(57)【要約】癌の治療のための医薬品としての、式（Ｉ）｛式中、Ｘが、互いに独立にＣＨ基又は窒素原子を表し、そしてＲが、場合により置換された５若しくは６員の非芳香族炭素環式環、又は非芳香族若しくは芳香族複素環式環を表す、ここで上記環系は、６員の、場合により置換された炭素環式芳香族環によって縮合されもする。｝によって表される化合物；及び医薬として許容されるその塩。【特許請求の範囲】
【請求項１】
医薬として許容される賦形剤又は希釈剤とともに、以下の式（Ｉ）：
【化１】
2005508311.tif 000017
｛式中、
Ｘが、互いに独立にＣＨ基又は窒素原子を表し、そして
Ｒが、場合により置換された５若しくは６員の非芳香族炭素環式環、又は非芳香族若しくは芳香族複素環式環を表し、
ここで上記環系が、６員の、場合により置換された炭素環式芳香族環と縮合されることもできる。但し、Ｒは、場合により置換されたピリジニルを表さない。｝によって表される１以上の化合物又はその医薬として許容される塩を活性成分として含む医薬組成物。
【請求項２】
以下の：
ベンゾフラン−２−カルボン酸（２−アミノ−フェニル）−アミド、
５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（２−アミノ−フェニル）−アミド、
５−プロポキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（２−アミノ−フェニル）−アミド、
５−アリルオキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（２−アミノ−フェニル）−アミド、
７−メトキシ−ベンゾフラン−２−カルボン酸（２−アミノ−フェニル）−アミド、
７−メトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（２−アミノ−フェニル）−アミド、及び
チアゾール−４−カルボン酸（２−アミノ−フェニル）−アミド、
から成る群から選ばれる化合物を活性成分として含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
以下の式（Ｉ）：
【化２】
2005508311.tif 000018
｛式中、
Ｘが、互いに独立にＣＨ基又は窒素原子を表し、そして
Ｒが、場合により置換された５若しくは６員の非芳香族炭素環式環、又は非芳香族若しくは芳香族複素環式環を表し、
ここで上記環系が、６員の、場合により置換された炭素環式芳香族環と縮合させることもできる。但し、
（ａ）Ｘが、ＣＨを表す場合、Ｒは、ハロゲン化ベンゾチオフェン；ハロゲン化チアゾリル；Ｎ−ベンジル−２−アセチルアミノ−４，５−ジメチルピロール−３−イル；場合により置換されたｌ，４−オキサチイン−３−イル；場合により置換されたピリジニル；メチル、メトキシ、メトキシカルボニル若しくはカルボキシルから選ばれる１〜３の置換基によって置換されたピリダジン−５−イルを表さないか、又は
（ｂ）式（Ｉ）中のＸの一方又は両方が、ＮＨを表す場合，Ｒは、場合により置換されたピリジニルを表さない。｝によって表される化合物、又は医薬として許容されるその塩。
【請求項４】
前記化合物が、以下の：
５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（２−アミノ−フェニル）−アミド、
５−プロポキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（２−アミノ−フェニル）−アミド、
５−アリルオキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（２−アミノ−フェニル）−アミド、
７−メトキシ−ベンゾフラン−２−カルボン酸（２−アミノ−フェニル）−アミド、及び
７−メトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（２−アミノ−フェニル）−アミド、
から成る群から選ばれる、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
請求項３に記載の化合物の製造方法であって、活性化試薬の存在下、以下の式（ＩＩ）：
【化３】
2005508311.tif 000019
｛式中、Ｒが、請求項３に記載の意味をもつ。｝によって表されるのカルボン酸を、以下の式（ＩＩＩ）：
【化４】
2005508311.tif 000020
｛式中、
Ｙが、アミノ又は保護されたアミノ基を表し、そして
