(57)【要約】本発明は、ジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物を開示する。化合物は、ペプチド基および任意でヒドロカルボキシ基が結合した、ジアミノ酸−ポリアミンまたはジアミノ酸−アミノ酸−ポリアミン骨格に基づく。ジアミノ酸−ポリアミンの使用：ペプチドに基づくジェミニ化合物およびこれらを産生するための方法もまた開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジアミノ酸−ポリアミンまたはジアミノ酸−アミノ酸−ポリアミン骨格を有し、式（I）：
【化１】
2005529860.tif 000054
［式中：
ｍは０ないし６であり；
ｎは０ないし７であり；
ｐは０ないし６であり；ここに
Ｘは、結合、ＣＨ２、（ＣＨ２）２、ｑが２ないし６であるＮＨ（ＣＨ２）ｑＮＨまたは
【化２】
2005529860.tif 000055
（式中、Ｒ９ないしＲ１２は、同一であっても、または異なっていてもよく、Ｈ、Ｏまたはｒが０ないし６であるＣｒＨ２ｒ＋１から選択される：ただし、Ｒ９およびＲ１２がＯであるか、あるいはＲ９およびＲ１１がＯである場合は、Ｒ１０およびＲ１１またはＲ１０およびＲ１２は、各々Ｈである）
であり；
Ｙは、結合、ＣＨ２、
【化３】
2005529860.tif 000056
（式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は水素であり、Ｒ１およびＲ２は、２４個までの炭素原子を有し、アミド結合によりジアミノ酸−ポリアミン骨格に結合した飽和または不飽和ヒドロカルボキシ基であるか；あるいは
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、水素であり、Ｒ１およびＲ２は、２４個までの炭素原子を有し、アミド結合によりジアミノ酸−ポリアミン骨格に結合した飽和または不飽和ヒドロカルボキシ基であり、Ｒ７およびＲ８は、同一であっても、または異なっていてもよく、アミド（ＣＯＮＨ）結合により一緒になって結合し、さらに、アミド結合によりジアミノ酸−ポリアミン骨格に結合し、直鎖または分枝鎖であり、１つまたはそれ以上のアミノ酸から形成される、一般式（ＩＩ）：
【化４】
2005529860.tif 000057
（ここに、ｐ１およびｐ２の値は、同じであっても、または異なっていてもよく、０ないし５、好ましくは１であり；
ｐ３およびｐ４の値は、同じであっても、または異なっていてもよく、０ないし５、好ましくは０であり；
Ａ１、Ａ３およびＡ４は、同じであっても異なっていてもよく、セリン、リシン、オルニチン、トレオニン、ヒスチジン、システイン、アルギニンおよびチロシンからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ａ２は、リシン、オルニチンおよびヒスチジンから選択されるアミノ酸である）
を有する、ペプチドである］
で示される一般構造に一致する、ジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項２】
Ｒ１およびＲ２が互いに同一であり、Ｒ３およびＲ４が互いに同一であり、Ｒ５およびＲ６が互いに同一であり、Ｒ７およびＲ８が互いに同一である対称性である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ａ１がリシン、セリンまたはトレオニンであり、Ａ３およびＡ４がリシン、オルニチン、ヒスチジンまたはアルギニンである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
ヒドロカルボキシ基が：
【化５】
2005529860.tif 000058
より選択される、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
ｍが０であり、ｎが２ないし４であり、Ｘが（ＣＨ２）または（ＣＨ２）２であり、Ｙが結合であり、ｐが０ないし４である、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
ｍが０であり、ｎが２ないし４であり、Ｘが、ｑが２ないし５であるＮＨ（ＣＨ２）ｑＮＨであり、Ｙが結合であり、ｐが２ないし５である、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
ｍが０であり、ｎが２ないし４であり、Ｘが
【化６】
2005529860.tif 000059
［式中、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は、全てＨである］
であり、Ｙが結合であり、ｐが２ないし５である、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
ｍが０であり、ｎが２ないし４であり、Ｘが（ＣＨ２）または（ＣＨ２）２であり、ｐが０ないし４であり、Ｙが
【化７】
2005529860.tif 000060
である、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
ｍが０であり、ｎが２ないし４であり、Ｘが、ｑが２ないし５であるＮＨ（ＣＨ２）ｑＮＨであり、ｐが２ないし５であり、Ｙが
【化８】
2005529860.tif 000061
である、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
ｍが０であり、ｎが２ないし４であり、Ｘが
【化９】
2005529860.tif 000062
［式中、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は全てＨである］
であり、ｐが２ないし５であり、Ｙが
【化１０】
2005529860.tif 000063
である、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｘが
【化１１】
2005529860.tif 000064
であり、Ｙが結合であり、ｐが１ないし６であり、ｎが１ないし７である、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
式：
【化１２】
2005529860.tif 000065
で示される化合物ＧＳＮ１１。
【請求項１３】
式：
【化１３】
2005529860.tif 000066
で示される化合物ＧＳＮ１４。
【請求項１４】
式：
【化１４】
2005529860.tif 000067
で示される化合物ＧＳＣ１０２。
【請求項１５】
式：
【化１５】
2005529860.tif 000068
で示される化合物ＧＳＣ１５７。
【請求項１６】
式：
【化１６】
2005529860.tif 000069
で示される化合物ＧＳＣ１７０。
【請求項１７】
式：
【化１７】
2005529860.tif 000070
で示される化合物ＧＳＣ１８４。
【請求項１８】
式：
【化１８】
2005529860.tif 000071
で示される化合物ＧＳＣ１０１。
【請求項１９】
インビボまたはインビトロでの、真核または原核細胞内へのＤＮＡもしくはＲＮＡまたはそのアナログのトランスフェクションを可能にすることにおける、請求項１ないし１８のいずれか１項に記載のジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物の使用。
【請求項２０】
化合物が：
（ｉ）中性担体、または
（ｉｉ）複合化試薬
よりなる群から選択される１つまたはそれ以上の補足物と組み合わせて使用される、請求項１９に記載のジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物。
【請求項２１】
中性担体がジオレイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）である、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
複合化試薬がＰＬＵＳ試薬である、請求項２０に記載の使用。
【請求項２３】
複合化試薬が主に塩基性アミノ酸を含むペプチドである、請求項２０に記載の使用。
【請求項２４】
ペプチドが塩基性アミノ酸より構成される、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
塩基性アミノ酸がリシンまたはアルギニンから選択される、請求項２３または２４に記載の使用。
【請求項２６】
ペプチドがポリリシンまたはポリオルニチンである、請求項２３に記載の使用。
【請求項２７】
遺伝治療のためにインビボでポリヌクレオチドを細胞内にトランスフェクションする方法であって、遺伝子治療用ベクターと一緒に、または別個に、請求項１ないし１８のいずれか１項に記載のジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物の投与を含む方法。
【請求項２８】
抗感染治療における使用のために、原核または真核生物内へのポリヌクレオチドまたは抗感染化合物の輸送を促進するための、請求項１ないし１８のいずれか１項に記載のジアミノ酸−ポリアミンに基づくジェミニ化合物の使用。
【請求項２９】
培養中の細胞の、互いに、あるいは固体または半固体表面への接着を促進するための、請求項１ないし１８のいずれか１項に記載のジアミノ酸−ポリアミンに基づくジェミニ化合物の使用。
【請求項３０】
請求項１記載のジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物の製造方法であって、溶媒としてのテトラヒドロフランおよび水の混合物中、塩基として炭酸カリウムを用いる、ポリアミンリンカーに結合したヒドロカルボキシ鎖に結合したαまたは末端アミノ基に結合したジアミノ酸のコハク酸イミデートエステルのカップリングを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本出願は２００２年３月２７日に出願された英国優先出願番号ＧＢ０２０７２８３．３および２００２年６月１３日に出願されたＧＢ０２１３６４６．３の利益を請求するものであり、その内容は出典を明示することで本明細書の一部とする。
【０００２】
本発明は、新規に同定されたジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドおよびジアミノ酸−アミノ酸−ポリアミンに基づくジェミニ界面活性剤化合物、かかる化合物の使用、およびそれらの製造法に関する。本発明は、また、薬剤のデリバリーのために細胞内への化合物の輸送を促進する、ジアミノ酸ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物の使用に関する。
【０００３】
（背景技術）
界面活性剤は、たとえ低濃度であっても、液体の表面特性に著しく影響を及ぼす物質である。例えば、界面活性剤は水または水溶液に溶解された際に表面張力を有意に減少し、２つの液体間または液体と固体間に働く界面張力を減少させるだろう。この界面活性剤分子の特性は、工業、特に洗剤および石油工業において広く利用されてきた。１９７０年代において、疎水性の架橋により結合した、極性末端を有する２本の疎水鎖により特徴付けられる、新規なクラスの界面活性剤分子が報告された（Deinega ,Yら., Kolloidn. Zh. 36, 649, 1974）。「ジェミニ」と呼ばれた（Menger, FMおよびLittau, CA, J. Am. Chem. Soc. 113, 1451, 1991）これらの分子は、モノマー等価物よりも非常に望ましい特性を有する。例えば、それらは油および水に基づく液体間に働く界面張力の減少において高度に効果的であり、非常に低い臨界ミセル濃度を有する（Menger, FMおよびKeiper, JS, Angewandte. Chem. Int. Ed. Engl., 2000, 39, 1906）。
【０００４】
特に培養中にポリヌクレオチドを細胞内にトランスフェクションするために、陽イオン界面活性剤が用いられ、かかる薬剤の例は遺伝子技術に関わる科学者に市販されている（例えば、Promega Corp. WI, USAより入手可能である真核細胞のトランスフェクション用の試薬ＴｆｘＴＭ−５０）。
【０００５】
遺伝子治療またはアンチセンス治療のいずれかに対して、いかに効率的にインビボで細胞にＤＮＡをデリバリーするかがここ数年大きな目標であった。デリバリービヒクルとしてのウイルス、例えば嚢胞性線維症（ＣＦ）の矯正的遺伝子治療を目的とした気道の上皮細胞に対するアデノウイルスの使用に大きな関心が向けられてきた。しかしながら、ＣＦ患者における遺伝子輸送の成功的な証拠が有るにも関わらず、アデノウイルス経路は、炎症性副作用および輸送された遺伝子の発現が一過性に制限されるため、問題が残ったままである。陽イオン界面活性剤を使用した研究を含む、インビボ遺伝子デリバリーに対するいくつかの代替的な方法が研究されてきた。Gao, Xら. Gene Ther. 2, 710-722, 1995は、陽イオン脂質を運ぶアミンを使用して、ＣＦマウスの気道上皮内にＣＦ膜貫通コンダクタンス調節因子（ＣＦＴＲ）に対する正常なヒト遺伝子を用いる方法の可能性を証明した。このグループは引き続きリポソームＣＦ遺伝子治療試験を行い、単に部分的に成功したにすぎないが、ヒトにおけるこの方法の可能性を証明した（Caplen、Njら., Nature Medicine, 1, 39-46, 1995）。更に最近では他のグループが、例えばコレステロール誘導体（Oudrhiri, Nら. Proc. Natl. Acad. Sci. 94, 1651-1656, 1997）などの遺伝子デリバリーに対する他の陽イオン脂質の可能性を研究している（Miller, A, Angew. Int. Ed. Engl., 37, 1768-1785, 1998）。この限定された研究は、インビトロおよびインビボの両方で上皮細胞内への遺伝子の輸送を促進する、これらのコレステロールに基づく化合物の能力を証明し、それによってこの一般的な方法の妥当性の支持を導いた。
【０００６】
これらおよびその他の研究は、この新たな研究分野において、細胞に基づく実験におけるトランスフェクションの場合インビトロ、および遺伝子治療およびアンチセンス治療の場合インビボの両方において、ポリヌクレオチドを細胞内に効果的に輸送することを促進する、新規な低毒性界面活性剤分子を開発する継続的な要求があることを示す。システイン（ＷＯ９９／２９７１２）に基づく、またはスペルミン（ＷＯ００／７７０３２）またはジアミン（ＷＯ００／７６９５４）に基づくジェミニ界面活性剤が以前に作られていた。ジェミニ界面活性剤の他の例がＷＯ００／２７７９５、ＷＯ０２／３０９５７およびＷＯ０２／５０１００において見られる。
【０００７】
本発明は、既存の化合物により示される問題を解決しようとするものである。
【０００８】
（発明の開示）
本発明は、ジアミノ酸−ポリアミンまたはジアミノ酸−アミノ酸−ポリアミン骨格を有し、式（Ｉ）：
【化１】
2005529860.tif 000002
［式中：
ｍは０ないし６であり；
ｎは０ないし７であり；
ｐは０ないし６であり；ここに
【０００９】
Ｘは、結合、ＣＨ２、（ＣＨ２）２、ｑが２ないし６であるＮＨ（ＣＨ２）ｑＮＨまたは
【化２】
2005529860.tif 000003
（式中、Ｒ９ないしＲ１２は、同一であっても、または異なっていてもよく、Ｈ、Ｏまたはｒが０ないし６であるＣｒＨ２ｒ＋１から選択される：ただし、Ｒ９およびＲ１２がＯであるか、あるいはＲ９およびＲ１１がＯである場合は、Ｒ１０およびＲ１１またはＲ１０およびＲ１２は、各々Ｈである）
であり；
【００１０】
Ｙは、結合、ＣＨ２、
【化３】
2005529860.tif 000004
（式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は水素であり、Ｒ１およびＲ２は、２４個までの炭素原子を有し、アミド結合によりジアミノ酸−ポリアミン骨格に結合した飽和または不飽和ヒドロカルボキシ基であるか；あるいは
