(57)【要約】本発明は、耐性突然変異を誘発する抗感染及び／又は抗腫瘍化学療法治療相と前記耐性突然変異に対する治療的ワクチン接種相とを含む感染性及び腫瘍病状の治療に関し、また、前記治療に関連して使用される薬剤に関する。より詳細には、本発明は、ＨＩＶ逆転写酵素配列の８〜８０アミノ酸のペプチドで、前記酵素の野生型配列と比較して、ＨＩＶ逆転写酵素のヌクレオシドまたは非ヌクレオシド類似体による治療に反応して誘発される少なくとも１つの突然変異を含むものに関する。本発明はまた、前記突然変異配列に対して特異的な免疫応答を誘導するための、また、ＨＩＶ逆転写酵素のヌクレオシドまたは非ヌクレオシド類似体の投与の有効性を増大または延長させるための、前記ペプチドに基づく薬剤組成物またはワクチンに関する。本発明はさらに、ワクチンの注射後の特異的免疫応答を評価するための前記ペプチド配列から得られるエピトープに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
耐性突然変異誘発性抗感染性及び／又は抗腫瘍化学療法治療相とこれらの耐性突然変異に対する治療的ワクチン接種相とを含んでなる感染性及び／又は腫瘍の病態を治療する方法。
【請求項２】
感染性及び／又は抗腫瘍病状の治療用の耐性突然変異誘発性医薬品を含んでなる第１成分と、
これらの耐性突然変異に対するワクチンを含んでなる第２成分との、少なくとも２つの成分を含んでなり、２つの成分が同時に、個別にまたは経時的に順次使用するためのものである感染性または腫瘍の病態を治療するための薬剤。
【請求項３】
ＮＲＴＩ及び／又はＮＮＲＴＩの投与後においてＨＩＶ感染患者に認められ、治療なしで、ＨＩＶ逆転写酵素の確立された対照標準配列に関して単一または複数の置換及び／又は挿入による少なくとも１つの突然変異を含んでなり、Ｚ１及びＺ２が少なくとも任意の１つのアミノ酸である配列Ｚ１−Ｙ−Ｖ−Ｄ−Ｄ−Ｚ２、Ｚ１−Ｙ−Ｉ−Ｄ−Ｄ−Ｚ２及びＺ１−Ｙ−Ｌ−Ｄ−Ｄ−Ｚ２のペプチドを除くＨＩＶ逆転写酵素のこの突然変異配列に対して特異的なＴリンパ球によって媒介される応答を誘導することができる、ＨＩＶ逆転写酵素配列の８〜８０アミノ酸のペプチド。
【請求項４】
好ましくは１５〜５０アミノ酸を含むことを特徴とする請求項３に記載のペプチド。
【請求項５】
そのペプチド配列が該ペプチドを可溶化または安定化するための１つまたは複数の中性アミノ酸によって先行または後続されている、請求項３または４のいずれかに記載のペプチド。
【請求項６】
少なくとも１つの突然変異Ｍｐを含む以下の配列または配列の一部を有し、
ｎ
Ｘ（以下の本文において便宜上Ｘｎと表記する）はＨＩＶ−１逆転写酵素ペプチド配列の同じ位置におけるロスアラモスデータバンクに記載されているものに対応するアミノ酸であり、ｎはＨＩＶ−１逆転写酵素配列のロスアラモスデータバンクに記載されているアミノ酸（ａａ）の位置であり、
Ｍｐは突然変異アミノ酸であり、ｐは認められる突然変異の数である請求項３から５のいずれか１項に記載のペプチド。
2005503418.tif 000043
この配列では、Ｍ１（ａａ６）はＫ、ＧもしくはＳに突然変異していてよい；
2005503418.tif 000044
この配列では、Ｍ２（ａａ３９）は、Ｘ３９であってよく、あるいはＡ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、ＭもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ３（ａａ４１）は、Ｘ４１であってよく、あるいはＬに突然変異していてよく、
Ｍ２及びＭ３の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000045
この配列では、Ｍ１（ａａ６）は、Ｘ６であってよく、あるいはＫ、ＧもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ２（ａａ３９）は、Ｘ３９であってよく、あるいはＡ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、ＭもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ３（ａａ４１）は、Ｘ４１であってよく、あるいはＬに突然変異していてよく、
Ｍ１、Ｍ２及びＭ３の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000046
この配列では、Ｍ４（ａａ６２）は、Ｘ６２であってよく、あるいはＶに突然変異していてよく、
Ｍ５（ａａ６５）は、Ｘ６５であってよく、あるいはＲに突然変異していてよく、
Ｍ６（ａａ６７）は、Ｘ６７であってよく、あるいはＮもしくはＧに突然変異していてよく、
Ｍ７（ａａ６８）は、Ｘ６８であってよく、あるいはＧもしくはＮに突然変異していてよく、
Ｍ８（ａａ６９）は、Ｘ６９であってよく、あるいはＤ、Ｎ、ＳもしくはＡに突然変異しているか、またはＳＧ、ＳＸ、ＳＳＡ、ＳＳＧ、ＳＳＳ、ＳＥＡ、ＳＴＳ、ＡＳＧ、ＳＸＸもしくはＸＸＸのような複数の挿入と組み合わされていてよく、
Ｍ９（ａａ７０）は、Ｘ７０であってよく、あるいはＲ、Ｎ、ＥもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ１０（ａａ７４）は、Ｘ７４であってよく、あるいはＶもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ１１（ａａ７５）は、Ｘ７５であってよく、あるいはＭ、Ｉ、ＬもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ１２（ａａ７７）は、Ｘ７７であってよく、あるいはＬに突然変異していてよく、
Ｍ４〜Ｍ１２の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000047
この配列では、Ｍ４（ａａ６２）は、Ｘ６２であってよく、あるいはＶに突然変異していてよく、
Ｍ５（ａａ６５）は、Ｘ６５であってよく、あるいはＲに突然変異していてよく、
Ｍ６（ａａ６７）は、Ｘ６７であってよく、あるいはＮもしくはＧに突然変異していてよく、
Ｍ７（ａａ６８）は、Ｘ６８であってよく、あるいはＧもしくはＮに突然変異していてよく、
Ｍ８（ａａ６９）は、Ｘ６９であってよく、あるいはＤ、Ｎ、ＳもしくはＡに突然変異しているか、またはＳＧ、ＳＸ、ＳＳＡ、ＳＳＧ、ＳＳＳ、ＳＥＡ、ＳＴＳ、ＡＳＧ、ＳＸＸもしくはＸＸＸのような複数の挿入と組み合わされていてよく、
Ｍ９（ａａ７０）は、Ｘ７０であってよく、あるいはＲ、Ｎ、ＥもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ１０（ａａ７４）は、Ｘ７４であってよく、あるいはＶもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ１１（ａａ７５）は、Ｘ７５であってよく、あるいはＭ、Ｉ、ＬもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ１２（ａａ７７）は、Ｘ７７であってよく、あるいはＬに突然変異していてよく、
Ｍ１３（ａａ８８）は、Ｘ８８であってよく、あるいはＣに突然変異していてよく、
Ｍ１４（ａａ８９）は、Ｘ８９であってよく、あるいはＧに突然変異していてよく、
Ｍ１５（ａａ９０）は、Ｘ９０であってよく、あるいはＩに突然変異していてよく、
Ｍ１６（ａａ９８）は、Ｘ９８であってよく、あるいはＧもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ１７（ａａ１００）は、Ｘ１００であってよく、あるいはＩに突然変異していてよく、
Ｍ１８（ａａ１０１）は、Ｘ１０１であってよく、あるいはＥ、Ｑ、Ｒ、ＩもしくはＰに突然変異していてよく、
Ｍ１９（ａａ１０３）は、Ｘ１０３であってよく、あるいはＮ、Ｑ、Ｒ、ＴもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ２０（ａａ１０６）は、Ｘ１０６であってよく、あるいはＡ、ＩもしくはＬに突然変異していてよく、
Ｍ２１（ａａ１０８）は、Ｘ１０８であってよく、あるいはＩに突然変異していてよく、
Ｍ２２（ａａ１１５）は、Ｘ１１５であってよく、あるいはＦに突然変異していてよく、
Ｍ２３（ａａ１１６）は、Ｘ１１６であってよく、あるいはＹに突然変異していてよく、
Ｍ２４（ａａ１１９）は、Ｘ１１９であってよく、あるいはＳに突然変異していてよく、
Ｍ４〜Ｍ２４の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000048
この配列では、Ｍ２５（ａａ１３８）は、Ｘ１３８であってよく、あるいはＡ、Ｇ、ＫもしくはＱに突然変異していてよく、
Ｍ２６（ａａ１３９）は、Ｘ１３９であってよく、あるいはＩ、ＭもしくはＫに突然変異していてよく、
Ｍ２７（ａａ１４１）は、Ｘ１４１であってよく、あるいはＥに突然変異していてよく、
Ｍ２８（ａａ１５１）は、Ｘ１５１であってよく、あるいはＭに突然変異していてよく、
Ｍ２９（ａａ１５７）は、Ｘ１５７であってよく、あるいはＳに突然変異していてよく、
Ｍ２５〜Ｍ２９の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000049
この配列では、Ｍ３０（ａａ１７２）は、Ｘ１７２であってよく、あるいはＫに突然変異していてよく、
Ｍ３１（ａａ１７８）は、Ｘ１７８であってよく、あるいはＭ、ＬもしくはＦに突然変異していてよく、
Ｍ３２（ａａ１７９）は、Ｘ１７９であってよく、あるいはＩ、Ｌ、ＤもしくはＥに突然変異していてよく、
Ｍ３３（ａａ１８１）は、Ｘ１８１であってよく、あるいはＣもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ３４（ａａ１８４）は、Ｘ１８４であってよく、あるいはＶ、ＩもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ３５（ａａ１８８）は、Ｘ１８８であってよく、あるいはＬ、ＣもしくはＨに突然変異していてよく、
Ｍ３６（ａａ１８９）は、Ｘ１８９であってよく、あるいはＩに突然変異していてよく、
Ｍ３７（ａａ１９０）は、Ｘ１９０であってよく、あるいはＡ、Ｓ、Ｅ、ＱもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ３０〜Ｍ３７の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000050
この配列では、Ｍ３０（ａａ１７２）は、Ｘ１７２であってよく、あるいはＫに突然変異していてよく、
Ｍ３１（ａａ１７８）は、Ｘ１７８であってよく、あるいはＭ、ＬもしくはＦに突然変異していてよく、
Ｍ３２（ａａ１７９）は、Ｘ１７９であってよく、あるいはＩ、Ｌ、ＤもしくはＥに突然変異していてよく、
Ｍ３３（ａａ１８１）は、Ｘ１８１であってよく、あるいはＣもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ３４（ａａ１８４）は、Ｘ１８４であってよく、あるいはＶ、ＩもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ３０〜Ｍ３４の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000051
この配列では、Ｍ３４（ａａ１８４）は、Ｘ１８４であってよく、
Ｍ３５（ａａ１８８）は、Ｘ１８８であってよく、あるいはＬ、ＣもしくはＨに突然変異していてよく、
Ｍ３６（ａａ１８９）は、Ｘ１８９であってよく、あるいはＩに突然変異していてよく、
Ｍ３７（ａａ１９０）は、Ｘ１９０であってよく、あるいはＡ、Ｓ、Ｅ、ＱもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ３４〜Ｍ３７の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000052
