(57)【要約】インターロイキン−２および少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体の組み合わせを用いて、リンパ腫を有するヒトを処置するための方法を提供する。これらの治療薬剤は、投薬レジメンに従い、一方がＩＬ−２を含み、他方が少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体を含む２つの別々の薬学的組成物として投与される。これらの２つの治療薬剤を一緒に投与することは、どちらかの薬剤単独の効果を増強し、どちらかの薬剤単独を用いて観察される応答に関して改善されたポジティブな治療応答を生じる。これらの薬剤の治療効果は、低用量のＩＬ−２を用いて達成され得、それによって、長期のＩＬ−２投与の毒性および腫瘍の逃避の可能性を減少させる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト被験体において非ホジキンＢ細胞リンパ腫を処置する方法であって、該方法は、抗ＣＤ２０抗体およびインターロイキン２（ＩＬ−２）を用いた併用治療の少なくとも１メンテナンス周期を該被験体に投与する工程を包含し、ここで、該メンテナンス周期は、治療的に有効な週あたりの用量の抗ＣＤ２０抗体をＩＬ−２の２段階投薬レジメンの投与と組み合わせて投与する工程を包含し、ここで、該ＩＬ−２の２段階投薬レジメンは、週あたりのより高い総用量のＩＬ−２が該被験体に投与される第１期を含み、その後、週あたりのより低い総用量のＩＬ−２が該被験体に投与される第２期が続く、方法。
【請求項２】
ＩＬ−２の最初の用量が、抗ＣＤ２０抗体の最初の用量より前に前記被験体に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＩＬ−２の最初の用量が、前記抗ＣＤ２０抗体の最初の用量が前記被験体に投与される１ヶ月前以内に投与される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＩＬ−２の最初の用量が、前記抗ＣＤ２０抗体の最初の用量が前記被験体に投与される１週間前に投与される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ＩＬ−２の最初の用量が、前記抗ＣＤ２０抗体の最初の用量と同時に前記被験体に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ＩＬ−２の最初の用量が、前記抗ＣＤ２０抗体の最初の用量が前記被験体に投与された１週間後に前記被験体に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記抗ＣＤ２０抗体が、週ごとに４週間〜８週間投薬される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記抗ＣＤ２０抗体の前記治療的な有効量が、約１２５ｍｇ／ｍ２〜約５００ｍｇ／ｍ２の範囲である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ＩＬ−２の２段階投薬レジメンが、組み合わされた４週間〜１６週間の期間を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＩＬ−２の２段階投薬レジメンの前記第１期が、前記組み合わされた４週間〜１６週間の期間のうち、少なくとも１週間の持続期間を有する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＩＬ−２の２段階投薬レジメンの前記第１期が、前記組み合わされた４週間〜１６週間の期間の２分の１の持続期間を有する、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１に記載の方法であって、前記週あたりのより高い総用量のＩＬ−２が、１用量として投与されるか、または第１の一連の等用量に分割され、週に２回、３回、４回、５回、６回または７回の投薬計画に従って投与され、そして前記週あたりのより低い用量のＩＬ−２が、１用量として投与されるか、または第２の一連の等用量に分割され、週に２回、３回、４回、５回、６回または７回の投薬計画に従って投与される、方法。
【請求項１３】
前記ＩＬ−２が、静脈内、筋肉内、および皮下からなる群から選択される経路により投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記週あたりのより高い総用量のＩＬ−２が、１用量として投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記第１の一連の等用量が、週に２回の投薬計画に従って投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
前記第１の一連の等用量が、週に３回の投薬計画に従って投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
前記第１の一連の等用量が、週に４回の投薬計画に従って投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
前記第１の一連の等用量が、週に５回の投薬計画に従って投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１９】
前記第１の一連の等用量が、週に６回の投薬計画に従って投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項２０】
前記第１の一連の等用量が、週に７回の投薬計画に従って投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項２１】
前記週あたりのより低い総用量のＩＬ−２が、１用量として投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項２２】
前記第２の一連の等用量が、週に２回の投薬計画に従って投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項２３】
前記第２の一連の等用量が、週に３回の投薬計画に従って投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項２４】
前記第２の一連の等用量が、週に４回の投薬計画に従って投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項２５】
前記第２の一連の等用量が、週に５回の投薬計画に従って投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項２６】
前記第２の一連の等用量が、週に６回の投薬計画に従って投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項２７】
前記第２の一連の等用量が、週に７回の投薬計画に従って投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項２８】
請求項１に記載の方法であって、前記週あたりのより高い総用量のＩＬ−２が、参照ＩＬ−２標準の一週間の総用量と等量であり、ヒト薬物速度論（ＰＫ）データ由来の血清濃度時間曲線の下の面積によって決定される２０００μｇ〜３６００μｇの範囲内であり、ここで、前記週あたりのより低い用量のＩＬ−２が、参照ＩＬ−２標準の一週間の総用量と等量であり、ヒトＰＫデータ由来の血清濃度時間曲線の下の面積によって決定される１２００μｇ〜２６００μｇの範囲内である方法であり、そして、ここで、該週あたりのより低い用量のＩＬ−２が、該週あたりのより高い総用量のＩＬ−２より低い、方法。
【請求項２９】
請求項２８に記載の方法であって、前記週あたりのより高い総用量のＩＬ−２が、１用量として投与されるか、または第１の一連の等用量に分割され、週に２回、３回、４回、５回、６回または７回の投薬計画に従って投与され、前記週あたりのより低い総用量のＩＬ−２が、１用量として投与されるか、または第２の一連の等用量に分割され、週に２回、３回、４回、５回、６回または７回の投薬計画に従って投与される、方法。
【請求項３０】
前記週あたりのより高い総用量のＩＬ−２が２８００μｇであり、そして前記週あたりのより低い総用量のＩＬ−２が２０００μｇである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記抗ＣＤ２０抗体の前記治療的に有効な用量が、約１２５ｍｇ／ｍ２〜約５００ｍｇ／ｍ２の範囲内である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
前記抗ＣＤ２０抗体の前記治療的に有効な用量が、約２２５ｍｇ／ｍ２〜約４００ｍｇ／ｍ２の範囲内である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
請求項１に記載の方法であって、前記週あたりのより高い総用量のＩＬ−２が、参照ＩＬ−２標準の一週間の総用量と等量であり、ヒトＰＫデータ由来の血清濃度時間曲線の下の面積によって決定される２０００μｇ〜３６００μｇの範囲内であり、前記週あたりのより低い用量のＩＬ−２が、参照ＩＬ−２標準の一週間の総用量と等量であり、ヒトＰＫデータ由来の血清濃度時間曲線の下の面積によって決定される１２００μｇ〜約２０００μｇの範囲内である方法であり、そして、ここで、該週あたりのより低い総用量のＩＬ−２が、該週あたりのより高い総用量のＩＬ−２より低い、方法。
【請求項３４】
前記週あたりのより高い総用量のＩＬ−２が２８００μｇであり、そして前記週あたりのより低い総用量のＩＬ−２が２０００μｇである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＩＬ−２が、単量体ＩＬ−２薬学的組成物、多量体ＩＬ−２薬学的組成物、安定化された凍結乾燥ＩＬ−２薬学的組成物、および安定化された噴霧乾燥ＩＬ−２薬学的組成物からなる群から選択される薬学的組成物として提供される、請求項１に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＩＬ−２が、組換え的に産生されたＩＬ−２であり、該ＩＬ−２が、ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列またはその改変体を有し、該改変体が、ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列に対し少なくとも７０％の配列同一性を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３７】
前記ヒトＩＬ−２の改変体が、デス−アラニル−１、セリン１２５ヒトインターロイキン２である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記抗ＣＤ２０抗体が、免疫学的に活性な抗ＣＤ２０抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３９】
前記抗ＣＤ２０抗体が、ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８またはそのフラグメントである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記抗ＣＤ２０抗体が、ヒト抗ＣＤ２０抗体、ヒト化抗ＣＤ２０抗体、またはキメラ抗ＣＤ２０抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項４１】
１つ以上のその後のメンテナンス周期が、第一メンテナンス周期の完了または任意のその後のメンテナンス周期の完了から約１ヶ月〜約６ヶ月後に開始される、請求項１に記載の方法。
【請求項４２】
請求項４１に記載の方法であって、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞数が前記被験体においてモニターされ、前記メンテナンス周期のそれぞれがいつ開始されるかを決定し、該メンテナンス周期が、ＮＫ細胞数が受容可能な閾値レベルより少ない時に開始される、方法。
【請求項４３】
前記受容可能な閾値レベルが２００細胞／μｌ以下である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記受容可能な閾値レベルが１５０細胞／μｌ以下である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記ＩＬ−２の２段階投薬レジメンにおける中断をさらに包含する、請求項１に記載の方法であって、該中断は、該ＩＬ−２の２段階投薬レジメンの前記第１期および前記第２期の間のＩＬ−２投与の中止期間を含む、方法。
【請求項４６】
前記中断が、抗ＣＤ２０抗体投与の中止期間をさらに含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
請求項４５に記載の方法であって、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞数が前記ヒトにおいてモニターされ、前記２段階投薬レジメンの前記第２期がいつ開始されるかを決定し、該第２期が、ＮＫ細胞数が受容可能な閾値レベルより少ない場合に開始される、方法。
【請求項４８】
前記受容可能な閾値レベルが２００細胞／μｌ以下である、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記受容可能な閾値レベルが１５０細胞／μｌ以下である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記中断が、約１週間〜約４週間の期間を有する、請求項４５に記載の方法。
【請求項５１】
ヒトにおいて非ホジキンＢ細胞リンパ腫を処置する方法であって、該方法は、治療的な有効量の抗ＣＤ２０抗体を、週に１回、４週間〜８週間、処置期間の１日目から、該ヒトに投与する工程、治療的な有効量のＩＬ−２を、週に３回、４週間〜１０週間、該処置期間の８日目から投与する工程を包含し、ここで、該治療的な有効量の抗ＣＤ２０抗体は、約１２５ｍｇ／ｍ２〜約５００ｍｇ／ｍ２の範囲内であり、ここで、該治療的な有効量のＩＬ−２は、参照ＩＬ−２標準の用量と同じ開始時ＩＬ−２暴露を達成するために必要な量であり、ヒトＰＫデータ由来の血清濃度時間曲線の下の面積によって決定される約９３３．３３μｇ〜約１２００μｇの範囲内である、方法。
【請求項５２】
前記ＩＬ−２が皮下的に投与される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記治療的な有効量の抗ＣＤ２０抗体が、週に１回、４週間投与され、かつ、前記治療的な有効量のＩＬ−２が、週に３回、４週間または８週間投与される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
前記治療的な有効量の抗ＣＤ２０抗体が、週に１回、８週間投与され、かつ、前記治療的な有効量のＩＬ−２が、週に３回、８週間投与される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
前記治療的な有効量の抗ＣＤ２０抗体が、約２２５ｍｇ／ｍ２〜約４００ｍｇ／ｍ２の範囲内である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５６】
前記治療的な有効量の抗ＣＤ２０抗体が、約３７５ｍｇ／ｍ２である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記ヒトが、参照ＩＬ−２標準の一週間の総用量と同量のＩＬ−２の一週間の総用量を投与され、該総用量が、ヒトＰＫデータ由来の血清濃度時間曲線の下の面積によって決定される約２８００μｇ〜約３６００μｇの範囲内である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５８】
抗ＣＤ２０抗体およびＩＬ−２の併用治療期間を受けている被験体の、臨床的応答を予測する方法であって、該方法が、該被験体におけるナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖を、該併用治療期間の開始後の約１週間〜約１０週間、モニターする工程を包含する、方法。
【請求項５９】
前記併用治療期間が約５週間であり、ここで、該ＮＫ細胞の増殖をモニターする工程が、該併用治療期間の開始後の約４週間〜約１０週間に起こる、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記治療的な有効量の抗ＣＤ２０抗体が、処置期間の第１日目に始めて４週間、週に１回投与され、そして、前記治療的な有効量のＩＬ−２が、該処置期間の第８日目に始めて４週間、週に３回投与され、ここで、前記ＮＫ細胞の増殖が、該併用治療期間の開始後約１０週間モニターされる、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記ヒトが、参照ＩＬ−２標準の一週間の総用量と同量のＩＬ−２の一週間の総用量を投与され、該総用量が、ヒトＰＫデータ由来の血清濃度時間曲線の下の面積によって決定される２８００μｇ〜３６００μｇの範囲内である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記被験体が少なくとも約１７０細胞／μｌのＮＫ細胞数を有し、そして、完全な応答、部分的な応答、または安定病態を有する該被験体を特徴付ける、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
ヒト被験体において非ホジキンＢ細胞リンパ腫を処置する方法であって、該方法は、少なくとも１つの治療的な有効量の抗ＣＤ２０抗体を、該被験体に投与する工程、および該被験体における受容可能閾値レベル以上のナチュラルキラー（ＮＫ）細胞数を維持するための手段を提供する工程を包含し、該手段は、治療的な有効量のインターロイキン２（ＩＬ−２）を、少なくとも１回、投与する工程を包含し、ここで、該治療的な有効量のＩＬ−２は、約２２ＩＵ＊時間／ｍｌ血清〜約６５３ＩＵ＊時間／ｍｌ血清の範囲内の開始時ＩＬ−２暴露を生じる量であり、ここで、該ＩＬ−２暴露は、ヒト薬物速度論（ＰＫ）データによって決定される血清濃度時間曲線（ＡＵＣ）の下の面積として測定される、方法。
【請求項６４】
前記受容可能な閾値レベルが約１５０細胞／μｌである、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
ＩＬ−２が一定的ＩＬ−２投薬レジメンに従って投与され、ここで、該治療的な有効量のＩＬ−２は、参照ＩＬ−２標準の用量と同じ開始時ＩＬ−２暴露を達成するために必要な量であり、ヒトＰＫデータ由来の血清濃度時間曲線の下の面積によって決定される約９３３．３３μｇ〜約１２００μｇの範囲内である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６６】
前記抗ＣＤ２０抗体の前記治療的な有効量が、約１２５ｍｇ／ｍ２〜約５００ｍｇ／ｍ２の範囲内である、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記一定的ＩＬ−２投薬レジメンが、前記治療的な有効量のＩＬ−２を、週に２回または週に３回の投薬計画に従って投与する工程を包含する、請求項６５に記載の方法。
【請求項６８】
請求項６３に記載の方法であって、ＩＬ−２が、ＩＬ−２の２段階投薬レジメンに従って投与され、ここで、該ＩＬ−２の２段階投薬レジメンは、週あたりのより高い総用量のＩＬ−２が前記被験体に投与される第１期を含み、その後、週あたりのより低い総用量のＩＬ−２が該被験体に投与される第２期が続く、方法。
【請求項６９】
請求項６８に記載の方法であって、前記週あたりのより高い総用量のＩＬ−２が、参照ＩＬ−２標準の週あたりの総用量と等量であり、ヒト薬物速度論（ＰＫ）データ由来の血清濃度時間曲線の下の面積によって決定される２０００μｇ〜３６００μｇの範囲内であり、ここで、前記週あたりのより低い総用量のＩＬ−２が、参照ＩＬ−２標準の週あたりの総用量と等量であり、ヒトＰＫデータ由来の血清濃度時間曲線の下の面積によって決定される１２００μｇ〜２６００μｇの範囲内であり、そして、ここで、該週あたりのより低い総用量のＩＬ−２が、該週あたりのより高い総用量のＩＬ−２より低い、方法。
【請求項７０】
前記治療的な有効量の抗ＣＤ２０抗体が、約１２５ｍｇ／ｍ２〜約５００ｍｇ／ｍ２の範囲内である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
ＩＬ−２の最初の用量が、抗ＣＤ２０抗体の最初の用量の投与より前に前記被験体に投与される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７２】
前記ＩＬ−２の最初の用量が、前記抗ＣＤ２０抗体の最初の用量と同時に前記被験体に投与される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７３】
前記ＩＬ−２の最初の用量が、前記抗ＣＤ２０抗体の最初の用量が前記被験体に投与された１週間後に該被験体に投与される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７４】
請求項６９に記載の方法であって、前記週あたりのより高い総用量のＩＬ−２が、１用量として投与されるか、または第１の一連の等用量に分割され、週に２回、３回、４回、５回、６回または７回の投薬計画に従って投与され、前記週あたりのより低い総用量のＩＬ−２が、１用量として投与されるか、または第２の一連の等用量に分割され、週に２回、３回、４回、５回、６回または７回の投薬計画に従って投与される、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、非ホジキンリンパ腫の治療方法に関し、より詳細には、インターロイキン２およびＣＤ２０Ｂ細胞表面抗原を標的化するモノクローナル抗体を用いた併用療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
非ホジキンリンパ腫は、優勢にＢ細胞起源である悪性疾患の多様な群である。Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ分類スキームにおいて、これらのリンパ腫は、それらのナチュラルヒストリー（ｎａｔｕｒａｌ  ｈｉｓｔｏｒｙ）の観点から、低級、中級および高級のカテゴリーに分類される（「Ｔｈｅ  Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｊｅｃｔ」Ｃａｎｃｅｒ  ４９（１９８２）：２１１２〜２１３５を参照のこと）。低級リンパ腫は、無痛性であり、５〜１０年の生存メジアンを有する（ＨｏｒｎｉｎｇおよびＲｏｓｅｎｂｅｒｇ（１９８４）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１１：１４７１〜１４７５）。化学治療は、大部分の無痛性リンパ腫における寛解を誘導し得るが、治癒は稀であり、大部分の患者は、結局再発し、さらなる治療を必要とする。中級リンパ腫および高級リンパ腫は、さらに攻撃的な腫瘍であるが、それらは化学治療を用いた治癒のより高い可能性を有する。しかし、有意な割合のこれらの患者は、再発し、そしてさらなる処置を必要とする。
【０００３】
インターロイキン−２（ＩＬ−２）は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびＴ細胞の増殖および機能の強力な刺激物質である（Ｍｏｒｇａｎら、（１９７６）Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９３：１００７〜１０１１）。この天然に存在するリンホカインは、単独でかまたはリンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞もしくは腫瘍湿潤リンパ球（ＴＩＬ）と組み合わされる場合のいずれかで、種々の悪性疾患に対して抗腫瘍活性を有することが示されている（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、（１９８７）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１６：８８９〜８９７；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（１９８８）Ａｎｎ．Ｓｕｒｇ．２０８：１２１〜１３５；Ｔｏｐａｌｉａｎら、（１９８８）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．６：８３９〜８５３；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、（１９８８）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１９：１６７６〜１６８０；およびＷｅｂｅｒら、（１９９２）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１０：３３〜４０を参照のこと）。ＩＬ−２の抗腫瘍活性は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２（市販で入手可能なＩＬ−２処方物）を使用する、転移性黒色腫および腎臓細胞癌を有する患者において記載されている。他の疾患（リンパ腫を含む）もまた、ＩＬ−２での処置に応答すると考えられる（Ｇｉｓｓｅｌｂｒｅｃｈｔら（１９９４）Ｂｌｏｏｄ  ８３（８）：２０２０〜２０２２）。しかし、腫瘍増殖に関して、陽性の治療結果を達成するために使用されるＩＬ−２の高い用量は、重度な副作用（毛細血管漏出、高血圧および神経学的変化を含む）を頻繁に引き起こす（例えば、Ｄｕｇｇａｎら、（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  １２：１１５〜１２２；Ｇｉｓｓｅｌｂｒｅｃｈｔら、（１９９４）Ｂｌｏｏｄ  ８３：２０８１〜２０８５；ならびにＳｚｎｏｌおよびＰａｒｋｉｎｓｏｎ（１９９４）Ｂｌｏｏｄ  ８３：２０２０〜２０２２を参照のこと）。
【０００４】
癌研究は、治療剤としてのモノクローナル抗体の使用に向けられる。診断抗体と同様の様式で惹起されるが、治療抗体は、腫瘍細胞を標的化するように設計され、それにより、腫瘍細胞の破壊を容易にする。治療的モノクローナル抗体の使用は、タンパク質の抗原性に関連する問題に起因して、過去、主に妨害されてきた。モノクローナル抗体は、慣用的にマウス産物であり、それによって、ヒトに注射した場合、抗マウス応答を生じる。これはいわゆるＨＡＭＡ（ヒト抗マウス抗体）応答と呼ばれ、繰返し投薬がほとんど常に防止されるので、モノクローナル抗体の使用の際に大きな制限を与える。さらに、血清病のような重篤な合併症が、これらの薬剤の使用と共に報告されている。キメラ抗体またはヒト化抗体の出現で、モノクローナルの治療的利点が認められた。組換えＤＮＡ技術を使用して、抗体の可変性領域または抗原認識部位をヒト抗体の骨格に結合することによってモノクローナル抗体を構築することが可能である。この構築物は、宿主由来の外来性抗体のブロックまたは除去の頻度を大きく減少させる。この発展は、複数用量の抗体が与えられるのを可能にし、この治療を用いた再現性でかつ持続性の応答についての機会を提供する。
