(57)【要約】    本発明は、女性の有効な分娩を確立するための、頸部および子宮筋層の予防的プライミングまたは治療的処置のための薬学的調製物を製造するための１００ＢＰ単位／ｍｇ以下の抗凝固剤活性を有する硫酸化グリコサミノグリカンの使用を言及する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
女性の有効な分娩を確立するための頸部および子宮筋層の予防的プライミングまたは治療的処置のための薬学的調製物を製造するための１００ＢＰ単位／ｍｇ以下の抗凝固活性を有する硫酸化グリコサミノグリカンの使用。
【請求項２】
ヘパラン硫酸および脱重合化ヘパラン硫酸からなる群に属する、請求項１に記載のグリコサミノグリカンの使用。
【請求項３】
コンドロイチン硫酸および脱重合化コンドロイチン硫酸からなる群に属する、請求項１に記載のグリコサミノグリカンの使用。
【請求項４】
デルマタン硫酸または脱重合化デルマタン硫酸からなる群に属する、請求項１に記載のグリコサミノグリカンの使用。
【請求項５】
１００００Ｄａ未満の、好ましくは６０００Ｄａ以下の平均分子量を有する脱重合化ヘパリンからなる群に属する、請求項１に記載のグリコサミノグリカンの使用。
【請求項６】
３０ＢＰ単位／ｍｇ以下の抗凝固活性を有する、請求項１〜５のいずれかに記載のグリコサミノグリカンの使用。
【請求項７】
１．０未満のスルフェ−ト／ヘキソサミン比および１０ＢＰ単位／ｍｇ以下の抗凝固活性を有する、請求項２または６に記載のグリコサミノグリカンの使用。
【請求項８】
オキシトシンと組み合わせた、請求項１〜７のいずれかに記載のグリコサミノグリカンの使用。
【請求項９】
局所的薬学的調製物の製造のための請求項１〜７のいずれかに記載のグリコサミノグリカンの使用。
【請求項１０】
非経口的薬学的調製物の製造のための請求項１〜７のいずれかに記載のグリコサミノグリカンの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、正期分娩（ｔｅｒｍ  ｌａｂｏｒ）の進行の遅延を予防および処置するための薬学的組成物を製造するための、特定の硫酸化グリコサミノグリカンの使用を言及する。
【背景技術】
【０００２】
産科における一般的な臨床上の問題は、延長された分娩またはいくつかの様式における分娩の機能不全である。分娩の進行の遅延または停止は、スウェーデンにおいて、全ての出産の約４０〜６０％で記録されている。発展途上国において、分娩（ｐｕｒｔｕｍ）後の大量の出血を伴う分娩停止に起因する妊婦の死亡は、妊婦の死亡に対する最も一般的な理由である。分娩の進行の遅延は、緊急の帝王切開に対する最も一般的な表示であり、次いで、これは、しばしば次の妊娠での選択的帝王切開の要求を生じる。延長された分娩の他の合併症は、増加した胎児の無酸素症を生じ、このことは、長期の後遺症を生じる。
【０００３】
子宮は、２つの部分（子宮の体（ｃｏｒｐｕｓ）および頸部）から構成され、これらは、妊娠および分娩の間、異なる機能を有する。子宮体は、主に、細胞外マトリクス（ＥＣＭ）中に包埋される平滑筋帯、子宮筋層から構成され、そして頸部は、主にＥＣＭから構成される。ＥＣＭの主成分はコラーゲンであるが、プロテオグリカンも、より少ない量で存在する。プロテオグリカンは、１〜１００個の多糖鎖であるグリコサミノグリカンが結合したタンパク質コアから構成される。
【０００４】
子宮の収縮および軟化（他の言葉では、成熟）と頸部の拡張との間の協調は、正常な分娩に重要である。これらのプロセス間の不調和は、異常な分娩を導く。
【０００５】