【００１１】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、水素であり、Ｒ１およびＲ２は、２４個までの炭素原子を有し、アミド結合によりジアミノ酸−ポリアミン骨格に結合した飽和または不飽和ヒドロカルボキシ基であり、Ｒ７およびＲ８は、同一であっても、または異なっていてもよく、アミド（ＣＯＮＨ）結合により一緒になって結合し、さらに、アミド結合によりジアミノ酸−ポリアミン骨格に結合し、直鎖または分枝鎖であり、１つまたはそれ以上のアミノ酸から形成される、一般式（ＩＩ）：
【化４】
2005529860.tif 000005
（ここに、ｐ１およびｐ２の値は、同じであっても、または異なっていてもよく、０ないし５、好ましくは１であり；
【００１２】
ｐ３およびｐ４の値は、同じであっても、または異なっていてもよく、０ないし５、好ましくは０であり；
Ａ１、Ａ３およびＡ４は、同じであっても異なっていてもよく、セリン、リシン、オルニチン、トレオニン、ヒスチジン、システイン、アルギニンおよびチロシンからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ａ２は、リシン、オルニチンおよびヒスチジンから選択されるアミノ酸である）
を有する、ペプチドである］
で示される一般構造に一致する、ジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物またはその医薬上許容される塩に関する。
【００１３】
好ましくは、化合物は対称性、すなわち、Ｒ１およびＲ２は互いに同一であり、Ｒ３およびＲ４は互いに同一であり、Ｒ５およびＲ６は互いに同一であり、Ｒ７およびＲ８は互いに同一である。
好ましい具体例において、Ａ１はリシン、セリンまたはトレオニン、好ましくはリシンである。好ましくは、Ａ３およびＡ４はリシン、オルニチン、ヒスチジンまたはアルギニンである。
【００１４】
さらに好ましい具体例において、ヒドロカルボキシ基は：
【化５】
2005529860.tif 000006
より選択される。
【００１５】
最も好ましくは、ヒドロカルボキシ基は（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７ＣＨ３天然混合物、シス型（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７ＣＨ３およびトランス型（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７ＣＨ３より選択される。
【００１６】
好ましい具体例において、ｍは０であり、ｎは２ないし４であり、Ｘは（ＣＨ２）または（ＣＨ２）２であり、Ｙは結合であり、ｐは０ないし４である。
【００１７】
さらに好ましい具体例において、ｍは０であり、ｎは２ないし４であり、Ｘは、ｑが２ないし５であるＮＨ（ＣＨ２）ｑＮＨであり、Ｙは結合であり、ｐは２ないし５である。
【００１８】
他の好ましい具体例において、ｍは０であり、ｎは２ないし４であり、Ｘは
【化６】
2005529860.tif 000007
［式中、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は全てＨである］
であり、Ｙは結合であり、ｐは２ないし５である。
【００１９】
さらにより好ましい具体例において、ｍは０であり、ｎは２ないし４であり、Ｘは（ＣＨ２）または（ＣＨ２）２であり、ｐは０ないし４であり、Ｙは
【化７】
2005529860.tif 000008
ある。
【００２０】
さらにより好ましい具体例において、ｍは０であり、ｎは２ないし４であり、Ｘは、ｑが２ないし５であるＮＨ（ＣＨ２）ｑＮＨであり、ｐは２ないし５であり、Ｙは
【化８】
2005529860.tif 000009
である。
【００２１】
さらにより好ましい具体例において、ｍは０であり、ｎは２ないし４であり、Ｘは
【化９】
2005529860.tif 000010
［式中、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は全てＨである］
であり、ｐは２ないし５であり、Ｙは
【化１０】
2005529860.tif 000011
である。
【００２２】
さらに好ましい具体例においては、Ｘは
【化１１】
2005529860.tif 000012
であり、Ｙは結合であり、ｐは１ないし６であり、ｎは１ないし７である。
【００２３】
本発明の化合物は、当業者によく知られている合成ペプチド化学を使用して、容易に入手可能である出発物質から調製されうる。図１に示されるスキームは、ヒドロカルボキシ基がジアミノ酸のα−アミノ基に結合し、さらにジアミノ酸がアミド結合によりポリアミン骨格部位に結合している、本発明の化合物を合成するための一般的なスキームを示し、図２に示されるスキームは、ヒドロカルボキシ基がジアミノ酸の末端アミノ基に結合しており、さらにジアミノ酸がアミド結合によりポリアミン骨格部位に結合している、本発明の化合物を合成するための一般的なスキームを示し、図３に示されるスキームは、アミノ酸がアミド結合により、ジアミノ酸のアミノ基（αまたは末端）に結合しており、さらにジアミノ酸がアミド結合によりポリアミン部位に結合しているジアミノ酸−アミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物を合成するための一般的なスキームを示す。
【００２４】
本発明の他の態様は、ジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物を使用する方法に関連する。かかる使用は、全ての生物におけるアンチセンス、遺伝子治療および（抗体の形成のため）遺伝子的免疫法のために、オリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドの細胞内への輸送を促進することを含む。他の使用は、例えばとりわけ遺伝子発現研究およびアンチセンスコントロール実験において、培養物中の細胞内へのポリヌクレオチドのトランスフェクションが必要となった場合に、かかるトランスフェクションを促進するために本発明の化合物を利用することを含む。かかるポリヌクレオチドおよびアンチセンス分子の調製のためのプロトコルは当該分野でよく知られている（例えば、Sambrookら., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989), Cohen, JS ed. Oligodeoxynucleotides as Antisense Inhibitors of Gene Expression, CRC Press, Boca Raton, FL (1989)）。ポリヌクレオチドを該化合物と混合し、細胞に加え、ポリヌクレオチドを取り込みが可能になるようにインキュベートすることができる。さらなるインキュベートの後、細胞はトランスフェクションされたＤＮＡにより与えられる表現型特性に関してアッセイすることができ、あるいは、該ＤＮＡから発現されるｍＲＮＡのレベルを、ノーザンブロッティングにより、または例えばＴａｑｍａｎ（登録商標）法（Perkin Elmer, Connecticut, USA）などのＰＣＲに基づく定量方法を用いることにより、決定できる。本発明の化合物は、先行技術における化合物と比較して、培養中の細胞におけるＤＮＡの細胞性取り込みの効率を、典型的には３倍ないし６倍の間で有意に改善する。トランスフェクションプロトコルにおいて、ジェミニ化合物を、トランスフェクションの効率を上昇させるため、１つまたはそれ以上の補足物と組み合わせて使用してよい。かかる補足物は、例えば：
【００２５】
（ｉ）中性担体、例えばジオレイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）（Farhood, H.,ら(1985) Biochim. Biophys. Acta, 1235-1289）；
（ｉｉ）複合化試薬、例えば市販されているＰＬＵＳ試薬（Life Technologies Inc. Maryland, USA）または、ポリリシンまたはポリオルニチンペプチドなどのペプチド、または排他的ではないが、主にリシン、オルニチンおよび／またはアルギニンなどの基本アミノ酸を含むペプチド、
から選択されうる。上記一覧が全てを網羅しているわけではなく、トランスフェクションの効率を上昇させる補足物が本発明の範囲内に含まれうる。
【００２６】
さらに他の態様において、本発明は、本発明の化合物を使用した遺伝子治療における遺伝子的物質の輸送に関する。例えば、当業者は、当該分野でよく知られたプロトコルを用いて、本発明のジェミニ界面活性剤化合物の使用に関連した、遺伝子治療における使用のための遺伝子デリバリー方法論を開発し得る。例えば、遺伝子輸送ベクターの肺へのデリバリーのための界面活性剤の使用は、Weiss, DJ (2002) Molecular Therapy 6(2) pp148から152において論評される。
【００２７】
本発明のさらなる他の態様は、本発明の化合物を使用した、インビトロおよびインビボでの、非ヌクレオチドに基づく薬剤化合物の細胞内へのデリバリーをもたらす方法に関連する。
【００２８】
本明細書に頻繁に用いられるある特定の用語の理解を容易にするため、以下の定義を提供する。
【００２９】
「アミノ酸」は、+Ｈ３ＮＣＨ（Ｒ）ＣＯ２−の形態の二極性イオン（双極性イオン）をいう。これらは、Ｒ基の性質により区別され、Ｒが水素以外である場合、これらは不斉であり得、ＤおよびＬファミリーを形成する。Ｒ基が、例えば非極性（例えばアラニン、ロイシン、フェニルアラニン）または極性（例えば、グルタミン酸、ヒスチジン、アルギニンおよびリシン）であり得る２０種の天然に生じるアミノ酸が存在する。非天然アミノ酸の場合、Ｒは天然のアミノ酸において見られない他のいずれの基であり得る。
【００３０】
「ポリヌクレオチド」は、一般に、いずれのポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドをいい、非修飾ＲＮＡまたはＤＮＡあるいは修飾ＲＮＡまたはＤＮＡであってもよい。「ポリヌクレオチド」は、制限するものではないが、１本鎖および２本鎖ＤＮＡ、１本鎖および２本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、１本鎖および２本鎖ＲＮＡ、および１本鎖および２本鎖領域の混合物であるＲＮＡ、１本鎖またはより典型的には、２本鎖であるＤＮＡおよびＲＮＡまたは１本鎖および２本鎖領域の混合物を含むハイブリッド分子を含む。加えて、「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡまたはＤＮＡあるいはＲＮＡかつＤＮＡ両方を含む３本鎖領域をいう。ポリヌクレオチドなる語は、また、１つまたはそれ以上の修飾塩基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡおよび安定性または他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡまたはＲＮＡを含む。「修飾」塩基は、例えば、トリチル化された塩基およびイノシンのような異常塩基を含む。種々の修飾がＤＮＡおよびＲＮＡに施され；かくして、「ポリヌクレオチド」は、典型的には、天然に見られるような、化学的、酵素的または代謝的に修飾されたポリヌクレオチドの形態、ならびにウイルスおよび細胞に特有のＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含する。「ポリヌクレオチド」は、また、しばしばオリゴヌクレオチドと呼ばれる比較的短いポリヌクレオチドを包含する。
【００３１】
「トランスフェクション」は、化学的または物理的方法のいずれかによる細胞膜の修飾に関する方法を用いる、培養中の細胞内へのポリヌクレオチドの導入をいう。かかる方法は、例えばSambrookら., MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.  (1989)に記載されている。ポリヌクレオチドは、直線状または環状の、１本鎖または２本鎖であってもよく、ポリヌクレオチドの複製またはポリヌクレオチドの一部を含む同種または異種遺伝子の発現を調節する要素を含みうる。
【００３２】
この度、本発明を、以下の実施例により記載する。
（実施例）
実施例１：
ＣＲ−１１０
【化１２】
2005529860.tif 000013
Ｈ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（５．０２ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）および２０．５ｍＬのＮａＯＨ１Ｍを０℃に冷却した８５Ｍｌの水−アセトン（１：２ｖ／ｖ）に溶解した溶液に、ｐＨが９以上となるよう維持するため、４．４３ｇ（２０．３ｍｍｏｌ）のドデシルクロリドおよびＮａＯＨ水溶液１Ｍを交互に滴下した。加えた後、１０分間、０℃でさらに攪拌を継続する。ＨＣｌ１０％をｐＨ２となるまで加えた。固体を濾過し、ｐＨ７となるまで水で洗浄する。Ｐ２Ｏ５で乾燥する。白色固体である化合物ＣＲ−１１０の収率が４６％となるまで固体をシリカ上で、ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨでクロマトグラフィする。αD 20  -1.0 (c 1.48  , MeOH)  ; IR(KBr)νmax   3347, 2921, 2851, 1717, 1681, 1521 cm-1; 1H NMR (300 MHz, CD3OD) 4.26 (dd, 1H, J= 4.77, 8.92 Hz, CH-COOH), 2.94 ( t, 2H, J= 6.7 Hz, CH2N), 2.16 (t, 2H, J= 7.4 Hz, CH2CON), 1.78-1.74 (m, 1H, HCH-CH(COOH), 1.63-1.45 (m, 7H, HCH-CH(COOH), CH2CH2N および CH2CH2CON), 1.35 (s, 9H, (CH3)3C), 1.22 (s,  16H, CH3(CH2)8), 0.82 (t, 3H, J=6.8 Hz, CH3); 13C (75 MHz, CD3OD) 176.32 C(O)NCH2), 175.45 (COOH), 158.42 (C(O)NO), 79.73 (C(CH3)3), 54.84 (CH), 41.16 (CH2N), 36.97, 33.04, 32.64, 30.74-29.99 (CH2), 28.83 (CH3), 26.98, 24.26, 23.71 (CH2), 14.48 (CH3)。
【００３３】
実施例２：
ＣＲ−１１６
【化１３】
2005529860.tif 000014
