(57)【要約】本発明は、進行性の軟骨破壊に関連する疾患を治療または予防するために、選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭｓ）を単独で、またはプロゲスチンと組み合わせて、医薬的に使用することに関する。特に本発明は、変形性関節症または慢性関節リウマチを治療または予防するために、クロマン誘導体とモアチンドロンとを組み合わせたものを医薬的に使用することに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ドロロキシフェン、レボルメロキシフェン、クロマン誘導体、ナフォキシジン、バセドキシフェン、ミプロキシフェン、アルゾキシフェン、ラソフォキシフェン、ＭＤＬ−１０３３２３、ＥＭ−８００、フルベストラント、ＩＣＩ  １８３，７８０、ＩＣＩ  １６４，３８４、ＧＷ  ５６３８、１９−ノルテストステロン誘導体、ならびに薬学的に許容可能なそのエステル、エーテルおよび塩から選択される選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）の有効量を、対象に投与する工程を含む、進行性の軟骨破壊を含む症状を予防する、治療するまたは緩和する方法。
【請求項２】
前記ＳＥＲＭがレボルメロキシフェン、クロマン誘導体もしくは１９−ノルテストステロン誘導体または薬学的に許容可能なその塩を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＳＥＲＭが、式２：
【化１】
2005524630.tif 000022
で示されるコア構造を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＳＥＲＭがクロマン誘導体である、請求項１または請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレーターが、式Ｉ
【化２】
2005524630.tif 000023
（式中、
Ｒ1はＨ、ＳＯ2ＮＲ24、ＳＯ2ＮＨＲ4、Ｃｌ、ＣＨ3またはベンジルであり、
Ｒ2はＯＨ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、ＳＨ、ＳＲ4、トリハロ−Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシおよびフェニルからなる群より独立して選択される１〜５個の置換基で任意選択的に置換されていてもよいフェニルであり、
Ｒ3は−−Ｘ−−（ＣＨ2）n−−Ｙで置換されたフェニルであり、式中、
Ｘは原子価結合、ＯまたはＳであり、
ｎは１〜１２の範囲の整数であり、
ＹはＨ、ハロゲン、ＯＨ、ＯＲ4、ＮＨＲ4、ＮＲ24、ＮＨＣＯＲ4、ＮＨＳＯ2Ｒ4、ＣＯＮＨＲ4、ＣＯＮＲ4、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ4、ＳＯ2Ｒ4、ＳＯＲ4、ＳＯＮＨＲ4、ＳＯＮＲ24、ピロリジニル環であり、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、ＳＨ、ＳＲ4、トリハロ−Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルおよびＣ1−Ｃ6アルコキシからなる群より独立して選択される１〜３個の置換基で任意選択的に置換されていてもよく、
Ｒ4はＣ1−Ｃ6アルキルである。）
のクロマン誘導体ならびに光学異性体および幾何異性体、薬学的に許容可能なそのエステル、エーテルおよび塩を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
Ｒ2およびＲ3がトランスに配置されている、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
（−）−３，４−トランス−７−メトキシ−２，２−ジメチル−３−フェニル−４｛４−［２−（ピロリジン−１−イル）エトキシ］フェニル｝クロマンであるクロマン化合物の使用を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
式中、
Ｒ1はＨ、ＳＯ2ＮＲ24、ＣＨ3またはＳＯ2ＮＨＲ4であり、
Ｒ2およびＲ3はシスに配置されており、
Ｒ2は、ＯＨ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、ＳＨ、ＳＲ4、トリハロ−Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルおよびＣ1−Ｃ6アルコキシからなる群より独立して選択される１〜３個の置換基で任意選択的に置換されていてもよいフェニルであり、
Ｒ3は−−Ｘ−−（ＣＨ2）n−−Ｙで置換されたフェニルであり、式中、
Ｘは原子価結合、ＯまたはＳであり、
ｎは１〜１２の範囲の整数であり、
ＹはＨ、ＯＨ、ＯＲ4、ＮＨＲ４、ＮＲ24、ＮＨＣＯＲ4、ＮＨＳＯ2Ｒ4、ＣＯＮＨ4、ＣＯＮＲ24、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ4、ＳＯ2Ｒ4、ＳＯＲ4、ＳＯＮＨＲ4、ＳＯＮＲ24、ピロリジニル環であり、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、ＳＨ、ＳＲ4、トリハロ−Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルおよびＣ1−Ｃ6アルコキシからなる群より独立して選択される１〜３個の置換基で任意選択的に置換されていてもよく、
Ｒ4はＣ1−Ｃ6アルキルであり、
のものならびに光学異性体および幾何異性体、薬学的に許容可能なそのエステル、エーテルおよび塩である、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3が上記に規定されたとおりである式：
【化３】
2005524630.tif 000024
または、
【化４】
2005524630.tif 000025
を有する式Ｉａまたは式Ｉｂの化合物の使用を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
Ｒ1が上記に規定されたとおりであり、そしてｍが０〜１０の整数である式：
【化５】
2005524630.tif 000026
の化合物の使用を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
Ｒ1が上記に規定されたとおりであり、そしてＲ6が次の置換基：メトキシ、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、フルオロおよびクロロの一つ以上を示す式：
【化６】
2005524630.tif 000027
の化合物の使用を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
（−）−シス−｛３−フェニル−４−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］｝−クロマン−７−オール；
（−）−シス−｛３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−４−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］｝−７−メトキシクロマン；
（−／＋）−シス−｛３−（３−メトキシフェニル）−４−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］｝−７−メトキシクロマン；
（−／＋）−シス−｛３−（３−ヒドロキシフェニル）−４−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］｝−クロマン−７−オール；
（−／＋）−シス−｛３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−４−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］｝−クロマン−７−オール；または
（＋，−）−（シス−３−（４−メチルフェニル）４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）−クロマン−７−イル）Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファミン酸エステル；
（−）−シス−７−メトキシ−３−フェニル−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）−フェニル）クロマン；
（＋／−）−シス−７−メトキシ−３−（３−メトキシフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）−フェニル）クロマン；
（＋／−）−シス−７−メトキシ−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）−フェニル）クロマン；および
（−）−シス−７−メトキシ−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）−フェニル）クロマンであるクロマン化合物の使用を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
進行性の軟骨破壊を含む症状を予防する、治療するまたは緩和するために用いる薬剤を調製するための、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のＳＥＲＭの使用。
【請求項１４】
１）選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）または薬学的に許容可能なその塩と一緒に、
２）プロゲスチンまたは薬学的に許容可能なその塩
を組み合わせたものの有効量を、対象に投与する工程を含む、進行性の軟骨破壊を含む症状を予防する、治療するまたは緩和する方法。
【請求項１５】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）が、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、タモキシフェン、４−ヒドロキシ−タモキシフェン、４’−ヨードタモキシフェン、トレミフェン、（デアミノヒドロキシ）トレミフェン、クロミフェン、レボルメロキシフェン、クロマン誘導体、クマリン誘導体、イドキシフェン、ナフォキシジン、バセドキシフェン、ミプロキシフェン、アルゾキシフェン、ラソフォキシフェン、ＭＤＬ−１０３３２３、ＥＭ−８００、フルレストラント、ＩＣＩ  １８３，７８０、ＩＣＩ  １６４，３８４、ＧＷ  ５６３８、ジエチルスチルベストロール、ゲニステイン、ナフォキシジン、クエン酸ニトロミフェン、モキセステロール、ジフェノールヒドロクリセン、エリトロ−ＭＥＡ、アレノル酸、シクロフェニル、クロロトリアニセン、エタモキシトリフェトール、デヒドロエピアンドロステロン、トリパラノール１９−ノルプロゲステロン誘導体、１９−ノルテストステロン誘導体ならびに薬学的に許容可能なエステル、エーテルおよび塩からなる群より選択され、そして前記プロゲスチンが、ノルエチンドロン、エチノジオール、デソゲストレル、レボノルゲストレル、ノルゲストレル、ノルゲスチメート、メドロキシプロゲステロン、ダナゾール、リノエストレノール、ジドロゲステロン、クロルマジノン、プロメゲステロン、ゲストリノン、アルゲストンアセトフェニド、アリルエストレノール、酢酸シプロテロン、デメゲストン、ゲストデン、オサテロン、ヘキサン酸ヒドロキシプロゲステロン、メドロゲストン、メゲストロール、ノメゲストロール、エチニルノルテストステロン、ノルプレグネニノロン、ＮＳＣ−９５６４、ノルエチノドレル、デキスノルゲストレル、ゲストデン、プロゲステロン、酢酸クロルマジノン、ドロスピレノン（ジヒドロスピロレノン）、または３−ケトデソゲストレルならびに光学異性体および幾何異性体、薬学的に許容可能なそのエステルおよび塩からなる群より選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＳＥＲＭが、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、タモキシフェン、レボルメロキシフェン、クロマン誘導体、クマリン誘導体、イドキシフェン、ナフォキシジン、バセドキシフェン、トレミフェン、（デアミノヒドロキシ）トレミフェン、ミプロキシフェン、アルゾキシフェン、ラソフォキシフェン、ＭＤＬ−１０３３２３、ＥＭ−８００、フルベストラントＩＣＩ  １８３，７８０、ＧＷ  ５６３８および１９−ノルテストステロン誘導体または薬学的に許容可能なその塩を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＳＥＲＭが、図２：
【化７】
2005524630.tif 000028
で示されるコア構造を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＳＥＲＭがクロマン誘導体である、請求項１５または請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記選択的エストロゲン受容体モジュレーターが、式Ｉ
【化８】
2005524630.tif 000029
（式中、
Ｒ1はＨ、ＳＯ2ＮＲ24、ＳＯ2ＮＨＲ4、Ｃｌ、ＣＨ3またはベンジルであり、
Ｒ2は、ＯＨ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、ＳＨ、ＳＲ4、トリハロ−Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシおよびフェニルからなる群より独立して選択される１〜５個の置換基で任意選択的に置換されていてもよいフェニルである。
Ｒ3は−−Ｘ−−（ＣＨ2）n−−Ｙで置換されたフェニルであり、式中、
Ｘは原子価結合、ＯまたはＳであり、
ｎは１〜１２の範囲の整数であり、
ＹはＨ、ハロゲン、ＯＨ、ＯＲ4、ＮＨＲ4、ＮＲ24、ＮＨＣＯＲ4、ＮＨＳＯ2Ｒ4、ＣＯＮＨＲ4、ＣＯＮＲ4、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ4、ＳＯ2Ｒ4、ＳＯＲ4、ＳＯＮＨＲ4、ＳＯＮＲ24、ピロリジニル環であり、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、ＳＨ、ＳＲ4、トリハロ−Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルおよびＣ1−Ｃ6アルコキシからなる群より独立して選択される１〜３個の置換基で任意選択的に置換されていてもよく、
Ｒ4はＣ1−Ｃ6アルキルである。）
のクロマン誘導体ならびに光学異性体および幾何異性体、薬学的に許容可能なそのエステル、エーテルおよび塩を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
Ｒ2およびＲ3がトランスに配置されている、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
（−）−３，４−トランス−７−メトキシ−２，２−ジメチル−３−フェニル−４｛４−［２−（ピロリジン−１−イル）エトキシ］フェニル｝クロマンであるクロマン化合物の使用を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
請求項１９に記載の方法であって、式中、
Ｒ1はＨ、ＳＯ2ＮＲ24、ＣＨ3またはＳＯ2ＮＨＲ4であり、
Ｒ2およびＲ3はシスに配置されており、
Ｒ2は、ＯＨ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、ＳＨ、ＳＲ4、トリハロ−Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルおよびＣ１−Ｃ６アルコキシからなる群より独立して選択される１〜３個の置換基で任意選択的に置換されていてもよいフェニルであり、
Ｒ3は−−Ｘ−−（ＣＨ2）n−−Ｙで置換されたフェニルであり、式中、
Ｘは原子価結合、ＯまたはＳであり、
ｎは１〜１２の範囲の整数であり、
ＹはＨ、ＯＨ、ＯＲ4、ＮＨＲ４、ＮＲ24、ＮＨＣＯＲ4、ＮＨＳＯ2Ｒ4、ＣＯＮＨ4、ＣＯＮＲ24、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ4、ＳＯ2Ｒ4、ＳＯＲ4、ＳＯＮＨＲ4、ＳＯＮＲ24、ピロリジニル環であり、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、ＳＨ、ＳＲ4、トリハロ−Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルおよびＣ1−Ｃ6アルコキシからなる群より独立して選択される１〜３個の置換基で任意選択的に置換されていてもよく、
Ｒ4はＣ1−Ｃ6アルキルであり、
のものならびに光学異性体および幾何異性体、薬学的に許容可能なそのエステル、エーテルおよび塩である方法。
【請求項２３】
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3が上記に規定されたとおりである式：
【化９】
2005524630.tif 000030
または、
【化１０】
2005524630.tif 000031
