(57)【要約】カロリー摂取、食物摂取、食欲、およびエネルギー消費に影響を及ぼす薬剤を同定するのに有用なスクリーニング法を本明細書に開示する。これらの方法は、肥満を治療するのに有用な薬剤を同定するために使用されるか、または被験者の体重を減少させるために使用できる。これらの方法はまた、食欲不振または悪液質を治療するのに有用な薬剤を同定するために使用でき、食欲を増進するためにおよび被験者の体重および除脂肪体重を増加させるために使用できる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロオピオメラノコルチンニューロンにおいてマーカーを発現しているマウス由来の弓状核の組織学的切片を、試験する薬剤と接触させ、ただし、前記マウスが、プロオピオメラノコルチン核酸配列に作動可能に連結したマーカーをコードした核酸を含む導入遺伝子を含み、ここでの前記プロオピオメラノコルチン核酸配列が、マウスの弓状核におけるプロオピオメラノコルチンニューロンにおいてマーカーの発現を指令すること；および、組織学的切片におけるプロオピオメラノコルチンニューロンの電気生理的応答についてアッセイし、これにより、薬剤がカロリー摂取に影響を及ぼすかどうかを決定することを含む、カロリー摂取に影響を及ぼす薬剤をスクリーニングする方法。
【請求項２】
薬剤が、プロオピオメラノコルチンニューロン上の受容体に特異的に結合する、請求項1記載の方法。
【請求項３】
薬剤が、メラノコルチン受容体またはμ-オピオイド受容体に特異的に結合する、請求項1記載の方法。
【請求項４】
薬剤が、メラノコルチン3受容体に特異的に結合する、請求項3記載の方法。
【請求項５】
薬剤が、ニューロペプチドYニューロン上の受容体に特異的に結合する、請求項1記載の方法。
【請求項６】
薬剤が、Y2受容体に特異的に結合する、請求項5記載の方法。
【請求項７】
電気生理的応答が、電流の誘導、または、プロオピオメラノコルチンニューロンの膜電位の変化を含む、請求項1記載の方法。
【請求項８】
電気生理的応答が、プロオピオメラノコルチンニューロンの脱分極を含む、請求項1記載の方法。
【請求項９】
マーカーが蛍光タンパク質である、請求項1記載の方法。
【請求項１０】
蛍光タンパク質が、緑色蛍光タンパク質である、請求項9記載の方法。
【請求項１１】
電気生理的応答のアッセイ法には、全細胞を記録することが含まれる、請求項1記載の方法。
【請求項１２】
電気生理的応答のアッセイ法には、プロオピオメラノコルチンニューロンの休止膜電位を決定することが含まれる、請求項1記載の方法。
【請求項１３】
電気生理的応答のアッセイ法には、GABAにより媒介される抑制性シナプス後電流を決定すること、または、プロオピオメラノコルチンニューロンの活動電位周波数を決定することが含まれる、請求項1記載の方法。
【請求項１４】
プロオピオメラノコルチン核酸配列が、プロオピオメラノコルチン調節核酸配列、および、マーカーをコードする核酸配列を含む、請求項1記載の方法。
【請求項１５】
薬剤が、ポリペプチド、化合物、塩、または神経伝達物質である、請求項1記載の方法。
【請求項１６】
薬剤がPYYではなく、10より長いアミノ酸長のPYYのポリペプチド断片ではない、請求項1記載の方法。
【請求項１７】
薬剤がポリペプチドではない、請求項1記載の方法。
【請求項１８】
請求項16記載の方法により同定された化合物。
【請求項１９】
請求項17記載の方法により同定された化合物。
【請求項２０】
プロオピオメラノコルチンニューロンにおいてマーカーを発現しているマウス由来の弓状核の組織学的切片を、試験する薬剤と接触させ、ただし、前記マウスが、プロオピオメラノコルチン核酸配列に作動可能に連結したマーカーをコードした核酸を含む導入遺伝子を含み、ここでの前記プロオピオメラノコルチン核酸配列が、マウスの弓状核におけるプロオピオメラノコルチンニューロンにおいてマーカーの発現を指令すること；および、組織学的切片におけるプロオピオメラノコルチンニューロンの電気生理的応答についてアッセイし、これにより、薬剤が食欲に影響を及ぼすかどうかを決定することを含む、食欲に影響を及ぼす薬剤をスクリーニングする方法。
【請求項２１】
薬剤が、プロオピオメラノコルチンニューロン上の受容体に特異的に結合する、請求項20記載の方法。
【請求項２２】
薬剤が、メラノコルチン受容体またはμ-オピオイド受容体に特異的に結合する、請求項20記載の方法。
【請求項２３】
薬剤が、メラノコルチン3受容体に特異的に結合する、請求項22記載の方法。
【請求項２４】
薬剤が、ニューロペプチドYニューロン上の受容体に特異的に結合する、請求項20記載の方法。
【請求項２５】
薬剤が、Y2受容体に特異的に結合する、請求項24記載の方法。
【請求項２６】
電気生理的応答が、電流の誘導、または、プロオピオメラノコルチンニューロンの膜電位の変化を含む、請求項20記載の方法。
【請求項２７】
電気生理的応答が、プロオピオメラノコルチンニューロンの脱分極を含む、請求項20記載の方法。
【請求項２８】
マーカーが蛍光タンパク質である、請求項20記載の方法。
【請求項２９】
蛍光タンパク質が緑色蛍光タンパク質である、請求項28記載の方法。
【請求項３０】
電気生理的応答のアッセイ法には、全細胞を記録することが含まれる、請求項20記載の方法。
【請求項３１】
電気生理的応答のアッセイ法には、プロオピオメラノコルチンニューロンの休止膜電位を決定することが含まれる、請求項20記載の方法。
【請求項３２】
電気生理的応答のアッセイ法には、GABAにより媒介される抑制性シナプス後電流を決定すること、または、プロオピオメラノコルチンニューロンの活動電位周波数を決定することが含まれる、請求項20記載の方法。
【請求項３３】
プロオピオメラノコルチン核酸配列が、プロオピオメラノコルチン調節核酸配列、および、マーカーをコードする核酸配列を含む、請求項20記載の方法。
【請求項３４】
薬剤が、ポリペプチド、化合物、塩、または神経伝達物質である、請求項20記載の方法。
【請求項３５】
薬剤がPYYではなく、10より長いアミノ酸長のPYYのポリペプチド断片ではない、請求項20記載の方法。
【請求項３６】
薬剤がポリペプチドではない、請求項20記載の方法。
【請求項３７】
請求項35記載の方法により同定される化合物。
【請求項３８】
請求項36記載の方法により同定される化合物。
【請求項３９】
プロオピオメラノコルチンニューロンにおいてマーカーを発現しているマウス由来の弓状核の組織学的切片を、試験する薬剤と接触させ、ただし、前記マウスが、プロオピオメラノコルチン核酸配列に作動可能に連結したマーカーをコードした核酸を含む導入遺伝子を含み、ここでの前記プロオピオメラノコルチン核酸配列が、マウスの弓状核におけるプロオピオメラノコルチンニューロンにおいてマーカーの発現を指令すること；および、組織学的切片におけるプロオピオメラノコルチンニューロンの電気生理的応答についてアッセイし、これにより、薬剤が食物摂取に影響を及ぼすかどうかを決定することを含む、食物摂取に影響を及ぼす薬剤をスクリーニングする方法。
【請求項４０】
薬剤が、プロオピオメラノコルチンニューロン上の受容体に特異的に結合する、請求項39記載の方法。
【請求項４１】
薬剤が、メラノコルチン受容体またはμ-オピオイド受容体に特異的に結合する、請求項39記載の方法。
【請求項４２】
薬剤が、メラノコルチン3受容体に特異的に結合する、請求項41記載の方法。
【請求項４３】
薬剤が、ニューロペプチドYニューロン上の受容体に特異的に結合する、請求項39記載の方法。
【請求項４４】
薬剤が、Y2受容体に特異的に結合する、請求項43記載の方法。
【請求項４５】
電気生理的応答が、電流の誘導、または、プロオピオメラノコルチンニューロンの膜電位の変化を含む、請求項39記載の方法。
【請求項４６】
電気生理的応答が、プロオピオメラノコルチンニューロンの脱分極を含む、請求項39記載の方法。
【請求項４７】
マーカーが蛍光タンパク質である、請求項39記載の方法。
【請求項４８】
蛍光タンパク質が緑色蛍光タンパク質である、請求項47記載の方法。
【請求項４９】
電気生理的応答のアッセイ法には、全細胞を記録することが含まれる、請求項39記載の方法。
【請求項５０】
電気生理的応答のアッセイ法には、プロオピオメラノコルチンニューロンの休止膜電位を決定することが含まれる、請求項39記載の方法。
【請求項５１】
電気生理的応答のアッセイ法には、GABAにより媒介される抑制性シナプス後電流を決定すること、または、プロオピオメラノコルチンニューロンの活動電位周波数を決定することが含まれる、請求項39記載の方法。
【請求項５２】
プロオピオメラノコルチン核酸配列が、プロオピオメラノコルチン調節核酸配列、および、マーカーをコードする核酸配列を含む、請求項39記載の方法。
【請求項５３】
薬剤が、ポリペプチド、化合物、塩、または神経伝達物質である、請求項39記載の方法。
【請求項５４】
薬剤がPYYではなく、10より長いアミノ酸長のPYYのポリペプチド断片ではない、請求項39記載の方法。
【請求項５５】
薬剤がポリペプチドではない、請求項39記載の方法。
【請求項５６】
請求項53記載の方法により同定される化合物。
【請求項５７】
請求項54記載の方法により同定される化合物。
【請求項５８】
弓状核の組織学的切片を、試験する薬剤と接触させ、ただし、前記の組織学的切片におけるプロオピオメラノコルチンニューロンが、組織学的切片における他の細胞からプロオピオメラノコルチンニューロンを区別する異種マーカーを発現していること；および、組織学的切片におけるプロオピオメラノコルチンニューロンの電気生理的応答についてアッセイし、これにより、薬剤が、カロリー摂取、食欲、エネルギー消費、または食物摂取に影響を及ぼすかどうかを決定することを含む、カロリー摂取、エネルギー消費、食欲、または食物摂取に影響を及ぼす薬剤をスクリーニングする方法。
【請求項５９】
異種マーカーが、導入遺伝子から発現される、請求項58記載の方法。
【請求項６０】
薬剤が、プロオピオメラノコルチンニューロン上の受容体に特異的に結合する、請求項58記載の方法。
【請求項６１】
薬剤が、メラノコルチン受容体またはμ-オピオイド受容体に特異的に結合する、請求項58記載の方法。
【請求項６２】
薬剤が、メラノコルチン3受容体に特異的に結合する、請求項61記載の方法。
【請求項６３】
薬剤が、ニューロペプチドYニューロン上の受容体に特異的に結合する、請求項58記載の方法。
【請求項６４】
薬剤が、Y2受容体に特異的に結合する、請求項63記載の方法。
【請求項６５】
電気生理的応答が、電流の誘導、または、プロオピオメラノコルチンニューロンの膜電位の変化を含む、請求項58記載の方法。
【請求項６６】
電気生理的応答が、プロオピオメラノコルチンニューロンの脱分極を含む、請求項58記載の方法。
【請求項６７】
異種マーカーが蛍光タンパク質である、請求項58記載の方法。
【請求項６８】
蛍光タンパク質が緑色蛍光タンパク質である、請求項67記載の方法。
【請求項６９】
電気生理的応答のアッセイ法には、全細胞を記録することが含まれる、請求項58記載の方法。
【請求項７０】
電気生理的応答のアッセイ法には、プロオピオメラノコルチンニューロンの休止膜電位を決定することが含まれる、請求項58記載の方法。
【請求項７１】
電気生理的応答のアッセイ法には、GABAにより媒介される抑制性シナプス後電流を決定すること、または、プロオピオメラノコルチンニューロンの活動電位周波数を決定することが含まれる、請求項58記載の方法。
【請求項７２】
プロオピオメラノコルチン核酸配列が、プロオピオメラノコルチン調節核酸配列、および、プロオピオメラノコルチンをコードする核酸配列を含む、請求項58記載の方法。
【請求項７３】
薬剤がPYYではなく、10より長いアミノ酸長のPYYのポリペプチド断片ではない、請求項58記載の方法。
【請求項７４】
薬剤がポリペプチドではない、請求項58記載の方法。
【請求項７５】
請求項73記載の方法により同定される化合物。
【請求項７６】
請求項74記載の方法により同定される化合物。
【請求項７７】
プロオピオメラノコルチンニューロンの生理的応答についてのアッセイ法には、緩く細胞に付着したパッチの記録が含まれる、請求項1記載の方法。
【請求項７８】
プロオピオメラノコルチンニューロンの生理的応答についてのアッセイ法には、緩く細胞に付着したパッチの記録が含まれる、請求項20記載の方法。
【請求項７９】
プロオピオメラノコルチンニューロンの生理的応答についてのアッセイ法には、緩く細胞に付着したパッチの記録が含まれる、請求項39記載の方法。
【請求項８０】
プロオピオメラノコルチンニューロンの生理的応答についてのアッセイ法には、緩く細胞に付着したパッチの記録が含まれる、請求項58記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権の主張
本出願は、2001年9月24日に出願された米国仮特許出願第60/324,406号、および、2002年6月28日に出願された米国仮特許出願第60/392,109号の恩典を主張し、これは共に、その全体が参照として本明細書に組み入れられる。
【０００２】
政府支援についての言明
本発明は、国立衛生研究所からの助成金番号TW001233、PR00163、DK51730、およびDK55819に従って米国政府支援のもとになされた。米国政府は本発明に一部の権利を有する。
【０００３】
分野
本出願は、体重の増加および減少、具体的には、食欲、食物摂取、およびカロリー摂取の調節に使用できる薬剤についてのスクリーニングに関する。肥満および関連疾患を治療するのに使用できる薬剤をスクリーニングする方法を開示する。また、悪液質、食欲不振症、および他のエネルギー恒常性の疾患を治療するのに使用できる薬剤をスクリーニングする方法も開示する。
【背景技術】
【０００４】
背景
米国全国民健康・栄養調査（NHANES III、1988〜1994）によると、米国の男性および女性の3分の1から2分の1が、過体重である。米国では、年齢が20歳またはそれ以上の男性の60％および女性の51％が、過体重または肥満である。さらに、米国では小児が高い比率で過体重または肥満である。
【０００５】
肥満の原因は複雑で複数の要因がある。増えつつある証拠により、肥満は単純な自己管理の問題ではなく、食欲調節およびエネルギー代謝の関与する複雑な疾患であることが示唆されている。さらに、肥満は、個体群における罹患率および死亡率の増加に関連した種々の容態に関連している。肥満の病因は決定的に確立されていないが、遺伝的、代謝的、生化学的、文化的および心理社会的な因子が原因であると考えられている。一般に、肥満は、過剰な体脂肪によって個体の健康が危険な状態に置かれる容態として記載されている。
【０００６】
肥満が、罹患率および死亡率の増加に関連しているという強力な証拠がある。心臓血管疾患リスクおよび2型糖尿病疾患リスクなどの疾患リスクは、体脂肪指数の増加とは独立的に増加する。実際に、このリスクは、BMIが24.9よりも高い1点毎に、男性の心臓疾患リスク5％増加、女性の心臓疾患リスク7％増加として数量化されている（Kenchaiahら、N.Engl.J.Med.347.305、2002；Massie,N、Engl.J.Med.347:358、2002）。さらに、肥満なヒトの体重減少は、重要な疾患リスク因子を減少させるという実質的な証拠がある。過体重および肥満成人の両方における、初期体重の10％などの小さな体重減少でさえ、高血圧、高脂血症、および高血糖などのリスク因子の減少に関連している。
【０００７】
食事療法および運動は体重増加を減少させる簡単なプロセスを提供するが、過体重および肥満個体は、これらの因子を十分に制御して、効果的に体重を減少させることができないことが多い。体重減少手術は、臨床的に重度の肥満である注意深く選択された患者における選択肢である。しかし、これらの治療はハイリスクであり、ほんの限られた数の患者においてしか使用に適していない。限定的な薬物療法が利用可能であり；包括的な体重減少プログラムの一部として使用できるいくつかの体重減少薬物が、食品医薬品局により認可されている。しかし、過体重および肥満被験者において体重減少を奏功するのに使用できる薬剤が依然として必要である。
【０００８】
通常の環境下では、動物およびヒトは、餓えに対して複雑な神経内分泌応答で応答し、これにより、最終的に、食欲は増加し、除脂肪体重の相対的節約および脂肪貯蔵の燃焼が生じ、基礎代謝速度の全体的な減少がもたらされる（WebberおよびMacdonald、1994、Brit.J.Nutr.71:437-447；Ahimaら、1996、Nature 382:250-252）。これに対し、いくつかの疾病では、悪液質として知られる壊滅的で病的な栄養失調状態が生じ、これは、食欲の劇的な減少と、脂肪および除脂肪体重の両方の代謝速度および代謝の増加との相乗的組合せによりもたらされ、除脂肪体重が相対的に消耗される（Tisdale、1997、J.Natl.Cancer Inst.89:1763-1773；Inui、1999、Cancer Res.59:4493-4501；Fongら、1989、Amer.J.Phys.256:R659-R665；Bruera、1997、Brit.Med.J.315:1219-1222；Emery、1999、Nutrition 15:600-603）。この組合せは、癌、嚢胞性線維症、エイズ、関節リウマチ、および腎不全を含む多くの疾患に見出される（Tisdale、1997、同上）。
【０００９】
多くの病気における悪液質の重度は、生活の質および最終的な死亡の両方において、主要な決定因子である場合がある（Tisdale、1997、同上；Larkin、1998、Lancet 351:1336）。実際に、エイズ患者における体重保持は、前記疾病のあらゆる他の指標よりも、生存とのより強力な相関を示す（Kotlerら、1989、Amer.J.Clin.Nutr.50:444-447）。多くの異なる腫瘍型が研究されており、腫瘍を有する動物は、転移または感染ではなくむしろ、悪液質および代謝燃料の枯渇から死亡するというのが一般的な知見である（Svaningerら、1987、J.Natl.Cancer Inst.78:943-950；Emery、1999、Nutrition 15:600-603；Svaningerら、1989、Eur.J.Cancer Clin.Oncol.25:1295-1302；Emeryら、1984、Cancer Res.44:2779-2784）。悪液質は、癌患者、特に小児および高齢の個体に一般に観察される（Bruera、1997、同上）。結果として生じる栄養失調および除脂肪体重の減少は、罹患個体の生活の質を下げ、療法に対する耐容性を低下させ、手術後の合併症を増加することにより、回復を損なう（Larkin、1998、同上；Inui、1999、同上）。
【００１０】
種々の薬剤を用いての悪疫質に対する薬物療法の試みはあまり成功しなかった（Deconnoら、1998、Eur.J Cancer 34:1705-1709；Windischら、1998、Ann.Pharmacother.32:437-445；Rivandeneriaら、1999、Nutr.Cancer 35:202-206；McCarthy、1999、Res.Nurs.Health 22:380-387）。最も広く用いられている薬剤である酢酸メゲストロールは、体重減少を逆転する見込みを示したが、これは主として、除脂肪体重の保存ではなくむしろ、体脂肪量および水分保持の増加に起因するものである（Strang、1997、Anticancer Res.17:657-662）。従って、悪液質の治療に使用でき、食欲不振症などの他の疾患の治療に有用であり得る、新しい薬剤を同定する必要が明らかにある。
【発明の開示】
【００１１】
概要
カロリー摂取、食物摂取、食欲、およびエネルギー消費に影響を及ぼす薬剤を同定するのに有用なスクリーニング法を本明細書に開示する。これらの方法は、肥満を治療するのに有用であるか、または、被験者の体重を減少するのに使用できる薬剤を同定するために使用される。これらの方法はまた、悪液質または食欲不振症を治療するのに有用であるか、または、被験者の体重を増加するのに使用できる薬剤を同定するのに有用である。
【００１２】
カロリー摂取に影響を及ぼす薬剤をスクリーニングする方法を本明細書に開示する。この方法は、プロオピオメラノコルチンニューロンにおいてマーカーを発現しているマウス由来の弓状核の組織学的切片を、試験する薬剤と接触させることを含む。前記マウスは、プロオピオメラノコルチン核酸配列に作動可能に連結したマーカーをコードする核酸を含む導入遺伝子を含み、ここでのプロオピオメラノコルチン核酸配列は、マウスの弓状核におけるプロオピオメラノコルチンニューロンにおいてマーカーの発現を指令する。組織学的切片におけるプロオピオメラノコルチンニューロンの電気生理的応答を評価し、これにより、薬剤がカロリー摂取に影響を及ぼすかどうかを決定する。
【００１３】
食物摂取に影響を及ぼす薬剤をスクリーニングする方法を本明細書に開示する。前記方法は、プロオピオメラノコルチンニューロンにおいてマーカーを発現しているマウス由来の弓状核の組織学的切片を、試験する薬剤と接触させることを含む。前記マウスは、プロオピオメラノコルチン核酸配列に作動可能に連結したマーカーをコードする核酸を含む導入遺伝子を含み、ここでのプロオピオメラノコルチン核酸配列は、マウスの弓状核におけるプロオピオメラノコルチンニューロンにおいてマーカーの発現を指令する。組織学的切片におけるプロオピオメラノコルチンニューロンの電気生理的応答を評価し、これにより、薬剤が食物摂取に影響を及ぼすかどうかを決定する。
【００１４】
食欲に影響を及ぼす薬剤をスクリーニングする方法を本明細書に開示する。前記方法は、プロオピオメラノコルチンニューロンにおいてマーカーを発現しているマウス由来の弓状核の組織学的切片を、試験する薬剤と接触させることを含む。前記マウスは、プロオピオメラノコルチン核酸配列に作動可能に連結したマーカーをコードする核酸を含む導入遺伝子を含み、ここでのプロオピオメラノコルチン核酸配列は、マウスの弓状核におけるプロオピオメラノコルチンニューロンにおいてマーカーの発現を指令する。組織学的切片におけるプロオピオメラノコルチンニューロンの電気生理的応答を評価し、これにより、薬剤が食欲に影響を及ぼすかどうかを決定する。
【００１５】
カロリー摂取、食欲、エネルギー消費、または食物摂取に影響を及ぼす薬剤をスクリーニングする方法を本明細書に開示する。前記方法は、弓状核の組織学的切片を、試験する薬剤と接触させることを含む。組織学的切片におけるプロオピオメラノコルチンニューロンは、組織学的切片における他の細胞からプロオピオメラノコルチンニューロンとを区別する異種マーカーを発現している。組織学的切片におけるプロオピオメラノコルチンニューロンの電気生理的応答を評価し、これにより、薬剤がカロリー摂取、食欲、エネルギー消費、または食物摂取に影響を及ぼすかどうかを決定する。
【００１６】
前記および他の特徴および利点は、添付図面を参照して進行する、以下のいくつかの態様の詳細な説明からより明らかとなると思われる。
【００１７】
配列表
添付配列表に列挙した核酸配列およびアミノ酸配列は、37C.F.R.1.822に定義されているように、ヌクレオチド塩基については標準的な文字略称を使用して、アミノ酸については3文字コードを使用して示す。各々の核酸配列の一方の鎖のみを示すが、相補鎖も、示した鎖を参照することにより含められると理解される。
【００１８】
詳細な説明
I．略称
α-MSH：αメラノコルチン刺激ホルモン
Arc：視床下部の弓状核
CPP：m-CPP塩酸塩、1-(3-クロロフェニル)ピペラジン
5-HT2B/2C受容体アゴニスト
d-FEN：フェンフルラミン
EPSP：興奮性シナプス後電位
GABA：γアミノ酪酸
GFP、EGFP：緑色蛍光タンパク質、増強緑色蛍光タンパク質
IPSC：抑制性シナプス後電流
kb：キロベース
kg：キログラム
MOP-R：μ-オピオイド受容体
MK：MK212塩酸塩、すなわち、6-クロロ-2-(1-ピペラジニル)ピラジン
5-HT2Cセロトニン受容体アゴニスト
MV：ミリボルト
nPOMC1：神経POMC調節エレメント1
nPOMC2：神経POMC調節エレメント2
NPY：ニューロペプチドY
pmol：ピコモル
POMC：プロオピオメラノコルチン
RIA：ラジオイムノアッセイ法
RPA：RNase保護アッセイ法
s.e.m.：平均値の標準誤差
TH：チロシンヒドロキシラーゼ
μM：マイクロモル
V：ボルト
Y2A：N-アセチル(Leu28、Leu31）NPY(24-36)
【００１９】
II．用語
特記しない限り、専門用語は慣用的な使用法に従って使用する。分子生物学における一般的な用語の定義は、Benjamin Lewin、Genes V、オックスフォード大学プレス出版、1994（ISBN0-19-854287-9）；Kendrewら（編）、The Encyclopedia of Molecular Biology、Blackwell Science Ltd.出版、1994（ISBN0-632-02182-9）；およびRobert A.Meyers（編）、Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference、VCH Publishers,Inc.出版、1995（ISBN1-56081-569-8）に見出し得る。
【００２０】
この開示の種々の態様の総説を平易にするために、以下の特定の用語の説明を記載する。
【００２１】
活動電位：
ニューロンの軸索に沿って、多くの筋肉細胞および腺細胞の表面膜上で加速する、急速に伝播する電気的メッセージ。軸索では、それらは短時間であり、一定速度で移動し、一定の振幅を維持する。中枢神経系の全ての電気的メッセージと同様に、活動電位は、膜中のイオンチャネルを通るイオンの流れにより引き起こされる膜電位変化である。1つの態様において、活動電位は、ナトリウム透過性の再現性の波である。
【００２２】
薬剤：
任意のポリペプチド、化合物、小分子、有機化合物、塩、ポリヌクレオチド、または目的とする他の分子。
【００２３】
動物：
生存している多細胞脊椎生物、このカテゴリーには例えば哺乳類および鳥類が含まれる。哺乳類という語は、ヒトおよび非ヒト哺乳類の両方が含まれる。同様に、「被験者」という語には、ヒトおよび獣の被験者の両方が含まれる。
【００２４】
食欲不振症：
食物への食欲の欠失または減少。1つの態様において、食欲不振症は、「神経性食欲不振症」の結果である。これは、女性が主に患う摂食障害であり、通常、青年期に始まり、通常の最小体重を維持するのも拒絶し、体重が増えることまたは肥満になることを強く恐れ、極めてやつれている場合でさえある領域が太っているまたは脂肪があると感じさせる体重イメージの撹乱、自己評価において体重または体型に対して過度に信頼しすぎる、および無月経を特徴とする。伴う特徴には、病気の否定および精神療法に対する抵抗、うつ症状、性欲の顕著な低下、および執着または風変わりな食物に関する挙動、例えば買いだめなどが含まれることが多い。疾患は、体重減少が主に食事療法または運動により達成される制限型と、むちゃ食いまたは気晴らし食い挙動も定期的に生じるむちゃ食い／気晴らし食い型という、2つのサブタイプに分けられる。
【００２５】
アンタゴニスト：
生物学的応答を惹起することなく細胞受容体に結合して、このような応答を惹起し得る物質の結合を遮断する薬剤として、別の物質の作用を無しにする傾向がある物質。
【００２６】
食欲：
食物に対する自然な願望または渇望。1つの態様において、食欲は、食物に対する願望を評価する調査により測定する。食欲増加により、一般に、摂食挙動は増加する。
【００２７】
食欲抑制剤：
食物に対する願望を減少させる化合物。商業的に入手可能な食欲抑制剤には、アンフェプラモン（ジエチルプロピオン）、フェンテルミン、マジンドール、およびフェニルプロパノールアミン、フェンフルラミン、デクスフェンフルラミン、およびフルオキセチンが含まれるがこれに限定されない。
【００２８】
結合：
2つの分子が相互作用するような2分子間の特異的相互作用。結合は特異的および選択的であり得、よって、1つの分子が、別の分子と比べて優先的に結合する。1つの態様において、特異的結合は、解離定数（Kd）により同定される。
【００２９】
肥満度指数（BMI）：
時にはケトレー指数とも呼ばれる、体重を測定するための数学式。BMIは、体重（kg）を身長2（m2）で割ることにより計算する。「正常」として受け入れられている男性および女性の両方の現在の標準は、20〜24.9kg/m2のBMIである。1つの態様において、25kg/m2より大きなBMIは、肥満被験者を同定するために使用できる。グレードIの肥満は、25〜29.9kg／m2のBMIに対応する。グレードIIの肥満は、30〜40kg／m2のBMIに対応し；グレードIIIの肥満は、40kg/m2より大きなBMIに対応する（Jequier、Am.J.Clin.Nutr. 45:1035-47、1987）。理想的な体重は、身長、体液、骨構造、および性別に基づき種間および個体間で変化する。
【００３０】
c-fos：
FBJ（Finkel-Biskis-Jinkins）およびFBRネズミ骨肉腫ウイルス（MSV）に見出されるウイルスv-fos発癌遺伝子の細胞相同体。ヒトfos遺伝子は、染色体14q21〜q31に位置づけられる。ヒトfosはTIS-28として同定されている。
【００３１】
c-fosは、シグナル伝達、細胞増殖、および分化において重要な役割を果たすと考えられている。それは、他の転写因子（例えば、jun）との組合せで、遺伝子発現のトランス活性化調節因子として作用する、核タンパク質である。c-fosは、増殖因子に対する細胞の初期応答に重要な役割を果たしていると考えられる、即時初期応答遺伝子である。c-fosはまた、胚造血細胞および神経細胞の細胞増殖および分化の制御にも関与している。ヒトc-fosをコードするアミノ酸および核酸配列は既知である（例えば、Vermaら、Cold Spring Harb.Symp.Quant.Biol.51、949、1986；GenBankアクセッション番号K00650およびM16287を参照し、インターネットでも入手可能）。
【００３２】
悪液質：
慢性疾患過程に関連していることの多い一般的な身体的消耗および栄養失調。悪液質は、癌、エイズ、または他の疾病に罹患した患者に頻繁に見られる。悪液質は、1）悪性腫瘍の症例に見られる、癌性悪液質；2）通常、カロリー消費増加とカロリー摂取もしくは利用の減少の組合せにより引き起こされる、心臓病に起因する痩せである、心臓性悪液質；3）フッ素沈着症に見られるフッ素悪疫質；4）下垂体悪液質；5）ろう、性的機能の消失、下垂体標的腺の萎縮、徐脈、低体温、感情鈍麻、および昏睡を含む、下垂体線の機能の完全な欠乏から生じる一群の症状である、下垂体除去性悪液質；6）重度のマラリアの前駆発作から生じる慢性の一群の物理的兆候である、マラリア性悪液質；7）慢性水銀中毒に見られる水銀性悪液質；8）下垂体悪液質；9）慢性鉛中毒に見られる鉛性悪液質；10）アジソン病に伴う副腎性悪液質；および11）進行した腎不全の他の全身症状に伴う尿毒症性悪液質を含むがこれに限定されない。
【００３３】
カロリーの摂取またはカロリー摂取：
個体により消費されるカロリー（エネルギー）の数。
【００３４】
カロリー：
食物の測定単位。標準的なカロリーは、4.184絶対ジュール、すなわち、1gの水の温度を15℃から16℃に上昇するのに必要なエネルギーの量として定義され（すなわち、1gの水の温度を1気圧で0℃から100℃に上昇するのに必要なエネルギーの100分の1の量）、食物カロリーは実際には1,000標準カロリーに等しい（1食物カロリー＝1キロカロリー）。
【００３５】
保存的変異：
アミノ酸残基を別の生物学的に類似した残基により置換。保存的変異の例は、イソロイシン、バリン、ロイシン、またはメチオニンなどの1つの疎水性残基を、別の残基で置換すること、または、1つの極性残基を別の残基で置換すること、例えばアルギニンをリジンで、グルタミン酸をアスパラギン酸で、またはグルタミンをアスパラギンなどで置換することが含まれる。「保存的変異」という語はまた、非置換親アミノ酸の代わりに、置換アミノ酸を使用することを含み、ただし、置換ポリペプチドに対して産生された抗体は、非置換ポリペプチドとも免疫反応する。
【００３６】
保存的アミノ酸置換の非制限的な例は、以下に列挙したものを含む。
2005514008.tif 000002
【００３７】
電流：
単位時間あたりの電荷の量。電流は、活動電位によりまたは細胞膜におけるイオンチャネルの開口により、ニューロンの細胞膜において発生し、隣接する膜領域を脱分極または過分極するように作用する。
【００３８】
欠失：
DNAなどの核酸配列の除去であって、両側の領域が一緒に連結される。
【００３９】
DNA（デオキシリボ核酸）：
DNAは、大半の生存している生物の遺伝子材料を含む長鎖ポリマーである（ウイルスの中には、リボ核酸RNAを含むものもある）。DNAポリマー中の反復単位は4つの異なるヌクレオチドであり、その各々が、リン酸基が付着しているデオキシリボース糖に結合している4つの塩基、すなわちアデニン、グアニン、シトシン、およびチミンの1つを含む。DNA分子中のコドンと称されるヌクレオチドの三塩基組は、ポリペプチド中のアミノ酸をコードする。コドンという語はまた、mRNA（これへとDNA配列が転写される）中の3つのヌクレオチドの対応する（および相補的な）配列に使用される。
【００４０】
脱分極：
細胞の膜電位の上昇。ある刺激は、形質膜を横切る電荷を減少させる。これらは電気的刺激（これは電位開口型チャネルを開口または閉口する）、機械的刺激（これは機械的開口型チャネルを活性化する）、またはある神経伝達物質（これはリガンド作動性チャネルを開口する）であり得る。各々の場合において、ナトリウムの細胞への拡散促進は、細胞上のその部位での休止電位を増加させ、興奮性シナプス後電位（EPSP）を作製する。脱分極はまた、抑制性シナプス後電流（IPSC）の周波数を減少させることにより起こすことができ、これらは塩化物イオンの細胞への流入を促進してIPSCを作製する抑制性神経伝達物質に起因する。脱分極はまた、いくつかのイオンチャネルを閉口することにより誘導できる。電位を閾値電圧（哺乳動物のニューロンでは約-50mV）まで増加すれば、通常、活動電位が細胞において生じる。
【００４１】
糖尿病：
内因性のインスリン欠乏および／またはインスリン感受性の欠陥により、細胞がその膜を横切って内因性グルコースを輸送できないこと。糖尿病は、インスリンを不十分にしか分泌できない、または、標的組織のインスリン耐性に因り、炭水化物、タンパク質、および脂肪の代謝が損なわれた慢性症候群である。インスリン依存性糖尿病（IDDM、I型）および非インスリン依存性糖尿病（NIDDM、II型）という2つの主要な形態で起こり、これらは病因、病理、遺伝学、発症年齢、および治療において異なる。
【００４２】
2つの主要な形態の糖尿病は、両方共に、グルコース恒常性の制御に必要とされる量および正確なタイミングでインスリンを送達できないことにより特徴づけられる。I型糖尿病、すなわちインスリン依存性糖尿病（IDDM）は、β細胞の破壊（これにより、内因性インスリンレベルは不十分となる）により引き起こされる。II型糖尿病、すなわち非インスリン依存性糖尿病は、インスリンに対する生体の感受性の欠陥およびインスリン生成の相対的欠乏の両方により生じる。
【００４３】
電気穿孔法：
電場を適用して細胞壁を可逆的に透過性とすることにより、細胞が巨大分子を取り込むように誘導または可能とする方法。使用される種々の方法および装置が、米国特許第4,695,547号；米国特許第4,764,473号；米国特許第4,882,28号；および米国特許第4,946,793号；米国特許第4,906,576号；米国特許第4,923,814号；および米国特許第4,849,089号に定義および記載されている。
【００４４】
真核細胞：
核膜により結合した組織化された核を有する細胞。これらには、酵母、粘菌などのより単純な生物だけでなく、無脊椎動物、脊椎動物、および哺乳動物などの多細胞生物由来の細胞も含まれる。多細胞生物には、多種多様な細胞型、例えば、内皮細胞、平滑筋細胞、上皮細胞、肝細胞、神経冠起源の細胞、腫瘍細胞、造血細胞、免疫細胞、T細胞、B細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞、線維芽細胞、ケラチノサイト、神経細胞、グリア細胞、脂肪細胞、筋芽細胞、筋細胞、軟骨芽細胞腫、軟骨細胞、骨芽細胞、骨細胞、破骨細胞、分泌細胞、内分泌細胞、卵母細胞、および精母細胞が含まれる。これらの細胞型は、標準的な組織学テキスト、例えばMcCormack、「Introduction to Histology」（著作権）1984、J.P.Lippincott Co.による；Wheaterら編、「Functional Histology」、第2版、（著作権）1987、Churchill Livingstoneによる；Fawcettら編、BloomおよびFawcett：「A Textbook of Histology」、（著作権）1984、WilliamおよびWilkinsによるに記載されている。
【００４５】
遺伝子：
ポリペプチドまたはタンパク質の作製に必要な制御配列およびコード配列を含むDNA配列。ポリペプチドは、全長コード配列により、または、ポリペプチドの所望の活性の少なくとも一部が保持される限り、いくつかの態様ではコード配列の任意の部分によりコードされ得る。「外来遺伝子」は、実験操作により動物のゲノムに導入される任意の核酸（例えば遺伝子配列）であり、導入遺伝子が、天然遺伝子と比べていくつかの修飾（例えば点突然変異、選択マーカー遺伝子の存在、非天然調節配列、または非天然位置においてゲノムに組み込まれた天然配列など）を含む限り、その動物に見られる遺伝子配列を含むことができる。
【００４６】
食物摂取：
個体により消費される食物の量。食物摂取は、容量によりまたは重量により測定できる。1つの態様において、食物摂取は、個体により消費される食物の全量である。別の態様において、食物摂取は、個体の、タンパク質、脂肪、炭水化物、コレステロール、ビタミン、ミネラル、または任意の他の食物成分の量である。「タンパク質摂取」は、個体により消費されるタンパク質の量を意味する。同様に、「脂肪摂取」、「炭水化物摂取」、「コレステロール摂取」、「ビタミン摂取」、および「ミネラル摂取」は、個体により消費される、タンパク質、脂肪、炭水化物、コレステロール、ビタミン、またはミネラルの量を意味する。
【００４７】
過分極：
細胞の膜電位の減少。抑制性神経伝達物質は、過分極により神経インパルスの伝達を抑制する。この過分極は、抑制性シナプス後電位（IPSP）と呼ばれる。過分極はまた、イオンチャネルの開口または閉口によっても引き起こされ得る。細胞の閾値電圧は変わらないが、過分極細胞は、閾値に達するのにより強い興奮刺激を必要とする。
【００４８】
抑制性シナプス後電位：
シナプス後細胞の電気生理的パラメータを抑制する電流。シナプス後細胞の電位を解析して、シナプス前細胞に対する作用を決定できる。1つの態様において、シナプス後細胞は、電圧固定形態で保持され、シナプス後電流を記録する。必要であれば、他のクラスの電流のアンタゴニストを添加できる。1つの特定の非制限的な実施例において、GABA作動性IPSCを記録するために、興奮性チャネルまたは受容体の遮断剤を添加できる。その後、時間に対する即時周波数を決定する。
【００４９】
1つの態様において、IPSCにより、NPYニューロンからのGABA遊離の周波数が測定される。従って、NPYニューロンはPOMCニューロン上にGABAを遊離するので、IPSC周波数の測定は、POMCニューロンが受けている抑制性緊張のゲージであり、PYYのアンタゴニストまたはアゴニストなどの、NPYニューロンに影響を及ぼす薬剤の作用を評価するのに使用できる。
【００５０】
イントロン：
成熟RNA分子に発現されない真核細胞における遺伝子内核酸配列。本開示のイントロンには、全長イントロン配列、またはその一部分、例えば全長イントロン配列の一部が含まれる。
【００５１】
インビトロでの増幅：
試料または標本中の核酸分子のコピー数を増加する技術。増幅の一例はポリメラーゼ連鎖反応であり、ここでは、被験者から回収した生物学的試料を、一対のオリゴヌクレオチドプライマーと、試料中の核酸鋳型へのプライマーのハイブリダイゼーションが可能な条件下で接触させる。プライマーは、適切な条件下で伸長し、鋳型から解離し、その後、再度アニーリングし、伸長し、解離して、核酸のコピー数を増幅する。インビトロでの増幅産物は、標準的な技術を使用する電気泳動、制限エンドヌクレアーゼ切断パターン、オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションまたはライゲーション、および／または核酸配列決定により、特徴づけ得る。インビトロでの増幅技術の他の例には、標準的な鎖置換増幅（米国特許第5,744,311号を参照されたい）；転写を含まない等温増幅（米国特許第6,033,881号を参照されたい）；修復連鎖反応増幅（国際公開公報第90/01069号を参照されたい）；リガーゼ連鎖反応増幅（欧州特許第EP-A-320 308号を参照されたい）；ギャップ充填リガーゼ連鎖反応増幅（米国特許第5,427,930号を参照されたい）；連結リガーゼ検出およびPCR（米国特許第6,027,889号を参照されたい）；およびNASBA（商標）RNA転写を含まない増幅（米国特許第6,025,134号を参照されたい）が含まれる。
【００５２】
単離：
単離された生物学的成分（例えば核酸、ペプチド、またはタンパク質）は、前記成分が天然に存在する生物の細胞中の他の生物学的成分、すなわち他の染色体および染色体外DNAおよびRNA、ならびにタンパク質から実質的に分離されているか、それとは離れて産生されるか、またはそれを含まないように精製されている。単離された核酸、ペプチド、およびタンパク質には、標準的な精製法により精製された核酸およびタンパク質が含まれる。この用語はまた、宿主細胞において組換え発現により調製された核酸、ペプチド、およびタンパク質、ならびに、化学的に合成された核酸が包含される。
【００５３】
マーカー：
