(57)【要約】本発明は、形質転換成長因子（「ＴＧＦ」）−βシグナル伝達経路、特にＴＧＦ−βＩ型またはアクチビン様キナーゼ（「ＡＬＫ」）−５レセプターによるｓｍａｄ２またはｓｍａｄ３のリン酸化の阻害物質である新規トリアゾール誘導体、その調製法および医学、特にこの経路により介される疾患状態の治療および予防におけるその使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2005538997.tif 000022
（式中、ＸはＮまたはＣＨである；
Ｒ１は水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルケニル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ、シアノ、ペルフルオロＣ１−６アルキル、ペルフルオロＣ１−６アルコキシ、−ＮＲ４Ｒ５、−（ＣＨ２）ｎＮＲ４Ｒ５、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ６、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＲ４Ｒ５、−ＣＯＮＲ４Ｒ５、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＮＲ４Ｒ５、−ＳＯ２Ｒ６、−ＳＯ２ＮＲ４Ｒ５、−ＮＲ５ＳＯ２Ｒ６および−ＮＲ４ＣＯＲ６である；
Ｒ２は水素、Ｃ１−６アルキル、ハロ、シアノまたはペルフルオロＣ１−６アルキルである；
Ｒ３は水素またはハロである；
Ｒ４およびＲ５は独立して水素、Ｃ１−６アルキルまたはＨｅｔであるか；あるいはＲ４およびＲ５はこれらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、ＳまたはＯから選択される１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい３、４、５、６または７員飽和または不飽和環であって、ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、シアノ、−ＣＦ３、ヒドロキシ、−ＯＣＦ３、Ｃ１−６アルキルおよびＣ１−６アルコキシから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい環を形成する；
Ｒ６は水素またはＣ１−６アルキルである；
Ｈｅｔは、飽和、不飽和または芳香族であってもよく、Ｎ、ＳまたはＯから選択される１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、Ｃ１−６アルキルにより置換されていてもよい５または６員Ｃ−結合複素環基ある；
ｎは１〜４である）の化合物、その医薬的に許容される塩、溶媒和物または誘導体。
【請求項２】
ＸがＮである請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１がＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ、ペルフルオロＣ１−６アルコキシ、−（ＣＨ２）ｎＮＲ４Ｒ５、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＲ４Ｒ５、−ＣＯＮＲ４Ｒ５または−ＳＯ２Ｒ６である前記請求項のいずれか１つに記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２が水素、Ｃ１−６アルキル、クロロまたはフルオロである前記請求項のいずれか１つに記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ３が水素またはフルオロである前記請求項のいずれか１つに記載の化合物。
【請求項６】
ＸがＮである場合、Ｒ２がメチルである前記請求項のいずれか１つに記載の化合物。
【請求項７】
ＸがＮであり、Ｒ２がメチルである場合、Ｒ３が水素である前記請求項のいずれか１つに記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ４およびＲ５が、独立して水素、Ｃ１−６アルキルまたはＨｅｔであるか；あるいはＲ４およびＲ５が、それらが結合している原子と一緒になって、モルホリン、ピペリジン、ピロリジン、ピペラジンまたはＮ−メチルピペラジン環を形成し、該環のそれぞれはハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、シアノ、−ＣＦ３、ヒドロキシ、−ＯＣＦ３、Ｃ１−４アルキルまたはＣ１−４アルコキシで置換されていてもよい前記請求項のいずれか１つに記載の化合物。
【請求項９】
ＸがＮである；
Ｒ１がＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ、ペルフルオロＣ１−６アルコキシ、−（ＣＨ２）ｎＮＲ４Ｒ５、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＲ４Ｒ５、−ＣＯＮＲ４Ｒ５または−ＳＯ２Ｒ６である；
Ｒ２が水素、Ｃ１−６アルキル、クロロまたはフルオロである；
Ｒ３が水素またはハロである；
Ｒ４およびＲ５が、独立して水素、Ｃ１−６アルキルまたはＨｅｔであるか；あるいはＲ４およびＲ５が、それらが結合している原子と一緒になってモルホン、ピペリジン、ピロリジンまたはピペラジンもしくはＮ−メチルピペラジン環を形成してもよく、該環のそれぞれは、ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、シアノ、−ＣＦ３、ヒドロキシ、−ＯＣＦ３、Ｃ１−４アルキルまたはＣ１−４アルコキシにより置換されていてもよい；
Ｒ６が水素またはＣ１−６アルキルである；
Ｈｅｔが、飽和、不飽和または芳香族であってよく、Ｎ、ＳまたはＯから選択される１以上のヘテロ原子を含んでもよく、Ｃ１−６アルキルにより置換されていてもよい５または６員Ｃ−結合複素環基である；
ｎが１〜４である請求項１記載の化合物。
【請求項１０】
２−（４−メタンスルホニルフェニル）−４−（５−（６−メチル）−ピリジン−２−イル−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−ピリジン（実施例１）；
２−（４−メトキシフェニル）−４−（５−（６−メチル）−ピリジン−２−イル−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−ピリジン（実施例２）；
ジメチル−［２−（４−｛４−［５−（６−メチル）−ピリジン−２−イル−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−ピリジン−２−イル｝−フェノキシ）−エチル］−アミン（実施例３）；
４−（４−｛４−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−ピリジン−２−イル｝−ベンジル）−モルホリン（実施例４）；
２−（４−エチルフェニル）−４−（５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−ピリジン（実施例５）；
４−｛４−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−ピリジン−２−イル｝−Ｎ−（テトラヒドロ−ピラン−４−イル）−ベンズアミド（実施例６）；
２−（４−クロロフェニル）−４−（５−（６−メチル）−ピリジン−２−イル−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−ピリジン（実施例７）；
２−（４−トリフルオロメトキシフェニル）−４−（５−（６−メチル）−ピリジン−２−イル−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−ピリジン（実施例８）；
２−｛４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル｝−４−（５−（６−メチル）−ピリジン−２−イル−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−ピリジン（実施例９）；および
２−（４−フルオロフェニル）−４−（５−（６−メチル）−ピリジン−２−イル−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−ピリジン（実施例１０）；
から選択される請求項１記載の化合物またはその医薬的に許容される塩、溶媒和物もしくは誘導体。
【請求項１１】
前記請求項のいずれか１項に記載の化合物および医薬的に許容される担体または希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項１２】
哺乳動物においてＡＬＫ５レセプターを介した疾患の治療または予防用医薬の製造における請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１３】
