(57)【要約】本発明は、ナツシロギクエキスを含有する組成物を局部的に投与することによって、皮膚中の血管を収斂させる方法、血管形成を抑制する方法、及び／又は皮膚の非炎症性赤みを減少させる方法を扱う。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナツシロギクエキスを含有する組成物を局部的に投与することを包含する、皮膚中の血管を収斂させる方法であって、前記組成物は、パルテノライドを実質的に含有していない、上記方法。
【請求項２】
ナツシロギクエキスを含有する組成物を局部的に投与することを包含する、皮膚中の血管形成を抑制する方法であって、前記組成物は、パルテノライドを実質的に含有していない、上記方法。
【請求項３】
ナツシロギクエキスを含有する組成物を局部的に投与することを包含する、皮膚の非炎症性赤みを整える方法であって、前記組成物は、パルテノライドを実質的に含有していない、上記方法。
【請求項４】
赤みは目の下のくまである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
赤みは蜘蛛の巣状静脈である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
皮膚の赤みは傷跡である、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
皮膚の赤みは、外部からの攻撃の結果である、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
皮膚の赤みは、顔面紅潮の結果である、請求項３に記載の方法。
【請求項９】
組成物は、ナツシロギクエキスを約０．００１重量％〜約２０重量％含有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
組成物は、ナツシロギクエキスを約０．００１重量％〜約２０重量％含有する、請求項２に記載の方法。
【請求項１１】
組成物は、ナツシロギクエキスを約０．００１重量％〜約２０重量％含有する、請求項３に記載の方法。
【請求項１２】
組成物は、ナツシロギクエキスを約０．００１重量％〜約２０重量％含有する、請求項４に記載の方法。
【請求項１３】
組成物は、ナツシロギクエキスを約０．００１重量％〜約２０重量％含有する、請求項５に記載の方法。
【請求項１４】
組成物は、ナツシロギクエキスを約０．００１重量％〜約２０重量％含有する、請求項６に記載の方法。
【請求項１５】
組成物は、ナツシロギクエキスを約０．００１重量％〜約２０重量％含有する、請求項７に記載の方法。
【請求項１６】
組成物は、ナツシロギクエキスを約０．００１重量％〜約２０重量％含有する、請求項８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
この出願は、２００２年９月９日に出願された、米国シリアルＮｏ．１０／２３７,３８９号に基づく優先権を主張する。
（発明の分野）
本発明は、ナツシロギク(Feverfew)エキスを含有している組成物、及び該組成物の化粧用としての使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
タナセタム・パーセニューム(Tanacetum parthenium)（通常、ナツシロギクとして知られている植物）は、中世紀以来、一般的解熱剤として内服したとき、顕著な薬効を有するものとして認識されてきた；それ故に、それの一般名称がある。多くの人々は、この植物のエキス(extracts; 抽出物)を単離し、また、それらエキスは、片頭痛、関節炎、及び気管支疾患を経口的に処理するために使用されてきた。例えば、米国特許第４,７５８,４３３号明細書、及びＰＣＴ特許出願Ｎｏ．ＷＯ９４／０６８００号パンフレットを参照。
【０００３】
ナツシロギクのエキスには、多くの成分が含まれている。全ての成分が単離されて、特徴付けられてきた訳ではないが、ナツシロギクのエキスの既知の諸成分には、かなりの数の生物学的活性成分が含まれている。今までのところ、ナツシロギクの全てのエキスの化学的構成物質には、アピゲニン−７−グルコシド、アピゲニン−７−グルクロニド、１−β−ヒドロキシアルブスクリン(hydroxyarbusculin)、６−ヒドロキシカエンプフェロール(hydroxykaempferol)−３,７−４’−トリメチルエーテル［タネチン(Tanetin)］、６−ヒドロキシカエンプフェロール−３,７−ジメチルエーテル、８−β−レイノシン(reynosin)、１０−エピカニン(epicanin)、アスコルビン酸、ベータ・カロチン、カルシウム、クロム、クリサンテモライド(chrysanthemolide)、クリサンテモミン(chrysanthemomin)、クリサルテン(chrysarten)−Ａ、クリサルテン−Ｃ、クリソエリオール(chrysoeriol)−７−グルクロニド、コバルト、コスモシイン(cosmosiin)、エポキシアルテモリン(epoxyartemorin)、ルテオリン(luteolin)−７−グルコシド、ルテオリン−７−グルクロニド、マングノリオライド(mangnoliolide)、パルテノライド、クエルセタゲンチン(quercetagentin)−３,７,３’−トリメチルエーテル、クエルセタゲンチン−３’,７−ジメチルエーテル、レイノシン(reynosin)、タナパルシン(tanaparthin)、タナパルシン−１α,４α−エポキシド、タナパルシン−１β,４β−エポキシド、β−コスツノライド、３−β−ヒドロキシ−パルテノライド、及び３,７,３’−トリメトキシクエルセタゲチンが包含されるが、それらに限定されない。
【０００４】
しかし、これらの成分化合物の各々がナツシロギクの生物学的活性において果たす独特の役割は、今までのところ知られていない。しかし、そのエキスの諸アレルギー反応に関する幾つかの情報は知られている。これらのアレルギー反応の多くは、パルテノライド(parthenolide)等のα−不飽和γ−ラクトン類(alpha-unsaturated gamma-lactones)によって引き起こされるものと思われる。例えば、Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｆｏｒｓｃｈ．，２５１（３），２３５〜４４（１９７５）；Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｆｏｒｓｃｈ．，２５５（２），１１１〜２１（１９７６）；Ｃｏｎｔａｃｔ  Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ，３８（４），２０７〜８（１９８８）；Ａｍ．Ｊ．Ｃｏｎｔａｃｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ，９（１），４９〜５０（１９９８）；及びＢｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ，１３２（４），５４３〜４７（１９９５）；を参照。パルテノライドは、皮膚の光老化(photoaging)を抑制するのに有用であるという研究報告がある（米国特許第６,１３０,２５４号明細書を参照）ものの、皮膚の老化因子を整えるために；又は、環境被害、若しくは外部からの攻撃(external aggressions)を処置し且つ予防するために；ナツシロギクのエキスであってアレルギーを引き起こすα−不飽和γ−ラクトン類の減少量を有する該エキスを使用することを記述する教示は全く存在しない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
（発明の概要）
