(57)【要約】  以下：（ａ）コアを形成する生分解性疎水性ポリマー、および；（ｂ）安定化脂質を含むポリマーコアに取り囲まれた外部両親媒性相から構成されるナノ粒子を含む送達ビヒクルは、活性薬剤を送達するために適切である。ナノ粒子を含む送達ビヒクルであって、ここで、該ナノ粒子は、以下：（ａ）コアを形成する生分解性疎水性ポリマー；および（ｂ）該ポリマーコアに取り囲まれている外部連続的または外部不連続的な両親媒性層であって、ここで、該層は、一つ以上の安定化脂質を含む、層で構成される、ビヒクル。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナノ粒子を含む送達ビヒクルであって、ここで、該ナノ粒子は、以下：
（ａ）コアを形成する生分解性疎水性ポリマー；および
（ｂ）該ポリマーコアに取り囲まれている外部連続的または外部不連続的な両親媒性層であって、ここで、該層は、一つ以上の安定化脂質を含む、層、
で構成される、
ビヒクル。
【請求項２】
請求項１に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記ナノ粒子は、以下：
（ｃ）少なくとも一つの活性薬剤を含む医薬品、
をさらに含む、
ビヒクル。
【請求項３】
請求項１に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記ポリマーコアは、ポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）を含む、
ビヒクル。
【請求項４】
請求項３に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記ＰＣＬは、約５，０００ダルトン〜約４５，０００ダルトンの分子量を有する、
ビヒクル。
【請求項５】
請求項４に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記ＰＣＬは、約１０，０００ダルトンの分子量を有する、
ビヒクル。
【請求項６】
請求項１に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記ポリマーコアは、ポリ（ｄ、ｌ−ラクチド）（ＰＬＡ）を含む、
ビヒクル。
【請求項７】
請求項６に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記ＰＬＡは、約５，０００ダルトン〜約２００，０００ダルトンの分子量を有する、
ビヒクル。
【請求項８】
請求項７に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記ＰＬＡは、約１００，０００ダルトンの分子量を有する、
ビヒクル。
【請求項９】
請求項１に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記ポリマーコアは、ジブロックコポリマー、トリブロックコポリマーもしくはマルチブロックコポリマー、またはそれらの組み合せを含む、
ビヒクル。
【請求項１０】
請求項２に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記少なくとも一つの活性薬剤は、抗腫瘍性薬剤である、
ビヒクル。
【請求項１１】
請求項１０に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記抗新生薬剤は、タキソール（登録商標）、エトポシド、カンプトセシン、バルビシン、およびポドフィロトキシン、またはそれらの機能的に等価な誘導体もしくはそれらの組み合わせからなる群から選択される、
ビヒクル。
【請求項１２】
請求項２に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記ポリマーおよび医薬品は、該医薬品とのポリマー結合を維持するのに十分な比率で存在する、
ビヒクル。
【請求項１３】
請求項１２に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記医薬品／ポリマーの重量比は、約１：１〜約１：５０である、
ビヒクル。
【請求項１４】
請求項１に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記安定化脂質は、ポリマー結合体化脂質である、
ビヒクル。
【請求項１５】
請求項１４に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記ポリマー結合体化脂質は、ＰＥＧ脂質結合体である、
ビヒクル。
【請求項１６】
請求項１５に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記ＰＥＧ脂質結合体は、前記ポリマーコアに非共有結合的に結合される、
ビヒクル。
【請求項１７】
請求項１に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記安定化脂質は、ホスファチジルグリセロールおよびホスファチジルイノシトールからなる群から選択される、
ビヒクル。
【請求項１８】
請求項１に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記ナノ粒子の平均直径は、約５０〜３００ｎｍである、
ビヒクル。
【請求項１９】
請求項１８に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記直径は、約５０〜２００ｎｍである、
ビヒクル。
【請求項２０】
請求項１９に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記直径は、約５０〜１５０ｎｍである、
ビヒクル。
【請求項２１】
請求項１に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記ナノ粒子は、ホスファチジルコリンをさらに含む、
ビヒクル。
【請求項２２】
請求項２１に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記ホスファチジルコリンは、２つの脂肪酸を含み、それぞれのアシル鎖は、同じかまたは異なるかのいずれかであり、少なくとも一つの該アシル鎖は、６より多い炭素原子を有する、
ビヒクル。
【請求項２３】
請求項２２に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記脂肪酸は、ステアロイルおよび／またはパルミトイルである、
ビヒクル。
【請求項２４】
請求項１に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記両親媒性層は、両親媒性ポリマーをさらに含む、
ビヒクル。
【請求項２５】
請求項２４に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記両親媒性のポリマーは、ポリ（カプロラクトン）−ＰＥＧである、
ビヒクル。
【請求項２６】
請求項１に記載の送達ビヒクルであって、ここで、前記両親媒性層は、ポリ（ビニルアルコール）をさらに含む、
ビヒクル。
【請求項２７】
ナノ粒子を含む送達ビヒクルを調製する方法であって、該ナノ粒子は、以下：
（ａ）コアを形成する生分解性の疎水性ポリマー；
（ｂ）該ポリマーコアを取り囲む外部の両親媒性層であって、ここで、該層は、一つ以上の安定化脂質を含む、層；および
（ｃ）少なくとも一つの活性薬剤を含む医薬品；
で構成され、ここで、該方法は、以下の工程：
（１）第一溶媒系に別々にまたは一緒に該両親媒性層の成分を溶解する工程；
（２）第二溶媒系に別々にまたは一緒に活性薬剤、疎水性ポリマーおよび生分解性ポリマーを溶解する工程であって、
ここで、該第一溶媒系は、水性成分、または一つ以上の有機成分および水性成分を含み、そして該第二溶媒系は、少なくとも一つの有機成分を含む、
工程；
（３）工程（１）および工程（２）から得られた溶液を組み合せ、そして機械的混合によって該生じた混合液を分散させる工程；
（４）該有機成分を除去する工程；および
（５）残った水性成分を緩衝溶液と交換する工程、
を包含する、
方法。
【請求項２８】
水性溶液で前記工程（３）から得られたものを希釈する工程をさらに包含する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
請求項２７に記載の方法であって、ここで、工程（２）の前記ポリマーは、ポリエステルポリマーを含む、
方法。
【請求項３０】
請求項２９に記載の方法であって、ここで、前記ポリエステルポリマーは、ポリ（カプロラクトン）である、
方法。
【請求項３１】
請求項３０に記載の方法であって、ここで、前記ポリ（カプロラクトン）は、約５，０００ダルトン〜約４５，０００ダルトンの分子量を有する、
方法。
【請求項３２】
請求項２９に記載の方法であって、ここで、前記ポリマーコアは、ポリ（ｄ、ｌラクチド）を含む、
方法。
【請求項３３】
請求項３２に記載の方法であって、ここで、前記ポリ（ｄ、ｌラクチド）は、約５，０００ダルトン〜約２００，０００ダルトンの分子量を有する、
方法。
【請求項３４】
請求項２７に記載の方法であって、ここで、前記ナノ粒子は、ＤＰＰＣおよび／またはＤＳＰＣをさらに含む、
方法。
【請求項３５】
請求項２７に記載の方法であって、ここで、前記安定化脂質は、脂質／ＰＥＧ脂質の組み合せを含む、
工程。
【請求項３６】
請求項２７に記載の方法であって、ここで、工程（１）の温度は、成分（ａ）または（ｂ）の層遷移温度を超えて上昇される、
方法。
【請求項３７】
請求項２７に記載の方法であって、ここで、前記第二溶媒系は、部分的に水混和溶媒またはその混合物を含む、
方法。
【請求項３８】