を有する式Ｉａまたは式Ｉｂの化合物の使用を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
Ｒ1が上記に規定されたとおりであり、そしてｍが０〜１０の整数である式：
【化１１】
2005524630.tif 000032
の化合物の使用を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
Ｒ1が上記に規定されたとおりであり、そしてＲ6が次の置換基：メトキシ、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、フルオロおよびクロロの一つ以上を示す式：
【化１２】
2005524630.tif 000033
の化合物の使用を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
（−）−シス−｛３−フェニル−４−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］｝−クロマン−７−オール；
（−）−シス−｛３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−４−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］｝−７−メトキシクロマン；
（−／＋）−シス−｛３−（３−メトキシフェニル）−４−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］｝−７−メトキシクロマン；
（−／＋）−シス−｛３−（３−ヒドロキシフェニル）−４−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］｝−クロマン−７−オール；
（−／＋）−シス−｛３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−４−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］｝−クロマン−７−オール；または
（＋，−）−（シス−３−（４−メチルフェニル）４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）−クロマン−７−イル）Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファミン酸エステル；
（−）−シス−７−メトキシ−３−フェニル−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）−フェニル）クロマン；
（＋／−）−シス−７−メトキシ−３−（３−メトキシフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）−フェニル）クロマン；
（＋／−）−シス−７−メトキシ−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）−フェニル）クロマン；および
（−）−シス−７−メトキシ−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）−フェニル）クロマンであるクロマン化合物の使用を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記プロゲスチンが、プロゲステロン、酢酸ノルエチンドロン、エチノジオール、デソゲストレル、レボノルゲストレル、ノルゲストレル、ノルゲスチメート、メドロキシプロゲステロンまたはエステルもしくは薬学的に許容可能なその塩である、請求項１４〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記プロゲスチンが、ノルエチンドロンもしくは酢酸ノルエチンドロンまたはエステルもしくは薬学的に許容可能なその塩である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
エストロゲンの産生を抑制することが要因であって、前記組成物が、３，４クロマンもしくはクマリン誘導体または薬学的に許容可能なその塩であるＳＥＲＭと、プロゲスチンまたは薬学的に許容可能なその塩とを組み合わせたものの有効量と、薬学的な担体または希釈剤とを含む、疾患の治療上の処置または予防上の処置において用いるための医薬組成物。
【請求項３０】
請求項２７に記載の医薬組成物の有効量をそれが必要な哺乳動物に投与する工程を含む、乳ガン、睾丸ガン、オステオペニアすなわち骨粗鬆症を導く骨量喪失、子宮内膜症、心疾患、高コレステロール血症、前立腺肥大、前立腺ガン、肥満、ホットフラッシュ、スキンエフェクト、気分変動、記憶喪失、尿失禁、毛髪の喪失、白内障、天然ホルモンの失調、および環境中の化学物質への暴露に関連する有害な生殖毒性などの症状の治療上の処置方法または予防上の処置方法。
【請求項３１】
進行性の軟骨破壊が要因であって、前記組成物が、３，４クロマンもしくはクマリン誘導体または薬学的に許容可能なその塩であるＳＥＲＭと、プロゲスチンまたは薬学的に許容可能なその塩とを組み合わせたものの有効量と、薬学的な担体または希釈剤とを含む、疾患の治療上の処置または予防上の処置において用いるための医薬組成物。
【請求項３２】
前記プロゲスチンが、ノルエチンドロンもしくは酢酸ノルエチンドロンまたは薬学的に許容可能なその塩である、請求項２７または請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
一個体あたり、一日あたりの前記クロマンもしくはクマリン誘導体または薬学的に許容可能なその塩の有効量として０．０１〜約１００ｍｇを投与するのに適する剤形の、請求項２９または請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
一個体あたり、一日あたりのノルエチンドロンもしくは酢酸ノルエチンドロンまたは薬学的に許容可能なその塩の有効量として０．０１〜約１００ｍｇを投与するのに適する剤形の、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
経口単位用量または非経口単位用量の形態である、請求項２９〜３４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
式（Ｉ）の化合物とプロゲスチンとを組み合わせたものの治療的に有効な量を、それが必要な哺乳動物に投与する工程を含む、変形性関節症を治療する方法。
【請求項３７】
式（Ｉ）の化合物とプロゲスチンとを組み合わせたものの治療的に有効な量を、それが必要な哺乳動物に投与する工程を含む、慢性関節リウマチを治療する方法。
【請求項３８】
前記哺乳動物がヒトである、請求項３４または請求項３５に記載の変形性関節症または慢性関節リウマチを治療する方法。
【請求項３９】
請求項３４または請求項３５に記載の用量を滴定するための、軟骨に特異的な生化学的マーカーの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、広範囲の疾患、しかし特に進行性の軟骨破壊に関連する疾患を治療または予防するために、選択的エストロゲン受容体モジュレーター類（ＳＥＲＭｓ）を単独で、またはその他の医薬、特にプロゲスチンと組み合わせて、医薬的に使用することに関する。特に本発明は、変形性関節症または慢性関節リウマチを治療または予防するために、クロマン誘導体を医薬的に部分的に使用することに関する。
【背景技術】
【０００２】
変形性関節症（ＯＡ、「変形性関節疾患」とも呼ばれている）は、最も一般的なリウマチ性疾患である。この慢性疾患の有病率は年齢に伴って上昇し、そしてこれは、高齢者の間の障害および生活の質の低下の突出した原因である。この疾患の有病率は、男性よりも女性の方が高く、そして女性においては、閉経後に変形性関節症の発生率が上昇する。これらの観察結果は、エストロゲンが軟骨の代謝に影響を与えたのかもしれないこと、および閉経後の内因性のエストロゲンの産生量の減少が、その後のＯＡの進行のリスクを高めることを示唆してきた（Ｄ  Ｆｅｌｓｏｎ  ＆  Ｍ  Ｎｅｖｉｔｔ，１９９８）。さらに、ほとんどの観察研究は、閉経後にエストロゲンを用いることが、ＯＡの発生の減少と関連があることを示唆している（Ｎｅｖｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ  １９９６）。しかしながら、いくつかの研究は、この結論に異議を申し立てている（Ｏｌｉｖｅｒｉａ  ｅｔ  ａｌ  １９９６、Ｅｒｂ  ｅｔ  ａｌ．２０００、Ｎｅｖｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ  ２００１）。従って、今のところ、軟骨の完全な状態を維持することについて、およびＯＡの進行を妨げることについて、エストロゲンの潜在的な役割が最終的に証明されてはいない。ＯＡにおける疾患プロセスの主要な要素は、不可逆的な軟骨破壊である。この疾患の臨床診断の何年も前から、このプロセスが開始されている可能性が高く、そして冒された関節の関節軟骨のほぼ全てが喪失するような疾患の末期まで、このプロセスが継続する。この期においては、関節の可動性が大きく損なわれており、そして治療オプションとしては関節置換術しか残されていない。ＯＡに関係する病的な関節の変化の長期に及ぶこのような進行のせいで、疾患のプロセスの早期に関与する要因を解明することは非常に困難である。慢性関節リウマチ（ＲＡ）とは、冒された関節の関節軟骨が破壊されているような炎症状態である。ＲＡの病因は複雑であり、そしてこの疾患の進行における役割について、多数の環境要因および遺伝的要因が示唆されてきた。さらに、ＲＡは女性においてより多く蔓延している。エストロゲンは炎症のインヒビターとして積極的な機能を有するので、エストロゲンもＲＡに関する潜在的に有益な効果を有するかもしれないことが示唆されてきた。ＯＡおよびＲＡのヒトモデルおよび動物モデルにおける研究から、疾患が進行するにつれて、関節軟骨の基質の巨大分子の枯渇が進むことが実証されてきた。ＯＡにおいては、軟骨の変性および骨棘（冒された関節における異常な骨の小枝）が発生し、そして関節の骨の裸の部分上で進行する。ＯＡの症状は、関節の痛み、腫れおよび硬直である。ＲＡにおいては、軟骨破壊がさらに急激に発生する傾向がある。関節破壊の進行は個々の患者の間で広範囲に変化し、これには断続的なより長い「沈黙」期間と共に疾患の活発さが高い（急激に発生する）期間を特徴とする、目だった周期的なパターンが伴う。疾患の活発さのこの周期的なパターンは、ＲＡについて特に顕著である。
【０００３】
ＲＡを治療するために最も一般的に用いられている薬剤は、非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）および疾患修飾抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ’ｓ）、ならびにステロイドまたはＴＮＦ−α拮抗剤などのより特異的な抗炎症剤である。ＯＡの治療においては、ＮＳＡＩＤおよびＤＭＡＲＤ’ｓも重要な役割を演じる。これらの疾患の現在の治療目的は、主に痛みと病状とを軽減することである。ＮＳＡＩＤおよびＤＭＡＲＤ’ｓがＯＡおよびＲＡの症状の軽減に有効であることが分かってきた。しかしそれらが軟骨の異化を抑制させる効果は十分に証明されていない。それらのうちのいくつか（サリチル酸ナトリウムなど）は、軟骨の修復プロセスを脅かすかもしれないプロテオグリカン合成に関する阻害特性を示している。プロテオグリカン合成を阻害しないその他の薬剤（チアプロフェン酸など）は、ＯＡ軟骨の異化を抑制できることをインビトロで示している（Ｊｅａｎ−Ｐｉｅｒｒｅ  Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  １９８９；１６：５，６４６−６５５）。しかしながら、後者の疾患を患っている患者に投与した場合、これらはＯＡの進行に関して有意な保護効果を全く提供できなかった（Ｅｄｗａｒｄ  Ｃ．Ｈｕｓｋｉｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  １９９５；２２：１０−１９４１−１９４６）。ドキシサイクリン（テトラサイクリンファミリーのメンバーである）も、イヌのＡＣＬモデルにおいて、メタロプロテアーゼ活性を抑制する一方、ＯＡの病変の重症度を軽減したことをインビボで示した（Ｙｕ  ＬＰ  Ｊｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ３５：１１５０−１１５９，１９９２）。最近のデータからは、コルチコステロイドの作用が、軟骨細胞によるストロメライシン−１の合成の抑制に関与することが示唆されている（Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ３７：４１４−４２３，１９９４；およびＰｅｌｌｅｔｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ  ７２：５７８−５８６，１９９５を参照）。
【０００４】
ＯＡおよびＲＡの両方において、エストロゲンおよびエストロゲン受容体を介して作用する化合物は、潜在的に有益な効果を有しているかもしれない。骨粗鬆症などの治療の際のホルモン補充療法において、女性ホルモンの有益な効果を持続させている間に乳ガンおよび子宮内膜の成長などの副作用を避けるために、天然のエストロゲンの代替物としての選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭｓ）が数年来用いられている。ＳＥＲＭは、エストロゲンの作用のいくつか（全てではない）を示す合成化合物である。たとえば、ラロキシフェンはＳＥＲＭとして分類される。というのは、ラロキシフェンは骨量喪失を抑制し、そしてエストロゲンアゴニストとしての血清コレステロールを低減させるが、子宮の子宮内膜上皮を刺激しないことによるエストロゲン拮抗剤として作用するからである。しかしながら、たとえば骨組織に対する強力なエストロゲンアゴニスト活性を伴うＳＥＲＭ’ｓには、子宮内膜などの組織に対するそれらの拮抗作用についての選択性がより弱い傾向がある。従って、好ましくない副作用が理由で、多くの強力なＳＥＲＭ’ｓは、骨粗鬆症などの予防や治療における薬剤としては用いられていない。このものの一例は、米国特許第３８２２２８７号および米国特許第５９７７１５８号において開示されるようなクロマン化合物のレボルメロキシフェンである。
【０００５】
プロゲスチンとしては、プロゲステロンに関連するステロイドホルモン、それらの誘導体およびプロゲステロンの効果を有する化合物が挙げられる。これらは、その他のステロイドホルモンと組み合わせてホルモン補充療法に広く用いられており、子宮内膜上皮の成長に関する（副）作用を減少させている。最近では、ＷＯ００／７４６８４号およびＥＰＯ  ０４７４３７４号において開示されるような骨に関連する疾患の治療のために、プロゲスチンのみが提案されている。ＥＰＯ  ０６６５０１５号に開示されているように、ＳＥＲＭのラロキシフェンとプロゲスチンの酢酸ノルエチンドロンとの組み合わせは、骨量指数を有意に向上させることによって、骨粗鬆症に対する相乗効果を有することが分かってきた。
【０００６】
骨格上でのエストロゲン補充療法の有益な作用が顕著であることが明らかなのに対して、エストロゲンがＯＡまたは慢性関節リウマチに及ぼす明白な効果についての示唆はあるが決定的な証拠がない（Ｆｅｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。しかしながら、ＳＥＲＭのラロキシフェンは、齧歯目における軟骨破壊の効果的なインヒビターとして証明されている（米国特許第５４１８２５２号）。最近、クマリン誘導体が慢性関節リウマチのインヒビターとして提案された（米国特許第６２９１４５６号および米国特許第６３３１５６２号）。しかしながら、これらの化合物のどれ一つとして、関節炎を治療するために臨床的に有用な薬剤としては認められていない。従って、エストロゲンとＯＡとの間の関係を調査する必要性、および強力なエストロゲンアゴニストを開発する必要性が継続しており、エストロゲンアゴニストはＯＡを患う関節組織を選択的に標的化することができ、かつ高い生物学的利用能を示すと同時に副作用を最小限度に抑える。
【発明の開示】
【０００７】
本発明は、第一の態様において、ドロロキシフェン、レボルメロキシフェン、クロマン誘導体類、ナフォキシジン、ミプロキシフェン、アルゾキシフェン、ラソフォキシフェン、バセドキシフェン、ＭＤＬ−１０３３２３、ＥＭ−８００、フルベストラント、ＩＣＩ  １８３，７８０、ＩＣＩ  １６４，３８４、１９−ノルテストステロン誘導体類、ならびに薬学的に許容可能なそのエステル類、エーテル類および塩類から選択される選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）の有効量を、対象に投与する工程を含む、進行性の軟骨破壊を含む症状を予防する、治療するまたは緩和する方法を提供する。
【０００８】
ＳＥＲＭがレボルメロキシフェン、クロマン誘導体、もしくは１９−ノルテストステロン誘導体または薬学的に許容可能なその塩の一種以上を含むことが好ましい。
【０００９】