本発明は、１つの面において、ナツシロギクエキスを含有する組成物を局部的に投与することによって、皮膚中の血管を収斂させる方法を扱う。
本発明は、もう１つの面において、ナツシロギクエキスを含有する組成物を局部的に投与することによって、血管形成を抑制する方法を扱う。
【０００６】
本発明は、更にもう１つの面において、ナツシロギクエキスを含有する組成物を局部的に投与することによって、皮膚の非炎症性赤みを整える方法を扱う。
本発明の他の諸特徴及び諸利点は、本発明の詳細な記述と、特許請求の範囲とから明らかになる。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（発明の詳細な記述）
当業者は、本明細書及び特許請求の範囲の記述に基づいて、本発明を、十二分に利用することができると思われる。次の特定の諸具体例は、単なる説明的なものであり、決して開示内容の残りを制限するものではないと解釈されるべきである。
別に規定しない限り、本明細書及び特許請求の範囲において使用する技術用語及び科学用語は全て、本発明が属する当業者によって通常に理解されている意味と同一の意味を持っている。また、本明細書に記述する刊行物、特許出願明細書、特許明細書、及び他の参考文献は全て、言及することによって組み入れる。本明細書及び特許請求の範囲において使用する百分率は全て、別に明記しない限り、重量％である。
【０００８】
定義
本明細書及び特許請求の範囲において使用する「局部適用(topical application)」は、例えば、手；又は、ワイプ(wipe)等の塗布具；を用いることによって、使用している外皮の上に直接塗ること又は広げることを意味する。
本明細書及び特許請求の範囲において使用する「化粧用として許容可能な(cosmetically-acceptable)」は、その字句が記述しているエキス、化粧用として活性な作用物質、又は不活性成分が、過度の毒性、配合禁忌(incompatibility)、不安定性、炎症、アレルギー反応、等を生じることなく、適度の利点／危険度比(benefit/risk ratio)に比例して、組織（例えば、皮膚）と接触して使用するのに適していることを意味する。
【０００９】
本明細書及び特許請求の範囲において使用する「皮膚の硬さを整えること(regulating the firmness of skin)」は、皮膚の硬さ又は弾力性の損失を防ぎながら；又は、たるんだ皮膚、緩んだ皮膚及び弛緩性皮膚を予防するか若しくは処置しながら；皮膚の硬さ又は弾力性を改善することを意味する。皮膚の硬さ又は弾力性は、肌弾力計(cutometer)を用いて測定することができる。「非観血的方法及び皮膚のハンドブック(Handbook of Non-Invasive Methods and the Skin)，Ｊ．セラップ(Serup)及びＧ．ジェメック(Jemec)編集，１４．３章（１９９５）」を参照。皮膚の弾力性又は硬さの喪失は、老化、環境的損傷を包含する（が、それらに限定されない）多数の因子の結果；又は、皮膚に対して化粧品を適用した結果；である場合がある。
本明細書及び特許請求の範囲において使用する「皮膚の調子を整えること(regulating the tone of skin)」は、皮膚を明化すること／暗化すること（例えば、色素性障害を明化すること、又は皮膚の血色の悪さを暗化すること）を意味する。
【００１０】
本明細書及び特許請求の範囲において使用する「皮膚の非炎症性赤みを整えること(regulating the non-inflammatory redness of skin)」は、炎症の結果でない、皮膚の赤色を減少させること又は防ぐことを意味する。炎症の結果でない、皮膚上の赤色の領域の諸例には、眼の下のくま；蜘蛛の巣状静脈；傷跡；及び、外部からの攻撃(external aggression)又は顔面紅潮にさらされた、皮膚の領域が包含されるが、それらに限定されない。
本明細書及び特許請求の範囲において使用する「皮膚中の血管を収斂させること(constricting blood vessels in the skin)」は、静脈、動脈等の血管を収斂させることを意味する。１つの具体例では、その収斂によって、そのような血管を通って流れる血液の量が制限され、それによって、皮膚中のそのような血管は見え難くなる。
【００１１】
本明細書及び特許請求の範囲において使用する「皮膚中の血管形成を抑制すること(inhibiting angiogenesis in the skin)」は、皮膚中で新たに血管が形成されること又は現存の血管が成長することを抑制することを意味する。このように、本発明は１つの具体例において、血管に関連する皮膚の状態及び疾患を処置するか又は予防する方法に関する。そのような状態及び疾患の諸例には、癌［例えば、有棘細胞癌、基底細胞癌、黒色腫、皮膚リンパ腫、及び、血管の腫瘍（例えば、血管肉腫、カポジ肉腫、及び血管腫）］；高肉芽損傷(hyper-granulation wounds)；水疱症(bullous diseases)（例えば、水疱性類天疱瘡、及び多形性紅斑）；酒さ(rosacea)；紫外線損傷；乾癬；並びに皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、及び接触性皮膚炎）；が包含されるが、それらに限定されない。「Ｄｅｔｍａｒ，Ｍ．，Ｊ．Ｄｅｒｍｏｔｏｌ．Ｓｃｉ．，２４，７８〜８４（２０００）」を参照。
【００１２】
本明細書及び特許請求の範囲において使用する「皮膚の構造を整えること(regulating the texture of skin)」は、皮膚の表面を滑らかにして、皮膚表面上の突出(bumps)又は割れ目(crevasses)を取り除くことを意味する。
本明細書及び特許請求の範囲において使用する「皮膚のしわを整えること(regulating wrinkles in skin)」は、皮膚にしわ及び細線(fine line)が形成される過程を予防するか、遅らせるか、抑えるか又は後退させることを意味する。
【００１３】
本明細書及び特許請求の範囲において使用する「皮膚における外部からの攻撃を処置すること(treatment of external aggressions in the skin)」は、皮膚に対する外部からの攻撃による損傷を軽減すること又は防止することを意味する。外部からの攻撃の諸例には、洗剤［例えば、界面活性剤を含有する局所洗剤(topical cleansers)］の使用、化粧、ひげそりによる皮膚の損傷だけでなく；環境による損傷、例えば、紫外線による損傷［例えば、太陽光による損傷、又は非天然源（例えば、紫外線ランプ、及び太陽シミュレータ）による損傷］、温度（例えば、低温及び加熱）、オゾン、排気ガス、汚染、塩素、塩素含有化合物、及びたばこの煙による損傷；が包含されるが、それらに限定されない。皮膚に対する外部からの攻撃の影響には、脂質、炭水化物、ペプチド、タンパク質、核酸、及びビタミン類に対する酸化損傷及び／又はニトロソ化損傷；並びに、脂質、炭水化物、ペプチド、タンパク質、核酸、及びビタミン類に対する変性；が包含されるが、それらに限定されない。皮膚に対する外部からの攻撃の影響にはまた、細胞生存度の損失、細胞機能の損失若しくは変質、並びに遺伝子及び／又はタンパク質発現の変化も包含されるが、それらに限定されない。
【００１４】
