(57)【要約】本発明は、新規の複素環式化合物、該化合物を含む薬学的組成物、免疫調節により恩恵を受けえる症状（例えば、関節リウマチ、多発性硬化症、糖尿病、喘息、移植、全身性エリテマトーデスおよび乾癬）の臨床治療のための方法および前記化合物の使用に関する。より具体的には、本発明は新規の複素環式化合物に関し、該化合物はCD80拮抗薬（CD80およびCD28の間の相互作用を阻害することが可能）である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下に示される一般式(I)を有する化合物またはその薬学的に許容される塩：
【化１】
2005501033.tif 000017
式中でXは、置換型または非置換型のC1-3-アルキル、NH-C(O)-C1-3-アルキル、NH-C(0)-CH2-0-CH2もしくはC(0)-NH-(アミノ酸残基)から選択される結合あるいは基を表わし；
YはNR4、OまたはSを表わし；
R1はH、ハロ、CF3、低級アルキルまたは低級アルコキシを表わし；
R2およびR4は独立にHまたは低級アルキルを表わし；並びに
R3はH、ハロ、低級アルキルまたは低級アルコキシを表わし、
ここでハロはF、ClまたはBrであり；
ここで低級アルキルは飽和の又は不飽和の、直鎖状、分枝状もしくは環状のアルキル基（1〜6の炭素原子を有する）を表わし；並びに
ここで低級アルコキシは飽和の又は不飽和の、直鎖状、分枝状もしくは環状のアルコキシ基（1〜6の炭素原子を有する）を表わす
（但しXが結合であり、YがNHであり、R3がHである場合、R2はHではない）。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、Xは結合である化合物。
【請求項３】
請求項１または２に記載の化合物であって、YはNHである化合物。
【請求項４】
請求項１〜３の何れか１項に記載の化合物であって、以下に記載のものからなる群から選択される化合物：
{[3-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニルカルバモイル]-メトキシ}-酢酸,
N-[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニル]-スクシンアミド酸,
4-[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニルカルバモイル]-酪酸,
{[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニルカルバモイル]-メトキシ}-酢酸,
4-[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニルカルバモイル]-2-フェニル-酪酸,
N-[3-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニル]-スクシンアミド酸,
2-{[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニルカルバモイル]-メチル}-安息香酸,
2-クロロ-4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸,
4-(6-ジメチル-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸
4-(8-メトキシ-6-メチル-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸
4-(6,8-ジメトキシ-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸
4-(7,9-ジメトキシ-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸,
4-(6-メチル-3-オキソ-8-トリフルオロメチル-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸,
4-(7,9-ジクロロ-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸,
[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニル]-プロピオン酸
[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニル]-酢酸,
4-(4-メチル-3-オキソ-3H-クロメノ[4,3-c]ピラゾール-2-イル)-安息香酸,
4-(3-オキソ-3H-チオクロメノ[4,3-c]ピラゾール-2-イル)安息香酸,
4-(5-メチル-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸
2-[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-ベンゾイルアミノ]-3-フェニル-プロピオン酸、および
2-[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-ベンゾイルアミノ]-2-酢酸。
【請求項５】
請求項１〜４の何れか１項に記載の化合物であって、該化合物はCD80拮抗薬（CD80およびCD28の間の相互作用を阻害することが可能）である化合物。
【請求項６】
請求項１〜５の何れか１項に記載の化合物であって、医薬として使用するための化合物。
【請求項７】
請求項６に記載の化合物であって、医薬として症状を治療するために使用される化合物（該症状は関節リウマチ、多発性硬化症、糖尿病、喘息、移植、全身性エリテマトーデスおよび乾癬を含む群から選択される）。
【請求項８】
請求項１〜５の何れか１項において定義された化合物の使用であって、プロドラッグ（好ましくはエステルの形態）としての使用。
【請求項９】
薬学的組成物であって、請求項１〜６の何れか１項に記載の化合物を活性成分として、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体と共に具備する薬学的組成物。
【請求項１０】
請求項９に記載の薬学的組成物であって、症状を治療するための薬学的組成物（該症状は関節リウマチ、多発性硬化症、糖尿病、喘息、移植、全身性エリテマトーデスおよび乾癬を含む群から選択される）。
【請求項１１】
以下に示される一般式(I)を有する化合物の又はその薬学的に許容される塩の、免疫調節により恩恵を受ける症状を治療するための医薬の製造における使用：
【化２】
2005501033.tif 000018
式中でXは、置換型または非置換型のC1-3-アルキル、NH-C(O)-C1-3-アルキル、NH-C(0)-CH2-0-CH2もしくはC(0)-NH-(アミノ酸残基)から選択される結合あるいは基を表わし；
YはNR4、OまたはSを表わし；
R1はH、ハロ、CF3、低級アルキルまたは低級アルコキシを表わし；
R2およびR4は独立にHまたは低級アルキルを表わし；並びに
R3はH、ハロ、低級アルキルまたは低級アルコキシを表わし、
ここでハロはF、ClまたはBrであり；
ここで低級アルキルは飽和の又は不飽和の、直鎖状、分枝状もしくは環状のアルキル基（1〜6の炭素原子を有する）を表わし；並びに
ここで低級アルコキシは飽和の又は不飽和の、直鎖状、分枝状もしくは環状のアルコキシ基（1〜6の炭素原子を有する）を表わす。
【請求項１２】
請求項１１に記載の使用であって、前記症状は関節リウマチ、多発性硬化症、糖尿病、喘息、移植、全身性エリテマトーデスおよび乾癬を含む群から選択される使用。
【請求項１３】
免疫調節により恩恵を受ける症状の治療のための方法であって、治療上効果的な量の以下の一般式(I)を有する化合物の又はその薬学的に許容される塩の投与を含む方法：
【化３】
2005501033.tif 000019
