(57)【要約】本発明は、免疫反応調整剤分子を用いた形質細胞様樹状細胞を成熟させる方法に関する。本発明は、成熟した形質細胞様樹状細胞の生物活性を検出する方法、および治療目的または予防目的に成熟形質細胞様樹状細胞を用いる方法にも関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
インビトロの樹状細胞による抗原提示を増強する方法であって、
（ａ）分離樹状細胞集団を抗原に曝露するステップと、
（ｂ）トル様受容体６、トル様受容体７、またはトル様受容体８の作動薬である免疫反応調整剤分子と分離樹状細胞を接触させるステップと、
（ｃ）樹状細胞を処理し、抗原を提示させるステップと、
を含む方法。
【請求項２】
抗原が新生細胞由来、感染性因子由来、または組換え由来である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
免疫反応調整剤分子が、トル様受容体７の作動薬である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
免疫反応調整剤分子が、イミダゾキノリンアミン類、イミダゾピリジンアミン類、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン類、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン類、チアゾロおよびオキサゾロキノリンアミン類およびピリジンアミン類、イミダゾナフチリジンアミン類およびテトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン類、およびそれらの薬学的に許容される塩類からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
免疫反応調整剤分子が、イミダゾキノリンアミン類および６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン類、およびそれらの薬学的に許容される塩類からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
抗原提示を検出するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
抗原提示を検出するステップが、
（ａ）活性化樹状細胞をナイーブＴ細胞と接触させるステップと、
（ｂ）樹状細胞による抗原提示の結果としてＴ細胞によって産生される１つ以上のサイトカインの産生を検出するステップと、
を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
１つ以上のサイトカインが、ＩＦＮ−γまたはＩＬ−１０を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
樹状細胞が形質細胞様樹状細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
（ａ）分離樹状細胞集団を抗原に曝露させる工程と、
（ｂ）トル様受容体６、トル様受容体７、またはトル様受容体８の作動薬である免疫反応調整剤分子と分離樹状細胞を接触させる工程と、
（ｃ）樹状細胞を処理し、抗原を提示させる工程と、
によって産生される分離樹状細胞集団。
【請求項１１】
免疫反応調整剤分子が、トル様受容体７の作動薬である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
免疫反応調整剤分子が、イミダゾキノリンアミン類、イミダゾピリジンアミン類、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン類、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン類、チアゾロおよびオキサゾロキノリンアミン類およびピリジンアミン類、イミダゾナフチリジンアミン類およびテトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン類、およびそれらの薬学的に許容される塩類からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
免疫反応調整剤分子が、イミダゾキノリンアミン類および６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン類、およびそれらの薬学的に許容される塩類からなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
抗原が新生細胞由来、感染性因子由来、または組換え由来である、請求項１０に記載の細胞集団。
【請求項１５】
樹状細胞が形質細胞様樹状細胞である、請求項１０に記載の細胞集団。
【請求項１６】
成熟樹状細胞の集団を得る方法であって、
（ａ）トル様受容体６、トル様受容体７、またはトル様受容体８の作動薬である免疫反応調整剤分子を対象の成熟樹状細胞に有効な量で対象に投与するステップと、
（ｂ）成熟樹状細胞を分離するステップと、
を含む方法。
【請求項１７】
成熟樹状細胞が対象の血液検体から分離される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
対象に投与される免疫反応調整剤分子の量が少なくとも０．００１ｍｇ／ｋｇである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
樹状細胞が形質細胞様樹状細胞である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
請求項１６に記載の方法によって得られる細胞集団。
【請求項２１】
免疫反応調整剤分子がトル様受容体７の作動薬である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２２】
免疫反応調整剤分子が、イミダゾキノリンアミン類、イミダゾピリジンアミン類、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン類、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン類、チアゾロおよびオキサゾロキノリンアミン類およびピリジンアミン類、イミダゾナフチリジンアミン類およびテトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン類、およびそれらの薬学的に許容される塩類からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２３】
免疫反応調整剤分子が、イミダゾキノリンアミン類および６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン類、およびそれらの薬学的に許容される塩類からなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
形質細胞様樹状細胞によるサイトカイン産生を検出する方法であって、
（ａ）形質細胞様樹状細胞がＩＬ−８、ＩＰ−１０、ＩＬ−６、ＭＩＰ−１α、およびＩＦＮ−ωから選択される１つ以上のサイトカインを産生するように促すために有効な量でトル様受容体６、トル様受容体７、またはトル様受容体８の作動薬である免疫反応調整剤分子と分離形質細胞様樹状細胞を接触させるステップと、
（ｂ）樹状細胞によるサイトカインの少なくとも１つの産生を検出するステップと、
を含む方法。
【請求項２５】
免疫反応調整剤分子がトル様受容体７の作動薬である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
免疫反応調整剤分子が、イミダゾキノリンアミン類、イミダゾピリジンアミン類、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン類、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン類、チアゾロおよびオキサゾロキノリンアミン類およびピリジンアミン類、イミダゾナフチリジンアミン類およびテトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン類、およびそれらの薬学的に許容される塩類からなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
免疫反応調整剤分子が、イミダゾキノリンアミン類および６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン類、およびそれらの薬学的に許容される塩類からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
免疫反応調整剤分子の量が、少なくとも約０．００１μＭの濃度で提供される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２９】
サイトカインの少なくとも１つの産生を検出するステップが、フローサイトメトリーによる細胞内サイトカインを検出するステップを含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項３０】
サイトカインの少なくとも１つの産生を検出するステップが、細胞外サイトカインを検出するステップを含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項３１】
サイトカインの少なくとも１つの産生を検出するステップが、酵素結合免疫吸着検定法を用いるステップを含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項３２】
サイトカインの少なくとも１つの産生を検出するステップが、形質細胞様樹状細胞中のサイトカインをコードするｍＲＮＡを検出するステップを含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項３３】
形質細胞様樹状細胞による共刺激マーカーの発現を検出する方法であって、
（ａ）形質細胞様樹状細胞が１つ以上の共刺激マーカーを発現するように促すために有効な量でトル様受容体６、トル様受容体７、またはトル様受容体８の作動薬である免疫反応調整剤分子と分離形質細胞様樹状細胞を接触させるステップと、
（ｂ）形質細胞様樹状細胞による少なくとも１つの共刺激マーカーの発現を検出するステップと、
を含む方法。
【請求項３４】
免疫反応調整剤分子がトル様受容体７の作動薬である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
免疫反応調整剤分子が、イミダゾキノリンアミン類、イミダゾピリジンアミン類、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン類、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン類、チアゾロおよびオキサゾロキノリンアミン類およびピリジンアミン類、イミダゾナフチリジンアミン類およびテトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン類、およびそれらの薬学的に許容される塩類からなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
免疫反応調整剤分子が、イミダゾキノリンアミン類および６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン類、およびそれらの薬学的に許容される塩類からなる群から選択される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
免疫反応調整剤分子の量が、少なくとも約０．００１μＭの濃度で提供される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３８】
共刺激マーカーがＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０、またはＨＬＡ−ＤＲを含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３９】
少なくとも１つの共刺激マーカーの発現を検出するステップが、フローサイトメトリーを用いるステップを含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項４０】
少なくとも１つの共刺激マーカーの発現を検出するステップが、形質細胞様樹状細胞の細胞表面上の少なくとも１つの共刺激マーカーの免疫学的検出を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項４１】
少なくとも１つの共刺激マーカーの発現を検出するステップが、形質細胞様樹状細胞における共刺激マーカーをコードするｍＲＮＡを検出するステップを含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項４２】
分離形質細胞様樹状細胞の生存を増強する方法であって、
（ａ）形質細胞様樹状細胞の生存を増強するために有効な量でトル様受容体６、トル様受容体７、またはトル様受容体８の作動薬である免疫反応調整剤分子と分離形質細胞様樹状細胞を接触させるステップと、
（ｂ）形質細胞様樹状細胞の少なくとも３０％が少なくとも４８時間生存するような条件下に形質細胞様樹状細胞をインキュベートするステップと、
を含む方法。
【請求項４３】
形質細胞様樹状細胞の少なくとも５０％が少なくとも４８時間生存する、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
形質細胞様樹状細胞の少なくとも７０％が少なくとも４８時間生存する、請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
形質細胞様樹状細胞の少なくとも７５％が少なくとも４８時間生存する、請求項４２に記載の方法。
【請求項４６】
免疫反応調整剤分子がトル様受容体７の作動薬である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４７】
免疫反応調整剤分子が、イミダゾキノリンアミン類、イミダゾピリジンアミン類、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン類、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン類、チアゾロおよびオキサゾロキノリンアミン類およびピリジンアミン類、イミダゾナフチリジンアミン類およびテトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン類、およびそれらの薬学的に許容される塩類からなる群から選択される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４８】
免疫反応調整剤分子が、イミダゾキノリンアミン類および６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン類、およびそれらの薬学的に許容される塩類からなる群から選択される、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
形質細胞様樹状細胞によるケモカイン受容体の発現を検出する方法であって、
（ａ）形質細胞様樹状細胞が１つ以上のケモカイン受容体を発現するように促すために有効な量でトル様受容体６、トル様受容体７、またはトル様受容体８の作動薬である免疫反応調整剤分子と分離形質細胞様樹状細胞を接触させるステップと、
（ｂ）少なくとも１つのケモカイン受容体の発現を検出するステップと、
を含む方法。
【請求項５０】
免疫反応調整剤分子がトル様受容体７の作動薬である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
免疫反応調整剤分子が、イミダゾキノリンアミン類、イミダゾピリジンアミン類、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン類、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン類、チアゾロおよびオキサゾロキノリンアミン類およびピリジンアミン類、イミダゾナフチリジンアミン類およびテトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン類、およびそれらの薬学的に許容される塩類からなる群から選択される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５２】
免疫反応調整剤分子が、イミダゾキノリンアミン類および６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン類、およびそれらの薬学的に許容される塩類からなる群から選択される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
免疫反応調整剤分子の量が、少なくとも約０．００１μＭの濃度で提供される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５４】
ケモカイン受容体がＣＣＲ７である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５５】
少なくとも１つのケモカイン受容体の発現を検出するステップが、ケモカイン受容体発現のアップレギュレーションまたはケモカイン受容体発現のダウンレギュレーションを検出するステップを含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５６】
少なくとも１つのケモカイン受容体の発現を検出するステップが、フローサイトメトリーの使用を含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
少なくとも１つのケモカイン受容体の発現を検出するステップが、酵素結合免疫吸着検定法を用いるステップを含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
少なくとも１つのケモカイン受容体の発現を検出するステップが、形質細胞様樹状細胞におけるケモカイン受容体をコードするｍＲＮＡを検出するステップを含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項５９】
形質細胞様樹状細胞によるケモカイン受容体の産生を選択的に誘導する化合物を同定する方法であって、
（ａ）炎症性サイトカイン産生細胞と形質細胞様樹状細胞の両方を含む細胞の集団を得るステップと、
（ｂ）細胞の集団を試験化合物と接触させるステップと、
（ｃ）試験化合物と接触した細胞の集団に存在するケモカイン受容体の量を測定するステップと、
