(57)【要約】本発明は、式（Ｉ）：【化１】2005531529.tif 000019［式中、  Ｒは、水素原子またはフッ素原子である］で示される化合物またはその医薬的に許容し得る塩が血栓性疾患の処置において有用な因子Ｘａインヒビターである、ことに関する。
2005531529.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2005531529.tif 000012
［式中、Ｒは、水素原子またはフッ素原子である］
で示される化合物、またはその医薬的に許容し得る塩。
【請求項２】
Ｒは水素原子である、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
１−(４−メトキシベンゾイル−Ｄ−シクロプロピルグリシニル)−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)−ピペラジン、並びにその塩酸、フマル酸およびマレイン酸付加塩から選ばれる、請求項２記載の化合物。
【請求項４】
結晶形態であるジ塩酸、ジフマル酸およびジマレイン酸付加塩から選ばれる、請求項３記載の化合物。
【請求項５】
結晶形態である１−(４−メトキシベンゾイル−Ｄ−シクロプロピルグリシニル)−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)ピペラジン・ジフマル酸塩である、請求項４記載の化合物。
【請求項６】
Ｒはフッ素原子である、請求項１記載の化合物。
【請求項７】
１−(３−フルオロ−４−メトキシベンゾイル−Ｄ−シクロプロピルグリシニル)−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)ピペラジンおよびその塩酸付加塩から選ばれる、請求項６記載の化合物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１つに記載の化合物を、医薬的に許容し得る希釈物または担体と一緒に含む、医薬組成物。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか１つに記載の化合物の製造法であって、
（ａ）式（ＩＩ）：
【化２】
2005531529.tif 000013
で示される化合物またはその塩と、式（ＩＩＩ）：
【化３】
2005531529.tif 000014
で示される化合物またはその反応性誘導体とを反応するか；あるいは、
（ｂ）式（ＩＶ）：
【化４】
2005531529.tif 000015
で示される化合物またはその塩と、式（Ｖ）：
【化５】
2005531529.tif 000016
で示される化合物またはその反応性誘導体とを反応し；続いて、
医薬的に許容し得る塩を所望する場合には、医薬的に許容し得る塩を形成する；
ことを含む、該製造法。
【請求項１０】
式（ＩＩ）：
【化６】
2005531529.tif 000017
で示される化合物、またはその塩。
【請求項１１】
式（Ｖ）：
【化７】
2005531529.tif 000018
で示される化合物。
【請求項１２】
療法において使用するための、請求項１〜７のいずれか１つに記載の化合物。
【請求項１３】
血栓性疾患の処置のための薬物の製造における、請求項１〜７のいずれか１つに記載の化合物の使用。
【請求項１４】
処置を必要とする被験者における血栓性疾患の処置方法であって、請求項１記載の化合物の有効な量を投与することを含む、該方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、医薬品として有用な化合物、該化合物を含有する医薬組成物、該化合物の製造法、該化合物の製造において有用な中間体、および医薬品としての該化合物の使用に関する。
【０００２】
循環器病は、主要な世界中の健康上の問題として存在し続けており、そして深刻な疾患および死亡の一般的な原因である。
【０００３】
循環器病のための新たな処置についての研究において研究者によって探求されている１系統の研究は、セリンプロテアーゼ、因子Ｘａのインヒビターが血栓性疾患の処置において抗凝固薬として有用であり得るという仮説に基づく。
【０００４】
因子Ｘａのインヒビターは、知られる。例えば、ＷＯ  ０１／９６３２３は、芳香族基、環状基を有するグリシン残基、および４−置換ピペラジニル基を含有するある化合物を開示する。該環状基は、シクロアルキル基（例えば、シクロペンチルまたはシクロヘキシル）であり得るが、該環状基がフェニル基である化合物は好ましいと表現されている。
【０００５】
驚くべきことに、本発明においてＷＯ  ０１／９６３２３の範囲内から、芳香族基として４−メトキシフェニルまたは３−フルオロ−４−メトキシフェニル基を、グリシン残基としてシクロプロピルグリシンを、および４−置換ピペラジニル基として１−メチルピペリジン−４−イルピペラジニル基を選ぶことによって、選択的な因子Ｘａインヒビターであってそして特に有利な性質を有する化合物を得ることができることが分かった。
【０００６】
従って、本発明は、式（Ｉ）：
【化１】
2005531529.tif 000003
［式中、Ｒは、水素原子またはフッ素原子である］
で示される化合物、またはその医薬的に許容し得る塩を提供する。
【０００７】
