(57)【要約】本発明は、一般式（Ｉ）〔式中：ｎは、１〜１０の整数を表し、Ｒ1およびＲ6は、互いに独立して、水素原子、ペプチド合成において窒素原子を保護するために有用な基、あるいは式ＣＯＲまたは−ＣＨ2ＣＯＲ〔式中、Ｒは、水素原子、１〜１０個の炭素原子のアルキル基、−ＣＯＯＲa基〔式中、Ｒaは、Ｈまたはアルキル基を表す〕、第一級−ＮＨ2アミノ基あるいは第二級または第三級アミン、アルコキシ基、フェニル基またはピリジニウム基を表す〕の基を表し、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は、互いに独立して、水素原子、１〜１０個の炭素原子のアルキル基を表し、Ｙは、ＣＨ2を表し、そしてＺは、ＣＯを表すか、またはＹは、ＣＯを表し、そしてＺは、ＣＨ2を表す〕の化合物の、腫瘍疾患あるいはアルツハイマー病またはレーン病のような神経変性疾患を処置するための薬剤を調製するための使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）：
【化１】
2005501121.tif 000065
〔式中：
ｎは、１〜１０の整数を表し、特にｎは、１または２を表し、
Ｙは、ＣＨ2を表し、そしてＺは、ＣＯを表すか、またはＹは、ＣＯを表し、そしてＺは、ＣＨ2を表し、
Ｒ1およびＲ6は、互いに独立して、
水素原子、
ＢＯＣ、ＦＭＯＣまたはＺ基のような、ペプチド合成において窒素原子の保護に使用できる基、
式−ＣＯＲ、または−ＣＨ2ＣＯＲ〔式中、Ｒは、
水素原子（Ｒ1が水素であって、これがトリフルオロ酢酸塩のような水性溶媒に可溶性の塩の形態をとる場合を除く）、
場合により一個以上のハロゲン原子によって置換された、１〜１０個の炭素原子を有するアルキル基（Ｒ基は、たとえば、−ＣＦ3または−ＣＨ2Ｘ基〔Ｘは、ＣｌまたはＢｒのようなハロゲン原子を表す〕を表す）、または−ＣＨ2ＣＮを表すＲ基のようなシアノ基によって置換された上記アルキル基、または−ＣＨ2ＳＣ2Ｈ5を表すＲ基のような硫黄を含む基によって置換された上記アルキル基、
−ＣＯＯＲa基（式中、Ｒaは、Ｈまたはアルキル基、たとえばメチルまたはエチル基を表す）、
−ＮＨ2第一級アミノあるいは第二級または第三級アミノ基、
−ＯＭｅメトキシ、または−ＯＥｔエトキシ基のような、アルコキシ基、
フェニル基、
式：
【化２】
2005501121.tif 000066
の基のような、ピリジニウム基
を表す〕の基を表し、
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は、互いに独立して：
水素原子、
場合により、特に一個以上のハロゲン原子によって、あるいは一個以上のアミンまたはフェニル基によって置換された、ブチル、イソブチル、−（ＣＨ2）4ＮＨ2、−ＣＨ2Ｐｈ、−（ＣＨ2）4ＮＨＢｏｃ基のような、１〜１０個の炭素原子を有するアルキル基
を表すか、
あるいはＲ1はＲ2と一緒になって、またはＲ6はＲ5と一緒になって、式：
【化３】
2005501121.tif 000067
の基を表す〕
の化合物の、腫瘍疾患、あるいはアルツハイマー病またはレーン病のような神経変性疾患の処置のための薬剤を調製するための使用。
【請求項２】
Ｒ1が、ＢＯＣ、ＦＭＯＣ、Ｚ基またはＨを表し（Ｒ1がＨであって、これが式ＣＦ3ＣＯ2-のトリフルオロ酢酸塩、Ｈ3Ｎ+−のような塩の形態をとる場合を除く）、
Ｒ2が、Ｈ、またはイソブチル基のような１〜１０個の炭素原子を有するアルキル基を表し、
Ｒ3が、Ｈ、またはイソブチル基のような１〜１０個の炭素原子を有するアルキル基を表し、
Ｒ4またはＲ5のいずれかが、Ｈを表し、他方が、上記で定義したようなアルキル基を表し、そしてＲ6が、上記で定義したような式−ＣＯＲまたは−ＣＨ2ＣＯＲの基を表すか、
あるいはＲ5が、Ｒ6と一緒になって、式：
【化４】
2005501121.tif 000068
の基を表し、
ｎが、１または２を表し、
ＹおよびＺが、請求項１で定義したとおりである、
一般式（Ｉ）の化合物の、請求項１記載の使用。
【請求項３】
Ｒ5が、Ｈを表し、そしてＲ6が、−ＣＯＲまたは−ＣＨ2ＣＯＲ基〔式中、Ｒは、−ＣＨ2Ｘ基を表し、Ｘは、ＣｌまたはＢｒのようなハロゲン原子、またはピリジニウム基を表す〕を表す、一般式（Ｉ）の化合物の、請求項１または２記載の使用。
【請求項４】
Ｒ5が、Ｈを表し、そしてＲ6が、−ＣＯＣＨ2Ｂｒ、−ＣＯＣＨ2Ｃｌまたは
【化５】
2005501121.tif 000069
の基を表す、一般式（Ｉ）の化合物の、請求項１〜３のいずれか一項記載の使用。
【請求項５】
Ｒ1およびＲ2が、Ｈを表す、一般式（Ｉ）の化合物の、請求項１〜４のいずれか一項記載の使用。
【請求項６】
Ｙが、ＣＨ2を表し、そしてＺが、ＣＯを表す、一般式（Ｉ）の化合物、すなわち次式（Ｉａ）：
【化６】
2005501121.tif 000070
〔式中、ｎおよびＲ1〜Ｒ6は、請求項１〜５のいずれかで定義したとおりである〕
の化合物の、請求項１〜５のいずれか一項記載の使用。
【請求項７】
下記の式：
【化７】
2005501121.tif 000071
2005501121.tif 000072
2005501121.tif 000073
2005501121.tif 000074
の化合物であって、脱保護された化合物がトリフルオロ酢酸塩のような塩の形態である化合物の、請求項１〜６のいずれか一項記載の使用。
【請求項８】
次式：
【化８】
2005501121.tif 000075
の化合物であって、脱保護された化合物が、トリフルオロ酢酸塩のような塩の形態である化合物の、請求項１〜７のいずれか一項記載の使用。
【請求項９】
Ｙが、ＣＯを表し、そしてＺが、ＣＨ2を表す、一般式（Ｉ）の化合物、すなわち次式（Ｉｂ）：
【化９】