この配列では、Ｍ３８（ａａ２０８）は、Ｘ２０８であってよく、あるいはＹに突然変異していてよく、
Ｍ３９（ａａ２１０）は、Ｘ２１０であってよく、あるいはＷに突然変異していてよく、
Ｍ４０（ａａ２１１）は、Ｘ２１１であってよく、あるいはＫ、Ａ、Ｅ、Ｎ、Ｄ、ＧもしくはＱに突然変異していてよく、
Ｍ４１（ａａ２１４）は、Ｘ２１４であってよく、あるいはＬもしくはＦに突然変異していてよく、
Ｍ４２（ａａ２１５）は、Ｘ２１５であってよく、あるいはＹ、ＦもしくはＣに突然変異していてよく、
Ｍ４３（ａａ２１９）は、Ｘ２１９であってよく、あるいはＱ、Ｅ、Ｎ、Ｒ、ＴもしくはＷに突然変異していてよく、
Ｍ４４（ａａ２２３）は、Ｘ２２３であってよく、あるいはＱに突然変異していてよく、
Ｍ４５（ａａ２２５）は、Ｘ２２５であってよく、あるいはＨに突然変異していてよく、
Ｍ４６（ａａ２２７）は、Ｘ２２７であってよく、あるいはＬに突然変異していてよく、
Ｍ４７（ａａ２２８）は、Ｘ２２８であってよく、あるいはＲ、ＨもしくはＦに突然変異していてよく、
Ｍ４８（ａａ２３３）は、Ｘ２３３であってよく、あるいはＶもしくはＮに突然変異していてよく、
Ｍ４９（ａａ２３４）は、Ｘ２３４であってよく、あるいはＩ、ＨもしくはＰに突然変異していてよく、
Ｍ５０（ａａ２３６）は、Ｘ２３６であってよく、あるいはＭ、ＳもしくはＬに突然変異していてよく、
Ｍ５１（ａａ２３８）は、Ｘ２３８であってよく、あるいはＴもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ５２（ａａ２４０）は、Ｘ２４０であってよく、あるいはＡ、ＤもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ３８〜Ｍ５２の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000053
この配列では、Ｍ５３（ａａ３３３）はＥもしくはＤに突然変異していてよい。
【請求項７】
製薬上許容される賦形剤中に分散している請求項３から６に記載の少なくとも１種のペプチドを含むことを特徴とする薬剤組成物。
【請求項８】
ワクチンとして使用するための請求項３から６のいずれか１項に記載のペプチドまたは請求項５に記載の組成物。
【請求項９】
請求項３から６のいずれか１項に定義されている少なくとも１つのペプチドを含むことを特徴とするワクチン。
【請求項１０】
サイトカインまたはケモカインのような免疫調節因子を添加した、請求項３から６のいずれか１項に定義されている少なくとも１つのペプチドを含むことを特徴とするワクチン。
【請求項１１】
脂質（脂肪酸、リン脂質、フロイント不完全アジュバント）、アニオンコポリマー、ＣｐＧユニット等のアジュバントを添加した、請求項３から６のいずれか１項に定義されている少なくとも１つのペプチドを含むことを特徴とするワクチン。
【請求項１２】
請求項３から６に記載の少なくとも１つのペプチドがリポペプチドに結合されていることを特徴とする請求項９から１１のいずれか１項に記載のワクチン。
【請求項１３】
請求項３から６に記載の少なくとも１つのペプチドがリポタンパク質に結合されていることを特徴とする請求項９から１１のいずれか１項に記載のワクチン。
【請求項１４】
請求項３から６に記載の少なくとも１つのペプチドがマイクロ粒子またはナノ粒子（定義すべき）に結合されていることを特徴とする請求項９から１１のいずれか１項に記載のワクチン。
【請求項１５】
請求項３から６に記載の少なくとも１つのペプチドが１つまたは複数のリポソームに結合されていることを特徴とする請求項９から１１のいずれか１項に記載のワクチン。
【請求項１６】
請求項３から６に記載の少なくとも１つのペプチドが１つまたは複数のニオソームに結合されていることを特徴とする請求項９から１１のいずれか１項に記載のワクチン。
【請求項１７】
請求項３から６に記載の少なくとも１つのペプチドを組換えウイルスで発現させることを特徴とする請求項９から１１のいずれか１項に記載のワクチン。
【請求項１８】
請求項３から６に記載の少なくとも１つのペプチドを弱毒化または不活性化ウイルスで発現させることを特徴とする請求項９から１１のいずれか１項に記載のワクチン。
【請求項１９】
請求項３から６に記載の少なくとも１つのペプチドを組換えウイルスベクターで発現させることを特徴とする請求項９から１１のいずれか１項に記載のワクチン。
【請求項２０】
請求項３から６に記載の少なくとも１つのペプチドを組換え細菌で発現させることを特徴とする請求項９から１１のいずれか１項に記載のワクチン。
【請求項２１】
請求項３から６に記載の少なくとも１つのペプチドを組換え細菌ベクターで発現させることを特徴とする請求項９から１１のいずれか１項に記載のワクチン。
【請求項２２】
請求項３から６に記載の少なくとも１つのペプチドを抗原提示細胞で発現させることを特徴とする請求項９から１１のいずれか１項に記載のワクチン。
【請求項２３】
請求項３から６のいずれか１項に記載の少なくとも１つのペプチドをコードしている少なくとも１つの裸のＤＮＡを含むことを特徴とする請求項９から１１のいずれか１項に記載のワクチン。
【請求項２４】
ＮＲＴＩ及び／又はＮＮＲＴＩファミリーの少なくとも１つの医薬品を含んでなる第１の組成物と、請求項３から６のいずれか１項に定義されている少なくとも１つのペプチドを含んでなる第２の組成物との少なくとも２つの組成物を含んでなり、これらの組成物が順次、おそらくは長期間で個別、もしくは同時の適用のためである、ＨＩＶ感染患者を治療するための薬剤。
【請求項２５】
請求項９から２３のいずれか１項に記載のワクチンの投与に応答する特異的Ｔ免疫応答を誘導することからなる、ＨＩＶウイルス感染を予防または治療する方法。
【請求項２６】
ＨＩＶウイルスにおける突然変異が逆転写酵素内に位置することを特徴とする請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
ワクチン接種時に導入されるワクチンペプチド配列に対して特異的なＴ細胞によりエピトープ配列として認識されることを特徴とする、８〜２０アミノ酸のペプチド配列。
【請求項２８】
少なくとも１つの突然変異Ｍｐを有するペプチド配列Ａ〜Ｋから選択される８〜２０個の連続アミノ酸のペプチド配列であることを特徴とする、請求項２７に記載のエピトープ配列。
【請求項２９】
少なくとも１つの突然変異Ｍｐを有するペプチド配列Ａ〜Ｋから選択される８〜１０個の連続アミノ酸のペプチド配列であることを特徴とする、請求項２７に記載のエピトープ配列。
【請求項３０】
少なくとも１つの突然変異Ｍｐを有するペプチド配列Ａ〜Ｋから選択される９個の連続アミノ酸のペプチド配列であることを特徴とする、請求項２７に記載のエピトープ配列。
【請求項３１】
エピトープ配列に対して特異的なＴ細胞を確定かつ定量するための請求項２７から３０のいずれか１項に記載のエピトープ配列の使用。
【請求項３２】
請求項２７から３０のいずれか１項に記載の少なくとも１つのエピトープ配列を含むことを特徴とする、これらのエピトープ配列に対して特異的なＴ細胞を確定するための診断用組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
本発明は、耐性突然変異誘発性抗感染性及び／又は抗腫瘍化学療法治療相とこれらの突然変異に対する治療的ワクチン接種相を含む感染性及び腫瘍の病態の治療に関し、また、この治療に関連して使用される薬剤に関する。
【０００２】
本発明の対象は、より詳細には、ＨＩＶ逆転写酵素配列の８〜８０アミノ酸のペプチドであり、この酵素の野生型配列と比較して、ＨＩＶ逆転写酵素のヌクレオシドまたは非ヌクレオシド類似体の投与に反応して誘発される少なくとも１つの突然変異を含むものである。
【０００３】
本発明の対象はまた、これらの突然変異配列に対して特異的な免疫応答を誘導するための、また、ＨＩＶ逆転写酵素のヌクレオシドまたは非ヌクレオシド類似体の投与の有効性を増大または延長させるための、これらのペプチドに基づく薬剤組成物またはワクチンである。
【０００４】
本発明の対象はまた、ワクチンの注射に伴って起こる特異的免疫応答を評価するためのこれらのペプチド配列から得られるエピトープである。
【０００５】
ＨＩＶに対して有効であるワクチンの特定は、不可欠である。有効な免疫化は、効果的で、財政的に妥当であると思われ、また、この感染に対する長期的アプローチを構成するものと思われる。しかし、有効なワクチンの開発に対する最大の障害は、ＨＩＶの変異性である。最近のデータは、細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）がウイルス血症の初期のピーク、疾患の無症候期における低レベルのウイルス複製及び大部分のウイルス変異体の消失のコントロールを担っていることを示唆している。
【０００６】
異物としての感染因子の認識は、免疫系が特定の特異的異種構造である非自己を構成する抗原を、それに属する構造と自己を構成する構造とを識別することにより認識することであると思われる。免疫反応に関与するものを以下に示す。
＊  免疫反応のエフェクター細胞であるリンパ球。それらは、Ｂリンパ球と、特異的免疫応答コーディネーターであるＣＤ４＋ヘルパーＴリンパ球（Ｔｈ）とＣＤ８＋細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）とに細分されるＴリンパ球を含む。これらのＣＴＬは、ウイルスに感染した細胞を、特にウイルスが細胞の表面で発育し始め、細胞外媒体に放出される前に、認識し、殺滅する。
＊  抗原を捕捉し、それらを処理し、免疫原型のそれらをＴリンパ球に提示する抗原提示細胞。
＊  細胞の表面で発現し、リンパ球への抗原の提示に関与するＭＨＣ（主要組織適合遺伝子複合体）分子。ヒトにおいては、ＭＨＣはＨＬＡ（ヒト白球抗原）と呼ばれている。生物のすべての有核細胞の表面に存在するクラスＩ分子と抗原提示細胞の表面においてのみ発現するクラスＩＩ分子の２つのクラスのＭＨＣ分子が存在する。８〜１０アミノ酸の抗原性ペプチドはクラスＩのＭＨＣ分子のポケットに結合し、１４〜１５アミノ酸のペプチドはクラスＩＩのＭＨＣ分子に結合する。それらの結合は、抗原性ペプチドのアミノ酸（本質的に２つの末端部分における）とＨＬＡ分子のポケットの壁のアミノ酸との間で確立される相互作用の力により決定される。これまでに２００種を超えるＨＬＡクラスＩ対立遺伝子がＨＬＡクラスＩ遺伝子の３つのファミリー（すなわち、Ａ、Ｂ及びＣ）内にあるものと定義された。各ＨＬＡクラスＩ対立遺伝子は、ペプチドポケット内で実質的に異なっており、したがって、それに結合することができるペプチドも異なっている。したがって、ペプチドとＨＬＡクラスＩ分子との間の相互作用に厳密な特異性が存在する。この特異性は、標的として提示されるペプチドの配列が極わずかに異なっているだけで、このペプチドがＨＬＡクラスＩ分子に結合することが完全に不可能であるということの説明となる。
＊  Ｔリンパ球膜に結合している抗原受容体。この受容体により、各Ｔリンパ球はＭＨＣ上に提示されている抗原を特異的に認識する。Ｔリンパ球の受容体は、ＴＣＲ（Ｔ細胞受容体）と呼ばれている。この受容体は、同時に細胞表面において抗原性ペプチドとＭＨＣ分子を認識しなければならない。この認識は、ＭＨＣ限定と言われている。
＊  その細胞膜上の存在によって細胞を識別することができる分子である、ＣＤ（分化抗原群［ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ］）マーカー。したがって、Ｔｈは、ＣＤ４マーカーを有し、ＣＤ４＋とも称され、ＣＤ８マーカーを有するＣＴＬは、ＣＤ８＋と称されている。ＣＤ８＋リンパ球は、ＭＨＣクラスＩ上のそれらの抗原を認識し、ＣＤ４＋リンパ球はＭＨＣクラスＩＩ上の抗原を認識する。