本明細書及び特許請求の範囲において使用する「安全且つ有効な量(safe and effective amount)」は、整えるべき又は処置すべき状態に対して正の修飾(positive modification)を有意に(significantly)引き起こすのに十分であるが、重大な副作用を回避するのに十分低い、化合物又は組成物（例えば、ナツシロギクエキス）の量を意味する。化合物又は組成物の安全且つ有効な量は、処置されている特定の状態；最終使用者の年齢及び物理的状態；処置されている／予防されている状態の重大度；処置の期間；併用療法の種類；使用される特定の化合物又は組成物；化粧用として許容可能な、利用される特定の局所用キャリヤ；及び類似の諸因子；によって変わる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
ナツシロギクエキス
「ナツシロギクエキス」の意味するものは、クリサンテマム(Chrysanthemum)又はタナセタム属(Tanacetum genus)（以下、ナツシロギクという）からの植物から単離される諸化合物の混合物である。ナツシロギクの諸例には、クリサンテマム・パーセニューム(Chrysanthemum parthenium)、タナセタム・パーセニューム(Tanacetum parthenium)、又はマトリカリア・パーセニューム(Matricaria parthenium)だけでなく、「ＣＲＣ  Ｅｔｈｎｏｂｏｔａｎｙ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １９９８，ティモシイ・ジョンソン(Timothy Johnson)編集，第１９８頁〜１９９頁，第８２３頁〜８２４頁，第５１６頁〜５１７頁（ＣＲＣ印刷，ボカ・ラトン(Boca Raton)，米国フロリダ州）」、及び「Ｔｈｅ  Ｐｌａｎｔ  Ｎａｍｅｓ  Ｐｒｏｊｅｃｔ（１９９９）」に記載されているものも包含されるが、それらに限定されない。インターネット；http://www.ipni.org［２００１年１月１１日にアクセス済み］に公表されている国際植物名称インデックス(International Plant Names Index)。
【００１６】
そのような諸化合物は、該植物の１つ以上の部分［例えば、茎、花、及び葉のような、植物のエアリアル部分(arial part)］から、そのような植物の断片を物理的に取り外すこと（例えば、植物の葉をすりつぶすこと）によって、単離することができる。そのような諸化合物はまた、当該技術において周知の抽出手順を用いることによって、例えば、有機溶媒（例えば、Ｃ１〜Ｃ８アルコール、Ｃ１〜Ｃ８アルキルポリオール、Ｃ１〜Ｃ８アルキルケトン、Ｃ１〜Ｃ８アルキルエーテル、酢酸Ｃ１〜Ｃ８アルキルエステル、及びクロロホルム）、並びに／又は、無機溶媒［例えば、水、無機酸（例えば、塩酸）、及び無機塩基（例えば、水酸化ナトリウム）］を用いることによって、該植物から単離することもできる。１つの具体例において、ナツシロギクエキスは、［例えば、親水性溶媒（例えば、水又はエタノール）を用いることによって単離された］親水性化合物のみを含有している。１つの具体例において、ナツシロギクエキスは、［例えば、疎水性溶媒（例えば、クロロホルム）を用いることによって単離された］疎水性化合物のみを含有している。１つの具体例において、ナツシロギクエキスは、親水性化合物と疎水性化合物の両方を含有している。
【００１７】
１つの具体例において、ナツシロギクエキスは、α−不飽和γ−ラクトン類(alpha-unsaturated gamma-lactones)を実質的に含有していない。字句「α−不飽和γ−ラクトン類を実質的に含有していない」は、α−不飽和γ−ラクトン類の重量含有量が約０．２重量％未満であるナツシロギクエキスを指す。これらのα−不飽和γ−ラクトン類には、パルテノライド(parthenolide)、３−β−ヒドロキシ−パルテノライド、コスツノライド、３−β−コスツノライド、アルテモリン(artemorin)、８−α−ヒドロキシ−エスタフィアチン(estafiatin)、クリサンテモライド(chrysanthemolide)、マングノリオライド(mangnoliolide)、タナパルシン(tanaparthin)、タナパルシン−１α,４α−エポキシド、タナパルシン−１β,４β−エポキシド、クリサンテモミン(chrysanthemomin)、及び他のセスキテルペンが包含されるが、それらに限定されない。該ナツシロギクエキスは、α−不飽和γ−ラクトン類の重量含有量が約０．２重量％未満であるのが好ましい。
【００１８】
パルテノライドを含むα−不飽和γ−ラクトン類は、ナツシロギク中に存在している。パルテノライド及び他のα−不飽和γ−ラクトン類を実質的に含有していないナツシロギクエキスの製法は、ＰＣＴ特許出願Ｎｏ．ＷＯ００／７４６９５号パンフレットに開示されている。
前記組成物中に存在するナツシロギクエキスの量は、使用するエキスの種類によって決まる。１つの具体例において、該組成物は、前記ナツシロギクエキスの安全且つ有効な量を含有している。該エキスは典型的には、該組成物中に、約０．００１重量％〜約２０重量％の量、とりわけ、約０．０１重量％〜約１重量％の量で存在する。
【００１９】
前記ナツシロギクエキスは、次の諸化合物：即ち、タネチン(tanetin)、３,７,３’−トリメトキシクエルセタゲチン、アピゲニン及びその誘導体を包含する（しかし、それらに限定されない）フラボノイド化合物／フラボン化合物を含有することがある。フラボノイド化合物／フラボン化合物が存在する場合、それら化合物は、局所用組成物の重量に基づき約０．００１重量％〜約０．５重量％の量（例えば、約０．００５重量％〜０．２重量％の間の量）で存在する。
【００２０】
局所用組成物
本発明において有用な局所用組成物は、皮膚の局所的療法に適する製剤を含有している。１つの具体例において、該組成物は、ナツシロギクエキスと、化粧用として許容可能な局所用キャリヤとを含有している。１つの具体例において、化粧用として許容可能な局所用キャリヤは、該組成物の約５０重量％〜約９９．９９重量％（例えば、約８０重量％〜約９５重量％）の間である。
１つの具体例において、該組成物は、パルテノライドを実質的に含有していない。「実質的に含有していない」の意味するものは、該組成物が、０．１重量％未満、好ましくは０．０１重量％未満、いっそう好ましくは０．００１重量％未満を含有していること、又はパルテノライドを全く含有していないことである。１つの具体例において、該組成物は、パルテノライドを含有していない。
【００２１】
該組成物は、ローション、クリーム、ゲル、棒状の物(sticks)、スプレー、ひげそり用クリーム、軟膏、洗浄用液体洗剤及び固体棒、シャンプー、ペースト、粉末(powders)、ムース(mousses)、ひげそり用クリーム、ワイプ(wipes)、パッチ(patches; 傷当て)、マニキュア、創傷被覆材及びガーゼ付き伴創膏(bandages)、ヒドロゲル、膜及び化粧品［例えば、ファンデーション(foundations; 基礎化粧品)］、マスカラ(mascaras)、並びに口紅を包含する（しかし、それらに限定されない）多種多様の生成物種に造ることができる。これらの生成物種は、幾つかの種類の、化粧用として許容可能な局所用キャリヤを含有することがある。それらキャリヤには、溶液、エマルション（例えば、マイクロエマルション及びナノエマルション）、ゲル、固形物、及びリポソーム(liposomes)が包含されるが、それらに限定されない。次のものは、そのような局所用キャリヤの非制限的諸例である。他の局所用キャリヤは、当業者によって配合することができる。
【００２２】
本発明において有用な局所用組成物は、溶液として配合することができる。溶液は典型的には、水性溶媒を（例えば、化粧用として許容可能な水性溶媒を約５０％〜約９９．９９％、又は約９０％〜約９９％）含有する。
【００２３】