疾患が、慢性腎臓病、急性腎臓病、創傷治癒、関節炎、骨粗鬆症、腎臓病、鬱血性心不全、潰瘍、眼疾患、角膜創、糖尿病性腎症、神経機能障害、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、腹膜および皮下癒着、これらに限定されるわけではないが、肺線維症、腎線維症、肝線維症［例えば、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）］、アルコール性肝炎、後腹膜線維化症、腸間膜線維症、ヘマクロマトーシスおよび原発性胆汁性肝硬変をはじめとする線維症が主要素である任意の疾患、子宮内膜症、ケロイドおよび再狭窄から選択される請求項１２記載の使用。
【請求項１４】
疾患が腎線維症である請求項１３記載の使用。
【請求項１５】
医薬として用いられる請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は形質転換成長因子（「ＴＧＦ」）−βシグナル伝達経路、特に、Ｉ型ＴＧＦ−βまたはアクチビン様キナーゼ（「ＡＬＫ」）−５レセプターによるｓｍａｄ２またはｓｍａｄ３のリン酸化の阻害物質である新規トリアゾール誘導体、その調製法、および医学、特にこの経路により介在される症状の治療および予防におけるその使用に関する。
【０００２】
ＴＧＦ−β１は、一回膜貫通型セリン／スレオニンキナーゼ受容体のファミリーを介してシグナルを送る、ＴＧＦ−β、アクチビン、インヒビン、骨形成タンパク質およびミュラー管阻害物質を含むサイトカインのファミリーの原型メンバーである。これらの受容体は２種のクラス、Ｉ型またはアクチビン様キナーゼ（ＡＬＫ）受容体およびＩＩ型受容体に分類することができる。ＡＬＫ受容体は、（ａ）セリン／スレオニンが豊富な細胞内尾部を欠くこと、（ｂ）Ｉ型受容体間で非常に相同性であるセリン／スレオニンキナーゼドメインを有すること、および（ｃ）グリシンおよびセリン残基が豊富な領域からなるＧＳドメインと呼ばれる共通の配列モチーフを共有する点で、該ＡＬＫ受容体はＩＩ型受容体から区別される。ＧＳドメインは、細胞内キナーゼドメインのアミノ末端にあり、ＩＩ型受容体による活性化に重要である。いくつかの研究により、ＴＧＦ−シグナル伝達はＡＬＫとＩＩ型受容体の両方を必要とすることが示されている。特に、ＩＩ型受容体は、ＴＧＦ−βの存在下で、ＴＧＦ−β、ＡＬＫ５のＩ型受容体のＧＳドメインをリン酸化する。ついで、ＡＬＫ５は、細胞質タンパク質ｓｍａｄ２およびｓｍａｄ３を２つのカルボキシ末端セリンでリン酸化する。リン酸化されたｓｍａｄタンパク質は核中に転位し、細胞外マトリックスの産生に寄与する遺伝子を活性化する。したがって、本発明の好ましい化合物は、これらがＩ型受容体、かくしてマトリックス産生を阻害するという点で選択的である。
意外にも、この度、ＡＬＫ５キナーゼの強力かつ選択的な非ペプチド阻害剤として機能する一群のトリアゾール誘導体が見いだされた。
【０００３】
第一の態様によると、本発明は式（Ｉ）：
【化１】
2005538997.tif 000002
（式中、ＸはＮまたはＣＨである；
Ｒ１は水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルケニル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ、シアノ、ペルフルオロＣ１−６アルキル、ペルフルオロＣ１−６アルコキシ、−ＮＲ４Ｒ５、−（ＣＨ２）ｎＮＲ４Ｒ５、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ６、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＲ４Ｒ５、−ＣＯＮＲ４Ｒ５、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＮＲ４Ｒ５、−ＳＯ２Ｒ６、−ＳＯ２ＮＲ４Ｒ５、−ＮＲ５ＳＯ２Ｒ６および−ＮＲ４ＣＯＲ６である；
Ｒ２は水素、Ｃ１−６アルキル、ハロ、シアノまたはペルフルオロＣ１−６アルキルである；
Ｒ３は水素またはハロである；
Ｒ４およびＲ５は独立して水素、Ｃ１−６アルキルまたはＨｅｔであるか；あるいはＲ４およびＲ５はこれらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、ＳまたはＯから選択される１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい３、４、５、６または７員飽和または不飽和環であって、ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、シアノ、−ＣＦ３、ヒドロキシ、−ＯＣＦ３、Ｃ１−６アルキルおよびＣ１−６アルコキシから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい環を形成する；
Ｒ６は水素またはＣ１−６アルキルである；
Ｈｅｔは、飽和、不飽和または芳香族であってもよく、Ｎ、ＳまたはＯから選択される１以上のヘテロ原子を含んでいてもよく、Ｃ１−６アルキルにより置換されていてもよい５または６員Ｃ−結合複素環基である；
ｎは１〜４である）
で示される化合物、その医薬的に許容される塩、溶媒和物または誘導体を提供する。
【０００４】
本明細書において用いられるように「Ｃ１−６アルキル」なる用語は、それ自体であるか、またはある基の一部であるかによらず、鎖長が限定されていなければ、これらに限定されるわけではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチルおよびヘキシルをはじめとする１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖飽和脂肪族炭化水素を意味する。
ある基またはある基の一部としての「アルケニル」なる用語は、指定された数の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖、一または多不飽和脂肪族炭化水素ラジカルを意味する。「アルケニル」基とはＥ形またはＺ形またはその混合物である基を包含する。
【０００５】
ある基またはある基の一部としての「アルコキシ」なる用語は、アルキルエーテルラジカルを意味し、「アルキル」なる用語は前記定義の通りである。このようなアルコキシ基は特に、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉｓｏ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｉｓｏ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシおよびｔｅｒｔ−ブトキシを包含する。
本明細書において用いられる「ペルフルオロアルキル」なる用語は、トリフルオロメチルなどの化合物を包含する。
本明細書において用いられる「ペルフルオロアルコキシ」なる用語は、トリフルオロメトキシなどの化合物を包含する。
「ハロ」または「ハロゲン」なる用語は、本明細書において交換可能に用いられ、塩素、フッ素、ヨウ素および臭素の元素から誘導されるラジカルを意味する。
【０００６】
本明細書において用いられるように「ヘテロサイクリル」なる用語は、５〜７個の環原子を含有し、そのうちの４以下が窒素、酸素および硫黄などのヘテロ原子であり、飽和、不飽和または芳香族であってもよい環状基を包含する。ヘテロサイクリル基の例は、フリル、チエニル、ピロリル、ピロリニル、ピロリジニル、イミダゾリル、ジオキソラニル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピラゾリル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、ピラニル、ピリジル、ピペリジニル、ジオキサニル、モルホリノ、ジチアニル、チオモルホリノ、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピペラジニル、スルホラニル、テトラゾリル、トリアジニル、アゼピニル、オキサゼピニル、チアゼピニル、ジアゼピニルおよびチアゾリニルである。加えて、ヘテロサイクリルなる用語は、縮合ヘテロサイクリル基、例えばベンズイミダゾリル、ベンゾキサゾリル、イミダゾピリジニル、ベンゾキサジニル、ベンゾチアジニル、オキサゾロピリジニル、ベンゾフラニル、キノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、ジヒドロキナゾリニル、ベンゾチアゾリル、フタルイミド、ベンゾフラニル、ベンゾジアゼピニル、インドリルおよびイソインドリルを包含する。
【０００７】
好ましくは、ＸはＮである。
好ましくは、Ｒ１はＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ、ペルフルオロＣ１−６アルコキシ、−（ＣＨ２）ｎＮＲ４Ｒ５、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＲ４Ｒ５、−ＣＯＮＲ４Ｒ５または−ＳＯ２Ｒ６である。さらに好ましくは、Ｒ１はＣ１−６アルコキシ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＲ４Ｒ５または−ＣＯＮＲ４Ｒ５である。
好ましくは、Ｒ２は水素、Ｃ１−６アルキル、クロロまたはフルオロである。さらに好ましくは、Ｒ２は水素、メチル、クロロまたはフルオロである。さらにいっそう好ましくは、Ｒ２はメチルである。
