(57)【要約】トリプトリド化合物の、種々に置換されたカーボネート誘導体およびカルバメート誘導体は、良好な水溶性を有し、プロドラッグ上の置換を変化することにより調節され得る速度で、インビボで生物学的に活性な化合物に転換する。そのプロドラッグは、免疫抑制剤、抗炎症剤および抗癌剤として有用である。また、本発明は、癌の処置において、特に結腸癌、乳癌、肺癌または前立腺癌の処置において、細胞死を誘導する方法を提供し、移植片拒絶反応の阻害、対宿主性移植片病の予防または処置、または自己免疫疾患の処置のように、免疫抑制に影響する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞死を誘導する方法であって、該方法は、このような処置を必要とする被験体に、薬学的に受容可能なビヒクル中の有効量のトリプトリド（ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ）プロドラッグまたは薬学的に受容可能なその塩を投与する工程を包含し、該トリプトリドは、構造Ｉ：
【化１】
2005528442.tif 000049
を有し、ここで、
Ｘ１が、ＯＨまたはＯＲ１であって、Ｘ２およびＸ３が、独立にＯＨ、ＯＲ１またはＨであって、但し、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３のうちの少なくとも一つが、ＯＲ１であって、そして、Ｘ２およびＸ３のうちの少なくとも一つが、Ｈであって、そして、
ＯＲ１が、Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｚであって、ここで、Ｚが、以下：
−ＯＲ２、−Ｏ−Ｙ−（Ｃ＝Ｏ）−ＯＲ３、−Ｏ−Ｙ−ＮＲ４Ｒ５、−ＮＲ４Ｒ５、−ＮＲ３−Ｙ−（Ｃ＝Ｏ）−ＯＲ３およびーＮＲ３−Ｙ−ＮＲ４Ｎ５からなる群から選択され、
ここで、
Ｙが、六個までの炭素原子を有する二価アルキル基、二価アルケニル基または二価アルキニル基であって、
Ｒ２が、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、アラルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アリールオキシアルキルおよびアシルオキシアルキルから選択され、
各Ｒ３が、水素およびＲ２から独立に選択され、そして、
Ｒ４およびＲ５が、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、アラルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アリールオキシアルキルおよびアシルオキシアルキルから独立に選択され、またはＲ４およびＲ５が、一緒になって、５〜７員環の複素環を形成し、該複素環の環原子が、炭素、窒素、酸素および硫黄からなる群から選択され、ここで、該環原子が最大で三個のヘテロ原子を含む、
方法。
【請求項２】
Ｘ２＝Ｘ３＝Ｈである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｙが、−ＣＨ２−または−ＣＨ２ＣＨ２−である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
請求項２に記載の方法であって、ここで、ＯＲ１が、Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−ＯＲ２、Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ−（Ｃ＝Ｏ）−ＯＲ３およびＯ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ−ＮＲ４Ｒ５からなる群から選択される、方法。
【請求項５】
請求項１に記載の方法であって、ここで、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５と定義される基のそれぞれが、アルキル、アルケニルおよびアルキニルから選択される場合、六個までの炭素原子を有し、シクロアルキルと定義される場合、３〜７個の炭素原子を有し、シクロアルケニルと定義される場合、５〜７個の炭素原子を有し、そしてアラルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アリールオキシアルキルおよびアシルオキシアルキルから選択される場合、六個までの炭素原子を有するアルキル構成要素を有する、方法。
【請求項６】
請求項５に記載の方法であって、ここで、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５のそれぞれが、６個までの炭素原子を有するアルキル、アリール、アラルキルおよびアルコキシアルキルからなる群から独立に選択される、方法。
【請求項７】
請求項２に記載の方法であって、ここで、ＯＲ１が、Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ４Ｒ５、Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ３−Ｙ−（Ｃ＝Ｏ）−ＯＲ３およびＯ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ３−Ｙ−ＮＲ４Ｎ５からなる群から選択される、方法。
【請求項８】
請求項７に記載の方法であって、ここで、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５のそれぞれが、６個までの炭素原子を有するアルキル、アリール、アラルキルおよびアルコキシアルキルからなる群から独立に選択される、方法。
【請求項９】
請求項１に記載の方法であって、ここで、前記処置が、結腸癌、乳癌、肺癌、または前立腺癌の処置である、方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法であって、ここで、前記処置が、結腸癌の処置である、方法。
【請求項１１】
免疫抑制を生じさせる方法であって、該方法は、請求項１で定義された構造Ｉを有する、有効量の化合物を、薬学的に受容可能なビヒクル中で、このような処置を必要とする被験体に投与することを含む、方法。
【請求項１２】
請求項１１に記載の方法であって、ここで、前記免疫抑制が、移植片拒絶反応の阻害を包含する、方法。
【請求項１３】
請求項１１に記載の方法であって、ここで、前記免疫抑制が、対宿主性移植片病の阻害を包含する、方法。
【請求項１４】
請求項１１に記載の方法であって、ここで、前記免疫抑制が、自己免疫疾患の処置を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、免疫抑制剤、抗炎症剤および抗癌剤として有用であるプロドラッグおよびそれらの使用方法に関する。その化合物は、良好な水溶性を有し、プロドラッグ上の置換を変化することにより調節され得る速度で、インビボで生物学的に活性な化合物に転換する。
【０００２】
【数１−１】
2005528442.tif 000002
【０００３】
【数１−２】
2005528442.tif 000003
【背景技術】
【０００４】
（発明の背景）
免疫抑制剤は、対宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）（移植された骨髄細胞がレシピエントの細胞を攻撃する状態）の処置を含む自己免疫疾患の処置および移植片拒絶反応の処置または防止に広く使用されている。一般的な免疫抑制薬剤としては、アザチオプリン、コルチコステロイド、シクロホスファミド、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、ビンクリスチンおよびシクロスポリンＡが挙げられる。一般に、これらの薬物は、いずれも完全には有効ではなく、そして、大抵のものは、重い毒性に制限されている。例えば、シクロスポリンＡは、広く使用されている薬剤であるが、腎臓に対して顕著に有毒である。さらに、有効な処置のために必要な用量は、種々の日和見性侵入者による感染に対する患者の感受性を増加し得る。
【０００５】
中国の薬草  Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ  ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ（ＴＷ）に由来する多くの化合物が、免疫抑制活性を有する（例えば、対宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）（移植された骨髄細胞がレシピエントの細胞を攻撃する状態）の処置を含む自己免疫疾患の処置および移植片拒絶反応の処置または防止において）と認められてきた。例えば、共有に係る米国特許第６，１５０，５３９号（高い水溶性を有するトリプトリドプロドラッグ）、同第５，９６２，５１６号（免疫抑制化合物および方法）、同第５，８４３，４５２号（免疫治療組成物および方法）、同第５，７５９，５５０号（異種移植片拒絶反応を抑制するための方法）、同第５，６６３，３３５号（免疫抑制化合物および方法）および同第５，６４８，３７６号（免疫抑制剤ジテルペン化合物）を参照のこと、これらおよびその中に引用された参考文献は、全て本明細書中に参考として援用される。このような化合物はまた、抗癌活性を示すことが報告されている。例えば、上記で引用されたＫｕｐｃｈａｎら、１９７２、１９７７ならびに共有に係るＰＣＴ公開番号ＷＯ０２／５６８３５を参照のこと、これらは、本明細書中に参考として援用される。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかし、これらの化合物の投与および治療効果は、それらの低い水溶性により制限されている。この問題は、エタノールおよびポリエトキシ化ヒマシ油（例えば、「ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ  ＥＬＴＭ」）の混合物中にその化合物を処方することにより、取り組まれ、その方法は、静脈内投与のための生理食塩水中へのその後の希釈を可能にする。しかし、このような処方物は、これらの化合物を溶解させるために必要な高濃度の可溶化剤のために、高い毒性を受ける。例えば、このような処方物中の可溶化剤（エタノールおよび「ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ  ＥＬＴＭ」）のトリプトリドに対する割合は、トリプトリドの低い溶解度（Ｍｏｒｒｉｓ、１９９１；Ｍｏｒｒｉｓら、１９９１）のために、代表的には、１０００：１のオーダーかまたはそれより大きい。懸濁液を使用した投薬量の標準化もまた、溶液を使用した場合より問題である。