Ｘが、ＣＨ又はＮを表し、そしてＸがＣＨを意味する場合、上記６員環は１又は２のハロゲン原子によって置換される。｝によって表される化合物と、
反応させ；そしてその後、保護基が存在する場合、当該保護基を解裂させて、アミノ基を形成し、そして所望により、式（Ｉ）によって表される化合物を、医薬として許容されるその塩に変換する、
ことによる前記製造方法。
【請求項６】
癌の治療のための医薬の製造における、１以上の下記式（Ｉ）：
【化５】
2005508311.tif 000021
｛式中、
Ｘが、互いに独立にＣＨ基又は窒素原子を表し、そして
Ｒが、場合により置換された５若しくは６員の非芳香族炭素環式環、又は非芳香族若しくは芳香族複素環式環を表し、
ここで上記環系は、６員の、場合により置換された炭素環式芳香族環と縮合されることもできる。但し、Ｒは、場合により置換されたピリジニルを表さない。｝によって表される化合物、又は医薬として許容されるその塩の使用。
【請求項７】
前記化合物が、以下の：
ベンゾフラン−２−カルボン酸（２−アミノ−フェニル）−アミド、
５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（２−アミノ−フェニル）−アミド、
５−プロポキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（２−アミノ−フェニル）−アミド、
５−アリルオキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（２−アミノ−フェニル）−アミド、
７−メトキシ−ベンゾフラン−２−カルボン酸（２−アミノ−フェニル）−アミド、
７−メトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（２−アミノ−フェニル）−アミド、及び
チアゾール−４−カルボン酸（２−アミノ−フェニル）−アミド、
から成る群から選ばれる、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
癌の治療のためのヒストン・アセチル化誘発剤としての、請求項３又は４に記載の１以上の化合物、あるいは請求項１又は２に記載の医薬組成物の使用。
【請求項９】
癌の治療方法であって、上記治療が必要な患者に、有効量の、請求項３又は４に記載の１以上の化合物、あるいは請求項１又は２に記載の医薬組成物を投与することを特徴とする前記方法。
【請求項１０】
腫瘍細胞増殖の抑制方法であって、腫瘍細胞に、有効量の、請求項３又は４に記載の１以上の化合物、あるいは請求項１又は２に記載の医薬組成物を投与することにより、当該腫瘍細胞内のヒストンのアセチル化を誘導することを特徴とする前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願発明は、抗悪性腫瘍剤、そして特にモノアシル化、芳香族、ｏ−ジアミン置換された芳香族又は複素環式芳香族六員環系、あるいは医薬として許容されるその塩の使用に関する。腫瘍細胞増殖の抑制、アポトーシスの誘導、及び浸潤の抑制をもたらす、それらの増殖抑制及び分化誘発活性に基づいて、これらの化合物は、病気、例えばヒト又は動物の癌の治療に有用である。
【０００２】
癌は、心及び脳血管疾患を超えて主な死因の１つであり、癌を克服するためにとても多くの研究が莫大な経費と時間をかけて行われた。しかし、外科手術、放射線治療、及び化学療法のような種々の治療法にもかかわらず、改良された抗癌治療の大きな必要性がまだ存在する。これらの治療法の中で、化学療法は癌治療の主要な分野の１つである。ほとんどの薬物が、主にＤＮＡに影響することによってそれらの細胞毒性を発現するれらの効能を示し、そしてその結果腫瘍細胞を損傷させる。しかし選択性を欠き、それらは腫瘍細胞と正常な細胞を十分に区別するわけではなく、そのため正常な細胞に発現された有害反応が、治療におけるそれらの使用を制限した。今まで、満足がいく薬物は発見されていない、そのため低い毒性、高い認容性、及び高い治療効果をもつ抗癌剤が非常に望まれる。
【０００３】
一方、抗癌剤の中の、分化を誘発する、増殖抑制薬剤は、細胞を直接的に死滅させるよりむしろ、それらの無限増殖及び生存を制御するために腫瘍細胞の分化を誘発することが意図される。
【０００４】
そのため、腫瘍の萎縮に関して、前記薬剤は、腫瘍細胞を直接的に死滅させる抗癌剤より劣っているかもしれないが、しかし低い毒性と様々な選択性をもつことが期待され、そして他の抗腫瘍療法又は治療と組み合わせて相加効果を発揮することが期待される。
【０００５】