【０００８】
好ましくは、Ｒ３は水素またはフルオロである。
好ましくは、ＸがＮである場合、Ｒ２はメチルである。さらに好ましくは、ＸがＮであり、Ｒ２がメチルである場合、Ｒ３は水素である。
好ましくは、Ｒ４およびＲ５は独立して水素、Ｃ１−６アルキルまたはＨｅｔであるか；あるいはＲ４およびＲ５はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、モルホリン、ピペリジン、ピロリジン、ピペラジンまたはＮ−メチルピペラジン環を形成し、これらのそれぞれはハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、シアノ、−ＣＦ３、ヒドロキシ、−ＯＣＦ３、Ｃ１−４アルキルまたはＣ１−４アルコキシで置換されていてもよい。
さらに好ましくは、Ｒ４およびＲ５は独立して水素、Ｃ１−６アルキルまたはテトラヒドロピラニルであるか；あるいはＲ４およびＲ５はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、モルホリンまたはピロリジン環を形成し、これはハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、シアノ、−ＣＦ３、ヒドロキシ、−ＯＣＦ３、Ｃ１−４アルキルまたはＣ１−４アルコキシで置換されていてもよい。
【０００９】
本発明は、前記した好ましい基のいずれの組み合わせを有する化合物を包含することを意図することは明らかだろう。
好ましくは、
ＸはＮである；
Ｒ１はＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ、ペルフルオロＣ１−６アルコキシ、−（ＣＨ２）ｎＮＲ４Ｒ５、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＲ４Ｒ５、ＣＯＮＲ４Ｒ５または−ＳＯ２Ｒ６である；
Ｒ２は水素、Ｃ１−６アルキル、クロロまたはフルオロである；
Ｒ３は水素またはハロである；
Ｒ４およびＲ５は独立して水素、Ｃ１−６アルキルまたはＨｅｔであるか；あるいはＲ４およびＲ５はそれらが結合している原子と一緒になって、モルホリン、ピペリジン、ピロリジン、ピペラジンあるいはＮ−メチルピペラジン環を形成し、これらのそれぞれは、ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、シアノ、−ＣＦ３、ヒドロキシ、−ＯＣＦ３、Ｃ１−４アルキルまたはＣ１−４アルコキシにより置換されていてもよい；
Ｒ６は水素またはＣ１−６アルキルである；
Ｈｅｔは、飽和、不飽和または芳香族であってよく、Ｎ、ＳまたはＯから選択される１以上のヘテロ原子を含有してもよく（好ましくはテトラヒドロピラニル）、またＣ１−６アルキルにより置換されていてもよい５または６員Ｃ−結合ヘテロサイクリル基である；
ｎは１〜４である。
【００１０】
ＴＧＦ−βの過剰発現により特徴づけられる疾患の治療または予防に有用な薬剤として特に興味深い式（Ｉ）の化合物は次のリストから選択される：
２−（４−メタンスルホニルフェニル）−４−（５−（６−メチル）−ピリジン−２−イル−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−ピリジン（実施例１）；
２−（４−メトキシフェニル）−４−（５−（６−メチル）−ピリジン−２−イル−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−ピリジン（実施例２）；
ジメチル−［２−（４−｛４−［５−（６−メチル）−ピリジン−２−イル−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−ピリジン−２−イル｝−フェノキシ）−エチル］−アミン（実施例３）；
４−（４−｛４−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−ピリジン−２−イル｝−ベンジル）−モルホリン（実施例４）；
２−（４−エチルフェニル）−４−（５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−ピリジン（実施例５）；
４−｛４−［５−（６−メチル−ピリジン−２−イル）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−ピリジン−２−イル｝−Ｎ−（テトラヒドロ−ピラン−４−イル）−ベンズアミド（実施例６）；
２−（４−クロロフェニル）−４−（５−（６−メチル）−ピリジン−２−イル−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−ピリジン（実施例７）；
２−（４−トリフルオロメトキシフェニル）−４−（５−（６−メチル）−ピリジン−２−イル−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−ピリジン（実施例８）；
２−｛４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル｝−４−（５−（６−メチル）−ピリジン−２−イル−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−ピリジン（実施例９）；および
２−（４−フルオロフェニル）−４−（５−（６−メチル）−ピリジン−２−イル−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−ピリジン（実施例１０）；
ならびにその医薬的に許容される塩、溶媒和物および誘導体。
【００１１】
特に断りのない限り、疑念を回避するために、「置換された」なる用語は、１以上の所定の基により置換されていることを意味する。基が多くの選択肢から選択される場合、選択された基は同一であっても、異なっていてもよい。
疑念を回避するために、「独立して」なる用語は、１以上の置換基が多くの可能な置換基から選択される場合、これらの置換基は同一であっても、異なっていてもよいことを意味する。
本明細書において用いられる場合、「医薬的に許容される誘導体」なる用語は、式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容される塩、溶媒和物、エステルまたはアミド、あるいはかかるエステルまたはアミドの塩または溶媒和物、あるいは受容者に投与されると式（Ｉ）の化合物または活性な代謝物質またはその残基を（直接または間接的に）提供できる任意の他の化合物、例えばプロドラッグを意味する。本発明の好ましい医薬的に許容される誘導体は、任意の医薬的に許容される塩、溶媒和物またはプロドラッグである。
【００１２】
式（Ｉ）の化合物の適当な医薬的に許容される塩が酸塩、例えばナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムおよびテトラアルキルアンモニウムなど、または一または二塩基性塩と適当な酸、例えば有機カルボン酸、例えば酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、イセチオン酸、ラクトビオン酸およびコハク酸；有機スルホン酸、例えば、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸およびトルエンｐ−スルホン酸ならびに無機酸、例えば塩酸、硫酸、リン酸およびスルファミン酸などを包含する。本発明の化合物のいくつかは溶媒、例えば水性および有機溶媒から結晶化または再結晶させることができる。かかる場合において、溶媒和物が形成され得る。本発明は、水和物ならびに凍結乾燥などのプロセスにより産生され得る様々な量の水を含有する化合物を包含する化学量論的溶媒和物をその範囲内に包含する。
【００１３】
以下、本発明の任意の態様において定義される化合物、その医薬的に許容される塩、その溶媒和物および多形体（化学プロセスにおける中間化合物を除く）を「本発明の化合物」と称する。
本発明の化合物は１以上の互変異性形態で存在することができる。全ての互変異性体およびその混合物は本発明の範囲内に含まれる。
本発明の化合物は光学異性体、例えばジアステレオマーおよびあらゆる比の異性体の混合物、例えばラセミ混合物で存在し得る。本発明はかかる形態の全て、特に純粋な異性体形態を包含する。異なる異性体形態は慣例の方法により互いに分離または分割することができるか、あるいは任意の所定の異性体は、慣例的な合成法、あるいは立体特異的または不斉合成により得ることができる。
【００１４】
本発明の化合物は医薬の合成において使用されることを意図されるので、これらはそれぞれ、好ましくは実質的に純粋な形態、例えば少なくとも６０％の純度、さらに好適には少なくとも７５％の純度、好ましくは少なくとも８５％の純度、特に少なくとも９８％の純度（％は重量基準）において提供される。化合物の純粋でない調製物は、医薬組成物において用いられるさらに純度の高い形態を調製するために用いることができ；これらの化合物の純度の低い調製物は、少なくとも１％、さらに好適には少なくとも５％、好ましくは１０％〜５９％の本発明の化合物を含有していなければならない。
