(57)【要約】本発明は、腫瘍の予防または治療のための有効成分の用途、および方法、これらの腫瘍に伴う疾患の診断的検出、および医薬組成物およびそれらに関係するキットに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分が、真核細胞において腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の発現および／または機能に影響を及ぼし、特に阻害し、それによって組織体積の増加および／または腫瘍の転移が少なくとも部分的に阻害される、腫瘍、特に悪性腫瘍の予防または治療のための有効成分の使用。
【請求項２】
有効成分が、真核細胞において腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の発現および／または機能に影響を及ぼし、特に阻害し、それによって組織体積の増加および／または腫瘍の転移が少なくとも部分的に阻害される、腫瘍の予防または治療のための薬物または医薬組成物を製造するための有効成分の使用。
【請求項３】
これらの腫瘍に伴う疾患を診断するための、真核細胞において腫瘍、特に悪性腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の発現および／または機能を検出するための少なくとも一の物質の使用。
【請求項４】
真核細胞が、腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の発現および／または機能に影響を及ぼす、特に阻害する、有効成分を用いて治療され、それによって組織体積の増加および／または腫瘍の転移が少なくとも部分的に阻害される、腫瘍、特に悪性腫瘍の予防または治療のための方法。
【請求項５】
真核細胞が、腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の発現および／または機能を検出する物質と接触させられることを特徴とする、腫瘍、特に悪性腫瘍に伴う疾患を診断するための方法。
【請求項６】
腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質が、表１のタンパク質、特にそのアイソフォームであることを特徴とする、請求項１から５のうちいずれかで請求される使用または方法。
【請求項７】
有効成分または物質が、腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質に向けられることを特徴とする、先行する請求項のうちいずれかで請求される使用または方法。
【請求項８】
有効成分または物質が、腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の活性化因子、阻害因子、調節因子および／または生物学的前駆体に向けられることを特徴とする、先行する請求項のうちいずれかで請求される使用または方法。
【請求項９】
有効成分または物質が、ペプチド、特にポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、このペプチドが腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の発現および／または機能に好ましくは影響を及ぼす、特に阻害することを特徴とする、先行する請求項のうちいずれかで請求される使用または方法。
【請求項１０】
有効成分または物質が、ペプチド、好ましくはポリペプチドであって、このペプチドが腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の発現および／または機能に好ましくは影響を及ぼす、特に阻害することを特徴とする、請求項１から８のうちいずれかで請求される使用または方法。
【請求項１１】
有効成分または物質が、小分子化合物、好ましくは１０００未満の分子量（ＭＷ）を有する小分子化合物であることを特徴とする、先行する請求項のうちいずれかで請求される使用または方法。
【請求項１２】
悪性腫瘍が前立腺がんであることを特徴とする、先行する請求項のうちいずれかで請求される使用または方法。
【請求項１３】
有効成分または物質を、経口、経静脈、局所および／または吸入によって投与することができることを特徴とする、先行する請求項のうちいずれかで請求される使用または方法。
【請求項１４】
腫瘍、特に悪性腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の発現および／または機能に影響を及ぼす、特に阻害する、少なくとも一の有効成分の有効量、および、適切な場合には医薬キャリアーを含む、医薬組成物。
【請求項１５】
有効成分が、ペプチド、特にポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、このペプチドが腫瘍、特に悪性腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の発現および／または機能に好ましくは影響を及ぼす、特に阻害することを特徴とする、請求項１４で請求される医薬組成物。
【請求項１６】
有効成分が、ペプチド、好ましくはポリペプチドであって、このペプチドが腫瘍、特に悪性腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の発現および／または機能に好ましくは影響を及ぼす、特に阻害することを特徴とする、請求項１４で請求される医薬組成物。
【請求項１７】
有効成分が小分子化合物、好ましくは１０００未満の分子量（ＭＷ）を有する小分子化合物であることを特徴とする、請求項１４から１６のいずれかで請求される医薬組成物。
