(57)【要約】小胞又はリポソームを形成することができる両親媒性化合物を提供し、前記両親媒性化合物は、コリン又はフェニルアラニン誘導体の残基など、選択的に切断され得る基又は部分を含む少なくとも１つの頭基、前記頭基内及び／又はそれに密接して位置する少なくとも１つの水素結合基を有する。切断され得る基又は部分は、化学的、物理的、又は生物学的環境の変化を含む選択的条件下で切断され、脳又は血液などの生物学的環境で酵素的に切断されることが好ましい。前記両親媒性化合物から製造した小胞又はリポソームは、特に標的器官又は組織への治療物質又は診断剤の送達、或いは遺伝子治療用の核酸の送達に適している。【特許請求の範囲】
【請求項１】
小胞又はリポソームを形成することができる両親媒性化合物であって、選択的に切断され得る基又は部分を含む少なくとも１つの頭基（ｈｅａｄｇｒｏｕｐ）と、該頭基内にある及び／又はそれに密接して位置する少なくとも１つの水素結合基とを含む、両親媒性化合物。
【請求項２】
前記選択的に切断され得る基又は部分が、化学的、物理的、又は生物学的環境の変化を含む選択的条件下で切断される基又は部分である、請求項１に記載の両親媒性化合物。
【請求項３】
前記選択的条件が、ｐＨ若しくは温度、酸化若しくは還元条件、及び／又は酵素条件の変化を含む、請求項２に記載の両親媒性化合物。
【請求項４】
前記切断され得る基が、生物学的環境中で酵素切断される、請求項３に記載の両親媒性化合物。
【請求項５】
前記生物学的環境が脳又は血液である、請求項４に記載の両親媒性化合物。
【請求項６】
前記選択的に切断され得る基又は部分が、コリン、芳香族アミノ酸、ジカルボキシアミノ酸、及び病変部位で酵素によって特異的に切断されるペプチドからなる群から選択される化合物の誘導体の残基から選択される、請求項１から５のいずれか一項に記載の両親媒性化合物。
【請求項７】
前記コリン誘導体がアセチルコリン又はアセチルチオコリンであり、前記芳香族アミノ酸がフェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンから選択され、該誘導体がｐ−アミノフェニルアラニン又はレボドパであり、前記ジカルボキシアミノ酸がグルタミン酸又はアスパラギン酸であり、前記ペプチドがエンケファリン、Ｎ−アセチル−ａｌａ、ａｌａ、β及びγセクレターゼによって認識される領域を構成するペプチド、及びストロメライシンによって認識されるペプチドである、請求項６に記載の両親媒性化合物。
【請求項８】
前記水素結合基が、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ−、−Ｎ＋Ｈ２−、−ＮＨ２、−Ｎ＋Ｈ３、−ＮＨ−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−Ｃ＝ＮＯＨ、−Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＯＨ、−Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＯ−、及び−ＣＯ−ＮＨ２から選択される、請求項１から７のいずれか一項に記載の両親媒性化合物。
【請求項９】
式Ｉの請求項１に記載の両親媒性化合物：
Ｘ１−ＣＯ−Ｘ２−Ｘ３      ［Ｉ］
［式中、
Ｘ１は、−Ｑ１−Ｒ０（式中、Ｑ１は−ＮＨ−、−Ｎ（ＣＨ３）１〜２−、−Ｏ−、−Ｓ−、又は−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）−Ｏ−であり、Ｒ０は、−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６、又は−（ＣＨ２）ｒ’−Ｘ７である）であり；
Ｘ２及びＸ５は、同じ又は異なり、各々が少なくとも５個の炭素原子のアルキレン鎖であり；
Ｘ３及びＸ６は、同じ又は異なり、各々が任意選択で少なくとも１つの二重結合を有する少なくとも５個、多くても１８個の炭素原子からなる脂肪族鎖であり、該脂肪族鎖は、少なくとも１つの極性基、イオン基、及び／又はエポキシ基、並びに／或いは少なくとも１つの極性基、イオン基、及び／又はエポキシ基を含む少なくとも１つの部分によって置換されており、該少なくとも１つの極性基、イオン基、及び／又はエポキシ基、並びに少なくとも１つの極性基、イオン基、及び／又はエポキシ基を含む少なくとも１つの部分は、それらの置換に関して、前記鎖の１−２、１−２−３、１−２−３−４、１−２−４−５、１−２−３−４−５、１−２−４、１−２−５、１−３−４、１−３、１−５、１−４、又は１−２−６位のいずれかの組合せであり、１位はＣＯ基から最も離れた置換に任意に割り当てられ、
Ｘ４は、任意選択でＱ２又は−ＣＯ−Ｑ２−（式中、Ｑ２は−ＮＨ−、−Ｎ（ＣＨ３）１〜２−、−Ｏ−、−Ｓ−、又は−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）−Ｏ−であり、少なくとも１つの極性基及び／又はイオン基、或いは少なくとも１つの極性基及び／又はイオン基を含む少なくとも１つの部分を任意選択で含む）によって中断される、１６個までの炭素原子の直鎖又は分枝状脂肪族鎖からなるスペーサ基であり、
Ｘ７は、水素、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、好ましくはフェニルであり、又は複素環式ラジカルであり、
ｒ’は、０〜１２の整数であり、
Ｘ３、Ｘ４、及び／又はＸ６の、少なくとも１つの極性基及び／又はイオン基、並びに／或いは少なくとも１つの極性基及び／又はイオン基を含む少なくとも１つの部分が、頭基であり、Ｘ３及び／又はＸ６、或いはＸ４の、該少なくとも１つの頭基の少なくとも１つは、選択的に切断され得る基又は部分を含む頭基であって、少なくとも１つの水素結合基が、選択的に切断され得る基又は部分を含む該頭基内に及び／又はそれに密接して位置する］。
【請求項１０】
式ＩＩの請求項１に記載の両親媒性化合物：
Ｘ６−Ｘ５−Ｘ４−ＣＯ−Ｑ１−Ｘ２−Ｘ３      ［ＩＩ］
［式中、
Ｑ１は、−ＮＨ−、−Ｎ（ＣＨ３）１〜３−、−Ｏ−、−Ｓ−、又は−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）−Ｏ−であり、
Ｘ４は、任意選択で−ＣＯ−Ｑ２−（式中、Ｑ２は−ＮＨ−、−Ｎ（ＣＨ３）１〜２−、−Ｏ−、−Ｓ−、又は−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）−Ｏ−であり、少なくとも１つの極性基及び／又はイオン基、或いは少なくとも１つの極性基及び／又はイオン基を含む少なくとも１つの部分を任意選択で含む）によって中断されている、１６個までの炭素原子の直鎖又は分枝状の脂肪族鎖からなるスペーサ基であり、
Ｘ２及びＸ５は、同じ又は異なり、各々が少なくとも５個の炭素原子のアルキレン鎖であり、
Ｘ３及びＸ６は、同じ又は異なり、各々が任意選択で少なくとも１つの二重結合を有する少なくとも５個、多くても１８個の炭素原子の脂肪族鎖であって、該脂肪族鎖は少なくとも１つの極性基、イオン基、及び／又はエポキシ基、並びに／或いは少なくとも１つの極性基、イオン基、及び／又はエポキシ基を含む少なくとも１つの部分によって置換されており、該少なくとも１つの極性基、イオン基、及び／又はエポキシ基、並びに少なくとも１つの極性基、イオン基、及び／又はエポキシ基を含む該少なくとも１つの部分は、それらの置換に関して、前記鎖の１−２、１−２−３、１−２−３−４、１−２−４−５、１−２−３−４−５、１−２−４、１−２−５、１−３−４、１−３、１−５、１−４、又は１−２−６位のいずれかの組合せであり、１位はＣＯ基から最も離れた置換に任意に割り当てられ、
Ｘ３、Ｘ４、及び／又はＸ６の、少なくとも１つの極性基及び／又はイオン基、並びに／或いは少なくとも１つの極性基及び／又はイオン基を含む少なくとも１つの部分は頭基であり、Ｘ３及び／又はＸ６、或いはＸ４の、少なくとも１つの該頭基の少なくとも１つは、選択的に切断され得る基又は部分を含む頭基であって、少なくとも１つの水素結合基は該選択的に切断され得る基又は部分を含む頭基内に及び／又はそれに密接して位置する］
【請求項１１】
−Ｘ２−Ｘ３基及び−Ｘ５−Ｘ６基によって形成され、各々が、選択的に切断され得る基又は部分を含む、極性頭基又はイオン性頭基を含む２つの脂肪酸鎖から構成され、該脂肪酸鎖の少なくとも１つは、該頭基に密接する及び／又は該頭基内の部位に付着するイオン性又は極性水素結合基を含み、該２つの脂肪酸鎖は非脂肪酸の中央部分又はスペーサによって分離され、任意選択で−Ｏ−、−Ｓ−、及び／又は−Ｎ−によって中断され、各脂肪酸鎖はアミド、エーテル、エステル、チオエステル、及び／又はリン酸エステル結合を通して中央部分に結合している請求項９又は１０に記載の両親媒性化合物。
【請求項１２】
前記２つの脂肪酸鎖は、同じ又は異なる脂肪酸に由来してよく、且つ該脂肪酸が、ベルノル酸（１２，１３−エポキシオクタデカ−９−エン酸）、レスクエロール酸（１４−ヒドロキシエイコサ−１１−エン酸）、リシノール酸（１２−ヒドロキシオクタデカ−９−エン酸）、部分的に又は完全にエポキシ化したリノール酸、リノレン酸、又はアラキドン酸から、エポキシ基及び／又は二重結合及び／又は水酸基の反応によって得られた前記脂肪酸の誘導体から、或いはラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘル酸、リグノセリン酸、又はウンデシレン酸から、或いはそれらの誘導体から選択される、請求項９から１１のいずれか一項に記載の両親媒性化合物。
【請求項１３】
式Ｉａの、単層小胞を形成することができる請求項９に記載の両親媒性化合物並びにその塩：
Ｒ８−Ｒ７−Ａ４−Ｒ６−Ａ３−Ｒ５−ＯＣ−Ｑ２−Ｒ１０−Ｑ１−ＣＯ−Ｒ１−Ａ１−Ｒ２−Ａ２−Ｒ３−Ｒ４      （Ｉａ）
［式中、
Ｒ１及びＲ５は、同じ又は異なり、各々が−（ＣＨ２）ｎであり、
Ａ１は、−（ＣＨ２）ｍ＋２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ２）ｍ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ（Ｙ１）−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（Ｙ１）−、（−ＣＨ２−ＣＨ（Ｙ１）−（ＣＨ２）ｍ−、−ＣＨ（Ｙ１）−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｍ−、−ＣＨ（Ｙ１）−ＣＨ（Ｙ２）−（ＣＨ２）ｍ−（式中、Ｙ１及びＹ２は、各々、ハロゲン、−ＯＨ、−Ｏ−ＣＯ（ＣＨ２）ｍ−Ｙ３、−ＮＨ−ＣＯ−Ｙ３、−ＳＨ、−ＳＲ１１、−ＮＨ２、又は−Ｎ（Ｒ１１）（Ｒ１２）であるか、又はＹ１及びＹ２は、それらが付着する炭素原子と共に、２、３−オキシラニレン基を形成し、Ｙ３は、ハロゲン、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ２、又は−Ｎ（Ｒ１１）（Ｒ１２）である）から選択され、
Ｒ２及びＲ６は、同じ又は異なり、各々がＣ１〜Ｃ４アルキレンであり、好ましくはメチレンであり、任意選択でハロゲン、アミノ、又はヒドロキシによって置換されており、
Ａ２は、−ＣＨ（Ｒ１３）−、−ＣＨ２−ＣＨ（Ｒ１３）−、−ＣＨ（Ｒ１３）−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（Ｒ１３）−、−ＣＨ（Ｒ１３）−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（Ｒ１３）−、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−ＣＨ（Ｒ１３）−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｇ１−（Ｃ６〜Ｃ１４アリーレン）−（ＣＨ２）ｑＲ１４、−Ｎ（ＣＨ３）２Ｒ１４、又は−ＳＲ１４から選択され、
Ｒ３及びＲ７は、同じ又は異なり、各々が−（ＣＨ２）Ｏ−であり、
Ｒ４はＨ又はＣＨ３であり、
前記Ｒ１−Ａ１−Ｒ２−Ａ２−Ｒ３−Ｒ４鎖中の炭素原子の総数は多くても２３個であり、
Ｑ１は、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、又は−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）−Ｏ−であり、
Ｑ２は、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、又は−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）−Ｏ−であり、
Ｒ１０は、−（ＣＨ２）ｐ−、−ＣＨ２（ＣＨ３）−（ＣＨ２）ｐ−、−ＣＨ（ＣＨ３）−（ＣＨ２）ｐ−ＣＨ（ＣＨ３）−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−）ｐ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−）ｐ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−（ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−）ｐ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−Ｃ６〜Ｃ１４アリーレン−、−（Ｃ６〜Ｃ１４アリーレン）−Ｒ−（Ｃ６〜Ｃ１４アリーレン）−（式中、Ｒは、Ｃ１〜Ｃ４アルキレン、−（ＣＨ３）２−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、又は−ＳＯ２−である）から選択される基であり、
Ａ３は、Ａ１について定義した通りであるか、或いは−（ＣＨ２）ｍ、フェニル、又は−ＣＨ２−フェニル（式中、該フェニル環はＣ１〜Ｃ４アルキル及び／又はハロゲンによって置換されていてもよい）であり、
Ａ４は、Ａ２について定義した通りであるか、又は−（ＣＨ２）ｍであり、
Ｒ８は、Ｒ４について定義した通りであり、
Ｒ１３は、−Ｇ１−（ＣＨ２）ｍＲ１４又はＧ１−ＣＯ（ＣＨ２）ｍＲ１４であり、
Ｇ１は、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ”−、−ＣＨ２ＮＲ”−、−ＣＨ２Ｓ−、又は−ＣＨ２Ｏ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−Ｃ＝ＮＯ−又は−Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＯ−（各式中、Ｒ”は、Ｈ又はＣ１〜Ｃ１８アルキルである）であり、
Ｒ１４は、選択的に切断され得る基又は部分を含む頭基、或いはＲ１５、又は選択的に切断され得る基又は部分によって置換されたＲ１５について定義した通りであり、
Ｒ１１及びＲ１２は、同じ又は異なり、各々が任意選択でハロゲンによって置換されたＣ１〜Ｃ１８アルキル、フェニル又は−ＣＨ２−フェニル（式中、フェニル環はＣ１〜Ｃ４−アルキル、及び／又はハロゲンによって置換されていてもよい）であり、Ｒ１１及びＲ１２の１つはＨでよく、
Ｒ１５は、−ＮＨ２、−ＮＲ１１Ｒ１２、−Ｎ＋Ｒ１１Ｒ１２Ｒ１６（式中、Ｒ１６は、Ｒ１１及びＲ１２について定義した通りである）、
2005521645.tif 000069
Ｒ１７は、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＯ−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＯ−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−（ＣＨ２）ｑ−Ｎ＋Ｒ１１Ｒ１２Ｒ１６、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｑ−ＳＯ３Ｈ、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｑ−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）２、−ＰＯ（ＯＨ）２、又は−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）−Ｏ（ＣＨ２）２−Ｎ＋Ｒ１１Ｒ１２Ｒ１６であり、
Ｒ１８は、水素、Ｃ１〜Ｃ１８アルキル、末端二重結合を有するＣ２〜Ｃ６アルケニル、−ＣＯ−ＣＨ＝ＣＨ２、又は−ＣＯ−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ−ＮＲ１１Ｒ１２であり、
ｎは、５〜１０の整数であり、ｍは、０〜４の整数であり、ｏは、０〜１０の整数であり、ｐは、１〜１６の整数であり、ｑは、０〜３の整数であり、ｒは、１〜６の整数であり、且つｔは、１〜１４の整数である］。
【請求項１４】
以下から選択される請求項１３に記載の両親媒性化合物：
【化１】
2005521645.tif 000070
［式中、
Ｒ１９は、−（ＣＨ２）７−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（Ｒ２０）−（ＣＨ２）４−ＣＨ３であり、