本発明の化合物は様々な方法で公知のようにして調製することができる。次の反応スキームおよび以下の文章において、特に断りにない限り、Ｒ１〜Ｒ６、Ｘおよびｎは第一の態様において定義したとおりである。これらのプロセスは、本発明のさらなる態様を形成する。
本明細書全体を通じて、一般式はローマの数字（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）などによって表される。これらの一般式のサブセットは、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）・・・（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（ＩＶｃ）などで示される。
【００１５】
式（Ｉ）の化合物は反応スキーム１にしたがってアジド供給源での処理により式（ＩＩ）の化合物から調製することができる。好ましい反応条件は、式（ＩＩ）の化合物をトリメチルシリルアジドと高温で、ジメチルホルムアミドなどの適当な溶媒中で処理することを含む。
【化２】
2005538997.tif 000003
【００１６】
式（ＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩ）の化合物（式中、Ｙは脱離基、例えばハロゲン、好ましくは塩素である）を式（ＩＶ）のボロン酸誘導体と反応スキーム２にしたがって反応させることにより調製することができる。好ましい条件は、Ｍｉｙａｕｒａら（Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９５、９５：２４５７）により開発されたものであり、典型的には、塩基およびパラジウムまたはニッケル触媒の存在下、室温から１３０℃の間の温度で３０分から４８時間の間反応させることを含む。適当な塩基は、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウムを包含する。適当な触媒はテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、酢酸パラジウム（ＩＩ）、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）、トリス（ジベニリデンアセトン）ジパラジウム（０）およびジクロロビス（トリフェニルホスフィン）ニッケルを包含する。
【化３】
2005538997.tif 000004
【００１７】
式（ＩＩＩ）の化合物は反応スキーム３にしたがって式（Ｖ）の化合物（好ましくは、Ｙは塩素であり、Ｚはヨウ素である）を式（ＶＩ）の化合物とＳｏｎａｇａｓｈｉｒａカップリングすることにより調製することができる。好ましい反応条件は、塩基およびパラジウム触媒の存在下で、室温から８０℃の間の温度で不活性溶媒中３０分から４８時間反応させることを含む。適当な塩基としては、ＴＭＥＤＡまたはトリエチルアミンを含む。適当なパラジウム触媒がテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）およびジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）を含む。
【化４】
2005538997.tif 000005
【００１８】
式（ＶＩ）の化合物は反応スキーム４に従って調製することができ、ここにおいて、式（ＶＩＩ）の化合物中、Ｙ１は脱離基、好ましくは臭素である。式（ＶＩＩＩ）の化合物を調製するための好ましい反応条件は、式（ＶＩＩ）の化合物を、テトラヒドロフランなどの不活性溶媒中、パラジウム触媒反応下、ＴＭＥＤＡおよびヨウ化銅の存在下、高温で、トリメチルシリルアセチレンで処理することを含む。トリメチルシリル基は、式（ＶＩＩＩ）の化合物を炭酸カリウムなどの塩基で、メタノールなどのプロトン性溶媒中で処理することにより除去することができる。
【化５】
2005538997.tif 000006
【００１９】
式（ＩＩａ）の化合物、すなわちＲ１が−Ｏ（ＣＨ２）２ＮＲ４Ｒ５である式（ＩＩ）の化合物は、反応スキーム５に従って式（ＩＩＩ）の化合物（式中、Ｙは好ましくは塩素である）から調製することができる。式（ＩＩＩ）の化合物を式（ＩＸ）の化合物と反応させて、一工程で式（ＩＩａ）の化合物を得ることができる。別法として、式（ＩＩＩ）の化合物をまず、４−ヒドロキシ−フェニルボロン酸と反応させ、続いて炭酸カリウムまたは水素化ナトリウムなどの塩基の存在下、ジメチルホルムアミドなどの溶媒中、Ｒ４Ｒ５Ｎ（ＣＨ２）２Ｃｌでアルキル化することができる。
【化６】
2005538997.tif 000007
【００２０】
式（ＩＩｂ）の化合物、すなわちＲ１が−ＣＨ２ＮＲ４Ｒ５である一般式（ＩＩ）の化合物は、反応スキーム６にしたがって調製することができる。式（ＩＩＩ）の化合物（Ｙは好ましくは塩素である）は、反応スキーム２と類似した条件を用いて４−ホルミルフェニルボロン酸と反応させ、式（Ｘ）の化合物を得ることができる。式（Ｘ）の化合物を次いで酢酸中ナトリウムシアノボロヒドリドなどの還元剤の存在下で、室温でＲ５Ｒ４ＮＨと反応させて、式（ＩＩｂ）の化合物を得ることができる。
【化７】
2005538997.tif 000008
【００２１】
式（Ｉ）の化合物の調製についてのさらなる詳細は以下の実施例の部分において見られる。
本発明の化合物は、単独で、あるいは少なくとも２、例えば５から１０００の化合物、さらに好ましくは１０から１００の化合物を含む化合物ライブラリーとして調製することができる。本発明の化合物のライブラリーは、当業者に公知の手順により、コンビナトリアル「スプリット・アンド・ミックス」法あるいは溶液相または固相化学反応のいずれかを用いたマルチプルパラレル合成法により調製することができる。かくしてさらに別の態様に従って、少なくとも２の本発明の化合物を含む化合物ライブラリーが提供される。
【００２２】
ＴＧＦ−β１軸の活性化および細胞外マトリックスの拡大は、慢性腎臓病および血管疾患の発症および進行についての早期で持続的な誘因である。Ｂｏｒｄｅｒ  Ｗ．Ａ．ら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、１９９４；３３１（１９）、１２８６−９２。さらに、ＴＧＦ−β１は、ＴＧＦ−β１レセプターＡＬＫ５によるｓｍａｄ３リン酸化の作用により、硬化した沈着物の成分であるフィブロネクチンおよびプラスミノーゲンアクチベーター阻害物質１の形成に関与する。Ｚｈａｎｇ  Ｙ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、１９９８；３９４（６６９６）、９０９−１３；Ｕｓｕｉ  Ｔ．ら、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．、１９９８；３９（１１）、１９８１−９。
【００２３】
腎臓および心血管系における進行性線維症は、苦痛および死の主原因であり、健康管理のコストの主な一因である。ＴＧＦ−β１は多くの腎線維増多障害に関与する。Ｂｏｒｄｒｅ  Ｗ．Ａ．ら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．  Ｍｅｄ．、１９９４；３３１（１９）、１２８６−９２。ＴＧＦ−β１は急性および慢性糸球体腎炎（Ｙｏｓｈｉｏｋａ  Ｋ．ら、Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．、１９９３；６８（２）、１５４−６３）、糖尿病性腎症（Ｙａｍａｍｏｔｏ、Ｔ．ら、１９９３、ＰＮＡＳ  ９０、１８１４−１８１８）、同種移植片拒絶、ＨＩＶ腎症およびアンギオテンシン誘発性腎症（Ｂｏｒｄｅｒ  Ｗ．Ａ．ら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、１９９４；３３１（１９）、１２８６−９２）において増大する。これらの病気において、ＴＧＦ−β１発現のレベルは細胞外マトリックスの産生と一致する。３つの証拠は、ＴＧＦ−β１とマトリックス産生間の因果関係を示唆する。第一は、正常な糸球体、メサンギウム細胞および腎臓以外の細胞は、インビトロで外因性ＴＧＦ−β１により細胞外マトリックスタンパク質の産生を誘発し、プロテアーゼ活性を阻害することができる。第二に、ＴＧＦ−β１に対する中和抗体は、腎炎ラットにおいて細胞外マトリックスの蓄積を防止する。第三に、ＴＧＦ−β１トランスジェニックマウスまたはＴＧＦ−β１遺伝子を正常ラット腎臓中にインビボトランスフェクションすると、結果として糸球体硬化症が急速に発症した。Ｋｏｐｐ  Ｊ．Ｂ．ら、Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．、１９９６；７４（６）、９９１−１００３。かくして、ＴＧＦ−β１活性の阻害は、慢性腎臓病における治療的介入として必要とされる。
【００２４】
