(57)【要約】  本発明は、閉塞性気道疾患等の炎症疾患の治療において吸入経路により、同時、順次又は別個に投与される、（ａ）本明細書で定義されているアデノシンＡ2a受容体アゴニストと、（ｂ）アドレナリン性β２受容体アゴニストとを含む、併用薬に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）以下の式：
【化１】
2005513041.tif 000003
で表されるアデノシンＡ2a受容体アゴニスト又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物［式中、
Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル基又はフルオレニル基（前記Ｃ1−Ｃ6アルキル基は、各々独立してフェニル基及びナフチル基から選択された１個又は２個の置換基により置換されていてもよく、前記フェニル基及びナフチル基は、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ基、ハロ基又はシアノ基により置換されていてもよい）であり；
（Ａ）Ｒ2は、Ｈ又はＣ1−Ｃ6アルキル基であり、Ｒ15は、Ｈ又はＣ1−Ｃ6アルキル基であり、Ｘは、（ｉ）Ｃ1−Ｃ6アルキル基又はＣ3−Ｃ8シクロアルキル基により置換されていてもよい未分岐Ｃ2−Ｃ3アルキレン基であるか、以下の（ｉｉ）式：
−（ＣＨ2）n−Ｗ−（ＣＨ2）p−
（式中、Ｗは、Ｃ1−Ｃ6アルキル基により置換されていてもよいＣ5−Ｃ7シクロアルキレン基であり、ｎは、０又は１であり、ｐは０又は１である）
で表される基であるか、
（Ｂ）Ｒ15は、Ｈ又はＣ1−Ｃ6アルキル基であり、Ｒ2及びＸは、それらが結合している窒素原子とともに、アゼチジン−３−イル基、ピロリジン−３−イル基、ピペリジン−３−イル基、ピペリジン−４−イル基、ホモピペリジン−３−イル基又はホモピペリジン−４−イル基（これらの各々は、Ｃ1−Ｃ6アルキル基により置換されていてもよい）であるか、
（Ｃ）Ｒ2は、Ｈ又はＣ1−Ｃ6アルキル基であり、Ｒ15及びＸは、それらが結合している窒素原子とともに、アゼチジン−３−イル基、ピロリジン−３−イル基、ピペリジン−３−イル基、ピペリジン−４−イル基、ホモピペリジン−３−イル基又はホモピペリジン−４−イル基（これらの各々は、Ｃ1−Ｃ6アルキル基により置換されていてもよい）であり；
Ｒ3及びＲ4は、それらが結合している窒素原子とともに、アゼチジニル基、ピロリジニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、ホモピペリジニル基又はホモピペラジニル基（これらの各々は、環窒素又は炭素原子上でＣ1−Ｃ6アルキル基又はＣ3−Ｃ8シクロアルキル基により置換されていてもよく且つ環窒素原子に隣接していない環炭素原子上で−ＮＲ6Ｒ7により置換されていてもよい）を表すか、
又はＲ3は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル基又はベンジル基であり、Ｒ4は、
（ａ）アゼチジン−３−イル基、ピロリジン−３−イル基、ピペリジン−３−イル基、ピペリジン−４−イル基、ホモピペリジン−３−イル基又はホモピペリジン−４−イル基（これらの各々は、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル基、フェニル基、ベンジル基又はｈｅｔにより置換されていてもよい）であるか、又は
（ｂ）−（Ｃ2−Ｃ6アルキレン）−Ｒ8、
（ｃ）−（Ｃ1−Ｃ6アルキレン）−Ｒ13、又は
（ｄ）Ｃ1−Ｃ6アルキル基又はＣ3−Ｃ8シクロアルキル基であり；
Ｒ5は、ＣＨ2ＯＨ又はＣＯＮＲ14Ｒ14であり；
Ｒ6及びＲ7は、各々独立してＨ又はＣ1−Ｃ6アルキル基であるか、それらが結合している窒素原子とともに、アゼチジニル基、ピロリジニル基又はピペリジニル基（前記アゼチジニル基、ピロリジニル基及びピペリジニル基は、Ｃ1−Ｃ6アルキル基により置換されていてもよい）を表し；
Ｒ8は、（ｉ）アゼチジン−１−イル基、ピロリジン−１−イル基、ピペリジン−１−イル基、モルホリン−４−イル基、ピペラジン−１−イル基、ホモピペリジン−１−イル基、ホモピペラジン−１−イル基又はテトラヒドロイソキノリン−１−イル基（これらの各々は、環炭素原子上でＣ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル基、フェニル基、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基、Ｒ9Ｒ9Ｎ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基、フルオロ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基、−ＣＯＮＲ9Ｒ9、−ＣＯＯＲ9又はＣ2−Ｃ5アルカノイル基により置換されていてもよく、且つ環窒素原子に隣接してない環炭素原子上でフルオロ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルコキシ基、ハロ基、−ＯＲ9、シアノ基、−Ｓ（Ｏ）mＲ10、−ＮＲ9Ｒ9、−ＳＯ2ＮＲ9Ｒ9、−ＮＲ9ＣＯＲ10又は−ＮＲ9ＳＯ2Ｒ10により置換されていてもよく、前記ピペラジン−１−イル基及びホモピペラジン−１−イル基は、前記Ｃ2−Ｃ6アルキレン基に結合していない前記環窒素原子上でＣ1−Ｃ6アルキル基、フェニル基、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ−（Ｃ2−Ｃ6）−アルキル基、Ｒ9Ｒ9Ｎ−（Ｃ2−Ｃ6）−アルキル基、フルオロ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基、Ｃ2−Ｃ5アルカノイル基、−ＣＯＯＲ10、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル基、−ＳＯ2Ｒ10、−ＳＯ2ＮＲ9Ｒ9又は−ＣＯＮＲ9Ｒ9により置換されていてもよい）であるか、又は
（ｉｉ）ＮＲ11Ｒ12であり；
Ｒ9は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル基又はフェニル基であり；
Ｒ10は、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル基又はフェニル基であり；
Ｒ11は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル基又はベンジル基であり；
Ｒ12は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル基、フェニル基、ベンジル基、フルオロ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基、−ＣＯＮＲ9Ｒ9、−ＣＯＯＲ10、Ｃ2−Ｃ5アルカノイル基又は−ＳＯ2ＮＲ9Ｒ9であり；
Ｒ13は、（ａ）フェニル基、ピリジン−２−イル基、ピリジン−３−イル基又はピリジン−４−イル基（これらの各々は、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ基、−（Ｃ1−Ｃ3アルキレン）−（Ｃ1−Ｃ6アルコキシ）基、ハロ基、シアノ基、−（Ｃ1−Ｃ3アルキレン）−ＣＮ、−ＣＯ2Ｈ、−（Ｃ1−Ｃ3アルキレン）−ＣＯ2Ｈ、−ＣＯ2（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、−（Ｃ1−Ｃ3アルキレン）−ＣＯ2（Ｃ1−Ｃ6アルキル）基、−（Ｃ1−Ｃ3アルキレン）−ＮＲ14Ｒ14、−ＣＯＮＲ14Ｒ14若しくは−（Ｃ1−Ｃ3アルキレン）−ＣＯＮＲ14Ｒ14により置換されていてもよい）であるか、又は（ｂ）アゼチジン−２−イル基、アゼチジン−３−イル基、ピロリジン−２−イル基、ピロリジン−３−イル基、ピペリジン−２−イル基、ピペリジン−３−イル基、ピペリジン−４−イル基、ホモピペリジン−２−イル基、ホモピペリジン−３−イル基又はホモピペリジン−４−イル基（これらの各々は、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル基、フェニル基、ベンジル基又はｈｅｔにより置換されていてもよい）であり；
