(57)【要約】  本発明は、皮膚用組成物、及び、皮膚用組成物に添加された分子の新規な効果の同定に関する。より特定的には本発明は、核受容体ＬＸＲａの活性化を介して皮膚中で健康な表皮障壁層の発達を増進することによって多様なスキンケア効果を与えるような全身性または局所性の組成物及びそれらの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚の表皮障壁機能を強化する局所性または全身性組成物を製造するための、一般式；
【化１】
2005509610.tif 000007
〔式中、
Ｒは水素、ヒドロキシル、ケト、アセチル、置換または未置換、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和のＣ１−Ｃ７アルキル基、または、置換または未置換、分枝状または非分枝状の不飽和Ｃ８アルキル基を表し、
Ｒ１は低級アルキル基、水素またはＣＯＲ６を表し、
Ｒ２は水素、ハロゲンまたはヒドロキシル基を表し、
Ｒ３は水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ケトまたは低級アルキル基を表し、
Ｒ４は水素、ヒドロキシルまたはケト基を表し、
Ｒ５は水素、ヒドロキシル、ハロゲンまたは低級アルキル基を表し、
Ｒ６は低級アルキル基を表し、
Ｘは水素、メチルまたはハロゲンを表し、
Ｙは水素、ヒドロキシル、アセチルまたはケト基を表す。〕
で示されるＬＸＲα賦活化合物の使用。
【請求項２】
Ｒが、水素、ヒドロキシル、ケトまたは置換もしくは未置換のＣ１−Ｃ４アルキル基を表すことを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項３】
Ｒが非分枝状の置換Ｃ１−Ｃ４アルキル基を表すことを特徴とする請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記賦活化合物が一般式Ａで表され、式中のＹがケト基であることを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
前記賦活化合物が式Ｂで表され、式中のＲ１が水素を表し、Ｙがヒドロキシル基、水素またはアセチル基を表すことを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
Ｒが、−Ｈ、−ＯＨ、＝Ｏ、−ＣＯＣＨ３、−ＣＯＨＣＨ３、＝ＣＨＣＨ３、＝ＣＨＣＨ２ＯＨ及び−ＯＣＯＣＨ３を表すことを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
ＲがＣ（ＣＨ３）（ＣＨ２）２Ｃ＝Ｃ（ＣＨ３）を表すことを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項８】
前記化合物が、４−アンドロステン−３，１６−ジオン、４−アンドロステン−３，１６−ジオン、アンドロスト−４−エン−３，６，１６−トリオン、４−アンドロステン−１７ベータ−オール−３，１６−ジオンアセテート、１６−ケトテストステロン、３β−アセトキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−アセトキシプレグナ−５−エン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５−エン−２０−オン、５，１６−ジエン−プレグナン−３，２０−ジオール、４，１６−ジエンプレグナ−３，２０−ジオン、４，１７（２０）−（シス）−プレグナジエン−３，１６−ジオン、４，１７（２０）−（トランス）−プレグナジエン−３，１６−ジオン、４−プレグナン−３，１６，２０−トリオン、４，１７（２０）−プレグナジエン−１１β，２１−ジオール−３−オン、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール−ジアセテート、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール、５−プレグネン−３ベータ，１６アルファ，２１−トリオール−２０−オン、２４−ヒドロキシコール−４−エン−３−オン、コレスタ−５，２４−ジエン−３β−オール、（３ベータ）−３−ヒドロキシウルス−１２−エン−２８オイック酸、シス−グーグルステロン及びデスモステロール及びそれらの混合物から成るグループから選択されることを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項９】
前記ＬＸＲα賦活化合物が４，１７（２０）−（シス）−プレグナジエン−３，１６−ジオンであることを特徴とする請求項４に記載の使用。
【請求項１０】
請求項１から９のいずれか一項に記載の式（Ａ）または（Ｂ）のＬＸＲα賦活剤を含む局所性組成物を皮膚に塗布すること
を含む、乾燥肌の治療／予防；炎症肌、赤化肌及び／または敏感肌の鎮静；インボルクリンレベルの増進／維持；老化速度の減速；から成るグループから選択された少なくとも１つのスキンケア効果を与える化粧方法。
【請求項１１】
請求項１から９のいずれか一項に記載の式（Ａ）または（Ｂ）のＬＸＲα賦活剤を含む組成物を全身性投与すること
を含む、乾燥肌の治療／予防；炎症肌、赤化肌及び／または敏感肌の鎮静；インボルクリンレベルの増進／維持；老化速度の減速；から成るグループから選択された少なくとも１つのスキンケア効果を与える化粧方法を提供する方法。
【請求項１２】
前記ＬＸＲα賦活化合物が組成物の０．００１−１０重量％のレベルで存在することを特徴とする請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１に記載のＬＸＲα賦活化合物および皮膚科学的に許容されるビヒクルを含み、式中のＲが−Ｈ、−ＯＨ、＝Ｏ、−ＣＯＣＨ３、−ＣＯＨＣＨ３、＝ＣＨＣＨ２ＯＨまたは−ＯＣＨＣＨ３を表すことを特徴とする皮膚の表皮障壁機能を増強する局所性組成物。
【請求項１４】
（ａ）４−アンドロステン−３，１６−ジオン、４−アンドロステン−３，１６−ジオン、アンドロスト−４−エン−３，６，１６−トリオン、４−アンドロステン１７ベータ−オール−３，１６−ジオンアセテート、１６−ケトテストステロン、３β−アセトキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−アセトキシプレグナ−５−エン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５−エン−２０−オン、５，１６−ジエン−プレグナン−３，２０−ジオール、４，１６−ジエンプレグナ−３，２０−ジオン、４−プレグネン−３，１６，２０−トリオン、４，１７（２０）−プレグナジエン−１１β，２１−ジオール−３−オン、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール−ジアセテート、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール、５−プレグネン−３ベータ，１６アルファ，２１−トリオール−２０−オン、２４−ヒドロキシコール−４−エン−３−オン、コレスタ−５，２４−ジエン−３β−オール、スティグマスタ−５，２２−ジエン−３β−オール、シス−グーグルステロン及びデスモステロール及びそれらの混合物から成るグループから選択されるＬＸＲα賦活剤と、および
（ｂ）皮膚科学的に許容されるビヒクルと、
を含む、皮膚の表皮障壁機能を強化する局所性組成物。
【請求項１５】
（ａ）４−アンドロステン−３，１６−ジオン、４−アンドロステン−３，１６−ジオン、アンドロスト−４−エン−３，６，１６−ジオン、４−アンドロステン１７ベータ−オール−３，１６−ジオンアセテート、１６−ケトテストステロン、３β−アセトキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−アセトキシプレグナ−５−エン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５−エン−２０−オン、５，１６−ジエン−プレグナン−３，２０−ジオール、４，１６−ジエンプレグナ−３，２０−ジオン、４−プレグネン−３，１６．２０−トリオン、４，１７（２０）−プレグナジエン−１１β，２１−ジオール−３−オン、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール−ジアセテート、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール、５−プレグネン−３ベータ，１６アルファ，２１−トリオール−２０−オン、２４−ヒドロキシコール−４−エン−３−オン、コレスタ−５，２４−ジエン−３β−オール、スティグマスタ−５，２２−ジエン−３β−オール、シス−グーグルステロン及びデスモステロール及びそれらの混合物から成るグループから選択されるＬＸＲα賦活剤と、および
