(57)【要約】哺乳動物（特に、ヒト）において、糖尿病、グルコース寛容減損、妊娠糖尿病およびグルコース抵抗性を調節するための方法が開示される。１つの実施形態において、この方法は、ガロタンニン組成物をこの組成物を必要とする哺乳動物に投与する工程を包含する。このガロタンニン組成物は、１以上の選択的加水分解性ガロタンニンを含有する。別の実施形態において、この方法は、１以上の選択的ガロタンニン改変化合物を含有するガロタンニン改変組成物を、被験体に投与する工程を包含する。被験体において体重増加を予防するか処置する方法が開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物被験体において糖尿病を処置するかまたは予防するための方法であって、該方法は、以下：
治療有効量のガロタンニン組成物を、該組成物を必要とする被験体に投与する工程を包含し、
ここで、該ガロタンニン組成物は、１，２，３，４−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，６−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，３，４，６−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘキサ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘキサ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘプタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘプタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−オクタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−オクタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ノナ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ノナ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−デカ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、および１，２，３，４，６−デカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、あるいはこれらの塩からなる群より選択される１以上の加水分解性ガロタンニンを含有し、そして
該ガロタンニン組成物は、以下の化合物：モノ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ジ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、トリ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、テトラ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ウンデカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ドデカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースまたはこれらの混合物のうち１以上を、５乾燥重量％未満含有する、組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記ガロタンニン組成物は、少なくとも５０乾燥重量％の１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、または１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、あるいは１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコースと１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースとの組み合わせを含有する、方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法であって、前記ガロタンニン組成物は、少なくとも５０乾燥重量％の１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコースを含有する、方法。
【請求項４】
請求項１に記載の方法であって、前記ガロタンニン組成物は、少なくとも５０乾燥重量％の１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースを含有する、方法。
【請求項５】
請求項１に記載の方法であって、前記ガロタンニン組成物は、経口的にかまたは注射によって前記被験体に投与される、方法。
【請求項６】
インスリンを前記被験体に投与する工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
被験体における糖尿病を処置するかまたは予防するための方法であって、該方法は、以下：
ガロタンニン改変組成物を該被験体に投与する工程を包含し、
ここで、該ガロタンニン改変組成物は、１以上のガロタンニン改変化合物またはこれらの塩を含有し、各々の該ガロタンニン改変化合物は以下：
【化１】
2005538987.tif 000015
の構造を有し、
ここで、Ｒは、Ｄ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｌ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−アロース、Ｌ−アロース、Ｄ−アルトロース、Ｌ−アルトロース、Ｄ−グロース、Ｌ−グロース、Ｄ−イドース、Ｌ−イドース、Ｄ−タロース、Ｌ−タロース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−フルクトース、α−Ｄ−キシロース、α−Ｄリキソース、β−Ｄリキソース、α−Ｄアラビノース、β−Ｄアラビノース、α−Ｄリボース、β−Ｄリボース、Ｄ−トレハロース、Ｄ−マルトース、Ｄ−セロビオース、ｍｙｏ−イノシトール、Ｄ−グルシトールからなる群より選択され、
Ｘは、エステル結合またはエーテル結合であり、
Ａは、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸、２，３，４−トリヒドロキシ安息香酸、２，４，６−トリヒドロキシ安息香酸からなる群より選択されるトリヒドロキシ安息香酸であるか、または２，３−ジヒドロキシ安息香酸、２，４−ジヒドロキシ安息香酸、３，４−ジヒドロキシ安息香酸からなる群より選択されるジヒドロキシ安息香酸であるか、または３−ヒドロキシ安息香酸および４−ヒドロキシ安息香酸からな群より選択されるモノヒドロキシ安息香酸であり、
ＲがＤ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｌ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−アロース、Ｌ−アロース、Ｄ−アルトロース、Ｌ−アルトロース、Ｄ−グロース、Ｌ−グロース、Ｄ−イドース、Ｌ−イドース、Ｄ−タロース、Ｌ−タロース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−フルクトースである場合は、ｎは５であり、ｑは０、１、２、３、４、または５であり、そしてｚは０であり；
Ｒがα−Ｄ−キシロース、α−Ｄリキソース、β−Ｄリキソース、α−Ｄアラビノース、β−Ｄアラビノース、α−Ｄリボース、β−Ｄリボースである場合は、ｎは４であり、ｑは０、１、２、３、または４であり、そしてｚは０、１、または２であり；
ＲがＤ−グルシトールまたはｍｙｏ−イノシトールである場合は、ｎは６であり、ｑは０、１、２、３、４、５、または６であり、そしてｚは０であり；そして
ＲがＤ−トレハロース、Ｄ−マルトース、またはＤ−セロビオースである場合は、ｎは８であり、ｑは０、１、２、３、４、５、６、７、または８であり、そしてｚは０である、方法。
【請求項８】
請求項７に記載の方法であって、Ｘはエーテル結合である、方法。
【請求項９】
請求項７に記載の方法であって、Ｒは、Ｌ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｌ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−アロース、Ｌ−アロース、Ｄ−アルトロース、Ｌ−アルトロース、Ｄ−グロース、Ｌ−グロース、Ｄ−イドース、Ｌ−イドース、Ｄ−タロース、Ｌ−タロース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−フルクトース、α−Ｄ−キシロース、α−Ｄリキソース、β−Ｄリキソース、α−Ｄアラビノース、β−Ｄアラビノース、α−Ｄリボース、β−Ｄリボース、Ｄ−トレハロース、Ｄ−マルトース、Ｄ−セロビオース、ｍｙｏ−イノシトール、またはＤ−グルシトールである、方法。
【請求項１０】
請求項４に記載の方法であって、Ａは、２，３，４−トリヒドロキシ安息香酸、２，４，６−トリヒドロキシ安息香酸からなる群より選択されるトリヒドロキシ安息香酸であるか、または２，３−ジヒドロキシ安息香酸、２，４−ジヒドロキシ安息香酸、３，４−ジヒドロキシ安息香酸からなる群より選択されるジヒドロキシ安息香酸であるか、または３−ヒドロキシ安息香酸および４−ヒドロキシ安息香酸からなる群より選択されるモノヒドロキシ安息香酸である、方法。
【請求項１１】
請求項４に記載の方法であって、各々の前記ガロタンニン改変化合物は、テトラ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘキサ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘプタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−オクタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ノナ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、および１，２，３，４，６−デカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースの構造以外の構造を有する、方法。
【請求項１２】
増大した血糖値を減少させる必要のある被験体において、該被験体において低血糖症を引き起こさずに増大した血糖値を減少させる方法であって、該方法は、以下の組成物（ａ）および（ｂ）のうちの一方または両方を該被験体に投与する工程を包含し、
ここで該組成物（ａ）は、ガロタンニン組成物であって、１，２，３，４−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，６−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，３，４，６−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘキサ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘキサ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘプタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘプタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−オクタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−オクタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ノナ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ノナ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−デカ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、および１，２，３，４，６−デカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、あるいはこれらの薬学的に受容可能な塩からなる群より選択される１以上の加水分解性ガロタンニンを含有し、そして
該ガロタンニン組成物は、以下の化合物：モノ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ジ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、トリ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、テトラ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ウンデカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ドデカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースまたはこれらの混合物のうち１以上を、５乾燥重量％未満含有する、ガロタンニン組成物であり、そして
該組成物（ｂ）は、ガロタンニン改変組成物であって、以下：
【化２】
2005538987.tif 000016
の構造を有する１以上の化合物、またはこれらの薬学的に受容可能な塩を含有し、
ここで、Ｒは、Ｄ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｌ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−アロース、Ｌ−アロース、Ｄ−アルトロース、Ｌ−アルトロース、Ｄ−グロース、Ｌ−グロース、Ｄ−イドース、Ｌ−イドース、Ｄ−タロース、Ｌ−タロース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−フルクトース、α−Ｄ−キシロース、α−Ｄリキソース、β−Ｄリキソース、α−Ｄアラビノース、β−Ｄアラビノース、α−Ｄリボース、β−Ｄリボース、Ｄ−トレハロース、Ｄ−マルトース、Ｄ−セロビオース、ｍｙｏ−イノシトール、Ｄ−グルシトールからなる群より選択され、
Ｘは、エステル結合またはエーテル結合であり、
Ａは、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸、２，３，４−トリヒドロキシ安息香酸、２，４，６−トリヒドロキシ安息香酸からなる群より選択されるトリヒドロキシ安息香酸であるか、または２，３−ジヒドロキシ安息香酸、２，４−ジヒドロキシ安息香酸、３，４−ジヒドロキシ安息香酸からなる群より選択されるジヒドロキシ安息香酸であるか、または３−ヒドロキシ安息香酸および４−ヒドロキシ安息香酸からな群より選択されるモノヒドロキシ安息香酸であり、
