(57)【要約】  膵癌治療に使用する組合せであって、（ｉ）抗ガストリン有効性免疫原性組成物、および、（ｉｉ）癌の増殖を阻害するのに適した１つまたは複数の化学療法薬、を含む組み合わせ。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）抗ガストリン有効性免疫原性組成物、および、
（ｉｉ）癌の増殖を阻害するのに適した１つまたは複数の化学療法薬の組合せからなる、膵癌治療に対する使用の組合せ。
【請求項２】
前記有効性免疫原性組成物は、スペーサーペプチドを介して免疫原性タンパク質またはそのフラグメントに共有結合したガストリンペプチドＧ１７のエピトープを含む免疫原から選択される、請求項１に記載の使用の組合せ。
【請求項３】
抗ＣＣＫＢ／ガストリン受容体ペプチドＧＲＥ１またはペプチドＧＲＥ４有効性免疫原性組成物をさらに含む、請求項１に記載の使用の組合せ。
【請求項４】
もう１つの前記化学療法薬は、ドセタキセル、ロイコボリン／５フルオロウラシル、ゲムシタビン、シスプラチン、およびイリノテカンからなる群より選択される、請求項１に記載の使用の組合せ。
【請求項５】
前記有効性免疫原性組成物は、免疫原性キャリアタンパク質リシン残基の側鎖のεアミノ酸に結合した７つのアミノ酸／ペプチドスペーサーと共有結合した、アミノ末端Ｇ１７ペプチドエピトープのコンジュゲートを含む、請求項１に記載の使用の組合せ。
【請求項６】
前記有効性免疫原性組成物は、前記免疫原性キャリアタンパク質リシン残基のεアミノ酸側鎖に結合したアミノ末端ＣＣＫＢ／ガストリン受容体ペプチドのコンジュゲートを含む、請求項３に記載の使用の組合せ．
【請求項７】
前記免疫原性組成物は、筋肉内注射に適した油中水エマルジョンに配合される、請求項１に記載の使用の組合せ。
【請求項８】
前記免疫原性組成物は、１用量あたり前記免疫原が１０μｇ〜５０００μｇの範囲である、請求項１に記載の使用の組合せ。
【請求項９】
前記化学療法薬は、２８日ごとに、３週間で週あたり５００〜１４００ｍｇ／ｍ２の範囲の用量のゲムシタビンである、請求項１に記載の使用の組合せ。
【請求項１０】
前記免疫原性組成物は、１用量あたり約２５０μｇ〜５００μｇである、請求項１または６に記載の使用の組合せ。
【請求項１１】
前記化学療法薬はイリノテカンである、請求項１に記載の使用の組合せ。
【請求項１２】
（ｉ）抗ガストリン免疫原性組成物を用いて免疫した患者で生成した抗血清由来のモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体であり得る、抗ガストリンおよび／または抗ガストリン受容体有効性免疫学的薬剤、および
（ｉｉ）癌の増殖を阻害するのに適した１つまたは複数の化学療法薬の組合せからなる、膵癌治療に対する使用の組合せ。
【請求項１３】
前記治療により癌細胞転移を防ぐ、請求項１または１２に記載の使用の組合せ。
【請求項１４】
ガストリン免疫中和免疫原性組成物を投与すること、および癌の増殖の阻害に有効な１つまたは複数の化学療法薬の薬学的組成物を投与することを含む、膵癌を治療する方法。
【請求項１５】
前記免疫原性組成物は、ガストリンＧ１７、ＧｌｙＧ１７、ＣＣＫＢ／ガストリン受容体ペプチドＧＲＥ１またはＧＲＥ４に対する抗体の中和を誘発することを意図した免疫原を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記１つまたは複数の化学療法薬は、ドセタキセル、ロイコボリン／５ーフルオロウラシル、ゲムシタビン、シスプラチン、およびイリノテカンからなる群より選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記化学療法薬はゲムシタビンである、請求項１４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、膵癌の免疫学的治療と化学療法的治療の組合せに関する。詳細には、局所的に進行した膵腺癌または転移性ガストリン依存性膵腺癌の、免疫という形態での治療が、１つまたは複数の抗癌剤の組合せでガストリンホルモンに対して提供される。
【背景技術】
【０００２】
１９９８年には、アメリカ合衆国で約２９，０００人が膵腺癌と診断され、約２８，９００人が、この腫瘍により死亡すると予測された［１］。膵癌についての全回復率は、２０年より長きにわたる臨床試験にも関わらず、５％未満のままである。被験体の１０％のみが、潜在的に切除可能な腫瘍を有するが、治療的膵頭十二指腸切除術を受けた被験体についてでさえ、５年生存率は６〜２４％である［２］。被験体の圧倒的多数は、切除不可能な腫瘍を有し、かつ治療の初年度中に転移性疾患を発症する。転移性疾患を有する被験体についての生存期間の平均値は、３〜６か月である。
【０００３】
以下に記載される癌栄養剤（cancertrophic agents）の説明は、癌性腫瘍またはより詳細には癌細胞で驚くほどに発現される、すなわち過剰発現される、増殖因子と増殖因子受容体との両方を含む。
【０００４】
ガストリンは、幽門洞粘膜（antral mucosa）および十二指腸球部で多く発現し、膵臓を含む様々な組織では低レベルで発現する。ガストリンはまた、胎児膵臓で多く発現し、この事実は膵臓腫瘍の発達において重要であり得る［３］。
【０００５】
正常な非胎児膵臓は、ガストリンのアイソフォームまたは受容体の発現を示さない。膵癌の患者の大部分は、その血液中にプロガストリン、グリシン延長（glycine-extended）ガストリン、アミド化ガストリンを保有し、かつＣＣＫＢ／ガストリン受容体が腫瘍細胞に存在するということが示されてきた［４］。したがって、膵腺癌はガストリンの前駆体形態、特にプロガストリンおよびグリシン延長形態を発現することが後から見いだされた。腫瘍細胞はまた、ＣＣＫＢ／ガストリン受容体を発現すると決定された。同様に、これらのガストリン前駆体形および受容体は、胃癌、結腸癌、および肝細胞癌などの他の癌で検出された。
【０００６】
複数の増殖因子が膵癌の増殖および発現に影響を及ぼすとされている。その上、ガストリンが栄養性ホルモンであり、かつ胃腸（ＧＩ）癌および非胃腸癌の増殖を促進することが、十分に認識されている［４］。ガストリンは、肝細胞癌、腎細胞癌、肺の小細胞癌、ならびに膵癌の増殖を促進することが、示されている［６〜９］。ガストリンは、完全にプロセシングされた循環ペプチドの形態で細胞挙動に影響を及ぼし、かつ自己分泌プロセスに影響をおよぼし、これによりプロセシングの不完全な前駆体ガストリンが、特にグリシン延長ガストリンの形態で、細胞増殖または細胞機能を刺激し得る［１０］。
【０００７】
詳細には、いくつかの研究により、Ｇ１７ガストリンおよびグリシン延長Ｇ１７（ＧｌｙＧ１７）ガストリンが膵腺癌を含む胃腸腺癌の増殖で果たす重要な役割が示されてきた。Ｇ１７ガストリンがｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの両方で、様々な結腸直腸癌細胞株、胃癌細胞株、および膵癌細胞株の増殖を引き起こすこと［１１］［１２］［６］［１３］、および自己分泌経路が含まれ得ること［１４］［１５］が、実証されている。ＧｌｙＧ１７ガストリンはまた、自己分泌／パラ分泌経路を介して種々の癌の増殖を刺激することが示されている［１６］［１７］。
【０００８】
ガストリンは、実際、Ｇ１７ガストリン、Ｇ３４ガストリン、および未成熟形態、グリシン延長Ｇ１７（ＧｌｙＧ１７）ガストリン、およびグリシン延長Ｇ３４（ＧｌｙＧ３４）ガストリンを含む、ペプチドファミリーである。Ｇ１７およびＧ３４は、コレシストキニン（ＣＣＫ）と共通の５アミノ酸カルボキシ末端配列を共有する。この配列でそれがＣＣＫＢ／ガストリン受容体と相互作用することが示されている［１１］［１８］。
【０００９】
ガストリンには、グリシンをアミドドナーとして使用して、翻訳後にカルボキシ末端をαアミド化することが必要である。最後から二番目の中間体は、Ｃ末端グリシンを有するガストリン、いわゆるグリシン延長ガストリン（ＧｌｙＧ１７およびＧｌｙＧ３４）である。同様な濃度のグリシン延長形態および成熟ガストリンがしばしば見いだされる。ＧｌｙＧ１７は、ガストリンの生物学的活性をいくらか有するようである［１７］。
【００１０】
異なる組織は、異なるパターンの翻訳後のガストリン修飾を示し、異なる中間体の蓄積をもたらす。胃幽門前庭部で産生されるガストリンは大部分が完全にアミド化されたＧ１７であるのに対し［１９］、下垂体前葉コルチコトロフはほぼ完全にアミド化部位をプロセシングできず、９９％を越えるグリシン延長ガストリンをもたらす。新生児膵細胞では、ガストリンは大部分がＧ３４形態であり［１９］かつそれはＴｙｒ２９で完全に硫酸化されている（独特の修飾が、それを効力においてＣＣＫ−様にしている）［３］。腫瘍組織では、一般的には未成熟形態のガストリンが優勢である。結腸直腸癌では、かなりの量のプロガストリン種が蓄積する［２１］［２２］。ラット膵腫瘍ＡＲ４２Ｊでは、グリシン延長ガストリンのみが存在することが報告されている［１７］。ヒト膵癌細胞で産生されるガストリンの形態については何も報告されていない。
【００１１】
ガストリンおよびＣＣＫＢ受容体は、最近クローニングされ、同一であることが示された［２２］。ＣＣＫＢ受容体のメッセンジャーＲＮＡは、管由来の全膵癌細胞株、および正常な膵臓組織、ならびに新しい腫瘍細胞で検出され［２３］［２４］［２５］、正常な組織と比較して悪性膵臓組織で過剰発現される可能性がある［２６］。放射標識リガンド（ガストリンまたはＣＣＫ）結合技法を使用して、正常な膵臓および腫瘍細胞株の両方でＣＣＫＢ受容体を検出した著者もいる［２７］。腫瘍細胞株において受容体を検出することはできなかったが、正常な組織において受容体を検出した者もいる［２８］［２９］。