（ｂ）皮膚科学的に許容される担体と、
を含む、成る皮膚の表皮障壁機能を強化する全身性組成物。
【請求項１６】
４−アンドロステン−３，１６−ジオン、４−アンドロステン−３，１６−ジオン、アンドロスト−４−エン−３，６，１６−トリオン、４−アンドロステン−１７ベータ−オール−３，１６−ジオンアセテート、１６−ケトテストステロン、３β−アセトキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−アセトキシプレグナ−５−エン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５−エン−２０−オン、５，１６−ジエン−プレグナン−３，２０−ジオール、４，１６−ジエンプレグナ−３，２０−ジオン、４−プレグナン−３，１６，２０−トリオン、４，１７（２０）−プレグナジエン−１１β，２１−ジオール−３−オン、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール−ジアセテート、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール、５−プレグネン−３ベータ，１６アルファ，２１−トリオール−２０−オン、２４−ヒドロキシコール−４−エン−３−オン、コレスタ−５，２４−ジエン−３β−オール、スティグマスタ−５，２２−ジエン−３β−オール、シス−グーグルステロン及びデスモステロール及びそれらの混合物から成るグループから選択されるＬＸＲα賦活化合物を含む食品組成物。
【請求項１７】
前記ＬＸＲα賦活剤が組成物の０．０１−１０重量％の量で存在することを特徴とする請求項１２から１６のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は局所性または全身性の組成物の分野、及び、このような組成物に含ませた分子の新規な効果の同定に関する。より特定的には本発明は、これらの組成物、及び、皮膚の健康な表皮障壁層の発達を増進することによって様々なスキンケア効果を与えるためのこれらの組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
表皮は層状のケラチン形成性上皮であり、その最も外側の層即ち角質層は皮膚に構造的団結性を与えて過剰な水分減少に対する障壁を形成する。ケラチノサイトは上皮の細胞の基底層を形成し、皮膚の最も外側の層に向かって移動しながら増殖かつ分化して角質層のコルネオサイト（角質細胞）を形成する。角質層は角質組織化したエンベロープを形成し、このエンベロープはまた、分化した膜複合体をコルネオサイト間のスペースに含んでおり、これらの膜複合体は、表皮内部で合成された脂質に由来しており透過性障壁を維持するために必要である。
【０００３】
肝のＸ受容体（ＬＸＲ）はヒトのケラチノサイト中に存在することが知られた核受容体であり、ヒトのケラチノサイト中で細胞の増殖及び分化並びに表皮内部の脂質代謝の調節において不可欠な役割を果たす。２２−Ｒヒドロキシコレステロールが、インボルクリン及びトランスグルタミナーゼ１をそれぞれコードする分化特異的遺伝子の協調発現を誘発し、角質組織化エンベロープの形成を増進し、細胞増殖を阻害することは当業界で公知である（Ｈａｎｌｅｙら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ  １１４  Ｎｏ．３ｐ．５４５−５５３）。
【０００４】
国際特許ＷＯ９８／３２４４４は、表皮障壁機能不全の問題を扱っており、ＬＸＲαの活性化を介して障壁発達を増進するために使用できるオキシステロールの特定サブセットを開示している。この文献の重要な指摘は、構造的に極めて類似したオキシステロール化合物及びコレステロール自体でさえもＬＸＲαの有効な賦活剤でないということである。これは、ＬＸＲαが極めて特異的な受容体であることを当業者に印象付ける。
【０００５】
グーグルステロンをその他の複数の有効成分と組み合わせて含む皮膚用組成物がセルライト（蜂巣炎）の治療に使用されることは公知である（米国特許第６，１２０，７７９号）。セルライトの原因は、真皮の下側にあるアジポサイト即ち脂肪細胞中で脂肪の堆積が増加することにあり、表皮の透過性障壁を維持する必要性という問題とは全く違った技術的問題を提起する。
【０００６】
表皮の障壁機能を改善できることは、皮膚が乾燥しているときまたは損傷されているときに特に有利である。乾燥肌または損傷肌の障壁機能が改善されると、水分減少が抑制され皮膚の質及び柔軟性が全般的に増強される。
【０００７】
本発明によって解決すべき主要な技術的課題は、高度に特異的なＬＸＲαの活性化を介して皮膚中の表皮障壁の発達を改善できる代替分子を見出すことである。
【０００８】
従来技術である国際特許ＷＯ９８／３２４４４は、ＬＸＲαを活性化する能力は少数のオキシステロール群に限られると教示している。従ってＬＸＲαを活性化する能力を有しておりこれによって皮膚中の表皮障壁特性を改善できる別の分子をここに発見したことは驚嘆に値する。
【発明の開示】
【０００９】
従って本発明は、ＬＸＲαを活性化するという新規に同定された能力を有しており、これによって皮膚中の表皮障壁特性を改善する手段となり得る一群の化合物を提供する。
【００１０】
本発明の第一の目的は、皮膚の表皮障壁機能を強化する局所性または全身性の組成物を製造するために、一般式；
【００１１】
【化１】
2005509610.tif 000002
2005509610.tif 000003
〔式中、
Ｒは水素、ヒドロキシル、ケト、アセチル、置換もしくは未置換、分枝状もしくは非分枝状、飽和もしくは不飽和のＣ１−Ｃ７アルキル基、または、置換もしくは未置換、分枝状もしくは非分枝状の不飽和のＣ８アルキル基を表し、
Ｒ１は低級アルキル基、水素またはＣＯＲ６を表し、
Ｒ２は水素、ハロゲンまたはヒドロキシル基を表し、
Ｒ３は水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ケトまたは低級アルキル基を表し、
Ｒ４は水素、ヒドロキシルまたはケト基を表し、
Ｒ５は水素、ヒドロキシル、ハロゲンまたは低級アルキル基を表し、
Ｒ６は低級アルキル基を表し、
Ｘは水素、メチルまたはハロゲンを表し、
Ｙは水素、ヒドロキシル、アセチルまたはケト基を表す。〕
で示されるＬＸＲα賦活化合物の使用を提案することである。
【００１２】
式（Ａ）または（Ｂ）の化合物を場合によっては１種または複数の別の成分と共に含む全身性または局所性の組成物も本発明の範囲内に包含される。
【００１３】
本発明の第二の目的は、乾燥肌の治療／予防；炎症肌、赤化肌及び／または敏感肌の鎮静；インボルクリンレベルの増進／維持；老化速度の減速；から成るグループから選択された少なくとも１つのスキンケア効果を与えるために、本文中に定義した式（Ａ）または（Ｂ）の化合物を含む局所性組成物を皮膚に塗布するかまたは全身性組成物を全身的に投与することを含む化粧方法を提供することである。
【００１４】
本発明の第三の目的は、上記の式のいずれかで表されるＬＸＲα賦活化合物および皮膚科学的に許容されるビヒクルを含み、式中のＲが−Ｈ、−ＯＨ、＝Ｏ、−ＣＯＣＨ３、−ＣＯＨＣＨ３、＝ＣＨＣＨ２ＯＨまたは−ＯＣＨＣＨ３を表すことを特徴とする皮膚の表皮障壁機能を強化する全身性組成物を提供することである。
【００１５】
本発明の第四の目的は、上記の式のいずれかで表されるＬＸＲα賦活化合物および皮膚科学的に許容される担体を含み、式中のＲが−Ｈ、−ＯＨ、＝Ｏ、−ＣＯＣＨ３、−ＣＯＨＣＨ３、＝ＣＨＣＨ２ＯＨまたは−ＯＣＨＣＨ３を表すことを特徴とする皮膚の表皮障壁機能を強化する局所性組成物を提供することである。
【００１６】
表皮障壁機能は、皮膚表皮内部に存在し透過性障壁を維持するために必要な健康な角質細胞化表皮の発達に関与する細胞の増殖及び分化によって決定される。
【００１７】
本発明では表皮障壁機能の改善を２つの手段によって測定した。第一の手段では、ＬＸＲαを活性化するリポーター遺伝子アッセイを使用し、第二の手段では、本発明によって治療した細胞中で検出されたフィラグリン発現レベルを測定する。フィラグリンは表皮分化のマーカーとして十分に認知されており、フィラグリンの増加は角質細胞化した上皮の発達によって皮膚内部の障壁機能が強化されたことを示す指標となる（Ｋｏｒｎｕｖｅｓ  ＬＧ．ら，１９９９  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  １１２：２０３−９）。
