(57)【要約】本発明は、細胞に対するミトコンドリアのエンハンサーと細胞を接触させることによって、細胞の生命の質を改善するために細胞性の血液成分およびミトコンドリアを含むその他の細胞を処理するために方法を提供する。ミトコンドリアのエンハンサーは、ミトコンドリアおよびミトコンドリアを含む細胞に対する防止し、若返らせる。ミトコンドリアのエンハンサーは、リボフラビンなどのアロキサジン類および関連した化合物を含む。細胞は、ミトコンドリアのエンハンサーで処理の前に、後に、および／または間に、存在するであろう病原体を減少させるために、光放射によって任意に処理される。ミトコンドリアのエンハンサーによって処理すると、より高い光放射エネルギーのを利用することができ、より優れた病原体の減少が達成される。血小板をミトコンドリアのエンハンサーによって処理するときは、処理した血小板を、これらが患者に投与される前に未処置の血小板よりも長時間貯蔵してもよい。
2005524714.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞性の血液成分を含む液体を、前記細胞性の血液成分の生命の質（vital quality）を改善するために処理するための方法であって、前記方法は、ミトコンドリアのエンハンサーの有効な、実質的に無毒の量を前記液体に添加することを含み、前記ミトコンドリアのエンハンサーは、アロキサジン類、内因性のアロキサジン類、非内因性のアロキサジン類、内因的のものに基づいた誘導体アロキサジン類、内因性の光増感剤、および非内因性の光増感剤からなる群より選択される方法。
【請求項２】
前記液体中の前記ミトコンドリアのエンハンサー濃度が、約1〜約200マイクロモルである、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記細胞性の血液成分が血小板を含む、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記液体が周囲光よりも多量の光放射に曝露されていない、請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記液体中の光増感剤を活性化するために十分なエネルギーの光放射に前記液体を曝露することも含む、請求項１記載の方法。
【請求項６】
前記光放射が紫外スペクトルの光を使用して行われる、請求項５記載の方法。
【請求項７】
光放射に対する前記液体の暴露が、前記ミトコンドリアのエンハンサーで前記液体を処理することの前に、後に、および同時にからなる群より選択される時に行われる、請求項５記載の方法。
【請求項８】
前記光放射が、前記液体に存在するであろう病原体を実質的に減少させるために十分なエネルギーである、請求項５記載の方法。
【請求項９】
前記病原体が、細胞外および細胞内ウイルス、細菌、バクテリオファージ、真菌、血液を伝染する寄生生物、および原生動物、並びに前述のいずれか二つ以上の混合物からなる群より選択される、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
前記光放射が5J／cm2〜約50J／cm2の間である、請求項７記載の方法。
【請求項１１】
前記光増感剤が前記ミトコンドリアのエンハンサーである、請求項５記載の方法。
【請求項１２】
前記光増感剤の濃度が約1〜約200マイクロモルである、請求項11記載の方法。
【請求項１３】
前記細胞性の血液成分が、前記ミトコンドリアのエンハンサーを添加する前に貯蔵されない、請求項１記載の方法。
【請求項１４】
前記細胞性の血液成分が、前記ミトコンドリアのエンハンサーを添加する前に貯蔵される、請求項１記載の方法。
【請求項１５】
前記細胞性の血液成分が、前記ミトコンドリアのエンハンサーを添加する前に約1時間以上貯蔵される、請求項14記載の方法。
【請求項１６】
前記細胞性の血液成分が、前記ミトコンドリアのエンハンサーを添加する前の約1時間〜約7日の間の時間の量の間貯蔵される、請求項14記載の方法。
【請求項１７】
前記ミトコンドリアのエンハンサーが、7,8-ジメチル-10-リビチルイソアロキサジン、7,8-ジメチルアロキサジン、7,8,10-トリメチルイソアロキサジン、アロキサジンモノヌクレオチド、イソアロキサジン-アデノシンジヌクレオチド、ビタミンK1、ビタミンK1酸化物、ビタミンK2、ビタミンK5、ビタミンK6、ビタミンK7、ビタミンK-S (II)、およびビタミンLからなる群より選択される、請求項１記載の方法。
【請求項１８】
前記ミトコンドリアのエンハンサーが7,8-ジメチル-10-リビチルイソアロキサジンである、請求項１記載の方法。
【請求項１９】
前記液体中の前記7,8-ジメチル10-リビチルイソアロキサジンの濃度が、約1〜約200マイクロモルである、請求項１記載の方法。
【請求項２０】
前記ミトコンドリアのエンハンサーが、以下の式である、請求項１記載の方法：
【化１】
2005524714.tif 000019
式中、R1、R2、R3、R4、R5、およびR6は、お互いに独立して、水素、任意に置換されたヒドロカルビル、アルコール、アミン、ポリアミン、サルフェート、ホスフェート、塩素、臭素、およびヨウ素からなる群より選択されるハロゲン、前述のものの塩;
並びに-NRa-(CRbRC)n-Xであって、Xは、塩素臭素、およびヨウ素からなる群より選択されるハロゲンであり、Ra、Rb、およびRcは、互いに独立して、水素、任意に置換されたヒドロカルビル、並びに塩素、臭素、およびヨウ素からなる群より選択されるハロゲンからなる群より選択され、かつnは、0〜20の整数であるもの;
からなる群より選択され、
ただし、R1は、-OHまたは直鎖アルキル基であって、該鎖の第二炭素が-OH または=Oで置換された直鎖アルキル基ではなく、かつR1、R4、R5は、R2、R3、およびR6が水素であるときに、全てメチル基ではないことを条件とする。
【請求項２１】
請求項20記載の方法であって、R1、R2、R3、R4、R5、およびR6が、お互いに独立して水素、任意に置換されたアルコール、直鎖または環状の糖類、アミノ酸、アミン、ポリアミン、ポリエーテル、多価アルコール、サルフェート、ホスフェート、カルボニル、グリコール、塩素、臭素、およびヨウ素からなる群より選択されるハロゲン、アルデヒド、ケトン、カルボン酸、およびアスコルベートからなる群より選択される方法。
【請求項２２】
前記細胞性の血液成分の前記生命の質が、酸素消費の量および／または速度、乳酸産生の量および／または速度、pH、pH変化の割合、活性化、低浸透圧性のショック反応、グルコース消費の量および／または速度、血小板回旋（swirl）、血小板凝集、二酸化炭素産生の量および／または速度、体細胞数、並びに形状変化の程度からなる群より選択される、請求項１記載の方法。
【請求項２３】
前記酸素の消費が少なくとも約5%増大される、請求項22記載の方法。
【請求項２４】
前記乳酸産生の速度が少なくとも約5%減少される、請求項22記載の方法。
【請求項２５】
前記pHが少なくとも約0.1ユニット増大される、請求項22記載の方法。
【請求項２６】
前記低浸透圧性ショック反応が少なくとも約5%増大される、請求項22記載の方法。
【請求項２７】
前記グルコース消費が少なくとも約10%減少される、請求項22記載の方法。
【請求項２８】
前記血小板回旋（swirl）が少なくとも約5%増大される、請求項22記載の方法。
【請求項２９】
前記血小板凝集が少なくとも約5%減少される、請求項22記載の方法。
【請求項３０】
前記二酸化炭素産生が少なくとも約5%増大される、請求項22記載の方法。
【請求項３１】
前記細胞数が少なくとも約5%増大される、請求項22記載の方法。
【請求項３２】
前記形状変化の程度が少なくとも約5%増大される、請求項22記載の方法。
【請求項３３】
前記活性化が少なくとも約5%減少される、請求項22記載の方法。
【請求項３４】
前記細胞性の血液成分が前記処理後に約1時間以上貯蔵される、請求項１記載の方法。
【請求項３５】
前記液体に一酸化窒素を添加することと、前記液体に失活剤を添加することと、前記液体にプロセス・エンハンサーを添加することと、前記液体に酸素を加えることと、および前記液体に解糖阻害剤を添加することとからなる群より選択される工程も含む、請求項１記載の方法。
【請求項３６】
細胞性の血液成分の貯蔵寿命を増大するための方法であって、前記細胞性の血液成分にミトコンドリアのエンハンサーの有効な、実質的に無毒の量を添加することを含み、前記ミトコンドリアのエンハンサーは、アロキサジン類、内因性のアロキサジン類、非内因性のアロキサジン類、内因的のものに基づいた誘導体アロキサジン類、内因性の光増感剤、および非内因性の光増感剤からなる群より選択される方法。
【請求項３７】
血小板貯蔵寿命を延長するのための方法であって、前記細胞性の血液成分にミトコンドリアのエンハンサーの有効な、実質的に無毒の量を添加することを含み、前記ミトコンドリアのエンハンサーは、アロキサジン類、内因性のアロキサジン類、非内因性のアロキサジン類、内因的のものに基づいた誘導体アロキサジン類、内因性の光増感剤、および非内因性の光増感剤からなる群より選択される方法。
【請求項３８】
ミトコンドリアを含む細胞を、前記細胞の生命の質を改善するために処理するための方法であって、ミトコンドリアのエンハンサーの有効な、実質的に無毒の量で前記細胞を処理することを含み、前記ミトコンドリアのエンハンサーは、アロキサジン類、内因性のアロキサジン類、非内因性のアロキサジン類、内因的のものに基づいた誘導体アロキサジン類、内因性の光増感剤、および非内因性の光増感剤からなる群より選択される方法。
【請求項３９】
前記細胞が、植物細胞、動物細胞、酵母細胞、細胞性の血液成分の細胞、血小板、および創傷面の細胞からなる群より選択される、請求項38記載の方法。
【請求項４０】
ミトコンドリアを含む細胞を含む液体を、前記液体の生命の質を改善するために処理するための方法であって、ミトコンドリアのエンハンサーの有効な、実質的に無毒の量で前記細胞を処理することを含み、前記ミトコンドリアのエンハンサーは、アロキサジン類、内因性のアロキサジン類、非内因性のアロキサジン類、内因的のものに基づいた誘導体アロキサジン類、内因性の光増感剤、および非内因性の光増感剤からなる群より選択される方法。
【請求項４１】
前記液体が腹膜の溶液、血液、血液製剤を含む液体、およびミトコンドリアを含む細胞を含む液体からなる群より選択される、請求項40記載の方法。
【請求項４２】
細胞性の血液成分を含む液体を、その中に存在するであろう病原体を減少させるために処理するための方法であって：
(a) 光増感剤の減少に有効な、実質的に無毒の量を前記液体に添加する工程と;
(b) 前記光増感剤とは異なるミトコンドリアのエンハンサーの有効な、実質的に無毒の量を前記液体に添加する工程と;
(c) 前記光増感剤を活性化するために十分なエネルギーの光放射に、前記病原体を実質的に減少するために十分な時間で前記液体を曝露する工程とを含み、
前記ミトコンドリアのエンハンサーは、アロキサジン類、内因性のアロキサジン類、非内因性のアロキサジン類、内因的のものに基づいた誘導体アロキサジン類、内因性の光増感剤、および非内因性の光増感剤からなる群より選択される方法。
【請求項４３】
前記エネルギーが、30J／cm2、50J／cm2、80J／cm2、100J/cm2、120J／cm2、および180J/cm2からなる群より選択される量よりも大きい請求項42記載の方法。
【請求項４４】
前記エネルギーが5J／cm2〜約360J/cm2の間である、請求項42記載の方法。
【請求項４５】
前記エネルギーが約25J／cm2〜約180J／cm2の間である、請求項42記載の方法。
【請求項４６】
前記エネルギーが約75J／cm2〜約120 J／cm2の間である、請求項42記載の方法。
【請求項４７】
前記エネルギーが約120J／cm2〜約180J／cm2の間である、請求項42記載の方法。
【請求項４８】
細胞性の血液成分を含む液体を、その中に存在するであろう病原体を減少させるために処理するための方法であって、
(a) 光増感剤の減少に有効な、実質的に無毒の量を前記液体に添加する工程と;
(b) 前記光増感剤とは異なるミトコンドリアのエンハンサーの有効な、実質的に無毒の量を前記液体に添加する工程と;
(c) 前記光増感剤を活性化するために十分なエネルギーの光放射に、前記病原体を実質的に減少するために十分な時間で前記液体を曝露する工程とを含み、
前記ミトコンドリアのエンハンサーは、アロキサジン類、内因性のアロキサジン類、非内因性のアロキサジン類、内因的のものに基づいた誘導体アロキサジン類、内因性の光増感剤、および非内因性の光増感剤からなる群より選択される方法。
【請求項４９】
前記エネルギーが、30J／cm2、50J／cm2、80J／cm2、100J/cm2、120J／cm2、および180J/cm2からなる群より選択される量よりも大きい請求項48記載の方法。
【請求項５０】
前記エネルギーが5J／cm2〜約360J/cm2の間である、請求項48記載の方法。
【請求項５１】
前記エネルギーが約25J／cm2〜約180J／cm2.の間である、請求項48記載の方法。
【請求項５２】
前記エネルギーが約75J／cm2〜約120 J／cm2の間である、請求項48記載の方法。
【請求項５３】
前記エネルギーが約120J／cm2〜約180J／cm2の間である、請求項48記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願についての相互参照  
本出願は、2000年6月2日に出願の第09/586,147号;および2000年6月15日出願の09/596,429号の一部継続出願であり、これは1999年7月20日に出願された第09/357,188号であって、現在は発行された米国特許第6,277,337号の一部継続出願であり;2002年5月6日に出願の米国特許仮出願番号第60/378,374号に対する優先権を主張し;これらの開示は、本明細書に不一致でない範囲で参照により本明細書に変容される。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景  
輸血レシピエントのためにボランティア・ドナーから収集される全血は、一般的にアフェレーシスまたはその他の既知の方法によって、その成分の赤血球、血小板、および血漿に分離される。これらの各々の画分は、個々に貯蔵され、多くの特定の症状および疾病状態を治療するために使用される。例えば、赤血球成分は、貧血を治療するために使用され、濃縮された血小板成分は、出血を抑制するために使用され、血漿成分は、血友病の治療のために凝固第VIII因子の供与源として頻繁に使用される。
【０００３】
米国では、血液貯蔵手順は、政府による規制を前提としている。これらの系で収集された血液成分の最大貯蔵期間は、具体的に規定されている。例えば、「開放」系（すなわち、非無菌）で収集した全血成分は、政府規則下で、24時間以内に輸血しなければならず、ほとんどの場合6〜8時間以内に輸血される。対照的に、全血成分が「閉鎖」（すなわち、滅菌)系で収集される時は、赤血球を42日間で貯蔵することができ（抗凝固薬のタイプおよび使用される媒体に応じて）、血漿は、より長期間でさえ凍結および貯蔵させてもよい。血小板は、ジメチルスルホキシド（DMSO）と共に凍結させることができ、長期間貯蔵することができる（Valeriら、(2000) Chapter 6, Frozen Platelets, pages 105-130, in Platelet Therapy: Current Status and Future Trends, Eds. Seghatchian, J.ら、, Elsevier, Amsterdam)。血小板は、6%のDMSOと共に-80℃で3年間貯蔵することができ、5%のDMSOと共に-150℃で約2年間貯蔵することができる。
【０００４】
赤血球は、冷えたところに貯蔵されるが、Murphy and Gardner, New Eng. J. Med. 280: 1094 (1969)では、血小板リッチな血漿（PRP）として22℃で保存した血小板は、4℃で貯蔵したものよりもすぐれたインビボ半減期を有したことを証明した。したがって、さらに許容される血小板濃縮物では、室温で貯蔵後に輸血することができるであろう。最近まで、本規則は、室温での血小板濃縮物の貯蔵に対して7日（貯蔵容器のタイプに応じて）間まで許容していた。しかし、細菌増殖およびその後のレシピエントの輸血反応の発病率が、7日前の血小板濃縮物で容認されがたいレベルに増大することが認識された。血小板濃縮物は、現在5日だけ貯蔵してもよい。
【０００５】
マラリア西ナイルウイルス、HIV、肝炎、並びにその他のウイルスおよび細菌などの感染性の微生物の血液供給への混入は、全血の輸血、または血小板、赤血球、血漿、第VIII因子、プラスミノーゲン、フィブロネクチン、抗スロンビンIII、クリオプレシピテート、ヒト血漿タンパク分画、アルブミン、免疫血清グロブリン、プロトロンビン複合体、血漿成長ホルモン、および血液から単離されるその他の成分などの種々の血液成分の投与を受けなければならないものに対して、重篤な健康ハザードを提示する。混入物がないであろう血液スクリーニング手技、および細胞性の血液成分にダメージを与えないが、感染性のウイルスおよびその他の微生物を全て効率的に不活性化するか、または減少させる滅菌手技が当該技術分野において必要とされる。血液バンクでの使いやすさを含む多くの理由のために、種々の液体中、例えば分離した血液成分中の微生物を不活性化または減少するために同様の化学を使用する系が望まれている。また、不活性化または減少の処理が血液バンクで容易に行われ、かつ短期間で不活性化または減少を生じさせることが望まれている。