2005501121.tif 000076
〔式中、ｎおよびＲ1〜Ｒ6は、請求項１〜８で定義したとおりである〕
の化合物の、請求項１〜８のいずれか一項記載の使用。
【請求項１０】
−ｎが、１を表し、
−Ｒ1が、Ｚ基またはＨを表し（Ｒ1がＨであって、これが式ＣＦ3ＣＯ2-のトリフルオロ酢酸塩、Ｈ3Ｎ+−のような塩の形態をとる場合を除く）、
−Ｒ2またはＲ3のいずれかが、Ｈを表し、他方が、上記で定義したようなアルキル基、特にイソブチル基を表し、
−Ｒ4が、上記で定義したようなアルキル基、特にイソブチル基、または−ＣＨ2Ｃ6Ｈ5、または（ＣＨ2）4−ＮＨ2、または−（ＣＨ2）4ＮＨＢｏｃ基を表し、
−Ｒ5が、Ｈを表し、そしてＲ6が、上記で定義したような式−ＣＯＲの基を表すか、
−あるいはＲ5が、Ｒ6と一緒になって、式：
【化１０】
2005501121.tif 000077
の基を表す、
請求項９記載の式（Ｉｂ）の化合物の使用。
【請求項１１】
式（Ｉｂ）の化合物が、下記の式：
【化１１】
2005501121.tif 000078
の化合物であることを特徴とする、請求項１０記載の使用。
【請求項１２】
プロテアソーム機能の阻害によって癌細胞のアポトーシスを誘導することによる、肝癌、結腸癌、乳癌のような癌の処置を意図した薬剤の調製のための、請求項１〜１１のいずれか一項記載の使用。
【請求項１３】
−ｎ＝１であり、
−Ｒ5が、Ｈを表し、そしてＲ6が、式−ＣＯＲまたは−ＣＨ2ＣＯＲ基〔式中、Ｒは、−ＣＨ2Ｘ基を表し、Ｘは、ＣｌまたはＢｒのようなハロゲン原子、またはピリジニウム基を表す〕を表し、
−Ｒ1〜Ｒ4は、請求項１〜５で定義したとおりである、
一般式（Ｉａ）の化合物。
【請求項１４】
下記の式：
【化１２】
2005501121.tif 000079
の、脱保護された化合物が、トリフルオロ酢酸塩のような塩の形態である、請求項１３記載の化合物。
【請求項１５】
−ｎ＝２であり、
−Ｒ4またはＲ5のいずれかが、Ｈを表し、他方が、請求項１で定義したようなアルキル基を表し、
−Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ6が、請求項１〜５のいずれか一項で定義したとおりである、
一般式（Ｉａ）の化合物。
【請求項１６】
下記の式：
【化１３】
2005501121.tif 000080
の、脱保護された化合物が、トリフルオロ酢酸塩のような塩の形態である、請求項１５記載の化合物。
【請求項１７】
下記の一般式（Ｉｂ）：
【化１４】
2005501121.tif 000081
〔式中、Ｒ1〜Ｒ6は、請求項１で定義したとおりである〕
の化合物。
【請求項１８】
−ｎが、１を表し、
−Ｒ1が、Ｚ基またはＨを表し（Ｒ1が、Ｈであって、これが式ＣＦ3ＣＯ2-のトリフルオロ酢酸塩、Ｈ3Ｎ+−のような塩の形態をとる場合を除く）、
−Ｒ2またはＲ3のいずれかが、Ｈを表し、他方が、上記で定義したようなアルキル基、特にイソブチル基を表し、
−Ｒ4が、上記で定義したようなアルキル基、特にイソブチル基、または−ＣＨ2Ｃ6Ｈ5、または（ＣＨ2）4−ＮＨ2、または−（ＣＨ2）4ＮＨＢｏｃ基を表し、
−Ｒ5が、Ｈを表し、そしてＲ6は、上記で定義したような式−ＣＯＲの基を表すか、
−あるいはＲ5が、Ｒ6と一緒になって、式：
【化１５】
2005501121.tif 000082
の基を表す、
式（Ｉｂ）の請求項１７記載の化合物。
【請求項１９】
下記の式：
【化１６】
2005501121.tif 000083
の、請求項１７または１８記載の化合物。
【請求項２０】
薬学上許容されうる賦形剤と組み合わせて、請求項１０〜１９のいずれか一項記載の化合物を含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の対象は、腫瘍の処置におけるヒドラジノペプトイド化合物の使用である。本発明の対象はまた、新しいヒドラジノペプトイド化合物、ならびにそれらの合成方法である。
【０００２】
大多数の細胞の細胞周期は、細胞の大きさを増大させ、ＤＮＡの量を倍増させて、その後、互いに同一であり、またそれらが産生された細胞と同一である二つの娘細胞を産生するために分離して染色体を分割することを可能にする。細胞周期は、二つの大きく異なる期間である静止期に分けられ、この間にＤＮＡの複製と有糸分裂が起こる。複製および有糸分裂期は、リン酸化の状態および／または分解によって調節されるタンパク質複合体によって制御される。不正確な構造のタンパク質（分子の二次および三次構造の異常）の存在または分解されることが不可欠である段階で分解されないタンパク質の存在に関連する、多くの神経変性および／または癌疾患が現在知られている。
【０００３】
ユビキチン／プロテアソーム系は、細胞内タンパク質分解、すなわち細胞周期の正しい進行と関連するある一定の数のタンパク質の分解において重要な役割を果たす。活性部位の特異的阻害因子によるプロテアソームの不活性化により、タンパク質分解機能不全の機序を理解し、それによって新しいクラスの抗腫瘍分子を考慮することができる。
【０００４】
カルパインおよびプロテアソームのペプチドアルデヒド阻害因子、たとえばＮ−アセチル−ロイシニル−ロイシニル−ノルロイシナル（ＡＬＬＮ）、ベンジルオキシカルボニルロイシニル−ロイシニル−ロイシナル（ＭＧ１３２）およびＮ−アセチル−ロイシニル−バリニル−フェニルアラニナル（ＡＬＶＰ）（ただしＮ−アセチル−ロイシニル−ロイシニル−メチオニナル（ＡＬＬＭ）ではない）は、三つのヒト腫瘍細胞系ならびに肺腺癌、前立腺癌および乳癌での細胞増殖の抑制およびアポトーシスの誘導において相乗作用を持つことが観察された（Cusak JC, Liu R, Houston M, Adendroth K, Elliot PJ, Adams J および Baldwin AS Jr (2001) Cancer Res, 61, 3535-3540; Soligo D, Servida D, Fontanella E, Lamorte G, Caneva L, Fumiatti R および Lambertenghi Deliliers G (2001) Br J Haematol, 113, 126〜135; Sun J, Nam S, Lee CS, Li B, Coppola D, Hamilton AD, Dou QP および Sebti SM (2001) Cancer Res, 61, 1280〜1284) 。
