(57)【要約】  本発明はマルチアーム樹枝状および機能的なＰＥＧを設計し合成することである。この新しい種類のポリマーは小さな分子薬、タンパク質あるいはペプチド類薬物のような分子の化学の修飾の中で広く使用することができる。この新しい種類のポリマーが改善した可溶性、安定性および免疫原性、増大した血漿滞留時間、ならびに増加した治療の効能を有することを見出した。【特許請求の範囲】
【請求項１】
簡便な形式ではＲＰＥＧｚＣＯＸのように表し、この式においてＲは直鎖アルキル、イソプロピル、ベンジルであり、ｚは腕の数であり、Ｘは機能的なグループである、マルチアーム樹枝状および機能的なＰＥＧ。
【請求項２】
Ｒは（Ｃ１〜Ｃ１０）直鎖アルキル、イソプロピル、ベンジルであり、ｚは腕の数であり、１ないし８の整数、Ｘは
【化１】
2005514505.tif 000007
からなる群から独立に選択される機能的なグループである、請求項１に記載のマルチアーム樹枝状および機能的なＰＥＧ。
【請求項３】
３−官能基を含む小さな分子の構造が
【化２】
2005514505.tif 000008
であるとき、
ｎが１ないし９の整数であり、
８つの腕のある樹枝状および機能的なＰＥＧは、下に示す：
【化３】
2005514505.tif 000009
Ｒは（Ｃ１〜Ｃ１０）直鎖アルキル、イソプロピル、ベンジル、好ましくはメチル基であり、
ｎは１ないし９の整数であり、
ｋは１ないし６の整数であり、
ｓ，ｔ，ｏ，ｐは１０ないし２０００の整数であり、
ＷはＯ、Ｓ及びＮＲ中のいずれかであり、
Ｘは
【化４】
2005514505.tif 000010
からなる群から独立に選択される、請求項１に記載のマルチアーム樹枝状および機能的なＰＥＧ。
【請求項４】
３−官能基を含む小さな分子化合物を線形のＰＥＧポリマと反応することにより得られる樹枝状および機能的なＰＥＧであることを特徴とする、ＲＰＥＧｚＣＯＸのような形式で表され、請求項１に記載のマルチアーム樹枝状および機能的なＰＥＧの製造方法。
【請求項５】
３−官能基を含む小さな分子化合物を活性化させるために用いられる官能基はカルボキシルおよび二つのアミドもしくはカルボキシルおよび二つのヒドロキシルである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
３−官能基を含む小さな分子化合物が
【化５】
2005514505.tif 000011
からなる群から独立に選択される１つであることを特徴とする、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
３−官能基を含む小さな分子化合物を線形のＰＥＧポリマと反応することにより樹枝状および機能的なＰＥＧを得られるＰＥＧはいずれの腕の分子量が４００Ｄａから８０００Ｄａである、反応をコントロールすることで、三つ、四つ、五つ、六つ、七つ、八つの腕のある樹枝状および機能的なＰＥＧの正確な合成制御ができる、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
ＰＥＧはアミド基、イミド基、カルバミン酸、エステル基、エスター基、エポキシ基、カルボキシル、ヒドロキシル、チオールメルカプト基、炭水化物およびこれらの組み合わせから選択される連結基を介して３−官能基を含む小さな分子に共有結合的に結合させた、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
小さな分子薬、ポリペプチド、タンパク質性薬物のような分子の化学の修飾の中においての請求項１に記載のマルチアーム樹枝状および機能的なＰＥＧの用途
【請求項１０】