【０００６】
細菌は、少なくとも2つの異なる手段によって容易に血液成分に導入することができる。第1に、ドナーが軽度の菌血症（血液中に細菌を含む症状）を経験している場合、血液は、収集または貯蔵方法に関係なく汚染されると考えられる。十分なドナーの病歴および身体検査により減少するであろうが、この問題は除去されない。B. J. Grossman ら、, Transfusion 31: 500 (1991)を参照されたい。
【０００７】
第2に、血液を抜くときに使用される静脈穿刺が、混入のより広播な供与源となる。「無菌の」皮膚調製方法が使用されるときに、汗腺および毛包周辺の腺窩を殺菌することは、極めて困難である。静脈穿刺の間に、この汚染された皮膚は、鋭い針によって小さな「コア」に切り抜かれることが多い。このコアは、細菌を有する血液バッグを「播種する」役割を果たし、これが増殖してレシピエントに対するリスクとなる。
【０００８】
実際に、血小板輸血を必要とする多くの患者が、化学療法または基本的な血液疾患のいずれかの理由で、正常なクリーニングおよび細菌の破壊のための宿主防衛機制を欠いている。貯蔵された血小板中のみたところ無害な生物体の増殖さえも、輸血により、レシピエント反応および死亡を生じる。たとえば、B. A. Myhre, JAMA 244: 1333 (1980) and J. M. Healら、, Transfusion 27: 2 (1987)を参照されたい。
【０００９】
光増感剤および光で処理されて、存在するであろう病原体が不活性化または減少された血小板は、このような処理後の長期間の貯蔵の間に病原体の再活性化を示すであろうことが分かっている。血小板凝集に加えて、血小板は、貯蔵の5日目までに高い活性化および低い伸長形状変化の反応（これらはいずれも、血小板の細胞骨格変化の徴候であろう）を示し得る。このような変化は、貯蔵条件による血小板ダメージの徴候であろう。したがって、貯蔵される光放射された血小板の質を改善することが必要である。
【００１０】
より優れた病原体の減少および／または不活性化が可能であり、一方で許容される限界以上の細胞の質を維持することができる方法に対して、および細胞の質を改善することが可能であり、一方で病原体の減少および／または不活性化を維持する方法に対しての要求がある。血液および血液製剤の期間満了のために、一定期間の貯蔵後に、大量の血液および血液製剤が血液バンクによって廃棄される。貯蔵の間に、および病原体の減少および／または不活性化の後に、血液成分の細胞の質を改善することによって、血液成分の貯蔵寿命は増大される。
【００１１】
細胞では、食物が酸化されて高エネルギーの電子を産生し、蓄積エネルギーに変換される。このエネルギーは、ATP中に高エネルギーのリン酸結合で貯蔵される。摂取された糖は、酵素によって分解され、これらをグルコースと呼ばれる6炭素分子に分割する。また、グルコースは、培地または貯蔵溶液中の細胞に提供されてもよい。細胞にエネルギーを提供するためのグルコース分解は、細胞代謝の重要な機構である。この機構は、解糖として知られており、酸素の存在下でまたは非存在下でATP（アデノシン三リン酸）を産生する。ATPの産生は、細胞のエネルギー代謝に必須である。グルコースは、「グルコース輸送物質」と呼ばれる膜の特別な分子によって細胞に入る。一旦細胞内部に入ると、グルコースは分解されて、2つの経路でATPを作製する。第1の経路は、酸素を必要とせず、嫌気的代謝と呼ばれている。嫌気的代謝または解糖は、ミトコンドリアの外側の細胞質において生じる。解糖の間に、グルコースは、ピルベート（3炭素分子）へ分解される。この変換は、ホスフェートを含有する中間体を作製する一連の9つの酵素による工程を含む。
【００１２】
それぞれの反応は、ATPの形態でエネルギーを作製するために使用することができる水素イオン（電子）を産生するようにデザインされている。この経路を介してグルコース工程（run）の1つの分子によって、2つのATP分子のみを作製することができる。また、この経路は、1つ毎のグルコース分子から2つの乳酸分子を産生するために使用される。
【００１３】
最後の工程で形成されるピルビン酸は、クエン酸回路において、細胞のミトコンドリアに迅速に入り、CO2およびH2Oに完全に酸化されるので、大部分の動物細胞については、解糖は、糖の細胞エネルギーへの分解の単なる第一段階となるだけである。また、クエン酸回路は、クレブス回路またはトリカルボン酸（TCA）回路として当該技術分野において既知である。クエン酸回路は、ミトコンドリアにおいて生じ、一般的な経路であり、燃料分子（大部分は、ピルベートの酸化的脱炭酸反応からの産物のアセチル補酵素Aである）を完全に酸化する。アセチル補酵素Aは、サイクルに入り、10工程の反応を介してエネルギー（ATP）およびCO2を産生する。
【００１４】
嫌気的である生物体（分子状酸素を使用しないもの）の場合、および嫌気的条件下で機能することができる組織様の骨格筋については、解糖は、細胞におけるATPの主要な供与源である。これは、細胞のミトコンドリアが何らかの方法でダメージを受けた場合には、好気的細胞においても生じ、これにより細胞がクエン酸回路に入ることを防止する。
【００１５】
ATPは、継続的な細胞機能に必須であるので、好気的代謝が酸素の欠乏によって遅くなるか、または妨げられるときには、ATPを産生するための嫌気的な経路が刺激され、細胞生存度を維持するために重要になる。ここでは、ミトコンドリアにおいて分解される代わりに、ピルビン酸分子がサイトゾルにとどまり、エタノールおよびCO2（酵母において）または乳酸（筋肉において）に変換することができる。
【００１６】
細胞内の乳酸の蓄積は、水素イオンの濃度の増大およびpHの減少を生じさせる。pHの減少を受けている貯蔵中の血液細胞は、解糖だけを受けているのであろう。このようなpHの低下は、細胞貯蔵の間の細胞の質の減少に寄与することも示している。
【００１７】
細胞が解糖に入り、これにより乳酸またはラクタートの蓄積を引き起こす因子は、発作または梗塞などの体の内部に生じるイベント、並びに体から除去した後の細胞の処理などの外部のイベントを含む。細胞にラクタートを蓄積させるであろう外部の処理の１つの例は、レシピエントに注入される細胞または細胞を含む液体に含まれるかもしれない病原体を不活性化または減少させる手順である。血液または血液成分中に存在するであろう病原性混入物を殺菌するための現在使用されている方法は、処理された細胞のミトコンドリアにダメージを生じさせ得る。これが生じると、細胞は、解糖経路を介してATPを作製することができるだけであり、貯蔵の間に、細胞に乳酸の集積を、その後にpHの減少を引き起こす。
【００１８】
ミトコンドリアは、血液成分の重要な細胞下小器官である。これらは、その中で好気的および酸化的なエネルギー代謝反応に関与する。ミトコンドリアは、内因性および外因性の影響に感受性であり、容易にダメージを受け、または破壊されるであろう。機能障害性のエネルギー代謝、およびより厳密には、ダメージを受けたミトコンドリアは、血小板の質および最終的な細胞死の低下を引き起こす。
【００１９】
血液成分に対してダメージを引き起こす可能性は、貯蔵、病原体の不活性化、および病原体の減少プロセスに存在するであろう。病原体の減少または不活性化の後の血小板の生存度の変化の理由は、病原体を殺すための血小板の照射が血小板ミトコンドリアにダメージを引き起こすためであろう（Chavezら、(September 1998) Biochem. Mol. Biol. Int. 46(1) : 207-214; Masakiら、(March 1997) J. Dermatol. Sci. 14 (3): 207-216；およびSaletら、(Apr 1995) Int. J. Radiat. Biol. 67 (4): 477-80)。病原体の減少プロセスの副作用は、血小板が紫外光に供されるときのものであり、血小板のミトコンドリアは、これらが可視光に供されたときよりも、少なくともいくらかダメージを受ける機会が多くなることが観察された。ミトコンドリアは、全ての酸素を利用する生物体に存在し、ここでアデノシン三リン酸の形態でエネルギーが作製されて酸素が水に還元される。生物体によって取り入れられる酸素の90パーセントは、ミトコンドリアによって消費される。ATP生成の実質的な副産物は、潜在的に有毒な活性酸素の形成である。例えば、全ての還元酸素の1-2%が、スーパーオキシド(O2・)および過酸化水素(H2O2)を産生すると推定される。形成されるその他の活性酸素種（ROS）は、一重項酸素（O2）およびヒドロキシルラジカル（・OH）である。細胞内のストレス条件下では、全ての消費される酸素の10％に上昇する。ミトコンドリア膜は、これらのROSから生じる脂質の過酸化および脱分極に感受性である。
【００２０】
さらに、血液産物における病原体の不活性化および減少のための光化学的な方法は、光増感剤の光分解プロセスにおいて一重項酸素種を生じ、ミトコンドリア膜に対してさらなるダメージを引き起こす。したがって、血小板の血小板ミトコンドリアおよびその他の血液細胞を、光化学的な汚染除去および貯蔵におけるストレス状態の両者によって産生されるROSから保護することが必要とされる。
【００２１】
当該技術分野において、ミトコンドリアに対するダメージを防止するための、貯蔵の間に、および病原体の不活性化および減少手順の前、間、および後に、血液成分に対するダメージおよびその分解を減少するための方法の要求が存在する。
【００２２】
引用した全ての参照は、本明細書の開示と不一致とならない範囲で、その全体が参照によって本明細書に援用される。上記文書の引用は、上記のいずれもが適切な従来技術であることを認めるものとしては意図されない。日時に関する全ての記載またはこれらの文書の内容に関する表示は、出願人が入手可能な情報の主観的な特徴に基づいており、日時またはこれらの文書の内容の正確さに関して何ら承認も構成しない。
【発明の開示】
【００２３】
発明の概要  
本発明は、細胞性の血液成分を含む液体を、前記細胞性の血液成分の生命の質を改善するために治療するための方法であって、前記方法は、ミトコンドリアのエンハンサーの有効な、実質的に無毒の量を前記液体に添加することを含み、前記ミトコンドリアのエンハンサーは、アロキサジン類、内因性のアロキサジン類、非内因性のアロキサジン類、内因的のものに基づいた誘導体アロキサジン類、内因性の光増感剤、および非内因性の光増感剤からなる群より選択される方法を提供する。液体中のミトコンドリアのエンハンサーの濃度は、液体中の細胞の生命の質の測定可能な増進を提供するために十分な任意の量から有毒量までであることができる。好ましくは、ミトコンドリアのエンハンサーは、約1〜約200マイクロモルの終濃度で存在する。
【００２４】
また、本発明は、前記液体の質を改善するために、細胞性の血液成分の貯蔵寿命を増大するため、血小板の貯蔵寿命を拡張するため、ミトコンドリアを含む細胞を処理するため、ミトコンドリアを含む細胞を含む液体を処理するための方法であって、前記細胞性の血液成分にミトコンドリアのエンハンサーの有効な、実質的に無毒の量を添加することを含み、前記ミトコンドリアのエンハンサーは、アロキサジン類、内因性のアロキサジン類、非内因性のアロキサジン類、内因的のものに基づいた誘導体アロキサジン類、内因性の光増感剤、および非内因性の光増感剤からなる群より選択される方法を提供する。本発明の方法によって処理できる液体は、ミトコンドリアを有する生細胞を含む液体または腹膜の溶液、血液、および血液製剤を含む液体などの、生細胞と接触した状態になる液体を含む。
【００２５】
本発明の方法によって処理できる細胞は、植物細胞、動物細胞、酵母細胞、細胞性の血液成分細胞、血小板、および創傷面の細胞を含む。
【００２６】
本発明の実施の際には、液体は、任意に周囲光よりも多量の光放射に曝露される。液体が周囲光より多量の光放射に曝露されるときは、光放射は、液体中の光増感剤を活性化するために十分なエネルギーのものであろう。液体が光放射に曝露されるときに、光の波長は、可視または紫外スペクトルであることができる。液体が光放射に曝露されるときに、ミトコンドリアのエンハンサーで前記液体を処理することの前に、後に、および同時にからなる群より選択される時に行うことができる。液体が光放射に曝露されるときに、5J／cm2〜約150J／cm2の間のエネルギーであることができる。
【００２７】
液体が、増感剤を活性化するために十分なエネルギーの光放射に曝露されるときは、液体中でも、光放射は、液体に存在するであろう病原体を実質的に減少させるために十分なエネルギーであることができる。本発明の方法によって減少させることができる病原体は、細胞外および細胞内ウイルス、細菌、バクテリオファージ、真菌、血液を伝染する寄生生物、および原生動物、並びに前述のいずれか二つ以上の混合物を含む。
【００２８】
光増感剤を液体に添加するときに、光増感剤は、液体に添加するミトコンドリアのエンハンサーと同じであることができる。光増感剤の濃度は、液体中の病原体の測定可能な減少を提供するために十分な任意の量から細胞に中毒性である量までであることができる。好ましくは、光増感剤は、約1〜約200マイクロモルの濃度で存在する。本発明の一つの態様において、細胞性の血液成分は、前記治療の前に貯蔵されない。本発明のもう一つの態様において、細胞性の血液成分は、前記治療の前に貯蔵される。細胞性の血液成分が治療の前に貯蔵されるときは、前記治療の前に約1時間〜約7日の間の時間の量の間貯蔵される。あるいは、細胞性の血液成分は、前記治療の前に約1時間以上の間貯蔵される。
【００２９】
本発明の実施において有用なミトコンドリアのエンハンサーは、同時に光増感剤として作用してもよく、7,8-ジメチル-10-リビチルイソアロキサジン、7,8-ジメチルアロキサジン、7,8,10-トリメチルイソアロキサジン、アロキサジンモノヌクレオチド、イソアロキサジン-アデノシンジヌクレオチド、ビタミンK1、ビタミンK1酸化物、ビタミンK2、ビタミンK5、ビタミンK6、ビタミンK7、ビタミンK-S (II)、およびビタミンLを含む。ミトコンドリアのエンハンサーが7,8-ジメチル-10-リビチルイソアロキサジンであるときは、約1〜約200マイクロモルの濃度で液体中にある。
【００３０】
本発明の実行に有用なさらなるミトコンドリアのエンハンサーは、以下の式の分子を含む：
【化２】
2005524714.tif 000003
式中、R1、R2、R3、R4、R5、およびR6は、お互いに独立して、水素、任意に置換されたヒドロカルビル、アルコール、アミン、ポリアミン、サルフェート、ホスフェート、塩素、臭素、およびヨウ素からなる群より選択されるハロゲン、前述のものの塩;
並びに-NRa-(CRbRC)n-Xであって、Xは、塩素臭素、およびヨウ素からなる群より選択されるハロゲンであり、Ra、Rb、およびRcは、互いに独立して、水素、任意に置換されたヒドロカルビル、並びに塩素、臭素、およびヨウ素からなる群より選択されるハロゲンからなる群より選択され、かつnは、0〜20の整数であるもの;
からなる群より選択され、
ただし、R1は、-OHまたは直鎖アルキル基であって、該鎖の第二炭素が-OH または=Oで置換された直鎖アルキル基ではなく、かつR1、R4、R5は、R2、R3、およびR6が水素であるときに、全てメチル基ではないことを条件とする。R1、R2、R3、R4、R5、およびR6が、お互いに独立して水素、任意に置換されたアルコール、直鎖または環状の糖類、アミノ酸、アミン、ポリアミン、ポリエーテル、多価アルコール、サルフェート、ホスフェート、カルボニル、グリコール、塩素、臭素、およびヨウ素からなる群より選択されるハロゲン、アルデヒド、ケトン、カルボン酸、およびアスコルベートからなる群より選択されることができる。また、これらの化合物は、光増感剤として作用してもよい。
【００３１】
本発明の方法によって処理できる細胞性の血液成分の例は、血小板である。本発明のある態様において、細胞の血液成分は、前記ミトコンドリアのエンハンサーが添加された約1時間以上後に貯蔵される。
【００３２】
また、本発明の方法は、液体に一酸化窒素を添加することと、液体に失活剤を添加することと、液体にプロセス・エンハンサーを添加することと、液体に酸素を加えることと、および／または液体に解糖阻害剤を添加することとを含む。
【００３３】
本発明の方法によって改善される生命の質は、酸素消費の量および／または速度、乳酸産生の量および／または速度、pH、pH変化の割合、活性化、低浸透圧性のショック反応、グルコース消費の量および／または速度、血小板回旋（swirl）、血小板凝集、二酸化炭素産生の量および／または速度、体細胞数、並びに形状変化の程度を含む。
【００３４】
本発明のある態様において、酸素消費は、少なくとも約5%増大される。本発明のある態様において、乳酸産生の速度は、少なくとも約5%減少される。本発明のある態様において、pHは、少なくとも約0.1ユニット増大される。本発明のある態様において、低浸透圧性ショック反応は、少なくとも約5%増大される。本発明のある態様において、グルコース消費量は、少なくとも約10%減少される。本発明のある態様において、血小板回旋（swirl）は、少なくとも約5%増大される。本発明のある態様において、血小板凝集は、少なくとも約5%減少される。本発明のある態様において、二酸化炭素産生は、少なくとも約5%増大される。本発明のある態様において、細胞数は、少なくとも約5%増大される。本発明のある態様において、形状変化の程度は、少なくとも約5%増大される。本発明のある態様において、活性化は、少なくとも約5%減少される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３５】
