(57)【要約】本発明は、式（ＩＩ）の化合物ならびにそれらの医薬適合性の塩および水和物を包含する。本化合物は、骨髄、臓器および組織移植拒絶反応などの免疫媒介疾患および状態の治療に有用である。医薬組成物および使用法も包含する。    【化１６】2005531508.tif 000027
2005531508.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式ＩＩ：
【化１】
2005531508.tif 000024
（式中、
ｍ＝１、２、３または４；
Ｐ＝９から２０；
Ｘは、結合、Ｏ、ＮＨ、Ｓ（Ｏ）ｋ（この場合、ｋは、０、１または２である）であり；
Ａは、−ＣＯ２Ｈ、−ＰＯ３Ｈ２、−ＰＯ２Ｈ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＰＯ（Ｒ８）ＯＨおよび下記：
【化２】
2005531508.tif 000025
から成る群より選択され、
各Ｒ１は、水素、ハロ、ヒドロキシ、−ＣＯ２Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルキルチオおよびアリールから成る群より独立して選択され、この場合、前記Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシおよびＣ１〜４アルキルチオは、一から最大数の置換可能位置をハロで、各々、場合によっては置換されており、前記アリールは、ハロおよびＣ１〜４アルキルから独立して選択された１個から５個の置換基で場合によっては置換されており；または
隣接する炭素原子上の２個のＲ１基は一緒になって、二重結合を形成していることがあり；
各Ｒ３は、水素、ハロ、ヒドロキシ、−ＣＯ２Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルキルチオおよびアリールから成る群より独立して選択され、この場合、前記Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシおよびＣ１〜４アルキルチオは、一から最大数の置換可能位置をハロで、各々、場合によっては置換されており、前記アリールは、ハロおよびＣ１〜４アルキルから独立して選択された１個から５個の置換基で場合によっては置換されており；または
隣接する炭素原子上の２個のＲ３基は一緒になって、二重結合を形成していることがあり；ならびに
Ｒ２およびＲ４は、水素、ハロ、ヒドロキシ、−ＣＯ２Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルキルチオおよびアリールから成る群より各々独立して選択され、この場合、前記Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシおよびＣ１〜４アルキルチオは、一から最大数の置換可能位置をハロで、各々、場合によっては置換されており、前記アリールは、ハロおよびＣ１〜４アルキルから独立して選択された１個から５個の置換基で場合によっては置換されており；または
同じ炭素原子上にあるＲ１とＲ２またはＲ３とＲ４が、場合によっては一緒になって、カルボニル基を形成していることがあり；
Ｒ８は、Ｃ１〜４アルキルおよびアリールから成る群より選択され、この場合、前記Ｃ１〜４アルキルは、１個から３個のハロ基で場合によっては置換されており、前記アリールは、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６アルキルチオおよびＣ３〜６シクロアルコキシ（前記Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６アルキルチオおよびＣ３〜６シクロアルコキシは、一から最大数の置換可能位置をハロで場合によっては置換されている）から成る群より独立して選択された１個から５個の置換基で場合によっては置換されており；
Ｒ９は、水素、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルキルチオおよびＣ３〜７シクロアルキルから成る群より選択され、この場合、前記Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルキルチオおよびＣ３〜７シクロアルキルは、各々独立して、一から最大数の置換可能位置をハロで場合によっては置換されており、前記アリールは、ハロおよびＣ１〜４アルキルから独立して選択された１個から５個の置換基で場合によっては置換されている）
によって表される化合物またはその医薬適合性の塩もしくは水和物。
【請求項２】
Ｘが、結合であり、ｍが、２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｘが、Ｏ、ＮＨまたはＳから選択され、ｍが、１である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ａが、−ＣＯ２Ｈ、−ＰＯ３Ｈ２、−ＰＯ２Ｈ２、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ（Ｒ８）ＯＨから成る群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
ｐが、９から１６である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
下記：
【化３】
2005531508.tif 000026
から成る群より選択される化合物。
【請求項７】
免疫調節異常の治療に有効な量の請求項１に記載の化合物を患者に投与することを含む、免疫調節異常をそうした治療が必要な哺乳動物の患者において治療する方法。
【請求項８】
前記免疫調節異常が、全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、Ｉ型糖尿病、炎症性腸疾患、胆汁性肝硬変、ブドウ膜炎、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、水疱性類天疱瘡、サルコイドーシス、乾癬、自己免疫性筋炎、ヴェグナー肉芽腫症、魚鱗癬、グレーブス眼症および喘息から成る群より選択される自己免疫または慢性炎症性疾患である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記免疫調節異常が、骨髄もしくは臓器移植拒絶反応または移植片対宿主疾患である、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記免疫調節異常が、臓器または組織の移植；移植によって生じる移植片対宿主疾患；関節リウマチを含む自己免疫性症候群；全身性エリテマトーデス；橋本甲状腺炎；多発性硬化症；重症筋無力症；Ｉ型糖尿病；ブドウ膜炎；後部ブドウ膜炎；アレルギー性脳脊髄炎；糸球状腎炎；リウマチ熱および感染後糸球状腎炎を含む感染後自己免疫疾患；炎症性および高増殖性皮膚疾患；乾癬；アトピー性皮膚炎；接触性皮膚炎；湿疹性皮膚炎；脂漏性皮膚炎；扁平苔癬、天疱瘡；水疱性類天疱瘡；表皮水疱症；じんま疹；血管性浮腫；脈管炎；紅斑；皮膚好酸球増加症；エリテマトーデス；アクネ；円形脱毛症；角結膜炎；春季結膜炎；ベーチェット病に随伴するブドウ膜炎；角膜炎；ヘルペス性角膜炎；円錐角膜；角膜上皮ジストロフィー；角膜白斑；眼天疱瘡；モーレン潰瘍；強膜炎；グレーブス眼病；フォークト−小柳−原田症候群；サルコイドーシス；花粉アレルギー；可逆性閉塞性気道疾患；気管支喘息；アレルギー性喘息；内因性喘息；外因性喘息；ほこり喘息；慢性または難治喘息性；遅発性喘息および気道反応亢進；気管支炎；胃潰瘍；虚血性疾患および血栓症に起因する血管損傷；虚血性腸疾患；炎症性腸疾患；壊死性全腸炎；熱傷に随伴する腸損傷；腹腔疾患；直腸炎；エオジン嗜好性胃腸炎；肥満細胞症；クローン病；潰瘍性大腸炎；偏頭痛；鼻炎；湿疹；間質性腎炎；グッドパスチャー症候群；溶血尿毒症症候群；糖尿病性腎障害；多発性筋炎；ギラン−バレー症候群；メニエール病；多発神経炎；多発性神経炎；単神経炎；神経根傷害；甲状腺機能亢進；バセドウ病；赤芽球癆；再生不良性貧血；低形成貧血；特発性血小板減少性紫斑病；自己免疫性溶血性貧血；無顆粒球症；悪性貧血；巨赤芽球性貧血；赤血球形成不全；骨粗鬆症；サルコイドーシス；肺線維症；特発性間質性肺炎；皮膚筋炎；尋常性白斑；尋常性魚鱗癬；羞明；皮膚Ｔ細胞リンパ腫；動脈硬化症；アテローム性動脈硬化症；大動脈炎症症候群；結節性多発性動脈炎；心筋症；強皮症；ヴェグナー肉芽腫；シェーグレン症候群；肥満症；好酸球性筋膜炎；歯肉、歯周組織、歯槽骨、歯のセメント質の病変；糸球状腎炎；脱毛を予防することによる、または発毛をもたらすことによる、ならびに／または発毛および育毛を促進することによる男性型脱毛症または老人性脱毛症；筋ジストロフィー；膿皮症およびセザール症候群；アジソン病；保存、移植または虚血性疾患時に発生する器官の虚血−再潅流傷害；エンドトキシンショック；偽膜性大腸炎；薬物または放射線に起因する大腸炎；虚血性急性腎不全；慢性腎不全；肺−酸素または薬物に起因する中毒症；肺癌；肺気腫；白内障；シデローシス；色素性網膜炎；老人性斑点性変性；硝子体瘢痕化；アルカリによる角膜の火傷；多形性紅斑性皮膚炎；線状ＩｇＡ水疱性皮膚炎およびセメント皮膚炎；歯肉炎；歯周炎；敗血症；膵臓炎；環境汚染、加齢、発癌、癌腫の転移および高山病に起因する疾病；ヒスタミンまたはロイコトリエン−Ｃ４放出に起因する疾病；ベーチェット病；自己免疫性肝炎；原発性胆汁性肝硬変；硬化性胆管炎；部分的肝臓切除；急性肝臓壊死；毒、ウイルス性肝炎、ショックまたは無酸素症に起因する壊死；Ｂ型ウイルス性肝炎；非Ａ非Ｂ型肝炎；肝硬変；アルコール性肝硬変；肝不全；劇症肝炎；遅発性肝不全、「慢性時急性」肝不全；化学療法作用の増強；サイトメガロウイルス感染症；ＨＣＭＶ感染症；ＡＩＤＳ；癌；老人性皮膚炎；外傷；ならびに慢性細菌感染症から成る群より選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記免疫調節異常が、多発性硬化症である、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
前記免疫調節異常が、関節リウマチである、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
前記免疫調節異常が、全身性エリトマトーデスである、請求項７に記載の方法。
【請求項１４】
前記免疫調節異常が、乾癬である、請求項７に記載の方法。
【請求項１５】
前記免疫調節異常が、移植された臓器または組織の拒絶反応である、請求項７に記載の方法。
【請求項１６】
前記免疫調節異常が、炎症性腸疾患である、請求項７に記載の方法。
【請求項１７】
前記免疫調節異常が、リンパ器官の悪性病変である、請求項７に記載の方法。
【請求項１８】
前記免疫調節異常が、急性および慢性リンパ性白血病およびリンパ腫である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
免疫抑制有効量の請求項１に記載の化合物を患者に投与することを含む、免疫抑制が必要な哺乳動物の患者における免疫系抑制方法。
【請求項２０】
医薬適合性の担体との組み合わせでの請求項１に記載の化合物を含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体作動薬であり、故に、二次リンパ組織においてリンパ球封鎖を生じることによる免疫抑制活性を有する化合物に関する。本発明は、そうした化合物を含有する医薬組成物および治療または予防の方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫抑制薬が、全身エリトマトーデス、慢性関節リウマチ、Ｉ型糖尿病、炎症性腸疾患、胆汁性肝硬変、ブドウ膜炎、多発性硬化症および他の疾患（クローン病、潰瘍性大腸炎、水疱性類天疱瘡、サルコイドーシス、乾癬、自己免疫性筋炎、ヴェグナー肉芽腫症、魚鱗癬、グレーブス眼症、アトピー性皮膚炎および喘息など）を含む多種多様な自己免疫および慢性炎症性疾患に有用であることは、証明されている。それらが、癌、リンパ腫および白血病の治療のための化学療法計画の一部として有用であることも証明されている。
【０００３】
これらの状態各々の根本的な病因は、全く異なっているかもしれないが、様々な自己抗体および／または自己反応性リンパ球の出現を共通して有する。そうした自己反応性は、正常な免疫系が管理する恒常的な調節の喪失に一部起因し得る。同様に、骨髄または臓器移植後、宿主リンパ球は、外来組織抗原を認識し、抗体、サイトカインおよび細胞毒を含む細胞と体液両方の反応を生じさせ始め、それらによって移植片拒絶反応が導かれる。
【０００４】
自己免疫または拒絶反応プロセスの一つの最終結果は、炎症性細胞およびそれらを放出するメディエイタによって生じる組織破壊である。ＮＳＡＩＤなどの抗炎症薬は、これらのメディエイタの作用または分泌を抑制するが、その疾病の免疫基盤を少しも修飾せずに、もっぱら作用する。他方、シクロホスファミドなどの細胞毒剤は、正常な反応も自己免疫反応も止めるような非特異的な方式で作用する。実際、そうした非特異的免疫抑制薬で治療した患者は、自己免疫疾患で死ぬがごとく感染で死ぬ可能性が高い。
【０００５】
シクロスポリンＡは、移植された臓器の拒絶反応を防止するために使用される薬物である。ＦＫ−５０６は、特に肝臓移植において、移植臓器拒絶反応の防止用に認可されているもう一つの薬物である。シクロスポリンＡおよびＦＫ−５０６は、身体の免疫系が、その天然保護物質の膨大な蓄積を移動させて、移植外来蛋白質を拒絶するのを阻止することにより作用する。シクロスポリンＡは、重症乾癬の治療用に認可されており、また、アトピー性皮膚炎の治療用に欧州の規制機関（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ａｇｅｎｃｉｅｓ）により認可されている。
【０００６】
シクロスポリンＡおよびＦＫ−５０６は、移植拒絶反応の遅延または抑制には有効であるが、腎毒性、神経毒性および胃腸の不快感を含む幾つかの望ましくない副作用の原因となることが知られている。それ故、これらの副作用を伴わない免疫抑制薬は、依然として開発され続けており、また、非常に望ましい。
【０００７】
免疫抑制化合物ＦＴＹ７２０は、目下、臨床試験中のリンパ球封鎖剤である。ＦＴＹ７２０は、哺乳動物体内で代謝されて、スフィンゴシン−１−リン酸受容体の強力な作動薬である化合物になる。スフィンゴシン−１−リン酸受容体の作動薬は、リンパ節およびパイエル斑において、リンパ球枯渇を伴うことなく、リンパ球（Ｔ細胞およびＢ細胞）の封鎖を誘導する。そうした免疫抑制は、臓器移植後および自己免疫疾患の治療における拒絶反応の防止に望ましい。
【０００８】
スフィンゴシン−１−リン酸は、造血細胞によって分泌され、貯蔵され、活性化血小板から放出される生物活性スフィンゴ脂質代謝産物である。Ｙａｔｏｍｉ，Ｙ．，Ｔ．Ｏｈｍｏｒｉ，Ｇ．Ｒｉｌｅ，Ｆ．Ｋａｚａｍａ，Ｈ．Ｏｋａｍｏｔｏ，Ｔ．Ｓａｎｏ，Ｋ．Ｓａｔｏｈ，Ｓ．Ｋｕｍｅ，Ｇ．Ｔｉｇｙｉ，Ｙ．Ｉｇａｒａｓｈｉ，およびＹ．Ｏｚａｋｉ，２０００．Ｂｌｏｏｄ．９６：３４３１−８。それは、細胞の増殖、分化、生残および運動を調節する系統のＧ蛋白結合受容体に対して作動薬として作用する。Ｆｕｋｕｓｈｉｍａ，Ｎ．，Ｉ．Ｉｓｈｉｉ，Ｊ．Ｊ．Ａ．Ｃｏｎｔｏｓ，Ｊ．Ａ．ＷｅｉｎｅｒおよびＪ．Ｃｈｕｎ．２００１．「（リゾリン脂質受容体（Ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ）」．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．４１：５０７−３４；Ｈｌａ，Ｔ．，Ｍ．−Ｊ．Ｌｅｅ，Ｎ．Ａｎｃｅｌｌｉｎ，Ｊ．Ｈ．ＰａｉｋおよびＭ．Ｊ．Ｋｌｕｋ．２００１．「リゾリン脂質  −  受容体の意外な新事実（Ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ  −  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｖｅｌａｔｉｏｎｓ）」．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２９４：１８７５−１８７８；Ｓｐｉｅｇｅｌ，Ｓ．およびＳ．Ｍｉｌｓｔｉｅｎ．２０００．「（新しい系統のスフィンゴシン−１−リン酸受容体の機能（Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ａ  ｎｅｗ  ｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎ  １−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ）」．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１４８４：１０７−１６；Ｐｙｎｅ，Ｓ．およびＮ．Ｐｈｙｎｅ．２０００．「内皮分化遺伝子系統のＧ蛋白結合受容体によるスフィンゴシン−１−リン酸のシグナリング（Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎ  １−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｖｉａ  ｔｈｅ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｇｅｎｅ  ｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ）」．Ｐｈａｒｍ．＆  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．８８：１１５−１３１。５つのスフィンゴシン−１−リン酸受容体が特定されており（Ｓ１Ｐ１、Ｓ１Ｐ２、Ｓ１Ｐ３、Ｓ１Ｐ４、およびＳ１Ｐ５。内皮分化遺伝子Ｅｄｇ１、Ｅｄｇ５、Ｅｄｇ３、Ｅｄｇ６、およびＥｄｇ８としても知られている）、これらは、広範にわたる細胞および組織分布を有し、ヒトおよび齧歯類においてよく維持されている（表参照）。Ｓ１Ｐ受容体への結合は、Ｇｑ−、Ｇｉ／ｏ、Ｇ１２−、Ｇ１３−およびＲｈｏ−依存性経路によりシグナル変換を惹起する。Ｓ１Ｐ１およびＳ１Ｐ３のリガンド誘発活性化は、脈管形成、走化性、ならびにＲａｃ−およびＲｈｏ−依存性経路により癒着性連結構築を促進し（Ｌｅｅ，Ｍ．−Ｊ．，Ｓ．Ｔｈａｎｇａｄａ，Ｋ．Ｐ．Ｃｌａｆｆｅｙ，Ｎ．Ａｎｃｅｌｌｉｎ，Ｃ．Ｈ．Ｌｉｕ，Ｍ．Ｋｌｕｋ，Ｍ．Ｖｏｌｐｉ，Ｒ．Ｉ．Ｓｈａ’ａｆｉおよびＴ．Ｈｌａ．１９９９．Ｃｅｌｌ．９９：３０１−１２参照）、これに対して、Ｓ１Ｐ２の作動は、神経突起の退縮を促進し（Ｖａｎ  Ｂｒｏｃｋｌｙｎ，Ｊ．Ｒ．，Ｚ．Ｔｕ，Ｌ．Ｃ．Ｅｄｓａｌｌ，Ｒ．Ｒ．ＳｃｈｍｉｄｔおよびＳ．Ｓｐｉｅｇｅｌ．１９９９．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：４６２６���４６３２参照）、Ｒａｃ活性化を阻止することにより走化性を抑制する（Ｏｋａｍｏｔｏ，Ｈ．，Ｎ．Ｔａｋｕｗａ，Ｔ．Ｙｏｋｏｍｉｚｏ，Ｎ．Ｓｕｇｉｍｏｎｏ，Ｓ．Ｓａｋｕｒａｄａ，Ｈ．ＳｈｉｇｅｍａｔｕおよびＹ．Ｔａｋｕｗａ．２０００．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２０：９２４７−９２６１参照）ことは、証明されている。Ｓ１Ｐ４は、造血細胞および組織に局在しており（Ｇｒａｅｌｅｒ，Ｍ．Ｈ．，Ｇ．ＢｅｒｎｈａｒｄｔおよびＭ．Ｌｉｐｐ．１９９９．Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４６：１３１−６参照）、これに対して、Ｓ１Ｐ５は、主として、リンパ組織において多少発現されるニューロン受容体である（Ｉｍ，Ｄ．Ｓ．，Ｃ．Ｅ．Ｈｅｉｓｅ，Ｎ．Ａｎｃｅｌｌｉｎ，Ｂ．Ｆ．Ｏ’Ｄｏｗｄ，Ｇ．Ｊ．Ｓｈｅｉ，Ｒ．Ｐ．Ｈｅａｖｅｎｓ，Ｍ．Ｒ．Ｒｉｇｂｙ，Ｔ．Ｈｌａ，Ｓ．Ｍａｎｄａｌａ，Ｇ．ＭｃＡｌｌｉｓｔｅｒ，Ｓ．Ｒ．ＧｅｏｒｇｅおよびＫ．Ｒ．Ｌｙｎｃｈ．２０００．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：１４２８１−６参照）。動物へのスフィンゴシン−１−リン酸の投与は、二次リンパ器官への抹消血リンパ球の全身性封鎖を誘導し、ＦＧＦ媒介血管成長および分化を刺激する（Ｌｅｅら、上記参照）が、治療薬としてのスフィンゴシン−１−リン酸の効用を制限する心臓血管性作用も有する（Ｓｕｇｉｙａｍａ，Ａ．Ｎ．Ｎ．Ａｙｅ，Ｙ．Ｙａｔｏｍｉ，Ｙ．ＯｚａｋｉおよびＫ．Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ．２０００．Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．８２：３３８−３４２参照）。スフィンゴシン−１−リン酸で測定される心拍数および血圧の低下は、すべてのＳ１Ｐ受容体に対する非選択的で強力な作動薬活性に関連している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体の作動薬であり、それ故、骨髄、臓器および移植拒絶反応などの疾病または状態を治療するための免疫抑制薬として有用であり、そうした化合物の他の使用には、関節炎、特に、関節リウマチ、インスリンおよび非インスリン依存性糖尿病、多発性硬化症、乾癬、炎症性腸疾患、クローン病、エリテマトーデスならびにこれらに類するものの治療が挙げられる。これらおよび他の目的は、本明細書に含まれている説明から、通常の当業者にははっきりとご理解いただける。
【００１０】
【表１】
2005531508.tif 000003
【課題を解決するための手段】
【００１１】
（発明の要約）
本発明は、下記式ＩＩ：
【００１２】
【化４】
2005531508.tif 000004
の化合物ならびにそれらの医薬適合性の塩および水和物を包含する。本化合物は、骨髄、臓器および組織移植拒絶反応などの免疫媒介疾患および状態の治療に有用である。医薬組成物および使用法を包含する。
【００１３】
（発明の詳細な説明）
本発明は、下記式ＩＩ：
【００１４】
【化５】
2005531508.tif 000005
（式中、
ｍ＝１、２、３または４；
Ｐ＝９から２０；
Ｘは、結合、Ｏ、ＮＨ、Ｓ（Ｏ）ｋ（この場合、ｋは、０、１または２である）であり；
Ａは、−ＣＯ２Ｈ、−ＰＯ３Ｈ２、−ＰＯ２Ｈ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＰＯ（Ｒ８）ＯＨおよび下記：
【００１５】
【化６】
2005531508.tif 000006
から成る群より選択され、
各Ｒ１は、水素、ハロ、ヒドロキシ、−ＣＯ２Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルキルチオおよびアリールから成る群より独立して選択され、この場合、前記Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシおよびＣ１〜４アルキルチオは、一から最大数の置換可能位置をハロで、各々、場合によっては置換されており、前記アリールは、ハロおよびＣ１〜４アルキルから独立して選択された１個から５個の置換基で場合によっては置換されており；または
隣接する炭素原子上の２個のＲ１基は一緒になって、二重結合を形成していることがあり；
各Ｒ３は、水素、ハロ、ヒドロキシ、−ＣＯ２Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルキルチオおよびアリールから成る群より独立して選択され、この場合、前記Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシおよびＣ１〜４アルキルチオは、一から最大数の置換可能位置をハロで、各々、場合によっては置換されており、前記アリールは、ハロおよびＣ１〜４アルキルから独立して選択された１個から５個の置換基で場合によっては置換されており；または
隣接する炭素原子上の２個のＲ３基は一緒になって、二重結合を形成していることがあり；ならびに