（ｄ）試験化合物と接触した細胞の集団に存在する炎症性サイトカインの量を測定するステップと、
（ｅ）細胞の集団に存在する炎症性サイトカインの量よりも少なくとも３倍多い量で試験化合物との接触後にケモカイン受容体が細胞の集団に存在する場合には、ケモカイン受容体の選択的誘導物質としての試験化合物を同定するステップと、
を含む方法。
【請求項６０】
ケモカイン受容体の量がフローサイトメトリーによって測定される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
炎症性サイトカインの量が、酵素結合免疫吸着検定法またはバイオアッセイを用いて培養上清から測定される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６２】
ケモカイン受容体および炎症性サイトカインの量が、ノーザンブロット法、ウェスタンブロット法、およびリアルタイムＰＣＲからなる群から選択される１つ以上の方法を用いて測定される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６３】
炎症性サイトカインがＴＮＦ−αまたはＩＬ−１２である、請求項５９に記載の方法。
【請求項６４】
細胞の集団が、約０．００５μＭ〜約５μＭの濃度で試験化合物と接触される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６５】
ケモカイン受容体を発現する細胞で豊富化された細胞集団を調製する方法であって、
（ａ）形質細胞様樹状細胞が１つ以上のケモカイン受容体を発現するように促すために有効な量でトル様受容体６、トル様受容体７、またはトル様受容体８の作動薬である免疫反応調整剤分子と分離形質細胞様樹状細胞を接触させるステップと、
（ｂ）細胞集団をケモカイン受容体を発現する細胞で豊富化するステップと、
を含む方法。
【請求項６６】
免疫反応調整剤分子がトル様受容体７の作動薬である、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
免疫反応調整剤分子が、イミダゾキノリンアミン類、イミダゾピリジンアミン類、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン類、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン類、チアゾロおよびオキサゾロキノリンアミン類およびピリジンアミン類、イミダゾナフチリジンアミン類およびテトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン類、およびそれらの薬学的に許容される塩類からなる群から選択される、請求項６５に記載の方法。
【請求項６８】
免疫反応調整剤分子が、イミダゾキノリンアミン類および６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン類、およびそれらの薬学的に許容される塩類からなる群から選択される、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
細胞集団を豊富化するステップが、ケモカイン受容体を発現することがない細胞を細胞集団から選択的に除去するステップを含む、請求項６５に記載の方法。
【請求項７０】
細胞集団を濃縮するステップが、
（ａ）ケモカイン受容体を発現する細胞を基質に選択的に結合する基質と細胞集団を接触させるステップと、
（ｂ）ケモカイン受容体を発現する細胞に可逆的に基質を結合させるステップと、
（ｃ）非結合細胞を除去するステップと、
（ｄ）結合細胞を収集するステップと、
を含む、請求項６５に記載の方法。
【請求項７１】
選択的な結合が、吸着または免疫吸着を含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
ケモカイン受容体がＣＣＲ７である、請求項６５に記載の方法。
【請求項７３】
請求項６５に記載の方法によって調製されるケモカイン受容体を発現する細胞で豊富化された形質細胞様樹状細胞の集団。
【請求項７４】
ケモカイン受容体がＣＣＲ７である、請求項７３に記載の細胞集団。
【請求項７５】
疾患を治療する方法であって、
（ａ）形質細胞様樹状細胞が１つ以上のケモカイン受容体を発現するように促すために有効な量でトル様受容体６、トル様受容体７、またはトル様受容体８の作動薬である免疫反応調整剤分子と分離形質細胞様樹状細胞を接触させるステップと、
（ｂ）疾患と関連した抗原と形質細胞様樹状細胞の集団を接触させるステップと、
（ｃ）少なくとも１つのケモカイン受容体を高レベルで発現する細胞で細胞集団を豊富化するステップと、
（ｄ）豊富化した細胞集団を患者に投与するステップと、
を含む方法。
【請求項７６】
免疫反応調整剤分子がトル様受容体７の作動薬である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
免疫反応調整剤分子が、イミダゾキノリンアミン類、イミダゾピリジンアミン類、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン類、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン類、チアゾロおよびオキサゾロキノリンアミン類およびピリジンアミン類、イミダゾナフチリジンアミン類およびテトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン類、およびそれらの薬学的に許容される塩類からなる群から選択される、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
免疫反応調整剤分子が、イミダゾキノリンアミン類および６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン類、およびそれらの薬学的に許容される塩類からなる群から選択される、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
疾患が腫瘍性疾患であり、抗原が新生細胞由来である、請求項７５に記載の方法。
【請求項８０】
疾患が感染性因子によってひき起こされ、抗原が感染性因子由来である、請求項７５に記載の方法。
【請求項８１】
抗原が組換え由来である、請求項７５に記載の方法。
【請求項８２】
疾患の治療用の細胞様補助剤を調製する方法であって、
（ａ）トル様受容体６、トル様受容体７、またはトル様受容体８の作動薬である免疫反応調整剤分子で樹状細胞を処理することによってインビトロで形質細胞様樹状細胞を成熟させるステップと、
（ｂ）成熟樹状細胞を前記疾患と関連した抗原に曝露するステップと、
を含む方法。
【請求項８３】
免疫反応調整剤分子がトル様受容体７の作動薬である、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
免疫反応調整剤分子が、イミダゾキノリンアミン類、イミダゾピリジンアミン類、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン類、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン類、チアゾロおよびオキサゾロキノリンアミン類およびピリジンアミン類、イミダゾナフチリジンアミン類およびテトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン類、およびそれらの薬学的に許容される塩類からなる群から選択される、請求項８２に記載の方法。
【請求項８５】
免疫反応調整剤分子が、イミダゾキノリンアミン類および６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン類、およびそれらの薬学的に許容される塩類からなる群から選択される、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
疾患が腫瘍性疾患であり、抗原が新生細胞由来である、請求項８２に記載の方法。
【請求項８７】
疾患が感染性因子によってひき起こされ、抗原が感染性因子由来である、請求項８２に記載の方法。
【請求項８８】
抗原が組換え由来である、請求項８２に記載の方法。
【請求項８９】
疾患を治療する方法であって、請求項８２に記載の細胞様補助剤の治療有効量をかかる治療を必要とする哺乳動物に投与するステップを含む方法。
【請求項９０】
請求項８２に記載の方法によって調製される細胞様補助剤。
【請求項９１】
疾患を治療する方法であって、トル様受容体６、トル様受容体７、またはトル様受容体８の作動薬である免疫反応調整剤分子で刺激することによって成熟されている形質細胞様樹状細胞の治療有効量をかかる治療を必要とする哺乳動物に投与するステップを含む方法。
【請求項９２】
疾患が腫瘍性疾患である、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
疾患がＴｈ２媒介性疾患である、請求項９１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２００１年８月３０日出願の米国仮特許出願第６０／３１６１４４号、および２００２年４月５日出願の米国仮特許出願第６０／３７０１７７号の利点を請求する。
【背景技術】
【０００２】
樹状細胞は、先天性免疫系と後天性免疫系との間の機能的な架け橋を提供する免疫系の抗原発現細胞である。未成熟樹状細胞は種々の体組織中に存在し、それらは病原体または他の外来抗原に接触しうる。これらの接触により、例えば、ＩＦＮ−αなどのインターフェロン類を含む一部のサイトカインの分泌が誘発される。未成熟樹状細胞は抗原を捕捉し、次いでリンパ組織に移動し、樹状細胞が成熟した後、それらはリンパ球に抗原（または抗原の一部分）を提示する。抗原提示は平行の免疫学的カスケードを誘発し、結果として抗原特異的細胞性免疫反応および抗原特異的体液性免疫反応が生じる。
【０００３】
形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）は、免疫学的チャレンジに応じてＩＦＮ−αを含むインターフェロンの産生および分泌を担う樹状細胞の主要なクラスとして同定されている。免疫反応調整剤（ＩＲＭ）として周知の化合物クラスも、ヒトを含む多くの種におけるＩＦＮ−αを含む種々のサイトカインの産生を誘発する。
【０００４】
一部のＩＲＭは、例えば、米国特許第４，６８９，３３８号；同第４，９２９，６２４号；同第５，２６６，５７５号；同第５，２６８，３７６号；同第５，３５２，７８４号；同第５，３８９，６４０号；同第５，４８２，９３６号；同第５，４９４，９１６号；同第６，１１０，９２９号；同第６，１９４，４２５号；同第４，９８８，８１５号；同第５，１７５，２９６号；同第５，３６７，０７６号；同第５，３９５，９３７号；同第５，６９３，８１１号；同第５，７４１，９０８号；同第５，２３８，９４４号；同第５，９３９，０９０号；同第６，２４５，７７６号；同第６，０３９，９６９号；同第６，０８３，９６９号；同第６，２４５，７７６号；同第６，３３１，５３９号；および同第６，３７６，６６９号；および国際公開第００／７６５０５号；同第００／７６５１８号；同第０２／４６１８８号、同第０２／４６１８９号；同第０２／４６１９０号；同第０２／４６１９１号；同第０２／４６１９２号；同第０２／４６１９３号；および同第０２／４６１９４号に開示されているものなどの小有機分子である。さらなる小分子ＩＲＭとしては、プリン誘導体（米国特許第６，３７６，５０１号および同第６，０２８，０７６号に記載されたものなど）、小複素環化合物（米国特許第６，３２９，３８１号に記載されたものなど）、およびアミド誘導体（米国特許第６，０６９，１４９号に記載されたものなど）が挙げられる。これら小分子ＩＲＭの一部は、例えば、ＴＬＲ−１、ＴＬＲ−２、ＴＬＲ−４、ＴＬＲ−６、ＴＬＲ−７、およびＴＬＲ−８などの１つ以上のトル（Ｔｏｌｌ）様受容体（ＴＬＲ）によって作用しうる。
【０００５】
他のＩＲＭとしては、オリゴヌクレオチド配列などの生物学的大分子が挙げられる。一部のＩＲＭオリゴヌクレオチド配列はシトシン−グアニンジヌクレオチド（ＣｐＧ）を含有し、例えば、米国特許第６，１９４，３８８号；同第６，２０７，６４６号；同第６，２３９，１１６号；同第６，３３９，０６８号；および同第６，４０６，７０５号に記載されている。ＣｐＧは、ＴＬＲ９によって作用することが報告されている。さらに、ＣｐＧ分子を用いて樹状細胞を活性化しうる（例えば、米国特許第６，４２９，１９９号を参照）。他のＩＲＭヌクレオチド配列はＣｐＧを欠き、例えば、国際公開第００／７５３０４号に記載されている。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、インビトロで樹状細胞による抗原提示を誘発する方法であって、（ａ）分離樹状細胞集団を抗原に曝露するステップと；（ｂ）トル様受容体６、トル様受容体７、またはトル様受容体８の作動薬である免疫反応調整剤分子と分離樹状細胞を接触させるステップと；（ｃ）樹状細胞を処理し、抗原を提示させるステップと、を含む方法を提供する。本発明の本態様、およびこれに続く追加のすべての態様において、一部の実施形態の免疫反応調整剤分子はトル様受容体７の作動薬であり、他の実施形態では、免疫反応調整剤分子は、イミダゾキノリンアミン類、イミダゾピリジンアミン類、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン類、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン類、チアゾロおよびオキサゾロキノリンアミン類およびピリジンアミン類、イミダゾナフチリジンアミン類およびテトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン類、およびそれらの薬学的に許容される塩類からなる群から選択される。
【０００７】
別の態様において、本発明は形質細胞様樹状細胞によるサイトカイン産生を検出する方法であって、（ａ）形質細胞様樹状細胞がＩＬ−８、ＩＰ−１０、ＩＬ−６、ＭＩＰ−１α、およびＩＦＮ−ωから選択される１つ以上のサイトカインを産生するように促すために有効な量でトル様受容体６、トル様受容体７、またはトル様受容体８の作動薬である免疫反応調整剤分子と分離形質細胞様樹状細胞を接触させるステップと；（ｂ）樹状細胞によるサイトカインの少なくとも１つの産生を検出するステップと、を含む方法を提供する。
【０００８】
別の態様において、本発明は、形質細胞様樹状細胞による共刺激マーカーの発現を検出する方法であって、（ａ）形質細胞様樹状細胞が１つ以上の共刺激マーカーを発現するように促すために有効な量でトル様受容体６、トル様受容体７、またはトル様受容体８の作動薬である免疫反応調整剤分子と分離形質細胞様樹状細胞を接触させるステップと；（ｂ）形質細胞様樹状細胞による少なくとも１つの共刺激マーカーの発現を検出するステップと、を含む方法を提供する。
【０００９】
別の態様において、本発明は、分離形質細胞様樹状細胞の生存を増強する方法であって、（ａ）形質細胞様樹状細胞の生存を増強するために有効な量でトル様受容体６、トル様受容体７、またはトル様受容体８の作動薬である免疫反応調整剤分子と分離形質細胞様樹状細胞の集団を接触させるステップと；（ｂ）形質細胞様樹状細胞の少なくとも３０％が少なくとも４８時間生存するような条件下に形質細胞様樹状細胞をインキュベートするステップと、を含む方法を提供する。
【００１０】
別の態様において、本発明は、形質細胞様樹状細胞によるケモカイン受容体の発現を検出する方法であって、（ａ）形質細胞様樹状細胞が１つ以上のケモカイン受容体を発現するように促すために有効な量でトル様受容体６、トル様受容体７、またはトル様受容体８の作動薬である免疫反応調整剤分子と分離形質細胞様樹状細胞を接触させるステップと；（ｂ）少なくとも１つのケモカイン受容体の発現を検出するステップと、を含む方法を提供する。
【００１１】
別の態様において、本発明は、形質細胞様樹状細胞によるケモカインの産生を選択的に誘発する化合物を同定する方法であって、（ａ）炎症性サイトカイン産生細胞と形質細胞様樹状細胞の両方を含む細胞の集団を得るステップと；（ｂ）細胞の集団を試験化合物と接触させるステップと；（ｃ）試験化合物と接触した細胞の集団に存在するケモカインの量を測定するステップと；（ｄ）試験化合物と接触した細胞の集団に存在する炎症性サイトカインの量を測定するステップと；（ｅ）細胞の集団に存在する炎症性サイトカインの量よりも少なくとも３倍多い量で試験化合物との接触後にケモカイン受容体が細胞の集団に存在する場合には、ケモカイン受容体の選択的誘導物質としての試験化合物を同定するステップと、を含む方法を提供する。
【００１２】
別の態様において、本発明は、ケモカイン受容体を発現する細胞で豊富化された細胞集団を調製する方法であって、（ａ）形質細胞様樹状細胞が１つ以上のケモカイン受容体を発現するように促すために有効な量でトル様受容体６、トル様受容体７、またはトル様受容体８の作動薬である免疫反応調整剤分子と分離形質細胞様樹状細胞を接触させるステップと；（ｂ）ケモカイン受容体を発現する細胞で細胞集団を豊富化するステップと、を含む方法を提供する。
【００１３】
別の態様において、本発明は、疾患を治療する方法であって、（ａ）形質細胞様樹状細胞が１つ以上のケモカイン受容体を発現するように促すために有効な量でトル様受容体６、トル様受容体７、またはトル様受容体８の作動薬である免疫反応調整剤分子と分離形質細胞様樹状細胞を接触させるステップと；（ｂ）疾患と関連した抗原と形質細胞様樹状細胞の集団を接触させるステップと；（ｃ）少なくとも１つのケモカイン受容体を高レベルで発現する細胞で細胞集団を豊富化するステップと；（ｄ）豊富化した細胞集団を患者に投与するステップと、を含む方法を提供する。
【００１４】
別の態様において、本発明は、疾患を治療するための細胞補助剤を調製する方法であって、（ａ）トル様受容体６、トル様受容体７、またはトル様受容体８の作動薬である免疫反応調整化合物で樹状細胞を処理することによってインビトロで形質細胞様樹状細胞を成熟させるステップと；（ｂ）成熟樹状細胞を前記疾患と関連した抗原に曝露するステップと、を含む方法を提供する。
【００１５】
別の態様において、本発明は、疾患を治療する方法であって、トル様受容体６、トル様受容体７、またはトル様受容体８の作動薬である免疫反応調整化合物で刺激することによって成熟されている形質細胞様樹状細胞の治療有効量をかかる治療を必要とする哺乳動物に投与するステップを含む方法を提供する。
【００１６】
