(57)【要約】４個のインテグリンを結合する化合物が開示され、ここで、この４個のインテグリンは、好ましくはＶＬＡ−４である。これらの特定の化合物はまた、白血球の接着を阻害し、特に、４個のインテグリンによって媒介される白血球の接着を阻害し、ここで、この４個のインテグリンは、好ましくはＶＬＡ−４である。このような化合物は、哺乳動物患者における炎症性疾患（例えば、ヒトにおける喘息、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化、ＡＩＤＳ痴呆、糖尿病、炎症性腸疾患、慢性関節リウマチ、組織移植、腫瘍転移および心筋虚血）の処置に有用である。この化合物はまた、多発性硬化症などの炎症性脳疾患の処置のために投与され得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2005529155.tif 000048
の化合物およびその薬学的に受容可能な塩であって、各Ｘは独立して、フルオロ、クロロまたはブロモであり；
ｐは、０または１〜３の整数であり；
Ｒ１は、メチルおよびエチルからなる群から選択され；  
Ｒ２は、低級アルキル、低級アルケニル、および低級アルキレンシクロアルキルからなる群から選択される、
化合物およびその薬学的に受容可能な塩。
【請求項２】
式ＩＩ：
【化２】
2005529155.tif 000049
の化合物およびその薬学的に受容可能な塩であって、各Ｘは独立して、フルオロおよびクロロからなる群から選択され、
ｍは、１または２に等しい整数であり；
Ｒ２は、低級アルキル、低級アルケニル、および低級アルキレンシクロアルキルからなる群から選択される、
化合物およびその薬学的に受容可能な塩。
【請求項３】
式ＩＩＩ：
【化３】
2005529155.tif 000050
の化合物およびその薬学的に受容可能な塩であって、各Ｘは独立して、フルオロまたは  クロロであり；
ｎは、０または１であり；
Ｒ２は、−ＣＨ２−Ｒ’であって、ここでＲ’は、水素、メチルまたは−ＣＨ＝ＣＨ２からなる群から選択される、
化合物およびその薬学的に受容可能な塩。
【請求項４】
請求項１、請求項２または請求項３のいずれか１項に記載の化合物であって、ここでＲ２は、ＣＨ３である、化合物。
【請求項５】
請求項３に記載の化合物であって、ここで、Ｘは、ＦまたはＣｌであり、そしてｎは、０である、化合物。
【請求項６】
化合物およびその薬学的に受容可能な塩以下：
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−クロロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジクロロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（ベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）イソプロピルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）イソプロピルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−クロロベンゼンスルホニル）イソプロピルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−クロロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）シクロプロピルメチル−アミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジフルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジクロロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジクロロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）−ｎ−プロピルアミノ−ピリミジン−４−イルアミノ}−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）アリルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）イソブチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）−ｎ−ブチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，５−ジフルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，３−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）−（２−トリスフルオロエチル）−アミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸
からなる群から選択される、
化合物およびその薬学的に受容可能な塩。
【請求項７】
薬学的に受容可能なキャリアおよび治療有効量の請求項１〜請求項３、請求項５または請求項６のいずれか１項に記載の化合物を含有する、薬学的組成物。
【請求項８】
患者においてα４インテグリンによって媒介される疾患を処置するための方法であって、該方法は、薬学的に受容可能なキャリアおよび治療有効量の請求項１〜請求項３、請求項５または請求項６のいずれか１項に記載の化合物を含有する、薬学的組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項９】
前記α４インテグリンによって媒介される疾患が、炎症性疾患である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
式（ＩＶ）：
【化４】
2005529155.tif 000051
の化合物およびその薬学的に受容可能な塩であって、各Ｘは独立して、フルオロ、クロロまたはブロモであり；
ｐは、０または１〜３の整数であり；
Ｒ１は、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ２は、低級アルキニルである、
化合物およびその薬学的に受容可能な塩。
【請求項１１】
式Ｖ：
【化５】
2005529155.tif 000052
の化合物およびその薬学的に受容可能な塩であって、各Ｘは独立して、フルオロおよびクロロからなる群から選択され、
ｍは、１または２に等しい整数であり；  
Ｒ２は、低級アルキニルである、
化合物およびその薬学的に受容可能な塩。
【請求項１２】
式ＶＩ：  
【化６】
2005529155.tif 000053
の化合物およびその薬学的に受容可能な塩であって、各Ｘは独立して、フルオロまたはクロロであり；
ｎは、０または１であり；
Ｒ２は、低級アルキニルである、
化合物およびその薬学的に受容可能な塩。
【請求項１３】
請求項１０、請求項１１または請求項１２のいずれか１項に記載の化合物であって、ここでＲ２は、プロパルギルである、化合物。
【請求項１４】
請求項１２に記載の化合物であって、ここでＸは、ＦまたはＣｌであり、そしてｎは、０である、化合物。
【請求項１５】
化合物およびその薬学的に受容可能な塩であって、２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸、
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸からなる群から選択される化合物、
およびその薬学的に受容可能な塩。
【請求項１６】
薬学的に受容可能なキャリアおよび治療有効量の、請求項１０〜１２、請求項１４または請求項１５のいずれか１項に記載の化合物を含有する、薬学的組成物。
【請求項１７】
患者においてα４インテグリンによって媒介される疾患を処置するための方法であって、該方法は、薬学的に受容可能なキャリアおよび治療有効量の請求項１０〜１２、請求項１４または請求項１５のいずれか１項に記載の化合物を含有する、薬学的組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１８】
前記α４インテグリンによって媒介される疾患が、炎症性疾患である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記疾患が、慢性関節リウマチである、請求項１７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の背景）
（発明の分野）
本発明は、白血球接着（特にα４インテグリンによって媒介される白血球接着）を阻害する化合物に関連し、ここで、α４インテグリンは、好ましくはＶＬＡ−４である。
【背景技術】
【０００２】
（参考文献）
以下の刊行物、特許および特許出願は、本出願において上付き数字で記載される：
【０００３】
【数１−１】
2005529155.tif 000002
【０００４】
【数１−２】
2005529155.tif 000003
上記の刊行物の全ては、各々個々の刊行物が具体的かつ個別にその全体が参考として援用されると示されたのと同じ程度に、本明細書中でその全体が、参考として援用される。
【０００５】
（技術水準）
ＶＬＡ−４（α４β１インテグリンおよびＣＤ４９ｄ／ＣＤ２９とも呼ばれる）は、ＨｅｍｌｅｒおよびＴａｋａｄａ１によって最初に同定された、細胞表面レセプターのβ１インテグリンファミリーのメンバーであり、それぞれが、２つのサブユニット（α鎖およびβ鎖）を含む。ＶＬＡ−４は、α４鎖およびβ１鎖を含む。少なくとも９個のβ１インテグリンが存在し、これらは全て、同一のβ１鎖を共有し、そしてそれぞれが異なったα鎖を有する。これらの９個のレセプターは全て、種々の細胞マトリックス分子の異なった補体（例えば、フィブロネクチン、ラミニン、およびコラーゲン）を結合する。例えば、ＶＬＡ−４は、フィブロネクチンに結合する。ＶＬＡ−４はまた、内皮細胞または他の細胞によって発現される、非マトリックス分子にも結合する。これらの非マトリックス分子としては、ＶＣＡＭ−１が挙げられ、これは、培養中のサイトカイン活性化ヒト臍静脈内皮細胞上で発現する。ＶＬＡ−４の明らかなエピトープは、フィブロネクチン結合活性およびＶＣＡＭ−１結合活性を担い、そして各活性は、独立して阻害されることが示されている２。
【０００６】
ＶＬＡ−４および他の細胞表面レセプターによって媒介される細胞間接着は、多くの炎症応答に関連する。損傷または他の炎症性刺激の部位において、活性化された血管内皮細胞は、白血球に接着する分子を発現する。白血球の内皮細胞への接着機構は、部分的に、白血球上の細胞表面レセプターの、内皮細胞上の対応する細胞表面分子に対する認識および結合を含む。一旦結合すると、白血球は、血管壁を横切って移動し、損傷部位へ侵入し、感染と戦う化学伝達因子を放出する。免疫系の接着レセプターの総説については、例えば、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ３およびＯｓｂｏｒｎ４を、参照のこと。
【０００７】
実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）、多発性硬化症（ＭＳ）および髄膜炎のような炎症性脳障害は、内皮／白血球接着機構がさもなければ健康な脳組織への破壊を生じる、中枢神経系障害の例である。これらの炎症性疾患を有する被験体において、多数の白血球が、血液脳関門（ＢＢＢ）を横切って移動する。この白血球は、甚大な組織損傷を引き起こして、神経伝導障害および麻痺を生じる毒性媒介物を放出する。
【０００８】
他の器官系において、組織損傷はまた、接着機構を介しても生じ、白血球の移動または活性化をもたらす。例えば、心臓組織への心筋虚血後の最初の傷害は、白血球が損傷組織に侵入してなおさらなる傷害を引き起こすことにより、さらに複雑化され得ることが、示されている（Ｖｅｄｄｅｒら）５。接着機構によって媒介される他の炎症状態または医学的状態の例としては、例えば、喘息６〜８、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化９〜１０、ＡＩＤＳ痴呆１１、糖尿病１２〜１４（急性若年発症糖尿病を含む）、炎症性腸疾患１５(潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む）、多発性硬化症１６〜１７、慢性関節リウマチ１８〜２１、組織移植２２、腫瘍転移２３〜２８、髄膜炎、脳炎、卒中および他の大脳の外傷、腎炎、網膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、心筋虚血および成人呼吸窮迫症候群で起こる急性白血球媒介性肺損傷のような急性白血球媒介性肺損傷が、挙げられる。
【０００９】
クラスとして、置換されたアミノピリミジンは、ＶＬＡ−４のＶＣＡＭ−１への結合を阻害する（従って、抗炎症性特性を示す）として開示される２９。これらの化合物が、このような結合についてアンタゴニストの特性を保有する一方、これらの化合物のバイオアベイラビリティーの増強は、その力価を増大する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
（発明の要旨）
本発明は、特定のＮ−［２−Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ−５−アミノスルホニルフェニルピリミジン−４−イル］−ｐ−カルバモイルオキシフェニルアラニン化合物が、そのＡＵＣによって測定したところ、以前に開示された他の置換アミノピリミジン化合物と比較して予期外に優れたバイオアベイラビリティーを保有するという知見に関する。
