(57)【要約】動物及びヒトの細胞における非エストロゲン依存性の過剰増殖は、ａ）細胞周期のＧ１／Ｓ期に対する二つ又はそれ以上のインヒビター、ｂ）細胞周期のＧ２／Ｍ期に対する二つ又はそれ以上のインヒビター、及びｃ）タンパク質チロシンキナーゼ活性に対する二つ又はそれ以上のインヒビターからの少なくとも三つの成分の組合わせを有する薬剤又は栄養剤組成物によって、予防又は治療することができる。特に、成分ａ）はフラバノリグナン、カロテノイド及びイソフラボンから選択される二つ又はそれ以上の化合物を含み、成分ｂ）は、フラバノリグナン、ヒドロキシル化スチルベン、イソフラボン及びアピゲニンをから選択される二つ又はそれ以上の化合物を含み、さらに、成分ｃ）はフラバノリグナン及びイソフラボンから選択される二つ又はそれ以上の化合物を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
動物及びヒトの細胞の非エストロゲン依存性の過剰増殖の予防及び治療のための組成物を調製するための、
ａ）細胞周期のＧ１／Ｓ期に対する二つ又はそれ以上のインヒビターと、
ｂ）細胞周期のＧ２／Ｍ期に対する二つ又はそれ以上のインヒビターと、
ｃ）タンパク質チロシンキナーゼ活性に対する二つ又はそれ以上のインヒビターと、
の組み合せの使用。
【請求項２】
成分ａ）は、フラバノリグナン、カロテノイド、ダイゼイン及びそれらの機能上の類似物から選択される二つ又はそれ以上の化合物を有する請求項１に記載の使用。
【請求項３】
成分ａ）は、日用量当たり１０〜１４００ｍｇ、好ましくは、２０〜５００ｍｇの量のフラバノリグナン、及び／又は日用量当たり０．１〜１００ｍｇ、好ましくは、５〜２０ｍｇの量のカロテノイド、及び／又は日用量当たり５〜１０００ｍｇ、好ましくは、３０〜２００ｍｇの量のダイゼインを含有している請求項２に記載の使用。
【請求項４】
成分ｂ）は、フラバノリグナン、ヒドロキシル化スチルベン、ゲニステイン、アピゲニン及びそれらの機能上の類似物から選択される二つ又はそれ以上の化合物を有する請求項１から３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
成分ｂ）は、日用量当たり１０〜１４００ｍｇ、好ましくは、２０〜５００ｍｇの量のフラバノリグナン、及び／又は日用量当たり０．１〜１００ｍｇ、好ましくは、５〜２０ｍｇの量のヒドロキシル化スチルベン、及び／又は日用量当たり５〜１０００ｍｇ、好ましくは、３０〜２００ｍｇの量のゲニステインを含有している請求項４に記載の使用。
【請求項６】
成分ｃ）は、フラバノリグナン、ゲニステイン、ヒドロキシル化スチルベン及びそれらの機能上の類似物から選択される二つ又はそれ以上の化合物を有する請求項１から５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
成分ｃ）は、日用量当たり５〜１０００ｍｇ、好ましくは、５〜５０ｍｇの量のフラバノリグナン、及び／又は日用量当たり５〜１０００ｍｇ、好ましくは、４０〜２００ｍｇの量のゲニステインを含有している請求項６に記載の使用。
【請求項８】
成分ａ）は、シリマリン、ダイゼイン、又はエクオル、及びリコピン又はレチノイン酸などのカロテノイドのうちの少なくとも二つを有し、成分ｂ）は、シリマリン、ゲニステイン、レスベラトロール、アピゲニン及びクエルセチンのうちの少なくとも二つを有し、さらに、成分ｃ）は、シリマリン及びゲニステインのうちの少なくとも二つを有している請求項２から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
シリマリン、ダイズ抽出物及びリコピンを有する請求項１から８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
成分ａ）、ｂ）及びｃ）の総日用量の合計が、動物及びヒトにおける体重１ｋｇ当たり０．５から３５ｍｇの間である請求項１から９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
組成物が脂質フラクションを有する請求項１から１０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
脂質フラクションがリン脂質を有する請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
成分ａ）、ｂ）及びｃ）の合計の日用量当たりの重量と脂質フラクションの日用量当たりの重量との比率が、１：３００から２：１の間、好ましくは、１：３０から１：６の間である請求項１１又は１２に記載の使用。
【請求項１４】
組成物が一つ又はそれ以上のハーブ抽出物又はそれらの成分を有している請求項１から１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
組成物は、ビタミン、微量元素、ミネラル、抗酸化剤及びマクロ成分から選択される一つ又はそれ以上の化合物をさらに有している請求項１から１４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１６】
動物又はヒトにおける非エストロゲン関連性のガン、特に、前立腺ガンもしくは結腸直腸ガンの予防及び治療のため、又は乾癬の治療のための請求項１から１５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１７】
少なくとも三つの活性成分、すなわち、
ａ）細胞周期のＧ１／Ｓ期に対する二つ又はそれ以上のインヒビターと、
ｂ）細胞周期のＧ２／Ｍ期に対する二つ又はそれ以上のインヒビターと、
ｃ）タンパク質チロシンキナーゼ活性に対する二つ又はそれ以上のインヒビターと、
を有する組成物であって、成分ａ）、ｂ）及びｃ）の合計の重量とＬ-アルギニンの重量との比率が１：１よりも大きい組成物。
【請求項１８】
シリマリン、ゲニステイン及び／又はダイゼイン、ならびにカロテノイドを１：０．２〜４：０．０２〜０．４の相対量で含有する請求項１９に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、細胞の過剰増殖の予防及び治療のための組成物の使用であって、細胞周期の異なる期(different phases)に対するインヒビターと、タンパク質チロシンキナーゼ活性に対するインヒビターとの組合わせを有する組成物の使用に関する。さらに、本発明はこれらの抗増殖性特性を有する組成物に関する。
【０００２】
発明の背景
細胞の過剰増殖は、多くの場合において、ヒト及び動物における非常に好ましくないプロセスであり、これは、深刻で、場合によっては、致死的な様々な疾患を生じる。これらの疾患の最も顕著なメンバーはガンである。ガンは、世界中でヒトの総死者数の多くの部分を占める。例えば、米国において、約１２０万件の侵襲性ガンの新規な症例が毎年診断され、そして、約５００，０００人がその疾患で毎年死亡している。ガンは２番目に致死率の高い疾患であり、２１世紀初期には心疾患を抑えてその極悪リストの最上位に昇ることが予測される。ガンは、直接的な拡大を通じて正常な器官に対して破壊的に侵襲することによって殺し、また、血液、リンパ液又は漿膜表面を介して異なる部位に転移する。
【０００３】
ガンは、異常な細胞の未制御の増殖によって特徴付けることのできる疾患のクラスである。細胞のこの未制御の増殖は、過剰増殖によって引き起こされる。正常な生活における哺乳動物組織は、常に、ストレス因子（ベンゼン又はニトロスアミンなどの化学物質、機械的損傷、ガンマ及び紫外線放射などの物理的因子、ならびにエプスタインバール及び肝炎ウイルスなどの生物因子）に曝され、これは細胞又はその中の特定の（必須の）成分(component)を損傷又は変異させることによって、ある条件の下で、発ガンに寄与する。健常な身体においては、これらの異常を修復し得る幾つかの機構が作動する。細胞が修復され得ない場合、細胞は制御された方法（アポトーシス）によって死に、組織はその細胞を健常な細胞と置換する。変異又は損傷を受けた細胞が望ましくないとして認識されない場合は、それらが環境の制御に非感受性になったとき、又はそれらが迅速に分裂できるとき（迅速な細胞増殖）には、腫瘍が形成される。
