(57)【要約】本発明は、貯蔵安定性が高く、貯蔵中の結晶化が低減されたものかまたは結晶化しないものであり、ヒトまたは動物の体に投与することに適するヒト成長ホルモン（ｈＧＨ、ソマトロピン）の液剤に関する。より具体的には、本発明は、冷蔵温度より高温で少なくとも一時的に貯蔵する場合に、安定性が高くそして最低限の結晶化かまたは全く結晶化しない、ヒト成長ホルモンの液剤に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
本質的に、約５ｍｇ／ｍｌから約１００ｍｇ／ｍｌの濃度のヒト成長ホルモン、フェノール、水溶性緩衝液、非イオン性界面活性剤からなる、複数回投与用ヒト成長ホルモン液体医薬製剤であって、該医薬製剤が約１００ｍｏｓｍ／ｋｇから約５００ｍｏｓｍ／ｋｇの張性を有し、約６．１から約６．３のｐＨを有し、アミノ酸賦形剤を実質的に含まない医薬製剤。
【請求項２】
医薬組成物の張性が約１００ｍｏｓｍ／ｋｇから約５００ｍｏｓｍ／ｋｇとなるような張性調節剤をさらに含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
ヒト成長ホルモンの濃度が約６ｍｇ／ｍｌから約１４ｍｇ／ｍｌである、請求項１または２に記載の医薬製剤。
【請求項４】
ヒト成長ホルモンの濃度が約６．６７ｍｇ／ｍｌである、請求項１または２に記載の医薬製剤。
【請求項５】
フェノールの濃度が約２ｍｇ／ｍｌから約５ｍｇ／ｍｌである、請求項１または２に記載の医薬製剤。
【請求項６】
フェノールの濃度が約２．５ｍｇ／ｍｌである、請求項１または２に記載の医薬製剤。
【請求項７】
緩衝液が、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液およびギ酸緩衝液からなる群より選択される、請求項１または２に記載の医薬製剤。
【請求項８】
水溶性緩衝液がリン酸緩衝液である、請求項１または２に記載の医薬製剤。
【請求項９】
緩衝液の濃度が約５ｍＭから約１００ｍＭである、請求項１または２に記載の医薬製剤。
【請求項１０】
緩衝液の濃度が約１０ｍＭである、請求項１または２に記載の医薬製剤。
【請求項１１】
緩衝液が約１０ｍＭの濃度のリン酸緩衝液である、請求項１または２に記載の医薬製剤。
【請求項１２】
非イオン性界面活性剤が、ポロキサマーおよびポリソルベートからなる群より選択される、請求項１または２に記載の医薬製剤。
【請求項１３】
非イオン性界面活性剤がポロキサマーである、請求項１または２に記載の医薬製剤。
【請求項１４】
非イオン性界面活性剤がポロキサマー１８８である、請求項１または２に記載の医薬製剤。
【請求項１５】
非イオン性界面活性剤が約０．０５から約４ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求項１または２に記載の医薬製剤。
【請求項１６】
非イオン性界面活性剤が約２ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
非イオン性界面活性剤が、約２ｍｇ／ｍｌの濃度で存在するポロキサマー１８８である、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
張性調節剤が、糖、糖アルコール、ポリオールおよび中性塩からなる群より選択される、請求項２に記載の医薬製剤。
【請求項１９】
張性調節剤がマンニトールである、請求項１７に記載の医薬製剤。
【請求項２０】
張性調節剤が７０ｍｇ／ｍｌまでの濃度で存在する、請求項１７に記載の医薬製剤。
【請求項２１】
張性調節剤が約３０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在するマンニトールである、請求項１７に記載の医薬製剤。
【請求項２２】
該医薬組成物が実質的に等張である、請求項１または２に記載の医薬製剤。
【請求項２３】
該医薬組成物のｐＨが約６．２である、請求項１または２に記載の医薬製剤。
【請求項２４】
請求項２に記載の医薬組成物であって、本質的に、
６．６７ｍｇ／ｍｌのヒト成長ホルモン、
２．５ｍｇ／ｍｌのフェノール、
１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、
３０ｍｇ／ｍｌのマンニトール、
２ｍｇ／ｍｌのポロキサマー１８８からなり、
およびｐＨが６．２である、医薬組成物。
【請求項２５】
注射器具、および請求項１または２に記載のヒト成長ホルモンの複数回投与用の液剤を含む別個の容器を含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、貯蔵安定性が高く、貯蔵中の結晶化が低減されたものかまたは結晶化しないものであり、ヒトまたは動物の体に投与することに適するヒト成長ホルモン（ｈＧＨ、ソマトロピン）の液剤に関する。より具体的には、本発明は、冷蔵温度より高温で少なくとも一時的に貯蔵する場合に、安定性が高くそして最低限の結晶化かまたは全く結晶化しない、ヒト成長ホルモンの液剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
