(57)【要約】本発明は、PNA（ペプチド核酸）オリゴマーの調製用の一般式(I)のモノマーに関し、予め定められた配列のPNAオリゴマー及びランダム配列のPNAオリゴマーの両方の合成の方法を提供する：式中、R1、R2、R3、R4、R5は独立して、H、ハロゲン、Cl-C4アルキル、ニトロ、ニトリル、Cl-C4アルコキシ、ハロゲン化されたC1-C4アルキル、又はハロゲン化されたC1-C4アルコキシであり、R1、R3、及びR5のうち少なくとも一つはニトロであり；R6は、H又は天然若しくは非天然のα‐アミノ酸の保護された若しくは非保護の側鎖であり；かつBは、天然又は非天然の核酸塩基であり、前記核酸塩基が環外アミノ官能基を有する場合は、前記官能基が酸に対しては不安定であるが弱から中間の塩基に対しては安定である保護基によって保護されている。【化１】2005538928.tif 000044
2005538928.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Iを有する化合物： 
【化１】
2005538928.tif 000030
式中、
R1、R2、R3、R4、R5は独立して、H、ハロゲン、Cl-C4アルキル、ニトロ、ニトリル、Cl-C4アルコキシ、ハロゲン化されたC1-C4アルキル、又はハロゲン化されたC1-C4アルコキシであり、R1、R3、及びR5のうち少なくとも一つはニトロであり；
R6は、H又は天然若しくは非天然のα‐アミノ酸の保護された若しくは非保護の側鎖であり；かつ
Bは、天然又は非天然の核酸塩基であり、前記核酸塩基が環外アミノ官能基を有する場合は、前記官能基が酸に対しては不安定であるが弱から中間の塩基に対しては安定である保護基によって保護されている。
【請求項２】
R6が、H又は天然α‐アミノ酸の保護された若しくは非保護の側鎖である請求項１の化合物。
【請求項３】
Bが、チミン（T）、シトシン（C）、アデニン（A）、又はグアニン（G）である請求項１の化合物。
【請求項４】
Bの保護基が、ベンジルオキシカルボニル又はベンズヒドリルオキシカルボニルである請求項１の化合物。
【請求項５】
R1がニトロであり、かつR3がハロゲン、トリフルオロメチル、又はメチルであり；かつR2、R4、R5がHである請求項１の化合物。
【請求項６】
R1がニトロであり、R3がClであり、R5がCl又はメチルであり、かつR2及びR4がHである請求項１の化合物。
【請求項７】
R3がニトロであり、R1、R2、R4及びR5がHである請求項１の化合物。
【請求項８】
R3がニトロであり、R1がClであり、かつR2、R4及びR5がHである請求項１の化合物。
【請求項９】
ペプチド合成に習慣的に使用される結合剤又は混合無水物の存在下で式VIの化合物を環化することを含む請求項１の化合物の調製方法であり、式VIが下記のように表される方法：
【化２】
2005538928.tif 000031
式中、
R1、R2、R3、R4、R5は独立して、H、ハロゲン、Cl-C4アルキル、ニトロ、ニトリル、Cl-C4アルコキシ、ハロゲン化されたC1-C4アルキル、又はハロゲン化されたC1-C4アルコキシであり、R1、R3、及びR5のうち少なくとも一つはニトロであり；
R6は、H又は天然若しくは非天然のα‐アミノ酸の保護された若しくは非保護の側鎖であり；かつ
Bは、天然又は非天然の核酸塩基であり、前記核酸塩基が環外アミノ官能基を有する場合は、前記官能基が酸に対しては不安定であるが弱から中間の塩基に対しては安定である保護基によって保護されている。
【請求項１０】
非求核性有機塩基及びペプチド合成に習慣的に使用される結合剤の存在下での、式IVの化合物と核酸塩基酢酸成分との結合反応を含む請求項１の化合物の調製方法であり、前記式IVが下記のように表される方法：
【化３】
2005538928.tif 000032
式中、
R1、R2、R3、R4、R5は独立して、H、ハロゲン、Cl-C4アルキル、ニトロ、ニトリル、Cl-C4アルコキシ、ハロゲン化されたC1-C4アルキル、又はハロゲン化されたC1-C4アルコキシであり、R1、R3、及びR5のうち少なくとも一つはニトロであり；
R6は、H又は天然若しくは非天然のα‐アミノ酸の保護された若しくは非保護の側鎖であり、
前記核酸塩基酢酸成分が下記のように表される：
【化４】
2005538928.tif 000033
式中、Bは、天然又は非天然の核酸塩基であり、前記核酸塩基が環外アミノ官能基を有する場合は、前記官能基が酸に対しては不安定であるが弱から中間の塩基に対しては安定である保護基によって保護されている。
【請求項１１】
式Vを有する化合物：
【化５】
2005538928.tif 000034
式中、
R1、R2、R3、R4、R5は独立して、H、ハロゲン、Cl-C4アルキル、ニトロ、ニトリル、Cl-C4アルコキシ、ハロゲン化されたC1-C4アルキル、又はハロゲン化されたC1-C4アルコキシであり、R1、R3、及びR5のうち少なくとも一つはニトロであり；
R6は、H又は天然若しくは非天然のα‐アミノ酸の保護された若しくは非保護の側鎖であり；
R7は、H、(Cl-C4)アルキル、又はアリールであり、；かつ
Bは、天然又は非天然の核酸塩基であり、前記核酸塩基が環外アミノ官能基を有する場合は、前記官能基が酸に対しては不安定であるが弱から中間の塩基に対しては安定である保護基によって保護されている。
【請求項１２】
R7がメチル、エチル、又はt-ブチルである請求項１１の化合物。
【請求項１３】
非求核性有機塩基及びペプチド合成に習慣的に使用される結合剤の存在下での、式IIの化合物と核酸塩基酢酸成分との結合反応を含む請求項１１の化合物の調製方法であり、前記式IIが下記のように表される方法：
【化６】
2005538928.tif 000035
式中、
R1、R2、R3、R4、R5は独立して、H、ハロゲン、Cl-C4アルキル、ニトロ、ニトリル、Cl-C4アルコキシ、ハロゲン化されたC1-C4アルキル、又はハロゲン化されたC1-C4アルコキシであり、R1、R3、及びR5のうち少なくとも一つはニトロであり；
R6は、H又は天然若しくは非天然のα‐アミノ酸の保護された若しくは非保護の側鎖であり；
R7は、H、(Cl-C4)アルキル、又はアリールであり、
前記核酸塩基酢酸成分が下記のように表される：
【化７】
2005538928.tif 000036
式中、Bは、天然又は非天然の核酸塩基であり、前記核酸塩基が環外アミノ官能基を有する場合は、前記官能基が酸に対しては不安定であるが弱から中間の塩基に対しては安定である保護基によって保護されている。
【請求項１４】
式IIを有する化合物：
【化８】
2005538928.tif 000037
式中、
R1、R2、R3、R4、R5は独立して、H、ハロゲン、Cl-C4アルキル、ニトロ、ニトリル、Cl-C4アルコキシ、ハロゲン化されたC1-C4アルキル、又はハロゲン化されたC1-C4アルコキシであり、R1、R3、及びR5のうち少なくとも一つはニトロであり；
R6は、H又は天然若しくは非天然のα‐アミノ酸の保護された若しくは非保護の側鎖であり；かつ
R7は、H、(Cl-C4)アルキル、又はアリールである。
【請求項１５】
非求核性有機塩基の存在下での、N-(2-アミノエチル)-グリシン誘導体と塩化スルホニル誘導体との結合反応を含む請求項１４の化合物の調製方法であり、N-(2-アミノエチル)-グリシン誘導体が下記のように表される方法：
【化９】
2005538928.tif 000038
式中、
R6は、H又は天然若しくは非天然のα‐アミノ酸の保護された若しくは非保護の側鎖であり；かつ
R7は、H、(Cl-C4)アルキル、又はアリールであり、
塩化スルホニル誘導体は下記のように表される：
【化１０】
2005538928.tif 000039
式中、
R1、R2、R3、R4、R5は独立して、H、ハロゲン、Cl-C4アルキル、ニトロ、ニトリル、Cl-C4アルコキシ、ハロゲン化されたC1-C4アルキル、又はハロゲン化されたC1-C4アルコキシであり、R1、R3、及びR5のうち少なくとも一つはニトロである。
【請求項１６】
非求核性有機塩基の存在下で、2-アミノエチルスルファニルアミド誘導体をハロ酢酸誘導体と反応させることを含む請求項１４の化合物の調製方法であり、2-アミノエチルスルファニルアミド誘導体が下記のように表される方法：
【化１１】
2005538928.tif 000040
式中、R1、R2、R3、R4、R5は独立して、H、ハロゲン、Cl-C4アルキル、ニトロ、ニトリル、Cl-C4アルコキシ、ハロゲン化されたC1-C4アルキル、又はハロゲン化されたC1-C4アルコキシであり、R1、R3、及びR5のうち少なくとも一つはニトロであり、及び
ハロ酢酸誘導体が下記のように表される：
【化１２】
2005538928.tif 000041
式中、
R7は、H、(Cl-C4)アルキル、又はアリールであり；かつ
Xは、Cl、Br、又はIである。
【請求項１７】
式IV及びその遊離酸型を有する化合物： 
【化１３】
2005538928.tif 000042
式中、
R1、R2、R3、R4、R5は独立して、H、ハロゲン、Cl-C4アルキル、ニトロ、ニトリル、Cl-C4アルコキシ、ハロゲン化されたC1-C4アルキル、又はハロゲン化されたC1-C4アルコキシであり、R1、R3、及びR5のうち少なくとも一つはニトロであり；
R6は、H又は天然若しくは非天然のα‐アミノ酸の保護された若しくは非保護の側鎖であり；かつ
HYは、有機酸又は無機酸である。
【請求項１８】
HYがHCl又はTFAである請求項１７の化合物。
【請求項１９】
ペプチド合成に習慣的に使用される結合剤又は混合無水物の存在下で、式IIIの化合物を環化すること、引き続いて酸中でのt-Bocの脱保護を含む請求項１７の化合物の調製方法であり、前記式IIIが下記のように表される方法：
【化１４】
2005538928.tif 000043
式中、
R1、R2、R3、R4、R5は独立して、H、ハロゲン、Cl-C4アルキル、ニトロ、ニトリル、Cl-C4アルコキシ、ハロゲン化されたC1-C4アルキル、又はハロゲン化されたC1-C4アルコキシであり、R1、R3、及びR5のうち少なくとも一つはニトロであり；
R6は、H又は天然若しくは非天然のα‐アミノ酸の保護された若しくは非保護の側鎖である。
【請求項２０】
請求項１の化合物を連結させることを含むPNAオリゴマーの調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の背景
１．発明の分野
【０００２】
本発明は、PNAオリゴマーの調製に好適なモノマーに関する。本発明はまた、該モノマーの前駆体に関し、該前駆体からのPNAモノマーの調製方法に関する。さらに、本発明は該PNAモノマーを用いるPNAオリゴマーの調製方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
２．一般的背景及び従来技術
【０００４】
ここ２０年間で、DNA診断、アンチセンスや抗原の形態の治療物質、及び分子生物学やバイオテクノロジーの基礎研究の分野での応用のために、リン酸基、リボース環又は核酸塩基を修飾することによりオリゴヌクレオチドの性質を最適化する試みにより、多数の新しいオリゴヌクレオチド誘導体の発見をもたらされた（U. Englisch及びD. H. Gauss, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1991, 30, 613-629（非特許文献１）; A. D. Mesmaeker et al., Curr. Opinion Struct. Biol. 1995, 5, 343-355（非特許文献２）; P. E. Nielsen, Curr. Opin. Biotech., 2001, 12, 16-20（非特許文献３））。最も優れた発見は、Nielsen、Egholm、Buchardt、及びBergのデンマークのグループにより報告されたペプチド核酸である（P. E. Nielsen et al., Science, 1991, 254, 1497-1500（非特許文献４））。PNAは、N-(2-アミノエチル)グリシンポリアミドがリン酸-リボース環骨格に置換され、そしてメチレン-カルボニルリンカーが天然だけではなく非天然の核酸-塩基（nucleo-base）をN-(2-アミノエチル)グリシンの中央のアミンに連結させているDNAアナログである。天然構造への基（radical）の変換にもかかわらず、PNAは、ワトソン-クリック塩基対の法則に従うDNAはもちろんRNAにも特異的に結合することができる配列である。PNAは、相補的核酸にそれらの天然の対応物（counterpart）より高い親和性で結合し、これはある程度は、骨格での負の電荷の不足、結果として生じる低減した電荷-電荷反発、及び有利な幾何学的要因による（S. K. Kim et al., J. Am. Chem. Soc., 1993, 115, 6477-6481（非特許文献５）; B. Hyrup et al., J. Am. Chem. Soc., 1994, 116, 7964-7970（非特許文献６）; M. Egholm et al., Nature, 1993, 365, 566-568（非特許文献７）; K. L. Dueholm et al., New J. Chem., 1997, 21, 19-31（非特許文献８）; P. Wittung et al., J. Am. Chem. Soc., 1996, 118, 7049-7054（非特許文献９）; M. Leijon et al., Biochemistry, 1994, 9820-9825（非特許文献１０））。また、結果として生じるPNA/DNA二重鎖の熱安定性はハイブリダイゼーション溶液の塩濃度には依存しないことが示された（H. Orum et al., BioTechniques, 1995, 19, 472-480（非特許文献１１）;S. Tomac et al., J. Am. Chem. Soc., 1996, 118, 5544-5552（非特許文献１２））。また、PNAは、平行又は逆平行のいずれかの様式で結合することができ、逆平行の様式が好ましい（E. Uhlman et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl, 1996, 35, 2632-2635（非特許文献１３）。
【０００５】
PNA/DNA二重鎖におけるミスマッチはDNA/DNA二重鎖におけるミスマッチよりもずっと不安定である。単一塩基のミスマッチは、PNA/DNA及びDNA/DNAのTmをそれぞれ15℃及び11℃低減させる。ホモピリミジンPNAオリゴマー及び高ピリミジン／プリン比を持つPNAオリゴマーは、通常安定なPNA2/DNA三重らせんを形成する相補的DNAと結合することができる（P. E. Nielsen et al., Science, 1991, 254, 1497-1500（非特許文献４）; L. Betts et al., Science, 1995, 270, 1838-1841（非特許文献１４）; H. Knudsen et al., Nucleic Acids Res., 1996, 24, 494-500（非特許文献１５））。PNAはアミド結合と核酸塩基を有しているが、PNAはヌクレアーゼとプロテアーゼの両方に対して大きな耐性を示す。強酸での処理とアルカリ水酸化物中での加水分解で脱プリン化するDNAとは対照的に、PNAは完全に酸安定性であり、弱塩基にも十分安定である。
【０００６】
一般的に、PNAオリゴマーは適切に構築された固相ペプチド合成プロトコルを用いて合成される。数グループが独立して、PNAオリゴマー合成を最適化するようモノマーの新しいストラテジーを開発してきた。PNAモノマーの調製は、好適に保護されたN-アミノエチルグリシン及び好適に保護された核酸塩基酢酸誘導体の合成に分けることができ、引き続いて両者を結合させることができる。
【０００７】
PNAオリゴマー合成用に報告された第一の合成ストラテジーは、t-Boc及び核酸塩基の環外アミノ酸基で保護された骨格アミノ基がベンジルオキシカルボニルで保護されるt-Boc/ベンジルオキシカルボニル保護基ストラテジーを用いるメリフィールド（Merrifield）固相合成である（P. E. Nielsen et al., Science, 1991, 254, 1497-1500（非特許文献４）; M. Egholm et al., J. Am. Chem. Soc., 1992, 114, 9677-9678（非特許文献１６）; M. Egholm et al., J. Am. Chem. Soc., 1992, 114, 1895-1897（非特許文献１７）; M. Egholm et al., J. Chem. Soc. Chem. Commun., 1993, 800-801（非特許文献１８）; K. L. Dueholm et al., J. Org. Chem., 1994, 59, 5767-5773（非特許文献１９）; WO 92/20702（特許文献１））。t- Boc/ベンジルオキシカルボニルで保護されたPNAモノマーは、現在市販されているが、TFAの繰り返し処理がt-Boc脱保護に必要であり、過酷なHF又はトリフルオロメタンスルホン酸処理が樹脂からの開裂及び核酸塩基の環外アミンからのベンジルオキシカルボニル基の脱保護に必要であるため、使用するのは不便である。よって、このストラテジーは、PNA-DNAキメラのような多種類の修飾PNAオリゴマーの合成には適合していない。さらに、HFやトリフルオロメタンスルホン酸のような有害な酸の使用は、操作者に関する安全及び自動化装備やラインへの侵食の影響の観点から商業的にも採用されていない。さらに、t-Boc/ベンジルオキシカルボニル保護ストラテジーは、同様の種類の試薬や条件によって保護基が取り除かれる保護基の系として定義された特異なストラテジーであるが、一方の基を他方の基に優先して除去するために、反応の異なる相対速度に依存している。例えば、t-Boc/ベンジルオキシカルボニル保護ストラテジーにおいては、両方の保護基が酸不安定性であるが、ベンジルオキシカルボニル基は、効率的な除去のためにより強い酸を必要とする。酸が、より酸不安定性のt-Boc基を完全に除去するために用いられる場合、ある割合のベンジルオキシカルボニル基も同時に除去される可能性がある。不幸にも、t-Boc基がオリゴマーの合成のための各合成サイクル中に骨格のアミノ基から除去されるに違いない。このように、TFAは、ある程度の側鎖ベンジルオキシカルボニル基を早期に脱保護するのに十分強く、よってオリゴマーが分枝する可能性が生じ、所望の生成物の全収率を減少させる。
【０００８】
DNAオリゴマー合成に適した、PNAオリゴマー合成用のよりゆるやかな脱保護方法をみつけるための更なる取り組みにおいて、いくつかの研究グループは、Mmtと核酸塩基の環外アミノ基で保護された骨格アミノ基がシトシンとアデニンについてのベンゾイル、アニソイル、及びt-ブチルベンゾイル、又はグアニンについてのイソブチリル、アセチル等のアシル基により保護されている、Mmt/アシルで保護されたPNAモノマーを開発した。（D. W. Will et al., Tetrahedron, 1995,51,12069-12082（非特許文献２０）; P. J. Finn et al., Nucleic Acid Research, 1996, 24, 3357- 3363（非特許文献２１）; D. A. Stetsenko et al., Tetrahedron Lett. 1996, 3571-3574（非特許文献２２）; G.. Breipohl et al., Tetrahedron, 1997, 14671-14686（非特許文献２３））。
【０００９】
Fmoc/ベンズヒドリルオキシカルボニルで保護された代替PNAモノマーもまた市場で利用可能であり、これはFmocと核酸塩基の環外アミノ基で保護された骨格アミノ基がベンズヒドリルオキシカルボニルで保護されている（J. M. Coull et al., US 6,133,444（特許文献２）。しかしFmoc/ベンズヒドリルオキシカルボニルストラテジーは、Fmoc脱保護中の副反応及び溶液中でのモノマーの不安定性等のいくつかの欠点がある。最も重大な副反応は、Fmoc脱保護条件下での２次アミノ官能基からアミノエチルグリシン骨格の遊離N-末アミノ官能基への核酸塩基のアセチル基の転移である（L. Christensen et al., J. Pept. Sci. 1995, 1, 175-183（非特許文献２４））。オリゴマー合成中の各サイクルでのN-アセチル転移反応は、類似の極性及び同様の分子量のため分離するのが困難である副生成物の蓄積をもたらす。また、Fmoc保護基は、微量のアミン（trace amine）の存在下でも極めて不安定である。従って、PNAモノマー用の溶媒の選択には注意するべきである。一般的には、高品質のN-メチルピロリドンが推奨される。このため、PNAオリゴマーの合成には、より高い費用がかかってしまう。
【００１０】
Fmoc/ベンズヒドリルオキシカルボニル（S. A. Thomson et al., Tetrahedron, 1995,6179-6194（非特許文献２５）及びFmoc/Mmt（G.. Breipohl et al., Bioorg. Med. Chenu. Lett., 1996, 6, 665-670（非特許文献２６））保護モノマーを用いるPNAオリゴマーの合成も報告されている。しかしながら、これらの方法には全て、モノマーの溶解性と調製、過酷な反応条件、並びにモノマー合成及び／又はPNAオリゴマー合成中の副反応の点で深刻な欠点がある。
【００１１】