Ｒ14は、Ｈ、又はシクロプロピル基により置換されていてもよいＣ1−Ｃ6アルキル基であり；
ｍは、０、１又は２であり；
Ｙは、ＣＯ、ＣＳ、ＳＯ2、又はＣ＝Ｎ（ＣＮ）であり；そして
Ｒ4及びＲ13の定義に使用されている「ｈｅｔ」は、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル基、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ基、Ｃ3−Ｃ8シクロアルコキシ基、ヒドロキシ基、オキソ基又はハロ基により置換されていてもよい、１〜４個の環窒素異種原子又は１若しくは２個の窒素環異種原子及び１個の酸素又は１個の硫黄環異種原子を有するＣ結合４〜６員複素環である］；
と、（ｂ）アドレナリン性β２受容体アゴニストとの吸入併用薬。
【請求項２】
前記式（Ｉ）で表されるアデノシンＡ2a受容体アゴニストは、６−［（２，２−ジフェニルエチル）アミノ］−９−｛（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−［（エチルアミノ）カルボニル］−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロ−２−フラニル｝−Ｎ−｛２−［（｛［１−（２−ピリジニル）−４−ピペリジニル］アミノ｝カルボニル）アミノ］エチル｝−９Ｈ−プリン−２−カルボキサミド、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物である、請求項１に記載の吸入併用薬併用薬。
【請求項３】
前記アドレナリン性β２受容体アゴニストが、サルメテロール、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物である、請求項１又は２に記載の吸入併用薬。
【請求項４】
前記アドレナリン性β２受容体アゴニストが、フォルモテロール、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物である、請求項１又は２に記載の吸入併用薬。
【請求項５】
薬剤として使用される、前記請求項のいずれかに記載の吸入併用薬。
【請求項６】
閉塞性気道疾患等の炎症疾患の治療において、同時、順次又は別個に投与される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の吸入併用薬。
【請求項７】
請求項１に記載の式（Ｉ）で表されるアデノシンＡ2a受容体アゴニストと、アドレナリン性β２受容体アゴニストと、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤又は担体とを含む、閉塞性気道疾患等の炎症疾患の治療において吸入経路により投与される、医薬組成物。
【請求項８】
前記式（Ｉ）で表されるアデノシンＡ2a受容体アゴニスト、及び前記アドレナリン性β２受容体アゴニストは、請求項２〜４のいずれか１項に記載のものである、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
請求項１に記載の式（Ｉ）で表されるアデノシンＡ2a受容体アゴニスト又はアドレナリン性β２受容体アゴニストの、閉塞性気道疾患等の炎症疾患の治療において吸入経路によりこれらの両方の物質を同時、順次又は別個に投与する薬剤の製造における使用。
【請求項１０】
前記式（Ｉ）で表されるアデノシンＡ2a受容体アゴニスト、及び前記アドレナリン性β２受容体アゴニストは、請求項２〜４のいずれか１項に記載のものである、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
閉塞性気道疾患等の炎症疾患の治療方法であって、効果的な量の、請求項１に記載の式（Ｉ）で表されるアデノシンＡ2a受容体アゴニストと、アドレナリン性β２受容体アゴニストとを、このような治療を必要としている哺乳動物に、吸入経路により同時、順次又は別個に投与する方法。
【請求項１２】
前記式（Ｉ）で表されるアデノシンＡ2a受容体アゴニスト、及び前記アドレナリン性β２受容体アゴニストは、請求項２〜４のいずれか１項に記載のものである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
閉塞性気道疾患等の炎症疾患の治療において、前記請求項１に記載の式（Ｉ）で表されるアデノシンＡ2a受容体アゴニスト、及びアドレナリン性β２受容体アゴニストを、同時、順次又は別個に投与するための吸入装置。
【請求項１４】
前記式（Ｉ）で表されるアデノシンＡ2a受容体アゴニスト、及び前記アドレナリン性β２受容体アゴニストは、請求項２〜４のいずれか１項に記載のものである、請求項１３に記載の装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アデノシンＡ2a受容体アゴニストとアドレナリン性β２受容体アゴニストとの吸入併用薬、投与用装置を含む医薬組成物、及びこのような併用薬の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
アデノシンＡ2a受容体アゴニストとアドレナリン性β２受容体アゴニストとの組み合わせは、閉塞性気道疾患等の炎症疾患、特に高度の気管支反射、炎症、気管支過剰反応及び気管支痙攣により悪化する、閉塞性気道疾患喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）等の閉塞性気道疾患の治療に有用である。
【０００３】
本発明により治療できる具体的な疾患としては、例えば、呼吸器疾患喘息、急性呼吸窮迫症候群、慢性肺炎症性疾患、気管支炎、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺（気道）疾患及び珪肺症並びに免疫系の疾患、例えば、アレルギー性鼻炎や慢性副鼻腔炎などがある。
【０００４】
アデノシンは、免疫反応及び炎症反応を含む広範な生理活性を有し、これらには受容体が介在し且つ少なくとも４種の形質膜受容体と相互作用する。これらの受容体は、一般的にＡ1、Ａ2a、Ａ2b及びＡ3と称される。アデノシン及びその類似体は、好中球及び好酸球をはじめとする非常に多種多様な免疫細胞及び炎症細胞を含む広範囲の抗炎症活性を有することが判明した。好中球に対するＡ2a受容体の活性により、反応性酸化剤、及びこれらの細胞によるエラスターゼ等の炎症の他のメディエータの産生が抑制されるだけでなく、β2−インテグリンの発現が減少する。
【０００５】
Ａ2a受容体は、リンパ球、好中球、好酸球、好塩基球、単球／マクロファージ、上皮細胞上、及びこれらが相互作用する血管内皮組織上に存在することが知られている。Ａ2a受容体に結合しているアデノシンは、多数の種類のこれらの細胞の活性に影響することにより、炎症を減少させることができる。例えば、Ａ2a受容体アゴニストは、好中球化学誘引物質、サイトカイン及び脂質産物等の生理的刺激により誘発された酸化種を著しく阻害する。
【０００６】
アデノシンＡ2a受容体が存在すると、好中球アデニリルシクラーゼが刺激され、細胞内環状ＡＭＰが増加する。増加した好中球環状ＡＭＰにより、次に、刺激された好中球酸化活性が低下する。種々の他の種類の炎症細胞に対する関連した作用により、Ａ2aアゴニストの抗炎症性が、好中球に対する阻害活性を超える。また、アデノシンは、エンドトキシン刺激単球／マクロファージＴＮＦαの放出を減少させる。また、内在性アデノシンだけでなくアデノシン類似体も、アデノシンＡ2a受容体に結合することにより、ヒト単球ＴＮＦα産生を減少させることが認められた。
【０００７】
インターロイキン−６（ＩＬ−６）及びインターロイキン−８（ＩＬ−８）のエンドトキシン刺激放出は、Ａ2aアデノシン受容体活性を示唆する程度の効力のアデノシン類似体により減少する。インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）は、単球からのエンドトキシン刺激ＴＮＦα放出を減少させる能力、酸化活性を阻害する能力、及び白血球接着分子の発現を低下させる能力があることから、抗炎症活性を有している。アデノシンは、刺激されたＩＬ−１０のヒト単球産生を高め、その結果、アデノシンがＡ2a受容体に結合することにより、関与することがある進行中の炎症反応の消散を促進する。
【０００８】
