(57)【要約】プロ−オピオメラノコルチンの反復生理活性領域であるＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶおよびＹＧＧＦＭを同定するためにコンピュータ解析が用いられた。個々のペプチド配列と比較して、配列ＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶおよび配列ＹＧＧＦＭの組み合わせによる付加的な細胞保護効果を証明するために、エタノールで誘導された胃の損傷の細胞保護モデルが用いられた。２つの配列（ＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶおよびＹＧＧＦＭ）の組み合わせはＫＯＭＥＴと定義され、かつ特許が与えられている。ＫＯＭＥＴを投与する目的は、炎症および外傷の治療における浸透性の局所調節に関してより良好でかつ強い効果を得るためである。両配列の異なる組み合わせを表わす付加的な構造式はまた、配列ＹＧＧＦＭＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶＹＧＧＦＭを示すＫＯＭＥＴ−１、ＹＧＧＦＭＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶを示すＫＯＭＥＴ−２、およびＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶＹＧＧＦＭを示すＫＯＭＥＴ−３と定義された。【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造式ＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶおよびＹＧＧＦＭ（表１）によって示される、浸透性局所調剤として用いられる薬剤の合成のための、生理活性を有する２つのプロ−オピオメラノコルチンの反復配列の組み合わせ。
【請求項２】
構造式ＹＧＧＦＭＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶＹＧＧＦＭによって示される、浸透性局所調剤として用いられる薬剤の合成のための、生理活性を有する２つのプロ−オピオメラノコルチンの反復配列であるＫＯＭＥＴ−１の組み合わせ。
【請求項３】
構造式ＹＧＧＦＭＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶによって示される、浸透性局所調剤として用いられる薬剤の合成のための、生理活性を有する２つのプロ−オピオメラノコルチンの反復配列であるＫＯＭＥＴ−２の組み合わせ。
【請求項４】
構造式ＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶＹＧＧＦＭによって示される、浸透性局所調剤として用いられる薬剤の合成のための、生理活性を有する２つのプロ−オピオメラノコルチンの反復配列であるＫＯＭＥＴ−３の組み合わせ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
１）本発明の技術分野
本発明は、プロ−オピオメラノコルチンホルモン（pro-opiomelanocortin hormone）から抽出された２つの生理活性ペプチドの組み合わせに関する。この組み合わせは付加的な細胞保護効果を有し、炎症応答および組織／外傷の治療の調節を可能にする。前記２つのプロ−オピオメラノコルチンのペプチドの組み合わせが、より優れた薬理効果を発揮しかつ組織損傷の治療を可能にする。
【背景技術】
【０００２】
【非特許文献１】
Ｌ．バラニ、Ｗ．キャンプベル、Ｋ．オイシマ他，ネイチャー  メディスン，１９９５年、第１巻，ｐ．８９４−９０１  （L. Baranyi, W. Campbell, K. Ohishima et al., Nature Medicine 1 (1995) 894-901）
【非特許文献２】
Ｊ．Ｅ．ブラロック，ネイチャー  メディスン，１９９５年、第１巻，ｐ．８７６−８７８  （J. E. Blalock, Nature Medicine, 1 (1995) 876-878）
【非特許文献３】
Ｎ．スタムバク，「相補的なタンパク質のコーディングの最適化について」，Ｓ．オオノ、Ｋ．アオキ、Ｍ．ウスイ、Ｅ．ウチオ編，１９９８年，ユベイティス  トゥディ，エスセビアー，アムステルダム，ｐ．３１５−３１８  （N. Stambuk, On the Optimization of Complementary Protein Coding, in: S. Ohno, K. Aoki, M. Usui, E. Uchio (Eds. ), Uveitis Today, Elsevier, Amsterdam, 1998, pp 315-318）
【非特許文献４】
Ｎ．スタムバク，Ｐ．コンジェボダ，ピリオド．バイオロジー．１９９９年，第１０１巻，ｐ．３６３−３６８ (N. Stambuk and P. Konjevoda, Period. Biol. 101 (1999) 363-368)
【非特許文献５】
Ｎ．スタムバク、Ｎ．ゴトバック、M．マルチニス他，「生理活性を有する反復モチーフの解析およびデザインのための３段階法」，Ｖ．B．バジック編，システム信号制御およびコンピュータの進歩  第２巻，１９９８年，イアアイアムサッドアンドアンス，ダーバン，ｐ．３１０−３１１（N. Stambuk, N. Gotovac, M. Martinis et al. Simple Three-step Method for the Analysis and Design of Repetitive and Bioactive protein Motifs, in: V. B. Bajic (ED.), Advances in Systems Signals Control and Computers Vol. II, IAAMSAD, and ANS, Durban, 1998, pp 310-311）