妊娠および分娩の間に、頸部および体の両方が再構築される。体(corpus)の完全な再構築は、容量の約７倍の増加を生じる。不十分な子宮の再構築は、収縮性の障害に関連する。確立された分娩の間に１〜１０ｃｍ開く頸部の通常の拡張は、コラーゲンおよびプロテオグリカンの濃度の減少を介して生じそして柔軟かつ弾性の頸部を生じる、頸部結合組織の全体的な再構築を示唆する。頸部成熟における障害は、このプロセスが過剰に早く開始する場合に、早期産を生じ得る。早期分娩は、未熟分娩をするための早期頸部成熟と協調しなければならない。一方、不十分な頸部成熟は、高頻度で長時間の分娩および機械による分娩（ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｌ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ）を伴う、過期妊娠を生じる。従って、頸部成熟および子宮筋層収縮は、正常な分娩を達成するために協調しなくてはならない２つのプロセスである。
【０００６】
正常な分娩および長時間分娩の両方の生理学は、なお不明である。ホルモン制御は、プロゲステロンによる阻害効果および増加するエストロゲンレベルによる活性化を含むようである。コルチコトロピン放出ホルモン、プロスタグランジンおよび変化したエストロゲン／プロゲステロンの比率が、分娩の開始に関与することが示唆されている。１９５０年に紹介されたオキシトシンの静脈内注入は、なお、長時間の分娩の主要な処置であり、そして最近発行された分娩の進行の遅延についての調査および概説は、オキシトキシン投与の種々の処置スケジュールを提示している。この処置は、多くの場合において不成功であり、そして増加する数の手術による分娩をもたらしている。分娩の進行の遅延の非常に広範な問題が存在するのにも関わらず、分娩の増強のための新薬を開発するための努力はほとんど行われてこなかった。
【０００７】
約２０年間、好ましくない頸部を有する女性における分娩の陣痛誘導が、プロスタグランジンＥ２の局所投与により実施されてきた。これらの場合の１５〜２０％において、頸部成熟および分娩での陣痛誘発は失敗する。最も顕著な場合は、分娩の停止である。
【０００８】
従来技術
Ｋ．Ｓｈａｋｅｒら、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  １６（１９７４年１１月）により、ヘパリンに起因する子宮収縮が、妊娠３２週の３２歳の経妊婦への、静脈血栓症を処置するための高用量のヘパリンの静脈内投与の副作用として記載されている。ヘパリンは、動物組織から商業ベースで単離され、そして抗血栓薬として臨床使用されているグリコサミノグリカンである。
【０００９】
ＥＰ  ０  ５０９  １２０  Ｂ１は、頸部膣領域の疾患の予防および処置のための局所的薬学的組成物を調製するためのグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）の使用を開示する。これらの疾患の例は、エストロゲンホルモンの欠乏により誘導されるいわゆるジストロフィー状態および萎縮状態、膣皮膚炎、特定の膣炎などである。ＧＡＧが、正常な膣の生態系を保護および回復することに関与するといわれている。
【００１０】
グリコサミノグリカンは、直線状のマクロ分子を形成する反復する二糖単位を含む、非常に長い分子を有する高分子の高度に異種のクラスのマクロ分子に属すると記載されている。一般的に、これらの反復単位の各々は、アミノ糖（これは、グルコサミンまたはガラクトサミンである）からなる残基、およびグルクロン酸またはイズロン酸からなるウロン酸残基を含む。Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４およびＣ６のヒドロキシル基およびＣ２のアミノ基が、スルフェート基と置換され得る。ＧＡＧは、以下の化合物により表される：ヘパリン、ヘパラン硫酸、デルマタン硫酸、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、ケラタン硫酸。
