(57)【要約】  本発明はO-メチル(エチル)ジクロロチオリン酸エステルをフェノール化合物と反応させ、O-メチル(エチル)O-アリールクロロチオリン酸エステルを得た後、こうして得られたO-メチル(エチル)O-アリールクロロチオリン酸エステルをアミノカルボン酸と反応させ、ホスホロチオエート類農薬の免疫分析的検出に利用されるハプテンを製造する方法に関する。本発明によれば、ただ二つの段階の工程だけでO-メチル(エチル)O-アリールN-(カルボキシアルキル)ホスホルアミドチオエートまたはO-メチル(エチル)O-アリールN-アルキル-N-(カルボキシアルキル)ホスホルアミドチオエートの構造を持つハプテンを高い収率で製造することだけではなく、製造に必要となる費用を減少させることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の各工程を含む有機燐系ホスホロチオエート類農薬の免疫分析的検出に利用されるハプテンの製造方法: 
(i)アセトニトリル中で化合物(10)をフェノール化合物(11)及びK2CO3と4℃で30分ないし90分間反応させ、化合物(12)を得る工程; 及び、
(ii)化合物(12)をメタノール中で化合物(13)及びKOHと4℃で3分ないし5分間反応させ、化合物(14)を得る工程。
【化１】
2005513159.tif 000008
式中、
R1はメチル基またはエチル基であり;
R2はアリール基であり;
R3は水素原子またはアルキル基であり; 及び、
R4はアルキリデン基である。
【請求項２】
ホスホロチオエート類農薬はフェンチオン、フェニトロチオン、パラチオン、パラチオン-メチル、ブロモホス-メチル、ブロモホス-エチル、クロロピリホス、クロロピリホス-メチル、クロロピリホス-エチル、ダイアジノン、ピリダフェンチオン、トリアゾホス、イソフェンホス、及びピリミホスから成る群から選択される1種の物質であることを特徴とする、請求項1に記載の有機燐系ホスホロチオエート類農薬の免疫分析的検出に利用されるハプテンの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はホスホロチオエート類農薬の免疫分析的検出(immunoassay)に利用されるハプテンの製造方法に係り、さらに具体的に、本発明はO-メチル(エチル)ジクロロチオリン酸エステルをフェノール化合物と反応させ、O -メチル(エチル)O -アリールクロロチオリン酸エステルを得た後、得られたO -メチル(エチル)O -アリールクロロチオリン酸エステルをアミノカルボン酸と反応させ、有機燐系ホスホロチオエート類農薬の免疫分析的検出に利用されるハプテンを製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
1930年代シュラダー(Schrader)が殺虫性の有機燐化合物を見つけて以来、有機塩素系農薬の使用が禁止されたことにより、生物学的力価が高い有機燐系農薬(organophosphorus pesticide)の開発が活発になった。今日、有機燐系農薬は現在使用中の農薬の大部分を占めているだけでなく、殺虫作用が検証された製品が約100,000個、市販されている製品だけでも100余個にのぼる。
【０００３】
有機燐系農薬は燐(P)原子周りの構造により、リン酸エステル(phosphate)、ホスホロチオエート(phosphorothioate)、ホスホロチオール酸エステル(phosphorothiolate)、ホスホロジチオエート(phosphorodithioate)、ホスホン酸エステル(phosphonate)、ホスホノチオエート(phosphonothioate)、ホスホノジチオエート(phosphonodithioate)、ホスホロチオロチオナート(phosphorothiolothinate)、 及びピロホスホルアミド(pyrophosphoramide)類などに分類され(表1参照)、この中農業で一番重要とされるものはホスホロチオエート類とホスホロジチオエート類であり、残留農薬分析の主要対象になっている。