【００１２】
MacKenzie et al［３０］は、放射性リガンド結合により、ラット膵腫瘍細胞株、ＡＲ４２Ｊに、ＣＣＫＢ／ガストリン受容体が大量に存在することを実証した。Tarasova et al［３１］は、膵腫瘍細胞株ＡＲ４２Ｊ、ならびに様々なヒト胃腫瘍細胞株および結腸直腸腫瘍細胞株で、リガンド結合アッセイに続いて、ＣＣＫＢ／ガストリン受容体の急速なクラスター形成および内部移行が起ったことを示した。１ｎＭの特異的インヒビターＣＩ９８ＳでのＣＣＫＢ／ガストリン受容体のインキュベーションにより、処置の９６時間後に約４７％で、ガストリン刺激性（１ｎＭ）ＡＲ４２Ｊ細胞の増殖が阻害され、このことはガストリン受容体の競合的阻害と一致する［３２］。抗Ｇ１７抗体は、膵腫瘍細胞株ＡＲ４２Ｊで、ガストリンのＣＣＫＢ／ガストリン受容体への結合を阻害することが示されている。
【００１３】
ガストリンペプチドが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの両方で、ヒトおよび動物由来のＧＩ癌細胞株の増殖を増加させることが示されている［５］。４種のヒト膵臓細胞株を用いた、さらに最近の研究では、未処理の対照と比較して、全ての細胞の増殖はＧ１７ガストリンが４０〜６８％増加したことが示された。受容体アンタゴニストを用いた研究は、増殖性効果がＣＣＫＢ受容体で媒介されることを示した［１１］。他の研究も同様な結果を報告しているが［１２］、たとえＣＣＫＢ受容体の存在が結合試験により確かめられたとしても、全ての研究が肯定的な効果を報告しているのではない［２５］。
【００１４】
さらなる研究により、癌の被験体から外科的切除で得られた結腸直腸腫瘍細胞と胃腫瘍細胞とにおける、ガストリンの分裂促進効果が比較された。胃腫瘍の６９％および結腸直腸腫瘍の５５％の細胞が、Ｇ１７ガストリンに応答した増殖の亢進を有したことが示され、これはＧＩ粘膜から得られる正常な細胞で見られるものよりも規模が大きかった［３３］［３４］。
【００１５】
ガストリン遺伝子はＧＩ腫瘍標本由来の上皮細胞で活性化されるが、正常なＧＩ粘膜細胞では活性化されないことが示されている［３５］［３６］［３７］［２１］［１７］［３８］。悪性上皮細胞は、周囲の細胞の自己増殖を増加させ、それにより腫瘍自律性状態を誘導し得る、分裂促進ガストリンペプチドを産生することが示されている［３９］［１６］。
【００１６】
ガストリンはまた、ヒトＰＡＮＣ１細胞を接種したマウスでの、ｉｎ  ｖｉｖｏ腫瘍増殖を刺激した。ペンタガストリンで処置したマウスでの腫瘍体積は、未処置の対照腫瘍よりも１２７％大きく、一方ＣＣＫＢ受容体アンタゴニスト（ペンタガストリンなし）を受けた動物の腫瘍は、対照の６０％の大きさしかなかった［１１］。
【００１７】
ガストリンの刺激性効果もまた、ガストリンに対するアンチセンスＲＮＡ（これはヒト膵細胞株の増殖を抑制した）により実証された［４０］。ガストリンｍＲＮＡが全ての正常細胞株ならびに腫瘍細胞株および新鮮な膵臓組織で検出可能であるのに対し、ガストリンペプチドは悪性組織でのみ検出可能であるという所見により、ガストリンｍＲＮＡが腫瘍細胞でのみ翻訳される可能性があることが示唆された［１５］。
【００１８】
酸分泌を刺激することにおいては不活性であるものの、ＧｌｙＧ１７ガストリンは、膵癌細胞の増殖を増加させることを示しており［４１］、Ｇ１７およびＧｌｙＧ１７はラット膵臓腫瘍ＡＲ４２Ｊ細胞の増殖を刺激することにおいて等効力であることが見いだされた。
【００１９】
ガストリンの通常の生理機能は、ＣＣＫＢ／ガストリン受容体により媒介される。受容体の発現は、全ての型の胃腸悪性度（結腸直腸、胃、膵臓、肝癌、および結腸直腸肝臓転移を含む）で生じる［４２］［４３］［２４］［１５］［４４］［４５］［４６］。異なるアイソフォームの受容体が存在し［５１］［５２］、ＣＣＫＢガストリン受容体の１つより多いアイソフォームが個々の細胞で同時発現し得る。それゆえ、ＣＣＫＢ受容体のアンタゴニズムは、血清中の、または腫瘍細胞により局所的に産生された、存在するガストリンの増殖作用を抑制するための最適な方法ではない場合がある。
【００２０】
複数の型の腫瘍、例えば、結腸直腸、胃、膵臓、および肝細胞腺癌は、それらの原形質膜にＣＣＫＢ／ガストリン受容体を保持すること、およびそれらがガストリンに強力な細胞増殖で応答することが示されてきた［５３］［１３］。そのうえ、さらに最近になって、これらの癌細胞の多くはまたガストリンを分泌するため、自律的な増殖経路に影響を及ぼすことが発見された［２１］［３７］［１６］。
【００２１】
ＣＣＫＢ／ガストリン受容体は、ＣＣＫとガストリンの両方に等しい親和性を有する７つの膜貫通ドメインを有するＧタンパク質共役受容体のファミリーに属する［５４］。この受容体は、主として脳で見いだされたことから、ＣＣＫＢ型受容体と名付けられた［５５］。その後、この受容体は、胃の壁細胞およびＥＣＬ細胞の末梢ＣＣＫ／ガストリン受容体と同一であることが見いだされた［５６］。この受容体は、いくつかの正常組織［５７］［５８］および腫瘍組織［５９］［３４］で十分に特徴決定されており、ラット膵腺癌細胞株ＡＲ４２Ｊを使用して広範に研究されている［６０］。ＡＲ４２ＪのＣＣＫＢ／ガストリン受容体ｃＤＮＡは、クローニングされて配列決定されており、ラットおよびヒト脳のＣＣＫＢ／ガストリン受容体に９０％を超えるＤＮＡ配列の相同性があり、かつイヌ壁細胞ＣＣＫＢ／ガストリン受容体ｃＤＮＡに５４％を超える配列の相同性があり［６１］、種の間でさえも高い配列相同性を実証している。
【００２２】
ペプチドホルモンＧ１７およびＧ３４は、正常細胞の細胞膜上のＣＣＫＢ／ガストリン受容体に結合する。しかしながら、Ｇ１７はガストリン依存性癌細胞の増殖を刺激するが、Ｇ３４は刺激しないことが見いだされた。詳細には、血清付随（serum-associated）Ｇ１７は、腫瘍細胞中のＣＣＫＢ／ガストリン受容体により媒介される内分泌様式で、結腸直腸腫瘍の増殖を刺激する可能性を有する［３４］。ガストリン１７は、他のガストリンホルモン種を超える腫瘍細胞上のＣＣＫＢ／ガストリン受容体に対する親和性の可能な増加により、結腸直腸腺癌の増殖を刺激することに特に関係しているらしい［６２］。ＣＣＫＢ／ガストリン受容体は、ヒト結腸直腸原発腫瘍の５６．７％で、高親和性形態で発現することが見いだされた［５３］。そのような腫瘍による前駆体ガストリンペプチドの内因性産生により、潜在的自己分泌ループもまた存在し得るとされている［２１］。得られるＧ１７リガンド／受容体複合体は、細胞機能を調節する二次メッセンジャーとして細胞増殖を刺激する［６３］。Ｇ１７のＣＣＫＢ／ガストリン受容体への結合は、ホスファチジルイノシトール崩壊の活性化、細胞内カルシウムイオン濃度の増加をもたらすタンパク質リン酸化酵素Ｃの活性化、ならびに分裂促進因子活性化タンパク質リン酸化酵素を介したｃｆｏｓおよびｃｊｕｎ遺伝子の誘導を導き、これは細胞増殖の調節に関係してきた［６４］。さらに、ＣＣＫＢ／ガストリン受容体へのガストリン結合は、その後、チロシンキナーゼ、ｐｐ１２５ＦＡＤＫ（接着斑キナーゼ）によるリン酸化の増加を伴い、これもまた分裂促進因子信号の伝達に役割を担っている［６５］。
【００２３】
胃腸癌のいくつかの実験モデルで、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの両方で、いくつかの高親和性ＣＣＫＢ／ガストリン受容体アンタゴニストが、治療面で評価されてきた。例えば、プログルミド（グルタミン酸誘導体）［１６］［６６］［６７］ベンゾトリプト（Benzotript）（トリプトファンのNアシル誘導体）;L365、260、（アスペルシリン（Aspercillin）の誘導体）［６８］、およびＣＩ９８８（ＣＣＫのＣ末端ペンタペプチド配列を模倣した分子）［６９］は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの両方で、胃腸腫瘍増殖における外因性ガストリンの影響を効果的に中和することが示されている［６］［７０］。しかしながら、これらのアンタゴニストは、重篤な毒性副作用を有し、かつそれらは正常細胞で受容体の全ての潜在的リガンド（Ｇ３４およびＣＣＫなど）の作用を遮断するので特異性を欠いている。最近、非常に強力かつ選択的なＣＣＫＢ／ガストリン受容体アンタゴニスト（ＹＭ０２２［７１］およびＹＦ４７６［７２］など）もまた記載されている。
【００２４】
プログルミドおよびベンゾトリプトは、前臨床試験で広く評価されてきた。これらの化合物の主な問題は、Ｇ１７を置換するのに必要な濃度が比較的高く、それらが効力に欠けていることである。これにも関わらず、プログルミドおよびベンゾトリプトは、いくつかの細胞株の基礎増殖およびガストリン刺激による増殖を阻害した［６７］。さらに、プログルミドは、ガストリン感受性マウス結腸腫瘍を有する異種移植マウス、ＭＣ２６の生存を、対照動物で２５日から、処置動物で３９日に増加させた。
【００２５】