タンパク質を産生する細胞を同定するためにシステムを使用できる、タンパク質、またはタンパク質をコードする遺伝子。マーカーの特定の非制限的な例には、薬剤耐性マーカー、例えばG418またはハイグロマイシンが含まれる。さらに、マーカーは、陰性選択を使用して、マーカーを発現している細胞を同定できる、タンパク質またはタンパク質をコードする遺伝子であり得る。陰性選択の特定の非制限的な例には、HSV-tk遺伝子が含まれるがこれに限定されない。この遺伝子により、細胞は、アシクロビルまたはガンシクロビルなどの薬剤に感受性となる。選択マーカーの別の特定の非制限的な例は、タンパク質、または、タンパク質をコードする遺伝子であり、例えば、蛍光活性化細胞選別（FACS）によりマーカーの過剰発現を選択するために、細胞表面マーカーを使用することにより選択を行なうことができる。選択マーカーの別の特定の非制限的な例は、その蛍光特性または酵素特性に基づいて細胞において同定できる、タンパク質、または、タンパク質をコードする遺伝子である。特定の非制限的な例には、増強緑色蛍光タンパク質（EGFP）、アルカリホスファターゼ、または西洋ワサビペルオキシダーゼが含まれるがこれに限定されない。マーカーはまた、ポリペプチドまたはその抗原性エピトープであり得、ここで、ポリペプチドに特異的に結合する抗体を使用して、ポリペプチドまたは抗原性エピトープを発現する細胞を同定できる。有用なポリペプチドの1つの特定の非制限的な例は、ヒト成長ホルモン（hGH）である。
【００５４】
膜電位：
外部浴溶液などの環境に関して細胞の内部の電位。当業者は、慣用的な全細胞技術を使用するなどにより、細胞の膜電位を容易に評価できる。細胞の活性化は、より負の少ない膜電位を伴う（例えば約-50mVから約-40mVへのシフト）。これらの電位変化は、活動電位が生じる可能性を増加し、従って、活動電位の頻度は増加する。
【００５５】
活動電位の頻度は、慣用的な全細胞利用を使用して、または、穿孔パッチ全細胞および細胞付着立体配置を使用するなどの多くのアプローチを使用して評価できる。各事象において、絶対的電圧または電流は評価せず、むしろ活動電位に特徴的な急速な偏位の周波数を時間の関数として評価する（それ故、この周波数は、「bins」として報告される瞬時周波数である）。この時間成分は、PYYアゴニストなどの化合物を、PYYアゴニストなどの化合物の活動電位発火率に対する作用を解析するために浴に適用する、時間に関連し得る。
【００５６】
ニューロペプチドY（NPY）：
哺乳動物の脳で同定されたニューロペプチドである36アミノ酸ペプチド。NPYは、中枢および末梢神経系の両方で重要な調節因子であると考えられ、精神運動活性、食物摂取、中枢内分泌、および心臓血管系における血管作動性に対する作用を含む、多種多様な生理的パラメータに影響を及ぼす。高濃度のNPYが、冠脈管、脳脈管、および腎脈管に供給する交感神経に見出され、血管収縮の原因となっている。NPY結合部位は、脾臓、腸膜、脳、大動脈平滑筋、腎臓、精巣、および胎盤を含む、多種多様な組織で同定されている。さらに、結合部位は、多くのラットおよびヒトの細胞系で報告されている。
【００５７】
ニューロペプチドY（NPY）受容体は、膵臓ポリペプチドファミリー内に構造／活性相関を有する。このファミリーは、ニューロンで主に合成されるNPY；腸の内分泌細胞により主に合成されるペプチドYY（PYY）；および、膵臓の内分泌細胞により主に合成される膵臓ポリペプチド（PYY）を含む。これらの36アミノ酸ペプチドは、ペプチドの中間に「PP畳み」と称されるアミノ酸構造を含む、緻密ならせん構造を有する。
【００５８】
NPYは、Y1、Y2、Y3、Y4（PP）、Y5、Y6、およびY7受容体を含むいくつかの受容体に結合する。これらの受容体は、結合親和性、薬理、および配列（既知の場合）に基づいて認識される。全てではないが大半のこれらの受容体はGタンパク質共役受容体である。Y1受容体は、一般に、シナプス後であると考えられ、末梢においてニューロペプチドYの既知の作用の多くを媒介する。最初は、この受容体は、ニューロペプチドYのC末端断片（例えば13〜36断片）に対して親和性が低いと記載されていたが、全長ニューロペプチドYおよびペプチドYYと同等の親和性で相互作用する（例えば、国際公開公報第93/09227号を参照されたい）。
【００５９】
薬理学的には、Y2受容体は、ニューロペプチドYのC末端断片に親和性を示すことによりY1とは区別される。Y2受容体は、ニューロペプチドY（13〜36）の親和性により区別されることが最も多いが、ニューロペプチドYおよびペプチドYYの3〜36断片により、親和性および選択性の向上が得られる（Dumontら、Society for Neuroscience Abstracts、19:726、1993を参照されたい）。Y1およびY2受容体の両方を介したシグナル伝達は、アデニル酸シクラーゼの阻害に共役している。Y-2受容体への結合はまた、N型カルシウムチャネルの選択的阻害により、シナプスにおけるカルシウムの細胞内レベルを減少することが判明した。さらに、Y-2受容体は、Y1受容体のように、セカンドメッセンジャーに対して差次的な共役を示す（米国特許第6,355,478号を参照されたい）。Y2受容体は、海馬、黒質外側、視床、視床下部、および脳幹を含む、多種多様な脳領域に見出される。ヒト、ネズミ、サル、およびラットのY2受容体がクローニングされている（米国特許第6,420,352号および米国特許第6,355,478号を参照されたい）。
【００６０】
Y2受容体アゴニストは、Y2受容体に優先的に結合し、細胞内シグナル伝達を刺激する、ペプチド、小分子、または化合物である。1つの態様において、Y2受容体のアゴニストは、NPYと等しいまたはNPYより高い親和性で受容体を結合する。別の態様において、アゴニストは、別の受容体に結合するのと比較して、Y2受容体に選択的に結合する。
【００６１】
当業者は、所与の化合物の解離定数（Kd）値を容易に決定できる。この値は、試験した化合物の選択性に依存する。例えば、10nMより低いKdを有する化合物が、一般に、優れた薬物候補と考えられる。しかし、特定の受容体に対してより低い親和性を示すが、選択的である化合物もまた、良好な薬物候補であり得る。1つの特定の非制限的な例において、競合アッセイ法などのアッセイ法を使用して、目的の化合物がY2受容体アゴニストであるかどうかを決定する。ニューロペプチドY受容体アンタゴニストを評価するのに有用なアッセイ法も当技術分野において公知である（例えば米国特許第5,284,839号（これは参照として本明細書に組み入れられる）およびWalkerら、Journal of Neuroscience、8:2438-2446、1988を参照されたい）。
【００６２】
通常の1日の食事：
所与の種の個体における平均的な食物摂取。通常の1日の食事は、カロリー摂取、タンパク質摂取、炭水化物摂取、および／または脂肪摂取によって表される。ヒトの通常の1日の食事は、一般に、以下を含む：約1,500、約1,800、約2,000、約2,400、または約2,800から有意により高いカロリー。さらに、ヒトの通常の1日の食事は、一般に、約12gから約45gのタンパク質、約120gから約610gの炭水化物、約11gから約90gの脂肪を含む。低カロリー食は、ヒト個体の通常のカロリー摂取の85％以下、好ましくは70％以下である。
【００６３】
動物では、カロリーおよび栄養必要量は、動物の種および体格に応じて変化する。例えば、ネコでは、1ポンドあたりの総カロリー摂取、ならびに、タンパク質、炭水化物、および脂肪の分布率は、ネコの年齢および生殖状態により変化する。しかし、ネコに関する一般的なガイドラインは40cal／lb／日（18.2cal/kg/日）である。約30％から約40％がタンパク質で、約7％から約10％が炭水化物に由来し、約50％から約62.5％が脂肪摂取に由来する。当業者は、任意の種の個体の通常の1日の食事を容易に同定できる。
【００６４】
肥満：
過剰な体脂肪によりヒトが健康上の危険な状態に置かれ得る状態（BarlowおよびDietz、Pediatrics 102:E29、1998；国立衛生研究所、米国心肺血液研究所（NHLBI）、Obes.Res.6（補刊2）：51S-209S、1998を参照されたい）。過剰な体脂肪は、エネルギー摂取とエネルギー支出の不均衡の結果である。1つの態様において、肥満度指数（BMI）を使用して、肥満を評価する。1つの態様において、BMIが25.0kg/m2から29.9kg/m2であれば過体重であり、一方、BMIが30kg/m2であれば肥満である。
【００６５】
別の態様において、腰周りを使用して肥満を評価する。この態様において、男性では102cmまたはそれ以上の腰周りが肥満と考えられ、女性では89cmまたはそれ以上の腰周りが肥満と考えられる。強力な証拠により、肥満が、個体の罹患率および死亡率の両方に影響を及ぼすことが示される。例えば、肥満個体は、とりわけ、心臓病、非インスリン依存性（2型）糖尿病、高血圧、卒中、癌（例えば子宮体癌、乳癌、前立腺癌、および結腸癌）、異脂肪血症、胆嚢疾患、睡眠時無呼吸、受精率の低下、および骨関節炎のリスクが増加している（Lyznickiら、Am.Fam.Phys.63:2185、2001を参照されたい）。
【００６６】
オリゴヌクレオチド：
約200までのヌクレオチド塩基長の線状ポリヌクレオチド配列、例えば、少なくとも6ヌクレオチド、例えば少なくとも15ヌクレオチド、50ヌクレオチド、100ヌクレオチド、またはさらには200ヌクレオチドの長さのポリヌクレオチド（例えばDNAまたはRNA）。
【００６７】
作動可能に連結：
第一核酸配列が、第二核酸配列と機能的な関係に配置されている場合に、第一核酸配列は第二核酸配列と作動可能に連結している。例えば、プロモーターは、プロモーターがコード配列の転写または発現に影響を及ぼす場合にコード配列に作動可能に連結している。一般に、作動可能に連結したDNA配列は連続的であり、2つのタンパク質コード領域を連結するために必要である場合には同じリーディングフレームにある。
【００６８】
過体重：
その理想の体重よりも重い個体。過体重個体は肥満である可能性があるが、必ずしも肥満ではない。1つの態様において、過体重個体は、その体重を減少させたいと望む任意の個体である。別の態様において、過体重個体は、BMIが25.0kg/m2から29.9kg/m2である個体である。
【００６９】
膵臓ポリペプチド：
PYYおよびNPYに対する相同性を有する膵臓により産生される、36アミノ酸ペプチド。
【００７０】
末梢投与：
中枢神経系外への投与。末梢投与は、脳への直接投与を含まない。末梢投与には、血管内、筋肉内、皮下、吸入、経口、直腸、経皮、または鼻腔内投与が含まれるがこれに限定されない。
【００７１】
ポリペプチド：
モノマーがアミド結合を介して共に連結されているアミノ酸残基である、ポリマー。アミノ酸がα-アミノ酸である場合、L-光学異性体またはD-光学異性体を使用でき、L-異性体が好ましい。本明細書に使用したような「ポリペプチド」または「タンパク質」という語は、任意のアミノ酸配列を包含し、糖タンパク質などの修飾配列を含むものとする。「ポリペプチド」という語は、特に、天然タンパク質ならびに組換えまたは合成的に作製されたものを網羅するものとする。「ポリペプチド断片」という語は、ポリペプチドの一部分、例えば、受容体への結合における少なくとも1つの有用な配列を示す断片を意味する。「ポリペプチドの機能的断片」という語は、ポリペプチドの活性を保持したポリペプチドの全ての断片を意味する。生物学的に機能的なペプチドはまた、目的のペプチドが、その所望の活性を減少させない別のペプチドに融合している、融合タンパク質を含むことができる。
【００７２】
プロモーター：
核酸の転写を指令する核酸制御配列のアレイ。1つの態様において、プロモーターは、転写開始部位の近くに必要な核酸配列、例えばポリメラーゼII型プロモーターの場合、TATAエレメントを含む。別の態様において、プロモーターはエンハンサーを含む。別の態様において、プロモーターはリプレッサーのエレメントを含む。エンハンサーおよびリプレッサーエレメントは、転写開始部位に必要な配列に隣接または遠位に位置することができ、転写開始部位から数千塩基対もの場所に位置することができる。
【００７３】
プロモーターは、RNAの転写を高いレベルで、例えばプロモーターの転写活性が、細胞内の全ての転写の転写活性の約25％を占めるようなレベルで促進する、「強力な」プロモーターであり得る。プロモーターの強度は、組織特異的であることが多く、従って、細胞型により異なり得る。例えば、CMVは、古典的な強力なプロモーターである。なぜなら、多くの細胞型において高いレベルの転写活性を生じるからである。
【００７４】
他の態様において、プロモーターは「組織特異的プロモーター」であり。これは、単細胞型または狭い範囲の組織において転写を促進する。1つの態様において、組織特異的プロモーターは、下垂体における発現を促進するが、他の組織における発現は促進しない。さらなる態様において、組織特異的プロモーターは視床下部における発現を促進するが、他の組織における発現は促進しない（例えば心臓、肺、膵臓、腸、皮膚など）。
【００７５】
他の態様において、プロモーターは「最小」プロモーターであり、これは、作動可能に連結したエンハンサー配列の非存在下において非常に低い内因性転写活性を有する。最小プロモーターは、固有な細胞特異的または組織特異的活性を有さないが、細胞特異的または組織特異的エンハンサー配列に作動可能に連結した場合には複数の真核細胞型において転写開始を指令し得るプロモーターである。最小プロモーターの1つの特異的で非制限的な例は、単純ヘルペスウイルスI型チミジンキナーゼ（HSV1-tk）の最小プロモーター配列である。
【００７６】
プロオピオメラノコルチン（POMC）：
分子量31kDaのタンパク質のグリコシル化タンパク質。POMCは、下垂体前葉において主に合成されるが、視床下部および脳幹においても見出される。このタンパク質は前駆タンパク質であり、POMCの翻訳後プロセシングにより、特異的切断時に数個の神経活性ペプチドが生じる。POMCコード配列は、副腎皮質刺激（ACTH）ホルモンおよびβ-リポトロピンのアミノ酸配列を含む。ACTHはプロセシングを受けて、コルチコトロピンに似た中葉ペプチドであるタンパク質のメラニン細胞刺激ホルモン（msh）を産生する。β-リポトロピンはプロセシングを受けて、タンパク質のα-リポトロピン、β-エンドルフィン、β-メラニン細胞刺激ホルモン（MSH）、およびmet-エンケファリンを産生する。POMCのアミノ末端断片は、γ-MSHペプチドファミリーに、および、副腎皮質細胞の推定分裂促進的刺激活性を有するペプチドにプロセシングされる。POMC由来ペプチドの生物活性は、組織特異的に、アミノ末端アミノ酸残基のアセチル化により、および／または、酵素ペプチジル-α-モノオキシゲナーゼ（PAM）によるカルボキシ末端アミノ酸残基のアミド化によりさらに調節される。
【００７７】
POMC遺伝子（ヒト染色体2p23）は、3つのエキソンおよび2つの大きなイントロンを含む：1つは約3.5kbであり、エキソン3に大半がコードされる共通前駆体のN末端断片を中断する。エキソン2は、mRNAの5’非翻訳部分の一部の配列、前駆タンパク質の小胞体への挿入を指令する全てのシグナル配列、および、N末端断片の8アミノ酸を含む。POMC遺伝子におけるイントロンおよびエキソンの全体的な配置は、全ての哺乳動物種においてほぼ同一である。POMC遺伝子転写のホルモン制御およびPOMC前駆体から得られるペプチド産物の遊離は組織特異的であり；例えば、グルココルチコイドは特異的に下垂体前葉を阻害するが、下垂体中葉POMC転写を阻害しない。
【００７８】
精製：
精製という語は、絶対的な純度を必要とせず；むしろ、相対的用語として捉えられる。従って、例えば、精製タンパク質調製物は、前記タンパク質が細胞内の天然環境にある前記タンパク質よりも純粋であるものである。このようなタンパク質は、例えば、標準的な精製技術、または組換え発現により作製できる。いくつかの態様において、タンパク質の調製物は、タンパク質が調製物の全タンパク質含量の少なくとも50％、例えば少なくとも70％を占めるように精製されている。
【００７９】
PYY：
任意の種から得られたまたは由来のペプチドYYポリペプチド。従って、PYYは、ヒト全長ポリペプチド（配列番号：1に示したような）およびPYYの種の変種（例えばネズミ、ハムスター、ニワトリ、ウシ、ラット、およびイヌPYYを含む）を含む。1つの態様において、PYYアゴニストは、NPYを含まない。「PYYアゴニスト」は、PYYに特異的に結合する受容体に結合し、PYYの作用を誘発する任意の化合物である。1つの態様において、PYYアゴニストは、食物摂取、カロリー摂取、エネルギー消費または食欲に影響を及ぼす、および／またはY受容体アッセイ法で特異的に結合するか、または、標識PYYを用いた競合的結合アッセイ法などでPYYとの結合を競合する化合物である。PYYアゴニストは、Y2受容体に結合する化合物を含むがこれに限定されない。
【００８０】
組換え体：
組換え核酸は、天然ではない配列を有するもの、または、2つの別様の方法で分離された配列セグメントを人口的に組換えることにより作製された配列を有するものである。この人工的組合せは、化学的合成により、またはより一般的には、核酸の単離セグメントの人口的操作により、例えばSambrookら（「Molecular Cloning：A Laboratory Mannual」、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク、1989）に記載のような遺伝子工学技術により達成されることが多い。
【００８１】
配列同一性：
アミノ酸配列間の類似性は、言い換えれば配列同一性と称される、配列間の類似性によって表される。配列同一性は、同一率（または類似性または相同性）に関して頻繁に測定され；より比率が高いほど、2つの配列は類似している。POMC配列の相同体またはバリアントは、標準的な方法を使用して整列化した場合、比較的高度の配列同一性を有する。
【００８２】
比較のために配列を整列化する方法は、当技術分野において公知である。種々のプログラムおよびアライメントアルゴリズムがSmithおよびWaterman、Adv.Appl.Math.2:482:1981；NeedlemanおよびWunsch、J.Mol.Biol.48:443、1970；PearsonおよびLipman、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85:2444、1988；HigginsおよびSharp、Gene 73:237、1988；HigginsおよびSharp、CABIOS 5:151、1989；Corpetら、Nucleic Acids Research 16:10881、1988；およびPearsonおよびLipman、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85:2444、1988に記載されている。Altschulら、Nature Genet.、6:119、1994は、配列アライメント法および相同性計算の詳細な考察を提示する。
【００８３】
NCBI基本局所アライメント探索ツール（BLAST）（Altschulら、J.Mol.Biol.215:403、1990）は、配列解析プログラムblastp、blastn、blastx、tblastnおよびtblastxに関連して使用するための、生物工学情報センター（NCBI、MD州ベテスダ）およびインターネットを含む数個のソースから入手可能である。このプログラムを使用して配列同一性をどのように決定するかの記載は、インターネット上のNCBIウェブサイトで入手可能である。100またはそれ以上のヌクレオチドの遺伝子内DNAの相同性領域を同定するために特別に設計された配列アライメントプログラムの他の特定の非制限的な例は、PIPMakerおよびDOTTERである。
【００８４】
POMC配列の相同体およびバリアントは、一般的には、デフォルトパラメータに設定されたNCBI Blast2.0を使用して、最初のPOMC配列を用いて全長アライメントにおよび計測された、少なくとも75％、例えば少なくとも80％、90％、95％、98％、または99％の配列同一性の保有により特徴づけられる。このような短い窓について配列同一性を決定する方法は、インターネット上のNCBIウェブサイトで入手可能である。当業者は、これらの配列同一性範囲は単に指針のために提供されることを理解し；提供された範囲外に該当する強力に有意な相同体も得られることが完全に可能である。
【００８５】
実質的に精製：
天然に会合している他のタンパク質、脂質、炭水化物、または他の材料を実質的に含まないポリペプチド。例えば、ポリペプチドは、天然に会合している他のタンパク質、脂質、炭水化物、または他の材料を少なくとも50％、80％、または90％含まない場合がある。
【００８６】
治療有効量：
疾患の進行を予防するか、または疾患の退行を引き起こすか、または、疾患の兆候または症状を寛解できるに十分な用量。いくつかの態様において、PYYまたはそのアゴニストの治療効果は、体重増加を阻害または停止するのに十分な量、または、食欲を減退するのに十分な量、または、カロリー摂取もしくは食物摂取を減少またはエネルギー消費を増加するのに十分な量である。
【００８７】
形質導入およびトランスフェクト：
ウイルスまたはベクターは、それが核酸を細胞中に導入する場合に、細胞を形質導入またはトランスフェクトする。細胞は、DNAが、細胞ゲノムへの核酸の取り込みにより、または、エピソーム複製により、細胞に安定に複製されるようになった場合に、細胞に形質導入された核酸により「形質転換」される。本明細書に使用したような形質導入およびトランスフェクトという語は、ウイルスベクターによるトランスフェクション、プラスミドベクターによるトランスフェクション、および電気穿孔法、リポフェクション、注入、および粒子銃加速による裸DNAの導入を含む、核酸分子がこのような細胞に導入され得る全ての技術を包含する。
【００８８】
導入遺伝子：
外来遺伝子を、胚幹（ES）細胞、新しく受精した卵または初期胚に導入することにより生物中に配置された、外来遺伝子。1つの態様において、導入遺伝子は、遺伝子配列であり、例えば、当業者に既知の方法を使用して検出できるマーカーポリペプチドをコードする配列である。別の態様において、導入遺伝子は、疾患の症状を軽減または寛解するのに使用できる治療ポリペプチドをコードする。さらに別の態様において、導入遺伝子は、治療に有効なオリゴヌクレオチド、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチドをコードし、オリゴヌクレオチドの発現は、標的核酸配列の発現を阻害する。さらなる態様において、導入遺伝子は、アンチセンス核酸またはリボザイムをコードする。さらに別の態様において、導入遺伝子は終止カセットである。
【００８９】
他の態様において、導入遺伝子は、導入遺伝子に作動可能に連結した調節配列を含む（例えばプロモーター、例えばPOMCプロモーター）。従って、導入遺伝子は、マーカーなどのポリペプチドをコードする核酸配列に作動可能に連結した調節配列を含むことができる。
【００９０】
トランスジェニック細胞：
外来の非天然DNAを含む細胞。
【００９１】
トランスジェニック動物：
その細胞の1つまたは複数に人工的に導入されたDNAを有する、動物、例えば非ヒト動物、例えばマウス。例えば、これは、一般的に無作為な組込みまたは標的化挿入によりなされる。DNAは、無作為に、それを受精卵の前核に注入することにより組込むことができる。この場合、DNAは、ゲノムのどの場所にも組込むことができ、複数のコピーが頭から尾の様式で組込まれることが多い。注入されたDNAと宿主ゲノムの間に相同性は必要ない。
【００９２】
トランスジェニック動物を作製する他の一般的な方法である標的化挿入は、DNAを胚幹（ES）細胞に導入し、DNAが一致ゲノム配列により相同的組換えを受けた細胞を選択することにより達成される。これが生じるためには、外来DNAとゲノムDNAの間に数キロ塩基の相同性が存在することが多く、陽性選択マーカーが含まれることが多い。さらに、陰性選択マーカーをしばしば使用して、非相同的組換え（無作為挿入）によりDNAを取り込んだ細胞に対して選択する。
【００９３】
ベクター：
細胞に導入され、これにより形質転換細胞が作製されるような核酸分子。ベクターは、複製起点のように細胞中での複製を可能とする核酸配列を含むことができる。ベクターはまた、1つまたは複数のマーカーまたは治療導入遺伝子および当技術分野において既知の他の遺伝子エレメントを含むことができる。
【００９４】
いくつかの態様において、ベクターは、細菌ベクターのように非ウイルスベクターである。他の態様において、ベクターはウイルスベクターである。ウイルスベクターの例には、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、およびヘルペスウイルスベクターが含まれるがこれに限定されない。
【００９５】
電圧：
ボルトで表わされる、電位または電位差。
【００９６】
特記しない限り、本明細書に使用した全ての専門用語および科学用語は、この開示が属する技術分野の当業者により一般的に理解される意味と同じ意味を有する。単数形の「1つの（a）」、「1つの（an）」、および「その（the）」は、他に明記しない限り、複数の言及も含む。同様に、「または」という語は、他に明記しない限り「および」も含むものとする。核酸またはポリペプチドに与えられた、全ての塩基サイズまたはアミノ酸サイズ、および全ての分子量または分子量値はおよそであり、説明のために記載されると理解される。本明細書に記載したものと類似または同等な方法および材料を、本開示の実践または試験に使用できるが、適切な方法および材料を以下に記載している。「含む（comprise）」という語は、「含む（includes）」を意味する。本明細書に記載した全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献の全体は参照として本明細書に組み入れられる。矛盾する場合には、用語の説明を含む本明細書により調整される。さらに、材料、方法、および実施例は単に説明のためであり、限定するものではない。
【００９７】
スクリーニング法
カロリー摂取、食物摂取、食欲、および／またはエネルギー消費に影響を及ぼす薬剤をスクリーニングする方法を本明細書に開示する。この方法は、プロオピオメラノコルチン（POMC）ニューロンにおいてマーカーを発現する非ヒト動物由来の弓状核の組織学的切片を、試験する薬剤と接触させることを含む。マーカーの発現により、プロオピオメラノコルチンニューロンは弓状核の他のニューロン（および他の細胞）から区別され、よって電気生理的測定をPOMCニューロンにおいて行なうことができる。POMCニューロンの電気生理的パラメータを測定する。治療有効量の薬剤を被験者に投与した場合に、薬剤が食欲、カロリー摂取、食物摂取、またはエネルギー消費に対して作用を及ぼすかどうかが、このパラメータに対する薬剤の作用により示される。
【００９８】
1つの態様において、POMCニューロンを、弓状核内の全ての他の細胞から区別するために、POMC核酸配列に作動可能に連結したマーカーをコードする核酸を含む導入遺伝子を含む非ヒト動物を作製する。POMC核酸配列は、非ヒト動物の弓状核のPOMCニューロンにおけるマーカーの発現を指令する。マーカーは、蛍光マーカー（例えば緑色蛍光タンパク質、エクオリア・ビクトリア（Aequoria victoria）、またはデスコソーマDSレッド（Discosoma DSRed））、抗原マーカー（例えばヒト成長ホルモン、ヒトインスリン、ヒトHLA抗原）、細胞表面マーカー（例えばCD4、または任意の細胞表面受容体）、または酵素マーカー（例えばlacZ）を含むがこれらに限定されない任意のマーカーであり得る。
【００９９】
マーカーをコードするcDNAは、弓状核のPOMCニューロンにおいてマーカーの発現を指令するPOMC調節配列などの、目的の調節配列の転写制御下および翻訳制御下で、適切な読み枠において融合できる。前記配列は、POMC遺伝子の調節配列およびコード配列、およびその適切な断片を含むがこれに限定されず、ここでの調節および／またはコードPOMC配列は、弓状核のPOMCニューロンにおけるマーカーの発現を指令する。有用なPOMC配列の特定の非制限的な例は、マウスまたはヒトPOMC遺伝子を含むがこれに限定されない、種々の長さまたは欠失の哺乳動物POMC遺伝子の5’隣接配列を有する導入遺伝子を含むがこれに限定されない。有用なPOMC配列の特定の非制限的な例は、ネズミ、ヒト、ウシ、ハムスター、およびウサギPOMC配列を含むがこれに限定されない。欠失、挿入、および付加などを含むがこれに限定されない、これらのPOMC配列のバリアントも、これらのバリアントが弓状核への発現を指令する限り有用である。1つの態様において、POMC配列は、nPOMC1、mPOMC2配列、および／またはPOMCプロモーター（以下の実施例の章を参照されたい）を含むことができる。nPOMC1およびnPOMC2における相同性領域を図10に示す。1つの態様において、有用なPOMC配列は、nPOMC1およびnPOMC2およびPOMCプロモーターを含み、対応する元来のPOMC配列に対して少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも98％、または少なくとも99％相同である。さらに、このような配列は点突然変異を含むことができる。ヒト、雌ウシ、ハムスター、マウス、ウサギ、およびラットnPOMC1およびnPOMC2領域の相同性領域を図10に示す。当業者はこの情報を使用して、目的の適切な配列を容易に設計することができる。例えば、保存領域（黒で示す）は保持できるが、非保存領域（灰色または白で示す）は置換できる。他の例示的な配列を、以下の実施例の章に記載する。
【０１００】
この構築物をベクターに導入して産物を作成でき、これはその後、例えば慣用的な方法に従って細菌ベクター中での調製により増幅される（例えば、Sambrookら、「Molecular Cloning：A Laboratory Mannual」、コールドスプリングハーバープレス、1989を参照されたい）。増幅構築物は、その後、ベクターから切り出し、トランスジェニック動物の作製に使用するために精製される。
【０１０１】
動物が任意の非ヒト動物である限り、任意の動物が本明細書に開示した方法に有用であり得る。「非ヒト動物」は、非ヒト霊長類、家畜、例えば、イノシシ、畜牛、および家禽、スポーツ動物またはペット、例えばイヌ、ネコ、ウマ、ハムスター、げっ歯類、または動物園の動物、例えばライオン、トラ、またはクマを含むがこれに限定されない。1つの特定で非制限的な例において、非ヒト動物は、例えばトランスジェニックのマウス、雌ウシ、ヒツジ、またはヤギを含むがこれに限定されないトランスジェニック動物である。
【０１０２】
トランスジェニック動物は、組換えDNAが動物の細胞に含まれるように、組換えウイルスを用いたマイクロインジェクションまたは感染などにより、細胞下レベルでの作為的な遺伝子操作により直接的または間接的に受け取られた遺伝情報を有する細胞を含む。この分子は、動物の染色体内に組込むことができるか、または、酵母人工染色体中に工学操作されるように、染色体外複製DNA配列として含めることができる。トランスジェニック動物は、遺伝情報が生殖系列細胞に取り込まれて組み込まれ、それ故、情報を子孫に移行する能力が付与されるような「生殖細胞系」トランスジェニック動物であり得る。このような子孫が事実、その情報のいくつかまたは全部を有する場合、それらもトランスジェニック動物である。
【０１０３】
トランスジェニック動物は、当業者により容易に作製できる。例えば、トランスジェニック動物は、ポリヌクレオチドが成熟動物の生殖系列細胞のDNAに安定に組み込まれ、正常なメンデル様式で遺伝されるように、マーカーをコードする単一細胞胚DNAに導入することにより作製できる。胚マイクロ操作の技術の進歩により、異種DNAを受精哺乳動物卵に導入できる。例えば、全能性または多能性幹細胞を、マイクロインジェクション、リン酸カルシウムにより媒介される沈降、リポソーム融合、レトロウイルス感染、または他の手段により形質転換でき、その後、形質転換細胞を胚に導入し、その後、胚はトランスジェニック動物へと発達する。1つの非制限的な方法において、発達中の胚を、所望のDNAを含むレトロウイルスで感染させ、トランスジェニック動物を感染胚から作製する。
【０１０４】
別の特定の非制限的な例において、適切なDNA（群）を、好ましくは単細胞段階において、胚の前核または細胞質に注入し、胚を成熟トランスジェニック動物へと発達させる。これらの技術は公知である。例えば、異種DNAを哺乳動物（マウス、ブタ、ウサギ、ヒツジ、ヤギ、雌ウシ）受精卵にマイクロインジェクトする標準的な実験手順の総説には以下が含まれる：Hoganら、マウス胚の操作、コールドスプリングハーバープレス、1986；Krimpenfortら、Bio/Technology 9:86、1991；Palmiterら、Cell 41:343、1985；Kraemerら、「Genetic Manipulation of the eary Mammalian Embryo」、コールドスプリングハーバーラボラトリープレス、1985；Hammerら、Nature、315:680、1985；Purcelら、Science、244:1281、1986；Wagnerら、米国特許第5,175,385号；Krimpenfortら、米国特許第5,175,384号。
【０１０５】
POMCニューロンにおいてマーカーを発現している非ヒト動物由来の弓状核の組織学的切片を、当業者に既知の方法を使用して調製し、前記切片を目的の試験剤と接触させる。その後、POMCニューロンの電気生理的パラメータを評価する。適切な電気生理的パラメータには、POMCニューロンの膜電位の過分極および／またはPOMCニューロンのIPSCの増加が含まれるがこれに限定されない。1つの非制限的な例において、POMCニューロンの膜電位の過分極を引き起こし、POMCニューロンにおけるIPSCを増加させるアゴニストが選択される。
【０１０６】
当業者は、ニューロン発火率、膜電圧、脱分極、活動電位、およびIPSC頻度を容易に評価できる。例示的方法は、以下の実施例の章に記載する。しかし、本明細書に開示した方法は、実施例の章に記載した装置および測定に限定されない。例えば、Dagan器具（MN州ミネアポリス）またはHeka Elektronik（ドイツのLambrecht/Pfalz）により製造された装置などであるがこれに限定されない、任意の電気生理増幅器を用いることができる。
【０１０７】
1つの態様において、薬剤で処理したPOMCニューロンにおける、膜電位、活動電位頻度、および／またはIPSCの周波数を対照と比較する。適切な対照には、薬剤の非存在下で緩衝液のみと接触させた切片、IPSCの周波数、活動電位頻度に影響を及ぼすか、または、POMCニューロンの膜電位を変化させることが知られる薬剤、または、IPSC、活動電位頻度、またはPOMCニューロンの膜電位に対して作用を及ぼすことが知られる薬剤などの、対照薬剤との試料の接触を含むがこれに限定されない。
【０１０８】
1つの特定の非制限的な例において、弓状核の切片を薬剤と接触させ、POMCニューロンの膜電位に対する効果を測定する。この例において、約2から約50mVの膜電位の変化は、薬剤が、食物摂取、カロリー摂取、食欲、および／またはエネルギー消費に影響を及ぼすことを示す。別の特定で非制限的な例において、IPSC周波数の変化を測定する。この例において、IPSC周波数の変化を測定する。この例において、約2％から10倍の増加のIPSC周波数の変化、または完全なIPSCの停止は、薬剤が、食物摂取、カロリー摂取、食欲、および／またはエネルギー消費に影響を及ぼすことを示す。別の態様において、POMCニューロンの活動電位頻度の変化を測定する。この例において、約2％から完全に停止する活動電位頻度の変化、または、約1倍、約2倍、約20倍、約50倍、または約100倍より高いまたは同等な活動電位頻度の変化は、薬剤が、食物摂取、カロリー摂取、食欲、および／またはエネルギー消費に影響を及ぼすことを示す。または、POMCニューロンの発火無しから活性への変化は、薬剤が、食物摂取、カロリー摂取、食欲、および／またはエネルギー消費に影響を及ぼすことを示す。活性を測定する他のアプローチは、c-fosの発現の解析を含むがこれに限定されない。
【０１０９】
当業者は、本明細書に開示した方法から得られたデータを評価する上で有用な統計学的解析を容易に同定できる。統計学的解析は、再現性の試験のように標準であり、例えば分散分析であるか、または、ウィルコクソン符号順位検定を、例えばp<0.05を含むがこれに限定されない適切な信頼レベルを使用して実施する。
【０１１０】
とりわけ、例えば、イオン流入（例えばカリウム流入）、酵素活性化（例えばセリン／トレオニンキナーゼ）、サイクリックヌクレオチドの変化（例えばcAMP、cADP、cGMP、cGDPなど）であるがこれに限定されないPOMCニューロンのパラメータも測定できることに留意すべきである。シグナル伝達事象の特定の非制限的な例は、POMCニューロンと薬剤の相互作用後のK＋流入の発生である。測定可能な特性が細胞の物理的パラメータに応答して変化する任意の化合物である「生理的指標」を使用して、シグナル伝達事象を測定できる。測定可能な特性の1つの特定の非制限的な例は、イオン流入に応答した生理的指標の蛍光の変化である。
【０１１１】
蛍光は、細胞の生理的パラメータを検出する手段として使用できる1つのスペクトル特性である。「蛍光特性」は、適切な励起波長におけるモル吸光係数、蛍光量子効率、励起スペクトルまたは発光スペクトルの形状、最大励起波長および最大発光波長、2つの異なる波長における励起振幅率、2つの異なる波長における発光振幅比、励起状態寿命、または蛍光異方性を意味する。対照細胞と比較した、薬剤と接触させた細胞間のこれらの特性のいずれか1つにおける測定可能な差異は、化合物を目的のものとして同定するのに十分である。測定可能な差異は、任意の定量的な蛍光特性の量、例えば、特定の波長における蛍光量、または発光スペクトルにおよぶ蛍光の積分を決定することにより決定できる。最適には、生理的指標は、容易に区別できる蛍光特性を有するように選択する。有用な蛍光指標の特定の非制限的な例は、fura-2である。このダイは、細胞内カルシウムを測定する。細胞内カルシウムの増加は、ニューロン活性の増加の指標であり、細胞内カルシウムの減少は、ニューロン活性の減少の指標である。
【０１１２】
任意の薬剤を本明細書に開示した方法を使用してスクリーニングでき、それが食欲、食物摂取、カロリー摂取、および／またはエネルギー代謝に影響を及ぼすかどうかを決定できる。適切な試験剤には、POMCニューロン上またはNPYニューロン上または両方の上にある受容体に結合する、または結合すると疑われる薬剤が含まれるがこれに限定されない。POMCニューロン上の受容体には、メラノコルチン受容体、μ-オピオイド受容体、レプチン受容体、およびインスリン受容体が含まれるがこれに限定されない。NPYニューロン上の受容体には、Y2受容体、レプチン受容体、インスリン受容体、メラノコルチン受容体、またはオピオイド受容体が含まれるがこれに限定されない。1つの特定で非制限的な例において、薬剤は受容体アゴニストであるか、または、受容体アゴニストであることが疑われる。別の特定の非制限的な例において、薬剤はY2受容体アゴニストであるか、または、Y2受容体アゴニストであることが疑われる。
【０１１３】
1つの特定の非制限的な例において、薬剤は、NPYニューロンまたはPOMCニューロンの受容体のアンタゴニストである。従って、薬剤は、Y2受容体のアンタゴニストであり得るが、これに限定されない。POMCニューロンの電気生理的特性を測定する。POMCニューロンにおけるIPSC周波数の増加、POMCニューロンの過分極、および／またはPOMCニューロンの活動電位発火率の減少として測定されるような、NPYニューロンの活性増加は、アンタゴニストが、摂食行動の増加において有用であることを示す。理論に縛られることはなく、Y2アンタゴニストなどのアンタゴニストは、Y2Rにより媒介されるこれらニューロンの緊張阻害を減少することによりNPYニューロンを刺激でき、従って、食欲不振および悪液質の治療に有用である。従って、本明細書に記載した方法は、食欲、食物摂取、カロリー摂取を増加させ、エネルギー消費を減少させる薬剤をスクリーニングするのに使用できる。
【０１１４】
本明細書に開示した方法を使用して試験できる薬剤には、とりわけ、ポリペプチド、化合物；生物学的薬剤、例えばポリペプチド、サイトカイン、および小分子、ペプチド模倣体；抗体：および合成リガンドが含まれるが、これに限定されない。受容体アゴニストおよびアンタゴニストをスクリーニングできる。
【０１１５】
「インキュベート」は、試験化合物と組織学的切片の間の接触を可能とする条件を含む。「接触」は、溶液中および固相を含む。試験化合物は、複数の化合物をスクリーニングするためのコンビナトリアルライブラリーであり得る。本発明の方法で同定された化合物は、固相支持体への結合後に溶液中で、PCR、オリゴマー制限（Saikiら、Bio/Technology 3:1008-1012、1085）、対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチド（ASO）プローブ解析（Connerら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.80:278、1983）、オリゴヌクレオチドライゲーションアッセイ法（OLA）（Landegrenら、Science 241:1077、1988）などの特異的DNA配列の検出に通常適用される任意の方法により、さらに、評価、検出、クローニング、配列決定などをすることができる。DNA解析の分子技術が概説されている（Landegrenら、Science 242:229-237、1988）。
【０１１６】
受容体アゴニスト（またはアンタゴニスト）の結合親和性も、受容体を発現している細胞または膜調製物において決定できる。例えば、標識リガンドを使用したアッセイ法を用いる。多くの標識が有用であると以前に示されている（例えばとりわけ放射能標識、蛍光標識）。候補化合物を、適切な緩衝媒体に加える。インキュベートして確実に結合させた後、表面を洗浄して、アッセイ媒体の非特異的に結合した成分、特に任意の非特異的に結合した標識リガンドを除去し得、表面に結合した任意の標識を決定する。標識は定量的に測定し得る。標準物質を使用することにより、候補化合物の相対結合親和性を決定できる。
【０１１７】
本明細書に開示した方法を使用してスクリーニングした後、さらなる試験を、動物モデルまたは臨床試験で行ない、食物摂取、カロリー摂取、食欲、またはエネルギー消費に影響を及ぼす薬剤を確認できる。例示的なインビボでのアッセイ法は、以下の実施例の章に記載されている。しかし、当業者は、代わりのインビボアッセイ法または臨床試験を容易に設計できる。