本発明において有用な局所用組成物は、皮膚軟化剤を含有する溶液として配合することができる。そのような組成物は、１種以上の皮膚軟化剤を約２％〜約５０％含有するのが好ましい。本明細書で使用する「皮膚軟化剤(emollients)」は、乾燥を予防するか又は軽減するためだけでなく、皮膚を保護するためにも使用する材料をいう。多種多様の適切な皮膚軟化剤が知られており、また、本発明で使用することができる。「サガリン(Sagarin)，化粧品，サイエンス・アンド・テクノロジー(Science and Technology)，第２版，第１巻，ｐｐ．３２〜４３（１９７２）」、並びに「国際化粧品成分辞典及びハンドブック(the International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook)，編集  ウェニンガー(Wenninger)及びマッキューエン(McEwen)，ｐｐ．１６５６〜６１，１６２６，及び１６５４〜５５［コスメチック・トイレトリ・アンド・フレグランス協会(The Cosmetic, Toiletry, and Fragrance Assoc.)，ワシントンＤ．Ｃ．，第７版（１９９７）］（以下、「ＩＣＩ」ハンドブック）には、適切な材料の多数の例が含まれている。
【００２４】
ローションは、そのような溶液から造ることができる。ローションは典型的には、皮膚軟化剤  約１％〜約２０％（例えば、約５％〜約１０％）と、水  約５０％〜約９０％（例えば、約６０％〜約８０％）とを含有する。
溶液から配合することのできる生成物のもう１つの種類は、クリームである。クリームは典型的には、皮膚軟化剤  約５％〜約５０％（例えば、約１０％〜約２０％）と、水  約４５％〜約８５％（例えば、約５０％〜約７５％）とを含有する。
【００２５】
溶液から配合することのできる生成物の更にもう１つの種類は、軟膏である。軟膏は、動物油、植物油又は半固体炭化水素の単純塩基を含有する。軟膏は、１種以上の皮膚軟化剤約２％〜約１０％と、１種以上の増稠剤約０．１％〜約２％とを含有することがある。本発明で有用な増稠剤又は増粘剤のいっそう完全な開示は、「サガリン，化粧品，サイエンス・アンド・テクノロジー，第２版，第１巻，ｐｐ．７２〜７３（１９７２）」、及び「ＩＣＩハンドブック，ｐｐ．１６９３〜１６９７」に見出だすことができる。
【００２６】
本発明に有用な局所用組成物は、エマルションとして配合した。そのキャリヤがエマルションである場合、該キャリヤの約１％〜約１０％（例えば、約２％〜約５％）は、１種以上の乳化剤を含有する。乳化剤は、非イオン性、陰イオン性、又は陽イオン性である場合がある。適切な諸乳化剤は、例えば、米国特許第３,７５５,５６０号明細書、米国特許第４,４２１,７６９号明細書、「マカッチャンの洗剤と乳化剤(McCutcheon’s Detergents and Emulsifiers)，北アメリカ版，ｐｐ．３１７〜３２４（１９８６）」、及び「ＩＣＩハンドブック，ｐｐ．１６７３〜１６８６」に開示されている。
【００２７】
ローション及びクリームは、エマルションとして配合することができる。そのようなローションは典型的には、１種以上の乳化剤を０．５％〜約５％含有する。そのようなクリームは典型的には、１種以上の皮膚軟化剤約１％〜約２０％（例えば、約５％〜約１０％）と、水約２０％〜約８０％（例えば、約３０％〜約７０％）と、１種以上の乳化剤約１％〜約１０％（例えば、約２％〜約５％）とを含有する。
水中油型及び油中水型の、単一エマルションスキンケア用製剤（例えば、ローション及びクリーム）は、化粧品技術では周知であり、本発明において有用である。米国特許第４,２５４,１０５号；及び同第４,９６０,７６４号明細書に開示されているような複数相エマルション組成物（例えば、水中油中水型）は、本発明においても有用である。概して、そのような単一エマルション又は複数相エマルションは、必須成分として、水、皮膚軟化剤及び乳化剤を含有する。
【００２８】
本発明の局所用組成物もまた、ゲル（例えば、適切なゲル化剤を使用している水性ゲル）として配合することもできる。水性ゲルのための適切なゲル化剤には、天然ゴム；アクリル酸とアクリル酸塩のポリマー及びコポリマー；並びに、セルロース誘導体（例えば、ヒドロキシルメチルセルロース、及びヒドロキシルプロピルセルロース）；が包含されるが、それらに限定されない。油（例えば、鉱油）のための適切なゲル化剤には、水素化されたブチレン／エチレン／スチレンのコポリマー、及び水素化されたエチレン／プロピレン／スチレンのコポリマーが包含されるが、それらに限定されない。そのようなゲルは典型的には、そのようなゲル化剤約０．１％〜５％を含有する。
本発明の局所用組成物はまた、配合して固体製剤（例えば、ワックスベースの棒、棒状石鹸の組成物、粉末、又は粉末含有ワイプ(wipe; ふき取るもの)）にすることができる。
【００２９】
リポソーム製剤もまた、本発明の有用な組成物である。リポソームの諸例は、単層リポソーム、多層リポソーム、及び少数層(paucilamellar)リポソームである。それらリポソームは、リン脂質を含有している場合もあり、含有していない場合もある。そのような組成物は、「メゼイ(Mezei)及びグラセクハラム(Gulasekharam)，リポソーム…局所経路投与のための選択的薬物運搬装置；ゲル投薬形態(Liposomes‐A Selective Drug Delivery System for the Topical Route of Administration; Gel Dosage Form)，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，第３４巻（１９８２），ｐｐ．４７３〜４７４」に記述されている方法、又はその方法の一部変形に従って、先ず、ヘスペレチン(hesperetin)を、リン脂質［例えば、ジパルミトイルホスファチジルコリン(dipalmitoylphosphatidyl choline)］、コレステロール、及び水と化合させることによって調製することができる。リポソームを形成するための適切な組成物の表皮脂質は、リン脂質と置換することができる。次いで、リポソーム配合物は、リポソーム製剤を生成するために、上記の諸キャリヤの１種の中に組み込むことができる。局部的に適用されるリポソームの他の組成物及び医薬用途は、「メゼイ(Mezei)，Ｍ．，皮膚用薬物運搬装置としてのリポソーム(Liposomes as a Skin Drug Delivery System)，Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ［編集：Ｄ．Ｄ．ブレイマー(Breimer)及びＰ．スパイザー(Speiser)］」；「Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  出版社Ｂ．Ｖ．，ニュヨーク州ニュヨーク，１９８５，ｐｐ．３４５〜３５８」；ＰＣＴ特許出願Ｎｏ．ＷＯ９６／３１１９４；並びに米国特許第５,２６０,０６５号明細書；に記述されている。
【００３０】
本発明に有用な局所用組成物は、上述の諸成分に加えて、当該技術の確立されたレベルにおいて、皮膚、髪及び爪に使用する組成物の中で従来使用されてきた、多種多様の更なる油溶性物質及び／又は水溶性物質を含有することがある。
【００３１】
更なる化粧用活性剤
１つの具体例における局所用組成物は、ナツシロギクエキスに加えて、もう１つの化粧用活性剤を更に含有する。「化粧用活性剤(cosmetically active agent)」の意味するものは、皮膚、髪及び爪に対して化粧効果又は治療効果を有する化合物［例えば、明化剤(lightening agents; 明るくする薬)；日焼け剤(self-tanning agents)等の暗化剤(darkening agent; 暗くする薬)；にきび止め剤(anti-acne agents)；つや抑制剤(shine control agent)；抗菌剤；抗炎症剤；抗真菌剤；駆虫剤；外用鎮痛剤；日焼け止め剤；光防護剤；酸化防止剤；角質溶解剤；洗剤／界面活性剤；保湿剤；栄養剤；ビタミン類；無機物；エネルギー強壮剤；発汗抑制剤；収斂薬；脱臭剤；脱毛剤；安定剤(firming agents)；抗たこ剤(anti-callous agents; 堅い皮膚防止剤)；植物エキス；並びに、整えている髪、爪及び／又は皮膚のための作用物質］である。
