(57)【要約】本発明は、少なくとも生分解可能ポリマーおよび環状オリゴ糖からなる材料であって、前記オリゴ糖の少なくとも１分子が共有結合を介して前記生分解可能ポリマーの少なくとも１分子にグラフトされていることを特徴とする材料に関する。本発明は、また前記材料を製造するための方法、前記材料に由来したナノ粒子とミクロ粒子、および有効成分のための生物用ベクターとしてのそれらの使用にも関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１個の生分解可能ポリマーおよび環状オリゴ糖からなる材料であって、前記オリゴ糖の少なくとも１分子が共有結合を介して前記生分解可能ポリマーの少なくとも１分子にグラフトされている、材料。
【請求項２】
第２の環状オリゴ糖分子、前記生分解可能ポリマーの第２の分子および／または前記生分解可能ポリマーおよび前記環状オリゴ糖と異なる分子も、前記の生分解可能ポリマーの領域において共有結合でグラフトされている、請求項１に記載の材料。
【請求項３】
該生分解可能ポリマー分子と１個または複数個の該他の分子との間に形成された該共有結合がエステル型の結合である、請求項１および２のいずれかに記載の材料。
【請求項４】
該共有結合が、該生分解可能ポリマーの該分子上にある活性化されたまたは活性化されていないカルボキシル官能基と、該グラフトされた分子上にあるヒドロキシル官能基との間の反応に由来する、請求項３に記載の材料。
【請求項５】
該生分解可能ポリマーが、式（Ｉ）に対応する、請求項１−４のいずれかに記載の材料。
【数１】
2005503476.tif 000003
ここで、
ｎ、ｍは、互いに独立して、０または１を表し、
Ｒ1は、C1−C20のアルキル基、該生分解可能ポリマー以外のポリマーまたはPEGブロックまたはエチレンオキサイド単位を含むコポリマー、該ポリマー上にある保護された反応性官能基、カルボキシル官能基またはヒドロキシル官能基を表し、そして
R2は、ヒドロキシル官能基またはカルボキシル官能基を表す。
【請求項６】
該生分解可能ポリマーが、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（ε−カプロラクトン）（ＰＣＬ）、ポリ無水物、ポリ（アルキルシアノアクリレート）、ポリオルトエステル、ポリホスファゼン、ポリアミド、ポリアミノ酸、ポリアミドアミン、ポリ（アルキレンｄ−酒石酸塩）、ポリカーボネート、ポリシロキサン、ポリエステルまたはポリ（リンゴ酸）のような合成ポリマー、およびそれらのコポリマーと誘導体から選択される、請求項１−５のいずれかに記載の材料。
【請求項７】
該生分解可能ポリマーが、５０，０００ｇ/モル未満の分子量を有するポリエステルである、請求項１−６のいずれかに記載の材料。
【請求項８】
該生分解可能ポリマーがポリカプロラクトンである、請求項１−７のいずれかに記載の材料。
【請求項９】
該環状多糖がシクロデキストリンである、請求項１−８のいずれかに記載の材料。
【請求項１０】
該生分解可能ポリマーが少なくとも２個のシクロデキストリン分子にグラフトされている、請求項９に記載の材料。
【請求項１１】
該ポリマーが、生分解可能ポリマー骨格と、前記材料の該骨格を形成するポリマーの分子と異なっても良くまたは異ならなくても良い１個以上の生分解可能ポリマー分子で任意にグラフトされている、少なくとも２個のシクロデキストリングラフトを有する、請求項１−１０のいずれかに記載の材料。
【請求項１２】
前記生分解可能ポリマーが、少なくとも１個のシクロデキストリン分子および異なるポリマーの分子にグラフトされている、請求項１−１１のいずれかに記載の材料。
【請求項１３】
該異なるポリマーがポリエチレングリコールである、請求項１２に記載の材料。
【請求項１４】
前記材料が、１０重量％以上の環状オリゴ糖を含有する、請求項９−１３のいずれかに記載の材料。
【請求項１５】
該材料が、２０−４０重量％の環状オリゴ糖を含有する、請求項９−１４のいずれかに記載の材料。
【請求項１６】
該環状オリゴ糖がシクロデキストリンである、請求項１−１５のいずれかに記載の材料。
【請求項１７】
該材料が、直鎖の、枝分れの、または架橋の構造を有する、請求項１−１６のいずれかに記載の材料。
【請求項１８】
該材料が、ポリカプロラクトン、ポリエステルおよびポリ乳酸を含む群から選択される生分解可能ポリマーに由来する、請求項１−１７のいずれかに記載の材料。
【請求項１９】
二つのタイプの分子間に共有結合を確立するのに適しており、さらに前記材料が回収される条件において、生分解可能ポリマーの少なくとも１個の分子、または少なくとも１個の反応性官能基を備えるその誘導体の少なくとも１個が、環状オリゴ糖の少なくとも１個の分子と一緒にされる、請求項１−１８のいずれかに記載の材料を製造するための方法。
【請求項２０】
該生分解可能ポリマーが請求項５−８に定義される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
該生分解可能ポリマーの該反応性官能基が活性化されたカルボン酸官能基である、請求項１９および２０のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
該環状多糖がシクロデキストリンである、請求項１９−２１のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