本発明の種々の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明、実施例、特許請求の範囲、および添付の図面を参考にして容易に明らかになるであろう。明細書の全体を通じて一部の箇所において、実施例のリストによって案内が示されている。それぞれの場合において、挙げられたリストは代表的なグループとしてのみ提供され、限定的なリストとして解釈すべきではない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明者らは、一部のトル様受容体（例えば、ＴＬＲ−６およびＴＬＲ−７）の作動薬であるＩＲＭが、ＩＦＮ−αを産生するすでに周知の反応に加えて、ｐＤＣから種々の生物学的反応を誘発しうることを見出した。例えば、ＴＬＲ−６、ＴＬＲ−７、またはＴＬＲ−８の作動薬であることが知られている一部のＩＲＭは、ヒトｐＤＣが、ＩＦＮ−ωおよびヒト誘導性タンパク質（ＩＰ）−１０などのサイトカインを産生するように促しうる。これら同じＩＲＭは、ｐＤＣの（１）生存力、（２）共刺激マーカーの発現、（３）ケモカイン受容体の発現、および（４）抗原提示を増強することもでき、これは抗原提示ｐＤＣとの接触によって誘発されるナイーブＣＤ４+Ｔ細胞によるＩＦＮ−γおよびＩＬ−１０の産生により測定される。
【００１８】
共刺激マーカーまたはケモカイン受容体などのマーカーの発現増大を示す形質細胞様樹状細胞は、細胞集団において豊富化されうる。濃縮にされた細胞集団を用いてインビトロで１つ以上の所望の分子を産生し、その後に治療または予防目的で患者に投与することができる。あるいは、豊富化された細胞集団自体を治療または予防目的で患者に投与することができる。
【００１９】
ＩＲＭ化合物
上述したように、多くのイミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン、チアゾロおよびオキサゾロキノリンアミンおよびピリジンアミン、イミダゾナフチリジンアミンおよびテトラヒドロイミダゾナフチリジンアミンＩＲＭ化合物が、重要な免疫調整活性を示している。発明における使用に適した典型的な免疫反応調整剤化合物としては、以下の式Ｉ〜Ｖのうちの１つによって規定される１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン類
【化１】
2005501550.tif 000002
［式中、
Ｒ11は、炭素原子が１〜１０個のアルキルと、炭素原子が１〜６個のヒドロキシアルキルと、アシルオキシアルキル［ここで、アシルオキシ部分は炭素原子が２〜４個のアルカノイルオキシまたはベンゾイルオキシであり、アルキル部分は１〜６個の炭素原子を含有する］と、ベンジルと、（フェニル）エチルと、フェニルと、からなる群から選択され、前記ベンジル、（フェニル）エチルまたはフェニル置換基が、炭素原子が１〜４個のアルキルと、炭素原子が１〜４個のアルコキシと、ハロゲンと、からなる群から独立して選択される、１つまたは２つの部分によってベンゼン環上で任意に置換され、但し、前記ベンゼン環が前記部分のうちの２つによって置換されている場合、前記部分が両方で６個以下の炭素原子を含有し；
Ｒ21は、水素と、炭素原子が１〜８個のアルキルと、ベンジルと、（フェニル）エチルと、フェニルと、からなる群から選択され、ベンジル、（フェニル）エチルまたはフェニル置換基が、炭素原子が１〜４個のアルキルと、炭素原子が１〜４個のアルコキシと、ハロゲンと、からなる群から独立して選択される、１つまたは２つの部分によってベンゼン環上で任意に置換され、但し、前記ベンゼン環が前記部分のうちの２つによって置換されている場合、前記部分が両方で６個以下の炭素原子を含有し、
各Ｒ1は、炭素原子が１〜４個のアルコキシと、ハロゲンと、炭素原子が１〜４個のアルキルと、からなる群から独立して選択され、ｎは０〜２の整数であり、但し、ｎが２である場合、前記Ｒ1基が組み合わせで６個以下の炭素原子を含有する］；
【化２】
2005501550.tif 000003
［式中、
Ｒ12は、２〜１０個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルケニルと、２〜１０個の炭素原子を含有する、置換された直鎖または分岐鎖のアルケニル［ここで、置換基は、１〜４個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルキルと３〜６個の炭素原子を含有するシクロアルキルとからなる群から選択される］と、１〜４個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルキルによって置換された、３〜６個の炭素原子を含有するシクロアルキルと、からなる群から選択され；
Ｒ22は、水素と、１〜８個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルキルと、ベンジルと、（フェニル）エチルと、フェニルと、からなる群から選択され、ベンジル、（フェニル）エチルまたはフェニル置換基が、１〜４個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルキルと１〜４個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルコキシとハロゲンとからなる群から独立して選択される、１または２つの部分によってベンゼン環上で任意に置換され、但し、ベンゼン環がそのような２つの部分によって置換されている場合、かかる部分が両方で６個以下の炭素原子を含有し；
各Ｒ2は、１〜４個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルコキシと、ハロゲンと、１〜４個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルキルと、からなる群から独立して選択され、ｎは０〜２の整数であり、但し、ｎが２である場合、前記Ｒ2基が組み合わせで６個以下の炭素原子を含有する］；
【化３】
2005501550.tif 000004
［式中、
Ｒ23は、水素と、炭素原子が１〜８個の直鎖または分岐鎖のアルキルと、ベンジルと、（フェニル）エチルと、フェニルと、からなる群から選択され、ベンジル、（フェニル）エチルまたはフェニル置換基が、炭素原子が１〜４個の直鎖または分岐鎖のアルキルと炭素原子が１〜４個の直鎖または分岐鎖のアルコキシとハロゲンとからなる群から独立して選択される、１または２つの部分によってベンゼン環上で任意に置換され、但し、ベンゼン環がそのような２つの部分によって置換されている場合、かかる部分が両方で６個以下の炭素原子を含有し；
各Ｒ3は、炭素原子が１〜４の直鎖または分岐鎖のアルコキシと、ハロゲンと、炭素原子が１〜４個の直鎖または分岐鎖のアルキルと、からなる群から独立して選択され、ｎは０〜２の整数であり、但し、ｎが２である場合、前記Ｒ3基が組み合わせで６個以下の炭素原子を含有する］；
【化４】
2005501550.tif 000005
［式中、
Ｒ14は、−ＣＨＲxＲy［式中、Ｒyは水素または炭素−炭素結合であり、但し、Ｒyが水素である場合、Ｒxは、炭素原子が１〜４個のアルコキシ、炭素原子が１〜４個のヒドロキシアルコキシ、炭素原子が２〜１０個の１−アルキニル、テトラヒドロピラニル、アルコキシアルキル［ここで、アルコキシ部分は１〜４個の炭素原子を含有し、アルキル部分は１〜４個の炭素原子を含有する］、２−ピリジル、３−ピリジルまたは４−ピリジルであり、さらに、Ｒyが炭素−炭素結合である場合、ＲyとＲxとの組み合わせで、ヒドロキシと炭素原子が１〜４個のヒドロキシアルキルとからなる群から独立して選択される１つ以上の置換基で任意に置換されたテトラヒドロフラニル基が形成される］であり；
Ｒ24は、水素と、炭素原子が１〜４個のアルキルと、フェニルと、置換されたフェニル［ここで、置換基は、炭素原子が１〜４個のアルキルと、炭素原子が１〜４個のアルコキシと、ハロゲンと、からなる群から選択される］と、からなる群から選択され；
Ｒ4は、水素と、１〜４個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルコキシと、ハロゲンと、１〜４個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルキルと、からなる群から選択される］；
【化５】
2005501550.tif 000006
［式中、
Ｒ15は、水素と、１〜１０個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルキルおよび１〜１０個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖の置換されたアルキル［ここで、置換基は、３〜６個の炭素原子を含有するシクロアルキルと、１〜４個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルキルによって置換された、３〜６個の炭素原子を含有するシクロアルキルと、からなる群から選択される］と、２〜１０個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルケニルおよび２〜１０個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖の置換されたアルケニル［ここで、置換基は３〜６個の炭素原子を含有するシクロアルキルと、１〜４個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルキルによって置換された、３〜６個の炭素原子を含有するシクロアルキルと、からなる群から選択される］と、炭素原子が１〜６個のヒドロキシアルキルと、アルコキシアルキル［ここで、アルコキシ部分は１〜４個の炭素原子を含有し、アルキル部分は１〜６個の炭素原子を含有する］と、アシルオキシアルキル［ここで、アシルオキシ部分は、炭素原子が２〜４個のアルカノイルオキシまたはベンゾイルオキシであり、アルキル部分は１〜６個の炭素原子を含有する］と、ベンジルと、（フェニル）エチルと、フェニルと、からなる群から選択され、前記ベンジル、（フェニル）エチルまたはフェニル置換基が、炭素原子が１〜４個のアルキルと、炭素原子が１〜４個のアルコキシと、ハロゲンと、からなる群から独立して選択される１つまたは２つの部分によってベンゼン環上で任意に置換され、但し、前記ベンゼン環が前記部分のうちの２つによって置換されている場合、かかる部分が両方で６個以下の炭素原子を含有し；
Ｒ25は、
【化６】
2005501550.tif 000007
［式中、
ＲSおよびＲTは、水素と、炭素原子が１〜４個のアルキルと、フェニルと、置換されたフェニル［ここで、置換基は、炭素原子が１〜４個のアルキルと、炭素原子が１〜４個のアルコキシと、ハロゲンと、からなる群から選択される］と、からなる群から独立して選択され；
Ｘは、１〜４個の炭素原子を含有するアルコキシと、アルコキシアルキル［ここで、アルコキシ部分は１〜４個の炭素原子を含有し、アルキル部分は１〜４個の炭素原子を含有する］と、炭素原子が１〜４個のヒドロキシアルキルと、炭素原子が１〜４個のハロアルキルと、アルキルアミド［ここで、アルキル基は１〜４個の炭素原子を含有する］と、アミノと、置換されたアミノ［ここで、置換基は、炭素原子が１〜４個のアルキルまたはヒドロキシアルキルである］と、アジドと、クロロと、ヒドロキシと、１−モルホリノと、１−ピロリジノと、炭素原子が１〜４のアルキルチオと、からなる群から選択される］；
Ｒ5は、水素と、１〜４個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルコキシと、ハロゲンと、１〜４個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルキルと、からなる群から選択される］；
および上記のうちのいずれかの薬学的に許容される塩が挙げられる。
【００２０】
適切な６，７縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミンＩＲＭ化合物は、以下の式ＶＩ
【化７】
2005501550.tif 000008
［式中、
ｍは、１、２、または３であり、
Ｒ16は、水素と、炭素原子が３、４、または５個の環式アルキルと、１〜１０個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルキルと、１〜１０個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖の置換されたアルキル［ここで、置換基は、３〜６個の炭素原子を含有するシクロアルキルと、１〜４個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルキルによって置換された、３〜６個の炭素原子を含有するシクロアルキルと、からなる群から選択される］と、１〜１０個の炭素原子と１個またはそれ以上のフッ素原子または塩素原子とを含有するフルオロアルキルまたはクロロアルキルと、２〜１０個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルケニルおよび２〜１０個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖の置換されたアルケニル［ここで、置換基は、３〜６個の炭素原子を含有するシクロアルキルと、１〜４個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルキルによって置換された、３〜６個の炭素原子を含有するシクロアルキルと、からなる群から選択される］と、炭素原子が１〜６個のヒドロキシアルキルと、アルコキシアルキル［ここで、アルコキシ部分は１〜４個の炭素原子を含有し、アルキル部分は１〜６個の炭素原子を含有する］と、アシルオキシアルキル［ここで、アシルオキシ部分は炭素原子が２〜４個のアルカノイルオキシまたはベンゾイルオキシであり、アルキル部分は１〜６個の炭素原子を含有する］（但し、上記のアルキル基、置換されたアルキル基、アルケニル基、置換されたアルケニル基、ヒドロキシアルキル基、アルコキシアルキル基またはアシルオキシアルキル基はいずれも、窒素原子に直接結合して完全に炭素置換された炭素原子を含むことはない）と、ベンジルと、（フェニル）エチルと、フェニル［前記ベンジル、（フェニル）エチルまたはフェニル置換基が、炭素原子が１〜４個のアルキルと、炭素原子が１〜４個のアルコキシと、ハロゲンと、からなる群から独立して選択される１つまたは２つの部分によってベンゼン環上で任意に置換され、但し、前記ベンゼン環が前記部分のうちの２つによって置換されている場合、かかる部分が両方で６個以下の炭素原子を含有する］と、
−ＣＨＲxＲy
［式中、
Ｒyは水素または炭素−炭素結合であり、但し、Ｒyが水素である場合、Ｒxは、炭素原子が１〜４個のアルコキシ、炭素原子が１〜４個のヒドロキシアルコキシ、炭素原子が２〜１０個の１−アルキニル、テトラヒドロピラニル、アルコキシアルキル［ここで、アルコキシ部分は１〜４個の炭素原子を含有し、アルキル部分は１〜４個の炭素原子を含有する］、２−ピリジル、３−ピリジルまたは４−ピリジルであり、さらに、Ｒyが炭素−炭素結合である場合、ＲyとＲxとの組み合わせで、ヒドロキシと炭素原子が１〜４個のヒドロキシアルキルとからなる群から独立して選択される１つまたはそれ以上の置換基で任意に置換されたテトラヒドロフラニル基が形成される］と、からなる群から選択され、
Ｒ26は、水素と、１〜８個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルキルと、１〜６個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のヒドロキシアルキルと、モルホリノアルキルと、ベンジルと、（フェニル）エチルと、フェニル［ベンジル、（フェニル）エチルまたはフェニル置換基が、メチルと、メトキシと、ハロゲンと、からなる群から選択される部分によってベンゼン環上で任意に置換される］と；
−Ｃ（ＲS）（ＲT）（Ｘ）［式中、ＲSおよびＲTは、水素と、炭素原子が１〜４個のアルキルと、フェニルと、置換されたフェニル［但し、置換基は、炭素原子が１〜４個のアルキルと、炭素原子が１〜４個のアルコキシと、ハロゲンと、からなる群から選択される］と、からなる群から独立して選択され、
Ｘは、１〜４個の炭素原子を含有するアルコキシと、アルコキシアルキル［ここで、アルコキシ部分は１〜４個の炭素原子を含有し、アルキル部分は１〜４個の炭素原子を含有する］と、炭素原子が１〜４個のハロアルキルと、アルキルアミド［ここで、アルキル基は１〜４個の炭素原子を含有する］と、アミノと、置換されたアミノ［置換基は１〜４個の炭素原子のアルキルまたはヒドロキシアルキルである］と、アジドと、炭素原子が１〜４個のアルキルチオと、モルホリノアルキル［アルキル部分は１〜４個の炭素原子を含有する］と、からなる群から選択される］と、からなる群から選択され、
Ｒ6は、水素と、フルオロと、クロロと、１〜４個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルキルと、１〜４個の炭素原子と少なくとも１個のフッ素原子または塩素原子とを含有する直鎖または分岐鎖のフルオロアルキルまたはクロロアルキルと、からなる群から選択される］；
およびこれらの薬学的に許容される塩類によって規定される。
【００２１】
適切なイミダゾピリジンアミンＩＲＭ化合物は、以下の式ＶＩＩ
【化８】
2005501550.tif 000009
［式中、
Ｒ17は、水素と、−ＣＨ2ＲW［式中、Ｒwは、１〜１０個の炭素原子を含有する、直鎖、分岐鎖または環式のアルキル、２〜１０個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルケニル、１〜６個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル［ここで、アルコキシ部分は１〜４個の炭素原子を含有し、アルキル部分は１〜６個の炭素原子を含有する］およびフェニルエチルからなる群から選択される］と、−ＣＨ＝ＣＲZＲZ［式中、各ＲZが独立して、炭素原子が１〜６個で、直鎖、分岐鎖または環式のアルキルである］と、からなる群から選択され；
Ｒ27は、水素と、１〜８個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のアルキルと、１〜６個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖のヒドロキシアルキルと、アルコキシアルキル［ここで、アルコキシ部分は１〜４個の炭素原子を含有し、アルキル部分は１〜６個の炭素原子を含有する］と、ベンジルと、（フェニル）エチルと、フェニル［ベンジル、（フェニル）エチルまたはフェニル置換基が、メチルと、メトキシと、ハロゲンと、からなる群から選択される部分によってベンゼン環上で任意に置換される］と、モルホリノアルキル［ここで、アルキル部分は１〜４個の炭素原子を含有する］と、からなる群から選択され；
Ｒ67およびＲ77は、水素と、１〜５個の炭素原子のアルキルと、からなる群から独立して選択され、但し、Ｒ67およびＲ77は組み合わせで６個以下の炭素原子を含有し、さらに、Ｒ77が水素である場合、Ｒ67は水素以外であってＲ27は水素またはモルホリノアルキル以外であり、さらに、Ｒ67が水素である場合、Ｒ77およびＲ27は水素以外である］；
およびこれらの薬学的に許容される塩類によって規定される。