新しいモノマーの発見への他の取り組みとして、環状モノマーがISIS及びBioceptにより報告された。ISISにより開発された第一のストラテジーは保護された骨格をモルホリノンによって置換することであるが（U.S.特許No. 5,539,083（特許文献３））、該ストラテジーにはオリゴマー合成中の伸長ステップ毎に、結合反応により生成されるヒドロキシ官能基がアミン官能基に変換されてしまうという深刻な欠点がある。代替案として、保護されたアミノエチルグリシン部分がN-t-Boc-ピペラジノンにより置換される（WO 00/02899（特許文献４））。しかし、このストラテジーもまた、オリゴマー化におけるモノマー反応性という点で深刻な欠点及び上記の連続的なt-Bocストラテジーに見られるような同じ問題をもつ。
【００１２】
最近の進展にも関わらず、収率を増加させ、合成費用をおさえ、自動的に並行して行う合成に適合するような新しいモノマーの必要性は残ったままである。
【特許文献１】WO 92/20702
【特許文献２】US 6,133,444
【特許文献３】US 5,539,083
【特許文献４】WO 00/02899
【非特許文献１】U. Englisch及びD. H. Gauss, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1991, 30, 613-629
【非特許文献２】A. D. Mesmaeker et al. Curr. Opinion Struct. Biol. 1995, 5, 343-355
【非特許文献３】P. E. Nielsen, Curr. Opin. Biotech., 2001, 12, 16-20
【非特許文献４】P. E. Nielsen et al., Science, 1991, 254, 1497-1500
【非特許文献５】S. K. Kim et al., J. Am. Chem. Soc., 1993, 115, 6477-6481
【非特許文献６】B. Hyrup et al., J. Am. Chem. Soc., 1994, 116, 7964-7970
【非特許文献７】M. Egholm et al., Nature, 1993, 365, 566-568
【非特許文献８】K. L. Dueholm et al., New J. Chem., 1997, 21, 19-31
【非特許文献９】P. Wittung et al., J. Am. Chem. Soc., 1996, 118, 7049-7054
【非特許文献１０】M. Leijon et al., Biochemistry, 1994, 9820-9825
【非特許文献１１】H. Orum et al., BioTechniques, 1995, 19, 472-480
【非特許文献１２】S. Tomac et al., J. Am. Chem. Soc., 1996, 118, 5544-5552
【非特許文献１３】E. Uhlman et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl, 1996, 35, 2632-2635
【非特許文献１４】L. Betts et al., Science, 1995, 270, 1838-1841
【非特許文献１５】H. Knudsen et al., Nucleic Acids Res., 1996, 24, 494-500
【非特許文献１６】M. Egholm et al., J. Am. Chem. Soc., 1992, 114, 9677-9678
【非特許文献１７】M. Egholm et al., J. Am. Chem. Soc., 1992, 114, 1895-1897
【非特許文献１８】M. Egholm et al., J. Chem. Soc. Chem. Commun., 1993, 800-801
【非特許文献１９】K. L. Dueholm et al., J. Org. Chem., 1994, 59, 5767-5773
【非特許文献２０】D. W. Will et al., Tetrahedron, 1995, 51, 12069-12082
【非特許文献２１】P. J. Finn et al., Nucleic Acid Research, 1996, 24, 3357-3363
【非特許文献２２】D. A. Stetsenko et al., Tetrahedron Lett. 1996, 3571-3574
【非特許文献２３】G.. Breipohl et al., Tetrahedron, 1997, 14671-14686
【非特許文献２４】L. Christensen et al., J. Pept. Sci. 1995, 1, 175-183
【非特許文献２５】S. A. Thomson et al., Tetrahedron, 1995,6179-6194
【非特許文献２６】G.. Breipohl et al.., Bioorg. Med. Chenu. Lett., 1996, 6, 665-670
【発明の開示】
【００１３】
（発明の概要）
本発明は、PNAオリゴマー合成中の効率と便利さを増大させるための新規なモノマーを提供する。別の目的は、PNAオリゴマーの合成用の自動化合成機のような装置に便利に適用されうるようなPNAモノマーを提供することである。本発明による新規モノマーは一般式Iを有する化合物である：
【００１４】
【化１】
2005538928.tif 000003
【００１５】
式中、
【００１６】
R1、R2、R3、R4、R5は独立して、H、F若しくはCl、Br、I等のハロゲン、Cl-C4アルキル、ニトロ、ニトリル、Cl-C4アルコキシ、（F及びCl等の）ハロゲン化されたC1-C4アルキル、又は（F及びCl等の）ハロゲン化されたC1-C4アルコキシであり、
【００１７】
R1、R3、及びR5のうち少なくとも一つはニトロであり；
【００１８】
R6は、H又は天然若しくは非天然のα‐アミノ酸の保護された若しくは非保護の側鎖であり；かつ
【００１９】
Bは、天然又は非天然の核酸塩基であり、前記核酸塩基が環外アミノ官能基を有する場合は、前記官能基が酸に対しては不安定であるが弱から中間の塩基に対しては安定である保護基によって保護されている。
【００２０】
本発明はさらに、一般式Vの化合物から一般式Iの化合物を調製する方法を提供する。
【００２１】
別の実施形態において、本発明は一般式Vの化合物及び、一般式IIの化合物からのそれらの調製方法を提供する：
【００２２】
【化２】
2005538928.tif 000004
【００２３】
式中、
【００２４】
R1、R2、R3、R4、R5は独立して、H、F若しくはCl、Br、I等のハロゲン、Cl-C4アルキル、ニトロ、ニトリル、Cl-C4アルコキシ、（F及びCl等の）ハロゲン化されたC1-C4アルキル、又は（F及びCl等の）ハロゲン化されたC1-C4アルコキシであり、
【００２５】
R1、R3、及びR5のうち少なくとも一つはニトロであり；
【００２６】
R6は、H又は天然若しくは非天然のα‐アミノ酸の保護された若しくは非保護の側鎖であり；
【００２７】
R7は、H、(Cl-C4)アルキル、又はアリールであり、；かつ
【００２８】
Bは、天然又は非天然の核酸塩基であり、前記核酸塩基が環外アミノ官能基を有する場合は、前記官能基が酸に対しては不安定であるが弱から中間の塩基に対しては安定である保護基によって保護されている。
【００２９】
本発明はさらに、一般式IVの化合物からの式Iの化合物の調製方法を提供する。
【００３０】
本発明はまた、一般式IVの化合物及びそれらの遊離酸型、並びにそれらの調製方法を提供する：
【００３１】
【化３】
2005538928.tif 000005
【００３２】
式中、
【００３３】
R1、R2、R3、R4、R5及びR6は上で定義された通りであり、かつ
【００３４】
HYは有機又は無機酸である。
【００３５】
本発明はさらに、一般式IIの化合物からの一般式IVの化合物の調製方法を提供する。
【００３６】
また、本発明は式IIの化合物、及びそれらの調製方法を提供する：
【００３７】
【化４】
2005538928.tif 000006
【００３８】
式中、
【００３９】
R1、R2、R3、R4、R5、R6及びR7は上で規定された通りである。
【００４０】
本発明は式Iの化合物を対象とし、その残基は上で定義されている。特に、R6残基はH、又は天然α-アミノ酸の保護された若しくは非保護の側鎖であってもよい。別の実施形態では、Bはチミン（T）、シトシン（C）、アデニン（A）、又はグアニン（G）であってもよい。さらに詳細には、Bの保護基はベンジルオキシカルボニル又はベンズヒドリルオキシカルボニルであってもよい。他の実施形態では、式Iのモノマー化合物は以下の構造を有していてもよい：R1がニトロであり、かつR3がハロゲン、トリフルオロメチル、又はメチルであり；かつR2、R4、R5がHである。あるいは、Rlがニトロであり、R3がClであり、R5がCl又はメチルであり、かつR2及びR4がHである。なおさらには、R3がニトロであり、かつR1、R2、R4及びR5がHである。よりさらには、R3がニトロであり、R1がClであり、R2、R4及びR5がHである。
【００４１】
本発明はまた、ペプチド合成で習慣的に用いられる結合剤又は混合無水物の存在下で、式VIの化合物を環化することを含む式Iの化合物の調製方法（図６）を対象としている。式VIの残基は上で定義された通りである。
【００４２】
本発明はまた、非求核性有機塩基とペプチド合成に習慣的に用いられる結合剤の存在下での、式IVの化合物と核酸塩基酢酸成分との結合反応を含む、式Iの化合物の調製方法を対象としている。
【００４３】
本発明は、式Vの化合物を対象としており、その残基は上に定義された通りである。特に、R6残基は、H又は天然α‐アミノ酸の保護された若しくは非保護の側鎖であってもよい。別の実施形態では、Bはチミン（T）、シトシン（C）、アデニン（A）、又はグアニン（G）であってもよい。さらに特には、Bの保護基はベンジルオキシカルボニル又はベンズヒドリルオキシカルボニルであってもよい。他の実施形態においては、式Vの化合物は以下の構造を有していてもよい：R1がニトロであり、R3がハロゲン、トリフルオロメチル、又はメチルであり；かつR2、R4、R5がHである。あるいは、R1がニトロであり、R3がClであり、R5がCl又はメチルであり、かつR2及びR4がHである。なおさらには、R3がニトロであり、かつRl、R2、R4及びR5がHである。なおさらには、R3がニトロであり、R1がClでり、かつR2、R4及びR5がHである。そしてなおさらには、R7がメチル、エチル、又はt-ブチルであってもよい。
【００４４】
別の実施形態において、本発明は、非求核性有機塩基とペプチド合成に習慣的に用いられる結合剤の存在下での、式IIの化合物と核酸塩基酢酸成分との結合反応を含む、式Vの化合物の調製方法を対象としている。
【００４５】
本発明は、式IIの化合物を対象としており、その残基は上で定義された通りである。特に、R6残基は、H又は天然α‐アミノ酸の保護された若しくは非保護の側鎖であってもよい。他の実施形態においては、式IIの化合物は、次の構造を有していてもよい：R1がニトロであり、かつR3がハロゲン、トリフルオロメチル、又はメチルであり；かつR2、R4、R5がHである。あるいは、R1がニトロであり、R3がClであり、R5がCl又はメチルであり、かつR2及びR4がHである。なおさらには、R3がニトロであり、かつR1、R2、R4及びR5がHである。なおさらには、R3がニトロであり、R1がClであり、かつR2、R4及びR5がHである。
【００４６】
本発明はまた、非求核性有機塩基の存在下で、求核置換反応により2-アミノエチルスルホニルアミド誘導体とハロ酢酸誘導体とを反応させることを含む、式IIの化合物の調製方法を対象としている。
【００４７】
本発明は、式IVを有する化合物とその遊離酸型をさらに対象としている。式IVの残基は上に定義されている。しかし、詳細には、R6残基は、H又は天然α‐アミノ酸の保護された若しくは非保護の側鎖であってもよい。他の実施例においては、式IVの化合物が、以下の構造を有していてもよい：R1がニトロであり、かつR3がハロゲン、トリフルオロメチル、又はメチルであり；かつR2、R4、R5がHである。あるいは、R1がニトロであり、R3がClであり、R5がCl又はメチルであり、かつR2及びR4がHである。なおさらには、R3がニトロであり、R1、R2、R4及びR5がHである。なおさらには、R3がニトロであり、R1がClであり、かつR2、R4及びR5がHである。さらには、HYがHCI又はTFAであってもよい。
【００４８】
本発明はさらに、 ペプチド合成に習慣的に使用される結合剤又は混合無水物の存在下で式IIIの化合物を環化し、引き続いて酸中でt-Bocを脱保護することを含む式IVの化合物の調製方法もまた対象としている。
【００４９】
本発明はまた、式Iの化合物を連結させることを含むPNAオリゴマーの調製方法を対象としている。
【００５０】
上で挙げられる"R"基という用語は、詳細な実施形態として挙げられるR基を含む式I〜VIの化合物全てに当てはまることは当然である。また、R基という用語が本発明の処理を受ける化合物に当てはまることも当然である。
【００５１】
これら及び本発明の他の目的は、本発明の以下の説明、添付された図面、添えられた請求の範囲からより完全に理解されるであろう。
【００５２】
（図面の簡単な説明）
本発明は、以下で示される詳細な説明、及び解説のためだけに示され従って本発明の限定ではない添付の図面から、より完全に理解されるであろう。
【００５３】
図１は、DNA認識に有用である、天然及び非天然に生ずる核酸塩基の化学構造の図を示す。
【００５４】
図２は、DNA認識に有用である、天然及び非天然に生ずる核酸塩基の化学構造の別の図を示す。
【００５５】
図３は、保護された骨格の合成の概略図を示す。
【００５６】
図４は、保護された骨格の別の合成の概略図を示す。
【００５７】
図５は、モノマーの前駆体としての保護されたピペラジノンの合成の概略図を示す。
【００５８】
図６は、PNAモノマーの合成の概略図を示す。
【００５９】
図７は、PNAモノマーの別の合成の概略図を示す。
【００６０】
図８は、PNAチミンモノマーの合成の概略図を示す。
【００６１】
図９は、PNAチミンモノマーの別の合成の概略図を示す。
【００６２】
図１０は、PNAシトシンモノマーの合成の概略図を示す。
【００６３】
図１１は、PNAシトシンモノマーの別の合成の概略図を示す。
【００６４】
図１２は、PNAアデニンモノマーの合成の概略図を示す。
【００６５】
図１３は、PNAアデニンモノマーの別の合成の概略図を示す。
【００６６】
図１４は、 PNAグアニンモノマーの合成の概略図を示す。
【００６７】
図１５は、 PNAグアニンモノマーの別の合成の概略図を示す。
【００６８】
図１６は、 PNAモノマーからのPNAオリゴマー合成の概略図を示す。
【００６９】
（発明を実施するための最良の形態）
本発明において、一般式Iを有する化合物のニトロベンゼンスルホニル基は、骨格のアミンの保護基としてだけではなく、結合反応の活性化基としても重要な役割を果たす。記載された特徴を有するモノマーは、手動又は自動の合成機によるPNAオリゴマーの合成、及びコンビナトリアル化学によるPNAオリゴマーライブラリーの調製に有用である。一般式I中の核酸塩基Bは、天然に見られる位置、すなわちチミン又はシトシンの位置１及びアデニン又はグアニンの位置９において、並びに非天然に生じた核酸塩基（核酸塩基アナログ）又は核酸塩基結合成分に、天然で付与される。核酸塩基及び例となる合成核酸塩基が、図１及び図２に示されている。
【００７０】
保護された骨格の調製
【００７１】
一般式Iを有する新規モノマーの調製のための第一段階は、式IIを有する[2-(ニトロベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン誘導体の合成である：
【００７２】
【化５】
2005538928.tif 000007
【００７３】
R1、R2、R3、R4、R5、R6及びR7で示されるものは、上で定義された通りである。
【００７４】
図３を参照すると、好ましいN-[2-(ニトロベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン誘導体が、エチレンジアミンと塩化ニトロベンゼンスルホニルとのモノ-保護反応、引き続いて非求核性有機塩基の存在下での、該生成物とハロ酢酸との求核置換反応によって合成される。塩化ニトロベンゼンスルホニルは、市販のものを手に入れる、又はU.S.No.4,204,870に記載されるような既知の方法によって調製される。塩化ニトロベンゼンスルホニルは、下記一般式の化合物である：
【００７５】
【化６】
2005538928.tif 000008
【００７６】
R1、R2、R3、R4及びR5で示されるものは、上で定義された通りである。 
【００７７】
ハロ酢酸は、下記一般式の化合物である：
【００７８】
【化７】
2005538928.tif 000009
【００７９】
式中、
【００８０】
XがCl、Br及びIなどのハロゲン基であり、かつ
【００８１】
R7が上で定義された通りである。
【００８２】
図３を参照すると、モノ-スルホニル化反応は、有機塩基を含まない適切な溶媒中の過度のエチレンジアミンの溶液中へ、塩化ニトロベンゼンスルホニルをゆっくりと添加することにより行うことができる。上記反応の溶媒の例は、トルエン、ベンゼン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、ジイソプロピルエーテル、ジエチルエテール、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、及びアセトニトリルである。好ましい溶媒は、ジクロロメタンである。反応の終了後、反応混合物を塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過する。所望の生成物を、ろ液に酢酸を添加することによって結晶化させる。求核置換反応がモノ-スルホニル化生成物及び非求核性有機塩基の適切な溶媒中の混合物にハロ酢酸を添加することによって行われる。上記反応の溶媒の例は、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、クロロホルム、DMF、及びN-メチルピロリドンである。好ましい溶媒はジクロロメタンである。非求核性有機塩基の例は、限定されないが、トリエチルアミン、トリプロピルアミン N,N-ジイソプロピルエチルアミン、N-メチルモルホリン、及びN-エチルモルホリンを含む。好ましい非求核性有機塩基はトリエチルアミンである。
【００８３】
代替的に、好ましいN-[2-(ニトロベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン誘導体が、2-アミノグリシン誘導体の第一アミンの選択反応によって合成され、既知の方法（例えば、R1がHである場合は、S. A. Thomson et al., Tetrahedron, 1995,6179- 6194参照; R1が天然又は非天然のα-アミノ酸の保護された又は保護されていない側鎖である場合は、A. Puschl et al., Tetrahedron Lett., 1998, 39,4707-4710参照）によって、塩化ニトロベンゼンスルホニルを用いて調製される（図４）。N-[2-(ニトロベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン誘導体の調製のための結合反応は、非求核性有機塩基の存在下で、周囲温度で、N-[2-(アミノエチル）-グリシン誘導体溶液に塩化ニトロベンゼンスルホニルをゆっくりと添加することによって行われる。上記反応の溶媒の例は、水、トルエン、ベンゼン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、ジイソプロピルエーテル、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、及びアセトニトリルである。好ましい溶媒は、ジクロロメタンである。非求核性有機塩基の例としては、限定されないが、トリエチルアミン、トリプロピルアミン N,N-ジイソプロピルエチルアミン、N-メチルモルホリン、及びN-エチルモルホリンを含む。好ましい非求核性有機塩基はトリエチルアミンである。薄層クロマトグラフィー（TLC）により観察することによって反応が終結した後、反応混合物を水で洗浄し、乾燥し、減圧下で蒸発させ、所望の生成物を得る。
【００８４】
1-(ニトロベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンの調製
【００８５】
一般式Iを有するモノマー合成のための式IVを有する第一の前駆シントン（precursory synthon）は、式IIを有するN-[2-(ニトロベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン誘導体から、加水分解、第二アミンの保護、環化、及び第三アミンの保護基の脱保護によって調製される（図５）。
【００８６】
【化８】
2005538928.tif 000010
【００８７】
R1、R2、R3、R4、R5、R6及びHYで示されるものは、上で定義された通りである。 
【００８８】
