(57)【要約】タンジンの総フェノール酸を調製する工程、およびこの産物の使用法を開示する。この工程は以下の段階を含む：タンジンを水で熱抽出する段階；ならびに、抽出物をポリアミドカラムおよび多孔質吸着樹脂カラムで分離精製して凍結乾燥して、タンジンの総フェノール酸を得る段階。最終産物の収率は、生薬量を元にすると4%を上回り、また総フェノール酸の量は80%を上回る。得られるタンジンの総フェノール酸は、脳血管疾患や心血管疾患などを予防および治療する薬剤として使用することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の段階を含む、総サルビアノール酸の調製法：
a. タンジンを水で抽出する段階；
b. タンジン抽出物を、分離用ポリアミドカラムにアプライする段階；
c. 上記段階で得られた画分を、さらなる分離用多孔質吸着樹脂カラムにアプライする段階。
【請求項２】
段階（a）が、抽出物を酸性化する段階および濾過する段階も含み；段階（b）が、濾液をポリアミドカラムにアプライする段階、カラムを水で洗浄して中性にする段階、洗浄液を捨てる段階、ポリアミドカラムを弱塩基性水溶液で溶出する段階、および画分を回収する段階を含み；段階（c）が、段階（b）の塩基性画分を多孔質吸着樹脂カラムにアプライする段階、画分を酸性化した後に、まずカラムを水で洗浄して中性にする段階、洗浄液を捨てる段階、およびその後カラムを含水または無水の低級アルコールで溶出する段階も含み；溶離液を回収し、アルコールが無くなるまで減圧下で濃縮して乾燥させる、請求項1記載の方法。
【請求項３】
段階（a）における水による加熱抽出を2回〜4回、各0.5時間〜2時間繰返し行う、請求項2記載の方法。
【請求項４】
段階（a）における水による抽出のための温度が60℃〜100℃である、請求項2記載の方法。
【請求項５】
段階（a）における水による抽出のための温度が90℃〜100℃である、請求項2記載の方法。
【請求項６】
段階（a）における抽出物を酸で調整してpH4以下にし、かつ段階（c）における塩基性画分を酸で酸性化してpH4以下にする、請求項2記載の方法。
【請求項７】
段階（a）における抽出物を酸で酸性化してpH2以下にし、かつ段階（c）における塩基性画分を塩酸または硫酸で酸性化してpH2以下にする、請求項2記載の方法。
【請求項８】
段階（b）において、0.01%〜2%の水性弱塩基性溶液を溶離液として用いる、請求項2記載の方法。
【請求項９】
段階（b）において、0.08%〜0.5%の炭酸水素ナトリウム水溶液を溶離液として用いる、請求項2記載の方法。
【請求項１０】
段階（c）における多孔質吸着樹脂がスチレン型である、請求項2記載の方法。
【請求項１１】
含水または無水の低級C1〜C5アルコールを、段階（c）における溶離液として用いる、請求項2記載の方法。
【請求項１２】
段階（c）において、濃度が40%〜95%のエタノール水溶液でカラムを溶出する、請求項2記載の方法。
【請求項１３】
低級C1〜C5アルコールまたはエタノール水溶液の濃度が60%〜95%である、請求項11または12記載の方法。
【請求項１４】
エタノール水溶液の濃度が95%である、請求項12記載の方法。
【請求項１５】
請求項1〜14のいずれか一項記載の方法で作製される、総サルビアノール酸。
【請求項１６】
以下の段階を含む方法で作製される、総サルビアノール酸：
タンジンを粗粉末に粉砕して、軽く沸騰した状態の100℃の水で3回抽出する段階（具体的には、1回目は水（5.5倍量）を加えて1時間かけて抽出し、2回目と3回目はそれぞれ水（3倍量）を加えて0.5時間かけて抽出する）；抽出物を混合し、10%塩酸で酸性化してpH2.0にする段階；抽出物を濾過して、濾液をポリアミドカラムにロードする段階；カラムを水（5倍量）で洗浄して中性にし、洗浄液を廃棄する段階；次に、カラムを0.1%炭酸水素ナトリウム水溶液で溶出する段階；画分を回収し、10%塩酸で酸性化してpH2.0にし、D101多孔質吸着樹脂カラムにロードする段階；カラムを水で洗浄して中性にし、洗浄液を廃棄する段階；次に、カラムを95%エタノールで溶出し、溶出時に色のついた部分を回収する段階；画分を減圧下で濃縮して完全に乾燥させる段階；得られた産物を水に溶解する段階；混合物を冷蔵庫内で一晩静置し、微小孔膜で濾過して総サルビアノール酸を抽出する段階；2%水酸化ナトリウムで総フェノール酸をpH6.0に調整したらすぐに凍結乾燥して、総サルビアノール酸の凍結乾燥粉末を得る段階。