【０００４】
残留農薬の分析は主にガスクロマトグラフィー(GC)または高性能液体クロマトグラフィー(HPLC)などにより遂行されているが、これらクロマトグラフィー方法は長期間の前処理過程と高価な器機、専門的技術を持った人力などを要するだけでなく、GCの場合不安定な物質の分析は不可能で、HPLCの場合は発色団のない農薬は検出が難しいという短所を持っている。このような問題点を解決するため、主に生体成分の分析や臨床診断に利用された免疫分析法(immunoassay)を残留農薬の分析に適用させようとする試みが1970年代に始まった。免疫分析法による残留農薬の分析は感度が非常に高く、試料の前処理過程が不必要であり、多数の試料を同時に速かに分析することができるので費用が少ししかかからないという長所がある。
【０００５】
免疫分析は抗体と抗原の間の特異的で親和力が高い結合に依拠した分析法なので、分析物質に対する抗体を生産するためには適切な抗原を用意すべきである。しかし、農薬のような低分子物質はそれ自体が抗原として作用することができないので、抗体の生産が不可能である。従って、農薬に特異的な抗原を合成するには、農薬と構造が類似であり、タンパク質と共有結合することができる原子団を持った物質、すなわち、ハプテン(hapten)の合成が要求される。また、競争的免疫分析法で使われる競争相手であるコーティング抗原及び酵素トレーサー(enzyme tracer)の製造のためにもハプテンの合成が要求される。
【表１】
2005513159.tif 000002
一般的に、ホスホロチオエート類農薬の免疫分析的検出に利用されるハプテンは次のような構造を持つ。
【化１】
2005513159.tif 000003
【０００６】
式中、
R1はメチル基またはエチル基であり;
R2はアリール基であり;
R3は水素原子またはアルキル基であり;及び、 
R4はアルキリデン基である。
【０００７】
前記構造のハプテンの中で、R３が水素原子で、R4が2個または5個のメチルレン基であるハプテンは下記のように、(i) 3-アミノプロパン酸エステル(1)をベンジルクロロギ酸と反応させ、3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)プロパン酸エステル(2)を得る工程;(ii) 前記得られた3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)プロパン酸エステル(2)をジシクロヘキサルカルボジイミド(DCC)の存在下でtert-ブタノールと反応させ、tert-ブチル3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)プロパン酸エステル(3)を得る工程;(iii) 前記得られたtert-ブチル3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)プロパン酸エステル(3)のアミノ基の保護基を触媒を利用した水素添加(hydrogenation)により離脱させ、tert-ブチル3-アミノプロパン酸エステル(4)を得る工程;(iv) 前記得られたtert-ブチル3-アミノプロパン酸エステル(4)をO-アルキルジクロロチオリン酸エステル(5)と反応させ、tert-ブチル3-[クロロ(メトキシル)-ホスホルチオイル-アミノ]-プロパン酸エステル(6)を得る工程;(v) 前記得られたtert-ブチル3-[クロロ(メトキシル)-ホスホルチオイル-アミノ]-プロパン酸エステル(6)をフェノールのナトリウム塩(7)と反応させ、O -アルキルO -アリールN-[[2-[tert-ブチルオキシ]カルボニル]エチル]ホスホルアミドチオエート(8)を得る工程;及び、(vi) 前記得られたO-アルキルO -アリールN-[[2-[tert-ブチルオキシ]カルボニル]エチル]ホスホルアミドチオエート(8)のtert-ブチルの保護基をトリフルオロ酢酸(TFA)により除去し、O -アルキルO -アリールN-(2-カルボキシエチル)ホスホルアミドチオエート(9)を得る工程を含む方法を通じて合成される。