式（Ｉ）の化合物は、セリンプロテアーゼ、因子Ｘａの強力で且つ選択的なインヒビターであり、ヒト血漿において良好な抗凝固活性を有し、哺乳動物に経口投与時に良好な血漿曝露を有し、そして特に有利な生理学的なおよび毒物学的な活性プロファイルを有することを見出した。
【０００８】
式（Ｉ）の化合物はまた、化学名：１−(４−メトキシベンゾイル−Ｄ−シクロプロピル−グリシニル)−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)ピペラジン、および１−(３−フルオロ−４−メトキシベンゾイル−Ｄ−シクロプロピル−グリシニル)−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)ピペラジンとも呼ばれ得る。
【０００９】
式（Ｉ）の化合物は、（Ｄ）立体配置を有する不斉中心を含むと認められるであろう。従って、該化合物は、対応する（Ｌ）異性体と合わせた混合物（例えば、ラセミ混合物）としてまたは別々に存在し、そして単離され得る。該化合物は該（Ｌ）異性体を実質的に有しないで単離される、ことが好ましい。
【００１０】
式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容し得る塩は、溶媒和物の形態で単離され得て、従っていずれかの該溶媒和物が本発明の範囲内に含まれる、ことも認められるであろう。
【００１１】
医薬的に許容し得る塩は、例えば塩酸、フマル酸、およびマレイン酸付加塩を含む。
【００１２】
式（Ｉ）の化合物は２つの塩基性窒素原子を含み、従ってモノおよびジ−酸付加塩を形成し得る、と認められるであろう。
【００１３】
式（Ｉ）の化合物の１群は、Ｒが水素原子である化合物である。
【００１４】
Ｒが水素原子である化合物は、１−(４−メトキシベンゾイル−Ｄ−シクロプロピルグリシニル)−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)ピペラジン、並びにその塩酸、フマル酸およびマレイン酸付加塩、特にジ塩酸、ジフマル酸およびジマレイン酸付加塩である。
【００１５】
結晶性のジ塩酸、ジフマル酸およびジマレイン酸付加塩を製造し、そして示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によって確認した。
ジ塩酸塩：融解前に分解する；
ジフマル酸塩：２２２．８℃（開始温度）、２２５．４℃（ピーク温度）；および、
ジマレイン酸塩：１９５．８℃（開始温度）、２０２．０℃（ピーク温度）。
【００１６】
結晶形態の１−(４−メトキシベンゾイル−Ｄ−シクロプロピルグリシニル)−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)ピペラジン・ジフマル酸塩を、特記する。
【００１７】
式（Ｉ）の化合物の別の群は、Ｒがフッ素原子である化合物である。
【００１８】
Ｒがフッ素原子である化合物は、１−(３−フルオロ−４−メトキシベンゾイル−Ｄ−シクロプロピルグリシニル)−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)ピペラジン；およびその塩酸付加塩である。
【００１９】
式（Ｉ）の化合物およびその医薬的に許容し得る塩は、
（ａ）式（ＩＩ）：
【化２】
2005531529.tif 000004
で示される化合物またはその塩（例えば、トリ塩酸塩）と、式（ＩＩＩ）
【化３】
2005531529.tif 000005
で示される化合物またはその反応性誘導体とを反応するか；あるいは、
（ｂ）式（ＩＶ）：
【化４】
2005531529.tif 000006
で示される化合物またはその塩（例えば、ジ臭化水素塩）と式（Ｖ）：
【化５】
2005531529.tif 000007
で示される化合物またはその反応性誘導体とを反応し；続いて、
医薬的に許容し得る塩を所望する場合には、医薬的に許容し得る塩を形成する；
ことを含む、方法によって製造し得る。
【００２０】
式（ＩＩ）の化合物と式（ＩＩＩ）の化合物との間の反応は、アミド結合の形成のために通常使用される試薬および反応条件を用いて、好都合なことに行なうことができる。該反応は好都合なことに、ベンゾトリアゾールベース試薬（例えば、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールまたは１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール）および脱水剤（例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミドまたは１−(３−ジメチルアミノプロピル)−３−エチルカルボジイミド）の存在下、不活性な有機溶媒（例えば、ジメチルホルムアミドおよび／または塩化メチレン）中で、行なう。該反応は好都合なことに、０〜５０℃の温度で（周囲温度が好ましい）行なう。式（ＩＩ）の化合物の塩を使用する場合には、該反応は通常、更に塩基（例えば、トリエチルアミン）の存在下で行なう。他の適当な試薬および溶媒が当該分野において知られ、例えば塩基（例えば、トリエチルアミン）の存在下での酸ハライド（例えば、ｐ−アニソイルクロリド）が挙げられる。
【００２１】