【０００４】
いくつかの遺伝子及び因子は、腫瘍の形成及び増殖に関与することが知られている。これに関して、分裂促進増殖因子(mitogenic growth factors)が周知である。これらの増殖因子は、タンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）の活性を増加させることが可能である。これらは、細胞周期ひいては増殖を調節する幾つかの重要なタンパク質をリン酸化することができる。ＰＴＫの阻害は、ガン治療手段のための公知の目標であるが、合成ＰＴＫインヒビターでの治療は重度のネガティブな副作用を生じる。さらに、いくつかの内因性遺伝子は、未制御の細胞増殖に加担する。これらの遺伝子の一つの群はオンコジーンと呼ばれる。オンコジーンの前駆体であるプロトオンコジーンは、細胞コマンド(cellular command)及び制御プロセスにおける生化学的なスイッチとして作用し、特に、細胞の外部から核へシグナルを伝達する。細胞外シグナルの前進的かつ制御された伝達は、伝達メンバーのうちの一つが腫瘍性変異によって本質的に活性化されたときには無視される。これによって、未制御の細胞分裂がもたらされる。
【０００５】
ポジティブな増殖シグナルの増加に加えて、細胞損失の減少及び細胞増殖の増加は、未制御の細胞増殖の原因である。プロトオンコジーンは変異的な損傷後の機能の獲得によって特定されるが、別のクラスのガン遺伝子、いわゆる、腫瘍抑制遺伝子は、変異的な損傷後の機能の喪失によって未制御の細胞増殖に寄与する。通常、これらの遺伝子は特異的な遺伝子に結合してそれらの発現を調節することによって、損傷したＤＮＡの分裂を防止することができる。その結果、細胞周期の間のチェックポイントとして役割を果たすあるタンパク質の発現が調節される。腫瘍抑制遺伝子が変異される場合、この調節は減少されるか、又は完全になくなり、未制御の細胞の増殖がもたらされる。
【０００６】
細胞増殖は周期的に起こる。順序付けられた作用のセットは、一つの細胞が母細胞と同一の遺伝子物質を有する二つの嬢細胞に分裂することを確実にする。それらは、それぞれ、二つの新規な嬢細胞へとさらに分裂可能である。非分裂細胞は、定義によれば、いわゆるＧ０期にある。間隙期（Ｇ１）は、細胞が、いわゆる、「合成」（Ｓ）期に入る前に生じる。合成期においては、ＤＮＡが複製される。合成期の後、第２の間隙期（Ｇ２）が認識される。これは、細胞が分裂（Ｍ）段階に入る前に認識される。分裂段階においては、核（及び染色体）及び細胞質が分離する（細胞質分裂）。Ｍ段階においては、四つの期が認識できる。
【０００７】
従って、染色体複製及び分離は細胞周期の別々の部分に拘束されるが、細胞再生の第３の必須の成分−増殖−は、全ての期、すなわち、Ｇ１、Ｓ、Ｇ２及びＭにおいて継続的に生じる。Ｇ１及びＧ２の間、細胞は増殖因子及びサイトカインなどの増殖及び抗増殖シグナルに応答することができ、それによって、細胞分裂を進行するべきかについて決定する。
【０００８】
現在、腫瘍は、最適な治療戦略を決定するために、治療の前に集中的に検査されることが多い。ガンについての主な治療法は、外科手術、放射線療法、化学療法及び生物学的療法を含む。外科手術は最も古い方法であるが、ガン細胞の転移のために、単独では不適切なことが多い。放射線療法は、切除できない限局性腫瘍や予測可能な隣接部位に伝播する傾向がある腫瘍について最も有用である。化学療法は、様々なガンについての全身性の治療について使用される。これは複数の薬物の組合わせからなる。成功の可能性を最も高くするためには、これら薬物の組合わせが投与される必要がある。これらのカクテルの調合物は、治療の間に腫瘍細胞の特性が変化する場合には、変更されることもある。最後に、ガンの生物学的治療は、初期段階について開発下にある。これらは、骨髄移植に加えて、化合物、たとえば、リンホカイン、モノクローナル抗体、又は腫瘍細胞を「無害な」細胞に分化させるレチノイン酸などの薬剤による治療を含む。
【０００９】
多くの形態のガンは、現在の治療を使用して処理することが非常に困難である。このことは、前立腺ガン及び結腸ガンなどの非エストロゲン依存性のガンに確実に当てはまる。利用可能な治療の適用にも拘らず、これらのガンに罹患している患者は、長期間の生存について予後は良好でないことが多い。多くの例において、このことは、有効な薬物が十分な量において腫瘍細胞に浸透できないか、腫瘍細胞が使用される薬物に対して耐性を獲得したかのいずれかの事実に起因する。さらに、ガン治療、特に、化学療法は深刻な望ましくない副作用を引き起こす。このことは、短期間又は長期間にわたって、患者の正常な機能を妨げる。これらの潜在的な副作用としては、病気、疲労、体重減少、機能異常、脱毛、不妊症などが挙げられる。ガン治療は、例えば、口、咽喉及び腸の粘膜内層に対して損傷を引き起こすことも知られる。さらに、多くの場合、患者は空腹感の喪失を感じる。このことは、悪い摂食習慣、さらには、栄養不良をもたらし、それによって、回復プロセス及び予後に影響を与える。
【００１０】
主要なガン療法の成功率は近年増加しているが、多くの研究が、ガンの原因を解明するため、及びより良好な治療を開発するためになされている。腫瘍の治療においては、腫瘍細胞の増殖の阻害が選択的な方法によって起こることが重要である。他の迅速に分裂する細胞ならびに代謝的に高い活性の細胞、たとえば、線維芽細胞、腸上皮細胞、骨髄、及び強力な内分泌機能を有する細胞の増殖は、理想的には妨げられないはずである。腫瘍増殖中においては、腫瘍への栄養素及び酸素の供給のための能力及び腫瘍からの代謝物質の除去のための能力を増加するために、新規な血管が形成されなくてはならない（血管形成）。それゆえ、治療用の調製物は、腫瘍細胞及び腫瘍誘導性の血管形成に関与する細胞の増殖を阻害することが重要である。
【００１１】
米国特許第５，９１２，２６５号（ボンバーデリ(Bombardelli)外）は、フラバノリグナンのエストロゲン依存性の腫瘍に対する抗増殖活性を開示している。フラバノリグナンは、シリマリン、シリビン、シリジアニン、シリクリスチン及びデヒドロシリビン、又はそれらの混合物もしくは抽出物から選択される。これらの腫瘍の増殖は高い全身性のエストロゲンレベルによって増進する。エストロゲン依存性のガンの例は、卵巣ガン、乳ガン、子宮頸ガン及び子宮ガンである。フラバノリグナン又はそれらの成分は、ＩＩ型エストロゲン受容体又は受容体βに対して拮抗作用を有することが示される。前立腺、結腸、肺、皮膚、膀胱などにおける腫瘍などの非エストロゲン依存性のガンからの腫瘍細胞の増殖に対するこれらのフラバノリグナン又はそれらの成分の活性に対しては、参照はされていない。フラバノリグナンは抗腫瘍剤のシスプラスチン又はアドリアマイシン、及び脂質と組み合わせることができる。
【００１２】