【化２】
2005513159.tif 000004
【０００８】
前記方法で合成されたO -アルキルO-アリールN-(2-カルボキシエチル)ホスホルアミドチオエートはホスホロチオエート類農薬に対する抗体形成において非常に望ましいハプテンであることが知られている。しかし、前記方法は、非常に複雑で、時間と費用がかかり、収率が低いという短所があることが分かった。
【発明の開示】
【０００９】
したがって、ホスホロチオエート類農薬の免疫分析的検出に利用されるハプテンをより效率的に製造できる方法を開発すべき必要性が強い。
【００１０】
本発明者らは、ホスホロチオエート類農薬の免疫分析的検出に利用されるハプテンをより效率的に製造することができる方法を開発しようと鋭意努力した結果、O-メチル(エチル)クロロチオリン酸エステルをフェノール化合物と反応させ、O-メチル(エチル)O-アリールクロロチオリン酸エステルを得た後、アミノカルボン酸のカルボキシル基を保護しないまま前記得られたO-メチル(エチル)O-アリールクロロチオリン酸エステルと反応させれば、O-メチル(エチル)O-アリールN-(カルボキシアルキル)ホスホルアミドチオエートまたはO-メチル(エチル)O-アリールN-アルキル-N-(カルボキシアルキル)ホスホルアミドチオエートの構造を持つハプテンを製造することができることを確認した。
【００１１】
つまり、本発明の目的は有機燐系ホスホロチオエート類農薬の免疫分析的検出に利用されるハプテンの製造方法を提供するところにある。
【００１２】
本発明の有機燐系ホスホロチオエート類農薬の免疫分析的検出のためのハプテンの製造方法は、(i）アセトニトリル中で化合物(10)をフェノール化合物(11)及びK2CO3と4℃で30分ないし90分間反応させ、化合物(12)を得る工程;及び、(ii) この化合物(12)をメタノール中で化合物(13)及びKOHと4℃で3分ないし5分間反応させ、化合物(14)を得る工程を含む。この際、ホスホロチオエート類農薬はフェンチオン(penthion)、フェニトロチオン(penitrothion)、パラチオン(parathion)、パラチオン-メチル、 ブロモホス-メチル(bromofos-methyl)、ブロモホス-エチル、クロロピリホス(chloropyrifos)、クロロピリホス-メチル、クロロピリホス-エチル、ダイアジノン(diazinon)、ピリダフェンチオン(pyridapenthion)、トリアゾホス(triazofos)、イソフェンホス(isopenfos)またはピリミホス(pyrimifos)を含む。
【化３】
2005513159.tif 000005
【００１３】
式中、
R1はメチル基またはエチル基であり;
R2はアリール基であり;
R3は水素原子またはアルキル基であり; 及び、
R4はアルキリデン基である。
【実施例】
【００１４】
以下、実施例を通して本発明をさらに詳述する。これら実施例はただ本発明をさらに具体的に説明するためのもので、本発明の範囲がこれら実施例により限られないことは当業界にとって自明であろう。
【００１５】
実施例１：ホスホロチオエート類農薬の免疫分析的検出に利用されるハプテンの製造