【０００５】
形質転換ペプチド、特に擬似ペプチドは、ペプチド自体よりも更に有効な類似体として挙動することができるため、大きな関心を喚起しているが、生分解性がかなり高いこと、生理的障壁を越える能力が低いこと、およびターゲットに対する選択性を欠くことにより、それらの治療用途は限定されている。それゆえ、より活性でより安定な、そしてより特異的な類似体を設計する必要がある。ペプチド骨格およびアミド結合（ＣＯ−ＮＨ）の化学的性質が改変された擬似ペプチドは、良好な生物活性を保持しながら、模倣されるペプチドよりもはるかに高いバイオアベイラビリティーを誘導することを可能にする。アザペプチドおよびペプトイドのような擬似ペプチドのこの特性は、特にペプチダーゼに対して誘導される耐性と関連し、ペプチダーゼは、アミド結合のレベルでペプチド骨格を切断することによってあらゆる外因性ペプチドを極めて速やかに分解するが、その作用は、これらの結合の修飾によって鈍化する。
【０００６】
ヒドラジノペプトイドの分野における前駆化合物、ならびにそれらの合成方法は、Cheguillaume ら、J. Org. Chem., 1999, 64, 2924〜2927 による論文に述べられている。しかし、この論文は、これらの化合物の生物学的性質については全く記述していない。
【０００７】
更に、Peptides 2000, Jean Martinez および Jean-Alain Fehrentz 編集、EDK, Paris, France 2001, p.793〜794に発表された Bouget らによる論文は、細胞周期進行の阻害におけるヒドラジノペプトイド型化合物の作用を述べている。しかし、この論文に示された結果は、（細胞骨格の解体を導き、それによって周期の停止を生じさせる、微小管の解重合のような）プロテアソームに関わるもの以外のあらゆる癌細胞の非特異的機序と関連すると考えられ、この論文に述べられている化合物を癌の処置において使用することは不可能であろう。
【０００８】
本発明は、以下で記載される式（Ｉ）のヒドラジノペプトイド化合物が、プロテアソームによって生じる酵素活性の阻害機序に従って癌細胞のアポトーシスを誘導することにより、癌細胞に対して特異的作用を持つという事実を、本発明者らが証明したことに由来する。
【０００９】
本発明の対象は、下記一般式（Ｉ）：
【００１０】
【化１７】
2005501121.tif 000002
【００１１】
〔式中：
ｎは、１〜１０までの整数を表し、特にｎは、１または２を表し、
Ｙは、ＣＨ2を表し、そしてＺは、ＣＯを表すか、またはＹは、ＣＯを表し、そしてＺは、ＣＨ2を表し、
Ｒ1およびＲ6は、互いに独立して、
水素原子、
ＢＯＣ、ＦＭＯＣまたはＺ基のような、ペプチド合成において窒素原子の保護に使用できる基、
式−ＣＯＲ、または−ＣＨ2ＣＯＲ〔式中、Ｒは、
水素原子（Ｒ1が、水素であって、これがトリフルオロ酢酸塩のような水性溶媒に可溶性の塩の形態をとる場合を除く）、
場合により一個以上のハロゲン原子によって置換された、１〜１０個の炭素原子を有するアルキル基（Ｒ基は、たとえば、−ＣＦ3または−ＣＨ2Ｘ基〔Ｘは、ＣｌまたはＢｒのようなハロゲン原子を表す〕を表す）、または−ＣＨ2ＣＮを表すＲ基のようなシアノ基によって置換された上記アルキル基、または−ＣＨ2ＳＣ2Ｈ5を表すＲ基のような硫黄を含む基によって置換された上記アルキル基、
−ＣＯＯＲa基（式中、Ｒaは、Ｈまたはアルキル基、たとえばメチルまたはエチル基を表す）、
−ＮＨ2第一級アミノあるいは第二級または第三級アミノ基、
−ＯＭｅメトキシ、または−ＯＥｔエトキシ基のような、アルコキシ基、
フェニル基、
式：
【００１２】
【化１８】
2005501121.tif 000003
【００１３】
の基のような、ピリジニウム基
を表す〕の基を表し、
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は、互いに独立して：
水素原子、
場合により、特に一個以上のハロゲン原子によって、あるいは一個以上のアミンまたはフェニル基によって置換された、ブチル、イソブチル、−（ＣＨ2）4ＮＨ2、−ＣＨ2Ｐｈ、−（ＣＨ2）4ＮＨＢｏｃ基のような、１〜１０個の炭素原子を有するアルキル基
を表すか、
あるいはＲ1はＲ2と一緒になって、またはＲ6はＲ5と一緒になって、式：
【００１４】
【化１９】
2005501121.tif 000004
【００１５】
の基を表す〕
の化合物の、腫瘍疾患あるいはアルツハイマー病またはレーン病のような神経変性疾患の処置のための薬剤を調製するための使用である。
【００１６】
本発明のより特定の対象は、
Ｒ1が、ＢＯＣ、ＦＭＯＣ、Ｚ基またはＨを表し（Ｒ1がＨであって、これが式ＣＦ3ＣＯ2-のトリフルオロ酢酸塩、Ｈ3Ｎ+−のような塩の形態をとる場合を除く）、
Ｒ2が、Ｈ、またはイソブチル基のような１〜１０個の炭素原子を有するアルキル基を表し、
Ｒ3が、Ｈ、またはイソブチル基のような１〜１０個の炭素原子を有するアルキル基を表し、
