(57)【要約】  本発明は、上皮増殖因子受容体(ＥＧＦ受容体)に対する抗体を含む凍結乾燥医薬品製剤に関する。前記製剤は、高温においても増加した貯蔵安定性を有し、また、再構成後、腫瘍治療のために非経口的に使用できる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体が、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦ受容体）に対する抗体であることを特徴とする、糖またはアミノ糖、アミノ酸および界面活性剤を含むモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体の凍結乾燥医薬品製剤。
【請求項２】
抗体が、Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ（登録商標）またはＥＭＤ７２０００またはそれに相当するマウス抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体類似体の１つであることを特徴とする請求項１に記載の凍結乾燥医薬品製剤。
【請求項３】
抗体が、Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ（登録商標）またはＥＭＤ７２０００であることを特徴とする請求項２に記載の凍結乾燥医薬品製剤。
【請求項４】
本質的に、抗体、糖またはアミノ糖、アミノ酸、バッファーおよび界面活性剤からなる請求項１から３の一項以上に記載の凍結乾燥医薬品製剤。
【請求項５】
糖が、単糖、二糖、または三糖であり、好ましくはスクロース、マルトースまたはトレハロースであることを特徴とする請求項１から４の一項以上に記載の凍結乾燥医薬品製剤。
【請求項６】
アミノ糖が、グルコサミン、Ｎ−メチルグルコサミン、ガラクトサミンまたはノイラミン酸であることを特徴とする請求項１から５の一項以上に記載の凍結乾燥医薬品製剤。
【請求項７】
アミノ酸が、塩基性、酸性または中性アミノ酸であり、好ましくは、アルギニン、リジン、またはオルニチンであることを特徴とする請求項１から６の一項以上に記載の凍結乾燥医薬品製剤。
【請求項８】
界面活性剤が、ポリソルベートまたはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンポリマーであることを特徴とする請求項１から７の一項以上に記載の凍結乾燥医薬品製剤。
【請求項９】
界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルであるモノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンまたはモノラウリン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンであることを特徴とする請求項８に記載の凍結乾燥医薬品製剤。
【請求項１０】
等張性を確立するために必要な濃度の等張化剤がさらに存在することを特徴とする請求項１から９の一項以上に記載の凍結乾燥医薬品製剤。
【請求項１１】
等張化剤として塩化ナトリウムが存在することを特徴とする請求項１０に記載の凍結乾燥医薬品製剤。
【請求項１２】
請求項１から１１の一項以上に記載の凍結乾燥物を再構成することにより得ることのできるモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体の水性医薬品製剤。
【請求項１３】
溶液が、ｐＨ５〜８、好ましくはｐＨ６〜７．４であることを特徴とする請求項１２に記載の水性医薬品製剤。
【請求項１４】
溶液が、ｐＨ約７．２であることを特徴とする請求項１３に記載の水性医薬品製剤。
【請求項１５】
有効成分としてのＣｅｔｕｘｉｍａｂ（登録商標）またはＥＭＤ７２０００ならびに添加物としての糖またはアミノ糖、アミノ酸および界面活性剤、また、所望の場合は、さらに医薬品補助剤を含む水性製剤を調製し、前記溶液を引き続いて凍結乾燥することを特徴とする請求項１から１１の一項以上に記載の凍結乾燥医薬品製剤の調製法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、上皮増殖因子受容体(ＥＧＦＲ)に対する抗体を含む安定な凍結乾燥医薬品製剤およびその調製に関する。