まず、式IIを有するN-[2-(ニトロベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン誘導体は、過剰の水酸化物イオン源を添加することによって対応する酸に変換される。好ましいR2は、メチルラジカル又はエチルラジカルである。水酸化物イオン源の例は、限定されないが、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、及び水酸化カリウムを含む。好ましい水酸化物イオン源は水酸化リチウムである。次いで、かす（work-up）のない反応混合物を二炭酸ジ-t-ブチルにより処理して、第二アミンを保護して、下記一般式を有するようにする：
【００８９】
【化９】
2005538928.tif 000011
【００９０】
R1、R2、R3、R4、R5及びR6で示されるものは、上で定義された通りである。
【００９１】
好ましい加水分解反応は、水酸化リチウムの水溶液（2当量）をN-[2-(ニトロベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン誘導体の溶液に周囲温度で添加することによって実行される。TLC分析により反応が終結した後、水酸化リチウムの水溶液（さらに1当量）を反応混合物に添加する。反応混合物を十分な時間攪拌する。その後、過剰の二炭酸ジ-t-ブチルを酢酸エチルを用いた抽出により除去する。次いで、水溶液を酸性化し、ジクロロメタンにより抽出し、乾燥させ、及び減圧下で蒸発させて、固体を生成する。上記反応の溶媒の例は、テトラヒドロフラン水溶液、ジオクサン水溶液、及び1,2-ジメトキシエタン水溶液である。好ましい溶媒は、テトラヒドロフラン水溶液である。
【００９２】
第２に、一般式IIIを有するカルボン酸の環化反応と、引き続いて起こるt-Bocの脱保護が、一般式IVを有するピペラジノン誘導体を生成する。環化反応は、カルボン酸の活性化中に同時に起こる。カルボン酸の活性化は、周囲温度でペプチド合成用の一般的な結合剤によって行うことができる。結合剤の例は、限定されないが、HATU（L. A. Carpino et al. , J. Am. Chem. Soc., 1993, 115, 4397-4398）、HAPyU、TAPipU（A. Ehrlich et al., Tetrahedron Lett., 1993, 4781-4784）、HBTU（V. Dourtoglou et al., Synthesis, 1984,572-574）、TBTU、TPTU、TSTU、TNTU（R. Knorr et al., Tetrahedron Lett., 1989, 1927-1930）、TOTU、BOP（B. Castro et al., Tetrahedron Lett., 1975,1219-1222）、PyBOP（J. Coste et al., Tetrahedron Lett., 1990,205-208）、BroP（J. Coste et al., Tetrahedron Lett., 1990,669-672）、PyBroP（J. Coste et al. , Tetrahedron Lett.,1991,1967-1970）、BOI（K. Akaji et al., Tetrahedron Lett., 1992,3177-3180）、MSNT（B. Blankemeyer-Menge et al., Tetrahedron Lett., 1990,1701-1704）、TDO（R. Kirstgen et al. , J. Chem. Soc. Chem. Commun., 1987, 1870-1871）、DCC、EDCである。溶媒は、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、クロロホルム、DMF、及びN-メチルピロリドンから選択することができる。好ましい溶媒はDMFである。
【００９３】
代替的に、カルボン酸の活性化はクロロギ酸アルキル又は塩化アルカノイルを非求核性有機塩基とともに用いた混合無水物の形成によって行うこともできる。ハロギ酸アルキル又は塩化アルカノイルの例は、限定されないが、クロロギ酸メチル、クロロギ酸エチル、クロロギ酸プロピル、クロロギ酸ブチル、クロロギ酸イソブチル、塩化ピバロイル、及び塩化カルボキシルアダマンチン（adamantine carboxyl chloride）である。最も好ましい酸塩化物は、クロロギ酸イソブチルである。クロロギ酸イソブチルを用いた環化反応は、-20℃と0℃の間の温度で、無水の適切な溶媒中の一般式IIIを有するカルボン酸と非求核性有機塩基の反応溶液に、クロロギ酸イソブチルをゆっくりと添加することによって行われる。非求核性有機塩基の例は、限定されないが、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、N,N-ジイソプロピルエチルアミン、N-メチルモルホリン、及びN-エチルモルホリンを含む。好ましい非求核性有機塩基はN-メチルモルホリンである。無水の適切な溶媒の例は、限定されないが、アセトニトリル、クロロホルム、ジクロロメタン、1,2-ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、及びテトラヒドロフランである。好ましい溶媒は、ジクロロメタンとテトラヒドロフランである。最も好ましい反応温度は、-20℃でクロロギ酸イソブチルの添加を終了させた後、0℃まで反応混合物がゆっくりと温まるようなものである。
【００９４】
図５を参照すると、t-Boc基は、酸の存在下で脱保護される。酸の例は、限定されないが、HCl、HBr、HF、HI、硝酸、硫酸、メタンスルホン酸、TFA、及びトリフルオロメタンスルホン酸である。好ましい酸はHClである。脱保護反応の溶媒の例は、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、酢酸エチル、トルエン、及びベンゼンである。最も好ましい溶媒は、ジクロロメタンである。
【００９５】
PNAモノマーの合成
【００９６】
本発明の方法により、一般式Iを有するPNAモノマーが、少なくとも二つの方法によって合成される。図６を参照すると、第一のPNAモノマーへのアプローチは、環化反応の前に、保護された直線状の骨格に保護された又は非保護の核酸塩基酢酸成分を導入する方法である。代替的に、PNAモノマーは、始めに保護された直線状の骨格の環化、引き続いて保護された又は非保護の核酸塩基酢酸成分の結合が起こることにより合成されて、所望の生成物を作ることができる。
【００９７】
方法１
【００９８】
一般式Vを有する直線状成分は、図６に示されるように結合剤を用いて核酸塩基酢酸成分のアシル化によって一般式IIを有する保護された直線状骨格から調製される。
【００９９】
図６を参照すると、結合反応は一般式IIを有する保護された直線状骨格、核酸塩基酢酸成分、及び非求核性有機塩基の、無水の適切な溶媒中の混合物に結合剤を添加することによって行われた。結合剤の例は、限定はされないが、HATU HAPyU、TAPip、HBTU、TBTU、TPTU、TSTU、TNTU、TOTU、BOP、PyBOP、BroP、MSNT、TDO、DCC、EDCを含む。好ましい結合剤はPyBOPである。非求核性有機塩基の例は、限定はされないが、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、N,N-ジイソプロピルエチルアミン、N-メチルモルホリン、及びN-エチルモルホリンである。好ましい非求核性有機塩基は、ジイソプロピルエチルアミンである。無水の適切な溶媒の例は、限定はされないが、クロロホルム、ジクロロメタン、1,2-ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、DMF、及びN-メチルピロリドンを含む。好ましい溶媒はDMFである。 
【０１００】
一般式Vを有する化合物は、過剰の水酸化物イオン源の添加によって式VIのような対応する酸に変換される。好ましいR2はメチルラジカル又はエチルラジカルである。水酸化物イオン源の例は、限定はされないが、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、及び水酸化カリウムを含む。好ましい水酸化物イオン源は水酸化リチウムである。
【０１０１】
【化１０】
2005538928.tif 000012
【０１０２】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、及びBで示されるものは上で定義された通りである。
【０１０３】
図６を参照すると、カルボン酸の環化反応は、カルボン酸の活性化中に同時に起こる反応によって一般式Iを有するPNAモノマーを生成する。カルボン酸の活性化は、周囲温度で、ペプチド合成用の一般的な結合剤によって行われる。結合剤の例は、限定はされないが、HATU、HAPyU、TAPip、HBTU、TBTU、TPTU、TSTU、TNTU、TOTU、BOP、PyBOP、BroP、MSNT、TDO、DCC、EDCを含む。好ましい結合剤は、PyBOPである。非求核性有機塩基の例は、限定はされないが、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、N,N-ジイソプロピルエチルアミン、N-メチルモルホリン、及びN-エチルモルホリンを含む。好ましい非求核性有機塩基はN,N-ジイソプロピルエチルアミンである。溶媒は、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、クロロホルム、DMF、及びN-メチルピロリドンから選択されることができる。好ましい溶媒はDMFである。
【０１０４】
代替的に、カルボン酸の活性化は非求核酸塩基とクロロギ酸アルキル又は塩化アルカノイルを用いた混合無水物の生成によって行うことができる。ハロギ酸アルキル又は塩化アルカノイルの例は、限定はされないが、クロロギ酸メチル、クロロギ酸エチル、クロロギ酸プロピル、クロロギ酸ブチル、クロロギ酸イソブチル、塩化ピバロイル、及び塩化カルボキシルアダマンチンを含む。最も好ましい酸塩化物は、クロロギ酸イソブチルである。クロロギ酸イソブチルを用いた環化反応は、-20℃と0℃の間の温度で、カルボン酸と非求核性有機塩基の無水の適切な溶媒中の反応溶液に、クロロギ酸イソブチルをゆっくりと添加することによって行われる。非求核性有機塩基の例は、限定はされないが、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、N,N-ジイソプロピルエチルアミン、N-メチルモルホリン、及びN-エチルモルホリンを含む。好ましい非求核性有機塩基はN-メチルモルホリンである。無水の適切な溶媒の例は、限定はされないが、アセトニトリル、クロロホルム、ジクロロメタン、1,2-ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ジイソプロイルエーテル及びテトラヒドロフランを含む。好ましい溶媒は、ジクロロメタンとテトラヒドロフランである。最も好ましい反応温度は、-20℃でクロロギ酸イソブチルの添加を終了させた後、0℃まで反応混合物がゆっくりと温まるようなものである。
【０１０５】
方法２
【０１０６】
代替的な方法のように、本発明によるPNAモノマーは、一般式IVを有する環状前駆体に保護された又は非保護の核酸塩基酢酸成分を結合させることによって調製されてもよい：
【０１０７】
【化１１】
2005538928.tif 000013
【０１０８】
R1、R2、R3、R4、R5、及びR6は上で定義された通りである。
【０１０９】
図７を参照すると、保護された又は非保護の核酸塩基酢酸成分との環状前駆体の結合反応は、周囲温度でペプチド合成用の一般的な結合剤と非求核性有機塩基を用いることによって行われる。結合剤の例は、限定はされないが、HATU、HAPyU、TAPip、HBTU、TBTU、TPTU、TSTU、TNTU、TOTU、BOP、PyBOP、BroP、MSNT、TDO、DCC、EDCを含む。好ましい結合剤は、PyBOPである。非求核性有機塩基の例は、限定はされないが、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、N,N-ジイソプロピルエチルアミン、N-メチルモルホリン、及びN-エチルモルホリンを含む。好ましい非求核性有機塩基はN,N-ジイソプロピルエチルアミンである。溶媒は、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、クロロホルム、DMF、及びN-メチルピロリドンから選択されることができる。好ましい溶媒は、DMFである。
【０１１０】
核酸塩基及び保護基
【０１１１】
本発明の核酸塩基の例は、限定はされないが、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、ウリジン、2,6-ジアミノプリン、及び図１と図２に示される天然に又は非天然に生じる核酸塩基である。好ましい核酸塩基は、アデニン、シトシン、グアニン、チミンである。核酸塩基は、PNAオリゴマーの合成ために保護基によって保護されていてもよい。保護基は、限定はされないが、Boc、アダマンチルオキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル（P. E. Nielsen et al., Science, 1991, 254, 1497-1500; M. Egholm et al., J. Am. Chem. Soc., 1992, 114, 9677-9679; M. Egholm et al.,J. Am. Chem. Soc., 1992, 114,1895-1897 ; M. Egholm et al., J. Chem. Soc. Chem. Commun., 1993, 800-801 ; K. L. Dueholm et al. , J. Org. Chez., 1994, 59, 5767-5773; WO 92/20702）、p-メトキシベンジルオキシカルボニル、ベンズヒドリルオキシカルボニル（U.S.特許No. 6,133,444）、2-メチルチオエトキシカルボニル（U.S.特許No. 6,063,569）、Mmt（G. Breipohl et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1996, 6, 665-670）、又は酸不安定性保護基（T. W. Greene及びP. G. M. Wuts, Protective Group in Organic Synthesis, 3rd Edition, pp494-653）であってもよい。
【０１１２】
T-モノマーの合成
【０１１３】
T-モノマーは一般式I-tを有する化合物である：
【０１１４】
【化１２】
2005538928.tif 000014
【０１１５】
R1、R2、R3、R4、R5、及びR6で示されるものは上で定義された通りである。
【０１１６】
好ましいモノマーは：
【０１１７】
R1がニトロであり、かつR3がF、Cl、又はトリフルオロメチル等の電子放出基（electron withdrawing group）であってもよい。 
【０１１８】
R3がニトロであり、かつR1又はR5が、F又はCl等の電子放出基であってもよい。
【０１１９】
T-モノマーの前駆体、(チミン-1-イル)-酢酸（下記に示す）は、既知の方法によって調製される（K. L. Dueholm et. al. , J. Org. Chem., 1994, 59, 5767-5773; WO 92/20702）。
【０１２０】
【化１３】
2005538928.tif 000015
【０１２１】
図８を参照すると、一般式V-tの化合物が、結合剤の存在下で(チミン-1-イル)-酢酸と一般式IIを有するニトロベンゼンスルホニル基保護骨格エステルとの結合反応によって調製され、下記一般式を有する化合物を生成する：
【０１２２】
【化１４】
2005538928.tif 000016
【０１２３】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、及びR7で示されるものは、上で定義された通りである。
【０１２４】
好ましいR7は、メチルラジカル又はエチルラジカルである。
【０１２５】
一般式V-tを有する化合物は、過剰の水酸化物イオン源を添加することにより対応する酸へと変換され、一般式VI-tを有する化合物を生成する。
【０１２６】
【化１５】
2005538928.tif 000017
【０１２７】
R1、R2、R3、R4、R5、及びR6で示されるものは、上で定義された通りである。
【０１２８】
図８を参照すると、カルボン酸の環化反応は、カルボン酸の活性化中に同時におこる反応によって一般式I-tを有するPNA T-モノマーを生成する。カルボン酸の活性化は、ペプチド合成用の一般的な結合剤又は混合無水物によって行うことができる。反応条件及び試薬は、上記のものと同じである。
【０１２９】
代替的に、図９に示されるように、PNA T-モノマーは(チミン- 1-イル)-酢酸を一般式IVを有するピペラジノン誘導体に結合させることによって調製することができる。反応条件及び試薬は、上記のものと同じである。
【０１３０】
C-モノマーの合成
【０１３１】
C-モノマーは一般式I-cを有する化合物である： 
【０１３２】
【化１６】
2005538928.tif 000018
【０１３３】
R8はベンジル又はベンズヒドリル基であってもよい。
【０１３４】
R1、R2、R3、R4、R5、及びR6で示されるものは、上で定義された通りである。
【０１３５】
好ましいモノマーは：
【０１３６】
R1がニトロであり、かつR3がF、Cl、又はトリフルオロメチル等の電子放出基であってもよい。あるいは、
【０１３７】
R3がニトロであり、かつR1又はR5が、F又はCl等の電子放出基であってもよい。
【０１３８】
PNA C-モノマー用の前駆体、好適に保護された(シトシン-1-イル)-酢酸（以下に示す）は、その全体においてここに参照によって組み込まれる、U.S.特許No. 6,133,444; U.S.特許No. 6,063,569; Dueholm, et al., J. Org. Chef., 1994, 59, 5767-5773; WO 92/20702に記載されたような既知の方法又はその改良法によって調製される。
【０１３９】
【化１７】
2005538928.tif 000019
【０１４０】
R8は、ベンジル又はベンズヒドリル基であってもよい。
【０１４１】
図１０を参照すると、PNA C-モノマーは、結合剤の存在下で、好適に保護された(シトシン-1-イル)-酢酸と一般式IIを有するニトロベンゼンスルホニル基保護骨格エステルとの結合反応によって調製され、下記一般式を有する化合物を生成する：
【０１４２】
【化１８】
2005538928.tif 000020
【０１４３】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、及びR8で示されるものは上で定義された通りである。
【０１４４】
一般式V-cを有する化合物は、過剰の水酸化物イオン源の添加によって対応する酸に変換され、一般式VI-cを有する化合物を生成する：
【０１４５】
【化１９】
2005538928.tif 000021
【０１４６】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、及びR8で示されるものは上で定義された通りである。
【０１４７】
図１０を参照すると、カルボン酸の環化反応は、カルボン酸の活性化中に同時に起こる反応によってPNAモノマー一般式I-cを生成する。カルボン酸の活性化は、ペプチド合成用の一般的な結合剤又は混合無水物によって行うことができる。反応条件及び試薬は上述したものと同じである。
【０１４８】
代替的に、図１１に示されるように、PNA C-モノマーは、好適に保護された(シトシン-1-イル）酢酸を一般式IVを有するピペラジノン誘導体に結合させることによって調製することができる。反応条件及び試薬は上述したものと同じである。
【０１４９】
A-モノマーの合成
【０１５０】
A-モノマーは一般式I-aを有する化合物である：
【０１５１】
【化２０】
2005538928.tif 000022
【０１５２】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、及びR8で示されるものは上で定義された通りである。
【０１５３】
好ましいモノマーは：
【０１５４】
R1がニトロであり、 かつR3がF、Cl、又はトリフルオロメチル等の電子放出基であってもよい。あるいは、
【０１５５】
R3がニトロであり、かつR1又はR5がF又はCl等の電子放出基であってもよい。
【０１５６】
PNA A-モノマーの前駆体、好適に保護された(アデニン-9-イル)-酢酸（以下に示される）は、その全体においてここに参照によって組み込まれる、U.S.特許No. 6,133,444; 及びS. A. Thomson et al., Tetrahedron, 1995, 6179-6194に記載されたような既知の方法又はその改良法によって調製される。
【０１５７】
【化２１】
2005538928.tif 000023
【０１５８】
R8はベンジル又はベンズヒドリル基であってもよい。
【０１５９】
図１２を参照すると、PNA C-モノマーは、結合剤の存在下で、好適に保護された(アデニン-9-イル)-酢酸と一般式IIを有するニトロベンゼンスルホニル基保護骨格エステルとの結合反応よって調製され、一般式V-aを有する化合物を生成する：
【０１６０】
【化２２】
2005538928.tif 000024
【０１６１】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、及びR8で示されるものは、上で定義された通りである。
【０１６２】