【請求項１７】
総サルビアノール酸の含量が80%に等しいかこれを上回り、かつサルビアノール酸Bの含量が50%に等しいかこれを上回る、請求項15または16記載の総サルビアノール酸。
【請求項１８】
活性成分としての請求項15〜17のいずれか一項記載の総サルビアノール酸、および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む、薬学的組成物。
【請求項１９】
心血管および脳血管の疾患、ネフローゼ、肝障害、肺炎、心肺疾患、膵炎、糖尿病、頸部症候群、眼底の血管疾患、眼底の神経疾患、偏頭痛、慢性胃炎、めまい、整形外科疾患、高山病、ならびに老年痴呆などの治療用薬物の調製における、請求項15〜17のいずれか一項記載の総サルビアノール酸の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、漢方薬（Traditional Chinese Medicine；TCM）の抽出物に関する。特に本発明は、TCMであるタンジン（丹参）から抽出される精製総フェノール酸、およびこの抽出法に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
タンジンは、その植物名である「紫丹参（Radix Salvia Miltiorrhizae）」とも呼ばれ、中国で最も一般的に使用されている漢方薬（TCM）の1種である。タンジンは主に二種類の化学成分、すなわち水溶性成分と非水溶性成分からなる。20世紀初頭にさかのぼると、これらの成分に関する主な研究は、tashinoneに代表される非水溶性成分に常に焦点が当てられており、数十年間の研究を経て多くの成果が得られた。1980年代の初頭になり、多くの研究の後、研究者たちはようやくタンジンの水溶性成分の研究を開始し、水溶性成分のタンジンス（Danshensu）の構造を初めて報告した。その後、数十種類の水溶性成分が相次いで発見され、その個々の化学構造が明らかにされた。続いて、タンジンの水溶性成分の活性成分のなかでも最も有効な成分がサルビアノール（salvianoic）酸A（1）、B（2）、C（3）、D（4）、E（5）、F（8）、G（9）、H（11）、I（12）、J（13）、ロスマリン（rosmarinic）酸（6）、アルカニック（alkannic）酸（7）、イソサルビアノール酸C（10）、ロスマリン酸のグルコシド（14）などのフェノール酸化合物であることが証明された（Lian-Niang Li、J. Chinese Pharmaceutical Sciences 1997、6、57-64）。薬理学的には、これらのサルビアノール酸化合物のさまざまな活性は既に報告されている。例えばサルビアノール酸Aは、虚血性再灌流（I/R）によって引き起こされる心筋細胞に対する大きな保護作用をもち、また総フェノール酸は、I/Rによって誘導される強力な抗不整脈作用をもつ。サルビアノール酸A、B、および総フェノール酸は、脳組織中のMDA量を低めることでラットのI/Rに起因する脳損傷に対する顕著な保護作用を示す。サルビアノール酸には、以下に示すさらに多くの他の作用がある：抗血栓作用、肝臓および腎臓に対する保護作用、抗酸化、および脂質超酸化（superoxidation）の阻害、ならびにスーパーオキシドアニオンおよびフリーラジカルの除去など（Du Guanhuaら、Basic medical science and clinics、2000、20 （5）：10〜14）。
【０００３】