ＷＯ００/０７６０７（コスバブ(Kosbab)）は、ガン及び骨粗鬆症、特に、ホルモン依存性のガンを含む女性のガンの予防又は治療に使用するための多成分組成物を開示している。組成物は、抗酸化剤、新生血管調節因子、コラーゲン因子、ミネラル、ビタミン、アルギニン、及び他のアミノ酸、ならびにさらに多くの成分を含む。抗酸化剤は、ビタミンＣ及びＥ、亜鉛、カリウム及び植物からのバイオフラボノイドを含む広範な成分からなる。バイオフラボノイドとしては、種々の植物抽出物からのカテキン、タンニン、レスベラトロール、シリマリン、クルクミン、クエルセチン、ルテイン、β-カロテン、及び多くの他の抗酸化剤の中で特に言及されるグルタチオンが挙げられる。新生血管調節因子としては、コンドロイチン硫酸、プロタミン硫酸、イソフラボン（例えば、ゲニステイン、ダイゼイン）、ギムネマ・シルベスタ(Gymnema sylvestre)などが挙げられる。コラーゲン因子としては、グルコサミン、コンドロイチン硫酸、マンガン及びある種のアミノ酸が挙げられる。例として、調合物ＩＩＩは、ロイコアントシアニジン、イチョウ、ビタミンＣ、Ｅ及びＡ、リモネン、カロテノイド（おそらく、リコピン）、茶ポリフェノール、ゲニステイン、コンドロイチン硫酸、亜鉛、カルシウム及びマグネシウム、アルギニン及びω-３脂肪酸を含み、調合物ＶＩは、調合物ＩＩＩの成分に加えて、プロタミン硫酸、ビタミンＤ３、分岐アミノ酸、クエルシチン、ノコギリパルメット、ビタミンＢ複合体、カリウム、セレニウム、チオクト酸、アリシン、シリマリン、クルクミン、ナイアシンアミド、リノレイン酸などを含む。投与されるべき量は、ほとんどの成分について、１日当たり数マイクログラム又は数ミリグラムから数百又は数千ミリグラムの範囲であるが、上記のような特定の調合物について、成分のいずれについても量は与えられていない。
【００１３】
ＷＯ００/０７６０７の組成物の欠点は、それらがかさ張るとともに高価であることである。さらに、組成物の抗増殖特性に対する関係は示唆されておらず、細胞増殖におけるいくつかの段階を阻害する種々の成分を投与することによって得られる相乗効果についても示唆されておらず、腫瘍細胞についての調製物の活性の特異性及び好ましくない重篤な副作用が起こらないことについても示唆されていない。組成物の成分は明らかに、広範な他の効果のために含まれる（ＷＯ００／０７６０７における表２を参照のこと）。ＷＯ００／０７６０７の組成物のさらなる欠点は、それらが、虚血及びＰＭＡ-誘導性の血管形成に対して望ましくない促進効果を有するアルギニン及びある種のグリコサミノグリカンなどの幾つかの成分を含むことである（ムロハラ(Murohara)外（１９９８）、ジェイ・クリン・インベスト(J.Clin.Invest.)、１０１、２５６７〜２５７８を参照のこと）。これらは、腫瘍増殖を促進する可能性がある。ＷＯ００／０７６０６は、多成分組成物と、炭水化物、脂肪及びタンパク質とを組合わせることの有望性については記載しておらず、また、これらのエネルギー提供物質の性質に対しても開示していない。
【００１４】
ＷＯ０１／２６６６８（シュローダー(Schroeder)外）は、リコピン、セレニウム化合物及びイソフラボノイド（ゲニステイン又はダイゼイン）を含む抗前立腺ガン活性を有する組成物を記載している。さらなる成分であるファイトステロール、カテキン、β-カロテン、ルテイン及びトコフェロールは、組成物の有効性を増強すると言われている。イソフラボノイド対リコピンの好ましい比率は１２：１である。分割投与（１日当たり数回の投与量中のイソフラボノイド及びカテキン、ならびに１日１回のみの他の成分）が好ましい。
【００１５】
ゾウ(Zhou)外（ジャーナル・オブ・ニュートリッション(J.Nutrition、１２９、（１９９９）１６２８）は、ダイズイソフラボン（ゲニステイン又はダイゼイン）が、ＩＣ５０＞５０μＭにおいて、前立腺ガン細胞の増殖を阻害することを報告している。フシー(Hsieh)とウー(Wu)（エクスペリメンタル・セル・リサーチ(Exp. Cell Res.)、２４９、（１９９９）１０９）は、前立腺特異的抗原の発現に対する高レベルのレスベラトロールのの阻害効果を記載している。ブハーシャ(Bhatia)及びアガーウォール(Agarwall)（ザ・プロステイト(The Prostate)、４６、（２００１）９８）は、１００〜２００μＭでのシリマリン、ゲニステイン及びエピガロカテキンガレートの前立腺ガン腫細胞に対する効果を報告している。これら及び他の研究は、幾つかの植物成分が活性な抗増殖剤であることを示唆するが、増殖細胞周期における種々の成分の標的に関して、従って、その組合わせが治療の総合的な有効性を増加させることに関して、当業者に何らの指針も与えてはいない。
【特許文献１】米国特許第５，９１２，２６５号明細書
【特許文献２】国際出願公開第ＷＯ００/０７６０７号明細書
【特許文献３】国際出願公開第ＷＯ０１／２６６６８号明細書
【特許文献４】国際出願公開第ＷＯ９９／４８３８６号明細書
【特許文献５】欧州特許出願公開第０，６００，５４４号明細書
【特許文献６】欧州特許出願公開第０，６５９，４０２号明細書
【特許文献７】米国特許第５，２１６，０２３号明細書
【非特許文献１】Journal of Nutrition, Vol.129, No.9, 1999, pp.1628-1635
【非特許文献２】Experimental Cell Research, Vol.249, No.1, pp.109-115
【非特許文献３】Journal of Nutrition, Vol.130, No.7, 1999, pp.1665-1669
【非特許文献４】Cancer Letters, Vol.142, No.2, 1999, pp.185-193
【非特許文献５】Prostate, Vol.46, No.2, 2001, pp.98-107
【非特許文献６】Biochemical and Biophysical Research Communications,                     Vol.287, No.4, 2001, pp.914-920
【発明の開示】
【００１６】
発明の概要
驚くべきことに、細胞周期のいくつかの段階に対して作用して、ＰＴＫ-及び増殖因子誘導性の細胞増殖を阻害することのできる幾つかの成分を含む組成物は、非常に広範な変異細胞及び非変異細胞に対して、従来技術における組成物よりも強力な抗増殖活性を有することがここに見出された。それゆえ、このような組成物は広範なガン、特に、非エストロゲン依存性のガンの予防及び治療において有用であるのみならず、前立腺などのある種の細胞の過剰増殖、非悪性細胞の過成長によって特徴づけられる他の疾患の予防及び管理又は治療において有用であり、さらには、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、特に、潰瘍性大腸炎の罹患中に間葉細胞の過剰増殖が生じる段階などの、ある段階における幾つかの慢性炎症性疾患の予防及び管理又は治療においても有用である。十分な抗増殖活性を有するためには、組成物は、上記の全ての増殖機構、すなわち、本明細書において三つの期Ｇ１／Ｓ、Ｇ２／Ｓ及びＭとして言及されている第１間隙（Ｇ１）、合成（Ｓ）、第２間隙（Ｇ２）及び分裂（Ｍ）を阻害するものでなくてはならない。治療に対する耐性の危険性を減少させるためには、有効な組成物はつねに、これらの三つの機構に対して作用しなくてはならず、また、各機構は少なくとも二つの異なる薬剤によって影響されなくてはならない。
【００１７】
発明の説明
本発明によれば、
ａ）細胞周期のＧ１／Ｓ期に対する二つ又はそれ以上のインヒビターと、
ｂ）細胞周期のＧ２／Ｍ期に対する二つ又はそれ以上のインヒビターと、
ｃ）タンパク質チロシンキナーゼ活性に対する二つまたはそれ以上のインヒビターと、
を有する成分の組み合せが、動物もしくはヒトにおける細胞の過剰増殖の予防及び治療のための組成物の調製のために使用できることが見出された。
【００１８】
成分ａ）は、細胞周期のＧ１／Ｓ期に対する二つ又はそれ以上のインヒビターを含む。これらのインヒビターは合成又は天然のいずれの起源でもよいが、天然の起源の化合物が好ましい。好ましくは、細胞周期のＧ１／Ｓ期に対するインヒビターは、フラバノリグナン(flavanolignans)、リコピン(lycopene)、ダイゼイン(daidzein)及びダイドジン(daidzin)、又はエクオル(equol)又はそれらの機能上の類似物(analogues)、たとえば、配糖体、硫酸化物、エステル及びラクトンなどから選択される化合物を含むが、従来周知の細胞周期のＧ１／Ｓ期に対する他のインヒビターも使用可能であり、さらには、細胞周期のＧ１／Ｓ期に対する他の天然のインヒビター又はそれらの合成等価物も使用可能である。本発明による機能上の類似物は、消費後において、腸内で同じ化合物として存在する化合物である。