ＴＧＦ−β１およびそのレセプターは損傷を受けた血管において増大し、バルーン血管形成術後の新生内膜形成において必要とされる。Ｓａｌｔｉｓ  Ｊ．ら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．、１９９６；２３（３）、１９３−２００。加えて、ＴＧＦ−β１はインビトロでの平滑筋細胞（ＳＭＣ）移動において有効な刺激因子であり、動脈壁におけるＳＭＣの移動は、アテローム性動脈硬化症および再狭窄の発症における誘因である。さらに、全体のコレステロールに対する内皮細胞産物の多変量解析において、ＴＧＦ−βレセプターＡＬＫ５は総コレステロールと相関関係を示した（Ｐ＜０．００１）。Ｂｌａｎｎ  Ａ．Ｄ．ら、アテローム性動脈硬化症、１９９６；１２０（１−２）、２２１−６。さらに、ヒトアテローム性動脈硬化病巣から誘導されるＳＭＣはＡＬＫ５／ＴＧＦ−βＩＩ型レセプター比が増大している。ＴＧＦ−β１は線維増殖性血管病巣において過剰に発現されるので、レセプター変異細胞は、細胞外マトリックス成分を過剰産生しつつ、制御不能であるがゆっくりと成長することが可能になる。ＭｃＣａｆｆｒｅｙ  Ｔ．Ａら、Ｊｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、１９９５；９６（６）、２６６７−７５。ＴＧＦ−β１は、活性マトリックス合成が起こるアテローム性動脈硬化病巣における非泡状マクロファージに免疫局在化され、このことは、非泡状マクロファージはＴＧＦ−βに依存したメカニズムによりアテローム性動脈硬化リモデリングにおいてマトリックス遺伝子調節に関与し得ることが示唆される。従って、ＴＧＦ−β１のＡＬＫ５に対する作用を阻害することも、アテローム性動脈硬化症および再狭窄において必要とされる。
【００２５】
ＴＧＦ−β１は傷の治療にも必要とされる。治癒プロセス中の過剰の瘢痕形成を制限することによりＴＧＦ−β１シグナル伝達が負傷後の回復機能において有益であることを示すための多くのモデルにおいてＴＧＦ−β１に対する中和抗体が用いられてきた。例えば、ＴＧＦ−β１およびＴＧＦ−β２に対する中和抗体は、瘢痕形成を軽減し、単球およびマクロファージの数を減少させ、ラットにおける皮膚フィブロネクチンおよびコラーゲンの沈着を減少させることにより、新真皮の細胞構造を改善した。Ｓｈａｈ  Ｍ．、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｓｃｉ．、１９９５、１０８、９８５−１００２。さらに、ＴＧＦ−β抗体はまたウサギの角膜創の回復を向上させ（Ｍｏｌｌｅｒ−Ｐｅｄｅｒｓｅｎ．Ｔ．、Ｃｕｒｒ．Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．、１９９８、１７、７３６−７４７）、ラットにおける胃潰瘍の創傷の回復を促進する（Ｅｒｎｓｔ  Ｈ．、Ｇｕｔ、１９９６、３９、１７２−１７５）。これらのデータは、ＴＧＦ−βの活性を制限することが、多くの組織において有益であることを強く示唆し、またＴＧＦ−βの慢性的上昇はｓｍａｄ２およびｓｍａｄ３シグナル伝達経路を阻害することにより有益であることを示唆する。
【００２６】
ＴＧＦ−βはまた、腹膜癒着にも関与する。Ｓａｅｄ  Ｇ．Ｍ．ら、Ｗｏｕｎｄ  Ｒｅｐａｉｒ  Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，１９９９年１１月〜１２月、７（６）、５０４−５１０。従って、ＡＬＫ５の阻害剤は外科手術後の腹膜および皮下線維増多癒着の防止に有益である。
ＴＧＦ−βはまた、皮膚の光による老化にも関与する（Ｆｉｓｈｅｒ  ＧＪ  ＫａｎｇＳＷ．Ｖａｒａｎｉ  Ｊ．Ｂａｔａ−Ｃｓｏｒｇｏ  Ｚ．Ｗａｎ  ＹＳ．Ｄａｔａ  Ｓ．Ｖｏｏｒｈｅｅｓ  ＪＪ．、光による老化および年齢による皮膚の老化のメカニズム、Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ、１３８（１１）：１４６２−１４７０、２００２年１１月およびＳｃｈｗａｒｔｚ  Ｅ．Ｓａｐａｄｉｎ  ＡＮ．Ｋｌｉｇｍａｎ  ＬＨ．「紫外線Ｂは局所的トレチノインにより無毛マウス皮膚調節においてサイトカインおよびインテグリンの定常状態ｍＲＮＡレベルを増大させる」、Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２９０（３）：１３７−１４４、１９９８年３月参照）。
【００２７】
従って、さらにもう一つの態様によると、本発明は、ＡＬＫ−５阻害により介される疾患または症状を治療または予防するための医薬の調製における、第一の態様において定義した化合物の使用を提供する。
好ましくは、ＡＬＫ−５阻害により介される疾患または症状は：慢性腎臓病、急性腎臓病、創傷治癒、関節炎、骨粗鬆症、腎臓病、鬱血性心不全、潰瘍（糖尿病性潰瘍、慢性潰瘍、胃潰瘍、および十二指腸潰瘍を包含する）、眼疾患、角膜創、糖尿病性腎症、神経機能障害、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、腹膜および皮下癒着、これらに限定されるわけではないが、腎線維症、肺線維症および肝線維症［例えば、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）］をはじめとする線維症が主要素である任意の疾患、アルコール性肝炎、ヘマクロマトーシス、原発性胆汁性肝硬変、再狭窄、腹膜後線維症、腸間膜線維症、子宮内膜症、ケロイド、癌、異常骨機能、炎症性疾患、瘢痕化および皮膚の光による老化から選択される。
【００２８】
さらに好ましくは、ＡＬＫ−５阻害により介される疾患または症状は線維症である。好ましくは、腎線維症である。
本明細書において治療とは予防ならびに確立された状態の治療にも及ぶと理解される。
本発明の化合物は、他の治療薬、例えば肝臓病については抗ウイルス薬との組み合わせ、または腎臓病についてはＡＣＥ阻害剤またはアンジオテンシンＩＩレセプター拮抗物質との組み合わせで投与することができる。
当業界で周知の慣例的な手順にしたがって、本発明の化合物を標準的医薬担体または希釈剤と組み合わせることにより調製される通常の投与形態で本発明の化合物を投与することができる。これらの手順は、成分を混合し、造粒し、圧縮するか、または適当ならば溶解して所望の製剤にすることを含む。
【００２９】
本発明の医薬組成物は、任意の経路により投与するために処方することができ、ヒトをはじめとする哺乳動物に対して経口、局所または非経口投与できる形態のものを包含する。
組成物は任意の経路により投与するために処方することができる。組成物は、錠剤、カプセル、散剤、顆粒剤、ロゼンジ、クリームまたは液体製剤、例えば経口または無菌非経口溶液または懸濁液の形態であってもよい。
本発明の局所処方は、例えば、軟膏、クリームまたはローション、眼軟膏および点眼液または点耳液、含浸包帯およびエアゾルとして提供することができ、適当な慣例の添加剤、例えば防腐剤、医薬の浸透を助ける溶媒ならびに軟膏およびクリーム中の皮膚軟化薬を含有してもよい。
処方はさらに、適合性の通常の担体、例えばクリームまたは軟膏基剤およびローション用のエタノールまたはオレイルアルコールを含有してもよい。かかる担体は、処方の約１％から約９８％まで存在してもよい。さらに一般的には、処方の８０％までを構成する。
【００３０】
経口投与用錠剤およびカプセルは単位投与形態であり、通常の賦形剤、例えば結合剤、例えばシロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、またはポリビニルピロリドン；フィラー、例えばラクトース、糖、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトールまたはグリシン；錠剤化滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコールまたはシリカ；崩壊剤、例えばジャガイモデンプン；または許容される湿潤剤、例えばラウリル硫酸ナトリウムを含有してもよい。錠剤は、通常の製薬実施例において周知の方法にしたがってコートすることができる。経口液体製剤は、例えば水性または油性懸濁液、溶液、乳液、シロップまたはエリキシルの形態であってもよく、あるいは使用前に水または他の適当なビヒクルで復元される乾燥製品として提供することもできる。かかる液体製剤は、通常の添加剤、例えば、沈殿防止剤、例えばソルビトール、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲルまたは水素化食用脂、乳化剤、例えばレシチン、ソルビタンモノオレエート、またはアカシア；非水性ビヒクル（食用油を包含してもよい）、例えばアーモンド油、油性エステル、例えばグリセリン、プロピレングリコール、またはエチルアルコール；防腐剤、例えばメチルまたはプロピルｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸、および所望により通常の香料または着色剤を含有してもよい。
【００３１】
坐薬は通常の坐薬基剤、例えばカカオ脂または他のグリセリドを含有する。
非経口投与に関して、液体単位投与形態は、化合物および無菌ビヒクル（水が好ましい）を利用して調製される。化合物は、使用されるビヒクルおよび濃度に応じて、ビヒクル中に懸濁できるかまたは溶解できるかのいずれかである。溶液の調製において、化合物は注射用水中に溶解でき、適当なバイアルまたはアンプル中に充填し、密封する前に濾過滅菌することができる。