Ｒ’１９は、−（ＣＨ２）７−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（Ｒ２１）−（ＣＨ２）４−ＣＨ３であり、
Ｒ”１９は、−（ＣＨ２）７−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（Ｒ２３）−（ＣＨ２）４−ＣＨ３であり、
Ｒ２０は、−ＯＣＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−フェニル−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯＯＨであり、
Ｒ２１は、−ＮＨＣＯ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−フェニル−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯＯＨであり、
Ｒ２３は、−ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−フェニル−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯＯＨであり、
Ｒ２４は、−（ＣＨ２）７−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（Ｒ２５）−（ＣＨ２）４−ＣＨ３であり、
Ｒ２５は、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＯＯＨであり、
Ｒ２６及びＲ２７は、各々、−（ＣＨ２）１２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−Ｒ２３である］。
【請求項１５】
以下から選択される請求項１３に記載の両親媒性化合物：
【化２】
2005521645.tif 000071
［式中、
Ｒ２８は−（ＣＨ２）１２−Ｒ２３であり、Ｒ２３は−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−フェニル−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨであり、
Ｒ２９は−（ＣＨ２）１２−Ｒ２１であり、且つＲ２１は−ＮＨＣＯ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−フェニル−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨであり、
Ｒ３０は−（ＣＨ２）１２−ＣＯＯＨであり、
Ｒ３１は−（ＣＨ２）１２−Ｒ３２であり、且つＲ３２は−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｎ＋（ＣＨ３）２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＣＯＣＨ３であり、
Ｒ３３は−（ＣＨ２）１２−Ｒ３４であり、且つＲ３４は−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｎ＋（ＣＨ３）３であり、
Ｒ３５は、−（ＣＨ２）９−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ（Ｒ３６）−（ＣＨ２）５ＣＨ３であり、
Ｒ３６は、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨであり、
Ｒ３７は、−（ＣＨ２）７−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ（Ｒ３８）−（ＣＨ２）５ＣＨ３であり、
Ｒ３８は、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−フェニル−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨであり、
Ｒ３９は、−（ＣＨ２）１２−Ｎ（Ｒ４０）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−フェニル−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨであり、
Ｒ４０は、Ｃ４〜Ｃ１６アルキルであり、
Ｒ４１は、−（ＣＨ２）７−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＲ４０）−ＣＨ（Ｒ３８）−（ＣＨ２）４ＣＨ３である］。
【請求項１６】
式ＩＩａの請求項１０に記載の両親媒性化合物：
Ｒ８−Ｒ７−Ａ４−Ｒ６−Ａ３−Ｒ５−Ｑ２−ＣＯ−Ｒ１０−ＣＯ−Ｑ１−Ｒ１−Ａ１−Ｒ２−Ａ２−Ｒ３−Ｒ４          （ＩＩａ）
［式中、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｑ１及びＱ２は、請求項１３で定義した通りであり、Ｑ２及びＱ１は同一である］。
【請求項１７】
以下から選択される請求項１０に記載の両親媒性化合物：
【化３】
2005521645.tif 000072
［式中、
Ｒ４２は、−（ＣＨ２）１０−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（Ｒ４３）−（ＣＨ２）３−ＣＨ３であり、
Ｒ４３は、−Ｏ−ＣＯ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯ２Ｈ    （ＩＩｂ）
であるか、又はＲ２１：−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ−ＮＨ−フェニルアラニン（ＩＩｃ）であり、
Ｒ４４は、−（ＣＨ２）１０−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（Ｒ４６）−（ＣＨ２）３−ＣＨ３であり、
Ｒ４５は、−（ＣＨ２）１０−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（Ｒ４７）−（ＣＨ２）３−ＣＨ３であり、
Ｒ４６は、−ＮＨＣＯ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ−ＮＨ−フェニルアラニンであり、
Ｒ４７は、−ＮＨＣＯ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈであり、
Ｒ４８は、−（ＣＨ２）１１−ＮＨ−（ＣＨ２）−Ｎ＋（ＣＨ３）２（ＣＨ２）２Ｏ−ＣＯ−ＣＨ３    Ｃｌ−であり、
Ｒ４９は、−（ＣＨ２）１１−ＮＨ−（ＣＨ２）−Ｎ＋（ＣＨ３）２（ＣＨ２）２Ｏ−ＣＯ−ＣＨ３    Ｃｌ−であり、
Ｒ５０は、−（ＣＨ２）１１−ＮＨ−（ＣＨ２）−ＮＨ−Ｃ６Ｈ１１Ｏ５であり、
−ＮＨ−Ｃ６Ｈ１１Ｏ５はグルコサミン部分である］。
【請求項１８】
次式の請求項９に記載の両親媒性化合物：
Ｒ８−Ｒ７−Ａ４−Ｒ６−Ａ３−Ｒ５−ＣＯ−Ｑ２−Ｒ２１０−Ｑ１−ＣＯ−Ｒ１−Ａ１−Ｒ２−Ａ２−Ｒ３−Ｒ４      （Ｉ’ａ）
［式中、
Ｒ１〜Ｒ８、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ｑ１、及びＱ２は請求項１３で定義した通りであり（但し、頭基として機能することができる官能基又は部分は存在しない）、
Ｒ２１０は、選択的に切断され得る基又は部分を有する頭基を含む残基を含有するスペーサであり、該スペーサは、−（ＣＨ２）ｑ−Ｒ５１−（ＣＨ２）ｑ−、−（Ｒ５２−Ｃ６〜Ｃ１４アリーレン）−、又は−（Ｃ６〜Ｃ１４アリーレン）−Ｇ２−（Ｒ５２−Ｃ６〜Ｃ１４アリーレン）−から選択され、
Ｇ２は、−（ＣＨ２）ｑ−、−ＮＨ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、又は−ＣＨ（ＣＨ３）２−であり、ｑは１〜３の整数であり、
Ｒ５１は、−Ｎ（Ｒ５３）（Ｒ５４）−であり（式中、Ｒ５３は選択的に切断され得る基又は部分を含む頭基であり、Ｒ５４はＨ又はＣ１〜Ｃ１８アルキル基である）、
Ｒ５２は、選択的に切断され得る基又は部分を含む頭基Ｒ５１を含む残基である］。
【請求項１９】
次式の請求項９に記載の両親媒性化合物：
Ｒ８−Ｒ７−Ａ４−Ｒ６−Ａ３−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−Ｑ２−Ｒ３１０−Ｑ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１−Ａ１−Ｒ２−Ａ２−Ｒ３−Ｒ４      （Ｉ”ａ）
［式中、
Ｒ１〜Ｒ８、Ａ１、Ａ２、Ａ３、及びＡ４は、請求項１３で定義した通りであり（但し、頭基として機能することができる官能基又は部分は存在しない）；
Ｑ１及びＱ２は−Ｏ−であり、
Ｒ３１０は、−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＲ５５）−ＣＨ２−及び−ＣＨ（ＣＨ２−ＯＲ５５）−ＣＨ２−から選択され、
Ｒ５５は、−（ＣＨ２）ｍ’Ｒ５１及び−ＣＯ（ＣＨ２）ｍ’Ｒ５１から選択され、
Ｒ５１は、選択的に切断され得る基又は部分を含む頭基であり、
ｍ’は０〜４の整数である］。
【請求項２０】
次式の請求項９に記載の両親媒性化合物：
Ｒ０−Ｑ１−ＣＯ−Ｒ１−Ａ１−Ｒ２−Ａ２−Ｒ３−Ｒ４      （Ｉｗ）
［式中、
Ｒ０は、−（ＣＨ２）ｒ’−Ｘ７であり、
Ｘ７は、水素、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、好ましくはフェニル、又は複素環式ラジカルであり、
ｒ’は、０〜１２の整数、好ましくは１であり、
Ｑ１は−Ｏ−、−Ｓ−、又は−ＮＨ−であり、
Ｒ１、Ａ１、Ｒ２、Ａ２、Ｒ３、及びＲ４は、請求項１３で定義した通りであるが、前記鎖ＣＯ−Ｒ１−Ａ１−Ｒ２−Ａ２−Ｒ３−Ｒ４は、切断され得る基又は部分を含む少なくとも１つの頭基、及び水素結合基を含み、且つＣ８〜Ｃ２０アルキル鎖が、該脂肪酸鎖、又は該頭基部分中の部位に結合している］。
【請求項２１】
請求項１から２０までのいずれか一項に記載の少なくとも１つの両親媒性化合物から製造した小胞又はリポソーム。
【請求項２２】
以下の１つ又は複数の特徴を有する、請求項２１に記載の小胞又はリポソーム：
（ｉ）疎水鎖に付着させたイオン性又は極性頭基であって、前記選択的に切断され得る基又は部分と、該頭基内の又は該頭基に密接する水素結合基とを含む頭基；
（ｉｉ）前記疎水鎖部分の両端にある２つのイオン性又は極性頭基であって、少なくとも一方の頭基が、選択的に切断され得る基又は部分と、該頭基内にある又は該頭基に密接する水素結合基とを含み、任意選択で該頭基に近接して、小胞の形成を阻害せず、そのような誘導体から製造した小胞を安定させる、極性結合又は水素結合による相互作用を可能にする、イオン基及び極性基を、更に含む頭基；
（ｉｉｉ）前記分子の両端にある２つの頭基であって、少なくとも一方の頭基が、選択的に切断され得る基又は部分と、該頭基内にある又は該頭基に密接する水素結合基とを含み、該頭基が、任意選択で、前記疎水鎖の中央部内に、或いは中央部分又は中央に比較的近接して、そのような誘導体から製造した小胞を安定させる、極性結合又は水素結合による相互作用を可能とする極性基を更に含む頭基；
（ｉｖ）（ｉ）から（ｉｉｉ）に加え、前記疎水鎖部分又は頭基に付着させて疎水性相互作用を増大させ、それによってそのような誘導体から製造された小胞の安定性に寄与する、少なくとも５個のメチレン基からなる追加の脂肪族鎖。
【請求項２３】
脂肪族鎖（２頭両親媒性物質）の両端上に２つの異なる極性又はイオン性頭基を有する２頭基両親媒性誘導体から製造した、非対称頭基を有する単層ナノ小胞であって、
該頭基の少なくとも１つ（大きい方）は、小胞外表面上に位置し選択的に切断され得る基又は部分を含み、更に、該脂肪族鎖上にあり、該小胞に追加の安定性を付与するが、それにもかかわらずイオン性又は極性頭基の除去後に小胞を破裂させる追加の極性又はイオン性の頭基を含む、請求項２１に記載の小胞又はリポソーム。
【請求項２４】
治療物質又は診断剤を特異的に標的器官又は組織へ送達するための、又は遺伝子治療用の核酸を送達するための、請求項２１から２３までのいずれか一項に記載の小胞又はリポソーム。
【請求項２５】
前記器官が脳である、請求項２４に記載の小胞又はリポソーム。
【請求項２６】
アセチルコリン及びアセチルチオコリンから選択される選択的に切断され得る基を含む頭基を有する両親媒性化合物から製造した、請求項２４又は２５に記載の小胞又はリポソーム。
【請求項２７】
−ＮＨ−（ＣＨ２）−Ｎ＋（ＣＨ３）２（ＣＨ２）２Ｏ−ＣＯ−ＣＨ３、−Ｏ−ＣＯ（ＣＨ２）−Ｎ＋（ＣＨ３）２（ＣＨ２）２Ｏ−ＣＯ−ＣＨ３、及び−Ｏ−ＣＯ（ＣＨ２）３−ＣＯ−Ｏ（ＣＨ２）２−Ｎ＋（ＣＨ３）３から選択される基を含む頭基を有する両親媒性化合物から製造した、請求項２６に記載の小胞又はリポソーム。
【請求項２８】
ネオスチグミンやピリドスチグミンなどのアセチルコリンエステラーゼ（ＡＣｈＥ）の阻害剤と共に投与するための、請求項２６又は２７に記載の小胞又はリポソーム。
【請求項２９】
フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンから選択した芳香族アミノ酸の誘導体から選択される、選択的に切断され得る基を含む頭基を有する両親媒性化合物から製造した、請求項２４又は２５に記載の小胞又はリポソーム。
【請求項３０】
前記頭基が、ＯＣＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−フェニル−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯＯＨ、−ＮＨＣＯ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−フェニル−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−フェニル−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯＯＨ、及び−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−フェニル−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯＯＨから選択される、請求項２９に記載の小胞又はリポソーム。
【請求項３１】
ベンセラジドやカルビドパなどの芳香族Ｌ−アミノ酸脱炭酸酵素（ＡＡＤＣ）阻害剤と共に投与するための、請求項２９又は３０に記載の小胞又はリポソーム。
【請求項３２】
前記治療物質が、小胞又はリポソーム中にカプセル化され、又は搭載されている、請求項２４に記載の小胞又はリポソーム。
【請求項３３】
パーキンソン病用の前記治療物質が、レボドパ（Ｌ−ＤＯＰＡ）、カルビドパ／レボドパ、アポモルフィン、ドーパミン、又はグリア由来神経栄養因子であり、アルツハイマー病治療用の前記治療物質が、アルツハイマーのプラーク成分に対する抗体、抗炎症剤、増殖因子、又はカルバコールなどのムスカリン作用薬である、パーキンソン病やアルツハイマー病などの中枢神経系の神経系／神経変性疾患を治療するための、請求項３２に記載の小胞又はリポソーム。
【請求項３４】
前記治療物質が、ドキソルビシンなどの脳腫瘍の化学療法のための化学療法薬である、請求項３２に記載の小胞又はリポソーム。
【請求項３５】
さらに、ターゲティング基、及び／又は血液脳関門を通過する輸送のための基、及び／又は身体による排除から前記小胞を安定させる基を含む頭基を有する両親媒性化合物を含有する、請求項２１から３４のいずれか一項に記載の小胞又はリポソーム。
【請求項３６】
脳への前記ターゲティング基が、ニコチン、シトシン、ロベリン、Ｌ−グルタミン酸、ＭＫ８０１、モルヒネ、エンケファリン、ベンゾジアゼピン、ドーパミン拮抗薬、三環系抗うつ剤、ムスカリン作用薬、ムスカリン拮抗薬及びカンナビノイドの残基から選択される、請求項３５に記載の小胞又はリポソーム。
【請求項３７】
血液脳関門を通り抜けて輸送するための前記基が、グルコース、マンノース、及びアスコルビン酸などの単糖類、抗体、コリン、並びにグルタミン酸、トリプトファン、及びレボドパなどのアミノ酸から選択される、請求項３５に記載の小胞又はリポソーム。
【請求項３８】
身体による排除から小胞を安定させる前記基が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）残基である、請求項３５に記載の小胞又はリポソーム。
【請求項３９】
送達部位での存続時間が短く、身体の別の部分でその活性を発揮する治療物質を送達するための、請求項２１から２３のいずれか一項に記載の小胞又はリポソーム。
【請求項４０】
前記治療物質が、インスリン、コパキソン、ハーセプチン、及び免疫グロブリン混合物から選択される、請求項３９に記載の小胞又はリポソーム。
【請求項４１】
本明細書で誘導体１、２、３、４、５、８、９、及び１２として示す両親媒性化合物。
【請求項４２】