【００１９】
成分ａ）は、日用量当たり１０〜１４００ｍｇ、好ましくは、２０〜５００ｍｇの量で使用されるフラバノリグナンを有する。さらに、それは、日用量当たり０．１〜１００ｍｇ、好ましくは、５〜２０ｍｇの量のカロテノイド(carotenoids)及び／又は日用量当たり５〜１０００ｍｇ、好ましくは、３０〜２００ｍｇの量のダイゼインを有する。
【００２０】
フラバノリグナンは、シリマリン(silymarin)、又は一つ又はそれ以上のその構成成分、及びシリビン(silybin)、シリジアニン(silydianin)、シリクリスチン(silycristin)、デヒドロシリビン(dehydrosilybin)及びそれらの混合物などの類似物有する。好ましくは、シリマリンはフラバノリグナンとして使用される。シリマリン又は一つよりも多いその構成成分が使用される場合、これらは一つのＧ１／Ｓインヒビターとして考慮され、従って、本発明の組成物においてさらなるＧ１／Ｓインヒビターを必要とする。以下、シリマリンと言う場合、それはその構成成分の一つ又はそれ以上の成分と置き換えることができる。フラバノリグナン、特に、シリマリンは、デングダケ属キノコの中毒(Amanita Mushroom poisening)、肝炎及び肝硬変などのいくつかの疾患の治療において有効であることが知られている。これらは合成できるが、オオアザミ(Silybum marianum)などの天然の供給源から精製されたものが好ましい。フラバノリグナンは、オオアザミの果実部分の抽出物中において最も高い濃度で見出されるが、その植物の葉又は種子などの他の部分の抽出物もフラバノリグナンを得るための供給源として適している。フラバノリグナンの単離及び精製のための方法は、当該分野において周知である。エンテロラクトン（２,３-ビス（３-ヒドロキシベンジル）ブチロラクトンなどの他のリグナンもＧ１／Ｓ細胞周期に対するインヒビターとして有効である。
【００２１】
カロテノイドは、植物において、おそらく、光子エネルギーの管理において、その役割を果たす周知の化合物である。本発明によるカロテノイド及びレチノイドは、好ましくは、天然の供給源から得られる。例としては、リコピン、α-カロテン、δ-カロテン及びレチノイン酸である。これらは、好ましくは、レチノイン酸、特に、リコピンを含む。リコピンは熟した果実中に含まれる。例えば、ピンクグレープグルーツでは３０〜４０ｐｐｍ含まれ、スイカ(Citrulus lanatus)では４０〜９００ｐｐｍ含まれ、Aglaonema commutatum、Arbarus unedo、グアバ、パプリカ(Capsicum annuum)、アプリコット(Prunus armeniaca)、モモ(Prunus persica)、Momordica charantia、ニンジン(Daurus carota)では８０〜１４０ｐｐｍ含まれ、パパイヤ(Carica papaya)、特に、トマト(Lycopersicon esculentum)では、果実中に、１〜３５ｐｐｍ含まれ、トマトペースト中に、５０〜８０ｐｐｍ含まれ、ケチャップ中に８０〜１２０ｐｐｍ含まれる。これは、リコピン生合成を行う他の果実からも得られる。カロテノイド、特に、リコピンの単離及び精製の方法は周知である。
【００２２】
細胞周期のＧ１／Ｓ期に対する別の好ましいインヒビターは、ダイゼイン、及びダイドジンなどのその機能上の類似物である。ダイゼイン及びその機能上の類似物は合成できるが、これらは、好ましくは、ダイズ及びムラサキツメクサの抽出物などの天然の供給源から得られる。エクオル（ジヒドロダイゼイン）は、ダイゼインの機能上の等価物として使用される。ダイゼイン及びその機能上の類似物の単離及び精製の方法は周知である。
【００２３】
成分ｂ）は、細胞周期のＧ２／Ｍ期に対する二つ又はそれ以上のインヒビターを含む。これらのインヒビターは合成又は天然のいずれの起源でもよいが、天然の起源の化合物が好ましい。好ましくは、細胞周期のＧ２／Ｍ期に対するインヒビターは、フラバノリグナン、ヒドロキシル化スチルベン(hydroxylated stilbenes)、ゲニステイン(genistein)などのイソフラボン(isoflavones)、及びゲネスチン(genestin)、エーテル化、エステル化又はグリコシル化形態などのそれらの機能上の類似物から選択される化合物を含むが、アピゲニン(apigenin)及びクエルセチン(quercetin)などの従来周知の細胞周期のＧ２／Ｍ期に対する他のインヒビターも使用可能である。
【００２４】
成分ｂ）は、日用量当たり１０〜１４００ｍｇ、好ましくは、２０〜５００ｍｇの量で使用されるフラバノリグナン、及び／又は日用量当たり０．１〜１００ｍｇ、好ましくは、５〜２０ｍｇの量のヒドロキシル化スチルベン、及び／又は日用量当たり５〜１０００ｍｇ、好ましくは、３０〜２００ｍｇの量のイソフラボン、特に、ゲニステインを有する。
【００２５】
本発明によるヒドロキシル化スチルベンは、好ましくは、レスベラトロール（３，５，４’-トリヒドロキシスチルベン）であるが、他のヒドロキシル化スチルベン、及び３，５-ジヒドロキシスチルベン（ピノシルビン）、３,３’-ジヒドロキシスチルベン、３,４’-ジヒドロキシスチルベン及び３,５,３’-トリヒドロキシスチルベンのトランス異性体及びそれらのグリコシル化形態などの周知の機能上の類似物も使用できる。本発明によるヒドロキシル化スチルベン、特に、レスベラトロールは、合成することもできるし、天然の供給源から単離することもできる。これらの供給源のうち好ましいものは、特に、Polygonum spp.及びVitis spp.の水又はエタノールの抽出物である。
【００２６】
細胞周期のＧ２／Ｍ期の別の好ましいインヒビターは、ゲニステイン、及びその機能上の類似物、例えば、ゲニスチンを含む。ゲニステイン及びその機能上の類似物は合成できるが、これらは、好ましくは、ダイズの抽出物などの天然の供給源から得られる。ゲニステイン及びその機能上の類似物の単離及び精製の方法は周知である。
【００２７】
成分ｃ）は、タンパク質チロシンキナーゼ活性に対する二つ又はそれ以上のインヒビターを有する。これらのインヒビターは合成又は天然のいずれの起源でもよいが、天然の起源の化合物が好ましい。好ましくは、タンパク質チロシンキナーゼ活性に対するインヒビターは、フラバノリグナン、イソフラボン、及びその機能上の類似物、たとえば、シリマリン及びゲニステインなどから選択される化合物を含むが、周知のタンパク質チロシンキナーゼ活性に対する他のインヒビター、たとえば、米国特許第５，２１６，０２３号に開示されているようなアミノ酸の脂肪酸誘導体、アピゲニン、及びレスベラトロールなどのヒドロキシル化スチルベンを使用することができる。
【００２８】
成分ｃ）は、日用量当たり５〜１，０００ｍｇ、好ましくは、５〜５０ｍｇの量で使用されるフラバノリグナン、及び／又は日用量当たり５〜１０００ｍｇ、好ましくは、４０〜２００ｍｇの量で使用されるイソフラボンを含む。
【００２９】
イソフラボンは、フィトエストロゲンと呼ばれたり植物エストロゲンと呼ばれたりする化合物の群である。これらは、主に、マメ科植物及び植物の種子に見出され、特に、ダイズ及びムラサキシロツメグサに見出される。ダイズにおける主要なイソフラボンは、ゲニステイン及びダイゼインである。イソフラボンのこれらの形態は、炭水化物基(carbohydrate groups)を含まないので、アグリコン形態(aglycone forms)と呼ばれる。しかし、炭水化物基を含むグリコン形態(glycone form)は、植物におけるイソフラボンの主な形態である。グリコンの例はゲニスチン及びダイドジンである。エクオルなどのイソフラバン(isoflavans)は、イソフラボン、特に、ダイゼインの代わりに、又はそれに加えて使用される。成分ａ）において使用されるイソフラボンは、好ましくは、ダイゼイン又はエクオルを有する。成分ｂ）及びｃ）において使用されるイソフラボンは、好ましくは、ゲニステインを有する。ゲニステインについて上述されたように、イソフラボンは合成できるが、これらは、好ましくは、ダイズ及びムラサキシロツメクサの抽出物などの天然の供給源から得られる。イソフラボン及びそれらの類似物の単離及び精製の方法は周知である。
