は、（ａ）餌として本発明の核酸によってもしくはベクターのいずれかによってコードされるポリペプチド及び餌食としてサッカロミセス・セレビシエｃＤＮＡライブラリーを用いる２ハイブリッド系を準備すること、（ｂ）該ポリペプチド及び該ｃＤＮＡライブラリーによってコードされるサッカロミセス・セレビシエポリペプチド間の相互作用を検出すること、並びに場合により（ｃ）該サッカロミセス・セレビシエポリペプチドを同定することの工程を含んでなるプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路に関与するポリペプチドを同定する方法である。
【００９５】
「細胞」という用語は、上記の方法において用いる場合、細菌、酵母、真菌、植物もしくはヒト細胞のような、しかしこれらに限定されるものではない任意のタイプの細胞に関する。
【００９６】
この方法を用いて見出される化合物は、野生型病原性株／腫瘍細胞を処置するための薬剤としてのそれらの有用性を確かめるために野生型細胞を殺すこともしくはその増殖を阻害することにおけるそれらの効率に関してさらに試験することができる。
【００９７】
本発明によれば、「突然変異」という用語には、該核酸もしくはポリペプチドの発現に影響を及ぼす、該ポリペプチドをコードする核酸における、または該細胞のゲノムの異なる位置での点突然変異、欠失、挿入、重複もしくは任意の改変が包含される。点突然変異が起こる場合、ヌクレオチドの数は、元の配列と比較して同一であり；ヌクレオチド配列における変異のみを認めることができる。これは、ヌクレオチドの数が野生型配列において認められる数と異なりそしてその結果としてヌクレオチド配列の変異にも反映する他の記載する突然変異と対照的である。
【００９８】
モニターすることができる細胞成分の形態学的及び／もしくは機能的性質の変化には、例えば、異常な細胞形態、核断片化、ＤＮＡ切断もしくはカスパーゼのようなある種の酵素の発現の変化のような形態学的及び分子的変化、並びにミトコンドリアの膜電位もしくは活性及びミトコンドリアからのシトクロムｃの放出の変化をモニターすることが包含される。全てのこれらの変化は、試験する化合物に接触させる全細胞上でモニターすることができる。
【００９９】
複合体形成の検出は、いくつかの方法を用いて行うことができる。第一に、ポリペプチド上への化合物の結合は、古典的な結合試験を用いて調べることができ：結合相手、化合物もしくはポリペプチドの一方を標識し、そして両方の相互作用を測定する。これらの試験の大部分は以下の工程を含んでなる：結合を可能にする条件において両方の結合相手をインキュベーションすること、両相手間で結合される複合体に存在する結合標識からの遊離標識の分離、及び形成された標識複合体の数を測定すること。遊離及び結合標識の分離は、濾過、遠心分離もしくは当業者が既知であるような他の手段によって行うことができる。他の技術は、そのような分離工程の必要なしに複合体形成の視覚化を可能にする。例えば、ＳＰＡ（シンチレーション近接アッセイ）ビーズを用いる試験系は、放射性３Ｈがシンチレーション液に存在する場合にのみ測定できるという原理に基づく。ＳＰＡビーズはシンチレーション液を含有し、そして結合相手の一方で被覆することができる。放射性標識したもう一方の結合相手がこのビーズに近づき、そして結合すると、シグナルが検出され、複合体を視覚化することを可能にする。シンチレーションビーズ上への放射性化合物の結合は、検出可能なシグナルをもたらすために必要とされ：溶液中に遊離したままでいる結合していない放射性の相手は、検出可能なシグナルをもたらさない。
【０１００】
そのような方法において用いる本発明によるタンパク質もしくはペプチドフラグメントは、例えば、溶液中であるかもしくは上記のような懸濁したビーズ上に被覆することができる。あるいはまた、これらを固体支持体につけるか、細胞もしくはファージ表面上に有するか、または細胞内に配置することができる。
【０１０１】
タンパク質もしくはペプチドフラグメントを固体支持体上に被覆する場合、それらを多数の化合物に対するそれらの結合親和性に関して試験することができる。これらは、本発明によるポリペプチドに対する適当な結合親和性を有する化合物を同定するために異なる種類の高処理量スクリーニングにおいて用いることができる。プラットフォーム技術もしくはＳＰＲ（以下参照）に基づく技術を適用することができる。
【０１０２】
例えば、本発明のタンパク質及び試験する化合物間の複合体の形成を測定することができる。あるいはまた、試験する化合物によって引き起こされる本発明によるタンパク質及び受容体／結合相手間の複合体形成の減少もしくは増加を調べることができる。
【０１０３】
本発明のポリペプチドと相互作用するタンパク質は、Ｃｈｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）によって最初に提示された２ハイブリッドベクター系を用いてタンパク質−タンパク質相互作用を調べることにより同定することができる。
【０１０４】
この技術は、レポーター遺伝子を活性化する転写因子のインビボにおける機能的再構成に基づく。さらに特に、この技術は、ＤＮＡ結合ドメイン及び活性化ドメインを有する転写因子によって調節されるプロモーターの制御下のレポーター遺伝子を含んでなるＤＮＡ構築物を有する適切な宿主細胞を準備すること、本発明による核酸配列のフラグメントもしくは全て及び転写因子の該ＤＮＡ結合ドメインもしくは該活性化ドメインのいずれかの第一の融合物をコードする第一のハイブリッドＤＮＡ配列を宿主細胞において発現させること、第一の融合物に含まれない転写因子のＤＮＡ結合もしくは活性化ドメインと一緒に調べる推定の結合タンパク質をコードするライブラリーなどのような少なくとも一つの第二のハイブリッドＤＮＡ配列を宿主において発現させること；宿主細胞における任意のレポーター遺伝子産物の存在を検出することによって本発明によるタンパク質と調べるタンパク質との任意の結合を検出すること；場合により結合タンパク質をコードする第二のハイブリッドＤＮＡ配列を単離することを含んでなる。
【０１０５】
そのような技術の例は、酵母におけるＧＡＬ４タンパク質を利用する。Ｇａｌ４は、酵母におけるガラクトース代謝の転写アクチベーターであり、そしてガラクトース代謝遺伝子の上流のアクチベーターに結合する別個のドメイン並びにタンパク質結合ドメインを有する。ヌクレオチドベクターを構築することができ、それらの一方は、Ｇａｌ４のＤＮＡ結合ドメインをコードするヌクレオチド残基を含んでなる。これらの結合ドメイン残基は、例えば本発明による核酸のような既知のタンパク質をコードする配列に融合させることができる。もう一方のベクターは、Ｇａｌ４のタンパク質結合ドメインをコードする残基を含んでなる。これらの残基は、試験タンパク質をコードする残基に融合させる。本発明による核酸によってコードされるポリペプチド及び試験するタンパク質間の任意の相互作用は、これらのベクターを形質転換したＧＡＬ４転写欠損酵母細胞におけるレポーター分子の転写活性化をもたらす。好ましくは、酵母ガラクトース代謝遺伝子の転写の回復の際にβ−ガラクトシダーゼのようなレポーター分子が活性化される。あるいはまた、ＥＧＦＰ（増強（ｅｎｈａｎｃｅｄ）グリーン蛍光タンパク質）もしくはｈＥＧＦＰのような他のレポータータンパク質を用いることができる。この後者は減少した寿命を有し、系が、調べる結合相手の相互作用を向上する化合物をスクリーニングすることを可能にする。
【０１０６】
２ハイブリッド法は、最初に酵母に対して開発され、そして酵母もしくは真菌を殺すことにおいて有効な化合物を探索する場合に理想的なスクリーニング系である。実際、この系において発現されるタンパク質は、病原性酵母株において認められるような正しい修飾をたいてい保有する。さらに、この試験系において有効な化合物は、細胞に入ることができる化合物をスクリーニング及び選択することを可能にし、この選択は、インビトロ試験系を用いる場合に可能ではない。化合物が哺乳動物細胞を標的とすることが必要とされる場合、調べるタンパク質の修飾は異なり、対応するタンパク質の構造を変えることができる。さらに、酵母での作業は、哺乳動物細胞膜を通常は越えることができるある種の化合物が細胞に入るのを妨げるかもしれない。その結果として、この目的のための哺乳動物２ハイブリッド系での作業は、哺乳動物細胞に入ることができる化合物の即座の選択をすでに与える。
【０１０７】
代わりのインビトロ法をタンパク質−タンパク質相互作用を調べるために用いることができる。インビトロにおけるタンパク質相互作用分析は、特異性、親和性、及び構造−機能関係に関する有益な情報を提供することによって完全な細胞におけるそれらの役割の解明に役立つことができる。市販されているバイオセンサー技術のこの数年間における出現でこの点における著しい進歩が起こっている。これは、リアルタイムで高分子相互作用を調べることを可能にし、運動学的分析、親和性測定、競合研究などに用いることができる大量の質の高いデータを提供する。バイオセンサー分析の主要な利点は、相互作用する成分の一方を標識しそして次に遊離分子から結合分子を分離する必要条件がないこと、実験方法を簡略化しそしていっそう正確な測定を提供することである。表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）の原理は、化合物もしくはタンパク質が、固定した相手分子に結合する場合の媒質の屈折率の変化の検出に基づく。ＳＰＲ技術には、相互作用する相手の一方をチップ表面に載せること、続いて第二の結合相手もしくはさらなる分子の表面灌流を必要とする。第二の相手は、精製された生成物として利用可能であることができるが、あるいはまた、この相手を含有する複合懸濁液を用いることもできる。２つもしくはそれ以上の化合物の相互作用を分析することができ、あるいはまた、相互に向かうこの結合親和性を妨害もしくは増大する化合物を同定することができる。
【０１０８】
ＳＰＲはタンパク質−タンパク質相互作用に限定されず：適当なサイズを有する任意の高分子は、バイオセンサー表面と接触して媒質の屈折率を変え、従ってシグナルを与える。タンパク質−ＤＮＡ相互作用並びにタンパク質−脂質相互作用で研究がなされている。さらに、完全なウイルス及び細胞さえもまた、受容体、レクチンなどへのそれらの結合を分析するために、バイオセンサー表面上に注入することができる。
【０１０９】
あるいはまた、ＭＭＲもまた、タンパク質−タンパク質もしくはＤＮＡ−タンパク質相互作用の詳細な研究のための優れた手段である。一方の化合物を１５Ｎもしくは１３Ｃで同位体標識する同位体編集（ｅｄｉｔｅｄ）もしくは同位体濾過実験は、これらの複合体を調べるための理想的な方法である。この方法は、分子相互作用を妨害もしくは増大する化合物の高処理量分析を与えない。それにもかかわらず、中間もしくは低処理量系を、高処理量アッセイによって得られる結果を確かめるためにもしくは結合相手のいずれも標識しない場合に用いることができる。相互作用を調べるために用いることができる他の技術は：オーバーレイ、リガンドブロッティング、バンドシフト、共免疫沈降法、サイズ排除クロマトグラフィー及びミクロ熱量測定である（“Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ”Ｅｄ．Ｃｌｅｇｇ  Ｒ．Ａ．Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎｅｗ  Ｙｅｒｓｅｙ）。
【０１１０】
アポトーシスをもたらす経路を調節する化合物は、本発明のポリペプチドの活性を変えることができる。従って、本発明のポリペプチドの改変されたタンパク質活性を探索するスクリーニング試験を設定することができる。アミノ酸配列に基づいてポリペプチドの潜在的機能が予見されるかもしれず；活性を確かめることができ、そして対応する活性試験を開始することができる。
【０１１１】
あるいはまた、タンパク質の安定性、翻訳後修飾、前駆体プロセシング及びタンパク質トランスロケーションへの化合物の影響を試験するために追加の試験を行うことができる。全てのこれらの面は、対応するタンパク質の濃度及び／もしくは活性に影響を与え、そしてその結果として細胞の代謝に対するこれらの作用に影響を及ぼす。ここでもまた、中間もしくは低処理量系を、高処理量アッセイによって得られる結果を確かめるために用いることができる。腫瘍細胞を標的とするために化合物を見出す必要がある場合、アポトーシス経路の刺激に焦点を合わせてスクリーニングアッセイを用いなければならない。従って、本発明はまた、治療薬をスクリーニングするために用いることができる本発明によるポリペプチドを発現する腫瘍組織もしくは細胞を含んでなるインビトロ及びインビボモデル系にも関する。インビボモデル系は、化合物効能に関して試験することを可能にするだけでなく、これらの化合物の毒性を試験することもできる。本発明において記述する方法のいずれかを用いて同定される化合物には、酵母及び真菌の細胞死を促進することにおいてそれらの効果を示す化合物が包含されるだけでなく、細胞死を防止もしくは遅延する化合物もまた包含される。後者の化合物は、病原体もしくは有毒な環境成分によって引き起こされる可能性があるヒト及び他の哺乳動物における内因性酵母もしくは真菌のアポトーシスを防止もしくは遅延するために用いることができる。
【０１１２】