【０１１８】
PYYアゴニスト
PYYアゴニストは、本明細書に開示した方法を使用してスクリーニングでき、PYYアゴニストがカロリー摂取、食物摂取、食欲、および／またはエネルギー代謝に影響を及ぼすかどうかを決定できる。PYYアゴニストは、PYYに特異的に結合する受容体に結合しPYYの効果を惹起する分子である。本明細書に開示した方法を使用してスクリーニングできる適切なPYYアゴニストには、Y受容体アッセイ法において特異的に結合するか、または、標識PYYを用いた競合結合アッセイ法においてPYYと結合を競合する化合物が含まれる。適切なPYYアゴニストには、Y2受容体に結合する化合物が含まれるがこれに限定されない。
【０１１９】
従って、1つの態様において、弓状核においてNPYニューロンと結合し、NPYニューロンに対して電気生理的効果を生じる、PYYアゴニストを、本明細書に開示した方法を使用して選択する。NPYニューロンに対する電気生理的効果は、POMCニューロンに対するさらなる電気生理的効果を生じ得る。従って、1つの特定で非制限的な例では、POMCニューロンの膜電位の脱分極を引き起こすPYYアゴニストを本明細書に開示した方法を使用して選択する。別の特定の非制限的な例では、POMCニューロンにおいてIPSCの減少および／またはPOMCニューロンの活性増加を引き起こすPYYアゴニストを、本明細書に開示した方法を使用して選択する。いくつかの非制限的な例において、POMCニューロンの膜電位の過分極、POMCニューロンにおけるIPSCの増加を引き起こすアゴニストを、本明細書に開示した方法を使用して選択する。
【０１２０】
1つの態様において、これらのPYYアゴニストは、NPYを含まない。別の特定の非制限的な例において、NPYニューロンに結合するが、血液／脳関門は通過しないPYYアゴニストを、本明細書に開示した方法を使用して試験する。PYYがその効果を奏功する弓状核ニューロンは、血液／脳関門により保護されず、従って、末梢で利用可能な分子は容易に到達可能である。さらに、Y2受容体を発現する他の脳部位は、血液／脳関門により保護されている。理論に縛られることはなく、弓状Y2Rに結合できるが、末梢投与後に血液／脳関門は通過しない薬剤を、本明細書に開示した方法を使用して選択する。1つの態様において、薬剤が血液脳関門を通過できる能力は、薬剤を被験者に末梢投与した後に薬剤が弓状核においてc-fosの発現を誘導できるかにより評価される。
【０１２１】
本明細書に開示した方法を使用してスクリーニングできるPYYおよびアゴニストには、PYYおよびそのアゴニスト（例えば突然変異体、断片および／またはバリアント）のアミノ酸配列を含む、または代替的にこれらからなるポリペプチドが含まれるがこれに限定されない。バリアントには、欠失、挿入、反転、反復、および置換が含まれる（例えば保存的置換および非保存的置換；例えば前記の表1および2を参照されたい）。2つ以上のアミノ酸（例えば2、3、4、5、6、7、8、9、10など）を欠失もしくは挿入または別のアミノ酸で置換できる。一般的には保存的置換は、脂肪族アミノ酸Ala、Val、Leu、およびIleの間の互いの置換；ヒドロキシ残基を含むSerとThrの交換、酸性残基AspとGluの交換、アミド残基AsnとGlnの交換、塩基性残基LysとArgの交換、芳香族残基PheとTyrの交換、および小サイズのアミノ酸Ala、Ser、Thr、Met、およびGlyの交換である。
【０１２２】
別の例として、ポリペプチド断片は、アミノ（N）末端またはカルボキシル（C）末端または両方からの連続した一連の欠失残基を含み得る（例えば以下の表1および2を参照されたい）。1から24の範囲の任意の数のアミノ酸を、N末端、C末端または両方から欠失できる。
【０１２３】
さらに、本明細書に開示した方法を使用してスクリーニングしたアゴニストのポリペプチドには、PPYおよび／またはそのアゴニストのアミノ酸配列の内部欠失を含む、または代替的にこれらからなるポリペプチドが含まれるがこれに限定されない（以下の表2を参照されたい）。このような欠失は、1つまたは複数のアミノ酸残基欠失（例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10など）を含み得、任意のアミノ酸位置（例えば2、3、4、5、6、7、8、9、10など）において始まり得る。さらに、1つまたは複数のこのような内部欠失を含むポリペプチドをスクリーニングできる。このような欠失は、PPY、NPY、およびPPにおいて作成することができる。
【０１２４】
Y2受容体に高い親和性および／または選択性を有するPPY、NPY、および／またはPPキメラであるアゴニストペプチドのスクリーニングも考えられる。これらのキメラは、PPY、NPY、および／またはPP、そのバリアント、突然変異体および／または欠失に由来する1つまたは複数のアミノ酸（例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10など）の、第二PPY、NPY、またはPP、そのバリアント、突然変異体および／または欠失に由来する1つまたは複数のアミノ酸（例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10など）によるアミノ酸置換を含み得る。これらの置換は、任意のアミノ酸位置（例えば、2、3、4、5、6、7、8、9、10など）で始まり得る。
【０１２５】
1つの態様において、本明細書に開示した方法を使用してスクリーニングする薬剤は、Y2受容体に選択的である。すなわち、それらは他の受容体（例えばY1、Y2、Y3、Y4、Y5、およびY6）と比べて高い親和性でY2受容体に結合する。別の態様において、ペプチドは、Y1、Y3、Y4、およびY6受容体よりも、Y2およびY5受容体に選択的である。
【０１２６】
スクリーニングできる他のポリペプチド断片は、本開示のポリペプチドの構造的ドメインまたは機能的ドメインを含む断片である。このような断片は、ポリプロリン-II型へリックス（残基1〜8）、β-ターン（残基9〜14）、両親媒性α-へリックス（残基15〜32）および／またはC末端ターン構造（残基33〜36）を含むアミノ酸残基を含む。Kirbyら、J.Med.Chem.36:385-393、1993を参照されたい。
【０１２７】
さらに、本開示は、PPY、NPY、およびPP種バリアント（以下の表1を参照されたい）、および／またはその突然変異体および断片のアミノ酸配列を含む、または代替的にこれらからなるポリペプチドまたはアゴニストをスクリーニングすることを含む。
【０１２８】
食欲、カロリー摂取、食物摂取、および／またはエネルギー消費を減少させるのに有用な融合タンパク質を同定するために、PYYまたはPYYアゴニストが、当技術分野において既知の組換え法を使用して別のタンパク質またはポリペプチド（融合パートナー）に融合している、融合タンパク質のスクリーニングも考えられる。これらの融合タンパク質は、任意の既知の方法により合成的に合成できる。任意の既知のペプチドまたはタンパク質を、融合パートナーとして使用できる（例えば血清アルブミン、炭酸脱水酵素、グルタチオン-S-トランスフェラーゼ、またはチオレドキシンなど）。このような融合タンパク質は、融合パートナーのカルボキシ末端を、PYYまたはアゴニストペプチドのアミノ末端に連結またはその逆により設計できる。選択的には、切断可能なリンカー領域は、PYYまたはPYYアゴニストを融合パートナーに連結して使用でき、これによりインビボで切断でき、活性型のPYYまたはPYYアゴニストが遊離される。このような切断領域の例には、リンカー領域D-D-D-D-Y（配列番号：330）、G-P-R（配列番号：331）、A-G-G（配列番号：332）、およびH-P-F-H-L（配列番号：333）が含まれるがこれに限定されず、これは、エンテロキナーゼ、トロンビン、ユビキチン切断酵素およびレニンによりそれぞれ切断可能である。例えば、米国特許第6,410,707号を参照されたい。
【０１２９】
米国特許第5,026,685号；米国特許第5,574,010号；米国特許第5,604,203号；米国特許第5,696,093号；米国特許第6,046,167号に記載のようなY2特異的ペプチドアゴニストであるPYYアゴニストのスクリーニングも考えられる。
【０１３０】
本明細書に開示したアッセイ法を使用してスクリーニングできるPPYアゴニストは、以下のように本明細書に記載する。
【０１３１】
（表１）PYY：種間の変化
2005514008.tif 000003
【０１３２】
（表２）PYYのペプチドアゴニスト
2005514008.tif 000004
【０１３３】
PYY（3〜36）の変化型
2005514008.tif 000005
を含むがこれに限定されない、PYYのN末端欠失。
【０１３４】
2005514008.tif 000006
【０１３５】
NPYの変化型
2005514008.tif 000007
を含むがこれに限定されないNPYのN末端欠失。
【０１３６】
2005514008.tif 000008
を含むがこれに限定されない内部欠失。
【０１３７】
2005514008.tif 000009
を含むがこれに限定されない追加の内部欠失突然変異体。
【０１３８】
2005514008.tif 000010
を含むがこれに限定されないNPYの環式アゴニスト。
【０１３９】
D-アミノ酸置換体：
2005514008.tif 000011
【０１４０】
他のNPYアゴニストおよび類似体
2005514008.tif 000012
2005514008.tif 000013
【０１４１】
PPの変化型
2005514008.tif 000014
を含むがこれに限定されないN末端欠失。
【０１４２】
（表３）PYYの保存的アミノ酸置換の例
2005514008.tif 000015
2005514008.tif 000016
2005514008.tif 000017
2005514008.tif 000018
【０１４３】
PYY(24-36)突然変異として含まれるのはまた、これらの任意の3つの突然変異体と、PYY(25-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれかとの組合せから生じるポリペプチド変化型（アミノ酸配列変化型）であり、例えば、[Lys25]PPY(24-36)(
2005514008.tif 000019
)は、配列番号：36の突然変異と配列番号：145の組合せから得られる。
【０１４４】
PYY(23-36)の点突然変異
2005514008.tif 000020
【０１４５】
PYY(23-36)突然変異として含まれるのはまた、これらの2つの突然変異体いずれかと、PYY(25-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれか、および／または、PYY(24-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれかとの組合せから生じるポリペプチド変化型（アミノ酸配列変化型）であり、例えば、[Lys25]PPY(23-36)
2005514008.tif 000021
は、配列番号：36からの突然変異と配列番号：148の組合せから生じる。
【０１４６】
PYY(22-36)の点突然変異
2005514008.tif 000022
【０１４７】
PYY(22-36)突然変異として含まれるのはまた、これらの2つの突然変異体のいずれかと、PYY(25-36)について前記に列挙したバリアントのいずれか、および／または、PYY(23-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれかとの組合せから生じたポリペプチド変化型（アミノ酸配列変化型）であり、例えば、[Lys25]PPY(22-36)
2005514008.tif 000023
は、配列番号：36からの突然変異と配列番号：150の組合せから生じる。
【０１４８】
PYY(21-36)の点突然変異
2005514008.tif 000024
【０１４９】
PYY(21-36)突然変異として含まれるのはまた、これらの3つのいずれかの突然変異体と、PYY(25-36)について前記に列挙したバリアントのいずれか、および／または、PYY(22-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれかとの組合せから生じたポリペプチド変化型（アミノ酸配列変化型）であり、例えば、[Lys25]PPY(21-36)
2005514008.tif 000025
は、配列番号：36からの突然変異と配列番号：152の組合せから生じる。
【０１５０】
PYY(20-36)の点突然変異
2005514008.tif 000026
【０１５１】
PYY(20-36)突然変異として含まれるのはまた、これらの3つのいずれかの突然変異体と、PYY(25-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれか、および／または、PYY(21-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれかとの組合せから生じたポリペプチド変化型（アミノ酸配列変化型）であり、例えば、[Lys25]PPY(20-36)
2005514008.tif 000027
は、配列番号：36からの突然変異と配列番号：152の組合せから生じる。
【０１５２】
PYY(19-36)の点突然変異
2005514008.tif 000028
【０１５３】
PYY(19-36) 突然変異として含まれるのはまた、これらの2つのいずれかの突然変異体と、PYY(25-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれか、および／または、PYY(20-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれかとの組合せから生じたポリペプチド変化型（アミノ酸配列変化型）であり、例えば、[Lys25]PPY(19-36)
2005514008.tif 000029
は、配列番号：36からの突然変異と配列番号：158の組合せから生じる。
【０１５４】
PYY(18-36)の点突然変異
2005514008.tif 000030
【０１５５】
PYY(18-36)突然変異として含まれるのはまた、これらの2つのいずれかの突然変異体と、PYY(25-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれか、および／または、PYY(19-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれかとの組合せから生じたポリペプチド変化型（アミノ酸配列変化型）であり、例えば、[Lys25]PPY(18-36)
2005514008.tif 000031
は、配列番号：36からの突然変異と配列番号：160の組合せから生じる。
【０１５６】
PYY(17-36)の点突然変異
2005514008.tif 000032
【０１５７】
PYY(17-36)突然変異として含まれるのはまた、これらの3つのいずれかの突然変異体と、PYY(25-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれか、および／または、PYY(18-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれかとの組合せから生じたポリペプチド変化型（アミノ酸配列変化型）であり、例えば、[Lys25]PPY(17-36)
2005514008.tif 000033
は、配列番号：36からの突然変異と配列番号：162の組合せから生じる。
【０１５８】
PYY(16-36)の点突然変異
2005514008.tif 000034
【０１５９】
PYY(16-36)突然変異として含まれるのはまた、これらの2つのいずれかの突然変異体と、PYY(25-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれか、および／または、PYY(17-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれかとの組合せから生じたポリペプチド変化型（アミノ酸配列変化型）であり、例えば、[Lys25]PPY(16-36)
2005514008.tif 000035
は、配列番号：36からの突然変異と配列番号：165の組合せから生じる。
【０１６０】
PYY(15-36)の点突然変異
2005514008.tif 000036
【０１６１】
PYY(15-36)突然変異として含まれるのはまた、これらの2つのいずれかの突然変異体と、PYY(25-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれか、および／または、PYY(16-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれかとの組合せから生じたポリペプチド変化型（アミノ酸配列変化型）であり、例えば、[Lys25]PPY(15-36)
2005514008.tif 000037
は、配列番号：36からの突然変異と配列番号：167の組合せから生じる。
【０１６２】
PYY(14-36)の点突然変異
2005514008.tif 000038
【０１６３】
PYY(14-36)突然変異として含まれるのはまた、このPYY(14-36)突然変異体と、PYY(25-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれか、および／または、PYY(15-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれかとの組合せから生じたポリペプチド変化型（アミノ酸配列変化型）であり、例えば、[Lys25]PPY(23-36)
2005514008.tif 000039
は、配列番号：36からの突然変異と配列番号：169の組合せから生じる。
【０１６４】
PYY(13-36)の点突然変異
2005514008.tif 000040
【０１６５】
PYY(13-36)突然変異として含まれるのはまた、これらの2つのいずれかの突然変異体と、PYY(25-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれか、および／または、PYY(14-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれかとの組合せから生じたポリペプチド変化型（アミノ酸配列変化型）であり、例えば、[Lys25]PPY(13-36)
2005514008.tif 000041
は、配列番号：36からの突然変異と配列番号：170の組合せから生じる。
【０１６６】
PYY(12-36)の点突然変異
2005514008.tif 000042
【０１６７】
PYY(12-36)突然変異として含まれるのはまた、これらの2つのいずれかの突然変異体と、PYY(25-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれか、および／または、PYY(13-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれかとの組合せから生じたポリペプチド変化型（アミノ酸配列変化型）であり、例えば、[Lys25]PPY(12-36)
2005514008.tif 000043
は、配列番号：36からの突然変異と配列番号：172の組合せから生じる。
【０１６８】
PYY(11-36)の点突然変異
2005514008.tif 000044
【０１６９】
PYY(12-36)突然変異として含まれるのはまた、これらの2つのいずれかの突然変異体と、PYY(25-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれか、および／または、PYY(12-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれかとの組合せから生じたポリペプチド変化型（アミノ酸配列変化型）であり、例えば、[Lys25]PPY(11-36)
2005514008.tif 000045
は、配列番号：36からの突然変異と配列番号：174の組合せから生じる。
【０１７０】
PYY(10-36)の点突然変異
2005514008.tif 000046
【０１７１】
PYY(10-36)突然変異として含まれるのはまた、これらの2つのいずれかの突然変異体と、PYY(25-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれか、および／または、PYY(11-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれかとの組合せから生じたポリペプチド変化型（アミノ酸配列変化型）であり、例えば、[Lys25]PPY(10-36)
2005514008.tif 000047
（アミノ酸配列    配列番号：）は、配列番号：36からの突然変異と配列番号：176の組合せから生じる。
【０１７２】
PYY(9-36)の点突然変異
2005514008.tif 000048
【０１７３】
PYY(9-36)突然変異として含まれるのはまた、このPPY(9-36)突然変異体と、PYY(25-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれか、および／または、PYY(10-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれかとの組合せから生じたポリペプチド変化型（アミノ酸配列変化型）であり、例えば、[Lys25]PPY(9-36)
2005514008.tif 000049
は、配列番号：36からの突然変異と配列番号：178の組合せから生じる。
【０１７４】
PYY(8-36)の点突然変異
2005514008.tif 000050
【０１７５】
PYY(8-36)突然変異として含まれるのはまた、このPPY(8-36)突然変異体と、PYY(25-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれか、および／または、PYY(9-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれかとの組合せから生じたポリペプチド変化型（アミノ酸配列変化型）であり、例えば、[Lys25]PPY(8-36)（アミノ酸配列＝配列番号：207）は、配列番号：36からの突然変異と配列番号：179の組合せから生じる。
【０１７６】
PYY(7-36)の点突然変異
2005514008.tif 000051
【０１７７】
PYY(7-36)突然変異として含まれるのはまた、これらの2つのいずれかの突然変異体と、PYY(25-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれか、および／または、PYY(8-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれかとの組合せから生じたポリペプチド変化型（アミノ酸配列変化型）であり、例えば、[Lys25]PPY(7-36)
2005514008.tif 000052
は、配列番号：36からの突然変異と配列番号：180の組合せから生じる。
【０１７８】
PYY(6-36)の点突然変異
2005514008.tif 000053
【０１７９】
PYY(6-36)突然変異として含まれるのはまた、これらの2つのいずれかの突然変異体と、PYY(25-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれか、および／または、PYY(7-36)について前記に列挙したバリアントのいずれかとの組合せから生じたポリペプチド変化型（アミノ酸配列変化型）であり、例えば、[Lys25]PPY(6-36)
2005514008.tif 000054
（アミノ酸配列    配列番号：）は、配列番号：36からの突然変異と配列番号：182の組合せから生じる。
【０１８０】
PYY(5-36)の点突然変異
2005514008.tif 000055
【０１８１】
PYY(5-36)突然変異として含まれるのはまた、このPPY(5-36)突然変異体と、PYY(25-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれか、および／または、PYY(6-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれかとの組合せから生じたポリペプチド変化型（アミノ酸配列変化型）であり、例えば、[Lys25]PPY(5-36)
2005514008.tif 000056
は、配列番号：36からの突然変異と配列番号：184の組合せから生じる。
【０１８２】
PYY(4-36)の点突然変異
2005514008.tif 000057
【０１８３】
PYY(4-36)突然変異として含まれるのはまた、これらの4つのいずれかの突然変異体と、PYY(25-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれか、および／または、PYY(5-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれかとの組合せから生じたポリペプチド変化型（アミノ酸配列変化型）であり、例えば、[Lys25]PPY(4-36)
2005514008.tif 000058
は、配列番号：36からの突然変異と配列番号：185の組合せから生じる。
【０１８４】
PYY(3-36)の点突然変異
2005514008.tif 000059
【０１８５】
PYY(3-36)突然変異として含まれるのはまた、これらの3つのいずれかの突然変異体と、PYY(25-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれか、および／または、PYY(4-36)について前記に列挙した突然変異体のいずれかとの組合せから生じたポリペプチド変化型（アミノ酸配列変化型）であり、例えば、[Lys25]PPY(3-36)
2005514008.tif 000060
は、配列番号：36からの突然変異と配列番号：1の組合せから生じる。
【０１８６】
下記の式を有するPYYアゴニスト（NPY類似体）も考えられる：
2005514008.tif 000061
式中、Xは、HまたはCaMeまたはNaMeまたは7以下の炭素原子を有するデスアミノもしくはアシル基であり；Qは、R17-R18、R18またはdesQであり；R17は、Met、Arg、Nle、Nva、Leu、Ala、またはD-Alaであり；R18は、Ala、Ser、Ile、D-Ala、D-Ser、またはD-Ileであり；R19は、Arg、Lys、またはGlnであり；R20は、TyrまたはPheであり；R21は、Tyr、Glu、His、またはAlaであり；R22は、Ser、Ala、Thr、Asn、またはAspであり；R23は、Ala、Asp、Glu、Gln、Asn、またはSerであり；R25は、ArgまたはGlnであり；R26は、His、Arg、またはGlnであり；R27は、PheまたはTyrであり；R28は、Ile、Leu、Val、またはArgであり；R29は、AsnまたはIleであり；R30は、Leu、Met、Thr、またはValであり；R31は、Ile、Val、またはLeuであり；R32は、ThrまたはPheであり；R34は、Gln、Pro、またはHisであり；R36は、PheまたはTyrであり；Yは、NH2またはOHであり；ただし、QがR18である場合、R27およびR36の少なくとも一方はPheである。NPYの類似体は、以下の用途を有する：高血圧および心原性ショックの強力なシナプス後処置、急性心臓血管循環不全および細胞内ナトリウムの上昇の処置。米国特許第5,026,685号を参照されたい。
【０１８７】
ある好ましいNPY類似体は下記の式を有する：
2005514008.tif 000062
式中、Xは、HまたはCaMeまたはNaMeまたは7個またはそれ以下の炭素原子を有するデスアミノ基もしくはアシル基であり；R18は、AlaまたはSerであり；R22は、SerまたはAlaであり；R23は、AlaまたはSerであり；R27は、PheまたはTyrであり；R28は、IleまたはLeuであり；R31は、IleまたはValであり；R36は、PheまたはTyrであり；ただし、R27およびR36の少なくとも一方はPheである。米国特許第5,026,685号参照のこと。
【０１８８】
他の考えられるNPY類似体は、下記の式を有する：
2005514008.tif 000063
式中、R17は、ArgまたはLeuであり、R18は、SerまたはAlaまたはIleであり；X、R27、およびR36は、前記に示した通りである。
【０１８９】
さらに他の好ましいNPY類似体は、下記の式を有する：
2005514008.tif 000064
式中、Xは、デスアミノまたはCaMeまたはNaMeであり；R18、R25、R27、およびR36は、前記に示した通りである。
【０１９０】
このようなNPYアゴニストの例には下記が含まれる：
下記の式を有するpNPY(17-36)：
2005514008.tif 000065
下記の式を有するペプチドhNPY(17-36)：
2005514008.tif 000066
下記の式を有するペプチド[Phe27]-NPY(18-36)：
2005514008.tif 000067
下記の式を有するペプチド[Ac-D-Ala17]-NPY(17-36)：
2005514008.tif 000068
下記の式を有するペプチドNPY(19-36)：
2005514008.tif 000069
下記の式を有するペプチド[Nle17]-NPY(17-36)：
2005514008.tif 000070
下記の式を有するペプチド[D-Ser18]-NPY(18-36)：
2005514008.tif 000071
下記の式を有するペプチド[Ala17、His21]-NPY(17-36)：
2005514008.tif 000072
下記の式を有するペプチド[D-Ile18]-NPY(18-36)：
2005514008.tif 000073
下記の式を有するペプチド[Ac-Arg17]-NPY(17-36)：
2005514008.tif 000074
下記の式を有するペプチド[Gln19]-NPY(19-36)：
2005514008.tif 000075
下記の式を有するペプチド[Phe20]-NpY(18-36)：
2005514008.tif 000076
下記の式を有するペプチド[CaMeLeu17]-pNPY(17-36)：
2005514008.tif 000077
下記の式を有するペプチド[NaMeLeu17]-pNPY(17-36)：
2005514008.tif 000078
下記の式を有するペプチド[デスアミノAla18]-NpY(18-36)：
2005514008.tif 000079
下記の式を有するペプチド[For-Ala18、Glu23、Arg26]-NPY(18-36)：
2005514008.tif 000080
下記の式を有するペプチド[Nva17、Ala21、Leu28]-NPY(17-36)：
2005514008.tif 000081
下記の式を有するペプチド[Thr22、Gln23]-NPY(18-36)：
2005514008.tif 000082
下記の式を有するペプチド[デスアミノLeu17、Asn23、Val30]-NPY(17-36)：
2005514008.tif 000083
下記の式を有するペプチド[Asp22、Ser23、Thr30]-NPY(18-36)：
2005514008.tif 000084
下記の式を有するペプチド[Gln25、Leu31、Pro34]-NPY(18-36)：
2005514008.tif 000085
下記の式を有するペプチド[Gln2Phe36]-NPY(17-36)：
2005514008.tif 000086
下記の式を有するペプチド[Phe36]-pPYY(19-36)：
2005514008.tif 000087
下記の式を有するペプチドpPYY(18-36)：
2005514008.tif 000088
下記の式を有するペプチド[Ac-Ser18、Phe27]-pPYY(18-36)：
2005514008.tif 000089
下記の式を有するペプチド[Nle17、Asn22、Phe27]-NPY(17-36)：
2005514008.tif 000090
下記の式を有するペプチド[D-Ala18、Glu21、His34]-NPY(18-36)：
2005514008.tif 000091
下記の式を有するペプチド[Bz-Leu17、Pro34、Phe36]-pNPY(17-36)：
2005514008.tif 000092
下記の式を有するペプチド[Lys19、Phe27、Val28]-NpY(18-36)：
2005514008.tif 000093
下記の式を有するペプチド[D-Ala17、Val28、Phe32]-NPY(17-36)：
2005514008.tif 000094
下記の式を有するペプチド[CaMeSer18、Met30、Phe36]-NPY(18-36)：
2005514008.tif 000095
下記の式を有するペプチド[Arg17、Ile18、Phe27,36]-NPY(17-36)：
2005514008.tif 000096
下記の式を有するペプチド[Ser18、Phe27]-pNPY(17-36)：
2005514008.tif 000097
下記の式を有するペプチド[NaMeIle18、Gln25、Phe27]-NPY(18-36)：
2005514008.tif 000098
下記の式を有するペプチド[D-Ser18、Phe36]-NPY(18-36)：
2005514008.tif 000099
下記の式を有するペプチド[Asp23、Arg26]hNPY(17-36)：
2005514008.tif 000100
下記の式を有するペプチド[Gln23、Ile29]-NPY(18-36)：
2005514008.tif 000101
下記の式を有するペプチド[D-Ala17]-NPY(17-36)-OH：
2005514008.tif 000102
。
【０１９１】
他のペプチドYYアゴニストは、下記の式または薬学的に許容されるその塩を有する：
2005514008.tif 000103
式中、
Xは、0-5アミノ酸鎖であり（0と5を含む）、そのN末端アミノ酸はR1およびR2に結合しており、
Yは、0-4アミノ酸鎖であり（0と5を含む）、そのC末端アミノ酸はR3およびR4に結合しており、
R1は、H、C1-C2アルキル（例えばメチル）、C6-C18アリール（例えばフェニル、ナフタレンアセチル）、C1-C12アシル（例えばホルミル、アセチル、およびミリストイル）、C7-C18アラルキル（例えばベンジル）、またはC7-C18アルカリール（例えばp-メチルフェニル）であり；
R2は、H、C1-C12アルキル（例えばメチル）、C6-C18アリール（例えばフェニル、ナフタレンアセチル）、C1-C12アシル（例えばホルミル、アセチル、およびミリストイル）、C7-C18アラルキル（例えばベンジル）、またはC7-C18アルカリール（例えばp-メチルフェニル）であり；
A22は、芳香族アミノ酸、Ala、Aib、Anb、N-Me-Alaであるか、または欠失しており；
A23は、Ser、Thr、Ala、N-Me-Ser、N-Me-Thr、N-Me-Alaであるか、または欠失しており；
A24は、Leu、lie、Vat、Trp、Gly、Aib、Anb、N-Me-Leuであるか、または欠失しており；
A25は、Arg、Lys、ホモ-Arg、ジエチル-ホモ-Arg、Lys-ε-NH-R（Rは、H、分岐鎖または直鎖C1-C10アルキル基、またはアリール基である）、Ornであるか、または欠失しており；
A26は、His、Thr、3-Me-His、1-Me-His、β-ピロゾリルアニリン、N-Me-His、Arg、Lys、ホモ-Arg、ジエチル-ホモ-Arg、Lys-ε-NH-R（Rは、H、（Rは、H、分岐鎖または直鎖C1-C10アルキル基、またはアリール基である）、Ornであるか、または欠失しており；
A27は、Tyr以外の芳香族アミノ酸であり；
A28は、Leu、Ile、Vat、Trp、Aib、Aib、Anb、またはN-Me-Leuであり；
A29は、Asn、Ala、Gln、Gly、Trp、またはN-Me-Asnであり；
A30は、Leu、Ile、Val、Trp、Aib、Anb、またはN-Me-Leuであり；
A31は、Vat、Ile、Trp、Aib、Anb、またはN-Me-Valであり；
A32は、Thr、Ser、N-Me-Set、またはN-Me-Thrであり；
R3は、H、C1-C12アルキル（例えばメチル）、C6-C18アリール（例えばフェニル、ナフタレンアセチル）、C1-C12アシル（例えばホルミル、アセチル、およびミリストイル）、C7-C18アラルキル（例えばベンジル）、またはC7-C18アルカリール（例えばp-メチルフェニル）であり；
R4は、H、C1-C12アルキル（例えばメチル）、C6-C18アリール（例えばフェニル、ナフタレンアセチル）、C1-C12アシル（例えばホルミル、アセチル、およびミリストイル）、C7-C18アラルキル（例えばベンジル）、またはC7-C18アルカリール（例えばp-メチルフェニル）である。
【０１９２】
開示の方法に使用されるこの式の特に好ましいアゴニストは、下記を含む：
2005514008.tif 000104
【０１９３】
他のペプチドYYアゴニストは、下記の式またはその薬学的に許容される塩を有する：
2005514008.tif 000105
式中、
N末端アミノ酸はR1およびR2に結合し；
Yは、0-4アミノ酸鎖であり（0と4を含む）、そのC末端アミノ酸はR3およびR4に結合しており；
R1は、H、C1-C12アルキル、C6-C18アリール、C1-C12アシル、C7-C18アラルキル、またはC7-C18アルカリールであり；
R2は、H、C1-C12アルキル、C6-C18アリール、C1-C12アシル、C7-C18アラルキル、またはC7-C18アルカリールであり；
A25は、Arg、Lys、ホモ-Arg、ジエチル-ホモ-Arg、Lys-ε-NH-R（Rは、H、分岐または直鎖C1-C10アルキル基、またはアリール基である）、Ornであるか、または欠失しており；
A26は、Ala、His、Thr、3-Me-His、1-Me-His、β-ピロゾリルアラニン、N-Me-His、Arg、Lys、ホモ-Arg、ジエチル-ホモ-Arg、Lys-ε-NH-R（Rは、H、分岐または直鎖C1-C10アルキル基、またはアリール基である）、Ornであるか、または欠失しており；
A27は、芳香族アミノ酸であり；
A28は、Leu、Ile、Val、Trp、Aib、Anb、またはN-Me-Leuであり；
A29は、Asn、Ala、Gln、Gly、Trp、またはN-Me-Asnであり；
A30は、Leu、Ile、Val、Trp、Aib、Anb、またはN-Me-Leuであり；
A31は、Val、Ile、Trp、Aib、Anb、またはN-Me-Valであり；
A32は、Thr、Set、N-Me-Set、またはN-Me-Thr、またはD-Trpであり；
R3は、H、C1-C12アルキル、C6-C18アリール、C1-C12アシル、C7-C18アラルキル、またはC7-C18アルカリールであり；
R4は、H、C1-C12アルキル、C6-C18アリール、C1-C12アシル、C7-C18アラルキル、またはC7-C18アルカリールである。特記しない限り、本明細書に記載した全てのペプチドYYアゴニストについて、各アミノ酸残基、例えばLeuおよびA1は、NH--C(R)H--CO--の構造を示し、Rは側鎖であることを留意する。アミノ酸残基間の線は、アミノ酸を連結するペプチド結合を示す。また、アミノ酸残基が光学的に活性である場合、D型が表現されて示されていなければ、L型立体配置であるものとする。
【０１９４】
他のPYYアゴニストは、下記の式または薬学的に許容されるその塩を有する：
2005514008.tif 000106
式中、
Xは、0-5アミノ酸鎖であり（0と5を含む）、そのN末端アミノ酸はR1およびR2に結合しており；
Yは、0-4アミノ酸鎖であり（0と4を含む）、そのC末端アミノ酸はR3およびR4に結合しており；
R1は、H、C1-C12アルキル（例えばメチル）、C6-C18アリール（例えばフェニル、ナフタレンアセチル）、C1-C12アシル（例えばホルミル、アセチル、およびミリストイル）、C7-C18アラルキル（例えばベンジル）、またはC7-C18アルカリール（例えばp-メチルフェニル）であり；
R2は、H、C1-C12アルキル（例えばメチル）、C6-C18アリール（例えばフェニル、ナフタレンアセチル）、C1-C12アシル（例えばホルミル、アセチル、およびミリストイル）、C7-C18アラルキル（例えばベンジル）、またはC7-C18アルカリール（例えばp-メチルフェニル）であり；
A22は、芳香族アミノ酸、Ala、Aib、Anb、N-Me-Alaであるか、または欠失しており；
A23は、Ser、Thr、Ala、Aib、N-Me-Ser、N-Me-Thr、N Me-Alaであるか、または欠失しており；
A24は、leu、Ile、Val、Trp、Gly、Nle、Nva、Aib、Anb、N-Me-Leuであるか、または欠失しており；
A25は、Arg、Lys、ホモ-Arg、ジエチル-ホモ-Arg、Lye-e-NH-R（Rは、H、分岐または直鎖C1-C10アルキル基、またはアリール基である）、Ornであるか、または欠失しており；
A26は、Ala、His、Thr、3-Me-His、1-Me-His、β-ピロゾリルアラニン、N-Me-His、Arg、Lys、ホモ-Arg、ジエチル-ホモ-Arg、Lys-ε-NH-R（Rは、H、分岐または直鎖C1-C10アルキル基、またはアリール基である）、Ornであるか、または欠失しており；
A27は、Tyr以外の芳香族アミノ酸であり；