式中でXは、置換型または非置換型のC1-3-アルキル、NH-C(O)-C1-3-アルキル、NH-C(0)-CH2-0-CH2もしくはC(0)-NH-(アミノ酸残基)から選択される結合あるいは基を表わし；
YはNR4、OまたはSを表わし；
R1はH、ハロ、CF3、低級アルキルまたは低級アルコキシを表わし；
R2およびR4は独立にHまたは低級アルキルを表わし；並びに
R3はH、ハロ、低級アルキルまたは低級アルコキシを表わし、
ここでハロはF、ClまたはBrであり；
ここで低級アルキルは飽和の又は不飽和の、直鎖状、分枝状もしくは環状のアルキル基（1〜6の炭素原子を有する）を表わし；並びに
ここで低級アルコキシは飽和の又は不飽和の、直鎖状、分枝状もしくは環状のアルコキシ基（1〜6の炭素原子を有する）を表わす。
【請求項１４】
請求項13に記載の方法であって、前記症状は関節リウマチ、多発性硬化症、糖尿病、喘息、移植、全身性エリテマトーデスおよび乾癬を含む群から選択される方法。
【請求項１５】
請求項１３または１４に記載の方法であって、前記治療上効果的な量（一日あたりの）は、0,001〜10mg/kg  体重の範囲内、好ましくは0,1〜5mg/kg  体重の範囲内である方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫調節性の化合物、該化合物を含む薬学的組成物、該化合物の使用、同様に免疫調節により恩恵を受ける医学的な状態の治療のための方法であって、該化合物が投与される治療方法に関する。
【発明の背景】
【０００２】
免疫系は、リンパ球の活性化と不活性化の間の恒常性を、免疫応答の間およびその後の多様な調節機構を介してコントロールする能力を有する。なかでも特異的に免疫応答を阻害および／または遮断（turn off）する機構が存在する。抗原がMHC分子によりT細胞受容体に提示された際、該T細胞は付加的な共刺激性シグナルの存在下でのみ正しく活性化される。補助的なシグナル（accessory signals）の非存在下ではリンパ球活性化が生じず、機能的な不活性化（アネルギーまたは耐性と称される）状態が誘導されるか、またはT-細胞が特異的にアポトーシスにより排除される。
【０００３】
そのような共刺激シグナルの１つには、特殊化した抗原提示細胞上のCD80とＴ細胞上のCD28との相互作用があり、これは完全なT細胞活性化に必須であることが実証されている。 (Lenschow et al. (1996) Annu. Rev. Immunol., 14,233-258).
【従来技術】
【０００４】
US4,312,870に化合物Ａがいくつかの精神賦活性の（psychoactive）化合物の１つとして開示されているが、生物学的データの開示はない。いくつかの関連する化合物は文献〔A. Carotti in Bioorganic & Medicinal Chemistry 6 (1998) 389-399〕に記載され、それらの化合物に関連するデータからカルボン酸置換体が非常に生物学的な活性（CNSベンゾジアゼピン受容体に対する親和性として測定される）を弱めることが明らかである。
【０００５】
【化４】
2005501033.tif 000002
【０００６】
EP  0354693A1  (Boots)は、一般構造Ｂの免疫調節性化合物を開示しているが、R7および／またはR8がCOOHである若しくはCOOH基を含有する構造を含んでいない。
【０００７】
【化５】
2005501033.tif 000003
【０００８】
同様にEP  0354693A1  (Boots)は、一般構造Ｃの免疫調節性化合物を開示しているが、R6および／またはR7がCOOHである若しくはCOOH基を含有する構造を記載していない。
【０００９】
【化６】
2005501033.tif 000004
【００１０】
また、W09111448  (Boots)は、一般構造Ｄの免疫調節性化合物を開示しているが、この開示中にはR7および／またはR8およびR8'がCOOHである若しくはCOOH基を含有する構造が存在しない。
【００１１】
【化７】
2005501033.tif 000005
【発明の概要】
【００１２】
本発明は、第一側面において一般式(I)を有する新規の化合物、
【００１３】
【化８】
2005501033.tif 000006
【００１４】
｛式中でXは、置換型または非置換型のC1-3-アルキル、NH-C(O)-C1-3-アルキル、NH-C(0)-CH2-0-CH2もしくはC(0)-NH-(アミノ酸残基)から選択される結合あるいは基を表わし；
YはNR4、OまたはSを表わし；
R1はH、ハロ、CF3、低級アルキルまたは低級アルコキシを表わし；
R2およびR4は独立にHまたは低級アルキルを表わし；並びに
R3はH、ハロ、低級アルキルまたは低級アルコキシを表わし、
ここでハロはF、ClまたはBrであり；
ここで低級アルキルは飽和の又は不飽和の、直鎖状、分枝状もしくは環状のアルキル基（1〜6の炭素原子を有する）を表わし；並びに
ここで低級アルコキシは飽和の又は不飽和の、直鎖状、分枝状もしくは環状のアルコキシ基（1〜6の炭素原子を有する）を表わし、
（但しXが結合であり、YがNHであり、R3がHである場合、R2はHではない）｝、
またはその薬学的に許容される塩に関する。
【００１５】
本発明の１つの好適な態様において化合物のＸは結合であり、また別の好適な態様においてＹはＮＨである。
【００１６】
更なる態様において、前記化合物は以下の群から選択される、
{[3-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニルカルバモイル]-メトキシ}-酢酸,
N-[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニル]-スクシンアミド酸,
4-[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニルカルバモイル]-酪酸,
{[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニルカルバモイル]-メトキシ}-酢酸,
4-[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニルカルバモイル]-2-フェニル-酪酸,
N-[3-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニル]-スクシンアミド酸,
2-{[4-(3-オキソ-3, 5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニルカルバモイル]-メチル}-安息香酸,
2-クロロ-4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸,
4-(6,8-ジメチル-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸,
4-(8-メトキシ-6-メチル-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸,
4-(6,8-ジメトキシ-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸,
4-(7,9-ジメトキシ-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸,
4-(6-メチル-3-オキソ-8-トリフルオロメチル-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸,
4-(7,9-ジクロロ-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸,
[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニル]-プロピオン酸,