【００３０】
特に、増殖のＧ１／Ｓ期及びＧ２／Ｍ期ならびにチロシンキナーゼに対するこれらのインヒビターは、以下の表１において限定されるような濃度において活性を示す。有効成分の阻害濃度は、以下のインビトロアッセイにおけるこれらの成分の活性によって限定される。
【００３１】
Ｇ１／Ｓ及びＧ２／Ｍ阻害を決定するための細胞周期分析
ＬＮＣａＰ細胞はサブコンフルエント(subconfluency)に増殖され、そして、２４時間にわたって、種々の濃度の生体活性成分又はベヒクルコントロール(vehicle control)とともにインキュベートされる。細胞は採集され、ＰＢＳ中の７０％エタノールで固定化される。次いで、細胞ペレットは、ヨウ化プロピジウム（５０μｇ／ｍｌ）及びＤＮアーゼを含まないＲＮアーゼ（１００μｇ／ｍｌ）を含有する０．５ｍｌのＰＢＳ中で再懸濁される。細胞周期分析は、ＦＡＣＳ分析を使用することによって行われる。有効Ｇ１／Ｓ停止は、Ｇ１曲線下の領域における１．５倍を越える増加によって限定される。同様に、Ｇ２／Ｍ停止は、所定の濃度におけるＧ２曲線下の領域における２倍を越える増加によって限定される。
【００３２】
タンパク質チロシンキナーゼ阻害アッセイ
３６時間の血清飢餓(serum starvation)の後、７０〜８０％のコンフルエント(confluent)なＤｕ−１４５細胞は、２時間にわたって、種々の濃度の生体活性成分を有する抽出物又はベヒクルコントロールとともにインキュベートされる。この予備的なインキュベーションの後、細胞は、３７℃で１５分間、ＴＮＦα（５０ｎｇ／ｍｌ）又はＰＢＳで処理される。細胞が氷冷緩衝液（１０ｍＭ  トリス(Tris)、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１％  トリトン(Triton)  Ｘ−１００、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．２ｍＭ  バナジン酸ナトリウム、０．２ｍＭ  ＰＭＳＦ、０．５％  ＮＰ−４０、０．２単位／ｍｌ  アプロチニン）中で溶解され、ｅｒｂＢ１が抗ＥＧＦＲを使用して免疫沈降され、その後、ウェスタンブロッティング(Western blotting)及び抗ホスホチロシンによるプローブ化(probing)が行われる。チロシンキナーゼ阻害についてのＩＣ５０価は、抗ホスホチロシンシグナルの減少に基づいている。
【００３３】
2005513025.tif 000002
【００３４】
好ましい実施形態においては、成分ａ）は、フラバノリグナン、ダイゼイン又はエクオル、及びリコピンもしくはレチノイン酸などのカロテノイドのうちの少なくとも二つのを含み、成分ｂ）はフラバノリグナン、ゲニステイン、ヒドロキシル化スチルベン、アピゲニン及びクエルセチンのうちの少なくとも二つを含み、さらに、成分ｃ）は、フラバノリグナン、ゲニステイン、レスベラトール及びアピゲニンのうちの少なくとも二つを含む。従って、好ましい例としては、成分ａ）は、シリマリン及びカロテノイド又はダイゼインを含み、成分ｂ）は、シリマリン及びレスベラトール又はゲニステインを含み、さらに、成分ｃ）は、シリマリン及びゲニステインを含む。これらの成分は、動物及びヒトにおける細胞の過剰増殖の予防及び治療のための組成物を調製するために使用される。好ましい組合わせは、シリマリン＋ダイゼイン＋ゲニステイン、シリマリン＋ダイゼイン＋レスベラトロール、シリマリン＋カロテノイド＋ゲニステイン、シリマリン＋カロテノイド＋レスベラトロール、カロテノイド＋ダイゼイン＋レスベラトロール、及びカロテノイド＋ダイゼイン＋ゲニステイン、ならびにこれらの成分の四つ又はそれ以上の組合わせである。特に好ましい組成物は、フラバノリグナン、特に、シリマリン、ダイズ抽出物、及びリコピンを有するものである。
【００３５】
本発明による好ましい使用においては、成分ａ）、ｂ）及びｃ）の総日用量の合計は、動物及びヒトにおける体重１ｋｇ当たり０．５から３５ｍｇの間、又はヒトの一日当たり約３５ｍｇから約２５００ｍｇの間、好ましくは、ヒトの一日当たり７０から７００ｍｇの間である。
【００３６】
本発明による使用の好ましい実施形態においては、組成物は、脂質フラクションを含み、その量は、インヒビターａ）、ｂ）及びｃ）の合計部分に対する重量基準で、２〜８００部、特に、重量基準で８〜２００部である。この脂質フラクションは、上記の成分の生物利用能を増加するために組成物中に存在する。脂質フラクションは、トリグリセリド油、部分グリセリド、界面活性剤及び共界面活性剤(cosurfactant)を含む。脂質フラクションは、好ましくは、生体活性化合物の吸収中において、胃腸管において生じるような自己乳化プロセスを支援するために、これらの成分を含む。従って、脂質フラクションは、好ましくは、トリグリセリド油及びリン脂質である。トリグリセリド油の例は、オリーブ油、ヒマワリ油、コーン油及びＭＣＴ（中鎖トリグリセリド）油であるが、ココナッツ油又はパーム核油などの、より多くの飽和脂肪酸を含む脂質も含まれる。リン脂質の例としては、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン及びホスファチジルセリンがあるが、リゾリン脂質でもよい。ダイズ、アブラナ及びタマゴからの抽出物は、リン脂質の好ましい供給源である。リゾリン脂質の使用は、局所的な投与についての乳濁液の製造のために有用である。リン脂質に対する界面活性が達成されるのは、特に、３０％よりも多いリン脂質がホスファチジルコリンである場合である。グリセロールは、自己乳化プロセスを支援するため、及び生成物の味を改善するために、本発明の生成物中に添加される。
【００３７】
さらに、成分ａ）、ｂ）及びｃ）の合計の日用量当たりの重量と脂質フラクションの日用量当たりの重量との比は、１：３００から２：１の間であることが好ましい。日常的な食事と組合わせて使用されるサプリメントについては、１：６から２：１の間、特に、約１：１の比率が好ましい。また、独立して使用されるサプリメントについては、ａ）＋ｂ）＋ｃ）と脂質との比率は、１：３０から１：６の間が好ましい。本発明による使用の別の実施形態においては、脂質は、例えば、イソフラボンのリン脂質エステルを合成することによって合成的に生成された化合物に化学的に付加される。
【００３８】
本発明による使用の好ましい実施形態においては、組成物は、さらに、一つ又はそれ以上の有益な他のハーブ抽出物又はそれらの成分、たとえば、バイカレイン、バイカリン又はリコカリコンを含む抽出物、また、ビタミンＣ、Ｅ、Ａ及びＤなどのビタミン、さらには、亜鉛、セレニウムなどの微量元素に加えて、ミネラル、抗酸化剤及びマクロ成分（脂肪、炭水化物及び/又はタンパク質）を含むことができる。なお、セレニウムは、特に、セレニウムを多く含むニンニク又は酵母として添加される。これらの化合物は、周知の方法に従って添加される。さらに、本発明による組成物中には、大腸において相当な量の酪酸塩を生成し得る繊維供給源を含ませることが好ましい。このような繊維供給源の例は、フスマ、イヌリン及びそのフラクション、ならびに耐性スターチである。この繊維供給源の量は、好ましくは、日用量当たり１ｇを超える量である。
【００３９】