【００２２】
適切な１，２−架橋イミダゾキノリンアミンＩＲＭ化合物は、以下の式ＶＩＩＩ
【化９】
2005501550.tif 000010
［式中、
Ｚは、
−（ＣＨ2）p−［式中、ｐは１〜４である］と、
−（ＣＨ2）a−Ｃ（ＲDＲE）（ＣＨ2）b−［式中、ａおよびｂは整数であり、ａ＋ｂは０〜３であり、ＲDは水素または炭素原子が１〜４個のアルキルであり、ＲEは、炭素原子が１〜４個のアルキルと、ヒドロキシと、−ＯＲF［式中、ＲFは炭素原子が１〜４個のアルキルである］と、−ＮＲGＲ’G［式中、ＲGおよびＲ’Gは独立して水素または炭素原子が１〜４個のアルキルである］と、からなる群から選択される］と；
−（ＣＨ2）a−（Ｙ）−（ＣＨ2）b−［式中、ａおよびｂは整数であり、ａ＋ｂは０〜３であり、Ｙは、Ｏ、Ｓまたは−ＮＲJ−［式中、ＲJは水素または１〜４個の炭素原子のアルキルである］である］と、からなる群から選択され；
ｑは０または１であり；
Ｒ8は、炭素原子が１〜４個のアルキルと、炭素原子が１〜４個のアルコキシと、ハロゲンと、からなる群から選択される］
およびこれらの薬学的に許容される塩類によって規定される。
【００２３】
適切なチアゾロ−およびオキサゾロ−キノリンアミン化合物およびピリジンアミン化合物としては、以下の式ＩＸによって規定される化合物
【化１０】
2005501550.tif 000011
［式中、
Ｒ19は、酸素と、硫黄と、セレンと、からなる群から選択され；
Ｒ29は；
−水素；
−アルキル；
−アルキル−ＯＨ；
−ハロアルキル；
−アルケニル；
−アルキル−Ｘ−アルキル；
−アルキル−Ｘ−アルケニル；
−アルケニル−Ｘ−アルキル；
−アルケニル−Ｘ−アルケニル；
−アルキル−Ｎ（Ｒ59）2；
−アルキル−Ｎ3と；
−アルキル−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ59）2；
−ヘテロシクリル；
−アルキル−Ｘ−ヘテロシクリル；
−アルケニル−Ｘ−ヘテロシクリル；
−アリール；
−アルキル−Ｘ−アリール；
−アルケニル−Ｘ−アリール；
−ヘテロアリール；
−アルキル−Ｘ−ヘテロアリール；および
−アルケニル−Ｘ−ヘテロアリールからなる群から選択され；
Ｒ39およびＲ49はそれぞれ独立して、
−水素；
−Ｘ−アルキル；
−ハロ；
−ハロアルキル；
−Ｎ（Ｒ59）2；
であるか、あるいは、Ｒ39とＲ49との組み合わせで、芳香族、ヘテロ芳香族、シクロアルキルまたはヘテロ環の縮合環が形成され；
Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ59−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、および結合からなる群から選択され；
各Ｒ59は独立して、ＨまたはＣ1-8アルキルである］
およびそれらの薬学的に許容される塩類が挙げられる。
【００２４】
適切なイミダゾナフチリジンＩＲＭ化合物およびテトラヒドロイミダゾナフチリジンＩＲＭ化合物は、以下の式ＸおよびＸＩによって規定される化合物
【化１１】
2005501550.tif 000012
［式中、
Ａは、＝Ｎ−ＣＲ＝ＣＲ−ＣＲ＝；＝ＣＲ−Ｎ＝ＣＲ−ＣＲ＝；＝ＣＲ−ＣＲ＝Ｎ−ＣＲ＝；または
＝ＣＲ−ＣＲ＝ＣＲ−Ｎ＝であり；
Ｒ110は、
−水素；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−Ｏ−Ｃ1-20アルキル；
−Ｏ−（Ｃ1-20アルキル）0-1−アリール；
−Ｏ−（Ｃ1-20アルキル）0-1−ヘテロアリール；
−Ｏ−（Ｃ1-20アルキル）0-1−ヘテロシクリル；
−Ｃ1-20アルコキシカルボニル；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −Ｃ1-20アルキル；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（Ｃ1-20アルキル）0-1−アリール；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（Ｃ1-20アルキル）0-1−ヘテロアリール；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（Ｃ1-20アルキル）0-1−ヘテロシクリル；
−Ｎ（Ｒ310）2；
−Ｎ3；
オキソ；
−ハロゲン；
−ＮＯ2；
−ＯＨ；および
−ＳＨ
からなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換されていない、または置換されている、
−Ｃ1-20アルキルまたはＣ2-20アルケニル；および
Ｑが−ＣＯ−または−ＳＯ2−であり；Ｘが結合であり；−Ｏ−または−ＮＲ310−およびＲ410がアリール；ヘテロアリール；ヘテロシクリル；または置換されていない、または、
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−Ｏ−Ｃ1-20アルキル；
−Ｏ−（Ｃ1-20アルキル）0-1−アリール；
−Ｏ−（Ｃ1-20アルキル）0-1−ヘテロアリール；
−Ｏ−（Ｃ1-20アルキル）0-1−ヘテロシクリル；
−Ｃ1-20アルコキシカルボニル；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −Ｃ1-20アルキル；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（Ｃ1-20アルキル）0-1−アリール；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（Ｃ1-20アルキル）0-1−ヘテロアリール；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（Ｃ1-20アルキル）0-1−ヘテロシクリル；
−Ｎ（Ｒ310）2；
−ＮＲ310−ＣＯ−Ｏ−Ｃ1-20アルキル；
−Ｎ3；
オキソ；
−ハロゲン；
−ＮＯ2；
−ＯＨ；および
−ＳＨ
からなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換されている−Ｃ1-20アルキルまたは−Ｃ2-20アルケニルである、
−Ｃ1-20アルキル−ＮＲ310−Ｑ−Ｘ−Ｒ410または−Ｃ2-20アルケニル−ＮＲ310−Ｑ−Ｘ−Ｒ410
または、Ｒ410が、
【化１２】
2005501550.tif 000013
［式中、Ｙが−Ｎ−または−ＣＲ−であり；
Ｒ210が
−水素；
−Ｃ1-10アルキル；
−Ｃ2-10アルケニル；
−アリール；
−Ｃ1-10アルキル−Ｏ−Ｃ1-10アルキル；
−Ｃ1-10アルキル−Ｏ−Ｃ2-10アルケニル；および
−ＯＨ；
−ハロゲン；
−Ｎ（Ｒ310）2；
−ＣＯ−Ｎ（Ｒ310）2；
−ＣＯ−Ｃ1-10アルキル；
−Ｎ3；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−ＣＯ−アリール；および
−ＣＯ−へテロアリール
からなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換される
−Ｃ1-10アルキルまたはＣ2-10アルケニル
からなる群から選択され；
各Ｒ310は、水素およびＣ1-10アルキルからなる群から独立して選択され；
各Ｒは、水素、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10アルコキシ、ハロゲン、およびトリフルオロメチルからなる群から独立して選択され、
【化１３】
2005501550.tif 000014
［式中、
Ｂは、−ＮＲ−Ｃ（Ｒ）2−Ｃ（Ｒ）2−Ｃ（Ｒ）2−；−Ｃ（Ｒ）2−ＮＲ−Ｃ（Ｒ）2−Ｃ（Ｒ）2−；
−Ｃ（Ｒ）2−Ｃ（Ｒ）2−ＮＲ−Ｃ（Ｒ）2−または−Ｃ（Ｒ）2−Ｃ（Ｒ）2−Ｃ（Ｒ）2−ＮＲ−であり；
Ｒ111は、
−水素；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−Ｏ−Ｃ1-20アルキル；
−Ｏ−（Ｃ1-20アルキル）0-1−アリール；
−Ｏ−（Ｃ1-20アルキル）0-1−ヘテロアリール；
−Ｏ−（Ｃ1-20アルキル）0-1−ヘテロシクリル；
−Ｃ1-20アルコキシカルボニル；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −Ｃ1-20アルキル；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（Ｃ1-20アルキル）0-1−アリール；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（Ｃ1-20アルキル）0-1−ヘテロアリール；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（Ｃ1-20アルキル）0-1−ヘテロシクリル；
−Ｎ（Ｒ311）2；
−Ｎ3；
オキソ；
−ハロゲン；
−ＮＯ2；
−ＯＨ；および
−ＳＨ
からなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換されていない、または置換されている、
−Ｃ1-20アルキルまたはＣ2-20アルケニル；および
Ｑが−ＣＯ−または−ＳＯ2−であり；Ｘが結合であり；−Ｏ−または−ＮＲ311−およびＲ411がアリール；ヘテロアリール；ヘテロシクリル；または置換されていない、または、
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−Ｏ−Ｃ1-20アルキル；
−Ｏ−（Ｃ1-20アルキル）0-1−アリール；
−Ｏ−（Ｃ1-20アルキル）0-1−ヘテロアリール；
−Ｏ−（Ｃ1-20アルキル）0-1−ヘテロシクリル；
−Ｃ1-20アルコキシカルボニル；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −Ｃ1-20アルキル；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（Ｃ1-20アルキル）0-1−アリール；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（Ｃ1-20アルキル）0-1−ヘテロアリール；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（Ｃ1-20アルキル）0-1−ヘテロシクリル；
−Ｎ（Ｒ311）2；
−Ｎ3；
オキソ；
−ハロゲン；
−ＮＯ2；
−ＯＨ；および
−ＳＨ
からなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換されている−Ｃ1-20アルキルまたは−Ｃ2-20アルケニルである、
−Ｃ1-20アルキル−ＮＲ311−Ｑ−Ｘ−Ｒ411または−Ｃ2-20アルケニル−ＮＲ311−Ｑ−Ｘ−Ｒ411
または、Ｒ411が、
【化１４】
2005501550.tif 000015
［式中、Ｙが−Ｎ−または−ＣＲ−であり；
Ｒ211が
−水素；
−Ｃ1-10アルキル；
−Ｃ2-10アルケニル；
−アリール；
−Ｃ1-10アルキル−Ｏ−Ｃ1-10−アルキル；
−Ｃ1-10アルキル−Ｏ−Ｃ2-10アルケニル；および
−ＯＨ；
−ハロゲン；
−Ｎ（Ｒ311）2；
−ＣＯ−Ｎ（Ｒ311）2；
−ＣＯ−Ｃ1-10アルキル；
−Ｎ3；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−ＣＯ−アリール；および
−ＣＯ−へテロアリール
からなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換される
−Ｃ1-10アルキルまたはＣ2-10アルケニル
からなる群から選択され；
各Ｒ311は、水素およびＣ1-10アルキルからなる群から独立して選択され；
各Ｒは、水素、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10アルコキシ、ハロゲン、およびトリフルオロメチルからなる群から独立して選択される］
およびそれらの薬学的に許容される塩類である。
【００２５】
追加の好ましい１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン類およびテトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン類としては、以下の式ＸＩＩ、ＸＩＩＩ、およびＸＩＶによって規定される化合物
【化１５】
2005501550.tif 000016
［式中、
Ｒ112は、Ｒ412がアリール、ヘテロアリール、アルキルまたはアルケニルであり、そのそれぞれが、
−アルキル；
−アルケニル；
−アルキニル；
−（アルキル）0-1−アリール；
−（アルキル）0-1−（置換アリール）；
−（アルキル）0-1−へテロアリール；
−（アルキル）0-1−（置換へテロアリール）；
−Ｏ−アルキル；
−Ｏ−（アルキル）0-1−アリール；
−Ｏ−（アルキル）0-1−（置換アリール）；
−Ｏ−（アルキル）0-1−ヘテロアリール；
−Ｏ−（アルキル）0-1−（置換ヘテロアリール）；
−ＣＯ−アリール；
−ＣＯ−（置換アリール）；
−ＣＯ−ヘテロアリール；
−ＣＯ−（置換ヘテロアリール）；
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ｏ−アルキル；
−ＣＯ−アルキル；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −アルキル；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（アルキル）0-1−アリール；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（アルキル）0-1−（置換アリール）；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（アルキル）0-1−ヘテロアリール；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（アルキル）0-1−（置換ヘテロアリール）；
−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ312）2；
−ＮＲ312−ＣＯ−Ｏ−アルキル；
−Ｎ3；
−ハロゲン；
−ＮＯ2；
−ＣＮ；
−ハロアルキル；
−Ｏ−ハロアルキル；
−ＣＯ−ハロアルキル；
−ＯＨ；
−ＳＨ；およびアルキル、アルケニル、またはヘテロシクリルの場合、オキソ；
からなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換されていなくても、または置換されていてもよい、−アルキル−ＮＲ312−ＣＯ−Ｒ412または−アルケニル−ＮＲ312−ＣＯ−Ｒ412であり、または、Ｒ412が、
【化１６】
2005501550.tif 000017
［式中、Ｒ512が、アリール、（置換アリール）、ヘテロアリール、（置換へテロアリール）、ヘテロシクリル、または（置換へテロシクリル）基であり；
Ｒ212は、
−水素
−アルキル；
−アルケニル；
−アリール；
−（置換アリール）；
−へテロアリール；
−（置換へテロアリール）；
−へテロシクリル；
−（置換へテロシクリル）；
−アルキル−Ｏ−アルキル；
−アルキル−Ｏ−アルケニル；および
−ＯＨ；
−水素；
−Ｎ（Ｒ312）2；
−ＣＯ−Ｃ1-10アルキル；
−ＣＯ−Ｏ−Ｃ1-10アルキル；
−Ｎ３；
−アリール；
−（置換アリール）；
−ヘテロアリール；
−（置換ヘテロアリール）；
−へテロシクリル；
−（置換ヘテロシクリル）；
−ＣＯ−アリール；および
−ＣＯ−ヘテロアリール
からなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換されている
−アルキルまたはアルケニル
からなる群から選択され；
各Ｒ312は、水素；Ｃ1-10アルキル−へテロアリール；Ｃ1-10アルキル−（置換へテロアリール）；Ｃ1-10アルキル−アリール；Ｃ1-10アルキル−（置換アリール）、およびＣ1-10アルキルからなる群から独立して選択され；
ｖは、０〜４であり；
存在する各Ｒ12は、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10アルコキシ、ハロゲン、およびトリフルオロメチルからなる群から独立して選択され；
【化１７】
2005501550.tif 000018
［式中、
Ｒ113は、−アルキル−ＮＲ313−ＳＯ2−Ｘ−Ｒ413または−アルケニル−ＮＲ313−ＳＯ2−Ｘ−Ｒ413であり；
Ｘは結合または−ＮＲ513−であり；
Ｒ413は、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アルキル、またはアルケニルであり、そのそれぞれが、
−アルキル；
−アルケニル；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−置換シクロアルキル；
−置換アリール；
−置換へテロアリール；
−置換へテロシクリル；
−Ｏ−アルキル；
−Ｏ−（アルキル）0-1−アリール；
−Ｏ−（アルキル）0-1−置換アリール；
−Ｏ−（アルキル）0-1−ヘテロアリール；
−Ｏ−（アルキル）0-1−置換ヘテロアリール；
−Ｏ−（アルキル）0-1−ヘテロシクリル；
−Ｏ−（アルキル）0-1−置換ヘテロシクリル；
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ｏ−アルキル
−ＣＯ−アルキル；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −アルキル；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（アルキル）0-1−アリール；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（アルキル）0-1−置換アリール；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（アルキル）0-1−ヘテロアリール；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（アルキル）0-1−置換ヘテロアリール；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（アルキル）0-1−ヘテロシクリル；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（アルキル）0-1−置換ヘテロシクリル；
−（アルキル）0-1−ＮＲ313Ｒ313；
−（アルキル）0-1−ＮＲ313−ＣＯ−Ｏ−アルキル；
−（アルキル）0-1−ＮＲ313−ＣＯ−アルキル；
−（アルキル）0-1−ＮＲ313−ＣＯ−アリール；
−（アルキル）0-1−ＮＲ313−ＣＯ−置換アリール；