本発明の好ましい態様によれば、記述する方法のいずれかによる酵母もしくは真菌は、カンジダ種、アスペルギルス種、ミクロスポルム種、トリコフィトン種、フサリウム種、ザイゴミケス種、ボトリティス種、クラドスポリウム種、マラセチア種、エピデルモフィトン・フロコサム、ブラストミセス・デルマティティジス、コクシジオイデス・イミティス、ヒストプラスマ・カプスラツム、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシス、クリプトコックス・ネオフォルマンス及びスポロトリクス・シェンキイから選択される。
【０１１３】
本発明はまた、本発明の方法のいずれかを用いて同定される化合物にも関する。本発明による方法を用いて同定できるもしくは同定される化合物は、薬剤として都合よく用いることができる。本発明はまた、本発明の方法によって得ることができる化合物を適当な製薬学的に許容しうる担体と混合することを含んでなる酵母もしくは真菌と関連する疾病を処置する方法にも関する。
【０１１４】
本発明はさらに、上記に同定するとおりの化合物を適当な製薬学的に許容しうる担体と混合することを含んでなる酵母もしくは真菌と関連する疾病を処置するための製薬学的組成物を製造する方法に関する。本発明はまた、該製薬学的組成物にも関する。
【０１１５】
本発明の化合物もしくは製薬学的組成物は、酵母及び真菌感染と関連する疾病もしくは症状を処置するための薬剤の製造に用いることができ、より好ましくは、ここで、酵母もしくは真菌は、カンジダ種、アスペルギルス種、ミクロスポルム種、トリコフィトン種、フサリウム種、ザイゴミケス種、ボトリティス種、クラドスポリウム種、マラセチア種、エピデルモフィトン・フロコサム、ブラストミセス・デルマティティジス、コクシジオイデス・イミティス、ヒストプラスマ・カプスラツム、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシス、クリプトコックス・ネオフォルマンス及びスポロトリクス・シェンキイから選択される。
【０１１６】
これらの化合物はまた、その製薬学的に許容しうる担体、希釈剤もしくは賦形剤と一緒に製薬学的組成物に都合よく含むこともできる。
【０１１７】
本発明による薬剤は、ヒトもしくは哺乳動物を処置するための殺菌・殺カビ性及び静真菌性化合物に関するだけでなく、植物を処置するための殺菌・殺カビ剤にも関する。
【０１１８】
さらに別の態様によれば、本発明は、本発明の核酸もしくはポリペプチドの少なくとも一つの過剰発現もしくは不十分な発現が改変によってもたらされる遺伝子的に改変された酵母もしくは真菌に関し、該核酸もしくはポリペプチドのこの過剰発現もしくは不十分な発現は、該遺伝子的に改変された酵母もしくは真菌のアポトーシスを防止、遅延もしくは感作する。これらの遺伝子的に改変された生物体は、ヒト及び他の哺乳動物の内因性微生物叢に対するプラス効果を有することができる。遺伝子的に改変された酵母もしくは真菌は、製薬学的組成物に含むことができ、または予防もしくは治療用途の薬剤の製造に用いることができる。
【０１１９】
ヒト及び他の哺乳動物の内因性微生物叢を改変する薬剤の製造のための本発明の方法によって得ることができる化合物、製薬学的組成物もしくは上記のような遺伝子的に改変された生物体の使用もまた本発明による。
【０１２０】
別の態様によれば、本発明は、本発明の核酸の少なくとも一つもしくはそのヒト相同物または本発明のポリペプチドの少なくとも一つもしくはそのヒト相同物の過剰発現もしくは不十分な発現が改変によってもたらされる遺伝子的に改変された哺乳動物細胞もしくは非ヒト生物体に関し、該核酸もしくはポリペプチドのこの過剰発現もしくは不十分な発現は、該遺伝子的に改変された哺乳動物細胞のもしくは該遺伝子的に改変された非ヒト生物体におけるアポトーシスを防止もしくは遅延する。
【０１２１】
好ましい態様によれば、本発明は、該改変が本発明の核酸の少なくとも一つに対するアンチセンス分子もしくは該核酸の哺乳動物相同物に対するアンチセンス分子の発現を含んでなる上記のような遺伝子的に改変された哺乳動物細胞もしくは非ヒト生物体に関する。
【０１２２】
本発明はまた、本発明の核酸配列の少なくとも一つもしくはそのヒト相同物及び／または本発明のポリペプチドの少なくとも一つもしくはそのヒト相同物及び／または本発明に記述するとおりの遺伝子的に改変された哺乳動物細胞もしくは非ヒト生物体の使用を含んでなるアポトーシスを刺激もしくは阻害する化合物を同定する方法にも関する。
【０１２３】
上記の方法において用いることができる酵母及び／もしくはカンジダ種配列の好ましいヒト相同物のいくつかの例を配列番号６７５〜６８６に示す。
【０１２４】
本発明はさらに、上記の方法に従って同定できる化合物及び薬剤としてのそれらの使用に関する。
【０１２５】
本発明はさらに、上記の方法に従って同定できる化合物を適当な製薬学的に許容しうる担体と混合することを含んでなる増殖性疾患を処置するためのまたはある種の疾病におけるアポトーシスを防ぐための製薬学的組成物を製造する方法に関する。
【０１２６】
本発明はまた、増殖性疾患を処置するためのもしくはある種の疾患におけるアポトーシスを防ぐための薬剤の製造のための、上記の方法によって得ることができる化合物の使用にも関する。
【０１２７】
さらに、本発明者等は、病原性酵母カンジダ・アルビカンスにおいてＢａｘタンパク質を過剰発現させ、そしてこれが同様の表現型をもたらすことを見出した。しかしながら、これらの結果は、この病原性生物体において適切に発現させることができる新規の合成ｂａｘ遺伝子を構築した後にのみ得ることができた。
【０１２８】
従って、本発明は：
ａ）配列番号１によって示すとおりの配列を含んでなる核酸；
ｂ）配列番号１の配列のフラグメントを含んでなりそして配列番号２によって示す配列の機能性フラグメントをコードする核酸、
ｃ）配列番号３〜１０のいずれかにおいて示すとおりの配列を含んでなる核酸、
ｄ）配列番号１によって示すとおりの核酸に、またはｂ）もしくはｃ）において特定するとおりの核酸に基づく核酸に７５％より多く同一である、好ましくは８０％、８５％、９０％もしくは９５％より多く同一である、最も好ましくは９７％より多く同一である核酸、及び
ｅ）介在するＤＮＡ配列によって遮られる（ａ）〜（ｉ）のいずれか一つにおいて特定するとおりの核酸、
あるいは（ａ）〜（ｄ）において特定するとおりの該核酸のいずれかの相補物に相当する核酸、
の群から選択されるカンジダ種における発現のための合成ＢＡＸ遺伝子に相当する単離された核酸に関する。
【０１２９】
合成ＢＡＸ遺伝子は、Ｂａｘ−αをコードする遺伝子と７３．７％の同一性を示す。本発明はまた、配列番号１において示す配列に行った選択の代わりに他の同様に頻繁に使用されるカンジダ種コドンを用いる核酸にも関することが明らかであるはずである（表８）。
【０１３０】
本発明によるそして上に特に記述する全ての核酸は、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、合成ＤＮＡ、もしくはＴがＵで置換されているＲＮＡであることができることは明らかであるはずである。
【０１３１】
本発明の別の態様によれば、上記に特定するような本発明による核酸配列は、適当なベクター、好ましくは、宿主細胞に形質転換、トランスフェクションもしくは感染することができる発現ベクターに都合よく含むことができる。そのような発現ベクターにおいて、核酸は、適当な原核もしくは真核宿主細胞における本発明によるタンパク質の発現を保証するために、適当なプロモーターなどのような、宿主細胞における発現を可能にする一つもしくはそれ以上の制御配列に操作可能に連結される。この点で、構成的もしくは誘導性プロモーターを用いることができる。
【０１３２】
実施例において記述するように、本発明はまた、酵母ＧＦＰ遺伝子のようなしかしこれに限定されるものではないキャリヤー遺伝子との融合物として、合成ＢＡＸもしくはその一部を含んでなる核酸及び構築物にも関する。発現構築物において融合相手の完全な遺伝子を含む必要はなく、従って、本発明は、合成ＢＡＸ遺伝子及びその融合相手から生じることができる様々な融合生成物に関する。
【０１３３】
合成構築物もしくは融合タンパク質を含んでなる発現ベクター及び本明細書において特定する宿主細胞もまた、本発明の一部をなす。該宿主細胞は細菌、酵母、真菌、昆虫、哺乳動物もしくはヒト起源からであることができる。本発明による興味深い宿主細胞は、カンジダ種細胞である。
【０１３４】
別の態様として、発現ベクターはさらに誘導性プロモーター及び／もしくはさらにレポーター分子を含んでなることができる。
【０１３５】
本発明はまた、カンジダ種におけるプログラムされた細胞死を誘導するための上記のようなベクターにも関する。
【０１３６】
本発明はさらにまた、プログラムされた細胞死を最終的にもたらす少なくとも一つの経路の開始が該改変によってもたらされる上記のような遺伝子的に改変された酵母もしくは真菌細胞にも関する。
【０１３７】
本発明はまた、プログラムされた細胞死を最終的にもたらす少なくとも一つの経路の開始が該改変によってもたらされる遺伝子的に改変されたカンジダ種細胞にも関する。
【０１３８】
さらなる態様によれば、本発明は、上記のような合成ＢＡＸ遺伝子、もしくは本明細書において記述するような該遺伝子を含んでなるベクター、もしくは上記のような遺伝子的に改変された酵母もしくは真菌細胞を用いてプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路において差次的に発現されるカンジダ種における遺伝子を同定する方法に関する。
【０１３９】
この点で異なるモデル系が予想される。融合タンパク質としての合成ＢＡＸ遺伝子の発現は、融合相手なしに発現させる場合より宿主細胞を迅速に殺すことが本発明において示されている。従って、カンジダ種遺伝子が各系において差次的に発現されるのに違いがある。従って、本発明は、プログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路において差次的に発現されるカンジダ種における遺伝子を同定する方法に関し、ここで、該方法において、宿主細胞は餓死させるためにいっそう長いもしくは短い期間を必要とする。該期間は、用いる発現構築物もしくは系により決まる。
【０１４０】
本発明はさらに、
ａ）餌として上記のような核酸もしくは上記のようなベクターによってコードされるポリペプチド及び餌食としてカンジダ種ｃＤＮＡライブラリーを発現する２ハイブリッド系を準備すること、
ｂ）該ポリペプチド及び該ｃＤＮＡライブラリーによってコードされるカンジダ種ポリペプチド間の相互作用を検出すること、及び、
ｃ）該カンジダ種ポリペプチドを同定すること、
の工程を含んでなるプログラムされた細胞死を最終的にもたらす経路に関与するカンジダ種配列（遺伝子もしくはポリペプチド）を取得及び同定する方法に関する。
【０１４１】
本発明はまた、
ａ）上記のような遺伝子的に改変された生物体を準備すること、
ｂ）該遺伝子的に改変された生物体においてｃＤＮＡライブラリーを発現させること、及び、
ｃ）該遺伝子的に改変された生物体の生存及び／もしくは増殖に対して発現が有益な効果を有するポリペプチドもしくはｃＤＮＡを同定すること、
の工程を含んでなるＢａｘで誘導される細胞死のインヒビター（もしくはインヒビター配列）を同定する方法にも関する。
【０１４２】
本発明はさらに、
ａ）上記のような遺伝子的に改変された酵母もしくは真菌（一つもしくは複数）を準備すること、
ｂ）該遺伝子的に改変された酵母もしくは真菌を突然変異誘発物質で処理すること、
ｃ）耐性酵母もしくは真菌細胞を単離すること、並びに、
ｄ）場合により、該耐性酵母もしくは真菌細胞における突然変異遺伝子を同定及び／もしくは特性化すること、
の工程を含んでなるＢａｘ耐性酵母もしくは真菌を同定する方法に関する。
【０１４３】
本発明はさらに、該遺伝子的に改変された生物体がカンジダ種である上記の方法のいずれかに関する。
【０１４４】
本発明はまた、上記の方法のいずれかによって同定できる単離されたカンジダ種核酸にも関する。
【０１４５】
今回一般的に記述している本発明は、以下の実施例を参照することによってさらに明らかに理解することができ、それらは単に本発明のある種の特徴及び態様の例示の目的で含まれ、そして本発明を限定するものではない。この本文に引用する全ての参考文献の内容は、引用することにより本明細書に組み込まれる。
［表の簡単な説明］
［表１］
合成ＣａＢＡＸ遺伝子の構築に使用するオリゴヌクレオチド：開始及び終止コドンはボールド体であり、クローニングに使用する制限部位はボールド体で且つイタリック体である。
【０１４６】
［表２−６］
サッカロミセス・セレビシエにおけるＢａｘ発現によって調節される遺伝子。
【０１４７】
この表は、Ｂａｘタンパク質発現の３０分（表２）、１時間（表３）、２時間（表４）、３時間（表５）もしくは６時間（表６）誘導後にｍＲＮＡレベルが有意に変化した遺伝子を含む。Ｑｔ値は、ＰａｔｈｗａｙｓＴＭソフトウェア（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）を用いて計算した。
【０１４８】
［表７］