式（ＩＶ）の化合物および式（Ｖ）の化合物の間の反応は好都合なことに、アミド結合の形成のために通常使用される試薬および反応条件を用いて、例えば式（ＩＩ）の化合物と式（ＩＩＩ）の化合物との反応について上記の通り、行なうことができる。
【００２２】
式（ＩＩ）の化合物は、式（ＩＶ）の化合物を式（ＶＩ）：
【化６】
2005531529.tif 000008
［式中、Ｒ１は、アミノ保護基（例えば、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ））である］
で示される化合物と反応することによって、式（ＶＩＩ）：
【化７】
2005531529.tif 000009
で示される化合物を得て、
続いて、該保護基を除去する、
ことによって製造することができる。
【００２３】
式（ＩＶ）の化合物は知られ、このものはまた、１−(１−メチルピペリジン−４−イル)ピペラジンとも呼ばれる。
【００２４】
式（Ｖ）の化合物は、式（ＶＩＩＩ）：
【化８】
2005531529.tif 000010
［式中、Ｒ２は、カルボキシ保護基（例えば、メチル、エチルなどの(Ｃ１〜６)アルキル基である］
で示される化合物を式（ＩＩＩ）の化合物と反応することによって、式（ＩＸ）：
【化９】
2005531529.tif 000011
で示される化合物を得て、続いて、
該保護基を除去する、
ことによって製造することができる。
【００２５】
式（ＶＩ）および（ＶＩＩＩ）の化合物は知られるか、あるいはアミノ酸内のカルボキシ基またはアミノ基の保護についての通常の方法を用いて(Ｄ)−シクロプロピルグリシンから製造することができる。(Ｄ)−シクロプロピルグリシンは好都合なことに、米国特許第６,０９０,９８２号に記載する方法によって(Ｒ)−(＋)−メチルベンジルアミンを用いてシクロプロパンカルボキシアルデヒドから、あるいは本明細書中に引用する方法を用いることによって、製造することができる。
【００２６】
式（ＩＩＩ）の化合物は、よく知られる。
【００２７】
アミノ基およびカルボン酸基の保護は、ＭｃＯｍｉｅによるProtecting Groups in Organic Chemistry, Plenum Press, NY, 1973、並びにＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓによるProtecting Groups in Organic Synthesis, 2版, John Wiley & Sons, NY, 1991中に記載されている。カルボキシ保護基として例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基（例えば、メチル、エチル、ｔ−ブチル）およびｔ−アミル；アリール(Ｃ１〜Ｃ４)アルキル基（例えば、ベンジル、４−ニトロベンジル、４−メトキシベンジル、３,４−ジメトキシベンジル、２,４−ジメトキシベンジル、２,４,６−トリメトキシベンジル、２,４,６−トリメチルベンジル、ベンズヒドリル、およびトリチル）；シリル基（例えば、トリメチルシリル、およびｔ−ブチルジメチルシリル）、およびアリル基（例えば、アリル、および１−(トリメチルシリルメチル)プロパ−１−エン−３−イル）を含む。
【００２８】
アミン保護基としては例えば、アシル基を含み、例えば式Ｒ３ＣＯの基（ここで、Ｒ３はＣ１〜６アルコキシ、フェニルＣ１〜６アルコキシ、またはＣ３〜１０シクロアルコキシである）が挙げられ、ここで、該フェニル基は場合により、例えば１または２個のハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＣ１〜Ｃ４アルコキシによって置換され得る。
【００２９】
好ましいアミノ保護基は、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）およびｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）を含む。
【００３０】
本明細書中に記載する中間体、例えば式（ＩＩ）および（Ｖ）の化合物は、新規であると考えられ、従ってこれらは本発明の更なる態様として提供する。
【００３１】
本発明の化合物は、例えば胃腸管（例えば、直腸でまたは経口的に）、鼻、肺、筋系もしくは脈管系中へのいずれかの好都合な経路によって、または経皮的に、投与することができる。該化合物は、いずれかの好都合な投与形態（例えば、錠剤、散剤、カプセル剤、液剤、分散剤、懸濁剤、シロップ剤、スプレー剤、坐剤、ゲル剤、乳剤、パッチ剤など）で投与することができる。該組成物は、医薬製剤における通常の構成成分（例えば、希釈剤、担体、ｐＨ調節剤、甘味剤、バルク剤、および更なる活性薬物）を含み得る。非経口投与を所望する場合には、該組成物は減菌であって、そして注射または注入にとって適当な液体または懸濁液の形態であろう。該組成物は、本発明の更なる態様を形成する。
【００３２】
本態様の視点から、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容し得る塩を、医薬的に許容し得る希釈物または担体と一緒に含む、医薬組成物を提供する。
【００３３】
別の態様によれば、本発明は、療法において使用するための式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容し得る塩を提供する。
【００３４】