活性化された好酸球は、組織に移動し、アレルギー性及び非アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎及びアトピー性皮膚炎等の疾患において、細胞障害及び炎症を生じる。アデノシン及びアデノシンＡ2a受容体アゴニスト類似体は、好酸球上のＡ2a受容体に結合することにより、好中球に対するＡ2a受容体の阻害作用に似ている反応である、反応性酸素種の刺激放出を阻害する。
【０００９】
さらに、吸入Ａ2aアゴニストは、肺における作用を介して感作モルモットの肺への好酸球の漸増を阻害する（ＷＯ−Ａ−９９／６７２６３参照）。これは、Ａ2aアゴニストは動物において血管をリラックスさせ、血圧を低下させ、したがって、Ａ2aアゴニストの抗炎症作用は、末梢コンパートメントと比較して肺における活性についての高治療指数を有する吸入剤により理想的に生じることから、重要である。
【００１０】
アドレナリン性β受容体は、交感神経系において生じる。これには、少なくとも２種類がある。アドレナリン性β１受容体は、心臓においてみられ、アゴニストエピネフリン及びノルエピネフリンの作用を介して心拍数の調整において主要な役割を果たしている。アドレナリン性β２受容体は、肺における多数の種類の細胞（例えば、気道平滑筋細胞、上皮細胞及び各種炎症細胞）上に存在し、アドレナリン性β２受容体アゴニストは、有効な気管支拡張薬であり、気道平滑筋を弛緩させる。交感神経様作動アミンは、ＣＯＰＤ及び喘息等の部分的可逆性気道狭窄により特徴付けられる慢性気道疾患の治療に長年にわたって使用されており、最初は静脈内エピネフリンの形態で気管支拡張薬として使用された。後に、イソプレナリン等の吸入β−アドレナリン作動薬が使用された。これらは、β１受容体よりもβ２受容体に対して比較的非選択性であり、したがって、有効気管支拡張剤投与量で頻脈を生じた。より最近では、β２受容体に対してより選択性であるが、短時間作用性である、サルブタモール等の吸入β−アドレナリン作動薬が使用された。吸入β−アドレナリン作動薬であるフォルモテロール及びサルメテロールは、両方とも選択性があり且つ長時間作用性である。
【発明の開示】
【００１１】
このたび、驚くべきことに、特定のアデノシンＡ2a受容体アゴニストとアドレナリン性β２受容体アゴニストとを組み合わせることにより、これらの薬剤を単独及び他の公知の組み合わせで治療する場合と比較して、閉塞性気道疾患等の炎症疾患の治療において顕著な利点があることが判明した。この組み合わせの利点は、疾患の病状に最も適当な機構、すなわち、不適当な炎症の有効な抑制とともに、アドレナリン性β２受容体アゴニズムにより、気道直径を最適に制御できることである。このように、疾患の症状は、せき、粘液産生及び呼吸困難をひどくさせる不適当な気道神経反射を正すことにより制御される。アドレナリン性β２受容体アゴニストとＡ2aアゴニストの両方を吸入径路を介して供給することにより、望ましくない末梢効果を生じることなく各種のメリットが得られる。さらに、本発明の特定の組み合わせにより、各種類の薬剤を最大許容投与量で単独で使用した場合よりも大きな効力の、予想外の相乗作用が得られる。
【００１２】
したがって、本発明によれば、以下の（ａ）式：
【化１】
2005513041.tif 000002
で表されるアデノシンＡ2a受容体アゴニスト又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物［式中、
Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル基又はフルオレニル基（前記Ｃ1−Ｃ6アルキル基は、各々独立してフェニル基及びナフチル基から選択された１個又は２個の置換基により置換されていてもよく、前記フェニル基及びナフチル基は、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ基、ハロ基又はシアノ基により置換されていてもよい）であり；
（Ａ）Ｒ2は、Ｈ又はＣ1−Ｃ6アルキル基であり、Ｒ15は、Ｈ又はＣ1−Ｃ6アルキル基であり、Ｘは、（ｉ）Ｃ1−Ｃ6アルキル基又はＣ3−Ｃ8シクロアルキル基により置換されていてもよい未分岐Ｃ2−Ｃ3アルキレン基であるか、以下の（ｉｉ）式：
−（ＣＨ2）n−Ｗ−（ＣＨ2）p−
（式中、Ｗは、Ｃ1−Ｃ6アルキル基により置換されていてもよいＣ5−Ｃ7シクロアルキレン基であり、ｎは、０又は１であり、ｐは０又は１である）
で表される基であるか、
（Ｂ）Ｒ15は、Ｈ又はＣ1−Ｃ6アルキル基であり、Ｒ2及びＸは、それらが結合している窒素原子とともに、アゼチジン−３−イル基、ピロリジン−３−イル基、ピペリジン−３−イル基、ピペリジン−４−イル基、ホモピペリジン−３−イル基又はホモピペリジン−４−イル基（これらの各々は、Ｃ1−Ｃ6アルキル基により置換されていてもよい）であるか、
（Ｃ）Ｒ2は、Ｈ又はＣ1−Ｃ6アルキル基であり、Ｒ15及びＸは、それらが結合している窒素原子とともに、アゼチジン−３−イル基、ピロリジン−３−イル基、ピペリジン−３−イル基、ピペリジン−４−イル基、ホモピペリジン−３−イル基又はホモピペリジン−４−イル基（これらの各々は、Ｃ1−Ｃ6アルキル基により置換されていてもよい）であり；
Ｒ3及びＲ4は、それらが結合している窒素原子とともに、アゼチジニル基、ピロリジニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、ホモピペリジニル基又はホモピペラジニル基（これらの各々は、環窒素又は炭素原子上でＣ1−Ｃ6アルキル基又はＣ3−Ｃ8シクロアルキル基により置換されていてもよく且つ環窒素原子に隣接していない環炭素原子上で−ＮＲ6Ｒ7により置換されていてもよい）を表すか、
又はＲ3は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル基又はベンジル基であり、Ｒ4は、
（ａ）アゼチジン−３−イル基、ピロリジン−３−イル基、ピペリジン−３−イル基、ピペリジン−４−イル基、ホモピペリジン−３−イル基又はホモピペリジン−４−イル基（これらの各々は、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル基、フェニル基、ベンジル基又はｈｅｔにより置換されていてもよい）であるか、又は
（ｂ）−（Ｃ2−Ｃ6アルキレン）−Ｒ8、
（ｃ）−（Ｃ1−Ｃ6アルキレン）−Ｒ13、又は
（ｄ）Ｃ1−Ｃ6アルキル基又はＣ3−Ｃ8シクロアルキル基であり；
Ｒ5は、ＣＨ2ＯＨ又はＣＯＮＲ14Ｒ14であり；
Ｒ6及びＲ7は、各々独立してＨ又はＣ1−Ｃ6アルキル基であるか、それらが結合している窒素原子とともに、アゼチジニル基、ピロリジニル基又はピペリジニル基（前記アゼチジニル基、ピロリジニル基及びピペリジニル基は、Ｃ1−Ｃ6アルキル基により置換されていてもよい）を表し；
Ｒ8は、（ｉ）アゼチジン−１−イル基、ピロリジン−１−イル基、ピペリジン−１−イル基、モルホリン−４−イル基、ピペラジン−１−イル基、ホモピペリジン−１−イル基、ホモピペラジン−１−イル基又はテトラヒドロイソキノリン−１−イル基（これらの各々は、環炭素原子上でＣ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル基、フェニル基、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基、Ｒ9Ｒ9Ｎ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基、フルオロ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基、−ＣＯＮＲ9Ｒ9、−ＣＯＯＲ9又はＣ2−Ｃ5アルカノイル基により置換されていてもよく、且つ環窒素原子に隣接してない環炭素原子上でフルオロ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルコキシ基、ハロ基、−ＯＲ9、シアノ基、−Ｓ（Ｏ）mＲ10、−ＮＲ9Ｒ9、−ＳＯ2ＮＲ9Ｒ9、−ＮＲ9ＣＯＲ10又は−ＮＲ9ＳＯ2Ｒ10により置換されていてもよく、前記ピペラジン−１−イル基及びホモピペラジン−１−イル基は、前記Ｃ2−Ｃ6アルキレン基に結合していない前記環窒素原子上でＣ1−Ｃ6アルキル基、フェニル基、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ−（Ｃ2−Ｃ6）−アルキル基、Ｒ9Ｒ9Ｎ−（Ｃ2−Ｃ6）−アルキル基、フルオロ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基、Ｃ2−Ｃ5アルカノイル基、−ＣＯＯＲ10、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル基、−ＳＯ2Ｒ10、−ＳＯ2ＮＲ9Ｒ9又は−ＣＯＮＲ9Ｒ9により置換されていてもよい）であるか、又は