【００１１】
その組成物の局面の１つにおいて、本発明は、式（Ｉ）：
【００１２】
【化７】
2005529155.tif 000004
の化合物およびその薬学的に受容可能な塩に関し、
ここで、各Ｘは独立して、フルオロ、クロロまたはブロモであり；
ｐは、０または１〜３の整数であり；
Ｒ１は、メチルおよびエチルからなる群から選択され；  
Ｒ２は、低級アルキル、低級アルケニル、および低級アルキレンシクロアルキルからなる群から選択される。
【００１３】
好ましい実施形態において、本発明は、式ＩＩ：
【００１４】
【化８】
2005529155.tif 000005
の化合物およびその薬学的に受容可能な塩を提供し、ここで、各Ｘは独立して、フルオロおよびクロロからなる群から選択され、
ｍは、１または２に等しい整数であり；
Ｒ２は、低級アルキル、低級アルケニル、および低級アルキレンシクロアルキルからなる群から選択される。
【００１５】
特に好ましい実施形態において、本発明は、式ＩＩＩ：
【００１６】
【化９】
2005529155.tif 000006
の化合物およびその薬学的に受容可能な塩を提供し、ここで、各Ｘは独立して、フルオロまたは  クロロであり；
ｎは、０または１であり；
Ｒ２は、−ＣＨ２−Ｒ’であって、ここでＲ’は、水素、メチルまたは−ＣＨ＝ＣＨ２からなる群から選択される。
【００１７】
別の特に好ましい実施形態において、本発明は、式（ＩＶ）：
【００１８】
【化１０】
2005529155.tif 000007
の化合物およびその薬学的に受容可能な塩を提供し、ここで、各Ｘは独立して、フルオロ、クロロまたはブロモであり；
ｐは、０または１〜３の整数であり；
Ｒ１は、メチルおよびエチルからなる群から選択され；
Ｒ２は、低級アルキニルである、
化合物およびその薬学的に受容可能な塩を、提供する。
【００１９】
さらに別の特に好ましい実施形態において、本発明は、式Ｖ：
【００２０】
【化１１】
2005529155.tif 000008
の化合物およびその薬学的に受容可能な塩を提供し、ここで、各Ｘは独立して、フルオロおよびクロロからなる群から選択され、
ｍは、１または２に等しい整数であり；  
Ｒ２は、低級アルキニルである。
【００２１】
さらに別の特に好ましい実施形態において、本発明は、式ＶＩ：  
【００２２】
【化１２】
2005529155.tif 000009
の化合物およびその薬学的に受容可能な塩を提供し、ここで、各Ｘは独立して、フルオロまたはクロロであり；
ｎは、０または１であり；
Ｒ２は、低級アルキニルである。
【００２３】
Ｒ２は好ましくは、式ＩＶ、式Ｖまたは式ＶＩのいずれか１つにおいてプロパルギルである。
【００２４】
本発明の範囲内のＮ−［２−Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノ−５−アミノスルホニルフェニルピリミジン−４−イル］−ｐ−カルバモイルオキシフェニルアラニン化合物としては、以下の表Ｉに示した化合物が、挙げられる：
【００２５】
【表１−１】
2005529155.tif 000010
【００２６】
【表１−２】
2005529155.tif 000011
本発明の範囲内の特定の化合物としては、以下が挙げられる。以下で使用される場合、これらの化合物は、プロピオン酸誘導体に基づいて名付けられるが、あるいは、これらの化合物は、Ｎ−［２−Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ−５−アミノスルホニルフェニルピリミジン−４−イル］−ｐ−カルバモイルオキシ−フェニルアラニン誘導体に基づいて名付けられていてもよい。
【００２７】
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−クロロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；  
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジクロロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（ベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）イソプロピルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）イソプロピルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−クロロベンゼンスルホニル）イソプロピルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−クロロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）シクロプロピルメチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジフルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；  
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジクロロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジクロロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）−ｎ−プロピルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）アリルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）イソブチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）−ｎ−ブチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，６−ジフルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，３−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）−（２−トリスフルオロエチル）−アミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸；およびこれらの薬学的に受容可能な塩。
【００２８】
別の局面において、本発明は、薬学的に受容可能なキャリアおよび治療有効量の本明細書中で定義される化合物を含有する薬学的組成物を提供する。
【００２９】
その方法の局面の１つにおいて、本発明は、患者における、α４インテグリン（好ましくはＶＬＡ−４）によって少なくとも部分的に媒介される疾患を処置するための方法に関し、この方法は、薬学的に受容可能なキャリアおよび治療有効量の本発明の化合物を含有する薬学的組成物を投与する工程を、包含する。
【００３０】
本発明の化合物および薬学的組成物は、α４インテグリンによって少なくとも部分的に媒介される疾患状態の処置に有用であり、α４インテグリンは、好ましくはＶＬＡ−４または白血球接着であり得る。このような疾患状態としては、例えば、喘息、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化、ＡＩＤＳ痴呆、糖尿病（急性若年発症糖尿病を含む）、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む）、多発性硬化症、慢性関節リウマチ、組織移植、腫瘍転移、髄膜炎、脳炎、卒中および他の大脳の外傷、腎炎、網膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、心筋虚血および成人呼吸窮迫症候群で起こる急性白血球媒介性肺損傷のような急性白血球媒介性肺損傷が、挙げられる。
【００３１】
他の疾患状態としては、以下のような炎症状態が挙げられるが、これらに限定はされない：結節性紅斑、アレルギー性結膜炎、視神経炎、ブドウ膜炎、アレルギー性鼻炎、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、脈管炎、ライター症候群、全身性エリテマトーデス、進行性全身性硬化症、多発性筋炎、皮膚筋炎、ヴェグナー肉芽腫症、大動脈炎、サルコイドーシス、リンパ球減少症、側頭動脈炎、心外膜炎、心筋炎、鬱血性心不全、結節性多発性動脈炎、過敏性症候群、アレルギー、過好酸性症候群、チャーグ−ストラウス症候群、慢性閉塞性肺疾患、過敏性肺炎、慢性活動性肝炎、間質性膀胱炎、自己免疫性内分泌障害、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性再生不良性貧血、慢性持続性肝炎および甲状腺炎。
【００３２】
好ましい実施形態において、α４インテグリンによって媒介されるこの疾患状態は、炎症性疾患である。
【００３３】
（発明の詳細な説明）
上記のように、本発明は、白血球接着（特に、α４インテグリン、好ましくはＶＬＡ−４によって少なくとも部分的に媒介される白血球接着）を阻害する化合物に関する。しかし、本発明をさらに詳細に説明する前に、以下の用語がまず定義される。
【００３４】
（定義）
別に述べられない限り、本明細書および特許請求の範囲の中で用いられる以下の用語は、下記の意味を有する：
本明細書中で使用される場合、「低級アルキル」は、１個〜５個の炭素原子を有する一価のアルキル基を言い、これは、直鎖アルキル基および分枝鎖のアルキル基を包含する。この用語は、メチル、エチル、イソプロピル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチルなどの基によって例示される。「低級アルキル」は、必要に応じて、ハロゲン（例えばクロロ、フルオロ、ブロモなど）で置換され得る。
【００３５】
用語「低級アルキレン」は、１個〜４個の炭素原子の二価のアルキレン基を言い、これは、直鎖アルキレン基および分枝鎖のアルキレン基を包含する。この用語は、メチレン、エチレン、ｎ−プロピレン、イソ−プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−および−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−）などの基によって例示される。
【００３６】
用語「低級アルキニル」は、好ましくは２個〜６個の炭素原子を有し、そして少なくとも１箇所（好ましくは１箇所のみ）のアルキニル不飽和（すなわち、−Ｃ≡Ｃ）を有する、アルキニル基を言う。この用語は、アセチル（−Ｃ≡ＣＨ）、プロパルギル（−ＣＨ２−Ｃ≡ＣＨ）、３−ブチニル（−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ３）などの基によって例示される。
【００３７】
用語「低級シクロアルキル」は、１個の環式環を有する３個〜６個の炭素原子の環式アルキル基を言い、例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが挙げられる。
【００３８】
用語「低級アルキレンシクロアルキル」は、本明細書中で定義される低級アルキレン〜低級シクロアルキルからなる基を言う。このような基は、メチレンシクロプロピル（−ＣＨ２−シクロプロピル）、エチレンシクロプロピルなどによって例示される。
【００３９】
「薬学的に受容可能なキャリア」は、一般的に安全で、非毒性でかつ生物学的にもそれ以外でも所望されなくはない、薬学的組成物の調製において有用なキャリアを意味し、これは、獣医学的使用およびヒト薬学的使用のために受容可能なキャリアを包含する。本明細書および特許請求の範囲の中で使用される「薬学的に受容可能なキャリア」は、１つのこのようなキャリアおよび１より多くのこのようなキャリアの両方を包含する。
【００４０】
疾患の「処置すること」または「処置」は、以下を包含する：（１）疾患を予防すること（すなわち、疾患に曝されるかまたは疾患の素因があるが、まだこの疾患症状を経験も呈示もしたことがない哺乳類において、疾患の臨床的症状が発症しないようにすること）、（２）疾患を阻害すること（すなわち、疾患またはその臨床症状の発症を、停止または低減すること）、または（３）疾患を和らげること（すなわち、疾患またはその臨床症状を後退させること）。
【００４１】
「治療有効量」は、疾患の処置のために哺乳類に投与された場合、その疾患のこのような処置をもたらすのに十分な化合物量を意味する。「治療有効量」は、化合物、疾患およびその重症度、ならびに処置される哺乳類の年齢、体重などに依存して変化する。
【００４２】
「薬学的に受容可能な塩」は、式Ｉの化合物の薬学的に受容可能な塩を言い、この塩は、当該分野で周知の、種々の有機対イオンまたは無機対イオンから誘導され、例のみとしては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、四アルキルアンモニウムなどが、挙げられる；そして、この分子が、塩基性の官能性を含む場合、有機酸または無機酸の塩（例えば、塩酸塩、塩化臭素酸塩、酒石酸塩、メシレート、酢酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩など）が挙げられる。