【０００７】
従って、比較的低い毒性を有し、改良された水溶性を有する免疫抑制性化合物を提供することが望ましい。プロドラッグ上の置換基の選択によって制御され得る速度で、インビボでの免疫抑制形態に転換されるプロドラッグ化合物を提供することもまた、望ましい。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の要旨）
一つの局面では、本発明は、癌の処置において、特に結腸癌、乳癌、肺癌または前立腺癌の処置において、細胞死を誘導する方法を提供する。別の局面では、本発明は、移植片拒絶反応の阻害、対宿主性移植片病の予防または処置、または自己免疫疾患の処置のように、免疫抑制に影響する方法を提供する。本発明に従って、このような処置の必要な被験体は、薬学的に受容可能なビヒクル中の、以下の構造Ｉ
【０００９】
【化２】
2005528442.tif 000004
【００１０】
を有する有効量のトリプトリドプロドラッグまたは薬学的に受容可能なその塩で処置される。構造Ｉにおいて、変数は、以下のように定義される：
Ｘ１は、ＯＨまたはＯＲ１であって、Ｘ２およびＸ３が、独立にＯＨ，ＯＲ１またはＨであって、但し、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３の内の少なくとも一つが、ＯＲ１であって、そして、Ｘ２およびＸ３の内の少なくとも一つが、Ｈであって；そして、
ＯＲ１が、Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｚであって、ここで、Ｚが、以下：―ＯＲ２、−Ｏ−Ｙ−（Ｃ＝Ｏ）−ＯＲ３、−Ｏ−Ｙ−ＮＲ４Ｒ５、−ＮＲ４Ｒ５、−ＮＲ３−Ｙ−（Ｃ＝Ｏ）−ＯＲ３および−ＮＲ３−Ｙ−ＮＲ４Ｎ５からなる群から選択され、
ここで、
Ｙが、六個までの炭素原子を有する二価アルキル基、二価アルケニル基または二価アルキニル基であって、
Ｒ２が、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、アラルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アリールオキシアルキルおよびアシルオキシアルキルから選択され、
各Ｒ３が、水素およびＲ２から独立に選択され、そして、
Ｒ４およびＲ５が、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、アラルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アリールオキシアルキルおよびアシルオキシアルキルから独立に選択され、またはＲ４およびＲ５が、一緒になって、５〜７員環の複素環を形成し、その環原子が、炭素、窒素、酸素または硫黄からなる群から選択され、ここで、その環原子が最大で３個のヘテロ原子を含む。
【００１１】
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５と定義される基が、アルキル、アルケニルおよびアルキニルから選択される場合、好ましくは六個までの炭素原子を有する。シクロアルキルまたはシクロアルケニルから選択される場合、それらは、好ましくは、３〜７個の炭素原子を有し、またはシクロアルケニルの場合、５〜７個の炭素原子を有する。アラルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アリールオキシアルキルおよびアシルオキシアルキルから選択される場合、これらの基のアルキル構成要素は、好ましくは、６個までの炭素原子を有する。一つの実施形態において、これらの基のそれぞれは、アルキル、アリール、アラルキルおよびアルコキシアルキルから独立に選択される。
【００１２】
選択された実施形態において、Ｘ２＝Ｘ３＝Ｈであって、Ｙは、−ＣＨ２−または−ＣＨ２ＣＨ２−である。さらなる実施形態において、ＯＲ１は、Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−ＯＲ２、Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ−（Ｃ＝Ｏ）−ＯＲ３およびＯ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ−ＮＲ４Ｒ５（カーボネート誘導体）からなる群から選択される。他の実施形態において、ＯＲ１は、Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ４Ｒ５、Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ３Ｙ−（Ｃ＝Ｏ）−ＯＲ３およびＯ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ３−Ｙ−ＮＲ４Ｎ５（カーボネート誘導体）からなる群から選択される。
【００１３】
本発明のこれらおよび他の、目的および特徴は、以下の発明の詳細な説明が、添付する図と組み合わせて読まれる場合、より十分に明らかになる。
【００１４】
（発明の詳細な説明）
（Ｉ．定義）
他に示されない場合、以下の用語は、以下の意味を有する。
【００１５】
「トリプトリド誘導体」または「トリプトリドアナログ」とは、一つ以上のヒドロキシル基で誘導体化されたトリプトリドの誘導体（１６−ヒドロキシトリプトリドまたはトリプジオリド（２−ヒドロキシトリプトリド））をいう。
【００１６】
「アルキル」とは、直鎖であっても分枝であってもよいが、炭素および水素からなる完全に飽和の非環式部分をいう。アルキル基の例は、メチル、エチル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ヘプチルおよびイソプロピルである。一般に好ましいのは、１個〜６個の炭素原子を有する低級アルキル基であり、メチル、エチル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、イソアミル、ｎ−ペンチルおよびイソペンチルにより例示される。
【００１７】
「シクロアルキル」とは、３個〜８個の炭素原子を有し、好ましくは、３個〜６個の炭素原子を有する、炭素および水素からなる完全に飽和した環状部分（例えば、シクロプロピルまたはメチルシクロペンチル）をいう。「シクロアルケニル」とは、５個〜８個の炭素原子を有し、好ましくは、５個〜６個の炭素原子を有する、炭素および水素からなる不飽和環状部分をいう。
【００１８】
「アルケニル」とは、直鎖であっても分枝であってもよいが、一つ以上の二重結合を有する、炭素および水素からなる不飽和非環式部分をいう。一般に好ましいのは、２個〜６個の炭素原子を有する低級アルケニル基である。「アルキニル」とは、直鎖であっても分枝であってもよいが、一つ以上の三重結合を有する、炭素および水素からなる不飽和非環式部分をいう。一般に、好ましいのは、２個〜６個の炭素原子を有する、低級アルキニル基である。
【００１９】
「アリール」とは、一般に、単環（例えば、ベンゼン）または縮合二環（例えば、ナフチル）を有する、置換されたかまたは置換されていない一価芳香族ラジカルをいい、ここで、単環式アリール基が好ましい。その用語は、ヘテロアリール基を含み、これは、その環の中に、１個以上の窒素、酸素または硫黄原子を有する芳香環基（例えば、フリル、ピロール、ピリジルおよびインドール）である。「置換された」とは、アリール基の中の一つ以上の環水素、好ましくは、一つまたは二つの環水素が、好ましくはフッ素、塩素、臭素、メチル、エチル、ヒドロキシ、ヒドロキシメチル、ニトロ、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、メトキシ、ハロメトキシおよびハロメチルから選択された基で置換されることを意味する。
【００２０】
「アシルオキシアルキル」とは、−Ｒ−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｒ’の形態の置換基をいい、ここで、Ｒは、好ましくは６個までの炭素原子を有するアルキルであり、Ｒ’は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールおよびアラルキルから選択され、ここで、Ｒ’は、好ましくは、低級アルキル基、低級アルケニル基、または低級アルキニル基（すなわち、Ｃ２〜Ｃ６）および単環式アリール基を含む。
【００２１】
「アラルキル」とは、アリール基、好ましくは、単環式アリール基でさらに置換されたアルキル置換基をいい、好ましくは、低級（Ｃ１〜Ｃ４、より好ましくはＣ１〜Ｃ２）アルキル置換基をいう；例は、ベンジルおよびフェネチルである。広く使用されるＦｍｏｃ（フルオレニルメトキシカルボニル）保護基の構成要素であるフルオレニルメチルも含まれる。
【００２２】
用語「薬学的に受容可能な塩」とは、有機カチオンおよび無機カチオン（例えば、アルカリ金属カチオンおよびアルカリ土類金属カチオン（例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、バリウムおよびカルシウム）；アンモニウム）；または、有機カチオン（例えば、ジベンジルアンモニウム、ベンジルアンモニウム、２−ヒドロキシエチルアンモニウム、ビス（２−ヒドロキシエチル）アンモニウム、フェニルエチルベンジルアンモニウム、ジベンジルエチレンジアンモニウムなど）を有するカルボキシレート塩を含む。上記用語に含まれる他のカチオンとしては、プロカイン、キニーネおよびＮ−メチルグルコサミンのプロトン化形態および塩基性アミノ酸（例えば、グリシン、オルニチン、ヒスチジン、フェニルグリシン、リジンおよびアルギニン）のプロトン化形態が挙げられる。
【００２３】
その用語はまた、有機酸または無機酸由来の対イオンを有する塩基性基（例えば、アミノ基）との標準的酸−塩基反応によって形成される塩も含む。このような対イオンとしては、塩化物、硫酸、リン酸、酢酸、コハク酸、クエン酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、パルミチン酸、コール酸、グルタミン酸、グルタル酸、酒石酸、ステアリン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ソルビン酸、ピクリン酸、安息香酸、桂皮酸などが挙げられる。
【００２４】
本明細書の開示のために、以下の番号付けスキームを、トリプトリドおよびトリプトリドアナログのために使用する：
【００２５】
【化３】
2005528442.tif 000005
【００２６】
（ＩＩ．トリプトリドアナログ）