【００１１】
ＥＰ  ０  ８６７  ４５２  Ａ１は、有効成分としてヒアルロン酸またはその誘導体を含む頸部成熟剤を言及する。
【００１２】
グリコサミノグリカンが細胞活性に対する多数の効果を有することは周知である。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
（発明の説明）
ヘパラン硫酸プロテオグリカンの発現は、妊娠および分娩の間の子宮の再構築の間に変化することが最近見出された。従って、これらは、分娩において中枢的な役割を果たすと考えられている。硫酸化グリコサミノグリカンでのヒト子宮細片の処理がその収縮活性を増強することも見出されている。
【００１４】
本発明は、女性の有効な分娩を確立するための頸部および子宮筋層の予防的プライミングまたは治療的処置のための薬学的調製物を製造するための、１００ＢＰ単位／ｍｇ以下の抗凝固活性を有する硫酸化グリコサミノグリカンの使用を言及する。正常な分娩は、頸部の軟化および規則的な子宮筋層の収縮を含む。
【００１５】
抗凝固効果が、硫酸化グリコサミノグリカン１ｍｇ当りの凝固時間の増加を測定することによって評価されており、そしてこれはＢＰ単位／ｍｇで表示される。ヘパリンは、１５７ＢＰ単位／ｍｇの抗凝固活性を有する。
【００１６】
硫酸化グリコサミノグリカン（これは、主にヘパリン、ヘパラン硫酸、デルマタン硫酸およびコンドロイチン硫酸である）は、交互のヘキソサミンおよびウロン酸残基から構成される。ヒアルロン酸は、スルフェート基を有さない。Ｄ−グルクロン酸（ＧｌｃＡ）およびそのＣ−５エピマーＬ−イズロン酸（ＩｄｏＡ）の存在ならびにヘキソサミンおよびウロノシル残基の特定の硫酸化は、このポリマーに極度の構造的バリエーションを与える。この構造は、０または数％から約１００％のイズロン酸含有二糖類の範囲をとり得る。二糖類を含むＧｌｃＡ−およびＩｄｏＡ−Ｎ−ヘキソサミンの構成は、長いブロックから交互の二糖類パターンまで変化し得る。高い程度の硫酸化および高い程度のイズロン酸硫酸は、一般的に、その化合物の高い生物学的活性に関与する。デルマタン硫酸（ＤＳ）、コンドロイチン硫酸（ＣＳ）、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、および脱重合化されたヘパリンの種々の十分に規定された多糖類が存在する。
【００１７】
反復する二糖類としてグルコサミンおよびウロン酸を有し、そしてＮ−アセチル化二糖類およびＮ−硫酸化二糖類から構成される（これらは、主に分離様式で構成される）ヘパラン硫酸は、細胞表面および細胞外マトリクス中に遍在する分布を有する。それは、一般的に、ヘパリンより低い程度に硫酸化され、かつより低いイズロン酸含量を有し、そしてより多様な構造を有する。ヘパラン硫酸とタンパク質との間の相互作用が、種々の生理学的プロセス（例えば、細胞接着、酵素調節、サイトカイン作用、ウイルス進入、および抗凝固特性）に関連する。ヘパラン硫酸は、特定の抗凝固剤五糖類の存在に依存するが、ヘパリンより非常に低い抗凝固活性を保有する。ヘパラン硫酸は、Ｆｒａｎｓｓｏｎら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  ｈｅｐａｒａｎ  ｓｕｌｐｈａｔｅｓ、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０６、５９−６９（１９８０）に記載されるように、ブタの腸粘膜またはウシの肺から、塩化セチルピリジニウム分画および連続する塩抽出を用いてヘパリンのサイドフラクション（ｓｉｄｅ  ｆｒａｃｔｉｏｎ）から調製され得る直鎖状の多糖類である。
【００１８】
本発明は、ヘパラン硫酸および脱重合化ヘパラン硫酸からなる群に属する硫酸化グリコサミノグリカンの使用を言及する。