この種類のガストリン拮抗剤のガストリン／ＣＣＫＢ受容体に対する特異性が低いために、腫瘍増殖の阻害はガストリンアンタゴニストで効果的に制御されない可能性がある。そのうえ、ガストリンを認識して結合する細胞受容体は、試験したインヒビター全部に結合しなかった［１６］。したがって、もしガストリンの受容体への結合の完全な阻害が自己分泌増殖カスケードで生じなければ、ガストリンアンタゴニストは腫瘍増殖促進のこの機構を遮断できない可能性がある。
【００２６】
最近の展開で、細胞性増殖などのホルモン制御された生理機能または効果を阻害するための、ホルモンまたはそれらの受容体部分の免疫中和の実現可能性が示された。（米国特許第５，０２３，０７７号および第５，４６８，４９４号）
【００２７】
例えば、免疫原Ｇ１７ＤＴでの免疫は、Ｇ１７ガストリンおよびＧｌｙＧ１７ガストリンのアミノ末端の末端と特異的に反応する抗体を誘発する（米国特許出願番号第０８／７９８，４２３号）。抗体は、Ｇ３４ガストリンおよびＣＣＫを含む、試験されたその他のガストリン種のいずれとも交差反応しない。Ｇ１７ＤＴにより誘発した抗体は、膵腫瘍細胞を含む様々な胃腸腫瘍細胞で、ガストリンのＣＣＫＢ／ガストリン受容体への結合を阻害する。Ｇ１７ＤＴにより誘発した抗体は、ヒト胃、膵臓、および結腸直腸癌細胞の増殖をｉｎ  ｖｉｔｒｏで阻害し、かつ胃および結腸直腸癌のｉｎ  ｖｉｖｏ動物モデルで阻害する。免疫学的中和は、結腸直腸癌の転移を阻害することが発見された[46][47]。
【００２８】
膵癌の増殖におけるガストリン効果に対する代替の、またはさらなる免疫学的武器は、同時譲渡係属中の米国特許出願番号第０９／０７６，３７２号に記載されるように、特異的抗受容体ＧＲＥ１またはＧＲＥ４ペプチドエピトープと結合する抗ＣＣＫＢ／ガストリン受容体抗体の誘導を含む。したがって、受容体部分は、循環ガストリンホルモンまたはそのフラグメントの結合から予防され得る。さらに、膵癌のこの免疫学的阻害は、有利なことにアポトーシス様細胞死を引き起こす受容体抗体複合体の内部移行をもたらす。
【００２９】
特定の抗癌化学化合物は、膵腫瘍などの腺癌を治療するのに有用であることが見いだされた。例えば、ゲムシタビン（２'，２'，ジフルオロデオキシシチジン）は、シタラビンＥと構造的に類似した、ヌクレオシド類似体である。その作用機序は、細胞複製の崩壊を含む。ゲムシタビンは、他のヌクレオシドと共有されるキャリア媒介輸送系を介して細胞に入る。ゲムシタビンは、ジフルオロデオキシシチジンモノホスフェート（ｄｉＦｄＣＭＰ）、ジフルオロデオキシシチジンジホスフェート（ｄｉＦｄＣＤＰ）、そしてジフルオロデオキシシチジントリホスフェート（ｄｉＦｄＣＴＰ）へと順にリン酸化される。ゲムシタビンの前臨床試験は、リン酸化ｄｉＦｄＣＴＰのＤＮＡ中への組込みを示した［７３］［７４］。
【００３０】
ゲムシタビントリホスフェートは、基質であり、かつＤＮＡポリメラーゼαおよびεの競合インヒビターである。ｄＦｄＣＴＰが成長鎖に組み込まれると、１つだけ（またはおそらく２つ）多いヌクレオチド（複数可）が組み込まれることができ、新規機構は「マスク化鎖終結（masked chain termination）」と呼ばれる。いったんさらなる残基が３'末端に組み込まれると、ゲムシタビンはＤＮＡポリメラーゼのプルーフリーディングヌクレオチド鎖分解活性により切除され得ない［４８］。ＤＮＡフラグメント化およびアポトーシスが続く。その作用機序により予測されるように、ゲムシタビンは、細胞が活性にＤＮＡを複製しているときに、Ｓ期でのみ活性である［４９］。
【００３１】
膵癌は転移の発生率が高いので、この方法はまた、免疫学的抗ガストリン、抗ＣＣＫＢ／ガストリン受容体薬剤、およびイリノテカンなどの化学療法薬、および必要に応じて５ＦＵ／ＬＶまたはゲムシタビン、あるいは両方との有利な組合せ治療を含む。
【００３２】
イリノテカンは化学療法薬（カンプトサル（Camptosar）（登録商標））であり、複数の型の癌について、主に二次生存治療として承認されている。これは、５ＦＵ治療後に進行した転移性結腸直腸癌に対して、５ＦＵ／ＬＶと併用して適用されている。
【００３３】
シスプラチンは、様々な新生物に使用される薬物であり、鎖間および鎖内ＤＮＡ架橋を生成することができる。シスプラチンは、単独で、または他の化学療法学とともに投与され得る。
【００３４】
膵癌の予後が非常に悪いこと、および現在利用可能な治療により高い生存率が得られないことに鑑みて、１つまたは複数の化学療法薬を使用する化学療法的方法と組合わせてガストリンおよびその受容体の免疫学的標的化を含む治療戦略により、新規かつ有効な治療を提供し得る。
【００３５】
［発明の概要］
予想とは反対に、処置された動物またはヒトの予防接種への免疫応答が、化学療法学により顕著には抑制されないか、または少なくともワクチン投与量を調節することにより克服され得ることが、新たに発見された。
【００３６】
したがって、有利なことに、本発明は、１つまたは複数の抗癌性増殖能動免疫原を用いた免疫療法と化学療法との組合せを含む膵癌治療を提供し、ここで化学療法は、１つまたは複数の化学療法抗癌剤を含む。
【００３７】
本発明は、膵癌の転移性腫瘍を含む膵癌の治療に使用する方法の組合せを提供し、免疫療法は、１つまたは複数の癌栄養性標的を含む能動性または受動性免疫学的組成物の形態の両方で投与され、化学療法は癌の増殖の阻害に適した１つまたは複数の化学療法薬を含む。本発明の一般的なコンテキストにおいて、能動免疫は、抗増殖因子免疫原および／または抗増殖因子受容体免疫原を含み、受動免疫は、抗増殖因子抗体、およびポリクローナルまたはモノクローナルである抗増殖因子受容体抗体を含む。
【００３８】
詳細には、方法の組合せは、膵癌細胞の増殖を刺激するホルモンおよびその受容体に向けられた免疫学療法による、かつ同時に薬学的に許容可能な化学療法薬の投与による膵癌治療を提供する。
【００３９】
本発明はまた、免疫原性キャリアタンパク質に共有結合したアミノ末端Ｇ１７ペプチドエピトープのコンジュゲートを含む免疫原性組成物および化学療法組成物を投与することを含む、膵癌治療の組合せを提供する。
【００４０】
本発明に従った能動免疫の一つの形態は、スペーサーペプチドを介して免疫原性キャリアまたは免疫原性キャリアフラグメントに共有結合しているガストリンペプチドＧ１７のエピトープを含む、抗ガストリン有効性免疫原性組成物を提供する。
【００４１】
より詳細には、本発明は、７つのアミノ酸ペプチドスペーサー（このスペーサーは、ジフテリアトキソイドのリシン残基のεアミノ酸を運ぶ側鎖に結合されている）に結合したアミノ末端Ｇ１７ペプチドエピトープのコンジュゲート、および化学療法組成物キャリアタンパク質を提供し得る。
【００４２】
本発明の免疫原性組成物は、約１０μｇ〜５０００μｇの範囲の免疫原の単位での投与量を含む。
【００４３】
本発明の代替的実施形態は、抗ガストリン受容体免疫原を提供する。例えば、そのような実施形態は、免疫された患者で抗体を誘発するＣＣＫＢ／ガストリン受容体ペプチドまたはそのフラグメントを含む免疫原を提供し、上記抗体は、受容体に結合して不活性化させるように、特に受容体のエピトープに対するものである。
【００４４】
抗ＣＣＫＢ／ガストリン受容体免疫原により産生される抗体は、それにより腫瘍細胞の自己分泌増殖刺激性径路を含む増殖刺激性径路を阻害し、最終的に腫瘍の増殖を阻害する。
【００４５】
本発明の別の実施形態は、結合時に抗体が受容体関連膵腫瘍細胞（receptor associated pancreatic tumor cell）内へ内部移行するように、特にガストリン受容体に対する、自己抗体を誘発する免疫原を提供する。
【００４６】
本発明のさらなる実施形態は、結合時に受容体関連膵腫瘍細胞の核内へ内部移行するように、特にガストリン受容体またはそのフラグメントに対する抗体を誘発する免疫原を提供する。
【００４７】
膵癌治療の一実施形態は、抗ＣＣＫＢ／ガストリン受容体免疫原での免疫を、単独でおよび／または１つまたは複数の膵癌に対して有効な化学療法薬を含む組成物を投与することによる癌の治療と組み合わせて、提供する。
【００４８】
本発明のさらなる実施形態は、有利なことに、筋肉内注射に許容可能な油中水エマルジョンとして配合される免疫原性組成物を提供する。
【００４９】
膵癌治療の別の実施形態は、１つまたは複数の化学療法薬と組合わせた、抗ガストリン免疫原および抗ガストリン受容体免疫原の両方での免疫を提供する。
【００５０】
本発明に従った治療は、既知の薬学的に許容可能なタキサン（例えば、ドセタキセル、タキソテール、パクリタキセル、７−エピ−タキソール、１０デアセチルタキソール、ならびにそれらの混合物など）、５フルオロウラシル（5FU）、シスプラチン、ゲムシタビン、イリノテカン（カンプトサル（Camptosar）（登録商標）またはＣＰＴ１１とも呼ばれる）、およびタモキシフェンから選択される１つまたは複数の化学的アジュバント化合物での治療の免疫学的局面を含む。５ＦＵはロイコボリンとともに投与され得る。
【００５１】
化学療法は、９０ｍｇ／ｄ〜１００ｍｇ／ｄのロイコボリン、または２００〜３００ｍｇ／ｍ２／ｄの範囲のイリノテカン、１００〜１５００ｍｇ／ｍ２／ｄの範囲のゲムシタビンとともに、５０〜１０００ｍｇ／ｍ２／ｄの範囲の５ＦＵ；４０ｍｇ〜１００ｍｇ／ｍ２／ｄの範囲のシスプラチン（プラチノール）；および１日あたり、１０ｍｇ〜２０ｍｇの錠剤タモキシフェンの用量を含む。例えば、化学療法薬の組合せは、５ＦＵシスプラチン、５ＦＵゲムシタビン、または５ＦＵとロイコボリンおよびシスプラチンとを含む。
【００５２】
本発明は、これまでに処置されていない被験体での、膵臓の切除不能な転移性癌腫の、ゲムシタビンと組合わせたＧ１７ＤＴ免疫原（１００〜５００μｇ）を用いた処置を提供する。