【請求項１８】
腫瘍、特に悪性腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の活性化因子、阻害因子、調節因子および／または生物学的前駆体の発現および／または機能に好ましくは影響を及ぼす、特に阻害する、少なくとも一の有効成分の有効量、および、適切な場合には医薬キャリアーを含む、医薬組成物。
【請求項１９】
有効成分が、ペプチド、特にポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、このペプチドが腫瘍、特に悪性腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の活性化因子、阻害因子、調節因子および／または生物学的前駆体の発現および／または機能に好ましくは影響を及ぼす、特に阻害することを特徴とする、請求項１８で請求される医薬組成物。
【請求項２０】
有効成分が、ペプチド、好ましくはポリペプチドであって、このペプチドが腫瘍、特に悪性腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の活性化因子、阻害因子、調節因子および／または生物学的前駆体の発現および／または機能に好ましくは影響を及ぼす、特に阻害することを特徴とする、請求項１８で請求される医薬組成物。
【請求項２１】
有効成分が小分子化合物、好ましくは１０００未満の分子量（ＭＷ）を有する小分子化合物であることを特徴とする、請求項１８から２０のいずれかで請求される医薬組成物。
【請求項２２】
これらの腫瘍に伴う疾患を診断するための、腫瘍、特に悪性腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の発現および／または機能を検出するための少なくとも一の物質を含む診断キット。
【請求項２３】
前立腺がんを診断するための、請求項２２で請求される診断キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍の予防または治療のための有効成分の使用、および方法、これらの腫瘍に伴う疾患の診断的検出、および医薬組成物およびそれらに関係するキットに関する。
【０００２】
腫瘍によって（By tumor）とは、腫脹または組織体積の局所的増加を意味する。より広義では、たとえば浮腫、急性または慢性炎症、動脈瘤拡張、炎症に関係する器官腫脹（たとえばいわゆる脾臓肥大）による任意の局所的腫脹を意味しうる。より狭い意味では、腫瘍は内生組織のさまざまな程度の脱抑制を有する、自然発生的、自律的、および非可逆的な過剰増殖の形の組織新生物（増殖、芽細胞腫、新生物形成）を意味し、通常は特有の細胞機能および組織機能のさまざまな程度の喪失を伴う。
より良い分類のため腫瘍は下記に分けられる；
Ｉ．それらの生物学的挙動に基づいた分類；
１．分化した細胞および遅い局所的に置換する増殖を示す良性腫瘍。
２．細胞核多型、細胞異型、退形成、および浸潤する通常は速やかな破壊的増殖および転移を示す悪性腫瘍。
３．悪性腫瘍の組織学的特徴および局所的に浸潤する増殖を示すが通常は転移を示さない、準悪性腫瘍。
ＩＩ．原組織的分類；
これは発生過程で起源となった組織に基づいて分類された腫瘍を内包する。
１．外胚葉および内胚葉が起源である上皮腫瘍；
ａ）たとえば、腺腫、乳頭腫、およびポリープといった良性腫瘍
ｂ）たとえば、がんといった悪性腫瘍。
２．中胚葉が起源である間葉性腫瘍；
ａ）たとえば、脂肪腫、線維腫、骨腫、筋腫、平滑筋腫、横紋筋腫、軟骨腫といった良性腫瘍、
ｂ）たとえば、肉腫といった悪性腫瘍。
３．未分化組織が起源である胎児性腫瘍。これらは、たとえば腎芽細胞腫、神経芽細胞腫、髄芽腫、網膜芽細胞腫、および胎児性横紋筋肉腫および奇形腫を含む。
：がある。
ＩＩＩ．臨床所見および病理所見に基づく分類；
とりわけＴＮＭ分類、等級、ローレン（Ｌａｕｒeｎ）分類、デュークス（Ｄｕｋｅｓ）分類、キーラー（Ｋｉｅｌｅｒ）分類、ラパポート（Ｒａｐｐａｐｏｒｔ）分類などがここに該当する。
【０００３】
腫瘍分類のこの短い概観でさえ、さまざまな型の腫瘍の中に存在する多様性（および一部の場合には対立）を示す。したがって、たとえば、良性腫瘍と悪性腫瘍の間だけでなく、個々の腫瘍の死亡率または致死率と、良性腫瘍がさらに悪性腫瘍を生じる確率との間の区別も行うべきである。
【０００４】
たとえば女性の最も普通の悪性腫瘍である乳がんといった、一部の腫瘍は、特に４５歳から７０歳の間に高い頻度で起こる。初期症状は、触診の疑わしい所見であり、通常は早期がん診断のための検査後におよび乳房の定期的な自己健診時に発見される。腫瘍の病期および腫瘍の分化の程度に応じて、これらの症例における予後は完全に良好から非常に不良までの範囲にわたる可能性がある。乳がんの早期のリンパ行性および血行性転移のために、可能な限り早く治療を始めることができるようにその腫瘍が迅速に診断されることは重要である。
【０００５】
一方、前立腺がんは男性で最も一般的な悪性腫瘍であり、特に５０歳から７０歳の間に起こる。前立腺がんは大部分の場合、腺がんである。この悪性腫瘍は最初は前立腺内部での浸潤増殖を経て拡がり、のちに精嚢腺および骨盤結合組織の、および相対的に稀には直腸、膀胱、または尿道の浸潤がある。リンパ行性および／または血行性転移が起こる。治療は分化の組織学的程度および臨床病期に依存し、通常は局所的リンパ節摘出を伴う前立腺全摘除術、および進行した段階では男性ホルモンの離脱を含む。これらの症例でも、予後はがんの病期に依存する。ごく早期には前立腺全摘除術後に症例の約９０％が治癒する一方、進行した段階では予後は悲観的になる傾向がある。