（ｉｉ）ＮＲ11Ｒ12であり；
Ｒ9は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル基又はフェニル基であり；
Ｒ10は、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル基又はフェニル基であり；
Ｒ11は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル基又はベンジル基であり；
Ｒ12は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル基、フェニル基、ベンジル基、フルオロ−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル基、−ＣＯＮＲ9Ｒ9、−ＣＯＯＲ10、Ｃ2−Ｃ5アルカノイル基又は−ＳＯ2ＮＲ9Ｒ9であり；
Ｒ13は、（ａ）フェニル基、ピリジン−２−イル基、ピリジン−３−イル基又はピリジン−４−イル基（これらの各々は、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ基、−（Ｃ1−Ｃ3アルキレン）−（Ｃ1−Ｃ6アルコキシ）基、ハロ基、シアノ基、−（Ｃ1−Ｃ3アルキレン）−ＣＮ、−ＣＯ2Ｈ、−（Ｃ1−Ｃ3アルキレン）−ＣＯ2Ｈ、−ＣＯ2（Ｃ1−Ｃ6アルキル）、−（Ｃ1−Ｃ3アルキレン）−ＣＯ2（Ｃ1−Ｃ6アルキル）基、−（Ｃ1−Ｃ3アルキレン）−ＮＲ14Ｒ14、−ＣＯＮＲ14Ｒ14若しくは−（Ｃ1−Ｃ3アルキレン）−ＣＯＮＲ14Ｒ14により置換されていてもよい）であるか、又は（ｂ）アゼチジン−２−イル基、アゼチジン−３−イル基、ピロリジン−２−イル基、ピロリジン−３−イル基、ピペリジン−２−イル基、ピペリジン−３−イル基、ピペリジン−４−イル基、ホモピペリジン−２−イル基、ホモピペリジン−３−イル基又はホモピペリジン−４−イル基（これらの各々は、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル基、フェニル基、ベンジル基又はｈｅｔにより置換されていてもよい）であり；
Ｒ14は、Ｈ、又はシクロプロピル基により置換されていてもよいＣ1−Ｃ6アルキル基であり；
ｍは、０、１又は２であり；
Ｙは、ＣＯ、ＣＳ、ＳＯ2、又はＣ＝Ｎ（ＣＮ）であり；そして
Ｒ4及びＲ13の定義に使用されている「ｈｅｔ」は、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル基、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ基、Ｃ3−Ｃ8シクロアルコキシ基、ヒドロキシ基、オキソ基又はハロ基により置換されていてもよい、１〜４個の環窒素異種原子又は１若しくは２個の窒素環異種原子及び１個の酸素又は１個の硫黄環異種原子を有するＣ結合４〜６員複素環である］；
と、（ｂ）アドレナリン性β２受容体アゴニストとの吸入併用薬が提供される。
【００１３】
さらに、本発明によれば、（ａ）上記した式（Ｉ）で表されるアデノシンＡ2a受容体アゴニストと、（ｂ）アドレナリン性のβ２受容体アゴニストとを含む、薬剤として使用される吸入併用薬が提供される。
【００１４】
さらに、本発明によれば、閉塞性気道疾患等の炎症疾患の治療において吸入経路により、同時、順次又は別個に投与される、（ａ）上記した式（Ｉ）で表されるアデノシンＡ2a受容体アゴニストと、（ｂ）アドレナリン性β２受容体アゴニストとを含む、併用薬が提供される。
【００１５】
さらに、本発明によれば、上記の式（Ｉ）で表されるアデノシンＡ2a受容体アゴニストと、アドレナリン性β２受容体アゴニストと、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤又は担体とを含む、閉塞性気道疾患等の炎症疾患の治療において吸入経路により投与される、医薬組成物が提供される。
【００１６】
さらに、本発明によれば、上記の式（Ｉ）で表されるアデノシンＡ2a受容体アゴニスト又はアドレナリン性β２受容体アゴニストの、閉塞性気道疾患等の炎症疾患の治療において吸入経路によりこれらの両方の物質を同時、順次又は別個に投与する薬剤の製造における使用が提供される。
【００１７】
さらに、本発明によれば、閉塞性気道疾患等の炎症疾患の治療方法であって、効果的な量の、上記した式（Ｉ）で表されるアデノシンＡ2a受容体アゴニストと、アドレナリン性β２受容体アゴニストとを、このような治療を必要としている哺乳動物に、吸入経路により同時、順次又は別個に投与する方法が提供される。
【００１８】
さらに、本発明によれば、閉塞性気道疾患等の炎症疾患の治療において、上記した式（Ｉ）で表されるアデノシンＡ2a受容体アゴニスト、及びアドレナリン性β２受容体アゴニストを、同時、順次又は別個に投与するための吸入装置が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
式（Ｉ）で表される化合物の調製については、国際特許出願ＰＣＴ／ＩＢ０１／００９７３（ＷＯ−Ａ−０１／９４３６８として公開）に記載されている。
【００２０】
本発明で使用するのに好ましいアデノシンＡ2a受容体アゴニストには、６−［（２，２−ジフェニルエチル）アミノ］−９−｛（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−［（エチルアミノ）カルボニル］−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロ−２−フラニル｝−Ｎ−｛２−［（｛［１−（２−ピリジニル）−４−ピペリジニル］アミノ｝カルボニル）アミノ］エチル｝−９Ｈ−プリン−２−カルボキサミド（ＷＯ−Ａ−０１／９４３６８の実施例８及び３５）並びにその薬学的に許容される塩及び溶媒和物などがある。
【００２１】
好ましくは、本発明による併用薬において使用されるアドレナリン性β２受容体アゴニストは、選択的アドレナリン性β２受容体アゴニストである。すなわち、アドレナリン性β２受容体に対して、全ての他の公知のアドレナリン性β受容体よりも親和性が大きい。好ましくは、このような選択的アドレナリン性β２受容体アゴニストの親和性は、アドレナリン性β２受容体に対して、他のアドレナリン性β受容体に対する親和性と比較して、少なくとも１００倍大きい。
【００２２】
本発明で使用される好ましいアドレナリン性β２受容体アゴニストには、サルメテロール、フォルモテロール並びにその薬学的に許容される塩及び溶媒和物などがある。
【００２３】
本発明で使用される、アデノシンＡ2a受容体アゴニストとアドレナリン性β２受容体アゴニストとの併用薬の具体的に好ましいものには、
６−［（２，２−ジフェニルエチル）アミノ］−９−｛（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−［（エチルアミノ）カルボニル］−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロ−２−フラニル｝−Ｎ−｛２−［（｛［１−（２−ピリジニル）−４−ピペリジニル］アミノ｝カルボニル）アミノ］エチル｝−９Ｈ−プリン−２−カルボキサミド又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物と、サルメテロール又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物との併用薬；及び
