(57)【要約】【解決すべき課題】肥満等の状態に対するマーカーとして作用する核酸分子を発見すること。【解決手段】本発明は一般的に異なる生理的条件下で異なるディスプレイ技術を用いて同定される、少なくとも視床下部、肝臓又は膵臓で発現する核酸分子に関する。この核酸分子は、健康状態、肥満、摂食障害、体重維持、糖尿病及び／又は代謝エネルギーレベルの諸状態に対するマーカーと結び付くか又はマーカーとして作用する。より具体的には、本発明は肥満、摂食障害、体重維持、糖尿病及びエネルギー不均衡などの諸状態の治療プロトコル及び診断プロトコルで用いる核酸分子及び／又はその発現産物に関する。従って、本核酸分子及び発現産物とその誘導体、同族体、類似体及び模倣体は、肥満、摂食障害、体重維持、糖尿病及びエネルギー不均衡の治療薬及び診断用薬として、又はその活性及び／又は機能の調節因子を設計及び／又は同定するための標的として有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
発現タンパク質又はその誘導体若しくは同族体をコードするヌクレオチド配列又はコードする配列に相補的なヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、痩せた動物と比べて肥満動物の、又は給餌した動物と比べて絶食させた動物の、又は糖尿病でない動物と比べて糖尿病の動物の視床下部、肝臓、及び／又は膵臓組織で差異をもって発現する核酸分子。
【請求項２】
配列番号：１で表されるヌクレオチド配列、又はそれと少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：１若しくはその相補形と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列を含む、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項３】
配列番号：２で表されるヌクレオチド配列、又はそれと少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：２若しくはその相補形と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列を含む、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項４】
配列番号：３で表されるヌクレオチド配列、又はそれと少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：３若しくはその相補形と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列を含む、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項５】
配列番号：４で表されるヌクレオチド配列、又はそれと少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：４若しくはその相補形と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列を含む、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項６】
配列番号：５で表されるヌクレオチド配列、又はそれと少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：５若しくはその相補形と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列を含む、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項７】
配列番号：６で表されるヌクレオチド配列、又はそれと少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：６若しくはその相補形と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列を含む、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項８】
配列番号：１で表されるヌクレオチド配列を含む、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項９】
配列番号：２で表されるヌクレオチド配列を含む、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項１０】
配列番号：３で表されるヌクレオチド配列を含む、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項１１】
配列番号：４で表されるヌクレオチド配列を含む、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項１２】
配列番号：５で表されるヌクレオチド配列を含む、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項１３】
配列番号：６で表されるヌクレオチド配列を含む、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項１４】
痩せた動物と比べて肥満動物の、又は給餌した動物と比べて絶食させた動物の、又は糖尿病でない動物と比べて糖尿病の動物の視床下部、肝臓、及び／又は膵臓組織で差異をもって発現する核酸分子によりコードされるヌクレオチド又はアミノ酸の配列を含む、単離された分子。
【請求項１５】
配列番号：１で表される核酸分子、又は配列番号：１と少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：１若しくはその相補形と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項１４記載の単離された分子。
【請求項１６】
配列番号：２で表される核酸分子、又は配列番号：２と少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：２若しくはその相補形と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項１４記載の単離された分子。
【請求項１７】
配列番号：３で表される核酸分子、又は配列番号：３と少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：３若しくはその相補形と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項１４記載の単離された分子。
【請求項１８】
配列番号：４で表される核酸分子、又は配列番号：４と少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：４若しくはその相補形と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項１４記載の単離された分子。
【請求項１９】
配列番号：５で表される核酸分子、又は配列番号：５と少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：５若しくはその相補形と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項１４記載の単離された分子。
【請求項２０】
配列番号：６で表される核酸分子、又は配列番号：６と少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：６若しくはその相補形と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項１４記載の単離された分子。
【請求項２１】
分子がタンパク質である、請求項１４記載の単離された分子。
【請求項２２】
配列番号：１で表されるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項２１記載の単離されたタンパク質。
【請求項２３】
配列番号：２で表されるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項２１記載の単離されたタンパク質。
【請求項２４】
配列番号：３で表されるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項２１記載の単離されたタンパク質。
【請求項２５】
配列番号：４で表されるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項２１記載の単離されたタンパク質。
【請求項２６】
配列番号：５で表されるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項２１記載の単離されたタンパク質。
【請求項２７】
配列番号：６で表されるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項２１記載の単離されたタンパク質。
【請求項２８】
（ｉ）痩せた動物と比べて肥満動物の視床下部又は筋組織で差異をもって発現する核酸分子によりコードされるタンパク質、又はその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
（ｉｉ）給餌した動物と比べて絶食させた動物の肝臓組織で差異をもって発現する核酸分子によりコードされるタンパク質、又はその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
（ｉｉｉ）実質的に配列番号：１で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体、又はこの配列と少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ酸配列をコードする配列によりコードされるタンパク質、又はこのタンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
（ｉｖ）実質的に配列番号：２で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体、又はこの配列と少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ酸配列をコードする配列によりコードされるタンパク質、又はこのタンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
（ｖ）実質的に配列番号：３で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体、又はこの配列と少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ酸配列をコードする配列によりコードされるタンパク質、又はこのタンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
（ｖｉ）実質的に配列番号：４で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体、又はこの配列と少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ酸配列をコードする配列によりコードされるタンパク質、又はこのタンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
（ｖｉｉ）実質的に配列番号：５で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体、又はこの配列と少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ酸配列をコードする配列によりコードされるタンパク質、又はこのタンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
（ｖｉｉｉ）実質的に配列番号：６で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体、又はこの配列と少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ酸配列をコードする配列によりコードされるタンパク質、又はこのタンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
（ｉｘ）配列番号：１で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質、
（ｘ）配列番号：２で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質、
（ｘｉ）配列番号：３で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質、
（ｘｉｉ）配列番号：４で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質、
（ｘｉｉｉ）配列番号：５で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質、
（ｘｉｖ）配列番号：６で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質、
（ｘｖ）項（ｉ）から（ｘｉｖ）のいずれか一つで定義された、ホモ二量体の形のタンパク質、
（ｘｖｉ）項（ｉ）から（ｘｉｖ）のいずれか一つで定義された、ヘテロ二量体の形のタンパク質、
から成るリストから選択される、単離されたタンパク質。
【請求項２９】
哺乳動物におけるＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４の一つ以上の発現を変化させる方法であって、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４を、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４の発現を高レベル調節又は低レベル調節、又はその他の方法で変化させるのに十分な時間及び条件の下で、効果的な量のＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４のモジュレーターと接触させる工程を含む方法。
【請求項３０】
哺乳動物におけるＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の活性を変化させる方法であって、該哺乳動物に、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４の活性を増加又は減少させるのに十分な時間及び条件の下で変化させるのに効果的な量の分子を投与する工程を含む方法。
【請求項３１】
肥満症、摂食障害、糖尿病及び／又はエネルギー不均衡の症状の一つ以上を特徴とする状態を患う哺乳動物の治療法であって、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４の発現を変化させるのに十分な、又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４の活性を変化させるのに十分な時間及び条件の下で、該哺乳動物に効果的な量の物質を投与する工程を含む方法。
【請求項３２】
肥満症、摂食障害、糖尿病又はエネルギー不均衡の症状の一つ以上を特徴とする状態を患う哺乳動物の治療法であって、該哺乳動物に、効果的な量のＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４を投与する工程を含む方法。
【請求項３３】
肥満症、摂食障害、糖尿病、及び／又はエネルギー不均衡を特徴とする状態を治療するための医薬の製造における、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又はその誘導体、同族体若しくは類似体の発現を変化させることができる物質の使用。
【請求項３４】
肥満症、摂食障害、糖尿病、及び／又はエネルギー不均衡を特徴とする状態を治療するための医薬の製造における、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又はその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体の活性を変化させることができる物質の使用。
【請求項３５】
肥満症、摂食障害、糖尿病、及び／又はエネルギー不均衡を特徴とする状態を治療するための医薬の製造における、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又はその誘導体、同族体若しくは類似体、又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又はその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体の使用。
【請求項３６】
ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の発現、又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の活性のモジュレーター、及び一つ以上の薬学的に許容できる担体及び／又は希釈剤を含む組成物。
【請求項３７】
被験体由来の生体試料中のＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４、又はその誘導体若しくは同族体を検出する方法であって、該生体試料を、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４に特異的な抗体又はその抗原性誘導体若しくは同族体と、複合体を形成するのに十分な時間及び条件の下で接触させる工程、及び次いで該複合体を検出する工程を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般的に異なる生理的条件下で異なるディスプレイ技術を用いて同定される、少なくとも視床下部、肝臓又は膵臓で発現する核酸分子に関する。この核酸分子は、健康状態、肥満、摂食障害、体重維持、糖尿病及び／又は代謝エネルギーレベルの諸状態に対するマーカーと結び付くか又はマーカーとして作用する。より具体的には、本発明は肥満、摂食障害、体重維持、糖尿病及びエネルギー不均衡などの諸状態の治療プロトコル及び診断プロトコルで用いる核酸分子及び／又はその発現産物に向けられる。従って、本核酸分子及び発現産物とその誘導体、同族体、類似体及び模倣体は、肥満、摂食障害、体重維持、糖尿病及びエネルギー不均衡の治療薬及び診断用薬として、又はその活性及び／又は機能の調節因子を設計及び／又は同定するための標的として有用であると提言する。
【背景技術】
【０００２】
本明細書における如何なる先行技術の参照も、その先行技術がどの国においても共通する一般知識の一部を形成することを認識、又は示唆するものではなく、そのように解釈されるべきではない。
【０００３】
本明細書で筆者が言及する文献の書誌的詳細は、明細書の末尾にまとめてある。
【０００４】
組換えＤＮＡ技術がますます高度化したため、医学、獣医学並びに同類のヒト及び動物の健康の分野での研究及び開発が極めて容易になっている。これは特に、ある種の疾病状態の病因に関わる遺伝子的基礎の研究においてそうである。罹患率及び死亡率の観点から観た特に重大な状態の一つは肥満、及び２型糖尿病（以前は、インシュリン非依存性真正糖尿病、即ちＮＩＤＤＭ）及び心臓血管病と肥満の関連である。
【０００５】
肥満は体脂肪の病理学的な過多と定義され、持続的な期間の間のエネルギー摂取とエネルギー消費の不均衡の結果である。肥満は裕福な国で最も一般的な代謝病である。これらの国における肥満症の罹患率は驚くほど高く、１０％から５０％以上の範囲に及ぶ部分集団もある（非特許文献１）。特に気になるのは、肥満症の罹患率が裕福な社会で一貫して上昇しているようであり、それほど裕福でない国でも裕福になるにつれ、及び／又は裕福な国の文化的習慣を取り入れるにつれ、肥満症の罹患率は今や急速に上昇しているという事実である（非特許文献２）。
【０００６】
例えばオーストラリアでは、１９９５年の成人人口の１９％が肥満症（ＢＭＩ＞３０）であった。平均すると、１９９５年の女性の体重は１９８０年よりも４．８ｋｇ増加し、男性では３．６ｋｇ増加した（非特許文献３）。もっと最近では、１９９９年から２０００年の間に行われたオースダイアブ・スタディー（オーストラリア糖尿病研究）では、２５歳〜６４歳の男性の６５％、女性の４５％が太りすぎであった。（非特許文献４）。米国での肥満症の罹患率も１９９１年から１９９８年の間に確実に増加しており、この間にアメリカ人では１２％から１８％に増加している（非特許文献５）。
【０００７】
肥満症の罹患率が高く且つ増加しつつあることは、個人と社会全体の双方に健康にかかわる重大な意味合いを含んでいる。肥満症は複雑で異質な障害であり、２型真正糖尿病や心臓血管病など他のいくつかの他の代謝状態の危険性を増大させるため、予防可能な罹患率や死亡率の主要な危険指標であると認識されてきた（非特許文献６、非特許文献７）。肥満症と並行して糖尿病の罹患率も急速に増加し続けている。オーストラリアでは糖尿病を患う人が１９９５年に約７０万人であったが、一方米国では糖尿病の罹患率が１９９０年の４．９％から１９９９年の６．９％まで増加した（非特許文献８）。オーストラリアでは、糖尿病や他の疾患状態と関連する肥満症の年間コストは、１９９２年〜１９９３年の間で控えめに見積もっても８億１千万ＡＵ＄になるとされた（非特許文献９）。米国では、ナショナル・ヘルス・インタビュー・サーベイ（ＮＨＩＳ）が１９９５年に肥満症の経済的コストを約９９０億ＵＳ＄と推定したが、それは当時の米国の全保健コストの５．７％に相当するものであった（非特許文献１０）。
【０００８】
肥満症の病因の遺伝的基礎がとりわけ双子の研究、養子縁組研究及び人口に基づく分析から指摘されており、これらは一般住民の体重変化の２５〜８０％は遺伝的影響で説明できるとする（非特許文献１、非特許文献１１、非特許文献１２）。遺伝子が一個人の体重のとりうる範囲を決定し、次いで環境がその時々で該個人が占めるその範囲内の点に影響を与えると考えられている（非特許文献１）。しかしながら、肥満症の病因に関与すると考えられる遺伝子についての研究が数多くあるにもかかわらず、当分野での重要な発見は驚くほど少なかった。加えて、さまざまな集団群でゲノムを読み取ったが、肥満症に主要な効果を持つ染色体領域の決定的な証拠は得られなかった。
【０００９】
幾つかの器官／組織が肥満症及び２型糖尿病の病理生理学に関与するとされてきた。特に興味深い器官の一つが視床下部である。初期の研究では、視床下部にある二つの対立する中枢、即ち視床下部外側野（ＬＨＡ、「空腹中枢」）及び視床下部腹内側野（ＶＭＨ、「満腹中枢」）、が摂食の開始と終了を司ると提言する二重中枢仮説にたどり着いた（非特許文献１３）。二重中枢仮説は、他の様々な脳の領域、神経伝達物質系、及び食物摂取を制御するため腸から発せられるホルモンシグナル及び神経シグナルなどが果たす役割に関する更なる情報に対応するため、繰り返し修正されてきた。ＬＨＡとＶＭＨに加え、現在では視床下部の室傍核（ＰＶＮ）がエネルギー摂取の制御において重要な統合的な機能を担うと考えられている。
【００１０】
ニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）、メラニン凝集ホルモン（ＭＣＨ）、セロトニン、コレシストキニン、及びガラニンを含む多数の神経伝達物質が、摂食行動の視床下部制御因子である可能性があるとして研究されてきた。これらの神経伝達物質の幾つかは食物摂取を刺激し、幾つかは食欲不振を起こすという形で作用し、幾つかは投与する部位に応じてエネルギー摂取に対し異なる効果を及ぼす。例えば、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）はＬＨＡに注射されると食物摂取を阻止するが、ＶＭＨ又はＰＶＮに注射されると摂食を刺激する（非特許文献１４）。摂食行動は、視床下部における刺激シグナル及び阻止シグナルの相互作用により大いに影響を受けると考えられる。
【００１１】
もう一つの目的の器官は肝臓である。
【００１２】
肝臓は幾つかの重要な生理学的経路において重要な役割を果たす。それはグルコース、アミノ酸及び脂肪の代謝の調節において主要な役割を担う。さらに、肝臓は大量の摂取された食物と直接接触する（腸管を除き）唯一の器官である。従って、肝臓は体内に入る栄養分のレベル、とりわけタンパク質及び炭水化物の量を「感知する」又はモニターすることができる。肝臓は腸管からの栄養分の吸収及び身体全体にわたる代謝的変化についての情報を脳に中継する未同定シグナルの伝達を介して食物摂取の調節の役割を果たしている可能性もあると提唱されてきた（非特許文献１５、非特許文献１６を参照）。肝臓は糖新生やグリコーゲン分解などの経路を調節することにより循環しているグルコース濃度を維持するのにも決定的役割を果している。グルコース恒常性の変化はグルコース耐性障害や２型真正糖尿病の発症の病理生理学における重要な因子である。
【非特許文献１】
ブーチャード、The genetics of obesity，ボカラートン，ＣＲＣプレス，1994。
【非特許文献２】
ズィメット、Diabetes Care 15(2)： 232-247, 1992。
【非特許文献３】
オーストラリアンインスティチュートオブヘルスアンドウェルフェア（ＡＩＨＷ）、心臓病、卒中及び血管病、オーストラリアの事実 AIHW Cat. No. CVD 7, キャンベラ：ＡＩＨＷとハート・ファンデーション・オブ・オーストラリア，1999。
【非特許文献４】
デ・ルーパーとバーティア、Australia's Health Trends 2001. オーストラリアン・インスティチュート・オブ・ヘルス・アンド・ウェルフェア（AIHW) Cat. No. PHE 24,キャンベラ：ＡＩＨＷ, 2001。
【非特許文献５】
モクダッドら、JAMA. 282(16): 1519-22, 1999。
【非特許文献６】
マストら、JAMA. 282(16)： 1523-1529, 1999。
【非特許文献７】
コペルマン、Nature 404： 635-643, 2000。
【非特許文献８】
モクダッド、Diabetes Care 24(2)： 412, 2001。
【非特許文献９】
ナショナル・ヘルス・アンド・メディカル・リサーチ・カウンシル、オーストラリアの体重に対する行動：体重過重及び肥満を予防するための戦略, キャンベラ：ナショナル・ヘルス・アンド・メディカル・リサーチ・カウンシル, 1996。
【非特許文献１０】
ウォルフとコルディッツ、Obes Res. 6：97-106, 1998。
【非特許文献１１】
コペルマンら、Int J Obesity 18： 188-191, 1994。
【非特許文献１２】
ラヴシン、Metabolism 44(Suppl 3）：12-14, 1995。
【非特許文献１３】
ステラー、Psychol. Rev. 61: 5-22, 1954 。
【非特許文献１４】
レーボヴィッツ、Fed. Proc. 45(5): 1396-403, 1985。
【非特許文献１５】
ルシーク、Nature 200：176, 1963。
【非特許文献１６】
「肥満ハンドブック」Ｇ．Ａ．ブレイ，Ｃ．ブーチャード，Ｗ．Ｐ．Ｔ．グレイ編、273-312, 1998中の、クープマンズ「食物摂取の制御に関する実験的研究」。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明に基づき、痩せた動物と肥満の動物、又は給餌しない動物と比較して給餌した動物で異なって発現する遺伝子配列を探究した。そしてエネルギー均衡だけでなく、健康状態、肥満症、摂食障害、体重維持、及び糖尿病のためのマーカーと結び付く、又はこれらのマーカーとして作用すると提唱する、新規な遺伝子が同定される。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
発明の概要
本明細書を通じて、論旨が別意を要求しない限り、語「含む（comprise）」、又はその変化形である「含む（comprises）」若しくは「含む（comprising）」などは、述べられた要素又は整数又は要素若しくは整数の群の含有を意味するが他の如何なる要素又は整数又は要素若しくは整数の群の排除を意味するものではないと解する。
【００１５】
ヌクレオチド配列及びアミノ酸配列は、配列番号（配列番号：）で参照する。配列番号：は、＜４００＞１(配列番号：１）、＜４００＞２（配列番号：２）などの配列同定子に数字で対応する。配列表は特許請求の範囲の後に添付する。
【００１６】
健康状態にと結び付く、又は肥満症、摂食障害、体重維持、糖尿病、及び／又は代謝エネルギーレベルなどの生理学的状態と結び付く遺伝子配列の候補を同定するため、視床下部、肝臓及び膵臓組織由来の遺伝子物質のディファレンシャルディスプレイ分析を用いた。イスラエル・スナネズミ（プサモミス・オビーサス）を含む動物モデルを採用した。代謝表現型に基づきグループＡ、Ｂ、Ｃと命名した、次のような三つの動物グループを用いた：
グループＡ：  痩せた動物（正常血糖、正常インスリン）、
グループＢ：  肥満、非糖尿病の動物（正常血糖、高インスリン）、及び
グループＣ：  肥満、糖尿病の動物（高血糖、高インスリン）。
【００１７】
動物は、給餌した状態か給餌しない状態、又はグルコース若しくはインスリンが高い状態若しくは低い状態の下で維持し、遺伝子配列はディファレンシャルディスプレイで分析した。これらの技術を用いた好ましい実施態様では、異なって発現した６つの配列が視床下部細胞から同定され、本明細書ではこれらをＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１、及びＡＧＴ−２０４と命名した。それぞれ、配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６の配列番号を持つ。
【００１８】
ＡＧＴ−１０９はディファレンシャルディスプレイＰＣＲを用いて視床下部組織で最初に検出され、その発現は給餌した動物と比べ、絶食のグループＡとグループＢの動物で上昇した。ＡＧＴ−４０７はサプレッション・サブトラクティブ・ハイブリッド形成（ＳＳＨ）を用いて肝臓で最初に検出され、その発現は絶食状態のグループＢとＣの動物と比べ、同様の状態のグループＡ動物で上昇した。結果的に、この遺伝子は肥満症の動物又は糖尿病の動物と比べて健康な動物で発現する。ＡＧＴ−４０８は、ＳＳＨを用いて肝臓で最初に同定され、その発現レベルは絶食させたグループＡ動物又は給餌したグループＢ動物と比べて給餌した健康な動物即ちグループＡの動物でより低かった。ＡＧＴ−４０９は、ＳＳＨを用いて肝臓で最初に同定され、絶食状態のグループＡ、Ｂ、Ｃの動物と比べて給餌した健康な動物、即ちグループＡの動物で発現レベルの上昇を示した。ＡＧＴ−６０１は、コンピュータ内で視床下部組織で同定され、その発現は他のグループと比べて糖尿病の肥満の動物、即ちグループＣ動物で上昇した。一般に、この遺伝子の発現は、どのグループに属するかに関わらず絶食の動物と比べて給餌した動物で上昇した。ＡＧＴ−２０４はディファレンシャル発現分析を用いて膵臓で同定され、その発現は絶食の動物と比べて給餌下の動物で上昇することが見出された。ＡＧＴ遺伝子のまとめを表１に示す。
【００１９】
【表１】
2005503793.tif 000002
【００２０】
様々に発現するこれらの配列を同定すれば、発現産物と拮抗できる又は発現産物と作動（agonize)できる分子の理論的な設計及び／又は選択が可能になり、及び／又はスクリーニング検定法の発達が可能になる。スクリーニング検定法には、例えばある特定の対象の生理学的状態の評価が含まれる。
【００２１】
従って、本発明の一つの側面は、タンパク質若しくはｍＲＮＡ又はその誘導体、同族体、類似体若しくは模倣体をコードするヌクレオチド配列又はそれらをコードする配列と相補的なヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、絶食した動物と給餌した動物の間、及び／又は糖尿病の動物と糖尿病でない動物の間で、視床下部、肝臓、又は膵臓で異なって発現する核酸分子を提供する。
【００２２】
好ましい実施態様では、これらの核酸分子は、配列番号：１若しくは配列番号：２若しくは配列番号：３若しくは配列番号：４若しくは配列番号：５若しくは配列番号：６で実質的に表されるヌクレオチド配列、又は配列番号：１若しくは配列番号：２若しくは配列番号：３若しくは配列番号：４若しくは配列番号：５若しくは配列番号：６の全て若しくは一部と少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列を含み、及び／又は配列番号：１若しくは配列番号：２若しくは配列番号：３若しくは配列番号：４若しくは配列番号：５若しくは配列番号：６又はそれらの相補形の一つ以上と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できる。
【００２３】
本発明の別の一側面は、痩せた動物と比べて肥満の動物の視床下部、肝臓又は膵臓組織で及び／又は給餌下動物と比べて絶食した動物の視床下部、肝臓又は膵臓組織で、異なった量で生産される、単離された分子又はその誘導体、同族体、類似体、若しくは模倣体を提供する。
【００２４】
この分子は一般的にタンパク質であるが、ｍＲＮＡ、イントロン又はエクソンであっても良い。この点では、この分子は本ヌクレオチド配列の発現産物とみなしても良い。
【００２５】
好ましい実施態様では、核酸分子は配列番号：１若しくは配列番号：２若しくは配列番号：３若しくは配列番号：４若しくは配列番号：５若しくは配列番号：６で実質的に表されるヌクレオチド配列を含む。
【００２６】
本発明の好ましい遺伝子配列は、本明細書ではＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１、及びＡＧＴ−２０４と呼ばれる。ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１、及びＡＧＴ−２０４にコードされる発現産物は、本明細書ではそれぞれＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１、及びＡＧＴ−２０４と呼ばれる。これらの発現産物は、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）又はタンパク質であって良い。これらの発現産物がＲＮＡである場合、本発明はさらにＲＮＡｉなどのそれに関連するＲＮＡ関連分子にまで及ぶ。
【００２７】
本発明の更なる一側面は、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４、又はその誘導体、同族体、類似体若しくは模倣体、又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１、及びＡＧＴ−２０４のアンタゴニスト又はアゴニストを、一つ以上の薬学的に許容しうる担体及び／又は希釈剤と共に含む組成物に関する。
【００２８】
本発明の更なる一側面は、治療に効果的な量のＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４、又はそれらの誘導体、同族体、類似体若しくは模倣体、又はこれらをコードする遺伝子遺伝子配列、又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の活性若しくはＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１、及びＡＧＴ−２０４の遺伝子発現のアンタゴニスト又はアゴニストを、治療を行なうのに十分な時間及び条件の下で被験体に投与する工程を含む、該被験体を治療法する方法を意図する。
【００２９】
本発明のこの側面及び他の側面に基づき、本明細書で意図する治療は、肥満症、摂食障害、体重維持、エネルギー不均衡、及び糖尿病を含むが、これらに限定されない。治療は遺伝子療法による医薬的組成物又は遺伝子配列の投与によって行って良い。治療は、ヒト被験者並びに畜産業にとって重要な動物などの動物に対するものが意図される。
【００３０】
本発明のさらに別の一側面は、肥満症、摂食障害、体重維持、エネルギー不均衡及び／又は糖尿病、これらに限定しないが、などの症状のモニターと診断に用いる診断用薬であって、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１、及びＡＧＴ−２０４、又はその誘導体、同族体、類似体若しくは模倣体に対する抗体、及び特にＰＣＲ、ハイブリッド形成及び／又はＲＦＬＰに有用なＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４と結び付くヌクレオチド鎖を含む又はこれらとアニーリングできる遺伝子配列から選択される診断用薬に向けられている。
【００３１】
本明細書を通じて用いられる配列番号の一覧を表２に掲載する。
【００３２】
【表２】
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【発明を実施するための最良の形態】
【００３３】
本発明は、エネルギー均衡、肥満症及び糖尿病及び／又は筋発達の制御にとりわけ関連する新規な遺伝子（複数）の同定に部分的に基づいている。これらの遺伝子は、痩せた動物と肥満の動物の間での、及び／又は給餌した動物と絶食させた動物の間での、及び／又は糖尿病の動物と糖尿病でない動物の間での、視床下部、肝臓又は膵臓のｍＲＮＡのディファレンシャルディスプレイ、マイクロアレイ分析又はサプレッション・サブトラクティブ・ハイブリッド形成（ＳＳＨ）［レプリゼンタティブ・ディファレンス分析（ＲＤＡ）とも言う］を含む幾つかの手法を用いて同定した。
【００３４】
用語「ディファレンシャル」アレイは、同じ動物又は異なる動物の別の型の組織と比べた場合の一つ型の組織での核酸配列の発現を含むようにその最も広い意味で使用する。「異なる」動物とは、給餌した状態又は給餌していない状態などの食に関する状態が異なる同じ動物を含む。マイクロアレイ分析は、ディファレンシャルハイブリッド形成特性を示す核酸発現産物（例えば、ｍＲＮＡやＰＣＲ産物）のアレイの組を含むことが好ましい。
【００３５】
従って本発明の一つの側面は、タンパク質又はその誘導体、同族体、類似体若しくは模倣体をコードする配列をコードするヌクレオチド配列又はそれらをコードする配列に相補的なヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、痩せた動物と比べて肥満の動物の視床下部、肝臓及び／又は膵臓でより多量で又はより少量で発現する核酸分子を提供する。
【００３６】
関連する実施態様では、本発明はタンパク質又はその誘導体、同族体、類似体若しくは模倣体をコードするヌクレオチド配列又はこれらをコードする配列と相補的なヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、絶食した動物と比べて給餌した動物の視床下部、肝臓及び／又は膵臓でより多量で又はより少量で発現する核酸分子を提供する。
【００３７】
また別の関連する実施態様では、本発明はタンパク質又はその誘導体、同族体、類似体若しくは模倣体をコードするヌクレオチド配列又はこれらをコードする配列と相補的なヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、糖尿病でない動物と比べて糖尿病の動物の視床下部、肝臓及び／又は膵臓でより多量で又はより少量で発現する核酸分子を提供する。
【００３８】
用語「痩せた」及び「肥満の」はその最も一般的な意味で用いられるが、肥満症を決定付ける標準的な基準と相対的に考えるべきである。一般的に、ヒト被験者については、肥満の定義はＢＭＩ＞３０（リスク・ファクター・プレバレンス・スタディー・マネジメント・コミティー、Risk Factor Prevalence Study: Survey No. 3: 1989. キャンベラ: National hearth Foundation of Australia and Australian Institute of Health, 1990；ウォーターズとベネット、心臓血管病の危険因子：オーストラリアのデータの概要、キャンベラ：Australian Institute of Health and Welfare, 1995）。
【００３９】
便宜上、肥満の動物と痩せた動物の間で、及び絶食の動物と給餌した動物の間での遺伝子発現の差異を研究するのに動物モデルを採用する場合がある。とりわけ本発明は、食餌誘発型肥満及びＮＩＤＤＭの動物モデルであるプサモミス・オビーサス（イスラエル・スナネズミ）を用いて実証する。その天然の砂漠生息地での活発な生活様式とソルトブッシュの摂食により、プサモミス・オビーサスは痩せと正常血糖を維持することを確実にする（シャフリルとガットマン、J Basic Clin Physiol Pharm 4: 83-99, 1993）。しかしながら、（多くの他の動物種は健康状態を保つ）無制限の食事を用意する実験室では、様々な病理生理学的反応が見られる（バーネットら、Diabetologia 37: 671-676, 1994a；バーネットら、Int. J. Obesity 18: 789-794, 1994b；バーネットら、Diabete Nutr Metab 8: 42-47, 1995）。生後１６週までには、半数以上の動物が肥満になり、およそ３分の１がＮＩＤＤＭを発症する。過食の動物のみが高血糖症を発症し続け、プサモミス・オビーサスでは肥満とＮＩＤＤＭの病理生理学における過剰なエネルギー摂取の重要性を強調している（コーリアら，Ann New York Acad Sci 827: 50-63, 1997a、ウォルダーら，Obesity Res 5: 193-200, 1997a）。他に見つかった表現型には、高インスリン血症、異脂肪血症及び耐糖能異常が含まれる（コーリアら、1997a、上記；コーリアら、Exp Clin Endocrinol Diabetes 105:36-37, 1997b）。プサモミス・オビーサスは、「膵臓のスターリン曲線」として知られる血糖レベルとインスリンレベル間の逆Ｕ字型の関係を含む、ヒト集団で見られるパターンに極めて類似した連続曲線を形成する、広範囲の体重と血糖とインスリンの各レベルを示す（バーネットら、1994a、上記）。プサモミス・オビーサスを肥満とＮＩＤＤＭの病因及び病理生理学を研究するための理想的モデルにさせるのは、プサモミス・オビーサスの表現型反応の異質性である。
【００４０】
プサモミス・オビーサス動物は便宜上三つのグループ、即ち、痩せた正常血糖で正常インスリン血のグループＡ動物、肥満で正常血糖で高インスリン血のグループＢ動物、及び肥満で高血糖で高インスリン血のグループＣ動物に分ける。
【００４１】
本発明の別の一側面は、発現産物をコードするヌクレオチド配列又は発現産物をコードする配列に相補的なヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、配列番号：１若しくは配列番号：２若しくは配列番号：３若しくは配列番号：４若しくは配列番号：５若しくは配列番号：６で実質的に表されたもの、又は配列番号：１若しくは配列番号：２若しくは配列番号：３若しくは配列番号：４若しくは配列番号：５若しくは配列番号：６の全て又は一部と少なくとも約３０％の類似性を有するヌクレオチド配列、及び／又は、配列番号：１若しくは配列番号：２若しくは配列番号：３若しくは配列番号：４若しくは配列番号：５若しくは配列番号：６又はそれらの相補形の一つ以上と低ストリンジェンシー条件下で４２℃でハイブリッド形成できる核酸分子であり、痩せた動物と比べて肥満の動物の、及び／又は絶食した動物と比べて給餌した動物の視床下部、肝臓又は膵臓で、より多量でまたはより少量で発現する核酸分子を提供する。
【００４２】
４０％又は５０％又は６０％又は７０％又は８０％又は９０％又は９５％又は９６％又は９７％又は９８％又は９９％又はそれ以上より高いなどのより高度の類似性も本発明で意図される。
【００４３】
発現産物には、ｍＲＮＡ転写物などのＲＮＡ分子、並びにタンパク質が含まれる。一部の遺伝子は遺伝子をコードする非タンパク質であり、ｍＲＮＡ又は他のＲＮＡ型の分子を生産し、ＲＮＡ：ＤＮＡ、ＲＮＡ：ＲＮＡ、又はＲＮＡ：タンパク質の相互作用による制御に関与する。これらのＲＮＡ（例えばｍＲＮＡ）は、直接に又はＲＮＡｉなどの他の分子の誘発を介して、又はスプライシング現象から媒介された産物（例えば、エキソン又はイントロン）を介して作用することがある。他の遺伝子はｍＲＮＡ転写物をコードし、ｍＲＮＡは次いでタンパク質へ翻訳される。タンパク質にはポリペプチドが含まれる。差異を伴って発現される核酸分子は、従って、ｍＲＮＡのみをコードするか、更にタンパク質をコードしても良い。ｍＲＮＡとタンパク質は、共に「発現産物」の形態である。
【００４４】
本明細書で言う類似性は、一般に連続した又は実質的に連続した少なくとも１５個のヌクレオチドの比較、又は連続した又は実質的に連続した少なくとも５個のアミノ酸残基の比較というレベルでのことである。
【００４５】
本明細書で用いられる用語「類似性」は、ヌクレオチドレベル又はアミノ酸レベルで比較された配列の間の完全な同一性を含む。ヌクレオチドレベルで非同一性が存在する場合、「類似性」はそれにもかかわらず構造的、機能的、生化学的及び／又は立体構造的なレベルで互いに関連する異なるアミノ酸を生ずる複数の配列の間の相違を含む。アミノ酸レベルで非同一性が存在する場合、「類似性」はそれにもかかわらず構造的、機能的、生化学的及び／又は立体構造的なレベルで互いに関連する複数のアミノ酸を含む。特に好ましい実施態様では、ヌクレオチド及び配列の比較は類似性ではなく同一性のレベルで行われる。
【００４６】
二つ以上のポリヌクレオチド間の配列関係を記述するのに用いられる用語には、「参照配列」、「比較窓」、「配列類似性」、「配列同一性」、「配列類似性のパーセンテージ」、「配列同一性のパーセンテージ」、「実質的に類似」及び「実質的な同一性」が含まれる。「参照配列」はモノマー単位が少なくとも１２であるが、しばしば１５から１８、より多くは３０などの少なくとも２５以上のモノマー単位の長さである。二つのポリヌクレオチドはそれぞれが（１）二つのポリヌクレオチド間で類似する配列（即ち、完全なポリヌクレオチド配列の部分のみ）、及び（２）二つのポリヌクレオチド間で異なる配列を含むことがあるため、二つ（以上）のポリヌクレオチドの配列比較は、通常は「比較窓」上で二つのポリヌクレオチドの配列を比較し、配列類似性の局所的な領域を確認し比較することにより行なわれる。「比較窓」は参照配列と比較される通常は１２の連続した残基の概念的なセグメントを指す。比較窓は、二つの配列の最適整列について（付加又は欠失を含まない）参照配列と比較すると、約２０％以下の付加及び欠失（即ち、ギャップ）を含むことがある。比較窓を整列させるための配列の最適整列は、アルゴリズム（ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ、ウィスコンシン・ジェネティクス  ソフトウェアパッケージ  リリース７．０、ジェネティクスコンピュータグループ、５７５サイエンスドライブ  マディソン、ウィスコンシン州、米国）のコンピュータによる実施により、又は観察による点検により、そして選択された様々な方法のいずれかで形成された最良の配置（即ち、比較窓上で相同性のパーセンテージが最高となるもの）によって行って良い。例えばアルチュールら（Nucl. Acids Res. 25: 3389, 1997）に開示されたもののような、ＢＬＡＳＴファミリーのプログラムを参照しても良い。配列分析の詳細な議論はアウスベルら（「分子生物学の最新プロトコール」ジョン・ワイリー・アンド・サンズ・インコーポレイテッド，1994-1998，１５章）の１９．３単元で見ることができる。