【００１８】
伝統的に受け容れられていた学説に反して、ＬＸＲαを活性化し得る分子のグループが従来技術で主張されていたような少数のオキシステロール群に限られていないことが知見された。更に、本発明の１つの特徴によれば、本発明で同定されたグループを構成する分子は従来技術で同定されたオキシステロールよりも大きいＬＸＲα活性化能力を有しており、これによって表皮の障壁特性を強化するためのより有効な成分を提供することが証明された。
【００１９】
Ｒ基を１７位の炭素原子に連結する結合は、Ｒ基の種類に依存するであろう（波形結合によって表す）。Ｒが水素またはヒドロキシル基またはアセチル基であるときには結合は飽和結合であろうが、Ｒがケト基であるときには結合は不飽和結合であろう。Ｒがアルキル基であるとき、この基は、飽和または不飽和の結合を介して１７位の炭素に連結され得るが、好ましくは不飽和結合である。
【００２０】
本発明の目的に適うためにはＲはヒドロキシル、ケトまたはアセチル基を表すことができる。
【００２１】
また、Ｒは置換または未置換、飽和または不飽和、分枝状または非分枝状のＣ１−Ｃ７（即ち、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６及びＣ７を含む）アルキル基を表してもよい。好ましくは、このＣ１−Ｃ７アルキル基は、ヒドロキシル、ケト及びアセチル基から選択された少なくとも１つの置換基を含んでおり、より特定的にはＲは２個及び３個の上記のような置換基を有している置換アルキル基を表す。より好ましくはこのアルキル基は１つまたは複数のケト基またはヒドロキシル基によって置換されている。更に好ましくはアルキルＲ基は図７に示すＣ２０，Ｃ２１，Ｃ２２及びＣ２３に対応するかまたは等価の１つまたは複数の位置で置換されている。置換がケト基による置換であるときは、この基はＣ２０に結合するのが最も好ましく、置換がヒドロキシル基による置換であるときは、この基はＣ２１及び／またはＣ２２で炭素に結合するのが最も好ましい。
【００２２】
アルキルＲ基は非分枝状であるのが好ましい。これによって有利な直鎖状配置（ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ）を維持し易いからである。しかしながらアルキル基が分枝であるときは、これらの分枝が好ましくは２個の炭素、より好ましくは１個の炭素を有している。
【００２３】
上述のようにＲ基がアルキル基である場合、この基はある程度の不飽和を有しているのが好ましい。好ましくは不飽和が１つまたは複数の置換ケト基の形態である。
【００２４】
Ｒが不飽和のＣ１−Ｃ８アルキル基を表す場合、この基は式−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２）２Ｃ＝Ｃ（ＣＨ３）２を有しているのが最も好ましい。
【００２５】
いかなる理論に制約されることも望んでいないが、出願人らは、ＬＸＲαの活性部位との正しい相互作用を決定し従ってＬＸＲαの活性化を決定するのは、本文中に提示した一般式で示される分子のＲ基のコンホメーションであると考えている。より特定的には、分子構造のコンピューターモデル化から、Ｒ基が炭素鎖である場合には活性部位との正しい相互作用を生じさせるためにＲ基は図４に示すような実質的に直鎖状のコンホメーションを有しているのが好ましいと考えられる。このようなコンホメーションは、Ｒ基が実質的に直鎖状の炭素鎖であり及び／または少なくとも１つの不飽和Ｃ−Ｃ結合を有しているような分子で得られる。
【００２６】
また、ＬＸＲαの最も有効な活性化剤は小さいＲ基を含んでいると考えられる。従って好ましい実施態様では、ＬＸＲα賦活化合物のＲ基は水素、ヒドロキシル、ケトまたは未置換のＣ１−Ｃ４アルキル基を表すか、または、より好ましくは置換Ｃ１−Ｃ４アルキル基を表す。好ましくは置換がこのアルキル基内部のＣ２０またはＣ２１で生じる。Ｒ基がアルキル基の場合、この基は環構造のＣ１７と不飽和結合を形成しているのが好ましい。
【００２７】
好ましい実施態様で、Ｒは水素、ヒドロキシル、ケトまたは置換／未置換Ｃ１−Ｃ４アルキル基を表す。適当な未置換基としてはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチルまたはｔｅｒ−ブチルがある。
【００２８】
極めて好ましい実施態様では、Ｒは−Ｈ、−ＯＨ、＝Ｏ、−ＣＯＣＨ３、−ＣＯＨＣＨ３、＝ＣＨＣＨ３、＝ＣＨＣＨ２ＯＨ、−ＯＣＯＣＨ３及びＣ（ＣＨ３）（ＣＨ２）２Ｃ＝Ｃ（ＣＨ３）２から成るグループから選択される。
【００２９】
本文中で使用された“低級アルキル”という用語は、４個以下の炭素原子を有している直鎖状及び分枝状の双方のラジカルを包含する。適当な基の例は上述した。好ましい実施態様ではＲ１が水素である。
【００３０】
Ｒ２は水素、ハロゲン好ましくは塩素、または、ヒドロキシル基を表し、Ｒ２は好ましくは水素を表す。
【００３１】
Ｒ３は水素、ハロゲン好ましくはフッ素もしくは塩素、ケト基または低級アルキル基を表す。Ｒ３は好ましくはケト基または水素である。最も好ましい実施態様ではＲ３は水素である。
【００３２】
Ｒ４及びＲ５は好ましくはヒドロキシル基または水素を表し、最も好ましくはこれらの基は水素を表す。
【００３３】
Ｒ６は低級アルキル基、好ましくはメチル基を表す。
【００３４】
Ｘは好ましくは水素、フッ素または塩素を表し、最も好ましくはＸは水素である。
【００３５】
Ｙは好ましくは水素、ヒドロキシル基またはケト基を表す。
【００３６】
Ｙが水素のとき一般式Ａの化合物中の二重結合がＣ１６とＣ１７との間で形成され得る。
【００３７】
式Ｂの化合物中ではＹが水素のとき、Ｒ１は好ましくは水素または−ＣＯＲ６である。Ｙがケト基のとき賦活分子は一般式Ａで表されるのが好ましいが、Ｙがヒドロキシル基のとき賦活分子は好ましくは一般式Ｂで表される。
【００３８】
最も好ましい実施態様では賦活化合物が式Ａで表され、式中のＹはケト基である。
【００３９】
Ｒが水素またはヒドロキシル基である場合、式Ａの賦活化合物中のＹは好ましくはケト基である。
【００４０】
Ｒが−ＣＯＣＨ３である場合、式Ａまたは式Ｂ好ましくは式Ａの賦活化合物中のＹは好ましくは水素またはケト基である。
【００４１】
Ｒが＝ＣＨＣＨ３または−ＯＣＯＣＨ３である場合、式Ａの賦活化合物中のＹは極めて好ましくはケト基である。
【００４２】
Ｒが＝ＣＨＣＨ２ＯＨである場合、Ｙは好ましくは、式中のＲ４が好ましくはヒドロキシル基を表す一般式Ａの賦活化合物中の水素であるか、または、式中のＲ１が水素を表す式Ｂの賦活化合物中のヒドロキシル基である。
【００４３】
ＲがＣ（ＣＨ３）（ＣＨ２）２Ｃ＝Ｃ（ＣＨ３）２である場合、Ｙは好ましくは式中のＲ１もまた水素を表す式Ｂの賦活化合物中の水素である。
【００４４】
本発明による使用の好ましい実施態様では、望ましいＬＸＲαの活性化は、４−アンドロステン−３，１６−ジオン、４−アンドロステン−３，１６−ジオン、アンドロスト−４−エン−３，６，１６−トリオン、４−アンドロステン１７ベータ−オール−３，１６−ジオンアセテート、１６−ケトテストステロン、３β−アセトキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−アセトキシプレグナ−５−エン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５−エン−２０−オン、５，１６−ジエン−プレグナン−３，２０−ジオール、４，１６−ジエンプレグナ−３，２０−ジオン、４，１７（２０）−（シス）−プレグナジエン−３，１６−ジオン、４，１７（２０）−（トランス）−プレグナジエン−３，１６−ジオン、４−プレグナン−３，１６，２０−トリオン、４，１７（２０）−プレグナジエン−１１β，２１−ジオール−３−オン、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール−ジアセテート、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール、５−プレグネン−３ベータ，１６アルファ，２１−トリオール−２０−オン、２４−ヒドロキシコール−４−エン−３−オン、コレスタ−５，２４−ジエン−３β−オール、シス−グーグルステロン及びデスモステロール及びそれらの混合物から成るグループから選択された化合物によって行われる。
【００４５】
極めて好ましい実施態様では、本発明は、皮膚の表皮障壁機能を強化する組成物を製造するための、４，１７（２０）−（シス）−プレグナジエン−３，１６−ジオンの使用に関する。