A28は、Leu、Ile、Val、Trp、Nle、Nva、Aib、Anb、またはN-Me-Leuであり；
A29は、Asn、Ala、Gin、Gly、Trp、またはN-Me-Asnであり；
A30は、Leu、Ile、Val、Trp、Nle、Nva、Aib、Anb、またはN-Me-Leuであり；
A31は、Val、Leu、Ile、Trp、Nle、Nva、Aib、Anb、またはN-Me-Valであり；
A32は、Thr、Ser、N-Me-Ser、N-Me-Thr、またはD-Trpであり；
R3は、H、C1-C12アルキル（例えばメチル）、C6-C18アリール（例えばフェニル、ナフタレンアセチル）、C1-C12アシル（例えばホルミル、アセチル、およびミリストイル）、C7-C18アラルキル（例えばベンジル）、またはC7-C18アルカリール（例えばp-メチルフェニル）であり；
R4は、H、C1-C12アルキル（例えばメチル）、C6-C18アリール（例えばフェニル、ナフタレンアセチル）、C1-C12アシル（例えばホルミル、アセチル、およびミリストイル）、C7-C18アラルキル（例えばベンジル）、またはC7-C18アルカリール（例えばp-メチルフェニル）である。
【０１９５】
好ましい態様において、A27は、Phe、Nal、Bip、Pcp、Tic、Trp、Bth、Thi、またはDipである。
【０１９６】
好ましい態様において、Xは、A17-A18-A19-A20-A21であり、式中
A17は、Cys、Leu、Ile、Val、Nle、Nva、Aib、Anb、またはN-Me-Leuであり；
A18は、Cys、Ser、Thr、N-Me-Ser、またはN-Me-Thrであり；
A19は、Arg、Lys、ホモ-Arg、ジエチル-ホモ-Arg、Lys-ε-NH-R（Rは、H、分岐または直鎖C1-C10アルキル基、またはC6-C18アリール基である）、Cys、またはOrnであり；
A20は、芳香族アミノ酸、またはCysであり；
A21は、芳香族アミノ酸、Cys、または薬学的に許容されるその塩である。さらに他の好ましい態様において、Yは、A33-A34-A35-A36であり、式中、
A33は、Arg、Lys、ホモ-Arg、ジエチル-ホモ-Arg、Lys-ε-NH-R（Rは、H、分岐または直鎖C1-C10アルキル基、またはアリール基である）、Cys、またはOrnであり；
A34は、Cys、Gln、Asn、Ala、Gly、N-Me-Cln、Aib、またはAnbであり；
A35は、Arg、Lys、ホモ-Arg、ジエチル-ホモ-Arg、Lys-ε-NH-R（Rは、H、分岐または直鎖C1-C10アルキル基、またはC6-C18アリール基である）、Cys、またはOrnであり；
A36は、芳香族アミノ酸、Cys、または薬学的に許容されるその塩である。米国特許第5,604,203号を参照されたい。
【０１９７】
特定の態様には、下記の式
2005514008.tif 000107
を有する化合物または薬学的に許容されるその塩が含まれる。
【０１９８】
他のPYYアゴニストは、下記の式を有する：
2005514008.tif 000108
式中、N末端アミノ酸は、R1およびR2に結合しており；Yは、0-4アミノ酸鎖であり（0と4を含む）、そのC末端アミノ酸は、R3およびR4に結合しており；
R1は、H、C1-C12アルキル（例えばメチル）、C6-C18アリール（例えばフェニル、ナフタレンアセチル）、C1-C12アシル（例えばホルミル、アセチル、およびミリストイル）、C7-C18アラルキル（例えばベンジル）、またはC7-C18アルカリール（例えばp-メチルフェニル）であり；
R2は、H、C1-C12アルキル（例えばメチル）、C6-C18アリール（例えばフェニル、ナフタレンアセチル）、C1-C12アシル（例えばホルミル、アセチル、およびミリストイル）、C7-C18アラルキル（例えばベンジル）、またはC7-C18アルカリール（例えばp-メチルフェニル）であり；
A25は、Arg、Lys、ホモ-Arg、ジエチル-ホモ-Arg、Lys-ε-NH-R（Rは、H、分岐または直鎖C1-C10アルキル基、またはアリール基である）、Ornであるか、または欠失しており；
A26は、Ala、His、Thr、3-Met-His、1-Me-His、β-ピロゾリルアラニン、N-Me-His、Arg、Lys、ホモ-Arg、ジエチル-ホモ-Arg、Lys-ε-NH-R（Rは、H、分岐または直鎖C1-C10アルキル基またはアリール基である）、Ornであるか、または欠失しており；
A27は、芳香族アミノ酸であり；
A28は、Leu、Ile、Val、Trp、Nle、Nva、Aib、Anb、またはN-Me-Leuであり；
A29は、Asn、Ala、Gin、Gly、Trp、またはN-Me-Asnであり；
A30は、Leu、Ile、Val、Trp、Nle、Nva、Aib、Anb、またはN-Me-Leuであり；
A31は、Val、Ile、Trp、Nle、Nva、Aib、Anb、またはN-Me-Valであり；
A32は、Thr、Ser、N-Me-Ser、N-Me-Thr、またはD-Trpであり；
R3は、H、C1-C12アルキル（例えばメチル）、C6-C18アリール（例えばフェニル、ナフタレンアセチル）、C1-C12アシル（例えばホルミル、アセチル、およびミリストイル）、C7-C18アラルキル（例えばベンジル）、またはC7-C18アルカリール（例えばp-メチルフェニル）であり；
R4は、H、C1-C12アルキル（例えばメチル）、C6-C18アリール（例えばフェニル、ナフタレンアセチル）、C1-C12アシル（例えばホルミル、アセチル、およびミリストイル）、C7-C18アラルキル（例えばベンジル）、またはC7-C18アルカリール（例えばp-メチルフェニル）、または薬学的に許容されるその塩である。米国特許第5,604,203号を参照されたい。
【０１９９】
特定の態様において、A27は、Phe、Nal、Bip、Pcp、Tic、Trp、Bth、Thi、またはDipである。
【０２００】
特定の態様において、Xは、A33-A34-A35-A36であり、式中
A33は、Arg、Lys、ホモ-Arg、ジエチル-ホモ-Arg、Lys-ε-NH-R（Rは、H、分岐または直鎖C1-C10アルキル基、またはC6-C18アリール基である）、Cys、またはOrnであり；
A34は、Gln、Asn、Ala、Gly、N-Me-Gin、Aib、Cys、またはAnbであり；
A35は、Arg、Lys、ホモ-Arg、ジエチル-ホモ-Arg、Lys-ε-NH-R（Rは、H、分岐または直鎖C1-C10アルキル基、またはC6-C18アリール基である）、Cys、またはOrnであり；
A36は、芳香族アミノ酸、Cys、または薬学的に許容されるその塩である。
【０２０１】
好ましくは、化合物は、下記の式を有する：
2005514008.tif 000109
【０２０２】
例示的PYYアゴニストには以下が含まれる：
2005514008.tif 000110
2005514008.tif 000111
2005514008.tif 000112
【０２０３】
他のPYYアゴニストには、下記の式を有する向神経性YY2受容体特異的ペプチドを含む：
Xl(-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14)n-X15
式中、
X1は、NH、CH3CO、または1もしくは2つの天然アミノ酸であり、
X2は、Leu、Ile、またはValであり、
X3は、Arg、Lys、またはHisであり、
X4は、His、Lys、またはArgであり、
X5は、TyrまたはPheであり、
X6は、Leu、Ile、またはValであり、
X7は、AsnまたはGlnであり、
X8は、Leu、Ile、またはValであり、
X9は、Leu、Ile、またはValであり、
X10は、ThrまたはSerであり、
X11は、Arg、His、またはLysであり、
X12は、GlnまたはAsnであり、
X13は、Arg、His、またはLysであり、
X14は、TyrまたはPheであり、
X15は、COOH、NH2、または1もしくは2つの天然アミノ酸であり、末端アミノ酸は通常の形またはカルボキシアミド形であり、
nは1から5である。米国特許第5,696,093号を参照されたい。
【０２０４】
例示的アゴニストには下記が含まれる：
2005514008.tif 000113
【０２０５】
他のPYYアゴニストは、下記の式または薬学的に許容される塩を有し：
2005514008.tif 000114
式中、R1は、H、（C1-C12）アルキル、または（C1-C12）アシルであり；
Ψは、--CH2--NH--、--CH2--S--、--CH2--CH2--、--CH2--O--、および--CH2--CO--からなる群より選択された偽ペプチド結合である。米国特許第6,046,162号を参照されたい。
【０２０６】
直前の化合物の群の特定の化合物は、R1がアセチルであり、Ψが--CH2--NH--であるものである。
【０２０７】
特定の化合物の群は、
2005514008.tif 000115
またはその薬学的に許容される塩からなる群より選択される。
【０２０８】
別の特定の化合物は、式N-α-Ac-[Nle24,28、Trp30、Nva.sup.31、Ψ35/36]PYY(22-36)-NH2（配列番号：309）または薬学的に許容されるその塩を有する。
【０２０９】
別のPYYアゴニストは、1または2つの偽ペプチド結合を有する下記の式（A）または薬学的に許容されるその塩：
2005514008.tif 000116
を有し、各偽ペプチド結合は、独立的に、-CH2-NH-、-CH2-S-、-CH2-CH2-、-CH2-O-、および-CH2-CO-からなる群より選択され；
R10は、0-5アミノ酸鎖であり（0と5を含む）、N末端アミノ酸は、N末端アミノ酸の側鎖により、またはN末端アミノ酸のアミノ基の窒素により、R1およびR2に結合しており、
R20は、0-4アミノ酸鎖であり（0と4を含む）、C末端アミノ酸は、C末端アミノ酸の側鎖により、またはC末端アミノ酸のカルボキシル基の炭素によりR3およびR4に結合しており；
R1、R2、R3、およびR4は、各々独立的に、H、(C1-C12)アルキル、(C6-C18)アリール、(C1-C12)アシル、フェニル(C1-C12)アルキル、および((C1-C12)アルキル)1-5-フェニルからなる群より選択され；
A22は、芳香族アミノ酸、Ala、Aib、Anb、N-Me-Alaであるか、または欠失しており；
A23は、Ser、Thr、Ala、N-Me-Ser、N-Me-Thr、N-Me-Alaであるか、または欠失しており；
A24は、Leu、Ile、Nle、Val、Trp、Gly、Aib、Anb、N-Me-Leuであるか、または欠失しており；
A25は、Arg、Lys、ホモ-Arg、ジエチル-ホモ-Arg、Lys-p.ε.-NH-Z、Ornであるか、または欠失しており；
A26は、His、Thr、3-Me-His、1-Me-His、β-ピラゾリルアラニン、N-Me-His、Arg、Lys、ホモ-Arg、ジエチル-ホモ-Arg、Lys-ε-NH-Z、Ornであるか、または欠失しており；
A28は、Leu、Ile、Nle、Val、Trp、Aib、Anb、またはN-Me-Leuであり；
A29は、Asn、Ala、Gln、Gly、Trp、またはN-Me-Asnであり；
A30は、Leu、Ile、Nle、Fla、Val、Trp、Aib、Anb、またはN-Me-Leuであり；
A31は、Val、Nva、Ile、Trp、Aib、Anb、またはN-Me-Valであり；
A32は、Thr、Ser、N-Me-Ser、またはN-Me-Thrであり；
各場合のZは、独立的に、H、(C1-C10)アルキルおよび(C6-C18)アリールからなる群より選択される。米国特許第6,046,167号を参照されたい。
【０２１０】
直前の化合物群の特定の化合物群は、R10が、A17-A18-A19-A20-A21であり；
A17は、Cys、Leu、Ile、Val、Nle、Nva、Aib、Anb、またはN-Me-Leuであり；
A18は、Cys、Ser、Thr、N-Me-Ser、またはN-Me-Thrであり；
A19は、Arg、Lys、ホモ-Arg、ジエチル-ホモ-Arg、Lys-ε-NH-R.sup.5、Cys、またはOrnであり；
A20は、芳香族アミノ酸またはCysであり；
A21は、芳香族アミノ酸またはCysであり；
R20は、A33-A34-A35-A36であり；
A33は、Arg、Lys、ホモ-Arg、ジエチル-ホモ-Arg、Lys-ε-NH-R5、Cys、またはOrnであり；
A34は、Cys、Gin、Asn、Ala、Gly、N-Me-Gln、Aib、またはAnbであり；
A35は、Arg、Lys、ホモ-Arg、ジエチル-ホモ-Arg、Lys-ε-NH-R5、Cys、またはOrnであり；
A36は、芳香族アミノ酸またはCysであり；
各場合のR5は、独立的に、H1(C1-C10)アルキルおよび(C6-C18)アリールからなる群より選択される。
【０２１１】
前の化合物群の特定の化合物群は、式N-α-Ac-[Fla27)]PYY(25-36)-NH2およびN-α-Ac-[Fla27]PYY(22-36)-NH2の化合物または薬学的に許容されるその塩である。
【０２１２】
別のPYYアゴニストの群は、下記の式または薬学的に許容されるその塩を有する：
2005514008.tif 000117
----は、連結して示されるアミノ酸間の選択的な結合を示し、ここでは各結合は、独立的に、連結されたアミノ酸がCys-Cys、-CO-NH-、-CH2-NH-および
2005514008.tif 000118
である場合にのみ--S--S--からなる群より選択され、
ただし、選択的な結合が
2005514008.tif 000119
である場合には、選択的な結合が付着している2つのアミノ酸を置換しており；qは1-4であり；mは1-4であり；
R30は、OHまたは-O-R1であり、ただし、A1からA7が欠失している場合には、R30もNH-R1であり、ここでのR30は、C末端アミノ酸のカルボキシルの炭素原子に付着しており；
各場合のR1およびR2は、各々独立的に、H、(C1-C12)アルキル、(C6-C18)アリール、(C1-C12)アシル、フェニル(C1-C12)アルキル、および((C1-C12)アルキル)1-5-フェニルからなる群より選択され、ここでのR1およびR2は、N末端アミノ酸のアミンの窒素に付着しており；
A1は欠失しているか、または下記のアミノ酸のD型もしくはL型である：Trp、Tyr、Fla、Bth、Nal、Tic、Tic-OH、Dip、Bip、または選択的に置換されたPhe、ここでのPheは、(C1-C4)アルキル、ハロ、(C1-C4)アルコキシ、アミノ、およびニトロからなる群より選択された1から5つの置換基により選択的に置換されており；
A2は、欠失しているか、または、以下のアミノ酸のD型もしくはL型であり：Ile、Val、Leu、Nle、Anb、Aib、Pro、Gln、またはAsn；
A3は、欠失しているか、または、以下のアミノ酸のD型もしくはL型であり：Asn、Gln、Glu、Asp、Orn、Lys、Dpr、またはCys；
A4は、欠失しているか、または、以下のアミノ酸のD型もしくはL型であり：Ile、Val、Leu、Nle、Anb、Aib、またはPro；
A5は、欠失しているか、または、以下のアミノ酸のD型もしくはL型であり：Ile、Val、Leu、Nle、Anb、Aib、Pro、Glu、Asp、Orn、Lys、Dpr、またはCys；
A6は、欠失しているか、または、以下のアミノ酸のD型もしくはL型であり：Thr、Ser、Trp、Tyr、Fla、Bth、Nal、Tic、Tic-OH、Dip、Bip、または選択的に置換されたPhe、ここでのPheは、(C1-C4)アルキル、ハロ、(C1-C4)アルコキシ、アミノ、およびニトロからなる群より選択された1から5つの置換基により選択的に置換されており；
A7は、欠失しているか、または、以下のアミノ酸のD型もしくはL型であり：Arg、Lys、ホモ-Arg、ジアルキル-ホモ-Arg、Lys-ε-NH-R7、またはOrn；
A8は、欠失しているか、または、以下のアミノ酸のD型もしくはL型であり：Nva、Val、Ile、Leu、Nle、Anb、Aib、Pro、Gln、Asn、Glu、Asp、Orn、Lys、Dpr、またはCys；
A9は、欠失しているか、または、以下のアミノ酸のD型もしくはL型であり：Arg、Lys、ホモ-Arg、ジアルキル-ホモ-Arg、Lys-ε-NH-R7、またはOrn；
A10は、欠失しているか、または、以下のアミノ酸のD型もしくはL型であり：Tyr、Trp、Fla、Bth、Nal、Tic、Tic-OH、Dip、Bip、チラミン、または選択的に置換されたPhe、ここでのPheは、(C1-C4)アルキル、ハロ、(C1-C4)アルコキシ、アミノ、およびニトロからなる群より選択された1から5つの置換基により選択的に置換されているか、または対応する脱炭酸した選択的に置換されたPheであり；
各場合のR7は、独立的に、H置換1(C1-C10)アルキルおよび(C6-C18)アリールからなる群より選択され、ただし、A1からA10の全てが同時に欠失するわけではない。米国特許第6,046,167号を参照されたい。
【０２１３】
直前の化合物群の特定の化合物群は、下記または薬学的に許容されるその塩である：
2005514008.tif 000120
【０２１４】
PYYおよびPYYアゴニストは、アミド化、グリコシル化、アシル化（例えばアセチル化）、硫酸化、リン酸化、環化、脂質化、およびPEG化などの公知のプロセスにより修飾し得る。スルフヒドリル含有化合物の脂肪酸誘導体を用いた脂質化の方法は、米国特許第5,936,092号；米国特許第6,093,692号；および米国特許第6,225,445号に開示されている。ジスルフィド結合を有する脂肪酸が結合した生成物を含む、スルフヒドリル含有PYYおよびPYYアゴニストの脂肪酸誘導体を、PYYおよびPYYアゴニストの神経細胞および組織への送達のために使用する。この修飾により顕著に、非結合化合物の吸収速度に比べて化合物の吸収は増加するだけでなく、前記化合物の血液および組織保持も延長する。さらに、結合物中のジスルフィド結合は細胞において極めて不安定であり、従って、脂肪酸部分からの無傷化合物の細胞内遊離は促進される。
【０２１５】
リン脂質の構成成分としての脂肪酸は、大部分の細胞膜バルクを構成する。その脂質的性質（lipidic nature）のために、脂肪酸は、無毒性に細胞膜に容易に分配され、細胞膜と相互作用できる。それ故、脂肪酸は、タンパク質およびペプチドの送達において、有用な可能性のある担体リガンドを示す。タンパク質およびペプチドの送達に脂肪酸を使用し得る戦略には、タンパク質およびペプチドの共有結合的な修飾、および、脂肪酸エマルジョンの使用が含まれる。
【０２１６】
このような結合物を調製するために、スルフヒドリル含有PYYおよびPYYアゴニストを、可逆的で生分解性のジスルフィド結合を介して脂肪酸誘導体に付着する。このような結合物は、細胞膜の尖端側に結合し、膜輸送およびターンオーバーの結果としてGI上皮の側底膜に達し、ジスルフィド結合還元の結果として間質液に遊離されるようになると考えられる。
【０２１７】
このような脂質化PYYおよびPYYアゴニスト化合物は、下記の一般式を有する：
2005514008.tif 000121
式中、Pは、PYYまたはPYYアゴニストに由来する残基であり；R1は、水素、低級アルキル、またはアリールであり；R2は、脂質含有部分であり、R3は、−−OH、脂質含有部分、または、1もしくは2つのアミノ酸を含み、-CO2Hまたは-COR2で終結するアミノ酸鎖である。米国特許第5,936,092号を参照されたい。これらの結合物は、PYYおよびPYYアゴニストの吸収を増加させ、血液および組織の保持を延長するのに特に有用である。
【０２１８】
一般的なアルキル基にはC1-6アルキル基が含まれ、これにはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、ペンチル、2-ペンチル、3-ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、2-ヘキシル、3-ヘキシル、2-メチル-1-ペンチル、3-メチル-1-ペンチル、4-メチル-1-ペンチルなどが含まれる。
【０２１９】
好ましいアリール基は、C6-14アリール基であり、一般的にはフェニル、ナフチル、フルオレニル、フェナントリル、およびアントラシル基が含まれる。
【０２２０】
「脂質含有部分」という語は、それ自体脂質基、または脂質基を含む炭化水素をベースとした基（特に、1つまたは複数のアミノ酸）を意味する。「脂質基」という語により、4-26の炭素原子、好ましくは5-19の炭素原子からなる疎水性置換基を意味する。適切な脂質基には、下記が含まれるがこれに限定されない：パルミチル（C15H31）、オレイル（C15H29）、ステアリル(C17H35)、コレート；およびデオキシコレート。
【０２２１】
国際公開公報第00/34236号は、その製造における薬物-担体結合物および合成戦略、並びに、生物学的に活性なアミノ基含有化合物の取り込みおよび遊離に有用な合成法、中間体、および最終生成物を記載する。このような脂質化PYYおよびPYYアゴニスト化合物は、下記の一般式Iを有する：
2005514008.tif 000122
式中、R2は、水素、ハロ、アルキル、またはアリールからなる群より選択され、ここでのアルキルまたはアリール基は、1つまたは複数のアルコキシ、アルコキシアルキル、アルカノイル、ニトロ、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルカノイルオキシ、アルキル、またはハロゲン原子で選択的に置換されており；
R3は、親油性基であり；R4およびR5の一方はPYYまたはPYYアゴニストであり、R4およびR5の他方はOR6であり、ここでのR6は水素、アルカリ金属、または陰性荷電であり；
Xは、酸素または硫黄であり；
Yは、架橋天然または非天然アミノ酸であり；nは0または1であり；mは0から10の整数である。
【０２２２】
一般的なアルキル基にはC1-6アルキル基が含まれ、これには、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、ペンチル、2-ペンチル、3-ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、2-ヘキシル、3-ヘキシル、2-メチル-1-ペンチル、3-メチル-1-ペンチル、4-メチル-1-ペンチルなどが含まれる。
【０２２３】
一般的なアルコキシ基には、前記した任意のアルキル基により置換された酸素が含まれる。
【０２２４】
一般的なアルコキシアルキル基には、アルコキシ基により置換された任意の前記アルキル基、例えば、メトキシメチル、エトキシメチル、プロポキシメチル、ブトキシメチル、ペントキシメチル、ヘキソキシメチル、メトキシエチル、メトキシプロピル、メトキシブチル、メトキシペンチル、メトキシヘキシルなどが含まれる。
【０２２５】
好ましいアリール基は、C6-14アリール基であり、一般的にはフェニル、ナフチル、フルオレニル、フェナントリル、およびアントラシル基が含まれる。
【０２２６】
一般的なアルコキシ置換アリール基には、1つまたは複数の前記アルコキシ基により置換された前記のアリール基、例えば3-メトキシフェニル、2-エトキシフェニルなどが含まれる。
【０２２７】
一般的なアルキル置換アリール基は、任意のC1-6アルキル基により置換された任意の前記アリール基が含まれ、これには、Ph(CH2)n基(nは1-6である)、例えば、トリル、o-キシリル、m-キシリル、およびp-キシリル、エチルフェニル、1-プロピルフェニル、2-プロピルフェニル、1-ブチルフェニル、2-ブチルフェニル、t-ブチルフェニル、1-ペンチルフェニル、2-ペンチルフェニル、3-ペンチルフェニルが含まれる。
【０２２８】
一般的なアルケニル基には、C2-6アルケニル基、例えばエテニル、2-プロペニル、イソプロペニル、2-ブテニル、3-ブテニル、4-ペンテニル、3-ペンテニル、2-ペンテニル、5-ヘキセニル、4-ヘキセニル、3-ヘキセニル、および2-ヘキセニル基が含まれる。
【０２２９】
一般的なアルキニル基には、C2-6アルキニル基、例えばエチニル、2-プロペニル、2-ブチニル、3-ブチニル、4-ペンチニル、3-ペンチニル、2-ペンチニル、5-ヘキシニル、4ヘキシニル、3-ヘキシニル、および2-ヘキシニル基が含まれる。
【０２３０】
一般的なアルケニルまたはアルキニル置換アリール基には、任意の前記のC2-6アルケニルまたはC2-6アルキニル基により置換された任意の前記のC6-14アリール基、例えば、エテニルフェニル、1-プロペニルフェニル、2-プロペニルフェニル、1ブテニルフェニル、2-ブテニルフェニル、1-ペンテニルフェニル、2-ペンテニルフェニル、3-ペンテニルフェニル、1-ヘキセニルフェニル、2-ヘキセニルフェニル、3-ヘキセニルフェニル、エチニルフェニル、1-プロピニルフェニル、2-プロピニルフェニル、1-ブチニルフェニル、2-ブチニルフェニル、1-ペンチニルフェニル、2-ペンチニルフェニル、3-ペンチニルフェニル、1-ヘキシニルフェニル、2-ヘキシニルフェニル、3-ヘキシニルフェニル基が含まれる。
【０２３１】
一般的なハロ基には、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素が含まれる。
【０２３２】
一般的なハロ置換アルキル基には、1つまたは複数のフッ素、塩素、臭素、またはヨウ素原子により置換されたC1-6アルキル基、例えば、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル、1,1-ジフルオロエチル、およびトリクロロメチル基が含まれる。
【０２３３】
一般的なアルカノイル基には、C1-5C(=O)-アルカノイル基、例えばアセチル、プロピオニル、ブタノイル、ペンタノイル、およびヘキサノイル基、またはアリールアルカノイル基により、例えば、任意の前記アリール基により置換されたC1-5C(=O)-アルカノイル基が含まれる。
【０２３４】
一般的なシクロアルキル基にはC3-8シクロアルキル基が含まれ、これにはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシクロオクチル基が含まれる。
【０２３５】
本明細書に使用したような「親油性基」という語は、それ自体天然の脂質、約4から約26の炭素原子、好ましくは約5から約19の炭素原子を含む疎水性の分岐もしくは非分岐炭化水素、その脂肪酸またはエステル、または界面活性剤を意味する。適切な親油性基には、パルミチル(C15H31)、オレイル(C15H29)、ステアリル(C17H35)、ラウリル(C11H23)、コリル、およびミリスチル(C13H27)を含む、長鎖アルカノイル基が含まれるがこれに限定されない。
【０２３６】
本明細書に使用したような「天然または非天然アミノ酸」という語は、21のいずれかの天然アミノ酸、ならびに、D型アミノ酸、遮断L-およびD-形アミノ酸、例えばアミド化またはアシル化により遮断されたもの、置換アミノ酸（例えば、立体障害のあるアルキル基またはシクロアルキル基、例えばシクロプロピルまたはシクロブチルで置換されたもの）（ここでの置換により、アミノ酸にコンフォメーション的な制約が導入される）を意味する。アミノ酸またはペプチドもしくはタンパク質の成分として本開示に使用するに好ましい天然アミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、シトルリン、システイン、シスチン、y-グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ノルロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、γ-カルボキシグルタメート、またはO-ホスホセリンである。アミノ酸またはペプチドもしくはタンパク質の成分として本開示に使用するに好ましい非天然アミノ酸は、β-アミノ酸のいずれか、例えば、α-アラニン、γ-アミノ酪酸、γ-（アミノフェニル）酪酸、α-アミノイソ酪酸、ε-アミノカプロン酸、7-アミノヘプタン酸、アミノ安息香酸、アミノフェニル酢酸、アミノフェニル酪酸、システイン(ACM)、メチオニンスルホン、フェニルグリシン、ノルバリン、オルニチン、δ-オルニチン、ρニトロ-フェニルアラニン、1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-3-カルボン酸およびチオプロリンである。
【０２３７】
本開示はまた、PYYおよびPYYアゴニストの脂質化結合物を調製する方法、PYYおよびPYYアゴニストの脂質化結合物を含む医薬組成物、および、アミノ基含有PYYおよびPYYアゴニストの細胞への送達を増加させる方法に関する。
【０２３８】
開示により、ポリペプチドの溶解度、安定性、および循環時間の増加、または免疫原性の減少などの、追加の利点を付与し得る、PYYおよびPYYアゴニストの化学的に修飾された誘導体が提供される（米国特許第4,179,337号を参照されたい）。このような修飾誘導体には、PEG化により修飾されたPYYおよびPYYアゴニストが含まれる。「PEG化された」および「PEG化」という語は、ポリ（アルキレングリコール）、好ましくは活性型ポリ（アルキレングリコール）を、アミノ酸、例えばリジンなどの促進剤と反応させて、共有結合を形成するプロセスを意味する。「PEG化」は、ポリ（エチレングリコール）またはその誘導体（例えばメトキシポリ（エチレングリコール））を使用して実施することが多いが、この用語は、ここではそのように限定するものではなく、任意の他の有用なポリ（アルキレングリコール）、例えば、ポリ（プロピレングリコール）を含むものとする。
【０２３９】
誘導体化のための化学的部分はまた、水溶性ポリマー、例えばポリエチレングリコール、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコールなどから選択され得る。ポリペプチドは、分子内のランダムな位置で、または、分子内の予め決定された位置で修飾され得、1個、2個、3個、またはそれ以上の付着化学部分を含み得る。
【０２４０】
ポリマーは任意の分子量であり得、分岐していても非分岐でもよい。ポリエチレングリコールでは、好ましい分子量は、取り扱い易さおよび製造し易さのため、約1kDaから約100kDa（「約」という語は、ポリエチレングリコールの調製において、いくつかの分子は記載の分子量より多い、いくつかは少ない重量であることを示す）である。他のサイズも、所望の治療プロファイル（例えば所望の持続放出時間、ある場合には生物活性に対する効果、取り扱い易さ、抗原性の程度または欠失、および治療タンパク質または類似体に対するポリエチレングリコールの他の既知の効果）も使用し得る。例えば、ポリエチレングリコールは、約200、500、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、8500、9000、9500、10,000、10,500、11,000、11,500、12,000、12,500、13,000、13,500、14,000、14,500、15,000、15,500、16,000、16,500、17,000、17,500、18,000、18,500、19,000、19,500、20,000、25,000、30,000、35,000、40,000、50,000、55,000、60,000、65,000、70,000、75,000、80,000、85,000、90,000、95,000、または100,000kDaの平均分子量を有し得る。
【０２４１】
前記したように、ポリエチレングリコールは、分岐構造を有し得る。分岐ポリエチレングリコールは、例えば米国特許第5,643,575号；Morpurgoら、Appl.Biochem.Biotechnol.56:59-72、1996；Vorobjevら、Nucleosides Nucleotides 18:2745-2750、1999；およびCalicetiら、Bioconjug.Chem.10:638-646、1999に記載されている。
【０２４２】
ポリエチレングリコール分子（または他の化学部分）は、ポリペプチドまたはタンパク質の機能的または抗原性ドメインに対する効果を考慮しながら、ポリペプチドまたはタンパク質に付着させるべきである。当業者に使用可能な多くの付着法が存在し、例えば欧州特許第0401384号（PEGのG-CSFへのカップリング）が挙げられ、またMalikら、Exp.Hematol.20:1028-1035、1992（塩化トレシルを使用したGM-CSFのPEG化を報告）も参照されたい。例えば、ポリエチレングリコールは、遊離アミノまたはカルボキシル基などの反応性基を介して、アミノ酸残基を通して共有結合し得る。反応性基は、活性型ポリエチレングリコール分子が結合し得るものである。遊離アミノ基を有するアミノ酸残基は、リジン残基およびN末端アミノ酸残基を含み得；遊離カルボキシル基を有するものは、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基およびC末端アミノ酸残基を含み得る。スルフヒドリル基はまた、ポリエチレングリコール分子を付着させるための反応性基として使用し得る。治療目的に好ましいのは、N末端またはリジン基における付着などの、アミノ基における付着である。
【０２４３】
前記に示唆したように、ポリエチレングリコールは、多くのアミノ酸残基のいずれかへの結合を介してタンパク質およびポリペプチドに付着させ得る。例えば、ポリエチレングリコールは、リジン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはシステイン残基への共有結合を介してタンパク質およびポリペプチドに連結できる。1つまたは複数の反応化学を使用して、ポリペプチドまたはタンパク質の特定のアミノ酸残基（例えばリジン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはシステイン）に、または、タンパク質またはポリペプチドの2つ以上の型のアミノ酸残基（例えばリジン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン、およびその組合せ）にポリエチレングリコールを付着させ得る。
【０２４４】
N末端において化学的に修飾されたタンパク質およびポリペプチドを特定して求めることができる。説明としてポリエチレングリコールを使用して、多種多様のポリエチレングリコール分子（分子量、分岐などにより）、反応混合液中のポリエチレングリコール分子とタンパク質（またはペプチド）分子の比率、実施するPEG化反応の型、および選択したN末端PEG化タンパク質を得る方法から選択し得る。N末端PEG化調製物を得る（すなわち、この部分を、必要であれば他のモノPEG化部分から分離する）方法は、PEG化タンパク質分子の個体群からN末端PEG化材料を精製することにより得られ得る。N末端修飾において化学的に修飾された選択的タンパク質は、特定のタンパク質の誘導体化に利用可能な異なる型の一級アミノ基（リジン対N末端）の異なる反応性を用いた還元的アルキル化により達成し得る。適切な反応条件下で、カルボニル基含有ポリマーを用いたN末端におけるタンパク質の実質的に選択的な誘導体化を達成する。
【０２４５】
前記に示したように、タンパク質およびポリペプチドのPEG化は、任意の数の手段により達成し得る。例えば、ポリエチレングリコールは、直接的に、または介在リンカーによりタンパク質またはポリペプチドに付着させ得る。ポリエチレングリコールをタンパク質およびポリペプチドに付着するためのリンカーを使用しないシステムは、Delgadoら、Crit.Rev.Thera.Drug Carrier Sys.9:249-304、1992；Francisら、Intern.J. of Hematol.68:1-18、1998；米国特許第4,002,531号；米国特許第5,349,052号；国際公開公報第95/06058号；および国際公開公報第98/32466号に記載されている。
【０２４６】
ポリエチレングリコールを、介在リンカーを用いることなく、タンパク質およびポリペプチドのアミノ酸残基に直接付着する1つのシステムは、モノメトキシポリエチレングリコール（MPEG）、トレシルクロリド（ClSO2CH2CF3）を使用したモノメトキシポリエチレングリコール（MPEG）の修飾により作製される。トレシル化MPEGを用いたタンパク質またはポリペプチドの反応時に、ポリエチレングリコールを、直接、タンパク質またはポリペプチドのアミン基に付着する。従って、開示は、タンパク質およびポリペプチドを、2,2,2-トリフルオロエタンスルホニル基を有するポリエチレングリコール分子と反応させることにより作製したタンパク質-ポリエチレングリコール結合物を含む。
【０２４７】
ポリエチレングリコールはまた、多くの異なる介在リンカーを使用して、タンパク質およびポリペプチドに付着できる。例えば、米国特許第5,612,460号は、ポリエチレングリコールをタンパク質に連結するためのウレタンリンカーを開示する。タンパク質-ポリエチレングリコール結合物（ここでのポリエチレングリコールは、リンカーによりタンパク質またはポリペプチドに付着している）はまた、タンパク質またはポリペプチドを、MPEG-スクシンイミジルスクシネート、1,1’-カルボニルジイミダゾールを用いて活性化したMPEG、MPEG-2,4,5-トリクロロペニルカーボネート、MPEG-ρ-ニトロフェノールカーボネート、および種々のMPEG-スクシネート誘導体などの化合物との反応により作製できる。ポリエチレングリコールをタンパク質およびポリペプチドに付着するための多くの他のポリエチレングリコール誘導体および反応化学は国際公開公報第98/32466号に記載されている。
【０２４８】
各タンパク質またはポリペプチドに付着したポリエチレングリコール部分の数（すなわち置換度）も変化し得る。例えば、PEG化タンパク質およびポリペプチドは、平均して、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、17、20、またはそれ以上のポリエチレングリコール分子に連結し得る。同様に、平均的な置換度は、1分子のタンパク質またはポリペプチドあたり、1-3、2-4、3-5、4-6、5-7、6-8、7-9、8-10、9-11、10-12、11-13、12-14、13-15、14-16、15-17、16-18、17-19、または18-20の範囲のポリエチレングリコール部分である。置換度を決定する方法は、例えば、Delgadoら、Crit.Rev.Thera.Drug Carrier Sys.9:249-304、1992に考察されている。
【０２４９】
実質的に非抗原性のポリマー、好ましくはポリ（アルキレングリコール）を含むタンパク質およびポリペプチドは、例えば、米国特許第5,428,128号；米国特許第6,127,355号；および米国特許第5,880,131号に記載のように調製し得る。
【０２５０】
ポリ（エチレングリコール）（PEG）をタンパク質またはポリペプチドに共有結合的に付着するために、PEGのヒドロキシル末端基を最初に反応性官能基に変換しなければならない。このプロセスは「活性化」と頻繁に称され、生成物は「活性化PEG」と呼ばれる。反応性官能基で遠位にキャッピングしたメトキシポリ（エチレングリコール）（mPEG）を使用することが多い。1つのこのような活性化PEGは、PEGのスクシンイミジルスクシネート誘導体（SS-PEG）である。ポリ（エチレングリコール）-N-スクシンイミドカーボネートおよびその調製法を開示するAbuchowskiら、Cancer Biochem.Biophys.7:175-186、1984；および米国特許第5,122,614号も参照されたい。
【０２５１】
本開示の実践に使用し得る代替的な実質的に非抗原性のポリマーには、デキストラン、ポリビニルピロリドン、ポリサッカリド、デンプン、ポリビニルアルコール、ポリアクリルアミド、または他の類似の非免疫原性ポリマーなどの材料が含まれる。当業者は、前記は単に例示であり、本明細書に使用するのに適したポリマー物質の型を限定するものではないことを理解すると思われる。
【０２５２】
開示の1つの側面において、ポリマーは、1つまたは複数のアミノ酸と反応させ付着させるために官能性を付与または活性化した後に、ペプチドまたはタンパク質分子に導入される。官能性付与により、当業者は、ポリマーに所望の反応性基が含まれるようにポリマーを官能性を付与することを理解する。例えば米国特許第4,179,337号および米国特許第5,122,614号を参照されたい。この態様において、ポリ（アルキレングリコール）のヒドロキシル末端基は、反応性官能基へと変換および活性化される。
【０２５３】
開示の別の側面において、ポリマーを、ポリペプチドまたはタンパク質分子に導入する前に、促進部分に結合する。促進部分は、好ましくは、リジンなどのアミノ酸であるが、非アミノ酸部分も考えられる。この側面内で、アルキルまたは置換アルキルなどの多官能性付与有機部分が含まれる。このような部分は、アミンなどの親核性官能基および酸などの親電子性基、ならびに、所望のポリマーもしくはポリマー群を結合するための適切に官能性を付与された領域を有するように調製できる。
【０２５４】
促進部分により、ポリマーを、合成中にペプチドまたはタンパク質分子により容易に包含することができる。例えば、ポリペプチドまたはタンパク質中の促進アミノ酸またはアミノ酸残基に適切なカップリング剤を用いてカップリングしたポリ（アルキレングリコール）は例示である。当技術分野において既知の多くのカップリング剤の有用な総説は、Dreborgら、Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 6(4):315-165、1990にあり、特に、p.317-320を参照されたい。
【０２５５】
PEG化PYYペプチドおよびアゴニストはまた、下記の一般式であり得る：
2005514008.tif 000123
式中、
Dは、PYYペプチドまたはアゴニストの残基であり；
Xは、電子吸引基であり；
YおよびY'は独立的にOまたはSであり；
(n)は0または正の整数、好ましくは1から約12であり；
R1およびR2は、独立的に、H、C1-6アルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、ヘテロアルキル、置換へテロアルキル、および置換C1-6アルキルからなる群より選択され；