[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニル]-酢酸,
4-(4-メチル-3-オキソ-3H-クロメノ[4,3-c]ピラゾール-2-イル)-安息香酸,
4-(3-オキソ-3H-チオクロメノ[4,3-c]ピラゾール-2-イル)安息香酸,
4-(5-メチル-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸,
2-[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-ベンゾイルアミノ]-3-フェニル-プロピオン酸、および
2-[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-ベンゾイルアミノ]-2-酢酸。
【００１７】
更に別の態様において、前記化合物はCD80拮抗薬（CD80およびCD28の間の相互作用を阻害することが可能）である。
【００１８】
本発明は、第二側面において、上記の化合物の医薬（medicament）としての使用に関する。
【００１９】
１つの好適な態様において、前記化合物は医薬として症状（medical conditions）を治療するために使用され、その症状は関節リウマチ、多発性硬化症、糖尿病、喘息、移植、全身性エリテマトーデスおよび乾癬を含む群から選択される。
【００２０】
本発明は、第三側面において、上記の化合物のプロドラッグ（好ましくはエステルの形態）としての使用に関する。
【００２１】
本発明は、第四側面において薬学的組成物に関し、該薬学的組成物は前記化合物を活性成分として薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体と共に具備する。
【００２２】
１つの好適な態様において、前記薬学的組成物は症状の治療のために使用され、その症状は関節リウマチ、多発性硬化症、糖尿病、喘息、移植、全身性エリテマトーデスおよび乾癬を含む群から選択される。
【００２３】
本発明は、第五側面において一般式（Ｉ）を有する化合物
【００２４】
【化９】
2005501033.tif 000007
【００２５】
｛式中でXは、置換型または非置換型のC1-3-アルキル、NH-C(O)-C1-3-アルキル、NH-C(0)-CH2-0-CH2もしくはC(0)-NH-(アミノ酸残基)から選択される結合あるいは基を表わし；
YはNR4、OまたはSを表わし；
R1はH、ハロ、CF3、低級アルキルまたは低級アルコキシを表わし；
R2およびR4は独立にHまたは低級アルキルを表わし；並びに
R3はH、ハロ、低級アルキルまたは低級アルコキシを表わし、
ここでハロはF、ClまたはBrであり；
ここで低級アルキルは飽和の又は不飽和の、直鎖状、分枝状もしくは環状のアルキル基（1〜6の炭素原子を有する）を表わし；並びに
ここで低級アルコキシは飽和の又は不飽和の、直鎖状、分枝状もしくは環状のアルコキシ基（1〜6の炭素原子を有する）を表わす｝の、或いはその薬学的に許容される塩の、免疫調節により恩恵を受ける症状を治療するための医薬の製造における使用に関する。
【００２６】
１つの好適な態様において、前記症状は関節リウマチ、多発性硬化症、糖尿病、喘息、移植、全身性エリテマトーデスおよび乾癬を含む群から選択される。
【００２７】
本発明は、第六側面において免疫調節により恩恵を受ける症状の治療のための方法に関し、該方法は治療上効果的な量の一般式(I)を有する化合物
【００２８】
【化１０】
2005501033.tif 000008
【００２９】
｛式中でXは、置換型または非置換型のC1-3-アルキル、NH-C(O)-C1-3-アルキル、NH-C(0)-CH2-0-CH2もしくはC(0)-NH-(アミノ酸残基)から選択される結合あるいは基を表わし；
YはNR4、OまたはSを表わし；
R1はH、ハロ、CF3、低級アルキルまたは低級アルコキシを表わし；
R2およびR4は独立にHまたは低級アルキルを表わし；並びに
R3はH、ハロ、低級アルキルまたは低級アルコキシを表わし、
ここでハロはF、ClまたはBrであり；
ここで低級アルキルは飽和の又は不飽和の、直鎖状、分枝状もしくは環状のアルキル基（1〜6の炭素原子を有する）を表わし；並びに
ここで低級アルコキシは飽和の又は不飽和の、直鎖状、分枝状もしくは環状のアルコキシ基（1〜6の炭素原子を有する）を表わす｝の、またはその薬学的に許容される塩の投与を含む。
【００３０】
１つの好適な態様において、前記症状は関節リウマチ、多発性硬化症、糖尿病、喘息、移植、全身性エリテマトーデスおよび乾癬を含む群から選択される。
【００３１】
別の態様において、前記治療上効果的な量（一日の）は、0,001〜10mg/kg  体重の範囲内、好ましくは0,1〜5mg/kg  体重の範囲内である。
【発明の詳細説明】
【００３２】
本発明は、複素環式化合物に、それらを含む薬学的組成物に、および免疫調節により恩恵を受けえる症状（例えば、関節リウマチ、多発性硬化症、糖尿病、喘息、移植、全身性エリテマトーデスおよび乾癬）の臨床治療のための方法および前記化合物の使用に関する。より具体的に本発明は複素環式化合物に関し、該化合物はCD80拮抗薬（CD80およびCD28の間の相互作用を阻害することが可能）である。
【００３３】
本発明により、一般式Iの化合物がCD80拮抗薬であることが発見された。一般式Iの化合物は、CD80およびCD28の間の相互作用を阻害する。一般式Ｉの化合物のCD80拮抗特性は、表面プラズモン共鳴(BIAcore)実験で確認された。
【００３４】
一般式ＩにおけるＸは結合であることが好ましく、この場合に他の置換体（例えば、隣接するメタ−クロロ）は活性を改善する。
【００３５】
本発明の化合物は、酸の形態であってもよいが、薬学的に許容される塩の形態であってもよい。
【００３６】
また、本発明の化合物は、プロドラッグ（特に、適切なアルコールとのエステル）の形態であってもよい。プロドラッグは、薬物動態および／または溶解度の特性を改善することが可能である。
【００３７】
式Ｉの化合物CD80拮抗薬（CD80−CD28相互作用を干渉する能力を有する）であるので、それらは炎症状態および自己免疫疾患（例えば、関節リウマチ、多発性硬化症、糖尿病、喘息、移植、全身性エリテマトーデスおよび乾癬）の治療に有用である。
【００３８】
式Ｉの化合物の効果的量は、好ましくはかかる治療を必要とする患者に通常の投与経路から投与され、通常の薬学的組成物（効果的な量の活性成分および適切な薬学的に許容される担体を含む）に処方される。かかる組成物は、様々な形態（例えば、液剤、懸濁剤、エマルジョン剤、錠剤、カプセル剤および粉剤）として経口投与に関して、滅菌溶液として非経口投与に関して、座剤として直腸投与に関して調製されるか、または適切な局所用製剤として調製することが可能である。適切な薬学的製剤の選択および調製のための従来の手段は、例えば、"Pharmaceuticals-The Science of Dosage Form Design" ,M. B. Aulton, Churchill Livingstone, 1988に記載されている。
【００３９】
上記の任意の病状の治療における使用に関して適切な一日量（daily dose）は、0.001〜10mg/kg  体重の範囲内、特に0.01〜5mg/kg体重の範囲内であり、特定の治療される病状、特定の患者の年齢および重量、特定の患者の薬物療法（medication）に対する応答に依存する。正確な個々の用量、同様に一日の用量（daily dosage）は、医師の指示による標準医学的な原則にしたがって決定される。
【００４０】
様々な添加物（薬物の安定性を増強する又は投与を容易にする）を、処方に添加することができる。また、前記薬学的組成物は、付加的な治療上有用な物質を１以上の一般式Ｉの化合物以外に含有していてもよい。
【００４１】
本発明は、以下の限定されない実験部分により更に説明される。