【０００２】
抗体によるＥＧＦＲの遮断は、例えば癌細胞の増殖阻害、腫瘍媒介血管新生の減少、癌細胞アポトーシスの誘導および放射線療法や従来の化学療法の毒性の増加により、種々のレベルの腫瘍に対して作用することが、種々のインビトロおよびインビボ研究で示されている。
【０００３】
ＭＡＢｃ２２５(Cetuximab(登録商標))は、ＥＧＦ受容体と結合する臨床的に証明された抗体である。Cetuximab(登録商標)は、その可変部がマウス由来で、その定常部がヒト由来のキメラ抗体であり、Naramuraらの、Cancer Immunol. Immunotherapy 1993年、37：343〜349頁およびWO96／40210A1により初めて述べられた。
【０００４】
ＭＡＢ４２５は、腫瘍細胞において過剰発現し、ＥＧＦＲ特に、Ａ４３１悪性上皮腫瘍細胞のＥＧＦＲに対する、マウス由来の抗体である。そのヒト化したキメラ形態は、例えば、EP0531472A1；Kettleboroughら、Protein Engineering 1991年、４：773〜783；Bierら、Cancer Chemother. Pharmacol. 2001年、47：519〜524頁；Bierら、Cancer Immunol. Immunother. 1998年、46：167〜173頁に開示されている。ここでＥＭＤ72000は、臨床第Ｉ／ＩＩ相にある抗体(ｈ425)であり、その定常部はκおよびヒトγ−１鎖を含む。
【０００５】
ヒト抗ＥＧＦＲ抗体は、WO91／10741A1、WO94／02602A1およびWO96／33735A1に記載されているゼノマウス(XenoMouse)法によって提供できる。この方法によって生産され、現在、臨床試験中の特異的抗体は、ＡＢＸ−ＥＧＦ(Abgenix、Crit. Rev. Oncol. Hematol.、2001年、38：17〜23頁；Cancer Research 1999年、59：1236〜43頁) である。
【０００６】
ＥＧＦＲに対するさらなる抗体は、例えばEP0586002B1およびJ. Natl. Cancer Inst．、1993年、85：27〜33頁 (ＭＡＢ528) に記載されている。
【０００７】
他の抗体と同様、ＥＧＦＲ抗体は、治療上の使用のために液剤として非経口的にも適用される。これらの抗体を含有する液剤で特に問題となるのは、それらの凝集および蛋白質多量体の形成への傾向である。還元性多量体の場合、これは近接する部分間の相互作用による意図されない分子間ジスルフィド橋の形成に帰することができる。疎水性相互作用とその結果非還元性多量体が形成される可能性もある。さらに、引き続く蛋白質分解反応をもたらす脱アミド化反応も生じる。特に高温での貯蔵、または例えば、輸送中に生じるずり応力中に、前記の変性反応が生じる。したがって、総括的に見て、液体製剤は広汎に使用するための薬剤形態としては好適性が低い。
【０００８】
抗体安定化の慣例的方法は、抗体と補助剤を含有する溶液の凍結乾燥である。水分の除去により、分解産物および凝集物の形成が減少する。(Hsuら、Dev.Biol.Stand.1991年、74：255〜267頁およびPikalら、Dev.Biol.Stand.1991年、74：21〜27頁)。
【０００９】
WO93／00807A1は、安定化のためにポリエチレングリコールおよび糖を含む蛋白質の凍結乾燥製剤を記載している。しかし、ポリエチレングリコールは、毒性的に疑わしく、特に非経口的投与が意図されている薬剤においては、できれば避けるべきである。
【００１０】
WO98／22136A2は、抗体、糖またはアミノ糖、アミノ酸および界面活性剤を含む凍結乾燥製剤を開示している。この製剤は一般に抗体に関してクレームされているが、実施例として開示されている製剤は、Ｂ型肝炎ウィルス(ＡＫＨＢＶ)に対するモノクローナル抗体だけであり、各々の場合に、製剤はＬ−セレクチン(抗Ｌ−セレクチン)に対する抗体および抗Ｌ神経増殖因子受容体(抗ＬＮＧＦＲ)に対する抗体を含む。ＡＫ  ＨＢＶおよび抗Ｌ−セレクチンを含む製剤は、各々８ｍｇ／ｍｌ、７ｍｇ／ｍｌの最高抗体濃度を有する溶液から調製されているが、増殖因子、抗ＬＮＧＦＲに対する抗体を含む製剤は、僅か0.25 ｍｇ／ｍｌの抗体を含む以外は補助剤の同一の定性的、定量的組成を有する溶液から調製された。このように抗ＬＮＧＦＲを含む製剤が20分の１より低い抗体含量を有し、したがってそれに相当するより少量の分解生産物が予想できるが、他の抗体を含む製剤と対照的に、安定性データは開示されていない。