２．４ｇ（５．６ｍｍｏｌ）のＣＲ−１１０を−２０℃のＴＨＦに溶解した溶液に、Ｅｔ３Ｎ（０．７８ｍＬ、５．６ｍｍｏｌ）およびＥｔＯＣＯＣｌ（０．５５ｍＬ、５．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応物をこの温度で３０分間攪拌し、２４６ｍｇ（２．８ｍｍｏｌ）の１，４−ジアミノブタンを加え、さらに−２０℃で１時間攪拌した後、反応混合液を室温で温め、一晩攪拌した。真空で溶媒を除去し、残渣物をＣＨＣｌ３に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３ａｑおよび食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４ａｎｈ上で乾燥した。得られた残渣物をクロマトグラフィして、白色固体である化合物ＣＲ−１１６（５０％）を与えた。：αD 20  -10.06 (c 1.51  , MeOH); IR(KBr)νmax    3415-3307, 2920, 2851, 1688, 1637, 1515 cm-1; 1H NMR (300 MHz, CD3OD) 4.17 (dd, 1H, J= 5.5, 8.5 Hz, CH-COOH), 3.12 (m, 2H, CH2N), 2.96 ( q, 2H, J= 6.4 Hz, CH2N), 2.17 (t, 2H, J= 7.4 Hz, CH2C(O)N), 1.69-1.64 (m, 1H, HCH-HC(COOH), 1.58-1.42 (m, 5H, HCH-HC(COOH), CH2CH2CO, CH2CH2N), 1.36 (s, 9H, (CH3)3C), 1.22 (s, 16H, CH3(CH2)8CH2), 0.88 (t, 2H, J=6.8 Hz, CH3); 13C (75 MHz, CD3OD) 176.26, 174.46 C(O)NCH2), 158.42 (C(O)N),  79.93 (C(CH3)3), 54.82 (CH), 41.11 および 39.96 (CH2N), 36.89, 33.09, 32.92,  30.77-30.38 (CH2), 28.85 (CH3), 27.63, 26.94, 24.28, 23.74(CH2), 14.48 (CH3)。
【００３４】
実施例３：
ＣＲ−１１７：ＧＳＮ１１
【化１４】
2005529860.tif 000015
１．２２９９ｇ（１．３５ｍｍｏｌ）のＣＲ−１１６をＥｔＯＡｃ４Ｍで４５分間処理した。白色固体である化合物ＣＲ−１１７（４９％）を得るため、固体を濾過およびＭｅＯＨより再結晶化し、ＥｔＯＡｃを加えた：αD 20  -13.98 (c 1.76  , MeOH); IR(KBr)νmax  3422, 3298, 3089, 2920, 2851, 1638 cm-1; 1H NMR (300 MHz, CD3OD) 4.20 (dd, 1H, J= 5.6, 8.4 Hz, CH-COOH), 3.12 (m, 2H, CH2N), 2.84 ( t, 2H, J= 6.4 Hz, CH2N), 2.18 (t, 2H, J= 7.6 Hz, CH2C(O)N), 1.74-1.72 (m, 1H, HCH-CH(COOH), 1.69-1.34 (m, 5H, HCH-CH(COOH) + CH2CH2CO+ CH2CH2N), 1.22 (s, 16H, CH3(CH2)8CH2), 0.82 (t, 2H, J=6.8 Hz, CH3); 13C (75 MHz, CD3OD) 176.39, 174.22 C(O)NCH2), 54.59 (CH), 40.55, 39.99 (CH2N), 33.08, 32.57, 30.76-30.41(CH2), 28.23, 27.61, 26.93 (CH2), 14.44 (CH3); C40H80Cl2N6O4. H2O 778.56 calc C 60.94 %,H 10.36 %, N 10.65 % found C 60.88%, H10.22%, N 10.08%。
【００３５】
実施例４
ＲＧ００／７８１
【化１５】
2005529860.tif 000016
Ｎ−ε−（第３ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシン（１．２４ｇ、５．０３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１４０ｍＬ）に溶解した溶液に連続して、Ｋ２ＣＯ３（０．７５ｇ、５．４３ｍｍｏｌ、１．０８等量）を水（２０ｍＬ）に溶解した溶液およびオレイルコハク酸イミデート（１．９２ｇ、５．０６ｍｍｏｌ、１等量）を加えた。反応物を室温で２０時間攪拌し、ほとんどのＴＨＦが蒸発した。水およびＣＨＣｌ３（各３０ｍＬ）を加え、有機層を分離した。水層をｐＨ２まで酸性化し、ＣＨＣｌ３（２ｘ３０ｍＬ）を用いて２回抽出した。有機層を水および食塩水（各２０ｍＬ）で洗浄、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過および蒸発させ、油を与えた。収率：２．４６ｇ（４．８２ｍｍｏｌ、９６％）．1H NMR (400 MHz, d6-DMSO): δ 12.4 (m, 1 HOH),  7.92 (d, 1 H, J = 7.8, HNα), 6.70 (t, 1 H, J = 6.0, HNε), 5.29 (m, 2 CH9,10), 4.10 (dt, 1 H, J = 5.0, 8.9, CHα), 2.85 (q, 2 H, J = 6.2, CH2ε), 2.07 (dt, 2 H, J = 2.2, 7.0, CH22), 1.95 (q, 4 H, J = 6.0, CH28,11), 1.62 (m, 1 H, CHβ), 1.51 (m, 1 H, CHβ), 1.45 (m, 2 H, CH23), 1.33 (s, 9 H, C(CH3)3), 1.2 (m, 26 H, 2 CH2γ，δ および 10 CH2 オレオイル), 0.82 (t, J = 6.4, 3 H, CH318)。
【００３６】
実施例５
ＲＧ００／３６６
【化１６】
2005529860.tif 000017
Ｎ−α−オレオイル−Ｎ−ε−（ダイサンブチルオキシカルボニル）−Ｌ−リシン（１．８０ｇ、３．５２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（８０ｍＬ）に溶解した溶液に連続して、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド（０．４１ｇ、３．５６ｍｍｏｌ、１．０１等量）およびＤＣＣ（０．７３ｇ、３．５４ｍｍｏｌ、１．０１等量）を加えた。反応物を室温で１６時間攪拌した。沈殿物を濾過し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で洗浄した。濾液を濃縮し、ＥｔＯＡｃに再溶解し、再び濾過した。残渣物をＣＨＣｌ３に溶解し、Ｅｔ２Ｏで沈殿させ、白色固体であるＮ−α−オレイン酸−Ｎ−ε−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−リシニルコハク酸イミデートを与えた。収率：１．９８ｇ（９３％）．NMR 1H (400 MHz, CDCl3) : δ 6.11 (m, 1 H, HNα), 5.38 (m, 2 H, H9,10), 4.94 (m, 1 H, CHα), 4.65 (m, 1 H, HNε), 3.12 (m, 2 H, CH2ε), 2.79 (s, 4 H, 2 CH2Su), 2.20 (t, J = 6.1, 2 H, CH22), 2.00 (m, 5 H, CHβ および 2 CH28,11), 1.84 (m, 1 H, CHβ), 1.63 (m, 2 H, CH23), 1.48 (m, 4 H, 2 CH2γ，δ), 1.37 (s, 9 H, 3 CH3), 1.27 (m, 20 H, 10 CH2 オレオイル), 0.83 (t, J = 6.3 Hz, 3 H, CH318)。
【００３７】
実施例６
ＲＧ００／２５０
【化１７】
2005529860.tif 000018
Ｎ４，Ｎ９−ビス−（第３ブチルオキシカルボニル）−１，１２−ジアミノ−４，９−ジアザドデカン（６２９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（８０ｍＬ）に溶解した溶液およびＫ２ＣＯ３（０．２９ｇ、２．１ｍｍｏｌ、２．１等量）を水（１０ｍＬ）に溶解した溶液に、Ｎ−α−オレオイル−Ｎ−ε−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−リシニルコハク酸イミデート（１２４６ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ、２．０５等量）の溶液を加えた。反応物を室温で一晩攪拌した。ほとんどのＴＨＦは蒸発し、水（３０ｍＬ）を加えた。水層をＣＨＣｌ３（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。有機層を水、０．１ＭＨＣｌ、水および食塩水（各２０ｍＬ）で洗浄、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過、蒸発およびカラムクロマトグラフィによりＳｉＯ２（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ：９５／５、Ｒｆ＝０．３０）上で精製し、油を与えた。収率：１０６０ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ、７６％）．1H NMR (400 MHz, CDCl3) : δ 7.30 (bs, 2 H, 2 NHC1'), 6.33 (bs, 2  H, 2 NHα), 5.31 (m, 4 H, 2 CH9,10), 4.71 (bs, 2 H, 2 NHε), 4.41 (m, 2 H, 2 CHα), 3.18 (m, 12 H, 2 CH21', 2 CH23'), 3.08 (m, 4 H, 2 CH23' および 2 CH2ε), 2.18 (t, 4 H, J = 6.8, 2 CH22), 1.98 (m, 8 H, 2 CH28,11), 1.90 (m, 2 H, 2 CHβ), 1.79 (m, 2 H, 2 CHβ), 1.60 (m, 10 H, 2 CH22', 2 CH2γ および 2 CH23), 1.45 (m, 26 H, 2 CH2δ, 2 CH25' および 2 C(CH3)3), 1.40 (s, 18 H, 2 C(CH3)3), 1.25 (m, 40 H, 2 x 10 CH2Tail), 0.86 (m, 6 H, J = 6.6, 2 CH318). 13C NMR (100 MHz, CDCl3) : δ 171.1, 174.3, 155.6, 155.7, 129.5, 129.3, 79.4, 78.5, 76.8, 52.4, 48.6, 46.4, 39.6, 36.1, 33.5, 31.4, 29.3, 29.2, 29.0, 28.8, 28.7, 28.0, 26.7, 25.3, 24.5, 22.2, 22.1, 13.7。
【００３８】
実施例７
ＲＧ００／２６７：ＧＳＣ１０２
【化１８】
2005529860.tif 000019
ＲＧ００／２５０（１．０４ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）をＭＯＨ（２０ｍＬ）に溶解した溶液に、濃ＨＣｌ（１０ｍＬ）を加え、反応物を室温で２時間攪拌した。それから溶媒を除去し、残渣物を水（８０ｍＬ）に再溶解し、フリット上で濾過し、再び蒸発させた。残渣物を最少量のメタノールに再溶解し、Ｅｔ２Ｏで沈殿させ、濾過の後に淡黄色の固体を与えた。収率：０．７３４ｇ（０．６５ｍｍｏｌ、８６％）．1H NMR  (400 MHz, d6-DMSO) : δ9.02 (m, 4 H, 2 NH), 8.16 (t, 2 H, J = 6.0, 2 NHC1'), 7.98 (s, 6 H, 2 NαH および 2 NεH2), 5.29 (m, 4 H, 2 CH9,10), 4.10 (q, 2 H, J = 7, 2 CHα), 3.10 (hp, 4 H, J = 6.4, 2 CH21'), 2.85 (m, 8 H, 2 CH23' および 2 CH24'), 2.71 (m, 4 H, 2 CH2ε), 2.10 (AB, 4 H, J = 6.4, 2 CH22), 1.95 (m, 8 H, 2 CH28,11), 1.76 (m, 4 H, 2 CH22'), 1.68 (m, 4 H, 2 CH25'), 1.65  1.42 (m, 12 H, 2 CH2β, 2 CH2δ および 2 CH23), 1.25 (m, 44 H, 10 CH2Ol および 2 CH2γ), 0.83 (t, 6 H, 2 CH318). MS (+ES) : 999.8 [M+Na]。
【００３９】
実施例８
ＲＧ００／３７１
【化１９】
2005529860.tif 000020
Ｎ−α−オレオイル−Ｎ−ε−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−リシン（９００ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６０ｍＬ）に溶解した溶液に連続して、炭酸カリウム（２２５ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ、１．１等量）を水（６ｍＬ）に溶解した溶液およびＮ−ε−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−リシン（３６５ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ、１等量）を加えた。それから溶液を室温で１６時間攪拌した。ほとんどのＴＨＦを蒸発させ、水溶液のｐＨを２に調節し、ＣＨＣｌ３（２ｘ８０ｍＬ）で抽出した。有機層を水（５０ｍＬ）および食塩水（４０ｍＬ）で洗浄、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過および蒸発させた。それから得られた油を最少量のＣＨＣｌ３に溶解し、Ｅｔ２Ｏを加えた。それから白色固体を採取した。収率：１００８ｍｇ（１．４６ｍｍｏｌ、９９％）．1H NMR  (400 MHz, CDCl3) : δ12.60 (m, 1 H, COOH), 8.55 (m, 1 H, NH), 7.10 (m, 1 H, 1 NH), 6.70 (m, 1 H, 1 NH), 5.32 (m, 2 H, CH9,10), 4.80 (m, 1 H, NH), 4.51 (m, 2 H, 2 CHα), 3.08 (m, 4 H, 2 CH2ε), 2.20 (t, 2 H, J = 7.0, 2 CH22), 1.99 (m, 4 H, CH28,11), 1.60 (m, 4 H, 2 CH2β), 1.50  1.20 (m, 44 H), 0.87 (t, 3 H, J = 6.8, CH318)。
【００４０】
実施例９
ＲＧ００／３７６
【化２０】
2005529860.tif 000021
Ｎ−α−（Ｎ−α−オレオイル−Ｎ−ε−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−リシル）−Ｎ−ε−（第３ブチルオキシカルボニル））−Ｌ−リシン（１００８ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４０ｍＬ）に溶解した溶液に、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド（１７７ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ、１．０２等量）およびＤＣＣ（３１１ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ、１．０３等量）を加えた。反応物を室温で一晩攪拌し、それからＤＣＵを濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。それから溶媒を除去し、残渣物をＥｔＯＡｃに再溶解し、ＤＣＵを再び濾過し、蒸発させた後白色固体を単離した。収率：１１４７ｍｇ（１．３６ｍｍｏｌ、９３％）。
【００４１】
実施例１０
ＲＧ００／３８４
【化２１】
2005529860.tif 000022