本願発明の好ましい態様は、分化の誘発、及び増殖抑制効果を示す化合物を提供し、それによって悪性腫瘍の治療、自己免疫疾患、皮膚病、及び寄生虫によって引き起こされた病気の治療のための薬剤として有用である。
【０００６】
本発明は、細胞増殖活性を抑制し、それによりヒト又は動物の癌のような疾患の治療に有用である、新規モノ−Ｎ−アシル化ｏ−ジアミノ置換された芳香族、又は複素環式六員環系、及び医薬として許容されるその塩に関する。本発明は、これらのｏ−ジアミン誘導体の製造方法、それらを含んでいる医薬組成物、及び癌のような病気の治療のための薬物の製造ためのそれらの使用にも関する。
【０００７】
ＥＰ−Ａ  ０  ８４７  ９９２は、細胞分化インデューサーとしてのモノアシル化ｏ−フェニレンジアミン誘導体を説明する。同じ種類の化合物は、ＥＰ−Ａ  ０  ２４２  ８５１の対象でもある。これらの出願に記載された化合物は、ほぼ例外なく安息香酸の誘導体によってモノアシル化されたｏ−フェニレン誘導体である。しかし、改善された性質、例えば高い認容性、低い毒性、及び低い副作用を有する化合物を提供する必要性がまだ存在する。
【０００８】
モノアシル化ｏ−フェニレンジアミンは、対応するベンズイミダゾールの調製のための前駆物質として当該技術分野で知られており、そのような調製方法は、例えばＤＥ−Ａ  ２  ０６２  ２６５；  ＦＲ  ２  １６７  ９５４；  Ｒａｓｔｏｇｉ，  Ｒ．，  ａｎｄ  Ｓｈａｒｍａ，  Ｓ．，  Ｉｎｄｉａｎ  Ｊ．  Ｃｈｅｍ．，  Ｓｅｃｔ．  Ｂ，  ２１Ｂ  （５）  （１９８２）  ４８５−４８７；  Ｍｏｌｌ，  Ｒ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｚ．  Ｃｈｅｍ．  １７  （１９７７）  １３３−１３４；  ａｎｄ  Ｈａｓｓａｎ，  Ｈ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｄｉａｎ  Ｊ．  Ｃｈｅｍ．  ３９Ｂ  （２０００）  ７６４−７６８中に記載されている。
【０００９】
本発明は、以下の一般式（Ｉ）：
【００１０】
【化１】
2005508311.tif 000002
【００１１】
｛式中、
Ｘが、互いに独立にＣＨ基又は窒素原子を表し、そして
Ｒが、場合により置換された５若しくは６員の非芳香族炭素環式環、又は非芳香族若しくは芳香族複素環式環を表す、
ここで上記環系が、６員の、場合により置換された炭素環式芳香族環によって縮合されもする、
但し、
（ａ）Ｘが、ＣＨを表す場合、Ｒは、ハロゲン化ベンゾチオフェン；ハロゲン化チアゾリル；Ｎ−ベンジル−２−アセチルアミノ−４，５−ジメチルピロール−３−イル；場合により置換されたｌ，４−オキサチイン−３−イル；場合により置換されたピリジニル；メチル、メトキシ、メトキシカルボニル若しくはカルボキシルから選ばれる１〜３の置換基によって置換されたピリダジン−５−イルを表さないか、又は
（ｂ）式（Ｉ）中のＸの一方又は両方が、ＮＨを表す場合，Ｒは、場合により置換されたピリジニルを表さない。｝によって表される新規化合物に関する。
【００１２】
本発明は、式（Ｉ）の化合物の医薬として許容される塩又はプロドラッグ、並びに薬剤を製造するためのこれらの化合物の使用を含みもする。
【００１３】
環系を含む記号Ｘは、フェニル、ピリジン、又はピリミジンであり、ここで上記フェニル環が、１又は２のハロゲン原子、好ましくは塩素によって置換される。
【００１４】
一般式（Ｉ）のＲによって表される非芳香族炭素環式環系は、５又は６員環を形成する一重及び二重結合から構築される炭素環式環として理解される。環系は、少なくとも１つのシングルｓｐ３混成炭素原子を含む必要がある。例は、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロヘキセン、シクロヘキサジエンを含み、好ましいものは、シクロヘキセンである。式（Ｉ）中の置換基Ｒの非芳香族又は芳香族複素環式環は、窒素、酸素若しくは硫黄から選ばれる１〜４のヘテロ原子を含み、５又は６員の、飽和又は不飽和環である。この複素環式環は、例えばピペラジン、ピペリジン、モルホリン、ピロリジン、ピリミジン、ピラジン、ピリダジン、テトラヒドロ−ピリダジン、ピロール、フラン、イミダゾール、ピラゾール、ジヒドロピラゾール、トリアゾール、チオフェン、チアゾール、オキサゾール、イソチアゾール、イソキサゾール、ジヒドロ−イソキサゾール、チアジアゾール、テトラゾールを含み、これによって複素環式、ピロリジン、ジヒドロピラゾール及びテトラヒドロ−ピリダジンがオキソ基を担持する。好ましい環は、チオフェン、フラン、ピラゾール、イミダゾール、イソチアゾール、イソキサゾール、トリアゾールである。
