(57)【要約】式（１）の化合物（式中、各Ｒ１，Ｒ２，Ｒ４，Ｒ４’，Ｒ７，Ｒ１１，Ｒ１２，Ｒ１５，Ｒ１６，Ｒ１７’は独立に、水素、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシル、オキソ、ハロ、スルホン酸、‐Ｏ‐スルホン酸、または、任意選択で‐ＮＨ‐，‐Ｎ（アルキル）‐，‐Ｏ‐，‐Ｓ‐，‐ＳＯ‐，‐ＳＯ２‐，‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐を挿入され、さらに任意選択でヒドロキシ、ハロ、アミノ、カルボキシル、スルホン酸、もしくは‐Ｏ‐スルホン酸で置換されるアルキルであり；Ｒ３はＸ‐Ｙ‐であって、Ｘは水素、アミノ、カルボキシル、ハロ、スルホン酸、‐Ｏ‐スルホン酸、またはアルキルであり；Ｙは‐Ｓ‐，‐ＮＨ‐，‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＳＯ‐，‐ＳＯ２‐，‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐であり；Ｒ５とＲ６とを合わせて‐Ｏ‐であるか；またはＲ５とＲ６とを合わせてＣ‐５とＣ‐６との間の二重結合であって、かつＲ７がオキソであり；各Ｒ８，Ｒ９，Ｒ１０，Ｒ１３，およびＲ１４は独立に水素、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、またはアミノであり；かつｎは０，１，または２である）。上記化合物を適用することによる、低コレステロール血症を治療する方法およびＬＸＲアゴニストをスクリーニングする方法、少なくとも１種の上記化合物を含有してなる医薬組成物、ならびに５α，６α‐エポキシコレステロール‐３‐サルフェートまたは７‐ケトコレステロール‐３‐サルフェートに対する抗体も開示される。
2005508281.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）の化合物：
【化１】
2005508281.tif 000004
（式中、
各Ｒ１，Ｒ２，Ｒ４，Ｒ４’，Ｒ７，Ｒ１１，Ｒ１２，Ｒ１５，Ｒ１６，Ｒ１７，およびＲ１７’は独立に、水素、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシル、オキソ、ハロ、スルホン酸、‐Ｏ‐スルホン酸、または、任意選択で‐ＮＨ‐，‐Ｎ（アルキル）‐，‐Ｏ‐，‐Ｓ‐，‐ＳＯ‐，‐ＳＯ２‐，‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐を挿入され、さらに任意選択でヒドロキシ、ハロ、アミノ、カルボキシル、スルホン酸、もしくは‐Ｏ‐スルホン酸で置換されるアルキルであり；
Ｒ３はＸ‐Ｙ‐であって、Ｘは水素、アミノ、カルボキシル、ハロ、スルホン酸、‐Ｏ‐スルホン酸、またはアルキルであり；Ｙは‐Ｓ‐，‐ＮＨ‐，‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＳＯ‐，‐ＳＯ２‐，‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐であり；
Ｒ５とＲ６とを合わせて‐Ｏ‐であるか；またはＲ５とＲ６とを合わせてＣ‐５とＣ‐６との間の二重結合であって、かつＲ７がオキソであり；
各Ｒ８，Ｒ９，Ｒ１０，Ｒ１３，およびＲ１４は独立に水素、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、またはアミノであり；かつ
ｎは０，１，または２である）。
【請求項２】
Ｘは水素またはアミノであり、かつＹは‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ５とＲ６とを合わせて‐Ｏ‐である請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｘは水素またはアミノであり、かつＹは‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐である請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｘは水素であり、かつＹは‐ＳＯ３である請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
‐Ｏ‐はＣ‐５およびＣ‐６のα面側にある請求項３に記載の化合物。
【請求項７】
Ｘは水素またはアミノであり、かつＹは‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐である請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｘは水素であり、かつＹは‐ＳＯ３である請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ１，Ｒ２，Ｒ４，Ｒ４’，Ｒ７，Ｒ８，Ｒ９，Ｒ１１，Ｒ１２，Ｒ１４，Ｒ１５，Ｒ１６，およびＲ１７は水素であり；各Ｒ１０，Ｒ１３，およびＲ１７’は独立にアルキルである請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
化合物は５α，６α‐エポキシコレステロール‐３‐サルフェートである請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
請求項１０に記載の化合物に特異的な抗体。
【請求項１２】