【０００５】
モノクローナル抗体はますます、Ｂ細胞型のリンパ腫の処置のための選択された方法となる。全てのＢ細胞は、共通の細胞表面マーカーを発現し、このマーカーとしては、ＣＤ２０およびＣＤ１９が挙げられる。ＣＤ２０は、３３〜３７ｋＤのリンタンパク質であり、このリンタンパク質は、Ｂ細胞分化において早期に発現され、そして通常は成熟プラズマ細胞において消失する。ＣＤ１９は、細胞が抗原に係合する場合、Ｂ細胞抗原レセプターと密接に関連し、そしてシグナルを送達するように機能する。ＣＤ２０およびＣＤ１９は、リンパ腫細胞上でかなり高いレベルで発現される。約９０％の低級リンパ腫は、ＣＤ２０を発現するが、ＣＤ１９は、骨髄前駆体およびプラズマ細胞を除く全てのＢ細胞からほとんど遍在的に発現される。
【０００６】
ＣＤ２０は、Ｂ細胞抗原に指向されるモノクローナル治療についての主要な標的となる。インビトロでの研究は、ＣＤ２０に指向されるモノクローナル抗体がアポトーシスによる細胞死を生じることを証明している（Ｓｈａｎら、（１９９８）Ｂｌｏｏｄ  ９１：１６４４〜１６５２）。他の研究は、Ｂ細胞死が抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）によって主に媒介されることを報告する。ＡＤＣＣは、その標的に結合したモノクローナル抗体のレセプターを運ぶ特定のエフェクター細胞に依存する細胞機構である。これらは、一般に、ＮＫ細胞、好中球および単球／マクロファージ系統を有する細胞上に存在するレセプターである。ＮＫ細胞は、この表現型の関連する媒介物であると考えられ、そしてＣＤ２０に対する抗体は、主にＡＤＣＣによってそれらの細胞傷害性を媒介する。
【０００７】
抗ＣＤ２０抗体の抗腫瘍活性の可能な免疫学的基礎に起因して、ＮＫ細胞機能を増強する他のサイトカインとの組み合わせが試験される。ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＴＨＦ−α、ＴＨＦ−β、γ−ＩＦＮおよびＩＬ−２のようなサイトカインを、ＡＤＣＣの増強作用（ＮＫ細胞独特の機能である）について試験した。全てがＡＤＣＣの増強の際に活性であると考えられるが、各因子は、それ自体の特定の毒性に関連する。
【０００８】
最も強制的な動物モデルは、Ｄａｕｄｉ細胞を用いて移植されたヌードマウスである。Ｄａｕｄｉ細胞は、バーキットリンパ腫、ＣＤ２０を発現するＢ細胞腫瘍を有する患者由来の細胞株からの細胞である。このモデルにおいて、ＩＬ−２は、予防法として、および腫瘍が樹立した後の両方の非結合体化抗ＣＤ２０抗体と組み合わせて試験された（Ｈｏｏｉｊｂｅｒｇら、（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５５：２６２７〜２６３４）。Ｈｏｏｉｊｂｅｒｇの研究は、ＩＬ−２が、非結合抗ＣＤ２０抗体と組み合わせて、いくつかの動物において完全に腫瘍を排除し得ることを示した。この組み合わせは、腫瘍の完全な退行をもたらすのにかなり有効であった。他のサイトカインの組み合わせおよびサイトカイン単独での使用は、腫瘍を除去する際にあまり有効ではなかった。Ｈｏｏｉｊｂｅｒｇらはまた、腫瘍増殖を予防する際の組み合わせを試験し、そしてＩＬ−２および抗ＣＤ２０が腫瘍増殖を予防する際にかなり有効であることを見出した。
【０００９】
従って、この動物モデルは、ＩＬ−２が、抗ＣＤ２０との組み合せにおいて、腫瘍の増殖予防において、Ｂ細胞腫瘍退化の強力なメディエーターであるという考えを支持する。この研究において、ＩＬ−２は、毎週与えられ、皮下に２００，０００単位／マウスを投与した。ヒトの等価量は、６００ＭＩＵであり、これは、高用量のボーラスより大きい用量で腎臓細胞癌または転移性黒色腫の処置において利用される。
【００１０】
リツキシマブ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）（ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８；ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）は、キメラ抗ＣＤ２０モノクローナル抗体であり、ヒトＩｇＧ１およびκ定常領域を含み、マウス可変領域（マウス抗ＣＤ２０モノクローナル抗体（ＩＤＥＣ−２Ｂ８）（Ｒｅｆｆら、（１９９４）Ｂｌｏｏｄ  ８３：４３５〜４４５）から単離したもの）を含む。リツキシマブの抗リンパ腫効果は、部分的に補体媒介性細胞傷害性（ＣＭＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、細胞増殖の阻害、および最終的にアポトーシスの直接的な誘導に起因する。初期の研究で、リツキシマブは、迅速なＣＤ２０＋正常Ｂ細胞およびリンパ腫細胞の枯渇を誘導する（Ｒｅｆｆら、（１９９４）Ｂｌｏｏｄ  ８３：４３５〜４４５）。第Ｉ相試験の５００ｍｇ／ｍ２までの単回用量および３７５ｍｇ／ｍ２の４週用量は、低悪性度または濾胞性リンパ腫患者において用量を限定しない毒性を伴う臨床的な応答を示した（Ｍａｌｏｎｅｙら、（１９９４）Ｂｌｏｏｄ  ８４：２４５７〜２４６６）。第ＩＩ相試験において、３７５ｍｇ／ｍ２の４週注入は、１０．２ヶ月の進行に対する時間の中央値において、評価可能な低悪性度または濾胞性リンパ腫患者の３４人中１７人に応答を誘導した（Ｍａｌｏｎｅｙら、（１９９７）Ｂｌｏｏｄ  ９０：２１８８〜２１９５）。副作用は、最初のリツキシマブ注入に関し、通常自然に緩和した。最近報告された大規模の中心的な第ＩＩ相試験において、低悪性度または濾胞性リンパ腫患者の１６６人の患者において目的の応答は、１５１人の評価可能な患者の７６人（５０％）について報告され、副作用は、以前に記載されるものと同一であった（ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎら、（１９９８）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１６：２８２５〜２８３３）。巨大細胞組織を有する患者においてのリツキシマブを用いた以前の試験は、非常に限定され、１２人未満の患者が初期の第Ｉ相および第ＩＩ相試験に含まれる。しかし、最近の研究は、リツキシマブが拡大した巨大細胞リンパ腫および外套（ｍａｎｔｌｅ）細胞リンパ腫患者において活性を有し、このような患者において化学療法の組み合せが試験されるべきであることを示す（Ｃｏｉｆｆｉｅｒら（１９９８）Ｂｌｏｏｄ  ９２：１９２７〜１９３２）。
【００１１】
しかし、全ての最近の抗新生物治療の実態は、腫瘍が、種々のメカニズム（腫瘍の回避、薬物抵抗性の獲得、および細胞表面標的分子の下流制御などを含む）により、治療に抵抗するようになることである。最近の研究において、抗ＣＤ２０抗体でのＢ細胞リンパ腫の治療は、ＣＤ２０抗原発現を減じ得ることが示された（Ｄａｖｉｓら（１９９９）、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５：６１１〜６１５）。リツキシマブでの治療の二つの過程の後に、被験体は、もはやＣＤ２０を発現しない形質転換されたリンパ腫を発生した。
【００１２】
したがって、ＩＬ−２治療単独およびリツキシマブ治療単独では、リンパ腫の部分的な処置のための手段を提供するが、新たな治療は、この癌の持続的な処置を提供するのに必要とされる。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
（本発明の要旨）
インターロイキン２（ＩＬ−２）またはその改変体（本明細書中で、以後、まとめて「ＩＬ−２」とする）と少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体またはそのフラグメント（本明細書中で、以後、まとめて「抗ＣＤ２０抗体」とする）との組み合わせを用いる、リンパ腫を有するヒト被験体に対する処置を提供する方法が、提供される。これらの２つの治療薬剤は、別々の薬学的組成物（一方はＩＬ−２を含み、他方は少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体を含む）として、それぞれ特定の投薬レジメンに従い、投与される。抗ＣＤ２０抗体を含む薬学的組成物は、週に１回の投薬計画に従って、投与される。ＩＬ−２を含む薬学的組成物は、週に２回または３回の一定的ＩＬ−２投薬計画に従って、投与されるか、または２段階ＩＬ−２投薬レジメンに従って、投与される。この２段階ＩＬ−２投薬レジメンは、週あたりにより高い総用量のＩＬ−２が被験体に投与されるＩＬ−２投薬の第１期を含み、その後、週あたりにより低い総用量のＩＬ−２が被験体に投与されるＩＬ−２投薬の第２期が続く。ＩＬ−２投薬の第２期の間の週あたりのＩＬ−２の総用量は、ＩＬ−２投薬の第１期の間の週あたりのＩＬ−２の総用量より低い。ＩＬ−２投薬の第１期および／または第２期の間に投与される週あたりのＩＬ−２の総用量は、１回の用量として投与され得る。あるいは、ＩＬ−２投薬の第１期および第２期のどちらかまたは両方の間の週あたりのＩＬ−２の総用量は、週に２回、３回、４回、５回、６回または７回の投薬計画に従って投与される、一連の等用量に分割される。幾つかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体を２段階ＩＬ−２投薬と組み合わせて用いる治療の多数のメンテナンス周期は、非ホジキンリンパ腫の処置を必要とする被験体に投与され、ここで、それぞれのメンテナンス周期は、抗ＣＤ２０抗体を２段階ＩＬ−２投薬レジメンと組み合わせて投与する工程を含む。これらの多数のメンテナンス周期の投与の必要性は、本発明の方法を用いる処置を受けている被験体のナチュラルキラー（ＮＫ）細胞数をモニターすることにより、評価される。この方法はまた、ＩＬ−２の２段階投薬レジメン中の中断を提供し、ここで、被験体が、ＩＬ−２投与の中止期間またはＩＬ−２投与および抗ＣＤ２０抗体投与の中止期間を、２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第１期と第２期との間に与えられる。
【００１４】
本明細書中で述べる方法において、これらの２種の薬剤を一緒に投与することは、これらのどちらかの薬剤を単独で使用することにより達成され得るより大きな治療的有効性を提供し、陽性の治療的応答（どちらかの薬剤単独を用いて観察される応答より改善される）を生じる。さらに、これらの薬剤の有益な治療効果は、ＩＬ−２のより低い蓄積容量を用いて達成され得、これにより、長期のＩＬ−２投与の毒性および腫瘍回避の可能性を減じ得る。
【００１５】
抗ＣＤ２０抗体およびＩＬ−２を用いた併用治療の期間中に経験する被験体の臨床的応答を予測する方法もまた、提供される。この方法は、併用療法の期間の開始後約１週間〜約１４週間の上述の被験体において、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖をモニターする工程を、包含する。ＮＫ細胞の増殖の数の閾値が、提供され、これにより、これらの２つの治療薬剤の併用療法を受けている被験体における陽性の治療応答を予測する。
【００１６】
（発明の詳細な説明）
本発明は、リンパ腫、より詳細には、非ホジキンＢ細胞リンパ腫を有するヒト被験体を処置する方法に関する。この方法は、インターロイキン−２またはこの改変体（本明細書中で、以後まとめて「ＩＬ−２」とする）および少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体またはこれのフラグメント（本明細書中で、以後まとめて「抗ＣＤ２０抗体」とする）を用いた組み合わせ治療を含む。これらの２つの治療薬剤の組み合わせ治療は、抗腫瘍活性を提供する。「抗腫瘍活性」は、細胞増殖の速度を減少させることを意図し、従って、存在する腫瘍の増殖速度を減少させるかまたは治療中に生じる腫瘍を減少させ、そして／または存在する新生物（腫瘍）細胞、または新たに形成される新生物細胞の破壊、従って治療中の腫瘍の全体の大きさを減少させることを意図する。本発明の方法に従い、ＩＬ−２および少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体の組み合わせを用いる治療を受けている被験体は、Ｂ細胞リンパ腫（より詳細には非ホジキンＢ細胞リンパ腫）の処置に関して、有益な生理学的応答を経験する。
【００１７】
本発明の治療方法は、異常なＢ細胞型がＣＤ２０表面抗原を発現する、任意の非ホジキンＢ細胞リンパ腫の処置に関する。「ＣＤ２０表面抗原」は、３３〜３７ｋＤ内在性膜リンタンパク質を意図する。このリンタンパク質は、前Ｂ細胞発生初期の間に発現され、成熟Ｂ細胞まで続くが、プラスマ細胞期に失われる。ＣＤ２０は、正常Ｂ細胞において発現されるが、この表面抗原は、通常、新生物Ｂ細胞において非常に高いレベルで発現される。Ｂ細胞リンパ腫および慢性のリンパ性白血病の９０％より多く、および前Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病の約５０％が、この表面抗原を発現する。
【００１８】
ＩＬ−２および抗ＣＤ２０抗体を用いた併用治療は、任意の型の癌（この癌の衰えずに増殖する細胞が、ＣＤ２０表面抗原を発現する）の処置において、有用であり得ることが、理解される。従って、例えば、癌が異常なＴ細胞増殖を伴い、この異常なＴ細胞集団がＣＤ２０表面抗原を発現する場合、本発明の方法に従う併用治療は、この癌の処置に関する陽性の治療応答を提供する。ＣＤ２０表面抗原を発現するヒトＴ細胞集団は、（Ｂ細胞に比べて少ない量であるが、）同定されている（Ｈｕｌｔｉｎら（１９９３）Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  １４：１９６〜２０４）。
【００１９】
本発明の方法は、改定された欧州および米国リンパ腫分類（Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ａｎｄ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ）（ＲＥＡＬ）システムに従って分類されているＢ細胞リンパ腫の治療処置において有用であることが認識されている。このようなＢ細胞リンパ腫としては、前駆Ｂ細胞新生物として分類されるリンパ腫（例えば、Ｂリンパ芽球白血病／リンパ腫）；末梢Ｂ細胞新生物（Ｂ細胞慢性リンパ性白血病／小リンパ球性リンパ腫、リンパ性プラズマ細胞様リンパ腫／免疫細胞腫、外套細胞腫（ＭＣＬ）、小胞中心リンパ腫（小胞性）（拡散小細胞、拡散混合小細胞および大細胞、および拡散大細胞リンパ腫を含む）、周辺帯Ｂ細胞リンパ腫（結節外型、結節型、および脾臓型を含む）、有毛細胞白血病、プラズマ細胞腫／黒色腫、サブタイプ一次縦隔（胸腺）の拡散大細胞Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、およびバーキット様高級リンパ腫を含む）；ならびに分類不能な低級または高級Ｂ細胞リンパ腫が挙げられるが、これらに限定はされない。
【００２０】
「非ホジキンＢ細胞リンパ腫」は、異常な、制御不能なＢ細胞増殖に関する任意の非ホジキンＢ細胞リンパ腫をベースとするリンパ腫を意図する。本発明の目的のために、このようなリンパ腫は、Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ分類スキーム（「Ｔｈｅ  Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｉｋｉｎ’ｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｊｅｃｔ」、Ｃａｎｃｅｒ  ４９（１９８２）：２１１２〜２１３５）に従って示され、これは、これらのＢ細胞リンパ腫が低悪性度、中悪性度、および高悪性度として分類されることを示している。低悪性度のＢ細胞リンパ腫は、小リンパ球性リンパ腫、濾胞性小分割細胞リンパ腫、ならびに濾胞性混合小分割細胞リンパ腫を含み；中悪性度リンパ腫は、濾胞性大細胞リンパ腫、びまん性核切れ込み小細胞リンパ腫、びまん性小細胞ならびに大細胞混合細胞、およびびまん性核切れ込み大細胞リンパ腫を含み；そして高悪性度リンパ腫は、大細胞免疫芽球リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、およびバーキット型ならびに非バーキット型のリンパ腫の小細胞非分割細胞リンパ腫を含む。
【００２１】
本発明の方法は、既存の非ホジキンＢ細胞リンパ腫の処置に関するが、この方法は、治療の間に生じるさらなる腫瘍増殖を防止する際に有用であり得ることが認識される。本発明の方法は、低級Ｂ細胞リンパ腫を有する被験体、特にその被験体が標準的な化学療法後の再発を有する被験体の処置において有用である。低級Ｂ細胞リンパ腫は、中級および高級Ｂ細胞リンパ腫よりもより無痛性であり、そして再発／軽減経過によって特徴付けられる。従って、これらのリンパ腫の処置は、再発エピソードが数および重篤度において減少するように、本発明の方法を使用して改善される。
【００２２】
本発明の方法に従って、以下のいずれかで定義されるように、ＩＬ−２および少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体は、非ホジキンＢ細胞リンパ腫に関する陽性治療応答を促進するために組み合わせて使用される。「陽性治療応答」は、組み合わせられたこれらの薬剤の疾患における改善および／または疾患に関連する症状における改善を意図する。従って、例えば、疾患における改善は、完全な応答として特徴付けられ得る。「完全な応答」は、任意の以前に異常であったＸ線撮影研究、骨髄、および脳脊髄液（ＣＳＦ）の正常化を有する臨床的に検出可能な疾患の非存在を意図する。このような応答は、本発明の方法に従う処置後少なくとも１か月間持続しなければならない。完全な応答は、腫瘍症状のくり返し評価が最初の応答が評価されてから後少なくとも１ヶ月なされない場合、確認され得る。あるいは、疾患における改善は、部分的応答であるとして分類され得る。「部分的応答」は、新しい病変の非存在下および少なくとも１か月の持続下での全ての測定可能腫瘍負荷（すなわち、被験体に存在する腫瘍細胞の数）における少なくとも５０％の減少を意図する。このような応答は、測定可能な腫瘍のみに適用可能である。これらの陽性治療応答に加えて、これらの２つの治療薬剤を用いた併用治療を受ける被験体は、この疾患に関連する症状における改善の有益な効果を経験し得る。従って、被験体は、いわゆるＢ症状（すなわち、寝汗、熱、体重減少、および／またはじんま疹）の減少を経験し得る。
【００２３】
ヒト被験体における非ホジキンリンパ腫に関する陽性治療応答の促進は、ＩＬ−２および少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体の両方を用いる併用治療を介して達成される。「併用治療」は、両方の物質の組み合わせの治療効果が、治療を受ける被験体において引き起こされるように、ヒト被験体へＩＬ−２および少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体を提供することを意図する。併用治療は、特定の投薬レジメンに従い、ＩＬ−２を含む薬学的組成物の少なくとも１つの治療有効用量および少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体を含む薬学的組成物の少なくとも１つの治療有効用量を投与することによって達成され得る。例えば、本発明の方法に従い、併用治療は、推奨される一週間総量のＩＬ−２を含む薬学的組成物を、推奨治療的有効許容量の少なくとも一つの抗ＣＤ２０抗体を含む薬学的組成物との組み合わせで投与することにより、達成される（それぞれの投与は、特定の投薬レジメンに従って投与される）。「治療的に有効な用量または量」は、他の治療薬剤の治療的に有効な用量または量を投与される場合、非ホジキンリンパ腫のようなＢ細胞リンパ腫の処置に関して陽性の治療応答を引き起こす、治療薬剤の量を意図する。別々の薬学的組成物の投与は、両物質の組み合わせの治療効果が治療を受けている被験体において引き起こされる限り、同じとき（すなわち、同時）または異なる時（すなわち、連続で、どちらかの順序で、同日または異なる日）であり得る。
【００２４】
治療的に活性な成分として、これらの抗治療剤を含む別々の薬学的組成物は、当該分野で公知の任意の受容可能な方法を使用して投与され得る。従って、例えば、ＩＬ−２を含む薬学的組成物は、任意の注射形態（静脈内（ＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）、または皮下（ＳＣ）の注射を含む）よって投与され得る。本発明の幾つかの実施形態においては、ＩＬ−２を含む薬学的組成物は、ＳＣ注射によって投与される。本発明の他の実施形態において、ＩＬ−２を含む薬学的組成物は、徐放性の処方物であり、または徐放性デバイスを使用して投与される処方物である。このようなデバイスは、当該分野で周知であり、このようなデバイスとしては、経皮パッチ、およびミニチュアの移植可能ポンプが挙げられ、これは、連続的な定常状態様式の経時の薬物送達を、種々の用量において提供し得、非徐放性のＩＬ−２薬学的組成物を用いて、徐放性効果を達成し得る。抗ＣＤ２０抗体を含む薬学的組成物は、例えば、静脈内に投与される。静脈内に投与される場合、抗ＣＤ２０抗体を含む薬学的組成物は、約１〜約１０時間にわたる注入によって投与され得る。幾つかの実施形態において、投与される抗ＣＤ２０抗体に依存して、抗体の注入は、約２〜約８時間にわたって、約３〜約７時間にわたって、約４〜約６時間にわたって、または約６時間にわたって投与される。
【００２５】
これらの治療薬剤の両方を本明細書中で示される様式で用いる併用治療は、これらのどちらかの薬剤を単独で使用することにより達成され得るより大きな治療的有効性を提供し、陽性の治療的応答（いずれかの薬剤単独を用いて観察される応答に対して改善される）を生じる。この陽性治療応答は、ＩＬ−２を単独の薬剤として使用して同様の治療有益性を得るために求められる用量より、低い蓄積用量のＩＬ−２を用いて達成される。従って、普通は治療的に有効ではないＩＬ−２単独の用量が、本発明の方法に従い、少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体との組み合わせで投与される場合に、治療的に有効であり得る。このの有意性は、２倍である。まず、ＩＬ−２を用いたリンパ腫の処置の治療的有益性の可能性は、普通、長期のＩＬ−２治療または高ボーラスのＩＬ−２投与に関わる傷害性応答を縮小する、ＩＬ−２の用量で実現され得る。このような傷害性応答としては、慢性疲労、悪心、高血圧、熱、悪寒、体重増加、かゆみまたは発疹、呼吸困難、窒素血症、錯乱、血小板減少、心筋梗塞、胃腸毒性、および脈管漏出症候群（例えば、Ａｌｌｉｓｏｎら（１９８９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．７（１）：７５−８０）が挙げられるが、これらに限定されない。第２に、モノクローナル抗体による腫瘍細胞表面上の特定の分子の標的化は、抗体によって認識されないかまたはその結合に影響されないクローンを選択し得、腫瘍回避、および効果的な治療処置の喪失を生じる。このような腫瘍回避は、反復用量の抗ＣＤ２０抗体を用いて記載されている（Ｄａｖｉｓら（１９９９）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５：６１１−６１５）。ＩＬ−２と組み合わせて投与される抗ＣＤ２０抗体の改善された治療的有効性は、モノクローナル抗体のより頻繁でない投与に変換し得、それにより、腫瘍回避の可能性をより低くする。
【００２６】
ＩＬ−２の量と組み合わせて投与される少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体の量および他の抗腫瘍剤の効力を増強するために必要なこれらの治療薬剤のどちらかの量は、本明細書中で示される開示が与えられれば、過度な実験を用いることなく、当業者によって容易に決定される。本明細書中で開示される投薬レジメンに従い、所定の量の少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体と組み合わせて投与されるＩＬ−２のそれぞれの量に影響する因子としては、投薬の形態、治療を受ける特定のリンパ腫、疾患の重篤度、疾患の履歴、および治療を受ける個体の年齢、身長、体重、健康、および身体状態が挙げられるが、これらに限定されない。同様に、これらの因子は、本明細書中で示される様式でのＩＬ−２／抗ＣＤ２０抗体の組み合わせ治療に対するくり返しの暴露の必要性に影響する。一般に、治療を受ける被験体の体重が増加するにつれて、これらの抗体薬剤のより高い投薬量が好ましい。ｃ
本発明の方法に従い、本明細書中の以下で定義されるように、週に１回以上の抗ＣＤ２０抗体の投薬の処置を受けているヒト被験体はまた、本明細書中の以下で定義されるように、一定的ＩＬ−２投薬レジメンまたは２段階ＩＬ−２投薬レジメンに従い、ＩＬ−２も、投与される。被験体に投与される第１の治療的に有効な投薬は、抗ＣＤ２０抗体またはＩＬ−２であり得、どちらのＩＬ−２投薬レジメンが使用されたかによる。一般的に、個体が一定的ＩＬ−２投薬レジメンを受ける場合、投与される最初の治療的薬剤は抗ＣＤ２０抗体であり、その後、ＩＬ−２の第１用量が投与される。ＩＬ−２の第１用量は、例えば、第１の治療有効用量の抗ＣＤ２０抗体の投与後１０日以内（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０日）に投与される。幾つかの実施形態において、一定的ＩＬ−２投薬レジメンは、第１の治療有効用量の抗ＣＤ２０抗体の投与の７日以内（例えば、１、２、３、４、５、６、または７日）の、第１用量のＩＬ−２の投与によって、開始される。個体が２段階ＩＬ−２投薬レジメンを受ける場合、それぞれが本明細書中で開示される特定の投薬レジメンに従って、被験体が重複期間（両方の治療薬剤が被験体に投与される）を有する限り、いずれの治療薬剤もが最初に投与され得る。
【００２７】
従って、１実施形態において、ＩＬ−２の２段階投薬レジメンは、抗ＣＤ２０抗体の治療有効用量の週１回の投与の開始に先んじて、開始される。この様式において、ＩＬ−２の第１用量は、抗ＣＤ２０抗体の第１用量が投与される前１ヶ月以内に投与される。「１ヶ月以内」は、ＩＬ−２の第１用量が、抗ＣＤ２０抗体投与の開始の少なくとも１日前に投与されるが、抗ＣＤ２０抗体投与の開始の１ヶ月（すなわち、３０日）以上前ではないことを、意図する。従って、ＩＬ−２投与は、第１治療有効用量の抗ＣＤ２０抗体の投与の、例えば、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日（すなわち、１週間）、１０日、１４日（すなわち、２週間）、１７日、２１日（すなわち、３週間）、２４日、２８日（４週間）または１月（すなわち、３０日）まで前に、開始され得る。
【００２８】
他の実施形態において、２段階ＩＬ−２投薬レジメンおよび抗ＣＤ２０抗体投与は、同じ時（すなわち、同時投与）または異なる時（すなわち、どちらかの順番の連続的投与）で、同時に同日に始まる。従って、例えば、これらの２つの治療的薬剤を用いた併用治療は、処置期間の第１日目に始まる１実施形態においては、抗ＣＤ２０抗体の第１の治療有効用量およびＩＬ−２の第１の用量は、両方ともこの処置期間の第１日目に投与される。
【００２９】