ＲがＤ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｌ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−アロース、Ｌ−アロース、Ｄ−アルトロース、Ｌ−アルトロース、Ｄ−グロース、Ｌ−グロース、Ｄ−イドース、Ｌ−イドース、Ｄ−タロース、Ｌ−タロース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−フルクトースである場合は、ｎは５であり、ｑは０、１、２、３、４、または５であり、そしてｚは０であり；
Ｒがα−Ｄ−キシロース、α−Ｄリキソース、β−Ｄリキソース、α−Ｄアラビノース、β−Ｄアラビノース、α−Ｄリボース、β−Ｄリボースである場合は、ｎは４であり、ｑは０、１、２、３、または４であり、そしてｚは０、１、または２であり；
ＲがＤ−グルシトールまたはｍｙｏ−イノシトールである場合は、ｎは６であり、ｑは０、１、２、３、４、５、または６であり、そしてｚは０であり；そして
ＲがＤ−トレハロース、Ｄ−マルトース、またはＤ−セロビオースである場合は、ｎは８であり、ｑは０、１、２、３、４、５、６、７、または８であり、そしてｚは０である、ガロタンニン改変組成物である、方法。
【請求項１３】
肥満症、ＩＩ型糖尿病、グルコース不耐症、インスリン抵抗性、高血糖症、または高インスリン血症のうち１以上を示す被験体を処置する方法であって、該方法は、以下：
ガロタンニン組成物を該被験体に投与する工程を包含し、
ここで、該ガロタンニン組成物は、１，２，３，４−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，６−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，３，４，６−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘキサ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘキサ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘプタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘプタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−オクタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−オクタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ノナ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ノナ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−デカ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、および１，２，３，４，６−デカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、あるいはこれらの塩からなる群より選択される１以上の加水分解性ガロタンニンを含有し、そして
該ガロタンニン組成物は、以下の化合物：モノ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ジ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、トリ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、テトラ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ウンデカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ドデカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースまたはこれらの混合物のうち１以上を、５乾燥重量％未満含有する、方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法であって、前記ガロタンニン組成物の投与が、前記被験体において前脂肪細胞の脂肪細胞への分化を阻害する、方法。
【請求項１５】
請求項１３に記載の方法であって、前記ガロタンニン組成物は、経口的にかまたは注射によって被験体に投与される、方法。
【請求項１６】
インビトロまたはインビボで前脂肪細胞の脂肪細胞への分化を阻害する方法であって、該方法は、以下：
前脂肪細胞とガロタンニン組成物を接触させる工程を包含し、
ここで、該ガロタンニン組成物は、１，２，３，４−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，６−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，３，４，６−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘキサ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘキサ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘプタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘプタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−オクタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−オクタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ノナ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ノナ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−デカ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、および１，２，３，４，６−デカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、あるいはこれらの塩からなる群より選択される１以上の加水分解性ガロタンニンを含有する、方法。
【請求項１７】
請求項１６に記載の方法であって、該ガロタンニン組成物は、以下の化合物：モノ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ジ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、トリ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、テトラ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ウンデカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ドデカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースまたはこれらの混合物のうち１以上を、５乾燥重量％未満含有する、方法。
【請求項１８】
請求項１６に記載の方法であって、該ガロタンニン組成物は、少なくとも５０乾燥重量％の１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、または１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、あるいは１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコースと１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースとの組み合わせを含有する、方法。
【請求項１９】
請求項１６に記載の方法であって、前記ガロタンニン組成物は、少なくとも５０乾燥重量％の１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースを含有する、方法。
【請求項２０】
インビトロまたはインビボで前脂肪細胞の脂肪細胞への分化を阻害する方法であって、該方法は、以下：
前脂肪細胞を以下：
【化３】
2005538987.tif 000017
の構造を有する１以上の化合物、これらの塩を含有する組成物を接触させる工程を包含し、
ここで、Ｒは、Ｄ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｌ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−アロース、Ｌ−アロース、Ｄ−アルトロース、Ｌ−アルトロース、Ｄ−グロース、Ｌ−グロース、Ｄ−イドース、Ｌ−イドース、Ｄ−タロース、Ｌ−タロース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−フルクトース、α−Ｄ−キシロース、α−Ｄリキソース、β−Ｄリキソース、α−Ｄアラビノース、β−Ｄアラビノース、α−Ｄリボース、β−Ｄリボース、Ｄ−トレハロース、Ｄ−マルトース、Ｄ−セロビオース、ｍｙｏ−イノシトール、Ｄ−グルシトールからなる群より選択され、
Ｘは、エステル結合またはエーテル結合であり、
Ａは、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸、２，３，４−トリヒドロキシ安息香酸、２，４，６−トリヒドロキシ安息香酸からなる群より選択されるトリヒドロキシ安息香酸であるか、または２，３−ジヒドロキシ安息香酸、２，４−ジヒドロキシ安息香酸、３，４−ジヒドロキシ安息香酸からなる群より選択されるジヒドロキシ安息香酸であるか、または３−ヒドロキシ安息香酸および４−ヒドロキシ安息香酸からな群より選択されるモノヒドロキシ安息香酸であり、
ＲがＤ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｌ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−アロース、Ｌ−アロース、Ｄ−アルトロース、Ｌ−アルトロース、Ｄ−グロース、Ｌ−グロース、Ｄ−イドース、Ｌ−イドース、Ｄ−タロース、Ｌ−タロース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−フルクトースである場合は、ｎは５であり、ｑは０、１、２、３、４、または５であり、そしてｚは０であり；
Ｒがα−Ｄ−キシロース、α−Ｄリキソース、β−Ｄリキソース、α−Ｄアラビノース、β−Ｄアラビノース、α−Ｄリボース、β−Ｄリボースである場合は、ｎは４であり、ｑは０、１、２、３、または４であり、そしてｚは０、１、または２であり；
ＲがＤ−グルシトールまたはｍｙｏ−イノシトールである場合は、ｎは６であり、ｑは０、１、２、３、４、５、または６であり、そしてｚは０であり；そして
ＲがＤ−トレハロース、Ｄ−マルトース、またはＤ−セロビオースである場合は、ｎは８であり、ｑは０、１、２、３、４、５、６、７、または８であり、そしてｚは０である、方法。
【請求項２１】
ガロタンニン改変組成物であって、該ガロタンニン改変組成物は、１以上のガロタンニン改変化合物、またはこれらの薬学的に受容可能な塩を含有し、ここで、各々の該ガロタンニン改変化合物は、以下：
【化４】
2005538987.tif 000018
の構造を有し、
ここで、Ｒは、Ｄ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｌ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−アロース、Ｌ−アロース、Ｄ−アルトロース、Ｌ−アルトロース、Ｄ−グロース、Ｌ−グロース、Ｄ−イドース、Ｌ−イドース、Ｄ−タロース、Ｌ−タロース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−フルクトース、α−Ｄ−キシロース、α−Ｄリキソース、β−Ｄリキソース、α−Ｄアラビノース、β−Ｄアラビノース、α−Ｄリボース、β−Ｄリボース、Ｄ−トレハロース、Ｄ−マルトース、Ｄ−セロビオース、ｍｙｏ−イノシトール、Ｄ−グルシトールからなる群より選択され、
Ｘは、エステル結合またはエーテル結合であり、
Ａは、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸、２，３，４−トリヒドロキシ安息香酸、２，４，６−トリヒドロキシ安息香酸からなる群より選択されるトリヒドロキシ安息香酸であるか、または２，３−ジヒドロキシ安息香酸、２，４−ジヒドロキシ安息香酸、３，４−ジヒドロキシ安息香酸からなる群より選択されるジヒドロキシ安息香酸であるか、または３−ヒドロキシ安息香酸および４−ヒドロキシ安息香酸からな群より選択されるモノヒドロキシ安息香酸であり、
ＲがＤ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｌ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−アロース、Ｌ−アロース、Ｄ−アルトロース、Ｌ−アルトロース、Ｄ−グロース、Ｌ−グロース、Ｄ−イドース、Ｌ−イドース、Ｄ−タロース、Ｌ−タロース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−フルクトースである場合は、ｎは５であり、ｑは０、１、２、３、４、または５であり、そしてｚは０であり；
Ｒがα−Ｄ−キシロース、α−Ｄリキソース、β−Ｄリキソース、α−Ｄアラビノース、β−Ｄアラビノース、α−Ｄリボース、β−Ｄリボースである場合は、ｎは４であり、ｑは０、１、２、３、または４であり、そしてｚは０、１、または２であり；
ＲがＤ−グルシトールまたはｍｙｏ−イノシトールである場合は、ｎは６であり、ｑは０、１、２、３、４、５、または６であり、そしてｚは０であり；そして
ＲがＤ−トレハロース、Ｄ−マルトース、またはＤ−セロビオースである場合は、ｎは８であり、ｑは０、１、２、３、４、５、６、７、または８であり、そしてｚは０であり、
そして、各々の該ガロタンニン改変化合物は、テトラ−Ｏ−ガロイル−Ｄ−グルコース、ペンタ−Ｏ−ガロイル−Ｄ−グルコース、ヘキサ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、ヘプタ−Ｏ−ガロイル−Ｄ−グルコース、オクタ−Ｏ−ガロイル−Ｄ−グルコース、ノナ−Ｏ−ガロイル−Ｄ−グルコース、またはデカ−Ｏ−ガロイル−Ｄ−グルコースのβアノマー型ではない、ガロタンニン改変組成物。
【請求項２２】
請求項２１に記載の組成物であって、該組成物は、ペンタキス−Ｏ−（３，４−ジヒドロキシベンゾイル）−β−Ｄ−グルコピラノース、またはテトラキス−Ｏ−（３，４，５−トリヒドロキシベンゾイル）−α−Ｄ−キシロピラノースを含有する、組成物。
【請求項２３】
被験体において糖尿病、インスリン抵抗性、グルコース寛容減損、高血糖症、高インスリン血症または肥満症を処置するための化合物、あるいは該化合物の薬学的に受容可能な塩であって、該化合物は、以下：
【化５】
2005538987.tif 000019
の構造を有し、