Ｒ２およびＲ４は、水素、ハロ、ヒドロキシ、−ＣＯ２Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルキルチオおよびアリールから成る群より各々独立して選択され、この場合、前記Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシおよびＣ１〜４アルキルチオは、一から最大数の置換可能位置をハロで、各々、場合によっては置換されており、前記アリールは、ハロおよびＣ１〜４アルキルから独立して選択された１個から５個の置換基で場合によっては置換されており；または
同じ炭素原子上にあるＲ１とＲ２またはＲ３とＲ４が、場合によっては一緒になって、カルボニル基を形成していることがあり；
Ｒ８は、Ｃ１〜４アルキルおよびアリールから成る群より選択され、この場合、前記Ｃ１〜４アルキルは、１個から３個のハロ基で場合によっては置換されており、前記アリールは、ハロ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６アルキルチオおよびＣ３〜６シクロアルコキシ（前記Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６アルキルチオおよびＣ３〜６シクロアルコキシは、一から最大数の置換可能位置をハロで場合によっては置換されている）から成る群より独立して選択された１個から５個の置換基で場合によっては置換されており；
Ｒ９は、水素、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルキルチオおよびＣ３〜７シクロアルキルから成る群より選択され、この場合、前記Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４アルキルチオおよびＣ３〜７シクロアルキルは、各々独立して、一から最大数の置換可能位置をハロで場合によっては置換されており、前記アリールは、ハロおよびＣ１〜４アルキルから独立して選択された１個から５個の置換基で場合によっては置換されている）
によって表される化合物またはそれらの医薬適合性の塩もしくは水和物を包含する。
【００１６】
本発明の一つの実施態様は、Ｘが、結合であり、ｍが２である式ＩＩの化合物を包含する。
【００１７】
本発明の一つの実施態様は、Ｘが、Ｏ、ＮＨまたはＳから選択され、ｍが、１である、式ＩＩの化合物を包含する。
【００１８】
本発明の一つの実施態様は、Ａが、−ＣＯ２Ｈ、−ＰＯ３Ｈ２、−ＰＯ２Ｈ２、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ（Ｒ８）ＯＨから成る群より選択される、式ＩＩの化合物を包含する。
【００１９】
本発明の一つの実施態様は、Ｐが、９から１６である、式ＩＩの化合物を包含する。
【００２０】
本発明の一つの実施態様は、免疫調節異常の治療に有効な量の式ＩＩの化合物を患者に投与することを含む、免疫調節異常をそうした治療が必要な哺乳動物の患者において治療する方法を包含する。
【００２１】
この実施態様には、前記免疫調節異常が、全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、Ｉ型糖尿病、炎症性腸疾患、胆汁性肝硬変、ブドウ膜炎、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、水疱性類天疱瘡、サルコイドーシス、乾癬、自己免疫性筋炎、ヴェグナー肉芽腫症、魚鱗癬、グレーブス眼症および喘息から成る群より選択される自己免疫または慢性炎症性疾患である上記方法が包含される。
【００２２】
この実施態様には、免疫調節異常が、骨髄もしくは臓器移植拒絶反応または移植片対宿主疾患である上記方法も包含される。
【００２３】
この実施態様には、前記免疫調節異常が、臓器または組織の移植；移植によって生じる移植片対宿主疾患；関節リウマチを含む自己免疫性症候群；全身性エリテマトーデス；橋本甲状腺炎；多発性硬化症；重症筋無力症；Ｉ型糖尿病；ブドウ膜炎；後部ブドウ膜炎；アレルギー性脳脊髄炎；糸球状腎炎；リウマチ熱および感染後糸球状腎炎を含む感染後自己免疫疾患；炎症性および高増殖性皮膚疾患；乾癬；アトピー性皮膚炎；接触性皮膚炎；湿疹性皮膚炎；脂漏性皮膚炎；扁平苔癬、天疱瘡；水疱性類天疱瘡；表皮水疱症；じんま疹；血管性浮腫；脈管炎；紅斑；皮膚好酸球増加症；エリテマトーデス；アクネ；円形脱毛症；角結膜炎；春季結膜炎；ベーチェット病に随伴するブドウ膜炎；角膜炎；ヘルペス性角膜炎；円錐角膜；角膜上皮ジストロフィー；角膜白斑；眼天疱瘡；モーレン潰瘍；強膜炎；グレーブス眼病；フォークト−小柳−原田症候群；サルコイドーシス；花粉アレルギー；可逆性閉塞性気道疾患；気管支喘息；アレルギー性喘息；内因性喘息；外因性喘息；ほこり喘息；慢性または難治喘息性；遅発性喘息および気道反応亢進；気管支炎；胃潰瘍；虚血性疾患および血栓症に起因する血管損傷；虚血性腸疾患；炎症性腸疾患；壊死性全腸炎；熱傷に随伴する腸損傷；腹腔疾患；直腸炎；エオジン嗜好性胃腸炎；肥満細胞症；クローン病；潰瘍性大腸炎；偏頭痛；鼻炎；湿疹；間質性腎炎；グッドパスチャー症候群；溶血尿毒症症候群；糖尿病性腎障害；多発性筋炎；ギラン−バレー症候群；メニエール病；多発神経炎；多発性神経炎；単神経炎；神経根傷害；甲状腺機能亢進；バセドウ病；赤芽球癆；再生不良性貧血；低形成貧血；特発性血小板減少性紫斑病；自己免疫性溶血性貧血；無顆粒球症；悪性貧血；巨赤芽球性貧血；赤血球形成不全；骨粗鬆症；サルコイドーシス；肺線維症；特発性間質性肺炎；皮膚筋炎；尋常性白斑；尋常性魚鱗癬；羞明；皮膚Ｔ細胞リンパ腫；動脈硬化症；アテローム性動脈硬化症；大動脈炎症症候群；結節性多発性動脈炎；心筋症；強皮症；ヴェグナー肉芽腫；シェーグレン症候群；肥満症；好酸球性筋膜炎；歯肉、歯周組織、歯槽骨、歯のセメント質の病変；糸球状腎炎；脱毛を予防することによる、または発毛をもたらすことによる、ならびに／または発毛および育毛を促進することによる男性型脱毛症または老人性脱毛症；筋ジストロフィー；膿皮症およびセザール症候群；アジソン病；保存、移植または虚血性疾患時に発生する器官の虚血−再潅流傷害；エンドトキシンショック；偽膜性大腸炎；薬物または放射線に起因する大腸炎；虚血性急性腎不全；慢性腎不全；肺−酸素または薬物に起因する中毒症；肺癌；肺気腫；白内障；シデローシス；色素性網膜炎；老人性斑点性変性；硝子体瘢痕化；アルカリによる角膜の火傷；多形性紅斑性皮膚炎；線状ＩｇＡ水疱性皮膚炎およびセメント皮膚炎；歯肉炎；歯周炎；敗血症；膵臓炎；環境汚染、加齢、発癌、癌腫の転移および高山病に起因する疾病；ヒスタミンまたはロイコトリエン−Ｃ４放出に起因する疾病；ベーチェット病；自己免疫性肝炎；原発性胆汁性肝硬変；硬化性胆管炎；部分的肝臓切除；急性肝臓壊死；毒、ウイルス性肝炎、ショックまたは無酸素症に起因する壊死；Ｂ型ウイルス性肝炎；非Ａ非Ｂ型肝炎；肝硬変；アルコール性肝硬変；肝不全；劇症肝炎；遅発性肝不全、「慢性時急性」肝不全；化学療法作用の増強；サイトメガロウイルス感染症；ＨＣＭＶ感染症；ＡＩＤＳ；癌；老人性皮膚炎；外傷；ならびに慢性細菌感染症から成る群より選択される、上記方法も包含される。
【００２４】
この実施態様には、免疫調節異常が、多発性硬化症である上記方法も包含される。
【００２５】
この実施態様には、免疫調節異常が、関節リウマチである上記方法も包含される。
【００２６】
この実施態様には、免疫調節異常が、全身性エリトマトーデスである上記方法も包含される。
【００２７】
この実施態様には、免疫調節異常が、乾癬である上記方法も包含される。
【００２８】
この実施態様には、免疫調節異常が、移植された臓器または組織の拒絶反応である上記方法も包含される。
【００２９】
この実施態様には、免疫調節異常が、炎症性腸疾患である上記方法も包含される。
【００３０】
この実施態様には、免疫調節異常が、リンパ器官の悪性病変である上記方法も包含される。
【００３１】
この実施態様には、免疫調節異常が、急性および慢性リンパ性白血病およびリンパ腫である、上記方法も包含される。
【００３２】
本発明のもう一つの実施態様は、免疫抑制有効量の式ＩＩの化合物を患者に投与することを含む、免疫抑制が必要な哺乳動物の患者における免疫系抑制方法を包含する。
【００３３】
本発明は、医薬適合性の担体との組み合わせでの式ＩＩの化合物を含む医薬組成物も包含する。
【００３４】
本発明のよい例となるのは、以下の化合物である：
【００３５】
【表２】
2005531508.tif 000007
2005531508.tif 000008
2005531508.tif 000009
2005531508.tif 000010
【００３６】
本発明は、別様に指示されていない限り以下の定義を使用して説明されている。
【００３７】
用語「ハロゲン」または「ハロ」は、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩを包含する。
【００３８】
用語「アルキル」は、指示されている数の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖構造およびそれらの組み合わせを意味する。従って、例えば、Ｃ１〜６アルキルには、メチル、エチル、プロピル、２−プロピル、ｓ−およびｔ−ブチル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、１，１−ジメチルエチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルならびにシクロヘキシルが挙げられる。
【００３９】
用語「アルコキシ」は、指示されている数の炭素原子を有する直鎖、分枝鎖または環状構造のアルコキシ基を意味する。Ｃ１〜６アルコキシには、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシおよびこれらに類するものが挙げられる。
【００４０】
用語「アルキルチオ」は、指示されている数の炭素原子を有する直鎖、分枝鎖または環状構造のアルキルチオ基を意味する。Ｃ１〜６アルキルチオには、例えば、メチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオおよびこれらに類するものが挙げられる。
【００４１】
用語「アルケニル」は、少なくとも一つの炭素−炭素二重結合を有する（この場合の水素原子は、さらなる炭素−炭素二重結合により置換されていることがある）指示されている炭素原子数の直鎖構造または分枝鎖構造およびそれらの組み合わせを意味する。Ｃ２〜６アルケニルには、例えば、エテニル、プロペニル、１−メチルエテニル、ブテニルおよびこれらに類するものが挙げられる。
【００４２】
用語「アルキニル」は、少なくとも一つの炭素−炭素三重結合を有する、指示されている炭素原子数の直鎖構造または分枝鎖構造およびそれらの組み合わせを意味する。Ｃ３〜６アルキニルには、例えば、プロペニル、１−メチルエテニル、ブテニルおよびこれらに類するものが挙げられる。
【００４３】
用語「シクロアルキル」は、直鎖または分枝鎖構造を場合によっては兼備する、指示されている炭素原子数の単環式、二環式または三環式構造を意味する。シクロアルキルの例には、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘプチル、アダマンチル、シクロドデシルメチル、２−エチル−１−ビシクロ［４．４．０］デシルおよびこれらに類するものが挙げられる。
【００４４】
用語「アリール」は、単環式または二環式芳香族環構造と定義され、例えば、フェニル、ナフチルおよびこれらに類するものが挙げられる。
【００４５】
用語「アラルキル」は、アルキル基の水素原子の一個が上で定義したようなアリール基で置換されている、炭素原子数１から６の上で定義したようなアルキル基、例えば、ベンジルおよびこれらに類するものを意味する。
【００４６】
用語「アリールオキシ」は、酸素原子によって分子に結合されている、上で定義したようなアリール基（アリール−Ｏ）を意味し、例えば、フェノキシ、ナフトキシおよびこれらに類するものが挙げられる。
【００４７】
用語「アラルコキシ」は、酸素原子によって分子に結合されている、上で定義したようなアラルキル基（アラルキル−Ｏ）を意味し、例えば、ベンジルオキシおよびこれらに類するものが挙げられる。
【００４８】
用語「アリールチオ」は、硫黄原子によって分子に結合されている、上で定義したようなアリール基（アリール−Ｓ）と定義され、例えば、チオフェニルオキシ、チオナフトキシおよびこれらに類するものが挙げられる。
【００４９】
用語「アロイル」は、炭素原子によって分子に結合されている、上で定義したようなアリール基（アリール−Ｃ（Ｏ）−）を意味し、例えば、ベンゾイル、ナフトイルおよびこれらに類するものが挙げられる。
【００５０】
用語「アロイルオキシ」は、酸素原子によって分子に結合されている、上で定義したようなアロイル基（アロイル−Ｏ）を意味し、例えば、ベンゾイルオキシまたはベンゾキシ、ナフトイルオキシおよびこれらに類するものが挙げられる。
【００５１】
用語「ＨＥＴ」は、Ｏ、ＳおよびＮから選択されたヘテロ原子１個から５個を含有し、オキソ基１個から２個で場合によっては置換されている、５から１０員の芳香族、部分芳香族または非芳香族の単環式または二環式の環と定義される。好ましくは、「ＨＥＴ」は、Ｏ、ＳおよびＮから選択されたヘテロ原子１個から３個を含有する５または６員の芳香族または非芳香族の単環式の環、例えば、ピリジン、ピリミジン、ピリダジン、フラン、チオフェン、チアゾール、オキサゾール、イソオキサゾールおよびこれらに類するものであるか、へテロ環は、Ｏ、ＳおよびＮから選択されたヘテロ原子１個から３個を含有する９または１０員の芳香族または部分芳香族の二環式の環、例えば、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、インドール、ピラノピロール、ベンゾピラン、キノリン、ベンゾシクロヘキシル、ナフチリジンおよびこれらに類するものである。「ＨＥＴ」は、以下のものも包含する：ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾピラゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチオフェニル、ベンゾオキサゾリル、カルバゾリル、カルボリニル、シノリニル、フラニル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、インドラジニル、インダゾリル、イソベンゾフラニル、イソインドリル、イソキノリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリドピリジニル、ピリダジニル、ピリジル、ピリミジル、ピロリル、キナゾリニル、キノリル、キノキサリニル、チアジアゾリル、チアゾリル、チエニル、トリアゾリル、アゼチジニル、１，４−ジオキサニル、ヘキサヒドロアゼピニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピロリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ジヒドロベンズイミダゾリル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロベンゾチオフェニル、ジヒドロベンゾオキサゾリル、ジヒドロフラニル、ジヒドロイミダゾリル、ジヒドロインドリル、ジヒドロイソオキサゾリル、ジヒドロイソチアゾリル、ジヒドロオキサジアゾリル、ジヒドロオキサゾリル、ジヒドロピラジニル、ジヒドロピラゾリル、ジヒドロピリジニル、ジヒドロピリミジニル、ジヒドロピロリル、ジヒドロキノリニル、ジヒドロテトラゾリル、ジヒドロチアジアゾリル、ジヒドロチアゾリル、ジヒドロチエニル、ジヒドロトリアゾリル、ジヒドロアゼチジニル、メチレンジオキシベンゾイル、テトラヒドロフラニル、およびテトラヒドロチエニル。ＨＥＴの好ましい群は、次のとおりである：
【００５２】
【化７】
2005531508.tif 000011
【００５３】
用語「治療すること」は、疾病または状態の徴候および症状を和らげるために患者を治療することばかりでなく、その疾病または状態の発症または進行を予防するために無症状の患者を予防的に治療することも包含する。用語「治療に有効な量」は、研究者、獣医、医師または他の臨床家が捜し求めている、組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を惹起するであろう薬物または製剤の量を意味するためのものである。この用語は、組織、系、動物またはヒトにおける予防のために研究者、獣医、医師または他の臨床家が探し求める、生物学的または医学的事象が発生するリスクを防止または低下させるであろう薬物の量も包含する。
【００５４】
本明細書に記載されている発明は、医薬適合性の塩および水和物を包含する。医薬適合性の塩は、金属（無機）塩と有機塩の両方を包含し、これらのリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７版，１４１８頁（１９８５）に与えられている。適切な塩の形態が、物理的および化学的安定性、流動性、吸湿性および溶解性を基に選択されることは、当業者にはよく知られている。当業者にはおわかりのように、医薬適合性の塩には、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、二リン酸塩、臭化水素酸塩および硝酸塩などの無機酸の塩、またはリンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩もしくはパモ酸塩、サリチル酸塩およびステアリン酸塩などの有機酸の塩が挙げられるが、それらに限定されない。同様に、医薬適合性のカチオンには、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アルミニウム、リチウムおよびアンモニウム（特に、第二アミンとのアンモニウム塩）が挙げられるが、それらに限定されない。上に挙げた理由のために本発明の好ましい塩には、カリウム、ナトリウムおよびアンモニウム塩が挙げられる。式ＩＩの化合物の結晶形、水和物および溶媒和物も本発明の範囲に包含される。
【００５５】
本明細書のために、「医薬適合性の水和物」は、１個以上の水分子を伴って結晶化して、水和形を形成している本発明の化合物を意味する。
【００５６】
本発明は、一つ以上の立体異性体の形態の、実質的に純粋な形態の、または立体異性体の混合物の形態の式ＩＩの範囲に入る化合物も包含する。そうした異性体すべてが本発明の範囲内に包含される。
【００５７】
Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１作動薬活性によって、本発明の化合物は、自己免疫または慢性炎症性疾患の治療または予防に有用な免疫調節薬である。本発明の化合物は、免疫抑制が、骨髄、臓器または移植拒絶反応、自己免疫および慢性炎症性疾患（全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、Ｉ型糖尿病、炎症性腸疾患、胆汁性肝硬変、ブドウ膜炎、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、水疱性類天疱瘡、サルコイドーシス、乾癬、自己免疫性筋炎、ヴェグナー肉芽腫症、魚鱗癬、グレーブス眼症および喘息を含む）などのためのものである場合の免疫系の抑制に有用である。
【００５８】
さらに詳細には、本発明の化合物は、臓器または組織の移植；移植によって生じる移植片対宿主疾患；関節リウマチを含む自己免疫性症候群；全身性エリテマトーデス；橋本甲状腺炎；多発性硬化症；重症筋無力症；Ｉ型糖尿病；ブドウ膜炎；後部ブドウ膜炎；アレルギー性脳脊髄炎；糸球状腎炎；リウマチ熱および感染後糸球状腎炎を含む感染後自己免疫疾患；炎症性および高増殖性皮膚疾患；乾癬；アトピー性皮膚炎；接触性皮膚炎；湿疹性皮膚炎；脂漏性皮膚炎；扁平苔癬、天疱瘡；水疱性類天疱瘡；表皮水疱症；じんま疹；血管性浮腫；脈管炎；紅斑；皮膚好酸球増加症；エリテマトーデス；アクネ；円形脱毛症；角結膜炎；春季結膜炎；ベーチェット病に随伴するブドウ膜炎；角膜炎；ヘルペス性角膜炎；円錐角膜；角膜上皮ジストロフィー；角膜白斑；眼天疱瘡；モーレン潰瘍；強膜炎；グレーブス眼病；フォークト−小柳−原田症候群；サルコイドーシス；花粉アレルギー；可逆性閉塞性気道疾患；気管支喘息；アレルギー性喘息；内因性喘息；外因性喘息；ほこり喘息；慢性または難治喘息性；遅発性喘息および気道反応亢進；気管支炎；胃潰瘍；虚血性疾患および血栓症に起因する血管損傷；虚血性腸疾患；炎症性腸疾患；壊死性全腸炎；熱傷に随伴する腸損傷；腹腔疾患；直腸炎；エオジン嗜好性胃腸炎；肥満細胞症；クローン病；潰瘍性大腸炎；偏頭痛；鼻炎；湿疹；間質性腎炎；グッドパスチャー症候群；溶血尿毒症症候群；糖尿病性腎障害；多発性筋炎；ギラン−バレー症候群；メニエール病；多発神経炎；多発性神経炎；単神経炎；神経根傷害；甲状腺機能亢進；バセドウ病；赤芽球癆；再生不良性貧血；低形成貧血；特発性血小板減少性紫斑病；自己免疫性溶血性貧血；無顆粒球症；悪性貧血；巨赤芽球性貧血；赤血球形成不全；骨粗鬆症；サルコイドーシス；肺線維症；特発性間質性肺炎；皮膚筋炎；尋常性白斑；尋常性魚鱗癬；羞明；皮膚Ｔ細胞リンパ腫；動脈硬化症；アテローム性動脈硬化症；大動脈炎症症候群；結節性多発性動脈炎；心筋症；強皮症；ヴェグナー肉芽腫；シェーグレン症候群；肥満症；好酸球性筋膜炎；歯肉、歯周組織、歯槽骨、歯のセメント質の病変；糸球状腎炎；脱毛を予防することによる、または発毛をもたらすことによる、ならびに／または発毛および育毛を促進することによる男性型脱毛症または老人性脱毛症；筋ジストロフィー；膿皮症およびセザール症候群；アジソン病；保存、移植または虚血性疾患時に発生する器官の虚血−再潅流傷害；エンドトキシンショック；偽膜性大腸炎；薬物または放射線に起因する大腸炎；虚血性急性腎不全；慢性腎不全；肺−酸素または薬物に起因する中毒症；肺癌；肺気腫；白内障；シデローシス；色素性網膜炎；老人性斑点性変性；硝子体瘢痕化；アルカリによる角膜の火傷；多形性紅斑性皮膚炎；線状ＩｇＡ水疱性皮膚炎およびセメント皮膚炎；歯肉炎；歯周炎；敗血症；膵臓炎；環境汚染、加齢、発癌、癌腫の転移および高山病に起因する疾病；ヒスタミンまたはロイコトリエン−Ｃ４放出に起因する疾病；ベーチェット病；自己免疫性肝炎；原発性胆汁性肝硬変；硬化性胆管炎；部分的肝臓切除；急性肝臓壊死；毒、ウイルス性肝炎、ショックまたは無酸素症に起因する壊死；Ｂ型ウイルス性肝炎；非Ａ非Ｂ型肝炎；肝硬変；アルコール性肝硬変；肝不全；劇症肝炎；遅発性肝不全、「慢性時急性」肝不全；化学療法作用の増強；サイトメガロウイルス感染症；ＨＣＭＶ感染症；ＡＩＤＳ；癌；老人性皮膚炎；外傷；ならびに慢性細菌感染症から成る群より選択される疾病または疾患の治療または予防に有用である。
【００５９】
治療に有効な量の式ＩＩの化合物を投与することを含む、その必要がある哺乳動物の患者において臓器または組織の移植に対する抵抗または移植拒絶反応を予防または治療する方法も、本発明の範囲内に包含される。
【００６０】
免疫系を抑制する量の式ＩＩの化合物を患者に投与することを含む、その必要がある哺乳動物の患者における免疫系の抑制方法は、さらにもう一つの実施態様である。
【００６１】
最も詳細には、本明細書に記載の本発明は、骨髄または臓器移植拒絶反応の治療または予防に有効な量の式ＩＩの化合物またはその医薬適合性の塩もしくは水和物を、そうした治療または予防が必要な哺乳動物の患者に投与することを含む、骨髄または臓器移植拒絶反応を治療または予防する方法を包含する。
【００６２】
本発明は、医薬適合性の担体および式ＩＩの化合物またはその医薬適合性の塩もしくは水和物を含む医薬調合物も包含する。本調合物の好ましい実施態様は、二次免疫抑制薬も含むものである。そうした二次免疫抑制薬の例には、アザチオプリン、ブレキナーナトリウム、デオキシスーパーグアリン、ミザリビン、ミコフェノール酸モルホリノエステル、シクロスポリン、ＦＫ−５０６、ラパマイシンおよびＦＴＹ７２０があるが、それらに限定されない。