Ｒ５とＲ６とを合わせてＣ‐５とＣ‐６との間の二重結合であって、かつＲ７がオキソである請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｘは水素またはアミノであり、かつＹは‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐である請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｘは水素であり、かつＹは‐ＳＯ３‐Ｏ‐である請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ１，Ｒ２，Ｒ４，Ｒ４’，Ｒ７，Ｒ８，Ｒ９，Ｒ１１，Ｒ１２，Ｒ１４，Ｒ１５，Ｒ１６，およびＲ１７は水素であり；各Ｒ１０，Ｒ１３，およびＲ１７’は独立にアルキルである請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
化合物は７‐ケトコレステロール‐３‐サルフェートである請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
請求項１６に記載の化合物に特異的な抗体。
【請求項１８】
低コレステロール血症を治療する方法であって、投与を必要とする対象に有効な量の式（１）の化合物：
【化２】
2005508281.tif 000005
（式中、
各Ｒ１，Ｒ２，Ｒ４，Ｒ４’，Ｒ７，Ｒ１１，Ｒ１２，Ｒ１５，Ｒ１６，Ｒ１７，およびＲ１７’は独立に、水素、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシル、オキソ、ハロ、スルホン酸、‐Ｏ‐スルホン酸、または、任意選択で‐Ｏ‐，‐Ｓ‐，‐ＮＨ‐，‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＳＯ‐，‐ＳＯ２‐，‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐を挿入され、さらに任意選択でヒドロキシ、ハロ、アミノ、カルボキシル、スルホン酸、もしくは‐Ｏ‐スルホン酸で置換されるアルキルであり；
Ｒ３はＸ‐Ｙ‐であって、Ｘは水素、アミノ、カルボキシル、ハロ、スルホン酸、‐Ｏ‐スルホン酸、またはアルキルであり；Ｙは‐Ｓ‐，‐ＮＨ‐，‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＳＯ‐，‐ＳＯ２‐，‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐であり；
Ｒ５とＲ６とを合わせて‐Ｏ‐であるか；またはＲ５とＲ６とを合わせてＣ‐５とＣ‐６との間の二重結合であって、かつＲ７がオキソであり；
各Ｒ８，Ｒ９，Ｒ１０，Ｒ１３，およびＲ１４は独立に水素、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、またはアミノであり；かつ
ｎは０，１，または２である）
を投与することからなる方法。
【請求項１９】
Ｘは水素またはアミノであり、かつＹは‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐である請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
Ｒ５とＲ６とを合わせて‐Ｏ‐である請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
Ｘは水素またはアミノであり、かつＹは‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐である請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
Ｘは水素であり、かつＹは‐ＳＯ３‐Ｏ‐である請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
‐Ｏ‐はＣ‐５およびＣ‐６のα面側にある請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
Ｘは水素またはアミノであり、かつＹは‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯである請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
Ｘは水素であり、かつＹは‐ＳＯ３‐Ｏ‐である請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
Ｒ１，Ｒ２，Ｒ４，Ｒ４’，Ｒ７，Ｒ８，Ｒ９，Ｒ１１，Ｒ１２，Ｒ１４，Ｒ１５，Ｒ１６，およびＲ１７は水素であり、かつ各Ｒ１０，Ｒ１３，およびＲ１７’は独立にアルキルである請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
化合物は５α，６α‐エポキシコレステロール‐３‐サルフェートである請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
Ｒ５とＲ６とを合わせてＣ‐５とＣ‐６との間の二重結合であって、かつＲ７がオキソである請求項１８に記載の方法。
【請求項２９】
Ｘは水素またはアミノであり、かつＹは‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐である請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
Ｘは水素であり、かつＹは‐ＳＯ３‐Ｏ‐である請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
Ｒ１，Ｒ２，Ｒ４，Ｒ４’，Ｒ７，Ｒ８，Ｒ９，Ｒ１１，Ｒ１２，Ｒ１４，Ｒ１５，Ｒ１６，およびＲ１７は水素であり、かつ各Ｒ１０，Ｒ１３，およびＲ１７’は独立にアルキルである請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
化合物は７‐ケトコレステロール‐３‐サルフェートである請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