代替の実施形態において、抗ＣＤ２０抗体の第１の治療有効用量は、例えば、処置期間の第１日目に被験体に投与され、そして２段階ＩＬ−２投薬レジメンは、抗ＣＤ２０抗体の第１の治療有効用量の投与の１０日以内に、ＩＬ−２の第１の用量の投与により、開始される。このような実施形態において、好ましくは、２段階ＩＬ−２投薬レジメンが、抗ＣＤ２０抗体の第１の治療有効用量の投与の７日以内にＩＬ−２（例えば、１、２、３、４、５、６、または７日）の第１の用量の投与により開始される。疾患の重度、患者の健康、および患者の疾患の既往歴に依存して、本明細書中で開示される投薬レジメンに従った、ＩＬ−２および抗ＣＤ２０抗体を用いた併用治療の反復セッションが、企図される。このような反復セッションは、本明細書中でメンテナンス周期と呼ばれ、以下でさらに詳細に記載される。
【００３０】
本発明の方法に従い、治療有効用量の抗ＣＤ２０抗体は、一定的ＩＬ−２投薬レジメンと組み合わせるか、または２段階ＩＬ−２投薬レジメンと組み合わせて、毎週投与される。治療有効用量の抗ＣＤ２０抗体の毎週投与の期間は、およびどちらかのＩＬ−２投薬レジメンの期間は、被験体の全体的な健康、疾患進行の履歴、および特定の抗ＣＤ２０／ＩＬ−２投与プロトコルの耐性に依存する。一般的に、抗ＣＤ２０抗体の毎週投与の期間は、約４週間〜約８週間（４、５、６、７または８週間を含む）である。ＩＬ−２投与の期間は、使用したＩＬ−２投薬レジメンの関数である。
【００３１】
本発明の幾つかの実施形態において、これらの２つの治療薬剤の併用治療を受けている被験体は、一定的ＩＬ−２投薬レジメンを投与される。「一定的ＩＬ−２投薬レジメン」は、ＩＬ−２および抗ＣＤ２０抗体を用いた併用治療を受けている被験体が、週あたりに一定の総用量のＩＬ−２を投与されることを意図する。このＩＬ−２の週あたりの総用量は、一連の等用量に分割され、これらの等用量が、週に２回または３回の投薬計画に従って投与される。一定的ＩＬ−２投薬レジメンに関して、「週に２回」「毎週２回」または「一週間につき２回」の投薬計画は、ＩＬ−２の週あたりの総用量が、２回の等用量に分割され、これら等用量が、７日間以内に被験体に投与される（投薬と投薬との間は最短７２時間、最長９６時間とされる）ことを意味することを意図される。「週に３回」「毎週３回」または「一週間につき３回」の投薬計画は、ＩＬ−２の週あたりの一定の総用量が、３回の等用量に分割され、これら等用量が、７日間以内に被験体に投与される（投薬と投薬との間は最短２５時間、最長７２時間とされる）ことを意味することを意図する。一定的ＩＬ−２投薬レジメンの期間は、約４週間〜約１０週間（例えば、４、５、６、７、８、９、または１０週間）である。
【００３２】
従って、このような実施形態の１つにおいて、これらの２つの治療薬剤を用いた併用治療は、４週間〜８週間の一定的ＩＬ−２投薬レジメンの投与と組み合わせて、少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体の治療有効用量を４週間、毎週投与することを包含し、ここで、ＩＬ−２の週あたりの推奨総用量は、それぞれ３つの等用量に分割され、これら等用量が、週３回投薬計画に従って、７日間以内に被験体に投与される（すなわち、投薬と投薬との間は最短２５時間、最長７２時間とされる）。１実施形態において、一定的ＩＬ−２投薬レジメンは、４週間の期間を有する；別の実施形態においては、一定的ＩＬ−２投薬レジメンは、８週間の期間を有する。例えば、少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体の治療有効用量が、処置期間の１日目、８日目、１５日目、および２２日目において投与され、そして４週間または８週間の一定的ＩＬ−２投薬レジメンが、同じ処置期間の３日目、４日目、５日目、６日目、７日目、８日目、９日目、もしくは１０日目に開始される。このような１つの実施形態において、４週間または８週間の一定的ＩＬ−２投薬レジメンは、同じ処置期間の８日目に始まり、ＩＬ−２の週あたりの推奨総用量は、それぞれ３つの等用量に分割され、週３回投薬計画に従って投与される（すなわち、ＩＬ−２の４週分の総用量は、計１２回の等用量で投与される；またはＩＬ−２の８週分の総用量は、計２４回の等用量で投与される）。
【００３３】
従って、例えば、４週間の一定的ＩＬ−２投薬レジメンが企図され、治療有効用量の抗ＣＤ２０抗体が、処置期間の１日目、８日目、１５日目、および２２日目に投与され、一方、１２回分の等用量のＩＬ−２は、同じ処置期間の８日目、１０日目、１２日目、１５日目、１７日目、１９日目、２２日目、２４日目、２６日目、２９日目、３１日目、および３３日目に投与される。毎週投与される３回分の等用量のＩＬ−２は、ＩＬ−２の投薬と投薬との間を最短２５時間および最長７２時間とするようにずらされるため、任意の所定の週のこの３回分の等用量は、例えば、ＩＬ−２投与の任意の所定の週の１日目、２日目、および５日目；任意の所定の週の１日目、３日目、および５日目；任意の所定の週の１日目、３日目、および６日目；任意の所定の週の１日目、４日目、および５日目；任意の所定の週の１日目、４日目、および６日目；または任意の所定の週の１日目、４日目、および７日目に（ＩＬ−２投薬の期間の間が最短２５時間および最長７２時間であり、そしてＩＬ−２の一定的週総用量の全体が投与される限りで）投与され得る。
【００３４】
本発明の別の実施形態においては、約４週間〜約１０週間（４、５、６、７、８、９、または１０週間を含む）の期間を有する一定的ＩＬ−２投薬レジメンと組み合わせて、少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体の週あたりの治療有効用量を全体で８週間にわたって投与すること以外は同様である投薬レジメンが、使用される。この実施形態において、これらの２つの治療薬剤を用いた併用治療は、少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体の治療有効用量の、処置期間の１日目、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、４３日目、および５０日目（計８回の抗ＣＤ２０抗体の治療有効用量）における投与、および４週間〜１０週間の一定的ＩＬ−２投薬レジメンの開始（同じ処置期間の３日目、４日目、５日目、６日目、７日目、８日目、９日目、または１０日目に始められる）を含み、ここで、ＩＬ−２の週あたりの推奨総用量は、それぞれ３つの等用量に分割され、これら等用量は、上で記載されたように週３回投薬計画に従って投与される。１実施形態において、一定的ＩＬ−２投薬レジメンは、処置期間の８日目（すなわち、２週目の始め）に始まり、そして同じ処置期間の連続して８週間にわたって続く（すなわち、推奨一定的週総用量が、２〜９週にわたって投与される）。
【００３５】
上述のそれぞれの実施形態において、４週間〜１０週間の一定的ＩＬ−２投薬レジメンにわたって投与されるＩＬ−２の推奨週総用量は、２回分の等用量に分割され、週２回の投薬計画に従って投与される。この様式において、一定的ＩＬ−２投薬レジメンのそれぞれの週の間、各週に２回の等用量が投与され、この投与は、ＩＬ−２投与の第１週の１日目に始まり、投薬と投薬との間の期間が、最短７２時間および最長９６時間である。従って、例えば、４週間〜１０週間の一定的ＩＬ−２投薬レジメンが処置期間の８日目（すなわち、第１の抗ＣＤ２０抗体の治療有効用量が投与されてから８日後）に始まる場合、その週の第２の用量は、処置期間の１１日目または１２日目に投与され得、次のＩＬ−２の治療有効用量は、同じ処置期間の１５日目に投与され得る。
【００３６】
従って、本発明の１実施形態において、これらの２つの治療薬剤を用いた併用治療は、少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体の治療有効用量の、処置期間の１日目、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、４３日目、および５０日目における投与（計８回の抗ＣＤ２０抗体の治療有効用量）、および４週間〜１０週間の一定的ＩＬ−２投薬レジメンの開始（同じ処置期間の３日目、４日目、５日目、６日目、７日目、８日目、９日目、および１０日目に始まる）を含み、ここで、それぞれのＩＬ−２の推奨週総用量が、２回分の等用量に分割され、これら等用量が、週２回の投薬計画に従って投与される。このような１つの実施形態において、一定的ＩＬ−２投薬レジメンは、処置期間の８日目（すなわち、２週目の始め）に始まり、４週間（すなわち、ＩＬ−２の４週間分の週総用量が、計８回分の等用量として投与される）または８週間（すなわち、ＩＬ−２の８週間分の週総用量が、計１６回分の等用量として投与される）の期間を有する。従って、例えば、ＩＬ−２投与が、８週間にわたり、抗ＣＤ２０抗体の第１の治療有効用量の投与の一週間後に始まる場合、完全な処置期間は、９週間にわたる。代替の実施形態において、この４週間または８週間の一定的ＩＬ−２投薬レジメン（すなわち、処置期間のそれぞれ２〜５週の間、または２〜９週の間に投与される、ＩＬ−２の推奨週総用量）が行われ、一方、治療有効用量の抗ＣＤ２０抗体は、週に１回、処置期間の最初の４週にわたって（すなわち、１日目、８日目、１５日目、および２２日目）、計４回分の治療有効用量の抗体抗腫瘍薬剤として、投与される。
【００３７】
本発明の他の実施形態において、これらの２つの治療薬剤を用いた併用治療は、「２段階ＩＬ−２投薬レジメン」を含む。「２段階ＩＬ−２投薬レジメン」は、ＩＬ−２および抗ＣＤ２０抗体を用いた併用治療を受けている被験体が、ＩＬ−２投薬の２期間の間投与され、これらの投薬期間が約４週間〜約１６週間（４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６週間を含む）の合わせられた期間を有することを意図する。１実施形態において、２段階ＩＬ−２投薬レジメンは、約４週間〜約１２週間の組み合わせられた期間を有する；他の実施形態においては、２段階ＩＬ−２投薬レジメンは、約４週間〜約８週間（約４、５、６、７または８週間を含む）の合わせられた期間を有する。２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第１期および第２期の間投与されるＩＬ−２の週総用量は、ＩＬ−２の週あたりのより高い総用量が第１期の間に与えられ、そしてＩＬ−２の週あたりのより低い総用量が第２期の間に与えられるように、選ばれる。２段階ＩＬ−２投薬レジメンの個々の第１期および第２期の期間は、個体の健康および疾患進行の履歴に依存して、変わり得る。一般的に、被験体は、４週間〜１６週間の２段階ＩＬ−２投薬レジメンからの少なくとも１週間、より高い週総用量のＩＬ−２を投与される。１実施形態において、より高い週総用量のＩＬ−２が、２段階ＩＬ−２投薬レジメンの前半の間投与され、より低い週総用量が、２段階ＩＬ−２投薬レジメンの後半の間投与される。従って、例えば、２段階ＩＬ−２投薬レジメンが、８週間の合わせられた期間を有する場合、より高いＩＬ−２の週総用量がＩＬ−２投薬の最初の４週間に投与され、そしてより低いＩＬ−２の週総用量がＩＬ−２投薬の次の４週間に投与される。
【００３８】
特別な投薬レジメンが本明細書中で以下に開示されるが、本発明は、抗ＣＤ２０抗体および２段階ＩＬ−２投薬レジメン（ＩＬ−２のより高い週総用量への最初の暴露およびその後のＩＬ−２のより低い週総用量への暴露を提供する）を用いた併用治療を提供する、任意の投薬プロトコルを含むことが認識される。学説に結びつかないが、ＩＬ−２投薬の最初の段階の間のより高いＩＬ−２用量の投与は、ＮＫ細胞活性の最初の刺激を提供し、これの刺激は、ＩＬ−２投薬のその後の週の間のより低い用量の投与によって維持され得る。ＩＬ−２の副作用は用量に関係するため、より低い用量は、延長された処置期間の間の耐久性を高める。
【００３９】
従って、本発明の方法は、約４週間〜約１６週間（４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６週間を含む）の合わされた期間を有する２段階ＩＬ−２投薬レジメンと組み合わされて、少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体の治療有効用量が、週に１回、１週間以上（例えば、４週間または８週間）投与される処置レジメンを、意図する。この２段階ＩＬ−２投薬レジメンについて上で説明されたように、どちらかの薬剤が最初に投与される。例えば、１実施形態において、治療有効用量の抗ＣＤ２０抗体が、例えば、処置期間の１日目に最初に投与され、その後、２段階ＩＬ−２投薬レジメンの開始が１０日以内に続く。この２段階ＩＬ−２投薬レジメンの開始は、好ましくは、抗ＣＤ２０抗体の第１の投与の７日以内（例えば、１日目以内、２日目以内、３日目以内、４日目以内、５日目以内、６日目以内、または７日目以内）である。２段階ＩＬ−２投薬レジメンの間、週あたりのより高い総用量のＩＬ−２が、２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第１期において（例えば、ＩＬ−２投与の最初の１〜４週間にわたって）投与され、そして週あたりのより低い総用量のＩＬ−２が、２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第２期において（すなわち、２段階投薬レジメンの残りの経過にわたって）投与される。
【００４０】
１実施形態において、本発明の方法は、少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体を含む薬学組成物の治療有効用量の週毎の４週間にわたる投与を、４週間〜８週間（４、５、６、７、または８週間を含む）の合わされた期間を有する２段階ＩＬ−２投薬レジメンとの組み合わせで、提供する。この様式において、少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体の治療有効用量は、処置期間の１日目、８日目、１５日目、および２２日目に投与され、そして４週間〜８週間の２段階ＩＬ−２投薬レジメンが、同じ処置期間の３日目、４日目、５日目、６日目、７日目、８日目、９日目または１０日目から開始される。
【００４１】
このような１つの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体を含む薬学組成物の治療有効用量は、処置期間の１日目に始まって、週毎に４週間投与され、そして２段階ＩＬ−２投薬レジメンが、同じ処置期間の８日目に始まって、８週間続けられる（すなわち、処置期間の２〜９週間の間）。代替の実施形態において、この８週間の２段階ＩＬ−２投薬レジメンが、行われ（すなわち、処置期間の２〜９週の間に、ＩＬ−２の投与が行われる）、一方、抗ＣＤ２０抗体を含む薬学組成物の治療有効用量は、週に１回、処置期間の最初の８週間にわたって（すなわち、処置期間の１日目、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、４３日目、および５０日目に）投与される。
【００４２】
治療有効用量の抗ＣＤ２０抗体の週毎の投与を、２段階ＩＬ−２投薬レジメンと組み合わせて用いる併用治療を受けているヒト被験体について、この２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第１期および第２期の間のＩＬ−２の週あたりの総用量は、１用量として投与され得るか、または一連の等用量に分割され、その等用量が、週に２回、３回、４回、５回、６回または７回の投与計画に従って投与され得る。従って、例えば、第１期の間の週あたりのより高い総用量は、１用量として投与され得るか、または一連の等用量に分割され、その等用量が、週に２回、３回、４回、５回、６回または７回の投与計画に従って投与され得る。同様に、第２期の間の週あたりのより低い総用量は、１用量として投与され得るか、または一連の等用量に分割され、その等用量が、週に２回、３回、４回、５回、６回または７回の投与計画に従って投与され得る。２段階ＩＬ−２投薬レジメンの目的で、「週に２回、３回、４回、５回、６回または７回の投与計画」は、週総用量がそれぞれ２回分、３回分、４回分、５回分、６回分または７回分の等用量に分割され、７日間にわたって被験体に投与され、２４時間に１回の等用量より多くが投与されないことを、意味することを意図される。一連の等用量は、連日で投与され得るか、または任意の一連の２用量の間に、一週間に投与される等用量の回数に依存して、１日以上が存在し得るように投与され得る。
【００４３】
従って、例えば、ＩＬ−２の一連の２回の等用量が、一週間（すなわち、７日間にわたって）に投与され、そしてその週の第１の等用量が１日目に投与される場合、ＩＬ−２の第２の等用量は、その週の２日目、３日目、４日目、５日目、６日目、または７日目に投与され得る。１実施形態において、ＩＬ−２の週あたりの総用量は、２回分の等用量に分割され、７日間以内に、投薬の間が最短７２時間および最長９６時間となるように、被験体に投与される。
【００４４】
同様に、ＩＬ−２の一連の３回の等用量が、一週間に投与され、そしてその週の第１の等用量が１日目に投与される場合、第２の等用量は、その週の２日目、３日目、４日目、５日目、または６日目に投与され得、そして第３の等用量は、その週の３日目、４日目、５日目、６日目、または７日目に投与され得、ここで、等用量の投与の２回目と３回目との間に、約２４時間が存在する。１実施形態において、ＩＬ−２の週あたりの総用量は、３回分の等用量に分割され、７日間以内に、投薬の間が最短２５時間および最長７２時間となるように、被験体に投与される。
【００４５】
ＩＬ−２の一連の４回の等用量が、一週間に投与され、そしてその週の第１の等用量が１日目に投与される場合、第２の等用量は、その週の２日目、３日目、４日目、または５日目に投与され得、第３の等用量は、その週の３日目、４日目、５日目、または６日目に投与され得、そして第４の等用量は、その週の４日目、５日目、６日目、または７日目に投与され得、ここで、任意の２つの一連の用量の投薬の間に、約２４時間が存在する（すなわち、第１等用量と第２等用量との間、第２等用量と第３等用量との間、および第３等用量と第４等用量との間）。
【００４６】
一連の５回の等用量が、一週間に投与され、そしてその週の第１の等用量が１日目に投与される場合、第２の等用量は、その週の２日目、３日目、または４日目に投与され得、第３の等用量は、その週の３日目、４日目、または５日目に投与され得、第４の等用量は、その週の４日目、５日目、または６日目に投与され得、そして第５の等用量は、その週の５日目、６日目、または７日目に投与され得、ここで、任意の２つの一連の用量の投薬の間に、約２４時間が存在する（すなわち、第１等用量と第２等用量との間、第２等用量と第３等用量との間、第３等用量と第４等用量との間、および第４等用量と第５等用量との間）。
【００４７】
ＩＬ−２の一連の６回の等用量が、一週間に投与され、そしてその週の第１の等用量が１日目に投与される場合、第２の等用量は、その週の２日目または３日目に投与され得、第３の等用量は、その週の３日目または４日目に投与され得、第４の等用量は、その週の４日目または５日目に投与され得、第５の等用量は、その週の５日目または６日目に投与され得、そして第６の等用量は、その週の６日目または７日目に投与され得、ここで、任意の２つの一連の用量の投薬の間に、約２４時間が存在する（すなわち、第１等用量と第２等用量との間、第２等用量と第３等用量との間、第３等用量と第４等用量との間、第４等用量と第５等用量との間、および第５等用量と第６等用量との間）。
【００４８】
１実施形態において、ＩＬ−２の週あたりの総用量は、７回分の等用量に分割されて、これら等用量が、７日間にわたって毎日投与され、ここで、それぞれの一連の用量の間に、約２４時間が存在する。
【００４９】
２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第１期および第２期について、同じ投薬計画が行われる必要はない。従って、抗ＣＤ２０抗体治療と組み合わされた延長されたＩＬ−２の治療に対する個体の耐性に適応させるため、およびこれらの２つの治療薬剤を用いた同時治療に対する個体の応答性を反映させるために、投薬計画は、調整され得る。これらの２つの期間中の好ましい投薬計画は、患者の医療履歴を与えられた管理医師および本明細書中で提供されるガイダンスにより、容易に決定され得る。
【００５０】
従って、本発明は、非ホジキンリンパ腫を有するヒト被験体を、週１回の抗ＣＤ２０抗体の治療有効用量の投与を、一定的ＩＬ−２投薬レジメンまたは２段階ＩＬ−２投薬レジメンのどちらかと組み合わせて用いる同時治療を用いて、処置する方法を、提供する。本発明の目的のために、毎週投与される少なくともひとつの抗ＣＤ２０抗体の治療有効用量は、約１００ｍｇ／ｍ２〜約５５０ｍｇ／ｍ２、約１２５ｍｇ／ｍ２〜約５００ｍｇ／ｍ２、約２２５ｍｇ／ｍ２〜約４００ｍｇ／ｍ２、または約３７５ｍｇ／ｍ２の範囲である。抗ＣＤ２０抗体を含む薬学的組成物は、例えば、本明細書中の上で述べられたように、静脈内に投与される。ＩＬ−２は、例えば、ＩＶ注射、ＩＭ注射、またはＳＣ注射によって、抗ＣＤ２０抗体治療と組み合わせて投与され、以下でより完全に記載されるような、一定的ＩＬ−２投薬レジメンの間または２段階ＩＬ−２投薬レジメンの間のＩＬ−２の推奨週総用量を提供する。以下の実施形態は、適切な投薬レジメンに関するガイダンスを提供する。任意の数の異なった投薬レジメンが、本明細書中で示される開示を知らされた当業者によって、企図され得る。
【００５１】
以下の、一定的または２段階のＩＬ−２投薬レジメンの間に投与される週あたりのＩＬ−２の総用量の議論の目的のために、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２（Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）の商標名の下で市販される多量体ＩＬ−２薬学組成物が、参考ＩＬ−２標準として、使用される。「参考ＩＬ−２標準」により、少なくとも１つの抗ＣＤ２０抗体と組み合わせて、望ましい一定的または２段階のＩＬ−２投薬レジメンに従い、リンパ腫を有するヒト被験体に投与される、週あたりのＩＬ−２総量量の決定の基礎として働く、ＩＬ−２の処方物が意図される。このＩＬ−２処方物は、望ましい陽性効果（すなわち、これらの治療剤どちらかの単独で観察されたのと比べて改善された陽性の治療応答）を達成する。
【００５２】
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２が、一定的ＩＬ−２投薬レジメンに従って投与される場合、週あたりの総用量は、約３０．０ＭＩＵ〜約５４．０ＭＩＵであり、処置期間の持続時間、およびＩＬ−２が週に２回または週に３日のどちらの投薬計画で投薬されるかに依存する。一方一週間に投与される抗ＣＤ２０抗体の治療有効用量は、約１００ｍｇ／ｍ２〜約５５０ｍｇ／ｍ２、約１２５ｍｇ／ｍ２〜約５００ｍｇ／ｍ２、約２２５ｍｇ／ｍ２〜約４００ｍｇ／ｍ２、または約３７５ｍｇ／ｍ２の範囲である。従って、例えば、幾つかの実施形態において、一定的ＩＬ−２投薬レジメンの一部として週ごとに投与されるＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の総量は、約３０．０ＭＩＵ、約３２．０ＭＩＵ、約３５．０ＭＩＵ、約３７．０ＭＩＵ、約４０．０ＭＩＵ、約４２．０ＭＩＵ、約４５．０ＭＩＵ、約４７．０ＭＩＵ、約５０．０ＭＩＵ、約５２．０ＭＩＵ、または約５４．０ＭＩＵであり、抗ＣＤ２０抗体の総量は、週あたり約２２５ｍｇ／ｍ２、約２５０ｍｇ／ｍ２、約２７５ｍｇ／ｍ２、約３００ｍｇ／ｍ２、約３２５ｍｇ／ｍ２、約３５０ｍｇ／ｍ２、約３７５ｍｇ／ｍ２、または約４００ｍｇ／ｍ２の用量である。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２のの週あたりの総用量が約３０．０ＭＩＵ〜約４２．０ＭＩＵである場合、抗ＣＤ２０抗体の総量は、週あたり約３２５ｍｇ／ｍ２、約３５０ｍｇ／ｍ２、約３７５ｍｇ／ｍ２、または約４００ｍｇ／ｍ２の用量である。１実施形態において、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の週あたりの総用量は約４２．０ＭＩＵであり、そして抗ＣＤ２０抗体の総量は、約３７５ｍｇ／ｍ２／週あたりの用量である。上述のように、一定的ＩＬ−２投薬レジメンの間のＩＬ−２の週あたりの総用量は、２つまたは３つの等用量に分割され、これらは、それぞれ週２回または週３回の投薬計画に従って投与される。従って、例えば、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の週あたりの総用量が３０．０ＭＩＵである場合、それぞれの週の間に投与される参考ＩＬ−２標準の３つの等用量は、１０．０ＭＩＵであり、そしてそれぞれの週の間に投与される参考ＩＬ−２標準の２つの等用量は、１５．０ＭＩＵである。同様に、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の週あたりの総用量が５４．０ＭＩＵである場合、それぞれの週の間に投与される参考ＩＬ−２標準の３つの等用量は、１８．０ＭＩＵであり、そしてそれぞれの週の間に投与される参考ＩＬ−２標準の２つの等用量は、２７．０ＭＩＵである。
【００５３】
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２が２段階ＩＬ−２投薬レジメンに従って投与される場合、この投薬レジメンの第１期の間に投与される週あたりのより高い総用量は、約３０．０ＭＩＵ〜約５４．０ＭＩＵであり、そしてこの投薬レジメンの第２期の間に投与される週あたりのより低い総用量は、約１８．０ＭＩＵ〜約３９．０ＭＩＵである。上述のように、２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第１期の間（例えば、この投薬レジメンの前半の間）に投与される週あたりの総用量は、常に、２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第２期の間（例えば、この投薬レジメンの後半の間）に投与される週あたりの総用量より多い。
【００５４】