＊  抗原提示細胞による抗原性配列の提示は、ワクチンの有効性の決定因子の１つである。これは、特定の天然または合成化合物である、脂質（脂肪酸、リン脂質、フロイントアジュバント）、アニオンコポリマー、ＣｐＧユニットなどのアジュバントにより増幅させることができる。サイトカイン（インターロイキン、インターフェロン、ＴＮＦ（腫瘍壊死因子）等）、ＴＧＦ（トランスフォーミング成長因子など）及びケモカインのような他の分子が、免疫系細胞の成熟、活性化及び分化の制御に関与しており、ワクチンの有効性の調節に主要な役割を果たしている。
【０００７】
ＨＩＶ感染は、ウイルスがＣＤ４＋リンパ球と抗原提示細胞を選択的に感染させ、免疫系を徐々に、一般的に１０年にわたり破壊するという意味で、免疫系の感染症である。２０年以上感染しており、抗レトロウイルス治療を全く受けたことがない一部の人々は、非常に低いウイルス負荷（または検出限界以下のウイルス負荷）を有するが、ＨＬＡクラスＩ分子限定エピトープに対して誘導される非常に実質的なウイルス特異的ＣＴＬ応答を示す。ＨＩＶに対するこれらのＣＴＬ応答の強度と多様性をウイルス複製の制御と関連付けることができ、これらの免疫防御においてこれらのＣＴＬが本質的な役割を果たしていることが示唆された。
【０００８】
ＣＴＬの標的であるＨＩＶのペプチド配列は、ほとんどのＨＩＶタンパク質について定義されている。ＨＬＡクラスＩ分子の機能は所与の個人の細胞の表面で発現されるので、これらの標的は個人によって異なっている。
【０００９】
免疫系によるコントロールのウイルスによる回避がこれらの応答の無効の主な原因である。ＣＴＬエピトープにおけるウイルス変異が、免疫系がウイルスを含まないことに本質的な役割を果たしていると思われる。ＣＴＬにより認識される定義済みエピトープの単一突然変異は、実際に、ＣＴＬ認識の解消、あるいはクラスＩ分子へのペプチドの結合の阻害、あるいはＴＣＲとの相互作用に不可欠の残基の変化に十分なものであると思われる。ＨＩＶ逆転写酵素の配列は様々なウイルスサブタイプ間に高度に保存されているので、この配列は、ＣＴＬタイプの免疫応答の好ましい標的であり、試験する患者の８０％がＨＩＶ−１に対応する逆転写酵素に対するＣＴＬ応答を示す。
【００１０】
ＨＩＶに対する多数のワクチンが開発され、試験された。これらのワクチンとしては、組換えＨＩＶタンパク質、合成ペプチド、組換えウイルスまたは細菌ベクター及び裸ＤＮＡタイプワクチンなどがある。米国及びヨーロッパにおける最も一般的なサブタイプであるＢ型ＨＩＶに対する特異的ワクチンの約３０種の候補についての６０件を超える第Ｉ相臨床試験が実施済みか、あるいは進行中である。これらの試行のほとんどがＨＩＶ外被タンパク質に焦点をあてている。しかし、試験した組換えタンパク質は、ＨＩＶに感染した細胞を認識し、殺滅するＣＤ８＋  ＣＴＬをほとんど誘導しない。さらに、Ｉ型ＨＩＶ分離株は、感染性、伝播性または免疫原性のような生物学的サイクルの特定の側面に影響を及ぼす可能性があるウイルス外被に関して強度の遺伝的多様性を示す。
【００１１】
ＡＩＤＳ治療では、宿主細胞の正しい機能を損なわずに、ウイルスサイクルの１つまたは複数の段階を阻害することができる分子を使用する。ウイルス外被より保存性が高い、他の構造タンパク質（特に、ウイルスキャプシド及び逆転写酵素）及び調節タンパク質は、今日、予防的ワクチン接種戦略の好ましい標的を構成している。
【００１２】
＊  ＲＮＡゲノムのＤＮＡ合成を触媒するウイルスポリメラーゼである逆転写酵素（ＲＴ）は、抗レトロウイルス療法の適切な標的である。特に、ＡＺＴ（ジドブジン）、ＤＤＩ（ジダノシン）、ＤＤＣ（ザルシタビン）、３ＴＣ（ラミブジン）、ＡＢＣ（アバカビル）、Ｄ４Ｔ（スタブジン）等のヌクレオシドの非加水分解性類似体（ＮＲＴＩ）は、現在に至るまで最も一般的に用いられているＲＴ阻害薬のファミリーを構成している。三リン酸化型では、それらはＤＮＡ合成時に天然ヌクレオシドと競合し、それらの伸長の終結をもたらす。逆転写段階の阻害薬の他のファミリーである非ヌクレオシド酵素阻害薬（ＮＮＲＴＩ）は、活性であるためにリン酸化を必要とせず、おそらくアロステリック阻害により作用する。最も広く知られているものは、ネビラピン、デラビルジンまたはエファビレンツである。
【００１３】
＊  ＨＩＶプロテアーゼは、リトナビル、サキナビル、インジナビル等の酵素阻害薬を用いる抗レトロウイルス療法の他の主な標的を構成する。
【００１４】
現在の抗レトロウイルス療法は、一般的にいくつかのクラスを併用するものであり、１つまたは複数の逆転写酵素阻害薬を含む。しかし、これらの療法はウイルスを根絶することができず、これらの治療（最も活性なものでさえも）中に持続する残余複製が逆転写酵素遺伝子における突然変異の時間の経過に伴う選択を可能にする。これらの突然変異の一部は、突然変異したウイルスにこれらの薬剤の阻害作用に抵抗する能力を付与する。したがって、多くの突然変異が特に逆転写酵素配列に影響を及ぼし（酵素の活性部位の変化を含む）、ひいては、治療を開始してから１〜１２カ月以内にＮＲＴＩまたはＮＮＲＴＩファミリーに対して耐性を有する変異ウイルスの発生を促進する。これらの薬剤を投与した患者における時間の経過に伴うこれらの突然変異の蓄積が、多剤耐性の選択をもたらし、治療無効につながる。
【００１５】
ＷＯ９９／５１７５０に、ラミブジンの投与によりＨＩＶ逆転写酵素の触媒部位における点突然変異が誘発されることが示された。この点突然変異は、ＴＣＲによるペプチド認識の部位に位置している。その結果、野生型エピトープを認識した投与患者のＣＴＬは、突然変異したエピトープをもはや認識することができなかった。
【００１６】
最近の推定で、西欧諸国では、少なくとも１種の逆転写酵素阻害薬を投与したＨＩＶ感染患者の８５％のうち、５０％が検出可能なウイルス血症を保持し、治療無効とみなされることが示されている。これは、これらの阻害薬に対する耐性の少なくとも１つの突然変異の存在に関連しており、ウイルス負荷の増加とＣＤ４＋Ｔリンパ球の減少をもたらす。さらに、最近感染したが、まだ治療を受けていない患者の１０％が抗レトロウイルス療法に対する耐性の突然変異を有する新たなウイルス株に感染している。多くの研究で、同じクラスの分子によるその後の抗ウイルス療法はこれらの耐性ウイルスに対して有効性がより低いことが示された。
【００１７】
長期にわたるこれらの療法の毒性と費用を抑えるために代替治療戦略が今日提案されている。それは、これらの療法を、最後に治療を中断するために利用可能なワクチン候補による抗ＨＩＶ免疫化と組み合わせることにより治療患者におけるＨＩＶに対する免疫応答を刺激することを含む。非突然変異ウイルスの対照共通配列に対して誘導したワクチン化合物を用いた第Ｉ及びＩＩ相臨床試験が進行中である。
【００１８】
出願者は、耐性突然変異誘発性抗感染性及び／又は抗腫瘍化学療法相とこれらの耐性突然変異に対する治療的ワクチン接種の相を含む、感染性及び腫瘍病状の療法を発見した。
【００１９】
出願者は、より詳細には、特定の逆転写酵素配列、すなわち、ＮＲＴＩ及び／又はＮＮＲＴＩによる様々な治療中に発生する標準化点突然変異の部位が実際にこれらの突然変異を認識することができる特異的ＣＴＬの誘導をもたらすことができることを発見した。これらの突然変異を有する治療を受けた感染患者の末梢血単核細胞における突然変異４１、７４、１８４等のＮＲＴＩにより誘発されたいくつかの逆転写酵素突然変異に対して誘導されたＣＤ８＋細胞（血中単核細胞百万個当たり５０〜５００個程度の特異的細胞）の存在がＥＬＩＳＰＯＴタイプの方法を用いてエキソビボで実証された。したがって、この免疫応答は、これらの治療中に発生させることはできるが、それ自体では特異的変異体を除去することはできないと思われる。これらの突然変異に対して誘導された免疫の増幅により、これらのＨＩＶ変異体が発生を抑えられ、これらの治療による長期持続性ウイルス抑制を維持することが可能となるであろう。ＮＲＴＩもしくはＮＮＲＴＩの投与前または投与時にこれらの突然変異したウイルスの逆転写酵素配列を含むワクチンを投与することにより、これらの治療に耐えることができる突然変異ウイルスの出現を予防し、遅延させ、あるいは低減させることができるはずである。したがって、この新しいタイプの治療的免疫化は、ＮＲＴＩ及び／又はＮＮＲＴＩによる抗レトロウイルス療法の有効性を増強またはその持続期間を延長させることを目的とする。これは、他の抗レトロウイルスクラスにより誘発された他の突然変異に二次的に適用することができ、また、予防ワクチン接種にも用いることができる。
【００２０】
したがって、本発明は、感染性及び／又は腫瘍の病態の療法からなる。
【００２１】
本発明はまた、この療法に関連して用いられる治療薬からなる。
【００２２】
本発明の対象はまた、ＮＲＴＩ及び／又はＮＮＲＴＩに対する耐性の突然変異を含む免疫原の調製である。
【００２３】
より詳細には、本発明は、単独もしくは１つまたは複数のＮＲＴＩと併用した１つまたは複数のＮＮＲＴＩに対する耐性の突然変異を含む免疫原の調製からなる。
【００２４】
本発明の対象はまた、免疫原の要素であるペプチドである。
【００２５】
本発明の他の対象は、製薬上許容される賦形剤中に分散している定義した少なくとも１つのペプチドを含み、ワクチンとして使用することを特徴とする薬剤組成物である。
【００２６】
本発明の他の対象は、診断の目的のために用いることができる、ワクチン接種時に導入されるワクチンペプチド配列に対して特異的なＣＴＬにより認識されるエピトープの決定である。
【００２７】
感染性及び／又は腫瘍の病態を治療する方法は、耐性突然変異誘発性抗感染性及び／又は抗腫瘍化学療法治療相とこれらの耐性突然変異体に対する治療的ワクチン接種の相を含む。ワクチン接種相は化学療法治療相の後であることが好ましい。
【００２８】
本発明はまた、
感染性及び／又は抗腫瘍病状の治療用の耐性突然変異誘発性医薬品を含む第１成分と、
これらの耐性突然変異体に対して誘導されたワクチンを含む第２成分と、
の少なくとも２つの成分を含み、２つの成分が同時に、個別にまたは経時的に順次使用するための、感染性及び／又は腫瘍の病態を治療するための薬剤に関する。
【００２９】
本発明の対象は、また、治療なしで、ＨＩＶ逆転写酵素の確立された配列に関して単一または複数の置換及び／又は挿入による少なくとも１つの突然変異を含み、その変異がＮＲＴＩ及び／又はＮＮＲＴＩの投与後に認めらるＨＩＶ逆転写酵素配列の８〜８０アミノ酸のペプチドであり、このペプチドは、Ｚ１及びＺ２が少なくとも１つのアミノ酸であるＺ１−Ｙ−Ｖ−Ｄ−Ｄ−Ｚ２、Ｚ１−Ｙ−Ｉ−Ｄ−Ｄ−Ｚ２及びＺ１−Ｙ−Ｌ−Ｄ−Ｄ−Ｚ２の他にＨＩＶ逆転写酵素のこの突然変異配列に対して特異的なＴリンパ球によって媒介される応答を誘導することができることを特徴として、ラミブジン単独（ＮＲＴＩ）投与後に認められた。
【００３０】
特に、本発明の対象は、その変異はＮＮＲＴＩ単独投与後、またはＮＮＲＴＩとＮＲＴＩとの併用投与後に認められ、治療なしで、好ましくはＨＩＶ逆転写酵素の確立された配列に関して単一または複数の置換及び／又は挿入による少なくとも１つの突然変異を含むＨＩＶ逆転写酵素配列の８〜８０アミノ酸のペプチドであり、このペプチドは、ＨＩＶ逆転写酵素のこの突然変異配列に対して特異的なＴリンパ球によって媒介される応答を誘導することができることを特徴とする。
【００３１】
好ましくは、本発明によるペプチドは１５〜５０アミノ酸を含む。
【００３２】
本発明によるペプチドの配列は、ペプチドを可溶化または安定化することができる中性アミノ酸に先行または後続していてよい。
【００３３】
本発明によるペプチドの配列は、少なくとも１つの以下の突然変異Ｍｐを含む配列または配列の一部であることを特徴とし、ＸｎはＨＩＶ−１逆転写酵素ペプチド配列の同じ位置におけるロスアラモスデータバンクに記載されているものに対応するアミノ酸で、ｎはＨＩＶ−１逆転写酵素配列のロスアラモスデータバンクに記載されているアミノ酸の位置であり、Ｍｐは突然変異アミノ酸で、ｐは認められる突然変異の数である。
2005503418.tif 000002
この配列では、Ｍ１（ａａ６）はＫ、ＧもしくはＳに突然変異していてよい。
2005503418.tif 000003