O-メチル(エチル)ジクロロチオリン酸エステルをフェノールと反応させて合成したO-メチル(エチル)O-アリールクロロチオリン酸エステルをアミノカルボン酸と反応させ、ホスホロチオエート類農薬の免疫分析的検出に利用されるハプテンを製造した:46.28mmolのO-メチル(エチル)ジクロロチオリン酸エステル(10)を30mLのアセトニトリルに溶解させ、45gの粉碎したK2CO3及び30mLのアセトニトリルに溶解させた42.07mmolのフェノール(11)を添加した後、室温で1時間の間撹拌した。その後、反応溶液をセライト(cellite)を利用して濾過し、濾液の溶媒を揮発させた後、残留物をベンゼン/ヘキサン(1:1、v/v)溶媒またはヘキサン/エチル酢酸(10:1、v/v)溶媒で平衡化したシリカゲルカラムクロマトグラフィーに適用させてオイル形態の化合物であるO-メチル(エチル)O-アリールクロロチオエート(12)を得た。
【００１６】
2.1mmolの前記で得られたO-メチル(エチル)O-アリールクロロチオエート(12)をメタノールに溶解させ、4℃の氷水に入れた後、5.2mmol(292mg)のKOH及び 2.6mmolのアミノカルボン酸(13)を1.7mLのメタノールに溶解させた溶液を加えながら3ないし5分間撹拌した。このメタノール溶液の製造の時、アミノカルボン酸が塩酸塩の場合にはアミノカルボン酸に対してKOHの量を3倍にした。反応溶液を分別漏斗に注ぎ、1N HCl及びクロロホルムで抽出し、MgSO4で脱水させた後、残余溶媒を揮発させ、残留物をクロロホルム:酢酸エチル:酢酸(65:35:1、v/v/v)溶媒で平衡化したシリカゲルカラムクロマトグラフィーに適用させ、ホスホロチオエート類農薬の免疫分析的検出に利用される化合物(14)を得た。下記の化学反応式で、R1はメチル基またはエチル基で、R2はアリール基であり、R3は水素原子またはアルキル基であり、R4はアルキリデン基である。
【化４】
2005513159.tif 000006
【００１７】
実施例２：ホスホロチオエート類農薬の免疫分析的検出に利用されるハプテンの合成
前記実施例1の方法を利用し、パラチオン-メチル、クロロピリホス及びイソフェンホスなどのホスホロチオエート類農薬の免疫検出のための多様な置換基R1、R2、R3及びR4を有するハプテンを合成した。次の表2はホスホロチオエート類農薬の検出のための多様なハプテンの構造を表わし、Phはベンゼン環を表わし、Pyrはピリジニル基を表わす。
【表２】
2005513159.tif 000007
【００１８】
合成されたハプテンの1H NMR分析を行ない、合成されたハプテンが前記表2の構造に符合することを確認した。1H NMRスペクトルで、化学シフト値はテトラメチルシランからのシフト値で、ppmで表わし、結合定数値(J)は Hzで表わし、sはsinglet、dはdoublet、tはtriplet、qはquartet、qnはquintet、sextはsextet、spはseptet及びmはmutipletを表わす。
【００１９】
実施例２−１：ハプテンAの合成
前記実施例1の方法を利用し、R1=メチル基、R2=アリール基、R3=水素原子及びR4=-(CH2)3-であるハプテンAを合成した。3.00g(21.6mmol)のO-メチルジクロロチオリン酸エステルを20mLのアセトニトリルに溶解させ、20gの粉碎したK2CO3及び 15mLのアセトニトリルに溶解させた3.00g(21.6mmol)の4-ニトロフェノールを添加した後、室温で1時間の間撹拌した。反応溶液をセライトを利用して濾過し、濾液の溶媒を揮発させた後、残留物をベンゼン/ヘキサン(1:1、 v/v)溶媒で平衡化したシリカゲルカラムクロマトグラフィーに適用させオイル形態の化合物であるO-メチルO-(4-ニトロフェニル)ホスホロクロリドチオエートを得た。化合物の収率は70%であり、そのNMRデータは次の通りである。
【００２０】
1H NMR(300 MHz、CDCl3): δ8.28(2H、d、J=6.1、ar)、7.42(2H、d、J=7.2、ar)、4.03(3H、d、J=16.5、CH3OP)。
【００２１】
