(57)【要約】  本質的に、ＩＧＦＢＰ−２をコードする遺伝子とＩＧＦＢＰ−５をコードする遺伝子の両方の一部に相補的な塩基の配列からなる、二重特異性アンチセンスオリゴヌクレオチドは、内分泌調節性癌の治療におけるアンチセンス療法として有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
本質的に、ＩＧＦＢＰ−２をコードする遺伝子とＩＧＦＢＰ−５をコードする遺伝子両方の一部に相補的であり、かつ有効量のＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−５のインヒビターとして作用するのに充分な長さである塩基の配列からなる、二重特異性アンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項２】
オリゴヌクレオチドは本質的に、配列番号１に記載される一連の塩基からなる、請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項３】
オリゴヌクレオチドは本質的に、配列番号２に記載される一連の塩基からなる、請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項４】
オリゴヌクレオチドは本質的に、配列番号３〜７のいずれかに記載される一連の塩基からなる、請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項５】
内分泌調節性癌の治療用の薬剤組成物の製造方法であって、請求項１〜４のいずれか１項に記載の二重特異性アンチセンスオリゴを、静脈内、腹腔内、皮下または経口投与のための薬剤学的に許容しうる担体と組合せる工程を含む方法。
【請求項６】
内分泌調節性癌に罹患している対象において内分泌調節性癌を治療する方法であって、対象に、請求項１〜４のいずれか１項に記載の二重特異性アンチセンスオリゴヌクレオチドを、内分泌調節性癌の細胞内の有効レベルのＩＧＦＢＰ−２および／またはＩＧＦＢＰ−５を減少させるのに有効な量で投与する工程を含む方法。
【請求項７】
癌は前立腺癌である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
癌は乳癌である、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドと薬剤学的に許容しうる担体を含む、薬剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の背景
本出願は、ＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−５を阻害する二重特異性アンチセンスオリゴヌクレオチド、並びに内分泌調節性腫瘍（例えば、乳癌、前立腺癌、卵巣癌および結腸癌）の治療におけるこれらの使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
前立腺癌は、男性が罹患する最もありふれた癌であり、西洋における男性の癌死亡の第２の死因である。前立腺癌は、アンドロゲン感受性腫瘍であるため、進行した前立腺癌の患者には、幾つかの治療法において、例えば去勢によるアンドロゲン除去が利用されている。アンドロゲン除去によって、前立腺腫瘍における広範囲のアポトーシスが起こり、従って疾患が緩解する。しかし、去勢誘発性アポトーシスは徹底的ではなく、そして結局はアンドロゲン非依存性へと生存腫瘍細胞の進行が起こる。この進行は、生存率と生活の質の改善にとって主要な障害であり、従ってアンドロゲン非依存性細胞を標的として努力されてきている。これらの努力は、アンドロゲン非依存性腫瘍細胞を標的とする非ホルモン療法に傾注してきたが、１９９８年の報告では、どの非ホルモン剤も生存率を改善していない。Ohら, J. Urol. 160: 1220-1229 (1998)。従って代替案となるアプローチが必要とされる。
【０００３】
インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）−ＩおよびＩＧＦ−IIは、多くの正常および悪性細胞にとって強力なマイトジェンである。増え続ける証拠は、ＩＧＦが前立腺疾患および乳癌の病態生理学において重要な役割を演じていることを示唆している。Boudonら, J. Clin. Endocrin. Metab. 81: 612-617 (1996)；Angelloz-Nicoudら, Endocrinology 136: 5485-5492 (1995)；Nickersonら, Endocrinology 139: 807-810 (1998)；Figueroaら, J. Urol. 159: 1379-1383 (1998)。