ここで、Ｒは、Ｄ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｌ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−アロース、Ｌ−アロース、Ｄ−アルトロース、Ｌ−アルトロース、Ｄ−グロース、Ｌ−グロース、Ｄ−イドース、Ｌ−イドース、Ｄ−タロース、Ｌ−タロース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−フルクトース、α−Ｄ−キシロース、α−Ｄリキソース、β−Ｄリキソース、α−Ｄアラビノース、β−Ｄアラビノース、α−Ｄリボース、β−Ｄリボース、Ｄ−トレハロース、Ｄ−マルトース、Ｄ−セロビオース、ｍｙｏ−イノシトール、Ｄ−グルシトールからなる群より選択され、
Ｘは、エステル結合またはエーテル結合であり、
Ａは、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸、２，３，４−トリヒドロキシ安息香酸、２，４，６−トリヒドロキシ安息香酸からなる群より選択されるトリヒドロキシ安息香酸であるか、または２，３−ジヒドロキシ安息香酸、２，４−ジヒドロキシ安息香酸、３，４−ジヒドロキシ安息香酸からなる群より選択されるジヒドロキシ安息香酸であるか、または３−ヒドロキシ安息香酸および４−ヒドロキシ安息香酸からな群より選択されるモノヒドロキシ安息香酸であり、
ＲがＤ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｌ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−アロース、Ｌ−アロース、Ｄ−アルトロース、Ｌ−アルトロース、Ｄ−グロース、Ｌ−グロース、Ｄ−イドース、Ｌ−イドース、Ｄ−タロース、Ｌ−タロース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−フルクトースである場合は、ｎは５であり、ｑは０、１、２、３、４、または５であり、そしてｚは０であり；
Ｒがα−Ｄ−キシロース、α−Ｄリキソース、β−Ｄリキソース、α−Ｄアラビノース、β−Ｄアラビノース、α−Ｄリボース、β−Ｄリボースである場合は、ｎは４であり、ｑは０、１、２、３、または４であり、そしてｚは０、１、または２であり；
ＲがＤ−グルシトールまたはｍｙｏ−イノシトールである場合は、ｎは６であり、ｑは０、１、２、３、４、５、または６であり、そしてｚは０であり；そして
ＲがＤ−トレハロース、Ｄ−マルトース、またはＤ−セロビオースである場合は、ｎは８であり、ｑは０、１、２、３、４、５、６、７、または８であり、そしてｚは０である、化合物。
【請求項２４】
被験体においてインスリン抵抗性、グルコース寛容減損、高血糖症、高インスリン血症または肥満症を処置するための薬学的組成物であって、該薬学的組成物は、有効量の請求項２３に記載の化合物またはこれらの薬学的に受容可能な塩と、薬学的に受容可能なキャリアもしくは希釈剤とを含有する、組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、哺乳類被験体において真性糖尿病、および異常なグルコースレベルおよび／もしくはインスリンレベルに関連する他の障害を調節するための方法および組成物に関する。本発明の方法は、脂肪生成または低血糖症を誘導しない組成物を使用する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
真性糖尿病（一般的に糖尿病と呼ばれる）とは、原因となる複数の因子に由来し、増大したレベルの血漿グルコース（高血糖症と呼ばれる）によって特徴付けられる疾患プロセスをいう。例えば、ＬｅＲｏｉｔｈ，Ｄ．ら（編）、ＤＩＡＢＥＴＥＳ  ＭＥＬＬＩＴＵＳ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｐａ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１９９６）を参照のこと。すべての参考文献は、本明細書中に引用される。糖尿病協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）によると、真性糖尿病は、世界の人口の約６％に影響を及ぼすと推定される。制御されない高血糖症は、微小血管性疾患および大血管（ｍａｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ）性疾患（腎症、神経障害、網膜症、高血圧症、脳血管疾患および冠状動脈性心臓病が挙げられる）についての増大した危険性に起因する、増加した早発死亡率と関連付けられる。
【０００３】
糖尿病には２つの主要な形態が存在する：１型糖尿病（以前は、インスリン依存性糖尿病またはＩＤＤＭと呼ばれていた）；および２型糖尿病（以前は、非インスリン依存性糖尿病またはＮＩＤＤＭと呼ばれていた）。１型糖尿病は、グルコース利用を調節するホルモンである、インスリンの絶対的な欠乏の結果である。このインスリン欠乏症は、通常は、膵臓のランゲルハンス島内のβ細胞の破壊、および絶対的なインスリンの欠乏によって特徴付けられる。２型糖尿病は、絶対的ではなく相対的なインスリン欠乏症を伴うインスリン抵抗性によって特徴付けられる疾患である。２型糖尿病は、相対的なインスリン欠乏症を伴う支配的（ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔ）インスリン抵抗性から、多少のインスリン抵抗性を伴う支配的インスリン欠乏症の範囲であり得る。インスリン抵抗性は、広範な濃度にわたって生物学的作用を発揮することに対して、インスリンの能力が低下することである。インスリン抵抗性の個体において、その身体は、異常に大量のインスリンを分泌して、この欠乏の補充をする。インスリン抵抗性を補完し、かつグルコースを適切に制御するのに不適切な量のインスリンが存在する場合には、グルコース寛容減損の状態が進展する。多数の個体において、インスリン分泌がさらに衰え、そして血漿グルコースレベルが上昇し、糖尿病の臨床状態が生じる。
【０００４】
２型糖尿病患者の大多数は、β細胞からのインスリンの放出を刺激することによって作用する血糖降下剤、またはインスリンに対する患者の組織感受性を増強する薬剤のいずれか、あるいはインスリンを用いて処置される。スルホニル尿素は、β細胞からのインスリンの放出を刺激する薬剤の例である。インスリンに対する組織感受性を増強するために適用される薬剤の中で、メトホルミンが代表的な例である。スルホニル尿素がＩＩ型糖尿病の処置において広く使用されるにもかかわらず、この治療は、ほとんどの場合、満足のいくものではない。多数のＩＩ型糖尿病患者において、スルホニル尿素は、血糖値を正常化するのに十分ではなく、従って、患者は、糖尿病性合併症を発症する危険性がある。また、多くの患者は、スルホニル尿素を用いる処置に対して応答する能力を次第に失い、従って、次第にインスリン処置を強いられる。この経口血糖降下剤からインスリン治療への患者の移行は、通常は、ＩＩ型糖尿病患者における膵臓のβ細胞の消耗によるものである。
【０００５】
インスリンは、主に、細胞表面の細胞内貯蔵部位からグルコース輸送体４（ＧＬＵＴ４）のトランスロケーションを通して、骨格筋および脂肪組織によるグルコース摂取を刺激する（Ｓａｌｔｉｅｌ，Ａ．Ｒ．およびＫａｈｎ，Ｃ．Ｒ．（２００１）Ｎａｔｕｒｅ  ４１４：７９９−８０６；Ｓａｌｔｉｅｌ，Ａ．およびＰｅｓｓｉｎ，Ｊ．Ｅ．（２００２Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１２：６５−７１；Ｗｈｉｔｅ，Ｍ．Ｆ．（１９９８）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１８２：３−１１）。インスリンに応じて、細胞内膜に存在するＧＬＵＴ４の画分は、形質膜に再分配されて、細胞表面上のＧＬＵＴ４の増加、およびこれらの細胞による増強したグルコース摂取が生じる。主に、ＧＬＵＴ４トランスロケーションは、インスリンレセプター（ＩＲ）を通して媒介される。
【０００６】
グルコース輸送に加えて、インスリンは脂肪生成に深く関わる。脂肪生成は、前脂肪細胞の増殖、および脂肪細胞中の脂肪の蓄積に伴う前脂肪細胞の脂肪細胞への分化に関わるプロセスである。脂肪細胞株３Ｔ３−Ｌ１を用いる研究は、脂肪生成において果たすインスリンの役割が、主に分裂であることを示唆する（４３）。分化前では、３Ｔ３−Ｌ１細胞は、ＩＲよりもＩＧＦ−１レセプターを含む、線維芽細胞様の前脂肪細胞である。インビトロでは、前脂肪細胞の脂肪生成は、一般に使用される分化誘導混合物であるＭＤＩによって誘発され得る。ＭＤＩは、ｃＡｍｐを増強するメチルイソブチルキサンチン（ＭＩＸ）；糖質コルチコイドであるデキサメタゾン（ＤＥＸ）；および前脂肪細胞においてＩＧＦ−１レセプターと相互作用するインスリン（またはＩＧＦ−１）からなる（Ｔｏｎｇ，Ｑ．、Ｈｏｔａｍｉｓｌｉｇｉｌ，Ｇ．Ｓ．（２００１）Ｒｅｖ．ｉｎ  Ｅｎｄｏｃ．  ＆  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．２：３４９−３５５；Ｒｏｓｅｎ，Ｅ．Ｄ．ら、（２０００）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１４：１２９３−１３０７）。ＭＤＩで処理した場合、コンフルエントな前脂肪細胞が細胞周期に再び入り、約２ラウンドの有糸分裂が起こる（Ｍｏｄａｎ−Ｍｏｓｅｓ，Ｄ．ら、（１９９８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３３３：８２５−８３１；Ｔｏｎｇ，Ｑ．、Ｈｏｔａｍｉｓｌｉｇｉｌ，Ｇ．Ｓ．（２００１）Ｒｅｖ．ｉｎ  Ｅｎｄｏｃ．  ＆  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．２：３４９−３５５；Ｒｏｓｅｎ，Ｅ．Ｄ．ら、（２０００）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１４：１２９３−１３０７）。これは、一般にクローン増殖と呼ばれるプロセスである。クローン増殖の後、前脂肪細胞は、細胞周期を出て、脂肪細胞遺伝子（Ｃ／ＥＢＰ−α、Ｃ／ＥＢＰ−β、Ｃ／ＥＢＰ−γ、およびＰＰＡＲ−γが挙げられる）を発現することによって脂肪細胞への分化を開始する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
その脂肪生成効果の結果、インスリンは、２型糖尿病を有する患者の肥満を促進する、望ましくない効果を有する（Ｍｏｌｌｅｒ，Ｄ．Ｅ．（２００１）Ｎａｔｕｒｅ  ４１４１：８２１−８２７を参照のこと）。不運なことに、２型糖尿病を有する患者のグルコース輸送を促すために最近使用されている他の抗糖尿病薬もまた、脂肪生成活性を有する。従って、最近の薬物治療は、血糖の低下を提供し得るが、多くの場合、肥満を促進する。従って、付随する脂肪生成の副作用を生じることなしに、高血糖症を補正する抗糖尿病薬の新たな生成を開発することが、極めて望ましい。高血糖症を引き起こすことなく、糖尿病患者においてグルコース摂取を誘導する化合物もまた、望ましい。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の要旨）
本発明は、哺乳動物（特にヒト）において、糖尿病、グルコース寛容減損、妊娠糖尿病およびグルコース抵抗性を調節するための方法を提供する。１つの実施形態において、この方法は、本明細書中以下「ガロタンニン組成物」と呼ぶ組成物を、この組成物を必要とする哺乳動物に投与する工程を包含する。このガロタンニン組成物は、実質的に純粋であり、そして１，２，３，４−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，６−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，３，４，６−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘキサ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘキサ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘプタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘプタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−オクタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−オクタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ノナ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ノナ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−デカ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、および１，２，３，４，６−デカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースからなる群より選択される１以上の加水分解性ガロタンニンを含有する。本明細書中で使用される場合、用語「実質的に純粋」とは、このガロタンニン組成物が、列挙したガロタンニンのうちの１つまたは組み合わせを少なくとも９５乾燥重量％含有し、かつ以下の化合物：モノ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ジ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、トリ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、テトラ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ウンデカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ドデカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースまたはこれらの混合物のうちの１つまたは組み合わせを、５％乾燥重量％未満含有することを意味する。
【０００９】
別の実施形態において、この方法は、本明細書中以下「ガロタンニン改変組成物」と呼ぶ組成物を、被験体に投与する工程を包含する。このガロタンニン改変組成物は、１以上のガロタンニン改変化合物またはこれらの塩を含有する。このガロタンニン改変化合物は、以下：
【００１０】
【化６】
2005538987.tif 000002
【００１１】
の構造を有し、
ここで、Ｒは、Ｄ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｌ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−アロース、Ｌ−アロース、Ｄ−アルトロース、Ｌ−アルトロース、Ｄ−グロース、Ｌ−グロース、Ｄ−イドース、Ｌ−イドース、Ｄ−タロース、Ｌ−タロース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−フルクトース、α−Ｄ−キシロース、α−Ｄリキソース、β−Ｄリキソース、α−Ｄアラビノース、β−Ｄアラビノース、α−Ｄリボース、β−Ｄリボース、Ｄ−トレハロース、Ｄ−マルトース、Ｄ−セロビオース、ｍｙｏ−イノシトール、Ｄ−グルシトールからなる群より選択され、