該シクロデキストリンおよび該生分解可能ポリマーが、２：９８から４０：６０までの範囲の重量比で一緒にされる、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
請求項１−１８のいずれかに記載の材料から得られる粒子。
【請求項２５】
該粒子が、エステルタイプの結合によって１個のシクロデキストリン、好ましくは少なくとも２個のシクロデキストリンに結合した、少なくとも１個のポリカプロラクトンまたはポリ（乳酸）分子に由来する材料からなる、請求項２４に記載の粒子。
【請求項２６】
該粒子がナノ粒子である、請求項２５に記載の粒子。
【請求項２７】
該粒子がミクロ粒子である、請求項２５に記載の粒子。
【請求項２８】
該粒子が活性成分をさらに含む、請求項２４−２７のいずれかに記載の粒子。
【請求項２９】
該活性成分が、ペプチド、蛋白質、炭水化物、核酸、脂質、多糖、または生物学的効果を生ずることおよび/または治療活性を明らかにすることが可能な有機および無機分子を含む群から選択される、請求項２８に記載の粒子。
【請求項３０】
該活性成分が、モルシドミン、ケトコナゾール、グリクラジド、ジクルフェナク、レボノルゲストレル、パクリタキセル、ヒドロコルチゾン、パンクラチスタチン、ケトプロフェン、ジアゼパム、イブプロフェン、ニフェジピン、テストステロン、タモキシフェン、フロセミド、トルブタミド、クロラムフェニコール、ベンゾジアゼピン、ナプロキセン、デキサメタゾン、ジフルニサール、アナダミド、ピロカルピン、ダウノルビシン、ドキソルビシンおよびジアゼパムを含む群から選択される、請求項２８に記載の粒子。
【請求項３１】
該粒子が活性な物質を９５重量％まで含む、請求項２８−３０のいずれかに記載の粒子。
【請求項３２】
該粒子が、その表面に共有結合的に結合された少なくとも１個の分子をさらに含む、請求項２４−３１のいずれかに記載の粒子。
【請求項３３】
該粒子が、その表面に非共有結合的に結合された少なくとも１個の分子をさらに含む、請求項２４−３１のいずれかに記載の粒子。
【請求項３４】
この分子が、生物学的に活性な分子、標的に向かう役割を有する分子、または検知され得る分子である、請求項３２および３３のいずれかに記載の粒子。
【請求項３５】
該標的に向かう分子が、受容体、抗体、抗体断片およびレクチンを含む群から選択される、請求項３４に記載の粒子。
【請求項３６】
少なくとも１個の活性物質をカプセル化するための、請求項２４−３５のいずれかに記載の粒子の使用。
【請求項３７】
該活性物質が、ペプチド、蛋白質、炭水化物、核酸、脂質、または生物学的効果を生ずることおよび/または治療活性を明らかにすることが可能な有機または無機分子を含む群から選択される、請求項３６に記載の使用。
【請求項３８】
請求項２４−３５のいずれかに記載の粒子を含む医薬組成物。
【請求項３９】
請求項２４−３５のいずれかに記載の粒子を含む診断組成物。
【請求項４０】
請求項２４−３５のいずれかに記載の粒子のステルスベクターとしての使用。
【請求項４１】
請求項２４−３４のいずれかに記載の粒子の生着性ベクターとしての使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生分解可能ポリマーおよび環状オリゴ糖、好ましくはシクロデキストリン類をベースとする新規材料、それらに由来する粒子、有効成分のための生物用ベクターとしてのそれらの使用に関するものである。
【０００２】
本発明は、特に、ナノ粒子およびミクロ粒子タイプのベクターの分野、およびそれらの応用に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
「ナノ粒子」（nanoparticle）の語は、通常ナノカプセル（nanocapsule）に加えてナノ球体(nanosphere)を含むように解釈される。ナノカプセルは、ポリマータイプの壁で囲まれた油性腔から形成された小胞ベクターであり、一方、ナノ球体は、有効成分をカプセルに入れることができるポリマーマトリックスから成る。一般に、ナノ粒子が誘導される、または既に形成されたナノ粒子の表面で吸着させることによる、モノマーの重合工程の間、または予備形成されたポリマーから粒子を製造する間のいずれかにおいて、ナノ粒子のレベルで活性生成物が組み込まれる。
【０００４】
種々のタイプのナノ粒子およびミクロ粒子は、既に文献において提案されている。従来、それらは、モノマー（例えばシアノアクリレート）の直接重合によって、または架橋によって得られる物質から誘導されており、またそれらは、予備形成されたポリマー：ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（ε−カプロラクトン）（ＰＣＬ）、および例えばポリ（ラクティックグリコリックアシッド）（ＰＬＧＡ）のようなそれらのコポリマーから開発されている。
【０００５】
より最近では、シクロデキストリン上でモノマー（例えばラクチドまたはカプロラクトンのような）の触媒重合によって、新タイプの物質が製造されている。残念ながら、このタイプのコポリマーの化学的組成を精度良く制御することが可能ではない。シクロデキストリン上に存在するヒドロキシル官能基の全てが、モノマーの重合を開始し得る。そのために、種々の大きさを持った非常に多くのポリマー鎖が、そのモノマーからの誘導で形成される。それは、一方では制御困難であり、他方ではシクロデキストリンの錯形成反応性の阻害を生ずる。結果として、シクロデキストリン上でモノマーの直接重合によってこのタイプのコポリマーを得ることは、重合度および置換度が制御され得るものに出来ず、そのために効果的な合成再現性および均一な検体の製造を可能にするものではない。