【実験部分】
【００４２】
一般式Ｉの化合物は、以下に記載される方法により調製されてもよい。上記で参照した従来技術の特許文献も有用な合成方法を網羅している。
【００４３】
一般式Ｉの化合物（式中でY=NおよびXはアルキル鎖）は、以下の反応に示されるように調製することができる。
【００４４】
【化１１】
2005501033.tif 000009
【００４５】
出発物質は既知の処理(例えば、L. Savini et al, Bioorganic & Medicinal Chemistry 6 (1998) 389-399)を実施することにより入手可能であり、ヒドラジン誘導体との反応は加温することにより、適切な溶媒（例えば、n-ブタノール）中で実施される。酸が反応条件下でエステル化される場合、加水分解により酸に回復する。ヒドラジン誘導体の調製は、次の文献に記載される処理(Hunsberger et al, J. Org. Chem. 21 (1956) 394,395, 396.Harden F. A. et al, J. Med. Chem. 34 (1991) 2892-8)にしたがって達成された。
【００４６】
化合物（R4が低級アルキル）は、引き続くアルキル化により取得し得る。もし前記アルキル化がエステル形成を生じる場合、対応する酸は容易に加水分解により取得される。
【００４７】
【化１２】
2005501033.tif 000010
【００４８】
一般式Ｉの化合物（式中でY=OおよびXはアルキル鎖）は、様々な文献に記載される処理〔例えば、Ghosh C. K. Et al, Synthesis (1978) 779-781; Frogett J. A. et al, J. Chem. Research (S) (1997) 30-31〕にしたがって調製することができる。1合成経路（R2=Meの場合）を以下に記載する。シアノ基は、引き続いて加水分解されて対応する酸を産生する。
【００４９】
【化１３】
2005501033.tif 000011
【００５０】
一般式Ｉの化合物（式中でY=ＳおよびXはアルキル鎖）は文献(Donelly M. X. D. et al, J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 (1993) 1729-1735;Lombardino J. G. et al, J. Med. Chem. 24 (1981) 830-834)に記載された処理を用いて以下に示されるように調製することができる。
最終的な酸化は、空気中で撹拌することによって達成された。
【００５１】
【化１４】
2005501033.tif 000012
【００５２】
またXが結合である化合物は対応するシアン化物誘導体から取得し得る、またアミノ酸誘導体は前記酸を適切なアミノ酸で凝縮（condensation）することにより調製される。
【００５３】
【化１５】
2005501033.tif 000013
【００５４】
化合物（XがNH-C(0)-(アルキル)-およびNH-C(O)CH2-O-CH2-）は、ニトロ基の還元(L. Savini et al, Bioorganic & Medicinal Chemistry 6 (1998) 389-399)そして引き続くアシル化（適切な無水物で）により調製することができる。
【００５５】
【化１６】
2005501033.tif 000014
【実施例】
【００５６】
以下に記載される実施例は、本発明を例示する目的で記載され、本発明の範囲を限定するものではない。化合物はBeilsteinのAutonom 2.1を用いて命名（named）された。NMRスペクトラをBrukerARX400機器で記録した。芳香族領域の結合定数（Coupling constants）を、NMRスペクトルの結果を反映させるために、一重線(s)、二重線(d)、三重線(t)と記載している。
【００５７】
＜実施例１＞
{[3-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニルカルバモイル]-メトキシ-酢酸,
【００５８】
DMF(0.8ml)中の2-(3-アミノ-フェニル)-2,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-1(0.050g,  0.18mmol)の懸濁液に、ジグリコール無水物(0.025g,  0.22mmol)および4-ジメチルアミノピリジン(0.007g,  0.05mmol)を添加した。
透明な溶液を室温で撹拌し、生成物が反応の間に沈殿した。３ｈ後、水を混合物に添加した。前記沈殿を収集し、水で洗浄し、乾燥して{[3-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニル-カルバモイル]-メトキシ}-酢酸(0.064 g)を産出した：1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 12.8 (1H, bs), 10.02 (1H, s), 8.69 (1H, s), 8.37 (1H, s), 8.18 (1H, d), 7.95 (1H, d), 7.62-7.70 (2H, m), 7.49-7.55 (2H, m), 7.33 (1H, t), 4.19 (2H, s), 4.17 (2H, s); ESI MS m/z 393 (M+H+)
【００５９】
基本的に同じ処理を用いて、以下の化合物を調製した：
N-[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニル]-スクシンアミド酸,
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.98 (1H, s), 8.67 (1H, s), 8.18 (1H, d), 8.08 (2H, d), 7.58-7.70 (4H, m), 7.51 (1H, t), 2.47-2.57 (4H, m); ESI MS m/z 377 (M+H+)。
4-[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニルカルバモイル]-酪酸,
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.89 (1H, s), 8.67 (1H, s), 8.18 (1H, d), 8.08 (2H, d), 7.60-7.69 (4H, m), 7.51 (1H, t), 2.33 (2H, t), 2.25 (2H, t), 1.75-1.83 (2H, m); ESI MS m/z 391 (M+H+)。
{[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニルカルバモイル]-メトキシ}-酢酸,
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.76 (1H, bs), 9.86 (1H, s), 8.68 (1H, d), 8.19 (1H, d), 8.11 (2H, d), 7.61-7.69 (4H, m), 7.52 (1H, t), 4.19 (2H, s), 4.15 (2H, s); ESI MS m/z 393 (M+H+)。
4-[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニルカルバモイル]-2-フェニル-酪酸,
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) (contain some 3-phenyl regioisomer) δ 9.86 (1H, s), 8.67 (1H, s), 8.18 (1H, d), 8.07 (2H, d), 7.58-7.69 (4H, m), 7.51 (1H, t), 7.20-7.38 (5H, m), 3.55 (1H, t), 2.10-2.30 (3H, m), 1.90-2.02 (1H, m); ESI MS m/z 467 (M+H+)。