Ｘは、エステル結合またはエーテル結合であり、
Ａは、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸、２，３，４−トリヒドロキシ安息香酸、２，４，６−トリヒドロキシ安息香酸からなる群より選択されるトリヒドロキシ安息香酸であるか、または２，３−ジヒドロキシ安息香酸、２，４−ジヒドロキシ安息香酸、３，４−ジヒドロキシ安息香酸からなる群より選択されるジヒドロキシ安息香酸であるか、または３−ヒドロキシ安息香酸および４−ヒドロキシ安息香酸からな群より選択されるモノヒドロキシ安息香酸であり、
ＲがＤ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｌ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−アロース、Ｌ−アロース、Ｄ−アルトロース、Ｌ−アルトロース、Ｄ−グロース、Ｌ−グロース、Ｄ−イドース、Ｌ−イドース、Ｄ−タロース、Ｌ−タロース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−フルクトースである場合は、ｎは５であり、ｑは０、１、２、３、４、または５であり、そしてｚは０であり；
Ｒがα−Ｄ−キシロース、α−Ｄリキソース、β−Ｄリキソース、α−Ｄアラビノース、β−Ｄアラビノース、α−Ｄリボース、β−Ｄリボースである場合は、ｎは４であり、ｑは０、１、２、３、または４であり、そしてｚは０、１、または２であり；
ＲがＤ−グルシトールまたはｍｙｏ−イノシトールである場合は、ｎは６であり、ｑは０、１、２、３、４、５、または６であり、そしてｚは０であり；そして
ＲがＤ−トレハロース、Ｄ−マルトース、またはＤ−セロビオースである場合は、ｎは８であり、ｑは０、１、２、３、４、５、６、７、または８であり、そしてｚは０である。このガロタンニン改変組成物中の各々の化合物は、テトラ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘキサ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘプタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−オクタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ノナ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、および１，２，３，４，６−デカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースの構造以外の構造を有する。
【００１２】
第３の実施形態において、この方法は、本発明のガロタンニン組成物と本発明のガロタンニン改変組成物との組み合わせを、患者に投与する工程を包含する。
【００１３】
本発明はまた、患者において体重増加を予防するかまたは処置する方法を提供する。この方法は、本発明のガロタンニン組成物、本発明のガロタンニン改変組成物、または本発明のガロタンニン組成物と本発明のガロタンニン改変組成物との組み合わせを、被験体に投与する工程を包含する。
【００１４】
本発明はまた、前脂肪細胞の脂肪細胞への分化を阻害する方法を提供する。この方法は、前脂肪細胞を、本発明の天然のガロタンニン組成物、本発明のガロタンニン改変組成物、または本発明の天然のガロタンニン組成物と本発明のガロタンニン改変組成物との組み合わせと、接触させる工程を包含する。この前脂肪細胞は、培養物中かまたは哺乳類被験体中に存在し得る。
【００１５】
本発明はまた、以下：
【００１６】
【化７】
2005538987.tif 000003
【００１７】
の構造を有する化合物またはこれらの塩である、本発明のガロタンニン改変組成物、ならびにこのような化合物またはこれらの塩を含有する薬学的組成物に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
（発明の詳細な説明）
（定義）
用語「真性糖尿病」または「糖尿病」とは、一般的に、体内の適切な血糖値を維持することの不全を生じる、グルコースの産生および利用における代謝性欠損症によって特徴付けられる疾患または状態を意味する。これらの欠損症の結果、「高血糖症」と呼ばれる血糖の上昇が生じる。糖尿病の２つの主要な型は、１型糖尿病および２型糖尿病である。上記のように、１型糖尿病は、一般的に、グルコース利用を調節するホルモンである、インスリンの完全な欠乏の結果である。２型糖尿病は、多くの場合、正常なレベルのインスリンにもかかわらず生じるか、または上昇したレベルのインスリンでさえも生じ、そして組織がインスリンに対して適切に応答できないことから生じ得る。ほとんどの２型糖尿病患者は、インスリン抵抗性であり、そしてインスリンの相対的欠乏症を有し、この欠乏症では、インスリン分泌は末梢組織のインスリンへの応答に対する抵抗性を補完し得ない。さらに、多くの２型糖尿病患者は、肥満である。グルコースホメオスタシスの障害の他の型としては、正常なグルコースホメオスタシスと糖尿病との中間にある代謝段階であるグルコース耐性障害、および１型糖尿病もしくは２型糖尿病の履歴を有さない女性における妊娠中のグルコース耐性である妊娠糖尿病メリティス（ｍｅｌｌｉｔｕｓ）が挙げられる。
【００１９】
２型糖尿病、グルコース耐性障害、および妊娠糖尿病についての診断に関する指針は、糖尿病協会によって概説されている（例えば、Ｔｈｅ  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍｅｌｌｉｔｕｓ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ、（１９９９）Ｖｏｌ  ２（Ｓｕｐｐｌ  １）：Ｓ５−１９）。
【００２０】
本明細書中で使用される場合、用語、糖尿病の「症状」としては、多尿症、多渇症、および多食症、高インスリン血症、ならびに高血糖症が挙げられる（これらの一般的用法を援用する）が、これらに限定されない。例えば、「多尿症」とは、所定の期間での大量の尿の排泄を意味し；「多渇症」とは、慢性的な過度の渇きを意味し；「多食症」とは、過食を意味し；そして高インスリン血症とは、上昇したインスリンの血液レベルを意味する。糖尿病の他の症状としては、例えば、特定の感染症（特に、真菌感染症およびブドウ球菌感染症）に対する増大した感受性、吐き気、およびケトアシドーシス（血中のケトン体の増強した生成）が挙げられる。
【００２１】
用語、糖尿病の「合併症」としては、微小血管の合併症および大血管の合併症が挙げられるが、これらに限定されない。微小血管の合併症は、一般的に微小血管損傷を生じる合併症である。これらの合併症としては、例えば、網膜症（眼の中の血管損傷に起因する視覚の障害または喪失）；神経障害（神経系に対する血管損傷に起因する神経損傷および足部問題）および腎症（腎臓内の血管損傷に起因する腎臓疾患）が挙げられる。大血管の合併症は、一般的に大血管損傷から生じる合併症である。これらの合併症としては、例えば、心臓血管疾患および末梢血管疾患が挙げられる。心臓血管疾患とは、心臓の血管の疾患をいう。例えば、Ｋａｐｌａｎ，Ｒ．Ｍ．ら、ＨＥＡＬＴＨ  ＡＮＤ  ＨＵＭＡＮ  ＢＥＨＡＶＩＯＲ中の「Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅｓ」、ｐｐ．２０６−２４２（ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９９３）。心臓血管疾患は、一般的に、以下に挙げるいくつかの形態のうちの１つである；例えば、高血圧症、冠状動脈性心臓病、脳卒中、およびリウマチ性心疾患。末梢血管疾患とは、心臓の外側の任意の血管の疾患をいう。これは、多くの場合、血液を脚および腕の筋肉に輸送する血管の狭窄である。
【００２２】
本明細書中で使用される場合、「加水分解性ガロタンニン」とは、１以上のトリヒドロキシ安息香酸を有するグルコースのエステルである、ガロタンニングルコース化合物をいう。実質的に純粋な本発明の加水分解性ガロタンニン組成物は、５個、６個、７個、８個、９個、または１０個のガロイル基を有する加水分解性ガロタンニンの１以上のαアノマーまたはβアノマー、あるいはこれらの薬学的に受容可能な塩を含有する。加水分解性ガロタンニンのヘキサ体、ヘプタ体、オクタ体、ノナ体、およびデカ体は、各々が、それぞれ、グルコース核の炭素１、炭素２、炭素３、炭素４、および炭素６に連結するガロイル基の初期集合、ならびに１〜５個のさらなるガロイル基を含むガロイル基の二次集合を有する。二次集合のガロイル基は、一次集合中の別個のガロイル基に連結される。実質的に純粋な本発明のガロタンニン組成物はまた、１，２，３，４−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，６−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，３，４，６−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコースを含有し得る。
【００２３】
加水分解性ガロタンニンのβアノマーは、多くの植物ベースの食品（一般的な果物（液果、バナナ、ブドウ、リンゴ）；穀物（大麦、モロコシ）；茶およびワインのような植物由来の飲料）中に見出される。代表的には、加水分解性ガロタンニンのβアノマーはまた、市販のタンニン酸混合物中に見出される。市販のタンニン酸混合物はまた、１個、２個、３個、１１個、および１２個のガロイル基を含む、様々な量のメチルガロイル化合物およびガロイルグルコース化合物を含有する。実質的に純粋な本発明の加水分解性ガロタンニン組成物は、以下の化合物：モノ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ジ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、トリ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、テトラ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ウンデカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ドデカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースまたはこれらの混合物のうちの１つまたは混合物を、５乾燥重量％未満、好ましくは３乾燥重量％未満、より好ましくは１乾燥重量％未満含む。従って、本発明の方法で使用される実質的に純粋な加水分解性ガロタンニン組成物は、市販のガロタンニンの混合物とは異なる。
【００２４】
本明細書中で使用される場合、「ガロタンニン改変体」とは、テトラ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ヘキサ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ヘプタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、オクタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ノナ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、デカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ウンデカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、およびドデカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースに対して構造が類似であるが同一ではない化合物をいう。
【００２５】
この改変体は、以下：
【００２６】
【化８】
2005538987.tif 000004
【００２７】
の構造を有し、
ここで、Ｒは、Ｄ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｌ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−アロース、Ｌ−アロース、Ｄ−アルトロース、Ｌ−アルトロース、Ｄ−グロース、Ｌ−グロース、Ｄ−イドース、Ｌ−イドース、Ｄ−タロース、Ｌ−タロース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−フルクトース、α−Ｄ−キシロース、α−Ｄリキソース、β−Ｄリキソース、α−Ｄアラビノース、β−Ｄアラビノース、α−Ｄリボース、β−Ｄリボース、Ｄ−トレハロース、Ｄ−マルトース、Ｄ−セロビオース、ｍｙｏ−イノシトール、Ｄ−グルシトールからなる群より選択され、
Ｘは、エステル結合またはエーテル結合であり、
Ａは、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸、２，３，４−トリヒドロキシ安息香酸、２，４，６−トリヒドロキシ安息香酸からなる群より選択されるトリヒドロキシ安息香酸であるか、または２，３−ジヒドロキシ安息香酸、２，４−ジヒドロキシ安息香酸、３，４−ジヒドロキシ安息香酸からなる群より選択されるジヒドロキシ安息香酸であるか、または３−ヒドロキシ安息香酸および４−ヒドロキシ安息香酸からな群より選択されるモノヒドロキシ安息香酸であり、
ＲがＤ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｌ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−アロース、Ｌ−アロース、Ｄ−アルトロース、Ｌ−アルトロース、Ｄ−グロース、Ｌ−グロース、Ｄ−イドース、Ｌ−イドース、Ｄ−タロース、Ｌ−タロース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−フルクトースである場合は、ｎは５であり、ｑは０、１、２、３、４、または５であり、そしてｚは０であり；
Ｒがα−Ｄ−キシロース、α−Ｄリキソース、β−Ｄリキソース、α−Ｄアラビノース、β−Ｄアラビノース、α−Ｄリボース、β−Ｄリボースである場合は、ｎは４であり、ｑは０、１、２、３、または４であり、そしてｚは０、１、または２であり；
ＲがＤ−グルシトールまたはｍｙｏ−イノシトールである場合は、ｎは６であり、ｑは０、１、２、３、４、５、または６であり、そしてｚは０であり；そして
ＲがＤ−トレハロース、Ｄ−マルトース、またはＤ−セロビオースである場合は、ｎは８であり、ｑは０、１、２、３、４、５、６、７、または８であり、そしてｚは０である。
【００２８】
本明細書中で使用される場合、「脂肪細胞（ａｄｉｐｏｃｙｔｅ）」は、脂肪細胞（ｆａｔ  ｃｅｌｌ）をいう。形態学的には、脂肪細胞は円形であり、トリグリセリド（脂肪）小胞を含む細胞である。生化学的には、脂肪細胞は、それらの細胞表面上に高いレベルのインスリンレセプターを発現し、グルコース輸送体４（ＧＬＵＴ４）に関して高度に活性なインスリン媒介性グルコース輸送シグナル経路を示す。インビボでは、脂肪細胞は、脂肪（トリグリセリド）の合成および貯蔵、ならびにグルコース代謝（血液からのグルコースの摂取およびグルコースの脂肪への変換）に関与する。
【００２９】