現在、サルビアノール酸の抽出法が多数報告されているが、その多くは主に、水で抽出後に樹脂カラムを通過させる手法に集中している。例えばTakashi Tanakaらは、こうしたサルビアノール酸塩（salviandate）抽出法を明らかに報告している（Chemical Pharmaceutical Bulletin、1989、37（2）、340〜344）。また、タンジンからフェノール化合物を抽出するという同様の方法を用いている研究者は、Koji Haseら（Planta Medica、1997、63、22〜26）、Xu Yamingら（中国特許CN1247855A号、2000年3月公開）、Liu Pingら（中国特許CN1270809A号、2000年10月公開）、およびLi Lianniang（中国特許出願第0114228.2号、2001年9月出願）など他にも多くいる。しかし、上述の抽出工程にはいずれも、工業化する際に大量の水の濃縮が必要であるという共通の問題がある。その不安定性のために、総サルビアノール酸水の煎じ液の濃縮温度は50℃〜60℃で変動させなければならない。このため手法の難易度および費用上昇の問題が生じる。同時に、長時間に及ぶ加熱工程は、50℃〜60℃ではあるものの、不安定性を含む一連の重大な問題を生じるので、その品質と治療効果に影響を及ぼす。以上の問題のために工業化はほぼ不可能である。以上の既存の方法の別の短所は、その収率の低さ（一般に2%〜3%）であり、これは産業への応用を制限する。
【発明の開示】
【０００４】
発明の概要
したがって本発明の1つの目的は、先行技術の欠点を取り除いて、高収率、低コスト、高品質、および産業への応用の容易さを備えた、総フェノール酸の調製法を提供することにある。
【０００５】
好ましい態様の詳細な説明
本発明の総フェノール酸を調製する方法は主に、タンジンを温水で煎じる段階と、煎じ液をポリアミドカラムおよび多孔質吸着樹脂で分離する段階からなる。
【０００６】
総フェノール酸は以下のスキームで得られる：
（a）不純物を除いた後にタンジンを小片に切るか、または粗粉末に粉砕し、温水で煎じる。この煎じ液を、pH値を酸性に調整した後に濾過する。
（b）煎じ液をポリアミドカラムにアプライし、カラムを水で洗浄して中性にする。カラムを弱塩基性水溶液で溶出し、溶離液を回収する。
（c）溶離液を、段階（b）の塩基性溶離液を酸性化した後に、多孔質吸着樹脂カラムにアプライする。最初にカラムを水で洗浄して中性条件とし、次にカラムを含水または無水の低級アルコールで溶出する。その後、溶離液を回収する。
（d）溶離液を減圧下でエタノールが無くなるまで濃縮し、乾燥させて総サルビアノール酸を得る。
【０００７】
段階（a）では、温水で2回〜4回（各0.5時間〜2時間）処理してタンジンを抽出する。抽出温度は60℃〜100℃とする（好ましくは90℃〜100℃）。各抽出工程後の抽出物溶液を単独か、または混合して（好ましくは混合して）、さらに処理する。pH値を酸で4未満、好ましくは2以下に調整する。
【０００８】
段階（b）では、弱塩基性水溶液の濃度は好ましくは0.01%〜2%であり、最も好ましくは0.08%〜0.5%であり、また例えばポリカプロラクタム（ナイロン-6）などの一般的なポリアミド材料を使用する。
【０００９】
段階（c）では、例えばスチレン型吸着樹脂などの一般的な多孔質吸着樹脂を使用し、弱塩基性画分のpH値を酸で4以下、好ましくは2以下に調整する。低級アルコールの炭素原子の数は1〜5個であり（例えばメタノールやエタノールなど）、溶出濃度は40%〜95%であり、好ましくは60%〜95%である。しかし、大規模な工業生産時における安全性、費用の抑制、および工程の単純化の観点から、95%エタノールによる溶出が、目的を達成するための最良の方法である。
【００１０】
段階（d）では、必要であれば、微小孔フィルター膜で濾過後に、上記濃縮液を凍結乾燥法などで乾燥させる。
【００１１】
本発明の方法で製造された総フェノール酸は、任意の種類の薬学的に許容される剤型に処方することが可能であり、また他の薬剤または活性成分と併用することもできる。
【００１２】
本発明によれば、タンジンの総フェノール酸は、本発明の方法で作られる。
【００１３】
本発明のタンジンの総フェノール酸および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む薬学的成分。
【００１４】
先行技術と比較して、本発明には以下のような利点がある。