【００１９】
コンドロイチン硫酸は、交互のグルクロン酸およびＮ−アセチル−ガラクトサミン残基からなる硫酸化した直鎖状の多糖類であり、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン残基は、４位または６位のいずれかで硫酸化されている。これらは、ウシの気管または鼻軟骨から調製され得る。ＣＳは、細胞外マトリクスの組織化に重要であり、間質膨張圧を発生させ、そして好中球の増加に関与する。
【００２０】
本発明はまた、コンドロイチン硫酸または脱重合化コンドロイチン硫酸の使用に言及する。
【００２１】
デルマタン硫酸は、交互のウロン酸およびＮ−アセチル化ガラクトサミン残基からなる硫酸化した直鎖状多糖である。ウロン酸は、Ｄ−ＧｌｃＡまたはＬ−ＩｄｏＡのいずれかであり、そしてこの二糖類は、夫々、ガラクトサミンおよびＩｄｏＡの４位および６位および２位で硫酸化され得る。ＤＳは、ブタの皮膚および腸粘膜から調製され得る。デルマタン硫酸は、生物学的活性（例えば、細胞外マトリクスの組織化、サイトカインとの相互作用、抗凝固活性、および好中球の増加）を保有する。
【００２２】
本発明はまた、デルマタン硫酸または脱重合化デルマタン硫酸の使用に言及する。
【００２３】
低分子量のへパリンまたは脱重合化ヘパリンは、２〜１０ｋＤａの間のＭｒを有し、主に交互のＮ−硫酸化グルコサミンおよびＩｄｏＡ残基からなり、そしてしばしば、抗凝固五糖類を含む直鎖状のオリゴ糖である。これらは、特定の化学的切断によりヘパリンから調製され得る。これらの主要な臨床的機能は、第Ｘａ因子を阻害することであり、このことは、抗血栓効果を引き起こす。それが、転移抑制特性を有することが提唱されている。Ｆｒａｇｍｉｎ（登録商標）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｓｗｅｄｅｎ）は、ヘパリンの制御された脱重合化により得られ、そして第Ｘａ因子の阻害に起因した抗血栓効果を有する低分子ヘパリンの例である。選択的抗凝固活性を有するヘパリン画分およびその調製方法が、米国特許第４，３０３，６５１号に記載されている。しかし、この抗凝固効果は、通常、分娩の間に用いられる調製物のためには所望されない。
【００２４】
本発明は、特に、１００００Ｄａ未満の、好ましくは６０００Ｄａ以下の相対分子量を有する脱重合化ヘパリンからなる群に属するグリコサミノグリカンの使用を言及する。
【００２５】
抗凝固活性が過剰に高すぎないことが必要不可欠であり、そして、好ましい局面によれば、本発明は、３０ＢＰ単位／ｍｇ以下の抗凝固活性を有する硫酸化グリコサミノグリカンの使用を言及する。
【００２６】
インビトロでの試験は、抗凝固能力が低いかまたは抗凝固能力のない低硫酸化構造が好ましい化合物であることを示唆する。従って、ヘパリンの製造の間に得られる副産物は、出発物質の選択のための良好な候補物である。特定の過ヨウ素酸酸化を用いて抗トロンビンＩＩＩ結合特性をなくして、ヘパランおよびヘパリンのサイドフラクションから、所望の特性を有する化合物を得ることができる。
【００２７】
選択的Ｎ−脱硫酸化と引き続く再−Ｎ−アセチル化、または選択的Ｏ−脱硫酸化もまた、低い抗凝固活性の化合物を産生する。
【００２８】
選択的Ｎ−脱アセチル化と引き続く特異的Ｎ−硫酸化および／またはＯ−硫酸化もまた、所望の活性を有する化合物を産生する。
【００２９】
本発明は、特に、１．０未満のスルフェート／ヘキソサミン比、および１０ＢＰ単位／ｍｇ未満の抗凝固活性、または凝固時間を有するグリコサミノグリカンの使用を言及する。
【００３０】