【００４７】
本明細書で用いる用語「配列類似性」及び「配列同一性」は、配列が比較窓上で個々のヌクレオチド毎に比較して同一である又は機能的若しくは構造的に類似している程度を指す。従って、例えば「配列同一性のパーセンテージ」は、比較窓上で最適に整列させた二つの配列を比較し、同一の核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）が両方の配列で現れた位置の数を決定して合致する位置の数を求め、その合致した位置の数を比較窓内の位置の総数（即ち、窓の大きさ）で割り、その結果を１００倍して配列同一性のパーセンテージを求めることにより計算する。本発明の目的においては、「配列類似性」はＤＮＡＳＩＳコンピュータプログラム（ウィンドウズ（登録商標）用バージョン２．５、ヒタチソフトウェア・エンジニアリング社、サウスサンフランシスコ、カリフォルニア、米国）でこのソフトウェアに添付されたリファレンスマニュアルで用いられている標準的なデフォルト値を用いて計算した「合致のパーセンテージ」を意味すると理解されたい。配列類似性についても同様のコメントが当てはまる。
【００４８】
本明細書で言う低ストリンジェンシーは、ハイブリッド形成条件において、少なくとも約０から少なくとも約１５％ｖ／ｖまでのホルムアミドと少なくとも約１Ｍから少なくとも約２Ｍまでの塩、及び洗浄条件において、少なくとも約１Ｍから少なくとも約２Ｍまでの塩を含み包含する。一般的に、低ストリンジェンシーは約２５〜３０℃から約４２℃までである。この温度は変更しても良く、ホルムアミドと置き換えるため及び／又は別のストリンジェンシー条件を得るために、より高い温度を用いても良い。必要であれば、ハイブリッド形成条件において少なくとも約１６％ｖ／ｖから少なくとも約３０％ｖ／ｖまでのホルムアミド及び少なくとも約０．５Ｍから少なくとも約０．９Ｍまでの塩、及び洗浄条件において少なくとも約０．５Ｍから少なくとも約０．９Ｍまでの塩を含み包含する中ストリンジェンシー、又はハイブリッド形成条件において少なくとも約３１％ｖ／ｖから少なくとも約５０％ｖ／ｖまでのホルムアミド及び少なくとも約０．０１Ｍから少なくとも約０．１５Ｍまでの塩、及び洗浄条件において少なくとも約０．０１Ｍから少なくとも約０．１５Ｍまでの塩を含み包含する高ストリンジェンシーなどを適用しても良い。一般的に、洗浄はＴm＝６９．３＋０．４１（Ｇ＋Ｃ）％（マーマーとドーティ、J. Mol. Biol. 5: 109, 1962）。しかしながら、２重鎖ＤＮＡのＴmは不適合塩基の対の数が１％増える毎に１℃低下する（ボナーとラスキー、Eur. J. Biochem. 46: 83, 1974）。ホルムアミドはこれらのハイブリッド形成条件では任意選択的である。従って、特に好ましいストリンジェンシーのレベルは次のように定義される：低ストリンジェンシーは２５〜４２℃で６×ＳＳＣ緩衝液、０．１％ｗ／ｖのＳＤＳであり、中ストリンジェンシーは温度が２０℃から６５℃の範囲で２×ＳＳＣ緩衝液、０．１％ｗ／ｖのＳＤＳであり、高ストリンジェンシーは温度が少なくとも６５℃で０．１×ＳＳＣ緩衝液、０．１％ｗ／ｖのＳＤＳである。
【００４９】
本発明のヌクレオチド配列又はアミノ酸配列は、自然発生する遺伝子（又は対応するｃＤＮＡ）又はタンパク質の完全に同じ配列と対応することがあり、一つ以上のヌクレオチド又はアミノ酸の置換、付加、及び／又は欠失を保持することもある。配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５及び配列番号：６で表されるヌクレオチド配列は、それぞれ本明細書でＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１、及びＡＧＴ−２０４と呼ぶ遺伝子に対応する。これに対応するタンパク質は、それぞれＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１、及びＡＧＴ−２０４である。本明細書におけるＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１、及びＡＧＴ−２０４への言及は、適切な場合には、ゲノム遺伝子又はｃＤＮＡへの言及並びに自然発生又は誘導された任意の誘導体への言及が含まれる。ヌクレオチド配列における置換、欠失及び／又は付加とは別に、本発明はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１、及びＡＧＴ−２０４に対応するヌクレオチド配列の変異体、断片、一部及び部分を更に包含する。
【００５０】
本発明の別の一側面は、配列番号：１で実質的に表されるアミノ酸配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体、又は配列番号：１における少なくとも１０個の連続したアミノ酸と少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、又はこれらのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列と相補的なヌクレオチド配列を含む、核酸分子、又はその誘導体、同族体若しくは類似体を提供する。
【００５１】
本発明の更に別の一側面は、配列番号：２で実質的に表されるアミノ酸配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体、又は配列番号：２における少なくとも１０個の連続したアミノ酸と少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、又はこれらのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列と相補的なヌクレオチド配列を含む、核酸分子又はその誘導体、同族体若しくは模倣体を提供する。
【００５２】
本発明のまた別の一側面は、配列番号：３で実質的に表されるアミノ酸配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体、又は配列番号：３における少なくとも１０個の連続したアミノ酸と少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、又はこれらのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列と相補的なヌクレオチド配列を含む、核酸分子又はその誘導体、同族体若しくは模倣体を提供する。
【００５３】
本発明の更に別の一側面は、配列番号：４で実質的に表されるアミノ酸配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体、又は配列番号：４における少なくとも１０個の連続したアミノ酸と少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、又はこれらのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列と相補的なヌクレオチド配列を含む、核酸分子又はその誘導体、同族体若しくは類似体を提供する。
【００５４】
本発明のまた別の一側面は、配列番号：５で実質的に表されるアミノ酸配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体、又は配列番号：５における少なくとも１０個の連続したアミノ酸と少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、又はこれらのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列と相補的なヌクレオチド配列を含む、核酸分子又はその誘導体、同族体若しくは類似体を提供する。
【００５５】
本発明のまた別の一側面は、配列番号：６で実質的に表されるアミノ酸配列又はその誘導体、同族体又は類似体、又は配列番号：６における少なくとも１０個の連続したアミノ酸と少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、又はこれらのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列と相補的なヌクレオチド配列を含む、核酸分子又はその誘導体、同族体若しくは類似体を提供する。
【００５６】
ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の発現パターンは、とりわけ、肥満症、糖尿病及び／又はエネルギー代謝のうち一つ以上の調節への関与を示すために測定されてきた。痩せた動物対肥満動物、及び給餌した動物対絶食させた動物の筋肉、視床下部、肝臓、胃及び／又は膵臓におけるＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の差異的な発現に加え、これらの遺伝子は筋肉、視床下部、肝臓、胃及び／又は膵臓を含むがこれらに限定されない他の組織でも発現することがある。ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４のそれぞれをコードする核酸分子は、ｃＤＮＡ配列やゲノム配列などのデオキシリボ核酸の配列であることが好ましい。ゲノム配列はまた、エキソン及びイントロンを含んでも良い。ゲノム配列はプロモーター領域又は他の調節領域を含んでも良い。
【００５７】
同族体は、別の動物種由来のＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４遺伝子であると考えられる。ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４遺伝子は本明細書ではプサモミス・オビーサスの視床下部、肝臓及び／又は膵臓から実証される。しかしながら本発明は、ヒト、霊長類、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ロバ）、実験動物（例えば、マウス、モルモット、ハムスター、ウサギ）、伴侶動物（例えば、ネコ、イヌ）及び捕獲された野生動物（例えば、齧歯動物、キツネ、シカ、カンガルー）由来の、ヌクレオチド配列及び／又は機能によって決定される相同遺伝子群にも及ぶ。
【００５８】
本発明の核酸、及び特にＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４並びにそれらの誘導体及び同族体は、発現ベクターなどのベクターとして単離し又はそれから精製しても良く、及び／又はベクターに結合しても良い。発現は真核細胞株（例えば、哺乳動物、昆虫又は酵母菌の細胞）又は微生物細胞（例えば、大腸菌）、又はその双方で行なわせてもよい。
【００５９】
本発明の核酸分子の誘導体は、オリゴヌクレオチド、ＰＣＲプライマー、アンチセンス分子、共抑制に用いるのに適した分子、及び融合核酸分子を含む。ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４又はそのｍＲＮＡに対するリボザイム及びＤＮＡ酵素も本発明で意図される。ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の誘導体及び同族体は、配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５又は配列番号：６と４２℃の低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列により便宜的に包含される。
【００６０】
誘導体は、天然資源、合成資源又は融合タンパク質を含む組換え資源由来の断片、一部、部分、突然変異体、変異体及び模倣体を含む。一部又は断片は、例えばＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の活性領域を含む。誘導体は、アミノ酸の挿入、欠失又は置換から誘導して良い。アミノ酸挿入誘導体は、１個又は複数のアミノ酸の内部配列挿入だけでなく、アミノ末端融合及び／又はカルボキシル末端融合をも含む。挿入アミノ酸配列変異体は一つ以上のアミノ酸残基がタンパク質内の所定の部位に導入されたものであるが、無作為な挿入も結果的に得られる産物を適切にスクリーニングすることにより可能となる。欠失変異体は元の配列から一つ以上のアミノ酸が除去されたことを特徴とする。置換アミノ酸変異体は、配列内の少なくとも一つの残基が除去されその場所に異なる残基が挿入されたものである。置換アミノ酸変異体の一例は、同類アミノ酸置換である。同類アミノ酸置換は、通常は次のグループ内の置換を含む。即ち、グリシンとアラニン、バリンとイソロイシンとロイシン、アスパラギン酸とグルタミン酸、アスパラギンとグルタミン、セリンとトレオニン、リジンとアルギニン、及び、フェニルアラニンとチロシンである。アミノ酸配列への付加は、他のペプチド、ポリペプチド又はタンパク質との融合を含む。
【００６１】
ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の化学的及び機能的な等価物は、これらの分子の機能的活性の任意の一つ以上を示す分子と解されるべきであり、化学的に合成されるか天然産物スクリーニングなどのスクリーニング手法により同定されるものなどの任意の資源から誘導されることがある。
【００６２】
誘導体はペプチド、ポリペプチド又は他のタンパク質性若しくは非タンパク質性の分子と融合したタンパク質全体の特定のエピトープ又は一部を有する断片を含む。
【００６３】
本発明の別の一側面は、痩せた動物と比べて肥満動物での視床下部、肝臓、及び／又は膵臓でより多量で又はより少量で生産される、単離されたタンパク質又はその誘導体、同族体、類似体若しくは模倣体を提供する。
【００６４】
本発明のさらに好ましい側面では、単離されたタンパク質又はその誘導体、同族体、類似体、若しくは模倣体であって、該タンパク質が配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５又は配列番号：６で表されるヌクレオチド配列に実質的にコードされるアミノ酸配列、又はその全部又は一部と少なくとも３０％の類似性を有するアミノ酸配列を含み、該タンパク質が痩せた動物と比べて肥満動物の肝臓又は胃でより多量で又はより少量で生産されるタンパク質又はその誘導体、同族体、類似体、若しくは模倣体を提供する。
【００６５】
本発明のさらに別の一側面は、単離されたタンパク質又はその誘導体、同族体、類似体若しくは模倣体であって、該タンパク質が配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６で実質的に表されるヌクレオチド配列、又は配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５又は配列番号：６の全部又は一部と少なくとも６０％の類似性を有する、及び／又は配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５又は配列番号：６、又はその相補形と４２℃の低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列によりコードされるものであるタンパク質又はその誘導体、同族体、類似体若しくは模倣体に向けられる。
【００６６】
本明細書でＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４と言うときは、単離された又は精製された自然発生のＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４タンパク質分子、並びにその任意の誘導体、同族体、類似体及び模倣体をも含む。誘導体は、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の一部、断片及び部分、並びにＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４への１個及び複数のアミノ酸の置換、欠失及び／又は付加を含む。ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の誘導体は、便宜上、配列番号：１又は配列番号：２又は配列番号：３又は配列番号：４又は配列番号：５又は配列番号：６と４２℃の低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列にコードされる分子により包含される。
【００６７】
ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の他の誘導体には、化学的類似体が含まれる。本明細書で意図するＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の類似体は、側鎖への修飾、ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質の合成の間の非天然アミノ酸及び／又はその誘導体の組込み、及びタンパク質性分子又はその類似体に立体構造的な制約を課す架橋結合物質及び他の方法の使用を含むが、これらに限定されない。
【００６８】
本発明で意図する側鎖修飾の例は、アルデヒドとの反応に続くＮａＢＨ4による還元による還元的アルキル化、メチルアセチミデートによるアミジン化、無水酢酸によるアシル化、シアン酸によるアミノ基のカルバモイル化、２、４、６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）によるアミノ基のトリニトロベンジル化、無水コハク酸とテトラヒドロ無水フタル酸によるアミノ基のアシル化、及びピリドキサル−５−リン酸によるリジンのピリドキシル化に続くＮａＢＨ4による還元などによるアミノ基の修飾を含む。
【００６９】
アルギニン残基のグアニジン基は、２、３−ブタンジオン、フェニルグリオキサール、及びグリオキサールなどの試薬による複素環縮合物の形成により修飾しても良い。
【００７０】
カルボキシル基は、Ｏ−アシルイソ尿素形成を経るカルボジイミドの活性化とその後の例えば対応するアミドへの誘導化により修飾しても良い。
【００７１】
メルカプト基は、ヨード酢酸又はヨードアセトアミドによるカルボキシメチル化、システイン酸への過ギ酸酸化、他のチオール化合物との混合ジスルフィドの形成、マレイミド、無水マレイン酸又は他の置換マレイミドとの反応、４−クロロメルクリ安息香酸、４−クロロメルクリフェニルスルホン酸、クロロフェニル水銀、２−クロロメルクリ−４−ニトロフェノール、及び他の水銀物質を用いた水銀誘導体の形成、アルカリｐＨでのシアン酸によるカルバモイル化などの方法で修飾しても良い。
【００７２】
トリプトファン残基は、例えばＮ−ブロモスクシンイミドによる酸化、２−ヒドロキシ−５−ニトロベンジルブロマイド又はスルフェニルハライドによるインドール環のアルキル化などにより、修飾しても良い。一方チロシン残基は、テトラニトロメタンによりニトロ化し３−ニトロチロシン誘導体を形成することにより改変しても良い。
【００７３】
ヒスチジン残基のイミダゾール環の修飾は、ヨード酢酸誘導体によるアルキル化、又はジエチルピロカルボネートによるＮ−エトキシカルボニル化によって行っても良い。
【００７４】
ペプチド合成中に非天然アミノ酸と誘導体を組込む例には、ノルロイシン、４−アミノ酪酸、４−アミノ−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンタン酸、６−アミノヘキサン酸、ｔ−ブチルグリシン、ノルバリン、フェニルグリシン、オルニチン、サルコシン、４−アミノ−３−ヒドロキシ−６−メチルヘプタン酸、２−チエニルアラニン、及び／又はアミノ酸のＤ−異性体の使用が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で意図する非天然アミノ酸の一覧を表３に示す。
【００７５】
【表３】
2005503793.tif 000004
【００７６】
【表３−１】
2005503793.tif 000005
【００７７】
【表３−２】
2005503793.tif 000006
【００７８】
【表３−３】
2005503793.tif 000007
【００７９】
架橋結合物質は、例えばｎ＝１からｎ＝６の（ＣＨ2）nスペーサー基を持つ二官能性イミドエステルである、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシニミドエステルなどのホモ二官能性架橋結合物質、及び、通常はＮ−ヒドロキシスクシンイミドなどのアミノ反応性部分とマレイミド部分やジチオ部分（ＳＨ）若しくはカルボジイミド（ＣＯＯＨ）などの別の基に特異的に反応する部分を含むヘテロ二官能性試薬を用いて、３Ｄ立体構造を安定化させるのに使用できる。加えて、ペプチドは例えばＣα及びＮα−メチルアミノ酸の組込み、アミノ酸のＣα原子とＣβ原子の間に二重結合の導入、及びＮ末端とＣ末端間、二つの側鎖間、又は一つの側鎖とＮ末端又はＣ末端の間にアミド結合を形成するなどの共有結合の導入による環状ペプチド又は類似体の形成により、立体構造的に制約を加えることができる。
【００８０】
このような修飾は全て、イン・ビボの投薬計画で用いるため、又は診断目的でＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４分子を安定化するのにも有用である場合がある。
【００８１】
本発明の核酸分子は、単離された形か又は発現ベクターなどのベクターに結合していることが好ましい。「単離された」とは、核酸分子が少なくとも一つの精製工程を受けたことを意味し、分子量、コード活性、ヌクレオチド配列、基底構造又は他の便宜的な手段で測定されたとき、他の成分と比べ、本核酸分子を少なくとも約１０％、好ましくは少なくとも約２０％、さらに好ましくは少なくとも約３０％、より好ましくは少なくとも約４０〜５０％、さらに好ましくは少なくとも６０〜７０％、もっと好ましくは８０〜９０％以上含む組成物により、便宜的に定義される。本発明の核酸分子は、好ましい実施態様では、生物学的に純粋である場合がある。
【００８２】
用語「タンパク質」は、ペプチド、ポリペプチド及びタンパク質を包含すると解すべきである。タンパク質は、グリコシル化されても又はグリコシル化されていなくても良く、及び／又はアミノ酸、脂質、炭水化物又は他のペプチド、ポリペプチド又はタンパク質などの、タンパク質に融合、連結、結合又その他の方法で結び付いた様々な他の分子を含んでも良い。以後「タンパク質」と言うときは、アミノ酸配列を含むタンパク質並びに、アミノ酸、脂質、炭水化物又は他のペプチド、ポリペプチド若しくはタンパク質などの他の分子と結び付いたタンパク質を含むタンパク質を含む。
【００８３】
特に好ましい実施態様では、ＡＧＴ−１０９に対応するヌクレオチド配列は、配列番号：１で表されるヌクレオチド配列、又は配列番号：１と類似性を有するヌクレオチド配列を含むその誘導体、同族体若しくは類似体、を含むｃＤＮＡ配列である。