−（アルキル）0-1−ＮＲ313−ＣＯ−ヘテロアリール；
−（アルキル）0-1−ＮＲ313−ＣＯ−置換ヘテロアリール；
−Ｎ3；
−ハロゲン；
−ハロアルキル；
−ハロアルコキシ；
−ＣＯ−ハロアルキル；
−ＣＯ−ハロアルコキシ；
−ＮＯ2；
−ＣＮ；
−ＯＨ；
−ＳＨ；およびアルキル、アルケニル、またはヘテロシクリルの場合、オキソ
からなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換されていなくてもよく、または置換されていてもよい；
Ｒ213は、
−水素
−アルキル；
−アルケニル；
−アリール；
−置換アリール；
−へテロアリール；
−置換へテロアリール；
−アルキル−Ｏ−アルキル；
−アルキル−Ｏ−アルケニル；および
−ＯＨ；
−ハロゲン；
−Ｎ（Ｒ313）2；
−ＣＯ−Ｎ（Ｒ313）2；
−ＣＯ−Ｃ1-10アルキル；
−ＣＯ−Ｏ−Ｃ1-10アルキル；
−Ｎ３；
−アリール；
−置換アリール；
−ヘテロアリール；
−置換へテロアリール；
−へテロシクリル；
−置換へテロシクリル；
−ＣＯ−アリール；
−ＣＯ−（置換アリール）；
−ＣＯ−へテロアリール；および
−ＣＯ−（置換へテロアリール）
からなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換されている
−アルキルまたはアルケニル
からなる群から選択され；
各Ｒ313は、水素およびＣ1-10アルキルからなる群から独立して選択され；
Ｒ513は、水素およびＣ1-10アルキルからなる群から選択され、またはＲ413およびＲ513は結合し、複素３〜７員環式または置換複素環式環を形成することができ；
ｖは、０〜４であり、
存在する各Ｒ13は、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10アルコキシ、ハロゲン、およびトリフルオロメチルからなる群から独立して選択され；
【化１８】
2005501550.tif 000019
［式中、
Ｒ114は、−アルキル−ＮＲ314−ＣＹ−ＮＲ514-−Ｘ−Ｒ414または
−アルケニル−ＮＲ314−ＣＹ−  ＮＲ514-−Ｘ−  Ｒ414であり、
式中、
Ｙは、＝０または＝Ｓであり；
Ｘは、結合、−ＣＯ−、または−ＳＯ2−であり；
Ｒ414は、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アルキル、またはアルケニルであり、そのそれぞれが、
−アルキル；
−アルケニル；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−置換アリール；
−置換へテロアリール；
−置換へテロシクリル；
−Ｏ−アルキル；
−Ｏ−（アルキル）0-1−アリール；
−Ｏ−（アルキル）0-1−置換アリール；
−Ｏ−（アルキル）0-1−ヘテロアリール；
−Ｏ−（アルキル）0-1−置換ヘテロアリール；
−Ｏ−（アルキル）0-1−ヘテロシクリル；
−Ｏ−（アルキル）0-1−置換ヘテロシクリル；
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ｏ−アルキル
−ＣＯ−アルキル；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −アルキル；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（アルキル）0-1−アリール；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（アルキル）0-1−置換アリール；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（アルキル）0-1−ヘテロアリール；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（アルキル）0-1−置換ヘテロアリール；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（アルキル）0-1−ヘテロシクリル；
−Ｓ（Ｏ）0-2 −（アルキル）0-1−置換ヘテロシクリル；
−（アルキル）0-1−ＮＲ314Ｒ314；
−（アルキル）0-1−ＮＲ314−ＣＯ−Ｏ−アルキル；
−（アルキル）0-1−ＮＲ314−ＣＯ−アルキル；
−（アルキル）0-1−ＮＲ314−ＣＯ−アリール；
−（アルキル）0-1−ＮＲ314−ＣＯ−置換アリール；
−（アルキル）0-1−ＮＲ314−ＣＯ−ヘテロアリール；
−（アルキル）0-1−ＮＲ314−ＣＯ−置換ヘテロアリール；
−Ｎ3；
−ハロゲン；
−ハロアルキル；
−ハロアルコキシ；
−ＣＯ−ハロアルコキシ；
−ＮＯ2；
−ＣＮ；
−ＯＨ；
−ＳＨ；およびアルキル、アルケニル、またはヘテロシクリルの場合、オキソ
からなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換されていなくてもよく、または置換されていてもよく；
但し、Ｘが結合である場合、Ｒ414は追加的に水素であることができ；
Ｒ214は、
−水素
−アルキル；
−アルケニル；
−アリール；
−置換アリール；
−へテロアリール；
−置換へテロアリール；
−アルキル−Ｏ−アルキル；
−アルキル−Ｏ−アルケニル；および
−ＯＨ；
−ハロゲン；
−Ｎ（Ｒ314）2；
−ＣＯ−Ｎ（Ｒ314）2；
−ＣＯ−Ｃ1-10アルキル；
−ＣＯ−Ｏ−Ｃ1-10アルキル；
−Ｎ3；
−アリール；
−置換アリール；
−ヘテロアリール；
−置換へテロアリール；
−へテロシクリル；
−置換へテロシクリル；
−ＣＯ−アリール；
−ＣＯ−（置換アリール）；
−ＣＯ−へテロアリール；および
−ＣＯ−（置換へテロアリール）
からなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換されている
−アルキルまたはアルケニル
からなる群から選択され；
各Ｒ314は、水素およびＣ1-10アルキルからなる群から独立して選択され；
Ｒ514は、水素およびＣ1-10アルキルからなる群から選択され、またはＲ414およびＲ514は結合し、複素３〜７員環式または置換複素環式環を形成することができ；
ｖは、０〜４であり、
存在する各Ｒ14は、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10アルコキシ、ハロゲン、およびトリフルオロメチルからなる群から独立して選択される］
およびそれらの薬学的に許容される塩類が挙げられる。
【００２６】
追加の適切な１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン類およびテトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン類としては、以下の式ＸＶ、ＸＶＩ、ＸＶＩＩ、ＸＶＩＩＩ、ＸＩＸ、ＸＸ、ＸＸＩ、ＸＸＩＩ、ＸＸＩＩＩ、ＸＸＩＶ、ＸＸＶ、およびＸＸＶＩによって規定される化合物
【化１９】
2005501550.tif 000020
［式中、Ｘは−ＣＨＲ515−、−ＣＨＲ515−アルキル−、または−ＣＨＲ515−アルケニル−であり；
Ｒ115は、
−Ｒ415−ＣＲ315−Ｚ−Ｒ615−アルキル；
−Ｒ415−ＣＲ315−Ｚ−Ｒ615−アルケニル；
−Ｒ415−ＣＲ315−Ｚ−Ｒ615−アリール；
−Ｒ415−ＣＲ315−Ｚ−Ｒ615−へテロアリール；
−Ｒ415−ＣＲ315−Ｚ−Ｒ615−ヘテロシクリル；
−Ｒ415−ＣＲ315−Ｚ−Ｈ；
−Ｒ415−ＮＲ715−ＣＲ315−Ｒ615−アルキル；
−Ｒ415−ＮＲ715−ＣＲ315−Ｒ615−アルケニル；
−Ｒ415−ＮＲ715−ＣＲ315−Ｒ615−アリール；
−Ｒ415−ＮＲ715−ＣＲ315−Ｒ615−へテロアリール；
−Ｒ415−ＮＲ715−ＣＲ315−Ｒ615−へテロシクリル；および
−Ｒ415−ＮＲ715−ＣＲ315−Ｒ815、からなる群から選択され；
Ｚは、−ＮＲ515−、−Ｏ−、または−Ｓ−であり；
Ｒ215は、
−水素；
−アルキル；
−アルケニル；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−アルキル−Ｙ−アルキル；
−アルキル−Ｙ−アルケニル；
−アルキル−Ｙ−アリール；および
−ＯＨ；
−ハロゲン；
−Ｎ（Ｒ515）2；
−ＣＯ−Ｎ（Ｒ515）2；
−ＣＯ−Ｃ1-10アルキル；
−ＣＯ−Ｏ−Ｃ1-10アルキル；
−Ｎ3；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−ＣＯ−アリール；および
−ＣＯ−ヘテロアリールからなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換された
−アルキルまたはアルケニルからなる群から選択され；
Ｒ315は、＝Ｏまたは＝Ｓであり；
Ｒ415は、１個以上の−Ｏ−基によって中断されうるアルキルまたはアルケニルであり；
各Ｒ515は、独立してＨまたはＣ1-10アルキルであり；
Ｒ615は、１個以上の−Ｏ−基によって中断されうる結合、アルキル、またはアルケニルであり；
Ｒ715は、Ｈ、Ｃ1-10アルキル、またはアリールアルキルであり；またはＲ415およびＲ715は結合して環を形成することができ；
Ｒ815は、ＨまたはＣ1-10アルキルであり；またはＲ715およびＲ815は結合して環を形成することができ；
Ｙは、−Ｏ−または−Ｓ（Ｏ）0-2−であり；
ｖは、０〜４であり；および
存在する各Ｒ15は、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10アルコキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、およびトリフルオロメチルからなる群から独立して選択され］；
【化２０】
2005501550.tif 000021
［式中、Ｘは−ＣＨＲ516−、−ＣＨＲ516−アルキル−、または−ＣＨＲ516−アルケニル−であり；
Ｒ116は、
−Ｒ416−ＣＲ316−Ｚ−Ｒ616−アルキル；
−Ｒ416−ＣＲ316−Ｚ−Ｒ616−アルケニル；
−Ｒ416−ＣＲ316−Ｚ−Ｒ616−アリール；
−Ｒ416−ＣＲ316−Ｚ−Ｒ616−へテロアリール；
−Ｒ416−ＣＲ316−Ｚ−Ｒ616−ヘテロシクリル；
−Ｒ416−ＣＲ316−Ｚ−Ｈ；
−Ｒ416−ＮＲ716−ＣＲ316−Ｒ616−アルキル；
−Ｒ416−ＮＲ716−ＣＲ316−Ｒ616−アルケニル；
−Ｒ416−ＮＲ716−ＣＲ316−Ｒ616−アリール；
−Ｒ416−ＮＲ716−ＣＲ316−Ｒ616−へテロアリール；
−Ｒ416−ＮＲ716−ＣＲ316−Ｒ616−へテロシクリル；および
−Ｒ416−ＮＲ716−ＣＲ316−Ｒ815、からなる群から選択され；
Ｚは、−ＮＲ516−、−Ｏ−、または−Ｓ−であり；
Ｒ216は、
−水素；
−アルキル；
−アルケニル；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−アルキル−Ｙ−アルキル；
−アルキル−Ｙ−アルケニル；
−アルキル−Ｙ−アリール；および
−ＯＨ；
−ハロゲン；
−Ｎ（Ｒ516）2；
−ＣＯ−Ｎ（Ｒ516）2；
−ＣＯ−Ｃ1-10アルキル；
−ＣＯ−Ｏ−Ｃ1-10アルキル；
−Ｎ3；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−ＣＯ−アリール；および
−ＣＯ−ヘテロアリールからなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換された
−アルキルまたはアルケニルからなる群から選択され；
Ｒ316は、＝Ｏまたは＝Ｓであり；
Ｒ416は、１個以上の−Ｏ−基によって中断されうるアルキルまたはアルケニルであり；
各Ｒ516は、独立してＨまたはＣ1-10アルキルであり；
Ｒ616は、１個以上の−Ｏ−基によって中断されうる結合、アルキル、またはアルケニルであり；
Ｒ716は、Ｈ、Ｃ1-10アルキル、またはアリールアルキルであり；またはＲ416およびＲ716は結合して環を形成することができ；
Ｒ816は、ＨまたはＣ1-10アルキルであり；またはＲ716およびＲ816は結合して環を形成することができ；
Ｙは、−Ｏ−または−Ｓ（Ｏ）0-2−であり；
ｖは、０〜４であり；および
存在する各Ｒ16は、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10アルコキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、およびトリフルオロメチルからなる群から独立して選択され］；
【化２１】
2005501550.tif 000022
［式中、Ｘは−ＣＨＲ317−、−ＣＨＲ317−アルキル−、または−ＣＨＲ317−アルケニル−であり；
Ｒ117は、
−アルケニル；
−アリール；および
−Ｒ417アリールからなる群から選択され；
Ｒ217は、
−水素；
−アルキル；
−アルケニル；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−アルキル−Ｙ−アルキル；
−アルキル−Ｙ−アルケニル；
−アルキル−Ｙ−アリール；および
−ＯＨ；
−ハロゲン；
−Ｎ（Ｒ317）2；
−ＣＯ−Ｎ（Ｒ317）2；
−ＣＯ−Ｃ1-10アルキル；
−ＣＯ−Ｏ−Ｃ1-10アルキル；
−Ｎ3；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−ＣＯ−アリール；および
−ＣＯ−ヘテロアリールからなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換された
−アルキルまたはアルケニルからなる群から選択され；
Ｒ417は、１個以上の−Ｏ−基によって中断されうるアルキルまたはアルケニルであり；
各Ｒ317は、独立してＨまたはＣ1-10アルキルであり；
各Ｙは、独立して−Ｏ−または−Ｓ（Ｏ）0-2−であり；
ｖは、０〜４であり；および
存在する各Ｒ17は、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10アルコキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、およびトリフルオロメチルからなる群から独立して選択され］；
【化２２】
2005501550.tif 000023
［式中、Ｘは−ＣＨＲ318−、−ＣＨＲ318−アルキル−、または−ＣＨＲ318−アルケニル−であり；
Ｒ118は、
−アルケニル；
−アリール；および
−Ｒ418アリールからなる群から選択され；
Ｒ218は、
−水素；
−アルキル；
−アルケニル；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−アルキル−Ｙ−アルキル；
−アルキル−Ｙ−アリール；
−アルキル−Ｙ−アルケニル；および
−ＯＨ；
−ハロゲン；
−Ｎ（Ｒ318）2；
−ＣＯ−Ｎ（Ｒ318）2；
−ＣＯ−Ｃ1-10アルキル；
−ＣＯ−Ｏ−Ｃ1-10アルキル；
−Ｎ3；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−ＣＯ−アリール；および
−ＣＯ−ヘテロアリールからなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換された
−アルキルまたはアルケニルからなる群から選択され；
Ｒ418は、１個以上の−Ｏ−基によって中断されうるアルキルまたはアルケニルであり；
各Ｒ318は、独立してＨまたはＣ1-10アルキルであり；
各Ｙは、独立して−Ｏ−または−Ｓ（Ｏ）0-2−であり；
ｖは、０〜４であり；および
存在する各Ｒ18は、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10アルコキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、およびトリフルオロメチルからなる群から独立して選択され］；
【化２３】
2005501550.tif 000024
［式中、Ｘは−ＣＨＲ319−、−ＣＨＲ319−アルキル−、または−ＣＨＲ319−アルケニル−であり；
Ｒ119は、
−ヘテロアリール；
−ヘテロシクリル；
−Ｒ419−へテロアリール；および
−Ｒ419ヘテロシクリルからなる群から選択され；
Ｒ219は、
−水素；
−アルキル；
−アルケニル；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−アルキル−Ｙ−アルキル；
−アルキル−Ｙ−アルケニル；
−アルキル−Ｙ−アリール；および
−ＯＨ；
−ハロゲン；
−Ｎ（Ｒ319）2；
−ＣＯ−Ｎ（Ｒ319）2；
−ＣＯ−Ｃ1-10アルキル；
−ＣＯ−Ｏ−Ｃ1-10アルキル；
−Ｎ3；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−ＣＯ−アリール；および
−ＣＯ−ヘテロアリールからなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換された
−アルキルまたはアルケニルからなる群から選択され；
Ｒ419は、１個以上の−Ｏ−基によって中断されうるアルキルまたはアルケニルであり；
各Ｒ319は、独立してＨまたはＣ1-10アルキルであり；
各Ｙは、独立して−Ｏ−または−Ｓ（Ｏ）0-2−であり；
ｖは、０〜４であり；および
存在する各Ｒ19は、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10アルコキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、およびトリフルオロメチルからなる群から独立して選択され］；
【化２４】
2005501550.tif 000025
［式中、Ｘは−ＣＨＲ320−、−ＣＨＲ320−アルキル−、または−ＣＨＲ320−アルケニル−であり；
Ｒ120は、
−ヘテロアリール；
−ヘテロシクリル；
−Ｒ420−へテロアリール；および
−Ｒ419ヘテロシクリルからなる群から選択され；
Ｒ220は、
−水素；
−アルキル；
−アルケニル；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−アルキル−Ｙ−アルキル；
−アルキル−Ｙ−アルケニル；
−アルキル−Ｙ−アリール；および
−ＯＨ；
−ハロゲン；
−Ｎ（Ｒ320）2；
−ＣＯ−Ｎ（Ｒ320）2；
−ＣＯ−Ｃ1-10アルキル；
−ＣＯ−Ｏ−Ｃ1-10アルキル；
−Ｎ3；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−ＣＯ−アリール；および
−ＣＯ−ヘテロアリールからなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換された
−アルキルまたはアルケニルからなる群から選択され；
Ｒ420は、１個以上の−Ｏ−基によって中断されうるアルキルまたはアルケニルであり；
各Ｒ320は、独立してＨまたはＣ1-10アルキルであり；