一般式V-aを有する化合物は、過剰の水酸化物イオン源の添加によって対応する酸に変換され、一般式VI-aを有する化合物を生成する：
【０１６３】
【化２３】
2005538928.tif 000025
【０１６４】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、及びR8で示されるものは、上で定義された通りである。
【０１６５】
図１２を参照すると、カルボン酸の環化反応は、カルボン酸の活性化中に同時に起こる反応によってPNAモノマー一般式I-aを生成する。カルボン酸の活性化はペプチド合成用の一般的な結合剤又は混合無水物によって行うことができる。反応条件及び試薬は上述のものと同じである。
【０１６６】
代替的に、図１３に示されるように、PNA A-モノマーは、好適に保護された(アデニン-9-イル)-酢酸を一般式IVを有するピペラジノン誘導体に結合させることによって調製することができる。反応条件及び試薬は上述のものと同じである。
【０１６７】
G-モノマーの合成
【０１６８】
G-モノマーは一般式I-gを有する化合物である：
【０１６９】
【化２４】
2005538928.tif 000026
【０１７０】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、及びR8で示されるものは、上で定義された通りである。
【０１７１】
好ましいモノマーは：
【０１７２】
R1がニトロであり、 及びR3がF、Cl、又はトリフルオロメチル等の電子放出基であってもよい。あるいは、
【０１７３】
R3がニトロであり、及びR1又はR5がF、Cl、又はトリフルオロメチル等の電子放出基であってもよい。
【０１７４】
PNA G-モノマー用の前駆体、好適に保護された(グアニン-9-イル)-酢酸（以下に示される）は、U.S.特許No. 6,172,226に記載されるような既知の方法又はその改良法によって調製される。
【０１７５】
【化２５】
2005538928.tif 000027
【０１７６】
R8はベンジル又はベンズヒドリル基であってもよい。 
【０１７７】
図１４を参照すると、PNA G-モノマーは、結合剤の存在下で、好適に保護された(グアニン-9-イル)-酢酸と一般式IIを有するニトロベンゼンスルホニル基保護骨格エステルとの結合反応によって調製され、一般式V-gを有する化合物を生成する：
【０１７８】
【化２６】
2005538928.tif 000028
【０１７９】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、及びR8で示されるものは、上で定義された通りである。
【０１８０】
一般式V-gを有する化合物は、過剰の水酸化物イオン源の添加によって対応する酸へと変換され、一般式VI-gを有する化合物を生成する：
【０１８１】
【化２７】
2005538928.tif 000029
【０１８２】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、及びR8で示されるものは、上で定義された通りである。
【０１８３】
図１４を参照すると、カルボン酸の環化反応は、カルボン酸の活性化中に同時に起こる反応によってPNAモノマー一般式I-gを生成する。カルボン酸の活性化は、ペプチド合成用の一般的な結合剤又は混合無水物によって行うことができる。反応条件及び試薬は上述のものと同じである。
【０１８４】
代替的に、図１５に示されるように、PNA G-モノマーは、好適に保護された(グアニン-9-イル)-酢酸を一般式IVを有するピペラジノン誘導体に結合させることによって調製することができる。反応条件及び試薬は上述のものと同じである。 
【０１８５】
PNAオリゴマーの調製
【０１８６】
既に化学文献に報告されている種々のコンビナトリアル合成方法が、本発明のモノマーを用いるPNAオリゴマー合成に概ね適用することができる。これらの方法は、限定はされないが、固相合成及び液相合成を含む。PNAモノマーが上述の様式で合成された後、PNAオリゴマーが、好適な担体材料（例えば、限定はされないが、ポリスチレン、ポリキシレン修飾ポリスチレン、例えばTentagel（登録商標）、細孔性グラス（Controlled Pore Glass））での固相合成によって行われ、これには、開裂アミン官能基を潜在的に含む固定化基（anchoring group）が設けられている。固相合成においては、本発明の第一のPNAモノマーが固相担体へ結合反応によって取り込まれる。その後、次の段階は、PNAオリゴマー配列の体系的な加工である。この加工は脱保護/結合/キャップ形成サイクルの繰り返しを含む。最後の結合モノマーにおける骨格保護基、ニトロベンゼンスルホニル基は有機塩基の存在下で好適なチオールでの処理によって計量的に除去されて、末端遊離アミンを開放する。いったんPNAオリゴマーの合成が完了すると、オリゴマーは固相担体から開裂され、カチオンスカベンジャーとしてのTFA含有クレゾール中での、室温、１〜２時間のインキュベーションによって核酸塩基保護基が除去される。
【０１８７】
以下は、PNAオリゴマー合成に用いられる一般的サイクルである：
【０１８８】
１．アミン官能基を活性化させるための樹脂からの保護基の除去。
【０１８９】
２．アミノ酸、リンカー、又は末端保護アミン基を有するPNAモノマーの樹脂への組み込み。
【０１９０】
３．洗浄。 
【０１９１】
４．有機塩基の存在下での無水酢酸によるキャップ形成。
【０１９２】
５．洗浄。
【０１９３】
６．スルホンアミド中の反応アセチル基での開裂。
【０１９４】
７．洗浄。
【０１９５】
８．スルホニル基の脱保護。
【０１９６】
９．洗浄。
【０１９７】
１０．モノマーの付加。
【０１９８】
１１．３へ戻り、４〜１１の繰り返し。
【０１９９】
オリゴマー合成用のモノマーの結合反応の過程において、アシル化反応は、 酢酸水銀、フッ化テトラメチルアンモニウム、フッ化テトラエチルアンモニウム、フッ化テトラブチルアンモニウム、フッ化ベンジルトリメチルアンモニウム、フッ化セシウム、トリブチルホスフィン、トリフェニルホスフィン等の触媒を用いることによって加速されることができる。好ましい触媒は、フッ化テトラブチルアンモニウムである。また、反応速度は、溶媒と温度に依存する。溶媒の例は、限定はされないが、DMF、N-メチルピロリドン、ジメトキシエタン、ジクロロメタン、1,2-ジクロロエタン、DMSO、テトラヒドロフラン、ヘキサメチルホホルアミド、テトラメチレンスルホン、イソプロピルアルコール、エチルアルコール、及び選択された溶媒の混合物を含む。好ましい溶媒はDMFである。N-末アミノ保護基は溶媒中の有機塩基とともにチオールを用いて開裂される。チオールの例は、限定はされないが、C2〜C20アルカンチオール、4-メトキシトルエンチオール、4-メチルベンゼンチオール、3,6-ジオキサ-1,8-オクタンチオール、4-クロロトルエンチオール、ベンジルメルカプタン、N-アセチルシステイン、N-(t-Boc)システインメチルエステル、メチル3-メルカプトプロピオナート、4-メトキシベンゼンチオールを含む。有機塩基の例は、限定はされないが、トリエチルアミン、N,N-ジイソプロピエチルアミン、ピペリジン、N-メチルモルホリン、及び1,8-ジアザビシクロ[5,4,0]ウンデカ-7-オンを含む。好ましい有機塩基はN,N-ジイソプロピエチルアミンである。
【０２００】
略語のリスト
【０２０１】
t-Boc  tert-ブチルオキシカルボニル
【０２０２】
BOI    2-(ベンゾトリアゾール-1-イル)オキシ-1,3-ジメチル-イミダゾリニウムヘキサフルオロリン酸
【０２０３】
BOP    ベンゾトリアゾリル-l-オキシ-トリス(ジメチルアミノ)ホホニウムヘキサフルオロリン酸
【０２０４】
BroP    ブロモトリス(ジメチルアミノ)ホホニウムヘキサフルオロリン酸
【０２０５】
DMF    ジメチルホルムアミド
【０２０６】
Fmoc    9-フルオレニルメチルオキシカルボニル
【０２０７】
HAPyU    O-(7-アザベンゾトリアゾール-l-イル)-l,l,3,3-ビス(テトラメチレン)ウロニウムヘキサフルオロリン酸
【０２０８】
HATU    O-(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸
【０２０９】
HBTU    O-(ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸
【０２１０】
MSNT    2,4,6-メシチレンスルホニル-3-ニトロ-1,2,4-トリアゾリド
【０２１１】
Mmt    4-メトキシフェニルジフェニルメチル
【０２１２】
PyBOP    ベンゾトリアゾリル-1-オキシ-トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロリン酸
【０２１３】
PyBroP    ブロモトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロリン酸
【０２１４】
TAPipU    O-(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-ビス(ペンタメチレン)ウロニウムテトラフルオロホウ酸
【０２１５】
TBTU    O-(ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸
【０２１６】
TDO    2,5-ジフェニル-2,3-ジヒドロ-3-オキソ-4-ヒドロキシチオフェンジオキシド
【０２１７】
TFA    トリフルオロ酢酸
【０２１８】
TNTU    O-[(5-ノルボネン-2,3-ジカルボキシミド)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸
【０２１９】
TOTU    O-[(シアノ(エトキシカルボニル)メチレン)アミノ)-1,1,3.3-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸
【０２２０】
TPTU  O-(1,2-ジヒドロ-2-オキソ-1-ピリジル-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸
【０２２１】
TSTU  O-(N-サクシニミジル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸
【０２２２】
本発明は、以下の実施例によって、より詳細に説明されるが、それらは特記のない限り本発明の限定を意味するものではない。
【実施例】
【０２２３】
実施例１−N-(2-アミノエチル)-2-ニトロ-ベンゼンスルホンアミド酢酸塩
【０２２４】
1.2-ジアミノエタン（60.1 g, 1.00 mol）を、ジクロロメタン（1 L）中に溶解させた。2-ニトロ-ベンゼンスルホニル塩化物（22.16 g, 0.100 mol）のジクロロメタン（100 mL）中の溶液を３時間かけて滴下して添加した。さらに30分間攪拌した後、反応混合物を塩水で洗浄した（1 L X 4）。有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過した。ろ液に酢酸（6.0 g, 0.1 mol）を添加して、固体を沈殿させた。固体をろ過して除去し、ジクロロメタン（200 mL）で洗浄し、減圧下で乾燥させて、黄色の固体として標題化合物を生成した（23.1 g, 76%）。lH-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 8.01-7.95(m, 2H), 7.88-7.83(m, 2H), 2.90(t, 2H), 2.60(t, 2H), 1.87(s, 3H)
【０２２５】
実施例２−N-(2-アミノエチル)-4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホンアミド酢酸塩
【０２２６】
標題化合物（22.5 g, 66 %）を、4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル塩化物（25.61 g, 0.1 mol）から、実施例１の手順に従って合成した。lH-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 8.26(d, 1H), 8.01-7.97(m, 2H), 2.97(t, 2H), 2.69(t, 2H), 1.91(s, 3H)
【０２２７】
実施例３−N-(2-アミノエチル)-4-フルオロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホンアミド酢酸塩
【０２２８】
標題化合物（21.7 g, 67 %）を、4-フルオロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル塩化物（23.96 g, 0.10 mol）から、実施例１の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 8.11-8.06(m, 2H), 7.78(m, 1H), 2.94(t, 2H), 2.67(t, 2H), 1.89(s, 3H) 
【０２２９】
実施例４−N-(2-アミノエチル)-2-ニトロ-4-トリフルオロメチル-ベンゼンスルホンアミド酢酸塩
【０２３０】
標題化合物（23.62 g, 63 %）を、2-ニトロ-4-トリフルオロメチル-ベンゼンスルホニル塩化物（28.96 g, 0.10 mol）から、実施例１の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 8.56(s, 1H), 8.28(d, 1H), 8.24(d, 1H), 2.92(t, 2H), 2.65(t, 2H), 1.87(s, 3H)
【０２３１】
実施例５−N-(2-アミノエチル)-4-ニトロ-ベンゼンスルホンアミド酢酸塩
【０２３２】
標題化合物（2.40 g, 78 %）を、4-ニトロ-ベンゼンスルホニル塩化物（2.22 g, 10 mmol）から、実施例１の手順に従って合成した。
【０２３３】
実施例６−N-(2-アミノエチル)-2-クロロ-4-ニトロ-ベンゼンスルホンアミド酢酸塩
【０２３４】
標題化合物（2.38 g, 70 %）を、4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル塩化物（2.56 g, 0.1 mol）から実施例１の手順に従って合成した。
【０２３５】
実施例７−N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステル
【０２３６】
N-(2-アミノエチル)-2-ニトロ-ベンゼンスルホンアミド酢酸塩（15.15 g, 49.6 mmol）及びトリエチルアミン（15.16 g, 0.15 mol）のジクロロメタン（100 mL）中の溶液に、ブロモ酢酸エチル（16.7 g 0.100 mol）を室温で攪拌しながら添加した。さらに1時間攪拌した後、反応混合物を塩水（100 mL）で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧下で蒸発させ、残渣をエチルエーテル（100 mL）で粉砕（triturate）して、白色固体として標題化合物（8.1 g, 49%）を生成した。lH-NMR (500MHz ; DMSO- d6) δ 8.02-7.96 (m, 2H), 7.87-7.84 (m, 2H), 4.05(q, 2H), 3.23(s, 2H), 2.95(t,2H), 2.57(t, 2H), 1.16(t, 3H)
【０２３７】
実施例８−N-[2-(4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステル
【０２３８】
標題化合物（8.3 g, 46 %）を、N-(2-アミノエチル)-4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホンアミド酢酸塩（16.79 g, 49.4 mmol）から実施例７の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 8.26(s, 1H), 8.01(d, 1H), 7.96(d, 1H), 4.06(q, 2H), 3.23 (s, 2H), 2.95(t, 2H), 2.57(t, 2H), 1.16(t, 3H)
【０２３９】
実施例９−N-[2-(4-フルオロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン エチルエステル
【０２４０】
標題化合物（7.7 g, 42 %）を、N-(2-アミノエチル)-4-フルオロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホンアミド, 酢酸塩（16.79 g, 51.9 mmol）から実施例７の手順に従って合成した。1H- NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 8.08(m, 2H), 7.76(m, 1H), 4.06(q, 2H), 3.24(s, 2H), 2.95(t, 2H), 2.57(t, 2H), 1.16(t, 3H)
【０２４１】
実施例１０−N-[2-(2-ニトロ-4-トリフルオロメチル-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステル
【０２４２】
標題化合物（9.23 g, 46 %）を、N-(2-アミノエチル)-2-ニトロ-4-トリフルオロメチル-ベンゼンスルホンアミド酢酸塩（18.76 g, 50.3 mmol）から実施例７の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 8.55(s, 1H), 8.27 d, 1H), 8.22(d, 1H), 4.05(q, 2H), 3.22(s, 2H), 2.99(t, 2H), 2.57(t, 2H), 1.16(t, 3H)
【０２４３】
実施例１１−N-[2-(4-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステル
【０２４４】
標題化合物（826 mg, 50 %）を、N-(2-アミノエチル)-4-ニトロ-ベンゼンスルホンアミド酢酸塩（1.52 g, 5.2 mmol）から実施例７の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 8.41(d, 2H), 8.04(d, 2H), 4.05(q, 2H), 3.23(s, 2H), 2.86(t, 2H), 2.54(t, 2H), 1.16(t, 3H)
【０２４５】
実施例１２−N-[2-(2-クロロ-4-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステル
【０２４６】
標題化合物（885 mg, 48 %）を、 N-(2-アミノエチル)-2-クロロ-4-ニトロ-ベンゼンスルホンアミド酢酸塩（1.68 g, 5 mmol）から実施例７の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 8.43(d, 1H), 8.32(dd, 1H), 8.22(d, 1H), 4.04(q, 2H), 3.20(s, 2H), 2.96(t, 2H), 2.54(t, 2H), 1.16(t, 3H)
【０２４７】
実施例１３−N-[2-(4-メチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステル
【０２４８】
Will（D. W. Will et al., Tetrahedron, 1995, 51, 12069-12802）に記載されたように調製したN-(2-アミノエチル)-グリシンエチルエステル2HCl（1.10 g, 5.0 mmol）の、ジクロロメタン（50 mL）中の溶液に、トリエチルアミン（2.02 g, 20 mmol）を室温でゆっくりと添加した。次いで、4-メチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル塩化物（1.19 g, 5.0 mmol）のジクロロメタン（10 mL）中の溶液を反応混合物に5分間かけて室温で添加した。生じた反応混合物を室温でさらに2時間攪拌し、水（30 mL）で洗浄した。有機層をMgSO4上で乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧下で蒸発させ、所望の生成物を固体として得た（1.60 g, 92 %）。lH-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 7.87(d,1H), 7.81(s,1H), 7.66(d,1H), 4.06(q, 2H), 3.24(s, 2H), 2.91(t, 2H), 2.57(t, 2H), 2.44(s, 3H), 1.17(t, 3H)
【０２４９】
実施例１４−N-[2-(4-クロロ-6-メチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステル
【０２５０】
標題化合物（1.72 g, 90 %）を、N-(2-アミノエチル)-グリシン,エチルエステル2HC1（1.10 g, 5.0 mmol）と4-クロロ-6-メチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル塩化物（1.36 g, 5.0 mmol）とを反応させることにより実施例１３の手順に従って合成した。