【０００４】
ＩＧＦに対する生物学的応答は、ＩＧＦＢＰ類を含む種々の因子により調節される。現在までのところ、機能が、高親和性相互作用によってＩＧＦの生物学的作用の調節に関係していると考えられている、６種のＩＧＦＢＰが同定されている。Rajaramら, Endocrin. Rev. 18: 801-813 (1997)。しかし幾つかの証拠は、ＩＧＦＢＰの生物学的作用が、ＩＧＦとは独立であることを示唆しており（同著者, Andressら, J. Biol. Chem. 267: 22467-22472 (1992)；Ohら, J. Biol. Chem. 268: 14964-14971 (1993)）、細胞増殖に及ぼすＩＧＦＢＰの刺激および阻害の両方の効果が、種々の実験条件下で報告されている。Andressら, 上記文献；Elginら, Proc. Nat'l. Acad. Sci. (USA), 84, 3254-3258 (1987)；Huynhら, J. Biol. Chem. 271: 1016-1021 (1996)；Damonら, Endocrinology 139: 3456-3464 (1998)。すなわち、ＩＧＦＢＰ類の正確な機能的役割は、依然として論議を呼んでいる。このため、報告された結果は、ＩＧＦが前立腺及び乳癌に関係すると見なしながらも、この関与に基づく治療的アプローチを明白に示唆してはいない。
【０００５】
ＰＣＴ公開WO 01/05435（引用例として本明細書に取り込まれる）は、ＩＧＦＢＰ−５をコードする遺伝子の一部に相補的なアンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドの投与による、ヒトを含む哺乳動物におけるホルモン調節性腫瘍（例えば、乳癌及び前立腺腫瘍）の治療方法を記述している。ＰＣＴ公開番号WO 02/22642（引用例として本明細書に取り込まれる）は、ＩＧＦＢＰ−２をコードする遺伝子の一部に相補的なアンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドの投与による、ヒトを含む哺乳動物における、前立腺及び他の内分泌腫瘍の治療のために提供される方法を記述している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、内分泌調節性癌の治療法として、ＩＧＦＢＰ−２とＩＧＦＢＰ−５の両方を標的とする二重特異性アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドを利用する。アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドは、標的遺伝子のｍＲＮＡ領域に相補的な１本鎖ＤＮＡの化学修飾されたストレッチであり、従ってＲＮＡ／ＤＮＡ２本鎖を形成することにより遺伝子発現を有効に阻害する。Figueroaら, J. Urol., 159: 1379-1383 (1998)。チオリン酸オリゴデオキシヌクレオチドは、ＤＮＡの非架橋ホスホリル酸素の１個を硫黄で置換することにより、ヌクレアーゼ消化に抵抗するように安定化される。最近、新生物疾の進行に関係する遺伝子を特異的に標的とした幾つかのアンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドが、インビトロとインビボの両方で評価されており、可能性ある治療剤としてのアンチセンス戦略の効力を証明している。Moniaら, Nature Med. 2: 668-675 (1996)；Cuccoら, Cancer Res. 56: 4332-4337 (1996)；Zieglerら, J. Natl. Cancer Inst. 89: 1027-1036 (1997)；Jansenら, Nature Med. 4: 232-234 (1998)。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
発明の要約