【００８４】
別の特に好ましい実施態様では、ＡＧＴ−４０７に対応するヌクレオチド配列は、配列番号：２で表されるヌクレオチド配列、又は配列番号：２と類似性を有するヌクレオチド配列を含むその誘導体、同族体若しくは類似体、を含むｃＤＮＡ配列である。
【００８５】
また別の好ましい実施態様では、ＡＧＴ−４０８に対応するヌクレオチド配列は、配列番号：３で表されるヌクレオチド配列、又は配列番号：３と類似性を有するヌクレオチド配列を含むその誘導体、同族体若しくは類似体、を含むｃＤＮＡ配列である。
【００８６】
さらに好ましい実施態様では、ＡＧＴ−４０９に対応するヌクレオチド配列は、配列番号：４で表されるヌクレオチド配列、又は配列番号：４と類似性を有するヌクレオチド配列を含むその誘導体、同族体若しくは類似体、を含むｃＤＮＡ配列である。
【００８７】
さらに好ましい実施態様では、ＡＧＴ−６０１に対応するヌクレオチド配列は、配列番号：５で表されるヌクレオチド配列、又は配列番号：５と類似性を有するヌクレオチド配列を含むその誘導体、同族体若しくは類似体、を含むｃＤＮＡ配列である。
【００８８】
さらに好ましい実施態様では、ＡＧＴ−２０４に対応するヌクレオチド配列は、配列番号：６で表されるヌクレオチド配列、又は配列番号：６と類似性を有するヌクレオチド配列を含むその誘導体、同族体もしくは類似体、を含むｃＤＮＡ配列である。
【００８９】
この核酸分子は、原核細胞（例えば、大腸菌）又は真核細胞（例えば、酵母細胞、真菌細胞、昆虫細胞、哺乳動物細胞又は植物細胞）内で発現できる発現ベクターに連結させても良い。この核酸分子は、例えばシグナルペプチドなどの別の実体をコードする核酸分子に連結又は融合又は他の方法で結び付けても良い。この核酸分子はまた、３’末端若しくは５’末端部のいずれかで、又は３’末端と５’末端部の両方で核酸分子と融合又は結合又は他の方法で結び付いた付加的なヌクレオチド配列情報を含んでも良い。この核酸分子は発現ベクターなどのベクターの一部であっても良い。
【００９０】
本発明は、上で定義したような核酸分子の発現産物にまで及ぶ。
【００９１】
これらの発現産物は、それぞれ配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５又は配列番号：６にコードされるアミノ酸配列を有するＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４、又はその誘導体、類似体、同族体、化学的等価物若しくは模倣体であることが好ましい。
【００９２】
本発明の別の一側面は、下に挙げるものから成るリストから選択される単離されたタンパク質に向けられている。
【００９３】
（i）痩せた動物と比べて肥満動物の視床下部、肝臓及び／又は膵臓で差異をもって発現する新規な核酸分子によってコードされるタンパク質、又はその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物又は模倣体。
【００９４】
（ii）絶食した動物と比べて給餌した動物の視床下部、肝臓及び／又は膵臓で差異をもって発現する新規な核酸分子によってコードされるタンパク質、又はその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体。
【００９５】
（iii）配列番号：１で実質的に表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体により、又はこの配列と少なくとも約４５％の類似性を有するアミノ酸配列をコードする配列によりコードされるタンパク質、又は該タンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体。
【００９６】
（iv）配列番号：２で実質的に表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体により、又はこの配列と少なくとも約４５％の類似性を有するアミノ酸配列をコードする配列によりコードされるタンパク質、又は該タンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体。
【００９７】
（v）配列番号：３で実質的に表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体により、又はこの配列と少なくとも約４５％の類似性を有するアミノ酸配列をコードする配列によりコードされるタンパク質、又は該タンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体。
【００９８】
（vi）配列番号：４で実質的に表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体により、又はこの配列と少なくとも約４５％の類似性を有するアミノ酸配列をコードする配列によりコードされるタンパク質、又は該タンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体。
【００９９】
（vii）配列番号：５で実質的に表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体により、又はこの配列と少なくとも約４５％の類似性を有するアミノ酸配列をコードする配列によりコードされるタンパク質、又は該タンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体。
【０１００】
（viii）配列番号：６で実質的に表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体により、又はこの配列と少なくとも約４５％の類似性を有するアミノ酸配列をコードする配列によりコードされるタンパク質、又は該タンパク質の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体。
【０１０１】
（ix）配列番号：１で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質。
【０１０２】
（x）配列番号：２で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質。
【０１０３】
（xi）配列番号：３で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質。
【０１０４】
（xii）配列番号：４で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質。
【０１０５】
（xiii）配列番号：５で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質。
【０１０６】
（xiv）配列番号：６で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できる核酸分子によりコードされるタンパク質。
【０１０７】
（xv）ホモダイマーの形態である、項（i）から（xiv）のいずれか１項で定義されるタンパク質。
【０１０８】
（xvi）ヘテロダイマーの形態である、項（i）から（xiv）のいずれか１項で定義されるタンパク質。
【０１０９】
（xvii）オリゴマーの形態である、項（i）から（xiv）のいずれか１項で定義されるタンパク質。
【０１１０】
（xviii）ヘテロオリゴマーの形態である、項（i）から（xiv）のいずれか１項で定義されるタンパク質。
【０１１１】
本発明のタンパク質は、単離された形であるのが好ましい。「単離された」とは、少なくとも一つの精製工程を受けたタンパク質を意味し、これは、便宜上、分子量、アミノ酸配列又は他の便利な手段で測定したとき、例えば少なくとも約１０％の本発明のタンパク質、好ましくは少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約３０％、さらに好ましくは少なくとも約４０〜５０％、さらに好ましくは少なくとも約６０〜７０％、もっと好ましくは８０〜９０％以上の本発明のタンパク質を他の成分と比べて含む組成物により定義される。本発明のタンパク質はまた、好ましい実施態様では、生物学的に純粋であるとみなして良い。
【０１１２】
本発明の理論又は作用様式を制限することなく、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の発現は体重及びブドウ糖恒常性の調節に関連すると考えられる。これらの遺伝子発現の調節は、とりわけエネルギー摂取への効果、及び炭水化物／脂肪代謝への効果によりエネルギー均衡を調節すると考えられる。エネルギー摂取への効果は、中枢神経系によって仲介される可能性があると思われるが、炭水化物と脂肪の両方の代謝に対する末梢の効果も考えられる。これらの遺伝子の発現は絶食と給餌で調節しても良く、従ってこれらの遺伝子又はその発現産物の発現及び／又は活性の調節は、体重及び炭水化物代謝や脂肪代謝を含むエネルギー代謝の双方を調節するためのメカニズムを提供できるであろう。
【０１１３】
ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４を同定すると、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の発現を変更できる、又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の活性を変更できる様々な治療用分子の作成が可能になる。本発明で意図するモジュレーターには、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の発現のアゴニスト及びアンタゴニストが含まれる。ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４発現のアンタゴニストには、アンチセンス分子、リボザイム及び共抑制分子が含まれる。アゴニストには、プロモーター活性を増強する分子、又は負の調節機構を妨害する分子が含まれる。ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４のアンタゴニストには、抗体やペプチド断片阻害剤が含まれる。このような分子は全て、このような分子が細胞膜を貫通できるようにまず修飾する必要がある場合がある。または、遺伝子要素を導入してＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の発現を変更するために、ウイルス性物質を採用しても良い。ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４がレプチンをコードするｏｂ遺伝子などの他の遺伝子と共に作用している限りにおいては、治療用分子はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４、及びｏｂ遺伝子、又はこれらの翻訳産物を標的としても良い。
【０１１４】
従って本発明は、哺乳動物におけるＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の発現を変更する方法であって、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４遺伝子を、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の発現を高レベル調節、低レベル調節又はその他の方法で変更するのに十分な時間及び条件の下で、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４発現のモジュレーターの効果的な量と接触させる工程を含む方法を意図する。例えば、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４又はその誘導体若しくは同族体をコードする核酸分子を細胞に導入して、その細胞がＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４を生産する能力を増強しても良く、逆にオリゴヌクレオチドなどのＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４のアンチセンス配列を導入して、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４分子の利用可能性を減少させても良い。
【０１１５】
本発明の別の一側面は、哺乳動物におけるＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の活性を変更する方法であって、該哺乳動物に、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の活性を増大又は減少させるのに十分な時間及び条件の下で、変更に効果的量の分子を投与する工程を含む方法を意図する。この分子は、タンパク質性分子又は化学的実体であっても良く、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の誘導体、又はそのリガンドであっても良い。
【０１１６】
ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の発現のレベルを変更することは、肥満症、及び、摂食障害、エネルギー不均衡、糖尿病、代謝症候群、異脂肪血症、高血圧症、インスリン抵抗性及び筋発達の状態を含む、肥満症に関連する状態などの様々な状態の治療に重要である。これは、畜産業において、より痩せた動物、又は必要であればより太った動物の生産を支援するのにも有用である。従って、本発明で意図する哺乳動物は、ヒト、霊長類、家畜動物（例えば、ブタ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ロバ）、実験動物（例えば、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ウサギ）、愛玩動物（例えば、イヌ、ネコ）及び捕獲した野生動物（例えば、キツネ、カンガルー、シカ）を含むが、これらに限定されない。特に好ましい宿主は、ヒト、霊長類又は家畜動物である。
【０１１７】
従って本発明は、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４のアゴニストとアンタゴニストに加えて、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４のアミノ酸分子、及び核酸分子の治療上及び予防上の使用を意図する。
【０１１８】
従って本発明は、哺乳動物におけるＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の発現の変更する方法であって、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４の発現を高レベル調節、低レベル調節又はその他の方法で変更するのに十分な時間及び条件の下で、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４遺伝子を、効果的量の物質と接触させる工程を含む方法を意図する。例えば、オリゴヌクレオチドなどのアンチセンス配列を用いても良い。
【０１１９】
逆に、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４をコードする核酸分子又はその誘導体を、一つ以上の特異的な機能的活性を高レベル調節するために導入しても良い。
【０１２０】
本発明の別の一側面は、被験体におけるＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の活性を変更する方法であって、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４活性を増加又は減少させるのに十分な時間及び条件の下で、変更に効果的な量の物質を該被験体に投与する工程を含む方法を意図する。
【０１２１】
哺乳動物にある物質を投与することによる該活性の変更は、
（i）ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４の発現を変更する
（ii）ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４のアンタゴニストとして機能する
（iii）ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４のアゴニストとして機能する、
タンパク質性又は非タンパク質性の分子を該哺乳動物に導入する工程、決してこの工程に限定されないが、を含む複数の技術のうち一つにより、行うことができる。
【０１２２】
該タンパク質性分子は、融合タンパク質又は次に挙げる例えば天然産物スクリーニングを含む、天然資源又は組換え資源から誘導しても良い。該非タンパク質性分子は、例えば、核酸分子であっても良く、又は例えば天然産物スクリーニングなどの天然資源から誘導しても良く、又は化学的に合成しても良い。本発明は、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４の化学的類似体、又はアゴニスト若しくはアンタゴニストとして作用できる小分子を意図する。化学的類似体は、必ずしもＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４から誘導されるとは限らず、ある立体構造的な類似性を共有しても良い。また化学的アゴニストは、一定の物理化学的特性を模倣するよう、特別に設計しても良い。アンタゴニストは、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４がその正常な生物学的機能を実行することを遮断、阻害又はその他の方法で阻止できる如何なる化合物であっても良い。アンタゴニストには、哺乳動物細胞においてＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４の遺伝子又はｍＲＮＡの転写若しくは翻訳を阻止するモノクローナル抗体及びアンチセンス核酸が含まれる。発現の変更は、抗原、ＲＮＡ、リボソーム、ＤＮＡザイム（DNAzyme）、ＲＮＡアプタマー又は抗体を用いて行っても良い。
【０１２３】
該タンパク質性又は非タンパク質性分子は、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４の発現又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４の活性を直接又は間接的に変更するように作用することがある。該分子は、発現又は活性を変更するために、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４と結び付く場合には直接作用する。該分子は、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４以外の分子と結び付き、この他の分子がＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４の発現又は活性を直接又は間接的のいずれかで変更する場合には、間接的に作用する。従って本発明の方法は、調節段階のカスケードの導入による、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４の発現又は活性の調節を包含する。
【０１２４】
本発明に基づいて哺乳動物に投与されうる分子は、これらの分子を標的細胞に特異的に送達する、モノクローナル抗体などの標的化手段と結び付けても良い。
【０１２５】
本発明の更なる一側面は、哺乳動物の疾病状態に対する本発明の使用に関する。例えば、本発明は特に、肥満症、摂食障害、糖尿病、又はエネルギー不均衡の治療処置又は予防処置に有用であるが、これらに限定されない。
【０１２６】
従って本発明の別の一側面は、肥満症、摂食障害、糖尿病及び／又はエネルギー不均衡の一つ以上の症状を特徴とする状態を患う哺乳動物を処置する方法であって、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４の発現を変更するのに十分な、又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４の活性を変更するのに十分な時間及び条件の下で、効果的な量のある物質を該哺乳動物に投与する工程を含む方法に関する。
【０１２７】
また別の一側面では、本発明は肥満症、摂食障害、糖尿病又はエネルギー不均衡の一つ以上の症状を特徴とする症状を患う哺乳動物を処置する方法であって、該哺乳動物に効果的な量のＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４を投与する工程を含む方法に関する。
【０１２８】
「効果的な量」とは、少なくとも部分的には所望の免疫反応を得る、又は発病を遅らせる若しくは進行を阻止する、又は処置対象の個人、処置対象の個人の分類上のグループのある特定の症状の発症もしくは進行、所望の保護の程度、ワクチンの処方、医学的状態の評価、及び他の関連する因子を全体的に止めるのに必要な量を意味する。この量は、機械的な試行により決定できる比較的広範囲なものとなる。
【０１２９】
これらの方法に基づき、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又は該分子の発現又は活性を調節できる物質は、一つ以上の他の化合物又は他の分子と共に同時投与しても良い。「同時投与」とは、同じ製剤での同時投与、又は同じ経路若しくは異なる経路による異なる二つの製剤での同時投与、又は同じ経路若しくは異なる経路による逐次投与を意味する。「逐次」投与とは、２種類の分子の投与の間に、数秒、数分、数時間又は数日間の時間的差異があることを意味する。これらの分子はどの順序で投与しても良い。
【０１３０】
また別の一側面では、本発明は肥満症、摂食障害、糖尿病及び／又はエネルギー不均衡を特徴とする状態を治療するための医薬の製造における、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又はその誘導体、同族体若しくは類似体の発現を変更できる物質の使用に関する。
【０１３１】
また別の側面では、本発明は肥満症、摂食障害、糖尿病及び／又はエネルギー不均衡を特徴とする状態を治療するための医薬の製造にける、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又はその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物、若しくは模倣体の活性を変更できる物質の使用に関する。
【０１３２】
本発明のさらにべつの一側面は、肥満症、摂食障害、糖尿病及び／又はエネルギー不均衡を特徴とする状態を治療するための医薬の製造における、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４又はその誘導体、同族体若しくは類似体、又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又はその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体の使用に関する。
【０１３３】
本発明のさらに別の一側面は、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又はその誘導体、同族体若しくは類似体の発現を変更するのに用いる物質に関する。
【０１３４】