【００４３】
インテグリンは、相同な膜貫通リンカータンパク質の大型ファミリーであり、これは、ほとんどの細胞外マトリックスタンパク質（例えば、コラーゲン、フィブロネクチン、およびラミニン）を結合するための、動物細胞上の主要なレセプターである。インテグリンは、α鎖とβ鎖とからなる、ヘテロダイマーである。今日までに、９個の異なったαサブユニットおよび１４個の異なったβサブユニットからなる２０個の異なったインテグリンへテロダイマーが、同定されている。用語「α４インテグリン」は、任意のβサブユニットと対になったα４サブユニットを含む、酵素に結合された細胞表面レセプターであるヘテロダイマーのクラスを言う。ＶＬＡ−４は、α４インテグリンの例であり、α４サブユニットおよびβ-１サブユニットのヘテロダイマーであり、そしてまた、α４β１インテグリンとも呼ばれる。
【００４４】
（化合物調製）
本発明の化合物は、容易に入手し得る出発物質から、以下の実施例で示される方法および手順を使用して、調製され得る。これらの方法および手順は、Ｎ−［２−Ｎ’，Ｎ’−ジエチルアミノ−５−アミノスルホニルフェニル−ピリミジン−４−イル］−ｐ−カルバモイルオキシ−フェニルアラニン化合物を調製するための、特定の反応プロトコールを概説する。これらの実施例および方法において例として挙げられない、範囲内の化合物は、市販されているかまたは当該分野で周知である出発物質の適切な置換によって、容易に調製される。
【００４５】
本発明の化合物を調製するための他の手順および反応状態は、以下に実施例において開示される。さらに、本発明の特定の局面における有用な化合物を調製するための他の手順は、米国特許第６，４９２，３７２号に開示される（この記載は、本明細書中でその全体が、参考として援用される）。
【００４６】
（薬学的処方物）
医薬品として使用される場合、本発明の化合物は、通常、薬学的組成物の形態で投与される。これらの組成物は、種々の経路（経口投与、直腸投与、経皮投与、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、および鼻腔内投与が挙げられる）で投与され得る。これらの組成物は、注射送達および経口送達の両方によって有効である。このような組成物は、薬学分野で周知の様式で調製され、そして少なくとも１つの活性な化合物を含有する。
【００４７】
本発明はまた、（薬学的に受容可能なキャリアと共に）１つ以上の上記の式Ｉ〜式ＶＩＩの化合物を活性成分として含有する薬学的組成物を、包含する。本発明の組成物の生成において、活性成分は、通常、賦形剤と混合されるか、賦形剤によって希釈されるかまたはカプセル、サシェ、紙もしくは他の容器の形態であり得るようなキャリア内に閉じ込められる。使用される賦形剤は、代表的に、ヒト被験体または他の哺乳類への投与に適切な賦形剤である。賦形剤が、希釈剤として作用される場合、活性成分のためのビヒクル、キャリアまたは媒体として作用する、固形物質、半固形物質、または液体物質であり得る。従って、組成物は、錠剤、丸剤、散剤、トローチ剤、サシェ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、液剤、シロップ剤、エアロゾル剤（固形として、または液体媒体中）、（例えば、１０重量％までの活性化合物を含んだ軟膏、軟ゼラチンカプセル剤および硬ゼラチンカプセル剤、座剤、無菌注射可能剤、および無菌封入粉末の形状であり得る。
【００４８】
処方物の調製において、他の成分と混合する前に、活性化合物をすりつぶし、適切な粒子サイズを提供する必要があり得る。活性化合物が実質的に不溶である場合、通常、２００メッシュ未満の粒子サイズにすりつぶされる。活性化合物が実質的に水溶性である場合、すりつぶして処方物中での実質的に一様な分布を提供することにより、粒子サイズは、通常、調整される（例えば、約４０メッシュ）。
【００４９】
適切な賦形剤のいくつかの例としては、乳糖、ブドウ糖、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリジン、セルロース、水、シロップ、およびメチルセルロースが、挙げられる。処方物は、さらに以下を含み得る：滑石、ステアリン酸マグネシウム、および鉱物油のような滑沢剤；湿潤剤；乳化剤および懸濁剤；安息香酸メチルおよび安息香酸プロピルヒドロキシのような保存剤；甘味料（ｓｗｅｅｔｅｎｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）および香料（ｆｌａｖｏｒｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）。本発明の組成物は、従って、患者への投与後に、活性成分の迅速な放出、徐放、または遅延放出を提供するように、当該分野に公知の手順を使用して、処方され得る。
【００５０】
組成物は、好ましくは、単位投与量形態で処方され、各投与量は、約５ｍｇ〜約１００ｍｇ、より普通には、約１０ｍｇ〜３０ｍｇの活性成分を含有する。用語「単位投与量形態」は、ヒト被験体および他の哺乳類の単一投与として適切な、物理学的に別個の単位を言い、各単位は、所望の治療効果を生じるように計算された所定量の、活性物質を、適切な薬学的賦形剤と共に含有する。
【００５１】
活性な化合物は、広範な投与量の範囲にわたって有効であり、一般的に、薬学的有効量で投与される。しかし、実際に投与される化合物の量は、関連の状況（処置されるべき状態、選択された投与経路、投与される実際の化合物、患者個々人の年齢、体重および応答、患者の症状の重症性などが挙げられる）から見て、医師によって決定されることが、理解される。
【００５２】
錠剤のような固形組成物の調製について、主な活性成分は、薬学的賦形剤と混合されて、本発明の化合物の均一な混合物を含有する、固形の事前処方組成物を形成する。これらの事前処方組成物を均一であると言う場合、これは、活性成分が、組成物全体に均一に分散し、従って、組成物は、錠剤、丸剤およびカプセルとして、等分な有効単位投与量形態に、容易に細分割され得ることを意味する。次いで、この固形の事前処方組成物は、例えば０．１ｍｇ〜約５００ｍｇの本発明の活性成分を含有する、上述の型の単位投与量形態に再分割される。
【００５３】
本発明の錠剤または丸剤は、コートされるかまたは化合されて、長期作用という投与利点を提供する投与量形態を提供し得る。例えば、錠剤または丸剤は、内側投与量構成要素および外側投与量構成要素を含み得、後者は前者を包み込む形態である。２つの構成要素は、腸管用層によって分離され得、これは、胃における消化に抵抗して働き、そして内側構成要素をインタクトに十二指腸へ通させるか、または放出において遅延させる。種々の物質が、このような腸管用層またはコーティングに使用され得、このような物質としては、多くのポリマー酸およびポリマー酸と、シェラック、セチルアルコール、および酢酸セルロースのような物質との混合物が、挙げられる。
【００５４】
本発明の新規の組成物が経口投与または注射による投与のために取り込まれ得る液体形態としては、適切に風味付けされたシロップ水溶液、水懸濁液もしくは油懸濁液、および食用油（例えば、綿実油、ゴマ油、ココナッツ油、またはピーナッツ油）で風味付けされた乳剤、ならびにエリキシル剤および同様の薬学的ビヒクルが、挙げられる。
【００５５】
吸入またはガス吸入のための組成物としては、薬学的に受容可能な、水性溶媒もしくは有機溶媒またはそれらの混合物中の溶液または懸濁液、ならびに粉末が、挙げられる。液状組成物または固形組成物は、適切な、上述のような薬学的に受容可能な賦形剤を含み得る。好ましくは、組成物は、経口または鼻吸入経路によって、局部効果または全身的効果のために投与される。好ましくは、薬学的に受容可能な溶媒中の組成物は、不活性ガスの使用により、噴霧され得る。噴霧される溶液は、噴霧デバイスから直接吸息され得るか、または噴霧デバイスは、顔面マスクテントに取り付けられ得るか、連続または間欠性の陽圧呼息機器に取り付けられ得る。溶液組成物、懸濁液組成物、または粉末組成物は、好ましくは経口または経鼻で、処方物を適切な様式で送達するデバイスにより、投与され得る。
【００５６】
以下の処方例は、本発明の薬学的組成物を説明する。
【００５７】
（処方例１）
以下の成分を含有する硬質ゼラチンカプセルが、調製される：
成分                            量
（ｍｇ／カプセル）
活性成分                          ３０．０
デンプン                        ３０５．０
ステアリン酸マグネシウム            ５．０
上記の成分は、混合され、そして硬質ゼラチンカプセル内に、３４０ｍｇの量で充填される。
【００５８】
（処方例２）
以下の成分を使用して、錠剤処方が調製される：
成分                            量
（ｍｇ／カプセル）
活性成分                          ２５．０
微結晶性セルロース              ２００．０
コロイド状二酸化ケイ素            １０．０
ステアリン酸                        ５．０
これらの成分は、混合され、そして圧縮されて、それぞれ２４０ｍｇの錠剤が形成される。
【００５９】
（処方例３）
以下の成分を含有する乾燥粉末吸入処方が、調製される：
成分                          重量％
活性成分                          ５
乳糖                            ９５
活性混合物は、乳糖と混合され、そして混合物は、乾燥粉末吸入機器に加えられる。
【００６０】
（処方例４）
それぞれ３０ｍｇの活性成分を含有する錠剤が、以下のように調製される：
成分                            量
（ｍｇ／錠剤）
活性成分                            ３０．０ｍｇ
デンプン                            ４５．０ｍｇ
微結晶性セルロース                  ３５．０ｍｇ
ポリビニルピロリドン
（水中１０％溶液として）            ４．０ｍｇ
カルボキシメチルデンプンナトリウム    ４．５ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム              ０．５ｍｇ
滑石                                  １．０ｍｇ
計                                    １２０ｍｇ
活性成分、デンプンおよびセルロースは、Ｕ．Ｓ．シーブ第２０番メッシュに通され、完全に混合される。ポリビニルピロリドンの溶液は、生じた粉末と混合され、次いでＵ．Ｓ．シーブ第１６番メッシュに通される。このようにして生成された顆粒は、５０℃〜６０℃にて乾燥され、Ｕ．Ｓ．シーブ第１６番メッシュに通される。カルボキシメチルデンプンナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、および滑石は、事前にＵ．Ｓ．シーブ第３０番メッシュに通され、次いで、顆粒に添加され、混合後打錠機で加圧され、各１２０ｍｇの重さの錠剤を生じる。
【００６１】
（処方例５）
それぞれ４０ｍｇの薬剤を含有するカプセル剤が、以下のように作製される：
成分                            量
（ｍｇ／カプセル）
活性成分                            ４０．０ｍｇ
デンプン                          １０９．０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム              １．０ｍｇ
計                                １５０．０ｍｇ
活性成分、デンプンおよびステアリン酸マグネシウムは、混合され、Ｕ．Ｓ．シーブ第２０番メッシュに通され、そして硬質ゼラチンカプセル内に、１５０ｍｇの量で充填される。
【００６２】
（処方例６）
２５ｍｇの活性成分を含有する坐剤が、以下のように作製される：
成分                          量
活性成分                        ２５ｍｇ
飽和脂肪酸グリセリド      ２，０００ｍｇまで
活性成分は、Ｕ．Ｓ．シーブ第６０番メッシュに通され、そして必要最低の熱を使用して事前に融解された飽和脂肪酸グリセリド中に懸濁される。この混合物は、次いで、名目上２．０ｇの容量の坐剤鋳型に注がれ、冷却される。
【００６３】
（処方例７）
それぞれ５０ｍｇの薬剤を含有する５．０ｍＬ用量につき懸濁液が、以下のように作製される：
成分                            量
活性成分                                            ５０．０ｍｇ
キサンタンガム                                        ４．０ｍｇ
カルボキシメチルセルロースナトリウム（１１％）
微結晶性セルロース（８９％）                        ５０．０ｍｇ
ショ糖                                                １．７５ｇ
安息香酸ナトリウム                                  １０．０ｍｇ
香料および色素                                        適宜