本明細書で誘導体６、７、１０、及び１１として示す両親媒性化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な両親媒性誘導体、並びにその誘導体から製造した、非関連組織から隔離しながら、治療薬を部位指向的に送達し標的組織でその特異的な放出を行なうための小胞及びリポソームに関する。本発明は、毒物、或いは生物学的存続時間の短い又は生体利用能の低い薬剤を標的器官へ送達するのに特に適している。
【背景技術】
【０００２】
多くの生体活性物質は、治療上有効な又は十分な量で治療対象となる患者の器官又は組織に送達することが困難又は不可能なために、その治療効果が妨げられてきた。そのような物質の効率的な送達に関する主要な困難の１つは、多くの物質に対して透過性が低い又は皆無である生物学的障壁によってもたらされている。
【０００３】
生体活性分子の細胞内送達を促進するように設計された化合物は、体内で極性成分及び非極性成分と相互作用しなければならないため、通常、化合物自体極性及び非極性の領域を含む。この目的のために、極性及び疎水性（非極性）領域を含む両親媒性化合物、特に陽イオン性両親媒性物質が薬物の細胞内送達に適当であることが分っている。
【０００４】
リポソームとして知られているリン脂質両親媒性物質に由来する小胞は、ある種の癌及び微生物感染症の治療用の薬物を送達するために使用されている。例えば、いくつかの重要な化学療法剤及び抗生剤は、リポソーム中にそれらの薬剤をカプセル化することによってその治療効果を高めることができ、このリポソームは、許容できる血液循環寿命を有し、血管空孔率（ｖａｓｃｕｌａｒ  ｐｏｒｏｓｉｔｙ）の増大による病変部位へのアクセスが改善される（Ｌａｓｉｃ、１９９６年）。しかし、こうした場合の送達モードは受動的であり、制御放出によるターゲティングの目標は依然として達成し難い。
【０００５】
治療への適用を目的とする生体活性物質の標的を定めた制御放出は、ミセル、エマルジョン、複合体形成物、プロドラッグ、小胞など、様々な薬物送達プラットホームを使用して継続的に開発が行なわれている。合成両親媒性物質から製造した小胞、及び合成若しくは天然のリン脂質から製造したリポソームは、非常に有望な手法と見なされている。というのは、治療薬は、周囲から完全に隔離され、各小胞又はリポソームは、多くの分子を送達し、生物学的安定性に関する小胞又はリポソームの表面特性を改変し、生物学的障壁の膜透過性を高め、カプセル化した薬物の物理化学的特性に依存せずにターゲティングを行なうことができる。しかし、標的を定めた制御放出特性を有する小胞の製造に対する熱心な努力にもかかわらず、多くの適用例に必要とされる優れた物理学的、化学的及び生物学的安定性を有する小胞は未だ生成されていない。
【０００６】
小胞又はリポソームからの薬物の放出における時間的制御を改善するために、現在、３つのアプローチ（ｉ）温度、ｐＨ、又は標的結合感受性誘導相の変化（ｔａｒｇｅｔ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｈａｓｅ  ｃｈａｎｇｅｓ）などの物理的アプローチ、（ｉｉ）特定の場所でのリポソームの不安定化を試みる化学的アプローチ、（ｉｉｉ）ターゲティング部分を付着させた表面を使用する生物学的アプローチ（Ｌａｓｉｃ、１９９８年）、が追求されている。
【０００７】
薬物放出の空間的制御は、ポリマー鎖によってリポソーム表面に付着させた抗体分子を含むリポソームにより物理的に利用可能な部位おける細胞ターゲティングによって試みられてきた。現況技術では、標的を定めた送達に関して、抗体及び表面リガンドの潜在能力は不確実である。特定の組織及び細胞への到達し易さという問題、並びに抗体又はレクチンでコートしたリポソームによる宿主組織に対して誘発される免疫反応の看過が、このアプローチを問題の多いものにしていると思われる。
【０００８】
酵素に不安定なリポソームが、部位特異的リポソーム薬物送達システムのモデルとして研究されてきた。このアプローチは、ある種の病原性細胞が過剰な量の特定酵素を産生すること、例えば、骨癌細胞はアルカリフォスファターゼを産生し、神経芽細胞腫細胞はアセチルコリンエステラーゼを産生することを意図したものである。１つのアプローチでは、アセチルコリン頭基を持つ小型単層膜小胞を製造し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでアセチルコリンエステラーゼの存在下、破裂することを示した（Ｍｅｎｇｅｒ及びＪｏｈｎｓｔｏｎ、１９９１年）。
【０００９】
エラスターゼは、炎症及び腫瘍状態に至るところで関与しているので重要である。酵素切断に感受性のペプチド−脂質複合体が設計され、酵素の活性化によって融合を誘発させることのできるリポソームを生成すると報告されている。事実、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミンをエラスターゼ基質、Ｎ−アセチル−ａｌａ−ａｌａに共有結合すると、固有の融合形成活性のない切断可能なペプチド−脂質がもたらされた。さらに、単純ペプチド基質を認識するエラスターゼの能力は、その結合を容易にするだけでなく、ペプチド−脂質の免疫原性を潜在的に制限する（Ｐａｋら、１９９８年）。
【００１０】
ＵＳ６、０８７、３２５号は、リポソーム中に組み込んで標的ペプチダーゼ分泌細胞付近で選択的にリポソームを不安定化させ、それによって標的細胞の近傍に又は直接細胞中にリポソームを送達するペプチド−脂質複合体を記載している。このようにしてリポソームを使用して、ペプチダーゼ分泌細胞の発生を特徴とする、疾病、異常、又は腫瘍、微生物感染、炎症などの状態の哺乳類を治療することができる。
【００１１】
標的部位でｐＨを変化させることにより小胞及びリポソームを不安定化させることもできる。例えば、ＷＯ０１／０５３７５号は、酸又は酸化に不安定なビニルエーテルが結合した親水性頭基を有する両親媒性脂質化合物、及びそれを用いて製造したリポソームを記載しており、これが、循環に対する所与の安定性、及び所望の放出速度プロフィール又は融合誘発性を有し、特定の治療又は診断指標示に適することを述べている。安定化したリポソーム又は小胞は、ｐＨや酸化体などの化学的環境の変化によって所与の部位で容易に不安定化されると言われている。
【００１２】
ＵＳ６、２９４、１９１号は、細胞への生理活性剤の送達を局在化させるための、１つ又は複数のＮ−アシル化ホスファチジルエタノールアミン部分を含むリポソームを記載している。
【００１３】
血液から標的組織への化合物の輸送は、血液脳関門（ＢＢＢ）などの生物学的障壁によって制限されている。脳への薬物送達は、ＢＢＢを形成する隣接の脳毛細血管内皮細胞間の緊密な結合のために特に抑制されている。但し、いくつかの脂溶性物質は、受動的にこの関門を通過することができ、その一方で、親水性及びイオン性物質［例えばアミノ酸］は、特定の担体輸送システムによって輸送される。従って、一定の物質の中枢神経系（ＣＮＳ）への進入をこれらのトランスポーターを調節することによって改善することができる。
【００１４】
薬物をＣＮＳ透過性部分と結合させることによってＢＢＢを経由する輸送を増強する努力がなされてきた。例えば、蛋白質や特定の核酸配列などの外来性生体化合物のＢＢＢ透過性を、それらを脂質と結合させることによって増大させ、それによりＣＮＳの障害を修正する試みがなされている（Ｃｈｏｐｉｎｅａｕら、１９９８年）。脂肪酸などの長鎖アルキル鎖は、その疎水性及び低毒性のために、薬物に共有結合させた場合、薬物のＢＢＢ透過性を強化することができる可能性の高い候補物質である。ＢＢＢを通過する輸送を強化する、ベクター又は担体との複合体を形成する別の例は、膜結合型酵素を利用して高度に親油性なトリグリセリドペプチド担体から生理活性ペプチドを放出させるものである（Ｐａｔｅｌら、１９９７年）。
【００１５】
しかし、上記の方法や他の方法は、活性剤をカプセル化せず、結合した分子がいくつかの生物学的区域で吸着され分解されるので、選択的ではない。ＢＢＢの通過にリポソームを使用することについて、リポソーム中に酵素を組み込むこと（Ｎａｏｉ及びＹａｇｉら、１９８０）、ＰＣコレステロール及びスルファチドを使用し、ラット脳にその内容物を送達すること（Ｙａｇｉら、１９８２年）、ＢＢＢの細胞によってマンノース残基が認識されるので、ＰＣコレステロール及びｐ−アミノフェニル−アルファ−マンノピラノシドから構成されるリポソームを使用して、脳リソソーム及びグリア細胞に［３Ｈ］−ガラクトセレブロシドを送達すること（Ｕｍｅｚａｗａ及びＥｔｏ、１９８８年）など、他にもいくつかの研究が報告されている。またｃＡＭＰホスホジエステラーゼ［ＰＤＥ］をヨウ化処理し、脱水−再水和小胞、或いはＰＣコレステロール及びスルファチドから調製した小型単層膜小胞（ＳＵＶ’ｓ）に封じ込め、高浸透圧性マンニトールの静脈内注射によって脳に送達させた研究では、ＢＢＢを通過するリポソームの透過性が増加することが示された（Ｋｏｚｌｅｒ、２００１年）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
上記従来技術の手法のいずれもＣＮＳに有効なターゲティングを提供していない。さらに、安定性が不十分なために、現況技術のリポソームは、比較的大量のカプセル化活性剤を様々な非標的組織に放出している。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明は、小胞又はリポソームを形成することができる新規な両親媒性化合物に関し、当該両親媒性化合物は、選択的に切断され得る基又は部分を含む少なくとも１つの頭基と、当該頭基内に及び／又はそれに密接して位置する少なくとも１つの水素結合基を有する。
【００１８】
選択的に切断され得る基又は部分は、非限定的に、ｐＨ若しくは温度、酸化若しくは還元条件、及び／又は好ましくは酵素条件の変化などの化学的、物理的、又は生物学的環境の変化を含む選択的条件下で切断される基又は部分である。
【００１９】
本発明の両親媒性化合物から製造した小胞及びリポソームは、それを使用して、薬物をカプセル化し、カプセル化したままそれらを標的器官まで送達することができる。次いで、小胞を標的器官で破裂させ、主としてそこで薬物を放出させる。両親媒性化合物は、両親媒性物質が小胞として組織化されたとき水素結合を形成し、その結果小胞の安定性を増大させる基と、標的器官又は組織で加水分解されることによって小胞の破裂を生じる結果、カプセル化した薬物の放出を引き起こす、選択的に切断され得る基又は部分を有する頭基とを含む。追加のターゲティングペンダントを導入して小胞を標的器官又は組織に向かわせることもできる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
一態様において、本発明は、小胞又はリポソームを形成することができる両親媒性化合物に関し、前記両親媒性化合物は、選択的に切断され得る基又は部分を含む少なくとも１つの頭基と、当該頭基内及び／又はそれに密接して位置する少なくとも１つの水素結合基とを有する。
【００２１】
本明細書では、「選択的に切断され得る基又は部分」の語は、非限定的に、ｐＨ若しくは温度、酸化若しくは還元条件、及び／又は酵素条件の変化を含む選択的条件などの、化学的、物理的、又は生物学的環境の変化を含む選択的条件下で切断される基又は部分をさす。また、本明細書で使用される「除去可能な基」の語は、切断が生じた場合、その分子から除去される、選択的に切断され得る基又は部分中の特定の官能基を示す。
【００２２】
本発明の好ましい一実施形態において、選択的に切断され得る基は、生物学的環境中で、特に脳又は血液中で、加水分解酵素、エステル分解酵素、脱リン酸酵素、酸化酵素、脱炭酸酵素、脱アミノ酵素、異性化酵素などの分解酵素によって酵素切断され、その酵素の幾つかは脳に限定され、又は脳及びその周囲にも存在する。そのような酵素の例としては、アセチルコリンエステラーゼ（ＡＣｈＥ）や芳香族Ｌ−アミノ酸脱炭酸酵素（ＡＡＤＣ）などのコリンエステラーゼ（ＣｈＥ）があるが、これらに限るものではない。
【００２３】
本発明で使用することができる、選択的に切断され得る基又は部分の例としては、アセチルコリンやチオアセチルコリンなどの、コリン及びチオコリン誘導体からの残基；ｐ−アミノフェニルアラニン、レボドパ（３，４−ジヒドロキシ−フェニルアラニン）などの、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンから選択した芳香族アミノ酸の誘導体からの残基；グルタミン酸又はアスパラギン酸の残基；及び（主として脳中でエンケファリナーゼによって切断される）エンケファリン、（エラスターゼによって切断され、一定の型の癌及び動脈瘤で過剰に発現される）Ｎ−アセチル−ａｌａ，ａｌａ、（アルツハイマー病患者の脳中に過剰に発現される）β及びγセクレターゼにより認識される領域を構成するペプチド、及び（小胞へ取り込むことで、炎症部位でその成分を放出する）ストロメライシンによって認識されるペプチドなどの、ペプチド又はその誘導体からの残基があるが、これらに限るものではない。
【００２４】
本発明によれば、非限定的に、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ−、−Ｎ＋Ｈ２−、−ＮＨ２、−Ｎ＋Ｈ３、−ＮＨ−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−Ｃ＝ＮＯＨ、−Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＯＨ、−Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＯ−、−ＣＯ−ＮＨ２などの、少なくとも１つの水素結合基は、選択的に切断され得る基又は部分を含む頭基内に、及び／又はその頭基に密接して見出され、よってそのような両親媒性化合物から製造した小胞により高い安定性及び他の特徴をもたらす。本明細書では「密接」は、頭基が結合している脂肪族鎖中の原子に隣接する原子に、及び／又は該脂肪族鎖中の原子から６原子まで離れて、水素結合基が位置していることを意味する。
【００２５】
一実施形態では、本発明の両親媒性化合物は式Ｉで示される：
【００２６】
Ｘ１−ＣＯ−Ｘ２−Ｘ３      ［Ｉ］
［式中、
Ｘ１は、−Ｑ１−Ｒ０（式中、Ｑ１は−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、又は−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）−Ｏ−であり、Ｒ０は、−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６、又は−（ＣＨ２）ｒ’−Ｘ７である）であり、
Ｘ２及びＸ５は、同じ又は異なり、各々が少なくとも５個の炭素原子のアルキレン鎖であり、
Ｘ３及びＸ６は、同じ又は異なり、各々が任意選択で少なくとも１つの二重結合を有する少なくとも５個、多くても１８個の炭素原子の脂肪族鎖であって、当該脂肪族鎖は、少なくとも１つの極性基、イオン基、及び／又はエポキシ基、並びに／或いは少なくとも１つの極性基、イオン基、及び／又はエポキシ基を含む少なくとも１つの部分によって置換されており、当該少なくとも１つの極性基、イオン基、及び／又はエポキシ基、並びに少なくとも１つの極性基、イオン基、及び／又はエポキシ基を含む少なくとも１つの部分は、それらの置換に関して、鎖の１−２、１−２−３、１−２−３−４、１−２−４−５、１−２−３−４−５、１−２−４、１−２−５、１−３−４、１−３、１−５、１−４、又は１−２−６位のいずれかの組合せであり、１位はＣＯ基から最も離れた置換に任意で割り当てられ、
Ｘ４は、任意選択でＱ２又は−ＣＯ−Ｑ２−（式中、Ｑ２は−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、又は−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）−Ｏ−であり、少なくとも１つの極性基及び／又はイオン基、或いは少なくとも１つの極性基及び／又はイオン基を含む少なくとも１つの部分を任意選択で含む）によって中断される、１６個までの炭素原子の直鎖又は分枝状の脂肪族鎖からなるスペーサ基であり、
Ｘ７は、水素、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、好ましくはフェニル、又は複素環式ラジカルであり、
ｒ’は、０〜１２の整数であり、
Ｘ３、Ｘ４、及び／又はＸ６の、少なくとも１つの極性基及び／又はイオン基、並びに／或いは少なくとも１つの極性基及び／又はイオン基を含む少なくとも１つの部分は、頭基であり、且つＸ３及び／又はＸ６、或いはＸ４の当該少なくとも１つの頭基の少なくとも１つは、選択的に切断され得る基又は部分を含む頭基であって、少なくとも１つの水素結合基が、当該選択的に切断され得る基又は部分を含む頭基内に、及び／又はそれに密接して位置する］。
【００２７】
別の実施形態では、本発明の両親媒性化合物は式ＩＩで示される：
Ｘ６−Ｘ５−Ｘ４−ＣＯ−Ｑ１−Ｘ２−Ｘ３      ［ＩＩ］
【００２８】
［式中、
Ｑ１は、−ＮＨ−、−Ｎ（ＣＨ３）１〜２−、−Ｏ−、−Ｓ−、又は−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）−Ｏ−であり、