【０００６】
ポリマーの化学的組成の制御に関するこの問題と共に、それらの低カプセル化能力の問題がある。実際に、ナノ粒子の有効成分負荷能力が、しばしば限定される。この欠点は、特に、水溶性の低い有効成分のカプセル化において見られ、その限りでは、ナノ粒子またはミクロ粒子を製造するための従来法は、しばしば水性媒体中での重合技術を用いる。
【０００７】
その結果、現状で入手可能な材料は、全く満足できるものではない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の第１の目的は、特にこれらの欠点が解決され得るような材料を提案することである。
【０００９】
第２の目的は、そのような材料から得られる粒子、好ましくはナノ粒子に関する。
【００１０】
本発明は、また第３の目的において、これらの粒子の利用、特に生物学的薬剤としての利用にも関する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
さらに詳細には、本発明の第１の側面は、少なくとも１個の生分解可能ポリマーおよび環状オリゴ糖からなる材料であって、前記オリゴ糖の少なくとも１分子が共有結合を介して前記生分解可能ポリマーの少なくとも１分子上にグラフトされている材料に関する。
【００１２】
上記の材料に対照して、本発明に従って開発された材料は、制御された構造を持ち、それ故再現性のある方法で製造され得るという第１の利点を有する。使用される生分解可能ポリマーは、特にモル質量の言い方で特徴付けられる。
【００１３】
さらに詳細には、本件で請求されている材料は、生分解可能ポリマーの分子を少なくとも１個の環状オリゴ糖分子で官能化することによって得られる。
【００１４】
この官能化は、二つのタイプの分子間に共有結合を確立することによって実施される。そのような場合、この共有結合は生分解可能であり、好ましくは、結果的にエステル官能基を生成する、カルボン酸官能基とヒドロキシル官能基間の反応に由来する。
【００１５】
より好ましくは、この結合は、生分解可能ポリマーに存在する任意に活性化されたカルボキシル官能基と、オリゴ糖に存在するヒドロキシル官能基の間の反応に由来する。その酸の好ましい活性化誘導体は、前もって合成され分離されたN−ヒドロキシスクシンイミドエステル、または例えばカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）から誘導されたもののように現場で（in situ）得られて反応媒体から分離されない誘導体のいずれかである。この反応性官能基は、好ましくは、次の環状オリゴ糖分子へのカップリングを促進するために、生分解可能ポリマーの骨格に自然に存在するか、またはその骨格に前もって導入されている、カルボキシル官能基に由来する。
【００１６】
本発明の好ましい実施態様に従って、請求される材料は、前記の生分解可能ポリマーの領域において、第２の環状オリゴ糖分子、第２の生分解可能ポリマー分子および／または前記の生分解可能ポリマーおよび前記の環状オリゴ糖分子と異なる分子にグラフトされている本発明のコポリマーからなる。
図1は、本発明による構造を模式的に示す。
【００１７】
本発明に第１の態様に従って、生分解可能ポリマー分子は、好ましくは末端において、好ましくはエステル型の生分解可能な共有結合によって、好ましくはシクロデキストリン型の少なくとも２個の環状オリゴ糖分子に、グラフトされている。
【００１８】
本発明に第２の態様に従って、生分解可能ポリマー分子は、好ましくはエステル型の生分解可能な共有結合によって、好ましくはシクロデキストリン型の少なくとも１個のオリゴ糖分子、および別のポリマー、好ましくはポリ（エチレングリコール）の分子に、グラフトされている。
【００１９】
この第２の態様が、生分解可能ポリマーの自由末端に第２の分子または高分子を固定することにあるので、特に、オリゴ糖、より特別にはシクロデキストリンの孔において前記生分解可能ポリマーの疎水性鎖の自然発生的な自動カプセル化を防ぐことが望まれる場合には、有利である。従って、前記孔は、いかなる疎水性有効成分についても利用可能となる。
【００２０】
いずれの態様が検討されても、生分解可能ポリマー分子によってなされる一つまたは複数のグラフトが、好ましくはエステル型の生分解可能官能基によって前記生分解可能ポリマーの１個以上の分子にもグラフトされ、かくして非常に高い分子量を有する材料（架橋された）を得ることを可能にすることも、想到可能である。
【００２１】
本発明による材料は、それを構成するポリマーの化学的特性によって、満足な生分解可能性を持つという第２に利点を有する。
【００２２】
本発明の意味において、「生分解可能」（biodegradable）の語は、通常生体内の処置において意図された用途のために受入れ可能な期間で溶解または分解するすべてのポリマーを言う。もし６−８のｐＨを有する対応する物理学的溶液が２５℃と３７℃の間の温度に曝されるのであれば、一般的にこの期間は、５年未満、好ましくは１年未満でなければならない。
【００２３】
本発明による生分解可能ポリマーは、合成または天然の生分解可能ポリマーであるか、それに由来している。
【００２４】