【非特許文献６】
Ｐ．コンジェボダ、Ｎ．スタムバク、Ｄ．ビキク−トピック他，クロート．ケム．アクタ，２０００年，第７３巻，ｐ．１１１１−１１２１（P. Konjevoda, N. Stambuk, D. Vikic-Topic et al. Croat. Chem. Acta 73 (2000) 1111-1121）
【非特許文献７】
Ｐ．コンジェボダ、Ｎ．スタムバク、Ｇ．アラリカ、Ｂ．ポーキック，ジャーナルオブフィシオロジ−パリ，２００１年，第９５巻，第１−６号，ｐ．２７７−２８１（P. Konjevoda, N. Stambuk, G. Aralica, and B. Pokric, J Physiol.-Paris 95 (1-6) (2001) 277-281）
【非特許文献８】
Ｊ．Ｍ．リプトン、Ａ．カタニナ，イミュノロジー．トゥディ，１９９７年，第１８巻，ｐ．１４０−１４５  （J. M. Lipton and A. Catania, Immunol. Today 18 (1997) 140-145）
【非特許文献９】
Ｎ．スタムバク、Ｎ．コプジャー、Ｋ．センチヤ他，クロート．ケム．アクタ，１９９８年，第７１巻，ｐ．５９１−６０５  （N. Stambuk, N.Kopjar, K. Sentija, et al. Croat. Chem. Acta 71 (1998) 591-605）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
２）技術的な問題
タンパク質および遺伝子の配列中の生理活性領域はしばしば、５−１５アミノ酸長でかつ反復ペプチドであり、定義されていない基（非特許文献１−５参照）からなる、より大きなアミノ酸部位によって分離されている。このようなモチーフ（motif）の抽出ならびにその後に行われる生理活性効果を有するタンパク質領域を用いた操作のために、コンピュータ処理を用いることができる（非特許文献１−５参照）。本発明は、付加的な細胞保護効果および薬理効果を発揮する、生理活性を有するプロ−オピオメラノコルチンホルモンの２つの反復領域の組み合わせに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
３）技術説明
単一のタンパク質またはタンパク質ファミリー内の反復ペプチドモチーフは、これらの適合する相補的な配列、領域とともに表される。前記配列、領域は、より大きな分子構造の生理活性と関連する（非特許文献１−５参照）。
【０００５】
現代のプログラム技術、ソフトウエアの発展、ならびにタンパク質および遺伝子構造のデータベースは、多数の異なるタンパク質からなる生理活性を有する相補的な反復構造をコンピュータモデリングすることを可能にした（非特許文献１−５参照）。その結果、短い反復モチーフの抽出が、パーソナルコンピュータ上で即座にかつ容易に実行可能である（非特許文献１−５参照）。我々は、付加的な薬理効果および細胞保護効果を有する要素の潜在的な組み合わせを得るために、ソフトウエアＳＣＡＮ（非特許文献３−５参照）を用いて、プロ−オピオメラノコルチン分子の生理活性を有する反復ペプチドを解析した。
【０００６】
４）本発明の目的
本発明の目的は、プロ−オピオメラノコルチンホルモン分子からなる生理活性を有する２つの反復ペプチドを組み合わせることにより、付加的な細胞保護効果を得ることである。
【０００７】
本発明は、実際には、異なるプロ−オピオメラノコルチンのタンパク質のモチーフについて薬理学的なランダムスクリーニングを行なうかわりに、生理活性を有する２つの反復配列（ＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶおよびＹＧＧＦＭ）を抽出するのにソフトウエアＳＣＡＮが用いられた。２つの抽出された配列は下記の分子内に存在する：プロ−オピオメラノコルチンの前駆体、プロ−オピオメラノコルチン、コルチコトロピン、メラノトロピン、β−リポトロピン、プロエンケファリン、プレプロエンケファリン、β−エンドルフィン、β−ｉアドレノルフィン（表１参照）。
【０００８】
雄ウィスターラットに対して９６％エタノールで誘導された胃の損傷の標準的な細胞保護モデルを用いて、生理活性ペプチド断片であるＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶおよびＹＧＧＦＭについて個々にまたは組み合わせて試験が行われた（非特許文献６，７参照）。生理的食塩水で処理した８個体からなるコントロール群では、胃の損傷領域は255.5±78.1mm2であった（平均±標準偏差，図１）（非特許文献７参照）。ペプチドＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶ（1mg/kg）およびペプチドＹＧＧＦＭ（10mg/kg）の組み合わせで処理した８個体からなる群では、胃の損傷領域は0.3±0.7mm2であった（コントロールと比較してｐ<０．０５，図１）（非特許文献７参照）。ペプチドＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶ（1mg/kg）で処理した８個体からなる群では、胃の損傷領域は5.9±8mm2であった（コントロールと比較してｐ<０．０５，図１）（非特許文献７参照）。ペプチドＹＧＧＦＭ（10mg/kg）で処理した８個体からなる群では、胃の損傷領域は139.4±36.1mm2であった（コントロールと比較してｐ<０．０５，図１）（非特許文献７参照）。最も優れた細胞保護効果を示すペプチドＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶおよびペプチドＹＧＧＦＭの組み合わせはＫＯＭＥＴの名称で特許になっている。ペプチドまたはこれらの組み合わせは通常の胃粘膜に悪影響を一切及ぼさなかった（非特許文献７参照）。