分娩の開始時に内因性のオキシトシンの量がその最適レベルに達している場合、本発明に従い用いられる硫酸グリコサミノグリカンを用いる前処置により分娩を開始させる。不十分な量の内因性オキシトシンレベルの場合、硫酸化グリコサミノグリカンが、子宮筋層のプライミングのためのオキシトシンの静脈注射と組み合わせて単回用量で用いられ得る。
【００３１】
本発明はまた、局所的に（ｌｏｃａｌｌｙ）、すなわち局所に（ｔｏｐｉｃａｌｌｙ）（例えば、頸管内、膣、直腸または経皮投与によって）か、または全身に、すなわち非経口で（例えば、皮下または静脈注射によって）投与され得る薬学的調製物を製造するための硫酸化グリコサミノグリカンの使用を言及する。この薬学的組成物はまた、経口投与によっても投与され得る。
【００３２】
非経口投与に関して、活性化合物は、溶液または懸濁液へと組み込まれ得、これらはまた、１つ以上のアジュバント（例えば、滅菌希釈液（例えば、注射用水、生理食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセロール、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒）、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、緩衝剤および張度調整剤）も含む。非経口調製物は、アンプル、使い捨てシリンジでまたは輸液中で送達され得る。
【００３３】
局所調製物は、従来の薬学的に許容されるキャリアと組み合わせた活性硫酸化グリコサミノグリカンからなる。このキャリアまたは賦形剤は、活性物質のビヒクルとしての役割を果たし得る固体、半固体または液体物質であり得る。局所調製物の例は、軟膏、クリーム、ゲル、経鼻または経膣スプレー、ローション、液剤または懸濁液である。
【００３４】
有効な分娩をもたらすために、硫酸化グリコサミノグリカンが、１〜３０日間、好ましくは１〜１０日間にわたり、２４時間毎に単回用量で投与され得る。この用量は、子宮筋層の収縮をもたらす最低限の量として評価されなくてはならない。評価された単回用量は、２５〜１００ｍｇ／日であるが、１ｇ以上まででもよい。この用量は、投与の形態に関連する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３５】
実施例
実施例１．ヘパラン硫酸の調製
１０ｇのヘパリン副産物である、ＴＢ  ００１−９１  ＳＶＣＭ  ９５０１３０（Ｋａｂｉ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を、１ｌの５％酢酸カルシウム−０．５Ｍ酢酸中に溶解した。この溶液をろ過した。次いで、ろ過した溶液を、１８％のエタノール濃度に調整した。次いで、遠心分離後の上清を、３６％のエタノール濃度に調整した。沈殿物を、遠心分離により集めた。以下のヘパラン硫酸を、Ｆｒａｎｓｓｏｎら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  ｈｅｐａｒａｎ  ｓｕｌｐｈａｔｅｓ、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０６、５９−６９（１９８０）に従い調製した。
【００３６】
ＨＳ６の調製
１８〜３６％エタノールの得られた沈殿物を、１．２ＭのＮａＣｌ中に溶解した。１８ｇの塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）を添加し、そして沈殿物を、２４時間にわたり生じさせた。沈殿物をろ過により回収し、そして２ＭのＮａＣｌ中に再溶解した。ろ液を、ＨＳ５の調製のために用いた。溶解した沈殿物に３倍容量のエタノールを添加した。得られた沈殿物を１６時間にわたり生じさせ、そして遠心分離により集めた。最後に、それを、水中に再溶解させ、そして３倍容量のエタノール−０．４％酢酸ナトリウムを用いて再沈殿させた。沈殿物を遠心分離により集め、そして乾燥した。収量は、  ４．３４ｇであった。