通常、最も頻繁に使用される合成の生分解可能ポリマーは、ＰＬＡ、ＰＧＡ、ＰＣＬのようなポリエステルおよび例えばＰＬＧＡのようなそれらのコポリマーである。それらの生分解可能性と生体適合性は、広く確立されてきている。他の合成ポリマーも、研究されてきている。ポリ無水物、ポリ（アルキルシアノアクリレート）、ポリオルトエステル、ポリホスファゼン、ポリアミノ酸、ポリアミドアミン、ポリシロキサン、ポリヒドロキシブチレートのようなポリエステル、またはポリ（リンゴ酸）およびそれらのコポリマーと誘導体がある。天然の生分解可能ポリマー（アルブミンまたはゼラチンのような蛋白質類、アルギン酸塩、デキストランまたはキトサンのような多糖類）も、妥当であるかもしれない。
【００２５】
適切な例において、合成ポリマーが、その生体浸食性が早く見られるので、特に有利である。但し、とりわけ直鎖状の生分解可能ポリエステル（ＰＬＡ、ＰＣＬ等）の場合において、それらが、議論の対象である反応性基、より特別にはカルボン酸基を有さないので、商業的なポリマーが、１個以上のオリゴ糖に結合されるのに、必ずしも常に適当ではない。結果的に、本発明に従ってこれらのポリマーを環状オリゴ糖にカップリングさせるには、必要な反応性基、特にカルボン酸官能基を持つポリマーの事前の合成を要する一方、同時に、その鎖の末端に自然に存在する基の特性を制御することを要する。これらは、特にかくして得られる化合は、本発明で生分解可能ポリマー誘導体と呼ばれる。
【００２６】
かくして生分解可能ポリマーは、好ましくは一般式Iに対応する。
【００２７】
【数１】
2005503476.tif 000002
【００２８】
ここで、
ｎ、ｍは、互いに独立して、０または１を表し、
Ｒ1は、C1−C20のアルキル基、生分解可能ポリマー以外のポリマー（例えばポリエチレン（グリコール）（PEG））、またはPEGブロックまたはエチレンオキサイド単位を含むコポリマー（例えばPluronicTM  ポリマー）、ポリマー上にある保護された反応性官能基（例えばBOC−NH−）、カルボキシル官能基またはヒドロキシル官能基を表し、そして
R2は、ヒドロキシル官能基またはカルボキシル官能基を表す。
【００２９】
本発明による生分解可能ポリマーとして、次のポリエステルが特に好ましい。すなわち、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（ε−カプロラクトン）（ＰＣＬ）、および例えばポリ（ラクティックグリコリックアシッド）（ＰＬＧＡ）のようなそれらのコポリマー、ポリ無水物、ポリ（アルキルシアノアクリレート）、ポリオルトエステル、ポリホスファゼン、ポリアミド（例えばポリカプロラクタム）、ポリアミノ酸、ポリアミドアミン、ポリ（アルキレンｄ−酒石酸塩）、ポリカーボネート、ポリシロキサン、ポリヒドロキシブチレートまたはポリヒドロキシバレレートのようなポリエステル、およびポリ（リンゴ酸）のような合成ポリマー、さらに加えてこれらの物質のコポリマーおよびそれらの誘導体である。
【００３０】
その物質は、より好ましくはポリ乳酸、好ましくは５０００ｇ／モル未満の分子量を有するポリエステル、および特に好ましくは２０００−４０００ｇ／モルの分子量を有するポリカプロラクトンである。
【００３１】
本件で請求される材料は、さらにその構造中に環状オリゴ糖分子を有するため、高いカプセル形成性能を有するナノ粒子またはミクロ粒子を得るのに、特に有利である。カプセル形成速度は、勿論環状オリゴ糖の含有重量に依存している。
【００３２】
本発明に意味において、「オリゴ糖」（oligosaccharide）の語は、グリコシド結合によって結合された、最大で１５、好ましくは最大で１０の単糖単位の環状に連結されたものを言う。
【００３３】
環状オリゴ糖は、好ましくはシクロデキストリンを含む群から選択され、そのシクロデキストリンは、中性または荷電され、自然のままの（α、β、γ、δ、εシクロデキストリン）、枝分れまたは重合した、または例えば、アルキル、アリール、アリールアルキル、グリコシルのような基で1個以上のヒドロキシルを置換することにより、アルコールでのエーテル化により、または脂肪酸でエステル化することにより、加えてポリマー鎖リンク（例えば、ポリエチレングリコール）をグラフトすることにより、化学的に変性されたものであっても良い。上記の基の中で、ヒドロキシプロピル基、メチル基およびチオブチルエーテル基が特に好ましい。
【００３４】
これらの変性は、勿論、次に生分解可能ポリマーの結合を可能にするのに、それらの大部分を自由にしたままにするために、環状オリゴ糖上にある少数の基のみを攻撃しなければならない。ポリ（エチレングリコール）の親水性鎖でグラフトされたシクロデキストリンが、既に記載されている。
【００３５】
本発明による材料において、少なくとも1個、好ましくは2個の環状オリゴ糖分子、特に疎水性ポリマーに共有結合的に結合されたシクロデキストリンの存在が、特に有利である。その特性、すなわち疎水性、両親媒性および／または不溶性がいかなるものであっても、請求される材料に由来する粒子を使用して、運搬されるように意図された活性成分が、前記材料のポリマー構造の内部に浸透することを可能にする。これは、シクロデキストリンにおける疎水性の内部孔の存在によって、非常に増加したカプセル化収率を生む。これらの孔は、一方では活性成分の通路を大きくして、他方では放出特性のより良い制御が得られるようにする。
【００３６】
本発明に有利な実施態様に沿って、請求される材料は、重量含有量で１０％以上、有利には約２０−４０％の環状オリゴ糖、好ましくはシクロデキストリンを有する。
【００３７】
生分解可能性およびカプセル形成性能によって有利に働くことに加えて、本発明による材料は、生体の器官および/または細胞のレベルで、それに由来する粒子についての生着性およびターゲッティング特性の点でも特に有利である。