【００３２】
１つの具体例における化粧用活性剤は、ヒドロキシ酸；過酸化ベンゾイル；イオウ・レゾルシノール；アスコルビン酸；Ｄ−パンテノール；ヒドロキノン；メトキシケイ皮酸オクチル；二酸化チタン；サリチル酸オクチル；ホモサラート(homosalate)；アボベンゾン；ポリフェノリック(polyphenolics)；カロチノイド；フリーラジカル捕捉剤；スピントラップ(spin traps)；レチノイド（例えば、レチノール及びレチニルパルミテート）；セラミド；多価不飽和脂肪酸；必須脂肪酸；酵素；酵素阻害剤；無機物；ホルモン（例えば、エストロゲン）；ステロイド（例えば、ヒドロコーチゾン）；２−ジメチルアミノエタノール；銅塩（例えば、塩化第二銅）；銅含有ペプチド（例えば、Ｃｕ：Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ）；補酵素Ｑ１０；ペプチド（例えば、ＰＣＴ特許出願ＷＯ００／１５１８８号パンフレットに開示されるもの）；リポ酸；アミノ酸（例えば、プロリン、及びチロシン）；ビタミン類；ラクトビオン酸；アセチル補酵素Ａ；ナイアシン(niacin)；リボフラビン；チアミン；リボース；電子伝達体(electron transporters)（例えば、ＮＡＤＨ及びＦＡＤＨ２）；並びに、他の植物エキス（例えば、アロエ・ベラ、及び大豆）；並びに、それらの誘導体及び混合物；から成る群から選ばれるが、それらに限定されない。化粧用活性剤は典型的には、本発明の組成物の中に、該組成物の約０．００１重量％〜約２０重量％、例えば約０．０１重量％〜約１０重量％（例えば約０．１重量％〜約５重量％）の量で存在する。
【００３３】
ビタミンの諸例には、ビタミンＡ；ビタミンＢｓ（例えば、ビタミンＢ３、ビタミンＢ５、及びビタミンＢ１２）；ビタミンＣ；ビタミンＫ；及びビタミンＥ；及びそれらの誘導体；が包含されるが、それらに限定されない。
ヒドロキシ酸の諸例には、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、サリチル酸、クエン酸、及び酒石酸が包含されるが、それらに限定されない。例えば、欧州特許出願第２７３,２０２号明細書を参照。
【００３４】
酸化防止剤の諸例には、水溶性酸化防止剤、例えば、スルフヒドリル化合物、及びそれらの諸誘導体（例えば、メタ重亜硫酸ナトリウム、及びＮ−アセチル−システイン）；リポ酸及びジヒドロリポ酸；レズベラトロル(resveratrol)；ラクトフェリン；並びに、アスコルビン酸及びアスコルビン酸誘導体（例えば、アスコルビン酸パルミテート、及びアスコルビン酸ポリペプチド）；が包含されるが、それらに限定されない。本発明の組成物に使用するのに適した油溶性酸化防止剤には、ブチル化ヒドロキシトルエン；レチノイド（例えば、レチノール、及びレチニルパルミテート）；トコフェロール（例えば、酢酸トコフェロール）；トコトリエノール；並びにユビキノン；が包含されるが、それらに限定されない。本発明の組成物に使用するのに適した酸化防止剤を含有する天然エキスには、フラボノイド及びイソフラボノイド及びそれらの諸誘導体［例えば、ゲニステイン及びジアドゼイン(diadzein)］を含有するエキス；レズベラトロルを含有するエキス；等が包含されるが、それらに限定されない。そのような天然エキスの諸例には、ブドウの種、緑茶、松の樹皮、プロポリス、ザクロ、ブドウ、ツルマメ(Glycine soya)、ホワイト・ティー(white tea)が包含される。酸化防止剤の他の諸例には、スピントラップ(spin traps)；スーパーオキシドジスムターゼ；システインの塩及びそのエステル；並びに「ＩＣＩハンドブックの第１６１２頁〜１６１３頁」に見られるもの；が包含されるが、それらに限定されない。
【００３５】
無機物の諸例には、ナトリウムの塩及びそのエステル；カリウムの塩及びそのエステル；カルシウムの塩及びそのエステル；マグネシウムの塩及びそのエステル；亜鉛の塩及びそのエステル；銅の塩及びそのエステル；セレンの塩及びそのエステル；マンガンの塩及びそのエステル；が包含されるが、それらに限定されない。
【００３６】
植物エキスの諸例には、アボカド・オレウム(Avocado oleum)；アミグダラエ・ダルス(Amygdalae dulces)；クレマチス・レクタア・ハーブ(Clematis rectae herba)；ハマメリディス・コルテックス(Hamamelidis cortex)；ハマメリディス・フォリウム (Hamamelidid folium)；ヒッポカスタニ・ザーメン(Hippocastani semen)；サングィソルバエ・ハーブ(Sanguisorbae herba)；アキャリファエ・インディカエ(Acalyphae indicae)；アリー・アーサイン・ハーブ(Allii ursine herba)；アリー・サティバム(Allii sativum)；アナガリディス・ハーブ(Anagallidis herba)；アラキディス・オレウム(Arachidid oleum)；アラリアエ・ラセモサエ・ラディックス(Araliae racemosae radix)；ブクシ・フォリウム(Buxi folium)；カルサエ・パラストリディス・ハーブ(Calthae palustridis herba)；クレロデンドリ・ラシニアティ・フォリウム(Clerodendri laciniati folium)；クレロデンドリ・ラシニアティ・ラディックス(Clerodendri laciniati radix)；クレロデンドリ・ラシニアティ・コルテックス(Clerodendri laciniati cortex)；クレロデンドリ・ラシニアタム(Clerodendri laciniatum)；ダナイディス・フラッグランティス(Danaidis fragrantis)；ディプサコ・シルベストリス(Dipsaco sylvestris)；エリンギー・ラディックス(Eryngii radix)；エリスロフライ・スアベオレンティス(Erythrophlei suaveolentis)；ユーパトリ・ペルフォリアティ(Eupato perfoliati)；ユーテルペ・エデュリス(Euterpe edulis)；フィチ・エクサスペラタエ(Fici exasperatae)；ギャラ(Galla)；グリシルリザ・グラブラ(Glycyrrhiza glabra)；ヘリアンチ・オレウム(Helianthi oleum)；ヘナ(Henna)；イレクス・パラグアリエンシス(Ilex paraguariensis)；ジュグランス・シネレアエ(Juglans cinereae)；クナウティア・アルベンシス(Knautia arvensis)；ローソニア・イネルミス(Lawsonia inermis)；リナリア・ブルガリス(Linaria vulgaris)；リナム・ウシタチッシマム(Linum usitatissimum)