500mg(1.87mmol)の前記で得られた化合物であるO-メチルO-(4-ニトロフェニル) ホスホロクロリドチオエートを3mLのメタノールに溶解させて、4℃の氷水に入れた後、274mg(4.88mmol)のKOH及び229mg(2.2mmol)のアミノ酪酸を1.7mLのメタノールに溶解させた溶液を加えながら3ないし5分間撹拌した。前記撹拌した反応溶液を分別漏斗に盛り、1N HCl及びクロロホルムで生成物を抽出して、MgSO4で脱水させた後、残余溶媒を揮発させ、残留物をクロロホム:酢酸エチル:酢酸(65:35:1、v/v/v)溶媒で平衡化したシリカゲルカラムクロマトグラフィーに適用させ、表2のハプテンAを得た。前記得られたハプテンAの収率は81%であり、そのNMRデータは次の通りである。
【００２２】
1H NMR(300 MHz、CDCl3): δ8.24(2H、d、J=8.9、ar)、7.38(2H、d、J=8.3、ar)、3.81(3H、d、J=14.1、CH3OP)、3.47(1H、qn、J=7.4、NH)、3.17(2H、sext、J=6.8、NCH2)、2.46(2H、t、J=7.0、CH2CO2)、1.88(2H、qn、J=7.0、CH2CH2CH2)。
【００２３】
実施例２−２：ハプテンBの合成
前記実施例1の方法を利用し、R1=メチル基、R2=アリール基、R3=水素原子及び R4=-(CH2)6-であるハプテンBを合成した。500mg(1.87mmol)の前記で得られた化合物 O-メチルO-(4-ニトロフェニル)ホスホロクロリドチオエートを3mLのメタノールに溶解させ、4℃の氷水に入れた後、274mg(4.88mmol)のKOH及び291mg(2.2mmol)の 6-アミノカプロン酸(aminocaproic acid)を1.7mLのメタノールに溶解させた溶液を加えながら3ないし5分間撹拌した。以後、前記実施例2-1と同様な方法で得られたハプテンBの収率は88%であり、そのNMRデータは次の通りである。
【００２４】
1H NMR(300 MHz、CDCl3): δ8.24(2H、d、J=8.9、ar)、7.37(2H、d、J=9.2、ar)、3.81(3H、d、J=14.2、CH3OP)、3.34(1H、qn、J=7.3、NH)、3.09(2H、sext、J=6.9、NCH2)、2.37(2H、t、J=7.3、CH2CO)、1.68(2H、qn、J=7.6、NHCH2CH2)、1.56(2H、m、CH2CH2CO)、1.40(2H、m、CH2CH2CH2)。
【００２５】
実施例２−３：ハプテンCの合成 
前記実施例1の方法を利用し、R1=メチル基、R2=アリール基、R3=メチル基及びR4=-(CH2)3-であるハプテンCを合成した。202mg(0.76mmol)のO-メチルO-(4-ニトロフェニル)ホスホロクロリドチオエートを1.5mLのメタノールに溶解させ、4℃の氷水に入れた後、207mg(3.7mmol)のKOH及び154mg(1.0mmol)の4-(メチルアミノ)酪酸を1.5mLのメタノールに溶解させた溶液を加えながら5分間撹拌した。以後、前記実施例2-1と同様な方法で得られたハプテンCの収率は70%であり、そのNMRデータは次の通りである。
【００２６】
1H NMR(300 MHz、CDCl3): δ8.23(2H、d、J=9.0、ar)、7.31(2H、d、J=9.0、ar)、3.76(3H、d、J=14.1、CH3OP)、3.36(2H、m、NCH2)、2.86(3H、d、J=11.0、CH3N)、2.40(2H、t、J=7.5、CH2CO2)、1.89(2H、qn、J=7.0、CH2CH2CH2)。
【００２７】
実施例２−４：ハプテンDの合成 