従って、幾つかの実施形態において、２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第１期の間に投与されるＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の週あたりのより高い総用量は、約３０．０ＭＩＵ〜約５４．０ＭＩＵ（約３０．０ＭＩＵ、約３２．０ＭＩＵ、約３５．０ＭＩＵ、約３７．０ＭＩＵ、約４０．０ＭＩＵ、約４２．０ＭＩＵ、約４５．０ＭＩＵ、約４７．０ＭＩＵ、約５０．０ＭＩＵ、約５２．０ＭＩＵ、または約５４．０ＭＩＵ、およびこのより高い投薬範囲内に収まる他のこのような値を含む）である；そしてＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の週あたりのより低い総用量は、約１８．０ＭＩＵ〜約３９．０ＭＩＵ（約１８．０ＭＩＵ、約２０．０ＭＩＵ、約２３．０ＭＩＵ、約２５．０ＭＩＵ、約２７．０ＭＩＵ、約３０．０ＭＩＵ、約３２ＭＩＵ、約３５．０ＭＩＵ、約３７．０ＭＩＵ、および約３９．０ＭＩＵ、ならびにこのより低い投薬範囲内に収まる他のこのような値を含む）である。１実施形態において、２段階ＩＬ−２投薬レジメンは、組み合わせられた４週間〜８週間の期間を有し、ここで、２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第１期の間に投与されるＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の週あたりのより高い総用量は、約３０．０ＭＩＵ〜約４２．０ＭＩＵ（例えば、３０．０ＭＩＵ、３２．０ＭＩＵ、３４．０ＭＩＵ、３６．０ＭＩＵ、３８．０ＭＩＵ、４０．０ＭＩＵ、４２．０ＭＩＵ）であり、そして２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第２期の間に投与されるＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の週あたりのより低い総用量は、約１８．０ＭＩＵ〜約３０．０ＭＩＵ（例えば、１８．０ＭＩＵ、２０．０ＭＩＵ、２２．０ＭＩＵ、２４．０ＭＩＵ、２６．０ＭＩＵ、２８．０ＭＩＵ、３０．０ＭＩＵ）である。１つのこのような実施形態において、第１期の間に投与されるＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の週あたりのより高い総用量は、４２．０ＭＩＵであり、そして第２期の間に投与されるＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の週あたりのより低い総用量は、３０．０ＭＩＵである。上述のように、２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第１期および第２期の間のＩＬ−２の週あたりの総用量は、単一用量として投与されるか、または一連の同じ用量に分割され、これらは、週に２回、３回、４回、５回、６回または７回の投与計画に従って投与される。従って、例えば、２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第１期の間のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の週あたりの総用量が４２．０ＭＩＵである場合、それぞれの週の間に投与される参考ＩＬ−２標準の３つの等用量は、１４．０ＭＩＵであり、そしてそれぞれの週の間に投与される参考ＩＬ−２標準の２つの等用量は、２１．０ＭＩＵである。同様に、２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第２期の間のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の週あたりの総用量が３０．０ＭＩＵである場合、それぞれの週の間に投与される参考ＩＬ−２標準の３つの等用量は、１０．０ＭＩＵであり、そしてそれぞれの週の間に投与される参考ＩＬ−２標準の２つの等用量は、１５．０ＭＩＵである。
【００５５】
本発明の方法に従い、被験体は、この２段階ＩＬ−２投与レジメンを、抗ＣＤ２０抗体の治療有効用量の毎週の投与と組み合わせて投与される。毎週投与される抗ＣＤ２０抗体の治療有効用量は、約１００ｍｇ／ｍ２〜約５５０ｍｇ／ｍ２、約１２５ｍｇ／ｍ２〜約５００ｍｇ／ｍ２、約２２５ｍｇ／ｍ２〜約４００ｍｇ／ｍ２、または約３７５ｍｇ／ｍ２の範囲である。従って、例えば、幾つかの実施形態において、抗ＣＤ２０抗体の総量は、週あたり約２２５ｍｇ／ｍ２、約２５０ｍｇ／ｍ２、約２７５ｍｇ／ｍ２、約３００ｍｇ／ｍ２、約３２５ｍｇ／ｍ２、約３５０ｍｇ／ｍ２、約３７５ｍｇ／ｍ２、または約４００ｍｇ／ｍ２の用量である。他の実施形態において、抗ＣＤ２０抗体の総量は、週あたり約３２５ｍｇ／ｍ２、約３５０ｍｇ／ｍ２、約３７５ｍｇ／ｍ２、または約４００ｍｇ／ｍ２の用量である。
【００５６】
好ましい実施形態において、抗ＣＤ２０抗体の治療有効用量は、処置期間の１日目に始まって、週に１回、４週間〜８週間投与され、そして２段階ＩＬ−２投薬レジメンは、この治療期間の８日目に開始され、８週間の組み合わされた持続時間を有する。この実施形態において、処置期間の２週〜５週の間投与される、週あたりのより高い総用量のＩＬ−２は、約３０．０ＭＩＵ〜約５４．０ＭＩＵであり、好ましくは約３０．０ＭＩＵ〜約４２．０ＭＩＵである。そして処置期間の６週〜９週の間投与される、週あたりのより低い総用量のＩＬ−２は、約１８．０ＭＩＵ〜約３９．０ＭＩＵであり、好ましくは約１８．０ＭＩＵ〜約３０．０ＭＩＵである。ＩＬ−２の週あたりのより高い総用量およびＩＬ−２の週あたりのより低い総用量は、単一用量として投与されるか、または同じ用量に分割され、これらは、週に２回、３回、４回、５回、６回または７回の投与計画に従って投与される。このような１実施形態において、処置期間の２週〜５週の間投与される、週あたりのより高い総用量のＩＬ−２は、約３０．０ＭＩＵ〜約４２．０ＭＩＵ（例えば、約４２．０ＭＩＵ）であり、そして週あたりのより低い総用量のＩＬ−２は、約１８．０ＭＩＵ〜約３０．０ＭＩＵ（例えば、約３０．０ＭＩＵ）である。この実施形態において、ＩＬ−２の週あたりのより高い総用量およびＩＬ−２の週あたりのより低い総用量の各々は、２つの同じ用量に分割され、これらは、週に２回の投与計画に従って投与される。ここで、２つの同じ用量は、７日間以内に被験体に投与され、投薬と投薬との間は最短約７２時間、最長９６時間とされる。代替の実施形態において、ＩＬ−２の週あたりのより高い総用量およびＩＬ−２の週あたりのより低い総用量の各々は、３つの同じ用量に分割され、これらは、週に３回の投与計画に従って投与される。ここで、３つの同じ用量は、７日間以内に被験者に投与され、投薬と投薬との間は最短約２５時間、最長７２時間とされる。
【００５７】
上述の参考ＩＬ−２標準Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の治療有効用量は、ＭＩＵに換算して表現され、これは、週ごとの基準においてヒト被験体に投与される、総量または絶対用量を表す。ヒトに投与される週あたりのＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の対応する相対総用量は、容易に計算され得る。平均的なヒトは、およそ１．７ｍ２である。従って、投与されるＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の週あたりの絶対総用量が、約３０．０ＭＩＵ〜約５４．０ＭＩＵである場合、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の週あたりの対応する相対総用量は、約１７．６ＭＩＵ／ｍ２〜約３１．８ＭＩＵ／ｍ２である。同様に、週あたりの絶対総用量が、約３０．０ＭＩＵ、約３２．０ＭＩＵ、約３５．０ＭＩＵ、約３７．０ＭＩＵ、約４０．０ＭＩＵ、約４２．０ＭＩＵ、約４５．０ＭＩＵ、約４７．０ＭＩＵ、約５０．０ＭＩＵ、約５２．０ＭＩＵ、または約５４．０ＭＩＵである場合、週あたりの対応する相対総用量は、それぞれ、約１７．６ＭＩＵ／ｍ２、約１８．８ＭＩＵ／ｍ２、約２０．６ＭＩＵ／ｍ２、約２１．８ＭＩＵ／ｍ２、約２３．５ＭＩＵ／ｍ２、約２４．７ＭＩＵ／ｍ２、約２６．５ＭＩＵ／ｍ２、約２９．４ＭＩＵ／ｍ２、約３０．６ＭＩＵ／ｍ２、および約３１．８ＭＩＵ／ｍ２である。これらのＩＬ−２の週あたりの相対総用量は、一定的ＩＬ−２投薬レジメンに従って投与される用量を表し、また、２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第１期の間に投与される、ＩＬ−２の週あたりの相対総用量の範囲も表す。２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第２期の間に投与される週あたりの絶対総用量（すなわち、１８．０ＭＩＵ〜約３９．０ＭＩＵの範囲内（例えば、１８．０ＭＩＵ、２０．０ＭＩＵ、２３．０ＭＩＵ、２５．０ＭＩＵ、２７．０ＭＩＵ、３０．０ＭＩＵ、３２ＭＩＵ、３５．０ＭＩＵ、３７．０ＭＩＵ、および３９．０ＭＩＵを含む））は、約１０．６ＭＩＵ／ｍ２〜約２２．９ＭＩＵ／ｍ２（それぞれ、約１０．６ＭＩＵ／ｍ２、約１１．８ＭＩＵ／ｍ２、約１３．５ＭＩＵ／ｍ２、約１４．７ＭＩＵ／ｍ２、約１５．９ＭＩＵ／ｍ２、約１７．６ＭＩＵ／ｍ２、約１８．８ＭＩＵ／ｍ２、約２０．６ＭＩＵ／ｍ２、約２１．８ＭＩＵ／ｍ２、および約２２．９ＭＩＵ／ｍ２を含む）の、週あたりの対応する相対総用量を有する。
【００５８】
ＭＩＵは、タンパク質の生物学的活性についての国際単位を表す。ＩＬ−２の生物学的活性についての国際単位は、１９８８年に、世界保健機構（ＷＨＯ）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄにおいて確立された。ＩＬ−２の生物学的参考物質は、ＷＨＯ所属のＮａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌ（ＮＩＢＳＣ）によって提供され、ネイティブのヒトＪｕｒｋａｔ由来ＩＬ−２の１アンプルあたり１００の国際単位を有する。ＩＬ−２産物の活性は、この国際標準に対し、ＨＴ−２細胞増殖によるインビトロ効力アッセイにおいて、測定され得る。従って、例えば、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２は、ＨＴ−２細胞増殖アッセイにより決定される場合、このＩＬ−２産物１ｍｇあたり約１５ＭＩＵの生物学的活性を有する（例えば、ＧｅａｒｉｎｇおよびＴｈｏｒｐｅ（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １１４：３〜９；Ｎａｋａｎｉｓｈｉら（１９８４）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６０（６）：１６０５〜１６２１を参照のこと）。この産物において使用される活性部分は、組換えヒトＩＬ−２ムテインアルデスロイキン（デス−アラニル−１，セリン−１２５  ヒトインターロイキン２と呼ばれる；米国特許第４，９３１，５４３号参照）である。この情報を使用して、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の週あたり推奨絶対総用量を、マイクログラムで計算し得る。従って、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の週あたりの絶対総用量が、約３０．０ＭＩＵ〜約５４．０ＭＩＵである場合、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の週あたりの対応する絶対総用量（マイクログラムで）は、この産物の約２０００μｇ〜約３６００μｇである。同様に、この週あたりの絶対総用量（ＭＩＵ）が、約１８．０ＭＩＵ〜約３９．０ＭＩＵである場合、その週あたりの対応する絶対総用量（μｇ）は、約１２００μｇ〜約２６００μｇである。従って、ＭＩＵで表現されるＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の週あたりの所定の絶対総用量を考慮すると、当業者は、容易にこのＩＬ−２産物の週あたりの関連相当総用量（ＭＩＵ／ｍ２で表現される）または週あたりの絶対総用量（μｇで表現される）を計算し得る。以下の実施例７もまた、参照せよ。
【００５９】
本発明を説明する目的で、ＩＬ−２の用量は、参考ＩＬ−２標準としてＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２を使用して、示されている。当業者は、ＩＬ−２の任意の形態を含む任意のＩＬ−２産物についての対応する用量がいくらであるか、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２について２４時間の間集計された匹敵する薬物速度論（ＰＫ）データおよびＰＫデータについての血清濃度−時間曲線（ＡＵＣ）に基づく変換因子を使用して、容易に決定し得る。ＰＫデータを使用して、参考ＩＬ−２標準の１用量を投与されたヒト被験体におけるＩＬ−２暴露が、決定された。これらの被験体は、以前外因性ＩＬ−２治療を受けたことのないように選択された（すなわち、これらの被験体はＩＬ−２治療を未経験である）。「外因性ＩＬ−２治療」は、任意の介入を意図し、この介入により、天然に存在するＩＬ−２の身体からの産生によって生じる曝露とは反対に、被験体は、外因性のＩＬ−２の供給源に暴露される。これらの被験体の幾人かは、参考ＩＬ−２標準の４．５ＭＩＵの単一用量を受けており、一方、他の被験体は参考ＩＬ−２標準の７．５ＭＩＵまたは１８．０ＭＩＵの単一用量を受けている。本明細書中の以下の実施例８を参照のこと。
【００６０】
参考ＩＬ−２標準の単一用量の投与後、血清中のＩＬ−２暴露を、注射後最初の１０時間〜１２時間にわたってモニターし、次いで２４時間まで外挿し、そしてこの２４時間の間に集められたデータについての血清濃度−時間曲線（ＡＵＣ）の下の面積を計算した。この血清濃度−時間曲線の下の面積は、本明細書中でＡＵＣ０−２４と呼ばれる。この様式でＩＬ−２暴露を測定する方法は、当該分野で周知である。例えば、Ｇｕｓｔａｖｓｏｎ（１９９８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ  １９９８：４４０〜４４９；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら（１９８７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４７：４２０２〜４２０７；Ｋｉｒｃｈｎｅｒら（１９９８）Ｂｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４６：５〜１０；Ｐｉｓｃｉｔｅｌｌｉら（１９９６）Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ  １６（５）：７５４〜７５９；および以下の実施例８を参照のこと。従って、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の４．５ＭＩＵ（３００μｇ）の用量を受けている被験体については、ＡＵＣ０−２４値は５６ＩＵ＊時間／ｍｌ（ＳＤ＝１５）であった；Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の７．５ＭＩＵ（５００μｇ）の用量を受けている被験体については、ＡＵＣ０−２４値は８６ＩＵ＊時間／ｍｌ（ＳＤ＝３１．５）であった；およびＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の１８．０ＭＩＵ用量を受けている被験体については、ＡＵＣ０−２４値は３７５ＩＵ＊時間／ｍｌ（ＳＤ＝１３９）であった。このようなＡＵＣ０−２４データは、参考ＩＬ−２標準（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２）について決定され、本明細書中で記載される治療有効用量は、約２２ＩＵ＊時間／ｍｌ血清〜約６５３ＩＵ＊時間／ｍｌ血清の範囲内のＩＬ−２暴露を生じた（以下の実施例８を参照）。
【００６１】
個々の用量からの個々のＡＵＣ０−２４の総計は、個々の用量に分割された週あたりの総ＡＵＣ０−２４を含む。例えば、１８ＭＩＵの用量が週に３回投与される場合、個々のＡＵＣ０−２４は、３７５ＩＵ＊時間／ｍｌと見積もられ、そして週あたりの総ＡＵＣ０−２４は、以下の表１において示される用量を用いた増加したＡＵＣ０−２４の直線的前提に基づき、１１２５ＩＵ＊時間／ｍｌとなる。
【００６２】
【表１】
2005538034.tif 000002
【００６３】
２７ＭＩＵの週２回の投薬または約１１ＭＩＵの週５回の投薬により、１１２５ＩＵ＊時間／ｍｌの週あたりの同じ総ＡＵＣ０−２４が、得られ得る。
【００６４】
任意の他のＩＬ−２の供給源（すなわち、任意の他のＩＬ−２処方物またはＩＬ−２の任意の形態（ネイティブまたはムテインのような生物学的に活性なＩＬ−２改変体を含む））について、本発明の方法における使用のための匹敵する推奨用量は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２についてのＡＵＣ０−２４データに基づき、決定され得る。この様式において、目的のＩＬ−２供給源の単一用量が、ヒト被験体に投与され、そしてこの最初のＩＬ−２暴露後の血清中のＩＬ−２レベルが、目的のＩＬ−２供給源についてのＰＫデータを集めることおよびＡＵＣ０−２４を生成することによって、決定される。「最初のＩＬ−２暴露」により、上述のように、ＩＬ−２暴露を測定するために使用される被験体が、ＩＬ−２の外因性供給源を用いた治療を以前に受けたことがないことが、意図される。このＡＵＣ０−２４は、次いでＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２についてのＡＵＣ０−２４と比較され、変換因子（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２についての推奨用量と匹敵するＩＬ−２供給源の用量を計算するために使用され得る）を決定する。例えば、代表的単量体ＩＬ−２処方物（Ｌ２−７００１）についての計算（以下の実施例８で示す）を参照のこと。従って、本発明の方法において使用される任意のＩＬ−２供給源について、一定的ＩＬ−２投薬レジメンの間または２段階ＩＬ−２投薬レジメンの間に投与されるべきＩＬ−２の週あたりの総用量は、ヒトＰＫデータから得られた血清濃度−時間曲線の下の面積により、決定されるように、参考ＩＬ−２標準（すなわち、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２）の週あたりの推奨総用量と同じ量である。
【００６５】
本発明の方法はまた、治療有効用量の抗ＣＤ２０抗体の毎週の投与および２段階ＩＬ−２投薬レジメンの投与を用いた同時治療を受けている被験体が、２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第１期の終結と２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第２期の開始との間に、「薬物休暇（ｄｒｕｇ  ｈｏｌｉｄａｙ）」すなわちＩＬ−２投薬またはＩＬ−２投薬および抗ＣＤ２０抗体投薬の中断期間を与えられる実施形態も、企図する。これらの実施形態において、２段階ＩＬ−２投薬レジメンは、ＩＬ−２投薬が、週あたりのより高い総用量が投与されている間の２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第１期の終結後、約１週間〜約４週間控えられるように、中断される。このＩＬ−２投薬の中断期間の間、被験体は、治療有効用量の抗ＣＤ２０抗体の毎週の投与を受け続け得るか、あるいは、抗ＣＤ２０抗体投与はまた、停止され得る。この中断の長さは、被験体の健康、疾患進行の履歴、および２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第１期の間に受けた最初のＩＬ−２／抗体治療に対する被験体の感受性に依存する。
【００６６】
この薬物休暇（すなわち、ＩＬ−２投与の中断期間、またはＩＬ−２投与および抗ＣＤ２０抗体投与の中断期間）の間、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞数がモニターされ、これにより、いつＩＬ−２の２段階投薬レジメンを再開するか、またはいつＩＬ−２の２段階投薬レジメンおよび週１回の抗ＣＤ２０抗体投与を再開するかを、決定する。この様式において、ＮＫ細胞数は、ＩＬ−２の２用量投薬レジメンの間、２週に１回または月に１回測定され、そしてＩＬ−２の２段階投薬レジメンの第１期が完了した後、薬物休暇が開始される。ＮＫ細胞数が受容可能な閾値レベルを超える場合、２段階ＩＬ−２投薬レジメンは、中断され得る。「受容可能な閾値レベル」により、処置を受けている被験体が、約１５０細胞／μｌ以上（好ましくは約２００細胞／μｌ以上）のＮＫ細胞数を有することが意図される。ＩＬ−２投薬の断絶（抗ＣＤ２０抗体の投与の断絶を含んでも含まなくてもよい）の後、次いで、ＮＫ細胞数を、その後、週に１回または２回（好ましくは週に１回）測定する。約１５０細胞／μｌの受容可能な細胞数未満に収まるＮＫ細胞数（例えば、１５０細胞／μｌ未満のＮＫ細胞数）は、２段階ＩＬ−２投薬レジメンを再開する必要性、または２段階ＩＬ−２投薬レジメンおよび抗ＣＤ２０抗体投薬レジメンを再開する必要性を示し、ここで、薬物休暇はまた、抗ＣＤ２０抗体投与の中断期間も含む。好ましくは、２段階ＩＬ−２投薬レジメンは、ＮＫ細胞数が約２００細胞／μｌの閾値レベルより下に収まる場合（すなわち、ＮＫ細胞数が２００細胞／μｌ未満の場合）に、再開される。この時、被験体は、２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第２期（週あたりのより低い総用量のＩＬ−２が、週１回の治療有効用量の抗ＣＤ２０抗体の投与と組み合わせて投与される）を投与される。
【００６７】
上述の投薬レジメンに従う治療を受けている被験体が、部分的応答を示す場合、または延長された寛解期間後の再発を示す場合、その後の同時治療の経過は、疾患の完全な寛解を達成するために必要とされ得る。従って、第１期処置（一定的ＩＬ−２投薬レジメンまたは２段階ＩＬ−２投薬レジメンを含み得る）の中断期間の後、被験体は、一定的または２段階のＩＬ投薬レジメンのどちらかを含む、１回以上の追加の処置期間を、抗ＣＤ２０抗体の投与と組み合わせて、受け得る。このような処置期間と処置期間との間の中断機関は、本明細書中で、断絶期間（ｐｅｒｉｏｄ  ｏｆ  ｄｉｓｃｏｎｔｉｎｕａｎｃｅ）と呼ばれる。断絶期間の長さは、任意の先行のこれらの２つの治療剤を用いた同時治療の処置期間を用いて達成された、腫瘍応答の程度（すなわち、完全  対  部分的）に依存することが、認識される。
【００６８】
従って、例えば、被験体が、週１回の抗ＣＤ２０抗体用量および２段階ＩＬ−２投薬レジメンを用いた同時治療（２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第１期と第２期との間に、薬物休暇を含んでも含まなくてもよい）を受けている場合、その処置レジメンは、複数の処置セッションを含み得、この処置セッションのそれぞれが、週１回の抗ＣＤ２０抗体用量および２段階ＩＬ−２投薬レジメンを用いた同時治療を含む。これらの複数の処置セッションは、本明細書中で、メンテナンス周期と呼ばれ、それぞれのメンテナンス周期は、完成された２段階投薬レジメンと組み合わせた抗ＣＤ２０抗体の投与を含む。「完成された２段階投薬レジメン」により、被験体が、週あたりのより高い総用量投薬の第１期および週あたりのより低い総用量投薬の第２期の両方を投与されていることが、意図される。複数のメンテナンス周期の必要性は、いつ薬物休暇が保証されるか、そしていつこのような薬物休暇を完了させるべきかを、決定するために使用されるのと同様の様式で、ＮＫ細胞数をモニターすることにより、評価され得る。従って、任意の所定のメンテナンス周期における２段階ＩＬ−２投薬レジメンの完了時に、処置する医師は、ＮＫ細胞数の測定値を得る。次いで、このインジケーターが、任意の所定の２段階ＩＬ−２投薬レジメンの完了の後、１ヶ月間隔（すなわち、月に１回）で測定される。薬物休暇と同様に、受容可能な閾値レベル以下に収まるＮＫ細胞数（すなわち、約１５０細胞／μｌ未満、好ましくは約２００細胞／μｌ未満）は、被験体への別のメンテナンス周期の投与の必要を示し得る。メンテナンス周期とメンテナンス周期との間の持続期間は、約１ヶ月〜約６ヶ月（１ヶ月、１．５ヶ月、２ヶ月、２．５ヶ月、３ヶ月、３．５ヶ月、４ヶ月、４．５ヶ月、５ヶ月、５．５ヶ月、６ヶ月、または、約１ヶ月〜約６ヶ月の範囲内に収まる他のこのような期間を含む）であり得る。
【００６９】
従って、本発明の投与方法は、ヒト患者における非ホジキンＢ細胞リンパ腫を御するための改善された手段を提供する。週２回または週３回の投薬計画に従う一定量のＩＬ−２投薬は、間欠性の投薬計画を提供し、これは、抗ＣＤ２０抗体治療の間のＩＬ−２投与の頻度の低下、および長期間ＩＬ−２治療に対するより良い耐性を可能にする。２段階ＩＬ−２投薬レジメンは、患者に週あたりのより高い総用量のＩＬ−２を提供する機械を与え、このことはＩＬ−２投薬後の何週間かの間、より低い用量により維持され得るＮＫ細胞数の拡大を提供する。ＩＬ−２副作用は用量関連性であるため、低用量は、長い処置期間の間の耐性を高める。この投与プロトコルは、週あたりのより高い用量の投薬計画と週あたりのより低い容量の投薬計画との間に薬物休暇を提供し、抗ＣＤ２０抗体およびＩＬ−２を用いた併用治療に対する耐性を高めることに、再び寄与する、さらなる魅力を有する。
【００７０】
用語「ＩＬ−２」は、本明細書中で使用される場合、正常な末梢血リンパ球によって産生されるリンホカインをいい、これは、低濃度で体内に存在する。ＩＬ−２は、Ｍｏｒｇａｎら（（１９７６）Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９３：１００７〜１００８）によって最初に記載され、そして本来は、刺激されたＴリンパ球の増殖を誘導するその能力に起因してＴ細胞増殖因子と呼ばれていた。これは、１３，０００〜１７，０００の範囲の報告された分子量を有するタンパク質であり（ＧｉｌｌｉｓおよびＷａｔｓｏｎ（１９８０）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５９：１７０９）、そして６〜８．５の範囲の等電点を有する。本発明の目的について、用語「ＩＬ−２」は、哺乳類供給源（例えば、マウス、ラット、ウサギ、霊長類、ブタ、およびヒト）を含むＩＬ−２の任意の供給源を含むことを意図され、そしてネイティブであっても、組み換え技術によって得られてもよい。ＩＬ−２は、ネイティブなポリペプチド配列であり得るか、または改変体ＩＬ−２ポリペプチドは、本明細書中で記載されるような目的のＩＬ−２の生物学的活性を保持している限り、本明細書中の以下で記載されるように、ネイティブＩＬ−２ポリペプチドの改変体であり得る。好ましくは、このＩＬ−２ポリペプチドまたはこの改変体は、ヒト供給源に由来し、そして組換え的に産生されたヒトＩＬ−２（例えば、微生物宿主により産生された組換えヒトＩＬ−２ポリペプチドおよび目的のＩＬ−２の生物学的活性を保持するヒトＩＬ−２の改変体）を含む。治療的に活性な成分としてＩＬ−２を含む任意の薬学的組成物は、本発明の実践において、使用され得る。
【００７１】
本発明の方法において有用なＩＬ−２分子は、ネイティブなＩＬ−２の生物学的に活性な改変体であり得る。このような改変体ＩＬ−２ポリペプチドは、この改変体ポリペプチドを含む薬学的組成物が、被験体に投与された場合にネイティブなポリペプチドを含む薬学的組成物と同じ治療効果を有するように、ネイティブのポリペプチドの望ましい生物学的活性を保持するべきである。すなわち、改変体ポリペプチドは、ネイティブなポリペプチドについて観察されるのと類似の様式で、薬学的組成物において治療的に活性な成分として作用する。改変体ポリペプチドが所望の生物学的活性を保持し、故に薬学的組成物中で治療的に有効な成分として作用するか否かを決定するための方法は、当該分野で利用可能である。生物学的な活性は、ネイティブなポリペプチドまたはタンパク質の活性を測定するために特別に設計されたアッセイ（本発明において記載されるアッセイを含む）を用いて測定され得る。さらに、生物学的に活性なネイティブポリペプチドに対して惹起された抗体は、改変体ポリペプチドに結合するその能力に関して試験され得、ここで、有効な結合は、ネイティブなポリペプチドと類似のコンフォメーションを有するポリペプチドの指標である。