さらに別の一側面は、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４活性、又はその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体の活性を変更するのに用いる物質に関する。
【０１３５】
本発明のまた別の一側面は、肥満症、摂食障害、糖尿病及び／又はエネルギー不均衡の一つ以上の兆候を特徴とする状態の処置に用いられるＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又はその誘導体、同族体若しくは類似体、又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又はその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体に関する。
【０１３６】
本発明の関連する側面では、治療を受ける哺乳動物は、治療処置又は予防処置の必要なヒト又は哺乳動物であって良い。
【０１３７】
従って本発明は、一つの実施態様で、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４の発現、又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４の活性のモジュレーター及び一つ以上の薬学的に許容できる担体及び／又は希釈剤を含む組成物を意図する。別の実施態様では、この組成物はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又はその誘導体、同族体、類似体、若しくは模倣体及び一つ以上の薬学的に許容できる担体及び／又は希釈剤を含む。これらの組成物は、レプチン又はレプチン活性若しくはｏｂ発現のモジュレーターを含んでも良い。
【０１３８】
簡単に、このような組成物のこのような成分を全て、「活性成分」と呼ぶ。
【０１３９】
注射使用に適した剤形での活性成分の組成物には、滅菌水溶液（水溶性の場合）、及び滅菌注射溶液の即時調製用の滅菌粉末が含まれる。どの場合においても、その剤形は無菌でなかればならず、注入が容易である程度の流体でなければならない。この剤形は製造条件及び保存条件の下で安定していなければならず、細菌や真菌類などの微生物の汚染作用から保護されなければならない。
【０１４０】
担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、これらの適切な混合物、及び植物油などを含む溶媒又は他の培体であり得る。
【０１４１】
微生物の作用の防止は、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール（thirmerosal）などの様々な抗細菌物質及び抗真菌物質によって行なうことができる。多くの場合は、例えば糖や塩化ナトリウムなどの等張性物質を含めることが好ましい。注射可能組成物の持続的な吸収は、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなどの吸収を遅延させる物質を組成物に用いることで達成できる。
【０１４２】
滅菌注射溶液は、必要量の活性成分を、必要であれば任意選択的に他の成分と共に、適切な溶媒に混合し、次いで例えば濾過滅菌、照射又はその他の都合の良い手段で滅菌して調製する。滅菌注射溶液調製用の滅菌粉末の場合、好ましい調製法は真空乾燥並びにフリーズドライ技術である。この場合、活性成分プラス所望の付加的な成分の粉末が事前に濾過滅菌したその溶液から得られる、。
【０１４３】
ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４自体を含むＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４、及びＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４が適切に保護されている場合は、これらは例えば不活性な希釈剤又は同化可能な食用担体と共に経口投与しても良く、硬殻又は軟殻のゼラチンカプセル中に封入しても良く、又は圧縮して錠剤にしても良く、又は食事療法の食物に直接混ぜ込んでも良い。経口治療投与には、活性成分は賦形剤と混合して摂食可能な錠剤、バッカル錠、トローチ、カプセル、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、カシェ剤などの剤形で用いても良い。このような組成物及び製剤は、少なくとも１重量％の活性成分を含むべきである。組成物及び製剤のパーセンテージは、当然変えても良く、便宜的に単位重量の約５％から約８０％の間であって良い。このような治療に有用な組成物中の活性成分の量は、適切な投与量が得られるような量である。本発明の好ましい組成物又は製剤は、経口投与単位剤形が活性化合物を約０．１μｇ〜２０００ｍｇの間で含むように調製する。
【０１４４】
錠剤、トローチ、丸薬、カプセルなどは、次に挙げるものを含んでも良い。即ち、トラガカントゴム、アカシア、コーンスターチまたはゼラチンなどの結合剤、リン酸二カルシウムなどの賦形剤、コーンスターチ、片栗粉、アルギン酸などの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、及びショ糖、ラクトース又はサッカリンなどの甘味料、又はペパーミント、冬緑油、若しくはチェリー香料などの香料を添加しても良い。投与単位剤形がカプセルの場合は、上で述べた種類の原料に加え、液体の担体を含んでも良い。様々な他の原料を被覆剤として、又はその他の方法で投与単位の物理的剤形を修飾するために存在しても良い。例えば、錠剤、丸薬又はカプセルは、シェラック、糖又はその両方で被覆しても良い。シロップ又はエリキシルは、活性化合物、甘味料としてのショ糖、保存料としてのメチル及びプロピルパラベン、着色料及びチェリー香料やオレンジ香料などの香料を含んでも良い。当然、如何なる投与量単位剤形の調製に用いる如何なる材料も、薬学的に純粋で採用した量において実質的に無害でなければならない。さらに、該活性化合物は徐放性の調製品及び製剤に混合しても良い。
【０１４５】
薬学的に許容できる担体及び／又は希釈剤には、任意の及び全ての溶媒、分散媒、被覆剤、抗細菌物質並びに抗真菌物質、等張物質並びに吸収遅延物質などが含まれる。このような媒体及び物質の薬学的に活性な物質への使用は、当分野では良く知られている。如何なる便利な媒体又は物質も活性成分と配合禁忌である場合を除き、治療用組成物におけるそれらの使用が意図される。補充的な活性成分もまた、これらの組成物に混合することが出来る。
【０１４６】
投与の簡便性と投与量の均一性のため、非経口組成物を投与単位剤形で製剤することは、特に有用である。本明細書で用いるとき投与単位剤形とは、処置を受ける哺乳動物被験体への単位投与量として適した物理的に分離した単位を指し、それぞれの単位は必要な薬学的担体と共に所望の治療効果を生ずるように計算された事前に決められた量の活性物質を含む。本発明の新規な投与単位剤形の仕様は、（ａ）活性物質の独特の特性及び達成すべき特定の治療効果、及び（ｂ）本明細書で詳細に開示するような身体的な健康が損なわれた疾病状態を有する生体被験体の病気を治療するためのかかる活性物質を混合する当分野に固有の限界によって決定され、これらに直接依存する。
【０１４７】
主要な活性成分は、便利で効果的な投与のために、薬学的に許容できる適切な担体と共に、十分な量で投与単位剤形中に混合されうる。投与単位剤形は、例えば、主要な活性成分を例えば、０．５μｇから約２０００ｍｇの範囲の量で含むことができる。比率で表すと、活性成分は一般的には担体の約０．５μｇから約２０００ｍｇ／ｍｌまでで存在する。補充的な活性成分を含む組成物の場合は、投与量は該成分の通常の投与量及び投与方法を参考に決定される。
【０１４８】
大まかに言えば、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の効果的な量は、０．０１ｎｇ／ｋｇ／体重から１０、０００ｍｇ／ｋｇ／体重以上までの範囲である。代替量は、０．１ｎｇ／ｋｇ／体重から１０００ｍｇ／ｋｇ／体重以上までの範囲である。ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４は、処置対象の状態に応じて、分、時間、日、週、月又は年ごとに投与して良い。投与の経路は変えても良く、投与経路は静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、鼻腔内の投与、座薬、注入、点滴、経口又は他の便宜的な手段を含む。
【０１４９】
医薬組成物はまた、標的細胞をトランスフェクトできるベクターであって、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の発現、又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の活性を変更できる核酸分子を保持するベクターなどの遺伝子分子を含んでも良い。このベクターは、例えば、ウイルスベクターである。
【０１５０】
本発明のまた別の一側面は、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４、及びその誘導体及び同族体に対する抗体に向けられている。このような抗体は、モノクローナル又はポリクローナルであって良く、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４に対する自然発生的な抗体から選択しても良く、また特にＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４又はその誘導体又は同族体に対して特異的に形成させても良い。後者の場合、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４又はその誘導体又は同族体は、まず担体分子と結び付ける必要があることがある。本発明の抗体及び／又は組換えＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４又はその誘導体は、治療用物質又は診断用物質として特に有用である。
【０１５１】
例えば、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４及びその誘導体は、細胞死が発生するある種の自己免疫疾患で生ずるＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４に対して自然発生する抗体をスクリーニングするのに用いることができる。これらは、例えば一部の自己免疫疾患で発生することがある。または、特異的な抗体を用いてＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４をスクリーニングすることもできる。このような検定技術は当分野で良く知られており、例えばサンドイッチ検定及びＥＬＩＳＡが含まれる。
【０１５２】
本発明のＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４に対する抗体は、モノクローナル又はポリクローナルであって良く、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４に対して自然発生する抗体から選択して良く、またはＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４又はその誘導体に対して、特異的に形成させても良い。後者の場合、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４タンパク質は、まず担体分子と結び付ける必要があるかもしれない。代わりに、Ｆａｂ断片などの抗体の断片を用いても良い。さらに、本発明は組換え抗体及び合成抗体にも及び、抗体ハイブリッドにも及ぶ。「合成抗体」は本明細書では、抗体の断片及びハイブリッドを含むと考える。本発明のこの側面の抗体は免疫療法に特に有用であり、診断道具として又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の精製手段として用いても良い。
【０１５３】
例えば、特異的な抗体を用いてＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４タンパク質をスクリーニングすることができる。後者は、例えば細胞抽出物又は他の生体液中のＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４のレベルをスクリーニングする手段として、又は培養上清液から組換え手段で生産したＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４を精製する手段として、重要であろう。本明細書で意図する検定技術は当分野で良く知られており、例えばサンドイッチ検定やＥＬＩＳＡが含まれる
【０１５４】
上で議論した最初に述べた抗体に対する任意の第二抗体（モノクローナル、ポリクローナル、又は抗体の断片）を含めることは、本発明の範囲内である。第一抗体と第二抗体の両方を検出検定に用いても良く、また第一抗体を市販されている抗免疫グロブリン抗体と共に用いても良い。本明細書で意図する抗体には、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の任意の領域に特異的な任意の抗体が含まれる。
【０１５５】
ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体の両者は、酵素又はタンパク質で免疫化することによって得ることができ、いずれのタイプも免疫検定に利用できる。両方のタイプの血清を得る方法は当分野で良く知られている。ポリクローナル血清はあまり好ましくないが、適切な実験動物に有効量のＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４又はその抗原部分を注射し、この動物から血清を採取し、特異的な血清を任意の既知の免疫吸着技術で単離することにより、比較的簡単に調製できる。この方法で調製した抗体は、実際にどの型の免疫検定でも利用できるが、これらは一般的に、産物の不均一性の可能性があるためにあまり好まれない。
【０１５６】
免疫検定におけるモノクローナル抗体の使用は、モノクローナル抗体が大量に生産できることと産物の均一性のため、とりわけ好ましい。不死細胞と免疫原性のある調製品に対して感作されたリンパ球とを融合させて誘導したモノクローナル抗体生産用のハイブリドーマ細胞株を調製することは、当業者らに良く知られる技術により実施できる（例えば、ドゥイラードとホフマン、「ハイブリドーマに関する基礎事実」，Compendium of Immunology Vol. II, シュバルツ編，1981；クーラーとミルシュタイン、Nature 256: 495-499, 1975；クーラーとミルシュタイン、European Journal of Immunology 6: 511-519, 1976）。
【０１５７】
本発明の別の一側面は、被験体由来の生体試料中のＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４又はその誘導体若しくは同族体を検出する方法であって、複合体を形成するのに十分な時間及び条件の下で、該生体試料をＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４又はその抗原性誘導体若しくは同族体と接触させる工程、及び次いで該複合体を検出する工程を含む方法を意図する。
【０１５８】
この複合体の存在は、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の存在を示す。この検定は、肥満症または他の状態を発症させる傾向を測定するため、又は治療計画を監視するために、定量化又は半定量化しても良い。
【０１５９】
ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の存在は、ウェスタンブロットやＥＬＩＳＡの手法などによる幾つかの方法で検出しても良い。米国特許第４，０１６，０４３号、第４，４２４，２７９号及び第４，０１８，６５３号を参照することにより分かるように、広範囲の免疫検定技術が利用できる。これらには、当然、非競争タイプの単一部位検定、二部位検定、又は「サンドイッチ」検定、ならびに伝統的な競争的結合検定が含まれる。これらの検定はまた、標識された抗体の標的への直接結合をも含む。
【０１６０】
サンドイッチ検定は、中でも最も有用な、最も普通に用いられる検定法である。サンドイッチ検定技術の幾つかの変法が存在し、その全てが本発明で包含されることを意図する。簡潔に言えば、典型的な前向き検定では、非標識抗体が固体の基体の上に固定され、テスト対象の試料が結合分子と接触させられる。適切な期間、即ち抗体−ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４複合体が形成するのに十分な時間インキュベートした後、検出可能なシグナルを形成できるレポーター分子で標識したＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４に特異的な第二抗体を次に加えてインキュベートし、抗体−ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４−標識化抗体というもう一つの複合体を形成するのに十分な時間置いた。未反応の物質を全て洗い流し、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の存在をレポーター分子が産出する信号を観察して測定する。その結果は、可視シグナルの単純な観察による定性的なものであるか、又は既知量のハプテンを含む対照試料と比較することによる定量的なもののいずれであっても良い。前向き検定の変法には、試料と標識した抗体の両方が同時に結合抗体に加えられる同時検定が含まれる。これらの技術は、すでに明らかなように、任意の僅かな変法も含め、当業者らに良く知られている。本発明に基づき、試料は細胞抽出物、組織生検又は恐らくは血清、唾液、粘膜分泌物、リンパ液、組織流体及び呼吸流体を含む、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４を含むと思われるものである。従ってこの試料は、一般的には生体液を含む生体試料であるが、細胞培養液などの発酵液及び上清液にも及ぶ。
【０１６１】
固体表面は、通常はガラス又は重合体であり、最も普通に用いられる重合体は、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、塩化ポリビニル、又はポリプロピレンである。固体支持体は管、ビーズ、円盤又はマイクロプレート、又は免疫検定の実施に適した他のどんな形状であっても良い。結合工程は当分野では良く知られており、一般的には重合体−抗体複合体を固体表面への架橋結合、共通結合又は物理的吸着であり、次いでテスト試料のための調製品中で洗浄する工程から成る。テスト対象の試料の一部を次いで固相複合体に添加し、抗体中に存在するサブユニットの結合を可能にするのに十分な時間（例えば、２〜４０分又はより都合がよければ一晩）及び適切な条件（例えば、室温から約３７℃まで）の下でインキュベートする。インキュベーション時間に続き、抗体サブユニット固相を洗浄し、乾燥し、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の部分に特異的な第二抗体とインキュベートする。この第二抗体は、第二抗体のＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４への結合を示すのに用いられるレポーター分子に連結する。
【０１６２】
また別の方法は、生体試料中の標的分子を固定化し、次いで固定化した標的をレポーター分子で標識した又は標識していない特異的な抗体に曝す工程を含む。標的の量とレポーター分子のシグナルの強さに応じて、結合した標的が抗体との直接標識化により検出されることがある。また、第一抗体に特異的な標識した第二抗体は、標的−第一抗体複合体に曝され、標的−第一抗体−第二抗体の三次複合体を形成する。この複合体は、レポーター分子が発するシグナルにより検出される。
【０１６３】
本明細書で用いる「レポーター分子」は、その化学的性質により、抗原結合抗体を検出できる分析的に同定可能なシグナルを生ずる分子を意味する。検出は定性的であるか又は定量的であるかのいずれかである。この種の検定で最も普通に用いられるレポーター分子は、酵素、発蛍光団、又は放射性核種を含む分子（即ち、放射性同位元素）、及び化学発光分子である。
【０１６４】
酵素免疫検定の場合、酵素は一般的にはグルタルアルデヒド又は過ヨウ素酸により、第二抗体に結合させる。しかしながら、容易に分かるように、様々な別の結合技術が存在し、当業者らには容易に利用可能である。普通に用いられる酵素には、西洋わさびペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ及びアルカリホスファターゼなどが含まれる。特異的な酵素と共に用いられる基質は、一般的には対応する酵素により加水分解されて、検出可能な色の変化を生ずることで選択される。適切な酵素の例には、アルカリホスファターゼ及びペルオキシダーゼが含まれる。上述の色素生産性基質ではなく、蛍光産物を生ずる蛍光生産性基質を採用することも可能である。全ての場合、酵素で標識した抗体を第一抗体ハプテン複合体に添加し、結合させ、次いで過剰な試薬を洗い流す。次いで、適切な基質を含む溶液を抗体−抗原−抗体の複合体に添加する。この基質は、第二抗体と連結した酵素と反応し、定性的な可視性シグナルを生じ、これは通常分光光度計により、さらに定量化して試料中に存在したハプテンの量を特定できる。「レポーター分子」はまた、ラテックスビーズ上の赤血球などの細胞凝集又は凝集の阻害の使用にも及ぶ。
【０１６５】
代わりに、フルオレセイン及びローダミンなどの蛍光性化合物を、その結合能力を変えることなく抗体に化学的に結合させても良い。ある特定の波長を持つ光で照射することにより活性化した場合、蛍光色素で標識された抗体は光エネルギーを吸収し、分子に励起状態を誘発し、続いて光学顕微鏡で可視的に検出できる特徴的な色の光を発する。ＥＩＡの場合のように、蛍光で標識された抗体を第一抗体−ハプテン複合体に結合させる。結合していない試薬を洗い流した後、残りの三次複合体を次に適切な波長の光に曝す。蛍光が観察されれば目的のハプテンが存在する。免疫蛍光技術及びＥＩＡ技術は共に、当分野で十分確立されており、本発明の方法にとって特に好ましい。しかしながら、放射性同位元素、化学発光分子又は生物発光分子などの他のレポーター分子を採用しても良い。
【０１６６】
本発明はまた、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４、又はその誘導体を検出するための、ＰＣＲ分析などを含む遺伝子検定をも意図する。
【０１６７】
本発明の検定法はまた、ｏｂ又はレプチンとの関連でＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４、又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の測定にも及ぶ。
【０１６８】
本発明は、次の限定的でない実施例でさらに記載する。
【実施例１】
【０１６９】
プサモミス・オビーサスＡＧＴ−１０９の部分配列
ＡＧＴ−１０９は、糖尿病及び糖尿病でないプサモミス・オビーサス由来の視床下部ｃＤＮＡのディファレンシャルディスプレイＰＣＲを用いて同定した。
【０１７０】