【００１５】
先に触れた複素環は、６員の、場合により、置換された炭素環式芳香族環によって融合される。その例は、ベンゾチオフェン、ベンゾフラン、インドール、ベンズイミダゾール、インダゾール、ベンゾチアゾール、ベンズオキサゾール、キノリン、イソキノリン、ベンゾインドールであり；好ましくは、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、インドールである。
【００１６】
前記環系Ｒ又はその縮合誘導体は、アラルキル、アリール、ヘテロアリール（ｈｅｔａｒｙｌ）、ヘテロアラルキル（ｈｅｔａｒａｌｋｙｌ）、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ１−Ｃ７アシル、Ｃ１−Ｃ６アルキルオキシ、Ｃ２−Ｃ６アルケニルオキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキルアミノ、ジ（Ｃｌ−Ｃ６）アルキルアミノ、アミノ、ヒドロキシ、ハロゲン、ニトロ、カルボキシル、カルボキサミド、アミノカルボニル、又はトリフルオロメチル基から選ばれる１以上の置換基によって置換される。
【００１７】
一般式（Ｉ）中の環Ｒの置換基である、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、及びヘテロアラルキル置換基は、それ自身が、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃｌ−Ｃ７アシル、Ｃ１−Ｃ６アルキルオキシ、Ｃ１−Ｃ６アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ６ジアルキルアミノ、アミノ・ヒドロキシ、ハロゲン、ニトロ、カルボキシル、カルボキサミド、アミノカルボニル、トリフルオロメチル基から選ばれる置換基１つ以上によって置換されうる。
【００１８】
アリール基は、炭素環式融合環系、例えば前述の置換基で置換されたか又は置換されていないフェニル、ナフチル、好ましくはフェニルを表す。
【００１９】
アラルキル基は、アルキル部分を通して接続された前記アリール基と、Ｃ１−Ｃ６アルキル基との、組み合わせ物を意味する。その例は、ベンジル、フェネチル、及びナフチルメチルであり、好ましくは、ベンジル及びフェネチルである、ここで上記フェニル環は、前述の置換基によって置換されうる。
【００２０】
環Ｒの置換基であるヘテロアリール基は、環系を終えるための、窒素、酸素、又は硫黄及び炭素原子から選ばれる１〜４のヘテロ原子を含む単環又は二環式抱合型環系を表す。そのような環は、例えばピペラジン、ピペリジン、モルホリン、ピロリジン、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ピリダジン、ピロール、フラン、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、チオフェン、チアゾール、イソチアゾール、イソキサゾール、チアジアゾール、テトラゾール、オキサゾールを含み、好ましくは、チオフェン、フラン、ピラゾール、イミダゾール、イソチアゾール、イソキサゾール、トリアゾール、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ベンゾフラン、インドール、ベンゾチオフェン、キノリンである。
【００２１】
ヘテロアラルキル基は、アルキル部分を通して残基に接続した、前述のヘテロアリール基と、Ｃ１−Ｃ６アルキル基の組み合わせ物であることを意味し、好ましくは、ピリジルメチル、チエニルメチル、イミダゾリルメチルである。
【００２２】
それ自身又は他の残基との組み合わせでＣ１−Ｃ６アルキル残基は、好ましくはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル又はｔｅｒｔ．ブチルを意味する。
【００２３】
Ｃ２−Ｃ６アルケニルは、好ましくはアリル又はペンタジエニルを表す。Ｃ２−Ｃ６アルキニルは、好ましくはプロパルギルを表す。
【００２４】
Ｃ２−Ｃ６アルケニルオキシは、好ましくはアリルオキシを表す。
【００２５】
Ｃ１−Ｃ７アシルは、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６アルキル、又は−Ｃ（Ｏ）Ｈ、好ましくはアセチル基を表す。
【００２６】