以下の構造Ｉによって示される化合物は、親水性置換基を有するトリプトリドの誘導体であり、非誘導体化開始化合物より大きな水溶性を有し、インビボで加水分解し、そして親化合物に変換するために有効である。その化合物は、免疫抑制性適用、抗炎症性適用および抗癌性適用に対するプロドラッグとして、有用である。
【００２７】
（Ａ．構造）
式Ｉの化合物中で、
【００２８】
【化４】
2005528442.tif 000006
【００２９】
Ｘ１が、ＯＨまたはＯＲ１であって、Ｘ２およびＸ３が、独立にＯＨ、ＯＲ１または水素であって、但し、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３のうちの少なくとも一つがＯＲ１であって、そして、Ｘ２およびＸ３の内の少なくとも一つが水素である。
【００３０】
ＯＲ１は、カルバメート基またはカルボネート基であって、それらはさらに、例えば、エステルまたはアミンにより置換され得る。特にＯＲ１が、Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｚとして示される場合、Ｚは、以下：
−ＯＲ２、
−Ｏ−Ｙ−（Ｃ＝Ｏ）−ＯＲ３、
−Ｏ−Ｙ−ＮＲ４Ｒ５
−ＮＲ４Ｒ５
−ＮＲ３−Ｙ−（Ｃ＝Ｏ）−ＯＲ３、および
−ＮＲ３−Ｙ−ＮＲ４Ｎ５
からなる基から選択され、ここで、Ｙは、六個までの炭素原子を有する二価アルキル基、二価アルケニル基または二価アルキニル基であり；Ｒ２は、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、アラルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アリールオキシアルキルおよびアシルオキシアルキルから選択され；そして、各Ｒ３は、水素およびＲ２から独立に選択される。Ｒ４およびＲ５は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、アラルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アリールオキシアルキルおよびアシルオキシアルキルから独立に選択される。あるいは、Ｒ４およびＲ５が、一緒になって、５〜７員環の複素環を形成し得、その複素環の環原子が、炭素、窒素、酸素および硫黄からなる群から選択され、ここで、その環原子は、最大で３個のヘテロ原子を含む。例としては、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジンおよびモルホリンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３１】
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５と定義される基が、アルキル、アルケニルおよびアルキニルから選択される場合、好ましくは、六個までの炭素原子を有する。シクロアルキルまたはシクロアルケニルから選択される場合、それらは、好ましくは、３〜７個の炭素原子を有し、または、シクロアルケニルについては、５〜７個の炭素原子を有する。アラルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アリールオキシアルキルおよびアシルオキシアルキルから選択される場合、これらの基のアルキル構成要素は、好ましくは、六個までの炭素原子を有する。一つの実施形態において、これらの基のそれぞれは、アルキル、アリール、アラルキルおよびアルコキシアルキルから独立に選択される。
【００３２】
一つの実施形態において、Ｘ１はＯＲ１であり、そして、Ｘ２およびＸ３のそれぞれは、水素である。別の実施形態において、Ｙは、メチレン（−ＣＨ２−）またはエチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）である。
【００３３】
（Ｂ．調製）
構造Ｉの化合物は、トリプトリドから調製され得、トリプトリドは、中国の薬草Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ  ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ（ＴＷ）の根の木部または他の公知の供給源から入手され得る。ＴＷ植物は、福建省および中国の他の南部の省で見られる；ＴＷ植物材料は、一般に中国で入手され得るかまたは米国の商業的供給源を介して入手され得る。トリプトリドおよびその誘導体のいくつか（例えば、トリプジオリドおよび１６−ヒドロキシトリプトリド）を調製する方法は、当該分野で公知であり、例えば、Ｋｕｐｃｈａｎら（１９７２、１９７７）；Ｌｉｐｓｋｙら（１９９４）；Ｐｕら（１９９０）およびＭａら（１９９２）に記載される。
【００３４】
トリプトリドまたはその誘導体のヒドロキシル基は、実施例１（一般的手順Ａ）、５および６に示されるように、適切に置換されたイソシアネートとの反応によって、または実施例２（一般的手順Ｂ）および７に示されるように、ホスゲンおよび適切に置換されたアミンとの反応によって構造Ｉのカルバメートに変換され得る。
【００３５】
同様に、トリプトリドまたはその誘導体のヒドロキシル基は、実施例３（一般的手順Ｃ）、８および９に示されるように、適切に置換されたクロロホルメートとの反応によって、または実施例４（一般的手順Ｄ）、１０〜１３および１５に示されるように、ホスゲンおよび適切に置換されたアルコールとの反応によって構造Ｉのカーボネートに変換され得る。実施例７および１１〜１５に示されるように、カーボネートまたはカルバメートのアルキル基にさらなる官能基が組み入れられ得る。金属塩およびアミン塩は、適切な対イオンとの反応または交換によって、容易に調製され得る（実施例１４、１６、１７）。
【００３６】
出発物質の全ての利用可能なヒドロキシル基が誘導体化される場合、反応の完了を促進するために、過剰の試薬が使用され得る。化合物１６−ヒドロキシトリプトリドは、二つの遊離ヒドロキシル基を含み、一つは、第二級（Ｃ−１４）であり、一つは、第一級（Ｃ−１６）である。１６位のヒドロキシル基は、立体構造上の理由から１４−ヒドロキシル基より反応性であるので、モノエステル誘導体およびジエステル誘導体が、適切な反応条件を使用して、選択的に作製され得る。化学量論的な量の選択された試薬との反応は、１４ヒドロキシル基が遊離したままで、主に、１６位がモノ誘導体化された化合物を産生する。より妨害された（第二級）ヒドロキシル基で置換されたモノ誘導体は、妨害されていない（第一級）ヒドロキシル基をまず選択的に保護し、非保護位で誘導体化を行い、次いで、保護基を取り除くことにより調製され得る。適切なヒドロキシル保護基は、周知であり、例えば、Ｋｏｃｉｅｎｓｋｉ（１９９４）によって記載される。
【００３７】
上記のようにおよび実施例中に記載されたように調製された本発明の種々の化合物は、以下の表に表される。全てのトリプトリドの１４ヒドロキシルが、カーボネートまたはカルバメート置換基で置換されている。参照エステル置換化合物ＰＣ４９０−８８およびＰＧ６６１もまた、含まれ、本明細書中でＰＧ４９０と呼ばれる親化合物もまた含まれる。
【００３８】
（表１．例示的なカルバメート置換トリプトリド誘導体およびカーボネート置換トリプトリド誘導体）
【００３９】
【表１】
2005528442.tif 000007
【００４０】
（ＩＩＩ．プロドラッグ変換およびアポトーシス誘導活性）
（Ａ．変換アッセイ）
式Ｉの化合物は、以下に示すように、種々のおよび時々大きく変化する親化合物への変換速度の利点を提供する。従って、式Ｉのプロドラッグは、カーボネート結合またはカルバメート結合によってトリプトリドに結合した種々の構造的構成要素を選択することによって、ヒト血清／血漿中で異なる所望の変換速度を選択され得る。
【００４１】
式Ｉの化合物は、上の表１および実施例に示されるように、３７℃で、プールされたヒト血清と種々の時間インキュベートした後、ジャーカットヒトＴリンパ球細胞株由来の細胞中でアポトーシスを誘導する性能について、アッセイされた（実施例１９を参照のこと）。ＰＧ４９０−８８と呼ばれるエステルプロドラッグであるトリプトリド−１４−スクシネートは、比較のために、含まれた。このようなインキュベートの後、トリプトリドへの変換の程度もまた、ＨＰＬＣ分析により、独立に決定された。
【００４２】
アポトーシスアッセイの結果を、表２に示す。ＥＤ５０値（列３）は、各実験のデータから直接計算され、％変換値（列４）は、同一の血漿中でインキュベートされた（すなわち、同一の実験で）ＰＧ４９０と呼ばれるトリプトリドにより産生されたＥＤ５０値の百分率として計算される。この手順は、同一の実験条件下でのトリプトリドに対する各化合物の最も妥当な直接比較を示す。
【００４３】
各インキュベーション時間の変換百分率の比較は、化合物間で、広範囲の値を示す。変換百分率は、１時間後、７％（ＰＧ６８１；１４−（Ｒ）−α−メチル−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメチルカーボネート）〜９８％（ＰＧ６７４；１４−エチルカーボネート）まで変動し、４８時間後、６％（ＰＧ６８７トリス；１４−ヒドロキシカルボニルメチルカーボネート、トリス塩）〜１００％（ＰＧ６７４、ＰＧ６９５；１４−ｔｅｒｔ−ブチルカーボネート）またはそれより大きい値（ＰＧ６８２；１４−ジメチルアミノエチルカーボネート、ＰＧ４９０と比較して、＞１００％と計算された）まで変動する。
【００４４】
【表２】
2005528442.tif 000008
【００４５】
ＨＰＬＣによって、独立に決定されたプロドラッグのトリプトリドへの変換は、列４に示される。バイオアッセイデータと同様に、トリプトリドへの変換に対するｔ１／２値の比較は、化合物間で幅広い範囲の値を示す。ｔ１／２値は、９分（ＰＧ６８０；１４−メトキシカルボニルメチルカーボネート）、１１分（ＰＧ６７９；１４−エトキシエチルカーボネート）および１２分（ＰＧ６７４；１４−エチルカーボネート）から４８時間のインキュベーション（ＰＧ６８７Ｎａ；１４−ヒドロキシカルボニルメチルカーボネート、ナトリウム塩）中の不完全な変換（１０％）までに及ぶ。ＰＧ６８１（１４−（Ｒ）−α−メチル−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメチルカーボネート）は、バイオアッセイ中で最も低い変換百分率（７％）を示し、ＨＰＬＣによるアッセイにより、４８時間で不完全に（２０％）変換する。ＰＧ６８７（１４−ヒドロキシカルボニルメチルカーボネート）は、アポトーシスアッセイで評価した場合、４８時間以内に、６％しか変換せず、そして、ＨＰＬＣによってアッセイされる場合、この時間範囲では、１０％しか変換しない。ＰＧ６７４（１４−エチルカーボネート）は、バイオアッセイにおいて、１時間以内に９８％変換し、４８時間以内に１００％変換し、そして、ＨＰＬＣ分析によって、１２分のｔ１／２値を示す。ＰＧ６８２（１４−ジメチルアミノエチルカーボネート）は、アポトーシス誘導において、＞１００％と計算される変換を示し、そして、ＨＰＬＣ評価によって１７分のｔ１／２値を示す。