【００３８】
本件で請求される材料の例は、特に、生分解可能ポリマー骨格、および前記材料の骨格を形成するそれらのポリマーと異なる化学的タイプであっても、またはなくても良い1個以上の生分解可能ポリマー分子によって任意にグラフトされた少なくとも2個のシクロデキストリングラフトを含む。
【００３９】
一方では環状オリゴ糖、好ましくはシクロデキストリンタイプの分子上にグラフトされ、他方では異なる生分解可能ポリマーの分子上にグラフトされている、生分解可能ポリマー分子からなる材料に関する本発明の第2の態様は、この点で特に有利である。
【００４０】
この態様に従って、前記材料からなるナノ粒子から放出されるべき活性物質の放出特性に関与することを意図された化合物を、その材料の構造中に組み込むことが、想到され得る。
【００４１】
例えば1個以上のPEG鎖をエステル結合で生分解可能ポリマー分子にグラフトすることによって、その材料の構造を変えることも、想到され得る。かくしてPEGクラウンで覆われた粒子は、血液中で延長された循環を呈する。
【００４２】
本件で請求される材料を形成するコポリマーは、2個のブロックまたは多数のブロックのコポリマーの形でも良く、直鎖、枝分れまたは架橋構造を有していても良い。
【００４３】
「架橋」（cross-linked）は、単純化された直鎖状のポリマーに対照して、三次元ネットワークを形成するポリマーを言う。三次元ネットワークにおいて、その鎖は、共有結合またはイオン結合でお互いに結合されて、不溶性になる。
【００４４】
2個のブロックまたは多数のブロックのコポリマーは、合成中にオリゴ糖／生分解可能ポリマーのモル比を変えることによって得られても良い。架橋構造を有するコポリマーは、少なくとも２個の反応性官能基を含む生分解可能ポリマーから得られても良い。
【００４５】
本発明の第２の側面は、その請求される材料を製造する方法に関する。
【００４６】
さらに詳細には、この方法は、二つのタイプの分子間に共有結合および前記材料の回収を促進する条件において、生分解可能ポリマーの少なくとも１個の分子、または少なくとも１個の反応性官能基を備えるその誘導体の少なくとも１個を、環状オリゴ糖の少なくとも１個の分子に接触させる工程を含む。
【００４７】
有利には、ポリカプロラクトンの場合に、請求される製造方法は、オリゴ糖または多糖の骨格でのモノマーの直接重合の従来法におけるような、触媒の使用を必要としない。それ故、請求される方法におけるこの特異性は、生成物として得られる材料の無害性および生分解可能性の点で特に有利である。
【００４８】
本発明の好ましい態様によれば、生分解可能ポリマー上にある反応性官能基は、活性化されたカルボン酸官能基である。好ましくはオリゴ糖、より好ましくはシクロデキストリン、および適当に活性化された生分解可能ポリマーが、重量比２：９８−４０：６０の範囲で一緒にされる。
【００４９】
環状オリゴ糖とポリエステルの間のエステル結合は、次いで単離される酸官能基の活性化されたエステル（ジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC)の存在下でNHSIとのエステル化）を経由して、または単離されない中間体（カルボニルジイミダゾール（CDI)による活性化）を経由して、製造される。このエステル化反応は、当業者の実施できる範囲内にある。
【００５０】
さらに好ましくは、生分解可能ポリマーは上記定義に対応している。特に、それらは、本発明によって官能化されるように変性されている天然のまたは合成の生分解可能ポリマー分子に由来しても良い。
【００５１】
本発明の第３の側面は、本発明による材料からなる粒子に関する。
【００５２】
本件で請求される粒子は、５０ｎｍ−５００μｍ、好ましくは８０ｎｍ−１００μｍの大きさを有して良い。
【００５３】
実際に、請求される材料から粒子を製造するために用意された製造原案に従って、その粒子の大きさは固定されても良い。
【００５４】
本発明の好ましい実施態様によれば、その粒子は、１−１０００ｎｍの大きさを有し、それ故ナノ粒子と呼ばれる。１−数千μｍで大きさが変化する粒子は、ミクロ粒子と言う。
【００５５】
本件で請求されるナノ粒子またはミクロ粒子は、例えばエマルジョン／溶剤蒸発の技術[R. Gurny等 "Development of biodegradable and injectable latices for controlled release of potent drugs", Drug Dev. Ind. Pharm., Vol. 7, pp. 1-25, 1981]、水混和性の溶剤を使用するナノ沈殿技術（フランス特許出願公開第２６０８９８８号、欧州特許出願公開第２７４６９１号）のような文献に既に記載された方法によって製造されても良い。それらの方法の変更されたものもある。例えば、親水性有効成分のカプセル化のために有利な、所謂「二重エマルジョン」（double emulsion）技術は、前記有効成分を水相に溶解させる工程と、ポリマーを含む有機相で水／油型のエマルジョンを形成する工程、および界面活性剤を含む新たな水相を使用して水／油／水型のエマルジョンを形成する工程からなる。有機溶剤が蒸発された後、ナノ球体またはミクロ球体が回収される。
【００５６】
本発明による材料は、その両親媒性のために、界面活性の特性を持つという主要な利点を有する。それ故、例えば上記の方法において系統立って使用される界面活性剤の使用を避けるために、粒子の製造中にこれらの特性が有利に生かされても良い。前記界面活性剤は、必ずしも生体適合性ではなく、またその工程の終了時に除去するのが困難である。