【００７２】
本発明の目的のために、目的のＩＬ−２生物学的活性は、ＩＬ−２を活性化させ、そして／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を増大させて、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）活性および抗体依存的細胞性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介する能力である。従って、本発明の方法における使用のためのＩＬ−２改変体（例えば、ヒトＩＬ−２のムテイン）は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化し、そして／または増大させて、それにより、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）活性および抗体抗体依存的細胞性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介する。ＮＫ細胞は、「ＮＫ細胞感受性」標的と呼ばれる特定の細胞標的（例えば、ヒト赤白血病Ｋ５６２細胞株）に対する自発的または天然の細胞傷害性を、媒介する。ＩＬ−２による活性化後、ＮＫ細胞はＬＡＫ活性を獲得する。このようなＬＡＫ活性は、ＩＬ−２活性化ＮＫ細胞が、広範な種々にわたる腫瘍細胞および他の「ＮＫ感受性」標的（通常、残留型（非活性化）ＮＫ細胞による溶解に抵抗性である、ドージ（Ｄａｕｄｉ）Ｂ細胞リンパ腫株など）を殺傷する活性により、アッセイされ得る。同様に、ＡＤＣＣ活性は、ＩＬ−２活性化ＮＫ細胞が「ＮＫ非感受性」標的細胞（例えば、ドージＢ細胞リンパ腫株）または残留型ＮＫ細胞によって容易に溶解されない他の標的細胞を、最適濃度の関連の腫瘍細胞特異的抗体の存在下で溶解する能力によって、アッセイされ得る。ＮＫ／ＬＡＫ細胞の細胞傷害性活性およびＡＤＣＣを産生する方法ならびにこれらを測定する方法は、当該分野で公知である。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ：Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎｓ，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  １７，Ｕｎｉｔ  ７．７，７．１８，および７．２７（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９９６）を、参照のこと。本発明の目的のために、ＩＬ−２改変体により本発明の方法における使用のために活性化されたＮＫ細胞は、ＮＫ非感受性細胞の、抗体存在下（ＡＤＣＣ活性）または非存在下（ＬＡＫ活性）における特異的な溶解活性を証明し、より詳細には、ＮＫ非感受性ドージ細胞の、Ｂ細胞特異的抗体（リツキシマブを含む）の存在下における特異的な溶解活性を証明する。この特異的な溶解活性は、標準的４時間５１Ｃｒ放出細胞傷害性アッセイにおいて、標的に対するエフェクターを１２．５〜５０：１の割合で、使用して測定された、残留型（すなわち、非活性型）ＮＫ細胞の溶解活性のベースラインより、少なくとも約２０％以上、または少なくとも約２５％以上、または３０％、または３５％、または４０％以上大きい（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ：Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎｓ，Ｕｎｉｔ  ７．７，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  １７，Ｓｅｃｔｉｏｎ１７．１８．１（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９９６）を、参照のこと）。幾つかの実施形態において、これらのＩＬ−２改変体活性化ＮＫ細胞の特異的溶解活性は、上述のように測定された場合の残留型ＮＫ細胞のベースライン溶解活性より、少なくとも約４５％以上、少なくとも約５０％以上、少なくとも約５５％以上、また���少なくとも約６０％以上大きい。
【００７３】
ネイティブなＩＬ−２または天然に存在するＩＬ−２の適切な生物学的に活性な改変体は、これらのポリペプチドのフラグメント、アナログ、および誘導体であり得る。「フラグメント」によって、インタクトなポリペプチド配列および構造の一部のみからなるポリペプチドが意図され、そしてネイティブなポリペプチドのＣ末端欠失またはＮ末端欠失であり得る。「アナログ」によって、ネイティブなポリペプチドまたはこのネイティブなポリペプチドのフラグメントのいずれかのアナログが意図され、ここで、これらのアナログは、１つ以上のアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するネイティブなポリペプチド配列および構造を含む。「ムテイン」（例えば、本明細書中において記載されるムテイン）および１つ以上のペプトイド（ｐｅｐｔｏｉｄ）（ペプチド模倣物）を有するペプチドがまた、用語「アナログ」によって含まれる（国際公開番号ＷＯ９１／０４２８２を参照のこと）。「誘導体」によって、ネイティブなポリペプチドの所望の生物学的活性が保持される限り、目的のネイティブなポリペプチド、このネイティブポリペプチドのフラグメント、またはこれらそれぞれのアナログの任意の適切な改変（例えば、グリコシル化、リン酸化、ポリマー結合体化（例えば、ポリエチレングリコールを用いて）または外来部分の他の付加）が意図される。ポリペプチドフラグメント、アナログ、および誘導体を作製するための方法は、一般的に当該分野で利用可能である。
【００７４】
例えば、ポリペプチドのアミノ酸配列改変体は、目的のネイティブなポリペプチドをコードするクローン化されたＤＮＡ配列における変異によって調製され得る。変異誘発およびヌクレオチド配列改変のための方法は、当該分野で周知である。例えば、ＷａｌｋｅｒおよびＧａａｓｔｒａ，編（１９８３）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：４８８−４９２；Ｋｕｎｋｅｌら（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４：３６７−３８２；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；米国特許第４，８７３，１９２号；ならびにこれらに引用される参考文献を参照のこと。目的のポリペプチドの生物学的活性に影響を与えない適切なアミノ酸置換に関する手引きは、Ｄａｙｈｏｆｆら（１９７８）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）（これは、本明細書中に参考として援用される）中のモデルに見出され得る。保存的置換（例えば、１つのアミノ酸と類似の特性を有する別のアミノ酸との交換）が、好ましくあり得る。保存的置換の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
【００７５】
【数１】
2005538034.tif 000003
【００７６】
。
【００７７】
目的のＩＬ−２ポリペプチドの改変体の構築において、改変体が所望の活性を保持し続けるように改変が作製される。明らかに、改変体ポリペプチドをコードするＤＮＡ中に作製されるいずれの変異も、リーディングフレームの範囲外に配列を配置するべきではなく、好ましくは二次ｍＲＮＡ構造を生成し得る相補的領域を作製しない。ＥＰ特許出願公開番号７５，４４４号を参照のこと。
【００７８】
ＩＬ−２の生物学的に活性な改変体は、一般的に、参照ポリペプチド分子のアミノ酸配列（これは、比較のための基礎としてはたらく）に対して、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは約９０〜９５％もしくはそれより多く、そして最も好ましくは約９８％以上のアミノ酸配列同一性を有する。従って、ＩＬ−２参照分子がヒトＩＬ−２である場合、その生物学的に活性な改変体は、ヒトＩＬ−２についてのアミノ酸配列に対して、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは約９０〜９５％もしくはそれより多く、そして最も好ましくは約９８％以上の配列同一性を有する。目的のネイティブなポリペプチドの生物学的に活性な改変体は、わずか１〜１５アミノ酸だけか、わずか１〜１０（例えば、６〜１０）だけ、わずか５だけ、わずか４、３、２、またはさらに１アミノ酸残基だけ、そのネイティブなポリペプチドと異なり得る。「配列同一性」によって、同じアミノ酸残基が、改変体ポリペプチド内および参照としてはたらくポリペプチド分子内において見出されること（改変体の特定された連続するアミノ酸配列セグメントが、この参照分子のアミノ酸配列と整列され、かつ比較される場合）が意図される。２つのアミノ酸配列間の配列同一性のパーセンテージは、同一のアミノ酸残基が両配列において生じる位置の数を決定して一致した位置の数を得ること、参照分子に対する比較を受けたセグメントにおける位置の総数でこの一致した位置の数を除算し、そして結果に１００を掛けて配列同一性のパーセンテージを得ることによって、算出される。
【００７９】
２つの配列の最適な整列の目的のために、改変体のアミノ酸配列の連続セグメントは、参照分子のアミノ酸配列に関して、追加のアミノ酸残基、または欠失されたアミノ酸残基を有し得る。参照アミノ酸配列に対する比較のために使用される連続セグメントは、少なくとも２０個連続するアミノ酸残基を含み得、そして３０、４０、５０、１００またはより多くの残基であり得る。改変体のアミノ酸配列におけるギャップの含有と関連する増加した配列同一性についての補正は、ギャップペナルティーを割当てることによって作製され得る。配列整列の方法は、アミノ酸配列およびアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の両方に関して、当該分野で周知である。
【００８０】
従って、任意の２つの配列間のパーセント同一性の決定は、数理的なアルゴリズムを用いて達成され得る。配列比較のために利用される数理的なアルゴリズムの１つの好ましい非限定的な例は、ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ（１９８８）ＣＡＢＩＯＳ  ４：１１−１７のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列整列ソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（第２版）において利用される。ＰＡＭ１２０重量残基表、１２のギャップの長さのペナルティー、および４のギャップペナルティーが、アミノ酸配列を比較する場合に、ＡＬＩＧＮプログラムを用いて使用され得る。２つの配列間を比較する場合に使用するための数理的なアルゴリズムの別の好ましい非限定的な例は、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：２２６４（ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：５８７３−５８７７のように改変された）のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３のＮＢＬＡＳＴプログラムおよびＸＢＬＡＳＴプログラムに組込まれる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２を用いて実行されて、目的のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に相同なヌクレオチド配列を獲得し得る。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３を用いて実行されて、目的のポリペプチドに相同なアミノ酸配列を獲得し得る。比較目的のためのギャップの入った整列を得るために、ギャップＢＬＡＳＴ（Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴ）を、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９に記載されるように利用し得る。あるいは、ＰＳＩ−Ｂｌａｓｔを使用して、分子間の遠位の関係を検出する反復検索を実行し得る。Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９７）（前出）を参照のこと。ＢＬＡＳＴプログラム、ギャップＢＬＡＳＴプログラム、およびＰＳＩ−Ｂｌａｓｔプログラムを利用する場合、それぞれのプログラムのデフォルトパラメーター（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）が、使用され得る。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照のこと。ＡＬＩＧＮプログラム（Ｄａｙｈｏｆｆ（１９７８）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ５：補遺３（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）およびＷｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ  ８中のプログラム（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎから入手可能）（例えば、ＧＡＰプログラム）（これらのプログラムのデフォルトパラメーターが利用される）もまた、参照のこと。
【００８１】
アミノ酸配列同一性のパーセンテージを考慮すると、いくつかのアミノ酸残基の位置は、保存的アミノ酸置換（これは、タンパク質機能の特性に影響を与えない）の結果として異なり得る。これらの例において、保存的置換されたアミノ酸における類似性に起因して、配列同一性のパーセントは、上方へ調節され得る。このような調節は、当該分野で周知である。例えば、ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ（１９８８）Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｐｐｌｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．４：１１−１７を参照のこと。
【００８２】
ＩＬ−２活性を有するポリペプチドの正確な化学構造は、多くの要因に依存する。この分子中にイオン化可能なアミノ基およびカルボキシル基が存在するため、特定のポリペプチドは、酸性塩または塩基性塩として得られ得るか、あるいは中性形態で得られ得る。適切な環境条件に置かれた場合に、その生物学的活性を保持するこのような調製物の全ては、本明細書中で使用される場合、ＩＬ−２活性を有するポリペプチドの定義に含まれる。さらに、このポリペプチドの一次アミノ酸配列は、糖部分を用いる誘導体化（グリコシル化）によって、または他の補助的な分子（例えば、脂質、ホスフェート、アセチル基など）によって増強され得る。これはまた、糖類との結合体化によっても増強され得る。このような増強の特定の局面は、産生する宿主の翻訳後プロセシング系を介して達成される；他のこのような改変は、インビトロで導入され得る。任意の事象において、このような改変は、このポリペプチドのＩＬ−２活性が破壊されない限り、本明細書中で使用されるＩＬ−２ポリペプチドの定義に含まれる。このような改変は、種々のアッセイにおいて、このポリペプチドの活性を増強するかまたは減少するかのいずれかによって、この活性に量的または質的に影響し得ることが予想される。さらに、この鎖内の個々のアミノ酸残基は、酸化、還元、または他の誘導体化によって改変され得、そしてこのポリペプチドは切断されて、活性を保持するフラグメントが得られ得る。活性を破壊しないこのような変化は、本明細書中で使用される目的のＩＬ−２ポリペプチドの定義から、このポリペプチド配列を除去しない。
【００８３】
この技術は、ポリペプチド改変体の調製および使用に関する実質的なガイダンスを提供する。ＩＬ−２改変体の調製において、当業者は、ネイティブタンパク質のヌクレオチドまたはアミノ酸配列に対するどの改変が、本発明の方法において使用される薬学的組成物の治療的に活性な成分としての使用に適切な改変体を生じるかを、容易に決定し得る。
【００８４】
本発明の方法において使用するためのＩＬ−２は、任意の供給源由来であり得るが、好ましくは、組換えＩＬ−２である。「組換えＩＬ−２」によって、ネイティブな配列のＩＬ−２に匹敵する生物学的活性を有し、そして、例えばＴａｎｉｇｕｃｈｉら（１９８３）Ｎａｔｕｒｅ  ３０２：３０５−３１０およびＤｅｖｏｓ（１９８３）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １１：４３０７−４３２３において記載される組換えＤＮＡ技術によって調製されるか、またはＷａｎｇら（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２４：１４３１−１４３３によって記載されるように、変異的に変更されたＩＬ−２である、インターロイキン−２が意図される。一般に、ＩＬ−２をコードする遺伝子はクローニングされ、本明細書中に記載されるように、形質転換された生物体、好ましくは微生物（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）において発現される。この宿主生物体は、発現条件下で、ＩＬ−２を生成するための外来遺伝子を発現する。合成組換えＩＬ−２はまた、真核生物（例えば、酵母またはヒト細胞）において作製され得る。細胞からＩＬ−２を増殖、収集、破壊、または抽出するためのプロセスは、当該分野に公知であり、例えば、米国特許第４，６０４，３７７号；同第４，７３８，９２７号；同第４，６５６，１３２号；同第４，５６９，７９０号；同第４，７４８，２３４号；同第４，５３０，７８７号；同第４，５７２，７９８号；同第４，７４８，２３４号；および同第４，９３１，５４３号において、明示される。
【００８５】
改変体ＩＬ−２タンパク質の例については、欧州（ＥＰ）特許ＥＰ１３６，４８９（天然に存在するＩＬ−２のアミノ酸配列における１つ以上の以下の変化を開示する：Ａｓｎ２６〜Ｇｌｎ２６；Ｔｒｐ１２１〜Ｐｈｅ１２１；Ｃｙｓ５８〜Ｓｅｒ５８またはＣｙｓ５８〜Ａｌａ５８、Ｃｙｓ１０５〜Ｓｅｒ１０５またはＣｙｓ１０５〜Ａｌａ１０５；Ｃｙｓ１２５〜Ｓｅｒ１２５またはＣｙｓ１２５〜Ａｌａ１２５；Ａｒｇ１２０以下の全ての残基の欠失；およびこれらのＭｅｔ−１形態）；および１９８３年１０月１３日出願の欧州特許出願番号８３３０６２２１．９（番号１０９,７４８で１９８４年５月３０日公開）に記載される組換えＩＬ−２ムテインは、ベルギー国特許第８９３，０１６号、共有に係る米国特許第４，５１８，５８４号（ネイティブのヒトＩＬ−２に関連して番号付けされた１２５位のシステインが、欠失されるか、または中性のアミノ酸と置き換えられた、組換えヒトＩＬ−２ムテイン（アラニル−ｓｅｒ１２５−ＩＬ−２；およびｄｅｓ−アラニル（ａｌａｎａｙｌ）−ｓｅｒ１２５−ＩＬ−２）を開示する）に対する等価物である。米国特許第４，７５２，５８５号（以下の改変体ＩＬ−２タンパク質を開示する：
【００８６】
【化１】
2005538034.tif 000004
【００８７】
）および米国特許第４，９３１，５４３号（他のＩＬ−２ムテインと同様に、本明細書中の実施例で使用されたＩＬ−２ムテイン（ｄｅｓ−アラニル−１，ｓｅｒ−１２５ヒトＩＬ−２）を開示する）もまた、参照せよ。
【００８８】
欧州特許公報ＥＰ２００，２８０（１９８６年１２月１０日公表）もまた、参照せよ。これは、１０４位のメチオニンが保存的アミノ酸と置換されている組換えＩＬ−２ムテインを開示する。例としては、以下のムテインが挙げられる：
【００８９】
【化２】
2005538034.tif 000005
【００９０】
。
欧州特許公報ＥＰ１１８，６１７および米国特許第５，７００，９１３号もまた、参照せよ。これらは、Ｎ末端のアミノ酸として、ネイティブＩＬ−２のメチオニンの代わりにアラニンを有する、非グリコシル化ヒトＩＬ−２改変体；Ｎ末端のアミノ酸として、ネイティブＩＬ−２の開始メチオニンを欠失し、プロリンがＮ末端のアミノ酸である、非グリコシル化ヒトＩＬ−２改変体；Ｎ末端のアミノ酸であるメチオニンとプロリンとの間に挿入されたアラニンを有する、非グリコシル化ヒトＩＬ−２改変体を開示する。
【００９１】
他のＩＬ−２ムテインとしては、ＷＯ９９／６０１２８において開示されたＩＬ−２（ヒスチジンもしくはイソロイシンを用いた２０位でのアスパルテートの置換、アルギニン、グリシン、もしくはイソロイシンを用いた８８位でのアスパラギンの置換、またはロイシンもしくはグルタミン酸を用いた１２６位でのグルタミンの置換）（ＮＫ細胞および低減されたＩＬ−２傷害性よりむしろ、高親和性ＩＬ−２レセプター（Ｔ細胞レセプターを発現する細胞によって発現される）についての選択的活性を有すると伝えられる）；米国特許第５，２２９，１０９号において開示されたムテイン（アラニンを用いた３８位でのアルギニンの置換、またはリジンを用いた４２位でのフェニルアラニンの置換）（ネイティブのＩＬ−２と比較される場合、高親和性ＩＬ−２レセプターに対して低減された結合を示し、一方で、ＬＡＫ細胞を刺激する能力を保有する）；国際公開番号ＷＯ００／５８４５６において開示されたムテイン（ネイティブなＩＬ−２における天然に存在する（ｘ）Ｄ（ｙ）配列（Ｄはアスパラギン酸、（ｘ）はロイシン、イソロイシン、グリシン、またはバリン、および（ｙ）はバリン、ロイシンまたはセリンである）の改変または欠失）（脈管漏出症候群（ｖａｓｃｕｌａｒ  ｌｅａｋ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）を減少させると主張される）；国際公開番号ＷＯ００／０４０４８において開示されたＩＬ−２ｐｌ−３０ペプチド（ＩＬ−２の最初の３０アミノ酸に対応し、ＩＬ−２のａ−ヘリックスＡ全体を含み、そしてＩＬ−２レセプターのｂ鎖と相互作用する）（ＮＫ細胞およびＬＡＫ細胞の誘導を刺激すると報告される）；および、また国際公開番号ＷＯ００／０４０４８において開示されたＩＬ−２ｐｌ−３０ペプチドの変異体形態（リジンでの２０位でのアスパラギン酸の置換）（脈管出血を誘発すると報告されるが、ＬＡＫ細胞を産生する能力を保持する）が挙げられる。さらに、ＩＬ−２は、増大した溶解性および変化した薬物動態学的プロフィールを提供するために、ポリエチレングリコールを用いて改変され得る（米国特許第４，７６６，１０６号を参照のこと）。
【００９２】
本明細書中で使用される場合、用語「ＩＬ−２」はまた、ＩＬ−２融合体またはＩＬ−２結合体を含むことを意図され、このＩＬ−２融合体またはＩＬ−２結合体は、２次タンパク質に融合されたＩＬ−２、またはポリプロリンもしくは水溶性ポリマーに共有結合され、投薬の頻度を減少させるか、またはＩＬ−２耐性を改善する。例えば、ＩＬ−２（または上で定義されたようなその改変体）は、当該分野で公知の方法を使用して、ヒトアルブミンまたはアルブミンフラグメントと融合され得る（ＷＯ０１／７９２５８を参照のこと）。あるいは、ＩＬ−２は、当該分野で公知である方法を使用して、ポリプロリンまたはポリエチレングリコールホモポリマーおよびポリオキシエチル化ポリオルと共有結合され得、ここで、ホモポリマーは、非置換であるか、または１端をアルキル群で置換されており、そしてポプリオル（ｐｏｐｌｙｏｌ）は非置換である（例えば、米国特許第４，７６６，１０６号、同第５，２０６，３４４号、および同第４，８９４，２２６号を、参照のこと）。
【００９３】
治療活性成分としてＩＬ−２を含む任意の薬学的組成物は、本発明の方法において使用され得る。このような薬学的組成物は、当該分野で公知であり、これらとしては、米国特許第４，７４５，１８０号；同第４，７６６，１０６号；同第４，８１６，４４０号；同第４，８９４，２２６号；同第４，９３１，５４４号；および同第５，０７８，９９７号において開示される組成物が挙げられるが、これらに限定されない。従って、ＩＬ−２を含む、当該分野で公知の液体組成物、凍結乾燥組成物、または噴霧乾燥組成物は、本発明の方法に従って、後で被検体に投与するための水性溶液もしくは非水性溶液、または懸濁液として調製され得る。これらの組成物の各々は、治療的または予防的に活性な成分としてＩＬ−２を含む。「治療的または予防的に活性な成分」により、この薬学的組成物が被検体に投与される場合に、この被検体における疾患または状態の処置、予防または診断に関する所望の治療応答または予防応答をもたらすために、この組成物にＩＬ−２が特異的に組み込まれることが、意図される。好ましくは、この薬学的組成物は、調製および貯蔵の間のタンパク質安定性および生物学的活性の損失に関連する問題を最小化するために、適切な安定化剤、バルキング剤、またはその両方を含む。
【００９４】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の方法において有用なＩＬ−２含有薬学的組成物は、安定化単量体ＩＬ−２を含む組成物、多量体ＩＬ−２を含む組成物、および安定化凍結乾燥ＩＬ−２または安定化噴霧乾燥ＩＬ−２を含む組成物である。
【００９５】
安定化された単量体ＩＬ−２を含む薬学的組成物は、「Ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ」と題された国際公開番号ＷＯ０１／２４８１４において開示される。「単量体」ＩＬ−２により、本明細書中に記載される薬学的組成物において、実質的にその単量体形態で存在するが、凝集形態では存在しないタンパク質分子が意図される。従って、ＩＬ−２の共有結合性のオリゴマーもしくは凝集体、または疎水性のオリゴマーもしくは凝集体は、存在しない。簡潔に言うと、これらの液体組成物におけるＩＬ−２は、貯蔵の間のＩＬ−２の凝集体の形成を減少するのに十分な量のアミノ酸塩基を用いて処方される。このアミノ酸塩基は、アミノ酸またはアミノ酸の組み合わせであり、ここで、任意の所定のアミノ酸は、その遊離塩基形態またはその塩の形態のいずれかで存在する。好ましいアミノ酸は、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸からなる群から選択される。これらの組成物は、さらに、ＩＬ−２の安定性についての許容範囲内にこの液体組成物のｐＨを維持するための緩衝剤を含み、ここで、この緩衝剤は、その塩形態を実質的に含まない酸、その塩形態である酸、または酸およびその塩形態の混合物である。好ましくは、この酸は、コハク酸、クエン酸、リン酸およびグルタミン酸からなる群から選択される。このような組成物は、本明細書中で、安定化された単量体ＩＬ−２薬学的組成物といわれる。
【００９６】