【００６３】
塩および水和物を含めて本化合物は、骨髄移植、外来臓器移植の拒絶反応ならびに／または関連する苦痛、疾病および疾患の予防を含む、自己免疫疾患の治療に有用である。
【００６４】
本発明の化合物は、温血動物の体内の作用部位に本活性成分化合物を接触させるあらゆる手段により投与することができる。例えば、経口投与、経皮投与を含む局所投与、目への投与、口腔内投与、鼻腔内投与、吸入、経膣投与、直腸内投与、槽内投与および非経口投与することができる。本明細書中で用いられる場合、用語「非経口」は、皮下、静脈内、筋肉内、関節内注射または注入、槽内および腹腔内を含む投与方式を指す。
【００６５】
本化合物は、製薬に関連する使用に利用できる通常のあらゆる手段により、個々の治療薬として、または複数の治療薬併用で投与することができる。それらは、単独で投与できるが、選択される投与形路および標準的な製薬の慣例を基にして選択された製薬用担体とともに、一般には投与される。
【００６６】
投与される用量は、受容者の年齢、健康および体重、疾病の程度、もしあるなら併用療法の種類、治療の頻度、および望まれる効果の性質に依存する。普通、活性成分化合物の日用量は、１日あたり約０．１から２０００ミリグラムである。通常、望ましい結果を得るには、一回以上の適用で、１日あたり１から１００ミリグラムが有効である。これらの用量は、自己免疫疾患の治療、外来臓器移植の拒絶反応ならびに／または関連した苦痛、疾病および疾患に有効な量である。
【００６７】
活性成分は、カプセル、錠剤、トローチ、糖衣錠、顆粒および粉末などの固体剤形で、またはエリキシル、シロップ、エマルジョン、分散液および懸濁液などの液体剤形で、経口投与することができる。活性成分は、分散液、懸濁液または溶液などの無菌液体剤形で、非経口投与することもできる。局所投与のために軟膏、クリーム、滴剤、経皮パッチもしくは粉末、目への投与のために眼科用溶液もしくは懸濁液調合物、すなわち、点眼剤、吸入もしくは鼻腔内投与のためにエーロゾルスプレー剤もしくは粉末組成物、または直腸内もしくは経膣投与のためにクリーム、軟膏、スプレー剤もしくは坐剤といった他の剤形を使用して、活性成分を投与することもできる。
【００６８】
ゼラチンカプセルには、活性成分、およびラクトース、デンプン、セルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸およびこれらに類するものなどの粉末状担体が収容される。同様な希釈剤は圧縮錠を製造するのに用いられ得る。錠剤およびカプセルは、両方とも、持続放出性の製品として製造して、長時間にわたって薬物が継続的に放出されるようにすることができる。圧縮錠に糖衣またはフィルムコーチングを施して、あらゆる不快な味を隠蔽し、且つ、錠剤を大気から保護することができ、または腸溶コーチングを施して、胃腸管で選択的に消化されるようにすることができる。
【００６９】
経口投与のための液体剤形は、患者の受入れやすさを増すために着色剤および着香剤を含有することができる。
【００７０】
一般に、水、適する油、生理食塩水、デキストロース（グルコース）水溶液、ならびに関連する糖溶液およびプロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどのグリコールが、非経口用溶液に適する担体である。非経口投与のための溶液は、活性成分の水溶性塩、適する安定化剤、および必要な場合には緩衝物質を好ましくは含有する。重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムまたはアスコルビン酸など単独または併用での酸化防止剤は、適する安定化剤である。クエン酸およびその塩ならびにＥＤＴＡナトリウムも使用される。加えて、非経口用溶液は、塩化ベンズアルコニウム、メチル−またはプロピルバラベン、およびクロロブタノールなどの保存薬を含有することができる。
【００７１】
適する製薬用担体は、この分野における標準的参考図書であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ａ．Ｏｓｏｌに記載されている。
【００７２】
吸入による投与のために、本発明の化合物は、加圧パックまたはネブライザーからのエーロゾルスプレー剤押出しの形で適便に送達することができる。本化合物は、調合できる粉末として送達することもでき、その粉末組成物は、吸入粉末用吸入装置を使って吸入することができる。吸入に好ましい送達系は、定量吸入（ＭＤＩ）エーロゾルであり、これは、過フッ化炭化水素または炭化水素などの適する噴射剤中の式ＩＩの化合物の懸濁液または溶液などとして調合することができる。
【００７３】
目への投与のための眼科用製剤は、適切な眼科用ビヒクル中の適切な重量パーセントの式ＩＩの溶液または懸濁液を用いて調合して、角膜、そして目の内部領域への前記化合物の浸透を可能ならしめるために充分な時間、前記化合物が目の表面と接触した状態で維持されるようにする。
【００７４】
本発明の化合物の投与に有用な剤形は、次のように説明することができる：
カプセル
１００ミリグラムの粉末活性成分、１５０ミリグラムのラクトース、５０ミリグラムのセルロースおよび６ミリグラムのステアリン酸マグネシウムで標準的な二部構成硬質ゼラチンカプセルの各々を満たすことにより、非常に多数の単位カプセルを調製する。
【００７５】
軟質ゼラチンカプセル
大豆油、綿実油またはオリーブ油などの可消化油中の活性成分の混合物を調製し、容積式ポンプによりゼラチンに注入して、１００ミリグラムの活性成分を収容した軟質ゼラチンカプセルを形成する。それらのカプセルを洗浄し、乾燥させる。
【００７６】
錠剤
投薬単位が、１００ミリグラムの活性成分、０．２ミリグラムのコロイド状二酸化珪素、５ミリグラムのステアリン酸マグネシウム、２７５ミリグラムの微結晶性セルロース、１１ミリグラムのデンプンおよび９８．８ミリグラムのラクトースになるように、通常の手順により非常に多数の錠剤を調製する。適切なコーチングを施して、美味性を増すことができ、または吸収を遅らせることができる。
【００７７】
注射用
注射による投与に適する非経口用組成物は、１０容量％プロピレングリコール中で１．５重量％の活性成分を攪拌することにより調製する。その溶液を注射用蒸留水で増量し、滅菌する。
【００７８】
懸濁液
経口投与のために、各５ミリグラムが、１００ミリグラムの微粒子状活性成分、１００ミリグラムのカルボキシメチルセルロースナトリウム、５ミリグラムの安息香酸ナトリウム、１．０グラムのソルビトール溶液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．および０．０２５ミリリットルのバニリンを含有するように、水性懸濁液を調製する。
【００７９】
一般に、同剤形は、本発明の化合物を段階的に、または別の治療薬と併用で投与する際、使用することができる。薬物を物理的に併用して投与する際、その剤形および投与形路は、併用される薬物の相溶性に依存して選択すべきである。従って、用語「共同投与」は、相伴って、または逐次的に、あるいは固定用量の二つの活性成分の組合せとして、二つの薬剤を投与することを包含する。
【００８０】
合成方法
ｍ＝１、Ｒ１＝Ｒ２＝Ｈ、およびＡ＝−ＯＰＯ３Ｈ２である本発明の式Ｉおよび式ＩＩの化合物の調製方法を、図式１に示す。構造ｉまたはｖのビシナルアミノアルコールは、市販されており、または当業者に一般に知られている方法を使用して対応するαアミノ酸から容易に得られる。アミノ基の保護は、適する溶媒（例えば、塩化メチレン、アセトニトリル、ＴＨＦ）中、塩基（例えば、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、重炭酸カリウム）の存在下で、ｉとクロロギ酸アルキル（例えば、Ｒａ＝エチル、ベンジル）または重炭酸ジアルキル（例えば、Ｒａ＝ｔ−ブチル）とを反応させて、ｉｉを得ることにより、行うことができる。適切な溶媒（例えば、ＣＨ２Ｃｌ２、アセトニトリル）中、Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノジアルキルホスファイト（例えば、ジエチルアミノジベンジルホスファイト、ジイソプロピルアミノジベンジルホスファイト）および触媒１Ｈ−テトラゾールでｉｉを処理し、その後、酸化剤（例えば、３−クロロペルオキシ安息香酸、過酢酸、４−メチルモルホリンＮ−オキシド）で処理することによりリン酸化を行って、リン酸エステルｉｉｉを得ることができる。ｉｉｉの保護基の除去により、リン酸塩ｉｖを生じることができる。Ｒａ＝Ｒｂ＝−ＣＨ２Ｐｈである場合には、アンモニア水中のナトリウムでｉｉｉを処理することにより、これを行うことができる。あるいは、水素ガス雰囲気のもと、パラジウムまたは白金触媒の存在下、水およびアルコール（例えば、メタノール、エタノール）の溶液中でｉｉｉを攪拌することにより、これを行うことができる。ビシナルアミノアルコールｖを出発原料として使用すると、類似の段階順序により、リン酸塩ｖｉが得られる。
【００８１】
【化８】
2005531508.tif 000012
【００８２】
ｍ＝２であり、炭素原子が二重結合により連結しており、Ａ＝−ＰＯ３Ｈ２である本発明び式Ｉの化合物の調製方法を、図式２に示す。−７８℃で塩化メチレン中の塩化オキサリルとジメチルスルホキシドの混合物にｉｉを添加し、続いてＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンで処理し、その後、周囲温度に温めることにより、中間体ｉｉをアルデヒドｖｉｉに酸化することができる。この酸化の他の実施法には、溶媒（例えば、塩化メチレン、アセトニトリル）中の過ルテニウム酸テトラプロピルアンモニウムおよび４−（メチル）モルホリンＮ−オキシドでｉｉを処理すること、または塩化メチレン中のデス・マーチンパーヨージナンでｉｉを処理することが含まれる。溶媒（ＴＨＦ、ジエチルエーテル）中、適する塩基（ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド、リチウムジイソプロピルアミド）の存在下、テトラエチルメチレンビス（ホスホネート）でｉｉを処理することにより鎖の伸長を行って、ｖｉｉｉを得ることができる。適する溶媒（例えば、塩化メチレン、クロロホルム、アセトニトリル）中、室温以上で、ｖｉｉｉと臭化トリメチルシリルまたはヨウ化トリメチルシリルとを反応させることによりｖｉｉｉの包括的脱保護を行って、ｉｘを得ることができる。あるいは、強酸（塩酸、硫酸）水溶液中でｖｉｉｉを温めることにより、ｉｘを得ることができる。
【００８３】
【化９】
2005531508.tif 000013
【００８４】
図式３は、どのようにすれば図式２に記載した幾つかの中間体から出発して本発明の幾つかの他の化合物を調製できるのかを示している。ｍ＝２であり、第一アミノ基を有するものに隣接する炭素についてＲ１＝−ＯＨであり、Ａ＝−ＰＯ３Ｈ２である本発明の化合物（式Ｉ）は、室温以下で、適する溶媒（ＴＨＦ、１，２−ジメトキシエタン）、強塩基（例えば、リチウムジイソプロピルアミド、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド）の存在下、メチルホスホン酸ジアルキルでｖｉを処理し、その後、ｖｉｉｉをｉｘに転化させるために上に記載したものに類似したものを利用して脱保護することにより、調製することができる。ｍ＝２、Ｒ１＝Ｒ２＝Ｈ、およびＡ＝−ＰＯ３Ｈ２である本発明の化合物（式Ｉ）は、接触水素化を利用してｖｉｉｉの二重結合を還元し、その後、ｖｉｉｉをｉｘに転化させるために上に記載したものに類似したものを利用して脱保護しすることにより、調製することができる。
【００８５】
【化１０】
2005531508.tif 000014
【００８６】
ｍ＝２であり、ｎ＝２であり、Ａ＝−ＰＯ３Ｈ２であり、ホスホン酸基に隣接する炭素についてＲ１＝−ＯＨである、エナンチオマー的に純粋な本発明の式Ｉの化合物の調製方法を図式４に示す。適する溶媒（塩化メチレン、１，２−ジクロロエタン）中、強ルイス酸（例えばＡｌＣｌ３）の存在下、２−（Ｎ−トリフルオロアセトアミド）コハク酸無水物のいずれかのエナンチオマー（（Ｒ）−エナンチオマーが示されている）で処理することにより、置換アレーンｘｉｉのフリーデル・クラフツのアシル化を行って、ｘｉｉｉを得ることができる。適する溶媒（ＭｅＯＨ、ＨＯＡｃ）中、触媒（例えば、Ｐｄ／Ｃ、Ｐｔ／Ｃ）の存在下、水素ガス（１気圧以上）でｘｉｉｉのケトン官能価の還元を行って、ｘｉｖを得ることができる。酸（トリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸）の存在下で還元剤（ＮａＢＨ４、トリエチルシラン）を使用することによりｘｉｉｉの還元を行って、ｘｉｖを得ることもできる。適切な溶媒（例えば、水、メタノール、ジオキサン）中、塩基（ＮａＯＨ、ＫＯＨ）でｘｉｖを処理し、続いてジ−ｔ−ブチルジカーボネートで処理することにより、カルバメートで保護された中間体ｘｖを得ることができる。ｘｖを対応するジアゾケトンに転化させ、その後、アルコール溶媒中、第三アミン塩基（トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＤＢＵ）の存在下、銀（Ｉ）塩（例えば、安息香酸銀、酸化銀）で処理することにより鎖の伸長を達成して、エステルｘｖｉを得ることができる。ｘｖｉｉへのｘｖｉの転化は、先ず、ｘｖｉの対応するアルコールへの還元（ＤＩＢＡＬＨ、０℃、Ｒｅｄ−Ａｌ、トルエン、−７８℃）、その後、アルデヒドｘｖｉｉへのスウェルン酸化による二段階で、行うことができる。酸化は、適する溶媒（塩化メチレン、アセトニトリル）中、４−（メチル）モルホリンＮ−オキシドおよび触媒過ルテニウム酸テトラプロピルアンモニウムでその中間体アルコールを処理することにより、または塩化メチレン溶媒中、デス・マーチンパーヨージナンでその中間体アルコールを処理することにより、行うこともできる。あるいは、ｘｖｉｉは、−７８℃、適切な溶媒（塩化メチレン、ＴＨＦ、トルエン）中、ＤＩＢＡＬＨで処理することにより、ｘｖｉから直接得ることができる。適切な溶媒（例えば、ＴＨＦ、ＣＨ２Ｃｌ２）中、塩基（例えば、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド、リチウムジイソプロピルアミド、トリエチルアミン）の存在下、ｘｖｉｉと亜リン酸ジアルキルとを反応させ、その後、ｖｉｉｉをｉｘに転化させるために上に記載した条件を利用して脱保護する。最終脱保護前または後にｘｖｉｉｉのジアステレオマーを分離して、エナンチオマー的に純粋な生成物を得ることができる。
【００８７】
【化１１】
2005531508.tif 000015
【００８８】
ｍ＝２であり、ｎ＝２であり、Ａ＝−ＰＯ３Ｈ２であり、ホスホン酸基に隣接する炭素についてＲ１＝−ＯＨである本発明の化合物を調製するための別法を図５に示す。周囲温度以上で、適する溶媒（ＴＨＦ、１，２−ジメトキシエタン、トルエン）中、ジアルキルボラン（例えば、９−ＢＢＮ、ジシクロヘキシルボラン）でビニルオキサゾリジノンｘｉｘを処理し、その後、周囲温度以上で、置換塩化、臭化もしくはヨウ化アリールまたは置換アリールトリフレートおよびパラジウム（０）触媒（例えば、テトラキス（トリフェニル−ホスフィン）パラジウム）で処理して、ｘｘを得る。酸を触媒とするアセトニド解裂により、ｘｘをアルコールｘｘｉに転化させることができる。そのメシレートによりｘｘｉをそのニトリルに転化させ、その後、ＤＩＢＡＬＨで還元することにより、鎖の伸長を行うことができる。あるいは、ｘｘｉをカルボン酸に酸化し、エーテル中のジアゾメタンまたはＭｅＯＨ中のトリメチルシリルジアゾメタンを使用してメチルエステルにエステル化し、その後、ｘｖｉをｘｖｉｉに転化させるために図式４に記載したものと同じ反応順序を使用して、ｘｘｉｉに転化させることができる。ｘｖｉｉｉへのｘｘｉｉの転化は、ｘｖｉｉをｘｖｉｉｉに転化させるために図式４に記載したものに類似した反応を使用して、行うことができる。
【００８９】
【化１２】
2005531508.tif 000016
【００９０】
ｍ＝２、Ａ＝−ＰＯ３Ｈ２である本発明の式ＩＩの化合物の調製方法を図式６に示す。周囲温度以下で、適切な溶媒（ＴＨＦ、１，２−ジメトキシエタン、１，４−ジオキサン）中、強塩基（リチウムジイソプロピルアミド、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド、カリウムビス（トリメチルシリル）アミド）で４−ホスホノ酪酸トリエチルを処理し、その後、トリフレートの塩化、臭化、ヨウ化アルキルで処理して、ｘｘｉｉｉを得ることができる。カルボン酸ｘｘｉｖへのｘｘｉｉｉのカルボン酸エステルの選択的鹸化は、メタノール水溶液中の水酸化ナトリウムを用いて行うことができる。クルチウス転位によって、アミンｘｘｖを保護するためのｘｘｉｖへの転化を行うことができ、混合酸無水物または酸塩化物により、そのカルボン酸塩をアシルアジドに転化させ、その後、イソシアネートに熱転位させ、アルコールで捕捉することにより、カルバミン酸塩ｘｘｖを生じる。適する溶媒（例えば、塩化メチレン、クロロホルム、アセトニトリル）中、室温以上で、ｖｉｉｉを臭化トリメチルシリルまたはヨウ化トリメチルシリルと反応させることによりｘｘｖの総括的な脱保護を行って、ｘｘｖｉを得ることができる。あるいは、強酸（塩酸、硫酸）水溶液中でｘｘｖを温めることにより、ｘｘｖｉを得ることができる。
【００９１】
【化１３】
2005531508.tif 000017
【００９２】
本発明の化合物の調製方法を以下の実施例においてさらに説明する。本分野に従事する者には別経路が容易に認識される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００９３】
一般的な方法
溶液の濃縮は、ロータリーエバポレータを減圧下で用いて行った。シリカゲル（２３０−４００メッシュ）を用いる通常のフラッシュクロマトグラフィーを行った。示されているサイズの予めパッケージされているカートリッジに入ったシリカゲル（３２〜６３ｍＭ、孔径６０Å）を用いるＢｉｏｔａｇｅフラッシュクロマトグラフィー装置（Ｄｙａｘ  Ｃｏｒｐ．）を使用するフラッシュクロマトグラフィーも行った。ＮＭＲスペクトルは、別様に述べられていない限り、ＣＤＣｌ３溶液中で得たものである。結合定数（Ｊ）の単位は、ヘルツ（Ｈｚ）である。略記：ジエチルエーテル（エーテル）、トリエチルアミン（ＴＥＡ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、飽和水溶液（ｓａｔ’ｄ）、室温（ｒｔ）、時間（複数を含む）（ｈ）、分（複数を含む）（分）。
【００９４】
ＨＰＬＣ法
ＨＰＬＣ  Ａ：Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓａｌｅｓ  ａｎｄ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ａｒｍｏｒ  Ｃ８、５μ、４．６ｍｍ  ｘ  ５０ｍｍカラム、傾斜  ４分かけて、１０：９０→９０：１０  ｖ／ｖ  ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ  ＋  ０．０５％ＴＦＡ、その後、４分間、９０：１０  ｖ／ｖ  ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ  ＋０．０５ＴＦＡで保持；２．５ｍＬ／分、２１０ｎｍ。
【００９５】
ＨＰＬＣ  Ｂ：ＹＭＣ  ＯＤＳ  Ａ、５μ、４．６ｍｍ  ｘ  ５０ｍｍカラム、傾斜  ４．５分かけて、１０：９０→９５：５  ｖ／ｖ  ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ  ＋  ０．０５％ＴＦＡ、その後、１．５分間、９５：５  ｖ／ｖ  ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ  ＋０．０５ＴＦＡで保持；２．５ｍＬ／分、２１０ｎｍ。
【００９６】
ＨＰＬＣ  Ｃ：Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓａｌｅｓ  ａｎｄ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ａｒｍｏｒ  Ｃ８、５μ、２０ｍｍ  ｘ  １０ｃｍカラム、傾斜  １２分かけて、１０：９０→９０：１０  ｖ／ｖ  ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ  ＋  ０．０５％ＴＦＡ、その後、４分間、９０：１０  ｖ／ｖ  ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ  ＋０．０５ＴＦＡで保持；１０ｍＬ／分、２１０ｎｍ。
【００９７】
実施例の調製
（実施例１）
（＋／−）−２−アミノ−４−（４−オクチルフェニル）ブタノール・Ｏ−リン酸塩
段階Ａ：（＋／−）−２−アミノ−４−（４−オクチルフェニル）ブタン酸
１３．２５ｇ（３０．６ｍｍｏｌ）のジエチル２−アセトアミド−２−（２−（４−オクチルフェニル）エチル）プロパンジオエート（Ｄｕｒａｎｄら，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２０００，５０５−５０６により記載された手法に従って調製したもの。この文献は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる）および７５ｍＬの濃ＨＣＬの混合物を１００℃で１６時間攪拌した。その混合物を冷却し、７５ｇの氷を添加した。その混合物を５ＮのＮａＯＨで中和した（ｐＨ＝７）。沈殿を濾過して、水ですすぎ、乾燥させて、８．９ｇの表題化合物を得た：ＨＰＬＣ  Ｂ：２．６８分；ＥＳＩ−ＭＳ  ２９２（Ｍ＋Ｈ）。
【００９８】
段階Ｂ：（＋／−）−２−ベンジルオキシカルボニルアミド−４−（４−オクチルフェニル）ブタン酸
１０ｍＬの１：１  ｖ／ｖ  ジオキサン／１Ｎ  ＮａＯＨ中の５１０ｍｇ（１．７５ｍｍｏｌ）の（＋／−）−２−アミノ−４−（４−オクチルフェニル）ブタン酸（実施例１、段階Ａからのもの）の溶液を、０．２５ｍＬ（１．７５ｍｍｏｌ）のクロロギ酸ベンジルで処理し、得られた混合物を室温で２時間攪拌した。その混合物を、５０ｍＬの１０：１  ｖ／ｖ  ＥｔＯＡｃ／ｉＰｒＯＨ、および２ｘ５０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機部分を併せ、乾燥させて、濃縮した。溶離剤として４：１  ｖ／ｖ  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＋１％ＨＯＡｃを使用するＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｓカートリッジでのフラッシュクロマトグラフィーによって、５２５ｍｇ（７０％）の表題化合物を得た：ＨＰＬＣ  Ｂ：４．７４分；ＥＳＩ−ＭＳ  ３８２（Ｍ−ＣＯ２＋Ｈ）。
【００９９】
段階Ｃ：（＋／−）−２−ベンジルオキシカルボニルアミド−４−（４−オクチルフェニル）ブタノール
０℃で１０ｍＬのＴＨＦ中の５２５ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）の（＋／−）−２−ベンジルオキシカルボニルアミド−４−（４−オクチルフェニル）ブタン酸および０．１８ｍＬ（１．３ｍｍｏｌ）のＴＥＡの混合物を、０．１７ｍＬ（１．３ｍｍｏｌ）のクロロギ酸イソブチルで処理し、３０分間冷却しながら攪拌した。その混合物を、徐々に濾過して、２０ｍＬの水中の３００ｍｇ（７．９ｍｍｏｌ）の水素化ホウ素ナトリウムの冷却（０℃）溶液に入れ、２時間冷却しながら攪拌した。その反応を２０ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌで停止させ、その後、７５ｍＬのＥｔＯＡｃで抽出した。抽出物を乾燥させ、濃縮した。溶離剤として４：１  ｖ／ｖ  ヘキサン／アセトンを使用するＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｓカートリッジでのフラッシュクロマトグラフィーによって、３９０ｍｇ（７９％）の表題化合物を得た。