精製水                                              ５．０ｍＬ
薬剤、ショ糖およびキサンタンガムは、混合され、Ｕ．Ｓ．シーブ第１０番メッシュに通され、次いで、事前に調製された水中の微結晶性セルロースおよびカルボキシメチルセルロースナトリウム溶液と混合される。安息香酸ナトリウム、香料、および色素は、幾らかの水で希釈され、かき混ぜられながら添加される。次いで、十分な水を加え、必要な容量を得た。
【００６４】
（処方例８）
成分                            量
（ｍｇ／カプセル）
活性成分                        １５．０ｍｇ
デンプン                      ４０７．０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム          ３．０ｍｇ
計                            ４２５．０ｍｇ
活性成分、デンプン、およびステアリン酸マグネシウムは、混合され、Ｕ．Ｓ．シーブ第２０番メッシュに通され、そして硬質ゼラチンカプセルに４２５ｍｇの量で充填される。
【００６５】
（処方例９）
静脈内処方物は、以下のように調製され得る：
成分                          量
活性成分                    ２５０．０ｍｇ
等張生理食塩水                １０００ｍＬ
（処方例１０）
局所的処方物は、以下のように調製され得る：
成分                          量
活性成分                    １〜１０ｇ
乳化ワックス                    ３０ｇ
流動パラフィン                  ２０ｇ
白色ワセリン              ２〜１００ｇ
白色ワセリンは、融けるまで温められる。流動パラフィンおよび乳化ワックスは、組み込まれ、溶けるまでかき混ぜられる。活性成分は、加えられ、そして攪拌は分散するまで続けられる。混合物は、次いで、固体になるまで冷却される。
【００６６】
本発明の方法において用いられる別の好ましい処方物は、経皮送達デバイス（「パッチ」）を使用する。このような経皮パッチは、本発明の化合物の継続的または断続的な制御された量での注入を提供するために、使用され得る。薬剤の送達のための経皮パッチの構築および使用は、当該分野で周知である。例えば、米国特許５，０２３，２５２号（１９９１年６月１１日発行）を参照のこと。この特許は、本明細書中で参考として援用される。このようなパッチは、継続的、断続的また要求に応じた薬剤の送達のために、構築され得る。
【００６７】
この薬学的組成物を脳に導入することが所望されるかまたは必要である場合、直接または間接の配置技術が、使用され得る。直接の技術は、通常、宿主脳室系に薬物送達カテーテルを配置し、血液脳関門をバイパスすることを含む。生物学的因子を体の特定の解剖学的領域へ輸送するために使用される１つのこのような移植可能な送達システムは、米国特許第５，０１１，４７２号（本明細書中で参考として援用される）に記載される。
【００６８】
一般的に好ましい間接技術は、通常、親水性薬物の脂溶性薬物への変換による、薬物潜伏化（ｌａｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ）を提供するための組成物の処方を含む。潜伏化は、一般に、薬物において存在するヒドロキシ基、カルボニル基、サルフェート基、および一級アミン基のブロッキングを通して、薬物をより脂溶性にし、そして血液脳関門を横切って移送されやすくすることを達成される。あるいは、親水性薬物の送達は、血液脳関門を一時的に開き得る高張性溶液の動脈内注入によって、増強され得る。
【００６９】
（有用性）
本発明の化合物は、インビボで、α４インテグリンによって（このα４インテグリンは、好ましくはＶＬＡ−４である）少なくとも部分的に媒介される白血球の内皮細胞への接着を、α４インテグリン（好ましくはＶＬＡ−４）への競合的結合によって阻害する。従って、本発明の化合物は、α４インテグリン（このα４インテグリンは、好ましくはＶＬＡ−４である）または白血球接着によって媒介される哺乳動物の疾患の処置において使用され得る。このような疾患としては、哺乳動物患者における炎症性疾患が挙げられ、これらは、例えば、喘息、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化、ＡＩＤＳ痴呆、糖尿病（急性若年発症糖尿病を含む）、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む）、多発性硬化症、慢性関節リウマチ、組織移植、腫瘍転移、髄膜炎、脳炎、卒中および他の大脳の外傷、腎炎、網膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、心筋虚血および成人呼吸窮迫症候群で起こる急性白血球媒介性肺損傷のような急性白血球媒介性肺損傷である。
【００７０】
哺乳動物患者への投与量は、何が投与されているか、投与の目的（例えば、予防または治療）、患者の状態、投与様式などによって変化する。治療適用において、組成物は、既に疾患を患っている患者に対し、治癒に十分な量かまたは疾患およびその合併症の症状を少なくとも部分的に抑止するために十分な量で、投与される。これを達成するために適切な量を、「治療有効用量」と定義する。この使用のための有効量は、処置されている疾患の状態、ならびに炎症の重篤性、患者の年齢、体重および一般的状態などに基づく担当医師の判断に依存する。
【００７１】
患者に投与される組成物は、上述の薬学的組成物の形態である。これらの組成物は、従来の滅菌技術によって滅菌され得るか、または濾過滅菌され得る。生じた水溶液は、そのままの使用のために梱包され得るか、または凍結乾燥され、凍結乾燥された調製物は、投与の前に滅菌水溶性キャリアと混合される。化合物調製物のｐＨは、代表的に３〜１１の間であり、より好ましくは５〜９であり、最も好ましくは７〜８である。特定の上述の賦形剤、キャリア、または安定剤の使用が、薬学的塩の形成を生じる。
【００７２】
本発明の化合物の薬学的投与量は、例えば、処置がなされた特定の使用、化合物の投与の様式、患者の健康および状態、および処方医の判断によって変化する。例えば、静脈内投与については、この用量は、代表的には、体重１ｋｇあたり約２０μｇ〜約５００μｇ、好ましくは体重１ｋｇあたり約１００μｇ〜約３００μｇの範囲である。鼻腔内投与のための適切な投与量の範囲は、一般的に、体重１ｋｇあたり約０．１ｐｇ〜１ｍｇである。有効用量は、インビトロまたは動物モデル試験系から得られた用量−応答曲線から外挿され得る。
【００７３】
以下の合成実施例および生物学的実施例は、本発明を解説するために提供され、いかなる意味においても本発明の範囲を限定すると解釈されるべきではない。特に述べない限り、全ての温度は、摂氏度である。
【実施例】
【００７４】
以下の実施例において、以下の略号は、以下の意味を有する。略号が規定されていない場合、それは、一般的に受け入れられた意味を有する。
【００７５】
ＡＵＣ＝曲線下面積；
ＢＳＡ＝ウシ血清アルブミン；
ＤＭＡＰ＝４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン；
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド；
ＥＤＣ＝１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩；
ＥＤＴＡ＝エチレンジアミン四酢酸；
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル；
ＥｔＯＨ＝エタノール；
ｂｄ＝広い二重線；
ｂｓ＝広い一重線
ｄ＝二重線；
ｍ＝多重線；
ｔ＝三重線；
ｓ＝一重線；
ｅｑまたはｅｑ．＝当量；
ＦＡＣＳ＝蛍光活性化セルソータ；
ＦＩＴＣ＝フルオレセインイソチオシアネート；
Ｆｍｏｃ＝Ｎ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）；
ＦｍｏｃＯＮＳｕ＝Ｎ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）−スクシンイミド；
ｇ＝グラム；
ｉ．ｐ．＝腹腔内；
ｈ＝時間；
ＨＢＳＳ＝ハンクス平衡生理食塩溶液；
ＨＥＰＥＳ＝４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジン−エタンスルホン酸；
ＨＯＢＴ＝１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物；
ｈｒ＝時間；
ＩｇＧ  Ｆｃ＝免疫グロブリンの結合ドメイン；
ｋｇ＝キログラム；
ＬＣＭＳ＝液体クロマトグラフィー質量分析法；
Ｌ＝リットル；
ｍ＝メートル；
Ｍ＝モル濃度；
Ｈｃｔ＝ヘマトクリット、すなわち、血液サンプルの容積中の遠心分離によって得られる充填赤血球の測定値；
ＨＢ＝ヘモグロビン；
ＭＣＨ＝平均血球性ヘモグロビン；Ｈｂ／ＲＢＣ；
ＭＣＨＣ＝百分率として表した平均血球性ヘモグロビン数；Ｈｂ／Ｈｃｔ。
【００７６】
ＭＣＶ＝平均血球容積；１赤血球あたりの立方マイクロメートルで便利に表した、赤血球の平均容積；
ＲＢＣ＝赤血球数；
ＭｅＯＨ＝メタノール；
ｍｇ＝ミリグラム；
ｍＬ＝ミリリットル；
ｍｍ＝ミリメートル；
ｍＭ＝ミリモル濃度；
ｍｏｌ＝モル；
ｍｍｏｌ＝ミリモル；
ｍｐ＝融点；
ｍｐｋ＝１キログラムあたりのミリグラム；
Ｎ＝規定；
ＮａＯＥｔ＝ナトリウムエトキシド；
ＮＭＭ＝Ｎ−メチルモルホリン；
ＯｔＢｕ＝ｔｅｒｔ−ブトキシ；
ＰＢＳ＋＋＝リン酸緩衝化生理食塩水；
Ｐｈｅ＝Ｌ−フェニルアラニン；
Ｐｒｏ＝Ｌ−プロリン；
ｐｓｉ＝平方インチあたりのポンド；
ｑ．ｓ．＝容積にする；
Ｒｆ＝保持係数；
ｒｐｍ＝１分間あたりの回転；
ｒｔ＝室温；
ｓａｔ＝飽和した；
ｔ−ＢｕＯＨ＝ｔｅｒｔ−ブタノール；
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸；
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン；
ＴＬＣまたはｔｌｃ＝薄層クロマトグラフィー；
ＴＹＲ＝チロシン；
μＬ＝マイクロリットル；
μＭ＝マイクロモル濃度；
μｇ＝マイクログラム；
Ｖｔ＝総容積；
ＷＢＣ＝白血球；
ｗ／ｗ＝重量／重量；
ｗ／ｖ＝重量／容積；
ｖ／ｖ＝容積／容積。
【００７７】
（実施例１）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
（一般）
フラッシュクロマトグラフィーを、Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｆｌａｓｈ  ７５Ｌを用い、８００ｇのＫＰ−Ｓｉｌシリカカートリッジ（３２〜６３μＭ、６０オングストローム、５００〜５５０ｍ２／ｇ）を用いて行った。Ｒｆを、分析薄層クロマトグラフィーについて、正常相についてはＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｓｉｌｉｃａ  Ｇｅｌ  Ｆ（２５４）２５０μＭ厚プレートを、そして逆相についてはＷａｔｍａｎ  ＭＫＣ１８Ｆ  ２００μＭ厚プレートを用いて記録した。
【００７８】
（工程１：２，４−ジクロロ−５−ニトロピリミジンの調製）
５−ニトロウラシルを、Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ（Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９５１，１５６５）の手順に従ってオキシ塩化亜リン酸およびＮ，Ｎ−ジメチルアニリンで処理して、表題化合物を得た。表題化合物はまた、Ｃｉｔｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ（Ｗｅｓｔ  Ｈａｖｅｎ，ＣＴ）から入手可能である。
【００７９】
（工程２：２−（２−ジエチルアミノ−５−ニトロピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロピオン酸，ｔ−ブチルエステルの調製）
−１０℃において、ＴＨＦ（２５０ｍＬ）中の２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロピオン酸（３０．６ｇ、０．１２９ｍｏｌ）の溶液に、添加の間、温度を５℃未満に保ちながら、２，４−ジクロロ−５−ニトロピリミジン（２５ｇ、０．１２９ｍｏｌ）を添加した。一旦添加が完了したら、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３３．７ｍＬ、０．１９４ｍｏｌ）を滴下した。−１０℃で１時間攪拌した後、ジエチルアミン（６６．７３ｍＬ、０．６４５ｍｏｌ）をゆっくりと添加し、次いで反応混合物を一晩、室温まで温めた。この反応混合物をジエチルエーテル（５００ｍＬ）で希釈し、そして有機層を０．２Ｎクエン酸（３×１５０ｍＬ）、水（１×１５０ｍＬ）、および１０％  Ｋ２ＣＯ３（３×１５０ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして減圧濃縮して、黄色の残渣を得た。この残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲルにおいて２０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、３７．３９ｇ（６７％）の表題化合物を黄色泡状物として得た。Ｒｆ＝０．２１（シリカゲルにおいて２５％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）。