【００４６】
生物学的に活性なアポトーシス誘導性化合物（おそらくトリプトリド）に対するヒト血清中のプロドラッグ変換の結果およびヒト血漿中の変換とＨＰＬＣによって評価されるトリプトリドへのプロドラッグ変換のｔ１／２として、分単位で表現される結果との間の整合性の大きな目安がある。変換が、アポトーシス誘導バイオアッセイ中で評価されても、またはＨＰＬＣによるトリプトリドの同定および定量化により評価されても、プロドラッグの変換に対する広範囲の値がある。ヒト血清または血漿におけるこの広範囲の変換の値は、式Ｉの化合物が、これらの環境下では、同様の変換速度を共有しないことを示唆している。これらのトリプトリドプロドラッグからトリプトリドへの変換速度の、この予期されない違いは、種々のおよび大きく異なる変換速度が、本明細書に記載されたように種々に置換されたプロドラッグを作製することによって達成し得ることを示している。
【００４７】
一般に、本発明のカルバメート誘導体は、分類として、カーボネート誘導体より、ヒト血清中で容易に変換されないことが見出された。以下にさらに考察するように、ヒトエステラーゼおよびプロテアーゼによる加水分解に対して耐性である誘導体は、酵素プロドラッグ治療に関する抗体に有用であり得る。
【００４８】
（Ｂ．用量反応データ）
トリプトリド（ＰＧ４９０）、その１４−スクシニルエステル（ＰＧ４９０−８８）およびその１４−グルタミルエステル（ＰＧ６６１）と比較した本発明の化合物ＰＧ６６６（１４−エチルカルバメート）によるアポトーシス誘導に関する用量反応データは、表３に示される。用量反応データはまた、図１にグラフを用いて表される。
【００４９】
（表３．ヒト血清存在下でのトリプトリドエステルおよびカルバメートＰＧ６６６によるアポトーシスの誘導）
【００５０】
【表３】
2005528442.tif 000009
【００５１】
トリプトリド（ＰＧ４９０）、その１４−スクシニルエステル（ＰＧ４９０−８８）およびその１４−グルタミルエステル（ＰＧ６６１）と比較して、本発明の化合物ＰＧ６６６（１４−エチルカルバメート）、ＰＧ６７１（１４−フェニルカルバメート）およびＰＧ６７２（Ｎ−メチルピペラジンカルボニル）（カルバメート）によるアポトーシス誘導に対する用量反応データは、表４に表される。用量反応データはまた、図２にグラフを用いて表される（いくつかのアッセイは、通常観察されるより高い明白なバックグラウンドアポトーシスを表し、それは、この実験に対して分離した人為的結果であると考えられる）。
【００５２】
（表４．ヒト血清存在下でのトリプトリドエステルおよびカルバメートによるアポトーシスの誘導）
【００５３】
【表４】
2005528442.tif 000010
【００５４】
トリプトリド（ＰＧ４９０）およびその１４−スクシニルエステル（ＰＧ４９０−８８）と比較した本発明の化合物ＰＧ６６６（１４−エチルカルバメート）およびＰＧ６８８（１４−ジメチルアミノエチルカルバメート）によるアポトーシスの誘導についての用量反応データは、表５に示される。用量反応データはまた、図３にグラフを用いて表される。
【００５５】
（表５．ヒト血清存在下でのトリプトリドエステルおよびカルバメートによるアポトーシスの誘導（４８時間））
【００５６】
【表５】
2005528442.tif 000011
【００５７】
これらの化合物に対する用量反応データの検討は、ヒト血清中での４８時間のインキュベーション後、ＰＧ６６６（１４−エチルカルバメート）が、ＰＧ６８８（４−ジメチルアミノエチルカルバメート）およびＰＧ６７１（１４−フェニルカルバメート）より活性であることを示している。ＰＧ６６６は、およそ１０倍高い濃度で、ＰＧ４９０（トリプトリド）と等しいアポトーシス活性を示す。イソグルタミルエステル（ＰＧ６６１）が、本質的に活性を示さなかった（図１〜２）のに対して、Ｎ−メチルピペラジンカルバメート（ＰＧ６７２）は、高い濃度で活性を示した（図２）。
【００５８】
（ＩＩＩ．抗癌処置）
トリプトリドプロドラッグは、インビボの癌処置において効果を示した。例えば、共有に係るＰＣＴ公開番号ＷＯ０２／５６８３５（これは、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。この文献は、ＨＴ−２９ヒト結腸癌細胞株の腫瘍異種移植片を用いた研究において、５−ＦＵおよびＣＰＴ−１１と比較して、トリプトリドプロドラッグの高い効力を記載する。トリプトリドプロドラッグ（トリプトリドの１４−スクシネート誘導体）は、５−ＦＵおよびＣＰＴ−１１より有意に大きい程度まで腫瘍の増殖を強く阻害し、そして、腫瘍の退行を誘導した。
【００５９】
従って、本発明は、本明細書に記載された癌を処置するための組成物の使用を含む。この癌は、生殖組織（例えば、セルトリ細胞、生殖細胞、発生途上のまたはより成熟した精原細胞、精子細胞または精母細胞および栄養細胞、生殖細胞および卵巣の他の細胞）、リンパ系または免疫系（例えば、ホジキン病および非ホジキンリンパ腫）、造血系および上皮（例えば、皮膚および胃腸管）、中実器官、神経系および筋骨格組織に由来する細胞に関する癌を含む。トリプトリドプロドラッグは、種々の癌細胞型（それらとしては、乳房、結腸、小細胞肺、大細胞肺、前立腺、悪性黒色腫、肝臓、腎臓、膵臓、食道、胃、卵巣、子宮頸部またはリンパ腫の腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない）の処置に使用され得る。乳房、結腸、肺および前立腺の腫瘍の処置は、特に企図される。白血病の処置もまた、企図される。組成物は、上に考察したように、従来的な任意の投与経路によって、癌および／または白血病に苦しむ患者に投与され得る。
【００６０】
その方法は、完全な消失の程度まで、腫瘍の増殖を遅延させる、腫瘍の増殖を防止する、腫瘍の部分的な退行を誘導するおよび腫瘍の完全な退行を誘導するために有用である。その方法はまた、固形腫瘍由来の転移の成長を防止するのに有用である。
【００６１】
式Ｉの組成物は、単独の治療として、または被験者に抗癌効果を有するように設計されていない他の対症的もしくは治療的な処置とともに投与され得る。その方法はまた、一つ以上の従来的な抗癌薬物または生物タンパク質薬剤と組み合わせた式Ｉの化合物の投与を含み、ここで、薬物または薬剤のその量は、それだけでは癌の増殖の適切な抑制を誘導するには効果がないが、被験体中で所望の抗癌効果を有するのに効果的な量である。このような抗癌薬剤としては、アクチノマイシンＤ、カンプトセシン、カルボプラチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シトシンアラビノシド、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エトポシド、フルダラビン、５−フルオロウラシル、ヒドロキシウレア、ゲムシタビン、イリノテカン、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、パクリタキセル、タキソテール、テニポシド、トポテカン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビンが挙げられる。抗癌生物タンパク質薬剤としては、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、他のＴＮＦ関連またはＴＲＡＩＬ関連リガンドおよび因子、インターフェロン、インターロイキン２、他のインターロイキン、他のサイトカイン、ケモカインおよび腫瘍関連分子またはレセプターに対する因子、抗体（例えば、抗ＨＥＲ２抗体）およびこれらの薬剤と反応するかまたは結合するかする薬剤（例えば、レセプターのＴＮＦスーパーファミリーのメンバー、他のレセプター、レセプターアンタゴニストおよびこれらの薬剤に対する特異性を有する抗体）が挙げられる。
【００６２】
（ＩＶ．プロドラッグ変換およびサイトカイン阻害活性）
（Ａ．変換アッセイ）
上に考察したように、化学式Ｉの化合物は、種々の利点および時には、大きく変化する親化合物への変換速度を提供する。従って、式Ｉのプロドラッグは、トリプトリドにカーボネート結合またはカルバメート結合によって結合した種々の構造の構成要素を選択することによって、ヒト血清／血漿中で種々の変換速度に関して、選択され得る。
【００６３】
式Ｉのいくつかの化合物を、３７℃で４８時間プールしたヒト血清とともにインキュベートした後、ジャーカットヒトＴリンパ球細胞中でＩＬ−２の生成を阻害する能力について、分析した（実施例２０を参照のこと）。比較のために、ＰＧ４９０−８８と呼ばれるエステルプロドラッグであるトリプトリド−１４−スクシネートが、含まれた。
【００６４】
免疫抑制アッセイの結果は、表６に示されている。ＩＣ５０値（列１）は、各実験のデータから直接計算される。％変換値（列２）は、同一の血漿中でインキュベートされた（すなわち、同一の実験で）ＰＧ４９０と呼ばれるトリプトリドにより産生されたＩＣ５０値の百分率として計算される。
【００６５】
（表６）
【００６６】
【表６】
2005528442.tif 000012
【００６７】
再び、ＩＬ−２阻害アッセイ中で評価された、プロドラッグの変換に対する広範囲の値が示される。ヒト血清または血漿におけるこの広範囲の変換値は、式Ｉの化合物が、これらの環境下では、同様の変換速度を共有しないことを示している。これらのトリプトリドプロドラッグからトリプトリドへの変換速度の、この予期されない違いは、種々のおよび大きく異なる変換速度が、本明細書に記載されたように種々に置換されたプロドラッグを作製することによって達成され得ることを示している。
【００６８】
（Ｂ．用量反応データ）
トリプトリド（ＰＧ４９０）およびその１４−スクシニルエステル（ＰＧ４９０−８８）と比較した本発明の化合物ＰＧ６６６（１４−エチルカルバメート）およびＰＧ６８８（１４−ジメチルアミノエチルカルバメート）によるＩＬ−２阻害に関する用量反応データは、表７に表されている。用量反応データはまた、図４にグラフを用いて表される。
【００６９】
（表７．ジャーカット細胞におけるＩＬ−２生成の阻害（４８時間））
【００７０】
【表７】
2005528442.tif 000013
【００７１】