サッカロミセス・セレビシエにおけるＢａｘ発現によって調節される遺伝子。この表は、Ｂａｘタンパク質発現の誘導後にｍＲＮＡレベルが有意に変化した全ての遺伝子を含む。Ｑｔ値は、Ｐａｔｈｗａｙｓソフトウェア（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）を用いて計算した。正の値は、アップレギュレーションされる遺伝子と対応する。負の値は、ダウンレギュレーションされる遺伝子と対応する。（表２−６におけるそれぞれ↑及び↓と同様）。
【０１４９】
［表８］
合成ＢＡＸ遺伝子のコドン使用。
【０１５０】
［表９］
２３の選択した「Ｂａｘ特異的」機能の調節。
実施例
実施例１．Ｂａｘで誘導される細胞死の際の差次的遺伝子発現分析
材料及び培地
細菌株エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）ＭＣ１０６１（Ｃａｓａｄａｂａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｈｅｎ，１９８０）をプラスミドの構築及び増幅に用いた。酵母株は、標準的な培地上で通常の条件下で増殖させた（Ｓｈｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９７９）。サッカロミセス・セレビシエ株ＩＮＶＳｃ１（ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＲ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）は、Ｔｙδ要素（Ｚｈｕ，１９８６）における線状化の後、ＹＩｐＵＴｙＬもしくはＹＩｐＵＴＹＬＭｕＢａｘで酢酸リチウム法（Ｓｃｈｉｅｓｔｌ  ａｎｄ  Ｇｉｅｔｚ，１９８９）により形質転換した。
マウスＢＡＸ ｃＤＮＡのクローニング
マウスＢａｘ−αタンパク質をコードするマウスｂａｘ  ｃＤＮＡは、
プライマー：
５’−ＡＴＧＧＡＣＧＧＧＴＣＣＧＧＧＡＧＣＡＧ−３’（配列番号６８９）及び
５’−ＴＣＡＧＣＣＣＡＴＣＴＴＣＴＴＣＣＡＧＡＴＧＧＴＧＡＧ−３’（配列番号６９０）
を利用することによってＥＬ４／１３．１８胸腺腫ｃＤＮＡライブラリー（ＢＣＣＭＴＭ／ＬＭＢＰ−ＬｌＢ１５）からＰｆｕ  ＤＮＡポリメラーゼ（ＳｔｒａｔａｇｅｎｅＲ，Ｌｏ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，ＵＳＡ）連鎖反応増幅（ＰＣＲ）によりクローン化した。
【０１５１】
得られるＰＣＲ産物は、標準的な方法（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，１９８９）に従ってＨｉｎｃＩＩで開いたｐＵＣ１９にクローン化した。
プラスミド構築
２μ  ｏｒｉ及びＵＲＡ３マーカー遺伝子をｐＵＴ３３２（Ｇａｔｉｇｎｏｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０）からＣｌａＩ及びＢｇｌＩＩでの連続消化により取り除いた。ＢａｍＨＩ−ＨｉｎｄＩＩＩ  ＧＡＬ１プロモーターフラグメントをＢｇｌＩＩ−ＨｉｎｄＩＩＩで開いたプラスミドに連結した。ＸｂａＩ−ＦｓｐＩ  ＦＬＰターミネーターフラグメントをこのＸｂａＩ−ＨｉｎｄＩＩＩ（平滑化）で開いたプラスミドに挿入し、その結果、プラスミドＹＩｐＵＴを得た。ＫｐｎＩ−ＡａｔＩＩで開きそして平滑化したＹＩｐＵＴにおける平滑化したＥｃｏＲＩ−ＢｓａＡＩ  Ｔｙδ要素の挿入によりプラスミドＹＩｐＵＴｙがもたらされた。続いて、ＢａｍＨＩで開きそして平滑化したＹＩｐＵＴｙにおける平滑化したＢｓａＡＩ−ＢｓｒＧＩフラグメントとしてのＬＥＵ２マーカー遺伝子の挿入によってプラスミドＹＩｐＵＴｙＬがもたらされた。
【０１５２】
マウスｂａｘ  ｃＤＮＡをｐＵＣ１９からＸｂａＩ及びＨｉｎｄＩＩＩでの消化によって切り出し、そしてＸｂａＩ−ＨｉｎｄＩＩＩで開いたプラスミドＹＩｐＵＴｙＬにサブクローン化し、最終的な発現プラスミドＹＩｐＵＴｙＬＭｕＢａｘを得た。
【０１５３】
プラスミドＹＩｐＵＴｙＬＭｕＢａｘは、限定使用下で受託番号３８７１でｐＳＣＴｙＧＡＬｍＢａｘとしてＢＣＣＭＴＭ／ＬＭＢＰ培養収集物に寄託されている。
ＧｅｎｅＦｉｌｔｅｒｓ
酵母ＧｅｎｅＦｉｌｔｅｒｓＴＭは、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．（Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ，ＵＳＡ）から購入した。酵母ＧｅｎｅＦｉｌｔｅｒｓＴＭは、ＰＣＲによって個々に増幅しそして２枚のナイロン膜フィルター（フィルターＩ及びＩＩ）上にスポットした全部で６１４４の遺伝子ＯＲＦ（オープンリーディングフレーム）を含有するすぐにハイブリダイゼーションできるナイロン膜である。フィルターは右上隅で切断され、そしてＤＮＡはフィルターの標示の付いた側上にある。
【０１５４】
フィルターＩは、２つの領域（領域１及び２）に編成される３０７２のＯＲＦを含有する。各領域は、８個のグリッド（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ及びＨ）に分割される１５３６のＯＲＦを含有する。グリッドは横２４列及び縦８列に編成される。
【０１５５】
フィルターＩＩは、２つの領域（領域３及び４）に編成される３０７２のＯＲＦを含有する。領域３及び４は、領域１及び２と同じように編成される。
酵母ＯＲＦ標的
酵母フィルターは、ＳＧＤから得られる６１４４の酵母ＯＲＦに対応する６１４４を越えるＰＣＲ産物からなる。ＰＣＲ反応は、全オープンリーディングフレームを増幅するように設計したＯＲＦ特異的プライマー対を用いた。プライマーは、開始コドンＡＴＧ及び終止コドンを含有する固有の配列から作製した（Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  ＣｅｎｔｅｒのＭ．Ｃｈｅｒｒｙによって親切にも提供された）。従って、ＰＣＲ産物は、開始及び終止コドンを含む完全なオープンリーディングフレームを含有する。これらの産物を精製し、そしてプリンティング（ｐｒｉｎｔｉｎｇ）をモニターすることを可能にする着色した溶液に５０ナノグラム／マイクロリットルで再懸濁した。正に荷電したナイロン膜上に約１／１０マイクロリットルの変性したＰＣＲ産物溶液をスポットするためにロボット装置を用いた。次にＤＮＡを膜にＵＶ架橋した。
結果
酵母細胞におけるＢａｘ発現の誘導
ＧＡＬ１プロモーターの制御下の５ＢａｘカセットがＴｙδ要素の近くでゲノムに組み込まれている、ＹＩｐＵＴｙＬＭｕＢａｘを含有する酵母株ＩＮＶＳｃ１の前培養を、コントロールとしてＹＩｐＵＴｙＬを含有する酵母株ＩＮＶＳｃ１と並行して最小グルコース含有培地において一晩増殖させた。前培養を１００ｍｌの最小グルコース含有培地に希釈し、そして１のＯＤ６００に達するまで増殖させた。続いて、酵母細胞を１００ｍｌのガラクトース含有培地に移し、そして３０分、１時間、２時間、３時間もしくは６時間のさらなる期間にわたってインキュベーションした。
ＲＮＡ単離
全ＲＮＡをＲＮＡｐｕｒｅＴＭ試薬（Ｇｅｎｈｕｎｔｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  Ｎａｓｈｖｉｌｌｅ，ＴＮ，ＵＳＡ）をＧｅｎＨｕｎｔｅｒプロトコルに従って用いて単離した。１．５  １０９個の細胞をマイクロ遠心チューブにおいて濃縮し、そして１ｍｌのＲＮＡｐｕｒｅＴＭ試薬を１ｇのガラスパールと一緒に加えた。酵母細胞を５回の２分の期間の間十分に混合することによって破壊し、そしてＲＮＡ分解を防ぐために中間には氷上に置いた。ライセートにクロロホルム（１５０μｌ）を加え、そして４℃で１５０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清を新しいチューブに移し、そしてＲＮＡを等容量のイソプロパノールで沈殿させた。氷上で１０分インキュベーション後、ＲＮＡを遠心分離によりペレットにし、そしてペレットを７０％のよく冷えたエタノールで洗浄した。乾燥させたＲＮＡペレットをＲＮアーゼを含まない５０μｌのｄＨ２Ｏに再懸濁した。
α−３３Ｐ ｄＣＴＰの存在下での第一鎖ｃＤＮＡ合成
以下のように、ＩＮＶＳｃ１  ＹＩｐＵＴｙＬＭｕＢａｘもしくはＩＮＶＳｃ１  ＹＩｐＵＴｙＬ酵母細胞から単離した全ＲＮＡ及びα−３３Ｐ  ｄＣＴＰの取り込みを用いる第一鎖ｃＤＮＡ合成によって高い比活性を有するプローブを製造した：ＲＮアーゼを含まない８μｌのｄＨ２Ｏの最大容量において２０μｇの全ＲＮＡに２μｌ（１μｇ／ｍｌ）のオリゴｄＴを加え、そして７０℃で１０分間インキュベーションした。氷上で１分間冷却した後、以下の成分を加え：
６μｌ  ５ｘ濃縮した第一鎖バッファー（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ，Ｐａｉｓｌｅｙ，ＵＫ）
１μｌ  ０．１Ｍ  ＤＴＴ
１μｌ  ＲＮアーゼブロック（４０ユニット／μｌ）（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）
１．５μｌ  ２０ｍＭ  ｄＸＴＰ溶液（Ｘ＝Ａ、Ｇ及びＴ）（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）
１．５μｌ  ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＴＭ逆転写酵素（２００ユニット／μｌ）（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ）
１０μｌ  α−３３Ｐ  ｄＣＴＰ（１０ｍＣｉ／ｍｌ，３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）
そして３７℃で２時間インキュベーションし、この間に第一鎖ｃＤＮＡ合成が行われた。
【０１５６】
取り込まれていない標識をセファデックスＧ−５０カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）上でプローブから分離した。プローブに取り込まれた放射能を液体シンチレーションによって測定した。プローブの比活性は、ＩＮＶＳｃ１  ＹＩｐＵＴｙＬ及びＩＮＶＳｃ１  ＹＩｐＵＴｙＬＭｕＢａｘプローブの両方で５．１０８ｃｐｍ／μｇであった。
【０１５７】
さらに、第一鎖ｃＤＮＡプローブの長さを標準的な電気泳動技術を用いてアルカリ２％アガロースゲル上で制御し、そして誘導燐光オートラジオグラフィーによって約５００ｂｐのフラグメントの束の検出をもたらした。
サッカロミセス・セレビシエ酵母ＧｅｎｅＦｉｌｔｅｒｓＴＭとのハイブリダイゼーション及びシグナル検出
α−３３Ｐ  ｄＣＴＰで標識したｃＤＮＡプローブと酵母ＧｅｎｅＦｉｌｔｅｒｓＴＭとを製造業者（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．，Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ，ＵＳＡ）によって供給されるＭｉｃｒｏＨｙｂＴＭ溶液を用いて連続してハイブリダイゼーションさせた。この溶液は、プレハイブリダイゼーション工程においてもハイブリダイゼーション中と同様に用いた。ＭｉｃｒｏＨｙｂＴＭ溶液は、より低い温度でハイブリダイゼーションが起こるのを可能にするためにホルムアミドを含有する。
【０１５８】
ハイブリダイゼーション実験は、本質的に以下のように行った：プレハイブリダイゼーション中、５μｌのポリｄＡ（１μｇ／ｍｌ）を含有する５ｍｌのＭｉｃｒｏＨｙｂＴＭ溶液（４２℃）を入れたハイブリダイゼーションフラスコ（３５ｘ２５０ｍｍ）に酵母ＧｅｎｅＦｉｌｔｅｒｓＴＭを置き、そして回転させながら（１０ｒｐｍ）４２℃で２４時間インキュベーションした。プレハイブリダイゼーション溶液の廃棄後に、変性した（１００℃で３分）ｃＤＮＡを５ｍｌの前もって温めたＭｉｃｒｏＨｙｂ溶液中で加え、そして回転させながら再び４２℃で一晩インキュベーションした。５０℃で洗浄バッファー（２ｘ  ＳＳＣ，１％  ＳＤＳ）における２０分の２回の洗浄工程の後に、３回目の洗浄工程を第二の洗浄バッファー（０．５ｘ  ＳＳＣ，１％  ＳＤＳ）において室温でさらに１５分間行った。蓄積蛍光体（ｓｔｏｒａｇｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｒ）スクリーンを有するＰｈｏｓｐｈｏｒＩｍａｇｅｒＴＭカセット（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）中に酵母ＧｅｎｅＦｉｌｔｅｒｓＴＭを置いた。４日の現像後に、スクリーンを（ＢｉｏＲａｄ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）Ｐｅｒｓｏｎａｌ  ＦＸを用いて５０μｍの解像度で走査した。これらの結果を図３に示す。
実施例２．ハイブリダイゼーションシグナルの定量