この配列では、Ｍ２（ａａ３９）は、Ｘ３９であってよく、あるいはＡ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、ＭもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ３（ａａ４１）は、Ｘ４１であってよく、あるいはＬに突然変異していてよく、
Ｍ２及びＭ３の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
本発明の好ましい実施形態において、Ｍ２（ａａ３９）はＡ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、ＭもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ３（ａａ４１）は、Ｘ４１であってよく、あるいはＬに突然変異していてよい。
2005503418.tif 000004
この配列では、Ｍ１（ａａ６）は、Ｘ６であってよく、あるいはＫ、ＧもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ２（ａａ３９）は、Ｘ３９であってよく、あるいはＡ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、ＭもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ３（ａａ４１）は、Ｘ４１であってよく、あるいはＬに突然変異していてよく、
Ｍ１、Ｍ２及びＭ３の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
本発明の好ましい実施形態において、Ｍ１（ａａ６）は、Ｘ６であってよく、あるいはＫ、ＧもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ２（ａａ３９）は、Ｘ３９であってよく、あるいはＡ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、ＭもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ３（ａａ４１）は、Ｘ４１であってよく、あるいはＬに突然変異していてよく、
Ｍ１またはＭ２は、突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000005
この配列では、Ｍ４（ａａ６２）は、Ｘ６２であってよく、あるいはＶに突然変異していてよく、
Ｍ５（ａａ６５）は、Ｘ６５であってよく、あるいはＲに突然変異していてよく、
Ｍ６（ａａ６７）は、Ｘ６７であってよく、あるいはＮもしくはＧに突然変異していてよく、
Ｍ７（ａａ６８）は、Ｘ６８であってよく、あるいはＧもしくはＮに突然変異していてよく、
Ｍ８（ａａ６９）は、Ｘ６９であってよく、あるいはＤ、Ｎ、ＳもしくはＡに突然変異しているか、またはＳＧ、ＳＸ、ＳＳＡ、ＳＳＧ、ＳＳＳ、ＳＥＡ、ＳＴＳ、ＡＳＧ、ＳＸＸもしくはＸＸＸのような複数の挿入と組み合わされていてよく、
Ｍ９（ａａ７０）は、Ｘ７０であってよく、あるいはＲ、Ｎ、ＥもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ１０（ａａ７４）は、Ｘ７４であってよく、あるいはＶもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ１１（ａａ７５）は、Ｘ７５であってよく、あるいはＭ、Ｉ、ＬもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ１２（ａａ７７）は、Ｘ７７であってよく、あるいはＬに突然変異していてよく、
Ｍ４〜Ｍ１２の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
本発明の好ましい実施形態において、Ｍ４（ａａ６２）は、Ｘ６２であってよく、あるいはＶに突然変異していてよく、
Ｍ５（ａａ６５）は、Ｘ６５であってよく、あるいはＲに突然変異していてよく、
Ｍ６（ａａ６７）は、Ｘ６７であってよく、あるいはＮもしくはＧに突然変異していてよく、
Ｍ７（ａａ６８）は、Ｘ６８であってよく、あるいはＧもしくはＮに突然変異していてよく、
Ｍ８（ａａ６９）は、Ｘ６９であってよく、あるいはＤ、Ｎ、ＳもしくはＡに突然変異しているか、またはＳＧ、ＳＸ、ＳＳＡ、ＳＳＧ、ＳＳＳ、ＳＥＡ、ＳＴＳ、ＡＳＧ、ＳＸＸもしくはＸＸＸのような複数の挿入と組み合わされていてよく、
Ｍ９（ａａ７０）は、Ｘ７０であってよく、あるいはＲ、Ｎ、ＥもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ１０（ａａ７４）は、Ｘ７４であってよく、あるいはＶもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ１１（ａａ７５）は、Ｘ７５であってよく、あるいはＭ、Ｉ、ＬもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ１２（ａａ７７）は、Ｘ７７であってよく、あるいはＬに突然変異していてよく、
Ｍ４、Ｍ７、Ｍ１２の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000006
この配列では、Ｍ４（ａａ６２）は、Ｘ６２であってよく、あるいはＶに突然変異していてよく、
Ｍ５（ａａ６５）は、Ｘ６５であってよく、あるいはＲに突然変異していてよく、
Ｍ６（ａａ６７）は、Ｘ６７であってよく、あるいはＮもしくはＧに突然変異していてよく、
Ｍ７（ａａ６８）は、Ｘ６８であってよく、あるいはＧもしくはＮに突然変異していてよく、
Ｍ８（ａａ６９）は、Ｘ６９であってよく、あるいはＤ、Ｎ、ＳもしくはＡに突然変異しているか、またはＳＧ、ＳＸ、ＳＳＡ、ＳＳＧ、ＳＳＳ、ＳＥＡ、ＳＴＳ、ＡＳＧ、ＳＸＸもしくはＸＸＸのような複数の挿入と組み合わされていてよく、
Ｍ９（ａａ７０）は、Ｘ７０であってよく、あるいはＲ、Ｎ、ＥもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ１０（ａａ７４）は、Ｘ７４であってよく、あるいはＶもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ１１（ａａ７５）は、Ｘ７５であってよく、あるいはＭ、Ｉ、ＬもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ１２（ａａ７７）は、Ｘ７７であってよく、あるいはＬに突然変異していてよく、
Ｍ１３（ａａ８８）は、Ｘ８８であってよく、あるいはＣに突然変異していてよく、
Ｍ１４（ａａ８９）は、Ｘ８９であってよく、あるいはＧに突然変異していてよく、
Ｍ１５（ａａ９０）は、Ｘ９０であってよく、あるいはＩに突然変異していてよく、
Ｍ１６（ａａ９８）は、Ｘ９８であってよく、あるいはＧもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ１７（ａａ１００）は、Ｘ１００であってよく、あるいはＩに突然変異していてよく、
Ｍ１８（ａａ１０１）は、Ｘ１０１であってよく、あるいはＥ、Ｑ、Ｒ、ＩもしくはＰに突然変異していてよく、
Ｍ１９（ａａ１０３）は、Ｘ１０３であってよく、あるいはＮ、Ｑ、Ｒ、ＴもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ２０（ａａ１０６）は、Ｘ１０６であってよく、あるいはＡ、ＩもしくはＬに突然変異していてよく、
Ｍ２１（ａａ１０８）は、Ｘ１０８であってよく、あるいはＩに突然変異していてよく、
Ｍ２２（ａａ１１５）は、Ｘ１１５であってよく、あるいはＦに突然変異していてよく、
Ｍ２３（ａａ１１６）は、Ｘ１１６であってよく、あるいはＹに突然変異していてよく、
Ｍ２４（ａａ１１９）は、Ｘ１１９であってよく、あるいはＳに突然変異していてよく、
Ｍ４〜Ｍ２４の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
本発明の好ましい実施形態において、Ｍ４（ａａ６２）は、Ｘ６２であってよく、あるいはＶに突然変異していてよく、
Ｍ５（ａａ６５）は、Ｘ６５であってよく、あるいはＲに突然変異していてよく、
Ｍ６（ａａ６７）は、Ｘ６７であってよく、あるいはＮもしくはＧに突然変異していてよく、
Ｍ７（ａａ６８）は、Ｘ６８であってよく、あるいはＧもしくはＮに突然変異していてよく、
Ｍ８（ａａ６９）は、Ｘ６９であってよく、あるいはＤ、Ｎ、ＳもしくはＡに突然変異しているか、またはＳＧ、ＳＸ、ＳＳＡ、ＳＳＧ、ＳＳＳ、ＳＥＡ、ＳＴＳ、ＡＳＧ、ＳＸＸもしくはＸＸＸのような複数の挿入と組み合わされていてよく、
Ｍ９（ａａ７０）は、Ｘ７０であってよく、あるいはＲ、Ｎ、ＥもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ１０（ａａ７４）は、Ｘ７４であってよく、あるいはＶもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ１１（ａａ７５）は、Ｘ７５であってよく、あるいはＭ、Ｉ、ＬもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ１２（ａａ７７）は、Ｘ７７であってよく、あるいはＬに突然変異していてよく、
Ｍ１３（ａａ８８）は、Ｘ８８であってよく、あるいはＣに突然変異していてよく、
Ｍ１４（ａａ８９）は、Ｘ８９であってよく、あるいはＧに突然変異していてよく、
Ｍ１５（ａａ９０）は、Ｘ９０であってよく、あるいはＩに突然変異していてよく、
Ｍ１６（ａａ９８）は、Ｘ９８であってよく、あるいはＧもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ１７（ａａ１００）は、Ｘ１００であってよく、あるいはＩに突然変異していてよく、
Ｍ１８（ａａ１０１）は、Ｘ１０１であってよく、あるいはＥ、Ｑ、Ｒ、ＩもしくはＰに突然変異していてよく、
Ｍ１９（ａａ１０３）は、Ｘ１０３であってよく、あるいはＮ、Ｑ、Ｒ、ＴもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ２０（ａａ１０６）は、Ｘ１０６であってよく、あるいはＡ、ＩもしくはＬに突然変異していてよく、
Ｍ２１（ａａ１０８）は、Ｘ１０８であってよく、あるいはＩに突然変異していてよく、
Ｍ２２（ａａ１１５）は、Ｘ１１５であってよく、あるいはＦに突然変異していてよく、
Ｍ２３（ａａ１１６）は、Ｘ１１６であってよく、あるいはＹに突然変異していてよく、
Ｍ２４（ａａ１１９）は、Ｘ１１９であってよく、あるいはＳに突然変異していてよく、
Ｍ４、Ｍ７、Ｍ１２〜Ｍ２１、Ｍ２３またはＭ２４の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000007
この配列では、Ｍ２５（ａａ１３８）は、Ｘ１３８であってよく、あるいはＡ、Ｇ、ＫもしくはＱに突然変異していてよく、
Ｍ２６（ａａ１３９）は、Ｘ１３９であってよく、あるいはＩ、ＭもしくはＫに突然変異していてよく、
Ｍ２７（ａａ１４１）は、Ｘ１４１であってよく、あるいはＥに突然変異していてよく、
Ｍ２８（ａａ１５１）は、Ｘ１５１であってよく、あるいはＭに突然変異していてよく、
Ｍ２９（ａａ１５７）は、Ｘ１５７であってよく、あるいはＳに突然変異していてよく、
Ｍ２５〜Ｍ２９の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
本発明の好ましい実施形態において、
Ｍ２５（ａａ１３８）は、Ｘ１３８であってよく、あるいはＡ、Ｇ、ＫもしくはＱに突然変異していてよく、
Ｍ２６（ａａ１３９）は、Ｘ１３９であってよく、あるいはＩ、ＭもしくはＫに突然変異していてよく、
Ｍ２７（ａａ１４１）は、Ｘ１４１であってよく、あるいはＥに突然変異していてよく、
Ｍ２８（ａａ１５１）は、Ｘ１５１であってよく、あるいはＭに突然変異していてよく、
Ｍ２９（ａａ１５７）は、Ｘ１５７であってよく、あるいはＳに突然変異していてよく、