天然のｈＧＨは、１９１アミノ酸からなる一本鎖のポリペプチドのタンパク質である。このタンパク質は二つのジスルフィド架橋によって内部で架橋結合しており、そしてモノマー体の分子量は約２２ｋＤａである。
【０００３】
ｈＧＨの主な生物学的作用は、体内の様々な器官や組織の全体に亘る成長を促進することである。ｈＧＨは、一生を通じて下垂体から脈動的に分泌される。ｈＧＨの主な生物学的作用は成長を促進することである。ｈＧＨに応答する器官または組織としては、肝臓、腸、腎臓、筋肉、結合組織および骨格が挙げられる。ｈＧＨの欠乏は、すべての年齢層で起こり得る。ｈＧＨの欠乏による結果としては、骨密度の減少、子供時代の身長の伸び悩み、除脂肪体重および細胞外の体積の減少ならびに心臓血管系のリスクファクターの上昇が挙げられる。組み換え型ｈＧＨを用いる代償療法は安全で、これらの作用を打ち消す効果があることは分かっているが、定期的に注射を繰り返す必要がある。
【０００４】
たとえば、下垂体性小人症は、その状態を経験している対象にｈＧＨを投与することによって容易に治療されるというものである。組み換え手段によって多量のｈＧＨを生産する以前は、ヒトの死体の下垂体から煩雑な抽出操作をすることによって、限られた量のｈＧＨを調製できただけであった。この操作には、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）の原因因子などの感染性因子に関連するリスクが伴い、これらの因子はｈＧＨを受け取る患者に移動するかもしれない。ｈＧＨ遺伝子を単離し、そして細胞培養中に組み換え型ｈＧＨを発現する、形質転換された宿主細胞を構築することは、より信頼性が高く、より安全でより費用対効果に勝る下垂体性小人症の治療法の可能性だけでなく、その上、その他の疾患および状態を治療するためにｈＧＨを使用することの可能性をも切り開く。従って、本発明との関連において、ｈＧＨとは好ましくは組み換え型ヒト成長ホルモンを表す。しかしながら、天然資源から単離されるヒト成長ホルモンも同様に原則的に本発明の医薬製剤に包含できることが、容易に認識できる。
【０００５】
ｈＧＨだけではない医薬用のタンパク質の水溶性の液剤に伴う、長時間に亘り認識されてきた問題は、ある期間を超えて貯蔵される間の不安定さである。水溶液中のｈＧＨは様々な分解性の変化を経験することが分かっている。その他の多くのタンパク質と同様に、ｈＧＨには主に三つの分解経路が考えられる。すなわち遊離アミノ基の脱アミノ化に至る加水分解、アミノ酸に含まれるイオウの酸化、および凝集という物理的変化−−ここでは二以上のｈＧＨ分子が物理的に互いに付着し合い、その結果、不透明な不要物などが生じる−−である。加水分解の結果として、ペプチドのバックボーンが短くなる可能性もある。さらに、主な問題はｈＧＨの結晶化である。
【０００６】
上記の不安定性という問題をどのようにして解決するかについての初期の提案には凍結乾燥が含まれたが、当然のことながら、このことは、当然得られる凍結乾燥された産物を投与する直前又はすぐ前に、その産物の再構成が必要であることを意味した。自宅での患者による定期的な自己投与を行うという状況下では、このことは通常、患者が凍結乾燥調製品を水溶液中で再構成させるという作業を行うことを意味する。このことは患者にとっては不便であり、配慮不足、詳細および取扱説明書に対する注意不足、または単なる患者側の誤解により、不適切な再構成が生じるリスクが伴う。生産の観点からは、製剤の凍結乾燥にも価格と時間が要するという不都合があり、悩ましい。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って、患者によるｈＧＨのより簡単な自己投与が可能となる製剤を見出すことに、多大な努力が払われる。これらの努力は、いつでも使用することができる形態の、十分に安定的なｈＧＨの水溶性の液剤を提供する方法に焦点が当てられている。このような液体の剤形によって更なる利便性が提供される。従って、再構成させ、そして別の道具を介してペン型のカートリッジに注入する必要がある凍結乾燥体の剤形と比べてより適応性がある。
【０００８】
しかしながら、水溶性のｈＧＨ製剤を安定化させることができる賦形剤には、患者に投与する際のいくらかのリスクが伴うかもしれないことを注意する必要がある。安定剤として機能するかもしれない多くの化合物は、臨床的に許容されないと思われ、従って、それらの化合物によって、作製される製剤を医薬適合性のものとすることはできない。さらに、製薬上の規制要件によって、患者に対するリスクを低下させるために、不必要なあらゆる添加物／賦形剤−−とりわけ合成添加物／賦形剤−−を避ける必要があることが決定される。