６−［（２，２−ジフェニルエチル）アミノ］−９−｛（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−５−［（エチルアミノ）カルボニル］−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロ−２−フラニル｝−Ｎ−｛２−［（｛［１−（２−ピリジニル）−４−ピペリジニル］アミノ｝カルボニル）アミノ］エチル｝−９Ｈ−プリン−２−カルボキサミド又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物と、フォルモテロール又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物との併用薬などがある。
【００２４】
本発明で使用されるアデノシンＡ2a受容体アゴニスト又はアドレナリン性β２受容体アゴニストは、必要に応じて薬学的に許容される塩又は溶媒和物の形態で利用できる。このような塩は、酸付加塩又は塩基塩でよい。
【００２５】
好適な酸付加塩が、非毒性塩を形成する酸から形成され、その例として、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、リン酸水素塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、グルコン酸塩、コハク酸塩、サッカリン酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩及びパモエート塩が挙げられる。
【００２６】
好適な塩基塩が、非毒性塩を形成する塩基から形成され、その例として、ナトリウム塩、カリウム塩、アルミニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、亜鉛塩及びジエタノールアミン塩が挙げられる。
【００２７】
好適な塩についての詳細については、Ｂｅｒｇｅ等、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、６６、１−１９、１９７７を参照のこと。
【００２８】
本発明で使用されるアデノシンＡ2a受容体アゴニスト及びアドレナリン性β２受容体アゴニストの薬学的に許容される溶媒和物又はそれらの塩としては、それらの水和物などがある。
【００２９】
本発明のアデノシンＡ2a受容体アゴニスト及びアドレナリン性β２受容体アゴニストは、一つ以上のポリモルフィック形態で存在することができる。
【００３０】
本発明のアデノシンＡ2a受容体アゴニスト及びアドレナリン性β２受容体アゴニストは、一つ以上の不斉炭素原子を含有することができ、したがって、２種以上の立体異性形態（例えば、Ｒ、Ｒ’フォルモテロールが、好ましい実施態様である）で存在する。このようなアゴニストがアルケニル基又はアルケニレン基を含有するとき、シス／トランス（又はＺ／Ｅ）異性が生じることもある。本発明は、本発明の化合物のこれらの個々の立体異性体及び必要に応じて、それらの個々の互変異性体をそれらの混合物とともに含む。
【００３１】
ジアステレオ異性体又はシス及びトランス異性体の分離は、通常の方法、例えば、本発明の化合物又はその好適な塩若しくは誘導体の立体異性混合物の分別結晶、クロマトグラフィー又はＨ．Ｐ．Ｌ．Ｃ．によりおこなうことができる。また、本発明の化合物の個々の鏡像体は、対応する光学的に純粋な中間体から調製するか、又は好適なキラル支持体を用いた対応のラセミ体のＨ．Ｐ．Ｌ．Ｃ．による等の分割によるか、必要に応じて対応のラセミ体と好適な光学的に活性な酸又は塩基との反応により形成されたジアステレオ異性体塩の分別結晶によっても調製できる。
【００３２】
また、本発明は、本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩の全ての好適な同位体変形物も含む。本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩の同位体変形物は、少なくとも一つの原子が、原子数が同じであるが、原子質量が通常自然にみられる原子質量とは異なる原子により置き換えられているものとして定義される。本発明の化合物及びそれらの薬学的に許容される塩に組み込まれることができる同位体としては、例えば、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素及び塩素の同位体、例えば、それぞれ2Ｈ、3Ｈ、13Ｃ、14Ｃ、15Ｎ、17Ｏ、18Ｏ、31Ｐ、32Ｐ、35Ｓ、18Ｆ及び36Ｃｌが挙げられる。本発明の化合物及びそれらの薬学的に許容される塩のある種の同位体変形物は、例えば、3Ｈ又は14Ｃ等の放射性同位体が組み込まれているものは、薬物及び/又は基質組織分布の研究に有用である。三重水素化された、すなわち、3Ｈ、及び炭素−１４、すなわち、14Ｃ、同位体は、調製の容易性及び検出性の面で特に好ましい。さらに、デューテリウム、すなわち、2Ｈ等の同位体で置換することにより、より大きな代謝安定性、例えば、増加した生体内半減期又は減少した必要投与量から一定の治療上の利点が得られ、したがって、ある状況では好ましいことがある。
【００３３】
本発明の併用薬を用いて治療できる疾患には、喘息、慢性又は急性気管支収縮、慢性気管支炎、小気道閉塞、気腫、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎を有するＣＯＰＤ、肺気腫、又はそれらに関連する呼吸困難、及び不可逆的進行性気道閉塞により特徴付けられるＣＯＰＤなどがあるが、これらには限定されない。
【００３４】
喘息
本発明の治療剤の組み合わせにより治療できる最も重要な呼吸器疾患の一つは、世界的にますます一般になりつつある慢性障害であり、断続的可逆性気管閉塞、気道過敏症及び炎症により特徴付けられる喘息である。喘息の原因は、まだ判明していないが、喘息の最も一般的な病理学的表現は、気道の炎症であり、これは、軽度な喘息を患っている患者の気道においても顕著である。この炎症は、反射気道現象を動かし、その結果、血漿タンパク質溢血、呼吸困難及び気管支収縮が生じる。気管支バイオプシー及び洗浄の研究から、喘息には、マスト細胞、好酸球及びＴリンパ球による患者の気道への浸潤を伴うことが明白になった。アトピー性喘息患者における気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）により、インターロイキン（ＩＬ）−３、インターロイキン（ＩＬ）−４、インターロイキン（ＩＬ）−５及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）の活性化が示され、Ｔヘルパー２（Ｔｈ−２）様Ｔ細胞集団の存在を示唆している。
【００３５】
本発明の治療剤の組み合わせは、アトピー性喘息及び非アトピー性喘息の治療に有用である。用語「アトピー」は、一般の環境の抗原に対するＩ型（即時）過敏性反応の発現に関する遺伝素質を意味する。最も一般的な臨床的徴候は、アレルギー性鼻炎であり、一方、気管支喘息、アトピー性皮膚炎及び食物アレルギーの発生頻度はもっと低い。したがって、本明細書において使用される表現「アトピー性喘息」は、「アレルギー性喘息」、すなわち、感作したヒトにおけるアレルギーの発現である気管支喘息と同意語であることを意図している。本明細書で使用されている用語「非アトピー性喘息」とは、全ての他の喘息、とりわけ種々の因子、例えば、激しい運動、刺激性粒子、心理的ストレス等により引き起こされる本態性又は「真の」喘息を意味することを意図する。
【００３６】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）
本発明の治療剤の組み合わせは、さらに慢性気管支炎、肺気腫又はそれらと関連する呼吸困難を含むＣＯＰＤ又はＣＯＡＤの治療に有用である。ＣＯＰＤは、不十分に可逆性の進行性気道閉塞により特徴付けられる。慢性気管支炎は、大きな軟骨組織気道における粘膜下組織の粘液分泌腺の過形成及び肥大と関連している。ゴブレット細胞の過形成、粘膜及び粘膜下の炎症細胞浸潤、浮腫、繊維症、粘液栓並びに増加した平滑筋は、全て、終末細気管支及び呼吸細気管支にみられる。小気道は、気道閉塞の主要部位であることが知られている。気腫は、肺胞壁の破壊及び肺弾力性の損失により特徴付けられる。また、多数の危険因子は、ＣＯＰＤの出現に関連していることが確認された。喫煙とＣＯＰＤとの間の関連は、十分に確立している。他の危険因子には、炭塵及び種々の遺伝因子への暴露などがある。Ｓａｎｄｆｏｒｄ等、「Ｇｅｎｅｔｉｃ  ｒｉｓｋ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅ（慢性閉塞性肺疾患の遺伝的危険因子）」、Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．１０  １３８０−１３９１、１９９７参照。ＣＯＰＤの出現率は増加し、それは、先進工業国の人口に対する顕著な経済的負担を表す。また、ＣＯＰＤは、それ自体臨床的に、慢性呼吸不全を有する重度障害状態の患者に対する障害なしに、単純慢性気管支炎からの広範な変化を示す。