別の態様によれば、本発明は、血栓性疾患の処置のための医薬の製造における、式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容し得る塩の使用を提供する。
【００３５】
別の態様によれば、本発明は、処置が必要な被験者における血栓性疾患の処置方法を提供し、該方法は、式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容し得る塩の有効な量を投与することを含む。
【００３６】
該被験者は、ヒトまたは非ヒト動物（例えば、非ヒト哺乳動物（例えば、ネコ、イヌ、ウマ、ウシまたはヒツジ））であり得る。
【００３７】
該トロンビン疾患は例えば、静脈血栓症、肺塞栓症、動脈血栓症、心筋虚血、心筋梗塞、または脳血栓症であり得る。本発明の化合物は、例えば冠動脈または末梢動脈の経腔的冠動脈形成術またはバイパス移植術後の、血栓溶解性治療および再狭窄に関連する急性閉塞の処置において、および長期の血液透析患者における血管アクセス開放(patency)の維持において、本発明の方法に従って使用することもできる。
【００３８】
式（Ｉ）の化合物の用量は、処置する病気の性質および激しさ、投与経路、並びに被験者の大きさおよび種、に依存するであろう。一般的に、０．０１〜１００μＭ／体重ｋｇの範囲である量を投与する。
【００３９】
本明細書に使用する用語「処置」とは、予防学的な使用を含む。用語「有効な量」とは、処置する血栓性疾患の症状の発生を軽減しまたは抑制するのに有効である、式（Ｉ）の化合物の量を意味する。
【００４０】
本発明に記載の化合物は、単独で、または異なる作用様式を有する抗凝固薬もしくは血栓性薬と組み合わせて投与することができる。
【００４１】
以下の実施例は、本発明を例示する。
使用する略号は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ命名法に従う。以下の略号を、本明細書中で使用する。Ｂｏｃ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）、Ｃａｌｃｄ（計算値）、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド、ＮＭＲ用には全重水素化）、ＥＤＣＩ（１−(３−ジメチルアミノプロピル)−３−エチルカルボジイミド・塩酸塩）、ＥＳ−ＭＳ（エレクトロスプレーイオン化質量分析）、ＨＯＢｔ（１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール）、ＨＰＬＣ（保持時間としてｔｒを有する、高速液体クロマトグラフィー）、ＭｅＯＨ（メタノール）、ＮＭＲ（核磁気共鳴）、ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）。
【００４２】
（実施例１）
１−(４−メトキシベンゾイル−Ｄ−シクロプロピルグリシル)−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)ピペラジン
Ａ．Ｄ−シクロプロピルグリシン
該アミノ酸は、(Ｒ)−(＋)−α−メチル−ベンジルアミンおよび米国特許第６,０９０,９８２号の方法を用いることによって、または本明細書中に引用する方法を用いることによって好都合に、シクロプロパン−カルバキシアルデヒドから得る。
【００４３】
Ｂ．Ｂｏｃ−Ｄ−シクロプロピルグリシン
ジオキサン（６００ｍＬ）、水（３００ｍＬ）および１Ｎ  ＮａＯＨ（４８０ｍＬ、０．４８ｍｏｌ）混合物中のＤ−シクロプロピルグリシン（４６．１ｇ、０．４ｍｏｌ）溶液を、氷浴中、０〜５℃まで冷却して撹拌する。二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１０５ｇ、０．４８ｍｏｌ）をゆっくりと加え、そして撹拌を室温で０．５時間続ける。該溶液を真空下で約５００ｍＬまで濃縮し、氷−水浴中で冷却し、酢酸エチル（５００ｍＬ）層を用いて覆い、そしてＫＨＳＯ４の希釈水溶液を用いてｐＨ２〜３まで酸性とする。該水相を、酢酸エチル（５００ｍＬ）を用いて抽出し、そして該抽出を生成物が全く残らなくなるまで繰り返す。該酢酸エチル抽出物を貯蔵し、水（０．５Ｌ）、ブライン（０．５Ｌ）を用いて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４を用いて乾燥し、ろ過し、そして濃縮して、白色個体（７８ｇ、９０．６％）を得る。[α]Ｄ２０＝−３１°（ｃ＝１．０２、ＭｅＯＨ）。
1H NMR (CDCl3) δ 5.9 (sb, 1H), 5.09 (sb, 1H), 3.75 (m, 1H), 1.42 (s, 9H), 1.10 (d, 1H), 0.4-0.7 (m, 4H)。
【００４４】
Ｃ．１−(Ｂｏｃ−Ｄ−シクロプロピルグリシニル)−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)ピペラジン