クロラムブチル、シスプラチン、５−フルオロウラシル、タキソール、アドリアマイシン、メトトレキセートのような小さな分子薬における請求項９に記載のマルチアーム樹枝状および機能的なＰＥＧを利用する。
【請求項１１】
タンパク質薬物は腫瘍壊死因子、インターロイキン、コロニー刺激因子、エリスロポエチン、神経成長因子、スーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）、インターフェロンである、請求項９に記載のマルチアーム樹枝状および機能的なＰＥＧ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、マルチアーム樹枝状および機能的なＰＥＧの調製法および薬剤中のこれらのポリマーの用途に関する。より具体的には、３−官能基を含む小さな分子化合物を線形のＰＥＧポリマと反応することによってマルチアーム樹枝状および機能的なＰＥＧを合成できるようにするための方法を提供することにある。
【背景技術】
【０００２】  さまざまなタイプの薬物（抗がん剤も含まれる）が分子量によって二つの種類に分類される。一つは低分子量で主に１０００Ｄａ以下の分子量を持ってる。これらの薬物は主に化学合成分子、或は天然物から抽出され、純粋化されたものである。メクロレタミン、シスプラチン、５−フルオロウラシル、タキソールなどはその類に属する。一方、もう一つのタイプは高分子で、主に遺伝子技術で組みあわせたタンパク質とペプチト類である。この二種の薬物は高毒性、低水溶性、また比較的に短い半減期があるなどの恐れがある。さらに、タンパク質とペプチト類は免疫反応を惹起する可能性もある。【０００３】  これらの問題を解決する方法として、多量化が注目された。Ｃａｌｉｃｅｔｉ，Ｔ．等はポリビニールのビロリドンによってスーパーオキサイドディスムターゼが修飾されたことを報告した［Ｊ．Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍ．１０：１０３−１２０（１９９５）］。Ｕｒｅｎ，Ｊ．Ｒ．等はＬ−アスパラギナーゼがポリＤＬ−アラニンによって修飾されたことも検討した（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．Ｖ３９，１９２７−１９３３，１９８１）。文献と特許による最も注目されるのは活性化されたＰＥＧを用いての化学修飾反応（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）である。Ｎａｎｄｉｎｉ，Ｋｅ．（Ｅｕｐ．Ｐａｔ．８７３０４７０３．９）とＭｉｋｅ．Ａ．等（ＰＣＴ／ＵＳ９８／００６８３）は腫瘍壊死因子ＴＮＦとＰＥＧの反応を述べた。Ｇｉｌｂｅｒｔ，Ｃ．Ｗ等（ＵＳ  ｐａｔｅｎｔ  ５９５１９７４，ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  ５９８１７０９  ａｎｄ  ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  ６０４２８２２）はＰＥＧがインターフェロン−αを修飾したことを報告し、また、同じく反応、例えインターロイキン２がＰＥＧによって修飾された反応（Ｐｒａｋａｓｈ，Ｒ．Ｋ．ｅｌ．ａｌ  ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  ６２５１やＧＭ−ＣＳＦがＰＥＧによって修飾された反応［Ｋｎｕｓｌｉ，Ｃ  ｅｌ  ａｔ  Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｌ，ｖ８２（４），６５４−６６３（１９９２）、成長因子がＰＥＧによって修飾された反応（Ｍａｌｉｋ，Ｆ  ｅｔ  ａｌ  Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｏｌ，ｖ２０，１０２８−１０３５（１９９２））も次々報告された。