【０００９】
好都合なことに、水溶性のｈＧＨの医薬製剤は複数回投与用の製剤として患者に提供されるべきものであり、患者は注射器を用いてそのような製剤を投与する。このような複数回投与用の医薬製剤は、多くの場合、存在するための適切な防腐剤を必要とする。
【００１０】
一般的なｈＧＨの液剤は、薬物が低濃度−−たとえば約３．３３ｍｇ／ｍｌ−−で含まれていることが知られている。しかしながら、投与時には患者にとって特定の不利益を生じさせるかもしれない。
【００１１】
とりわけ、患者は注射ごとにこのような低濃度のｈＧＨ製剤を比較的多量受け入れる必要があり、このことは、不快感または痛みさえも引き起こす。たとえば、成長ホルモン欠乏症（ＧＨＤ）を患う子供にとっては、一日あたり約０．１ＩＵ／体重ｋｇの投与量のｈＧＨを投与しなければならない。従って、体重が５０ｋｇの患者は一日あたり約５ＩＵのｈＧＨを受け入れる必要があり、これは、約３．３３ｍｇ／ｍｌのｈＧＨ（１ＩＵのｈＧＨ＝０．３３ｍｇのｈＧＨ）を含有する５００μＬの液剤からなる。５００μＬ未満の適用量が極めて望ましいことは、容易に認識される。
【００１２】
別の方法では、このような低濃度のｈＧＨ製剤を２回以上の注射によって、そしてそれぞれの注射量を減少させて、このような投与量を投与することが可能である。しかしながら、適用の安全性の観点からは、適用量について２回以上の注射を行うことは推奨されない。
【００１３】
さらに、所定量のｈＧＨを供給するためには、治療のスケジュールおよび投与量に依存して、このような低濃度のｈＧＨ製剤を２回以上注射して患者に用いる必要があるかもしれない。これを、たとえばターナー症候群に関連する成長不全を伴う患者に適用してもよい。というのは、患者の体重の増加には多量のｈＧＨを必要とするかもしれないからである。多数の例において、このような低濃度のｈＧＨ製剤の適切な量を有する一回の注射によって、このような患者に必要な量のｈＧＨを届けることは不可能である。
【００１４】
したがって、高濃度のｈＧＨを含む液体の医薬製剤が引き続き望まれている。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明の過程において、公知の水溶性の液体の成長ホルモン製剤におけるｈＧＨの濃度をより高い値−−たとえば５ｍｇ／ｍｌ以上のｈＧＨ−−に調整した場合、そのような製剤では結晶を形成する傾向があることに気付いた。このことは、このような製剤を冷蔵温度で貯蔵した場合に当てはまるだけではなく、少なくとも一時的に冷蔵温度より高い濃度に貯蔵した場合にも当てはまる。液体のｈＧＨ製剤において結晶が存在することは極めて不都合である。というのは、このような製剤を投与する前に撹拌するかまたは旋回させる必要があるからであり、結晶が小さいかまたは見えない場合は、まず結晶を十分に溶解させることなく製剤が投与されるということが生じる例があり得るからである。さらに、貯蔵中に結晶が形成された場合、ｈＧＨ製剤の外観に関して明らかに不都合が生じる。
【００１６】
従って、本発明の一つの目的は、冷蔵温度にてある期間−−たとえば数ヶ月かまたは１年もしくは２年さえも−−貯蔵した場合でも安定性の高い複数回投与用の水溶性のｈＧＨの液剤を提供することである。本発明の別の目的は、上記と共通の冷蔵温度（たとえば２から８℃より高い）で少なくとも一定期間貯蔵した場合でも、または冷蔵庫の外側でたとえば数時間、数日間または数週間貯蔵した場合でさえ安定したｈＧＨの液剤を提供することである。
【００１７】
本出願との関連において、「安定」とは、主に、結晶の形成という問題が本質的に避けられたことを意味する。この問題は完全に避けることが好ましい。従って、本発明の医薬製剤は、上記のような貯蔵時において、最小限の結晶化を起こすか全く結晶化しない。
【００１８】
安定した製剤は、結晶化を避けることに加えて、好ましくは貯蔵時にｈＧＨの凝集を示さないか最小限度の凝集しか示さないものであるべきである。同様に、安定した製剤は、好ましくは、脱アミノ化、酸化および／または加水分解などによるｈＧＨのその他の分解を受けないか、または受けても最小限度にすぎないものであるべきである。
【００１９】
本発明との関連において、高濃度のｈＧＨを含むこのような複数回投与用の液剤に用いられる防腐剤が、安定性に関して重要な要素であること、および高濃度のｈＧＨを含むこのような製剤に用いられる最も好ましい防腐剤がフェノールであることが明らかにされた。さらに、本発明との関連において、驚くべきことに、安定した製剤は、既に考えられたよりも少数の賦形剤から構成できることが明らかになった。
【００２０】