これらの組成物中のアミノ酸塩基は、ＩＬ−２をこの液体薬学的組成物の貯蔵の間の凝集体の形成に対して安定化するように働き、一方、その塩形態を実質的に含まない酸、その塩形態である酸、または酸およびその塩形態の混合物の緩衝剤としての使用は、ほぼ等張の浸透圧を有する液体組成物を生じる。この液体薬学的組成物は、さらに、他の安定化剤（より詳細には、メチオニン、ポリソルベート８０のような非イオン性界面活性剤、およびＥＤＴＡ）を組み込み、このポリペプチドの安定性をさらに増加し得る。このような液体薬学的組成物は、その塩形態を実質的に含まない酸、その塩形態である酸、または酸およびその塩形態の混合物と組み合わせてのアミノ酸塩基の添加と同様に、安定化されるといわれ、これらの２つの成分の組み合わせの非存在下において処方される液体薬学的組成物と比較して、増加した貯蔵安定性を有する組成物を生じる。
【００９７】
安定化された単量体ＩＬ−２を含むこれらの液体薬学的組成物は、水性液体形態で使用されるか、または後での使用のために凍結状態で貯蔵されるか、あるいは本発明の方法に従って被検体に投与するために適切な液体形態または他の形態へと後で再形成するための乾燥形態のいずれかであり得る。「乾燥形態」により、液体の薬学的組成物または処方物が、フリーズドライ（すなわち、凍結乾燥；例えば、ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＰｏｌｌｉ（１９８４）Ｊ．Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．３８：４８−５９を参照のこと）、噴霧乾燥（Ｍａｓｔｅｒｓ（１９９１）、Ｓｐｒａｙ−Ｄｒｙｉｎｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ（５ｔｈ  ｅｄ；Ｌｏｎｇｍａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ，Ｅｓｓｅｚ，Ｕ．Ｋ．），ｐｐ．４９１−６７６；Ｂｒｏａｄｈｅａｄら（１９９２）Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌ．Ｉｎｄ．Ｐｈａｒｍ．１８：１１６９−１２０６；およびＭｕｍｅｎｔｈａｌｅｒら（１９９４）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１１：１２−２０を参照のこと）、または風乾（ＣａｒｐｅｎｔｅｒおよびＣｒｏｗｅ（１９８８）Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ  ２５：４５９−４７０；およびＲｏｓｅｒ（１９９１）Ｂｉｏｐｈａｒｍ．４：４７−５３）のいずれかによって乾燥されることが、意図される。
【００９８】
ＩＬ−２をその非凝集化単量体状態で含むＩＬ−２処方物の他の例としては、ＷｈｉｔｔｉｎｇｔｏｎおよびＦａｕｌｄｓ（１９９３）Ｄｒｕｇｓ  ４６（３）：４４６−５１４において記載される処方物が、挙げられる。これらの処方物としては、組換えＩＬ−２産物が挙げられる。ここで、組換えＩＬ−２ムテインテセロイキン（Ｔｅｃｅｌｅｕｋｉｎ）（アミノ末端に付加されたメチオニン残基を有する非グリコシル化ヒトＩＬ−２）は、等張性生理食塩水中で再構成される凍結乾燥粉末において、０．２５％のヒト血清アルブミンを用いて処方され、そして、組換えＩＬ−２ムテイン  バイオロイキン（Ｂｉｏｌｅｕｋｉｎ）（アミノ末端に付加されたメチオニン残基、およびヒトＩＬ−２配列における１２５位でのシステイン残基のアラニンとの置換を有する、ヒトＩＬ−２）は、０．１〜１．０ｍｇ／ｍｌ  ＩＬ−２ムテインが酸と結合するように調製され、ここで、この処方物は３．０〜４．０のｐＨ（有利には、緩衝液を含まない）１０００ｍｍｈｏｓ／ｃｍ未満（有利には５５０ｍｍｈｏｓ／ｃｍ未満）の導伝率を有する。ＥＰ３７３，６７９；Ｘｈａｎｇら（１９９６）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｒｅｓ．１３（４）：６４３〜６４４；およびＰｒｅｓｔｒｅｌｓｋｉら（１９９５）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｒｅｓ．１２（９）：１２５０−１２５８を、参照のこと。
【００９９】
単量体ＩＬ−２を包含する薬学的組成物の例は、共有に係る米国特許第４，６０４，３７７号に開示される。「多量体」により、タンパク質分子が、この薬学的組成物中に、１０〜５０分子の平均分子会合を有する微小凝集形態で存在することが意図される。これらの多量体は、ゆるく結合した、物理的に会合したＩＬ−２分子として存在する。これらの組成物の凍結乾燥形態は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）（Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）の商品名で、市販されている。この参考文献中に開示される凍結乾燥処方物は、選択的に酸化した、微生物により生成された組換えＩＬ−２を含み、ここで、この組換えＩＬ−２は、バルクを提供する水溶性キャリア（例えば、マンニトール）、および組換えＩＬ−２の水への溶解性を保証するのに十分な量のドデシル硫酸ナトリウムと混合される。これらの組成物は、非経口的投与のための水性注射物中での再構築のために適切であり、そして、ヒト患者において安定かつ十分に耐性である。再構築の際に、このＩＬ−２は、その多量体状態を保持する。多量体ＩＬ−２を含むこのような凍結乾燥組成物または液体組成物は、本発明の方法に含まれる。このような組成物は、本明細書中において、多量体ＩＬ−２薬学的組成物と呼ばれる。
【０１００】
本発明の方法はまた、ＩＬ−２を含む、安定化された凍結乾燥薬学的組成物または噴霧乾燥薬学的組成物を使用し得、これらの組成物は、本発明の方法に従って投与するために、液体形態または適切な他の形態へと再構築され得る。このような薬学的組成物は、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２」と題された国際公開番号ＷＯ０１／２４８１４に開示される。これらの組成物は、さらに、少なくとも１つのバルキング剤、乾燥プロセスの間にこのタンパク質を安定化するのに十分な量の少なくとも１つの薬剤、またはそれら両方を含み得る。「安定化された」により、ＩＬ−２タンパク質またはその改変体が、そのモノマーまたはマルチマー形態を保持し、そしてこの組成物の固体形態または乾燥粉末形態を得るための凍結乾燥または噴霧乾燥の後に、その質、純度および効力の、他の重要な特性を保持することが意図される。これらの組成物において、バルキング剤としての使用のために好ましいキャリア材料としては、グリシン、マンニトール、アラニン、バリン、またはこれらの任意の組み合わせが挙げられ、最も好ましくは、グリシンである。このバルキング剤は、使用される薬剤に依存して、０％〜約１０％（ｗ／ｖ）の範囲でこの処方物中に存在する。安定化剤として使用するための好ましいキャリア材料としては、任意の糖または糖アルコール、あるいは任意のアミノ酸が挙げられる。好ましい糖としては、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、ソルビトール、グルコース、ラクトース、デキストロースまたはこれらの任意の組み合わせが挙げられ、好ましくはスクロースである。安定化剤が糖である場合、これは約０％〜約９．０％（ｗ／ｖ）の範囲、好ましくは約０．５％〜約５．０％、より好ましくは約１．０％〜約３．０％、最も好ましくは約１．０％で存在する。この安定化剤がアミノ酸である場合、これは、約０％〜約１．０％（ｗ／ｖ）の範囲、好ましくは約０．３％〜約０．７％、最も好ましくは約０．５％で存在する。これらの安定化された凍結乾燥組成物または噴霧乾燥組成物は、必要に応じて、メチオニン、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、またはその塩の１つ（例えば、ＥＤＴＡ二ナトリウム）あるいは他のキレート剤を含み得、これらは、メチオニン酸化に対してＩＬ−２を保護する。この様式におけるこれらの薬剤の使用は、国際公開番号ＷＯ０１／２４８１４において記載される。この安定化された凍結乾燥組成物または噴霧乾燥組成物は、緩衝剤を使用して処方され得、この緩衝剤は、液相の場合、例えば処方プロセスの間またはこの組成物の乾燥形態の再構築後に、この薬学的組成物のｐＨを、許容範囲内、好ましくは約ｐＨ４．０〜約ｐＨ８．５に維持する。緩衝液は、これらが、乾燥プロセスと適合性であり、かつ処理の間および貯蔵の際にこのタンパク質の質、純度、効力および安定性に影響を与えないように選択される。
【０１０１】
以前に記載された安定化された単量体ＩＬ−２薬学的組成物、多量体ＩＬ−２薬学的組成物および安定化された凍結乾燥ＩＬ−２薬学的組成物または噴霧乾燥ＩＬ−２薬学的組成物は、本発明の方法における使用のための適切な組成物を表す。しかし、治療活性成分としてＩＬ−２を含む任意の薬学的組成物が、本発明の方法に含まれる。
【０１０２】
本明細書において用いる場合、用語「抗ＣＤ２０抗体」は、ＣＤ２０  Ｂ細胞表面抗原を特異的に認識する任意の抗体を包含する。抗ＣＤ２０抗体としては、ポリクローナル抗ＣＤ２０抗体、モノクローナル抗ＣＤ２０抗体、ヒト抗ＣＤ２０抗体、ヒト化抗ＣＤ２０抗体、キメラ抗ＣＤ２０抗体、異種抗ＣＤ２０抗体、およびＣＤ２０  Ｂ細胞表面抗原を特異的に認識するこれらの抗ＣＤ２０抗体のフラグメントが挙げられる。好ましくは、この抗体は、実際には、モノクローナル抗体である。「モノクローナル抗体」は、実質的に相同な抗体の集団（すなわち、集団を含む個々の抗体は、少量で存在し得る、天然に存在する可能性のある変異体を除いて同一である）から得られた抗体を意図する。モノクローナル抗体は、非常に特異的であり、単一の抗原部位（すなわち、本発明においてはＣＤ２０  Ｂ細胞表面抗原）に対して指向されている。さらに、代表的には、異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含む従来の（ポリクローナル）抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向されている。修飾語句「モノクローナル」は、抗体の実質的に相同な集団から得られるような、抗体の特徴を示すものであり、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするとは解釈されてはならない。例えば、本発明に従って用いられるべきモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製され得るか、または組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）によって作製され得る。「モノクローナル抗体」はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４〜６２８およびＭａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１〜５９７に記載の技術を用いてファージ抗体ライブラリーから単離され得る。
【０１０３】
マウス起源の抗ＣＤ２０抗体は、本発明の方法における使用に適切である。このようなマウス抗ＣＤ２０抗体の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定はされない：Ｂ１抗体（米国特許第６，０１５，５４２号に記載）；１Ｆ５抗体（Ｐｒｅｓｓら（１９８９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．７：１０２７を参照のこと）；ＮＫＩ−Ｂ２０およびＢＣＡ−Ｂ２０抗ＣＤ２０抗体（Ｈｏｏｉｊｂｅｒｇら（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５５：８４０〜８４６に記載）；およびＩＤＥＣ−２Ｂ８（ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから市販されている）；２Ｈ７抗体（Ｃｌａｒｋら（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：１７６６〜１７７０に記載）；ならびにＣｌａｒｋら（１９８５）（前出）およびＳｔａｓｈｅｎｋｏら（１９８０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２５：１６７８〜１６８５）に記載の他の抗体。
【０１０４】
本明細書において用いられる場合、用語「抗ＣＤ２０抗体」とは、キメラ抗ＣＤ２０抗体を包含する。「キメラ抗体」により、最も好ましくは、組換えデオキシリボ核酸技術を用いて誘導され、そしてヒト（免疫学的に「関連した」種、例えば、チンパンジーを含む）の成分および非ヒト成分の両方を含む抗体が意図される。従って、キメラ抗体の定常領域は、最も好ましくは、天然のヒト抗体の定常領域と実質的に同一である；キメラ抗体の可変性領域は、最も好ましくは非ヒトの供給源に由来し、そしてＣＤ２０細胞表面抗原に対して所望の抗原特異性を有する。この非ヒト供給源は、ヒトＣＤ２０細胞表面抗原またはヒトＣＤ２０細胞表面抗原を含有する物質に対する抗体を産生するために用いられ得る、任意の脊椎動物の供給源であり得る。このような非ヒトの供給源としては、げっ歯類（例えば、ウサギ、ラット、マウスなど；例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）、および非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル、類人猿など；例えば、米国特許第５，７５０，１０５号および同第５，７５６，０９６号を参照のこと）が挙げられるがこれらに限定されない。最も好ましくは、非ヒト成分（可変領域）は、マウスの供給源由来である。本明細書において用いる場合、語句「免疫学的に活性な」は、キメラ抗ＣＤ２０抗体に関して使用する場合、ヒトＣ１ｑに結合するキメラ抗体を意味し、ヒトＢリンパ腫細胞株の補体依存性溶解（「ＣＤＣ」）を媒介し、そして抗体依存性細胞傷害性（「ＡＤＣＣ」）を通じてヒト標的細胞を溶解する。キメラ抗ＣＤ２０抗体の例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８（リツキシマブ（ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）の名称で市販されており、そして、米国特許第５，７３６，１３７号、同第５，７７６，４５６号、および同第５，８４３，４３９号に記載される）；米国特許第５，７５０，１０５号に記載のキメラ抗体；米国特許第５，５００，３６２号；同第５，６７７，１８０号；同第５，７２１，１０８号；および同第５，８４３，６８５号に記載されるキメラ抗体）。
【０１０５】
ヒト化抗ＣＤ２０抗体はまた、本明細書において用いる場合、用語、抗ＣＤ２０抗体に包含される。「ヒト化」により、非ヒト免疫グロブリン配列に由来する最小配列を含む抗ＣＤ２０抗体の形態が意図される。ほとんどの部分について、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であり、ここでレシピエントの超可変性領域由来の残基は、所望の特異性、親和性および能力を有する、マウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類のような非ヒト種（ドナー抗体）の超可変性領域由来の残基と置き換えられている。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；同第５，８５９，２０５号を参照のこと。いくつかの場合、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基で置き換えられている（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号；５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号を参照のこと）。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体においても、ドナー抗体においても見出されない、残基を含む。これらの改変は、抗体の能力をさらに洗練する（例えば、所望の親和性を得る）ためになされる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つの可変ドメイン、代表的には２つの可変ドメインの、実質的に全てを含む。ここで超可変性領域の全て、または実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリンの超可変性領域に相当し、そしてこのフレームワーク領域の全てまたは実質的に全てが、ヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域に相当する。ヒト化抗体はまた、必要に応じて、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、代表的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の、少なくとも１部分を含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３３１：５２２〜５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３〜３２９；およびＰｒｅｓｔａ（１９９２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３〜５９６を参照のこと。
【０１０６】
用語、抗ＣＤ２０抗体により、非ヒト哺乳動物宿主、より詳細には、トランスジェニックマウス（不活性な内因性免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子座によって特徴づけされた）において産生された、異種の抗ＣＤ２０抗体または改変された抗ＣＤ２０抗体もまた、包含される。このようなトランスジェニック動物において、宿主免疫グロブリンの軽鎖サブユニットおよび重鎖サブユニットの発現のためにコンピテントな内因性遺伝子は、機能しないようにされ、そして類似しているヒト免疫グロブリン遺伝子座で置換されている。これらのトランスジェニック動物は、軽鎖または重鎖の宿主免疫グロブリンサブユニットが実質的に存在しないヒト抗体を産生する。例えば、米国特許第５，９３９，５９８号を参照のこと。
【０１０７】
抗ＣＤ２０抗体のフラグメントは、全長抗体の所望の親和性を保持する限り、本発明の方法における使用に適切である。従って、抗ＣＤ２０抗体のフラグメントは、ＣＤ２０  Ｂ細胞表面抗原に結合する能力を保持する。抗体のフラグメントは、全長抗体の一部、一般にはその抗原結合領域または可変領域を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、およびＦｖフラグメント、ならびに単鎖抗体分子が挙げられるが、これらに限定されない。「単鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」抗体フラグメントにより、抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含むフラグメントが意図される。ここでこれらのドメインは、単鎖ポリペプチドに存在する。例えば、米国特許第４，９４６，７７８号；同第５，２６０，２０３号；同第５，４５５，０３０号；同第５，８５６，４５６号を参照のこと。一般に、Ｆｖポリペプチドは、さらに、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーを含み、これによってｓＦｖは、抗原結合のための所望の構造を形成することが可能になる。ｓＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（１９９４），Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、第１１３巻、ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、第２６９〜３１５を参照のこと。
【０１０８】
抗体または抗体フラグメントは、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２〜５５４（１９９０）に記載の技術を用いて生成された抗体ファージライブラリーから単離され得る。Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４〜６２８およびＭａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１〜５９７は、ファージライブラリーを用いた、マウスおよびヒト抗体の単離を、それぞれ記載する。その後の刊行物は、チェーンシャッフリングによる高親和性（ｎＭ範囲）のヒト抗体の産生（Ｍａｒｋｓら（１９９２）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９〜７８３）、ならびに非常に大きいファージライブラリーを構築するためのストラテジーとしての、コンビナトリアル感染およびインビボ組換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら（１９９３）Ｎｕｃｌｅｉｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２１：２２６５〜２２６６）を記載する。従って、これらの技術は、モノクローナル抗体の単離のための伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術に対する実行可能な代替法である。
【０１０９】
ヒト化抗体は、非ヒトである供給源から導入される１つ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、「ドナー」残基と呼ばれ、これは、代表的には「ドナー」可変ドメインからとられる。ヒト化はげっ歯類のＣＤＲまたはＣＤＲ配列をヒト抗体の相当する配列で置換することによって、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者の方法（Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２〜５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３〜３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４〜１５３６）に従い、本質的に実施され得る。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；同第５，８５９，２０５号を参照のこと。従って、このような「ヒト化された」抗体は、インタクトなヒト可変ドメインよりも実質的に少ないドメインが非ヒト種由来の相当する配列によって置換された抗体を含み得る。実際に、ヒト化抗体は、代表的にヒト抗体であり、この抗体では、いくつかのＣＤＲ残基およびおそらくいくつかのフレームワーク残基が、げっ歯類抗体の類似性部位由来の残基で置換される。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；同第５，８５９，２０５号を参照のこと。米国特許第６，１８０，３７０号および国際公開番号ＷＯ０１／２７１６０もまた、参照のこと。ここでは、所定の抗原に対する改善された親和性を有するヒト化抗体およびヒト化抗体を産生するための技術が、開示される。
【０１１０】
種々の技術が、抗体フラグメントの産生のために開発されている。従来、これらのフラグメントは、インタクトな抗体のタンパク質分解性消化を介して誘導された（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら（１９９２）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７〜１１７（１９９２）、およびＢｒｅｎｎａｎら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１を参照のこと）。しかし、これらのフラグメントは、今では組換え宿主細胞によって直接産生され得る。例えば、抗体フラグメントは、上で議論された抗体ファージライブラリーから単離され得る。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収され得、そして化学的に結合されて、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを形成し得る（Ｃａｒｔｅｒら（１９９２）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３〜１６７）。別のアプローチに従って、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、組換え宿主培養から、直接単離され得る。抗体フラグメントの産生についての他の技術は、当業者に明白である。
【０１１１】
さらに、前に記載した抗ＣＤ２０抗体のいずれかは、本発明の方法における使用の前に結合体化され得る。このような結合体化抗体は、当該分野で利用可能である。従って、抗ＣＤ２０抗体は、間接的標識および間接的標識アプローチを用いて標識され得る。「間接的標識」または「間接的標識アプローチ」により、キレート剤が抗体に共有結合すること、そして少なくとも１つの放射性核種が、このキレート剤に挿入されることが、意図される。例えば、ＳｒｉｖａｇｔａｖａおよびＭｅａｓｅ（１９９１）Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏ．１８：５８９〜６０３に記載されるキレート剤および放射性核種を参照のこと。あるいは、抗ＣＤ２０抗体は、「直接的標識」または「直接的標識アプローチ」を用いて標識され得る。ここでは、放射性核種は、抗体に（代表的にはアミノ酸残基を介して）直接共有結合する。好ましい放射性核種は、ＳｒｉｖａｇｔａｖａおよびＭｅａｓｅ（１９９１）（前出）において、提供されている。間接的な標識アプローチが特に好ましい。例えば、また、米国特許第６，０１５，５４２号に記載の抗ＣＤ２０抗体の標識された形態を参照のこと。
【０１１２】
抗ＣＤ２０抗体は、代表的には、標準的技術によって、薬学的に受容可能な緩衝液（例えば、滅菌生理食塩水、滅菌緩衝化水、プロピレングリコール、前述の組み合わせ、など）中で提供される。非経口的に投与可能な薬剤を調製する方法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版；Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．：Ｅａｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，１９９０）に記載されている。例えば、国際公開番号ＷＯ  ９８／５６４１８も参照のこと。これは、本発明の方法における使用に適切な安定化抗体薬学的処方物を記載する。
【０１１３】