ハイブリダイゼーションシグナルの定量をＰａｔｈｗａｙｓＴＭソフトウェア（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ，ＵＳＡ）を用いて行い、そしてこれらのシグナルを全てのデータ点に対して正規化した。これらの正規化したデータの比較により、差次的に発現される候補遺伝子が明らかになった。ハイブリダイゼーションスポットの目視検査は、これらの選択を裏付けた。これらの遺伝子並びにそれらをアップもしくはダウンレギュレーションする因子を各個々の時点に対して表２〜６に記載する。いくつかの時点でＢａｘ発現の誘導の結果として調節されるアップ及びダウンレギュレーションされた遺伝子の概要を表７に示す。これらの遺伝子の配列及びそれらがコードするアミノ酸配列を図１に示す。
実施例３．Ｂａｘで誘導される細胞死及びＨ２Ｏ２で誘導される細胞死の際の比較遺伝子発現分析
酸化的Ｈ２Ｏ２攻撃
ＹＩｐＵＴｙＬを含有する酵母株ＩＮＶＳｃ１の前培養を最小グルコース含有培地において一晩増殖させた。前培養を１００ｍｌの最小グルコース含有培地に希釈し、そして１のＯＤ６００に達するまで増殖させた。続いて、０．１ｍＭのＨ２Ｏ２を補足した１００ｍｌのガラクトース含有培地に酵母細胞を移し、そして１時間のさらなる期間にわたってインキュベーションした。この酸化的攻撃は、同じ増殖条件におけるＢａｘ発現の１時間の誘導と同じ最終毒性をもたらした。
α−３３Ｐ ｄＣＴＰの存在下での第一鎖ｃＤＮＡ合成
実施例１に記載するようにＲＮＡを単離した。ＩＮＶＳｃ１  ＹＩｐＵＴｙＬＭｕＢａｘもしくはＩＮＶＳｃ１  ＹＩｐＵＴｙＬ（実施例１に記述するとおりの増殖条件）または酸化的にストレスを加えたＩＮＶＳｃ１  ＹＩｐＵＴｙＬ酵母細胞から単離した全ＲＮＡを用いる第一鎖ｃＤＮＡ合成によって高い比活性を有するプローブを製造した（実施例１に詳述する）。
【０１５９】
全てのプローブの比活性は５．１０８ｃｐｍ／μｇであった。
ハイブリダイゼーションシグナルの定量
実施例１に記述するとおりのハイブリダイゼーション及びシグナル検出。Ｑｕａｎｔｉｔｙ  Ｏｎｅプログラム（ＢｉｏＲａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いる１６ビットＴＩＦＦフォーマットへのデジタル画像の変換は、画像データを保ち、そしてＰａｔｈｗａｙｓＲソフトウェア（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ，ＵＳＡ）へのファイルの取り込みに必要であった。ハイブリダイゼーションシグナルの定量にはＰａｔｈｗａｙｓＲを使用し、そしてこれらのシグナルを全てのデータ点に対して正規化した。
Ｂａｘ応答遺伝子の同定
ＩＮＶＳｃ１  ＹＩｐＵＴｙＬＭｕＢａｘ（Ｂ）及びＩＮＶＳｃ１  ＹＩｐＵＴｙＬ（Ｃ）から得られる正規化したデータの二つ一組の比較により、差次的に発現される遺伝子が明らかになった。誘導もしくは抑制倍数を決定するために、Ｂａｘ誘導後の正規化したシグナル強度（Ｂ）をショック前のもの（Ｃ）で割った。ハイブリダイゼーションスポットの目視検査は、これらの選択を裏付けた（ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ）。
Ｂａｘ応答プール内のＢａｘ特異的遺伝子の同定
１時間の時点でＩＮＶＳｃ１  ＹＩｐＵＴｙＬＭｕＢａｘ（Ｂ）及びＩＮＶＳｃ１  ＹＩｐＵＴｙＬ（Ｃ）から得られる正規化したデータの二つ一組の比較により、差次的に発現される遺伝子が明らかになった。変化が少なくとも２倍でありそして一方のスポットの正規化したシグナル強度が平均バックグラウンド値より少なくとも１０倍上である場合に一次比（ｌｉｎｅａｒ  ｒａｔｉｏｓ）（Ｂ対Ｃ）を有意であると評価した。Ｂａｘ応答遺伝子の正規化したデータをＨ２Ｏ２でストレスを加えたＩＮＶＳｃ１  ＹＩｐＵＴｙＬ（Ｈ）から得られるデータと比較した。Ｂａｘ応答（アップレギュレーション／ダウンレギュレーションされる）遺伝子は、Ｂａｘ誘導後の正規化したシグナル強度が酸化的ストレス後の対応する強度より少なくとも２倍高い／低い場合にＢａｘ特異的であるとみなした。ハイブリダイゼーションスポットの目視検査は、これらの選択を裏付けた。１時間の時点のＢａｘ特異的遺伝子の概要を表９に示す。これらの遺伝子の配列及びそれらがコードするアミノ酸配列を図２に示す。
実施例４．カンジダ・アルビカンス及びヒトにおける相同物の検索
公共及び商用配列データベースに対する配列類似性検索をＢＬＡＳＴソフトウェアパッケージ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０）バージョン２で行った。元のヌクレオチド配列及び６フレームの概念的翻訳の両方をクエリー配列として用いた。使用した公共データベースは、ＥＭＢＬヌクレオチド配列データベース（Ｓｔｏｅｓｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）、ＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴタンパク質配列データベース及びその補足ＴｒＥＭＢＬ（Ｂａｉｒｏｃｈ  ａｎｄ  Ａｐｗｅｉｌｅｒ，１９９８）、並びにＡＬＣＥＳカンジダ・アルビカンス配列データベース（Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉｎｅｓｏｔａ）であった。使用した商用配列データベースは、ＰａｔｈｏＳｅｑＴＭ微生物ゲノムデータベース（Ｉｎｃｙｔｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）であった。
【０１６０】
配列類似性検索は、ＢＬＡＳＴソフトウェアパッケージバージョン２を用いて行った。２つの配列間の同一性は、同一残基パーセンテージとして計算し、２つの配列間の類似性パーセンテージは、スコアリングマトリックスとしてＢＬＯＳＵＭ６２を用いて計算した。
【０１６１】
相同物カンジダ種及びヒト遺伝子の配列並びに対応するアミノ酸配列を図２に示す。
実施例５．カンジダ・アルビカンスの細胞死の誘導に関与するポリペプチドの発現を調節する化合物のスクリーニング
提示する方法は、あるプロセス（例えば翻訳）の任意の成分の不十分な発現もしくは過剰発現が、そのプロセスにおける関連工程のインヒビターに対する改変された感受性をもたらし得ることを示唆する結果（Ｓａｎｄｂａｋｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０；Ｈｉｎｎｅｂｕｓｃｈ  ａｎｄ  Ｌｉｅｂｍａｎ  １９９１；Ｒｉｂｏｇｅｎｅ  ＰＣＴ  ＷＯ  ９５／１１９６９，１９９５）に基づく。そのようなインヒビターは、野生型（ＷＴ）細胞と比較した場合に、その工程を触媒する高分子における欠陥及び／もしくは効能が低い高分子によって制約される細胞に対していっそう効能があるはずである。
【０１６２】
例えば、突然変異体酵母株により、翻訳のいくつかの工程が、関与する高分子の化学量論に感受性であることが示されている（Ｓａｎｄｂａｋｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０）。そのような株は、（翻訳に関与する成分に作用することにより）翻訳を特異的に乱す化合物にいっそう感受性であるが、他の作用機構を有する化合物には同等に感受性である。
【０１６３】
従って、この方法は、試験化合物があるプロセスを乱すかどうかを同定する手段だけでなく、それがその作用を示す部位の指摘も与える。増殖が試験化合物によって影響を受ける細胞において改変された形態もしくは量で存在する成分は、潜在的に試験化合物の作用部位である。
【０１６４】
提示するアッセイは、Ｒ−化合物（Ｒ−ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）の存在下で、野生型（ＷＴ）カンジダ・アルビカンス株に対する、ある特定の対立遺伝子においてのみ改変されている同系株の増殖及び／もしくは死亡率の測定を伴う。株は、特定のタンパク質の発現がアンチセンスの誘導の際に損なわれるものもしくは必須遺伝子における破壊を保有する株であることができる。カンジダ・アルビカンスにおける新規な遺伝子を見出すためのインシリコ法を行う。このようにして同定される多数の必須遺伝子を（一方の対立遺伝子において）破壊し、そして得られる株を比較増殖及び／もしくは死亡率スクリーニングに用いることができる。
実施例６．薬剤の高処理量スクリーニング用アッセイ
３５μｌの最小培地（Ｓ培地＋２％ガラクトース＋２％マルトース）を自動ピペッティングシステム（Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ，Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ，Ｈｅｌｓｉｎｋｉ，Ｆｉｎｌａｎｄ）を用いて透明な平底９６ウェルプレート（ＭＷ９６）に移す。９６溝ピペッターは、ＤＭＳＯ中１０−３Ｍの２．５μｌのＲ−化合物をストックプレートからアッセイプレートに移す。
【０１６５】
選択したカンジダ・アルビカンス株（突然変異体及び親（ＣＡＩ−４）株）は、−７０℃でグリセロールストック（１５％）として保存する。これらの株を選択プレート（ＳＤ培地）上に筋状に延ばし、そして３０℃で２日間インキュベーションする。親株、ＣＡＩ−４には、培地に２０μｇ／ｍｌのウリジンを常に補足する。単一のコロニーを拾い上げ、そして１ｍｌの最小培地（Ｓ培地＋２％ガラクトース＋２％マルトース）に再懸濁する。細胞を２５０ｒｐｍで振盪しながら３０℃で８時間インキュベーションする。１０ｍｌの培養物を２５０，０００細胞／ｍｌで接種する。培養物を２５０ｒｐｍで振盪しながら３０℃で２４時間インキュベーションする。細胞をコールターカウンターにおいて計数し、そして最終培養物（Ｓ培地＋２％ガラクトース＋２％マルトース）を２０，０００〜５０，０００細胞／ｍｌで接種する。培養物を０．２４（＋／−０．０４）の最終ＯＤ６００に達するまで２５０ｒｐｍで振盪しながら３０℃で増殖させる。
【０１６６】
２００μｌのこの酵母懸濁液を４５０μｌの総容量でＲ−化合物を含有するＭＷ９６プレートの全てのウェルに加える。ＭＷ９６プレートを３０℃で４８時間インキュベーションする（静止して）。
【０１６７】
光学密度を４８時間後に測定する。
【０１６８】
試験増殖は、突然変異体（ｘ）及び野生型（ｙ）株の両方に対して陽性コントロール増殖のパーセンテージとして表す。これらの得られた変数の比（ｘ／ｙ）を計算する。
実施例７．Ｂａｘ発現の誘導の際の酵母細胞生存能力アッセイ
材料及び培地
酵母株を標準的な培地上で通常の条件下で増殖させた（Ｓｈｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９７９）。サッカロミセス・セレビシエＢＹ４７４２野生株及びＹＧＲ１８３Ｃ遺伝子破壊を有するＢＹ４７４２（ＥＵＲＯＳＣＡＲＦ収集物）を低コピー動原体ｐＲＳ４１５ＢａｘプラスミドもしくはコントロールとしてｐＲＳ４１５で、または高コピーエピソームｐＲＳ４２５ＢａｘプラスミドもしくはコントロールとしてｐＲＳ４２５で酢酸リチウム法（Ｓｃｈｉｅｓｔｌ  ａｎｄ  Ｇｉｅｔｚ，１９８９）によって形質転換した。
プラスミド構築
Ｂａｘ発現カセット、ＧＡＬ１プロモーター、ｂａｘ  ｃＤＮＡ及びＦＬＰターミネーターを含有するＹＩｐＵＴｙＬＭｕＢａｘから切り出したＢｓｇＩ（平滑化）−ＳａｐＩ（平滑化）フラグメントを、Ｅｃｌ１３６ＩＩで開いたｐＲＳ４１５（ＡＴＣＣ  ８７５２０）及びｐＲＳ４２５（ＡＴＣＣ  ７７１０６）プラスミドに連結し、低コピー動原体ｐＲＳ４１５Ｂａｘ及び高コピーエピソームｐＲＳ４２５Ｂａｘ発現プラスミドを得た。
結果
ｐＲＳ４１５もしくはｐＲＳ４１５ＢａｘまたはｐＲＳ４２５もしくはｐＲＳ４２５Ｂａｘで形質転換した酵母細胞の単一コロニーを１０ｍｌの最小グルコース含有培地において３０℃で活発な通気で１ＯＤ６００の光学密度まで増殖させた。細胞を遠心分離によってペレット化し、そして滅菌したｄＨ２Ｏで２回洗浄し、その後１０ｍｌの最小ガラクトース含有培地に再懸濁した。３０℃で様々な時間培養した後、培養物の総細胞密度を決定し、そして１０００個の細胞をグルコースに基づく最小半固体培地上に広げ、続いて３０℃で３日間インキュベーションした。０時間培養物からのプレート上のコロニーの数を１００％として示した（図４）。
実施例８．カンジダ細胞におけるＢａｘ発現
株
実験を行うためにカンジダ・アルビカンス株ＣＡＩ４（ｕｒａ３≡）を用いた（Ｆｏｎｚｉ  ａｎｄ  Ｉｒｗｉｎ  １９９３）。
【０１６９】
エシェリキア・コリ形質転換は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）からのＴｏｐ１０株を用いて行った（Ｆ’ｍｃｒＡ  ≡（ｍｒｒ−ｈｓｄＲＭＳ−ｍｃｒＢＣ）≡８０ｌａｃＺ□Ｍ１５  ≡ｌａｃＸ７４  ｄｅｏＲ  ｒｅｃＡ１  ａｒａＤ１３９  ≡（ａｒａ−ｌｅｕ）７６９７  ｇａｌＵ  ｇａｌＫ  ｒｐｓＬ（ＳｔｒＲ）ｅｎｄＡ１  ｎｕｐＧ）。
培地
２％グルコース、アミノ酸なしの１．３４％酵母窒素基礎培地及び０．７７ｇ／ｌのＣＳＭ−ｕｒａ（Ｂｉｏ１０１，Ｖｉｓｔａ，ＣＡ，ＵＳＡ）を含有する合成デキストロース培地（ＳＤ）をカンジダ・アルビカンス形質転換体を増殖させるために用いた。野生型（ＣＡＩ４）の場合、培地に５０μｇ／ｍｌのウリジンを補足した。プレートを製造するために培地を２％の寒天で固めた。合成ＢＡＸ遺伝子の発現は、炭素源として２％ガラクトースを用いて行った。