部分的なヌクレオチド配列は次のとおりである。
GATTTTGGTTGGCAATAAATGTGACTTGGAAGATGAGCGGGTAGTTGGCAAAGAACAAGGC
CAGAATTTAGCAAGACAGTGGTGTAACTGTGCCTTTTTAGAATCTTCTGCAAAGTCAAAGA
TCAACGTTAATGAGGTCACTTTTCACAACTATGCTTATAGACTCTTATTTTAAATACCTGA
TATTTTATGATCTGGTCAGACAGATAAATAGAAAAACACCAGTG  ［配列番号：１］
【実施例２】
【０１７１】
ＡＧＴ−１０９遺伝子の発現
実時間ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）を用いた遺伝子発現の研究は、給餌した対照動物と比べて絶食させたＡ動物とＢ動物におけるＡＴＧ−１０９遺伝子の発現には有意な差異がある（グループＡ：ｐ＜０．００１、グループＢ：ｐ＝０．０１８）が、Ｃ動物（ｐ＝０．１９、図１）では有意な差異がなかったことを示した。給餌又は絶食状態のグループＡ、Ｂ及びＣの動物の間では有意な差異はなかった。全ての動物からのデータが集まってみると、給餌した動物と比べて絶食させた動物でのＡＧＴ−１０９の発現は有意に増加した（ｐ＜０．００１、図２）。ＡＧＴ−１０９の発現とインスリン、体重、体脂肪、又はブドウ糖レベルの間には有意な相関関係はなかった。実験を繰り返すと、視床下部ＡＧＴ−１０９の発現は２週間エネルギーを制限したグループＡ、Ｂ又はＣの動物では、又は全ての対照とすべての制限した動物の間には、有意な差異はなかった。対照動物では、グループＡ動物におけるＡＧＴ−１０９の発現はグループＣ対照動物における発現よりも有意に高く（ｐ＝０．００８）、対照のグループＢ動物よりも高い傾向があった（ｐ＝０．０７）（図３）。
【０１７２】
対照動物では、ＡＧＴ−１０９の発現と、パーセント体脂肪（ｐ＜０．０５）やプレインスリン濃度（ｐ＝０．０２６）との間には負の相関関係もあった。全ての動物を併せると、ＡＧＴ−１０９の発現とプレグルコースの間には有意の負の関係（ｐ＝０．０３７）があり、そしてプレインスリンとの間には負の関係の傾向があった（ｐ＝０．０７）。
【実施例３】
【０１７３】
ＡＧＴ−１０９遺伝子の相同性
ジェンバンクｎｒとｄｂｅｓｔデータベースによるＢＬＡＳＴ（バージョン２．２．１[２００１年4月１３日］）を用いた有意な一致により、ＡＧＴ−１０９がｒａｓオンコジーン・ファミリーのメンバーであるヒトＲＡＰ１Ａ（寄託番号  ＡＬ０４９５５７）と９６％の相同性を共有することが分かった。ＡＧＴ−１０９はウシのｒａｓ・ｐ２１様ＧＴＰ結合タンパク質と同様の相同性（９５％）を共有する。
【０１７４】
ｒａｓオンコジーンは至る所で発現する進化的に保存された分子スイッチであり、これは細胞外シグナルを様々な細胞反応に連結する（キタヤマら、Cell 56: 77-84, 1989）。ｒａｓオンコジーンは、アミノ酸の置換が偽のＧタンパク質の連続活性化をもたらすことを除いては正常なＧタンパク質と類似するタンパク質をコードする。Ｇタンパク質は通常はＧＴＰと結合し加水分解するが、突然変異がそのＧＴＰアーゼ活性を損ね、そのため正常な遮断メカニズムが妨害される。ＲＡＰ１Ａは古典的なｒａｓタンパク質と約５０％のアミノ酸同一性を共有する（ボスら、Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2(5): 369-377, 2001）。
【０１７５】
Ｒａｐ１（ＫＲＥＶ１、ＫＲＥＶ−１並びにＳＭＧＰ２１としても知られる）は、Ｒａｓの最も近い類縁体であり、Ｒａｓ仲介型シグナル伝達を調節することがある。ＲＡＰとｒａｓタンパク質の最も著しい差異はアミノ酸６１にあり、ｒａｓではグルタミン、ＲＡＰタンパク質ではスレオニンである（キタヤマら、1989，上記）。ＲＡＰ１Ａは染色体１ｐ１３．３に位置付けされており、１４ｑ２４．３に偽遺伝子（ＫＲＥＶ１Ｐ）がある（タカイら、Cytogenet. Cell Genet. 63: 59-61, 1993）。
【０１７６】
ＲＡＰ１Ａは、細胞質性であり、ｒａｐサブファミリーに属すると同定された。これはＧＴＰアーゼ（ＧＴＰをＧＤＰとオルトリン酸塩に加水分解する酵素活性を示す）であり、細胞周期制御とシグナル伝達経路に関与すると考えられる。Ｒａｐ１は幾つかの調節タンパク質を介して細胞外シグナルにより活性化される。これは増殖及び分化の変更から分泌、インテグリン媒介細胞接着及び形態形成にまで及ぶ多様なプロセスで機能し得る（ボスら、2001, 上記）。
【０１７７】
Ｒａｓファミリー、小ＧＴＰアーゼのＲａｂサブファミリー、ＲＡＳ小ＧＴＰアーゼのＲａｓサブファミリー、Ｒａｓ様小ＧＴＰアーゼのＲｈｏ（Ｒａｓ相同性）サブファミリー、及び小ＧＴＰ加水分解酵素のＲａｎ（Ｒａｓ関連の核タンパク質）／小ＧＴＰアーゼのＴＣ４サブファミリーを含む、ＲＡＰ１Ａタンパク質において、いくつかの領域が同定されている。
【０１７８】
これらの領域は、小胞輸送（ウッドマン、Curr. Biol. 8(6): R199-210, 1998；ラーザールら、Trends Biochem. Sci. 22(12): 468-472, 1997；ノヴィックとツェリアル、Curr. Opin. Cell Biol. 9(4): 496-504, 1997；ホーブラックら、EMBO J. 6(13): 4049-4053, 1987；ガルウィッツら、Nature 306(5944): 704-707, 1983）、受容体チロシンキナーゼ及びＧタンパク質受容体のタンパク質キナーゼカスケードへの連結（ダウンワード、Curr. Opin. Genet. Dev. 8(1): 49-54, 1998；ロイド、Curr. Opin. Genet. Dev. 8(1): 43-48, 1998；ウィッティングホーファーとパイ、Trends Biochem. Sci. 16(10): 382-387, 1991；シュリッヒティングら、Nature 345(6273): 309-315, 1990；パイら、Nature 341(6239): 209-214, 1989；シーら、Nature 287(5784): 686-691, 1980）及び核膜孔を通るタンパク質の能動輸送（リチャードら、Science 276(5320): 1842-1844, 1997；ヨネダ、J. Biochem. 121(5): 811-817, 1997；ラウンズベリーら、J. Biol. Chem.. 271(51): 32834-32841, 1996；ケップとシルバー、Cell 87(1): 1-4, 1996；シェフゼクら、Nature 374(6520): 378-381, 1995；マツモトとビーチ、Cell 66(2): 347-360, 1991）を含む、様々な機能に関連付けられている。
【実施例４】
【０１７９】
プサモミス・オビーサスＡＧＴ−４０７の部分配列
ＡＧＴ−４０７は、糖尿病及び糖尿病でないプサモミス・オビーサス由来の肝臓ｃＤＮＡのサプレッション・サブトラクティブ・ハイブリッド形成（ＳＳＨ）［明示的ディファレンス・アナリシス（ＲＤＡ）としても知られる］により同定した。
【０１８０】
部分的なヌクレオチド配列は次のとおりである。
GAGGGATGNGGACAATGGCCTTTCCTTGTCATCTTTAAGTGACTGGTACAACACTTCTGTT
ATGAGAAAAGTGAAATTTTATGATGAAAACACAAGGCAGTGGTGGATGCCAGATACTGGAG
GAGCCAACATCCCAGCTCTGAATGAGCTGCTGTCTGTATGGAACATGGGGTTCAGTGACGG
CCTGTATGAAGGGGAATTTGTCCTGGCAAACCATGACATGTATTATGCGTCGGGGTGCAGC
ATCGCCAGGTTTCCAGAAGATGGTGTTGTGATCACACAGACTTTCAAGGATCAAGGATTGG
AGGTCTTAAAACAAGAGACAGCAGTTGTTGAAAATGTTCCCATTTTGGGGCTTTATCAGAT
TCCAGCTGAAGGTGGAGGTCGTATTGTGCTGTATGGAGACTTCAACTGCTTGGATGACAGT
CACAGACAGAAGGACTGNTTTTGGCTTCTGGATGCGCTCCTTNAGTACCTCGG ［配列番号：２］
【実施例５】
【０１８１】
ＡＧＴ−４０７遺伝子の発現
ＡＧＴ−４０７は通常は分布しなかった。非パラメトリック（クラスカル・ワリス）検定により、グループ間の有意な差異が示された（ｐ＝０．０３６）。マンホイットニー検定を用いると、グループＡの絶食動物ではＣの給餌した動物（ｐ＝０．０１４）及びＢの給餌した動物（ｐ＝０．０２９、図４）よりも有意に高い遺伝子発現があることが分かった。グループ間で他の差異は見出されなかった。
【０１８２】
マンホイットニー検定を用いると、絶食させた動物では、給餌した動物と比べて有意に高いＡＧＴ−４０７の発現があった（ｐ＝０．００３）（図５）。
【実施例６】
【０１８３】
ＡＧＴ−４０７遺伝子の相同性
ＡＧＴ−４０７は、マウスのサイト１プロテアーゼ、マウス及びラットのズブチリシン／ケキシンアイソザイムＳＫＩ−１前駆体及びヒトの膜結合転写因子プロテアーゼ、サイト１及びＫＩＡＡ００９１遺伝子（ＢＬＡＳＴＮ  バージョン２．２．１［２００１年４月１３日］）との強いヌクレオチド相同性を示した。
【０１８４】
サイト１プロテアーゼは、ＳＫＩ−１及びＫＩＡＡ００９１と同じ遺伝子であり、膜結合転写因子プロテアーゼ、サイト１、サイト１プロテアーゼ（サブチリシン様、ステロール調節、ステロール調節エレメント結合タンパク質を切断する）及びサブチリシン／ケキシンアイソザイム−１プレプロタンパク質としても知られる。
【０１８５】
サイト１プロテアーゼ（Ｓ１Ｐ）は、小胞体管腔においてステロール調節エレメント結合タンパク質（ＳＲＥＢＰ）を切断しＳＲＥＢＰの転写活性アミノ末端断片の膜からの放出を開始する、ズブチリシン関連プロテアーゼである。第二プロテアーゼ（サイト２プロテアーゼ）もこのプロセスに関与するが、サイト１プロテアーゼが作用した後にのみ関与する。
【０１８６】
ＳＲＥＢＰは、膜に埋め込まれたタンパク質で、核に移動する活性部分をタンパク質分解により放出する必要がある。ＳＲＥＢＰは、コレステロール及び脂肪酸の生合成経路におけるＬＤＬ受容体と複数の酵素をコードする遺伝子の発現を調節するためのフィードバックシステムを形成する、転写調節タンパク質である。
【０１８７】
核の内部で、ＳＲＥＢＰはコレステロール生合成経路（ＨＭＧ・ＣｏＡシンターゼ、ＨＭＧ・ＣｏＡ還元酵素、ファルネシル二リン酸シンターゼ、スクアレンシンターゼ、及びＬＤＬ受容体などの調節遺伝子）、及び脂肪酸生合成（アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）、脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳ）、ステアロイルＣｏＡデサチュラーゼ−１（ＳＣＤ））に関与する遺伝子の転写を活性化する。
【０１８８】
成熟したＳＲＥＢＰを欠いている細胞は、コレステロール合成とＬＤＬ受容体の活性をほぼ完全に阻止され、脂肪酸合成の速度が５０％だけ減少する。ＳＲＥＢＰ１ａイソ型を過剰に発現する動物は、コレステロール及び脂肪酸を過剰生産し、トリグリセリド（ＴＧ）及びコレステロールエステルが増えるために肝臓のサイズが肥大する。しかしながら、血漿コレステロール及びＴＧは、恐らく肝臓でＬＤＬ受容体の活性が増加するため、減少する。キムら，1998は、レプチンがＳＲＥＢＰ応答遺伝子であるという証拠を示している。
【０１８９】
ヒトのサイト１プロテアーゼは染色体１６に位置し、区間１６ｑ２４にマッピングされている。この遺伝子は長さが６０ｋｂより長く、２３のエキソンと２２のイントロンを含む。この遺伝子のエキソン１内にある転写開始部位は、エキソン２にある開始コドンとは離れている。エキソン／イントロン構造の分析により、Ｓ１Ｐ遺伝子が機能単位のモザイクから成ることが明らかになった。即ち、エキソン１は５’非翻訳領域をコードし、エキソン２はアミノ末端シグナル配列をコードし、エキソン２と３はＳ１Ｐが内分子切断により自己活性化する場合に放出されるプレペプチド配列をコードする。エキソン５〜１０は、触媒活性に必要なズブチリシン−相同領域をコードし、エキソン２３は膜貫通領域をコードする。（ナカジマら、2000，上掲）。図６はヒトＳ１Ｐ遺伝子のゲノム構造を表す。
【０１９０】
推定上のプロモーター領域には、ＡＤＤ１／ＳＲＥＢＰ−１並びにＳｐ１及びＡＰ２部位に対するの結合部位を含む、極めてＧ／Ｃが豊富な領域があった。従って、Ｓ１Ｐ遺伝子の発現は、細胞内脂質代謝に必須の遺伝子の発現の重要な調節因子であるＳＲＥＢＰ−１の制御下にあると言って良い。
【０１９１】
図７に示すのは、エキソンの構成とＳ１Ｐの機能領域の間の関係である。翻訳開始コドン（ＡＴＧ）はエキソン２に存在し、翻訳停止コドン（ＴＧＡ）はエキソン２３に存在する。上向き矢印はＳ１Ｐプロセシング部位を表し、ＳＳはシグナル配列、ＴＭは膜貫通領域を表す。
【実施例７】
【０１９２】
プサモミス・オビーサスＡＧＴ−４０８の部分配列
ＡＧＴ−４０８は、糖尿病及び非糖尿病のプサモミス・オビーサス由来の肝臓ｃＤＮＡのＳＳＨ（ＲＤＡ）により、同定した。
【０１９３】
部分的なヌクレオチド配列は次のとおりである。
CCGCCCGGGCAGGACTTGAGNCCACCCCTGTAGATCTGGCTTCTATTTCTCCAGCTATTGC
NGTCCTCAAGTAAAGGTCTGCAGCTAGCAGGCAGGTGTAAACCAGCCATTAAGTCTTGGCA
GATACCNCACTGTGGGTGTTAGATCTAGATCATTAAAATATTGGTAAAAAGTGATCTATCA
TGAGATTAAGCTTCCTAAAGAAGAAAGTAGCTATATANCAAGAGTCTATTAGAAGAAAGTA
GAGGAGCTGCTGAGTAAAAATCCAGCTGTATTAAGGCAAGGAACTGGAATATTGCAAAAGG
ATACACCTCCATCTCTGAGTTTGTTTTAGATGGAAAAAGTGGAGTGGGAGTGGAAAGCTCT
TTAAGGTCAGATCTTTGATAGATGATGCTCTGCATAGACATTGGTGCTGTAGAACTTAATC
AAATTGGAGCATGCATGGGCATTACCTGGGGTTCTCGTTAAACTTCTTTGTTATCATGAAA
TTCTGGGCTGGGACACAAAGGAAGCATTTGAGAAAGCTCTGCTGCGNCTAATGCCACTTTG
AGTTGTAAGAACCTCCTAGAATGTCAGGAGGACAAGGTGCCAGAAGCATATGCACTAANCT
CAATATGAAGATAAGGTANGGGACTANAAAGGGATTCANAT ［配列番号：３］
【実施例８】
【０１９４】
ＡＧＴ−４０８遺伝子の発現
ＡＧＴ−４０８は、正規分布した。ＬＳＤポストホック検定による一元配置ＡＮＯＶＡでは、グループＡの給餌した動物は、絶食したグループＡ動物（ｐ＝０．００２）と給餌させたグループＢ動物（ｐ＝０．０４１、図８）よりも遺伝子発現が有意に低かった。全ての動物を合わせると、有意な差異はなかった（図９）。
【実施例９】
【０１９５】
ＡＧＴ−４０８遺伝子の相同性
ＡＧＴ−４０８の配列は、公共のデータベース（ＢＬＡＴＮバージョン２．２．１［２００１年4月１３日］）のいずれとも有意な相同性を示さなかった。
【実施例１０】
【０１９６】
プサモミス・オビーサスＡＧＴ−４０９の部分配列
ＡＧＴ−４０９は糖尿病及び糖尿病でないプサモミス・オビーサスに由来する肝臓ｃＤＮＡのＳＳＨ（ＲＤＡとも言う）で同定した。
【０１９７】
部分的なヌクレオチド配列は次のとおりである。
CCTCACACCAGTTCTTTTCTTCATAATGGACCGGATATAAAGCTTCTTGGCATCCCAGAAC
TTTGGCATACAGCTCACAGATTTTCTTCTTCCTCATTTCTTTTTGTAGCTTAGCAAGTCGA
TCTGCTTTCCGGGCAAGTATGAAGCCCTTGATGGCAGGAAATGATCCATCTGGTTTGGTAT
CATCCAAAGTGATTGAAATTGGAGCTTCCTCATCTTCAATTAGCATGCAGCCACAATAGTC
CTTTTTCTTCCAGAAGGCTTCCTTGTAATACACCATGCACTTTATTACAGCACCCATTGGT
AGACGCTGAATTAACTGGTTTCTCTCAGATGGAAGCTCTGGTTTAAAGTGGATCTTGGTAG
TCAAAGCTGGTGGGATGGCACTAATTACGTATTTGCACTCATAGTGGTCATGATTCAGTGT
CTCTACAATGAT  ［配列番号：４］
【実施例１１】
【０１９８】
ＡＧＴ−４０９遺伝子の発現
ＡＧＴ−４０９は正規分布した。ゲームズ・ハウェルポストホック検定による一元配置ＡＮＯＶＡにより、グループＡの給餌した動物が絶食のグループＡ（ｐ＝０．０４８）、Ｂ（ｐ＝０．０２９）及びＣ（ｐ＝０．０２４）動物よりも有意に高い遺伝子発現をすることが見出された（図１０）。別個の試料のｔ−検定では、給餌した動物は絶食させた動物（ｐ＜０．００１、図１１）よりも有意に高い遺伝子発現をすることが示された。
【実施例１２】
【０１９９】
ＡＧＴ−４０９遺伝子の相同性
ＡＧＴ−４０９はラット及びヒトのモノアミンオキシダーゼＡ（ＭＡＯＡ）遺伝子との強いヌクレオチド相同性を示した（ＢＬＡＳＴＩＮ  バージョン２．２１［２００１年４月１３日］）。ＭＡＯＡはまた、アミンオキシダーゼ（フラビンを含む）としても知られている。ヒトＭＡＯＡ遺伝子は染色体Ｘ上に位置し、区間Ｘｐ１１．４〜１１．３に位置付けされている。
【０２００】
別別の遺伝子によりコードされる、Ａ及びＢと命名された二つのモノアミンオキシダーゼのイソ型が存在する（コッヘルスペルガーら，J. Neurosci. Res. 16: 601-616, 1986、ランら，Genomics 4: 552-559, 1989）。ＭＡＯＡ及びＭＡＯＢは、アミノ酸レベルで７０％相同である。いずれの酵素も生体起源のアミンの酸化的脱アミノを触媒する場所である、外側のミトコンドリア膜に局在する（ブルナーら，Science 262: 578-580, 1993a）。これらは肝臓及び脳を含む殆どの細胞型で見出される（シュナイトマンら，J. Cell Biol. 32(3): 719-735, 1967）。
【０２０１】
マウスでのＭＡＯＡノックアウト研究では、セロトニン濃度が９倍にまで上昇し、セロトニン様の免疫反応性が子供の脳のカテコールアミン作動性ニューロン中に存在した。子供と成人の脳では、ノルエピネフリン濃度が２倍にまで上昇し、細胞構築上の変化が体性感覚皮質で観察された。震え、体勢の立て直しの困難及び恐怖を含む子供の行動変化は、セロトニン合成抑制物質であるパラクロロフェニルアラニンにより回復した。成人では、男性における攻撃性の増強を含む、異なる行動症候群が明らかになった（ケーシーズら，Science 268: 1763-1766, 1995）。同様の結果がシーら（Annu. Rev. Neurosci. 22: 197-217, 1999）により実証された。肥満症と糖尿病が関わる表現型は、これらのＭＡＯＡノックアウト研究では検討されなかった。
【０２０２】
ＭＡＯＡは染色体Ｘｐ１１．４〜ｐ１１．２３に位置するとされている。シムズら（Neuron 2: 1069-1076, 1989）はノリエ病を患う患者はＸｐ２１〜ｐ１１の範囲に極微小な欠失があり、そのためＭＡＯＡ遺伝子が欠如していることを実証した。精神遅滞、自衛的態度、異常な性成熟、末梢性自立神経障害、運動機能亢進、発作及び睡眠障害を含むノリエ病の特徴のいくつかは、ＭＡＯＡ遺伝子又はＭＡＯＢ遺伝子における突然変異のためであると思われる。肥満症と糖尿病に関する表現型は、これらの患者では検討されなかった.
【０２０３】
Ｘ連結した非異型症の穏和な精神遅滞の形態の連鎖解析は、Ｘｐ１１．４〜ｐ１１．２３でＭＡＯＡに連結するための、３．６９という最大多点ロッドスコアを示した（ブルナーら，1993a，上掲）。影響を受けた男性は全て、特徴的な異常な行動、特に攻撃そして時には暴力を見せた。他のタイプの衝動的な行動には、放火、強姦未遂、及び露出症が含まれる。自殺未遂が一つの症例で報告された。三人の影響を受けた男性の尿検査の結果、著しいモノアミン代謝障害が示された。血小板ＭＡＯＢ活性は正常であった。後の発表でブルナーら（Am. J. Hum. Genet. 52: 1032-1039, 1993b）は、影響を受けた５人の男性には、グルタミンを停止コドンに変える、ＭＡＯＡ構造遺伝子の８つのエキソンでの点突然変異があったと報告した。
【０２０４】
ＭＡＯＡ阻害薬は、恐怖性障害の治療に効果的である。ＭＡＯＡ遺伝子のプロモーターにおける反復多型との関連研究は、恐怖性障害（デッカートら，Hum. Molec. Genet. 8: 621-624, 1999）との有意な関連を示した。いくつかの研究では、ＭＡＯＡ多型と二極性情動障害の間には有意な関連性があることが分かった（リムら，(レター）Am. J. Hum. Genet. 54: 1122-1124, 1994、カワダら，（レター）Am. J. Hum. Genet. 56: 335-336, 1995）が、他の研究では分からなかった（ノーゼンら、（レター）Am. J. Hum. Genet. 57: 975-977, 1995）。
【０２０５】
イン・ビトロの研究では、ＭＡＯＡ活性が対照の被検体で５０倍を超えて変化できることが実証された（ブレイクフィールドら、Psychiatry Res. 2(3): 307-314, 1980）。ＭＡＯＡ活性の増加は、加齢及び糖質コルチコイド処理と共に発生する（エデルシュタインとブレイクフィールド、Cell Mol. Neurobiol. 6(2): 121-150, 1986）。ホタミスリギルとブレイクフィールド（Am. J. Hum. Genet. 49: 383-392, 1991）は、ＭＡＯＡに対するｍＲＮＡのコード配列を決定した。二つのＲＦＬＰとＭＡＯＡ遺伝子の非コード領域に位置するもう一つのＲＦＬＰを用いると、ヒトの男性の繊維芽細胞株中の特定の対立遺伝子とＭＡＯ活性レベルの間に、統計的に有意な関連性があることを見出した。彼らはこれを、ＭＡＯＡ遺伝子はそれ自体が、明らかに部分的には非コード領域の調節因子による、活性レベルの主要な決定因子であることを示すと解釈した。
【実施例１３】
【０２０６】
プサモミス・オビーサスＡＧＴ−６０１の部分配列
ＡＧＴ−６０１は、コンピュータ上で発見した。
【０２０７】
部分配列は次のとおりである。
ATGGCTAACAGGGGCCCGAGCTATGGTTTAAGCCGCGAGGTGCAGGAGAAGATCGAGCAG
AAGTATGACGCGGACCTGGAGAACAAGCTGGTGGACTGGATCATCCTACAGTGTGCCGAG
GACATAGAGCACCCGCCCCCGGGCAGGGCCCATTTTCAGAAATGGTTGATGGACGGGACG
GTCCTGTGCAAGCTGATAAACAGTTTATACCCACCAGGACAAGAACCCATCCCCAAGATC
TCAGAGTCAAAGATGGCTTTTAAGCAGATGGAGCAGATCTCTCAGTTCCTGAAAGCAGCC
GAGGTCTATGGTGTCAGGACCACTGACATCTTTCAAACAGTGGATCTGTGGGAAGGGAAG
GACATGGCAGCTGTTCAGAGGACTCTGATGGCTCTAGGCAGTGTTGCTGTTACCAAGGAT
GATGGCTGCTACAGGGGAGAGCCATCCTGGTTTCACAGGAAAGCCCAGCAGAATCGGAGA