【０００６】
前立腺がんは、前立腺肥大と診断上識別する必要がある。前立腺肥大は良性腫瘍である。これらの症例では、間質の細胞および腺の数的な増加を通じた前立腺の拡大が存在する。前立腺肥大は男性における排尿障害の最も一般的な原因である。その臨床的発現は特に４０歳から５０歳の間である。進行は遅く間欠的である。さらに、症状は大部分の症例で、漸進的な尿線減弱および排尿開始の遅れの数年後に初めて現れる。これらの症例では、薬草剤の投与を症状の治療または緩和として考慮することができる。
【０００７】
治療を速やかに開始するためには腫瘍の早期認識、すなわち診断が一般に重要であり、腫瘍がより早期に診断される場合には予後もまたより良好であるため、いくつかのいわゆる腫瘍マーカーが臨床使用されている。定性または定量分析によって（悪性）疾患の存在、進行、または予後について説明することができる物質、および細胞の変化は、一般に腫瘍マーカーといわれる。腫瘍マーカーは下記の通り分類される；
１．細胞腫瘍マーカー；
これらはとりわけ、細胞膜結合型腫瘍抗体、受容体（たとえばホルモン受容体、白血病における増殖促進物質に対する受容体）、ならびに、がん遺伝子の発現増加、およびモノクローナルな細胞増殖、および分子遺伝的細胞変化、特に染色体異常を示す細胞マーカーを含む。
２．体液性腫瘍マーカー；
これらは、血清、尿、およびその他の体液中に、生理的条件と比較して増加した量で検出可能な（通常は生理的に存在する）、および腫瘍組織によって合成および／または分泌され、腫瘍退縮によって放出されるかまたは腫瘍に対する生物の反応として形成される物質である。腫瘍マーカーの生理学的意義は不完全にしか知られていない。腫瘍マーカーは通常は人体において免疫原効果を有しない。臨床的な（診断上の）意義はそれらの特異性および感度に依存する。体液性腫瘍マーカーは二つの群に分けられる。第一の群は、腫瘍自身によって産生される体液性腫瘍マーカーを含む。これらは、たとえば、腫瘍関連抗体、ある種のホルモン（たとえばガストリン、コルチゾールなど）、酵素（たとえば神経特異性エノラーゼ（ＮＳＥ））、およびタンパク質（たとえばベンス−ジョーンズタンパク質）を含む。第二の群は、腫瘍によって誘導されるが腫瘍によって産生されない腫瘍マーカーを含む。この群の重要な体液性腫瘍マーカーは、たとえば、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、ＬＤＨ、ネオプテリンなどである。
【０００８】
上の記載は、選択的で高感度な腫瘍検出方法がいかに重要かを示す。加えて、腫瘍治療のための新規標的の大きな必要性がある。
【０００９】
したがって、本発明の目的は、腫瘍治療における診断的および治療的用途のための新規有効成分および標的を提供することである。
【００１０】
驚くべきことに、さまざまな腫瘍についての実験において、ある種のタンパク質が腫瘍に冒された組織でだけ合成および／または分泌されたことを示すことができている。これらのタンパク質はこのようにして、腫瘍の発生および新生物性疾患の進行において重要な役割を果たす。
【００１１】
したがって、本発明の目的は、独立請求項１から５、１４、１８、および２２の内容によって達成される。好ましい実施形態は、従属請求項６から１３、１５から１７、１９から２１、および２３に特定される。これらすべての請求項の内容は、参照によって説明に含まれる。
【００１２】
本発明によると、腫瘍、特に悪性腫瘍の予防または治療のために、少なくとも一の有効成分を使用することが可能である。この点について、この有効成分は、真核細胞において腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の発現および／または機能に影響を及ぼし、それによって組織体積の増加および／または腫瘍の転移は少なくとも部分的に阻害される。腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の発現および／または機能に影響を及ぼすということは、特にこれらのタンパク質の阻害を意味する。この有効成分は、さらに、腫瘍の予防または治療のための薬物または医薬組成物の製造に用いることができる。
【００１３】
これらの腫瘍に伴う疾患を診断するための、真核細胞において腫瘍、特に悪性腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の発現および／または機能を検出するための物質の使用もまた請求される。これらの腫瘍に伴う疾患は、たとえば、上述の前立腺がん、前立腺肥大などを含む。しかし、本発明のタンパク質が合成および／または分泌されるすべてのその他の腫瘍関連疾患もまた本発明によって包含される。
【００１４】
別の好ましい一実施形態では、真核細胞が、腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の発現および／または機能に影響を及ぼす、特に阻害する、有効成分を用いて治療され、それによって組織体積の増加および／または腫瘍の転移が少なくとも部分的に阻害される、腫瘍、特に悪性腫瘍の予防または治療のための方法が請求される。
【００１５】
加えて、別の好ましい一実施形態では、真核細胞がこれらの腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の発現および／または機能を検出する物質と接触させられる、腫瘍、特に悪性腫瘍に伴う疾患を診断するための方法が請求される。
【００１６】
腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質は、特に好ましい一実施形態では、下に示す表１に列挙されたタンパク質である。したがって、腫瘍関連疾患を検出および／または診断するために用いられる物質はたとえば、これらのタンパク質に対して向けられた、当業者に既知である、たとえば、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸収測定法）といった検出方法で用いられる抗体であることができる。そのようないわゆる免疫測定法では、測定すべき抗体に対して向けられた特異的抗体（または抗体測定の場合には均質な被験抗体）が担体（たとえばセルロース、ポリスチレン）に結合され、検体とのインキュベート後に担体上で免疫複合体が形成する。その後の段階で、標識化抗体がこれらの免疫複合体に添加される。均質な基質を反応混合物に添加することによって、免疫複合体に結合した酵素−基質複合体を可視化し、免疫複合体と結合したマーカー酵素の、既知の酵素活性の標準との比較による光度定量によって、検体中の抗体濃度を推定することが可能である。診断的検出に使用することができる別の物質は、たとえば、特定のＤＮＡ断片の選択的増幅がある分子遺伝的方法によるいわゆるポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて、調査するタンパク質の定量的検出を達成するのに適した、いわゆるオリゴヌクレオチドである。既知の標的タンパク質を定量的にまたは定性的に検出することが可能な他の方法は当業者に知られている。これらのタンパク質の少なくとも部分的な阻害に使用することができる有効成分は、同様に当業者に既知である。したがって、たとえば、いわゆるアンチセンス配列を有効成分として使用することができる。さらに、本発明に記載のこれらのタンパク質の、たとえば酵素活性が消失しているいわゆる欠損変異体のような、遺伝子改変された突然変異体を有効成分として使用することが可能である。
【表１】
2005538044.tif 000002
2005538044.tif 000003
2005538044.tif 000004
スコア＝ＭＡＳＣＯＴ法を用いて見出されたヒット数
ＭＷ理論値＝理論（計算）分子量
ＭＷ幅＝標記のマーカータンパク質の分子量範囲内に見出される
ｐＩ＝等電点
がん発現（０＝悪性および良性組織の両方に見出される；＋アップレギュレート；−ダウンレギュレート）。
【００１７】
別の好ましい一実施形態では、有効成分または物質は、腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質自体に向けられる。すでに説明した通り、有効成分はたとえばアンチセンス配列であることができる。これらはそのとき直接に、その合成および／または分泌されるタンパク質に向けられる。有効成分はさらに、遺伝子改変された突然変異体を含むことができる。したがって、たとえば、遺伝子工学の方法によって、触媒中心が除去された突然変異体（いわゆる欠損変異体）を構築することが可能である。これらの場合には、腫瘍関連タンパク質が合成されるが、それらは酵素活性をまったく、または低い活性しか持たない。先に腫瘍組織に挿入されたこれらの欠損変異体は、腫瘍組織においてそれらに割り当てられた役割を満たすことができず、それによって組織体積の増加および／または腫瘍の転移は少なくとも部分的に阻害される。
【００１８】
本発明の別の好ましい一実施形態では、有効成分は腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の活性化因子、阻害因子、調節因子および／または生物学的前駆体に向けられる。これらの活性化因子、阻害因子、調節因子および／または生物学的前駆体は、たとえば、表１に列記されたタンパク質の伝達カスケードの上流または下流に位置するメンバー、前記タンパク質の発現のレベルを調節する転写因子，しかしまた有効成分によって影響され前記タンパク質の発現および／または機能に関与する以前は未知であった分子であることができる。
【００１９】
本発明において、既知および未知の両方の有効成分または物質を使用することが可能である。したがって、たとえば、有効成分または物質は、ペプチド、特にポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであることができ、このペプチドが腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の発現および／または機能に好ましくは影響を及ぼす、特に阻害することができる。有効成分または物質はさらに、ペプチド、好ましくはポリペプチドであることができ、このペプチドが腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の発現および／または機能に好ましくは影響を及ぼす、特に阻害することができる。有効成分または物質はさらに、小分子化合物であることができ、好ましくは１０００未満の分子量（ＭＷ）を有する小分子化合物であることができる。
【００２０】