コドンを最適化したＢＡＸ遺伝子の構築
合成ＢＡＸ遺伝子の構築は、カンジダ・アルビカンスについて記述されている命名法に従った（Ｌｌｏｙｄ  ａｎｄ  Ｓｈａｒｐ  １９９２；Ｂｒｏｗｎ，ｅｔ  ａｌ．１９９１；ｈｔｔｐ：／／ａｌｃｅｓ．ｍｅｄ．ｕｍｎ．ｅｄｕ／ｃａｎｄｉｄａ／ｃｏｄｏｎｓ．ｈｔｍｌ；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｋａｚｕｓａ．ｏｒ．ｊｐ／ｃｏｄｏｎ）。合成遺伝子の高発現を保証するために、高度に発現される遺伝子の「最適」コドンのサブセットを合成ＢＡＸ遺伝子を設計するために用いた。
【０１７０】
ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸ遺伝子は、８個のオリゴヌクレオチドを用いて３つに分けて構築した（図５）。オリゴヌクレオチドの配列を表７に示す。プライマーＡ１は、ＡＴＧコドンの上流にＰｓｔＩ部位及びＢｇｌＩＩ部位を導入した。ＰｓｔＩ部位は後でカンジダ・アルビカンス発現ベクターへの直接クローニングに使用し、一方、ＢｇｌＩＩ部位はｙＥＧＦＰ融合のリンカーとして用いた。プライマーＣ２は、発現ベクターへのクローニングに適当なＳｍａＩ部位を導入した。
【０１７１】
フラグメントＡ及びＢを２段階で合成した：第一のＰＣＲラウンドにおいてプライマーＸ１及びＸ２（ＸはそれぞれＡもしくはＢを表す）を一緒に用いた。得られるフラグメントを鋳型として第二のＰＣＲラウンドにおいてプライマーＸ１及びＸ３と一緒に用いた。フラグメントＣは、プライマーＣ１及びＣ２を用いて単一のＰＣＲラウンドにおいて合成した。フラグメントＡ及びＢはｐＣＲ−ＢｌｕｎｔＩＩ−ＴＯＰＯベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）にクローン化し、一方、フラグメントＣはｐＣＲ２．１−ＴＯＰＯベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）にクローン化した。ＰＣＲによっていかなる突然変異も導入されなかったことを確かめるために全ての３フラグメントをシークエンスした。
【０１７２】
続いて、フラグメントＡをＰｓｔＩ及びＴａｑＩで、フラグメントＢをＴａｑＩ及びＢａｍＨＩで、そしてフラグメントＣをＢａｍＨＩ及びＳｍａＩで消化した。ＰｓｔＩ及びＳｍａＩで消化したｐＵＣ２１に３つの生成物を四重連結でクローン化し、プラスミドｐＵＣ２１：ｓｙｎｔｈＣａｎｄｉｄａＢＡＸをもたらした。合成ＢＡＸ遺伝子の配列を図６に示す。
合成ＢＡＸ−及びＧＦＰ−合成ＢＡＸ発現プラスミドの構築
合成ＢＡＸ遺伝子のＯＲＦを含有するＰｓｔＩ−ＳｍａＩフラグメントをＰｓｔＩ−ＳｔｕＩで消化したベクターｐＧＡＬ１ＡＣＴ１ＬＵＣ（Ｗ．Ｍａｒｔｉｎｅｔ，ＥＰ出願ｎｒ  ９９２０４５５７．５）にクローン化し、発現構築物ｐＧＡＬ１Ｐ：ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸをもたらした（図７Ａ）。開始複合体の形成中にＡＵＧコドンの認識を容易にするためにＳｔｒａｔａｇｅｎｅからのＱｕｉｃｋ  ｃｈａｎｇｅ部位特異的突然変異誘発キットを用いてプリン塩基（Ａ）をＡＵＧコドンから−３の位置に導入した（Ｋｏｚａｋ  １９８１）。
【０１７３】
酵母増強ＧＦＰ遺伝子ｙＥＧＦＰ（Ｃｏｒｍａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．１９９７）は、上流プライマーとしてプライマー５’−ＡＡＣＴＧＣＡＧＡＴＧＴＣＴＡＡＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＴＴＡＴＴＣ−３’（配列番号１１）そして下流プライマーとしてプライマー５’−ＧＧＡＡＧＡＴＣＴＴＣＣＴＴＴＧＴＡＣＡＡＴＴＣＡＴＣＣＡＴＡＣＣ−３’（配列番号１２）を用いてＰＣＲによって増幅した。センスプライマーはＰｓｔＩ部位（ボールド体及びイタリック体で示す）を導入し、一方、アンチセンスプライマーは、合成ＢＡＸ遺伝子との融合のためのＢｇｌＩＩリンカー（ボールド体及びイタリック体で示す）を含有した。ｐＣＲ２．１−ＴＯＰＯベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）へのｙＥＧＦＰ遺伝子のクローニングの後、ＰＣＲによっていかなる突然変異も導入されなかったことを確かめるために遺伝子をシークエンスした。
【０１７４】
ｙＥＧＦＰ−ｓｙｎｔｈＣａｎｄｉｄａＢＡＸ融合物は、ＰｓｔＩ−ＳｔｕＩで消化した発現ベクターｐＧＡＬ１ＡＣＴ１ＬＵＣにＰｓｔＩ−ＢｇｌＩＩ  ｙＥＧＦＰフラグメントをＢｇｌＩＩ−ＳｍａＩ合成カンジダＢＡＸフラグメントと一緒にクローニングすることによって作製した。いかなるフレームシフトも起こらなかったことを確かめるために、得られたｐＧＡＬ１Ｐ：ｙＥＧＦＰ−ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸ融合構築物（図７Ｂ）をシークエンスした。
合成ＢＡＸ発現株の作製
発現プラスミドの形質転換は、スフェロブラスティング（ｓｐｈｅｒｏｂｌａｓｔｉｎｇ）プロトコル（Ｈｅｒｒｅｒｏｓ  ｅｔ  ａｌ．１９９２）の修正した方法（Ｌｏｇｇｈｅ，未公開）を用いて行った。ＧＡＬ１プロモーター部位でゲノムへの特異的組込みを可能にするためにプラスミドをＢｐｕ１１０２Ｉで線状にした。正しい組込みをサザンブロッティングによって分析した。従って、異なる形質転換体からのゲノムＤＮＡをＮｕｃｌｅｏｎＲ抽出及び精製キット（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いて調製し、そしてＸｂａＩで消化した。サザンブロットにおいて使用するＢＡＸプローブは、ＰＣＲによって製造した。ＰＣＲは、センスプライマー５’−ＡＴＧＧＡＴＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＡＡＣ−３’（配列番号１３）及びアンチセンスプライマー５’−ＴＴＡＡＣＣＣＡＴＴＴＴＴＴＴＣＣＡＧＡＴＧ−３’（配列番号１４）と一緒に、ｐＧＡＬ１Ｐ：ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸプラスミドを鋳型として用いて行った。標準的なＰＣＲ条件を用いた。ｙＥＧＦＰの検出には、プローブをセンスプライマーとしてプライマー５’−ＡＧＡＧＡＴＣＴＣＧＡＧＧＧＡＴＣＣ−３’（配列番号１５）そしてアンチセンスプライマーとしてプライマー５’−ＧＣＡＴＴＡＴＴＴＧＴＡＣＡＡＴＴＣＡＴＣＣ−３’（配列番号１６）を用いてＰＣＲによって合成した。サザンブロットハイブリダイゼーション及び検出は、ＡｌｋＰｈｏｓ  ＤＩＲＥＣＴラベリング及び検出システム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を製造業者の説明書に従って用いて行った。
ウェスタンブロット分析
ウェスタンブロット分析には、細胞を後期対数期までＳＤ−ｕｒａ培地において一晩前もって増殖させた。細胞を遠心分離によって採取し、水で２回洗浄し、そしてＢａｘ発現を誘導するためにＳＧ−ｕｒａに接種した。誘導は１５時間行った。酵母粗抽出物を以前に記述されているように調製した（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．１９８９）。Ｂａｘタンパク質の検出は、ポリクローナルウサギ抗マウス／ラットＢａｘ抗体（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を用いて行った。酵母細胞壁マンナン抗体でのこの抗体の汚染のために、非常に高いバックグラウンドが生じた。この問題は、０．５ｍｇ／ｍｌの精製された酵母マンナン（Ｒｏｓｓａｎｅｓｅ  ｅｔ  ａｌ．１９９９）と抗体とのプレインキュベーションによって防ぐことができた。Ｇｆｐタンパク質の検出は、抗Ｇｆｐモノクローナル抗体（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ，ＵＳＡ）を用いて行った。
増殖曲線
増殖曲線用に、酵母細胞をＳＤ−ｕｒａ培地（野生型にはウリジンを補足する）において２４時間増殖させた。これらの培養物を採取し、水で２回洗浄し、そして新しいＳＤ−ｕｒａもしくはＳＧ−ｕｒａ培地に０．１のＯＤ６００に接種した。Ｂｉｏｓｃｒｅｅｎ  Ｃシステム（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて増殖をマイクロタイタープレートにおいてモニターした。
生存能力試験
細胞を１のＯＤ６００まで最小デキストロース培地において前もって増殖させた。細胞を水で２回洗浄した後、炭素源としてガラクトースを含有する最小培地に交換した。示す時点でサンプルを採取し、そして等しい細胞量を最小デキストロースプレート上に広げた。生じるコロニーは、プールの生存可能な割合に相当する。
結果：カンジダ・アルビカンスにおける合成ＢＡＸ遺伝子の条件付き発現
全長マウスＢａｘタンパク質をコードするｃＤＮＡをカンジダ・アルビカンスＧＡＬ１プロモーターの制御下に置き、細胞をガラクトース含有培地において増殖させる場合に条件付き発現を与えた。最初の実験は、野生型マウスｂａｘ遺伝子を用いて行った。この遺伝子の発現は検出可能な表現型をもたらさず、細胞をガラクトース含有培地上で増殖させた場合に野生型と比較した増殖におけるいかなる違いも認められなかった（データは示さない）。これは、カンジダ・アルビカンス及び関連種によって採用される非伝統的なコドン戦略のためであり得た。マウスＢＡＸ遺伝子に使用されるコドンの分析により、カンジダ・アルビカンスにとってこの酵母において高度に発現される遺伝子に認められるような最適なコドン使用ではないことが明らかになった。ＢＡＸ遺伝子の高発現を保証するために、上記の戦略を用いて遺伝子のコドンを適応させた合成バージョンを作製した。ＦＡＣＳ技術を用いて高いｙＥＧＦＰ−ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸ発現レベルを有する形質転換体のスクリーニングを可能にするために合成ＢＡＸ遺伝子をｙＥＧＦＰに融合させた。新たに得られたプラスミドｐＧＡＬ１Ｐ：ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸ及びｐＧＡＬ１：ＧＦＰ−ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸをカンジダ・アルビカンスＣＡＩ４株に形質転換した。ウリジンを含まない最小培地上で形質転換体を選択した。各発現構築物の約２５個の形質転換体を選択し、そして最小デキストロース培地上（非誘導条件）並びに最小ガラクトース培地上（誘導条件）に筋状に延ばした。３０℃で２日インキュベーションした後、全ての形質転換体はグルコース含有培地上で増殖した。ガラクトースを唯一の炭素源として用いた場合、形質転換体の大部分は増殖しなかった（図８）。ガラクトース陰性形質転換体のサザンブロット分析により、１コピーのｓｙｎｔｈＣａＢＡＸ遺伝子がＧＡＬ１プロモーターの内因性コピーに組込まれていることが明らかになった。増殖における違いを調べるために、形質転換体を合成グルコース含有培地において一晩増殖させた。続いて、細胞を水で洗浄し、そして炭素源としてガラクトースを含有する新しい培地に交換した。野生型株はガラクトース含有培地上でよく増殖したが、Ｂａｘを発現する形質転換体ではいかなる増殖も認められなかった（図９Ａ及びＢ）。ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸ形質転換体のウェスタンブロット分析により、Ｂａｘタンパク質の蓄積が示された（１５時間のＢａｘ誘導、図１０）。免疫ブロッティングをＧＦＰ−ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸ発現株で行った場合に同様の結果が認められた。ここで、融合タンパク質は、誘導条件下（炭素源としてガラクトース）で約４５Ｋの予想される分子量で検出された。融合タンパク質に加えて、約２０Ｋの分子量でバンドが生じた。これは、Ｇｆｐタンパク質単独の分子量に相当する。ウェスタンブロットに陽性コントロールとしてＧｆｐ発現株を加えることによりこれらの結果が裏付けられた。ここで、Ｇｆｐタンパク質は、ＧＦＰ−ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸ発現株における予想外のバンドと同じ分子量で検出された（図１１）。これは、おそらく、融合タンパク質の部分的タンパク質分解破壊のためである。ＦＡＣＳ技術を用いたＧｆｐ蛍光の分析により、融合タンパク質を発現する形質転換体には高いＧｆｐ蛍光シグナルが示された（図１２）。細胞生存能力を分析した場合、ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸ株及びＧＦＰ−ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸ株で異なる結果が得られた。ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸ株は、ガラクトース含有培地上で最初の６時間のインキュベーション中にコロニー形成単位の量のかなり急速な減少を示した。その後にこのプロセスは著しく減速した。これは、ｇｆｐ−ｓｙｎｔｈＣａｂａｘ融合タンパク質を発現する株で得られる結果と大いに異なる。ここで、ほとんど全ての細胞は、唯一の炭素源としてガラクトースを含有する培地において最初の３時間のインキュベーション中に非常に急速に死亡した。ｓｙｎｔｈＣａｂａｘ発現細胞におけるＢａｘ誘発は、全ての細胞を殺すのに十分に強力ではないことが可能である。細胞は、おそらくＢａｘタンパク質のタンパク質分解破壊によって、防御機構のようなものを活性化するのに十分な時間を有する。状況は融合タンパク質では異なる。Ｇｆｐはそれ自体非常に安定なタンパク質である。別のタンパク質へのＧｆｐの融合は、このタンパク質の安定化をもたらし得る。それはタンパク質分解破壊にいっそう耐性であると思われる。これは、Ｇｆｐ−Ｂａｘ融合物の状況を説明する。Ｇｆｐ−Ｂａｘタンパク質は、タンパク質分解破壊からいっそう防御される。そのようにそれは細胞においていっそう長い期間にわたって存在する。これにより死の誘発はいっそう強く、従って、細胞はいっそう速く死ぬ。細胞がタンパク質分解機構を活性化しなければならない時間は、それらが生存するのに十分ではない。