【００１１】
本発明の目的は、ＥＧＦＲに対する抗体の安定化製剤を提供することであった。前記製剤は毒性的に許容できない補助剤を含むべきではなく、高温および大気の湿度などの高ストレス条件下で比較的長期間安定であるべきであり、水性溶媒で再構成されて、有効成分高含量を有する即時使用液剤を提供すべきである。
【００１２】
驚くべきことに、これらの要件に合致する製剤は、これら抗ＥＧＦＲ抗体の１種以外に糖またはアミノ糖、アミノ酸および界面活性剤をも含む水溶液を凍結乾燥することによって提供された。このように本発明は、抗体が表皮増殖因子受容体(ＥＧＦＲ)に対する抗体であることを特徴とし、糖またはアミノ糖、アミノ酸および界面活性剤を含むモノまたはポリクローナル抗体の安定な凍結乾燥製剤に関する。
【００１３】
存在し得る抗体は、表皮増殖因子に対する任意の抗体、特に最初に挙げた、マウス、ヒト化またはキメラ抗体および前記ゼノマウス法によって調製された、または調製できるヒト抗ＥＧＦＲ抗体である。本発明による製剤に存在する抗ＥＧＦＲ抗体は、Cetuximab(登録商標)またはＥＭＤ72000またはそれに対応するマウス、ヒト化またはキメラ抗体類似体の１種であることが好ましい。抗体としてCetuximab(登録商標)またはＥＭＤ72000を含む製剤が好ましい。
【００１４】
本発明による製剤は、生理学的に十分に忍容性があり、容易に調製でき、正確に分配でき、アッセイ、貯蔵期間において、また凍結と解凍の反復工程間の分解生産物や凝集物に関して安定である。冷蔵庫温度(２℃〜８℃)および室温(23℃〜27℃、相対大気湿度(RAH)60％)において、少なくとも３ヶ月間〜１年から２年の期間にわたる貯蔵において安定である。驚くべきことに、本発明による製剤は、高温と高大気湿度、例えば温度40℃、相対的大気湿度75％においても、前記期間にわたる貯蔵に安定である。
【００１５】
前記凍結乾燥製剤は簡単な方法で再構成でき、水性溶媒、例えば注射用の水または等張性水溶液の添加によって、肉視できる粒子を含有することのない即時使用液剤を提供する。再構成された液剤は５日間にわたって安定であるが、４時間以内に適用することが特に好ましい。本発明による製剤を、水性溶媒により再構成することによって、抗体含有溶液の製剤がｐＨ５から８、好ましくはｐＨ 6.0から7.4、特に好ましくはｐＨ約7.2ならびに250から350ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇの浸透圧を有することが可能になり、有利である。したがって、再構成製剤は、実質的に痛みなしに直接静脈内、動脈内および皮下に投与できる。さらに本製剤は、例えば、ブドウ糖溶液、等張食塩溶液またはリンガー溶液などのさらなる有効成分を含み得る注入溶液に添加することもでき、したがって、比較的大量の有効成分を投与することも可能となる。
【００１６】
本発明の好ましい実施態様によれば、凍結乾燥医薬品製剤は本質的に、抗体、糖またはアミノ糖、アミノ酸、バッファーおよび界面活性剤からなる。
【００１７】
本発明による製剤は、臨床上の必要性に濃度を合わせた抗体製剤の調製を可能にする。約0.5 ｍｇ／ｍｌから25 ｍｇ／ｍｌ、特に好ましくは５ｍｇ／ｍｌから20 ｍｇ／ｍｌ、とりわけ特に好ましくは10 ｍｇ／ｍｌから15 ｍｇ／ｍｌの抗体濃度を有する抗体液剤が好ましい。このように本発明による製剤は、WO98／22136A2の製剤に関して記載されている抗体濃度より著しく高い抗体濃度を有する即時使用製剤の調製を可能にする。
【００１８】
本発明による製剤に使用される糖は、単糖、二糖または三糖であり得る。単糖類の例としては、グルコース、マンノース、ガラクトース、フルクトースおよびソルボースが挙げられ、二糖類の例としては、スクロース、ラクトース、マルトースおよびトレハロースが挙げられ、三糖類の例としては、ラフィノースが挙げられる。スクロース、ラクトース、マルトースおよびトレハロースが好ましく、スクロースが特に好ましい。
【００１９】