本発明による使用においては、組成物は、好ましくは、栄養剤及び/又は薬剤組成物である。それらは、完全な食事として又はサプリメントとして投与可能であり、風味、味及び生成物の濃度の点で非常にくちあたりがよく、また、望ましくない副作用がほとんど又は全くない。本発明による組成物は、液体形態又は乾燥形態で、動物又はヒトに対して、好ましくは、経口的に投与することができる。それらの形態としては、例えば、飲み物、エマルジョン、ゼリー、プリン、アイスクリーム、スープ、ソース、バー、水性もしくは油性の懸濁液、シロップもしくはエリキシルがあり、錠剤、トローチ、薬用キャンディー、分散可能な粉末又は顆粒、硬質カプセル又は軟質ゼラチンカプセルなどの乾燥形態、あるいは、液体形態に再構成することのできる粉末又はプレミクス濃縮物がある。感覚的観点からの好ましい実施形態は、バー型製品、特に、チョコレート味を有するバーである。製品は、局所的な使用、例えば、乾癬及びイボの予防及び治療に適するようにも形成できる。適切な適用形態は、例えば、噴霧可能な乳濁液などのスプレーである。
【００４０】
本発明によれば、組成物は、動物及びヒトにおける過剰増殖に関連する疾患の予防及び治療のために使用できる。ある種の細胞の過剰増殖によって特徴づけられる疾患の例は、特に、乾癬、イボなどの非分裂細胞の過成長、良性の前立腺過形成及び腺腫性ポリープ、ならびに、ある段階での幾つかの慢性炎症性疾患、たとえば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、特に、潰瘍性大腸炎である。
【００４１】
特に、本発明による組成物は、発生の種々の段階での広範な変異化腫瘍細胞の未制御の増殖に対して効果的であることが請求される。さらに詳しくは、本発明による組成物は、増殖がエストロゲンによって促進されない腫瘍細胞の未制御の増殖に対して特に効果的であることが要求される。このような疾患の例は、特に、前立腺、肺、膀胱、皮膚、血球（ホジキン、白血病）、膵臓、肝臓、腎臓、口、咽頭、食道、胃、脾臓、直腸、小腸及び大腸である。
【００４２】
腫瘍増殖の速度及び転移形成の程度を低減することは別として、本発明による組成物は、例えば、腫瘍の大きさが小さいときには、外科手術の前の期間において、腫瘍細胞の増殖速度を低く維持するために使用できる。組成物は、単独で使用できるし、過剰増殖、特に、ガンと関連する疾患の予防もしくは治療に適した現在の技術と組合わせて使用することもできる。
【００４３】
本発明は、さらに、血管形成を促進しない組成物に関する。アルギニン及びギリコサミノグリカンなどのように、血管形成を促進することが知られる薬剤は、存在するべきでないか又は低レベルでのみ存在するべきである。二つの動物モデルにおいて、アルギニンが血管形成を刺激することが見出された（ムロハラ(Murohara)外（１９９８）ジェイ・クリン・インベスト(J.Clin.Invest.)、１０１、２５６７〜２５７８参照のこと）。これは、腫瘍への栄養素又は酸素の供給する能力、ならびに腫瘍からの代謝物を除去する能力を増加する。それゆえ、本発明の組成物は、好ましくは、
ａ）細胞周期のＧ１／Ｓ期に対する二つ又はそれ以上のインヒビターと、
ｂ）細胞周期のＧ２／Ｍ期に対する二つ又はそれ以上のインヒビターと、
ｃ）タンパク質チロシンキナーゼ活性に対する二つ又はそれ以上のインヒビターと、
を有する。ここに、成分ａ）、ｂ）及びｃ）の合計の重量とＬ-アルギニンの重量との比率は、１：１よりも大きく、好ましくは、４：１よりも大きい。また、Ｌ-アルギニンの量は、１日当たり１０ｍｇよりも少ないＬ-アルギニンの用量をもたらす量である。好ましくは、本発明による組成物はアルギニンを含まない。また、本発明による組成物は、コンドロイチン硫酸及びグルコサミン硫酸などの、極めて少量のグルコサミン硫酸塩及びグリコサミノグリカンを含み、特に、このような化合物のレベルは成分ａ）、ｂ）及びｃ）の合計量の０．１倍未満、より好ましくは、０．０２倍未満、又は絶対量において、１日当たり５０ｍｇ未満、好ましくは、１０ｍｇ未満であることが好ましい。
【実施例】
【００４４】
本発明の成分の投与の関数としての細胞増殖
材料及び方法
試験成分
イソフラボン（ゲニステイン、ダイゼイン、エクオル）は、インドファイン・ケミカル・カンパニ・インコーポレーテッド(Indofine Chemical Company, Inc.)(New Jersey, USA)から購入された。シリマリン、silybum marianumの果実からのフラボノリグナンの混合物は、シグマ‐アルドリッヒ・ヘミエ(Sigma-Aldrich Chemie)(Zwijndrecht, Netherland)から購入された。リコピンは、ロシュ・ディアグノスティクス(Roche Diagnostics)(Mannheim, Germany)によって提供された。ストック溶液は以下のように調製された。すなわち、ゲニステイン及びシリマリンがエタノールに溶解された。ダイゼイン及びエクオルがジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解された。リコピンが０．０２ＭのＨＣｌに溶解された。
【００４５】
細胞培養
ＰＣ３細胞株(American Type Culture Collection, Mannassas, USA)は、骨の転移病変に起源を有する高い耐性の前立腺ガン細胞株であり、５％ＦＣＳ(Gibco)が補充されたＲＰＭＩ培地(Gibco, Life technologies BV, Breda, Netherlands)中において、単層培養細胞(monolayer cultures)として維持された。細胞は、プラスチック組織培養フラスコ(Falcon, Micronic, Lelystad, Netherlands)中において、マイコプラズマを含有しない状態で増殖された。培養物は、５％ＣＯ２の加湿された大気中において、３７℃の温度で維持された。培地は２又は３日ごとに置き換えられ、細胞は０．０５％トリプシン及び０．０１％ＥＤＴＡを使用して１週間間隔で二次培養(subcultured)された。
【００４６】
試験成分への曝露
ＰＣ３細胞は、平底９６ウェル組織培養処理プレート(Falcon, Micronic, Lelystad, Netherlands)内へ、ウェル当たり１６０００の細胞密度で播種された。２４時間のインキュベーション後、ベヒクルコントロール、試験成分又は試験成分の組合わせが培地に添加された（ウェル内の２００μｌの培地に対して２０μｌが添加された）。成分は、追加の効果又は相乗的な効果を決定するために、組合わせて試験された。ＰＣ３細胞は４日間にわたって曝露された。
【００４７】
増殖アッセイ
細胞増殖は、ＤＮＡ合成の間の５-ブロモ-２’-デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）の組み込みを測定することによって、及びミトコンドリアデヒドロゲナーゼによる生存細胞中のテトラゾリウム塩（ＷＳＴ-１）の切断によって定量された。ＢｒｄＵ比色分析アッセイ（イムノアッセイ）及びＷＳＴ-１比色分析アッセイは、製造業者の指示に従って行われた(Roche Diagnostics Mannheim, Germany)。簡単に言うと、ＢｒｄＵアッセイにおいては、曝露の期間後、細胞はＢｒｄＵ標識化溶液で３時間処理された。標識化後、細胞はＰＢＳで洗浄され、３０分間固定され、ＰＢＳで再度洗浄された。抗ＢｒｄＵ-ＰＯＤ作用溶液での９０分間のインキュベーション後、細胞は３回洗浄された。基質の添加後、反応はＨ２ＳＯ４で停止された。吸光度は、６５０ｎｍでの参照波長を用いて、４５０ｎｍで測定された。ＷＳＴ-１アッセイにおいては、曝露の期間後、細胞はＰＢＳで洗浄され、培地中で希釈（１：１０）されたＷＳＴ-１で処理された。３時間のインキュベーション後、吸光度が、５９５ｎｍでの参照波長を用いて、４５０ｎｍで測定された。
【００４８】
阻害効果の分類
異なる成分の組合わせの相乗的な効果は、成分単独の組合わせの値よりも著しく大きく増殖を阻害するというものであった。投与の付加効果は、増殖が成分単独の組合わせの値よりも大きくはないが、増殖の阻害が成分単独の値よりも著しく大きかった。