特に好ましい一実施形態では、悪性腫瘍は前立腺がんである。既に説明した通り、前立腺がんは男性における最も一般的な悪性腫瘍にあたる。前立腺腫瘍を、たとえば前立腺特異的抗体を基礎とするマススクリーニングによって早期に検出することができさえすれば（Bartsch G, Horninger W, Klocker H, Reissigl A, Oberaigner W, Schonitzer D, Severi G, Robertson C, BoyleP: 『オーストリア、チロル州における前立腺特異的抗体マススクリーニング導入後の前立腺がん死亡率』（Prostate cancer mortality after introduction of prostate-specific antigen mass screening in the Federal State of Tyrol, Austria.） Urology 2001; 58:417-24）、前立腺の純（予防的）外科的除去を考慮することが可能である（Bukkapatnam R, Pow-Sang JM: 『臨床的に局在化された前立腺がんの管理における前立腺全摘除術』（Radical prostatectomy in the management of clinically localized prostate cancer.） Cancer Control 2001; 8:496-502; Pentyala SN, Lee J, Hsieh K, Waltzer WC, Trocchia A, Musacchia L, Rebecchi MJ, Khan SA: 『前立腺がん；包括的総説』（Prostate cancer: a comprehensive review.） Med Oncol 2000; 17:85-105）。すでに一つの器官に限られていない進行した疾患については、前立腺の予防的除去はもはや適当でない。これらの前立腺腫瘍（前立腺がん）についての可能な治療の選択肢は、その一部は無効であるが、既に説明した通り、男性ホルモンの抑制である（Hussain A, Dawson N: 『進行／転移性前立腺がんの管理；２０００年最新』（Management of advanced/metastatic prostate cancer: 2000 update.） Oncology (Huntingt) 2000; 14; 1677-88; 考察1688, 1691-4）。この男性ホルモンの産生の抑制は、一部の症例では外科的なまたは薬理学的な性腺摘除と組み合わせて、腫瘍の増殖および転移を部分的に抑制し、それによって一定期間コントロールすることができる（Afrin LB, Ergul SM: 『前立腺がんの内科的治療；１９９９年』（Medical therapy of prostate cancer: 1999.） J S C Med Assoc 2000; 96:77-84; Auclerc G, Antoine EC, Cajfinger F, Brunet-Pommeyrol A, Agazia C, Khayat D: 『進行前立腺がんの管理』（Management of advanced prostate cancer.） Oncologist 2000; 5:36-44）。大部分の前立腺腫瘍はやがてこの内分泌治療に対して一定の抵抗性を生じ、および、やがて、それらはアンドロゲン非感受性となる（Eder IE, Culig Z, Putz T, Nessler-Menardi C, Bartsch G, Klocker H: 『アンドロゲン受容体の分子生物学；分子的理解から診療所まで』（Molecular biology of the androgen receptor: from molecular understanding to the clinic.） Eur Urol 2001; 40:241-51; Crawford ED, Rosenblum M, Ziada AM, Lange PH: 『ホルモン不応性前立腺がん』（Hormone refractory prostate cancer.） Urology 1999; 54:1-7）。たとえば細胞毒性物質の使用（Heidenreich A, von Knobloch R, Hofmann R: 『ホルモン不応性前立腺がんにおける細胞毒性化学療法の現状』（Current status of cytotoxic chemotherapy in hormone refractory prostate cancer:） Eur Urol 2001; 39:121-30）、遺伝子治療（Miyake H, Hara I, Kamidono S, Gleave ME: 『アンドロゲン非依存性進行を遅延させ化学物質感受性を高めるための、アンドロゲン離脱後にアップレギュレートされる抗アポトーシス遺伝子を標的とするアンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドを用いた進行前立腺がんのための新規の治療戦略』（Novel therapeutic strategy for advanced prostate cancer using antisense oligodeoxynucleotides targeting anti-apoptotic genes upregulated after androgen withdrawal to delay androgen-independent progression and enhance chemosensitivity.） Int J. Urol 2001; 8:337-49）、および免疫療法 （Rini Bl, Small EJ: 『前立腺がんのための免疫療法』（Immunotherapy for prostate cancer.） Curr Oncol Rep 2001; 3:418-23）、といったその他の可能な治療選択肢は、臨床試験中であるが、現在までのところ前立腺がんの治療において目立った成功を達成していない（DiPaola RS, Kumar P, Hait WN, WeissRE: 『最先端の前立腺がん治療および研究。