アミノ糖、すなわちヒドロキシル基の代わりに第一級、第二級または第三級アミノ基またはアシル化アミノ基(−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ)を含有する単糖類が存在することも可能である。本発明の目的にはグルコサミン、Ｎ−メチルグルコサミン、ガラクトサミンおよびノイラミン酸が特に好ましい。
【００２０】
本発明による製剤における糖／アミノ糖は、提起した溶媒量で再構成した後に生じる溶液中に約１ｍｇ／ｍｌから200 ｍｇ／ｍｌの濃度で存在するような量で存在する。前記糖は、再構成溶液中、30 ｍｇ／ｍｌから65 ｍｇ／ｍｌの濃度で存在することが好ましい。
【００２１】
本発明に従って使用される好適なアミノ酸は、例えば特にアルギニン、ヒスチジン、オルニチン、リジンなどの塩基性アミノ酸であり、前記アミノ酸は、それらの無機塩(有利には塩酸塩の形態、すなわち塩酸アミノ酸として)の形態で用いられることが好ましい。遊離アミノ酸が用いられる場合、所望のｐＨは、例えば、クエン酸またはリン酸、硫酸、酢酸、ギ酸などの有機酸または無機酸またはそれらの塩などの生理学的に忍容される好適な緩衝物質の添加により設定される。特に安定な凍結乾燥物が得られるクエン酸塩およびリン酸塩が好ましい。
【００２２】
好ましいアミノ酸は、アルギニン、リジンおよびオルニチンである。さらに、例えば、グルタミン酸およびアスパラギン酸などの酸性アミノ酸、または例えば、イソロイシン、ロイシン、およびアラニンなどの中性アミノ酸、または例えば、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンなどの芳香族アミノ酸を用いることも可能である。本発明による製剤中のアミノ酸含量は、１ｍｇ／ｍｌから100ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１ｍｇ／ｍｌから50ｍｇ／ｍｌ、特に好ましくは３ｍｇ／ｍｌから30ｍｇ／ｍｌ(各場合とも再構成溶液を基準にして)である。
【００２３】
使用し得る界面活性剤は、医薬品製剤において通常使用される全ての界面活性剤であり、好ましくは、ポリソルベート類およびポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンポリマー類が好ましい。モノラウリン酸ポリオキシエチレン(20)ソルビタンおよびモノオレイン酸ポリオキシエチレン(20)ソルビタンが特に好ましい。本発明によれば、前記製剤は、0.001重量％から１重量％、好ましくは0.005重量％から0.1重量％、特に好ましくは約0.01重量％(各場合とも再構成溶液を基準にして)を含む。
【００２４】
本発明による製剤がバッファーを含む場合、これらは原則として、所望のｐＨ設定に好適な生理学的に忍容される任意の物質であり得る。緩衝物質の量は、凍結乾燥製剤の例えば、注射用の水による再構成後、生じた水溶液が５ mmol／ｌから20 mmol／ｌ、好ましくは約10 mmol／ｌのバッファー濃度を有するように選択される。好ましいバッファーは、クエン酸塩バッファーまたはリン酸塩バッファーである。好適なリン酸塩バッファーは、リン酸水素二ナトリウムまたはリン酸二水素カリウムなどのリン酸の一および二ナトリウムおよびカリウム塩溶液ならびに例えば、リン酸水素二ナトリウムとリン酸二水素カリウムの混液などのナトリウム塩とカリウム塩の混液である。
【００２５】
再構成溶液が抗体および安定化に用いられた補助剤の浸透性によっても等張になっていない場合、等張化剤、好ましくは、例えば、塩化ナトリウムまたは塩化カリウムなどの生理学的に忍容される塩、または例えば、グルコースまたはグリセロールなどの生理学的に忍容されるポリオールが等張性の確立に必要な濃度でさらに存在してもよい。
【００２６】
また、本発明による凍結乾燥物は、さらに例えば、アスコルビン酸またはグルタチオンなどの抗酸化剤、フェノール、ｍ−クレゾール、メチルまたはプロピルパラベン、クロロブタノール、チオマーサル(thiomersal)または塩化ベンザルコニウムなどの防腐剤、ＰＥＧ3000、3350、4000または6000などのポリエチレングリコール類(PEG)またはヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエチル−β−シクロデキストリンまたはγ−シクロデキストリンなどのシクロデキストリン類などの生理学的に忍容される補助剤を含み得る。