【００５３】
本発明に従って、膵癌治療方法は、抗癌効果を有する１つまたは複数の化学的化合物を含む化学療法薬と併せた、免疫学的抗増殖刺激剤の周期的投与を提供する。免疫学的薬剤は、外因性抗増殖因子抗体での能動免疫または受動免疫のいずれかのホルモン免疫原である。外因性ヒト抗体は、標準的な技法を使用して、トランスジェニック動物または他の適した被験体で産生され得る。受動免疫については、抗体は、モノクローナル、ポリクローナル、またはハイブリッドであり得る。抗体は、例えばＩｇＧフラクションなどの精製した形態で投与され、これは循環増殖因子またはホルモン（例えば、ガストリンＧ１７またはＧｌｙＧ１７）またはそれらの受容体を中和するのに十分な投与量を含む。
【００５４】
本発明のさらなる増殖因子またはホルモン特異的な実施形態は、毒素などの薬剤または放射標識物質で修飾された形態の外因的に加えられた抗ＣＣＫＢ／ガストリン受容体抗体を利用する。毒素は、コレラ型のものであり得る。放射標識は、１２５ヨウ素、１３１ヨウ素、１８７レニウム、または９０イットリウムであり得る。
【００５５】
例えば、この実施形態は、他の化学療法薬および他の免疫学的活性薬剤とさらに組み合わせて、内部移行の際に細胞を破壊するための放射標識された特異的抗癌栄養性抗体を提供する。
【００５６】
放射標識抗体はまた、検出診断法に使用することができ、ここで放射標識は、１２５ヨウ素、１３１ヨウ素、テクネチウム（Ｔｃ）、ｌｌｌインジウム、６７ガリウム、または９０イットリウムを含む。
【００５７】
［発明の詳細な説明］
様々な癌の異種移植片を有する動物に投与された抗Ｇ１７ＤＴ抗体、ならびに結腸直腸癌または胃癌の被験体のＧ１７ＤＴコンジュゲートでの能動免疫により誘発された抗体は、Ｇ１７およびＧｌｙＧ１７ガストリンの両方に、高親和性で結合した。そのうえ、結腸直腸、胃、および膵臓の進行癌の被験体における安全性および用量範囲の研究は、Ｇ１７ＤＴ免疫原により高親和性抗体が誘発されることを実証した。化学療法と組合せたＧ１７ＤＴでの免疫などの生物学的治療は、それぞれ単独でよりも高い有効度を示し得る。より高い有効性は、ガストリンなどの増殖因子の阻害が細胞分裂停止性であり、かつ化学療法が細胞毒性効果であることによる。２つの様式の組合せは、進行性乳癌で化学療法と組合せた抗ＨＥＲ２抗体による処置ですでに実証されているのと同様に［７５］相乗的であり、これは、より詳細には、Ｇ１７ＤＴの化学療法薬との組合せの前臨床試験の結果により示される。
【００５８】
ガストリンペプチドに対して産生される中和用抗血清の大部分は、Ｇ１７ガストリン（配列番号４）、Ｇ３４ガストリン（配列番号５）、およびコレシストキニン（ＣＣＫ）に共通する分子の５アミノ酸カルボキシ末端部分に向けられてきた。これらのペプチドホルモンのこのカルボキシ末端配列は、ＣＣＫＢ／ガストリン受容体と相互作用する［１４］。Ｇ１７ＤＴコンジュゲートは、Ｇ１７およびＧｌｙＧ１７ガストリンのアミノ末端に対する抗体を産生するために開発された。Ｇ１７ＤＴコンジュゲートは、システイニル残基が末端に来る７つのアミノ酸残基のスペーサーペプチドにＣ末端で連結した、Ｇ１７ガストリンのアミノ酸残基１〜９由来のエピトープを含む、合成した１６残基のペプチドから構成される。ペプチドは、二価架橋剤ＥＭＣＳを使用してＣ末端のシステイン残基を介してキャリアタンパク質、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）へ架橋し、Ｇ１７ＤＴコンジュゲートを形成する。Ｇ１７ＤＴは、筋肉内注射に適した油中水エマルジョンに配合される。
【００５９】
本発明で使用するための他の免疫原は、同時譲渡米国特許第５，０２３，０７７号、第５，４８８，４９４号、第５，６０７，６７６号、第５，８６６，１２８号、第５，６０９，８７０号、第５，６８８，５０６号、および第５，６６２，７０２号に開示され、これらはその全体の参照により本明細書中に援用される。
【００６０】
例えば、すぐ上のＧ１７ＤＴ免疫原に対して産生されたＧ１７特異的抗体が、ウサギ血清からアフィニティ精製されて、放射性ヨウ素標識ヒトＧ１７の、ＡＲ４２Ｊ細胞、すなわちガストリン受容体を発現するラット膵癌細胞株への結合をｉｎ  ｖｉｔｒｏで阻害するそれらの能力について試験されたことが示されている。標識Ｇ１７と予め混合された抗Ｇ１７抗体が、Ｇ１７の細胞への結合を大幅に（９０％を越えて）阻害したことが示された。このデータは、膵癌細胞におけるヒトＧ１７の生物活性を中和する抗体の能力を実証する。
【００６１】
Ｇ１７ＤＴは、著しい全身性副作用を引き起こさず、かつＧ１７ガストリンおよびＧｌｙＧ１７ガストリンの長期中和化の有害な効果に対する証拠は見いだされなかった。Ｇ１７ＤＴを用いた免疫に続く唯一の著しい副作用は、注射部位反応である。
【００６２】
Ｇ１７およびグリシン延長Ｇ１７ガストリンの内分泌および自己分泌／パラ分泌効果の中和が機構として提案され、これによりＧ１７ＤＴ免疫がガストリン刺激による腫瘍増殖を減少させ、患者の生存率を上昇させ得る。許容可能な局所的反応原性を示しながらも免疫応答を誘発するＧ１７ＤＴ配合物が開発されてきた。
【００６３】
そのうえ、同時譲渡国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９９／１０７５０に記載されるように、有利なことに、通常よりも少ない量のロイコボリン／５ＦＵと組合わせた抗ガストリン免疫処置は、効果的であった。
【００６４】
本発明の方法は、ヒトを含む動物のガストリンホルモン依存性腫瘍の治療に関し、患者に抗ＣＣＫＢ／ガストリン受容体免疫原を投与する（免疫された患者で、腫瘍細胞のＣＣＫＢ／ガストリン受容体に結合する抗体の形成を誘導する）ことを含む。細胞受容体に結合した抗体は、ホルモンの受容体への結合を遮断し、それによりホルモンの増殖促進効果を阻害する。受容体／抗ＧＲＥ１（抗ガストリン受容体エピトープ１）抗体複合体は迅速に内部移行し、細胞質を横切って核に入ることがより重要である。核内の複合体１は、患部腫瘍細胞の自殺（アポトーシス）を誘発する。
【００６５】
本発明の免疫原は、免疫模倣物（immunomimics）として作用するヒトＣＣＫＢ／ガストリン受容体の天然または合成ペプチドを含む。特に、２つの合成ペプチドが、免疫模倣物として開発された。ＣＣＫＢ／ガストリン受容体のアミノ酸配列から開発されたこれらのペプチドは、免疫原性であり、かつ腫瘍細胞の内因性ＣＣＫＢ／ガストリン受容体と、ｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏの両方で交差反応性である。ペプチド１は、ＣＣＫＢ／ガストリン受容体のアミノ酸５〜２１、配列ＫＬＮＲＳＶＱＧＴＧＰＧＰＧＡＳＬ（ペプチド１、配列表中、配列番号１）からなる。ペプチド１は、受容体のアミノ末端ドメインの一部分を構成し、細胞膜の細胞外表面に位置する。
【００６６】
別の実施形態において、免疫原はペプチド４を含み、これはＣＣＫＢ／ガストリン受容体のアミノ酸配列ＧＰＧＡＨＲＡＬＳＧＡＰＩＳＦ（ペプチド４、配列表中、配列番号２）からなる。ペプチド４は、受容体の４番目の細胞外ドメインの一部分であり、これも細胞膜の外側にある。
【００６７】
免疫原はまた、免疫模倣ペプチドをタンパク質キャリアから突出させるのに適し、かつリンパ球受容体に結合する能力を向上させる、延長またはスペーサーペプチドを含む。適したスペーサーペプチドは、アミノ酸配列ＳＳＰＰＰＰＣ（セリン（Ｓｅｒ）スペーサー、配列表中、配列番号３）を有する。しかしながら、他のスペーサーペプチドも同じように適している。免疫模倣ペプチドは、スペーサーを有するか有さないかに関わらず、次いでカルボキシ末端のシステイン残基を介して、タンパク質キャリア（ジフテリアトキソイドなど）と結合する。スペーサーペプチドは、ＣＣＫＢ／ガストリン受容体由来のペプチドと免疫学的に関連しておらず、それゆえ受容体由来のペプチドの特異的免疫原性を増強するが、決定しないはずである。
【００６８】
患者の腫瘍細胞におけるＣＣＫＢ／ガストリン受容体の存在および密度は、標識抗受容体抗体を腫瘍バイオプシーから得られる標本と反応させることにより、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで測定され得る。抗受容体抗体は、当該分野で既知のように、放射性トレーサー、染料、酵素、または蛍光標識のいずれかで標識され得る。さらに、ガストリンに対する腫瘍細胞の応答性は、標準的な技法を使用して、患者の腫瘍バイオプシー標本からｉｎ  ｖｉｔｒｏで評価され得る。腫瘍バイオプシー標本がＣＣＫＢ／ガストリン受容体抗体アッセイに対して陽性である患者は、本発明の方法による処置の典型的な候補である。
【００６９】
０．００１〜５ｍｇの範囲の有効投与量の免疫原性組成物が、胃腸癌の治療のため、患者に投与される。免疫原性組成物の有効投薬量は、患者での免疫応答を誘発することが可能なはずであり、免疫の１〜３か月後にＣＣＫＢ／ガストリン受容体に対して有効レベルの抗体力価からなる。患者の免疫に続いて、免疫原の有効性は、腫瘍の存在および大きさを検出するための、超音波および核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）などの標準的な臨床手順によりモニタリングされる。受容体に対する抗体力価レベルはまた、患者から採取された血液標本からモニタリングされてもよい。有効抗体力価を維持するために必要に応じて追加免疫が与えられる。本方法に従ったガストリン依存性癌（胃、肝臓、膵臓、および結腸直腸腺癌など）の効果的治療は、腫瘍増殖の阻害をもたらし、かつ腫瘍の大きさを減少させるはずである。