発明の詳細な説明  
定義  
本明細書に使用されるものとして、「ミトコンドリアのエンハンサー」は、ミトコンドリアのまたはミトコンドリアを含む細胞の生命の質を増強する組成物をいう。本発明の実施に有用なミトコンドリアのエンハンサーは、アロキサジン類、内因性のアロキサジン類、非内因性のアロキサジン類、内因的のものに基づいた誘導体アロキサジン類、内因性の光増感剤、および非内因性の光増感剤を含む。
【００３６】
本明細書に使用されるものとして、「周囲光」は、ガラスまたはプラスチックを通った日光を含む日光などの自然光、または白熱灯、蛍光灯、および／またはハロゲンランプなどからの頭上の部屋の光をいう。周囲光は、通常、十分に溶液中で光増感剤を十分に活性化して、その中の病原体を実質的に減少させるために十分なエネルギーおよび／または適切な波長のものではない。
【００３７】
本明細書に使用されるものとして、「実質的に病原体を不活性化する」は、病原体が再生する能力を、好ましくはこれらを殺すことによって減少させることをいう。処理された液体が、細胞性の血液成分を含むときは、細胞性の血液成分が安全に患者に投与されてもよいように、液体中の病原体のレベルを減少することができる。
【００３８】
本明細書に使用されるものとして、「実質的に病原体を減少させる」は、病原体が再生する能力を、好ましくはこれらを殺すことによって減少することをいう。処理された液体が細胞性の血液成分を含むときは、細胞性の血液成分が安全に患者に投与されてもよいように、液体中の病原体のレベルを減少することができる。
【００３９】
本明細書に使用されるものとして、「貯蔵」は、処方または収集の後、液体がその企図された目的に利用される前の時間の量をいう。本明細書に使用されるものとして、血液または血液製剤の貯蔵は、血液または血液製剤の収集から、患者にその血液製剤を投与することなどのその企図された目的に血液または血液製剤を利用する間の時間をいう。
【００４０】
本明細書に使用されるものとして、「貯蔵寿命を改善するために十分なミトコンドリアのエンハンサーの量」は、生細胞の質を測定可能に増大する量をいう。
【００４１】
本明細書に使用されるものとして、「解糖阻害剤」は、解糖の生化学経路を妨げる組成物をいう。2-デオキシ-D-グルコースは、解糖阻害剤の例である。
【００４２】
本明細書に使用されるものとして、「液体に一酸化窒素を添加すること」は、液体内の一酸化窒素の量を増大することをいう。本発明の実行において、一酸化窒素は、当該技術分野において既知の任意の方法によって液体に添加されてもよい。液体に一酸化窒素を添加するための方法は、一酸化窒素を含む液体、固体、または気体を加えること、および一酸化窒素ジェネレーターを添加することを含むが限定されない。一酸化窒素ジェネレーターは、直接または間接的に反応して一酸化窒素を産生することが可能である化学薬品である。一酸化窒素ジェネレーターは、すでに液体にある成分と反応して一酸化窒素を産生してもよく、またはこれらは、液体に1つまたは複数の異なる一酸化窒素ジェネレーター（これらが反応して一酸化窒素を産生するであろう）を添加することが必要であってもよい。1つまたは複数の異なる一酸化窒素ジェネレーターの添加が必要でない一酸化窒素ジェネレーターは、一酸化窒素ドナーである。一酸化窒素ドナーは、当該技術分野において周知であり（Bauerら、, (1995) Advances in Pharmacology 34: 361 and U. S. Patent No. 6, 232, 434）、Cayman Chemical, Ann Arbor, MIなどの会社から購入することができる。一酸化窒素ドナーは、L-アルギニン、N-アセチル-L‐システイン、DEA-NO、DETA-NO、DETA-NONOate、PAPA-NO、ニトロフェリシアン化ナトリウム、およびニトログリセリンを含むが、これらに限定されない。一酸化窒素を含む液体は、液体中で組み合わされて一酸化窒素を産生する2つの一酸化窒素ジェネレーターを含む液体、一酸化窒素気体が泡立たせた（bubbled）塩類溶液、および一酸化窒素飽和水を含むが、これらに限定されない。
【００４３】
本明細書に使用されるものとして、「酸素を添加すること」は、液体が混合していない周囲条件の気圧下の液体に存在するよりも大量に液体中の溶存酸素を増大するために、液体に酸素を添加することをいう。
【００４４】
本明細書に使用されるものとして、「プロセス・エンハンサー」は、病原体の減少プロセスを増強する組成物をいう。プロセス・エンハンサーは、本発明の光放射プロセスに含めることができる。このようなエンハンサーは、所望の液体成分に対するダメージを防止するための、もしくは微生物の減少率を改善するための抗酸化物またはその他の薬剤を含み、アデニン、ヒスチジン、システイン、チロシン、トリプトファン、アスコルベート、N-アセチル-L‐システイン、没食子酸プロピル、グルタチオン、メルカプトプロピオニルグリシン、ジチオスレイトオール（dithiothreothol）、ニコチンアミド、BHT、BHA、リジン、セリン、メチオニン、グルコース、マンニトール、トロロクス、グリセリン、ビタミンE、αトコフェロールアセテート、およびこれらの混合物によって例示される。これらのプロセス・エンハンサーは、乾燥培地形態（粉末またはピルを含む）中にまたは液体の形態で添加されてもよい。
【００４５】
本明細書に使用されるものとして、「撹拌機」は、ヘルマー血小板インキュベーター／撹拌機（Helmer platelet incubator/agitator：Helmer Company, Noblesville, IN)などの、照射を受ける産物を含む容器を撹拌する、たとえば振盪または回転することができる装置をいう。
【００４６】
本明細書において血小板組成物に関して使用されるものとして、「100%の血漿持ち越し汚染」および「100%のPCO」は、体積の約20％の抗凝固薬が添加された血漿をいう。したがって、100%のPCOは、約80%の血漿である。同様の計算によって、90%のPCOは、約72%の血漿である。血漿または抗凝固薬のいずれでもない血小板組成物のバランスにより、ミトコンドリアのエンハンサーおよび／または光増感剤などのさらなる成分を含むことができる。、ACDA（抗凝血性のクエン酸デキストロース処方A）およびCPD（クエン酸ホスフェートデキストロース）を含む当該技術分野において既知の血液凝固阻止剤は、本発明の実施に有用である。
【００４７】
本明細書に使用されるものとして、「生命の質」は、細胞性の血液成分質の指標、すなわち、その質を評価するために測定することができる、細胞または細胞性の血液成分を含む液体のパラメーターをいう。細胞性の血液成分の質（生命の質）の指標は、以下に記載されており、活性化、低浸透圧性のショック反応、乳酸産生の量および速度、グルコース消費の量および速度、pHおよびpH変化の割合、血小板回旋（swirl）、血小板凝集、酸素消費の量および速度、二酸化炭素産生の量および速度、体細胞数（細胞の生存）、および形状変化の程度（ESC）を含むが、これに限定さない。本明細書に使用されるものとして、「細胞性の血液成分の生命の質を改善する」ことは、質を評価するために測定することができる細胞性の血液成分のパラメーターを改善することをいい、前述したパラメーターを含む。改善された細胞性の血液成分により、例えば患者を治療するために利用したときに、より良い結果を提供する。これらの生命の質の測定は、ミトコンドリアの健康状態についての情報を提供する。ミトコンドリアの健康状態についての情報を提供するさらなる質は、活性化、低浸透圧性のショック反応、グルコース消費、血小板回旋、血小板凝集、二酸化炭素産生、体細胞数、およびESCを含む。
【００４８】
本明細書に使用されるものとして、「生命の質を改善するために有効なミトコンドリアのエンハンサーの量」は、生細胞の質に測定可能な改善を引き起こすのに十分であるが、ミトコンドリアを含む細胞に対して中毒性ではないミトコンドリアのエンハンサーをいう。ミトコンドリアのエンハンサーが、細胞またはその環境内に天然に存在するときは、本発明のミトコンドリアのエンハンサーは、生命の質に測定可能な改善を引き起こすために十分な量で添加される。ミトコンドリアのエンハンサーのリボフラビンを血液細胞に添加するときは、約0.1マイクロモル〜約1ミリモル間、約1マイクロモル〜約200マイクロモル間、および約5マイクロモル〜約75マイクロモルの間に終濃度が有効である。
【００４９】
「生物学的に活性」の用語は、生きている生物またはその成分に変化を生じさせことができることを意味する。
【００５０】
「血液製剤」および「血液成分」の用語は、本明細書に使用されるものとして、血液、血漿、血液成分、および血液に由来するタンパク質を含む治療的なタンパク質組成物を含む。
【００５１】
本明細書に使用されるものとして、「細胞性の血液成分」は、血液の実質的な量を含むか、または血液の細胞性の成分である血液成分をいう。細胞性の血液成分は、血小板、赤血球（赤血球）、好酸球、好中球、白血球（白血球細胞）、単球、リンパ球、好塩基球、および血液幹細胞を含む。血漿の試料が、細胞性の血液成分の実施的な、すなわち血小板または白血球細胞などのその中の細胞が有用であるために十分な量を含む場合、これが細胞性の血液成分である。本明細書に使用されるものとして、「血小板を含む血液成分」は、血漿中の血小板および培地中の血小板を含む。
【００５２】
本明細書に使用されるものとして、「創傷表面の細胞」は、創傷の表面またはその近くの細胞をいう。哺乳類の体の表面近くの創傷は、白血球細胞、赤血球、線維芽細胞、表皮細胞、および内皮細胞を含み得る。創傷表面の細胞は、外胚葉、中胚葉、および内胚葉起源の細胞を含み得る。
【００５３】
本発明のエレメントの「実質的に無毒の」量は、微生物以外のこのような液体成分の生物活性を破壊しないものである。
【００５４】
本明細書に使用されるものとして、「病原体」は、1つの種の個々の病原生物、1つの種の複数のこのような生物、または2つ以上の種の複数の病原生物をいう。本明細書に使用されるものとして、「病原体の不活性化を増大する」は、本明細書に記載されている手順の効果に関して、手順がないときよりも、手順を使用した後の病原体の量が減少することをいう。本明細書に使用されるものとして、「病原体の減少を増大する」は、本明細書に記載されている手順の効果に関して、本手順がないときよりも、本手順を使用した後の病原体の量が減少することをいう。
【００５５】
液体中に存在するであろう、および本発明のプロセスによって除染されるであろう病原体は、典型的には、細胞外および細胞内ウイルス、細菌、バクテリオファージ、真菌、血液を伝染する寄生生物、および原生動物、並びに前述のいずれか二つ以上の混合物からなる群より選択されるものを含む。病原体の1つがウイルスである場合、これは、ヒト免疫不全症ウイルス（HIV）、A型、B型、およびC型肝炎ウイルス、シンドビスウイルス、サイトメガロウイルス、小胞性口内炎ウィルス、単純ヘルペスウイルス（たとえばタイプIおよびII）、ヒトTリンパ指向性レトロウイルス、HTLV-III、リンパ節腫脹ウイルスLAV/IDAV、パルボウイルス、輸液伝染（transfusion-transmitted：TT）ウイルス、およびプスタイン・バー・ウイルス、ウシ・ウイルス性下痢ウイルス、オーエスキー病ウイルス、西ナイルウイルス、および前述の任意の二つ以上の混合物からなる群より選択されてもよい。病原体のうちの1つがバクテリオファージである場合、φX174、φ6、λ、R17、T4、およびT2前述の任意の二つ以上の混合物からなる群より選択されてもよい。病原体のうちの1つが細菌である場合、緑膿菌、S.アウレウス（S.aureus）、S.エピダーミ（S. epidermidis）、大腸菌、K.ニューモニア（K.pneumoniae）、E.ファカリス（E. faecalis）、枯草菌（B. subtilis）、S.ニューモニア（S.pneumoniae）、S.パイロジェネス（S. pyrogenes）、S. ビリダンス(S.viridans）、B.セレウス、E. アイロゲネス、プロピオナバクター（propionabacter）、ウエルチ菌（C. perfringes）、E.クロアカ（E.cloacae）、P.ミラビリス、豚コレラ菌（S. cholerasuis）、S.リキファシエンス（S. liquifaciens）、S.マイティス（S.mitis）、Y.エンテロコリチカ（Y. entercolitica）、蛍光菌（P. fluorescens）、腸炎菌（S.enteritidis）、C.フロイディ（C. freundii）、およびS.マルセセンス（S. marcescens）、並びに前述の任意の二つ以上の混合物からなる群より選択さ
れてもよい。本発明の態様において、病原体の1つが原生動物である場合、P.ファルシパラム（P.falciparum）であってもよい。
【００５６】
本明細書に使用されるものとして、「光増感剤」は、1つまたは複数の定義された波長の照射を吸収し、その後に吸収エネルギーを利用して化学プロセスを実行する任意の化合物をいう。本発明に有用な光増感剤は、微生物を減少するために有用な、当該技術分野において既知の任意の光増感剤を含む。このような光増感剤の例は、ポルフィリンを含む、ソラレン、ニュートラルレッド、メチレンブルー、アクリジン、トルイジン、フラビン（塩酸アクリフラビン）およびフェノチアジン誘導体などの色素、クマリン、キノロン、キノン、およびアンスロキノン（anthroquinones）。本発明の光増感剤は、優先して核酸に吸着することにより、付随する細胞またはタンパク質による効果をわずかにまたは全く有さない微生物およびウイルスによるこれらの光力学的な効果を集中させる化合物を含んでもよい。また、一重項酸素依存的な機構を使用しているものなどの、本発明のその他の光増感剤も有用である。本発明の実施に有用な光増感剤は、内因性の光増感剤を含む。
【００５７】
本明細書に使用されるものとして、「光増感剤を活性化する」は、光増感剤を、これが実質的に病原体を減少できるように変えることにをいう。活性化された光増感剤は、これらの複製を防止するように妨げることなどによって、液体中の微生物を減少することができる。光増感剤の作用の特異性は、微生物の核酸に光増感剤を非常に近くにすることによって与えることができ、これは、核酸に対する光増感剤の結合によって生じてもよい。「核酸」は、リボ核酸（RNA）およびデオキシリボ核酸（DNA）を含む。また、光増感剤は、細胞膜に結合することによって、またはその他の機構によって作用することができる。
【００５８】
「内因性の」の用語は、体による合成の結果として、または必須食料（たとえばビタミン）としての摂取または代謝産物および／または副産物のインビボで形成によるかのいずれかにより、ヒトまたは哺乳類体において天然に見いだされることを意味する。
【００５９】
「非内因性の」の用語は、体による合成の結果として、または必須食料の摂取もしくはインビボでの代謝産物および／または副産物の形成のために、ヒトまたは哺乳類体において天然に見いだされないことを意味する。
【００６０】
内因性の光増感剤の例は、アロキサジン類を含む。アロキサジン類は、アロキサジンバックボーンを含む分子である。「アロキサジン」の用語は、イソアロキサジンを含む。内因性の光増感剤の例は、7,8-ジメチル10-リビチルイソアロキサジン（リボフラビン）、7,8,10-トリメチルイソアロキサジン（ルミフラビン）、7,8-ジメチルアロキサジン（ルミクロム）、イソアロキサジン-アデニンジヌクレオチド（フラビンアデニンジヌクレオチド[FAD]）、アロキサジンモノヌクレオチド（また、フラビンモノヌクレオチド[FMN]およびリボフラビン-5-ホスフェートとしても知られる）、ビタミンK、ビタミンL、これらの代謝産物および前駆体、並びにナフトキノン、ナフタレン、ナフトール、および平面の分子高次構造を有しているこれらの誘導体を含む。内因的のものに基づいた誘導体光増感剤は、内因性の光増感剤の類似体および相同体に合成的に由来するものを含み、これは、これらに由来する光増感剤の低級(1〜5)アルキルまたはハロゲン置換基を有していても、または欠いていてもよい（これらは、これらの機能および実質的な非毒性を保存する）。内因性の光増感剤または内因的のものに基づいた誘導体光増感剤は、本発明の実施に使用されるとき、特にこのような光増感剤が本質的に有毒でないか、または光放射後に有毒な光産物を産生しないときには、除去または精製の工程は、汚染除去後に必要ではなく、処理された産物は、直接患者の体に戻すことができ、またはその治療的な効果を必要とする患者に投与することができる。
【００６１】
ミトコンドリアのエンハンサーであり、米国特許出願第09/420,652号に記載されているものなどの、内因性の構造に基づく非内因性の光増感剤は、本発明の実施に有用である。これらの非内因性のミトコンドリアのエンハンサーおよび内因性のものに基づいた誘導体ミトコンドリアのエンハンサーは、本明細書において、内因性のものに基づいた誘導体ミトコンドリアのエンハンサーという。これは、以下の式の分子を含む：
【化３】
2005524714.tif 000004