【００２７】
本発明による製剤は、有効成分としてCetuximab(登録商標)またはＥＭＤ72000および添加剤として糖またはアミノ糖、アミノ酸および界面活性剤、ならびに所望の場合は、さらに医薬品補助剤を含む水性製剤を調製し、その後この溶液を凍結乾燥することによって調製できる。
【００２８】
前記水性製剤は、前記補助剤をCetuximab(登録商標)またはＥＭＤ72000を含む溶液に加えることによって調製できる。この最後に、一定の濃度のさらなる前記補助剤を含む原液(stock solution)の一定体積を、溶液調製から得られた一定の濃度のCetuximab(登録商標)またはＥＭＤ72000を有する溶液に加えることが有利であり、前記混合物は、所望の場合、水により予め計算された濃度へと希釈される。あるいは、補助剤をCetuximab(登録商標)を含む出発溶液に固体として加えることもできる。Cetuximab(登録商標)またはＥＭＤ72000が固体形態、例えば凍結乾燥物の形態にある場合、本発明による製剤は、先ず各抗体を１種以上のさらなる補助剤を含む水または水溶液に溶解させ、引き続いて固体形態におけるさらなる補助剤および／または水を含む原液のそれぞれの場合に必要な量を加えることによって調製できる。Cetuximab(登録商標)またはＥＭＤ72000もまた、有利にさらなる補助剤を全て含む溶液に直接溶解できる。
【００２９】
本発明による製剤に存在する１種以上の補助剤は特定のＥＧＦＲ抗体の調製過程の間、またはその最後に添加してしまうことが有利である。これは１種、１種以上または全てのさらなる補助剤を含む水溶液に、その調製後に実施される精製化最終ステップにおいて、Cetuximab(登録商標)またはＥＭＤ72000を直接溶解させることにより実施できることが好ましい。前記製剤の調製のため、次に各々のさらなる成分(単数または複数)は、それぞれの場合に、より少量添加すればよく、および／または全く添加しなくてもよい。各々の成分は、溶液調製後に実施される精製化の最終ステップにおいて、全てのさらなる補助剤を含む水溶液に直接溶解させて、その溶液を直接凍結乾燥させることが好ましい。各々の抗体および補助剤を含む溶液は、ｐＨ５から８に設定し、滅菌ろ過し、凍結乾燥する。
【００３０】
実施例は限定することなく、本発明を説明している。
【００３１】
10 mmol／ｌのリン酸ナトリウムバッファーまたはリン酸カルシウムバッファーｐＨ 7.2を用いた場合、これは2.07 ｇ／ｌのリン酸水素二ナトリウム七水和物と0.31 ｇ／ｌのリン酸二水素ナトリウム一水和物または1.220 ｇ／ｌのリン酸水素二カリウムと0.4050 ｇ／ｌのリン酸二水素カリウムを含んでいた。
【００３２】
実施例１
以下のものを含む水溶液から得られた凍結乾燥物：
１０ｍｇ／ｍｌのＥＭＤ７２０００
１０ｍｍｏｌ／ｌのリン酸カリウムバッファーｐＨ７．２
１７ｍｍｏｌ／ｌのアルギニン
３重量％のスクロース
０．０１重量％のモノラウリン酸ポリオキシエチレン(２０)ソルビタン
０．４重量％のＰＥＧ６０００
規定の濃度で各補助剤を含む水溶液の規定体積を混合することによって調製を実施した。
【００３３】
以下の溶液を用いた：
以下のものを含む溶液Ａ(有効成分溶液)：
２０ｍｇ／ｍｌのＥＭＤ７２０００
１０ｍｍｏｌ／ｌのリン酸カリウムバッファーｐＨ７．２
溶液Ｂ(バッファー／塩溶液)：
１０ｍｍｏｌ／ｌのリン酸カリウムバッファーｐＨ７．２
６重量％のスクロース
０．０２重量％のモノラウリン酸ポリオキシエチレン(２０)ソルビタン
３４ｍｍｏｌ／ｌのアルギニン
０．８重量％のポリエチレングリコール６０００。
【００３４】
本発明による製剤を調製するために、等体積の溶液Ａと溶液Ｂを互いに混合した。
【００３５】
調製した溶液は包装前に滅菌ろ過した。バイアルを各々２ｍｌの溶液で満たした。引き続きこのバイアルを部分的に密栓し、凍結乾燥した。凍結乾燥後、バイアルを密封し、折り目をつけた。
【００３６】
実施例２
以下のものを含む水溶液から得られた凍結乾燥物：
１０ｍｇ／ｍｌのＥＭＤ７２０００
１０ｍｍｏｌ／ｌのリン酸カリウムバッファーｐＨ７．２
１４ｍｍｏｌ／ｌのアルギニン
３重量％のスクロース