ニュージャージーがん研究所からの報告』（State-of-the-art prostate cancer treatment and research. A report from the Cancer Institute of New Jersey.） N J Med 2001; 98:23-33）。腫瘍だけで発現しているかまたは、良性腫瘍と悪性腫瘍で異なる発現を検出することができる遺伝子の特定は、したがって、これらの腫瘍の治療への有望な手掛かりである（Magee JA, Araki T, Patil S, Ehrig T, True L, Humphrey PA, Catalona WJ, Watson MA, Milbrandt J: 『発現プロファイリングが前立腺がんにおけるヘプシン過剰発現を明らかにする』（Expression profiling reveals hepsin overexpression in prostate cancer.） Cancer Res 2001; 61:5692-6; Welsh JB, Sapinoso LM, Su Al, Kern SG, Wang-Rodriguez J, Moskaluk CA, Frierson HF, Jr., Hampton GM: 『遺伝子発現の分析が、前立腺がんにおけるマーカーおよび薬理学的標的の候補を特定』（Analysis of gene expression identifies candidate markers and pharmacological targets in prostate cancer.） Cancer Res 2001; 61:5974-8; Stamey TA, Warrington JA, Caldwell MC, Chen Z, Fan Z, Mahadevappa M, McNeal JE, Nolley R, Zhang Z: 『良性前立腺肥大と比較したグリーソン（Ｇｌｅａｓｏｎ）等級４／５前立腺がんの分子遺伝学的プロファイリング』（Molecular genetic profiling of Gleason grade 4/5 prostate cancers of compared to benign prostatic hyperplasia.） J Urol 2001; 166:2171-7; Dhanasekaran SM, Barrette TR, Ghosh D, Shah R, Varambally S, Kurachi K, Pienta KJ, Rubin MA, Chinnaiyan AM: 『前立腺がんにおける予後バイオマーカーの描写』（Delineation of prognostic biomarkers in prostate cancer.） Nature 2001; 412:822-6; Waghray A, Schober M, Reroze F, Yao F, Virgin J, Chen YQ: 『ヒト前立腺がんにおける遺伝子発現の連続分析による、発現に差のある遺伝子の特定』（Identification of differentially expressed genes by serial analysis of gene expression in human prostate cancer.）Cancer Res 2001; 61:4283-6; Chaib H, Cockrell EK, Rubin MA, Macoska JA: 『ｃＤＮＡマイクロアレイ分析による、正常および悪性ヒト前立腺組織における遺伝子発現パターンのプロファイリングおよび検証』（Profiling and verification of gene expression patterns in normal and malignant human prostate tissues by cDNA microarray analysis.） Neoplasia 2001; 3:43-52; Chetcuti A, Margan S, Mann S, Russell P, Handelsman D, Rogers J, Dong Q: 『器官に限局された前立腺がんにおける発現に差のある遺伝子の遺伝子発現アレイによる特定』（Identification of differentially expressed genes in organ-confined prostate cancer by gene expression array.）Prostate 2001; 47:132-40）。したがって、本発明によれば、記載の腫瘍関連タンパク質の阻害を通じたこれらの腫瘍の治療への治療法を提供することが可能である。
【００２１】
有効成分または物質を、別の好ましい一実施形態では、さらに、経口、経静脈、局所および／または吸入によって投与することができる。投与形態は腫瘍自体に、および患者の体質次第である。別の投与形態は当業者に既知である。
【００２２】
本発明はさらに、腫瘍、特に悪性腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の発現および／または機能に影響を及ぼす、特に阻害する、少なくとも一の有効成分の有効量、および、適切な場合には医薬キャリアーを含む、医薬組成物を含む。有効成分は、ペプチド、特にポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであることができ、このペプチドが腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の発現および／または機能に好ましくは影響を及ぼす、特に阻害することができる。有効成分はさらに、ペプチド、好ましくはポリペプチドであることができ、このペプチドが腫瘍、特に悪性腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の発現および／または機能に好ましくは影響を及ぼす、特に阻害することができる。有効成分はさらに、いわゆる小分子化合物であることができ、好ましくは１０００未満の分子量（ＭＷ）を有する小分子化合物であることができる。そのような有効成分のその他の特性については、説明の対応する上記の文中で引用がなされている。