本明細書で用いられる「プロゲスチンまたはプロゲスチン剤」とは、プロゲステロン活性（すなわち分泌性子宮内膜の形成を誘導すること）を有する化合物という意味であり、具体的には、ノルエチンドロン（ノルエチステロンとも称される）、エチノジオール、デソゲストレル、レボノルゲストレル、ノルゲストレル、ノルゲスチメート、メドロキシプロゲステロン、ダナゾール、リノエストレノール、ジドロゲステロン、クロルマジノン、プロメゲステロン、ゲストリノン、アルゲストンアセトフェニド、アリルエストレノール、酢酸シプロテロン、デメゲストン、ゲストデン、オサテロン、ヘキサン酸ヒドロキシプロゲステロン、メドロゲストン、メゲストロール、ノメゲストロール、エチニルノルテストステロン、ノルプレグネニノロン、ＮＳＣ−９５６４、ノルエチノドレル、デキスノルゲストレル、ゲストデン、プロゲステロン、酢酸クロルマジノン、ドロスピレノン（ジヒドロスピロレノン）、もしくは３−ケトデソゲストレルまたはこれらの塩、およびプロゲステロン活性を有するその他の化合物がある。プロゲスチン剤は、当分野で十分に説明されている（たとえば、Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ：Ｔｈｅ  Ｅｘｔｒａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ、第３０版、１９９３を参照。これは引用することにより本明細書の一部をなすものとする）。好ましい塩は酢酸塩である。より好ましいプロゲスチン剤はノルエチンドロンであり、酢酸ノルエチンドロンが最も好ましい。プロゲスチン剤は、プロゲストゲン、ゲスターゲンまたはプロゲステロンホルモンとも称される。
【００１０】
「変形性関節症」すなわち「ＯＡ」とは関節炎の一種であり、結果として生じる関節の軟骨の喪失と共に軟骨の崩壊によって引き起こされる。軟骨は、関節の骨の間の「クッション」として役立つタンパク質性の物質である。変形性関節症は変性性関節炎としても知られている。
【００１１】
「慢性関節リウマチ」すなわち「ＲＡ」とは、冒された関節の関節軟骨が破壊されているような炎症状態である。ＲＡの病因は複雑であり、そしてこの疾患の進行における役割について、多数の環境要因および遺伝的要因が示唆されてきた。
【００１２】
「選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）」とは、エストロゲン作用の全てではないがいくつかを有し、そしてエストロゲン受容体（たとえばＥＲ．αまたはＥＲ．β）のアゴニストまたは拮抗剤としての活性を、組織依存性の様式で示す合成化合物である。従って、生化学分野および内分泌学分野の当業者であれば明らかなように、ＳＥＲＭｓとして機能する本発明の化合物は、いくつかの組織（たとえば骨、脳および／または心臓）においてエストロゲン受容体のアゴニストとして機能することができ、かつ乳房および／または子宮内壁などのその他のタイプの組織において拮抗剤として機能することができる。
【００１３】
本明細書で用いられる「クロマン」とは、３，４−クロマン誘導体を意味する。
【００１４】
本明細書で用いられる「クマリン」とは、２−クロメン−２−オン誘導体を意味する。
【００１５】
本明細書で用いられる「軟骨に特異的な生化学的マーカー」は、体液中で定量することができる軟骨異化の代謝産物を意味し、当該代謝産物は、全身の軟骨破壊の指標である。
【００１６】
本発明の第一の態様の好ましい方法に従えば、選択的エストロゲン受容体モジュレーターはクロマン誘導体から選択される。今現在当分野で知られている任意のクロマン誘導体またはその後に開発されるものを用いて、請求の範囲の方法を実施してもよい。典型的な受容体拮抗剤の合成については、米国特許第５，９１９，８１７号、米国特許第６，０４３，２６９号、およびＥＰ  ９３７０５７号、ＥＰ  ９３７０６０号、およびＥＰ  ９３７０６２号の実施例のみに記載されており、これらの全体は引用することにより本明細書の一部をなすものとする。
【００１７】
本発明の好ましい実施形態においては、選択的エストロゲン受容体モジュレーターは、式Ｉ
【化１】
2005524630.tif 000002
式中、
Ｒ1はＨ、ＳＯ2ＮＲ24、ＳＯ2ＮＨＲ4、Ｃｌ、ＣＨ3またはベンジルであり、
Ｒ2は、ＯＨ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、ＳＨ、ＳＲ4、トリハロ−Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシおよびフェニルからなる群より独立して選択される１〜５個の置換基で、必要に応じて置換されていてもよいフェニルであり、
Ｒ3は−−Ｘ−−（ＣＨ2）n−−Ｙで置換されたフェニルであり、式中、
Ｘは原子価結合、ＯまたはＳであり、
ｎは１〜１２の範囲の整数であり、
ＹはＨ、ハロゲン、ＯＨ、ＯＲ4、ＮＨＲ4、ＮＲ24、ＮＨＣＯＲ4、ＮＨＳＯ2Ｒ4、ＣＯＮＨＲ4、ＣＯＮＲ4、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ4、ＳＯ2Ｒ4、ＳＯＲ4、ＳＯＮＨＲ4、ＳＯＮＲ24、ピロリジニル環であり、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、ＳＨ、ＳＲ4、トリハロ−Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルおよびＣ1−Ｃ6アルコキシからなる群より独立して選択される１〜３個個の置換基で任意選択的に置換されていてもよく、
Ｒ4はＣ1−Ｃ6アルキルであり、
のクロマン誘導体ならびに、ＷＯ９８／１８７７３号に記載の光学異性体および幾何異性体、薬学的に許容可能なそのエステル、エーテルおよび塩からなる群より選択される。
【００１８】
本発明の別の実施形態においては、式Ｉの化合物の使用が提供され、そこでは、セントクロマン（レボルメロキシフェン）すなわち（−）−３，４−トランス−７−メトキシ−２，２−ジメチル−３−フェニル−４｛４［２−（ピロリジン−１−イル）エトキシ］フェニル｝クロマンなどのように、置換基Ｒ2およびＲ3がトランスに配置されている。
【００１９】
別の好ましい実施形態においては、本発明は、式Ｉ
式中、
Ｒ1はＨ、ＳＯ2ＮＲ24、Ｃｌ、ＣＨ3またはＳＯ2ＮＨＲ4であり、
Ｒ2およびＲ3はシスに配置されており、
Ｒ2は、ＯＨ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、ＳＨ、ＳＲ4、トリハロ−Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルおよびＣ1−Ｃ6アルコキシからなる群より独立して選択される１〜３個個の置換基で任意選択的に置換されていてもよいフェニルであり、
Ｒ3は−−Ｘ−−（ＣＨ2）n−−Ｙで置換されたフェニルであり、式中、
Ｘは原子価結合、ＯまたはＳであり、
ｎは１〜１２の範囲の整数であり、
ＹはＨ、ＯＨ、ＯＲ4、ＮＨＲ４、ＮＲ24、ＮＨＣＯＲ4、ＮＨＳＯ2Ｒ4、ＣＯＮＨ4、ＣＯＮＲ24、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ4、ＳＯ2Ｒ4、ＳＯＲ4、ＳＯＮＨＲ4、ＳＯＮＲ24、ピロリジニル環であり、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、ＳＨ、ＳＲ4、トリハロ−Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルおよびＣ1−Ｃ6アルコキシからなる群より独立して選択される１〜３個の置換基で任意選択的に置換されていてもよく、
Ｒ4はＣ1−Ｃ6アルキルであり、
の化合物ならびに光学異性体および幾何異性体、薬学的に許容可能なそのエステル、エーテルおよび塩の使用に関する。
【００２０】
別の好ましい実施形態においては、本発明は、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3が上記に規定されたとおりである式：
【化２】
2005524630.tif 000003
または、
【化３】
2005524630.tif 000004
の化合物の使用に関する。
【００２１】
別の好ましい実施形態においては、本発明は、Ｒ1が上記に規定されたとおりであり、そしてｍが０〜１０の整数である式：
【化４】
2005524630.tif 000005
の化合物の使用に関する。
【００２２】
別の好ましい実施形態においては、本発明は、Ｒ1が上記に規定されたとおりであり、そしてＲ6が次の置換基：メトキシ、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、フルオロおよびクロロの一つ以上を示す式：
【化５】
2005524630.tif 000006
の化合物の使用に関する。
【００２３】
より好ましい実施形態において、本発明は以下の化合物：
（＋）−シス−３−（４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋）−シス−３−（４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−４−（４−（２−ピペリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋）−シス−３−（４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−４−（４−（３−ピペリジノプロポキシ）フェニル）クロマン
（＋）−シス−７−メトキシ−３−フェニル−４−（４−（２−ピペリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋）−シス−７−メトキシ−３−フェニル−４−（４−（３−ピペリジノプロポキシ）フェニル）クロマン
（＋）−シス−７−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋）−シス−７−メトキシ−３−（４−フェニル−フェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋）−シス−７−メトキシ−３−（４−メチルフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋）−シス−７−メトキシ−３−（４−メチルフェニル）−４−（４−（２−ピペリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋）−シス−７−メトキシ−４−（４−（２−ピペリジノエトキシ）フェニル）−３−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）クロマン
（＋）−シス−７−メトキシ−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）−３−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）クロマン
（＋）−シス−７−メトキシ−３−（３−メチルフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋）−シス−３−（３−フルオロフェニル）−７−メトキシ−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋）−シス−７−メトキシ−３−（３−メトキシフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋）−シス−７−メトキシ−３−（３−メトキシフェニル）−４−（４−（２−ピペリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋）−シス−７−メトキシ−３−（３−メトキシフェニル）−４−（４−（３−ピペリジノプロポキシ）フェニル）クロマン
（＋）−シス−７−メトキシ−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）−３−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）クロマン
（＋）−シス−７−メトキシ−４−（４−（２−ピペリジノエトキシ）フェニル）−３−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）クロマン
（＋）−シス−３−（２−フルオロフェニル）−７−メトキシ−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋）−シス−７−メトキシ−３−（２，３，４，５，６−ペンタフルオロフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋）−シス−７−メトキシ−３−（２，３，４，５，６−ペンタフルオロフェニル）−４−（４−（２−ピペリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋）−５−（シス−７−メトキシ−３−（４−メチルフェニル）−クロマン−４−イル）−２−メチル−ベンゾオキサゾール
（＋）−シス−６−メトキシ−３−フェニル−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋）−シス−６−メトキシ−３−（３−ヒドロキシフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋）−シス−４−（４−ヘキシルフェニル）−７−メトキシ−３−フェニルクロマン
（＋）−シス−７−メトキシ−３−フェニル−４−｛４−２−（ピロリジン−１−イル）エトキシ｝フェニル｝クロマン
（−）−シス−３−（４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（−）−シス−３−（４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−４−（４−（２−ピペリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（−）−シス−３−（４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−４−（４−（３−ピペリジノプロポキシ）フェニル）クロマン
（−）−シス−７−メトキシ−３−フェニル−４−（４−（２−ピペリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（−）−シス−．ｓｕｐ．７−メトキシ−３−フェニル−４−（４−（３−ピペリジノプロポキシ）フェニル）クロマン
（−）−シス−７−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（−）−シス−７−メトキシ−３−（４−フェニル−フェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（−）−シス−７−メトキシ−３−（４−メチルフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（−）−シス−７−メトキシ−３−（４−メチルフェニル）−４−（４−（２−ピペリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（−）−シス−７−メトキシ−４−（４−（２−ピペリジノエトキシ）フェニル）−３−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）クロマン
（−）−シス−７−メトキシ−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）−３−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）クロマン
（−）−シス−７−メトキシ−３−（３−メチルフェニル）４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（−）−シス−３−（３−フルオロフェニル）−７−メトキシ−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（−）−シス−７−メトキシ−３−（３−メトキシフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（−）−シス−７−メトキシ−３−（３−メトキシフェニル）−４−（４−（２−ピペリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（−）−シス−７−メトキシ−３−（３−メトキシフェニル）−４−（４−（３−ピペリジノプロポキシ）フェニル）クロマン
（−）−シス−７−メトキシ−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）−３−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）クロマン
（−）−シス−７−メトキシ−４−（４−（２−ピペリジノエトキシ）フェニル）−３−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）クロマン
（−）−シス−３−（２−フルオロフェニル）−７−メトキシ−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（−）−シス−７−メトキシ−３−（２，３，４，５，６−ペンタフルオロフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（−）−シス−７−メトキシ−３−（２，３，４，５，６−ペンタフルオロフェニル）−４−（４−（２−ピペリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（−）−５−（シス−７−メトキシ−３−（４−メチルフェニル）−クロマン−４−イル）−２−メチル−ベンゾオキサゾール
