(57)【要約】本発明は、代謝向性グルタメート受容体拮抗活性、特にｍＧｌｕ１受容体活性を示す式（Ｉ−Ａ）＊または（Ｉ−Ｂ）＊【化１】2005524679.tif 000178に従う放射能標識付きキノリンおよびキノリノン誘導体およびこれらの製造に関し、本発明は更にそれらを含んで成る組成物ばかりでなくそれらを代謝向性グルタメート受容体部位にマークを付けそしてそれを同定する目的および器官の画像を形成する目的で用いることにも関する。好適な態様において、ＸはＯを表し、Ｒ１はＣ１−６アルキル；シクロＣ３−１２アルキルまたは（シクロＣ３−１２アルキル）Ｃ１−６アルキル［ここで、場合によりＣ１−６アルキル部分またはシクロＣ３−１２アルキル部分の中の１個以上の水素原子がＣ１−６アルキルオキシ、アリール、ハロまたはチエニルに置き換わっていてもよい］を表し、Ｒ２は水素；ハロ；Ｃ１−６アルキルまたはアミノを表し、Ｒ３およびＲ４は各々独立して水素またはＣ１−６アルキルを表すか、或はＲ２とＲ３が一緒になって−Ｒ２−Ｒ３−［これは、式−Ｚ４−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−または−Ｚ４−ＣＨ２−ＣＨ２−（ここで、Ｚ４はＯまたはＮＲ１１であり、ここで、Ｒ１１はＣ１−６アルキルである）で表される二価の基（ここで、各二価の基は場合によりＣ１−６アルキルで置換されていてもよい）を表す］を形成していてもよいか、或はＲ３とＲ４が一緒になって式−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−で表される二価の基を形成していてもよく、Ｒ５は水素を表し、ＹはＯを表し、そしてアリールは場合によりハロで置換されていてもよいフェニルを表す。最も好適な化合物は、放射性同位元素が３Ｈ、１１Ｃおよび１８Ｆの群から選択される放射能標識付き化合物である。本発明は、また、それらを診断方法、特に生物学的材料に入っているｍＧｌｕＲ１受容体にマークを付けそしてそれを同定する方法で用いることばかりでなくそれらを器官の画像化、特にＰＥＴを用いた画像化で用いることにも関する。
2005524679.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ−Ａ）＊または（Ｉ−Ｂ）＊
【化１】
2005524679.tif 000172
｛式中、
Ｘは、Ｏ；Ｃ（Ｒ６）２［ここで、Ｒ６は水素、アリールまたはＣ１−６アルキルであり、これは場合によりアミノまたはモノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノで置換されていてもよい］；ＳまたはＮ−Ｒ７［ここで、Ｒ７はアミノまたはヒドロキシである］を表し、
Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル；アリール；チエニル；キノリニル；シクロＣ３−１２アルキルまたは（シクロＣ３−１２アルキル）Ｃ１−６アルキル［ここで、前記シクロＣ３−１２アルキル部分は場合により二重結合を含有していてもよくかつシクロＣ３−１２アルキル部分の中の１個の炭素原子が酸素原子またはＮＲ８部分（ここで、Ｒ８は水素、ベンジルまたはＣ１−６アルキルオキシカルボニルである）に置き換わっていてもよく、ここで、場合によりＣ１−６アルキル部分またはシクロＣ３−１２アルキル部分の中の１個以上の水素原子がＣ１−６アルキル、ヒドロキシＣ１−６アルキル、ハロＣ１−６アルキル、アミノＣ１−６アルキル、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキルオキシ、アリールＣ１−６アルキルオキシ、ハロ、Ｃ１−６アルキルオキシカルボニル、アリール、アミノ、モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ、Ｃ１−６アルキルオキシカルボニルアミノ、ハロ、ピペラジニル、ピリジニル、モルホリニル、チエニル、または式−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ２−Ｏまたは−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−で表される二価の基に置き換わっていてもよい］；または式（ａ−１）
【化２】
2005524679.tif 000173
［式中、
Ｚ１は、単共有結合、Ｏ、ＮＨまたはＣＨ２であり、
Ｚ２は、単共有結合、Ｏ、ＮＨまたはＣＨ２であり、
ｎは、０、１、２または３の整数であり、そして
フェニル環の中の各水素原子が独立して場合によりハロ、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシまたはヒドロキシＣ１−６アルキルに置き換わっていてもよい］
で表される基を表すか、或は
ＸとＲ１がＸとＲ１が結合している炭素原子と一緒になって式（ｂ−１）、（ｂ−２）または（ｂ−３）；
【化３】
2005524679.tif 000174
で表される基を形成していてもよく、
Ｒ２は、水素；ハロ；シアノ；Ｃ１−６アルキル；Ｃ１−６アルキルオキシ；Ｃ１−６アルキルチオ；Ｃ１−６アルキルカルボニル；Ｃ１−６アルキルオキシカルボニル；Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシＣ１−６アルキル；Ｃ２−６アルケニル；ヒドロキシＣ２−６アルケニル；Ｃ２−６アルキニル；ヒドロキシＣ２−６アルキニル；トリ（Ｃ１−６アルキル）シランＣ２−６アルキニル；アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキルチオＣ１−６アルキル）アミノ；アリール；アリールＣ１−６アルキル；アリールＣ２−６アルキニル；Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキルアミノＣ１−６アルキル；場合によりＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシカルボニルＣ１−６アルキルまたはピリジニルＣ１−６アルキルで置換されていてもよいアミノカルボニル；チエニル、フラニル、ピロリル、チアゾリル、オキサゾリル、イミダゾリル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピペリジニルおよびピペラジニル［場合によりＮがＣ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル、モルホリニル、チオモルホリニル、ジオキサニルまたはジチアニルで置換されていてもよい］から選択される複素環；基−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ９［ここで、Ｒ９は、場合によりシクロＣ３−１２アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルオキシカルボニル、アリール、アリールオキシ、チエニル、ピリジニル、モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ、Ｃ１−６アルキルチオ、ベンジルチオ、ピリジニルチオまたはピリミジニルチオで置換されていてもよいＣ１−６アルキル；シクロＣ３−１２アルキル；シクロヘキセニル；アミノ；アリールシクロＣ３−１２アルキルアミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキルオキシカルボニルＣ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキルオキシカルボニル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ２−６アルケニル）アミノ；モノ−もしくはジ（アリールＣ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジアリールアミノ；アリールＣ２−６アルケニル；フラニルＣ２−６アルケニル；ピペリジジニル；ピペラジニル；インドリル；フリル；ベンゾフリル；テトラヒドロフリル；インデニル；アダマンチル；ピリジニル；ピラジニル；アリール；アリールＣ１−６アルキルチオまたは式（ａ−１）で表される基を表す］；スルホンアミド−ＮＨ−ＳＯ２−Ｒ１０［式中、Ｒ１０はＣ１−６アルキル、モノ−もしくはポリハロＣ１−６アルキル、アリールＣ１−６アルキル、アリールＣ２−６アルケニル、アリール、キノリニル、イソキサゾリルまたはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノを表す］を表し、
Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素；ハロ；ヒドロキシ；シアノ；Ｃ１−６アルキル；Ｃ１−６アルキルオキシ；Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル；Ｃ１−６アルキルカルボニル；Ｃ１−６アルキルオキシカルボニル；Ｃ２−６アルケニル；ヒドロキシＣ２−６アルケニル；Ｃ２−６アルキニル；ヒドロキシＣ２−６アルキニル；トリ（Ｃ１−６アルキル）シランＣ２−６アルキニル；アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキルチオＣ１−６アルキル）アミノ；アリール；モルホリニルＣ１−６アルキルまたはピペリジニルＣ１−６アルキルを表すか、或は
Ｒ２とＲ３が一緒になって−Ｒ２−Ｒ３−［これは、式−（ＣＨ２）３−、−（ＣＨ２）４−、−（ＣＨ２）５−、−（ＣＨ２）６−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｚ４−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｚ４−、−Ｚ４−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｚ４−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｚ４−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｚ４−、−Ｚ４−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｚ４−ＣＨ２−または−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｚ４−（ここで、Ｚ４はＯ、Ｓ、ＳＯ２またはＮＲ１１であり、ここで、Ｒ１１は水素、Ｃ１−６アルキル、ベンジルまたはＣ１−６アルキルオキシカルボニルである）で表される二価の基（ここで、各二価の基は場合によりＣ１−６アルキルで置換されていてもよい）を表す］を形成していてもよいか、或は
Ｒ３とＲ４が一緒になって式−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−で表される二価の基を形成していてもよく、
Ｒ５は、水素；シクロＣ３−１２アルキル；ピペリジニル；オキソ−チエニル；テトラヒドロチエニル；アリールＣ１−６アルキル；Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル；Ｃ１−６アルキルオキシカルボニルＣ１−６アルキルまたはＣ１−６アルキル［場合により基Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｘＲｙ［ここで、ＲｘおよびＲｙは、各々独立して、水素、シクロＣ３−１２アルキル、Ｃ２−６アルキニルまたはＣ１−６アルキル（場合によりシアノ、Ｃ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルオキシカルボニル、フラニル、ピロリジニル、ベンジルチオ、ピリジニル、ピロリルまたはチエニルで置換されていてもよい）である］で置換されていてもよい］を表し、
Ｙは、ＯまたはＳを表すか、或は
ＹとＲ５が一緒になって＝Ｙ−Ｒ５−［これは、式
−ＣＨ＝Ｎ−Ｎ＝              （ｃ−１）；
−Ｎ＝Ｎ−Ｎ＝                （ｃ−２）；または
−Ｎ−ＣＨ＝ＣＨ−            （ｃ−３）；
で表される基を表す］
を形成していてもよく、
アリールは、場合によりハロ、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、フェニルオキシ、ニトロ、アミノ、チオ、Ｃ１−６アルキルチオ、ハロＣ１−６アルキル、ポリハロＣ１−６アルキル、ポリハロＣ１−６アルキルオキシ、ヒドロキシＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル、アミノＣ１−６アルキル、モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ、モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノＣ１−６アルキル、シアノ、−ＣＯ−Ｒ１２、−ＣＯ−ＯＲ１３、−ＮＲ１３ＳＯ２Ｒ１２、−ＳＯ２−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−ＳＯＲ１２、−ＳＯ２Ｒ１２［ここで、各Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は、独立して、Ｃ１−６アルキル；シクロＣ３−６アルキル；フェニル；ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、ハロＣ１−６アルキル、ポリハロＣ１−６アルキル、フラニル、チエニル、ピロリル、イミダゾリル、チアゾリルまたはオキサゾリルで置換されているフェニルを表す］から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよいフェニルもしくはナフチルを表し、そして
Ｒ１−Ｃ（＝Ｘ）部分が７位でも８位でもない別の位置に結合している時には前記７および８位がＲ１５およびＲ１６で置換されていてもよく、ここで、Ｒ１５およびＲ１６のいずれか一方または両方がＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシを表すか、或はＲ１５とＲ１６が一緒になって式−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−で表される二価の基を形成していてもよい｝
に従う放射能標識付き化合物、これのＮ−オキサイド形態、薬学的に受け入れられる付加塩、第四級アミンおよび立体化学異性体形態。
【請求項２】
ＸがＯ；Ｃ（Ｒ６）２［ここで、Ｒ６は水素またはアリールである］；またはＮ−Ｒ７［ここで、Ｒ７はアミノまたはヒドロキシである］を表し、
Ｒ１がＣ１−６アルキル；アリール；チエニル；キノリニル；シクロＣ３−１２アルキルまたは（シクロＣ３−１２アルキル）Ｃ１−６アルキル［ここで、前記シクロＣ３−１２アルキル部分は場合により二重結合を含有していてもよくかつシクロＣ３−１２アルキル部分の中の１個の炭素原子が酸素原子またはＮＲ８部分（ここで、Ｒ８はベンジルまたはＣ１−６アルキルオキシカルボニルである）に置き換わっていてもよく、ここで、場合によりＣ１−６アルキル部分またはシクロＣ３−１２アルキル部分の中の１個以上の水素原子がＣ１−６アルキル、ハロＣ１−６アルキル、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキルオキシ、アリールＣ１−６アルキルオキシ、ハロ、アリール、モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ、Ｃ１−６アルキルオキシカルボニルアミノ、ハロ、ピペラジニル、ピリジニル、モルホリニル、チエニル、または式−Ｏ−または−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−で表される二価の基に置き換わっていてもよい］；または式（ａ−１）
【化４】
2005524679.tif 000175
［式中、
Ｚ１は、単共有結合、ＯまたはＣＨ２であり、
Ｚ２は、単共有結合、ＯまたはＣＨ２であり、
ｎは、０、１または２の整数であり、そして
フェニル環の中の各水素原子が独立して場合によりハロまたはヒドロキシに置き換わっていてもよい］
で表される基を表すか、或は
ＸとＲ１がＸとＲ１が結合している炭素原子と一緒になって式（ｂ−１）、（ｂ−２）または（ｂ−３）；
【化５】
2005524679.tif 000176
で表される基を形成していてもよく、
Ｒ２が水素；ハロ；シアノ；Ｃ１−６アルキル；Ｃ１−６アルキルオキシ；Ｃ１−６アルキルチオ；Ｃ１−６アルキルカルボニル；Ｃ１−６アルキルオキシカルボニル；Ｃ２−６アルケニル；ヒドロキシＣ２−６アルケニル；Ｃ２−６アルキニル；ヒドロキシＣ２−６アルキニル；トリ（Ｃ１−６アルキル）シランＣ２−６アルキニル；アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキルチオＣ１−６アルキル）アミノ；アリール；アリールＣ１−６アルキル；アリールＣ２−６アルキニル；Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキルアミノＣ１−６アルキル；場合によりＣ１−６アルキルオキシカルボニルＣ１−６アルキルで置換されていてもよいアミノカルボニル；チエニル、フラニル、チアゾリルおよびピペリジニル［場合によりＮがモルホリニルまたはチオモルホリニルで置換されていてもよい］から選択される複素環；基−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ９［ここで、Ｒ９は、場合によりシクロＣ３−１２アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルオキシカルボニル、アリール、アリールオキシ、チエニル、ピリジニル、モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ、Ｃ１−６アルキルチオ、ベンジルチオ、ピリジニルチオまたはピリミジニルチオで置換されていてもよいＣ１−６アルキル；シクロＣ３−１２アルキル；シクロヘキセニル；アミノ；アリールシクロＣ３−１２アルキルアミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキルオキシカルボニルＣ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキルオキシカルボニル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ２−６アルケニル）アミノ；モノ−もしくはジ（アリールＣ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジアリールアミノ；アリールＣ２−６アルケニル；フラニルＣ２−６アルケニル；ピペリジジニル；ピペラジニル；インドリル；フリル；ベンゾフリル；テトラヒドロフリル；インデニル；アダマンチル；ピリジニル；ピラジニル；アリールまたは式（ａ−１）で表される基を表す］；スルホンアミド−ＮＨ−ＳＯ２−Ｒ１０［式中、Ｒ１０はＣ１−６アルキル、モノ−もしくはポリハロＣ１−６アルキル、アリールＣ１−６アルキルまたはアリールを表す］を表し、
Ｒ３およびＲ４が各々独立して水素；Ｃ１−６アルキル；Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル；Ｃ１−６アルキルオキシカルボニルを表すか、或は
Ｒ２とＲ３が一緒になって−Ｒ２−Ｒ３−［これは、式−（ＣＨ２）４−、−（ＣＨ２）５−、−Ｚ４−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｚ４−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−または−Ｚ４−ＣＨ２−ＣＨ２−（ここで、Ｚ４はＯ、Ｓ、ＳＯ２またはＮＲ１１であり、ここで、Ｒ１１は水素、Ｃ１−６アルキル、ベンジルまたはＣ１−６アルキルオキシカルボニルである）で表される二価の基（ここで、各二価の基は場合によりＣ１−６アルキルで置換されていてもよい）を表す］を形成していてもよいか、或は
Ｒ３とＲ４が一緒になって式−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−で表される二価の基を形成していてもよく、
Ｒ５が水素；ピペリジニル；オキソ−チエニル；テトラヒドロチエニル；アリールＣ１−６アルキル；Ｃ１−６アルキルオキシカルボニルＣ１−６アルキル；または場合により基Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｘＲｙ［ここで、ＲｘおよびＲｙは、各々独立して、水素、シクロＣ３−１２アルキル、Ｃ２−６アルキニルまたはＣ１−６アルキル（場合によりシアノ、Ｃ１−６アルキルオキシまたはＣ１−６アルキルオキシカルボニルで置換されていてもよい）である］で置換されていてもよいＣ１−６アルキルを表し、
ＹがＯまたはＳを表すか、或は
ＹとＲ５が一緒になって＝Ｙ−Ｒ５−［これは、式
−ＣＨ＝Ｎ−Ｎ＝              （ｃ−１）；または
−Ｎ＝Ｎ−Ｎ＝                （ｃ−２）
で表される基を表す］
を形成していてもよく、
アリールが場合によりハロ、Ｃ１−６アルキルオキシ、フェニルオキシ、モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノおよびシアノから選択される１個以上の置換基で置換されていてもよいフェニルもしくはナフチルを表し、そして
Ｒ１−Ｃ（＝Ｘ）部分が７位でも８位でもない別の位置に結合している時には前記７および８位がＲ１５およびＲ１６で置換されていてもよく、ここで、Ｒ１５およびＲ１６のいずれか一方または両方がＣ１−６アルキルを表すか、或はＲ１５とＲ１６が一緒になって式−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨで表される二価の基を形成していてもよい、
ことを特徴とする請求項１記載の放射能標識付き化合物。
【請求項３】
ＸがＯを表し、
Ｒ１がＣ１−６アルキル；シクロＣ３−１２アルキルまたは（シクロＣ３−１２アルキル）Ｃ１−６アルキル［ここで、場合によりＣ１−６アルキル部分またはシクロＣ３−１２アルキル部分の中の１個以上の水素原子がＣ１−６アルキルオキシ、アリール、ハロまたはチエニルに置き換わっていてもよい］を表し、
Ｒ２が水素；ハロ；Ｃ１−６アルキルまたはアミノを表し、
Ｒ３およびＲ４が各々独立して水素またはＣ１−６アルキルを表すか、或は
Ｒ２とＲ３が一緒になって−Ｒ２−Ｒ３−［これは、式−Ｚ４−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−または−Ｚ４−ＣＨ２−ＣＨ２−（ここで、Ｚ４はＯまたはＮＲ１１であり、ここで、Ｒ１１はＣ１−６アルキルである）で表される二価の基（ここで、各二価の基は場合によりＣ１−６アルキルで置換されていてもよい）を表す］を形成していてもよいか、或は
Ｒ３とＲ４が一緒になって式−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−で表される二価の基を形成していてもよく、
Ｒ５が水素を表し、
ＹがＯを表し、そして
アリールが場合によりハロで置換されていてもよいフェニルを表す、
ことを特徴とする請求項１−２のいずれか１項記載の放射能標識付き化合物。
【請求項４】
前記Ｒ１−Ｃ（＝Ｘ）部分がキノリンまたはキノリノン部分の６位に結合していることを特徴とする請求項１−３のいずれか１項記載の放射能標識付き化合物。
【請求項５】
化合物が放射性原子を少なくとも１個含有することを特徴とする請求項１−４のいずれか１項記載の放射能標識付き化合物。
【請求項６】
前記放射性同位元素が３Ｈ、１１Ｃおよび１８Ｆの群から選択されることを特徴とする請求項５記載の放射能標識付き化合物。
【請求項７】
化合物が化合物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）および（ｅ）：
【化６】
2005524679.tif 000177
の中のいずれか１つであることを特徴とする請求項６項記載の放射能標識付き化合物。
【請求項８】
化合物が化合物（ａ）であることを特徴とする請求項６記載の放射能標識付き化物。
【請求項９】
哺乳動物に投与するための放射性組成物であって、請求項１−８のいずれか記載の放射能標識付き化合物を治療有効量で含有しかつ薬学的に受け入れられる担体もしくは希釈剤を含有して成る放射性組成物。
【請求項１０】
診断方法で用いるための請求項１−８のいずれか１項記載の放射能標識付き化合物または請求項９記載の組成物。
【請求項１１】
診断方法が生物学的材料に入っているｍＧｌｕ１受容体にマークを付けるか或はそれを同定することを包含することを特徴とする請求項１−８のいずれか１項記載の放射能標識付き化合物または請求項９記載の組成物。
【請求項１２】
マークを付けることが前記放射能標識付き化合物を生物学的材料に投与することを包含しかつ同定が前記放射能標識付き化合物からの放射を検出することを包含することを特徴とする請求項１−８のいずれか１項記載の放射能標識付き化合物または請求項９記載の組成物。
【請求項１３】
診断方法が試験化合物が生物学的材料に入っているｍＧｌｕ１受容体を占めるか或はそれと結合する能力を有するか否かを選別することを包含することを特徴とする請求項１−８のいずれか１項記載の放射能標識付き化合物または請求項９記載の組成物。
【請求項１４】
生物学的材料が温血動物、特に人に由来する組織サンプル、血漿液、体液、体の部分および器官ならびに温血動物自体から成る群から選択されることを特徴とする請求項１１−１３のいずれか１項記載の放射能標識付き化合物または組成物。
【請求項１５】
生物学的材料に入っているｍＧｌｕ１受容体にマークを付けるか或はそれを同定するに適した診断ツールを製造するための請求項１−８のいずれか１項記載の放射能標識付き化合物または請求項９記載の組成物。
【請求項１６】
マークを付けることが前記放射能標識付き化合物を生物学的材料に投与することを包含しかつ同定が前記放射能標識付き化合物からの放射を検出することを包含することを特徴とする請求項１５記載の放射能標識付き化合物もしくは組成物の使用。
【請求項１７】
試験化合物が生物学的材料に入っているｍＧｌｕ１受容体を占めるか或はそれと結合する能力を有するか否かを選別するに適した診断ツールを製造するための請求項１−８のいずれか１項記載の放射能標識付き化合物または請求項９記載の組成物。
【請求項１８】
請求項１−８のいずれか１項記載の放射能標識付き化合物または請求項９記載の組成物を適切な組成物の状態で生物学的材料に前記放射能標識付き化合物が前記生物学的材料に入っているｍＧｌｕ１受容体部位と結合するに充分な量で投与しそして前記放射能標識付き化合物からの放射を検出することを特徴とする器官画像化用診断ツールを製造するための請求項１−８のいずれか１項記載の放射能標識付き化合物または請求項９記載の組成物。
【請求項１９】
陽電子射出断層撮影法（ＰＥＴ）を用いて画像化を実施することを特徴とする器官画像化用診断ツールを製造するための請求項１８記載の放射能標識付き化合物または組成物の使用。
【請求項２０】
生物学的材料が温血動物、特に人に由来する組織サンプル、血漿液、体液、体の部分および器官ならびに温血動物自体から成る群から選択されることを特徴とする請求項１５から１９のいずれか１項記載の放射能標識付き化合物または組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、代謝向性（ｍｅｔａｂｏｔｒｏｐｉｃ）のグルタメート受容体拮抗活性、特にｍＧｌｕｌ受容体活性を示す放射能標識付きキノリンおよびキノリノン誘導体およびこれらの製造に関し、更に、それらを含んで成る組成物ばかりでなくそれらを診断方法、特に代謝向性グルタメート受容体部位にマークを付けそしてそれらを同定する方法および器官の画像を形成する方法で用いることに関する。
【背景技術】
【０００２】
序論
神経伝達物質であるグルタメートは哺乳動物の中枢神経系における主要な興奮性神経伝達物質であると見なされている。この神経伝達物質が代謝向性グルタメート受容体（ｍＧｌｕＲ）［これは、Ｇ蛋白質結合受容体の亜族であり、これには異なる８サブタイプのｍＧｌｕＲ、即ちｍＧｌｕＲ１からｍＧｌｕＲ８が含まれる］と結合すると、細胞内の多様な二次メッセンジャー系が活性化され得る。ｍＧｌｕＲ類は、アミノ酸配列の相同性、当該受容体が利用する二次メッセンジャー系および薬理学的特徴を基にして３群に分割可能である。Ｉ群のｍＧｌｕＲ（これにはｍＧｌｕＲサブタイプ１および５が含まれる）はホスホリパーゼＣと結合し、そしてそれらが活性化されると細胞内カルシウムイオン代謝がもたらされる。ＩＩ群のｍＧｌｕＲ（ｍＧｌｕＲ２および３）およびＩＩＩ群のｍＧｌｕＲ（ｍＧｌｕＲ４、６、７および８）はアデニルシクラーゼと結合し、そしてそれらが活性化されると二次メッセンジャーｃＡＭＰの減少がもたらされ、このようにして、ニューロン活性が減衰する。Ｉ群のｍＧｌｕＲの拮抗剤による処置を行うと平行接合において神経伝達物質であるグルタメートの放出が減少する方向に推移しそしてシナプス後機構によってグルタメート介在ニューロン興奮が低下することが分かっている。中枢神経系に影響を与える多様な病態生理学過程および病気状態は中枢神経系のニューロンが過剰なグルタメートによって誘発されて興奮することによるものであると考えられていることから、Ｉ群のｍＧｌｕＲの拮抗剤、特にｍＧｌｕＲ１拮抗剤は中枢神経系病、特に精神病および神経学的病気の治療で治療的利点を示す可能性がある。
【０００３】
しかしながら、今までのところ、特異的ｍＧｌｕＲ１リガンドは入手不能であり、そのような不足によって、ｍＧｌｕ１受容体の研究、特にそのような受容体が脳部分の中に明白に分布していて豊富に存在することをラジオオートグラフィで調査することがひどく妨げられていた。Ｉ群に関して今までに利用されたのは［３Ｈ］グルタメートのみであり、これはラット（非特許文献１）またはヒト（非特許文献２）のｍＧｌｕ１ａ受容体に対して用いられた。ｍＧｌｕ１ａ受容体およびｍＧｌｕ５受容体に対しては［３Ｈ］キスクアレート（ｑｕｉｓｑｕａｌａｔｅ）を利用することができるが、しかしながら、前記受容体はｍＧｌｕ１受容体にとって特異的ではなく（これはまたＡＭＰＡ受容体とも結合し）、それは競合的である、即ちそれはグルタメートを追い出す（非特許文献３）。
【０００４】
本発明の目的は適切な特異的、特に非競合的ｍＧｌｕ１受容体リガンドを提供することにあった。
【０００５】
本発明者らは、ここに、放射能標識形態において適切な特異的、特に非競合的ｍＧｌｕ１受容体リガンドを与える特別な群の化合物ばかりでなく代謝向性グルタメート受容体部位にマークを付けそしてそれらを同定する方法そして器官の画像化を行う方法を見いだした。
【０００６】
本出願の構成において、用語「特異的」は、当該リガンドが優先的にｍＧｌｕ１受容体部位と結合することを意味する。用語「非競合的」は、当該リガンドがｍＧｌｕ１受容体部位と結合しているグルタメートを追い出さないか或は追い出す度合が僅かのみであることを意味する。
【０００７】
本発明に従う非放射性化合物が特許文献１に開示されている。
【０００８】
神経学的病気および障害を治療するためのＩ群のｍＧｌｕＲの拮抗剤が特許文献２に開示されており、それはとりわけキノリン構造が基になっている。
【０００９】
代謝向性二環状グルタメート受容体リガンドが特許文献３に開示されているが、それらはいずれもキノリン構造もキノリノン構造も基になっていない。
【００１０】
１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−２，３，４−トリオン−３もしくは４−オキシムおよびそれらをニューロン損失、神経変性病、興奮性アミノ酸の活性が過剰な結果として起こる不利な影響および不安を治療および予防する目的で用いることばかりでなくそれらの放射能標識付き化合物が特許文献４に開示されている。
【特許文献１】ＷＯ  ０２／２８８３７
【特許文献２】ＷＯ  ９９／２６９２７
【特許文献３】ＷＯ  ９９／０３８２２
【特許文献４】ＷＯ  ９４／２７６０５
【非特許文献１】Ｔｈｏｍｓｅｎ他、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．６１９：２２−２８、１９９３
【非特許文献２】Ｋｉｎｇｓｔｏｎ他、Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ３７：２７７−２８７、１９９８
【非特許文献３】Ｍｕｔｅｌ他、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．７５：２５９０−２６０１、２０００