有利には、局部麻酔剤、防腐剤および緩衝剤のなどの薬剤をビヒクル中に溶解させることができる。安定性を増大させるために、組成物をバイアル中に充填した後に凍結させ、水を真空下で除去することができる。凍結乾燥粉末を次いでバイアル中に密封し、使用前に液体を復元するために注射用水の添付バイアルを供給することができる。非経口懸濁液は、化合物が溶解される代わりにビヒクル中に懸濁され、滅菌が濾過により達成できない以外は、実質的に同じ方法で調製される。化合物を無菌ビヒクル中に懸濁させる前に酸化エチレンに暴露することにより殺菌することができる。有利には、界面活性剤または湿潤剤を組成物中に配合して、化合物の均一な分布を促進する。
【００３２】
組成物は、投与方法に応じて、好ましくは０．１重量％、好ましくは１０〜６０重量％の活性物質を含有することができる。組成物が投与単位を含む場合、各単位は５０〜５００ｍｇの活性成分を含有する。成人の治療に用いられる投与量は、投与経路および頻度に応じて、好ましくは１日当たり１００〜３０００ｍｇの範囲、例えば１日あたり１５００ｍｇである。かかる投与量は、１日当たり１．５〜５０ｍｇ／ｋｇに相当する。適当には、投与量は１日当たり５〜２０ｍｇ／ｋｇである。
本発明の化合物の最適量および各投与の間隔は、治療される状態の性質および程度、投与の形態、経路および部位、ならびに治療される特定の哺乳動物により決定され、このような最適値は通常の技術により決定できることは当業者には承認されるであろう。治療の最適コース、すなわち所定の日数の間、一日あたり投与される本発明の化合物の投与回数は通常の治療決定試験を用いて当業者が確定することができる。
【００３３】
本発明の化合物を前記投与範囲で投与する場合に、毒性は示されない。
本明細書に記載する特許および特許出願を包含するがこれらに限定されない全ての刊行物は、それぞれの開示は出典明示により本発明の一部として参照される。
本発明は次のさらに別の態様を包含する。第一の態様について記載された好ましい態様はこれらのさらに別の態様におよぶ：
ｉ）本発明の化合物および医薬的に許容される担体または希釈剤を含む医薬組成物：
ｉｉ）医薬として使用される本発明の化合物；
ｉｉｉ）哺乳動物における、慢性腎臓病、急性腎臓病、創傷治癒、関節炎、骨粗鬆症、腎臓病、鬱血性心不全、潰瘍（糖尿病性潰瘍、慢性潰瘍、胃潰瘍、および十二指腸潰瘍を包含する）、眼疾患、角膜創、糖尿病性腎症、神経機能障害、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、腹膜および皮下癒着、これらに限定されるわけではないが、腎線維症、肺線維症および肝線維症［例えば、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）］をはじめとする線維症が主要素である任意の疾患、アルコール性肝炎、ヘマクロマトーシス、原発性胆汁性肝硬変、再狭窄、腹膜後線維症、腸間膜線維症、子宮内膜症、ケロイド、癌、異常骨機能、炎症性疾患、瘢痕化および皮膚の光による老化から選択される  疾患の治療または予防法であって、かかる治療を必要とする哺乳動物に有効量の本発明の化合物を投与することを含む方法；
ｉｖ）本発明の化合物とＡＣＥ阻害剤またはアンジオテンシンＩＩレセプター拮抗物質の組み合わせ。
【００３４】
さらにもう一つの態様によると、本発明は、式（Ｉ）
【化８】
2005538997.tif 000009
（式中、ＸはＮまたはＣＨである；
Ｒ１はＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルケニル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ、シアノ、ペルフルオロＣ１−６アルキル、ペルフルオロＣ１−６アルコキシ、−ＮＲ４Ｒ５、−（ＣＨ２）ｎＮＲ４Ｒ５、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ６、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＲ４Ｒ５、−ＣＯＮＲ４Ｒ５、−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＮＲ４Ｒ５、−ＳＯ２Ｒ６、−ＳＯ２ＮＲ４Ｒ５、−ＮＲ５ＳＯ２Ｒ６および−ＮＲ４ＣＯＲ６である；
Ｒ２はＨ、Ｃ１−６アルキル、ハロ、シアノまたはペルフルオロＣ１−６アルキルから選択される；
Ｒ３はＨまたはハロから選択される；
Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は独立してＨまたはＣ１−６アルキルから選択されるか；あるいはＲ４およびＲ５はこれらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｎ、ＳまたはＯから選択される１以上のヘテロ原子を含んでいてもよい３、４、５、６または７員飽和または不飽和環であって、ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＨ、−ＯＣＦ３、Ｃ１−６アルキルおよびＣ１−６アルコキシから選択される１以上の置換基によりさらに置換されていてもよい環を形成する；
ｎは１〜４である）の化合物を提供する。
【００３５】
以下の非制限的実施例で本発明を説明する。
略号
ＣｕＩ        ヨウ化銅（Ｉ）
ＣＨ２Ｃｌ２    ジクロロメタン
ＤＭＥ        １，２−ジメトキシエタン
ＤＭＦ        ジメチルホルムアミド
ＥｔＯＡｃ    酢酸エチル
Ｋ２ＣＯ３      炭酸カリウム
ＭｅＯＨ      メタノール
Ｎａ２ＣＯ３    炭酸ナトリウム
ＮａＮＯ２      亜硝酸ナトリウム
ＮａＯＨ      水酸化ナトリウム
Ｎａ２ＳＯ４    硫酸ナトリウム
ＮＨ４Ｃｌ    塩化アンモニウム
Ｐｄ（ＰＰｈ３）４  テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）
ＴＭＳ        トリメチルシリル
ＴＭＳＮ３    トリメチルシリルアジド
ＴＨＦ        テトラヒドロフラン
ＴＭＥＤＡ    Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミン
【００３６】
中間体１：２−クロロ−４−ヨード−ピリジン
４−アミノ−２−クロロ−ピリジン（８．０９ｇ、６３ミリモル、１当量）の水（１５０ｍＬ）中氷冷溶液に、反応温度を０℃に維持しながら９８％濃ＨＣｌを添加した。亜硝酸ナトリウム（５．６５ｇ、８２ミリモル、１．３当量）の水（５０ｍＬ）中溶液を−１０℃でゆっくりと添加した。混合物を−１０℃で４０分間撹拌し、ヨウ化カリウム（１２．５５ｇ、７４．６ミリモル、１．２当量）の水（５０ｍＬ）中溶液を添加した。結果として得られる混合物を０℃で一夜撹拌した。ＮａＯＨ３５％で処理した後、酢酸エチルで抽出し、有機相を合し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。溶媒を減圧下で除去し、残留物をシリカゲル上クロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２、次いでＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ  ９９／１）により精製して、オレンジ色固体として標記化合物を得た（９．５ｇ、６３％）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：７．９９（ｄ、１Ｈ）、７．６８（ｓ、１Ｈ）、７．５２（ｄ、１Ｈ）；（ＧＣ−ＭＳ）ｍ／ｚ：２３９。
【００３７】
中間体２：２−メチル−６−トリメチルシラニルエチニル−ピリジン
２−ブロモ−４−メチル−ピリジン（２５ｇ、０．１５モル）の乾燥ＴＨＦ（２００ｍＬ）中溶液に、ＴＭＥＤＡ（２００ｍＬ）およびＴＭＳ−アセチレン（１００ｍＬ、過剰）をＮ２下で添加した。結果として得られる混合物を窒素で１０分間脱気し、次いでテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（３．７ミリモル、４．３ｇ）およびヨウ化銅（１４．７ミリモル、２．８ｇ）を添加した。結果として得られる混合物を６０℃で１８時間加熱した。反応混合物を濃縮し、残留物を酢酸エチル／水間で分配した。有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過した。溶媒を真空中で蒸発させ、粗生成物を得、これをシリカゲル上クロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２）により精製して、黒色油状物として標記化合物を得た（１８．４ｇ、６５％）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：７．５８−７．４９（ｍ、１Ｈ）、７．３０（ｄ、１Ｈ）、７．１０（ｄ、１Ｈ）、２．５６（ｓ、３Ｈ）、０．２８（ｓ、９Ｈ）。
【００３８】
中間体３：２−エチニル−６−メチル−ピリジン
中間体２（１８．４ｇ、０．０９７モル）のＭｅＯＨ（１００ｍｌ）中溶液に、炭酸カリウム（４当量、０．３９ｍｏｌ、５３．７ｇ）を添加した。反応混合物を次いで３０分間室温で撹拌し、溶媒を蒸発乾固させた。残留物を酢酸エチル／水間で分配した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させて、褐色油状物として標記化合物を得た（８．７５ｇ７７％）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：７．４５−７．３４（ｍ、１Ｈ）、７．１４（ｄ、１Ｈ）、６．９８（ｄ、１Ｈ）、２．９７（ｓ、１Ｈ）、２．４０（ｓ、３Ｈ）。