【００１５】
1.工業化が容易である。先行技術の工程には大量の水の濃縮が必要であり、この結果、工業化が困難なものとなる。こうした欠点は本発明では克服されており、加熱や減圧を行うことなく大量の水を驚くように除去できる。したがって工程および条件は、エネルギー消費および環境汚染を伴うことなく最適化される。このため、手法または環境保護に関する利点により、工業化の実現が容易になる。
【００１６】
2. 活性成分の喪失が減少する。本発明は、先行技術におけるアルコールによる沈殿によって引き起こされる活性成分の喪失を効率的に回避することができ、また大量の水の濃縮時における総フェノール酸の不安定化を防ぐことができる。上記すべての事項は、工程中の活性成分の喪失および分解を実質的に回避するので、最終産物の安定性が確保される。
【００１７】
3. 収率が高い。先行技術で製造される産物（すなわち総フェノール酸の乾燥粉末）の収率は、生薬ベースで2%〜3%（重量）に過ぎないが、本発明の方法を用いた収率は4%を超える。これは先行技術による収率を明らかに上回る。また、高品質の最終産物中の総フェノール酸の量は80%を上回り、不純物も少ない。
【００１８】
4. 費用が安い。本発明の方法では、加熱したり減圧したりすることなしに大量の水を濃縮して除去することが可能であり、エネルギー消費および費用を効率的に削減できる。また、本発明による総フェノール酸の収率は高く、さらに最終産物中の量は、先行技術で得られる量に近いか、またはこれと比較して多い。つまり品質が同等か、または優れた、より多くの産物が同じ量の生薬から得られることになる。費用が安いことは、工業化だけでなく、患者の経済的関心の面からも大変有益であり、結果的に大きな社会的利益を生じる。
【００１９】
5. 動物を対象とした研究でも、本発明の方法で得られる総フェノール酸の良好な効果が示されている。
【００２０】
ラットの大脳動脈虚血（cerebral artery ischemia）に対する総フェノール酸の保護作用
1. 材料および方法
1）動物：
雄のウィスターラット（体重200 g〜220 g；証明書番号SCXK（北京）2002〜2003）を北京医科大学の動物センターから入手した。
【００２１】
2）試薬：
抱水クロラールをShenyang試薬工場（遼寧省、中国）から購入した（ロット番号920401）。レッド・テトラゾリン（TTC）を北京化学プラントから入手した（ロット番号810911）。
【００２２】
3）装置：
高周波電気メスを北京の医科電子装置工場から購入した。SXP-1B手術用顕微鏡を上海の医科光学装置工場から入手した。
【００２３】
4）試験薬：
総フェノール酸はTianjin Tasly Modern TCM研究所において本発明の方法で製造された。また総サルビアノール酸は、中国医科学院のMateria Medica研究所において、中国特許出願第01142288.2号（2001年9月出願）の方法で製造された。対照薬となるXiangdan注射剤は、Ya an Sanjiu製薬会社から購入した（ロット番号010901）。
【００２４】
5）試験薬の処方の方法および投与経路：
総フェノール酸およびXiangdan注射剤を、滅菌済みの生理食塩水で所望の濃度に希釈する。総フェノール酸についてはl0 mg/kgおよび20 mg/kgに、またXiangdan注射剤については1 ml/kg（1 g/kgに相当）に希釈する。いずれの薬剤とも、虚血から30分後に舌下静脈経由で投与する。
【００２５】
6）群：
すべてのラットを以下の群に無作為に分ける：偽手術対照群、虚血対照群、総フェノール酸（Materia Medica研究所）の10 mg/kg投与群および20 mg/kg投与群、ならびに総フェノール酸（Tasly）の10 mg/kg投与群および20 mg/kg投与群。
【００２６】
2. 方法
1）ラットの大脳動脈遮断（電気的凝固）による虚血：