N-[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニル]-スクシンアミド酸,
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.05 (1H, s), 8.68 (1H, s), 8.31 (1H, s), 8.17 (1H, d), 7.90 (1H, d), 7.62-7.70 (2H, m), 7.48-7.55 (2H, m), 7.30 (1H, t), 2.49-2.57 (4H, m); ESI MS m/z 377 (M+H+)。
2-{[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニルカルバモイル]-メチル}-安息香酸,
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.11 (1H, s), 8,67 (1H, s), 8.18 (1H, d), 8.08 (2H, d), 7.85 (1H, d), 7.59-7.69 (4H, m), 7.46-7.54 (2H, m), 7.35 (2H, t), 4.07 (2H, s); ESI MS m/z 439 (M+H+)。
【００６０】
＜実施例２＞
4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸,
【００６１】
4-クロロ-キノリン-3-カルボン酸エチルエステル(11.8mg,  0.5mmol)および4-ヒドラジノ-安息香酸(7.6mg,  0.5mmol)〔n-ブタノール(0.5mL)中〕の溶液剤を、115℃で一晩、封管中で撹拌した。50〜70℃に冷却後、ヘプタン(1.0mL)を添加し、生成物を更に室温にまで冷却して結晶化させた。溶媒を除去し、生成物をヘプタンで洗浄し、バキューム条件で乾燥させて4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸(13mg)を産出した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.9 (1H, s), 8.77 (1H, d), 8.38 (2H, d), 8.25 (1H, d), 8.03 (2H, d), 7.65-7.77 (2H, m), 7.58 (1H, t)。
【００６２】
基本的に同じ処理を用いて、以下の化合物を調製した：
3-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸,
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.87 (1H, bs), 8.78 (1H, s), 8.72 (1H, d), 8.46 (1H, d), 8.23 (1H, d), 7.63-7.72 (3H, m), 7.51-7.56 (2H, m); ESI MS m/z 306 (M+H+)。
2-クロロ-4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸,
【００６３】
この反応に2-クロロ-4-ヒドラジノ-安息香酸の塩酸塩を使用し、Et3N(2eq)も混合物に添加した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.00 (1H, bs), 8.76 (1H, d), 8.44 (1H, s), 8.22-8.28 (2H, m), 7.94 (1H, d), 7.65-7.74 (2H, m), 7.55 (1H, t); ESI MS m/z 340 (M+H+)。
4-(6-メチル-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.1 (1H, s), 8.52 (1H, d), 8.38 (2H, d), 8.12 (1H, d), 8.03 (2H, d), 7.56 (1H, d), 7.48 (1H, t), 2.58 (3H, s)。
4-(8-メチル-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.9 (1H, s), 8.73 (1H, d), 8.39 (2H, d), 8.06 (1H, s), 8.03 (2H, d), 7.64 (1H, d), 7.53 (1H, d), 2.50 (3H, s, DMSOシグナルにおいて)。
4-(6,8-ジメチル-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.48 (1H, s), 8.38 (2H, d), 8.03 (2H, d), 7.92 (1H, s), 7.40 (1H, s), 2.57 (3H, s), 2.45 (3H, s)。
4-(8-tert-ブチル-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.9 (1H, s), 8.75 (1H, d), 8.40 (2H, d), 8.17 (1H, s), 8.03 (2H, d), 7.81 (1H, d), 7.69 (1H, d), 1.40 (9H, s)。
4-(8-メトキシ-6-メチル-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.3 (1H, s), 8.45 (1H, d), 8.41 (2H, d), 8.03 (2H, d), 7.49 (1H, d), 7.21 (1H, d), 3.93 (3H, s), 2.57 (3H, s)。
4-(8-メトキシ-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.9 (1H, s), 8.71 (1H, d), 8.41 (2H, d), 8.03 (2H, d), 7.70 (1H, d), 7.61 (1H, d), 7.32 (1H, dd), 3.94 (3H, s)。
4-(6,8-ジメトキシ-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.40 (2H, d), 8.31 (1H, s), 8.03 (2H, d), 7.18 (1H, d), 6.93 (1H, d), 4.03 (3H, s), 3.95 (3H, s)。
4-(7,9-ジメトキシ-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.6 (s, 1H), 8.61 (1H, s), 8.36 (2H, d), 8.01 (2H, d), 6.79 (1H, d), 6.69 (1H, d), 4.00 (3H, s), 3.87 (3H, s)。
4-(3-オキソ-8-トリフルオロメチル-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸(60%純粋、NMRによる)
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.1 (1H, s), 8.85 (1H, d), 8.38 (2H, d), 8.10 (1H, s), 8.03 (2H, d), 7.87 (1H, d), 7.73 (1H, d)。
4-(6-フルオロ-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.0 (1H, s), 8.58 (1H, s), 8.37 (2H, d), 8.06 (1H, d), 8.04 (2H, d), 7.54-7.66 (2H, m)。