【００３７】
ＣＯＰＤは、喘息の場合と同様に気道の炎症により特徴付けられるが、気管支肺胞洗浄液及び患者の唾液に見られる炎症細胞は、好酸球ではなく、好中球及びマクロファージである。また、高レベルの炎症伝達物質は、ＩＬ−８、ＬＴＢ4及びＴＮＦ−α等のＣＯＰＤ患者にもみられ、このような患者の気管支の表面上皮及び上皮下組織は、Ｔリンパ球及びマクロファージにより浸潤されることが判明した。ＣＯＰＤ患者の症候性軽減は、βアゴニスト及び抗コリン作用性気管支拡張剤を使用することによって可能であるが、疾病の進行は変更のないままである。ＣＯＰＤは、テオフィリンを用いて治療されてきたが、大きな成功はなかった。これは、一部には、望ましくない効果を生じやすいことによる。また、ステロイド剤は、抗炎症剤として比較的効果がないため、ＣＯＰＤにおいて満足のいく治療剤として大きな期待をいだかせるにはいたらなかった。
【００３８】
したがって、ＣＯＰＤ並びにその関連及び含まれる閉塞気道疾患を治療に本発明の治療剤の組み合わせを使用することにより、当該技術分野において大きな進歩がなされる。本発明は、所望の治療目的が、本発明の治療剤の組み合わせを利用することにより得られる方法について、いずれの特定の作用機序や仮説には限定されない。
【００３９】
気管支炎及び気管支拡張
本発明の治療剤の組み合わせにより得られる上記した特定及び多様な阻害活性によれば、どのような種類、病因又は病原の気管支炎、例えば、短期間であるが、重度の進行があり、冷気にあたったり、刺激性物質の呼気、又は急性感染により生じる急性気管支炎；多量の粘液膿性の排泄をともなう急性気管支炎の形態である風邪気管支炎；急性気管支炎の反復発作又は慢性全身疾患のため、程度の差はあるが休止段階後に再発する傾向が著しい長期持続型気管支炎であり、咳発作、少量又は多量の吐出物、及び肺組織における二次変化により特徴付けられる、慢性気管支炎；粘りのある唾液の少量の分泌により特徴付けられる乾性気管支炎；喘息を患っているヒトにおける気道感染後に気管支痙攣の症状の発現によって特徴付けられる症候群である感染性喘息様気管支炎；湿咳に関連する気管支炎である喀痰を伴う気管支炎の治療に有用である。
【００４０】
アトピー性喘息又は非アトピー性喘息、ＣＯＰＤ又は他の慢性炎症性気道疾患を治療するために本発明の治療剤の組み合わせ（併用薬）を使用することは、以下で説明する血漿の浸出及び気管支痙攣モデル等の気道における反射現象の阻害の当該技術分野において公知の多数の異なるモデルを使用することにより、確定及び実証することができる。
【００４１】
気管支拡張薬活性 − ｃＡＭＰは、平滑筋の弛緩に関与しているだけでなく、気道平滑筋の増殖に対して全体的な阻害作用を示す。これらは、両方とも、本発明の成分によるＡ２ａ受容体の活性化から生じることができる。気道平滑筋の肥大及び過形成は、ｃＡＭＰにより調節でき、これらの状態は、慢性喘息の一般的な形態学的特徴である。
【００４２】
アトピー性喘息又は非アトピー性喘息、ＣＯＰＤ又は他の慢性炎症性気道疾患を治療するために本発明の治療剤の組み合わせを使用することは、以下で説明するモデルを含む当該技術分野において公知の多数の異なるモデルを使用することにより、確定及び実証することができる。
【００４３】
生体外鎮咳・気管支拡張活性  − モルモットの気管の平滑筋の弛緩を生じさせるための本発明の治療剤の併用薬の能力は、以下の試験操作により示される。モルモット（３５０〜５００ｇ）を、ペントタールナトリウム（１００ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）で殺す。気管を、解剖し、長さ２〜３ｃｍの切片を摘出する。気管を、深さ３〜５ｍｍの組織環とするように交互軟骨プレートで横断面で横断させる。近位環及び末端環を捨てる。個々の環を、ステンレス鋼支持体上に垂直に取り付ける。それらのうちの一つを、臓器浴の底部に固定し、一方、他のものは、等長トランスデューサに取り付ける。環を、３７℃でクレブス液に入れ（組成、μＭ：ＮａＨＣＯ3  ２５；ＮａＣｌ  １１３；ＫＣｌ  ４．７；ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ  １．２；ＫＨ2ＰＯ4  １．２；ＣａＣｌ2  ２．５；グルコース１１．７）、Ｏ2／ＣＯ2（９５：５、ｖ／ｖ）で満たした。このようにして作製した環は、電場刺激により収縮する。鎮痙活性を確認するために、本発明の治療剤の試験併用薬を、生理食塩水に溶解し、臓器浴に量を増加しながら、５分間隔で添加して、積算濃度−効果曲線を得る。
【００４４】
上記試験モデルにおいて、本発明の治療剤の組み合わせは、一般的に０．００１〜１．０μＭの範囲の濃度で、モルモットの気管環試料の電場刺激収縮を抑制する。
【００４５】
ヒト気管支の弛緩  − 癌の手術中に切り裂いたヒトの肺の試料を、取り出し後３日以内に得る。小気管支（内径＝約２〜５ｍｍ）を切除し、切断して切片とし、１．８Ｍジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）と０．１Ｍスクロースを凍結保護剤として含有するウシ胎児血清（ＦＣＳ）で満たした２ｍｌ液体窒素保存アンプルに入れる。アンプルを、ポリスチロールボックス（１１×１１×２２ｃｍ）に入れ、−７０℃に維持したフリーザー中で約０．６℃／ｍの平均冷却速度でゆっくりと凍結させる。３〜１５時間後、アンプルを液体窒素(-１９６℃)に移し、使用するまでそこに保存する。使用前に、組織を３０〜６０分間−７０℃に暴露してから、３７℃の水浴にアンプルを入れて２．５分以内で解凍する。その後、気管支片を、３７℃のクレブス−ヘンゼライト溶液（μＭ：ＮａＣｌ  １１８、ＫＣｌ  ４．７、ＭｇＳＯ4  １．２、ＣａＣｌ2  １．２、ＫＨ2ＰＯ4  １．２、ＮａＨＣＯ3  ２５、グルコース１１、ＥＤＴＡ０．０３）を入れた皿に入れてすすぎ、環状に切断し、臓器浴１０ｍｌに懸濁させて、予荷重約１ｇ下で等長張力記録をおこなう。電場刺激を印加して張力をさらに増加させる。これにより、気道試料における神経の活性化を促し、アセチルコリン及び他の神経由来メディエイタを放出することにより張力を発生させることが知られている。累積的添加により、濃度-反応曲線を作成する。この場合、最大効果が前の濃度により得られたときに、各濃度を加える。パパベリン（３００μＭ）を、濃度-反応曲線の終わりに添加して、気管支環を完全に弛緩させる。この効果を、１００％弛緩とする。
【００４６】
上記試験モデルにおいて、本発明の治療剤の組み合わせにより、０．００１〜１．０μＭの濃度範囲で、ヒト気管支環試料の濃度関連弛緩が一般的に生じる。好ましい実施態様では、活性濃度は、５．０ｎＭ〜５００ｎＭの範囲である。
【００４７】
カプサイチン誘発気管支収縮の抑制  −  実験前に食料や水を自由に得ることができるようにしてあった雄のダンキン−ハートレイ（Ｄｕｎｋｉｎ−Ｈａｒｔｌｅｙ）モルモット（４００〜８００ｇ）を、ナトリウムフェノバルビタール（１００ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．［腹腔内］）で麻酔する。直腸検温器により制御した加熱パッドを用いて３７℃に維持した動物を、空気と酸素との混合物（４５：５５  ｖ／ｖ）を用いて気管カニューレにより通気（約８ｍｌ／ｋｇ、１Ｈｚ）する。通気は、呼吸ポンプと直結した差圧変換器に接続した呼吸タコメータにより、気管で監視する。胸部内の圧力変化を、気管と胸部との間の圧力差を測定し且つ表示できるように、差圧変換器を用いて、胸郭内カニューレにより直接監視する。空気流と経肺圧のこれらの測定値から、気道抵抗（Ｒ1ｃｍＨ2Ｏ／ｌ／ｓ）とコンプライアンス（Ｃｄdyn）の両方を、各呼吸サイクルについて、デジタル電子呼吸分析器を用いて計算する。血圧と心拍数を、圧力変換器を用いて頚動脈から記録する。
【００４８】