本発明は、ＩＧＦＢＰ−２をコードする遺伝子とＩＧＦＢＰ−５をコードする遺伝子の両方の一部に相補的な二重特異性アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドの投与による、ヒトを含む哺乳動物における内分泌調節性腫瘍（例えば、乳癌、前立腺癌、卵巣癌および結腸癌）の治療方法を提供する。このようなオリゴデオキシヌクレオチドの投与は、ＰＣ３およびＬＮＣａＰ細胞においてＩＧＦＢＰ−２とＩＧＦＢＰ−５両方のレベルを減少させることが証明され、そしてタンパク質の発現の減少が、腫瘍細胞の増殖を減少させること、またアンドロゲン非依存性への進行を遅延させることは以前に証明されている。すなわち、本発明により我々は、ＩＧＦＢＰ−２をコードする核酸配列とＩＧＦＢＰ−５をコードする核酸配列の両方の一部に相補的な、治療有効量の二重特異性アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド（これらは、そのような配列とハイブリダイズすることにより、ＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−５の発現を阻害するか、あるいは減少させる）を哺乳動物に投与する工程を特徴とする、ヒトを含む哺乳動物における前立腺癌の治療方法、およびアンドロゲン非依存性への前立腺腫瘍の進行を遅延させる方法を提供する。
【０００８】
本出願はさらに、本発明の方法において使用することができる二重特異性アンチセンス配列を提供する。
【０００９】
発明の詳細な説明
本発明は、本質的に、ＩＧＦＢＰ−２をコードする遺伝子とＩＧＦＢＰ−５をコードする遺伝子両方の一部に相補的であり、かつ有効量のＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−５のインヒビターとして作用するのに充分な長さ（一般に少なくとも１５塩基）である塩基の配列からなる、二重特異性アンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。本出願の明細書および請求の範囲において使用されるとき、この用語は、実質的に全てのアンチセンスオリゴヌクレオチドが、各遺伝子配列の一部に相補的であることを意味する。しかし本発明は、完全な相補性からは逸脱するかもしれないが、有効量のＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−５のインヒビターとしてなお機能する、１個または２個の末端塩基の付加、あるいは単一塩基置換のような、配列の軽微な修飾を除外しない。
【００１０】
「有効量のインヒビター」という用語は、アンチセンスオリゴヌクレオチドが、異なる機序により機能するかもしれないという事実を考慮している。ＩＧＦＢＰ−２またはＩＧＦＢＰ−５の有効量とは、細胞内で機能状態で存在する量である。アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与によるこの量の減少は、ＩＧＦＢＰの制限産生（転写または翻訳レベルで）により、または産生されるよりも速い速度でＩＧＦＢＰが分解されることにより起こりうる。さらに、阻害とは、アンチセンスオリゴヌクレオチドが投与されなかったならば、ＩＧＦＢＰが存在したであろうというときに起こるものである。以下に考察されるように、可能性ある治療標的である全ての細胞が、ＩＧＦＢＰ−２とＩＧＦＢＰ−５の両方を発現するわけではない。
【００１１】
本発明の具体的なアンチセンスオリゴヌクレオチドは、本質的に、配列番号１〜７に記載される一連の塩基からなる。これらの配列は、表１に記載される。
【００１２】
【表１】
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【００１３】
利用されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、インビボでのアンチセンスオリゴの安定性を増大させるために修飾してもよい。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、チオリン酸誘導体（硫黄原子による非架橋ホスホリル酸素原子の置換）として利用してもよいが、これはヌクレアーゼ消化に対する抵抗性が増大している。アンチセンスオリゴヌクレオチドの安定性の増大はまた、米国特許第6,451,991号および米国特許出願第10/080,794号（引用例として本明細書に取り込まれる）に一般的に記載されるように、２−メトキシエチル（ＭＯＥ）置換された基本骨格を持つ分子を使用して達成することができる。
【００１４】
本発明の組成物は、本発明の二重特異性アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与による、ヒトを含む哺乳動物の内分泌調節性腫瘍（例えば、乳癌、前立腺癌、卵巣癌および結腸癌）の治療に使用することができる。アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与は、そのままの投与および薬剤学的に許容しうる担体中での投与を含む、当該分野において既知の種々の機序を利用して実施することができる。例えば、アンチセンス送達のための脂質担体は、米国特許第5,855,911号および5,417,978号（引用例として本明細書に取り込まれる）に記載されている。一般に、アンチセンスは、静脈内、腹腔内、皮下又は経口経路により投与される。オリゴヌクレオチドが、薬剤学的に許容しうる担体中で投与される場合、この担体は一般には、ヒトに投与されるとき毒性反応または他の有害反応を引き起こす物質を含まない。