本明細書中で使用される場合、「前脂肪細胞」とは、ホルモン（例えば、インスリンおよび糖質コルチコイド）の作用下で分裂し、脂肪細胞に分化する脂肪細胞前駆細胞をいう。形態学的には、前脂肪細胞は、線維芽細胞のよう（薄く、紡錘型）であり、それらの細胞質においてトリグリセリド（脂肪）小胞を欠いている。脂肪細胞と比較すると、前脂肪細胞は、マイトジェンシグナルおよび分化シグナルを受け取るために、低いレベルのインスリンレセプター、および相対的に高いレベルのインスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）レセプターを含む。誘導または完全な分化なしに、前脂肪細胞は、ＧＬＵＴ４も他の分化関連遺伝子（例えば、ＰＰＡＲ−γ、Ｃ／ＥＢＰ−αまたはＣ／ＥＢＰ−γ）も発現しない。前脂肪細胞の細胞内グルコース輸送活性は、脂肪細胞の細胞内グルコース輸送活性よりも低い。
【００３０】
本明細書中で使用される場合、「脂肪生成」とは、前脂肪細胞が分裂し、脂肪細胞に分化するプロセスをいう。
【００３１】
本明細書中で使用される場合、「脂質生成」とは、脂肪が合成され、脂肪細胞に蓄積されるプロセスをいう。
【００３２】
用語「哺乳動物」としては、限定なしに、ヒト、家庭用動物（ｄｏｍｅｓｔｉｃ  ａｎｉｍａｌ）（例えば、イヌまたはネコ）、家畜（ウシ、ウマ、またはブタ）、サル、ウサギ、マウス、および実験動物が挙げられる。
【００３３】
１つの局面において、本発明は、哺乳動物（特に糖尿病、グルコース不耐性障害、インスリン抵抗性または妊娠糖尿病を有する哺乳動物）の細胞において、グルコースの摂取を刺激するための方法を提供する。別の局面において、本発明は、哺乳動物（特に、肥満か、過体重であるか、あるいは真性糖尿病、グルコース不耐性、または妊娠糖尿病の症状を示す哺乳動物）において、前脂肪細胞の脂肪細胞への分化を阻害するための方法を提供する。本発明は、部分的には、特定の加水分解性ガロタンニンおよび特定のガロタンニン改変体が、脂肪細胞へのグルコース輸送を刺激し得、そして前脂肪細胞の脂肪細胞への分化を阻害し得るという本発明者らの発見に基づく。本発明の方法はまた、部分的には、特定の加水分解性ガロンタンニンが、哺乳動物において血糖値および血液のインスリンレベルを低下させるという本発明者らの発見に基づく。従って、本発明の方法は、哺乳動物における糖尿病、グルコース耐性障害、インスリン抵抗性および妊娠糖尿病を処置するかまたは予防するのに有用である。
【００３４】
１つの実施形態において、哺乳動物における糖尿病、グルコース耐性障害、インスリン抵抗性および妊娠糖尿病を処置するかまたは予防するための本発明の方法は、治療有効量の実質的に純粋な加水分解性ガロタンニン組成物を、その哺乳動物に投与する工程を包含する。実質的に純粋なガロタンニン組成物は、１，２，３，４−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，６−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，３，４，６−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘキサ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘキサ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘプタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘプタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−オクタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−オクタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ノナ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ノナ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−デカ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、および１，２，３，４，６−デカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースからなる群より選択される加水分解性ガロタンニン、あるいはこれらの加水分解性ガロタンニンの薬学的に受容可能な塩を１以上含有する。実質的に純粋な加水分解性ガロタンニン組成物は、以下の化合物：モノ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ジ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、トリ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、テトラ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ウンデカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ドデカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースまたはこれらの混合物のうちの１以上を、５乾燥重量％未満含有する。
【００３５】
別の実施形態において、哺乳動物における糖尿病、グルコース耐性障害、インスリン抵抗性および妊娠糖尿病を処置するかまたは予防するための方法は、１以上のガロタンニン改変化合物を含有する治療有効量のガロタンニン改変組成物を、患者に投与する工程を包含する。さらなる実施形態において、この方法は、実質的に純粋な本発明の加水分解性ガロタンニン組成物、およびガロタンニン改変組成物の両方を、患者に投与する工程を包含する。
【００３６】
必要に応じて、糖尿病を治療するかまたは予防するために使用される他の物質（インスリン、スルホニル尿素、メグリチニド、ビグアナイド（グルコファージ（Ｇｌｕｃｏｐｈａｇｅ）またはメトホルミン）、チアゾリジンジオン（ＴＺＤ）、およびα−グルコシダーゼインヒビターが挙げられる）が、本発明の加水分解性ガロタンニンまたはガロタンニン改変組成物と組み合わせて、哺乳動物に投与される。Ｉ型真性糖尿病を有するこれらの哺乳動物について、インスリンは、ガロタンニン組成物および／またはガロタンニン改変組成物と組み合わせて投与されることが好ましい。
【００３７】
（被験体）
本発明の方法は、糖尿病、妊娠糖尿病、インスリン抵抗性またはグルコース耐性障害を有すると診断されている哺乳動物を処置するのに有用である。本発明の方法はまた、糖尿病、妊娠糖尿病、インスリン抵抗性またはグルコース耐性障害の症状を示す哺乳動物、あるいは糖尿病、妊娠糖尿病、インスリン抵抗性またはグルコース耐性障害に対して遺伝的な疾病素質を有する哺乳動物を処置するのに有用である。本発明の方法はまた、患者（特に、肥満または過体重である患者）における体重増加を予防するかまたは処置するのに有用である。
【００３８】
（投与の形態）
本発明の組成物は、注射（皮下注射、非経口注射、および静脈内注射）によってか、または経口投与によって、被験体に投与される。その投与の容易さの理由から、好ましい投与経路は、経口投与である。
【００３９】
（処方物）
本発明の方法に従う使用のためのガロタンニン組成物およびガロタンニン改変組成物は、従来の方法を使用して薬学的組成物中に処方される。このような薬学的調製物は、１以上の本発明の加水分解性ガロタンニン、および／または１以上の本発明のガロタンニン改変組成物を含有する。必要に応じて、この薬学的組成物は、薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤をさらに含有する。用語「薬学的に受容可能」とは、ガロタンニン組成物またはガロタンニン改変組成物の有効性を妨げない無毒性物質を意味する。多くのこのようなキャリアが慣用的に使用され、そして薬学のテキストを参照することによって同定され得る。このキャリアの特性は、投与経路、および組成物中の特定の化合物もしくは化合物の組み合わせに依存する。このような処方物の調製は、当業者のレベルの範囲内である。この調製物は、ガロタンニンもしくはガロタンニン改変体の活性を増強するか、またはそれらの活性を補完するかのいずれかの、他の物質をさらに含有する。この調製物は、賦形剤、塩、緩衝剤、安定剤、可溶化剤、および当該分野で周知の他の物質をさらに含み得る。
【００４０】
薬学的組成物は、単位投薬形態で都合よく提供され得、そして薬学分野で周知の任意の方法によって調製され得る。用語「単位投薬量」とは、標的の疾患または障害を処置することにおいて有効であるのに十分な、ガロタンニン組成物またはガロタンニン改変組成物の所定の量を意味する。すべての方法は、ガロタンニン組成物、ガロタンニン改変組成物のいずれかまたは両方を、キャリアもしくは希釈剤、およびその他の任意の副成分と接触させる工程を包含する。
【００４１】
経口投与について、薬学的組成物は、例えば、薬学的に受容可能な賦形剤（例えば、結合剤（例えば、アルファ化（ｐｒｅｇｅｌａｔｉｎｉｚｅｄ）トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、またはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えば、ラクトース、微結晶性セルロース、またはリン酸水素カルシウム）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、または滑石）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプン、またはグリコール酸デンプンナトリウム）；あるいは湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム））と共に、従来の手段によって調製された錠剤またはカプセルの形態を取り得る。錠剤は、当該分野で周知の方法によってコーティングされ得る。経口投与のための液体調製物は、例えば、水溶液、シロップまたは懸濁液の形態を取り得るか、あるいは使用前に水または他の適切なビヒクルと共に構成するために、乾燥生成物として提供され得る。このような液体調製物は、薬学的に受容可能な添加物（例えば、懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体、または硬化食用脂）；乳化剤（例えば、レシチン、またはアカシア）；非水性ビヒクル（例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコール、または分留植物油）；および防腐剤（例えば、メチル−ｐ−ヒドロベンゾエートもしくはプロピル−ｐ−ヒドロベンゾエート、またはソルビン酸））と共に、従来の方法によって調製され得る。調製物はまた、必要に応じて、緩衝塩、香料、着色料、および甘味剤を含有し得る。調製物はまた、栄養学的処方物の形態を取り得る。経口投与用の調製物は、ガロタンニン組成物が徐放されるように処方され得る。唾液中には高いレベルのプロリンを含むタンパク質が存在するため、好ましい経口処方物は、唾液との相互作用からガロタンニン組成物を保護するためのコーティングを含む、カプセルの形態であることが望まれる。
【００４２】
ガロタンニン組成物およびガロタンニン改変組成物は、注射（例えば、ボーラス注射、または連続注射）による非経口投与のために処方され得る。注射のための処方物は、添加した防腐剤と共に、単位投薬形態（例えば、アンプルまたは複数回用量容器）で提供され得る。組成物は、懸濁液、油性ビヒクルまたは水性ビヒクル中の溶液または乳濁液のような形態を取り得、そして処方剤（例えば、懸濁剤、安定剤および／または分散剤）を含有し得る。あるいは、活性成分は、使用前に適切なビヒクル（例えば、発熱物質を含まない滅菌水）と共に構成するための粉末形態、錠剤またはカプセルであり得る。
【００４３】
ガロタンニン組成物およびガロタンニン改変組成物はまた、例えば、従来の坐剤の主成分（例えば、カカオバター、他のグリセリドもしくはカーボワックス）を含む坐剤または保持浣腸剤のような直腸組成物中に処方される。
【００４４】
上記の処方物に加えて、ガロタンニン組成物およびガロタンニン改変組成物はまた、貯蔵調製物として処方され得る。このような長く作用する処方物は、移植（例えば、皮下または筋肉内に）または筋肉内注射によって投与され得る。従って、例えば、化合物は、適切な高分子物質もしくは疎水性物質（例えば、適切な油中の乳濁液として）もしくはオン交換樹脂と共にか、あるいはやや溶け難い誘導体（例えば、やや溶け難い塩）として処方され得る。
【００４５】
（投薬量）
ガロタンニン組成物およびガロタンニン改変組成物は、治療有効量で被験体に投与される。本明細書中で使用される場合、用語「治療有効量」とは、有意義な利益（例えば、高血糖症の軽減（血糖値の低下）、高インスリン血症の軽減（血中インスリンレベルの低下）、グルコース耐性の改善、体重増加および体重減少の予防）を示すのに十分である総量を意味する。有意義な結果を得るのに必要とされるガロタンニン組成物またはガロタンニン改変組成物の投薬量は、本開示の観点で、当業者が適切なコントロールと共に定期的試行を行うことによって決定され得る。コントロールに対する適切な処置群の比較は、特定の投薬量が、被験体の血糖値を低下させるかまたは脂肪生成を阻害するのに有効であるかどうかを示す。
【００４６】
必要とされるガロタンニン組成物の量は、処置されるべき状態の性質および重篤度、ならびに被験体が受けた以前の処置の性質に依存する。最終的には、投薬量は、臨床試験を使用して決定される。まず、臨床医は、動物研究に由来する用量を投与する。有効量は、組成物の単回投与によって達成され得る。あるいは、有効量は、被験体への組成物の複数回投与によって達成される。インビトロでは、生物学的有効量（すなわち、グルコース摂取を誘導するのに十分な量）は、活性の全範囲を決定するために、２倍の増分で投与される。経口投与、皮下投与および静脈内投与の効力は、臨床研究で決定される。ガロタンニン組成物の単一投与は有益であり得るが、複数回用量が好ましいことが期待される。
【００４７】
（細胞におけるグルコース摂取を刺激するための投薬量を決定する方法）
細胞におけるグルコース摂取活性は、標準的なアッセイを使用して２−デオキシ−Ｄ−[３Ｈ]グルコースの摂取を測定することによって分析され得る。１２ウェルプレート中で増殖させたコンフルエントな３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞を、無血清ＤＭＥＭで２回洗浄し、そして１ｍＬの同じ培地と共に３７℃で２時間インキュベートする。その細胞を、Ｋｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ−Ｈｅｐｅｓ（ＫＲＰ）緩衝液で３回洗浄し、そして０．９ｍＬ  ＫＲＰ緩衝液と共に３７℃で３０分間インキュベートする。次いで、インスリン（ポジティブコントロール）、またはガロタンニンもしくはガロタンニン改変体（実験）を、あらかじめ決められた濃度で添加し、そして脂肪細胞を３７℃で１５分間インキュベートする。グルコース摂取を、０．１ｍＬ  ＫＲＰ緩衝液、３７ＭＢｑ／Ｌ  ２−デオキシ−Ｄ−[３Ｈ]グルコース、および最終濃度として１ｍｍｏｌ／Ｌのグルコースの添加によって開始する。１０分後、グルコース摂取を、細胞を冷ＰＢＳで３回洗浄することによって終了させる。その細胞を、０．７ｍＬの１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を用いて３７℃で２０分間溶解させる。その細胞溶解物によって保持された放射能を、シンチレーションカウンターによって決定する。最大のグルコース摂取を誘導する投薬量は、実験サンプルの間で選択され得る。