式中、R1、R2、R3、R4、R5、およびR6は、お互いに独立して、水素、任意に置換されたヒドロカルビル、アルコール、アミン、ポリアミン、サルフェート、ホスフェート、塩素、臭素、およびヨウ素からなる群より選択されるハロゲン、前述のものの塩;並びに-NRa-(CRbRC) n-Xであって、Xは、塩素臭素、およびヨウ素からなる群より選択されるハロゲンであり、Ra、Rb、およびRcは、互いに独立して、水素、任意に置換されたヒドロカルビル、並びに塩素、臭素、およびヨウ素からなる群より選択されるハロゲンからなる群より選択され、かつnは、0〜20の整数であるもの;からなる群より選択され、ただし、R1は、-OHまたは直鎖アルキル基であって、該鎖の第二炭素が-OH または=Oで置換された直鎖アルキル基ではなく、かつR1、R4、R5は、R2、R3、およびR6が水素であるときに、全てメチル基ではないことを条件とする。
【００６２】
化合物のもう一つの群において、nは、0〜10の整数である。化合物のもう一つの群において、nは、0〜20の整数である。
【００６３】
化合物のもう一つの群において、鎖の第二炭素が-OHまたは=Oで置換され手イル場合は、R1は、-OHまたは直鎖アルキル基であり;および、R2、R3、およびR6がHであり、かつR4およびR5がCH3であるときは、R1は、2-、3-,4-、または5-炭素直鎖アルキルであって、-OH、-COH、または-Hで終わるものではなく;R2、R3、およびR6がHであり、かつR4およびR5がCH3であるときは、R1は、CH2CH2-（CHOH）2-CH3または-CH2CH2-(CHOH)2-CH2SO4または1'-D-ソルビチルまたは1'-D-ダルシチルまたは1'-D-ラムニチル(rhamnityl）または1'-D,L-グリセリルまたは-CH2-0-C(O)-CH3または-CH2-O-C（O）-CH2CH3または2',3',4',5'-ジO-イソプロピリデン-リボフラビンまたは8-アミノオクチルではなく;R4およびR5が両方とも塩素であるるとき、並びにR2、R3、およびR6が全ての水素であるときは、R1は、1'-D-ソルビチルまたは1'-D-ダルシチル（dulcityl）ではなく;R1およびR4がメチルであり、かつR2、R3、およびR6が全ての水素であるときに、R5は、エチルまたはクロロではなく;R1がメチルであり、R2、R3、およびR6が全て水素であるときに、R4およびR5は、両方ともメトキシまたは両方ともテトラメチレンではなく;R1がメチルであり、R4およびR5がCH3であり、かつR3およびR6がHであるときに、R2は、-CH2CH2NHではなく;R1、R4、およびR5がCH3であり、かつR3およびR6がHであるときに、
R2は、
【化４】
2005524714.tif 000005
ではなく;R4がメトキシであり、かつR1がエチル-2'.N-ピロリジノであり、R2、R3、およびR6が水素であるときに、R5は、クロロではなく;R5がクロロまたはメチルであり、かつR2、R3、R4、およびR6が水素であるときに、RIは、N,N-ジメチルアミノプロピルまたはN,N-ジエチルアミノエチルではなく;R6が-NH2であり、かつR1、R2、R4、およびR5がHであるときに、R3は、-NH(CH2CH2) Clではなく; R2、R3、およびR6の全てが水素であるときに、R1、R4、R5は、全てメチル基ではなく;R3およびR6が水素であるときに、 R1、R4、R5、およびR2の全てがメチル基ではなく;R1、R4、およびR5がメチルであり、かつR3およびR6が水素であるときに、R2は、カルボキシメチルではなく;R1およびR5がメチルおよびR2であり、かつR3およびR6が全て水素であるときに、R4は、-NH2ではなく;R4およびR5がメチルであり、R2、R3、およびR6が全てHであるであるときに、R1はフェニル基ではなく;R2、R3、R4、R5、およびR6の全てが水素であるときに、R1は、メチルまたはN,N-ジメチルアミノエチルではなく;R1がアセトキシエチルであり、かつR3およびRが水素であるときに、R2、R4、R5は、全てメチルではなく;R1がN,N-ジエチルアミノエチルであり、かつR2、R3、R4、およびR6が全て水素であるときに、R5は、メチルではなく;R1がメチルであり、かつR2、R3およびR6が全て水素であるときに、R4およびR5は、両方とも塩素ではなく;R5がNH2であり、かつR2、R3、R4、およびR6が全て水素であるときに、R1は、エチル、3-クロロエチル、n-ブチル、アニリノ、ベンジル、フェニル、p-トリル、またはp-アニシルではなく;並びに、R1がN,N-ジメチルアミノプロピルであり、かつR2、R3、R5、およびR6が全て水素であるときに、R4は、塩素ではない。
【００６４】
上で特定したマーカッシュ群の置換基またｈメンバーの任意の組み合わせを含む化合物も、本発明の実施に有用である。本発明の実施に有用な全ての化合物は、ミトコンドリアの機能を増強する能力を有する。本発明の化合物の全ての置換基は、同じものであってもよく、全ての置換基は、異なっていてもよく、または任意の置換基の組み合わせは、同じもまたは異なっていてもよい。指定された機能を有する置換基、たとえば水溶性を化合物に与えるものをR1〜26のいずれかに含んでいてもよい。
【００６５】
本発明の実施に有用な化合物は、イソアロキサジンバックボーンを有する全てのこれらの化合物（以下に示した）を含む：
【化５】
2005524714.tif 000006
式中、R1〜R6は、当業者に既知のものを除き、他に記載したとおりの種々の置換基で置換される。化合物において含まれ、本発明の方法に使用される置換基は、微生物中和剤の所望の微生物中和を実質的に妨げるであろう構造または反応性を有していない任意の置換基であってもよく、これは、当業者によって過度の実験なしに容易に決定されるであろう。前述のイソアロキサジン関連の光増感剤も、ミトコンドリア機能のエンハンサーとして機能する。
【００６６】
本発明は、生命の質を増強すること、および／または細胞内のミトコンドリアに対するダメージを防止することによって液体中の生命の質を改善するために、細胞を含む液体を処理するための方法を提供する。ミトコンドリアの機能を増強し、および／またはミトコンドリアに対するダメージを防止するために、液体を処理するために有用な組成物は、ミトコンドリアのエンハンサーを含む。本発明によって提供されるミトコンドリアのエンハンサーは、内因性のアロキサジン類、非内因性のアロキサジン類、および内因的のものに基づいた誘導体アロキサジン類などのアロキサジン類、並びに内因性の光増感剤、非内因性の光増感剤、および内因のものに基づいた誘導体光増感剤などの光増感剤を含む。アロキサジンバックボーンを有する分子は、アロキサジン類である。本発明によって提供される方法は、ミトコンドリアのエンハンサーの実質的に無毒の量を液体に添加することを含み、これにより液体中の細胞内のミトコンドリアの機能が増強される。ミトコンドリアは、これらがダメージを受けるのを防止されるときに、これらが若返るときに、および／またはミトコンドリアを含む細胞の生細胞の質が改善されるときに増強される。液体内に存在するであろう病原体を減らすために貯蔵し、または光放射することなど、液体中の細胞内のミトコンドリアにダメージを与える液体に対して方法の工程を行うときは、ミトコンドリアのエンハンサーは、細胞内のミトコンドリアに対するダメージを防止するか、または若返らせる。ミトコンドリアのエンハンサーは、ダメージを与える方法の工程の前に、間に、または後に添加されてもよい。本発明の方法は、リンパ性の個体群の減少プロセスの前に、間に、または後における、非リンパ球性の血液成分に対するダメージを妨げるため、および／または若返らせるための、ミトコンドリアのエンハンサーの使用を含む。
【００６７】
ミトコンドリアを含む細胞を含む任意の液体を本発明の方法によって処理することができる。ミトコンドリアのエンハンサーは、ミトコンドリアに対するダメージを防止するため、および／または若返らせるために有効であり、かつミトコンドリアに対して非毒性でもある量で、ミトコンドリアを含む細胞に対して、および処理される液体のレシピエントに対して使用される。本発明の方法によって処理できる液体は、血液、細胞の血液産物または細胞性の血液成分を含む液体および体液を含む。本発明の方法によって処理できる細胞性の血液成分は、血小板、血液、および血小板またはその他の細胞性の血液成分を含む血漿を含む。本発明の方法によって処理される液体が、ヒトまたは動物によって消費されるときは、ミトコンドリアのエンハンサーは、また、ヒトまたは動物に対して非中毒性でなければならないか、または消費の前に液体から除去される。また、本発明は、ミトコンドリアを有する細胞を処理するために、ミトコンドリアのエンハンサーを使用するための方法を提供する。本発明の方法によって処理できる細胞は、ミトコンドリアを含むことが当該技術分野において既知の細胞を含み、植物細胞、動物細胞、および酵母細胞を含む。また、本発明は、創傷表面を処理するために、ミトコンドリアのエンハンサーを使用するための方法を提供する。創傷表面またはその近くの細胞は、白血球細胞、赤血球、線維芽細胞、表皮細胞、および内皮細胞を含むことができる。創傷表面の細胞は、外胚葉、中胚葉、および内肺葉起源の細胞を含むことができる。ミトコンドリアのエンハンサーで創傷表面のミトコンドリアを含む細胞を処理することにより、細胞の健康、感染の防止、および回復速度が改善される。
【００６８】
ミトコンドリアを含む細胞と接触しているであろうどのような液体（たとえば、腹膜液および唾液）も、本発明の方法によって処理できる。腹膜液は、哺乳類の体の胃腸の器官を収納する腹膜空間内にある液体である。腹膜液は、細胞を含み得るし、本発明の方法によって処理することができる。さらに、腹膜液は、体から除去して、ミトコンドリアのエンハンサーを添加して、および処理した液体を体に投与して戻すこともできる。あるいは、ミトコンドリアのエンハンサーは、腹膜液を除去せずに、体内の腹膜液に直接投与することができる。体内の腹膜液中のミトコンドリアのエンハンサーは、腹膜空間の液体および／または裏打ちの内の細胞のミトコンドリアの機能を増強する。唾液にミトコンドリアのエンハンサーを添加することにより、消化管細胞の裏打ちのミトコンドリアの機能を増強する。
【００６９】
血液または血液成分を個体から収集し、血液または血液成分を同じか、または別の個体に輸血するときは、収集および輸液のプロセス、収集と輸液の間の時間経過、および収集と輸液の間に血液および血液成分に対して行われるプロセスは、血液または血液成分の質を低下させるであろう。血液または血液成分の質の変化は、血液または血液成分の生命の質の変化としての検出可能であり、当該技術分野において既知の任意の方法によってアッセイすることができる。細胞性の血液成分の質（生命の質）の指標は、活性化、低浸透圧性のショック反応、乳酸産生の量および速度、グルコース消費の量および速度、pHおよびpH変化の割合、血小板回旋（swirl）、血小板凝集、酸素消費の量および速度、二酸化炭素産生の量および速度、体細胞数、および形状変化の程度（ESC）を含むが、これらに限定されない。
【００７０】
収集および輸液のプロセス、収集と輸液の間の時間経過、および収集と輸液の間に血液および血液成分に対して行われるプロセスでは、ミトコンドリアにダメージを与えること、または血液もしくは細胞性の血液成分内で生じるミトコンドリアのプロセスによって、血液または細胞性の血液成分の質を減少させるかもしれない。前述したように、ミトコンドリアまたはミトコンドリアのプロセスがダメージを受けるときは、細胞におけるエネルギー産生の代謝は、ミトコンドリア内で生じるクエン酸回路および電子伝達鎖プロセスを組み合わせて、任意に細胞質の解糖と組み合わせて、酸化的リン酸化よりも嫌気的解糖を好むようにスイッチが変わる。その結果、血液または血液製剤を含む液体によって消費される酸素は、より少なくなり、乳酸産生が増大される（乳酸は、解糖生成物である）、生じる乳酸の増加によって液体のpHの減少が生じる。したがって、ミトコンドリアの健康の指標でもある細胞の質の指標には、酸素消費の量および速度、乳酸産生の量および速度、pHおよびpH変化の割合を含む。活性化、低浸透圧性のショック反応、グルコース消費の量および速度、血小板回旋、血小板凝集、二酸化炭素産生の量および速度、体細胞数、およびESCを含む(しかし、これらに限定されない）細胞の質のその他の指標は、また、ミトコンドリアの健康状態についての情報も提供する。
【００７１】
血液または細胞性の血液成分の質を減少させることができるプロセスは、収集と輸液の間の時間経過および病原体を減少するための光放射を含むが、これらに限定されない。
【００７２】
収集と輸液または収集された血液または血液製剤のその他の使用の間の時間経過は、数分〜数時間、〜数日の短いものか、または数週間もの長い間のものであってもよい。上記の通り、「開放」（すなわち、非無菌）系で収集した全血成分は、政府規則下では、24時間以内、そしてほとんどの場合6〜8時間以内に輸血されなければならない。全血成分が「閉鎖」（すなわち、無菌)系で収集されるときは、赤血球は42日（抗凝固薬のタイプおよび使用される記憶媒体によって）まで貯蔵することができ、および血漿は、より長い期間さえ凍結および貯蔵してもよい。現在、血小板濃縮物は、5日間までのみ室温で貯蔵してもよい。
【００７３】
本発明は、細胞性の血液成分を含む液体を、前記血液成分の生命の質を改善するために処理するための方法であって、前記方法は、前記液体にミトコンドリアのエンハンサーの有効な、実質的に無毒の量を添加することを含み、前記ミトコンドリアのエンハンサーは、アロキサジン類、内因性のアロキサジン類、非内因性のアロキサジン類、内因的のものに基づいた誘導体アロキサジン類、内因性の光増感剤、および非内因性の光増感剤からなる群より選択される方法を提供する。本発明の一つの態様において、液体は、ミトコンドリアのエンハンサーの添加の前に、後に、または間に、周囲光よりも多量の光放射に曝露されない。血液を含む液体または細胞性の血液成分にミトコンドリアのエンハンサーを添加することにより、血液または細胞性の血液成分の質を改善し、これにより血液または細胞性の血液成分の貯蔵寿命を増大することができ、血液または細胞性の血液成分を、これを患者に投与する前に、より長時間の量の間貯蔵するとができる。FDAは、工業のためのガイダンス：ヒト血液および血液成分の使用のための情報の承認可能な回覧（An Acceptable Circular of Information for the Use of Human Blood and Blood Components）（http://www. fda. gov／cber／gdlns／circbld. pdf）を提供しており、当該技術分野に既知の血液および血液成分の貯蔵時間を認めた。血小板を含む本発明の一つの態様において、ミトコンドリアのエンハンサーで処理した血小板の生細胞の質は、処理された血小板が7日の貯蔵後に患者に投与することができるように改善される。
【００７４】
ミトコンドリアのエンハンサーは、貯蔵の前に、後に、および／または間に液体に添加されてもよい。本発明の実施において、液体が、生成または穫得の直後にその企図された目的のために利用される場合、貯蔵されなかったものとみなされる。生成または穫得の間に、処理時間を含む時間が経過する場合、これは貯蔵時間である。本発明の一つの態様において、ミトコンドリアのエンハンサーは、貯蔵の初めに添加する。貯蔵の開始は、総貯蔵時間の最初の約10%である。もう１つの態様において、ミトコンドリアのエンハンサーは、貯蔵の中間の間に添加する。貯蔵の中間は、総貯蔵時間の真ん中の約80%である。もう１つの態様において、ミトコンドリアのエンハンサーは、貯蔵の最後の方で添加する。貯蔵の最後は、総貯蔵時間の最後の10%である。本発明のある態様において、血液または細胞性の血液成分を含む液体は、ミトコンドリアのエンハンサーを添加する前の、約1分〜約45日の間の時間の量の間貯蔵された。本発明のある態様において、血液または細胞性の血液成分を含む液体は、ミトコンドリアのエンハンサーを添加する前に、約1時間〜約7日の間の時間の量の間貯蔵された。本発明のある態様において、液体は、ミトコンドリアのエンハンサーを液体に添加する前に6日間貯蔵された血小板を含む。本発明のある態様において、血液または細胞性の血液成分を含む液体は、ミトコンドリアのエンハンサーを添加した後に、約1時間〜約5日間の時間の量の間貯蔵される。本発明のもう一つの態様において、血液または細胞性の血液成分を含む液体は、ミトコンドリアのエンハンサーを添加した後に、約1分〜約45日間の時間の量の間貯蔵され、およびミトコンドリアのエンハンサーが添加された液体は、その後に約1分〜約45日間の時間の量の間貯蔵される。本発明のもう一つの態様において、血小板を含む液体は、ミトコンドリアのエンハンサーを添加する前に、約3年まで時間の量の間貯蔵される。本発明のさらにもう一つの態様において、細胞性の血液成分を含む液体は、ミトコンドリアのエンハンサーを添加する前に、まで時間の量の間貯蔵される。
【００７５】