各Ｙは、独立して−Ｏ−または−Ｓ（Ｏ）0-2−であり；
ｖは、０〜４であり；および
存在する各Ｒ20は、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10アルコキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、およびトリフルオロメチルからなる群から独立して選択され］；
【化２５】
2005501550.tif 000026
［式中、Ｘは−ＣＨＲ521−、−ＣＨＲ521−アルキル−、または−ＣＨＲ521−アルケニル−であり；
Ｒ121は、
−Ｒ421−ＮＲ321−ＳＯ2−Ｒ621−アルキル；
−Ｒ421−ＮＲ321−ＳＯ2−Ｒ621−アルケニル；
−Ｒ421−ＮＲ321−ＳＯ2−Ｒ621−アリール；
−Ｒ421−ＮＲ321−ＳＯ2−Ｒ621−へテロアリール；
−Ｒ421−ＮＲ321−ＳＯ2−Ｒ621−ヘテロシクリル；
−Ｒ421−ＮＲ321−ＳＯ2−Ｒ721；
−Ｒ421−ＮＲ321−ＳＯ2−ＮＲ521−Ｒ621−アルキル；
−Ｒ421−ＮＲ321−ＳＯ2−ＮＲ521−Ｒ621−アルケニル；
−Ｒ421−ＮＲ321−ＳＯ2−ＮＲ521−Ｒ621−アリール；
−Ｒ421−ＮＲ321−ＳＯ2−ＮＲ521−Ｒ621−へテロアリール；
−Ｒ421−ＮＲ321−ＳＯ2−ＮＲ521−Ｒ621−へテロシクリル；および
−Ｒ421−ＮＲ321−ＳＯ2−ＮＨ2からなる群から選択され；
Ｒ221は、
−水素；
−アルキル；
−アルケニル；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−アルキル−Ｙ−アルキル；
−アルキル−Ｙ−アルケニル；
−アルキル−Ｙ−アリール；および
−ＯＨ；
−ハロゲン；
−Ｎ（Ｒ521）2；
−ＣＯ−Ｎ（Ｒ521）2；
−ＣＯ−Ｃ1-10アルキル；
−ＣＯ−Ｏ−Ｃ1-10アルキル；
−Ｎ3；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−ＣＯ−アリール；および
−ＣＯ−ヘテロアリールからなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換された
−アルキルまたはアルケニルからなる群から選択され；
Ｙは、−Ｏ−または−Ｓ（Ｏ）0-2−であり；
Ｒ321は、Ｈ、Ｃ1-10アルキル、またはアリールアルキルであり；
各Ｒ421は、１個以上の−Ｏ−基によって中断されうる独立してアルキルまたはアルケニルであり；またはＲ321およびＲ421は結合して環を形成することができ；
各Ｒ521は、独立してＨ、Ｃ1-10アルキル、またはＣ2-10アルケニルであり；
Ｒ621は、１個以上の−Ｏ−基によって中断されうる結合、アルキル、またはアルケニルであり；
Ｒ721は、Ｃ1-10アルキルであり、またはＲ321およびＲ721は結合して環を形成することができ；
ｖは、０〜４であり；および
存在する各Ｒ21は、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10アルコキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、およびトリフルオロメチルからなる群から独立して選択され］；
【化２６】
2005501550.tif 000027
［式中、Ｘは−ＣＨＲ522−、−ＣＨＲ522−アルキル−、または−ＣＨＲ522−アルケニル−であり；
Ｒ122は、
−Ｒ422−ＮＲ322−ＳＯ2−Ｒ622−アルキル；
−Ｒ422−ＮＲ322−ＳＯ2−Ｒ622−アルケニル；
−Ｒ422−ＮＲ322−ＳＯ2−Ｒ622−アリール；
−Ｒ422−ＮＲ322−ＳＯ2−Ｒ622−へテロアリール；
−Ｒ422−ＮＲ322−ＳＯ2−Ｒ622−ヘテロシクリル；
−Ｒ422−ＮＲ322−ＳＯ2−Ｒ722；
−Ｒ422−ＮＲ322−ＳＯ2−ＮＲ522−Ｒ622−アルキル；
−Ｒ422−ＮＲ322−ＳＯ2−ＮＲ522−Ｒ622−アルケニル；
−Ｒ422−ＮＲ322−ＳＯ2−ＮＲ522−Ｒ622−アリール；
−Ｒ422−ＮＲ322−ＳＯ2−ＮＲ522−Ｒ622−へテロアリール；
−Ｒ422−ＮＲ322−ＳＯ2−ＮＲ522−Ｒ622−へテロシクリル；および
−Ｒ422−ＮＲ322−−ＳＯ2−ＮＨ2からなる群から選択され；
Ｒ222は、
−水素；
−アルキル；
−アルケニル；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−アルキル−Ｙ−アルキル；
−アルキル−Ｙ−アルケニル；
−アルキル−Ｙ−アリール；および
−ＯＨ；
−ハロゲン；
−Ｎ（Ｒ522）2；
−ＣＯ−Ｎ（Ｒ522）2；
−ＣＯ−Ｃ1-10アルキル；
−ＣＯ−Ｏ−Ｃ1-10アルキル；
−Ｎ3；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−ＣＯ−アリール；および
−ＣＯ−ヘテロアリールからなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換された
−アルキルまたはアルケニルからなる群から選択され；
Ｙは、−Ｏ−または−Ｓ（Ｏ）0-2−であり；
Ｒ322は、Ｈ、Ｃ1-10アルキル、またはアリールアルキルであり；
各Ｒ422は、１個以上の−Ｏ−基によって中断されうる独立してアルキルまたはアルケニルであり；またはＲ322およびＲ422は結合して環を形成することができ；
各Ｒ522は、Ｈ、Ｃ1-10アルキル、またはＣ2-10アルケニルであり；
Ｒ622は、１個以上の−Ｏ−基によって中断されうる結合、アルキル、またはアルケニルであり；
Ｒ722は、Ｃ1-10アルキルであり、またはＲ322およびＲ722は結合して環を形成することができ；
ｖは、０〜４であり；および
存在する各Ｒ22は、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10アルコキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、およびトリフルオロメチルからなる群から独立して選択され］；
【化２７】
2005501550.tif 000028
［式中、Ｘは−ＣＨＲ323−、−ＣＨＲ323−アルキル−、または−ＣＨＲ323−アルケニル−であり；
Ｚは、−Ｓ−、−ＳＯ−、または−ＳＯ2−であり；
Ｒ123は、
−アルキル；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−アルケニル；
−Ｒ423−アリール；
−Ｒ423−へテロアリール；
−Ｒ423−へテロシクリル
からなる群から選択され；
Ｒ223は、
−水素；
−アルキル；
−アルケニル；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−アルキル−Ｙ−アルキル；
−アルキル−Ｙ−アルケニル；
−アルキル−Ｙ−アリール；および
−ＯＨ；
−ハロゲン；
−Ｎ（Ｒ323）2；
−ＣＯ−Ｎ（Ｒ323）2；
−ＣＯ−Ｃ1-10アルキル；
−ＣＯ−Ｏ−Ｃ1-10アルキル；
−Ｎ3；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−ＣＯ−アリール；および
−ＣＯ−ヘテロアリールからなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換された
−アルキルまたはアルケニルからなる群から選択され；
各Ｒ323は、独立してＨまたはＣ1-10アルキルであり；
各Ｒ423は、独立してアルキルまたはアルケニルであり；
各Ｙは、独立して−Ｏ−または−Ｓ（Ｏ）0-2−であり；
ｖは、０〜４であり；および
存在する各Ｒ23は、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10アルコキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、およびトリフルオロメチルからなる群から独立して選択され］；
【化２８】
2005501550.tif 000029
［式中、Ｘは−ＣＨＲ324−、−ＣＨＲ324−アルキル−、または−ＣＨＲ324−アルケニル−であり；
Ｚは、−Ｓ−、−ＳＯ−、または−ＳＯ2−であり；
Ｒ124は、
−アルキル；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−アルケニル；
−Ｒ424−アリール；
−Ｒ424−へテロアリール；および
−Ｒ424−へテロシクリル
からなる群から選択され；
Ｒ224は、
−水素；
−アルキル；
−アルケニル；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−アルキル−Ｙ−アルキル；
−アルキル−Ｙ−アルケニル；
−アルキル−Ｙ−アリール；および
−ＯＨ；
−ハロゲン；
−Ｎ（Ｒ324）2；
−ＣＯ−Ｎ（Ｒ324）2；
−ＣＯ−Ｃ1-10アルキル；
−ＣＯ−Ｏ−Ｃ1-10アルキル；
−Ｎ3；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−ＣＯ−アリール；および
−ＣＯ−ヘテロアリールからなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換された
−アルキルまたはアルケニルからなる群から選択され；
各Ｒ324は、独立してＨまたはＣ1-10アルキルであり；
各Ｒ424は、独立してアルキルまたはアルケニルであり；
各Ｙは、独立して−Ｏ−または−Ｓ（Ｏ）0-2−であり；
ｖは、０〜４であり；および
存在する各Ｒ24は、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10アルコキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、およびトリフルオロメチルからなる群から独立して選択され］；
【化２９】
2005501550.tif 000030
［式中、Ｘは−ＣＨＲ525−、−ＣＨＲ525−アルキル−、または−ＣＨＲ525−アルケニル−であり；
Ｒ125は、
−Ｒ425−ＮＲ825−ＣＲ325−ＮＲ525−Ｚ−Ｒ625−アルキル；
−Ｒ425−ＮＲ825−ＣＲ325−ＮＲ525−Ｚ−Ｒ625−アルケニル；
−Ｒ425−ＮＲ825−ＣＲ325−ＮＲ525−Ｚ−Ｒ625−アリール；
−Ｒ425−ＮＲ825−ＣＲ325−ＮＲ525−Ｚ−Ｒ625−へテロアリール；
−Ｒ425−ＮＲ825−ＣＲ325−ＮＲ525−Ｚ−Ｒ625−ヘテロシクリル；
−Ｒ425−ＮＲ825−ＣＲ325−ＮＲ525Ｒ725；
−Ｒ425−ＮＲ825−ＣＲ325−ＮＲ925−Ｚ−Ｒ625−アルキル；
−Ｒ425−ＮＲ825−ＣＲ325−ＮＲ925−Ｚ−Ｒ625−アルケニル；
−Ｒ425−ＮＲ825−ＣＲ325−ＮＲ925−Ｚ−Ｒ625−アリール；
−Ｒ425−ＮＲ825−ＣＲ325−ＮＲ925−Ｚ−Ｒ625−へテロアリール；および
−Ｒ425−ＮＲ825−ＣＲ325−ＮＲ925−Ｚ−Ｒ625−へテロシクリルからなる群から選択され；
Ｒ225は、
−水素；
−アルキル；
−アルケニル；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−アルキル−Ｙ−アルキル；
−アルキル−Ｙ−アルケニル；
−アルキル−Ｙ−アリール；および
−ＯＨ；
−ハロゲン；
−Ｎ（Ｒ525）2；
−ＣＯ−Ｎ（Ｒ525）2；
−ＣＯ−Ｃ1-10アルキル；
−ＣＯ−Ｏ−Ｃ1-10アルキル；
−Ｎ3；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−ＣＯ−アリール；および
−ＣＯ−ヘテロアリールからなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換された
−アルキルまたはアルケニルからなる群から選択され；
各Ｒ325は、＝Ｏまたは＝Ｓであり；
各Ｒ425は、独立して１個以上の−Ｏ−基によって中断されうるアルキルまたはアルケニルであり；
各Ｒ525は、独立してＨまたはＣ1-10アルキルであり；
Ｒ625は、１個以上の−Ｏ−基によって中断されうる結合、アルキル、またはアルケニルであり；
Ｒ725は、Ｈ、またはヘテロ原子によって中断されうるＣ1-10アルキルであり、またはＲ725はＲ525と結合して環を形成することができ；
Ｒ825は、Ｈ、Ｃ1-10アルキル、またはアルールアルキルであり；またはＲ425およびＲ825は結合して環を形成することができ；
Ｒ925は、Ｒ825と結合して環を形成することができるＣ1-10アルキルであり；
各Ｙは、独立して−Ｏ−または−Ｓ（Ｏ）0-2−であり；
Ｚは、結合、−ＣＯ−、または−ＳＯ2−であり；
ｖは、０〜４であり；および
存在する各Ｒ25は、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10アルコキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、およびトリフルオロメチルからなる群から独立して選択され］；
【化３０】
2005501550.tif 000031
［式中、Ｘは−ＣＨＲ526−、−ＣＨＲ526−アルキル−、または−ＣＨＲ526−アルケニル−であり；
Ｒ126は、
−Ｒ426−ＮＲ826−ＣＲ326−ＮＲ526−Ｚ−Ｒ626−アルキル；
−Ｒ426−ＮＲ826−ＣＲ326−ＮＲ526−Ｚ−Ｒ626−アルケニル；
−Ｒ426−ＮＲ826−ＣＲ326−ＮＲ526−Ｚ−Ｒ626−アリール；
−Ｒ426−ＮＲ826−ＣＲ326−ＮＲ526−Ｚ−Ｒ626−へテロアリール；
−Ｒ426−ＮＲ826−ＣＲ326−ＮＲ526−Ｚ−Ｒ626−ヘテロシクリル；
−Ｒ426−ＮＲ826−ＣＲ326−ＮＲ526Ｒ726；
−Ｒ426−ＮＲ826−ＣＲ326−ＮＲ926−Ｚ−Ｒ626−アルキル；
−Ｒ426−ＮＲ826−ＣＲ326−ＮＲ926−Ｚ−Ｒ626−アルケニル；
−Ｒ426−ＮＲ826−ＣＲ326−ＮＲ926−Ｚ−Ｒ626−アリール；
−Ｒ426−ＮＲ826−ＣＲ326−ＮＲ926−Ｚ−Ｒ626−へテロアリール；および
−Ｒ426−ＮＲ826−ＣＲ326−ＮＲ926−Ｚ−Ｒ626−へテロシクリルからなる群から選択され；
Ｒ226は、
−水素；
−アルキル；
−アルケニル；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−アルキル−Ｙ−アルキル；
−アルキル−Ｙ−アルケニル；
−アルキル−Ｙ−アリール；および
−ＯＨ；
−ハロゲン；
−Ｎ（Ｒ526）2；
−ＣＯ−Ｎ（Ｒ526）2；
−ＣＯ−Ｃ1-10アルキル；
−ＣＯ−Ｏ−Ｃ1-10アルキル；
−Ｎ3；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−ＣＯ−アリール；および
−ＣＯ−ヘテロアリールからなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換された
−アルキルまたはアルケニルからなる群から選択され；
各Ｒ326は、＝Ｏまたは＝Ｓであり；
各Ｒ426は、独立して１個以上の−Ｏ−基によって中断されうるアルキルまたはアルケニルであり；
各Ｒ526は、独立してＨまたはＣ1-10アルキルであり；
Ｒ626は、１個以上の−Ｏ−基によって中断されうる結合、アルキル、またはアルケニルであり；
Ｒ726は、Ｈ、またはヘテロ原子によって中断されうるＣ1-10アルキルであり；またはＲ726はＲ526と結合して環を形成することができ；
Ｒ826は、Ｈ、Ｃ1-10アルキルまたはアリールアルキルであり；またはＲ426およびＲ826は結合して環を形成することができ；
Ｒ926は、Ｒ826と結合して環を形成することができるＣ1-10アルキルであり；
各Ｙは、独立して−Ｏ−または−Ｓ（Ｏ）0-2−であり；
Ｚは、結合、−ＣＯ−、または−ＳＯ2−であり；
ｖは、０〜４であり；および
存在する各Ｒ26は、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10アルコキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、およびトリフルオロメチルからなる群から独立して選択される］
および上記のいずれかの薬学的に許容される塩類が挙げられる。
【００２７】
追加の適切な１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−４−アミン類としては、式ＸＸＶＩＩによって規定される化合物
【化３１】
2005501550.tif 000032
［式中、Ｘは、アルキレンまたはアルケニレンであり；
Ｙは、−ＣＯ−、−ＣＳ−、または−ＳＯ2−であり；
Ｚは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、または−ＮＲ527−であり；
Ｒ127は、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、Ｃ1-20アルキル、またはＣ2-20アルケニルであり、そのそれぞれは、
−アルキル；
−アルケニル；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−置換シクロアルキル；
−Ｏ−アルキル；
−Ｏ−（アルキル）0-1−アリール；
−Ｏ−（アルキル）0-1−ヘテロアリール；
−Ｏ−（アルキル）0-1−ヘテロシクリル；
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ｏ−アルキル；
−ＣＯ−アルキル；
−Ｓ（Ｏ）0-2−アルキル；
−Ｓ（Ｏ）0-2−（アルキル）0-1−アリール；
−Ｓ（Ｏ）0-2−（アルキル）0-1−ヘテロアリール；
−Ｓ（Ｏ）0-2−（アルキル）0-1−ヘテロシクリル；
−（アルキル）0-1−Ｎ（Ｒ527）2；
−（アルキル）0-1−ＮＲ527−ＣＯ−Ｏ−アルキル；
−（アルキル）0-1−ＮＲ527−ＣＯ−アルキル；
−（アルキル）0-1−ＮＲ527−ＣＯ−アリール；
−（アルキル）0-1−ＮＲ527−ＣＯ−ヘテロアリール；
−Ｎ3；
−ハロゲン；
−ハロアルキル；
−ハロアルコキシ；
−ＣＯ−ハロアルキル；
−ＣＯ−ハロアルコキシ；
−ＮＯ2；
−ＣＮ；
−ＯＨ；
−ＳＨからなる群から独立して選択される１つ以上の置換基によって、置換されず、または置換されることができ；アルキル、アルケニル、およびヘテロシクリル、オキソの場合；
Ｒ227は、
−水素；
−アルキル；
−アルケニル；
−アルキル−Ｏ−アルキル；
−アルキル−Ｓ−アルキル；
−アルキル−Ｏ−アリール；
−アルキル−Ｓ−アリール；
−アルキル−Ｏ−アルケニル；
−アルキル−Ｓ−アルケニル；および
−ＯＨ；
−ハロゲン；
−Ｎ（Ｒ527）2；
−ＣＯ−Ｎ（Ｒ527）2；
−ＣＳ−Ｎ（Ｒ527）2；
−ＳＯ2−Ｎ（Ｒ527）2；
−ＮＲ527−ＣＯ−Ｃ1-10アルキル；
−ＮＲ527−ＣＳ−Ｃ1-10アルキル；
−ＮＲ527−ＳＯ2−Ｃ1-10アルキル；