前記実施例1の方法を利用し、R1=エチル基、R2=アリール基、R3=水素原子及びR4=-(CH2)3-であるハプテンDを合成した。3.52g(20 mmol)のO-エチルジクロロチオリン酸エステルを20mLのアセトニトリルに溶解させ、10gの粉碎したK2CO3及び5mLのアセトニトリルに溶解させた3.00g(15mmol)の3、5、6-卜リクロロ-2-ピリジノールを添加した後、室温で1時間の間撹拌した。前記撹拌した反応溶液をセライトを利用して濾過し、濾液の溶媒を揮発させた後、残留物をベンゼン/ヘキサン(1:1、v/v)溶媒で平衡化したシリカゲルカラムクロマトグラフィーに適用させてオイル形態の化合物O-エチルO-(3,5,6-卜リクロロ-2-ピリジニル)ホスホロクロリドチオエートを得た。前記得られた化合物の収率は65%であり、そのNMRデータは次の通りである。
【００２８】
1H NMR(300 MHz、CDCl3): δ7.91(1H、d、J=1.3、ar)、4.52(2H、qxd、J=11.0 &  7.1、CH2CH3)、1.51(3H、txd、J=7.1  &  1.1、CH2CH3)。
【００２９】
0.50g(1.47mol)の前記で得られた化合物O-エチルO-(3,5,6-卜リクロロ-2-ピリジニル)ホスホロクロリドチオエートを3mLのメタノールに溶解させ、4℃の氷水に入れた後、0.205g(3.23mmol)のKOH及び0.166g(1.6mmol)のアミノ酪酸を 1.7mLのメタノールに溶解させた溶液を加えながら3〜5分間撹拌した。前記撹拌した反応溶液を分別漏斗に盛り、1N HCl及びクロロホルムで生成物を抽出し、MgSO4で脱水させた後、残余溶媒を揮発させ、残留物をクロロホルム:酢酸エチル:酢酸(65:35:1、v/v/v)溶媒で平衡化したシリカゲルカラムクロマトグラフィーに適用させ、表2のハプテンDを得た。前記得られたハプテンDの収率は54%であり、そのNMRデータは次の通りである。
【００３０】
1H NMR(300 MHz、CDCl3): δ7.85(1H、d、J=0.9、ar)、4.34(2H、qxd、J=9.5 & 7.1、CH2CH3)、3.54(1H、m、NH)、3.25(2H、m、NHCH2)、2.51(2H、t、J=7.2、CH2CO2)、1.93(2H、qn、J=6.9、CH2CH2CH2)、1.41(3H、t、J=7.1、CH2CH3)。
【００３１】
実施例２−５：ハプテンEの合成
前記実施例1の方法を利用し、R1=エチル基、R2=アリール基、R3=水素原子及びR4=-(CH2)6-であるハプテンEを合成した。0.50g(1.47mol)の前記で得られた化合物O-エチルO-(3,5,6-卜リクロロ-2-ピリジニル)ホスホロクロリドチオエートを3mLのメタノールに溶解させ、4℃の氷水に入れた後、0.205g(3.23mmol)のKOH及び 0.210g(1.6mmol)の6-アミノカプロン酸を1.7mLのメタノールに溶解させた溶液を加えながら5分間撹拌した。以後、前記実施例2-4と同様な方法で得られたハプテンEの収率は53%であり、そのNMRデータは次の通りである。
【００３２】
1H NMR(300 MHz、CDCl3): δ7.87(1H、d、J=1.0、ar)、4.36(2H、qxd、J=9.6  &  7.1、CH2CH3)、3.47(1H、m、NH)、3.19(2H、m、NHCH2)、2.40(2H、t、J=7.3、CH2CO2)、1.50(6H、m、CH2(CH2)3CH2)、1.43(3H、t、J=7.1、CH2CH3)。
【００３３】
実施例２−６：ハプテンFの合成
前記実施例1の方法を利用し、R1=エチル基、R2=アリール基、R3=水素原子及びR4=-(CH2)3-であるハプテンFを合成した。0.50g(1.47mol)の前記で得られた化合物 O-エチルO-(3,5,6-卜リクロロ-2-ピリジニル)ホスホロクロリドチオエートを3mLのメタノールに溶解させ、4℃の氷水に入れた後、0.205g(3.23mmol)のKOH及び 0.166g(1.61mmol)の4-(アミノ)酪酸を1.7mLのメタノールに溶解させた溶液を加えながら5分間撹拌した。以後、前記実施例2-4と同様な方法で得られたハプテンFの収率は54%であり、そのNMR データは次の通りである。