（−）−シス−６−メトキシ−３−フェニル−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（−）−シス−６−メトキシ−３−（３−ヒドロキシフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（−）−シス−４−（４−ヘキシルフェニル）−７−メトキシ−３−フェニルクロマン
（−）−シス−７−メトキシ−３−フェニル４−｛４−｛２−（ピロリジン−１−イル）エトキシ｝フェニル｝クロマン．
（＋，−）−シス−３−（４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋，−）−シス−３−（４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−４−（４−（２−ピペリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋，−）−シス−３−（４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−４−（４−（３−ピペリジノプロポキシ）フェニル）クロマン
（＋，−）−シス−７−メトキシ−３−フェニル−４−（４−（２−ピペリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋，−）−シス−７−メトキシ−３−フェニル−４−（４−（３−ピペリジノプロポキシ）フェニル）クロマン
（＋，−）−シス−７−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋，−）−シス−７−メトキシ−３−（４−フェニルフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋，−）−シス−７−メトキシ−３−（４−メチルフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋，−）−シス−７−メトキシ−３−（４−メチルフェニル）−４−（４−（２−ピペリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋，−）−シス−７−メトキシ−４−（４−（２−ピペリジノエトキシ）フェニル）−３−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）クロマン
（＋，−）−シス−７−メトキシ−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）−３−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）クロマン
（＋，−）−シス−７−メトキシ−３−（３−メチルフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋，−）−シス−３−（３−フルオロフェニル）−７−メトキシ−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋，−）−シス−７−メトキシ−３−（３−メトキシフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋，−）−シス−７−メトキシ−３−（３−メトキシフェニル）−４−（４−（２−ピペリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋，−）−シス−７−メトキシ−３−（３−メトキシフェニル）−４−（４−（３−ピペリジノプロポキシ）フェニル）クロマン
（＋，−）−シス−７−メトキシ−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）−３−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）クロマン
（＋，−）−シス−７−メトキシ−４−（４−（２−ピペリジノエトキシ）フェニル）−３−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）クロマン
（＋，−）−シス−３−（２−フルオロフェニル）−７−メトキシ−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋，−）−シス−７−メトキシ−３−（２，３，４，５，６−ペンタフルオロフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋，−）−シス−７−メトキシ−３−（２，３，４，５，６−ペンタフルオロフェニル）−４−（４−（２−ピペリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋，−）−５−（シス−７−メトキシ−３−（４−メチルフェニル）−クロマン−４−イル）−２−メチル−ベンゾオキサゾール
（＋，−）−シス−６−メトキシ−３−フェニル−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋，−）−シス−６−メトキシ−３−（３−ヒドロキシフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン
（＋，−）−シス−４−（４−ヘキシルフェニル）−７−メトキシ−３−フェニルクロマン、
（＋，−）−（シス−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）−３−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）−クロマン−７−イル）２，２−ジメチルプロパノアート、
（＋，−）−（シス−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）−３−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−クロマン−７−イル）２，２−ジメチルプロパノアート塩酸塩、
（＋，−）−（シス−３−（４−メチルフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）−クロマン−７−イル）Ｎ，Ｎ−ジエチルカルバマート、
（＋，−）−（シス−３−（４−メチルフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）−クロマン−７−イル）Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファミン酸エステル、
（＋，−）シス７−ベンジルオキシ−４−（４−ヒドロキシ−フェニル）−３−フェニル−クロマン、
７−ベンジルオキシ−４−［４−（４−クロロブチルオキシ）−フェニル］−３−フェニル−クロマン、
７−ベンジルオキシ−４−［４−（２−クロロエチルオキシ）−フェニル］−３−フェニル−クロマン、
７−ベンジルオキシ−４−［４−（６−ブロモヘキシルオキシ）−フェニル］−３−フェニル−クロマン、
７−ベンジルオキシ−４−［４−（１０−ブロモデシルオキシ）−フェニル］−３−フェニル−クロマン、
（＋，−）−シス−３−（４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン、
（＋−）−５−（シス−７−メトキシ−３−（４−メチルフェニル）−クロマン−４−イル）−２−メチル−ベンゾオキサゾール
（＋，−）−シス−６−メトキシ−３−フェニル−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）フェニル）クロマン、
（＋，−）−シス−４−（４−ヘキシルフェニル）−７−メトキシ−３−フェニルクロマン、
（＋，−）シス［４−（７−ベンジルオキシ−３−フェニル−クロマン−４−イル）−フェノキシ］−酢酸メチルエステル、
（＋，−）シス７−ベンジルオキシ−４−［４−（６−モルホリノヘキシルオキシ）−フェニル］−３−フェニル−クロマン、
（＋，−）シス７−ベンジルオキシ４−［４−（６−ジブチルアミノヘキシルオキシ）−フェニル］−３−フェニル−クロマン、
（＋，−）シス７−ベンジルオキシ４−［４−（ジメチルアミノデシルオキシ）−フェニル］−３−フェニル−クロマン、
（＋，−）シス７−ベンジルオキシ４−［４−（モルホリノデシルオキシ）−フェニル］−３−フェニル−クロマン、
（＋，−）シス７−ベンジルオキシ４−［４−（２−ジブチルアミノエチルオキシ）−フェニル］−３−フェニル−クロマン、
（＋，−）シス７−ベンジルオキシ４−［４−（ブチルアミノエチルオキシ）−フェニル］−３−フェニル−クロマン、
（＋，−）シス７−ベンジルオキシ４−［４−（モルホリノエチルオキシ）−フェニル］−３−フェニル−クロマン、
（＋，−）シス７−ベンジルオキシ４−［４−（Ｎ−メチルピペラジノエチルオキシ）−フェニル］−３−フェニル−クロマン、
（＋，−）シス７−ベンジルオキシ４−［４−（モルホリノブチルオキシ）−フェニル］−３−フェニル−クロマン、に関し、これらの純粋な光学異性体も含まれる。
【００２４】
最も好ましい実施形態において、本発明は以下の化合物：
（−）−シス−｛３−フェニル−４−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］｝−クロマン−７−オール
【化６】
2005524630.tif 000007
（−）−シス−｛３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−４−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］｝−７−メトキシクロマン
【化７】
2005524630.tif 000008
（−／＋）−シス−｛３−（３−メトキシフェニル）−４−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］｝−７−メトキシクロマン
【化８】
2005524630.tif 000009
（−／＋）−シス−｛３−（３−ヒドロキシフェニル）−４−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］｝−クロマン−７−オール
【化９】
2005524630.tif 000010
（−／＋）−シス−｛３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−４−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］｝−クロマン−７−オール
【化１０】
2005524630.tif 000011
（−）−シス−７−メトキシ−３−フェニル−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）−フェニル）クロマン
【化１１】
2005524630.tif 000012
（＋／−）−シス−７−メトキシ−３−（３−メトキシフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）−フェニル）クロマン
【化１２】
2005524630.tif 000013
（＋／−）−シス−７−メトキシ−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）−フェニル）クロマン
【化１３】
2005524630.tif 000014
および
（−）−シス−７−メトキシ−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−４−（４−（２−ピロリジノエトキシ）−フェニル）クロマン
【化１４】
2005524630.tif 000015
に関する。
【００２５】
本発明は、進行性の軟骨破壊を含む症状を予防する、治療するまたは緩和するために用いる薬剤を調製するための、上記に規定されるＳＥＲＭの使用を含む。
【００２６】
もう一つの態様において、本発明は、
１）選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）または薬学的に許容可能なその塩と、
２）軟骨破壊を軽減するような組み合わせのプロゲスチンまたは薬学的に許容可能なその塩と
を組み合わせたものの有効量を、対象に投与する工程を含む、進行性の軟骨破壊を含む症状を予防する、治療するまたは緩和する方法に関する。
【００２７】
本発明はさらに、（１）クロマン誘導体もしくはクマリン誘導体または薬学的に許容可能なその塩もしくは溶媒和物と、（２）プロゲスチンまたはその塩と、プロゲステロン活性を有するその他の化合物とを、一種以上の薬学的に許容可能な担体と共に、ＯＡまたはＲＡを抑制するような量で含有する、関節炎を治療するための医薬製剤である。
【００２８】
特に、本発明は、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、タモキシフェン、４−ヒドロキシ−タモキシフェン、４’−ヨードタモキシフェン、トレミフェン、（デアミノヒドロキシ）トレミフェン、クロミフェン、レボルメロキシフェン、クロマン誘導体、クマリン誘導体、イドキシフェン、ナフォキシジン、ミプロキシフェン（ＴＡＴ−５９）、アルゾキシフェン（ＬＹ−３５３３８１）、ラソフォキシフェン（ＣＰ−３３６１５６）、ＭＤＬ−１０３３２３、ＥＭ−８００、フルベストラント（ＩＣＩ−１８２，７８０）ＩＣＩ  １８３，７８０、ＩＣＩ  １６４，３８４、ジエチルスチルベストロール、ゲニステイン、ナフォキシジン、ＧＷ  ５６３８、パノミフェン、クエン酸ニトロミフェン、モキセステロール、ジフェノールヒドロクリセン、エリトロ−ＭＥＡ、アレノル酸（allenolic acid）、シクロフェニル、クロロトリアニセン、エタモキシトリフェトール、トリパラノール１９−ノルプロゲステロン誘導体、１９−ノルテストステロン誘導体ならびに薬学的に許容可能なエステル、エーテルおよび塩からなる群より選択される選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）と、ノルエチンドロン、エチノジオール、デソゲストレル、レボノルゲストレル、ノルゲストレル、ノルゲスチメート、メドロキシプロゲステロン、ダナゾール、リノエストレノール、ジドロゲステロン、クロルマジノン、プロメゲステロン、ゲストリノン、アルゲストンアセトフェニド、アリルエストレノール、酢酸シプロテロン、デメゲストン、ゲストデン、オサテロン、ヘキサン酸ヒドロキシプロゲステロン、メドロゲストン、メゲストロール、ノメゲストロール、エチニルノルテストステロン、ノルプレグネニノロン、ＮＳＣ−９５６４、ノルエチノドレル、デキスノルゲストレル、ゲストデン、プロゲステロン、酢酸クロルマジノン、ドロスピレノン（ジヒドロスピロレノン）、または３−ケトデソゲストレルならびに光学異性体および幾何異性体、薬学的に許容可能なそのエステルおよび塩からなる群より選択されるプロゲスチンとを組み合わせたものの有効量を、対象に投与する工程を含む、関節炎を治療するまたは緩和する方法に関する。
【００２９】
好ましいＳＥＲＭ’ｓとしては、ドロロキシフェン、タモキシフェン、レボルメロキシフェン、クロマン誘導体、ナフォキシジン、トレミフェン、ＴＡＴ−５９、ＬＹ−３５３３８１、ＣＰ−３３６１５６、ＭＤＬ−１０３３２３、ＥＭ−８００、ＩＣＩ−１８２、ＩＣＩ  １８３，７８０および１９−ノルテストステロン誘導体または薬学的に許容可能なその塩が挙げられる。
【００３０】
本発明のこの態様は、特に特定の選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭｓ）を単独投与するというホルモン補充療法の副作用（たとえば乳ガン発生率の上昇および子宮内膜上皮の成長など）を、プロゲスチンを組み合わせて投与することによって抑制することができるという観察に関する。変形性関節症および慢性関節リウマチなどの進行性の軟骨破壊に関連する疾患を治療、予防または緩和する際には、軟骨破壊のインヒビターとして有効なものを長期間継続して投与することが必須である。従って、当該インヒビターの軽微な副作用でさえ、長期に亘れば患者の健康に劇的な影響を与えるかもしれず、この副作用を回避するかまたは最小化して患者の生活の価値を改善すべきであり、かつ費用がかかる合併症に対する保険制度のコストを節約すべきである。
【００３１】
本発明の第二態様の好ましい方法に従えば、選択的エストロゲン受容体モジュレーターはクロマン誘導体から選択される。
【００３２】
好ましいクロマン誘導体は、上記のとおりである。
【００３３】
本発明の別の好ましい実施形態において、当該プロゲスチンは、プロゲステロン、酢酸ノルエチンドロン、エチノジオール、デソゲストレル、レボノルゲストレル、ノルゲストレル、ノルゲスチメート、メドロキシプロゲステロンおよびそのエステルまたは薬学的に許容可能なその塩である。
【００３４】
本発明のさらに好ましい実施形態において、当該プロゲスチンは、ノルエチンドロンまたは酢酸ノルエチンドロンおよびそのエステルもしくは薬学的に許容可能なその塩である。
【００３５】
別の態様において、本発明は、エストロゲンの産生を抑制することが要因であって、当該組成物が、３，４クロマンもしくはクマリン誘導体または薬学的に許容可能なその塩と、プロゲスチンまたは薬学的に許容可能なその塩とを組み合わせたものの有効量と、薬学的な担体または希釈剤とを含む、疾患の治療上の処置または予防上の処置において用いるための医薬組成物に関する。