【００４６】
すべての化合物の製造に関しては文献に記載されており及び／またはこれらの化合物が例えばＳｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙから市販されている。
【００４７】
本発明の組成物を製造するためには、リポーター遺伝子発現レベルの検出可能な増加を惹起でき、それによって皮膚の障壁発達の改善を果たし得る有効量のＬＸＲα賦活分子を組成物に含有させる。本発明の最終組成物中に存在するＬＸＲα賦活分子またはその混合物の量は、典型的には組成物の重量の０．００１−５０重量％、好ましくは０．０１−１０重量％、最も好ましくは０．１−１重量％の範囲であろう。賦活分子の濃度は典型的には約１−１０μＭであろう。
【００４８】
本発明の好ましい実施態様では、皮膚の表皮障壁機能を強化する局所性組成物は：
（ａ）４−アンドロステン−３，１６−ジオン、４−アンドロステン−３，１６−ジオン、アンドロスト−４−エン−３，６，１６−トリオン、４−アンドロステン−１７ベータ−オール−３，１６−ジオンアセテート、１６−ケトテストステロン、３β−アセトキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−アセトキシプレグナ−５−エン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５−エン−２０−オン、５，１６−ジエン−プレグナン−３，２０−ジオール、４，１６−ジエンプレグナ−３，２０−ジオン、４−プレクネン−３，１６，２０−トリオン、４，１７（２０）−プレグナジエン−１１β，２１−ジオール−３−オン、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール−ジアセテート、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール、５−プレグネン−３ベータ，１６アルファ，２１−トリオール−２０−オン、２４−ヒドロキシコール−４−エン−３−オン、コレスタ−５，２４−ジエン−３β−オール、スティグマスタ−５，２２−ジエン−３β−オール、シス−グーグルステロン及びデスモステロール及びそれらの混合物から成るグループから選択された有効量のＬＸＲα賦活剤と、および
（ｂ）皮膚科学的に許容されるビヒクルと、
を含む。
【００４９】
本発明の別の好ましい実施態様は、皮膚の表皮障壁機能を強化する全身性組成物を提供し、該組成物は、
（ａ）４−アンドロステン−３，１６−ジオン、４−アンドロステン−３，１６−ジオン、アンドロスト−４−エン−３，６，１６−トリオン、４−アンドロステン−１７ベータ−オール−３，１６−ジオンアセテート、１６−ケトテストステロン、３β−アセトキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−アセトキシプレグナ−５−エン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５−エン−２０−オン、５，１６−ジエン−プレグナン−３，２０−ジオール、４，１６−ジエンプレグナ−３，２０−ジオン、４−プレグネン−３，１６，２０−トリオン、４，１７（２０）−プレグナジエン−１１β，２１−ジオール−３−オン、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール−ジアセテート、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール、５−プレグネン−３ベータ，１６アルファ，２１−トリオール−２０−オン、２４−ヒドロキシコール−４−エン−３−オン、コレスタ−５，２４−ジエン−３β−オール、スティグマスタ−５，２２−ジエン−３β−オール、シス−グーグルステロン及びデスモステロール及びそれらの混合物から成るグループから選択されたＬＸＲα賦活化合物と、および
（ｂ）皮膚科学的に許容されるビヒクルと、
を含む。
【００５０】
皮膚科学的に許容されるビヒクルは、組成物中の新規に同定されたＬＸＲα賦活剤の希釈剤、分散剤または担体として作用し、組成物を局所使用したときに組成物の分布を促進する。
【００５１】
水以外の皮膚科学的に許容されるビヒクルとしては液体または固体の皮膚緩和剤、溶媒、保湿剤、増粘剤及び粉末がある。単独使用することもできまたは１種もしくは複数のビヒクルの混合物として使用することもできるこれらの種類のビヒクルの各々について実例を以下に示す：
皮膚緩和剤、例えば、ステアリルアルコール、グリセロールモノリシノレエート、グリセロールモノステアレート、ミンクオイル、セチルアルコール、イソプロピルイソステアレート、ステアリン酸、イソブチルパルミテート、イソセチルステアレート、オレイルアルコール、イソプロピルラウレート、ヘキシルラウレート、デシルオレエート、オクタデカン−２−オール、イソセチルアルコール、エイコサニルアルコール、ベヘニルアルコール、セチルパルミテート、ジメチルポリシロキサンのようなシリコーン油、ジ−ｎ−ブチルセバケート、イソプロピルミリステート、イソプロピルパルミテート、イソプロピルステアレート、ブチルステアレート、ポリエチレングリコール、トリエチレングリコール、ラノリン、カカオ脂、トウモロコシ油、綿実油、牛脂、豚脂、オリーブ油、パーム核油、ナタネ油、ベニバナ種油、マツヨイグサ油、ダイズ油、ヒマワリ種油、アボカド油、オリーブ油、ゴマ種油、ココヤシ油、ピーナツ油、ヒマシ油、アセチル化ラノリンアルコール、石油ゼリー、鉱油、ブチルミリステート、イソステアリン酸、パルミチン酸、イソプロピルリノレエート、ラウリルラクテート、ミリスチルラクテート、デシルオレエート、ミリスチルミリステート；
噴射剤、例えば、トリクロロフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、モノクロロジフルオロメタン、トリクロロトリフルオロエタン、プロパン、ブタンイソブタネムデメチルエーテル、二酸化炭素、一酸化二窒素；
溶媒、例えば、エチルアルコール、メチレンクロリド、イソプロパノール、アセトン、エチレングリコール、モノエチルエーテル、ジエチレングリコールモノブチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン；
粉末、例えば、白亜、滑石、酸性白土、カオリン、デンプン、ガム、コロイドシリカ、ポリアクリル酸ナトリウム、テトラアルキル及び／またはトリアルキルアリールアンモニウムスメクタイト、化学的に改質されたマグネシウムアルミニウムシリケート、有機的に改質されたモンモリロナイトクレー、水和アルミニウムシリケート、ヒュームドシリカ、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチレングリコールモノステアレート。
【００５２】
皮膚科学的に許容されるビヒクルは通常は、消費者がそのまま使用できる最終組成物の１０−９９．９９重量％、好ましくは５０−９９重量％を構成するであろう。
【００５３】
組成物はまた、上記のような最終組成物の通常は９８容量％以下、好ましくは５−８０容量％の水を含んでもよい。
【００５４】
本発明の組成物は、ヒトの皮膚に局所使用する製品として、より特定的には皮膚が特別に乾燥または損傷しているときに皮膚の透水性抑制剤として、皮膚の水分減少を抑制し皮膚の質及び柔軟性を全般的に強化する目的で使用される。このような表皮障壁機能の強化は多くの美容的スキンケア効果を個人に与えることができる。従って１つの実施態様は、乾燥肌の治療／予防；炎症肌、赤化肌及び／または敏感肌の鎮静；インボルクリンレベルの増進／維持；から成るグループから選択された少なくとも１つのスキンケア効果を与える化粧方法から成り、方法は、上述のような局所性組成物を皮膚に塗布することから成る。
【００５５】
本発明の皮膚用組成物は、４，０００−１０，０００ｍＰａｓの粘度を有しているローション、１０，０００−２０，０００ｍＰａｓの粘度を有している流体、または、温度２０℃で２０，０００−１００，０００ｍＰａｓまたはそれ以上の粘度を有しているクリームとして配合できる。組成物はその粘度及び所期の消費者用途に適した容器に包装され得る。例えば、ローションまたは流体状クリームは、ビン、ロールボールアプリケーター、噴射剤に推進されるエアロゾルデバイス、または、適当な指操作ポンプの付いた容器に包装できる。組成物がクリームであるとき、組成物は、非変形性のビン、または、チューブのような絞り出し容器、または、蓋付きジャーに簡単に収容できる。
【００５６】