請求項３７に記載の方法であって、ここで、前記溶媒は、酢酸エチル、プロピレンカルボネートおよびベンジルアルコール、またはそれらの組み合せからなる群から選択される、
方法。
【請求項３９】
請求項２７に記載の方法であって、ここで、前記第一溶媒系は、短鎖アルコールを含む、
方法。
【請求項４０】
請求項３９に記載の方法であって、ここで、前記短鎖アルコールは、エタノールである、
方法。
【請求項４１】
請求項２７に記載の方法であって、ここで、前記ナノ粒子は、直径約５０〜３００ｎｍである、
方法。
【請求項４２】
請求項２７に記載の方法であって、ここで、前記両親媒性層は、両親媒性ポリマーをさらに含む、
方法。
【請求項４３】
請求項４２に記載の方法であって、ここで、前記両親媒性ポリマーは、ポリ（カプロラクトン）ＰＥＧである、
方法。
【請求項４４】
請求項２７に記載の方法であって、ここで、前記両親媒性層は、ポリ（ビニルアルコール）をさらに含む、
方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、薬物（部分的に、疎水性の薬物）の送達のためのナノ粒子を含むビヒクルに関する。
【背景技術】
【０００２】
（背景技術）
脂質ベースの送達ビヒクル系を含む薬物送達ビヒクルは、薬物動態学および薬物の組織分布特性を変化させることによって薬物の治療的指標を改善するそれらの能力について広範に開発されそして分析されている。このアプローチは、標的部位への薬物送達を増加させつつ、治療的薬剤に対する健康な組織の暴露を減少させることを目的とする。
【０００３】
かなりの努力が、疎水性薬剤を含む有機活性薬剤の送達および投与についての新規なアプローチの開発に向けられている。疎水性薬剤の臨床学的有効性および経済的可能性は、十分に確立されている。高度に水不溶性の有機薬物は、有意な可溶性組織を有し、そして投与および長い注入期間の間に遭遇する副作用を改善するため、共可溶化薬剤および／または前投薬を一般的に必要とする。従って、疎水性薬剤、特に、抗新生薬剤は、適切な送達ビヒクル組成物によって与えられる増加された循環寿命から生じる治療的活性の増加から恩恵を受ける。タキソール（登録商標）およびエトポシドは、送達の改善された方法から恩恵を受ける疎水性薬剤の例である。
【０００４】
有機活性薬剤の送達ビヒクル処方物は、これらが、「不満足な捕捉効率」；乏しい安定性；肝臓および脾臓にあまり受け入れられない送達；乏しいプラズマ薬学動態学；活性薬剤の急速な解離；および適度であるかまたは全く改善されてない抗腫瘍活性を示すという不利益をしばしば被る（Ｓｈａｒｍａら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、（１９９６）１０７：２６５−２７２；Ｓｈａｒｍａら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ（１９９７）７１：１０３−１０７；Ｃｒｏｓａｓｓｏら、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ（２０００）６３：１９−３０；およびＣａｂａｎｅｓら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．（１９９８）１２：１０３５−１０４０）。
【０００５】
多くの注射用薬物送達系は、リポソーム、微小カプセルおよび微小粒子を含む有機活性薬剤のキャリアーとして調査されてきた。これらの注射用薬物送達物質の使用についての重大な障害は、単食細胞系（ｍｏｎｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ  ｓｙｓｔｅｍ）（ＭＰＳ）による血流からの物質の急激なクリアランスである。さらなる障害は、有効な大きさ、安定性および薬剤保持の組織である。
【０００６】
有意な努力がまた、これらの不利益を改善するための試みにおいて、水乳濁液中で油を安定化するためのＰＥＧ改変リン脂質の使用を含む、混合ミセルおよび乳濁液型処方物を使用して有機薬物調製物を処方するために費やされた（Ａｌｋａｎ−Ｏｎｙｕｋｓｅｌら、Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．（１９９４）１１：２０６−２１２；Ｌｕｎｄｂｅｒｇ、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（１９９７）４９：１６−２１；Ｗｈｅｅｌｅｒら、ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９４）８３：１５５８−１５６４）。
【０００７】
他のポリマー薬物送達組成物が、提案された。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０１４７７には、ｐＨ感受性共有結合を介して薬物が共有結合されているポリマー物質を含む系が記載されており、これは、低いｐＨで薬剤を放出する。米国４，６１０，８６８には、疎水性化合物および両親媒性化合物から構成される５００ｎｍ〜１００μｍの範囲で粒子サイズを有するマトリックス物質が記載されている。得られる「脂質マトリックスキャリアー」は、生物学的に活性な薬剤をカプセル化し、かつマトリックスからの放出をもたらす。米国５，８６９，１０３には、１０ｎｍ〜２００μｍの大きさの範囲の粒子組成物が記載されており、そしてこの粒子は、生分解性ポリマーおよび水溶性ポリマーの混合物と活性薬剤の乳濁液を混ぜ合わせることによって形成される。コポリマーを含むこのような多くの生分解性ポリマーおよび水溶性ポリマーが、記載されている。
【０００８】
ＰＣＴ公開ＷＯ９５／２６３７６には、非可溶性ポリマーおよび本質的に水溶性ポリマーからなる表面層の球状コア粒子を含む１０ｎｍ〜２ｍｍの大きさの範囲のポリマーミクロスフェアが記載されており、そしてポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に結合され得る。このポリエチレングリコールは、コア粒子に水溶性ポリマーを固着すると言われている。この出願人は、薬学的適用においてこのような組成物を使用する可能性を認めているが、生物活性薬剤の組み込みを含む調製物は、記載されていない。
【０００９】
米国５，１４５，６８４には、粒子の調製物が記載されており、ここで、結晶薬物物質は、それ自体が、被験体への投与のために、表面改変剤（ｍｏｄｉｆｉｅｒ）で被覆されている。同様に、米国５，４７０，５８３には、荷電したリン脂質と結合した表面改変剤として非イオン性界面活性剤を有するナノ粒子が記載されている。同様に、この場合において、生物学的な活性物質（それ自体４００ｎｍ未満の粒子の大きさを有する）が、粒子のコアとして使用される。
【００１０】
米国５，８９１，４７５には、疎水性コア（例えば、多糖類から調製されるもの）を含む薬物送達ビヒクルが記載されている。この粒子は、共有結合によってコア上に移植された脂肪酸の外部層を含むように処理される。
【００１１】
米国５，１８８，８３７には、コアおよびリン脂質として固体疎水性ポリマーを含む（例えば、外部コーティングとしてホスファチジルコリンまたはレシチンを含む）一般的に１〜３８μｍの大きさの範囲である微小粒子が記載されている。この開示によれば、他のリン脂質（例えば、ホスファジルイノシトールおよびホスファジルグリセロール）は、この系において役に立たない。米国５，５４３，１５８には、ＰＥＧのポリマーコアおよび表面層を有する１ｎｍ〜１μｍの粒子が開示されており、これは、それに含まれる生物学的な活性薬剤に共有結合的に連結され得る。
【００１２】
粒子薬物送達系をまた記載する開示文献に関する多くの公報が存在する。例としては、Ｐｅｒｋｉｎｓ、Ｗ．Ｒ．ら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．（２０００）２００：２７−３９には、ＰＥＧ結合体化脂質によって取り囲まれた乏しい水溶性薬物のコアから形成される「リポコア」が記載されている。
【００１３】
Ｇｒｅｆ、Ｒ．ら、Ｃｏｌｌ  ａｎｄ  ＳｕｒｆＢ：Ｂｉｏｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ（２０００）１８：３０１−３１３には、ポリカプロラクトンを含む様々なポリマーおよびコポリマーから形成されるＰＥＧ被覆ナノ粒子上へのタンパク質吸着の特性が記載されている。このような粒子が、薬学的な用途において有用であり得ることは認識されているが、粒子それ自体のみが、研究されていた。Ｌｅｍｏｉｎｅ、Ｄ．ら、Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（１９９６）１７：２１９１−２１９７には、他のポリマー、ポリカプロラクトンの間に構成される様々なナノ粒子の研究が報告されている。再び、送達系において有用としてこれらを認識するが、この粒子それ自体のみが、研究された。
【００１４】
Ｌａｍｐｒｅｃｈｔ、Ａ．ら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．（２０００）１９６：１７７−１８２には、様々な疎水性ポリマーおよびコポリマーを使用して得られるナノ粒子の粒子の大きさに対する微小フルイダイザの使用の効果の研究が報告されている。
【００１５】
Ｋｉｍ，Ｓ−Ｙ．ら、Ｊ．Ｃｏｎｔ．Ｒｅｌ．（２０００）６５：３４５−３５８には、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）とのＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）のコポリマーナノスフェアが記載されている。２００ｎｍ未満の平均直径を有するＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）／ＰＣＬブロックコポリマーのナノスフェアは、エンドメチシンでロードされ、そして細胞毒性、薬物放出、薬物ローディング効果および物理的特性に関し評価された。この粒子は、全体的にブロックコポリマーから形成される。