アルキル残基は、場合により、例えばＣＨ３−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ残基を形成するために一回又は数回ヘテロ原子（Ｏ、Ｓ、Ｎ）によって中断されうる。
【００２７】
ハロゲンは、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、好ましくは、フッ素、又は塩素と理解されている。
【００２８】
好ましい化合物は、式（Ｉ）｛式中、ＸがＣＨである。｝の化合物である。
【００２９】
本発明のさらなる態様は、以下の一般式（Ｉ）：
【００３０】
【化２】
2005508311.tif 000003
【００３１】
｛式中、
Ｘが、互いに独立にＣＨ基又は窒素原子を表し、そして
Ｒが、場合により置換された５若しくは６員の非芳香族炭素環式環、又は非芳香族若しくは芳香族複素環式環を表す、
ここで上記環系が、６員の、場合により置換された炭素環式芳香族環によって縮合されもする、
但し、Ｒは、場合により置換されたピリジニルを表さない。｝によって表される化合物、及び
医薬として許容されるその塩、
を活性成分として含む医薬組成物である。
【００３２】
本発明の他の態様は、癌の治療のための薬剤としての、以下の一般式（Ｉ）：
【００３３】
【化３】
2005508311.tif 000004
【００３４】
｛式中、
Ｘが、互いに独立にＣＨ基又は窒素原子を表し、そして
Ｒが、場合により置換された５若しくは６員の非芳香族炭素環式環、又は非芳香族若しくは芳香族複素環式環を表す、
ここで上記環系が、６員の、場合により置換された炭素環式芳香族環によって縮合されもする、
但し、Ｒは、場合により置換されたピリジニルを表さない。｝によって表される化合物、及び
医薬として許容されるその塩、
の使用である。
【００３５】
一般式（Ｉ）によって表される化合物は、周知の方法に従って調製されうる。その残基Ｒが前述の意味を有する一般式（ＩＩ）をもつカルボン酸を、その残基Ｙがアミノ又は保護アミノ基を表し、かつ、Ｘが炭素又は窒素を表し、そしてＸが炭素を示す場合、６員環が１又は２のハロゲン原子によって置換される、一般式（ＩＩＩ）によって表される化合物と反応させる。
【００３６】
【化４】
2005508311.tif 000005
【００３７】
このアミド結合の形成を達成するために、ペプチド化学から分かった方法を使ってカルボン酸を活性化させる。そのような活性化試薬は、カルボジイミド、Ｎ，Ｎ−カルボニルジイミダゾール、ウロニウム塩によるクロロホルメートの活性化を使った混合無水物、例えばＯ−（ｌＨ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロ・ホウ酸塩、リン・ベースの試薬、例えばビス−（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）−ホスフィン酸塩化物の形成を含む。
【００３８】
カルボン酸は、知られた方法を使って、例えば、チオニルクロライド又は二塩化シュウ酸を用いた処理によってそれらの酸塩化物に変換されもする。Ｙは、アミノ基を表し、かつ、この２番目のアミノ基はカルボン酸の重縮合を避けるために保護される。保護基は、アミド結合の形成後に解裂させる。アミノ基のための保護基、例えばベンジルオキシカルボニル（水素添加又は酢酸による臭化水素酸によって解裂させる）、ｔ−ブトキシカルボニル（強酸、例えばトリフルオロ酢酸によって解裂させる）、９−フルオレンメトキシカルボニル（第２級アミン、例えばピペリジンによって解裂させる）は、ペプチド化学から分かった。同様に、ニトロ基は、アミノ基の前駆物質として使われうる。この場合、弱塩基性アミノ基のアシル化のために強活性化カルボン酸、好ましくは酸塩化物を使用することが最適である。アミノ基は、触媒による水素添加、例えば炭素上のパラジウムによって、又は還元剤での処理、例えば酢酸中の亜鉛、塩化第一スズ、又は亜ジチオン酸ナトリウム／ＮａＨＣＯ３によるニトロ基の還元によって生成される。保護基を使用しないことも可能である。この場合、第１のアミノ基の完全なアシル化を達成するために、過剰の酸を使用することが最適である。処理の間、所望した産物は、二置換から生成した産物から分離されなければならない。これは、イオン交換体、好ましくは有機溶剤中でも使用されうるマクロ孔型のイオン交換体を使った産物の塩基性質を使うことによって容易に達成される。
【００３９】
文献で記載されている、カルボン酸及び芳香族アミンは、市販されているか、又は公表された方法と同じように調製されうる。
【００４０】