Ｂｏｃ−Ｄ−シクロプロピルグリシン（２１６ｇ、１．０ｍｏｌ）および１−(１−メチルピペリジン−４−イル)ピペラジン（１９２ｇ、１．０５ｍｏｌ）を、Ｎ２下、無水ＣＨ２Ｃｌ２（３．２Ｌ）中にスラリーとする。次いで、該混合物を氷浴中で０〜５℃まで冷却する。この混合物に、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）モノ水和物（１４９ｇ、１．１ｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（１３６ｇ、１．０５ｍｏｌ）を加え、続いて１−[３−(ジメチルアミノ)プロピル]−３−エチルカルボジイミド・塩酸塩（ＥＤＣＩ）（２１１ｇ、１．１ｍｏｌ）を、温度を０〜５℃に保ちながら１時間かけてゆっくりと加える。該反応混合物を、室温まで終夜昇温させる。次いで、該反応液を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３Ｌ）を加えることによってクエンチし、そして塩化メチレン（２Ｌ）を用いて抽出する。相分離する。該有機相を再び、飽和ＮａＨＣＯ３（３Ｌ）、ブライン（２Ｌ）を用いて洗浄し、ＭｇＳＯ４を用いて乾燥し、ろ過し、そして濃縮して、粘性油状物の粗生成物（４１５ｇ、１０９％）を得て、このものを直接に使用する。
1H NMR (DMSO-d6) δ 6.91 (d, 1H), 3.97 (t, 1H), 3.41 (sb, 4H), 2.74 (d, 2H), 2.40 (sb, 4H), 2.10 (m, 1H), 2.09 (s, 3H), 1.79 (t, 2H), 1.65 (d, 2H), 1.40 (m, 2H), 1.36 (s, 9H), 1.05 (m, 1H), 0.93 (d, 1H), 0.40 (m, 2H), 0.26 (m, 1H)。
【００４５】
Ｄ．１−(Ｄ−シクロプロピルグリシニル)−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)−ピペラジン・トリ塩酸塩
１−(Ｂｏｃ−Ｄ−シクロプロピルグリシニル)−４−(１−メチルピペラジン−４−イル)ピペラジン（粗、４１５ｇ、１．０ｍｏｌ）を、無水メタノール（１．５Ｌ）中に溶解する。この溶液に、ＨＣｌ−ＭｅＯＨ（３８０ｇ／１．５Ｌ、１０．４ｍｏｌ）溶液を０℃で加える。該反応混合物を撹拌し、そして室温まで２時間ゆっくりと昇温させる。次いで、酢酸エチル（２Ｌ）を撹拌しながら加える。撹拌を０〜５℃で１時間続け、そして白色粉末の生成物を析出し、このものをろ過し、そして４５℃で真空乾燥して、白色個体の標題化合物（３５７ｇ、９１．７％）を得る。
1H NMR (DMSO-d6＋D2O) δ 8.4 (bs, 1H), 4.5 (bs, 2H), 3.0 (t, 4H), 2.78 (m, 1H), 2.74 (s, 3H), 2.35 (m, 2H), 2.20 (m, 1H), 2.08 (m, 2H), 1.06 (bd, 1H), 0.60 (m, 4H)。
【００４６】
Ｅ．１−(４−メトキシベンゾイル−Ｄ−シクロプロピルグリシニル)−４−(１−メチル−ピペリジン−４−イル)ピペラジン
１−(Ｄ−シクロプロピルグリシニル)−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)−ピペラジン・トリ塩酸塩（３００ｇ、０．７７ｍｏｌ）を、Ｎ２下、無水ＣＨ２Ｃｌ２（３Ｌ）中にスラリーとする。次いで、該混合物を氷浴中、０〜５℃まで冷却する。トリエチルアミン（４５０ｍＬ、３．２３ｍｏｌ）を、温度を０〜５℃に保ちながらゆっくりと加え、続いてｐ−アニソイルクロリド（１４２ｇ、０．８３ｍｏｌ）を、温度を０〜５℃に保ちながらゆっくりと加える。該反応混合物を、室温まで２時間かけて昇温する。次いで、該反応液を、飽和ＮａＨＣＯ３（１Ｌ）を加えてクエンチし、そして該相分離する。次いで、該水相を、ＣＨ２Ｃｌ２（２Ｌ）を用いて抽出する。該有機相を合わせて、ブライン（１Ｌ）を用いて洗浄し、ＭｇＳＯ４を用いて乾燥し、ろ過し、そして濃縮して、標題化合物（３２６ｇ、１０２％）を得る。
1H NMR (DMSO-d6) δ 8.55 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.88 (d, 2H), 6.96 (d, 2H), 4.39 (t, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.45 (s, 4H), 2.74 (d, 2H), 2.40 (m, 4H), 2.09 (s, 3H), 2.08 (m, 1H), 1.79 (dt, 2H), 1.62 (d, 2H), 1.38 (m, 2H), 1.26 (m, 1H), 0.43 (m, 2H), 0.35 (m, 2H)。
【００４７】
（実施例１ａ）
１−(４−メトキシベンゾイル−Ｄ−シクロプロピルグリシニル)−４−(１−メチル−ピペリジン−４−イル)ピペラジン・ジフマル酸塩
６５℃まで加温した１−(４−メトキシベンゾイル−Ｄ−シクロプロピル−グリシニル)−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)ピペラジン（３１５ｇ、０．７６ｍｏｌ）の９５％エタノール（４．２Ｌ）溶液に、フマル酸（１７７ｇ、１．５２ｍｏｌ）の熱エタノール（６５℃、２．８Ｌ）溶液を加える。最終的な透明溶液を６５℃で撹拌し、そしてこのものを室温までゆっくりと（２時間かけて）、次いで０〜５℃まで冷却する。該白色結晶をろ過によって集め、９５％エタノール（１Ｌ）を用いて洗浄し、４５℃で真空乾燥して、標題の塩（４４８ｇ、９１．２％）（ｍｐ＝２０５〜２０７℃）を得る。