従って、本発明の一つの実施態様は、高濃度のヒト成長ホルモンを含有する複数回投与用の水溶性の液体の医薬製剤の調製の際の防腐剤として、フェノールを使用することに関する。ここで、本明細書に記載のように、当該製剤は実質的にアミノ酸賦形剤を含まない。
【００２１】
本発明との関連において、液体の医薬製剤はすぐに使用できる形態の製剤として提供される。すなわち、凍結乾燥体などのように、投与前に再構成させる形態で提供されるのではない。
【００２２】
従って、本発明は、本質的に、約５ｍｇ／ｍｌから約１００ｍｇ／ｍｌの濃度のヒト成長ホルモン、フェノール、水溶性緩衝液、非イオン性界面活性剤からなる、複数回投与用の液体のヒト成長ホルモンの医薬製剤であって、当該医薬製剤が約１００ｍｏｓｍ／ｋｇから約５００ｍｏｓｍ／ｋｇの張性を有し、約６．１から約６．３のｐＨを有し、アミノ酸賦形剤を実質的に含まない医薬製剤を提供する。
【００２３】
必要に応じて、医薬製剤の張性が約１００ｍｏｓｍ／ｋｇから約５００ｍｏｓｍ／ｋｇとなるような張性調節剤が追加的に存在してもよい。本発明の医薬製剤は等張であることが好ましい。
【００２４】
従って、本発明のさらなる実施態様においては、本質的に、約５ｍｇ／ｍｌから約１００ｍｇ／ｍｌの濃度のヒト成長ホルモン、フェノール、水溶性緩衝液、非イオン性界面活性剤からなる複数回投与用の液体のヒト成長ホルモンの医薬製剤であって、当該医薬製剤の張性が約１００ｍｏｓｍ／ｋｇから約５００ｍｏｓｍ／ｋｇであり、約６．１から約６．３のｐＨであり、実質的にアミノ酸賦形剤を含まない医薬製剤であって、当該医薬製剤がさらに医薬組成物の張性が約１００ｍｏｓｍ／ｋｇから約５００ｍｏｓｍ／ｋｇとなるような張性調節剤を含有するという医薬製剤を提供する。
【００２５】
製剤のさらなる賦形剤が、所望の張性が達成されるような程度に製剤全体の張性に寄与できない場合、追加的な張性調節剤が存在することが必要となる。
【００２６】
本発明との関連において、「本質的に・・・からなる」という用語は、本発明の医薬製剤はさらなる賦形剤を含まないことを意味する。その上、安定性、ｐＨ、張性などの観点から、医薬製剤に対して技術的な薬学上の機能に寄与することができるものは、本明細書で記載されている。しかしながら、このことは、このような製剤が一以上のさらなる助剤−−製剤中の技術的な薬学上の機能を発揮しない−−を含んでもよいという可能性を排除するものではない。このような助剤としては、たとえば、薬学的に許容され得る色素でもよく、この色素によって、液剤が着色される。このことは、複数回投与用の注射器具内で液体の量を確認するのに役立ったり、または結晶化が生じたかどうかを簡単に確認する助けとなる。
【００２７】
本発明との関連において、「実質的にアミノ酸賦形剤を含まない」という用語は、技術的な薬学上の作用−−張性剤として、安定剤としてまたは緩衝剤として機能すること−−を製剤に与えることができるアミノ酸である賦形剤の一定量を、製剤が含まないことを意味する。しかしながら、それ以前の調製または精製工程に由来する残留物などとして存在する微量のアミノ酸は、製剤の技術的な薬学上の挙動に影響を与えない限り、本発明によるところの医薬製剤に含まれてもよいことは理解される。
【００２８】
好ましい実施態様においては、本発明によるところの医薬製剤はアミノ酸賦形剤を含んでいない。
【００２９】
本発明から生じるように、本発明者らは患者、薬剤師および医師にとって便利なことを明らかにした。今までは、結晶化を最小限に抑えるために、冷蔵温度（たとえば２から８℃の範囲内）にて成長ホルモン製剤を注意深く確実に貯蔵する必要があった。患者により成長ホルモンが受け取られる前に、通常は製剤を製造メーカーおよび薬剤師によって確実に冷蔵温度で貯蔵することができる。しかしながら、一旦患者によって受け取られ家庭用の冷蔵庫内で貯蔵されると、貯蔵温度の点での信頼性が極めて小さくなる。たとえば、頻繁に開閉するために、患者の家庭の冷蔵庫内の温度は実質的に２から８℃より上、たとえば、約１５℃となる。さらに、適用される液剤を含む道具を冷蔵庫の外に貯蔵するかもしれない。たとえば、投与後に台所の椅子の上に忘れるかもしれない。それによって室温にしばらくの間、さらされる（たとえば、約２０℃から約２７℃、多くは約２５℃）。ｈＧＨの結晶化は、公知のｈＧＨの医薬製剤と共に、８℃を超える温度、すなわち冷蔵温度を超える温度でより容易に生じる傾向がある。
【００３０】
本発明の製剤は、一時的に冷蔵温度より高い温度で貯蔵しても、結晶化に対してより高い抵抗性を提供する。従って、このことによって、患者に十分な成長ホルモンを供給することが可能となり、今まで推奨されてきたまたは望まれてきたよりも長期に亘って、毎日の投与が提供される。それに対して以前では、患者は一週間を超えて使用するための小数の投与分を保存していたかもしれないが、本発明の製剤によって、患者は数週間または数ヶ月でさえ、結晶化が起こらないか、または最小限度しか起こること無く、家庭内の冷蔵庫で成長ホルモンを供給し続けることができる。したがって、本発明によって、患者に処方する頻度を減少させることができる。