【００４９】
結果
ヒト前立腺ガン細胞株ＰＣ３の増殖に対するゲニステイン、エクオル、リコピン及びシリマリンの組合わせの効果
ゲニステイン（２７μｇ/ｍｌ）及びエクオル（２６ｍｇ/ｍｌ）単独は、それぞれ、２０．２±４．６％、３０．１±４.４％（平均±ｓ．ｅ．）のヒト前立腺細胞株ＰＣ３の増殖の阻害をもたらした。シリマリン（２５μｇ／ｍｌ）、ダイゼイン（２５μｇ/ｍｌ）及びリコピン（５３μｇ/ｍｌ）単独は、ＰＣ３細胞の増殖を著しく阻害することはなかった（それぞれ、９．５±４％、１０．０±６％、７．３±２．７％）。シリマリンと、ゲニステイン、ダイゼイン、エクオル又はリコピンのいずれかとの組合わせは、さらに、それぞれ、５２．３±３．７％、３８±１．１％、６４．４±１．１％及び４６．０±３．４％だけ増殖を阻害した。ゲニステインと、ダイゼイン、エクオル又はリコピンとは、さらに、４３±４％、７３．１±０．７％及び９１．５±４．１％だけ増殖を阻害し、リコピンとエクオルとは、９１．６±３．３％だけさらに増殖を阻害した。三つ又はそれ以上の成分の組合わせは、９９％を超えて増殖をさらに阻害した。
【００５０】
実施例１
前立腺ガンの治療のための組成物
以下の成分が混合された。
成分                              １日当たりの量（ｍｇ）
ダイズイソフラボン                    １００．０
リコピン                                １５．０
シリマリン                            １６０．０
抗酸化剤
ビタミンＣ                      ２２５．０
ビタミンＥ                        ７５．０
カロテノイド                        ３．０
フラボノイド                      １９．０
ユビキノール                        ４．０
セレニウム                          ０．１２８
亜鉛                              １８．０
銅                                  ２．７
マンガン                            ５．０
リボフラビン                        ２．５
ビタミンＢ６                        ３．３
ビタミンＢ１２                      ０．００３３
葉酸                                ０．４
Ｎ-アセチル-システイン          ５００
【００５１】
実施例２
結腸直腸ガンの予防のための組成物
以下の成分が混合された。
成分                              １日当たりの量（ｍｇ）
ダイズイソフラボン                      ２５．０
リコピン                                  ２．０
シリマリン                              ５０．０
繊維ミックス                      １５０００
カルシウム                          １５００
プロバイオティック
Lb.rhamnosus＋Lb.acidophilus    ２〜４  １０１０  ＣＦＵ
抗酸化剤                    
ビタミンＣ                      １５０．０
ビタミンＥ                        ３７．５
カロテノイド                        １．５
フラボノイド                      １０．０
ユビキノール                        ２．０
セレニウム                          ０．０８５
亜鉛                                ９．０
銅                                  １．４
マンガン                            ２．５
リボフラビン                        １．３
ビタミンＢ６                        １．３
ビタミンＢ１２                      １．６
葉酸                                ０．４
緑茶抽出物                      ３００．０
クルクミン                        ６０．０
【００５２】
実施例３
４５ｇの従来のチョコレートバー。成分は、糖シロップ、粉乳、チョコレート塊、ココアバーター、ダイズレシチン及び香料。１ｇの糖シロップがグリセロールによって置き換えられ、また、１．５ｇのチョコレート塊が５０ｍｇのオオアザミの抽出物、２０ｍｇのアピゲニン及び２０ｍｇのリコピンで置き換えられている。
【００５３】
実施例４
１００ｇ乾燥塊当たりに含まれる食事(hot meal)用の供給源
オオアザミの抽出物              ５０ｍｇ（４２ｍｇシリマリンを供給する。）
トマト濃縮物                      ２０ｇ（２ｍｇリコピンを供給する。）
ニンジン粉末                        ２ｇ（７ｍｇリコピンを供給する。）
脂肪分の高いダイズフラワー        ４０ｇ（ダイゼイン及びゲニステインを供給
する。８．２ｇの脂質を供給し、そ
のうちの０．８ｇはリン脂質である。）
ニンニク                            １ｇ（酵母によって置換可能である。）
加工デンプン                        ５ｇ
香料（タイム、ローズマリー）        １ｇ
野菜濃縮物                        ２０ｇ
塩化ナトリウム                    １０ｇ
【００５４】
実施例５
良性の前立腺肥厚化（ＢＰＨ）の治療及び前立腺がんの予防のための組成物
以下の成分が混合された。
成分                                      １日当たりの量（ｍｇ）
ダイズイソフラボン                              ３０
供給するゲニステイン                      １０
リコピン                                          ５
Silybum marianum                                ５０
Serence repens（ノコギリパルメット）          ３２０
リン脂質抽出物                          ２７２
セレニウム                                        ０．１０
亜鉛                                            １５
銅                                                ２
プラナスアフリカーナ抽出物                      ５０
供給するステロール（１２％）                ６
ダイズ油                                      ５００
ダイズレクチン                                ２００
他の成分として、カプセルシェル、ゼラチン、グリセロール、天然供給源の色素、亜硫酸アンモニアカラメル、二酸化チタニウム、固化防止剤、二酸化シリコンがある。
【００５５】
実施例６