【００３６】
一つの実施形態において、本発明は、乳ガン、睾丸ガン、オステオペニアすなわち骨粗鬆症を導く骨量喪失、子宮内膜症、心疾患、高コレステロール血症、前立腺肥大、前立腺ガン、肥満、ホットフラッシュ、スキンエフェクト、気分変動、記憶喪失、尿失禁、毛髪の喪失、白内障、天然ホルモンの失調、および環境中の化学物質への暴露に関連する有害な生殖毒性などの症状を治療上処置するためにまたは予防上処置するために、当該医薬組成物を使用することに関する。
【００３７】
好ましい実施形態において、本発明は、進行性の軟骨破壊が要因であって、当該組成物が、３，４クロマンもしくはクマリン誘導体または薬学的に許容可能なその塩と、プロゲスチンまたは薬学的に許容可能なその塩とを組み合わせたものの有効量と、薬学的な担体または希釈剤とを含む、疾患の治療上の処置または予防上の処置において用いるための医薬組成物に関する。
【００３８】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、進行性の軟骨破壊が要因であって、当該組成物が、３，４クロマンもしくはクマリン誘導体または薬学的に許容可能なその塩と、ノルエチンドロンもしくは酢酸ノルエチンドロンまたは薬学的に許容可能なその塩とを組み合わせたものの有効量と、薬学的な担体または希釈剤とを含む、疾患の治療上の処置または予防上の処置において用いるための医薬組成物に関する。
【００３９】
最も好ましい実施形態において、本発明は、進行性の軟骨破壊が要因であって、当該組成物が、シス−３，４ジアリールクロマンまたは薬学的に許容可能なその塩の有効量と、ノルエチンドロンもしくは酢酸ノルエチンドロンまたは薬学的に許容可能なその塩の有効量とを組み合わせたものと、薬学的な担体または希釈剤とを含む、疾患の治療上の処置または予防上の処置において用いるための医薬組成物に関する。
【００４０】
本発明の好ましい実施形態において、一個体あたり、一日あたりの当該選択的エストロゲン受容体モジュレーターまたは薬学的に許容可能なその塩の有効量は０．０１〜約１００ｍｇであり、一個体あたり、一日あたり０．１〜約１０ｍｇが好ましく、一個体あたり、一日あたり０．２〜約１．０ｍｇが最も好ましい。
【００４１】
本発明の別の好ましい実施形態において、一個体あたり、一日あたりの当該プロゲスチンまたは薬学的に許容可能なその塩および薬学的な担体または希釈剤の有効量は０．０１〜約１００ｍｇであり、一個体あたり、一日あたり０．１〜約１０ｍｇが好ましく、一個体あたり、一日あたり０．２〜約１．０ｍｇが最も好ましい。
【００４２】
本発明の最も好ましい実施形態において、当該プロゲスチンまたは薬学的に許容可能なその塩の有効量と、その薬学的な担体または希釈剤は、ＳＥＲＭにより誘導されるエストロゲン様副作用を有意に低下させるのに十分な量である。
【００４３】
さらに別の好ましい実施形態において、本発明は、経口単位用量または非経口単位用量の形態である、上記の医薬組成物に関する。
【００４４】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、治療的に有効な量の化合物Ｉとプロゲスチンとを組み合わせたものを、それが必要な哺乳動物に投与することに関する。
【００４５】
最も好ましい実施形態において、本発明は、治療的に有効な量の化合物Ｉとノルエチンドロンまたは酢酸ノルエチンドロンとを組み合わせたものを、それが必要なヒトに投与することに関する。
【００４６】
別の実施形態において、本発明は、治療的に有効な量の化合物（Ｉ）とプロゲスチンとを組み合わせたものを、それが必要なヒトに投与する工程を含む、変形性関節症または慢性関節リウマチを治療する方法に関する。
【００４７】
別の態様において、本発明は、上記の用量を滴定するための、軟骨に特異的な生化学的マーカーの使用に関する。治療的に有効な用量の滴定は、上記の軟骨基質タンパク質の断片の一種以上を定量することに基づく。種々の用量の医薬組成物を、哺乳動物に少なくとも２〜４週間与え、そして治療的に有効な最小限の用量を選択するために、それぞれの用量について、軟骨破壊反応を評価する。治療的に有効な用量を、軟骨の特定のバイオマーカーを有意に低下させる用量と定義する。
【００４８】
好ましい実施形態において、当該治療的に有効な用量は、軟骨の特定のバイオマーカーの対照レベルの２０〜９０％の減少をもたらし、より好ましくは３０〜７０％、特に好ましくは４０〜５０％の減少をもたらす。
【００４９】
好ましい実施形態において、当該マーカーは、Ｃｈｒｉｓｔｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００１によって開示されたようなＣａｒｔｉＬａｐｓ  ＥＬＩＳＡである。
【００５０】
さらに別の態様において、本発明は、進行性の軟骨破壊を含む症状を予防する、治療するまたは緩和するための、ドロロキシフェン、タモキシフェン、レボルメロキシフェン、クロマン誘導体、クマリン誘導体、イドキシフェン、ナフォキシジン、トレミフェン、ＴＡＴ−５９、ＬＹ−３５３３８１、ＣＰ−３３６１５６、ＭＤＬ−１０３３２３、ＥＭ−８００、ＩＣＩ−１８２、ＩＣＩ  １８３，７８０および１９−ノルテストステロン誘導体または薬学的に許容可能なその塩から選択される選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）を含む組成物の使用に関する。
【００５１】
別の実施形態において、本発明は、ドロロキシフェン、タモキシフェン、レボルメロキシフェン、クロマン誘導体、クマリン誘導体、イドキシフェン、ナフォキシジン、トレミフェン、ＴＡＴ−５９、ＬＹ−３５３３８１、ラソフォキシフェン、ＭＤＬ−１０３３２３、ＥＭ−８００、ＩＣＩ−１８２、ＩＣＩ  １８３，７８０、ＩＣＩ  １６４，３８４、ＩＣＩ  １８３，７８０、ＧＷ  ５６３８、１９−ノルテストステロン誘導体ならびに薬学的に許容可能なそのエステル、エーテルおよび塩から選択される選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）の軟骨破壊を抑制するような配合量を、対象に投与する工程を含む、進行性の軟骨破壊を含む症状を予防する、治療するまたは緩和する方法に関する。
【００５２】
好ましい実施形態において、本発明は、ドロロキシフェン、レボルメロキシフェン、クロマン誘導体、ナフォキシジン、ＴＡＴ−５９、ＬＹ−３５３３８１、ラソフォキシフェン、ＭＤＬ−１０３３２３、ＥＭ−８００、ＩＣＩ−１８２，７８０、ＩＣＩ  １８３，７８０、ＩＣＩ  １６４，３８４、ＧＷ  ５６３８、ＩＣＩ  １８３，７８０、１９−ノルテストステロン誘導体ならびに薬学的に許容可能なそのエステル、エーテルおよび塩から選択される選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）の有効量を、対象に投与する工程を含む、進行性の軟骨破壊を含む症状を予防する、治療するまたは緩和する方法に関する。
【００５３】
本発明のそれぞれの態様に従えば、好ましいＳＥＲＭ’ｓとは、下記の式２：
【化１５】
2005524630.tif 000016
で示されるコア構造を含むＳＥＲＭ’Ｓであることが理解できるだろう。
【００５４】
点線の結合は、単結合または二重結合を示す。
【００５５】
これはクロマンに、そして多数のその他の（全てではないが）既知のＳＥＲＭ’ｓにも含まれることが正しく理解できるだろう。コア構造を特に、下記の式３：
【化１６】
2005524630.tif 000017
中の印の付いたＲの位置で拡張してもよい。
【００５６】
Ｒの位置でのそれぞれの拡張は、式２のコア構造に結合する任意の構造であってもよく、それによってＳＥＲＭを生じさせる。
【００５７】
好ましくは、本発明の任意の態様において用いるためのＳＥＲＭの、エストロゲン受容体αに対する結合親和性Ｋｉは１０μＭ以上であるべきであり、１μＭ以上が好ましく、および／またはエストロゲン受容体βに対する結合親和性は１０μＭ以上であり、１μＭ以上が好ましい。本発明の最も好ましい実施形態においては、当該ＳＥＲＭはレボルメロキシフェン、クロマン誘導体および１９−ノルテストステロン誘導体または薬学的に許容可能なその塩を含む。
【００５８】
上記に引用される化合物の慣用名を以下のようにより完全に定義する。
オルメロキシフェン    トランス−１−（２−（４−（−メトキシ−２，２−ジメチル−３−フェニル）−５Ｈ−ベンゾピラン−４−イル）−フェノキシ）エチルイル）−ピロリデン
ラロキシフェン／エビスタ    ＬＹ１１７０１８    ６−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）−ベンゾ（ｐ）−チエン−３−イル−４−（２−（１−ピペリジニル）−エトキシ）−フェニルメタン
トレミフェン／ファレストン    ＦＣ−１１５７／ＮＫ６２２    Ｚ−２−（４−（１，２−ジフェニル−１−４−クロロブテニル）−フェノキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン
タモキシフェン    ＩＣＩ  ４６，４７４    Ｚ−２−（４−（１，２−ジフェニル−１−ブテニル）−フェノキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン
アルゾキシフェン    ＬＹ−３５３３８１    ６−ヒドロキシ−３−（４−（２−（１−ピペリニジル）−エトキシ）−フェノキシ）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−ベンゾ（ｐ）−チオフェン
ラソフォキシフェン    ＣＰ  ３３６，１５６    シス−１Ｒ−［４’−ピロリジノ−エトキシフェニル］−２Ｓ−フェニル−６−ヒドロキシ−１，２，３，４，−テトラヒドロナフタレン  Ｄ−（−）−タータラート
バゼドキシフェン    ＥＲＡ−９２３／ＴＳＥ−４２４    １Ｈ−インドール−５−オル１−［［４−［２−（ヘキサヒドロ−１Ｈ−アゼピン−１−イル）エトキシ］フェニル］メチル］−２−（４−ヒドロキシフェニル）−３−メチル−モノアセテート
テスミリフェン    ＤＰＰＥ    Ｎ，Ｎ−ジエチル−２−［４−（フェニルメチル）−フェノキシ］エタンアミン；ＩＣＩ  １６４，３８４    Ｎ−ｎ−ブチル−Ｎ−メチル−１１−（３，１７ｂ−ジヒドロキシオエスラ−１，３，５（１０）−トリエン−７ａ−イル）ウンデカンアミド
オスペミフェン    ＦＣ−１２７１ａ    Ｚ−２−（４−（４−クロロ−１，２−ジフェニル−ブト−１−エニル）フェノキシ）エタノール；ＣＨＦ−４０５６    ３−フェニル−４−［［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ］フェニル］メチル］−２Ｈ−１−ベンゾピラン−７−オル
ミプロキシフェン    ＴＡＴ−５９    （Ｅ）−４−［１−［４−［２−（ジメチルアミノ）エトキシ］−フェニル］−２−（４−イソプロピル）フェニル−１−ブテニル］−フェニル−モノホスファート
イドキシフェン    ＳＢ  ２２３  ０３０    ピロリジノ−４−ヨードタモキシフェン
ファスロデックス    ＩＣＩ  １８２，７８０    ７ａ−（９−（４，４，５，５，５−ペンタフルオロ−ペンチル−スルフィニル）−ノニル）−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３，１７ｂ−ジオール．
ナフォキシジン    １１１００Ａ    １−（２−（４−（３，４−ジヒドロ−６−メトキシ−２−フェニル−ナフチル）−フェノキシ）−エチル）−ピロリジン；ＭＤＬ−１０３３２３    （Ｅ）−１−ブタンアミン，４−［４−（２−クロロ−１，２−ジフェニルエテニル）フェノキシ］−Ｎ，Ｎ−ジエチル−二水素シトラート；ＥＭ−８００／ＳＣＨ５７０５０    （ｓ）−（＋）−４−［７−（２，２−ジメチル−１−オキソプロポキシ）−４−メチル−２−［４−［２−（１−ピペリニジル）エトキシ］フェニル］２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル］−フェニル２，２−ジメチルプロパノアート
ドロロキシフェン    ＥＭ−６５２／ＳＣＨ５７０５８    Ｚ−２−（４−（１−３−フェノール−２−フェニル−１−ブテニル）−フェノキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン７−ヒドロキシ−２−（４−（２−ピペリジノエトキシ）フェニル）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−４−メチル−２Ｈ−１−ベンゾピラン
パノミフェン    ＧＹＫＩ  １３５０４    （Ｅ）−１，２，−ジフェニル−１−［４−［２（２−ヒドロキシエチルアミノ）−エトキシ］−フェニル］−３，３，３−トリフルオロプロペン
クロミフェン    ２−（４−（２−クロロ−１，２−ジフェニルエテニル）フェノキシ−Ｎ，Ｎ−ジエチルエタノールアミン
ジンドキシフェン    １Ｈ−インドール−５−オール−２−（４−アセトキシ）フェニル）−１−エチル−３−メチルアセタート；ＧＷ  ５６３８    ３−［４−（１，２−ジフェニルブト−１−エニル）フェニル］アクリル酸
【００５９】
当分野で周知のクロマンの化学的性質を利用することによって、本発明の化合物を調製してもよい。たとえば、Ｐ．Ｋ．Ａｒｏｒａ，Ｐ．Ｌ．Ｋｏｌｅ  ａｎｄ  Ｓ．Ｒａｙ，Ｉｎｄｉａｎ  Ｊ．Ｃｈｅｍ．２０Ｂ，４１−５，１９８１；Ｓ．Ｒａｙ，Ｐ．Ｋ．Ｇｒｏｖｅｒ  ａｎｄ  Ｎ．Ａｎａｎｄ，Ｉｎｄｉａｎ  Ｊ．Ｃｈｅｍ．９，７２７−８，１９７１；Ｓ．Ｒａｙ，Ｐ．Ｋ．Ｇｒｏｖｅｒ，Ｖ．Ｐ．Ｋａｍｂｏｊ，Ｓ．Ｂ．Ｂｅｔｔｙ，Ａ．Ｂ．Ｋａｒ  ａｎｄ  Ｎ．Ａｎａｎｄ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９，２７６−９，１９７６；Ｍｄ．Ｓａｌｍａｎ，Ｓ．Ｒａｙ，Ａ．Ｋ．Ａｇａｒｗａｌ，Ｓ．Ｄｕｒａｎｉ，Ｂ．Ｓ．Ｂｅｔｔｙ，Ｖ．Ｐ．Ｋａｍｂｏｊ，ａｎｄ  Ｎ．Ａｎａｎｄ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２６，５９２−５，１９８３；Ｔｅｏ，Ｃ．，Ｓｉｍ，Ｋ．，Ｂｕｌｌ．Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ  Ｎａｔｌ．Ｉｎｓｔ．Ｃｈｅｍ．２２，６９−７４，１９９４がある。
【００６０】
しかしながら、本発明はさらに、米国特許第６０４３２６９号に記載されたような式（Ｉ）の化合物を調製するための一般的な方法にも関する。
【００６１】
［医薬製剤］
本発明はさらに、本発明に従うところの化合物の有効量と、薬学的な担体または希釈剤とを含む医薬組成物に関する。このような組成物の形態は、経口単位用量または非経口単位用量であることが好ましい。本発明に係る化合物は、それらの薬物動態学的特性と合致する任意の経路による投与に備えたものでもよい。経口投与が可能な組成物としては、錠剤、カプセル、粉剤、顆粒剤、舐剤、液体またはゲル状の製剤、たとえば口内用、局所用または滅菌済みの非経口用の溶液もしくは懸濁液など、の形態のものでもよい。経口投与用の錠剤およびカプセルは、単位用量を表示する形態であってもよく、通常用いられている賦形剤、たとえばシロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカントまたはポリビニルピロリドンなどの結合剤；ラクトース、砂糖、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトールまたはグリシンなどの増量剤；ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコールまたはシリカなどの錠剤用の潤滑剤；ジャガイモデンプンなどの崩壊剤、またはラウリル硫酸ナトリウムなどの許容できる湿潤剤、を含んでもよい。標準的な薬学の実務において周知の方法に従って、錠剤をコーティングしてもよい。口内用の液体製剤は、たとえば水性もしくは油性の懸濁液、溶液、エマルション、シロップまたはエリキシルの形態でもよく、あるいは使用前に水またはその他の適切な媒体で再形成させるための乾燥した製品として提示してもよい。このような液体製剤には、通常用いられている添加物、たとえば、ソルビトール、シロップ、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン硬化食用脂などの懸濁化剤；レシチン、モノオレイン酸ソルビタン、またはアカシアなどの乳化剤；扁桃油、分留ヤシ油、グリセリン、プロピレングリコールなどの油状エステルまたはエチルアルコールなどの非水性媒体（食用油を含んでもよい）；ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはヒドロキシ安息香酸プロピルまたはソルビン酸などの防腐剤、が含まれていてもよく、そして必要に応じて通常用いられている香料または着色剤が含まれていてもよい。
【００６２】
経口投与に係る単位用量には、本発明の化合物が約０．０１〜１００ｍｇ含まれればよく、約０．１〜１０ｍｇが好ましく、約０．２〜１ｍｇが最も好ましい。哺乳動物にとっての一日あたりの適切な用量は、患者の症状に依存して広範囲に変わり得る。しかしながら、一般式Ｉの化合物の用量は、体重１ｋｇあたり約０．１〜１０ｍｇであり、体重１ｋｇあたり約０．２〜１ｍｇがより妥当であろう。
【００６３】