【００８０】
（工程３：２−（２−ジエチルアミノ−５−ニトロピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸ｔ−ブチルエステルの調製）
ＣＨ２Ｃｌ２（６００ｍＬ）中の２−（２−ジエチルアミノ−５−ニトロピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−ヒドロキシ−フェニル）プロピオン酸ｔ−ブチルエステル（３１．８０ｇ、０．０７４ｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＡＰ（９．００ｇ、０．０７４ｍｏｌ）を添加した。５分後、トリエチルアミン（１０．２３ｍＬ、０．０７４ｍｏｌ）を滴下した。Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバミルクロリド（１３．８３ｍＬ、０．１１０ｍｏｌ）を滴下し、そして反応物を加熱して、一晩、還流させた。この反応混合物を減圧濃縮し、そしてＥｔＯＡｃ（１Ｌ）中に溶解した。有機相を０．５Ｍクエン酸（３×２５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（３×２５０ｍＬ）、ブライン（１×２５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして減圧濃縮して、３７．０ｇ（９９％）の表題化合物を白色固体として得た。
【００８１】
（工程４：２−（２−ジエチルアミノ−５−アミノピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸ｔ−ブチルエステルの調製）
ＥｔＯＨ（２５０ｍＬ）中の２−（２−ジエチルアミノ−５−ニトロピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−ジメチルカルバモイル−オキシフェニル）プロピオン酸ｔ−ブチルエステル（３７．０ｇ、０．０７３ｍｏｌ）および１０％  Ｐｄ／Ｃ（３．８ｇ、１０ｗｔ％  Ｐｄ）の混合物を、６０ｐｓｉ水素下で、ＴＬＣ（シリカゲルにおいて５０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）が生成物への１００％の変換を示すまで（４８時間）振盪した。次いで、反応混合物をＣｅｌｉｔｅ栓を通して濾過し、そして減圧濃縮して、３２．０ｇ（９２％）の表題化合物を紫色の泡状物として得た。
【００８２】
（工程５：２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）アミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸ｔ−ブチルエステルの調製）
２−（２−ジエチルアミノ−５−アミノピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシ−フェニル）プロピオン酸ｔ−ブチルエステル（３２．０ｇ、０．０６７ｍｏｌ）のピリジン（１２０ｍＬ）溶液を、ドライアイス／ＣＨ３ＣＮ浴を用いて−２０℃に冷却した。混合物を３０分間攪拌し、次いでｐ−フルオロベンゼンスルホニルクロリド（１３．１８ｇ、０．０６７ｍｏｌ）をゆっくりと添加した。反応物を−２０℃で４．５時間攪拌し、次いで３−ジメチルアミノプロピルアミン（８．５２ｍＬ、０．０６７ｍｏｌ）を添加し、次いで混合物を一晩、室温まで温めた。反応物を減圧濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（１Ｌ）中に溶解し、そして有機相を０．５Ｍクエン酸（３×９００ｍＬ）、水（１×９００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（３×９００ｍＬ）、ブライン（１×９００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして減圧濃縮して、褐色の残渣を得た。この残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲルにおいて５０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、３３．０４ｇ（７７％）の表題化合物を黄色泡状物として得た。Ｒｆ＝０．５４（シリカゲルにおいて３：２のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）。
【００８３】
（工程６：２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸ｔ−ブチルエステルの調製）
アセトン（５１０ｍＬ）中２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）アミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチル−カルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸ｔ−ブチルエステル（３３．０４ｇ、０．０５２ｍｏｌ）の溶液にＫ２ＣＯ３（８．６９ｇ、０．０６３ｍｏｌ）を添加し、そして混合物を１０分間、室温で攪拌した。次いで、硫酸ジメチル（５．９５ｍＬ、０．０６３ｍｏｌ）をゆっくりと添加し、そして反応混合物を室温で一晩攪拌した。反応混合物を減圧濃縮し、そして残渣をＥｔＯＡｃ（６００ｍＬ）中に溶解した。有機相を水（２×４００ｍＬ）、ブライン（２×４００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして減圧濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲルにおいて２：１のヘキサン／ＥｔＯＡｃ）によって精製して、２８．６９ｇ（８５％）の表題化合物を白色固体として得た。
【００８４】
（工程７：２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸ヒドロクロリドの調製）
２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］−ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸ｔ−ブチルエステル（２８．６９ｇ、０．０４４ｍｏｌ）のギ酸（５００ｍＬ）溶液を７０℃まで２時間加熱し、次いで減圧濃縮した。残渣をギ酸（５００ｍＬ）中に再度溶解し、次いで７０℃にて２時間再度加熱し、次いで再度、減圧濃縮した。残渣をギ酸（５００ｍＬ）中に再度溶解し、次いで７０℃にて１時間再度加熱した。溶液の容積を９０％減少させ、次いで１．０Ｍ  ＨＣｌ（４４ｍＬ、０．０４４ｍｏｌ）および蒸留水（４９０ｍＬ）で処理した。得られた均質な溶液を減圧濃縮し、次いで蒸留水（１００ｍＬ）を添加し、そして均質な溶液を１４日間にわたって凍結乾燥して、２６．７６ｇ（９６％）の表題化合物を白色固体として得た。
【００８５】
【数２−１】
2005529155.tif 000012
（実施例２）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−クロロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程６および工程７を、実施例１についての通りに実施した。工程５を、４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに４−クロロベンゼンスルホニルクロリドを用いて実施した。
【００８６】
【数２−２】
2005529155.tif 000013
（実施例３）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程６および工程７を、実施例１についての通りに実施した。工程５を、４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに３，４−ジフルオロベンゼンスルホニルクロリドを用いて実施した。
【００８７】
【数３】
2005529155.tif 000014
（実施例４）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジクロロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程６および工程７を、実施例１についての通りに実施した。工程５を、４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに３，４−ジクロロベンゼンスルホニルクロリドを用いて実施した。
【００８８】
【数４】
2005529155.tif 000015
（実施例５）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（ベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルボニルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程６および工程７を、実施例１についての通りに実施した。工程５を、４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりにベンゼンスルホニルクロリドを用いて実施した。
【００８９】
【数５】
2005529155.tif 000016
（実施例６）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程６および工程７を、実施例１についての通りに実施した。工程５を、４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに２−フルオロベンゼンスルホニルクロリドを用いて実施した。
【００９０】
【数６】
2005529155.tif 000017
（実施例７）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３−フルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程６および工程７を、実施例１についての通りに実施した。工程５を、４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに３−フルオロベンゼンスルホニルクロリドを用いて実施した。
【００９１】
【数７】
2005529155.tif 000018
（実施例８）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）イソプロピルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２および工程３を、実施例１についての通りに実施した。その後、工程４および工程６を、１ポット中で、以下の手順に従って達成した。その後、工程５および工程７を、実施例１についての通りに実施した。
【００９２】
【数８】
2005529155.tif 000019
（２−（２−ジエチルアミノ−５−イソプロピルアミノピリミジン−４−イル）−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸ｔ−ブチルエステルの調製についての代替的１ポット手順）
ＥｔＯＨ（１５ｍＬ）中の２−（２−ジエチルアミノ−５−ニトロピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸ｔ−ブチルエステル（５．０ｇ、０．０１０ｍｏｌ）、氷酢酸（１０滴）、アセトン（２．１９ｍＬ、０．０３０ｍｏｌ）、および酸化白金（０．２５０ｇ、５ｗｔ％）の混合物を、４５ｐｓｉ水素において、ＴＬＣ（５０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）が生成物への１００％の変換を示すまで（２０時間）水素付加した。次いで、反応混合物を、Ｃｅｌｉｔｅ栓を通して濾過し、そして減圧濃縮して、褐色の残渣を得た。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（４：１のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、３．５４ｇ（７０％）の９を紫色の泡状物として得た。
【００９３】
（実施例９）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程５および工程７を、実施例１についての通りに実施した。工程６を、硫酸ジメチルの代わりにヨウ化エチルを用いて実施した。
【００９４】
【数９】
2005529155.tif 000020
（実施例１０）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）イソプロピルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程６および工程７を、実施例８についての通りに実施した。工程５を、４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに３，４−ジフルオロベンゼンスルホニルクロリドを用いて実施した。