基底抵抗とコンプライアンスについての値が安定であるとき、気管支収縮の急性エピソードを、カプサイチンの静脈内ボーラスにより誘発させる。カプサイチンを、１００％エタノールに溶解し、リン酸緩衝生理食塩水で希釈する。カプサイチンに対する反応が安定であるとき（計算によれば、１０分間隔で２〜３回投与後）に、本発明の治療剤の試験併用薬を投与する。気管支収縮の逆反応を、気管内若しくは十二指腸内滴注又は静脈内ボーラス注射後に１〜８時間にわたって評価する。鎮咳・気管支拡張活性を、カプサイチンを注入後に、初期最大抵抗（ＲD）の阻害率として表す。ＥＤ50値は、カプサイチンにより誘発された抵抗の増加の５０％減少を生じる投与量を表す。作用の持続時間は、気管支収縮が５０％以上減少した場合の時間（分）として定義される。血圧（ＢＰ）及び心拍数（ＨＲ）に対する影響は、ＥＤ20値、すなわち、投与５分後に測定したときにＢＰ又はＨＲが２０％減少する投与量により特徴付けられる。
【００４９】
上記試験モデルでは、本発明の治療剤の組み合わせにより、一般的に０．００１〜０．１ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｔ．［気管内］の範囲の投与量で気管支拡張活性を示す。さらに、気管内に組み合わせて供給したときに、鎮咳・気管支拡張に対して、少なくとも付加的阻害作用を示す（各成分は、単独で観察された制御反応の５０％超を阻害できる）。
【００５０】
ＬＰＳ誘発肺好中球増加症  −  肺における好中球に対するレクルートメント及び活性化は、ＣＯＰＤ及び重度の喘息における重要な病理学的特徴と考えられる。その結果、動物におけるこれらのエンドポイントのいずれか又は両方の阻害により、本発明の有用性を支持する確証が得られる。
【００５１】
雄のウィスター−アルビノ（Ｗｉｓｔａｒ−Ａｌｂｉｎｏ）ラット（１５０〜２５０ｇ）又は雄のダンキン−ハートレイ（Ｄｕｎｋｉｎ−Ｈａｒｔｌｅｙ）モルモット（４００〜６００ｇ）を、短時間の全身麻酔下、吸入又は気管内（ｉ．ｔ．）滴注により、試験品を単独又は組み合わせて予備処理する。化合物を投与してから１〜２４時間後、動物に、細菌性リポ多糖（ＬＰＳ）の吸入エアゾールを十分にチャレンジして、続いての１〜２４時間にわたって、肺好中球増加症を顕著に誘発させる。好中球増加症を、気管支洗浄液中の細胞計数によるか、又は肺洗浄液又は組織中の好中球産物を測定することにより評価する。この試験系において、本発明の治療剤は、一般的に０．０００１〜０．１ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｔ．の範囲の投与量で抗炎症活性を示す。予想外にも、併用薬を気管内に供給すると、成分の一つが、それ自体では顕著な抗炎症効果をしめさないにもかかわらず、炎症に対して少なくとも付加的効果が得られる。さらに、成分のうちの一つの高投与量による等価抗炎症効果が、本発明におけるような組み合わせで使用したときにより低投与量で観察される。これにより、全身の望ましくない作用を最小限に抑えることができる。
【００５２】
アレルギー性モルモットのアッセイ − 呼吸困難及び気管支痙攣の症状、すなわち、困難な呼吸又は強制呼吸及び肺抵抗の増加、並びに炎症の症状、すなわち、肺好中球増加症及び好酸球増加症に対する、本発明の治療剤の併用薬の治療効果を評価する試験において、ダンキン−ハートレイ（Ｄｕｎｋｉｎ−Ｈａｒｔｌｅｙ）モルモット（体重４００〜６００ｇ）を利用する。
【００５３】
この試験で使用される卵アルブミン（ＥＡ）、グレードＶ、結晶化及び凍結乾燥した水酸化アルミニウム並びにマレイン酸メピラミンは、市販されている。チャレンジと続いての呼吸の読み取りを、内部寸法が１０×６×４インチである透明プラスチックボックス内で実施する。このボッスは、頭部と本体部が分離できるようになっている。使用に際して、これらの２つの部分を、クランプによりしっかりと互いに保持し、チャンバー間の気密シールを、軟質ゴムガスケットにより維持する。チャンバーのヘッドエンドの中央を通って、気密シールを介してネブライザーを挿入する。また、ボックスの各端には、出口もついている。呼吸タコメータを、ボックスの一端に挿入し、体積圧力変換器に接続し、次に適当なカプラーを介してダイノグラフに接続する。抗原をアエロゾル投与した後、出口を開け、呼吸タコメータを、チャンバーから分離する。次に、出口を閉め、呼吸タコメータとチャンバーを、呼吸パターンの記録中接続する。チャレンジについて、抗原を食塩水に添加した３％溶液２ｍｌを、各ネブライザーに入れ、１０ｐｓｉ及び流量８リットル／分で運転している小ダイヤフラムポンプから空気を用いてアエロゾルを発生させる。
【００５４】
モルモットに、ＥＡ１ｍｇと水酸化アルミニウム２００ｍｇを食塩水に含有する懸濁液１ｍｌを皮下及び腹腔内注射することにより、感作する。これらを、１２日目の後感作と２４日目の後感作との間使用する。反応のヒスタミン成分を排除するために、モルモットを、メピラミン２ｍｇ／ｋｇでアエロゾルチャレンジする３０分前に腹腔内前処理をおこなう。次に、モルモットを、食塩水にＥＡ３％を添加したアエロゾルに正確に１分間暴露した後、呼吸プロファイルを、さらに３０分間記録する。続いて、肺の炎症を、死後、１〜４８時間にわたって測定する。連続呼吸困難の存続時間を、呼吸記録から測定する。
【００５５】
本発明の治療剤の試験併用薬は、一般的にチャレンジの０．５〜４時間前に気管内投与又はアエロゾルにより投与される。化合物の組み合わせを、食塩水又は生体適合性溶媒に溶解する。化合物の活性を、ビヒクル処理対照群と比較して、呼吸困難及び気管支痙攣の症状の大きさ及び存続時間並びに/又は肺炎症の大きさを減少させるそれらの能力に基づいて測定する。本発明の治療剤の併用薬の試験を、一連の投与量で評価し、症状の存続時間を５０％抑制する投与量（ｍｇ／ｋｇ）として定義されるＥＤ50を得る。
【００５６】
抗炎症活性  −本発明の治療剤の併用薬の抗炎症活性を、好酸球又は好中球活性化の阻害により明らかにする。このアッセイにおいて、血液試料（５０ｍｌ）を、好酸球数が０．０６〜０．４７×１０9Ｌ-1の範囲である非アトピー性志願者から採取する。静脈血を、クエン酸三ナトリウム（３．８％、ｐＨ７．４）５ｍｌを入れてある遠心管に採取する。
【００５７】
非凝固血液を、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ；カルシウムもマグネシウムも含有していない）で希釈し（１：１、ｖ：ｖ）、５０ｍｌ遠心管に入れた等張パーコール（Ｐｅｒｃｏｌｌ）（密度１．０８２〜１．０８５ｇ／ｍｌ、ｐＨ７．４）１５ｍｌ上に重ねる。遠心分離（３０分、１０００ｘｇ、２０℃）後、血漿／Ｐｅｒｃｏｌｌ界面の単核細胞を、注意深く吸入し、捨てる。
【００５８】
好中球／好酸球／赤血球ペレット（容積約５ｍｌ）を、等張塩化アンモニウム溶液（ＮＨ4Ｃｌ、１５５ｍＭ；ＫＨＣＯ3、１０ｍＭ；ＥＤＴＡ、０．１ｍＭ；０〜４℃）３５ｍｌに穏やかに再懸濁する。１５分後、細胞を、ウシ胎児血清（２％、ＦＣＳ）を含有するＰＢＳ中で、２回（１０分、４００ｘｇ、４℃）洗浄する。
【００５９】
磁気セル分離システムを使用して、好酸球及び好中球を分離する。このシステムは、表面マーカーにより懸濁状態で細胞を分離でき、永久磁石を含む。これに、磁化できる鋼製マトリックスを備えたカラムを入れる。使用前に、このカラムを、ＰＢＳ／ＦＣＳで１時間平衡化した後、２０ｍｌシリンジにより、氷冷ＰＢＳ／ＦＣＳで逆行フラッシングする。２１Ｇ皮下針を、カラムのベースに取り付け、氷冷緩衝液１〜２ｍｌを、針により流出させる。
【００６０】
顆粒球を遠心分離した後、上清を吸入し、細胞を、磁粒（超常磁性粒子に接合させた抗ＣＤ１６モノクローナル抗体）１００μｌで穏やかに再懸濁する。好酸球／好中球／抗ＣＤ１６磁粒混合物を、氷上で４０分間インキュベーションした後、氷冷ＰＢＳ／ＦＣＳで５ｍｌまで希釈する。細胞懸濁液を、カラムの上部にゆっくりと導入し、タップを開いて、細胞をゆっくりと鋼製マトリックスに移動させる。次に、カラムを、ＰＢＳ／ＦＣＳ（３５ｍｌ）で洗浄する。この際、ＰＢＳ／ＦＣＳを、既に鋼製マトリックスにトラップされた磁気標識好中球を乱さないようにカラムの上部に慎重に添加する。非標識好酸球を、５０ｍｌ遠心管に集め、洗浄する（１０分、４００ｘｇ、４℃）。得られたペレットを、ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）５ｍｌに再懸濁して、細胞数及び純度を、使用前に評価できるようにする。分離カラムを、磁石から除去し、好中球画分を、溶離させる。次に、カラムを、ＰＢＳ（５０ｍｌ）及びエタノール(無水)で洗浄し、４℃で保存する。