本発明は、本明細書中で開示される投薬レジメンに従い、抗ＣＤ２０抗体およびＩＬ−２を用いる併用治療期間を経験する被験体の臨床応答を予測する方法を、さらに提供する。この方法は、この被験体において、これらの２つの治療薬剤を用いた併用治療期間の開始後の、約１週間〜約７週間、好ましくは約１〜約１４週間、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞発現をモニターする工程を、包含する。好ましくは、ＮＫ細胞数が、併用治療の始まりに先行して決定され、そして併用治療期間を通してモニターされ、従って、ＮＫ細胞の拡大の時間経過が、追跡され得る。この様式において、ＮＫ細胞数は、抗ＣＤ２０抗体およびＩＬ−２を用いた併用治療、ならびにＩＬ−２の最終投与から４〜６週間後の経過にわたって、患者において毎週決定される。ＮＫ細胞数を決定する方法は、当該分野で公知である。例えば、Ｓｕｚｕｋｉら（１９８３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３０：９８１〜９８７；Ｈｅｒｂｅｒｍａｎ（１９８７）Ｐｒｏｇ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ．２４４：２６７〜２７４；およびＭｅｒｏｐｏｌら（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．４６：３１８〜３２６において開示される方法を、参照のこと。ＩＬ−２および抗ＣＤ２０抗体を用いた組み合わせ治療（本明細書中で概略を示したように、４週間にわたって週２回、週３回または毎日のＩＬ−２投薬を用いる）を受ける場合、約２００細胞／μｌより多いＮＫ細胞数の拡大を有する、治療開始後１０週間の患者は、１４週目の評価において、非進行者である（すなわち、完全な応答者であるか、部分的応答者であるか、または安定病態によって特徴付けられる）ことが予測される。対照的に、約２００細胞／μｌ未満のＮＫ細胞数の拡大を有する、治療開始後１０週間の患者は、１４週目の評価において、進行者である（すなわち、再発または進行性の疾患を有する）ことが予測される。従って、リツキシマブおよびＩＬ−２との組み合わせ治療を受けている患者における、ＮＫ細胞数の拡大のモニタリングは、患者のこの治療の予後についての重要な診断ツールとして役立ち得る。
【０１１４】
従って、本発明は、少なくとも１回の治療有効用量の抗ＣＤ２０抗体を被験体に投与する工程、およびこの被験体におけるナチュラルキラー（ＮＫ）細胞数を、受容可能な閾値レベルより高く維持する手段を提供する工程を包含する、ヒト被験体におけるリンパ腫（より特定には非ホジキンＢ細胞リンパ腫）の処置のための方法を、提供する。この受容可能な閾値レベルは、約１５０細胞／μｌのＮＫ細胞数、好ましくは約１７５細胞／μｌのＮＫ細胞数である。幾つかの実施形態において、この方法は、被験体における約２００細胞／μｌより多いＮＫ細胞数を、効果的に維持する。ＮＫ細胞数が維持される手段は、少なくとも１つの治療有効用量のＩＬ−２が約２２ＩＵ＊時間／ｍｌ血清〜約６５３ＩＵ＊時間／ｍｌの範囲内の最初のＩＬ−２暴露を生じる量で被験体に投与され、ここで、このＩＬ−２暴露がヒト薬物速度論（ＰＫ）データにより決定される血清濃度時間曲線（ＡＵＣ）の下の面積として測定されるように、ＩＬ−２が被験体に投与される、任意のプロトコルを含む。
【０１１５】
ＮＫ細胞数を受容可能閾値レベルより上に維持する１つの手段は、本明細書中で開示される一定的ＩＬ−２投薬レジメンに従ってＩＬ−２を投与することを含む。従って、被験体は、少なくとも１つの治療有効用量のＩＬ−２を、参照ＩＬ−２標準（すなわち、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２）の約６６６．６７μｇ〜約１２００μｇの用量の範囲内と同じ最初のＩＬ−２暴露（ヒトＰＫデータ由来の血清濃度時間曲線の下の面積により決定される）を達成するために必要な量で、投与される。このような実施形態において、被験体はまた、治療有効用量の抗ＣＤ２０抗体も、約１２５ｍｇ／ｍ２〜約５００ｍｇ／ｍ２の範囲内で、投与される。抗ＣＤ２０抗体は、本明細書中で上述されるような毎週の投薬計画に従って投与される。ＮＫ細胞数を受容可能閾値レベルより上に維持するための手段は、本明細書中で開示される一定的ＩＬ−２投薬レジメンを含み、治療有効用量のＩＬ−２は、週２回または週３回の投薬計画に従って、２０００μｇ〜３６００μｇの範囲内（例えば、２８００μｇ〜３６００μｇ）の参照ＩＬ−２標準の週あたりの総用量（ヒトＰＫデータ由来の血清濃度時間曲線の下の面積により決定される）と同量であるＩＬ−２の週あたりの総用量が被験体に投与されるように、投与され得る。抗ＣＤ２０抗体の投薬期間は、約４週間〜約８週間であり得、そして一定的ＩＬ−２投薬レジメンの期間は、約４週間〜約１０週間であり得る（本明細書中で述べられる）。一定的ＩＬ−２投薬と組み合わせられた抗ＣＤ２０抗体の特定の投薬レジメンについてのさらなる指示は、本明細書中に上で提供される。
【０１１６】
ＮＫ細胞数を受容可能閾値レベルより上に維持する別の手段は、ＩＬ−２の２段階投薬レジメンの施与を含む。ここで、ＩＬ−２の２段階投薬レジメンは、週あたりのより高い総用量のＩＬ−２をこの被験体に投与する第１期を含み、この後、週あたりのより低い総用量のＩＬ−２をこの被験体に投与する第２期が続く（本明細書中で上に開示する）。この実施形態において、ＩＬ−２の週あたりのより高い総用量は、２０００μｇ〜３６００μｇの範囲内の参照ＩＬ−２標準の週あたりの総用量（ヒト薬物速度論（ＰＫ）データ由来の血清濃度時間曲線の下の面積により決定される）と同量であり、ＩＬ−２の週あたりのより低い総用量は、１２００μｇ〜２６００μｇの範囲内の参照ＩＬ−２標準の週あたりの総用量（ヒトＰＫデータ由来の血清濃度時間曲線の下の面積により決定される）と同量である。以前上で述べられたように、ＩＬ−２の週あたりのより低い総用量は、ＩＬ−２の週あたりのより高い総用量より低い。このような実施形態において、抗ＣＤ２０抗体の治療有効用量は、約１２５ｍｇ／ｍ２〜約５００ｍｇ／ｍ２の範囲内である。
【０１１７】
ＮＫ細胞数を受容可能閾値レベルより上に維持する手段がＩＬ−２の２投薬レジメンである場合、ＩＬ−２の第１用量は、抗ＣＤ２０抗体の第１用量より先行して（例えば、抗ＣＤ２０抗体の第１用量の投与より約１週間〜約３０日先行する）被験体に投与され得る。あるいは、ＩＬ−２の第１用量は、抗ＣＤ２０抗体の第１用量と共に（すなわち、同じ日に、同時にかまたはどちらかの順序で一連のいずれかで）被験体に投与され得る。さらに別の実施形態において、ＩＬ−２の第１用量は、抗ＣＤ２０抗体の第１用量が被験体に投与された後（例えば、被験体への抗体の投与から１０日以内、好ましくは７日以内）に投与され得る。本明細書中の上述のように、ＩＬ−２の週あたりのより高い総用量は、単回用量として投与され得るか、または週に２回、３回、４回、５回、６回または７回の投与計画に従って投与される、第１の一連の等用量に分割され得、ＩＬ−２の週あたりのより低い総用量は、単回用量として投与され得るか、または週に２回、３回、４回、５回、６回または７回の投与計画に従って投与される、第２の一連の等用量に分割され得る。抗ＣＤ２０抗体の投薬期間は、約４週間〜約８週間であり得、２段階ＩＬ−２投薬レジメンの期間は、約４週間〜約１６週間であり得る（上述）。ＮＫ細胞数を維持する手段は、２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第１期（すなわち、ＩＬ−２の週あたりのより高い総用量が投与される）と２段階ＩＬ−２投薬レジメンの第２期（すなわち、ＩＬ−２の週あたりのより低い総用量が投与される）との間に、薬物休暇を被験体に与える工程を、さらに含む（本明細書中で記載される）。
【０１１８】
必要な場合、被験体は、抗ＣＤ２０抗体および２段階ＩＬ−２投薬レジメンの併用治療の多数のメンテナンス周期を施与され、ＮＫ細胞数を受容可能な閾値レベルより上（すなわち、約１５０細胞／μｌ）に維持し得る。上述のように、このようなメンテナンス周期のそれぞれは、週１回の抗ＣＤ２０抗体の投与を、完全な２段階ＩＬ−２投薬レジメン（すなわち、被験体は、より高い週総投薬の第１期およびより低い週総投薬の第２期の両方を完了させる。ここで、完全な２段階ＩＬ−２投薬レジメンは、薬物休暇をさらに含み得る）と組み合わせて、含む。２段階ＩＬ−２投薬レジメンと組み合わせられた、抗ＣＤ２０抗体の特定の投薬レジメンについてのさらなる指示は、本明細書中の上記に提供される。
【０１１９】
以下の実施例は、例示の目的で提供されるものであり、限定の目的ではない。
【実施例】
【０１２０】
（実施例１：非ホジキンリンパ腫を有する患者における、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の一定週総用量と組み合わせた毎週のリツキシマブ治療の第Ｉ相研究）
本研究で使用されるＩＬ−２処方物は、Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａにより、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の商標の下で製造される。この処方物におけるＩＬ−２は、組換え的に産生された、非グリコシル化ヒトＩＬ−２ムテイン（アルデスロイキン（ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）と呼ばれる）であり、最初のアラニン残基が欠失され、１２５位のシステイン残基がセリン残基と置換されている（ｄｅｓ−アラニル−１，セリン−１２５ヒトインターロイキン２と呼ばれる）点で、ネイティブなヒトＩＬ−２アミノ酸配列と異なる。このＩＬ−２ムテインは、Ｅ．ｃｏｌｉで発現され、その後、ダイアフィルトレーション（ｄｉａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）およびカチオン変換クロマトグラフィにより、精製される（米国特許第４，９３１，５４３号に記載される）。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２として市販されるＩＬ−２処方物は、タンパク質１．３ｍｇ（２２ＭＩＵ）を含むバイアル中で、無菌の、白からオフホワイトの保存料非含有凍結乾燥粉末として供給される。
【０１２１】
本実施例および以下の実施例において使用された抗ＣＤ２０抗体は、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ；ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８；ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）である。これは、包装挿入物の用量（６時間にわたって３７５ｍｇ／ｍ２を注入）毎に投与される。
【０１２２】
本研究の第１の目的は、ＣＤ２０＋  Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫の段階ＩＩＩまたは段階ＩＶの処置のために、週１回の一定量（３７５ｍｇ／ｍ２）のＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ）の静脈（ＩＶ）注入と併用して、３回の等用量で皮下的に投与された場合の、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の週あたりの最大耐性用量（ＭＴＤ）を決定することであった。２つ目の目的は、ＩＬ−２の効果を、リツキシマブと同時に、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の拡大の程度、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）により測定されるＮＫ細胞機能、抗腫瘍応答、抗腫瘍応答の期間、ならびにＩＬ−２およびリツキシマブの薬物速度論において、調査することであった。
【０１２３】
（研究設計）
これは、ＩＬ−２の増大する用量を、週に１回、計４用量注入される３７５ｍｇ／ｍ２のリツキシマブと組み合わせた、開放標識研究であった。多数の研究中心が、予測される。ＩＬ−２の週あたりの総用量は、１３．５百万国際単位（すなわち、週に３回の４．５ＭＩＵのＩＬ−２用量）、３０．０ＭＩＵ（すなわち、週に３回の１０．０ＭＩＵのＩＬ−２用量）、４２．０ＭＩＵ（すなわち、週に３回の１４．０ＭＩＵのＩＬ−２用量）、および５４．０ＭＩＵ（すなわち、週に３回の１８．０ＭＩＵのＩＬ−２用量）である。これらは、約７．９ＭＩＵ／ｍ２、約１７．６ＭＩＵ／ｍ２、約２４．７ＭＩＵ／ｍ２、および約３１．８ＭＩＵ／ｍ２の相対的な週あたりの総用量に相当する。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の週あたりの総用量（本明細書中で、以後、本実施例においてＩＬ−２と呼ぶ）を、３回分の等用量に分割し、これを、リツキシマブの週１回のＩＶ注入と共に、週に３回（ｔｉｗ）、皮下注射によって投与した。インターロイキン２処置を、リツキシマブの最初のＩＶ注入の１週間後に始め、５週目の終わりまで続けた。患者を、この時期の全体、一定量のＩＬ−２に留めた。
【０１２４】
（投与した処置および用量増加方法論）
患者は、３７５ｍｇ／ｍ２のリツキシマブを用いた処置を、ＩＶ注入により、１日目に始め、次いで、さらに３週間、週１回で行った。週３回のＩＬ−２の皮下注射を、８日目に所定の用量で始め、計４週間続けた。ＩＬ−２の週３回の処置を、注射と注射との間に少なくとも４８時間を有する、ＩＬ−２の週３回の投与として規定した。最初のＩＬ−２の注射を、リツキシマブ注入の開始後３０分以内に与えた。続く２回のＩＬ−２注射を、４８時間間隔で投与した。ＩＬ−２皮下注射の２週目〜４週目を、リツキシマブ注入と共に開始した。５週目は、ＩＬ−２皮下注射のみであった。研究した週３回のＩＬ−２用量レベルは、４．５百万国際単位（４．５ＭＩＵ）、１０．０ＭＩＵ、１４．０ＭＩＵ、および１８．０ＭＩＵであった。これらは、１３．５ＭＩＵ、３０．０ＭＩＵ、４２．０ＭＩＵ、および５４．０ＭＩＵの週あたりの総用量に相当する。
【０１２５】
用量限定毒性（ＤＬＴ）は、血液学的毒性および熱毒性（ＤＬＴと考えられるには４級の傷害性等級付けが必要である）を除き、国立癌研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）（ＮＣＩ）判定基準（すなわち、ＮＣＩ共通毒性判定基準）により、３級または４級の毒性等級付けで、処置依存性有害反応として定義される。研究の過程の間に現われ得る幾つかの特定の判定基準は、３級の毒性（例えば、白血球数（１．０〜＜２．０×１０３／μｌの値）、血小板（２５〜４９×１０３／μｌの値）、ヘモグロビン（６．５〜＜８．０×ｇ／ｄｌの値）、感染（重度、生命の危険はない）、嘔吐（充分な制吐治療の存在下で、２４時間に６〜１０回）、肺（通常レベルの労働での呼吸困難）、低血圧（治療および入院を必要とする；試験投薬を止めて４８時間以内の分解）、神経感覚（ｎｅｕｒｏｓｅｎｓｏｒｙ）（主要な知覚の重篤な喪失または機能に干渉する感覚異常）、運動支配系（機能の障害を有する主要な弱さ）、熱（口内が３９．６〜４０．４℃を超える）疲労（通常の活動性が５０％を超えて低下し、働く能力がない）、研究における体重増加（少なくとも２０．０％）、局所応答（１０ｃｍ２を超える硬化；重度または長期の潰瘍化または壊死）など）および２級の毒性（例えば、心律動異常（再発性または永続性だが治療を必要としない）、心機能（安静時排出画分の２０％を超える低下）、心筋虚血（無症候性ＳＴ−Ｔ波変化）、および心膜（臨床診断基準による心膜炎））である。本明細書中で列挙されたものを除き、任意の３級毒性は、用量限定と考えられる。有害反応の特定の例（ＤＬＴと考えられるためには４級でなければならない）は、以下である：絶対好中球数（ＡＮＣ）＜５×１０２／μｌ；総白血球数（ＷＢＣ）＜１×１０３／μｌ；ヘモグロビン（Ｈｇｂ）＜６．５ｇ／ｄｌ；血小板＜２５×１０３／μｌ；および４０．５℃または１０５°Ｆを超える熱（口内）。
【０１２６】
３患者のコホートを、それぞれのＩＬ−２用量レベルで登録した。患者における用量限定毒性（ＤＬＴ）の有害事象を、５週目の終わりまでモニターした。５週目の終わりまで通して、ＩＬ−２のその時の用量レベルに対し、全ての３患者が耐性であり、ＤＬＴのいかなる有害事象も有さない場合、ＩＬ−２の次に高い用量レベルで別の３患者のコホートを登録した。この次に高い用量レベルの患者は、ＤＬＴデータに基づき、ＩＬ−２の３週目（本研究の４週目）で登録され、リツキシマブを受け得るが、コホート内の全ての患者が５週間レジメンを完了するまで、ＩＬ−２を投与しなかった。３患者の１人が、５週間レジメンの間の任意の時にＤＬＴの有害事象を経験した場合、さらなる３人の患者を、この用量レベルで登録した。３人のさらなる患者が、ＤＬＴの有害事象を経験せずに５週間を完了しない限り、ＩＬ−２の用量を、次の用量レベルまで増やさなかった。次の用量レベルの患者は、登録され、リツキシマブを受け得るが、コホート内の全ての患者が５週間レジメンを完了するまで、ＩＬ−２を投与しなかった。ＩＬ−２の外来患者ＭＴＤは、最低用量レベル（ＤＬＴの有害事象が２人以上の患者で観察された用量レベル）の直ぐ下の用量レベルであると考えられた。
【０１２７】
（研究集団の選択）
本研究において登録される患者についての診断基準に包含される主なものは、以下であった：ＣＤ２０＋  Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫ＩＩＩ段階またはＩＶ段階の資料の活用；患者は再発したか第１線処置に対し再発性であるかまたは難治性であるべきである；Ｋａｒｎｏｆｓｋｙ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｓｃｏｒｅが７０％以上である；そして１８歳未満ではない。患者を、以下の理由のために研究から除外した：ＩＬ−２を用いた以前の処置；本研究の処置の前３ヶ月以内の、リツキシマブを用いた任意の兆候に対する処置；およびリツキシマブまたはＩＬ−２の使用と矛盾する、現在または以前の医療履歴。
【０１２８】
（測定、安全性、および効能）
本研究の主要な目的は、３７５ｍｇ／ｍ２のリツキシマブの週１回の用量と共に投与される場合の、週３回のＩＬ−２のＭＴＤを決定することであった。ＭＴＤを見積もる目的のために、患者は、１回を超えるＩＬ−２用量を連続的に受け損なうことも、３０％以上の上述のＩＬ−２用量を受け損なうことも可能ではなく、分析に入れられるために、リツキシマブの全ての４用量を受けねばならなかった（患者がＩＬ−２に対しての間ＤＬＴを経験しない限り）。
【０１２９】
ＮＫ細胞の数および機能ならびにＴ細胞の数を本研究の経過の間に増大させることを確立するための、提案された組み合わせ治療を成功させることが、重要であった。これらの細胞型は、ＩＬ−２処置の後に増殖され得、これは、リツキシマブ抗腫瘍活性のために不可欠であり得る。従って、ＮＫ細胞の数および機能ならびにＴ細胞部分集合数の測定を、行った。この様式において、リンパ球の部分集合（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１６＋５６、およびＣＤ１９を発現するリンパ球のパーセントおよび絶対数、ならびにＣＤ２０を発現するリンパ球のパーセント）およびＮＫ細胞ＡＤＣＣ機能を、１週間間隔で、本研究を通して測定し、その後、標準的プロトコルを用いて、リツキシマブ注入を行った。ＮＫ細胞の増殖は、リツキシマブ活性の増強のための臨床的な必要条件と考えられ、そしてＮＫ細胞増殖の程度は、未来の研究におけるその後の投薬決定の構成部分である。本研究で観察された他の変数は、腫瘍の応答および期間、ならびにＩＬ−２の薬物速度論を含んだ。
【０１３０】
全ての患者において、効能を、第２の変数として評価した。評価可能な患者を、以下のように定義した：被験体は、４週間のリツキシマブ治療および上述のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２用量および計画の７０％を受けねばならない。応答を、以下のように評価した。腫瘍測定は、最長の直径と最大の垂線を用いた、垂直な直径の測定に基づいた。腫瘍応答の等級付けは、非ホジキンリンパ腫の応答診断基準を標定するための国際ワークショップ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐ  ｔｏ  Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ）の報告に基づき（Ｃｈｅｓｏｎら（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１７：１２４４〜１２５３を参照）、そしてプロトコル定義診断基準は、以下のようである：
・完全応答（ＣＲ）−任意の以前の異常なＸ線撮影研究、骨髄および脳脊髄液（ＣＳＦ）の正常化を有する、臨床的に検出可能な疾患の非存在として定義される。応答は、少なくとも１ヶ月続かねばならない。化学療法に先行してリンパ腫に対して陽性の骨髄を有する患者は、くり返し生検を取るべきである（１ヵ月後にリンパ腫に対して陰性であることが確認される）。
【０１３１】
・部分的応答（ＰＲ）−新規の病巣の非存在下で、全ての測定可能な腫瘍負荷における少なくとも５０％の減少として定義され、少なくとも１ヶ月続く（測定可能な腫瘍にのみ適用可能）。
【０１３２】
患者を、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２およびリツキシマブ治療の効果について、以下の点でまた評価した：
・応答期間−最初の記載される応答から進行性の疾患までの時間で定義される。
【０１３３】
・進行する時間−研究開始から、進行性疾患、再発または死までの時間として定義される。
【０１３４】
・安定病態（ＳＤ）−進行性疾患の非存在下で、腫瘍負荷における５０％未満の減少として定義される。
【０１３５】
・進行性疾患（ＰＤ）−腫瘍負荷における２５％以上の増加の提示または新たな疾患部位の出現として、定義される。
【０１３６】
・再発（Ｒ）−完全応答の記載後の腫瘍の出現として、定義される。
【０１３７】
腫瘍応答による効能の評価が、第２の目的である。効能を、また、ＮＫ細胞の拡大の程度により、測定した；ＡＤＣＣにより測定されるようなＮＫ細胞の機能；抗腫瘍応答；および抗腫瘍応答の期間。
【０１３８】
合計１５名の患者が、上述の第Ｉ相臨床試験に登録されている。週３回投薬レジメンは、一般的に、１４ＭＩＵ用量レベルでよく耐えられていた。１８ＭＩＵの用量において、３人の患者は、全用量で治療を完了した。４人目の患者は、用量限定傷害性（過敏性）を発達させ、さらなる処置を止めた。
【０１３９】
１３人の患者は、治療を完了し、１４週目において、最大の腫瘍応答が評価されている。全体で、７患者が応答（４人が完全応答（ＣＲ）、および３人が部分応答（ＰＲ））した；４患者は安定病態（ＳＤ）を有した；そして２患者は進行性疾患（ＰＤ）を有した。７人の応答者全ては、週３回計画における最も高い３用量の１組を受けた。２件のＣＲは、中程度または重度のリンパ腫を有する患者において起こり、そして２件のＣＲは軽度のリンパ腫を有する患者において起こった。３件のＰＲは、中程度または重度の患者において見られ、これは、マントル細胞リンパ腫を有する１人を含んだ。
【０１４０】
図１は、非ホジキンリンパ腫の処置のための週１回のリツキシマブ治療（３７５ｍｇ／ｍ２）および週３回用量のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２（組換えヒトＩＬ−２ムテイン）の併用治療を受けている１１人の患者における、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞数（ＣＤ１６／ＣＤ５６細胞）（パネルＡ）、ＣＤ４細胞数（パネルＢ）、およびＣＤ８細胞数（パネルＣ）についての時間経過を示す。ＮＫ細胞数を、フローサイトメトリにより決定した。リツキシマブを、１日目（Ｄ１）、８日目（Ｄ８）、１５日目（Ｄ１５）および２２日目（Ｄ２２）に、６時間までの間の注入により、投与した。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２を、皮下的に、週に３回、８日目から始めて、４週間投与した。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の用量は、４．５ＭＩＵ（患者３人）、１０ＭＩＵ（患者３人）、１４ＭＩＵ（患者３人）および１８ＭＩＵ（患者２人）であった。入手可能なデータを有する９人の患者（投薬レジメンの全体を完了している）についての１０週目の対応細胞数  対  治療に対する１４週目のその臨床的応答を、パネルＤ（ＮＫ細胞数）、パネルＥ（ＣＤ４細胞数）およびパネルＦ（ＣＤ８細胞数）に示す。ＰＤ＝進行性疾患；ＳＤ＝安定病態；ＣＲ／ＰＲ＝完全な応答または部分的な応答。
【０１４１】
１人（疾患進行を有した）を除く全ての患者において、ナチュラルキラー（ＮＫ）ＣＤ５６＋ＣＤ１６＋細胞数は、週３回のＩＬ−２投与により、増加した（図１、パネルＡ）。４週目の始めに、５人中４人の応答者は、５７２細胞／μｌより多い絶対ＮＫ細胞数を有した。一方、進行性疾患を有する４人の患者は、３９４細胞／μｌ未満のＮＫ細胞数を有した（個々の患者のデータは示さない；細胞数の中央値については、図２を参照のこと）。現在１０週目のＮＫ細胞値が得られる１０人の患者について、週３回計画におけるＩＬ−２治療中のＮＫ  ＣＤ５６＋ＣＤ１６＋細胞の増殖の程度は、応答者（完全応答者または部分的応答者）において、非応答者（安定病態患者および進行性疾患患者）におけるより高かった（中央値１５５細胞／μｌ（４０〜１９５細胞／μｌの範囲）に比べて中央値３８２細胞／μｌ（２１５〜４９４細胞／μｌ）を有する）（図１、パネルＤ；図２をまた参照のこと）。１０週目におけるＮＫ細胞数の中央値は、これらの群の間の統計的に有意な差異を示した（ｐ＝０．０１；図２）。
【０１４２】
３集団の集められた細胞数のうちＮＫ細胞数は、ＩＬ−２と組み合わせられた場合のリツキシマブに対する応答についての重要な予測指標と考えられる。ＮＫ細胞数が、この週３回ＩＬ−２投薬および週１回のリツキシマブ投薬の１４週目の腫瘍応答に対してプロットされる場合、安定病態または完全応答もしくは部分的応答を有するこれらの患者が、リツキシマブ治療開始後１０週目に、少なくとも１８５細胞／μｌを有することが見られ得る（図１パネルＤ；図２）。
【０１４３】
さらに、ＮＫ感受性ＬＡＫ抵抗性Ｋ５６２細胞株に対する新鮮なエキソビボＮＫ媒介性天然細胞溶解性殺傷、ならびにＮＫ感受性ＬＡＫ抵抗性ドージＢ細胞株に対するＬＡＫおよびＡＤＣＣ媒介性機能が、最適濃度のリツキシマブの存在下または非存在下で、５０：１〜１．５６：１のエフェクター：標的比率の標準４時間５１Ｃｒ放出細胞傷害性アッセイにおいて、応答者および非応答者（両方ともＩＬ−２投薬プロトコル中である）について評価されている。この細胞傷害性アッセイの記載については、例えば、Ｖｌａｓｖｅｌｄら（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．４０（１）：３７〜４７を、参照のこと。この研究のために、フィコールヒパーグ（Ｆｉｃｏｌｌ  Ｈｙｐａｇｕｅ）密度遠心法により、このプログラムに登録された患者の血液からＰＢＭＣを単離した。リツキシマブ処置（１日目；ｄ１）の前、ＩＬ−２処理（８日目；ｄ８）、ＩＬ−２処置の１週間後（１５日目；ｄ１５）、ＩＬ−２処置の２週間後（２２日目；ｄ２２）、および本研究を通じたその後の時点で、ＰＢＭＣを単離した。ＰＢＭＣを５０：１〜５６：１の範囲のエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）の比率で、５１Ｃｒ標識標的細胞のパネルに対し、試験した。５１Ｃｒ標識標的細胞の群は、Ｋ５６２細胞、ドージ細胞、および最適濃度のリツキシマブ（２μｇ／ｍｌ）の存在下のドージ細胞からなり、それぞれ、ＮＫ活性、ＬＡＫ活性、ＡＤＣＣ活性を評価した。５１Ｃｒ放出を、４時間のインキュベーション時間後に測定した。