さらなる方法の工程を、本発明の実施の際に液体に対して行ってもよい。本発明の一つの態様において、本方法は、また、周囲光よりも大きいエネルギーの光放射に液体を曝露することを含む。1つの態様において、本方法は、また、液体に対して病原体を減少するプロセスを行うことを含む。本発明の一つの態様において、病原体の減少プロセスは、液体に存在するであろう病原体を実質的に減少するために、十分なエネルギーの光放射に液体を曝露することを含む。1つの態様において、病原体の減少プロセスは、液体にミトコンドリアのエンハンサーを添加して行われる。もう１つの態様において、ミトコンドリアのエンハンサーは、病原体の減少プロセスの間に添加する。もう一つの態様において、病原体の減少プロセスは、ミトコンドリアのエンハンサーを添加した後に行われる。1つの態様において、ミトコンドリアのエンハンサーは、病原体の減少プロセスの間に添加され、ミトコンドリアのエンハンサーを添加する前に、間に、および後に病原体の減少プロセスが行われることとなる。当該技術分野において既知のとおり、光増感剤を利用する病原体の減少プロセスは、典型的には光放射も利用する。本発明の一つの態様において、本方法は、また、液体に光増感剤を添加することを含む。ミトコンドリアのエンハンサーは、また、光増感剤およびその逆であってもよい。本発明の一つの態様において、光増感剤は、利用されるミトコンドリアのエンハンサーと同じである。1つの態様において、液体に光増感剤を添加する工程は、液体にミトコンドリアのエンハンサーを添加することによって行われる。本発明の方法によって実質的に減少される病原体は、細胞外および細胞内ウイルス、細菌、バクテリオファージ、真菌、血液を伝染する寄生生物、および原生動物、並びに前述のいずれか二つ以上の混合物を含む。
【００７６】
液体に対して光放射を利用する病原体の減少プロセスを行うときは、光放射の量は、液体内の所望の生物活性を破壊することなく、実質的に病原体を減少するように選択される。好ましくは、光放射の量は、液体内の所望の生物活性のダメージまたは減少を最小にするように選択される。本発明のある態様において、可視光放射は、約419nMのものである。本発明のある態様において、紫外線放射は、約320nMのものである。本発明は、液体にミトコンドリアのエンハンサーを添加するための方法であって、ミトコンドリアのエンハンサーの添加は、液体に対して行われる病原体の減少プロセスにおける光放射工程によって引き起こされるダメージから液体成分を保護または若返らせて、より多くの光放射エネルギーの使用を可能にし、より優れた病原体の減少を可能にするする方法を提供する。本発明のある態様において、ミトコンドリアのエンハンサーは、病原体の減少プロセスの前に、血小板を含む液体に添加して、約5J／cm2〜約360J／cm2の紫外線光放射を利用して、液体に対して行われる。本発明のもう一つの態様において、病原体の減少プロセスは、5J／cm2以上、約30J／cm2以上、約50J／cm2以上、約80J／cm2以上、約100J／cm2以上、約120J／cm2以上、120J／cm2以上、約180J／cm2以上、180J／cm2以上、200J／cm2以上、約5J／cm2〜約360J／cm2の間、約25J／cm2〜約180J／cm2の間、約75J／cm2〜約120J／cm2の間、または約120J／cm2〜約180J／cm2の間の紫外線を利用する。
【００７７】
本発明の一つの態様において、1つよりも多いミトコンドリアのエンハンサーが添加される。1つの態様において、ミトコンドリアのエンハンサーは、二回以上添加される。
【００７８】
本発明の一つの態様において、ミトコンドリアのエンハンサーは、リボフラビン（別名7,8-ジメチル-10-リビチルイソアロキサジン）である。1つの態様において、リボフラビンは、約1マイクロモル〜約200マイクロモルの終濃度の液体に添加される。1つの態様において、約10マイクロモルを添加する。もう１つの態様において、約50マイクロモルを添加する。リボフラビンは、光増感剤およびミトコンドリアのエンハンサーであることができる。1つの態様において、リボフラビンは、約5マイクロモル〜約100マイクロモルの間の量で添加される。
【００７９】
本発明の実施において、処理される液体、たとえば血液または細胞性の血液成分を含む液体の少なくとも１つの生命の質は、ミトコンドリアのエンハンサーを液体に添加した後に改善される。当該技術分野において既知の細胞質の任意の指標を測定されてもよい。細胞代謝の間に、細胞はグルコースを消費し、2つの乳酸分子を作製し、これがpHを低下させる。米国において、周囲の液体のpHについての具体的な下限は、22℃で測定すると約6.2である。グルコースの固定量は、保管の際に細胞に与えられる。細胞があまりに急速にグルコースを使い果たした場合には、これらは死滅する。グルコースの消費量が遅いほどよく、ラクトース産生がより少なく、6.2以上のpHに維持される。細胞の質の指標のグルコース消費、ラクトース産生、およびpHは、割合で、並びに絶対変化として測定される。血小板およびその他の細胞性の血液成分が、貯蔵後にこれらの機能的な能力を保持していたかどうか決定するために測定することができる3つの活性パラメーターは、体細胞数、低浸透圧性のストレス応答、およびアデノシン二リン酸（ADC）と組み合わせてコラーゲンによって誘導される凝集である。本発明のある態様において、本発明の実施において測定される細胞の質の指標は、活性化、低浸透圧性のショック反応、乳酸産生の量および速度、グルコース消費の量および速度、pH、pH変化の割合、血小板回旋、血小板凝集、酸素消費の量および速度、二酸化炭素産生の量および速度、体細胞数、および／またはESCを含む。細胞の質の指標は、典型的には周期的に測定され、たとえば、血小板の細胞の質は、典型的にはミトコンドリアのエンハンサーを添加した後に各時間または1、3、5、および／または7日に測定される。細胞の質の指標を測定するための当該技術分野において既知の全ての方法は、本発明の実施に有用である。酸素濃度、二酸化炭素濃度、およびpHは、血液ガス成分計を使用して測定してもよい。
【００８０】
P-セレクチン、別名GMP-140により、活性化を測定する。細胞が活性化されるときに、p-セレクチンは、発現されて、細胞の表面上に現れる。血小板細胞は、これらが輸液目的のために正常に機能するように長期間貯蔵のため取り出されるときは、活性化する能力を保持していなければならない。細胞は、インビボで活性化される必要があり、そしてインビトロでの未熟な活性化が防止される必要がある。p-セレクチンが低レベルに保たれているときは、インビボにおいて血小板の回収および生存の改善があった（Transfusion 2002; 42: 847-854 and Transfusion 2002; 42: 1333-1339).患者の治療に使用される血液成分の特定の生命の質の値のための限界は、米国食品医薬品局（FDA）によるセットがある（ヒト血液および血液成分の使用のための情報の回覧（An Acceptable Circular of Information for the Use of Human Blood and Blood Components）またはhttp://www. fda. gov／cber／gdlns／circbld. pdfを参照されたい）。p-セレクチンの発現は、ミトコンドリアのエンハンサーを添加する前に、次いでミトコンドリアのエンハンサーを添加された後の1つまたは複数の時点で任意に測定される。選択された時点において、p-セレクチンを発現する細胞の割合を処理した試料および未処理の試料について測定する。p-セレクチンを発現している細胞の割合は、活性化された細胞のパーセント（パーセント活性化）である。ミトコンドリアのエンハンサーの添加による活性化の変化の量は、(（処理したもののパーセント活性化-未処理のもののパーセント活性化）／未処理のもののパーセント活性化））*100 =活性化パーセントの変化である。活性化のパーセント変化が負である場合：その時点におけるパーセントにおいて、活性化のパーセント変化の絶対値=活性化の減少の量である。本発明の実施において、細胞の活性化は、ミトコンドリアのエンハンサーが添加されなかった液体の細胞の活性化と比較すると減少される。好ましくは、活性化は、p-セレクチン発現の存在などの、α顆粒放出を検出することによって測定されるが、当該技術分野において既知の任意の方法を使用してもよい。活性化は、少なくとも約3%まで、少なくとも約10%まで、および少なくとも約15%まで減少することができる。本発明のある態様において、活性化は、約5%〜約50%の間の量まで減少することができる。
【００８１】
低浸透圧性のストレス応答（HSR）は、血小板が代謝的生存度を保持するかどうかを決定するために使用されるアッセイ法である。これは、約10回の回復期後に、細胞が浸透圧ショックに対して応答する能力を測定する。パーセントHSRは、約10分間で回復することができる細胞の割合を測定する。回復することができる細胞のパーセンテージは、逆のパーセントである。HSRについての具体的な下限は、約36%である。このアッセイ法は、低張液の添加を克服する血小板の能力の測光測定である。この活性は、細胞の機能（すなわち、機能的な膜の水ポンプを維持する能力）を反映し、貯蔵に続く血小板の回復の指標である。低浸透圧性のストレス応答は、輸液に続いて循環において生存する血小板の能力の重要な指標であることが証明された。結果的に、低浸透圧性のストレス応答は、貯蔵に続く血小板の生化学を評価するための重要なパラメーターを表す。ミトコンドリアのエンハンサーを添加する前に、次いでミトコンドリアのエンハンサーを添加された後の1つまたは複数の時点に任意に測定される。選択された時点において、HSRを発現する細胞の割合を処理した試料および未処理の試料について測定される。ミトコンドリアのエンハンサーの添加によるHSRの変化の量は、(（処理したもののHSR-未処理のもののHSR）／未処理のもののHSR））*100 =HSRの変化である。HSRのパーセント変化が負ではない場合：その時点におけるパーセントにおいて、HSRのパーセント変化は、HSRの増加の量である。本発明の実施において、低浸透圧性のショック反応（HSR）は、ミトコンドリアのエンハンサーが添加されなかった液体の低浸透圧性のショック反応と比較すると増大される。HSRは、少なくとも約5%まで、少なくとも約20%まで、および少なくとも約50%まで増大させることができる。本発明の態様において、HSRは、ミトコンドリアのエンハンサーを添加された後に、5日目に測定すると、約5%〜約25%の間の量まで増大させることができる。
【００８２】
血小板回旋は、細胞の質の主観的な、定性的な指標である。血液バッグを絞り出したときに、健康な細胞は回旋し、光を反映させて、細胞を通すことによって観察することができるパターンを引き起こす。血小板回旋は、ゼロ〜3または4のスケールで記録され、3または4が最も好ましいものである。回旋する細胞の量および回旋の強度には、考慮される2つの特徴がある。血小板回旋は、ミトコンドリアのエンハンサーを添加する前に、次いでミトコンドリアのエンハンサーが添加された後の1つまたは複数の時点で任意に測定される。選択された時間点で、血小板回旋は、試料および未処理の試料について測定される。ミトコンドリアのエンハンサーの添加による血小板回旋の変化の量は、(（処理したものの血小板回旋-未処理のものの血小板回旋）／未処理のものの血小板回旋））*100=血小板回旋のパーセント変化である。血小板回旋のパーセント変化が負ではない場合：その時点におけるパーセントにおいて、血小板回旋の増加の量は、血小板回旋のパーセント変化である。本発明の実施において、血小板回旋は、ミトコンドリアのエンハンサーが添加されなかった液体の血小板回旋と比較すると増大される。血小板回旋は、少なくとも約5%まで、および少なくとも約20%まで増大させることができる。本発明の態様において、血小板回旋は、ミトコンドリアのエンハンサーを添加された後に、5日目に測定すると、約5%〜約1000%の間の量まで増大させることができる。
【００８３】
本発明の実施において、ミトコンドリアのエンハンサーが添加されなかった液体のpHおよびpH減少の割合と比較すると、液体のpHを増大し、pH減少の割合を減少することができる。また、pHが増大する場合、pH増加の増大される割合を測定することができる。pHは、ミトコンドリアのエンハンサーを添加する前に、次いでミトコンドリアのエンハンサーが添加された後の1つまたは複数の時点で任意に測定される。選択された時間点で、pHは、処理された試料および未処理の試料について測定される。pHユニットのpHの変化の量は、処理した試料のpH-未処置の試料のpHである。pHの割合の変化を算出するためには、pHは、2つ以上の選択された時点で測定され、少なくとも一方の時点は、ミトコンドリアのエンハンサーを添加した後に存在する。時間点2は、時間点1の後に測定される。pH変化の割合は、（時間2のpH-時点1のpH）／（時点2-時点1）=時間ユニット（例えば時間または日）あたりのpHユニットのpH変化の割合によって算出される。pH変化の割合が負である場合、pHは、時間とともに減少している。細胞性の血液成分を含む液体のpHは、光放射の後に減少させることができる。pH変化の割合は、試料および未処理の試料について算出される。pH変化の割合のパーセント変化は、(（処理したもののpH変化-未処理のもののpH変化）／未処理のもののpH変化））*100である。処理したもののpHの割合、未処理のものの変化の割合、およびpH変化の割合のパーセント変化が負である場合、pHの割合の変化は、ミトコンドリアのエンハンサーの添加によって減少する。pH減少の割合は、pH変化の割合のパーセント変化の絶対値である。pH減少の割合は、少なくとも約2%まで、少なくとも約20%まで、および少なくとも約40%まで減少することができる。本発明のある態様において、pH減少の割合は、約2%量〜約50%の間の量まで減少することができる。pHは、少なくとも約0.1ユニットまで、少なくとも約0.2まで、少なくとも約0.35まで、および少なくとも約0.5まで増大させることができる。本発明のある態様において、pHは、約0.1〜約0.75の間の量まで増大させることができる。本発明のある態様において、pH減少の割合は、5日目において約15%〜約50%の間の量まで減少することができる。本発明のある態様において、pHは、ミトコンドリアのエンハンサーが、アフェレーシス後に6日間貯蔵された血小板に添加されてから約24時間後に、約0.1〜約0.5pHユニットの間の量まで増大される。
【００８４】
本発明の実施において、処理される液体の細胞による乳酸産生の速度および産生される乳酸の量は、ミトコンドリアのエンハンサーが添加されなかった液体において産生される乳酸産生の速度および乳酸の量と比較すると減少する。液体中の乳酸の量は、当該技術分野において既知の任意の方法によって測定することができる。乳酸の量は、ミトコンドリアのエンハンサーを添加する前に、次いでミトコンドリアのエンハンサーが添加された後の1つまたは複数の時点で任意に測定される。乳酸の量は、液体中の乳酸の濃度として測定することができる。選択された時間点で、乳酸の量は、処理された試料および未処理の試料について測定される。乳酸産生のパーセント変化は、(（処理した試料の乳酸の量-未処理の試料の乳酸の量）／未処理の試料の乳酸の量））*100である。乳酸産生のパーセント変化が負である場合、ミトコンドリアのエンハンサーを添加することによる乳酸産生のパーセント減少は、乳酸産生のパーセント変化の絶対値である。乳酸産生の速度を算出するためには、乳酸の量は、2つ以上の選択された時点で測定され、少なくとも一方の時点は、ミトコンドリアのエンハンサーを添加した後に存在する。時間点2は、時間点1の後に測定される。乳酸産生の速度は、（時点2の乳酸の量-時点1の乳酸の量）／（時点2-時点1）=時間ユニット（例えば時間または日）あたりの乳酸を測定したユニットにおける乳酸産生の速度によって算出される。乳酸産生の変化率は、処理された試料および未処理の試料について算出される。乳酸産生の速度のパーセント変化は、（（処理したものの乳酸産生の変化率-未処理のものの乳酸産生の変化率）／未処理のものの乳酸産生の変化率）* 100である。処理したものの乳酸産生の速度および未処理のものの乳酸産生の速度が正である場合、乳酸産生の速度のパーセント変化は負であり、乳酸産生の速度は、ミトコンドリアのエンハンサーの添加により減少される。乳酸産生の速度の減少は、乳酸産生の速度のパーセント変化の絶対値である。乳酸酸性の速度（毎時マイクロモル）は、少なくとも約5%まで、少なくとも約50%まで、少なくとも約80%まで、および少なくとも約125%まで減少することができる。本発明のある態様において、乳酸産生の速度は、約25%〜約100%の間の量まで減少することができる。本発明のある態様において、産生される乳酸の量は、約15%〜約100%の間の量まで減少することができる。本発明のある態様において、産生される乳酸の量は、約75%まで減少することができる。本発明のある態様において、乳酸産生の速度は、ミトコンドリアのエンハンサーが血小板に添加された24時間後に、約75%〜約100%の間の量まで減少することができる。
【００８５】