【発明の開示】
【００１１】
発明の詳細な説明
本発明は、式（Ｉ−Ａ）＊または（Ｉ−Ｂ）＊
【００１２】
【化１】
2005524679.tif 000003
【００１３】
｛式中、
Ｘは、Ｏ；Ｃ（Ｒ６）２［ここで、Ｒ６は水素、アリールまたはＣ１−６アルキルであり、これは場合によりアミノまたはモノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノで置換されていてもよい］；ＳまたはＮ−Ｒ７［ここで、Ｒ７はアミノまたはヒドロキシである］を表し、
Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル；アリール；チエニル；キノリニル；シクロＣ３−１２アルキルまたは（シクロＣ３−１２アルキル）Ｃ１−６アルキル［ここで、前記シクロＣ３−１２アルキル部分は場合により二重結合を含有していてもよくかつシクロＣ３−１２アルキル部分の中の１個の炭素原子が酸素原子またはＮＲ８部分（ここで、Ｒ８は水素、ベンジルまたはＣ１−６アルキルオキシカルボニルである）に置き換わっていてもよく、ここで、場合によりＣ１−６アルキル部分またはシクロＣ３−１２アルキル部分の中の１個以上の水素原子がＣ１−６アルキル、ヒドロキシＣ１−６アルキル、ハロＣ１−６アルキル、アミノＣ１−６アルキル、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキルオキシ、アリールＣ１−６アルキルオキシ、ハロ、Ｃ１−６アルキルオキシカルボニル、アリール、アミノ、モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ、Ｃ１−６アルキルオキシカルボニルアミノ、ハロ、ピペラジニル、ピリジニル、モルホリニル、チエニル、または式−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ２−Ｏまたは−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−で表される二価の基に置き換わっていてもよい］；または式（ａ−１）
【００１４】
【化２】
2005524679.tif 000004
【００１５】
［式中、
Ｚ１は、単共有結合、Ｏ、ＮＨまたはＣＨ２であり、
Ｚ２は、単共有結合、Ｏ、ＮＨまたはＣＨ２であり、
ｎは、０、１、２または３の整数であり、そして
フェニル環の中の各水素原子が独立して場合によりハロ、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシまたはヒドロキシＣ１−６アルキルに置き換わっていてもよい］
で表される基を表すか、或は
ＸとＲ１がＸとＲ１が結合している炭素原子と一緒になって式（ｂ−１）、（ｂ−２）または（ｂ−３）；
【００１６】
【化３】
2005524679.tif 000005
【００１７】
で表される基を形成していてもよく、
Ｒ２は、水素；ハロ；シアノ；Ｃ１−６アルキル；Ｃ１−６アルキルオキシ；Ｃ１−６アルキルチオ；Ｃ１−６アルキルカルボニル；Ｃ１−６アルキルオキシカルボニル；Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシＣ１−６アルキル；Ｃ２−６アルケニル；ヒドロキシＣ２−６アルケニル；Ｃ２−６アルキニル；ヒドロキシＣ２−６アルキニル；トリ（Ｃ１−６アルキル）シランＣ２−６アルキニル；アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキルチオＣ１−６アルキル）アミノ；アリール；アリールＣ１−６アルキル；アリールＣ２−６アルキニル；Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキルアミノＣ１−６アルキル；場合によりＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシカルボニルＣ１−６アルキルまたはピリジニルＣ１−６アルキルで置換されていてもよいアミノカルボニル；チエニル、フラニル、ピロリル、チアゾリル、オキサゾリル、イミダゾリル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピペリジニルおよびピペラジニル［場合によりＮがＣ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル、モルホリニル、チオモルホリニル、ジオキサニルまたはジチアニルで置換されていてもよい］から選択される複素環；基−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ９［ここで、Ｒ９は、場合によりシクロＣ３−１２アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルオキシカルボニル、アリール、アリールオキシ、チエニル、ピリジニル、モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ、Ｃ１−６アルキルチオ、ベンジルチオ、ピリジニルチオまたはピリミジニルチオで置換されていてもよいＣ１−６アルキル；シクロＣ３−１２アルキル；シクロヘキセニル；アミノ；アリールシクロＣ３−１２アルキルアミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキルオキシカルボニルＣ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキルオキシカルボニル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ２−６アルケニル）アミノ；モノ−もしくはジ（アリールＣ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジアリールアミノ；アリールＣ２−６アルケニル；フラニルＣ２−６アルケニル；ピペリジジニル；ピペラジニル；インドリル；フリル；ベンゾフリル；テトラヒドロフリル；インデニル；アダマンチル；ピリジニル；ピラジニル；アリール；アリールＣ１−６アルキルチオまたは式（ａ−１）で表される基を表す］；スルホンアミド−ＮＨ−ＳＯ２−Ｒ１０［式中、Ｒ１０はＣ１−６アルキル、モノ−もしくはポリハロＣ１−６アルキル、アリールＣ１−６アルキル、アリールＣ２−６アルケニル、アリール、キノリニル、イソキサゾリルまたはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノを表す］を表し、
Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素；ハロ；ヒドロキシ；シアノ；Ｃ１−６アルキル；Ｃ１−６アルキルオキシ；Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル；Ｃ１−６アルキルカルボニル；Ｃ１−６アルキルオキシカルボニル；Ｃ２−６アルケニル；ヒドロキシＣ２−６アルケニル；Ｃ２−６アルキニル；ヒドロキシＣ２−６アルキニル；トリ（Ｃ１−６アルキル）シランＣ２−６アルキニル；アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキルチオＣ１−６アルキル）アミノ；アリール；モルホリニルＣ１−６アルキルまたはピペリジニルＣ１−６アルキルを表すか、或は
Ｒ２とＲ３が一緒になって−Ｒ２−Ｒ３−［これは、式−（ＣＨ２）３−、−（ＣＨ２）４−、−（ＣＨ２）５−、−（ＣＨ２）６−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｚ４−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｚ４−、−Ｚ４−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｚ４−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｚ４−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｚ４−、−Ｚ４−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｚ４−ＣＨ２−または−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｚ４−（ここで、Ｚ４はＯ、Ｓ、ＳＯ２またはＮＲ１１であり、ここで、Ｒ１１は水素、Ｃ１−６アルキル、ベンジルまたはＣ１−６アルキルオキシカルボニルである）で表される二価の基（ここで、各二価の基は場合によりＣ１−６アルキルで置換されていてもよい）を表す］を形成していてもよいか、或は
Ｒ３とＲ４が一緒になって式−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−で表される二価の基を形成していてもよく、
Ｒ５は、水素；シクロＣ３−１２アルキル；ピペリジニル；オキソ−チエニル；テトラヒドロチエニル；アリールＣ１−６アルキル；Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル；Ｃ１−６アルキルオキシカルボニルＣ１−６アルキルまたはＣ１−６アルキル［場合により基Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｘＲｙ［ここで、ＲｘおよびＲｙは、各々独立して、水素、シクロＣ３−１２アルキル、Ｃ２−６アルキニルまたはＣ１−６アルキル（場合によりシアノ、Ｃ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルオキシカルボニル、フラニル、ピロリジニル、ベンジルチオ、ピリジニル、ピロリルまたはチエニルで置換されていてもよい）である］で置換されていてもよい］を表し、
Ｙは、ＯまたはＳを表すか、或は
ＹとＲ５が一緒になって＝Ｙ−Ｒ５−［これは、式
−ＣＨ＝Ｎ−Ｎ＝              （ｃ−１）；
−Ｎ＝Ｎ−Ｎ＝                （ｃ−２）；または
−Ｎ−ＣＨ＝ＣＨ−            （ｃ−３）；
で表される基を表す］
を形成していてもよく、
アリールは、場合によりハロ、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、フェニルオキシ、ニトロ、アミノ、チオ、Ｃ１−６アルキルチオ、ハロＣ１−６アルキル、ポリハロＣ１−６アルキル、ポリハロＣ１−６アルキルオキシ、ヒドロキシＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル、アミノＣ１−６アルキル、モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ、モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノＣ１−６アルキル、シアノ、−ＣＯ−Ｒ１２、−ＣＯ−ＯＲ１３、−ＮＲ１３ＳＯ２Ｒ１２、−ＳＯ２−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−ＳＯＲ１２、−ＳＯ２Ｒ１２［ここで、各Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は、独立して、Ｃ１−６アルキル；シクロＣ３−６アルキル；フェニル；ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、ハロＣ１−６アルキル、ポリハロＣ１−６アルキル、フラニル、チエニル、ピロリル、イミダゾリル、チアゾリルまたはオキサゾリルで置換されているフェニルを表す］から選択される１個以上の置換基で置換されていてもよいフェニルもしくはナフチルを表し、そして
Ｒ１−Ｃ（＝Ｘ）部分が７位でも８位でもない別の位置に結合している時には前記７および８位がＲ１５およびＲ１６で置換されていてもよく、ここで、Ｒ１５およびＲ１６のいずれか一方または両方がＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシを表すか、或はＲ１５とＲ１６が一緒になって式−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−で表される二価の基を形成していてもよい｝
で表される放射能標識付き化合物、これのＮ−オキサイド形態、薬学的に受け入れられる付加塩、第四級アミンおよび立体化学異性体形態に関する。
【００１８】
この上に示した定義および本明細書の以降で用いる如きＣ１−６アルキルは、基または基の一部として、炭素原子数が１から６の直鎖および分枝鎖飽和炭化水素基、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチルまたはヘキシルなどを包含し、Ｃ２−６アルケニルは、基または基の一部として、二重結合を有する炭素原子数が２から６の直鎖および分枝鎖炭化水素基、例えばエテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、３−メチルブテニルなどを包含し、Ｃ２−６アルキニルは、基または基の一部として、三重結合を有する炭素原子数が２から６の直鎖および分枝鎖炭化水素基、例えばエチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、３−メチルブチニルなどを定義し、シクロＣ３−６アルキルは、一環状アルキル環構造、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルなどを包含し、シクロＣ３−１２アルキルは、一環状、二環状もしくは三環状アルキル環構造を包含し、これは例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、ノルボルナニル、アダマンチルなどの総称である。
【００１９】
用語ハロはフルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードの総称である。この上および本明細書の以下で用いる如きポリハロＣ１−６アルキルは、基または基の一部として、モノ−もしくはポリハロ置換Ｃ１−６アルキル、特に１個以上のフルオロ原子で置換されているメチル、例えばジフルオロメチルまたはトリフルオロメチルなどとして定義される。ポリハロＣ１−６アルキルの定義の範囲内で、アルキル基に結合しているハロゲン原子の数が２以上の場合、それらは同一もしくは異なってもよい。
【００２０】
如何なる成分でも任意の変数、例えばアリールなどが２回以上存在する場合、各定義は独立している。
【００２１】
任意の結合が環構造の中に入る線で描かれている場合、相当する置換基が前記環構造の如何なる原子と結合していてもよいことを意味する。これは、例えば、Ｒ１−Ｃ（＝Ｘ）部分がキノリンまたはキノリノン部分の５、６、７、８位ばかりでなくまた３位または４位に結合していてもよいことを意味する。
【００２２】
用語「放射能標識付き化合物」は、放射性原子を少なくとも１個含有する式（Ｉ−Ａ）＊もしくは（Ｉ−Ｂ）＊に従う化合物、これのＮ−オキサイド形態、薬学的に受け入れられる付加塩、第四級アミンもしくは立体化学異性体形態のいずれかを意味する。本出願の構成内で、ある化合物が放射性原子を含有しない場合、それらをそれらの式番号（ｆｏｒｍｕｌａ  ｎｕｍｂｅｒ）に星印を付けないで示し、ある化合物が放射性原子を含有する場合、それらをそれらの式番号に星印を付けて示す。陽電子もしくはガンマのいずれかを放射する放射性核種を用いて化合物に標識を付けることができる。ラジオリガンド結合技術（ｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）（膜受容体検定）で選択した原子は「３Ｈ］原子または「１２５Ｉ］原子である。画像化の場合に最も一般的に用いる陽電子射出（ＰＥＴ）放射性核種は１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏおよび１３Ｎであり、これらは全部加速器でもたらされ（ａｃｃｅｌｅｒａｔｏｒ  ｐｒｏｄｕｃｅｄ）、これらの半減期はそれぞれ２０、１００、２および１０分である。このような放射性核種の半減期がそのように短いことから、それらを用いることができる施設は、それらを生じさせる現場に加速器が設置されている施設のみであり、従ってそれらの使用は制限される。それらの中で最も幅広く用いられているのは１８Ｆ、９９ｍＴｃ、２０１Ｔｌおよび１２３Ｉである。
【００２３】
特に、放射性原子を水素、炭素、窒素、硫黄、酸素およびハロゲンの群から選択する。好適には、放射性原子を水素、炭素およびハロゲンの群から選択する。
【００２４】
特に、放射性原子を３Ｈ、１１Ｃ、１８Ｆ、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒおよび８２Ｂｒの群から選択する。好適には、放射性原子を３Ｈ、１１Ｃおよび１８Ｆの群から選択する。
【００２５】
用語「本発明に従う化合物」は、式（Ｉ−Ａ）＊もしくは（Ｉ−Ｂ）＊に従う化合物、これのＮ−オキサイド形態、薬学的に受け入れられる付加塩、第四級アミンおよび立体化学異性体形態を意味する。
【００２６】
式（Ｉ−Ａ）＊および（Ｉ−Ｂ）＊で表される化合物の塩をインビボで用いる場合の対イオンは薬学的に受け入れられるイオンである。しかしながら、また、薬学的に受け入れられない酸および塩基の塩も使用可能であり、例えば薬学的に受け入れられる化合物の調製または精製などで使用可能である。薬学的に受け入れられるか否かに拘らず、あらゆる塩を本発明の範囲内に包含させる。用語「インビボ」を用いる場合、これは、本発明に従う化合物を生きている動物に投与する本化合物の使用のいずれかを意味する。
【００２７】
本明細書の上に記述した如き薬学的に受けさせる付加塩は、これに式（Ｉ−Ａ）＊および（Ｉ−Ｂ）＊で表される化合物が形成し得る無毒の治療活性酸付加塩形態を包含させることを意味する。後者は、便利に、塩基形態を適切な酸、例えば無機酸、例えばハロゲン化水素酸、例えば塩酸、臭化水素酸など、硫酸、硝酸、燐酸など、または有機酸、例えば酢酸、プロピオン酸、ヒドロキシ酢酸、２−ヒドロキシプロピオン酸、２−オキソプロピオン酸、しゅう酸、マロン酸、こはく酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、２−ヒドロキシ−１，２，３−プロパントリカルボン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−メチルベンゼンスルホン酸、シクロヘキサンスルファミン酸、２−ヒドロキシ安息香酸、４−アミノ−２−ヒドロキシ安息香酸などで処理することで入手可能である。逆に、塩形態をアルカリで処理することで遊離塩基形態に変化させることも可能である。
【００２８】
酸性プロトンを含有する式（Ｉ−Ａ）＊および（Ｉ−Ｂ）＊で表される化合物を適切な有機および無機塩基で処理することでそれらの無毒の治療活性金属もしくはアミン付加塩形態に変化させることができる。適切な塩基塩形態には、例えばアンモニウム塩、アルカリおよびアルカリ土類金属の塩、例えばリチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム塩など、有機塩基との塩、例えば第一級、第二級および第三級脂肪族および芳香族アミン、例えばメチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン、４種類のブチルアミン異性体、ジメチルアミン、ジエチルアミン、ジエタノールアミン、ジプロピルアミン、ジイソプロピルアミン、ジ−ｎ−ブチルアミン、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、キヌクリジン、ピリジン、キノリンおよびイソキノリン、ベンザチン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール、ヒドラバミンの塩、そしてアミノ酸、例えばアルギニン、リシンなどとの塩が含まれる。逆に、塩形態を酸で処理することで遊離酸形態に変化させることも可能である。
【００２９】
用語「付加塩」はまた式（Ｉ−Ａ）＊および（Ｉ−Ｂ）＊で表される化合物が形成し得る水化物および溶媒付加形態も包含する。そのような形態の例は、例えば水化物、アルコラートなどである。
【００３０】
本明細書の上で用いた如き用語「第四級アミン」は、式（Ｉ−Ａ）＊または（Ｉ−Ｂ）＊で表される化合物の塩基性窒素と適切な第四級化剤、例えば場合により置換されていてもよいアルキルハライド、アリールハライドまたはアリールアルキルハライド、例えばメチルヨージドまたはベンジルヨージドなどの間の反応によって式（Ｉ−Ａ）＊および（Ｉ−Ｂ）＊で表される化合物が形成し得る第四級アンモニウム塩を定義するものである。また、良好な脱離基を有する他の反応体、例えばトリフルオロメタンスルホン酸アルキル、メタンスルホン酸アルキルおよびｐ−トルエンスルホン酸アルキルなども使用可能である。第四級アミンは正帯電窒素を有する。薬学的に受け入れられる対イオンにはクロロ、ブロモ、ヨード、トリフルオロアセテートおよびアセテートが含まれる。イオン交換樹脂を用いて、その選択した対イオンを導入することができる。
【００３１】
本発明に従う化合物の数種はキラルティーを持つ中心を１個以上含有することで立体化学異性体形態として存在する可能性があることは理解されるであろう。
【００３２】
本明細書の上で用いた如き用語「立体化学異性体形態」は、本発明に従う化合物または生理学的機能誘導体が取り得る可能なあらゆる立体異性体形態を定義するものである。特に明記も指示もしない限り、ある化合物の化学的表示は可能なあらゆる立体異性体形態の混合物（この混合物は基本的分子構造を有するあらゆるジアステレオマーおよびエナンチオマーを含有する）ばかりでなく本発明に従う化合物の個々の異性体形態（これは他の異性体を実質的に含有しない、即ちこれが伴う他の異性体は１０％未満、好適には５％未満、特に２％未満、最も好適には１％未満である）の各々を表す。明らかに、本発明に従う化合物の立体化学異性体形態を本発明の範囲内に包含させることを意図する。同じことが本明細書に記述する如き中間体（本発明に従う化合物の最終生成物を調製する時に用いる）にも当てはまる。
【００３３】
本明細書では、用語シスおよびトランスをケミカルアブストラクト（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｔｓ）の命名法に従って用いる。
【００３４】
本発明に従う化合物およびこれらの調製で用いる中間体の数種では絶対的な立体化学形態を測定していない。そのような場合には、１番目に単離した立体異性体形態を「Ａ」と表示しそして２番目に単離した立体異性体形態を「Ｂ」と表示するが、これは実際の立体化学的形態を更に言及するものでない。しかしながら、前記「Ａ」および「Ｂ」立体異性体形態は、明瞭に、物理化学的特徴、例えば「Ａ」と「Ｂ」が鏡像関係を有する場合には旋光などで特徴づけ可能である。本分野の技術者は、本技術分野で公知の方法、例えばＸ線回折などを用いてそのような化合物の絶対的形態を決定することができるであろう。「Ａ」と「Ｂ」が立体異性体混合物の場合、それらを更に分離することができ、それぞれ、単離した１番目の画分を「Ａ１」および「Ｂ１」と表示しそして２番目の画分を「Ａ２」および「Ｂ２」と表示するが、実際の立体化学形態を更に言及するものでない。
【００３５】
本化合物のＮ−オキサイド形態は、これに、１個または数個の窒素原子が酸化されていわゆるＮ−オキサイドになっている式（Ｉ−Ａ）＊および（Ｉ−Ｂ）＊で表される化合物を包含させることを意味する。
【００３６】
本発明に従う化合物の数種はまた互変異性形態で存在する可能性もある。そのような形態を前記式の中に明確には示さなかったが、それらを本発明の範囲内に包含させることを意図する。特に興味の持たれる化合物は、立体化学的に高純度の式（Ｉ−Ａ）＊および（Ｉ−Ｂ）＊で表される化合物である。
【００３７】
興味の持たれる群の化合物は、
ＸがＯ；Ｃ（Ｒ６）２［ここで、Ｒ６は水素またはアリールである］；またはＮ−Ｒ７［ここで、Ｒ７はアミノまたはヒドロキシである］を表し、
Ｒ１がＣ１−６アルキル；アリール；チエニル；キノリニル；シクロＣ３−１２アルキルまたは（シクロＣ３−１２アルキル）Ｃ１−６アルキル［ここで、前記シクロＣ３−１２アルキル部分は場合により二重結合を含有していてもよくかつシクロＣ３−１２アルキル部分の中の１個の炭素原子が酸素原子またはＮＲ８部分（ここで、Ｒ８はベンジルまたはＣ１−６アルキルオキシカルボニルである）に置き換わっていてもよく、ここで、場合によりＣ１−６アルキル部分またはシクロＣ３−１２アルキル部分の中の１個以上の水素原子がＣ１−６アルキル、ハロＣ１−６アルキル、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキルオキシ、アリールＣ１−６アルキルオキシ、ハロ、アリール、モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ、Ｃ１−６アルキルオキシカルボニルアミノ、ハロ、ピペラジニル、ピリジニル、モルホリニル、チエニル、または式−Ｏ−または−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−で表される二価の基に置き換わっていてもよい］；または式（ａ−１）
【００３８】
【化４】
2005524679.tif 000006
【００３９】
［式中、
Ｚ１は、単共有結合、ＯまたはＣＨ２であり、
Ｚ２は、単共有結合、ＯまたはＣＨ２であり、
ｎは、０、１または２の整数であり、そして
フェニル環の中の各水素原子が独立して場合によりハロまたはヒドロキシに置き換わっていてもよい］
で表される基を表すか、或は
ＸとＲ１がＸとＲ１が結合している炭素原子と一緒になって式（ｂ−１）、（ｂ−２）または（ｂ−３）；
【００４０】
【化５】
2005524679.tif 000007
【００４１】
で表される基を形成していてもよく、
Ｒ２が水素；ハロ；シアノ；Ｃ１−６アルキル；Ｃ１−６アルキルオキシ；Ｃ１−６アルキルチオ；Ｃ１−６アルキルカルボニル；Ｃ１−６アルキルオキシカルボニル；Ｃ２−６アルケニル；ヒドロキシＣ２−６アルケニル；Ｃ２−６アルキニル；ヒドロキシＣ２−６アルキニル；トリ（Ｃ１−６アルキル）シランＣ２−６アルキニル；アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキルチオＣ１−６アルキル）アミノ；アリール；アリールＣ１−６アルキル；アリールＣ２−６アルキニル；Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキルアミノＣ１−６アルキル；場合によりＣ１−６アルキルオキシカルボニルＣ１−６アルキルで置換されていてもよいアミノカルボニル；チエニル、フラニル、チアゾリルおよびピペリジニル［場合によりＮがモルホリニルまたはチオモルホリニルで置換されていてもよい］から選択される複素環；基−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ９［ここで、Ｒ９は、場合によりシクロＣ３−１２アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルオキシカルボニル、アリール、アリールオキシ、チエニル、ピリジニル、モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ、Ｃ１−６アルキルチオ、ベンジルチオ、ピリジニルチオまたはピリミジニルチオで置換されていてもよいＣ１−６アルキル；シクロＣ３−１２アルキル；シクロヘキセニル；アミノ；アリールシクロＣ３−１２アルキルアミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキルオキシカルボニルＣ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキルオキシカルボニル）アミノ；モノ−もしくはジ（Ｃ２−６アルケニル）アミノ；モノ−もしくはジ（アリールＣ１−６アルキル）アミノ；モノ−もしくはジアリールアミノ；アリールＣ２−６アルケニル；フラニルＣ２−６アルケニル；ピペリジジニル；ピペラジニル；インドリル；フリル；ベンゾフリル；テトラヒドロフリル；インデニル；アダマンチル；ピリジニル；ピラジニル；アリールまたは式（ａ−１）で表される基を表す］；スルホンアミド−ＮＨ−ＳＯ２−Ｒ１０［式中、Ｒ１０はＣ１−６アルキル、モノ−もしくはポリハロＣ１−６アルキル、アリールＣ１−６アルキルまたはアリールを表す］を表し、
Ｒ３およびＲ４が各々独立して水素；Ｃ１−６アルキル；Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル；Ｃ１−６アルキルオキシカルボニルを表すか、或は
Ｒ２とＲ３が一緒になって−Ｒ２−Ｒ３−［これは、式−（ＣＨ２）４−、−（ＣＨ２）５−、−Ｚ４−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｚ４−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−または−Ｚ４−ＣＨ２−ＣＨ２−（ここで、Ｚ４はＯ、Ｓ、ＳＯ２またはＮＲ１１であり、ここで、Ｒ１１は水素、Ｃ１−６アルキル、ベンジルまたはＣ１−６アルキルオキシカルボニルである）で表される二価の基（ここで、各二価の基は場合によりＣ１−６アルキルで置換されていてもよい）を表す］を形成していてもよいか、或は
Ｒ３とＲ４が一緒になって式−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−で表される二価の基を形成していてもよく、
Ｒ５が水素；ピペリジニル；オキソ−チエニル；テトラヒドロチエニル；アリールＣ１−６アルキル；Ｃ１−６アルキルオキシカルボニルＣ１−６アルキル；または場合により基Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｘＲｙ［ここで、ＲｘおよびＲｙは、各々独立して、水素、シクロＣ３−１２アルキル、Ｃ２−６アルキニルまたはＣ１−６アルキル（場合によりシアノ、Ｃ１−６アルキルオキシまたはＣ１−６アルキルオキシカルボニルで置換されていてもよい）である］で置換されていてもよいＣ１−６アルキルを表し、
ＹがＯまたはＳを表すか、或は
ＹとＲ５が一緒になって＝Ｙ−Ｒ５−［これは、式
−ＣＨ＝Ｎ−Ｎ＝              （ｃ−１）；または
−Ｎ＝Ｎ−Ｎ＝                （ｃ−２）
で表される基を表す］
を形成していてもよく、
アリールが場合によりハロ、Ｃ１−６アルキルオキシ、フェニルオキシ、モノ−もしくはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノおよびシアノから選択される１個以上の置換基で置換されていてもよいフェニルもしくはナフチルを表し、そして
Ｒ１−Ｃ（＝Ｘ）部分が７位でも８位でもない別の位置に結合している時には前記７および８位がＲ１５およびＲ１６で置換されていてもよく、ここで、Ｒ１５およびＲ１６のいずれか一方または両方がＣ１−６アルキルを表すか、或はＲ１５とＲ１６が一緒になって式−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨで表される二価の基を形成していてもよい、
式（Ｉ−Ａ）＊および（Ｉ−Ｂ）＊で表される化合物である。
【００４２】
最も興味の持たれる群のさらなる化合物には
ＸがＯを表し、
Ｒ１がＣ１−６アルキル；シクロＣ３−１２アルキルまたは（シクロＣ３−１２アルキル）Ｃ１−６アルキル［ここで、場合によりＣ１−６アルキル部分またはシクロＣ３−１２アルキル部分の中の１個以上の水素原子がＣ１−６アルキルオキシ、アリール、ハロまたはチエニルに置き換わっていてもよい］を表し、
Ｒ２が水素；ハロ；Ｃ１−６アルキルまたはアミノを表し、
Ｒ３およびＲ４が各々独立して水素またはＣ１−６アルキルを表すか、或は
Ｒ２とＲ３が一緒になって−Ｒ２−Ｒ３−［これは、式−Ｚ４−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−または−Ｚ４−ＣＨ２−ＣＨ２−（ここで、Ｚ４はＯまたはＮＲ１１であり、ここで、Ｒ１１はＣ１−６アルキルである）で表される二価の基（ここで、各二価の基は場合によりＣ１−６アルキルで置換されていてもよい）を表す］を形成していてもよいか、或は
Ｒ３とＲ４が一緒になって式−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−で表される二価の基を形成していてもよく、
Ｒ５が水素を表し、
ＹがＯを表し、そして
アリールが場合によりハロで置換されていてもよいフェニルを表す、
式（Ｉ−Ａ）＊および（Ｉ−Ｂ）＊で表される化合物が含まれる。