【００１６】
薬物送達のために設計されたナノ粒子の調製物の実質的な数にもかかわらず、理想の組成物は、達成されなかった。薬物送達組成物として首尾よく実施するため、ナノ粒子が、血清または血漿の存在下で安定である（すなわち、凝集しない、沈殿しない、または血漿タンパク質に結合しない）；粒子は、薬物の有意な量で首尾よくロードされ得る；そして薬物の放出は、標的組織へのその首尾よい送達を最大にするように設定した時に行われるのが望ましい。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１７】
（本発明の開示）
本明細書中に記載された送達ビヒクルは、好ましい薬物動態学および比較的水に不溶性である生物学的に活性な薬剤の有効な送達を提供する。この送達ビヒクルは、疎水性のポリマーコアを有するナノ粒子の乳濁液であり、これは、両親媒性である保護層によって取り囲まれた生物学的に活性な薬剤を含み得、従って、粒子の凝集または沈殿を妨げ、かつ血漿または血清中でタンパク質との粒子の結合を阻害する。このビヒクルは、ナノ粒子の調製についてこれまでに企図されていない方法によって調製され得る。
【００１８】
従って、一局面において、本発明は、コア、およびポリマーコアを取り囲む外部の両親媒性層を形成する少なくとも一つの生分解性の疎水性ポリマーを有するナノ粒子を含む組成物に関する。両親媒性層は、少なくとも一つの安定化脂質を含む。この外部層は、連続的であることを必要としない。好ましくは、ナノ粒子は、平均的に５０〜３００ｎｍの平均直径を有する。
【００１９】
ナノ粒子は、ポリマーコアの中に活性薬剤をさらに含み得る。
【００２０】
別の局面において、本発明は、以下の工程：
（１）第一溶媒系で両親媒性層の成分を溶解する工程；
（２）第二溶媒系で活性薬剤および疎水性ポリマー、生分解性ポリマーを溶解する工程であって、該第一溶媒系は、少なくとも一つの有機成分および水性成分、または水性成分だけを含み；そして該第二溶媒系は、少なくとも一つの有機成分を含む、工程；
（３）工程（１）および（２）から得られた溶液を混合する工程ならびに機械的混合によって生じた混合溶液を分散させる工程；
（４）該有機成分を除去する工程；ならびに
（５）緩衝溶液で残った水性成分を交換する工程、
を包含するこれらの組成物を作製する方法に関する。
【００２１】
一般的に、この方法は、約５０〜約９９％の範囲で活性薬剤の有効なカプセル化を可能にする。
【００２２】
（本発明を実施する様式）
本発明は、生物学的に活性な薬剤を送達する際に有用である組成物を提供し、ここで、多くの生物学的に活性な薬剤が可溶性である疎水性コアは、少なくとも一つの両親媒性成分の保護層によって取り囲まれている。両親媒性成分は、安定化脂質であり得るかまたは安定化脂質を含み得、そして両親媒性ポリマー、またはいくつかのそのようなポリマーを含み得る。
【００２３】
「安定化脂質」としては、脂質のヘッド基（ｈｅａｄｇｒｏｕｐ）に結合体化する表面安定化ポリマーを含む脂質が挙げられるが、これに限定されない。好ましくは、脂質のヘッド基に結合体化されるポリマーは、疎水性である。好ましい疎水性ポリマー結合体化脂質は、ポリエチレングリコール結合体化脂質である。ポリマー脂質結合体を作り上げるポリマーは、粒子のコアと結合することを可能にする骨格を含み、それによって、送達ビヒクルの安定性を高めるポリマー（例えば、脂質に結合体化されるポリ（ビニルアルコール））であり得る。
【００２４】
安定化脂質は、安定化ポリマーに結合体化されないいくつかの脂質を含む。このような脂質は、疎水性の中性成分によって保護された負に荷電したリン酸基（例えば、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ））を含む。
【００２５】
ポリマーコアは、生分解性である一つ以上の親油性ポリマーまたは親油性コポリマーを含み得る。適切な疎水性コアポリマーは、両親媒性コポリマーの疎水性ブロックとして使用されるものを含む。コアを作り上げる適切なポリマーは、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、ポリ（ｄ，ｌ−ラクチド）（Ｐ（ｄ，ｌ−ＬＡ）またはＰＬＡ）、ポリ（β−ベンジル−ｌ−アスパルテート）、ポリ（ベンジル−ｌ−グルタメート）および同程度の疎水性のポリマーを含む。ポリマーの好ましい分子量は、そのポリマーの特性に依存する。
【００２６】
本発明の好ましい実施形態において、上記された送達ビヒクルは、一つ以上の活性薬剤を組み込む。好ましくは、該薬剤は、水不溶性薬剤（例えば、タキソール（登録商標）、エトポシド化合物、カンプトセシン化合物およびバルビシン（ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ）、またはそれらの混合物）である。任意の生物学的に活性な薬剤が、ナノ粒子に含まれ得る。
【００２７】
活性薬剤対コアポリマーの好ましい重量比は、薬剤対ポリマーの比が約１：１から約１：５０までであり；下記の説明から明らかであるように、活性薬剤対コアポリマーの比は、組成物の特性によって本質的に制限される。この組成物および方法の両方について成分の好ましい重量比は、約１：３０活性薬剤／ポリマーを含み得る。
【００２８】
好ましくは、外部安定化層の成分（この層は、安定化脂質を含み断続的であり得る）、およびポリマーコア中のポリマーコア中のポリマーの成分は、約５０ｎｍ〜約３００ｎｍ、好ましくは２００ｎｍより小さい、注入可能な大きさのナノ粒子を維持し、かつ約０℃〜約４５℃の範囲の温度で安定である粒子を提供するのに十分な比率の範囲内である。また、外部安定化層の成分およびポリマーコアを作り出すポリマーの成分は、活性薬剤の捕捉効果および／または放出プロフィールを最適化するように選択される。
【００２９】
本発明の送達ビヒクルは、非経口投与においてだけでなく、局所的な送達、鼻送達、皮下送達、腹腔内送達、筋肉内送達、もしくは口送達において、または治療目的もしくは医学的画像化などのため、標的部位でもしくは標的部位の近くでの、自然移植可能デバイスもしくは合成移植可能デバイスの、上のもしくは中への、送達ビヒクルの適用によって、使用され得る。好ましくは、本発明の送達ビヒクルは、非経口投与において、最も好ましくは、静脈内投与において使用される。
【００３０】
本明細書中に記載された好ましい実施形態は、開示された正確な形態まで本発明の範囲を網羅することも制限することも意図されない。それらは、当業者がその教示を理解することを可能にするため、本発明の原理およびその適用および実践的な使用を最もよく説明するように選択され、そして記載されている。
【００３１】
（略語）
ＰＥＧ：ポリエチレングリコール；数に先行するかまたは従う、ＰＥＧ：この数は、ＰＥＧの分子量である；ＰＥＧ−脂質：ポリエチレングリコール脂質結合体；ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００：２０００の分子量を有するポリエチレングリコールで誘導体化されたジステアロイルホスファチジルエタノールアミン；ＰＥ：ホスファチジルエタノールアミン；ＰＣ：ホスファチジルコリン；
ＰＩ：ホスファチジルイノシトール；ＰＳ：ホスファチジルセリン；ＤＳＰＥ：ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン；ＤＳＰＣ：ジステアロイルホスファチジルコリン；ＤＰＰＣ：ジパルミトイルホスファチジルコリン；ＤＭＰＣ：ジミリストイルホスファチジルコリン；ＤＭＰＥ−ＰＥＧ２０００：２０００ダルトンの分子量を有するポリエチレングリコールで誘導体化されたジミリストイルホスファチジルエタノールアミン；ＥＡ：酢酸エチル；ＢＡ：ベンジルアルコール；ＬＡ：ｄ，ｌ−ラクチド；Ｐ（ｄ，ｌ−ＬＡ）またはＰＬＡ：ポリ（ｄ，ｌ−ラクチド）；ＰＶＡ：ポリビニルアルコール；ＰＩＬＡ：ポリ（ｌ−ラクチド）；ＰＢＬＡ：ポリ（ベンジル−ｌ−アスパルテート）；ＰＣＬ：ポリカプロラクトン；ＨＢＳ：２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ；Ｔｍ：層遷移（または溶解）温度；Ｔｇ：ガラス遷移温度；ＡＵＣ：曲線下領域；ＲＴ：室温；ｖ／ｖ：容積対容積比；ＱＥＬＳ：準弾性光散乱。
【００３２】
（安定化脂質）
用語「安定化脂質」とは、粒子のコアとの共有層互作用または非共有層互作用のいずれかを介して粒子の表面に粘着させることによってナノ粒子の安定性を高める脂質をいう。安定化脂質は、乳化剤として働き得るかまたは働き得ない。いくつかの実施形態において、安定化脂質（例えば、ポリマー脂質結合体）は、ポリマーコア内のポリマーに共有結合的に結合される。
【００３３】
安定化脂質は、ポリマーで誘導体化された脂質（例えば、ポリマーに、その極性ヘッド部分で共有結合的に結合される脂質）を含む。結合体化された脂質は、そのような結合体（例えば、ホスホグリセリド、スフィンゴ脂質、およびセラミド）における使用について当該分野で記載されるいくつかの脂質であり得る。好ましくは、このポリマーは、疎水性である。結合体は、放出可能な脂質ポリマー結合（例えば、ペプチド結合、エステル結合、またはジスルフィド結合）を含むように調製され得る。結合体はまた、標的リガンドを含み得る。
【００３４】