一般式（Ｉ）によって表される化合物は、１又は複数のキラル中心を含み、そしてラセミ化合物又は光学活性形態で提供されるかもしれない。ラセミ体は、知られている方法に従ってエナンチオマーに分けられるかもしれない。好ましくは、結晶形成によって分離されうるジアステレオマー塩は、光学活性酸、例えばＤ−又はＬ−酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸、又はカンフルスルホン酸との反応によってラセミ混合物から形成される。
【００４１】
本発明の化合物は、有機又は無機酸の塩として存在するかもしれない。酢酸、クエン酸又は塩酸のような塩が、常法、例えば酢酸、クエン酸又は塩酸から選ばれる有機又は無機酸を用いて上記化合物を滴定することによって医薬として許容される材料として主に使用される。塩は、水／アセトンからの再沈殿によって通常精製される。
【００４２】
本発明による式（Ｉ）によって表される新規化合物及びその塩は、液状又は固形で経腸的に又は非経口的に投与されることができる。この点に関して、全ての通常の投与形態、例えば錠剤、カプセル、コート錠、シロップ剤、液剤、懸濁剤などを検討材料に入れる。注射液ではお決まりの添加剤、例えば安定化剤、溶解補助剤、及び緩衝物質を含む水が、注射溶媒として好ましくは使用される。
【００４３】
そのような添加剤は、例えば酒石酸及びクエン酸緩衝物質、エタノール、錯化剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸及びその無毒性塩）、粘性を調節するための高分子重合体（例えば、液体ポリエチレングリコール）である。注射液のための液体担体物質は、無菌でなければならず、そしてアンプル中に好ましくは調合される。固体担体物質は、例えばスターチ、ラクトース、マンニトール、メチルセルロース、タルク、高度に分散されたケイ酸、高分子脂肪酸（例えば、ステアリン酸）、ゼラチン、寒天、リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、動物性及び植物性脂肪、固体高分子重合体（例えば、ポリエチレングリコール）であり；経口適用に好適な処方は、調味料及び甘味料を場合により含むこともできる。
【００４４】
投与量は、様々な要因、例えば投与様式、種、年齢、及び／又は個々の健康状態に依存する。毎日投与される投与量は、約５〜４００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１０〜１００ｍｇ／ｋｇであり、そして単回又は数回投与に分けて摂取され得る。
【００４５】
本発明は、以下の、限定されない実施例によってされに説明される。
【実施例】
【００４６】
実施例１
表１に挙げた化合物を、以下の基本手順に従って調製した：
カルボン酸（ａｐｐｒ．２０ｍｇ、１．２当量）を、塩基３．６当量に相当するジメチルホルムアミド中、ジイソプロピルアミンの０．２Ｍ溶液中に溶かした。撹拌している溶液に、１．２０当量に相等するＤＭＦ中、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）の０．１Ｍの溶液を加え、続いて６０分後に、１当量に相等するＤＭＦ中、ジアミン・アリール（ＮＨ２）２の０．１Ｍ溶液を加えた。前記混合物を、一晩撹拌した。この産物を、方法Ａ又は方法Ｂによって分離した。
【００４７】
方法Ａ：酸性イオン交換カラム
未精製の反応混合物を、メタノール／水（９：ｌ）中、１ｍｏｌａｒの硫酸を用いて前もって調整したＦｒａｃｔｏｇｅｌ  ＥＭＤ  ＳＯ３−６５０（Ｓ）を充填した酸性イオン交換カラム（４５ｍｍ、１５ｍｍＩＤ）に添加し、そしてメタノール／水、９：１を用いて洗浄した。このカラムを、水、続いてがメタノールによってすすいだ。次に、産物を、メタノール中、０．４Ｍのピリジン、続いてメタノール中、０．２Ｍのアンモニアを用いて溶出した。産物画分を、ＬＣ／ＭＳによって確認し、合わせて、そして留去した。
【００４８】
方法Ｂ：
未精製の反応混合物を留去し、残渣をメタノール中に溶かし、そして逆相カラム（Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８、１０μｍ、２５０ｍｍ、２０ｍｍＩＤ）に添加した。このカラムを、水中、メタノールのグラジエント（５０％メタノール／水→１００％メタノール）により溶出した。産物画分を、ＬＣ／ＭＳによって確認し、合わせて、そして留去した。
【００４９】
産物の同定及び純度を、質量分析（大気圧イオン化）、及び質量検出（ＬＣ／ＭＳ）を備えたＨＰＬＣによって確認した。
【００５０】