トリプトリド（ＰＧ４９０）、その１４−スクシニルエステル（ＰＧ４９０−８８）およびそのイソグルタミルエステル（ＰＧ６６１）と比較した本発明の化合物ＰＧ６６６（１４−エチルカルバメート）、ＰＧ６７１（１４−フェニルカルバメート）およびＰＧ６７２（１４−Ｎ−メチルピペラジンカルボニル）（カルバメート）によるＩＬ−２阻害に関する用量反応データは、表８に表されている。用量反応データはまた、図５にグラフを用いて表される。
【００７２】
（表８．ジャーカット細胞におけるＩＬ−２生成の阻害）
【００７３】
【表８】
2005528442.tif 000014
【００７４】
いくつかの本発明の化合物（ＰＧ６６６、１４−エチルカルバメート；ＰＧ６８８、４−ジメチルアミノエチルカルバメート；ＰＧ６７１、１４−フェニルカルバメート；およびＰＧ６７２、Ｎ−メチルピペラジンカルバメート）は、これらのアッセイにおいて、ある程度のレベルの生物活性を示した（図４〜５）。さらに、イソグルタミルエステル（ＰＧ６６１）は、少ししか活性を示さないか全く活性を示さなかった（図５）。ＰＧ６６６（１４−エチルカルバメート）は、ＰＧ４９０の活性濃度の約１０〜３０倍で、ＰＧ４９０（トリプトリド）と等しいＩＬ−２阻害活性を示した。
【００７５】
（Ｖ．免疫調節処置および抗炎症処置）
式Ｉの化合物を含む薬学的組成物（それは、トリプトリドのプロドラッグである）は、トリプトリドが有効であるとわかっている他の適用（例えば、自己免疫疾患の処置などの場合の免疫抑制治療、移植拒絶の予防または対宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）の防止）において、有用である。
【００７６】
その方法は、不適合ヒトドナー由来の固形器官移植片、組織移植片または細胞移植片の拒絶を阻害するのに有用であり、従って、移植片の生存および機能を延長し、そして、レシピエントの生存も延長する。この使用としては、固形器官移植片（例えば、心臓、腎臓および肝臓）組織移植片（例えば、皮膚、腸、膵臓、生殖腺、骨および軟骨）および細胞移植片（例えば、膵臓、脳および神経組織、筋肉、皮膚、骨、軟骨および肝臓由来の細胞）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７７】
その方法はまた、組織中で天然であろうとヒト遺伝子、ＲＮＡ，タンパク質、ペプチドまたは他の非天然異種遺伝子分子を発現するように生物工学処理されていよう（遺伝子的に操作されている）と、または動物の天然遺伝子、ＲＮＡ、タンパク質、ペプチドもしくは他の通常は発現する分子の発現を欠くように生物工学処理されていようと、異種移植（種間）拒絶の阻害；すなわち、非ヒト動物からの固形器官移植片、組織移植片または細胞移植物の拒絶反応の防止に対して有用である。本発明はまた、非ヒト動物由来のこのような固形器官移植物、組織移植片または細胞移植物の生存を延長するための上に記載した組成物の使用を含む。
【００７８】
別の局面では、本発明は、適合したかまたは適合していない骨髄、脾臓細胞、胎児組織、臍帯血または移植したかもしくは収集した幹細胞のレシピエントへの移植から生じる対宿主性移植片病の処置または防止の方法を含む。その用量は、好ましくは、０．２５〜２ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲内であり、好ましくは０．５〜１ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内で経口によりまたは非経口により与えられる。
【００７９】
自己免疫疾患または自己免疫症状を有する疾患（例えば、アジソン病、自己免疫溶血性貧血、自己免疫甲状腺炎、クローン病、糖尿病（Ｉ型）、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ループス腎炎、多発性硬化症、重症筋無力症、乾癬、原発性胆汁性肝硬変、リウマチ様関節炎およびブドウ膜炎、喘息、アテローム性動脈硬化、Ｉ型糖尿病、乾癬および種々のアレルギー）の処置の方法もまた、含まれる。自己免疫状態の処置において、患者は、その組成物を定期的に（例えば、１週間あたり１〜２回）、症状を軽減するためおよび患者の心地よさを改善するために十分な投薬量で与えられる。特に、慢性関節リウマチの処置については、その組成物は静脈内注射によるかまたは病気に冒された関節に直接注射することにより投与され得る。その患者は、患者における疾患の症状の開始後、数週間の期間にわたって、少なくとも２４時間の間隔をあけて繰り返し処置され得る。
【００８０】
インビボにおける化合物の免疫抑制活性は、当該分で公知の確立された動物モデルを使用することにより評価され得る。このようなアッセイは、免疫抑制化合物の相対的な効果を評価するために使用され得、免疫抑制処置に対する適切な投薬量を推定するために使用され得る。例えば、これらのアッセイとしては、ＯｎｏおよびＬｉｎｄｓｅｙ（１９６９）により記載される、よく特徴付けられた同種移植に対するラットモデル系が挙げられるが、この中では、移植された心臓が、異種レシピエント動物の腹部の大血管に付着し、移植された心臓の生存度が、心臓のレシピエント動物の中で拍動する性能により測定されている。レシピエント動物が異なる種の動物である異種移植モデルは、Ｗａｎｇ（１９９１）およびＭｕｒａｓｅ（１９９３）により記載されている。ＧＶＨＤに対する効果を評価するためのモデルとしては、正常なＦ１マウスへの親の脾臓細胞の注入が挙げられる；このマウスは、脾腫および免疫抑制により特徴付けられるＧＶＨＤ症候群を発現する（Ｋｏｒｎｇｏｌｄ、１９７８；Ｇｌｅｉｃｈｍａｎｎ、１９８４）。単一細胞の懸濁液は、個々の脾臓から調製され、そして、分裂促進的な反応の程度を評価するためにコンカナバリンＡの存在下および非存在下で、マイクロウェル培養が確立される。
【００８１】
移植拒絶における治療のために、その方法は特に、心臓、腎臓、肝臓、細胞および骨髄の移植片の拒絶の処置を特に意図され、ＧＶＨＤの処置にも使用され得る。その処置は、急性移植拒絶反応の処置のために、代表的には、手術に際して開始され、外科的移植手順のすぐ前かすぐ後かのいずれかであり、少なくとも数週間の期間、毎日の投与計画を継続される。処置の期間の間、その患者は、定期的に免疫抑制レベルを、例えば、異質遺伝子間リンパ球に関連する混合したリンパ球反応によってか、または移植された組織の生検を取ることによってかで、試験され得る。
【００８２】
さらに、その組成物は、移植片拒絶反応を防止するために慢性的に、または後の移植片拒絶の急性の発症の処置において投与され得る。上記のように、投与される用量は、一日あたり好ましくは１〜２５ｍｇ／ｋｇ患者体重であり、より低い量は、非経口投与に好ましく、より高い量は経口投与に好ましい。その用量は、患者の反応および処置の期間、患者の感染に抵抗する能力に依存して、適切に増加することも減少することもできる。
【００８３】
その化合物はまた、上で考察した免疫抑制処置のために、別の免疫抑制薬剤とともに同時に投与される場合、増強剤として有用である。従って、従来的な免疫抑制剤（例えば、サイクロスポリンＡ、ＦＫ５０６、アザチオプリン、ラパマイシン、マイコフェノール酸またはグルココルチコイド）は、その化合物が単独で投与される場合よりかなり少ない量（例えば、標準用量の２０％〜５０％）で投与され得る。あるいは、そのトリプトリドアナログおよび免疫抑制剤は、生じる免疫抑制が、単独で使用されたその薬物およびトリプトリドアナログから得た効果の合計から予想されるかまたは得られるものより大きくなるような量で投与される。代表的には、免疫抑制剤および増強剤は、通常の間隔で、少なくとも２週間の期間にわたって投与される。
【００８４】
式Ｉの組成物はまた、炎症状態（例えば、喘息、内因性および外因性の両方の症状）の処置に有用である。喘息の処置に関しては、その組成物は好ましくは、吸入により投与されるが、任意の従来的な投与経路も、有用であり得る。その組成物および方法はまた、他の炎症状態（外傷性炎症、ライム病、乾癬、慢性気管支炎（慢性感染性肺疾患）、慢性副鼻腔炎、肺血症関連急性呼吸窮迫症候群、ベーチェット病、肺型サルコイドーシス、天疱瘡、類天疱瘡炎症腸疾患および潰瘍性大腸炎における炎症を含む）の処置に対して使用され得る。トリプトリドおよび本発明のアナログはまた、雄の妊性の減少において有用である。
【００８５】
式Ｉの組成物はまた、従来的な抗炎症剤または複数の抗炎症剤と組み合わせて投与され得、ここで、その薬物または投与された薬物の量は、炎症の抑制または阻害を適切に誘導するには、単独では効果がない。
【００８６】
投与される用量は、一日あたり、１〜２５ｍｇ／ｋｇ患者体重の範囲が好ましく、非経口投与についてはより低い量が好ましく、経口投与についてはより高い量が好ましい。最適投薬量は、当該分野で公知の方法に従った慣用的な実験によって決定され得る。
【００８７】
（ＶＩ．抗体結合酵素の基質としてのトリプトリドのプロドラッグ）
ヒトエステラーゼおよびプロテアーゼによる加水分解に耐性であるトリプトリド誘導体は、抗体特異的酵素プロドラッグ治療において好都合に使用され得る。この方法論では、抗腫瘍抗体は、適切な酵素（例えば、カルボキシペプチダーゼＧ２）に結合化され、正常な組織からは除去されるのに対して、腫瘍への局在が可能になる。非毒性プロドラッグは次いで、送達され、腫瘍部位で酵素により特異的に活性化され、毒性薬剤になる（例えば、Ｂａｇｓｈａｗｅ  １９８７、１９８９、１９９３；Ｂａｇｓｈａｗｅら  １９８８を参照のこと）。
【００８８】
酸素−カルボニル−窒素部分を加水分解する酵素は、あまり容易には変換されない本発明のカルバメート（例えば、ＰＧ６７１、ＰＧ６７２、ＰＧ６８８）を変換するために使用され得る。カルバメートエステル結合を加水分解し得る抗体結合化酵素は公知である；例えば、Ｗｅｎｔｗｏｒｔｈら、１９９６を参照のこと。従って、上記のトリプトリドのカルバメートは、毒性が顕著に低く、抗体結合化酵素の存在下では、腫瘍部位で遊離するプロドラッグとして有用であり得る。
【００８９】
（ＶＩＩ．治療組成物）
式Ｉのトリプトリドアナログを含む処方物は、固体、半固体、凍結乾燥粉末もしくは液体投薬量形態（例えば、錠剤、カプセル、粉末、徐放性処方物、溶液、懸濁液、エマルション、軟膏、ローションまたはエアゾール）の形態を取り得、好ましくは、正確な投薬量の単一投与に適した単位投薬量形態であり得る。その組成物は、代表的には、従来的な薬学的キャリアまたは賦形剤を含み、さらに他の薬剤、キャリアまたはアジュバントを含み得る。好ましくは、その組成物は、式Ｉの化合物の約０．５〜７５重量％であり得、残りは適切な薬学的賦形剤からなる。経口投与については、このような賦形剤としては、薬学的等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、滑石粉、セルロース、グルコース、ゼラチン、スクロース、炭酸マグネシウムなどが挙げられる。所望の場合、その組成物はまた、少量の非毒性補助物質（例えば、湿潤剤、乳化剤または緩衝液）を含み得る。