【００３７】
ＨＳ５の調製
次いで、ＨＳ６の調製からのろ液を、０．１％  ＣＰＣを用いて、１．０Ｍ  ＮａＣｌの最終濃度まで希釈した。次いで、それを、ＨＳ６と同様に処理した。ろ液を、ＨＳ４の調製のために用いた。収量は、０．８２ｇであった。
【００３８】
ＨＳ４の調製
次いで、ＨＳ５の調製からのろ液を、０．１％  ＣＰＣを用いて、０．８Ｍ  ＮａＣｌの最終濃度まで希釈した。次いで、それを、ＨＳ６と同様に処理した。ろ液を、ＨＳ３の調製のために用いた。収量は、０．５１ｇであった。
【００３９】
ＨＳ３の調製
次いで、ＨＳ４の調製からのろ液を、０．１％  ＣＰＣを用いて、０．６Ｍ  ＮａＣｌの最終濃度まで希釈した。次いで、それを、ＨＳ６と同様に処理した。ろ液を、ＨＳ２の調製のために用いた。収量は、０．１７ｇであった。
【００４０】
ＨＳ２の調製
次いで、ＨＳ３の調製からのろ液を、０．１％  ＣＰＣを用いて、０．４Ｍ  ＮａＣｌの最終濃度まで希釈した。次いで、それを、ＨＳ６と同様に処理した。収量は、０．０９ｇであった。
【００４１】
種々のヘパラン硫酸を、グルクロン酸、イズロン酸、および総スルフェート基の含量について分析した。ヘキソサミンのアミノ基上のスルフェート基の数を、ｍｏｌ／ｍｏｌとして決定し、そしてイズロン酸残基のパーセンテージを決定した。結果を、以下の表１に示す。１ｍｇのヘパリン硫酸あたりの凝固時間を測定することにより抗凝固活性も評価し、そして以下の表１にＢＰ単位／ｍｇで示した。
【００４２】
【表１】
2005513148.tif 000002
上記の全てのヘパラン硫酸調製物の抗凝固活性が、選択的過ヨウ素酸酸化により排除され得る（Ｆｒａｎｓｓｏｎ  ＬＡ、およびＬｅｗｉｓ  Ｗ、Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｈｅｐａｒｉｎ  ａｎｄ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ｐｅｒｉｏｄａｔｅ  ｏｘｉｄａｔｉｏｎ  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．１９７９、９７：１１９−２３を参照のこと）。
【００４３】
実施例２．デルマタン硫酸の調製
１ｋｇの乾燥したブタの皮膚を、５ｌの０．５Ｍ ＮａＣｌ、０．０１Ｍ  ＥＤＴＡおよび０．０１Ｍの塩酸システイン、ｐＨ６．５中に懸濁した。５００ｍｇの結晶パパインを添加し、そして５０時間消化を進行させた。この消化物をろ過し、次いで７５ｍｌのＣＰＣの１０％溶液を用いて沈殿させた。得られたピリジニウム複合体を、ろ過により集め、そして１５％エタノールを含む２Ｍ  ＮａＣｌ中に再溶解した。この溶液を、３倍容量の０．５％  ＣＰＣで希釈した。沈殿物を集め、そして２００ｍｌの１ＭのＮａＣｌおよび４０ｍｌのエタノール中に溶解した。この材料を１００ｍｌの水に再溶解し、次いで３倍容量のエタノール−０．４％酢酸ナトリウムを用いて沈殿させた。得られた沈殿物を集め、そして乾燥した。最終的な収量は２．３２ｇであった。Ｆｒａｎｓｓｏｎら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｐｉｇ  ｓｋｉｎ  ｄｅｒｍａｔａｎ  ｓｕｌｆａｔｅ．１．Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄ−ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｓｉｄｕｅｓ．（１９７１）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１８、４２２−４３０を参照のこと。
【００４４】
種々の含量のＬ−イズロン酸を有するＤＳの調製