【００７０】
本発明の抗ＣＣＫＢ／ガストリン受容体免疫原により産生される抗体は、３つの可能な機構、すなわち（ｉ）ガストリンのその受容体への結合の阻害、（ＩＩ）腫瘍細胞増殖のシグナル伝達径路の分解または破壊；および（ｉｉｉ）受容体／抗体複合体が内部移行して核内に移動する細胞におけるアポトーシス（すなわち細胞の自殺）の誘導、により、ガストリン依存性腫瘍に対して抗栄養性効果を有し得る。
【００７１】
本発明の別の実施形態において、抗ＣＣＫＢ／ガストリン受容体抗体は、ＣＣＫＢ／ガストリン受容体応答性腫瘍を保有する患者に投与される。この抗体は、腫瘍細胞のＣＣＫＢ／ガストリン受容体に特異的に結合する。抗体の受容体への結合は、細胞膜におけるガストリンのそのリガンドへの結合を阻止し、したがって、ガストリン依存性腫瘍細胞の増殖シグナルが阻害されて腫瘍の増殖が停止する。抗体は、好ましくは、キメラ抗体またはヒト化抗体、あるいはそれらのフラグメントを有し、これらは標的受容体に効果的に結合し、標準的な技法（例えば米国特許第５，０２３，０７７号、第５，４６８，４９４号、第５，６０７，６７６号、第５，６０９，８７０号、第５，６８８，５０６号、および第５，６６２，７０２号に開示されるものなど）により産生され得る。これらの外因的に産生された抗体はまた、それらが腫瘍細胞の増殖を阻害すること、または腫瘍細胞に毒性物質を送達することによって、その原形質膜にＣＣＫＢ／ガストリン受容体を有する腫瘍細胞を殺すのに有用であり得る。治療用抗ＣＣＫＢ／ガストリン抗体は、それぞれＧＲＥ１およびＧＲＥ４として、受容体タンパク質の細胞外ドメイン１および４と反応するものである。この免疫の方法における腫瘍増殖の阻害もまた、超音波画像法およびＭＲＩによりモニタリングされ、患者の必要に応じて繰り返し免疫が施される。
【００７２】
腫瘍細胞増殖を阻害および腫瘍細胞を死滅させる際の抗体の有効性は、細胞毒性分子を抗ＣＣＫＢ／ガストリン抗体および抗ガストリンＧ１７またはＧ１７ｇｌｙ抗体へ結合させることにより増強され得る。細胞毒性分子は、毒素（例えば、コレラ毒素、リシン、αーアマニチン）、または１２５Ｉまたは１３１Ｉなどで標識された放射性分子、または化学療法薬（例えば、シトシンアラビノシド、または５フルオロウリジン（５ＦＵ）など）である。
【００７３】
１２５Ｉまたは１３１Ｉで放射標識された抗体に加えて、抗ＣＣＫＢ／ガストリン受容体抗体はまた、放射性核種（１１１インジウムおよび９０イットリウムなど）で標識され得る。本発明のこの態様において、これらの抗体を患者へ投与してＣＣＫＢ／ガストリン受容体含有腫瘍細胞へ結合した抗体を検出することにより、抗体は、腫瘍を有するＣＣＫＢ／ガストリン受容体をｉｎ  ｖｉｖｏで検出および診断するのに有用である。放射標識抗ＣＣＫＢ／ガストリン抗体を腫瘍へ到着させた後、注射の約１〜２時間後に、放射性「ホットスポット」が、以前に開示されたようにして（「ハリソン内科の原理（Harrison's Principles of Internal Medicine）」、Isselbacher et al. eds. 13th Ed. 1994）、標準シンチグラフィー手順を使用して画像化される。
【００７４】
患者のガストリン依存性腫瘍の治療のために免疫原を投与する場合の組成物は、様々な形態であってよい。これらには、例えば、固体、半固体、および液体の剤形（錠剤、粉末、溶液、懸濁液、坐剤、ならびに注射液および不溶解性溶液など）が含まれる。好適な形態は、意図される投与様式および治療的用途によって決まる。組成物は、本発明の免疫原および適した薬学的に許容可能な構成成分を含み、かつ他の薬用剤、キャリア、アジュバント、賦形剤などを含み得る。適したアジュバントとして、ｎｏｒムラミルジペプチド（norMDP、Peninsula Labs., CA）、およびモンタニド（Montanide）ＩＳＡ７０３（Seppic, Inc., Paris, France）などのオイルが含まれてよく、これらは標準的な手順を使用して混合され得る。好ましくは、組成物は単位用量の形態である。免疫のために、または薬物として、１回でまたは一定期間に渡り、投与される活性化合物の量は、処置される被験体、投与の様式および形態、ならびに処置する医師の判断によって決まる。
【００７５】
本発明の受動免疫のための抗ＣＣＫＢ／ガストリン受容体抗体は、生理食塩水溶液などの薬学的に許容可能なキャリア（例えば、リン酸緩衝食塩水）を使用して、患者へ静脈内投与され得る。
【００７６】
本発明の進行性膵癌の組合せ治療についての薬理学および毒物学は以下に記載される：
【００７７】
実施例Ａ
進行性膵腺癌の患者２８人に、０週、１週、および３週めに、２５０μｇの用量でＧ１７ＤＴを投与した［１６］。１人の患者だけ、抗体応答を高められなかった。Ｇ１７ＤＴは、全身性副作用がなく、十分に寛容性を示した。１人の患者は無菌の膿瘍を発生したが、これは後の吸引で解決された。年齢、段階、およびポッサムスコアリング（POSSUM scoring）による同時に存在する罹患率の観点で一致する過去の対照と比較した場合、Ｇ１７ＤＴ患者での生存率は顕著に改善されたことが見いだされた［４０］。
【００７８】
膵癌の被験体の応答率に関して、Ｇ１７ＤＴに対する免疫応答の開始時間の平均値は、用量に関連しているようであり、２５０μｇのＧ１７ＤＴで最適であるようである。
【００７９】
実施例Ｂ
ＣＣＫＢ／ガストリン受容体（ＧＲＥ１エピトープ）のアミノ末端に向けられた抗血清を使用した免疫−電子顕微鏡観察による研究により、１時間のインキュベーション後、イムノゴールド標識ＣＣＫＢ／ガストリン受容体抗体の分布が速やかに内部移行し、抗体受容体複合体の１２％が細胞膜に会合し、３６．６％が細胞質内に、７．９％が核膜に、そして非常に驚くべきことに４３．５％が細胞核内にあったことが示された。核内の強烈なＣＣＫＢ／ガストリン受容体免疫反応性領域はクロマチンで見いだされ、これはＤＮＡの調節の特異的結合部位を示唆し得る。
【００８０】
金ビーズ（イムノゴールド）と結合した抗免疫グロブリンでのこれらの電子顕微鏡観察による研究により、抗受容体／受容体複合体の極めて速いターンオーバーが腫瘍細胞で生じていることが明らかにされた。抗体に曝露後１０秒もの早さで、複合体は細胞核で検出され得る。
【００８１】
実施例Ｃ：免疫学的有効性
患者の血清を、２〜４週間間隔で、Ｇ１７ガストリンに対する抗体について評価した。１２５Ｉ標識ヒトガストリン１７での滴定および阻害放射性免疫測定法を使用して、抗ガストリン１７抗体を測定した。膵癌試験１および２におけるＧ１７ガストリンに対する抗体についてのアッセイを、Ｇ１７抗原系ＥＬＩＳＡにより行った。
【００８２】
Ｇ１７ＤＴに対する免疫応答の薬物動力学を、Ｇ１７ＤＴの用量および処置レジメンの関数として評価した。Ｇ１７ガストリン特異的抗体の血清転換の頻度および産生開始時間を用いて、最適用量を推定した。
【００８３】
ＲＩＡによる試験血清での陽性免疫応答は、免疫後の最初の１２週以内で、免疫前の被験体血清の１：４０希釈で測定された非特異的バックグラウンドの４０倍以上であるとしいうことが明らかになった。これは、ＲＩＡアッセイに加えられた全１２５ＩＧ１７ｃｐｍの約１０％に相当する。ＥＬＩＳＡアッセイにおける陽性応答は、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて４単位以上と概算され、これはＲＩＡで観測されたものと一致する。
【００８４】
用量と配合の比較を容易にするために、切除不能な、局所的に進行した（第ＩＩ／ＩＩＩ段階）および転移性（第ＩＶ段階）膵癌の被験体で観測される、１２週までおよびこれを含む時点での免疫応答を使用して、様々な研究の処置群の中での免疫レスポンダーの割合を決定した。免疫レスポンダーの割合および免疫応答発生時間の平均値は、それぞれ表Ａおよび表Ｂに要約される。
【００８５】
膵癌の患者２２人でのＧ１７ＤＴの用量を設定するフェーズＩＩの研究により、非レスポンダーと比較した場合に、適切な抗体応答を高めた患者での生存率がより高いことが実証された（７．８９対４．９３ヶ月）［３９］。
【００８６】
2005508838.tif 000002
【００８７】
2005508838.tif 000003
【００８８】
化学療法
実施例１：ゲムシタビンの活性
米国食品医薬品局は、複数の臨床試験（ゲムザル（Ｇｅｍｚａｒ）（登録商標）（ゲムシタビンＨＣｌ）添付文書、１９９６、１９９８、表３に要約される）の結果に基づき、ゲムシタビンの膵癌での使用を認可した。局所進行性または転移性疾患の被験体が、ゲムシタビン１０００ｍｇ／ｍ２を週あたり７回、または３回、続いて１週間の休止、次いでその後４週間ごとに週あたり３回で、処置された。初期のフェーズＩＩの治験により、有意数の被験体が、中程度の目的応答速度のみにも関わらず症状のいくらかの緩和を経験したことが示された。これらの効果を定量化するため、続く治験で使用するための、新規エンドポイント、いわゆる症状緩和効果（Clinical Benefit Response）が開発された。
【００８９】