【００４３】
興味の持たれるさらなる群の化合物には、前記Ｒ１−Ｃ（＝Ｘ）部分がキノリンまたはキノリノン部分の６位に結合している式（Ｉ−Ａ）＊および（Ｉ−Ｂ）＊で表される化合物が含まれる。
【００４４】
特に興味の持たれる化合物は下記の放射性化合物である：
【００４５】
【化６】
2005524679.tif 000008
【００４６】
本発明に従う化合物は全部が控えめから強力なｍＧｌｕＲ１活性を示す。そのような活性はとりわけ前記化合物がｍＧｌｕ１受容体と特異的に結合することに起因し、それによって、そのような化合物は診断方法、例えばｍＧｌｕ１受容体部位の標識付けおよび検出などで用いるに有用である。従って、本発明は、また、本発明に従う放射線標識付き化合物を診断方法で用いることにも関する。
１番目の好適な態様（ガンマ射出放射性核種）
１番目の好適な態様に従う放射能標識付き化合物は［３Ｈ］原子または［１２５Ｉ］原子を少なくとも１個含んで成る。便利には、分子中の１個以上の非放射性［３Ｈ］水素原子の一部または全部をそれの放射性同位元素に置き換えることで［３Ｈ］原子を導入する。［３Ｈ］または［１２５Ｉ］のいずれのラジオリガンドを用いるかの選択は、ある程度ではあるが、液体シンチレーションカウンター（ｌｉｑｕｉｄ  ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  ｃｏｕｎｔｅｒｓ）（ＬＳＣ）（これはかなり高価である）の利用性に依存し得る。［１２５Ｉ］リガンドはγ−カウンターまたはＬＳＣのいずれかを用いて量化可能である一方、［３Ｈ］リガンドの場合にはＬＳＣを用いる必要がある。
【００４７】
［３Ｈ］原子または［１２５Ｉ］原子を少なくとも１個含んで成る放射能標識付き化合物を有利にはラジオリガンド結合技術、特に生物学的材料に入っているｍＧｌｕ１受容体にマークを付けるか或はそれを同定するインビトロ膜受容体アッセイで用いる。
【００４８】
［３Ｈ］原子または［１２５Ｉ］原子を少なくとも１個含んで成る放射能標識付き化合物をまた有利には脳のインビボｍＧｌｕ１受容体オートラジオグラフィでも用いる、と言うのは、本発明に従う化合物は予想外に血液脳関門を容易に通り抜けると言った有利な能力を有するからである。
【００４９】
従って、本発明は、また、インビボであるか或はインビトロであるかに拘らず、本発明に従う放射能標識付き化合物を生物学的材料に入っているｍＧｌｕ１受容体にマークを付けるか或はそれを同定することを包含する診断方法で用いることばかりでなく本発明に従う化合物を生物学的材料に入っているｍＧｌｕ１受容体にマークを付けるか或はそれを同定する診断具を製造する目的で用いることにも関する。
【００５０】
本出願の構成内で、用語「生物学的材料」は、これに、生物学的源を有する全ての材料を包含させることを意味する。これは特に温血動物、特に人に由来する組織サンプル、血漿液、体液、体の部分および器官ならびに温血動物自体に関する。
【００５１】
生物学的材料に入っているｍＧｌｕ１受容体にマークを付けるか或はそれを同定する目的で膜アッセイ系を用いて実施する基本的実験は、飽和実験、阻害実験、結合速度実験および解離速度実験である。このような方法は大部分の神経伝達物質およびホルモン受容体系（ｍＧｌｕＲ１系を包含）に適用可能である（Ｈｅｎｒｙ  Ｉ．Ｙａｍａｍｕｒａ他編集のＭｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ  Ｌｔｄ．、ニューヨーク、１９９０）。この目的で、本放射能標識付き化合物を生物学的材料に投与してｍＧｌｕ１受容体にマークを付けそして本放射能標識付き化合物からの放射を検出してｍＧｌｕ１受容体の量または場所を同定する（例えばエックスビボ受容体オートラジオグラフィで）。
【００５２】
［３Ｈ］原子または［１２５Ｉ］原子を少なくとも１個含んで成る本発明に従う放射能標識付き化合物は、また、試験化合物がｍＧｌｕ１受容体部位を占めるか或はそれと結合する能力を有するか否かを選別するための作用剤としても有用である。試験化合物が本発明に従う化合物をｍＧｌｕ１受容体部位から追い出す度合によって、その試験化合物がｍＧｌｕ１受容体を占めるか或はそれと結合する能力を有するか否かが分かり、従って、それがｍＧｌｕ１受容体の作動剤、拮抗剤または混合作動／拮抗剤のいずれで作用するかが分かる。
【００５３】
［３Ｈ］原子または［１２５Ｉ］原子を少なくとも１個含んで成る本発明に従う放射能標識付き化合物の調製を、有利には、以下の実験章に示すように、ハロゲン原子をトリチウム原子に置き換えることで行う。
２番目の好適な態様（陽電子射出放射性核種）
２番目の好適な態様における放射能標識付き化合物は放射性炭素もしくはハロゲン原子を少なくとも１個含んで成る。原則として、炭素もしくはハロゲン原子を含有する式（Ｉ）に従う如何なる化合物も、その炭素もしくはハロゲン原子を適切な放射性同位元素に置き換えるか或は放射能標識付き反応体（ｒｅａｇｅｎｔｉａ）を用いて式（Ｉ）に従う化合物を製造することで、放射能標識付きにすることができる。この目的に適した放射性同位元素は放射性炭素、例えば［１１Ｃ］など、放射性ヨージド、例えば［１２２Ｉ］、［１２３Ｉ］、［１３１Ｉ］など、放射性ブロマイド、例えば［７５Ｂｒ］、［７６Ｂｒ］、［７７Ｂｒ］および［８２Ｂｒ］など、および放射性フルオライド、例えば［１８Ｆ］などである。好適な放射能標識付き化合物は、Ｒ１が放射性炭素もしくはハロ原子、特に［１１Ｃ］、［１８Ｆ］、［１２３Ｉ］、［７５Ｂｒ］、［７６Ｂｒ］または［７７Ｂｒ］を含んで成る式（Ｉ−Ａ）＊および（Ｉ−Ｂ）＊で表される化合物である。
放射性化合物の調製
放射性ハロゲン原子の導入は適切な反応、例えば以下に描写する如き反応を用いて実施可能である：
【００５４】
【化７】
2005524679.tif 000009
【００５５】
ここで、式（Ｉ−Ａ−ａ）および（Ｉ−Ａ−ａ）＊中の置換基は全部式（Ｉ−Ａ）＊の場合に定義した通りであり、そしてハロはハロゲン原子である。適切な化合物（Ｉ−Ａ−ａ）をＨ［１８Ｆ］と反応させることで、キノリン環に存在するハロゲン原子を求核置換反応によって放射性［１８Ｆ］原子に置き換える。
【００５６】
式（Ｉ−Ｂ）＊に従う放射能標識付き化合物を得ようとする場合には、例えば以下に描写する如き反応スキームを用いて放射能標識付けを相当する方法で実施することができる。明らかに、また、相当する様式、即ちＲ１置換基に標識を付ける様式を用いて式（Ｉ−Ａ）＊に従う化合物を入手することも可能である。
【００５７】
【化８】
2005524679.tif 000010
【００５８】
他のトリチウム標識付け方法が例えばＰｅｎｇ他、Ｆｕｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、２１（２）：３０７−３１１、１９９２およびＢｒｕｎｄｉｓｈ他、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌａｂｅｌｌｅｄ  Ｃｏｕｍｐｏｕｎｄｓ  ａｎｄ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ２５（１２）：１３６１−１３６９（１９８８）などに開示されている。
【００５９】
放射性［１１Ｃ］の導入は以下に示す反応スキームを用いて実施可能であり、このスキームでは、適切な化合物（Ｉ−Ａ−ａ）に最初にスタニル化を受けさせ（ｓｔａｎｙｌｌａｔｅｄ）た後、例えば［１１Ｃ］メチルヨージドを用いたパラジウム触媒使用「Ｓｔｉｌｌｅ型」連成反応などで放射性［１１Ｃ］を導入する（Ｓｃｏｔｔ，Ｗ．Ｊ．；Ｃｒｉｓｐ，Ｇ．Ｔ．；Ｓｔｉｌｌｅ，Ｊ．Ｋ．、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１９８４、１０６、４６３０）。
【００６０】
【化９】
2005524679.tif 000011
【００６１】
式（Ｉ−Ａ−ａ）、（Ｉ−Ａ−ｂ）および（Ｉ−Ａ−ｃ）＊中の置換基は全部式（Ｉ−Ａ）＊で定義した意味と意味を有し、ハロはハロゲン原子であり、そしてＲ１７はメチルまたはブチルである。
【００６２】
放射性ハロゲン原子を含んで成る本放射能標識付き化合物は血液脳関門を容易に通り抜けると言った予想外な特性を有することから、これを有利には適切な組成物の状態で動物、特に温血動物にインビボ投与し、そして画像化技術、例えばコンピューター制御単光子射出断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）または陽電子射出断層撮影法（ＰＥＴ）などを用いて前記放射能標識付き化合物の場所を検出する。このようにして、体全体に渡るｍＧｌｕ１受容体部位の分布を検出することができ、そして本明細書の上に記述した画像化技術を用いて、ｍＧｌｕ１受容体部位を含有する器官、例えば脳などを可視化することができる。そのようなｍＧｌｕ１受容体部位と結合する式（Ｉ−Ａ）＊または（Ｉ−Ｂ）＊で表される放射能標識付き化合物を投与しそして前記放射性化合物からの放射を検出することで器官の画像を形成する方法もまた本発明の１つの面を構成するものである。
【００６３】
この上に記述した技術で式（Ｉ−Ａ）＊または（Ｉ−Ｂ）＊で表される化合物を適用することが本発明のさらなる面を構成するものである。本発明は、特に、本発明に従う化合物をＰＥＴで用いられる診断具を製造する目的で使用することに関する。ＰＥＴで用いる場合の最も好適な本発明に従う放射能標識付き化合物は、１８Ｆを組み込んだ化合物である（１９９０年の６月５日付けで公開されたＨｏｒｎ他の米国特許第４，９３１，２７０号）。
非放射性化合物の調製
本発明に従う非放射性化合物の製造は数多くの方法で実施可能である。
【００６４】
本化合物および以下の製造手順で用いる中間体の数種の構造的表示を簡潔にする目的で、本明細書では以降、キノリンもしくはキノリノン部分を記号Ｑで表す。
【００６５】
【化１０】
2005524679.tif 000012
【００６６】
ＸがＯを表す式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）で表される化合物［この化合物を式（ＩＡ／Ｂ−ａ）で表す］の調製は、式（ＩＩ）で表される中間体に酸化を適切な酸化剤、例えば過マンガン酸カリウムなどおよび適切な相移動触媒、例えばトリス（ジオキサ−３，６−ヘプチル）アミンなどの存在下で反応に不活性な適切な溶媒、例えばジクロロメタンなど中で受けさせることで実施可能である。
【００６７】
【化１１】
2005524679.tif 000013
【００６８】
式（ＩＡ／Ｂ−ａ）で表される化合物の調製は、また、式（ＩＩＩ）で表される中間体とＷ１がハロ原子、例えばブロモなどを表す式（ＩＶ）で表される中間体をブチルリチウムおよび反応に不活性な適切な溶媒、例えばテトラヒドロフランなどの存在下で反応させることでも実施可能である。
【００６９】
【化１２】
2005524679.tif 000014
【００７０】
別法として、式（ＩＡ／Ｂ−ａ）で表される化合物の調製は、また、式（Ｖ）で表される中間体と式（ＩＶ）で表される中間体をブチルリチウムおよび反応に不活性な適切な溶媒、例えばテトラヒドロフランなどの存在下で反応させることでも実施可能である。
【００７１】
【化１３】
2005524679.tif 000015
【００７２】
Ｒ１置換基が酸素原子を通してカルボニル部分と連結していて前記Ｒ１置換基がＯ−Ｒ１ａで表される式（ＩＡ／Ｂ−ａ）で表される化合物［この化合物を式（ＩＡ／Ｂ−ａ−１）で表す］の調製は、式（ＶＩ）で表される中間体と式（ＶＩＩ）で表される中間体を適切な酸、例えば硫酸などの存在下で反応させることで実施可能である。
【００７３】
【化１４】
2005524679.tif 000016
【００７４】
Ｒ２がメチルカルボニルを表す式（Ｉ−Ａ）で表される化合物［この化合物を式（Ｉ−Ａ−１）で表す］の調製は、式（ＶＩＩＩ）で表される中間体を適切な酸、例えば塩酸などおよび反応に不活性な適切な溶媒、例えばテトラヒドロフランなどの存在下で反応させることで実施可能である。
【００７５】
【化１５】
2005524679.tif 000017
【００７６】
また、本技術分野で公知の変換に従って、式（Ｉ）で表される化合物を互いに変化させることも可能である。
【００７７】
Ｒ２がハロ原子、例えばクロロなどである式（Ｉ−Ａ）で表される化合物を適切なハロゲン化剤、例えばフッ化カリウムまたはヨウ化ナトリウムなどと反応に不活性な適切な溶媒、例えばジメチルスルホキサイドまたはアセトニトリルの存在下および場合により塩化アセチルの存在下で反応させることで、Ｒ２が別のハロ原子、例えばフルオロまたはヨードなどである式（Ｉ−Ａ）で表される化合物に変化させることができる。
【００７８】
Ｒ２が適切な脱離基、例えばハロ原子、例えばクロロ、ヨードなど（この脱離基をＷ２で表す）である式（Ｉ−Ａ）で表される化合物［この化合物を（Ｉ−Ａ−２）で表す］を適切なシアノ導入剤、例えばトリメチルシランカルボニトリルなどと適切な塩基、例えばＮ，Ｎ−ジエチルエタンアミンなどおよび適切な触媒、例えばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムなどの存在下で反応させることで、Ｒ２がシアノである式（Ｉ−Ａ）で表される化合物［この化合物を式（Ｉ−Ａ−３）で表す］に変化させることができる。
【００７９】
また、式（Ｉ−Ａ−２）で表される化合物をＣ２−６アルキニルトリ（Ｃ１−６アルキル）シランとＣｕＩ、適切な塩基、例えばＮ，Ｎ−ジエチルエタンアミンなどおよび適切な触媒、例えばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムなどの存在下で反応させることで、式（Ｉ−Ａ−４）で表される化合物に変化させることも可能である。次に、式（Ｉ−Ａ−４）で表される化合物をフッ化カリウムと適切な酸、例えば酢酸などの存在下で反応させるか或は適切な塩基、例えば水酸化カリウムなどと反応に不活性な適切な溶媒、例えばアルコール、例えばメタノールなどの存在下で反応させることで、式（Ｉ−Ａ−５）で表される化合物に変化させることができる。
【００８０】
また、式（Ｉ−Ａ−２）で表される化合物を式（ＩＸ）で表される中間体とＣｕＩ、適切な塩基、例えばＮ，Ｎ−ジエチルエタンアミンなどおよび適切な触媒、例えばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムなどの存在下で反応させることで、式（Ｉ−Ａ−６）で表される化合物に変化させることも可能である。
【００８１】
また、式（Ｉ−Ａ−２）で表される化合物を適切なアルキル化剤、例えばＳｎ（Ｃ１−６アルキル）４など存在下でＲ２がＣ１−６アルキルである化合物［この化合物を式（Ｉ−Ａ−８）で表す］に変化させるか或は適切なアルケニル化剤、例えばＳｎ（Ｃ２−６アルケニル）（Ｃ１−６アルキル）３など存在下でＲ２がＣ２−６アルケニルである化合物［この化合物を式（Ｉ−Ａ−９）で表す］に変化させることも可能であり、両方の反応とも適切な触媒、例えばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムなどおよび反応に不活性な溶媒、例えばトルエンまたはジオキサンなどの存在下で実施可能である。
【００８２】
また、式（Ｉ−Ａ−２）で表される化合物を式（Ｘ）で表される中間体と場合により適切な塩基、例えば炭酸ジカリウムなどおよび反応に不活性な溶媒、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの存在下で反応させることで、ＺがＯまたはＳを表す式（Ｉ−Ａ−７）で表される化合物に変化させることも可能である。
【００８３】
また、式（Ｉ−Ａ−２）で表される化合物を式Ｃ１−６アルキルＯＨで表される適切なアルコールおよびＣＯと適切な触媒、例えば酢酸パラジウム（ＩＩ）など、トリフェニルホスフィン、適切な塩基、例えば炭酸ジカリウムなどおよび反応に不活性な溶媒、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの存在下で反応させることで、Ｒ２がＣ１−６アルキルオキシカルボニルである式（Ｉ−Ａ）で表される化合物［この化合物を式（Ｉ−Ａ−１０）で表す］およびＲ２が水素である式（Ｉ−Ａ）で表される化合物［この化合物を式（Ｉ−Ａ−１１）で表す］に変化させることも可能である。
【００８４】
また、式（Ｉ−Ａ−１１）で表される化合物の調製は、式（Ｉ−Ａ−２）で表される化合物とＺｎを適切な酸、例えば酢酸などの存在下で反応させることでも実施可能である。
【００８５】
また、式（Ｉ−Ａ−２）で表される化合物を式Ｈ２Ｎ−Ｃ１−６アルキル−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ１−６アルキルで表される中間体とＣＯ、適切な触媒、例えばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムなど、適切な塩基、例えばＮ，Ｎ−ジエチルエタンアミンなどおよび反応に不活性な適切な溶媒、例えばトルエンなどの存在下で反応させることで、Ｒ２がＣ１−６アルキルオキシカルボニルＣ１−６アルキルで置換されているアミノカルボニルである式（Ｉ−Ａ）で表される化合物［この化合物を式（Ｉ−Ａ−１２）で表す］に変化させることも可能である。
【００８６】
【化１６】
2005524679.tif 000018
また、式（Ｉ−Ａ−２）で表される化合物を式（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）で表される中間体と適切な触媒、例えばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムなどおよび反応に不活性な適切な溶媒、例えばジオキサンなどの存在下で反応させることで、Ｒ２が本明細書の上に示したＲ２の定義に記述した群から選択されるアリールまたは複素環（このＲ２をＲ２ａで表す）である式（Ｉ−Ａ）で表される化合物［この化合物を式（Ｉ−Ａ−１３）で表す］に変化させることも可能である。
【００８７】
【化１７】
2005524679.tif 000019
【００８８】
また、式（Ｉ−Ａ−２）で表される化合物をヒドラジンカルボキサルデヒドまたはアジ化ナトリウムと反応に不活性な適切な溶媒、例えばアルコール、例えばブタノールなどまたはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなど中で反応させることで、ＹとＲ５が一緒になって式（ｂ−１）または（ｂ−２）で表される基を形成している式（Ｉ−Ｂ）で表される化合物［この化合物を式（Ｉ−Ｂ−１）または（Ｉ−Ｂ−２）で表す］に変化させることも可能である。
【００８９】
【化１８】
2005524679.tif 000020
【００９０】
式（Ｉ−Ａ−１１）で表される化合物を適切な過酸化物、例えば３−クロロ−ベンゼンカルボペルオキソイックアシッド（ｂｅｎｚｅｎｅｃａｒｂｏｐｅｒｏｘｉｏｉｃ  ａｃｉｄ）などと反応に不活性な適切な溶媒、例えば塩化メチレンなど中で反応させることで、式（Ｉ−Ａ−１４）で表される相当するＮ−オキサイドに変化させることができる。前記式（Ｉ−Ａ−１４）で表される化合物を更に塩化４−メチル−ベンゼンスルホニルと適切な塩基、例えば炭酸ジカリウムなどおよび反応に不活性な適切な溶媒、例えば塩化メチレンなどの存在下で反応させることで、Ｒ５が水素である式（Ｉ−Ｂ）で表される化合物［この化合物を式（Ｉ−Ｂ−３）で表す］に変化させることも可能である。
【００９１】
【化１９】
2005524679.tif 000021
【００９２】
式（Ｉ−Ｂ−３）で表される化合物の調製は、また、Ｒ２がＣ１−６アルキルオキシである式（Ｉ−Ａ）で表される化合物［この化合物を式（Ｉ−Ａ−１５）で表す］を適切な酸、例えば塩酸などと反応に不活性な適切な溶媒、例えばテトラヒドロフランなどの存在下で反応させることでも実施可能である。
【００９３】
【化２０】
2005524679.tif 000022
【００９４】
式（Ｉ−Ｂ−３）で表される化合物を適切なアルキル化剤、例えばＷ３が適切な脱離基、例えばハロ原子、例えばヨードなどを表す式（ＸＩＶ）で表される中間体などとカリウム第三ブトキサドの存在下および反応に不活性な適切な溶媒、例えばテトラヒドロフランなどの存在下で反応させることで、Ｒ５がＣ１−６アルキルを表す式（Ｉ−Ｂ）で表される化合物［この化合物を式（Ｉ−Ｂ−４）で表す］に変化させることができる。
【００９５】
【化２１】
2005524679.tif 000023
【００９６】
また、式（Ｉ−Ｂ−３）で表される化合物をＷ４が適切な脱離基、例えばハロ原子、例えばブロモ、クロロなどを表す式（ＸＶ）で表される中間体と適切な塩基、例えば水素化ナトリウムなどおよび反応に不活性な適切な溶媒、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの存在下で反応させることで、Ｒ５がＣ１−６アルキルオキシカルボニルＣ１−６アルキルまたはアリールＣ１−６アルキル（このＲ５をＲ５ａで表す）である式（Ｉ−Ｂ）で表される化合物［この化合物を式（Ｉ−Ｂ−５）で表す］に変化させることも可能である。
【００９７】
【化２２】
2005524679.tif 000024
【００９８】
また、式（Ｉ−Ａ−２）で表される化合物をＨ２Ｎ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ２と適切な塩基、例えば水酸化カリウムなどおよび反応に不活性な適切な溶媒、例えばアルコール、例えばエタノールなどまたは水などの存在下で反応させることで、Ｒ５が水素でありそしてＹがＳである式（Ｉ−Ｂ）で表される化合物［この化合物を式（Ｉ−Ｂ−６）で表す］に変化させることも可能である。式（Ｉ−Ｂ−６）で表される化合物を更に適切なＣ１−６アルキルハライド、例えばＣ１−６アルキルヨージドなどと適切な塩基、例えば炭酸ジカリウムなどおよび適切な溶媒、例えばアセトンなどの存在下で反応させることで、Ｒ２がＣ１−６アルキルチオである式（Ｉ−Ａ）で表される化合物［この化合物を式（Ｉ−Ａ−１６）で表す］に変化させることも可能である。
【００９９】
【化２３】
2005524679.tif 000025
【０１００】
式（ＩＡ／Ｂ−ａ）で表される化合物を式（ＸＶＩ）で表される中間体と場合により適切な塩基、例えばＮ，Ｎ−ジエチルエタンアミンなどおよび反応に不活性な適切な溶媒、例えばアルコール、例えばエタノールなどの存在下で反応させることで、ＸがＮ−Ｒ７である式（Ｉ−Ａ）もしくは（Ｉ−Ｂ）で表される化合物［この化合物を式（ＩＡ／Ｂ−ｂ）で表す］に変化させることができる。
【０１０１】
【化２４】
2005524679.tif 000026
【０１０２】
この上に記述した式（Ｉ−Ａ−１３）で表される化合物の製造手順に既に示したように、三価の窒素をそれのＮ−オキサイド形態に変化させるに適することが本技術分野で知られている手順に従って、式（Ｉ）で表される化合物をまた相当するＮ−オキサイド形態に変化させることも可能である。前記Ｎ−オキサイド化反応は、一般に、式（Ｉ）で表される出発材料を適切な有機もしくは無機過酸化物と反応させることで実施可能である。適切な無機過酸化物には、例えば過酸化水素、アルカリ金属もしくはアルカリ土類金属の過酸化物、例えば過酸化ナトリウム、過酸化カリウムなどが含まれ、適切な有機過酸化物にはペルオキシ酸、例えばベンゼンカルボペルオキソイックアシッドまたはハロ置換ベンゼンカルボペルオキソイックアシッド、例えば３−クロロベンゼンカルボペルオキソイックアシッドなど、ペルオキソアルカン酸、例えばペルオキソ酢酸など、アルキルヒドロパーオキサイド、例えばｔ−ブチルヒドロパーオキサイドなどが含まれ得る。適切な溶媒は、例えば水、低級アルカノール、例えばエタノールなど、炭化水素、例えばトルエンなど、ケトン、例えば２−ブタノンなど、ハロゲン置換炭化水素、例えばジクロロメタンなど、そしてそのような溶媒の混合物などである。
【０１０３】
この上に示した反応手順で用いる中間体および出発材料の数種は商業的に入手可能であるか、或は文献に既に記述されている手順に従って合成可能である。
【０１０４】
式（ＩＩ）で表される中間体の調製は、式（ＸＶＩＩ）で表される中間体とＷ５が適切な脱離基、例えばハロ原子、例えばクロロ、ブロモなどを表す式（ＸＶＩＩＩ）で表される中間体をマグネシウム、ジエチルエーテルおよび反応に不活性な適切な溶媒、例えばジエチルエーテルなどの存在下で反応させることで実施可能である。
【０１０５】
【化２５】
2005524679.tif 000027
【０１０６】
式（ＸＶＩＩ）で表される中間体の調製は、式（ＸＩＸ）で表される中間体に酸化を適切な酸化剤、例えばＭｎＯ２などおよび反応に不活性な適切な溶媒、例えば塩化メチレンなどの存在下で受けさせることで実施可能である。
【０１０７】
【化２６】
2005524679.tif 000028
【０１０８】
式（ＸＩＸ）で表される中間体の調製は、式（ＸＸ）で表される中間体に還元を適切な還元剤、例えば水素化リチウムアルミニウムなどおよび反応に不活性な適切な溶媒、例えばテトラヒドロフランなどの存在下で受けさせることで実施可能である。
【０１０９】
【化２７】
2005524679.tif 000029
【０１１０】
Ｑが３位が場合によりＣ１−６アルキルで置換されていてもよいキノリン部分を表しかつカルボニル部分が６位に位置している式（ＸＸ）で表される中間体［この中間体を式（ＸＸ−ａ）で表す］の調製は、式（ＸＸＩ）で表される中間体と式（ＸＸＩＩ）で表される中間体を３−ニトロ−ベンゼンスルホン酸ナトリウム、適切な酸、例えば硫酸などおよび適切なアルコール、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールなどの存在下で反応させることで実施可能である。
【０１１１】
【化２８】
2005524679.tif 000030
【０１１２】
別法として、式（ＩＩ）で表される中間体の調製は、また、式（ＸＸＩＩＩ）で表される中間体とＷ６が適切な脱離基、例えばハロ原子、例えばブロモ、クロロなどである式（ＸＸＩＶ）で表される中間体を適切な作用剤、例えばブチルリチウムなどおよび反応に不活性な適切な溶媒、例えばテトラヒドロフランなどの存在下で反応させることでも実施可能である。
【０１１３】
【化２９】
2005524679.tif 000031
【０１１４】
式（ＸＸＩＩＩ）で表される中間体の調製は、Ｍｏｆｆａｔｔ  ＰｆｉｔｚｎｅｒまたはＳｗｅｒｎ酸化（ジメチルスルホキサイドと脱水剤、例えばＤＣＣ、Ａｃ２Ｏ、ＳＯ３、Ｐ４Ｏ１０、ＣＯＣｌ２またはＣｌ−ＣＯ−ＣＯＣｌの付加体）を用いて式（ＸＸＶ）で表される中間体に酸化を不活性な溶媒、例えば塩化メチレンなどの存在下で受けさせることで実施可能である。
【０１１５】
【化３０】
2005524679.tif 000032
【０１１６】
式（ＸＸＶ）で表される中間体の調製は、式（ＸＸＶＩ）で表される中間体に還元を適切な還元剤、例えば水素化リチウムアルミニウムなどおよび反応に不活性な適切な溶媒、例えばベンゼンなどの存在下で受けさせることで実施可能である。
【０１１７】
【化３１】
2005524679.tif 000033
【０１１８】
式（ＸＸＶＩ）で表される中間体の調製は、式（ＸＸＶＩＩ）で表される中間体にエステル化を適切なアルコール、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールなどおよび適切な酸、例えば硫酸などなどの存在下で受けさせることで実施可能である。
【０１１９】
【化３２】
2005524679.tif 000034
【０１２０】
Ｒ１が式（ａ−１）で表される基を表し、Ｚ１がＯであり、Ｚ２がＣＨ２でありそしてｎが１である式（ＸＸＶＩＩ）で表される中間体［この中間体を式（ＸＸＶＩＩ−ａ）で表す］の調製は、式（ＸＸＶＩＩＩ）で表される中間体に還元を適切な還元剤、例えば水素などおよび適切な触媒、例えば炭に担持されているパラジウムなどおよび適切な酸、例えば酢酸などの存在下で受けさせることで実施可能である。中間体（ＸＸＶＩＩ）のＲ１が場合により置換されていてもよいフェニル部分を表す場合、また、それに還元を適切な還元剤、例えばＡｌ２Ｏ３に担持されているロジウムなどおよび反応に不活性な適切な溶媒、例えばテトラヒドロフランなどの存在下で受けさせることで、それを場合により置換されていてもよいシクロヘキシル部分に変化させることも可能である。
【０１２１】
【化３３】
2005524679.tif 000035
【０１２２】
Ｑが２位がハロ、例えばクロロなどで置換されているキノリン部分を表す式（ＩＶ）で表される中間体［この中間体を式（ＩＶ−ａ）で表す］の調製は、Ｑがキノリノン部分を表してＲ５が水素である式（ＩＶ）で表される中間体［この中間体を式（ＩＶ−ｂ）で表す］をＰＯＣｌ３の存在下で反応させることで実施可能である。
【０１２３】
【化３４】
2005524679.tif 000036
【０１２４】
Ｒ４が水素である式（ＩＶ−ａ）で表される中間体［この中間体を式（ＩＶ−ａ−１）で表す］の調製は、また、式（ＸＸＩＸ）で表される中間体とＰＯＣｌ３をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドの存在下で反応させることでも実施可能である（Ｖｉｌｓｍｅｉｅｒ−Ｈａａｃｋホルミル化に続く環化）。
【０１２５】
【化３５】
2005524679.tif 000037
【０１２６】
式（ＸＸＩＸ）で表される中間体の調製は、式（ＸＸＸ）で表される中間体とＷ７が適切な脱離基、例えばハロ原子、例えばクロロなどを表す式（ＸＸＸＩ）で表される中間体を適切な塩基、例えばＮ，Ｎ−ジエチルエタンアミンなどおよび反応に不活性な適切な溶媒、例えば塩化メチレンなどの存在下で反応させることで実施可能である。
【０１２７】
【化３６】
2005524679.tif 000038
【０１２８】
式（ＩＶ−ａ）で表される中間体を式（ＸＸＸＩＩ）で表される中間体と反応に不活性な適切な溶媒、例えばアルコール、例えばメタノールなどの存在下で反応させることで式（ＩＶ−ｃ）で表される中間体に変化させることができる。
【０１２９】
【化３７】
2005524679.tif 000039
【０１３０】
また、式（ＩＶ−ａ）で表される中間体をＺ３およびＺ４が各々独立して水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルチオＣ１−６アルキルを表す式（ＸＸＸＩＩＩ−ａ）で表される適切なアミンと反応させることで式（ＩＶ−ｄ−１）で表される中間体に変化させることも可能であり、或はＺ３とＺ４が一緒になって本明細書の上で行ったＲ２の定義で定義した如き複素環を形成しているが、但しこの複素環が窒素原子を少なくとも１個含んで成ることを条件とする式（ＸＸＸＩＩＩ−ｂ）で表される適切なアミンと適切な塩基、例えば炭酸ジカリウムなどおよび反応に不活性な溶媒、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの存在下で反応させることで式（ＩＶ−ｄ−２）で表される中間体に変化させることも可能である。
【０１３１】
【化３８】
2005524679.tif 000040
【０１３２】
また、Ｒ３がＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃｌを表す式（ＩＶ−ａ）で表される中間体［この中間体を式（ＩＶ−ａ−２）で表す］を適切な酸、例えば塩酸などと反応させることでＲ２とＲ３が一緒になって式−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−で表される二価の基を形成している式（ＩＶ）で表される中間体［この中間体を式（ＩＶ−ｅ−１）で表す］に変化させることも可能である。また、式（ＩＶ−ａ−２）で表される中間体をＨ２Ｎ−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ２と反応に不活性な適切な溶媒、例えばアルコール、例えばエタノールなどの存在下で反応させることで、Ｒ２とＲ３が一緒になって式−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−で表される二価の基を形成している式（ＩＶ）で表される中間体［この中間体を式（ＩＶ−ｅ−２）で表す］に変化させることも可能である。
【０１３３】
【化３９】
2005524679.tif 000041
【０１３４】
式（Ｖ）で表される中間体の調製は、式（ＸＸＶＩＩ）で表される中間体と式ＣＨ３−ＮＨ−Ｏ−ＣＨ３で表される中間体を１，１’−カルボニルジイミダゾールおよび反応に不活性な適切な溶媒、例えば塩化メチレンなどの存在下で反応させることで実施可能である。
【０１３５】
【化４０】
2005524679.tif 000042
【０１３６】