全身性投与するための本発明の組成物は例えば、経口投与に適した形態、例えば、錠剤、ドロップ剤、カプセル剤、液剤（例えばシロップまたは舐剤）の形態でもよく、または、注射剤（例えば、皮下注射又は筋肉内注射）、浸剤または座薬剤として投与されてもよい。
【００５７】
典型的なこのような配合技術及び薬理学的に許容される適当な担体は当業者に公知である。適当な経口投与組成物としてはまた、徐放性になるように調製されたもの及び／または下部胃腸管で放出するように調製されたものがある。
【００５８】
別の全身性投与手段としては、上記組成物のいずれかを食品に入れて投与する方法がある。この場合には薬理学的に許容される担体を必ずしも使用する必要がない。
【００５９】
従って本発明はまた、本文中に定義した美容的に許容される組成物を収容している閉鎖容器を提供する。
【実施例１】
【００６０】
リポーター遺伝子アッセイ
ＬＸＲαの活性化は、Ｋｌｉｅｗｅｒら（Ｎａｔｕｒｅ  ３５８  ７７１−７７４  １９９２）によって記載されたアッセイに基づくリポーター遺伝子アッセイによって判定した。このアッセイでは、ｃｏｓ−７細胞（ＥＣＡＣＣ  Ｎｏ．８７０２１３０２）を２４ウェルプレートに５×１０４細胞／ウェルの密度で播種した。１０％  ＦＣＳ、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１００ｉｕ／ｍｌ  ペニシリン及び１００ｇ／ｍｌ  ストレプトマイシンを含有するＤＭＥＭ中の細胞を３７℃／５％  ＣＯ２中で一夜増殖させた。
【００６１】
リポーター遺伝子構築物の作製
市販のベクター−ｐＮＦｋＢ−Ｌｕｃ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を基本のリポータープラスミドとして使用した。このプラスミドがチミジンキナーゼプロモーター要素の下流にホタルのルシフェラーゼ遺伝子を含んでいたからである。ＮＦｋＢコンセンサス配列を制限酵素Ｍｌｕ  Ｉ及びＢｇｌ  ＩＩを使用して切除し、ＬＸＲ核リポーター用のＤＮＡレスポンス要素配列の３つの順方向反復配列を挿入した。
【００６２】
ＬＸＲレスポンス要素の作製
レスポンス要素はＷｉｌｌｙ，Ｐ．ら（１９９５）から（マウスの乳腫瘍ウイルスのプロモーター領域から）採取し、３回繰り返し、クローニング中のフラグメントを配向するために各末端に制限酵素部位Ｍｌｕ  Ｉ及びＢｇｌ  ＩＩ部位を組み込んだ（図５）。この長いオリゴヌクレオチドを合成し、クレノウ埋め込みによって二重鎖ＤＮＡ鋳型を産生するようにアニーリングプライマーを設計した。
【００６３】
このｄｓＤＮＡ鋳型をベクターｐＮＦｋＢ−Ｌｕｃと同じく制限酵素Ｍｌｕ  Ｉ及びＢｇｌ  ＩＩによって切断して該ベクターにインサートをクローニングできるようにした。インサートとベクターとを結合させ、次いで熱ショックを加えて大腸菌（ＪＭ１０９株）を形質転換させ、次いで、ＬＢ寒天＋アンピシリン（１００μｇ／ｍｌ）の上で組換え体を選択した。生じた各コロニーの液状ミニ培養物を樹立させ、ミニプラスミド調製物を作製し（Ｑｕｉａｇｅｎプロトコルに準拠）、更に制限消化して組換えインサートの寸法を検証した。これらのベクターがＬＸＲレスポンス要素配列を正しい配向で含むことを証明するために、これらのベクターをＤＮＡ配列決定によって最終的に検証した。
【００６４】
ＬＸＲレスポンス要素；５′ＧＧＴＴＴＡ  ａａｔａ  ＡＧＴＴＣＡ  ３′（ＩＤ配列１）
ＬＸＲレスポンス要素オリゴ；
【００６５】
【化４】
2005509610.tif 000004
ＬＸＲレスポンス要素のアニーリングプライマー；５′ｃａｔｇｃｇｔａａｇａｔｃｔｇｔｔｇｃｃ３′（ＩＤ配列３）。
【００６６】
ＲＸＲα発現ベクターの作製
ｐＲＳＶ／ｈＲＸＲαをＣｏｌｌｉｎｇｗｏｏｄ  ＴＮら，１９９７，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７２：１３０６０−５の方法によって調製した。上述のようにして形質転換を実施し、１００ｍｌの一夜培養物からバルクプラスミド調製を行った。このベクターの選択抗生物質は１００μｇ／ｍｌのアンピシリンであった。
【００６７】
リポフェクトアミン（Ｇｉｂｃｏ  Ｂｒｉ）を製造業者の指示通りに使用して細胞のトランスフェクションを行った。トランスフェクトした細胞を３７℃／５％  ＣＯ２で５時間インキュベートし、次いで血清を最終濃度２％まで加えた。次に細胞をリガンドの存在下または非存在下で更に２４時間インキュベートした。２４時間後、細胞溶解液を調製し、Ｄｕａｌ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅアッセイ系（Ｐｒｏｍｅｇａ）及びＭＬＸマイクロタイタープレートルミノメーター（Ｄｙｎｅｘ）を使用してホタル及びウミシイタケ（ｒｅｎｉｌｌａ）のルシフェラーゼのレベルを測定した。
【００６８】
トランスフェクション培地（ＤＭＥＭ）で細胞を洗浄し、次いで４つのプラスミド、即ち、ＬＸＲ反応性ホタルルシフェラーゼリポーター遺伝子（ｐＬＸＲＥ−ｌｕｃ）、ヒトのＬＸＲ及びＲＸＲαのｃＤＮＡをそれぞれ含む哺乳類発現プラスミド（ｐｃＤＮＡ３．１／ＬＸＲ及びｐＲＳＶ／ｈＲＸＲα）、及び、ウミシイタケのルシフェラーゼ遺伝子を構成的に発現する対照プラスミド（ｐＲＬＴＫ，Ｐｒｏｍｅｇａ）に一過性にトランスフェクトした。
【００６９】
トランスフェクトした細胞を３７℃／５％  ＣＯ２で５時間インキュベートし、次いで血清を最終濃度２％に添加した。次に細胞をリガンドの存在下または非存在下で更に２４時間インキュベートした。２４時間後、細胞溶解液を調製し、Ｄｕａｌ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅアッセイ系（Ｐｒｏｍｅｇａ）及びＭＬＸマイクロタイタープレートルミノメーター（Ｄｙｎｅｘ）を使用してホタル及びウミシイタケのルシフェラーゼのレベルを測定した。（対照となるウミシイタケのルシフェラーゼに対して標準化した）ホタルのルシフェラーゼのレベルがリポーター遺伝子活性の測定値を与える。これはまたＬＸＲの活性化レベルを表す。
【００７０】
（対照となるウミシイタケのルシフェラーゼに対して標準化した）ホタルのルシフェラーゼのレベルはリポーター遺伝子活性の測定値を与え、これはまたＬＸＲαの活性化レベルを表す。
【００７１】
【表１】
2005509610.tif 000005
陽性対照実験の各々では２２Ｒ−ヒドロキシコレステロールが記載の濃度で存在していた。
【００７２】
活性リガンドの存在はリポーター遺伝子活性を用量依存的に刺激する。リポーター遺伝子発現はＬＸＲによってコントロールされ、従ってＬＸＲの活性化レベルを表す。従って、これらのデータは、特許請求の範囲に記載の物質がＬＸＲ賦活剤として作用することを示す。
【実施例２】
【００７３】
ＲＮＡ発現分析
市販のヒト表皮培養物をＳｋｉｎ  ＥｔｈｉｃＴＭから入手した。グーグルステロン（濃縮）を補充したＤＭＥＭ中またはビヒクル単独（Ｘ％エタノール）中で培養物をＸ日間インキュベートした。培地を毎日交換した。
【００７４】
次にＱａｉｇｅｎ  ＲＮＥａｓｙＴＭミニキットを製造業者の指示通りに使用して培養物からＲＮＡを抽出した。次いでＲＮＡをＤＮアーゼで処理し、２６０ｎｍ及び２８０ｎｍのＯＤを分光光度計で測定することによって定量した。
【００７５】
次に、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＧｅｎｅｔｉｃｓのＩｎｔｅｇｒｉｄｅｒｍアレイを使用して遺伝子発現レベルを測定した。以下に概略的に説明するように製造業者の指示に従って、グーグルステロン処理した培養物中のＲＮＡ発現をビヒクル単独処理した培養物中のＲＮＡ発現に比較した。
【００７６】
（ｉ）膜の調製及びプレハイブリダイズ処理
プレハイブリダイズさせるために、ＤＮＡ塗抹面を内側にして膜の各々を個別の回転瓶に入れた。５．０ｍｌのＭｉｃｒｏＨｙｂ（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ＃ＨＹＢ１２５．ＧＦ）を以下のブロッキング剤と共に各瓶に加えた；
（ａ）９９℃で６分間変性し氷冷した５．０μｇのヒトＣｏｔ−１  ＤＮＡ（１μｇ／ｕｌ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ  ＃１５２７９−０１１）
（ｂ）５．０μｇのポリｄＡ（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ＰＯＬＹＡ．ＧＦ，１μｇ／ｕｌ）。
【００７７】
回転オーブン中でプレハイブリダイゼーションを４２℃で少なくとも２時間行った。
【００７８】