０．０１重量％のモノラウリン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン
規定の濃度で各補助剤を含む水溶液の規定体積を混合することによって調製を実施した。
【００３７】
以下の溶液を用いた：
以下のものを含む溶液Ａ（有効成分溶液）：
２０ｍｇ／ｍｌのＥＭＤ７２０００
１０ｍｍｏｌ／ｌのリン酸カリウムバッファーｐＨ７．２
溶液Ｂ（バッファー／塩溶液）：
１０ｍｍｏｌ／ｌのリン酸カリウムバッファーｐＨ７．２
６重量％のスクロース
０．０２重量％のモノラウリン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン
３４ｍｍｏｌ／ｌのアルギニン。
【００３８】
本発明による製剤を調製するために、等体積の溶液Ａと溶液Ｂとを互いに混合した。
【００３９】
調製した溶液は包装前に滅菌ろ過した。バイアルを各々２０ｍｌの溶液で満たした。引き続きこのバイアルを部分的に密栓し、凍結乾燥した。凍結乾燥後、バイアルを密封し、折り目をつけた。
【００４０】
実施例３
以下のものを含む水溶液から得られた凍結乾燥物：
１５ｍｇ／ｍｌのＣｅｔｕｘｉｍａｂ（登録商標）
５ｍｍｏｌ／ｌのクエン酸塩
１００ｍｍｏｌ／ｌのアルギニン
４重量％のマンニトール
０．０１重量％のモノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン
規定の濃度で各補助剤を含む水溶液の規定体積を混合することによって調製を実施した。
【００４１】
以下の溶液を用いた：
以下のものを含む溶液Ａ（有効成分溶液）：
１９ｍｇ／ｍｌのＣｅｔｕｘｉｍａｂ（登録商標）
５ｍｍｏｌ／ｌのクエン酸塩
１２７ｍｍｏｌ／ｌのアルギニン
４重量％のマンニトール
０．０１重量％のモノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン
溶液Ｂ（バッファー／塩溶液）：
５ｍｍｏｌ／ｌのクエン酸塩
１９．０５重量％のマンニトール
０．０１重量％のモノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン
本発明による製剤を調製するために、７．９ｍｌの溶液Ａと２．１ｍｌの溶液Ｂとを互いに混合した。
【００４２】
調製した溶液は包装前に滅菌フィルタを用いてろ過した。ピペットを用いてバイアルを各々２ｍｌの溶液で満たした。引き続きこのバイアルを部分的に密栓し、凍結乾燥した。凍結乾燥後、バイアルを密封し、折り目をつけた。
【００４３】
実施例４
以下のものを含む水溶液から得られた凍結乾燥物：
１５ｍｇ／ｍｌのＣｅｔｕｘｉｍａｂ（登録商標）
５ｍｍｏｌ／ｌのクエン酸塩
１００ｍｍｏｌ／ｌのアルギニン
１．５重量％のスクロース
０．０１重量％のモノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン
規定の濃度で各補助剤を含む水溶液の規定体積を混合することによって調製を実施した。
【００４４】
以下の溶液を用いた：
以下のものを含む溶液Ａ（有効成分溶液）：
１９ｍｇ／ｍｌのＣｅｔｕｘｉｍａｂ（登録商標）
５ｍｍｏｌ／ｌのクエン酸塩
１２７ｍｍｏｌ／ｌのアルギニン
０．０１重量％のモノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン
溶液Ｂ（バッファー／塩溶液）：
５ｍｍｏｌ／ｌのクエン酸塩
７．１重量％のスクロース
０．０１重量％のモノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン
本発明による製剤を調製するために、７．９ｍｌの溶液Ａと２．１ｍｌの溶液Ｂとを互いに混合した。
【００４５】
調製した溶液は包装前に滅菌フィルタを用いてろ過した。ピペットを用いてバイアルを各々２ｍｌの溶液で満たした。引き続きこのバイアルを部分的に密栓し、凍結乾燥した。凍結乾燥後、バイアルを密封し、折り目をつけた。
【００４６】
実施例５
以下のものを含む水溶液から得られた凍結乾燥物：
１５ｍｇ／ｍｌのＣｅｔｕｘｉｍａｂ（登録商標）
１０ｍｍｏｌ／ｌのリン酸カリウムバッファーｐＨ７．２
１４ｍｍｏｌ／ｌの塩酸Ｌ−アルギニン
８８ｍｍｏｌ／ｌのスクロース