【表１】
2005508311.tif 000006
【００５１】
【表２】
2005508311.tif 000007
【００５２】
【表３】
2005508311.tif 000008
【００５３】
【表４】
2005508311.tif 000009
【００５４】
【表５】
2005508311.tif 000010
【００５５】
【表６】
2005508311.tif 000011
【００５６】
【表７】
2005508311.tif 000012
【００５７】
実施例２
本願発明による化合物の分化誘発効果を調査するために、２つのアッセイを使用した。
【００５８】
Ａ）ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）の抑制に関するアッセイ
原理：
ＨＤＡＣは、ヒストンＨ４内のリジンを脱アセチルする。Ｃ末端にＴＡＭＲＡをもち、及びＮ末端にＱＳＹ７をもつ１７ａａのペプチドを基質として使用した。ＨＤＡＣによる脱アセチル化により、酵素ＬｙｓＣが、クエンチ効果の消失、そして強いシグナルをもたらす、ペプチドの解裂が可能である。化合物によるＨＤＡＣの抑制が、結果として弱い信号をもたらす、なぜなら、ＬｙｓＣが解裂させるための基質をもたず、そしてクエンチ効果が続くためである。
【００５９】
アッセイ：
用量反応曲線のために、３０μＭから始めて１０種類の濃度に希釈した。１０μｌの化合物希釈物を、３８４ウェルプレートの各々のウェルに入れた。１０μｌのＨＤＡＣ（ＨＥＫ２９３細胞から精製されたｒｅｃ．ＨＤＡＣ−１；活性を各々の製剤について評価する必要がある）を加えた。１０μｌのペプチド（１μＭの終濃度）を加えた。室温での９０分間のインキュベーション後に、３ｕｇ／ｍｌのＬｙｓＣ及び０．０７５％のＳＤＳを含む２０μｌの試験バッファーの添加によって反応を停止させた。一晩のインキュベーションの後に、ＴＡＭＲＡの蛍光シグナルを、Ｖｉｃｔｏｒ２によって、吸収５４４ｎｍ、励起５９０ｎｍで計測した。
【００６０】
Ｂ）Ｅ−カドヘリン上方制御アッセイ
アッセイ原理：
接着分子としてＥ−カドヘリンは、細胞の連結及び組織の統合性にとって重要である。細胞が転移することを可能にするＥ−カドヘリン・タンパク質が下方制御される所に、腫瘍細胞が存在する。十分なＥ−カドヘリンが存在しない細胞におけるタンパク質の上方制御は、未分化腫瘍細胞特性を残すことを意味する腫瘍細胞の分化に関するマーカーとみなされる。記載された化合物は、Ａ５４９におけるＥ−カドヘリンの上方制御された発現を可能にする。並列して、細胞増殖を検査する。Ｅ−カドヘリンの上方制御活性は、ＥＬＩＳＡによって測定されるＥ−カドヘリン発現の増加と規定される。同じウェル内のＷＳＴ−１によって決定される細胞増殖を考慮した。
【００６１】
方法：
アッセイを、３８４ウェル形式で実施した。ヒト肺癌細胞株、Ａ５４９（ＡＴＣＣ：ＣＣＬ−１８５）は、Ｅ−カドヘリンの非常に低い発現を示す。１日目、１ウェルにつき５０００細胞を、１０％のＦＣＳを含む培地中に蒔いた。２日目に、４０μＭから始まる異なる濃度の化合物を、０．５％のＤＭＳＯの終濃度で添加した。４日目に、ＷＳＴ−１試薬を添加し（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓの取扱説明書を参照のこと）、吸収を、４５分後に計測した（４５０ｎｍ／６９０ｎｍ）。
【００６２】
培地を吸引し、ウェルごとに１００μｌの固定溶液を添加して、そして３０分後捨てて、続いて１００μｌのブロッキング溶液を添加した。２０μｌ／ウェルのｍＡｂ抗Ｅ−ｃａｄ（クローン６Ｆ９）、終濃度０．３μｇ／ｍｌを添加し６０分間。１００μｌ／ウェルのＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎによる３回の洗浄ステップ。ｍＡｂ抗マウスＩｇ−ビオチン（２０μｌ／ウェル）を添加し、６０分間。ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎによる３回の洗浄ステップ。ストレプトアビジン−ＰＯＤ（２０μｌ／ウェル）を添加し６０分間。ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎによる３回の洗浄ステップ。５０μｌのＡＢＴＳ基質を添加し５分間、そして最後に１２．５μｌのシュウ酸を添加し反応を止める。４０５ｎｍにて吸収の計測。
【００６３】
ＥＣ５０の計算：