【０１７５】
【表１】
2005507636.tif 000002
【０１７６】
【表２】
2005507636.tif 000003
【０１７７】
【表３】
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【０１７８】
【表４】
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【０１７９】
【表５】
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【０１８０】
【表６】
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【０１８１】
【表７】
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【０１８２】
【表８】
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【０１８３】
【表９】
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【０１８４】
【表１０】
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【０１８５】
【表１１】
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【０１８６】
【表１２】
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【０１８７】
【表１３】
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【０１８８】
【表１４】
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【０１８９】
【表１５】
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【０１９０】
【表１６】
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【０１９１】
【表１７】
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【０１９２】
【表１８】
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【０１９３】
【表１９】
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【０１９４】
【表２０】
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【０１９５】
【表２１】
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【０１９６】
【表２２】
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【０１９７】
【表２３】
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【図面の簡単な説明】
【図１】
サッカロミセスゲノムデータベース（ＳＧＤ）から得られた情報に基づくサッカロミセス・セレビシエ配列（配列番号１７〜３９６及び配列番号６９１〜７１６）。
【図２】
カンジダ・アルビカンス（配列番号３９７〜６７４、６８７、６８８及び７１７〜７３２）及びヒト相同物（配列番号６７５〜６８６）。
ヒト相同物は、スコアリングマトリックスとしてＢＬＯＳＵＭ６２を用いてフォワード及びリバースＢＬＡＳＴによって確かめた。
ＹＧＬ０８０Ｗ（配列番号１６１）は、未知の細胞役割及び未知の生化学機能を有する酵母タンパク質をコードする。ヒト相同物（３３０ｂｐ（配列番号６７５）、１０９ａａ（配列番号６７６））ＬＯＣ５１６６０／ｇ７７０６３６９は、報告された細胞役割もしくは生化学機能をもたない。
ＹＧＲ２４３Ｗ（配列番号１８９）は、未知の細胞役割及び未知の生化学機能を有する酵母タンパク質をコードする。ヒト相同物（３８４ｂｐ（配列番号６７７）、１２７ａａ（配列番号６７８））ＤＫＦＺＰ５６４Ｂ１６７／ｇ５８１７２５７は、報告された細胞役割もしくは生化学機能をもたない。
ＹＧＲ１８３Ｃ（ＱＣＲ９）（表３）は、既知の細胞役割及び既知の生化学機能を有する酵母タンパク質をコードする。ＱＣＲ９は、ユビキノールシトクロム−ｃレダクターゼ複合体の成分であるユビキノールシトクロム−ｃレダクターゼのサブユニット９をコードする（７．３ｋＤａタンパク質）。細胞役割：エネルギー生成。生化学機能：オキシドレダクターゼ及び能動輸送体。ヒト相同物（１３２ａａ（配列番号６７９）、３９９ｂｐ（配列番号６８０））ＡＦ１６１５３６は、同様の細胞役割及び生化学機能を有すると予測された。
ＹＢＲ００９Ｃ（配列番号３７）、ＹＧＲ２０９Ｃ（配列番号１８７）及びＹＰＲ０２８Ｗ（配列番号３９３）は、既知の酵母ＯＲＦに相当する。これらのヒト相同物は、報告された細胞役割もしくは生化学機能を有する。
【図３】
２枚のナイロン膜フィルター（Ｉ及びＩＩ）上にスポットした全部で６１４４の遺伝子ＯＲＦを含有する酵母ゲノムマクロアレイ。各フィルターは２つの領域を含有し、そして各領域は、横２４列及び縦８列に編成される８個のグリッドに分けられる。
スポットは、３０分、１時間、２時間、３時間及び６時間にわたるＢａｘ発現の誘導がない（マイナスＢＡＸ）及びある（プラスＢＡＸ）全ゲノムの発現プロフィールを示す。
【図４】
破壊されたＹＧＲ１８３Ｃ遺伝子を有する酵母細胞は、Ｂａｘで誘導される細胞死に完全に耐性である。耐性は、低コピー（Ａ）及び高コピー（Ｂ）Ｂａｘ発現系の両方において認められる。クローン原性生存は、ガラクトース含有培地から様々な時点で細胞を回収しそしてグルコースに基づく半固体培地上での１０００個の細胞の平板培養によって決定した。データは３回の実験を表す（平均±ＳＤ、ｎ＝３）。ＳＤ棒は、記号によって隠されている。
【図５】
カンジダ・アルビカンス最適コドンを用いる合成ＢＡＸ遺伝子の合成のスキーム。
【図６】
合成カンジダ・アルビカンスＢＡＸ遺伝子のＤＮＡ（配列番号１）及びタンパク質（配列番号２）配列。
【図７】
ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸ遺伝子（Ａ）及びｙＥＧＦＰ−ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸ融合物（Ｂ）の発現構築物の表示。
【図８】
カンジダ・アルビカンス形質転換体の増殖：ｐＧＡＬ１Ｐ：ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸ及びｐＧＡＬ１Ｐ：ＧＦＰ−ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸの個々の形質転換体を、唯一の炭素源として２％グルコースもしくは２％ガラクトースのいずれかを含有するプレート上に筋状に延ばした。増殖を４日後にモニターした。
【図９】
ガラクトース含有最小培地上でのＧＡＬ１Ｐ：ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸ（Ａ）及びＧＡＬ１Ｐ：ＧＦＰ−ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸ（Ｂ）の増殖速度論。
【図１０】
最小ガラクトース含有培地上で１５時間のＢａｘ誘導後のＧＡＬ１Ｐ：ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸの２個の独立した形質転換体の免疫ブロット分析。２０ｋＤａの矢印は、Ｂａｘタンパク質の位置を示す。５０ｋＤａで認められるバンドは、おそらく細胞壁マンナンに相当する。ポリクローナルＢａｘ抗体の汚染の全てが、サッカロミセス・セレビシエマンナンでの処理によって取り除くことができたとは限らない。
【図１１】
ガラクトース含有最小培地上でのＧＡＬ１Ｐ：ＧＦＰ−ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸ株の免疫ブロット分析。４５ｋＤａで生じるバンドは、Ｇｆｐ−Ｂａｘ融合タンパク質に相当し、一方、２０ｋＤａのバンドはＧｆｐタンパク質単独に相当する。
【図１２】
ガラクトース含有培地上で増殖させた２個の独立したＧＡＬ１Ｐ：ＧＦＰ−ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸ形質転換体のＦＡＣＳ分析：薄灰色のピークは、ｗｔ株の自己蛍光を示し、ＧＦＰ蛍光ピークには陰影をつけない。
【図１３】
ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸ（Ａ）及びＧＦＰ−ｓｙｎｔｈＣａＢＡＸ形質転換体（Ｂ）の生存能力試験：細胞を最小デキストロース培地においてあらかじめ増殖させ、そして次にガラクトースを含有する新しい最小培地に交換した。示す時点でサンプルを取り、そして等しい細胞量を最小デキストロースプレート上に広げた。生じるコロニーは、全プールの生存可能な割合に相当した。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
2005507636.tif 000026
【図１ｃ】
2005507636.tif 000027
【図１ｄ】
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【図１ｅ】
2005507636.tif 000029
【図１ｆ】
2005507636.tif 000030
【図１ｇ】
2005507636.tif 000031
【図１ｈ】
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【図１ｉ】
2005507636.tif 000033
【図１ｊ】
2005507636.tif 000034
【図１ｋ】
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【図１ｌ】
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【図１ｍ】
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【図１ｎ】
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【図１ｏ】
2005507636.tif 000039
【図１ｐ】
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【図１ｑ】
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【図１ｒ】
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【図１ｓ】
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【図１ｔ】
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【図１ｕ】
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【図１ｖ】
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【図１ｗ】
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【図１ｘ】
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【図１ｙ】
2005507636.tif 000049
【図１ｚ】