０．０１重量％のモノラウリン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン
リン酸を用いてｐＨ７．５に調整
規定の濃度で各補助剤を含む水溶液の規定体積を混合することによって調製を実施した。
【００４７】
以下の溶液を用いた：
以下のものを含む溶液Ａ（有効成分溶液）：
２５ｍｇ／ｍｌのＣｅｔｕｘｉｍａｂ（登録商標）
１０ｍｍｏｌ／ｌのリン酸カリウムバッファーｐＨ７．２
注射目的用水
溶液Ｂ（バッファー／塩溶液）：
１０ｍｍｏｌ／ｌのリン酸カリウムバッファーｐＨ７．２
３５．６ｍｍｏｌ／ｌの塩酸Ｌ−アルギニン
２１９ｍｍｏｌ／ｌのスクロース
０．０２５重量％のモノラウリン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン
リン酸を用いてｐＨ７．５に調整。
【００４８】
本発明による製剤を調製するために、６ｍｌの溶液Ａと４ｍｌの溶液Ｂとを互いに混合した。
【００４９】
調製した溶液は包装前に滅菌フィルタを用いてろ過した。ピペットを用いてバイアルを各々２ｍｌの溶液で満たした。引き続きこのバイアルを部分的に密栓し、凍結乾燥した。凍結乾燥後、バイアルを密封し、折り目をつけた。
【００５０】
実施例６（比較製剤１）
以下のものを含む水溶液：
５ｍｇ／ｍｌのＣｅｔｕｘｉｍａｂ（登録商標）
１０ｍｍｏｌ／ｌのリン酸ナトリウムバッファーｐＨ７．２
１４５ｍｍｏｌ／ｌの塩化ナトリウム
規定の濃度で各補助剤を含む水溶液の規定体積を混合することによって調製を実施した。
【００５１】
以下の溶液を用いた：
以下のものを含む溶液Ａ(有効成分溶液)：
１０ｍｇ／ｍｌのＣｅｔｕｘｉｍａｂ（登録商標）
１０ｍｍｏｌ／ｌのリン酸ナトリウムバッファーｐＨ７．２
１４５ｍｍｏｌ／ｌの塩化ナトリウム
（この溶液は、その調製後実施されたクロマトグラフィーによる有効成分精製の最終ステップにおいて、溶液Ｂを用いてカラムから有効成分を溶出することによって得られた。）
溶液Ｂ（バッファー／塩溶液）：
有効成分を含まない溶液Ａに相当する。
【００５２】
前記比較製剤を調製するために、溶液Ａと溶液Ｂの各１０ｍｌを互いに混合した。
【００５３】
実施例７（比較製剤２）
以下のものを含む水溶液：
５ｍｇ／ｍｌのＣｅｔｕｘｉｍａｂ（登録商標）
１０ｍｍｏｌ／ｌのリン酸ナトリウムバッファーｐＨ７．２
４５ｍｍｏｌ／ｌの塩化ナトリウム
０．０１重量％のモノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン
規定の濃度で各補助剤を含む水溶液の規定体積を混合することによって調製を実施した。
【００５４】
以下の溶液を用いた：
以下のものを含む溶液Ａ(有効成分溶液)：
９．７ｍｇ／ｍｌのＣｅｔｕｘｉｍａｂ（登録商標）
１０ｍｍｏｌ／ｌのリン酸ナトリウムバッファーｐＨ７．２
１４５ｍｍｏｌ／ｌの塩化ナトリウム
(この溶液は、その調製後実施されたクロマトグラフィーによる有効成分精製の最終ステップにおいて、溶液Ｂを用いてカラムから有効成分を溶出することによって得られた。)
溶液Ｂ（バッファー／塩溶液）：
有効成分を含まない溶液Ａに相当する。
【００５５】
溶液Ｃ（ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル溶液）：
さらに１重量％のモノオレイン酸ポリオキシエチレン(20)ソルビタンを含む溶液Ｂに相当する。
【００５６】
前記比較製剤を調製するために、10 ｍｌの溶液Ａ、9.8 ｍｌの溶液Ｂおよび0.2 ｍｌの溶液Ｃを互いに混合した。
【００５７】
調製した溶液は包装前に滅菌フィルタを用いてろ過した。ピペットを用いてバイアルを各々２ｍｌの溶液で満たした。引き続きこのバイアルを密封し、折り目をつけた。
【００５８】
製剤安定性試験
実施例１および２の本発明による製剤の安定性をストレス試験において試験した。この最後に調製された凍結乾燥物を40℃、相対大気湿度(ＲＡＨ)75％で貯蔵した。製剤を一定期間貯蔵し、適当な分析法を用いて分析した。抗体が不安定である可能性は、主に凝集物の形成および分解生産物の形成によって明らかであった。分解生産物は、ゲル電気泳動法(ドデシル硫酸ナトリウム／ポリアクリルアミドゲル電気泳動法(ＳＤＳ−ＰＡＧＥ)および等電点電気泳動法(ＩＥＦ))により検出することが好ましく、一方、可視的凝集物を検出するためには、肉視検査および濁度測定を用い、溶解性凝集物の検出には、サイズ排除クロマトグラフィー(ＨＰＬＣ−ＳＥＣ)を用いた。同様に製剤の評価に用いられるＥＬＩＳＡ(酵素結合免疫吸着剤アッセイ)試験は完全性および受容体に対する結合能力を調べるために役立つ。