−ＣＯ−Ｃ1-10アルキル；
−ＣＯ−Ｏ−Ｃ1-10アルキル；
−Ｎ3；
−アリール；
−へテロアリール；
−へテロシクリル；
−ＣＯ−アリール；および
−ＣＯ−ヘテロアリールからなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換された
−アルキルまたはアルケニルからなる群から選択され；
Ｒ327およびＲ427は、水素、アルキル、アルケニル、ハロゲン、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、およびアルキルチオからなる群から独立して選択され；
各Ｒ527は、独立してＨまたはＣ1-10アルキルである］
およびそれらの薬学的に許容される塩類が挙げられる。
【００２８】
本願中で用いられる、「アルキル」、「アルケニル」なる用語、および「アルキ（ａｌｋ）−」なる接頭辞は、直鎖基と分岐鎖基の両方、および環式基、すなわち、シクロアルキルとシクロアルケニルを含む。他に特に規定がない限り、これらの基は１〜２０個の炭素原子とともに、２〜２０個の炭素原子を含有するアルケニル基を含有する。好ましい基は、合計１０個までの炭素原子を有する。環式基は、単環式または多環式であることができ、３〜１０個の環状炭素原子を有することが好ましい。典型的な環式基としては、シクロプロピル、シクロプロピルメチル、シクロペンチル、シクロへキシル、およびアダマンチルが挙げられる。
【００２９】
「ハロアルキル」なる用語は、フッ素基を含めて、１個以上のハロゲン原子によって置換された基を含む。これは、「ハロ（ｈａｌｏ）−」なる接頭辞を含む基にも当てはまる。適切なハロアルキル基の例は、クロロメチル、トリフルオロメチルなどである。
【００３０】
本願中で用いられる「アリール」なる用語は、炭素環式芳香族環または環系を含む。アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、ビフェニル、フルオレニル、およびインデニルが挙げられる。「ヘテロアリール」なる用語は、少なくとも１個の環状へテロ原子（例えば、Ｏ、Ｓ、Ｎ）を含有する原子環または環系を含む。適切なヘテロアリール基としては、フリル、チエニル、ピリジル、キノリニル、イソキノリニル、インドリル、イソインドリル、トリアゾルイル、ピルロルイル、テトラゾルイル、イミダゾルイル、ピラゾルイル、オキサゾルイル、チアゾルイル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、カルバゾルイル、ベンゾキサゾルイル、ピリミジニル、ベンズイミダゾルイル、キノキサリニル、ベンゾチアゾリル、ナフチリジニル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、プリニル、キナゾリニルなどが挙げられる。
【００３１】
「ヘテロシクリル」は、少なくとも１個の環ヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｓ、Ｎ）を含む非芳香族環または環系を含むとともに、上記ヘテロアリール基のうち完全に飽和した誘導体および部分的に飽和した誘導体のすべてを含む。典型的なヘテロ環式基としては、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、チアゾリジニル、イミダゾリジニル、イソチアゾリジニルなどが挙げられる。
【００３２】
ｐＤＣの成熟
上述したＩＲＭ化合物は、エクスビボ（ｅｘ  ｖｉｖｏ）で形質細胞様樹状細胞の成熟を誘発することがわかっている。一般に、成熟ｐＤＣは、サイトカイン分泌、特定の細胞表面マーカーの発現、およびＴ細胞を刺激する増強能力などの特性を示す。
【００３３】
本発明の方法を用いて成熟しうる形質細胞様樹状細胞は、適切な任意の源から得ることができる。例えば、未成熟ｐＤＣは、血液またはリンパ様組織などの組織からｐＤＣを分離することによって得ることができる。ｐＤＣを得る１つの方法としては、血液からの末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）の分離、次いでｐＤＣの試料の選択的豊富化が挙げられる。本願で用いられる「豊富化する」、「豊富化」、または「豊富化された」は、天然の試料における同じ細胞型の比率に対する集団における１つの細胞型の比率の選択的増大を指す。細胞集団は、細胞集団から他の細胞型を除去することによって豊富化されうる。あるいは、所望の細胞型を細胞集団から選択的に除去し、非所望の細胞を洗い流し、所望の細胞を適切な細胞培地中に再懸濁しうる。「豊富化された」なる用語は、所望の細胞型が関連細胞集団の特定の比率を構成することを示すことはない。
【００３４】
こうして得られるｐＤＣは未成熟状態下にあり、一般に抗原の捕捉および処理の高い能力を有するが、Ｔ細胞刺激は比較的低い。最適のＴ細胞刺激能を得るには、ｐＤＣが安定した成熟状態下にある必要がある。成熟ｐＤＣは、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、およびＣＣＲ７など一部の細胞表面マーカーのその発現を含めて、多くの特性によって同定しうる。成熟ｐＤＣは、混合リンパ球反応時に、樹状細胞サイトカインの産生増大およびＴ細胞によるサイトカイン産生の誘発を含むがこれに限定されない典型的な反応も示す。
【００３５】
本発明の方法は一般に、ＤＣを成熟させるに十分な量および時間のＩＲＭでｐＤＣを刺激することによる分離細胞集団におけるｐＤＣの成熟を含む。本願中で用いられる「分離」細胞集団は、エクスビボで培養された細胞を指す。ｐＤＣは、例えば、血液検体を含めて適切な任意の方法によって対象から得ることができる。血液検体は、分離細胞集団におけるｐＤＣの比率を濃縮する一部の方法で処理しうるが、このような処理は必須ではない。したがって、「分離」は、対象からの分離を指し、細胞集団に存在しうる他の細胞型に関してｐＤＣの純度の基準を指すことはない。組織培地および条件は、当業者には容易に決定可能である。
【００３６】
使用されるＩＲＭの具体的な量および曝露時間は、成熟されるｐＤＣ源、使用されるＩＲＭ化合物の潜在力および他の特性などを含めて、当業者には自明であろう多くの因子によって変動する。一部の実施形態では、ＩＲＭは約０．１μＭ〜約１００μＭの濃度で用いることができる。ＩＲＭ化合物は、ｐＤＣ培地に添加される前に、好ましくは水中または生理緩衝液中で可溶化されうる。しかし、必要に応じて、化合物は少量のＤＭＳＯなど有機溶媒中で可溶化し、次いで希釈またはｐＤＣ培地に直接添加することができる。
【００３７】
ＩＲＭ成熟樹状細胞の使用
一部のＩＲＭへの曝露によって成熟されている樹状細胞は、未成熟ｐＤＣと比較して抗原提示能を増強しており、種々の方法で対象の免疫反応の増強において用いることができる。例えば、成熟ｐＤＣは、患者に直接注入することができる。この場合、患者がｐＤＣ源であることが望ましい場合もある。
【００３８】
ｐＤＣは多くの免疫療法において用いることもできる。かかる療法の例としては、ＡＩＤＳなどの免疫系の疾患を治療するためのエクスビボ細胞移植療法；Ｔ細胞、特に免疫系の変質によって特徴づけられる疾患を治療するために用いることができる抗原特異的Ｔ細胞のエクスビボ増幅（ｅｘ  ｖｉｖｏ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）；ｐＤＣ特異的マーカー類を認識するモノクローナル抗体の生成；当業界で周知の方法による抗原活性化ｐＤＣの調製；およびワクチンやワクチン補助剤の開発が挙げられる。
【００３９】
１つ以上のＩＲＭへの曝露によって成熟されているｐＤＣの好ましい使用としては、抗原活性化ｐＤＣおよび／またはｐＤＣ変性抗原の利用が挙げられる。本発明の抗原活性化ｐＤＣ、または細胞補助剤は一般にＩＲＭで処理したｐＤＣを抗原に曝露することによって調製される。抗原は、自然状態のタンパク質、糖質、または核酸でありうるとともに、新生細胞（例えば、腫瘍細胞）類、プリオン類、および感染性因子類（例えば、細菌類、ウイルス類、酵母菌、寄生体）を含むがこれらに限定されない適切な任意の源由来でありうる。あるいは、抗原は組換え手段によって誘導しうる。
【００４０】
本発明の細胞補助剤は、疾患の治療において用いることができる。例えば、ｐＤＣを腫瘍由来抗原に曝露することによって調製される細胞補助剤を患者に投与し、それによって患者における抗原腫瘍免疫反応を誘発することができる。同様に、感染性因子由来の抗原にｐＤＣを曝露することによって調製される細胞補助剤を患者に投与することによって感染症を治療することができる。細胞補助剤は、アルツハイマー病および一部の心疾患形態を含むがこれらに限定されない非感染性タンパク質関連疾患の治療に用いることもできる。
【００４１】
本発明の方法によって処理されている形質細胞様樹状細胞は、Ｔｈ１免疫反応の生成に有利であるＩＦＮ−αなどのサイトカイン類を産生する。Ｔｈ２免疫性とは対照的に、Ｔｈ１免疫性に対する免疫反応にバイアスをかける能力は、Ｔｈ２媒介性疾患の治療用手段を提供しうる。かかる疾患の例として挙げられるのは、喘息；アレルギー性鼻炎；全身性紅斑性狼瘡；湿疹；アトピー性皮膚炎オーメン症候群（好酸球過剰増多（ｈｙｐｅｒｓｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉａ）症候群）；皮膚および全身性リューシュマニア症、トキソプラズマ感染症、およびトリパノソーマ感染症など一部の寄生虫感染症；および一部の真菌感染症、例えば、カンジダ症およびヒストプラスマ症；およびらい病や結核症など一部の細胞内細菌感染症である。
【００４２】
また、Ｔ細胞からＩＬ−１０を誘導する能力は、Ｔｈ３−様反応に対する免疫反応にバイアスをかけることができる。Ｔｈ３−様免疫性は、免疫反応をダウンレギュレートするＩＬ−１０産生細胞の生成の結果として生じる。これらのＴ細胞は、制御性Ｔ細胞とも呼ばれている。一部の環境下でのｐＤＣの活性化の結果として、効果器Ｔ細胞機能をダウンレギュレートする制御性Ｔ細胞が生成された。かかる細胞の生成は、もっぱら、または少なくとも部分的にＴ細胞によって媒介される疾患の治療に有用でありうる。これらの疾患としては、乾癬、炎症性腸疾患、関節リウマチ、糖尿病、多発性硬化症、および慢性Ｔ細胞活性化と関連した他の疾患が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４３】
一般に、本発明は、ＴＬＲ−６、ＴＬＲ−７、またはＴＬＲ−８の作動薬である、免疫反応調整剤分子で分離形質細胞様樹状細胞の細胞集団を処理するステップを含む。一部の実施形態では、ＴＬＲ−７の作動薬である免疫反応調整剤分子が利用される。こうした分離ｐＤＣの処理は、広域スペクトルの生物活性を誘発する。本発明は、ｐＤＣを処理して所望の活性を示す方法、所望の生物活性を検出する方法、所望の生物活性を有する細胞を検査する方法、所望の生物活性を有する細胞で豊富化される細胞集団、および治療または予防目的で豊富化された細胞集団を用いうる方法を含む。
【００４４】
１つの実施形態では、本発明は、形質細胞様樹状細胞による特定抗原の抗原提示をエクスビボで誘発する方法を含む。この方法は、分離細胞集団を抗原に曝露し、分離細胞集団をＩＲＭで処理するステップを含む。ＩＲＭ処理により、ｐＤＣのＴ細胞刺激能が増強される。ｐＤＣによる抗原提示に対する１つのターゲットは、ナイーブＴ細胞である。したがって、抗原を提示しているｐＤＣとの接触から生じるＴ細胞の１つ以上の生物活性を検出することによってＩＲＭによるｐＤＣにおける抗原提示の誘発を検出しうる。適切なＴ細胞の生物活性としては、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−１０の産生が挙げられるが、これに限定されない。
【００４５】
したがって、ｐＤＣによる抗原提示の誘導を検出する１つの方法は、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０、または特定抗原に曝露され、ＩＲＭで処理されたｐＤＣと接触されたＴ細胞による産生を検出するステップを含む。ＩＦＮ−γのＴ細胞産生は、Ｔｈ１、または細胞媒介性免疫反応に関与しうる。ＩＬ−１０は、Ｔｈ２、または体液性、免疫反応に関連してＴ細胞によって産生されるサイトカインの一例である。ＩＬ−１０のＴ細胞産生は、Ｔｒ３、または制御性、Ｔ細胞反応にも関与する。図１は、ＩＲＭで処理したｐＤＣとの接触の結果として４対象におけるＴ細胞によるＩＦＮ−γ産生のＥＬＩＳＡ検出の結果を示す。図２は、ＩＲＭで処理したｐＤＣとの接触の結果として４対象におけるＴ細胞によるＩＬ−１０産生のＥＬＩＳＡ検出の結果を示す。
【００４６】
分離ｐＤＣは、上述したＩＲＭのいずれかで処理しうる。さらに、ｐＤＣが曝露される抗原は、それに対してＴｈ１またはＴｈ２免疫反応が望ましい抗原でありうる。適切な抗原の例としては、病原体由来の抗原、新生細胞由来の抗原、および組換え抗原のほか、他の疾患関連性抗原が挙げられる。したがって、病原体抗原のｐＤＣ提示は、医原病に対する治療または予防を提供しうる。同様に、新生細胞由来抗原のｐＤＣ提示は、腫瘍関連性疾患に対する治療および予防を提供しうる。
【００４７】
対象の治療は、成熟ｐＤＣによるナイーブＴ細胞へのエクスビボ抗原提示の後、活性化Ｔ細胞、抗原提示ｐＤＣ、またはその両方の対象への投与を含みうる。
【００４８】
別の実施形態では、本発明は、ＩＲＭによるインビボ処理の後、対象からの成熟ｐＤＣの分離による成熟形質細胞様樹状細胞集団を得る方法を提供する。一部の実施形態では、成熟ｐＤＣは、対象から採取した血液検体から分離される。こうして得られた成熟ｐＤＣは、ｐＤＣがインビボで曝露された１つ以上の抗原に対するエクスビボでＴ細胞を刺激し、それによって対象特異的、抗原特異的療法の可能性を提供するために有用でありうる。
【００４９】
別の実施形態では、本発明は、ＩＲＭによる処理に応じて分離形質細胞様樹状細胞によるサイトカイン産生を検出する方法を提供する。この方法は、ＩＲＭでｐＤＣの分離集団を処理し、１つ以上のサイトカインの産生を検出するステップを含む。ＩＲＭによる処理に応じてｐＤＣにより産生されるサイトカインとしては、ＩＬ−８、ＩＰ−１０、ＩＬ−６、ＭＩＰ−１α、およびＩＦＮ−ωが挙げられるが、これらに限定されない。サイトカイン産生は、フローサイトメトリー、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット分析、および特定のサイトカインをコードする細胞内ｍＲＮＡの検出を含む一部の標準方法のいずれか１つによって検出しうる。
【００５０】
別の実施形態では、本発明は、ＩＲＭでの処理に応じたｐＤＣによる共刺激マーカーの発現を検出するための方法を提供する。この方法は、ｐＤＣの分離集団をＩＲＭで処理し、１つ以上の共刺激マーカーの発現を検出するステップを含む。ＩＲＭでのｐＤＣ処理後に検出しうる共刺激マーカーの例としては、ＣＤ８０、ＣＤ８６、およびＣＤ４０が挙げられるが、これらに限定されない。共刺激マーカーの発現は、例えば、フローサイトメトリー、免疫組織化学、または特定の共刺激マーカーをコードする細胞内ｍＲＮＡを検出することによって検出しうる。
【００５１】
図３は、それぞれがｐＤＣの生存を誘発する、サイトカインＩＬ−３およびＩＦＮ−αで処理した場合の共刺激マーカーのｐＤＣ発現と比較したＩＲＭで処理したｐＤＣの共刺激マーカーの発現のフローサイトメトリー分析を示す。
【００５２】
共刺激マーカーは、ｐＤＣを含む抗原提示細胞上に発現し、ナイーブＴ細胞ならびに活性化およびメモリーＴ細胞への抗原提示を補助する。したがって、共刺激マーカーの発現の検出は、抗原提示が可能なｐＤＣを検出するために望ましい場合がある。また、ＣＣＲ７の発現は、Ｉ型インターフェロンのｐＤＣ産生およびｐＤＣ成熟と相関する。さらに別の実施形態では、本発明は、インビトロでｐＤＣの生存を増強する方法を提供する。この方法は、分離ｐＤＣの集団をＩＲＭで処理し、ｐＤＣの生存を促進する条件下に細胞をインキュベートするステップを含む。
【００５３】
図４は、ＩＲＭの有無による処理後２４時間と４８時間でのｐＤＣの生存の比較である。４８時間では、ＩＲＭで処理したｐＤＣは、統計上有意に高い生存率を示した。一部の実施形態では、ＩＲＭで処理した４８時間後のｐＤＣの生存は、約７５％を超え；他の実施形態では、４８時間生存は約７０％を超え；他の実施形態では、ＩＲＭ処理後４８時間の生存は約５０％を超え；他の実施形態では、４８時間生存は約３０％を超える。
【００５４】
インビトロでのｐＤＣの生存の増強は、治療または予防使用のｐＤＣ細胞集団の生成に際して望ましい場合がある。かかる細胞集団におけるｐＤＣのインビトロ生存の増強は、有効な治療または予防を提供し、失効細胞集団と関連した消耗を削減しうる。
【００５５】
さらに別の実施形態では、本発明は、ＩＲＭでの処理に応じてｐＤＣによるケモカイン受容体の発現を検出する方法を提供する。この方法は、分離ｐＤＣの集団をＩＲＭで処理し、次いで少なくとも１つのケモカイン受容体の発現を検出するステップを含む。ケモカインの発現を検出する方法としては、共刺激マーカーおよびサイトカインの発現を検出するために有用な上述した方法が挙げられる。ＩＲＭでのｐＤＣの処理に応じて発現されるケモカイン受容体の一例はＣＣＲ７であり、これは成熟ｐＤＣのリンパ節への誘導と関係がある。図５は、ＩＲＭで処理した場合のケモカイン受容体ＣＣＲ７対ｐＤＣ生存因子ＩＬ−３およびＩＦＮ−αの組換え異形のｐＤＣ発現のフローサイトメトリー分析を示す。
【００５６】
本発明は、比較的高いレベルのケモカイン受容体を発現するｐＤＣの集団を調製する方法も提供する。この方法は、分離ｐＤＣの集団をＩＲＭで処理することによってケモカイン受容体の発現を誘導するステップを含む。この方法は、細胞集団をケモカイン受容体を発現する細胞で豊富化するステップも含む。
【００５７】
ケモカイン受容体を発現する細胞は、インビボで、二次リンパ組織に移動し、ここでＴ細胞への抗原提示が生じ、それによってＴｈ１およびＴｈ２を刺激しうる。ケモカイン受容体を発現する抗原特異的ｐＤＣは、例えば、単独、またはワクチン中の補助剤として、特に有用な治療薬または予防薬を提供しうる。したがって、本発明は、分離ｐＤＣの集団を抗原に曝露し、ｐＤＣをＩＲＭで処理し、ケモカイン受容体を発現する細胞で処理細胞を豊富化し、豊富化された細胞集団を患者に投与すステップを含む、疾患をを治療する方法を提供する。
【実施例】
【００５８】
以下の実施例は、ただ単に、本発明の特徴、利点、および他の詳細をさらに示すために選択された。しかし、これらの実施例はこの目的に役立つが、使用される具体的な材料や量、および他の条件や詳細は、本発明の範囲を過度に限定するように解釈すべきではないことを明確に理解すべきである。
【００５９】
ＩＲＭ、４−アミノ−２−エトキシメチル−α、α−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール、Ｍ．Ｗ．＝３１４．４を、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、滅菌細胞培養等級、シグマ・ケミカル・カンパニー（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ）（ミズーリ州、セントルイス））中に溶解し、そのＩＲＭの１２ｍＭ溶液を形成した。ＩＲＭ溶液を−２０℃下、分割量で保存した。他に特に規定がない限り、ＩＲＭを細胞培養に添加し、最終濃度を３μＭとした。