症状緩和効果は、痛み（鎮痛薬消費量および痛み強度）、カルノフスキー指数、および体重変化の度合いの総合である。ゲムシタビンは、エンドポイントとして症状緩和効果を使用することが認可された最初の薬剤であった。症状緩和（Clinical benefit）には、それ以外で悪化することなく少なくとも１つのパラメーターで持続した（４週間以上）改善が要求される。被験体は、少なくとも４週間連続して、その他のパラメーターのいずれにもどのような持続した悪化も示すことなく、痛みのレベル（痛みの記録評価票（Memorial Pain Assessment Card））または鎮痛薬の消費の少なくとも５０％の減少、あるいは指数（カルノフスキー指数）の少なくとも２０ポイントの改善を示した場合にのみ、症状緩和レスポンダーとみなされる。被験体はまた、これらのパラメーター全てが安定している場合に、症状緩和陽性レスポンダーとみなされる。
【００９０】
実施例２：ゲムシタビンでの治療
１９９６年にゲムシタビン（ゲムザル（登録商標）、Eli Lilly&Co.）が膵臓の局所進行性および転移性腺癌の第一選択治療として認可される以前、５フルオロウラシル（５ＦＵ）が、３０年間、ＧＩまたは膵癌治療の標準であった。２５種の新薬を含む２８例のフェーズＩＩの治験の総説［５０］により、いずれも、０％の客観的応答率平均値（０〜１４％の範囲）および３ヶ月生存率平均値（２〜８．３ヶ月の範囲）の結果で、被験体に５ＦＵを超えるどのような改善も与えなかったことが示された。組合せ化学療法的処置が５ＦＵ単独に勝る改善を提供するという示唆は、無作為のフェーズＩＩＩの治験で確認されなかった［５０］。
【００９１】
ゲムシタビンは、自身のＤＮＡ中への組み込みを向上させる複数の自己増強機構を示す［７６］。これらの効果は、ゲムシタビンおよびその代謝産物とピリミジンヌクレオチド代謝酵素との相互作用に媒介され、そして細胞中に高濃度の活性薬物を産生することおよび細胞中の活性薬物の半減期を延長させることが重要であると考えられる。これらは、以下を含む：
【００９２】
ゲムシタビントリホスフェートは、ｄＣＭＰ脱アミノ酵素を直接阻害し、したがってゲムシタビンモノホスフェートからジフルオロデオキシウリジンモノホスフェートへの分解（主分解径路）を阻害する。
【００９３】
ゲムシタビントリホスフェートはまた、ＵＴＰおよびアンモニア（またはグルタミン酸）からのＣＴＰ合成を触媒するＣＴＰ合成酵素も阻害することができ、さらにｄＣＴＰプールを枯渇させる。
【００９４】
ゲムシタビンジホスフェートによるリボヌクレオチド還元酵素の阻害は、ｄＣＴＰおよびｄＣＤＰ（これらはともにデオキシシチジンキナーゼをフィードバック阻害する）の濃度を減少させる。したがって、フィードバック阻害を取り除くために、さらにゲムシタビンがリン酸化される。
【００９５】
ゲムシタビンはまた、強力な放射線増感剤であることを示してきた。この活性は、リン酸化薬物のＤＮＡ中への取込みと並行していない。むしろ、それはｄＡＴＰの細胞内枯渇と並行しており、リボヌクレオチド還元酵素の阻害がこの作用の重要な機構であることを示唆している［７３］［７４］［１］。一般に、ｄＮＴＰプールを減少させる薬剤（例えば、尿素）は、放射線増感剤として作用する。中間体ｄｉＦｄＣＤＰ（ゲムシタビンジホスフェート）は、リボヌクレオチド還元酵素の強力なインヒビターである。この阻害は、４種のデオキシヌクレオチドトリホスフェートの細胞内プールを全て減少させ、これがＤＮＡ合成の阻害をもたらす。異なる細胞型における各ｄＮＴＰプールの枯渇程度の差異は、固形腫瘍細胞型で特に観測されるｄＡＴＰプールの枯渇が大きいことがゲムシタビンの固形腫瘍での臨床活性がより高い原因であり得ることを示唆する［７４］［１］。
【００９６】
ゲムシタビンは、ＩＶ投与後、速やかに体内総水分中に分散される。分散量は、注入期間、年齢、および性別により影響される。注入が長くなると、濃度も高くなる。
【００９７】
クリアランスは、用量および注入期間とは無関係であるが、可変であり、年齢により影響を受ける。注入期間が長くなるほど分布量が増えるので、その排出半減期は、長期にわたって注入されるほど長くなる。
【００９８】
ゲムシタビンは、血漿中のシチジン脱アミノ酵素により脱アミノ化されてジフルオロデオキシウリジン（これは不活性である）になる。５％のみがゲムシタビンとして未変化で排泄される。
【００９９】
ゲムシタビンは一般に、５ＦＵほど十分な耐容性を示さないが、副作用の発生率がより高いにも関わらず、その全体的な毒性は中程度と判断される。累積的毒性の証拠はない。
【０１００】
本発明の治療は、Ｇ１７ガストリンまたはＧ１７Ｇｌｙガストリンの免疫中和をゲムシタビンでの化学療法と組合わせる。この組合せの有利な態様は、毒性および他の有害な副作用が減少するように、より少ない投薬量のゲムシタビンまたはイリノテカン（またはある類似の許容可能かつ認可された抗癌剤）を提供する。さらに、例えばＧ１７ＤＴ免疫原含有組成物での免疫は、自己抗血清の十分な力価が処置される被験体で生じる前に免疫応答が抑制されることを避けるために、化学療法に先行する時点で投与され得る。
【０１０１】
実施例３：イリノテカンでの治療
イリノテカン注射剤（イリノテカン塩酸塩注射剤）は、カンレンボク（Camptotheca acuminata）などの植物由来のアルカロイド抽出物であるカンプトテシンの半合成誘導体である。化学名は、（Ｓ）４，１ジエチル３，４，１２，１４テトラヒドロ４ヒドロキシ３，１４ジオキシ［Ｈピラノ［３'，４'：６７］インドリジノ［１，２ｂ］キノリン９イル［１，４'ビピペリジン］１'カルボキシレート、一塩酸塩、三水和物である。これは、黄色透明の滅菌薄水溶液として供給される。各１ミリリットルの溶液は、２０ｍｇのイリノテカンを含む。（カンプトサル添付文書は、イリノテカンの詳細な表示情報を提供する）。イリノテカンは催吐性（emetogenic）である。したがって、患者は制吐薬で前投薬を受けることができる。イリノテカン治療は、ＧＩ副作用、特に早期および後期下痢を引き起こすことが示されてきた。早期下痢は、コリン作用性症状を伴い得る。コリン作用性症状を経験している患者には、アトロピンの予防的または治療的投与が考慮されるべきである。後期下痢は、ロペラミドで迅速に治療されるべきである。ＧＩ徴候に加えて、イリノテカンは、骨髄抑制および過敏性反応を引き起こすことが示されてきた。適切な血液機能、腎機能、および肝機能を有する患者、ならびに以前のイリノテカンに基づく治療からイリノテカンに対して禁忌のない患者のみが、好中球減少およびＧＩ異常などの毒性効果の頻度および重篤度を避けるかまたは免疫し得る。
【０１０２】
患者は、全身性（すなわち、経口または注射）副腎皮質ステロイドを含む、免疫抑制薬以外を服用する投薬を続けることが許容される。全ての付随する投薬は、症例報告書（ＣＲＦ）の適切なページに記録されるべきである。
【０１０３】
緩和放射線治療が可能である。ゲムシタビン治療が重篤有害事象（ＳＡＥ）のために中止される場合、Ｇ１７ＤＴ免疫は継続され得る。
【０１０４】
実施例４：シスプラチンでの治療
プラチノール（シスプラチンまたはｃｉｓジアミンジクロロプラチン（ＩＩ）の溶液）の注射は、大抵、睾丸生殖細胞腫瘍の有望な治療として使用されてきた他の細胞毒性剤と組合せて使用される。実質的な活性は、小細胞肺癌、膀胱癌、および卵巣生殖細胞腫瘍の治療で観測されてきた。本発明に従って、シスプラチンは、他の薬学的に許容可能な細胞毒性剤および免疫原または抗癌栄養性抗体の外因性適用（exogenous application）と組合せて、抗膵癌治療を増強し得る。適した効果的な投薬は、１週間あたり１０００ｍｇ／ｍ２ほど多くの範囲であり得るが、化学療法効果は、化学療法薬投薬量を少なくすることを可能にするような免疫療法の併用で増強され得る。
【０１０５】
実施例５：Ｇ１７ＤＴ免疫原性におけるゲムシタビンの効果
本実施例は、Ｇ１７ＤＴ免疫原の免疫原性における化学療法薬ゲムシタビンの効果を評価するためのｉｎ  ｖｉｖｏ試験を示す。その目的のため、モデル動物系としてマウスを、０日、２８日、および５６日目に、０．１ｍｌ体積のモンタニドＩＳＡ７０３エマルジョン中、Ｇ１７ＤＴを１２５μｇ、２５０μｇ、および５００μｇ用量で腹腔内（ＩＰ）に免疫した。ゲムシタビンを、０日、７日、１４日、２１日、２８日、３５日、４２日、５６日、６３日、および７０日目に、０．２ｍｌ体積中２１．４ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内（ＩＶ）に与えた。対照マウスは、化学療法薬を含まない生理食塩水賦形剤を受けた。結果として生じる抗Ｇ１７抗体応答を、研究課程にわたり２週間ごとに収集された血清、および２１日目での１回の出血でＥＬＩＳＡにより測定した。
【０１０６】
Ｇ１７ＤＴ免疫原を、滅菌条件下、ＰＢＳ（生理的塩類溶液）を希釈剤として使用して配合した。７０：３０の油相：水相Ｗ／Ｗ比で免疫原の水相をモンタニドＩＳＡ７０３と混合して、エマルジョンを生成した。
【０１０７】
分取量８〜１０ｍｇの乾燥ゲムシタビンを計量し、静脈内投与前に３．４２４ｍｇ／ｍｌのゲムシタビンヒト処置濃度で、ＰＢＳに溶解した。
【０１０８】
８４日間の課程にわたる治療の結果は、全群の応答平均値を比較すると、全てのマウスが同様な動態学でＧ１７ＤＴ免疫原に応答したことを示した。（表１を参照）。
【０１０９】
１２５μｇのＧ１７ＤＴで免疫されたマウスは、ゲムシタビンで同時に処置された場合、平均抗Ｇ１７力価の統計学的減少を明らかにした。しかしながら、抑制は、免疫原の用量を２５０μｇまたは５００μｇのＧ１７ＤＴに増加させることにより、克服された。
【０１１０】