２．２ｇの上記で得られた物質を、２２０ｍｌの５％酢酸カルシウム−０．５Ｍ酢酸中に溶解した。この溶液を、エタノールと混合し、そしてそれぞれ０−１８％エタノール（ＤＳ−１８）、１８−３６％エタノール（ＤＳ−３６）、および３６−５０％エタノール（ＤＳ−５０）の間で形成された沈殿物を集めた。これらの材料を、水に再溶解し、そして３倍容量のエタノール−０．４％酢酸ナトリウムを用いて再沈殿した。乾燥後、最終収量は、ＤＳ−１８について０．９ｇ；ＤＳ−３６について１．０２ｇ；ＤＳ−５０について０．２８ｇであった。
【００４５】
種々のデルマタン硫酸を、スルフェート基、グルクロン酸、イズロン酸、およびヘキソサミンの含量について分析した。そしてその結果を、以下の表２に示す。
【００４６】
【表２】
2005513148.tif 000003
ＤＳ調製物は、総ヘキソサミンのうち９９％のガラクトサミンを含み、そしてＨＳおよびヘパリン調製物は、総ヘキソサミンのうち９７％を超えるグルコサミンを含む。
【００４７】
実験
試験１．収縮アッセイ
以下の試験において、ヘパリンサイドフラクションＴＢ  ００１−９１  ＳＶＣＭ  ９５０１３０（Ｋａｂｉ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｓｗｅｄｅｎ）から得られたヘパラン硫酸ＨＳ２およびＨＳ６を試験した。ＨＳ６は、より高度に硫酸化されておりかつより多いＬ−イズロン酸残基を有することによりＨＳ２とは異なる（上記表１を参照のこと）。
【００４８】
子宮サンプルを、妊娠３８〜３９週で選択的帝王切開術を経験している女性から得た。サンプルは、２０×１０×１０ｍｍと測定され、そしてそれを峡部切開の上部から採取した。生検を、直ぐに氷冷Ｋｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ緩衝液中に入れた。これらの生検を、縦細片（長さ１０〜１５ｍｍかつ幅約５ｍｍ）に切断した。この細片を、２ｍｌのＫｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ溶液を含む３７℃の臓器浴（ｏｒｇａｎ  ｂａｔｈ）中に垂直に取り付けた。この溶液を、９５％Ｏ２と５％ＣＯ２との混合物でバブリングして、この浴のｐＨを７．３５〜７．４５に維持した。これらの細片が安定な収縮状態に平衡化（ｅｑｕｉｌｉｂｒａｔｅ）した後で（通常、取り付け後１〜２時間以内に）、この実験を実施した。収縮を、ガラスモデル７ポリグラフ（Ｇｒａｓｓ  Ｉｎｓｔｒ．Ｃｏ．、Ｑｕｉｎｃｙ、ＭＡ、ＵＳＡ）を用いて等尺で記録した。標準化された最大応答を得るために、実験の間、全てのサンプルを１００ｍＭのＫＣｌに曝した。次いで、種々の用量のヘパラン硫酸を、子宮細片を含む浴に添加した。２０分後、１Ｕのオキシトシンを添加した。１Ｕのオキシトシンのみの添加を、コントロールとして用いた。
【００４９】
この手順を、６μｇのヘパラン硫酸を用いて繰り返した。２０分後、１単位のオキシトシンを添加した。収縮を記録し、そして曲線の下の表面を積分することにより評価した。異なる構造を有する２種類のヘパラン硫酸（ＨＳ２およびＨＳ６）を添加し、そしてコントロールとして１単位のオキシトシンを用いた。以下の表３を参照のこと。
【００５０】
【表３】
2005513148.tif 000004
オキシトシンとＨＳ６との組み合わせは、収縮力の２．５倍の増加をもたらし、そしてＨＳ２との組み合わせは、収縮力の４．１倍の増加をもたらした。
【００５１】
このことは、ヘパラン硫酸が、ヒト子宮細片の収縮力をインビトロで増強することを示す。この効果はヘパラン硫酸の構造に依存し、そして低硫酸化構造がより有効であるようである。
【００５２】
この試験を、デルマタン硫酸（ＤＳ−１８）を用いて繰り返した場合（表２を参照のこと）、収縮性を記録したが、結果を評価しなかった。