Ｍ２５〜Ｍ２８の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000008
この配列では、Ｍ３０（ａａ１７２）は、Ｘ１７２であってよく、あるいはＫに突然変異していてよく、
Ｍ３１（ａａ１７８）は、Ｘ１７８であってよく、あるいはＭ、ＬもしくはＦに突然変異していてよく、
Ｍ３２（ａａ１７９）は、Ｘ１７９であってよく、あるいはＩ、Ｌ、ＤもしくはＥに突然変異していてよく、
Ｍ３３（ａａ１８１）は、Ｘ１８１であってよく、あるいはＣもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ３４（ａａ１８４）は、Ｘ１８４であってよく、あるいはＶ、ＩもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ３５（ａａ１８８）は、Ｘ１８８であってよく、あるいはＬ、ＣもしくはＨに突然変異していてよく、
Ｍ３６（ａａ１８９）は、Ｘ１８９であってよく、あるいはＩに突然変異していてよく、
Ｍ３７（ａａ１９０）は、Ｘ１９０であってよく、あるいはＡ、Ｓ、Ｅ、ＱもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ３０〜Ｍ３７の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
本発明の好ましい実施形態において、
Ｍ３０（ａａ１７２）は、Ｘ１７２であってよく、あるいはＫに突然変異していてよく、
Ｍ３１（ａａ１７８）は、Ｘ１７８であってよく、あるいはＭ、ＬもしくはＦに突然変異していてよく、
Ｍ３２（ａａ１７９）は、Ｘ１７９であってよく、あるいはＩ、Ｌ、ＤもしくはＥに突然変異していてよく、
Ｍ３３（ａａ１８１）は、Ｘ１８１であってよく、あるいはＣもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ３４（ａａ１８４）は、Ｘ１８４であってよく、あるいはＶ、ＩもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ３５（ａａ１８８）は、Ｘ１８８であってよく、あるいはＬ、ＣもしくはＨに突然変異していてよく、
Ｍ３６（ａａ１８９）は、Ｘ１８９であってよく、あるいはＩに突然変異していてよく、
Ｍ３７（ａａ１９０）は、Ｘ１９０であってよく、あるいはＡ、Ｓ、Ｅ、ＱもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ３０、Ｍ３３、Ｍ３５〜Ｍ３７の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000009
この配列では、Ｍ３０（ａａ１７２）は、Ｘ１７２であってよく、あるいはＫに突然変異していてよく、
Ｍ３１（ａａ１７８）は、Ｘ１７８であってよく、あるいはＭ、ＬもしくはＦに突然変異していてよく、
Ｍ３２（ａａ１７９）は、Ｘ１７９であってよく、あるいはＩ、Ｌ、ＤもしくはＥに突然変異していてよく、
Ｍ３３（ａａ１８１）は、Ｘ１８１であってよく、あるいはＣもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ３４（ａａ１８４）は、Ｘ１８４であってよく、あるいはＶ、ＩもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ３０〜Ｍ３４の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
本発明の好ましい実施形態において、
Ｍ３０（ａａ１７２）は、Ｘ１７２であってよく、あるいはＫに突然変異していてよく、
Ｍ３１（ａａ１７８）は、Ｘ１７８であってよく、あるいはＭ、ＬもしくはＦに突然変異していてよく、
Ｍ３２（ａａ１７９）は、Ｘ１７９であってよく、あるいはＩ、Ｌ、ＤもしくはＥに突然変異していてよく、
Ｍ３３（ａａ１８１）は、Ｘ１８１であってよく、あるいはＣもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ３４（ａａ１８４）は、Ｘ１８４であってよく、あるいはＶ、ＩもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ３０、Ｍ３２またはＭ３３の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000010
この配列では、Ｍ３４（ａａ１８４）は、Ｘ１８４であってよく、
Ｍ３５（ａａ１８８）は、Ｘ１８８であってよく、あるいはＬ、ＣもしくはＨに突然変異していてよく、
Ｍ３６（ａａ１８９）は、Ｘ１８９であってよく、あるいはＩに突然変異していてよく、
Ｍ３７（ａａ１９０）は、Ｘ１９０であってよく、あるいはＡ、Ｓ、Ｅ、ＱもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ３４〜Ｍ３７の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
本発明の好ましい実施形態において、
Ｍ３４（ａａ１８４）は、Ｘ１８４であってよく、
Ｍ３５（ａａ１８８）は、Ｘ１８８であってよく、あるいはＬ、ＣもしくはＨに突然変異していてよく、
Ｍ３６（ａａ１８９）は、Ｘ１８９であってよく、あるいはＩに突然変異していてよく、
Ｍ３７（ａａ１９０）は、Ｘ１９０であってよく、あるいはＡ、Ｓ、Ｅ、ＱもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ３５〜Ｍ３７の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000011
この配列では、Ｍ３８（ａａ２０８）は、Ｘ２０８であってよく、あるいはＹに突然変異していてよく、
Ｍ３９（ａａ２１０）は、Ｘ２１０であってよく、あるいはＷに突然変異していてよく、
Ｍ４０（ａａ２１１）は、Ｘ２１１であってよく、あるいはＫ、Ａ、Ｅ、Ｎ、Ｄ、ＧもしくはＱに突然変異していてよく、
Ｍ４１（ａａ２１４）は、Ｘ２１４であってよく、あるいはＬもしくはＦに突然変異していてよく、
Ｍ４２（ａａ２１５）は、Ｘ２１５であってよく、あるいはＹ、ＦもしくはＣに突然変異していてよく、
Ｍ４３（ａａ２１９）は、Ｘ２１９であってよく、あるいはＱ、Ｅ、Ｎ、Ｒ、ＴもしくはＷに突然変異していてよく、
Ｍ４４（ａａ２２３）は、Ｘ２２３であってよく、あるいはＱに突然変異していてよく、
Ｍ４５（ａａ２２５）は、Ｘ２２５であってよく、あるいはＨに突然変異していてよく、
Ｍ４６（ａａ２２７）は、Ｘ２２７であってよく、あるいはＬに突然変異していてよく、
Ｍ４７（ａａ２２８）は、Ｘ２２８であってよく、あるいはＲ、ＨもしくはＦに突然変異していてよく、
Ｍ４８（ａａ２３３）は、Ｘ２３３であってよく、あるいはＶもしくはＮに突然変異していてよく、
Ｍ４９（ａａ２３４）は、Ｘ２３４であってよく、あるいはＩ、ＨもしくはＰに突然変異していてよく、
Ｍ５０（ａａ２３６）は、Ｘ２３６であってよく、あるいはＭ、ＳもしくはＬに突然変異していてよく、
Ｍ５１（ａａ２３８）は、Ｘ２３８であってよく、あるいはＴもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ５２（ａａ２４０）は、Ｘ２４０であってよく、あるいはＡ、ＤもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ３８〜Ｍ５２の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
本発明の好ましい実施形態において、
Ｍ３８（ａａ２０８）は、Ｘ２０８であってよく、あるいはＹに突然変異していてよく、
Ｍ３９（ａａ２１０）は、Ｘ２１０であってよく、あるいはＷに突然変異していてよく、
Ｍ４０（ａａ２１１）は、Ｘ２１１であってよく、あるいはＫ、Ａ、Ｅ、Ｎ、Ｄ、ＧもしくはＱに突然変異していてよく、
Ｍ４１（ａａ２１４）は、Ｘ２１４であってよく、あるいはＬもしくはＦに突然変異していてよく、
Ｍ４２（ａａ２１５）は、Ｘ２１５であってよく、あるいはＹ、ＦもしくはＣに突然変異していてよく、
Ｍ４３（ａａ２１９）は、Ｘ２１９であってよく、あるいはＱ、Ｅ、Ｎ、Ｒ、ＴもしくはＷに突然変異していてよく、
Ｍ４４（ａａ２２３）は、Ｘ２２３であってよく、あるいはＱに突然変異していてよく、
Ｍ４５（ａａ２２５）は、Ｘ２２５であってよく、あるいはＨに突然変異していてよく、
Ｍ４６（ａａ２２７）は、Ｘ２２７であってよく、あるいはＬに突然変異していてよく、
Ｍ４７（ａａ２２８）は、Ｘ２２８であってよく、あるいはＲ、ＨもしくはＦに突然変異していてよく、
Ｍ４８（ａａ２３３）は、Ｘ２３３であってよく、あるいはＶもしくはＮに突然変異していてよく、
Ｍ４９（ａａ２３４）は、Ｘ２３４であってよく、あるいはＩ、ＨもしくはＰに突然変異していてよく、
Ｍ５０（ａａ２３６）は、Ｘ２３６であってよく、あるいはＭ、ＳもしくはＬに突然変異していてよく、
Ｍ５１（ａａ２３８）は、Ｘ２３８であってよく、あるいはＴもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ５２（ａａ２４０）は、Ｘ２４０であってよく、あるいはＡ、ＤもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ３８、Ｍ４０、Ｍ４４〜Ｍ５２の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000012
この配列では、Ｍ５３（ａａ３３３）はＥもしくはＤに突然変異していてよい。
【００３４】
好ましくは、本発明によるペプチドは、以下の配列または配列の一部が以下の突然変異Ｍｐの少なくとも１つを含むことを特徴とする
2005503418.tif 000013
この配列中、Ｍ１（ａａ６−ｗｔ＝Ｅ）は、主としてＫ、またはＧもしくはＳに突然変異していてよい。
2005503418.tif 000014
この配列では、Ｍ２（ａａ３９−ｗｔ＝Ｔ）は、Ｘ３９であってよく、あるいは主としてＡ、もしくはＫ、もしくはＮ、もしくはＰ、もしくはＭ、もしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ３（ａａ４１−ｗｔ＝Ｍ）は、Ｘ４１であってよく、あるいは主としてＬに突然変異していてよく、
Ｍ２及びＭ３の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
本発明の好ましい実施形態において、Ｍ２（ａａ３９）は、Ａ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、ＭまたはＳに突然変異していてよく、
Ｍ３（ａａ４１）は、Ｘ４１であってよく、あるいはＬに突然変異していてよい；
2005503418.tif 000015
この配列では、Ｍ１（ａａ６−ｗｔ＝Ｅ）は、主としてＫ、またはＧもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ２（ａａ３９−ｗｔ＝Ｔ）は、Ｘ３９であってよく、あるいは主としてＡ、もしくはＫ、もしくはＮ、もしくはＰ、もしくはＭ、もしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ３（ａａ４１−ｗｔ＝Ｍ）は、Ｘ４１であってよく、あるいはＬに突然変異していてよく、
Ｍ１、Ｍ２及びＭ３の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
本発明の好ましい実施形態において、Ｍ１（ａａ６）は、Ｘ６であってよく、Ｋ、ＧもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ２（ａａ３９）は、Ｘ３９であってよく、あるいはＡ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、ＭもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ３（ａａ４１）は、Ｘ４１であってよく、あるいはＬに突然変異していてよく、