【０２５１】
実施例１５−N-[2-(4,6-ジクロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステル 
【０２５２】
標題化合物（1.83 g, 87 %）を、 N-(2-アミノエチル)-グリシン,エチルエステル2HC1（1.10 g, 5.0 mmol）と4,6-ジクロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル塩化物（1.46 g, 5.0 mmol）とを反応させることにより実施例１３の手順に従って合成した。
【０２５３】
実施例１６−N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-アラニンエチルエステル
【０２５４】
Puschl（A. Puschl et al., Tetrahedron, 1998, 39, 4707-4710）に記載された通りに調製されたN-(2-アミノエチル)-アラニンエチルエステル2HCl（1.165 g, 5.0 mmol）を、2-ニトロ-ベンゼンスルホニル塩化物（1.11 g, 5.0 mmol）と反応させることにより実施例１３の手順に従って標題化合物（1.64 g, 95 %）を得た。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 8.02-7.96 (m, 2H), 7.86 (m, 2H), 4.05 (q, 2H), 3.16 (q, 1H), 2.94 (t, 2H), 2.58 (m, 1H), 2.43 (m, 1H), 1.17 (t, 3H), 1.09 (d, 3H)
【０２５５】
実施例１７−N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-フェニルグリシンメチルエステル
【０２５６】
標題化合物（716 mg, 91 %）を、N-(2-アミノエチル)-フェニルグリシン,メチルエステル2HCl（416 mg, 2 mmol）と、2-ニトロ-ベンゼンスルホニル塩化物（592 mg, 2.0 mmol）とを反応させることにより実施例１３の手順に従って合成した。lH-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 8.00-7.94 (m, 2H), 7.87-7.81 (m, 2H), 7.34-7.26 (m, 5H), 4.32 (s, 1H), 3.57(s, 3H), 2.98(t, 2H), 2.54-2.41(m, 2H)
【０２５７】
実施例１８−N-t-ブチルオキシカルボニル-N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン
【０２５８】
N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチル（6.66 g, 20.1 mmol）のテトラヒドロフラン（50 mL）中の溶液に、水（30 mL）中に溶解させたLiOH（1.64 g, 40 mmol）溶液を添加した。室温で1時間攪拌後、二炭酸ジ-t-ブチル（6.55 g, 30 mmol）を反応混合物に添加した。生じた反応混合物を、30分間攪拌し、次いでLiOH（0.82 g, 0.02 mol）の水（15 mL）中の溶液を添加した。TLCによる反応の終了後、沈殿をろ過によって除去し、そしてテトラヒドロフランを減圧下で蒸発させた。残りの溶液を、エチルエステル（100 mL）で洗浄した。水層を、2N HClを添加することによってpH 3まで酸性化し、ジクロロメタン（100 mL）で抽出した。有機層をMgS04上で乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、所望の生成物（7.9 g, 98%）を得た。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 8.00(m, 2H), 7.86(m, 2H), 3.80(s, 1H), 3.76(s, 1H), 3.24(m, 2H), 3.05(m,2H), 1.35(s, 4.5H), 1.31(s, 4.5H)
【０２５９】
実施例１９−N-t-ブチルオキシカルボニル-N-[2-(4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン
【０２６０】
標題化合物（8.1 g, 92 %）を、N-[2-(4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ) -エチル]-グリシンエチルエステル（7.35 g, 20 mmol）から実施例１８の手順に従って合成した。lH-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 8.28(s, 1H), 7.97(s, 2H), 3.78(s, 1H), 3.76(s, 1H), 3.24(m, 2H), 3.06(m, 2H), 1.35(s, 4.5H) 1.31(s, 4.5H)
【０２６１】
実施例２０−N-t-ブチルオキシカルボニル-N-[2-(4-フルオロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン
【０２６２】
標題化合物（7.9 g, 89 %）を、N-[2-(4-フルオロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステル（7.35 g, 21 mmol）から実施例１８の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8.14-8.02(m, 2H), 7.76(m, 1H), 3.82(s, 1H), 3.77(s, lH), 3.24(m, 2H), 3.05(m, 2H), 1.36(s, 4.5H), 1.32(s, 4.5H)
【０２６３】
実施例２１−N-t-ブチルオキシカルボニル-N-[2-(2-ニトロ-4-トリフルオロメチル-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン
【０２６４】
標題化合物（8.62 g, 91 %）を、N-[2-(2-ニトロ-4-トリフルオロメチル-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステル（8.00 g, 20 mmol）から実施例１８の手順に従って合成した。lH-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 8.57(d, 1H), 8.41(t, 0.5H), 8.35(t, 0.5H), 8.19(dd, 1H), 3.82(s, 1H), 3.75(s, 1H), 3.24(t, 2H), 3.09(m, 1H), 1.34(s, 4.5H), 1.30(s, 4.5H) 
【０２６５】
実施例２２−N-t-ブチルオキシカルボニル-[2-(4-メチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン
【０２６６】
標題化合物（7.80 g, 93 %）を、N-[2-(4-メチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステル（6.91 g, 0.02 mol）から実施例１８の手順に従って合成した。lH-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 7.99-7.93(m, 1H), 7.85(dd, 1H), 7.82(s, 1H), 7.67(d, 1H), 3.81(s, 1H), 3.76(s, 1H), 3.23(m, 2H), 3.05(m, 2H), 2.44(s, 3H), 1.36(s, 4.5H), 1.31(s, 4.5H) 
【０２６７】
実施例２３−N-t-ブチルオキシカルボニル-N-[2-(4-クロロ-6-メチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン
【０２６８】
標題化合物（413 mg, 91 %）を、N-[2-(4-クロロ-6-メチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステル（380 mg, 0.01 mol）から実施例１８の手順に従って合成した。
【０２６９】
実施例２４−N-t-ブチルオキシカルボニル-N-[2-(4,6-ジクロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン
【０２７０】
標題化合物（417 mg, 88 %）を、N-[2-(4,6-ジクロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステル（400 mg, 1.0 mmol）から実施例１８の手順に従って合成した。
【０２７１】
実施例２５−N-t-ブチルオキシカルボニル-N-[2-(4-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン
【０２７２】
標題化合物（362 mg, 90 %）を、N-[2-(4-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステル（331 mg, 1.0 mmol）から実施例１８の手順に従って合成した。lH-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 8.42(dd, 2H), 8.03(d, 2H), 8.01(br, 1H), 3.80(s, 1H), 3.22(m, 2H), 2.96(m, 2H), 1.34(s, 4.5H), 1.31(s, 4.5H) 
【０２７３】
実施例２６−N-t-ブチルオキシカルボニル-N-[2-(2-クロロ-4-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン
【０２７４】
標題化合物（371 mg, 85 %）を、N-[2-(2-クロロ-4-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステル（366 mg, 20 mmol）から実施例１８の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8.44(q, 1H), 8.35-8.27(m, 2H), 8.20(d, 1H), 3.81(s, 1H), 3.73(s, 1H), 3.22(t, 2H), 3.06(m, 2H), 1.35(s, 4.5H), 1.30(s, 4.5H) 
【０２７５】
実施例２７−N-(t-ブチルオキシカルボニル)-N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-アラニン
【０２７６】
N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ-エチル)-アラニンエチルエステル（1.04 g, 3 mmol）のテトラヒドロフラン（10 mL）中の溶液を、水（10 mL）中に溶解したLiOH（252 mg, 6 mmol）溶液に添加した。室温で1時間攪拌した後、二炭酸ジ-t-ブチル（983 mg, 4.5 mmol）を反応混合物に添加した。生じた反応混合物を5時間攪拌し、次いで水（15 mL）中のLiOH（126 mg, 3 mmol）の溶液を添加した。TLCによる反応の終了後、沈殿をろ過によって除去し、テトラヒドロフランを減圧下で蒸発させた。残りの溶液をエチルエーテル（20 mL）で洗浄した。水層を、2N HClを添加することによってpH 3まで酸性化し、ジクロロメタン（30 mL）で抽出した。有機層をMgSO4上で乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、所望の生成物（1.16 g, 93%）を得た。lH-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 7.99(m, 2H), 7.87(m, 2H), 4.31(q, 0.4H), 4.03(q, 0.6H), 3.37-3.19(m, 2H), 3.10-2.95(m, 2H), 1.35(s, 4.5H), 1.33(s, 4.5H), 1.30(d, 1.5H), 1.29(d, 1.5H) 
【０２７７】
実施例２８−N-(t-ブチルオキシカルボニル)-N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-フェニルグリシン
【０２７８】
標題化合物（583 mg, 81 %）を、N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-フェニルグリシンメチルエステル（590 mg, 1.5 mmol）から実施例２７の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 7.97-7.82(m, 4H), 7.35-7.30(m, 3H), 7.23-7.21(m, 2H), 5.58(s, 0.6H), 5.40(s, 0.4H), 3.20-2.85(m, 4H), 1.46(s, 4.5H), 1.37(s, 4.5H)
【０２７９】
実施例２９−1-(2-ニトロベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩
【０２８０】
N-(t-ブトキシカルボニル)-N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン（8.06 g, 20 mmol）のジクロロメタン（100 ml）中の溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（5.16 g, 25 mmol）を添加した。室温で2時間攪拌した後、沈殿をろ過によって除去した。ろ液を濃縮して、残渣を酢酸エチル（50 mL）に溶解させ、0℃まで冷却した。沈殿固体を除去して、ろ液に酢酸エチル（100 mL）中の2N-HClを添加した。混合物をさらに10時間、周囲温度で攪拌した。沈殿生成物をろ過して除去し、酢酸エチル（500 mL）で洗浄し、減圧下で乾燥させ、標題化合物を白色固体5.39 g(79%)として得た。lH-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 9.95(br.s, 2H), 8.38(d,1H), 8.04-7.95(m, 2H), 4.09(dd, 2H), 3.96(s, 2H), 3.56(dd, 2H)
【０２８１】
実施例３０−1-(4-クロロ-2-ニトロベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩
【０２８２】
標題化合物（4.3 g, 67 %）を、N-(t-ブチルオキシカルボニル)-N-[2-(4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ) -エチル]-グリシン（7.92 g, 18 mmol）から実施例２９の手順に従って合成した。lH-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 10.01(br.s, 2H), 8.42(d, 1H), 8.35(dd, 1H), 8.06(dd, 1H), 4.07(t, 2H), 3.95(s, 2H), 3.55(t, 2H)
【０２８３】
実施例３１−1-(4-フルオロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩
【０２８４】
標題化合物（4.2 g, 69 %）を、N-(t-ブチルオキシカルボニル)-N-[2-(4-フルオロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル}-グリシン（7.61 g, 18 mmol）から実施例２９の手順に従って合成した。lH-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 9.91(br.s, 2H), 8.43(m, 1H), 8.27(m, 1H), 7.87(m, 1H), 4.06(dd, 2H), 3.96(s, 2H), 3.55(dd, 2H)
【０２８５】
実施例３２−1-(2-ニトロ-4-トリフルオロメチル-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩
【０２８６】
標題化合物（2.55 g, 65 %）を、N-(t-ブチルオキシカルボニル)-N-[2-(2-ニトロ-4-トリフルオロメチル-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン（4.71 g, 10 mmol）から実施例２９の手順に従って合成した。lH-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 10.16(br.s, 2H), 8.71(s, 1H), 8.60(d, 1H), 8.35(d, 1H), 4.13(dd, 2H), 3.96(s, 2H), 3.57(dd, 2H)
【０２８７】
実施例３３−1-(4-メチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩
【０２８８】
標題化合物（2.40 g, 71 %）を、N-(t-ブチルオキシカルボニル)-N-[2-(4-メチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン（4.19 g, 10 mmol）から実施例２９の手順に従って合成した。lH-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.87(br.s, 1H), 8.23(d, 1H), 7.98(s, 1H), 7.77(d, 1H), 4.06(dd, 2H), 3.95(s, 2H), 3.55(dd, 2H), 2.49(s, 3H)
【０２８９】
実施例３４−1-(4-クロロ-6-メチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHC1塩
【０２９０】
標題化合物（2.53 g, 68 %）を、N- (t-ブチルオキシカルボニル)-N-[2-(4-クロロ-6-メチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン（4.54 g, 10 mmol）から実施例２９の手順に従って合成した。lH-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 10.02(br.s, 2H), 8.20(s, 1H), 7.96(s, 1H), 4.04(dd, 2H), 3.96(s, 2H), 3.53(dd, 2H), 2.67(s, 3H)
【０２９１】
実施例３５−1-(4,6-ジクロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩
【０２９２】
標題化合物（2.51 g, 64 %）を、N-(t-ブチルオキシカルボニル)-N-[2-(4,6-ジクロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン（4.74 g, 10 mmol）から実施例２９の手順に従って合成した。lH-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 10.06(br.s, 2H), 8.43(s,1H), 8.32(s,1H), 4.16(t, 2H), 3.99(s, 2H), 3.50(t, 2H)
【０２９３】
実施例３６−1-(4-ニトロベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩
【０２９４】
標題化合物（208 mg, 65 %）を、N-(t-ブチルオキシカルボニル)-N-[2-(4-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン（403 mg, 1 mmol）から実施例２９の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 9.92(br.s, 2H), 8.43(d, 2H), 8.29(d, 2H), 4.17(dd, 2H), 4.03(s, 2H), 3.54(dd, 2H)
【０２９５】
実施例３７−1-(2-クロロ-4-ニトロベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩
【０２９６】
標題化合物（239 mg, 67 %）を、N-(t-ブチルオキシカルボニル)-N-[2-(2-クロロ-4-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン（437 mg, 1 mmol）から実施例２９の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 10.28(br.s, 2H), 8.53(d, 1H), 8.45(d, 1H), 8.39(dd, 1H), 4.25(dd, 2H), 3.94(s, 2H), 3.54(dd, 2H)