Ｒ4またはＲ5のいずれかが、Ｈを表し、他方が、上記で定義したようなアルキル基を表し、そしてＲ6が、上記で定義したような式−ＣＯＲまたは−ＣＨ2ＣＯＲの基を表すか、
あるいはＲ5が、Ｒ6と一緒になって、式：
【００１７】
【化２０】
2005501121.tif 000005
【００１８】
の基を表し、
ｎが、１または２を表し、
ＹおよびＺが、上記で定義したとおりである、
一般式（Ｉ）の化合物の上述した使用である。
【００１９】
本発明は、更により詳細には、Ｒ5が、Ｈを表し、そしてＲ6が、−ＣＯＲまたは−ＣＨ2ＣＯＲ基〔式中、Ｒは、−ＣＨ2Ｘ基を表し、Ｘは、ＣｌまたはＢｒのようなハロゲン原子、またはピリジニウム基を表す〕を表す、一般式（Ｉ）の化合物の上述した使用に関する。
【００２０】
本発明のより特定の対象は、また、Ｒ5が、Ｈを表し、そしてＲ6が、−ＣＯＣＨ2Ｂｒ、−ＣＯＣＨ2Ｃｌまたは
【００２１】
【化２１】
2005501121.tif 000006
【００２２】
の基を表す、一般式（Ｉ）の化合物の上述した使用に関する。
【００２３】
本発明は、更により詳細には、Ｒ1およびＲ2が、Ｈを表す、一般式（Ｉ）の化合物の上述した使用に関する。
【００２４】
本発明のより特定の対象は、また、Ｙが、ＣＨ2を表し、そしてＺが、ＣＯを表す、一般式（Ｉ）の化合物、すなわち次式（Ｉａ）：
【００２５】
【化２２】
2005501121.tif 000007
【００２６】
〔式中、ｎ、およびＲ1〜Ｒ6は、上記で定義したとおりである〕
の化合物の上述した使用に関する。
【００２７】
本発明の範囲内での使用のために特に好ましい式（Ｉａ）の化合物は、次式：
【００２８】
【化２３】
2005501121.tif 000008
2005501121.tif 000009
2005501121.tif 000010
2005501121.tif 000011
【００２９】
の化合物であって、脱保護された化合物が、トリフルオロ酢酸塩のような塩の形態である化合物である。
【００３０】
本発明のより特定の対象は、また、次式：
【００３１】
【化２４】
2005501121.tif 000012
【００３２】
に相当する式（Ｉａ）の化合物であって、脱保護された化合物が、トリフルオロ酢酸塩のような塩の形態である化合物の上述した使用である。
【００３３】
本発明の対象は、また、Ｙが、ＣＯを表し、そしてＺが、ＣＨ2を表す、一般式（Ｉ）の化合物、すなわち次式（Ｉｂ）：
【００３４】
【化２５】
2005501121.tif 000013
【００３５】
〔式中、ｎ、およびＲ1〜Ｒ6は、上記で定義したとおりである〕
の化合物の上述した使用である。
【００３６】
本発明のより特定の対象は、
−ｎが、１を表し、
−Ｒ1が、Ｚ基またはＨを表し（Ｒ1がＨであって、これが式ＣＦ3ＣＯ2-のトリフルオロ酢酸塩、Ｈ3Ｎ+−のような塩の形態をとる場合を除く）、
−Ｒ2またはＲ3のいずれかが、Ｈを表し、他方が、上記で定義したようなアルキル基、特にイソブチル基を表し、
−Ｒ4が、上記で定義したようなアルキル基、特にイソブチル基、または−ＣＨ2Ｃ6Ｈ5、または（ＣＨ2）4−ＮＨ2、または−（ＣＨ2）4ＮＨＢｏｃ基を表し、
−Ｒ5が、Ｈを表し、そしてＲ6が、上記で定義したような式−ＣＯＲの基を表すか、
−あるいはＲ5が、Ｒ6と一緒になって、式：
【００３７】
【化２６】
2005501121.tif 000014
【００３８】
の基を表す、
一般式（Ｉｂ）の化合物の上述した使用である。
【００３９】
本発明の範囲内での使用のための特に好ましい式（Ｉｂ）の化合物は、下記の式：
【００４０】
【化２７】
2005501121.tif 000015
【００４１】
の化合物である。
【００４２】
本発明のより特定の対象は、プロテアソーム機能の阻害によって癌細胞のアポトーシスを誘導することによる、肝癌、結腸癌、乳癌のような癌の処置を意図した薬剤の調製のための、上記で定義した化合物の使用である。
【００４３】
本発明の対象は、また、上述した一般式（Ｉ）の化合物、より詳細には、上記で定義した式（Ｉａ）および（Ｉｂ）の化合物である。
【００４４】
本発明のより特定の対象は、
−ｎ＝１であり、
−Ｒ5が、Ｈを表し、そしてＲ6が、式−ＣＯＲまたは−ＣＨ2ＣＯＲ基〔式中、Ｒは、−ＣＨ2Ｘ基を表し、Ｘは、ＣｌまたはＢｒのようなハロゲン原子、またはピリジニウム基を表す〕を表し、
−Ｒ1〜Ｒ4が、上記で定義したとおりである、
一般式（Ｉ／ａ）の化合物である。
【００４５】
本発明のより特定の対象は、下記の式：
【００４６】
【化２８】
2005501121.tif 000016
【００４７】
に相当する、式（Ｉａ）の上述した化合物であって、脱保護された化合物が、トリフルオロ酢酸塩のような塩の形態である化合物である。
【００４８】
本発明は、また、
−ｎ＝２であり、
−Ｒ4またはＲ5のいずれかが、Ｈを表し、他方が、上記で定義したようなアルキル基を表し、
−Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ6が、上記で定義したとおりである、
式（Ｉａ）の化合物に関する。
【００４９】
本発明のより特定の対象は、下記の式：
【００５０】
【化２９】
2005501121.tif 000017
【００５１】
に相当する一般式（Ｉａ）の上述した化合物であって、脱保護された化合物が、トリフルオロ酢酸塩のような塩の形態である化合物である。
【００５２】
本発明の対象は、また、上記で定義した一般式（Ｉｂ）の化合物である。
【００５３】
本発明は、したがって、より詳細には、
−ｎが、１を表し、
−Ｒ1が、Ｚ基またはＨを表し（Ｒ1が、Ｈであって、これが式ＣＦ3ＣＯ2-のトリフルオロ酢酸塩、Ｈ3Ｎ+−のような塩の形態をとる場合を除く）、
−Ｒ2またはＲ3のいずれかが、Ｈを表し、他方が、上記で定義したようなアルキル基、特にイソブチル基を表し、