R3は、実質的に非抗原性ポリマー、C1-12直鎖または分岐アルキルまたは置換アルキル、C5-8シクロアルキルまたは置換シクロアルキル、カルボキシアルキル、カルボアルコキシアルキル、ジアルキルアミノアルキル、フェニルアルキル、フェニルアリール、または
2005514008.tif 000124
であり；かつ
R4およびR5は、独立的に、H、C1-6アルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、ヘテロアルキル、置換へテロアルキル、および置換C1-6アルキルからなる群より選択されるか、または一緒に環式C5-C7環を形成する。米国特許第6,127,355号を参照されたい。
【０２５６】
一般的なアルキル基にはC1-6アルキル基が含まれ、これにはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、ペンチル、2-ペンチル、3-ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、2-ヘキシル、3-ヘキシル、2-メチル-1-ペンチル、3-メチル-1-ペンチル、4-メチル-1-ペンチルなどが含まれる。
【０２５７】
好ましいアリール基は、C6-14アリール基であり、これには一般的にフェニル、ナフチル、フルオレニル、フェナントリル、およびアントラシル基が含まれる。
【０２５８】
一般的なアルキル置換アリール基には、C1-6アルキル基のいずれかにより置換された前記のいずれかのアリール基が含まれ、これには、Ph(CH2)n基（nは1-6である）、例えば、トリル、o-キシリル、m-キシリル、およびp-キシリル、エチルフェニル、1-プロピルフェニル、2-プロピルフェニル、1-ブチルフェニル、2-ブチルフェニル、t-ブチルフェニル、1-ペンチルフェニル、2-ペンチルフェニル、3-ペンチルフェニルが含まれる。
【０２５９】
一般的なシクロアルキル基には、C3-8シクロアルキル基が含まれ、これには、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシクロオクチル基が含まれる。
【０２６０】
一般的な電子吸引基には、O、NR1、S、SO、およびSO2が含まれ、R1は前記に定義した通りである。
【０２６１】
PYYアンタゴニスト
Y受容体アンタゴニストの使用も考えられる。Y受容体アンタゴニストは、Y受容体に結合し、Y受容体アゴニスト（例えば、PYY、NPY、またはPP（以下の表1-3を参照されたい））の生理的作用を遮断する物質（一般的にはリガンド）である。これらのアンタゴニストは、PYY、NPY、またはPPのペプチドアンタゴニストおよび非ペプチドアンタゴニストであり得る。
【０２６２】
ペプチドアンタゴニストには、Y受容体のアンタゴニストとして作用するペプチドを生じる、PYY、NPY、またはPPペプチドの天然アミノ酸配列の修飾、突然変異体、断片、および／またはそのバリアント（例えば、N末端アミノおよび／またはC末端カルボキシル基の欠失、アミノ酸置換、欠失、挿入、および修飾による）が含まれる。さらに、PYY、NPY、またはPPアミノ酸配列は、Y受容体においてアンタゴニストとして作用する、融合またはキメラタンパク質であり得る。これらのペプチドはまた、脂質化、PEG化、アミド化、グリコシル化、アシル化、硫酸化、リン酸化、アセチル化、および環化などのプロセスにより修飾され得る。
【０２６３】
Y受容体の多くの非ペプチドアンタゴニストが当技術分野において知られており、本発明での使用が考えられる。（以下の表5を参照されたい）。任意の既知のPYY、NPY、またはPP非ペプチドアンタゴニストが本発明において有用であり得る。
【０２６４】
（表５）PYYおよびNPYアンタゴニスト
Y受容体の例示的アンタゴニストには、下記が含まれるがこれに限定されない：
BIBO3304
参照文献: Berglund, MM. Biochem Pharmacol 60(12):1815-22、2000年12月15日
SR120819A
1-[2-[2-(2-ナフチルスルファモイル)-3-フェニルプロピオンアミド]-3-[4-[N-[4-(ジメチルアミノメチル)-シス-シクロヘキシルメチル]アミジノ]フェニル]プロピオニル]ピロリジン、(S,R)立体異性体
参照文献: Berglund, MM. Biochem Pharmacol 60(12):1815-22、2000年12月15日
BIIE0246
(S)-N2-[[1-[2-[4-[(R,S)-5,11-ジヒドロ-6(6h)-オキソジベンズ[b,e]アゼピン-11-yl]-1-ピペラジニル]-2-オキソエチル]シクロペンチル]アセチル]-N-[2-[1,2-ジヒドロ-3,5-(4H)-ジオキソ-1,2-ジフェニル-3H-1,2,4-トリアゾール-4-イル]エチル]-アルギニンアミド
参照文献: Malmstrom、Life Sci 69(17):1999-2005、2001年9月14日
BIBP 3226
[(R)-N2-(ジフェニルアセチル)-N-[(4-ヒドロキシフェニル)メチル] -D-アルギニン-アミド]および近年記載されたペプチド構造[Ile-Glu-Pro-Orn-Tyr-Arg- Leu-Arg-Tyr-NH2,サイクリック(2,4'), (2',4)-ジアミド]
参照文献: Doods, H.N. J Pharmacol Exp Ther 275(1):136-42,1995年10月
BIBP 3435
参照文献: Lundberg J.M.、Modin A. Br J Pharmacol 116(7):2971-82,1995年12月
H 394/84
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-[スピロ(インデン-4,1'-ピペリジン-1-イル)]プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル
参照文献: Malmstrom, R.E. Eur J Pharmacol 418(1-2):95-104、2001年4月20日
H 409/22
(2R)-5-([アミノ(イミノ)メチル]アミノ)-2-[(2,2-ジフェニルアセチル)アミノ]-N-[(IR)-1 -(4-ヒドロキシフェニル)エチル]-ペンタンアミド
参照文献: Malmstrom, R.E. Life Sci 69(17):1999-2005、2001年9月14日
1229U91
参照文献: Schober, DA. Peptides 19(3):537-42,1998.
L-152,804
参照文献: Kanatani, A. Biochem Biophys Res Commun 272(1):169-73、2000年5月27日
アミノアルキル置換ピラゾロ[l,5,-a]-1,5-ピリミジンおよびピラゾロ[l,5-a]-l,3,5-トリアジン
参照文献:米国特許第6,372,743号
1,4-ジヒドロピリジンのアルキルおよびシクロアルキル誘導体
（例えば、1,4-ジヒドロ-2,6-ジメチル-4-[4- [[[[3-[4-(3-メトキシフェニル)-1-ピペリジニル]プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]ブチル]-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル)
参照文献:米国特許第6,444,675号
4-(3-置換-フェニル)-1,4-ジヒドロピリジン誘導体
参照文献:米国特許第5,635,503号
4-フェニル-1,4-ジヒドロピリジンのスクアレート誘導体
例えば、1,4-ジヒドロ-4-[3-[[2-[[3-[4-(3-メトキシフェニル)-1-ピペリジニル]プロピル]アミノ]-3,4-ジオキソ-1-シクロブテン-1-イル]アミノ]フェニル]-2,3-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル
参照文献:米国特許第6,432,960号
置換アミドY受容体アンタゴニスト、例えば：
N-(4-ジエチルアミノ-フェニル)-2-フェニル-2-ピリジン-4-イル-アセトアミド；
2-(4-フルオロ-フェニル)-2-ピリジン-4-イル-N-(3,4,5,6-テトラヒドロ-2H-[1,2']ビピリジン イル-5'イル)-アセトアミド；
2-フェニル-2-ピリジン-4-イル-N-(3,4,5,6-テトラヒドロ-2H-[1,2']ビピリジニル-5'-yl)-アセトアミド；
N-(4-ジエチルアミノ-フェニル)-2-フェニル-2-ピリジン-2-イル-アセトアミド；
N-(6-ジエチルアミノ-ピリジン-3-イル)-2,2-ジフェニルアセトアミド；
N-(4-ジエチル-スルファモイル-フェニル)-2-フェニル-2-ピリジン-4-イル-アセトアミド；
2,2-ジフェニル-N-(6-ピロリジン-1-イル-ピリジン-3-イル)-アセトアミド；
2,2-ジフェニル-N-(3,4,5,6-テトラヒドロ-2H-[ 1,2']ビピリジニル-5'-イル)-アセトアミド；
N-[6-(2,5-ジメチル-ピロリジン-1-イル)-ピリジン-3-イル] -2,2-ジフェニル-アセトアミド；
N-(4-ジエチルスルファモイル-フェニル)-2,2-ジフェニル-アセトアミド；および
N-(4-ジメチルスルファモイル-フェニル)-2,2-ジフェニル-アセトアミド。
参照文献:米国特許第6,407,120号
【０２６５】
カルバゾールY受容体アンタゴニスト、例えば：
2-ジメチルアミノ-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-アセトアミド；
3-ジエチルアミノ-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-プロピオンアミド；
N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-2-フルオロ-ベンズアミド；
4-ジメチルアミノ-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-ブチルアミド；
N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-2-ヒドロキシ-2,2-ジフェニル-アセトアミド；
N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-2-ヒドロキシ-2-メチル-プロピオンアミド；
N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-2-ヒドロキシ-2-メチル-ブチルアミド；
N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-2-ヒドロキシ-2-フェニル-プロピオンアミド；
(R)-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-2-ヒドロキシ-2-フェニル-プロピオンアミド；
2-ブロモ-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-アセトアミド；および
3-ジメチルアミノ-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-プロピオンアミド。
【０２６６】
2-[ビス-(2-ヒドロキシ-エチル)-アミノ]-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-アセトアミド；
2-ベンジルアミノ-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-アセトアミド；
3-ジフェニルアミノ-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-プロピオンアミド；および
N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-3-(4-ピペリジン-1-イルメチル-フェノキシ)-プロピオンアミド；
N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-3-[メチル-(1,2,3,4-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル)-アミノ]-プロピオンアミド；
N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-3-(キノリン-7-イルオキシ)-プロピオンアミド；および
2-[ビス-(2-ヒドロキシ-エチル)-アミノ]-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-アセトアミド。
3-ブロモ-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-プロピオンアミド；N-(9-イソプロピル-9H-カルバゾール-3-イル)-トリフルオロアセトアミド；
4-ジメチルアミノ-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-N-メチル-ブチルアミド；
N-(9-メチル-9H-カルバゾール-3-イル)-トリフルオロアセトアミド；
1-ヒドロキシ-シクロプロパンカルボン酸(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-アミド；
2-(4-クロロ)-ベンジルアミノ-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-アセトアミド。
2-(4-フルオロ)-ベンジルアミノ-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-アセトアミド；
(R)-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-2-(1-フェニル-エチルアミノ)-アセトアミド；
(R)-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-2-(1-(4-クロロ)-フェニル-エチルアミノ)-アセトアミド；
2-(3-ジエチルアミノ-2-ヒドロキシ-プロピルアミノ)-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-アセトアミド；
2-(ベンジル-イソプロピル-アミノ)-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-アセトアミド；
N-3-ブロモ-(9-エチル-9H-カルバゾール-6-イル)-トリフルオロアセトアミド；
N-(9-エチル-6-ホルミル-9H-カルバゾール-3-イル)-トリフルオロアセトアミド；
N-(9-エチル-6-ヒドロキシメチル-9H-カルバゾール-3-イル)-トリフルオロアセトアミド；
N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-メタンスルホンアミド；
N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-クロロメタンスルホンアミド；
2-ブロモ-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-アセトアミド；および
3-ジメチルアミノ-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-プロピオンアミド。
【０２６７】
2-[ビス-(2-ヒドロキシ-エチル)-アミノ]-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-アセトアミド；
2-ベンジルアミノ-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-アセトアミド；
3-ジフェニルアミノ-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-プロピオンアミド；
N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-3-(4-ピペリジン-1-イルメチル-フェノキシ)-プロピオンアミド；
N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-3-[メチル-(1,2,3,4-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル)-アミノ]-プロピオンアミド；
N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-3-(キノリン-7-イルオキシ)-プロピオンアミド；
2-[ビス-(2-ヒドロキシ-エチル)-アミノ]-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-アセトアミド；
3-ブロモ-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-プロピオンアミド；および
N-(9-イソプロピル-9H-カルバゾール-3-イル)-アセトアミド。
【０２６８】
4-ジメチルアミノ-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-N-メチル-ブチルアミド；
N-(9-メチル-9H-カルバゾール-3-イル)-トリフルオロアセトアミド；
1-ヒドロキシ-シクロプロパンカルボン酸(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-アミド；
2-(4-クロロ)-ベンジルアミノ-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-アセトアミド；および
2-(4-フルオロ)-ベンジルアミノ-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-アセトアミド。
【０２６９】
(R)-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-2-(1-フェニル-エチルアミノ)-アセトアミド；
(R)-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-2-(1-(4-クロロ)-フェニル-エチルアミノ)-アセトアミド；
(R)-、(S)-、または(R)-および(S)-2-(3-ジエチルアミノ-2-ヒドロキシ-プロピルアミノ)-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-アセトアミドの混合物；
(S)-N-(6-tert-ブチル-9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-2-(3-ジエチルアミノ-2-ヒドロキシ-プロピルアミノ)-アセトアミド、2-(ベンジル-イソプロピル-アミノ)-N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-アセトアミド；
N-3-ブロモ-(9-エチル-9H-カルバゾール-6-イル)-トリフルオロアセトアミド；
N-(9-エチル-6-ホルミル-9H-カルバゾール-3-イル)-トリフルオロアセトアミド；および
N-(9-エチル-6-ヒドロキシメチル-9H-カルバゾール-3-イル)-トリフルオロアセトアミド。
【０２７０】
N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-メタンスルホンアミド；および
N-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-クロロメタンスルホンアミド。
参照文献:米国特許第6,399,631号
【０２７１】
種々のジヒドロピリジン誘導体：
参照文献:米国特許第4,829,076号
【０２７２】
4-(3-置換-フェニル)-1,4-ジヒドロピリジンのシアノグアニジン誘導体
参照文献:米国特許第6,001,836号
【０２７３】
NPY Y5受容体アンタゴニストであるアミド誘導体
参照文献:米国特許第6,410,792号
【０２７４】
4-フェニル-1,4-ジヒドロピリジンのチオ尿素連結ピペラジンおよびピペリジン誘導体、例えば：
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-[4-(3-メトキシフェニル)ピペリジニル]プロピル]アミノ]カルボノチオイル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル、
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-(4-フェニルピペリジニル)プロピル]アミノ]カルボノチオイル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル、および
1,4-ジヒドロ-4-[4-[[[[3-(4-シクロヘキシル-1-ピペラジニル)プロピル]アミノ]カルボノチオイル]アミノ]フェニル]- 2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル。
【０２７５】
1,4-ジヒドロ-4-[4-フルオロ-3-[[[[3-(4-フェニルピペリジニル)プロピル]アミノ]カルボノチオイル]アミノ]フェニル]- 2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル、
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-(4-メチル-1-ピペリジニル)プロピル]アミノ]カルボノチオイル]アミノ]-4-フルオロフェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル、
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-(4-エチル-1-ピペリジニル]プロピル]アミノ]カルボノチオイル]アミノ]-4-フルオロフェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル、
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-(4-プロピル-1-ピペリジニル)プロピル]アミノ]カルボニチオイル]アミノ]-4-フルオロフェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル、
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-[4-1,1-ジメチルエチル)-1-ピペリジニル]プロピル]アミノ]カルボニルチオイル]アミノ]-4-フルオロフェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル、
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-[4-(1-メチルエチル)-1-ピペリジニル]プロピル]アミノ]カルボノチオイル]アミノ]-4-フルオロフェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル、および
1,4-ジヒドロ-4-[4-[[[[3-(4-シクロヘキシル-1-ピペラジニル)プロピル]アミノ]カルボノチオイル]アミノ]-4-フルオロフェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル。
参照文献:米国特許第6,391,881号
【０２７６】
新規アリールスルホンアミドおよびスルファミド化合物
参照文献:米国特許第6,391,877号
【０２７７】
アミンおよびアミド誘導体Y受容体アンタゴニスト、例えば：
アミノ-6-[(2-フルオロフェニルスルホニル)アミノ]-N-[シス-1,2,3,4-テトラヒドロ-6-メトキシ-1-(3-ピリジニルメチル)-2-ナフテニル]-(2S)-ヘキサンアミドビス塩酸塩、
N-[5-アミノ-6-[[シス-1,2,3,4-テトラヒドロ-6-メトキシ-1-(3-ピリジニルメチル)-2-ナフタレニル]アミノ]ヘキシル]-2-フルオロベンゼンスルホンアミドトリス塩酸塩、
N-[5-アミノ-6-[[シス-1,2,3,4-テトラヒドロ-6-ヒドロキシ-1-(3-ピリジニルメチル)-2-ナフタレニル]アミノ]ヘキシル]-2-フルオロベンゼンスルホンアミドトリス塩酸塩、
(2S)-2-(アセチルアミノ)-6-[(2-フルオロフェニルスルホニル)アミノ]-N-[シス-1,2,3,4-テトラヒドロ-6-メトキシ-1-(3-ピリジニルメチル)-2-ナフテニル]ヘキサンアミドビス塩酸塩、
(2S)-2-(アセチルアミノ)-6-[(2-フルオロフェニルスルホニル)アミノ]-N-[シス-1,2,3,4-テトラヒドロ-6-ヒドロキシ-1-(3-ピリジニルメチル)-2-ナフテニル]ヘキサンアミドビス塩酸塩、
3-[(フェニルスルホニル)アミノ]-N-[シス-1,2,3,4-テトラヒドロ-6-フルオロ-1-(3-ピリジニルメチル)-2-ナフタレニル]-1-ピロリジンアセトアミド二トリフルオロ酢酸塩、
4-オキソ-1-フェニル-N-[シス-1,2,3,4-テトラヒドロ-1-(3-ピリジニルメチル)-2-ナフタレニル]-1,3,8-トリアザスピロ[4.5]デカン-8-アセトアミドビス塩酸塩、
トランス-N-[2-(4-フルオロフェニル)-3-(3-ピリジニル)プロピル]-4-[((2-フルオロフェニルスルホニル)アミノ)メチル]-1-シクロヘキサンアミド塩酸塩、
トランス-N-[[[[[2-(4-フルオロフェニル)-3-(3-ピリジニル)プロピル]アミノ]メチル]-4-シクロヘキシル]メチル]2-フルオロベンゼンスルホンアミドビス塩酸塩。
参照文献:米国特許第6,380,224号。
【０２７８】
アルキレンジアミン置換ピラゾロ(1,5-a)-1,5-ピリミジンおよびピラゾロ(1,5-a)1,3,5-トリアジン、例えば：
2-{2-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イルアミノ]-エチルアミノ}-ブタン-1-オール；
N-{2-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イルアミノ]-エチル}-N'-メチル-シクロヘキサン-1,4-ジアミン；
N-{2-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イルアミノ]-エチル}-N'-エチル-シクロヘキサン-1,4-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(4-モルホリン-4-イル-シクロヘキシル)-エタン-1,2-ジアミン；
4-{2-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イルアミノ]-エチルアミノ}-シクロヘキサノール；
3-{2-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イルアミノ]-エチルアミノ}-プロパン-1,2-ジオール；
N-{2-[3(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イルアミノ]-エチル}-N'-イソブチル-シクロヘキサン-1,4-ジアミン；
N-{2-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イルアミノ]-エチル}-N-イソブチル-シクロヘキサン-1,4-ジアミン；
4-{2-[3-(2,6-ジクロロ-4-エトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イルアミノ]-1-メチル-エチルアミノ}-シクロヘキサノール；
2-{2-[3-(2,6-ジクロロ-4-エトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イルアミノ]-エチルアミノ}-シクロヘキサノール；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾール[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(4,4,4-トリフルオロ-ブチル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-エトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(2,2,2-トリフルオロ-エチル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(2-トリフルオロメチル-シクロヘキシル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(4-トリフルオロメチル-シクロヘキシル)-エタン1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(2,2-ジフルオロ-エチル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(2-フルオロ-1-メチル-エチル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(2-フルオロ-シクロヘキシル)-エタン-1,2-ジアミン。
【０２７９】
N-[3-(2,6-ジクロロ-フェニル)-2,5-ジメチルピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(1-エチル-ピペリジン-5-a)ピリミジン-7-イル]-N-(2,2,6,6-テトラメチル-ピペリジン-4-イル)-エタン-1,2ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-19ピペリジン-4-イル-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(1-エチル-ピペリジン-3-イル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-(1ベンジル-ピロリジン-3-イル)-N'-[3-(2,6-ジクロロ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N'-ピリミジン-2-イル-エタン-1,2-ジアミン；
N-(1-ベンジルピペリジン-4-イル)-N'-[3-(2,4-ジクロロ-6-メトキシ-フェニル)-2,5-ジエチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-エタン-1,2-ジアミン；
N-(1-ベンジル-ピペリジン-4-イル)-N'-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(1-メチル-ピペリジン-4-イル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(1-エチル-ピペリジン-4-イル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-(3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(1-イソプロピル-ピペリジン-4-イル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(2,2,6,6-テトラメチル-ピペリジン-4-イル)エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(1-エチル-ピペリジン-3-イル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N'-ピペリジン-4-イル-エタン1,2-ジアミン；
N.sup.2-(1-ベンジル-ピペリジン-4-イル)-N'-[3-(2,6-ジクロロ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5ajピリミジン-7-イル]-プロパン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N'-(1-ピリジン-3-イルメチル-ピペリジン-4-イル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシフェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N'-(1-ピリジン-4-イルメチル-ピペリジン4-イル)-エタン-1,2-ジアミン；
3,5-ジクロロ-4-12,5-ジメチル-7-[2-(1-フェニル-ピロリジン-3-イルアミノ)-エチルアミノ]-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-3-イル]-フェノール；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N'-(1-ピリジン-2-イルメチル-ピペリジン-4-イル)-エタン-1,2-ジアミン；
3,5-ジクロロ-4-(2,5-ジメチル-7-[2-(1-ピリミジン-2-イル-ピペリジン-4-イルアミノ)-エチルアミノ]-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-3-イル}-ベンゾニトリル；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-エトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5a]ピリミジン-7-イル]-N'-(1-ピリミジン-2-イル-ピペリジン-4-イル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N'-(1-ピリミジン-2-イル-ピペリジン-4-イル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-(1-ベンジル-ピペリジン-4-イル)-N'-[3(2,6-ジクロロ-4-エトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-フェニル)-5-エチル-2-メチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N'-(1-ピリミジン-2-イル-ピペリジン-4-イル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-フェニル)-5イソプロピル-2-メチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N'-(1-ピリミジン-2-イル-ピペリジン-4-イル)エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,4-ジクロロ-フェニル)-5-イソプロピル-2-メチル-ピラゾロ[1,5a]ピリミジン-7-イル]-N'-(1-ピリミジン-2-イル-ピペリジン-4-イル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-エトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5a]ピリミジン-7-イル]-N-(1-ピリミジン-2-イル-ピペリジン-4-イル)-プロパン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-5イソプロピル-2-メチル-ピラゾロ[1,5a]ピリミジン-7-イル]-N2-(1-ピリミジン-2-イル-ピペリジン-4-イル)プロパン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-5-エチル-2-メチルピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(1-ピリミジン-2-イル-ピペリジン-4-イル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2-メチル-5-プロピル-ピラゾロ[1,5a]ピリミジン-7-イル]-N-(1-ピリミジン-2-イル-ピペリジン-4-イル)-プロパン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)5-エチル-2-メチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(1-ピリミジン-2-イルピペリジン-4-イル)-プロパン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-フェニル)-2-メチル-5-プロピルピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N'-(1-ピリミジン-2-イル-ピペリジン-4-イル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-フェニル)-2-メチル-5-プロピル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N2-(1-ピリミジン-2-イル-ピペリジン-4-イル)-プロパン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-フェニル)-5-エチル-2-メチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N.sup.2-(1-ピリミジン-2-イル-ピペリジン-4-イル)-プロパン1,2-ジアミン；
N-[5-エチル-2-メチル-3-(2,4,6-トリメチル-フェニル)-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N'-(1-ピリミジン-2-イル-ピペリジン-4-イル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-[5-エチル-2-メチル-3-(2,4,6-トリメチル-フェニル)-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(1-ピリミジン-2-イル-ピペリジン-4-イル)-プロパン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6ジクロロ-4-エチニル-フェニル)-2,5-ジメチルピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N'-(1-ピリミジン-2-イル-ピペリジン-4-イル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-[2-メチル-5-プロピル-3-(2,4,6-トリメチル-フェニル)-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N'-(1ピリミジン-2-イル-ピペリジン-4-イル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-[2,5-ジメチル-3-(2,4,6-トリメチルフェニル)-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N'-(1-ピリジン-2-イル-ピペリジン-4-イル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジメチル-フェニル)-5-エチル-2-メチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(1-ピリミジン-2-イル-ピペリジン-4-イル)-プロパン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジメチル-フェニル)-2-メチル-5-プロピル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(1-ピリミジン-2-イル-ピペリジン-4-イル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジメチル-フェニル)-2-メチル-5-プロピル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-NZ-(1-ピリミジン-2-イル-ピペリジン-4-イル)-プロパン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6ジメチル-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(1-ピリミジン-2-イルピペリジン-4-イル)-プロパン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,4-ジメチル-フェニル)-5-エチル-2-メチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(1-ピリミジン-2-イル-ピペリジン-4-イル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,4-ジメチル-フェニル)-2-メチル-5-プロピル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(1-ピリミジン-2-イル-ピペリジン-4-イル)-エタン-1,2-ジアミン；および
1-[4-(1-{[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシフェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イルアミノ]-メチル]-プロピルアミノ)ピペリジン-1-イル]-エタノン。