【０２９７】
実施例３８−1-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-3-メチル-ピペラジン-2-オンHCl塩
【０２９８】
標題化合物（450 mg, 67 %）を、N-(t-ブチルオキシカルボニル)-N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-アラニン（835 mg, 2 mmol）から実施例２９の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 8.38(d, 1H), 8.14(d, 1H), 8.03(dd, 1H), 7.98(dd, 1H), 4.30(m, 1H), 4.13(m, 2H), 3.70(m, 1H), 3.51(m, 1H), 1.39(d, 3H)
【０２９９】
実施例３９−1-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-3-フェニル-ピペラジン-2-オンHCl塩
【０３００】
標題化合物（247 mg, 63 %）を、N-(t-ブチルオキシカルボニル)-N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-フェニルグリシン（480 mg, 1 mmol）から実施例２９の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 8.35(d, 1H), 8.15(d, 1H), 8.02 (t, 1H), 7.94(t, 1H), 7.40(m, 5H), 5.47(br s, 1H), 4.24(m, 2H), 3.69(m, 1H), 3.60(m, 1H)
【０３０１】
実施例４０−(2-アミノ-6-ヨードプリン-9-イル)-酢酸エチルエステル
【０３０２】
2-アミノ-6-ヨード-プリン（78.3 g, 0.3 mol）のDMF（1960 mL）中の溶液に、ブロモ酢酸エチル（55.1 g, 0.33 mol）と炭酸カリウム（82.9 g, 0.6 mol）を添加した。生じた反応混合物を、室温で12時間攪拌した。反応混合物を少量（約150 mL）まで減圧下で濃縮して、残渣を水に溶解した。固体をろ過して除去し、水とエチルエーテルで洗浄し、減圧下で乾燥させ、標題化合物（98.4 g,95%）を生成した。1H-NMR (500MHz ;DMSO-d6) δ 8.06(s, 1H), 6.90(br.s, 2H), 4.94(s, 2H), 4.17(q, 2H), 1.22(t, 3H)
【０３０３】
実施例４１−[2-(ベンズヒドリルオキシカルボニル)-アミノ-6-ヨードプリン-9-イル]-酢酸エチルエステル
【０３０４】
(2-アミノ-6-ヨードプリン-9-イル)-酢酸エチルエステル（13.9 g, 40 mmol）のTHF（280 mL）中溶液に、トリホスゲン（5.34 g, 18 mmol）を0℃で添加した。さらに5分間攪拌した後、N,N-ジイソプロピルエチルアミン（24.4 mL）をゆっくりと添加し、反応混合物を0℃で30分間攪拌した。次いで、ベンズヒドロールを添加し、生じた反応混合物を室温まで温まるよう放置し、さらに13時間攪拌した。反応混合物を、1N HCl溶液の添加により中和し、 塩化ナトリウムとチオ硫酸ナトリウムで飽和させた。有機層を分離し、水層を酢酸エチル（200 mL X 3）で抽出した。併せた有機層を、塩水（200 mL X 2）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧下で蒸発させ、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製して標題化合物（15.15g, 68%）を得た。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 10.88(bs, 1H), 8.45(s, 1H), 7.60-7.20(m, 10H), 6.79(s, 1H), 5.08(s, 2H), 4.15(q, 2H), 1.17(t, 3H)
【０３０５】
実施例４２−[2-N-(ベンズヒドリルオキシカルボニル)-グアニン-9-イル]-酢酸
【０３０６】
60% NaH（5.04 g, 126 mmol）のTHF（110 mL）中の懸濁液に、3-ヒドロキシプロピオニトリルを0℃で10分間かけてゆっくりと添加し、混合物をさらに12分間攪拌した。 生じた反応混合物に、[2-(ベンズヒドリルオキシカルボニル)-アミノ-6-ヨード-プリン-9-イル]-酢酸（11.12 g, 21 mmol）を分割して（portionwise）、氷浴中でゆっくりと添加した。添加が終了した後、氷浴を取り除いて、さらに3.5時間攪拌し続けた。 次いで、反応混合物を、20%クエン酸水溶液を添加することにより酸性化し、塩化ナトリウムで飽和させた。有機層を分離し、水層をTHF（300 mL X 2）で抽出した。併せた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をエチルアルコールで再結晶化した。固体をろ過して除去し、冷エチルアルコールで洗浄し、減圧下で乾燥させて所望の生成物（9.00 g）を得た。
【０３０７】
実施例４３−[2-(ベンジルオキシカルボニル)-アミノ-6-ヨード-プリン-9-イル]-酢酸エチルエステル
【０３０８】
標題化合物（12.42 g, 64.4%）を、(2-アミノ-6-ヨードプリン-9-イル)-酢酸エチルエステル（13.9 g, 40 mmol）とホスゲンとの反応、引き続いてベンジルアルコール処理によって実施例４１の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 10.83(bs, 1H), 8.48(s, 1H), 7.50-7.30(m, 5H), 5.18(s, 2H), 5.11(s, 2H), 4.19(q, 2H), 1.21(t, 3H)
【０３０９】
実施例４４−[2-(ベンジルオキシカルボニル)-アミノ-6-ヨードプリン-9-イル]-酢酸
【０３１０】
[2-(ベンジルオキシカルボニル)-アミノ-6-ヨード-プリン-9-イル]-酢酸エチルエステル（10.02 g, 20.8 mmol）のテトラヒドロフラン（50 mL）と水（50 mL）中の懸濁液に、水酸化リチウム水和物（2.83 g, 20.8 mmol）を10℃で添加した。生じた反応混合物を30分間攪拌した。次いで、混合物を1N HClの添加によりpH 3まで酸性化した。沈殿した固体をろ過して除去し、水とエチルエーテルで洗浄し、減圧下で乾燥させて標題化合物（9.81g）を得た。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 10.75(s, 1H), 8.44(s, 1H), 7.50-7.30(m,5H), 5.17(s, 2H), 4.97(s, 2H)
【０３１１】
実施例４５−[2-N-(ベンジルオキシカルボニル)-グアニン-9-イル]-酢酸
【０３１２】
標題化合物（5.44 g, 79.2%）を、[2-(ベンジルオキシカルボニル)-アミノ-6-ヨードプリン-9-イル]-酢酸（9.06 g, 20 mmol）から実施例４２の手順に従って合成した。1H NMR (DMSO-d6) δ 11.54(s, 1H), 11.37(s, 1H), 7.94(s, 1H), 7.46-7.33(m, 5H), 5.28(s, 2H), 4.87(s, 2H)
【０３１３】
実施例４６−N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-N-[(チミン-1-イル)-アセチル]-グリシンエチルエステル
【０３１４】
N-[2-(2-ニトロ-スルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステル（1.67g, 5 mmol）、(チミン-1-イル)-酢酸（0.92 g, 5 mmol）、及びPyBOP（3.12 g, 6 mmol）のDMF（15 mL）中の混合物に、N,N-ジイソプロピルエチルアミン（1.31 mL, 7.5 mmol）を周囲温度で添加した。生じた反応混合物を7時間、同じ温度で攪拌し、溶媒を減圧下で除去した。残渣を酢酸エチル（50 mL）中に溶解させ、1N HCl水溶液、飽和重炭酸ナトリウム溶液、及び塩水で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ろ過した。ろ液を濃縮し、残渣をエチルアルコールで粉砕した。生じた固体をろ過して除去し、減圧下で乾燥させて、標題化合物を白色固体（2.35 g, 93%）として得た。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 11.29(s, 0.6H), 11.26(s, 0.4H), 8.25-7.87(m, 5H), 7.30(s, 0.6H), 7.23(s, 0.4H), 4.64(s, 1.2H), 4.46(s, 0.8H), 4.29(s, 0.8H), 4.16(q, 0.8H), 4.07(q, 1.2H), 4.00(s, 1.2H), 3.49(t, 1.2H), 3.21(q, 1.2H), 3.12-3.01(m, 1.6H), 1.75(s, 3H), 1.22(t, 1.2H), 1.17(t, 1.8H)
【０３１５】
実施例４７−N-[2-(4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-N-[(チミン-1-イル)-アセチル]-グリシンエチルエステル
【０３１６】
標題化合物（2.46 g, 92 %）を、N-[2-(4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステル（1.84 g, 5 mmol）と(チミン-1-イル)-酢酸（0.92 g, 5 mmol）との反応により実施例４６の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 11.31(s, 0.6H), 11.28(s, 0.4H), 8.31-7.95(m, 4H), 7.31(s, 0.6H), 7.23(s, 0.4H), 4.64(s, 1.2H), 4.46(s, 0.8H), 4.28(s, 0.8H), 4.16(q. 0.8H), 4.07(q. 1.2H), 4.00(s, 1.2H), 3.49(t, 1.2H), 3.22(q, 1.2H), 3.12-3.01(m, 1.6H), 1.74(s, 3H), 1.22(t, 1.2H), 1.17(t, 1.8H)
【０３１７】
実施例４８−N-[2-(4-フルオロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-N-[(チミン-l-イル)-アセチル]-グリシンエチルエステル
【０３１８】
標題化合物（2.35 g, 91 %）を、N-[2-(4-フルオロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステル（1.76 g, 5 mmol）と(チミン-1-イル)-酢酸（0.92 g, 5 mmol）との反応により実施例４６の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 11.30(s, 0.6H), 11.27(s, 0.4H), 8.28-8.05(m, 2.8H), 7.78(m, 1.2H), 7.31(s, 0.6H), 7.23(s, 0.4H), 4.65(s, 1.2H), 4.47(s, 0.8H), 4.30(s, 0.8H), 4.16(q. 0.8H), 4.07(q. 1.2H), 4.00(s, 1.2H), 3.49(t, 1.2H), 3.22(q, 1.2H), 3.12-3.01(m, 1.6H), 1.75(s, 3H), 1.23(t, 1.2H), 1.18(t, 1.8H)
【０３１９】
実施例４９−N-[2-(2-ニトロ-4-トリフルオロメチル-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-N-[(チミン-1-イル)-アセチル]-グリシンエチルエステル
【０３２０】
標題化合物（2.69 g, 95 %）を、N-[2-(2-ニトロ-4-トリフルオロメチル-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステル（2.00 g, 5 mmol）と(チミン-1-イル)-酢酸（0.92 g, 5 mmol）との反応により実施例４６の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 11.31(s, 0.55H), 11.28(s, 0.45H), 8.57(s, 0.55H), 8.54(s, 0.45H), 8.50(t, 0.55H), 8.38(t, 0.45H), 8.29-8.18(m, 2H), 7.31(s, 0.55H), 7.22(s, 0.45H), 4.64(s, 1.1H), 4.46(s, 0.9H), 4.21(s, 0.9H), 4.16(q. 0.9H), 4.07(q. 1.1H), 3.95(s, 1.1H), 3.49(t, 1.1H), 3.37(q, 1.1H), 3.25(t, 0.9H), 3.09(t, 0.9H), 1.75(s, 3H), 1.23(t, 1.35H), 1.18(t, 1.65H)
【０３２１】
実施例５０−N-{[4-N-(ベンズヒドリルオキシカルボニル)-シトシン-1-イル]-アセチル}-N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステル
【０３２２】
標題化合物（2.45 g, 88 %）を、N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステル（1.33 g, 4 mmol）と2-[4-N-(ベンズヒドリルオキシカルボニル)-シトシン-1-イル]-酢酸（1.51 g, 4 mmol）との反応により実施例４６の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 10.99(s, 0.6H), 10.98(s, 0.4H), 8.30-7.80(m, 5H), 7.50-7.25(m, 10H),  6.94(t, 1H),  6.79(s, 1H), 4.79(s, 1.2H), 4.61(s, 0.8H), 4.33(s, 0.8H), 4.15(q. 0.8H), 4.05(q. 1.2H), 4.01(s, 1.2H), 3.52(t, 1.2H), 3.36(t, 0.8H), 3.24(q, 1.2H), 3.02(q, 0.8H), 1.23(t, 1.2H), 1.15(t, 1.8H)
【０３２３】
実施例５１−N-{[4-(ベンジルオキシカルボニル)-シトシン-1-イル]-アセチル}-N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステル
【０３２４】
標題化合物（収率：78 %）を、実施例４６の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 8.15-8.06(m, 1H), 7.84-7.57(m, 5H), 7.38-7.32(m, 6H), 7.14(t, 0.7H), 6.44(t, 0.3H), 5.20(s, 2H), 4.93(s, 1.4H), 4.55(s, 0.6H), 4.36(s, 0.6H), 4.26(q. 0.6H), 4.17(q. 1.4H), 4.03(s, 1.4H), 3.71(t, 1.4H), 3.57(t, 0.6H), 3.39(q, 1.4H), 3.30(q, 0.6H), 1.31(t, 0.9H), 1.24(t, 2.1H)
【０３２５】
実施例５２−N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-N-[(チミン-1-イル)-アセチル]-グリシン
【０３２６】
N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-N-[(チミン-1-イル)-アセチル]-グリシンエチルエステル（1.00 g, 2.0 mmol）のTHF（10 mL）中の溶液に、水酸化リチウム（210 mg, 5 mmol）の水（10 mL）中の溶液を10℃で添加した。1.5時間の攪拌後、反応混合物を1N HCl水溶液の添加により、pH 2〜3まで酸性化した。沈殿した固体をろ過して除去し、水で洗浄し、減圧下で乾燥させ、標題生成物を白色固体（896 mg, 95%）として得た。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 11.30(s, 0.6H), 11.27(s, 0.4H), 8.22-7.85(m, 5H), 7.31(d, 0.6H), 7.23(d, 0.4H), 4.63(s, 1.2H), 4.45(s, 0.8H), 4.19(s, 0.8H), 4.16(q, 0.8H), 3.93(s, 1.2H), 3.47(t, 1.2H), 3.34(t, 0.8H), 3.20(q, 1.2H), 3.04(q, 0.8H), 1.75(s, 3H)
【０３２７】
実施例５３−N-[2-(4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-N-[(チミン-1-イル)-アセチル]-グリシン
【０３２８】
標題化合物（1.40 g, 93 %）を、N-[2-(4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-N-[(チミン-1-イル)-アセチル]-グリシンエチルエステル（1.60 g, 3.0 mmol）から実施例５２の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 11.31(s, 0.55H), 11.28(s, 0.45H), 8.33-7.95(m, 4H), 7.31(s, 0.55H), 7.23(s, 0.45H), 4.63(s, 1.1H), 4.44(s, 0.9H), 4.20(s, 0.9H), 4.00(s, 1.1H), 3.47(t, 1.1H), 3.34(t, 0.9H), 3.19(q, 1.1H), 3.04(q, 0.9H), 1.75(s, 3H)
【０３２９】
実施例５４−N-[2-(4-フルオロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-N-[(チミン-1-イル)-アセチル]-グリシン
【０３３０】
標題化合物（0.92 g, 94 %）を、N-[2-(4-フルオロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-N-[(チミン-1-イル)-アセチル]-グリシンエチルエステル（1.03 g, 2.0 mmol）から実施例５２の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 11.30(s, 0.6H), 11.28(s, 0.4H), 8.29-8.05(m, 2.8H), 7.78(m, 1.2H), 7.31(s, 0.6H), 7.23(s, 0.4H), 4.63(s, 1.2H), 4.44(s, 0.8H), 4.20(s, 0.8H), 3.94(s, 1.2H), 3.46(t, 1.2H), 3.34(t, 0.8H), 3.20(q, 1.2H), 3.04(q, 0.8H), 1.75(s, 3H)
【０３３１】
実施例５５−N-[2-(2-ニトロ-4-トリフルオロメチル-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-N-[(チミン-1-イル)-アセチル]-グリシン
【０３３２】
標題化合物（1.02 g, 95 %）を、N-[2-(2-ニトロ-4-トリフルオロメチル-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-N-[(チミン-1-イル)-アセチル]-グリシンエチルエステル（1.14 g, 2.0 mmol）から実施例５２の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ  11.31(s, 0.55H), 11.28(s, 0.45H), 8.58(s, 0.55H), 8.54(s, 0.45H), 8.51(s, 0.55H), 8.38(s, 0.45H), 8.29-8.18(m, 2H), 7.31(s, 0.55H), 7.22(s, 0.45H), 4.63(s, 1.1H), 4.45(s, 0.9H), 4.20(s, 0.9H), 3.94(s, 1.1H), 3.48(s, 1.1H), 3.37(t, 0.9H), 3.24(q, 1.1H), 3.09(q, 0.9H), 1.75(s, 3H)
【０３３３】
実施例５６−N-{[4-N-(ベンズヒドリルオキシカルボニル)-シトシン-1-イル]-アセチル}-N-[2-(2-ニトロ-ベンゼネスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン
【０３３４】
N-{[4-N-(ベンズヒドリルオキシカルボニル)-シトシン-l-イル]-アセチル}-N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステル（1.91 g, 2.75 mmol）のTHF（10 m）中の溶液に、水酸化リチウム（290 mg, 6.9 mmol）の水（9 mL）中の溶液を10℃で添加した。1.5時間攪拌後、反応混合物を1N HCl溶液の添加によりpH 3〜4まで酸性化した。水層を塩化ナトリウムにより飽和させ、有機層を分離した。水層をTHF（15 mL X 2）により抽出した。併せた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過した。ろ液を濃縮し、エチルアルコールで粉砕して固体を沈殿させた。沈殿した固体をろ過して除去し、水で洗浄し、減圧下で乾燥させ、標題化合物を白色固体（1.42 g,78%）として得た。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 8.25-7.80(m, 5H), 7.50-7.25(m, 10H), 6.94(d, 0.6H), 6.92(d, 0.4H), 6,79(1H, s), 4.78(s, 1.2H), 4.60(s, 0.8H), 4.22(s, 0.8H), 3.94(s, 1.2H), 3.50(t, 1.2H), 3.35(t, 0.8H), 3.24(q, 1.2H), 3.02(q, 0.8H)
【０３３５】
実施例５７−N-{[4-N-(ベンジルオキシカルボニル)-シトシン-1-イル]-アセチル}-N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン
【０３３６】
標題化合物（収率：70 %）を、N-{[4-N-(ベンジルオキシカルボニル)-シトシン-1-イル]-アセチル}-N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンエチルエステルから実施例５６の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 8.26-7.83(m, 5H), 7.44-7.33(m, 5H), 7.02(d, 0.6H), 7.00(d, 0.4H), 5.19(s, 2H) 4.80(s, 1.2H), 4.61(s, 0.8H), 4.23(s, 0.8H), 3.94(s, 1.2H), 3.50(t, 1.2H), 3.35(t, 0.8H), 3.24(q, 1.2H), 3.02(q, 0.8H)
【０３３７】
実施例５８−1-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-4-[(チミン-1-イル)-アセチル]-ピペラジン-2-オン
N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-N-[(チミン-1-イル)-アセチル]-グリシン（469 mg, 1.0 mmol）とN-メチルモルホリン（330μL, 3 mmol）のTHF（10 mL）中の溶液に、クロロギ酸イソブチル（205 mg, 1.5 mmol）を-20℃で添加した。反応混合物を0℃に温まるよう1時間放置した。次いで、水（10 mL）を反応混合物に添加して固体を沈殿させた。固体をろ過して除去し、水で洗浄し、減圧下で乾燥させ、標題化合物（442 mg, 98%）を得た。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 11.32(s, 0.6H), 11.30(s, 0.4H), 8.35(m, 1H), 8.12(dd, 1H), 8.04-7.96(m, 2H), 7.35(s, 0.6H), 7.28(s, 0.4H), 4.67(s, 1.2H), 4.59(s, 0.8H), 4.41(s, 0.8H), 4.27(s, 1.2H), 4.04(m, 1.2H), 3.95(m, 1.2H), 3.90-3.85(m, 1.6H), 1.75(s,3H) 
【０３３８】
実施例５９−1-(4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-4-[(チミン-1-イル)-アセチル]-ピペラジン-2-オン)
【０３３９】
標題化合物（933 mg, 96 %）を、N-[2-(4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-N-[(チミン-1-イル)-アセチル]-グリシン（1.01 g, 2.0 mmol）から実施例５８の手順に従って合成した。 1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 11.33(s, 0.6H), 11.31(s, 0.4H), 8.40(d, 1H), 8.33(dd, 1H), 8.08(dd, 1H), 7.34(s, 0.6H), 7.28(s, 0.4H), 4.66(s, 1.2H), 4.59(s, 0.8H), 4.41(s, 0.8H), 4.26(s, 1.2H), 4.02(m, 1.2H), 3.94(m, 1.2H), 3.89-3.82(m, 1.6H), 1.74(s, 3H)
【０３４０】
実施例６０−1-(4-フルオロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-4-[(チミン-1-イル)-アセチル]- ピペラジン-2-オン
【０３４１】
標題化合物（451 mg, 96 %）を、N-[2-(4-フルオロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-N-[(チミン-1-イル)-アセチル]-グリシン（487 mg, 1.0 mmol）から実施例５８の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 11.33(s, 0.6H), 11.31(s, 0.4H), 8.41(m, 1H), 8.25(dd, 1H), 7.88(m, 1H), 7.34(s, 0.6H), 7.28(s, 0.4H), 4.66(s, 1.2H), 4.59(s, 0.8H), 4.41(s, 0.8H), 4.26(s, 1.2H), 4.02(m, 1.2H), 3.94(m, 1.2H), 3.88-3.82(m, 1.6H), 1.74(s, 3H) 
【０３４２】
実施例６１−1-(2-ニトロ-4-トリフルオロメチル-ベンゼンスルホニル)-4-[(チミン-1-イル)-アセチル]-ピペラジン-2-オン
【０３４３】
標題化合物（493 mg, 95 %）を、N-[2-(2-ニトロ-4-トリフルオルメチル-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-N-[(チミン-1-イル)-アセチル]-グリシン（537 mg, 1.0 mmol）から実施例５８の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 11.33(s, 0.6H), 11.31(s, 0.4H), 8.69(s, 1H), 8.56(dd, 1H), 8.39(dd, 1H), 7.34(s, 0.6H), 7.28(s, 0.4H), 4.67(s, 1.2H), 4.59(s, 0.8H), 4.42(s, 0.8H), 4.27(s, 1.2H), 4.05(m, 1.2H), 3.95(m, 1.2H), 3.91-3.85(m, 1.6H), 1.75(s, 3H)
【０３４４】
実施例６２−4-{[4-N-(ベンズヒドリルオキシカルボニル)-シトシン-1-イル]-アセチル}-1-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オン
【０３４５】
N-{[4-N-(ベンズヒドリルオキシカルボニル)-シトシン-1-イル]-アセチル}-N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシン（1.20 g, 1.8 mmol）のTHF（24 mL）中の溶液に、N-メチルモルホリン（0.6 mL, 5.42 mmol）を添加し、次いで混合物を-20℃まで冷却した。同じ温度で5分間攪拌した後、クロロギ酸イソブチル（0.30 mL, 2.31 mmol）を反応混合物に添加した。生じた混合物を0℃まで1時間かけてゆっくりと温めた。次いで、反応混合物を減圧下で蒸発させ、酢酸エチルとアセトニトリルの混合物中に溶解させた。溶液を飽和NaCl溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧下で蒸発させ、メタノールで粉砕し、固体を沈殿させた。固体をろ過して除去し、メタノールで洗浄し、減圧下で乾燥させ、標題化合物0.9 g（77%）を得た。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 8.35(t, 1H), 8.12-7.95(m, 3H), 7.90(d, 0.6H), 7.84(d, 0.4H), 7.48-7.28(m, 10H), 6.95(d, 0.6H), 6.94(d, 0.4H), 6.79(s, 1H), 4.82(s, 1.2H), 4.73(s, 0.8H), 4.45(s, 0.8H), 4.27(s, 1.2H), 4.10-3.95(m, 2.4H), 3.95-3.80(m, 1.6H)
【０３４６】
実施例６３−4-{[4-N-(ベンジルオキシカルボニル)-シトシン-1-イル]-アセチル}-1-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オン
標題化合物（収率：90 %）を、N-{[4-N-(ベンジルオキシカルボニル)-シトシン-1-イル]-アセチル}-N-[2-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニルアミノ)-エチル]-グリシンから実施例６２の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 10.76(s, 1H), 8.36(t, 1H), 8.12(dd, 1H), 8.02-7.81(m, 3H), 7.41-7.31(m, 5H), 7.03(s, 0.4H), 7.02(s, 0.6H), 5.17(s, 2H), 4.82(s, 1.2H), 4.74(s, 0.8H), 4.45(s, 0.8H), 4.27(s, 1.2H), 4.06(m, 1.2H), 3.98(m, 1.2H), 3.91(m, 0.8H), 3.84(m, 0.8H)
【０３４７】
実施例６４−1-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-4-[(チミン-1-イル)-アセチル]-ピペラジン-2-オン
【０３４８】
1-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩（1.13 g, 3.5 mmol）、(チミン-1-イル)-酢酸（0.64 g, 3.5 mmol）、及びPyBOP（2.00 g, 3.85 mmol）のDMF（11 mL）中の混合物に、N,N-ジイソプロピルエチルアミン（0.91 mL）を室温で添加した。さらに2時間攪拌した後、反応混合物を水溶性のエチルアルコール溶液にゆっくりと添加して、固体を沈殿させた。固体をろ過して除去し、エタノールとエチルエーテルで洗浄し、減圧下で乾燥させ、標題化合物（1.50 g, 95%）を得た。 
【０３４９】
実施例６５−1-(4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-4-[(チミン-1-イル)-アセチル]-ピペラジン-2-オン
【０３５０】
標題化合物（1.60 g, 94 %）を、1-(4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩（1.25 g, 3.5 mmol）と(チミン-1-イル)-酢酸（0.64 g, 3.5 mmol）との反応によって実施例６４の手順に従って合成した。
【０３５１】
実施例６６−1-(4-フルオロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-4-[(チミン-1-イル)-アセチル]-ピペラジン-2-オン
【０３５２】
標題化合物（900 mg, 96 %）を、1-(4-フルオロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩（680 mg, 2.0 mmol）と(チミン-1-イル)-酢酸（369 mg, 2.0 mmol）との反応によって、実施例６４の手順に従って合成した。
【０３５３】
実施例６７−1-(2-ニトロ-4-トリフルオロメチル-ベンゼンスルホニル)-4-[(チミン-1-イル)-アセチル]-ピペラジン-2-オン
【０３５４】
標題化合物（980 mg, 94 %）を、1-(2-ニトロ-4-トリフルオロメチル-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩（780 mg, 2 mmol）と(チミン-1-イル)-酢酸（369 mg, 2 mmol）との反応によって実施例６４の手順に従って合成した。
【０３５５】
実施例６８−1-(4-メチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-4-[(チミン-1-イル)-アセチル]-ピペラジン-2-オン
【０３５６】
標題化合物（888 mg, 95 %）を、1-(4-メチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩（672 mg, 2.0 mmol）と(チミン-1-イル)-酢酸（369 mg, 2.0 mmol）との反応によって実施例６４の手順に従って合成した。 1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 11.33(s, 0.6H), 11.32(s, 0.4H), 8.22(m, 1H), 7.96(s, 1H), 7.78(m, 1H), 7.35(s, 0.6H), 7.28(s, 0.4H), 4.66(s, 1.2H), 4.58(s, 0.8H), 4.39(s, 0.8H), 4.24(s, 1.2H), 4.01(m, 1.2H), 3.93(m, 1.2H), 3.88-3.81(m, 1.6H), 2.49(s, 3H), 1.74(s, 3H)
【０３５７】
実施例６９−1-(4-クロロ-6-メチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-4-[(チミン-1-イル)-アセチル]-ピペラジン-2-オン
【０３５８】
標題化合物（913 mg, 91%）を、1-(4-クロロ-6-メチル-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩（740 mg, 2.0 mmol）と(チミン-1-イル)-酢酸（368 mg, 2.0 mmol）との反応によって実施例６４に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 11.34(s, 0.6H), 11.32(s, 0.4H), 8.19(s, 1H), 7.95(s, 1H), 7.34(s, 0.6H), 7.28(s, 0.4H), 4.67(s, 1.2H), 4.59(s, 0.8H), 4.40(s, 0.8H), 4.26(s, 1.2H), 3.99(m, 1.2H), 3.92(m, 1.2H), 3.82(m, 1.6H), 2.64(s, 3H), 1.74(s, 3H)
【０３５９】
実施例７０−1-(4,6-ジクロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-4-[(チミン-1-イル)アセチル]-ピペラジン-2-オン
【０３６０】
標題化合物（919 mg, 88%）を、1-(4,6-ジクロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩（781 mg, 2.0 mmol）と(チミン-1-イル)-酢酸（368 mg, 2.0 mmol）との反応によって実施例６４に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 11.34(s, 0.6H), 11.32(s, 0.4H), 8.42(d, 0.4H), 8.41(d, 0.6H), 8.32(d, 0.4H), 8.30(d, 0.6H), 7.35(s, 0.6H), 7.27(s, 0.4H), 4.69(s, 1.2H), 4.58(s, 0.8H), 4.42(s, 0.8H), 4.27(s, 1.2H), 4.11(t, 1.2H), 3.97(t, 0.8H), 3.93(t, 1.2H), 3.82(t, 0.8H), 1.74(s, 3H)
【０３６１】
実施例７１−1-(4-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-4-[(チミン-1-イル)-アセチル]-ピペラジン-2-オン
【０３６２】
標題化合物（151 mg, 95%）を、1-(4-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩（113 mg, 0.35 mmol）と(チミン-1-イル)-酢酸（64 mg, 0.35 mmol）との反応によって実施例６４に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 11.31(s, 0.6H), 11.29(s, 0.4H), 8.44(d, 2H), 8.29(d, 2H), 7.34(s, 0.6H), 7.27(s, 0.4H), 4.64(s, 1.2H), 4.55(s, 0.8H), 4.33(s, 0.8H), 4.18(s, 1.2H), 4.14(t, 1.2H), 4.00(t, 0.8H), 3.90(t, 1.2H), 3.80(t, 0.8H), 1.74(s, 3H)
【０３６３】
実施例７２−1-(2-クロロ-4-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-4-[(チミン-1-イル)-アセチル]-ピペラジン-2-オン
【０３６４】
標題化合物（159 mg, 94%）を、1-(4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩（125 mg, 0.35 mmol）と(チミン-1-イル)-酢酸（64 mg, 0.35 mmol）との反応によって実施例６４に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 11.32(s, 0.6H), 11.30(s, 0.4H), 8.53(d, 1H), 8.47-8.40(m, 2H), 7.35(s, 0.6H), 7.28(s, 0.4H), 4.68(s, 1.2H), 4.57(s, 0.8H), 4.38(s, 0.8H), 4.24(s, 1.2H), 4.18(t, 1.2H), 4.04(t, 0.8H), 3.95(t, 1.2H), 3.84(t, 0.8H), 1.75(s, 3H)
【０３６５】
実施例７３−4-{[6-N-(ベンズヒドリルオキシカルボニル)-アデニン-1-イル]アセチル}-1-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オン
【０３６６】
1-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩（0.76 g, 2.36 mmol）、[6-N-(ベンズヒドリルオキシカルボニル)-アデニン-9-イル]-酢酸（1.0 g, 2.47 mmol）、及びPyBOP（1.35 g）のDMF（20 mL）中の溶液に、N,N-ジイソプロピルエチルアミン（0.95 mL）を5℃で添加した。さらに2時間攪拌した後、反応混合物を酢酸エチル（200 mL）と水（150 mL）で希釈した。有機層を分離し、水、5%重炭酸ナトリウム水溶液（aqueous sodium bicarbonate）、10%クエン酸水溶液（aqueous citric acid）及び塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（830 mg, 58%）を得た。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 10.95(s, 1H), 8.59(s, 0.6H), 8.58(s, 0.4H), 8.40-8.36(m, 1H), 8.33(s, 0.6H), 8.31(s, 0.4H), 8.14(d, 1H), 8.06-7.96(m, 2H), 7.54-7.27(m, 10H), 6.82(s, 1H), 5.39(s, 1.2H), 5.30(s, 0.8H), 4.56(s, 0.8H), 4.27(s, 1.2H), 4.12-4.08(m, 2.4H), 3.92-3.86(m, 1.6H). 