−Ｒ4が、上記で定義したようなアルキル基、特にイソブチル基、または−ＣＨ2Ｃ6Ｈ5、または（ＣＨ2）4−ＮＨ2、または−（ＣＨ2）4ＮＨＢｏｃ基を表し、
−Ｒ5が、Ｈを表し、そしてＲ6が、上記で定義したような式−ＣＯＲの基を表すか、
−あるいはＲ5が、Ｒ6と一緒になって、式：
【００５４】
【化３０】
2005501121.tif 000018
【００５５】
の基を表す、
上記で定義した式（Ｉｂ）の化合物に関する。
【００５６】
本発明のより特定の対象は、下記の式：
【００５７】
【化３１】
2005501121.tif 000019
【００５８】
に相当する式（Ｉｂ）の化合物である。
【００５９】
本発明の対象は、また、薬学上許容されうる賦形剤と組み合わせて上記で定義したような式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物である。
【００６０】
好都合には、本発明の医薬組成物は、経口または皮下経路によって投与され、約１００mg／kgの一日当たりの投与のために、約２０〜５０mgの単位用量の形態で提供される。
【００６１】
本発明の対象は、また、上記で定義した式（Ｉ）の化合物の合成方法であり、本方法は、主として以下の工程：
−式
【００６２】
【化３２】
2005501121.tif 000020
【００６３】
の化合物を、式
【００６４】
【化３３】
2005501121.tif 000021
【００６５】
の生成物と置換させて、それぞれ式ＡおよびＢ
【００６６】
【化３４】
2005501121.tif 000022
【００６７】
〔式中、Ｒ4、Ｒ5およびＲ6は、上記で定義したとおりである〕
の化合物を得る工程、
−式
【００６８】
【化３５】
2005501121.tif 000023
【００６９】
〔式中、Ｒ1〜Ｒ3は、上記で定義したとおりである〕
の化合物を、上記の式ＡおよびＢの化合物と反応させて、それぞれ下記の式（Ｉ）：
【００７０】
【化３６】
2005501121.tif 000024
【００７１】
〔式中、Ｒ1〜Ｒ6は、上記で定義したとおりである〕
の化合物を得る工程、
−適切ならば、特に下記で述べる脱保護方法により、Ｒ1基の除去による脱保護の工程、
−適切ならば、上述の工程を繰り返して、所望の数ｎだけ式（Ｉ）の化合物の鎖を延長する工程、
を含むことを特徴とする。
【００７２】
本発明の化合物の合成およびそれらの生物学的性質の研究についての下記の詳細な説明において、本発明を更に説明する。
【００７３】
ＡＬＬＮ（システインプロテアーゼおよびプロテアソームインヒビター）は、求電子基としてＣ末端アミノアルデヒドを有する。同じく図式に示すＺ−Ｌｅｕ−Ｎｏｒｌｅｕ−Ｈジペプチドのような同等の活性の他のインヒビターが開発されている。しかし、アミノアルデヒドが不安定であり、非常に急速にラセミ化し、それによって活性が失われることが知られている。本発明者らは、それゆえ、周期に関わるタンパク質の分解の特異的阻害作用を得るために、固定された立体配置の不斉中心を持たない類似体を合成した。
【００７４】
【化３７】
2005501121.tif 000025
【００７５】
ＡＬＬＮ（Ｎ−アセチル−ロイシル−ロイシル−ノルロイシナル）は、Ｇ１／Ｓ遷移および中期−後期遷移に影響を及ぼすことによって細胞周期の進行を阻害する。高濃度のＡＬＬＮ（＞５０μg／ml）は、有糸分裂の長い停止をもたらす一方、低濃度では、有糸分裂の減速がもたらされる。その後、細胞は、第２周期を開始することができる。
【００７６】
本発明者らが、ペプチド類似体であるヒドラジノアザペプトイドおよびヒドラジノペプトイドのようなペプチド模倣体の合成を通して再現することを目指したのは、細胞機能に関わるこれらのペプチドの活性である（最大の生理的障壁を越えること、すなわちペプチダーゼに対する耐性）。
【００７７】
反復法により合成したペプチドミメティックは、固定された立体配置の不斉中心を持たないという点で、ペプトイド、アザチドおよび尿素ペプトイドのクラスに類似するヒドラジノアザペプトイドである。ペプチドミメティックの効果を有するこれらの異なるファミリーのオリゴマーはすべて、それらにかなりの立体配置上の自由を与えるＣＨαｓの等電子である窒素原子上に、それらのアミノ酸相同体を模倣する側鎖を持つという特徴を共有する。合成方法の単純化（立体化学的問題の排除）およびアミド結合の修飾による、ペプチダーゼの作用に対して変化した骨格に対するそのような類似体のより高い耐性などの、他の潜在的な恩恵もこれから生じる。
【００７８】
Ｉ）式（Ｉａ）の化合物の合成
「Ｎ−ヒドラジノ酸」単位を、反復できる二つの化学的工程に導入する。更に、天然ペプチドと比べて付加的な窒素原子のヒドラジノアザペプトイド単位の存在は、この方法から出発して、この原子上に様々な性質の側鎖を導入する可能性を提供する。
【００７９】
【化３８】
2005501121.tif 000026
【００８０】
本発明者らは、上記の方法により、アザアミノエステル単位またはＣ末端のＮ−アザアミノエステルをそれぞれＮα−ヒドラジノ酸単位と組合せた化合物を合成した。これは、様々な相対的位置で、現在既知のインヒビターの大半において存在するアミノ酸ロイシン、ノルロイシンおよびフェニルアラニンを模倣する側鎖を持つ擬似ジペプチド骨格を得ることを可能にする。次に、Ｃ末端での保護基の選択的開裂により、再官能基化して、システインの側鎖と相互作用することができる基を導入することができる。本発明者らは、それゆえ、様々な官能性（トリフルオロアセチル、ケトエステル、アミド等）を導入することができた。そのような官能基は、窒素原子上にあるときには求電子性が低いが、これは、更に、システインプロテアーゼに対するインヒビターの選択性を高める方法であることが知られている（ＳＨは、ＯＨよりも求核性である）。合成した種々の擬似ペプチドを以下に示す。