皮膚に対する局所的な適用のためのクリーム
以下のプレミクスが調製された。
Ａ：鉱物油                                    １０％
スクワラン                                  ５％
ジメチコン                                  ３％
ＰＥＧ−３０ジポリヒドロキシステアレート    ３％
Ｂ：グリセロール                                ６％
マグネシウム硫酸７水和物                    ０．７％
水                                      １００％まで
Ｃ：保存剤                                      ０．５％
芳香剤                                      ０．５％
本発明の有効成分                            ２％
Ｃにおける有効成分は以下の通りである。
レスベラトール（ブドウの種から）            ２０ｍｇ
リコピン（トマトから）                      ４０ｍｇ
アピゲニン                                  ２０ｍｇ
エンテロラクトン                            １０ｍｇ
クリームは、Ａ及びＢを７５℃に過熱し、攪拌しながらＡにＢを添加し、１分間均質化し、攪拌しながら４０℃に冷却し、Ｃを添加し、そして、攪拌しながら周囲温度に冷却させることによって調製される。
【手続補正書】
【提出日】平成15年10月23日(2003.10.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
動物及びヒトの細胞の非エストロゲン依存性の過剰増殖の予防及び治療のための組成物を調製するための、
ａ）細胞周期のＧ１／Ｓ期に対する二つ又はそれ以上のインヒビターと、
ｂ）細胞周期のＧ２／Ｍ期に対する二つ又はそれ以上のインヒビターと、
ｃ）タンパク質チロシンキナーゼ活性に対する二つ又はそれ以上のインヒビターと、
の組み合せの使用であって、成分ａ）は、フラバノリグナン、カロテノイド、ダイゼイン及びそれらの機能上の類似物から選択され、成分ｂ）は、フラバノリグナン、イソフラボン、ヒドロキシル化スチルベン、アピゲニン、クエルセチン及びそれらの機能上の類似物から選択され、成分ｃ）は、フラバノリグナン、イソフラボン、ヒドロキシル化スチルベン、アピゲニン及びそれらの機能上の類似物から選択され、それらの組み合せが前記インヒビターの少なくとも三つを有するような使用。
【請求項２】
成分ａ）は、日用量当たり１０〜１４００ｍｇ、好ましくは、２０〜５００ｍｇの量のフラバノリグナン、及び／又は日用量当たり０．１〜１００ｍｇ、好ましくは、５〜２０ｍｇの量のカロテノイド、及び／又は日用量当たり５〜１０００ｍｇ、好ましくは、３０〜２００ｍｇの量のダイゼインを含有している請求項１に記載の使用。
【請求項３】
成分ｂ）は、日用量当たり１０〜１４００ｍｇ、好ましくは、２０〜５００ｍｇの量のフラバノリグナン、及び／又は日用量当たり０．１〜１００ｍｇ、好ましくは、５〜２０ｍｇの量のヒドロキシル化スチルベン、及び／又は日用量当たり５〜１０００ｍｇ、好ましくは、３０〜２００ｍｇの量のゲニステインを含有している請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
成分ｃ）は、日用量当たり５〜１０００ｍｇ、好ましくは、５〜５０ｍｇの量のフラバノリグナン、及び／又は日用量当たり５〜１０００ｍｇ、好ましくは、４０〜２００ｍｇの量のゲニステインを含有している請求項１から３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
成分ａ）は、シリマリン、ダイゼイン、エクオル、リコピン及びレチノイン酸のうちの少なくとも二つを有し、成分ｂ）は、シリマリン、ゲニステイン、レスベラトロール、アピゲニン及びクエルセチンのうちの少なくとも二つを有し、さらに、成分ｃ）は、少なくともシリマリン及びゲニステインを有している請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
シリマリン、ダイズ抽出物及びリコピンを有する請求項１から５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
成分ａ）、ｂ）及びｃ）の総日用量の合計が、動物及びヒトにおける体重１ｋｇ当たり０．５から３５ｍｇの間である請求項１から６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
組成物が脂質フラクションを有する請求項１から７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
脂質フラクションがリン脂質を有する請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
成分ａ）、ｂ）及びｃ）の合計の日用量当たりの重量と脂質フラクションの日用量当たりの重量との比率が、１：３００から２：１の間、好ましくは、１：３０から１：６の間である請求項８又は９に記載の使用。
【請求項１１】
組成物が一つ又はそれ以上のハーブ抽出物又はそれらの成分を有している請求項１から１０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
組成物は、ビタミン、微量元素、ミネラル、抗酸化剤及びマクロ成分から選択される一つ又はそれ以上の化合物をさらに有している請求項１から１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
動物又はヒトにおける非エストロゲン関連性のガン、特に、前立腺ガンもしくは結腸直腸ガンの予防及び治療のため、又は乾癬の治療のための請求項１から１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４】
少なくとも三つの活性成分、すなわち、
ａ）細胞周期のＧ１／Ｓ期に対する二つ又はそれ以上のインヒビターと、
ｂ）細胞周期のＧ２／Ｍ期に対する二つ又はそれ以上のインヒビターと、
ｃ）タンパク質チロシンキナーゼ活性に対する二つ又はそれ以上のインヒビターと、
を有する組成物であって、成分ａ）は、フラバノリグナン、カロテノイド、ダイゼイン及びそれらの機能上の類似物から選択され、成分ｂ）は、フラバノリグナン、イソフラボン、ヒドロキシル化スチルベン、アピゲニン、クエルセチン及びそれらの機能上の類似物から選択され、成分ｃ）は、フラバノリグナン、イソフラボン、ヒドロキシル化スチルベン、アピゲニン及びそれらの機能上の類似物から選択され、アルギニンが存在する場合には、成分ａ）、ｂ）及びｃ）の合計の重量とＬ‐アルギニンの重量との比率が１：１よりも大きい組成物。
【請求項１５】
シリマリン、ゲニステイン及び／又はダイゼイン、ならびにカロテノイドを１：０．２〜４：０．０２〜０．４の相対量で含有する請求項１４に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１
【補正方法】追加
【補正の内容】
【図１】
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【手続補正３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２
【補正方法】追加
【補正の内容】
【図２】
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【国際調査報告】
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