Ｎ４，Ｎ９−ビス−（第３ブチルオキシカルボニル）−１，１２−ジアミノ−４，９−ジアザドデカン（２４１ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６０ｍＬ）に溶解した溶液およびＫ２ＣＯ３（０．１０ｇ、０．７３ｍｍｏｌ、２．１等量）を水（８ｍＬ）に溶解した溶液に、Ｎ−α−（Ｎ−α−オレオイル−Ｎ−ε−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−リシル）−Ｎ−ε−（第３ブチルオキシカルボニル））−Ｌ−リシルコハク酸イミド（６００ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ、２．０等量）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解した溶液を加えた。反応物を室温で一晩攪拌した。ほとんどのＴＨＦを蒸発させ、水（３０ｍＬ）を加えた。水層をＣＨＣｌ３（２ｘ６０ｍＬ）で抽出した。有機層を水、０．１ＭＨＣｌ、水および食塩水（各２０ｍＬ）で洗浄、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、蒸発およびＳｉＯ２（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ：９／１、Ｒｆ＝０．２７）上で精製し、白色固体を与えた。収率：４９７ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ、７５％）．1H NMR  (400 MHz, CDCl3): δ8.40 (m, 2 H, 2 NH), 6.90 (m, 2 H, 2 NH), 6.40 (m, 2 H, 2 NH), 5.33 (m, 4 H, 2 CH9,10), 4.85 (m, 4 H, 4 NεH), 4.40 (m, 4 H, 2 x 2 CHα), 3.28  3.02 (m, 20 H, 2 x 2 CH2ε, 2 CH21', 2 CH23' および 2 CH24'), 2.22 (m, 4 H, 2 CH22), 1.99 (m, 8 H, 2 CH28,11), 1.80 (m, 4 H, 2 CH2β), 1.72  1.25 (m, 126 H), 0.83 (t, 6 H, J = 6.8, 2 CH318)。
【００４２】
実施例１１
ＲＧ００／４０４
【化２２】
2005529860.tif 000023
ＲＧ００／３８４（４７０ｍｇ、０．２５５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解した溶液に、濃ＨＣｌ（１０ｍＬ）を加え、反応物を室温で１時間攪拌した。溶媒を真空下で除去し、残渣物を水（８０ｍＬ）に再溶解し、濾過し、再び蒸発させた。残渣油をＭｅＯＨに溶解し、Ｅｔ２Ｏで沈殿させ、黄色粉末を与えた。収率：２８４ｍｇ（０．１９４ｍｍｏｌ、７６％）．1H NMR  (400 MHz, d6-DMSO) : δ9.10 (m, 4 H, 2 NH2+), 8.18 (m, 4 H, 4 NHC), 8.10  7.98 (m, 16 H, 2 x 2 NαH および 2 x 2 NεH3+), 5.29 (m, 4 H, 2 CH9,10), 4.18 (m, 2 H, CHα), 4.11 (m, 2 H, 2 CHα), 3.10 (m, 4 H, 2 CH21'), 2.85 (m, 8 H, 2 CH23' および 2 CH24'), 2.71 (m, 8 H, 2 x 2 CH2ε), 2.10 (m, 4 H, 2 CH22), 1.95 (m, 8 H, 2 CH28,11), 1.80  1.39 (m, 28 H), 1.25 (m, 48 H, 10 CH2Ol および 2 x 2 CH2γ), 0.83 (t, 6 H, J = 6.8, 2 CH318）。
【００４３】
実施例１２
ＲＧ００／２７８
【化２３】
2005529860.tif 000024
Ｎ−α−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−リシン（７７９ｍｇ、３．１６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（８０ｍＬ）に溶解した溶液に連続して、炭酸カリウム（０．５２４ｇ、３．７９ｍｍｏｌ、１．２等量）を水（１０ｍＬ）に溶解した溶液およびオルコイルコハク酸イミデート（１．２０ｇ、３．１６ｍｍｏｌ、１等量）を加えた。反応物を室温で一晩攪拌する。ほとんどのＴＨＦを蒸発させ、水（４０ｍＬ）を加えた。水層をｐＨ２まで酸性化し、ＣＨＣｌ３（３ｘ６０ｍＬ）で抽出した。混合された有機層を水（３０ｍＬ）および食塩水（４０ｍＬ）で洗浄、硫酸ナトリウム上で乾燥、濾過および蒸発させ、無色油であるＮ−α−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｎ−ε−オレオイル−Ｌ−リシンを与えた。収率：１．３１ｇ（２．５６ｍｍｏｌ、８１％）．1H NMR (400 MHz, CDCl3) : d 5.78 (t, 1 H, J = 8.0, NHε), 5.33 (m, 2 H, CH9,10), 5.27 (d, 1 H, J = 7.8, NHα), 4.27 (m, 1 H, CHα), 3.24 (q, 2 H, J = 8.0, CH2ε), 2.26 (t, 2 H, J = 6.8, CH22), 1.98 (m, 4 H, CH28,11), 1.85 (m, 1 H, CHβ), 1.70 (m, 1 H, CHβ), 1.60 (m, 2 H, CH23), 1.55 (m, 2 H, CH2δ), 1.43 (s, 9 H, C(CH3)3), 1.40 (m, 2 H, CH2γ), 1.27 (m, 20 H, 10 CH2Tail), 0.87 (m, 3 H, J = 6.6, CH318). HRMS (+ES) : 533.40327 calculated for C29H54O5N2Na found 533.39110。
【００４４】
実施例１３
ＲＧ００／２８１
【化２４】
2005529860.tif 000025
Ｎ−α−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｎ−ε−オレオイル−Ｌ−リシン（１．８０ｇ、３．５２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（８０ｍＬ）に溶解した溶液に連続して、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド（０．４１ｇ、３．５６ｍｍｏｌ、１．０１等量）およびＤＣＣ（０．７３ｇ、３．５４ｍｍｏｌ、１．０１等量）を加えた。反応物を室温で１６時間攪拌した。沈殿物を濾過し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で洗浄した。濾液を濃縮し、ＥｔＯＡｃに再溶解し、再び濾過した。残渣物をＣＨＣｌ３に溶解し、Ｅｔ２Ｏで沈殿させ、白色固体であるＮ−α−オレイン酸−Ｎ−ε−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−リシニルコハク酸イミデートを与えた。収率：１．９８ｇ（９３％）．1H NMR (400 MHz, CDCl3) : d 5.80 (t, 1 H, J = 8.0, NHε), 5.32 (m, 2 H, CH9,10), 5.12 (d, 1 H, J = 7.8, NHα), 4.66 (m, 1 H, CHα), 3.24 (q, 2 H, J = 8.0, CH2ε), 2.82 (s, 4 H, 2 CH2Su), 2.14 (t, 2 H, J = 6.8, CH22), 1.98 (m, 4 H, CH28,11), 1.90 (m, 2 H, 2 CHβ), 1.60 (m, 2 H, CH23), 1.55 (m, 2 H, CH2δ), 1.44 (s, 9 H, C(CH3)3), 1.39 (m, 2 H, CH2γ), 1.25 (m, 20 H, 10 CH2Tail), 0.86 (m, 3 H, J = 6.6, CH318）。
【００４５】
実施例１４
ＲＧ００／２８６
【化２５】
2005529860.tif 000026
Ｎ４，Ｎ９−ビス−（第３ブチルオキシカルボニル）−１，１２−ジアミノ−４，９−ジアザドデカン（４１４ｍｇ、０．６５９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６０ｍＬ）に溶解した溶液およびＫ２ＣＯ３（２００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ、２．２等量）を水（７ｍＬ）に溶解した溶液に、Ｎ−α−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｎ−ε−オレオイル−Ｌ−リシニルコハク酸アミデート（８００ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ、２．０等量）をＴＨＦ（３５ｍＬ）に溶解した溶液を加えた。反応物を室温で一晩攪拌した。ほとんどのＴＨＦを蒸発させ、水（３０ｍＬ）を加えた。水層をＣＨＣｌ３（２ｘ３０ｍＬ）で抽出した。有機層を水、０．１ＭＨＣｌ、水および食塩水（各３０ｍＬ）で洗浄、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過、蒸発およびＳｉＯ２（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ：９５／５、Ｒｆ＝０．２７）上で精製し、油を与えた。収率：７４０ｍｇ（０．５３３ｍｍｏｌ、８１％）．1H NMR (400 MHz, CDCl3) : δ 7.20 (bs, 2 H, 2 NHC1'), 5.72 (bs, 2  H, NHε), 5.33 (m, 4 H, 2 CH9,10), 5.25 (bs, 2 H, 2 NHα), 4.08 (m, 2 H, 2 CHα), 3.24 (m, 12 H, 2 CH21', 2 CH24' および 2 CH2ε), 3.12 (m, 4 H, 2 CH23'), 2.13 (t, 4 H, J = 6.8, 2 CH22), 1.98 (m, 8 H, 2 CH28,11), 1.80 (m, 2 H, 2 CHβ), 1.60 (m, 10 H, 2 CH22', 2 CHβ および 2 CH23), 1.50 (m, 4 H, 2 CH2δ), 1.47 (m, 4 H, 2 CH25'), 1.45 (s, 18 H, 2 C(CH3)3), 1.42 (s, 18 H, 2 C(CH3)3), 1.37 (m, 4 H, 2 CH2γ), 1.25 (m, 40 H, 2 x 10 CH2Tail), 0.86 (m, 6 H, J = 6.6, 2 CH318)。
【００４６】
実施例１５
ＲＧ００／３２０：ＧＳＣ１０１
【化２６】
2005529860.tif 000027
ＲＧ００／２９６（７５０ｍｇ、０．５４０ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解した溶液に、濃ＨＣｌ（１０ｍＬ）を加えた。反応物を室温で１時間攪拌し、それから蒸発させた。残渣物を水（６０ｍＬ）に再溶解し濾過した。水を蒸発させ、残渣物を最少量のＭｅＯＨに溶解し、Ｅｔ２Ｏで沈殿させ、黄色固体を与えた。収率：５３３ｍｇ（０．４７０ｍｍｏｌ、９０％）．1H NMR  (400 MHz, d6-DMSO) : δ9.02 (m, 4 H, 2 NH2+), 8.83 (t, 2 H, J = 6.0, 2 NHC1'), 8.30 (d, 6 H, J = 4.0, 2 NαH3+), 8.83 (t, 2 H, J = 6.0, 2 NεH), 5.30 (m, 4 H, 2 CH9,10), 3.70 (q, 2 H, J = 7, 2 CHα), 3.22 (m, 2 H, 2 CH1'), 3.13 (m, 2 H, 2 CH1'), 2.97 (m, 4 H, 2 CH2ε),  2.71(m, 8 H, 2 CH23' および 2 CH24'), 2.10 (t, 4 H, J = 7.3, 2 CH22), 1.95 (q, 8 H, J = 6.0, 2 CH28,11), 1.82 (h, 4 H, J = 7.0, 2 CH22'), 1.68 (m, 8 H, 2 CH2β および 2 CH25'), 1.43 (qu, 4 H, J = 6.2, 2 CH23), 1.35 (m, 4 H, 2 CH2δ), 1.25 (m, 44 H, 2 x 10 CH2Ol および 2 CH2γ), 0.82 (t, 6 H, 2 CH318). MS (+ES) : 999.8 [M+Na]。
【００４７】
実施例１６
ＲＧ００／５１８
【化２７】
2005529860.tif 000028
活性型アミノ酸ＲＧ００／３６６（６１０ｇ、１．０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４５ｍＬ）に溶解した溶液に、ビス−Ｎ−アミノプロピル−ピペラジン（０．０８１ｍＬ、０．５ｍｍｏｌ、０．５等量）およびそれから炭酸カリウム（０．１５ｇ、１．１ｍｍｏｌ、２．２等量）を水（１０ｍＬ）に溶解した溶液を加え、反応物を室温で２０時間攪拌した。ほとんどのＴＨＦを真空下で除去し、ＣＨＣｌ３を加え、有機層を抽出、水（２０ｍＬ）で洗浄、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過および蒸発させた。残渣物をシリカ（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ：８．５／１．５、Ｒｆ＝０．３）上でカラムクロマトグラフィにより精製し、白色固体を与えた。収率：４９０ｍｇ（０．４１３ｍｍｏｌ、８３％）．1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.68 (m, 2 H, 2 NHC1), 6.46 (m, 2 H, 2 NαH), 5.32 (m, 4 H, 2 CH9,10), 4.86 (m, 2 H, 2 NεHboc), 4.33 (q, 2 H, J = , 2 CHα), 3.38 (m, 2 H, CH1'), 3.28 (m, 2 H, CH1'), 3.05 (m, 4 H, 2 CH2ε), 2.47 (m, 12 H, 2 CH23' および 4 CH22'), 2.18 (t, 4 H, J = , 2 CH22), 1.99 (m, 8 H, 2 CH28,10), 1.82  1.54 (m, 12 H, 2 CH22', 2 CH23 および 2 CH2β), 1.48 (m, 4 H, 2 CH2γ), 1.42 (s, 18 H, 2 (CH3)3), 1.21 (m, 24 H, 10 CH2Ol および 2 CH2γ), 0.87 (t, 6 H, J = 6.4, 2 CH318). 13C NMR (400 MHz, CD3OD): δ 175.2, 173.4, 157.5, 129.9, 129.8, 78.8, 56.0, 53.8, 52.9, 41.3, 40.1, 37.7, 35.9, 32.1, 31.9, 29.9, 29.6, 29.5, 29.4, 29.3, 27.9, 27.2, 26.2, 26.0, 23.3, 22.8, 13.5。
【００４８】
実施例１７
ＲＧ００／５２２＝ＧＳＣ１７０
【化２８】
2005529860.tif 000029
保護ＲＧ００／５１８（４９０ｍｇ、０．４１３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解した溶液に、濃ＨＣｌ（１０ｍＬ）を加えた。反応物を１時間攪拌し、それから溶媒を蒸発させた。残渣物を水（４０ｍＬ）に再溶解、濾過および蒸発させた。本実施例において、ＭｅＯＨ／Ｅｔ２Ｏを使用して化合物を沈殿させることは不可能であった。白色固体を採取した。収率：３８１ｍｇ（０．３３７ｍｍｏｌ、８１％）．HRMS (+ES) : 985.8879 calculated for C58H113N8O4, found 985.8890.