【０１００】
段階Ｄ：（＋／−）−１−ジベンジルホスホリルオキシ−２−ベンジルオキシカルボニルアミド−４−（４−オクチルフェニル）ブタン
３ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中の１３２ｍｇ（０．３２ｍｍｏｌ）の（＋／−）−２−ベンジルオキシカルボニルアミド−４−（４−オクチルフェニル）ブタノール（実施例１、段階Ｃからのもの）、１３４ｍｇ（０．３９ｍｍｏｌ）のジベンジルジイソプロピルホスホロアミダイトおよび３６ｍｇ（０．５２ｍｍｏｌ）の１Ｈ−テトラゾールの溶液を、）℃で１時間攪拌した。その混合物を９９ｍｇ（０．４ｍｍｏｌ）の７０％ＭＣＰＢＡで処理した。冷却浴を取り外し、得られた混合物を室温で１時間攪拌した。反応を５ｍＬのＮａＨＣＯ３飽和水溶液で停止させ、その後、４０ｍＬのエーテルと２０ｍＬの水とで分配した。有機層を分離し、乾燥させて、濃縮した。溶離剤として３：２  ヘキサン／エーテルを使用するＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｓカートリッジでのフラッシュクロマトグラフィーによって、１５８ｍｇ（７３％）の表題化合物を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（５００Ｍｈｚ）δ０．８８（ｔ，Ｊ＝７．０，３Ｈ），１．２６−１．３０（１２Ｈ），１．５５−１．５９（ｍ，２Ｈ），１．７０−１．７５（ｍ，２Ｈ），２．５３−２．５８（４Ｈ），３．９５−４．００（ｍ，１Ｈ），４．９０（ｄ，Ｊ＝９．０，１Ｈ），４．９６−５．０４（６Ｈ），５．０７（ｑ，Ｊ＝１２．５，２Ｈ），７．００−７．３０（１５Ｈ）。
【０１０１】
段階Ｅ：（＋／−）−２−アミノ−４−（４−（オクチルフェニル）ブタノール・Ｏ−リン酸塩
１ｍＬのＴＨＦ中の１５７ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）の（＋／−）−１−ジベンジルホスホリルオキシ−２−ベンジルオキシカルボニルアミド−４−（４−オクチルフェニル）ブタン（実施例１、段階Ｄからのもの）の溶液を、−３３℃で１０ｍＬの液体アンモニア中の１８５ｍｇ（７．７ｍｍｏｌ）の金属ナトリウムの混合物に添加した。その混合物を１．５時間攪拌し、その後、氷５ｇ／水５ｍＬで反応を停止させた。その混合物を５０ｍＬのエーテルと２０ｍＬの水とで分配した。水性層を分離し、１Ｎ  ＨＣｌで中和した（ｐＨ＝７）。沈殿を濾過し、水で洗浄して、ＭｅＯＨで洗浄し、乾燥させて、６０ｍｇ（７３％）の表題化合物を得た：ＨＰＬＣ  Ｂ：２．９０分；ＥＳＩ−ＭＳ  ３５７（Ｍ＋Ｈ）。
【０１０２】
（実施例２）
（＋／−）−ｔｒａｎｓ−３−アミノ−４−（４−オクチルフェニル）ブト−１−エニルホスホン酸
段階Ａ：（＋／−）−２−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブタン酸
１５０ｍＬの１：１  ｖ／ｖ  ジオキサン／１Ｎ  ＮａＯＨ中の９．８ｇ（３０．６ｍｍｏｌ）の（＋／−）−２−アミノ−４−（４−オクチルフェニル）ブタン酸（実施例１、段階Ａからのもの）の溶液を、１０ｇ（４５．８ｍｍｏｌ）のジ−ｔ−ブチルジカーボネートで処理し、室温で１時間攪拌した。その混合物を５５０ｍＬの１０：１  ｖ／ｖ  ＥｔＯＡｃ／ｉＰｒＯＨと２００ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌとで分配した。有機層を分離し、乾燥させて、濃縮した。溶離剤として４：１  ｖ／ｖ  ヘプタン／ＥｔＯＡｃ（２．５Ｌ）、その後、４：１  ｖ／ｖ  ヘプタン／ＥｔＯＡｃ＋１％ＨＯＡｃ（５Ｌ）を使用するＢｉｏｔａｇｅ  ７５Ｓカートリッジでのフラッシュクロマトグラフィーによって、１２．０ｇ（１００％）の表題化合物を得た：ＨＰＬＣ  Ｂ：４．８２分；ＥＳＩ−ＭＳ  ２９２（Ｍ−ＢＯＣ＋Ｈ）。
【０１０３】
段階Ｂ：（＋／−）−２−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブタノール
実施例１、段階Ｃに記載したものに類似した手順を使用して、（＋／−）−２−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブタン酸（実施例２、段階Ａからのもの）から表題化合物を調製した：１Ｈ  ＮＭＲ（５００Ｍｈｚ）δ０．８８（ｔ，Ｊ＝６．５，３Ｈ），１．２５−１．３０（１２Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ），１．５５−１．６２（ｍ，２Ｈ），１．７２−１．７７（ｍ，１Ｈ），１．７９−１．８５（ｍ，１Ｈ），２．３３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），２．５６（ｔ，Ｊ＝８．５，２Ｈ），２．６１−２．７１（ｍ，４Ｈ），３．５６−３．５８（ｍ，１Ｈ），３．６５−３．６９（ｍ，２Ｈ），４．６４−４．６６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．０９（ａｐｐ  ｓ，４Ｈ）。
【０１０４】
段階Ｃ：（＋／−）−２−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブタナール
−７８℃で８ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中の０．２１ｍＬ（２．４ｍｍｏｌ）の塩化オキサリルの溶液を０．２６ｍＬ（３．６ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシドで処理した。得られた混合物を５分間冷却しながら攪拌し、その後、３ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中の４６０ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）の（＋／−）−２−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブタノール（実施例２、段階Ｂからのもの）で処理した。得られた混合物を３０分間冷却しながら攪拌し、その後、１．５０ｍＬ（８．６ｍｍｏｌ）のＤＩＥＡで処理した。冷却浴を取り外し、反応混合物を放置して０℃に温めた。反応を２５ｍＬの０．５Ｎ  ＫＨＳＯ４で停止させ、その後、５０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２と２０ｍＬの水とで分配した。有機層を分離し、乾燥させて、濃縮した。溶離剤として４：１  ｖ／ｖ  ヘキサン／エーテルを使用するＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｓカートリッジでのフラッシュクロマトグラフィーによって、３８８ｍｇ（８６％）の表題化合物を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（５００Ｍｈｚ）δ０．８８（ｔ，Ｊ＝６．５，３Ｈ），１．２２−１．３３（１２Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），１．５５−１．６１（ｍ，２Ｈ），１．８５−１．８９（ｍ，１Ｈ），１．９６−２．０６（ｍ，１Ｈ），１．８５−１．９１（ｍ，１Ｈ），２．１４−２．２４（ｍ，１Ｈ），２．５６（ｔ，Ｊ＝８．０，２Ｈ），２．６０−２．７０（ｍ，２Ｈ），４．２４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），５．０５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．０７−７．１１（４Ｈ），９．５４（ｓ，１Ｈ）。
【０１０５】
段階Ｄ：（＋／−）−ｔｒａｎｓ−３−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブト−１−エニルホスホン酸ジエチル
４ｍＬのＴＨＦ中の４３２ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）のメチレンジホスホン酸テトラエチルの溶液を、ＴＨＦ中１．０Ｍのナトリウムビス（トリエチルシリル）アミド溶液１．５ｍＬで処理し、室温で１５分間攪拌した。得られた混合物を、２ｍＬのＴＨＦ中の１８８ｍｇの（＋／−）−２−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブタナール（実施例２、段階Ｃからのもの）の溶液で処理し、室温で３０分間攪拌した。反応を１０ｍＬのＮａＨＣＯ３飽和水溶液で停止させ、その後、４０ｍＬのエーテルと１０ｍＬの水とで分配した。有機層を分離し、乾燥さて、濃縮した。溶離剤として４：１  ｖ／ｖ  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（１Ｌ）、その後、３：２  ｖ／ｖ  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（１Ｌ）を使用するＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｓカートリッジでのフラッシュクロマトグラフィーによって、２１８ｍｇ（８６％）の表題化合物を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（５００Ｍｈｚ）δ０．８８（ｔ，Ｊ＝７．０，３Ｈ），１．２２−１．３４（１２Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ），１．５６−１．６１（ｍ，１Ｈ），１．７２−１．８２（ｍ，１Ｈ），１．８６−１．９４（ｍ，１Ｈ），２．５６（ｔ，Ｊ＝８．０，２Ｈ），２．６１−２．６７（ｍ，２Ｈ），４．０４−４．１０（４Ｈ），４．３１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．５０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），５．７８（ａｐｐ  ｔ，Ｊ＝１７．０，１Ｈ），６．６４−６．７３（ｍ，１Ｈ），７．０８（ａｐｐ  ｑ，Ｊ＝８．０，４Ｈ）；ＨＰＬＣ  Ａ：５．４３分；ＨＰＬＣ  Ｂ：５．０３分；ＥＳＩ−ＭＳ５１０（Ｍ＋Ｈ）。
【０１０６】
段階Ｅ：（＋／−）−ｔｒａｎｓ−３−アミノ−４−（４−オクチルフェニル）ブト−１−エニルホスホン酸
２ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中の９８ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ）（＋／−）−ｔｒａｎｓ−３−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブト−１−エニルホスホン酸ジエチルの溶液を、０．１４ｍＬ（０．８ｍｍｏｌ）のトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルで処理し、室温で１５分間攪拌した。その混合物を０．０７ｍＬ（０．５ｍｍｏｌ）のヨードトリメチルシランで処理し、室温で２時間攪拌した。反応を５ｍＬのＭｅＯＨで停止させ、その後、濃縮した。ＨＰＬＣ精製（ＨＰＬＣ  Ｃ）によって、５７ｍＬ（８５％）の表題化合物を得た：ＨＰＬＣ  Ｂ：２．７８分；ＥＳＩ−ＭＳ  ３５４（Ｍ＋Ｈ）。
【０１０７】
（実施例３）
（＋／−）−３−アミノ−４−（４−オクチルフェニル）ブチルホスホン酸
段階Ａ：（＋／−）−３−（−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（４−オクチルフェニル）ブチルホスホン酸ジエチル
５ｍＬのＥｔＯＨ中の１００ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）の（＋／−）−ｔｒａｎｓ−３−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド−４−（４−オクチルフェニル）ブト−１−エニルホスホン酸ジエチル（実施例２、段階Ｄからのもの）および４０ｍｇの炭素担持１０％パラジウムの混合物を、Ｈ２雰囲気下で２０時間攪拌した。触媒を濾過し、濾液を濃縮して、１００ｍｇ（１００％）の表題化合物を得た。
【０１０８】
段階Ｂ：（＋／−）−３−アミノ−４−（４−オクチルフェニル）ブチルホスホン酸
３ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中の１００ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）の（＋／−）−３−（−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（４−オクチルフェニル）ブチルホスホン酸ジエチルの溶液を、０．１１ｍＬ（０．７７ｍｍｏｌ）のヨードトリメチルシランで処理し、室温で１時間攪拌した。反応を５ｍＬのＭｅＯＨで停止させ、その後、濃縮した。ＨＰＬＣ精製（ＨＰＬＣ  Ｃ）によって、３９ｍＬ（５６％）の表題化合物を得た：ＨＰＬＣ  Ａ：３．９４分；ＨＰＬＣ  Ｂ：２．８８分；ＥＳＩ−ＭＳ  ３５６（Ｍ＋Ｈ）。
【０１０９】
（実施例４）
２−ヒドロキシ−３−アミノ−４−（４−オクチルフェニル）ブチルホスホン酸
段階Ａ：２−ヒドロキシ−３−（−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（４−オクチルフェニル）ブチルホスホン酸ジエチル
０℃で８ｍＬのＴＨＦ中の０．１７ｍＬ（１．２ｍｍｏｌ）のジイソプロピルアミンの溶液を、ヘキサン中２．５Ｍのｎ−ブチルリチウム溶液０．４８ｍＬで処理した。得られた混合物を−７８℃に冷却した。１ｍＬのＴＨＦ中の３３２ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）のメチルホスホン酸ジベンジルの溶液を添加し、得られた混合物を１時間冷却しながら攪拌した。１７５ｍｇ（０．４７ｍｍｏｌ）の（＋／−）−２−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブタナール（実施例２、段階Ｃからのもの）の溶液を添加し、得られた混合物を２時間冷却しながら攪拌した。反応を１０ｍＬのＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液で停止させ、５０ｍＬのエーテルと１０ｍＬの水とで分配した。有機層を分離し、乾燥させて、濃縮した。４：１  ｖ／ｖ  ヘキサン／アセトンを使用するＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｓカートリッジでのフラッシュクロマトグラフィーによって、１５８ｍｇ（６１％）の表題化合物を異性体混合物として得た。ＨＰＬＣ  Ａ：５．９９分。
【０１１０】
段階Ｂ：２−ヒドロキシ−３−アミノ−４−（４−オクチルフェニル）ブチルホスホン酸
実施例３、段階Ｂに記載したものに類似した手順を使用して、２−ヒドロキシ−３−（−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（４−オクチルフェニル）ブチルホスホン酸ジエチル（実施例４、段階Ａからのもの）から表題化合物を調製した：ＨＰＬＣ  Ｂ：２．８３分；ＥＳＩ−ＭＳ  ３７２（Ｍ＋Ｈ）。
【０１１１】
（実施例５）
（＋／−）−３−アミノ−５−（４−オクチルフェニル）ペンタン酸
段階Ａ：（＋／−）−１−ジアゾ−３−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−５−（４−オクチルフェニル）ペンタン−２−オン
０℃で１０ｍＬの１：１  ｖ／ｖ  ＣＨ２Ｃｌ２／エーテル中の７０５ｍｇ（１．８ｍｍｏｌ）の（＋／−）−２−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブタン酸（実施例２、段階Ａからのもの）および０．２６ｍＬ（２．４ｍｍｏｌ）の４−メチルモルホリンの溶液を、０．２６ｍＬ（２．０ｍｍｏｌ）のクロロギ酸イソブチルで処理し、５０分間冷却しながら攪拌した。その混合物を濾過して、０℃でエーテル１５ｍＬ中のジアゾメタン（７ｍｍｏｌ）の溶液に入れた。冷却浴を取り外し、混合物を室温で２０時間放置した。酢酸（０．５ｍＬ）を添加して、残留ジアゾメタンを失活させた。トルエン（２０ｍＬ）を添加し、その混合物を濃縮した。３：１  ｖ／ｖ  ヘキサン／ＥｔＯＡｃを使用するＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｓカートリッジでのフラッシュクロマトグラフィーによって、６９６ｍｇ（８６％）の表題化合物を得た。
【０１１２】
段階Ｂ：（＋／−）−３−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−５−（４−オクチルフェニル）ペンタン酸メチル
１０ｍＬのＭｅＯＨ中の６９４ｍｇ（１．６ｍｍｏｌ）の（＋／−）−１−ジアゾ−３−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−５−（４−オクチルフェニル）ペンタン−２−オン（実施例５、段階Ａからのもの）の溶液を、１ｍＬのＴＥＡ中７０ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）の安息香酸銀の溶液で処理し、室温で２０分間攪拌した。その混合物をＣｅｌｉｔｅのパッドに通して濾過し、濾液を濃縮した。９：１  ｖ／ｖ  ヘキサン／ＥｔＯＡｃを使用するＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｓカートリッジでのフラッシュクロマトグラフィーによって、５６５ｍｇ（８７％）の表題化合物を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（５００Ｍｈｚ）δ０．８８（ｔ，Ｊ＝６．５，３Ｈ），１．２２−１．３６（１２Ｈ），１．４５（ｓ，１Ｈ），１．５５−１．６２（ｍ，２Ｈ），１．７４−１．８８（ｍ，２Ｈ），２．５１−２．７０（４Ｈ），２．５５（ｔ，Ｊ＝８，２Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．９０−３．９８（ｍ，１Ｈ），４．９７（ｄ，Ｊ＝８．０，１Ｈ），７．０８（ａｐｐ  ｓ，４Ｈ）。
【０１１３】
段階Ｃ：（＋／−）−３−アミノ−５−（４−オクチルフェニル）ペンタン酸
４ｍＬのＭｅＯＨ中の１００ｍｇの（＋／−）−３−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−５−（４−オクチルフェニル）ペンタン酸メチル（実施例５、段階Ｂからのもの）の溶液を０．５ｍＬの５Ｎ  ＮａＯＨで処理し、室温で３０分間攪拌した。その混合物を濃縮し、残留物を３０ｍＬのＥｔＯＡｃと２０ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌとで分配した。有機層を分離し、乾燥させて、濃縮した。残留物を２ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、０℃に冷却して、２ｍＬのトリフルオロ酢酸で処理した。得られた混合物を室温で２時間攪拌し、その後、濃縮した。残留物をエーテルと研和し、濾過して、５８ｍｇ（７９％）の表題化合物を得た：ＨＰＬＣ  Ｂ：３．２２分；ＥＳＩ−ＭＳ  ３０６（Ｍ＋Ｈ）。
【０１１４】
（実施例６）
（＋／−）−Ｎ−メタンスルホニル  ２−アミノ−４−（４−オクチルフェニル）ブタンアミド・トリフルオロ酢酸塩
段階Ａ：（＋／−）−Ｎ−メタンスルホニル  ２−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブタンアミド
２．５ｍＬのＴＨＦ中の１１０ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ）の（＋／−）−２−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブタン酸（実施例２、段階Ａからのもの）および４６ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−カルボニルジイミダゾールの混合物を１時間還流させながら加熱した。得られた混合物を冷却し、３５ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）のメタンスルホンアミドおよび０．０７５ｍＬのＤＢＵで処理し、室温で２０時間攪拌した。その混合物を４０ｍＬのＥｔＯＡｃと２０ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌとで分配し、層を分離した。有機層を乾燥させて、濃縮した。１０：１  ｖ／ｖ  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ＋０．５％ＨＯＡｃを使用するＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｓカートリッジでのフラッシュクロマトグラフィーによって、１０７ｍｇ（８２％）の表題化合物を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（４００Ｍｈｚ）δ０．８８（ｔ，Ｊ＝７．２，３Ｈ），１．２２−１．３６（１２Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），１．５４−１．６２（ｍ，２Ｈ），１．８８−１．９８（ｍ，１Ｈ），２．１４−２．２４（ｍ，１Ｈ），３．２６（ｓ，３Ｈ），４．０８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．９９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．０３−７．１８（４Ｈ），９．３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）。
【０１１５】
段階Ｂ：（＋／−）−Ｎ−メタンスルホニル  ２−アミノ−４−（４−オクチルフェニル）ブタンアミド・トリフルオロ酢酸塩
０℃で３ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中の１０５ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）の（＋／−）−Ｎ−メタンスルホニル  ２−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブタンアミド（実施例６、段階Ａからのもの）の溶液を３ｍＬのトリフルオロ酢酸で処理した。得られた混合物を室温で１．５時間攪拌し、その後、濃縮して、１０８ｍｇ（１００％）の表題化合物を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（５００Ｍｈｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ０．８８（ｔ，Ｊ＝７．０，３Ｈ），１．２２−１．３６（１２Ｈ），１．５６−１．６２（ｍ，２Ｈ），２．１８−２．２２（ｍ，２Ｈ），３．２６（ｓ，３Ｈ），３．９６−４．００（ｍ，１Ｈ）：ＨＰＬＣ  Ｂ：３．０９分；ＥＳＩ−ＭＳ３６９（Ｍ＋Ｈ）。
【０１１６】
（実施例７）
（＋／−）−Ｎ−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）２−アミノ−４−（４−オクチルフェニル）ブタンアミド・塩酸塩
段階Ａ：（＋／−）−Ｎ−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）２−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブタンアミド
２．５ｍＬのＴＨＦ中の９８ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ）の（＋／−）−２−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブタン酸（実施例２、段階Ａからのもの）および４１ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−カルボニルジイミダゾールの混合物を１時間還流させながら加熱した。その混合物を４０ｍｇ（０．３９ｍｍｏｌ）の５−アミノテトラゾール・一水和物で処理し、３時間還流させながら加熱した。その混合物を冷却し、４０ｍＬのＥｔＯＡｃと２０ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌとで分配した。有機層を分離し、乾燥させて、濃縮した。溶離剤として２：１  ｖ／ｖ  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＋１％ＨＯＡｃ、次に２：１  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ＋１％ＨＯＡｃ、次に２０：１  ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ＋２％ＨＯＡｃを使用するＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｓカートリッジでのフラッシュクロマトグラフィーによって、７８ｍｇ（６８％）の表題化合物を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（５００Ｍｈｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ０．８８（ｔ，Ｊ＝７．０，３Ｈ），１．２４−１．３４（１２Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ），１．５４−１．６０（ｍ，２Ｈ），１．９３−２．０２（ｍ，１Ｈ），２．０４−２．１４（ｍ，１Ｈ），２．５３（ｔ，Ｊ＝８．０，２Ｈ），２．６１−２．６８（ｍ，１Ｈ），２．７０−２．８０（ｍ，１Ｈ），４．２３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．０７（ａｐｐ  ｑ，Ｊ＝８．０，４Ｈ）；ＨＰＬＣ  Ａ：４．５１分；ＨＰＬＣ  Ｂ：４．５３分；ＥＳＩ−ＭＳ４５９（Ｍ＋Ｈ）。
【０１１７】
段階Ｂ：（＋／−）−Ｎ−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）２−アミノ−４−（４−オクチルフェニル）ブタンアミド・塩酸塩
ＭｅＯＨ中０．５ＮのＨＣｌ（８ｍＬ）中の７８ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ）の（＋／−）−Ｎ−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）２−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブタンアミド（実施例７、段階Ａからのもの）の溶液を室温で７２時間攪拌した。その溶液を濃縮し、残留物をエーテルと研和した。得られた固体を濾過し、乾燥させて、５８ｍｇ（８６％）の表題化合物を得た：ＨＰＬＣ  Ｂ：２．６７分；ＥＳＩ−ＭＳ  ３５９（Ｍ＋Ｈ）。
【０１１８】
（実施例８）
（＋／−）−３−アミノ−５−（４−オクチルフェニル）ペンタンスルホン酸
段階Ａ：（＋／−）−３−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−５−（４−オクチルフェニル）ペンタノール
−７８℃で８ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中の３４５ｍｇ（０．８２ｍｍｏｌ）の（＋／−）−３−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−５−（４−オクチルフェニル）ペンタン酸メチル（実施例５、段階Ｂからのもの）の溶液を、ＣＨ２Ｃｌ２中１．０Ｍのジイソブチルアルミニウムヒドリド溶液２．０ｍＬで処理した。得られた混合物を０℃に温め、２時間攪拌した。反応を５ｍＬのロシェル塩飽和水溶液で停止させ、５０ｍＬのエーテルと２０ｍＬの１Ｎ  ＮａＯＨとで分配した。有機層を分離し、乾燥させて、濃縮した。３：１  ヘキサン／ＥｔＯＡｃを使用するＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｓカートリッジでのフラッシュクロマトグラフィーによって２９２ｍｇ（９１％）の表題化合物を得た。
【０１１９】
段階Ｂ：（＋／−）−１−ヨード−３−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−５−（４−オクチルフェニル）ペンタン
５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中の１３１ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）のトリフェニルホスフィンおよび３４ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）のイミダゾールの溶液を、１２６ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）のヨウ素で処理し、室温で３０分間攪拌した。得られた混合物を１０８ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ）の３−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−５−（４−オクチルフェニル）ペンタノール（実施例８、段階Ａからのもの）で処理し、１時間攪拌した。反応を５ｍＬのＮａＨＣＯ３飽和水溶液で停止させ、４０ｍＬのエーテルと２０ｍＬの水とで分配した。有機層を分離し、乾燥させた。９：１  ｖ／ｖ  ヘキサン／エーテルを使用するＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｓカートリッジでのフラッシュクロマトグラフィーによって、１０５ｍｇ（７６％）の表題化合物を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（５００Ｍｈｚ）δ０．８８（ｔ，Ｊ＝７．０，３Ｈ），１．２２−１．３８（１２Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ），１．５５−１．６２（ｍ，２Ｈ），１．６４−１．８２（２ｈ），１．９４−２．１２（２Ｈ），２．５６（ｔ，Ｊ＝７．５，２Ｈ），２．５５−２．６６（ｍ，２Ｈ），３．１２−３．２４（２Ｈ），３．６４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．３１（ｄ，Ｊ＝９．０，１Ｈ）７．０８（ａｐｐ  ｓ，４Ｈ）；ＨＰＬＣ  Ａ：５．５７分。
【０１２０】
段階Ｃ：（＋／−）−３−アミノ−５−（４−オクチルフェニル）ペンタンスルホン酸
４ｍＬの１：１  ｖ／ｖ  ＥｔＯＨ／水中の１０２ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）の１−ヨード−３−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−５−（４−オクチルフェニル）ペンタン（実施例８、段階Ｂからのもの）および２５２ｍｇ（２ｍｍｏｌ）の亜硫酸ナトリウムの混合物を、１６時間、７０℃で加熱した。その混合物を冷却して、１０：１  ｖ／ｖ  ＣＨ２Ｃｌ２／ｉＰｒＯＨと１Ｎ  ＨＣｌとで分配し、層を分離した。有機層を乾燥させて、濃縮した。残留物を６ｍＬの１：１  ｖ／ｖＣＨ２Ｃｌ２／トリフルオロ酢酸に溶解し、得られた溶液を室温で３０分間攪拌した。その混合物を濃縮し、その後、５ｍＬのＭｅＯＨに溶解した。沈殿を濾過し、乾燥させて、３０ｍｇ（４２％）の表題化合物を得た。ＨＰＬＣ  Ａ：３．４１分；ＨＰＬＣ  Ｂ：３．１４分；ＥＳＩ−ＭＳ  ３５６（Ｍ＋Ｈ）。
【０１２１】
（実施例９）
（＋／−）−ｔｒａｎｓ−４−アミド−６−（４−オクチルフェニル）ヘクス−２−エン酸
段階Ａ：（＋／−）−ｔｒａｎｓ−４−アミノ−６−（４−オクチルフェニル）ヘクス−２−エン酸メチル
０℃で５ｍＬのＴＨＦ中の０．２４ｍＬ（１．５ｍｍｏｌ）のホスホノ酢酸トリメチルの溶液を、ＴＨＦ中のナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド溶液１．５ｍＬで処理し、２０分間冷却しながら攪拌した。３６５ｍｇ（０．９７ｍｍｏｌ）の（＋／−）−２−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブタナール（実施例２、段階Ｃからのもの）の溶液を添加して、冷却浴を取り外し、その混合物を室温で４５分間攪拌した。反応を停止させ、５０ｍＬのエーテルと２５ｍＬの水とで分配した。有機層を分離し、乾燥させて、濃縮した。３：１  ｖ／ｖ  ヘキサン／エーテルを使用するＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｓカートリッジでのフラッシュクロマトグラフィーによって、３００ｍｇ（７２％）の表題化合物を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（５００Ｍｈｚ）δ０．８８（ｔ，Ｊ＝７．０，３Ｈ），１．２４−１．３６（１２Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ），１．５５−１．６１（ｍ，２Ｈ），１．７４−１．９４（２Ｈ）３．７４（ｓ，３Ｈ），４．３３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．５２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），５．９３（ｄｄ，Ｊ＝１５．５，１．０，１Ｈ），６．８７（ｄｄ，Ｊ＝１５．５，５．０，１Ｈ），７．０８（ａｐｐ  ｑ，Ｊ＝８．５，４Ｈ）。
【０１２２】
段階Ｂ：（＋／−）−ｔｒａｎｓ−４−アミノ−６−（４−オクチルフェニル）ヘクス−２−エン酸
実施例５、段階Ｃに記載したものに類似した手順を使用して、（＋／−）−ｔｒａｎｓ−４−アミノ−６−（４−オクチルフェニル）ヘクス−２−エン酸メチル（実施例９、段階Ａからのもの）から表題化合物を調製した：ＨＰＬＣ  Ｂ：２．９０分；ＥＳＩ−ＭＳ  ３５０（Ｍ＋Ｈ）。
【０１２３】
（実施例１０）
（＋／−）−４−アミノ−６−（４−オクチルフェニル）ヘキサン酸
段階Ａ：（＋／−）−４−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−６−（４−オクチルフェニル）ヘキサン酸メチル
実施例３、段階Ａに記載したものに類似した手順を使用して、（＋／−）−ｔｒａｎｓ−４−アミノ−６−（４−オクチルフェニル）ヘクス−２−エン酸メチル（実施例９、段階Ａからのもの）から表題化合物を調製した。
【０１２４】
段階Ｂ：（＋／−）−４−アミノ−６−（４−オクチルフェニル）ヘキサン酸
実施例５、段階Ｃに記載したものに類似した手順を使用して、（＋／−）−４−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−６−（４−オクチルフェニル）ヘキサン酸メチルから表題化合物を調製した。
【０１２５】
（実施例１１）
１−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−３−アミノ−５−（４−オクチルフェニル）ペンタノール・トリフルオロ酢酸塩
段階Ａ：（＋／−）−３−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−５−（４−オクチルフェニル）ペンタナール
実施例２、段階Ｃに記載したものに類似した手順を使用して、３−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−５−（４−オクチルフェニル）ペンタノール（実施例８、段階Ａからのもの）から表題化合物を調製した：１Ｈ  ＮＭＲ（５００Ｍｈｚ）δ０．８８（ｔ，Ｊ＝７．０，３Ｈ），１．２２−１．３６（１２Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ），１．５２−１．６２（ｍ，２Ｈ），１．７６−１．９０（ｍ，２Ｈ），２．５６（ｔ，Ｊ＝８．０，２Ｈ），２．６０−２．７４（４Ｈ），４．０５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．６８（ｂｒ，ｓ）７．０８−７．１０（４Ｈ），９．７４（ｓ，１Ｈ）。
【０１２６】
段階Ｂ：１−（１−（４−メトキシベンジル）−テトラゾール−５−イル）−３−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−５−（４−オクチルフェニル）ペンタノール、（＋／−）−異性体１および（＋／−）−異性体２
−１００℃で１１ｍＬの１０：１  ｖ／ｖ  ＴＨＦ／Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミン中の４００ｍｇ（２．１ｍｍｏｌ）の１−（４−メトキシベンジル）テトラゾールの溶液を、ヘキサン中１．６Ｍのｎ−ブチルリチウム溶液１．３ｍＬで処理し、１０分間冷却しながら攪拌した。得られた混合物を、２ｍＬのＴＨＦ中２６０ｍｇ（０．６７ｍｍｏｌ）の（＋／−）−３−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−５−（４−オクチルフェニル）ペンタナール（実施例１１、段階Ａからのもの）の溶液で処理した。その混合物を放置して、徐々に０℃に温め、その後、２０ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌで反応を停止させた。その反応を停止させた混合物を７０ｍＬのエーテルで抽出した。抽出物を分離し、乾燥させて、濃縮した。１７：３  ｖ／ｖ  ヘキサン／ＥｔＯＡｃを使用するＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｍカートリッジでのフラッシュクロマトグラフィーによって、表題化合物を二つの異性体として得た。（＋／−）−異性体１（９４ｍｇ、２４％）について：ＨＰＬＣ  Ｂ：５．２５分；ＥＳＩ−ＭＳ  ５８０（Ｍ＋Ｈ）。異性体２（８４ｍｇ、２２％）について：ＨＰＬＣ  Ｂ：４．９９分；ＥＳＩ−ＭＳ  ５８０（Ｍ＋Ｈ）。
【０１２７】
段階Ｃ：１−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−３−アミノ−５−（４−オクチルフェニル）ペンタノール、（＋／−）−異性体１および（＋／−）−異性体２
３ｍＬのＣＨＣｌ３中の８９ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）の１−（１−（４−メトキシベンジル）−テトラゾール−５−イル）−３−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−５−（４−オクチルフェニル）ペンタノール、（＋／−）−異性体１（実施例１１、段階Ｂからのもの）および０．１０ｍＬ（０．７ｍｍｏｌのヨードトリメチルシランの溶液を、５０℃で２時間攪拌した。その混合物を、さらなるヨードトリメチルシラン（０．１５ｍＬ）で処理し、２時間攪拌した。その混合物を冷却し、３ｍＬのＭｅＯＨで処理して、室温で２０時間攪拌した。その混合物を濃縮した。ＨＰＬＣ精製（ＨＰＬＣ  Ｃ）によって、６０ｍｇ（８５％）の表題化合物（（＋／−）−異性体１）をその対応するトリフルオロ酢酸塩として得た：ＨＰＬＣ  Ｂ：２．９３分；ＥＳＩ−ＭＳ  ３６０（Ｍ＋Ｈ）。
【０１２８】
表題化合物（（＋／−）−異性体２）は、１−（１−（４−メトキシベンジル）−テトラゾール−５−イル）−３−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−５−（４−オクチルフェニル）ペンタノール、（＋／−）−異性体２（実施例１１、段階Ｂからのもの）から同様に得た：ＨＰＬＣ  Ｂ：２．９３分；ＥＳＩ−ＭＳ  ３６０（Ｍ＋Ｈ）。
【０１２９】
（実施例１２）
１−（ＲまたはＳ）−ヒドロキシ−３−（Ｒ）−アミノ−５−（４−オクチルフェニル）ペンチルホスホン酸
段階Ａ；２−（Ｒ）−トリフルオロアセトアミド−４−オキソ−４−（４−オクチルフェニル）ブタン酸
１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中の２．０ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）の塩化アルミニウムの懸濁液を０．８ｍＬ（１５ｍｍｏｌ）のニトロメタン、次に２．２ｍＬ（１０ｍｍｏｌ）のオクチルベンゼンで処理した。得られた均質混合物を１．０６ｇ（５．０ｍｍｏｌ）の２−（Ｒ）−トリフルオロアセトアミドコハク酸無水物で処理し、室温で２０時間攪拌した。その混合物を２０ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌで失活させ、１５０ｍＬのＥｔＯＡｃで抽出した。抽出物を分離し、乾燥させて、濃縮した。溶離剤として９：１  ｖ／ｖ  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＋１％ＨＯＡｃ、次に７：３  ｖ／ｖ  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＋１％ＨＯＡｃを使用するＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｍカートリッジでのフラッシュクロマトグラフィーによって、１．９０ｇの純粋な生成物を得た。２０：１のヘキサン／ＥｔＯＡｃからの再結晶により、１．４１ｇ（７０％）の表題化合物を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（５００Ｍｈｚ）δ０．８８（ｔ，Ｊ＝７．０，３Ｈ），１．２２−１．３８（１２Ｈ），１．５８−１．６６（ｍ，２Ｈ），２．６８（ｔ，Ｊ＝８．０，２Ｈ），３．５７（ｄｄ，Ｊ＝１３．５，４．５，１Ｈ），３．８９（ｄｄ，Ｊ＝１３．５，４．５，１Ｈ），４．９９−５．０３（ｍ，１Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝８．５，２Ｈ），７．５２（ｄ，３＝８．０，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝８．５，２Ｈ）；ＨＰＬＣＡ：４．２７分；ＨＰＬＣＢ：４．３２分。
【０１３０】
段階Ｂ：２−（Ｒ）−トリフルオロアセトアミド−４−（４−オクチルフェニル）ブタン酸
２５ｍＬのＨＯＡｃ中の８．７ｇ（２１．７ｍｍｏｌ）の２−（Ｒ）−トリフルオロアセトアミド−４−オキソ−４−（４−オクチルフェニル）ブタン酸（実施例１２、段階Ａからのもの）および１．７５ｇの１０％Ｐｄ／Ｃの混合物を４０ｐｓｉで２０時間水素化した。その混合物をＣｅｌｉｔｅのパッドに通して濾過し、そのフラスコおよびパッドをＥｔＯＡｃですすいだ。トルエンを濾液に添加し、その濾液を濃縮して９．０の表題化合物を生じ、それをさらに精製せずに使用した。
【０１３１】
段階Ｃ：２−（Ｒ）−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブタン酸
５０ｍＬのジオキサンおよび１００ｍＬの１Ｎ  ＮａＯＨ中の９．０ｇ（〜２１．７ｍｍｏｌ）の粗製２−（Ｒ）−トリフルオロアセトアミド−４−（４−オクチルフェニル）ブタン酸（実施例１２、段階Ｂからのもの）の溶液を、室温で３０分間攪拌した。ジ−ｔ−ブチルジカーボネート（７．６ｇ、３４．８ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を３０分間攪拌した。固体を濾過し、濾液をエーテルと１Ｎ  ＨＣｌとで分配した。有機層を乾燥させて、濃縮した。溶離剤として４：１  ｖ／ｖ  ヘプタン／ＥｔＯＡｃ＋１％ＨＯＡｃを使用するＢｉｏｔａｇｅ  ７５Ｓでのフラッシュクロマトグラフィーによって、８．５ｇの表題化合物を得た：ＥＳＩ−ＭＳ  ２９２（Ｍ−ＢＯＣ＋Ｈ）；ＨＰＬＣ  Ａ：４．６８分；ＨＰＬＣ  Ｂ：４．６６分。
【０１３２】
段階Ｄ：３−（Ｒ）−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−５−（４−オクチルフェニル）ペンタナール
実施例５の段階ＡおよびＢ、実施例８の段階Ａならびに実施例２の段階Ｃに記載したものに類似した手順を使用して、２−（Ｒ）−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブタン酸（実施例１２、段階Ｃからのもの）から表題化合物を調製した。
【０１３３】
段階Ｅ：１−（ＲまたはＳ）−ヒドロキシ−３−（Ｒ）−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−５−（４−オクチルフェニル）ペンチルホスホン酸ジエチル（異性体１）および１−（ＳまたはＲ）−ヒドロキシ−３−（Ｒ）−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−５−（４−オクチルフェニル）ペンチルホスホン酸ジエチル（異性体）
−５℃で１０ｍＬのＴＨＦ中の０．１９ｍＬ（１．５ｍｍｏｌ）の亜リン酸ジエチルの溶液を、ＴＨＦ中のナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド溶液１．５ｍＬで処理し、３０分間冷却しながら攪拌した。得られた混合物を、４ｍＬのＴＨＦ中の３６３ｍｇ（０．９３ｍｍｏｌ）の３−（Ｒ）−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−５−（４−オクチルフェニル）ペンタナール（実施例１２、段階Ｄからのもの）の溶液で処理して、得られた混合物を２０分間冷却しながら攪拌した。反応を１０ｍＬのＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液で停止させ、５０ｍＬのＥｔＯＡｃと２０ｍＬの水とで分配した。有機層を分離し、乾燥させた。水性層を５０ｍＬのＥｔＯＡｃで抽出した。抽出物を分離して、乾燥させた。有機層を併せ、濃縮した。溶離剤として３：１  ｖ／ｖ  ＣＨ２Ｃｌ２／アセトニトリル（１Ｌ）、次に１：１  ＣＨ２Ｃｌ２／アセトニトリル（２Ｌ）を使用するＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｍカートリッジでのフラッシュクロマトグラフィーによって、１８０ｍｇ（３５％）の異性体１および８８ｍｇ（１７％）の異性体２を得た。異性体１について：１Ｈ  ＮＭＲ（５００Ｍｈｚ）δ０．８８（ｔ，Ｊ＝７．０，３Ｈ），１．２２−１．３８（１２Ｈ），１．３５（ｔ，Ｊ＝７．０，６Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ），１．５６−１．６０（ｍ，２Ｈ），１．６２−１．７０（ｍ，１Ｈ），１．７１−１．７８（ｍ，２Ｈ），１．７９−１．８６（ｍ，２Ｈ），１．９０−１．９７（ｍ，２Ｈ），２．５６（ｔ，Ｊ＝７．５，２Ｈ），１．６０−１．７３（ｍ，２Ｈ），３．８０−３．９０（ｍ，１Ｈ），３．９５（ｄｔ，Ｊ＝５．０，１２．０，１Ｈ），４．１５−４．２３（４Ｈ），４．４２−４．４８（２Ｈ），７．０５−７．１０（４Ｈ）。Ｆｏｒ  Ｉｓｏｍｅｒ  ２：１Ｈ  ＮＭＲ（５００Ｍｈｚ）δ０．８８（ｔ，Ｊ＝７．０，３Ｈ），１．２６−１．３８（１２Ｈ），１．３３（ｔ，Ｊ＝７．５，６Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ），１．５５−１．６０（ｍ，２Ｈ），１．６８−１．７８（ｍ，２Ｈ），１．８４−１．８９（ｍ，２Ｈ），２．００−２．０８（ｍ，１Ｈ），２．５６（ｔ，Ｊ＝７．５，２Ｈ），２．５８−２．７０（２Ｈ），３．４０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．７６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．９８−４．０２（ｍ，１Ｈ），４．１３−４．２０（４Ｈ），４．６６（ｄ，Ｊ＝８．０，１Ｈ），７．１０（ａｐｐ  ｓ，４Ｈ）。