【００９０】
その組成物は、被験体に、経口、経皮的にまたは非経口で（例えば、静脈内、皮下、腹腔内または筋肉内注射により）投与され得る。経口用の液体調製物での使用に関しては、その組成物は、溶液、懸濁液、エマルションまたはシロップとして調製され得、液体形態か水中もしくは通常の生理食塩水への水和に適した乾燥形態のいずれかで供給される。非経口投与に関しては、注射し得る非経口投与のための組成物は、代表的には、適切な静脈内溶液（例えば、滅菌した生理食塩水溶液）中にトリプトリドアナログを含む。
【００９１】
液体組成物は、トリプトリドアナログ（約０．５％〜約２０％）および溶液または懸濁液をつくるためのキャリア中の任意の薬学的アジュバント（例えば、水性生理食塩水、水性デキストロース、グリセロールまたはエタノール）を溶解するか分散することにより調製され得る。式Ｉの化合物の高い水溶性は、これらの化合物を水溶液で投与する（例えば、腹腔内注射により）ために特に好都合にする。水溶液は好ましいが、式Ｉに従った組成物はまた、脂質（例えば、トリグリセリド、リン脂質またはポリエトキシ化ひまし油（例えば、「ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ  ＥＬＴＭ」）、リポソーム懸濁液または水性エマルション中での懸濁液として処方され得る。
【００９２】
その化合物はまた、好ましくは呼吸に適した大きさの固体または液体のいずれかのエアゾール粒子の形態で、吸入により投与され得る。このような粒子は、吸入の際に、口および喉頭を通過するのに十分小さく、そして気管支および肺胞に入る。一般に、約１〜１０ミクロンの大きさの範囲であり、好ましくはその大きさが約５ミクロンより小さい粒子が、呼吸に適している。吸入のための液体組成物は、水性キャリア（例えば、滅菌したピロゲンを含まない生理食塩水溶液または滅菌したピロゲンを含まない水）に分散した活性薬剤を含む。所望の場合、その組成物は、その組成物の噴射およびエアゾールの形成を補助するために噴射剤と混合され得る。
【００９３】
このような投薬量形態を調製する方法は、公知であるかまたは当業者には明らかである；例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１９版、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、１９９５）を参照のこと。投与され得るその組成物は、被験体の免疫抑制を達成するために、薬学的に効果的な量で、多くの選択された化合物を含む。
【実施例】
【００９４】
以下の実施例は、例示するが、決して本発明を限定することを意図しない。
【００９５】
（実施例１．イソシアネートとの反応によるトリプトリドカルバメートの調製（一般的手順Ａ））
【００９６】
【化５】
2005528442.tif 000015
【００９７】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、７．０ｍｌ）中のトリプトリド１（０．２０ｍｍｏｌ、１．０当量）およびイソシアネート（３．０ｍｍｏｌ、１５．０当量）の混合物を密閉し、５４℃の油浴中で攪拌しながら加熱する。反応をＴＬＣでモニタリングする。出発物質が完全に消費された後、反応混合物を減圧下で濃縮し、その後、粗生成物を分取ＴＬＣで精製する。
【００９８】
（実施例２．ホスゲンおよびアミンとの反応によるトリプトリドカルバメートの調製（一般的手順Ｂ））
【００９９】
【化６】
2005528442.tif 000016
【０１００】
１，４−ジオキサン（１５ｍｌ）中のトリプトリド１（０．３２５ｍｍｏｌ、１．０当量）および４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、０．０３７７ｍｍｏｌ、０．１２当量）の溶液に、攪拌しながら、ピリジン（１．０ｍｌ）およびホスゲン（トルエン中で約２０％、１．１９ｍｌ、２．２５ｍｍｏｌ、６．９２当量）を室温で、窒素下で添加する。室温で攪拌１時間後、反応混合物を減圧下で濃縮する。残留物に、ジクロロメタン（ＤＣＭ、１５．０ｍｌ）を添加し、次いでアミン（Ｒ６Ｒ７ＮＨ、１．０ｍｌ）を添加する。室温で攪拌１０分後、反応混合物を減圧下で濃縮し、粗生成物を分取ＴＬＣで精製する。
【０１０１】
（実施例３．クロロホルメートとの反応によるトリプトリドカーボネートの調製（一般的手順Ｃ））
【０１０２】
【化７】
2005528442.tif 000017
【０１０３】
ジクロロメタン（ＤＣＭ、１５ｍｌ）中のトリプトリド１（０．３３ｍｍｏｌ、１．０当量）および４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、３．９２ｍｍｏｌ、１１．９当量）の溶液に、攪拌しながらクロロホルメート（２．１５ｍｍｏｌ、６．５当量）を室温で、窒素下で添加する。室温で攪拌２４時間後、反応混合物を減圧下で濃縮し、粗生成物を分取ＴＬＣで精製する。
【０１０４】
（実施例４．ホスゲンおよびアルコールとの反応によるトリプトリドカーボネートの調製（一般的手順Ｄ））
【０１０５】
【化８】
2005528442.tif 000018
【０１０６】
１，４−ジオキサン（１５ｍｌ）中のトリプトリド１（０．３０ｍｍｏｌ、１．０当量）および４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、３．６０ｍｍｏｌ、１２．０当量）の溶液に、攪拌しながらホスゲン（トルエン中で約２０％、０．７９ｍｌ、１．５０ｍｍｏｌ、５．０当量）を室温で、窒素下で添加する。室温で攪拌１時間後、反応混合物を減圧下で濃縮する。残留物に、ジクロロメタン（ＤＣＭ、１５ｍｌ）を添加し、次いでアルコール（Ｒ２ＯＨ、１．０ｍｌ）を添加する。室温で一晩攪拌後、反応混合物を減圧下で濃縮し、粗生成物を分取ＴＬＣで精製する。
【０１０７】
（実施例５．トリプトリド  １４−エチルカルバメート（ＰＧ６６６）の合成）
【０１０８】
【化９】
2005528442.tif 000019
【０１０９】
一般的手順Ａを使用して、エチルイソシアネートおよびトリプトリドから生成物を９８．５％の収率で得た。分析用ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．４４（酢酸エチル／ヘキサン／メタノール  １：１：０．１）。
【０１１０】
【数２】
2005528442.tif 000020
【０１１１】
（実施例６：トリプトリド  １４−フェニルカルバメート（ＰＧ６７１）の合成）
【０１１２】
【化１０】
2005528442.tif 000021
【０１１３】
一般的手順Ａを使用して、フェニルイソシアネートおよびトリプトリドから生成物を８７．０％の収率で得た。分析用ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．５１（酢酸エチル／ヘキサン／メタノール  １：１：０．１）。
【０１１４】
【数３】
2005528442.tif 000022
【０１１５】
（実施例７：トリプトリド  １４−ジメチルアミノエチルカルバメート（ＰＧ６８８）の合成）
【０１１６】
【化１１】
2005528442.tif 000023
【０１１７】
一般的手順Ｂを使用して、トリプトリド、ホスゲンおよびＮ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミンから生成物を７９．９％の収率で得た。分析用ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．４５（酢酸エチル／ヘキサン／メタノール／トリエチルアミン  １．２：０．８：０．２：０．１）。
【０１１８】
【数４】
2005528442.tif 000024
【０１１９】
（実施例８：トリプトリド  １４−エチルカーボネート（ＰＧ６７４）の合成）
【０１２０】
【化１２】
2005528442.tif 000025
【０１２１】
一般的手順Ｃを使用して、エチルクロロホルメートおよびトリプトリドから生成物を８９．６％の収率で得た。分析用ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．５８（酢酸エチル／ヘキサン／メタノール  １：１：０．１）。
【０１２２】
【数５】
2005528442.tif 000026
【０１２３】
（実施例９：トリプトリド  １４−フェニルカーボネート（ＰＧ６７６）の合成）
【０１２４】
【化１３】
2005528442.tif 000027
【０１２５】
一般的手順Ｃを使用して、フェニルクロロホルメートおよびトリプトリドから生成物を７８．８％の収率で得た。分析用ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．５３（酢酸エチル／ヘキサン／メタノール  １：１：０．１）。
【０１２６】
【数６】
2005528442.tif 000028
【０１２７】
（実施例１０：トリプトリド  １４−エトキシエチルカーボネート（ＰＧ６７９）の合成）
【０１２８】
【化１４】
2005528442.tif 000029
【０１２９】
一般的手順Ｄを使用して、トリプトリド、ホスゲンおよびエトキシエタノールから生成物を９０．２％の収率で得た。分析用ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．４９（酢酸エチル／ヘキサン／メタノール  １：１：０．１）。
【０１３０】
【数７】
2005528442.tif 000030
【０１３１】
（実施例１１：トリプトリド  １４−（Ｒ）−α−メチル−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメチルカーボネート（ＰＧ６８１）の合成）
【０１３２】
【化１５】
2005528442.tif 000031
【０１３３】
一般的手順Ｄを使用して、トリプトリド、ホスゲンおよびｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−（＋）−ラクテートから生成物を７６．２％の収率で得た。分析用ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．６２（酢酸エチル／ヘキサン／メタノール  １：１：０．１）。
【０１３４】
【数８】
2005528442.tif 000032
【０１３５】