式（１）の化合物：
【化３】
2005508281.tif 000006
（式中、
各Ｒ１，Ｒ２，Ｒ４，Ｒ４’，Ｒ７，Ｒ１１，Ｒ１２，Ｒ１５，Ｒ１６，Ｒ１７，およびＲ１７’は独立に、水素、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシル、オキソ、ハロ、スルホン酸、‐Ｏ‐スルホン酸、または、任意選択で‐Ｏ‐，‐Ｓ‐，‐ＮＨ‐，‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＳＯ‐，‐ＳＯ２‐，‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐
ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐を挿入され、さらに任意選択でヒドロキシ、ハロ、アミノ、カルボキシル、スルホン酸、もしくは‐Ｏ‐スルホン酸で置換されるアルキルであり；
Ｒ３はＸ‐Ｙ‐であって、Ｘは水素、アミノ、カルボキシル、ハロ、スルホン酸、‐Ｏ‐スルホン酸、またはアルキルであり；Ｙは‐Ｓ‐，‐ＮＨ‐，‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＳＯ‐，‐ＳＯ２‐，‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐であり；
Ｒ５とＲ６とを合わせて‐Ｏ‐であるか；またはＲ５とＲ６とを合わせてＣ‐５とＣ‐６との間の二重結合であって、かつＲ７がオキソであり；
各Ｒ８，Ｒ９，Ｒ１０，Ｒ１３，およびＲ１４は独立に水素、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、またはアミノであり；かつ
ｎは０，１，または２である）と、
医薬として許容可能な担体とを含んでなる医薬組成物。
【請求項３４】
Ｘは水素またはアミノであり、かつＹは‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐である請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
Ｒ５とＲ６とを合わせて‐Ｏ‐である請求項３３に記載の組成物。
【請求項３６】
Ｘは水素またはアミノであり、かつＹは‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐である請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
Ｘは水素であり、かつＹは‐ＳＯ３‐Ｏ‐である請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
‐Ｏ‐はＣ‐５およびＣ‐６のα面側にある請求項３５に記載の組成物。
【請求項３９】
Ｘは水素またはアミノであり、かつＹは‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐である請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
Ｘは水素であり、かつＹは‐ＳＯ３‐Ｏ‐である請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】
Ｒ１，Ｒ２，Ｒ４，Ｒ４’，Ｒ７，Ｒ８，Ｒ９，Ｒ１１，Ｒ１２，Ｒ１４，Ｒ１５，Ｒ１６，およびＲ１７は水素であり、かつ各Ｒ１０，Ｒ１３，およびＲ１７’は独立にアルキルである請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
化合物は５α，６α‐エポキシコレステロール‐３‐サルフェートである請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
Ｒ５とＲ６とを合わせてＣ‐５とＣ‐６との間の二重結合であって、かつＲ７がオキソである請求項３３に記載の組成物。
【請求項４４】
Ｘは水素またはアミノであり、かつＹは‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐
Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐である請求項３３に記載の組成物。
【請求項４５】
Ｘは水素であり、かつＹは‐ＳＯ３‐Ｏ‐である請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
Ｒ１，Ｒ２，Ｒ４，Ｒ４’，Ｒ７，Ｒ８，Ｒ９，Ｒ１１，Ｒ１２，Ｒ１４，Ｒ１５，Ｒ１６，およびＲ１７は水素であり、かつ各Ｒ１０，Ｒ１３，およびＲ１７’は独立にアルキルである請求項４５に記載の組成物。
【請求項４７】
化合物は７‐ケトコレステロール‐３‐サルフェートである請求項４６に記載の組成物。
【請求項４８】
肝Ｘレセプターに対する作動的作用について化合物を評価する方法であって、
評価する化合物を、式（１）の化合物：
【化４】
2005508281.tif 000007
（式中、
各Ｒ１，Ｒ２，Ｒ４，Ｒ４’，Ｒ７，Ｒ１１，Ｒ１２，Ｒ１５，Ｒ１６，Ｒ１７，およびＲ１７’は独立に、水素、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシル、オキソ、ハロ、スルホン酸、‐Ｏ‐スルホン酸、または、任意選択で‐Ｏ‐，‐Ｓ‐，‐ＮＨ‐，‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＳＯ‐，‐ＳＯ２‐，‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐を挿入され、さらに任意選択でヒドロキシ、ハロ、アミノ、カルボキシル、スルホン酸、もしくは‐Ｏ‐スルホン酸で置換されるアルキルであり；