皮膚へ局所適用するために、薬剤からクリーム、ローションまたは軟膏を作製してもよい。薬剤のために用いてもよいクリーム製剤または軟膏製剤は、当分野で周知の、通常用いられている製剤であり、たとえば、英国薬局方などの薬剤学の標準的な教本に記載されている。
【００６４】
有効成分を滅菌済みの媒体にて非経口的に投与してもよい。媒体および用いる濃度に依存して、薬剤を媒体中で懸濁させるかまたは溶解させればよい。局所麻酔剤などのアジュバント、防腐剤および緩衝化剤を媒体中に溶解させることができ、都合がよい。
【００６５】
膣内に投与するための薬剤としては、通常用いられている膣座剤に加えて、液体の油状の基剤または軟膏を含む軟カプセル剤、および同じものを含み、注射での使用時用の管が挙げられ得る。基剤としては、油脂性基剤、水溶性基剤、乳剤性基剤、軟膏様基剤などが挙げられる。具体的には、油脂性基剤としては、落花生油、オリーブ油、コーン油、ヒマシ油、カカオ油、ラウリン脂、グリセリン脂肪酸エステル、具体的にはＰｈａｒｍａｓｏｌ（ＮＯＦ社の製品）、Ｗｉｔｅｐｓｏｌ（Ｄｉｎａｍｉｔｅ  Ｎｏｂｅｌ社の製品）、ＳＢ−ｂａｓｅ（Ｋａｎｅｋａ社の製品）、およびラノリン脂などの油脂が挙げられる。水溶性基剤の具体例としては、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、グリセリンおよびグリセロゼラチンが挙げられる。乳剤性基剤は水溶性基剤と油脂性基剤とを乳化させた基剤であり、Ｏ／Ｗ型でもまたはＷ／Ｏ型でもよい。本発明においては油脂性基剤が好ましく用いられ、そしてそれによって、ＰＧの安定性が高くなり、ＰＧの優れた薬理効果が達成できる。これらの基剤は単独で用いてもよく、または適切に組み合わせてもよい。本発明の化合物を、インプラント、膣リング、パッチ、ゲル、およびその他の任意の徐放用製剤の中に組み込んでもよい。
【００６６】
スプレー式点鼻薬としての溶液からの経鼻投与を適用してもよく、当業者が知る種々の方法によって、スプレーとして分配してもよい。スプレーとして液体を分配するための好ましいシステムは、米国特許第４，５１１，０６９号に開示されている。以降に記述された実施例に記載の操作を実施する際に、このようなシステムを利用した。このようなスプレー式点鼻薬の溶液には、薬剤すなわち供給される薬剤、薬剤の吸収を促進させるための非イオン性界面活性剤、ポリソルベート８０、および一種以上の緩衝剤が含まれる。本発明のいくつかの実施形態において、スプレー式点鼻薬の溶液は、さらに噴霧剤を含む。スプレー式点鼻薬の溶液のｐＨは、ｐＨ６．８〜７．２の間が好ましい。
【００６７】
本発明の次の実施例を、例証のためにかつ制限を目的とせずに提示する。
【実施例１】
【００６８】
卵巣摘出によって軟骨の侵食を誘導する。
変形性関節症のいくつかの動物モデルが文献中に記載されている（Ｂｅｎｄｅｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。マウス、ゴールデンハムスター、モルモットおよびヒト以外の霊長類などのいくらかの動物種において、自然に生じるＯＡが見られる。さらに、ＯＡが起こりやすい様々なトランスジェニックマウス種が開発されてきており、外科的に誘導された関節の損傷も広範囲に亘って研究されてきた。徐々に進行する形態のヒトの疾患にとっては、徐々に疾患が進行するモデルがおそらく最も適切であろう。これらのモデルは、ＯＡの進行時における要因の重要性、たとえば、軟骨破壊時のマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰｓ）の役割、骨棘形成時のＴＧＦ−βの重要性、およびＭＭＰの産生と軟骨細胞のアポトーシスの誘導についての一酸化窒素の役割を特定することにおいて、非常に有用である。しかしながら、現在のところ、軟骨の完全な状態を維持することにおけるエストロゲンの潜在的な役割を研究することに、これらのモデルを適用することはなされてこなかった。カニクイザルにおける最近の研究から、卵巣が摘出された動物の関節内ではＯＡに類似の病的な変化が生じたこと、そしてこの変化が外因性のエストロゲン製剤によって予防できたことが明らかになった（Ｈａｍ  ｅｔ  ａｌ  ２００２）。このことは、エストロゲンおよびＳＥＲＭｓなどのエストロゲン受容体に作用する化合物が、潜在的に軟骨を保護する役割を持つことを示唆するものである。
【００６９】
我々は、雌のラットで卵巣摘出術（ＯＶＸ）を実施することによって、閉経後のＯＡをインビボで評価するためのモデルを樹立した。５月齢および７月齢のラットにおいて関節軟骨の損傷を定量することによって、このモデルの妥当性を評価した。ここで、損傷の定量は、膝関節における侵食性の変化を数値化するために開発されたスコアリングシステムを用いての組織学的な計算によってなされた。さらに、特異的な生化学的マーカーによって、軟骨および骨の代謝レベルを評価した。軟骨の代謝回転の指標としてはＩＩ型コラーゲンの分解産物に特異的なＣａｒｔｉＬａｐｓ（ＣＴＸ−ＩＩ）であり（Ｃｈｒｉｓｔｇａｎ  ｅｔ  ａｌ  ２００１）、ＲａｔＬａｐｓ（ＣＴＸ−Ｉ）は骨吸収から派生したＩ型コラーゲンの分解産物に特異的である。
【００７０】
本研究における動物は、２０匹の雌のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（ドイツのＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ社から入手した）の二集団から構成されていた。一方の集団は５月齢の動物であり、第二の集団の動物は７月齢の動物であった。それぞれの集団を二群に分けた。それぞれの群は１０匹であり、９週間飼育した。研究を開始する２ヶ月前から、動物施設にて動物を受け取り、環境に順化できるようにした。基準線にて体重を測定し、動物を無作為化して二群に分けた。Ｈｙｐｎｏｒｍ−Ｄｏｒｍｉｃｕｍ（Ｈｙｐｎｏｒｍ（登録商標）１部＋Ｄｏｒｍｉｃｕｍ（登録商標）１部＋滅菌済み脱イオン水２部）を用いて最初に麻酔をかけて、全てのラットについて卵巣摘出術を行う。体重１００ｇあたり０．１５〜０．２ｍＬ）をラットに与え、標準的な偽手術または卵巣摘出術を行う。実験の全期間に亘って、週ごとに動物の体重を測定した。研究の全期間を通して、定期的な間隔をあけて動物の体重を測定し、血液サンプルならびに尿サンプルを採取した。動物の腹部を優しくさすって排尿を促すことによって、または代謝測定用のかごの中に動物を３０〜６０分間収容して得られる尿サンプルを回収することによって、尿サンプルのスポットとして尿サンプルを採取した。終了時に膝を分離して、そして軟骨の侵食について組織学的に分析した。
【００７１】
１０％のギ酸、２％のホルムアルデヒドにて、膝の脱灰処理を行った。内側側副靭帯に沿って脱灰後の膝関節を二つの切片に切断し、パラフィンで包埋した。次いで、包埋された膝を、内側側副靭帯から三種の異なる深さ（０、２５０、および５００μｍ）に切断し、次いで、それぞれの切片をトルイジンブルーで染色した。ブラインド化された次のパラメータ：侵食、プロテオグリカンの喪失、軟骨細胞の黒色化／死滅、軟骨細胞の喪失、嚢胞、細動、および軟骨中での骨形成について、軟骨切片のスコアリングを行った。軟骨の総表面のパーセントとして全ての変化を測定し、そして（ＯＶＸ／偽手術）群中の侵食の発生率も算出した。血清サンプルおよび尿サンプルのそれぞれのＲａｔＬａｐｓ（ＣＴＸ−Ｉ、骨吸収）レベルおよびＣａｒｔｉＬａｐｓ（ＣＴＸ−ＩＩ、軟骨破壊）レベルを測定した。
【００７２】
ＩＩ型コラーゲンのＣ−テロペプチド断片に特異的なモノクローナル抗体（ＭａｂＦ４６）を利用する競合的ＥＬＩＳＡ法を用いて、尿中のＣａｒｔｉＬａｐｓ  ＥＬＩＳＡを測定する（Ｃｈｒｉｓｔｇａｎ  ｅｔ  ａｌ  ２００１）。最初に、ＩＩ型コラーゲンのＣ−テロペプチドに由来するペプチド（ＥＫＧＰＤＰ）をビオチン化したものを、ストレプトアビジンマイクロタイタープレート上でインキュベートし、次いでサンプルならびに一次抗体を添加することによって、評価を行った。尿サンプルの測定のために開発した競合的ＥＬＩＳＡフォーマット内で、ＩＩ型コラーゲンのＣ−テロペプチド断片に特異的なモノクローナル抗体ＭａｂＦ４６を用いた。概略を述べれば、次のように評価を行った。ＩＩ型コラーゲンのＣ−テロペプチドに由来するペプチド（ＥＫＧＰＤＰ）をビオチン化したものをコーティング緩衝液（１．５ｍｇ／Ｌ）で希釈し、そしてその１００μＬを、ストレプトアビジンでコーティングされたマイクロタイタープレート（Ｍｉｃｒｏ−Ｃｏａｔ、ミュンヘン、ドイツ）のそれぞれのウェル中にピペットで注入した。１８〜２２℃で３０±５分間、プレートをインキュベートした。洗浄緩衝液でプレートを５回洗浄し、そして標準物質、対照サンプルまたは未知サンプルの４０μＬを、ウェル中にピペットで注入した。すべてのサンプルを二重に測定した。１００μＬの一次抗体（ＭａｂＦ４６）をアッセイ緩衝液で１９ｍｇ／Ｌの濃度に希釈し、それぞれのウェル中にピペットで注入した。４℃にて一晩インキュベートした後、プレートを洗浄してペルオキシダーゼで標識した抗マウス抗体を添加し、次いで発色性のペルオキシダーゼの基質と結合した抗体を視覚化した。ＥＬＩＳＡプレートリーダで４５０ｎｍにおける吸光度（６５０ｎｍは参考）を測定し、既知濃度のＩＩ型コラーゲンペプチドを用いて標準物質の測定から求めた標準曲線を作成することによって、未知サンプルの濃度を決定した。ＣａｒｔｉＬａｐｓ  ＥＬＩＳＡ［ｎｇ／Ｌ］の濃度を、尿クレアチニンの総量［ｍｍｏｌ／Ｌ］：濃度／クレアチニン［ｎｇ／ｍｍｏｌ］に標準化した。この評価法の測定精度については、評価間および評価中の偏差に対してそれぞれ７．１％および８．４％であった。
【００７３】
競合的ＥＬＩＳＡ法での特異的モノクローナル抗体を用いるＲａｔＬａｐｓ  ＥＬＩＳＡにて、Ｉ型コラーゲンのＣ−テロペプチドの分解産物を測定する。この評価法は尿サンプルおよび血清サンプルの両方に適している。しかし、本研究では血清サンプルのみを評価した。この評価法は市販物を利用できる（Ｎｏｒｄｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社、ヘルレブ、デンマーク）。この評価法にて測定された全ての血清サンプルは動物に由来するものであった。サンプリングの少なくとも６時間前から、動物を絶食させておいた。概略を述べれば、Ｃ−テロペプチドのエピトープのＥＫＳＱＤＧＧＲを表す合成ペプチドのビオチン化型をインキュベートすることによって、この評価を行う。この後にサンプルおよび一次抗体を添加し、インキュベートを一晩した後で、ペルオキシダーゼで標識した二次抗体と発色性のペルオキシダーゼの基質とを用いて、結合した抗体の量を視覚化する。標準物質の合成ペプチドの測定結果に基づく校正曲線の作成結果から、サンプル中の濃度を決定した。
【００７４】
両集団において、偽手術群に比べて、ＯＶＸ群では大腿骨の内側における侵食が顕著に進行していた（５月齢および７月齢の動物について、それぞれｐ＝０．０３７およびｐ＝０．０８）。ＯＶＸでは、膝関節のその他の領域の軟骨のさらなる侵食が示された。しかし、５月齢の集団の脛骨の内側および７月齢の集団の大腿骨の外側においてのみ、差分が統計的有意性にまで到達した（それぞれｐ＜０．０１およびｐ＝０．００９）。四領域に亘る総スコアから、５月齢および７月齢の動物の両方において、偽手術群の侵食よりもＯＶＸ群の侵食の方が顕著に進行していたことが示された（それぞれｐ＝０．０９およびｐ＝０．００８）（図１）。
【００７５】
５月齢および７月齢の動物の両方において、ＯＶＸによって、ＣＴＸ−ＩレベルおよびＣＴＸ−ＩＩレベルの非常に顕著な上昇が導かれた（図２）。この結果は組織学のデータに合致する。ＯＶＸ動物における９週間の研究期間を通して、ＣＴＸ−Ｉマーカーを用いて測定された骨吸収が増加し続けているのに対して、ＣａｒｔｉＬａｐｓの増加はＯＶＸの４週間後に最も明白になり、次いで減少傾向を示している。ＣａｒｔｉＬａｐｓの変化と侵食との間の相関性について評価した（図３）。相関係数Ｒ2＝０．２７とは、この二つのパラメータの間に有意な（ｐ＝０．０３９）相関性があることを示し、このことは予想され得るものであった。大腿骨の外側（最も激しい侵食が見られた箇所）における侵食に対するＣａｒｔｉＬａｐｓの相関性も有意であった（Ｒ2＝０．２５、ｐ＝０．０４８；データは示さず）。
【００７６】
ＣａｒｔｉＬａｐｓと、組織学によって定量化される侵食との間の関連性を評価するための別の方法は、ＣａｒｔｉＬａｐｓレベルの変化だけでなく、レベルとその後の軟骨の侵食との間の関連性を評価することである。図４において、７月齢の集団についてのデータをこの方法で処理した。ＯＶＸから４週間後のＣａｒｔｉＬａｐｓに従って、動物を二群：小さい値のＣａｒｔｉＬａｐｓ（２８〜７５ｎｇ／ｍｍｏｌ）と大きい値（９７〜５２０ｎｇ／ｍｍｏｌ）とに分割した。小さい値のＣａｒｔｉＬａｐｓデータを示す動物は、わずかな侵食のみであるのに対して、大きい値のＣａｒｔｉＬａｐｓを示す動物は、侵食の発生率が高いだけではなく、侵食のパーセントも大きい（図４）。５月齢の動物からのデータを分析した場合にも、同様の結果が得られた。
【００７７】
結論としては、ＯＶＸ処理ラットにおいて骨および軟骨の両方の代謝回転の有意な上昇が誘導されること、およびＯＶＸ処理ラットにおける軟骨の侵食は９週間後に現れることが、結果から実証される。
【００７８】
このことは、エストロゲンおよびエストロゲン受容体を介して作用する化合物が、正常な軟骨の代謝回転を維持するための重要な役割を持つことを示唆し、そして次の実施例において実証されるように、エストロゲンおよびＳＥＲＭ’ｓが軟骨を保護する可能性があることを示唆する。さらに、この結果から、ＯＶＸモデルを閉経後のＯＡのインビボのモデルとして用いることが妥当であることが確認される。最後に、この結果から、関節炎のラットモデルにおけるその後の関節軟骨の破壊の妥当な生化学的マーカーとして、ＣａｒｔｉＬａｐｓの評価を用いてもよいことが実証される。
【実施例２】
【００７９】
レボルメロキシフェンは、卵巣が摘出されたラットにおける軟骨破壊の強力なインヒビターである。
このＳＥＲＭの潜在的な軟骨保護効果を検定するために、閉経後のＯＡのＯＶＸモデル（実施例１を参照）において、レボルメロキシフェンを評価した。ドイツのＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒから７０匹の６月齢の雌のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを入手し、この研究に用いた。１０匹の動物に偽手術を行い、残りのもの（６０匹の動物）に卵巣摘出術を行った。動物の卵巣摘出術と取り扱いについては、実施例１に記載されたようにして実施した。ＯＶＸ動物を、１２匹の動物の５群に分け、媒体、０．１ｍｇ／ｋｇ／日の１７α−エチニルエストラジオール（Ｓｉｇｍａ社、Ｅ−８８７５、ロット番号２１Ｋ１２６７）または三通りの用量のレボルメロキシフェン（０．２、１または５ｍｇ／ｋｇ／日）で処理した。全ての処理を、懸濁液（５０％のプロピレングリコール（Ｕｎｉｋｅｍ社、コペンハーゲン、デンマーク、カタログ番号２９１４４３）、０．０７５ＭのＮａＣｌ）にて経口投与で実施した。１週間に５日、毎日実施し、週末には投与しなかった。研究の全期間を通して、定期的な間隔をあけて動物の体重を測定し、血液サンプル／尿サンプルを採取した。動物の腹部を優しくさすって排尿を促すことによって、または代謝測定用のかごの中に動物を３０〜６０分間収容して得られる尿サンプルを回収することによって、尿サンプルのスポットとして尿サンプルを採取した。終了時に膝を分離して、そして軟骨の侵食について組織学的に分析した。
【００８０】
最も少ない用量（０．２ｍｇ／ｋｇ／日、１週間に５日投与）では、偽手術の動物またはＯＶＸ処理された動物としての体重の進展は同一であること、すなわち、９週間に亘る研究期間の間、体重に有意な変化はないことが示された。その一方、中用量（１ｍｇ／ｋｇ／日、１週間に５日投与）および高用量（５ｍｇ／ｋｇ／日、１週間に５日投与）では、これらの基準群よりも若干成長が遅いことが示された（データは示さず）。
【００８１】
レボルメロキシフェンは、エストロゲン処理動物または偽手術動物に見られるレベルと同じレベルにまで、ＯＶＸ動物におけるＣａｒｔｉＬａｐｓレベルの有意な減少を引き起こした（図５）。三つのレボルメロキシフェン処理群の間には、差は見られなかった。このことは、軟骨に関して完全な反応を維持している間に、用量を減少することが可能であることを示唆するものである。対照的に、この化合物の骨吸収を抑制する潜在能力はより小さいことが示された。レボルメロキシフェンの用量が最も高い場合にのみ、ＲａｔＬａｐｓ（ＣＴＸ−Ｉ）のレベルを、偽手術群またはエストラジオール処理群で見られたのと同レベルにまで有意に減少させることができた。
【００８２】
結論として、レボルメロキシフェンは軟骨の代謝回転の抑制が可能であること、従って、ＯＶＸ処理ラットにおける軟骨侵食を正常動物に見られるレベルにすることが可能であることを示した。さらに、このＳＥＲＭは、骨よりも軟骨に優先的に効果を発揮すること、従って、閉経後のＯＡにおける軟骨を保護する可能性のある治療として極めて有用となろうことが示される。
【実施例３】
【００８３】
レボルメロキシフェン、およびレボルメロキシフェン＋酢酸ノルエチステロン（ＮＥＴＡ）は軟骨破壊の強力なインヒビターではあるが、卵巣が摘出された３＋１／２月齢のラットの子宮の重量には影響を与えない。