（実施例１２：トリプトリド  １４−メトキシカルボニルメチルカーボネート（ＰＧ６８０）の合成）
【０１３６】
【化１６】
2005528442.tif 000033
【０１３７】
一般的手順Ｄを使用して、トリプトリド、ホスゲンおよびメチルグリコレートから生成物を８２．４％の収率で得た。分析用ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．４５（酢酸エチル：ヘキサン：メタノール  １：１：０．１）。
【０１３８】
【数９】
2005528442.tif 000034
【０１３９】
（実施例１３：トリプトリド  １４−ジメチルアミノエチルカーボネート（ＰＧ６８２）の合成）
【０１４０】
【化１７】
2005528442.tif 000035
【０１４１】
一般的手順Ｄを使用して、トリプトリド、ホスゲンおよびジメチルアミノエタノールから生成物を７１．２％の収率で得た。分析用ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．２４（酢酸エチル：ヘキサン：メタノール：トリエチルアミン  １：１：０．１：０．０２）。
【０１４２】
【数１０】
2005528442.tif 000036
【０１４３】
（実施例１４：トリプトリド  １４−ジメチルアミノエチルカーボネートのｐ−トルエンスルホン酸塩（ＰＧ６８２  ＰＴＳＡ）の合成）
【０１４４】
【化１８】
2005528442.tif 000037
【０１４５】
Ｈ２Ｏ（８．０ｍｌ）中のｐ−トルエンスルホン酸（１９．０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）の溶液に、攪拌しながら、トリプトリド  １４−ジメチルアミノエチルカーボネート（ＰＧ６８２）（４７．６ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）をゆっくり添加した。添加後、溶液をさらに３０分間攪拌し、次いで凍結乾燥し、６０．５ｍｇ（９３．４％）の白色粉末を得た。
【０１４６】
【数１１】
2005528442.tif 000038
【０１４７】
（実施例１５：トリプトリド  １４−ヒドロキシカルボニルメチルカーボネート（ＰＧ６８７）の合成）
【０１４８】
【化１９】
2005528442.tif 000039
【０１４９】
一般的手順Ｄを使用して、トリプトリド、ホスゲンおよびグリコール酸から生成物を４７．８％の収率で得た。分析用ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．３２（酢酸エチル：ヘキサン：メタノール：酢酸  １：１：０．１：０．１）。
【０１５０】
【数１２−１】
2005528442.tif 000040
【０１５１】
【数１２−２】
2005528442.tif 000041
【０１５２】
（実施例１６：トリプトリド  １４−ヒドロキシカルボニルメチルカーボネートのナトリウム塩（ＰＧ６８７  Ｎａ）の合成）
【０１５３】
【化２０】
2005528442.tif 000042
【０１５４】
Ｈ２Ｏ（３．９ｍｌ）中のＮａＨＣＯ３（５．１８ｍｇ、０．０６１６ｍｍｏｌ）の溶液に、攪拌しながら、トリプトリド  １４−ヒドロキシカルボニルメチルカーボネート（ＰＧ６８７）（２８．５ｍｇ、０．０６１６ｍｍｏｌ）をゆっくり添加した。添加後、溶液をさらに３０分間攪拌し、次いで凍結乾燥し、２９．７ｍｇ（９９．３％）の白色粉末を得た。
【０１５５】
【数１３】
2005528442.tif 000043
【０１５６】
（実施例１７：トリプトリド  １４−ヒドロキシカルボニル−メチルカーボネートのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩（ＰＧ６８７  トリス）の合成）
【０１５７】
【化２１】
2005528442.tif 000044
【０１５８】
トリプトリド  １４−ヒドロキシカルボニルメチルカーボネート（ＰＧ６８７）（８．３ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）の懸濁液に、攪拌しながら、Ｈ２Ｏ（０．７５ｍｌ）中のトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（２．１７ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。添加後、溶液をさらに３０分間攪拌し、次いで凍結乾燥した。粉末をＨ２Ｏ（２．０ｍｌ）中に溶解し、微粒子を除去するために、綿のパッドを通してろ過した。ろ液を次いで、凍結乾燥し、１０．１ｍｇ（９６．５％）の白色粉末を得た。
【０１５９】
【数１４−１】
2005528442.tif 000045
【０１６０】
【数１４−２】
2005528442.tif 000046
【０１６１】
（実施例１８：トリプトリド  １４−ｔｅｒｔ−ブチルカーボネート（ＰＧ６９５）の合成）
【０１６２】
【化２２】
2005528442.tif 000047
【０１６３】
ジクロロメタン（１５ｍｌ）中のトリプトリド（１０８．１ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ、１．０当量）および４−ＤＭＡＰ（３６７．０ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ、１０．０当量）の溶液に、室温で、窒素下で、攪拌しながら、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（３９３．０ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ、６．０当量）を添加した。室温で４８時間攪拌後、メチルアルコール（１．０ｍｌ）を添加した。反応混合物を減圧下で濃縮し、粗生成物を分取ＴＬＣ（酢酸エチル／ヘキサン／メタノール  １：１：０．１）を用いて精製し、１３１．３ｍｇ（９５．１％）の所望の生成物を得た。分析用ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．６６（酢酸エチル／ヘキサン／メタノール  １：１：０．１）。
【０１６４】
【数１５】
2005528442.tif 000048
【０１６５】
（実施例１９  アポトーシスアッセイ）
（Ａ．化合物のヒト血清とのインキュベーション）
プールしたヒト血清をアリコート中で、−８０℃で保存した。試験化合物を２０ｍＭで、１．５ｍｌの微小遠心管中の解凍したヒト血清に添加し、種々の時間、３７℃で水浴中で、インキュベートした。試験サンプルを、バイオアッセイのために希釈するまで、氷上に配置した。コントロールは、ヒト血清ではなくて、完全組織培養培地（５％加熱不活性化ウシ胎仔血清、１％ＨＥＰＥＳ、１％ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ、１％グルタミンを添加したＲＰＭＩ  １６４０倍地）でインキュベートした化合物からなった。
【０１６６】
（Ｂ．ヒト血清とインキュベートした化合物のアポトーシスアッセイ）
試験サンプルを完全組織培養培地中で、１ｍＭに希釈した。アリコートをミクロ培養プレートに配置し、最終濃度が対数で半分の区切りを有するように１〜１０，０００ｎＭの範囲を含むように、連続的な希釈物を調製した。指数関数的に増殖するジャーカットヒトＴリンパ球株（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡから入手した＃ＴＩＢ−１５２）の培養から細胞を回収し、遠心により一度洗浄し、完全組織培養培地中で希釈し、その後１×１０６細胞／ｍｌの濃度まで希釈した。１００μｌの体積のジャーカット細胞（１×１０５細胞）を、１００μｌの希釈した化合物を含むウェルに添加し、その後そのプレートを５％ＣＯ２インキュベーター中で３７℃でインキュベートした。２４時間後、細胞をペレットにするために、そのプレートを遠心し、その後その細胞を、ＰＢＳ中の２％加熱不活性化ウシ胎仔血清で２度洗浄した。各ウェルに、Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖアッセイ手順（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ，Ｉｎｃ．、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ）に従って、５００μｌの結合緩衝液を添加した。次に、５μｌのＡｎｎｅｘｉｎ  Ｖのフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）結合体（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ，Ｉｎｃ．）を各ウェルに添加し、続いて暗所で５分間インキュベートした。いくつかのアッセイにおいては、壊死細胞を調べるために、ヨウ化プロピジウム（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ，Ｉｎｃ．）をこの段階で添加した。ウェルの内容物を、個々に試験管に移し、その後ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（ＢＤ  Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）を使用して、アポトーシスを分析した。Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ結合に対して陽性の細胞は、アポトーシスであるとみなし、そのデータをアポトーシス細胞パーセントとして計算した。
【０１６７】
（Ｃ．ヒト血清中での化合物のインキュベーション後の生物活性の比較）
データを、血清中でインキュベートした化合物の濃度対アポトーシス細胞パーセントとしてプロットした。５０％アポトーシスを誘導する化合物の濃度（ＥＤ５０）を、これらの用量反応曲線から計算した。試験化合物の生物活性化合物（トリプトリドと考えられる）への変換パーセントを、同実験におけるヒト血漿中で平行してインキュベートしたトリプトリドでの結果を参照して、トリプトリドのＥＤ５０のパーセント（これを１００％として）と比較した化合物のＥＤ５０のパーセントとして計算した。ヒト血清中でインキュベートした後の種々の化合物の生物活性を比較するために、この変換パーセントを使用した。
【０１６８】
（実施例２０  免疫抑制アッセイ）
（Ａ．ヒト血清とインキュベートした化合物の活性に対するＩＬ−２生成アッセイ）