Ｘ４は、任意選択で−ＣＯ−Ｑ２−（式中、Ｑ２は−ＮＨ−、−Ｎ（ＣＨ３）１〜２−、−Ｏ−、−Ｓ−、又は−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）−Ｏ−であり、少なくとも１つの極性基及び／又はイオン基、或いは少なくとも１つの極性基及び／又はイオン基を含む少なくとも１つの部分を任意選択で含む）によって中断される、１６個までの原子の直鎖又は分枝状脂肪族鎖からなるスペーサ基であり、
Ｘ２及びＸ５は、同じ又は異なり、各々が少なくとも５個の炭素原子のアルキレン鎖であり、
Ｘ３及びＸ６は、同じ又は異なり、各々が任意選択で少なくとも１つの二重結合を有する少なくとも５個、多くても１８個の炭素原子の脂肪族鎖であって、当該脂肪族鎖は少なくとも１つの極性基、イオン基、及び／又はエポキシ基、並びに／或いは少なくとも１つの極性基、イオン基、及び／又はエポキシ基を含む少なくとも１つの部分によって置換されており、その少なくとも１つの極性基、イオン基、及び／又はエポキシ基、並びに少なくとも１つの極性基、イオン基、及び／又はエポキシ基を含む少なくとも１つの部分は、それらの置換に関して、鎖の１−２、１−２−３、１−２−３−４、１−２−４−５、１−２−３−４−５、１−２−４、１−２−５、１−３−４、１−３、１−５、１−４、又は１−２−６位のいずれかの組合せであり、１位はＣＯ基から最も離れた置換に任意に割り当てられ、
Ｘ３、Ｘ４、及び／又はＸ６の、少なくとも１つの極性基及び／又はイオン基、並びに／或いは少なくとも１つの極性基及び／又はイオン基を含む少なくとも１つの部分は、頭基であり、且つＸ３及び／又はＸ６、或いはＸ４の当該少なくとも１つの頭基の少なくとも１つは、選択的に切断され得る基又は部分を含む頭基であって、少なくとも１つの水素結合基が、前記選択的に切断され得る基又は部分を含む頭基内に、及び／又はそれに密接して位置する］
【００２９】
好ましい一実施形態において、本発明の式Ｉ又はＩＩの両親媒性化合物は、−Ｘ２−Ｘ３基及び−Ｘ５−Ｘ６基によって形成され、各基が選択的に切断され得る基又は部分を含む、極性頭基又はイオン頭基を含む２つの脂肪酸鎖から構成され、その脂肪酸鎖の少なくとも１つは当該頭基に密接する、且つ／又は当該頭基内の部位に付着するイオン性又は極性水素結合基を含み、２つの脂肪酸鎖は非脂肪酸の中央部分又はスペーサ、例えば、任意選択で−Ｏ−、−Ｓ−、又はＮＨ−によって中断されたＣ２−Ｃ１６アルキレン鎖によって分離され、各脂肪酸鎖はアミド（水素結合基）、エーテル、エステル、チオエステル、及び／又はリン酸エステル結合を介して中央部分に結合している。
【００３０】
好ましい一実施形態において、本発明は、単層小胞を形成することができる、式Ｉａで示される上式Ｉの両親媒性化合物又はその誘導体を提供する：
Ｒ８−Ｒ７−Ａ４−Ｒ６−Ａ３−Ｒ５−ＯＣ−Ｑ２−Ｒ１０−Ｑ１−ＣＯ−Ｒ１−Ａ１−Ｒ２−Ａ２−Ｒ３−Ｒ４      （Ｉａ）
【００３１】
［式中、鎖−ＣＯ−Ｒ１−Ａ１−Ｒ２−Ａ２−Ｒ３−Ｒ４及びＲ８−Ｒ７−Ａ６−Ｒ６−Ａ５−Ｒ５−ＣＯ−は同じ脂肪酸に由来してよく、当該脂肪酸は、ベルノル酸（１２，１３−エポキシオクタデカ−９−エン酸）、レスクエロール酸（１４−ヒドロキシエイコサ−１１−エン酸）、リシノール酸（１２−ヒドロキシオクタデカ−９−エン酸）、部分的に又は完全にエポキシ化したリノール酸、リノレン酸、及びアラキドン酸から、或いはエポキシ基及び／又は二重結合及び／又は水酸基の反応によって得られたその誘導体から選択されるか、或いは鎖Ｒ８−Ｒ７−Ａ６−Ｒ６−Ａ５−Ｒ５−ＣＯ−は、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘル酸、リグノセリン酸、又はウンデシレン酸から選択した脂肪酸に由来する］。
いくつかのエポキシ化及びヒドロキシ化した脂肪酸の供給源は、ベルノニア（ｖｅｒｎｏｎｉａ）油、レスクエレラ（ｌｅｓｑｕｅｒｅｌｌａ）油、ヒマシ油、並びにエポキシ化した大豆及び亜麻仁油である。
【００３２】
好ましい一実施形態において、本発明は、式ｌａの両親媒性化合物及びその塩であって、式中、
Ｒ１及びＲ５は、同じ又は異なり、各々が−（ＣＨ２）ｎであり、
Ａ１は、−（ＣＨ２）ｍ＋２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ２）ｍ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ（Ｙ１）−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（Ｙ１）−、（−ＣＨ２−ＣＨ（Ｙ１）−（ＣＨ２）ｍ−、−ＣＨ（Ｙ１）−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｍ−、−ＣＨ（Ｙ１）−ＣＨ（Ｙ２）−（ＣＨ２）ｍ−（式中、Ｙ１及びＹ２は各々、ハロゲン、−ＯＨ、−Ｏ−ＣＯ（ＣＨ２）ｍ−Ｙ３、−ＮＨ−ＣＯ−Ｙ３、−ＳＨ、−ＳＲ１１、−ＮＨ２、又は−Ｎ（Ｒ１１）（Ｒ１２）であるか、又はＹ１及びＹ２は、それらが付着する炭素原子と共に２、３−オキシラニレン基を形成し、Ｙ３は、ハロゲン、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ２、又は−Ｎ（Ｒ１１）（Ｒ１２）である）から選択され、
Ｒ２及びＲ６は、同じ又は異なり、各々が、任意選択でハロゲン、アミノ、又はヒドロキシによって置換されている、Ｃ１〜Ｃ４アルキレン、好ましくはメチレンであり、
Ａ２は、−ＣＨ（Ｒ１３）−、−ＣＨ２−ＣＨ（Ｒ１３）−、−ＣＨ（Ｒ１３）−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（Ｒ１３）−、−ＣＨ（Ｒ１３）−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（Ｒ１３）−、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−ＣＨ（Ｒ１３）−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｇ１−（Ｃ６〜Ｃ１４アリーレン）−（ＣＨ２）ｑＲ１４、−Ｎ（ＣＨ３）２Ｒ１４、又は−ＳＲ１４から選択され、
Ｒ３及びＲ７は、同じ又は異なり、各々が−（ＣＨ２）Ｏ−であり、
Ｒ４はＨ又はＣＨ３であり、Ｒ１−Ａ１−Ｒ２−Ａ２−Ｒ３−Ｒ４鎖中の炭素原子の総数は多くても２３個であり、
Ｑ１は、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、又は−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）−Ｏ−であり、
Ｑ２は、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、又は−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）−Ｏ−であり、
Ｒ１０は、
2005521645.tif 000002
（式中Ｒ１は、Ｃｌ−Ｃ４アルキレン、−Ｃ（ＣＨ３）２−、−０−、−Ｓ−、−ＮＨ−又は−ＳＯ２−である）から選択される基であり、
Ａ３は、Ａ１について定義した通りであるか、或いは−（ＣＨ２）ｍ、フェニル、又は−ＣＨ２−フェニル（式中、フェニル環はＣ１〜Ｃ４アルキル及び／又はハロゲンによって置換することができる）であり、
Ａ４は、Ａ２について定義した通りであり、又は−（ＣＨ２）ｍであり、
Ｒ８は、Ｒ４について定義した通りであり、
Ｒ１３は、−Ｇ１−（ＣＨ２）ｍＲ１４又は−Ｇ１−ＣＯ（ＣＨ２）ｍＲ１４であり、
Ｇ１は、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ”−、−ＣＨ２ＮＲ”−、−ＣＨ２Ｓ−若しくは−ＣＨ２Ｏ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−Ｃ＝ＮＯ−、−Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＯ−（式中、Ｒ”は、Ｈ又はＣ１〜Ｃ１８アルキルである）であり、
Ｒ１４は、選択的に切断され得る基又は部分を含む頭基、或いはＲ１５又は選択的に切断され得る基又は部分によって置換されたＲ１５について定義した通りであり、
Ｒ１１及びＲ１２は、同じ又は異なり、各々が任意選択でハロゲンによって置換されたＣ１〜Ｃ１８アルキル、フェニル又は−ＣＨ２−フェニル（式中、フェニル環はＣ１〜Ｃ４−アルキル、及び／又はハロゲンによって置換することができる）であって、Ｒ１１及びＲ１２の１つはＨでよく、
Ｒ１５は、−ＮＨ２、−ＮＲ１１Ｒ１２、−Ｎ＋Ｒ１１Ｒ１２Ｒ１６（式中、Ｒ１６は、Ｒ１１及びＲ１２に対して定義した通りである）、
2005521645.tif 000003
であり、
Ｒ１７は、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＯ−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＯ−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−（ＣＨ２）ｑ−Ｎ＋Ｒ１１Ｒ１２Ｒ１６、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｑ−ＳＯ３Ｈ、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｑ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｑ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｑ−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）２、−ＰＯ（ＯＨ）２、又は−Ｏ−ＰＯ（ＯＨ）−Ｏ（ＣＨ２）２−Ｎ＋Ｒ１１Ｒ１２Ｒ１６であり、
Ｒ１８は、水素、Ｃ１〜Ｃ１８アルキル、末端二重結合を有するＣ２〜Ｃ６アルケニル、−ＣＯ−ＣＨ＝ＣＨ２、又は−ＣＯ−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ−ＮＲ１１Ｒ１２であり、
ｎは、５〜１０の整数であり、ｍは、０〜４の整数であり、ｏは、０〜１０の整数であり、ｐは１〜１６の整数であり、ｑは、０〜３の整数であり、ｒは、１〜６の整数であり、ｔは、１〜１４の整数である、
両親媒性化合物及びその塩を提供する。
【００３３】
本発明の一実施形態において、両親媒性化合物ｌａは、対称であり２つの同一の脂肪酸鎖を含み、そのそれぞれに、同じ選択性で切断され得る基と同じ安定性の極性水素結合基とを含む同じ頭基が密接して脂肪族鎖に付着している。さらに、追加の水素結合基が個々の頭基内に存在することができる。
【００３４】
例えば、アシル残基が次式
【化１】
2005521645.tif 000004
で示されるベルノル酸から出発して、アルキレンジアミン、例えばエチレンジアミンとの反応、及びカルボン酸誘導体を用いるオキシラニル（ｏｘｉｒａｎｙｌ）環の開裂によって式Ｉｂの対称両親媒性化合物を合成することができる。
【００３５】
Ｒ１９−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ１９      （Ｉｂ）
［式中、Ｒ１９は、−（ＣＨ２）７−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（Ｒ２０）−（ＣＨ２）４−ＣＨ３であり、
Ｒ２０は、−ＯＣＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−フェニル−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯＯＨである］
【００３６】
この実施例では、Ｒ２０は、エステル結合によって脂肪酸鎖Ｒ１９に結合する、選択的に切断され得る部分ｐ−アミノフェニルアラニンを含む頭基部分であり、当該頭基は、水素結合−ＮＨ基をフェニル基のパラ位に、別の水素結合−ＯＨ基を近接の炭素原子（１−２位）上に含み、両基は安定化に寄与する。
【００３７】
スペーサＸ４としてのエチレンの代わりに別の長鎖スペーサ、又は例えば、分枝スペーサを、ＮＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＮＨ２などのジアミンとの反応によって形成することができる。
【００３８】
別の実施形態では、２つの脂肪酸鎖をアミド結合の代わりにエステルによってスペーサに結合することができ、ジエチレングリコールなどのジヒドロキシ化合物と反応させた場合、それによって例えばＩｃの化合物式が得られる。
【００３９】
Ｒ１９−ＣＯ−Ｏ（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＯ−Ｒ１９      （Ｉｃ）
［式中、Ｒ１９は、上記化合物Ｉｂについて定義した通りである］
【００４０】
別の実施形態では、両親媒性化合物は式Ｉｄで示される。
【００４１】
Ｒ’１９−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ’１９      （Ｉｄ）
［式中、Ｒ’１９は、−（ＣＨ２）７−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（Ｒ２１）−（ＣＨ２）４−ＣＨ３であり、
Ｒ２１は、−ＮＨＣＯ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−フェニル−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯＯＨである］
【００４２】
さらに別の実施形態では、両親媒性化合物は式Ｉｅで示される。
【００４３】
Ｒ’１９−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ”１９      （Ｉｅ）
［式中、Ｒ’１９は、上記で定義した通りであり、
Ｒ”１９は、−（ＣＨ２）７−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（Ｒ２３）−（ＣＨ２）４−ＣＨ３であり、Ｒ２３は、−ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−フェニル−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯＯＨである］
【００４４】
式Ｉｄ及びＩｅの化合物では、ｐ−アミノフェニルアラニン基を含む頭基部分Ｒ２１又はＲ２３は、それぞれアミド又はアミノ結合を介して脂肪酸鎖Ｒ’ｌ９又はＲ”１９に結合し、当該頭基は、水素結合−ＮＨ基をフェニル基のパラ位に、水素結合−ＣＯＮＨ−又は−ＮＨ−基を炭素原子２つ離れた所に、さらに近接の炭素原子上に水素結合−ＯＨ基を含む。これらの化合物は、ベルノニア油のアミド化（Ｉｄ）、又はエポキシド環のアミノ分解（Ｉｅ）によって得ることができる。
【００４５】
本発明の好ましい一実施形態では、非対称両親媒性化合物を提供し、その化合物ではスペーサＸ４の両側の脂肪族鎖は頭基を除いて同一であり、少なくとも大きい方の頭基は選択的に切断され得る基又は部分を含み、その化合物から製造した小胞の外側に存在する。このような非対称化合物の一例は式Ｉｆの化合物である。
【００４６】
Ｒ２４−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ’１９      （Ｉｆ）
［式中、Ｒ”１９は、上記で定義した通りであり、選択的に切断され得る部分−ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−フェニル−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯＯＨを有する大きい方の頭基Ｒ２１を含み、
Ｒ２４は、−（ＣＨ２）７−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（Ｒ２５）−（ＣＨ２）４−ＣＨ３であり、
Ｒ２５は、選択的に切断され得る基を持たない頭基−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＯＯＨである］
【００４７】
さらに別の実施形態では、対称両親媒性化合物は式Ｉｇで示される。
【００４８】
Ｒ２７−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ２６      （Ｉｇ）
［式中、Ｒ２６は、−（ＣＨ２）１２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−Ｒ２３であり、
Ｒ２７は、−（ＣＨ２）１２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−Ｒ２３であり、
Ｒ２３は−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−フェニル−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨである］
【００４９】