【０００４】  薬物ＰＥＧ化学修飾反応において、琥珀酸イミドの活性エステル基、アルデヒド基、トリフルオスルホン酸エステル基、ｐ−ニトロフェニル炭酸エステル基、炭酸エステル基などの活性グループが常に用いられている。一般に使われたＰＥＧは構造的に言うと、線型のグリコースと分枝したグリコースがあるが、分子量が２０００Ｄａから６００００Ｄａまでの大きさを持っている（Ｍｏｎｆａｒｄｉｎｉ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．６：６２−６９，１９９５）。【０００５】  修飾された高分子の性質はＰＥＧの構造、分子量、分子量の分布、および配置によって制御される。同じ構造で、異なる分子量のＰＥＧを用いて修飾された薬物は異なる性質があり、同じ構造と分子量、異なる配置のＰＥＧを用いて修飾された薬物の性質も異なる。
以前、ＰＥＧ修飾反応に存在しているいくつかの問題点はこの修飾された薬物の優れた点が覆われてしまうことにあった。具体的に言うと、ＰＥＧは共役反応に特異な選択性がないため、タンパク性薬物の活性化部位と結合すれば、薬物としての薬効が失うおそれがある。また、多結合点の薬物については、特異の結合点のコント−ロルも非常に難しい。これらの問題のため、ＰＥＧで修飾された薬物の質量は制御できない。【０００６】  この発明の目的は、マルチアーム樹枝状および機能的なＰＥＧを設計し合成し、マルチアーム樹枝状および機能的なＰＥＧの製造方法を提供し、および薬剤中のこれらのポリマーの用途を提供する。【０００７】  本発明のポリマーは、簡便な形式ではＲＰＥＧｚＣＯＸのように表し；ここでＲは（Ｃ１〜Ｃ１０）直鎖アルキル、イソプロピル、ベンジルであり；Ｒが直鎖低級アルキル基（Ｃ１−Ｃ１０）、イソプロピル、ベンジルであり；ｚが腕の数を表す。Ｘが機能的なグループである。ＰＥＧはアミド基，イミド基，カルバミン酸エステル基，エスター基，エポキシ基，カルボキシル，ヒドロキシル，チオールメルカプト基，．炭水化物およびこれらの組み合わせから選択される連結基を介して３−官能基を含む小さな分子に共有結合している。
３−官能基を含む小さな分子は
【化６】
2005514505.tif 000002
からなる群から選ばれる。
例えば３−官能基を含む小さな分子はＨ２Ｎ（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＮＨ２）ＣＯ２Ｈ（ｎ１−９）であり、反応基Ｘは、アミド基カルバミン酸エステル基が用いられているとき，８つの腕のある樹枝状および機能的なＰＥＧ（ＲＰＥＧ８ＣＯＸ）は、下に示す：
【化７】
2005514505.tif 000003
その中に、Ｒは（Ｃ１〜Ｃ１０）直鎖アルキル、イソプロピル、ベンジル、好ましくはメチル基であり；
ｎは１ないし９の整数であり；
ｋは１ないし６の整数であり；
ｓ，ｔ，ｏ，ｐは１０ないし２０００の整数であり；
ＷはＯ、Ｓ及びＮＲ中のいずれかであり；
Ｘは
【化８】
2005514505.tif 000004
からなる群から独立に選択される、
ほかの分枝の数および機能的ＰＥＧの構造は上記のＲＰＥＧ８ＣＯＸと類似している。分枝の数によって構造が異なる。例えば７本の分枝をもつＰＥＧの構造は，８本の分枝をもつＰＥＧの２つの分枝構造が１本の分枝をもつＰＥＧで置換される；６本の分枝をもつＰＥＧ６の構造は，６つの１本の分枝をもつＰＥＧが有する．ここで、いずれの腕の子量が４００から８００，０００ダルトンのである。２本の分枝をもつＰＥＧの調製法はもう述べられている。例えば、Ｙａｍｓｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．