本発明の実施において、細胞性の血液成分などの液体中の細胞によるグルコース消費速度および消費されるグルコースの量は、ミトコンドリアのエンハンサーが添加されなかった液体において消費されるグルコースのグルコース消費速度および量と比較すると減少する。ミトコンドリアのエンハンサーの添加は、細胞がエネルギーを作製するためによりよくミトコンドリアの生化学経路（クエン酸回路および電子伝達鎖）を利用することを可能にし、これは、細胞質の生化学経路（解糖）と比較して、グルコース分子あたりにより多くのエネルギーを作製するので、グルコース消費は、ミトコンドリアのエンハンサーを添加することによって減少する。さらに、血小板において、エネルギーを産生するためのミトコンドリアの生化学経路では、グルコースを必要としない。グルコース消費は、選択された時間点で液体に残っているグルコースの量を測定して測定することができる。グルコース消費の減少は、液体に残っているグルコースの量の増加として測定することができる。液体に残っているグルコースの量は、当該技術分野において既知の任意の方法によって測定することができる。残っているグルコースの量は、ミトコンドリアのエンハンサーを添加する前に、次いでミトコンドリアのエンハンサーが添加された後の1つまたは複数の時点で任意に測定される。グルコースの量は、液体中のグルコースの濃度（たとえば分子／体積または分子／細胞）として測定することができる。選択された時間点で、グルコースの量は、処理された試料および未処理の試料について測定される。グルコース消費のパーセント変化は、(（処理した試料のグルコースの量-未処理の試料のグルコースの量）／未処理の試料のグルコースの量））*100である。この計算によって、液体に残っているグルコースのパーセント変化は、ミトコンドリアのエンハンサーを添加することによるグルコース消費のパーセント変化である。グルコース消費速度を算出するために、液体に残っているグルコースの量は、2つ以上の選択された時点で測定され、少なくとも一方の時点は、ミトコンドリアのエンハンサーを添加した後に存在する。時点2は、時点1の後に測定される。グルコース消費の速度は、（時点2のグルコースの量-時点1のグルコースの量）／（時点2-時点1）=時間ユニット（例えば時間または日）あたりのグルコースを測定したユニットにおけるグルコース産生の速度によって算出される。残っているグルコースの量を使用して算出されるグルコース消費速度（図8）は、負であり得る。グルコース消費速度の変化は、処理された試料および未処理の試料について算出される。グルコース消費速度のパーセント変化は、（（処理したもののグルコース消費速度-未処理のもののグルコース消費速度）／未処理のもののグルコース消費速度）* 100である。処理したもののグルコース消費速度および未処理のもののグルコース消費速度が負であり、グルコース消費速度のパーセント変化が正である場合、ミトコンドリアのエンハンサーを添加することによってグルコースの消費速度が減少する。グルコース消費速度の減少は、グルコース消費速度のパーセント変化である。グルコース消費速度が減少するときは、選択された時点においてより多くのグルコースが液体に残されている。グルコースの消費速度は、好ましくは少なくとも約5%まで、少なくとも約25%まで、少なくとも約75%、および少なくとも約100%まで減少することができる。本発明のある態様において、グルコース消費速度は、約25%〜約150%の間の量まで減少することができる。残っているグルコースの量によって測定される消費されたグルコースの量は、少なくとも約10%まで、少なくとも約25%まで、および少なくとも約80%まで減少される。本発明のある態様において、残っているグルコースの量によって測定される消費されるグルコースの量は、3日目において約10%〜約150%の間または約25%〜約100%の間の量まで減少される。
【００８６】
形状の変化の程度（ESC）は、細胞性の血液成分細胞が、アゴニストと接触したときに形状を変えることができる範囲である。健康な細胞は、形状を変化することができる。パーセントESCは、形状を変化することができる細胞のパーセントを測定する。ESCについて具体的な下限は、10%である。ESCは、ミトコンドリアのエンハンサーを添加する前に、次いでミトコンドリアのエンハンサーを添加された後の1つまたは複数の時点で任意に測定される。選択された時間点で、ESCは、処理された試料および未処理の試料について測定される。ミトコンドリアのエンハンサーの添加によるESCの変化の量は、(（処理したもののESC-未処理のもののESC）／未処理のもののESC）である）*100=ESCのパーセント変化によって算出される。ESCのパーセント変化が負でではない場合、その時点におけるパーセントにおいて、ESCのパーセント変化は、ESCの増加の量である。本発明の実施において、細胞形態の変化の程度（ESC）は、細胞性の血液成分が血小板を含むときに、ミトコンドリアのエンハンサーが添加されなかった血小板を含む液体のESCと比較すると増大される。本発明のある態様において、ESCは、約5%〜約125%の間の量まで増大させることができる。本発明のある態様において、ESCは、少なくとも約5%まで、少なくとも約25%まで、少なくとも約75%まで、および少なくとも約100%まで増大させることができる。本発明のある態様において、ESCは、5日目において、少なくとも約75%まで増大させることができる。
【００８７】
本発明の実施において、細胞性の血液成分の酸素消費の量および／または速度は、ミトコンドリアのエンハンサーが添加されなかった液体の細胞性の血液成分の酸素消費の量および／または速度と比較すると増大される。液体上の気体に存在する酸素の量は、当該技術分野において既知の任意の方法によって測定することができる。解糖は、酸素を必要としないが、クエン酸回路では必要とし、したがって、細胞がエネルギーを作製するためにミトコンドリアの生化学を利用しているときに（クエン酸回路）、より多くの酸素が消費され、従って細胞を含む液体上の気体には残るものは少ない。酸素の量は、ミトコンドリアのエンハンサーを添加する前に、次いでミトコンドリアのエンハンサーを添加された後の1つまたは複数の時点で任意に測定される。選択された時間点で、酸素の量は、処理された試料および未処理の試料について測定される。また、酸素消費のパーセント変化は、液体上の気体に残っている酸素のパーセント変化である。酸素消費のパーセント変化は、（（処理した試料中の酸素の量-未処理の試料中の酸素の量）／未処理の試料中の酸素の量）*100である。酸素消費のパーセント変化が負である場合、ミトコンドリアのエンハンサーを添加することによる酸素消費のパーセント増加は、酸素消費のパーセント変化の絶対値である。酸素消費の速度を算出するためには、酸素の量は、2つ以上の選択された時点で測定され、少なくとも一方の時点は、ミトコンドリアのエンハンサーを添加した後に存在する。時点2は、時点1の後に測定される。酸素消費の速度は、（時点2の酸素の量-時点1の酸素の量）／（時点2-時点1）=時間ユニット（例えば時間または日）あたりの酸素を測定したユニット（たとえば分圧）における酸素消費の速度によって算出される。酸素消費の変化率は、処理された試料および未処理の試料について算出される。酸素消費の速度のパーセント変化は、（（処理したものの酸素消費の変化率-未処理のものの酸素消費の変化率）／未処理のものの酸素消費の変化率）* 100である。処理したものの酸素消費の速度および未処理のものの酸素消費の速度が正であり、酸素消費の速度のパーセント変化が負である場合、酸素消費の速度は、ミトコンドリアのエンハンサーの添加により増大される。酸素消費の速度の増大は、酸素消費の速度のパーセント変化の絶対値である。本発明のある態様において、酸素消費は、約5%〜約125%の間の量まで増大させることができる。本発明のある態様において、酸素消費は、少なくとも約5%まで、少なくとも約15%まで、少なくとも約75%まで、少なくとも約100%まで、および少なくとも約175%まで増大させることができる。本発明のある態様において、酸素消費は、ミトコンドリアのエンハンサーが添加された24時間後において、少なくとも約50%増大させることができる。本発明のある態様において、酸素消費は、少なくとも約10%、または約10%〜約50%の間まで増大させることができる。
【００８８】
本発明の実施において、処理される液体上の気体中の細胞による二酸化炭素産生の速度および産生される二酸化炭素の量は、ミトコンドリアのエンハンサーが添加されなかった細胞を含む液体による二酸化炭素産生の速度および産生される二酸化炭素の量と比較すると、増大される。二酸化炭素は、エネルギーを産生するためのミトコンドリアの生化学経路（クエン酸回路）の間に産生される。液体上の気体中の二酸化炭素の量は、当該技術分野において既知の任意の方法によって測定することができる。二酸化炭素の量は、ミトコンドリアのエンハンサーを添加することによるグルコース消費のパーセント変化である。二酸化炭素の量は、液体中の二酸化炭素の濃度（たとえば分圧）として測定することができる。選択された時点で、二酸化炭素の量は、処理された試料および未処理の試料について測定される。二酸化炭素産生のパーセント変化は、未処理の試料と比較した、処理した試料上の気体中の二酸化炭素のパーセント変化である。二酸化炭素産生のパーセント変化は、（（処理した試料中の二酸化炭素の量-未処理の試料中の二酸化炭素の量）／未処理の試料中の二酸化炭素の量）*100である。二酸化炭素産生のパーセント変化が正である場合、これは、ミトコンドリアのエンハンサーを添加することによる二酸化炭素産生のパーセント増加である。二酸化炭素産生の速度を算出するために、二酸化炭素の量は、2つ以上の選択された時点で測定され、少なくとも一方の時点は、ミトコンドリアのエンハンサーを添加した後に存在する。時点2は、時点1の後に測定される。二酸化炭素産生の速度は、（時点2の二酸化炭素の量-時点1の二酸化炭素の量）／（時点2-時点1）=時間ユニット（例えば時間または日）あたりの二酸化炭素を測定したユニット（たとえば濃度）における二酸化炭素産生の速度によって算出される。二酸化炭素産生の変化率は、処理された試料および未処理の試料について算出される。二酸化炭素産生の速度のパーセント変化は、（（処理したものの二酸化炭素産生の変化率-未処理のものの二酸化炭素産生の変化率）／未処理のものの二酸化炭素産生の変化率）*100である。処理したものの二酸化炭素産生の速度および未処理のものの二酸化炭素産生の速度が正であり、かつ二酸化炭素産生の速度のパーセント変化が正である場合、二酸化炭素産生の速度はミトコンドリアのエンハンサーの添加により増大される。
【００８９】
凝集の可能性は、血小板が貯蔵の間にこれらの機能的完全性を維持していたかどうかを示すもう一つの生命の質である。この可能性は、凝集を誘導するためにADPおよびコラーゲンを用いて測定される。アゴニストは、受容体に結合し、特定の反応を開始する薬剤である。アゴニストで誘導された凝集において、凝集（aggregation）または凝集（clumping）は、アゴニストに対する反応である。アゴニストADPおよびコラーゲンは、血小板がこれらの凝集能力を保持しているかどうかを決定するために、凝集を誘導するために使用される。さらに、凝集反応試験を行うときに、アゴニストを添加せずにお互いに付着している血小板である自発的な凝集の存在を検出することができる。自発的な凝集の発生は、循環から血小板を除去することと相関していたことから、血小板が短い生残時間を有することを示す。凝集は、当該技術分野において既知の任意の方法によって測定することができる。凝集は、ミトコンドリアのエンハンサーを添加する前に、次いでミトコンドリアのエンハンサーを添加された後の1つまたは複数の時点に任意に測定される。選択された時間点で、凝集は、処理された試料および未処理の試料について測定される。ミトコンドリアのエンハンサーの添加による凝集の変化の量は、（処理したものの凝集-未処理のものの凝集）／未処理のものの凝集））*100=凝集のパーセント変化によって算出される。凝集のパーセント変化が負である場合、その時間点のパーセントにおいて、凝集のパーセント変化の絶対値は、凝集の減少の量である。
【００９０】
血液成分の許容される貯蔵寿命を決定する生細胞の質は、米国FDAによって決定されている（ヒト血液および血液成分の使用のための情報の回覧（Circular of Information for the Use of Human Blood and Blood Components）またはhttp://www. fda. gov／cber／gdlns／circbld. pdfを参照されたい）。血液成分の貯蔵寿命を増大させるためには、その血液成分の貯蔵寿命を制限する生細胞の質が改善されなければならない。さらなる生細胞の質も同様に改善することができる。本発明の実施において、10〜50マイクロモルのリボフラビンを血小板に添加するときは、細胞性の血液成分の活性化の生命の質は、少なくとも約3%減少することができ、および／または、HSRの生命の質は、少なくとも約5%まで増大させることができ、および／または血小板回旋の生命の質は、少なくとも約5%増大させることができ、および／または細胞性の血液成分を含む液体のpHの生命の質は、少なくとも約0.1pHユニットまで減少することができ、および／または乳酸産生の速度の生命の質は、少なくとも約5%減少することができ、および／またはグルコース消費の速度の生命の質は、少なくとも約5%減少することができ、および／または酸素消費の速度の生命の質は、少なくとも約5%減少することができ、および／または二酸化炭素産生の生命の質は、約5%減少することができる。本発明のある態様において、細胞性の血液成分は、血小板であり、これらは、たとえば5日よりも長期間、約5日〜約7日間貯蔵することができる。
【００９１】
収集された血小板は、本発明の方法を使用して処理する前に濃縮することができる。血小板は、血液収集すると共に、または以前に収集された全体の試料から、アフェレーシス装置を使用するなど当該技術分野において既知の任意の方法によって濃縮することができる。本発明のある態様において、血小板は、3000倍の重力(3000×G)で15分間遠心分離して、1時間安静にさせることによって、過濃縮（hyperconcentrated）して過濃縮された（hyperconcentrated）血小板（HCP）を形成する。本発明のある態様において、HCPを自己の血漿に再懸濁し、約5,000,000,000,000の血小板／ミリリットルにする。液体は、本質的に血小板の血漿または細胞培養培地溶液からなり、たとえば血小板および約5%〜約95%の間の血漿または培地を含むことができる。
【００９２】
本発明によって提供される方法は、任意に光放射すること、光活性化剤（photoactivator）を添加すること、一酸化窒素を添加すること、失活剤を添加すること、解糖阻害剤を添加すること、酸素を添加すること、および／または治療されている液体にプロセス・エンハンサーを添加することをさらに含む。
【００９３】
光放射を使用する病原体の減少には、除染される材料と光増感剤を混合することが必要である。混合は、単に除染される液体に光増感剤を含む光増感剤または溶液を添加することによってなされてもよい。一つの系において、光増感剤が添加された除染される材料は、光放射供与源を通って流されて、材料が流れることにより、除染される液体の全体にわたって光増感剤を分布させるために十分な乱れを提供する。もう一つの系において、液体および光増感剤は、光透過性の容器に配置されてバッチ様式で照射を受け、好ましくは、一方で容器を撹拌しながら、完全に光増感剤を分布させて、全ての液体を照射に曝露させる。
【００９４】
液体と共に混合される光増感剤の量は、その中の微生物を十分に減少させるために十分な量であるが、中毒性（ヒトまたはその他の哺乳類に対して）または不溶性の量よりも少ない。所望の光増感剤の最適な濃度は、過度の実験を伴わずに当業者によって容易に決定されるであろう。
【００９５】
光増感剤を含む液体を、上記の通りに光増感剤を活性化するために十分なエネルギーの光放射の量であるが、生物学的な成分に非特異的なダメージを引き起こすか、または実質的に液体に存在するその他のタンパク質の生物活性を妨げるであろうよりも少ない量を使用して、光増感剤を活性化するために適切な波長の光放射に曝露させる。使用される波長は、選択される光増感剤に依存し、これは当該技術分野において既知であるか、または、本明細書の教示にしたがって過度の実験なしで容易に決定できる。光エネルギーに対して照射した後、病原体が減少された細胞性の血液成分は、病原体減少溶液中に保持してもよく、または貯蔵溶液に移してもよい。
【００９６】
病原体を減少させるための光放射は、当該技術分野において既知の方法によって、または本明細書に含まれる参照に記載されている方法によって行われる。エネルギーの量は、光放射を使用して液体に供給される。好ましくは、供給されるエネルギーの量は、液体に存在するであろう病原体を減少するために十分であるが、また液体に含まれる血液成分（類）の生物活性を実質的に妨げない。液体中の血液成分（類）の生物活性は、特定の血液成分について標準的な貯蔵時間、たとえば血小板について5日または好ましくは7日間、少なくとも医学的および獣医学的な使用のための最低限の標準的な性質を満たす。本発明の病原体の減少方法は、ユニット時間（最小値）につき、ユニット領域(cm2)あたりのジュール（J）の単位のフラックス（エネルギー）を使用して記述される。光放射の時間の長さは、処理される液体中の病原体を実質的に減少させるように選択したエネルギーの総量のデリバリーを達成するように選択される。必要とされるエネルギーを提供するために有用ないくつかのランプは、メルクロン・バラスト（mercron ballast）を有するVHO光、氷冠バラスト（icecap ballast）を有するT8光、または氷冠バラストおよび石英減衰器を有するT8光である。光放射は、連続的に、または分離された（断続性の）様式でデリバリーすることができる。適切な光放射は、望ましくは紫外範囲または可視域の範囲内である。約300nm〜約700nmまたは約340nm〜約650nmの間の照射の光を提供することができる光放射光源を選択されることができる。液体にデリバリーされるエネルギーは、光増感剤を活性化するために十分な量、たとえば5J／cm2〜約360J／cm2の間である。本発明のある態様において、光放射の総時間は、実質的に病原体を減少させるために十分であり、たとえば約3〜約30分の間である。「実質的に病原体を不活性化する」は、これらが再生する能力を、好ましくはこれらを殺すことによって、血液成分が安全に患者に投与されるような血液成分中のレベルに減少させることを意味する。320nmの紫外波長は、本発明の実施に有用である。
【００９７】