化合物Ｉｇは、式Ｉａの化合物であって、式中、Ｒ１及びＲ５が−（ＣＨ２）１０であり、Ａ１及びＡ３が−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（Ｙ１）−であり、Ｙ１が−ＯＨであり、Ｒ２及びＲ６が−ＣＨ２であり、Ａ２及びＡ４がＲ２３であり、Ｒ３及びＲ７が存在せず、Ｒ４及びＲ８がＨである、化合物である。
【００５０】
下記化合物Ｉｈ−Ｉｎは、本発明の両親媒性化合物の幾つの具体例であり、水素結合基は選択的に切断され得る基又は部分を含む頭基内に位置する。
【００５１】
Ｒ２８−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ２８      （Ｉｈ）
［式中、Ｒ２８は−（ＣＨ２）１２−Ｒ２３であり、Ｒ２３は−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−フェニル−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨである］
【００５２】
化合物Ｉｈは、選択的に切断され得るフェニルアラニン（レボドパ型）部分、及び（ＣＨ２）１２脂肪族鎖に付着させた水素結合−ＮＨ−基の両方を含む頭基Ｒ２３を有し、脂肪族鎖中には更なる水素結合基を持たない。
【００５３】
Ｒ２９−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ２９      （Ｉｉ）
［式中、Ｒ２９は−（ＣＨ２）１２−Ｒ２１であり、Ｒ２１は−ＮＨＣＯ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−フェニル−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨである］
【００５４】
化合物Ｉｈとｌｉの唯一の相違は、Ｉｈの頭基部分Ｒ２３は（ＣＨ２）１２脂肪族鎖にアミノ結合によって付着し、他方、頭基部分Ｒ２３はアミド結合によって付着していることである。
【００５５】
化合物Ｉｊは、一端にレボドパ型頭基を含む大きい頭基Ｒ２９を有し、他端に−ＣＯＯＨ基を持つ小さい頭基を有する非対称両親媒性化合物の一例である。
【００５６】
Ｒ３０−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ２９      （Ｉｊ）
［式中、Ｒ２９は−（ＣＨ２）１２−Ｒ２１であり、Ｒ２１は−ＮＨＣＯ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−フェニル−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨであり、Ｒ３０は−（ＣＨ２）１２−ＣＯＯＨである］
【００５７】
対称両親媒性化合物の別の実施例は式Ｉｋによって表される。
【００５８】
Ｒ３１−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ３ｌ      （Ｉｋ）
［式中、
Ｒ３１は−（ＣＨ２）１２−Ｒ３２であり、Ｒ３２は−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｎ＋（ＣＨ３）２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＣＯＣＨ３である］
Ｒ３２は、アセチルコリン型基、及び水素結合−ＮＨ−基を共に含む頭基の一例である。
【００５９】
非対称両親媒性化合物の別の実施例は式Ｉｌである。
【００６０】
Ｒ３３−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ３１      （Ｉｌ）
［式中、Ｒ３１は−（ＣＨ２）１２−Ｒ３２であり、Ｒ３２は−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｎ＋（ＣＨ３）２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＣＯＣＨ３であり、Ｒ３３は−（ＣＨ２）１２−Ｒ３４であり、Ｒ３４は−ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｎ＋（ＣＨ３）３である］
【００６１】
非対称双頭両親媒性誘導体Ｉｌでは、１つの鎖はアセチルコリン型基及び水素結合−ＮＨ−基を有する大きい方のイオン性頭基Ｒ３２を含み、他方の脂肪族鎖は小さいイオン性頭基を含む。
【００６２】
先に例示した、ベルノル酸及び飽和脂肪酸に由来する両親媒性化合物と同様に、本発明による別の両親媒性誘導体は、レスクエレラ油中に見出されるレスクエロール酸に由来し、この酸のアシル残基は式：−ＣＯ（ＣＨ２）９−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−（ＣＨ２）５ＣＨ３で示される。
【００６３】
一実施形態では、対称両親媒性化合物は式Ｉｍで示される。
【００６４】
Ｒ３５−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ３５      （Ｉｍ）
［式中、Ｒ３５は、−（ＣＨ２）９−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ（Ｒ３６）−（ＣＨ２）５ＣＨ３であり、
Ｒ３６は、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨである］
【００６５】
Ｒ３６は、選択的に切断され得るグルタミン酸の残基ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨ、及び安定化のために水素結合−ＣＯＮＨ−極性基を含む頭基である。
【００６６】
追加の実施形態では、本発明の両親媒性誘導体はヒマシ油中に見出されるリシノール酸に由来し、このアシル残基は次式で示される。
【００６７】
−ＣＯ（ＣＨ２）７−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−（ＣＨ２）５ＣＨ３
【００６８】
一例として対称な誘導体は式Ｉｎに示される。
【００６９】
Ｒ３７−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ−ＣＯ−Ｒ３７      （Ｉｎ）
［式中、Ｒ３７は、−（ＣＨ２）７−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ（Ｒ３８）−（ＣＨ２）５ＣＨ３であり、
Ｒ３８は、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−フェニル−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨである］
【００７０】
本発明の異なる実施形態では、両親媒性化合物は選択的に切断され得る基及び水素結合基を含む極性又はイオン性頭基に加えて、追加の疎水性ペンダントを脂肪族鎖上に、及び／又は選択的に切断され得る基又は部分を含む頭基上に含む。
【００７１】
一実施形態において、疎水性ペンダントを、選択的に切断され得る基を含む頭基上に有する対称両親媒性化合物は、式Ｉｏで示される。
【００７２】
Ｒ３９−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ−ＣＯ−Ｒ３９      （Ｉｏ）
［式中、Ｒ３９は、−（ＣＨ２）１２−Ｎ（Ｒ４０）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−フェニル−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨであり、Ｒ４０は、Ｃ４〜Ｃ１６アルキルである］
【００７３】
上記化合物では、選択的に切断され得るレボドパ型基及びＨ結合基−ＮＨ−を含む頭基は、両頭基部分中のアミノ基に付着させた比較的長い脂肪族鎖Ｒ４０をも含み、疎水的相互作用により追加の安定性を得ている。
【００７４】
別の実施形態では、両親媒性化合物の追加の疎水性基（Ｒ４０）は、上記のように頭基部分中に位置せず、式Ｉｐに示すようにエーテル結合を介して脂肪酸鎖に結合している。
【００７５】
Ｒ４１−ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ−ＣＯ−Ｒ４１      （Ｉｐ）
［式中、Ｒ４１は、−（ＣＨ２）７−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＲ４０）−ＣＨ（Ｒ３８）−（ＣＨ２）４ＣＨ３であり、
Ｒ４０は、Ｃ４〜Ｃ１６アルキルであり、
Ｒ３８は、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−フェニル−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨである］
【００７６】
別の実施形態では、本発明の両親媒性化合物は、以下のように−ＣＯ−Ｒ１０−ＣＯ−の中央部分を含む式ＩＩａの２頭両親媒性物質である。
【００７７】
Ｒ８−Ｒ７−Ａ４−Ｒ６−Ａ３−Ｒ５−Ｑ２−ＣＯ−Ｒ１０−ＣＯ−Ｑ１−Ｒ１−Ａ１−Ｒ２−Ａ２−Ｒ３−Ｒ４      （ＩＩａ）
［式中、全ての基は、本明細書上記で定義した通りであり、Ｑ２及びＱ１は同一である］
【００７８】
例えば、ヘキサデカン酸［ＨＯ２Ｃ（ＣＨ２）１４ＣＯ２Ｈ］、及び１１−ヘキサデセン−１−オール［ＣＨ３（ＣＨ２）３ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ｌ０ＯＨ］から出発して、それぞれ、グルタミン酸残基、又はｐ−アミノフェニルアラニン残基を含む頭基を有する以下の対称誘導体ＩＩｂ及びＩＩｃを合成することができる。
【００７９】
Ｒ４２−Ｏ−ＣＯ（ＣＨ２）１４−ＣＯ−Ｏ−Ｒ４２
［式中、Ｒ４２は、−（ＣＨ２）１０−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（Ｒ４３）−（ＣＨ２）３−ＣＨ３であり、
Ｒ４３は、−Ｏ−ＣＯ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯ２Ｈ    （ＩＩｂ）である］
又はＲ２１：−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ−ＮＨ−フェニルアラニン    （ＩＩｃ）
【００８０】
式ＩＩｄによって示されるように、ｐ−アミノフェニルアラニン残基を含む１つの大きな頭基と、グルタル酸残基を含む第２の小さい頭基とを有する、非対称の２頭両親媒性物質を製造することができる。
【００８１】
Ｒ４４−Ｏ−ＣＯ（ＣＨ２）１４−ＣＯ−Ｏ−Ｒ４５      （ＩＩｄ）
［式中、Ｒ４４は、−（ＣＨ２）１０−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（Ｒ４６）−（ＣＨ２）３−ＣＨ３であり、
Ｒ４５は、−（ＣＨ２）１０−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（Ｒ４７）−（ＣＨ２）３−ＣＨ３であり、
Ｒ４６は、−ＮＨＣＯ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ−ＮＨ−フェニルアラニンであり、
Ｒ４７は、−ＮＨＣＯ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈである］
【００８２】
別の実施形態では、上記化合物ＩＩｂ−ＩＩｄのように近接の炭素原子上に水素結合−ＯＨ基は存在せず、水素結合基が、式ＩＩｅに示すように選択的に切断され得るイオン基を含む頭基内に位置する、対称の２頭両親媒性物質が提供される。
【００８３】
Ｒ４８−Ｏ−ＣＯ（ＣＨ２）１６−ＣＯ−Ｏ−Ｒ４８      （ＩＩｅ）
［式中、Ｒ４８は、−（ＣＨ２）１１−ＮＨ−（ＣＨ２）−Ｎ＋（ＣＨ３）２（ＣＨ２）２Ｏ−ＣＯ−ＣＨ３    Ｃｌ−である］
【００８４】
この対称の２頭両親媒性物質は、アセチルコリン型部分及び水素結合−ＮＨ−基を共に含む頭基Ｒ４８を有し、ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）１６−ＣＯＯＨ、及び１１−ブロモ−１−ウンデカノール［Ｂｒ（ＣＨ２）１１ＯＨ］から出発して調製することができる。
【００８５】
別の実施形態では、再び、ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）１６−ＣＯＯＨ及び１１−ブロモ−ｌ−ウンデカノールから出発して、１つのアセチルコリン頭基、及び１つのグルコサミン頭基を用いて、以下の式ＩＩｆの非対称の２頭両親媒性物質を製造することができる。
【００８６】
Ｒ４９−Ｏ−ＣＯ（ＣＨ２）１６−ＣＯ−Ｏ−Ｒ５０      （ＩＩｆ）
［式中、Ｒ４９は、−（ＣＨ２）１１−ＮＨ−（ＣＨ２）−Ｎ＋（ＣＨ３）２（ＣＨ２）２Ｏ−ＣＯ−ＣＨ３    Ｃｌ−であり、Ｒ５０は、−（ＣＨ２）１１−ＮＨ−（ＣＨ２）−ＮＨ−Ｃ６Ｈ１１Ｏ５であり、
−ＮＨ−Ｃ６Ｈ１１Ｏ５は、生物学的障壁を通過する輸送に有用なグルコサミン部分である］
【００８７】
別の異なる実施形態において、本発明は、２層膜小胞を形成することができる両親媒性誘導体であって、２つの脂肪酸鎖が、−ＮＨ−（ＣＨ２）２−Ｎ＋−（ＣＨ２）２−Ｎ−などの中央部分／スペーサ領域を介して結合し、選択的に切断され得る基又は部分を含有する極性又はイオン性の頭基を含む残基が、分子の中央部分に位置して、２つの脂肪酸鎖間の中央部分領域の中央にあるＮ＋原子に付着している、両親媒性誘導体を提供する。中央部分はまた、脂肪酸鎖との共通部分である−ＣＯＮＨ−基によって提供される水素結合基をも含み、頭基部分も水素結合基を含むことができる。そのような化合物の一例が本明細書の誘導体４である。
【００８８】
この実施形態によれば、本発明の両親媒性化合物は、式Ｉ’ａで示される。
【００８９】
Ｒ８−Ｒ７−Ａ４−Ｒ６−Ａ３−Ｒ５−ＣＯ−Ｑ２−Ｒ２１０−Ｑ１−ＣＯ−Ｒ１−Ａ１−Ｒ２−Ａ２−Ｒ３−Ｒ４      （Ｉ’ａ）
［式中、
Ｒ１〜Ｒ８、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ｑ１、及びＱ２は、式ｌａの化合物に対して上記で定義した通りであり（但し、頭基として機能することができる官能基又は部分は存在しない）、
Ｒ２１０は、選択的に切断され得る基又は部分を含む頭基を有する残基を含有するスペーサであって、当該スペーサは、−（ＣＨ２）ｑ−Ｒ５１−（ＣＨ２）ｑ−、−（Ｒ５２−Ｃ６〜Ｃ１４アリーレン）−、又は−（Ｃ６〜Ｃ１４アリーレン）−Ｇ２−（Ｒ５２−Ｃ６〜Ｃ１４アリーレン）−から選択され（式中、Ｇ２は、−（ＣＨ２）ｑ−、−ＮＨ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、又は−ＣＨ（ＣＨ３）２−であり、ｑは１〜３の整数である）、
Ｒ５１は、−Ｎ（Ｒ５３）（Ｒ５４）−であり、Ｒ５３は選択的に切断され得る基又は部分を含む頭基であり、Ｒ５４はＨ又はＣ１〜Ｃ１８アルキル基であり、
Ｒ５２は、選択的に切断され得る基又は部分を含む頭基Ｒ５１を有する残基である］
【００９０】
Ｒ８−Ｒ７−Ａ４−Ｒ６−Ａ３−Ｒ５−の価及び構造は、Ｒ１−Ａ１−Ｒ２−Ａ２−Ｒ３−Ｒ４に等しいことも、等しくないこともある。好ましい一実施形態ではそれらは同等である。
【００９１】
上記誘導体は、単一２層膜又は多層２層膜のいずれかの２層膜を有する小胞を形成することができる。
【００９２】
この型の化合物の具体例を以下の式Ｉｑ−Ｉｕの化合物に示す。
【００９３】
【化２】
2005521645.tif 000005
［式中、Ｒ’はＣ４〜Ｃ１８アルキルである］
【００９４】
【化３】
2005521645.tif 000006
【００９５】
脂肪酸及び中央部分／スペーサ基間のアミド結合の代わりにエステル交換を行って、アミドの代わりにエステル結合を有する同様の誘導体を形成することができるが、その一例は下記の通りである。
【００９６】
【化４】
2005521645.tif 000007
【００９７】
さらに、脂肪酸鎖には、安定性をより高めるために上記のようなエポキシ基又は下記のような水酸基などの極性基を含めることができる。
【００９８】
【化５】
2005521645.tif 000008
【００９９】
さらに別の実施形態において、本発明は、グリセロールの水酸基の１つに選択的に切断され得る基又は部分を含む頭基を含み、残りの２つの水酸基には脂肪酸鎖を含む脂肪酸グリセロール誘導体である両親媒性化合物を提供する。その際、前記脂肪酸鎖に追加の極性基、エポキシ基又はハロゲンを含めて、形成した小胞の安定化に貢献させる。
【０１００】
この実施形態によれば、式Ｉ”ａの２層膜小胞を形成することができる両親媒性化合物が提供される。
【０１０１】
Ｒ８−Ｒ７−Ａ４−Ｒ６−Ａ３−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−Ｑ２−Ｒ３１０−Ｑ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１−Ａ１−Ｒ２−Ａ２−Ｒ３−Ｒ４      （Ｉ”ａ）
［式中、
Ｒ１〜Ｒ８、Ａ１、Ａ２、Ａ３、及びＡ４は、上記で定義した通りであり（但し、頭基として機能することができる官能基又は部分は存在しない）、