4-(6-クロロ-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.47 (1H, s), 8.36 (2H, d), 8.24 (1H, d), 8.04 (2H, d), 7.88 (1H, d), 7.57 (1H, t)。
4-(8-クロロ-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸(85%純粋、NMRにより)
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.0 (1H, s), 8.82 (1H, d), 8.38 (2H, d), 8.20 (1H, s), 8.03 (2H, d), 7.76 (2H, s)。
4-(7,9-ジクロロ-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸(60%純粋、NMRにより)
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.0 (s, 1H), 8.81 (1H, s), 8.36 (2H, d), 8.04 (2H, d), 7.78 (1H, d), 7.71 (1H, d)。
【００６４】
＜実施例３＞
[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニル]-プロピオン酸
【００６５】
4-クロロ-キノリン-3-カルボン酸エチルエステル(0.050g,  0.21mmol)および3-(4-ヒドラジノ-フェニル)-プロピオン酸(0.046g,  0.25mmol)〔2-プロパノール(3ml)中〕の懸濁液を、84℃で油浴中で10h加熱した。前記沈殿を収集し、2-プロパノールで洗浄し、乾燥して前記生成物の2-プロピルエステル(0.031g)を産出（afford）した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.8 (1H, bs), 8.66 (1H, d), 8.18 (1H, d), 8.07 (2H, d), 7.60-7.72 (2H, m), 7.52 (1H, t), 7.26 (2H, d), 4.85 (1H, m), 2.82 (2H, t), 2.55 (2H, t), 1.12 (6H, d)。
【００６６】
前記エステル(0.019g)をEtOH(0.8ml)および1M  NaOH(0.4ml)に溶解することによって加水分解した。９０分後、前記混合物を2M  HClで酸性にし、そして前記沈殿を収集し、水で洗浄し、そして乾燥して[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニル]-プロピオン酸(0.016g)を産出した：1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.66 (1H, s), 8.18 (1H, d), 8.07 (2H, d), 8.61-8.69 (2H, m), 7.51 (1H, t), 7.26 (2H, d), 2.81 (2H, t), 2.52 (2H, t); ESI MS m/z 334 (M+H+)。
【００６７】
基本的に同じ処理を用いて、以下の化合物を調製した：
【００６８】
[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニル]-酢酸  n-ブチルエステル
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.8 (1H, bs), 8.68 (1H, d), 8.18 (1H, d), 8.13 (2H, d), 7.61-7-72 (2H, m), 7.53 (1H, t), 7.30 (2H, d), 4.02 (2H, t), 3.63 (2H, s), 1.52 (2H, m), 1.28 (2H, m), 0.83 (3H, t);並びに
【００６９】
[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニル]-酢酸
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.67 (1H, s), 8.19 (1H, d), 8.11 (2H, d), 7.61-7.69 (2H, m), 7.52 (1H, t), 7.29 (2H, d), 3.54 (2H, s); ESI MS m/z 320 (M+H+)。
【００７０】
＜実施例４＞
3-(4-ヒドラジノ-フェニル)-プロピオン酸
【００７１】
3-(4-アミノフェニル)-プロピオン酸(0.50g,  3.0mmol)〔濃塩酸(3.5ml)中〕の懸濁液を、亜硝酸ナトリウム(0.21g,  3.0mmol)〔H20(1.7ml)中〕で0℃で処理した。反応を45分間実施し、その後に塩化第一スズ(1.26g,  6.7mmol)［濃縮塩酸(1.5ml)中］を0℃で滴下して添加した。反応を１ｈ室温で実施した。前記沈殿を収集し、乾燥して塩酸塩(0.54g)を産出（afford）した。その塩(0.100g)を少量の水に溶解し、1M  NaOHで塩基性にした。固体物質を濾過により除去し、そして濾過物を酸性の酸（acidic acid）で酸性化して沈殿物を産出した。前記固体を収集し、水で洗浄し、乾燥して3-(4-ヒドラジノ-フェニル)-プロピオン酸(0.050g)を産出（afford）した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.90 (2H, d), 6.64 (2H, d), 2.63 (2H, t), 2.39 (2H, t)。
【００７２】
基本的に同じ処理を用いて、以下の化合物を調製した：
2-クロロ-4-ヒドラジノ-安息香酸ハイドロクロライド
【００７３】
この反応において、前記ハイドロクロライド塩を再結晶化によりエタノールから収集および精製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.97 (1H, bs), 7.76 (1H, d), 7.03 (1H, s), 6.88 (1H, d)。
【００７４】
＜実施例５＞
4-3-(2-ヒドロキシ-フェニル)-5-オキソ-4,5-ジヒドロ-ピラゾロ-1-イル]-ベンゾニトリル
【００７５】
4-ヒドロキシクマリン(0.71g,  4.4mmol)および4-シアノフェニルヒドラジン(0.88g,  6.6mmol)〔ドライトルエン中〕の懸濁液を、125℃でオイル・バス中で加熱した。トルエンを反応の間に緩徐に蒸留除去して水を分離した。総量30mlのトルエンを除去した。３ｈ後、前記溶液を冷却し、そして沈殿物を濾過し、トルエンで洗浄し、そして乾燥した。粗製品をCH2Cl2に溶解した。固形物質を濾過により除去した（溶液を2M  HClで洗浄する前に）。有機物相を、乾燥し、濾過し、そして溶媒を蒸散させて4-[3-(2-ヒドロキシ-フェニル)-5-オキソ-4,5-ジヒドロ-ピラゾロ-1-イル]-ベンゾニトリル(0.44g)を産出した：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.86 (1H, s), 8.01 (2H, d), 7.73 (2H, d), 7.41 (1H, t), 7.23-7.26 (1H, m), 7.08 (1H, d), 6.98 (1H, t), 3.99 (2H, s)。
【００７６】
＜実施例６＞
4-(4-メチル-3-オキソ-3H-クロメノ[4,3-c]ピラゾール-2-イル)-ベンゾニトリル
【００７７】