等は（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１９９５，６，６２−６９）．に、開示されている。この開示事項を参考としてここに引用する。【０００８】  異なるの腕のある樹枝状および機能的なＰＥＧの調製法は類似している。ここは、３および４本の分枝をもつＰＥＧの調製法を説明している．例えば、ｎが４、ｋが０、ＷがＮＨ、Ｘがパラニトロフェニルであるとき、３および４本の分枝をもつＰＥＧは下に示すようにして調製される。ここで１および２本の分枝をもつＰＥＧはＭｏｎｆａｒｄｉｎｉらの調製法はこのようにして調製される。
【化９】
2005514505.tif 000005
上記のカルボキシル基はパラニトロフェニルエステルとして活性化される、ほかの活性エステルでもいい。例えばスクシンイミジルエステル；カルボキシル基活性化されるのに、パラニトロフェニルエステルを用いられたとき，主な利点は１次に一つ腕だけ付着する。いずれの腕の分子量も制御できる。もし、カルボキシル基活性化するのに、スクシンイミジルエステルを用いると，１次に２つの腕が付着する。主な欠点は２つ腕が同じしかない。もし３−官能基を含む小さな分子化合物のアミドおよびカルボキシルがあらかじめ保護基で保護されていたら，いずれの腕の分子量も制御できる．例えばカルボキシル基活性化するためにスクシンイミジルエステルを用いると、３および４つの腕のある樹枝状ＰＥＧは下に示すようにして調製される。その中に、（Ｌｙｓ）２ＣｕがＷｉｅｊａｋ’ｓ．等（Ｓ．Ｗｉｅｊａｋ，ｅｔ  ａｌ  ＣＨｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１９９９，４７，１４８９−１４９０）．の調製法はこのようにして調製される。【０００９】
【化１０】
2005514505.tif 000006
明らかに、以上のルートにより、調製中には適当なコントロールをすれば、ほかのマルチアーム樹枝状ＰＥＧを容易に調製することできる。この分野に熟練した当業者であれば理解すべきことである。【００１０】  本発明のマルチアーム樹枝状および機能的なＰＥＧは、小さな分子薬、ペプチド、タンパク質類薬物において広く使用されている。例えば．メクロレタミン、シスプラチン、５−フルオロウラシル、タキソール、エリスロポエチン（ＥＰＯ），スーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）、腫瘍壊死因子、インターフェロン、ＧＭ−ＣＳＦ、成長因子。この技術分野でよく知られている方法に従い、ＰＥＧの調製した。例えば．Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ等は（Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１９９４，４，２４６５）に、Ｃａｌｉｃｅｔｉ等はＩＬ  Ｆａｒｍａｃｏ，１９９３，４８，９１９に、Ｚａｌｉｐｓｋｙ  ａｎｄ  Ｌｅｅは  Ｊ．Ｍ．Ｈａｒｒｙｓが編集した《ＰＥＧ化学：生物技術および適用》Ｐｌｅｕｎｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．１９９２に述べた。この開示事項を参考としてここに引用する。この分野に熟練した当業者であれば理解すべきことである。【００１１】  上の例は、本発明の有利な特徴を説明する。
第一に、マルチアーム樹枝状ＰＥＧは大きな流体力学ボリュームを持っているために、タンパク質上の表面の何らかの基と反応したら、ほかの結合点との反応が難しくになる。それによって特異の結合ができる。