（ｉｉ）標識ｃＤＮＡプローブの調製
ｍＲＮＡのアニーリング／プライミング：
０．５ｍｌのＰＣＲ管で以下の材料を混合した：
全量８μｌのＤＥＰＣ  Ｈ２Ｏ中の１μｇの全ＲＮＡ
２．０μｌのオリゴｄＴ（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ＃ＰＯＬＹＴ．ＧＦ１０−２０ｍｅｒ、１μｇ／ｕｌ）
７０℃で１０分間インキュベートした後、管を２分間氷冷した。
【００７９】
伸長：
各ｄＮＴＰ（ｄＡＴＰを除く）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＃２７−２０３５−０２、１００ｍＭの予製液）の２０ｍＭのプールを、２０ｕｌのＤＥＰＣ  Ｈ２Ｏ、１０ｕｌの各ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰを混合することによって調製した（−２０℃で保存）。
【００８０】
２つのＲＮＡサンプルのマスターミックスは以下の材料を混合することによって調製した：
１４．４μｌの５×第一ストランド用バッファ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈ  ＃１８０６４−０１４）；
２．４μｌのＤＴＴ（０．１Ｍ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈ  ＃１８０６４−０１４）；
３．６μｌのｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰのプール（上記参照）；
３，６μｌの逆転写酵素（２００Ｕ／μｌ、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈ  ＃１８０６４−０１４）；
２４μｌの３３Ｐ  ｄＡＴＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ＢＦ１００１−２５０Ｃｉ，１０ｍＣｉ／ｍｌ）。
【００８１】
２０ｕｌのマスターミックスをＲＮＡ及びオリゴｄＴを収容している管の各々に加え、反応混合物を３７℃または４２℃で９０分間インキュベートした。次にＢｉｏ−Ｓｐｉｎ６カラム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ＃７３２−６００２）を製造業者の指示通りに使用して取り込まれなかったヌクレオドを除去した。
【００８２】
２ｕｌのサンプルを取り出して、活性をシンチレーションカウンティング（３２Ｐチャンネル）によって点検し、各サンプルの画分（〜１００μｌ）の全活性を計算した。
【００８３】
（ｉｉｉ）ハイブリダイゼーション
ｃＤＮＡを９９℃で３分間加熱することによって変性し、２分間氷冷した。回転オーブン中、４２℃で１６−２０時間ハイブリダイゼーションを行った。
【００８４】
（ｉｖ）膜の洗浄
回転オーブン中、〜３０ｍｌの洗浄溶液１（２×ＳＳＣ，１％ＳＤＳ）によって５０℃で毎回２０分間の洗浄を４回、引き続いて、回転オーブン中、〜３０ｍｌの洗浄溶液２（０．５×ＳＳＣ，１％ＳＤＳ）によって５０℃で毎回１５分間の洗浄を４回行うサイクルで膜を洗浄した。
【００８５】
（ｖ）燐光イメージの現像
膜のイメージは、走査中に１００ｕのピクセルサイズを使用するホスファーイメージャー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ）を使用して得られた。ＰａｔｈｗａｙｓＴＭ２．０１ソフトウェア（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）を使用してイメージを分析可能な“ＴＩＦ”ファイルに変換し、ＲＮＡ発現の変化を示す点の強度を比較した。各アレイはフィラグリンＤＮＡの独立の３点を含み、各アレイ毎に３点全部の強度の平均を計算した。この強度をアレイ上の全部の点の平均強度に標準化した。
【００８６】
結果
フィラグリンは表皮分化のマーカーであると広く認識されており、フィラグリンレベルの上昇は皮膚内部の障壁機能の改善に顕らかに関連すると考えられている。我々はここに（表２）、シスグーグルステロンによる表皮培養物の処理の結果としてフィラグリンｍＲＮＡのレベルが上昇したことを示すが、これは表皮内部の障壁機能の改善に至る経路を表す。
【００８７】
【表２】
2005509610.tif 000006
【図面の簡単な説明】
【００８８】
【図１】シス−グーグルステロン（シス−４，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール）によるＬＸＲαの活性化に伴うリポーター遺伝子活性を示す。
【図２】デスモステロール（コレスタ−５，２４−ジエン−３β−オール）によるＬＸＲαの活性化に伴うリポーター遺伝子活性を示す。
【図３】試験によってＬＸＲαを活性化することが証明された分子の分子モデルを示す。
【図４】ＬＸＲαを活性化しないことが証明された分子の分子モデルを示す。
【図５】ｐＮＦｋＢ−Ｌｕｃのプラスミドマップを示す。
【図６】コレステロール型分子の慣用の炭素番号系を示す。
【図１】
2005509610.tif 000008
【図２】
2005509610.tif 000009
【図３】
2005509610.tif 000010
【図４】
2005509610.tif 000011
【図５】
2005509610.tif 000012
【図６】
2005509610.tif 000013
【手続補正書】
【提出日】平成15年8月5日(2003.8.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚の表皮障壁機能を強化する局所性または全身性組成物を製造するための、一般式；
【化１】
2005509610.tif 000014
〔式中、
Ｒは水素、ヒドロキシル、ケト、アセチル、置換または未置換、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和のＣ１−Ｃ７アルキル基、または、置換または未置換、分枝状または非分枝状の不飽和Ｃ８アルキル基を表し、
Ｒ１は低級アルキル基、水素またはＣＯＲ６を表し、
Ｒ２は水素、ハロゲンまたはヒドロキシル基を表し、
Ｒ３は水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ケトまたは低級アルキル基を表し、
Ｒ４は水素、ヒドロキシルまたはケト基を表し、
Ｒ５は水素、ヒドロキシル、ハロゲンまたは低級アルキル基を表し、
Ｒ６は低級アルキル基を表し、
Ｘは水素、メチルまたはハロゲンを表し、
Ｙは水素、ヒドロキシル、アセチルまたはケト基を表す。〕
で示されるＬＸＲα賦活化合物の使用。
【請求項２】
Ｒが、水素、ヒドロキシル、ケトまたは置換もしくは未置換のＣ１−Ｃ４アルキル基を表すことを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項３】
Ｒが非分枝状の置換Ｃ１−Ｃ４アルキル基を表すことを特徴とする請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記賦活化合物が一般式Ａで表され、式中のＹがケト基であることを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
前記賦活化合物が式Ｂで表され、式中のＲ１が水素を表し、Ｙがヒドロキシル基、水素またはアセチル基を表すことを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
Ｒが、−Ｈ、−ＯＨ、＝Ｏ、−ＣＯＣＨ３、−ＣＯＨＣＨ３、＝ＣＨＣＨ３、＝ＣＨＣＨ２ＯＨ及び−ＯＣＯＣＨ３を表すことを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
ＲがＣ（ＣＨ３）（ＣＨ２）２Ｃ＝Ｃ（ＣＨ３）を表すことを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項８】