【００８１】
【表１】
2005501121.tif 000027
2005501121.tif 000028
【００８２】
本発明者らは、更に、Ｎ末端を脱保護し、ＡＬＬＮのトリペプチド構造により近いトリペプチド類似体（ＰＴＰ１）を得るために、工程ＡおよびＢを繰り返すことによって新しいヒドラジノペプトイド単位を導入した。
【００８３】
【化３９】
2005501121.tif 000029
【００８４】
１）ブロモアセチル化ヒドラジン
ブロモアセチル化：ジクロロメタン（１０ml）中の臭化ブロモアセチル（１２mmol、１．２当量）を、ジクロロメタン（１０ml）およびピリジン（１２mmol、１．２当量）中のCheguillaume らの上記論文に記載されているＮ保護ヒドラジン（１０mmol、１当量）の、攪拌下で０℃に冷却した溶液に滴下した。混合物を５時間攪拌し、次に水５０mlを用いて３回洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下留去し、保護基の性質に応じて、生成物を沈殿させるか（Ｆｍｏｃ、Ｚ）または油状物の形態で得た（ＣＯＮＨ2）。
【００８５】
【化４０】
2005501121.tif 000030
2005501121.tif 000031
2005501121.tif 000032
2005501121.tif 000033
【００８６】
２）真交性に保護されたヒドラジノアザペプトイド
臭素原子の置換：クロロホルム（１０ml）中のα−ブロモヒドラジド（１０mmol、１当量）を、クロロホルム（１０ml）中のＮ保護ヒドラジン（２５mmol、２．５当量）の攪拌下の溶液にゆっくり加えた。反応混合物を攪拌しながら２４時間還流した。冷却後、媒質を水５０ml、２Ｎ  ＨＣｌ  ５０ml、ＮａＨＣＯ3  ５０mlおよび水５０mlを順次用いて３回洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下留去した。二つの保護基の性質に応じて、生成物を低温状態でエーテルからゆっくり沈殿させるか、または帯白色の油状物の形態で得た。
【００８７】
【化４１】
2005501121.tif 000034
2005501121.tif 000035
2005501121.tif 000036
【００８８】
３）脱保護された偽ペプトイド
【００８９】
【化４２】
2005501121.tif 000037
【００９０】
末端の一つの選択的脱保護
Ｆｍｏｃ基に関して：エーテル（３ml）中のピペリジン（２０mmol、２当量）の溶液を最小量のエーテル（５ml）中の偽ジペプトイド（１０mmol、１当量）の溶液に滴下した。反応混合物を攪拌下に１５時間放置した。溶媒を減圧下留去し、粗生成物をエタノールから再結晶化させた。得られた白色沈殿物は、フルオレン基にピペリジンを付加したことから生じる、反応の付加物であった。選択的再結晶化およびこの付加物全体のろ過後、目的生成物が、低温状態でエーテルからゆっくり沈殿した。
【００９１】
Ｚ基に関して：酢酸３滴および１０％パラジウム担持炭素（Ｐｄ／Ｃ）（生成物のmmol当り５０mg）を、エタノール（１５ml）中の偽ペプトイド（１０mmol、１当量）の攪拌下溶液に加えた。混合物を２４時間、水素雰囲気下に置いた。混合物をセライトでろ過し、得られた生成物（エタノール中の白色粒子）を可溶化するためにジクロロメタンを加えた。溶媒を減圧下留去し、生成物を、エーテルに不溶性の白色固体の形態で得た。
【００９２】
Ｂｏｃ基に関して：濃硫酸（２０ml）で３７％塩酸１５mlを脱水することにより、気体ＨＣｌを、エーテル（１０ml）中の擬似ペプチド（１０mmol、１当量）の攪拌下溶液に通して起泡させた。ほとんど瞬時に塩酸塩が出現し、混合物を攪拌下に２時間放置した。次に、焼結ガラスを用いて沈殿物をろ過し、エーテルを使用して数回洗浄した（生成物を保持する場合は、塩酸塩の形態のままにしておく方がよい）。その後、塩酸塩を１Ｎ  ＮａＨＣＯ3溶液に溶解し、遊離アミンをエーテルで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下留去した。生成物を濃厚な油状物の形態で得た。
【００９３】
【化４３】
2005501121.tif 000038
2005501121.tif 000039
2005501121.tif 000040
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【００９４】
４）ヒドラジノアザペプトイド
【００９５】
【化４４】
2005501121.tif 000042
【００９６】
Ｃ末端の官能基化
ケトンおよびケト−エステル基に関して：エーテル（５ml）溶液の求電子剤
（５．５mmol、１．１当量）（無水トリフルオロ酢酸および塩化エチルオキサリル）を、エーテル（５ml）およびトリエチルアミン（５．５mmol、１．１当量）中の偽ジペプトイド（５mmol、１当量）の、攪拌下で０℃に冷却した溶液に滴下した。反応媒質を攪拌下に６時間放置した。トリエチルアンモニウム塩がエーテルに不溶であるときには、ろ過して、ろ液を減圧下留去した；トリエチルアンモニウム塩が、エーテルに不溶でないときには、水３０mlを使用して媒質を３回洗浄し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥して、溶媒を減圧下留去した。いずれの場合も、目的生成物が低温状態でエーテルからゆっくり沈殿した。
【００９７】
【化４５】
2005501121.tif 000043
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【００９８】