【００５７】
本発明による材料のもう一つの利点は、以下の選択を通じて、粒子の製造方法に必要とされる特性を調整できる可能性を提供することである。
生分解可能ポリマー／オリゴ糖の重量比、および／または
議論の対象である生分解可能ポリマーおよびオリゴ糖のモル重量（ブロックの大きさ）
【００５８】
かくして、水に溶解または不溶であり、広範囲に渡る親水性−疎水性のバランスを有し、水／油または油／水のエマルジョンのいずれかを確保可能にするコポリマーを得ることが可能である。
【００５９】
同様に、本発明による２以上のタイプの材料の混合物から、粒子が形成されても良いことが、想到され得る。
【００６０】
本発明による粒子の例には、特に、エステルタイプの結合によって、少なくとも１個、好ましくは２個のシクロデキストリン分子に結合されたポリカプロラクトンまたはポリ（乳酸）ブロックに由来する材料からなるものが含まれる。
【００６１】
本発明による材料および上記方法から得られ得る粒子構造は、変更されても良い。すなわち、次のものが分類して挙げられる。
上記方法の一つを使用することによって、または予備成形された粒子への本発明の材料の吸着によって得られる、生分解可能ポリマーの疎水性コア（有効成分をカプセル化し得る）／環状オリゴ糖の親水性クラウン型の構造；
「二重エマルジョン」法によって得られ、そして親水性有効成分のカプセル化に適用されても良い、水性含有物を含む生分解可能ポリマーマトリックスによる粒子の構造；尚、選択された操作手順およびその材料の親水性／親油性バランスに従って、水性含有物の領域に、またはこれらの含有物と粒子表面の領域のいずれか一方のみに環状オリゴ糖が配列されても良い。カプセル化された反応しやすい特定の有効成分（蛋白質、ペプチド等）が、しばしば変性を生じる疎水性の生分解可能ポリマーおよび有機溶剤との相互作用について保護されても良い。
もし油中油型（例えばシリコーン−アセトン油）または油中油中水型のエマルジョンから粒子が製造されれば、親水性コア−（環状オリゴ糖）／疎水性クラウン（生分解可能ポリマー）のタイプの構造；
本発明の材料の水相における自然会合によって得られるミセル構造、
少なくとも２個の反応性官能基を含む生分解可能ポリマーでオリゴ糖を架橋することによって形成された所謂ゲル構造；および
PEG（または他の親水性ポリマー）のクラウンおよびポリエステルと環状オリゴ糖を混合したコアを有する、コア／クラウン型の構造
【００６２】
本発明の場合、粒子が、好ましくは１時間と数週間の間の期間に分解する。
【００６３】
本発明による粒子は、活性成分を含んでも良い。この成分は、親水性、疎水性または両親媒性、および現実に生物学的活性であっても良い。
【００６４】
生物学的有効成分の例には、特にペプチド、蛋白質、炭水化物、核酸、脂質、多糖、またはそれらの混合物が含まれる。それらは、合成物または天然物、有機物または無機物の分子であっても良く、動物または患者に対して生体内投与されるときに、生物学的効果を生ずることおよび/または治療活性を明らかにすることが可能である。従って、それらが、抗原、酵素、ホルモン、受容体、ペプチド、ビタミン、鉱物質および／またはステロイドであっても良い。
【００６５】
これらの粒子中に組み込まれ得る薬剤の例は、抗炎症化合物、麻酔剤、化学療法剤、イムノトキシン、免疫抑制剤、ステロイド、抗生物質、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗寄生虫薬、ワクチン剤、免疫調整剤および鎮痛剤を含む。
【００６６】
これらの粒子に組み込まれても良い薬剤の例は、特に、モルシドミン、ケトコナゾール、グリクラジド、ジクルフェナク、レボノルゲストレル、パクリタキセル、ヒドロコルチゾン、パンクラチスタチン、ケトプロフェン、ジアゼパム、イブプロフェン、ニフェジピン、テストステロン、タモキシフェン、フロセミド、トルブタミド、クロラムフェニコール、ベンゾジアゼピン、ナプロキセン、デキサメタゾン、ジフルニサール、アナダミド、ピロカルピン、ダウノルビシン、ドキソルビシンおよびジアゼパムを含む。
【００６７】
同様に、診断機能を持った化合物が粒子に組み込まれても良い。これらは、X線、蛍光、超音波、核磁気共鳴または放射能で検知され得る物質であっても良い。従って、その粒子は、磁性粒子、放射線不透過性物質（例えば空気、バリウムのような）または蛍光化合物を含んで良い。例えば、ローダミンまたはナイルレッドのような蛍光化合物が、粒子内で疎水性コアで包囲されても良い。一方、ガンマ線エミッタ（例えばインジウムまたはテクネチウム）が、その中に組み込まれても良い。親水性蛍光化合物が、粒子内にカプセル化されても良いが、マトリックスとの親和性が低いために、疎水性化合物に比較して収率が低い。
【００６８】
制御された表面特性を有する商業的に入手可能な磁性粒子は、粒子のマトリックス中に組み込まれてもよく、あるいはそれらの成分の一つに共有結合的に結合されても良い。
【００６９】
活性物質が、その成形工程中にこれらの粒子中に組み込まれてもよく、あるいはこれらが得られた時に粒子のレベルで供給されても良い。
【００７０】
本発明による粒子は、９５重量％までの有効成分を含んで良い。
【００７１】
従って、有効成分は、粒子中に０．００１−９９０ｍｇ／ｇ粒子、好ましくは０．１−５００ｍｇ／ｇ粒子の範囲で変化する量で存在する。特定の高分子化合物（DNA、オリゴヌクレオチド、蛋白質、ペプチド等）のカプセル化の場合には、より少量の負荷でさえ十分であることに注意されるべきである。