【０１４４】
このプロトコルにおける応答者は、ＮＫ天然細胞傷害性、ＬＡＫ媒介性殺傷、およびＡＤＣＣ媒介性殺傷として言及される持続的ＮＫ媒介性活性を証明した。このＮＫ媒介活性は、次第に増加し、ＩＬ−２投薬を５週目の終わりに完了したという事実にもかかわらず、１０週目で維持された（図３）。この傾向はまた、応答者について観察されたより少ない程度であるが、安定病態の患者でも観察された（データは示さない）。対照的に、進行性疾患を発達させた患者は、より低い一時的なＮＫ媒介性殺傷活性レベルを示し、これは、ＩＬ−２処置の中断後、急速に低下した（データは示さない）。まとめて、ＮＫ細胞数データおよびＮＫ機能データは、ＩＬ−２媒介性ＮＫ細胞の増殖および機能が、ＩＬ−２およびリツキシマブを用いる併用治療に対する、臨床的応答結果の重要な相互依存性決定因子であることを、示唆する。
【０１４５】
従って、ＩＬ−２およびリツキシマブを用いた併用治療を、本明細書で概略されるように（週３回投薬を４週間）受けている場合、治療の開始後１０週目に、約１７０細胞／μｌより多いＮＫ細胞数の増殖を有する患者は、完全応答者、部分的応答者と予測されるか、または安定病態と特徴付けられる。対照的に、治療の開始後１０週目に、約１７０細胞／μｌ未満までのＮＫ細胞数の増殖を有する患者は、再発または進行性の疾患を有すると予測される。従って、リツキシマブおよびＩＬ−２を用いた併用治療を受けている患者におけるＮＫ細胞の増殖のモニタリングは、患者のこの治療の予後についての重要な診断ツールとして役立ち得る。
【０１４６】
（実施例２：非ホジキンリンパ腫を有する、以前にリツキシマブが作用しなかった患者における、４週間の週１回リツキシマブ治療を、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の８週間の２段階ＩＬ−２投薬レジメンと組み合わせた、第ＩＩ相／第ＩＩＩ相臨床試験）
第ＩＩ相／第ＩＩＩ相臨床試験は、ＣＤ２０＋Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫の治療のための、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の８週間の２段階ＩＬ−２投薬レジメン（２〜９週）と組み合わせられた４週間のリツキシマブ治療（すなわち、１〜４週）の、以前リツキシマブに応答しなかったか、または処置の６ヶ月以内に再発した患者における、安全性および効能を評価するために行われる。第２の目的は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖の程度、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）によって測定されるようなＮＫ細胞機能、抗腫瘍応答、抗腫瘍応答の期間、ならびにＩＬ−２およびリツキシマブの薬学速度理論に対するリツキシマブと同時に用いたＩＬ−２の効果を、さらに証明することである。
【０１４７】
（研究設計）
これは、２用量のＩＬ−２を、週に１回注入される３７５ｍｇ／ｍ２のリツキシマブ（６時間注入）と組み合わせて使用する、開放標識研究である。患者は、一定量（３７５ｍｇ／ｍ２）のＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ）のＩＶ注入を、４週間の間のそれぞれの週の１日目の始めに、毎週施与される（すなわち、計４用量）。従って、リツキシマブは、１日目、８日目、１５日目、２２日目に投与される。患者は、同時のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２（本明細書中で、以後、参照ＩＬ−２標準と呼ぶ）投与を、皮下注射により、２週目の１日目（すなわち、処置期間の８日目）に始める。週あたりのＩＬ−２総用量は、３回分の等用量に分割され、週に３回の投薬計画（投与と投与との間に最短４８時間を有する）に従って、８週間投与される（すなわち、処置期間の２〜９週の間、計２４用量）。２〜５週の間、３回の等用量として投与される週あたりのＩＬ−２総用量は、４２．０ＭＩＵである（すなわち、それぞれの等用量は１４．０ＭＩＵ）。ＩＬ−２投与の４週間後、週あたりのＩＬ−２総用量は、３０．０ＭＩＵに下げられる。従って、６〜９週の間、３０．０ＭＩＵの週あたりのＩＬ−２総用量は、３回分の等用量に分割され（すなわち、それぞれ１０．０ＭＩＵ）、週に３回の投薬計画に従って投与される。患者は、この処置レジメンの効能と安全性を、９週間の処置期間にわたってモニターされ、１６週間を通して（すなわち、ＩＬ−２投与の最終週の後７週間）追跡調査決定される。
【０１４８】
（研究集団の選択）
患者は、ＣＤ２０＋、Ｂ細胞、先行治療後の測定可能な再発または非応答性の疾患を有する軽度または濾胞性組織の非ホジキンリンパ腫を持っていることが望ましい。さらに、彼らは以前、リツキシマブ単独の薬剤の経過を受けたことがあり、腫瘍応答を見せなかったか、または６ヶ月未満の応答を有した。以前投与されたリツキシマブは、標準４週間レジメン（４×３７５ｍｇ／ｍ２）の少なくとも７５％を含まねばならない。以前のリツキシマブ処置および応答の記録が、その現場の原書類として入手可能でなければならない。他の主な包含および排除の基準は、第Ｉ相臨床試験（上の実施例２で記載）について述べられたものと同様である。
【０１４９】
（測定、安全性、および効力）
本研究の主な目的は、週１回の３７５ｍｇ／ｍ２のリツキシマブ用量と共に、８週連続で投与される場合の、週３回のＩＬ−２の安全性と効力を決定することである。患者は、１回を超えるＩＬ−２用量を連続的に受け損なうことも、３０％以上の処方されたＩＬ−２用量を受け損なうことも許されず、第１効力分析に含まれるために、リツキシマブの全ての４用量を受けねばならない。
【０１５０】
効力は、腫瘍応答および腫瘍応答の期間によって、実施例１に記載される第Ｉ相臨床試験について述べられた手順および診断基準を用いて、評価される。腫瘍応答は、フローサイトメトリによって決定されるＮＫ細胞における増加と関連する。本研究で、患者の部分集団において観察される他の変数は、実施例１に記載される第Ｉ相臨床試験について述べられるように、ＮＫ細胞機能およびＩＬ−２の薬物速度理論である。
【０１５１】
（実施例３：攻撃的な非ホジキンリンパ腫を有する患者における、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の８週間２段階ＩＬ−２投薬レジメンと組み合わせられた８週間の週１回のリツキシマブ治療）
８週間まで延長された週１回のリツキシマブ治療を除いて、実施例２で概略を示されたのと同様の投薬計画が、攻撃的な非ホジキンリンパ腫（段階ＩＩＩまたは段階ＩＶ、すなわち、中程度または重度）を有する被験体で、実行される。この様式において、被験体は、８週間リツキシマブ治療（すなわち、１〜８週）を、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の８週間２段階ＩＬ−２用量レジメン（２〜９週）と組み合わせて、与えられる。第２の目的は、ＩＬ−２の効果を、リツキシマブと共に、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖の程度、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）によって測定されるＮＫ細胞機能、腫瘍応答、腫瘍応答の期間に対する効果を、さらに証明することである。  
【０１５２】
望ましい被験体は、固定量（３７５ｍｇ／ｍ２）のＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ）のＩＶ注入を、８週間の間のそれぞれの週の１日目の始めに、毎週投与される（すなわち、計８用量）。従って、リツキシマブは、１日目、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、４３日目、５０日目に投与される。被験体は、同時のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２（本明細書中で、以後、参照ＩＬ−２標準と呼ぶ）投与を、皮下注射により、２週目の１日目（すなわち、処置期間の８日目）に始める。週あたりのＩＬ−２総用量は、３回分の等用量に分割され、週に３回の投薬計画（投与と投与との間に最短４８時間を有する）に従って、８週間投与される（すなわち、処置期間の２〜９週の間、計２４用量）。２〜５週の間、３回の等用量として投与される週あたりのＩＬ−２総用量は、４２．０ＭＩＵである（すなわち、それぞれの等用量は１４．０ＭＩＵ）。ＩＬ−２投与の４週間後、週あたりのＩＬ−２総用量は、３０．０ＭＩＵに下げられる。従って、６〜９週の間、３０．０ＭＩＵの週あたりのＩＬ−２総用量は、３つの等用量に分割され（すなわち、それぞれ１０．０ＭＩＵ）、週に３回の投薬計画に従って投与される。被験体は、この処置レジメンの効力と安全性を、９週間の処置期間にわたってモニターされ、１６週目まで（すなわち、ＩＬ−２投与の最終週の後７週間）追跡調査決定される。
【０１５３】
（実施例４：非ホジキンリンパ腫を有する患者における、単量体ＩＬ−２の４週間一定的週１回の総用量と組み合わせられた、４週間の週１回のリツキシマブ治療を用いた、第Ｉ相臨床試験）
第Ｉ相臨床試験が、ＣＤ２０＋Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫の処置のためのＩＬ−２の単量体処方物（Ｌ２−７００１）の使用を試験するために、実行される。使用される特定の単量体ＩＬ−２処方物は、Ｌ２−７００１である。この液体処方物は、この処方の前の最後の精製工程を除いてはＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２と同じである、ヒトＩＬ−２ムテイン（アルデスロイキン）を含む。上の実施例１で述べられたように、このＩＬ−２ムテインはＥ．ｃｏｌｉから発現される。アルデスロイキンを得るための最初の精製工程は、この２つの処方物と同様である。米国特許第４，９３１，５４３号を参照せよ。どちらの場合においても、組換え的に産生されるＩＬ−２ムテインは、宿主細胞内で、屈折小体（ｒｅｆｒａｃｔｉｌｅ  ｂｏｄｙ）として生じる。細胞破壊の後、この屈折小体は単離され、サイズ排除クロマトグラフィーおよびＲＰ−ＨＰＬＣを用いて、最初に精製される。Ｌ２−７００１に使用されるＩＬ−２ムテインのための残りの精製工程は、以下のようである。生じたタンパク質沈殿物は、グアニジン塩酸塩によって溶解され、次いで、ダイアフィルトレーション、イオン交換クロマトグラフィおよびその後のダイアフィルトレーションによって処理され、Ｌ２−７００１処方物を生成するための最終精製ＩＬ−２ムテインを得る。対照的に、ＩＬ−２ムテインがＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２において使用される場合、最初の精製工程から生じるタンパク質沈殿物は、１％ＳＤＳに溶解され、次いで、サイズ排除クロマトグラフィーおよびダイアフィルトレーションによって処理される。精製されたＩＬ−２ムテインは、次いで、「Ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ」と題された同時係属出願（２０００年１０月３日出願）、および譲渡された米国特許出願番号０９／６７７，６４３において開示された方法に従って、Ｌ２−７００１に処方される。
【０１５４】
これは、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２について記載されたのと同様の、ＭＴＤ用量探索研究である。この研究において、Ｌ２−７００１の一定の週あたりの総用量が、４週間にわたって、４週間の週に１回のリツキシマブの推奨される用量（すわなち、３７５ｍｇ／ｍ２）と組み合わせて、投与される。週あたりのＩＬ−２総用量は、３回分の等用量に分割され、週に３回の投薬計画（投与と投与との間に最短４８時間を有する）に従って投与される。用量増大方法論は、上述のものと同様である。最初の増大するＬ２−７００１の週あたりの総用量は、５４０μｇ、８１０μｇ、１０８０μｇ、および１５００μｇである（Ｌ２−７００１の薬学速度論についてのＡＵＣデータから決定される）。下の実施例８の表４を参照のこと。研究設計および集められたデータは、上の実施例１において記載されたものと同様である。安全性および効力は、上述の臨床試験において述べられたように、評価される。
【０１５５】
（実施例５：非ホジキンリンパ腫を有する、以前にリツキシマブを失敗している患者における、Ｌ２−７００１の８週間２回の投薬レジメンと組み合わせられた４週間の週１回リツキシマブ治療）
実施例２で概説された投薬レジメンから変わって、望ましい被験体は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の代わりに単量体ＩＬ−２処方物Ｌ２−７００１を投与される。この様式において、被験体は、固定量（３７５ｍｇ／ｍ２）のＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ）のＩＶ注入を、４週間の間のそれぞれの週の１日目の始めに、毎週投与される（すなわち、計４用量）。従って、リツキシマブは、１日目、８日目、１５日目、２２日目に投与される。被験体は、同時のＬ２−７００１（本明細書中で、以後本実施例において、ＩＬ−２と呼ぶ）投与を、皮下注射により、２週目の１日目（すなわち、処置期間の８日目）に始める。週あたりのＩＬ−２総用量は、３つの等用量に分割され、週に３回の投薬計画（投与と投与との間に最短４８時間を有する）に従って、８週間投与される（すなわち、処置期間の２〜９週の間、計２４用量）。２〜５週の間、３回の等用量として投与される週あたりのＩＬ−２総用量は、８１０μｇである（すなわち、それぞれの等用量は２７０μｇ）。ＩＬ−２投与の４週間後、週あたりのＩＬ−２総用量は、５４０μｇに下げられる。従って、６〜９週の間、５４０μｇの週あたりのＩＬ−２総用量は、３回分の等用量に分割され（すなわち、それぞれ１８０μｇ）、週に３回の投薬計画に従って投与される。被験体は、この処置レジメンの効力と安全性を、９週間の処置期間にわたってモニターされ、１６週目まで（すなわち、ＩＬ−２投与の最終週の後７週間）追跡調査決定される。
【０１５６】
（実施例６：攻撃的な非ホジキンリンパ腫を有する患者における、Ｌ２−７００１の８週間２回の投薬レジメンと組み合わせられた８週間の週１回リツキシマブ治療を用いた第ＩＩ／ＩＩＩ相臨床試験）
実施例３で示された投薬レジメンから変わって、望ましい被験体は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の代わりに単量体ＩＬ−２処方物Ｌ２−７００１を投与される。固定量（３７５ｍｇ／ｍ２）のＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ）のＩＶ注入を、８週間の間のそれぞれの週の１日目に始めに、毎週投与される（すなわち、計８用量）。従って、リツキシマブは、１日目、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、４３日目、５０日目に投与される。被験体は、同時のＬ２−７００１（本明細書中で、以後本明細書において、ＩＬ−２と呼ぶ）投与を、皮下注射により、２週目の１日目（すなわち、処置期間の８日目）に始める。週あたりのＩＬ−２総用量は、３つの等用量に分割され、週に３回の投薬計画（投与と投与との間に最短４８時間を有する）に従って、８週間投与される（すなわち、処置期間の２〜９週の間、計２４用量）。２〜５週の間、３回の等用量として投与される週あたりのＩＬ−２総用量は、８１０μｇである（すなわち、それぞれの等用量は２７０μｇ）。ＩＬ−２投与の４週間後、週あたりのＩＬ−２総用量は、５４０μｇに下げられる。従って、６〜９週の間、５４０μｇの週あたりのＩＬ−２総用量は、３回分の等用量に分割され（すなわち、それぞれ１８０μｇ）、週に３回の投薬計画に従って投与される。被験体は、この処置レジメンの効力と安全性を、９週間の処置期間にわたってモニターされ、１６週目まで（すなわち、ＩＬ−２投与の最終週の後７週間）追跡調査決定される。
【０１５７】
（実施例７：異なった測定単位におけるＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の等用量の計算）
第Ｉ相および第ＩＩ相の臨床試験における上述のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の用量は、ＭＩＵで絶対量を表している。ＭＩＵ／ｍ２での対応する相対用量を、平均的なヒトはおよそ１．７ｍ２であるとして、容易に決定し得る。同様に、対応する絶対用量をμｇ単位で決定し得る（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２は、１μｇにつきこのＩＬ−２産物の約１５ＭＩＵの生物学的活性を有するように与えられる）。表２は、異なった測定単位における、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２についての週あたりの等しい総用量を、提供する。
【０１５８】
【表２】
2005538034.tif 000006
【０１５９】
（実施例８：ＩＬ−２の薬学的処方物についてのＩＬ−２血清濃度時間曲線の計算）
４５０万国際単位（ＭＩＵ）（およそ３００μｇタンパク質と同等）における、皮下的に（ＳＣ）投与されるＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の血清濃度時間曲線（ＡＵＣ）の下の面積を、未発表のＨＩＶ研究から得られたデータを用いて決定した。血清濃度時間プロファイルを、８人のＩＬ−２未経験のＨＩＶ患者において、本研究におけるＩＬ−２投薬に対する最初の暴露後に、測定した。それぞれの患者について、ＡＵＣを、線形台形公式（ｌｉｎｅａｒ  ｔｒａｐｅｚｏｉｄａｌ  ｒｕｌｅ）を用いて、最後の測定可能な濃度まで計算し、２４時間に外挿した（Ｗｉｎｎｏｎｌｉｎ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ３．１，Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）。４．５ＭＩＵ用量におけるＡＵＣ０−２４平均値、ＳＤ、および９５％信頼区間の上限および下限を、表３に示す。
【０１６０】
１８ＭＩＵ等価量（１２００μｇ）でＳＣ投与されたＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２のＡＵＣ０−２４値を、このＩＬ−２産物がＳＣ投与された３つの異なった研究から得られたデータを用いて、見積もった。２つは発表された研究であり、１つはＨＩＶ患者におけるもの（Ｎ＝３）（Ｐｉｓｃｉｔｅｌｌｉら（１９９６）Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ  １６（５）：７５４〜７５９）で、１つは癌患者におけるもの（Ｎ＝７）（Ｋｉｒｃｈｎｅｒら（１９９８）Ｂｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４６：５〜１０）である。３つ目は、未発表の研究で、ここでは、血清濃度時間データを、６人の癌患者から、ＩＬ−２のＳＣ投薬後に得た。癌患者およびＨＩＶ患者におけるＡＵＣの類似性は、以前に確立されている（未発表データ）。これらの３つの研究において投与された実際の用量は、１８〜３４ＭＩＵの範囲におよぶ。２つの公表された試験について、２４時間までのＡＵＣ（ＡＵＣ０−２４）値を、１８の指数およびＭＩＵでの実際用量を用いたＡＵＣを乗算することにより、１８ＭＩＵ用量に規格化した。例えば、２０ＭＩＵ用量についてのＡＵＣ０−２４を４００と算出した場合、規格化ＡＵＣ０−２４は、４００＊１８／２０＝３６０となる。未発表の癌患者研究について、個々のＡＵＣ値を、線形台形公式を用いて、最後の測定可能濃度まで、血清濃度時間データから計算して、２４時間に外挿し（Ｗｉｎｎｏｎｌｉｎ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ３．１，Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）、次いで、上述のように、１８ＭＩＵ用量に規格化した。方程式１および方程式２を用い、全ての３つの研究についての全体平均およびＳＤを、平均値と分散の加重平均（ｗｅｉｇｈｔｅｄ  ａｖｅｒａｇｅ）としてそれぞれ計算した。
【０１６１】
【数２】
2005538034.tif 000007
【０１６２】
ｎ１、ｎ２、ｎ３、
【０１６３】
【数３】
2005538034.tif 000008
【０１６４】
および
【０１６５】
【数４】
2005538034.tif 000009
【０１６６】
は、各３研究についての、それぞれ被験体の数、平均値、および分散である。
【０１６７】
【数５】
2005538034.tif 000010
【０１６８】
およびＳＤＰは、全体平均および標準偏差の概算である。１８ＭＩＵにおけるＡＵＣ全体平均、ＳＤ、および９５％信頼区間の上限および下限もまた、表２に示す。
【０１６９】
【表３】
2005538034.tif 000011
【０１７０】
Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２と同様に、Ｌ２−７００１（単量体ＩＬ−２の液対処方物）を、５０〜１８０μｇの範囲の用量で、ＨＩＶ患者に投与した（未発表データ）。ＡＵＣによって測定された、この研究から得られた暴露を、表４に示す。これらの暴露値は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２を使用して出された暴露値の範囲内であった（表３）。
【０１７１】
【表４】
2005538034.tif 000012
【０１７２】
ＩＬ−２暴露データ（ＡＵＣ）を、公表文献から得た（ここでは、組換えヒト天然ＩＬ−２が、０．１ＭＵ〜３．０ＭＵの範囲の用量で、８人の癌患者に、ＳＣ投与される）。０．３ＭＵ、１ＭＵおよび３ＭＵ用量レベルについての報告された平均（％ＣＶ）ＡＵＣは、１２０（３８）、１７７（３６）、および３５９（４６）Ｕ＊ｈｒ／ｍｌであった（Ｇｕｓｒａｖｓｏｎ（１９９８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ  １９９８：４４０〜４４９）。Ｔｈｏｍｐｓｏｎら（１９８７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４７：４２０２〜４２０７において示されたように、本研究において測定された単位を、ＷＨＯによる国際単位（ＩＵ）（Ｇｅａｒｉｎｇ  ａｎｄ  Ｔｈｏｒｐｅ（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １１４：３〜９）として後に採用された、ＢＲＭＰ単位（Ｒｏｓｓｉｏら（１９８６）Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５（補足１）：Ｓ１３〜Ｓ１８）に基準化した。本研究条件の下で出されたＡＵＣ値もまた、確立されたＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２暴露と一致する。
【０１７３】
本明細書において言及された全ての刊行物および特許出願は、本発明に関連する当業者のレベルを示す。全ての刊行物および特許出願は、それぞれ個々の刊行物または特許出願が、特定にそして個々に参考として援用されるように、同程度で、本明細書中で参考として援用される。
【０１７４】
当業者は、慣用的に実験以上を使用することなく、本明細書中で記載された本発明の特定の実施形態に対する、多くの等価物を、理解するか、または確かめ得る。このような等価物は、添付の特許請求の範囲によって包含されることを意図される。
【図面の簡単な説明】
【０１７５】
【図１】図１Ａ〜図１Ｆは、非ホジキンリンパ腫の処置のための週１回のリツキシマブ治療（３７５ｍｇ／ｍ２）および週３回のＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２投与の併用治療を受けている１１人の患者における、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞数（ＣＤ１６／ＣＤ５６細胞）（１Ａ）、ＣＤ４細胞数（１Ｂ）、およびＣＤ８細胞数（１Ｃ）についての時間経過を示す。リツキシマブを、１日目（Ｄ１）、８日目（Ｄ８）、１５日目（Ｄ１５）および２２日目（Ｄ２２）に、６時間までの注入により、投与した。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２を、皮下的に、週に３回、８日目から始めて、４週間投与した。Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２の用量は、４．５ＭＩＵ（患者３人）、１０．０ＭＩＵ（患者３人）、１４．０ＭＩＵ（患者３人）および１８．０ＭＩＵ（患者２人、データは示さない）であった。９人の患者についての対応する細胞数（腫瘍評価および入手可能な１０週目のリンパ球数部分集合の両方を有する）を、１Ｄ（ＮＫ細胞数）、１Ｅ（ＣＤ４細胞数）および１Ｆ（ＣＤ８細胞数）に示す。ＰＤ＝進行性疾患；ＳＤ＝安定病態；ＣＲ／ＰＲ＝完全な応答または部分的な応答。
【図２】図２は、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２およびリツキシマブを用いた併用治療の、ベースライン、開始後４週目、および開始後１０週目のＮＫ細胞数の中央値を、図１で記載した研究から、応答者（完全応答または部分的応答）対非応答者（安定病態または進行性疾患）について、示す。統計的有意性は、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ  Ｒａｎｋ  Ｓｕｍ  Ｔｅｓｔを用いて、計算した。
【図３】図３は、ＮＫ細胞機能（ＮＫ媒介性細胞溶解機能（ＮＫ）ならびにＬＡＫ媒介性機能（ＬＡＣ）およびＡＤＣＣ媒介性機能（ＡＤＣＣ）を含む）についてのインビトロアッセイを使用した、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性の時間経過を示す（完全な応答者（ＣＲ）について決定した）。ＣＲ患者は、図１に記載した、週３回の１８．０ＭＩＵ  Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ＩＬ−２／週１回のリツキシマブの投薬レジメンに、参加した。機能的アッセイに関する詳細については、以下の実施例１を参照のこと。このデータは、ＣＲ患者において、ＮＫ活性が維持されることを証明する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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