【０００９】
５）図および表
表１は、ＫＯＭＥＴと名付けられた、プロ−オピオメラノコルチンの２つの生理活性配列の組み合わせ、ならびにＫＯＭＥＴ−１、ＫＯＭＥＴ−２ｉ、ＫＯＭＥＴ−３の化学構造式からなる３つの組み合わせを示す（個々の構造式を組み合わせることにより得られた）。
【００１０】
図１は、エタノールで誘導されたラットの胃の損傷モデルにおいて、プロ−オピオメラノコルチン分子の生理活性ペプチド断片であるＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶおよびＹＧＧＦＭ、ならびにこれらの組み合わせであるＫＯＭＥＴの細胞保護効果を示す。
【００１１】
６）本発明の潜在的な適用の説明
生理活性配列であるＫＯＭＥＴ、ならびに表１に示される構造式ＫＯＭＥＴ−１、ＫＯＭＥＴ−２ｉ、ＫＯＭＥＴ−３の組み合わせは、炎症および傷の治療の調節のための生理活性ペプチドとして用いることができる。プロ−オピオメラノコルチンホルモンの生理活性領域から（非特許文献６−９参照）、構造式ＫＯＭＥＴ、ＫＯＭＥＴ−１、ＫＯＭＥＴ−２ｉ、ＫＯＭＥＴ−３を同定する目的は、即座にかつ効率的な方法にて潜在的な薬剤の構造式（配列）を得ることである。
【００１２】
ＫＯＭＥＴ、ＫＯＭＥＴ−１、ＫＯＭＥＴ−２ｉ、ＫＯＭＥＴ−３の発明の目的は、下記１−８の外傷、感染、およびやけどと同様に、炎症性疾患および自己免疫疾患における組織および臓器の損傷を防止する薬剤を得ることである。
【００１３】
１．結合組織、関節、および骨
【００１４】
２．中枢神経、末梢神経、視神経、目、および耳
【００１５】
３．皮膚、毛髪、および爪
【００１６】
４．消化器系、肝臓、膵臓、虫歯、歯、および洞（sinuse）
【００１７】
５．免疫系、骨髄リンパ節、および脾臓
【００１８】
６．循環器系
【００１９】
７．呼吸器系（respiratornog sustava）
【００２０】
８．生殖系
【００２１】
７）本発明の産業上の適用
プロ−オピオメラノコルチンの生理活性配列である、ＫＯＭＥＴ−１、ＫＯＭＥＴ−２ｉ、ＫＯＭＥＴ−３は、皮下投与、筋肉内投与、腹腔内投与、および静脈内投与によって投与可能である。局所投与は、軟膏、クリーム、ジェル、座剤、膣座剤、点眼薬、および点耳薬を含む。
【００２２】
［表および図］
表１は、生理活性を有する２つの反復タンパクモチーフ（ペプチドＹＧＧＦＭおよびペプチドＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶ）の組み合わせは、ＳＣＡＮソフトウエア（非特許文献３−５参照）によって、プロ−オピオメラノコルチン前駆体およびプロ−オピオメラノコルチン分子からコンピュータ解析によって決定された。反復ペプチドＹＧＧＦＭはまた、プレプロエンケファリン、プロエンケファリン、β−リポトロピン、β−エンドルフィン、およびアドレノルフィン分子に存在する（（ａ）参照）。ペプチドＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶは、メラノトロピンおよびコルチコトロピン分子に付加的に存在する（（ｂ）参照）。
【００２３】
プロ−オピオメラノコルチン分子の生理活性ペプチドであるＹＧＧＦＭおよびＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶの組み合わせは、ＫＯＭＥＴの名称で特許になっている。
【００２４】
両ペプチドからなる２つの配列の他の組み合わせは、下記の名称で特許になっており、その構造式は以下の通りである。
【００２５】
構造式ＹＧＧＦＭＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶＹＧＧＦＭで表されるＫＯＭＥＴ−１
【００２６】
構造式ＹＧＧＦＭＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶｉで表されるＫＯＭＥＴ−２
【００２７】
構造式ＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶＹＧＧＦＭで表されるＫＯＭＥＴ−３
【００２８】
【表１】
2005508356.tif 000002
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】図１は、エタノールで誘導されたラットの胃の損傷モデルにおいて、プロ−オピオメラノコルチン分子の生理活性ペプチド断片であるＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶおよびＹＧＧＦＭの細胞保護効果を示す。配列ＫＯＭＥＴ（ＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶ＋ＹＧＧＦＭ）の組み合わせは、個々のペプチド配列よりも強い細胞保護効果を示す。
【図１】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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