【００６１】
総細胞数を、ミクロ細胞カウンタでカウントする。溶原液一滴を、試料に添加し、その３０秒後に再カウントして、赤血球による汚染を評価する。サイトスピン汚れを、Ｓｈａｎｄｏｎ  Ｃｙｔｏｓｐｉｎ２サイトスピナー（試料１００μｌ、３分間、５００ｒｐｍ）上に調製する。これらの試料を、染色し、ディファレンシャル細胞カウントを、光学顕微鏡により測定する。この際、少なくとも５００個の細胞を調査する。細胞の生存を、トリパンブルーの排除により評価する。
【００６２】
好酸球又は好中球を、ＨＢＳＳに希釈し、ピペットにより９６ウエルマイクロタイタープレート（ＭＴＰ）に入れる（細胞１〜１０×１０3個／ウェル）。各ウエルは、試料２００μｌを含む。試料は、細胞懸濁液１００μｌ；ＨＢＳＳ５０μｌ；ルシゲニン１０μｌ；活性化刺激薬２０μｌ；及び試験化合物２０μｌを含む。
【００６３】
試料を、試験化合物又はビヒクルとともに１０分間インキュベーションした後、活性化刺激薬ｆＭＬＰ（１〜１０μＭ）又はＣ５ａ（１〜１００ｎＭ）（ジメチルスルホキシドに溶解後、緩衝液で希釈して、最高使用溶媒濃度が１％（１００μＭ試験化合物で）とする）を添加する。ＭＴＰを攪拌して細胞と培地の混合を容易にし、ＭＴＰを、照度計に入れる。各ウエルの総化学発光と経時的プロファイルを、２０分間にわたって同時に測定し、結果を、任意単位で表すか、又は試験化合物の不存在下でのｆＭＴＰ誘発化学発光の百分率として表す。結果を、ヒルの式に入れ、ＩＣ50値を、自動的に計算する。
【００６４】
本発明の治療剤の組み合わせは、上記試験方法において、一般的に０．０００１〜０．５μＭの濃度範囲で活性である。好ましい実施態様では、活性濃度は、０．１ｎＭ〜１００ｎＭの範囲である。
【００６５】
本発明の治療剤の併用剤の抗炎症活性は、さらにラット気道への血漿溢出の阻害により明らかにされる。このアッセイでは、気管組織を採取し、血漿漏出の程度を測定する。このアッセイは、ＣＯＰＤを含むがこれには限定されない気道の他の慢性炎症疾患に等しく関連しており、したがって、そのセクションでは、再度総括はしない。
【００６６】
ウィスターアルビノ（Ｗｉｓｔａｒ  ａｌｂｉｎｏ）ラット（１５０〜２００ｇ）又はダンキン−ハートレイ（Ｄｕｎｋｉｎ−Ｈａｒｔｌｅｙ）モルモット（４５０〜６００ｇ）を、ナトリウムペントバルビトンで麻酔し、静脈及び動脈カニューレを取り付ける。血漿蛋白に結合させるためのＥｖａｎｓ  Ｂｌｕｅ染料を、静脈内投与（３０ｍｇ／ｋｇ）する。１０分後、試験薬剤を気管内投与し、１０分後、カプサイチンを静脈内投与（３ｕｇ／ｋｇ）する。３０分後、気管組織を取り出し、ホルムアミドに一晩抽出し、６２０ｎｍでの吸収度を読み取る。一部の実験では、投薬の順序を逆にして、Ｅｖａｎｓ  Ｂｌｕｅ及び炎症刺激薬の前に化合物を投与した。
【００６７】
上記試験モデルにおいて、本発明の治療剤の組み合わせは、一般的に０．００１〜０．１ｍｇ／ｋｇ（気管内）の範囲の投与量で、抗炎症活性を示す。
【００６８】
上記から、本発明の治療剤の併用薬は、炎症性又は閉塞性気道疾患や、気道閉塞を伴う他の状態の治療に有用であることが分かる。特に、これらは、気管支喘息の治療に有用である。
【００６９】
それらの抗炎症活性及びそれらの気道過敏性に対する影響の面から、本発明の治療剤の併用薬は、閉塞性又は炎症性気道疾患の治療、特に予防処理に有用である。したがって、本発明の化合物の併用薬を長期間にわたり継続的及び定期的に投与すると、閉塞性又は炎症性気道疾患の結果として生じる気管支収縮等の症状の発作の再発を予め防止するのに有用である。本発明の化合物の併用薬は、このような疾患の制御、改善、又は基礎的状態の反転にも有用である。
【００７０】
気管支拡張活性を考慮して、本発明の治療剤の併用薬は、例えば、慢性又は急性気管支収縮の治療及び閉塞性又は炎症性気道疾患の症候治療に、気管支拡張剤として有用である。
【００７１】
本発明が適用される閉塞性又は炎症性気道疾患には、喘息；じん肺症；慢性好酸球性肺炎；慢性閉塞性気道疾患又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＡＤ又はＣＯＰＤ）；及び成人呼吸促進症候群（ＡＲＤＳ）、並びに他の薬物療法、例えば、アスピリン又はβアゴニスト療法の結果として生じる気道過敏性の悪化などがある。
【００７２】
本発明のアデノシンＡ2a受容体アゴニスト及びアドレナリン性β２受容体アゴニストを、単独又は組み合わせて投与できるが、一般的には好適な医薬賦形剤、希釈剤又は担体との混合剤として投与される。
【００７３】
本発明のアデノシンＡ2a受容体アゴニスト及びアドレナリン性β２受容体アゴニストは、好ましくは吸入により投与し、乾燥粉末（単独又は混合物、例えば、ラクトースとの混合物）の形態で乾燥粉末吸入器からか、加圧した容器、ポンプ、噴霧器、アトマイザー（好ましくは、微細ミストを生成する電気流体力学を用いたアトマイザー）又はネブライザーから、好適な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、ハイドロフルオロアルカン、例えば、１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＡ  １３４Ａ［商標］）又は１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＡ  ２２７ＥＡ［商標］）、二酸化炭素、さらなる過フッ化炭化水素、例えば、Ｐｅｒｆｌｕｂｒｏｎ（商標）又は他の好適なガスを使用するか、使用せずに、アエロゾルスプレーで供給するのが都合がよい。加圧アエロゾルの場合、投与単位は、計量した量を供給するのにバルブを設けることにより測定できる。加圧化容器、ポンプ、噴霧器、アトマイザー又はネブライザーは、例えば、エタノール（必要に応じてエタノール水溶液）又は分散、可溶化又は放出拡大に好適な薬剤と、溶媒としての噴射剤（さらに滑剤、例えば、ソルビタントリオレエートを含有できる）との混合物を用いた活性化合物の溶液又は懸濁液を含むことができる。吸入器又は注入器に使用されるカプセル、ブリスタ及びカートリッジ（例えば、ゼラチン又はＨＰＭＣ製）は、本発明の化合物と、ラクトース又はデンプン等の好適な粉末基剤と、ｌ−ロイシン、マンニトール又はステアリン酸マグネシウム等の性能改良剤との粉末配合物を含むように構成できる。
【００７４】
吸入のために乾燥粉末配合物又は懸濁配合物を使用する前に、本発明の化合物を、吸入による供給に好適な大きさ（典型的には５ミクロン未満と考えられる）に微粒化する。微粒化は、各種方法、例えば、スパイラルジェットミリング、流動床ジェットミリング又は超臨界流動結晶化を使用することにより、おこなうことができる。
【００７５】
電気流体力学を用いたアトマイザーに使用して微細ミストを生成するのに好適な溶液配合物は、本発明の化合物を動作１回あたり１μｇ〜１０ｍｇを含有でき、動作容積は、１〜１００μｌで異なることができる。典型的な配合物は、本発明の化合物、プロピレングリコール、滅菌水、エタノール及び塩化ナトリウムを含有することができる。プロピレングリコールの代わりに代替溶媒、例えば、グリセロール又はポリエチレングリコールを使用してもよい。
【００７６】
アエロゾル又は乾燥粉末配合物は、各計量された投与量又は「パフ」が、患者へ供給するための本発明の化合物を１〜４０００μｇ含有するように構成するのが好ましい。アエロゾルの場合の総１日量は、１μｇ〜２０ｍｇの範囲であり、これを、１回で投与してもよいし、又はより一般的には、その日を通じて分割して投与してもよい。
【００７７】
使用アデノシンＡ2a受容体アゴニスト：アドレナリン性β２受容体アゴニストの好ましい重量比（ｗ／ｗ）は、試験される特定の組み合わせにより異なる。これは、個々の化合物の効力の差によるものである。いずれにしても、医師は、個々の患者に最も適している各化合物の実際の投与量を決定する。この投与量は、個々の患者の年齢、体重及び反応により異なる。
【００７８】
本明細書において治療について言及されている全ての場合は、治療的処理、待期療法及び予防的治療を含む。
【国際調査報告】
2005513041.tif 000004
2005513041.tif 000005