結合体について好ましい疎水性ポリマーは、水溶性によって特徴付けられる生体適合性ポリマーであり、そのポリマー鎖が、それを取り囲んでいる水性媒体の中のナノ粒子表面から外へ効果的に伸長することを可能にする。疎水性ポリマーの例としては、ポリアルキルエーテル（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリメチルエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、およびポリヒドロキシプロピレングリコール）がある。さらなる適切なポリマーとしては、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコールおよびポリアクリル酸が挙げられる。好ましくは、疎水性ポリマーは、約３５０〜５，０００ダルトンの分子量を有する。
【００３５】
ポリマー脂質結合体を作り上げるポリマーはまた、粒子のコアと結合することを可能にする骨格を含み、それによって送達ビヒクルの安定性を高めるポリマーであり得る。このようなポリマーの例としては、ポリ（ビニルアルコール）がある。
【００３６】
安定化脂質はまた、安定化ポリマーに結合体化されない脂質であり得る。このような脂質としては、ホスホグリセリド；糖脂質；スフィンゴ脂質（例えば、スフィンゴシン、セラミド、スフィンゴミエリン、ガングリオシドおよびセレブロシド）ならびに、特にホスファチジルグリセロール（ＰＧ）およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）が挙げられる。
【００３７】
安定化脂質中に含まれる脂質の層遷移温度（Ｔｍ）またはアシル鎖長は、特に上昇温度で、送達ビヒクルの安定性に対して有意な効果を有する。高いＴｍ脂質は、低いＴｍ脂質と比較して、脂質組成物の安定性を高める。３７℃で、高いＴｍ脂質は、ゲル相であるが、低いＴｍ脂質は、ゲル相である。
【００３８】
（さらなる安定化成分）
他の脂質および成分はまた、コレステロールおよびコレステロール誘導体（例えば、エトキシ化されたコレステロール、コレステリルヘミスクシネート、コレステロールエステル、およびコレステロールヘミスクシネート）のような送達ビヒクルの調製物中に含まれ得る。他の成分としては、エルゴステロール、α−トコフェロール、ビタミンＡ、ビタミンＥ；ならびにフィトステロール（例えば、カンペステロール、β−シトステロール、スティグマステロールおよびそれらの誘導体）が挙げられ得る。これらとしてはまた、様々なホスファチジルコリン分子が挙げられ得る。
【００３９】
安定化脂質を含むことに加えて、ナノ粒子を取り囲む安定化層は、（粒子が、疎水性コアで調製される場合）粒子のコアに結合し得る疎水性部分を有する一つ以上の両親媒性ポリマー（例えば、コポリマー）をさらに含み得る。実施例５には、ＰＣＬ−ｂ−ポリ（エチレンオキシド）およびＰＥＧ−脂質の表面層を含むポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）粒子の調製物が記載されている。
【００４０】
好ましくは、両親媒性コポリマーは、ＰＣＬ、ポリ（ｄ，ｌ−ラクチド）（Ｐ（ｄ，ｌ−ＬＡ）またはＰＬＡ）、ポリ（β−ベンジル−ｌ−アスパルテート）、ポリ（ベンジル−ｌ−グルタメート）および同程度の疎水性のポリマーの疎水性部分を有する。ポリマーの好ましい分子量は、そのポリマーの特性に依存する。両親媒性コポリマーの疎水性部分は、ブロック（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリメチルエチレングリコール、ポリヒドロキシプロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリ（ビニルピロリドン）およびポリアクリル酸）を含み得る。
【００４１】
（コアが、疎水性である場合）コアと層互作用し得る疎水性骨格を含む安定化ポリマー（例えば、ポリ（ビニルアルコール）ＰＶＡ）もまた、安定化脂質に加えて使用され得る（ＰＶＡ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧおよびＰＶＡ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ／ＤＰＰＣ／ＤＳＰＣを含むＰＣＬナノ粒子の調製については実施例３および４を参照のこと）。
【００４２】
（ポリマーコア）
用語「ポリマーコア」とは、ナノ粒子のコアをいい、そして一つ以上のポリマーを含み、そして親油性および生分解性である。ポリマーコアは、半結晶、結晶または非結晶であり得る。
【００４３】
適切なポリマーの例としては、ポリエステル（例えば、ポリラクチド（ＰＬＡまたはＰ（ｄ，ｌ−ＬＡ））、ポリグリコリド、ポリヒドロキシブチレート、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ））がある。このようなポリマーとしてはまた、ポリアミノ酸、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリホスファジン、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリリン酸エステル、ポリエチレンテレフタレート（ｔｅｒｅｐｈａｌａｔｅ）、ポリアルキルシアノアクリレートおよびこれらのポリマーのモノマーから調製されるコポリマーが挙げられる。
【００４４】
好ましいポリマーとしては、ＰＣＬホモポリマー、Ｐ（ｄ，ｌ−ＬＡ）ホモポリマー、約５，０００〜約２００，０００ダルトンの好ましい分子量を有するジブロックコポリマー、トリブロックコポリマー、およびマルチブロックコポリマーが挙げられ得る。ポリマーの選択が、ＰＣＬである場合、分子量は、好ましくは、約１０，０００ダルトンである。ポリマーの選択が、Ｐ（ｄ、ｌ−ＬＡ）である場合、分子量は、好ましくは、約１００，０００ダルトンである。このようなポリマーは、薬物送達における適用のために広範に研究されてきた周知の生体適合性ポリマーである。Ｐ（ｄ，ｌ−ＬＡ）およびＰＣＬの物理的特性は、全く異なる。ポリマーＰ（ｄ，ｌ−ＬＡ）は、約５０℃のガラス遷移温度（Ｔｇ）を有する適度に疎水性無晶性ポリマーとして公知であるが、一方ＰＣＬは、−６０℃のＴｇおよび５６℃の溶解温度（Ｔｍ）を有する疎水性半結晶ポリマーである。ポリマーのＴｇおよびＴｍの両方は、ポリマーの分子量に依存する。ＰＣＬのＴｍおよびＴｇは、示差走査熱量計（ＤＳＣ）（Ｐｒｅｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）によって確認された。増加された疎水性の程度を有する任意のポリマー（例えば、ポリ（Ｂ−ベンジル−ｌ−アルパルテート）（ＰＢＬＡ）もまた、使用され得る。
【００４５】
（安定化脂質およびポリマーコアの組合わせの比率）
安定化脂質層およびポリマーコアを作り上げるポリマーは、３００ｎｍ〜約５０ｎｍの注入可能な大きさのナノ粒子を維持するように、そして０℃〜約４５℃の温度で安定である、十分な比率で使用され、。任意の比率での成分は、捕捉効果およびカプセル化活性薬剤の放出プロフィールを改善する。この成分は、組合わせて、物理学的条件および物理学的温度で約３００ｎｍ〜約５０ｎｍの直径の大きさでのよりよい安定性、改善された薬剤保持パラメーター、およびＣｈｉ−平方値によって示されるような非双峰分布が挙げられるが、これらに限定されない特性を有する（表１を参照のこと）。
【００４６】
（活性薬剤）
本明細書中で使用される場合、用語「活性薬剤」または「薬剤」とは、治療または診断で使用される化学的成分をいい、このために、本発明による薬物送達が、望ましい。この定義において含まれるものは、治療的薬剤および画像化薬剤である。好ましくは、この活性薬剤は、水または緩衝液中で「乏しい可溶性」である。本発明の送達ビヒクルは、乏しい可溶性の活性薬剤の送達について特に適切である。水または緩衝液中で活性薬剤を参照する用語「乏しい可溶性」は、活性薬剤が、水または緩衝液中で約１０ｍｇ／ｍＬより低い可溶性を有することを意味する。いくつかの活性薬剤が、本発明の組成物について使用され得る。
【００４７】
本発明における使用のために適切な好ましい治療的薬剤は、「抗新生薬剤」である。用語「抗新生薬剤」とは、抗腫瘍性細胞もしくは腫瘍の成長、増殖、侵襲性または生存に対して効果を有する化学的部分を意味する。抗新生治療薬剤としては、エトポシド化合物、抗微小細管薬剤、カンプトテシン化合物、ジスルフィド化合物、アルキル化化合物、抗代謝産物、細胞毒性抗生物および様々な植物アルカロイドならびにそれらの誘導体が挙げられる。
【００４８】
用語「エトポシド化合物」とはまた、テニポシドを含む類似のコア構造を有するエトポシドおよびエトポシド誘導体の両方をいう。エトポシドおよびテニポシドは、乏しい水溶性（１０ｍｇ／ｍＬより低い）であり、現在様々な癌（精巣新生物、肺癌、リンパ腫、神経芽細胞腫、ＡＩＤＳ関連カポージ肉種、ウィルムス腫、様々な型の白血病などを含む）のための治療に使用されている。テニポシドはまた、嚢癌、リンパ腫、神経芽細胞腫、小細胞の肺癌および特定のＣＮＳ腫瘍に対する活性を示した。テニポシドは、エトポシドと同じように広範に研究されてなかったが、類似の特性を有することが推定される。
【００４９】
用語「抗微小細管薬剤」とは、細胞の微小細管の通常の機能を崩壊させる薬剤を意味する。この定義において含まれるものは、タキサン（パクリタキセルおよびドセタキセルは、このクラスの代表的な薬剤である）ならびにビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチンおよびビノレルビンは、このクラスの他のメンバーである）である。
【００５０】
用語「カンプトテシン化合物」とは、カンプトテシンおよびトポイソメラーゼ阻害活性を有するこの植物アルカロイドの誘導体化形態（トポテカン、イロノテカン、ラートテカン（ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ）、９−アミノカンプトテシン、９−ニトロカンプトテシンおよび１０−ヒドロキシカンプトテシンを含む）（それらの塩を含む）をいう。好ましくは、カンプトテシン化合物は、カンプトテシンである。