【００７２】
本発明による粒子は、例えば経口投与、非経口投与、目、肺、鼻、膣、皮膚および頬から局所投与等の異なる経路で投与されても良い。非侵襲である経口投与が、好ましい経路である。
【００７３】
一般に、経口投与される粒子は、移動（捕獲、次いで完全な粒子による消化系上皮の通過）、生着（接着機構による粘液分泌表面での粒子の固定）、および輸送の種々のプロセスを経由する。これらの最初の二つの現象において、表面特性が主要な役割をする。有利には、粒子がそれらの表面に共有結合的にまたは非共有結合的に結合した少なくとも一つの分子をさらに含む。
【００７４】
本発明による特定の粒子が表面で自由なヒドロキシル官能基を多数有する事実は、標的に向かう役割を有する、または検知され得る生物学的に活性な分子を結合するために、特に有利であることを立証する。従って、それらの表面特性を変性するため、および／または特定の組織または器官の方により特異的にそれらを向かわせるために、これらの粒子の表面が官能化されても良いことが、想到され得る。このように官能化された粒子は、任意に、医療用の像を形成中、または活性成分の放出中に、磁界を使用して標的のレベルに維持されても良い。同様に、受容体、レクチン、抗体またはそれらの断片のような標的に向かう分子の配位子が、粒子の表面で固定されても良い。このタイプの官能化は、当業者の実施可能な範囲にある。
【００７５】
一般的に、これらの配位子または分子は、粒子を覆うオリゴ糖に配位子を結合させることによって共有結合的に、または親和性によって非共有結合的に、粒子の表面にカップリングされる。それ故、特定のレクチンは、本発明による粒子の表面に位置されたオリゴ糖に、特別の親和性によって結合されて、これらの粒子の細胞認識特性を強化しても良い。このタイプの応用のために、環状オリゴ糖のレベルで糖残基をグラフトすることによって、本発明による材料を官能化することが有利である。最適の形態で標的に到達することを可能にするために、スペーサーアームの手段で配位子をグラフトすることも有利である。一方、配位子は、粒子の組成物に入り込む他のポリマーによってなされても良い。この側面については既に記載されている。
【００７６】
本発明は、上記に定義されるような1個以上の有効成分をカプセル化するために、本発明によって得られる粒子を使用することにも関する。
【００７７】
本発明のもう一つの側面は、好ましくは医薬として受入れ可能で適合性のある少なくとも一つの薬を伴った、本発明の粒子を含む医薬または診断組成物にも関する。その粒子は、例えば胃耐性のカプセルに施されても良く、またはゲル、移植組織または錠剤中に組み込まれても良い。それらは、オイル（MigliolTMのような）中で直接製造されても良く、この懸濁物がカプセル中に施され、または正確な場所（例えば腫瘍）に注入されても良い。
【００７８】
これらの粒子は、特に、有機的組織体の免疫防御システムを潜り抜けることができるようなステルス（stealth）ベクター、および／または生着性ベクターとして使用されても良い。
【００７９】
以下の実施例および図は、本発明の非限定的説明による形式で示される。
【実施例】
【００８０】
実施例１
R‐PCL‐COOHの合成（R=C9H19）
２０００−５０００ｇ／モルで変化する分子量を有するR‐PCL‐CO2H（R=C9H19）の単官能化されたPCLポリマーが、３．２ｇのモノマー（蒸留されたばかりのε−カプロラクトン）と０．３ｇの高純度カプリン酸（C9H19 CO2H）から得られた。その酸とε−カプロラクトンは、上に向かう冷却装置で上を覆われた丸底フラスコ中に投入された。それらの試薬を十分にパージした後、丸底フラスコが23５℃に加熱されたオイルバスに浸けられた。不活性雰囲気（アルゴン）下で６．５時間反応が行われた。氷中に丸底フラスコを浸すことによって、反応が停止された。得られた固形物が、１５ｍｌのTHFで加熱溶解され、次いで冷メタノールを使用して室温で沈殿された。
【００８１】
続けて３回の沈殿の後、反応の収率が重量で６０−７０％であった。数平均および重量平均の分子量が、サイズ排除クロマトグラフィ（SEC）（THFを１ｍｌ／分で溶出し、ポリスチレン基準でユニバーサルキャリブレーションを実施）によって決定された。Mnが３４２０ｇ／モルに等しく、Mwが４８９０ｇ／モルに等しく、従って多分散性指数が１．４に等しかった。
【００８２】
３２００ｇ／モルに等しい数平均分子量が、溶液アセトンー水混合物に溶解された約１００ｍｇのポリマーサンプルを、KOH／EtOHの１０-2モル溶液で滴定して決定された。
【００８３】
実施例２
HOOC‐PCL‐COOHの合成
二官能化されたHOOC‐PCL‐COOHポリマーが、実施例１の操作手順に従って合成された。
【００８４】
開始剤として用いられるコハク酸（９９．９％  Aldrich）が、１１０℃で２４時間真空乾燥された。モノマー（ε−カプロラクトン）が水素化カルシウム上で減圧蒸留されて新たに精製された。
【００８５】
３時間の反応後に、０．２ｇのコハク酸と４ｇのε−カプロラクトンからの重合で３．２ｇのポリマーが得られた（続けて４回の沈殿後、重量での収率７６％）。
【００８６】
KOH／EtOHの１０-2モル溶液をCOOH末端基と共に混合して、３５００ｇ／モルの分子量に対応する酸度が決定されるようになった。
【００８７】