Ｒ３はＸ‐Ｙ‐であって、Ｘは水素、アミノ、カルボキシル、ハロ、スルホン酸、‐Ｏ‐スルホン酸、またはアルキルであり；Ｙは‐Ｓ‐，‐ＮＨ‐，‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＳＯ‐，‐ＳＯ２‐，‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐であり；
Ｒ５とＲ６とを合わせて‐Ｏ‐であるか；またはＲ５とＲ６とを合わせてＣ‐５とＣ‐６との間の二重結合であって、かつＲ７がオキソであり；
各Ｒ８，Ｒ９，Ｒ１０，Ｒ１３，およびＲ１４は独立に水素、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、またはアミノであり；かつ
ｎは０，１，または２である）
の存在下で肝Ｘレセプターに接触させることと、
評価する化合物の肝Ｘレセプターに対する作動的作用を判定することと、からなる方法。
【請求項４９】
Ｘは水素またはアミノであり、かつＹは‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐である請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
Ｒ５とＲ６とを合わせて‐Ｏ‐である請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
Ｘは水素またはアミノであり、かつＹは‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐である請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
Ｘは水素であり、かつＹは‐ＳＯ３‐Ｏ‐である請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
‐Ｏ‐はＣ‐５およびＣ‐６のα面側にある請求項５０に記載の方法。
【請求項５４】
Ｘは水素またはアミノであり、かつＹは‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐である請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
Ｘは水素であり、かつＹは‐ＳＯ３‐Ｏ‐である請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
Ｒ１，Ｒ２，Ｒ４，Ｒ４’，Ｒ７，Ｒ８，Ｒ９，Ｒ１１，Ｒ１２，Ｒ１４，Ｒ１５，Ｒ１６，およびＲ１７は水素であり、かつ各Ｒ１０，Ｒ１３，およびＲ１７’は独立にアルキルである請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
化合物は５α，６α‐エポキシコレステロール‐３‐サルフェートである請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
Ｒ５とＲ６とを合わせてＣ‐５とＣ‐６との間の二重結合であって、かつＲ７がオキソである請求項４８に記載の方法。
【請求項５９】
Ｘは水素またはアミノであり、かつＹは‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐である請求項４８に記載の方法。
【請求項６０】
Ｘは水素であり、かつＹは‐ＳＯ３‐Ｏ‐である請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
Ｒ１，Ｒ２，Ｒ４，Ｒ４’，Ｒ７，Ｒ８，Ｒ９，Ｒ１１，Ｒ１２，Ｒ１４，Ｒ１５，Ｒ１６，およびＲ１７は水素であり、かつ各Ｒ１０，Ｒ１３，およびＲ１７’は独立にアルキルである請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
化合物は７‐ケトコレステロール‐３‐サルフェートである請求項６１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ステロイド誘導体に関する。
【背景技術】
【０００２】
コレステロールは２つの主な生化学的役割：（１）細胞の原形質膜の不可欠な構成成分としての役割、および（２）副腎、卵巣、精巣、および胎盤の内分泌細胞におけるステロイド産生の生合成上の前駆物質としての役割、を有する。細胞内のコレステロールのレベルは、新規な（ｄｅ  ｎｏｖｏ）コレステロール合成、およびコレステロールの取り込みと流出とにより影響を受ける。低コレステロール血症、すなわちコレステロールの欠乏症は、情動障害などの疾患の原因となる。
【０００３】
核レセプタースーパーファミリーの一員である肝Ｘレセプター（ＬＸＲ）には、ＬＸＲαとユビキタスレセプター（ＵＲ、ＬＸＲβとも呼ばれる）とが含まれる。ＬＸＲの数種の直接的標的遺伝子は、コレステロールの逆輸送と廃棄とに関与する。このような遺伝子の例には、コレステロールから胆汁酸を合成する律速酵素であるコレステロール７αヒドロキシラーゼをコードするＣＹＰ７Ａ遺伝子、ならびにコレステロールエステル転送タンパク質（ＣＥＴＰ）、ＡＢＣ１、およびＡＢＣ８をコードする遺伝子がある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
従って、コレステロールの逆輸送と廃棄を低減するかまたは新規な（ｄｅ  ｎｏｖｏ）コレステロール合成を高めるために、ＬＸＲアンタゴニストを投与してコレステロールのレベルを増大させることは、低コレステロール血症を治療する手段を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の１つの態様は下式の化合物：
【０００６】
【化１】
2005508281.tif 000003