【００４８】
（動物におけるグルコース摂取を刺激するための投薬量を決定する方法）
８週齢の雄性ｄｂ／ｄｂ（レプチンレセプター欠乏）マウスが、インビボでグルコース摂取を刺激するための投薬量を決定するために使用され得る。このマウスを、いくつの投薬量を分析するかによって、３〜４つの群に分ける。あらかじめ決められた濃度のガロタンニン組成物を有する１０μｌの試験溶液を、試験マウスに経口投与する。ネガティブコントロールマウスには、同じ量の水を与える。投与後、経口投与後の様々な時間にて、マウスの尾部から血液を採取する。投与後の所定の時間でのマウスの血糖値は、６μｌの血液を、Ｏｎｅ  Ｔｏｕｃｈ  Ｂａｓｉｃ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｌｉｆｅｓｃａｎ製）に適用することによって測定する。有効投薬量範囲および最適投薬量は、ネガティブ（水）コントロール群のグルコースレベルに対して、様々な投薬量による血糖値の減少を比較することによって決定され得る。
【００４９】
（脂肪生成および体重増加の阻害）
別の局面において、本発明は、前脂肪細胞の脂肪細胞への分化を阻害するための方法を提供する。脂肪細胞は、培養物中かまたは哺乳類被験体中に存在し得る。１つの実施形態において、この方法は、前脂肪細胞を、生物学的有効量の加水分解性ガロタンニン組成物と接触させる工程を包含する。このガロタンニン組成物は、実質的に純粋である。そして、このガロタンニン組成物は、１，２，３，４−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，６−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，３，４，６−テトラ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘキサ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘキサ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘプタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ヘプタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−オクタ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−オクタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ノナ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ノナ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−デカ−Ｏ−ガロイル−α−Ｄ−グルコース、および１，２，３，４，６−デカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースからなる群より選択される１以上の加水分解性ガロタンニンを含有する。
【００５０】
別の実施形態において、この方法は、前脂肪細胞を、１以上のガロタンニン改変体を含有する生物学的有効量のガロタンニン改変組成物と接触させる工程を包含する。さらなる実施形態において、この方法は、患者に対して、前脂肪細胞を、本発明の加水分解性ガロタンニン組成物およびガロタンニン改変組成物の両方と接触させる工程を包含する。
【００５１】
（インビトロで投薬量を決定するための手順）
インビトロで脂肪生成を予防するのに使用するガロタンニンまたはガロタンニン改変体の有効濃度を決定するために、未分化の前脂肪細胞を、３−イソブチル−１−メチルキサンチン、デキサメタゾン、およびインスリン（ＭＤＩ）からなる分化誘導カクテルか；またはＭＤＩとガロタンニンもしくはガロタンニン改変体のいずれかと共に、インキュベートした。約１０日後、ＭＤＩは、線維芽細胞様の前脂肪細胞から円形の脂肪小胞含有脂肪細胞への変化として、はっきりと目に見える分化を誘導する。細胞の分化の程度は、資質蓄積の顕微鏡観察、およびオイルレッドＯ染色（トリグリセリドを含む小胞のみが赤く染色され得る）、ならびにインキュベーション期間の終わりに処置した細胞が示すグルコース摂取活性によって評価する。グルコース摂取アッセイは、分化した脂肪細胞が、インスリンによって誘導されてグルコースを摂取し得るが、前脂肪細胞は誘導され得ないという観察に基づいて、脂肪細胞分化の程度を決定するために、本明細書で選択され、そして実施される。
【００５２】
（インビボで投薬量を決定するための手順）
インビボでの抗脂肪生成効果、およびガロタンニン組成物もしくは改変ガロタンニン組成物の有効量を決定するために、遺伝的に糖尿病の５週齢の雌性マウス（ＩＩ型、ＫＫ−Ａｙ）を使用する。ガロタンニンまたはガロタンニン改変体は、６〜１０週間の間、毎日様々な濃度でマウスに経口的に送達されるか、またはＩＰ注射される。実験の最後に、処置したマウスおよびコントロールマウスから、パラメータの脂肪組織を取り出し、秤量し、そして比較する。さらに、処置したマウスおよびコントロールマウスの肝臓もまた、取り出し、その肝臓の脂肪含量を測定する。食物摂取を有意に変化させることなく、パラメータの脂肪組織、および肝臓の脂質含量において最も大きい減少を生じる投薬量を、本発明のガロタンニン組成物またはガロタンニン改変組成物の抗脂肪生成活性につていの最適投薬量とみなす。
【００５３】
（加水分解性ガロタンニンを生成する例示的方法）
Ａ．単離方法
加水分解性ガロタンニンのβ体は、ＨＰＬＣを使用して、市販のタンニン酸調製物から単離され得る。ＨＰＬＣシステムは、１２５  溶媒モジュール、１６８  ＰＤＡ検出器、および５０８  自動試料採取器からなるＢｅｃｋｍａｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｇｏｌｄである。分離のために、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ  Ｃ−１８逆相Ｓｅｍｉ−Ｐｒｅｐカラム（１０．０ｍｍ×２５０ｍｍ  Ｉ．Ｄ．、５μｍ）を使用する。検出波長は、３２０ｎｍ、または３３０ｎｍに設定する。溶離液Ａは、０．１％  トリフルオロ酢酸を添加した水であり、溶離液Ｂは、０．１％  トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリルである。ＩＳＣＯ製のＦｏｘｙ  Ｊｒ．フラクションコレクターを使用して、個々のピークを時間ウインドウ（ｔｉｍｅｄ  ｗｉｎｄｏｗ）に集める。分離は、４０分間で定組成の溶離液（Ａ：Ｂ  ８２：１８）を用いて、３ｍＬ／分の流速で達成される。この条件下で、ガロタンニンのβ体についての適切な保持時間は、以下の通りである：
ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース  １３．５分
ヘキサ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース  ２０．２分
オクタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース  ２２．０分
ノナ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース  ３０．０分
デカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース  ３６．３分
ウンデカ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース  ３９．８分。
【００５４】
Ｂ．合成方法
ＰＧＧのα体およびβ体の化学合成のための方法は、４つの工程からなる：
（ｉ）没食子酸のメチルエステルで開始して、アセトン中の炭酸カリウムおよびヨウ化カリウムの存在下で、塩化ベンジルとの反応で、保護された没食子酸誘導体であるメチル３，４，５−トリ−Ｏ−ベンジルガレートを得る。
【００５５】
（ｉｉ）水性エタノール中の水酸化ナトリウムによるエステル開裂で、３，４，５−トリ−Ｏ−没食子酸ベンジルの構造を導く。
【００５６】
（ｉｉｉ）１，２−ジクロロエタン中の４−（ジメチルアミノ）ピリジンの存在下で、Ｄ−グルコースのジシクロヘキシルカルボジイミド媒介性エステル化において、３，４，５−トリ−Ｏ−没食子酸ベンジルを使用する。ペンタ−Ｏ−（３，４，５−トリ−Ｏ−ベンジルガロイル）−Ｄ−グルコピラノースを、αアノマーとβアノマーとの混合物として得る。
【００５７】
（ｉｖ）ペンタ−Ｏ−（３，４，５−トリ−Ｏ−ベンジルガロイル）−Ｄ−グルコピラノースを、テトラヒドロフラン中のパラジウム触媒の存在下で、水素化によって脱保護する。ＰＧＧのα／β混合物のクロマトトロン（Ｃｈｒｏｍａｔｏｔｒｏｎ）分離で、個々の純粋なアノマーを得る。
【００５８】
天然に存在する中間体および生成物の同定および純度は、１Ｈ−ＮＭＲ分光法および１３Ｃ｛１Ｈ｝ＮＭＲ分光法、エレクトロスプレー質量分析法、ならびにＵＶ−可視スペクトルによって決定される。
【００５９】
出発物質として、α−ペンタ−Ｏ−ガロイルグルコースとβ−ペンタ−Ｏ−ガロイルグルコースとの混合物を使用して、α−ヘキサ−Ｏ−ガロイルグルコース、β−ヘキサ−Ｏ−ガロイルグルコース、α−ヘプタ−Ｏ−ガロイルグルコース、β−ヘプタ−Ｏ−ガロイルグルコース、α−オクタ−Ｏ−ガロイルグルコース、β−オクタ−Ｏ−ガロイルグルコース、α−ノナ−Ｏ−ガロイルグルコース、β−ノナ−Ｏ−ガロイルグルコース、α−デカ−Ｏ−ガロイルグルコース、β−デカ−Ｏ−ガロイルグルコースが生成され得る。α／β−ペンタ−Ｏ−ガロイルグルコースに対する１以上の没食子酸のさらなる反応は、上記のようなα／β−ペンタ−Ｏ−ガロイルグルコースの合成についての反応工程と同一であるかまたは非常に類似する。この反応は、６個、７個、８個、９個、または１０個の没食子酸を有するガロイルグルコースの混合物を合成する。これらの異なる化合物は、ＨＰＬＣによって単一の種に分離され得、そしてこれらの個々の構造の同一性は、質量スペクトルおよびＮＭＲ分析によって確認され得る。
【００６０】
α−テトラ−Ｏ−ガロイルグルコースおよびβ−テトラ−Ｏ−ガロイルグルコースは、没食子酸の添加前に、グルコースにおけるヒドロキシル基のうちの１つを保護し、そしてそのヒドロキシル基を付加反応後に脱保護することによって生成され得る。
【００６１】
（ガロタンニン改変体を生成する例示的方法）
１）ペンタキス−Ｏ−（３，４−ジベンジルオキシベンゾイル）−β−Ｄ−グルコピラノースの合成
工程１：エチル３，４−ジベンジルオキシベンゾエート
【００６２】
【化９】
2005538987.tif 000005
【００６３】
手順：
アセトン（５００ｍＬ）中のエチル３，４−ジヒドロキシベンゾエート（１０ｇ、５４．３ｍｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（４ｇ、２４ｍｍｏｌ）および無水粉末炭酸カリウム（４０ｇ、２８９ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で２０分間攪拌した。１００ｍＬのアセトンに溶解させた塩化ベンジル（１４．８５ｇ、１１７ｍｍｏｌ）を加えた。この懸濁液を、１８時間還流した。固体を濾過して除き、濾液をエバポレートした。残渣を３００ｍＬのジクロロメタンに再溶解させ、そして再び濾過した。溶媒をエバポレートした。暗黄色油を得た。これを、これ以上精製せずに次の工程に使用した。
【００６４】
工程２：３，４−ジベンジルオキシ安息香酸
【００６５】
【化１０】
2005538987.tif 000006
【００６６】
手順：
上記の工程の粗生成物を、９５％エタノール中に懸濁させ、そして水酸化ナトリウムペレット（３．５４ｇ、８８．５ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を、還流下で３時間加熱した。この温溶液を、水（５００ｍＬ）と濃塩酸（２５ｍＬ）との混合物中に注いだ。フラスコを１０分間旋回した後、生成物を濾過して取り出し、水（１００ｍＬ）、９５％エタノール（１００ｍＬ）、メタノール（１００ｍＬ）、そしてメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１００ｍＬ）で連続的に洗浄した。白色固体を、オイルポンプの真空（約０．１ｂａｒ）中で、一晩室温にて乾燥させた。
【００６７】
２つの工程にわたる収量：１８．６ｇ（９３％）。
【００６８】
工程３：ペンタキス−Ｏ−（３，４−ジベンジルオキシベンゾイル）−β−Ｄ−グルコピラノース
【００６９】
【化１１】
2005538987.tif 000007
【００７０】
手順
Ｄ−グルコース（０．２ｇ、１．１１ｍｍｏｌ）、３，４−ジベンジルオキシ安息香酸（２．７８ｇ、８．３１ｍｍｏｌ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、１．８４ｇ、８．９２ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、１．０８ｇ、８．８４ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（１３０ｍＬ）に加えた。この懸濁液を、２．５日間還流した。室温まで冷却した後、尿素副生成物を濾過して除いた。８ｇのシリカゲルをその濾液に加え、乾燥するまでエバポレートした。残渣を、シリカゲルカラム（溶媒系  ジクロロメタン：トルエン：酢酸エチル＝３００：１００：４）に適用した。清浄な画分を合わせてエバポレートした。
【００７１】
収量：１．７２ｇ（８８％）非常に粘性のある透明な油。
【００７２】
工程４：ペンタキス−Ｏ−（３，４−ジヒドロキシベンゾイル）−β−Ｄ−グルコピラノース
【００７３】
【化１２】
2005538987.tif 000008
【００７４】
手順：
ベンジル保護した出発物質（３９２ｍｇ、０．２２２ｍｍｏｌ）を、乾燥ＴＨＦ（５０ｍＬ）に溶解させた。その溶液を、磁気的に攪拌しながら、水流吸引器による減圧に約３０秒間適用することによって脱気した。次いで、そのフラスコを、アルゴン気体でフラッシングした。脱気およびフラッシングをさらに２回繰り返した。１０％パラジウム炭（２８７ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を脱気し、次いで、水素気体でフラッシングした。脱気およびフラッシングをさらに２回繰り返した。次いで、この懸濁液を、水素気体雰囲気下で、標準圧力、４０℃にて、最大速度で５時間攪拌した。この混合物を冷却し、セライトを通して濾過し、そして濾液をエバポレートした。
【００７５】
収量：１９０ｍｇ（９９％）の泡状無定形固体。
【００７６】
ジヒドロキシベンジルオキシベンゾイル部分を含む他のガロタンニン改変体は、工程１の出発物質として様々なエチルジヒドロキシベンゾエートを使用することを除いては、上記のように生成する。
【００７７】
２）テトラキス−Ｏ−（３，４−ジヒドロキシベンゾイル）−β−Ｄ−グルコピラノースの合成
工程１：メチル３，４，５−トリベンジルオキシベンゾエート
【００７８】
【化１３】
2005538987.tif 000009
【００７９】
手順：