この実施例の２番目の部分は、テトラゾリウム系の、抗ガストリンＧ１７と組合せた、Ｇ１７ＤＴ（１０〜５００μｇ／ｍｌ）で誘導された抗体を使用した、ヒト膵細胞株、ＰＡＮＣ１、ＢｘＰＣ３、およびＰＡＮ１の細胞増殖を描く。Ｇ１７ＤＴ誘発抗体は、血清付随および腫瘍分泌の両方の増殖形態のガストリンに対して活性である。ＰＡＮ１細胞は、臨床的に反射的用量で投与された。
【０１１１】
１００および５０μｇ／ｍｌのＧ１７ＤＴ濃度は、３種の細胞株全てについて個別の薬剤と比較した場合、ゲムシタビン（１．０〜０．０１μｇ／ｍｌ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害効果を１１〜３８％増加させた（ｐ＜０．０５、ＡＮＯＶＡ）。
【０１１２】
ゲムシタビンについては３８％であったのに対し（ｐ＝０．００４、ＡＮＯＶＡ）、ｉｎ  ｖｉｖｏで、Ｇ１７ＤＴ単独では、基底膵腫瘍重量を３３％阻害した（ｐ＝０．０１６、ＡＮＯＶＡ）。薬剤を組合わせた場合、阻害された腫瘍重量は５５％で、これはＧ１７ＤＴ単独よりも顕著であった（Ｐ＝０．０２５）。したがって、免疫薬剤Ｇ１７ＤＴは、ゲムシタビンの治療有効性を高め得る。
【０１１３】
2005508838.tif 000004
【０１１４】
本発明の別の実施形態は、適切な増殖因子および／または増殖因子受容体に対する能動免疫と組合せた、１つより多い化学療法薬での処置を提供する。例えば、そのような処置は、５ＦＵ／ロイコボリンまたは５ＦＵ＋シスプラチナの組合せを含み得る。
【０１１５】
前臨床実験として、マウスを２種の抗癌剤、５ＦＵおよびシスプラチナの組合せで処置し、そして多数の抑制効果の程度に対して試験した。
【０１１６】
実施例６：Ｇ１７ＤＴ免疫原性における５ＦＵ＆シスプラチナの効果
この実施例は、マウスでの、Ｇ１７ＤＴ免疫原の免疫原性における、化学療法薬５フルオロウラシル（５ＦＵ）およびシスプラチナ（ＩＩ）ジアミンジクロリド（薬物配合物シスプラチンの活性成分としてのシスプラチナ）での同時処置の効果に関する。
【０１１７】
Ｇ１７ＤＴ免疫原を、Ｇ１７ＤＴコンジュゲート１．２５ｍｇ／ｍｌで、モンタニド（登録商標）ＩＳＡ７０３と配合した。０日、２８日、５６日目に、マウスを、１２５μｇの用量でＧ１７ＤＴを送達する０．１ｍｌ体積の腹腔内（ＩＰ）注射で免疫した。化学療法投薬レジメンは、ヒト患者に推奨される用量に基づいた。したがって、組合せた５ＦＵ＋シスプラチナは、試験群に０日目に、続いて５ＦＵが１日目および２日目に、１０．０ｍｇ／ｋｇの５ＦＵおよび１．０ｍｇ／ｋｇのシスプラチナの用量で、０．２ｍｌ体積の静脈内注射により投与された。対照マウスは、化学療法薬を含まない生理食塩水賦形剤を受けながら免疫された。シスプラチナにより引き起こされる潜在的な脱水のための支持療法として、全てのマウスは、ＩＰで１．０ｍｌのＰＳＳ（生理食塩水）を受けた。１４日間隔（さらに２１日目を加えて）で収集された血清中の抗Ｇ１７抗体レベルは、ＥＬＩＳＡによりアッセイした。
【０１１８】
Ｇ１７ＤＴ免疫原を、実施例４に記載するように配合した。５ＦＵおよびシスプラチナの配合物を、５ＦＵに対して１０．０ｍｇ／ｋｇ、およびシスプラチナに対して１．０ｍｇ／ｋｇで調製し、３２０ｍｇの５ＦＵ、および３２ｍｇのシスプラチナで計算された用量を提供する。５ＦＵおよびシスプラチナの乾燥分取量を、同じＰＳＳに溶解することにより、処置日に再構成して、それぞれ１．６ｍｇ／ｍｌおよび０．１６ｍｇ／ｍｌとした。１日目および２日目に、５ＦＵを単独でＰＳＳ中１．６ｍｇ／ｍｌで与えた。
【０１１９】
被験体のマウスは、１０匹の、約１８ヶ月齢のメスのＣＡＦ１であった。全てのマウスを、研究の０日、２８日、５６日目での０．１ｍｌのＧ１７ＤＴの用量（ＩＰ）でＧ１７免疫した。全ての化学療法薬は、０．２ｍｌ体積で投与された。対照マウスは、処置レジメンに従って、０．２ｍｌのＰＳＳプラセボを受けた。シスプラチナ関連の脱水に対応するため、全てのマウスに、１匹あたり１０ｍｌのＰＳＳをＩＰ注射した。マウスを１４日ごとに採血し、０日から始めて８４日目で終了した。血清をＥＬＩＳＡでアッセイした結果、全てのマウスがＧ１７ＤＴ免疫原に対して明らかな力価の抗Ｇ１７抗体で応答したことを示した。両群の応答は、７０日目にピークとなった。組合せ処置群の平均／平均値応答は、免疫原の二次注射の投与により克服された。結果は、ＳＦＵ＋シスプラチナ処置（ヒトに対して計画された投薬レジメンに従って）が、抗Ｇ１７抗体応答に、統計的に有意な負の効果を有さなかったことを示す。
【０１２０】
2005508838.tif 000005
【０１２１】
実施例７：Ａ．免疫およびゲムシタビンでの組合せ処置（プロトコル）
以下の臨床処置レジメンが提供される：
薬物療法      Ｇ１７ＤＴ                ゲムシタビン
（免疫療法＋  １日、２８日、５６日目    １日目、および週に一度で合計７週続け
化学療法）                            続いて１週間休止。次いで、３週投与と
１週間休止の４週間サイクルを続ける。
標本採取スケジュール：
血液化学：                                                            毎週
血液学：                                                              毎週
尿検査：                                                              毎週
免疫学：                                                    １２週まで隔週、
１２週後は月毎
参加前の診断：
内視鏡検査：                                                予め登録した数
ＣＴスキャンおよび胸部Ｘ線：                              予め登録した数
追跡診断：
ＣＴスキャン：                                                        毎月
胸部Ｘ線：                                                  必要に応じて
【０１２２】
処置（複数可）は、疾患の進行、許容不能な毒性、または承認の撤回まで投与され得る。もし許容不能な毒性が化学療法によるものであり、そして被験体の疾患が進行していなければ、化学療法は中止することができ、免疫療法が計画された通りに継続され得る。免疫療法は、疾患の進行開始後継続され、そしてＧ１７ＤＴに起因する許容不能な毒性または承認の撤回についてのみ中止される。
ゲムシタビン
用量：          １０００ｍｇ／ｍ２
径路：          ３０分かけて２５０ｍｌの０．９％塩化ナトリウム中、ＩＶ注射
スケジュール：  １日目および週に一度で合計７週続け、続いて１週間休止。次いで、３週間投与とその後それぞれ１週間休止の４週間サイクルを続ける。
【０１２３】
あるいは、ゲムシタビンの投薬量は、約７５０ｍｇ／ｍ２または５００ｍｇ／ｍ２あるいはそれ未満に減少され得る。
【０１２４】
Ｂ．イリノテカンとの組合せ
イリノテカンは、最初は、続く５ＦＵに基づく治療で疾患が再発または進行した、転移性結腸直腸癌の患者の第二選択治療として認可された。続いて、５ＦＵおよびＬＶと組合せたイリノテカンが、この疾患の処置のための第一選択治療として認可された。しかしながら、イリノテカンに基づく治療は、顕著な罹患（下痢および骨髄抑制を含む）がないわけではない。これらの副作用を減少させるため、用量調節がしばしば必要となるが、これはイリノテカンの効力を減少させる可能性がある。それにより、イリノテカンに基づく治療が失敗した患者には、彼らの疾患の有効な処置に対してほとんど選択肢は残されていない。
【０１２５】
イリノテカンと組合せた免疫療法は、イリノテカン処置に伴う副作用を減少させながら全体的な治療効果を向上させる可能性を有している。それ自身に抗腫瘍活性を有していることに加えて、５ＦＵおよびＬＶ処置の前に投与されたＧ１７ＤＴによるガストリン中和は、５ＦＵおよびＬＶ療法の抗腫瘍活性を向上させることを示し、そしてラットの結腸直腸腫瘍で最適以下の用量の５ＦＵの活性を増強した。
【０１２６】
この理論的根拠を使用して、Ｇ１７ＤＴはまた、イリノテカンの効力を増強することができ、かつ有望な新規治療様式（抗ガストリン免疫の細胞分裂停止性作用を化学療法の細胞毒性効果と組合せる）を提供し得ることが提案され得る。さらに、Ｇ１７ＤＴでの免疫は、重篤な副作用を伴うために最大用量を減少させなければならない薬物とともに使用され得る。
【０１２７】
Ｇ１７ＤＴは、０．２ｍＬの賦形剤中２５０μｇの筋肉内注射として投与される。免疫応答を誘発するために、Ｇ１７ＤＴは、第１週の最初の処置期間に投与される。Ｇ１７ＤＴの最初の注射後にＧ１７ＤＴに対してグレード２またはそれより大きいアレルギー反応がない場合、さらなる用量のＧ１７ＤＴが、５週目、９週目に投与される。その後、Ｇ１７ＤＴは、抗Ｇ１７力価の最大力価より５０％またはそれより多い減少に続いて投与される。
【０１２８】