第二に、分枝の数および分子量で流体力学ボリュームが制御できる。それでタンパク質の結合点に近づくことが難しい。ＰＥＧ／タンパク質複合体の生物活性を維持する。
第三に、マルチアーム樹枝ＰＥＧは２本の分枝をもつＰＥＧおよび直鎖状ＰＥＧと比べて、タンパク質表面の巨大分子あるいは細胞を效率的に妨げされる．それによって血中循環半減期が増大して免疫原性も減少する。
【実施例】
【００１２】  以下、実施例を挙げ、本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではなく、また本発明の範囲を逸脱しない範囲で変化させてもよい。
ＧＰＣおよびＭＡＬＤＩを用い、合成したマルチアーム樹枝状ＰＥＧを分析した。【００１３】  ＜実施例１＞
ｍＰＥＧ３ＣＯ２ＰｈＮＯ２の合成．（腕の長さが異なる）
リジン（４３９ｍｇ，３ｍｍｏｌ）を、２０ｍｌ水（ｐＨ８．０ｔｏ  ｐＨ８．３）中に溶解し、ｍＰＥＧ２ＣＯ２ＰｈＮＯ２（２本の分枝をもつＰＥＧ    ＭＷ１０，０００Ｄａ，１本の分枝のＭＷ  ７，０００，もう１本の分枝のＭＷ３，０００，１０ｇ，１ｍｍｏｌ））を、３時間で少量ずつ添加し、２Ｎ  ＮａＯＨを用いてｐＨ８．３に維持した。反応混合物を室温で一夜攪拌した。朝になって反応を０℃にまで冷却し，２ＮＨＣｌを用いて、中和して、ｐＨ３になるまで添加した。ジエチルエーテルにより水中の不純物を除去し、次いでクロロホルムで３回抽出した。有機層を濃縮して、生成物はエチルエーテルで沈殿させて捕集した。さらに沈殿はエタノールから２回再結晶させ、標題化合物ｍＰＥＧ２−モノ−リジン（ｍＰＥＧ２−ｍｏｎｏ−Ｌｙｓｉｎｅ）が固体として得られた。アミドより滴定したＧＰＣ（ｇｅｌ  ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）およびＭＡＬＤＩ（ｍａｔｒｉｘ−ａｓｓｉｓｅｄ  ｌａｓｅｒｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ）を用い、生成物を合分析した。純度は９９％であった。
Ｃ．Ｍｏｎｆａｒｄｉｎｉ，Ｏ．Ｓｃｈｉａｖｏｎ，Ｐ．Ｃａｌｉｃｅｔｉ，Ｍ．Ｍｏｒｐｕｒｇｏ，Ｊ．Ｍ．Ｈａｒｒｉｓ  ａｎｄ  Ｆ．Ｍ．Ｖｅｒｏｎｅｓｅ，Ａ  Ｂｒａｎｃｈｅｄ  Ｍｏｎｍｅｔｈｏｘｙｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ，１９９５，６，６２−６９）を参考としてここに引用する。
得られたｍＰＥＧ２−モノ−リジン（ｍＰＥＧ２−ｍｏｎｏ−Ｌｙｓｉｎｅ）が（９ｇ，０．９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍｌ）溶液にトリエチルアミン（ＴＥＡ）をｐＨ８まで添加した。ｍＰＥＧＣＯ２ＰｈＮＯ２（直鎖状ＰＥＧＭＷ５，０００Ｄａ５．０２５ｇ・１．０５ｍｍｏｌ））を、３時間で少量ずつ加え、トリエチルアミン（ＴＥＡ）でｐＨ８に維持した．溶液は７２時間加熱還流させ、室温まで冷却後，濃縮し、濾過し、無水エチルエーテルを添加することにより、白色粉末を沈殿させた。得られた沈殿物を少量のエタノールから再結晶させる。過剰量のｍＰＥＧＣＯ２ＰｈＮＯ２を炭酸ナトリウム水溶液（Ｎａ２ＣＯ３ｐＨ９−１０）に一夜撹拌し，水解させる。一昼夜の反応後，０℃にまで冷却し、２ＮＨＣｌを用いて、ｐＨ３に調整した。次いでｐ−ニトロフェノールをジエチルエーテルで抽出した後、クロロホルムで３回抽出した。有機層を濃縮して、生成物はエチルエーテルで沈殿させて捕集した。さらに沈殿物はエタノールから２回再結晶させた。ＱＡＥセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ａ５０カラム（サイズ：内径５×高さ８０ｍｍ，ｐＨ８．９ボラート緩衝液）において，生成物を精製し，純粋なｍＰＥＧ３ＣＯ２Ｈを得た。アミノにより滴定した。生成物をＧＰＣおよびＭＡＬＤＩで分析した。純度は９９％であった。