【００３１】
従って、冷蔵温度から室温の温度で貯蔵する際に、本発明の医薬製剤は安定であり、とりわけ実質的に結晶化しない。とりわけ、このような製剤は冷蔵温度から室温の温度で少なくとも４週間または少なくとも１ヶ月の貯蔵で安定であり、好ましくは少なくとも７週間、より好ましくは少なくとも１３週間安定である。その好ましい実施態様においては、このような製剤は安定であり、とりわけ２℃から８℃の温度で数ヶ月間、たとえば３ヶ月間の貯蔵でも実質的に結晶化せず、好ましくは少なくとも１２ヶ月、最も好ましくは少なくとも１８ヶ月は結晶化しない。そのさらに好ましい実施態様においては、このような製剤は安定であり、とりわけ１５℃から２５℃の温度で少なくとも１３週間は実質的に結晶化しない。
【００３２】
これに関連して、貯蔵の前に、ｈＧＨ製剤は脱アミノ化および酸化の分解プロセスによって生じるタンパク質性物質である約４％の「関連するタンパク質」を含んでもよいことについて言及する。このような「関連するタンパク質」は欧州薬局方に規定されており、そして逆相ＨＰＬＣによって測定される。本発明者らは、製剤の有効期限の終点での指標として、「関連するタンパク質」が最大で２０％ということを提案する。
【００３３】
ｈＧＨの分解速度は正確な直線ではなく、そして分解速度は温度の上昇に伴って加速する。２℃から８℃においては、製剤の「関連するタンパク質」は通常一ヶ月当たり約０．８％上昇する。２５℃では、この上昇が一ヶ月当たり約１３％となり、そして４０℃では、一ヶ月当たり約７０％となる。２５℃で１ヶ月間貯蔵することは、２℃から８℃において１７ヶ月間貯蔵することとほぼ等しい。１５℃で１ヶ月間貯蔵することは、２℃から８℃において５ヶ月間貯蔵することとほぼ等しい。従って、約２５から４０℃の範囲の温度で継続的に貯蔵することは、実益がない。
【００３４】
本発明の製剤によって、４０℃までの温度でさえ、とりわけ２５℃まで、より好ましくは１５℃まで、結晶化に対する優れた抵抗性が提供されるが、これらの温度における「関連するタンパク質」の急激な形成は、通常、製剤の考えられる有効期限の限界をより短くすることになる。
【００３５】
異なる温度における「関連するタンパク質」の長期に亘る形成速度は、平均的な技量を持つものであれば容易に測定することができる。そしてこの情報を用いて、貯蔵時間／温度のパターンの最適化および極大化を、過度の負担を伴うこと無く計算することができる。実際には、それぞれの日々において有効期限の明確な消失を伴うことなく投与する目的のために、本発明の製剤を、冷蔵庫の扉を開閉することによって約８℃をわずかに超える温度にまで毎日上昇させたり、または一時間程度のうちのしばらくの時間、冷蔵庫から取り出したりすることが容易に実施できる。有利なことに、冷蔵庫から取り出して一日程度室温に放置した場合でも、分解または結晶化の観点から、本発明の製剤は劣化を経験しないはずである。
【００３６】
従って、本発明の医薬製剤を冷蔵温度（たとえば２から８℃の範囲内）で保存すると、常に安定した状態のままである。さらに、貯蔵時間の全体のうちの少なくともいくらかが冷蔵温度を超えていても、冷蔵庫の外で約一週間まで、冷蔵庫の外で約一ヶ月またはそれ以上の長期間でさえ、医薬組成物は、十分な安定性を示す。
【００３７】
従って、製剤が貯蔵される時間の少なくとも一部が少なくとも８℃の貯蔵温度であればよく、必要に応じて、８から４０℃、８から２５℃または８から１５℃から選択される温度であればよい。
【００３８】
本発明によるところの医薬製剤の好ましい実施態様においては、製剤中のｈＧＨの濃度は約６ｍｇ／ｍｌから約１４ｍｇ／ｍｌである。その特に好ましい実施態様においては、製剤中のｈＧＨの濃度は約６．６７ｍｇ／ｍｌである。
【００３９】
本発明の経緯に関して、防腐剤として用いられるフェノールがこのような高濃度のｈＧＨを含む本発明の製剤を十分に安定化させることができることが明らかになったのは、驚くべきことであった。本発明の医薬製剤は、好ましくは約２ｍｇ／ｍｌから約５ｍｇ／ｍｌの濃度の、より好ましくは約２ｍｇ／ｍｌから約３ｍｇ／ｍｌの濃度の、特に好ましくは約２．５ｍｇ／ｍｌの濃度の、とりわけ２．５ｍｇ／ｍｌの濃度のフェノールを含む。
【００４０】