【００２３】
本発明はまた、腫瘍、特に悪性腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の活性化因子、阻害因子、調節因子および／または生物学的前駆体の発現および／または機能に影響を及ぼす、特に阻害する、少なくとも一の有効成分の有効量、および、適切な場合には医薬キャリアーを含む、医薬組成物も包含する。この場合の有効成分は、ペプチド、特にポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであることができ、このペプチドが好ましくは腫瘍、特に悪性腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の活性化因子、阻害因子、調節因子および／または生物学的前駆体の発現および／または機能に好ましくは影響を及ぼす、特に阻害することができる。有効成分はさらに、ペプチド、好ましくはポリペプチドであることができ、このペプチドが腫瘍、特に悪性腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の活性化因子、阻害因子、調節因子および／または生物学的前駆体の発現および／または機能に好ましくは影響を及ぼす、特に阻害することができる。本発明の有効成分はさらに、たとえば小分子化合物であることができ、好ましくは１０００未満の分子量（ＭＷ）を有する小分子化合物であることができる。そのような有効成分、およびこの有効成分が向けられる活性化因子、阻害因子、調節因子および／または生物学的前駆体のその他の特性については、説明の対応する上記の文中で引用がなされている。
【００２４】
最後に、本発明は診断キットを含み、この診断キットは 、これらの腫瘍に伴う疾患を診断するための、腫瘍、特に悪性腫瘍によって合成および／または分泌されるタンパク質の発現および／または機能を検出するための少なくとも一の基質を含む。さらに、たとえば対応する疾患が前立腺がんであることが可能であり、それは特に 好ましい一実施形態で請求される。そのような物質のその他の特性については、説明の対応する上記の文中で引用がなされている。
【００２５】
本発明の既存の特性およびその他の特性は、好ましい実施形態の下記の説明と併せて付属の請求項および図から明らかである。これに関連して、個々の特性をそれ自体でまたは互いに複数の組み合わせで実施することが可能である。
【００２６】
図面は示す。
図１：実験計画の図式的表現。
図２：良性および悪性前立腺組織のゲル電気泳動分析およびＭＳ分析、および対応するスポット。
図３：組織特異的タンパク質発現を示す調製ゲル。
【００２７】
材料および方法；
患者 および組織検体；
良性および悪性前立腺組織は、以前に前立腺摘除術を受けた患者から得た。患者はＰＳＡ（前立腺特異的抗体）スクリーニングを用いて特定されており、腫瘍は超音波で確認された。手術を実施する前に各患者から同意を得た。
【００２８】
前立腺が除去された直後、それを滅菌箱へ入れそこで冷却した。検体は病理学者に渡し、そこで厚さ０．５ないし１ｃｍの組織切片が作製された。切片は左右に二分割し、凍結用マトリクスに埋め込んで急速冷凍した。前立腺の残りはホルマリンで固定し、標準的方法に従ってさらに処理した。組織検体を得るために、前立腺の両方の側から薄切片を取り、ヘマトキシリン−エオシンを用いて染色した。病理学者は腫瘍の位置を特定し印を付けた。腫瘍組織はヘマトキシリン−エオシン染色条片から取り、−８０℃にて保存した。印を付けた良性対照条片を腫瘍に冒されていない領域から取り、同一の処理に供した。腫瘍は必要な場合には−８０℃にて保存した。
【００２９】
プロテオミクス分析；
タンパク質アルキル化、ヨウ化、２Ｄ−ＰＡＧＥおよびデータ分析は標準的方法に従って実施した。放射性ヨウ素はアマシャム・バイオサイエンス（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）（フライブルク（Ｆｒｅｉｂｕｒｇ））が起源であった。タンパク質はヨウ素Ｉ−１２５またはＩ−１３１単独を用いてヨウ素の同一濃度で標識した。すべての放射能操作は「放射線障害防止法令」（"Ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ ２００１"）（ドイツ）に従って作成した。２ＤＰＡＧＥについては、検体は図１の図式に従って、混ぜ合わせ、同時電気泳動によって分画した。放射能測定は多光子検出（ＭＰＤ）またはフォスフォイメージャー（Ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒ）（登録商標）（フジ（Ｆｕｊｉ）ＦＬＡ ３０００、レイテスト社（Ｒａｙｔｅｓｔ）、ドイツ・シュトラウベンハルト（Ｓｔｒａｕｂｅｎｈａｒｄ））を用いて実施した。
【００３０】