【００１５】
投与されるアンチセンスオリゴヌクレオチドの量は、関係する内分泌調節性腫瘍細胞においてＩＧＦＢＰ−２および／またはＩＧＦＢＰ−５のレベルの有効量を減少させるのに有効な量である。上記のように、本発明に関連して、出願人らは、この減少が起こりうる任意の具体的な機序により制約を受けようとするものではないが、減少は、もしアンチセンス分子がｍＲＮＡの翻訳を妨げるなら、ＩＧＦＢＰ−２および−５の発現の減少の結果として、またはＲＮアーゼ介在性機序を介して起こりうることが知られている。さらに、当然のことながら、適切な治療量は、利用される具体的なアンチセンスオリゴヌクレオチドの有効性、および使用される任意の担体の性質の両方により変化する。任意の所定の組成物について適量の決定は当該分野における技術の範囲内であり、適切な治療レベルを評価するために設定される標準系列の試験を介して行われる。
【００１６】
本発明の内分泌調節性癌の治療方法はさらに、化学療法剤および／または異なる標的に向けられた追加のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含んでいてもよい。例えば、タキソール（パクリタキセル（paclitaxel）またはドセタキセル（docetaxel））およびミトキサントロンのような従来の化学療法剤を使用することができる。同様に、本発明の二重特異性アンチセンスオリゴヌクレオチドと、アンチセンスＢｃｌ−２オリゴヌクレオチド、ＴＲＰＭ−２（クラステリン（clusterin））オリゴヌクレオチド、ＩＧＦＢＰ−２またはＩＧＦＢＰ−５オリゴヌクレオチドのような他のアンチセンス配列との組合せを使用することができる。
【００１７】
本発明の有効性は、確固とした理論および実験を基に見い出される。アンドロゲン除去後の代替増殖因子経路の活性化は、進行した前立腺癌におけるアンドロゲン非依存性（ＡＩ）進行に介在する１つの機序である。インスリン様増殖因子−Ｉ（ＩＧＦ−Ｉ）活性化は、インスリン様増殖因子結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）のあるファミリーにより調節される。ＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−５は、ホルモン不応性前立腺癌における最もありふれた過剰発現遺伝子の一員であるが、ＡＩ進行中のＩＧＦ−Ｉシグナル伝達の変化の機能的重要性は、まだあまり明確でない。前立腺癌のＡＩ進行は、治療抵抗性をもたらし、最終的には、進行した前立腺癌患者の臨床的進行の最も不吉な徴候である骨転移の発生に至る。この発生は、通常１２〜１８ヶ月死亡に先立つ。特にＩＧＦＢＰ−５に富んだ骨環境は、長い間にわたり前立腺癌転移を支持するための魅力ある「土壌」として特定されている。重要なＩＧＦ−Ｉシグナル伝達成分のＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−５は、ＡＩ進行への鍵でありうるばかりでなく、前立腺癌の部位特異的転移への鍵でもありうる。これらの問題を解決するための試みにおいて、我々は、アンドロゲン除去後の前立腺癌モデルにおけるＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−５の変化を性状解析し、そして機能の増強および機能の低下分析を使用して、ＡＩ進行におけるその機能的重要性を評価した。
【００１８】
ＩＧＦＢＰ−２  ｍＲＮＡおよびタンパク質レベルは、インビトロのＬＮＣａＰ細胞およびインビボのＡＩ進行中のＬＮＣａＰ腫瘍において、アンドロゲン除去後２〜３倍上昇する。去勢後のＩＧＦＢＰ−２レベルの上昇はまた、未処置およびホルモン療法処置前立腺切除術試料のヒト前立腺組織マイクロアレイを使用して特定した。安定してＩＧＦＢＰ−２を過剰発現したＬＮＣａＰ細胞トランスフェクタント（ＬＮＢＰ−２）は、細胞倍加時間が短く、アンドロゲンの非存在下でのアポトーシスの比率が低かった。レポーター測定法は、この成長可能性の上昇が、アンドロゲン応答要素のＩＧＦＢＰ−２介在性転写に起因するものでないことを証明した。ＬＮＢＰ−２細胞株はインビボで、対照細胞株と比較して去勢マウスで有意に多くの腫瘍を形成し、そしてより速くアンドロゲン非依存性へと進行した。ＩＧＦＢＰ−２を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＩＧＦＢＰ−２  ｍＲＮＡおよびタンパク質発現を用量依存的かつ配列特異的に＞７０％減少させた。アンチセンスオリゴヌクレオチド誘導性のＩＧＦＢＰ−２の低下は、ＬＮＣａＰ細胞成長速度を減少させ、そしてアポトーシスを３倍増加させた。去勢＋アジュバントＩＧＦＢＰ−２アンチセンスオリゴヌクレオチドで処置したマウスの、ＬＮＣａＰ腫瘍成長および血清ＰＳＡレベルは、ミスマッチ対照オリゴヌクレオチドに比較して有意に減少した。