Ｑ１及びＱ２は−Ｏ−であり、
Ｒ３１０は、−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＲ５５）−ＣＨ２−及び−ＣＨ（ＣＨ２−ＯＲ５５）−ＣＨ２−から選択され、
Ｒ５５は、−（ＣＨ２）ｍ’Ｒ５１及び−ＣＯ（ＣＨ２）ｍ’Ｒ５１から選択され、
Ｒ５１は、選択的に切断され得る基又は部分を含む頭基であり、ｍ’は０〜４の整数である］
【０１０２】
この定義による化合物であって、Ｒ３１０が、−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＲ５５）−ＣＨ２−である化合物は、以下に示す構造を有する。
【０１０３】
【化６】
2005521645.tif 000009
【０１０４】
この定義による化合物であって、Ｒ３１０が、−ＣＨ（ＣＨ２−ＯＲ５５）−ＣＨ２−である化合物は、以下に示す構造を有する。
【０１０５】
【化７】
2005521645.tif 000010
【０１０６】
いずれの脂肪酸鎖上のＲｓ基及びＡｓ基も、全て同じ群から選択されるが、それら群の中で各鎖の選択は異なってもよい。一の好ましい場合では、それらの基は同等である。
【０１０７】
さらに別の実施形態において、本発明の両親媒性化合物は、２層膜を形成し、先に定義した通りの単一の脂肪族鎖と、第２の脂肪族鎖の代わりに、１つの短いアルキル鎖又はフェニルラジカル若しくはフェニルアルキルラジカルのいずれかを有する。
【０１０８】
これらの誘導体は一般式Ｉｗで示される。
【０１０９】
Ｒ０−Ｑ１−ＣＯ−Ｒ１−Ａ１−Ｒ２−Ａ２−Ｒ３−Ｒ４      （Ｉｗ）
［式中、Ｒ０は、−（ＣＨ２）ｒ’−Ｘ７であり、
Ｘ７は、水素、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、好ましくはフェニルであり、又は複素環式ラジカルであり、
ｒ’は、０〜１２の整数、好ましくは１であり、
Ｑ１は−Ｏ−、−Ｓ−、又は−ＮＨ−であり、
Ｒ１、Ａ１、Ｒ２、Ａ２、Ｒ３、及びＲ４は先に定義した通りであるが、切断され得る基若しくは部分、及び水素結合基を含む頭基と、頭基部分から取り除かれる脂肪酸鎖の１つ又は２つの炭素、或いは頭基部分中のある部位に結合し、それによって頭基部分の領域に由来する２つのアルキル鎖を有する両親媒性誘導体を形成する、Ｃ８〜Ｃ２０アルキル鎖とを含む。
【０１１０】
このような化合物の一例の式Ｉｚを以下に示す。
【０１１１】
Ｈ３ＣＯ−ＣＯ（ＣＨ２）７−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨＮＨ［（ＣＨ２）２−ＮＨ−フェニル−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨ］−Ｃ５Ｈ１１    Ｉｚ
【０１１２】
本発明の両親媒性誘導体の調製には、同じ出願人のＷＯ０２／０５５０１１号に記載した方法と類似の方法を使用することができる。
【０１１３】
上記脂肪酸鎖を製造するための好ましい出発物質は天然植物油であり、特にべルノニア油、ヒマシ油、及びレスクエレラ油、並びに他の脂肪酸油、又は脂肪酸鎖中に、水酸基、及び／又はエポキシ基、及び／又は二重結合（例えば、アリルメチル基、実際上、オレフィンに対するメチレン基α）の組合せを含む、その誘導体の油が好ましい。これらの反応基を用いて化学の技術分野で知られている方法を実施して、脂肪酸鎖の１−２、１−２−３、１−２−３−４又は１−２−３−４−５、１−２−４、１−２−５、１−３−４、１−３、１−５、１−４、１−２−６、又は１−２−４−５位が極性基、イオン基、及び／又はエポキシ基での置換された様々な配置を得ることができる。
【０１１４】
以下の化学的成分置換を好ましい例の一類型として示すがこれらは限定的なものではない。また、本明細書の式中では、−ＯＨ基が、その隣接基に対してシス位に存在するが、これは、便宜上そうしたものにすぎず、実際には、化合物の好ましい配置であるトランスの配置をも含むことを意味する。
【０１１５】
例示のため、べルノニア、レスクエレラ及びヒマシ油由来の脂肪酸のアシル鎖を以下に示す。その際、番号を付した個々の反応性炭素を本発明に従って改変して、所望の両親媒性誘導体を生成することができる。
【０１１６】
【化８】
2005521645.tif 000011
【０１１７】
上記炭素番号１〜６のどれも、所望に応じて極性基又はイオン基の様々な組合せで置換することができる。例えば、べルノニアのエポキシ基を異なる基によって置換して１−２配置を得ることができる。以下に示す一例では、エポキシ基をクロロ酢酸などのハロカルボン酸で開裂して、Ｇ１がハロアシルオキシ基（例えば−ＯＣＯＣＨ２Ｃｌ）、Ｇ２が−ＯＨである誘導体を得ることができ、或いはエポキシ基をアジド（例えばＮａＮ３）で開裂し、次いで−ＮＨ２に還元して、式中、Ｇ１が−ＮＨ２、Ｇ２は−ＯＨである誘導体を得ることができ、或いはエポキシをＮａ２Ｓで開裂すると、Ｇ１＝−ＳＨ及びＧ２＝−ＯＨとなる。これらの基は全て、随意に、化学合成で知られている方法によってさらに誘導体化することができる。従って、ハロアシルオキシ基ＯＣＯＣＨ２Ｃｌにおいて、Ｃｌをさらに第三級アミン、例えばトリメチルアミンと反応させて、第四級アンモニウム基を得ることができ、或いはアミノエタンスルホン酸と反応させて、対応するアミノエタンスルホン酸誘導体を得ることができる。
【０１１８】
【化９】
2005521645.tif 000012
【０１１９】
別の実施形態では、上記誘導体を、Ｂｒ２など二重結合に付加する試薬と反応させて、それによって以下に示すように１−２−４−５位に置換基を有する誘導体を形成することができる。
【０１２０】
【化１０】
2005521645.tif 000013
【０１２１】
ＨＢｒで二重結合に対する反応を実施した場合、次いで以下に示すように１−２−４位及び１−２−５位に置換基を有する誘導体が形成される。
【０１２２】
【化１１】
2005521645.tif 000014
【０１２３】
−Ｂｒ原子は、アミノ基又は硫化物基を含む化合物と容易に反応して、陰イオン基、陽イオン基、又は双性イオン基を含む生成物にすることができる。上記ブロモ基を、−ＮＨ２基又は−ＳＨ基、或いは−ＮＨ２又は−ＳＨを含む部分によって置換した場合、次いで蛋白質、ペプチド、多糖類、ＤＮＡ、及びＲＮＡ断片を結合するために使用することもできる誘導体が形成される。
【０１２４】
別の実施形態では、以下のべルノニア油
【化１２】
2005521645.tif 000015
をＮ−ブロモサクシナミド／過酸化ベンゾイル＋ＵＶ放射に供し、第３炭素位をＢｒで置換すると次の誘導体が得られる。
【０１２５】
【化１３】
2005521645.tif 000016
【０１２６】
このブロモ誘導体をさらにアミンと反応させて、
【化１４】
2005521645.tif 000017
を得ることができる。
【０１２７】
次いで、エポキシをＮａ＋−ＯＣＯＣＨ２Ｃｌで開裂すると、例えば、以下の１−２−３の組合せを有する誘導体が得られる。
【０１２８】
【化１５】
2005521645.tif 000018
【０１２９】
別の実施形態では、エポキシを加水分解して
【化１６】
2005521645.tif 000019
を得ることができる。
【０１３０】
そのアミノ基をさらに知られている試薬及び条件で反応させて、陰イオン部分、陽イオン部分、又は双性イオン部分を有する誘導体を得ることができる。
【０１３１】
別の実施形態では、べルノニア油を塩化メチレン中、炭素原子６上のアリルのＨが置換される条件下で、Ｎ−ブロモ−サクシナミド／過酸化ベンゾイル／ＵＶ放射と反応させた場合、次の誘導体が形成される。
【０１３２】
【化１７】
2005521645.tif 000020
【０１３３】
この誘導体をさらに、例えばＮａ２Ｓと反応させて下の１−２−６誘導体を得ることができる。
【０１３４】
【化１８】
2005521645.tif 000021
【０１３５】
別の実施形態では、レスクエレラ油又はヒマシ油に由来するアシル鎖をメタ−クロロ過安息香酸と反応させて二重結合をエポキシ化すると、それぞれ以下の誘導体が得られる。
【０１３６】
【化１９】
2005521645.tif 000022
【０１３７】
次いで、エポキシを本明細書に記載した反応のいずれかに供することができる。例えば、エポキシ基を開裂し、さらに反応させると、以下に示す１−３−４の位置で置換基を有する誘導体［式中、Ｇ３はハロアシルオキシ（例えば−ＯＣＯＣＨ２Ｃｌ）でよく、Ｇ４は−ＯＨでよい］を得ることができ、或いはエポキシをアジドで開裂し、次いで−ＮＨ２に還元してＧ３＝−ＮＨ２及びＧ４＝−ＯＨとすることができ、或いはエポキシをＮａ２Ｓによって開裂させてＧ３＝−ＳＨ及びＧ４＝−ＯＨとすることができる。そのアミノ、−ＳＨ、及び−ＯＨは、容易に誘導体化されて陰イオン、陽イオン、又は双性イオンの誘導体になり、或いは蛋白質、ペプチド、多糖類、ＤＮＡ、及びＲＮＡ断片を結合するためにそれらを使用することができる。
【０１３８】
【化２０】
2005521645.tif 000023
【０１３９】
別の実施形態では、レスクエレラ油又はヒマシ油に由来するアシル鎖を水中で次亜塩素酸（ＨＯＣＩ）と反応させた場合、他の１−３−４誘導体を合成することができ、次いで塩化メチレン中に抽出すると、以下の化合物を得ることができる。
【０１４０】
【化２１】
2005521645.tif 000024
【０１４１】
レスクエレラ油又はヒマシ油のアシル鎖を塩化メチレン中、炭素２及び５上のアリルのＨがＢｒで置換される条件下で、Ｎ−ブロモサクシナミド／過酸化ベンゾイル／ＵＶ放射と反応させた場合、以下のレスクエレラ及びヒマシ油からの１−２−５誘導体が形成される。
【０１４２】
【化２２】
2005521645.tif 000025
【０１４３】
先に記載したように−Ｂｒ基を容易に反応させて、先に記載したように陰イオン基、陽イオン基、及び双性イオン基を得ることができる。上記１−２−５誘導体を二重結合によってＢｒ２でさらに誘導体化して、例えば１−２−３−４−５置換鎖を得ることができる。
【０１４４】
レスクエレラ油又はヒマシ油のアシル鎖を塩化メチレン中、第２の炭素原子上のアリルのＨとしか反応しない条件下で、Ｎ−ブロモサクシナミド／過酸化ベンゾイル／ＵＶ放射と反応させて以下のものを得ることができる。
【０１４５】
【化２３】
2005521645.tif 000026
【０１４６】
先に記載したように、−Ｂｒをさらに反応させて誘導体化させることができる。
【０１４７】
上記誘導体をさらに二重結合によって、例えばＢｒ２と反応させて１−２−３−４誘導体を得ることができ、又はＨＢｒを用いて１−２−４又は１−２−３誘導体を得ることができる。
【０１４８】
レスクエレラ油又はヒマシ油のアシル鎖をＨＢｒ、又は二重結合に付加し１つの炭素にはＨラジカルを付加する同様の試薬と反応させると、１−３及び１−４誘導体を製造することができる。ＨＢｒは、ＯＨ基を臭化イオンで置換することもできる。以下のＧ基はＯＨ又はＢｒを表し得る。Ｂｒをさらにアミノ基又はメルカプト基によって置換することができ、次いでそれを改変して陰イオン基、陽イオン基、又は双性イオン基を形成することができる。
【０１４９】
【化２４】
2005521645.tif 000027
【０１５０】
先に記載したように、これらの誘導体にさらに修飾を行って、Ｂｒを他の基又は部分で置換すると、先に記載したように極性基又はイオン基又は部分を得ることができる。
【０１５１】
レスクエレラ油又はヒマシ油のアシル鎖を塩化メチレン中、炭素５上のアリルのＨがＢｒで置換される条件下で、Ｎ−ブロモサクシナミド／過酸化ベンゾイル／ＵＶ放射と反応させた場合、上述したように、これらの誘導体をさらに誘導体化して、１−５位に極性基及びイオン基を有する誘導体を得ることができる。
【０１５２】
本明細書では「Ｃ１〜Ｃ１８アルキル」の語は、通常１〜１８個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖アルキルラジカルを指し、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ヘプチル，２、２−ジメチルプロピル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ドデシル、ｎ−オクタデシルなどが含まれる。「Ｃ２〜Ｃ１６アルキレン」の語は、２〜１６個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖アルキレン基を指し、例えば、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレンなどが含まれる。「Ｃ２〜Ｃ６アルケニル」の語は、２〜６個の炭素原子と、少なくとも１つの末端二重結合とを有する直鎖又は分枝鎖炭化水素ラジカルを指し、例えば、ビニル、プロパ−２−エン−１−イル、ブタ−３−エン−１−イル、ペンタ−４−エン−１−イル、ヘキサ−５−エン−１−イルが含まれる。「任意選択でＱ２又は−ＣＯ−Ｑ２によって中断されている１６個までの原子の脂肪族鎖」の語は、Ｑ２によって表されるヘテロ原子を含む鎖が１６個までの原子を有することを意味する。
【０１５３】
「Ｃ６〜Ｃ１４アリール」の語は、フェニル、ナフチル、フェナントリルなどの単環又は縮合した複数の環からなる６〜１４個の炭素原子を有する芳香族炭素環基を指し、任意選択でＣ１〜Ｃ６アルキルによって置換されている。「複素環式」の語は、単環式、二環式又は三環式縮合環ヘテロ芳香族基を指す。具体例は、ピリジル、ピロリル、フリル、チエニル、イミダゾリル、オキサゾリル、キノリニル、チアゾリル、ピラゾリル，１、３、４−トリアジニル、１、２、３−トリアジニル、ベンゾフリル、イソベンゾフリル、インドリル、イミダゾ［１、２−ａ］ピリジル、ベンゾイミダゾリル、ベンズチアゾリル、ベンゾオキサゾリルである。「ハロゲン」の語は、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素を指す。
【０１５４】
本発明は、さらに両親媒性誘導体の塩を包含する。塩の例は、無機酸（塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸など）によって形成された酸付加塩、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、マレイン酸、アスコルビン酸、安息香酸などの有機酸によって形成した塩を含むが、これらに限るものではない。前記化合物は、当業者によって知られている第四級塩でもよく、具体的には式−ＮＲＲ’Ｒ”＋Ｚ’［式中、Ｒ、Ｒ’、Ｒ”は、それぞれ独立に、水素、アルキル又はベンジルであり、Ｚは塩素、臭素、ヨウ素、Ｏ−アルキル、トルエンスルホン酸、メチルスルホン酸、スルホン酸、リン酸、又はカルボン酸を含む対イオンである］の第四級塩を含む。
【０１５５】
塩基付加塩は、アルカリ金属及びアルカリ土類金属、又は有機アミンなど金属又はアミンによって形成される。陽イオンとして使用される金属の例は、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどである。適切なアミンの例は、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、及びＮ−メチルグルカミンである。
【０１５６】
本発明のべルノニア油誘導体は、べルノニア油の主成分であるベルノル酸トリグリセリドであるトリベルノリン（ｔｒｉｖｅｒｎｏｌｉｎ）から調製される。トリベルノリンの誘導体化は、べルノニア油混合物から抽出した高純度トリベルノリンを反応させることによって、又は多成分べルノニア油混合物を反応させ、続いて生成物を単離し、官能化トリベルノリンを精製することによって実現することができる。本発明で提供する実施例では、トリベルノリンの両親媒性誘導体の調製は、別段の指定がない限り、べルノニア油混合物に対して、最初にトリベルノリンを分離せずに実行している。先に述べた通り、トリベルノリンは、べルノニア油からカラムクロマトグラフィにより、溶離剤としてｎ−ヘキサンと、量を増やしながらジエチルエーテルを使用して分離した（Ｇｒｉｎｂｅｒｇら、１９９４年）。ｎ−ヘキサン：ジエチルエーテル（１．５：１ｖ／ｖ）によるＴＬＣではトリベルノリンのＲｆは０．４であった。トリベルノリンについて算出したエポキシ基の量は１３．６％（実測値：１３．３％）であった。
【０１５７】
別の態様では、本発明は、非関連組織から隔離しながら、薬剤及び診断剤を含む生体活性剤を特異的に標的器官へ送達するための、本発明の新規な両親媒性誘導体から製造した小胞／リポソームを提供する。
【０１５８】
本発明の小胞／リポソームは、以下の１つ又は複数の特徴を有する：
（ｉ）疎水鎖に付着させたイオン性又は極性頭基であって、前記選択的に切断され得る基又は部分と、当該頭基内に又は頭基に密接する水素結合基とを含む頭基、
（ｉｉ）疎水鎖部分の両端上の２つのイオン性又は極性頭基であって、少なくとも１つの頭基は、選択的に切断され得る基又は部分と、当該頭基内に又は頭基に密接する水素結合基とを含み、更に、任意選択で当該頭基に近接し、小胞の形成を阻害せず、そのような誘導体から製造した小胞を安定させる、極性結合又は水素結合による相互作用が可能な、追加のイオン基及び極性基を含む、頭基、