アセトン（５００ｍＬ）中のメチル３，４，５−トリヒドロキシベンゾエート（１０ｇ、５４．３ｍｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（４ｇ、２４ｍｍｏｌ）、および無水粉末炭酸カリウム（４４ｇ、３１８ｍｍｏｌ）を、室温で２０分間攪拌した。１００ｍＬのアセトンに溶解させた塩化ベンジル（２２ｇ、１７４ｍｍｏｌ）を加えた。この懸濁液を、１８時間還流した。固体を濾過して除き、濾液をエバポレートした。残渣を、４００ｍＬのジクロロメタン中に回収した。この懸濁液を、セライトを通して濾過し、濾液をエバポレートした。残渣を、オイルポンプの真空中で、室温にて４５分間乾燥させた。
【００８０】
収量：２６．５２８ｇ（１０７％）（この生成物は、不純物として多少の塩化ベンジルを含む）。
【００８１】
工程２：３，４，５−トリベンジルオキシ安息香酸
【００８２】
【化１４】
2005538987.tif 000010
【００８３】
手順：
上記の工程の粗生成物を、９５％エタノール（３００ｍＬ）に懸濁させ、そして水酸化ナトリウムペレット（３．５４ｇ、８８．５ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を還流下で３時間加熱した。この温溶液を、水（５００ｍＬ）と濃塩酸（２５ｍＬ）との混合物中に注いだ。フラスコを１０分間回旋した後、生成物を濾過して取り出し、水（１００ｍＬ）、９５％エタノール（１００ｍＬ）、メタノール（１００ｍＬ）、そしてメチルｔｅｒｔ−ウチルエーテル（１００ｍＬ）で連続的に洗浄した。白色固体を、オイルポンプの真空（約０．１ｂａｒ）中で、室温にて一晩乾燥させた。
【００８４】
２つの工程にわたる収量：２２．４２ｇ（９４％）
工程３：テトラキス−Ｏ−（３，４，５−トリベンジルオキシベンゾイル）−Ｄ−キシロピラノース
【００８５】
【化１５】
2005538987.tif 000011
【００８６】
手順：
Ｄ−キシロース（０．２ｇ、１．３３ｍｍｏｌ）、３，４，５−トリベンジルオキシ安息香酸（３．５１５ｇ、７．９８ｍｍｏｌ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、１．７７ｇ、８．５７ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、１．０４ｇ、８．４９ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（１３０ｍＬ）に加えた。この懸濁液を、２．５日間還流した。室温まで冷却した後、尿素副生成物を濾過して除いた。９ｇのシリカゲルをその濾液に加え、乾燥するまでエバポレートした。残渣を、シリカゲルカラム（溶媒系  ジクロロメタン：トルエン：酢酸エチル＝３００：１００：４）に適用した。清浄な画分を合わせてエバポレートした。
【００８７】
収量：２０８ｍｇのβ異性体、２２０ｍｇのα異性体、７７０ｍｇの混合画分（α＋β）。
【００８８】
工程４：テトラキス−Ｏ−（３，４，５−トリヒドロキシベンゾイル）−β−Ｄ−グルコピラノース
【００８９】
【化１６】
2005538987.tif 000012
【００９０】
手順：
ベンジル保護した出発物質（１５０ｍｇ、０．０８１５ｍｍｏｌ）を、乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ）に溶解させた。その溶液を、磁気的に攪拌しながら、水流吸引器の真空を約３０秒間適用することによって脱気した。次いで、そのフラスコを、アルゴン気体でフラッシングした。脱気およびフラッシングをさらに２回繰り返した。１０％パラジウム炭（１２０ｍｇ、０．１１３ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を脱気し、次いで、水素気体でフラッシングした。脱気およびフラッシングをさらに２回繰り返した。次いで、この懸濁液を、水素気体雰囲気下で、標準圧力、４０℃にて、最大速度で５時間攪拌した。この混合物を冷却し、セライトを通して濾過し、そして濾液をエバポレートした。
【００９１】
収量：６２ｍｇ（１００％）の泡状無定形固体。
【００９２】
グルコース以外（例えば、ガラクトース、マンノース、トレハロース、マルトース、セロビオース、イノシトール、およびグルシトール）の糖核を含む他のガロタンニン改変体は、工程３で加えたキシロースを別の糖に置き換えることを除いては、上記のように生成する。
【００９３】
３）没食子酸とグルコースとの間のエステル結合の、エーテル結合への置換
【００９４】
【化１７】
2005538987.tif 000013
【００９５】
この合成の、最初の３つの工程は、文献の手順（Ｅ．Ｅｉｃｈ、Ｈ．Ｐｅｒｔｚ、Ｍ．Ｋａｌｏｇａ、Ｊ．Ｓｃｈｕｌｚ、Ｍ．Ｒ．Ｆｅｓｅｎ、Ａ．Ｍａｚｕｍｄｅｒ、Ｙ．Ｐｏｍｍｉｅｒ、（−）−Ａｒｃｔｉｇｅｎｉｎ  ａｓ  ａ  Ｌｅａｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  Ｖｉｒｕｓ  Ｔｙｐｅ−１  Ｉｎｔｅｇｒａｓｅ、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９６、３９、８６−９５）である。
【００９６】
その後の工程は、炭水化物の標準的なベンジル保護／脱保護化学に類似する。最終的な水素化分解は、炭水化物が結合したトリヒドロキシベンジル基よりも、フェノール性ベンジル基について非常に速い。酸加水分解に対するエーテル結合の低下した感度が、分子の安定性（半減期）を増大し、それゆえに、インビボでの作用の持続期間および全体的な見かけの活性が増大することが期待される。
【実施例】
【００９７】
以下の実施例は、例示のみの目的のためであり、添付の特許請求の範囲の範囲を限定することは意図されない。本明細書中で引用されるすべての参考文献は、その全体が本明細書中に具体的に援用される。
【００９８】
（実施例１：ペンタ−Ｏ−ガロイル−Ｄ−グルコース（ＰＧＧ）による、細胞におけるグルコース摂取の刺激）
５０：５０のα−ＰＧＧとβ−ＰＧＧとの混合物を、上記のように合成した。αアノマーとβアノマーとを、上記のように分離した。この２つのアノマーのグルコース輸送刺激活性を、標準植物由来のβ−ＰＧＧのグルコース輸送刺激活性と比較した。化学的に合成したＰＧＧと標準植物由来のＰＧＧは、スペクトル的に同一である。
【００９９】
３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞を、ＡＴＣＣから購入し、維持し、そして細胞の要求に応じて１０％ＣＯ２を含む３７℃のインキュベーター中で、１０％仔ウシ血清を補充したＤＭＥＭにおいて前脂肪細胞として認めた。この細胞を、Ｌｉｕ，Ｆ．、Ｋｉｍ，Ｊ．、Ｌｉ，Ｙ．、Ｌｉｕ，Ｘ．、Ｌｉ，Ｊ．  ＆  Ｃｈｅｎ，Ｘ．（２００１）に記載されるように、ＭＤＩ誘導カクテルの添加によって脂肪細胞へ分化するように誘導した。Ｌａｇｅｒｓｔｒｏｅｍｉａ  ｓｐｅｃｉｏｓａ  Ｌ．の抽出物は、３Ｔ３−Ｌ１細胞におけるインスリン様グルコース摂取刺激活性および脂肪細胞分化阻害活性を有する。Ｊ．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  １３１：２２４２−２２４が、参考として本明細書中に具体的に援用される。次いで、様々な量のα−ＰＧＧおよびβ−ＰＧＧを、培地に添加し、コントロール細胞および処理した細胞によるグルコース摂取量を、Ｌｉｕらに記載されるように、標準的なグルコース摂取アッセイを使用して決定した。図２Ａに示したように、化学的に合成したβ−ＰＧＧおよび植物由来のβ−ＰＧＧは、同様のグルコース輸送刺激性（ＧＴＳ）を有する。α−ＰＧＧのＧＴＳ活性は、β−ＰＧＧのＧＴＳ活性よりも一貫して１０〜２０％高い（図２）。
【０１００】
ＰＧＧがＧＴＳ活性を誘導する機構を調べるために、１４Ｃで標識したＰＧＧを合成し、細胞研究で使用した。ＰＧＧが細胞膜または細胞内で作用するかを決定するために、放射活性ＰＧＧを、３７℃または４℃のいずれかで、３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞と共に様々な時間の間インキュベートした。インキュベーションの後、過剰な放射活性ＰＧＧを洗浄によって除去し、細胞を収集し、公開されたプロトコルを使用して細胞膜画分と細胞内画分とに分別した。９０〜９５％を超える放射能は膜画分に関連し、このことは、ＰＧＧが細胞膜に結合することによって、３Ｔ３−Ｌ１細胞と相互作用することを示唆する。
【０１０１】
リガンド置換研究を、１４Ｃ−ＰＧＧおよび増加量の非標識ＰＧＧと共に４℃で一晩インキュベートした３Ｔ３−Ｌ１細胞を使用して行った。放射活性インスリンを、レセプター結合コントロールとして使用した。試験した濃度範囲において、ＰＧＧは、約１０−５Ｍの見かけのレセプター結合定数（Ｋｄ）で標的に結合するリガンドとして機能するようであった（図３）。見積もられたＫｄが、ＧＴＳ活性およびＡＤ活性の両方についてＰＧＧのＥＣ５０と非常に類似することは、注目に値する（図２）。ＰＧＧはインスリン様ＧＴＳ活性を有し、インスリンと同様の方法でＧＴＳ活性を誘導するようであるため、ＰＧＧが、インスリンレセプターに結合することによって、３Ｔ３−Ｌ１細胞におけるＧＴＳ活性を誘導することが推測された。
【０１０２】
ＰＧＧとインスリンとが共通の標的を有するかどうかを決定するために、３Ｔ３−Ｌ１細胞を、一定濃度の放射活性インスリン＋増加量の冷ＰＧＧと共にか、または増加量の冷インスリンを含む放射性ＰＧＧと共にインキュベートした。結合アッセイの結果は、ＰＧＧが、ＩＲ上に位置するインスリン結合部位に対して、インスリンと競合しないことを示す（図４）。逆に、インスリンもまた、細胞膜上に位置するＰＧＧ結合部位に対してＰＧＧと競合することは見出されなかった。従って、ＰＧＧは、インスリン結合部位以外のＩＲ上の部位、またはＩＰ以外の膜レセプターに結合するようである。
【０１０３】
トレーサーとして放射標識したウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を用いる競合結合アッセイを使用して、ＰＧＧがタンパク質に選択的に結合するかどうかを決定した。ＰＧＧについての３つの標準タンパク質の相対的親和性は、互いに、少なくとも１０倍異なり（図５）、ゼラチンおよびオボアルブミンに対するＰＧＧの結合親和性の相違は、１００倍を超える。このことは、ＰＧＧ−タンパク質相互作用が特異性を有すること、およびＰＧＧがＩＲのような単一の生化学的標的に選択的に作用し得ることを示す。
【０１０４】
インスリン媒介性シグナル経路に関わるタンパク質／酵素を選択的に阻害する化学インヒビターを使用して、ＰＧＧの分子標的をさらに同定した。３つのインヒビターを試験した：ＩＲチロシンキナーゼを阻害する化学物質であるヒドロキシ−２−ナフタレニルメチルホスホン酸トリアセトキシメチルエステル（ＨＮＭＰＡ−（ＡＭ）３）（Ｑｉｕ，Ｚ．ら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：１１９８８−１１９９５）；ＰＩ−３Ｋを特異的に阻害する化合物であるワートマニン（Ｓａｐｅｒｓｔｅｉｎ，Ｒ．ら（１９８９）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８：５６９４−５７０１）；およびＧＬＵＴ４によって媒介されるグルコース輸送を特異的に阻害する化合物であるサイトカラシンＢ（Ｔｏｍｉｙａｍａ，Ｋ．ら（１９９５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ．２１２：２６３−２６９；Ｋｌｅｔｚｉｅｎ，Ｒ．Ｆ．ら（１９７２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４７：２９６４−２９６６）。３つのすべてのインヒビターは、インスリンまたはＰＧＧのいずれかによって媒介されるＧＴＳ活性を完全に阻害した（図６）。このことは、ＰＧＧによって媒介されるすべてのＧＴＳ活性が、インスリン媒介性シグナル経路を経由し、かつインスリン媒介性シグナル経路のみを経由することを示唆する。インスリンシグナル経路における一次酵素（ＩＲチロシンキナーゼ）のインヒビターであるＨＮＭＰＡ−（ＡＭ）３もまたＰＧＧのＧＴＳ活性を完全に無効にするという事実は、ＰＧＧの分子標的がＩＲであることを示唆する。ＰＧＧがインスリン媒介性ＧＴＳ経路を使用するという考えは、本発明者らのウエスタンブロット分析によってさらに指示され、このウエスタンブロット分析は、この経路（ｚｚ）に関する重要なタンパク質キナーゼであるＡｋｔが、ＰＧＧによってリン酸化されることを示す（図７）。
【０１０５】
（実施例２：脂肪生成におけるＰＧＧの効果）
３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞を、ＡＴＣＣから購入し、維持し、そして細胞の要求に応じて１０％ＣＯ２を含む３７℃のインキュベーター中で、１０％仔ウシ血清を補充したＤＭＥＭにおいて前脂肪細胞として認めた。脂肪生成におけるＰＧＧの効果を試験するために、この前脂肪細胞を、３−イソブチル−１−メチルキサンチン、デキサメタゾン（ＭＤＩ）からなる分化誘導カクテル、３−イソブチル−１−メチルキサンチン、デキサメタゾン（ＭＤ）およびＰＧＧからなるカクテルと共にか；あるいはＭＤＩ＋ＰＧＧと共にインキュベートした。ＭＤＩ中のインスリンがＰＧＧによって置換された場合、その新しいカクテルは、前脂肪細胞の分化の誘導に失敗した（図２Ｂを参照のこと）。これらの結果は、ＰＧＧが、前脂肪細胞の脂肪細胞への分化の誘導のために、インスリンを置換し得ないことを示す。
【０１０６】
細胞増殖アッセイを使用して、ＰＧＧが、クローン増殖をブロックすることによって脂肪細胞分化を阻害するかどうかを決定した。このアッセイは、クローン増殖の第一ラウンドが、α−ＰＧＧまたはβ−ＰＧＧのいずれによっても阻害されないことを示した。クローン増殖の第二ラウンドは、α−ＰＧＧによって部分的に阻害され、そしてβ−ＰＧＧによって完全に阻害される（図１０）。クローン増殖および分化におけるアノマー間の相違についての基礎は、公知ではない。しかし、本発明者らの結果は、前脂肪細胞におけるクローン増殖阻害またはアポトーシス（プログラム細胞死）が、観察された分化阻害の原因ではないことを示す。なぜなら、α−ＰＧＧが、ＭＤＩ誘導細胞と比較して、クローン増殖のわずかに限定された阻害を伴い、そして有意に増大した細胞死を伴わずに分化を無効にするからである（データは示さず）。従って、阻害の重要な工程は、クローン増殖とは異なる工程にあるようである。
【０１０７】
ＰＧＧが３Ｔ３−Ｌ１前脂肪細胞分化を阻害する機構を研究するために、本発明者らは、遺伝子発現研究を利用した。この戦略は、ＰＧＧが、分化プロセスに関与する遺伝子に特異的に作用するかどうかを決定することを可能にする。さらに、この遺伝子発現研究は、細胞表面に１０分の１少ないＩＲを発現する前脂肪細胞中のインスリンレセプターを研究することの困難を克服する（Ｍｏｄａｎ−Ｍｏｓｅｓら（１９９８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３３３：８２５−８３１）。ＡＤの間にＰＧＧによって影響を受ける遺伝子を調べるために、前脂肪細胞を、３−イソブチル−１−メチルキサンチン、デキサメタゾン、およびインスリンからなる分化誘導カクテルと共にか；またはＭＤＩ＋ＰＧＧのいずれかと共にインキュベートした。約１０日後、ＭＤＩは、線維芽細胞様の前脂肪細胞から円形の脂肪小胞含有脂肪細胞への変化としてはっきりと目に見える分化を誘導する（図８、中央）。対照的に、ＭＤＩ＋ＰＧＧで処理した前脂肪細胞は、その線維芽細胞様の形態を保持し、かつ脂肪小胞を含まないままである（図８、右）。