【０１３４】
段階Ｆ：１−（ＲまたはＳ）−ヒドロキシ−３−（Ｒ）−アミノ−５−（４−オクチルフェニル）ペンチルホスホン酸
実施例３、段階Ｂに記載したものに類似した手順を使用して、１−（ＲまたはＳ）−ヒドロキシ−３−（Ｒ）−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−５−（４−オクチルフェニル）ペンチルホスホン酸ジエチル（異性体１）から表題化合物を調製した：ＨＰＬＣ  Ｂ  ２．８８分；ＥＳＩ−ＭＳ  ３７２（Ｍ＋Ｈ）。
【０１３５】
（実施例１３）
１−（ＳまたはＲ）−ヒドロキシ−３−（Ｒ）−アミノ−５−（４−オクチルフェニル）ペンチルホスホン酸
実施例３、段階Ｂに記載したものに類似した手順を使用して、１−（ＳまたはＲ）−ヒドロキシ−３−（Ｒ）−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−５−（４−オクチルフェニル）ペンチルホスホン酸ジエチル（異性体２、実施例１２、段階Ｅからのもの）から表題化合物を調製した：ＨＰＬＣ  Ｂ  ２．９０分；ＥＳＩ−ＭＳ  ３７２（Ｍ＋Ｈ）。
【０１３６】
（実施例１４）
１−（ＳまたはＲ）−ヒドロキシ−３−（Ｓ）−アミノ−５−（４−オクチルフェニル）ペンチルホスホン酸
実施例１２、段階ＥおよびＦに記載したものに類似した手順を使用して、３−（Ｓ）−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−５−（４−オクチルフェニル）ペンタナールから表題化合物を調製した：ＨＰＬＣ  Ｂ  ２．８３分；ＥＳＩ−ＭＳ  ３７２（Ｍ＋Ｈ）。
【０１３７】
（実施例１５）
１−（ＲまたはＳ）−ヒドロキシ−３−（Ｓ）−アミノ−５−（４−オクチルフェニル）ペンチルホスホン酸
実施例１２の段階Ｅおよび実施例１３に記載したものに類似した手順を使用して、３−（Ｓ）−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−５−（４−オクチルフェニル）ペンタナールから表題化合物を調製した：ＨＰＬＣ  Ｂ  ２．９０分；ＥＳＩ−ＭＳ  ３７２（Ｍ＋Ｈ）。
【０１３８】
（実施例１６から１９）
【０１３９】
【化１４】
2005531508.tif 000018
【０１４０】
段階Ａにおいて４−オクチルベンゼンの代わりに適切なアレーンを使用する、実施例１２に記載したものに類似した手順を使用して、以下の化合物を調製した。
【０１４１】
【表３】
2005531508.tif 000019
2005531508.tif 000020
【０１４２】
（実施例２０）
（＋／−）−２−（２−アミノ−４−（４−オクチルフェニル）ブチルチオ）イミダゾール
段階Ａ：（＋／−）−１−ヨード−２−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブタン
実施例８、段階Ｂに記載したものに類似した手順を使用して、（＋／−）−２−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブタノール（実施例２、段階Ｂからのもの）から表題化合物を調製した：１Ｈ  ＮＭＲ（５００Ｍｈｚ）δ０．８８（ｔ，Ｊ＝７．０，３Ｈ），１．２６−１．３０（１２Ｈ），１．５４−１．６１（４Ｈ），１．７９−１．９５（４Ｈ），２．５６（ｔ，Ｊ＝７．８，２Ｈ），３．３１−３．４６（３Ｈ），７．０７−７．１１（４Ｈ）。
【０１４３】
段階Ｂ：（＋／−）−２−（２−ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブチルチオ）イミダゾール
４ｍＬのＣＨ３ＣＮ中の２１０ｍｇ（０．４３ｍｍｏｌ）の（＋／−）−１−ヨード−２−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブタン（実施例２０、段階Ａからのもの）、５１ｍｇ（０．５１ｍｍｏｌ）の２−メルカプトイミダゾールおよび０．９７ｍＬのＤＩＥＡの混合物を、３時間還流させながら加熱した。その混合物を冷却し、５０ｍＬのエーテルと２５ｍＬの水とで分配した。有機層を２５ｍＬのＮａＣｌ飽和水溶液で洗浄し、乾燥させて、濃縮した。２：１  ｖ／ｖ  ヘキサン／ＥｔＯＡｃを使用するＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｓカートリッジでのカラムクロマトグラフィーによって、１５０ｍｇの純粋な表題化合物を得た：ＨＰＬＣ  Ｂ：３．６０分；ＥＳＩ−ＭＳ  ３６０（Ｍ−ＢＯＣ＋Ｈ）。
【０１４４】
段階Ｃ：（＋／−）−２−（２−アミノ−４−（４−オクチルフェニル）ブチルチオ）イミダゾール
ＭｅＯＨ中のＨＣｌ飽和溶液４ｍＬ中の１５０ｍｇの純粋な（＋／−）−２−（２−ｔ−ブトキシカルボニルアミド−４−（４−オクチルフェニル）ブチルチオ）イミダゾール（実施例２０、段階Ｂからのもの）の溶液を、室温で２時間攪拌した。その溶液を濃縮した。溶離剤として２０：１：０．１  ｖ／ｖ／ｖ  ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨを使用するＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｓカートリッジでのクロマトグラフィーによって、１１３ｍｇの表題化合物を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，５００Ｍｈｚ）δ０．８９（ｔ，Ｊ＝７．０，３Ｈ），１．２６−１．３８（１２Ｈ）；１．５６−１．５８（ｍ，２Ｈ），１．９５−２．０８（ｍ，２Ｈ），２．５５（ｔ，Ｊ＝７．７，２Ｈ），２．６０−２．７０（ｍ，２Ｈ），３．１５−３．１９（ｍ，１Ｈ），３．３４−３．３９（ｍ，２Ｈ），７．０５−７．１２（６Ｈ）；ＨＰＬＣ  Ｂ：２．５３分；ＥＳＩ−ＭＳ３６０（Ｍ＋Ｈ）。
【０１４５】
（実施例２１）
（＋／−）−３−（２−アミノ−４−（４−オクチルフェニル）ブチルチオ）−１，２，４−トリアゾール
段階Ｂにおいて２−メルカプトイミダゾールの代わりに３−メルカプト−１，２，４−トリアゾールを使用する、実施例２０に記載したものに類似した手順を使用して、（＋／−）−２−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブタノール（実施例２、段階Ｂ）から表題化合物を調製した：１Ｈ  ＮＭＲ（５００Ｍｈｚ）δ０．８７（ｔ，Ｊ＝７．０，３Ｈ），１．２６−１．２９（１２Ｈ），１．５４−１．６０（ｍ，２Ｈ），１．８０−１．９８（ｍ，２Ｈ），２．５５（ｔ，Ｊ＝７，８，２Ｈ），２．６２−２．７３（ｍ，２Ｈ），３．０４−３．０９（ｍ，１Ｈ），３．２２−３，３２（ｍ，２Ｈ），５．８８（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），７．０５−７．１２（４Ｈ），８．００（ｓ，１Ｈ）；ＨＰＬＣ  Ｂ：２．９６分；ＥＳＩ−ＭＳ３６１（Ｍ＋Ｈ）。
【０１４６】
（実施例２２）
（＋／−）−１−Ｈ−５−（２−アミノ−４−（４−オクチルフェニル）ブチルチオ）−１，２，３−トリアゾール
段階Ｂにおいて２−メルカプトイミダゾールの代わりに１−Ｈ−５−メルカプト−１，２，３−トリアゾールを使用する、実施例２０に記載したものに類似した手順を使用して、（＋／−）−２−（ｔ−ブトキシカルボニルアミド）−４−（４−オクチルフェニル）ブタノール（実施例２、段階Ｂ）から表題化合物を調製した：１Ｈ  ＮＭＲ（５００Ｍｈｚ）δ０．８７（ｔ，Ｊ＝７．０，３Ｈ），１．２２−１．２６（１２Ｈ），１．５５−１．６２（ｍ，２Ｈ），１．７５−１．８４（ｍ，１Ｈ），１．８６−１．９４（ｍ，１Ｈ），２．５５（ｔ，Ｊ＝７．８，２Ｈ），２．５８−２．６６（ｍ，１Ｈ），２．６７−２．７３（ｍ，１Ｈ），２．８４−２．８９（ｍ，１Ｈ），３．０６−３．１６（ｍ，１Ｈ），５．０９（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），７．０５−７．０９（４Ｈ），７．５６（ｓ，１Ｈ）；ＨＰＬＣ  Ｂ：２．９３分；ＥＳＩ−ＭＳ３６１（Ｍ＋Ｈ）。
【０１４７】
（実施例２３）
（＋／−）−３−（２−アミノ−４−（４−オクチルフェニル）ブチルスルホニル）−１，２，４−トリアゾール
段階Ａ：（＋／−）−３−（２−ｔ−ブトキシカルボニルアミド−４−（４−オクチルフェニル）ブチルスルホニル）−１，２，４−トリアゾール
０℃で４ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中の８１ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）の（＋／−）−３−（２−ｔ−ブトキシカルボニルアミド−４−（４−オクチルフェニル）ブチルチオ）−１，２，４−トリアゾール（実施例２１からのもの）の溶液を、６７ｍｇ（０．３９ｍｍｏｌ）の３−クロロペルオキシ安息香酸で処理した。得られた混合物を室温に温め、１．５時間攪拌した。その反応混合物を５０ｍＬのＥｔＯＡｃと２５ｍＬの１Ｎ  ＮａＯＨとで分配し、層を分離した。有機層を２５ｍＬのＮａＣｌ飽和水溶液で洗浄し、乾燥させて、濃縮した。溶離剤として３：２  ｖ／ｖ  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＋１％ＨＯＡｃを使用するＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｓカートリッジでのクロマトグラフィーによって、８２％の表題化合物を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（５００Ｍｈｚ）δ０．８７（ｔ，Ｊ＝７．０，３Ｈ），１．２１−１．３４（１２Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ），１．５４−１．５９（ｍ，２Ｈ），１．９６−２．１０（ｍ，２Ｈ），２．５３−２．６９（４Ｈ），３．４９−３．５７（ｍ，１Ｈ），３．６９−３．８０（ｍ，１Ｈ），４．０７−４．１２（ｍ，１Ｈ），４．８２−４．９２（ｍ，１Ｈ），７．０１−７．１８（４Ｈ），８．５０（ｓ，１Ｈ）；ＨＰＬＣ  Ｂ：４．５６分。
【０１４８】
段階Ｂ：（＋／−）−３−（２−アミノ−４−（４−オクチルフェニル）ブチルスルホニル）−１，２，４−トリアゾール
実施例２０、段階Ｃに記載したものに類似した手順を使用して、（＋／−）−３−（２−ｔ−ブトキシカルボニルアミド−４−（４−オクチルフェニル）ブチルスルホニル）−１，２，４−トリアゾール（実施例２３、段階Ａからのもの）から表題化合物を調製した：ＨＰＬＣ  Ｂ：２．８０分；ＥＳＩ−ＭＳ  ３９３（Ｍ＋Ｈ）。
【０１４９】
（実施例２４）
（＋／−）−３−（２−アミノ−４−（４−オクチルフェニル）ブチルスルホニル）−１，２，４−トリアゾール
実施例２３に記載したものに類似した手順を使用して、（＋／−）−１−Ｈ−５−（２−ｔ−ブトキシカルボニルアミド−４−（４−オクチルフェニル）ブチルチオ）−１，２，３−トリアゾール（実施例２２からのもの）から表題化合物を調製した：ＨＰＬＣ  Ｂ：３．１２分；ＥＳＩ−ＭＳ  ３９３（Ｍ＋Ｈ）。
【０１５０】
（実施例２５）
１−（ＲまたはＳ）−ヒドロキシ−３−（Ｒ）−アミノ−５−（３−メトキシ−５−メチル−４−オクチルオキシフェニル）ペンチルホスホン酸
段階Ａ：１−ブロモ−３−メトキシ−５−メチル−４−オクチルオキシベンゼン
１００ｍＬのアセトニトリル中の５．８９ｇ（２７ｍｍｏｌ）の１−ブロモ−４−ヒドロキシ−３−メトキシ−５−メチルベンゼン（Ｓｙｎ．Ｌｅｔｔ．１９９７，１３５１−１３５２）の溶液を、５．３３ｇ（３８．５ｍｍｏｌ）の粉末Ｋ２ＣＯ３および５．７５ｍＬ（３１．８ｍｍｏｌ）の１−ヨードオクタンで処理した。８５℃で１９時間攪拌した後、その反応物を冷却し、濃縮した。残留物を１００ｍＬのＨ２Ｏに溶解し、１００ｍＬのＥｔ２Ｏで抽出した。相を分離した後、有機層を１００ｍＬの１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させて、濃縮した。残留物を、ヘキサン、９９／１  ｖ／ｖ  ヘキサン／ＥｔＯＡｃそして９８／２  ｖ／ｖ  ヘキサン／ＥｔＯＡｃという傾斜を利用するＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｌカラムで精製して、０．４３ｇの表題化合物を無色の油として得た。幾つかの混合カラム画分を再びクロマトグラフに付して、さらに７０３ｍｇの表題化合物を得た。ＲＦ：０．６３（１９／１  ｖ／ｖ  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ０．９３（ｔ，Ｊ＝６．８，３Ｈ），１．３３−１．３９（ｍ，８Ｈ），１．４６−１．５２（ｍ，２Ｈ），１．７５−１．８１（ｍ，２Ｈ），２．２７（ｓ，３Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．９１（ｔ，Ｊ＝６．６，２Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝２．３，１Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝２．３，１Ｈ）。
【０１５１】
段階Ｂ：３−ｔ−ブトキシカルボニル−２，２−ジメチル−４−（Ｒ）−［２−（３−メトキシ−５−メチル−４−オクチルオキシフェン）エチル］オキサゾリジン
ＳａｂａｔおよびＪｏｈｎｓｏｎの方法（Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．２０００，２，１０８９−１０９２）に従って、６ｍＬのトルエン中の３１２ｍｇ（１．３ｍｍｏｌ）の３−ｔ−ブトキシカルボニル−２，２−ジメチル−４−（Ｒ）−ビニルオキサゾリジン（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  １９９４，１４６３−１４６６）の溶液を、ＴＨＦ中０．５Ｍの９−ボラビシクロ［３．３．１］ノナン（９−ＢＢＮ）で処理した。アルゴン下、８０℃で４０分間攪拌した後、反応物を冷却し、１．６ｍＬ（５．１ｍｍｏｌ）の３．２Ｎ  ＮａＯＨ；３２ｍｇ（０．０３５ｍｍｏｌ）のトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）；７０ｍｇ（０．２６ｍｍｏｌ）のトリフェニルホスフィン；２ｍＬのトルエン中の４３０ｍｇ（１．３ｍｍｏｌ）の１−ブロモ−３−メトキシ−５−メチル−４−オクチルオキシベンゼン（段階Ａからのもの）；および２４１ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のヨウ化テトラブチルアンモニウムで処理した。９０℃で１６時間攪拌した後、反応物を冷却し、５０ｍＬのＨ２Ｏに注入して、２ｘ５０ｍＬのＥｔ２Ｏで抽出した。併せた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させて、濃縮した。残留物を、９２．５／７．５  ｖ／ｖ  ヘキサン／Ｅｔ２Ｏそして９／１  ｖ／ｖ  ヘキサン／Ｅｔ２Ｏという傾斜を使用するＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｍカラムで精製して、５９８ｍｇの表題化合物を金色の油として得た。ＲＦ：０．１６（９／１  ｖ／ｖ  ヘキサン／Ｅｔ２Ｏ）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ｒｏｔａｍｅｒｓ）δ０．９１（ｔ，Ｊ＝  ６．９，３Ｈ），１．１９−１．９７（ｍ，２９Ｈ），２．２４（ｓ，３Ｈ），２．３７−２．５７（ｍ，２Ｈ），３．８０−３．９８（ｍ，７Ｈ），４．２４，４．３９（２ｂｒ  ｍ，１Ｈ），６．５５−６．６１（ｍ，２Ｈ）。
【０１５２】
段階Ｃ：２−（Ｒ）−［Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−（３−メトキシ−５−メチル−４−オクチルオキシフェニル）−１−ブタノール
６ｍＬのＭｅＯＨ中の５９８ｍｇ（１．２ｍｍｏｌ）の３−ｔ−ブトキシカルボニル−２，２−ジメチル−４−（Ｒ）−［２−（３−メトキシ−５−メチル−４−オクチルオキシフェン）エチル］オキサゾリジン（段階Ｂからのもの）の溶液を、０．２０ｍＬ（２．５ｍｍｏｌ）のピリジンおよび０．４７ｇ（２．５ｍｍｏｌ）のｐ−トルエンスルホン酸で処理した。３時間還流させた後、反応物を濃縮し、５０ｍＬのＨ２Ｏと５０ｍＬのＥｔ２Ｏとで分配した。相を分離した後、水性層を５０ｍＬのＥｔ２Ｏで抽出した。併せた有機層を１００ｍＬの１Ｎ  ＮａＨＣＯ３、１００ｍＬのＨ２Ｏおよび１００ｍＬのブラインで洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させて、濃縮した。残留物を、３／１  ｖ／ｖ  ヘキサン／ＥｔＯＡｃそして７／３  ｖ／ｖ  ヘキサン／ＥｔＯＡｃという傾斜を使用するＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｍカラムで精製して、３３９ｍｇの表題化合物を無色の油として得た。ＲＦ：０．１９（７／３  ｖ／ｖ  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ０．９１（ｔ，Ｊ＝６．９，３Ｈ），１．２７−１．４６（ｍ，７Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ），１．７２−１．８７（ｍ，６Ｈ），１．９９（ｂｒｍ，１Ｈ），２．２４（ｓ，３Ｈ），２．５６−２．６８（ｍ，２Ｈ），３．５８−３．７１（ｍ，４Ｈ），３．８３（ｓ，３Ｈ），３．８９（ｔ，Ｊ＝６．７，２Ｈ），４．７０（ｂｒ  ｍ，１Ｈ），６．５９（ｓ，１Ｈ），６．６０（ｓ，１Ｈ）。
【０１５３】
段階Ｄ：３−（Ｒ）−［Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−（３−メトキシ−５−メチル−４−オクチルオキシフェニル）−ペンタンニトリル
０℃で８ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中の５１０ｍｇ（１．１ｍｍｏｌ）の２−（Ｒ）−［Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−（３−メトキシ−５−メチル−４−オクチルオキシフェニル）−１−ブタノール（段階Ｃからのもの）の溶液を、０．１４ｍＬ（１．８ｍｍｏｌ）の塩化メタンスルホニルと０．２５ｍＬ（１．８ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンで同時に処理した。０℃で３０分後、その反応物を室温に温め、１００ｍＬのブラインに注入して、１００ｍＬのＥｔ２Ｏで抽出した。層を分離した後、有機層を１００ｍＬのブライン、１００ｍＬの０．５Ｎ  ＨＣｌ、１００ｍＬのブライン、１００ｍＬの１Ｎ  ＮａＨＣＯ３、そして１００ｍＬのブラインで洗浄した。有機部分をＭｇＳＯ４で乾燥させて、濃縮した。その粗製メシレートをさらに精製せずに用いた。
【０１５４】
６ｍＬのＤＭＦ中のそのメシレートの溶液を、０．１４ｇ（２．８ｍｍｏｌ）の粉末ＮａＣＮで処理した。４３時間、室温で攪拌した後、反応物を１００ｍＬのＥｔ２Ｏに注入し、２ｘ１００ｍＬのＨ２Ｏで洗浄した。有機部分をＭｇＳＯ４で乾燥させて、濃縮した。残留物を、１７／３  ｖ／ｖ  ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｍカラムで精製して、１５１ｍｇの表題化合物を無色の油として得た。ＲＦ：０．３６（４／１  ｖ／ｖ  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ０．９１（ｔ，Ｊ＝７．０，３Ｈ），１．２８−１．５１（ｍ，１８Ｈ），１．７２−１．８０（ｍ，２Ｈ），１．９０−１．９５（ｍ，２Ｈ），２．２５（ｓ，３Ｈ），２．５１−２．８０（ｍ，４Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．８５−３．８８（ｍ，２Ｈ），３．８９（ｔ，Ｊ＝６．８，２Ｈ），４．６９（ｄ，Ｊ＝７．７，１Ｈ），６．５６−６．５８（ｍ，２Ｈ）。
【０１５５】
段階Ｅ：３−（Ｒ）−［Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−（３−メトキシ−５−メチル−４−オクチルオキシフェニル）−ペンタナール
−６０℃で１０ｍＬのＥｔ２Ｏ中の２２０ｍｇ（０．４９ｍｍｏｌ）の３−（Ｒ）−［Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−（３−メトキシ−５−メチル−４−オクチルオキシフェニル）−ペンタンニトリル（段階Ｄからのもの）の溶液を、シリンジ・ポンプにより、４時間かけて、２．０ｍＬ（２．０ｍｍｏｌ）の１Ｍ  Ｄｉｂａｌで処理した。−６０℃でさらに１時間攪拌した後、反応をＭｅＯＨで停止させ、室温に温めた。その混合物を５０ｍＬのＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液（２ＮのＨＣｌでｐＨを３にしたもの）に注入した。相を分離した後、水性層を２ｘ５０ｍＬのＥｔＯＡｃ（エマルジョンを避けるために、ｐＨを３に維持した水溶液）で抽出した。併せた有機部分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させて、濃縮した。残留物を、４／１  ｖ／ｖ  ヘキサン／ＥｔＯＡｃで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、９５ｍｇの表題化合物を無色の薄膜として得た。ＲＦ：０．２０（４／１  ｖ／ｖ  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ０．９１（ｔ，Ｊ＝６．９，３Ｈ），１．２７−１．８６（ｍ，２３Ｈ），２．２５（ｓ，３Ｈ），２．５４−２．７０（ｍ，４Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．８９（ｔ，Ｊ＝６．８，２Ｈ），４．０８（ｍ，１Ｈ），４．７２（ｍ，１Ｈ），６．５７−６．５８（ｍ，２Ｈ），９．７７（ｓ，１Ｈ）。
【０１５６】
段階Ｆ：１−（ＲまたはＳ）−ヒドロキシ−３−（Ｒ）−アミノ−５−（３−メトキシ−５−メチル−４−オクチルオキシフェニル）ペンチルホスホン酸・ジエチルエステル