【００１９】
同様の知見は、ＩＧＦＢＰ−５発現前立腺癌モデルにおけるＩＧＦＢＰ−５の機能の増強および機能の低下分析により得られた。ＩＧＦＢＰ−５でトランスフェクトしたＬＮＣａＰ細胞の成長速度は、ジヒドロテストステロンの存在下と非存在下の両方で、親細胞またはベクターのみトランスフェクトしたＬＮＣａＰ細胞のいずれに比較しても有意に速かった。ＩＧＦＢＰ−５誘導性のＬＮＣａＰ細胞増殖の上昇は、サイクリンＤ１  ｍＲＮＡ発現および細胞周期のＳ＋Ｇ２／Ｍ期の細胞の画分の対応する上昇と共に、ＩＧＦ−Ｉ依存性および非依存性経路の両方を介して起こる。ＬＮＣａＰサブラインにおける、ホスファチジルイノシトール３’−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）経路の下流成分である、Ａｋｔ／プロテインキナーゼＢ（ＰＫＢ）の変化もまた、その成長速度の変化と平行した。ＰＩ３Ｋインヒビターでの処置は、対照とＩＧＦＢＰ−５過剰発現ＬＮＣａＰ細胞の両方にアポトーシスを誘導したが、このＰＩ３Ｋインヒビター誘導性のアポトーシスは、外因性ＩＧＦ−Ｉ処置によってＩＧＦＢＰ−５トランスフェクタントのみが阻止されたが、このことは、ＩＧＦＢＰ−５過剰発現がＩＧＦ−Ｉの抗アポトーシス効果を増強できることを示唆している。さらに、腫瘍増殖および血清ＰＳＡレベルは、去勢後のＩＧＦＢＰ−５でトランスフェクトしたＬＮＣａＰ腫瘍を担持するマウスにおいて、去勢前には無傷マウスで増殖させたとき対照と同様な腫瘍発生率と腫瘍増殖速度を持っていたにもかかわらず数倍速く上昇した。これらのデータは、去勢後の前立腺癌細胞におけるＩＧＦＢＰ−５過剰発現が、ＩＧＦ−Ｉの抗アポトーシスおよびマイトジェン効果を増強するのを助け、それによってＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ／ＰＫＢシグナル伝達経路の活性化を介してアンドロゲン非依存性への進行を加速する、適応細胞生存機序であるということを示唆している。ＩＧＦＢＰ−５アンチセンスオリゴヌクレオチドの全身投与は、アンドロゲン非依存性への進行までの時間を有意に遅延させ、そしてＡＩ再発腫瘍の増殖を阻害した。ヒトの骨におけるＩＧＦＢＰ−５発現が確認された。
【００２０】
標的化アンチセンス法を使用してＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−５発現を阻害することは、ＩＧＦ−Ｉシグナル伝達の鍵となるこれらの調節物質を発現する前立腺癌患者および他の悪性腫瘍患者における、ＡＩ進行および骨転移を遅延させるための治療の基盤を与える。単一のアンチセンスオリゴヌクレオチドで同時にＩＧＦＢＰ−２とＩＧＦＢＰ−５の両方を標的とすることにより、これらの化合物のいずれかを別々に標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドのカクテルの使用に伴う複雑な状況が回避される。
【００２１】
本出願はさらに、以下の非限定例において説明される。
【実施例１】
【００２２】
ＬＮＣａＰ細胞は、５００nM濃度の配列番号１、２または３のアンチセンスオリゴヌクレオチド、あるいはミスマッチ対照で処理した。ＩＧＦＢＰ−２のレベルを測定した。結果は、図１Ａに要約される。
【００２３】
ＰＣ３細胞は、５００nM濃度の配列番号１、２または３のアンチセンスオリゴヌクレオチド、あるいはミスマッチ対照で処理した。ＩＧＦＢＰ−５のレベルを測定した。結果は、図１Ｂに要約される。
【実施例２】
【００２４】
ヒト前立腺癌細胞の試料は、切片にして、ＩＧＦＢＰ−２を検出するために免疫染色した。組織マイクロアレイのスコアリングによって、良性の非癌組織にはＩＧＦＢＰ−２の発現は本質的に存在しなかったが、アンドロゲン非依存性が達成された後には経時的に最高レベルまで上昇することが証明された（図２）。
【実施例３】
【００２５】