【００９５】
【数１０】
2005529155.tif 000021
（実施例１１）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−クロロベンゼンスルホニル）イソプロピルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程６および工程７を、実施例８についての通りに実施した。工程５を、４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに４−クロロベンゼンスルホニルクロリドを用いて実施した。
【００９６】
【数１１】
2005529155.tif 000022
（実施例１２）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程６および工程７を、実施例９についての通りに実施した。工程５を、４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに３，４−ジフルオロベンゼンスルホニルクロリドを用いて実施した。
【００９７】
【数１２】
2005529155.tif 000023
（実施例１３）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−クロロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程６および工程７を、実施例９についての通りに実施した。工程５を、４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに４−クロロベンゼンスルホニルクロリドを用いて実施した。
【００９８】
【数１３】
2005529155.tif 000024
（実施例１４）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）シクロプロピルメチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイル−オキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程５および工程７を、実施例１についての通りに実施した。工程６を、硫酸ジメチルおよび炭酸カリウムの代わりにブロモメチルシクロプロパンおよび炭酸セシウムを用いて実施した。
【００９９】
【数１４】
2005529155.tif 000025
（実施例１５）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジフルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程６および工程７を、実施例１についての通りに実施した。工程５を、４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに３，５−ジフルオロベンゼンスルホニルクロリドを用いて実施した。
【０１００】
【数１５】
2005529155.tif 000026
（実施例１６）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程５および工程７を、実施例１５についての通りに実施した。工程６を、硫酸ジメチルの代わりにヨウ化エチルを用いて実施した。
【０１０１】
【数１６】
2005529155.tif 000027
（実施例１７）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程６および工程７を、実施例１についての通りに実施した。工程５を、４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに２，４−ジフルオロベンゼンスルホニルクロリドを用いて実施した。
【０１０２】
【数１７】
2005529155.tif 000028
（実施例１８）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程５および工程７を、実施例１７についての通りに実施した。工程６を、硫酸ジメチルの代わりにヨウ化エチルを用いて実施した。
【０１０３】
【数１８】
2005529155.tif 000029
（実施例１９）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジクロロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程６および工程７を、実施例１についての通りに実施した。工程５を、４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに３，５−ジクロロベンゼンスルホニルクロリドを用いて実施した。
【０１０４】
【数１９】
2005529155.tif 000030
（実施例２０）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（３，５−ジクロロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程５および工程７を、実施例１９についての通りに実施した。工程６を、硫酸ジメチルの代わりにヨウ化エチルを用いて実施した。
【０１０５】
【数２０】
2005529155.tif 000031
（実施例２１）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）−ｎ−プロピルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程５および工程７を、実施例１についての通りに実施した。工程６を、硫酸ジメチルの代わりにヨウ化１−プロピルを用いて実施した。
【０１０６】
【数２１】
2005529155.tif 000032
（実施例２２）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）アリルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程５および工程７を、実施例１についての通りに実施した。工程６を、硫酸ジメチルの代わりに臭化アリルを用いて実施した。
【０１０７】
【数２２】
2005529155.tif 000033
（実施例２３）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）イソブチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程５および工程７を、実施例１についての通りに実施した。工程６を、硫酸ジメチルの代わりにヨウ化イソブチルを用いて実施した。ＭＳ  ｍ／ｚ  ６３１．２（ＭＨ＋）。
【０１０８】
（実施例２４）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）−ｎ−ブチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程５および工程７を、実施例１についての通りに実施した。工程６を、硫酸ジメチルの代わりにヨウ化１−ブチルを用いて実施した。
【０１０９】
【数２３】
2005529155.tif 000034
（実施例２５）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，５−ジフルオロベンゼンスルホニル）メチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程６および工程７を、実施例１についての通りに実施した。工程５を、４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに２，６−ジフルオロベンゼンスルホニルクロリドを用いて実施した。
【０１１０】
【数２４】
2005529155.tif 000035
（実施例２６）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２．３−ジフルオロベンゼンスルホニル）エチルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程６および工程７を、実施例１についての通りに実施した。工程５を、４−フルオロベンゼンスルホニルクロリドの代わりに２，３−ジフルオロベンゼンスルホニルクロリドを用いて実施した。２，３−ジフルオロベンゼンスルホニルクロリドを、以下の手順によって調製した。
【０１１１】
【数２５】
2005529155.tif 000036
（２，３−ジフルオロベンゼンスルホニルクロリドの調製）。
【０１１２】
以下の手順を、２つのフラスコを用いて実行した。第１のフラスコでは、２，３−ジフルオロアニリン（２．０ｇ、０．０１５ｍｏｌ）を濃ＨＣｌ（１５．９ｍＬ）中に溶解し、そして得られた溶液を、氷／ＮａＣｌ浴を用いて−５℃まで冷却した。蒸留水（１３．６ｍＬ）中の亜硝酸ナトリウム（１．１８ｇ、０．０１７ｍｏｌ）の溶液を、温度を０℃未満に維持しながら、攪拌しながら少しずつ添加し、そして混合物を１０分間攪拌した。第２のフラスコでは、塩化チオニル（５．０８ｍＬ、０．０６９ｍｏｌ）を、氷／ＮａＣｌ浴を用いて予め−５℃に冷却した蒸留水（３０．６ｍＬ）に滴下した。得られた溶液を室温まで温め、次いでＣｕ（Ｉ）Ｃｌ（０．０８ｇ、０．７７ｍｍｏｌ）を添加し、次いで反応混合物を−５℃まで再度冷却した。連続して冷却および攪拌しながら、第１フラスコの内容物を２ｍＬずつ第２フラスコの内容物へと添加し、そして混合物を３０分間攪拌し、この間に沈澱物が形成された。この沈澱物を濾過により単離し、冷たい水で洗浄し、そして減圧下で保存して、３．２５ｇ（９８％）の１０を白色固体として得た。
【０１１３】
（実施例２７）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程５および工程７を、実施例１についての通りに実施した。工程６を、硫酸ジメチルの代わりに臭化プロパルギルを用いて実施した。
【０１１４】
【数２６】
2005529155.tif 000037
（実施例２８）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（２，４−ジフルオロベンゼンスルホニル）プロパルギルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイルオキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程５および工程７を、実施例１７についての通りに実施した。工程６を、硫酸ジメチルの代わりに臭化プロパルギルを用いて実施した。
【０１１５】
【数２７】
2005529155.tif 000038
（実施例２９）
（２−｛２−ジエチルアミノ−５−［（４−フルオロベンゼンスルホニル）−（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−３−（４−ジメチルカルバモイル−オキシフェニル）プロピオン酸の調製）
工程１、工程２、工程３、工程４、工程５および工程７を、実施例１についての通りに実施した。工程６を、硫酸ジメチルおよび炭酸カリウムの代わりに三フッ化２，２，２−トリフルオロエチルおよび炭酸セシウムを用いて実施した。
【０１１６】
【数２８】
2005529155.tif 000039
（実施例Ａ）
（α４β１インテグリン接着アッセイ：ヒト血漿フィブロネクチンに対するＪｕｒｋａｔＴＭ細胞の接着）
（手順）
９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ  ３５９０  ＥＩＡプレート）を、ヒトフィブロネクチン（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ，カタログ番号３３０１６−０２３）を１０μｇ／ｍＬの濃度にて、一晩、４℃にて用いてコーティングした。次いで、これらのプレートを、生理食塩水中のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ；０．３％）の溶液でブロックした。ＪｕｒｋａｔＴＭ細胞（対数期増殖に維持した）を、Ｃａｌｃｅｉｎ  ＡＭを製造業者の指示に従って用いて標識し、そして２×１０６細胞／ｍＬの濃度にてＨｅｐｅｓ／生理食塩水／ＢＳＡ中に懸濁した。次いで、これらの細胞を試験化合物およびコントロール化合物に３０分間、室温にて曝露し、その後、フィブロネクチンでコーティングしたプレートの個々のウェルに移した。接着を、３７℃にて３５分間生じさせた。次いで、これらのウェルを、穏やかな吸引および新鮮な生理食塩水でのピペッティングによって洗浄した。残りの接着細胞に会合した蛍光を、蛍光プレートリーダーをＥＸ  ４８５／ＥＭ  ５３０にて用いて定量した。
【０１１７】
細胞培養物を、定常期のＪｕｒｋａｔＴＭ細胞を１日目に１：１０に、そして２日目に１：２に最初に分けることにより調製して、３日目にアッセイを行った。１日目に１：１０に分けた細胞を、４日目のアッセイのために３日目に１：４に分けた。
【０１１８】