Ｑがキノリン部分、特にＲ２がエチルであり、Ｒ３がメチルでありそしてＲ４が水素でありかつカルボキシル部分が６位に位置するキノリン部分を表す式（ＶＩＩ）で表される中間体［この中間体を式（ＶＩＩ−ａ）で表す］の調製は、式（ＸＸＸＩＶ）で表される中間体を適切なアルデヒド、例えばＣＨ３−ＣＨ２−ＣＨ（＝Ｏ）など、（ＣＨ２Ｏ）ｎ、ＺｎＣｌ２、ＦｅＣｌ３および反応に不活性な適切な溶媒、例えばアルコール、例えばエタノールなどの存在下で反応させることで実施可能である。
【０１３７】
【化４１】
2005524679.tif 000043
【０１３８】
式（ＶＩＩＩ）で表される中間体の調製は、式（ＸＸＸＶ）で表される中間体と式（ＸＸＸＶＩ）で表される中間体を適切な触媒、例えばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムなどおよび反応に不活性な適切な溶媒、例えばジオキサンなどの存在下で反応させることで実施可能である。
【０１３９】
【化４２】
2005524679.tif 000044
【０１４０】
他のさらなる調製もいくつか考案可能であり、それらのいくつかを本出願の実施例を用いて更に開示する。
【０１４１】
本発明の化合物および中間体の高純度の立体異性体形態は本技術分野で公知の手順を適用することで入手可能である。ジアステレオマーの場合、物理的分離方法、例えば選択的結晶化およびクロマトグラフィー技術、例えばキラル固定相を用いた液クロなどを用いてそれの分離を行うことができる。エナンチオマーの場合、それと光学活性酸のジアステレオマー塩を選択的に結晶化させることを通して互いに分離可能である。別法として、キラル固定相を用いたクロマトグラフィー技術を利用してエナンチオマーの分離を行うことも可能である。また、適切な出発材料の相当する高純度の立体異性体形態を用いてそのような高純度の立体異性体形態を生じさせることも可能であるが、但しその反応が立体選択的または立体特異的に起こることを条件とする。特定の立体異性体が望まれる場合、好適には、立体選択的もしくは立体特異的製造方法を用いてそのような化合物の合成を行う。このような方法では有利にキラル的に（ｃｈｉｒａｌｌｙ）高純度の出発材料を用いる。明らかに、式（Ｉ）で表される化合物の立体異性体形態を本発明の範囲内に包含させることを意図する。
【０１４２】
式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）で表される化合物の立体異性体、例えばシス形態などを適切な酸、例えば塩酸などと反応に不活性な適切な溶媒、例えばテトラヒドロフランなどの存在下で反応させることで、そのような化合物を別の立体異性体、例えば相当するトランス形態などに変化させることも可能である。
【０１４３】
本化合物がｍＧｌｕＲ拮抗活性を有することは、本明細書の以下に記述するように、ＣＨＯ細胞の中にクローン化したラットｍＧｌｕＲ１におけるシグナル導入試験およびラットにＢｅｎｎｅｔｔ結紮を行うＣｏｌｄ異痛試験で実証可能である。
【０１４４】
式（Ｉ−Ａ）または（Ｉ−Ｂ）で表される化合物、これらのＮ−オキサイド、薬学的に受け入れられる付加塩、第四級アミンおよび立体化学的異性体形態は、ｍＧｌｕＲ拮抗活性、より詳細にはＩ群のｍＧｌｕＲ拮抗活性、更により詳細にはｍＧｌｕＲ１拮抗活性を有することから、中枢神経系のグルタメート誘発病の治療または予防で用いるに有用である。グルタメートがある役割を果たしていることが立証されている病気には、薬剤中毒または禁断（依存、オピオイド耐性、オピオイド禁断症状）、低酸素、無酸素および虚血損傷（虚血発作、心拍停止）、痛み（神経障害痛、炎症痛、痛覚過敏）、低血糖症、ニューロン損傷に関連した病気、脳外傷、頭外傷、脊椎損傷、脊髄障害、痴呆、不安、精神分裂病、鬱病、認識障害、記憶喪失、双極性病、行為障害、アルツハイマー病、血管痴呆、混合（アルツハイマーおよび血管）痴呆、Ｌｅｗｙ  Ｂｏｄｙ病、せん妄または混乱、パーキンソン病、ハンチングトン病、ダウン症候群、てんかん、老化、筋委縮性側索硬化症、多発性硬化症、エイズ（後天性免疫不全症候群）およびエイズ関連コンプレックス（ＡＲＣ）が含まれる。
【０１４５】
本発明は、また、哺乳動物、特に人に投与、特に診断の理由、より詳細には器官の画像化の目的で投与するための組成物も提供し、これは、式（Ｉ−Ａ）＊または（Ｉ−Ｂ）＊で表される放射能標識付き化合物を治療有効量で含有しかつ薬学的に受け入れられる担体または希釈剤を含有して成る。
【０１４６】
従って、本発明の化合物またはこれのサブグループのいずれも投与の目的でいろいろな薬剤形態に調合可能である。適切な組成物として、全身投与される薬剤で通常用いられるあらゆる組成物を挙げることができる。本発明の薬剤組成物を調製する時、個々の化合物を塩基もしくは付加塩形態で活性材料として治療有効量で薬学的に受け入れられる担体と密に混ざり合っている状態で一緒にするが、そのような担体は投与で望まれる調剤の形態に応じて幅広く多様な形態を取り得る。本薬剤組成物を望ましくは単一投薬形態、好適には経口、直腸、局所、経皮または非経口注入投与に適した単一投薬形態にする。例えば、本組成物を経口投薬形態で調製しようとする場合、通常の薬学的媒体のいずれも使用可能であり、例えば経口用液状調剤、例えば懸濁液、シロップ、乳液、エリキシルおよび溶液などの場合には水、グリコール、油、アルコールなどを用いてもよく、或は粉末、ピル、カプセルおよび錠剤の場合には固体状担体、例えば澱粉、糖、カオリン、滑剤、結合剤、崩壊剤などを用いてもよい。投与が容易なことが理由で錠剤およびカプセルが最も有利な経口投薬単位形態に相当し、この場合には明らかに固体状の薬剤担体を用いる。非経口用組成物の場合の担体は一般に少なくとも大部分が無菌水を含んで成るが、例えば溶解を補助する目的などで他の材料を含有させることも可能である。例えば、注射可能な溶液を調製することも可能であり、この場合の担体には食塩溶液、グルコース溶液または食塩溶液とグルコース溶液の混合物が含まれる。また、注射可能な懸濁液を調製することも可能であり、この場合には適切な液状担体、懸濁剤などを用いてもよい。また、使用直前に液状形態の調剤に変えることを意図する固体形態の調剤も含まれる。局所的投与に適した組成物として、薬剤を局所的に投与する目的で通常用いられる組成物の全部を挙げることができ、例えばクリーム、ゲル、包帯、シャンプー、チンキ、ペースト、軟膏、軟膏剤、粉末などを挙げることができる。経皮投与に適した組成物では、その担体に、場合により、浸透増強剤および／または適切な湿潤剤を含めてもよく、それを場合により僅かな比率のある性質の適切な添加剤と組み合わせてもよく、そのような添加剤は、皮膚に有害な影響を有意には引き起こさない添加剤である。そのような添加剤は皮膚への塗布を容易にしそして／または所望組成物の調製に役立ち得る。そのような組成物はいろいろな様式で投与可能であり、例えば経皮パッチ、スポットオン（ｓｐｏｔ−ｏｎ）、軟膏などとして投与可能である。
【０１４７】
投与が容易でありかつ投薬が均一であることが理由で上述した薬剤組成物を単位投薬形態に調合するのが特に有利である。本明細書および本明細書の請求の範囲で用いる如き単位投薬形態は、各単位が必要な薬剤担体と一緒に所望の治療効果をもたらすように計算して前以て決めておいた量の活性材料を含有する単一投薬として適する物理的に個々別々の単位を指す。そのような単位投薬形態の例は錠剤（刻み目付きまたは被覆錠剤を包含）、カプセル、ピル、座薬、粉末パケット、ウエハース、注射可能な溶液もしくは懸濁液、茶サジ一杯、テーブルスプーン一杯など、そしてそれらを複数に分離させた状態（ｓｅｇｒｅｇａｔｅｄ  ｍｕｌｔｉｐｌｅｓ）である。
【０１４８】
診断に有効な用量または投与頻度は、本分野の技術者に良く知られているように、使用する式（Ｉ−Ａ）＊または（Ｉ−Ｂ）＊で表される個々の化合物および治療を受けさせるべき哺乳動物の個々の状態に依存する。
【０１４９】
以下の実施例は本発明を説明することを意図するものであり、本発明の範囲を限定するものでない。
【実施例】
【０１５０】
実験部分
本明細書では以降、「ＤＭＦ」をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドとして定義し、「ＤＩＰＥ」をジイソプロピルエーテルとして定義し、「ＤＭＳＯ」をジメチルスルホキサイドとして定義し、「ＢＨＴ」を２，６−ビス（１，１−ジメチルエチル）−４−メチルフェノールとして定義し、そして「ＴＨＦ」をテトラヒドロフランとして定義する。
Ａ．中間体の調製
実施例Ａ１
【０１５１】
【化４３】
2005524679.tif 000045
【０１５２】
の調製
４−（１−メチルエトキシ）安息香酸（０．０８３モル）と５％Ｒｈ／Ａｌ２Ｏ３（１０ｇ）をＴＨＦ（２２０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物に水添を５０℃（３バールのＨ２圧力下）で一晩受けさせた。この混合物をセライトで濾過し、ＴＨＦで洗浄した後、蒸発させた。中間体１の収量：１６ｇ（１００％）。
実施例Ａ２
２−エチル−３−メチル−６−キノリンカルボン酸（中間体２）の調製
４−アミノ安息香酸（０．２９９モル）をエタノール（２５０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を室温で撹拌した。ＺｎＣｌ２（０．０３６７モル）および（ＣＨ２Ｏ）ｎ（１０ｇ）を加えた。ＦｅＣｌ３・６Ｈ２Ｏ（０．５モル）を分割して加えた後、温度を６０−６５℃にまで上昇させた。プロパナール（３０ｍｌ）を２時間かけて滴下した。この混合物を２時間還流させた後、室温に１２時間保持した。この混合物を水の中に注ぎ込んだ後、セライトに通して濾過した。その濾液を６ＮのＨＣｌでｐＨ＝７になるまで酸性にした後、この混合物に蒸発を乾燥状態になるまで受けさせた。その残留物をさらなる精製なしに用いた。２−エチル−３−メチル−６−キノリンカルボン酸（中間体２）の収量：５６．１ｇ。
実施例Ａ３
【０１５３】
【化４４】
2005524679.tif 000046
【０１５４】
の調製
４−ブロモベンゼンアミン（０．２３２モル）とＮ，Ｎ−ジエチルエタンアミン（０．２７８４モル）をＣＨ２Ｃｌ２（４００ｍｌ）に入れることで生じさせた５℃の混合物にペンタノイルクロライド（０．２７８４モル）を加えた。この混合物を室温で一晩撹拌し、水の中に注ぎ出した後、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、濃ＮＨ４ＯＨ溶液そして水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（６０ｇ）をジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。その残留物（３５ｇ、６３％）をＣＨ２Ｃｌ２で取り上げた。その有機層を分離し、１０％のＫ２ＣＯ３溶液で洗浄し、水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。中間体（３）の収量：３０ｇ（５４％）。
実施例Ａ４
【０１５５】
【化４５】
2005524679.tif 000047
【０１５６】
の調製
６−ブロモ−２（１Ｈ）−キノリノン（０．０８９モル）をＰＯＣｌ３（５５ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を６０℃で一晩に続いて１００℃で３時間撹拌した後、溶媒を蒸発させた。その残留物をＣＨ２Ｃｌ２で取り上げ、氷水の中に注ぎ出した後、濃ＮＨ４ＯＨで塩基性にし、セライトで濾過した後、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。中間体（４）の収量：１４．５ｇ（６７％）。
実施例Ａ５
ａ）
【０１５７】
【化４６】
2005524679.tif 000048
【０１５８】
の調製
１０℃のＰＯＣｌ３（１０８ｍｌ）にＮ２流下でＤＭＦ（３７ｍｌ）を滴下した。滴下終了後の混合物を室温に温めた。Ｎ−（４−ブロモフェニル）ブタンアミド（０．３３モル）を分割して加えた。この混合物を８５℃で一晩撹拌した後、室温に冷却して、氷の上に注ぎ出した（発熱反応）。その沈澱物を濾別し、少量の水で洗浄した後、乾燥（真空）させた。その残留物をＥｔＯＡｃ／ジエチルエーテルで洗浄した後、乾燥させた。中間体（５）の収量：４４．２ｇ（５０％）。
ｂ）
【０１５９】
【化４７】
2005524679.tif 000049
【０１６０】
の調製
中間体５（０．１６２モル）とメタノール中３５％のメタノールナトリウム塩溶液（１５４ｍｌ）をメタノール（６００ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を撹拌しながら一晩還流させた。この混合物を氷の上に注ぎ出した。その沈澱物を濾別し、少量の水で洗浄した後、ＣＨ２Ｃｌ２で取り上げた。１０％のＫ２ＣＯ３を加えた後、この混合物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。中間体（６）の収量：３１．９ｇ（７４％）。
実施例Ａ６
【０１６１】
【化４８】
2005524679.tif 000050
【０１６２】
の調製
４−メトキシシクロヘキサンカルボン酸（０．０６３モル）をＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物に１，１’−カルボニルビス−１Ｈ−イミダゾール（０．０７４モル）を分割して加えた。その混合物を室温で１時間撹拌した。次に、Ｎ−メトキシメタンアミン（０．０７４モル）を加えた。この混合物を室温で一晩撹拌し、Ｈ２Ｏの中に注ぎ出した後、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、Ｈ２Ｏで数回洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。中間体７の収量：１２．６ｇ。
実施例Ａ７
ａ）６−フルオロ−４−オキソ−４Ｈ−１−ベンゾピラン−２−カルボン酸（０．３０モル）を酢酸（４００ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物に水添をＰｄ／Ｃ（３ｇ）を触媒として用いて受けさせた。Ｈ２（３当量）吸収後、前記触媒を濾別した。その濾液に蒸発を受けさせた。その残留物を石油エーテルに入れて撹拌した。その沈澱物を濾別した後、乾燥（真空；７０℃）させた。ＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨを用いた再結晶化を行った後、その沈澱物を濾別して乾燥（真空；８０℃そして高真空；８５℃）させた。６−フルオロ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−カルボン酸（中間体８）の収量：８．８ｇ（１５．０％）。
ｂ）中間体８（０．２５５モル）をエタノール（４００ｍｌ）とＨ２ＳＯ４（５ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を撹拌しながら８時間還流させた。溶媒を乾燥状態になるまで蒸発させた。その残留物をＣＨ２Ｃｌ２に溶解させた。その有機層を分離し、１０％のＫ２ＣＯ３で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。６−フルオロ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−カルボン酸エチル（中間体９）の収量：４５ｇ（７９％）。
ｃ）Ｎ２下の反応。中間体９（０．２２モル）とベンゼン（６００ｍｌ）の混合物を還流させながら、これに、メチルベンゼン中７０重量％のナトリウムビス（２−メトキシエトキシ）アルミニウムハイドライド溶液をベンゼン（１５０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物（３．４Ｍ）（０．４４モル）（還流）を１時間かけて滴下した。撹拌を還流温度で２．５時間行った後の混合物を±１５℃に冷却した。この混合物にエタノール（３０ｍｌ）と水（１０ｍｌ）を滴下することでそれを分解させた。この混合物を氷／水の上に注ぎ出した後、この混合物を濃塩酸で酸性にした。この混合物をジエチルエーテル（５００ｍｌ）で抽出した。その有機層を分離し、水で洗浄し、乾燥させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨＣｌ３）で精製した。所望画分を集めた後、その溶離液に蒸発を受けさせた。６−フルオロ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−メタノール（中間体１０）の収量：３４ｇ（８５％）。
ｄ）Ｎ２下の反応。エタンジオイルジクロライド（０．１モル）をＣＨ２Ｃｌ２（３５０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を冷却（−６０℃、２−プロパノン／ＣＯ２浴）しつつ撹拌しながらこれにスルフィニルビス［メタン］（３０ｍｌ）を１０分かけて加えた。撹拌を１０分間行った後、中間体１０をＣＨ２Ｃｌ２（９０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を５分かけて加えた。撹拌を１５分間行った後、Ｎ，Ｎ−ジエチルエタンアミン（１２５ｍｌ）を加えた。この混合物が室温になるまで温まった時点で、それを水の中に注ぎ出した。この生成物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を水、ＨＣｌ（１Ｍ）、水、ＮａＨＣＯ３（１０％）そして水で洗浄し、乾燥させた後、蒸発させた。その残留物をジエチルエーテルに溶解させ、水で洗浄し、乾燥させ、濾過した後、蒸発させた。その残留物をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨＣｌ３）で精製した。所望画分を集めた後、その溶離液に蒸発を受けさせた。６−フルオロ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−カルボキサルデヒド（中間体１１）の収量：２１．６ｇ（６７％）。
ｅ）
【０１６３】
【化４９】
2005524679.tif 000051
【０１６４】
の調製
中間体（５）（０．０４６モル）をＴＨＦ（１００ｍｌ）に入れることで生じさせた−７０℃の溶液に１．６Ｍのｎブチルリチウム（０．０５６モル）をゆっくり加えた。この混合物を−７０℃で３０分間撹拌した。中間体１１（０．０５６モル）をＴＨＦ（１００ｍｌ）に入れることで生じさせた懸濁液をゆっくり加えた。この混合物を−７０℃で１時間撹拌した後、室温にもって行き、Ｈ２Ｏの中に注ぎだした後、ＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（２１ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが８０／１０；１５−３５μｍ）で精製した。高純度画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。中間体１２の収量：９．５ｇ（５５％）。
実施例Ａ８
ａ）
【０１６５】
【化５０】
2005524679.tif 000052
【０１６６】
の調製
中間体（５）（０．１１２７モル）と２−メトキシエタンアミン（０．２２５４モル）とＫ２ＣＯ３（０．２２５４モル）をＤＭＦ（５００ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を１２０℃で１５時間撹拌した後、冷却した。溶媒を蒸発させた。その残留物をＣＨ２Ｃｌ２とＨ２Ｏで取り上げた。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を乾燥状態になるまで蒸発させた。その残留物（３３．５３ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨが９５．５／０．５；１５−４０μｍ）で精製した。２画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。中間体１４（３８％）と中間体１３（３４％）の収量：５．７ｇ。
ｂ）
【０１６７】
【化５１】
2005524679.tif 000053
【０１６８】
の調製
中間体（５）（０．０７５１モル）とチオモルホリン（０．０８９１モル）とＫ２ＣＯ３（０．１５モル）をＤＭＦ（２００ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を１２０℃で１２時間撹拌した。溶媒を乾燥状態になるまで蒸発させた。その残留物をＣＨ２Ｃｌ２とＨ２Ｏで取り上げた。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（２６ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが８０／２０；２０−４５μｍ）で精製した。２画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。前記２画分を一緒にした。中間体１５の収量：９．４ｇ（３７％）；融点８２℃。
実施例Ａ９
ａ）３−ニトロベンゼンスルホン酸ナトリウム（０．１１８モル）を７０％のＨ２ＳＯ４（２３０ｍｌ）に入れることで生じさせた溶液に４−アミノ安息香酸（０．２１９モル）を加えた後、この混合物を撹拌しながら還流させた。２−プロペン−１，１−ジオール，２−メチル−，ジアセテート（０．２１６モル）を滴下した後、この混合物を４時間還流させた。エタノール（２００ｍｌ）を加えた後、この混合物を８０℃で４８時間撹拌した。この混合物に蒸発を受けさせ、その残留物を氷水／ＮＨ４ＯＨの中に注ぎ込んだ後、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）させた後、蒸発させた。その残留物をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２／２−プロパノールが９９／１）で精製した。高純度画分を集めた後、蒸発させた。３−メチル−６−キノリンカルボン酸エチル（中間体１６）の収量：２１ｇ（４５％）。
ｂ）ＬｉＡｌＨ４（０．０９８モル）をＴＨＦに入れることで生じさせた０℃の溶液にＮ２下で中間体１６（０．０９８モル）をＴＨＦ（２７０ｍｌ）に入れて添加した。この添加が終了した時点で水（１０ｍｌ）を加えた。その沈澱物を濾別した後、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄した。その有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾別した後、蒸発させた。その生成物をさらなる精製なしに用いた。３−メチル−６−キノリンメタノール（中間体１７）の収量：１６．７１ｇ。
ｃ）中間体１７（０．０９６モル）をＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍｌ）に入れることで生じさせた溶液にＭｎＯ２（０．２３７モル）を加えた後、この混合物を室温で１２時間撹拌した。この混合物をセライトに通して濾過した後、その濾液を再びＭｎＯ２（２０ｇ）と一緒にして１２時間撹拌した。ＭｎＯ２（１０ｇ）を再び加えた。この混合物を１２時間撹拌した。この混合物をセライトに通して濾過した後、蒸発させた。この生成物をさらなる精製なしに用いた。３−メチル−６−キノリンカルボキサルデヒド（中間体１８）の収量：１１．７１ｇ（７１％）。
ｄ）ＴＨＦ（０．１４モル）を１，１’−オキシビスエタン（１０ｍｌ）に入れることで生じさせた１０℃の混合物に、ブロモシクロヘキシル（０．１４モル）を１，１’−オキシビスエタン（５０ｍｌ）とＭｇ削り屑（５０ｍｌ）に入れることで生じさせた溶液を加えた。中間体１８（０．０７モル）をＭｇ削り屑（１００ｍｌ）に入れることで生じさせた溶液を５℃で注意深く加え、この混合物を氷水の中に注ぎ込んだ後、ＥｔＯＡｃで抽出した。（±）−α−シクロヘキシル−３−メチル−６−キノリンメタノール（中間体１９）の収量：１１．３４ｇ（６３％）。
実施例Ａ１０
【０１６９】
【化５２】
2005524679.tif 000054
【０１７０】
の調製
化合物（５）（０．００１５０７モル）とトリブチル（１−エトキシエテニル）スタナン（０．００２２６モル）とＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．０００１５１モル）を１，４−ジオキサン（５ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を８０℃で３時間撹拌した。水を加えた。この混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。この生成物をさらなる精製なしに用いた。中間体２０の収量：１．４ｇ。
実施例Ａ１１
【０１７１】
【化５３】
2005524679.tif 000055
【０１７２】
の調製
化合物（４５）（Ｂ６に従って調製）（０．００１２５モル）を３ＮのＮａＯＨ（５ｍｌ）とｉＰｒＯＨ（１．７ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を室温で一晩撹拌した後、Ｈ２Ｏの中に注ぎ込み、３ＮのＨＣｌで酸性にした後、ＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。この残留物をジエチルエーテルで取り上げた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。中間体２１の収量：０．２６ｇ（５６％）（融点：２３２℃）。
実施例Ａ１２
ａ．
【０１７３】
【化５４】
2005524679.tif 000056
【０１７４】
の調製
５−ブロモ−１Ｈ−インドール−２，３−ジオン（０．２２１モル）を３ＮのＮａＯＨ（５００ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を８０℃で３０分間撹拌し、室温に持って行った後、２−ペンタノン（０．２２１モル）を加えた。この混合物を撹拌しながら１時間３０分還流させた後、ＡｃＯＨでｐＨ＝５になるまで酸性にした。その沈澱物を濾過し、水で洗浄した後、乾燥させた。中間体２２と中間体２３の収量：５２．３ｇ（全体収率：８０％）。
ｂ．
【０１７５】
【化５５】
2005524679.tif 000057
【０１７６】
の調製
中間体２２（０．０３４モル）と中間体２３（０．０３４モル）をＴＨＦ（３００ｍｌ）に入れることで生じさせた−７８℃の懸濁液にＮ２流下で１．６ＭのｎＢｕＬｉ（０．０８１６モル）を滴下した。この混合物を−７８℃で３０分間撹拌した。１．６ＭのｎＢｕＬｉ（０．０８１６モル）を滴下した。この混合物を１時間撹拌した。中間体９（０．１０２モル）をＴＨＦ（２５０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物をゆっくり加えた。この混合物を−７８℃から−２０℃になるまで撹拌し、Ｈ２Ｏ／３ＮのＨＣｌの中に注ぎ出した後、ＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を乾燥状態になるまで蒸発させた。化合物である中間体２４と中間体２５の収量：２０．８９ｇ（８６％）。
実施例Ａ１３
ａ．
【０１７７】
【化５６】
2005524679.tif 000058
【０１７８】
の調製
３−クロロ−２−エチル−２−ブテナール（０．０６５モル）をＡｃＯＨ（１００ｍｌ）に入れることで生じさせた室温の溶液に４−アミノ−３−メトキシ安息香酸（０．０５４モルを分割して加えた。この混合物を撹拌しながら８時間還流させた後、乾燥状態になるまで蒸発させた。その残留物をＣＨ２Ｃｌ２で取り上げ、水を加えた後、その溶液をＥｔ３Ｎで塩基性にした。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物を２−プロパノンから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。中間体２６の収量：２．５ｇ（１８％）。
ｂ．
【０１７９】
【化５７】
2005524679.tif 000059
【０１８０】
の調製
中間体２６（０．０１１モル）をＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）に入れることで生じさせた室温の溶液にＣＤＩ（０．０１２モル）を加えた。この混合物を室温で１時間撹拌した。メトキシアミノメチル（０．０１２モル）を加えた後、この混合物を室温で８時間撹拌した。Ｈ２Ｏを加えた。沈澱物を濾別した。その濾液をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物をジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。中間体２７の収量：０．９５ｇ（３１％）（融点：１４８℃）。
実施例Ａ１４
【０１８１】
【化５８】
2005524679.tif 000060
【０１８２】
の調製
３−クロライド−２−エチル−２−ブタナール（０．０４１モル）をＡｃＯＨ（６０ｍｌ）に入れることで生じさせた室温の溶液に４−ブロモベンゼンアミン（０．０３４モル）を加えた。この混合物を撹拌しながら８時間還流させ、室温にもって行った後、乾燥状態になるまで蒸発させた。その生成物をＥｔＯＡｃから結晶化させた。その沈澱物を濾過し、１０％のＫ２ＣＯ３で洗浄した後、ＣＨ２Ｃｌ２で取り上げた。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。中間体２８の収量：４．６ｇ（５４％）。
実施例Ａ１５
ａ．
【０１８３】
【化５９】
2005524679.tif 000061
【０１８４】
の調製
１，３−シクロヘキサンジオン（０．２６８モル）をＨ２Ｏ（１５０ｍｌ）に入れることで生じさせた５℃の溶液に、ＫＯＨ（０．３２６モル）をＨ２Ｏ（１５０ｍｌ）に入れることで生じさせた溶液をゆっくり加えた。温度が１２℃に到達しないようにすべきである。ＫＩ（２ｇ）に続いて２−ブロモ−１−（４−ニトロフェニル）エタノン（０．２９４モル）を分割して加えた。この混合物を室温で４８時間撹拌した。その沈澱物を濾過し、Ｈ２Ｏに続いてジエチルエーテルで洗浄した後、乾燥させた。収量：６３ｇ（８５％）。この画分の一部（１ｇ）をＥｔＯＨから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。中間体２９の収量：０．５ｇ（４２％）（融点：１００℃）。
ｂ．
【０１８５】
【化６０】
2005524679.tif 000062
【０１８６】
の調製
中間体２９（０．１４５モル）をＨ２ＳＯ４（４０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を室温で１時間撹拌し、氷の中に注ぎ出し、ＮＨ４ＯＨで塩基性にした後、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物をＥｔＯＨから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。収量：３１ｇ（５８％）。この画分の一部（１ｇ）をＥｔＯＨから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。中間体３０の収量：０．７ｇ（５８％）（融点：２００℃）。
ｃ．
【０１８７】
【化６１】
2005524679.tif 000063
【０１８８】
の調製
中間体３０（０．０３９モル）とラネーＮｉ（１０ｇ）をＥｔＯＨ（１００ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物に水添を３バールの圧力下室温で１時間受けさせた。この混合物をセライトで濾過した後、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（９．５ｇ）をジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。収量：４．６ｇ（５２％）。その濾液に蒸発を受けさせた。その残留物（２．７ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨが９９／１；１５−４０μｍ）で精製した。２画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。収量：Ｆ１が１．６ｇでＦ２が１．２ｇ。Ｆ２をＥｔＯＨから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。中間体３１の収量：０．２４ｇ（２％）（融点：２０２℃）。
ｄ．
【０１８９】
【化６２】
2005524679.tif 000064
【０１９０】
の調製