トリクロロ酢酸アルデヒドの腹腔内注射（350 mg/kg体重）によりラットを麻酔し、支持台上に左側臥位で固定する。手術用顕微鏡下で、皮膚を外耳道と眼角の間の中線から切開する。頬骨（zygomatic orthopedics）を露出させ、整形外科用ロンジュールで充分除く。筋膜を頭骨に沿ってつまみ取り、側頭葉窩を露出させる。鱗縁（squamous orthopedics）と下顎の間をレトラクタで慎重に支え、頭骨の底部に頭骨の窓（skull window）を開けて中大脳動脈（cerebral middle artery）を露出させる。この中大脳動脈を高周波電気メスで焼いて血流を遮断することで、大脳局所虚血のモデルが得られる。30分後にラットの舌下静脈を通じて投与し、ケージに戻して餌を与える。室温は24℃〜25℃に厳密に保つ。
【００２７】
2）脳梗塞体積の測定：
中大脳動脈を遮断した24時間後にラットの首を切断して大脳を摘出する。大脳全体を、生理食塩水を満たしたビーカーに入れ、冷蔵庫内で4℃で10分間維持する。続いて嗅球、小脳、および脳幹低位を除去する。冠状面に沿って、大脳を5枚の切片に切り分け、1.5 mlの4% TTCと0.1 mlの1 mol/L リン酸水素二カリウムを含む5 mlの染色溶液中に移し、水浴中で37℃で30分間、遮光状態でインキュベートする。大脳切片を取り出し、10%ホルマリンに漬けて固定化する。結果として、正常大脳組織はローズピンク色に、虚血部位は白色になる。重量面積測定法（weight planimetry）で梗塞域面積を測定し、さらに大脳半球全体に対する梗塞域面積の割合を計算する。
【００２８】
3）大脳中の水分量測定：
中大脳動脈を遮断した24時間後にラットを殺し、大脳全体を丁寧に取り出す。次に嗅球、小脳、および脳幹下部を取り除いて、大脳の重量を計測する（大脳湿重量とする）。次に大脳を、重量が一定になるまで（約48時間）オーブン（105℃）で乾燥させ、再び計量する（大脳乾燥重量とする）。大脳中の水の最終量は、以下の計算式で計算する：
大脳中の水分量＝（大脳湿重量-大脳乾燥重量）/大脳湿重量×100%
【００２９】
3. 結果
ラットの中大脳動脈の凝固性虚血に対する総フェノール酸の保護作用
2005538055.tif 000002
注：（1）**P<0.01、*P<0.05、両側検定（虚血対照群と比較）。
#P<0.05、片側検定（虚血対照群と比較）。
（2）対照としての1 ml/kgのXiangdan注射剤は1 g/kgの生薬に相当し；10 mg/kgの総フェノール酸（Tasly）は0.25 g/kgの生薬に相当し（収率を4%として計算）；ならびに20 mg/kgの総フェノール酸（Tasly）は0.5 g/kgの生薬に相当する（収率を4%として計算）。
【００３０】
4. 結論
ラットで大脳虚血に達するための中大脳動脈を凝固させる方法を用いて、大脳動脈の虚血に対する、Tasly製造およびMateria Medica研究所製造の総フェノール酸の保護効果が認められた。この結果から、静脈投与の30分後に、10 mg/kgおよび20 mg/kgの両フェノール酸が、虚血に起因する脳浮腫および脳梗塞を顕著に緩和可能なことが分かった。またこれら2種類のフェノール酸は、同じ用量を投与時に同じ作用を示した。上記の研究全てにより、2種類のフェノール酸が同じ抗脳虚血効果を有することが示された。
【００３１】
本発明の総フェノール酸は、錠剤、カプセル、顆粒、経口液剤、持続放出性製剤、制御放出製剤、ゲル、軟膏（ointment/salve）、クリーム、坐剤、注射剤、粉末、パッチ、溶丸剤（dripping pill）、および懸濁剤などの薬学的に許容される剤型に処方することができる。
【００３２】
本発明の総フェノール酸は、心血管および脳血管の疾患、ネフローゼ、肝障害、肺炎、心肺疾患、膵炎、糖尿病、頸部症候群、眼底血管疾患、眼底神経疾患、偏頭痛、慢性胃炎、めまい、整形外科疾患、高山病、ならびに老年痴呆などの疾患の治療に使用することができる。
【００３３】
態様
以下の実施例は、説明目的のみで提供するものであり、本発明の範囲を何ら制限する意図はない。
【００３４】
比較例
総フェノール酸を、中国特許出願第01142288.2号（2001年9月出願）にしたがって調製する。
【００３５】