０℃で２ｍＬのＴＨＦ中の０．０４１ｍＬ（０．３ｍｍｏｌ）の亜リン酸ジエチルの溶液を、ＴＨＦ中１Ｍのナトリウムビス（トリメチル−シリル）アミド０．３２ｍＬ（０．３２ｍｍｏｌ）で処理した。２０分後、３ｍＬのＴＨＦ中の９２ｍｇ（２ｍｍｏｌ）の３−（Ｒ）−［Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−（３−メトキシ−５−メチル−４−オクチルオキシフェニル）−ペンタナール（段階Ｅからのもの）の溶液を添加した。０℃で１時間攪拌した後、反応物を２５ｍＬのＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液に注入し、２ｘ２５ｍＬのＥｔ２Ｏで抽出した。併せた有機部分をＭｇＳＯ４で乾燥させて、濃縮した。残留物を、３／１  ｖ／ｖ  ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＣＮそして１／１  ｖ／ｖ  ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＣＮという傾斜で溶離するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、５４ｍｇの主ジアステレオマーと１２ｍｇの副ジアステレオマーを両方とも無色の薄膜として得た。主ジアステレオマー：ＲＦ：０．７４（１／１  ｖ／ｖ  ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＣＮ）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ０．９１（ｔ，Ｊ＝６．９，３Ｈ），１．３１−１．５０（ｍ，２４Ｈ），１．６５−１．９８（ｍ，７Ｈ），２．２４（ｓ，３Ｈ），２．５６−２．６９（ｍ，２Ｈ），３．８３（ｓ，３Ｈ），３．８６−３．９９（ｍ，４Ｈ），４．１７−４．２５（ｍ，４Ｈ），４．４８（ｄ，Ｊ＝９．１，１Ｈ），６．５４−６．５６（ｍ，２Ｈ）；副ジアステレオマー：ＲＦ：０．６５（１／１  ｖ／ｖ  ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＣＮ）；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ０．９０（ｔ，Ｊ＝７．０，３Ｈ），１．３０−１．５０（ｍ，２４Ｈ），１．７１−１．９１（ｍ，６Ｈ），２．０３（ｍ，１Ｈ），２．２３（ｓ，３Ｈ），２．５３−２．６６（ｍ，２Ｈ），３．０２（ｂｒ  ｍ，１Ｈ），３．７８−３．９０（ｍ，６Ｈ），４．０２（ｍ，１Ｈ），４．１５−４．２２（ｍ，４Ｈ），４．７８（ｍ，１Ｈ），６．５４−６．５７（ｍ，２Ｈ）。
【０１５７】
段階Ｇ：１−（ＲまたはＳ）−ヒドロキシ−３−（Ｒ）−アミノ−５−（３−メトキシ−５−メチル−４−オクチルオキシフェニル）ペンチルホスホン酸
２ｍＬのＣＨ３ＣＮ中の５４ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ）の１−（ＲまたはＳ）−ヒドロキシ−３−（Ｒ）−アミノ−５−（３−メトキシ−５−メチル−４−オクチルオキシフェニル）ペンチルホスホン酸・ジエチルエステル（段階Ｆからの主ジアステレオマー）および０．０６ｍＬ（０．４５ｍｍｏｌ）のブロモトリメチルシランの溶液を、７５℃で１時間攪拌した。多少の出発原料がまだ存在していたので、さらに０．０１２ｍＬ（０．０９ｍｍｏｌ）のブロモトリメチルシランを添加した。７５℃で３０分後、反応をＭｅＯＨで停止させ、濃縮した。残留物をＭｅＯＨから濃縮し（３ｘ）、２ｍＬのＣＨ３ＣＮに溶解して、２．５日間冷凍器に入れておいた。上清を除去して、無色の薄膜を生じた（定量的と仮定）。ＥＳＩ−ＭＳ  ４３２．２（Ｍ＋Ｈ）；ＬＣ−１：２．９０分。
【０１５８】
（実施例２６）
１−（ＲまたはＳ）−ヒドロキシ−３−（Ｒ）−アミノ−５−（４−ヘプチルフェニル）ペンチルホスホン酸
段階Ｂにおいて１−ブロモ−３−メトキシ−５−メチル−４−オクチルオキシベンゼンの代わりにトリフルオロメタンスルホン酸・４−ヘプチルフェニルエステルを使用する、実施例２５に記載したものに類似した手順を使用して、表題化合物を調製した。ＥＳＩ−ＭＳ  ３５８．４（Ｍ＋Ｈ）；ＬＣ−１：２．７２分。
【０１５９】
（実施例２７）
（±）−３−（アミノ）ペンタデシルホスホン酸
段階Ａ：（±）−３−（カルボエトキシ）ペンタデシルホスホン酸ジエチル
１ｍＬのＴＨＦ中の４−ホスホノ酪酸トリエチル（１．００ｇ、３．９６ｍｍｏｌ）の溶液を、−７８℃のカリウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＴＨＦ中０．５Ｍ、８．７０ｍＬ、４．３６ｍｍｏｌ）に添加した。１時間、−７８℃で攪拌した後、１−ヨードドデカン（１．２ｍＬ、４．７５ｍｍｏｌ）を一滴ずつ添加した。反応物を浴から取り出し、室温に温めて、２時間攪拌した。その反応物を酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、２Ｎ  ＨＣｌ（５０ｍＬ）、ＮａＣｌ飽和水溶液（５０ｍＬ）で洗浄して、乾燥させ、濃縮した。３：１  ｖ／ｖ  ヘキサン／アセトンを使用するフラッシュクロマトグラフィーによって、６１０ｍｇの表題化合物を得た：ＥＳＩ−ＭＳ  ４２１．３（Ｍ＋Ｈ）。
【０１６０】
段階Ｂ：（±）−３−（カルボキシ）ペンタデシルホスホン酸ジエチル
１０ｍＬのＭｅＯＨ中の０．６１ｇ（１．４４ｍｍｏｌ）の（±）−３−（カルボエトキシ）ペンタデシルホスホン酸ジエチル（実施例２７、段階Ａからのもの）の溶液を、４．３ｍＬの１Ｎ  ＮａＯＨで処理した。得られた混合物を室温で２時間攪拌し、その後、１６時間、５０℃に加熱した。その反応物を７５ｍＬのＥｔＯＡｃで希釈し、５０ｍＬの２Ｎ  ＨＣｌ、５０ｍＬのＮａＣｌ飽和水溶液で洗浄して、乾燥させ、濃縮して、０．６２ｇの表題化合物を得た：ＥＳＩ−ＭＳ  ３９３．１（Ｍ＋Ｈ）。
【０１６１】
段階Ｃ：（±）−３−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）ペンタデシルホスホン酸ジエチル
０℃で５ｍＬのＴＨＦ中の０．６２ｇ（１．６ｍｍｏｌ）の（±）−３−（カルボキシ）ペンタデシルホスホン酸ジエチル（実施例２７、段階Ｂからのもの）の溶液を、０．２７ｍＬ（１．９ｍｍｏｌ）のＴＥＡおよび０．２３ｍＬ（１．９ｍｍｏｌ）のクロロギ酸メチルで処理した。得られた混合物を３０分間冷却しながら混合し、その後、３ｍＬの水中の０．５１ｇ（７．９ｍｍｏｌ）のアジ化ナトリウムの溶液で処理した。得られた混合物を２時間、０℃で攪拌した。その反応物を５０ｍＬのＥｔＯＡｃで希釈し、５０ｍＬの２Ｎ  ＨＣｌ、５０ｍＬのＮａＣｌ飽和水溶液で洗浄して、乾燥させ、濃縮した。残留物を５ｍＬのトルエンに溶解して、ベンジルアルコール（０．３３ｍＬ、３．２ｍｍｏｌ）を添加し、その溶液を３時間、８５℃に加熱した。反応物を冷却し、溶離剤として７：３  ｖ／ｖ  ヘキサン／アセトンを使用するシリカゲルクロマトグラフィーによって直接精製して、０．４５ｇの表題化合物を得た：ＥＳＩ−ＭＳ  ４９８．３（Ｍ＋Ｈ）。
【０１６２】
段階Ｄ：（±）−３−（アミノ）ペンタデシルホスホン酸
１ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中の１００ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）の（±）−ジエチル３−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）ペンタデシルホスホン酸ジエチル（実施例２７、段階Ｃからのもの）の溶液を、０．１１ｍＬ（０．８ｍｍｏｌ）のヨードトリメチルシランで処理し、その後、室温で１時間攪拌した。反応を１ｍＬのメタノールで停止させ、室温で１５分間攪拌し、その後、濃縮した。得られた油を０．５ｍＬのＥｔＯＡｃに溶解し、５ｍＬのヘキサンで希釈して、１分間超音波処理した。その懸濁液を濾過し、乾燥させて、６８ｍｇの表題化合物を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ３．２２−３．３０（ｍ，１Ｈ），１．７６−２．０１（ｍ，４Ｈ），１．５６−１．７０（ｍ，２Ｈ），１．２６−１．４６（ｍ，２０Ｈ），０．８９（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ３０８．２（Ｍ＋Ｈ）。
【０１６３】
（実施例２８から３７）
【０１６４】
【化１５】
2005531508.tif 000021
【０１６５】
段階Ａにおいて１−ヨードドデカンの代わりに適切なハロゲン化アルキルを使用する、実施例２７に記載したものに類似した手順を使用して、実施例２８から３７を調製した。段階Ｄにおける超音波処理によって純粋な材料が生じなかった場合には、ＨＰＬＣ  Ｃを使用して、さらなる精製を行った。
【０１６６】
【表４】
2005531508.tif 000022
2005531508.tif 000023
【０１６７】
生物活性
本発明の化合物のＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１、Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３、Ｓ１Ｐ２／Ｅｄｇ５、Ｓ１Ｐ４／Ｅｄｇ６またはＳ１Ｐ５／Ｅｄｇ８活性を、以下のアッセイを使用して評価した：
Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体に対するリガンド結合アッセイ
５０ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４、１ｍＭ  メルカプトエタノール、１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、２５ｍＭ  ＫＦ、２ｍＭ  セミカルバジド、１ｍＭ  Ｎａ２ＥＤＴＡ、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５０ｍＭ  スフィンゴシン、０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１１４、および１ｍＣｉ  γ３３Ｐ−ＡＴＰ（ＮＥＮ；比活性３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を含有する反応混合物中のスフィンゴシンキナーゼ活性を有する粗製酵母エキスを使用して、γ３３Ｐ−ＡＴＰおよびスフィンゴシンから３３Ｐ−スフィンゴシン−１−リン酸を酵素的に合成した。反応生成物をブタノールで抽出し、３３Ｐ−スフィンゴシン−１−リン酸をＨＰＬＣによって精製した。
【０１６８】
ＥＤＧ／Ｓ１Ｐ受容体を発現している細胞を、酵素非含有解離溶液（Ｓｐｅｃｉａｌｉｔｙ  Ｍｅｄｉａ，Ｌａｖａｌｌｅｔｔｅ，ＮＪ）で採取した。それらを冷ＰＢＳで一度洗浄し、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ−Ｎａ（ｐＨ７．５）、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、および０．５％脂肪酸非含有ＢＳＡから成る結合アッセイバッファに浮遊させた。３３Ｐ−スフィンゴシン−１−リン酸を、結合アッセイバッファ中０．１ｎＭのスフィンゴシン−１−リン酸とともに超音波処理し、１００μＬのリガンド混合物を、９６ウエルのマイクロタイタ皿の中の１００μＬの細胞（細胞数１ｘ１０６／ｍＬ）に添加した。穏やかに混合しながら室温で６０分間、結合させた。その後、細胞を、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｆｉｌｔｅｒｍａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｈａｒｖｅｓｔｅｒで、ＧＦ／Ｂフィルタープレート上に回収した。そのフィルタープレートを３０分間乾燥させた後、４０μＬのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ  ２０を各ウエルに添加し、Ｗａｌｌａｃ  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ  Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  Ｃｏｕｎｔｅｒを使用して結合を測定した。非特異的結合は、０．５μＭの冷スフィンゴシン−１−リン酸の存在下で残存する放射活性の量と定義した。
【０１６９】
あるいは、Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体を発現している細胞から調製した膜を用いて、リガンド結合アッセイを行った。細胞を酵素非含有解離溶液で収集し、冷ＰＢＳ中で一度洗浄した。Ｋｉｎｅｍａｔｉｃａ  ｐｏｌｙｔｒｏｎ（設定５、１０秒間）を使用して、氷冷２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ中で均質化することにより、細胞を破壊した。ホモジネートを４℃で１５分間、４８，０００ｘｇで遠心分離し、そのペレットを２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、０．１ｍＭ  ＥＤＴＡに懸濁させた。第二の遠心分離後、最終ペレットを２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２に懸濁させた。０．５から２μｇの膜蛋白を使用して、上に記載したとおり、リガンド結合アッセイを行った。
【０１７０】
Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体の作動薬および拮抗薬を、３３Ｐ−スフィンゴシン−１−リン酸結合アッセイで特定した。化合物をＤＭＳＯ、メタノールまたは他の溶媒で希釈し、マイクロタイタ皿内で３３Ｐ−スフィンゴシン−１−リン酸および結合アッセイバッファを含有するプローブと混合した。Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体を発現している細胞から調製した膜を添加し、３３Ｐ−スフィンゴシン−１−リン酸への結合を記載したとおり行った。様々な濃度の化合物の存在下での結合量の判定およびＭＲＬＣａｌｃ（Ｍｅｒｃｋ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）またはＰＲＩＳＭ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）などの非線形回帰ソフトウエアによるデータ解析を利用して、前記受容体に対する化合物の親和性を測定した。Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体に対する化合物の選択性は、それぞれの受容体（Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１、Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３、Ｓ１Ｐ２／Ｅｄｇ５、Ｓ１Ｐ４／Ｅｄｇ６、Ｓ１Ｐ５／Ｅｄｇ８）でトランスフェクトした細胞から調製した膜を使用し、化合物の存在下で３３Ｐ−スフィンゴシン−１−リン酸の結合レベルを測定することにより、判定した。
【０１７１】
３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合アッセイ
Ｇ蛋白へのＳ１Ｐ／Ｅｄｇの機能性結合は、３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合アッセイで測定した。Ｌｉｇａｎｄ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  Ａｓｓａｙに記載されているとおり調製した膜（１μｇから１０μｇの膜蛋白）を、９６ウエルマイクロタイタ皿内の、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５μＭ  ＧＤＰ、０．１％脂肪酸非含有ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ、カタログＡ８８０６）、様々な濃度のスフィンゴシン−１−リン酸、および１２５ｐＭ  ３５Ｓ−ＧＴＰγＳ（ＮＥＮ；比活性１２５０Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を含有する２００μＬ量中でインキュベートした。穏やかに混合しながら１時間、室温で結合を行い、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｆｉｌｔｅｒｍａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＨａｒｖｅｓｔｅｒでＧＦ／Ｂフィルタープレート上に膜を回収した。そのフィルタープレートを３０分間乾燥させた後、４０μＬのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ  ２０を各ウエルに添加して、Ｗａｌｌａｃ  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ  Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  Ｃｏｕｎｔｅｒで結合を測定した。
【０１７２】
Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体の作動薬および拮抗薬は、３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合アッセイで識別することができる。ＤＭＳＯ、メタノールまたは他の溶媒で希釈した化合物をマイクロタイタ皿に添加して、０．０１ｎＭから１０μＭの最終アッセイ濃度を得た。Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体を発現している細胞から調製した膜を添加し、記載したとおりに３５Ｓ−ＧＴＰγＳへの結合を行った。天然リガンドまたは他の既知作動薬が不在の状態でアッセイする時、内在レベルより高く３５Ｓ−ＧＴＰγＳを刺激する化合物は、作動薬とみなし、一方、内在レベルの３５Ｓ−ＧＴＰγＳを阻害する化合物を逆作動薬とみなした。拮抗薬は、最大下レベルの天然リガンドまたは既知Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体作動薬の存在下での３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合アッセイにおいて検出し、この場合、それらの化合物は、３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合レベルを低下させた。様々な濃度の化合物の存在下での結合量の判定を利用して、Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体の作動薬、逆作動薬または拮抗薬としての化合物の力価を測定した。作動薬を評価するために、基礎値に対する刺激率は、化合物の存在下での結合をリガンド不在下での結合で割り、それに１００を掛けて計算した。用量反応曲線は、非線形回帰曲線当てはめプログラムＭＲＬＣａｌｃ（Ｍｅｒｃｋ  ＲＥｓａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｏｒｉｅｓ）を使用してプロットし、ＥＣ５０値は、それ自体の最大刺激の５０％を生じるために必要な作動薬の濃度と定義した。Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体に対する化合物の選択性は、それぞれの受容体の各々でトランスフェクトした細胞から調製した膜を使用して、化合物の存在下での３５Ｓ−ＧＴＰγＳの結合レベルを測定することにより判定した。
【０１７３】
細胞内カルシウムフラックスアッセイ
細胞内カルシウム動態に関連したＧ蛋白へのＳ１Ｐ／Ｅｄｇの機能性結合は、ＦＬＩＰＲ（蛍光イメージ板読取機（Ｆｌｕｏｒｅｓｅｎｃｅ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して測定した。Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇを発現している細胞を採取し、アッセイバッファ（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ，０．１％ＢＳＡおよび７１０μｇ／ｍＬ  プロベネシドを含有するハンクス緩衝生理食塩溶液（ＢＲＬ）（Ｓｉｇｍａ））で一度洗浄した。３７℃および５％ＣＯ２で１時間、５００ｎＭのカルシウム感受性色素Ｆｌｕｏ−４（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を含有する同緩衝液中で細胞を標識した。それらの細胞をバッファで二度洗浄した後、ポリリシンをコーチングした９６ウエルの黒色マイクロタイタ皿に、１ウエルあたり細胞数１．５ｘ１０５で（９０μＬ）プレーティングした。最終試験濃度の二倍の濃度を生じるように、スフィンゴシン−１−リン酸または他の作動薬を希釈して２００μＬのアッセイバッファにすることにより、９６ウエルリガンドプレートを準備した。そのリガンドプレートおよび細胞プレートを、分析のため、ＦＬＩＰＲ装置に入れた。プレートを３７℃にした。等量のリガンドを細胞プレートに移すことによりアッセイを開始し、そのカルシウムフラックスを３分間隔でずっと記録した。細胞の反応は、面積（合計）または最大ピークの高さ（最大）として定量した。作動薬は、化合物を適切な溶媒で希釈し、Ｆｌｕｏ−４標識細胞に移入することにより、天然リガンド不在の状態で評価した。拮抗薬は、Ｆｌｕｏ−４標識細胞を様々な濃度の化合物で細胞を１５分間前処理した後、天然リガンドまたは他のＳ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体作動薬の添加によりカルシウムフラックスを開始させることにより評価した。
【０１７４】
Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体を発現している細胞の調製
様々な手法のうちのいずれを使用しても、Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１、Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３、Ｓ１Ｐ２／Ｅｄｇ５、Ｓ１Ｐ４／Ｅｄｇ６またはＳ１Ｐ５／Ｅｄｇ８をクローニングすることができる。これらの方法には、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：（１）ＲＡＣＥ  ＰＣＲクローニング法（Ｆｒｏｈｍａｎら，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：８９９８−９００２）。５’および／または３’ＲＡＣＥを行って、完全長ｃＤＮＡ配列を生成することができる；（２）適切な発現ベクター系においてＳ１Ｐ／Ｅｄｇ含有ｃＤＮＡライブラリを構築した後の、Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ  ｃＤＮＡの直接機能性発現；（３）Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ蛋白質のアミノ酸配列から設計した標識変性オリゴヌクレオチドプローブでの、バクテリオファージまたはプラスミドシャトルベクターにおいて構築されたＳ１Ｐ／Ｅｄｇ含有ｃＤＮＡライブラリのスクリーニング；（４）Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ蛋白質をコードしている部分ｃＤＮＡでの、バクテリオファージまたはプラスミドシャトルベクターにおいて構築されたＳ１Ｐ／Ｅｄｇ含有ｃＤＮＡライブラリのスクリーニング。この部分ｃＤＮＡは、Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ蛋白質に関連する他の蛋白質についてのわかっているアミノ酸配列から変性オリゴヌクレオチドプライマーを設計することによる、Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ  ＤＮＡフラグメントの特異的ＰＣＲ増幅により得られる；（５）哺乳動物Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ蛋白質に相同性の部分ｃＤＮＡまたはオリゴヌクレオチドでの、バクテリオファージまたはプラスミドシャトルベクターにおいて構築されたＳ１Ｐ／Ｅｄｇ含有ｃＤＮＡライブラリのスクリーニング。この戦略は、Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ  ｃＤＮＡのＰＣＲ増幅のための遺伝子特異的オリゴヌクレオチドプライマーの使用も含むことがある；または（６）完全長ｃＤＮＡを既知ＲＡＣＥ法によって生成することができるような、またはそのコドン領域の一部を生成し、単離して、非常に多くのタイプのｃＤＮＡおよび／もしくはゲノムライブラリのうちの一つをスクリーニングしてＳ１Ｐ／Ｅｄｇをコードしているヌクレオチド配列の完全長バージョンを単離するためのプローブとして使用するために、そのコドン領域の一部をこれらの同じ既知ＲＡＣＥ法によって生成することができるような、テンプレートとしてＳ１Ｐ／Ｅｄｇヌクレオチド配列を使用する５’および３’遺伝子特異的オリゴヌクレオチドの設計。