０℃にｍＰＥＧ３ＣＯ２Ｈ（９ｇ，０．６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍｌ）溶液にパラニトロフェノー（０．１６７ｇ，１．２ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（０．４８ｇ，１．２ｍｍｏｌ）を入れ、室温で一夜撹拌反応させ、濾液を濃縮し、無水エチルエーテルで沈殿させて、さらに沈殿物はエチルアセテートに２回再結晶させた。純粋なｍＰＥＧ３ＣＯ２ＰｈＮＯ２を得た。加水分解した生成物はアルカリの条件下、パラニトロフェノールの陰イオンのＵＶ吸収を４００ｎｍで測定を行った。活性エステルの含有量は９９％以上であった。【００１４】  ＜実施例２＞
ｍＰＥＧ３ＣＯ２Ｓｕの合成．（腕の長さが異なる）
実施例１で合成されたｍＰＥＧ３ＣＯ２Ｈ（９ｇ，０．６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍｌ）に溶解し、この溶液を０℃に冷やした後、Ｎ−−ビドロキシルスクシナイミド（０．１３８ｇ，１．２ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（０．４８ｇ，１．２ｍｍｏｌ）を入れ、室温で一夜撹拌した。ろ過し、ろ液を無水エチルエーテルを添加することにより、白色粉末を沈殿させた。得られた沈殿物を少量のエチルアセテートから再結晶させ、純粋なｍＰＥＧ３ＣＯ２Ｓｕを得た。スクシナイミドの陰イオンのＵＶ吸収を２６０ｎｍで測定を行った。含有量は９８％であった。【００１５】  ＜実施例３＞
ｍＰＥＧ４ＣＯ２ＰｈＮＯ２の合成．（腕の長さが異なる）
実施例１で得られたｍＰＥＧ２−モノ−リジンが（ＭＷ１０，０００，９ｇ，０．９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍ１）溶液にトリエチルアミン（ＴＥＡ）をＰＨ８になるまで添加し、ｍＰＥＧＣＯ２ＰｈＮＯ２（２本の分枝をもつＰＥＧ  ＭＷ１０，０００Ｄａ，１本の分枝のＭＷ７，０００，もう１本の分枝のＭＷ３，０００．１０．５ｇ，１．０５ｍｍｏｌ）を、３時間で少量ずつ添加し，トリエチルアミン（ＴＥＡ）でｐＨ８に維持した。７２時間加熱還流し，その後室温まで冷却後、濃縮し、濾過し、無水ジエチルエーテルを添加することにより、白色粉末を沈殿させた。その後、次いで生成物をエタノールから２回再結晶させた。炭酸水素ナトリウム水溶液（Ｎａ２ＣＯ３  ｐＨ  ９−１０）ｍＰＥＧＣＯ２ＰｈＮＯ２）を一夜撹拌し、水解させる。一昼夜の反応後、０℃にまで冷却し２Ｎ  ＨＣｌを用いて、ｐＨ３になるまで中和した。次いでｐ−ニトロフェノールをジエチルエーテルで抽出し、クロロホルムで３回抽出した。合わせた有機層に無水ジエチルエーテルを添加することにより、白色粉末を沈殿させた。次いで生成物をエタノールから２回再結晶させた。ＱＡＥセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ａ５０カラム（サイズ：内径５×高さ８０ｍｍ，ｐＨ８．９硼酸緩衝液）において、精製し、純粋なｍＰＥＧ４ＣＯ２Ｈを得た。カルボキシにより滴定した。生成物をＧＰＣおよびＭＡＬＤｌで分析した。純度は９８．５％であった。
０℃にｍＰＥＧ４ＣＯ２Ｈ（１２ｇ，０．６ｍｍｏｌ）の炭酸水素ナトリウム水溶液（２５ｍｌ）溶液に、ｐ−ニトロフェノール（０．１６７ｇ，１．２ｍｏｌ）、ＤＣＣ（０．４８ｇ，１．２ｍｍｏｌ）を入れ、室温で一夜撹拌反応させ、ろ過し、ろ液を無水エチルエーテルを添加することにより、白色粉末を沈殿させた。得られた沈殿物を少量のエチルアセテートから再結晶させ、純粋なｍＰＥＧ４ＣＯ２ＰｈＮＯ２を得た。ｍＰＥＧ４ＣＯ２ＰｈＮＯ２はＵＶ吸収を４００ｎｍで測定を行った。純度は９８％であった。【００１６】  ＜実施例４＞