タンジン5 kgを粗粉末に粉砕し、脱イオン水を加えて100℃で3回抽出する。具体的には、1回目に30 Lの水を加えて1時間かけて抽出し、2回目と3回目は各15 Lの水を加えて0.5時間かけて抽出する。この抽出液を50℃で減圧下で5 Lに濃縮し、冷却する。この濃縮物に14 Lの95%エタノールを加える。この混合物を一晩静置して濾過する。減圧下でエタノールを50℃で回収する。得られた濃縮物を、RA多孔質吸着樹脂（主にスチレンおよびクリソフェニン（chrysophenine）を含み、乾燥樹脂重量は2 kg）にアプライする。この樹脂を、明瞭なα-ナフトール反応が溶離液に見られなくなるまで脱イオン水で洗浄し、続いて、溶離液が、鉄セスキクロライドフェリシアン化カリウム添加時に明瞭なフェノールヒドロキシル反応を示さなくなるまで50%エタノールで溶出する。画分を50℃で減圧下で濃縮する。この混合物を冷蔵庫内で一晩静置し、濾過して総サルビアノール酸の抽出物を得る。2%水酸化ナトリウムで抽出物をpH6.5に調整し、抽出物を凍結乾燥して114 gの総フェノール酸を得る。生薬の最終産物の収率は2.3%である。解析の結果、最終産物中の総フェノール酸の量が83.72%で、サルビアノール酸Bの量が54.41%であることがわかった。総サルビアノール酸およびサルビアノール酸Bを、中国特許出願第01142288.3号（2001年9月出願）の方法で解析する。
【００３６】
（1）サルビアノール酸B：
HPLC（288 nm）で解析する。サルビアノール酸B CRSは、Modern TCM研究所（Tianjin Tasly Group）において98.0%の純度で製造されている。
【００３７】
（2）総サルビアノール酸：
量＝F(A-B)+B
式中、Aは総サルビアノール酸の量であり、サルビアノール酸BをCRSとして紫外分光光度法で計算される。BはHPLCで測定されたサルビアノール酸Bの量であり、Fは補正係数（0.626）を示す。
【００３８】
実施例1
タンジン5 kgを粗粉末に粉砕し、軽く沸騰した状態で100℃で脱イオン水で3回抽出する。具体的には、1回目は水（5.5倍量）を加えて1時間かけて抽出し、2回目と3回目はそれぞれ水（3倍量）を加えて0.5時間かけて抽出する。抽出物を混合し、10%塩酸でpH2.0に調整する。抽出物を濾過し、濾液をポリアミドカラムにロードする（乾燥樹脂量は生薬量の3分の2である）。カラムを脱イオン水（5倍量）で洗浄し、洗浄液を捨てる。次にカラムを5カラム容量の0.1%炭酸水素ナトリウム水溶液で溶出する。画分を回収し、10%塩酸でpH2.0に調整し、D101多孔質樹脂カラムにロードする。カラムを脱イオン水で洗浄して中性条件とし、洗浄液を捨てる。次にカラムを95%エタノールで溶出し、色のついた部分を溶出時に回収する。画分を、完全に乾燥するまで減圧下で濃縮する。得られた濃縮物を水に溶解する。この混合物を冷蔵庫内で一晩静置し、0.3 μmの混合セルロース微小孔膜で濾過して総サルビアノール酸の抽出液を得る。2%水酸化ナトリウムで総フェノール酸をpH6.0に調整したらすぐに凍結乾燥して、221 gの総サルビアノール酸の凍結乾燥粉末を得る。最終産物の収率は、生薬量を元にすると4.4%である。中国特許出願第01142288.2号（2001年9月出願）の方法による解析の結果、最終産物中の総フェノール酸の量が83.94%で、サルビアノール酸Bの量が53.73%であることがわかる。
【００３９】
実施例2
タンジン5 kgを粗粉末に粉砕し、脱イオン水で80℃で3回抽出する。具体的には、1回目は水（5.5倍量）を加えて2時間かけて抽出し、2回目と3回目はそれぞれ水（3倍量）を加えて1時間かけて抽出する。抽出物を混合し、5%硫酸でpH1に調整する。抽出物を濾過し、濾液をポリアミドカラムにロードする（乾燥樹脂量は生薬量の3分の2である）。カラムを脱イオン水（5倍量）で洗浄し、洗浄液を捨てる。次にカラムを4カラム容量の0.2%炭酸水素ナトリウム水溶液で溶出する。画分を冷却し、5%硫酸でpH1に調整し、AB-8多孔質吸着樹脂カラムにロードする。カラムを脱イオン水で洗浄して中性条件とし、洗浄液を捨てる。次にカラムを60%エタノールで溶出し、色のついた部分を溶出時に回収する。画分を、エタノールの匂いがしなくなるまで減圧下で濃縮する。この混合物を冷蔵庫内で一晩静置し、0.3 μmの混合セルロース微小孔膜で濾過して総サルビアノール酸の抽出液を得る。総フェノール酸を2%水酸化ナトリウムでpH6.0に調整したらすぐ凍結乾燥して、227 gの総サルビアノール酸の凍結乾燥粉末を得る。最終産物の収率は、生薬量を元にすると4.5%である。中国特許出願第01142288.2号（2001年9月出願）の方法による解析の結果、最終産物中の総フェノール酸の量が83.15%で、サルビアノール酸Bの量が54.03%であることがわかる。