【００５３】
試験２．頸部繊維芽細胞中のＣａ２＋レベルに対する効果
妊娠していない人および正期妊娠（ｔｅｒｍ  ｐｒｅｇｎａｎｔ）の患者および膣から分娩した女性（分娩後の患者）から繊維芽細胞培養物を確立した。細胞を、１０％のドナー仔ウシ血清を有する最小必須培地を用いて単層培養中で培養した。実験のために、これらの細胞をセミコンフルーエントでカバーグラス上にプレートし、そして３０分間にわたり、１０ｍＭのＨＥＰＥＳを含むリン酸緩衝化生理食塩水中のＦｌｕｏ−４を充填した。最初に、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ＨＥＰＥＳ−緩衝液）を含むリン酸緩衝化生理食塩水を、３０分間観察チャンバ中にポンピングし、次いで、同じ緩衝液中のＫＣｌを、６０秒間ポンピングし、引き続き３０秒間ＨＥＰＥＳ緩衝液をポンピングした。次いで、ＨＥＰＥＳ−緩衝液中１ｍｌあたり１０ｎｇのＰＤＧＦを添加した。３分間蛍光を連続的にモニタリングした。他の実験において、ＰＤＧＦを、１００μｇのＨＳ６と置き換えた。妊娠していない患者および正期妊娠患者から確立された培養物において蛍光の変化は示されなかった。分娩後に患者から直接得られた培養物において、ＫＣｌ、ＰＤＧＦおよびＨＳ６は、全て、蛍光の一過性の４〜８倍の増加を誘導し、これは、細胞内Ｃａ２＋の一過性の増加を示す。このことは、分娩後の患者から確立された培養物中の細胞がＨＳ６により活性化されることを示す。この効果は、分娩のための頸部の最終的な準備のために、分娩において重要であると仮定される。
【００５４】
試験３．ダルテパリンナトリウム塩（Ｆｒａｇｍｉｎ（登録商標））を用いる臨床試験
未経産婦における分娩の結果に対する臨床データを研究した。１４人の未経産婦に、血栓の危険性の増加に起因して、妊娠期間の間、Ｆｒａｇｍｉｎ（登録商標）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を皮下投与した。投与した予防用量は、毎日２５００ＩＥを投与した４人の女性を除き、毎日５０００ＩＥであった。これらの女性のうち８人に、１２週間より長く（１２〜２８週間の範囲）処置をし、そして彼女らのうち６人に、１〜６週間の間、処置をした。女性たちがこの研究に参加した直後に同じ診療所で分娩する、Ｆｒａｇｍｉｎ（登録商標）投薬療法を行わなかった次の１３人の未経産婦が、コントロールとしての役割を果たした。評価項目は、陣痛−分娩期間（時間）ならびに帝王切開の数およびこれらの適応である。
【００５５】
処置の持続時間と分娩の持続時間との間に相関は見られなかった。陣痛−分娩時間は、患者群において５．８±２．６時間となり、コントロール群において１４．０±６．３時間となった（ｐ＜０．００１）。さらに、分娩の遅い進行が、処置群において１４人中１人であったのと比較して、コントロール群において１３人中６人において報告された。
【００５６】
帝王切開の数は、各々の群において３人であったが、研究群における適応は、子癇前症（ｐｒｅ−ｅｃｋｌａｍｐｓｉａ）、不十分な無痛覚および疑似的胎児仮死であった。コントロール群において、３人全てが、主な適応として分娩停止を有し、２人の女性において、疑似的胎児仮死を伴った。
【００５７】
陣痛−分娩時間をまた、９人のコントロールと比較して、上記のようにＦｒａｇｍｉｎ（登録商標）を投与した２１人の経産婦において調査した。コントロール群における５．９±２．１時間（３〜１２の範囲）の陣痛−分娩時間と比較して、Ｆｒａｇｍｉｎ（登録商標）投与群における陣痛−分娩時間は３．５±２．９時間（０．５〜８の範囲）であった（ｐ＜０．０５）。従って、陣痛−分娩時間は、処置群において有意に短かった。
【国際調査報告】
2005513148.tif 000005