ｍＰＥＧ３ＣＯ２Ｓｕの合成．腕の長さが異なる）［方法二］
リジン塩酸塩（３６５ｍｇ，２ｍｍｏｌ）をＮａＨＣＯ３溶液（２Ｍ  ２ｍｌ）に撹拌しながら溶解し、ＣｕＳＯ４溶液（０．５Ｍ，２ｍＬ）を投入し、同時にボラート緩衝液をＰＨ８になるまで添加し、ｍＰＥＧ２ＣＯ２Ｓｕ（２本の分枝をもつＰＥＧ  ＭＷ  １０，０００Ｄａ，１本の分枝のＭＷ７，０００，もう１本の分枝のＭＷ３，０００，２０ｇ，２ｍｍｏｌ）を加え、ＮａＯＨでｐＨ８．に維持し、室温で２４時間反応させた。その後、シュウ酸を用いて１００ｍＬに希釈し、ｐＨ３にした。溶液をジクロロメタンで３回抽出し、濾液を濃縮し、無水ジエチルエーテルを添加することにより、白色粉末を沈殿させた。得られた生成物をエタノールから２回再結晶させ、（ｍＰＥＧ２Ｌｙｓ）２Ｃｕとして得られた。
上述の（ｍＰＥＧ２Ｌｙｓ）２Ｃｕ（２０ｇ，２ｍｍｏｌ）のアセトン（４０ｍｌ）溶液に８−カルボキシル基キノリン（４．２ｍｍｏｌ）およびＮａ２ＣＯ３水溶液（１０％，２０ｍｌ）を入れ、室温で１時間攪拌後、ｍＰＥＧＣＯ２Ｓｕ（直鎖状ＰＥＧ  ＭＷ５，０００Ｄａ，１０ｇ，２ｍｍｏｌ）を加え、ｐＨ８．に維持し、室温で２４時間反応させた。その後反応液をろ過釈し、シュウ酸を用いてｐＨ３にする。溶液をジクロロメタンで３回抽出し、濾液を濃縮し、無水ジエチルエーテルを添加することにより、白色粉末を沈殿させた。次いで得られた生成物をエタノールから２回再結晶させ、ｍＰＥＧ３ＣＯ２Ｈとして得られた。ＱＡＥセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ａ５０カラム（サイズ：内径５×高さ８０ｍｍ，ｐＨ８．９ボラート緩衝液）において、生成物を精製し、純粋なｍＰＥＧ３ＣＯ２Ｈを得た。カルボキシにより滴定した。生成物をＧＰＣおよびＭＡＬＤＩで分析した。純度は９９％であった。
０℃にｍＰＥＧ３ＣＯ２Ｈ（９ｇ，０．６ｍｍｏｌ）の炭酸水素ナトリウム水溶液（２０ｍｌ）溶液に、Ｎ−−ビドロキシルスクシナイミド（０．１３８ｇ，１．２ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（０．４８ｇ，１．２ｍｍｏｌ）を入れ、室温で一夜撹拌反応させ、ろ過し、ろ液を無水エチルエーテルを添加することにより、白色粉末を沈殿させた。さらに沈殿物を少量のエチルアセテートから再結晶させ、純粋なｍＰＥＧ３ＣＯ２Ｓｕを得た。活性エステルの含有量は９９％であった。【００１７】  ＜実施例５＞
ｍＰＥＧ４ＣＯ２Ｓｕの合成．（腕の長さが同じ）
リジン塩酸塩（３６５ｍｇ，２ｍｍｏｌ）を１００ｍｌボラート緩衝液（ｐＨ８．０）に溶解し、ｍＰＥＧ２ＣＯ２Ｓｕ（ＭＷ２０，０００，８０ｇ，４ｍｍｏｌ）を加え、同時に０．２Ｎ  ＮａＯＨでｐＨ８．に維持し、室温で２４時間反応させた後、シュウ酸イオン化水を用いて４００ｍＬに希釈し、ｐＨ３になった。溶液をジクロロメタンで３回抽出し、濾液を濃縮し、そして無水ジエチルエーテルを添加することにより、白色粉末を沈殿させた。次いでこの生成物をエタノールにより精製して２回再結晶させるとｍＰＥＧ４ＣＯ２Ｈの粗生成物が得られた。ＤＥＡＥセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）ＥＦにおいて粗生成物を分離し、純粋なｍＰＥＧ４ＣＯ２Ｈを得た。収率は９２％であった。ＮＭＲ，ＧＰＣおよびＭＡＬＤＩスペクトルより反応産物構造を認めた。