注釈：ＴＦＡを使用した同様の手順およびＫ２ＣＯ３を用いた中和を、遊離アミンを同量の収率で単離するため使用した。1H NMR (400 MHz, d6-DMSO): δ 7.78 (2 d, 4 H, J = 8.0, 4 NHCO), 5.29 (m, 4 H, 2 CH9,10), 4.12 (q, 2 H, J = 6.2, 2 CHα), 3.04 (m, 4 H, 2 CH21'), 2.47 (m, 8 H, 4 CH24), 2.29 (m, 4 H, 2 NH2), 2.19 (t, 4 H, J = 6.2, 2 CH23'), 2.05 (m, 4 H, 2 CH22), 1.95 (m, 8 H, 2 CH28,10), 1.35  1.69 (m, 12 H, 2 CH22', 2CH23 および 2 CH2β), 1.21 (m, 26 H, 10 CH2Ol および CH2δ および CH2γ), 0.82 (t, 6 H, J = 6.4, 2 CH318)。
【００４９】
実施例１８
ＲＧ００／７９４
【化２９】
2005529860.tif 000030
ビスアミノ化合物（１５０ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４０ｍＬ）に溶解した溶液に連続して、Ｋ２ＣＯ３（４２ｍｇ、ｍｍｏｌ、２．１等量）を水（２ｍＬ）に溶解した溶液およびＮ，Ｎ−ビス−（第３ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシニルコハク酸イミデート（１４０ｍｇ、０．３０４ｍｍｏｌ、２．０等量）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解した溶液を加えた。それから反応物を室温で１６時間攪拌した。ほとんどのＴＨＦを蒸発させ、残渣物をＣＨＣｌ３に再溶解した。水（１０ｍＬ）を加え、有機層を抽出し、水（２ｘ１０ｍＬ）および食塩水（２０ｍＬ）で洗浄した。乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過および蒸発の後、残渣物をＳｉＯ２（溶出液：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ：８７／１２／１、Ｒｆ＝０．２８）上で精製する。それからＥｔ２Ｏを加え、生じる白色固体を濾過分離する。収率：０．１２４ｇ（０．０７６ｍｍｏｌ、５０％）．1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) : δ 7.75 (m, 4 H, 2 NHα1 および 2 NHC1), 7.68 (t, 2 H, J = , 2 NHε1), 6.69 (t, 2 H, J = , 2 NHε2), 6.63 (d, 2 H, J = , 2 NHα2), 5.29 (m, 4 H, 2 CH9,10), 4.10 (q, 2 H, J = , 2 CHα1), 3.78 (q, 2 H, J = , 2 CHα2), 3.00 (m, 6 H, 2 CH2ε1 および 2 CH1'), 2.95 (m, 2 H, 2 CH1'), 2.84 (m, 4 H, 2 CH2ε2), 2.29 (m, 8 H, 4 CH24'), 2.19 (m, 4 H, 2 CH23'), 2.06 (t, 4 H, J = , 2 CH22), 1.95 (m, 8 H, 2 CH28,10), 1.55  1.4 (m, 16 H), 1.32 (s, 36 H, 4 C(CH3)3), 1.20 (m, 48 H), 0.82 (t, 6 H, J = 6.4, 2 CH318)。
【００５０】
実施例１９
ＲＧ００／８１３＝ＧＳＣ１８４
【化３０】
2005529860.tif 000031
ＲＧ００／７９４（１２４ｍｇ、０．０７５５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５ｍＬ）に溶解した溶液に、濃ＨＣｌ（５ｍＬ）を加えた。反応物を室温で１時間攪拌し、それから溶媒を真空下で除去した。残渣物を水に溶解し、濾過および蒸発させた。化合物を最少量のＭｅＯＨに溶解し、Ｅｔ２Ｏで沈殿させた。生じる固体を濾過および採取した。収率：０．１０２ｇ（０．０７０ｍｍｏｌ、９３％）．1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) : δ 8.66 (d, 2 H, J = 7.8, 2 NHε1), 8.28 (m, 6 H, 2 NαH3+), 8.09 (m, 2 H, 2 NHC1), 8.05 (m, 6 H, 2 NεH3+), 7.98 (d, 2 H, J = 7.0, 2 NαH), 5.29 (m, 4 H, 2 CH9,10), 4.09 (m, 2 H, 2 CHα1), 3.72 (m, 2 H, 2 CHα2), 3.65 (m, 2 H, 2 NH+), 3.10 (m, 12 H, 2 CH2ε1, 2 CH23' および 2 CH21'), 2.74 (m, 8 H, 2 CH2ε2), 2.11 (t, 4 H, J = 7.2, 2 CH22), 1.95 (m, 8 H, 2 CH28,10), 1.82 (m, 2 H, 2 CH2δ1), 1.70 (m, 2 H, 2 CH2β2), 1.57 (m, 6 H, 2 CH2δ2 および 2 CHβ1), 1.50  1.15 (m, 66 H), 0.84 (t, 6 H, J = 6.4, 2 CH318). MS (+ES) : 1264.9 [M+Na]。
【００５１】
実施例２０
ＲＧ００／７８７
【化３１】
2005529860.tif 000032
１，６−ジアミノヘキセン（７２ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６０ｍＬ）に溶解した溶液およびＫ２ＣＯ３（１８０ｍｇ、１．３０ｍｍｏｌ、２．１等量）を水（１０ｍＬ）に溶解した溶液に、Ｎ−α−オレオイル−Ｎ−ε−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−リシニルコハク酸イミデート（７５０ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ、２等量）溶液を加えた。反応物を室温で一晩攪拌した。ほとんどのＴＨＦを蒸発させ、水（３０ｍＬ）を加えた。水層をＣＨＣｌ３（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。有機層を水、０．１ＭＨＣｌ、水および食塩水（各２０ｍＬ）で洗浄、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過、蒸発およびＳｉＯ２（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ：９／１、Ｒｆ＝０．３３）上でカラムクロマトグラフィにより精製し、油を与えた。収率：６５０ｍｇ（０．５９ｍｍｏｌ、９５％）．1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) : δ 7.73 (m, 4 H, 2 NαH および 2 N1'H), 6.68 (t, 2 H, J = 5.0, 2 NεH), 5.28 (m, 4 H, 2 CH9,10), 4.12 (m, 2 H, 2 CHα), 2.99 (q, 4 H, J = 6.4, 2 CH1'), 2.83 (q, 4 H, J = 6.6, 2 CH2ε), 2.07 (dt, 4 H, J = 3.2, 7.0, 2 CH22), 1.95 (m, 8 H, 2 CH28,11), 1.52 (m, 2 H, 2 CHβ), 1.42 (m, 6 H, 2 CH23 および 2 CHβ), 1.32 (s, 18 H, 2 C(CH3)3), 1.31  1.15 (m, 56 H, 2 x 10 CH2Tail, 2 CH2δ, 2 CH2γ, 2 CH22' および 2 CH23'), 0.82 (t, 6 H, J = 6.8, 2 CH318)。
【００５２】
実施例２１
ＲＧ００／８７３：ＧＳＮ１４
【化３２】
2005529860.tif 000033
保護化合物（６４０ｍｇ、０．５８１ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に溶解した溶液に、ＴＦＡ（１０ｍＬ）を加えた。本能物を室温で１時間攪拌し、それから（共役的蒸発をさせるためのいくらかのＥｔ２Ｏ（１０ｍＬ）を使用して）蒸発させた。それから油性残渣物をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、１０％水性Ｋ２ＣＯ３（１０ｍＬ）、水および食塩水で洗浄した。有機相を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過および蒸発させることで淡褐色固体を与え、これをＥｔ２Ｏで粉砕、濾過および乾燥することで白色固体を与えた。収率：４６０ｍｇ（０．５１０ｍｍｏｌ、８８％）。メタノール中の濃ＨＣｌを使用して脱保護を実行し得て、ＧＳＮ１４なる名称の塩酸塩を与える。1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) : δ 7.80 (m, 4 H, 2 NαH および 2 N1'H), 5.28 (m, 4 H, 2 CH9,10), 4.16 (m, 2 H, 2 CHα), 3.20 (bs, 4 H, 2 NH2), 2.99 (q, 4 H, J = 6.4, 2 CH1'), 2.53 (m, 4 H, 2 CH2ε), 2.10 (dt, 4 H, J = 3.2, 7.0, 2 CH22), 1.91 (m, 8 H, 2 CH28,11), 1.52 (m, 2 H, 2 CHβ), 1.48 (m, 2 H, 2 CHβ), 1.42 (m, 4 H, 2 CH23), 1.31  1.15 (m, 56 H, 2 x 10 CH2Tail, 2 CH2δ, 2 CH2γ, 2 CH22' および 2 CH23'), 0.81 (t, 6 H, J = 6.8, 2 CH318)。
【００５３】
実施例２２
ＲＧ００／８７４
【化３３】
2005529860.tif 000034
ＲＧ００／８７３（１００ｍｇ、０．１１１ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（３２ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ、２．１等量）を含む水およびＴＨＦ（２０ｍＬ）の１／９混合液に、Ｎ，Ｎ−ビス−（第３ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−リシニルコハク酸イミデート（１０３ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ、２．１等量）を加えた。反応物を室温で２０時間攪拌した。ほとんどのＴＨＦを除去し、残渣物を水（１０ｍＬ）およびＣＨＣｌ３（４０ｍＬ）で希釈した。有機層をデカンテーションし、連続して水（１０ｍＬ）、０．１ＭＨＣｌ（２０ｍＬ）、水（１０ｍＬ）および食塩水（２５ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥、濾過および蒸発させた。生じる油をＥｔ２Ｏより結晶化した。白色固体を採取した。収率：１６４ｍｇ（０．１０５ｍｍｏｌ、９５％）。
【００５４】
実施例２３
ＲＧ００／８７５＝ＧＳＣ１９７
【化３４】
2005529860.tif 000035
ＲＧ００／８７４（１６０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍＬ）に溶解した溶液に濃ＨＣｌ（５ｍＬ）を加えた。反応物を１時間攪拌し、それから蒸発し乾燥させた。それから残渣物を水（３０ｍＬ）に溶解し、珪華フリット漏斗（Ｎ°３）で濾過し、共役的蒸発をさせるためのＥｔＯＨを使用して蒸発し乾燥させた。残渣物を最少量のメタノールに溶解し、Ｅｔ２Ｏで沈殿させて淡褐色固体として目的の化合物を与えた。収率：１２４ｍｇ（０．９５１ｍｍｏｌ、９５％）．1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) : δ 8.59 (t, 2 H, J = 5.0, 2 N1'H), 8.22 (m, 6 H, 2 Nα2H3+), 7.96 (m, 6 H, 2 Nε2H3+), 7.89 (d, 2 H, J = 8.0, 2 Nα1H), 7.89 (t, 2 H, J = 5.8, 2 Nε1H), 5.29 (m, 4 H, 2 CH9,10), 4.14 (dt, 2 H, J = 5.4, 8.0, 2 CHα1), 3.70 (m, 2 H, 2 CHα2), 3.05 (m, 4 H, 2 CH21'), 2.98 (q, 4 H, J = 5.8, 2 CH2ε1), 2.72 (m, 4 H, 2 CH2ε2), 2.09 (t, 4 H, J = 7.0, 2 CH22), 1.94 (m, 8 H, 2 CH28,11), 1.69 (m, 2 H, 2 CH2β2), 1.55 (m, 6 H, 2 CH2δ2 および 2 CHβ1), 1.48  1.15 (m, 56 H), 0.81 (t, 6 H, J = 6.6, 2 CH318)。