【００５１】
（調製の方法）
ナノ粒子を含む本発明の送達ビヒクルは、当該分野において公知である多くの従来技術を使用して調製され得る。しかし、改善された調製法は、さらに以下に記載されているように使用されることが好ましい。
【００５２】
様々な技術は、小さい粒子（ナノ粒子）を含む水性コロイド分散系（塩析、乳化−拡散、ナノ−沈殿および乳化−蒸発を含む）を調製するために公知であり、これらは、小さい粒子成分を含む有機溶液の使用に関するということで共通する。薬物を微小カプセル化して、微小カプセル化生成物を形成する一つの従来法は、米国特許番号第５，４０７，６０９号に開示されている。この方法は、溶解された壁形成物質を含む溶媒中で、薬剤、液体または固体を溶解させるか、またはそうでなければ分散させる工程、プロセス媒体中の薬剤／ポリマー溶媒混合物を分散させて、乳濁液を形成する工程、および全ての乳濁液を多量のプロセス媒体または他の適切な抽出媒体に直ちに移して、乳濁液中で微小液滴から溶媒を直ちに抽出し、微小カプセル化生成物（例えば、微小カプセルもしくはミクロスフェア）を形成する工程を包含する。
【００５３】
ポリマー送達ビヒクル処方物を調製するために使用される最も一般的な方法は、溶媒蒸発法である。この方法は、水と完全に不混和性である有機溶媒（例えば、ジクロロメタン）中でポリマーおよび薬剤を溶解する工程を包含する。有機混合物は、安定剤（最も頻繁にはポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ））を含む水に加えられる。ＰＶＡを用いてこの溶媒蒸発法を使用する場合、高エネルギーせん断力（例えば、超音波処理）を必要とし、それ自体に、チタニウム汚染問題を有する。水との有機溶媒混合物を使用する同様の方法はまた、これらの方法が、完全に不混和性の溶媒を使用するので問題であった。これらの方法は、静脈内投与のために受容可能な大きさの粒子を製造するため、過剰なプロセス工程および高エネルギーせん断力を必要とする。
【００５４】
当該分野において、利用可能な方法が、使用され得るが、さらに以下に記載されているように、改善されたプロセスにおいて本発明の送達ビヒクル組成物を調製することが好ましい。
【００５５】
最初の工程（工程（１））は、水性成分、ならびに水と混和性であるか、部分的に混和性であるかまたは不混和性であり、かつ安定化脂質およびさらなる成分を可溶するのに十分である、一つ以上の成分を含む第一溶媒系で表面安定化層を作り上げる、安定化脂質および必要に応じて一つ以上の成分を溶解することである。第一溶媒系において使用され得る水混和溶媒としては、短鎖アルコールを含むアセトンおよびアルコール、すなわち４つの炭素原子長より短い水混和アルコール（例えば、エタノール、メタノール、イソプロピルアルコール）が挙げられる。部分的に水混和溶媒としては、酢酸エチル、イソプロピルアルコール、ベンジルアルコール、２−ブタノン、１−ブタノール、テトラヒドロフラン、イソプロピルアルコール、イソプロピルアセテート、プロピレンカルボネート、酢酸メチルが挙げられる。使用され得る水不混和溶媒としては、クロロホルムおよびジクロロメタンが挙げられる。水混和性溶媒、部分的に水混和性溶媒および水不混和性溶媒の組み合せもまた、使用され得る。
【００５６】
好ましい実施形態において、第一溶媒系は、水性成分または水性成分と水混和溶媒の混合液（例えば、アルコール、好ましくは約１：２５ｖ／ｖ（アルコール：水）の比率の短鎖アルコール）である。短鎖アルコールは、好ましくは、メタノール、エタノールおよびイソプロピルアルコール、またはそれらの組み合せからなる群から選択される。水混和溶媒が使用される場合、工程（１）は、最も高い層遷移温度を有する安定化脂質の遷移温度を超える（好ましくは、該脂質の層遷移温度より５℃〜約２０℃上の）温度で実施される。最も好ましくは、工程（１）は、最も高い層遷移温度を有する脂質の層遷移温度より１０℃上の温度で実施される。
【００５７】
この方法の工程（２）は、水と混和性であるか、部分的に混和性であるかまたは不混和性であり、かつ活性薬剤およびコアポリマーを可溶することができる一つ以上の有機溶媒を含む第二溶媒系にコアポリマーおよび活性薬剤を溶解することである。第二溶媒系において使用され得る水混和溶媒としては、短鎖アルコールを含むアセトンおよびアルコールが挙げられ；部分的に水混和溶媒としては、酢酸エチル、イソプロピルアルコール、ベンジルアルコール、２−ブタノン、１−ブタノール、テトラヒドロフラン、イソプロピルアルコール、イソプロピルアセテート、プロピレンカルボネートおよび酢酸メチルが挙げられ；水不混和溶媒としては、クロロホルムおよびジクロロメタンが挙げられる。水混和性溶媒、部分的に水混和性溶媒および水不混和性溶媒も組み合せはまた、第二溶媒系において使用され得る。第二溶媒系は、好ましくは、水不混和溶媒および部分的に水混和溶媒を含む。好ましくは、この溶媒系は、酢酸エチル、クロロホルム、プロピレンカルボネート、ベンジルアルコール、酢酸メチル、２−ブタノン、テトラヒドロフラン、１−ブタノール、イソプロピルアセテートまたはそれらの組み合せから選択される。酢酸エチルおよびベンジルアルコールは、約１：１ｖ／ｖの好ましい比率の組合わせで使用され得る。第二溶媒系を作り上げる溶媒またはそれらの組み合せの好ましい選択は、使用される活性薬剤の選択に従い選択され得る。
【００５８】
粒子の安定性、多分散性、および薬剤漏出を最適化するために調節される方法関連パラメーターとしては、工程（１）において含まれる脂質の層遷移温度；工程（２）の第二溶媒系を作り上げる溶媒の比率；混合した後、工程（１）〜工程（２）から得られる溶液の比率；ならびに工程（３）におけるその次の機械的混合の比率および継続時間が挙げられる。さらに、本方法の成分は、以下：（ｉ）使用される活性薬剤の型；（ｉｉ）被験体への薬物の送達の方法；（ｉｉｉ）所望の放出プロフィール；および（ｉｖ）使用の目的または選択された標的部位から選択される特定の必要条件により処方され得る。
【００５９】
工程（１）および工程（２）から得られる溶液は、混ぜ合わされた後、それぞれ、約１０：１ｖ／ｖ〜１：３０ｖ／ｖの比率であり得る。好ましくは、工程（１）および工程（２）から得られる溶液の比率は、それぞれ、比率１：１〜１：１０で混ぜ合わされる。得られる溶液を混ぜ合わせる好ましい比率は、酢酸エチル／ベンジルアルコール混合液およびエタノール水混合液が、使用される場合、１：２ｖ／ｖ[工程（１）の溶液対工程（２）の溶液]である。
【００６０】
二つの最初の工程から生じる溶液の混合の後に、機械的混合である工程（３）が続く。機械的混合の好ましい方法は、超音波処理およびミリングを超える均質化である。混合物は、使用されるホモジナイザーの型または製品に依存する時間の間、均質化される。
【００６１】
機械的混合に続き、生じた溶液は、水性溶液、好ましくは水の添加によって希釈され得る。好ましくは、この混合液は、混合しながら水をゆっくりと添加することによって希釈される。好ましい混合手段は、ボルテックスすることである。
【００６２】
機械的混合に続き、第一溶媒系および第二溶媒系の有機成分の除去（工程（４））は、このような溶媒の除去に関する当業者に公知である従来技術によって達成される。好ましい方法としては、室温でまたは上昇された温度での溶液の回転蒸発および撹拌ならびに透析が挙げられる。好ましくは、有機成分の除去は、水に対する透析による。
【００６３】
第一溶媒系および第二溶媒系の有機成分の除去に続いて、残った水性成分は、緩衝液で交換される。この工程は、従来技術（例えば、透析、接線流、カラムクロマトグラフィーおよび凍結乾燥）によって実施され得る。好ましい技術は、接線流によるものである。緩衝液のｐＨは、好ましくは、物理学的ｐＨである。この工程は、所望の濃度までサンプルを濃縮するために実施され得る。
【００６４】
この方法は、機械的混合の後、必要に応じて、得られた液体を希釈する工程をさらに包含し得る。希釈は、当業者に公知の従来技術によって実施され得る。好ましくは、希釈は、混合の間、水溶液をゆっくりと添加することによって実施される。混合の好ましい方法は、ボルテックスすることである。好ましくは、工程（３）から得られた液体は、水で希釈される。
【００６５】
第一溶媒系および第二溶媒系の除去に続き、好ましくは、水は、緩衝液と交換される。緩衝液交換は、従来技術（例えば、透析、接線流および凍結乾燥）によって実施され得る。緩衝液のｐＨは、好ましくは、おおよそ物理学的ｐＨ（例えば；ＨＢＳ、ｐＨ＝７．４）である。好ましくは、この溶液は、接線流装置（例えば、ＭｉｄＧｅｅＴＭＣｒｏｓｓ  Ｆｌｏｗ  Ｆｉｌｔｅｒ、ＡＧ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して濃縮される。
【００６６】
いくつかの方法に関連したパラメーターは、安定性、大きさ、多分散性、薬物放出プロフィールおよび薬物カプセル化、調製されるナノ粒子の薬物保持に影響し得る。特定されたパラメーターとしては、水相対有機相の容積比、薬物対ポリマー比、安定化脂質対ポリマー比、混合温度および混合比、ならびに均質化の持続期間が挙げられる。
【００６７】
ナノ粒子の大きさは、安定化脂質の比率に依存し、そしてポリマーコアを作り上げるポリマーはまた、カプセル化活性薬剤によって影響される。直径が５０ｎｍ〜３００ｎｍの粒子は、非経口投与に適切である（米国特許番号５，５２７，５２８号）。粒子の大きさおよび多分散性は、以下に例示されているように、準弾力光散乱（ＱＥＬＳ、Ｎｉｃｏｍｐ３７０サブミクロン粒子サイザーおよび）によって決定され得る。多分散性は、表１において示されるようなＣｈｉ平方値ｘ２で示され得る。好ましい実施形態において、本発明のナノ粒子は、選択された範囲で実質的に均質の大きさを有するように調製される。