３−クロロ−２−エチル−２−ブテナール（０．０４モル）をＡｃＯＨ（５０ｍｌ）に入れることで生じさせた室温の溶液に中間体３０（０．０２モル）を加えた。この混合物を撹拌しながら４時間還流させた。溶媒を乾燥状態になるまで蒸発させた。その残留物をＥｔＯＡｃから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。その残留物をＣＨ２Ｃｌ２で取り上げた。この混合物を１０％のＫ２ＣＯ３で塩基性にした後、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物をＥｔＯＨから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。中間体３２の収量：２．５ｇ（４０％）。
実施例Ａ１６
【０１９１】
【化６３】
2005524679.tif 000065
【０１９２】
の調製
２−（４−ニトロフェニル）−１−フェニルエタノン（０．０８３モル）とラネーＮｉ（２０ｇ）をＥｔＯＨ（２００ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物に水添を３バールの圧力下室温で１時間受けさせた後、セライトで濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨで洗浄した後、乾燥させた。中間体３３の収量：１７．５ｇ（９７％）。
実施例Ａ１７
ａ．
【０１９３】
【化６４】
2005524679.tif 000066
【０１９４】
の調製
５℃のＰＯＣｌ３（０．７５３６モル）にＤＭＦ（１２．４ｍｌ）を滴下した。４’−ブロモ−５−クロロバレラニリド（０．１０３２モル）を加えた後、この混合物を７５℃で６時間撹拌し、室温に冷却した後、氷水の中に注ぎ出した。不溶物を濾過し、水で洗浄した後、乾燥させた。中間体３４の収量：２５．７ｇ（７８％）。
ｂ．
【０１９５】
【化６５】
2005524679.tif 000067
【０１９６】
の調製
中間体３４（０．０９４モル）を６ＮのＨＣｌ（２５０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を撹拌しながら２日間還流させ、冷却し、水（１００ｍｌ）の上に注ぎ出した後、ＮＨ４ＯＨ（濃）で中和した。不溶物を濾過した後、水に続いてＥｔＯＨで洗浄した。収量：１９ｇ。その濾液に蒸発を受けさせた。その残留物（９．４ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨが９９．２５／０．７５；１５−３５μｍ）で精製した。１画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。中間体３５の収量：８ｇ（３２％）。
Ｂ．非放射性化合物の調製
実施例Ｂ１
【０１９７】
【化６６】
2005524679.tif 000068
【０１９８】
の調製
５℃のＤＭＦ（０．０２４モル）にＰＯＣｌ３（０．０２４モル）をゆっくり加えた。この混合物を室温で３０分間撹拌した後、５℃に冷却した。３−オキソ−酪酸エチルエステル（０．０２４モル）をゆっくり加えた。この混合物を５℃で３０分間撹拌した。１−（４−アミノフェニル）−２−フェニルエタノン（０．０２４モル）を分割して加えた。この混合物を９０℃で３時間撹拌した後、ＣＨ２Ｃｌ２に溶解させた。氷水を加えた。この混合物をＮＨ４ＯＨで塩基性にした後、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物を２−プロパノン／ジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物３０６の収量：０．９ｇ（１１％）（融点：１３６℃）。
実施例Ｂ２
【０１９９】
【化６７】
2005524679.tif 000069
【０２００】
の調製
【０２０１】
【化６８】
2005524679.tif 000070
【０２０２】
（実施例Ａ７．ｅに従って調製）（０．０２２モル）をトリス（ジオキサ−３，６−ヘプチル）アミン（１ｍｌ）とＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍｌ）に入れることで生じさせた室温の溶液にＫＭｎＯ４（１０ｇ）を分割して加えた。この混合物を室温で８時間撹拌し、セライトで濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄した後、乾燥させた。その残留物（６ｇ、１００％）をジエチルエーテル／石油エーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（２）の収量：２ｇ（３３％）；融点８２℃。
実施例Ｂ３
ａ）
【０２０３】
【化６９】
2005524679.tif 000071
【０２０４】
の調製
中間体（５）（０．０５８モル）をＴＨＦ（１５０ｍｌ）に入れることで生じさせた−７０℃の溶液に１．６ＭのｎＢｕＬｉ（０．０７モル）をゆっくり加えた。この混合物を−７０℃で３０分間撹拌した。２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−カルボニトリル（０．０７モル）をＴＨＦ（１００ｍｌ）に入れることで生じさせた溶液をゆっくり加えた。この混合物を−７０℃で１時間撹拌し、室温にゆっくりもって行き、Ｈ２Ｏで加水分解を起こさせた後、ＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（２２ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２／シクロヘキサンが８０／２０から１００；１５−３５μｍ）で精製した。高純度画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。２番目の画分を２−プロパノン／ジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（３）の収量：０．１１ｇ。その濾液に濃縮を受けさせた。化合物（３）の収量：０．５５ｇ；融点１４５℃。
ｂ）
【０２０５】
【化７０】
2005524679.tif 000072
【０２０６】
の調製
中間体（５）（０．０１８モル）をＴＨＦ（５０ｍｌ）に入れることで生じさせた−７０℃の溶液に１．６ＭのｎＢｕＬｉ（０．０２２モル）をゆっくり加えた。この混合物を−７０℃で１時間撹拌し、−４０℃にもって行った後、−７０℃に冷却した。中間体７（０．０１８モル）をＴＨＦ（４０ｍｌ）に入れることで生じさせた溶液をゆっくり加えた。この混合物を−７０℃で１時間撹拌した後、−２０℃にもって行き、Ｈ２Ｏで加水分解を起こさせた後、ＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（６．５ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：トルエン／ＥｔＯＡｃが９０／１０；１５−４０μｍ）で精製した。２画分（Ｆ１とＦ２）を集めた後、溶媒を蒸発させた。Ｆ１（２．４ｇ）をジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（４）の収量：１．８ｇ（２９％）；融点１２３℃。Ｆ２（０．９ｇ）をジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（５）の収量：０．２ｇ（３％）；融点１２０℃。
ｃ）
【０２０７】
【化７１】
2005524679.tif 000073
【０２０８】
の調製
中間体（６）（０．０８９モル）をＴＨＦに入れることで生じさせた−７８℃の混合物にＮ２流下でエキサン中１．６ＭのｎＢｕＬｉ（０．１０７モル）を滴下した。この混合物を−７８℃で１時間撹拌した。中間体７（１５０ｍｌ）の混合物をＮ２流下−７８℃で加えた。この混合物を−７８℃で２時間撹拌し、０℃にもって行き、Ｈ２Ｏの中に注ぎ出した後、ＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（３１ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが８５／１５；２０−４５μｍ）で精製した。高純度画分を２画分集めた後、溶媒を蒸発させた。収量：化合物（７）が１１ｇ（３８％）で化合物（８）が８．２ｇ（２８％）。
ｄ）
【０２０９】
【化７２】
2005524679.tif 000074
【０２１０】
の調製
Ｍｇ（０．００６９モル）を少量のジエチルエーテルに入れることで生じさせた懸濁液に、クロロメチルベンゼン（０．００６９モル）をジエチルエーテル（８ｍｌ）に入れることで生じさせた溶液をゆっくり加えた。この混合物を室温で３０分間撹拌［Ｍｇのディスパリション（ｄｉｓｐａｒｉｔｉｏｎ）］した後、５℃に冷却した。中間体２７（０．００２７モル）をＴＨＦ（８ｍｌ）に入れることで生じさせた溶液をゆっくり加えた。この混合物を５℃で１５分間に続いて室温で２時間撹拌した後、Ｈ２Ｏの中に注ぎ出して、セライトで濾過した。その沈澱物をＥｔＯＡｃで洗浄した。その濾液をＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（１ｇ）をクロマシル（ｋｒｏｍａｓｉｌ）使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２が１００からＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨが９９／１；１５−４０μｍ）で精製した。高純度画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。その残留物（０．５ｇ、５６％）をジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物５０３の収量：０．１４ｇ（１５％）。
実施例Ｂ４：末端基修飾の実施例
ａ）
【０２１１】
【化７３】
2005524679.tif 000075
【０２１２】
の調製
【０２１３】
【化７４】
2005524679.tif 000076
【０２１４】
（実施例Ｂ３．ｃに従って調製）（０．０１８モル）を３ＮのＨＣｌ（６０ｍｌ）とＴＨＦ（６０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を６０℃で一晩撹拌した。この混合物を１０％のＫ２ＣＯ３溶液で塩基性にした後、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。化合物（１５６）の収量：４．６ｇ（８２％）。
ｂ）
【０２１５】
【化７５】
2005524679.tif 000077
【０２１６】
の調製
【０２１７】
【化７６】
2005524679.tif 000078
【０２１８】
（実施例Ｂ３．ｃに従って調製）（０．０１２２モル）を３ＮのＨＣｌ（４０ｍｌ）とＴＨＦ（４０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を撹拌しながら一晩還流させ、水の中に注ぎ出し、１０％のＫ２ＣＯ３で塩基性にした後、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが４０／６０；１５−４０μｍ）で精製した。高純度画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。化合物（９）の収量：２ｇ（５２％）；融点２２６℃。
ｃ）
【０２１９】
【化７７】
2005524679.tif 000079
【０２２０】
の調製
化合物（４）（０．００１５モル）と２−メトキシエタンアミン（０．００３モル）とＫ２ＣＯ３（０．００３モル）をＤＭＦ（５ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を１４０℃で４８時間撹拌した。Ｈ２Ｏを加えた。この混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（１ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが６０／４０；１５−４０μｍ）で精製した。２画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。両方の画分とも個別にペンタンから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。収量：化合物（１０）が０．０５ｇ（９％；融点１１５℃）と化合物（１１）が０．０５７ｇ（１０％；融点１０７℃）。
ｄ）
【０２２１】
【化７８】
2005524679.tif 000080
【０２２２】
の調製
化合物（４）（０．００１５モル）を２−（メチルチオ）エタンアミン（２ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を１２０℃で８時間撹拌した。１０％のＫ２ＣＯ３を加えた。この混合物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（２．２ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが７０／３０；１５−４０μｍ）で精製した。２画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。１番目の画分をジエチルエーテル／石油エーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（１２）の収量：０．０８ｇ（１４％）；融点１２０℃。２番目の画分をジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（１３）の収量：０．１８ｇ（３１％）；融点１２５℃。
ｅ）
【０２２３】
【化７９】
2005524679.tif 000081
【０２２４】
の調製
化合物（４）（０．００１５０７モル）とエチニルトリメチルシラン（０．００３０１３モル）とＣｕＩ（０．０００１５１モル）とＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．０００１５１モル）をＮ，Ｎ−ジエチルエタンアミン（５ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を１００℃で２４時間撹拌した。水を加えた。この混合物をセライトで濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄した後、その濾液をＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（１．３ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが８５／１５；１５−４０μｍ）で精製した。高純度画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。その残留物（０．３ｇ）をペンタンから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（１４）の収量：０．１１ｇ（１８％）；融点１１４℃。
ｆ）
【０２２５】
【化８０】
2005524679.tif 000082
【０２２６】
の調製
化合物（１４）（０．０１３モル）とＫＦ（０．０３８モル）を酢酸（５０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を室温で２時間撹拌した。Ｈ２Ｏを加えた後、この混合物をジエチルエーテルで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（４．４ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが７０／３０；１５−４０μｍ）で精製した。１画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。この画分（３ｇ、７３％）をジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（１５）の収量：２．４５ｇ（６０％）；融点１３２℃。
ｇ）
【０２２７】
【化８１】
2005524679.tif 000083
【０２２８】
の調製
【０２２９】
【化８２】
2005524679.tif 000084
【０２３０】
（実施例Ｂ．７．ａに従って調製）（０．００５６モル）をＫＯＨ［１Ｍ、Ｈ２Ｏ］（１０ｍｌ）とメタノール（３０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を室温で１時間撹拌し、水の中に注ぎ出した後、ＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（２．２ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが８５／１５から７０／３０；１５−４０μｍ）で精製した。２画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。１番目の画分をジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（１５）の収量：０．２ｇ（１１％）；融点１３３℃。２番目の画分をジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（１７）の収量：０．３ｇ（１６％）；融点１２８℃。
ｈ）
【０２３１】
【化８３】
2005524679.tif 000085
【０２３２】
の調製
化合物（４）（０．００１２０５モル）と２−プロピン−１−オール（０．００２４１１モル）とＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．０００１２１モル）とＣｕＩ（０．０００１２１モル）をＮ，Ｎ−ジエチルエタンアミン（５ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を１００℃で２時間撹拌した。水を加えた。この混合物をセライトで濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄した後、ＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（０．７ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨが９８／２；１５−４０μｍ）で精製した。高純度画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。その残留物を石油エーテルとジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（１８）の収量：０．１ｇ（２３％）；融点１１３℃。
ｉ）
【０２３３】
【化８４】
2005524679.tif 000086
【０２３４】
の調製
化合物（４）（０．００６０２７モル）とＫＦ（０．０２４１０８モル）をＤＭＳＯ（２０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を１４０℃で撹拌した。溶媒を乾燥状態になるまで蒸発させた。その残留物を水とジエチルエーテルに入れて固化させた。その混合物をジエチルエーテルで抽出した。その有機層を分離し、ジエチルエーテルで洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（１．７ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが８５／１５；１５−４０μｍ）で精製した。３画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。１番目の画分を石油エーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（１９）の収量：０．２１ｇ（１１％）；融点９２℃。２番目の画分を石油エーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（２０）の収量：０．３３ｇ（１７％）；融点１１４℃。
ｊ）
【０２３５】
【化８５】
2005524679.tif 000087
【０２３６】
の調製
化合物（４）（０．００３０１３モル）と塩化アセチル（０．００３３１５モル）とヨウ化ナトリウム（０．００６０２７モル）をＣＨ３ＣＮ（１０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を撹拌しながら１時間還流させた。１０％のＫ２ＣＯ３を加えた。この混合物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（１ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが８０／２０；１５−４０μｍ）で精製した。２画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。１番目の画分を石油エーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（２１）の収量：０．１２ｇ；融点１１０℃。
ｋ）
【０２３７】
【化８６】
2005524679.tif 000088
【０２３８】
の調製
化合物（２１）（０．０００８９８モル）とトリメチルシランカルボニトリル（０．００１３４７モル）とＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．００００９モル）をＮ，Ｎ−ジエチルエタンアミン（５ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を１００℃で２時間撹拌した。水を加えた。この混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（０．４ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが８０／２０；１５−４０μｍ）で精製した。高純度画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。その残留物（０．１８ｇ、６２％）を石油エーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（２２）の収量：０．１３ｇ（４５％）；融点１３８℃。
ｌ）
【０２３９】
【化８７】
2005524679.tif 000089
【０２４０】
の調製
化合物（４）（０．００６０３モル）とＰｄ（ＯＡｃ）２（０．０００６０３モル）とＰＰｈ３（０．００９０４モル）とＫ２ＣＯ３（０．０１２０５４モル）をＣＯ（気体）とメタノール（４０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を５バールのＣＯ圧力下９０℃で８時間撹拌した。Ｈ２Ｏを加えた。この混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（６ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨが１００／０から９８／２；１５−３５μｍ）で精製した。４画分（Ｆ１−Ｆ４）を集めた後、溶媒を蒸発させた。収量：０．１３ｇの（シス）Ｆ１；０．０２ｇのＦ２（シス、化合物２５）；０．０５５ｇのＦ３（トランス、３％）および０．１１ｇのＦ４（トランス；化合物２６）。Ｆ１を石油エーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（２３）の収量：０．０３ｇ（１％）；融点９１℃。Ｆ３を石油エーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（２４）の収量：０．０３５ｇ（１％）；融点９９℃。
ｍ）
【０２４１】
【化８８】
2005524679.tif 000090
【０２４２】
の調製
化合物（４）（０．００９モル）とＺｎ（０．０２７モル）を酢酸（３０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を６０℃で４時間撹拌し、セライトで濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、乾燥状態になるまで蒸発させ、ＣＨ２Ｃｌ２に溶解させた後、１０％のＫ２ＣＯ３で洗浄した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（４ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが７５／２５；１５−４０μｍ）で精製した。１画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。この画分（１ｇ、３７％）を石油エーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。収穫：化合物（２５）；融点８８℃。
ｎ）
【０２４３】
【化８９】
2005524679.tif 000091
【０２４４】
の調製
化合物（４）（０．００１５０２モル）とＳｎ（ＣＨ３）４（０．００３００４モル）とＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．０００１５モル）をメチルベンゼン（５ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を撹拌しながら３時間還流させた。１０％のＫ２ＣＯ３を加えた。この混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（０．７ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが８５／１５；１５−４０μｍ）で精製した。２画分（Ｆ１とＦ２）を集めた後、溶媒を蒸発させた。収量：０．２７ｇ（Ｆ１、出発材料）および０．１４ｇ（Ｆ２）。Ｆ２をペンタンと石油エーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（２７）の収量：０．０８ｇ（１７％）；融点１１０℃。
ｏ）
【０２４５】
【化９０】
2005524679.tif 000092
【０２４６】
の調製
化合物（４）（０．００１５０７モル）とトリブチルエテニルスタナン（０．００２２６０モル）とＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．０００１５１モル）をジオキサン（５ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を８０℃で８時間撹拌した。水を加えた。この混合物をセライトで濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄した後、ＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（０．６５ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが９０／１０；１５−４０μｍ）で精製した。高純度画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。その残留物を石油エーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（２８）の収量：０．０７ｇ（１４％）；融点１０８℃。
ｐ）
【０２４７】
【化９１】
2005524679.tif 000093
【０２４８】
の調製
化合物（５）（０．００１５０７モル）とトリフェニル（フェニルメチル）スタナン（０．００２２６０モル）とＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．０００１５１モル）をジオキサン（５ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を８０℃で８時間撹拌した。水を加えた。この混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（１．４ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃが９６／４；１５−４０μｍ）で精製した。高純度画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。その残留物（０．３８ｇ）を石油エーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（２９）の収量：０．１６ｇ（２８％）；融点１１２℃。
ｑ）
【０２４９】
【化９２】
2005524679.tif 000094
【０２５０】
の調製
化合物（４）（０．００１５０７モル）とトリブチル−２−チエニルスタナン（０．００２２６モル）とＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．０００１５１モル）をジオキサン（５ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を８０℃で８時間撹拌した。１０％のＫ２ＣＯ３を加えた。この混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（１．７ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが８５／１５；１５−４０μｍ）で精製した。高純度画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。その残留物（０．６５ｇ）をジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（３０）の収量：０．３５ｇ（６１％）；融点１４２℃。
ｒ）
【０２５１】
【化９３】
2005524679.tif 000095
【０２５２】
の調製
化合物（４）（０．００１５モル）と３−チエニルホウ素酸（０．００２２６モル）とＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．０００１５モル）とジオキサンの混合物を撹拌しながら２４時間還流させた。１０％のＫ２ＣＯ３を加えた。この混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（０．８ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが８０／２０；１５−４０μｍ）で精製した。高純度画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。その残留物（０．４ｇ、７０％）を石油エーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（３１）の収量：０．３９ｇ（６８％）；融点１１３℃。
ｓ）
【０２５３】
【化９４】
2005524679.tif 000096
【０２５４】
の調製
化合物（４）（０．００３モル）とグリシンメチルエステルの一塩酸塩（０．００６６モル）とＰｄ（ＰＰｈ）４（０．０００３モル）をＥｔ３Ｎ（２ｍｌ）とトルエン（１０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を５バールのＣＯ圧力下１００℃で８時間撹拌し、セライトで濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄した後、蒸発させた。その残留物（２ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが８０／２０；７５−３５μｍ）で精製した。１画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。この画分（１ｇ、８０％）をジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（３２）の収量：０．４６ｇ（３７％）。
ｔ）
【０２５５】
【化９５】
2005524679.tif 000097
【０２５６】
の調製
化合物（４）（０．００３モル）とヒドラジンカルボキサルデヒド（０．００４５モル）を１−ブタノール（１５ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を撹拌しながら一晩還流させ、氷水の中に注ぎ出した後、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ／ＮＨ４ＯＨが９５／５／０．１；１５−４０μｍ）で精製した。２画分（Ｆ１とＦ２）を集めた後、溶媒を蒸発させた。収量：Ｆ１が０．３ｇでＦ２が０．３ｇ。Ｆ１をＣＨ３ＣＮとジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（３３）の収量：０．１０２ｇ；融点２２４℃。Ｆ２をＣＨ３ＣＮとジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（３４）の収量：０．２ｇ；融点１８５℃。