本発明の医薬製剤中に存在する水溶性緩衝液は、医薬適合性の任意の緩衝液でよい。その好ましい実施態様においては、水溶性緩衝液が、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液およびギ酸緩衝液からなる群より選択され、好ましくはリン酸緩衝液であり、より好ましくはリン酸ナトリウム緩衝液である。通常、水溶性緩衝液の濃度は約５ｍＭから約１００ｍＭである。その好ましい実施態様においては、水溶性緩衝液の濃度は約１０ｍＭである。その特に好ましい実施態様においては、水溶性緩衝液は、約１０ｍＭ（１０ｍＭという数値はリン酸イオンの濃度を意味する）の濃度のリン酸緩衝液である。最も好ましい水溶性緩衝液は約１０ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム緩衝液である。同様に好ましいものは１０ｍＭのリン酸緩衝液であり、とりわけ１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液である。
【００４１】
本発明の医薬製剤中に存在する非イオン性界面活性剤は、医薬適合性の任意の非イオン性界面活性剤でよい。好ましい非イオン性界面活性剤は、ポロキサマー１８４またはポロキサマー１８８などのポロキサマー、およびポリソルベート２０またはポリソルベート８０などのポリソルベート、およびその他のエチレン／ポリプロピレンブロックポリマーからなる群より選択される。好ましくい非イオン性界面活性剤はポロキサマーであり、とりわけポロキサマー１８８が好ましい。用いられる非イオン性界面活性剤の量としては、約０．００１％（ｗ／ｖ）から約１０％（ｗ／ｖ）の範囲でよく、より好ましくは約０．００５％（ｗ／ｖ）から約５％（ｗ／ｖ）、さらに好ましくは約０．０１％（ｗ／ｖ）から約１％（ｗ／ｖ）である。その好ましい実施態様においては、非イオン性界面活性剤は約０．０５ｍｇ／ｍｌから約４ｍｇ／ｍｌの濃度で、好ましくは約２ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本発明の一つの好ましい実施態様には医薬製剤と関係があり、ここで非イオン性界面活性剤は約０．０５ｍｇ／ｍｌから約４ｍｇ／ｍｌの濃度で、好ましくは約２ｍｇ／ｍｌの濃度で存在するポロキサマー１８８である。
【００４２】
本発明によるところの医薬製剤において、製剤の張性を約１００ｍｏｓｍ／ｋｇから約５００ｍｏｓｍ／ｋｇという所望の値に調節するためのさらなる張性調節剤が存在する場合、このような張性調節剤としては、アミノ酸以外の医薬適合性の張性調節剤がよい。そのような好ましい張性調節剤は、糖、糖アルコール、ポリオールおよび中性塩からなる群より選択される。たとえば、糖としては単糖類でも二糖類でもよく、たとえば、ラクトースまたはスクロースがある。ポリオールの具体例としてはジオールがよく、たとえば、１，２−プロピレングリコールがある。中性塩の具体例としては水に溶解したときにほぼ中性のｐＨを示す無機塩がよく、塩化ナトリウムまたは酢酸アンモニウムがある。その好ましい実施態様においては、張性調節剤は糖アルコールであり、好ましくはマンニトールである。張性調節剤は、７０ｍｇ／ｍｌまでの濃度で存在すること、より好ましくは５０ｍｇ／ｍｌまでの濃度で存在すること、さらに好ましくは３０ｍｇ／ｍｌまでの濃度で存在することが好ましい。その特に好ましい実施態様においては、追加される張性調節剤は、約３０ｍｇ／ｍｌの濃度のマンニトールである。
【００４３】
本発明によるところの医薬製剤は、好ましくは、約１００ｍｏｓｍ／ｋｇから約５００ｍｏｓｍ／ｋｇの張性を有する。すなわち、このような製剤の張性は、低張から高張でよい。その好ましい実施態様においては、本発明の医薬製剤は、わずかに低張からわずかに高張な張性を有する。好ましくは、周知の知識（たとえば、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ｖｏｌｕｍｅ  ２；  ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ：  Ｋｅｎｎｅｔｈ  Ｅ．  Ａｖｉｓ；  Ｈｅｒｂｅｒｔ  Ａ．  Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ；  Ｌｅｏｎ  Ｌａｃｈｍａｎ；  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ａｎｄ  Ｂａｓｅｌ、発行：０４／０１／１９９３、第５８から６０頁を参照すること）に従い、これは、約２５０ｍｏｓｍ／ｋｇから約３５０ｍｏｓｍ／ｋｇの張性に合致する。その特に好ましい実施態様においては、本発明の医薬製剤は等張である。等張は、好ましくは、約２７０ｍｏｓｍ／ｋｇから約３２８ｍｏｓｍ／ｋｇの張性に相当する。より好ましくは、等張は約２８６ｍｏｓｍ／ｋｇの張性に相当する。
【００４４】
好ましい実施態様においては、本発明によるところの医薬製剤のｐＨ値は約６．２である。当業者であれば、ｐＨが約６．２とはｐＨ６．１５からｐＨ６．２５であることを理解する。好ましいｐＨは６．２である。
【００４５】