【００６８】
（送達ビヒクルの投与）
本発明の薬物送達ビヒクル組成物は、ヒトを含む温血動物に投与され得る。ヒトの病気の処置のため、適任の医者は、どのように本発明の組成物が、確立されたプロトコルを使用する投与用量、投与計画および投与経路に関して利用されるべきかを決定する。本発明は、より高用量が、より低用量容積、より長い部位特異的用量保持、活性薬剤物質のより迅速な吸着、薬物の増加されたバイオアベイラビリティ、より高い安全性、効力およびよりよい患者コンプライアンスでローディングされるのを可能にする。
【００６９】
本発明の送達ビヒクルは、当業者に公知である方法を使用して投与され、これらとしては、非経口注射または皮下注射、固体形態、液体形態またはゲル形態の経口投与、直腸投与または局所投与などのために処方される組成物が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７０】
本発明の組成物は、非経口投与され得る。代表的には、これは、薬学的に受容可能な溶液、好ましくは水性溶液中で、懸濁された薬物送達ビヒクルの溶液を含む。例えば、様々な水性ビヒクルキャリアー（水、緩衝水、０．９％等張性生理食塩水、５％デキストロースなど）が使用され得る。本明細書中で使用される場合、用語「非経口的」は、静脈内、動脈内、筋肉内、腹膜内および実行可能な程度までの、腹腔内および皮下を意味する。
【００７１】
以下の実施例において、表１および表２ならびに図１および図２は、３７℃での安定性、薬物放出プロフィールおよび多分散性が、薬物の放出の間の数時間、数日または数週間までの間、一定で保持され得ることを示す。脂質組成物；薬物対ポリマー比；脂質対ポリマー比；または脂質およびコアポリマー組成物についての第二溶媒系の処方物を変更することによって、それぞれの処方物は、最も有効な薬物またはその薬物の組み合せを用いて、必要とされる処置の特定の必要条件に適合される。
【００７２】
以下の実施例は、本発明を示すために提供されるが、これらを限定しない。
【実施例】
【００７３】
（物質の供給源）
ホモポリマー、ポリ（ｄ，ｌ−ラクチド）（Ｐ（ｄ，ｌ−ＬＡ）またはＰＬＡ）、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）およびポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）、ならびに溶媒を、Ｓｉｇｍａから購入し、そしてＰＣＬ−ｂ−ＰＥＯを、Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｏｕｒｃｅｓ  Ｉｎｃ．（Ｄｏｒｖａｌ、Ｑｕｅｂｅｃ）から購入した。脂質を、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  ＬｉｐｉｄｓおよびＡｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓから購入した。
【００７４】
（方法）
（ナノ粒子の大きさおよび多分散性の測定）
送達ビヒクルの大きさおよび多分散性を、準弾力光散乱（６３２．８ｎｍの波長で操作するＱＥＬＳ、Ｎｉｃｏｍｐ３７０サブミクロン粒子サイザー）によって決定した。
【００７５】
（薬物ローディング容量の測定）
放射性標識タキソール（登録商標）（１４Ｃ）を、使用する場合、薬物ローディング容量を、ＵＶアッセイを使用してまたはシンチレーション計数によって測定した。このＵＶアッセイは、安定化脂質およびポリマーを沈殿させるため、アセトニトリル／水混合液（８：２比率ＡＣＮ：水）に送達ビヒクル溶液の２０μＬアリコートを加えることを含んだ。混合液を、１時間冷蔵庫の中に放置し、次いで１０分間１０００ｇで遠心分離した。カプセル化されたタキソール（登録商標）の量を、ＵＶ分光光度計で測定された上清（２３０ｎｍ）の吸光度から計算した。０．００１ｍｇ／ｍＬ〜０．５ｍｇ／ｍＬのタキソール（登録商標）の濃度範囲にある標準を、以下に記載されるように処理した。較正曲線についての線形範囲は、０．００１ｍｇ／ｍＬ〜０．０５ｍｇ／ｍＬまでであった。コントロールは、空の送達ビヒクルおよびアセトニトリル／水混合液だけを含んだ。ＰＣＬレベルを、ポリマーの疎水性に起因して一定のままであると想定した。
【００７６】
（室温および３７℃での送達ビヒクルの安定性の測定）
脂質で被覆された送達ビヒクルの安定性を、室温（ＲＴ）および３７℃の両方でインキュベーションの間、送達ビヒクルの沈殿および粒子の大きさの変化（上記のように測定した）に対する溶液のモニタリングによって評価した。沈殿を生じることを注意し、そして溶液中で顕著な変化（光彩／白均質色を有する状態から透析バッグまたは透析バイアルの底で蓄積された凝集体が目に見える透明な状態までの外観）が起こった際に沈殿が生じることに注意した。
【００７７】
（室温（ＲＴ）および３７℃での緩衝液または血清中でインビトロ薬物放出の測定）
ＲＴでおよび３７℃で薬物の放出を分析するため、１ｍＬのタキソール（登録商標）含有脂質／ポリマー送達ビヒクル溶液のアリコートを、透析バッグ（Ｓｐｅｃｔｒａｐｏｒ、ｍｏｌ．ｗｔ．カットオフ５０，０００）に放置し、そして１Ｌの緩衝液（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、（ＨＢＳ）ｐＨ７．４）中に懸濁した。特定の時間的間隔で、１０μＬ（シンチレーション計数のための）または５０μＬ（ＵＶアッセイのため）アリコートを、薬物レベルを決定するために透析バッグから取り出した。タキソール（登録商標）放出を計算する場合、薬物／コアＰＣＬレベルを決定し、そしてナノ粒子のＰＣＬコアを、インタクトのままであると仮定した。
【００７８】
（実施例１）
（ＤＰＰＣ／ＤＳＰＣ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ混合液によって安定化されたＰＣＬナノ粒子の調製）
ＤＰＰＣ／ＤＳＰＣ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００（４５：４５：１０モル比）を含み、タキソール（登録商標）を組み込んだナノ粒子系を、本発明の方法を使用して調製した。ポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）を、粒子のコアを作り上げる疎水性ポリマーとして選択した。ナノ粒子を、粒子形成の間、安定化脂質／ＰＥＧ−脂質混合物で被覆した。この方法において、ポリマーおよび薬物を、水に部分的に混和である溶媒中に溶解し、次いで脂質を含む水溶液と混ぜる。次いで、混合物を、均質化し、ボルテックスしながら水で希釈し、そして透析した。この方法によって脂質被覆ナノ粒子を調製するため、水だけではなくエタノール／水混合液中で安定化脂質（脂質およびＰＥＧ−脂質溶液）を溶解することが必要であった。ナノ粒子の安定性を、粒子の大きさおよび多分散性を測定することによって評価した；さらに、緩衝液および血清中での、粒子からのタキソール（登録商標）のインビボ放出を、決定した。
【００７９】
ＤＰＰＣ、ＤＳＰＣおよびＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００脂質（２０ｍｇ）を、４５：４５：１０のモル比で０．２５：１ｖ／ｖの２ｍＬのエタノール／水混合液中に溶解し、そして得られた液体を、６５℃まで加熱した。分離チューブにおいて、ポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）（２０ｍＬ）およびタキソール（登録商標）を、１ｍＬの１：１酢酸エチル／ベンジルアルコール（有機混合物）溶液中に１：３０の重量比で溶解した。上記２つの溶液を、１：２ｖ／ｖのポリマー−タキソール（登録商標）混合物／脂質混合物で混ぜ合わせた。次いで、生じた溶液を、３分間（ＰｏｌｙｔｒｏｎＴＭホモゲナイザーを使用して）均質化し、さらにボルテックスしながら、水の遅い添加によって希釈した。溶液を、室温で撹拌し、次いで有機溶媒を除去するため８時間水に対して透析した。透析手順に続いて、水を、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ（ＨＢＳ緩衝液）、ｐＨ７．４に交換し、そして溶液を、接線流装置（ＭｉｄＧｅｅＴＭＣｒｏｓｓ  Ｆｌｏｗ  Ｆｉｌｔｅｒ、ＡＧ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して濃縮した。室温（ＲＴ）でおよび３７℃で緩衝液中での透析の間、生じたタキソール（登録商標）含有ナノ粒子の安定性を、ナノ粒子の沈殿および粒子の大きさについての変化に対する溶液のモニタリングによって上記の方法により測定した。３７℃で上記で測定したように、この方法によって得られた平均ナノ粒子直径および多分散性を、以下の表１において示した。表１における結果によって証明されたように、ナノ粒子の大きさは、測定された時間経過を通じておおよそ一定のままであった。
【００８０】
【表１】
2005513145.tif 000002
室温および３７℃での緩衝液中の薬物の放出を分析するため、１ｍＬのタキソール（登録商標）含有脂質／ナノ粒子溶液のアリコートを、透析バッグ（Ｓｐｅｃｔｒａｐｏｒ、ｍｏｌ．ｗｔ．カットオフ５０，０００）に放置し、そしてこの方法で特定されたように、１ＬのＨＢＳ、ｐＨ７．４中で懸濁した。特定の時間的間隔で、１０μＬ（シンチレーション計数のため）または５０μＬ（ＵＶアッセイのため）アリコートを、その時間を通じて透析バッグから取り出した。ナノ粒子調製物の中で最初のタキソール（登録商標）の濃度は、０．５ｍｇ／ｍＬまたは０．７ｍｇ／ｍＬであった。図１において要約された結果は、７日間で、ＨＢＳ緩衝液に対して３７℃で透析する場合、タキソール（登録商標）の濃度が、０．５ｍｇ／ｍＬの最初の濃度から約０．３ｍｇ／ｍＬまで減少したことを示す。０．７ｍｇ／ｍＬの最初の濃度を有するサンプルは、室温および３７℃で８日間透析した後、約０．６ｍｇ／ｍＬのタキソール（登録商標）の濃度という結果であった。