【０２８０】
N-[2,5-ジメチル-3-(2,4,6-トリメチルフェニル)-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-[2-(4-メトキシ-フェニル)-エチル]-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-[2-(4-メトキシ-フェニル)-エチル]-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N'-[2-(3-エトキシ-4-メトキシ-フェニル)-エチル]-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-[2-(4-エトキシ-3-メトキシ-フェニル)-エチル]-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,a]ピリミジン-7-イル]-N'-(1,2,3,4-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(2-ピリジン-2-イル-エチル)-エタン-1,2-ジアミン；
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(2-ピリジン-3-イル-エチル)-エタン-1,2-ジアミン；および
N-[3-(2,6-ジクロロ-4-メトキシ-フェニル)-2,5-ジメチル-ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル]-N-(2-ピリジン4-イル-エチル)-エタン-1,2-ジアミン。
参照文献:米国特許第6,372,743号
【０２８１】
スピロイソキノリノン誘導体Yアンタゴニスト、例えば：
2-(3-クロロプロピル)-2-フェニル-1,3-ジオキソラン、
2-(3-クロロプロピル)-2-(4-メトキシフェニル)-1,3-ジオキソラン、
2-(3-クロロプロピル)-2-(4-フェノキシフェニル)-1,3-ジオキソラン、
2-(3-クロロプロピル)-2-(4-ブロモフェニル)-1,3-ジオキソラン、
2-(3-クロロプロピル)-2-(4-クロロフェニル)-1,3-ジオキソラン、
N-3-クロロプロピル-N-メチルベンゼンメタンアミン塩酸塩、
N-(3-クロロプロピル)-N-(フェニルメチル)ベンゼンメタンアミン塩酸塩、
N-(2-ヒドロキシエチル)-N-メチルベンゼンメタンアミン、
クロロ-1-(4-フェノキシフェニル)エタノン、
3-クロロ-1-(4-フェノキシフェニル)プロパノン、
1’-[3-(4-フェノキシフェニル)-3-オキソプロピル]スピロ[イソキノリン-1-(2H)-4’-ピペリジン-3-(4H)-オン塩酸塩、
1’-[3-(4-ブロモフェニル)-3-オキソプロピル]スピロ[イソキノリン-1-(2H)-4’-ピペリジン-3-(4H)-オン]、
1’-[2-[(1,1’-ビフェニル)-4-イル]-2-オキソエチル]スピロ[イソキノリン-1-(2H)-4’-ピペリジン-3-(4H)-オン]、
1’-[2-(4-ブロモフェニル)-2-オキソエチル]スピロ[イソキノリン-1-(2H)-4’-ピペリジン-3-(4H)-オン]、
1’-[2-(4-フェノキシフェニル)-2-オキソエチル]スピロ[イソキノリン-1-(2H)-4’-ピペリジン-3-(4H)-オン]、塩酸塩、
1’-[2-[ビス(フェニルメチル)アミノ]エチル]スピロ[イソキノリン-1-(2H)-4’-ピペリジン-3-(4H)-オン]二塩酸塩、
1’-(4-フェニル-4-オキソブチル)スピロ[イソキノリン-1-(2H)-4’-ピペリジン-3-(4H)-オン]塩酸塩、
1’-[4-(4-メトキシフェニル)-4-オキソブチル]スピロ[イソキノリン-1-(2H)-4’-ピペリジン-3-(4H)-オン]塩酸塩、
1’-[4-(4-フェノキシフェニル)-4-オキソブチル]スピロ[イソキノリン-1-(2H)-4’-ピペリジン-3-(4H)-オン]塩酸塩、
1’-[4-(4-ブロモフェニル)-4-オキソブチル]スピロ[イソキノリン-1-(2H)-4’-ピペリジン-3-(4H)-オン]、
1’-[4-(4-クロロフェニル)-4-オキソブチル]スピロ[イソキノリン-1-(2H)-4’-ピペリジン-3-(4H)-オン]塩酸塩、
1’-[2-[(1,1’-ビフェニル)-3-イル]-2-オキソエチル]スピロ[イソキノリン-1-(2H)-4’-ピペリジン-3-(4H)-オン]塩酸塩、
1’-[3-[(1,1’-ビフェニル)-4-イル]-3-オキソプロピル]スピロ[イソキノリン-1-(2H)-4’-ピペリジン-3(4H)-オン]塩酸塩、
1’-[4-[(1,1’-ビフェニル)-4-イル]-4-オキソブチル]スピロ[イソキノリン-1-(2H)4’-ピペリジン-3-(4H)-オン]塩酸塩、
1’-[2-[(1,1’-ビフェニル)-4-イル]-2-ヒドロキシエチル]スピロ[イソキノリン-1-(2H)-4’-ピペリジン-3-(4H-オン)塩酸塩、
参照文献:米国特許第6,348,472号。
【０２８２】
トリアジン誘導体Y受容体アンタゴニスト、例えば：
N1-{[4-({[4-(イソプロピルアミノ)-6-(メチルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノ}メチル)シクロヘキシル]メチル}-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-[4-([4-(エチルアミノ)-6-(イソプロピルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-1-ナフタレンスルホンアミド)-6-(イソプロピルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノ}メチル)シクロヘキシル]メチル}-1-ナフタレンスルホンアミド
N1-{[4-({[4,6-ジ(イソプロピルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノ}メチル)シクロヘキシル]メチル}-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-[4-([4-(イソプロピルアミノ)-6-(プロピルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル3メチル-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-[4-([4-(ブチルアミノ)-6-(イソプロピルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-[4-([4-(シクロブチルアミノ)-6-(イソプロピルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-[4-([4-(シクロプロピルアミノ)-6-(イソプロピルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-[4-([4-(イソプロピルアミノ)-6-(ペンチルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-[4-([4-[(2-シアノエチル)アミノ]-6-(イソプロピルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-[4-([4-[(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-6-(イソプロピルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-(4-[(4-(イソプロピルアミノ)-6-((2-メトキシエチル)アミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル)アミノ]メチル)シクロヘキシルメチル)-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-(4-[(4-(イソプロピルアミノ)-6-[(3-メトキシプロピル)アミノ]-1,3,5-トリアジン-2-イルアミノ)メチル]シクロヘキシルメチル)-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-{[4-({[4-}[2-(ジメチルアミノ)エチル]アミノ}-6-(イソプロピルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノ}メチル)シクロヘキシル]メチル}-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-[4-([4-[3-(1H-1-イミダゾリル)プロピル]アミノ-6-(イソプロピルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-({4-[({4-(イソプロピルアミノ)-6-1(4-メトキシフェネチル)アミノ]-1,3,5-トリアジン-2-イル}アミノ)メチル]シクロヘキシル}メチル)-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-{[4-({[4-(ジメチルアミノ)-6-(イソプロピルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノ}メチル)シクロヘキシル]メチル}-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-[4-([4-[エチル(メチル)アミノ]-6-(イソプロピルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-[4-([4-(ジエチルアミノ)-6-(イソプロピルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-[4-([4-(イソプロピルアミノ)-6-テトラヒドロ-1H-1-ピロリル-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-(4-[(4-(イソプロピルアミノ)-6-[(2S)-2-(メトキシメチル)テトラヒドロ-1H-1-ピロリル]-1,3,5-トリアジン-2-イルアミノ)メチル]シクロヘキシルメチル)-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-{[4-({[4-(イソプロピルアミノ)-6-ピペリジノ-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノ}メチル)シクロヘキシル]メチル}-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-4-([4-(イソプロピルアミノ)-6-(2-メチルピペリジノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-[4-([4-(イソプロピルアミノ)-6-モルホリノ-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-{[4-({[4-[(2S,6S)-2,6-ジメチル-1,4-オキサジナン-4-イル]-6-(イソプロピルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノ}メチル)シクロヘキシル]メチル}-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-[4-([4-[(2-ヒドロキシエチル)(メチル)アミノ]-6-(イソプロピルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-{[4-({[4-(4-アセチルピペラジノ)-6-(イソプロピルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノ}メチル)シクロヘキシル]メチル}-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-{[4-({[4-(イソプロピルアミノ)-6-(4-イソプロピルピペラジノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノ}メチル)シクロヘキシル]メチル}-1-ナフタレンスルホンアミド、
N1-[4-([4,6-ジ(エチルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-4-(tert-ブチル)-1-ベンゼンスルホンアミド、
N1-[4-([4,6-ジ(エチルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-4-フルオロ-1-ベンゼンスルホンアミド、
N1-[4-([4,6-ジ(エチルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-2-メトキシ-5-メチル-1-ベンゼンスルホンアミド、
N1-[4-([4,6-ジ(エチルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-2-フルオロ-1-ベンゼンスルホンアミド、
N1-[4-([4,6-ジ(エチルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-2-メチル-1-ベンゼンスルホンアミド、
N3-[4-([4,6-ジ(エチルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-3-ピリジンスルホンアミド、
N1-[4-([4,6-ジ(エチルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-4-メトキシ-1-ベンゼンスルホンアミド、
N5-[4-([4,6-ジ(エチルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-2,4-ジメチル-1,3-オキサゾール-5-スルホンアミド、
N2-[4-([4,6-ジ(エチルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-2-チオフェンスルホンアミド、
N4-[4-([4,6-ジ(エチルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-1-メチル-1H-4-イミダゾールスルホンアミド、
N1-4-([4,6-ジ(エチルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-4-メチル-1-ベンゼンスルホンアミド、
N5-[4-([4,6-ジ(エチルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-2,1,3-ベンゾチアジアゾール-5-スルホンアミド、
N8-[4-([4,6-ジ(エチルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-8-キノリンスルホンアミド-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチルメタンスルホンアミド、
N1-[4-([4-(イソプロピルアミノ)-6-テトラヒドロ-1H-1-ピロリル-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-1-ピロリジンスルホンアミド、
N4-[4-([4-(イソプロピルアミノ)-6-モルホリノ-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-4-モルホリンスルホンアミド、
N1-[4-([4-(イソプロピルアミノ)-6-ピペリジノ-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-1-ピペリジンスルホンアミド、
N1-[(4-[(4,6-ジテトラヒドロ-1H-1-ピロリル-1,3,5-トリアジン-2-イル)アミノ]メチルシクロヘキシル)メチル]-4-(tert-ブチル)-1-ベンゼンスルホンアミド、
N-シクロプロピル-N'-[4-([4-(シクロプロピルアミノ)-6-(イソプロピルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチルスルファミド、
N'-[4-([4-(シクロプロピルアミノ)-6-(イソプロピルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-N,N-ジメチルスルファミド、
N1-{[4-({[4-クロロ-6-(イソプロピルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノ}メチル)シクロヘキシル]メチル}-1-ナフタレンスルホンアミド、
N'-[(4-[(4,6-ジモルホリノ-1,3,5-トリアジン-2-イル)アミノ]メチルシクロヘキシル)メチル]-N,N-ジメチルスルファミド、
N1-[4-([4-クロロ-6-(イソプロピルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-4-(tert-ブチル)-1-ベンゼンスルホンアミド、
N1-[4-([4-(シクロプロピルアミノ)-6-テトラヒドロ-1H-1-ピロリル-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-4-フルオロ-1-ベンゼンスルホンアミド、
N'-((4-(((4,6-ジクロロ-1,3,5-トリアジン-2-イル)アミノ)メチル)シクロヘキシル)メチル)-N,N-ジメチルスルファミド、
N1-[(4-[(4,6-ジテトラヒドロ-1H-1-ピロリル-1,3,5-トリアジン-2-イル)アミノ]メチルシクロヘキシル)メチル]-2-メトキシ-5-メチル-1-ベンゼンスルホンアミド、
N1-[4-([4-(シクロプロピルアミノ)-6-(2-ピリジル)-1,3,5-トリアジン-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-4-フルオロ-1-ベンゼンスルホンアミド、
N1-[4-(アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-4-フルオロ-1-ベンゼンスルホンアミド、
N1-[4-(アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-4-フルオロ-1-ベンゼンスルホンアミド、
N2,N4-ジエチル-N6-[5-(1H-1-ピラゾリル)ペンチル]-1,3,5-トリアジン-2,4,6-トリアミン、
N2,N4-ジエチル-N6-[3-(1H-1-イミダゾリル)プロピル]-1,3,5-トリアジン-2,4,6-トリアミン
N2,N4-ジエチル-N6-(2-ピリジルメチル)-1,3,5-トリアジン-2,4,6-トリアミン
参照文献:米国特許第6,340,683号
【０２８３】
三環式化合物Y受容体アンタゴニスト、例えば：
トランス-N2-(4-ジメチルアミノスルホニルアミノメチル)シクロヘキシル-9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-アミン；
1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-{5-(ジメチルアミノスルホニル-アミノ)ペンチル}アミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-9-フルオロ-2-(5-(2-フルオロフェニル)スルホニルアミノ)ペンチルアミノ-4,5-ジヒドロ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(5-(1-ナフチル)スルホニルアミノ)-ペンチルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(4-(メタンスルホニルアミノ)-ブチル)アミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(4-(ジメチルアミノスルホニル-アミノ)ブチル)アミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-9-フルオロ-2-(4-(2-フルオロフェニル)スルホニルアミノ)ブチルアミノ-4,5-ジヒドロ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(4-((2(S)-メトキシメチル)-ピロリジン-1-イル)スルホニル)フェニルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(5-(メチルスルホニルアミノ)-ペンチル)アミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(4-(メチルスルホニルアミノ-メチル)シクロヘキシル)アミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(5-(2,4-ジフルオロフェニル)スルホニルアミノ)ペンチルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(5-イソプロピルスルホニルアミノ)-ペンチルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(5-(ジエチルアミノスルホニル-アミノ)ペンチル)アミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(5-(2-メトキシ-5-メチルフェニル)スルホニルアミノ)ペンチルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-2-(5-ベンジルスルホニルアミノ)ペンチルアミノ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-2-(5-(3,4-ジフルオロフェニル)スルホニルアミノ)ペンチルアミノ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(5-(4-メトキシフェニル)スルホニルアミノ)ペンチルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(5-(2-チエニル)スルホニルアミノ)-ペンチルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-9-フルオロ-2-(5-(2-トリフルオロエチル)スルホニルアミノ)ペンチルアミノ-4,5-ジヒドロ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-9-フルオロ-2-(5-エチルスルホニルアミノ)ペンチルアミノ-4,5-ジヒドロ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-2-(4-ジエチルアミノスルホニルアミノ)ブチルアミノ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(5-(1-メチルイミダゾール-4-イル)スルホニルアミノ)ペンチルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(5-(3,5-ジメチルイソキサゾール-4-イル)スルホニルアミノ)ペンチルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(5-アミノスルホニルアミノ)ペンチルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-1-アザ-9-フルオロ-(2-(4-(2-フルオロフェニル)スルホニルアミノ-メチル)シクロヘキシルアミノ-4,5-ジヒドロ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-{4-(4-メトキシフェニル)-スルホニルアミノメチル}シクロヘキシルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-N2-(4-(2,6-ジフルオロフェニルスルホニル)アミノメチル)シクロヘキシル-9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ-[d][1,3]-チアゾール-2-アミン；
トランス-1-アザ-2-{4-ベンジルスルホニルアミノメチル}シクロヘキシルアミノ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-N2-(4-(2-チエニルスルホニル)アミノメチル)シクロヘキシル-9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-アミン；
トランス-N2-(4-エチルスルホニルアミノメチル)シクロヘキシル-9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-アミン；
トランス-1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-{4-(1-メチルイミダゾリル-4-イル)スルホニルアミノメチル}シクロヘキシルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-{4-(3,5-ジメチルイソキサゾール-4-イル)スルホニルアミノメチル}シクロヘキシルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン)-シクロヘキシルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(4-ジエチルアミノスルホニルアミノ)-シクロヘキシルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(4-(4-メトキシフェニル)スルホニルアミノ)-シクロヘキシルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(4-(2-チエニル)スルホニル-アミノ)-シクロヘキシルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(4-(2,2,2-トリフルオロ-エチル)スルホニルアミノ)-シクロヘキシルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(4-(2,2,2-トリフルオロエチル)-スルホニルアミノ)ブチルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-1-アザ-9-フルオロ-2-{4-(3,4-ジフルオロフェニル)スルホニル-アミノメチル}シクロヘキシルアミノ-4,5-ジヒドロ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-1-アザ-9-フルオロ-2-{4-トリフルオロメチルスルホニルアミノメチル}シクロヘキシルアミノ-4,5-ジヒドロ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-1-アザ-9-フルオロ-2-{4-(2-フルオロ)フェニルスルホニルアミノ}-シクロヘキシルメチルアミノ-4,5-ジヒドロ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-N2-(4-メチルスルホニルアミノ)シクロヘキシルメチル-9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-アミン：トランス-N2-(4-アミノ)シクロヘキシルメチル-9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-アミン二塩酸塩の混合物；
トランス-N2-(4-アミノスルホニルアミノ)シクロヘキシルメチル-9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-アミン；
トランス-N2-(4-アミノ)シクロヘキシルメチル-9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-アミン；
トランス-N2-(4-アミノスルホニルアミノ)シクロヘキシルメチル-9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-アミン；
9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-アミン：
6-ブロモ-3-フルオロ-6,7,8,9-テトラヒドロ-5H-ベンゾ[a]シクロヘプテン-5-オン；
N1-(9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-イル)-5-ブロモペンタンアミド；
1-5-[(9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]-チアゾール-2-イル)アミノ]-5-オキソペンチル-1,2-トリアザジエン-2-イウム；
N1-(9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-イル)-5-アミノペンタンアミド；
N1-(9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-イル)-5-[(メチルスルホニル)アミノ]ペンタンアミド；
トランス-N2-(4-アミノスルホニルアミノメチル)シクロヘキシル-4,5-ジヒドロ-ベンゾ[2,3]オキセピノ[4,5-d][1,3]チアゾール-2-アミン；
トランス-N2-(4-メチルスルホニルアミノメチル)シクロヘキシル-4,5-ジヒドロ-ベンゾ[2,3]オキセピノ[4,5-d][1,3]チアゾール-2-アミン；
トランス-1-アザ-4,5-ジヒドロ-2-{4-(2-メトキシ-5-メチル)フェニル-スルホニルアミノメチル}シクロヘキシルアミノ-6-オキサ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
N1-(9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]-チアゾール-2-イル)-5-[(2-メトキシ-5-メチルフェニル)スルホニル]-アミノペンタンアミド；
N1-(9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]-チアゾール-2-イル)-5-アミノペンタンアミド；
トランス-N2-(4-メチルスルホニルアミノ)シクロヘキシルメチル-4,5-ジヒドロ-ベンゾ[2,3]オキセピノ[4,5-d][1,3]チアゾール-2-アミン；
トランス-1-アザ-4,5-ジヒドロ-2-{4-(2-メトキシ-5-メチルフェニル)-スルホニルアミノ}シクロヘキシルメチルアミノ-6-オキサ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-N2-(4-エチルスルホニルアミノ)シクロヘキシルメチル-9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-アミン；
トランス-1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-{4-イソプロピルスルホニルアミノ}シクロヘキシルメチルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(4-(3-ピリジルスルホニルアミノ)シクロヘキシル)アミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(5-(3-ピリジル)スルホニルアミノ)ペンチルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(4-(3-ピリジル)スルホニルアミノ)ブチルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-{2-(2-メチルスルホニルアミノ)エトキシ}エチルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-{2-[2-(2-メトキシ-5-メチルフェニル)スルホニルアミノ]エトキシ}エチルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(4-(3-ピリジル)スルホニルアミノメチル)シクロヘキシルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-N2-(4-エチルスルホニルアミノ)シクロヘキシルメチル-8-メトキシ-4,5-ジヒドロ-ベンゾ[2,3]オキセピノ[4,5-d][1,3]チアゾール-2-アミン；
トランス-1-アザ-4,5-ジヒドロ-8-メトキシ-2-{4-メチルスルホニル-アミノ)シクロヘキシルメチルアミノ-6-オキサ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-{4-(3-ピリジル)スルホニルアミノ}シクロヘキシルメチルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-1-アザ-4,5-ジヒドロ-9-メトキシ-2-{4-メチルスルホニル-アミノ}シクロヘキシルメチルアミノ-6-オキサ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-N2-(4-エチルスルホニルアミノ)シクロヘキシルメチル-9-メトキシ-4,5-ジヒドロベンゾ[2,3]オキセピノ[4,5-d][1,3]チアゾール-2-アミン；
トランス-N2-(4-メチルスルホニルアミノ)シクロヘキシルメチル-7-メトキシ-4,5-ジヒドロ-ベンゾ[2,3]オキセピノ[4,5-d][1,3]チアゾール-2-アミン塩酸塩；
トランス-1-アザ-4,5-ジヒドロ-7-メトキシ-2-{4-ジメチルアミノスルホニルアミノ}シクロヘキシルメチルアミノ-6-オキサ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-N2-(4-ジメチルホスホニルアミノ)シクロヘキシルメチル-9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-アミン；
トランス-N2-(4-エトキシカルボニルアミノ)シクロヘキシルメチル-9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-アミン塩酸塩；
1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(2-(2-イソプロピルスルホニルアミノ)-エトキシ)エチルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]-アズレン；
2-(4-メチルスルホニルアミノメチル)シクロヘキシルアミノ-4H-クロメノ[4,3-d]チアゾール；
トランス-1-アザ-4,5-ジヒドロ-8-メトキシ-2-(4-メチルスルホニル-アミノ)シクロヘキシルメチルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]-アズレン；
トランス-1-アザ-4,5-ジヒドロ-8-メトキシ-2-(4-メチルスルホニルアミノ-メチル)シクロヘキシルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]-アズレン；
トランス-1-アザ-4,5-ジヒドロ-2-(4-イソプロピルスルホニルアミノメチル)-シクロヘキシルアミノ-8-メトキシ-3-チア-ベンゾ[e]-アズレン；
トランス-1-アザ-4,5-ジヒドロ-2-(4-メチルスルホニルアミノメチル)-シクロヘキシルアミノ-7-メトキシ-3-チア-ベンゾ[e]-アズレン；
トランス-1-アザ-4,5-ジヒドロ-2-(4-エチルカルボニルアミノメチル)-シクロヘキシルアミノ-9-フルオロ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(4-(4-モルホリニル)-スルホニルアミノメチル)シクロヘキシルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(4-(2-メトキシ)エトキシ-カルボニルアミノメチル)シクロヘキシルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン2-メトキシエチルN-(t4-[(9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]-シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-イル)アミノ]シクロヘキシル}メチル)-カルバメート；
tert-ブチルN-[(4-{[(ベンゾイルアミノ)カルボチオイル]アミノ}シクロ-ヘキシル)メチル]カルバメート；
tert-ブチル-N-({4-[(アミノカルボチオイル)アミノ]シクロヘキシル}-メチル)カルバメート；
6-ブロモ-3-フルオロ-6,7,8,9-テトラヒドロ-5H-ベンゾ[a]シクロヘプテン-5-オン；
tert-ブチル-N-({4-[(9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]-シクロヘプタ-[d][1,3]チアゾール-2-イル)アミノ]シクロヘキシル}メチル)-カルバメート；
トランス-N2-[4-(アミノメチル)シクロヘキシル]-9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-アミン；
トランス-1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(4-(2-メトキシ)エトキシ-カルボニルアミノメチル)シクロヘキシルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン2-メトキシエチルN-({4-[9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-イル]アミノ]シクロヘキシル}-メチル)-カルバメート；
トランス-N2-(4-(1-モルホリニルスルホニルアミノメチル)シクロヘキシル-8-メトキシ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-アミン塩酸塩；
3-({4-[(9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-イル)アミノ]シクロヘキシル}メチル)-1,3-オキサゾラン-2-オン；
2-クロロエチル-N-({4-[(9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]-シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-イル)アミノ]シクロヘキシル}メチル)-カルバメート；
3-({4-[(9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-イル)アミノ]シクロヘキシル}メチル)-1,3-オキサゾラン-2-オン；
N1-({4-[(9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ-[d][1,3]チアゾール-2-イル)アミノ]シクロヘキシル}メチル)-2-メトキシアセトアミド；
N1-({4-[(9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]-シクロヘプタ-[d][1,3]チアゾール-2-イル)アミノ]シクロヘキシル}メチル)アセトアミド；
トランス-1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(4-(N-プロピルホルムアミド)-メチル)シクロヘキシルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-1-アザ-9-フルオロ-4,5-ジヒドロ-2-(4-(N-イソプロピルホルムアミド)メチル)シクロヘキシルアミノ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
N1-{4-[(4,5-ジヒドロベンゾ[2,3]オキセピノ[4,5-d][1,3]チアゾール-2-イルアミノ)メチル]シクロヘキシル}-2-メトキシアセトアミド；
ベンジル-N-(4-{[(アミノカルボチオイル)アミノ]メチル}シクロヘキシル)-カルバメート；
ベンジル-N-{4-[(4,5-ジヒドロベンゾ[2,3]オキセピノ[4,5-d][1,3]-チアゾール-2-イルアミノ)メチル]シクロヘキシル}カルバメート；
N2-[(4-アミノシクロヘキシル)メチル]-4,5-ジヒドロベンゾ[2,3]オキセピノ[4,5-d][1,3]チアゾール-2-アミン；
N-{[4-(4,5-ジヒドロベンゾ[2,3]オキセピノ[4,5-d][1,3]チアゾール-2-イルアミノ)シクロヘキシル]メチル}-N-プロピルホルムアミド；
N1-{[4-(4,5-ジヒドロベンゾ[2,3]オキセピノ[4,5-d][1,3]チアゾール-2-イルアミノ)シクロヘキシル]メチル}プロパンアミド；
N2-{4-[(プロピルアミノ)メチル]シクロヘキシル}-4,5-ジヒドロベンゾ-[2,3]オキセピノ[4,5-d][1,3]チアゾール-2-アミン；
N-{[4-(4,5-ジヒドロベンゾ[2,3]オキセピノ[4,5-d][1,3]チアゾール-2-イルアミノ)シクロヘキシル]メチル}-N-プロピルホルムアミド；
N-{4-[(4,5-ジヒドロベンゾ[2,3]オキセピノ[4,5-d][1,3]チアゾール-2-イルアミノ)メチル]シクロヘキシル}-N-(2-メトキシエチル)ホルムアミド；