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【図１ａａ】
2005507636.tif 000051
【図１ａｂ】
2005507636.tif 000052
【図１ａｃ】
2005507636.tif 000053
【図１ａｄ】
2005507636.tif 000054
【図１ａｅ】
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【図１ａｆ】
2005507636.tif 000056
【図１ａｇ】
2005507636.tif 000057
【図１ａｈ】
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【図１ａｉ】
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【図１ａｊ】
2005507636.tif 000060
【図１ａｋ】
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【図１ａｌ】
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【図１ａｍ】
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【図１ａｎ】
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【図１ａｏ】
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【図１ａｐ】
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【図１ａｑ】
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【図１ａｒ】
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【図１ａｓ】
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【図１ａｔ】
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【図１ａｕ】
2005507636.tif 000071
【図１ａｖ】
2005507636.tif 000072
【図１ａｗ】
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【図１ａｘ】
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【図１ａｙ】
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【図１ａｚ】
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【図１ｂａ】
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【図１ｂｂ】
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【図１ｂｃ】
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【図１ｂｄ】
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【図１ｂｅ】
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【図１ｂｆ】
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【図１ｂｇ】
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【図１ｂｈ】
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【図１ｂｉ】
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【図１ｂｊ】
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【図１ｂｋ】
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【図１ｂｌ】
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【図１ｂｍ】
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【図１ｂｎ】
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【図１ｂｏ】
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【図１ｂｐ】
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【図１ｂｑ】
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【図１ｂｒ】
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【図１ｂｓ】
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【図１ｂｔ】
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【図１ｂｕ】
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【図１ｂｖ】
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【図１ｂｗ】
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【図１ｂｘ】
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【図１ｂｙ】
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【図１ｂｚ】
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【図１ｃａ】
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【図１ｃｂ】
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【図１ｃｃ】
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【図１ｃｄ】
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【図１ｃｅ】
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【図１ｃｆ】
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【図１ｃｇ】
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【図１ｃｈ】
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【図１ｃｉ】
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【図１ｃｊ】
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【図１ｃｋ】
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【図１ｃｌ】
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【図１ｃｍ】
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【図１ｃｎ】
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【図１ｃｏ】
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【図１ｃｐ】
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【図１ｃｑ】
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【図１ｃｒ】
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【図１ｃｓ】
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【図１ｃｔ】
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【図１ｃｕ】
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【図１ｃｖ】
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【図１ｃｗ】
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【図１ｃｘ】
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【図１ｃｙ】
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【図１ｃｚ】
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【図１ｄａ】
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【図１ｄｂ】
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【図１ｄｃ】
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【図１ｄｄ】
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【図１ｄｅ】
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【図１ｄｆ】
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【図１ｄｇ】
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【図１ｄｈ】
2005507636.tif 000136
【図１ｄｉ】
2005507636.tif 000137
【図１ｄｊ】
2005507636.tif 000138
【図１ｄｋ】
2005507636.tif 000139
【図１ｄｌ】
2005507636.tif 000140
【図１ｄｍ】
2005507636.tif 000141
【図１ｄｎ】
2005507636.tif 000142
【図１ｄｏ】
2005507636.tif 000143
【図１ｄｐ】
2005507636.tif 000144
【図１ｄｑ】
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【図１ｄｒ】
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【図１ｄｓ】
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【図１ｄｔ】
2005507636.tif 000148
【図１ｄｕ】
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【図１ｄｖ】
2005507636.tif 000150
【図１ｄｗ】
2005507636.tif 000151
【図１ｄｘ】
2005507636.tif 000152
【図１ｄｙ】
2005507636.tif 000153
【図１ｄｚ】
2005507636.tif 000154
【図１ｅａ】
2005507636.tif 000155
【図２ａ】
2005507636.tif 000156
【図２ｂ】
2005507636.tif 000157
【図２ｃ】
2005507636.tif 000158
【図２ｄ】
2005507636.tif 000159
【図２ｅ】
2005507636.tif 000160
【図２ｆ】
2005507636.tif 000161
【図２ｇ】
2005507636.tif 000162
【図２ｈ】
2005507636.tif 000163
【図２ｉ】
2005507636.tif 000164
【図２ｊ】
2005507636.tif 000165
【図２ｋ】
2005507636.tif 000166