得られたｍＰＥＧ４ＣＯ２Ｈ（２４ｇ，０．６ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン溶液（２０ｍｌ）に０℃にまで冷却し，Ｎ−−ビドロキシルスクシナイミド（０．１３８ｇ，１．２ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（０．４８ｇ，１．２ｍｍｏｌ）を入れ、室温で一夜撹拌反応させ、濾液を濃縮し、無水エチルエーテルで沈殿させて、さらに沈殿物はエチルアセテートに２回再結晶させた。純粋なｍＰＥＧ４ＣＯ２Ｓｕを得た。活性エステルの含有量は９６％であった。【００１８】  ＜実施例６＞
ｍＰＥＧ８ＣＯ２Ｓｕの合成（腕の長さが同じ）
実施例５の手順に従ってｍＰＥＧ４ＣＯ２Ｓｕ原料を用いて、ｍＰＥＧ８ＣＯ２Ｓｕを得た。收率は８５％であった。【００１９】  ＜実施例７＞
ｍＰＥＧ５ＣＯ２ＳｕおよびｍＰＥＧ５ＣＯ２ＰｈＮＯ２の合成
実施例１に記載した方法に準じ，ｍＰＥＧ３ＣＯ２ＰｈＮＯ２およびｍＰＥＧ２ＣＯ２ＰｈＮＯ２原料を用いて，ｍＰＥＧ５ＣＯ２ＰｈＮＯを得た。收率は９０％であった。実施例２に記載した方法に準じ，ｍＰＥＧ５ＣＯ２Ｓｕを得た。收率は９１％であった。【００２０】  ＜実施例８＞
ｍＰＥＧ６ＣＯ２ＳｕおよびｍＰＥＧ６ＣＯ２ＰｈＮＯ２の合成
実施例１に記載した方法に準じ，ｍＰＥＧ３ＣＯ２ＰｈＮＯ２原料を用いて，ｍＰＥＧ６ＣＯ２ＰｈＮＯ２を得た。收率は８９％であった。あるいは実施例２に記載した方法に準じ，ｍＰＥＧ６ＣＯ２Ｓｕを得た。收率は８８％であった。あるいはｍＰＥＧ２ＣＯ２ＳｕおよびｍＰＥＧ２ＣＯ２ＰｈＮＯ２原料を用いて，ｍＰＥＧ６ＣＯ２ＰｈＮＯ２を得た。收率は９２％であった。実施例２に記載した方法に準じ，ｍＰＥＧ６ＣＯ２Ｓｕを得た。收率は８８％であった。【００２１】  ＜実施例９＞
ｍＰＥＧ７ＣＯ２ＳｕおよびｍＰＥＧ７ＣＯ２ＰｈＮＯ２の合成
実施例１に記載した方法に準じ，ｍＰＥＧ３ＣＯ２ＰｈＮＯ２およびｍＰＥＧ４ＣＯ２ＰｈＮＯ２原料を用いて，ｍＰＥＧ７ＣＯ２ＰｈＮＯ２を得た。收率は９０％であった。実施例２に記載した方法に準じ，ｍＰＥＧ５ＣＯ２Ｓｕを得た。收率は８６％であった。実施例２に記載した方法に準じ，ｍＰＥＧ７ＣＯ２Ｓｕを得た。收率は８７％であった。【００２２】  ＜実施例１０＞
ｍＰＥＧ８ＣＯ２ＳｕおよびｍＰＥＧ８ＣＯ２ＰｈＮＯ２の合成
実施例１に記載した方法に準じ，ｍＰＥＧ３ＣＯ２ＰｈＮＯ２およびｍＰＥＧ５ＣＯ２Ｓｕ原料を用いて，ｍＰＥＧ８ＣＯ２ＰｈＮＯ２を得た。收率は８０％であった。あるいはｍＰＥＧ４ＣＯ２ＰｈＮＯ２原料を用いて，ｍＰＥＧ８ＣＯ２ＰｈＮＯ２を得た。收率は７９％であった。実施例２に記載した方法に準じ，ｍＰＥＧ８ＣＯ２Ｓｕを得た。收率は７８％であった。【００２３】  ＜実施例１１＞
実施例１−１０と同様の方法により、アルデヒド基活性化される（三つ，四つ，五つ，六つ，七つ，八つ）分枝をもつＰＥＧを得た。【００２４】  ＜実施例１２＞
実施例１−１０と同様の方法により、カルボキシル基活性化される（三つ，四つ，五つ，六つ，七つ，八つ）分枝をもつＰＥＧを得た。【００２５】  ＜実施例１３＞
実施例１−１０と同様の方法により、アミノ基活性化される（三つ，四つ，五つ，六つ，七つ，八つ）分枝をもつＰＥＧを得た。【００２６】  ＜実施例１４＞
実施例１−１０と同様の方法により、カルボキシル基活性化される（三つ，四つ，五つ，六つ，七つ，八つ）分枝をもつＰＥＧを得た。【００２７】  ＜実施例１５＞
実施例１−１０と同様の方法により、スクシナイミド基活性化される（三つ，四つ，五つ，六つ，七つ，八つ）分枝をもつＰＥＧを得た。
【国際調査報告】
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