【０３６７】
実施例７４−4-{[6-N-(ベンズヒドリルオキシカルボニル)-アデニン-1-イル]-アセチル}-1-(4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オン
【０３６８】
標題化合物（810 mg, 56 %）を、1-(4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩（712 mg, 2.0 mmol）と[6-N-(ベンズヒドリルオキシカルボニル)-アデニン-9-イル]-酢酸（779 mg, 2.0 mmol）との反応によって実施例７３の手順に従って合成した。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 11.05(s, 1H), 8.60(s, 0.6H), 8.59(s, 0.4H), 8.43-8.41(m, 1H), 8.37-8.32(m, 2H), 8.08(m,1H), 7.53-7.27(m, 10H), 6.82(s, 1H), 5.39(s, 1.2H), 5.31(s, 0.8H), 4.56(s, 0.8H), 4.27(s, 1.2H), 4.12-4.08(br.m, 2.4H), 3.90-3.85(m, 1.6H)
【０３６９】
実施例７５−4-{[6-N-(ベンズヒドリルオキシカルボニル)-アデニン-9-イル]-アセチル}-1-(4-フルオロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オン
【０３７０】
標題化合物（805 mg, 58 %）を、1-(4-フルオロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩（679 mg, 2.0 mmol）と[6-N-(ベンズヒドリルオキシカルボニル)-アデニン-9-イル]-酢酸（807 mg, 2.0 mmol）との反応により、実施例７３の手順に従って合成した。1H-NMR (DMSO-d6) δ 10.95(s, 1H), 8.59(s, 0.6H), 8.58(s, 0.4H), 8.47-8.40(m, 1H), 8.33(s, 0.6H), 8.30(s, 0.4H), 8.26(m, 1H), 7.88(m, 1H), 7.53-7.27 (m, 10H), 6.82(s, 1H), 5.38(s, 1.2H), 5.30(s, 0.8H), 4.56(s, 0.8H), 4.27(s, 1.2H), 4.12-4.06(m, 2.4H), 3.91-3.85(br.m, 1.6H)
【０３７１】
実施例７６−4-{[2-N-(ベンズヒドリルオキシカルボニル)-グアニン-9-イル]-アセチル}-1-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オン
【０３７２】
4-[2-N-(ベズヒドリルオキシカルボニル)-グアニン-9-イル]-酢酸（1.89 g, 4.5 mmol）、1-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩（1.45 g, 4.5 mmol）、及びPyBOP（2.81 g, 5.4 mmol）のDMF（13 mL）中の溶液に、N,N-ジイソプロピルエチルアミン（1.96 mL, 13 mmol）を室温で添加した。さらに1時間攪拌した後、反応混合物を20%クエン酸水溶液の添加によりpH 3〜4まで酸性化した。沈殿した固体をろ過して除去し、塩水で洗浄し、アセトニトリルから再結晶化させて、標題化合物（1.15g, 37%）を得た。1H-NMR (DMSO-d6) δ 11.63(s, 1H), 11.24(s, 1H), 8.37(m, 1H), 8.13(dd, 1H), 8.06-7.97(m, 2H), 7.82(s, 0.6H), 7.78(s, 0.4H), 7.46-7.28(m, 10H), 6.86(s, 1H), 5.15(s, 1.2H), 5.07(s, 0.8H), 4.52(s, 0.8H), 4.27(s, 1.2H), 4.12-4.02(m, 2.4H), 3.94-3.83(m, 1.6H)
【０３７３】
実施例７７−[2-N-(ベンズヒドリルオキシカルボニル)-グアニン-1-イル]アセチル}-l-(4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オン
【０３７４】
4-[2-N-(ベズヒドリルオキシカルボニル)-グアニン-9-イル]-酢酸（1.26 g, 3.0 mmol）、1-(4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩（1.07 g, 3.0 mmol）、及びPyBOP（1.87 g, 3.6 mmol）のDMF（10 mL）中の溶液に、N,N-ジイソプロピルエチルアミン（1.05ml, 6.0 mmol）を10℃で添加した。1時間さらに攪拌した後、反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を酢酸エチルに溶解させた。溶液を水、飽和重炭酸ナトリウム溶液、20%クエン酸水溶液、及び塩水で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（1.25 g, 58%）を得た。1H NMR (DMSO-d6) δ 11.63(br.s, 1H), 11.25(br.s, 1H), 8.43-8.32(m, 2H), 8.09(m, 1H), 7.81(s, 0.6H), 7.76(s, 0.4H), 7.46-7.28(m, 10H), 6.86(s, 1H), 5.14(s, 1.2H), 5.06(s, 0.8H), 4.52(s, 0.8H), 4.27(s, 1.2H), 4.10-4.00(m, 2.4H), 3.92-3.82(m, 1.6H)
【０３７５】
実施例７８−4-{[4-N-(ベンズヒドリルオキシカルボニル)-シトシン-1-イル]-アセチル}-1-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オン
【０３７６】
標題化合物（2.53g, 78 %）を、1-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩（679 mg, 2.0 mmol）と[4-N-(ベンズヒドリルオキシカルボニル)シトシン-1-イル]-酢酸（1.90 g, 5.0 mmol）との反応によって実施例７７の手順に従って合成した。
【０３７７】
実施例７９−4-{[4-N-(ベンズヒドリルオキシカルボニル)-シトシン-l-イル]アセチル}-l-(4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オン
【０３７８】
標題化合物（0.56g, 27%）を、1-(4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩（1.07 g, 3.0 mmol）の[4-N-(ベンズヒドリルオキシカルボニル)-シトシン-1-イル]-酢酸（1.14 g, 3.0 mmol）との反応によって実施例７７の手順に従って合成した。1H-NMR (DMSO-d6) δ 10.98(s, 1H), 8.40(s, 1H), 8.32(m, 1H), 8.07 (m, 1H), 7.89(d, 0.6H), 7.85(d, 0.4H), 7.46-7.28(m, 1H), 6.96(m, 1H), 6.79(s, 1H), 4.81(s, 1.2H), 4.73(s, 0.8H), 4.45(s, 0.8H), 4.27(s, 1.2H), 4.07-3.97(m, 2.4H), 3.90-3.80(m, 1.6H)
【０３７９】
実施例８０−4-{[4-N-(ベンズヒドリルオキシカルボニル)-シトシン-l-イル]アセチル}-l-(4-フルオロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オン
【０３８０】
標題化合物（1.19 g, 60 %）を、1-(4-フルオロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩（1.02 g, 3.0 mmol）と[4-N-(ベンズヒドリルオキシカルボニル)-シトシン-1-イル]-酢酸（1.14 g, 3.0 mmol）との反応によって実施例７７の手順に従って合成した。1H-NMR (DMSO-d6) δ 10.98(s, 1H), 8.41(m, 1H), 8.24(dd, 1H), 7.87(m, 2H), 7.50-7.25(m, 10H), 6.96(m, 1H), 6.79(s, 1H), 4.81(s, 1.2H), 4.73(s, 0.8H), 4.45(s, 0.8H), 4.27(s, 1.2H), 4.06-3.95(m, 2.4H), 3.90-3.80(m, 1.6H)
【０３８１】
実施例８１−4-{[6-N-(ベンジルオキシカルボニル)-アデニン-9-イル]アセチル}-1-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オン
【０３８２】
標題化合物（731 mg, 61 %）を、1-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩（644 mg, 2.0 mmol）と(6-N-(ベンジルオキシカルボニル)アデニン-9-イル]-酢酸（655 mg, 2.0 mmol）との反応によって実施例７７の手順に従って合成した。1H-NMR (DMSO-d6) δ 10.69(s, 1H), 9.00(m, 1H), 8.71(m, 1H), 8.63-8.58(m, 2H), 8.31(s, 0.6H), 8.29(s, 0.4H), 7.47-7.33(m, 5H), 5.39(s, 1.2H), 5.29(s, 0.8H), 5.21(s, 2H), 4.57(s, 0.8H), 4.29(s, 1.2H), 4.15-4.09(m, 2.4H), 3.93-3.86 (m, 1.6H) 
【０３８３】
実施例８２−4-{[2-N-(ベンジルオキシカルボニル)-グアニン-9-イル]アセチル}-1-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オン
【０３８４】
[2-N-(ベンジルオキシカルボニル)-グアニン-9-イル]-酢酸（1.48 g, 4.5 mmol）、1-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩（1.45 g, 4.5 mmol）、及びPyBOP（2.81 g, 5.4 mmol）のDMF（13 mL）中の溶液に、N,N-ジイソプロピルエチルアミン（1.96 mL, 13 mmol）を室温で添加した。さらに40分間攪拌した後、反応混合物を水（80 mL）で希釈し、固体を沈殿させた。固体をろ過して除去し、エチルアルコールで洗浄し、アセトニトリルとTHFで粉砕して、純粋な生成物（1.56 g, 58%）を得た。1H-NMR (DMSO-d6) δ 11.47(s, 1H), 11.38(s, 1H), 8.40-7.96(m, 4H), 7.82(s, 0.6H), 7.78(s, 0.4H), 7.45-7.35(m, 5H), 5.25(s, 2H), 5.13(s, 1.2H), 5.04(s, 0.8H), 4.51(s, 0.8H), 4.26(s, 1.2H), 4.10-4.02(m, 2.4H), 3.93-3.83(m, 1.6H)
【０３８５】
実施例８３−4-{[2-N-(ベンジルオキシバルボニル)-グアニン-9-イル] アセチル}-1-(4-クロロ-2-ニトロ- ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オン
【０３８６】
標題化合物（1.32 g, 60 %）を、1-(4-クロロ-2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-ピペラジン-2-オンHCl塩（1.25 g, 3.5 mmol）と[2-N-(ベンジルオキシカルボニル)グアニン-9-イル]-酢酸（1.15 g, 3.5 mmol）との反応によって実施例８２の手順に従って合成した。1H-NMR (DMSO-d6) δ 11.46(s, 1H), 11.37(s, 1H), 8.44-8.31(m, 2H), 8.09(m, 1H), 7.82(s, 0.6H), 7.78(s, 0.4H), 7.46-7.33(m, 5H), 5.25(s, 2H), 5.12(s, 1.2H), 5.04(s, 0.8H), 4.51(s, 0.8H), 4.26(s, 1.2H), 4.10-4.00(m, 2.4H), 3.92-3.82(m, 1.6H)
【０３８７】
実施例８４−3-メチル-1-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-4-[(チミン-1-イル)アセチル]-ピペラジン-2-オン
【０３８８】
(チミン-1-イル)-酢酸（55 mg, 0.30 mmol）、1-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-3-メチル-ピペラジン-2-オンHCl塩（100 mg, 0.30 mmol）、及びPyBOP（156 mg, 0.45 mmol）のDMF（1 mL）中の溶液に、N,N-ジイソプロピルエチルアミン（0.08 mL）を室温で添加した。40℃でさらに2時間攪拌した後、反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をジクロロメタン中に溶解させ、水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーで精製して、標題化合物（100 mg, 72%）を得た。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 11.31(s, 1H), 8.33(d, 1H), 8.10(d, 1H), 8.04-7.93(m, 2H), 7.35(s, 1H), 4.85-4.60(m, 2.5H), 4.55-4.40(m, 0.5H), 4.20-4.10(m, 0.5H), 4.05-3.90(m, 1.5H), 3.78-3.60(m, 1H), 3.30(m, 1H), 1.74(s, 3H), 1.42(d, 1H), 1.27(d, 2H)
【０３８９】
実施例８５−1-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-3-フェニル-4-[(チミン-l-イル)アセチル]-ピペラジン-2-オン
【０３９０】
(チミン-1-イル)-酢酸（13 mg, 0.071 mmol）、1-(2-ニトロ-ベンゼンスルホニル)-3-フェニル-ピペラジン-2-オンHCl塩（28 mg, 0.070 mmol）、及びPyBOP（40 mg, 0.077 mmol）のDMF（0.3 mL）中の溶液に、N,N-ジイソプロピルエチルアミン（0.018 mL）を室温で添加した。さらに27時間攪拌した後、反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（16 mg, 43%）を得た。1H-NMR (500MHz ; DMSO-d6) δ 11.33(s, 1H), 8.36(d, 1H), 8.13(d, 1H), 8.05-7.94(m, 3H), 7.39-7.29(m, 5H), 5.93(s, 1H), 4.87(d, 1H), 4.67(d, 1H), 4.22-4.16(m, 2H), 3.96(m, 1H), 3.78(m, 1H), 1.74(s, 3H)
【０３９１】
本明細書に引用される文献は全て、それらの全体を参照によって組み込まれる。
【０３９２】
当業者は、本明細書に詳細に記載されている本発明の詳細な実施形態との多数の均等物を認識し、又はルーチンの実験のみを用いてそれらを確認することができるであろう。かかる均等物は、請求の範囲に含まれることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【０３９３】
【図１】DNA認識に有用である、天然及び非天然に生ずる核酸塩基の化学構造の図を示す。
【図２】DNA認識に有用である、天然及び非天然に生ずる核酸塩基の化学構造の別の図を示す。
【図３】保護された骨格の合成の概略図を示す。
【図４】保護された骨格の別の合成の概略図を示す。
【図５】モノマーの前駆体としての保護されたピペラジノンの合成の概略図を示す。
【図６】PNAモノマーの合成の概略図を示す。
【図７】PNAモノマーの別の合成の概略図を示す。
【図８】PNAチミンモノマーの合成の概略図を示す。
【図９】PNAチミンモノマーの別の合成の概略図を示す。
【図１０】PNAシトシンモノマーの合成の概略図を示す。
【図１１】PNAシトシンモノマーの別の合成の概略図を示す。
【図１２】PNAアデニンモノマーの合成の概略図を示す。
【図１３】PNAアデニンモノマーの別の合成の概略図を示す。
【図１４】PNAグアニンモノマーの合成の概略図を示す。
【図１５】PNAグアニンモノマーの別の合成の概略図を示す。
【図１６】PNAモノマーからのPNAオリゴマー合成の概略図を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【国際調査報告】
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