（式中、各Ｒ１，Ｒ２，Ｒ４，Ｒ４’，Ｒ７，Ｒ１１，Ｒ１２，Ｒ１５，Ｒ１６，Ｒ１７，およびＲ１７’は独立に、水素、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシル、オキソ、ハロ、スルホン酸、‐Ｏ‐スルホン酸、または任意選択で‐Ｏ‐，‐Ｓ‐，‐ＮＨ‐，‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＳＯ‐，‐ＳＯ２‐，‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐を挿入され、さらに任意選択でヒドロキシ、ハロ、アミノ、カルボキシル、スルホン酸、もしくは‐Ｏ‐スルホン酸で置換されるアルキルであり；Ｒ３はＸ‐Ｙ‐であって、Ｘは水素、アミノ、カルボキシル、ハロ、スルホン酸、‐Ｏ‐スルホン酸、またはアルキルであり；Ｙは‐Ｓ‐，‐ＮＨ‐，‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＳＯ‐，‐ＳＯ２‐，‐Ｏ‐ＳＯ２‐，‐ＳＯ２‐Ｏ‐，‐ＳＯ３‐Ｏ‐，‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐Ｏ‐，‐Ｏ‐ＣＯ‐，‐ＣＯ‐ＮＨ‐，‐ＣＯ‐Ｎ（アルキル）‐，‐ＮＨ‐ＣＯ‐，もしくは‐Ｎ（アルキル）‐ＣＯ‐であり；Ｒ５とＲ６とを合わせて‐Ｏ‐であるか；またはＲ５とＲ６とを合わせてＣ‐５とＣ‐６との間の二重結合であって、かつＲ７がオキソであり；各Ｒ８，Ｒ９，Ｒ１０，Ｒ１３，およびＲ１４は独立に水素、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、またはアミノであり；ｎは０，１，または２である）に関する。「アルキル」という用語、「アルク（ａｌｋ）」という接頭辞（アルコキシ（ａｌｋｏｘｙ）など）、および「‐アルキル（‐ａｌｋｙｌ）」という接尾辞（ヒドロキシアルキル（ｈｙｄｒｏｘｙａｌｋｙｌ）など）はすべて直鎖または分岐鎖のＣ１‐１８を指す。「挿入する」という用語は、置換基（例えばＲ１またはＲ２）が、挿入される基（例えば上述の‐Ｏ‐，‐Ｓ‐，または‐ＮＨ‐）を介して環の炭素原子に連結されることを意味する。別途定めのない限り、式（１）の全ての環の炭素原子は水素により飽和される。
【０００７】
式（１）に関して、本発明の化合物の１つのサブセットは、Ｒ５とＲ６とを合わせて‐Ｏ‐であることを特徴とする。別のサブセットは、Ｒ５とＲ６とを合わせてＣ‐５とＣ‐６との間の二重結合であり、かつＲ７がオキソであることを特徴とする。２つの典型的な化合物は５α，６α‐エポキシコレステロール‐３‐サルフェートおよび７‐ケトコレステロール‐３‐サルフェートであり、ヒトの血液および組織で発見された新規な２化合物である。
【０００８】
該当する場合は、上記の化合物の塩も本発明の範囲内にある。そのような塩は、例をあげれば、カルボン酸を有する化合物と、例えばナトリウムイオンもしくはカリウムイオンなどのアルカリ金属陽イオンのような陽イオン性対イオン；または例えばテトラメチルアンモニウムイオンもしくはジイソプロピルエチルアンモニウムイオンなどの有機基で置換可能なアンモニウム陽イオンとの間に形成可能である。そのような塩は、プロトン化されたアミノ基を有する化合物と、例えば硫酸イオン、硝酸イオン、リン酸イオン、または酢酸イオンなどの陰イオン性対イオンとの間にも形成可能である。
【０００９】
本発明の化合物は予想外にもＬＸＲ、例えばＬＸＲαおよびＵＲに拮抗し、コレステロールの新規（ｄｅ  ｎｏｖｏ）生合成を著しく促進し、かつコレステロールの逆輸送と廃棄とを低減して、それにより細胞内のコレステロールレベルを増大させる。従って、本発明の別の態様は低コレステロール血症の治療方法に関する。本方法は、投与を必要とする対象に有効な量の１つまたはそれ以上の上記化合物を投与することを含む。
【００１０】
上記化合物のうちの１つを用いて、ＬＸＲに対する化合物の作動的作用について評価する方法も本発明の範囲内にある。５α，６α‐エポキシコレステロール‐３‐サルフェートまたは７‐ケトコレステロール‐３‐サルフェートに特異的な抗体もさらに本発明の範囲内にある。
【００１１】
本発明のいくつかの実施形態の詳細を、発明を実施するための最良の形態に示す。本発明のその他の特徴、目的、および利点は、発明を実施するための最良の形態から、かつ請求の範囲から明らかになるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明の３‐サルフェート化合物、例えば５α，６α‐エポキシコレステロール‐３‐サルフェートまたは７‐ケトコレステロール‐３‐サルフェートは、最初にトリエチルアミンをクロロスルホン酸と反応させてトリエチルアミン‐三酸化硫黄複合体を生成させることにより作製可能である。次いで該複合体を、ヒドロキシで３‐Ｃを置換した四環系化合物と反応させてサルフェート化合物を得る。これら２化合物の作製についての詳細な説明を、実施例１および２にそれぞれ記載する。
【００１３】
本発明のその他の化合物は、トリエチルアミン‐三酸化硫黄複合体ではなく他の適切な試薬を用いて四環系化合物と反応させる類似の方法により合成可能である。そのような適切な試薬の例には（１）３‐Ｃに連結部‐（Ｃ＝Ｏ）‐Ｏ‐を導入するためのマグネシウムメチルカーボネート、および（２）同様に３‐Ｃに‐ＮＨ‐Ｃ（＝Ｏ）‐を導入するためのアミド、トリフェニルホスフィン、およびアゾジカルボン酸ジエチルが含まれる。
【００１４】