【００５５】
実施例２４
ＲＧ００／８０４
【化３５】
2005529860.tif 000036
ＲＧ００／７９４（１１０ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（７ｍＬ）に溶解した溶液に、濃ＨＣｌ（７ｍＬ）を加えた。反応物を室温で１時間攪拌し、それから共役的蒸発をさせるためのＥｔＯＨを使用して真空下で溶媒を除去した。残渣物を水に溶解し、濾過および蒸発させた。化合物を最少量のＭｅＯＨに溶解し、Ｅｔ２Ｏで沈殿させた。生じる固体を濾過し、白色粉末として採取した。収率：８８ｍｇ（０．０４９ｍｍｏｌ、９４％）．１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ 8.69 (d, 2 H, J = 7.8, 2 NHα2), 8.30 (m, 2 H, 2 NHα1), 8.12 (m, 2 H, 2 NHC1), 7.95 (m, 12 H, 2 NHε2, 2 NHε3 および NHα3), 5.29 (m, 4 H, 2 CH9,10), 4.20 (m, 2 H, 2 CHα1), 4.08 (m, 2 H, 2 CHα3), 3.84 (m, 2 H, 2 CHα2), 3.65 (m, 2 H, 2 NH+), 3.10 (m, 12 H, 2 CH23' および 2 CH24'), 3.05 (m, 2 H, 2 CH1'), 2.95 (m, 2 H, 2 CH1'), 2.74 (m, 8 H, 2 CH2ε1 および 2 CH2ε2), 2.11 (t, 4 H, J = 7.2, 2 CH22), 1.95 (m, 8 H, 2 CH28,10), 1.80  1.12 (m, 82 H), 0.84 (t, 6 H, J = 6.4, 2 CH318). MS (+ES) : m/z [M+H]2+ 750.1。
【００５６】
実施例２５
ＲＧ００／７９７
【化３６】
2005529860.tif 000037
ビスアミノ化合物（１４０ｍｇ、０．１４２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４８ｍＬ）に溶解した溶液に連続して、Ｋ２ＣＯ３（４０ｍｇ、ｍｍｏｌ、２．１等量）を水（１０ｍＬ）に溶解した溶液および（Ｂｏｃ）４−ＫＫＫＯＳｕ（２５６ｍｇ、０．２８４ｍｍｏｌ、２．０等量）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解した溶液を加えた。それから反応物を室温で１６時間攪拌した。ほとんどのＴＨＦを蒸発させ、残渣物をＣＨＣｌ３に再溶解した。水（１０ｍＬ）を加え、有機層を抽出し、５％Ｋ２ＣＯ３、水（１０ｍＬ）および食塩水（２０ｍＬ）で洗浄した。乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過および蒸発の後、残渣物をＳｉＯ２（溶出液：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＥｔ３：８５／１５／１、Ｒｆ＝０．３２）上で精製した。それからＥｔ２Ｏを加え、生じる白色固体を濾過分離する。収率：０．３１０ｇ（０．１２１ｍｍｏｌ、８５％）．１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ 8.00 (m, 2 H, 2 NHα),7.85 (m, 2 H, 2 NHα), 7.75 (m, 4 H, 2 NHα および 2 NHC1), 6.85 (m, 2 H, 2 NαH), 6.68 (m, 6 H, 2 x 3 NεH), 5.29 (m, 4 H, 2 CH9,10), 4.18 (m, 2 H, 2 CHα), 4.09 (m, 4 H, 2 x 2 CHα), 3.82 (m, 4 H, 2 x 2 CHα), 3.00 (m, 6 H, 2 CH2ε および 2 CH1'), 2.75 (m, 2 H, 2 CH1'), 2.84 (m, 12 H, 2 x 3 CH2ε), 2.47 (m, 8 H, 2 x 2 CH24'), 2.29 (m, 4 H, 2 CH23'), 2.09 (t, 4 H, J = 9.0, 2 CH22), 1.95 (m, 8 H, 2 CH28,10), 1.65  1.15 (m, 168 H), 0.82 (t, 6 H, J = 6.4, 2 CH318)。
【００５７】
実施例２６
ＲＧ００／８０５
【化３７】
2005529860.tif 000038
ＲＧ００／７９７（１１０ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（７ｍＬ）に溶解した溶液に、濃ＨＣｌ（７ｍＬ）を加えた。反応物を室温で１時間攪拌し、それから溶媒を、共役的蒸発をさせるためのＥｔＯＨを使用して真空下で除去した。残渣物を水（４０ｍＬ）に溶解し、濾過および蒸発させた。化合物を最少量のＭｅＯＨに溶解し、Ｅｔ２Ｏで沈殿させた。生じる固体を濾過し、淡褐色粉末として採取した。収率：８８ｍｇ（０．０４９ｍｍｏｌ、９４％）．1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) : δ8.80 (d, 2 H, J = 7.8, 2 NHα), 8.30 (m, 6 H, 2 x 3 NHα), 8.03 (m, 14 H, 2 NHC1 および 2 x 3 NεH3+), 5.30 (m, 4 H, 2 CH9,10), 4.28 (m, 2 H, 2 CHα), 4.18 (m, 2 H, 2 CHα), 4.08 (m, 2 H, 2 CHα), 3.85 (m, 2 H, 2 CHα), 3.65 (m, 2 H, 2 NH+), 3.10 (m, 16 H, 2 CH2ε1, 2 CH23' および 2 x 2 CH24'), 3.02 (m, 2 H, 2 CH1'), 2.95 (m, 2 H, 2 CH1'), 2.74 (m, 8 H, 2 x 3 CH2ε), 2.10 (t, 4 H, J = 7.2, 2 CH22), 1.95 (m, 8 H, 2 CH28,10), 1.71 (m, 4 H, 2 CH2β), 1.60  1.17 (m, 108 H), 0.84 (t, 6 H, J = 6.4, 2 CH318).. MS (+ES) : m/z [M+H]2+ 750.1。
【００５８】
実施例２７
ＲＧ００／８２３
【化３８】
2005529860.tif 000039
ビスアミノ化合物（７６ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４０ｍＬ）に溶解した溶液に、連続してＫ２ＣＯ３（２２ｍｇ、０．１５９ｍｍｏｌ、２．０６等量）を水（２ｍＬ）に溶解した溶液およびＢｏｃ３（Ｋ−ε−Ｋ）−ＯＳｕ（１０５ｍｇ、０．１５６ｍｍｏｌ、２．０等量）をＴＨＦ（８ｍＬ）に溶解した溶液を加えた。それから反応物を室温で１６時間攪拌した。ほとんどのＴＨＦを蒸発させ、残渣物をＣＨＣｌ３に再溶解した。水（１０ｍＬ）を加え、有機層を抽出し、水（２ｘ１０ｍＬ）および食塩水（２０ｍＬ）で洗浄した。乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過、および蒸発の後、残渣物をＳｉＯ２（溶出液：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＮＥｔ３：９１／８／１、Ｒｆ＝０．３０）上で精製した。それからＥｔ２Ｏを加え、生じる白色固体を濾過分離する。収率：０．１２４ｇ（０．０５９ｍｍｏｌ、７７％）．1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) : δ 7.79 (m, 4 H, 2 NHα および 2 NHε), 7.67 (m, 4 H, 2 NHC1 および 2 NHε), 6.69 (m, 2 H, 2 NHε), 8.28 (m, 8 H, 2 x 2 NHα), 5.28 (m, 4 H, 2 CH9,10), 4.10 (m, 2 H, 2 CHα1), 3.78 (m, 4 H, 2 x 2 CHα), 3.00 (m, 6 H, 2 CHε および 2 CH1'), 2.98 (m, 2 H, 2 CH1'), 3.13 (m, 12 H, 2 x 2 CH2ε ), 2.47 (m, 4 H, 2 CH23'), 2.25 (m, 8 H, 2 x 2 CH24'), 2.08 (t, 4 H, J = 7.2, 2 CH22), 1.95 (m, 8 H, 2 CH28,10), 1.80  1.14 (m, 138 H), 0.82 (t, 6 H, J = 6.4, 2 CH318)。
【００５９】
実施例２８
ＲＧ００／８３０
【化３９】
2005529860.tif 000040
ＲＧ００／８２３（１２４ｍｇ、０．０５９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解した溶液に、濃ＨＣｌ（６ｍＬ）を加えた。反応物を室温で１時間攪拌し、それから溶媒を、共役的蒸発をさせるためのＥｔＯＨを使用して真空下で除去した。残渣物を水（４０ｍＬ）に溶解し、濾過および蒸発させた。化合物を最少量のＭｅＯＨに溶解し、Ｅｔ２Ｏで沈殿させた。生じる固体を濾過し、淡桃色粉末として採取した。収率：１０１ｍｇ（０．０５６ｍｍｏｌ、９６％）．1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) : δ 8.73 (t, 2 H, J = 7.8, 2 NHε), 8.67 (m, 2 H, 2 NHε1), 8.28 (m, 8 H, 4 NH2α), 8.15 (m, 6 H, 2 NHC1, 2 NHε2 および 2 NHε3), 7.99 (m, 2 H, 2 NHα1), 5.29 (m, 4 H, 2 CH9,10), 4.09 (m, 2 H, 2 CHα1), 3.72 (m, 4 H, 2 CHα3 および 2 CHα2), 3.65 (m, 2 H, 2 NH+), 3.08 (m, 10 H, 2 CH2ε1, 2 CH2ε2, 2 CH23' および 2 CH24'), 2.74 (m, 2 H, 2 CH21'), 2.11 (t, 4 H, J = 7.2, 2 CH22), 1.95 (m, 8 H, 2 CH28,10), 1.80  1.14 (m, 82 H), 0.83 (t, 6 H, J = 6.4, 2 CH318)。
【００６０】
実施例２９ないし４０は、ＧＳＣ１７０およびその誘導体の合成のための代替経路を記載する。
【００６１】
実施例２９（ＲＧ００／７８１）
【化４０】
2005529860.tif 000041
Ｎ−ε−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リシン（４４６ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５３ｍＬ）に溶解した溶液に連続して、Ｋ２ＣＯ３（２８８ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ）を水（８ｍＬ）に溶解した溶液およびオレオイルコハク酸イミデート（７５４ｍｇ、１．９９ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１５時間攪拌し、ほとんどのＴＨＦを蒸発させた。水およびＨＣｌ３（各２５ｍＬ）を加え、混合液を１ＭＨＣｌによりｐＨ：２まで酸性化した。有機層を分離し、水層をＣＨＣｌ３（２ｘ２０ｍｌ）で抽出した。有機層を食塩水（１５ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過および蒸発させ、白色固体を与えた。収率：９４０ｍｇ（１．８４ｍｍｏｌ、９７％）．Ｒｆ（ＳｉＯ２）：０．２８（ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ９２：８）．
RMN-1H (500 MHz, CDCl3), δ (ppm): 5.33 (m, 2 H, CH9,10), 4.15 (m, 1 H, CHα), 3.05 (m, 2 H, CH2ε), 2.15 (m, 2 H, J = 6.0 Hz, CH22), 1.98 (m, 4 H, CH28,11), 1.80-1.48 (m, 4 H, CH23, CH2β), 1.46-1.20 (m, 33 H, CH2γ, CH2δ, C(CH3)3, 10 CH2ol), 0.84 (t, 3 H, J = 6.8 Hz, CH318).