イリノテカンは、５週目またはＧ１７ＤＴの最初の投与４週間後に開始する９０分かけての１２５ｍｇ／ｍ２の静脈内注入として投与される。処置の各サイクルは、４週間の間週に１度の注射に続いて２週間の休止期間によるイリノテカン静脈内投与からなる。疾患進行、用量制限毒性（ＤＬＴ）、または患者の停止まで、さらなる処置サイクルが繰り返される。必要であれば、イリノテカンの用量は、個々の患者の処置許容度に適応するための特定の用量修正規則を使用して、調整され得る。ＤＬＴまたは進行性疾患がない場合、患者は、Ｇ１７ＤＴとイリノテカンとの組合せ処置レジメンを継続する。この投薬レジメンは、合計３０４人の患者を含む、３つの非盲検、単一薬剤臨床試験の結果に基づく。
【０１２９】
実施例７：腫瘍応答診断基準
ＩＶ造影剤および胸部Ｘ線（必要に応じて）を用いた腹部／骨盤ＣＴスキャンが、腫瘍の負荷を評価するために使用され得る。
【０１３０】
臨床検査または画像処理手段により評価されるそのような病変の例として以下が挙げられる：
皮膚結節または浅リンパ節、最小で１０ｍｍ以上×１０ｍｍ以上
肝臓病変、軟部組織、リンパ節、およびＣＴスキャンにより調査される塊（最小で２０ｍｍ以上×１０ｍｍ以上）。
【０１３１】
これらには、ＣＴスキャンで２０ｍｍ異常、または理学的検査で１０ｍｍ以上の１つの直径だけで測定され得る全ての病変が含まれる。
【０１３２】
これらの病変の例は、１つの直径だけで測定され得る触診できる腹部塊または軟部組織塊がある。
【０１３３】
実施例８：応答の評価
被験体は、「初期進行」（この場合、彼らは進行性疾患で評価可能とみなされる）が生じない限り、Ｇ１７ＤＴおよび／またはＧＲＥ１ＤＴでの免疫を３回、および最小で１回の７週間サイクルまたは２回の４週間サイクルのゲムシタビン処置を、少なくとも１回の追跡腫瘍評価（応答を評価可能な、考慮されるべきベースラインと同様な方法を使用する）とともに受けなければならない。少なくともこの期間の治療にある被験体は、以下に記載される定義に従って分類された応答を有する。
【０１３４】
免疫応答評価は、２週ごとに１２週まで、およびその後４週ごとに被験体から収集された血液標本でのＥＬＩＳＡによりなされる。全ての病変についての腫瘍評価を、進行の証拠記述が出るまで、治療に対して４週ごとに行われなければならない。腫瘍応答は、進行性疾患（ＰＤ）以外の理由で研究を外れた被験体について４週ごとの追跡訪問で記録されるべきである。
【０１３５】
処置終了後、疾患の進行が報告されるまで、さらなる抗腫瘍処置は与えられないが、被験体がさらなる治療を要求するかまたは研究者が治療を必要と判断する場合を除く。全ての一次元または二次元的に測定可能な病変は、順次４週ごとに測定されるべきである。最初の応答が観測されてから少なくとも２８日後の応答を確認するために、さらなる評価が行われるべきである。さらに、臨床的に進行の疑いがある場合には、特別評価が行われ得る。複数の病変が存在する場合、これは不可能である可能性があるので、そのような状況下では、関連する全ての器官を代表する測定可能な病変が上限６か所まで、関連する部位に対して選択されるべきであり、二次元的に測定可能な病変、次いで一次元的に測定可能な病変に優先順位を与える。
【０１３６】
最適な全応答とは、処置の開始から疾患進行まで記録された最適応答命名である。
【０１３７】
完全および部分応答が、少なくとも４週間を空けた２回の疾患評価により確認されなければならない（評価時間については上記を参照）。
【０１３８】
処置開始の少なくとも４週間後にそれが測定された場合、変化のないことのみが許容される。
【０１３９】
腫瘍応答、進行までの時間、処置失敗までの時間、および生存率は、治療意図（intent-to-treat）ベースで、および評価可能な集団での両方で分析され得る。
【０１４０】
完全応答の期間は、完全応答が達成された日からその後の進行性疾患が最初に記録される日まで続く。部分応答を達成したこれらの被験体において、全応答の期間のみが記録されるべきである。全体的な応答の期間は、応答（部分または完全）の最初の観測日から進行性疾患の最初の観測日まで続く。
【０１４１】
疾患進行までの時間とは、処置の開始から、最初の進行、死亡、または化学療法および免疫療法両方の中止のいずれかが最初に生じるまでを測定した時間である。最終分析の時点で進行していなかった被験体は、被験体の最終腫瘍評価の日で打ち切られ得る。疾患進行前に研究外の抗腫瘍治療を受ける被験体は、治療前に最終評価の日で打ち切られ得る。
【０１４２】
処置失敗までの時間とは、処置の開始から、失敗（進行、再発、死亡、またはそれ以外の処置中止の原因）の日までを測定した時間である。
【０１４３】
生存率は、処置の開始から、何らかの理由による死亡の日までを測定する。最終分析のときの通りに生存している被験体は、被験体の最終接触日で打ち切られる。
【０１４４】
最初の一連の３回の注射に続く免疫応答の薬物動力学は、最初の免疫に続く１２週目で達成されるＡｒｍ  Ａ研究における２回の連続した採血の間持続した４より多いＥＬＩＳＡ単位での免疫レスポンダーの分布により、ならびにピーク力価の平均および平均値により評価される。免疫アッセイは、Ｇ１７抗原に基づくＥＬＩＳＡにより行われる。抗体応答の質は、阻害ＲＩＡにより測定され、そして解離定数（Ｋｄ）および抗原結合能力（ＡＢＣ）、ならびにＡＢＣ／Ｋｄ比により評価される。
【０１４５】
追加免疫を投与する時間を決定するために、ピーク力価からピーク力価の２５％を下回るまでの免疫応答持続期間の平均および平均値がアッセイされる。
【０１４６】
タキサン
進行性前立腺癌の最近の治療には、タキサンなどの化学療法薬の投与が含まれる。タキサン（例えば、ドセタキセルなど）は、効果的な微小管インヒビターであり、それによりＧ２／Ｍチェックポイントでの細胞周期のさらなる移行に干渉する。今タキサンは、現在ホルモン抵抗性前立腺癌での治験にある新規に認可された化学療法の有望なクラスとして出現している。いくつかの最近の研究は、タキサン、すなわちドセタキセルが特に活性であることを示している。例えば、ホルモン抵抗性前立腺癌の患者３５人が、アンドロゲン抑制を維持しながら２１日ごとに７５ｍｇ／ｍ２のドセタキセルで処置された。毒性は、処置を通じて容認できるままであった。とはいえ、研究中に２例の死亡があり、１例は肺毒性／肺炎によるもの、そして１例は肺塞栓によるものであった。測定可能な疾患の患者での４０％より多いＰＳＡ減退および二次元架橋生成物の５０％より多い減少として定義される応答は、登録された３５人の患者中１７人でみられ、１例の完全応答を含んだ。応答は、平均値９ヶ月（２〜２４ヶ月の範囲）で維持された。この研究における全体の生存率の平均値は、２７ヶ月であった。前臨床試験は、ホルモン抵抗性前立腺癌の患者の処置におけるドセタキセルのエストラムスチンとの組合せの潜在的な便益を示唆した。２つのフェーズＩの試験のデータに基づき、エストラムスチンと組合せてヒト被験体に試みられた、フェーズＩＩの試験に適用されたドセタキセル用量は、７０ｍｇ／ｍ２または６０ｍｇ／ｍ２であった。ドセタキセル＋エストラムスチンのフェーズＩＩの試験は、５９％〜８８％の患者で５０％より多いＰＳＡ減退を実証した。エストラムスチンの用量の減少はいくぶん低い応答速度をもたらすようであるものの、ドセタキセルとエストラムスチンとの組合せの効力に対するエストラムスチン（estramuxtine）の寄与は決定的ではなかった。
【０１４７】
受動免疫：
上記で記載される化学療法は、精製抗体（ポリクローナルまたはモノクローナルであり得る）の投与を含む、癌の増殖促進因子および受容体の受動免疫と組合せられ得る。モノクローナル抗体は、従来、ヒト化形またはキメラ形で、治療用に調製されている。
【０１４８】
形質転換マウスから単離されたヒト抗体は、さらに、標的癌細胞で壊死またはアポトーシスを誘導するように、放射標識または他の毒性材料で修飾され得る。例えば、抗体は、修飾されていてもいなくても、受容体に結合するように向けられており、その多くは、患部の細胞死を導くように、ａｂ受容体複合体を細胞核へ内部移行させ、このプロセスはアポトーシスと同様または類似しているだろう。膵癌治療は、上記で記載されるとおり、化学療法薬と能動または受動免疫療法の１つまたは複数の組合せを含み得る。しかしながら、処置は、いかなる方法でも上記の具体的なサンプルに限定されない。それどころか、本発明の攻撃は、腫瘍増殖を遅延または減少させる、化学および免疫学的薬剤の有用な様々な組合せを示唆する。
【０１４９】
ポリクローナル抗体は、免疫されたヒトおよび他の哺乳類源から得られ得る。高親和性特異的抗血清を誘導する１つの様式は、上記で記載されるように免疫原を利用し、ここで抗原性種は免疫原性キャリアに結合する。高活性抗体フラクションを単離して、この処置を必要としている癌患者に接種するために、従来手段により精製する。この型の受動免疫療法は患者自身の抗体を利用し得るため、拒絶反応および他の合併症の危険性は、最小化または完全に回避され得る。
【０１５０】
抗ＣＣＫＢ／ガストリン受容体抗体からである放射性標識などの修飾抗体での処置は、内部移行した特定の照射により細胞死に影響を及ぼす。さらに、ガストリンおよびガストリン受容体免疫原を使用する併用療法は、ガストリン依存性腺癌細胞を免疫するため、またはその転移を防ぐために投与され得る。そのような転移性癌細胞は、胃、前立腺、膵臓、または結腸直腸病変に由来し得、他の組織（骨、肝臓、またはリンパ節など）に局在し得る。抗ガストリン免疫は、肝臓転移を阻害することを示している。
【配列表】
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2005508838.tif 000008
【国際調査報告】
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