本発明の化合物は、ＬＸＲ、例えばＬＸＲαおよびＵＲに拮抗し、コレステロールの逆輸送と廃棄とを低減するかまたはコレステロールの新規（ｄｅ  ｎｏｖｏ）生合成を促進し、それにより細胞内のコレステロールレベルを増大させる。従って、本発明の別の態様は、投与を必要とする対象に有効な量の本発明の化合物（またはその塩）を投与することにより低コレステロール血症を治療する方法に関する。「有効な量」とは一般に、治療を受ける対象に対して治療効果を奏するために必要な化合物の量を指す。動物及びヒトについての用量の相関関係（体表面１平方メートルあたりのミリグラム数に基づく）は、フライライヒら（Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｒｅｐ．、第５０巻、２１９ページ、１９６６年により記載されている。体表面の面積は患者の身長と体重とから概算可能である。サイエンティフィクテーブル（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｔａｂｌｅ）、ガイギー製薬（Ｇｅｉｇｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ニューヨーク州アードレイ所在、５３７ページ、１９７０年を参照のこと。当業者には認識されるように、有効な用量は、投与経路、賦形剤の使用、および他の抗低コレステロール血症剤の使用などのその他の治療措置との共用の可能性によっても変動する。有効な量の化合物を医薬として許容可能な担体とともに製剤化し医薬組成物を形成してから、低コレステロール血症の治療を必要とする対象に投与する。
【００１５】
医薬組成物は、非経口経路を介して、例えば局所、皮下、腹腔内、筋肉内、および静脈内に投与可能である。非経口の剤形の例には、等張生理食塩水、５％グルコース、またはその他のよく知られた医薬として許容可能な任意の担体中における活性化合物の水溶液が含まれる。シクロデキストリンなどの可溶化剤または当業者によく知られたその他の可溶化剤を医薬組成物に含めてもよい。
【００１６】
活性化合物を、よく知られた方法を用いてその他の投与経路（例えば経口、経粘膜、経皮、または吸入による）のための剤形に製剤化することが可能である。例えば、医薬組成物を経口投与用の剤形に、カプセル、ゲル状シール剤、または錠剤に製剤化可能である。カプセルは、ゼラチンまたはセルロース誘導体などの医薬として許容可能な周知の材料を含みうる。錠剤は、活性化合物、固体の担体、および潤滑剤の混合物を圧縮することにより従来の手順で製剤化可能である。固体の担体の例には、デンプンおよびシュガーベントナイトが含まれる。化合物を、例えば結合剤としてラクトースもしくはマンニトール、従来の充填剤、および錠剤化剤を含むハードシェル錠剤またはカプセル剤の形態で投与することも可能である。
【００１７】
化合物を含有する医薬組成物、および低コレステロール血症の治療用薬物を製造するための化合物の使用も、本発明の範囲内にある。
【００１８】
前記化合物を、１つ以上の下記のインビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）アッセイにより、低コレステロール血症の治療における有効性について予備的にスクリーニングすることが可能である：
ＬＸＲ、例えばＬＸＲαまたはＵＲへの拮抗作用についての化合物の効果を、インビトロの（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）レポーター遺伝子転写活性化アッセイにより判定することができる。例えば、腎臓の細胞をルシフェラーゼのレポーター遺伝子（ヒトのｃ‐ｆｏｓの最小プロモーターを含む）とＬＸＲとでトランスフェクションする。トランスフェクションされた細胞を被験化合物と共にインキュベーションした後、ルシフェラーゼの活性を測定してレポーター遺伝子の転写活性化の程度を調べる。
【００１９】
ＬＸＲへの拮抗作用についての化合物の効果を、インビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）コアクチベータリクルートアッセイにより判定することもできる。例えば、グルタチオン‐Ｓ‐トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）とＬＸＲとの融合タンパク質をグルタチオン‐アガロースビーズとともにインキュベートして同ビーズに結合させる。次いで該ビーズを、標識したコアクチベータ、被験化合物、および任意選択でＬＸＲアゴニストとともにインキュベートする。結合したタンパク質を緩衝液によりビーズから溶出させ、次にコアクチベータとＵＲとの間の結合をオートラジオグラフィにより定量するためゲル上で分離する。
【００２０】
新規（ｄｅ  ｎｏｖｏ）コレステロール生合成の促進についての化合物の効果を、培養細胞におけるコレステロールへの［２‐１４Ｃ］酢酸の取り込みをモニターすることにより判定可能である。例えば、腎臓の細胞を培地に播いて、被験化合物および標識された酢酸とともにインキュベートする。細胞から培地を除いた後、細胞および培地に含まれる脂質を抽出する。抽出物由来の不溶物質は、全タンパク質を測定するために水溶液中に溶解することが可能である。抽出された脂質中の標識コレステロールの放射活性を測定してコレステロール量を決定する。
【００２１】
インビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）スクリーニングを、当業界で知られた手順に従って実施可能である。
【００２２】
本発明は、上記の文章に記載されたアッセイのうちの１つに従い、１つ以上の上記化合物の存在下でＬＸＲアゴニストをスクリーニングする方法にも関する。本発明の各化合物はＬＸＲに拮抗しうるので、スクリーニング法において該化合物を使用することによりアッセイのバックグラウンドが低減され、アゴニストの効果がより明確に観察される。そのようにして選択されたＬＸＲアゴニストを使用して、内在性コレステロールレベルを低減することにより、高コレステロールレベルに関連する疾患、例えばアテローム性動脈硬化症を治療するために使用可能である。
【００２３】