【図２ｌ】
2005507636.tif 000167
【図２ｍ】
2005507636.tif 000168
【図２ｎ】
2005507636.tif 000169
【図２ｏ】
2005507636.tif 000170
【図２ｐ】
2005507636.tif 000171
【図２ｑ】
2005507636.tif 000172
【図２ｒ】
2005507636.tif 000173
【図２ｓ】
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【図２ｔ】
2005507636.tif 000175
【図２ｕ】
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【図２ｖ】
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【図２ｗ】
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【図２ｘ】
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【図２ｙ】
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【図２ｚ】
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【図２ａａ】
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【図２ａｂ】
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【図２ａｃ】
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【図２ａｄ】
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【図２ａｅ】
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【図２ａｆ】
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【図２ａｇ】
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【図２ａｈ】
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【図２ａｉ】
2005507636.tif 000190
【図２ａｊ】
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【図２ａｋ】
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【図２ａｌ】
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【図２ａｍ】
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【図２ａｎ】
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【図２ａｏ】
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【図２ａｐ】
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【図２ａｑ】
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【図２ａｒ】
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【図２ａｓ】
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【図２ａｔ】
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【図２ａｕ】
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【図２ａｖ】
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【図２ａｗ】
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【図２ａｘ】
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【図２ａｙ】
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【図２ａｚ】
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【図２ｂａ】
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【図２ｂｂ】
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【図２ｂｃ】
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【図２ｂｄ】
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【図２ｂｅ】
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【図２ｂｆ】
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【図２ｂｇ】
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【図２ｂｈ】
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【図２ｂｉ】
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【図２ｂｊ】
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【図２ｂｋ】
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【図２ｂｌ】
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【図２ｂｍ】
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【図２ｂｎ】
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【図２ｂｏ】
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【図２ｂｐ】
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【図２ｂｑ】
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【図２ｂｒ】
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【図２ｂｓ】
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【図２ｂｔ】
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【図２ｂｕ】
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【図２ｂｖ】
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【図２ｂｗ】
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【図２ｂｘ】
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【図２ｂｙ】
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【図２ｂｚ】
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【図２ｃａ】
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【図２ｃｂ】
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【図２ｃｃ】
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【図２ｃｄ】
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【図２ｃｅ】
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【図２ｃｆ】
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【図２ｃｇ】
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【図２ｃｈ】
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【図２ｃｉ】
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【図２ｃｊ】
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【図２ｃｋ】
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【図２ｃｌ】
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【図２ｃｍ】
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【図２ｃｎ】
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【図２ｃｏ】
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【図２ｃｐ】
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【図２ｃｑ】
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【図２ｃｒ】
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【図２ｃｓ】
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【図２ｃｔ】
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【図２ｃｕ】
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【図２ｃｖ】
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【図２ｃｗ】
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【図２ｃｘ】
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【図２ｃｙ】
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【図２ｃｚ】
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【図２ｄａ】
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【図２ｄｂ】
2005507636.tif 000261
【図３−１】
2005507636.tif 000262
【図３−２】
2005507636.tif 000263
【図３−３】
2005507636.tif 000264
【図４】
2005507636.tif 000265
【図５ａ】
2005507636.tif 000266
【図５ｂ】
2005507636.tif 000267
【図６】
2005507636.tif 000268
【図７】
2005507636.tif 000269
【図８】
2005507636.tif 000270
【図９】
2005507636.tif 000271
【図１２】
2005507636.tif 000272
【図１３】
2005507636.tif 000273
【国際公開パンフレット】
2005507636.tif 000274
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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