【００３９】
中間体４：６−メチル−２−［（２−クロロ−ピリジン−４−イル）−エチニル］−ピリジン
【化９】
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中間体１（１．８５ｇ、７．７４ミリモル）の乾燥ＴＨＦ（４０ｍＬ）中溶液に、窒素下で、ＴＭＥＤＡ（２０ｍＬ）および中間体３（１．１当量、１ｇ、８．５１ミリモル）を添加した。結果として得られる混合物を窒素で１０分間脱気し、次いでテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．４６４ミリモル、５３７ｍｇ）およびヨウ化銅（０．９２８ミリモル、１７７ｍｇ）を添加した。結果として得られる混合物を４時間６０℃で加熱した。混合物をＮＨ４Ｃｌの飽和溶液中に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過した。溶媒を減圧下で除去した。残留物をシリカゲル上クロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ  ９０：１０）により精製して、ベージュ色固体として標記化合物を得た（１．５４ｇ、８６．４％）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：８．２９（ｄ、１Ｈ）、７．５２（ｔ、１Ｈ）、７．３９（ｓ、１Ｈ）、７．３４−７．２４（ｍ、２Ｈ）、７．１０（ｄ、１Ｈ）、２．５０（ｓ、３Ｈ）。
【００４０】
中間体５：４−（２−（ピロリジン−１−イル）−エトキシ）−ヨードベンゼン
【化１０】
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４−ヨード−フェノール（６ｇ、２７．３ミリモル）のアセトン（２００ｍｌ）中溶液に炭酸セシウム（２２．２ｇ、６８．４ミリモル）およびＮ−（２−クロロエチル）−ピロリジン塩酸塩（７ｇ、４１ミリモル）を添加し、混合物を４時間還流下で加熱し、次いで水中に注いだ。ＣＨ２Ｃｌ２で抽出後、有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、減圧下で濃縮した。標記化合物を赤色油状物として得た（８ｇ、９２．５３％）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ：７．５（ｄ、２Ｈ）、６．６５（ｄ、２Ｈ）、４（ｔ、２Ｈ）、２．８（ｔ、２Ｈ）、２．５５（ｍ、４Ｈ）、１．７５（ｍ、４Ｈ）。
【００４１】
中間体６：４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−Ｎ−（テトラヒドロ−ピラン−４−イル）−ベンズアミド
【化１１】
2005538997.tif 000012
４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−安息香酸（７０．１６ｇ、０．２８モル）をＳＯＣｌ２（２体積）で処理し、反応混合物を２時間還流温度で撹拌した。蒸発後、残留物をトルエンで希釈し、１０℃でテトラヒドロ−ピラン−４−イルアミン（３４．３４ｇ、０．３３９）およびトリエチルアミン（７９ｍＬ、０．５７モル）のＣＨ２Ｃｌ２中溶液に注いだ。反応混合物を室温で２日間撹拌し、水（４９０ｍｌ）を添加して、沈殿を得、これを濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９５：５）を用いたフラッシュクロマトグラフィーによる精製後、固体として標記化合物を得た（１７．０２ｇ、１８％）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ：７．８５（ｄ、２Ｈ）、７．７２（ｄ、２Ｈ）、５．９８（ｍ、１Ｈ）、４．２０（ｓ、１Ｈ）、３．９９（ｍ、２Ｈ）、３．３５（ｔ、２Ｈ）、２．０１（ｄ、２Ｈ）、１．５７（ｍ、２Ｈ）、１．３５（ｓ、１２Ｈ）。
【００４２】
中間７：１−［２−（ピロリジン−１−イル）−エトキシ］−４−［４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル］−ベンゼン
【化１２】
2005538997.tif 000013
中間体５（８ｇ、２５．２４ミリモル）のジオキサン（２００ｍｌ）中溶液に、４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（４ｍｌ、２７．６ミリモル）、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）（０．８８ｇ、１．２６ミリモル）、トリエチルアミン（１０．５ｍｌ、７５．７２ミリモル）を添加し、混合物を４時間還流下で加熱し、次いで水中に注いだ。ＣＨ２Ｃｌ２で抽出後、有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲル上クロマトグラフィー（ＣＨ２ＣＨ２／ＭｅＯＨ（９：１）で溶出）により精製した。標記化合物を黄色固体として得た（８ｇ、９９．９９％）；ｍｐ：１６０−１６４℃。
【００４３】
中間体８：２−［（２−（４−メチルスルホニルフェニル）−ピリジン−４−イル）−エチニル］−６−メチル−ピリジン
【化１３】
2005538997.tif 000014
中間体４（１ｇ、４．３７ミリモル）および４−（メチルスルホニル）フェニルボロン酸（１．１４ｇ、５．７ミリモル）をトルエン（３０ｍＬ）およびＥｔＯＨ（１０ｍＬ）の混合物中に溶解させた。この溶液に、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．１１８ｇ、０．１ミリモル）および水性炭酸ナトリウム２Ｍ（８．６ｍＬ、１７．２ミリモル）を窒素下で添加した。結果として得られる混合物を６時間還流下で撹拌した。混合物を水で加水分解し、酢酸エチルで抽出し、合した有機相を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。溶媒を減圧下で蒸発させて粗生成物を得、これをシリカゲル上クロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ  ９８：２）により精製して、黄色油状物として標記化合物を得た（０．７ｇ、４６％）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ：８．６６（ｄ、１Ｈ）、８．１４（ｄ、２Ｈ）、７．９８（ｄ、２Ｈ）、７．９０（ｓ、１Ｈ）、７．５６（ｔ、１Ｈ）、７．４３−７．３２（ｍ、２Ｈ）、７．１２（ｄ、１Ｈ）、３．０３（ｓ、３Ｈ）、２．５０（ｓ、３Ｈ）；［  ＡＰＣＩ  ＭＳ］ｍ／ｚ  ３４９（ＭＨ＋）
【００４４】
式（ＩＩｃ）の化合物、すなわちＸがＮであり、Ｒ２がメチルであり、Ｒ３が水素である式（ＩＩ）の化合物（表１参照）を、適当なボロン酸誘導体を用い、中間体８について記載したのと類似の方法により調製した。
【化１４】
2005538997.tif 000015
【表１】
2005538997.tif 000016
【００４５】
中間体１８：４−｛４−［４−（６−メチル−ピリジン−２−イルエチニル）−ピリジン−２−イル］−ベンジル｝−モルホリン
【化１５】
2005538997.tif 000017
中間体１７（０．４５ｇ、１．５ミリモル）のジクロロエタン（４０ｍｌ）中溶液に、モルホリン（０．９ｇ、６ミリモル）、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（１．２ｇ、６ミリモル）および酢酸（０．２７ｇ、４ミリモル）を添加した。混合物を６時間室温で撹拌し、氷中に注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、黄色油状物として標記化合物を得た（０．５５ｇ、定量的）；［ＡＰＣＩ  ＭＳ］  ｍ／ｚ＝３７０（ＭＨ＋）。
【００４６】
中間体１９：Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−［（４−｛４−（６−メチル−ピリジン−２−イル−エチニル）−ピリジン−２−イル｝フェニル）オキシ］エタンアミン
【化１６】
2005538997.tif 000018
中間体１１（０．５７２ｇ、２ミリモル）のアセトン（２０ｍｌ）中溶液に、２−クロロ−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン塩酸塩（０．３７４ｇ、２．６ミリモル）および炭酸カリウム（０．８２２ｇ、６ミリモル）を添加した。混合物を一夜還流下で撹拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮した。残留物を水中に注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮して、褐色油状物として標記化合物を得た（０．７ｇ、９８％）；［ＡＰＣＩ  ＭＳ］ｍ／ｚ＝３５８（ＭＨ＋）。
【００４７】
実施例