ｕ）
【０２５７】
【化９６】
2005524679.tif 000098
【０２５８】
の調製
化合物４（０．０１５モル）とＮａＮ３（０．０４５モル）をＤＭＦ（５０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を１４０℃で２時間撹拌した。１０％のＫ２ＣＯ３を加えた後、この混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（６ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが６０／４０；１５−４０μｍ）で精製した。１番目の画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。その残留物をジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（３５）の収量：１．２６ｇ（２４％）；融点１６０℃。
ｖ）
【０２５９】
【化９７】
2005524679.tif 000099
【０２６０】
の調製
化合物（４）（０．００９モル）とチオ尿素（０．００９９モル）をエチルアルコール（３０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を撹拌しながら１２時間還流させた後、ＫＯＨ（０．０１４９モル）をＨ２Ｏ（５ｍｌ）に入れることで生じさせた溶液をゆっくり加えた。この混合物を撹拌しながら１時間還流させ、水の中に注ぎ出した後、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが７０／３０；１５−４０μｍ）で精製した。高純度画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。収量：Ｆ１が１．１ｇ（３７％）でＦ２が０．４ｇ（１３％）。Ｆ１を２−プロパノンから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。収穫：化合物（３６）。Ｆ２を２−プロパノンから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。収穫：化合物（３７）。
ｗ）
【０２６１】
【化９８】
2005524679.tif 000100
【０２６２】
の調製
化合物（３６）（０．００１５モル）と化合物（３７）（０．００１５モル）とＫ２ＣＯ３（０．００３４モル）をアセトン（１５ｍｌ）に入れることで生じさせた室温の溶液にＣＨ３Ｉ（０．００３４モル）をゆっくり加えた。この混合物を室温で８時間撹拌した。水を加えた後、この混合物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（１．２ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが８５／１５；１５−４０μｍ）で精製した。高密度画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。収量：Ｆ１が０．６４ｇ（５７％）でＦ２が０．１８ｇ（１７％）。Ｆ１をジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（３８）の収量：０．２８ｇ（２７％）。Ｆ２をジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（３９）の収量：０．０６５ｇ（６％）。
ｘ）
【０２６３】
【化９９】
2005524679.tif 000101
【０２６４】
の調製
【０２６５】
【化１００】
2005524679.tif 000102
【０２６６】
（実施例Ｂ３．ｂに従って調製）（０．００１４モル）を３ＮのＨＣｌ（５ｍｌ）とＴＨＦ（５ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を撹拌しながら週末の間還流させた後、Ｈ２Ｏの中に注ぎ出し、Ｋ２ＣＯ３で塩基性にした後、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。Ｆの収量：０．５ｇ。この画分Ｆを２−プロパノンから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（４０）の収量：０．３５ｇ（７４％）。
ｙ）
【０２６７】
【化１０１】
2005524679.tif 000103
【０２６８】
の調製
化合物（５）（０．０４５モル）とアセトアミド（０．９００１３モル）とＫ２ＣＯ３（０．２２５モル）の混合物を撹拌しながら２００℃で２時間還流させ、室温に冷却し、Ｈ２Ｏ／ＣＨ２Ｃｌ２の中に注ぎ出した後、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を乾燥状態になるまで蒸発させた。その残留物（１４．４ｇ）をＣＨ３ＯＨから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。その濾液に蒸発を受けさせた。その残留物（１１．２７ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ／ＮＨ４ＯＨが９６／４／０．１；１５−３５μｍ）で精製した。高純度画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。化合物（１８８）の収量：４．２ｇ（６５％）。
ｚ）
【０２６９】
【化１０２】
2005524679.tif 000104
【０２７０】
の調製
化合物（１８８）（０．０００３２モル）と安息香酸（１．５当量、０．０００４８モル）と１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド・ＨＣｌ（１：１）（１．５当量、０．０００４８モル）とＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１．５当量、０．０００４８モル）とＥｔ３Ｎ（１当量、０．０００３２モル）をＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を室温で１５時間撹拌した。溶媒を蒸発させた。その残留物をＨＰＬＣで精製し、生成物画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。化合物（２０５）の収量：０．０６６ｇ（４９．５０％）。
ａａ）
【０２７１】
【化１０３】
2005524679.tif 000105
【０２７２】
の調製
中間体２０（０．００１５０７モル）を３ＮのＨＣｌ（１０ｍｌ）とＴＨＦ（１０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を室温で８時間撹拌し、１０％のＫ２ＣＯ３で塩基性にした後、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（１．２ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが８５／１５；１５−４０μｍ）で精製した。高純度画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。その残留物（０．４ｇ）を石油エーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（６）の収量：０．３ｇ（５８％）；融点１０８℃。
ａｂ）
【０２７３】
【化１０４】
2005524679.tif 000106
【０２７４】
の調製
化合物２１３（Ｂ４に従って調製）（０．００３０５モル）とＣＨ３ＯＮａ（ＣＨ３ＯＨ中３０％）（０．００９１６モル）をＣＨ３ＯＨ（２５ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を撹拌しながら１５時間還流させた後、室温に冷却し、Ｈ２Ｏの中に注ぎ出した後、ＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を乾燥状態になるまで蒸発させた。その残留物（１．１ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが４０／６０；１５−４０μｍ）で精製した。２画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。収量：Ｆ１が０．３ｇでＦ２が０．５ｇ（５０％）。Ｆ２をジエチルエーテル／石油エーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。収量：０．２６ｇ。Ｆ１をペンタンから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。収量：０．１９ｇ。この画分をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨが９８／２；１５−４０μｍ）で精製した。高純度画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。収量：０．１１ｇ。この画分をクロマシル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ３ＯＨ／Ｈ２Ｏが７０／３０）で精製した。高純度画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。収量：０．０９ｇ（９％）。この画分をジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物４１９の収量：０．０８ｇ（８％）。
実施例Ｂ５
【０２７５】
【化１０５】
2005524679.tif 000107
【０２７６】
の調製
化合物（９）（０．００１９モル）と化合物（８）（０．００１９モル）とｔＢｕＯＫ（０．００４５６モル）をＴＨＦ（３０ｍｌ）に入れることで生じさせた５℃の混合物にＮ２流下でヨードメタン（０．００４５６モル）を加えた。この混合物を室温で一晩撹拌し、Ｈ２Ｏの中に注ぎ出した後、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが６５／３５；１５−４０μｍ）で精製した。２画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。収量：化合物（４２）が０．３５ｇ（３０％；融点１２５℃）で化合物（４３）が０．３５ｇ（３０％；融点１１６℃）。
実施例Ｂ６
ａ）
【０２７７】
【化１０６】
2005524679.tif 000108
【０２７８】
の調製
化合物（８）と化合物（９）（０．００８９モル）の０℃の混合物にＮ２流下で６０％のＮａＨ（０．０１０６８モル）を加えた。この混合物を３０分間撹拌した。ブロモ酢酸エチル（０．０１０６８モル）を０℃で加えた。この混合物を室温で１時間撹拌し、水で加水分解を起こさせた後、ＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが６０／４０；１５−４０μｍ）で精製した。所望画分（Ｆ１−Ｆ４）を集めた後、溶媒を蒸発させた。収量：Ｆ１が０．１１ｇでＦ２が０．１３ｇでＦ３が０．７５ｇでＦ４が０．８ｇ。Ｆ３をジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。収穫：化合物（４４）；融点１５２℃。Ｆ４をジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。収穫：化合物（４５）；融点１４７℃。
ｂ）
【０２７９】
【化１０７】
2005524679.tif 000109
【０２８０】
の調製
化合物（８）と化合物（９）（０．００６４モル）と６０％のＮａＨ（０．００７モル）をＤＭＦ（４０ｍｌ）に入れることで生じさせた０℃の溶液にＮ２流下でブロモメチルベンゼン（０．００７モル）を滴下した。この混合物を室温で１時間撹拌し、水で加水分解を起こさせた後、ＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが７０／３０；１５−４０μｍ）で精製した。所望画分（Ｆ１−Ｆ４）を集めた後、溶媒を蒸発させた。収量：Ｆ１が０．１５ｇでＦ２が０．１ｇでＦ３が０．６ｇ（２３％）でＦ４が０．８ｇ。Ｆ３をジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（４６）の収量：０．１３ｇ；融点１３７℃。Ｆ４をＤＩＰＥと石油エーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。収穫：化合物（４７）；融点１３０℃。
実施例Ｂ７
ａ）化合物（４８）（実施例Ｂ２に従って調製）（０．０４４モル）をＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍｌ）に入れることで生じさせた０℃の溶液に３−クロロベンゼンカルボペルオキソイックアシッド（０．０８８モル）を加えた後、この混合物を室温で１２時間撹拌した。この混合物を１０％のＫ２ＣＯ３で洗浄した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物を（Ｃ２Ｈ５）２Ｏから再結晶化させた。シクロヘキシル（３−メチル−６−キノリニル）メタノンの１−オキサイド（化合物４９）の収量：８．２ｇ（６９％）。
ｂ）化合物（４９）（０．０２８モル）をＫ２ＣＯ３（４００ｍｌ）とＣＨ２Ｃｌ２（４００ｍｌ）に入れることで生じさせた溶液に４−メチルベンゼンスルホニルクロライド（０．０４３モル）を加えた後、この混合物を室温で１時間撹拌した。この混合物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾別した後、蒸発させた。その残留物を（Ｃ２Ｈ５）２Ｏから再結晶化させた。６−（シクロヘキシルカルボニル）−３−メチル−２（１Ｈ）−キノリノン（化合物５０）の収量：６．６４ｇ（８５％）；融点２５６．１℃。
実施例Ｂ８
ａ）
【０２８１】
【化１０８】
2005524679.tif 000110
【０２８２】
の調製
化合物（７）（０．０２２９モル）とヒドロキシルアミン（０．０２５２モル）とＮ，Ｎ−ジエチルエタンアミン（０．０２５２モル）をエタノール（１００ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を撹拌しながら６時間還流させ、水の中に注ぎ出した後、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物をＣＨ３ＣＮから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。その残留物をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃが８０／２０；１５−４０μｍ）で精製した。２画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。収量：化合物（５１）が２．８ｇ（３６％；融点１３３℃）で化合物（５２）が３ｇ（３８％；融点１４２℃）。
ｂ）
【０２８３】
【化１０９】
2005524679.tif 000111
【０２８４】
の調製
化合物（７）（０．０１５モル）をエタノール（７５ｍｌ）に入れることで生じさせた室温の溶液にヒドラジン（０．４１モル）を加えた。この混合物を撹拌しながら一晩還流させ、水の中に注ぎ出した後、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ／ＮＨ４ＯＨが９８／２／０．１）で精製した。高純度画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。その残留物をジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物（５３）の収量：０．８ｇ（１５％）；融点１１０℃。
実施例Ｂ９
【０２８５】
【化１１０】
2005524679.tif 000112
【０２８６】
の調製
化合物４００、４０１、４０２、４０３、４０４および４０５の手順。中間体２１（Ａ１１に従って調製）（０．０００２６９モル）と塩酸アマンタジン（０．０００４０４モル；１．５当量）と塩酸Ｎ’−（エチルカルボニミドイル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１，３−プロパンジアミン（０．０００４０４モル；１．５当量）と１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（０．０００４０４モル；１．５当量）とＥｔ３Ｎ（０．０００２６９モル）をＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を室温で１２時間撹拌した。溶媒を蒸発させた。その残留物をＨＰＬＣで精製した。生成物画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。化合物５２０の収量：０．０６３ｇ（４６．３７％）。
実施例Ｂ１０
【０２８７】
【化１１１】
2005524679.tif 000113
【０２８８】
の調製
中間体２７（０．００２６モル）と中間体２６（０．００２６モル）をＥｔＯＨ（３８０ｍｌ）と濃Ｈ２ＳＯ４（１９ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を撹拌しながら１５時間還流させた後、室温に冷却し、氷水の中に注ぎ出し、Ｋ２ＣＯ３で塩基性にした後、ＥｔＯＨで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（１７．９ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃが８０／２０；１５−３５μｍ）で精製した。高純度画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。収量：Ｆ１が０．８５ｇでＦ２が１．１ｇでＦ３が１１．５ｇ。Ｆ１およびＦ２を個別に石油エーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物２３３の収量：０．３４ｇ。
実施例Ｂ１１
【０２８９】
【化１１２】
2005524679.tif 000114
【０２９０】
の調製
化合物２２（Ｂ４に従って調製）（０．００４モル）を３ＮのＨＣｌ（２０ｍｌ）とＴＨＦ（２０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を撹拌しながら８時間還流させ、氷の上に注ぎ出し、ＮＨ４ＯＨで塩基性にした後、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（１．２ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ／ＮＨ４ＯＨが９３／７／０．５；１５−４０μｍ）で精製した。２画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。収量：Ｆ１が０．５ｇ（４１％）でＦ２が０．４ｇ。Ｆ１を石油エーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物５１１の収量：０．１７ｇ（１４％）。
実施例Ｂ１２
【０２９１】
【化１１３】
2005524679.tif 000115
【０２９２】
の調製
化合物５２４（Ｂ９ａに従って調製）（０．００１８モル）と８５％のＫＯＨ（０．００９４モル）をＥｔＯＨ（１５ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を撹拌しながら２４時間還流させ、Ｈ２Ｏの中に注ぎ出した後、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２／シクロヘキサンが８０／２０；１５−４０μｍ）で精製した。２画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。収量：Ｆ１が０．３５ｇ（６４％）で（ＳＭ）が０．１７ｇ。Ｆ１をジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物５１４の収量：０．３３ｇ（６０％）（融点；１８５℃）。
実施例Ｂ１３
【０２９３】
【化１１４】
2005524679.tif 000116
【０２９４】
の調製
中間体２８（０．０１９モル）と２−ベンゾフラニルホウ素酸（０．０２８モル）とＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．００１モル）とＢＨＴ（少量）をジオキサン（２５ｍｌ）とＮａ２ＣＯ３［２］（２５ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を撹拌しながら８時間還流させた後、ＥｔＯＡｃで抽出した。その水層をＮＨ４ＯＨで塩基性にした後、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（３．６ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨが９９／１；１５−４０μｍ）で精製した。高純度画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。収量：１．８ｇ（３３％）。この画分を２−プロパノン／ジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物５１５の収量：０．３９ｇ（７％）（融点；１３４℃）。
実施例Ｂ１４
【０２９５】
【化１１５】
2005524679.tif 000117
【０２９６】
の調製
中間体３２（０．００４モル）をＣＦ３ＣＯＯＨ（５ｍｌ）とＡｃＯＨ（１０ｍｌ）に入れることで生じさせた室温の溶液にトリエチルシラン（０．００１２モル）をゆっくり加えた。Ｎ２流下でＮａＢＨ４（０．００１２モル）を分割して加えた。この混合物を室温で８時間撹拌し、氷の上に注ぎ出し、Ｋ２ＣＯ３で塩基性にした後、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（１．２ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨが９９／１：１５−４０μｍ）で精製した。２画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。収量：Ｆ１が０．５ｇ（４３％）でＦ２が０．４ｇ。Ｆ１をｉＰｒＯＨに溶解させた。ＨＣｌ／ｉＰｒＯＨ（１当量）を加えた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物５２６の収量：０．３２ｇ（融点；２４８℃）。
実施例Ｂ１５
【０２９７】
【化１１６】
2005524679.tif 000118
【０２９８】
の調製
中間体３３（０．０８２モル）と３−クロロ−２−エチル−２−ブテナール（０．０９８モル）をＡｃＯＨ（２００ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を撹拌しながら８時間還流させた。溶媒を乾燥状態になるまで蒸発させた。その残留物をＣＨ２Ｃｌ２に溶解させた後、１０％のＫ２ＣＯ３で洗浄した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を蒸発させた。その残留物（２７ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃが９５／５から９２／８；１５−３５μｍ）で精製した。２画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。収量：Ｆ１が０．７ｇでＦ２が５．３ｇ。Ｆ１を２−プロパノン／ジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物４７１の収量：０．２５ｇ（２％）（融点；１４０℃）。
実施例Ｂ１６
【０２９９】
【化１１７】
2005524679.tif 000119
【０３００】
の調製
中間体３５（Ａ１７．ｂに従って調製）（０．０３７９モル）をＴＨＦ（２００ｍｌ）に入れることで生じさせた−７８℃の溶液にＮ２流下でｎＢｕＬｉ（０．０４１７モル）を滴下した。この混合物を３０分間撹拌した。４−ブロモ−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルベンゼンアセトアミド（０．０５６８モル）をＴＨＦ（１００ｍｌ）に入れることで生じさせた溶液を−７８℃で滴下した。この混合物を−７８℃から０℃で撹拌し、Ｈ２Ｏの中に注ぎ出した後、ＥｔＯＡｃで抽出した。その有機層を分離し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、濾過した後、溶媒を乾燥状態になるまで蒸発させた。その残留物（２０．９ｇ）をシリカゲル使用カラムクロマトグラフィー（溶離剤：トルエン／ＥｔＯＡｃが６０／４０から５０／５０；１５−３５μｍ）で精製した。２画分を集めた後、溶媒を蒸発させた。収量：画分１が４ｇで画分２が４ｇ（２８％）。画分２をジエチルエーテルから結晶化させた。その沈澱物を濾別した後、乾燥させた。化合物５２８の収量：１ｇ（融点１９５℃）。
【０３０１】
表１から８に、この上に示した実施例の中の１つに従って調製した式（Ｉ−Ａ）および（Ｉ−Ｂ）で表される化合物を挙げる。
【０３０２】
【表１】
2005524679.tif 000120
【０３０３】
【表２】
2005524679.tif 000121
【０３０４】
【表３】
2005524679.tif 000122
【０３０５】
【表４】
2005524679.tif 000123
【０３０６】
【表５】
2005524679.tif 000124
【０３０７】
【表６】
2005524679.tif 000125
【０３０８】
【表７】
2005524679.tif 000126
【０３０９】
【表８】
2005524679.tif 000127
【０３１０】
【表９】
2005524679.tif 000128
【０３１１】
【表１０】
2005524679.tif 000129
【０３１２】
【表１１】
2005524679.tif 000130
【０３１３】
【表１２】
2005524679.tif 000131
【０３１４】
【表１３】
2005524679.tif 000132
【０３１５】
【表１４】
2005524679.tif 000133
【０３１６】
【表１５】
2005524679.tif 000134
【０３１７】
【表１６】
2005524679.tif 000135
【０３１８】
【表１７】
2005524679.tif 000136
【０３１９】
【表１８】
2005524679.tif 000137
【０３２０】
【表１９】
2005524679.tif 000138
【０３２１】
【表２０】
2005524679.tif 000139
【０３２２】
【表２１】
2005524679.tif 000140
【０３２３】
【表２２】
2005524679.tif 000141
【０３２４】
【表２３】
2005524679.tif 000142
【０３２５】
【表２４】
2005524679.tif 000143
【０３２６】
【表２５】
2005524679.tif 000144
【０３２７】
【表２６】
2005524679.tif 000145
【０３２８】
【表２７】
2005524679.tif 000146
【０３２９】
【表２８】
2005524679.tif 000147
【０３３０】
【表２９】
2005524679.tif 000148
【０３３１】
【表３０】
2005524679.tif 000149
【０３３２】
【表３１】
2005524679.tif 000150
【０３３３】
【表３２】
2005524679.tif 000151
【０３３４】
【表３３】
2005524679.tif 000152
【０３３５】
【表３４】
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【０３３６】
【表３５】
2005524679.tif 000154
【０３３７】
【表３６】
2005524679.tif 000155
【０３３８】
【表３７】
2005524679.tif 000156
【０３３９】
【表３８】
2005524679.tif 000157
【０３４０】
Ｃ．放射能標識付き化合物の調製
Ｃ．１［３Ｈ］標識付き化合物
【０３４１】
【化１１８】
2005524679.tif 000158
【０３４２】
炭素に担持されているパラジウム（１０％、０．８７２ｍｇ）の量を注意深く計り取って、これに、化合物４９８（Ｉ、０．９１９ｍｇ、２．４μモル）とトリエチルアミン（０．９２μｌ、６．６μモル）をナトリウムで乾燥させておいたテトラヒドロフラン（１７５μｌ）に入れることで生じさせた溶液を加えた。反応フラスコをトリチウム化用多岐管系につなげた後、反応混合物に脱気を注意深く受けさせた。ウラントリチド（ｔｏｒｉｔｉｄｅ）からトリチウムガス（１０１７ミリバールの圧力下で１９．５Ｃｉ）を発生させて、前記室温で撹拌している反応混合物の上に導いた。３０分後、その反応混合物を液体窒素で凍らせた後、余分なトリチウムガスをウランスポンジで再捕捉した。その反応混合物から溶媒を凍結乾燥させた。メタノール（１００μｌ）を導入した後、凍結乾燥させることで、不安定なトリチウムを除去した。この手順をもう２回繰り返した。その残留物をエタノールで取り上げ、１３ｍｍのＧＨＰ  Ａｃｒｏｄｉｓｋシリンジフィルターで濾過した後、エタノールを用いて全体体積が５０．０ｍｌになるまで減少させた。それは放射能化学純度が６７％の［３Ｈ］化合物５２８（ＩＩ）による放射能を７１ｍＣｉ含有していた。この量から一部（５．０ｍｌ）を取り出して、調製用ＨＰＬＣ（クロマシルＫＲ  １００−１０、カラム寸法：４．６ｍｍのＩＤｘ３００ｍｍ）を用いて徹底的な精製を分割して行った。２６５ｎｍの所の紫外線を検出した。水−メタノール−アセトニトリル−ジイソプロピルアミン（４７：２６．５：２６．５：０．２；体積／体積／体積／体積）を２．０ｍｌ／分の流量で用いて溶離を平等（ｉｓｏｃｒａｔｉｃａｌｌｙ）に実施した。生成物が入っている画分を一緒にした後、真空下３０℃で濃縮した。その残留物をエタノール（５．０ｍｌ）に溶解させた後、再び濃縮を行った。この手順を更に２回繰り返した。最後に、残存する残留物をエタノール（２０．０ｍｌ）に溶解させて、そのまま貯蔵した。このバッチは純度が＞９８％で比活性が約２５Ｃｉ／ミリモルの［３Ｈ］化合物５２８（ＩＩ）を含有しており、これの全放射能は３．８３ｍＣｉであった。
Ｄ．薬理学的実施例
Ｄ１．ＣＨＯ細胞の中にクローン化したラットｍＧｌｕ１受容体におけるシグナル導入
予備被覆を受けさせておいた（ｐｒｅｃｏａｔｅｄ）９６個ウエルの黒色プレートを用いて、ｍＧｌｕ１受容体を発現するＣＨＯ細胞を平板培養した。次の日、蛍光を基にした検定を用いて、グルタメートで活性化されて増加する細胞内Ｃａ２＋に対して本化合物が示す効果を評価した。前記細胞にＦｌｕｏ−３  ＡＭを充填し、プレートを室温の暗所で１時間インキュベートし、細胞を洗浄した後、この細胞に本化合物を２０分間加えた。このインキュベート時間後、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｉｍａｇｅ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（ＦＬＩＰＲ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｉｎｃ．）を用いて、グルタメートで誘発されて増加するＣａ２＋を各ウエル毎に時間の関数として記録した。相対的蛍光単位を記録し、４個のウエルの平均データのグラフを得た。試験を受けさせた化合物の各濃度毎にピークの蛍光（１から９０秒の間の最大シグナル）を基にして濃度−反応曲線を作成した。ｐＩＣ５０値は、グルタメートに誘発されて増加する細胞内Ｃａ２＋の５０％抑制をもたらした試験化合物濃度の−ｌｏｇ値である。
【０３４３】
本発明に従う化合物が示したｐＩＣ５０値は少なくとも５であった。表１−８に含めた化合物が示したｐＩＣ５０値は少なくとも６であった。
【０３４４】
特別な群の化合物は７から８の範囲のｐＩＣ５０値を示した。これは表９に挙げる化合物に関する。