GGATTTTCAGAGGAGCAGCTTCGCCAGGGACAAAACGTCATAGGCCTGCAGATGGGTAGC
AACAAGGGTGCATCCCAGGCAGGCATGACGGGGTATGGGATGCCCCGGCAGATCATGTAA
［配列番号：５］
【実施例１４】
【０２０８】
ＡＧＴ−６０１遺伝子の発現
図１２は、Ｃの給餌した動物がＡとＢの給餌した動物（それぞれ、ｐ＝０．００４、ｐ＝０．００５）と有意に異なっただけでなく、Ａ、Ｂ及びＣの絶食させた動物（それぞれ、ｐ＜０．００１、ｐ＝０．００７、ｐ＝０．００１）と有意に異なったことを示す。図１３は、全ての給餌した動物と絶食させた動物（ｐ＝０．０１５）の間での視床下部におけるＡＧＴ−１０６遺伝子の発現に、有意な差異が見られることを示す。給餌した動物におけるＡＧＴ−６０１遺伝子の発現は、ブドウ糖レベルの対数（ｐ＝０．０２７、図１４）及び体脂肪パーセント（ｐ＝０．０４０、図１５）と正に相関する。
【０２０９】
生理的食塩水で処理したグループ、３μｇのビーコン（ＰＣＴ／ＡＵ９８／００９０２［ＷＯ  ９９／２３２１７］で処理したグループ、３０μｇのビーコンで処理したグループ、及びＮＰＹとビーコンで処理したグループ（ｐ＝０．０１５、図１６）の間での視床下部におけるＡＧＴ−６０１遺伝子の発現で有意の差異が観察された。生理的食塩水で処理した動物はＮＰＹとビーコンで処理した動物（ｐ＝０．０２８）と有意に異なり、ＮＰＹとビーコンで処理した動物は、３μｇのビーコンで処理した動物及び３０μｇのビーコンで処理した動物（それぞれ、ｐ＝０．００４、ｐ＝０．００５）と有意に異なった。このことは、ＮＰＹ及びビーコンのＩＣＶ投与が、視床下部でのＡＧＴ−６０１遺伝子の発現レベルを増大させることを示す。
【０２１０】
有意な差異は、インスリンで処理した全てのグループ（ｐ＝０．０２９）の間でのＧＴ１７細胞におけるＡＧＴ−６０１遺伝子の発現で観察された（図１）。０ｎＭのインスリンで処理したグループは１ｎＭ、１０ｎＭ、１００ｎＭ、及び１０００ｎＭで処理したグループと有意に異なった（それぞれ、ｐ＝０．００５、ｐ＝０．０１６、ｐ＝０．００６、ｐ＝０．００６）。全体的に、インスリンによる処理はＧＴ１７細胞におけるＡＧＴ−６０１遺伝子の発現を減少させる。
【０２１１】
異なるブドウ糖処理をしたグループ間のＡＧＴ−６０１遺伝子の発現では、有意な差異は観察されなかった。このことは、ブドウ糖がＧＴ１７細胞におけるＡＧＴ−６０１遺伝子の発現に対して影響を与えないことを示す。
【実施例１５】
【０２１２】
ＡＧＴ−６０１遺伝子の相同性
プサモミス・オビーサスのＡＧＴ−６０１ヌクレオチド配列は、ヌクレオチドレベル（ＢＬＡＳＴＮ  バージョン２．２．１［２００１年４月１３日］）とアミノ酸レベルの両方で、マウス、ラット及びヒトのＡＧＴ−６０１と強い相同性を有する。
【０２１３】
ＡＧＴ−６０１は、ラットで同定された（レンら，Molecular Brain Research 22: 173-185, 1994）２０６アミノ酸のニューロン特異的タンパク質である。今のところ、ＡＧＴ−６０１については殆ど発表されておらず、その機能は分かっていない。ＡＧＴ−６０１は、最初はウェスタンブロット分析により、ラットの脳で検出された。これは肝臓、腎臓、精巣、又は心臓（レンら，1994、上掲）では見つからなかった。このタンパク質はラットの脳内に広く、及び特異的に分布するが、このことは該タンパク質に必須の且つ高度に分化した機能がある可能性を示している（レンら，1994、上掲）。中心核及び分界条の強い染色は、扁桃体中に高レベルのＡＧＴ−６０１があることを示す。脳のこの領域は、幾つかの内分泌反応を制御し、複合行動機能を調節すると考えられている（レンら，1994、上掲）。
【０２１４】
ＡＧＴ−６０１、カルポニン及びＳＭ２２αの間には、高度の配列相同性がある。カルポニンは、それがアクチン、トロポミオシン及びカルモジュリンと結合する部位である殆どの脊椎動物の平滑筋に存在するトロポニン様の分子である（タカハシら，Biochem. Biopnys. Res. Commun. 141: 20-26, 1986；タカハシら，Hypertension 11: 620-626, 1988）。カルポニンはチューブリンとの結合によって、カルシウムに非依存の形で脳微小管とも相互作用する。このことは微小繊維と微小管の間での相互作用の調節因子としての潜在的な役割を示す（フジイら，Journal of Biochemistry 125: 869-875, 1999）。トランスゲリン（transgelin）とも呼ばれるＳＭ２２αは、平滑筋を含む組織で主に発現する球状タンパク質である（カモレッティ−メルカードら，Genomics 49: 452-457, 1998）。トランスゲリンという名は、このタンパク質の形態変化及び形状変化に感受性のアクチンゲル化機能を反映している（ローソンら，Cell Motil. Cytoskeleton 38: 250-257, 1997）。これらのタンパク質とＡＧＴ−６０１の間の配列相同性は、神経細胞におけるＡＧＴ−６０１と細胞骨格の相互作用の可能性を指し示す。
【０２１５】
ＡＧＴ−６０１はまた、ヒトで発見された新規なタンパク質、ｈＮＰ２２とも、高度に相同的である（＞９６％）（デパーズら，プロシーディング・オブ・オーストラリアン・ニューロサイエンス・ソサイエティ：２１回年会， 2001，ブリスベイン・コンベンションセンター，オーストラリアン・ニューロサイエンス・ソサイエティ，p. 191, 2001）。ｈＮＰ２２配列の３’領域は、ジェンバンク（寄託番号  ＡＦ１１２２０１）で列挙されたヒトＡＧＴ−６０１ｍＲＮＡの１００５個の塩基対配列で完全に整列する（ファンら，Journal of Neurochemistry 76: 1276-1281, 2001）。しかしながら、重大な例外がある。即ち、停止コドンであったであろうものの中に更にチミジンを含むヒトＡＧＴ−６０１配列はより大きタンパク質を生ずる。従ってファンら（2001，上掲）は、ヒト遺伝子産物の大きさと相同性を反映する、ｈＮＰ２２という名称を提案した。ヒトアルコール依存症患者由来の脳に関する最近の研究では、新規な遺伝子ｈＮＰ２２の発現の上昇が明らかになっており、アルコール依存症におけるその可能な役割が示唆されている（ファンら，2001，上掲）。ｈＮＰ２２が細胞骨格と相互作用しうる推定上の細胞質カルシウム結合タンパク質であるため、長期間アルコールに曝された後に観察された発現の増加は、順応性変化を反映するものであるかもしれないと示唆された。
【０２１６】
ラットのアルコール依存症の研究で、アルコール禁断に応答してＡＧＴ−６０１の発現の増加が明らかになり（デパーズら，2001，上掲）、ラットのアルコール中毒におけるＡＧＴ−６０１の役割が示唆される。そのｈＮＰ２２、カルポニン、及びＳＭ２２αとの配列相同性のため、ＡＧＴ−６０１はまた、細胞骨格と相互に作用し、長期間のアルコール漬けに対する順応応答に関与する。既に議論したように、見返り（reward）システムはアルコール依存症などの常習行為・脅迫行為に関与するとされてきた。従って、ＡＧＴ−６０１はこの複雑なシステムにおいて一つの役割を担っている。見返りシステムはエネルギー恒常性の調節と肥満症の発症に関与するため、ＡＧＴ−６０１がエネルギー均衡を調節する役割を担っているかもしれないというのも妥当と思われる。
【実施例１６】
【０２１７】
プサモミス・オビーサスＡＧＴ−２０４の部分配列
未知のタンパク質（ＡＧＴ−２０４）の非翻訳領域が、膵臓のマクロアレイ分析を用いて、糖尿病と糖尿病でないプサモミス・オビーサスの間で差異を伴って発現されるとして、同定された。
【０２１８】
部分配列は次のとおりである。
TGACCAATAGCTTATGAAATTTAGAAGCTTTCTAATACTCGTTTTATAAATTTAATCATT
TGCTAATGGGAATTTTACCACCTNGCATTTCTGTTACAAATCTCGGCTCCAGGGAGCAAC
GCTACAACGCTACAATTCTGGAGTTGCTTTTCTTGCCTGTCACAGGAGGTCCCTGCTCGG
CAATGACCTTTGTGAGTTAGGATAATGACTTTTCTTCTTTTCTTTCTTTTTTCCTTTTGT
ACTTCAGATGTAGGAAAAAAGGATTCTGTTTCCATGTGAAAGGAACTGTAAGCTTTTAT
［配列番号：６］
【実施例１７】
【０２１９】
ＡＧＴ−２０４遺伝子の発現
給餌したＡ動物と絶食させたＡ動物の間のＡＧＴ−２０４遺伝子発現には有意な差異があったが、Ｂ又はＣ動物の場合には有意の差異はなかった（Ａ動物  ｐ＝０．０１７、図１９）。全ての動物を集めると、絶食させた動物と比べて給餌した動物において、ＡＧＴ−２０４の発現は有意に増加した（ｐ＝０．００１、図２０）。Ａ、Ｂ又はＣ動物の間では、給餌状態、絶食状態のいずれでも有意な差はなかった。ＡＧＴ−２０４の発現と、体重、インスリンレベル若しくはブドウ糖レベルとの間には有意な相関関係はなかった。
【０２２０】
三つの動物グループにわたって、ＡＧＴ−２０４の視床下部発現は、グループＢ動物では絶食で増加し（ｐ＝０．０３）、グループＡ動物では増加の傾向にあった（ｐ＝０．０５）（図２１）。ＡＧＴ−２０４の視床下部発現は、給餌制御した動物と比べて、一晩絶食した動物の方が有意に高かった（ｐ＝０．００９、図２２）。グループＡ、Ｂ及びＣの給餌した動物の遺伝子発現の間には差異はなかった。
【０２２１】
視床下部ＡＧＴ−２０４の発現は、エネルギーを制限したグループＡ、Ｂ又はＣの動物において、又は全ての対照動物と全ての制限した動物の間においては、有意な差異はなかった（図２３）。グループＡ対照動物におけるＡＧＴ−２０４の発現は、グループＢ及びＣの対照動物における発現よりも有意に低かった（ｐ＜０．０３）。全ての動物又はエネルギー制限した動物では、ＡＧＴ−２０４発現と、体重、グルコース及びインスリンの間の関連性はなかったが、対照動物のみににおいて体重とＡＧＴ−２０４発現の間に関連性があった（ｐ＝０．００１）、（図２４）。
【実施例１８】
【０２２２】
ＡＧＴ−２０４遺伝子の相同性
ＡＧＴ−２０４のヌクレオチド配列を、二つの異なる遺伝子の非翻訳領域、即ちＭＡＰ１Ｂ（微小管関連タンパク質１Ｂ）の３’ＵＴＲ、及び、ＤＥＡＤ／Ｈ（Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｓｐ／Ｈｉｓ）ボックスポリペプチド［代替記号：ＤＩＣＥ１、ＤＫＦＺＰ４３４Ｂ１０５、ＨＤＢ、ＮＯＴＣＨＬ２、ＤＢＩ−１、及びＮｏｔｃｈ２−様］（ＢＬＡＳＴＮ  バージョン２．２．１［２００１年４月１３日］）としても知られるＥＧＦ反復膜貫通の５’ＵＴＲに対して整列させる。
【０２２３】
１９９９年に出版されたマイクスナーら（Biochemica et Biophysica Acta. 1445: 345-350, 1990）による論文は、ＭＡＰ１Ｂ遺伝子の３’領域とＮｏｔｃｈ２−様（ＤＢＩ−１）遺伝子の５’領域の間の明らかな重なりを検討した。彼らはＤＢＩ−１のｃＤＮＡの公表された構造が正しくないとする、極めて説得力のある議論を提出した。これは、ＡＧＴ−２０４が実際にはマウスＭＡＰ１Ｂ遺伝子（Ｍｔａｐ−５としても知られる）であることを示唆する。
【０２２４】
微小管関連タンパク質（ＭＡＰ）１Ｂは、ジストロフィン（リエンら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 7873-7876, 1991）のＣ末端領域に対して作られるポリクローナル抗血清とそれが交差反応することのために、初め単離された。ｃＤＮＡクローンはリエンら（1991，上掲）により単離され、この遺伝子は、イン・サイチュ・ハイブリッド形成により、脊髄筋萎縮症（ＳＭＡ）遺伝子座に極めて近い位置にある５ｑ１３に位置付けられた。ＳＭＡは神経変性障害の臨床的に不均質なグループであり、嚢胞性繊維症後に起こる二番目に一般的な致命的な常染色体性劣性病を含む（スゥオッシュとシュバルツ、神経筋疾患（スプリンガー、ロンドン）、第二版、85-112, 1988）。この疾患は主にα運動ニューロンに影響を与え、二次的な骨格筋萎縮を生ずる。
【０２２５】
ＳＭＡの二つのタイプ、タイプＩとタイプＩＩは、染色体５ｑ（５ｑ１３）に位置付けられており、リエンら（1991，上掲）はＭＡＰ１Ｂにおける欠陥がＳＭＡを生ずる可能性を研究した。性別を混合するとＳＭＡとＭＡＰ１Ｂ間の最大ロッドスコアは、０．０２の組換え比で２０．２４であった。ＭＡＰ１ＢとＳＭＡの間の二つの組換え体は、ＭＡＰ１ＢとＳＭＡの間の病因学的な関係の可能性を排除するように見えるかも知れない。しかしながら、特にＳＭＡの慢性の症例の間には、対立遺伝子的な不均質性はなさそうである。もしＭＡＰ１Ｂが本当にＳＭＡ遺伝子座であったのであれば、別の遺伝子座における突然変異を有するファミリーでは組換えがあると予測されるであろう。ＭＡＰ１ＢはＳＭＡの遺伝子座から遠い最も近いマーカーであり、その５−プライム末端は動原体に向けられていることが見出された（ワースら、Genomics 15: 113-118, 1993）。ＭＡＰ１ＢとＳＭＡの間の関係は決定的に確定することは出来なかったが、ＭＡＰ１ＢがＳＭＡに結び付いた遺伝子でないとしても、それにもかかわらずＭＡＰ１Ｂは遺伝学的及び物理学的証拠に基づき極めてしっかりと連関したマーカーである（リエンら，1991，上掲）。
【０２２６】
ＭＡＰ１Ｂは、前角にある運動ニューロンの強く特異的な染色を示す、成体ラットの脊髄中の（サトウ−ヨシタケら、Neuron 3(2): 229-238, 1989）、及び胚の鳥の脊髄中の（トラッカーら、J. Comp. Neurol. 271(1): 44-55, 1988）ＭＡＰ１Ｂの免疫組織化学的なデータのため、ＳＭＡと結び付いているとも考えられる。この発見は、ＳＭＡ患者における前角運動ニューロンの特異的変性と相関する（リエンら，1991，上掲）。
【０２２７】
ＭＡＰ１Ｂは、豊富な高分子量のニューロンタンパク質であり、神経系発達の過程で最初に発現されるＭＡＰである。ＭＡＰ１Ｂは、発達中及び成熟した神経系の成長中の軸索で、極めて豊富になることも知られており（ブルームら，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82(16)，5404-5408, 1985、カルバートとアンダーソン，EMBO J. 4(5): 1171-1176, 1985、カルバートら，Neuroscience 23(1): 131-141, 1987、リーデラーら，J. Neurocytol. 15(6): 763-775, 1986、ショーエンフェルドら，J. Neurosci. 9(5): 1712-1730, 1989、トラッカーら，1988, 上掲）、このことは軸索の細胞骨格の初期形成と再構築における特異的な役割を示唆する（ハマーバックら、Neuron 7: 129-139, 1991）。
【０２２８】
ＭＡＰ１Ｂは、一方の末端に小球領域を持つ、極めて細長い（長さ１９０ｎｍ）ものである（サトウ−ヨシタケら，1989，上掲）。これは一つの重鎖（＞２００ｋｄ）と二つの軽鎖（軽鎖１（ＬＣ１）は約３４ｋｄ、軽鎖３は約１９ｋｄ）の複合体である。ＭＡＰ−１ＡとＭＡＰ１Ｂ間のサブユニット組成には類似性があるが、この二つのタンパク質の重鎖は、免疫学的及び生化学的に異なっている（ブルームら，1985，上掲、リーデラーら，1986，上掲）。ハマーバックら（1991，上掲）はＬＣ１がＭＡＰ１Ｂ重鎖遺伝子の３’末端内でコードされることを見出した。彼らのデータは、重鎖と軽鎖１が前駆体ポリペプチドのタンパク質分解工程で生産されることを示唆した。これは重鎖Ｎ末端付近の新規な多サブユニット微小管結合領域を形成する。
【０２２９】
ノーブルら（J. Cell Biol. 109(6): 3367-3376, 1989）はＭＡＰ１Ｂ遺伝子が約２５５ｋｄの予測された分子量を持つタンパク質をコードすることを見出し、ＫＫＥＥとＫＫＥＶＩモチーフを含むタンパク質内の基本領域がＭＡＰ１Ｂと微小管のイン・ビボの相互作用を担うことを示した（ノーブルら，1989，上掲）。さらに、この領域はキネシン、ＭＡＰ２又はタウの微小管結合領域との配列関連性を示さない。リエンら（1994）はヒトＭＡＰ１Ｂ遺伝子を完全にクローン化し、配列決定した。発現したタンパク質は、ラット及びマウスのＭＡＰ１Ｂと９１％の全体的な同一性を示し、七つのエキソンを有する。三つめのエキソンは、マウス又はラットのＭＡＰ１Ｂでは現れない配列を含み、全長転写物の約１０分の１のレベルで発現する別の転写物の５’末端に存在する。
【０２３０】
ニューロン微小管は、樹状突起及び軸索の形成に一つの役割を担うと考えられている。発達中及び成熟した脳微小管の異なる部位が、異なる微小管関連タンパク質と相互作用する。ＭＡＰ１Ｂは脳の異なる部位で発現し、ニューロン可塑性及び脳発達において一つの役割を担うかもしれない。
【０２３１】
エーデルマンら（Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93(3): 1270-1275, 1996）は、ジーンターゲッティング法でＭＡＰ１Ｂに挿入したマウスを産生した。この修飾にホモ接合であるマウスは胚形成の間に死亡したが、ヘテロ接合体はより遅い成長速度、片目若しくは両目の視力の欠如、及び運動系異常を含む、表現型スペクトルを示した。重度に影響を受けたマウスの組織化学的分析は、プルキンエ細胞の樹状突起プロセスが異常で、ＭＡＰ１Ｂ抗体と反応せず、ＭＡＰ１Ａ抗体による染色の減少を示したことを実証した。同様の組織学的及び免疫化学的変化が嗅球、海馬及び網膜で観察され、観察された表現型の根拠を与えた。
【実施例１９】
【０２３２】
霊長類
増幅のためのプライマー配列とプローブ配列及び各遺伝子の分析（５’から３’の方向に示す）。
【０２３３】
2005503793.tif 000008
【実施例２０】
【０２３４】
サプレッション・サブトラクティブ・ハイブリッド形成（ＳＳＨ）
ＳＳＨは、痩せたグループＡ動物（ｎ＝３）と肥満症／糖尿病のグループＣ動物（ｎ＝３）の肝臓内の遺伝子の発見に用いた。前向き及び逆向きサブトラクションを実施して、各集団それぞれで高レベル調節された新規な遺伝子を同定した。
【０２３５】
グループＡ動物で高レベル調節された遺伝子を同定するための前向きサブトラクションを以下に記述する。グループＡとグループＣは、それぞれテスター及びドライバーと命名された。ＰＣＲ−選択ｃＤＮＡサブトラクションキット（クローンテック、パロ・アルト、米国）をＳＳＨに用いた。実験は製造者の説明書（クローンテック、パロ・アルト、米国）に基づいて実施した。以下に簡単に記す
【０２３６】
第一鎖ｃＤＮＡは、２０単位のＡＭＶ逆転写酵素とｃＤＮＡ合成プライマーを含む反応物中で０．４μｇのテスターｍＲＮＡと０．４μｇのドライバーｍＲＮＡから合成した。この反応物は、４２℃で９０分間インキュベートした。第二鎖のテスターｃＤＮＡ及びドライバーｃＤＮＡは、２４単位のＤＮＡポリメラーゼＩ、１単位のＲＮアーゼＨ、及び４．８単位のＤＮＡリガーゼを含む反応物中で合成した。この反応物を１６℃で３時間インキュベートした。６単位のＴ４・ＤＮＡポリメラーゼを添加し、さらに３０分間インキュベーションを続けた。
【０２３７】
テスターｃＤＮＡ及びドライバーｃＤＮＡは１５単位の制限エンドヌクレアーゼＲｓａＩで、３７℃で９０分消化した。
【０２３８】
上記のテスターｃＤＮＡは二つの等量のアリコートに分け、テスター１とテスター２と名付けた。アダプターオリゴヌクレオチドであるアダプター１をテスター１に連結し、アダプター２Ｒをテスター２に連結した。４００単位のＴ４・ＤＮＡリガーゼを含む反応物を１６℃で１６時間インキュベートした。アダプターの連結に続いて、二度のハイブリッド形成と二度の増幅工程を行った（図２６）。
【０２３９】
最初のハイブリッド形成には、過剰量のドライバーｃＤＮＡをテスター１及びテスター２に添加する工程が含まれていた。この試料を９８℃で９０秒間変性させ、６８℃で８時間アニーリングさせた。四つの異なる種類の分子（ａ、ｂ、ｃ及びｄと名付けた）が得られた。テスターとドライバーの両方に共通であった一本鎖ｃＤＮＡをアニーリングさせてタイプｃの分子を形成した。このテスターで高レベル調節された一本鎖ｃＤＮＡは、相補的なテスター配列（タイプｂ分子）と再アニーリングさせるか又は一本鎖のまま残すか（タイプａ分子）のいずれかであった。ドライバーを過剰に添加したため、殆どの高レベル調節ｃＤＮＡは確実に一本鎖のまま（タイプａ分子）であった。一本鎖及び二本鎖のドライバー分子も残留した（タイプｄ分子）。
【０２４０】
二度目のハイブリッド形性には、ドライバーｃＤＮＡの別のアリコートを９８℃で９０秒間変性させ、それをテスター１及びテスター２と混合する工程が含まれていた。この反応物を６８℃で２０時間アニーリングさせた。タイプａ、ｂ、ｃ及びｄの分子が、テスター１及びテスター２由来のタイプａ分子のハイブリッドであったタイプｅ分子と同様に残留した。これらの分子のうち一つのｃＤＮＡ鎖がアダプター１に連結し、他のｃＤＮＡ鎖はアダプター２Ｒに連結した。ＰＣＲを用いてこれらの分子を増幅した。
【０２４１】
増幅する前に、５分間で７５℃の伸長工程により各アダプターに対する相補鎖を「充填」した。プライマー配列は、アダプター１及びアダプター２Ｒの両方の「充填」された部分に相補的であった。タイプｄ分子はプライマー結合部位がないため、増幅されなかった。タイプａ分子とタイプｃ分子は一つプライマー結合部位しかないため、直線的に増幅した。タイプｂ分子はパン状（pan-like）構造を形成するため、指数関数的に増幅されなかった（ディアチェンコら，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93(12)，6025-6030, 1996、ディアチェンコら，遺伝子クローニングお解析のためのＲＴ−ＰＣＲ法，シーベルト，Ｐ．とラリック，Ｊ．編（バイオテクニック  ブックス、マサチューセッツ州）、213-239, 1998に収録）。タイプｅ分子は指数関数的に増幅した。
【０２４２】
二度目のＰＣＲは、アダプター１とアダプター２Ｒそれぞれの「充填」部分に相補的な二つのプライマーを用いて行った。タイプｅ分子を更に増幅させた。これらの分子は、グループＡ動物で高レベル調節されると推定される遺伝子を表した。
【０２４３】
ディファレンシャル・スクリーニング
高レベル調節されると推定される遺伝子をスクリーニングし、ＰＣＲ−選択ディファレンシャル・スクリーニングキット（クローンテック、パロ・アルト、米国）を用いて単離した。スクリーニング実験は、プロトコル（クローンテック、パロ・アルト、米国）に概述された前向き及び逆向きサブトラクションの産物で実施した。前向きサブトラクションによるスクリーニング実験を以下に簡単に記す。
【０２４４】
ＳＳＨ実験で得られたサブトラクトしたｃＤＮＡは、Ｔ／Ａクローニングシステム（ＴＯＰＯ  ＴＡ  クローニングキット、インビトロゲン、カールズバッド、米国）をインビトロゲンのプロトコルに記載されたとおりに用いてクローニングした。このＰＣＲ産物をｐＣＲ２．１−ＴＯＰＯプラスミドベクターに連結し、ＴＯＰ１０大腸菌細胞に化学的に形質転換した。細胞はルリア−ベルターニ（ＬＢ）プレート上で３７℃で一晩増殖させた。うまくトランスフェクトしたクローンであることを示す白いコロニーを選択し、ＬＢ培地で３７℃で一晩増殖させた。これらのクローンを、アダプター１及び２Ｒに相補的なプライマーを用いたＰＣＲで増幅した。これらのＰＣＲ産物を用いてｃＤＮＡドットプロットを調製した。
【０２４５】