【００８１】
ＤＰＰＣ／ＤＳＰＣ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００で被覆されたＰＣＬナノ粒子から３７℃で血清中でのタキソールのインビトロ放出をまた、透析バッグへの０．５ｍＬの粒子および０．５ｍＬの血清の添加およびＨＢＳ、ｐＨ７．４に対し透析することによって決定した。特定の時間的位置で（図２を参照のこと）、１０μＬサンプルを、取り出し、そしてタキソール（登録商標）の濃度を、決定した。図２において示される結果は、血清中でナノ粒子からのタキソール（登録商標）の放出は、測定された時間経過（１０日）を通じて徐々に生じることを示す。従って、インキュベーションの１０日後、約１０μＬのタキソール（登録商標）は、ナノ粒子が、１０日までの残留時間、血漿を延滞し得ることを示すままであった。
【００８２】
血液区画中インビボでタキソール（登録商標）のレベルを高めるためＤＰＰＣ／ＤＳＰＣ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧで被覆されたＰＣＬナノ粒子およびＣｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬの能力を、比較した。Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬは、現在、タキソール（登録商標）のような疎水性薬物の送達に使用される金標準処方物であり、そしてグリセロール−ポリエチレングリコールリシノレートの混合物を含む。雌Ｂａｌｂ／ｃマウスに、ナノ粒子調製物について５．０ｍｇ／ｋｇタキソール、１３３ｍｇ／ｋｇ全脂質、および１３３ｍｇ／ｋｇＰＣＬ  Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ中で５．０ｍｇ／ｋｇタキソールを投与した。データは、それぞれの送達系について３匹のマウスからの平均タキソール（登録商標）濃度を表示する。図３において証明されるように、安定化剤としてＤＳＰＣ／ＤＰＰＣ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００（４５：４５：１０モル比）およびＤＳＰＣ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００（９０：１０モル比）を含む、ＰＥＧ脂質／脂質で被覆されたＰＣＬナノ粒子は、静脈内投与の１時間後の血漿中のタキソール（登録商標）濃度の２倍より大きな増加を両方が示した。
【００８３】
従って、これらの結果は、脂質安定化ナノ粒子が、薬物の血液残留時間を増加させるナノ粒子の能力によって示されるように、疎水性薬物の送達についてＣｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬに対する優勢な代替物として使用され得ることを示す。さらに、脂質被覆ナノ粒子は、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒｅ  ＥＬ処方物が現在示す所望されない患者毒性を示し得ない。
【００８４】
（実施例２）
（ＰＣＬナノ粒子は、安定化脂質（例えば、ＰＥＧ脂質）の非存在において安定化され得ない）
安定化脂質（例えば、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ）の存在が、脂質被覆ＰＣＬナノ粒子および脂質被覆ＰＬＡナノ粒子の調製に必要であるかどうかを決定するため、脂質被覆としてＤＭＰＣまたはＤＰＰＣだけを使用して、ナノ粒子を、ＰＥＧ脂質の非存在下で調製した。
【００８５】
この方法を、ＤＭＰＣで被覆されたＰＬＡナノ粒子およびＤＰＰＣで被覆されたＰＣＬ粒子を調製するため実施例１における同様の様式で繰り返した。ＰＬＡまたはＰＣＬを、１：１ｖ／ｖベンジルアルコール：酢酸エチルの１ｍＬ溶液中に１：３０重量比でタキソール（登録商標）で溶解した。両方のナノ粒子の調製のため、薬物およびポリマーは、一般的手順の間に沈殿した。従って、大きさを測定することができなかった。従って、これらの結果は、安定化脂質（例えば、ＰＥＧ脂質結合体）が、インビトロで安定であるＰＣＬナノ粒子またはＰＬＡナノ粒子を生成するため、これらの系において必要とされることを示す。本発明のナノ粒子に包含されるために潜在的に適切であり得る、ＰＥＧ脂質に加えて、安定化脂質の実施例は、親水性中間成分によって保護された負に荷電したリン酸基（例えば、ホスファチジルグリセロールおよびホスファチジリノシトール）を有するものを含む。
【００８６】
（実施例３）
（ＰＶＡ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ混合物によって安定化されたＰＣＬナノ粒子の調製）
次に、発明者らは、ＰＥＧ脂質被覆ナノ粒子のインビトロ安定性もまた、親水性ポリマー表面安定化剤（ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ））の添加によって高められ得るかどうかを実験した。ＰＶＡは、ポリマーの親水性部分が、水性媒体の中に伸長する一方で、粒子の疎水性コアと安定に結合することを可能にする疎水性、炭化水素骨格を含む。より大きい分子量ＰＶＡが、分子の大きさの増加を導く溶液粘度の増加を生じ得る場合、１０，０００ｇ／モルの分子量のＰＶＡを、分子調製の間、系の粘度を最小化するため使用する。
【００８７】
酢酸エチル中で１００ｍｇ／ｍＬのＰＣＬ、酢酸エチル中で１０ｍｇ／ｍＬタキソール（登録商標）および水中で５％ｗ／ｗポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）のストック溶液を、調製した。１００ｍｇ／ｍＬの濃度でＤＳＰＥ−ＰＥＧ７５０ストック溶液を、エタノール中で調製した。有機溶液を、６７μＬのタキソール（登録商標）ストック溶液および７３３μＬの酢酸エチルとＰＣＬストック（２００μＬ）を混ぜ合わせることによって調製した。分離バイアルの中で、５０μＬのエタノールおよび１．６ｍＬの水と３００μＬのＰＶＡおよび５０μＬのＤＳＰＥ−ＰＥＧ７５０を、水溶液を形成するために一緒に混ぜ合わせた。水溶液および有機溶液を、ナノ粒子分散を生じさせるため、混ぜ合わし、そして均質化した。均質化に続き、さらに８ｍＬの水を、ボルテックスしながら、溶液に加えた。その次に、この溶液を、３〜４時間、室温で撹拌し、次いで一晩水に対し透析した。次いで、接線流を、溶液を濃縮するために使用し、そして緩衝液を水と交換した。生じたナノ粒子は、薬物対ＰＣＬが１：３０の重量比を含んだ。この粒子の平均の直径を、約１００ｎｍであると決定した。ＰＶＡ／ＰＥＧ−脂質で安定化されたＰＣＬ粒子はまた、薬物対ＰＣＬが１：２０の重量比を有するように上記手順により調製した。
【００８８】
ＰＣＬナノ粒子を含むＰＶＡ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧのインビトロ薬物放出および安定性を、血清中で決定し、そしてその結果を、以下の表２に示す。これらの結果を、ＤＳＰＣ／ＤＰＰＣ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００で安定化され、かつＰＶＡの欠いたＰＣＬナノ粒子の薬物放出特性と安定特性とを比較した（実施例１を参照のこと）。血清中でのインビトロ放出研究のため、５００μＬのナノ粒子を、５００μＬの血清と混ぜ合わせ、そして透析バッグの中に放置し、そして１ＬのＨＢＳ緩衝液、ｐＨ７．４に対して透析した。特定の時間的位置で、溶液のアリコートを、透析バッグから取り出し、そしてＵＶおよびＨＰＬＣの両方を使用することによってタキソール（登録商標）の濃度をアッセイした。ナノ粒子の安定性を、方法において示されるように決定した。
【００８９】
【表２】
2005513145.tif 000003
表２において示されるように、ほぼ完全な薬物組み込みを、全ての系について観察した。さらに、３つの全ての場合、この分子のように３７℃で血清中でのインキュベーションの間、長期の安定性を示した全ての分子は、少なくとも２４時間安定であった。ＤＳＰＣ／ＤＰＰＣ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００によって安定化されたＰＣＬ分子は、薬物が、この時間経過を通じて十分に保持され得ることを示すインビトロで血清中での２４時間インキュベーション後、約６８％の薬物保持を示した。１：３０のタキソール（登録商標）／ポリマー重量比でＰＶＡ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ７５０を用いて調製された粒子は、２４時間の時点で約４１％薬物保持を示した。約１：２０程度に高い薬物／ポリマー比率を含むＰＶＡ／ＰＥＧ７５０脂質粒子を、調製し得る；これは、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００／ＤＰＰＣ／ＤＳＰＣ安定化混合物を使用する以前の結果と対照的であった。１：３０の薬物／ポリマー比を有する粒子を調製することだけが可能であった。しかし、１：２０の比でＰＥＧ７５０を含むこれらの粒子は、２４時間の時点でごくわずかなタキソール（登録商標）保持を示した。
【００９０】