リコペルドニス真菌(Lycoperdonis fungus)；メイテナス・イリシフォリア(Maytenus ilicifolia)；ムッサエンダエ・アルキュアタエ(Mussaendae arcuatae)；ニコチアナ・タバカム(Nicotiana tabacum)；オリアエ・ランセア(Oleae lancea)；パエオニア・マスキュラ(Paeonia mascula)；パエオニア・オフィシナリス (Paeonia officinalis)；パレアエア・ビリディス(Palleaea viridis)；ペルグラリアエ・ダエミアエ(Pergulariae daemiae)；プラムバギニス・アウリキュラタ(Plumbaginis auriculata)；クウェルクス・インフェクトリア(Quercus infectoria)；キラヤ・サポナリア(Quillaja saponaria)；ラナンキュラス・アクリス(Ranunculus acris)；ラナンキュラス・スケレラタス (Ranunculus sceleratus)；ラファナス・ラファニストラム(Raphanus raphanistrum)；リキヌス・コミュニス(Ricinus communis)；サポナリア・オフィキナリス(Saponaria officinalis)；サッサフラス・アルビジウム(Sassafras albidium)；セダム・アクレ(Sedum acre)；センペルビウム・テクトルム(Sempervivum tectorum)；ソラナム・インキャナム(Solanum incannum)；ソラナム・ニグラム(Solanum nigrum)；ソラナム・カンパヌラタ(Solanum campanulata)；ストロファンタス・ヒスピダス(Strophantum hispidus)；ソニンギアエ・サンギナエ(Thonningiae sanguinae)；トリチカム・アエスチバム(Triticum aestivum)；ウルムス・フルバ(Ulmus fulva)；ウトリクラリア・ブルガリス(Utricularia vulgaris)；ヴェラテゥルム・ビライド(Veratrum viride)；バーバスカム・デンシフロラム(Verbascum densiflorum)；バーバスカム・フロモイデス(Verbascum phlomoides)；ビオラ・オドラータ(Viola odorata)；及びビロラ・セイオドラ(Virola theiodora)；が包含されるが、それらに限定されない。
【００３７】
他の物質
種々の他の物質も、本発明に有用な組成物の中に存在することがある。これらには、湿潤剤；タンパク質及びポリペプチド；防腐剤；並びにアルカリ剤；が包含される。そのような作用物質の諸例は、「ＩＣＩハンドブック，ｐｐ．１６５０〜１６６７」に開示されている。本発明の組成物はまた、キレート化剤（例えば、ＥＤＴＡ）、及び防腐剤（例えば、パラベン）をも含有することがある。適切な防腐剤及びキレート化剤の諸例は、「ＩＣＩハンドブック，ｐｐ．１６２６及び１６５４〜５５」に記載されている。加えて、本発明で有用な局部用組成物は、従来の化粧品用補助剤（例えば、染料）、乳白剤（例えば、二酸化チタン）、顔料、及びフレグランス(fragrances; 芳香のあるもの)を含有することがある。
【００３８】
鉱水
本発明の組成物は、鉱水(mineral water)を用いて調製することができる。１つの具体例において、鉱水は、少なくとも約２００ｍｇ／ｌ（例えば、約３００ｍｇ／ｌ〜約１０００ｍｇ／ｌ）の鉱物化を有する。１つの具体例において、鉱水は、カルシウムを少なくとも約１０ｍｇ／ｌ、及び／又はマグネシウムを少なくとも約５ｍｇ／ｌ含有する。
本発明のそのような諸組成物を含有している組成物及び配合剤は、当業者に周知の原理体系(methodology)を用いて調製することができる。
【実施例１】
【００３９】
実施例１：紫外線により誘発されるＭＭＰの抑制
紫外線により誘発されるマトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）を抑制する、ナツシロギクエキスの能力は、正常ヒト表皮ケラチン細胞由来の表皮同等物(epidermal equivalents)を用いて評価した。ＭＭＰｓは、細胞外マトリックスの病的破壊と生理的リモデリング(physiological remodeling)に大きな役割を果たす酵素の一群である。紫外線が紅斑下に照射されると、ヒト皮膚のＭＭＰ分泌が誘発される。該ＭＭＰ分泌は、次には、細胞外マトリックスを退化させ；光老化によるしわ形成と、堅さ及び弾性の損失とに重要な役割を果たす；ことが十分に立証されている。「Ｇ．Ｊ．フィッシャー(Fisher)、等，Ｎａｔｕｒｅ，３７９，第３３５頁〜３３９頁（１９９６）」、及び「Ｇ．Ｊ．フィッシャー及びＪ．Ｊ．ボールヒーズ(Voorhees)，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．シンポジウム会報，３，第６１頁〜６８頁（１９９８）」を参照。
【００４０】
紫外線誘発のＭＭＰ−１を抑制する、ナツシロギクエキスの能力を評価するために、表皮同等物をスキンエシック(SkinEthic)［フランス、ニース(Nice)］から入手し；次いで、フェノールを含有せず、ヒドロコルチゾンを含有しない培地（スキンエシック）を用いて培養した。次いで、１０００ワットの太陽紫外線シミュレータ［オーリエル(Oriel)、米国コネチカット州ストラトフォード］を使用して、太陽スペクトル光を、０、５、７、９及び１１ＭＥＤの照射量で照射する前、それら同等物は、パルテノライドを減少させたナツシロギクエキスであって、イタリア国ミラン(Milan)、インデナ(Indena)、Ｓ．ｐ．Ａ．からナツシロギク乾燥エキスＤ．Ｊ．として販売されている該ナツシロギクエキス（以下、「ＰＲ−ナツシロギク」という）を、０重量％又は０．５重量％を用いて、１〜２時間の間、局部的に処置した。次いで、４８時間の照射の後、各々の同等物の下の培地を回収して、ＥＬＩＳＡ［カルバイオケム(Calbiochem)、米国カリフォルニア州サンディエゴ］によって、分泌したＭＭＰ−１を分析した。そのような実験の結果は、表１に記述する。
【００４１】
【表１】
2005538161.tif 000002
【００４２】
これらの結果は、ＰＲ−ナツシロギクエキスを含有する製剤は、１１ＭＥＤ以下の照射量の太陽スペクトル光で照射した後の、ＭＭＰ−１の誘発を保護することができたことを示している。
【実施例２】
【００４３】
実施例２：煙により誘発されるチオール類の損失の予防
喫煙により誘発される、チオール類の損失を防ぐ、ナツシロギクエキスの能力は、正常ヒト皮膚線維芽細胞［クロネティクス(Clonetics)、カリフォルニア州サンディエゴ］を用いて評価した。チオール類（主として、グルタチオン）は、内因性細胞酸化防止剤系(endogenous cellular antioxidant defence system)の一部である。グルタチオンは、酸化還元緩衝剤として作用し、それによって、酸化剤と酸化防止剤の間のバランスを維持している。グルタチオンはまた、幾つかの酵素［例えば、グルタチオンペルオキシダーゼ（過酸化物を分解する）、及びグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（解毒酵素の主要群）］のための好ましい基質(substrate)でもある。「Ａ．マイスター(Meister)，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５４，１９６９ｓ〜１９７５ｓ（１９９４）」を参照。
【００４４】