【０１０８】
様々な時間で処理した細胞を収集し、全ＲＮＡを単離し、そしてこの分化プロセスに関わる様々な遺伝子に対して相補的なプローブを使用するノーザンブロットによって、発現を分析した。ノーザンブロット分析は、分化のために必要とされかつＭＤＩによって誘導される遺伝子ＰＰＡＲ−γ、ｃ／ＥＢＰ−αの発現が、ＰＧＧによって完全に無効にされたことを明らかにした（図９）。差動的に処理した細胞において比較的一致するβアクチンレベルは、βアクチン発現のような他の細胞プロセスが、ＰＧＧによって有意に影響を受けないことを示す（図９）。
【０１０９】
（実施例３：糖尿病の動物において血糖値を低下させることにおけるＰＧＧの効果）
α−ＰＧＧが、インビボで抗糖尿病活性を示し得るかどうかを決定するために、水溶液の形態中のα−ＰＧＧを、絶食している糖尿病の８週齢の雄性ｄｂ／ｄｂマウスに、経口的に送達した。２５ｍｇ／ｋｇ体重の濃度でのα−ＰＧＧの単回用量が、ビヒクル（α−ＰＧＧを含まない同一の水溶液）を与えたｄｂ／ｄｂマウスと比較して、ｄｂ／ｄｂマウスにおける血糖値を有意に低下させることが見出された（図１１Ａ）。グルコースレベルの低下は、α−ＰＧＧ投与後の時間に依存して、約１５〜２０％である（Ｐ＜０．０１、図１１Ａ）。
【０１１０】
α−ＰＧＧもまた、糖尿病かつ肥満のマウスにおけるグルコース耐性を改善するのに有効かどうかを決定するために、グルコース耐性試験を、ｏｂ／ｏｂマウスを使用して実施した。グルコース、またはグルコース＋α−ＰＧＧを、雄性ｏｂ／ｏｂマウスに経口的に送達し、そして血糖値を、グルコース／ＰＧＧ投与後の様々な時間にて測定した。グルコース＋α−ＰＧＧを与えているマウスは、グルコース単独で処置したマウスと比較して、有意により低い血糖値を有する（Ｐ＜０．００１、図１１Ｂ）。興味深いことに、改善した血糖値は、α−ＰＧＧ処置の２４時間後に依然として観察され得、このことは、α−ＰＧＧの効果が持続性であることを示す。
【０１１１】
グルコースチャレンジの約２４時間後の非常に高レベルの血糖値、またはグルコースチャレンジの２〜３日後の異常に低いグルコースレベルのいずれかの理由から、ｏｂ／ｏｂマウスにおける単回の大用量のグルコースは、致死性であり得る。本発明者らは、α−ＰＧＧが、ｏｂ／ｏｂマウスをグルコースチャレンジ直後の極度に高いグルコースレベルから保護した（図１１Ｂ）だけでなく、これらのマウスを２〜５日後の極度に低いグルコースレベルから保護した（図１２）ことを見出した。その保護機構は、現時点では未知であるが、ＰＧＧがそのＧＴＳ活性だけでなくＡＤ関連活性のようないくつかの他の活性によってｏｂ／ｏｂマウスを保護した可能性が高い。これらのマウスにおいて、ＰＧＧに関連する毒性効果は観察されなかった。
【０１１２】
これらの動物研究は、α−ＰＧＧが、３Ｔ３−Ｌ１細胞中で働くだけでなく、インビボでの糖尿病／肥満モデルにもまた有効であることを明確に示す。
【０１１３】
（実施例４：細胞によるグルコース摂取におけるガロタンニン改変体の効果）
本発明者らは、３Ｔ３−Ｌ１細胞系におけるＧＴＳについて、いくつかのポリフェノール重合体のクラスを試験した（表１）。バナバ（ｂａｎａｂａ）抽出物およびガロタンニン調製物（タンニン酸、ガロイルグルコースの混合物；および精製したＰＧＧ）が、高い活性を有した。プロアントシアニジンは限られた活性を有し、そして茶カテキンＥＧＣＧは活性を有さない。このことは、特定のタンパク質−ＰＧＧ相互作用が、ＧＴＳ活性の原因であるという考えを支持する。なぜなら、ＰＧＧおよび密接に関連した化合物のみが活性であったからである。ＧＴＳ活性が、単純に、ポリフェノール重合体による一般的なタンパク質結合の結果であった場合は、フラボノイドベースのプロアントシアニジンおよび茶カテキン調製物が活性である。
【０１１４】
α−ＰＧＧとβ−ＰＧＧとの間のＧＴＳ活性およびＡＤ活性における再現性の相違（図２）、ならびにＰＧＧとヘキサ−ＧＧとの間のＧＴＳ活性およびＡＤ活性における再現性の相違（表１）が、規定通りに得られた。糖の炭素１での没食子酸の配向が、α−ＰＧＧとβ−ＰＧＧとの間で観察される活性の相違の原因である。ペンタガロイルガラクトース（ＰＧＧａｌ）、本発明のガロタンニン改変体、およびペンタガロイルデオキシノジリマイシン（ＰＧ−ＤＪＭ）（図１３）を合成した。本発明者らは、ＰＧＧａｌはＰＧＧの活性の６０〜７０％であるが、ＰＧ−ＤＪＭは検出可能なＧＴＳ活性を有さないことを見出した。
【０１１５】
【表１】
2005538987.tif 000014
【０１１６】
（実施例５：血漿インスリンレベルにおけるＰＧＧの効果）
糖尿病かつ肥満のｏｂ／ｏｂマウスに、水またはα−ＰＧＧのいずれかを腹腔内に注射した。各々のマウス由来の血漿を、注射後の様々な時間で単離し、そしてインスリンレベルについて測定した。図１５に示したように、α−ＰＧＧの単回注射で処置したｏｂ／ｏｂ糖尿病かつ肥満のマウスは、水単独（ネガティブコントロール）で処置したｏｂ／ｏｂ糖尿病マウスよりも低い血漿インスリンレベルを有した。これらの結果、およびグルコース摂取におけるＰＧＧの効果に基づいて、ＰＧＧは、インビボでインスリンのグルコース輸送刺激活性を増強し得ると考えられる。従って、ＰＧＧが、哺乳類被験体においてインスリン抵抗性を改善するための治療に使用され得ることが期待される。
【０１１７】
（実施例６：脂肪細胞によるグルコース摂取におけるペンタキス−Ｏ−（３，４ジヒドロキシベンゾイル）−β−Ｄ−グルコピラノースおよびテトラキス−Ｏ−（３，４，５，トリヒドロキシベンゾイル）−α−Ｄ−キシロピラノースの効果）
１２ウェルプレート中で増殖させたコンフルエントな３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞を、無血清ＤＭＥＭで２回洗浄し、そして１ｍＬの同じ培地と共に３７℃にて２時間インキュベートした。この細胞を、Ｋｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ−Ｈｅｐｅｓ（ＫＲＰ）緩衝液で３回洗浄し、そして０．９ｍＬのＫＲＰ緩衝液と共に３７℃にて３０分間インキュベートした。次いで、以下の表に列挙した化合物を２０〜４０μＭの濃度（最終濃度？）で加え、そして脂肪細胞を３７℃で１５分間インキュベートした。グルコース摂取を、０．１ｍＬ  ＫＲＰ緩衝液、および３７ＭＢｑ／Ｌ  ２−デオキシ−Ｄ−[３Ｈ]グルコース、および最終濃度として１ｍｍｏｌ／Ｌのグルコースの添加によって開始した。１０分後、細胞を冷ＰＢＳで３回洗浄することによって、グルコース摂取を終了した。この細胞を、０．７ｍＬの１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を用いて、３７℃で２０分間溶解させた。細胞溶解物によって保持された放射活性を、シンチレーションカウンターによって決定した。表に示したように、ガロタンニン改変体であるペンタキス−Ｏ−（３，４ジヒドロキシベンゾイル）−β−Ｄ−グルコピラノース、およびテトラキス−Ｏ−（３，４，５，トリヒドロキシベンゾイル−）α−Ｄ−キシロピラノースは、細胞によるグルコース摂取を増加させた。
【０１１８】
（実施例７：ＰＧＧは高血糖症を引き起こさない）
正常な（健常な）マウスに、時間ゼロにて４０ｍｇのグルコースを経口的に摂食させた。２時間（１２０分）後、血中グルコースが標準レベルまたは基底レベルである場合、マウスに、様々な濃度のＰＧＧ、または水（ネガティブコントロール）のいずれかを経口的に摂食させるか、あるいはインスリンを腹腔内に注射した。ＰＧＧまたはインスリンの投与前および投与後の様々な時間間隔で、血液を、コントロール動物および処置した動物から採取し、そして血糖値を決定した。図１５に示したように、インスリン注射は、マウスにおいて高血糖状態を生じたが、ＰＧＧ投与では生じなかった。従って、ＰＧＧは、正常よりも高い場合に血糖値を低下させる。しかし、ＰＧＧは、正常値または基底値を超えてそれ以上血糖値を低下させない。
【図面の簡単な説明】
【０１１９】
【図１】図１は、ペンタ−Ｏ−ガロイル−Ｄ−グルコース（ＰＧＧ）の構造を示す。ＰＧＧは、エステル結合を介して５つの没食子酸に共有結合するグルコース核からなる。グルコースの炭素１（＊）での２つの可能な立体配置に関して、ＰＧＧの２つのアノマーが存在する。コンピューターでシミュレートしたＰＧＧコンホメーションは、α−ＰＧＧが、β−ＰＧＧよりも対称的（従って、より極性が小さい）であり得ることを示す。
【図２】図２は、ＰＧＧのグルコース輸送刺激活性および抗脂肪生成活性を示す。ＰＧＧ（混合物または単一の異性体（αもしくはβ）のいずれか）を、脂肪細胞（Ａ）または前脂肪細胞（Ｂ）のいずれかに加えた。ＰＧＧのＧＴＳ活性（Ａ）およびＡＤ活性（Ｂ）を、３Ｈ−グルコース摂取によって測定した。ＧＬＵＴ４は、前脂肪細胞中で発現せず、従って、グルコース摂取は脂肪細胞分化の間接的な測定法として使用し得る。
【図３】図３は、ＰＧＧが約１０−５ＭのＫｄでＩＲに結合することを示す。２４ウェルプレート中の３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞を、それぞれ、８ｐＭ  １２５Ｉ−インスリンの存在下で冷インスリンの濃度を増加させながらか、または２０μＭ  １４Ｃ−ＰＧＧの存在下で冷ＰＧＧの濃度を増加させながら、４℃で一晩インキュベートした。次いで、細胞に結合しなかった同位体を除去した後、細胞に結合した１２５Ｉ−インスリンまたは１４Ｃ−ＰＧＧについて測定した。
【図４】図４は、ＰＧＧが、３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞において、インスリンレセプターＩＲに結合しているインスリンを置換しないことを示す。３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞を、８ｐＭ  １２５Ｉ−インスリンの存在下で、１４Ｃ−ＰＧＧの濃度を増加させながら、４℃で一晩インキュベートし、次いで、細胞に結合した１２５Ｉ−インスリンおよび１４Ｃ−ＰＧＧについてカウントした。０．１μＭ〜２０μＭのＰＧＧの間でほぼ定数のインスリン数は、ＰＧＧが、この濃度範囲でＩＲからインスリンを置換し得ないことを示す。インスリン結合は、より高いＰＧＧ濃度で増大した。
【図５】図５は、ＰＧＧのタンパク質結合選択性を示す。固定量の１２５Ｉ  ＢＳＡを、様々な量の冷ゼラチン、またはＢＳＡ，またはオボアルブミンのいずれかの存在下で、ＰＧＧと共にインキュベートした。結合したものを、沈殿によって結合していないものから分離し、競合物（ｃｏｍｐｅｔｉｔｏｒ）の非存在下での％結合として表した。３つの競合曲線（ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ  ｃｕｒｖｅ）は、ＰＧＧ選択性が、有意に異なる親和性で様々なタンパク質に結合することを示す。
【図６】図６は、３つのインスリンシグナル経路特異的インヒビターもまた、３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞においてＰＧＧ誘導性グルコース輸送を無効にすることを示す。脂肪細胞を、様々なインヒビターの存在下または非存在下で、インスリンまたはＰＧＧによって誘導した。処理した細胞のグルコース輸送活性を、細胞による３Ｈグルコース摂取によって測定した。それぞれ、ＨＮＭＰＡ−（ＡＭ）３はＩＲ  Ｔｙｒキナーゼ活性を阻害し、サイトカラシンＢはＧＬＵＴ４を阻害し、ワートマニンはＰＩ−３Ｋを阻害する。
【図７】図７は、ＰＧＧが、３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞中のＡｋｔのリン酸化を誘導することを示す。差動的に処理した脂肪細胞を溶解させ、細胞タンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析した。１＝処理せず；２＝インスリン；３＝ｐＧＧ、１５μＭ；４＝ＰＧＧ、３０μＭ；Ｍ＝タンパク質サイズマーカー。
【図８】図８は、ＭＤＩまたはインスリンと、３０μＭ  ＰＧＧとによって誘導した３Ｔ３−Ｌ１細胞のオイルレッドＯ染色を示す。誘導の１０日後、細胞をオイルレッドＯで染色し、倍率×２００で写真撮影した。脂肪小胞（ｆａｔ  ｖｅｓｉｃｌｅ）（トリグリセリド）を含む細胞のみが、染色され得る。
【図９】図９は、３Ｔ３−Ｌ１前脂肪細胞におけるＰＰＡＲγ遺伝子発現およびＣ／ＥＢＰα遺伝子発現のノーザンブロット分析を示す。差動的に処理した前脂肪細胞を、処理後の様々な時間にて、それらのｍＲＮＡ発現について分析した。レーン１＝処理なし；レーン２＝ＭＤＩ；レーン３＝３０μＭ  ＰＧＧ＋ＭＤＩ；レーン４＝３０μＭのＰＧＧ単独。時間＝ｍＲＮＡを単離したときの処置後の時間。
【図１０】図１０は、３Ｔ３−Ｌ１前脂肪細胞を処理したα−ＰＧＧおよびβ−ＰＧＧにおけるクローン増殖を示す。前脂肪細胞を、ＭＤＩの存在下でＭＤＩ、またはα−ＰＧＧ、もしくはβ−ＰＧＧによって、クローン増殖が起こるように誘導した。誘導の２４時間後または４８時間後に、培地を取り除き、細胞を溶解させた。その細胞溶解物のラクトースデヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）活性を、ＬＤＨキットによって測定した。細胞増殖培地もまた回収し、死細胞由来のこれらのＬＤＨ活性もまた測定した（このグラフには示さず）。ＬＤＨ活性は、所定の細胞型において細胞当たり一定であり、測定したＬＤＨ活性は、サンプル中の細胞数に比例する。
【図１１】図１１は、ｄｂ／ｄｂマウスおよびｏｂ／ｏｂマウスにおける血糖値についてのＰＧＧの効果を示す。様々な用量のα−ＰＧＧを、ｄｂ／ｄｂマウス（Ａ）に対してはグルコースなしで、またはｏｂ／ｏｂマウス（Ｂ）に対してはグルコースと共に、経口的に送達した。送達後の様々な時間にて、尾部の血液から、サンプル中のグルコースを決定した。
【図１２】図１２は、ＰＧＧが、グルコースチャレンジの直後の高血糖症から、そしてそのチャレンジの数日後の高血糖症から、ｏｂ／ｏｂマウスを保護することを示す。ｏｂ／ｏｂマウスに、図１１Ｂに示したようにグルコース耐性試験を行った。グルコースチャレンジ後の様々な時点で、尾部の血液中の血糖値を測定した。
【図１３】図１３は、選択的ガロタンニン改変体の化学構造を示す。Ｇは、トリヒドロキシ安息香酸を示す。
【図１４】図１４は、ｏｂ／ｏｂマウスにおける血漿インスリンレベルについてのＰＧＧの効果を示す。
【図１５】図１５は、正常な血糖値を有するマウスにおける血糖値についてのＰＧＧの効果を示す。
【図１】
2005538987.tif 000020
【図２】
2005538987.tif 000021
【図３】
2005538987.tif 000022
【図４】
2005538987.tif 000023
【図５】
2005538987.tif 000024
【図６】
2005538987.tif 000025
【図７】
2005538987.tif 000026
【図８】
2005538987.tif 000027
【図９】
2005538987.tif 000028
【図１０】
2005538987.tif 000029
【図１１】
2005538987.tif 000030
【図１２】
2005538987.tif 000031
【図１４】
2005538987.tif 000032
【図１５】
2005538987.tif 000033
【図１３】
2005538987.tif 000034
【国際調査報告】
2005538987.tif 000035
2005538987.tif 000036