Ｍ１またはＭ２が突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000016
この配列では、Ｍ４（ａａ６２−ｗｔ＝Ａ）は、Ｘ６２であってよく、あるいはＶに突然変異していてよく、
Ｍ５（ａａ６５−ｗｔ＝Ｋ）は、Ｘ６５であってよく、あるいはＲに突然変異していてよく、
Ｍ６（ａａ６７−ｗｔ＝Ｄ）は、Ｘ６７であってよく、あるいはＮもしくはＧに突然変異していてよく、
Ｍ７（ａａ６８−ｗｔ＝Ｓ）は、Ｘ６８であってよく、あるいはＧもしくはＮに突然変異していてよく、
Ｍ８（ａａ６９−ｗｔ＝Ｔ）は、Ｘ６９であってよく、あるいは主としてＤ、もしくはＮ、もしくはＳ、もしくはＡに突然変異しているか、またはＳＧ、ＳＸ、ＳＳＡ、ＳＳＧ、ＳＳＳ、ＳＥＡ、ＳＴＳ、ＡＳＧ、ＳＸＸもしくはＸＸＸのような複数の挿入と組み合わされていてよく、
Ｍ９（ａａ７０−ｗｔ＝Ｋ）は、Ｘ７０であってよく、あるいは主としてＲ、もしくはＮ、もしくはＥ、もしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ１０（ａａ７４−ｗｔ＝Ｌ）は、Ｘ７４であってよく、あるいは主としてＶもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ１１（ａａ７５−ｗｔ＝Ｖ）は、Ｘ７５であってよく、あるいは主としてＭ、もしくはＩ、もしくはＬもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ１２（ａａ７７−ｗｔ＝Ｆ）は、Ｘ７７であってよく、あるいは主としてＬに突然変異していてよく、
Ｍ４〜Ｍ１２の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
本発明の好ましい実施形態において、Ｍ４（ａａ６２）は、Ｘ６２であってよく、あるいはＶに突然変異していてよく、
Ｍ５（ａａ６５）は、Ｘ６５であってよく、あるいはＲに突然変異していてよく、
Ｍ６（ａａ６７）は、Ｘ６７であってよく、あるいはＮもしくはＧに突然変異していてよく、
Ｍ７（ａａ６８）は、Ｘ６８であってよく、あるいはＧもしくはＮに突然変異していてよく、
Ｍ８（ａａ６９）は、Ｘ６９であってよく、あるいはＤ、Ｎ、ＳもしくはＡに突然変異しているか、またはＳＧ、ＳＸ、ＳＳＡ、ＳＳＧ、ＳＳＳ、ＳＥＡ、ＳＴＳ、ＡＳＧ、ＳＸＸもしくはＸＸＸのような複数の挿入と組み合わされていてよく、
Ｍ９（ａａ７０）は、Ｘ７０であってよく、あるいはＲ、Ｎ、ＥもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ１０（ａａ７４）は、Ｘ７４であってよく、あるいはＶもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ１１（ａａ７５）は、Ｘ７５であってよく、あるいはＭ、Ｉ、ＬもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ１２（ａａ７７）は、Ｘ７７であってよく、あるいはＬに突然変異していてよく、
Ｍ４、Ｍ７またはＭ１２の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000017
この配列では、Ｍ４（ａａ６２−ｗｔ＝Ａ）は、Ｘ６２であってよく、あるいは主としてＶに突然変異していてよく、
Ｍ５（ａａ６５−ｗｔ＝Ｋ）は、Ｘ６５であってよく、あるいは主としてＲに突然変異していてよく、
Ｍ６（ａａ６７−ｗｔ＝Ｄ）は、Ｘ６７であってよく、あるいは主としてＮもしくはＧに突然変異していてよく、
Ｍ７（ａａ６８−ｗｔ＝Ｓ）は、Ｘ６８であってよく、あるいは主としてＧもしくはＮに突然変異していてよく、
Ｍ８（ａａ６９−ｗｔ＝Ｔ）は、Ｘ６９であってよく、あるいは主としてＤ、もしくはＮ、もしくはＳ、もしくはＡに突然変異しているか、またはＳＧ、ＳＸ、ＳＳＡ、ＳＳＧ、ＳＳＳ、ＳＥＡ、ＳＴＳ、ＡＳＧ、ＳＸＸもしくはＸＸＸのような複数の挿入と組み合わされていてよく、
Ｍ９（ａａ７０−ｗｔ＝Ｋ）は、Ｘ７０であってよく、あるいは主としてＲ、もしくはＮ、もしくはＥ、もしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ１０（ａａ７４−ｗｔ＝Ｌ）は、Ｘ７４であってよく、あるいは主としてＶもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ１１（ａａ７５−ｗｔ＝Ｖ）は、Ｘ７５であってよく、あるいは主としてＭ、もしくはＩ、もしくはＬもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ１２（ａａ７７−ｗｔ＝Ｆ）は、Ｘ７７であってよく、あるいは主としてＬに突然変異していてよく、
Ｍ１３（ａａ８８−ｗｔ＝Ｗ）は、Ｘ８８であってよく、あるいは主としてＣに突然変異していてよく、
Ｍ１４（ａａ８９−ｗｔ＝Ｅ）は、Ｘ８９であってよく、あるいは主としてＧに突然変異していてよく、
Ｍ１５（ａａ９０−ｗｔ＝Ｖ）は、Ｘ９０であってよく、あるいは主としてＩに突然変異していてよく、
Ｍ１６（ａａ９８−ｗｔ＝Ａ）は、Ｘ９８であってよく、あるいは主としてＳもしくはＧに突然変異していてよく、
Ｍ１７（ａａ１００−ｗｔ＝Ｌ）は、Ｘ１００であってよく、あるいは主としてＩに突然変異していてよく、
Ｍ１８（ａａ１０１−ｗｔ＝Ｋ）は、Ｘ１０１であってよく、あるいは主としてＥ、もしくはＱ、もしくはＲ、もしくはＩ、もしくはＰに突然変異していてよく、
Ｍ１９（ａａ１０３−ｗｔ＝Ｋ）は、Ｘ１０３であってよく、あるいはＮ、主としてＱ、もしくはＲ、もしくはＴ、もしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ２０（ａａ１０６−ｗｔ＝Ｖ）は、Ｘ１０６であってよく、あるいは主としてＡ、もしくはＩ、もしくはＬに突然変異していてよく、
Ｍ２１（ａａ１０８−ｗｔ＝Ｖ）は、Ｘ１０８であってよく、あるいは主としてＩに突然変異していてよく、
Ｍ２２（ａａ１１５−ｗｔ＝Ｙ）は、Ｘ１１５であってよく、あるいは主としてＦに突然変異していてよく、
Ｍ２３（ａａ１１６−ｗｔ＝Ｆ）は、Ｘ１１６であってよく、あるいは主としてＹに突然変異していてよく、
Ｍ２４（ａａ１１９−ｗｔ＝Ｐ）は、Ｘ１１９であってよく、あるいは主としてＳに突然変異していてよく、
Ｍ４〜Ｍ２４の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
本発明の好ましい実施形態において、Ｍ４（ａａ６２）は、Ｘ６２であってよく、あるいはＶに突然変異していてよく、
Ｍ５（ａａ６５）は、Ｘ６５であってよく、あるいはＲに突然変異していてよく、
Ｍ６（ａａ６７）は、Ｘ６７であってよく、あるいはＮもしくはＧに突然変異していてよく、
Ｍ７（ａａ６８）は、Ｘ６８であってよく、あるいはＧもしくはＮに突然変異していてよく、
Ｍ８（ａａ６９）は、Ｘ６９であってよく、あるいはＤ、Ｎ、ＳもしくはＡに突然変異しているか、またはＳＧ、ＳＸ、ＳＳＡ、ＳＳＧ、ＳＳＳ、ＳＥＡ、ＳＴＳ、ＡＳＧ、ＳＸＸもしくはＸＸＸのような複数の挿入と組み合わされていてよく、
Ｍ９（ａａ７０）は、Ｘ７０であってよく、あるいはＲ、Ｎ、ＥもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ１０（ａａ７４）は、Ｘ７４であってよく、あるいはＶもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ１１（ａａ７５）は、Ｘ７５であってよく、あるいはＭ、Ｉ、ＬもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ１２（ａａ７７）は、Ｘ７７であってよく、あるいはＬに突然変異していてよく、
Ｍ１３（ａａ８８）は、Ｘ８８であってよく、あるいはＣに突然変異していてよく、
Ｍ１４（ａａ８９）は、Ｘ８９であってよく、あるいはＧに突然変異していてよく、
Ｍ１５（ａａ９０）は、Ｘ９０であってよく、あるいはＩに突然変異していてよく、
Ｍ１６（ａａ９８）は、Ｘ９８であってよく、あるいはＧもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ１７（ａａ１００）は、Ｘ１００であってよく、あるいはＩに突然変異していてよく、
Ｍ１８（ａａ１０１）は、Ｘ１０１であってよく、あるいはＥ、Ｑ、Ｒ、ＩもしくはＰに突然変異していてよく、
Ｍ１９（ａａ１０３）は、Ｘ１０３であってよく、あるいはＮ、Ｑ、Ｒ、ＴもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ２０（ａａ１０６）は、Ｘ１０６であってよく、あるいはＡ、ＩもしくはＬに突然変異していてよく、
Ｍ２１（ａａ１０８）は、Ｘ１０８であってよく、あるいはＩに突然変異していてよく、
Ｍ２２（ａａ１１５）は、Ｘ１１５であってよく、あるいはＦに突然変異していてよく、
Ｍ２３（ａａ１１６）は、Ｘ１１６であってよく、あるいはＹに突然変異していてよく、
Ｍ２４（ａａ１１９）は、Ｘ１１９であってよく、あるいはＳに突然変異していてよく、
Ｍ４、Ｍ７、Ｍ１２〜Ｍ２１、Ｍ２３またはＭ２４の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000018
この配列では、Ｍ２５（ａａ１３８−ｗｔ＝Ｅ）は、Ｘ１３８であってよく、あるいは主としてＡ、もしくはＧ、もしくはＫ、もしくはＱに突然変異していてよく、
Ｍ２６（ａａ１３９−ｗｔ＝Ｔ）は、Ｘ１３９であってよく、あるいは主としてＩ、もしくはＭもしくはＫに突然変異していてよく、
Ｍ２７（ａａ１４１−ｗｔ＝Ｇ）は、Ｘ１４１であってよく、あるいは主としてＥに突然変異していてよく、
Ｍ２８（ａａ１５１−ｗｔ＝Ｑ）は、Ｘ１５１であってよく、あるいは主としてＭに突然変異していてよく、
Ｍ２９（ａａ１５７−ｗｔ＝Ｐ）は、Ｘ１５７であってよく、あるいは主としてＳに突然変異していてよく、
Ｍ２５〜Ｍ２９の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
本発明の好ましい実施形態において、
Ｍ２５（ａａ１３８）は、Ｘ１３８であってよく、あるいはＡ、Ｇ、ＫもしくはＱに突然変異していてよく、
Ｍ２６（ａａ１３９）は、Ｘ１３９であってよく、あるいはＩ、ＭもしくはＫに突然変異していてよく、
Ｍ２７（ａａ１４１）は、Ｘ１４１であってよく、あるいはＥに突然変異していてよく、
Ｍ２８（ａａ１５１）は、Ｘ１５１であってよく、あるいはＭに突然変異していてよく、
Ｍ２９（ａａ１５７）は、Ｘ１５７であってよく、あるいはＳに突然変異していてよく、
Ｍ２５〜Ｍ２８の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000019
この配列中、Ｍ３０（ａａ１７２−ｗｔ＝Ｒ）は、Ｘ１７２であってよく、あるいは主としてＫに突然変異していてよく、
Ｍ３１（ａａ１７８−ｗｔ＝Ｉ）は、Ｘ１７８であってよく、あるいは主としてＭ、ＬもしくはＦに突然変異していてよく、
Ｍ３２（ａａ１７９−ｗｔ＝Ｖ）は、Ｘ１７９であってよく、あるいは主としてＩ、もしくはＬ、もしくはＤもしくはＥに突然変異していてよく、
Ｍ３３（ａａ１８１−ｗｔ＝Ｙ）は、Ｘ１８１であってよく、あるいは主としてＣもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ３４（ａａ１８４−ｗｔ＝Ｍ）は、Ｘ１８４であってよく、あるいは主としてＶ、もしくはＩもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ３５（ａａ１８８−ｗｔ＝Ｙ）は、Ｘ１８８であってよく、あるいは主としてＬ、もしくはＣもしくはＨに突然変異していてよく、
Ｍ３６（ａａ１８９−ｗｔ＝Ｖ）は、Ｘ１８９であってよく、あるいは主としてＩに突然変異していてよく、