潜在的な子宮および軟骨の保護効果を検定するために、若い動物（３＋１／２月齢）の閉経後のＯＡのＯＶＸモデルにおいて、レボルメロキシフェン単独、またはゲスターゲン類似化合物の酢酸ノルエチステロン（ＮＥＴＡ）と組み合わせたものを評価した。５０匹の３＋１／２月齢の雌のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを入手し、この研究に用いた。１０匹の動物に偽手術を行い、残りのもの（４０匹の動物）に卵巣摘出術を行った。動物の卵巣摘出術と取り扱いについては、実施例１に記載されたようにして実施した。ＯＶＸ動物を、１０匹の動物の４群に分け、媒体、レボルメロキシフェン（１．０ｍｇ／ｋｇ／日、１週間に５日投与）、ＮＥＴＡ（１．０ｍｇ／ｋｇ／日、１週間に５日投与）またはレボルメロキシフェン＋ＮＥＴＡ（両化合物を１．０ｍｇ／ｋｇ／日、１週間に５日投与）で５週間処理した。全ての処理を、懸濁液（５０％のプロピレングリコール、０．０７５ＭのＮａＣｌ）にて経口投与で実施した。１週間に５日、毎日実施し、週末には投与しなかった。研究の全期間を通して、定期的な間隔をあけて動物の体重を測定し、血液サンプル／尿サンプルを採取した。動物の腹部を優しくさすって排尿を促すことによって、または代謝測定用のかごの中に動物を３０〜６０分間収容して得られる尿サンプルを回収することによって、尿サンプルのスポットとして尿サンプルを採取した。
【００８４】
レボルメロキシフェンで処理すると、偽手術の動物としての体重の進展は同一であることが示された。その一方、レボルメロキシフェン＋ＮＥＴＡで処理すると動物の成長が遅れた。媒体またはＮＥＴＡで処理すると体重が増加し、媒体群の成長速度が最も速かった（表１）。媒体処理ラットと比べると、レボルメロキシフェン、レボルメロキシフェン＋ＮＥＴＡまたはＮＥＴＡで処理したものは、ＯＶＸラットの子宮の重量に全く影響が見られなかった（表１）。偽手術ラットは、ＯＶＸラットよりも子宮の重量が増加していた。このことは、内因性のエストロゲンが産生したことが原因である。レボルメロキシフェン、ＮＥＴＡまたはレボルメロキシフェン＋ＮＥＴＡで処理すると、偽手術動物に見られるレベルと同じレベルにまで、ＯＶＸ動物におけるＣａｒｔｉＬａｐｓレベルの有意な減少が生じた（図６）。ＣａｒｔｉＬａｐｓのデータとＲａｔＬａｐｓデータを実施例１、２および４と比較する場合、この実験の集団はより若い（研究開始時は３＋１／２月齢）ことを考慮すべきであり、従って、骨端軟骨板中にＩＩ型コラーゲンが存在するために、ＲａｔＬａｐｓの評価およびＣａｒｔｉＬａｐｓの評価の両方での測定に寄与するであろう実質的な骨格の成長が生じる。従って、この年齢幅での骨格の成長は緩やかに低下するという理由のために、偽手術群においては、４週間の観察期間に亘ってＣａｒｔｉＬａｐｓの約４０％の低下が見られた（図６）。よって、媒体処理群において見られるような、ＯＶＸによって引き起こされる骨および軟骨の代謝回転の高まりを偽手術群と結びつけて考える必要がある。レボルメロキシフェンまたはレボルメロキシフェン＋ＮＥＴＡで処理すると、偽手術動物に見られるレベルと同じレベルにまで、ＯＶＸ動物におけるＣａｒｔｉＬａｐｓレベルおよびＲａｔＬａｐｓレベルの有意な減少が生じた（図６）。ＮＥＴＡ単独で処理しても、ＣａｒｔｉＬａｐｓレベルは媒体処理動物と比べて有意に減少しなかった。しかしながら、ＮＥＴＡ単独で処理した動物群では、ＣａｒｔｉＬａｐｓレベルが低下する方向への傾向は存在した。
【００８５】
結論として、ゲスターゲン類似化合物のＮＥＴＡをレボルメロキシフェンに添加することは、このＳＥＲＭの潜在的な軟骨保護効果を弱めることにはならない。このような潜在的な多剤併用療法は、子宮の組織および乳房の組織に及ぼすＳＥＲＭｓのエストロゲン様効果と顕著に関係するヒトの被験者に臨床上の利益を与え続ける可能性があり、従って、ゲスターゲン類似化合物を添加することによって、エストロゲンがこれらの組織を刺激することを防ぐ十分に認識された方法が提供されることから、このことは望ましいのかもしれない。
【００８６】
【表１】
2005524630.tif 000018
【実施例４】
【００８７】
（−）−シス−３，４−ジアリールヒドロキシクロマンは卵巣が摘出されたラットにおける軟骨破壊の強力なインヒビターである。
このＳＥＲＭの潜在的な軟骨保護効果を検定するために、閉経後のＯＡのＯＶＸモデル（実施例１を参照）において、クロマンＳＥＲＭ化合物の（−）−シス−３，４−ジアリールヒドロキシクロマン（化合物＃０７８１、図７）を評価した。７０匹の６月齢の雌のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを入手し、この研究に用いた。１０匹の動物に偽手術を行い、残りのもの（６０匹の動物）に卵巣摘出術を行った。動物の卵巣摘出術と取り扱いについては、実施例１に記載されたようにして実施した。ＯＶＸ動物を、１２匹の動物の５群に分け、媒体、０．１ｍｇ／ｋｇ／日の１７α−エチニルエストラジオール（Ｓｉｇｍａ社、Ｅ−８８７５、ロット番号２１Ｋ１２６７）を１週間に５日の投与、または三通りの用量の（−）−シス−３，４−ジアリールヒドロキシクロマン（０．２、１または５ｍｇ／ｋｇ／日、１週間に５日投与）のいずれかで処理した。全ての処理を、懸濁液（５０％のプロピレングリコール、０．０７５ＭのＮａＣｌ）にて経口投与で実施した。１週間に５日、毎日実施し、週末には投与しなかった。研究の全期間を通して、定期的な間隔をあけて動物の体重を測定し、血液サンプル／尿サンプルを採取した。動物の腹部を優しくさすって排尿を促すことによって、または代謝測定用のかごの中に動物を３０〜６０分間収容して得られる尿サンプルを回収することによって、尿サンプルのスポットとして尿サンプルを採取した。ＲａｔＬａｐｓとＣａｒｔｉＬａｐｓの測定（図８、図９）から、この化合物が骨吸収および軟骨の代謝回転の両方に有意な影響を及ぼすことが証明される。ＳＥＲＭの用量が最も高い場合、ＣａｒｔｉＬａｐｓレベルがエストロゲン動物または偽手術動物（図８の左部）のレベルにまで減少するのに対して、エストロゲンと同程度にまで骨吸収を抑制することはできなかった。このことは、この化合物は骨よりも軟骨に対してより強い作用を及ぼすことを示唆する。従って、この化合物は、閉経後のＯＡの治療において潜在的な軟骨保護機能を発揮するかもしれない。
【実施例５】
【００８８】
ＩＩ型コラーゲンを接種されたＬｅｗｉｓラットにおける、（−）−シス−３，４−ジアリールヒドロキシクロマンによって誘導された炎症性関節炎の発生の遅延ならびに重症度および発生率の低下。
最も広く採用されているＲＡの動物モデルの一つは、Ｌｅｗｉｓラットのコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）動物モデルである。このモデルにおいては、ＩＩ型コラーゲンを接種することによって関節の炎症が誘導される。この接種は、組織学的な分析を行った場合の足の関節の腫れとその後の関節の破壊のように明白な、関節の軟骨に対する深刻な炎症反応を導く。この研究において、我々はエストロゲンならびにＳＥＲＭ＃０７８１（（−）−シス−３，４−ジアリールヒドロキシクロマン、図７）が、疾患の進行とＣＩＡの重症度とに及ぼす効果を測定した。足の腫れと赤みを肉眼でスコアリングすることによって、関節炎を監視した。ＣａｒｔｉＬａｐｓの尿中レベルとＲａｔＬａｐｓの血清レベルとを定量することによって、軟骨および骨の侵食を監視した。さらに、動物の子宮の重量を測定して、エストロゲンの発情原性を評価した。
【００８９】
研究の集団は、６６匹の雌のＬｅｗｉｓ  ＨａｎＨｓｄラット（ハーラン、オランダ）から構成された。１週間環境順化させた後、Ｈｙｐｎｏｒｍ−Ｄｏｒｍｉｃｕｍ（Ｈｙｐｎｏｒｍ（登録商標）１部＋Ｄｏｒｍｉｃｕｍ（登録商標）１部＋滅菌済み脱イオン水２部）を用いて最初に麻酔をかけて、５５匹のラットについて卵巣摘出術を行う。体重１００ｇあたり０．１５〜０．２ｍＬ）をラットに与え、標準的な卵巣摘出術を行う。同じ麻酔法を用いて、１１匹のラットに偽手術を行う。ＯＶＸの１週間後にラットに接種する。それぞれのラットに、フロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）で乳化した１５０μｇのウシのＩＩ型コラーゲン（カタログ番号＃２００２−１；Ｃｈｏｎｄｒｅｘ社、レドモンド、ワシントン州、米国）を接種する。１５０μＬのエマルションを尾の付け根に皮内注射する。１１日目から毎日、足の肉眼観察によってラットの足のスコアリングを行う。それぞれの足について０〜４の段階でのスコアリングを行い、四本の足についてのスコアを合計した。所定の動物についての関節炎の合計のスコアが１０に達した場合、または一つの足についての関節炎が非常に重症な程度に進行した場合、またはＣＩＡが１６日以上続いた場合、さらに激しい関節炎は顕著な痛みと不快感が伴うので、倫理的に考慮して動物を殺した。動物の残りは、完了する前に、ＯＶＸから４２日間飼育を続けた。
【００９０】
ＯＶＸおよび偽手術の後、無作為に６群に投与した動物の５９匹が生存した（表３を参照）。１０匹の動物が偽手術群（Ｓ）であり、１０匹の動物が媒体のみ（５０％のプロピレングリコール、０．１５ＭのＮａＣｌ）が与えらた群（Ｖ）であり、１１匹の動物が０．５ｍｇ／ｋｇ／日のエストロゲン（１７α−エチニルエストラジオール、Ｓｉｇｍａ社、Ｅ−８８７５、ロット番号２１Ｋ１２６７）が与えられた群（Ｅ）であった。そして群中のそれぞれの１０匹、８匹および１０匹の動物を、０．２、１および５ｍｇ／ｋｇ／日のＳＥＲＭ＃０７８１（Ａ、ＢおよびＣ）で処理した。ボルテックスと超音波によって、プロピレングリコール（Ｕｎｉｋｅｍ社、コペンハーゲン、デンマーク、カタログ番号２９１４４３）で化合物を懸濁させる。均質化された懸濁液を得ると、化合物を同じ量（１：１）の０．１５ＭのＮａＣｌで希釈する。１週間に５日、胃管栄養法によって化合物を経口投与し、週末には投与しなかった。ＯＶＸの翌日に、すなわちＩＩ型コラーゲンの接種の前に、媒体、エストロゲンおよびＳＥＲＭ＃０７８１を三つの異なる用量での処理を開始した。
【００９１】
実験の終了時に子宮の重量を測定して、ＳＥＲＭ＃０７８１による子宮肥大効果を調べた。正常の子宮の重量を意味する偽手術動物（Ｓ）において、最大の重量が見られた。媒体処理群（Ｖ）で見られるように、ＯＶＸでは５０％を超える子宮の重量の減少という結果が生じた。エストロゲン処理（Ｅ）では子宮の重量をある程度回復させるが、完全ではない。ＳＥＲＭ＃０７８１処理ラットでは、用量に関わらず、媒体処理ラットと比較してわずかな子宮の重量の増加が示される。
【００９２】
ＣＩＡ実験の終了時に脾臓の重量を測定した。偽手術群および媒体群と比較すると、全てのＳＥＲＭ＃０７８１処理群およびエストロゲン群において、脾臓の重量が減少していた。中用量のＳＥＲＭ＃０７８１（Ｂ）を媒体群（Ｖ）と比較して統計分析した結果は、ｐ＝０，０１４（ｎ＝５）である（図１０）。このことは、もしかするとＣＩＡの進行に極めて重要となり得るところのＳＥＲＭ＃０７８１の免疫抑制効果を示唆しているのかもしれない。
【００９３】
偽手術群（Ｓ）、媒体群（Ｖ）および中用量のＳＥＲＭ＃０７８１群（Ｂ）においては、接種から１２日後に関節炎の最初の徴候が観察された。既に出版されている研究に合致して、ＯＶＸラットはＣＩＡにさらにかかりやすかった。接種から１５日目に、媒体群のＣＩＡの発生率が最も高く、かつＣＩＡの重症度も最も高かった（表２）。
【００９４】
【表２】
2005524630.tif 000019
【００９５】
高用量のＳＥＲＭ＃０７８１（Ｃ）は、１８日目まで完全に保護していた（図１１）。三つの全てのＳＥＲＭ＃０７８１処理群では保護が残存し、接種から２５日目まで関節炎の指標はより小さいことが示された。しかしながら、エストロゲン処理ラットは、２５日目から最も重症の疾患を示した。ラットのスコアが（１６のうちの）１０に到達する時、または足の一本が非常に重い関節炎にまで進行した時、または１６日以上ＣＩＡが続いた時、終了した。図１２は、三つのＳＥＲＭ＃０７８１群の全てが、媒体群と比較して接種から最初の５週間までの生存率が向上していたことを示す。エストロゲン処理群も、最初の４週間までの生存率が向上していたことを示した。実験の終了時において、その他の全ての群は２０％まで低下していたのにも関わらず、低用量のＳＥＲＭ＃０７８１処理ラットの５０％が生存していた。
【００９６】
総合すれば、図１１および図１２から、ＳＥＲＭ＃０７８１がＣＩＡの進行に対する保護効果を有することが示される。興味深いことに、ＳＥＲＭ＃０７８１処理ラットは偽手術群よりもＣＩＡにかかりにくく、このことは、ＳＥＲＭ＃０７８１は、エストロゲンの欠乏を単に補うよりも、むしろ付加的な保護効果を有することを示唆した。
【００９７】
この若い動物集団（研究開始時は９週齢）における関節軟骨の代謝回転のＣａｒｔｉＬａｐｓ分析は、研究期間中に生じる顕著な骨格の成長によって妨害された。骨格の成長は骨端軟骨板の急激な代謝回転と関係があり、このものは基質を含む軟骨様ＩＩ型コラーゲンから構成され、そしてこのプロセスからの代謝産物はＣａｒｔｉＬａｐｓの評価の測定に寄与するだろう。従って、７週間の観察期間に亘って、偽手術処理を受けた動物において、全体的に約５０％に減少した（図１３Ａ）。媒体のみで処理されたＯＶＸラットは、偽手術群と比較して、三週間後にＣａｒｔｉＬａｐｓレベルの増加を示した。それに対してエストロゲン処理されたラットはレベルの減少を示した（図１３Ａ）。ＳＥＲＭ＃０７８１処理によって、ＣａｒｔｉＬａｐｓレベルが用量に依存する様式で減少した。低用量群は媒体群と同様に振る舞い、そして高用量処理の結果、媒体（ｐ＝０，０１２）と比較してＣａｒｔｉＬａｐｓレベルが有意に減少し、エストロゲン処理（ｐ＝０，００２１）と同程度となった。図１３Ｂで示されるＣａｒｔｉＬａｐｓレベルに対する関節炎の多大な影響から、図１３ＡにおけるＣａｒｔｉＬａｐｓレベルの変化が大きいことが説明される。ＯＶＸから三週間後（＝ＩＩ型コラーゲンの接種から二週間後）に、処理群の間で有意な差が見られたが、既にこの時点では、次に続く疾患の過程がＣａｒｔｉＬａｐｓレベルに影響を及ぼしていた（図１３Ａ）。
【００９８】
接種の時点、図１３の第１週目はＯＶＸから１週間後である。六週間の観察期間の間、健康を保ったラットの終点の値は、ＣａｒｔｉＬａｐｓの基準線レベルの２６，５％である。この群（ｎ＝１０）には、観察の最後の週の間にＣＩＡの弱い症状（２以下のスコア）が生じたラットも含まれる。有意に高い値の終点値は、関節炎ラットにおいて見られた（ｐ＜０，００５）。非常に重い炎症のせいで、すなわち１５日間以上に亘ってＣＩＡの徴候を示した（ＣＩＡ重症／初期）せいで、４１匹のラットは、計画よりも早期に終了させる必要があった。８匹のラットは中程度の疾患、すなわちＣＩＡの進行がより遅く、そして６週目の最終的な終了日までその状態を保ち続けることができた（ＣＩＡ中程度／後期）。これらのＣＩＡ群の両方とも、接種から４週目にてＣａｒｔｉＬａｐｓレベルの有意な上昇を示した（それぞれｐ＝０，００３４およびｐ＝０，０１４）。興味深いことに、ＣＩＡ中程度／後期群は既に２週目にて有意なレベルの上昇を示しており（ｐ＝０，０１２）、これはＣＩＡが発症する２週間前に対応する。このことは、ＣａｒｔｉＬａｐｓレベルの上昇は関節の炎症によって生じる軟骨の侵食を反映するのではなく、むしろ関節炎の発症前に起こる軟骨代謝の変化を反映することを示唆するのかもしれない。このような軟骨代謝の変化は、時間の経過と関節炎の進行を導くところの臨床上の症状を伴わない初期の病理学上の出来事なのかもしれない。この実験において用いられるＳＥＲＭで処理すると、この「発症前」の軟骨の代謝回転を抑制できるかもしれず、従ってその後の炎症性関節炎に進行する可能性を減少できるかもしれない。このように、ＳＥＲＭ化合物には、炎症性関節炎（ＲＡ）に進行するリスクの個体を処置するための予防薬としての可能性があるかもしれない。
【００９９】
図１４は、ＣＩＡ実験の終了時におけるＣａｒｔｉＬａｐｓの絶対値を示す。異なる処理群を分けて示している。このことは、ＣａｒｔｉＬａｐｓの絶対値もラットの関節炎の状態を反映することを明らかにしている。ＯＶＸのＯＡモデルにおいては、ＯＶＸによってＣａｒｔｉＬａｐｓレベルの増加が引き起こされた（実施例１〜４を参照）。このホメオスタシスの不均衡は６週間以内に修復され、エストロゲン処理、レボルメロキシフェン処理またはＳＥＲＭ＃０７８１によって予防できた。ＯＶＸの後の軟骨代謝の不均衡のこの期間が、この期間における軟骨侵食とＣＩＡの進行に対するかかりやすさが高まることの理由なのかもしれない。この実験におけるＳＥＲＭ＃０７８１の効果によって例示されるような、ＳＥＲＭ処理によるさらなる有益な効果は、それらが一般的な免疫抑制効果を結果的に生じさせることなのかもしれない（図１０を参照）。そしてこの効果は、炎症性関節炎を処理するための治療上の顕著な潜在能力を有するかもしれない。
【０１００】
結論として、実験から、ヒドロキシクロマン化合物のＳＥＲＭ＃０７８１などのＳＥＲＭｓの、炎症性関節炎における顕著な予防効果および／または治療効果が示される（図７）。
【実施例６】
【０１０１】
選択的エストロゲン受容体モジュレーターによって誘導されるヒトにおける軟骨の代謝回転の抑制。
年齢が４９〜６５歳の２３５人の健康な閉経後の女性の集団内での、軟骨の代謝回転に及ぼす選択的エストロゲン受容体モジュレーターの影響を評価した。軟骨の異化の際に放出される、ＩＩ型コラーゲンのＣ−テロペプチドの破壊産物を測定することによって、軟骨の代謝回転を定量した。比較のために、Ｉ型コラーゲンのＣ−テロペプチド（「ＣｒｏｓｓＬａｐｓ」）の血清レベルを骨吸収の特異的なマーカーとして測定した。
【０１０２】