前記化合物が、４−アンドロステン−３，１６−ジオン、４−アンドロステン−３，１６−ジオン、アンドロスト−４−エン−３，６，１６−トリオン、４−アンドロステン−１７ベータ−オール−３，１６−ジオンアセテート、１６−ケトテストステロン、３β−アセトキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−アセトキシプレグナ−５−エン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５−エン−２０−オン、５，１６−ジエン−プレグナン−３，２０−ジオール、４，１６−ジエンプレグナ−３，２０−ジオン、４，１７（２０）−（シス）−プレグナジエン−３，１６−ジオン、４，１７（２０）−（トランス）−プレグナジエン−３，１６−ジオン、４−プレグナン−３，１６，２０−トリオン、４，１７（２０）−プレグナジエン−１１β，２１−ジオール−３−オン、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール−ジアセテート、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール、５−プレグネン−３ベータ，１６アルファ，２１−トリオール−２０−オン、２４−ヒドロキシコール−４−エン−３−オン、コレスタ−５，２４−ジエン−３β−オール、（３ベータ）−３−ヒドロキシウルス−１２−エン−２８オイック酸、シス−グーグルステロン及びデスモステロール及びそれらの混合物から成るグループから選択されることを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項９】
前記ＬＸＲα賦活化合物が４，１７（２０）−（シス）−プレグナジエン−３，１６−ジオンであることを特徴とする請求項４に記載の使用。
【請求項１０】
請求項１から９のいずれか一項に記載の式（Ａ）または（Ｂ）のＬＸＲα賦活剤を含む局所性組成物を皮膚に塗布すること
を含む、乾燥肌の治療／予防；炎症肌、赤化肌及び／または敏感肌の鎮静；インボルクリンレベルの増進／維持；老化速度の減速；から成るグループから選択された少なくとも１つのスキンケア効果を与える化粧方法。
【請求項１１】
請求項１から９のいずれか一項に記載の式（Ａ）または（Ｂ）のＬＸＲα賦活剤を含む組成物を全身性投与すること
を含む、乾燥肌の治療／予防；炎症肌、赤化肌及び／または敏感肌の鎮静；インボルクリンレベルの増進／維持；老化速度の減速；から成るグループから選択された少なくとも１つのスキンケア効果を与える化粧方法を提供する方法。
【請求項１２】
前記ＬＸＲα賦活化合物が組成物の０．００１−１０重量％のレベルで存在することを特徴とする請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１に記載のＬＸＲα賦活化合物および皮膚科学的に許容されるビヒクルを含み、式中のＲが−Ｈ、−ＯＨ、＝Ｏ、−ＣＯＣＨ３、−ＣＯＨＣＨ３、＝ＣＨＣＨ２ＯＨまたは−ＯＣＨＣＨ３を表すことを特徴とする皮膚の表皮障壁機能を増強する局所性組成物。
【請求項１４】
（ａ）４−アンドロステン−３，１６−ジオン、４−アンドロステン−３，１６−ジオン、アンドロスト−４−エン−３，６，１６−トリオン、４−アンドロステン１７ベータ−オール−３，１６−ジオンアセテート、１６−ケトテストステロン、３β−アセトキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−アセトキシプレグナ−５−エン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５−エン−２０−オン、５，１６−ジエン−プレグナン−３，２０−ジオール、４，１６−ジエンプレグナ−３，２０−ジオン、４−プレグネン−３，１６，２０−トリオン、４，１７（２０）−プレグナジエン−１１β，２１−ジオール−３−オン、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール−ジアセテート、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール、５−プレグネン−３ベータ，１６アルファ，２１−トリオール−２０−オン、２４−ヒドロキシコール−４−エン−３−オン、コレスタ−５，２４−ジエン−３β−オール、シス−グーグルステロン及びそれらの混合物から成るグループから選択されるＬＸＲα賦活剤と、および
（ｂ）皮膚科学的に許容されるビヒクルと、
を含む、皮膚の表皮障壁機能を増強する局所性組成物。
【請求項１５】
（ａ）４−アンドロステン−３，１６−ジオン、４−アンドロステン−３，１６−ジオン、アンドロスト−４−エン−３，６，１６−ジオン、４−アンドロステン１７ベータ−オール−３，１６−ジオンアセテート、１６−ケトテストステロン、３β−アセトキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−アセトキシプレグナ−５−エン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５−エン−２０−オン、５，１６−ジエン−プレグナン−３，２０−ジオール、４，１６−ジエンプレグナ−３，２０−ジオン、４−プレグネン−３，１６．２０−トリオン、４，１７（２０）−プレグナジエン−１１β，２１−ジオール−３−オン、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール−ジアセテート、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール、５−プレグネン−３ベータ，１６アルファ，２１−トリオール−２０−オン、２４−ヒドロキシコール−４−エン−３−オン、コレスタ−５，２４−ジエン−３β−オール、シス−グーグルステロン及びそれらの混合物から成るグループから選択されるＬＸＲα賦活剤と、および
（ｂ）皮膚科学的に許容される担体と、
を含む皮膚の表皮障壁機能を増強する全身性組成物。
【請求項１６】
４−アンドロステン−３，１６−ジオン、４−アンドロステン−３，１６−ジオン、アンドロスト−４−エン−３，６，１６−トリオン、４−アンドロステン−１７ベータ−オール−３，１６−ジオンアセテート、１６−ケトテストステロン、３β−アセトキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−アセトキシプレグナ−５−エン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５−エン−２０−オン、５，１６−ジエン−プレグナン−３，２０−ジオール、４，１６−ジエンプレグナ−３，２０−ジオン、４−プレグナン−３，１６，２０−トリオン、４，１７（２０）−プレグナジエン−１１β，２１−ジオール−３−オン、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール−ジアセテート、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール、５−プレグネン−３ベータ，１６アルファ，２１−トリオール−２０−オン、２４−ヒドロキシコール−４−エン−３−オン、コレスタ−５，２４−ジエン−３β−オール、シス−グーグルステロン及びそれらの混合物から成るグループから選択されるＬＸＲα賦活化合物を含む食品組成物。
【請求項１７】
前記ＬＸＲα賦活剤が組成物の０．０１−１０重量％の量で存在することを特徴とする請求項１２から１６のいずれか一項に記載の組成物。
【手続補正書】
【提出日】平成16年6月7日(2004.6.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚の表皮障壁機能を強化する局所性または全身性組成物を製造するための、一般式；
【化１】
2005509610.tif 000015
〔式中、
Ｒは水素、ヒドロキシル、ケト、アセチル、置換または未置換、分枝状または非分枝状、飽和または不飽和のＣ１−Ｃ７アルキル基、または、置換または未置換、分枝状または非分枝状の不飽和Ｃ８アルキル基を表し、
Ｒ１は低級アルキル基、水素またはＣＯＲ６を表し、
Ｒ２は水素、ハロゲンまたはヒドロキシル基を表し、
Ｒ３は水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ケトまたは低級アルキル基を表し、
Ｒ４は水素、ヒドロキシルまたはケト基を表し、
Ｒ５は水素、ヒドロキシル、ハロゲンまたは低級アルキル基を表し、
Ｒ６は低級アルキル基を表し、
Ｘは水素、メチルまたはハロゲンを表し、
Ｙは水素、ヒドロキシル、アセチルまたはケト基を表す。〕
で示されるＬＸＲα賦活化合物の使用。
【請求項２】
Ｒが、水素、ヒドロキシル、ケトまたは置換もしくは未置換のＣ１−Ｃ４アルキル基を表すことを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項３】
Ｒが非分枝状の置換Ｃ１−Ｃ４アルキル基を表すことを特徴とする請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記賦活化合物が一般式Ａで表され、式中のＹがケト基であることを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