Ｍ３７（ａａ１９０−ｗｔ＝Ｇ）は、Ｘ１９０であってよく、あるいは主としてＡ、もしくはＳ、もしくはＥ、もしくはＱもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ３０〜Ｍ３７の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
本発明の好ましい実施形態において、
Ｍ３０（ａａ１７２）は、Ｘ１７２であってよく、あるいはＫに突然変異していてよく、
Ｍ３１（ａａ１７８）は、Ｘ１７８であってよく、あるいはＭ、ＬもしくはＦに突然変異していてよく、
Ｍ３２（ａａ１７９）は、Ｘ１７９であってよく、あるいはＩ、Ｌ、ＤもしくはＥに突然変異していてよく、
Ｍ３３（ａａ１８１）は、Ｘ１８１であってよく、あるいはＣもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ３４（ａａ１８４）は、Ｘ１８４であってよく、あるいはＶ、ＩもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ３５（ａａ１８８）は、Ｘ１８８であってよく、あるいはＬ、ＣもしくはＨに突然変異していてよく、
Ｍ３６（ａａ１８９）は、Ｘ１８９であってよく、あるいはＩに突然変異していてよく、
Ｍ３７（ａａ１９０）は、Ｘ１９０であってよく、あるいはＡ、Ｓ、Ｅ、ＱもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ３０、Ｍ３３、Ｍ３５〜Ｍ３７の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000020
この配列では、Ｍ３０（ａａ１７２−ｗｔ＝Ｒ）は、Ｘ１７２であってよく、あるいは主としてＫに突然変異していてよく、
Ｍ３１（ａａ１７８−ｗｔ＝Ｉ）は、Ｘ１７８であってよく、あるいは主としてＭもしくはＬに突然変異していてよく、
Ｍ３２（ａａ１７９−ｗｔ＝Ｖ）は、Ｘ１７９であってよく、あるいは主としてＩ、もしくはＬ、もしくはＤもしくはＥに突然変異していてよく、
Ｍ３３（ａａ１８１−ｗｔ＝Ｙ）は、Ｘ１８１であってよく、あるいは主としてＣもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ３４（ａａ１８４−ｗｔ＝Ｍ）は、Ｘ１８４であってよく、あるいは主としてＶ、もしくはＩもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ３０〜Ｍ３４の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
本発明の好ましい実施形態において、
Ｍ３０（ａａ１７２）は、Ｘ１７２であってよく、あるいはＫに突然変異していてよく、
Ｍ３１（ａａ１７８）は、Ｘ１７８であってよく、あるいはＭ、ＬもしくはＦに突然変異していてよく、
Ｍ３２（ａａ１７９）は、Ｘ１７９であってよく、あるいはＩ、Ｌ、ＤもしくはＥに突然変異していてよく、
Ｍ３３（ａａ１８１）は、Ｘ１８１であってよく、あるいはＣもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ３４（ａａ１８４）は、Ｘ１８４であってよく、あるいはＶ、ＩもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ３０、Ｍ３２またはＭ３３の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000021
この配列では、Ｍ３４（ａａ１８４−ｗｔ＝Ｍ）は、Ｘ１８４であってよく、あるいは主としてＶ、もしくはＩもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ３５（ａａ１８８−ｗｔ＝Ｙ）は、Ｘ１８８であってよく、あるいは主としてＬ、もしくはＣもしくはＨに突然変異していてよく、
Ｍ３６（ａａ１８９−ｗｔ＝Ｖ）は、Ｘ１８９であってよく、あるいは主としてＩに突然変異していてよく、
Ｍ３７（ａａ１９０−ｗｔ＝Ｇ）は、Ｘ１９０であってよく、あるいは主としてＡ、もしくはＳ、もしくはＥ、もしくはＱもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ３４〜Ｍ３７の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
本発明の好ましい実施形態において、
Ｍ３４（ａａ１８４）は、Ｘ１８４であってよく、
Ｍ３５（ａａ１８８）は、Ｘ１８８であってよく、あるいはＬ、ＣもしくはＨに突然変異していてよく、
Ｍ３６（ａａ１８９）は、Ｘ１８９であってよく、あるいはＩに突然変異していてよく、
Ｍ３７（ａａ１９０）は、Ｘ１９０であってよく、あるいはＡ、Ｓ、Ｅ、ＱもしくはＴに突然変異していてよく、
Ｍ３５〜Ｍ３７の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000022
この配列では、Ｍ３８（ａａ２０８−ｗｔ＝Ｈ）は、Ｘ２０８であってよく、あるいは主としてＹに突然変異していてよく、
Ｍ３９（ａａ２１０−ｗｔ＝Ｌ）は、Ｘ２１０であってよく、あるいは主としてＷに突然変異していてよく、
Ｍ４０（ａａ２１１−ｗｔ＝Ｒ）は、Ｘ２１１であってよく、あるいは主としてＫ、もしくはＡ、もしくはＥ、もしくはＮ、もしくはＤ、もしくはＧもしくはＱに突然変異していてよく、
Ｍ４１（ａａ２１４−ｗｔ＝ＦまたはＬ）は、Ｘ２１４であってよく、あるいは主としてＬもしくはＦに突然変異していてよく、
Ｍ４２（ａａ２１５−ｗｔ＝Ｔ）は、Ｘ２１５であってよく、あるいは主としてＹ、もしくはＦもしくはＣに突然変異していてよく、
Ｍ４３（ａａ２１９−ｗｔ＝Ｋ）は、Ｘ２１９であってよく、あるいは主としてＱ、もしくはＥ、もしくはＮ、もしくはＲ、もしくはＴもしくはＷに突然変異していてよく、
Ｍ４４（ａａ２２３−ｗｔ＝Ｋ）は、Ｘ２２３であってよく、あるいは主としてＱに突然変異していてよく、
Ｍ４５（ａａ２２５−ｗｔ＝Ｐ）は、Ｘ２２５であってよく、あるいは主としてＨに突然変異していてよく、
Ｍ４６（ａａ２２７−ｗｔ＝Ｆ）は、Ｘ２２７であってよく、あるいは主としてＬに突然変異していてよく、
Ｍ４７（ａａ２２８−ｗｔ＝Ｌ）は、Ｘ２２８であってよく、あるいは主としてＲ、もしくはＨもしくはＦに突然変異していてよく、
Ｍ４８（ａａ２３３−ｗｔ＝Ｅ）は、Ｘ２３３であってよく、あるいは主としてＶもしくはＮに突然変異していてよく、
Ｍ４９（ａａ２３４−ｗｔ＝Ｌ）は、Ｘ２３４であってよく、あるいは主としてＩ、もしくはＨもしくはＰに突然変異していてよく、
Ｍ５０（ａａ２３６−ｗｔ＝Ｐ）は、Ｘ２３６であってよく、あるいは主としてＭ、もしくはＳもしくはＬに突然変異していてよく、
Ｍ５１（ａａ２３８−ｗｔ＝Ｋ）は、Ｘ２３８であってよく、あるいは主としてＴもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ５２（ａａ２４０−ｗｔ＝Ｔ）は、Ｘ２４０であってよく、あるいは主としてＡ、もしくはＤもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ３８〜Ｍ５２の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
本発明の好ましい実施形態において、
Ｍ３８（ａａ２０８）は、Ｘ２０８であってよく、あるいはＹに突然変異していてよく、
Ｍ３９（ａａ２１０）は、Ｘ２１０であってよく、あるいはＷに突然変異していてよく、
Ｍ４０（ａａ２１１）は、Ｘ２１１であってよく、あるいはＫ、Ａ、Ｅ、Ｎ、Ｄ、ＧもしくはＱに突然変異していてよく、
Ｍ４１（ａａ２１４）は、Ｘ２１４であってよく、あるいはＬもしくはＦに突然変異していてよく、
Ｍ４２（ａａ２１５）は、Ｘ２１５であってよく、あるいはＹ、ＦもしくはＣに突然変異していてよく、
Ｍ４３（ａａ２１９）は、Ｘ２１９であってよく、あるいはＱ、Ｅ、Ｎ、Ｒ、ＴもしくはＷに突然変異していてよく、
Ｍ４４（ａａ２２３）は、Ｘ２２３であってよく、あるいはＱに突然変異していてよく、
Ｍ４５（ａａ２２５）は、Ｘ２２５であってよく、あるいはＨに突然変異していてよく、
Ｍ４６（ａａ２２７）は、Ｘ２２７であってよく、あるいはＬに突然変異していてよく、
Ｍ４７（ａａ２２８）は、Ｘ２２８であってよく、あるいはＲ、ＨもしくはＦに突然変異していてよく、
Ｍ４８（ａａ２３３）は、Ｘ２３３であってよく、あるいはＶもしくはＮに突然変異していてよく、
Ｍ４９（ａａ２３４）は、Ｘ２３４であってよく、あるいはＩ、ＨもしくはＰに突然変異していてよく、
Ｍ５０（ａａ２３６）は、Ｘ２３６であってよく、あるいはＭ、ＳもしくはＬに突然変異していてよく、
Ｍ５１（ａａ２３８）は、Ｘ２３８であってよく、あるいはＴもしくはＳに突然変異していてよく、
Ｍ５２（ａａ２４０）は、Ｘ２４０であってよく、あるいはＡ、ＤもしくはＩに突然変異していてよく、
Ｍ３８、Ｍ４０、Ｍ４４〜Ｍ５２の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
2005503418.tif 000023
この配列では、Ｍ５３（ａａ３３３−ｗｔ＝Ｇ）はＥもしくはＤに突然変異していてよい。
【００３５】
本発明はまた、製薬上許容される賦形剤中に分散している少なくとも１つのペプチドに基づき、ワクチンとしてそれ（それら）を使用するための薬剤組成物に関する。
【００３６】
本発明による薬剤組成物は、サイトカインまたはケモカインのような免疫調節因子もさらに含んでいてよい。
【００３７】
脂質（脂肪酸、リン脂質、フロイント不完全アジュバント）、アニオンコポリマー、ＣｐＧユニット等のアジュバントを本発明による薬剤組成物に加えることができる。
【００３８】
本発明の実施形態において、本発明による少なくとも１つのペプチドがリポペプチドまたはリポタンパク質の組成を構成している。実際、ペプチドと脂肪酸またはリン脂質配列との結合により、抗原のみを投与することによりもたらされる場合と比較して免疫原性反応の増強を認めることが可能になる。
【００３９】
本発明によるペプチドは、多糖コアからなり、かつ／または特に脂質二重層で被覆されたマイクロ粒子またはナノ粒子に結合させることができる。それらはまた、１つまたは複数のリポソームあるいは１つまたは複数のニオソームに結合させることができる。
【００４０】
本発明によるペプチドは、組換えウイルス、または組換えウイルスベクター、または弱毒化もしくは不活性ウイルスにおいて発現させることができる。
【００４１】
本発明によるペプチドは、組換え細菌、または組換え細菌ベクターにおいて発現させることができる。
【００４２】
本発明によるペプチドは、抗原提示細胞において発現させることができる。
【００４３】
本発明の他の対象は、本発明による少なくとも１つのペプチドをコードしている少なくとも１つの裸のＤＮＡまたは裸のＲＮＡを含むワクチンである。
【００４４】
本発明の他の対象は、ＮＲＴＩ及び／又はＮＮＲＴＩファミリーの少なくとも１つの医薬品を含む第１の組成物と、本発明による少なくとも１つのペプチドを含む第２の組成物の、少なくとも２つの組成物を含むＨＩＶ感染患者を治療するための薬剤である。これらの組成物は、順次、おそらく経時的に個別に、あるいは同時に投与するためのものである。
【００４５】
好ましくは、ＨＩＶ感染患者を治療するための薬剤は、ＮＮＲＴＩファミリーの少なくとも１つの医薬品を含む第１の組成物と、本発明による少なくとも１つのペプチドを含む第２の組成物との、少なくとも２つの組成物を含む。
【００４６】
本発明の他の対象は、ＨＩＶウイルス感染を予防または治療する方法である。この方法は、本発明によるワクチンの投与に反応する特異的Ｔ免疫応答を誘導することにある。好ましくは、ＨＩＶウイルスにおける突然変異が逆転写酵素内に位置する。
【００４７】
本発明の他の対象は、ワクチン接種時に導入される、ワクチン接種の前に対応するペプチド配列に対して特異的なＴ細胞によりエピトープ配列として認識される、８〜２０アミノ酸のペプチド配列である。
【００４８】