ヒト前立腺癌の骨転移は、１５個の標本で評価した。ヒト前立腺癌は、非常に高レベルでＩＧＦＢＰ−２を発現したが、またＩＧＦＢＰ−５も発現した。ヒト骨細胞は、高レベルのＩＧＦＢＰ−５と低レベルのＩＧＦＢＰ−２を発現した。
【実施例４】
【００２６】
二重特異性アンチセンスオリゴヌクレオチドを使用することにより、ＰＣ３、ＬＮＣａＰおよび骨細胞を５００nMの濃度で処理して、ＩＧＦＢＰ−２またはＩＧＦＢＰ−５の阻害の量をリアルタイムＰＣＲを用いて測定した。配列番号２、４、５および７のオリゴヌクレオチドを試験したが、測定したＩＧＦＢＰの検出量を減少させるのに全部が有効であった（図３Ａ）。配列番号４および５の５００nMを使用したＡ５４９肺細胞では、ＩＧＦＢＰ−２レベルの７０％未満の減少が観測された（図３Ｂ）。配列番号４（５００nM）はまた、ＬＮＣａＰ細胞の細胞成長を阻害し、９０％を超えて細胞数を減少させるのにも有効であることが証明された（図３Ｃ）。図３ＤおよびＥは、それぞれ、５００nMの配列番号１、２、４、５、６および７によるＰＣ３細胞中のＩＧＦＢＰ−５レベルの阻害；並びに５００nMの配列番号１、２、４、５、６および７によるヒト胎児骨線維芽細胞中のＩＧＦＢＰ−５レベルの阻害の結果を示す。
【実施例５】
【００２７】
リアルタイムＰＣＲを使用することにより、アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびリポフェクチン（LIPOFECTIN）（４μg/ml）での処理後にＭＳＦヒト胎児線維芽細胞中のＩＧＦＢＰ−５の量を測定した。細胞はインビトロで平板培養して、４時間パルスの５００nMオリゴヌクレオチドで処理し、続いて普通培地＋５％血清中で２０時間処理した。２日目に２回目の４時間パルスを反復して、３日目に細胞を計測した。最も活性なアンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号４および５であった（図６）。
【実施例６】
【００２８】
リアルタイムＰＣＲを使用することにより、種々の量のアンチセンスオリゴヌクレオチド（配列番号４および５）および４μg/mlのリポフェクチンでの処理後のヒト膀胱癌（ＲＴ４）におけるＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−５の量を評価した。図４および５に示されるように、５０〜５００nMの範囲の濃度の両方のアンチセンスオリゴヌクレオチドに対する用量依存的な応答が観測された。
【実施例７】
【００２９】
リアルタイムＰＣＲを使用することにより、ＬＮＣａＰ／ｍｓｆ混合腫瘍および無傷胎児骨断片におけるＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−５を測定した。結果は、図７に示される。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】図１は、３種の二重特異性アンチセンスオリゴヌクレオチド、ミスマッチ対照（ＭＭ）、またはオリゴヌクレオチドなし（対照）の投与による、それぞれＬＮＣａＰおよびＰＣ３細胞において観測されたＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−５発現の量を示す。
【図２】図２は、アンドロゲン非依存性への進行中の前立腺癌細胞におけるＩＧＦＢＰ−２発現の増加を示す。
【図３Ａ】図３Ａは、種々のアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用した、前立腺癌および骨細胞におけるＩＧＦＢＰ−２および５の阻害を示す。
【図３Ｂ】図３Ｂは、種々のアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用した、前立腺癌および骨細胞におけるＩＧＦＢＰ−２および５の阻害を示す。
【図３Ｃ】図３Ｃは、種々のアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用した、前立腺癌および骨細胞におけるＩＧＦＢＰ−２および５の阻害を示す。
【図３Ｄ】図３Ｄは、種々のアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用した、前立腺癌および骨細胞におけるＩＧＦＢＰ−２および５の阻害を示す。
【図３Ｅ】図３Ｅは、種々のアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用した、前立腺癌および骨細胞におけるＩＧＦＢＰ−２および５の阻害を示す。
【図４】図４は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドでの処置後のＲＴ４膀胱癌細胞におけるＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−５のレベルに関するリアルタイムＰＣＲ結果を示す。