さらに本発明は、５α，６α‐エポキシコレステロール‐３‐サルフェートまたは７‐ケトコレステロール‐３‐サルフェートに対する特異的なポリクローナルまたはモノクローナル抗体に関する。抗体の生産については、ハーロウら（Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、コールドスプリングハーバー（Cold Spring Harbor）出版、ニューヨーク州コールドスプリングハーバー所在、１９８８年、を参照のこと。抗体を、ラジオイムノアッセイおよびエライザ（ｅｎｚｙｍｅ‐ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏａｂｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ）などの免疫学的アッセイにおける内在性の５α，６α‐エポキシコレステロール‐３‐サルフェートまたは７‐ケトコレステロール‐３‐サルフェートのレベルの測定に使用可能である。例えばコーリガンら（Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、ジョンワイリーアンドサンズ社（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．）、ニューヨーク州ニューヨーク所在、１９９８年、を参照のこと。これらの化合物の異常レベルを、コレステロール関連疾患の指標として使用可能である。
【００２４】
さらに詳述しなくとも、当業者は本明細書中の記載に基づいて本発明を最大限に利用することができると考えられる。本明細書中に列挙された全ての刊行物はその結果引用により完全に本願に組み込まれる。従って、本発明の種々の化合物の合成及び生物学的試験について説明する以下の特定の実施例は、単に具体例として解釈されるべきであり、開示内容の残りの部分を何であれどのようにも限定するものではない。
【実施例１】
【００２５】
５α，６α‐エポキシコレステロール‐３‐サルフェート（ＥＣＨＳ）の合成
氷浴中の、１．０モルのトリエチルアミンを含有し撹拌中の２００ｍＬの塩化メチレンに、０．５モルのクロロスルホン酸を２時間にわたって滴下により添加した。得られた溶液を氷冷水でさっと洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水し、フィルターで濾過した。濾液を減圧下で約１００ｍＬまで濃縮し、過熱して沸騰させ、撹拌中の１５０ｍＬのエチルエーテル中に滴下により添加して溶液を得た。そのようにして得られた溶液を室温まで冷却し、次いで４℃に４時間置いて結晶状のトリエチルアミン‐三酸化硫黄複合体を生成させた。
【００２６】
０．０５ミリモルの５α，６α‐エポキシ‐３β‐ヒドロキシコレスタンを含む１．０ｍＬのジメチルホルムアミド溶液に、０．５５ミリモルのトリエチルアミン‐三酸化硫黄複合体を添加した。得られた溶液を室温で１時間よく混合し、２滴の水を加え、次いで４０℃でさらに１時間撹拌した。次に該溶液を２０ｍＬの撹拌中の氷冷された無水エチルエーテル中に注いだ。混合物を４℃に４時間放置して結晶状のＥＣＨＳを生成させた。
【００２７】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：０．６０２（３Ｈ，ｓ、１８‐ＣＨ３），２．８６９（１Ｈ，ｓ，６‐Ｈ），および４．５６５（１Ｈ，ｍ，３‐Ｈ）．
【実施例２】
【００２８】
７‐ケトコレステロール‐３‐サルフェート（ＫＣＨＳ）の合成
ＫＣＨＳを、５α，６α‐エポキシ‐３β‐ヒドロキシコレスタンの代わりに３β‐ヒドロキシ‐ΔΔ５‐コレスト‐７‐オンを使用したこと以外は実施例１に記載の同じ方法に従って調製した。
【実施例３】
【００２９】
レポーター遺伝子転写活性化アッセイ
ヒト胎児腎臓２９３細胞を、１０％ウシ胎児血清を添加したＤＭＥＭ中で４８ウェル培養プレートに１ウェルあたり１０５個となるように播種した。２４時間のインキュベーション後、細胞を、１ウェルあたり２５０ｎｇのｐＧＬ３／ＵＲＥｌｕｃレポーター遺伝子（プラスミドｂａｓｉｃ  ｐＧＬ３（プロメガ（Ｐｒｏｍｅｇａ）、ウィスコンシン州マディソン所在）中のホタルルシフェラーゼ遺伝子の前の、ヒトｃ‐ｆｏｓプロモーターのヌクレオチド‐５６から＋１０９に融合された３コピーのＡＧＧＴＣＡａｇｃｃＡＧＧＴＣＡで構成される遺伝子）、４０ｎｇのｐＳＧ５／ｈＲＸＲα、４０ｎｇのｐＳＧ５／ｒＵＲもしくはＣＭＸ／ｈＬＸＲα、１０ｎｇのｐＳＧ５／ｈＧｒｉｐ１、０．４ｎｇのＣＭＶ／Ｒ‐ｌｕｃ（トランスフェクション標準化レポーター、プロメガ社）、および２５０ｎｇのキャリアＤＮＡを用いてリン酸カルシウム共沈殿法によりトランスフェクションした。さらに１２〜２４時間インキュベーションした後、細胞をリン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、次いで４％の脱脂されたウシ胎児血清を添加したＤＭＥＭを添加した。被験化合物（すなわちＥＣＨＳトリエチルアンモニウムまたはＫＣＨＳトリエチルアンモニウム）を含有するエタノール溶液を、化合物の終濃度が１〜１０μＭでかつ最終エタノール濃度が０．２％となるようにＤＭＥＭ細胞培養物に２連で添加した。さらに２４〜４８時間インキュベートした後、細胞をハーベストして、市販のキット（プロメガ（Ｐｒｏｍｅｇａ）Ｄｕａｌ  ｌｕｃｉｆａｒａｓｅ（登録商標）ＩＩ）を用いてＭｏｎｏｌｉｇｈｔ（登録商標）ルミノメータ（ベクトンディッキンソン（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ、カリフォルニア州マウンテンビュー所在）によりルシフェラーゼ活性を測定した。結果から、ＥＣＨＳおよびＫＣＨＳのいずれも、ＬＸＲαおよびＵＲの両方による基礎的なレポーター遺伝子の転写活性化に対する強力な阻害剤であったことが示される。
【実施例４】
【００３０】
コアクチベータリクルートアッセイ