（ｉｉｉ）前記分子の両端上の２つの頭基であって、少なくとも１つの頭基は、選択的に切断され得る基又は部分と、当該頭基内に又は頭基に密接する水素結合基とを含み、更に当該頭基が、任意選択で、疎水鎖の中央部内に、或いは中央部分又は中央に相対的に近接して、そのような誘導体から製造した小胞を安定させる、極性結合又は水素結合による相互作用が可能な追加の極性基を含む、頭基、
（ｉｖ）（ｉ）から（ｉｉｉ）に加え、前記疎水鎖部分又は頭基に付着して疎水性相互作用を増大させ、それによってそのような誘導体から製造された小胞の安定性に寄与する、少なくとも５個のメチレン基からなる追加の脂肪族鎖。
【０１５９】
好ましい一実施形態において、小胞は、両端に２つの極性頭基を有する上記の両親媒性誘導体から製造した単層膜を含み、選択的に切断され得るイオン性又は極性頭基は少なくとも小胞外表面を向いている。単層膜を含む好ましい小胞の１つは、先に記載したようにベルノル酸、レスクエロール酸、又はリシノール酸に由来する非対称の両親媒性物質から形成され、現況技術の２層膜小胞に勝るいくつかの利点を有する。即ち、それらは一般により安定であり、膜はより薄く、２層膜ではなく単層膜をもつ完全に非対称の小胞膜を形成することができる。この非対称によって改善した安定性を有する小さい小胞の形成が可能となる。というのは、これらの頭基による立体反発が低減されて小胞の内部に含まれる頭基がより小さく、それによって内表面の半径が小さくなるからである。
【０１６０】
両親媒性誘導体の官能基の物理化学的相互作用により、物理的、化学的及び生物学的に安定した小胞であるにもかかわらず、その内容物を選択的に標的組織、細胞、器官又は微生物に放出することができる小胞の形成が可能となる。
【０１６１】
本発明によれば、診断又は療法用活性剤は、知られている方法によって本発明の小胞中にカプセル封入される。
【０１６２】
小胞膜の破裂、及びその内容物の放出は、前述の選択的に切断され得る極性基又はイオン基が酵素活性、又は小胞の安定性に作用する他の条件によって切断された場合に開始し、主に標的器官に限定することができる。こうした条件は、頭基の加水分解を促進し、それによって小胞を破裂する、ｐＨ若しくは酸化剤などの化学的環境、又は温度、又は化学的若しくは酵素的な条件とすることができる。破裂した小胞からの放出速度は、頭基除去の速度の関数である。
【０１６３】
選択的且つ制御可能に切断／除去できる頭基、並びに安定化させる疎水性、極性及びイオン性の基の独特の組合せを有する本発明の官能性両親媒性誘導体を使用することによって、ナノサイズ化した安定したターゲティング体である新規な小胞／リポソームが得られる。この特性の組合せにより、現況技術のリポソームの限界が克服され、小胞が生物学的障壁を通過し、生体の異なる区画を自由に出入りし、さらに、その内容物を、主として、小胞を不安定化させる酵素的又は化学的環境が局在する標的器官に放出することが可能になる。
【０１６４】
本発明の両親媒性誘導体の独特な物理的及び化学的特徴によって、様々な生物学的障壁を通過するのに十分に小さく、さらにそれらがその内容物を標的部位で放出するまで無傷のままである小胞／リポソームの製造が可能となる。これらのターゲティング小胞は必要な安定化要素、及び効率的なターゲティング機構に必要とされる表面官能基を含む。
【０１６５】
本発明以前には、化学的、機械的、及び生物学的安定性、生物学的障壁通過性、並びに標的器官での選択的放出の組合せを実現したナノサイズの小胞は開示されていない。目標とするＣＮＳ疾患の治療のための制御放出プラットホームを考慮すると、現況技術のこうした限界は特に明白である。本発明は、これらの現況技術の限界がどのようにして克服できるかを記述する。
【０１６６】
本発明の両親媒性誘導体は、疎水性脂肪酸鎖に付着させた、選択的に切断され得るイオン性又は極性の頭基と、当該脂肪族鎖の異なる部位に付着させた追加の官能基とを有する。後者の基は、小胞に安定性を追加するが、それにもかかわらず、標的組織で生じる切断され得る基の除去後、小胞を破裂され得るものにすることを可能にする。さらに、これらの追加の相互作用基なしでは、安定なナノサイズの小胞を形成することはできず、且つ製造中、破裂による収率の著しい減少なしに、小胞に、形成後表面修飾を施すことはできないはずである。形成後表面修飾は、生物学的障壁の通過を改善し、或いは様々な生体機構による排除を最小限に抑える官能基を導入するためにしばしば必要とされる。
【０１６７】
別の顕著な本発明の特徴は、標的組織に限定される条件で、加水分解を制御することができるように、選択的に切断され得る基又は部分を含む頭基を設計することである。そのような条件としては、酵素活性、ｐＨや酸化剤などの化学的環境、及び温度である。標的組織での頭基特異的な加水分解は、加水分解部位での小胞膜の破裂を引き起こすことによって、小胞内からの薬物の放出が主として標的組織で生じるようになる。
【０１６８】
本明細書中で完全に開示した場合と同様に参照により本明細書に組み込む、本出願人の２００１年１月１６日出願の国際出願番号ＰＣＴ／ＩＬ０２／０００４３号（２００２年７月１８日にＷＯ０２／０５５０１１号として公告）は、一定の両親媒性誘導体、その前駆体、並びに前記両親媒性誘導体から製造した小胞、リポソーム、ミセル、及び複合体形成物（ｃｏｍｐｌｅｘａｎｔ）について記載している。両親媒性誘導体、及びそれから製造された生成物は、医薬、農業、食物業界、美容及び化学の分野で使用することができる。その中に記載された両親媒性誘導体は、安定なナノサイズの小胞の形成に必要な、極性及びイオン性の官能基及び部分を開示している。しかし、この特許出願は、選択的に切断されて安定した小胞を標的部位で破裂させることができる頭基を開示していない。本発明では、両親媒性誘導体を、小胞がどこで破裂しその内容物を放出するか決定する、加水分解で切断可能な若しくはその他の方法で改変された頭基に組み込むことによって改変する。本発明の追加の顕著な特徴は、外側の頭基を除去する前に、当該ナノサイズ化した小胞が、生物学的障壁を通過することができ、且つ様々な生体区画中で比較的安定していることである。
【０１６９】
破裂した小胞からの放出速度は、加水分解、並びに小胞膜の表面からの又は脂肪族部分内からのイオン基又は極性基における除去の速度の関数である。小胞の不安定化は異なる程度で行なうことができる。好ましい１つの程度では、小胞膜は、加水分解後に、急速に崩壊し内容物の全てが急速に放出される。別の好ましい実施形態では、破裂及び小胞の内容物の放出がある時間にわたって行われる。放出の速度を制御できることが、本発明の別の顕著な特徴である。
【０１７０】
従って、特に好ましい一実施形態において、本発明は、脂肪族鎖の両端に２つの異なる極性又はイオン性の頭基を有し、当該頭基の少なくとも１つ（大きな方）は、選択的に切断し／除去することができる小胞外表面上に位置する基又は部分を含み、さらに脂肪族鎖上にそれより小さい、小胞の安定性を与える追加の極性又はイオン性頭基を有する、２頭基両親媒性誘導体から製造した（２頭両親媒性物質）、非対称頭基を有する単層ナノ小胞であって、それにもかかわらずイオン性又は極性頭基の除去後に小胞を破裂することが可能な、標的制御単層ナノ小胞を提供する。そのような小胞は、標的制御放出特徴を有する薬物送達システムの一般的プラットホームとして寄与する上で十分に安定である。
【０１７１】
好ましい一実施形態において、本発明の小胞調製物は、脳に治療剤又は診断剤を送達するように設計されている。そのような小胞は、加水分解酵素、エステル分解酵素、酸化酵素、脱炭酸酵素、脱アミノ酵素、異性化酵素などの分解剤である酵素によって加水分解され、又は転位される頭基を含む。分解酵素を脳に限定させるか、或いは、送達を、血液脳関門を通過しない酵素阻害剤と組み合わせて適用することによって、分解系酵素が阻害される周辺での小胞の破裂を防止する。例えば、小胞は、コリン若しくはチオコリン誘導体、又は芳香族アミノ酸型化合物を含有することができ、周辺酵素阻害剤はコリンエステル分解酵素阻害剤、芳香族Ｌ−アミノ酸脱炭酸酵素阻害剤、モノアミンオキシダーゼ（ＭＡＯ）阻害剤及びカテコール−Ｏ−メチル基転移酵素（ＣＯＭＴ）阻害剤とすることができる。
【０１７２】
本発明の最も好ましい一実施形態は、パーキンソン病やアルツハイマー病などのＣＮＳに影響を及ぼす神経学的／神経変性性の疾患又は障害の治療、或いは脳腫瘍の治療のための、脳を標的とする標的制御放出プラットホームに適用することである。
【０１７３】
好ましい一実施形態において、脳を標的とする治療薬物を含む本発明の小胞／リポソームは、その表面にフェニルアラニン、チロシン、レボドパ、トリプトファン、及びその誘導体などの芳香族アミノ酸型分子を含む頭基を有する両親媒性化合物から製造される。これらの芳香族アミノ酸のカルボキシル基は、脳内で芳香族Ｌ−アミノ酸脱炭酸酵素（ＡＡＤＣ）によって選択的に切断され、それによって治療薬物を脳中で放出する。しかし、ＡＡＤＣは、その周辺にも存在しており小胞が脳に到達する前に小胞を破裂させ得る。従って、小胞の時期尚早の破裂を防止するために、本発明は治療薬物を含む小胞をベンセラジドやカルビドパなどのＡＡＤＣ阻害剤と組み合わせて投与することをも企図し、この阻害剤は周辺のＡＡＤＣ活性を阻害し、脳に到達する前の小胞の破裂を防止する。この阻害剤は、薬物を含む小胞／リポソームに先んじて、通常は当該カプセル化薬物を投与する約１５分以上、約１時間又は２時間前に患者に投与される。
【０１７４】
別の実施形態において、脳を標的とする治療薬物を含む本発明の小胞／リポソームは、その表面に１つ又は複数のアセチルコリンやアセチルチオコリンなどの（チオ）コリンエステル誘導体を含む頭基を有する両親媒性化合物から製造され、これらの誘導体は脳中でアセチルコリンエステラーゼ（ＡＣｈＥ）によって切断される。しかし、血清、肝臓及び膵臓に存在するＡＣｈＥも、アセチルコリン残基及び同様の誘導体を切断することができる。従って、小胞の時期尚早の破裂を防止するために、本発明は治療薬物を含む小胞を、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過しないネオスチグミンやピリドスチグミンなどのＡＣｈＥ阻害剤と組み合わせて投与することも企図し、これらの阻害剤は周辺のＡＣｈＥ活性を阻害し、脳に到達する前の小胞の破裂を防止する。阻害剤は、薬物を含む小胞／リポソームに先んじて、通常、当該カプセル化薬物を投与する約１５分以上、約１時間又は２時間前に患者に投与される。
【０１７５】
脳内に薬物を投与する目的で、本発明の小胞は、選択的に切断され得る基又は部分を含む頭基に加えて、ターゲティングのための小胞の表面上に官能基としてのリガンド、及び／又はＢＢＢでの透過性を増大させるための表面基としてのリガンドも含むことができる。
【０１７６】
ターゲティングのためのリガンドの例としては、ニコチン、シチシン（ニコチン作用薬）、ロベリン（ニコチン作用薬）、１−グルタミン酸（ＮＭＤＡ及びＡＭＰＡ受容体のリガンド、ＢＢＢを通ってそれを移動させる特異的なトランスポーターを持つので）、ＭＫ８０１（ＮＭＤＡ拮抗薬）、モルヒネ（アヘン剤受容体に結合）、エンケファリン（アヘン剤受容体に結合するペンタペプチド、エンケファリナーゼと称する脳特異的ペプチダーゼによって特異的に切断される頭基として使用することもできる）、ジアゼパム（バリウム）やリブリウム（ＧＡＢＡ受容体複合体に結合）などのベンゾジアゼピン、ドーパミン作用薬（例えばブロモクリプチン、ペルゴリド、ロピリノール（ｒｏｐｉｒｉｎｏｌ）など）、ドーパミン拮抗薬（ハリドール（ｈａｌｉｄｏｌ）、ベンザミン（スルピリド）、フェノチアジンなどの神経遮断薬）、三環系抗うつ剤（アミチプチリン（ａｍｙｔｙｐｔｉｌｉｎｅ）やデシミプラミン（ｄｅｓｉｍｉｐｒａｍｉｎｅ）など）、ムスカリン作用薬（オキソトレモリン、ピロカルピン、シス−２−メチルスピロ［１、３−オキサチオラン−５、３’−キヌクリジン］）など、ムスカリン拮抗薬（ムスカリン受容体に非常に高い親和性を有し、アトロピンやスコポラミンなど）、δ−９−テトラヒドロカンナビノール（δ−９−ＴＨＣ）などのカンナビノイド、及びアラキドニルエタノールアミド（Ｕｍｅｚａｗａ及びＥｔｏ、１９８８年；Ｗｏｌｆ及びＢｒｅｔｔ、２０００年を参照のこと）が含まれる。
【０１７７】
リポソームのＢＢＢを通る移動に役立つ、ＢＢＢ通過のための潜在的なリガンドの例としては、グルコース、マンノース、アスコルビン酸などの単糖類；（ＢＢＢを通るリポソームの移動に非常に有効であることが示されている）トランスフェリン受容体を標的とするような抗体；コリン；ＢＢＢトランスポーター用のベクター及び脳内で特異的に切断する切断され得る頭基として使用することができる、グルタミン酸、トリプトファン、ＤＯＰＡなどのアミノ酸（Ｓｈｉら、２００１年；Ｐａｒｄｒｉｄｇｅ、２００１年；Ｌｅｅら、２００１年；Ｙａｎｇ  Ｃ．ら、２００１年を参照のこと）が含まれる。
【０１７８】
好ましい一実施形態において、本発明の小胞調製物は、ＣＮＳに関連する疾患又は障害の治療用の薬剤を送達するために設計される。パーキンソン病の治療用に、本発明の小胞／リポソーム中にカプセル化される薬物としては、レボドパ（Ｌ−ＤＯＰＡ）、カルビドパ／レボドパ、アポモルフィン、ドーパミン、及びグリア由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）などの増殖因子が含まれるが、これらに限るものではない。アルツハイマー病の治療用の薬物には、アルツハイマープラークの成分に対する抗体、抗炎症剤、増殖因子、カルバコールなどＢＢＢを通過しないムスカリン作用薬が含まれるが、これらに限るものではない。脳腫瘍の治療用には、小胞はドキソルビシンなどの適当な化学療法薬を含むことができる。知られている方法によって治療薬を本発明の安定した小胞中にカプセル化する。その際、小胞膜の外表面のイオン基は、芳香族Ｌ−アミノ酸（例えばフェニルアラニン、チロシン、レボドパ、トリプトファン、及びその誘導体）から構成され、治療薬を含む小胞を芳香族Ｌ−アミノ酸脱炭酸酵素周辺阻害剤（例えばベンセラジド又はカルビドパ）と併せてそれを必要とする患者に投与する。別の実施形態において、小胞膜の表面イオン基は、１つ又は複数のコリンエステルから構成され、コリンエステラーゼの周辺活性を、血液脳関門を通過しないネオスチグミンやピリドスチグミンなどの第四級コリンエステラーゼ阻害剤によって阻害する。
【０１７９】
別の好ましい実施形態において、本発明の小胞調製物は、送達部位（例えば胃、腸など）での寿命が短く、身体の他の部分の作用部位で放出されなければならない治療薬を送達するために設計されている。例えば、好ましい一実施形態において、本発明は、糖尿病の治療用のインスリン、複数の硬化症の治療用のＣｏｐ１（コパキソン）、乳癌の治療用のハーセプチンなどの抗体、又は免疫不全疾患の治療用の免疫グロブリン混合物を含む小胞を提供する。これらの薬剤は全て、血液循環中でその効果を発揮し、腸及び胃での寿命が短く胃腸（ＧＩ）管中で吸収されにくい。前記小胞は、小胞膜の表面上にコリンエステルから構成される極性頭基を含むように設計され、このコリンエステルは血液中でコリンエステラーゼによって加水分解され、それによって血液循環中に治療薬を放出する。この場合、酵素阻害剤は必要とされない。
【０１８０】
別の好ましい実施形態において、本発明は、ウイルス及び細菌の感染症の選択的治療のための抗菌剤又は抗ウイルス剤を送達するように設計された小胞を提供する。この場合、小胞膜の外表面は、非限定的にレクチンやイナクチンなどのウイルス壁と特異的に相互作用する官能基、又は、非限定的に様々な細菌で細胞壁局在化シグナルを構成する配列ＬＰＸＴＧに対する抗体や、黄色ブドウ球菌の蛋白質Ａに対する特異的抗体など、細菌壁と特異的に相互作用する官能基を含む。
【０１８１】
別の実施形態において、本発明は遺伝子治療のための核酸／遺伝子の送達用のリポソームを提供する。例えば、リポソーム−ＤＮＡの組合せ／複合体を含むリポソーム製剤が、肺癌の気管内遺伝子治療用に、卵巣癌及び他の癌、血友病、並びに他の疾患の治療用に開発されつつある。
【０１８２】
本発明の小胞調製物は、非限定的に、静脈内、経口、経鼻、経肺又は経歯肉投与を含む、適当な経路によって送達することができる。
【０１８３】
本明細書で上記に定義したように、本発明の小胞／リポソームは、選択的に切断され得る基及び水素結合基を含む、少なくとも１つの両親媒性誘導体のみから製造することができ、或いはその表面上に均一に又はモザイク状に分布する、追加の両親媒性及び／又は非両親媒性成分と混合することができる。頭基の破裂が小胞膜のモザイク部分でのみ生じる場合、その成分がその穴を通って放出されることで大きな穴が膜に作成されることになる。
【０１８４】
例えば、両親媒性誘導体は、上記のような、生物学的障壁、例えばＢＢＢを通過する輸送を助ける部分、且つ／又は上記のようなターゲティングを助ける部分、且つ／又は生物学的安定性を増大させるための疎水性立体障壁としてポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分を含む、頭基を形成することができる。
【０１８５】