N2-({4-[(2-メトキシエチル)アミノ]シクロヘキシル}メチル)-4,5-ジヒドロベンゾ[2,3]オキセピノ[4,5-d][1,3]チアゾール-2-アミン；
N-{4-[(4,5-ジヒドロベンゾ[2,3]オキセピノ[4,5-d][1,3]チアゾール-2-イルアミノ)メチル]シクロヘキシル}-N-(2-メトキシエチル)ホルムアミド；
トランス-1-アザ-2-(4-(n-(エチル)ホルムアミド)シクロヘキシル)メチル-アミノ-4,5-ジヒドロ-6-オキサ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
トランス-2-(4-アセトアミド)シクロヘキシルメチルアミノ-1-アザ-4,5-ジヒドロ-6-オキサ-3-チア-ベンゾ[e]アズレン；
ベンジル-N-[4-({[(ベンゾイルアミノ)カルボチオイル]アミノ}メチル)-シクロヘキシル]カルバメート；
ベンジル-N-(4-{[(アミノカルボチオイル)アミノ]メチル}シクロヘキシル)-カルバメート；
ベンジル-N-{4-[(4,5-ジヒドロベンゾ[2,3]オキセピノ[4,5-d][1,3]-チアゾール-2-イルアミノ)メチル]シクロへキシル}カルバメート；
N2-[(4-アミノシクロヘキシル)メチル]-4,5-ジヒドロベンゾ[2,3]-オキセピノ[4,5-d][1,3]チアゾール-2-アミン；
N1-{4-[(4,5-ジヒドロベンゾ[2,3]オキセピノ[4,5-d][1,3]-チアゾール-2-イルアミノ)メチル]シクロヘキシル}アセトアミド；
N2-{[4-(エチルアミノ)シクロヘキシル]メチル}-4,5-ジヒドロベンゾ-[2,3]オキセピノ[4,5-d][1,3]チアゾール-2-アミン；
N-{4-[(4,5-ジヒドロベンゾ[2,3]オキセピノ[4,5-d][1,3]チアゾール-2-イルアミノ)メチル]シクロヘキシル}-N-エチルホルムアミド；
N-(4-[(4,5-ジヒドロベンゾ[2,3]オキセピノ[4,5-d][1,3]チアゾール-2-イルアミノ)メチル]シクロヘキシル}-N-プロピルホルムアミド；
N2-{[4-(プロピルアミノ)シクロヘキシル]メチル}-4,5-ジヒドロベンゾ-[2,3]オキセピノ[4,5-d][1,3]チアゾール-2-アミン；
N-{4-[(4,5-ジヒドロベンゾ[2,3]オキセピノ[4,5-d][1,3]チアゾール-2-イルアミノ)メチル]シクロヘキシル}-N-プロピルホルムアミド；
N1-{4-[(9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-イル)アミノ]ベンジル}-2-メトキシアセトアミド；
N-{4-[(9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-イル)アミノ]ベンジル}メタンスルホンアミド；
N2-[4-(アミノメチル)フェニル]-9-フルオロ-5,6-ジヒドロ-4H-ベンゾ[6,7]シクロヘプタ[d][1,3]チアゾール-2-アミン。
参照文献:米国特許第6,225,330号。
【０２８４】
二環式化合物Y受容体アンタゴニスト、例えば：
2-(5-ジエチルアミノスルホニルアミノ)ペンチルアミノ-4-(2-ピリジル)-チアゾール塩化水素
4-(2-ピリジル)-2-(5-(2-チエニル)スルホニルアミノペンチル)-アミノ-チアゾール塩化水素
2-(5-(2-フルオロフェニル)スルホニルアミノ)ペンチルアミノ-4-(2-ピリジル)-チアゾール塩化水素
2-(5-(4-メトキシフェニル)スルホニルアミノ)ペンチルアミノ-4-(2-ピリジル)チアゾール塩化水素
2-(5-(3,5-ジメチルイソキサゾール-4-イル)スルホニルアミノ)ペンチルアミノ-4-(2-ピリジル)チアゾール塩化水素
2-(5-(3,4-ジフルオロフェニル)スルホニルアミノ)ペンチルアミノ-4-(2-ピリジル)チアゾール塩化水素
2-(5-(2-メトキシ-5-メチルフェニル)スルホニルアミノ)ペンチルアミノ-4-(2-ピリジル)チアゾール塩化水素
2-(5-(ベンジルスルホニルアミノ)ペンチルアミノ-4-(2-ピリジル)チアゾール塩化水素
2-(5-(エチルスルホニルアミノ)ペンチル)アミノ-4-(2-ピリジル)チアゾール塩化水素
2-(5-(トリフルオロメチルスルホニルアミノ)ペンチル)アミノ-4-(2-ピリジル)チアゾール塩化水素
2-(5-(アミノスルホニルアミノ)ペンチル)アミノ-4-(2-ピリジル)チアゾール塩化水素
2-(5-(2-フルオロフェニル)スルホニルアミノ)ペンチルアミノ-4-(3-ピリジル)チアゾール塩化水素
2-(5-(3,5-ジメチルイソキサゾール-4-イル)スルホニルアミノ)ペンチルアミノ-4-(3-ピリジル)チアゾール塩化水素
2-(5-(2-メトキシ-5-メチル)フェニルスルホニルアミノ)ペンチルアミノ-4-(3-ピリジル)チアゾール塩化水素
2-(5-(2-フルオロ)フェニルスルホニルアミノ)ペンチルアミノ-4-(4-ピリジル)チアゾール塩化水素
2-(5-(3,5-ジメチルイソキサゾール-4-イル)スルホニルアミノ)ペンチルアミノ-4-(4-ピリジル)チアゾール塩化水素
2-(5-(2-メトキシ-5-メチル)フェニルスルホニルアミノ)ペンチルアミノ-4-(4-ピリジル)チアゾール塩化水素
N1-{5-[(4-ベンゾ[b]チオフェン-2-イル-1,3-チアゾール-2-イル)アミノ]-ペンチル}-2-メトキシ-5-メチル-1-ベンゼンスルホンアミド
N1-(5-{[4-(5-クロロ-3-メチルベンゾ[b]チオフェン-2-イル)-1,3-チアゾール-2-イル]アミノ}ペンチル)-2-メトキシ-5-メチル-1-ベンゼン-スルホンアミド
N1-(4-{[4-(5-フェニル-3-イソキサゾリル)-1,3-チアゾール-2-イル)アミノ}-ペンチル)-2-メトキシ-5-メチル-1-ベンゼンスルホンアミド
N1-(5-{[4-(3-チエニル)-1,3-チアゾール-2-イル]アミノ}ペンチル)-2-メトキシ-5-メチル-1-ベンゼンスルホンアミド
N1-[5-({4-[1-(フェニルスルホニル)-1H-3-ピロリル]-1,3-チアゾール-2-イル}アミノ)ペンチル]-2-メトキシ-5-メチル-1-ベンゼンスルホンアミド
トランス-N8-[(4-{[4-(3-フェニル-5-イソキサゾリル)-1,3-チアゾール-2-イル]アミノ}シクロヘキシル)メチル]-8-キノリンスルホンアミド
N,N-ジメチル-N'-(5-{[4-(3-チエニル)-1,3-チアゾール-2-イル]アミノ}ペンチル)スルファミド
トランス-2-(4-(2-メトキシ-5-メチルフェニル)スルホニルアミノ)シクロヘキシルメチルアミノ-4-(2-ピリジル)チアゾール塩化二水素
トランス-2-(4-(2-フルオロフェニル)スルホニルアミノ)シクロヘキシルメチル-アミノ-4-(2-ピリジル)チアゾール塩化二水素
トランス-2-(4-(3,5-ジメチル-4-イソキサゾリル)スルホニルアミノ)シクロヘキシルメチルアミノ-4-(2-ピリジル)チアゾール塩化二水素
トランス-2-(4-(2-フルオロフェニル)スルホニルアミノ)シクロヘキシルメチル-アミノ-4-(3-ピリジル)チアゾール塩化二水素
トランス-2-(4-(2-メトキシ-5-メチルフェニル)スルホニルアミノ)シクロヘキシルメチルアミノ-4-(4-ピリジル)チアゾール塩化二水素
N1-(5-[4-(1,3-チアゾール-2-イル)-1,3-チアゾール-2-イル]アミノペンチル)-2-メトキシ-5-メチル-1-ベンゼンスルホンアミド
トランス-N1-[(4-[4-(2,5-ジメチル-1,3-チアゾール-4-イル)-1,3-チアゾール-2-イル]アミノシクロヘキシル)メチル]-2-メトキシ-5-メチル-1-ベンゼンスルホンアミド
トランス-N,N-ジメチル-N'-[(4-[4-(-1,3-チアゾール-2-イル)-1,3-チアゾール-2-イル]アミノシクロヘキシル)メチル]スルファミド
N,N-ジメチル-N'-(5-{[4-(2-チエニル)-1,3-チアゾール-2-イル]アミノ}-ペンチル)スルファミド
N1-(5-{[4-(2-チエニル)-1,3-チアゾール-2-イル]アミノ}ペンチル)-2-メトキシ-5-メチル-1-ベンゼンスルホンアミド
N1-(5-[4-(2,5-ジメチル-1,3-チアゾール-4-イル)-1,3-チアゾール-2-イル]アミノペンチル)-2-メトキシ-5-メチル-1-ベンゼンスルホンアミド
N1-(5-[4-(2,5-ジメチル-1,3-チアゾール-4-イル)-1,3-チアゾール-2-イル]アミノペンチル)-4-フルオロ-1-ベンゼンスルホンアミド
N1-(5-[4-(1,3-チアゾール-2-イル)-1,3-チアゾール-2-イル]アミノペンチル)-4-フルオロ-1-ベンゼンスルホンアミド
N'-(5-[4-(2,5-ジメチル-1,3-チアゾール-4-イル)-1,3-チアゾール-2-イル]アミノペンチル)-N,N-ジメチルスルファミド
トランス-N1-[(4-[4-(2,5-ジメチル-1,3-チアゾール-4-イル])-1,3-チアゾール-2-イル]アミノシクロヘキシル)メチル]-4-フルオロ-1-ベンゼン-スルホンアミド
トランス-N'-[(4-[4-(2,5-ジメチル-1,3-チアゾール-4-イル)-1,3-チアゾール-2-イル]アミノシクロヘキシル)メチル]-N,N-ジメチルスルファミド
トランス-N'-[4-([5-(2,5-ジメチル-1,3-チアゾール-4-イル)-1,3-チアゾール-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-N,N-ジメチル-スルファミド
トランス-N4-[4-([4-(2,5-ジメチル-1,3-チアゾール-4-イル)-1,3-チアゾール-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]メチル-4-モルホリン-スルホンアミド
トランス-N-[4-([4-(2,5-ジメチル-1,3-チアゾール-4-イル)-1,3-チアゾール-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]-N-(2-メトキシエチル)ホルムアミド
トランス-N-[4-([4-(2,5-ジメチル-1,3-チアゾール-4-イル)-1,3-チアゾール-2-イル]アミノメチル)シクロヘキシル]-N-イソプロピルホルムアミド
参照文献:米国特許第6,218,408号
【０２８５】
N-アラルキルアミノテトラリンY受容体アンタゴニスト、例えば：
rac-シス-1-(フェニルメチル)-6-メトキシ-N-(2-(3,4-ジメトキシフェニル)エチル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-2-ナフタレンアミン；
rac-シス-1-(フェニルメチル)-6-メトキシ-N-(2-(3-インドリル)エチル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-2-ナフタレンアミンヘミフマレート；
rac-シス-1-(フェニルメチル)-N-(4-フルオロフェニルメチル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-2-ナフタレンアミン一臭化水素酸塩；
rac-シス-1-(フェニルメチル)-N-(2-メトキシフェニルメチル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-2-ナフタレンアミン；
rac-シス-1-(フェニルメチル)-N-(2-メトキシフェニルメチル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-2-ナフタレンアミン一臭化水素酸塩；
rac-シス-1-(4-フルオロフェニルメチル)-N-(2-メトキシフェニルメチル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-2-ナフタレンアミン一臭化水素酸塩；
rac-トランス-1-(4-フルオロフェニルメチル)-N-(2-メトキシフェニルメチル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-2-ナフタレンアミン一シュウ酸塩；
rac-シス-1-(フェニルメチル)-N-(4-フルオロフェニルメチル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-2-ナフタレンアミン一臭化水素酸塩；
rac-シス-1-(フェニルメチル)-7-メトキシ-N-(2-メトキシフェニルメチル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-2-ナフタレンアミン一臭化水素酸塩；
rac-トランス-1-(4-フルオロフェニルメチル)-N-(2-(3-インドリル)エチル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-2-ナフタレンアミン一シュウ酸塩；
rac-シス-1-(フェニルメチル)-N-(2-メトキシフェニル-2-オキソメチル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-2-ナフタレンアミン一臭化水素酸塩；
rac-シス-1-(フェニルメチル)-7-メトキシ-N-(2-(3-インドリル)エチル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-2-ナフタレンアミン0.8フマレート0.8メタノール0.2ヒドレート；
rac-トランス-1-(フェニルメチル)-7-メトキシ-N-(2(3-インドリル)エチル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-2-ナフタレンアミン一シュウ酸塩；
rac-シス-1-(2-ナフチルメチル)-N-(2-(3-インドリル)エチル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-2-ナフタレンアミンヘミフマレートメタノール；
rac-トランス-1-(2-ナフチルメチル)-N-(2-(3-インドリル)エチル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-2-ナフタレンアミン一シュウ酸塩；
rac-シス-1-(2-ナフチルメチル)-N-(2-メトキシフェニルメチル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-2-ナフタレンアミン一臭化水素酸塩；
rac-シス-1-(フェニルメチル)-N-(2-メトキシフェニル-2-オキソエチル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-2-ナフタレンアミン；
rac-シス-1-(4-フルオロフェニルメチル)-N-(3-フェニルプロピル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-2-ナフタレンアミン一臭化水素酸塩；
rac-シス-1-(3-ピリジルメチル)-N-(2-(3,4-ジメトキシフェニル)エチル-1,2,3,4-テトラヒドロ-2-ナフタレンアミン一臭化水素酸塩；
参照文献:米国特許第6,201,025号
【０２８６】
アミド誘導体Y受容体アンタゴニスト：
参照文献:米国特許第6,048,900号
【０２８７】
N-置換アミノテトラリンY受容体アンタゴニスト、例えば：
rac-[1α,2α(トランス)]-N-[[[[[1,2,3,4-テトラヒドロ-6-メトキシ-1-(フェニルメチル)-2-ナフタレニル]アミノ]メチル]4-シクロヘキシル]メチル]2-ナフタレンスルホンアミド；
rac-[1α,2α(トランス)]-N-[[[[[1,2,3,4-テトラヒドロ-6-メトキシ-1-(フェニルメチル)-2-ナフタレニル]アミノ]-5-ペンチル]2-ナフタレンスルホンアミド；
rac-[1α,2α(トランス)]-N-[[[[[1,2,3,4-テトラヒドロ-6-メトキシ-1-(3-ピリジニルメチル)-2-ナフタレニル]アミノ]メチル]-4-シクロヘキシル]メチル]2-ナフタレンスルホンアミド；
rac-[1α,2α(トランス)]-N-[[[[[1,2,3,4-テトラヒドロ-6-フルオロ-1-(フェニルメチル)-2-ナフタレニル]アミノ]メチル]-4-シクロヘキシル]メチル]2-フルオロベンゼンスルホンアミド；
rac-[1α,2α(トランス)]-N-[[[[[1,2,3,4-テトラヒドロ-6-フルオロ-1-フェニル-2-ナフタレニル]アミノ]メチル]-4-シクロヘキシル]メチル]2-ナフタレンスルホンアミド；
rac-[1α,2α(トランス)]-N-[[[[[1,2,3,4-テトラヒドロ-6-メトキシ-1-(1-プロペン-3-イル)-2-ナフタレニル]アミノ]メチル]4-シクロヘキシル]メチル]ベンゼンスルホンアミド；
rac-[1α,2α(トランス)]-N-[[[[[1,2,3,4-テトラヒドロ-6-メトキシ-1-(3-ヒドロキシプロピル)-2-ナフタレニル]アミノ]メチル]-4-シクロヘキシル]メチル]ベンゼンスルホンアミド；
rac-[1α,2α(トランス)]-N-[[[[[1,2,3,4-テトラヒドロ-6-メトキシ-1-(n-プロピル)-2-ナフタレニル]アミノ]メチル]-4-シクロヘキシル]メチル]ベンゼンスルホンアミド。
参照文献:米国特許第6,140,354号
【０２８８】
4-フェニル-1,4-ジヒドロピリミジノン誘導体Y受容体アンタゴニスト：
参照文献:米国特許第5,889,016号
【０２８９】
ピペリジン誘導体ジヒドロピリジンY受容体アンタゴニスト：
4-ジヒドロ-[3-[[[[3-[4-(3-メトキシフェニル)-1-ピペリジニル]プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-[4-ヒドロキシ-4-(3-メトキシフェニル)ピペリジン-1-イル]プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-[4-(2-メトキシフェニル)ピペリジン-1-イル]プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-(4-フェニルピペリジン-1-イル)プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-(4-ヒドロキシ-4-フェニルピペリジン-1-イル)プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-2,6-ジメチル-4-[3-[[[[3-[4-[3-(2-プロピニルオキシ)フェニル]-1-ピペリジニル]プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-[4-シアノ-4-フェニルピペリジン-1-イル]プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-[4-(3-ヒドロキシフェニル)ピペリジン-1-イル]プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-[4-ナフタレン-1-イルピペリジン-1-イル]プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
4-[3-[[[[3-[4-(1,1’-ビフェニル-3-イル)ピペリジン-1-イル]プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-1,4-ジヒドロ-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-[4-(フェニルメチル)-ピペリジン-1-イル]プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
4-[3-[[[[3-(4-シクロヘキシル-1-ピペリジニル)プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-1,4-ジヒドロ-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-[4-ヒドロキシ-4-(2-フェノキシフェニル)-1-ピペリジニル]プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-(4-フェニル-1-ピペリジニル)プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、エチルメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-[(4-フェニルメチル)-1-ピペリジニル]プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、エチルメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[3-(4-ヒドロキシ-4-(2-メトキシフェニル)-ピペリジン-1-イル)プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、エチルメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-(4-ヒドロキシ-4-(3-メトキシフェニル)-ピペリジン-1-イル]プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、エチルメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-2,6-ジメチル-4-[3-[[[[3-[4-[3-(2-プロポキシ)フェニル]-1-ピペリジニル]-プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[2-[4-(3-メトキシフェニル)-1-ピペリジニル]エチル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル塩酸塩；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[4-[4-(3-メトキシフェニル)-1-ピペリジニル]ブチル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル塩酸塩；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-[4-(3-メトキシフェニル)-1-ピペリジニル]プロピル]メチルアミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル塩酸塩；
4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-[1,2,3,6-テトラヒドロ-4-(3-メトキシフェニル)ピリジン-1-イル]プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-(1,2,3,6-テトラヒドロ-4-フェニルピリジン-1-イル)プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-[1,2,3,6-テトラヒドロ-4-(3-ヒドロキシフェニル)ピリジン]プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-[1,2,3,6-テトラヒドロ-4-(1-ナフタレニル)-1-ピリジニル]プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[3-(4-フェニルピペリジン-1-イル)-1-オキソ-1-プロピル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[4-(4-フェニルピペリジン-1-イル)-1-オキソ-1-ブチル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[5-(4-フェニルピペリジン-1-イル)-1-オキソ-1-ペンチル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[6-(4-フェニルピペリジン-1-イル)-1-オキソ-1-ヘキシル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[5-(4-ヒドロキシ-4-フェニルピペリジン-1-イル)-1-オキソ-1-ペンチル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[5-(4-シアノ-4-フェニルピペリジン-1-イル)-1-オキソ-1-ペンチル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[4-[4-(3-メトキシフェニル)-1-ピペリジニル]ブチル]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-[4-(3-メトキシフェニル)-1-ピペリジニル]プロピル]オキシ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル塩酸塩；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-[4-(3-メトキシフェニル)ピペリジン-1-イル]プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-[4-(2-メトキシフェニル)ピリジン-1-イル]プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-[4-(3-ヒドロキシフェニル)ピペリジン-1-イル]プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-[4-ナフタレニルピペリジン-1-イル]プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
4-[3-[[[[3-(4-シクロヘキシル-1-ピペリジニル)プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-1,4-ジヒドロ-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[[3-[1,2,3,6-テトラヒドロ-4-(3-メトキシフェニル)ピリジン-1-イル]プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル]-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル；
1,4-ジヒドロ-4-[3-[[[3-[1,2,3,6-テトラヒドロ-4-(1-ナフタレニル)ピリジン-1-イル]プロピル]アミノ]カルボニル]アミノ]フェニル-2,6-ジメチル-3,5-ピリジンジカルボン酸、ジメチルエステル。
参照文献:米国特許第5,668,151号
【０２９０】
本発明は、以下の非制限的な実施例により説明される。
【０２９１】
実施例
実施例1
材料および方法
POMC-EGFPマウスの作製：
EGFPカセットは、EGFPmRNAの3’末端の正しいプロセシングを指令するEGFPコード配列の下流に、SV40ポリアデニル化シグナルと共に、それ自体のコザック共通翻訳開始部位を含む。EGFPカセットは、13kbの5’隣接配列および2kbの3’隣接配列を含むマウスPomcゲノムクローンのエキソン2の5’非翻訳領域に標準的な技術により導入した（Youngら、J Neurosci 18、6631-40、1998）。導入遺伝子を、記載のように（Youngら、J Neurosci 18、6631-40、1998）、C57BL/6Jマウス（ジャクソン・ラボラトリーズ）の1細胞期胚の前核にマイクロインジェクションを行った。初代を作製し、野生型C57BL/6Jと交配し、N1半接合性マウスを作製した。さらに、導入遺伝子にホモ接合性のN2およびその後の世代のマウスも作製した。マウスは繁殖性であり、正常な成長および発達を示す。
【０２９２】
免疫蛍光およびGFP共局在：
麻酔したマウスに、4％パラホルムアルデヒドを用いて心臓経由で灌流し、自由に浮遊している脳切片をビブラトームを用いて調製した。切片を、標準的な技術を使用して、免疫蛍光およびGFP蛍光の共局在のために処理した。一次抗血清およびその最終希釈液はウサギ抗β-エンドルフィン、1:2500v/v；ウサギ抗NPY、1:25,000v/v（Alanex Corp.）；ウサギ抗ACTH、1:2000v/v；およびマウス抗TH、1:1000v/v（Incstar）であった。濯いだ後、切片を、10mg/mlのビオチン化ウマ抗マウス/ウサギIgG1(Vector Laboratories)と共に、その後、Cy-3標識ストレプトアビジン、1:500v/v（Jackson Immunoresearch Laboratories）と共にインキュベートした。顕微鏡写真を、FITCおよびRITCフィルターセット（Chroma Technology Corp.）を使用してZeiss Axioscopで撮影した。
【０２９３】
電気生理学（実施例2）：
200μmの厚さの冠状切片を、4週令の雄POMC-EGFPマウスのARCから切り出した。切片を、[NaCl、126mM；KCl、2.5mM；MgCl2、1.2mM；CaCl2.2H2O、2.4mM；NaH2PO4.H2O、1.2mM；NaHCO3、21.4mM；グルコース、11.1mM](クレブス)中に35℃で維持し、記録する前に1時間95％O2 5％CO2で飽和させた。記録は、クレブス中で35℃で行なった。切片を、標準的な赤外線レンズを通してAxioskop FS2（Zeiss）で、FITCフィルターセットを通したエピフロレッセンスを使用して可視化した（図1c参照）。全細胞記録は、Axopatch 1D増幅器（Axon Instruments）およびClampex7（Axon Instruments）を使用して蛍光ニューロンから作製した。休止膜電位は、PowerLabシステム（AD Instruments、CA州マウンテンビュー）でイベント検出プロトコルを使用して拡大した膜電位の痕跡を平均化して決定した。薬物を、指定した時間におよび浴に適用した。休止膜電位は、クレブスのみで処理した細胞中で1時間まで安定であった。Met-Enk電流におけるI-V関係は、ステッププロトコルを使用して確立した；（-60mVの保持電位、-120から-50mVまで連続的にパルス（40m秒）、細胞を電圧ステップの間2秒間-60mVに戻した）。プロトコルはMet Enk添加後繰り返した。正味電流は、2つのI-V関係の間の差異であった。このプロトコルを、6.5mM K+を含むクレブス中で繰り返した。シナプス後レプチン電流を同定するためのI-V関係を、レプチン（100nM）の添加前および添加の10分後に、ゆっくりとした電圧ランプ（-100mVから-20mVまで5mV/s）を用いて同様に実施した、GABA作動性IPSCを、CsCl内部電極溶液（mM）を使用して記録した（CsCl、140mM；Hepes、10mM；MgCl2、5mM；Bapta、1mM；(Mg)-ATP、5mM；(Na)GTP、0.3mM）。ミニIPSCおよび大きな振幅（おそらく多シナプス）のIPSCの両方が非処理切片で観察された。TTX(1μl)は大きなIPSCを消失させた。データは、薬物の添加前および添加後に図面で指定した時間の間、-50mVの保持電位で4秒毎に2秒の掃引で獲得した。ミニシナプス後電流を、Axograph4（Axon Instruments）を使用して解析した。IPSCおよび興奮シナプス後電流（EPSC）は、その崩壊定数に基づいて区別し；さらにピクロトキシン（100μM）は全てのIPSCを遮断した。POMCニューロンは、低いEPSC緊張を受容し、周波数は、ここで記載したいずれかの処理により変調されなかった。
【０２９４】
光学顕微鏡および電子顕微鏡のための免疫染色：
異なる色のジアミノベンジジン（DAB）色素体を使用したNPYおよびPOMCの二重免疫細胞化学を、発表されたプロトコルに従って、固定したマウス視床下部上で実施した（Horvathら、Neuroscience 51、391-9、1992）。電子顕微鏡では、β-エンドルフィンに対する免疫染色の前包埋は、ABC Eliteキット（ベクター・ラボラトリーズ）およびDAB反応を使用してであり、その後、ウサギ抗GABA、1:1000v/vおよび金標識（10nm）ヤギ抗ウサギIgGまたはヒツジ抗NPYおよび金標識（25nm）ヤギ抗ヒツジIgGを使用したGABAおよびNPYの標識の後包埋を実施した。最後に、切片を、飽和酢酸ウラニル（10分間）およびクエン酸鉛（20-30秒）で対比し、フィリップスCM-10電子顕微鏡を使用して調べた。
【０２９５】
動物：
雄Pomc-EGFPマウスを、5-6週令で研究し、前記のように作製した。8-12週令で20-30gの体重の雄マウスを、特記しない限り、制御された温度（21-23℃）および光条件（06:00-18:00まで点灯）下で、水および食物に自由に近づけるようにした。全ての試験は、初期の光の期間で実施した（0700-0800）。
【０２９６】
腹腔内注射：
マウスを、試験の2日前に0.5mlの食塩水の注射によるIP注射に習慣づけた。全試験において、動物は、100μlのPYY3-36または食塩水のIP注射を受けた。
【０２９７】
電気生理学：
全細胞パッチクランプ記録は、以前に報告されたように（Cowleyら、Nature 411、480-484、2001）、Pomc-EGFPマウス由来の180μmの厚さの冠状切片の視床下部におけるPOMCニューロンから作成した。「緩く細胞に付着した」という記録は、電極溶液中で細胞外緩衝液を使用して、全記録を通じて3-5モームにシール抵抗を維持しながら作成した。発火率は、ミニ解析プロトコルを使用して解析した（MiniAnalysis、Jaejin Software、NJ）。ビヒクル対照は、ニューロペプチドの電気生理的作用について以前に確証したこのシステムで使用した（Cowleyら、Nature 411、480-484、2001）。データは、ANOVA、Neuman-Keuls posthoc比較、およびウィルコクソン符号順位検定により解析した。
【０２９８】
C-fos発現：
C-fos発現は、標準的な免疫組織化学的技術を使用して、食塩水またはPYY3-36（5μg/100g）のIP投与の2時間後にPomc-EGFPマウスで測定した（Hoffmanら、Front.Neuroendocrinol 14、173-213、1993）。データは、各群の5匹から得た。Pomc-EGFPマウスの5つの解剖学的に対応した弓状核切片（Franklinら、The Mouse Brain in Stereotaxin Coordinates（アカデミックプレス、サンディエゴ、1997）を、各動物から計測し、LeicaTSC共焦点顕微鏡を使用して画像を獲得した（Groveら、Neuroscience 100、731-40、2000）。
【０２９９】
エネルギー消費の測定：
エネルギー消費に対するPYYの作用を決定するために、OXYMAXシステム（Columbus Instruments、OH州コロンバス）を、処理集団にPYYを注射した後にげっ歯類に使用する。このシステムはまた、食塩水注射後のげっ歯類にも使用する（対照集団）。装置はO2消費およびCO2産生を測定し；生体がO2からCO2を産生する効率により、信頼性の高いカロリー効率または代謝効率の指数が得られる。類似のシステムをヒト試験ボランティアに使用する。
【０３００】
実施例2
弓状核の神経網
緑色蛍光タンパク質（EGFP Clontech）を、正確な神経発現に必要である-13kbから-2kbの間に位置している領域を含むマウスPomcゲノム配列の転写制御下で発現している、トランスジェニックマウス株を作製した（Youngら、J Neurosci 18、6631-40、1998）（図1a）。明るい緑色蛍光（509nm）が、ARCおよび弧束の核という2つのCNS領域に見られ、ここでPOMCが産生されている。紫外線（450-480nm）励起下では、POMCニューロンは、赤外線レンズで可視化された隣接する非蛍光ニューロン（図1b）とは明確に区別された。二重免疫蛍光により、ARC内のEGFPおよびPOMCペプチドの＞99％細胞共局在が判明した（図1c）。EGFPを発現しているPOMCニューロン上では、チロシンヒドロキシラーゼ（TH）染色末端およびNPY染色末端の両方が近くに並置されていたが、EGFPとのTHまたはNPY免疫反応性の共局在の証拠はなかった。冠状視床下部切片に実施した全蛍光細胞計数により、全ARCに分布している3148±62（平均±SEM:n=3）のPOMC-EGFPニューロンが判明した（Franklinら、The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates（アカデミックプレス、サンディエゴ、1997）（図1d）。マウスのPOMCニューロンは、ARC内の内側および腹側の両方に位置し、これに対し、ラットでは圧倒的に外側に位置している。
【０３０１】
視床下部切片におけるPOMC-EGFPニューロンは、-40mVから-45mVの休止膜電位を示し、頻繁に自発的な活動電位を示した。非選択的オピオイドアゴニストのmet-エンケファリン（Met-Enk：30μM；シグマ）は、POMC細胞（n=10）の急速（35-40秒）で可逆的な膜電位の過分極（10-20mV）を引き起こし、自発的な活動電位発生を妨げた（図2a）。通常（2.5mM K+）のクレブス緩衝液中で、内向きに流れるオピオイド電流の逆転電位は約-90mVであり、一方、6.5mMのK+クレブス中では、逆転電位は、約-60mVにシフトした（n=3；図2b）。μオピオイド受容体（MOP-R）アンタゴニストCTAP（1μM；Phoenix Pharmaceuticals）は、POMC細胞においてMet-Enkにより誘導される電流を完全に妨げた（n=3；図2c）。これらの特徴により、オピオイド電流はMOP-Rの活性化に起因し、Gタンパク質に共役した内向きに流れるカリウムチャネル（GIRK）を通じてイオンコンダクタンスを増加させたことが示される（Kellyら、Neuroendocrinology 52、268-75、1990）。類似オピオイドは、EGFP標識POMCニューロンにおいて、モルモット（Kellyら、Neuroendocrinology 52、268-75、1990）またはマウス（Sluggら、Neuroendocrinology 72、208-17、2000）のニューロンに応答する。記録後の免疫組織化学により同定したPOMC細胞により、EGFP導入遺伝子の発現は、POMCニューロンにおいて、受容体の発現も、セカンドメッセンジャーシステムへのその共役も損なわないことが示唆される。
【０３０２】
次に、切片標本における同定POMC細胞に対するレプチンの直接作用を調べた。レプチン（0.1-100nM）は、濃度応答的に、2-10分間以内に77個中72個のPOMC細胞を3-30mVだけ脱分極した（図3a；100nMのレプチンにおける平均±SEM脱分極＝9.7±1.2mV、n=45）（図3b）。脱分極に対する2つの成分が存在し、どちらも40分以内に完全に可逆的であった。第一に、脱分極は小さな内向き電流に起因し、これは約-20mVで逆転し（図3c）、このことは非特異的陽イオンチャネルの関与を示唆する（Powisら、Am J Physiol 274、R1468-72、1998）。第二に、レプチン処理により、POMC細胞に対するGABA作動性緊張は減少した。GABA作動性抑制性シナプス後電流（IPSC）がPOMC細胞において観察され、レプチン（100nM）は、15個中5個の細胞においてその周波数を25％（図3d）減少させ、これは、シナプス後に作用して、GABA遊離を減少させたことを示唆する（レプチンは、15個中10個のPOMCニューロンにおいてIPSCに対して全く作用がなかった）。IPSC周波数に対する作用は、膜電位に対する作用と類似した遅れで起こった。従って、レプチンはPOMCニューロンを直接脱分極するだけでなく、GABA作動性神経終末に作用して、GABAのPOMCニューロンへの遊離を減少させ、より脱分極した休止電位をとることが可能となる。レプチンによるPOMC細胞の一定した脱分極は特異的であった。なぜなら、レプチンは、試験した13個中5個の隣接する非蛍光細胞に対して全く作用がなかったが（図3e）、それはARCにおいて5個のの他の非POMCニューロンを過分極し（図3f）、3個の他の非POMCニューロンを脱分極したからである。ここに報告されたレプチンの電気生理的効果は、レプチンの生物学的作用と一致し；レプチンは、おそらくPOMCニューロンを活性化することにより、急速に、ラット視床下部からのα-MSHの遊離を引き起こす（Kimら、J Clin Invest 105、1005-11、2000）。
【０３０３】
レプチンによる神経過分極に関する以前の報告（Glaumら、Mol Pharmacol 50、230-5、1996；Spanswickら、Nature 390、521-5、1997）、およびARCニューロンの亜個体群内におけるGABAとNPYの共局在の実証（Horvathら、Brain Res 756、283-6、1997）により、レプチンが、POMCニューロンを直接神経支配しているNPY/GABA細胞を過分極し、従って、POMC細胞へのGABA作動性駆動を減少することが示唆された。レプチンおよびNPY Y2受容体の両方が、ARCにおいてNPYニューロン上に発現されている（Hakanssonら、J Neurosci 18、559-72、1998；Brobergerら、Neuroendocrinology 66、393-408、1997）。さらに、Y2受容体の活性化はNPYニューロンからのNPY遊離を抑制し（Kingら、J Neurochem 73、641-6、1999）、おそらくNPY/GABA終末からのGABA遊離もおそらく消失する。これは、レプチンとは独立して、GABA作動性NPYニューロンによるPOMCニューロンの神経支配という仮定を試験するための、代替的な薬理学的アプローチを提供する。実際に、NPY（100nM；Bachem）は、全ての試験した12のPOMC細胞において、GABA作動性IPSCの周波数を3分以内に55％減少させた（図4a）。NPYおよびレプチンの両方が、テトラドトキシン（TTX）の存在下でIPSCを依然として抑制し（それぞれ、6個中6個および5個中3個の細胞）、これは、いくらかのIPSC抑制が、シナプス前神経終末における直接作用を通して起こることを示した。POMCニューロンはNPY Y1受容体を発現し（Brobergerら、Neuroendocrinology 66、393-408、1997）、NPYもまた、全ての試験したPOMCニューロンを平均で9±6mVだけ過分極した（n=3）。