【００５９】
表１と表２の結果は、高温および上昇相対大気湿度(40℃／75％ＲＡＨ)での貯蔵においても調製された製剤の品質および安定性を明らかに立証している。
【００６０】
【表１】
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【００６１】
【表２】
2005513110.tif 000003
【００６２】
実施例３から７の本発明による製剤の安定性も同様にストレス試験において検査した。この最後に、実施例３〜５の溶液を含むバイアル、および比較目的で実施例６〜７の溶液を含むバイアルを、25℃、60％相対大気湿度(ＲＡＨ)ならびに40℃、75％ＲＡＨで貯蔵した。各々の場合で貯蔵前、ならびにある一定の貯蔵期間後、３個のバイアルを冷光源による直接照射下、肉視で評価し、濁度の尺度を表す350ｎｍと550ｎｍでの溶液の吸収を測定した。さらに、各々の場合で、３本のバイアルを取り出し、ＨＰＬＣゲルろ過によって、Cetuximab(登録商標)と分解生成物の含量に関して分析した。
【００６３】
アセトニトリル／水の95／５(V/V)勾配(Ｂ)と緩衝溶液ｐＨ2.5／アセトニトリルの95／５(V/V)(Ａ)を溶出液として、HPLCクロマトグラフィー試験を実施した。カラム：LiChroCHART(登録商標)125−2HPLCカートリッジ；Superspher(登録商標)60RP−Select B、流速：0.3 ml／分、210nMで検出。
【００６４】
安定性試験の結果は表３に示している。
【００６５】
【表３】
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【００６６】
図１から図５は、40℃、75％相対大気湿度における一定の貯蔵期間後、実施例４の本発明による製剤の種々の安定性試験結果と、比較製剤１および２との比較を示している。各々の分析を実施する前に、実施例４の凍結乾燥製剤を注射用の水により再構成し、凍結乾燥による凍結乾燥製剤の調製に使用された出発溶液に比して、３倍の水分量を含有する水溶液とした。
【００６７】
図１は、ＨＰＬＣ−ＳＥＣでモノマー含量として測定して、実施例４の本発明による製剤と比較して、比較製剤１および２における有効成分が減少したことを示している。
【００６８】
図２は、ＨＰＬＣ−ＳＥＣで測定して、実施例４の本発明による製剤と比較して、比較製剤１および２における分解生産物が増加したことを示している。
【００６９】
図３は、ＨＰＬＣ−ＳＥＣで測定して、実施例４の本発明による製剤と比較して、比較製剤１および２における凝集物が増加したことを示している。
【００７０】
図４は、実施例４の本発明による製剤と比較して、比較製剤１および２におけるλ＝350ｎｍでの光学密度が増加したことを示している。
【００７１】
図５は、実施例４の本発明による製剤と比較して、比較製剤１および２におけるλ＝550ｎｍでの光学密度が増加したことを示している。
【００７２】
これらの結果は、本発明による組成物が液体比較溶液に較べて著しく安定性が増加していることを明らかに示している。
【図面の簡単な説明】
【００７３】
【図１】Cetuximab(登録商標)を有する種々の製剤の貯蔵における有効成分含量の現象を示す図である。
【図２】Cetuximab(登録商標)を有する種々の製剤の貯蔵における分解生産物の増加を示す図である。
【図３】Cetuximab(登録商標)を有する種々の製剤の貯蔵における凝集物の増加を示す図である。
【図４】Cetuximab(登録商標)を有する種々の製剤の貯蔵における濁度の増加（350 nm(A350)で測定）を示す図である。
【図５】Cetuximab(登録商標)を有する種々の製剤の貯蔵における濁度の増加（550 nm(A550)で測定）を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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