【０３４５】
【表３９】
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【０３４６】
【表４０】
2005524679.tif 000160
【０３４７】
特別な群の化合物は少なくとも８のｐＩＣ５０値を示した。これは表１０に挙げる化合物に関する。
【０３４８】
【表４１】
2005524679.tif 000161
【０３４９】
【表４２】
2005524679.tif 000162
【０３５０】
【表４３】
2005524679.tif 000163
【０３５１】
【表４４】
2005524679.tif 000164
【０３５２】
【表４５】
2005524679.tif 000165
【０３５３】
【表４６】
2005524679.tif 000166
【０３５４】
Ｄ２．本発明に従う［３Ｈ］放射能標識付き化合物を用いたインビトロ結合実験
［３Ｈ］放射能標識付き化合物として、化合物４３２のトリチウム放射能標識付き相当物である化合物５２８を用い、これを本明細書では以降［３Ｈ］化合物Ａと呼ぶ。
【０３５５】
次のパラグラフでは、本発明に従う放射能標識付き化合物の使用を説明する研究を開示する。
材料
細胞培養物であるあらゆる試薬をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、米国）から入手した。グルタメートをＡｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（ミルウォーキー、ＷＩ）から入手した；［３Ｈ］キスカレート（ｑｕｉｓｑｕａｌａｔｅ）（２９Ｃｉ／ミリモル）、［３Ｈ］Ｒｏ  ４８−８５８７（５３Ｃｉ／ミリモル）、ミオ−［３Ｈ］−イノシトール（２２Ｃｉ／ミリモル）および［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ（１０３０Ｃｉ／ミリモル）をＡｍｅｒｓｈａｍ（Ｐａｉｓｌｅｙ、ＵＫ）から入手した。［３Ｈ］ＭＫ−８０１（２２．５Ｃｉ／ミリモル）および［３Ｈ］ＣＧＰ３９６５３（２０−５０Ｃｉ／ミリモル）をＮＥＮ（Ｚａｖｅｎｔｅｍ、ベルギー）から入手した。ＧＤＰをＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｈｅｉｍ（Ｂａｓｅｌ、スイス）から入手し、そしてグリシンをＢｉｏＲａｄ（ＣＡ、米国）から入手した。［３Ｈ］Ｌ６８９５６０（１０−３０Ｃｉ／ミリモル）、［３Ｈ］ＬＹ３４１４９５（３４．６１Ｃｉ／ミリモル）、［３Ｈ］ＭＰＥＰ（５０．２Ｃｉ／ミリモル）、（Ｓ）−４Ｃ３ＨＰＧ、（１Ｓ，３Ｒ）−ＡＣＰＤ、（Ｓ）−３，５−ＤＨＰＧ、（Ｓ）−４ＣＰＧ、ＡＩＤＡ、ＭＣＰＧ、ＭＰＥＰ、ＣＰＣＣＯＥｔ、Ｌ−ＳＯＰおよびＬ−キスカリックアシッド（ｑｕｉｓｑｕａｌｉｃ  ａｃｉｄ）をＴｏｃｒｉｓ  Ｃｏｏｋｓｏｎ（Ｅｓｓｅｘ、ＵＫ）から購入した。ＢＡＹ  ３６−７６２０、ＮＰＳ  ２３９０およびフェンシクリジン（ｐｈｅｎｃｙｃｌｉｄｉｎｅ）を社内で合成した。Ｆｌｕｏ−ｅ−ＡＭおよびプルロニックアシッド（ｐｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）をＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（Ｌｅｉｄｅｎ、オランダ）から入手した。プロベネシド（ｐｒｏｂｅｎｅｃｉｄ）、ストリクニン（ｓｔｒｙｃｈｎｉｎｅ）、Ｄ−セリンおよびＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００をＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ、ドイツ）から購入した。他の試薬は全部Ｍｅｒｃｋ（Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、ドイツ）から入手した。
細胞トランスフェクションおよび培養
ヒトｍＧｌｕ１ａ受容体を安定して発現するＬ９２９ｓＡ細胞をＬａｖｒｅｙｓｅｎ他、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６１：１２４４−１２５４、２００２に記述されているようにして得て、Ｇｌｕｔａｍａｘ−Ｉ培地（熱で不活化して透析しておいたウシ胎児血清を１０％、硫酸ストレプトマイシンを０．１ｍｇ／ｍｌおよびペニシリンを１００単位／ｍｌ補充しておいた）の中で培養した。ラットｍＧｌｕ１ａ、−２、−３、−４、−５および−６受容体を安定に発現するＣＨＯ−ｄｈｆｒ−細胞はＳ．Ｎａｋａｎｉｓｈｉ（東京大学、日本）から親切に贈られたものであり、Ｇｌｕｔａｍａｘ−Ｉ（熱で不活化して透析しておいたウシ胎児血清を１０％、Ｌ−プロリンを０．４ｍＭ、硫酸ストレプトマイシンを０．２ｍｇ／ｍｌおよびペニシリンを２００単位／ｍｌ補充しておいた）を入れたＤＭＥＭの中で増殖させた。細胞をＣＯ２が５％の雰囲気の中に入れて３７℃で保持した。
ラットおよびヒトｍＧｌｕ１ａ受容体を発現する細胞およびラットｍＧｌｕ５受容体を発現する細胞における細胞内Ｃａ２＋反応
Ｌａｖｒｅｙｓｅｎ他、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６１：１２４４−１２５４、２００２に記述されているようにして、Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（ＦＬＩＰＲ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、ＣＡ、米国）を用いて、ヒトｍＧｌｕ１ａ受容体を発現するＬ９２９ｓＡ細胞の細胞内カルシウムイオン濃度（［Ｃａ２＋］ｉ）を測定した。ラットｍＧｌｕ１ａ受容体を発現するＣＨＯ−ｄｈｆｒ−細胞も同じ手順に従わせた。ラットｍＧｌｕ５受容体に関しては、実験を行う２日前に細胞をウエル１個当たり３０，０００個の細胞になるように種付けした。
ラットｍＧｌｕ１ａ受容体を発現するＣＨＯ−ｄｈｆｒ−細胞におけるＩＰ反応
Ｌａｖｒｅｙｓｅｎ他、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６１：１２４４−１２５４、２００２に記述されているようにして、ＩＰ蓄積を測定した。簡単に述べると、２４個ウエルのプレートを用いて、細胞をウエル１個当たり３０，０００個の細胞になるように種付けし、これに２．５μＣｉ／ｍｌのミオ−［３Ｈ］イノシトールで一晩標識を付けた。実験日に細胞を洗浄した後、１０ｍＭのＬｉＣｌと一緒にして１０分間インキュベートした。［３Ｈ］化合物Ａの濃度を高くしながらインキュベーションを３０分間行った後、１ＮのＨＣｌＯ４を加えて、プレートを４℃に置いた。ＫＯＨ／燐酸塩溶液および３０ｍＭのＮａ２Ｂ４Ｏ７・１０Ｈ２Ｏと３ｍＭのＥＤＴＡを含有させた溶液を加えた後、イオン交換クロマトグラフィーにかけた。
ラットｍＧｌｕ１ａ、−２、−３、−４、−５および−６受容体を発現するＣＨＯ−ｄｈｆｒ−細胞を用いた膜調製
集密細胞を氷冷燐酸塩緩衝食塩水に入れて洗浄した後、膜調製まで−２０℃で貯蔵した。解凍後、細胞を５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）に入れて懸濁させた後、２３，５００ｇの遠心分離に４℃で１０分間かけることで細胞を集めた。この細胞を１０ｍＭの低浸透圧Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）に入れて溶解させた。再び３０，０００ｇの遠心分離を４℃で２０分間行った後、そのペレットを５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）に入れてＵｌｔｒａ  Ｔｕｒｒａｘホモジェナイザーで均一にした。ウシ血清アルブミンを標準として用いたＢｉｏ−Ｒａｄ蛋白質検定で蛋白質濃度を測定した。
ラットｍＧｌｕ２、−３、−４および−６受容体を発現するＣＨＯ−ｄｈｆｒ−細胞から得た膜と［３５Ｓ］ＧＴＰγＳの結合
膜を氷の上で解凍させた後、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ酸と１０ｍＭのＨＥＰＥＳ塩（ｐＨ７．４）（ＮａＣｌを１００ｍＭ、ＭｇＣｌ２を３ｍＭ、ＧＤＰを３μＭおよびサポニンを１０μｇ／ｍｌ入れておいた）で希釈した。検定用混合物の膜蛋白質含有量を１０μｇにして、それを化合物または緩衝液と一緒に前以て３７℃で５分間インキュベートした。次に、グルタメートを加えた後、その検定用混合物を３７℃で更に３０分間インキュベートした。［３５Ｓ］ＧＴＰγＳを最終濃度が０．１ｎＭになるように加えて３７℃に更に３０分間置いた。９６個ウエルのＰａｃｋａｒｄフィルターメートハーベスター（ｆｉｌｔｅｒｍａｔｅ  ｈａｒｖｅｓｔｅｒ）を用いてＵｎｉｆｉｌｔｅｒ−９６  ＧＦ／Ｂフィルタープレート（Ｐａｃｋａｒｄ、Ｍｅｒｉｄｅｎ、ＣＴ）に通して迅速濾過することで反応を停止させた。フィルターを氷冷１０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４／１０ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４緩衝液（ｐＨ７．４）で２回洗浄した。ＰａｃｋａｒｄのＭｉｃｒｏｐｌａｔｅ  ＳｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎおよびＬｕｍｉｎｅｓｅｎｃｅ  Ｃｏｕｎｔｅｒを用いて、フィルターと結合した放射能の計数を行った。
ラットｍＧｌｕ１ａ受容体ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−膜と結合するラジオリガンド
［３Ｈ］化合物Ａの結合
特に明記しない限り、前記膜を解凍させた後、Ｕｌｔｒａ  Ｔｕｒｒａｘホモジェナイザーを用いて均一にして、氷冷結合用緩衝液［Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）を５０ｍＭ、ＭｇＣｌ２を１．２ｍＭ、ＣａＣｌ２を２ｍＭ含有］に入れて懸濁させた。膜蛋白質を２０μｇ用いかつラジオリガンドを１０種類の濃度（０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、２．５、５および１０ｎＭ）で用いて、リガンド飽和実験を見かけ結合平衡状態（３０分間のインキュベーション）で実施した。化合物１３５を１μＭ存在させることで非特異的結合の度合を推定した。手動の４０個ウエル濾過多岐管を用いてＧＦ／Ｃガラス繊維フィルターによる迅速濾過を吸引下で行うことでインキュベーションを停止させた。結合速度を測定する目的で、膜を２．５ｎＭの［３Ｈ］化合物Ａの存在下で４℃、２５℃または３７℃で２、５、１０、１５、２０、３０、４５、６０、９０または１２０分間インキュベートした後、手動の４０個ウエル濾過装置を用いた迅速濾過で停止させた。濾過を行う前に、いろいろな時間で、２．５ｎＭの［３Ｈ］化合物Ａの存在下で４℃または２５℃で３０分間前以てインキュベートしておいた膜に化合物１３５を１μＭ加えることで、解離速度を測定した。前記フィルターをシンチレーション用小びんに移し、Ｕｌｔｉｍａ−Ｇｏｌｄ  ＭＶを加えた後、Ｐａｃｋａｒｄシンチレーションカウンターを用いて、前記フィルターに集められた放射能を計数した。抑制実験では、体積が０．５ｍｌの検定用混合物に膜蛋白質を１０−２０μｇ、試験化合物を適切な濃度および［３Ｈ］化合物Ａを２．５ｎＭ含有させて、それを４℃で３０分間インキュベートした。非特異的結合をこの上に示したように限定した。Ｕｎｉｆｉｌｔｅｒ−９６  ＧＦ／Ｃフィルタープレートおよび９６個ウエルのＰａｃｋａｒｄフィルターメートハーベスターを用いて濾過を実施した。ミクロシント−Ｏ（ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ−Ｏ）を添加した後、ＰａｃｋａｒｄのＭｉｃｒｏｐｌａｔｅ    ＳｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎおよびＬｕｍｉｎｅｓｅｎｃｅ  Ｃｏｕｎｔｅｒを用いて、前記フィルターに付着した放射能を計数した。
［３Ｈ］キスカレートの結合
解凍させた膜を氷冷結合用緩衝液に入れて均一にして懸濁させた。飽和実験では、３０μｇの膜蛋白質を１０種類の濃度（１、２、５、１０、２０、４０、６０、９０、１２０および１５０ｎＭ）の［３Ｈ］キスカレートと一緒に２５℃で１時間インキュベートした。Ｌ−グルタメートを１μＭ存在させることで非特異的結合を測定した。手動の４０個ウエル濾過多岐管を用いてＧＦ／Ｃガラス繊維フィルターによる迅速濾過を行うことで結合したラジオリガンドと遊離ラジオリガンドを分離した。抑制実験では、試験化合物を適切な濃度および［３Ｈ］キスカレートを１０ｎＭの最終濃度で入れておいた体積が０．５ｍｌの中に膜蛋白質を３０μｇ入れて２５℃で１時間インキュベートした。Ｕｎｉｆｉｌｔｅｒ−９６  ＧＦ／ＣフィルタープレートおよびＰａｃｋａｒｄフィルターメートハーベスターを用いて濾過を実施した。フィルターに捕捉された放射能の計数をこの上に示したようにして行った。
ラットｍＧｌｕ２、−３、−４および−６受容体を発現するＣＨＯ−ｄｈｆｒ−細胞から得た膜とラジオリガンドの結合
前記膜を解凍させた後、Ｕｌｔｒａ  Ｔｕｒｒａｘホモジェナイザーを用いて均一にして、氷冷結合用緩衝液［Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）を５０ｍＭ、ＭｇＣｌ２を１．２ｍＭ、ＣａＣｌ２を２ｍＭ含有］に入れて懸濁させた。［３Ｈ］化合物Ａの結合では、膜蛋白質を２０から１６０μｇおよび［３Ｈ］化合物Ａを２０ｎＭの最終濃度で用いた。結果章で示すように、非特異的結合を限定する目的でいろいろなブランク（ｂｌａｎｃｓ）を用いた。インキュベーション時間および温度ばかりでなく濾過もラットｍＧｌｕ１ａ受容体ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−膜で記述した通りである。［３Ｈ］ＬＹ３４１４９５（ｍＧｌｕ２、−３および−６）または［３Ｈ］ＭＰＥＰ（ｍＧｌｕ５）の特異的結合を用いてラットｍＧｌｕ２、−３、−５およびｍＧｌｕ−６受容体の発現を立証した。［３Ｈ］ＬＹ３４１４９５結合では、［３Ｈ］ＬＹ３４１４９５を１ｎＭ（ｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３）または１０ｎＭ（ｍＧｌｕ６）用いた。グルタメートを１ｍＭ用いることで非特異的結合を測定した。検定用混合物を４℃で３０分間（ｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３）または６０分間（ｍＧｌｕ６）インキュベートした。手動の４０個ウエル濾過多岐管を用いてＧＦ／Ｂガラス繊維フィルター（Ｗｈａｔｍａｎ、英国）による濾過でインキュベーションを停止させた。ラットｍＧｌｕ５受容体ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−膜では、非特異的結合を明らかにする目的で［３Ｈ］ＭＰＥＰを１０ｎＭおよびＭＰＥＰを１０μｍ用いた。インキュベーションを４℃で３０分間実施した。４０個ウエル濾過装置を用いたＧＦ／Ｃガラス繊維フィルター（Ｗｈａｔｍａｎ、英国）で結合したラジオリガンドと遊離ラジオリガンドを分離した。
［３Ｈ］化合物Ａとラット脳膜の結合
組織標本
オスのＷｉｓｔａｒラット（〜２００ｇ）を首切断で屠殺した。脳を迅速に取り出しそして直ちに皮質、海馬、線条および小脳を切開した。新鮮な組織を２０倍体積の５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）に入れてＵｌｔｒａ  Ｔｕｒｒａｘで均一にした後、組織を２３，５００ｇの遠心分離に１０分間かけた。ＤＵＡＬホモジェナイザーを用いた均一化を行った後、膜を２３，５００ｇの遠心分離に１０分間かけることによる洗浄を２回行った。最終的ペレットを１０倍体積の５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）に入れて懸濁させた後、−８０℃で凍結させた。
インビトロ結合検定
ラットの皮質、小脳、線条および海馬から調製した膜を解凍させた後、ＤＵＡＬを用いて再び均一にし、そして氷冷結合用緩衝液［Ｔｒｉｓ−ＨＣｌを５０ｍＭ、ＭｇＣｌ２を１．２ｍＭ、ＣａＣｌ２を２ｍＭ含有（ｐＨ７．４）］に入れて懸濁させた。一定分量の膜（小脳膜が４０μｇ、海馬膜が６０μｇ、線条膜が８０μｇまたは皮質膜が１５０μｇに相当）と２．５ｎＭの［３Ｈ］化合物Ａを入れておいた全体積が０．５ｍｌの中で結合検定を実施した。全結合と化合物１３５を１μＭ存在させた時の測定結合の間の差として特異的結合を計算した。インキュベーションを４℃で３０分間行った後、標識が付いた膜を洗浄しそして４０個ウエル濾過多岐管を用いたＷｈａｔｍａｎ  ＧＦ／Ｃガラス繊維フィルターによる迅速真空濾過で収穫した後、前記フィルターに集められた放射能の計数をこの上に示した如く実施した。
［３Ｈ］Ｒｏ４８−８５８７、［３Ｈ］Ｌ６８９５６０、［３Ｈ］ＣＧＰ３９６５３および［３Ｈ］ＭＫ−８０１とラット脳膜の結合
組織標本
オスのＷｉｓｔａｒラット（〜２００ｇ）を首切断で屠殺した。脳を迅速に取り出しそした後、前脳を切開した。その組織を２０倍体積の氷冷Ｈ２Ｏに入れてＵｌｔｒａ  Ｔｕｒｒａｘで均一にした後、４８，０００ｇの遠心分離に２０分間かけた。ＤＵＡＬホモジェナイザーを用いた均一化を行った後、膜を４８，０００ｇの遠心分離に１０分間かけることによる洗浄を行った。次に、そのペレットを２０倍体積の５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）［Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を０．０４％含有］に入れて懸濁させた後、再び４８，０００ｇの遠心分離に２０分間かけた。最終ペレットを−８０℃で凍結させた。
インビトロ結合検定
実験日に前記ペレットを解凍させ、洗浄した後、氷冷５０ｍＭのＴｒｉｓ−アセテート（ｐＨ７．４）に入れてＤＵＡＬで再び均一にした。いろいろなラジオリガンドの検定条件は下記の通りであった。この検定で用いた膜の最終濃度は下記の通りであった：［３Ｈ］Ｒｏ４８−８５８７および［３Ｈ］Ｌ６８９５６０は２０ｍｇ／ｍｌ（湿った状態の重量）であり、そして［３Ｈ］ＣＧＰ３９６５３および［３Ｈ］ＭＫ−８０１は１０ｍｇ／ｍｌ（湿った状態の重量）であった。用いたラジオリガンド濃度は下記の通りであった：［３Ｈ］Ｒｏ４８−８５８７は２ｎＭ、［３Ｈ］Ｌ６８９５６０は２ｎＭ、［３Ｈ］ＣＧＰ３９６５３は２ｎＭ、そして［３Ｈ］ＭＫ−８０１は３ｎＭであった。インキュベーションを［３Ｈ］Ｒｏ４８−８５８７の結合の場合にはＫＳＣＮを１ｍＭ存在させて実施し、［３Ｈ］Ｌ６８９５６０の結合の場合にはストリクニンを１００μＭ存在させて実施し、そして［３Ｈ］ＭＫ−８０１の結合の場合には１μＭのグリシン＋１μＭのグルタメートの存在下で実施した。非特異的結合の測定では、［３Ｈ］Ｒｏ４８−８５８７および［３Ｈ］ＣＧＰ３９６５３の結合の場合にはグルタメートを１ｍＭ存在させて測定を行った。［３Ｈ］Ｌ６８９５６０および［３Ｈ］ＭＫ−８０１の結合では、それぞれＤ−セリンを１００μＭまたはペンシクリジンを１０μＭ用いて非特異的結合を限定した。検定のインキュベーションを、それぞれ、［３Ｈ］Ｒｏ４８−８５８７の結合の場合には３７℃で１時間、［３Ｈ］Ｌ６８９５６０の結合の場合には４℃で２時間、［３Ｈ］ＣＧＰ３９６５３の結合の場合には２５℃で３０分間、そして［３Ｈ］ＭＫ−８０１の結合の場合には４℃で１時間実施した。インキュベーション後、４０個ウエル濾過多岐管を用いて、結合したラジオリガンドと遊離ラジオリガンドを分離した。前記フィルターに集められた放射能の計数をこの上に示した如く実施した。
ラット脳断片に対する［３Ｈ］化合物Ａの結合およびオートラジオグラフィ
組織標本
オスのＷｉｓｔａｒラット（２００ｇ）を首切断で屠殺した。脳を頭蓋から迅速に取り出した後、ドライアイス冷却２−メチルブタン（−４０℃）に入れて急速凍結させた。脳を断片化するまで−７０℃で貯蔵した。Ｌｅｉｃａ  Ｃ３０５０クリオスタットミクロトーム（Ｌｅｉｃａ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｗｅｔｚｌａｒ、ドイツ）を用いて厚みが２０ミクロメートルの矢状断片を切り取った後、ＳｕｐｅｒＦｒｏｓｔ  Ｐｌｕｓ顕微鏡スライド（Ｍｅｎｚｌｅ−ｇｌａｓｅｒ、ドイツ）の上に置いて解凍させた。次に、この断片を使用時まで−７０℃で保持した。
受容体のオートラジオグラフィ
断片を解凍させた後、冷風流下で乾燥させ、５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌと１．２ｍＭのＭｇＣｌ２と２ｍＭのＣａＣｌ２と０．１％のＢＳＡ（ｐＨ７．４）に入れて室温で再びインキュベートした（３ｘ５分間）。次に、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌを５０ｍＭとＭｇＣｌ２を１．２ｍＭとＣａＣｌ２を２ｍＭとＢＳＡ（ｐＨ７．４）を０．１％と［３Ｈ］化合物Ａを１．５ｎＭ入れておいた緩衝液に断片を入れて室温で６０分間インキュベートした。インキュベーション用緩衝液に化合物１３５を１μＭ添加することで非特異的結合を測定した。インキュベーション後、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌを５０ｍＭとＭｇＣｌ２を１．２ｍＭとＣａＣｌ２を２ｍＭ入れておいた氷冷緩衝液を用いて余分なラジオリガンドを洗い流し（３ｘ５分間）た後、冷蒸留水の中に迅速に浸した。これらの断片を冷風流下で乾燥させた後、［３Ｈ］Ｈｙｐｅｒｆｉｌｍ（Ａｍｅｒｓｈａｍ、ＵＫ）に室温で６週間接触させたままにした。そのフィルムに現像を手動でＫｏｄａｋ  Ｄ１９を用いて受けさせた後、Ｋｏｄａｋ  Ｒｅａｄｙｍａｔｉｃで固着させた。いくつかの断片をＦｕｊｉ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｐｌａｔｅに室温で２日間接触させた後、Ｆｕｊｉｘ  Ｂａｓｓ  ２０００ホスフォイメージャー（ｈｏｓｐｈｏｉｍａｇｅｒ）を用いて走査した。
データの解析および統計
ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍプログラム（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．、サンディエゴ、ＣＡ）を用いてデータの解析を実施した。非線形回帰解析を用いて飽和結合実験の解析を行った。ワンサイトコンペティション式（ｏｎｅ−ｓｉｔｅ  ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ  ｅｑｕａｔｉｏｎ）：Ｙ＝ボトム＋（（トップ−ボトム）／１＋１０Ｘ−ＬｏｇＩＣ５０）に適合させる非線形回帰解析を用いて抑制曲線を適合させた。Ｃｈｅｎ−Ｐｒｕｓｏｆｆ式：Ｋｉ＝ＩＣ５０／［１＋（［Ｃ］／ＫＤ）］［式中、Ｃはラジオリガンドの濃度であり、そしてＫＤはラジオリガンドの解離定数である］を用いてＫｉ値を計算した（ＣｈｅｎｇおよびＰｒｕｓｏｆｆ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２２、３０９９−３１０８、１９７３）。Ｐｒｉｓｍプログラムにおけるワンフェーズエクスポネンシャルアソシエーション（ｏｎｅ−ｐｈａｓｅ−ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）およびデケイ（ｄｅｃａｙ）式を用いて、それぞれ、観察したオン（ｋｏｂ）およびオフ（ｋｏｆｆ）率を結合−解離曲線から計算した。ｋｏｂからｋｏｆｆを差し引きそしてそれをラジオリガンドの濃度で割ることでおよびｋｏｎを計算した。結合データの統計学的評価ではＳｔｕｄｅｎｔの両側ｔ検定を用いた：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１および＊＊＊ｐ＜０．００１。ＩＰ実験によるデータの解析ではＤｕｎｎｅｔｔのｔテストの後に2元配置分散分析（化合物の濃度および実験を係数として使用）を用いた。
結果
化合物ＡがｍＧｌｕ１受容体に対して示す選択性および拮抗作用の様式
ラットｍＧｌｕ１ａ受容体を発現するＣＨＯ−ｄｈｆｒ−細胞では、化合物Ａがグルタメートによって誘発される［Ｃａ２＋］ｉ増加を２１．６±５．０ｎＭ（ｎ＝４；図１Ａ）のＩＣ５０値で抑制し、これが示した効力は、明らかに、同じ検定試験を受けさせた最近記述された特異的ｍＧｌｕ１受容体拮抗剤であるＢＡＹ  ３６−７６２０が示したそれ（ＩＣ５０＝１６１±３８μＭ、ｎ＝３）より約８倍高くかつＣＰＣＣＯＥｔが示した効力（ＩＣ５０＝１０．３±０．８μＭ、ｎ＝３）より５００倍高かった。ヒトｍＧｌｕ１ａ受容体に対して化合物Ａが示したＩＣ５０値は１０．４±４．７ｎＭ（ｎ＝３）であった。化合物Ａは、これに１０μＭの濃度以下で試験を受けさせた時、ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−細胞の中にグルタメートで誘発されて発現するラットｍＧｌｕ５受容体のＣａ２＋シグナルを抑制しなかった。組換え型ラットｍＧｌｕ２、−３、−４または−６受容体の場合、グルタメート（３０μＭ）によって誘発される［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ活性化を抑制するＩＣ５０値は３０μＭより高かった。［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ検定において、化合物Ａは、３０μＭの濃度以下の時、ｍＧｌｕ受容体のいずれに対しても作動活性を示さなかった。加うるに、化合物Ａが前記種類のｍＧｌｕ受容体の中の１つに対して肯定的なアロステリック調節因子（ａｌｌｏｓｔｒｉｃ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ）として働くか否かも調査した。この目的で、我々は、グルタメートを単独で添加するか或は１０μＭの化合物Ａと一緒に添加することで、グルタメート濃度反応曲線を前以て作成しておいた。組換え型ラットｍＧｌｕ２、−３、−４または−６受容体を用いた［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ検定により、化合物Ａを添加してもグルタメートのＥＣ５０が変わらないこととグルタメートのＥｍａｘ値が高くならないことが分かった。また、ラットｍＧｌｕ５受容体を発現する細胞に化合物Ａをグルタメートと一緒に添加しても、グルタメートによって誘発されて細胞内のＣＡ２＋が可動化することに関するＥＣ５０およびＥｍａｘ値が変化することｈａなかった（データを示していない）。これらのデータは、一緒になって、ｍＧｌｕ２、−３、−４または−６受容体に対する作動作用も拮抗作用もポジティブなアロステリック作用も排除している。［３Ｈ］Ｒｏ−４８８５８７、［３Ｈ］Ｌ６８９５６０、［３Ｈ］ＣＧＰ３９６５３および［３Ｈ］ＭＫ−８０１を用いたラット前脳とラジオリガンドの結合研究により、化合物ＡはＡＭＰＡ受容体と結合しないばかりでなくＮＭＤＡ受容体のそれぞれグリシン部位ともグルタメート部位ともチャネル孔部位（ｃｈａｎｎｅｌ  ｐｏｒｅ  ｓｉｔｅ）とも結合しない（１０μＭの濃度以下で試験）ことが分かった。化合物ＡがグルタメートによるｍＧｌｕ１ａ受容体の活性化をどのように抑制するかを解析する目的で、グルタメートに反応して起こるＣａ２＋の可動化を化合物Ａの存在の有り無しで比較した（図１Ｂ）。化合物Ａを存在させると、グルタメートの濃度−反応曲線が右側にシフトするばかりでなくまた結果として当該作動剤によって起こる最大反応が劇的に低下し、このことは、化合物Ａによる拮抗作用が非競合的であることを示している。化合物Ａを１００ｎＭ−１μＭ存在させるとｍＧｌｕ��ａ受容体介在シグナルが完全に抑制されることを観察した。化合物Ａが逆作動剤として働き得るか否かを調査する目的で、我々は、ラットｍＧｌｕ１ａ受容体を含有するＣＨＯ−ｄｈｆｒ−細胞の中に蓄積する基本的ＩＰ量を化合物Ａの存在下で測定した。図１Ｃは、化合物Ａの濃度を高くして行くと基本的ＩＰ産生量が明らかに低下することを示している。このような低下は化合物Ａが１μＭ（この時に基本的ＩＰ蓄積が２４±４％低下した）の時以外は統計学的に有意（ｐ＜０．０５）であった。化合物Ａを１００μＭ用いた時に最大の低下度合である３３±３％を確認した。このようなデータは、化合物Ａが実際にｍＧｌｕ１ａ受容体に対して逆作動剤として働き得ることを示している。
［３Ｈ］化合物ＡとラットｍＧｌｕ１ａ受容体ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−膜の結合の特徴付け
２．５ｎＭの［３Ｈ］化合物Ａが４℃でラットｍＧｌｕ１ａ受容体ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−膜と特異的に結合する度合は膜蛋白質の量に比例し、膜蛋白質が検定当たり１０から５０μｇの範囲で直線的に高くなった（図２）。化合物１３５を抑制剤として１μＭ用いて非特異的結合を限定した。グルタメート誘発［Ｃａ２＋］ｉ可動化の逆転に関して７．２±１．２ｎＭ（ｎ＝３）の効力を示す特異的ｍＧｌｕ１受容体拮抗剤として化合物１３５を同定した。蛋白質を検定当たり２０μｇ用いた時に［３Ｈ］化合物Ａが示した特異的結合は全結合の〜９２％であった、即ち典型的な検定条件下における全結合および非特異的結合はそれぞれ３，８００および３００ＤＰＭの範囲であった。
【０３５６】
ＭｇＣｌ２を１．２ｍＭとＣａＣｌ２を２ｍＭ添加すると特異的結合が若干高くなった（データは示していない）。ＮａＣｌ（１０−１００−３００ｍＭ）を更に添加しても全く効果がなかった。ｐＨを６にすると特異的結合が２２％低くなったがｐＨを１０にまで高くしても全く効果がなかった（データは示していない）。
【０３５７】
材料および方法に記述したようにして結合速度を測定した。インキュベーション温度を４℃にまで低くすると特異的結合が劇的に高くなったが、３７℃にすると結合度合が低くなることを観察した（図３）。［３Ｈ］化合物Ａと膜の結合速度は極めて速かった。インキュベーションを４℃で行うと２分間で既に特異的結合が起こり、これは、平衡状態における結合量の約７０％に相当する。各インキュベーション温度毎に５分以内のインキュベーションで最大結合に到達した。結合曲線を解析した結果、４℃、２５℃および３７℃の結合速度定数（ｋｏｂ）はそれぞれ０．６２８５、２．５７１および１．５２３分−１であることを観察した。また、解離速度も速かった（図４）。２５℃の時、反応用管に化合物１３５を１μＭ添加すると、ほぼ２分以内にラジオリガンドが解離した。このように２５℃における解離速度が速かったことから、我々は、正確な解離速度定数（ｋｏｆｆ）を計算することができなかった。インキュベーションを４℃で行った時の方が解離がより緩慢であった。化合物１３５を過剰に添加すると、ほぼ４５分以内に［３Ｈ］化合物Ａが完全に追い出された。４℃における解離曲線を解析した結果、ｋｏｆｆは０．１２４９分−１であった。４℃におけるｋｏｎ（ｋｏｂ−ｋｏｆｆ／ラジオリガンド濃度）は０．１００７ｎＭ−１・分−１であった。
【０３５８】
リガンド飽和実験を見かけ結合平衡状態（３０分間のインキュベーション）およびラジオリガンドを１０種類の濃度で用いて実施した。図５に、［３Ｈ］化合物ＡとラットｍＧｌｕ１ａ受容体ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−膜の結合の飽和曲線およびＳｃａｔｃｈａｒｄ  Ｐｌｏｔを示す。Ｓｃａｔｃｈａｒｄ  Ｐｌｏｔは直線であり、このことは、飽和可能な高親和性結合部位が１個のみ存在することを示している。直角双曲線の非線形回帰解析により、蛋白質１ｇ当たりのＢｍａｘは６５１２±１５０１ｆモルでＫＤは０．９０±０．１４ｎＭ（ｎ＝３）であることが分かった。
【０３５９】
一連のｍＧｌｕ１受容体作動剤および拮抗剤に［３Ｈ］化合物ＡとラットｍＧｌｕ１ａ受容体ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−膜の結合の抑制に関する試験を受けさせた。いくつかの拮抗剤が示した抑制曲線を図６に示し、そして試験を受けさせたあらゆる化合物が示したＫｉ値を表１１に挙げる。
【０３６０】
【表４７】
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【０３６１】