安定化剤としてＰＶＡおよびＤＳＰＥ−ＰＥＧ７５０で被覆されたＰＣＬナノ粒子を調製することに加え、粒子もまた、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ５５０を用いて調製した。短鎖ＰＥＧポリマー（例えば、ＰＥＧ５５０）を、脂質層とのＰＥＧ結合体の交換比を減少するために使用し得る。ＰＶＡ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ７５０を用いて安定化されたＰＣＬ粒子を調製するための上記される手順を、有機溶液が、２００μＬ  ＰＣＬストック溶液、１００μＬタキソールストックおよび７００μＬの酢酸エチルの混合物を含むことを除いて繰り返した。
【００９１】
（実施例４）
（ＰＶＡ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ／脂質混合物を用いて安定化されたＰＣＬナノ粒子の調製）
ＰＥＧ脂質およびＰＶＡの表面被覆を含む粒子を調製することに加え、ＰＥＧ脂質／ＰＶＡ／ＤＳＰＣ／ＤＰＰＣの混合物を含むＰＣＬナノ粒子もまた、調製した。粒子の大きさを減少することによって、乳濁液として作用するようにＰＥＧ脂質／脂質のレベルを増加する効果もまた、実験した。
【００９２】
１００ｍｇ／ｍＬのＰＣＬストックおよび１０ｍｇ／ｍＬのタキソール（登録商標）ストックを、酢酸エチル中で調製した。５％ｗ／ｗのＰＶＡストックを、水中で調製し、そして４５：４５：１０のモル比でＤＳＰＣ／ＤＰＰＣ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００の溶液を、エタノール（１００ｍｇ／ｍＬ）中で調製した。薬物およびコアポリマーの有機溶液を、２００μＬのＰＣＬ溶液、１００μＬのタキソール（登録商標）ストック溶液および７００μＬの酢酸エチル溶液を混ぜ合わせることによって調製した。０μＬ〜４００μＬの水性ＰＶＡストック溶液を、２００μＬ〜０μＬの脂質溶液と混ぜ合わせ、そして最終容積を、水を用いて２ｍＬに調節した。水溶液および有機溶液を、混ぜ合わせ、そして実施例１に示されるように均質化した。均質化の次に、８ｍＬの水を、この溶液に加え、続いて実施例１に記載されるように、透析し、そして緩衝液に交換した。これらの手順は、薬物対ＰＣＬが１：２０の重量比のナノ粒子を生じた。
【００９３】
図４において示されるように、脂質（ＤＳＰＣ／ＤＰＰＣ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００）対ＰＶＡ比の増加は、粒子の大きさの減少を生じた。脂質対ＰＶＡの１：１の重量比は、１００ｎｍの大きさであるナノ粒子の調製を可能にした。脂質／ＰＧＥ脂質の非存在（すなわち、ＰＶＡのみ）において、ナノ粒子は、２５０ｎｍの直径であった。従って、脂質混合物は、ナノ粒子の大きさを減少するように作用する。
【００９４】
（実施例５）
（ＰＣＬ−ｂ−ＰＥＯ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ混合物によって安定化されたＰＣＬナノ粒子の調製）
発明者らはまた、ＰＥＧ脂質被覆ＰＣＬナノ粒子の安定性のさらなる増加を目的として、表面安定化薬剤として、両親媒性ブロックコポリマー、両親媒性ポリカプロラクトン−ｂ−ポリ（エチレンオキシド）（ＰＣＬ−ｂ−ＰＥＯ）を利用した。コポリマーの疎水性ブロックは、ＰＣＬコアと激しく層互作用する傾向があり、従って、ナノ粒子の表面と安定に結合されたままである。２つの異なる比率でＰＧＥ脂質およびＰＣＬ−ｂ−ＰＥＯの混合物を含むナノ粒子からのタキソール（登録商標）のインビボ放出動力学を、その送達、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬの金標準からのタキソール放出と比較した。
【００９５】
酢酸エチル（４０ｍｇ／ｍＬ）中でＰＣＬ、酢酸エチル（１０ｍｇ／ｍＬ）中でタキソール（登録商標）および酢酸エチル（５０ｍｇ／ｍＬ）中でＰＣＬ−ｂ−ＰＥＯのストック溶液を、調製した。さらに、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ５５０のストック溶液を、エタノール中で５０ｍｇ／ｍＬで調製した。５００μＬのＰＣＬストック、３００μＬのＰＣＬ−ｂ−ＰＥＯストックおよび１２５μｌの薬剤ストックおよび７５μＬの酢酸エチルを含む有機溶液を、調製し、そして１００μＬのＤＳＰＥ−ＰＥＧ５５０ストックと１．９ｍＬの水を含む水溶液と混ぜ合わせた。得られた混合液を、実施例１および実施例２において記載されたように、均質化し、透析し、そして緩衝液に交換した。これらの手順は、薬物対ＰＣＬが１：１６の重量比を有する約１００ｎｍの平均直径のナノ粒子を生じた。同様の手順を、薬物対ＰＣＬが１：２０の重量比を有するナノ粒子を作製するために使用した。
【００９６】
血液区画中でタキソール（登録商標）のレベルを増加させる、ＰＣＬ−ｂ−ＰＥＯ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ５５０安定化ナノ粒子およびＣｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬの能力を、２つの異なるタキソール（登録商標）／コアＰＣＬ重量比で比較した。雌Ｂａｌｂ／ｃマウスに、薬物対コアＰＣＬが１：１６の重量比について、５．０ｍｇ／ｋｇタキソール（登録商標）、２５ｍｇ／ｋｇ全脂質、および１００ｍｇ／ｋｇコアＰＣＬを投与し、そして１：２０（タキソール（登録商標）／コアＰＣＬ）の比率でロードされたナノ粒子について、５．０ｍｇ／ｋｇタキソール（登録商標）、２０ｍｇ／ｋｇ全脂質および８０ｍｇ／ｋｇコアＰＣＬを投与した。データは、各送達系について３匹のマウスからの平均タキソール（登録商標）濃度を示す。図５において示されるように、ＰＣＬ−ｂ−ＰＥＯ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ５５０で被覆されたＰＣＬナノ粒子は、１：１６タキソール／コアＰＣＬ重量比でロードされる場合、静脈内投与後１時間で血漿中タキソール（登録商標）濃度の２倍の増加を示し、そして１：２０の比率でロードされる場合、３倍より大きい増加を示した。
【００９７】
さらに、ＰＣＬ−ｂ−ＰＥＯ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧで安定化されたＰＣＬナノ粒子を調製するために使用された上記された手順を、酢酸エチルの代わりにクロロホルム中でタキソール（登録商標）ストック溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）を調製することによってわずかに変更した。これらの手順はまた、薬物対コアＰＣＬが１：２０の重量比の１００ｎｍナノ粒子を生じた。従って、この調製法は、水と混和する溶媒（例えば、酢酸エチル、ベンジルアルコール）の使用に限定されない。クロロホルム中に可溶でない目的の薬物をまた、これらのナノ粒子内に組み込み得る。
【図面の簡単な説明】
【００９８】
【図１】図１は、ＨＢＳ中でＤＰＰＣ／ＤＳＰＣ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００の脂質組成物（４５：４５：１０のモル比）を有するＰＣＬコアおよびタキソール（登録商標）コアからなるナノ粒子由来のタキソール（登録商標）のインビトロ放出動力学を示すグラフである。
【図２】図２は、血清中でＤＰＰＣ／ＤＳＰＣ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００の脂質組成物（４５：４５：１０のモル比）を有するＰＣＬコアおよびタキソール（登録商標）コアからなるナノ粒子由来のタキソール（登録商標）のインビトロ放出動力学を示すグラフである。
【図３】図３は、雌Ｂａｌｂ／ｃマウスへの、ＤＰＰＣ／ＤＳＰＣ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００の脂質組成物（４５：４５：１０のモル比）およびＤＳＰＣ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００の脂質組成物（９０：１０モル比）を有するＰＣＬコアおよびタキソール（登録商標）コアからなるナノ粒子の静脈内投与の１時間後のタキソール（登録商標）のインビボ濃度を示すヒストグラムである。結果は、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ中で処方されたタキソール（登録商標）に対して比較される。
【図４】図４は、ＤＰＰＣ／ＤＳＰＣ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００（４５：４５：１０のモル比）およびＰＶＡで安定化され、かつＰＣＬコアおよびタキソール（登録商標）コアからなるナノ粒子の大きさを脂質およびＰＶＡ混合物中における脂質（脂質は、ＤＰＰＣ／ＤＳＰＣ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００を含む）の画分の関数として示すグラフである。
【図５】図５は、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ中で処方されたタキソール（登録商標）と比較した、雌Ｂａｌｂ／ｃマウスへの、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ５５０およびＰＣＬ−ｂ−ＰＥＯで安定化されたＰＣＬコアおよびタキソール（登録商標）からなるナノ粒子の静脈内投与の１時間後のタキソール（登録商標）のインビボ濃度を示すヒストグラムである。コアＰＣＬに対する薬物の重量比は、１：１６または１：２０のいずれかである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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