本発明の特に好ましい医薬製剤は、６．６７ｍｇ／ｍｌのヒト成長ホルモン、
２．５ｍｇ／ｍｌのフェノール、
１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、
３０ｍｇ／ｍｌのマンニトール、
２ｍｇ／ｍｌのポロキサマー１８８からなり、
およびｐＨは６．２である。
【００４６】
本発明によって最小化または回避される製剤の結晶化は、成長ホルモンの結晶化のように思われる。好ましくは、液剤におけるあらゆる結晶化は、直接目視によって検出され、より好ましくは５倍の倍率の光学顕微鏡下にて、さらに好ましくは１０倍の倍率の光学顕微鏡下にて検出される。光学顕微鏡下にて観察する前に、製剤をろ過してフィルター上の結晶の有無を確認してもよい。光学顕微鏡下にて観察する場合、フィルターの孔径を約５μｍとすればよい。
【００４７】
結晶化についての特に好ましい試験法は、１５℃または２５℃でしばらくの間、光が無い条件で密封容器内に隙間無く製剤を貯蔵し、次いで肉眼によって結晶の有無を観察する方法である。
【００４８】
さらに、本発明の好ましい水溶性の成長ホルモン製剤は、貯蔵期間中の成長ホルモンの凝集が無いか最小化されているという意味において、貯蔵安定性が高いものである。さらに、たとえば本明細書に記載の脱アミノ化などの成長ホルモンの化学的分解が無いか最小化されているものが好ましい。水溶液中の成長ホルモンの安定性を測定する適切な試験法は、本技術分野において周知であり、たとえば、参照して本明細書に組み込まれるＷＯ  ９４／０３１９８に記載されている。
【００４９】
本発明の好ましい製剤においては、成長ホルモンは１０％未満の凝集を示し、好ましくは１％未満、より好ましくは０．１％未満、さらに好ましくは０．０１％未満の凝集を示すものである。
【００５０】
本発明によるところの医薬製剤においては、好ましいヒト成長ホルモンはｈＧＨの組み換えによって生産されるものである。従って、特に好ましいヒト成長ホルモンは、たとえば参照して本明細書に組み込まれるＥＰ−Ａ−０  ２１７  ８２２に教示される組み換え手段によって生産される。本発明に従って−−単独でまたは別の天然のホルモンと組み合わせて−−用いられる種々のヒト成長ホルモンには、ソマトロピンとして知られる種類の１９１アミノ酸のものと、ソマトレムとして知られるＮ−末端がメチオニン（ｍｅｔ）の種類の１９２アミノ酸のものが含まれる。さらに、妊娠期間中の胎盤に自然に見られるｈＧＨ−Ｖとして知られる変異体も存在する。これらについての遺伝子配列は知られており、組み換え型タンパク質も調製されている。
【００５１】
本発明の好ましい複数回投与用の医薬製剤には、少なくとも二回の、より好ましくは複数回の成長ホルモンの投与が含まれる。
【００５２】
本発明の液剤中のｈＧＨの量は、製剤の体積および供給される予定のｈＧＨの体積の投与回数に依存する。好ましい投与体積は０．５ｍｌ未満、たとえば、０．４ｍｌであるが、一回の投与あたり０．０１ｍｌから１．０ｍｌの範囲の体積が原則として用いられる。その他の好ましい投与体積は０．１ｍｌから０．６ｍｌの範囲内であり、好ましくは０．１ｍｌから０．４ｍｌである。
【００５３】
一日に投与されるｈＧＨの量の投与についての好ましい投与単位は１．３ｍｇであるが、正確な投与量を特定の個体に応じて変化させてもよい。０．０３３ｍｇから３．３３ｍｇの範囲のｈＧＨの投与量が採用され、好ましい投与量は０．３３ｍｇから２．０ｍｇのｈＧＨの範囲である。投与頻度を減らす場合、投与量を増やすことが適切である。
【００５４】
主治医の明確な助言に従って、個体に応じて、体積および／または投与量を変化させてもよい。
【００５５】
医薬品は注射器具と共に用いる容器の形態とすることが好ましい。たとえば、ペン型注射器として用いるカートリッジが挙げられる。医薬品を注射器具の内部に、好ましくはペン型注射器の内部に収納してもよい。
【００５６】
従って、本発明はさらに、注射器具、および上記のような液体の成長ホルモン製剤を含む別個の容器を含むキットを包含する。投与器具が単なる皮下注射器である場合、キットは注射器、注射針および注射器と共に用いるためのｈＧＨ製剤を含むバイアルまたはアンプルを含んでいてもよい。より好ましい実施態様においては、注射器具は単なる皮下注射器以外に、別個の容器が、使用時に容器内の液剤が注射器具の出口によって体液と結合するように保証された注射器具に適合化されたものである。
【００５７】
投与器具の例としては、皮下注射器およびペン型注射器が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。特に好ましい注射器具は、その中の容器がカートリッジであるペン型注射器であり、カートリッジが使い捨てのものが好ましい。従って、本発明は、ペン型注射器と共に、上記の本明細書に記載のあらゆる液剤を含むカートリッジであって、複数回の投与量の成長ホルモンを含むカートリッジも提供する。