SECにより、Mnが４０６０ｇ／モルに等しく、Mwが４８１０ｇ／モルに等しく、そして多分散性指数が１．２であった。
【００８８】
実施例３
βCD‐PCL‐βCDの合成
実施例２によって得られた３ｇのHO2C‐PCL‐CO2Hが、共沸蒸留で無水にされ、次いで５０ｍｌの丸底フラスコ内で真空乾燥された。その丸底フラスコが、上に向かう冷却装置を備えられ、減圧／アルゴンのマニホールドに連結された。無水のTHF５ｍｌが丸底フラスコ内に添加され、ポリマーが溶解後、０．３０４ｇのカルボニルジイミダゾール（CDI)が添加され、そしてその混合物がTHFの還流にかけられた。CO2の放散が見られた。それは２時間後に少なくなった。その反応は３時間後に停止され、THFが蒸発され、無水のDMSO２５ｍｌ中に溶解された無水のβCD２．９２ｇが添加された。この全てがアルゴン下で１４０℃に３時間加熱された。DMSOが蒸発され、未処理の反応生成物が５００ｍｌのクロロホルム中に溶解された。この溶液が、２リッターのロート付きデカンターに投入され、１リッターの水と共に攪拌された。デカンテーションの後、水相が安定な乳濁物の形になった。この乳濁物が、RotovapTMでの蒸発によって壊された。ポリマーが沈殿の形で得られた。引き続き、この沈殿が水で再び洗浄され、次いで、ろ過で回収され、エーテルで洗浄されて、乾燥された。その収率は、重量で７５％であった。
【００８９】
そのコポリマーが、ポリスチレン基準で調整（ユニバーサルキャリブレーション）されたビスコゲルカラム（Visco gel column）（GMHHR‐N、Viscotek、英国、６０℃に加熱）を使用して、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー（屈折率および粘度検出器）によって特定された。そのコポリマーは、５ｍｇ／ｍｌの濃度でN、N−ジメチルアセタミド（DMAC)に溶解された。注入された容量は、１００μｌであった。その溶離剤は、流量が０．５ｍｌ／分の、臭素化リチューム０．５％含有DMACであった。
【００９０】
そのクロマトグラム（図２）は、未反応βCDを少し含む単一生成物であること示した。数平均分子量が８３３０ｇ／モルであり、重量平均分子量が１０７９０ｇ／モルであった。このポリマーは、約３５重量％のβCDを含んでいた。
【００９１】
実施例４
タモキシフェンの組込み
タモキシフェンと接触する全てのガラス器具および装置が、前もってシリコーンでコートされた。
【００９２】
１／１７０，０００（モル／モル）に等しい3H  タモキシフェン／原タモキシフェンの同位体希釈を得るために、２０μｇ／ｍｌのタモキシフェン溶液が、原タモキシフェン（Sigma、フランス）およびトリチウム化されたタモキシフェン（８０Ci／モル固有活性、５．２ｍCi／ｍｌエタノール溶液、Perkin Elmer、欧州）から製造された。
【００９３】
この目的のために、原タモキシフェン（粉末）およびトリチウム化タモキシフェン（エタノール溶液）が最小量のエタノールに投入されて溶液とされた。そのエタノールが、次いで窒素流通下で蒸発された。かくして得られた残渣が、超純水（Milli-Q）に投入されて、室温で１８時間攪拌されて溶液とされた。
【００９４】
この溶液の１０ｍｌが実施例３のコポリマー１０ｍｇを微粉末の形で含むピルボックス中に投入された。その懸濁物が、攪拌されながら室温で４８時間維持された。そのポリマーが、毎分３０，０００回転で３０分の遠心分離（Beckman L7-55 Ultracentrifuge、欧州）によって、上澄み液から分離された。
【００９５】
上澄み液中の放射能が、トリチウム化タモキシフェンの液体シンチレーション計数（Beckman LS-6000−TA Counter、欧州）によって決定された。この目的のために、２００μｌの界面活性剤が、４ｍｌのUltimagoldTM  シンチレーション液（Packard、オランダ）と共に混合された。準備された二つのサンプルの各々について、独立した２回の測定がなされ、４回の測定の平均が算出された。上澄み液中の放射能が、６．２５±０．１３μｇ／ｍｌのタモキシフェン濃度に対応する。
【００９６】
二つの対象標準（ポリマーを含まずに、タモキシフェン溶液を含むピルボックス、）が、同様な処理に付された。上澄み液中の残留放射能が、１３．２６±０．５４μｇ／ｍｌのタモキシフェン濃度に対応した。
【００９７】
減算によれば、全体としてタモキシフェンの７０μｇがコポリマーに組みこまれた。これは、７μｇタモキシフェン／ｍｇコポリマーに対応している。
【００９８】
組み込まれるのに特に困難な化合物であるタモキシフェンの多量の組込みを、本発明による材料が助長することは、注目されるだろう。採用された二つのサンプルの上澄み液中で測定された放射能値が非常に近いことにも、注目されるだろう。すなわち、それは、本発明による材料中への組込みが、再現性のある方法でなされたことを示している。
【図面の簡単な説明】
【００９９】
【図１】本発明による材料の種々の形態的構造を模式的に示すものである。
【図２】βシクロデキストリンのポリエステルPCL-二酸（HO2C-PCL-CO2H）との反応生成物のクロマトグラムを示すものである。
【図１】
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【図２】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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