本発明は、改善された病原体の減少のための方法を提供する。光放射を使用する病原体の減少プロセスは、ミトコンドリアのエンハンサーの添加によって改善される。ミトコンドリアを含む血液製剤を含む液体にミトコンドリアのエンハンサーを添加することにより、光放射による血液製剤に対するダメージを防止し、これにより病原体の減少により有効な、高い光放射エネルギーの使用が可能となる。血液製剤に対するダメージの予防は、光放射の前に、後に、または間に、ミトコンドリアのエンハンサーを添加していない同等のエネルギーで処理した液体と比較して、ミトコンドリアのエンハンサーで処理した液体中の生細胞の質に改善があることよって示される。本発明の実施に有用な高エネルギーは、約30J／cm2以上、約50J/cm2以上、約80J／cm2以上、約100J／cm2以上、約120J以上／cm2、120J／cm2以上、約180J／cm2以上、180J／cm2以上、5J／cm2〜約360J／cm2の間、約25J/cm2〜約180J／cm2の間、約75J/cm2〜約120J/cm2間、および約120J／cm2〜約180J／cm2の間、紫外線光放射を含む。本発明は、細胞性の血液成分を含む液体を、その中に存在するであろう病原体を減少させるために処理するための方法であって：
(a) 光増感剤の、減少に有効な、実質的に無毒の量を前記液体に添加する工程と;
(b) 前記光増感剤とは異なるミトコンドリアのエンハンサーの有効な、実質的に無毒の量を前記液体に添加する工程と;
(c) 前記光増感剤を活性化するために十分なエネルギーの光放射に、前記病原体を実質的に減少するために十分な時間、前記液体を曝露する工程とを含む方法を提供する。
【００９８】
本発明の実施において、光放射は、好ましくは約25J/cm2を超え、光放射が実質的に細胞性の血液成分に対して非毒性であるエネルギーで適用される。光放射エネルギーおよびミトコンドリアのエンハンサーの量は、光放射の直後の病原体減少の程度および生細胞の質と、光放射の約24時間後が、低エネルギーでのミトコンドリアのエンハンサーのない同等のプロセスよりもほぼ同じかまたは優れているように選択される。低エネルギーの例は、約5〜約15J／cm2である。本発明の実施において、光放射は、好ましくは約25J／cm2以上または約40J／cm2以上でデリバリーされる。本発明の実施において、光放射は、約25J／cm2〜約120J／cm2の間、約25J/cm2〜約180J/cm2間、または約25J/cm2〜約360J／cm2の間のエネルギーでデリバリーされる。
【００９９】
液体は、光放射の前か、または間に任意に混合されてもよい。混合することにより、成分の溶解を増強させてもよい。光放射の前か、または間に、液体を約70cpm〜約150cpmの間または約120cpm〜約135cpm間の速度で混合および／または振盪することによって混合してもよい。光放射の前に行われるときは、混合は、約1〜約10分間行うことができる。混合および振盪は、当該技術分野において既知の任意の動作で行ってもよく、往復式の動作を使用する混合および振盪を含む。1つまたは複数の光の供与源を混合の動作と協調した方法で移動させてもよい。混合により、容器内に含まれる大部分の光増感剤および液体を、光-流体の界面において曝露された液体を、光にまだ曝露されていないバッグのその他の一部からの液体と絶えず置換することによって、別々の放射線源のそれぞれから放射される光に曝露させることができる。このような混合により、光に曝露させる新たな液体が絶えず表面に運ばれる。光放射は、病原体を減少させることができ、細胞性の血液成分の生物活性を妨げない温度で行うることができる。細胞性の血液成分を含む光放射された液体は、血液製剤を貯蔵するための当該技術分野において既知の温度で貯蔵することができる。
【０１００】
周囲光よりも大きい光放射を含む本発明の方法によって処理してもよい材料は、病原体の減少を達成するために十分な光を提供するために、光放射に対して適切に透過するか、またはこのような光放射に対する透過性を有する液体に懸濁もしくは溶解することができる任意の材料を含む。細胞性の血液成分を含む血漿および細胞培養培地は、光放射に対して透過性である。
【０１０１】
本発明の汚染除去方法は、微生物以外の液体成分中の生物活性を破壊しない。本方法を最適化したときに、これらの成分の生物学的活性が保持できるほどに、生物活性の一部の減少、たとえばタンパク質成分の変性を液体の有効な汚染除去に対して釣り合わせなければならない。
【０１０２】
全血、細胞の血液製剤および体液を含む細胞を含む液体を処理することに加えて、本方法は、果実および植物の液汁などのヒトまたは動物の栄養のための手段である液体を含むその他の細胞含有液体を処理するために有用である。
【実施例】
【０１０３】
実施例1  リボフラビンによる血小板の処理  
血小板は、COBE（登録商標）Spectraアフェレーシス装置（Gambro BCT, Lakewood, CO, USAによって製造される)を使用する標準的な収集方法を使用して収集した。新しい血小板は、アフェレーシスを経て収集した後で24時間未満しか経っていなかった。輸液品質の血小板を収集するために有用なその他のアフェレーシス装置も、本発明の実施に有用である。収集された血小板は、0または10μMリボフラビンいずれかと共に0.9%の塩化ナトリウムを含む溶液に希釈した。試料は、激しく混合することによって空気で飽和させた。血小板は、周囲光より大きい光放射に曝露しなかった。結果は、表1に示してある。
【表１】
2005524714.tif 000007
細胞の質の指標は、リボフラビンの添加によって改善されたか、または影響を受けなかった。
【０１０４】
実施例2  リボフラビンおよび可視光による血小板の処理  
血小板は、COBE（登録商標）Spectraアフェレーシス装置（Gambro BCT, Lakewood, CO, USAによって製造される)およびTRIMA(登録商標)アフェレーシスシステム（Gambro BCT, Lakewood, CO, USAから入手可能である)を使用する標準的な収集方法を使用して収集した。新しい血小板は、アフェレーシスを経て収集した後で24時間未満しか経っていなかった。輸液品質の血小板を収集するために有用なその他のアフェレーシス装置も、本発明の実施に有用である。収集された血小板は、0または10μMリボフラビンのいずれかと共に0.9%の塩化ナトリウムを含む溶液に希釈した。試料は、激しく混合することによって空気で飽和させた。試料には、時間を変化させて15.5mW／cm2で1つの電球を使用するDymax光源で照射を受けさせた。光のUV成分をポリカーボネート・フィルタを使用してフィルターで除いた。露出時間は、31分であった。結果は、表2に示してある。
【表２】
2005524714.tif 000008
【０１０５】
細胞の質の指標は、リボフラビンの添加によって改善されたか、または影響を受けなかった。
【０１０６】
実施例3  リボフラビンおよび紫外線および可視光による血小板の処理  
血小板は、COBE（登録商標）Spectraアフェレーシス装置（Gambro BCT, Lakewood, CO, USAによって製造される)を使用する標準的な収集方法を使用して収集した。新しい血小板は、アフェレーシスを経て収集した後で24時間未満しか経っていなかった。輸液品質の血小板を収集するために有用なその他のアフェレーシス装置も、本発明の実施に有用である。収集された血小板は、0または10μMリボフラビンいずれかと共に0.9%の塩化ナトリウムを含む溶液に希釈した。試料は、激しく混合することによって空気で飽和させた。試料には、時間を変化させて15.5mW／cm2で1つの電球を使用するDymax光源で照射を受けさせた。結果は、表3および4に示してある。
【表３】
2005524714.tif 000009
【０１０７】
リボフラビを添加したときに、乳酸産生の速度は、約82%まで減少し、グルコース消費の速度は、約66%まで減少し、および酸素消費速度は、約175%に増大された。その他の細胞の質の指標も同様に改善された。紫外線および可視光の両者を組み合わせたエネルギーは、40J／cm2であった。
【表４】
2005524714.tif 000010
【０１０８】
リボフラビンを添加したときに、酸素消費は、約13%まで増大された。その他の細胞の質の指標も同様に改善された。
【０１０９】
関連した実験において、30mlの濃縮された血小板の一定分量を0〜10マイクロモルの異なる量のリボフラビンと共に、29J／cm2にした365nm UVおよび40J／cm2にした419nm可視光で光照射した。細胞の質の指標を光放射約25時間後に測定した。図5は、貯蔵時間（日）の関数として、血小板による乳酸産生（乳酸の濃度mM/1000細胞）に対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。産生される乳酸の量は、リボフラビンによって約70%減少した。図6は、ミトコンドリアのエンハンサー濃度の関数として、血小板による乳酸産生の速度に対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。乳酸産生の速度は、10マイクロモルのリボフラビンを添加したときに、リボフラビンなしと比較して約80%減少した。乳酸産生の速度は、リボフラビンの量の増加と共に減少する。
【０１１０】
実施例4  電子伝達鎖のダメージをシミュレートするためのNaCNによる血小板の処理  
シアン化ナトリウムを対照として使用して、電子伝達鎖に対するダメージをシミュレートした。結果は、表5に示してある。
【表５】
2005524714.tif 000011
【０１１１】
実施例5  リボフラビンによる貯蔵された血小板の処理  
血小板は、地域の血液バンクの標準的な状態下で貯蔵された6日経過したアフェレーシス血小板であった。製品を照射のために30mLのバッグに入れ24時間貯蔵した。結果は、表6に示してある。
【表６】
2005524714.tif 000012
【０１１２】
リボフラビンを貯蔵した血小板に添加されたときは、乳酸産生が、約91%まで減少する。その他の細胞の質の指標も同様に改善された。
【０１１３】
実施例6  リボフラビンおよび可視光による貯蔵した血小板の処理  
地域の血液バンクの標準的な状態下で貯蔵された6日経過したアフェレーシス血小板であった。製品を照射のために30mLのバッグに入れ24時間の貯蔵した。使用した光源は、単一電球を有するDymax光源であった。ポリカーボネート・シートを使用して、UV光をフィルターで除いた。露出時間は、40J／cm2をデリバリーするように調整した。結果は、表7に示してある。
【表７】
2005524714.tif 000013
【０１１４】
実施例7  リボフラビンおよび可視および紫外光による貯蔵した血小板の処理  
地域の血液バンクの標準的な状態下で貯蔵された6日経過したアフェレーシス血小板であった。製品を照射のために30mLのバッグに入れ24時間の貯蔵した。使用した光源は、単一電球を有するDymax光源であった。ポリカーボネート・シートを使用して、UV光をフィルターで除いた。露出時間は、可視光および紫外線を合わせて40J／cm2をデリバリーするように調整した。結果は、表8に示してある。
【表８】
2005524714.tif 000014
【０１１５】
実施例8  リボフラビンおよび紫外線による血小板の処理  
Sengewaldバッグ内の278mlの90% PCOを、50マイクロモルのリボフラビン（23試料）と共に、およびリボフラビンなし（6試料）で、一方で120cpm（酸素を添加する）で攪拌し、合計7J／cm2に320nmUV光放射を照射した。生細胞の質の指標を光放射後の種々の貯蔵時間において測定した。図8は、貯蔵時間（日）の関数として、血小板によるグルコース消費（グルコース濃度mM/1012細胞）に対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。リボフラビンの添加によって、グルコース消費の量および速度は減少した。図1は、貯蔵時間（日）の関数として、細胞性の血液成分の血小板回旋（0-4ユニット）に対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。血小板回旋は、リボフラビンの添加によって1日目に増大した。図2は、貯蔵時間（日）の関数として、血小板の低浸透圧性ショック反応（HSR）%逆転に対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。HSRは、リボフラビンの添加によって増大した。図3は、貯蔵時間（日）の関数として、貯蔵した液体のpHに対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。pHは、リボフラビンによって高くなった。pHは、リボフラビンにより、リボフラビンなしと比較して遅い速度で光放射後に減少した。図9は、貯蔵時間（日）の関数として、血小板によるp-セレクチン発現（GMP-140（顆粒膜タンパク質-140）の発現、%活性化とも呼ばれる、に対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示するグラフである。パーセント活性化は、ｐ-セレクチンを発現している細胞の割合である。P-セレクチン発現は、リボフラビンによって減少した。図4は、貯蔵時間（日）の関数として、血小板の形状変化の程度（ESC）のパーセントに対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。ESC%は、リボフラビンによって増大された。
【０１１６】
実施例9  リボフラビンおよび紫外光による血小板の処理  
Sengewaldバッグ内の278mlの90% PCOを、50マイクロモルのリボフラビン（23試料）と共に、およびリボフラビンなし（6試料）で、一方で120cpm（酸素を添加する）で攪拌し、合計7J／cm2に320nmUV光放射を照射した。生細胞の質の指標を光放射後の種々の貯蔵時間において測定した。図7は、貯蔵時間（日）の関数として、血小板による乳酸産生に対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。乳酸産生は、リボフラビンによって約20%および約30%の間まで減少した。乳酸産生の速度は、約25%まで減少した。図8は、貯蔵時間（日）の関数として、血小板によってグルコース消費に対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。グルコース消費量は、リボフラビンによって約15%および約85%の間まで減少した。グルコース消費の速度は、約36%まで減少した。図9は、貯蔵時間（日）の関数として、血小板によるp-セレクチン発現（%活性化）に対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。活性化は、リボフラビンによって約10%まで減少した。図10は、貯蔵時間（日）の関数として、血小板によって酸素消費に対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。図10は、酸素濃度が低くなると酸素消費は高くなるので、代わりに消費量を表す酸素濃度のグラフとして表示してある。酸素消費は、約30%まで増大した。酸素消費の速度は、約37.5%まで増大した。
【０１１７】
実施例10  種々のエネルギーレベルにおけるワクシニアウイルスの減少に対するリボフラビンの効果  
ワクシニアウイルスを使用してIsolyte S 培地(Halpern,ら、(1997) Crit Care Med. 25 (12): 2031-8）に播種した。試料には、10マイクロモルのリボフラビンも含んだ。暴露の前後にワクシニアウイルスの力価を測定し、TCID50（組織培養細胞の50%の組織培養感染量）として測定した。UV光放射を合計30分間続け（40J／cm2）、10分間隔でワクシニアウイルスの力価を測定した。より多くのエネルギーは、露出時間を長くすることによってデリバリーした。図11は、光放射露出時間（デリバリーされたエネルギー）の関数として、ワクシニアウイルスの減少速度に対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。露出時間（エネルギー）の増加と共に、ワクシニアウイルス減少が増大した。リボフラビンなしでは、減少しなかった。結果は、表9に示してある。
【表９】
2005524714.tif 000015
【０１１８】
実施例11  種々のエネルギーレベルおよびリボフラビン濃度におけるHSV-2の減少に対するリボフラビンの効果  
HSV-2を使用して、90%のPCOを播種し、バランスはIsolyte S 培地でとった。DYMAX 2000発光体から光放射に対する暴露の前後に、HSV-2の力価を測定した。図12は、光放射露光時間（デリバリーされたエネルギー）の関数として、Herpes Virus 2の減少に対する種々の濃度のミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。光放射は、可視および紫外波長を含んだ。図1の4本の矢印は、これらの試料がアッセイ法の検出限界であったので、実際のlog不活性化データポイントが、示したものより高いかもしれないことを示す。観察されたcfu/mlのlog減少は、処理前の最初の力価を測定すること、処理後の力価を測定すること、および後者の力価を最初の力価から減ずることによって算出される。減少は、10マイクロモルのリボフラビンで最も大きかった。結果は、表10に示してある。
【表１０】