多光子検出測定は、１６００ピクセルＭＰＤ画像処理装置（バイオトレース社（ＢｉｏＴｒａｃｅｒｓ Ｉｎｃ．）、米国ハーンドン（Ｈｅｒｎｄｏｎ））で、取扱説明書に従って少なくとも２４時間、測定毎に２４ｃｍ×２４ｃｍの領域について実施した。これらの症例におけるスキャンはピクセル当たり０．５ｍｍに設定した。一部の例では、より高い感度を達成するため小さい領域をより長い時間スキャンし、または分解能を高めるためスキャンがピクセル当たり０．２５ｍｍであった。ＭＰＤ画像処理装置をさらに各測定でＩ−１２５またはＩ−１３１のどちらかを検出するように設定した。Ｉ−１３１の半減期がより短いため、それぞれ個別の検体についてこの同位体は常にＩ−１２５より先に測定した。ＭＰＤデータは、ＩＭＡＧＥＶＩＥＷソフトウェア（バイオトレース社）を用いて行列データへ変換した。これらのデータを次いでＢＩＯＰＲＥＰＡＲＡＴＩＯＮソフトウェアを用いて取扱説明書に従って分析した。放射能データは、従来のソフトウェアの分析のためのアルゴリズムを用いてＴＩＦＦデータへ変換した。一部の放射能測定はフォスフォイメージャー（Ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒ）を用いて実施した。
【００３１】
タンパク質同定は調製２ＤＰＡＧＥゲルを用いて実施した。これらのゲルは、放射性ヨウ化に関しては同一の化学的条件下で、しかし非放射性ヨウ素分子を添加してヨウ化された、最大１ｍｇのタンパク質を含む。放射性タンパク質のような移動挙動を示した、銀染色されたタンパク質を、ゲノミクス・ソリューションズ社（Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）のフレキシス（Ｆｌｅｘｙｓ）（商標）ロボットを用いて自動的に回収した。一部の場合には、銀染色されたタンパク質は、放射能シグナルが存在しないが銀ゲルが良性と悪性組織との間で異なるゲル上の場所で取り出された。ゲルの一部はゲノミクス・ソリューションズ社のインベスティゲーター・プロジェスト（Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ Ｐｒｏｇｅｓｔ）（商標）でトリプシンを用いて自動的に消化し、結果として得られたタンパク質の１０%をＭＡＬＤＩテンプレート上に、ゲノミクス・ソリューションズ社のインベスティゲーター・プロＭＳ（Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ ＰｒｏＭＳ）（商標）ロボットを用いて負荷した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦは、ブルカー社（Ｂｒｕｋｅｒ）のオートフレックス（ＡｕｔｏＦｌｅｘ）で取扱説明書に従って実施した。必要に応じて、トリプシン消化で得られたペプチドの最大９０%を、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法を用いて分析した。この場合には、ＬＣ−パッキング・アルティメット（ＬＣ−Ｐａｃｋｉｎｇ Ｕｌｔｉｍａｔｅ）（商標）マイクロＨＰＬＣをブルカー社のエスクワイア（Ｅｓｑｕｉｒｅ）（商標）イオントラップ質量分析装置に接続し、または検体は同一の質量分析装置でナノスプレーＭＳ／ＭＳ法を用いて分析した。タンパク質同定は、ＭＡＳＣＯＴプログラムのバージョン１．０７（マトリクス・サイエンス社（ＭａｔｒｉｘＳｃｉｅｎｃｅ）、英国）を用いて、我々の自製のアルゴリズムを使用して実施した。
【００３２】
結果；
図１は実験計画の図式的表現を示し、結果はこれに基づく。これは分析する２つの検体ＡおよびＢを含み、ヨウ化された検体１２５−Ａ、１２５−Ｂ、１３１−Ａ、および１３１−Ｂを得るためそれぞれ別々にＩ−１２５およびＩ−１３１を用いて標識されている。各検体はそれぞれの例でゲル１および２で分析され、同じく図に示される通り同一であるが異なる標識化がなされた検体と比較する。検体ＡおよびＢはゲル３および４で分析され、同一条件下で対応する他の検体と比較する。これらのゲルはしたがって、検体ＡおよびＢの４連の複製分析を含み、それらは直接検体ＡおよびＢに関する。
【００３３】
図２はこれらの実験の結果を示す。そのうちの図２Ａは悪性、２Ｂは良性、および２Ｃは比較ゲル（２Ａ＋２Ｂ）を示す。図２Ｃは、異なる組織における個々のタンパク質の差のある発現を示す。これらの分析の結果は、既に示されている表１にまとめられている。
【００３４】
図３は、２つの調製ゲルの例について見出されたタンパク質を示す（ｐＨ範囲４〜１０）。個々のタンパク質のいくつかのアイソフォームが見つかったことに特に注目すべきである。このように、たとえば、タンパク質１１（γ−セミノプロテイン）についてはｐＨ６．５〜７．５に検出された合計５種類のアイソフォームが存在し、このように同一のタンパク質のいくつかのアイソフォームの存在を実証する。さらに、腫瘍における特定のタンパク質の形成だけでなく特に個々のタンパク質の特定のアイソフォームの形成も示すことが可能である。また、一部の場合には、特定のタンパク質（表１参照）の発現は阻害される、すなわちダウンレギュレートされることを示すことも可能である。これらのタンパク質はしたがって、既知であってこれから開発される、それに伴う疾患の治療用の有効成分のための適当な標的、およびこれらの疾患を検出するための適当な標的に相当する。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】図１は実験計画の図式的表現。
【図２】図２は良性および悪性前立腺組織のゲル電気泳動分析およびＭＳ分析、および対応するスポット。
【図３】図３は組織特異的タンパク質発現を示す調製ゲル。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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