1H NMR (DMSO-d6) δ 11.35 (s, 1H), 8.58 (d, 1H), 7.86 (d, 2H), 6.96 (d, 2H), 6.55 (s, 4H), 4.39 (t, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.45 (s, 4H), 3.20 (d, 2H), 2.62 (t, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.42 (m, 6H), 1.80 (d, 2H), 1.62 (d, 2H), 1.28 (m, 1H), 0.43 (m, 2H), 0.35 (m, 2H)。
[α]Ｄ２０＝−３７．７°（ｃ＝０．８３６、Ｈ２Ｏ）。
【００４８】
（実施例１ｂ）
１−(４−メトキシベンゾイル−Ｄ−シクロプロピルグリシニル)−４−(１−メチル−ピペリジン−４−イル)ピペラジン・塩酸塩
１−(４−メトキシベンゾイル−Ｄ−シクロプロピルグリシニル)−４−(１−メチル−ピペリジン−４−イル)ピペラジン（３．０４ｇ、６．７３ｍｍｏｌ）を、約０．２Ｍ  ＨＣｌ（３７ｍＬ）中に溶解し、そして凍結乾燥して標題化合物（２．９８ｇ、定量）を得る。
一部の1H NMRスペクトル（DMSO-d6）δ 10.63 (br, 1H), 8.59 (br, 1H), 7.88 (d, 2H), 6.98 (d, 2H), 4.36 (br t, 1H), 3.82 (s, 3H), 2.70 (s, 3H), 1.29 (m, 1H), 0.48 (m, 2H), 0.36 (m, 2H)。
ＥＳ−ＭＳ，ｍ／ｚ  ４１５．５（Ｍ＋１）＋。
元素分析（Ｃ２３Ｈ３４Ｎ４Ｏ３・１．２５ＨＣｌ・１．０Ｈ２Ｏとして計算）
計算値：Ｃ  ５７．７８；Ｈ  ７．８５；Ｎ  １１．７２；Ｃｌ  ９．３０；
実測値：Ｃ  ５７．７９；Ｈ  ７．９３；Ｎ  １１．７４；Ｃｌ  ９．６４。
分析用ＨＰＬＣ（Ｘｔｅｒｒａ  ＲＰ１８、４．６×１５０ｃｍ、１０％アセトニトリル／水（０．１％ＴＦＡ）〜５０％アセトニトリル／水（０．１％ＴＦＡ）を４０分間かけて）、１ｍＬ／分：９９％、ｔｒ＝１０．６６分。
【００４９】
（実施例２）
１−[(３−フルオロ−４−メトキシベンゾイル)−Ｄ−シクロプロピルグリシニル]−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)ピペラジン
１−Ｄ−シクロプロピルグリシニル−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)ピペラジン・トリ塩酸塩（１．５ｇ、３．８５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３０ｍＬ）撹拌懸濁液に、トリエチルアミン（１．３６ｇ、１３．５ｍｍｏｌ）を加え、続いて３−フルオロ−４−メトキシ安息香酸（０．６２２ｇ、３．６６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．５７３ｇ、４．２４ｍｍｏｌ）およびＥＤＣＩ（０．８１３ｇ、４．２４ｍｍｏｌ）を加える。終夜撹拌後に、該混合物を、ジクロロメタンおよび飽和炭酸水素ナトリウム水溶液の間で分配する。次いで、該有機層を飽和炭酸水素ナトリウムを用いて再び洗浄し、続いてブラインを用いて洗浄し、次いでＭｇＳＯ４を用いて乾燥し、ろ過し、そして真空下で濃縮する。次いで、該残渣をジクロロメタン中に溶解し、そしてこのものをシリカゲルクロマトグラフィー精製（０〜１２％勾配の２Ｍアンモニア／メタノールを用いて溶出する）を行なう。純粋な生成物を含有する画分を合わせ、真空下で濃縮して、標題化合物（１．０３ｇ、６１％）を得る。
ＥＳ−ＭＳ、ｍ／ｚ  ４３３．５（Ｍ＋１）＋。
分析用ＨＰＬＣ（Ｖｙｄａｃ  Ｃ１８、４．６×１５０ｃｍ、１０％アセトニトリル／水（０．１％ＴＦＡ）〜５０％アセトニトリル／水（０．１％ＴＦＡ）を４０分間かけて）、１ｍＬ／分：９５％、ｔｒ＝１３．１６分。
【００５０】
（実施例２ａ)
１−[(３−フルオロ−４−メトキシベンゾイル)−Ｄ−シクロプロピルグリシニル]−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)ピペラジン・塩酸塩
１−[(３−フルオロ−４−メトキシベンゾイル)−Ｄ−シクロプロピルグリシニル]−４−(１−メチルピペリジン−４−イル)ピペラジン（１ｇ、２．３１ｍｍｏｌ）を約０．２Ｍ  ＨＣｌ（１２．７ｍＬ）中に溶解し、凍結乾燥して、標題化合物（１．０３ｇ、定量）を得る。
一部の1H NMRスペクトル（DMSO-d6) δ 10.36 (br, 1H), 8.73 (d, 1H), 7.75-7.83 (m, 2H), 7.25 (t, 1H), 4.36 (t, 1H), 3.90 (s, 3H), 2.70 (s, 3H), 1.28 (m, 1H), 0.48 (m, 2H), 0.36 (m, 2H)。
ＥＳ−ＭＳ，ｍ／ｚ  ４３３．３（Ｍ＋１）＋。
元素分析（Ｃ２３Ｈ３３ＦＮ４Ｏ３・１．６ＨＣｌ・０．５Ｈ２Ｏとして計算）
計算値：Ｃ  ５５．２６；Ｈ  ７．１８；Ｎ  １１．２１；Ｆ  ３．８０；Ｃｌ  １１．３５；
実測値：Ｃ  ５５．３１；Ｈ  ７．２４；Ｎ  １１．３８；Ｆ  ３．６４；Ｃｌ  １１．３６。