ボリル化基に関して：エーテル（１０mL）中のボリル化アルデヒド（５．５mmol、１．１当量）の溶液を、エーテル５ml中の偽ペプトイド（５mmol、１当量）の攪拌下溶液に少量ずつ加えた。瞬時に白色沈殿物が形成したが、媒質を攪拌下に１時間放置した。焼結ガラスを用いて白色沈殿物をろ過し、エーテルで数回洗浄した。
【００９９】
【化４６】
2005501121.tif 000047
2005501121.tif 000048
【０１００】
アセチル化基に関して：ジクロロメタン（５mL）中の臭化ブロモアセチル（６mmol、１．２当量）を、ジクロロメタン（１０mL）およびピリジン（６mmol、１．２当量）中の脱保護されたヒドラジノアザペプトイド（５mmol、１当量）の、攪拌下で０℃に冷却した溶液に滴下した。混合物を５時間攪拌し、次に水５０mlで３回洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下留去した。生成物が低温状態でエーテルからゆっくり沈殿した。
【０１０１】
【化４７】
2005501121.tif 000049
2005501121.tif 000050
【０１０２】
ピリジニウム基に関して：ピリジン（６mmol、１．２当量）を、エーテル（５ml）中のブロモアセチル化偽ペプトイド（５mmol、１当量）の攪拌下溶液に加えた。反応媒質を攪拌下に周囲温度で１４時間放置した。溶媒を減圧下留去した後、生成物および過剰のピリジンを含有する泡状物を得た。泡状物（ピリジンは、可溶であるが、ピリジニウム塩は、不溶性である）に石油エーテルを加えてこの過剰物を除去した。ピペットを用いて石油エーテルを回収し、この操作を３回くり返した。石油エーテルの残分は、減圧下留去し、得られた生成物は、泡状物であったが、乾燥すると実質的に固体であった。
【０１０３】
【化４８】
2005501121.tif 000051
【０１０４】
アルデヒド基に関して：ギ酸（６mmol、２．４当量）およびＤＣＣ（５mmol、２当量）を、エーテル（５ml）中のペンタフルオロフェノール（５mmol、２当量）の、攪拌下で０℃に冷却した溶液に加えた。１０分間攪拌した後、偽ペプトイド（２．５mmol、１当量）をクロロホルム５mlの溶液に加え、反応媒質を攪拌下に周囲温度で４時間放置した。次に、混合物をクロロホルム２０mlで希釈し、ＤＥＥＡを加えた（５mmol、２当量）。媒質を、１Ｎ  ＨＣｌ  １０ml、５％ＮａＨＣＯ3  １０mlおよび水１０mlで洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。液体空気で冷却した後、生成物が沈殿した（凝固し、エーテルに不溶のペースト状物）。
【０１０５】
【化４９】
2005501121.tif 000052
2005501121.tif 000053
【０１０６】
II）式（Ｉａ）の化合物の生物学的分析
合成した分子を、前述したプロテアソームのタンパク質分解活性に関してインビトロで、次にアフリカツメガエル（ＸＬ２）細胞培養物に関してインビボで試験した。ＸＬ２細胞の細胞周期についての知識により、同期化実験を実施すること、そして同時に、周期の各々の相の期間を評価することが可能であった。
【０１０７】
プロテアソームの酵素活性に対する、合成したヒドラジノアザペプトイドの潜在的阻害能力のインビトロ分析。
ヒドラジノアザペプトイドの潜在的阻害能力を、精製プロテアソームのキモトリプシン酵素活性に関して定量した。結果を活性阻害のパーセンテージで表した。
【０１０８】
合成した化合物の、精製プロテアソームのキモトリプシン触媒活性に対する阻害特性の測定。
【０１０９】
【表２】
2005501121.tif 000054
【０１１０】
化合物Ｐ１４およびＰ１７が、特に有用な阻害活性を持つことが認められるであろう。これらの化合物２mMでプロテアソーム活性を７０％阻害することができる。この活性の９０％を阻害するには、ＡＬＬＮ  １mMが必要である。
【０１１１】
ＦＡＣＳ  分析
ＸＬ２細胞培養物に関して試験した生成物の生物学的結果を下記の表に示す。用量（２〜１７４μMまで）および速度（３０分〜７時間まで）の作用を実施した。
【０１１２】
【表３】
2005501121.tif 000055
【０１１３】
二つのインヒビターＰ１４およびＰ１７は、有糸分裂において遮断された細胞のパーセンテージを分析した場合、ＡＬＬＮと同等の活性を持つ。
【０１１４】
有糸分裂において遮断された細胞のパーセンテージは、これらの生成物のかなりの数について２０％を超える。本発明者らは、したがって、Ｃ末端の修飾によって、および擬似ペプチド骨格上の側鎖の位置によって生成物の生物活性を改善した。更に、媒質中の有糸分裂における同等の遮断を得るために必要なＰ１４の濃度は２μMであることが注目される。
【０１１５】
二つのインヒビターＰ１４およびＰ１７が周期の進行、より詳細には有糸分裂の進行を遮断できることは特に興味深い。有糸分裂中の細胞の遮断を可能にするＡＬＬＮの濃度が１００μMであるのに対し、有糸分裂における遮断を得るために必要な媒質中のＰ１４の濃度が２μMであることは注目される。
【０１１６】
【表４】
2005501121.tif 000056
【０１１７】
蛍光顕微鏡分析
核内容物の観察により、有糸分裂の種々の段階を決定することができる。有糸分裂において遮断された５０の細胞を使用して以下の結果を得た。最初の７つのインヒビターは、蛍光顕微鏡を用いて検討した。
【０１１８】
【表５】
2005501121.tif 000057
【０１１９】
ペプチド骨格に対して行った修飾の性質により、細胞周期の異なる相で細胞の遮断が起こる。生成物Ｐ６およびＰ７が有糸分裂の種々の段階で同じ阻害選択性を持たないことが注目される。すなわち、Ｐ６は、主として有糸分裂終了時に細胞を遮断するのに対し、Ｐ７は、はるかに低い選択性を示すことが認められる。