RMN-13C (125 MHz, CDCl3), δ (ppm): 178.6, 174.4, 156.2, 129.9, 129.7, 78.9, 54.5, 40.0, 36.4, 31.9, 31.3, 29.8, 29.5, 29.4, 29.3, 28.5, 27.3, 27.2, 25.9, 25.0, 22.9, 22.7, 14.1。
HRMS (+ ESI): C29H54N2O5Na [M+Na], 計算値: m/z = 533.3930, 実測値： m/z = 533.3903
【００６２】
実施例３０（ＲＧ００／５１８）
【化４１】
2005529860.tif 000042
アミノ酸ＲＧ００／７８１（４１０ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（４ｍｌ）に溶解した溶液に、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジン−ホスホニウムヘキサフルオロリン酸（４１８ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（２８０μｌ、１．６１ｍｍｏｌ）および１，４−ビス（３−アミノプロピル）ピペラジン（６４μｌ、０．３１ｍｍｏｌ）を加えた。混合液を室温で１６時間攪拌した。溶媒を除去し、ＣＨＣｌ３（４０ｍＬ）を加え、有機層を５％ＮａＨＣＯ３（３ｘ１２ｍＬ）および食塩水（３０ｍＬ）で洗浄、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過および蒸発させた。残渣物を逆転相（Ｃ−１８）でカラムクロマトグラフィにより精製し、シロップを与えた。収率：２９５ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ、８１％）、Ｒｆ（ＳｉＯ２）：０．４６（ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ８５：１５）、Ｒｆ（Ｃ−１８）：０．１５（ＭｅＯＨ）．
RMN-1H (500 MHz, CDCl3), δ (ppm): 7.49 (m, 2 H, NHCO), 6.52 (m, 2 H, NαHCO), 5.32 (m, 4 H, 2 CH9,10), 4.81 (m, 2 H, NHBOC), 4.29 (m, 2 H, CHα), 3.30 (m, 4 H, 2 CH21'), 3.05 (m, 4 H, J = 6.0 Hz, 2 CH2ε), 2.76 (s broad, 8 H, 4 CH24'), 2.61 (s broad, H, 2 CH23'), 2.19 (t, 4 H, J = 7.4 Hz, 2 CH22), 1.97 (m, 8 H, 2 CH28,11), 1.72 (m, 6 H, 2 CH22', 2 CHaβ), 1.68 (m, 6 H, 2 CH23, 2 CHbβ), 1.52-1.15 (m, 66 H, 2 CH2γ, 2 CH2δ, 2 x 10 CH2ol, 2 C(CH3)3),  0.85 (t, 6 H, J = 6.7 Hz, 2 CH318).  
RMN-13C (125 MHz, CDCl3), δ (ppm): 173.6, 172.3, 156.2, 130.0, 129.7, 79.0, 55.7, 53.1, 52.0, 40.0, 38.0, 36.5, 32.0, 31.9, 29.7, 29.5, 29.3, 29.2, 28.4, 27.2, 25.8, 25.7, 24.8, 22.7, 22.6, 14.1.
HRMS (+ ESI): C68H129N8O8 [M+H], 計算値: m/z = 1185.9928, 実測値： m/z = 1186.0006.
【００６３】
実施例３１（ＧＳＣ１７０）
【化４２】
2005529860.tif 000043
ＲＧ００／５１８（７１０ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に溶解した溶液に、４．９ＮＨＣｌ−ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）を加えた。反応物を室温で２時間攪拌した。沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄し、白色固体を与えた。収率５４２ｍｇ（０．４８ｍｍｏｌ、８０％）、Ｒｆ（ＳｉＯ２）：０．６３（ＭｅＯＨ−ＮＨ４ＯＨ８０：２０）。
RMN-1H (500 MHz, DMSO-d6), δ (ppm): 8.12 (m, 2 H, NHCO), 8.05-7.87 (m, 8 H, NαHCO, 2 NεH3+), 5.31 (m, 4 H, 2 CH9,10), 4.10 (m, 2 H, J = 5.0 Hz, 8.4 Hz, 2 CHα), 3.70 (s broad, 4 H, 4 CH axial 4'), 3.44 ( s broad, 4 H, 4 CH ecuat. 4'),  3.10 (m, 8 H, 2 CH21', 2 CH23'), 2.72 (m, 4 H, J = 6.2 Hz, 2 CH2ε), 2.12 (m, 4 H, J = 6.8 Hz, 2 CH22), 1.95 (m, 8 H, 2 CH28,11), 1.84 (m, 4 H, J = 6.3 Hz, 2 CH22'), 1.65-1.40 (m, 12 H, 2 CH2β,  2 CH2δ, 2 CH23), 1.35-1.15 (m, 44 H, 2 CH2γ, 2 x 10 CH2ol), 0.83 (t, 6 H, J = 6.7 Hz, 2 CH318)。
RMN-13C (125 MHz, DMSO-d6), δ (ppm): 172.5, 172.1, 129.7, 55.0, 53.7, 52.7, 48.1, 40.1, 39.9, 39.8, 39.6, 39.4, 39.3, 39.1, 38.5, 31.4, 29.3, 29.2, 28.9, 28.8, 28.7, 28.7, 26.7, 25.3, 22.2, 14.1。
HRMS (+ ESI): C58H113N8O4 [M+H], 計算値: m/z = 985.8879, 実測値： m/z = 985.8805。
【００６４】
実施例３２（化合物４）
【化４３】
2005529860.tif 000044
Ｎ−δ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−オルニチン（４４０ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５３ｍＬ）に溶解した溶液に連続して、Ｋ２ＣＯ３（２８８ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ）を水（８ｍＬ）に溶解した溶液およびオレオイルコハク酸イミデート（７５５ｍｇ、１．９９ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１５時間攪拌し、ほとんどのＴＨＦを蒸発させた。水およびＣＨＣｌ３（２５ｍＬｅａｃｈ）を加え、混合液を１ＭＨＣｌによりｐＨ：２まで酸性化した。有機層を分離し、水層をＣＨＣｌ３（２ｘ２０ｍｌ）で抽出した。有機層を食塩水（１５ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過および蒸発させ、白色固体を与えた。収率：８９８ｍｇ（１．８１ｍｍｏｌ、９６％）．Ｒｆ（ＳｉＯ２）：０．１６（ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ９２：８）。
RMN-1H (500 MHz, CDCl3), δ (ppm): 7.03 (m, 1 H, NHCO), 5.32 (m, 2 H, CH9,10), 4.40 (m, 1 H, CHα), 3.11 (m, 2 H, CH2δ), 2.19 (t, 2 H, J = 7.4 Hz, CH22), 1.99 (m, 4 H, CH28,11), 1.85 (m, 1 H, CHaβ), 1.70-1.20 (m, 34 H, CHbβ, CH23, CH2γ, C(CH3)3, 10 CH2ol), 0.87 (t, 6 H, J = 6.7 Hz, CH318)。
RMN-13C (125 MHz, CDCl3), δ (ppm): 176.6, 174.4, 156.5, 130.0, 129.7, 79.4, 53.0, 39.8, 36.4, 33.9, 31.9, 29.8, 29.5, 29.4, 29.3, 29.1, 28.9, 28.4, 27.2, 26.4, 25.7, 25.6, 24.8, 22.7, 14.1.
HRMS (+ ESI): C28H52N2O2 [M+H], 計算値: m/z = 519.3774, 実測値： m/z = 519.3767。
【００６５】
実施例３３（化合物５）
【化４４】
2005529860.tif 000045
アミノ酸４（５４８ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（５．５ｍｌ）に溶解した溶液に、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジン−ホスホニウムヘキサフルオロリン酸（５７４ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（３８５μｌ、２．２０ｍｍｏｌ）および１，４−ビス（３−アミノプロピル）ピペラジン（８４μｌ、０．４１ｍｍｏｌ）を加えた。混合液を室温で１８時間攪拌した。溶媒を除去し、ＣＨＣｌ３（４０ｍＬ）を加え、有機層を５％ＮａＨＣＯ３（３ｘ１０ｍＬ）および食塩水（２５ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過および蒸発させた。残渣物を、逆転相（Ｃ−１８）でカラムクロマトグラフィにより精製し、シロップを与えた。収率：３６０ｍｇ（０．３１ｍｍｏｌ、７６％）、Ｒｆ（ＳｉＯ２）：０．４６（ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ８５：１５）、Ｒｆ（Ｃ−１８）：０．２２（ＭｅＯＨ）。
RMN-1H (500 MHz, CDCl3), δ (ppm): 7.60 (m, 2 H, 2 NHCO), 6.50 (m, 2 H, J = 6.5 Hz, 2 NαHCO), 5.36 (m, 4 H, 2 CH9,10), 4.85 (m, 2 H, 2 NHBOC), 4.48 (m, J = 5.7 Hz, 2 H, 2 CHα), 3.38 (m, J = 13.2 Hz, J = 6.6 Hz, 2 H, 2 CHa1'), 3.28 (m, 4 H, 2 CHb1', 2 CHaδ), 3.11 (m, 2 H, J = 13.2 Hz, J = 6.3 Hz, 2 CHbδ), 2.48 (m, 12 H, 2 CH23', 4 CH24'), 2.23 (t, 4 H, J = 7.8 Hz, 2 CH22), 2.03 (m, 8 H, 2 CH28,11), 1.87-1.40 (m, 34 H, 2 CH2β, 2 CH22', 2 CH23, 2 CH2γ, 2 C(CH3)3), 1.30-1.22 (m, 40 H, 2 x 10 CH2ol), 0.91 (t, 6 H, J = 6.4 Hz, 2 CH318)。  
RMN-13C (125 MHz, CDCl3), δ (ppm): 173.2, 171.5, 156.4, 130.0, 129.8, 79.2, 57.0, 53.3, 52.2, 39.7, 39.2, 36.7, 31.9, 30.6, 29.8, 29.5, 29.3, 29.2, 28.5, 27.2, 26.5, 25.7, 25.2, 22.7, 14.1。
HRMS (+ ESI): C58H113N8O4 [M+H], 計算値: m/z 1157.9615, 実測値： m/z = 1157.9531。
【００６６】
実施例３４（ＧＳＣ１７０Ｏｒｎ）
【化４５】
2005529860.tif 000046
化合物５（１３８ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）に溶解した溶液に、４．９ＮＨＣｌ−ＥｔＯＡｃ（１０ｍｌ）を加えた。反応物を室温で２時間攪拌した。沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄し、白色固体を与えた。収率１１６ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ、８３％）、Ｒｆ（ＳｉＯ２）：０．６１（ＭｅＯＨ−ＮＨ４ＯＨ８０：２０）。
RMN-1H (500 MHz, CDCl3), δ (ppm): 8.24 (s broad, 2 H, 2 NHCO), 8.04 (d, 2 H, J = 7.8 Hz, 2 NHαCO), 7.94 ( s broad, 6 H, 2 NH3+), 5.33 (m, 4 H, 2 CH9,10), 4.20 (m, J = 5.5 Hz, 2 H, 2 CHα), 3.76 (m, 4 H, 4 CHaxial4'), 3.48 (m, 4 H, 4 CHecuat4'), 3.12 (m, 8 H, 2 CH21', 2 CH23'), 2.76 (m, 4 H, J = 5.7 Hz, 2 CH2δ), 2.14 (t, 4 H, J = 7.4 Hz, 2 CH22), 1.98 (m, 8 H, 2 CH28,11), 1.84 (m, 4 H, 2 CH22'), 1.70 (m, 2 H, 2 CHaβ), 1.64-1.40 (m, 10 H, 2 CHbβ, 2 CH23, 2 CH2γ), 1.24 (m, 40 H, 2 x 10 CH2ol), 0.86 (t, 6 H, J = 6.7 Hz, 2 CH318)。
RMN-13C (125 MHz, CDCl3), δ (ppm): 172.5, 171.8, 129.7, 79.3, 53.8, 51.9, 48.1, 38.3, 35.3, 31.4, 29.3, 29.2, 28.9, 28.8, 28.7, 26.7, 25.3, 22.2, 14.1。