前記賦活化合物が式Ｂで表され、式中のＲ１が水素を表し、Ｙがヒドロキシル基、水素またはアセチル基を表すことを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
Ｒが、−Ｈ、−ＯＨ、＝Ｏ、−ＣＯＣＨ３、−ＣＯＨＣＨ３、＝ＣＨＣＨ３、＝ＣＨＣＨ２ＯＨ及び−ＯＣＯＣＨ３を表すことを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
ＲがＣ（ＣＨ３）（ＣＨ２）２Ｃ＝Ｃ（ＣＨ３）を表すことを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項８】
前記化合物が、４−アンドロステン−３，１６−ジオン、４−アンドロステン−３，１６−ジオン、アンドロスト−４−エン−３，６，１６−トリオン、４−アンドロステン−１７ベータ−オール−３，１６−ジオンアセテート、１６−ケトテストステロン、３β−アセトキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−アセトキシプレグナ−５−エン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５−エン−２０−オン、５，１６−ジエン−プレグナン−３，２０−ジオール、４，１６−ジエンプレグナ−３，２０−ジオン、４，１７（２０）−（シス）−プレグナジエン−３，１６−ジオン、４，１７（２０）−（トランス）−プレグナジエン−３，１６−ジオン、４−プレグナン−３，１６，２０−トリオン、４，１７（２０）−プレグナジエン−１１β，２１−ジオール−３−オン、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール−ジアセテート、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール、５−プレグネン−３ベータ，１６アルファ，２１−トリオール−２０−オン、２４−ヒドロキシコール−４−エン−３−オン、コレスタ−５，２４−ジエン−３β−オール、（３ベータ）−３−ヒドロキシウルス−１２−エン−２８オイック酸、シス−グーグルステロン及びデスモステロール及びそれらの混合物から成るグループから選択されることを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項９】
前記ＬＸＲα賦活化合物が４，１７（２０）−（シス）−プレグナジエン−３，１６−ジオンであることを特徴とする請求項４に記載の使用。
【請求項１０】
請求項１から９のいずれか一項に記載の式（Ａ）または（Ｂ）のＬＸＲα賦活剤を含む局所性組成物を皮膚に塗布すること
を含む、乾燥肌の治療／予防；炎症肌、赤化肌及び／または敏感肌の鎮静；インボルクリンレベルの増進／維持；老化速度の減速；から成るグループから選択された少なくとも１つのスキンケア効果を与える化粧方法。
【請求項１１】
請求項１から９のいずれか一項に記載の式（Ａ）または（Ｂ）のＬＸＲα賦活剤を含む組成物を全身性投与すること
を含む、乾燥肌の治療／予防；炎症肌、赤化肌及び／または敏感肌の鎮静；インボルクリンレベルの増進／維持；老化速度の減速；から成るグループから選択された少なくとも１つのスキンケア効果を与える化粧方法。
【請求項１２】
前記ＬＸＲα賦活化合物が組成物の０．００１−１０重量％のレベルで存在することを特徴とする請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１に記載のＬＸＲα賦活化合物および皮膚科学的に許容されるビヒクルを含み、式中のＲが−Ｈ、−ＯＨ、＝Ｏ、−ＣＯＣＨ３、−ＣＯＨＣＨ３、＝ＣＨＣＨ２ＯＨまたは−ＯＣＨＣＨ３を表すことを特徴とする皮膚の表皮障壁機能を増強する局所性組成物。
【請求項１４】
（ａ）４−アンドロステン−３，１６−ジオン、４−アンドロステン−３，１６−ジオン、アンドロスト−４−エン−３，６，１６−トリオン、４−アンドロステン１７ベータ−オール−３，１６−ジオンアセテート、１６−ケトテストステロン、３β−アセトキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−アセトキシプレグナ−５−エン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５−エン−２０−オン、５，１６−ジエン−プレグナン−３，２０−ジオール、４，１６−ジエンプレグナ−３，２０−ジオン、４−プレグネン−３，１６，２０−トリオン、４，１７（２０）−プレグナジエン−１１β，２１−ジオール−３−オン、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール−ジアセテート、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール、５−プレグネン−３ベータ，１６アルファ，２１−トリオール−２０−オン、２４−ヒドロキシコール−４−エン−３−オン、コレスタ−５，２４−ジエン−３β−オール、シス−グーグルステロン及びそれらの混合物から成るグループから選択されるＬＸＲα賦活剤と、および
（ｂ）皮膚科学的に許容されるビヒクルと、
を含む、皮膚の表皮障壁機能を増強する局所性組成物。
【請求項１５】
（ａ）４−アンドロステン−３，１６−ジオン、４−アンドロステン−３，１６−ジオン、アンドロスト−４−エン−３，６，１６−ジオン、４−アンドロステン１７ベータ−オール−３，１６−ジオンアセテート、１６−ケトテストステロン、３β−アセトキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−アセトキシプレグナ−５−エン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５−エン−２０−オン、５，１６−ジエン−プレグナン−３，２０−ジオール、４，１６−ジエンプレグナ−３，２０−ジオン、４−プレグネン−３，１６．２０−トリオン、４，１７（２０）−プレグナジエン−１１β，２１−ジオール−３−オン、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール−ジアセテート、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール、５−プレグネン−３ベータ，１６アルファ，２１−トリオール−２０−オン、２４−ヒドロキシコール−４−エン−３−オン、コレスタ−５，２４−ジエン−３β−オール、シス−グーグルステロン及びそれらの混合物から成るグループから選択されるＬＸＲα賦活剤と、および
（ｂ）皮膚科学的に許容される担体と、
を含む皮膚の表皮障壁機能を増強する全身性組成物。
【請求項１６】
４−アンドロステン−３，１６−ジオン、４−アンドロステン−３，１６−ジオン、アンドロスト−４−エン−３，６，１６−トリオン、４−アンドロステン−１７ベータ−オール−３，１６−ジオンアセテート、１６−ケトテストステロン、３β−アセトキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−アセトキシプレグナ−５−エン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５，１６−ジエン−２０−オン、３β−ヒドロキシプレグナ−５−エン−２０−オン、５，１６−ジエン−プレグナン−３，２０−ジオール、４，１６−ジエンプレグナ−３，２０−ジオン、４−プレグナン−３，１６，２０−トリオン、４，１７（２０）−プレグナジエン−１１β，２１−ジオール−３−オン、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール−ジアセテート、５，１７（２０）−プレグナジエン−３，１６−ジオール、５−プレグネン−３ベータ，１６アルファ，２１−トリオール−２０−オン、２４−ヒドロキシコール−４−エン−３−オン、コレスタ−５，２４−ジエン−３β−オール、シス−グーグルステロン及びそれらの混合物から成るグループから選択されるＬＸＲα賦活化合物を含む食品組成物。
【請求項１７】
前記ＬＸＲα賦活剤が組成物の０．０１から１０重量％の量で存在することを特徴とする請求項１３から１６のいずれか一項に記載の組成物。
【国際調査報告】
2005509610.tif 000016
2005509610.tif 000017
2005509610.tif 000018
2005509610.tif 000019