【００５８】
記述した本文のすべての内容は、参照して本明細書に組み込まれる。
【００５９】
次の実施例によって本発明を詳細に例証するが、これらに限定されるわけではない。特に実施例は本発明の好ましい実施態様に関係するものである。
【００６０】
（実施例）
本明細書に記載の試薬などの材料は当業者にとってよく知られ、かつ市販されており、製造メーカーの取扱説明書に従って、用いればよい。
【実施例１】
【００６１】
バルクの組み換え型ｈＧＨの調製と精製
培養条件下でｈＧＨタンパク質を発現するようにｈＧＨ遺伝子で形質転換されたＣＨＯ細胞の細胞培養によって、組み換え型ｈＧＨを生産する。どのようにして細胞を得るのか、および細胞を培養するのかの詳細については、参照して本明細書に組み込まれるＥＰ−Ａ−０  ２１７  ８２２  （Ｓｃｉｏｓ  Ｎｏｖａ）に記載されている。工業スケールまたは商業スケールで培養するための培養条件の修正は、当業者の能力の範囲内のことである。
【００６２】
細胞の培養によって一旦生産されれば、ｈＧＨを抽出し、薬学的な使用に適する形態に精製する必要がある。参照して本明細書に組み込まれるＡＵ  ６２９１７７（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｎｅｗ  Ｓｏｕｔｈ  Ｗａｌｅｓ  ＆  Ｇａｒｖａｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）に記載の手法に従って、このことを実施する。得られたｈＧＨ調製品はバルク溶液の形態であり、このものを下記の製剤を作製するのに採用する。バルク溶液中のｈＧＨの濃度（製剤原料）は通常、約８ｍｇ／ｍｌから約１５ｍｇ／ｍｌであり、たとえば約１０ｍｇ／ｍｌである。好都合なことに、製剤原料は１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液中に存在する。
【実施例２】
【００６３】
ヒト成長ホルモン製剤の調製
三倍に濃縮された賦形剤の溶液をｈＧＨのバルク溶液に希釈することによって、医薬製剤を調製する。ここでは（たとえばＨＣｌまたはＮａＯＨで）ｐＨの調整が必要であり、次いで、下記に概説したように、最終的な重量を水で調節する。
【００６４】
約１５０ｍｇのｈＧＨ／ｍｌの値にまで濃縮した後に、またはたとえば１０ｍｇのｈＧＨ／ｍｌに直接濃縮することに、１０ｍＭのリン酸塩中のｈＧＨのバルク溶液を用いることができる。便宜上、１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液中の１０ｍｇ／ｍｌのｈＧＨを含むｈＧＨのバルク溶液を出発として、次の調製を実施した。異なる精製工程によって、異なる量のｈＧＨおよび／または異なる緩衝液を含むｈＧＨのバルク溶液が得られる場合、それ相応に下記のプロトコールに適合させる必要がある。このような適合化は当業者の日常の作業であることは認識できる。
【００６５】
Ｎａ２ＨＰＯ４×７Ｈ２ＯおよびＮａ２ＨＰＯ４×２Ｈ２Ｏの別個の１００ｍＭの溶液を調製し、互いに混合して最終ｐＨを６．２とする。
【００６６】
６６．６７ｇの三倍に濃縮された賦形剤の溶液を調製するために、この１００ｍＭのリン酸緩衝液の６．６７ｍｌをビーカーに注ぐ。次の量の賦形剤を添加する：
【００６７】
【表１】
2005538068.tif 000002
【００６８】
十分なバルクのｈＧＨを利用してｈＧＨの最終濃度が６．６７ｍｇ／ｍｌのものを得て、最終的な医薬製剤１を調製する。とりわけ、この調製はビーカー内に３２．６６ｇの製剤原料（ｈＧＨ濃度＝１０ｍｇのｈＧＨ／ｍｌ）を注ぐ工程を含む。１６．６７ｇの三倍に濃縮された賦形剤の溶液を撹拌しながら添加し、必要な場合はＨＣｌまたはＮａＯＨでｐＨ値を６．２に調整して、水で５０ｇになされた溶液とする。
【００６９】
０．２２μｍのフィルターを介してこの溶液をろ過し、プランジャ・ストッパが既に所定の位置に設けられたカートリッジ内に詰める。所定の位置にシールを縮める。
【００７０】
次の表は、結晶化を防ぐためのフェノールを含む最終の医薬製剤を示す：
【００７１】
【表２】
2005538068.tif 000003
【００７２】
３．製剤の貯蔵と結晶化の評価
医薬製剤１を含んだカートリッジをそれぞれ２から８℃、１５℃および２５℃で貯蔵する。結晶の有無について、このカートリッジを肉眼で頻繁に検査する。
【００７３】
２から８℃で貯蔵された製剤は、１８ヶ月の試験期間中、結晶化は見られない。１５℃および２５℃で貯蔵された製剤は、少なくとも１３週間は結晶化は見られない。
【国際調査報告】
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