アッセイプレートを、ＰＢＳ＋＋中で、１０μｇ／ｍＬにてＧｉｂｃｏ／ＢＲＬ  Ｈｕｍａｎ  Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ（カタログ番号３３０１６−０２３）の作業溶液を最初に調製することにより調製した。次いで、Ｃｏｓｔａｒ  ３５９０  ＥＩＡプレートを、５０μＬ／ウェルを用いて２時間、室温にて（しかし、これはまた、４℃にて一晩放置し得る）コーティングした。最終的に、このプレートを吸引し、そしてＨｅｐｅｓ／生理食塩水緩衝液（１００μＬ／ウェル）をＲＴにて１時間用いてブロックし、続いて１５０μＬのＰＢＳ＋＋を用いて３回洗浄した。
【０１１９】
化合物希釈を、以下の通りに化合物の１：３の連続希釈物を調製することにより達成した。各プレート（４化合物／プレート）について、６００μＬを、Ｔｉｔｅｒｔｕｂｅラック中の４つのＢｉｏ−Ｒａｄ  Ｔｉｔｅｒｔｕｂｅに添加した。充分な化合物を各適切なチューブに添加して、当該分野で周知の方法を用いて、２×濃度を得た。Ｆａｌｃｏｎ  Ｆｌｅｘｉプレートを用いて、１００μＬのＨｅｐｅｓ／生理食塩水緩衝液またはヒト血清をＢ行〜Ｇ行に添加した。ピペッタに均質に間隔を空けて４つのチップを備えた、１８０μＬに設定したマルチチャネルピペッタを用いた。各セットの４つのチューブを５回混合し、そして１８０μＬの２×化合物を、Ｂ行の各化合物希釈物の列に最初に移し、Ａ行を空のままにした。１８０μＬをＡ行の他のウェルに添加した。混合後のそれぞれの時点でチップを交換して、５０μＬを次の希釈物に移し、そして５回混合することによりこのプレートにおいて系列希釈を行った。希釈をＦ行において停止した。Ｇ行には、化合物は存在しなかった。
【０１２０】
Ｈｅｐｅｓ／生理食塩水緩衝液またはヒト血清中の２０μｇ／ｍＬの２１／６抗体溶液はポジティブコントロールであり、そして細胞懸濁プレートに添加するために試薬トラフ中に取っておいた。
【０１２１】
細胞染色を、５０ｍＬチューブ中での遠心分離（１１００ｒｐｍにて５分間）中で対数期ＪｕｒｋａｔＴＭ細胞を最初に収集することによって達成した。これらの細胞を、５０ｍＬ  ＰＢＳ＋＋中に再懸濁し、スピンし、そして２０ｍＬ  ＰＢＳ＋＋中に再懸濁した。これらの細胞を、２０μＬのＣａｌｃｅｉｎ  ＡＭを３０分間分間、Ｒ．Ｔ．にて添加することにより染色した。容積を、Ｈｅｐｅｓ／生理食塩水緩衝液を用いて５０ｍＬにし、そしてこれらの細胞を計数し、スピンし、そしてＨｅｐｅｓ／生理食塩水緩衝液またはヒト血清中に２×１０６細胞／ｍＬに再懸濁した。
【０１２２】
これらの化合物を、以下の手順を用いてインキュベートした。新たなフレキシ（ｆｌｅｘｉ）プレートにおいて、６５μＬの染色細胞をＢ行〜Ｈ行に添加した。次いで、６５μＬの２×化合物をプレート設定後に適切な行に添加し、そして３回混合した。６５μＬの２×−２１／６抗体をＨ行に添加し、そして３回混合した。最終的に、このプレートを室温で３０分間インキュベートした。
【０１２３】
フィブロネクチン接着を、以下の溶解手順の後に蛍光プレートリーダーをＥＸ  ４８５／ＥＭ  ５３０にて用いて測定した。インキュベーション後、これらの細胞を３回混合し、そして１００μＬを、フィブロネクチンでコーティングしたプレートに移し、そして３７℃で約３５分間インキュベートした。１００μＬのＲ．Ｔ．ＰＢＳ＋＋をウェルの側面に穏やかにピペッティングし、そしてプレートを９０度回転させて吸引することにより、各プレートを行毎に洗浄した。この手順を、合計３回の洗浄について繰り返した。ウェルの側面にピペッティングすることにより洗浄した後、各ウェルに１００μＬを満たした。
【０１２４】
ＩＣ５０値を、ヒト血清の存在下およびヒト血清の不存在下の両方において、各化合物について算出した。ＩＣ５０は、増殖または活性が５０％阻害される濃度である。データを、以下の表に表す。
【０１２５】
【表２】
2005529155.tif 000040
【０１２６】
【表３】
2005529155.tif 000041
【０１２７】
【表４】
2005529155.tif 000042
【０１２８】
【表５】
2005529155.tif 000043
（実施例Ｂ）
（α４β１に対する候補化合物の結合の決定のためのインビボ飽和アッセイ）
以下は、次の実施例に記載される実験的自己免疫脳脊髄炎（「ＥＡＥ」）モデルまたは他のインビボモデルにおいて活性であるために、化合物について必要とされる血漿レベルを決定するためのインビトロアッセイを記載する。
【０１２９】
対数増殖Ｊｕｒｋａｔ細胞を洗浄し、そして２０μｇ／ｍＬの１５／７抗体（Ｙｅｄｎｏｃｋら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９５）２７０（４８）：２８７４０）を含む正常動物血漿中に再懸濁する。
【０１３０】
Ｊｕｒｋａｔ細胞を、標準曲線のための標準的な１２点系列希釈を用いた６６μＭ〜０．０１μＭの種々の濃度で既知の候補化合物量を含む正常血漿サンプル、または候補化合物処置動物の末梢血から得た血漿サンプルのいずれかに２倍希釈する。
【０１３１】
次いで、細胞を３０分間、室温にてインキュベートし、２％ウシ胎仔血清および各１ｍＭの塩化カルシウムおよび塩化マグネシウムを含むリン酸緩衝化生理食塩水（「ＰＢＳ」）（アッセイ培地）を用いて２回洗浄して、未結合の１５／７抗体を除去する。
【０１３２】
次いで、細胞を、研究される動物種由来の５％血清との共インキュベーションによって任意の非特異的交差反応性のために吸着させたフィコエリトリン結合体化ヤギＦ（ａｂ’）２抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ，Ｗｅｓｔｂｒｏｏｋ，ＭＥ）（１：２００）に曝露し、そして暗所にて４℃で３０分間インキュベートする。
【０１３３】
細胞を、アッセイ培地を用いて２回洗浄し、そしてアッセイ培地に再懸濁する。次いで、これらを、標準的な蛍光活性化セルソータ（「ＦＡＣＳ」）分析をＹｅｄｎｏｃｋら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９５，２７０：２８７４０に記載の通りに用いて分析する。
【０１３４】
次いで、このデータを、例えば、規定用量応答様式で、用量に対する蛍光としてグラフにする。曲線の上のプラトーをもたらす用量レベルは、インビボモデルにおいて効力を得るために必要なレベルを表す。
【０１３５】
このアッセイをまた用いて、他のインテグリン（例えば、α４β２に最も近縁のインテグリンであるα９インテグリン（Ｐａｌｍｅｒら，１９９３，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏ．，１２３：１２８９））の結合部位を飽和するために必要な血漿レベルを決定し得る。このような結合は、α９β１インテグリンによって媒介される炎症状態（例として、慢性喘息に伴って生じる気道の過剰応答性および閉塞、アテローム性動脈硬化症における平滑筋細胞増殖、血管形成術後の脈管閉塞、腎臓病の結果としての線維症および糸球体瘢痕、大動脈狭窄、慢性関節リウマチにおける滑膜の肥大、ならびに潰瘍性大腸炎およびクローン病の進行に伴って生じる炎症および瘢痕が挙げられる）についてのインビボ有用性の予測である。
【０１３６】
従って、上記のアッセイは、α９β１インテグリンの結合を測定するために、Ｊｕｒｋａｔ細胞の代わりに、α９β１インテグリン（Ｙｏｋｏｓａｋｉら，１９９４，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６９：２６６９１）をコードするｃＤＮＡでトランスフェクトしたヒト結腸癌細胞株ＳＷ  ４８０（ＡＴＴＣ番号ＣＣＬ２２８）を用いて実施され得る。コントロールとして、他のαサブユニットおよびβ１サブユニットを発現するＳＷ  ４８０細胞を用い得る。
【０１３７】
従って、本発明の別の局面は、哺乳動物患者における疾患を処置するための方法に関し、この疾患は、α９β１によって媒介され、そしてこの方法は、この患者に、治療有効量の本発明の化合物を投与する工程を包含する。このような化合物は好ましくは、本明細書中の上記の薬学的組成物中で投与される。有効な毎日の投与は、患者の年齢、体重、状態に依存する。これらの要因は、担当医によって容易に確認され得る。しかし、好ましい実施形態では、これらの化合物は、１日当り約２０μｇ／ｋｇ〜約５００μｇ／ｋｇで投与される。
【０１３８】
（実施例Ｃ）
（バイオアベイラビリティの決定のための、カセット投与および血清分析）
経口バイオアベイラビリティを、ラットにカセット（すなわち、１つの投与溶液あたり６つの化合物の混合物）を投与することによりスクリーニングした。このカセットは、１０ｍｇ／ｋｇの総用量で、５つの試験品および標準化合物を含んでいた。各化合物／試験品を、等モル量の１Ｎ  ＮａＯＨを用いてナトリウム塩に変換し、そして水中に２ｍｇ／ｍＬに溶解した。このカセットを、６つの溶液の各々の等容積を混合することにより調製した。カセット投与溶液を充分に混合し、次いでｐＨを７．５〜９に調整した。投与溶液を、本研究の１日前に調製し、そして室温にて一晩攪拌した。
【０１３９】
Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからの雄性Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット（６〜８週齡）を、このスクリーニングにおいて用いた。ラットを少なくとも１日間検疫し、そして食物および水に連続的に接近させた。このカセットの投与の前夜に、これらのラットを約１６時間断食させた。
【０１４０】
４匹のＳＤラットを各カセットに割り当てた。１用量の投与溶液を各ラットに経口投与した。投与容積（５ｍＬ／ｋｇ）および時間を記録し、そして投与後２時間ラットに給餌した。
【０１４１】
血液サンプルを、以下の時点で心臓穿刺を介して収集した：４時間、８時間および１２時間。血液収集の直前に、ラットを１０〜２０秒間以内にＣＯ２ガスで麻酔した。１２時間のサンプルを収集した後、ラットをＣＯ２窒息を介して安楽死させ、続いて頚椎脱臼した。
【０１４２】
血液サンプルを、室温未満の温度（４℃）でヘパリン処理したマイクロテイナー（ｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ）チューブ中に保持し、その後、これらを加工した。血液サンプルを遠心分離し（１００００ｒｐｍにて５分間）、そして血漿サンプルを取り出し、そして薬物レベルについて分析するまで−２０℃フリーザー中で保存した。血漿中の薬物レベルを、直接的血漿沈澱についての以下のプロトコルを用いて分析した。
【０１４３】
１００μＬの試験血漿、１５０μＬのメタノールをこの順に添加し、続いて１０〜２０秒間ボルテックスすることにより、インビボ血漿サンプルを１．５ｍＬの９６ウェルプレート中に調製した。アセトニトリル中０．０５ｎｇ／μＬの内部標準（１５０μＬ）を添加し、そして３０秒間ボルテックスした。
【０１４４】
１００μＬのコントロールマウス血漿、続いて１５０μＬのメタノールの順で添加し、そして１０〜２０秒間ボルテックスすることにより、標準曲線サンプルを１．５ｍＬの９６ウェルプレート中に調製した。アセトニトリル中０．０５ｎｇ／μＬの内部標準（１５０μＬ）を添加し、そして３０秒間ボルテックスした。これらのサンプルを、５０％メタノール中の０〜２００ｎｇ（１０種の濃度）の目的の化合物でスパイクして、０．５ｎｇ／ｍＬ〜２，０００ｎｇ／ｍＬの標準曲線範囲を得た。再度、このサンプルを３０秒間ボルテックスした。
【０１４５】
次いで、これらのサンプルを、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ微量遠心機中で３０００ｒｐｍにて２０〜３０分間スピンし、その後、上清の８０％〜９０％をきれいな９６ウェルプレートに移した。次いで、これらのサンプルが乾燥するまで、有機溶媒をエバポレートした（４０℃にてＮ２下／３０〜６０分間（ＺｙｍａｒｋＴｕｒｂｏｖａｐ））。
【０１４６】
次いで、残渣を２００〜６００Ｌ移動相（５０％  ＣＨ３ＯＨ／０．１％  ＴＦＡ）中に溶解した。次いで、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを、ＰＥ−Ｓｃｉｅｘ  ＡＰＩ−３０００三重四極（ｑｕａｄｕｒｐｏｌｅ）質量分析計（ＳＮ０７４９７０７）（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ，Ｓｅｒｉｅｓ２００オートサンプラー）および島津１０Ａポンプを用いて泳動した。ＰＥ−Ｓｃｉｅｘ  Ａｎａｌｙｓｔ（ｖ１．１）を用いて取得を行い、そしてデータの解析および定量を、ＰＥ−Ｓｃｉｅｘ  Ａｎａｌｙｓｔ（ｖ１．１）を用いて達成した。５〜５０μＬのサンプル容積を、２５％  ＣＨ３ＯＨ、０．１％  ＴＦＡ−１００％  ＣＨ３ＯＨ、０．１％  ＴＦＡの移動相を用いて逆相ＴｈｅｒｍｏＨｙｐｅｒｓｉｌ  ＤＡＳＨ−１８カラム（Ｋｅｙｓｔｏｎｅ  ２．０×２０ｍｍ、５μｍ、ＰＮ：８８２３０２５−７０１）に注入した。泳動時間は、約３００μＬ／分の流速にて約８分間であった。
【０１４７】
曲線下面積（ＡＵＣ）を、ｔ＝０から最後のサンプリング時間ｔｘまでの線形規則（ｌｉｎｅａｒ  ｔｒａｐｅｚｏｉｄａｌ  ｒｕｌｅ）を用いて算出した（Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，Ｗｏｌｆｇａｎｇ  Ａ．ＲｉｔｓｃｈｅｌおよびＧｒｅｇｏｒｙ  Ｌ．Ｋｅａｒｎｓ，第５版，１９９９を参照のこと）。
【０１４８】
ＡＵＣ０→ｔｘ＝Ｓ（（Ｃｎ＋Ｃｎ＋１）／２））・（ｔｎ＋１−ｔｎ）［（μｇ／ｍＬ）ｈ］。
【０１４９】
カセット投与パラダイムの脈管外投与後４時間、８時間および１２時間のサンプルの場合、ＡＵＣを、ｔ＝０〜ｔ＝１２ｈで算出した。ＡＵＣ０→１２ｈ値を各個々の動物について算出した。そして平均ＡＵＣ０→１２ｈを以下の表に報告する。