【図５】図５は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドでの処置後のＲＴ４膀胱癌細胞におけるＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−５のレベルに関するリアルタイムＰＣＲ結果を示す。
【図６】図６は、アンチセンス処置後のＭＳＦヒト胎児線維芽細胞におけるＩＧＦＢＰ−５のリアルタイムＰＣＲ測定の結果を示す。
【図７】図７は、ＬＮＣａＰ／ｍｓｆ混合腫瘍および無傷胎児骨断片におけるＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−５のリアルタイムＰＣＲ測定の結果を示す。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
2005514948.tif 000009
【図３Ｅ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
2005514948.tif 000013
【図７】
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【手続補正書】
【提出日】平成16年2月27日(2004.2.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本質的に、ＩＧＦＢＰ−２をコードする遺伝子とＩＧＦＢＰ−５をコードする遺伝子両方の一部に相補的であり、かつ有効量のＩＧＦＢＰ−２およびＩＧＦＢＰ−５のインヒビターとして作用するのに充分な長さである塩基の配列からなる、二重特異性アンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項２】
オリゴヌクレオチドは本質的に、配列番号１に記載される一連の塩基からなる、請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項３】
オリゴヌクレオチドは本質的に、配列番号２に記載される一連の塩基からなる、請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項４】
オリゴヌクレオチドは本質的に、配列番号３〜７のいずれかに記載される一連の塩基からなる、請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項５】
オリゴヌクレオチドは配列番号１の一連の塩基からなる、請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項６】
オリゴヌクレオチドは配列番号２の一連の塩基からなる、請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項７】
オリゴヌクレオチドは配列番号３〜７のいずれかに記載される一連の塩基からなる、請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項８】
内分泌調節性癌の治療用の薬剤組成物の製造方法であって、請求項１〜７のいずれか１項に記載の二重特異性アンチセンスオリゴを、静脈内、腹腔内、皮下または経口投与のための薬剤学的に許容しうる担体と組合せる工程を含む方法。
【請求項９】
内分泌調節性癌に罹患している対象において内分泌調節性癌を治療するのに使用される薬剤組成物の製造方法であって、請求項１〜７のいずれか１項に記載の二重特異性アンチセンスオリゴを、薬剤学的に許容しうる担体と組合せる工程を含む方法。
【請求項１０】
癌は前立腺癌である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
癌は乳癌である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１〜７のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドと薬剤学的に許容しうる担体を含む、薬剤組成物。
【請求項１３】
内分泌調節性癌に罹患している対象において内分泌調節性癌を治療するのに使用される、請求項１２に記載の薬剤組成物
【請求項１４】
癌は前立腺癌である、請求項１３に記載の薬剤組成物。
【請求項１５】
癌は乳癌である、請求項１３に記載の薬剤組成物。
【国際調査報告】
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