分析用ＨＰＬＣ（Ｘｔｅｒｒａ  ＲＰ１８、４．６×１５０ｃｍ、１０％アセトニトリル／水（０．１％ＴＦＡ）〜５０％アセトニトリル／水（０．１％ＴＦＡ）を４０分間かけて）、１ｍＬ／分：９８％、ｔｒ＝８．０６７分。
【００５１】
（酵素阻害アッセイ）
試験化合物が因子Ｘａを阻害する能力を、以下の酵素阻害アッセイの１つ以上において、または当該分野の当業者にとって知られる他の標準的なアッセイにおいて、評価することができる。
【００５２】
（酵素阻害アッセイ）
ヒト因子Ｘａおよびヒトトロンビンを、エンザイム・リサーチ・ラボラトリーズ（Enzyme Research Laboratories製；South Bend, Indiana, 米国）から購入する。他のプロテアーゼは、他の商業源製である。色素生産性パラ−ニトロアニリドペプチドプロテアーゼ基質を、ミッドウェスト・バイオテク（Midwest Biotech; Fishers, Indiana, 米国）から購入する。
【００５３】
ヒト因子Ｘａについての結合アフィニティーは、以前に記載されているａ，ｂ，ｃ，ｄ、プロテアーゼ阻害速度論からの見かけ会合定数（Ｋａｓｓ）として測定する。該見かけＫａｓｓ値は、９６ウェルプレート中、自動化（ＢｉｏＭｅｋ−１０００）希釈のインヒビターを用いて得て（Ｋａｓｓ測定は、４〜８個のインヒビター濃度の各々について３回行なう）、そして色素生産性基質の加水分解速度は、サーモマックス（Thermomax）プレートリーダー（Molecular Devices製, San Francisco）を用いて４０５ｎｍで測定する。因子Ｘａの阻害の場合には、アッセイプロトコールは、５０μＬの緩衝液（０．０６Ｍのトリス、０．３ＭのＮａＣｌ、ｐＨ  ７．４）；２５μＬのインヒビター被験溶液（ＭｅＯＨ溶液）；２５μＬのヒト因子Ｘａ（０．０３Ｍのトリス、０．１５ＭのＮａＣｌ中、３２ｎＭ；１ｍｇ／ｍＬのＨＳＡ）であり；最後に、加水分解の開始前２分以内に、１５０μＬのＢｚＩｌｅＧｌｕＧｌｙＡｒｇｐＮＡ（０．３ｍＭの水溶液）を加える。最終的な［因子Ｘａ］は、３．２ｎＭである。［遊離Ｘａ］および［結合Ｘａ］は、各インヒビター濃度についてSoftmaxProソフトウェアを用いることによって、同一プレートでの線形標準曲線から測定する。そして、見かけのＫａｓｓは、コントロール（３．２ｎＭの因子Ｘａ）の２０％〜８０％の間の加水分解の阻害を与える各インヒビター濃度について、算出する（見かけＫａｓｓ＝［Ｅ：Ｉ]／［Ｅｆ］［Ｉｆ］＝［Ｅｂ］／［Ｅｆ］［Ｉｏ−Ｉｂ］である）。結果得られる見かけＫａｓｓ値は、各インヒビターについてＫｉのほぼ逆数［１／ａｐｐ  Ｋａｓｓ＝ａｐｐ  Ｋｉ）である。１つの基質濃度で測定した平均的な見かけＫａｓｓ値の変量は、＋／−１５％であった。該アッセイシステムＫｍは、０．３４７＋／−０．０３１ｍＭ［ｎ＝４］と測定され；Ｖ最大値は、１３．１１＋／−０．７６μＭ／分であった。
【００５４】
Ｋａｓｓ値は、以下の酵素および基質濃度を用いる同一プロトコールを使用して、トロンビンおよび他のプロテアーゼについて測定する。
トロンビン  ５．９ｎＭおよび０．２ｍＭ  ＢｚＰｈｅＶａｌＡｒｇｐＮＡ；
因子ＸＩａ  １．２ｎＭおよび０．４ｍＭ  ｐｙｒｏＧｌｕＰｒｏＡｒｇｐＮＡ；
因子ＸＩＩａ  １０ｎＭおよび０．２ｍＭ  ＨＤＰｒｏＰｈｅＡｒｇｐＮＡ；
プラスミン  ３．４ｎＭおよび０．５ｍＭ  ＨＤＶａｌＬｅｕＬｙｓｐＮＡ；
ｎｔ−ＰＡ  １．２ｎＭおよび０．８ｍＭ  ＨＤＩｌｅＰｒｏＡｒｇｐＮＡ；
ウロキナーゼ  ０．４ｎＭおよび０．４ｍＭ  ｐｙｒｏＧｌｕＧｌｙＡｒｇｐＮＡ；
ａＰＣ  ３ｎＭおよび０．１７４ｍＭ  ｐｙｒｏＧｌｕＰｒｏＡｒｇｐＮＡ；
血漿カリクレイン  １．９ｎＭおよびＤ−ＰｒｏＰｈｅＡｒｇｐＮＡ；および、
ウシトリプシン  １．４ｎＭおよび０．１８ｍＭ  ＢｚＰｈｅＶａｌＡｒｇｐＮＡ。
【００５５】
（引用文献）
（ａ）Sall DJ, JA Bastian, SL Briggs, JA Buben, NY Chirgadze, DK Clawson, ML Denny, DD Giera, DS Gifford-Moore, RW Harper, KL Hauser, VJ Klimkowski, TJ Kohn, H- S Lin, JR McCowan, AD Palkowitz, GF Smith, ME Richett, K Takeuchi, KJ Thrasher, JM Tinsley, BG Utterback, S-CB Yan, M Zhangによる、Dibasic Benzo[b]thiophenes Derivatives as a Novel Class of Active Site Directed Thrombin Inhibitors. 1. Determination of the Serine Protease Selectivity, Structure-Activity Relationships and Binding Orientation. J Med Chem 40 3489-3493 (1997)。