【０１５０】
【表６】
2005529155.tif 000044
【０１５１】
【表７】
2005529155.tif 000045
（実施例Ｄ）
（喘息モデル）
α４β１インテグリンによって媒介される炎症状態としては、例えば、好酸球流入、気道過剰応答性および慢性喘息に伴って生じる閉塞が挙げられる。以下は、喘息を処置する際に使用するための本発明の化合物のインビボでの影響を研究するために用いた喘息の動物モデルを記載する。
【０１５２】
（ラット喘息モデル）
Ｃｈａｐｍａｎら，Ａｍ  Ｊ．Ｒｅｓｐ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ，．１５３  ４，Ａ２１９（１９９６）およびＣｈａｐｍａｎら，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐ．Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １５５：４，Ａ８８１（１９９７）（これらは両方とも、それらの全体が参考として援用される）によって記載される手順に従う。オボアルブミン（ＯＡ；１０μｇ／ｍＬ）を水酸化アルミニウム（１０ｍｇ／ｍＬ）と混合し、そしてＢｒｏｗｎ  Ｎｏｒｗａｙラットに０日目に（ｉ．ｐ．）注射した。アジュバントを伴ってのＯＡの注射を、７日目および１４日目に繰り返した。２１日目に、感作した動物をプラスチックチューブ中に拘束し、そして鼻のみを曝露する系においてＯＡ（１０ｍｇ／ｋｇ）のエアロゾルに（６０分間）曝露した。動物を７２時間後にペントバルビタール（２５０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を用いて屠殺する。肺を、気管カニューレを介し、３アリコート（４ｍＬ）のハンクス溶液（ＨＢＳＳ×１０、１００ｍＬ；ＥＤＴＡ  １００ｍＭ、１００ｍＬ；ＨＥＰＥＳ  １Ｍ、２５ｍＬ；Ｈ２Ｏを用いて１Ｌにした）を用いて洗浄した；回収した細胞をプールし、そして回収した流体の総容積をハンクス溶液の添加によって１２ｍＬに調整した。総細胞を計数し（Ｓｙｓｍｅｘマイクロセル計数器Ｆ−５００，ＴＯＡ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ  Ｏｔｄ．，Ｊａｐａｎ）、そして回収した流体を（約１０６細胞／ｍＬになるように）希釈し、そしてアリコート（１００μＬ）を遠心機（Ｃｙｔｏｓｐｉｎ，Ｓｈａｎｄｏｎ，Ｕ．Ｋ．）中にピペッティングすることにより、塗沫標本（ｓｍｅａｒ）を作製した。塗沫標本を風乾し、メタノール中のファーストグリーン（ｆａｓｔ  ｇｒｅｅｎ）（２ｍｇ／ｍＬ）の溶液を用いて５秒間固定し、そして好酸球、好中球、マクロファージおよびリンパ球を区別するために、エオシンＧ（５秒間）およびチアジン（５秒間）（Ｄｉｆｆ−Ｑｕｉｃｋ，Ｂｒｏｗｎｅ  Ｌｔｄ．Ｕ．Ｋ．）を用いて染色した。１塗沫標本あたり計５００の細胞を、油浸して光学顕微鏡で計数した（×１００）。本発明の化合物を０．５％カルボキシメチルセルロースおよび２％  Ｔｗｅｅｎ８０懸濁物中に処方し、そしてアレルゲンであるオボアルブミンに対して感作したラットに経口投与した。能動的に感作されたＢｒｏｗｎ  Ｎｏｒｗａｙラットの気道におけるアレルゲン誘発性白血球（ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ）蓄積を阻害した化合物は、このモデルにおいて活性であると考えられた。
【０１５３】
（マウス喘息モデル）
化合物をまた、Ｋｕｎｇら，Ａｍ  Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１３：３６０−３６５（１９９５）およびＳｃｈｎｅｉｄｅｒら（１９９９）Ａｍ  Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０：４４８−４５７（１９９９）（これらは各々、それらの全体が参考として援用される）によって記載される手順に従って、急性肺炎症のマウスモデルにおいて評価した。雌性Ｂｌａｃｋ／６マウス（８〜１２週齡）を、２０μｇのｏｖａ（Ｇｒａｄｅ  ４，Ｓｉｇｍａ）および２ｍｇ注射ミョウバン（Ｐｉｅｒｃｅ）を含む０．２ｍＬ  ｏｖａ／ミョウバン混合物の腹腔内注射（ｉ．ｐ．）によって１日目に感作した。追加免疫注射を、１４日目に投与した。マウスを、２８日目および２９日目に、エアロゾル化した１％  ｏｖａ（０．９％生理食塩水中）で２０分間チャレンジした。マウスを安楽死させ、そして気管支肺胞（ｂｒｏｎｃｈａｖｅｏｌａｒ）洗浄液サンプル（３ｍＬ）を３０日目（最初のチャレンジの４８時間後）に収集した。好酸球を、ＦＡＣ／ＦＩＴＣ染色法によって定量した。本発明の化合物を０．５％カルボキシメチルセルロースおよび２％  Ｔｗｅｅｎ８０懸濁物中に処方し、そして、アレルゲンであるオボアルブミンに対して感作したマウスに経口投与した。能動的に感作されたＣ５７ＢＬ／６マウスの気道におけるアレルゲン誘発性白血球蓄積を阻害した化合物を、このモデルにおいて活性であると考えた。
【０１５４】
（ヒツジ喘息モデル）
このモデルは、Ａｂｒａｈａｍら，Ｊ．Ｃｌｉｎ，Ｉｎｖｅｓｔ，９３：７７６−７８７（１９９４）およびＡｂｒａｈａｍら，Ａｍ  Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １５６：６９６−７０３（１９９７）（これらは両方とも、それらの全体が参考として援用される）によって記載される手順を用いる。本発明の化合物は、Ａｓｃａｒｉｓ  ｓｕｕｍ抗原に対して過敏感性であるヒツジに対する静脈内投与（生理食塩水溶液）、経口投与（２％  Ｔｗｅｅｎ８０、０．５％カルボキシメチルセルロース）、およびエアロゾル投与によって評価した。初期抗原誘発性気管支応答を減少させるかおよび／または晩期（ｌａｔｅ−ｐｈａｓｅ）気道応答をブロックする（例えば、抗原誘発性晩期応答および気道過剰応答性（「ＡＨＲ」）に対する保護効果を有する）化合物を、このモデルにおいて活性であると考える。
【０１５５】
吸入したＡｓｃａｒｉｓ  ｓｕｕｍ抗原に対して初期気管支応答および晩期気管支応答の両方を発症することが示されるアレルギーヒツジを、候補化合物の気道への影響を研究するために用いた。２％リドカインを用いた鼻通路の局所麻酔後、１つの外鼻孔を介して食道下部へとバルーンカテーテルを進ませた。次いで、これらの動物を、可橈性光ファイバー気管支鏡をガイドとして用い、他の外鼻孔を通して、カフを付けた気管内チューブとともにインキュベートした。
【０１５６】
腹膜内圧を、Ａｂｒａｈａｍ（１９９４）に従って評価した。エアロゾル（以下の処方を参照のこと）を、Ａｎｄｅｒｓｅｎカスケードインパクタを用いて決定したところ３．２μｍの質量メジアン空気力学的直径を有するエアロゾルを提供する使い捨て医療用ネブライザを用いて生成した。このネブライザを、ソレノイド弁および圧縮空気（２０ｐｓｉ）の供給源からなる線量計系に接続した。このネブライザの出力をプラスチックＴ片に向け、その一端をピストン呼吸器の吸気口へと接続した。ソレノイドバルブを、この呼吸器の吸気サイクルの開始時に１秒間活動させた。エアロゾルを５００ｍＬのＶＴおよび２０呼吸／分の速度にて送達した。０．５％重炭酸ナトリウム溶液のみをコントロールとして用いた。
【０１５７】
気管支応答性を評価するために、カルバコールに対する累積濃度応答曲線を、Ａｂｒａｈａｍ（１９９４）に従って作成した。気管支生検を、処置開始前および処置開始後、ならびに抗原チャレンジの２４時間後に採取した。気管支生検を、Ａｂｒａｈａｍ（１９９４）に従って実施した。
【０１５８】
肺胞マクロファージのインビトロ接着研究をまた、Ａｂｒａｈａｍ（１９９４）に従って実施し、そして接着細胞の百分率を算出した。
【０１５９】
（エアロゾル処方）
０．５％重炭酸ナトリウム／生理食塩水（ｗ／ｖ）中の３０．０ｍｇ／ｍＬの濃度の候補化合物の溶液を、以下の手順に従って調製する。
【０１６０】
（Ａ．０．５％重炭酸ナトリウム／生理食塩水ストック溶液（１００．０ｍＬ）の調製）
【０１６１】
【表８】
2005529155.tif 000046
（手順）
１．０．５ｇ重炭酸ナトリウムを１００ｍＬメスフラスコ中に添加する。
２．約９０．０ｍＬの生理食塩水を添加し、そして溶解するまで超音波処理する。
３．生理食塩水を用いて１００．０ｍＬに合わせ、そして徹底的に混合する。
【０１６２】
（Ｂ．３０．０ｍｇ／ｍＬ候補化合物（１０．０ｍＬ）の調製）
【０１６３】
【表９】
2005529155.tif 000047
（手順）
１．０．３００ｇの候補化合物を１０．０ｍＬメスフラスコ中に添加する。
２．約９．７ｍＬの０．５％重炭酸ナトリウム／生理食塩水ストック溶液を添加する。
３．候補化合物が完全に溶解するまで超音波処理する。
４．０．５％重炭酸ナトリウム／生理食塩水ストック溶液を用いて１０．０ｍＬに合わせ、そして徹底的に混合する。
【０１６４】
（実施例Ｅ）
（Ｃ５７Ｂ６マウスに対する１０日間の毒性研究）
１０日間の研究を実施して、雌性Ｃ５７Ｂ６マウスに対する本発明の化合物の毒性を評価した。この化合物を、各用量レベルにおいて５匹のマウスを用いて、５用量レベル（０（ビヒクルコントロール）、１０、３０、１００、３００および１０００ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ））にて、胃管栄養法によって投与した。全てのレベルについての用量容積は、１０ｍＬ／ｋｇであった。用量溶液または用量懸濁物を、０．５％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）中の２％  Ｔｗｅｅｎ  ８０中に調製し、そして新たな用量溶液または用量懸濁物を、２〜３日毎に調製した。生存中の観察は、体重（研究１日目、２日目、３日目、５日目、７日目、８日目および１１日目）、毎日のケージの側での臨床観察（１〜２回／日）および周期的（研究−１日目、２日目および９日目）の機能的観察バッテリーを含んでいた。
【０１６５】
終了時に、血液サンプルを、臨床的病理（血液学および臨床化学）および薬物レベルのために心臓穿刺によって収集した。ＥＤＴＡ血液サンプルを、総白血球数、赤血球数、ヘモグロビン、ヘマトクリット、赤血球指数（ＭＣＶ、ＭＣＨ、ＭＣＨＣ）、血小板およびＷＢＣの５部の識別（好中球、リンパ球、単球、好酸球および好塩基性球）に関して分析した。ヘパリン処理した血漿サンプルを、アラニントランスアミナーゼ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ、アルカリホスファターゼ、総ビリルビン、アルブミン、タンパク質、カルシウム、グルコース、尿素窒素、クレアチニン、コレステロールおよびトリグリセリドに関して分析した。
【０１６６】
血液収集後、死体を剖検し、そして器官（肝臓、脾臓、腎臓、心臓および胸腺）の重さを量った。組織サンプル（脳、唾液腺、胸腺、心臓、肺、肝臓、腎臓、副腎脾臓、胃、十二指腸、回腸、結腸および子宮／卵巣）を収集し、そしてホルマリン固定した。ビヒクルコントロールならびに３００ｍｐｋ群および１０００ｍｐｋ群の動物由来の組織をＨ＆Ｅ染色ガラススライドに処理し、そして組織病理学的病変について評価した。
【０１６７】
体重変化、絶対的および相対的な器官体重および臨床的病理の結果を、Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いたＤｕｎｎｅｔの複数比較試験によってビヒクルコントロールと比較した統計学的有意差について分析した。機能的観察バッテリーの結果を、Ｄｕｎｎｅｔ、Ｆｉｓｈｅｒの精密試験を用いて差について、そして用量トレンド効果についてＳＡＳソフトウェアを用いたＣｏｃｈｒａｎ−Ｍａｎｔｅｌ−Ｈａｅｎｓｚｅｌ相関試験によって分析した。
【０１６８】
従来の経口処方を用いて、本発明の化合物は、このモデルにおいて活性である。
【０１６９】
（実施例Ｆ）
（ラットにおけるアジュバント誘発性関節炎）
アジュバント誘発性関節炎（「ＡＩＡ」）は、Ｌｅｗｉｓラットの尾部の基部にＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓを注射することによって誘発される、慢性関節リウマチ（ＲＡ）の研究において有用な動物モデルである。注射後１０日目と１５日目との間に、動物は、重篤な、進行性関節炎を発達させる。
【０１７０】
一般に、化合物を、ラットにおいてアジュバント誘発性浮腫をもたらす後足膨潤および骨損傷を変化させるその能力について試験する。ＡＩＡから生じる後足膨潤の阻害を定量するために、２相の炎症を規定した：（１）一次注射および二次注射した後足、ならびに（２）二次注射していない後足（これは一般に、注射した足において炎症の誘発から約１１日目に発症し始める）。後者の型の炎症の減少は、免疫抑制活性の指標である。Ｃｈａｎｇ，Ａｒｔｈ．Ｒｈｅｕｍ．，２０，１１３５−１１４１（１９７７）を参照のこと。
【０１７１】
ＲＡ（例えば、ＡＩＡ）の動物モデルを用いて、この疾患の初期段階に関与する細胞事象を研究することが可能になる。マクロファージおよびリンパ球に対するＣＤ４４発現は、アジュバント関節炎の初期発症の間にアップレギュレートされ、一方、ＬＦＡ−１発現は、この疾患の発症の晩期においてアップレギュレートされる。アジュバント関節炎の初期段階で接着分子と内皮との間の相互作用を理解することは、ＲＡの処置において用いられ得る方法において顕著な前進をもたらし得る。
【国際調査報告】
2005529155.tif 000054