実施例１：２−（４−メタンスルホニルフェニル）−４−（５−（６−メチル）−ピリジン−２−イル−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−ピリジン
【化１７】
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中間体８（７００ｍｇ、２ミリモル）の乾燥ＤＭＦ（１３ｍｌ）中溶液に、アジドトリメチルシラン（８ミリモル、９３０ｍｇ）を添加した。反応混合物を次いで一夜１００°Ｃで撹拌した。反応混合物を水で加水分解し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機相を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過した。真空中で溶媒を蒸発させて粗生成物を得、これをシリカゲル上クロマトグラフィー（トルエン／イソプロピルアミン９５：５）により精製した。粗油状物をＣＨ２Ｃｌ２／ヘキサンの混合物中で沈殿させて、黄色粉末として標記化合物を得た（２６０ｍｇ、３３．２％）、１５０℃でゴム状；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ：８．７０（ｄ、１Ｈ）、８．２８（ｓ、１Ｈ）、８．１５（ｄ、２Ｈ）、７．９５（ｄ、２Ｈ）、７．７０−７．５７（ｍ、２Ｈ）、７．５０（ｄ、１Ｈ）、７．１５（ｄ、１Ｈ）、３．００（ｓ、３Ｈ）、２．５０（ｓ、３Ｈ）、ＮＨトリアゾールは観察されなかった；ＴＯＦ  ＭＳ  ＥＳ＋  Ｃ２０Ｈ１７Ｎ５Ｏ２Ｓについて計算された正確な質量：３９２．１１８１（ＭＨ＋）。測定値：３９２．１２１８（ＭＨ＋）。
【００４８】
式（Ｉａ）の化合物、すなわちＸがＮであり、Ｒ２がメチルであり、Ｒ３が水素である式（Ｉ）の化合物（表２参照）は、表に示した中間体から実施例１について記載されたのと類似の方法により調製した。
【化１８】
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【表２】
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【００４９】
生物学
本発明の化合物の生物学的活性は、以下のアッセイを用いて評価することができる。
アッセイ１（細胞転写分析）
本発明の化合物のＴＧＦ−βシグナル伝達を阻害する可能性は、例えば次のインビトロアッセイを用いて示すことができる。
アッセイは、ルシフェラーゼ（ホタル）リポーター遺伝子に結合したＰＡＩ−１プロモーター（強力なＴＧＦ−β反応性プロモーターであることが知られている）で安定にトランスフェクトされたＨｅｐＧ２細胞において行った。化合物を、ＴＧＦ−βに暴露された細胞におけるルシフェラーゼ活性を阻害する能力に関して選択した。加えて、細胞を、ＴＧＦ−β反応性プロモーターにより左右されない第二のルシフェラーゼ（Ｒｅｎｉｌｌａ）遺伝子でトランスフェクトし、毒性対照として使用した。
【００５０】
２００μｌの血清含有培地中、マルチドロップ装置を用いて９６ウェルマイクロプレートをシードし、細胞系が各ウェルあたり３５０００細胞の濃度で安定にトランスフェクトされた。これらのプレートをセルインキュベーター中に入れた。
１８から２４時間後（２日）、細胞インキュベーション操作を開始した。細胞をＴＧＦ−βおよび候補化合物と共に５０ｎＭから１０μＭ（ＤＭＳＯの最終濃度１％）の濃度でインキュベートした。試験において用いられるＴＧＦ−β（ｒｈＴＧＦβ−１）の最終濃度は１ｎｇ／ｍＬであった。細胞を候補化合物と共にＴＧＦ−βの添加の前１５〜３０分にインキュベートした。試験反応の最終体積は１５０μｌであった。各ウェルは１つだけ候補化合物を含有し、そのＰＡＩ−１プロモーターに対する影響をモニターした。
【００５１】
１１および１２行を対照として用いた。１１行は８個のウェルを含み、ここにおいて細胞はＴＧＦ−βの存在下で、候補化合物なしでインキュベートした。試験ウェルにおいて測定された値を比較する（阻害活性を定量化するために）「参考ＴＧＦ−β誘発性ホタルルシフェラーゼ値」を決定するために１１行を用いた。これらの位置から得られるホタルルシフェラーゼ値は、「基本的ホタルルシフェラーゼ活性」の代表例である。ウェルＥ１２からＨ１２において、細胞をＴＧＦ−βおよび５００μＭ  ＣＰＯ（シクロペンテノン、Ｓｉｇｍａ）、細胞毒性化合物の存在下でインキュベートした。毒性は、ホタルおよびウミシイタケ（ｒｅｎｉｌｌａ）ルシフェラーゼ活性が減少すること（１１行において得られるものの５０％付近）により明らかになった。
【００５２】
１２から１８時間後（３日）、ルシフェラーゼ定量化を開始した。次の反応は、Ｄｕａｌ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）から入手した試薬を用いて行った。細胞を洗浄し、１０μｌの受動的溶解緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加して溶解させた。撹拌後（１５〜３０分）、プレートのルシフェラーゼ活性をデュアル・インジェクター・ルミノメーター（ＢＭＧ  ｌｕｍｉｓｔａｒ）で読みとった。この目的で、５０μｌのルシフェラーゼアッセイ試薬および５０μｌの「ストップ・アンド・ゴー」緩衝液を連続して注入し、両ルシフェラーゼの活性を定量化した。適当なソフトウェアを用いて測定から得られるデータを処理し、分析した。ウェルＡ１１〜Ｈ１１（１１行、ＴＧＦ−βのみ）において得られる平均ルシフェラーゼ活性値を１００％とみなし、ウェルＡ１１〜Ｄ１２（細胞培地のみ）において得られる値は基礎レベル（０％）であった。試験された化合物のそれぞれについて、濃度反応曲線を作成し、これからＩＣ５０値をグラフにより決定した。
【００５３】
アッセイ２（Ａｌｋ５蛍光偏光アッセイ）
フルオロフォアと結合したキナーゼ阻害化合物を、他の化合物の所定のキナーゼに対するＡＴＰ競合結合をモニターするために蛍光リガンドとして用いることができる。溶液中への結合リガンドの放出により起こる平面偏光の脱分極における増大を偏光／異方性値として測定する。このプロトコルは、組み換えＧＳＴ−ＡＬＫ５（残基１９８〜５０３）を用いるアッセイのローダミングリーン標識されたリガンドの使用の詳細を記載する。
アッセイ緩衝液成分：６２．５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ  ｐＨ７．５（Ｓｉｇｍａ  Ｈ−４０３４）、１ｍＭ  ＤＴＴ（Ｓｉｇｍａ  Ｄ−０６３２）、１２．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２（Ｓｉｇｍａ  Ｍ−９２７２）、１．２５ｍＭ  ＣＨＡＰＳ（Ｓｉｇｍａ  Ｃ−３０２３）。
【００５４】
プロトコル：固体化合物ストックを１００％ＤＭＳＯ中に溶解させて１ｍＭの濃度にし、９６ウェルＵ底ポリプロピレンプレート（Ｃｏｓｔｒａ  ＃３３６５）の１行、Ａ〜Ｈ列中に移して化合物プレートを得る。プレートを横切って１１行まで化合物を連続して希釈し（１００％ＤＭＳＯ中３倍）、各試験化合物について１１濃度を得た。１２行はＤＭＳＯのみを含有していた。９６ウェル黒色Ｕ底未処理プレート（Ｃｏｓｔａｒ＃３７９２）中に各ウェルから１μｌのサンプルを移してアッセイプレートを調製するためにＲａｐｉｄｐｌａｔｅ−９６を使用した。
ＡＬＫ５を、前記成分および１ｎＭのローダミングリーン標識リガンドを含有するアッセイ緩衝液に添加し、最終ＡＬＫ５濃度は酵素の活性部位滴定に基づいて１０ｎＭであった。酵素／リガンド試薬（３９μｌ）をあらかじめ調製したアッセイプレートの各ウェルに添加した。対照化合物（１μｌ）を低対照値に関しては１２行、Ｅ〜Ｈ列に添加した。プレートを、それぞれ４８５ｎｍ、５３０ｎｍ、および５０５ｎｍの励起、発光およびダイクロイックフィルターを有するＬＪＬ  Ａｃｑｕｅｓｔ蛍光リーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、シリアル番号  ＡＱ１０４８）で直ちに読みとった。各ウェルの蛍光偏光をＡｃｑｕｅｓｔリーダーにより計算し、次いで濃度反応曲線を作成するための曲線あてはめソフトウェアに導入した。正規化反応を高対照（１２行、Ａ〜Ｄ列において１μｌ  ＤＭＳＯ）および低対照（１２行、Ｅ〜Ｈ列における１μｌの対照化合物）に対して決定した。ＩＣ５０値を次いで各化合物について計算した。
前記アッセイを用いて、本発明の全実施例は、ＡＬＫ５レセプターモジュレーター活性（１〜２００ｎＭの範囲のＩＣ５０値を有する）およびＴＧＦ−β細胞活性（０．００１〜１０μＭの範囲のＩＣ５０値を有する）を示す。
２−（４−メタンスルホニルフェニル）−４−（５−（６−メチル）−ピリジン−２−イル−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−ピリジン（実施例１）は２６ｎＭのＡＬＫ５レセプターモジュレーター活性および４１３ｎＭのＴＧＦ−β細胞活性を示した。
【国際調査報告】
2005538997.tif 000023
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2005538997.tif 000025
2005538997.tif 000026
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