グルタチオンを包含する、皮膚の酸化防止剤（酵素系と非酵素系の両方）は、紫外線又はオゾンに曝露した後、激減する。「Ｍ．Ｊ．コナー(Connor)及びＬ．Ａ．ウィーラー(Wheeler)：Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．，４６，第２３９頁〜２４６頁（１９８７）」、並びに「Ｒ．Ｍ．ティレル(Tyrrell)及びＭ．ピドゥー(Pidoux)：Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．，４７，第４０５頁〜４１２頁（１９８８）」を参照。細胞培養モデルにおいて、細胞内グルタチオン（ＧＳＨ）の濃度が低いと、紫外線放射線感受性がいっそう高くなる。ラットの皮膚にシステイン誘導体を局部的に適用すれば、紫外線放射によって誘発される光損傷(photodamage)が保護されることが分かった；この利得は、ＧＳＨ合成の増大と相関関係があった。「Ｌ．Ｔ．ファン・デン・ブルーク(van den Broeke)及びＧ．Ｍ．Ｊ．ベイエリズバーゲン・ファン・ヘネゴウウェン(Beijersbergen van Henegouwen)：Ｊ．Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．Ｂ  Ｂｉｏｌ．，２７，第６１頁〜６５頁（１９９５）」；「Ｋ．ハナダ(Hanada)，等：Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１０８，第７２７頁〜７３０頁（１９９７）」；並びに、「Ｄ．Ｐ．Ｔ．ステーンボールデン(Steenvoorden)，等：Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．，６７，第６５１頁〜６５６頁（１９９８）」を参照。従って、グルタチオンは、環境の攻撃(challenges)に対する感受性が高く、皮膚の色調及びしわを整えることができるだけでなく、外部の侵略(aggression; 攻撃)を処置することのできる、主要な内因性酸化防止剤である。
【００４５】
この実験において、２４穴(well)のフォーマット・トランスウェル・インサート［コーニング・コスター(Corning Costar)、マサチューセッツ州ケンブリッジ］中に接種した、正常ヒト新生児皮膚の線維芽細胞は、偽薬の（模造の）煙又は巻きタバコの煙［１本の巻きタバコ、ＢＡＳＩＣ  Ｆｕｌｌ  Ｆｌａｖｏｒ  １００本の巻きタバコ、フィリップ・モーリス(Philip Morris)、バージニア州リッチモンド］に１０分間曝露する前、種々の濃度のＰＲ−ナツシロギクエキスを含有する培地で、２４時間の間培養した。煙に曝露する前、ＰＲ−ナツシロギクエキスを含有するインサートの上の培地は除去し、それら細胞は、インサートの下の培地のみを煙に曝露する前、ダルベッコ・リン酸緩衝生理食塩水［メリーランド州ゲーサーズバーグ、ライフ・テクノロジーズ(Life Technologies)］で３回洗浄した。曝露した直後、それら細胞は、更に２４時間の間、前の培地と一緒に培養した。それら細胞は再び、ダルベッコ・リン酸緩衝生理食塩水で５回洗浄し；次いで、それら細胞にモノブロモバイメイン(monobromobimane)［米国オレゴン州ユージン、モレキュラー・プローブズ(Molecular Probes)］６０μＭを添加し、次いで、蛍光を読む前、３７℃で３０分間、培養することによって、細胞内チオール類を測定した。チオール類の存在下、モノブロモバイメインは蛍光を放つようになる。フィルター・コンビネーション「３６０ｎｍで励起し、４６０ｎｍで発光」で設定したサイトフルオル(CytoFluor)（登録商標）蛍光プレート・リーダ(Fluorescence Plate Reader)［ペルセプティブ・バイオシステムズ(PerSeptive Biosystems)、米国マサチューセッツ州フレーミングハム］を使用して、この蛍光を測定した。
【００４６】
この実験の結果は、表２に記述する。
【表２】
2005538161.tif 000003
【００４７】
これらの結果は、煙により誘発される、チオール類の損失に対する保護が、ＰＲ−ナツシロギクエキスによって与えられたことを示す（データは、２回の独立した実験による、８〜９回の繰返しを表す）。
【実施例３】
【００４８】
実施例３：窒素酸化物の生成の抑制
ＬＰＳ−誘発のＲＡＷ２６４．７マウスのマクロファージ（ＡＴＣＣ  ＴＩＢ−７１）を用いて、窒素酸化物の生成を抑制する、ナツシロギクエキスの能力を評価した。窒素酸化物は、形質導入性(transducing)分子であって、生理学的プロセス（例えば、血管拡張及び神経伝達）においてだけでなく、病的プロセス（例えば、癌）においても複雑であることが実証されてきた該分子である。また、高濃度のＮＯは、組織にとって有毒であることも十分に立証されている。
【００４９】
この実験において、７マウスのマクロファージＲＡＷ２６４．７は、ＰＲ−ナツシロギク、及び、大腸菌(E. coli)［シグマ・ケミカルズ(Sigma Chemicals)、ミズーリ州セントルイス］由来のリポ多糖類と一緒に共処置を行った(co-traeted)。１８時間の培養時間の後、グリース・アッセイ(Griess assay)［チテラッジ(Titheradge)ＭＡ：分子生物学による方法(Methods in Molecular Biology)，第１００巻（窒素酸化物のプロトコール(Nitric Oxide Protocols)，チテラッジＭＡによる編集）ｐｐ．８３〜９１を参照］を使用して、培地に放出された亜硝酸塩を測定した。ＮＯの生成を抑制するものとして知られているフラボノイドであるケルセチン(Quercetin)は、正の調節(positive control)として使用した。ＰＲ−ナツシロギクは、０．１〜１００μｇ／ｍｌの濃度範囲で覆った。パルテノライドを低減した、ＰＲ−ナツシロギクのエキスは、２９．８３±２．１３μｇ／ｍｌ［平均±（独立した６組の実験から得られた平均の標準誤差）］のＩＣ５０（５０％抑制を与える抑制濃度）を有することが分かった。これらの結果は、ＰＲ−ナツシロギクエキスが、リポ多糖類により誘発された窒素酸化物の生成を抑制することを示している。
【実施例４】
【００５０】
実施例４：ニコチン酸メチルにより誘発される皮膚の赤みの減少
ニコチン酸メチル（３−ピリジンカルボン酸メチル）は、それを皮膚の上に塗布した場合、皮膚の血流を増大させる既知の血管拡張物質(vasodilator)である。「ガイ(Guy)Ｒ．Ｈ．：Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｒｅｓ，２７３，第９１頁〜９５頁（１９８２）」を参照。この実験では、ニコチン酸メチルの５ミリＭ溶液［オールドリッチ・ケミカル(Aldrich Chemical)、ミズーリ州セントルイス］を、４人の志願者の掌側の前腕(forearm)の上に、閉塞状態で［２．５ｃｍのディスク、ヒル・トップ・リサーチ社(Hill Top Research Inc.)、オハイオ州シンシナティ］、局部的に３０秒間塗布した。ニコチン酸メチルで攻撃する前、７０／３０のエタノール／プロピレングリコールに入れたＰＲ−ナツシロギクを３０分間塗布した。赤み(redness)は、拡散反射分光学によって評価した。「コリアス(Kollias)Ｎ．等：Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ  Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ，５６，第２２３頁〜２２７頁（１９９２）」を参照。ＵＳＢポートを通ってＨＰラップトップ・コンピュータに接続されたオーシャン・オプティクス(Ocean Optics)（フロリダ州ダニーディン）のダイオード配置分光光度計を使用して、実験を制御し、また、スペクトルデータを回収して分析を行った。光ファイバー束を用いて、ランプから皮膚まで光を導き、また、皮膚から分光光度計まで反射率測定値を送り返した。
【００５１】
そのような実験の結果は、表３に記述する［（平均）±（４個の個々の測定値から得られる平均の標準誤差）］。