【００６０】
他に特に規定がない限り、すべてのｐＤＣ細胞培養をＸ−Ｖｉｖｏ２０倍地（バイオウイタッカー（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ）社（Ｉｎｃ．）（メリーランド州、ウォルカーズヴィル））中に３７℃下、５％ＣＯ2で維持した。
【００６１】
正の選択およびｐＤＣの減少用に用いた抗体は、ＢＤＣＡ−２およびＢＤＣＡ−４ミクロビーズ（ミルテニー・バイオテック（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）社（Ｉｎｃ．）（カリフォルニア州、オーバーン））を含む。ビオチン標識モノクローナル抗体を用いて負の選択によってｐＤＣを得た；これらにはＣＤ３、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ５６（アンセル（Ａｎｃｅｌｌ）社（Ｃｏｒｐ．）（ミネソタ州、ベイポート））が含まれる。フローサイトメトリー用の抗体および蛍光色素標識試薬は、ＨＬＡ−ＤＲ−ＰｅｒＣＰ、ＣＤ１２３（ＩＬ−３−Ｒα）−ＰＥ、ＣＤ８０−ＰＥ、ＣＤ８６−ＰＥ、ＣＤ４０−ＰＥ、ビオチン標識ＣＣＲ７、ストレプトアビジン−ＰＥ、ＴＮＦ−α−ＦＩＴＣ、ＴＮＦ−α−ＰＥ、ＩＬ−１２ｐ４０／７０−ＦＩＴＣ、ＩＬ−１２ｐ４０／７０−ＰＥ（ＢＤファルミンゲン（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）（カリフォルニア州、サンディエゴ））、ＩＦＮ−α２−ＦＩＴＣ、およびＩＦＮ−α２−ＰＥ（クロマプローブ（Ｃｈｒｏｍａｐｒｏｂｅ）社（Ｉｎｃ．）（カリフォルニア州、アプトス）を含む。Ｆｃ受容体への非特異的結合は、ＩｇＧ（全分子、ピアス・ケミカル（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）社（Ｃｏｍｐａｎｙ）（イリノイ州、ロックフォード）またはＦｃＲ遮断試薬（ミルテニー・バイオテック社）を用いて行われた。
【００６２】
細胞内フローサイトメトリーは、ゴルジプラグ（ＧｏｌｇｉＰｌｕｇ）を含有するサイトステインキット（ＣｙｔｏＳｔａｉｎ  Ｋｉｔ）（ＢＤファルミンゲン）を用いて行われた。
【００６３】
ＨＳＶ−１（マッキンタイア（ＭａｃＩｎｔｙｒｅ））は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）（バージニア州、マナッサス））から得た。ＬＰＳは、シグマ・ケミカル・カンパニー（ミズーリ州、セントルイス）から得た。組換えヒトサイトカインＩＬ−３およびｒＧＭ−ＣＳＦは、Ｒ＆Ｄシステムズ（Ｓｙｓｔｅｍｓ）社（Ｉｎｃ．）（ミネソタ州、ミネアポリス）から得るとともに、ｒＩＦＮ−αＦは、ＰＢＬバイオメディカル・ラボラトリーズ（Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）（ニュージャージー州、ニューブランズウィック）から得た。
【００６４】
実施例１−ＰＢＭＣ分離
ヒストパケ（Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ）１０７７（シグマ・ケミカル・カンパニー（ミズーリ州、セントルイス）をメーカーによる推奨どおり用いた密度勾配遠心法によってＥＤＴＡで抗凝固処理した全血からＰＭＢＣを分離した。ハンクスの平衡塩溶液（セロックス・ラボラトリーズ（Ｃｅｌｏｘ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）社（Ｉｎｃ．）（ミネソタ州、セントポール）で分離単核球を２回洗浄し、完全ＲＰＭＩ（ｃＲＰＭＩ；ＲＰＭＩ１６４０、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、０．１ｍＭ非必須アミノ酸、１ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１％ペニシリン／ストレプトマイシン、５×１０-5Ｍ２−メルカプトエタノール、および１０％加熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＣＳ、セロックス・ラボラトリーズ社、またはハイクローン・ラボラトリーズ（Ｈｙｃｌｏｎｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）社（Ｉｎｃ．）（ユタ州、ローガン））またはＸ−Ｖｉｖｏ２０倍地（バイオウイタッカー社（メリーランド州、ウォルカーズヴィル）中に再懸濁した。
【００６５】
実施例２−形質細胞様ＤＣの分離
メーカー（ミルテニー・バイオテック社（カリフォルニア州、オーバーン））の指示に従い免疫磁気ビーズの正の選択によってＰＢＭＣからヒトｐＤＣを分離した。簡単に言えば、ｐＤＣ特異的抗体、ＢＤＣＡ−２、またはＢＤＣＡ−４でＰＢＭＣをインキュベートし、ミルテニーＬＣカラムで標識細胞を収集した。正の選択細胞をＸ−Ｖｉｖｏ２０培地中に再懸濁した。
【００６６】
Ｌｉｎ+細胞を消耗させることでＰＢＭＣから負の選択によってヒトｐＤＣも濃縮した。簡単に言えば、１２０ｍＬ全血から分離されたＰＢＭＣを１ｍＬ  ＰＢＳ、１％ＢＳＡ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ中に再懸濁し、ＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ５６、および一部の場合にＣＤ１１ｂおよびＣＤ１１ｃに対して特異的なビオチン標識抗体で、各抗体について最終濃度１００μｇ／ｍＬでインキュベートした。６〜１２℃下、１５分のインキュベーション後、細胞を洗浄し、さらに１５分間、６〜１２℃下にストレプトアビジンミクロビーズまたは抗ビオチンミクロビーズのいずれかでインキュベートした。洗浄後、ミルテニーＣＳカラムまたはＬＳカラム上に非標識画分を収集し、細胞をＸ−Ｖｉｖｏ２０中に再懸濁した。ｐＤＥ集団、ＨＬＡ−ＤＲ+／ＣＤ１２３HIを、０．１〜０．５％の開始ＰＢＭＣと比較して定期的に５〜１０％の最終調製物とした。
【００６７】
実施例３−フローサイトメトリーによって測定される細胞内サイトカインの検出
Ｘ−Ｖｉｖｏ２０培地（バイオウイタッカー社）中の１×１０6／ｍＬで細胞をインキュベートし、ＩＲＭで１時間刺激した。刺激後、細胞培地１ｍＬに対して、ブレフェルジン（Ｂｒｅｆｅｌｄｉｎ）−Ａ（ゴルジプラグ、ＢＤファルミゲン（カリフォルニア州、サンディエゴ））１μＬを添加した。次いで、１２時間以下、３７℃下に５％ＣＯ2で一夜インキュベートした。細胞を洗浄し、ファルミゲンステインバッファー−ＢＳＡ（ＢＤファルミゲン）中に２回再懸濁した。ＩｍｍｕｎｏＰｕｒｅマウスＩｇＧ（全分子、ピアス・ケミカル・カンパニー）でＦｃ受容体を遮断した（４℃下、１５分間、染色緩衝液１００μＬ中１００ｍＬ／１０6細胞）。次いで、細胞を染色緩衝液で洗浄し、次いで表面抗原に対して染色した（４℃下、３０分間、染色緩衝液５０μＬ中の抗体１０μＬ）。次いで、細胞を洗浄し、サイトフィックス（Ｃｙｔｏｆｉｘ）／サイトパーマ（Ｃｙｔｏｐｅｒｍ）（ＢＤファルミゲン）中に再懸濁し、細胞を固定し、浸透化した。パーマ／ウォッシュ溶液（ＢＤファルミゲン）での洗浄後、４℃下、３０〜４５分間、抗−ＴＮＦ−α、または抗−ＩＦＮ−α蛍光色素標識抗体で細胞内サイトカインに対して細胞を染色した。最後に、細胞を洗浄し、染色緩衝液中に再懸濁し、ＦＡＣＳｃａｎフロー（ＦＬＯＷ）サイトメーターおよびＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェア（ＢＤバイオサイエンシズ（Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）（カリフォルニア州、サンノゼ）を用いて分析した。
【００６８】
実施例４−フローサイトメトリーにより測定される共刺激マーカーの発現
ＢＤＣＡ−２またはＢＤＣＡ−４精製細胞を、Ｘ−Ｖｉｖｏ２０培地中で２４時間または４８時間、１０００Ｕ／ｍＬ  ｒＩＬ−３、１０００Ｕ／ｍＬ  ｒＩＦＮ−α、またはＩＲＭで処理した。
【００６９】
染色前に、ファルミゲンステインバッファー−ＢＳＡ中で細胞を洗浄した。次いで、細胞をファルミゲンステインバッファー−ＢＳＡ中に再懸濁し、ＣＤ８０、ＣＤ８６、またはＣＤ４０に対して特異的な蛍光染色標識抗体を添加した。４℃下、３０分後、細胞を洗浄し、フローサイトメトリーによって分析した。
【００７０】
実施例５−フローサイトメトリーによって測定されるケモカイン受容体の発現
蛍光染色標識抗体がＣＣＲ７に対して特異的であったことを除き、実施例４に記載されたように、ＢＤＣＡ−２細胞またはＢＤＣＡ−４細胞を精製し、処理した。
【００７１】
実施例６−リアルタイム（ＲＴ）ＰＣＲおよびＥＬＩＳＡによるサイトカインおよびケモカインの分析
サイトカインおよびケモカインの発現をＲＴ  ＰＣＲによって評価した。ＰＢＭＣおよびＢＤＣＡ−２精製ｐＤＣを２４穴プレート中で３μＭ  ＩＲＭで刺激した。ビヒクル対照細胞をＤＭＳＯで処理した。３７℃下、１時間または２時間のいずれかで細胞をインキュベートした。指示時間で、細胞を１．５ｍＬのエッペンドルフチューブに静かにピペットで取ることによって細胞を収穫し、４℃下、１０分間、４００ｘｇで遠心分離した。チューブから上清を除去し、１ｍＬのＴＲＩｚｏｌ（インビトロゲン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）社（Ｃｏｒｐ．）（カリフォルニア州、カールスバッド）で細胞を溶解した。ＲＮＡを試料から精製し、ＤＮａｓｅＩ（インビトロゲン社）で処理し、汚染ゲノムＤＮＡを除去し、その後に試料をＴＲＩｚｏｌで再抽出した。最終ペレットを１０μＬの水中に懸濁した。１μＬを１：１００に希釈し、ＲＮＡを吸光度（Ａｂｓ260）によって定量化した。
【００７２】
ＲＴ−ＰＣＲ用のスーパースクリプト・ファーストストランド合成システム（ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  Ｆｉｒｓｔ  Ｓｔｒａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ）（インビトロゲン社）を用いてＲＮＡを逆転写した。プライマー・エクスプレス（アプライド・バイオシステムズ・グループ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｇｒｏｕｐ）（カリフォルニア州、フォースターシティー）を用いて定量ＰＣＲ用のプライマーを生成した。各プライマーセットをゲノムＤＮＡを増幅させるように設計し、ヒトゲノムＤＮＡの試料に対して試験し、アンプリコンサイズを検証した。プライマーセットは表Ｉに示されている。ＡＢＩＰＲＩＳＭ（商標）７７００シーケンスデテクター（アプライド・バイオシステムズ・グループ）上で定量ＰＣＲを行った。ＳＹＢＲ（登録商標）グリーンＰＣＲマスターミックス（アプライド・バイオシステムズ・グループ）を用いて増幅産物を検出した。各プライマーセットを各試料につき３回試験した。９５℃下に１５秒間と６０℃下に１分間の３５サイクルでＰＣＲを行う前に、５０℃下に２分間と９５℃下に１０分間、インキュベートした。
【００７３】
計測器ソフトウェアにより、ベースラインより少なくとも１０以上の標準偏差の指定閾値に達する累積シグナルに必要とされる、Ｃtで指定されたサイクル数を計算した。その結果、Ｃt値はターゲットシーケンスの開始コピー数に比例する。ΔΔＣt法（ユーザー広報＃２、アプライド・バイオシステムズ・グループ）を用いて遺伝子発現の相対定量を行った。簡単に言えば、以下の式を用いてＧＡＰＤＨの発現に対して発現のフォールド変化を計算した
フォールド変化＝２-(ΔΔCt)
［式中、ΔΔＣt＝［当該Ｃt遺伝子（刺激試料）−ＣtＧＡＰＤＨ（刺激試料）］−［当該Ｃt遺伝子（ビヒクル対照）−ＣtＧＡＰＤＨ（ビヒクル対照）］］。
【００７４】
サイトカインおよびケモカインのタンパク質レベルを、ＥＬＩＳＡによって組織培養上清または細胞抽出物から測定した。ヒトＴＮＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１０（標準ＩＬ−１０  アッセイおよびＩＬ−１０超高感度）、ＩＬ−６、ＩＬ−１ＲＡ、ＭＣＰ−１、およびＭｉｐ−１αＥＬＩＳＡキットをバイオ・ソース・インターナショナル（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）社（Ｉｎｃ．）（カリフォルニア州、カマリロ）から入手した。ヒトＭｉｐ−３αＥＬＩＳＡキットおよび多種ＩＦＮ−αＥＬＩＳＡキットをそれぞれ、Ｒ＆Ｄシステムズ（ミネソタ州、ミネアポリス）およびＰＢＬバイオメディカル・ラボラトリーズ（Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）（ニュージャージー州、ニューブランズウィック）から入手した。ヒトＩＰ−１０ＥＬＩＳＡキットをセル・サイエンシズ（Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）社（Ｉｎｃ．）（マサチューセッツ州、ノーウッド）から入手した。すべてのＥＬＩＳＡ結果はｐｇ／ｍＬで示されている。ＥＬＩＳＡアッセイに対する確実な検出の限界は、１ｐｇ／ｍＬであるＩＬ−１０超高感度アッセイを除き、４０ｐｇ／ｍＬ以下である。多種ＩＦＮ−αＥＬＩＳＡアッセイは、ＩＦＮ−αＦ（ＩＦＮ−α２１）を除き、ヒトＩＦＮ−αサブタイプのすべてを特異的に検出する。
【００７５】
実施例８−Ｔ細胞活性化アッセイ
凍結ナイーブ臍帯血ＣＤ４+／ＣＤ４５ＲＡ+／ＣＤ４５ＲＯ-Ｔ細胞をオールセルズ（ＡｌｌＣｅｌｌｓ）ＬＬＣ（カリフォルニア州、バークリー）から入手し、メーカーの推奨に従い解凍した。簡単に言えば、凍結細胞を３７℃水浴中で解凍し、ＤＮａｓｅＩ（ステムセル・テクノロジーズ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）社（Ｉｎｃ．）（ブリティッシュコロンビア州、バンクーバー）３００μｇを含有する１５ｍＬの円錐管に移した。Ｘ−Ｖｉｖｏ２０培地（バイオウイタッカー社（メリーランド州、ウォルカーズヴィル））を細胞にゆっくり添加し、量を１５ｍＬまでにした。Ｘ−Ｖｉｖｏ２０培地中で１５分間、２００×ｇで遠心分離することによって、細胞を２回洗浄した。細胞を最後に２×１０6細胞／ｍＬでＸ−Ｖｉｖｏ２０培地中に再懸濁した。
【００７６】
ＢＤＣＡ−４ミクロビーズ（ミルテニー・バイオテック社（カリフォルニア州、オーバーン）で正の選択によって形質細胞様樹状細胞を調製した。Ｘ−Ｖｉｖｏ２０培地中で濃縮−ｐＤＣとＴ細胞の比１：１０（ウェル当り１×１０5ｐＤＣ／ｍＬ：１×１０6Ｔ細胞／ｍＬ）でナイーブ臍帯血Ｔ細胞とｐＤＣを共培養した。培養の開始時、ＩＬ−３［１０００Ｕ／ｍＬ］、ＩＦＮ−α［１０００Ｕ／ｍＬ］、ＩＲＭ、またはビヒクル（ＤＭＳＯ）で細胞を処理した。７２時間後、細胞を含まない上清を収集し、ＥＬＩＳＡによってＩＦＮ−γ、ＩＬ−１３、およびＩＬ−１０について分析した。
【００７７】
実施例９−生存の増強
実施例２に記載されているように分離ｐＤＣを得た。分離ｐＤＣをＩＲＭの有無によってインキュベートした。２４時間後とさらに４８時間後にフローサイトメトリーによって両方の培養における細胞の生存を測定した。
【００７８】
実施例１０−ケモカイン受容体の発現検査
実施例２に記載されているようにｐＤＣの集団を得ることができる。ｐＤＣ含有細胞集団をＸ−Ｖｉｖｏ２０培地（バイオウイタッカー社）中、１×１０6／ｍＬでインキュベートし、１時間、ＩＲＭ（１μＭ〜１０μＭ）で刺激することができる。ケモカインの発現は、実施例５または実施例６のいずれかの方法に従い測定することができる。
【００７９】
実施例１１−ケモカイン受容体を発現する細胞で豊富化されたｐＤＣ集団を用いた処理
実施例２に記載されているように患者から形質細胞様樹状細胞を得ることができる。分離ｐＤＣを抗原（例えば、破傷風トキソイド）およびＩＲＭ（１μＭ〜１０μＭ）と約１時間〜約２４時間、共刺激することができる。
【００８０】
高レベルのケモカイン受容体を発現する刺激ｐＤＣを実施例１０に記載されているように検査することができる。高レベルのケモカイン受容体を発現する形質細胞様樹状細胞は、フローサイトメトリーによって分類することができる。ケモカイン受容体を発現するｐＤＣは、Ｘ−Ｖｉｖｏ２０培地中に再懸濁することができる。
【００８１】
抗原を発現し、高レベルのケモカイン受容体を発現する形質細胞様樹状細胞は、静脈内に、または皮下免疫によって患者に再導入することができる。
【００８２】
統計的方法
図３は、各共刺激マーカーおよび時点で別々に検査されたデータを示す。
【００８３】
図４は、２４時間と４８時間の時点の変換されていないデータおよび逆正弦変換されたデータで別々に行われた、ドナーおよび治療に対する反応変数および説明変数としての％変数とともに分散分析（ＡＮＯＶＡ）を示す。ダンネットの調整を用いて、対照群とＩＲＭ処理細胞の二つ一組の比較を行い、０．０５の有意水準を維持した。２つの方法間に不一致点があった場合は、逆正弦変換データからの結果を報告した。
【００８４】
本願中に引用された特許、特許文献、および刊行物の完全な開示は、それぞれが個別に援用されるようにその全体が参考によって援用される。不一致が生じた場合は、本明細書は、定義を含めて、調整しなければならない。
【００８５】
本発明に対する種々の変形および変更は、本発明の範囲および精神から逸脱することなく当業者には明らかであろう。説明するための実施形態および実施例は、諸例としてのみ示されており、本発明の範囲を限定することは意図されていない。発明の範囲は、次に記載される特許請求の範囲によってのみ限定される。
【００８６】
【表１】
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【図面の簡単な説明】
【００８７】
【図１】ｐＤＣによる抗原提示の結果としてＴ細胞によって産生されるＩＦＮ−γのＥＬＩＳＡ検出を示す図である。
【図２】ｐＤＣによる抗原提示の結果としてＴ細胞によって産生されるＩＬ−１０のＥＬＩＳＡ検出を示す図である。
【図３】ＩＬ−３、ＩＦＮ−α、およびＩＲＭで処理したｐＤＣによって共刺激マーカー発現を比較するフローサイトメトリーデータを示す図である。
【図４】ＩＲＭの有無でインキュベートした場合のｐＤＣの生存を比較するフローサイトメトリーデータを示す図である。
【図５】ＩＬ−３、ＩＦＮ−α、およびＩＲＭで処理したｐＤＣによるケモカイン受容体ＣＣＲ７を比較するフローサイトメトリーデータを示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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