（ｂ）Smith GF, TJ Craft, DS Gifford-Moore, WJ Coffman, KD Kurz, E Roberts, RT Shuman, GE Sandusky, ND Jones, N ChirgadzeおよびCV Jacksonによる、A Family of Arginal Thrombin Inhibitors Related to Efegatran. Sem. Thrombos. Hemost. 22, 173-183 (1996)。
（ｃ）Smith GF, DS Gifford-Moore, TJ Craft, N Chirgadze, KJ Ruterbories, TD Lindstrom, JH Satterwhiteによる、Efegatran: A New Cardiovascular Anticoagulant. In New Anticoagulants for the Cardiovascular Patient. R Pifarre編, Hanley & Belfus,Inc., Philadelphia (1997) 265-300頁。
（ｄ）Sall DJ, DL Bailey, JA Bastian, NY Chirgadze, AC Clemens-Smith, ML Denney, MJ Fisher, DD Geira, DS Gifford-Moore, RW Harper, LM Johnson, VJ Klimkowski, TJ Kohn, HS Lin, JR McCowan, AD Palkowitz, ME Richett, GF Smith, DW Snyder, K Takeuchi, JE Toth, M Zangによる、Diamino Benzo[b]thiophene Derivatives as a Novel Class of Active Site Directed Thrombin Inhibitors: 5. Potency, Efficacy and Pharmacokinetic Properties of Modified C-3 Side Chain Derivatives. J. Med. Chem., 43, 649-663 (2000)。
【００５６】
本明細書に例示する式（Ｉ）の化合物は、酵素阻害アッセイにおいて、Ｋａｓｓが約１４×１０６〜３５×１０６Ｌ／モルを示すことを見出した。
【００５７】
試験化合物が部分トロンボプラスチン時間（プロトロンビン時間）を増大させる能力は、以下の試験プロトコールにおいて評価することができる。
【００５８】
（部分トロンボプラスチン時間（プロトロンビン）試験プロトコール）
静脈血液を、３．２％（０．１０９Ｍ）のクエン酸トリナトリウム・バキュテナー(vacutainer)チューブ中に、血液の９容量に対して抗凝固剤の１容量の割合で集める。該血液細胞を１０分間、遠心分離（７００ｇ）することによって分離して血漿を得て、このものを必要とするまで７０℃で冷蔵する。
【００５９】
試験を行なうために、血漿（１００μＬ）をガラス試験チューブ中にピペットし、ＤＭＳＯ中の試験化合物（１μＬ）を加え、３７℃で２分間かけて加温する。温めた（３７℃）マンテェスター（Manchester）（組織トロンボプラスチン）試薬（Helena Biosciences社製、英国）（１００μＬ）を加え、２分間平衡とする。温めた（３７℃）２５ｍＭの塩化カルシウム溶液（１００μＬ）を加え、凝固を開始する。該試験チューブを５秒毎に９０°まで３回傾けてそれらの試薬を混合し、凝固が生成する時間を記録する。得られた各化合物について、一連の観察データおよび試験化合物の濃度を、ＳＡＳ統計学的分析プログラムおよびＣＴ２（凝固時間を２倍にするのに必要な濃度）によって分析する。
【００６０】
本発明の化合物は、部分トロンボプラスチン時間（プロトロンビン時間）を有意に増大することを見出した。
【００６１】
（別のトロンビン時間およびＡＰＴＴプロトコール）
凝固測定
プロトロンビン時間およびＡＰＴＴ値を、ヒト血漿についてＳＴＡ装置（Stago社製）を用いて測定する。ＢｉｏＰＴは、ヒト組織因子（Ｉｎｎｏｖｉｎ）を用いてトリガーされる特別な非血漿凝固アッセイである。卵白または脂質との可能な結合を、３０ｍｇ／ｍＬのヒト卵白（ＨＳＡ）および１ｍｇ／ｍＬのホスファチジルコリン（ＰＣ）の存在下／非存在下でＢｉｏＰＴ効果を比較することによって、評価する。インヒビターは、５０％の水性メタノールビヒクルで運搬する。
【００６２】
（ＡＰＴＴアッセイ）
７５μＭの血漿  サイトロール(Citrol)（Baxter-Dade社製）クエン酸処理正常ヒト血漿、
２５μＬの被験溶液、
７５μＬのアクチン  （Baxter-Dade社製）活性化セファロプラスチン（３７℃で２分間インキュベートする）、
７５μＬのＣａＣｌ２（０．０２Ｍ）。
【００６３】
（ＰＴアッセイ）
７５μＬの血漿、
２５μＬの被験溶液、
７５μＬの生理食塩水（３７℃で１分間インキュベートする）、
７５μＬのイノビン（Innovin）（Baxter-Dade社製）組換えヒト組織因子。
【００６４】
式（Ｉ）の化合物の更に有利な性質は、絶食および摂食状態で経口投与後の実験室動物種（例えば、ラットおよびイヌ）におけるそれらの薬物動力学（ＰＤ）および薬物動態学（ＰＫ）の性質を測定することによって、実証することができる。
【国際調査報告】
2005531529.tif 000020
2005531529.tif 000021
2005531529.tif 000022