【０１７５】
他のタイプのライブラリ、ならびに他の細胞タイプもしくは種のタイプから構築されたライブラリが、Ｓ１Ｐ／ＥｄｇをコードしているＤＮＡまたはＳ１Ｐ／Ｅｄｇ相同体の単離に有用である場合もあることは、当業者には容易に理解される。他のタイプのライブラリには、他の細胞から誘導されたｃＤＮＡライブラリが挙げられるが、それらに限定されない。
【０１７６】
Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ活性を有する細胞または細胞系統から適するｃＤＮＡライブラリを作ることができることは、当業者には容易に理解される。Ｓ１Ｐ／ＥｄｇをコードしているｃＤＮＡを単離するためのｃＤＮＡライブラリの作成に使用するための細胞または細胞系統の選択は、そうした目的に利用できるいずれかの既知アッセイを使用して、細胞に付随するＳ１Ｐ／Ｅｄｇ活性を、先ず、測定することによって、行うことができる。
【０１７７】
ｃＤＮＡライブラリの作成は、当該技術分野においてよく知られている標準的な技法によって行うことができる。よく知られているｃＤＮＡライブラリ構築法は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ；Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋにおいて見出すことができる。相補的ＤＮＡライブラリは、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，およびＳｔｒａｔａｇｅｎｅを含む（しかし、これらに限定されない）非常に多数の市場の供給業者から入手することもできる。
【０１７８】
Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ様蛋白質をコードしているＤＮＡを含有する発現ベクターは、組換え宿主細胞におけるＳ１Ｐ／Ｅｄｇの発現に使用することができる。そうした組換え宿主細胞は、Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇまたは生物学的等価形の生産に適する条件下で培養することができる。発現ベクターには、クローニングベクター、修飾クローニングベクター、特異的に設計されたプラスミドまたはウイルスが挙げられるが、それらに限定されない。市販の哺乳類発現ベクターが、組換えＳ１Ｐ／Ｅｄｇ発現に適する場合もある。
【０１７９】
組換え宿主細胞は、原核細胞であってもよいし、真核細胞であってもよく、それらには、細菌（Ｅ．ｃｏｌｉなど）、真菌細胞（酵母など）、哺乳動物細胞（ウシ、ブタ、サルおよび齧歯動物由来の細胞系統が挙げられるが、これらに限定されない）、および昆虫細胞（ショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）およびカイコ由来細胞が挙げられる、これらに限定されない）が挙げられるが、それらに限定されない。
【０１８０】
様々なＳ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体についてのヌクレオチド配列が、当該技術分野において知られている。例えば、下記参照：
Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１  ヒト
Ｈｌａ，Ｔ．およびＴ．Ｍａｃｉａｇ，１９９０，「ヒト内皮細胞の分化において誘導される豊富な転写体は、Ｇ蛋白結合受容体に構造が類似しているポリペプチドをコードしている（Ａｎ  ａｂｕｎｄａｎｔ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｉｎ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ  ｅｎｃｏｄｅｓ  ａ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ｗｉｔｈ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ  ｔｏ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ）」，Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２６５：９３０８−９３１３。この論文は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０１８１】
１９９１年１０月１７日発行の国際公開公報第９１／１５５８３号。この公報は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０１８２】
１９９９年９月１６日発行の国際公開公報第９９／４６２７７号。この公報は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０１８３】
Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１  マウス
２０００年１０月１２日発行の国際公開公報第００／５９５２９号。この公報は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０１８４】
２００１年１１月２７日に付与された米国特許第６，３２３，３３３号。この特許は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０１８５】
Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１  ラット
Ｌａｄｏ，Ｄ．Ｃ．，Ｃ．Ｓ．Ｂｒｏｗｅ，Ａ．Ａ．Ｇａｓｋｉｎ，Ｊ．Ｍ．ＢｏｒｄｅｎおよびＡ．Ｊ．ＭａｃＬｅｎｎａｎ，１９９４，「ラットｅｄｇ−１前初期遺伝子のクローニング：発現パタンが、多様な機能を示唆する（Ｃｌｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒａｔ  ｅｄｇ−１  ｉｍｍｅｄｉａｔｅ−ｅａｒｌｙ  ｇｅｎｅ：ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐａｔｔｅｒｎ  ｓｕｇｇｅｓｔｓ  ｄｉｖｅｒｓｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ）」，Ｇｅｎｅ  １４９：３３１−３３６。この論文は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０１８６】
１９９６年１２月１７日に付与された米国特許第５，５８５，４７６号。この特許は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０１８７】
１９９９年１月５日に付与された米国特許第５，８５６，４４３号。この特許は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０１８８】
Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３  ヒト
Ａｎ，Ｓ．，Ｔ．Ｂｌｅｕ，Ｗ．Ｈｕａｎｇ，Ｏ．Ｇ．Ｈａｌｌｍａｒｋ，Ｓ．Ｒ．Ｃｏｕｇｈｌｉｎ，Ｅ．Ｊ．Ｇｏｅｔｚｌ，１９９７，「リソスフィンゴ脂質のための二つのＧ蛋白結合受容体をコードしているｃＤＮＡの特定（Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃＤＮＡｓ  ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ｔｗｏ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｌｙｓｏｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓ）」，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．４１７：２７９−２８２。この論文は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０１８９】
１９９９年１１月２５日発行の国際公開公報第９９／６００１９号。この公報は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０１９０】
２０００年１０月１０日に付与された米国特許第６，１３０，０６７号。この特許は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０１９１】
Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３  マウス
２００１年２月１５日発行の国際公開公報第０１／１１０２２号。この公報は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０１９２】
Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３  ラット
２００１年４月１９日発行の国際公開公報第０１／２７１３７号。この公報は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０１９３】
Ｓ１Ｐ２／Ｅｄｇ５  ヒト
Ａｎ，Ｓ．，Ｙ．Ｚｈｅｎｇ，Ｔ．Ｂｌｅｕ，２０００，「Ｇ蛋白結合受容体Ｅｄｇ３およびＥｄｇ５により媒介されるスフィンゴシン−１−リン酸誘導性細胞増殖、生残および関連シグナリング（Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ  １−Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｓｕｒｖｉｖａｌ，ａｎｄ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｅｖｅｎｔｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  Ｇ  Ｐｒｅｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  Ｅｄｇ３  ａｎｄ  Ｅｄｇ５）」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：２８８−２９６。この論文は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０１９４】
１９９９年７月１５日発行の国際公開公報第９９／３５２５９号。この公報は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０１９５】
１９９９年１０月２８日発行の国際公開公報第９９／５４３５１号。この公報は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０１９６】
２０００年９月２８日発行の国際公開公報第００／５６１３５号。この公報は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０１９７】
Ｓ１Ｐ２／Ｅｄｇ５  マウス
２０００年１０月１２日発行の国際公開公報第００／６００５６号。この公報は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０１９８】
Ｓ１Ｐ２／Ｅｄｇ５  ラット
Ｏｋａｚａｋｉ，Ｈ．，Ｎ．Ｉｓｈｉｚａｋａ，Ｔ．Ｓａｋｕｒａｉ，Ｋ．Ｋｕｒｏｋａｗａ，Ｋ．Ｇｏｔｏ，Ｍ．Ｋｕｍａｄａ，Ｙ．Ｔａｋｕｗａ，１９９３，「心臓血管系において発現される新規推定Ｇ蛋白結合受容体の分子クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ｐｕｔａｔｉｖｅ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｓｙｓｔｅｍ）」，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１９０：１１０４−１１０９。この論文は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０１９９】
ＭａｃＬｅｎｎａｎ，Ａ．Ｊ．，Ｃ．Ｓ．Ｂｒｏｗｅ，Ａ．Ａ．Ｇａｓｋｉｎ，Ｄ．Ｃ．Ｌａｄｏ，Ｇ．Ｓｈａｗ，１９９４，「進化に関係する可能性を秘めた推定Ｇ蛋白結合受容体のクローニングおよび特性付け（Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｐｔａｔｉｖｅ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）」，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．５：２０１−２０９。この論文は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０２００】
１９９６年１２月１７日に付与された米国特許第５，５８５，４７６号。この特許は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０２０１】
１９９９年１月５日に付与された米国特許第５，８５６，４４３号。この特許は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０２０２】
Ｓ１Ｐ４／Ｅｄｇ６  ヒト
Ｇｒａｌｅｒ，Ｍ．Ｈ．，Ｇ．Ｂｅｒｎｈａｒｄｔ，Ｍ．Ｌｉｐｐ，１９９８，「ＥＤＧ６、生物活性リゾリン脂質に関連する新規Ｇ蛋白結合受容体、は、リンパ組織において特異的に発現される（ＥＤＧ６，ａ  ｎｏｖｅｌ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ，ｉｓ  ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｔｉｓｓｕｅ）」，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ５３：１６４−１６９。この論文は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０２０３】
１９９８年１０月２９日発行の国際公開公報第９８／４８０１６号。この公報は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０２０４】
１９９９年６月１５日に付与された米国特許第５，９１２，１４４号。この特許は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０２０５】
１９９８年１１月１２日発行の国際公開公報第９８／５０５４９号。この公報は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０２０６】
２０００年５月９日に付与された米国特許第６，０６０，２７２号。この特許は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０２０７】
１９９９年７月１５日発行の国際公開公報第９９／３５１０６号。この公報は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０２０８】
２０００年３月２３日発行の国際公開公報第００／１５７８４号。この公報は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０２０９】
２０００年３月１６日発行の国際公開公報第００／１４２３３号。この公報は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０２１０】
Ｓ１Ｐ４／Ｅｄｇ６  マウス
２０００年３月２３日発行の国際公開公報第００／１５７８４号。この公報は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０２１１】
Ｓ１Ｐ５／Ｅｄｇ８  ヒト
Ｉｍ，Ｄ．−Ｓ．，Ｊ．Ｃｌｅｍｅｎｓ，Ｔ．Ｌ．Ｍａｃｄｏｎａｌｄ，Ｋ．Ｒ．Ｌｙｎｃｈ，２００１，「ヒトおよびマウススフィンゴシン−１−リン酸受容体、Ｓ１Ｐ５（Ｅｄｇ−８）、の特性付け：スフィンゴシン−１−リン酸受容体の構造と活性の関係（Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ａｎｄ  ｍｏｕｓｅ  ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ  １−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，Ｓ１Ｐ５（Ｅｄｇ−８）：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  １−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ）」，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４０：１４９５３−１４０６０。この論文は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０２１２】
２０００年３月２日発行の国際公開公報第００／１１１６６号。この公報は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０２１３】
２０００年６月２日発行の国際公開公報第００／３１２５８号。この公報は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０２１４】
２００１年１月１８日発行の国際公開公報第０１／０４１３９号。この公報は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０２１５】
２００１年４月１１日に付与された欧州特許第１，０９０，９２５号。この特許は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０２１６】
Ｓ１Ｐ５／Ｅｄｇ８  ラット
Ｉｍ，Ｄ．−Ｓ．，Ｃ．Ｅ．Ｈｅｉｓｅ，Ｎ．Ａｎｃｅｌｌｉｎ，Ｂ．Ｆ．Ｏ’Ｄｏｗｄ，Ｇ．−Ｊ．Ｓｈｅｉ，Ｒ．Ｐ．Ｈｅａｖｅｎｓ，Ｍ．Ｒ．Ｒｉｇｂｙ，Ｔ．Ｈｌａ，Ｓ．Ｈｌａ，Ｓ．Ｍａｎｄａｌａ，Ｇ．ＭｃＡｌｌｉｓｔｅｒ，Ｓ．Ｒ．Ｇｅｏｒｇｅ，Ｋ．Ｒ．Ｌｙｎｃｈ，２０００，「新規スフィンゴシン−１−リン酸受容体、Ｅｄｇ−８、の特性付け（Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ  １−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，Ｅｄｇ−８）」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：１４２８１−１４２８６。この論文は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０２１７】
２００１年１月２５日発行の国際公開公報第０１／０５８２９号。この公報は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０２１８】
心臓血管効果の測定
心臓血管パラメータに対する本発明の化合物の効果は、次の手順により評価することができる：
動脈圧の測定および静脈内化合物投与、それぞれのために、大腿動脈および静脈カテーテルを成体雄ラット（体重約３５０ｇ）に装備した。動物たちをネンブタール（５５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内投与）で麻酔した。血圧および心拍数をＧｏｕｌｄ  Ｐｏ−Ｎｅ−Ｍａｈデータ収集システムで記録した。心拍数は、動脈性脳波由来のものだった。順化期間後、ベースラインの読み取りをし（約２０分間）、データを平均した。化合物を静脈内投与（約５秒の大量注射か、持続時間１５分の注入）し、化合物の投与後６０分間、１分おきにデータを記録した。データは、心拍数のピーク変化または平均動脈圧として計算するか、心拍数の変化または血圧対時間に関する曲線の下の面積として計算する。データは、平均±ＳＥＭとして表す。スチューデントの片側一対ｔ検定を、ベースライン値に対する統計学的比較のために利用し、ｐ＜０．０５で有意と見なす。
【０２１９】
心臓血管系に対するＳ１Ｐの効果は、Ｓｕｇｉｙａｍａ，Ａ．，Ｎ．Ｎ．Ａｙｅ，Ｙ．Ｙａｔｏｍｉ，Ｙ。Ｏｚａｋｉ，Ｋ．Ｈａｓｈｉｍｏｎｏ，２０００，「ラット心臓血管系に対するスフィンゴシン−１−リン酸、天然の生物活性リゾリン脂質、の効果（Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ−１−Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ａ  ｎａｔｕｒａｌｌｙ  ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  ａｃｔｉｖｅ  ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ，ｏｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｓｙｓｔｅｍ）」，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．８２．３３８−３４２に記載されている。この論文は、その全文、本明細書に参照して組み込まれる。
【０２２０】
マウス急性毒性の測定
非毒性ビヒクルに溶解した試験化合物０．１ｍＬを一匹のマウスの静脈（尾の静脈）内に投薬し、毒性の徴候を観察する。重度の徴候には、死亡、発作、麻痺または意識消失が挙げられる。より軽度の徴候も書き留め、それらには、運動失調、努力性呼吸、ラフリング、または正常と比較して低下した活性が挙げられる。徴候を書き留めたら、投薬溶液を同ビヒクルで希釈する。希釈した用量を同じやり方で第二のマウスに投与し、同様に徴候を観察する。このプロセスを、徴候を生じない用量に達するまで繰り返す。これを、推定無効果レベルと見なす。追加マウスにこのレベルで投薬して、徴候の不在を確認する。
【０２２１】
リンパ球減少の評定
化合物を「マウス急性毒性の測定」に記載したとおり投与し、マウスにおけるリンパ球減少を下記のとおり投薬後三時間で評定する。行うために、ＣＯ２によりマウスを無意識にした後、胸部を開き、直接心臓穿刺により０．５ｍＬの血液を抜き、ＥＤＴＡで血液を即座に安定させ、マウスの血球算定を行うために較正された臨床血液学分析装置（Ｈ２０００，ＣＡＲＥＳＩＤＥ，Ｃｕｌｖｅｒ  Ｃｉｔｙ  ＣＡ）を使用して、血液学を評価した。試験処置によるリンパ球の減少は、三匹のビヒクル処置マウスに対する三匹のマウスの血液学的パラメータの比較により立証する。この評価に使用する用量は、上記希釈法の変形を利用して、許容度により決定する。このためには、効果がないことが望ましく、軽度の効果は、許容可能であり、重度毒性用量は、軽度の効果しか生じないレベルに系列希釈する。
【国際調査報告】
2005531508.tif 000028
2005531508.tif 000029
2005531508.tif 000030
2005531508.tif 000031