4-[3-(2-ヒドロキシ-フェニル)-5-オキソ-4,5-ジヒドロ-ピラゾロ-1-イル]-ベンゾニトリル(0.25g,  0.9mmol)およびオルソ酢酸トリエチル(1.6ml)の混合物を、120℃でオイル・バス中で１５分間加熱した。冷却後、前記沈殿物を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄し、乾燥して4-(4-メチル-3-オキソ-3H-クロメノ[4,3-c]ピラゾール-2-イル)-ベンゾニトリル(0.22g)を産出した：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.35 (2H, d), 8.18 (1H, d), 7.70 (2H, d), 7.58-7.62 (1H, m), 7.47-7.51 (2H, m), 2.84 (3H, s); ESI MS m/z 302 (M+H+)。
【００７８】
＜実施例７＞
4-(4-メチル-3-オキソ-3H-クロメノ[4,3-c]ピラゾール-2-イル)-安息香酸
【００７９】
4-(4-メチル-3-オキソ-3H-クロメノ[4,3-c]ピラゾール-2-イル)-ベンゾニトリル(0.030g,  0.10mmol)、酢酸(0.4ml)、H2SO4(0.4ml)および水(0.4ml)の混合物を、100℃でオイル・バス中で19ｈ加熱した。冷却後、水を添加し、沈殿物を収集し、水で洗浄し、乾燥して4-(4-メチル-3-オキソ-3H-クロメノ[4,3-c]ピラゾール-2-イル)-安息香酸(0.029g)を産出した：1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8.21 (2H, d), 8.13 (1H, d), 8.01 (2H, d), 7.67-7.75 (2H, m), 7.54-7.58 (1H, m), 2.78 (3H, s); ESI MS m/z 321 (M+H+)。
【００８０】
基本的に同じ処理を用いて、以下の化合物を調製した：
4-(3-オキソ-3H-チオクロメノ[4,3-c]ピラゾール-2-イル)安息香酸：
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.29 (1H, s), 8.44 (1H, d), 8.24 (2H, d), 8.03 (2H, d), 7.98 (1H, d), 7.67-7.76 (2H, m); ESI MS m/z 323 (M+H+)。
【００８１】
＜実施例８＞
4-オキソ-チオクロマン-3-カルボン酸  メチルエステル
【００８２】
無水THF(7ml)に溶解したLHMDS(1.12g,  6.7mmol)を、-78℃にN2存在下で冷却した。無水THF(20ml)中のチオクロマン-4-オン(1.00g,  6.1mmol)を滴下して添加した（２０分間未満）。更に60分間後、無水THF(1.5ml)中のメチルシアノフォルメート（cyanoformate；0.62g,  7.3mmol)を滴下して添加し（５分間未満）、懸濁液を次に-78℃で80分間撹拌した。懸濁液を10%  NH4Cl上に注ぎ、エーテルで抽出した。有機物相を水で洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、濾過し、そして溶媒を蒸散させた。粗製品をクロマトグラフィーによりシリカゲル上で精製(ヘプタン-酢酸エチル  10:1)して4-オキソ-チオクロマン-3-カルボン酸メチルエステル(0.65g)を産出した：1H NMR (400 MHz, CDCl3 ; エノール互変異性体) δ 12.64 (1H, s), 7.83 (1H, d), 7.25-7.29 (2H, m), 7.16-7.20 (1H, m), 3.84 (3H, s), 3.71 (2H, s)。
【００８３】
＜実施例９＞
4-(3-オキソ-1,4-ジヒドロ-3H-チオクロメノ[4,3-c]ピラゾール-2-イル)-ベンゾニトリル
【００８４】
4-オキソ-チオクロマン-3-カルボン酸メチルエステル(0.200g,  0.90mmol)、4-シアノフェニルヒドラジン(0.132g,  0.99mmol)と共に少量のピバリン酸を、118℃、オイルバス中、N2存在下で加熱した。1h後、混合物を室温に冷却し、そして次にエーテルで粉砕（triturated）した。沈殿物を濾過し、乾燥させて4-(3-オキソ-1,4-ジヒドロ-3H-チオクロメノ[4,3-c]ピラゾール-2-イル)-ベンゾニトリル(0.233g)を産出した：1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.06 (2H, d), 7.92 (2H, d), 7.80-7.83 (1H, m), 7.30-7.33 (1H, m), 7.18-7.25 (2H, m), 3.91 (2H, s)。
【００８５】
＜実施例１０＞
4-(3-オキソ-3H-チオクロメノ[4,3-c]ピラゾール-2-イル)-ベンゾニトリル
【００８６】
4-(3-オキソ-1,4-ジヒドロ-3H-チオクロメノ[4,3-c]ピラゾール-2-イル)-ベンゾニトリル(0.100g,  0.3mmol)〔DMSO(2ml)中〕の溶液剤を室温で激しく撹拌し、空気を溶液に吹き付けた。48h後、沈殿を濾過し、トルエンで洗浄し、乾燥させた。沈殿物をトルエンから再結晶化して4-(3-オキソ-3H-チオクロメノ[4,3-c]ピラゾール-2-イル)ベンゾニトリル(0.036g)を産出した：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.65 (1H, s), 8.53 (1H, d), 8.38 (2H, d), 7.72 (2H, d), 7.66 (2H, t), 7.58-7.62 (1H, m); ESI MS m/z 304 (M+H+)。
【００８７】
＜実施例１１＞
4-(5-メチル-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸
【００８８】
4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸(0.050g,  0.16mmol)〔DMF(1ml)中〕の懸濁液を、少量  NaH(55%)(0.017g,  0.39mmol)〔DMF(0.5ml)中、N2存在下〕の懸濁液に添加した。反応を室温で実施した。1ｈ後、MeI(0.053g,  0.38mmol)を添加した。更に24h後、水を添加し、固形物質(主にエステル生成物からなる)を濾過により除去した。濾過物を2M  HClで酸性化させた。前記沈殿を収集し、水で洗浄し、乾燥して4-(5-メチル-3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸(0.018 g)を産出した。この物質は約10%のエステル生成物を含有していた：1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.89 (1H, s), 8.34 (2H, d), 8.29 (1H, d), 7.99 (2H, d), 7.85 (1H, d), 7.76 (1H, t), 7.62 (1H, t), 4.00 (3H, s); ESI MS m/z 320 (M+H+)。
【００８９】
＜実施例１２＞
2-[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-ベンゾイルアミノ]-3-フェニル-プロピオン酸
【００９０】