2005524714.tif 000016
【０１１９】
実施例12  種々のエネルギーレベルおよびリボフラビン濃度におけるS. epidermidisの減少に対するリボフラビンの効果  
S. epidermidisを使用して、90%のPCOを播種し、バランスはIsolyte S 培地でとった。DYMAX 2000発光体から光放射に対する暴露の前後に、S.epidermidisの力価を測定した。光放射は、40J／cm2、80J／cm2、および120J／cm2でデリバリーした。光放射は、可視および紫外波長を含んだ。リボフラビン濃度は、0、10、25、50、および100マイクロモルであった。図13は、ミトコンドリアのエンハンサーの濃度の関数として、S. epidermidisの減少に対する種々のエネルギー用量の効果を示すグラフである。減少は、最も高いエネルギーデリバリーで、および10マイクロモル濃度のリボフラビンで最も大きかった。
【０１２０】
結果は、表11に示してある。
【表１１】
2005524714.tif 000017
【０１２１】
実施例13  種々のエネルギーレベルおよびリボフラビン濃度におけるφX174減少に対するリボフラビンの効果  
φX174を使用して、90%のPCOを播種し、バランスはIsolyte S 培地でとった。光放射は、40J／cm2、80J／cm2、および120J／cm2でデリバリーした。光放射は、可視および紫外波長を含んだ。リボフラビン濃度は、0、50、および100マイクロモル濃度であった。図14は、デリバリーされた光放射エネルギーの関数として、φX174の減少に対する種々の濃度のミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。減少は、最も高いリボフラビン濃度（100マイクロモル濃度）で、およびより高いエネルギー（120J／cm2）で最も大きかった。結果は、表12に示してある。
【表１２】
2005524714.tif 000018
【０１２２】
実施例14  非内因性のアロキサジンおよび紫外線による血小板の処理  
非内因性のアロキサジンを血小板および光増感剤を含む液体に添加する。液体を約30J／cm2の紫外線に曝露する。貯蔵の5日後に、細胞の質の指標は、非内因性のアロキサジンを使用していない同等のプロセスと比較して改善される。
【０１２３】
実施例15  内因的のものに基づいた誘導体アロキサジンおよび紫外線による血小板の処理  
内因的のものに基づいた誘導体アロキサジンを血小板および光増感剤を含む液体に添加する。液体を約30J／cm2の紫外線に曝露する。貯蔵の5日後に、細胞の質の指標は、内因性のものに基づいた誘導体アロキサジンを使用していない同等のプロセスと比較して改善される。
【０１２４】
実施例16  ビタミンKおよび紫外線による血小板の処理  
ビタミンKを血小板および光増感剤を含む液体に添加する。液体を約30J／cm2の紫外線に曝露する。貯蔵の5日後に、細胞の質の指標は、ビタミンKを使用していない同等のプロセスと比較して改善される。
【０１２５】
実施例17  ビタミンLおよび紫外線による血小板の処理  
ビタミンLを血小板および光増感剤を含む液体に添加する。液体を約30J／cm2の紫外線に曝露する。貯蔵の5日後に、細胞の質の指標は、ビタミンLを使用していない同等のプロセスと比較して改善される。
【０１２６】
実施例18  ミトコンドリアのエンハンサーによる腹膜溶液の処理  
腹膜の溶液を体から取り出し、ミトコンドリアのエンハンサーを添加して、ミトコンドリアのエンハンサーを有する腹膜の溶液を体の腹腔に投与する。体は、腹膜溶液を取りだしたものと同じ体であってもよい。代わりに、ミトコンドリアのエンハンサーを体の腹腔に直接投与する。腹膜の溶液内の細胞および／または腹腔を含むミトコンドリアのエンハンサーと接触している細胞は、ミトコンドリアによって増強される。
【０１２７】
実施例19  ミトコンドリアのエンハンサーによる創傷表面の処理  
創傷をミトコンドリアのエンハンサーの投与によって処理する。白血球細胞、赤血球、および線維芽細胞を含む（しかし、これらにに限定されない）創傷表面およびその近くの細胞は、ミトコンドリアによって増強される。
【０１２８】
当業者であれば、血液収集、アフェレーシス系、細胞性の血液成分、ミトコンドリアのエンハンサー、アロキサジン類、病原体の減少プロセス、光放射法、貯蔵時間、細胞の質の指標、および本明細書に具体的に開示されたもの以外の病原体が、当該技術分野において利用でき、本発明の実施に使用することができることは認識されるであろう。当該技術分野において既知の全ての均等物は、本発明の範囲内に含まれることが企図される。
【図面の簡単な説明】
【０１２９】
【図１】貯蔵時間（日）の関数として、細胞性の血液成分の血小板回旋（swirl）（0〜4ユニット）に対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。
【図２】貯蔵時間（日）の関数として、血小板の低浸透圧性のショック反応（HSR）%逆転に対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。
【図３】貯蔵時間（日）の関数として、貯蔵型の液体のpHに対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。
【図４】貯蔵時間（日）の関数として、%血小板の形状変化の程度（ESC）に対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。
【図５】貯蔵時間（日）の関数として、血小板による乳酸産生に対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。
【図６】ミトコンドリアのエンハンサー濃度の関数として、血小板による乳酸産生の速度に対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。
【図７】貯蔵時間（日）の関数として、血小板による乳酸産生に対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。
【図８】貯蔵時間（日）の関数として、血小板によるグルコース消費に対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。
【図９】貯蔵時間（日）の関数として、血小板によるp-セレクチン発現（%活性化）に対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。
【図１０】貯蔵時間（日）の関数として、血小板による酸素消費に対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。
【図１１】光放射露出時間（デリバリーされたエネルギー）の関数として、ワクシニアウイルスの還元反応速度に対するミトコンドリアのエンハンサーの効果を示すグラフである。
【図１２】光放射露光時間（デリバリーされたエネルギー）の関数として、ヘルペスウイルス2（HSV-2）の減少に対するミトコンドリアのエンハンサーの種々の濃度の効果を示すグラフである。
【図１３】ミトコンドリアのエンハンサーの濃度（マイクロモル）の関数として、S.エピダーミディス（S. epidermidis）の減少に対する種々のエネルギー用量の効果を示すグラフである。
【図１４】デリバリーされた光放射エネルギーの関数として、φX174の減少に対するミトコンドリアのエンハンサーの種々の濃度の効果を示すグラフである。
【図１】
2005524714.tif 000020
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【手続補正書】
【提出日】平成17年1月6日(2005.1.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞性の血液成分を含む液体を、前記細胞性の血液成分の生命の質（vital quality）を改善するために処理するための方法であって、前記方法は、ミトコンドリアのエンハンサーの有効な、実質的に無毒の量を前記液体に添加することを含み、前記ミトコンドリアのエンハンサーは、アロキサジン類、内因性のアロキサジン類、非内因性のアロキサジン類、内因的のものに基づいた誘導体アロキサジン類、内因性の光増感剤、および非内因性の光増感剤からなる群より選択される方法。
【請求項２】
前記液体中の前記ミトコンドリアのエンハンサー濃度が、約1〜約200マイクロモルである、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記細胞性の血液成分が血小板を含む、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記液体が周囲光よりも多量の光放射に曝露されていない、請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記液体中の光増感剤を活性化するために十分なエネルギーの光放射に前記液体を曝露することも含む、請求項１記載の方法。
【請求項６】
前記光放射が紫外スペクトルの光を使用して行われる、請求項５記載の方法。
【請求項７】
光放射に対する前記液体の暴露が、前記ミトコンドリアのエンハンサーで前記液体を処理することの前に、後に、および同時にからなる群より選択される時に行われる、請求項５記載の方法。
【請求項８】
前記光放射が、前記液体に存在するであろう病原体を実質的に減少させるために十分なエネルギーである、請求項５記載の方法。
【請求項９】
前記病原体が、細胞外および細胞内ウイルス、細菌、バクテリオファージ、真菌、血液を伝染する寄生生物、および原生動物、並びに前述のいずれか二つ以上の混合物からなる群より選択される、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
前記光放射が5J／cm2〜約50J／cm2の間である、請求項７記載の方法。
【請求項１１】
前記光増感剤が前記ミトコンドリアのエンハンサーである、請求項５記載の方法。
【請求項１２】
前記光増感剤の濃度が約1〜約200マイクロモルである、請求項11記載の方法。
【請求項１３】
前記細胞性の血液成分が、前記ミトコンドリアのエンハンサーを添加する前に貯蔵されない、請求項１記載の方法。
【請求項１４】
前記細胞性の血液成分が、前記ミトコンドリアのエンハンサーを添加する前に貯蔵される、請求項１記載の方法。
【請求項１５】
前記細胞性の血液成分が、前記ミトコンドリアのエンハンサーを添加する前に約1時間以上貯蔵される、請求項14記載の方法。
【請求項１６】
前記細胞性の血液成分が、前記ミトコンドリアのエンハンサーを添加する前の約1時間〜約7日の間の時間の量の間貯蔵される、請求項14記載の方法。
【請求項１７】
前記ミトコンドリアのエンハンサーが、7,8-ジメチル-10-リビチルイソアロキサジン、7,8-ジメチルアロキサジン、7,8,10-トリメチルイソアロキサジン、アロキサジンモノヌクレオチド、イソアロキサジン-アデノシンジヌクレオチド、ビタミンK1、ビタミンK1酸化物、ビタミンK2、ビタミンK5、ビタミンK6、ビタミンK7、ビタミンK-S (II)、およびビタミンLからなる群より選択される、請求項１記載の方法。
【請求項１８】
前記ミトコンドリアのエンハンサーが7,8-ジメチル-10-リビチルイソアロキサジンである、請求項１記載の方法。
【請求項１９】
前記液体中の前記7,8-ジメチル10-リビチルイソアロキサジンの濃度が、約1〜約200マイクロモルである、請求項１記載の方法。
【請求項２０】
前記ミトコンドリアのエンハンサーが、以下の式である、請求項１記載の方法：
【化１】
2005524714.tif 000034
式中、R1、R2、R3、R4、R5、およびR6は、お互いに独立して、水素、任意に置換されたヒドロカルビル、アルコール、アミン、ポリアミン、サルフェート、ホスフェート、塩素、臭素、およびヨウ素からなる群より選択されるハロゲン、前述のものの塩;
並びに-NRa-(CRbRC)n-Xであって、Xは、塩素臭素、およびヨウ素からなる群より選択されるハロゲンであり、Ra、Rb、およびRcは、互いに独立して、水素、任意に置換されたヒドロカルビル、並びに塩素、臭素、およびヨウ素からなる群より選択されるハロゲンからなる群より選択され、かつnは、0〜20の整数であるもの;
からなる群より選択され、
ただし、R1は、-OHまたは直鎖アルキル基であって、該鎖の第二炭素が-OH または=Oで置換された直鎖アルキル基ではなく、かつR1、R4、R5は、R2、R3、およびR6が水素であるときに、全てメチル基ではないことを条件とする。
【請求項２１】
請求項20記載の方法であって、R1、R2、R3、R4、R5、およびR6が、お互いに独立して水素、任意に置換されたアルコール、直鎖または環状の糖類、アミノ酸、アミン、ポリアミン、ポリエーテル、多価アルコール、サルフェート、ホスフェート、カルボニル、グリコール、塩素、臭素、およびヨウ素からなる群より選択されるハロゲン、アルデヒド、ケトン、カルボン酸、およびアスコルベートからなる群より選択される方法。
【請求項２２】
前記細胞性の血液成分の前記生命の質が、酸素消費の量および／または速度、乳酸産生の量および／または速度、pH、pH変化の割合、活性化、低浸透圧性のショック反応、グルコース消費の量および／または速度、血小板回旋（swirl）、血小板凝集、二酸化炭素産生の量および／または速度、体細胞数、並びに形状変化の程度からなる群より選択される、請求項１記載の方法。
【請求項２３】
前記酸素の消費が少なくとも約5%増大される、請求項22記載の方法。
【請求項２４】
前記乳酸産生の速度が少なくとも約5%減少される、請求項22記載の方法。
【請求項２５】
前記pHが少なくとも約0.1ユニット増大される、請求項22記載の方法。
【請求項２６】
前記低浸透圧性ショック反応が少なくとも約5%増大される、請求項22記載の方法。
【請求項２７】
前記グルコース消費が少なくとも約10%減少される、請求項22記載の方法。
【請求項２８】
前記血小板回旋（swirl）が少なくとも約5%増大される、請求項22記載の方法。
【請求項２９】
前記血小板凝集が少なくとも約5%減少される、請求項22記載の方法。
【請求項３０】
前記二酸化炭素産生が少なくとも約5%増大される、請求項22記載の方法。
【請求項３１】
前記細胞数が少なくとも約5%増大される、請求項22記載の方法。
【請求項３２】
前記形状変化の程度が少なくとも約5%増大される、請求項22記載の方法。
【請求項３３】
前記活性化が少なくとも約5%減少される、請求項22記載の方法。
【請求項３４】
前記細胞性の血液成分が前記処理後に約1時間以上貯蔵される、請求項１記載の方法。
【請求項３５】
前記液体に一酸化窒素を添加することと、前記液体に失活剤を添加することと、前記液体にプロセス・エンハンサーを添加することと、前記液体に酸素を加えることと、および前記液体に解糖阻害剤を添加することとからなる群より選択される工程も含む、請求項１記載の方法。
【請求項３６】
請求項1に記載の方法を使用する、細胞性の血液成分の貯蔵寿命を増大するための方法。
【請求項３７】
請求項1に記載の方法を使用する、血小板貯蔵寿命を延長するのための方法。
【請求項３８】
請求項1に記載の方法を使用する、ミトコンドリアを含む細胞を、前記細胞の生命の質を改善するために処理するための方法。
【請求項３９】
前記細胞が、植物細胞、動物細胞、酵母細胞、細胞性の血液成分の細胞、血小板、および創傷面の細胞からなる群より選択される、請求項38記載の方法。
【請求項４０】
請求項1に記載の方法を使用する、ミトコンドリアを含む細胞を含む液体を、前記液体の生命の質を改善するために処理するための方法。
【請求項４１】
前記液体が腹膜の溶液、血液、血液製剤を含む液体、およびミトコンドリアを含む細胞を含む液体からなる群より選択される、請求項40記載の方法。
【請求項４２】
細胞性の血液成分を含む液体を、その中に存在するであろう病原体を減少させるために処理するための方法であって：
(a) 光増感剤の減少に有効な、実質的に無毒の量を前記液体に添加する工程と;
(b) 前記光増感剤とは異なるミトコンドリアのエンハンサーの有効な、実質的に無毒の量を前記液体に添加する工程と;
(c) 前記光増感剤を活性化するために十分なエネルギーの光放射に、前記病原体を実質的に減少するために十分な時間で前記液体を曝露する工程とを含み、
前記ミトコンドリアのエンハンサーは、アロキサジン類、内因性のアロキサジン類、非内因性のアロキサジン類、内因的のものに基づいた誘導体アロキサジン類、内因性の光増感剤、および非内因性の光増感剤からなる群より選択される方法。
【請求項４３】
前記エネルギーが、30J／cm2、50J／cm2、80J／cm2、100J/cm2、120J／cm2、および180J/cm2からなる群より選択される量よりも大きい請求項42記載の方法。
【請求項４４】
前記エネルギーが5J／cm2〜約360J/cm2の間である、請求項42記載の方法。
【請求項４５】
前記エネルギーが約25J／cm2〜約180J／cm2の間である、請求項42記載の方法。
【請求項４６】
前記エネルギーが約75J／cm2〜約120 J／cm2の間である、請求項42記載の方法。
【請求項４７】
前記エネルギーが約120J／cm2〜約180J／cm2の間である、請求項42記載の方法。
【国際調査報告】
2005524714.tif 000035
2005524714.tif 000036
2005524714.tif 000037