【００４０】
実施例3
タンジン5 kgを粗粉末に粉砕し、軽く沸騰した状態で100℃で脱イオン水で3回抽出する。具体的には、1回目は水（5.5倍量）を加えて1時間かけて抽出し、2回目と3回目はそれぞれ水（3倍量）を加えて0.5時間かけて抽出する。抽出物を混合し、10%塩酸でpH2.0に調整する。抽出物を濾過し、濾液をポリアミドカラムにロードする（乾燥樹脂量は生薬量の3分の2である）。カラムを脱イオン水（5倍量）で洗浄し、洗浄液を捨てる。次にカラムを5カラム容量の0.1%炭酸水素ナトリウム水溶液で溶出する。画分を回収し、10%塩酸でpH2.0に調整し、RA多孔質樹脂カラムにロードする。カラムを脱イオン水で洗浄して中性条件とし、洗浄液を捨てる。次にカラムを60%メタノールで溶出し、色のついた部分を溶出時に回収する。画分を、エタノールの匂いがしなくなるまで減圧下で濃縮する。この混合物を冷蔵庫内に一晩静置し、0.3 μmの混合セルロース微小孔膜で濾過して総サルビアノール酸の抽出液を得る。総フェノール酸を2%水酸化ナトリウムでpH6.0に調整したらすぐ凍結乾燥して、224 gの総サルビアノール酸の凍結乾燥粉末を得る。最終産物の収率は、生薬量を元にすると4.5%である。中国特許出願第01142288.2号（2001年9月出願）の方法による解析の結果、最終産物中の総フェノール酸の量が84.02%で、サルビアノール酸Bの量が54.17%であることがわかる。
【００４１】
実施例4
総サルビアノール酸カプセル剤の処方
総サルビアノール酸    240 g
微結晶性セルロース    40 g
滑石粉    1.4%
ポリビドン（polyvidone）の3%エタノール溶液    適量
（1000個のカプセルを作製）
【００４２】
総サルビアノール酸および微結晶性セルロースを充分混合する。ポリビドンの3%エタノール溶液を混合物に添加して軟性物を得る。これを18メッシュのふるいに通して顆粒を得て、60℃で30分間〜45分間乾燥させる。次に滑石粉を添加し、混合物を攪拌し、1号の鞘カプセルに充填してカプセル剤（各240 mg含有）を得る。
【００４３】
実施例5
総サルビアノール酸錠剤の処方
総サルビアノール酸    240 g
微結晶性セルロース    40 g
滑石粉    1.4%
ポリビドンの3%エタノール溶液    適量
（1000個の錠剤を作製）
【００４４】
総サルビアノール酸および微結晶性セルロースを充分混合する。ポリビドンの3%エタノール溶液を混合物に添加して軟性物を得る。これを18メッシュのふるいに通して顆粒を得て、60℃で30分間〜45分間乾燥させる。次に滑石粉を添加し、混合物を攪拌して錠剤を得る。
【００４５】
実施例6
総サルビアノール酸顆粒剤の処方
総サルビアノール酸    240 g
微結晶性セルロース    40 g
滑石粉    1.4%
ポリビドンの3%エタノール溶液    適量
（500袋を作製）
【００４６】
総サルビアノール酸および微結晶性セルロースを充分混合する。ポリビドンの3%エタノール溶液を混合物に添加して軟性物を得る。これを18メッシュのふるいに通して顆粒を得て、60℃で30分間〜45分間乾燥させ、袋に充填する。
【００４７】
実施例7
注射用の総サルビアノール酸粉末の処方
総サルビアノール酸    100 g
マンニット    30 g
Antallin    5 g
蒸留水    5 ml
【００４８】
上記成分を充分混合し、凍結乾燥し、1000本のバイアルに充填する。
【国際調査報告】
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