4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸(30mg,  0.1mmol)をDMF(0.5ml)に溶解し、18mg(0.1mmol)のカルボニルジイミダゾール（carbonyldiimidazol；90%純粋)を添加し、混合物を4h撹拌した。フェニルアラニン(33mg,  0.2mmol)を、H20(0.5ml)にトリエチルアミン(0.05ml)と共に溶解し、活性化した酸に添加した。この反応混合物を75℃で2h加熱した。冷却後、それを酸性にし、5xにH2Oで希釈した。前記沈殿を濾過し、H20で洗浄し、バキューム条件下で乾燥させた。EtOAc/MeOH(7:3)を用いたFlashTubeクロマトグラフィーは、少量の2-[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-ベンゾイルアミノ]-3-フェニル-プロピオン酸を産出した。前記物質は約10%の出発物質を含有していた。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.7 (1H, s), 8.31 (2H, d), 8.21 (1H, d), 7.82 (2H, d), 7.70 (1H, d), 7.62 (1H, t), 7.50 (1H, t), 7.2-7.3 (4H, m), 7.17 (1H, t), 4.50 (1H, m), 3.1-3.2 (2H, m)。
【００９１】
基本的に同じ処理を用いて、以下の化合物を調製した：
2-4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-ベンゾイルアミノ]-2-酢酸
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.7 (1H, s), 8.36 (2H, d), 8.22 (1H, d), 7.92 (2H, d), 7.70 (1H, d), 7.63 (1H, t), 7.51 (1H, t), 3.85 (2H, d)。
【００９２】
＜実施例１３＞
時間分離（Time resolved）蛍光競合アッセイプロトコール:
CD28-CD80相互作用。
【００９３】
【表１】
2005501033.tif 000015
【００９４】
アッセイ緩衝液
50mM  Tris-HCl、150mM  NaCl、0.05%  Tween20、pH7.8、0.1%  BSA(w/v)含有を、使用前に添加した。
【００９５】
サンプル調製
阻害効果に関して検査される物質を、貯蔵濃度20mM(DMSO)〔アッセイ緩衝液中〕から、調製濃度の200、100、50および25μMへと連続的に希釈した。ウェル中の終濃度は、それぞれ100、50、25および12.5μMであった。アッセイで許容される最大の最終DMSO濃度は0.5%であった。適切に希釈系列を調整し、IC50の測定に適用した。
【００９６】
コントロール
CTLA4-hIg(Fc)を作業濃度の20nMおよび2nMへと希釈し、最終濃度の1OnMおよび1nM（ウェル中に）を作成した。これらの濃度(1OnMおよび1nM)で約90%および30%の阻害レベルが観察された。
【００９７】
試薬混合物の調製
【００９８】
１プレートに対して：
【００９９】
1.1mlアッセイ緩衝液を含有しているチュウブに次の試薬を添加した：
【０１００】
【表２】
2005501033.tif 000016
【０１０１】
CD8OFabC215混合物
900μlの上記試薬混合物を新しいチュウブに移した。CD80FabC215を調製濃度の20nM（即ち、0.4mg/mlストックから4.3μl）で添加した。ウェル中の終濃度は10nMであった。
【０１０２】
FabC215混合物
残存した200μl試薬混合物に、C215Fabを非特異的結合(NSB)のコントロールとして添加した。0.5μl（0.36mg/mlストックから）により、調製濃度の20nMおよび終濃度（ウェル中に）の10nMを調製した。
【０１０３】
ピペッティング
黒色の半分の領域（96-ウェルマイクロタイタープレート）に対し、C215Fabを含有している試薬混合物を、カラム12、ロウE〜H(4ウェル)（10μl/ウェル）に単一チャネル電気ピペットで移した。10μl/ウェルのCD80FabC215を含有している試薬混合物を、単一チャネル電気ピペットでプレート上の全ての他のウェルに移した。
【０１０４】
BO:アッセイ緩衝剤（10μl/ウェル）をCD80FabC215を含有しているウェル〔カラム12、ロウA〜D(4ウェル)の〕にピペットした。
【０１０５】
NSB:アッセイ緩衝剤（10μl/ウェル）をC215Fabを含有しているウェル〔カラム12、ロウＥ〜Ｈ(4ウェル)の〕にピペットした。
【０１０６】
CTLA4-hIg(Fc)〔10μl/ウェルの20および2nM(最終濃度10および1nM)〕を、ウェル11  E-Fおよび11  G-Hのウェルにピペットして複製を作成した。
【０１０７】
サンプル希釈系列:10μl/ウェル（複製）を残りのウェルに。
【０１０８】
インキュベーション
前記プレートをプラスチックリッドでカバーし、遮光条件でインキュベーションした：最初に1hは振盪機プラットフォーム上で室温(RTS)で、静止させ+4℃で一晩、そして最終的に1h、RTSで測定前にインキュベーションした。
【０１０９】
測  定
前記プレートをVictor  1420  Multilabelカウンター〔LANCEプロトコール(#2)を用いて〕でAPC(665nm)およびユウロピウム(615nm)の双方からの発光を二波長で測定した。第一測定:励起  340nm、発光  665nm、遅延（delay）  50μs、猶予時間（window time）  200μs。第二測定:励起  340nm、発光  615nm、遅延  50μs、猶予時間  200μs。
【０１１０】
計  算
蛍光シグナル比  1000*  665nm/615nm（これからパーセント阻害が計算される）を決定した。ロジットbプロット(ロジットb=LN(%結合/(100%-%結合、ログ濃度に対してプロットされる)を実行した（これからIC50が測定される）。
【０１１１】
アッセイを少なくとも２回実行した（２つの比較できる化合物のIC50値を得るために）。
【０１１２】
結  果
次の代表的な結果が得られた：
【０１１３】
4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸
IC50=0,48μM
【０１１４】
2-クロロ-4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸
IC50=0,27μM
【０１１５】
3-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-安息香酸
IC50=0,88μM
【０１１６】
N-[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニル]-スクシンアミド酸
IC50=0,6μM
【０１１７】
[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-フェニル]-プロピオン酸
IC50=1,6μM
【０１１８】
2-[4-(3-オキソ-3,5-ジヒドロ-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-2-イル)-ベンゾイルアミノ]-2-酢酸
IC50=3,9μM
【０１１９】
4-(3-オキソ-3H-チオクロメノ[4,3-c]ピラゾール-2-イル)安息香酸
IC50=13,5μM
【国際公開パンフレット】
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2005501033.tif 000021
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2005501033.tif 000051
【国際調査報告】
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2005501033.tif 000053
2005501033.tif 000054
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