本発明によるエピトープ配列は、少なくとも１つの突然変異Ｍｐを有するペプチド配列Ａ〜Ｋから選択される８〜２０個の連続アミノ酸のペプチド配列である。好ましくは、これらのペプチド配列は、少なくとも１つの突然変異Ｍｐを有するペプチド配列Ａ〜Ｋから選択される８〜１０個の連続アミノ酸からなっている。より好ましくは、本発明によるエピトープ配列は、少なくとも１つの突然変異Ｍｐを有するペプチド配列Ａ〜Ｋから選択される９個の連続アミノ酸からなっている。
【００４９】
記載した特性を有するエピトープ配列は、これらのエピトープに対して特異的なＴ細胞を確定し、定量するために用いることができる。
【００５０】
本発明の対象はまた、とりわけ本発明による少なくとも１つのエピトープ配列を含むことを特徴とする、これらのエピトープ配列に対して特異的なＴ細胞を確定するための診断用組成物である。
【００５１】
本発明の方法により得られるワクチンは、皮下、筋肉内、皮内または静脈内投与用の薬剤組成物として処方することができる。この種のワクチンを投与する技術は、文献に十分に記載されており、当業者によく知られている。
【００５２】
用いる投与手法に応じて製薬上許容される賦形剤を用いることができる。生理食塩水のような水性賦形剤を特に加えることができる。これらの溶液は無菌的であり、毒性物質または発熱物質を含まない。
【００５３】
本発明による組成物は、通常の既知の滅菌法により滅菌することができる。
【００５４】
投与方法によって、本発明による組成物は診断に通常用いられるすべての形態であってよい。
【００５５】
本発明による組成物は、生理的条件下にあるように、ｐＨ安定剤、緩衝剤、あるいは、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどの製薬上許容される物質を特に含んでいてよい。
【００５６】
以下の実施例は、いかなる点においても本発明を限定することなく、本発明を例示するものである。
【実施例１】
【００５７】
ＣＴＬ株の作製：
ＲＴ特異的ＣＴＬ応答に基づく、ＮＲＴＩ投与下で誘発された突然変異の結果を調査した。プロテアーゼ阻害薬を含まないＮＲＴＩによる単剤または二剤療法による治療を受けていた、または受けていなかった３５例の患者から合計６６血液試料を１９９１年から１９９６年まで１〜６年間にわたり毎年採取した。
【００５８】
ＨＩＶ−１ウイルスｐｏｌ及びｒｔ遺伝子産物の認識を分析するために、患者からのＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）と自己由来ＰＨＡ−芽球とを同時培養することにより、ＨＩＶ特異株を発生させた。５％ＣＯ２湿潤雰囲気中で３７℃で１８時間にわたり２μｇ／ｍｌのＰＨＡ（フィトヘマグルチニン）で刺激し、５０００ｒａｄで照射したＰＢＭＣを解凍したばかりの自己由来ＰＢＭＣに１：５の比率で加え、２４ウェルプレートに１×１０６／ｍｌの濃度で加えた。ＣＴＬ株を、培養第３日目とその後３日ごとに加えた２０Ｕ／ｍｌのインターロイキン２の存在下で少なくとも３週間にわたり培養した。少なくとも３週間の培養後に、これらの株を細胞障害活性について、標的として働く自己由来Ｂ−ＥＢＶ株（ＥＢＶで形質転換したＢリンパ球）に対して試験した。
【００５９】
ＮＮＲＴＩの投与下、またはＮＮＲＴＩとＮＲＴＩとの併用投与下で誘発された突然変異に関して同じ方法を用いた。
【実施例２】
【００６０】
ＣＴＬアッセイ：
ＣＴＬ活性は、５１クロム放出アッセイを用いて測定した。標的細胞は、ＣＴＬアッセイの１８時間前に、ＨＩＶ−１のｐｏｌ遺伝子またはｐｏｌ遺伝子のフラグメントを発現する種々の組換えワクシニアウイルスを５ＰＦＵ（プラーク形成単位）／細胞の感染多重度で感染させた自己由来Ｂ−ＥＢＶ株である。非組換え野生型ワクシニアウイルス（Ｖａｃ−ＷＴ）を対照とする。７０μｃｉ／１０６細胞の濃度のＮａ２５１ＣｒＯ４（比活性２ｍｃｉ／ｍｌ）の存在下で３７℃で２時間、標的細胞をペレットとしてインキュベートする。実測放射能は、次の式により計算する。すなわち、（実験での放出−自然放出）／（全放出−自然放出）×１００＝比溶解率（％）。少なくとも２連続エフェクター／標的比において得られる比溶解率が１０％より大きい場合、ＣＴＬ応答は陽性とみなされる。
【００６１】
ＲＴ−１：１−１４３及びＲＴ−２：１４３−２９３領域の認識の分析は、Ｐｏｌ特異的ＣＴＬ株について行った。細胞障害性Ｔ応答は、クロム５１放出アッセイを用いて評価した。標的細胞は、種々のｒｔ遺伝子フラグメント（ＲＴ−１：１−１４３及びＲＴ−２：１４３−２９３）を発現したワクシニアウイルスを感染させた自己由来Ｂ−ＥＢＶ株であった。
【実施例３】
【００６２】
耐性突然変異の検出：
プロウイルスＤＮＡにおける耐性突然変異をＬｉＰＡ  ＨＩＶ−１  ＲＴアッセイ（Ｍｕｒｅｘ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＳＡ、Ｃｈａｔｉｌｌｏｎ、フランス）を用いて検出した。このアッセイでは、「野生型」配列と、ヌクレオシドＲＴ阻害薬（ＮＲＴＩ）により誘発された耐性突然変異配列（４１、６９、７０、７４、１８４、２１４及び２１５）との検出が可能である。ＰＢＭＣから分離したＤＮＡを用い、ｒｔ遺伝子の増幅をビオチニル化プライマーを用いて行い、次いで、ビオチニル化ＤＮＡを、ストリップ上の平行ラインに固定した特異的オリゴヌクレオチドプローブとハイブリッド形成させる。アルカリホスファターゼ標識ストレプトアビジンの添加により、生成したビオチニル化ハイブリッドとそれとの結合が生じて、紫／褐色沈殿が生成する。種々のコドンに位置する野生型及び突然変異ｒｔ配列は、同じストリップ上に位置させることができる。
【実施例４】
【００６３】
ＥＬＩＳｐｏｔアッセイ
エピトープペプチドの認識のために、ＰＢＭＣを事前に刺激せずに目的のペプチドとともにインキュベートした、ＥＬＩＳｐｏｔ−γＩＦＮアッセイを用いた。
【００６４】
Ｉｍｍｏｂｉｌｏｎ  ｐプレート（ミリポア、Ｍｏｌｓｈｅｉｍ、フランス）の９６ウェルをモノクローナル抗γＩＦＮ（γ−インターフェロン）捕捉抗体（１μｇ／ｍｌのＩｇＧ１Ｂ−Ｂ１、Ｄｉａｃｌｏｎｅ、Ｂｅｓａｎｃｏｎ、フランス）を４℃で１８時間被覆した。３回洗浄した後、５μｇ／ｍｌのペプチド、またはポジティブコントロールとして用いる０．５μｇ／ｍｌのＰＨＡ、またはネガティブコントロールとして用いる培地のみの存在下で、ＰＢＭＣをウェル当たり１×１０５及び５×１０４細胞の濃度で３つ組で加える。次いで、プレートを５％ＣＯ２湿潤雰囲気中で３７℃で４０時間インキュベートした後、洗浄し、次いで、モノクローナル抗γＩＦＮ検出抗体（０．２μｇ／ｍｌのＢ−Ｇ１、Ｄｉａｃｌｏｎｅ、Ｂｅｓａｎｃｏｎ、フランス）を加え、プレートを再び３７℃で４時間インキュベートする。洗浄後、アルカリホスファターゼ標識ストレプトアビジン（アマシャム、Ｌｅｓ  Ｕｌｉｓ、フランス）を加え、プレートを３７℃で１時間インキュベートする。次いで、プレートを洗浄し、ＢＣＩＰ／ＮＴＰ（シグマ アルドリッチ、Ｓａｉｎｔ  Ｑｕｅｎｔｉｎ、フランス）とともにインキュベートすると、１０〜１５分後に紫色のスポットが出現する。プレートを水で洗浄して、反応を停止させる。スポットを自動ＥＬＩＳｐｏｔリーダーを用いて計数する。ネガティブコントロール値を差し引いた後、特異的レスポンダーＴ細胞数を計算する。γＩＦＮを分泌する細胞の頻度をＳＦＣ（スポット形成細胞）として示す。
【実施例５】
【００６５】
配列Ｂ（ａａ  ３０〜５０）の、長さが８〜２１アミノ酸の範囲の種々のペプチドへのフラグメント化
治療または診断への適用のために、ペプチド配列を少なくとも１つの突然変異を含む配列のいずれかの部分を含む８〜８０アミノ酸（ａａ）のペプチドにフラグメント化する。
【００６６】
Ｍ２が突然変異ａａ３９（Ａ）に対応し、Ｍ３が突然変異ａａ４１（Ｌ）に対応するペプチド配列３０〜５０について：
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【実施例６】
【００６７】
患者２０１＃５の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から分離したプロウイルスＤＮＡにおける耐性突然変異の検出
ＮＲＴＩを投与した患者２０１＃５について、プロウイルスＤＮＡにおける耐性突然変異の検出をＬｉＰＡ  ＨＩＶ−１  ＲＴアッセイ（実施例３を参照）を用いて実施した。ＬｉＰＡアッセイにより、所与の配列内の点突然変異アミノ酸の定義が可能であり、核酸配列のそれは可能ではない。ＤＮＡにおける耐性突然変異を検出する方法を図１に要約する。
【００６８】
このアッセイを用いて我々はこの患者について突然変異４１、１８４及び２１５を検出した。
【００６９】
したがって、患者２０１＃５からの試料のＲＴ配列は次のとおりである。
Ｘｘ４１（Ｌ）Ｘｘ１８４（Ｖ）Ｘｘ２１５（ＹまたはＦ）Ｘｘ
上記配列中、Ｘｘは対照アミノ酸配列を表す。
【実施例７】
【００７０】
患者２０１＃５からのＰＢＭＣにおける突然変異４１（Ｍ＞Ｌ）の免疫原性のエキソビボ評価
ガンマ−ＩＦＮ産生ＣＤ８細胞によるＲＴ突然変異４１（Ｍ＞Ｌ）の認識をＮＲＴＩを投与した患者２０１＃５について試験する。突然変異４１は、これらの同じＰＢＭＣから分離されたプロウイルスＤＮＡ上で検出された（実施例６を参照）。野生型及び突然変異ペプチド３３〜４１の認識をＥＬＩＳｐｏｔにより評価した。
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【００７１】
突然変異ペプチド３３〜４１の認識の頻度は９５個ＳＦＣ／１０６個ＰＢＭＣであり、野生型ペプチド３３〜４１のそれは３個ＳＦＣ／１０６個ＰＢＭＣである。
【実施例８】
【００７２】
リポペプチドの構造
リポペプチドの一般的構造を図２に記述する。
【００７３】
リポペプチドは、式Ｃ１６Ｈ３２Ｏ２またはＣ１５Ｈ３１−ＣＯＯＨと本文に記載するパルミチン酸、リシン残基（ペプチドのＮ末端に付加されている塩基性アミノ酸）及び記載する配列から選択される構造であるペプチドにより構成されている。
【００７４】
ペプチド３０〜５０（配列Ｂ）については以下のとおりである。
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この配列では、Ｍ２（ａａ３９）は、Ｘ３９であってよく、あるいはＡ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、ＭもしくはＳに突然変異していてよく、Ｍ３（ａａ４１）は、Ｘ４１であってよく、あるいはＬに突然変異していてよく、Ｍ２及びＭ３の少なくとも１つが突然変異を担っているアミノ酸を表す。
【００７５】
＊  ＮＲＴＩにより誘発された耐性突然変異３９及び４１を含む配列３０〜５０により構成されているリポペプチドの例
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このペプチドをａａ３０〜ａａ５０と称する（ａａ５０＝Ｉ）。
【００７６】
この実施例では、リシンが、イソロイシン（Ｉ）であるアミノ酸５０に付加されている。以下の反応により、リシン側鎖のアミン機能がパルミチン酸により修飾され、Ｃ末端アミノ酸がアミド化されている。
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【００７７】
この構造は、工業的方法に応じて異なる。したがって、リシンをペプチドのＣ末端に付加することができる。
【００７８】
次いで、この構造を、ヒトにおける免疫化のために使用する前の臨床的バッチを得るのに必要な条件に対応する工業的方法により精製し、調整する。
【図面の簡単な説明】
【００７９】
【図１】ＤＮＡにおける耐性突然変異を検出する方法を示す図である。
【図２】リポペプチドの構造を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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