ＧＳＴ‐ｒＵＲ融合タンパク質を、発現プラスミドｐＧＥＸ（ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、スウェーデン国ウプサラ所在）を用いて大腸菌株ＢＬ２１中で発現させた。１サイクルの凍結‐融解と超音波処理により細胞を溶解した。４５，０００×ｇで１時間の遠心分離により調製された上清をグルタチオン‐アガロースとともに４℃で１０分間インキュベートした。該アガロースを、ＨＥＰＥＳ（２０ｍＭ）、ＥＤＴＡ（１０ｍＭ）、Ｎａ２ＭｏＯ４（１０ｍＭ）、β‐メルカプトエタノール（１ｍＭ）、ＤＴＴ（１ｍＭ）、ＰＭＳＦ（０．５ｍＭ）、およびアプロチニン（２μｇ／ｍＬ）を含むｐＨ７．５の結合緩衝液で洗浄した。洗浄後、すぐにＬＸＲアゴニストである５α‐コラン酸メチルエステル（ＣＡＭ）を終濃度０．１〜１０μＭとなるように添加した。
【００３１】
コアクチベータであるヒトＧｒｉｐ１を、ウサギの網状赤血球溶解物を用いたインビトロ翻訳により生成させ、［３５Ｓ］メチオニンで標識した。［３５Ｓ］Ｇｒｉｐ１を含む網状赤血球溶解物（２μＬ）を１００μＬの結合緩衝液中のＧＳＴ‐ｒＵＲ結合アガロースビーズに添加した後、被験化合物（すなわちＥＣＨＳまたはＫＣＨＳ）を含むエタノール溶液を添加して終濃度１〜１０μＭとした。混合物を室温で３０分間インキュベートした。次いでアガロースビーズを結合緩衝液で洗浄した。結合したタンパク質をＳＤＳ‐ＰＡＧＥローディング緩衝液で溶出させ、次に８％ＳＤＳ‐ＰＡＧＥゲル上で分離した。タンパク質を含んだゲルを乾燥させてオートラジオグラフィに供した。コアクチベータのリクルート状態を定量化するため、Ｇｒｉｐ１の放射活性をＳＴＯＲＭ（登録商標）ｐｈｏｓｐｈｏｉｍａｇｅｒ（登録商標）（モレキュラーダイナミクス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ）、カリフォルニア州サニーベール所在）を用いて測定した。結果は、ＥＣＨＳおよびＫＣＨＳのいずれもコアクチベータのリクルートを抑制したことを示す。
【実施例５】
【００３２】
新規（ｄｅ  ｎｏｖｏ）コレステロール生合成に対する効果
マクロファージＪ７７４および腎臓２９３細胞を、血清、コレステロール、およびコレステロール受容体を含まないＣｏｍｐｌｅｔｅ（登録商標）培地（Ｃｅｌｌｇｒｏ（登録商標）、メディアテック社（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．）、バージニア州ハーンドン（Ｈｅｒｎｄｏｎ）所在）に含めて６ウェルプレートに播種した。２４時間後、ＥＣＨＳを細胞培養物に添加した。２４時間インキュベーションした後、１ｍＣｉの［２‐１４Ｃ］酢酸を各ウェルに添加した。さらに２４時間のインキュベーション後、培地を取り出して、培地中の脂質をクロロホルム／メタノール（容量比２：１）混合溶液で抽出した。プレートに付着した細胞をヘキサン／イソプロパノール（容量比２：１）混合溶媒で３回抽出した。抽出後の不溶物質を最初に１．０ＮのＮａＯＨ溶液に溶解し、ブラッドフォード（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、第７２巻、２４８‐２５４ページ、１９７６年、に記載の方法により全タンパク質の測定に使用した。抽出された脂質を薄層クロマトグラフィにより分離し、各画分の放射活性をＳＴＯＲＭ（登録商標）８６０  ｐｈｏｓｐｈｏｉｍａｇｅｒ（登録商標）（モレキュラーダイナミクス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ）、カリフォルニア州サニーベール所在）を用いて測定した。コレステロール画分の同定は、コレステロール標準物質を用いて確認した。結果は、予想に反してＥＣＨＳが新規（ｄｅ  ｎｏｖｏ）コレステロール生合成を５０％〜１０倍促進したことを示す。
（他の実施形態）
本発明の多数の実施形態について説明してきた。それでもなお、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく種々の変更形態を作製可能であるということが理解されるであろう。例えば、牛または豚に本発明の化合物を含有する飼料を与えることにより牛肉または豚肉中のコレステロールレベルを増大させることが可能である。すなわち、本発明の化合物を使用して牛または豚の「低コレステロール血症」（生理学的には正常なコレステロールレベルであるが一部の食通には低すぎるとされるレベル）を治療し、それにより一部の食通に好まれるようにコレステロールレベルを増大させることが可能である。従って、他の実施形態は請求の範囲の範囲内にある。
【国際公開パンフレット】
2005508281.tif 000008
2005508281.tif 000009
2005508281.tif 000010
2005508281.tif 000011
2005508281.tif 000012
2005508281.tif 000013
2005508281.tif 000014
2005508281.tif 000015
2005508281.tif 000016
2005508281.tif 000017
2005508281.tif 000018
2005508281.tif 000019
2005508281.tif 000020
2005508281.tif 000021
2005508281.tif 000022
2005508281.tif 000023
2005508281.tif 000024
2005508281.tif 000025
2005508281.tif 000026
2005508281.tif 000027
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2005508281.tif 000028
【国際調査報告】
2005508281.tif 000029
2005508281.tif 000030
2005508281.tif 000031
2005508281.tif 000032