研究に参加する者は、二種の異なる用量決定試験に従事してきた。そこでは、骨粗鬆症の予防に及ぼす二種の異なるＳＥＲＭｓの効果についての評価が行われてきた。試験期間の全体に亘って空腹時の尿サンプルを定期的に回収し、後の研究目的のために凍結した。全ての参加者は、閉経から１年以上経過しており、血清エストラジオールの濃度は２５ｐｇ／ｍＬ未満であった。全ての参加者は臨床的に明白な急性疾患または慢性疾患を患っておらず、登録の６ヶ月前から、骨または軟骨の代謝に影響を及ぼすことが知られている薬剤を投与された者はいなかった。表３から、参加者の基準線における肉体の人口統計データおよび関連するバイオマーカーのレベルが明らかにされる。ヘルシンキ宣言ＩＩおよび欧州における標準的な医薬品の臨床試験の実施基準に従って、両方の研究を実施した。
【０１０３】
設計：ラロキシフェンの研究には５種の処理群が含まれ、５年間続けられた。一つの群にはプラシーボが与えられ、三つの群はラロキシフェンで処理され、５年の研究期間を通して、一日あたりの経口での用量は３０、６０または１５０ｍｇであった。一つの群では、最初の３年間はプラシーボ処理が行われ、次いで一日あたり６０ｍｇのラロキシフェンに変更された。レボルメロキシフェンの研究には５種の処理群が含まれ、２年間続けられた。一つの群にはプラシーボが与えられ、四つの処理群には、一日あたりの経口での用量がそれぞれ１．２５ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇおよび２０ｍｇのレボルメロキシフェンが与えられた。１２ヶ月間レボルメロキシフェンが与えられた処理群には、さらに処理のない１２ヶ月間が続いた。両方の研究における全ての参加者には、試験期間全体を通して一日あたり４００〜６００ｍｇのカルシウムのサプリメントが与えられた。両研究においては、参加者を割り振るための方法としての乱数表を用いて二重盲検処理を行った。
【０１０４】
人口統計データ：基準線での質問を介して、年齢および閉経からの年数（ＹＳＭ）を登録した。軽い室内着を着てもらい、靴を脱いだ参加者に関して、身長および体重を、それぞれ最も近い０．１ｃｍおよび０．１ｋｇまで測定した。ＢＭＩ＝ｍ／ｈ2、式中、ｍはｋｇでの患者の体重であり、ｈはメートルでの身長である、として、肥満度指数（ＢＭＩ）を計算した。
【０１０５】
実施例１において記載されたようなＣａｒｔｉＬａｐｓ  ＥＬＩＳＡによって、ＩＩ型コラーゲンのＣ−テロペプチド断片の尿レベルを測定した。
【０１０６】
血清ＣｒｏｓｓＬａｐｓ  ＥＬＩＳＡ：比較のために、血清ＣｒｏｓｓＬａｐｓを盛り込んだ。血清ＣｒｏｓｓＬａｐｓのワンステップＥＬＩＳＡは骨吸収の鋭敏な指標であり、製造会社（Ｎｒｏｄｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社、ヘルレブ、デンマーク）の説明にしたがって、この評価法を実施した。両方の試験処理から３ヵ月、６ヵ月および１２ヵ月後に、基準線での血清ＣｒｏｓｓＬａｐｓの測定を行った。
【０１０７】
統計分析：独立ｔ検定およびＡＮＯＶＡを用いて、基準線における研究群間の比較分析を行った。スピアマンの相関によって、ＣａｒｔｉＬａｐｓの値とＣｒｏｓｓＬａｐｓの値の間の相関関係を調べた。文字で記した結果は、平均±標準偏差である。ＳＰＳＳ  ｆｏｒ  Ｗｉｎｄｏｗｓ  １０．１（ＳＰＳＳ社、シカゴ、イリノイ州、米国）を用いて統計計算を行った。ｐ＜０．０５の場合、差を有意とみなした。
【０１０８】
表３から、処理群とそれらの対象とに分けられた二つの研究集団についての基準線の値が提供される。ラロキシフェンの研究集団とレボルメロキシフェンの研究集団の間で行われた独立ｔ検定から、年齢に関して、二つの群の間にわずかな相違があったことが明らかになった。従って、ラロキシフェン群よりもレボルメロキシフェン群の方が１．１±０．５年（ｐ＜０．０５）分年長であり、閉経後の期間は、それに対応して、ラロキシフェン群よりも平均して１．９±０．５年（ｐ＜０．０５）長かった。骨吸収を介在する破骨細胞を反映するところの血清のＣｒｏｓｓＬａｐｓ値は、レボルメロキシフェン群の年齢およびＹＳＭが統計的により高いというこのようなわずかな違いと合致していた。軟骨のＩＩ型コラーゲンの破壊を反映するＢＭＩおよび尿ＣａｒｔｉＬａｐｓレベルに関しては、二つの研究集団の間に統計上の有意差はなかった。両研究集団について独立したＡＮＯＶＡによって、表１に列挙されたパラメータ間の分散を求めた。そして処理群とそれらの対照との間には、統計的な有意差は見られなかった。
【０１０９】
図１５の上部に、ラロキシフェン群における、基準線から５年間の巡回までのＣａｒｔｉＬａｐｓ測定の結果を示す。ラロキシフェンの三種の用量の全て（３０、６０および１５０ｍｇ／日）において、ＣａｒｔｉＬａｐｓレベルの基準線の約６５％までの有意かつ持続的な減少が誘導されたのに対して、プラシーボ処理された女性においては、５年の研究期間の間にＣａｒｔｉＬａｐｓレベルがわずかに増加した。処理群では、明らかな用量反応を伴うことなく、１２ヶ月後にＣａｒｔｉＬａｐｓマーカーがプラトーに到達した。最初の３年間はプラシーボが与えられ、その後に一日あたり６０ｍｇのラロキシフェンが与えられた群では、制定された治療法に対して同様の反応を示した。
【０１１０】
レボルメロキシフェンの研究に起因するＣａｒｔｉＬａｐｓの測定結果を、図１５の下部に示す。この研究において、レボルメロキシフェン処理から３〜６ヶ月後に、ＣａｒｔｉＬａｐｓレベルの５０％の低下が見られた。１２ヶ月の治療介入期間における四つの処理群における反応間には、相対的に小さくかつ有意ではない差のみが見られた。レボルメロキシフェン処理を中止した後、四つの処理群の全てのＣａｒｔｉＬａｐｓのレベルが基準線にまで戻った。
【０１１１】
骨吸収を定量するというＣｒｏｓｓＬａｐｓの測定値が、それらに対応するＣａｒｔｉＬａｐｓ値と相互に関係を有した時、ｒ＝０．４２というほんのわずかな相関関係が見出された。子宮内膜、骨および乳房などのエストロゲンに反応する組織に及ぼすエストロゲンおよび関連する化合物、ＳＥＲＭｓなど、の影響は、詳細に研究されてきた。軟骨はエストロゲンに反応する組織とは一般的にみなされておらず、既に記載したように、エストロゲンが軟骨に有益な保護効果を発揮するかどうかについての文献において、矛盾する報告が存在する。ここで、我々は、二つの異なるＳＥＲＭｓがＩＩ型コラーゲンのＣ−テロペプチド断片の尿レベルの有意な減少を誘導することを示し、この減少は、これらの化合物が著しい軟骨保護効果を持つことを実証している。
【０１１２】
ＩＩ型コラーゲンの特異的なタンパク質分解による破壊は、インビトロおよびインビボの両方における軟骨破壊に関して重大な出来事である。従って、このタンパク質に由来する代謝産物は、軟骨破壊の生化学的マーカーとして十分に適したものである。ＣａｒｔｉＬａｐｓの評価は、軟骨の代謝回転を評価するその他の既知の生化学的マーカーと関連付けて示されてきた。そして膝のＯＡの患者の長期間の研究において、ＣａｒｔｉＬａｐｓの測定は、放射線学によって計算される関節腔の狭窄と、痛みと機能に関して標準化されたスコアとに関連付けられていた。従って、この研究で見られたような、ＣａｒｔｉＬａｐｓレベルに及ぼすＳＥＲＭ処理の効果とは、全身の軟骨の代謝回転に及ぼす直接的な効果を意味する。
【０１１３】
二つの研究を含む研究集団には、ＯＡの特定の程度に従って選択したのではない閉経後の女性が含まれている。しかしながら、閉経後の女性はＯＡの発生率の上昇を経験することが既に示されている。閉経後の女性における軟骨破壊が抑制できれば、これに伴ってＯＡに進行するリスクをおそらく低減できるだろう。従って、閉経後の女性（ＯＡの兆候を示すことによっては選択されていない）は、予防によって軟骨を保護する治療法を研究するための適切な群を代表する。このような治療法のための、記録され、承認された適応症には閉経後の骨粗鬆症の予防が含まれることから、閉経後の女性はＳＥＲＭ治療のための重要な標的群をも代表する。ラロキシフェンで処理された研究集団は、５年間追跡された。継続的に処理された三群において、ＣａｒｔｉＬａｐｓレベルの減少はラロキシフェン処理の１２ヵ月後に完全に現れ、そして研究期間の最後まで、このレベルを維持した（図１５）。このことは、このＳＥＲＭの潜在的な軟骨保護効果が長期間の治療に亘って維持されることだけでなく、ラロキシフェンの軟骨保護効果が比較的穏やかに現れることを実証するものである。顕著な治療上の利点を提供するためには、長期間に亘る治療がおそらく必要とされている。調査した三種の用量（３０、６０および１５０ｍｇ）の間に有意差がなかったことは、この研究で用いた最も低い用量でさえ、最大の軟骨保護効果が得られることを示唆した。プラシーボ処理された女性についてラロキシフェンに変更した場合、ＣａｒｔｉＬａｐｓレベルの３５％の減少を伴うＳＥＲＭと同様の反応を示した。
【０１１４】
レボルメロキシフェンの研究において、ＳＥＲＭを１２ヶ月間与え、次いで患者をさらに１２ヶ月間追跡した。ＣａｒｔｉＬａｐｓレベルの減少が最も目立ったところの毎日２０ｍｇを与えることで、用量反応効果の徴候がわずかに見られた。３〜６ヶ月治療を行った後に、この減少が完全に現れた。このことは、試された用量のレボルメロキシフェンを与えると、ラロキシフェンと比べて軟骨保護効果がより早く現れたことを実証するものであった。さらに、ラロキシフェンで見られた効果と比較して、軟骨破壊マーカーの抑制もより顕著であった。治療から１２ヵ月後にレボルメロキシフェンでの処理を停止すると、１２ヵ月後にＣａｒｔｉＬａｐｓレベルが基準線の値に戻った。このことは、軟骨破壊に及ぼすレボルメロキシフェンの潜在的な抑制効果が可逆的であることを実証するものであった。
【０１１５】
バイオマーカーによって測定されるように、そしてラロキシフェンの場合は長期間の骨折の発生率の長期に亘る減少によっても分かるように、ラロキシフェンおよびレボルメロキシフェンの両方によって、骨吸収が抑制される。ＣｒｏｓｓＬａｐｓ  ＥＬＩＳＡによって評価される、骨吸収に及ぼすＳＥＲＭｓの効果は、我々が本明細書でＣａｒｔｉＬａｐｓ評価法によって実証したような軟骨破壊に及ぼす効果と同程度であった。
【０１１６】
ＣａｒｔｉＬａｐｓ評価法およびＣｒｏｓｓＬａｐｓ評価法によって測定されるＳＥＲＭに対する反応は同じように見えるにもかかわらず、二つの評価法は明白に異なるプロセスを意味する。第一に、ＣａｒｔｉＬａｐｓ測定とＣｒｏｓｓＬａｐｓ測定との間の相関関係は弱かった（ｒ＝０．４２）。もっと重要なことは、軟骨および骨の代謝回転に及ぼすＳＥＲＭｓの効果の中にいくつかの相違点を指摘することができる点である。ラロキシフェンについては、試験を行った三つの用量の全てにおいて軟骨破壊に最大の効果を与えたのに対して、骨吸収に及ぼす効果は用量反応の徴候を示していた。さらに、ラロキシフェンが軟骨破壊を最大限に抑制するためには１２ヶ月の処理を要したのに、骨吸収マーカーはわずかに３〜６ヵ月後に完全に抑えられた。レボルメロキシフェンについては、ＣａｒｔｉＬａｐｓにおいて用量反応効果の傾向があったのに対して、レボルメロキシフェンは全ての用量において、ＣｒｏｓｓＬａｐｓを同一のレベルに減少させた。従って、骨および軟骨のレボルメロキシフェンに対する応答性は量的に異なっており、このことは、骨および軟骨の代謝回転に最大の効果を与えるためには異なる用量を必要とすることを示す。これらの観察結果から、骨および軟骨に及ぼす、これらＳＥＲＭｓによって発揮される効果の動力学が異なることが実証される。
【０１１７】
結論として、この結果から、エストロゲンまたはＳＥＲＭなどのエストロゲン様の物質（これらはエストロゲンアゴニストのように機能する）といった化合物によって処理することで、軟骨の異化の有意な抑制を誘導できることが実証される。軟骨の破壊は、ＯＡに関する最も目立つ特徴の一つなので、このプロセスを阻害または抑制することが、有病率の低下またはＯＡに至る病理学上のプロセスの重症度の低減につながるだろう。従って、ＳＥＲＭｓはＯＡを治療または予防するための新規な治療上のオプションの構成要素となる。
【０１１８】
【表３】
2005524630.tif 000020
【０１１９】
参考文献：
【表４】
2005524630.tif 000021
【図面の簡単な説明】
【０１２０】
【図１】５月齢（上部）および７月齢（下部）の雌のラットをＯＶＸ処理または偽手術処理から９週間飼育した際の四つの異なる関節丘における軟骨の侵食。軟骨の全表面のパーセントとして侵食を表現する。二つの群（ｏｖｘ−深緑、偽手術−薄緑）については侵食の平均＋標準誤差値として侵食を表す。四つの関節丘のそれぞれをスコアリングした。脛骨の内側（Ｍｅｄｉａｌ  Ｔ）、大腿骨の内側（Ｍｅｄｉａｌ  Ｆ）、脛骨の外側（Ｌａｔｅｒａｌ  Ｔ）、および大腿骨の外側（Ｌａｔｅｒａｌ  Ｆ）。最終的な、四つの全ての領域の平均が示されている（合計）。
【図２】ＯＶＸ処理ラットおよび偽手術処理ラットにおける軟骨および骨の代謝回転。ＣＴＸ−ＩＩマーカー（Ａ部、Ｂ部）を用いて軟骨の代謝回転を評価し、そしてＲａｔＬａｐｓ（ＣＴＸ−Ｉ）（Ｃ部、Ｄ部）を測定することによって骨吸収を決定した。左部（Ａ、Ｃ）は、開始時が５月齢で９週間追跡したラットからの測定である。右部（Ｂ、Ｄ）は、開始時が７月齢で９週間追跡したラットからの測定である。Ｘ軸はＯＶＸ後の週数を示す。
【図３】７月齢の動物の実験についての、基準線（手術から４週間後）の％で表されるバイオマーカーのＣａｒｔｉＬａｐｓと、侵食（ｎ＝１６）の組織学的スコアリングとの間の相関関係。直線回帰から、Ｒ2＝０．２７の相関係数と有意なｐ値の０．０３９が得られた。
【図４】７月齢の集団中の小さい値のＣａｒｔｉＬａｐｓまたは大きい値のＣａｒｔｉＬａｐｓを有する動物における（４週目の）侵食のパーセント。
【図５】ＯＶＸラットにおける軟骨の代謝回転（左）および骨吸収（右）に及ぼすレボルメロキシフェンの効果。群の範囲内の基準線の平均％で結果を表し、エラーバーは標準誤差（ＳＥＭ）を表す。
【図６】卵巣を摘出されたラットにおける骨吸収（左）および軟骨破壊（右）に及ぼすレボルメロキシフェン、レボルメロキシフェン＋ＮＥＴＡ、およびＮＥＴＡの効果。群の範囲内の基準線の平均％で結果を表し、エラーバーは標準誤差（ＳＥＭ）を表す。
【図７】ＳＥＲＭ＃０７８１の（−）−シス−７−ヒドロキシ−３−フェニル−４−［４−［２−（ピロリジン−１−イル）エトキシ］フェニル］クロマンの化学構造。
【図８】三種の用量の（−）−シス−３，４−ジアリールヒドロキシクロマン（ＳＥＲＭ＃０７８１）、ならびに媒体およびエストラジオールで処理された６月齢のＯＶＸラットにおけるＣａｒｔｉＬａｐｓ（左部）レベルおよびＲａｔＬａｐｓ（右部）レベル。
【図９】図８のＣａｒｔｉＬａｐｓのデータの曲線下面積（ＡＵＣ）の測定。スチューデントのｔ検定を行って、媒体処理群に対する有意差を検定する。*）ｐ＞０．０５；**）ｐ＜０．０１；ＮＳ）有意でない。
【図１０】ＣＩＡ−２実験の終了時の脾臓の重量。Ａ）低用量のＳＥＲＭ＃０７８１、Ｂ）中用量のＳＥＲＭ＃０７８１、Ｃ）高用量のＳＥＲＭ＃０７８１、Ｅ）エストロゲン、Ｓ）偽手術、Ｖ）媒体。標準誤差を伴う平均値で値を表す。
【図１１】Ａ）低用量のＳＥＲＭ＃０７８１、Ｂ）中用量のＳＥＲＭ＃０７８１、Ｃ）高用量のＳＥＲＭ＃０７８１、Ｅ）エストロゲン、Ｓ）偽手術、Ｖ）媒体で処理されたまたはＳＥＲＭ＃０７８１で処理されなかったＣＩＡ動物における関節炎の累積発生率。値を群の範囲内の平均値で表す。関節炎の指標は、群中の全てのラットの関節炎の臨床上のスコアの平均値である。Ｘ軸は、ＩＩ型コラーゲンの接種後の日数を示す（ＯＶＸの１週間後に実施した）。
【図１２】Ａ）低用量のＳＥＲＭ＃０７８１、Ｂ）中用量のＳＥＲＭ＃０７８１、Ｃ）高用量のＳＥＲＭ＃０７８１、Ｅ）エストロゲン、Ｓ）偽手術、Ｖ）媒体で処理されたまたはＳＥＲＭ＃０７８１で処理されなかったＣＩＡ動物における平均生存時間。それぞれの群の範囲内の生存ラットのパーセントとして値を示す。Ｘ軸は、ＩＩ型コラーゲンの接種後の日数を示す（ＯＶＸの１週間後に実施した）。
【図１３】Ａ）低用量のＳＥＲＭ＃０７８１、Ｂ）中用量のＳＥＲＭ＃０７８１、Ｃ）高用量のＳＥＲＭ＃０７８１、Ｅ）エストロゲン  、Ｓ）偽手術、Ｖ）媒体で処理されたまたはＳＥＲＭ＃０７８１で処理されなかったＣＩＡ動物におけるＣａｒｔｉＬａｐｓのレベル。それ自身の基準線値を標準として、それぞれの動物について計算された基準線の％について、それぞれの群の範囲内の標準誤差を伴う平均値として値を示す。右部（Ｂ）においては、研究期間中にて軽度または極めて軽度の疾患（２以下のスコア）の動物の関節炎のスコア、関節炎の発症が後期（２５日後）の動物の関節炎のスコア、および疾患の発症が初期または関節炎が極めて重症の動物の関節炎のスコアに従って、総動物集団を分割する。個々の基準線の％として計算された平均の反応を、ＳＥＭを表すエラーバーを伴って再びプロットする。Ｘ軸上の０週目は、ＯＶＸの時点を示す。
【図１４】ＳＥＲＭ＃０７８１で処理されたまたはされなかったＣＩＡ動物における臨床上の関節炎の有無に従って分割したＣａｒｔｉＬａｐｓレベルの差。群の表示は次のとおりである。Ａ）低用量のＳＥＲＭ＃０７８１、Ｂ）中用量のＳＥＲＭ＃０７８１、Ｃ）高用量のＳＥＲＭ＃０７８１、Ｅ）エストロゲン、Ｓ）偽手術、Ｖ）媒体。それぞれの群についての標準偏差を伴う値で補正されたクレアチニンの平均値で値を示す。
【図１５】ラロキシフェン（上部）およびレボルメロキシフェン（下部）での処理中に破壊されたＩＩ型コラーゲンのＣ−テロペプチドの産物を測定する軟骨破壊マーカーの尿ＣａｒｔｉＬａｐｓの変化。設計および処理群は方法中に記載されている。エラーバーは標準誤差を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【国際調査報告】
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