【表３】
2005538161.tif 000004
これらの結果は、ニコチン酸メチルにより誘発されたヒト皮膚の赤みが、ＰＲ−ナツシロギクによって減少したことを示している。
【実施例５】
【００５２】
実施例５：内皮細胞増殖の抑制
血管形成は、種々の生理的プロセス及び病態生理学的プロセスにおいて重要な役割を果たす。血管供給の成長は、ヒト組織の成長、成熟、及び維持のために不可欠である。
この研究の目的は、生体外(in vitro)における潜在的な抗血管形成活性(anti-angiogenic activity)に関し、ＰＲ−ナツシロギクを評価することであった。ＶＥＧＦファミリーの諸分子のＶＥＧＦ（血管内皮細胞増殖因子）及び他の諸メンバー（members；諸構成要素）は、新血管形成の主なレギュレータ（regulators；調節剤）であり、且つ、強力な血管形成性因子である。「ヤンコポーロス(Yancopoulos)，Ｄ．Ｇ．，等：Ｎａｔｕｒｅ，４０７，第２４２頁〜２４７頁（２０００）」を参照。塩基性繊維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）は、第１の内皮細胞分裂促進剤(endothelial cell mitogen)として確認され、また、高度に血管形成性であった。「ビクファルビ(Bikfalvi)，Ａ，等：Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｖ．，１８，第２６頁〜４５頁（１９９７）」を参照。ＶＥＧＦは、ＰＩ−３キナーゼ／Ａｋｔのシグナル形質導入経路を通って内皮細胞の血管形成を調節することが確認されてきた。「ゲルバー(Gerber)ＨＰ，等：Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７３，第３０３３６頁〜３０３４３頁（１９９８）」を参照。
【００５３】
ＰＲ−ナツシロギクは、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）［シグマ(Sigma)、ミズーリ州セントルイス］に新たに溶解させて、１０ｍｇ／ｍｌの保存濃度となるようにした。更に、以下に示すように、培養培地中で希釈物を調製した。ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）と、それの成長培地ＥＧＭ−２とは、クロネティクス(Clonetics)（カリフォルニア州サンディエゴ）から購入した。それら細胞は、パッセージ(passage)２〜４で使用し、ＣＯ２ ５％及び空気９５%の湿潤雰囲気中、３７℃で培養した。
【００５４】
トリプシン０．０５％／ＥＤＴＡ ０．５３ミリＭ［ライフ・テクノロジーズ(Life Tecnologies)、メリーランド州ゲーサーズバーグ］を用いて、ＨＵＶＥＣｓを消化し；ヒト組換え体ＶＥＧＦ［カルバイオケム(Calbiochem)、カリフォルニア州ラ・ホーヤ(La Jolla)］１００ｎｇ／ｍｌと、熱不活性化済みＦＢＳ（ウシ胎仔血清）［ハイクローン(HyClone)、ユタ州ローガン］１０％とを含有するＥＢＭ（クロネティクス、カリフォルニア州サンディエゴ）に再懸濁させた。それら細胞は、次いで、数えて、９６穴の組織培養プレートの中に、穴１個当り９０ｍｌの中に２０００個の細胞が入るようにした。１時間後、細胞を付着させ、且つ単層を形成するために、最終濃度が０、５、１０、２０、及び４０ｍｇ／ｍｌになるようにした、ＰＲ−ナツシロギクを含有する同一培地 １０ｍｌを、各々の穴に添加した。負の調節(negative control)は、ＰＲ−ナツシロギクを希釈するための最高濃度のビヒクル（ＤＭＳＯ）を用いて処理した。細胞数は、２４時間、４８時間、７２時間及び９６時間の間処理を行って培養した後、トリプリケート(triplicates)で数えた。
【００５５】
そのような実験の結果は、表４に記述する。
【表４】
2005538161.tif 000005
【００５６】
１０〜４０μｇ／ｍｌの範囲の濃度のＰＲ−ナツシロギクは、ＶＥＧＦにより誘発される、ＨＵＶＥＣｓの増殖を減少させ；また、ＤＭＳＯは、未処理対照（ＮＣ）と比較して、ＨＵＶＥＣｓの増殖に全く影響を及ぼさなかった。
【実施例６】
【００５７】
実施例６：マトリゲル上におけるＨＵＶＥＣの生体外形成の抑制
ＰＲ−ナツシロギクは、１０ｍｇ／ｍｌの保存濃度となるように、ＤＭＳＯ（シグマ、ミズーリ州セントルイス）に新たに溶解させ、更に、以下に示すように、培養培地中で諸希釈物を調製した。ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）と、それの成長培地ＥＧＭ−２とは、クロネティクス（カリフォルニア州サンディエゴ）から購入した。それら細胞は、パッセージ２〜４で使用し、ＣＯ２ ５％及び空気９５%の湿潤雰囲気中、３７℃で培養した。
【００５８】
ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤シンバスタチン(simvastatin)は、タンパク質キナーゼＡｋｔを活性化し、正常コレステロール血症の動物における血管形成を促す。製造業者の教示に従って、マトリゲル(matrigel)で被覆した、２４穴プレート［ベクトン・ディキンソン・ラブウェア(Becton Dickinson Labware)、マサチューセッツ州ベッドフォード］を使用した。予備加温済みＥＢＭ（クロネティクス、カリフォルニア州サンディエゴ）０．５ｍｌを用いて、各々の穴を３７℃で３０分間、再水和した後、その培地は除去した。ＨＵＶＥＣｓ（ヒト臍静脈内皮細胞）は、トリプシン処理を行い；細胞数を数え；ＥＢＭ、又はＶＥＧＦを１００ｎｇ／ｍｌで含有するＥＢＭの中に懸濁させ；次いで、それらマトリゲル被覆済み穴に添加して、穴１個当り９００ｍｌの中に１０,０００個の細胞が入るようにした。１００ｍｌの容量の処置用溶液又は対照溶液を、各々の穴に添加した。ＰＲ−ナツシロギクは、ＥＢＭに入れたＶＥＧＦ １００ｎｇ／ｍｌに対して０、５、１０、２０、４０、８０及び１６０μｇ／ｍｌになるようにして試験を行った。ＥＢＭに入れた、１００ｎｇ／ｍｌのＶＥＧＦのみが、管(tube)形成のための正の調節(positive control)であった。ＰＲ−ナツシロギクを希釈するための最高濃度のＤＭＳＯは、試験を行った。それら細胞は、２４時間の間培養を行い；その培地は吸引を行い；また、それら細胞は、１０％緩衝ホルマリンで固定した。管形成の程度は、２００倍の光学顕微鏡［ライツ(Leitz) ＤＭ１Ｌ］を用いて、任意の区域の管面積／全面積の百分率を測定することによって、定量的に評価した。イメージ・プロ・プラス・プログラム(Image-Pro Plus program)［メディア・サイバーネティクス(Media Cybernetics)、メリーランド州シルバースプリング］を用いて、１つの実験条件当り３回の測定を行なった。
【００５９】
そのような実験の結果は、表５に記述する。
【表５】
2005538161.tif 000006
【００６０】
４０μｇ／ｍｌの濃度のＰＲ−ナツシロギクによって、ＶＥＧＦにより誘発された管形成（ＶＥＧＦ＋）レベルは、ＶＥＧＦで処理しなかった（ＶＥＧＦ−）レベルまで完全に減少した。
本発明は、それの詳細な記述と併せて記述してきたが、前述のものは実例を挙げるように意図されており、特許請求の範囲によって規定されている本発明の範囲を限定するようには意図されていない。他の諸面、諸利点及び部分的修正は、特許請求の範囲内にある。
【国際調査報告】
2005538161.tif 000007
2005538161.tif 000008
2005538161.tif 000009