【０３０４】
NPY/GABA終末由来のPOMCニューロン上のGABA作動性神経支配の起源を確認するための別の薬理試験は、近年特徴づけられ高度に選択的であるMC3-RアゴニストのD-Trp8-γMSH（Griecoら、J Med Chem 43、4998-5002、2000）の局所GABA遊離に対する作用を試験することであった。D-Trp8-γMSH（7nM）は、4個中3個のPOMCニューロン由来の記録したGABA作動性IPSCの周波数を増加させた（280±90％）（図4b）。1つの細胞に対しては全く作用がなかった。MC3-R活性化の正の作用は、NPYおよびレプチンの負の作用と共に、POMCニューロンへのNPY/GABAシナプスの動的範囲を実証し、ARC内のシグナルの流れを変調する上でのこのシナプスの重要な役割を指摘する。D-Trp8-γMSH（7nM）もまた試験した15個中9個のPOMCニューロンを過分極し（-5.5±2.4mV）、活動電位の周波数を減少させ（図4c）；残りの細胞は、D-Trp8-γMSHに対して有意な応答は示さなかった。これらの効果は、POMC細胞へのGABA遊離の増加に完全に起因し得るか、または、POMCニューロンに対するD-Trp8-γMSHの追加のシナプス後作用に起因し得、このPOMCニューロンのほぼ半分はMC3-Rも発現している（Bagnolら、J Neurosci(オンライン)19、RC26、1999）。従って、MC3-Rは、POMCニューロン上のMOP-Rに類似の自己受容体様式で作用し、POMCペプチドの上昇に応答してPOMCニューロン活性を消失する。
【０３０５】
POMCニューロンにおけるIPSCは、NPY/GABA細胞による局所神経支配に起因していたことをさらに決定するために、多数標識免疫組織化学を、光学顕微鏡および電子顕微鏡を使用して実施した。POMC細胞の独立したNPY（Csiffaryら、Brain Res 506、215-22、1990）およびGABA（Horvathら、Neuroscience 51、391-9、1992）神経支配が報告されているが、POMC細胞にシナプスを形成している神経終末におけるNPYおよびGABAの共局在は示されていない。ラットと同様に（Csiffaryら、Brain Res 506、215-22、1990）、NPY軸索終末によるPOMC細胞の濃い神経支配が、マウスにおいて検出された（図4d）。電子顕微鏡により、軸索終末におけるNPYおよびGABAの共発現が確認され、これらの終末ボタンは、解析した15個の全てのARC POMCニューロンの核周部上でシナプスを確立することが判明した（代表実施例、図4e）。
【０３０６】
この回路調節の詳細なモデルは、ARCにおけるレプチン作用の二重機序、NPY/GABAとPOMCニューロンの間の相互作用、および、オピオイドおよびメラノコルチンペプチドならびにNPYからの自己調節フィードバックを示す（図4f）。このモデルでは、レプチンは、POMCニューロンを直接脱分極し、NPY/GABAニューロンの細胞体を同時に過分極し、NPY/GABA終末からの遊離を消失する。この消失したGABA遊離によりPOMCニューロンは脱抑制し、その結果、POMCニューロンは活性化され、活動電位の周波数は増加する。
【０３０７】
実施例3
PYYの投与により食物摂取は抑制される
ラットおよびマウスの摂食に対するPYYの効果が確立された（Batterhamら、Nature 418:450、2002）。
【０３０８】
実施例4
PYY投与は、c-fos発現に影響を及ぼす
このような食物摂取の抑制が、視床下部経路に関与していたかどうかを調べるために、PYY3-36を一回IP注射した後に、c-fos発現を、重要な摂食制御の中心である弓状核（Schwartzら、Nature 404、661-671、2000；Cowleyら、Nature 411、480-484、2001）において調べた（図5）。ラットの外側弓状核におけるc-fosに陽性の細胞数は2倍増加していた（PYY3-36=168±2、食塩水=82.7±5、n=3、P<0.0001）。同様に、Pomc-EGFPトランスジェニックマウスでは（Cowleyら、Nature 411、480-484、2001）、PYY3-36のIP投与により、c-fosに陽性の弓状細胞数（図5b）は、食塩水対照動物（図5a）に比べて1.8倍増加した（PYY3-36=250±40、食塩水137±15、n=5、P<0.05）。IP PYY3-36は、c-fosを発現するPOMCニューロンの比率の2.6倍の増加を引き起こした（PYY3-36=20.4±2.9％、食塩水＝8±1.4％、n=5、P<0.006）（図5cおよびd）。これらの観察は、PYY3-36が弓状核を介して作用できることを示す。
【０３０９】
実施例5
Y2受容体
PYY3-36およびY2Aの両方の投与に対する、視床下部POMCニューロンの電気生理的応答を調べた。ラットおよびマウスにおける摂食に対するPYYの効果が確立されている（Batterhamら、Nature 418:450、2002）。POMCニューロンは、POMCニューロンにおける緑色蛍光タンパク質の標的化発現を用いてマウスを使用して同定された（Cowleyら、Nature 411、480-484、2001）。PYY3-36はPOMCニューロンを脱抑制し、その結果、試験した22個中19個のPOMCニューロンが有意に脱分極した（図6a挿入図）（10.3±2.1mVの脱分極、n=22、P<0.0003）。類似した脱分極がY2Aでも見られた（8.7±1.8mV脱分極、n=9、P<0.002）。PYY3-36により引き起こされた脱分極は、POMCニューロンにおける活動電位の周波数の有意な増加を刺激した（図6a）（対照に比べて93％の増加、P<0.05、n=22）。全細胞形式では、PYY3-36の効果は、時々、洗い流し時に逆転したが、長い潜伏時間（30分間）の後にしか逆転しなかった。これらのニューロンに対する類似したレプチン洗い流し効果が観察された。
【０３１０】
細胞ランダウンの効果を排除する、または悪化を封鎖するために、「緩く細胞に付着した」（または細胞外）配置のPYY3-36の効果を調べた。PYY3-36は、POMCニューロンの緩く細胞に付着した記録において、活動電位周波数の可逆的な5倍の増加を引き起こした（図6b）。発火率のこのような増加は、PYY3-36が、試験した全13個のPOMCニューロンにおける抑制性シナプス後電流（IPSC）の周波数を減少させたのと同じ潜伏時間で起こり（図6c）（51.9±9.2％減少、n=13、P<0.0001）、POMCニューロンへのGABA遊離の周波数の減少を示す。興味深いことに、POMCニューロンの発火率は、IPSCを連続的に阻害したにも関わらず、基線に戻った。IPSC周波数に対する類似の効果が、Y2Aにも見られ（44.4±9.3%の減少、n=8、P<0.004）、この効果がY2Rを介するものであることを示唆した。PYY3-36（25nM）は、弓状核における同定されていないが、おそらくNPYを含み非POMCのニューロンの過分極を引き起こした（5.2±1.16mV、P<0.004、n=5）。NPYニューロンによるPOMCニューロンの強直性のGABA作動性抑制が生じ（Cowleyら、Nature 411、480-484、2001）、これらの結果により、PYY3-36が、NPYニューロンを抑制し、従って、このGABA作動性緊張を減少させ、結果としてPOMCニューロンを脱抑制することにより作用することが示唆される。ペプチド分泌に対するY2Aの効果も、視床下部外植片を使用して調べた（Kimら、J.Clin.Invest.105、1005-11、2000）。Y2Aは有意にNPY遊離を減少させ、同時に視床下部外植片からのα-MSHの遊離を増加させた（Batterhamら、Nature 418:450、2002）。これらの観察と合わせて、PYY3-36は、弓状核においてNPYおよびメラノコルチンのシステムの両方を変調することが示される。
【０３１１】
実施例6
ヒト試験
ヒトにおける摂食に対するPYYの作用が確立されている（Batterhamら、Nature 418:450、2002）。
【０３１２】
実施例7
他のトランスジェニックマウス系の作製
弓状核ニューロン発現に必要とされる-13キロベース（kb）から-2kbの間に位置する領域を含むマウスPOMCゲノム配列の転写制御下で緑色蛍光タンパク質を発現する、トランスジェニックマウス株を作製した（前記、例えば実施例2、およびCowleyら、Nature 411:480、2001を参照されたい、これは参照として本明細書に組み入れられる）。その後、他のトランスジェニックマウス系も作製した。これらの実験の出発材料は、転写開始部位に対して5’であるおよそ-4000塩基対（bp）の位置から、最初のエキソンの+64の位置までの範囲であるラットPOMC遺伝子の4kb断片、または、5’隣接配列のおよそ2kbを含む10kbマウスゲノムクローンであった。完全なPOMC遺伝子は、3つのエキソンおよび2つのイントロン、ならびにおよそ2kbの3’隣接配列からなる（Rubinsteinら、Neuroendocrinol.58:373、1993を参照されたい、これは参照として本明細書に組み入れられる）。
【０３１３】
コスミドゲノムライブラリーは、EcoRI制限エンドヌクレアーゼで部分的に切断した129S6株のマウスゲノムDNAから構築した。このライブラリーを、元々の10kbのマウスPOMCクローンから作製したプローブでスクリーニングした。このスクリーニングにより、数個の重複したPOMCゲノムクローンが単離され、これを使用して約13kbの5’隣接配列、6kbのPOMC遺伝子、および8kbの3’隣接配列を含み全サイズが27kbであるマイクロインジェクション用の導入遺伝子ベクターを構築した。人工的なオリゴヌクレオチド配列をコード配列のエキソン3に導入して、内因性マウスPOMC遺伝子と比べて、導入遺伝子から転写されたmRNAの明解な同定および定量を可能とした。2つの他の導入遺伝子を構築し、一方はPOMC遺伝子の5’側の-2kbで切断短縮されており、他方はPOMC遺伝子の3’側の+2kbで切断短縮されていた（Youngら、J.Neurosci.18:6631、1998を参照されたい、これは参照として本明細書に組み入れられる）。この系列のトランスジェニックマウスにおける発現研究により、POMC遺伝子の5’の-13kbから-2kbの間のDNA配列が、視床下部の弓状核および孤束の核における正所性のニューロン特異的発現に必要であることが実証された。しかし、全ての導入遺伝子が下垂体で適切に発現され、これは、POMCプロモーターの基部の-400bp内の下垂体特異的DNA調節エレメントの位置に一致していた。
【０３１４】
EGFPリポーター遺伝子を含む他のシリーズの導入遺伝子を、図7で説明したように作製した。5’隣接配列を-9kbの位置まで切断短縮することにより、ニューロンにおける発現は消失したが、下垂体での発現には影響を及ぼさず、このことから、必須なニューロン特異的調節エレメントは、ヌクレオチド位置-13kbから-9kbまでの4kbに含まれていることが示唆された。さらに、-6.5から-0.8の位置までのゲノム5’隣接ゲノム配列の内部欠失は、その視床下部ニューロン（弓状ニューロンにおける蛍光タンパク質の頑強な発現を示した代表的な組織学的切片については図8aを参照されたい）または下垂体細胞における正の導入遺伝子発現に影響を及ぼさなかった。これは、基本プロモーターと比較した、神経調節エレメントとは独立した位置を示唆する。遠位の4kbの調節エレメントを用いて作製された実質的に全てのトランスジェニック株が、弓状核のニューロンにおいてリポーター導入遺伝子発現の高い浸透度を示し、このことは、4kbのDNA配列内に含まれる転写調節エレメントは、既知の遺伝子座制御型エンハンサーエレメントと同様に、無作為な染色体組込み位置の作用から遮蔽されている。
【０３１５】
-13kbから-9kbの間の遠位4kbのマウスPOMC5’ゲノム配列から最小単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（TK）プロモーターおよびヒト成長ホルモンリポーター導入遺伝子を含む導入遺伝子（図8bおよび8c）を作成し、この構築物を有するトランスジェニックマウスを作成した。マウスPOMCゲノム配列のこの領域により、ヒト成長ホルモンマーカーの視床下部弓状核ニューロン特異的発現が付与された。
【０３１６】
最小TKプロモーターは以前、基部の下垂体特異的POMC調節エレメントと合わせて使用された（Liuら、1992を参照されたい）。これらの研究において、トランスジェニックマウスのPOMC細胞において、TKプロモーターが、リポーター遺伝子発現を引き起こす内在的能力は全く観察されなかった。従って、これらのトランスジェニックマウスにおけるhGHマーカーの発現により、4kbの遠位マウスPOMCゲノム配列は、古典的に定義された位置とは独立的およびプロモーターとは独立的な転写エンハンサーを含み、インビボにおいて、POMCニューロンに対して高レベルの遺伝子発現を標的化するが、下垂体細胞には標的化しない比活性を有することが示される。
【０３１７】
4kbの129S6亜株のマウスPOMCゲノムDNAの完全ヌクレオチド配列を、コスミドクローンから得た。マルチプルアライメント配列比較を、ウェブに基づいたプログラムPIP Maker（同一性パーセントプロット）およびDotterと称されるプログラムを使用して、第2染色体上にヒトPOMC遺伝子を含む公開ヒトデータベースBAC配列を用いて実施した。完全に異なる配列比較アルゴリズムを使用する2つのプログラムは、マウス5’隣接POMC遺伝子配列とヒト5’隣接POMC遺伝子配列の間に、同じ2つの高度に保存された領域を見出した（図9）。これらの2つの相同性アイランドは、神経POMC調節エレメント1および2についてnPOMC1およびnPOMC2と称された。
【０３１８】
図10は、多種多様な哺乳動物種に由来するnPOMC1およびnPOMC2エレメントの配列アライメントを示す。一次配列の他に、TATAボックスまでの両方の部位の間の距離も、ヒトおよびマウスPOMC遺伝子では保存されている。nPOMC1部位は、約450bpにわたり、全体的なマウス/ヒト類似性は65％であり、最大保存度が80％の190bpのコアを有する（ヒトおよびウシの類似性はさらに高く、85％）。このコアは、それぞれ、ヒトおよびマウスTATAボックスから-10.5kbおよび-12.2kbにある。コアは、それぞれ、ヒトおよびマウスnPOMC2の上流の1.7kbまたは2.3kbに位置する。部位nPOMC2は153bpの領域を有し、この中の138は、マウスおよびヒトの間で同一である（類似性90％）。それぞれ、ヒトおよびマウスTATAボックスから-8.9kbおよび-9.9kbに位置する。
【０３１９】
理論に縛られることはなく、数kbの異種ゲノム配列内に包埋されている、これらの2つの小さく高度に保存された領域は、転写単位内のエキソン-イントロンの差に似ている。興味深いことに、マウスおよびヒトエキソン1、2および3の64％、87％および82％の類似性は、それぞれ、nPOMC1およびnPOMC2における種間同一性よりも低い（図9）。
【０３２０】
280bpの基部のヒトおよびマウスPOMCプロモーターのClustall比較は、基本発現（例えばTATAボックスおよびGCボックス）および下垂体（特異的発現T-Pit、Ptx1、およびPP1）に必要な全てのシス作用エレメントを含む領域において68％の類似性を示す。変性オリゴヌクレオチドプライマーを使用して他の哺乳動物種から対応するゲノム領域を増幅し、PCR断片を配列決定し、nPOMC1およびnPOMC2は、ウシ、ハムスター、およびウサギゲノムDNAにおいて高度に保存されていることが確認された。さらに、ウシゲノムライブラリーを、放射標識プローブとしてウシnPOMC1 PCR断片を使用してスクリーニングした。陽性ファージクローンの1つはまた、nPOMC2およびPOMCエキソン1も含み、これは、これら2つの調節領域は15kb内のTATAボックスとシンテニーであることを示し、これはヒトおよびマウスと類似している。このクローンから増幅したウシnPOMC2の内部分は、ヒトと90％の類似性を示す。ラットnPOMC1の配列は、ドラフトゲノムプロジェクトのBLAST比較から得られ、マウス配列と高度に類似している。さらに、129のマウスPOMCゲノム配列は、現在では公開ゲノムデータベースで入手可能なC57BL/6J POMCゲノム配列とほぼ同一である。ヒト第2染色体およびマウス第12染色体上の正確なヌクレオチド位置と共に、nPOMC1およびnPOMC2エレメントにおよぶヌクレオチド配列を図11に示す。BLAST解析により、完全なnPOMC1およびnPOMC2エレメントが以前には同定されておらず特徴づけられていない配列であり、POMC遺伝子座に対して唯一無二であるように思われる。従って、当業者は、マーカー（例えば成長ホルモンまたはGFPなどであるがこれに限定されない）に作動可能に連結した、POMC遺伝子のこれらのいずれかの領域を含む導入遺伝子を含むトランスジェニックマウスを容易に作成できる。
【０３２１】
脂肪静止ホルモンのレプチンは、視床下部において、JAKキナーゼ/STAT3-依存的経路により、POMCニューロンを活性化するだけでなく、POMC遺伝子の転写も刺激する。ウェブに基づいたプログラムのMat Inspectorを使用して、11.5kbのヒトPOMC遺伝子の5’隣接領域内のSTAT3DNA結合部位を位置づけた。共通コアTTCCNGGAAと高い相同性を共有する8つの部位を検出した。興味深いことに、唯一つの部位が、この共通配列と完全に一致し、高度に保存されたnPOMC1部位および別のSTAT3-に似た部位の50bp下流に位置する（図10）。この類似性により、nPOMC1は、POMC遺伝子内のレプチン応答エレメントであり得ることが示唆される。この部位は、入手可能な他のゲノム配列においては僅かにあまりよく保存されていない。全5つの哺乳動物種間で100％同一であるnPOMC1の5’ハーフに存在する別の可能性ある興味深い短いDNA配列は、
2005514008.tif 000125
（配列番号：352）
である。5’Cを除き、残りの16のヌクレオチドは、対称なDNA-タンパク質結合部位であり得る不完全な（12/16）パリンドロームを含む。
【０３２２】
本明細書に開示したように、マーカーをコードする核酸配列に作動可能に連結したPOMC調節領域を含む多くの導入遺伝子を有する多くのトランスジェニックマウス系を作製した。組織学的切片は、マーカーをコードする核酸配列に作動可能に連結したPOMC調節領域を有するこれらのトランスジェニックマウス系または他のトランスジェニックマウス系から容易に調製できる。これらの切片を使用して、化合物、タンパク質、小分子または塩などの薬剤をスクリーニングでき、本明細書に記載したようなカロリー摂取、食物摂取、または食欲に影響を及ぼす薬剤を同定できる。
【０３２３】
実施例8
例示的なスクリーニングプロトコル
約140μmから約400μmの厚さの、ニューロンを含む冠状切片は、マーカーに作動可能に連結したPOMC遺伝子または調節エレメントを有するマウスのARCを形成し、ここでのマーカーはARCのPOMCニューロンにおいて発現されている。1つの態様において、適切な切片を、本明細書に開示したマウス系列の1つなどの、POMCプロモーターからGFPを発現している雄の4週齢のマウスから作製する。動物の年齢および性別は制限ではなく、雌のマウスならびにより高齢および低齢のマウスも使用できることに注意すべきである。その後、これらの切片を目的の薬剤と共にインキュベートし、POMCニューロンの電気生理的パラメータを測定する。この電気生理的パラメータの変化により、薬剤が、カロリー摂取、食物摂取、食欲、および/またはエネルギー消費に影響を及ぼすことが示される。
【０３２４】
1つの例において、180μmの厚さのARC切片を、［NaCl、126mM；KCl、2.5mM；MgCl2、1.2mM；CaCl2H2O、2.4mM；NaH2PO4.H2O、1.2mM；NaHCO3、21.4mM；グルコース、11.1mM］（クレブス）に35℃で維持し、記録前に95％O2 5％CO2で1時間飽和させた。記録はクレブス中で35℃で実施した。標準的な赤外線レンズを通してAxioskop FS2（Zeiss）で、FITCフィルターセットを通したエピフロレッセンスを使用して可視化する（図1c参照）。全細胞または緩く付着した細胞の記録は、Axopatch 1D増幅器（Axon Instruments）およびClampex7（Axon Instruments）を使用して蛍光ニューロンから作製した。
【０３２５】
休止膜電位および活動電位周波数は、拡大した膜電位の痕跡を平均化するためにPowerLabシステム（AD Instruments、CA州マウンテンビュー）でイベント検出プロトコルを使用して決定した。または、Synaptosoft（Gaeginソフトウェア）などのイベント検出ソフトウェアパッケージを使用して即効の周波数をプロットする。薬剤を、約1分間から約15分間などであるがこれに限定されない特定の時間かけて浴に適用する。休止膜電位は、クレブスのみで処理した細胞において1時間まで安定である。
【０３２６】
電流と電圧（I-V）の関係は、ステッププロトコルを使用して確立し；（-60mV保持電位、-120mVから-50mVまで連続的にパルス（40m秒）、細胞を、電圧ステップの間2秒間-60mVまで戻した）。プロトコルは、目的の薬剤の添加後に繰り返す。正味電流は2つのI-V関係の間の差異であり、これを使用して、薬剤が、シナプス後効果を引き起こすことを確認する。同様に、薬剤（1nMから10mMの濃度のようなもの、例えば100nMであるがこれに限定されない）の添加前および添加10分後の遅い電圧ランプ（-100mVから-20mVまで5mV/秒）を使用して、シナプス後効果が起こっているかどうかを決定できる。
【０３２７】
GABA作動性IPSCを、CsCl内部電極溶液 [CsCl、140mM；Hepes、10mM；MgCl2、5mM；Bapta、1mM；（Mg）-ATP、5mM；（Na）GTP、0.3mM]を使用して記録した。興奮性電流の遮断剤の添加を使用して、孤立したIPSC周波数を解析できた。ミニIPSCおよび大振幅（おそらく多シナプス）IPSCの両方が、非処理切片に観察される。TTX(1mM)により大IPSCは消失する。データは、薬剤の添加前および添加後に、例えば-50mVの保持電位で4秒毎に2秒の掃引で獲得する。ミニシナプス後電流を、Axograph4（Axon Instruments）またはSynaptosoftを使用して解析する。IPSCおよび興奮シナプス後電流（EPSC）は、その崩壊定数および特定の遮断剤に対する感度に基づいて区別し；ピクロトキシン（100mM）はIPSCを遮断する。
【０３２８】
解析できる例示的パラメータは以下の通りである。
1．非処理切片中または対照剤と共にインキュベートした切片中のPOMCニューロンなどの、対照と比較した、POMCニューロンにおける膜電位の解析。これにより、薬剤が、POMCニューロンの活性を増加するか、または減少するかを評価できる。
2．非処理切片中または対照剤と共にインキュベートした切片中のPOMCニューロンなどの、対照と比較した、POMCニューロンにおける活動電位発火率の解析。これにより、薬剤がPOMCニューロンの活性を増加するか、または減少するかを評価できる。
3．非処理切片または対照剤と共にインキュベートした切片などの、対照と比較した、POMCニューロンへのIPSC周波数の解析。これにより、薬剤が、NPYニューロンの活性を増加するか、または減少するかを評価できる。
【０３２９】
これらの1つまたは複数のパラメータのあらゆる変化により、治療有効量の薬剤を被験者に投与した場合にカロリー摂取、食欲、食物摂取、および/またはエネルギー消費に影響を及ぼすものとして薬剤が同定される。従って、1つの態様において、これらのデータは、POMCニューロン（膜電位または活動電位発火率により示されるような）および/またはNPY/AGRPニューロン（POMCニューロンにおけるIPSC周波数により示されるような）の活性に対する薬剤の効果を決定することにより解釈される。NPYニューロンの活性を増加および/またはPOMCニューロンの活性を減少させる薬剤は、カロリー摂取、食物摂取、および/または食欲を増加させ、エネルギー消費を減少させる。NPYニューロンの活性を減少および/またはPOMCニューロンの活性を増加させる薬剤は、カロリー摂取、食物摂取および/または食欲を減少させ、および/または、エネルギー消費を増加させる。
【０３３０】
実施例9
既知の食欲刺激剤であるグレリンのインビトロにおける評価
POMC-EGFPマウス（動物の説明については実施例1を参照されたい）由来のARCの切片を、［NaCl、126mM；KCl、2.5mM；MgCl2、1.2mM；CaCl2.2H2O、2.4mM；NaH2PO4.H2O、1.2mM；NaHCO3、21.4mM；グルコース、11.1mM］（クレブス）中で35℃で維持し、記録前に95％O2 5%CO2で1時間飽和させた。記録はクレブス中で35℃で実施した。切片は、標準的な赤外線レンズを通してAxioskop FS2（Zeiss）で、FITCフィルターセットを通したエピフロレッセンスを使用して可視化した。全細胞（図12aおよび12b）または緩く付着した細胞（図12c）の記録は、Axopatch 1D増幅器（Axon Instruments）およびClampex7（Axon Instruments）を使用して蛍光ニューロンから作製した。
【０３３１】
GABA作動性IPSCを、CsCl内部電極溶液［CsCl、140mM；Hepes、10mM；MgCl2、5mM；Bapta、1mM；(Mg)-ATP、5mM；(Na)GTP、0.3mM］を使用して記録した。興奮性電流遮断剤の添加により、孤立したIPSC周波数の解析が可能となった。ミニIPSCおよび大きな振幅（おそらく多シナプス）IPSCの両方が、非処理切片で観察された。TTX（1mM）により、大きなIPSCは消失した。データは、薬剤の添加前および添加後に、-50mVの保持電位で4秒毎に2秒の掃引で獲得した。ピクロトキシン（100mM）は全てのIPSCを遮断した。
【０３３２】
IPSC周波数は、Synaptosoft（Gaeginソフトウェア）を使用して解析し、即時IPSC周波数を決定した（図12a）。休止膜電位は、拡大した膜電位の痕跡を平均化するためにPowerLabシステム（AD Instruments、CA州マウンテンビュー）でイベント検出プロトコルを使用して決定した（図12b）。活動電位発火率は、緩く細胞に付着した形態で決定し、記録したデータをSynaptosoftを使用して解析し、即時周波数を決定した。グレリン（50nM）を3分間かけて浴に適用した。休止膜電位は、クレブスのみで処理した細胞において1時間まで安定であった。
【０３３３】
POMCニューロンのIPSC周波数に対するグレリンの添加の結果を図12aに示す。POMCニューロンにおけるIPSC周波数の増加を検出した。これはNPYニューロンにより引き起こされる。従って、NPYニューロンの活性の増加が実証される。図12bは、POMCニューロンの休止膜電位に対するグレリンの作用を示す。グレリンはPOMCニューロンを過分極した、平均1.47±0.7mV；p<0.03。POMCニューロンの活性は、グレリンの添加により減少した。図12cは、POMCニューロンにおける活動電位発火率を示す。POMCニューロンの活性はグレリンにより阻害された。従って、摂食、カロリー摂取、および食欲を増加させ、エネルギー消費を減少させることが知られる薬剤であるグレリンは、POMCニューロンの休止膜電位（図12b）および活動電位発火率を減少させ（50％、図12cを参照されたい）、POMCニューロンにおけるIPSCの周波数を増加させ（図12a）、NPYニューロンの活性を増加させる。
【０３３４】
実施例10
既知の食欲抑制剤および体重減量剤である、フェンフルラミンのインビトロでの評価
POMC-EGFPを発現しているトランスジェニックマウス（Batterhamら、Nature 418:450、2002）のARCの切片を、[NaCl、126mM；KCl、2.5mM；MgCl2、1.2mM；CaCl2.2H2O、2.4mM；NaH2PO4.H2O、1.2mM；NaHCO3、21.4mM；グルコース、11.1mM]（クレブス）中で35℃で維持し、記録前に95％O2 5%CO2で1時間飽和した。記録はクレブス中で35℃で実施した。切片は、標準的な赤外線レンズを通してAxioskop FS2（Zeiss）で、endow-GFPフィルターセット（Chroma Technology Corp）を通したエピフロレッセンスを使用して可視化した。全細胞または緩く付着した細胞の記録（両方を使用し、全細胞記録の結果は図13bに示し；緩く付着した細胞の結果は図13aに示す）は、Axopatch 200B増幅器（Axon Instruments）およびClampex7（Axon Instruments）を使用して蛍光ニューロンから作製した。
【０３３５】
活動電位発火率は、緩く細胞に付着した形態で決定し、記録したデータはsynaptosoftを使用して解析し、即時周波数を決定した（図13a）。休止膜電位および脱分極は、拡大した膜電位の痕跡を平均化するためにPowerLabシステム（AD Instruments、CA州マウンテンビュー）でイベント検出プロトコルを使用して決定した（図13b）。セロトニン受容体アゴニストを、4分間かけて特定の濃度で浴に適用した。休止膜電位は、クレブスのみで処理した細胞において1時間まで安定であった。
【０３３６】
フェンフルラミン（20μM）は、POMCニューロンにおいて活動電位周波数の2倍の増加を引き起こした（図13a；n=3）。従って、フェンフルラミンにより、POMCニューロンの活性は増加した。別々の実験において、フェンフルラミンはまた、用量依存的にPOMCニューロン（図13b）を脱分極した。従って、別の試験によりフェンフルラミンは、POMCニューロンの活性を増加させる。非選択的セロトニン受容体アゴニストのセロトニン（5-HT）はまた、休止膜電位（脱分極）POMCニューロンを増加させた。セロトニンおよびフェンフルラミンのPOMCニューロンに対する作用は、5-HT2CRにより媒介される可能性が高い。なぜなら、5-HT2CR選択的アゴニストのmCPPおよびMK212もまたPOMCニューロンを脱分極したからである（図13b）。
【０３３７】
記載の方法または組成物の正確な詳細は、記載の本発明の精神から逸脱することなく変化または改変し得ることは明らかである。本発明者らは、特許請求の範囲および精神に該当する全てのこのような改変および変化を主張する。
【図面の簡単な説明】
【０３３８】
【図１】ARC POMCニューロンにおいてEGFPを発現しているトランスジェニックマウスの作製を示した、図およびデジタル画像のセットである。図1aは、POMC-EGFP導入遺伝子の構造の概略図である。図1bは、電気生理的記録の前に、生存しているARC切片における、EGFP蛍光（上）およびIR-DIC顕微鏡（下）による単一POMCニューロン（記録電極チップ上の矢印頭）の同定を示した、デジタル画像である。図1cは、ARC POMCニューロンにおけるEGFP（左）およびβ-エンドルフィン免疫反応性（中間）の共局在（明るい、右）を示した、デジタル画像のセットである。尺度バー：bおよびc、50μm。図1dは、ARC核の全体におけるEGFP陽性神経細胞体の分布を示した、図のセットである。○＝5細胞、●＝10細胞。
【図２】MOP-Rsを活性化することにより、Gタンパク質共役の内向きに流れるカリウムチャネルを開口することにより、EGFP標識POMCニューロンが過分極することを示した、軌跡およびグラフである。図2aは、met-エンケファリンはPOMCニューロンを過分極し、全ての活動電位を阻害することを示した軌跡である。水平なバーは、30μMのMet-Enkを切片に浴適用した場合の時間を示す。図2bは、met-エンケファリン電流および逆電位は、細胞外K＋濃度によりシフトされることを示したグラフである。図2cは、met-エンケファリンは、POMCニューロン上のMOP-Rsを活性化することを示したグラフである。Met-Enk（30μM）電流が観察され、MOP-R特異的アンタゴニストのCTAP（1μM）を1分間かけた。CTAP後には、Met-Enkは電流を誘発しなかった。図は、3回の実験の代表である。
【図３】レプチンが、非特異的陽イオンチャネルを介してPOMCニューロンを脱分極し、POMC細胞上のGABA作動性緊張を減少することを実証した軌跡およびグラフである。図3aは、レプチンが、POMCニューロンを脱分極し、添加の1〜10分間以内に活動電位の周波数を増加することを実証した軌跡である。図は、77個のPOMCニューロンから作製した記録の代表例である。図3bは、レプチンが、濃度依存的なPOMC細胞の脱分極を引き起こすことを示したグラフである。レプチンにより引き起こされる脱分極は、それぞれ、（8、7、9、3、45の）細胞において0.1nM、1nM、10nM、50nM、および100nM（EC50＝5.9nM）で決定した。図3cは、レプチンが、非特異的陽イオン電流を活性化することにより、POMC細胞を脱分極することを示したグラフである。図は、10個の細胞における応答の代表である。図3dは、レプチンが、POMC細胞においてIPSCの周波数を減少することを示したグラフである。図は、レプチン（100nM）がIPSCの周波数を減少させた、5個の細胞の例である。図3eは、レプチンが、5個の隣接した非蛍光ARCニューロンに対して全く作用を及ぼさないことを実証した軌跡である。図3fは、レプチンが、5個の非蛍光ARCニューロンを過分極したことを示した軌跡である。
【図４】POMC細胞へのGABA作動性入力が、GABAを同時発現するNPYニューロンに由来することを示した画像のセットである。図4aは、NPYが、POMCニューロンにおいてミニIPSCの周波数を減少させることを示したグラフである。図4bは、MC3-Rを選択的に活性化する用量のD-Trp8-γ-MSH（7nM）は、POMCニューロンにおいてGABA作動性IPSCの周波数を増加することを実証したグラフである。図4cは、D-Trp8-γMSHは、POMCニューロンを過分極することを示した軌跡である。図4a、4bおよび4cは代表である。図4dは、ARCにおけるPOMCニューロンに隣接する神経末端におけるNPYの発現を実証したデジタル画像のセットである。NPY神経末端（黒、矢印頭）；POMC神経細胞体（灰色）。尺度バー、10μm。図4eは、ARCにおいてPOMCニューロン上にシナプス形成している神経末端におけるGABAおよびNPYの発現を示したデジタル画像である。GABA免疫反応性（10nmの金粒子、尾を含まない矢印頭）およびNPY免疫反応性（25nmの金粒子、尾を含む矢印）は、POMCニューロンの細胞体と直接接触しているシナプス終末ボタン内に共局在している別々の小胞個体群にある（酢酸ウラニルおよびクエン酸鉛で造影したDAB、細胞質に拡散した黒）。尺度バー、1μm。図4fは、ARCにおけるNPY/GABAおよびPOMCニューロンのモデルの図である。
【図５】Pomc-EGFPマウスにおけるc-fos発現のデジタル画像のセットである。図5aおよび5bは、腹腔内食塩水（図5a）またはPYY3-36（5μg/100g）に応答した、Pomc-EGFPマウスの弓状核におけるc-fos発現の代表的な切片（ブレグマ−1.4mm）のデジタル画像である。尺度バー100μm。3V、第三脳室；Arc、弓状核。図5cおよび5dは、共局在（明るい矢印）または単独（単一のより暗い矢印）のPOMC-EGFPニューロン（図5c）およびc-fos免疫反応性（図5d）を示した、代表的な切片のデジタル画像である。
【図６】PYY3-36およびY2Aに対する電気生理的応答に関連した画像のセットである。図6aは、POMCニューロンにおける活動電位の周波数に対するPYY3-36（10nM）の効果を示した、軌跡および棒グラフである（全細胞の立体配置記録；n＝22）。＊p<0.05。PYY3-36は、時間Dにおいて3分間投与した；基線、-3分から0分；PYY3-36、2〜5分；洗浄除去、8〜11分。挿入図は、膜電位および活動電位周波数の代表的記録を示す。図6bは、緩く細胞に付着したパッチ記録における活動電位周波数に対するPYY3-36（10nM）の効果のグラフである（n=8）。個々の細胞由来のデータを、PYY3-36の添加前の200秒間発火率に標準化した。図6cは、POMCニューロン上への自発的IPSCに対するPYY3-36（50nM）の効果の軌跡およびグラフである（n＝13）。挿入図は、それぞれ、PYY3-36（50nM）の前および後のIPSCの代表的な記録を示し、図6a〜6cの結果は、平均±s.e.mとして表す。
【図７】マウスPOMC遺伝子の5’隣接配列の種々の長さまたは欠失を有する導入遺伝子の概略図である。EGFP遺伝子は、翻訳開始部位の直前の第二エキソンに挿入した。SV40ウイルスのラージT抗原からのポリアデニル化シグナルは、EGFP遺伝子にすぐ隣接しておよび3’に含まれた。黒いボックスは、マウスPOMCエキソンである。白抜きのボックス、EGFP。ストライプのボックスはnPOMC1およびnPOMC2部位である。白いボックスは、hGH構造遺伝子前のTK最小プロモーターである。右のプラスの記号は、導入遺伝子がPOMC下垂体細胞またはPOMC視床下部ニューロンにおいて正しく発現されたことを示し、マイナスの記号は、発現していないことを示す。
【図８】弓状核の切片のデジタル画像のセットである。図8aは、-13/+8POMC-EGFP（デルタ-6.5／0.8）トランスジェニックマウスの視床下部の弓状核のPOMCニューロンの蛍光を示したデジタル画像である。図8bは、ヒト成長ホルモンに特異的な抗結成を使用した免疫蛍光組織化学を使用したデジタル画像である。-13/-9POMC-TKhGHトランスジェニックマウスの弓状核におけるPOMCニューロンは、hGHマーカーを発現する。図8cは、神経細胞体の高倍率拡大デジタル画像および図8bからの過程である。
【図９】配列アライメントを示した図のセットである。図9aは、ヒトPOMC遺伝子を含む24kbと、TATAボックス由来の9kbから13kbの間に位置するマウスの5’隣接領域の4kbと、Genebankから入手した短い隣接配列（J00610、J00611、およびJ00612）を有する3つのエキソンとの間の、PIPメーカー複数配列アライメントである。保存領域は、灰色に影を付けた背景上に水平な黒の線で示す。エキソン1、2、および3を示し；反復遺伝子間領域は、-5kbおよび-6kbに存在し；100bpより長い2つの高度に保存された遺伝子間領域は、nPOMC1およびnPOMC2として同定される。灰色および白の水平ボックスは、GCに富んだ領域を示した。図9bは、マウスPOMC遺伝子の-13と-9の間の4kbおよびヒト5’隣接領域の15kbを使用して、Dotterプログラムを用いて実施した類似解析である。灰色に影を付けた領域内の対角線は、保存部位nPOMC1およびnPOMC2を示す。
【図１０】nPOMC1（5’ハーフ、ヒト（配列番号：336）、雌ウシ（配列番号：337）、ハムスター（配列番号：338）、マウス（配列番号：339）、ラット（配列番号：340））、nPOMC1（3’ハーフ、ヒト（配列番号：341）、マウス（配列番号：342）、およびラット（配列番号：343））、およびnPOMC2（ヒト（配列番号：344）、雌ウシ（配列番号：345）、マウス（配列番号：346）、およびウサギ（配列番号：347））の配列アライメントである。
【図１１】マウスおよびヒトnPOMC1およびnPOMC2エレメントのヌクレオチド配列である。マウス第12染色体ヌクレオチド3,808,013〜3,808,447（配列番号：348）由来のNPOMC1エレメント、ヒト第2染色体ヌクレオチド2,324,416〜2,323,942（配列番号：349）由来のnPOMC1エレメント、マウス第12染色体（配列番号：350）由来のnPOMC2エレメント、およびヒト第2染色体（配列番号：351）由来のnPOMC2エレメントを示す。
【図１２】グレリンが、POMCニューロン上へのNPYニューロンの分泌活性を増加し、POMCニューロンを過分極し、POMCニューロンにおける活動電位の周波数を減少させることを実証したグラフのセットである。図12aは、グレリンが、POMCニューロン上への自発的なシナプスGABA遊離の頻度を増加させることを実証したグラフである。図に示した結果は、18回の実験の代表である。NPYニューロンからのGABAの遊離増加が示され、従って、グレリンは、NPYニューロンの活性を増加させている。図12bは、グレリンが、POMCニューロンを穏和に過分極し、POMCニューロンの自発的活性を減少させることを実証したグラフである。図に示した結果は、34回の実験の代表である。図12aおよび12bは、慣用的な全細胞の形態で記録した。図12cは、グレリンが、POMCニューロンにおいて活動電位の周波数を減少させることを実証したグラフであり、この効果は、薬物の洗い流しにより逆転する。グレリンは、標準化した平均（+/-s.e.m）POMCニューロン発火率の50％減少を誘発した。これらの記録は、緩く細胞に付着した形態で行なった。
【図１３】フェンフルラミン（d-FEN）が、活動電位の周波数を増加させ、POMCニューロンを脱分極することを実証したグラフのセットである。図13aは、緩く細胞に付着した形態を使用して得られた結果を示す。d-FEN（20μM）は、平均（+/-s.e.m）POMCニューロン発火率の倍加を誘発した（n=3）。この効果は薬物の洗い流しにより逆転した。図13bは、慣用的な全細胞記録を使用して、d-FEN、5-HT mCPPまたはMK 212の浴に入れたPOMCニューロン（1用量あたりn=4〜8）の平均（+/-s.e.m）ピーク脱分極のグラフである。
【配列表】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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