ＰＣＲ選択ディファレンシャル・スクリーニングキットのプロトコル（クローンテック、パロ・アルト、米国）の記載どおりに、四つの同一のナイロン膜をｃＤＮＡドットブロット用に準備した。陽性クローンを表すＰＣＲ産物を、ＵＶストラタリンカー（ストラタジーン、オースティン、米国）を１２０ｍＪで用いてナイロン膜に架橋結合した。この膜をプレハイブリッド形成溶液であるエクスプレスヒブ（クローンテック、パロ・アルト、米国）中で洗浄した。
【０２４６】
前向き及び逆向きサブトラクションから得たサブトラクトしたｃＤＮＡを用いて、それぞれ前向き及び逆向きプローブを調製した。さらに、前向き及び逆向き実験で得られたサブトラクトしていないｃＤＮＡを用いて、サブトラクトしていないプローブを調製した。ｃＤＮＡを９５℃で８分間変性させ、α33Ｐで標識したｄＡＴＰ（５０μＣｉ）（ジーンワークス、アデレード、オーストラリア）と３単位のクレノー酵素（クローンテック、パロ・アルト、米国）を含む反応物中で３７℃で３０分間インキュベートした。前向き及び逆向きのプローブは７２℃で１６時間ナイロン膜にハイブリッド形成させた。膜を低及び高ストリンジェンシー洗浄溶液で洗浄し、リンプレート（モレキュラーダイナミクス、サニーベール、米国）に５日間曝した。ホスホルイメージャー（phosphorimager）（モレキュラーダイナミクス、サニーベール、米国）を用いてこのプレートに転写された画像を検討した。
【０２４７】
クローンは、逆サブトラクトしたプローブからのシグナルなしに前向きサブトラクトプローブからシグナルが検出された場合及び逆向き非サブトラクトプローブよりも前向き非サブトラクトプローブからより強いシグナルが検出された場合に、グループＡ動物で高レベル調節されると同定された。
【０２４８】
当業者らは、本明細書に記載した発明が、具体的に記載したもの以外にも変更及び改良の余地があることを認めるであろう。本発明は、このような変更及び改良を全て含むことを理解されたい。本発明はまた、本明細書で個別に又は集合的に言及又は指摘した工程、特性、組成物及び化合物の全て、及び該工程又は特性の二つ以上の組み合わせのいずれか及び全てをも含む。
【０２４９】
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【図面の簡単な説明】
【０２６８】
【図１】図１は、給餌した動物及び絶食させた動物の視床下部におけるＡＧＴ−１０９発現をグラフに表したものである。
【図２】図２は、給餌した動物及び絶食させた動物の視床下部におけるＡＧＴ−１０９発現をグラフに表したものである（蓄積した動物データ）。*ｐ＜０．００１。
【図３】図３は、視床下部におけるＡＧＴ−１０９発現をグラフに表したものである。
【図４】図４は、給餌した動物及び絶食させた動物の肝臓における、ＡＧＴ−４０７発現をグラフに表したものである。
【図５】図５は、給餌した動物及び絶食させた動物の肝臓におけるＡＧＴ−４０７発現をグラフに表したものである（蓄積した動物データ）。*ｐ＜０．００３。
【図６】図６は、Ｓ１Ｐ遺伝子のゲノム構造を表す略図である。
【図７】図７は、エクソン構成とＳ１Ｐの機能領域の間の関係を表す略図である（ナカジマら、J. Hum. Genet. 45: 212-217, 2000）。
【図８】図８は、給餌した動物及び絶食させた動物の肝臓におけるＡＧＴ−４０８発現をグラフに表したものである。
【図９】図９は、給餌した動物及び絶食させた動物の肝臓におけるＡＧＴ−４０８発現をグラフに表したものである（蓄積した動物データ）。
【図１０】図１０は、給餌した動物及び絶食させた動物の肝臓におけるＡＧＴ−４０９発現をグラフに表したものである。
【図１１】図１１は、給餌した動物及び絶食させた動物の肝臓におけるＡＧＴ−４０９発現をグラフに表したものである（蓄積した動物データ）。*ｐ＜０．００１。
【図１２】図１２は、給餌した動物及び絶食させた動物の視床下部におけるＡＧＴ−６０１の発現をグラフに表したものである。*は給餌したＡグループと給餌したＢグループとは有意に異なり、それぞれｐ＝０．００４とｐ＝０．００５である。＾は絶食させたＣグループと有意に異なる、ｐ＝０．００１。
【図１３】図１３は、給餌した動物及び絶食させた動物の視床下部におけるＡＧＴ−６０１発現をグラフに表したものである（蓄積した動物データ）。*ｐ＝０．０１５。
【図１４】図１４は、給餌した動物におけるＡＧＴ−６０１の対数：ブドウ糖の対数をグラフに表したものである。
【図１５】図１５は、給餌した動物におけるＡＧＴ−６０１の対数：体脂肪％をグラフに表したものである。
【図１６】図１６は、生理食塩水とビーコン（ＰＣＴ／ＡＵ９８／００９０２［ＷＯ  ９９／２３２１７］参照）の存在下でのＡＧＴ−６０１遺伝子発現をグラフに表したものである。*ｐ＝０．０３、生理食塩水のグループとは有意に異なる。**ｐ＝０．００４、ＮＰＹ＋ビーコンのグループとは有意に異なる。＃ｐ＝０．００５、ＮＰＹ＋ビーコンのグループとは有意に異なる。
【図１７】図１７は、インスリンで処理したＧＴ１７細胞におけるＡＧＴ−６０１発現をグラフに表したものである。
【図１８】図１８は、ブドウ糖で処理したＧＴ１７細胞におけるＡＧＴ−６０１発現をグラフに表したものである。
【図１９】図１９は、給餌した動物及び絶食させた動物の膵臓におけるＡＧＴ−２０４発現をグラフに表したものである。
【図２０】図２０は、給餌した動物及び絶食させた動物の膵臓におけるＡＧＴ−２０４発現をグラフに表したものである（蓄積した動物データ）。*ｐ＝０．００１。
【図２１】図２１は、給餌した状態又は絶食させた状態での視床下部のＡＧＴ−２０４発現をグラフに表したものである。*はｐ＝０．０５  グループＡの給餌した動物：グループＡの絶食させた動物、＃はｐ＝０．０３  グループＢの給餌した動物：Ｂの絶食させた動物。
【図２２】図２２は、給餌した状態及び絶食させた状態にある全ての動物の視床下部のＡＧＴ−２０４発現をグラフに表したものである。*ｐ＝０．００９。
【図２３】図２３は対照動物と制限された動物における視床下部ＡＧＴ−２０４発現をグラフに表したものである。*ｐ＜０．０３、グループＡの対照と有意に異なる。
【図２４】図２４は対照の体重（ＢＷ）とＡＧＴ−２０４発現をグラフに表したものである。
【図２５】図２５は。
【図２６】図２６は、ＳＳＨ（ＲＤＡ）プロトコルのハイブリッド形成工程と増幅工程を表す略図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2005503793.tif 000147
【手続補正書】
【提出日】平成15年6月10日(2003.6.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
発現タンパク質又はその誘導体若しくは同族体をコードするヌクレオチド配列又はコードする配列に相補的なヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、痩せた動物と比べて肥満動物の、又は給餌した動物と比べて絶食させた動物の、又は糖尿病でない動物と比べて糖尿病の動物の視床下部、肝臓、及び／又は膵臓組織で差異をもって発現するものであり、
（ｉ）    配列番号：１で表されるヌクレオチド配列、又はそれと少なくとも約３０％
の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：１若しくはその相補形と
低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列、
（ｉｉ）  配列番号：２で表されるヌクレオチド配列、又はそれと少なくとも約３０％
の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：２若しくはその相補形と
低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列、
（ｉｉｉ）  配列番号：３で表されるヌクレオチド配列、又はそれと少なくとも約３０
％の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：３若しくはその相補形
と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列、
（ｉｖ）  配列番号：４で表されるヌクレオチド配列、又はそれと少なくとも約３０％
の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：４若しくはその相補形と
低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列、
（ｖ）    配列番号：５で表されるヌクレオチド配列、又はそれと少なくとも約３０％
の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：５若しくはその相補形と
低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列、
（ｖｉ）  配列番号：６で表されるヌクレオチド配列、又はそれと少なくとも約３０％
の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：６若しくはその相補形と
低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列、
から選択される核酸分子。
【請求項２】
配列番号：１で表されるヌクレオチド配列を含む、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項３】
配列番号：２で表されるヌクレオチド配列を含む、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項４】
配列番号：３で表されるヌクレオチド配列を含む、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項５】
配列番号：４で表されるヌクレオチド配列を含む、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項６】
配列番号：５で表されるヌクレオチド配列を含む、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項７】
配列番号：６で表されるヌクレオチド配列を含む、請求項１記載の単離された核酸分子。
【請求項８】
痩せた動物と比べて肥満動物の、又は給餌した動物と比べて絶食させた動物の、又は糖尿病でない動物と比べて糖尿病の動物の視床下部、肝臓、及び／又は膵臓組織で差異をもって発現する核酸分子によりコードされるヌクレオチド又はアミノ酸の配列を含む、単離された分子であって、
（ｉ）    配列番号：１で表される核酸分子、又は配列番号：１と少なくとも約３０％
の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：１若しくはその相補形と
低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列、
（ｉｉ）  配列番号：２で表される核酸分子、又は配列番号：２と少なくとも約３０％
の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：２若しくはその相補形と
低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列、
（ｉｉｉ）  配列番号：３で表される核酸分子、又は配列番号：３と少なくとも約３０
％の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：３若しくはその相補形
と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列、
（ｉｖ）  配列番号：４で表される核酸分子、又は配列番号：４と少なくとも約３０％
の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：４若しくはその相補形と
低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列、
（ｖ）    配列番号：５で表される核酸分子、又は配列番号：５と少なくとも約３０％
の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：５若しくはその相補形と
低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列、
（ｖｉ）  配列番号：６で表される核酸分子、又は配列番号：６と少なくとも約３０％
の類似性を有するヌクレオチド配列、又は配列番号：６若しくはその相補形と
低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できるヌクレオチド配列、
から選択される核酸分子によりコードされる単離された分子。
【請求項９】
分子がタンパク質である、請求項８記載の単離された分子。
【請求項１０】
配列番号：１で表されるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項９記載の単離されたタンパク質。
【請求項１１】
配列番号：２で表されるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項９記載の単離されたタンパク質。
【請求項１２】
配列番号：３で表されるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項９記載の単離されたタンパク質。
【請求項１３】
配列番号：４で表されるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項９記載の単離されたタンパク質。
【請求項１４】
配列番号：５で表されるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項９記載の単離されたタンパク質。
【請求項１５】
配列番号：６で表されるヌクレオチド配列によりコードされる、請求項９記載の単離されたタンパク質。
【請求項１６】
痩せた動物と比べて肥満動物の視床下部、膵臓又は肝臓組織で差異をもって発現する核酸分子によりコードされるタンパク質、又はその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、即ち
（ｉ）    実質的に配列番号：１で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体
若しくは類似体、又はこの配列と少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ
酸配列をコードする配列によりコードされるタンパク質、又はこのタンパク質
の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
（ｉｉ）  実質的に配列番号：２で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体
若しくは類似体、又はこの配列と少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ
酸配列をコードする配列によりコードされるタンパク質、又はこのタンパク質
の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
（ｉｉｉ）  実質的に配列番号：３で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体
若しくは類似体、又はこの配列と少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ
酸配列をコードする配列によりコードされるタンパク質、又はこのタンパク質
の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
（ｉｖ）    実質的に配列番号：４で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体
若しくは類似体、又はこの配列と少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ
酸配列をコードする配列によりコードされるタンパク質、又はこのタンパク質
の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
（ｖ）      実質的に配列番号：５で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体
若しくは類似体、又はこの配列と少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ
酸配列をコードする配列によりコードされるタンパク質、又はこのタンパク質
の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
（ｖｉ）    実質的に配列番号：６で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体
若しくは類似体、又はこの配列と少なくとも約３０％の類似性を有するアミノ
酸配列をコードする配列によりコードされるタンパク質、又はこのタンパク質
の誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体、
（ｖｉｉ）  配列番号：１で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しく
は類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できる核酸分子に
よりコードされるタンパク質、
（ｖｉｉｉ）  配列番号：２で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しく
は類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できる核酸分子に
よりコードされるタンパク質、
（ｉｘ）    配列番号：３で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは
類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できる核酸分子によ
りコードされるタンパク質、
（ｘ）      配列番号：４で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは
類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できる核酸分子によ
りコードされるタンパク質、
（ｘｉ）    配列番号：５で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは
類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できる核酸分子によ
りコードされるタンパク質、及び
（ｘｉｉ）  配列番号：６で表されるヌクレオチド配列又はその誘導体、同族体若しくは
類似体と低ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成できる核酸分子によ
りコードされるタンパク質。
【請求項１７】
哺乳動物におけるＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４の一つ以上の発現を変化させる方法であって、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４を、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４の発現を高レベル調節又は低レベル調節、又はその他の方法で変化させるのに十分な時間及び条件の下で、効果的な量のＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４のモジュレーターと接触させる工程を含む方法。
【請求項１８】
哺乳動物におけるＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の活性を変化させる方法であって、該哺乳動物に、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４の活性を増加又は減少させるのに十分な時間及び条件の下で変化させるのに効果的な量の分子を投与する工程を含む方法。
【請求項１９】
肥満症、摂食障害、糖尿病及び／又はエネルギー不均衡の症状の一つ以上を特徴とする状態を患う哺乳動物の治療法であって、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４の発現を変化させるのに十分な、又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の活性を変化させるのに十分な時間及び条件の下で、該哺乳動物に効果的な量の物質を投与する工程を含む方法。
【請求項２０】
肥満症、摂食障害、糖尿病又はエネルギー不均衡の症状の一つ以上を特徴とする状態を患う哺乳動物の治療法であって、該哺乳動物に、効果的な量のＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４を投与する工程を含む方法。
【請求項２１】
肥満症、摂食障害、糖尿病、及び／又はエネルギー不均衡を特徴とする状態を治療するための医薬の製造における、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又はその誘導体、同族体若しくは類似体の発現を変化させることができる物質の使用。
【請求項２２】
肥満症、摂食障害、糖尿病、及び／又はエネルギー不均衡を特徴とする状態を治療するための医薬の製造における、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又はその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体の活性を変化させることができる物質の使用。
【請求項２３】
肥満症、摂食障害、糖尿病、及び／又はエネルギー不均衡を特徴とする状態を治療するための医薬の製造における、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又はその誘導体、同族体若しくは類似体、又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及び／又はＡＧＴ−２０４、又はその誘導体、同族体、類似体、化学的等価物若しくは模倣体の使用。
【請求項２４】
ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の発現、又はＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４の活性のモジュレーター、及び一つ以上の薬学的に許容できる担体及び／又は希釈剤を含む組成物。
【請求項２５】
被験体由来の生体試料中のＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４、又はその誘導体若しくは同族体を検出する方法であって、該生体試料を、ＡＧＴ−１０９、ＡＧＴ−４０７、ＡＧＴ−４０８、ＡＧＴ−４０９、ＡＧＴ−６０１及びＡＧＴ−２０４に特異的な抗体又はその抗原性誘導体若しくは同族体と、複合体を形成するのに十分な時間及び条件の下で接触させる工程、及び次いで該複合体を検出する工程を含む方法。
【国際調査報告】
2005503793.tif 000148
2005503793.tif 000149
2005503793.tif 000150