細胞増殖率（％）を、Ｄｅｌｔａにより得られたＥ−カドヘリン発現率（％）から差し引いた。１０種類の濃度から得られた用量反応曲線を、ＸＬｆｉｔを使って計算した。ＥＣ５０は、５０％の細胞がＥ−カドヘリン・タンパク質発現の実際の上方制御を示す濃度である。
【００６４】
【表８】
2005508311.tif 000013
【００６５】
実施例３
【００６６】
【表９】
2005508311.tif 000014
【００６７】
製造手順：
１．項目１、２、３及び４を混合し、純水を用いて粒状にする。
２．上記顆粒剤を５０℃で乾かす。
３．上記顆粒剤を、好適な製粉装置に通す。
４．項目５を加え、そして３分間混合する；好適なプレス機によって固める。
【００６８】
【表１０】
2005508311.tif 000015
【００６９】
製造手順：
１．項目１、２及び３を、好適なミキサーによって３０分間混合する。
２．項目４及び５を加え、そして３分間混合する。
３．好適なカプセル内に充填する。
【００７０】
実施例４
薬理試験の報告
方法
雌Ｂａｌｂ／Ｃ  ｎｕ／ｎｕマウス（１群につきｎ＝１２）、８〜１０週齢に、５×１０６のＳＷ６２０結腸癌細胞を皮下注射した。６日目に、約２００ｍｍ３の腫瘍量をもつ動物を、無作為に治療群に割り当てた。試験化合物を、実際の体重に基づいて１０ｍｌ／ｋｇの適用量で、０．５％のメチルセルロース中、澄んだ懸濁液として投与した。経口処置を、８日目から始めて、１日１回、１週間に７回の治療スケジュールで、２７日目まで続けた。
【００７１】
結果
研究の終了時における腫瘍量に対する効果：
【００７２】
【表１１】
2005508311.tif 000016
【００７３】
腫瘍量を、以下の方程式から決定した：
腫瘍量＝ｌ／２×（長軸）×（短軸）２
参考文献一覧
ＤＥ−Ａ  ２  ０６２  ２６５
ＥＰ−Ａ  ０  ２４２  ８５１
ＥＰ−Ａ  ０  ８４７  ９９２
ＦＲ  ２  １６７  ９５４
Ｈａｓｓａｎ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｄｉａｎ  Ｊ．Ｃｈｅｍ．３９Ｂ  （２０００）  ７６４−７６８
Ｍｏｌｌ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｚ．Ｃｈｅｍ．１７  （１９７７）  １３３−１３４
Ｒａｓｔｏｇｉ，Ｒ．，ａｎｄ  Ｓｈａｒｍａ，Ｓ．，Ｉｎｄｉａｎ  Ｊ．Ｃｈｅｍ．，Ｓｅｃｔ．Ｂ，２１Ｂ  （５）  （１９８２）  ４８５−４８７
【国際公開パンフレット】
2005508311.tif 000022
2005508311.tif 000023
2005508311.tif 000024
2005508311.tif 000025
2005508311.tif 000026
2005508311.tif 000027
2005508311.tif 000028
2005508311.tif 000029
2005508311.tif 000030
2005508311.tif 000031
2005508311.tif 000032
2005508311.tif 000033
2005508311.tif 000034
2005508311.tif 000035
2005508311.tif 000036
2005508311.tif 000037
2005508311.tif 000038
2005508311.tif 000039
2005508311.tif 000040
2005508311.tif 000041
2005508311.tif 000042
2005508311.tif 000043
2005508311.tif 000044
2005508311.tif 000045
2005508311.tif 000046
2005508311.tif 000047
2005508311.tif 000048
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2005508311.tif 000049
【国際調査報告】
2005508311.tif 000050
2005508311.tif 000051
2005508311.tif 000052
2005508311.tif 000053
2005508311.tif 000054
2005508311.tif 000055
2005508311.tif 000056
2005508311.tif 000057
2005508311.tif 000058
2005508311.tif 000059
2005508311.tif 000060
2005508311.tif 000061