注目すべきは、グルタメート結合部位と結合するリガンド、即ちグルタメート、キスカレート、１Ｓ，３Ｒ−ＡＣＰＤ、（Ｓ）−３，５−ＤＨＰＧ、ＬＹ−３６７３８５、（Ｓ）−４Ｃ３ＨＰＧ、（Ｓ）−４ＣＰＧ、ＭＣＰＧおよびＡＩＤＡの全部が［３Ｈ］化合物Ａの結合を抑制しなかった。それとは対照的に、非競合的ｍＧｌｕ１受容体拮抗剤であるＣＰＣＣＯＥｔ、ＢＡＹ  ３６−７６２０、ＮＰＳ  ２３９０および化合物Ａが、［３Ｈ］化合物ＡとラットｍＧｌｕ１ａ受容体ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−膜の結合を効力を伴って抑制し、このことは、一般に、それらがｍＧｌｕ１ａ受容体の機能を抑制する効力を有することと一致する。化合物ＡおよびＮＰＳ  ２３９０が最も高い親和性を示し、Ｋｉはそれぞれ１．３５±０．９９および１．３６±０．５０ｎＭであった。また、ＢＡＹ  ３６−７６２０もナノモル濃度で結合を抑制する一方、ＣＰＣＣＯＥｔもミクロモル濃度で追い出した。
【０３６２】
我々は、また、［３Ｈ］化合物ＡがｍＧｌｕ１に対して示す結合特異性（ｍＧｌｕ２、−３、−４、−５および−６受容体と対比した時の）も調査した。［３Ｈ］ＬＹ３４１４９５を用いて、それぞれｍＧｌｕ２、ｍＧｌｕ３またはｍＧｌｕ６受容体を発現するＣＨＯ−ｄｈｆｒ−細胞から調製した膜を用いた時の特異的結合は９５、９８および４０％であることを確認した。［３Ｈ］ＭＰＥＰをｍＧｌｕ５受容体の正対照として用い、それがラットｍＧｌｕ５受容体含有膜に対して示した特異的結合は９５％であった。ラットｍＧｌｕ２、−３、−４、−５または−６受容体を発現するＣＨＯ−ｄｈｆｒ−細胞から調製した膜に２０ｎＭの［３Ｈ］化合物Ａが結合する全結合は、それが野生型ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−細胞から調製した膜と結合する度合よりも高くなく、また、ラットｍＧｌｕ１ａ受容体ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−膜と非特異的に結合する度合よりも高くなかった。更に、下記のいろいろなブランクを用いて［３Ｈ］化合物Ａがそのような膜と特異的に結合する度合も調査した：化合物Ａと同じ部位と結合すると予測される化合物１３５（１μＭ）、グルタメート結合ポケット（ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｏｃｋｅｔ）と結合するグルタメートおよびＬ−ＳＯＰ、そしてｍＧｌｕ５受容体上のアロステリズム部位と結合するＭＰＥＰ（表１２を参照）。これらのブランクのいずれも［３Ｈ］化合物を追い出さなかった。これらのデータは、一緒になって、［３Ｈ］化合物ＡがｍＧｌｕ１受容体に対して特異性（ｍＧｌｕ２、−３、−４、−５および−６受容体サブタイプに対比）を示すことを立証している。
表１２：  ［３Ｈ］化合物ＡはｍＧｌｕ１受容体に特異的（ｍＧｌｕ２、−３、−４、−５または−６受容体に対比）である。このように、２０ｎＭの［３Ｈ］化合物Ａが野生型（ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−）細胞から調製した４０μｇの膜またはラットｍＧｌｕ２、−３、−４、−５または−６受容体を発現するＣＨＯ−ｄｈｆｒ−細胞から調製した４０μｇの膜に特異的に結合する度合を、１０ｎＭの［３Ｈ］化合物Ａが２０μｇのラットｍＧｌｕ１ａ受容体ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−膜と結合する度合と比較する。非特異的結合を限定する目的でいろいろな化合物を用いた。ラットｍＧｌｕ１ａ受容体ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−膜を用いた特異的結合（ＳＢ）データは、重複して実施した３実験の平均±ＳＤである。他のＳＢデータは１つの実験で重複して測定した値の平均である（ＮＤ＝測定せず）
【０３６３】
【表４８】
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【０３６４】
［３Ｈ］キスカレート結合との比較
１インキュベート当たり３０μｇの蛋白質およびｍＧｌｕ１受容体作動剤である［３Ｈ］キスカレートを１０種類の濃度（１、２、５、１０、２０、４０、６０、９０、１２０および１５０ｎＭ）で用いて飽和結合実験を実施した（図７）。曲線のフィッティングで結合部位は単一であることが分かり、ＫＤおよびＢｍａｘ値はそれぞれ２２．０±１０ｎＭおよび蛋白質１ｍｇ当たり３９１２±４３６ｆモルであった（ｎ＝３）。明らかに、［３Ｈ］化合物Ａの方が［３Ｈ］キスカレートよりもずっと高い親和性を伴ってｍＧｌｕ１ａと結合した。［３Ｈ］キスカレートによって標識が付けられた結合部位の数は、［３Ｈ］化合物Ａによって標識を付けられた結合部位の数の〜６０％であった。
【０３６５】
同じ化合物に評価を［３Ｈ］キスカレートとラットｍＧｌｕ１ａ受容体ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−膜の結合に対して示す抑制作用に関して受けさせた。試験を受けさせた作動剤および拮抗剤が示した抑制効力ばかりでなくＨｉｌｌ係数も表１３に要約する。この場合、グルタメートと競合的相互作用を示すことが知られている化合物は［３Ｈ］キスカレートの結合を抑制したが、ＣＰＣＣＯＥｔ、ＢＡＹ  ３６−７６２０およびＮＰＳ  ２３９０は［３Ｈ］キスカレートの結合に影響を与えなかった。また、化合物Ａは、ラットｍＧｌｕ１ａ受容体と結合している［３Ｈ］キスカレートを追い出すこともなかった。そのような競合的ｍＧｌｕ１受容体リガンドは結合している［３Ｈ］キスカレートを下記の効力等級順で追い出した：キスカレート＞グルタメート＞ＬＹ−３６７３８５＞（Ｓ）−３，５−ＤＨＰＧ＞（Ｓ）−４Ｃ３ＨＰＧ＞１Ｓ，３Ｒ−ＡＣＰＤ＞（Ｓ）−４ＣＰＧ＞ＡＩＤＡ＞ＭＣＰＧ。
【０３６６】
【表４９】
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【０３６７】
ＣＰＣＣＯＥｔとＢＡＹ  ３６−７６２０とＮＰＳ  ２３９０と［３Ｈ］化合物Ａの間の結合競合の性質
非競合的化合物は全部が結合している［３Ｈ］化合物Ａを追い出したが［３Ｈ］キスカレートの結合には影響を与えなかったことは、そのような拮抗剤はグルタメート結合部位ではない別の部位と結合することを示唆していた。参考化合物であるＣＰＣＣＯＥｔ、ＢＡＹ  ３６−７６２０、ＮＰＳ  ２３９０および新しく同定したｍＧｌｕ１受容体拮抗剤である化合物Ａが同じ部位または相互排除部位（ｍｕｔｕａｌｌｙ  ｅｘｃｌｕｓｉｖｅ  ｓｉｔｅｓ）に関して競合するか否かを評価する目的で、［３Ｈ］化合物Ａを０．２から２０ｎＭの濃度で用いた飽和実験をＣＰＣＣＯＥｔ（３０μＭ）、ＢＡＹ  ３６−７６２０（１００ｎＭ）およびＮＰＳ  ２３９０（１０ｎＭ）の存在有り無しで実施した。このような競合相手を存在させてもＢｍａｘ値は影響されなかったが、［３Ｈ］化合物Ａが示したＫＤ値が有意に高くなった（表１４）。このことを図８に見ることができ、この図では線形回帰を用いてデータをプロットする。Ｓｃａｔｃｈａｒｄプロットで得た直線は、実際、Ｘ軸上の同じ交点（即ちＢｍａｘ値）と合流している。
表１４：ｍＧｌｕ１受容体拮抗剤であるＣＰＣＣＯＥｔ（３０μＭ）、ＢＡＹ  ３６−７６２０（１００ｎＭ）およびＮＰＳ  ２３９０（１０ｎＭ）の存在有り無しで得た［３Ｈ］化合物Ａ飽和結合曲線の解析で得たＫＤおよびＢｍａｘ値。値は３回独立して行った実験の平均±ＳＤである。Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定（両側）：＊＊ｐ＜０．０１および＊＊＊ｐ＜０．００１を用いて統計学的解析を実施した。
【０３６８】
【表５０】
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【０３６９】
ラット脳膜および断片における［３Ｈ］化合物Ａの結合
我々は、ラット脳のいろいろな領域における受容体結合を検査する目的で特異的ｍＧｌｕ１受容体ラジオリガンドである［３Ｈ］化合物Ａを用いた。ラットの皮質、線条、小脳および海馬から膜を調製して、［３Ｈ］化合物Ａ結合を測定した。全結合と比較した非特異的結合は小脳の場合１０％であり、海馬の場合３０％であり、そして皮質および線条の場合２５％であった。各脳領域に関してＫＤおよびＢｍａｘ値を測定した（表１５）。ＫＤ値はあらゆる構造に関して約１ｎＭであった。Ｂｍａｘ値はいろいろな領域の間で有意に異なっていた。［３Ｈ］化合物Ａは小脳の中に存在するｍＧｌｕ１受容体に標識を顕著に多い数で付けた。線条および海馬で確認した標識付け部位の数は小脳の中で確認した数の約１６％であった。ラット皮質で確認した結合部位の数は小脳で確認したそれの１１％のみであった。重要なことに、構造的に無関係な化合物であるＢＡＹ  ３６−７６２０を１０μＭ用いてインキュベートした時にもまた［３Ｈ］化合物Ａ結合が最大限に抑制された（図９）。ｍＧｌｕ５受容体選択的化合物ＭＰＥＰ（３０μＭ以下で試験）は［３Ｈ］化合物Ａとラット小脳膜の結合に影響を与えず、このことは、再び、化合物ＡがｍＧｌｕ１受容体選択性を有することを示している。
【０３７０】
我々は、ラジオリガンドオートラジオグラフィを用いて、ラット脳断片の中の［３Ｈ］化合物Ａ結合の分布を更に詳細に検査した（図１０）。矢状ラット脳断片における［３Ｈ］化合物Ａオートラジオグラフィを調査し、化合物１３５を用いて非特異的結合を測定した（図１０、パネルＡ）。小脳の分子層の中に非常に高い特異的結合を観察した。海馬形成のＣＡ３場および歯状回、視床、嗅結節、扁桃および黒質小網の中に控えめなシグナルを観察した。大脳皮質、尾状被殻、腹側淡蒼球、側坐核が示した標識付けはより低かった。また、ＢＡＹ  ３６−７６２０と一緒にインキュベーションを行うと［３Ｈ］化合物Ａとラット脳断片の結合が完全に抑制された（図１０、パネルＣ）。
【０３７１】
【表５１】
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【０３７２】
考察
今日までに見つけだされたｍＧｌｕ１受容体サブタイプ選択的拮抗剤は僅かのみである。ｍＧｌｕ１受容体はＣＰＣＣＯＥｔ（Ｌｉｔｓｃｈｉｎｇ他、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５５：４５３−４６１、１９９９）およびＢＡＹ  ３６−７６２０によって選択的に遮断され、それらの効力は、ＣＰＣＣＯＥｔの場合のミクロモル（６．６μＭ）からＢＡＹ  ３６−７６２０の場合の高ナノモル濃度（１６０ｎＭ）に及んで多様であることが示されている。本研究において、ラットｍＧｌｕ１ａ受容体（２１．６ｎＭ）およびヒトｍＧｌｕ１ａ受容体（１０．４ｎＭ）に対して低ナノモルの機能的拮抗効力を有する新規なｍＧｌｕ１受容体拮抗剤であるとして化合物Ａを同定する。化合物Ａが示す拮抗作用は非競合的であることを確認した、と言うのは、グルタメートで誘発されるｍＧｌｕ１受容体の最大の活性化が化合物Ａの存在下で低下したからである。化合物Ａを存在させるとグルタメートＥＣ５０が高くなることを観察したが、これは、予備の受容体が存在することで説明可能である。非競合的拮抗剤を低濃度で存在させると濃度−反応曲線が右側にシフトする、と言うのは、当該拮抗剤によって遮断される「非予備（ｎｏｎｓｐａｒｅ）」受容体を補う目的でより多くの作動剤を必要とするからである。そのような拮抗剤の濃度はそれでも最大作動剤反応に影響を与えず、拮抗剤の濃度がより高くなることで最終的に最大反応が抑制されるであろう（Ｚｈｕ他、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｔｏｘ．Ｍｅｔｈ．２９：８５−９１、１９９３）。このような現象はまたＢＡＹ  ３６−７６２０（Ｃａｒｒｏｌｌ他、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５９：９６５−９７３、２００１）およびＣＰＣＣＯＥｔ（Ｈｅｒｍａｎｓ他、Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ３７：１６４５−１６４７、１９９８）でも報告された。我々のデータは、更に、化合物ＡはｍＧｌｕ１ａ受容体に対して逆作動剤として働く可能性があることと化合物Ａは他のｍＧｌｕ受容体サブタイプおよびイオン向性（ｉｏｎｏｔｒｏｐｉｃ）グルタメート受容体に関してｍＧｌｕ１受容体に選択的に作用することを示している。シグナル導入データにより、化合物ＡはｍＧｌｕ２、−３、−４、−５および−６受容体に対して作動作用も拮抗作用もポジティブなアロステリック作用も示さないことが分かり、かつラジオリガンド結合研究により、［３Ｈ］化合物ＡはｍＧｌｕ２、−３、−４、−５および−６受容体と結合しないことが分かり、それによって、更に、化合物Ａがそのような受容体タイプのいずれかの中性リガンドとして働く可能性も排除された。選択的ｍＧｌｕ１受容体ラジオリガンドが不足していることに加えて化合物Ａが興味の持たれる薬理学的特性を有することが、化合物Ａに標識を付けて結合試験でｍＧｌｕ１受容体を調査する注目すべき理由であった。
【０３７３】
［３Ｈ］化合物Ａの結合は、ｍＧｌｕ１受容体の結合特性、薬理学および分布を研究するに非常に良好に適したリガンドの要求を全部満足させる。最初に、ラットｍＧｌｕ１ａ受容体ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−膜を用いて［３Ｈ］化合物Ａ結合研究を実施した。特異的結合の度合が非常に高く、蛋白質の濃度に伴って直線的に高くなった（図２）。ＭｇＣｌ２およびＣａＣｌ２を存在させた時に示された特異的結合向上度合は妥当であったが、ｐＨを６にすると結合が２２％低下し、ｐＨを高くしても影響を受けなかった。ｐＨが結合に対して示す影響に関して、化合物Ａの計算した物理化学特性、即ち計算したｐＫａおよびｃｌｏｇＰがそれぞれ６．２および４．５であることを注目することは価値の有ることである。従って、ｐＨが７．４の時に化合物Ａがイオン化する度合は非常に低い（５．９％のみ）。イオン化パーセントはｐＨをより高くすると更に低下する（ｐＨ８の時には１．６％でｐＨ９の時には０．２％であり、ｐＨ１０の時にはプロトン化が起こらない）。ｐＨを７．４からｐＨを１０にしてもｃｌｏｇＤ値は４．５のままである。しかしながら、ｐＨを６にすると化合物Ａの６１．３％がプロトン化した形態になる。従って、ｃｌｏｇＤが４．１まで低下する。このリガンドがイオン化した形態で示す結合が低いことは、このリガンドがイオン化していない時に最大の結合親和性を示すことを示唆している。このことは注目すべきことであり、モノアミンＧ蛋白質結合受容体（例えばドーパミン受容体）のリガンド［これらはしばしば強塩基であり、カチオン形態で結合する］で確認されたそれとは対照的である。そのような化合物が受容体と結合する時の推進力は現実に静電力である（Ｖａｎ  ｄｅ  Ｗａｔｅｒｂｅｅｍｄ他、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２９：６００−６０６、１９８６）。我々のデータは、当該受容体と結合する時の推進力はイオン相互作用ではないこととイオン表面効果の貢献がないことを示している可能性がある。加うるに、化合物Ａは強親油性化合物であるが、［３Ｈ］化合物Ａの結合が非常に特異的である理由は化合物Ａの非イオン化形態と負に帯電している細胞膜の間に静電相互作用が生じ得ないことによるものであろう。結合は温度に依存し、４℃にすると実質的に高くなった（図３）。それの結合速度および解離速度が非常に速いことが理由で結合平衡状態に迅速に到達した。［３Ｈ］化合物Ａが標識を付ける部位の集団は明らかに単一であり、その親和性は非常に高い（ＫＤ＝０．９０±０．１４ｎＭ）。それとは対照的に、今日まで選択されていたｍＧｌｕ１受容体ラジオリガンドである［３Ｈ］キスカレートが示すＫＤ値はずっとより高く、２２．０±１０ｎＭであり、このことは、Ｍｕｔｅｌ他、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．７５：２５９０−２６０１、２０００が得た値である３７ｎＭと相互に良好に関係していた。［３Ｈ］化合物Ａの方が［３Ｈ］キスカレートよりも結合部位に対してかなり高い親和性を示すことに加えて、有意により多い数で標識を付けた（〜４０％）。［３Ｈ］化合物Ａおよび［３Ｈ］キスカレートのそれぞれが示したＢｍａｘ値は蛋白質１ｍｇ当たり６５１２±１５０１ｆモルおよび蛋白質１ｍｇ当たり３９１２±４３６ｆモルであることを確認した。このような相違は、当該受容体がＧ蛋白質と結合することを基にして説明可能である。作動剤は当該受容体とＧ蛋白質の結合を助長し、その結果として、受容体と作動剤が高い親和性を伴って適合する。この理論に従い、完全な作動剤、例えばキスカレートなどは主に高親和性もしくはＧ蛋白質結合受容体状態に標識を付けるであろう。拮抗剤は結合している受容体および結合していない受容体に等しい親和性を示す可能性があり、従って、高親和性状態および低親和性状態の両方の受容体に対して等しい親和性を示すであろう。［３Ｈ］化合物Ａが示すＢｍａｘの方が［３Ｈ］キスカレートが示すそれよりもかなり高いことを我々が確認したことは、そのような理論に従うものである。
【０３７４】
この研究で驚くべきことに見いだしたことは、天然の作動剤であるグルタメートおよびまたキスカレートは［３Ｈ］化合物ＡとラットｍＧｌｕ１ａ受容体ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−膜の結合を抑制することができないが非競合的拮抗剤として知られるＣＰＣＣＯＥｔ、ＢＡＹ  ３６−７６２０、ＮＰＳ  ２３９０および化合物Ａは全部［３Ｈ］化合物Ａの結合を同じ最大レベルで抑制したこと（図６）であった。後者の化合物が［３Ｈ］化合物Ａの結合を抑制することは、Ｓ状曲線に従い、Ｈｉｌｌ係数は約１．０であり（表１１）、このことは、結合が複数の部位に対する結合ではないことを示していた。非特異的結合を限定する目的で構造的に関連した類似物を用いたが、構造的に関連していない化合物、例えばＢＡＹ  ３６−７６２０などをラットｍＧｌｕ１ａ受容体ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−膜で１μＭ以上の量で用いた時にも同様に低い非特異的結合を得たこと（図６）を述べることは重要である。［３Ｈ］キスカレートの場合、競合的リガンドであるとして知られるアミノ酸様構造物の全部が［３Ｈ］キスカレートをこれの結合部位から追い出すことができた。キスカレート、グルタメート、ＬＹ−３６７３８５、（Ｓ）−３，５−ＤＨＰＧ、（Ｓ）−４Ｃ３ＨＰＧ、１Ｓ，３Ｒ−ＡＣＰＤ、（Ｓ）−４ＣＰＧ、ＡＩＤＡおよびＭＣＰＧが抑制効力を有すること（表１３）は、Ｍｕｔｅｌ他、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．７５：２５９０−２６０１、２０００に報告されている値と良好な一致を示した。それとは対照的に、前記非競合的化合物はそれの結合に影響を与えなかった。ＣＰＣＣＯＥｔの場合、これはラットｍＧｌｕ１ａ受容体を発現する細胞から調製した膜と［３Ｈ］グルタメートの結合に影響を与えないことが報告されている（Ｌｉｔｓｃｈｉｇ他、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５５：４５３−４６１、１９９９）。その上、ＣＰＣＣＯＥｔはグルタメート結合部位とは結合しないがトランスメンブランドメインＶＩＩの中でＴｈｒ８１５およびＡｌａ８１８と相互作用することが提案されている。ＣＰＣＣＯＥｔはグルタメート結合細胞外ドメインとトランスメンブランドメインＶＩＩの間の分子内相互作用を乱すことによって受容体のシグナルを妨害すると提案されている。Ｃａｒｏｌｌ他はＭｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５９：９６５−９７３、２００１の中でＢＡＹ  ３６−７６２０は［３Ｈ］キスカレートをグルタメート結合ポケットから追い出さないことを立証した。トランスメンブランヘリックス４から７がＢＡＹ  ３６−７６２０の結合に重要な役割を果たすことが示された。［３Ｈ］化合物Ａおよび［３Ｈ］キスカレートを用いて実施した我々の抑制実験は、ＣＰＣＣＯＥｔ、ＢＡＹ  ３６−７６２０、ＮＰＳ  ２３９０は化合物Ａと同じ部位と結合することを示唆している。［３Ｈ］化合物Ａを３０μＭのＣＰＣＣＯＥｔ、１００ｎＭのＢＡＹ  ３６−７６２０および１０ｎＭのＮＰＳ  ２３９０の存在有り無しで用いた飽和実験は、そのような化合物は同じまたは相互排除部位と結合することのさらなる裏付けを与えている。ＫＤ値が有意に高くなったが、Ｂｍａｘ値は変化しないままであった（表１４）。このような結果は、［３Ｈ］化合物Ａの親和性は低いが［３Ｈ］化合物Ａの濃度を高くすると��れは結合している別の化合物をそれの結合部位から追い出す能力を有することを示しており、これは競合的相互作用の典型的な特性である。結論として、我々のデータは、ＣＰＣＣＯＥｔ、ＢＡＹ  ３６−７６２０、ＮＰＳ  ２３９０および化合物Ａはグルタメート結合ポケットとは異なる部位に作用し、恐らくは、それらは同じトランスメンブランセグメントＶＩＩに関して競合すると言った注目を裏付けている。
【０３７５】
以前に行われた脳を用いたＩ群のｍＧｌｕ受容体の結合研究は［３Ｈ］グルタメートまたは［３Ｈ］キスカレートを用いて実施された（ＳｃｈｏｅｐｐおよびＴｒｕｅ、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ  １４５：１００−１０４、１９９２；Ｗｒｉｇｈｔ他、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．６３：９３８−９４５、１９９４；Ｍｕｔｅｌ他、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．７５：２５９０−２６０１、２０００）。このようなラジオリガンドは２種以上のグルタメート受容体に標識を付けると言った欠点を有する。従って、他の代謝向性もしくはイオン向性グルタメート受容体サブタイプに標識を付けないようにする目的で選択的抑制剤をインキュベーション用緩衝液に添加する必要があった。ｍＧｌｕ１受容体の結合および分布を具体的に研究する目的で利用することができるラジオリガンドは今日まで存在していなかった。［３Ｈ］化合物Ａは特異的にｍＧｌｕ１受容体に標識を付けることから、これは特にラットまたはヒト脳における未変性ｍＧｌｕ１受容体の調査で用いるに有用である。ラットの皮質、海馬、線条および小脳の膜を用いた実験で［３Ｈ］化合物Ａの特異的結合（化合物１３５を１μＭ存在させて限定）は高く、特に小脳で高いことが分かった（非特異的結合の％は１０％のみであった）。飽和実験により、再び、［３Ｈ］化合物Ａは明らかに単一の結合部位に非常に高い親和性を伴って標識を付けることが分かった。いろいろな脳領域の全部で測定されたＫＤ値は約１ｎＭであった（表１５）。Ｂｍａｘ値に驚くべき差があることを確認し、標識が付けられた結合部位は小脳の中に多数存在する一方、海馬、線条および皮質の中で検出された受容体発現の度合は控えめから低かった。
【０３７６】
［３Ｈ］化合物Ａは特異性を有することからラジオリガンドオートラジオグラフィを用いて脳断片の中に存在するｍＧｌｕ１受容体の分布を調査する時に用いるに特に適することを見いだした。ｍＧｌｕ１受容体オートラジオグラフィにより、小脳の分子層の中にｍＧｌｕ１特異的結合が最も高いレベルで存在することが分かった。顆粒細胞層が標識を付けられる度合は非常に弱かった。このような結果をまたＭｕｔｅｌ他もＪ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．７５：２５９０−２６０１、２０００の中で確認しており、彼は、［３Ｈ］キスカレートを用いてＩ群のｍＧｌｕ受容体の分布を調査した。海馬形成では、ＣＡ３樹状場（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｆｉｅｌｄ）が歯状回の分子層と一緒になって豊富な標識付けを示した。ＣＡ１領域が示した［３Ｈ］化合物Ａ結合は非常に弱く、このことは、Ｌｕｊａｎ他、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．８：１４８８−１５００、１９９６およびＳｈｉｇｅｍｏｔｏ他、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１７：７５０３−７５２２、１９７７［これらは、ＣＡ１樹状場ではｍＧｌｕ５受容体に特異的であるがｍＧｌｕ１受容体抗体には特異的でない抗体を用いると強力な免疫標識付け（ｉｍｍｕｎｏｌａｂｅｌｌｉｎｇ）がもたらされることを示した］の免疫組織化学データに良好に一致している。［３Ｈ］キスカレートを用いたオートラジオグラフィ実験により、実際に、海馬のＣＡ１およびＣＡ３両方の領域が染色されることが分かり、このことは、それがｍＧｌｕ１およびｍＧｌｕ５受容体の両方のそれぞれに結合することを示している（Ｍｕｔｅｌ他、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．７５：２５９０−２６０１、２０００）。［３Ｈ］化合物Ａの結合はまた視床、嗅結節、扁桃および黒質小網でも極めて高かったが、大脳皮質、尾状被殻、側坐核および腹側淡蒼球ではいくらか低かった。［３Ｈ］キスカレートを用いて同じ構造物に標識を付けることが行われた（Ｍｕｔｅｌ他、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．７５：２５９０−２６０１、２０００）。ｍＧｌｕ１ａ受容体に選択的な抗体を用いてｍＧｌｕ１ａ受容体の細胞場所を見つけだす免疫細胞化学で確認された事項もまた一般に我々のデータに一致していた（Ｍａｒｔｉｎ他、Ｎｅｕｒｏｎ．９：２５９−２７０、１９９２）。［３Ｈ］化合物Ａは今日までに知られているあらゆるｍＧｌｕ１受容体スプライスバリアント（ｓｐｌｉｃｅ  ｖａｒｉａｎｔｓ）に標識を付けると予測するが、しかしながら、１スプライスバリアントの分布は我々の放射能標識（ｒａｄｉｏｌａｂｅｌ）のそれとは異なる可能性がある。例えば、ラジオリガンドでＣＡ３領域および尾状被殻に標識を付けた時、ｍＧｌｕ１ｂ受容体の免疫反応性は確認されたが、ｍＧｌｕ１ａ受容体の免疫反応性は全くか或はほとんど確認されなかった（Ｍａｒｔｉｎ他、Ｎｅｕｒｏｎ．９：２５９−２７０、１９９２；Ｓｈｉｇｅｍｏｔｏ他、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１７：７５０３−７５２２、１９７７；Ｆｅｒｒａｇｕｔｉ他、Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｎｅｕｒ．４００：３９１−４０７、１９９８）。［３Ｈ］化合物Ａで標識が付けられる部位を同定する立証で重要な点は、構造的に異なる化合物であるＢＡＹ  ３６−７６２０もまたラット脳膜（図９）ばかりでなく脳断片（図１０）と結合している［３Ｈ］化合物Ａを完全に追い出すことを見いだしたことにあり、このことは、そのような結合の抑制は純粋に受容体に特異的であり、当該ラジオリガンドの構造部分に関係しないことの良好な保証を与えるものである。
【０３７７】
我々は、本出願において、［３Ｈ］化合物Ａが異種発現系、ラット脳ホモジネート（ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅｓ）および脳断片におけるｍＧｌｕ１受容体を研究する時の優れたラジオリガンドであることを示してきた。我々は、［３Ｈ］化合物Ａが示す非特異的結合は最小限であり、高い結合親和性を示しかつ顕著に選択的であることから、これはｍＧｌｕ１受容体を更に探求する時に選択すべきリガンドであると結論付けることができる。［３Ｈ］化合物ＡはｍＧｌｕ１受容体の細胞下および細胞場所を詳細に調査しかつ前記受容体がいろいろな領域で果たす機能的役割および調節を研究するための眺望を広げるものである。
【図面の簡単な説明】
【０３７８】
【図１】化合物Ａの拮抗剤プロファイル。図１Ａに、ラットｍＧｌｕ１ａ受容体を発現するＣＨＯ−ｄｈｆｒ−細胞の中でグルタメート（３０μＭ）によって誘発されるＣａ２＋可動化の抑制を示す。データをグルタメートを３０μＭ用いて得たシグナル（１００％に設定）のパーセントとして表し、これは３実験の平均±ＳＤである。図１Ｂに、グルタメートを単独で用いるか或は２０ｎＭ、３０ｎＭ、６０ｎＭ、１００ｎＭおよび１μＭの化合物Ａと一緒に用いた時の濃度−反応曲線を示す。値は１つの実験の中で三重に行った測定の平均±ＳＤである。追加的に行った実験は結果が同じであることを示していた。図１Ｃに、存在させる化合物Ａの濃度を高くして行った時の基本的ＩＰ蓄積を示す。値を溶媒を存在させた時の基本的ＩＰ産生（これを１００％に設定）のパーセントとして表し、これは四重に実施した３実験の平均±ＳＤである。
【図２】［３Ｈ］化合物Ａの特異的結合は膜蛋白質の量に伴って直線的である。１０から５０μｇのラットｍＧｌｕ１ａ受容体ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−膜を２．５ｎＭの［３Ｈ］化合物Ａと一緒に氷の上で３０分間インキュベートした。データを三重に行った測定の平均±ＳＤとして表し、これは代表的な実験で得たデータである。
【図３】［３Ｈ］化合物ＡとラットｍＧｌｕ１ａ受容体ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−膜の結合の結合時間−過程曲線。［３Ｈ］化合物Ａを２．５ｎＭ添加した後、いろいろな時間で濾過することで結合速度を測定し、この測定を異なる３種類の温度で実施した。データは二重に実施した独立した３実験の平均±ＳＤである。
【図４】［３Ｈ］化合物ＡとラットｍＧｌｕ１ａ受容体ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−膜を４℃および２５℃で解離させた時の時間−過程。サンプルを４℃または２５℃で３０分間インキュベートした後、化合物１３５を過剰量で添加し、次に、各データ点に示した時間の時に迅速濾過を行った。値は二重に実施した独立した２実験の平均±ＳＤである。
【図５】［３Ｈ］化合物ＡとラットｍＧｌｕ１ａ受容体ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−膜の結合の代表的飽和結合曲線およびＳｃａｔｃｈａｒｄ  Ｐｌｏｔ。化合物１３５を１μＭ存在させて測定した非特異的結合（ＢＬ）と全結合（ＴＢ）の間の差を計算することで特異的結合（ＳＢ）を得た。各実験毎にデータ点を重複して測定した。この実験を３回繰り返した。
【図６】いろいろなｍＧｌｕ受容体拮抗剤を用いて２．５ｎＭの［３Ｈ］化合物ＡとラットｍＧｌｕ１ａ受容体ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−膜の結合を抑制。データ点は全結合の％を表し、３−４回独立して行った実験の平均±ＳＤである。
【図７】［３Ｈ］キスカレートとラットｍＧｌｕ１ａ受容体ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−膜の結合の代表的飽和結合曲線およびＳｃａｔｃｈａｒｄ  Ｐｌｏｔ。各実験毎にデータ点を重複して測定した。この実験を２回繰り返した。
【図８】ＣＰＣＣＯＥｔ（３０μＭ）、ＢＡＹ  ３６−７６２０（１００ｎＭ）およびＮＰＳ  ２３９０（１０ｎＭ）の存在有り無しにおける［３Ｈ］化合物ＡとラットｍＧｌｕ１ａ受容体ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−膜の結合の飽和結合曲線およびＳｃａｔｃｈａｒｄ  Ｐｌｏｔ。示したグラフは３回独立して行った実験の代表である。データを特異的結合のｎＭで表す。各実験毎にデータ点を重複して測定した。
【図９】ＢＡＹ  ３６−７６２０による２．５ｎＭの［３Ｈ］化合物Ａとラット小脳膜の結合の抑制。データ点は全結合の％を表し、２回独立して行った実験の平均±ＳＤである。
【図１０】オートラジオグラフィを用いた［３Ｈ］化合物Ａと矢状ラット脳断片の結合。パネルＡは、［３Ｈ］化合物Ａを１．５ｎＭ用いた時の全結合を示す代表的断片である。パネルＢは、化合物１３５を１μＭ存在させて［３Ｈ］化合物Ａを１．５ｎＭ用いた時の非特異的結合を示す代表的および隣接する断片である。パネルＣは、ＢＡＹ  ３６−７６２０を１０μＭ存在させて［３Ｈ］化合物Ａを１．５ｎＭ用いた時の非特異的結合を示す代表的断片である。パネルＡおよびＢでは断片を［３Ｈ］Ｈｙｐｅｒｆｉｌｍに接触させた一方、パネルＣでは断片をＦｕｊｉ  Ｉｍａｇｉｎｇプレートに接触させた。Ｔｈ：視床；ＳＮｒ：黒質小網；ＣＡ３：海馬のＣＡ３領域；Ｄｇ：海馬の歯状回；Ｃｅｒ：小脳；Ｃｐ：尾状被殻；Ｃｘ：大脳皮質；Ｏｔ：嗅結節；Ａｍ：扁桃；Ｖｐ：腹側淡蒼球；Ｎａ：核アカンベン。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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