【０１２０】
III） 式（Ｉｂ）の化合物の合成
１）レトロヒドラジノアザペプトイド（ヒドラジド結合の反転）
Ｎ末端の官能基化
ブロモアセチル化基に関して：ジクロロメタン（５mL）中の臭化ブロモアセチル（６mmol、１．２当量）を、ジクロロメタン（１０mL）およびピリジン（６mmol、１．２当量）中の脱保護ヒドラジノアザペプトイド（５mmol、１当量）の、攪拌下で０℃に冷却した溶液に滴下した。混合物を５時間攪拌し、次に水５０mlを用いて３回洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下留去した。生成物が、低温状態でエーテルからゆっくり沈殿した。
【０１２１】
【化５０】
2005501121.tif 000058
2005501121.tif 000059
【０１２２】
ケトン基に関して：エーテル（５ml）中の無水トリフルオロ酢酸（５．５mmol、１．１当量）の溶液を、エーテル（５ml）およびトリエチルアミン（５．５mmol、１．１当量）中の偽ジペプトイド（５mmol、１当量）の、攪拌下で０℃に冷却した溶液に滴下した。反応混合物を攪拌下、４時間放置した。トリエチルアンモニウム塩が沈殿したら、ろ過して、ろ液を減圧下留去した；さもなければ、媒質を水３０mlで３回洗浄し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下留去した。いずれの場合も、目的生成物が、低温状態でエーテルからゆっくり沈殿した。
【０１２３】
【化５１】
2005501121.tif 000060
【０１２４】
ボリル化基に関して：エーテル（１０mL）中のボリル化アルデヒド（５．５mmol、１．１当量）の溶液を、エーテル５ml中の偽ペプトイド（５mmol、１当量）の攪拌下溶液に少量ずつ加えた。瞬時に白色沈殿物が形成したが、媒質を攪拌下に１時間放置した。焼結ガラスを用いて白色沈殿物をろ過し、エーテルで数回洗浄した。
【０１２５】
【化５２】
2005501121.tif 000061
2005501121.tif 000062
【０１２６】
２）レトロヒドラジノペプトイド
合成方法
【０１２７】
【化５３】
2005501121.tif 000063
【０１２８】
Ｎ末端で脱保護されたモノマー（A. Cheguillaume, I. Doubli-Bounoua, M. Baudy-Floc'h, P. Le Grel Synlett, 2000, 3, 331〜334）（３．０mmol）、ＤＭＡＰ（０．１mmol）およびＣ末端で脱保護されたモノマー（３．０mmol）を、ジクロロメタン５０mL中の溶液に入れた。反応混合物の温度を０℃に下げて、ＤＣＣ（４．５mmol、１．５当量）を少量ずつ加えた。この温度で５分間経過後、反応混合物を攪拌下に一晩放置した。生成したＤＣＵをセライトでろ過し、次に、得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。塩酸の２Ｎ水溶液で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を留去した。得られたダイマーをその後Ｎ末端の位置で脱保護して、上記の方法により再官能基化した。
【０１２９】
【化５４】
2005501121.tif 000064
【０１３０】
IV） 式（Ｉｂ）の化合物および化合物Ｐ２１およびＰ２２の生物学的分析：
プロテアソームは、周期を調節するタンパク質の分解工程に関与するタンパク質構造物であり；プロテアソームの種々のサブユニットに関連したいくつかのタンパク質分解活性を有するタンパク質構造物である。
【０１３１】
細胞周期の経過中、プロテアソームの機能不全は、考察している細胞および生物にとって劇的でありうる、周期の進行の異常をもたらすことがある。プロテアソームインヒビターは、細胞周期の進行を停止させ、アポトーシスを引き起こすことができるので、ある種の腫瘍の処置のために、潜在的に非常に有用な薬剤となってきた。
【０１３２】
プロテアソームインヒビターは、非常に重要な潜在的抗癌作用を有しており、化学療法プロトコルにおける補助剤としてのそれらの役割を評価し、この有用性を証明するために数多くの臨床試験が現在進行中である。
【０１３３】
我々は、マウス白血病細胞培養物へのレトロ化合物の作用を分析し、これらの生成物の中でも特に三つの化合物が、抗増殖作用を持つことを確認した。この作用は他の二つの細胞型、ラット肝細胞およびヒト乳癌系でも観察された。これら三つの系において、増殖指数はゼロに近く、列記した化合物の作用下では細胞が増殖を中止することが示されている。
【０１３４】
化合物ＰＲ７、ＰＲ６およびＰ２１（特許に既に記述されている）は、増殖阻害因子であり、細胞の生存率には影響を及ぼさない。化合物ＰＲ１、ＰＲ２、ＰＲ３、ＰＲ５、ＰＲ８およびＰ２２（上述した非レトロ化合物）は、増殖を阻害し、生成物によって２〜１２時間の範囲の速度で細胞死を引き起こす。
【０１３５】
したがって、これらの化合物は、抗腫瘍分子として特に有用である。
【国際公開パンフレット】
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2005501121.tif 000085
2005501121.tif 000086
2005501121.tif 000087
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【国際調査報告】
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