HRMS (+ ESI): C58H113N8O4 [M+H], 計算値: m/z 957.8572, 実測値： m/z = 957.8575。
【００６７】
実施例３５（化合物７）
【化４６】
2005529860.tif 000047
Ｎ−γ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−ジアミノ酪酸（２０３ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２７ｍＬ）に溶解した溶液に連続して、Ｋ２ＣＯ３（１４１ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を水に（４ｍＬ）に溶解した溶液およびオレオイルコハク酸イミデート（３７１ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１６時間攪拌し、ほとんどのＴＨＦを蒸発させた。水およびＣＨＣｌ３（各１０ｍＬ）を加え、混合液を１ＭＨＣｌによりｐＨ：２まで酸性化した。有機層を分離し、水層をＣＨＣｌ３（２ｘ１０ｍｌ）で抽出した。有機層を食塩水（８ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過および蒸発させ、シロップを与えた。収率：４４１ｍｇ（０．９１ｍｍｏｌ、９８％）．Ｒｆ（ＳｉＯ２）：０．３５（ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ８５：１５）。
【００６８】
実施例３６（化合物８）
【化４７】
2005529860.tif 000048
アミノ酸７（４１０ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（４ｍｌ）に溶解した溶液に、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジン−ホスホニウムヘキサフルオロリン酸（４４２ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（２９６μｌ、１．７０ｍｍｏｌ）および１，４−ビス（３−アミノプロピル）ピペラジン（６７μｌ、０．３３ｍｍｏｌ）を加えた。混合液を室温で１６時間攪拌した。溶媒を除去し、ＣＨＣｌ３（４０ｍＬ）を加え、有機層を５％ＮａＨＣＯ３（３ｘ１２ｍＬ）および食塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過および蒸発させた。残渣物を逆転相（Ｃ−１８）でカラムクロマトグラフィにより精製し、シロップを与えた。収率：３１６ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ、８５％）、Ｒｆ（ＳｉＯ２）：０．５１（ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ８５：１５）、Ｒｆ（Ｃ−１８）：０．１４（ＭｅＯＨ）。
【００６９】
実施例３７（ＧＳＣ１７０Ｄａｂ）
【化４８】
2005529860.tif 000049
化合物８（２４４ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）に溶解した溶液に、４．９ＮＨＣｌ−ＥｔＯＡｃ（１５ｍｌ）を加えた。反応物を室温で２時間攪拌した。沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄し、白色固体を与えた。収率１９８ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ、８２％）、Ｒｆ（ＳｉＯ２）：０．５２（ＭｅＯＨ−ＮＨ４ＯＨ８５：１５）。
【００７０】
実施例３８（化合物１０）
【化４９】
2005529860.tif 000050
Ｎ−β−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−ジアミノプロピオン酸（５６０ｍｇ、２．７４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（７７ｍＬ）に溶解した溶液に連続して、Ｋ２ＣＯ３（４１６ｍｇ、３．０２ｍｍｏｌ）を水（１１ｍＬ）に溶解した溶液およびオレオイルコハク酸イミデート（１．０４ｇ、２．７４ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１８時間攪拌し、ほとんどのＴＨＦを蒸発させた。水およびＣＨＣｌ３（各３０ｍＬ）を加え、混合液を１ＭＨＣｌによりｐＨ：２まで酸性化した。有機層を分離し、水層をＣＨＣｌ３（２ｘ３０ｍｌ）で抽出した。有機層を食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過および蒸発させ、白色固体を与えた。収率：１．２５ｇ（２．６７ｍｍｏｌ、９７％）．Ｒｆ（ＳｉＯ２）：０．３５（ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ８５：１５）。
【００７１】
実施例３９（化合物１１）
【化５０】
2005529860.tif 000051
アミノ酸１０（１．２２ｇ、２．６０ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１４ｍｌ）に溶解した溶液に、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジン−ホスホニウムヘキサフルオロリン酸（１．３５ｇ、２．６０ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（９１０μｌ、５．２１ｍｍｏｌ）および１，４−ビス（３−アミノプロピル）ピペラジン（２０６μｌ、１．００ｍｍｏｌ）を加えた。混合液を室温で１５時間攪拌した。溶媒を除去し、ＣＨＣｌ３（７５ｍＬ）を加え、有機層を５％ＮａＨＣＯ３（３ｘ３０ｍＬ）および食塩水（６０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過および蒸発させた。残渣物を逆転相（Ｃ−１８）でカラムクロマトグラフィにより精製し、シロップを与えた。収率：９４０ｍｇ（０．８５ｍｍｏｌ、８５％）、Ｒｆ（ＳｉＯ２）：０．５２（ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ８５：１５）、Ｒｆ（Ｃ−１８）：０．１６（ＭｅＯＨ）。
【００７２】
実施例４０（ＧＳＣ１７０Ｄａｐ）
【化５１】
2005529860.tif 000052
化合物１１（３５５ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）に溶解した溶液に、４．９ＮＨＣｌ−ＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ）を加えた。反応物を室温で２時間攪拌した。沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄し、白色固体を与えた。収率２８０ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ、８４％）、Ｒｆ（ＳｉＯ２）：０．３４（ＭｅＯＨ−ＮＨ４ＯＨ９９：１）。
【００７３】
実施例４１
リシン−ポリアミンに基づくジェミニ化合物を用いる、ルシフェラーゼを発現する組換えプラスミドの細胞内へのトランスフェクション
リシン−ポリアミンに基づくジェミニ化合物を用いる、ルシフェラーゼを発現する組換えプラスミドの細胞内へのトランスフェクション。接着細胞系ＣＨＯ−ＤＧ４４を用いて、トランスフェクション研究を行った。完全培地は、１０％ｖ／ｖウシ胎児血清を補足したＭＥＭアルファ培地および１ｘＬ−グルタミンにより構成された。全ての培地および補足物を、Life Technologiesから得た。インビトロ遺伝子トランスフェクション。約ウェル当たり３ｘ１０４細胞数の密度で、トランスフェクションの１６ないし１８時間前に、細胞をＢｉｏｃａｔのポリ−Ｄ−リシン９６ウェル・ブラック・プレート（ＢＤ）に播種した。トランスフェクションに関して、ウェル当たり０．１ｍｇのルシフェラーゼレポーター遺伝子プラスミド、ｐＧＬ３−コントロールベクター（Promega）を、様々な濃度のジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物および複合物質と共に、最終容量１００μｌでインキュベートした。室温で３０分間インキュベートした後、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）培地（Life Technologies）をトランスフェクション混合物に加え、溶液を細胞上に載せた（ウェル当たり最終容量：１００μｌ）。３７℃で３時間または一晩のインキュベートした後、トランスフェクション溶液を完全培地で置換し、細胞をさらに３７℃でインキュベートした。トランスフェクション後、約４８時間して、レポーター遺伝子アッセイを、製品ガイドライン（Roche Diagnostics）に従って行った。Packard TopCount NXT Microplate ScintillationおよびLuminescence Counterで発光を測定した。図４。ジェミニ界面活性剤ＧＳＣ１０２を用いたＣＨＯ−ＤＧ４４細胞のトランスフェクション。Ｘ軸上の数字は、ｍＭでのジェミニ化合物濃度を表す。図の右側の５本の黒いバーは、ＤＮＡをポリ−リシンと先に混合した場合に得られたデータを示す。左側の５本の黒いバーは、ポリ−リシンを用いなかった場合のデータを示す。Ｙ軸上の数字は、ルシフェラーゼアッセイ由来のＣＰＳ（秒当たりの計数）を表す。バーは、４回の試行の平均ＣＰＳ±平均の標準誤差を表す。図５。ジェミニ界面活性剤ＧＳＮ１４を用いたＣＨＯ−ＤＧ４４細胞のトランスフェクション。バーは、４回の試行の平均ＣＰＳ（秒当たりの計数）±平均の標準誤差を表す。図６。ジェミニ界面活性剤ＧＳＣ１９７を用いたＣＨＯ−ＤＧ４４細胞のトランスフェクション。バーは、４回の試行の平均ＣＰＳ（秒当たりの計数）±平均の標準誤差を表す。
【００７４】
ジェミニ界面活性剤（ＧＳＣ１７０）を用いる、細胞系／一次細胞への蛍光オリゴヌクレオチドのデリバリー
ＧＳＣ１７０（水中で１ｍｇ／ｍｌ）をＯｐｔｉｍｅｍ血清フリー培地で１０ｘ溶液に希釈した。ＦＩＴＣ標識オリゴヌクレオチドを、同様にＯｐｔｉｍｅｍで１０ｘの最終濃度で希釈した。ついで、ＧＳＣ１７０およびオリゴヌクレオチドを１：１で混合し、室温で１５分間インキュベートした。接着細胞系：ＲＢＬ−２Ｈ３、Ｊ７７４および１６ＨＢＥ１４ｏを、トランスフェクションの前日にプレートから除いた。ネズミの一次Ｔ細胞に、不活性化段階またはＴヘルパー２細胞への分化後いずれかでトランスフェクションした。
ＧＳＣ１７０：オリゴ複合体をＯｐｔｉｍｅｍで１ｘに希釈し、Ｏｐｔｉｍｅｍで一度洗浄した接着細胞に加え、ついで、全ての培地を除去した。オリゴヌクレオチドの核デリバリーを２４時間の期間に渡って観察し、市販の試薬であるリポフェクタミン２０００（ＬＦ２Ｋ）と比較した。
【００７５】
トランスフェクション効率を表１に示す：
【表１】
2005529860.tif 000053
【００７６】
本明細書に引用される、特許および特許出願に限らずそれらを含む全ての出版物は、仮に各出版物が明確に個々において、仮にその内容が十分記載されているとしても出典を明示することでその内容を本明細書の一部とすることを意図されるとしても、出典を明示することで本明細書の一部とするものである。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】図１は、疎水性末端がジアミノ酸のα−アミノ基に結合しており、さらにはこれがアミド結合によりポリアミン部位に結合している、ジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物の合成の一般的スキームを示す。
【図２】図２は、疎水性末端がジアミノ酸の末端アミノ基に結合しており、さらにはこれがアミド結合によりポリアミン部位に結合している、ジアミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物の合成の一般的スキームを示す。
【図３】図３は、アミノ酸がアミド結合によりジアミノ酸のα−アミノ基に結合しており、さらにはこれがアミド結合によりポリアミン部位に結合している、ジアミノ酸−アミノ酸−ポリアミン：ペプチドに基づくジェミニ化合物の合成の一般的スキームを示す。
【図４】図４は、ＧＳＣ１０２を用いる、ルシフェラーゼを発現する組換えプラスミドのＣＨＯ−ＤＧ４４細胞内へのトランスフェクションを示す。Ｘ軸上の数字は、ｍＭでのジェミニ化合物濃度を表す。図の右側の５本の黒いバーは、ＤＮＡをポリ−リシンと先に混合した場合に得られたデータを示す。左側の５本の黒いバーは、ポリ−リシンを用いなかった場合のデータを示す。Ｙ軸上の数字は、ルシフェラーゼアッセイ由来のＣＰＳ（秒当たりの計数）を表す。バーは、４回の試行の平均ＣＰＳ±平均の標準誤差を表す。
【図５】図５は、ＧＳＮ１４を用いる、ルシフェラーゼを発現する組換えプラスミドのＣＨＯ−ＤＧ４４細胞内へのトランスフェクションを示す。Ｘ軸上の数字は、ｍＭでのジェミニ化合物濃度を表す。図の右側の５本の黒いバーは、ＤＮＡをポリ−リシンと先に混合した場合に得られたデータを示す。左側の５本の黒いバーは、ポリ−リシンを用いなかった場合のデータを示す。Ｙ軸上の数字は、ルシフェラーゼアッセイ由来のＣＰＳ（秒当たりの計数）を表す。バーは、４回の試行の平均ＣＰＳ±平均の標準誤差を表す。
【図６】図６は、ＧＳＣ１９７を用いる、ルシフェラーゼを発現する組換えプラスミドのＣＨＯ−ＤＧ４４細胞内へのトランスフェクションを示す。Ｘ軸上の数字は、ｍＭでのジェミニ化合物濃度を表す。図の右側の５本の黒いバーは、ＤＮＡをポリ−リシンと先に混合した場合に得られたデータを示す。左側の５本の黒いバーは、ポリ−リシンが用いなかった場合のデータを示す。Ｙ軸上の数字は、ルシフェラーゼアッセイ由来のＣＰＳ（秒当たりの計数）を表す。バーは、４回の試行の平均ＣＰＳ±平均の標準誤差を表す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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