試験サンプルを、完全組織培養培地中に１ｍＭまで希釈した。アリコートを、抗ＣＤ３抗体（ジャーカット細胞によるＩＬ−２の生成を刺激するために使用した）で被覆したミクロ培養プレート中に配置し、最終濃度が対数の区切りを有するように０．００１〜１０，０００ｎＭの範囲を含むように、連続的な希釈物を調製した。指数関数的に増殖するジャーカットヒトＴリンパ球株（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡから入手した＃ＴＩＢ−１５２）の培養から細胞を回収し、遠心により一度洗浄し、完全組織培養培地中で希釈し、その後２×１０６細胞／ｍｌの濃度まで希釈した。５０μｌの体積のジャーカット細胞（１×１０５細胞）を、１００μｌの希釈した化合物を含むウェルに添加し、５０μｌのＰＭＡ（１０ｎｇ／ｍｌ）を各ウェルに添加し、その後そのプレートを５％ＣＯ２インキュベーター中で３７℃でインキュベートした。２４時間後、細胞をペレットにするために、そのプレートを遠心し、１５０μｌの上清を各ウェルから取り出し、そしてそのサンプルを、−２０℃で保存した。保存した上清を、Ｌｕｍｉｎｅｘ  １００（Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ａｕｓｔｉｎ、ＴＸ）、抗ＩＬ−２捕獲抗体と結合したＬｕｍｉｎｅｘ微粒子および蛍光色素結合抗ＩＬ−２検出抗体を使用して、ヒトＩＬ−２濃度について分析した。そのデータをＩＬ−２のｎｇ／ｍｌとして表した。
【０１６９】
（Ｂ．ヒト血清中での化合物のインキュベーション後の生物活性の比較）
データを、血清中でインキュベートした化合物の濃度対ＩＬ−２濃度としてプロットした。ＩＬ−２濃度における５０％減少を有する化合物の濃度（ＩＣ５０）を、これらの用量反応曲線から計算した。試験化合物の生物活性化合物（トリプトリドと考えられる）への変換パーセントを、同実験におけるヒト血漿中で平行してインキュベートしたトリプトリドでの結果を参照して、トリプトリドのＩＣ５０のパーセント（これを１００％として）と比較した化合物のＩＣ５０のパーセントとして計算した。ヒト血清中でインキュベートした後の種々の化合物の生物活性を比較するために、この変換パーセントを使用した。
【図面の簡単な説明】
【０１７０】
【図１】図１は、トリプトリド（ＰＧ４９０）、その１４−スクシニルエステル（ＰＧ４９０−８８）および１４−グルタミルエステル（ＰＧ６６１）と比較した、本発明の化合物ＰＧ６６６（１４−エチルカルバメート）によるアポトーシスの誘導を示すグラフである；表３も参照のこと。
【図２】図２は、トリプトリド（ＰＧ４９０）、その１４−スクシニルエステル（ＰＧ４９０−８８）およびその１４−グルタミルエステル（ＰＧ６６１）と比較した、本発明の化合物ＰＧ６６６（１４−エチルカルバメート）、ＰＧ６７１（１４−フェニルカルバメート）およびＰＧ６７２（Ｎ−メチルピペラジンカルボニル）（カルバメート）によるアポトーシスの誘導を示すグラフである；表４も参照のこと。
【図３】図３は、トリプトリド（ＰＧ４９０）およびその１４−スクシニルエステル（ＰＧ４９０−８８）と比較した、本発明の化合物ＰＧ６６６（１４−エチルカルバメート）およびＰＧ６８８（１４−ジメチルアミノエチルカルバメート）によるアポトーシスの誘導を示すグラフである；表５も参照のこと。
【図４】図４は、トリプトリド（ＰＧ４９０）およびその１４−スクシニルエステル（ＰＧ４９０−８８）と比較した、本発明の化合物ＰＧ６６６（１４−エチルカルバメート）およびＰＧ６８８（１４−ジメチルアミノエチルカルバメート）によるＩＬ−２阻害を示すグラフである；表７も参照のこと。
【図５】図５は、トリプトリド（ＰＧ４９０）、その１４−スクシニルエステル（ＰＧ４９０−８８）およびそのイソグルタミルエステル（ＰＧ６６１）と比較した、本発明の化合物ＰＧ６６６（１４−エチルカルバメート）、ＰＧ６７１（１４−フェニルカルバメート）およびＰＧ６７２（１４−Ｎ−メチルピペラジンカルボニル）（カルバメート）によるＩＬ−２阻害を示すグラフである；表８も参照のこと。
【図１】
2005528442.tif 000050
【図２】
2005528442.tif 000051
【図３】
2005528442.tif 000052
【図４】
2005528442.tif 000053
【図５】
2005528442.tif 000054
【手続補正書】
【提出日】平成16年12月1日(2004.12.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
トリプトリド（ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ）プロドラッグであって、該トリプトリドは、構造Ｉ：
【化１】
2005528442.tif 000055
を有し、ここで、
Ｘ１が、ＯＨまたはＯＲ１であって、Ｘ２およびＸ３が、独立にＯＨ、ＯＲ１またはＨであって、但し、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３のうちの少なくとも一つが、ＯＲ１であって、そして、Ｘ２およびＸ３のうちの少なくとも一つが、Ｈであって、そして、
ＯＲ１が、Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｚであって、ここで、Ｚが、以下：
−ＯＲ２、−Ｏ−Ｙ−（Ｃ＝Ｏ）−ＯＲ３、−Ｏ−Ｙ−ＮＲ４Ｒ５、−ＮＲ４Ｒ５、−ＮＲ３−Ｙ−（Ｃ＝Ｏ）−ＯＲ３および−ＮＲ３−Ｙ−ＮＲ４Ｎ５からなる群から選択され、
ここで、
Ｙが、六個までの炭素原子を有する二価アルキル基、二価アルケニル基または二価アルキニル基であって、
Ｒ２が、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、アラルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アリールオキシアルキルおよびアシルオキシアルキルから選択され、
各Ｒ３が、水素およびＲ２から独立に選択され、そして、
Ｒ４およびＲ５が、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、アラルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アリールオキシアルキルおよびアシルオキシアルキルから独立に選択され、またはＲ４およびＲ５が、一緒になって、５〜７員環の複素環を形成し、該複素環の環原子が、炭素、窒素、酸素および硫黄からなる群から選択され、ここで、該環原子が最大で三個のヘテロ原子を含む、
トリプトリドプロドラッグ。
【請求項２】
Ｘ２＝Ｘ３＝Ｈである、請求項１に記載のプロドラッグ。
【請求項３】
Ｙが、−ＣＨ２−または−ＣＨ２ＣＨ２−である、請求項２に記載のプロドラッグ。
【請求項４】
請求項２に記載のプロドラッグであって、ここで、ＯＲ１が、Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−ＯＲ２、Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ−（Ｃ＝Ｏ）−ＯＲ３およびＯ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｙ−ＮＲ４Ｒ５からなる群から選択される、プロドラッグ。
【請求項５】
請求項１に記載のプロドラッグであって、ここで、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５と定義される基のそれぞれが、アルキル、アルケニルおよびアルキニルから選択される場合、六個までの炭素原子を有し、シクロアルキルと定義される場合、３〜７個の炭素原子を有し、シクロアルケニルと定義される場合、５〜７個の炭素原子を有し、そしてアラルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アリールオキシアルキルおよびアシルオキシアルキルから選択される場合、六個までの炭素原子を有するアルキル構成要素を有する、プロドラッグ。
【請求項６】
請求項５に記載のプロドラッグであって、ここで、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５のそれぞれが、６個までの炭素原子を有するアルキル、アリール、アラルキルおよびアルコキシアルキルからなる群から独立に選択される、プロドラッグ。
【請求項７】
請求項２に記載のプロドラッグであって、ここで、ＯＲ１が、Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ４Ｒ５、Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ３−Ｙ−（Ｃ＝Ｏ）−ＯＲ３およびＯ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＲ３−Ｙ−ＮＲ４Ｎ５からなる群から選択される、プロドラッグ。
【請求項８】
請求項７に記載のプロドラッグであって、ここで、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５のそれぞれが、６個までの炭素原子を有するアルキル、アリール、アラルキルおよびアルコキシアルキルからなる群から独立に選択される、プロドラッグ。
【請求項９】
細胞死を誘導する方法に使用するための、請求項１に記載のプロドラッグであって、ここで、該方法が、このような処置の必要な被験体に、薬学的に受容可能なビヒクル中の有効量の前記トリプトリドプロドラッグまたは薬学的に受容可能なそれらの塩を投与する工程を包含する、方法である、プロドラッグ。
【請求項１０】
請求項９に記載のプロドラッグであって、ここで、前記処置が、結腸癌、乳癌、肺癌または前立腺癌の処置である、プロドラッグ。
【請求項１１】
免疫抑制を生じさせる方法に使用するための、請求項１で定義された構造Ｉを有するトリプトリドプロドラッグであって、ここで、該方法は、有効量の前記プロドラッグまたは薬学的に受容可能なこれらの塩を、薬学的に受容可能なビヒクル中で、このような処置を必要とする被験体に投与することを包含する、トリプトリドプロドラッグ。
【請求項１２】
請求項１１に記載のプロドラッグであって、ここで、前記免疫抑制が、移植片拒絶反応の阻害を包含する、プロドラッグ。
【請求項１３】
請求項１１に記載のプロドラッグであって、ここで、前記免疫抑制が、対宿主性移植片病の阻害を包含する、プロドラッグ。
【請求項１４】
請求項１１に記載のプロドラッグであって、ここで、前記免疫抑制が、自己免疫疾患の処置を包含する、プロドラッグ。
【国際調査報告】
2005528442.tif 000056
2005528442.tif 000057