【００３４】
1H NMR(300 MHz、CDCl3): δ7.82(1H、s、ar)、4.36(2H、qxd、J=8.7  &  7.1、CH2CH3)、3.33(2H、m、NCH2)、2.87(3H、d、J=12.3、CH3N)、2.46(2H、t、CH2CO2)、1.93(2H、qn、CH2CH2CH2)、1.43(3H、t、J=7.1、CH2CH3)。
【００３５】
実施例２−７：ハプテンGの合成
前記実施例1の方法を利用し、R1=エチル基、R2=2-(イソプロピルオキシカルボニル)フェニル基、R3=水素原子及びR4=-CH(CH3)CH2-であるハプテンGを合成した。2.96g(17mmol)のO-エチルジクロロチオリン酸エステルを10mLのアセトニトリルに溶解させ、5gの粉碎したK2CO3及び20mLのアセトニトリルに溶解させた1.96g(11 mmol)のサリチル酸イソプロピルを添加した後、室温で40分間撹拌した。前記撹拌した反応溶液をセライトを利用して濾過し、濾液の溶媒を揮発させた後、残留物をヘキサン/酢酸エチル(10:1、v/v)溶媒で平衡化したシリカゲルカラムクロマトグラフィーに適用させてオイル形態の化合物O-エチルO-[(2-イソプロピルオキシカルボニル)フェニル]ホスホロクロリドチオエートを得た。前記得られた化合物の収率は61%であり、そのNMRデータは次の通りである。
【００３６】
1H NMR(300 MHz、CDCl3): 7.93(1H、dxd、J=7.7  &  1.2、ar)、7.55(1H、dxd、J=8.5  &  1.5、ar)、7.48(1H、txt、J=8.4  &  1.6、ar)、7.32(1H、txt、J=7.5  &  1.5、ar)、5.25(1H、sp、J=6.3、(CH3)2CH)、4.48(2H、q、J=7.1、CH2CH3)、1.47(3H、t、J=7.1、CH2CH3)、1.38(6H、d、J=6.3、CH(CH3)2)。
【００３７】
67mg(0.21mmol)の前記で得られた化合物O-[(2-イソプロピルオキシカルボニル)フェニル]ホスホロクロリドチオエートを0.2mLのメタノールに溶解させ、4℃の氷水に入れた後、31mg(0.55mmol)のKOH及び26mg(0.25mmol)のDL-アミノ酪酸を0.26mLのメタノールに溶解させた溶液を加えながら5分間撹拌した。前記撹拌した反応溶液を分別漏斗に盛り、1N HCl及びクロロホルムで生成物を抽出し、MgSO4で脱水させた後、残余溶媒を揮発させ、残留物をクロロホルム:酢酸エチル:酢酸(29:9:1、v/v/v)溶媒で平衡化したシリカゲルカラムクロマトグラフィーに適用させ、表2のハプテンGを得た。前記得られたハプテンGの収率は66%であり、そのNMRデータは次の通りである。
【００３８】
1H NMR(300 MHz、CDCl3): δ7.81(1H、dxd、J=8.9  &  1.2、ar)、7.60(1H、dxqn、J=8.2  &  1.5、ar)、7.48(1H、txt、J=7.9  &  1.8、ar)、7.21(1H、txt、J=7.5  &  1.1、ar)、5.25(1H、sp、J=6.2、(CH3)2CH)、4.29(1H、q、J=9.5、NHCH)、4.20(2H、q、J=7.1、CH2CH3)、3.97(1H、sp、J=6.0、NHCH)、2.45(2H、t、J=6.3、CH2CO2)、1.38(3H、t、J=7.0、CH2CH3)、1.37(6H、d、J=6.2、CH(CH3)2)、1.31(3H、CHCH3)。
【国際調査報告】
2005513159.tif 000009
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