本発明の小胞の副成分として加えることができる他の物質の例は、コレステロール、コレステロール誘導体及び双性イオン型、酸性、又は陽イオン性脂質から得られる両親媒性誘導体である。双性イオン型脂質の例は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴミエリンである。酸性両親媒性脂質の例は、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、及びホスファチジン酸である。陽イオン性両親媒性脂質の例は、ジアシルトリメチルアンモニウムプロパン、ジアシルジメチルアンモニウムプロパン、及びステアリルアミンである。さらに、治療的生体活性分子の細胞中への輸送を促進する、スペルミンコレステロールカルバマートなどの陽イオン性両親媒性物質（Ｗ０９９／０２１９０号に記載）も加えることができる。
【０１８６】
共有結合による架橋は、小胞を化学的及び力学的に安定化させるもう１つの機構である。小胞の両親媒性膜成分を共有結合で架橋させると、一般に、頭基の加水分解後の膜の破裂が防止される。とはいえ、共有結合を選択的に切断することができる場合、又は小胞膜全体にわたってこの架橋が不均一に分布する場合には、この手法を使用することができる。従って、膜の選択的な共有結合による架橋は、小胞膜の破裂すべき部分を架橋しないモザイク状の分布で許容される。非架橋部分は浸出し、又は崩壊して、膜を多孔質にし、その孔を通って内容物が浸出することができる。
【０１８７】
小胞は、極性頭基によって、又は疎水性膜内の反応基によって架橋させることができる。例えば、ビニル置換基を有する頭基を、外表面上で水溶性開始剤を用いて、又は両表面上でＵＶ放射によって重合させることができる。膜の疎水層内の反応基は水溶性試薬には利用することができない。一般に、可視光線及びＵＶ放射を使用して両親媒性物質をジエン基又はジイン基によって重合させる。現況技術で広く知られている縮合反応によって架橋を生じさせることもできる。例えば、モノマー両親媒性化合物がエポキシ基を含む場合、適当な触媒（例えば、水酸基又はフェノール基を含む第三級アミン）を使用して、又は多官能性アミンとの反応によってこの化合物を自己縮合させることができる。
【０１８８】
身体の免疫系、及び他の障害物排除機構による排除に対して、小胞を安定化させるために官能基及び部分を使用することができる。すなわちオリゴマー又はポリマー鎖部分を含む他の両親媒性誘導体を小胞形成段階で副成分として加え、小胞の安定性に影響を及ぼすことなく表面特性に対する大きな効果を得ることができる（Ｌａｓｉｃ、１９９６年を参照のこと）。免疫系に対する透明性を改善し、生物学的安定性を改善するために、以下のペンダントを小胞表面に、選択的に切断され得る基の加水分解後の酵素的加水分解及び小胞の破裂を妨げないように様々な量で加えることができる。
即ち、非限定的に、表面上に加えられたガングリオシドＧＭ１又はホスファチジルイノシトール５〜１０モル％からのペンダント、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリエチルオキサゾリン、ポリメチルオキサゾリン、ＰＡＡなどのペンダント、表層上に約５モル％で共有結合したＰＶＰ、及びデキストランやセルロースなどの多糖類である。
【０１８９】
生物学的障壁の通過のために、小胞のサイズが小さいことは重要な要因である。小胞は、１０００Å未満とすべきであり、多くの場合２００Åに近い。いくつかの実施形態では、１０〜１００ｎｍのサイズが多くの適用において好ましく、他の適用にいおいては１５〜３０ｎｍが好ましい。しかし、より大きなサイズを他の適用において使用することもできる。
【０１９０】
次に、本発明を以下の非限定的実施例によって説明する。
【０１９１】
（実施例）
本発明の誘導体１、２、３、４、５、８、９、１２；ターゲティング基、トランスポーター基又は安定化基を含む誘導体６、７、１０、１１、及びその調製のために使用されたその前駆体１〜２４、並びに調製方法の概略を、本明細書の反応式１〜３１に示す。前駆体１、３、４、１６、２３の調製は、ＷＯ０２／０５５０１１号に記載されている。
【実施例１】
【０１９２】
１３−（２−クロロアセトキシ）−１２−ヒドロキシオクタデカ−９−エン酸メチルエステル（前駆体１）の合成
本明細書で反応式１に示し、且つＷＯ０２／０５５０１１号（実施例４）に記載される通りに、一段階でメチルベルノラート（ｖｅｒｎｏｌａｔｅ）から前駆体１を調製した。
【実施例２】
【０１９３】
前駆体２の合成
反応式２に示すように前駆体１（Ｘ＝Ｂｒ）から前駆体２を以下のように調製した。０．４４９ｇ（１ｍｍｏｌ）の前駆体１（Ｘ＝Ｂｒ）を含む１ｍｌの無水アセトンに、０．１３ｇ（１ｍｍｏｌ）の２−ジメチルアミノエチルアセタートを加え、その溶液を４時間還流した。溶離剤としてクロロホルム及びメタノール（１：１、ｖ／ｖ）を使用するカラムクロマトグラフィによって反応混合物から第四級塩（Ｒｆ＝０．６６）を分離すると収率４５％で０．２６ｇの前駆物質２が得られた。
2005521645.tif 000028
Ｃ２７Ｈ５０ＮＯ７Ｂｒの元素分析の計算値：Ｂｒ−１３．７４％、実測値（ｆｏｕｎｄ）：１２．２７％（含有量は銀滴定法（ａｒｇｅｎｔｏｍｅｔｒｉｃ  ｔｉｔｒａｔｉｏｎ）によって定量）。
【実施例３】
【０１９４】
Ｎ，Ｎ−エチレンビス８［ベルノルアミド（ｖｅｒｎｏｌａｍｉｄｅ）］の合成−前駆体３
本明細書の反応式３に示し、且つＷＯ０２／０５５０１１号（実施例１４）に記載される通りに、トリベルノリン、又はメチルベルノラートから前駆体３を調製した。
【実施例４】
【０１９５】
前駆体４の合成
本明細書の反応式４に示し、且つＷＯ０２／０５５０１１号（実施例１５）に記載される通りに、前駆体３から前駆体４を調製した。
【実施例５】
【０１９６】
両親媒性誘導体の調製１
反応式５に示すように前駆体４から誘導体１を以下のように調製した。０．８１ｇ（０．００１ｍｏｌ）の前駆体４の溶液に、０．２６４ｇ（０．００２ｍｏｌ）のジメチルアミノエチルアセタートを無水アセトン（２．０ｍｌ）中クロロ酢酸塩として加えた。反応混合物を３時間還流し、次いでエーテルで倍散化し、それによって塩化物塩として誘導体１を得た。同様に前駆体４をブロモ酢酸塩として使用して臭化塩として誘導体１を調製した。
2005521645.tif 000029
Ｃ５４Ｈ１００Ｎ４Ｏ１２Ｃｌ２（ＭＷ＝１０６７）の元素分析計算値：Ｃｌ：６．６％、実測値：６．５％（含有量は銀滴定法によって定量）。
Ｃ５４Ｈ１００Ｎ４Ｏ１２Ｂｒ２（ＭＷ＝１１５６）の元素分析計算値：Ｂｒ：１３．８％、実測値１２．０％。
【実施例６】
【０１９７】
前駆体５の合成
反応式６に示すようにべルノニア油のメチルエステル、及びグルタル酸から以下のように前駆体５を調製した。べルノニア油のメチルエステル７．２ｇと、グルタル酸１７ｇの混合物をトルエン２３０ｍｌで４８時間還流した。氷浴にて冷却後、過剰なグルタル酸を沈殿ろ過した（１４．６ｇ）。そのトルエン溶液を１０％ＮａＣｌ溶液で中性ｐＨになるまで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し溶媒を減圧除去すると８．６ｇの粗生成物が得られた。
ＩＲ（ｃｍ−１）：１７１０（カルボキシル基）、１７３４、１７３９（エステル基）
2005521645.tif 000030
ＨＰＬＣ  ＲＰ  Ｃ１８メタノール：水＝３：１、酢酸ｐＨ＝３．３、流速１ｍｌ／ｍｉｎ、Ｒｔ＝１６．７分間
元素分析Ｃ２４Ｈ４２Ｏ７（ＭＷ＝４４２）；酸価２．２６ｍｅｑ（ミリ当量）／ｇ；実測値２．１。
ＭＳｍ／ｚ［Ｍ−Ｈ］＝４４１。
【実施例７】
【０１９８】
前駆体６の合成
反応式７に示すように前駆体５のアシルハロゲン化物として前駆体６を以下のように調製した。前駆体５  ５ｇ及び塩化チオニル７．５ｍｌを含む無水トルエン（２３０ｍｌ）の溶液を終夜攪拌した。次いで、溶液を２時間還流し冷却し、溶媒を減圧留去すると５．３ｇの粗アシルハロゲン化物が得られた。
ＩＲ（ｃｍ−ｌ）１７９０（アシルハロゲン化物基）。
2005521645.tif 000031
Ｃ２４Ｈ４０Ｏ５Ｃｌ２（ＭＷ＝４７９）の元素分析計算値：Ｃｌ１４．８％、実測値Ｃｌ１３．７％。
【実施例８】
【０１９９】
前駆体７の合成
反応式８に示すように前駆体６から前駆体７を以下のように調製した。無水アセトン１１ｍｌ中アシル塩化物前駆体６  ２ｇと無水コリン塩化物０．７ｇの混合物を４時間還流した。反応混合物を冷却しエーテルを加え過剰なコリン塩化物をろ過した。溶媒を減圧で除去し数度ヘキサンで洗浄した。
Ｃ２８Ｈ５２ＮＯ６Ｃｌ２（ＭＷ＝５８２）の元素分析計算値：Ｃｌ６．１％、実測値６．３％、Ｃｌ総実測値＝１１．４％（Ｃｌ−総計算値＝１２．２％）。
ＭＳｍ／ｚ［Ｍ−Ｃｌ］＝５４７。
【実施例９】
【０２００】
前駆体８の合成
反応式９に示すように前駆体５から前駆体８を以下のように調製した。無水トルエン５０ｍｌ中前駆体５（カラムクロマトグラフィによる精製後）２００ｍｇ、ＤＣＣ９３ｍｇ、ジメチルアミノエタノール８０ｍｇの混合物を２０時間還流し冷却し、ろ過し水で洗浄し硫酸マグネシウムで乾燥し溶媒を蒸発させると１４０ｍｇの生成物が得られた。ＩＲは酸のピークを１つも示さず、エステルのピークのみであった。
Ｃ２８Ｈ５３ＮＯ７の元素分析計算値：ＭＷ＝５１３。
ＭＳｍ／ｚ［Ｍ］＝５１３。
【実施例１０】
【０２０１】
前駆体９の合成
反応式１０に示すように前駆体８から前駆体９を以下のように調製した。無水エーテル中、前駆体８  ０．１ｇとヨウ化メチル０．２５ｇを室温で約２時間反応させ、次いで冷却装置中で終夜放置した。ＡｍｂｅｒｌｉｔｅＣＧ−４００−１を使用すると塩化物誘導体が得られた。
【実施例１１】
【０２０２】
前駆体１０の合成
反応式１１に記載の通り前駆体５から前駆体１０を以下のように調製した。無水トルエン中前駆体５  ３ｇを含む溶液に、コリン塩化物０．９５ｇ及びＤＣＣ１．７ｇを加え反応混合物を１８時間還流した。
Ｃ２９Ｈ５４ＮＯ７Ｃｌ（ＭＷ＝５６３．５）の元素分析計算値：Ｃｌ−６．３％；
実測値５．９％、ＭＳＭ／ｚ［Ｍ−Ｃｌ］＝５２８。
【実施例１２】
【０２０３】
前駆体１１の合成
反応式１２に記載の通り前駆体３から前駆体１１を以下のように調製した。１，１，２−トリクロロエタン７０．５ｇ中ジアミド前駆物質３  １ｇ（１．７５ｍｍｏｌ）とグルタル酸２．８ｇ（２１．２ｍｍｏｌ）の混合物を還流温度で１７時間攪拌した。次いで反応を冷却した。過剰なグルタル酸を沈殿させ、ろ過した。ろ液を塩化ナトリウム飽和溶液で洗浄してｐＨ＝６．５にし、硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧除去すると１．５６ｇの粗生成物が得られた。生成物をカラムクロマトグラフィ（シリカゲル８０ｇ）により精製した。溶離剤はクロロホルム及びメタノールの混合物であった。高純度の前駆体１１が０．４４ｇ得られた。
2005521645.tif 000032
【実施例１３】
【０２０４】
前駆体１２の合成
反応式１３に示すように前駆体１１から前駆体１２を以下のように調製した。ジクロロメタン１０ｍｌ中１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチル−カルボジイミド塩酸塩０．３９ｇ（ＥＤＣＩ）を含む溶液を、ジクロロメタン１０ｍｌ中前駆体１１  ０．４４ｇ、ＤＭＡＰ（ジメチルアミノピリジン）０．２５ｇ及びジメチルアミノエタノール０．４８ｇを含む溶液に滴下した。添加中温度を０℃に保った。反応物を室温で終夜攪拌した。ＮａＣｌの飽和溶液を加え相分離させた。有機相を希ＨＣ１溶液で、次いでＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、次いで再度ＮａＣｌ溶液で洗浄してｐＨ＝６．７にした。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧除去すると０．２３ｇの粗生成物が得られた。生成物をカラムクロマトグラフィ（１３３ｇのシリカゲル６０、溶離剤：クロロホルム：メタノール＝１０：１）により精製した。高純度な前駆体１２  ０．１７ｇが得られた。
2005521645.tif 000033
【実施例１４】
【０２０５】
誘導体２の調製
反応式１４に従って前駆体１２から誘導体２を以下のように調製した。溶媒アセトン−イソプロパノール（１：１）中前駆体１１  ０．１７ｇ及びヨウ化メチル２ｍｌを含む溶液を室温で７２時間攪拌した。溶媒を減圧除去すると０．１８ｇの第四級誘導体２が得られた。
【０２０６】
Ｉ−１実測値＝１５％、Ｉ−１計算値＝１９．４％（ＡｍｂｅｒｌｉｔｅＣＧ−４００−１を使用してＩ−をＣｌ−に交換）
ＩＲｃｍ−１：第三級アミンに特有の２７７３ｃｍ−１のピークは消失
１ＨＮＭＲδｐｐｍ：０．８３（ＣＨ３−ＣＨ２−６Ｈ）；３．０（ＣＨ３Ｎ−，１８Ｈ）、３．６（ＣＨＯＨ−ＣＨＯＣＯ）；４．４（−ＯＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ−，４Ｈ）；４．７（−ＣＨ−Ｏ−ＣＯ、２Ｈ）；５．３−５．４（ＣＨ＝ＣＨ、４Ｈ）
１３Ｃ  ＮＭＲδｐｐｍ：第三級アミン［（ＣＨ３）２Ｎ）］に特有の４５．５ｐｐｍの化学シフトは消失し、第四級基［（ＣＨ３）３Ｎ）−］に特有の５２．９ｐｐｍの新規な化学シフトが出現；５７．９（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ）；６３．８（ＣＨ２Ｏ）；７０．０（ＣＨ２Ｎ、アミド）；７１（ＣＨＯＨ）；７５（−ＣＨ−Ｏ−ＣＯ−）；１７１．９−１７２．３（−ＣＨ２−ＣＯ−Ｏ−）
ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ［（Ｍ−２１）／２］＝５２６（ｚ＝２）
【実施例１５】
【０２０７】
前駆体１３の合成
反応式１５に記載の通り前駆体１３を以下のように調製した。１，１８−オクタデカンジカルボン酸２ｇ、ブロモウンデカノール２．９４ｇ及びｐ−トルエンスルホン酸０．４ｇを含むトルエン１１８ｇ溶液を終夜共沸還流した。冷却後混合物を水で洗浄し１０％ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し再度水で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し溶媒を減圧除去した。ヘキサンを加えると４ｇの最終生成物が沈殿した。
Ｂｒの元素分析計算値：１９．８％、実測値１８％。
【実施例１６】
【０２０８】
誘導体３の調製
誘導体３は、選択的に切断され得る基を含むが水素結合基を含まない化合物の一例である。とはいえ、それは非常に安定した小胞を形成し、本明細書で記載の本発明に包含される。
【０２０９】
反応式１６に示すように前駆体１３から誘導体３を以下のように調製した。ニトロメタン２５ｍｌ中前駆体１３  １．５ｇ及び２−ジメチルアミノエチルアセタート１．９ｇを含む溶液を６時間還流した。次いで、反応混合物を冷却し溶媒を蒸発させ、３０ｍｌのジクロロメタンを加え混合物を氷浴で冷却した。沈殿した生成物をジクロロメタン／酢酸エチルから３度再結晶化させた。
誘導体３  ０．６ｇが高純度な生成物として得られた。
Ｂｒの元素分析計算値：１４．９％、実測値１３．１％。
【実施例１７】
【０２１０】
前駆体１４の合成
本明細書反応式１７に示し、且つＷＯ０２／０５５０１１号に記載される通りに、ジエチレントリアミン及びメチルベルノラート又はトリベルノリンから前駆体１４を調製した。
【実施例１８】
【０２１１】
前駆物質１５の合成
反応式１８に記載の通りに前駆体１４から前駆体１５を以下のように調製した。前駆体１４（６．５６ｇ、１０ｍｍｏｌ）を６５℃の無水トルエン３０ｍｌに溶解した。この溶液に無水炭酸カリウム（０．６９ｇ、５ｍｍｏｌ）及びジブロモエタン（２．８２ｇ、１５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を６０℃で１５時間攪拌した。ろ過後反応混合物をクロロホルムに溶解し水で３〜４度洗浄した。有機相を分離しＮａ２ＳＯ４で乾燥し減圧下留去した。第三級アミン基を含むジアミド混合物を、溶離剤としてアセトン：メタノール＝１：ｌｖ／ｖを使用するカラムクロマトグラフィにより精製するとアルキル化した生成物前駆体１５が得られた。
ＩＲ（ＫＢｒ、ｃｍ−１）：３３３０、１６４０、１５５０（第二級アミド）、２７８０（第三級アミン）、８４０、８２０（エポキシ基）。
Ｃ４２Ｈ７６Ｏ４Ｎ３Ｂｒ（ＭＷ＝７６６）の元素分析計算値：Ｂｒ１０．４４％、実測値９．８％。
【実施例１９】
【０２１２】
誘導体４の調製
反応式１９に示すように前駆体１５から誘導体４を以下のように合成した。アルキル化生成物前駆体１５を６０℃の無水アセトン５０ｍｌに溶解し、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルアセタートを１０分間加えた。反応混合物を攪拌し６０℃で２時間加熱した。冷却後減圧下で溶媒を除去し、ジエチルエーテルを残留物に加え、次いで沈殿物をろ過すると白色粉の誘導体４（収率５０％）が得られた。
Ｃ４８Ｈ８９Ｏ６Ｎ４Ｂｒ（ＭＷ＝８９７）の元素分析計算値：Ｂｒ８．９％、実測値８．０％。
【実施例２０】
【０２１３】
誘導体５の調製
反応式２０に記載の通り前駆体４から誘導体５を以下のように調製した。無水アセトン２ｍｌ中前駆体４（０．８１ｇ）を含む溶液に、ｐ−アミノフェニルアラニン（０．４ｇ）及び炭酸カリウム（０．１４５ｇ）を加えた。反応混合物４時間還流した。ろ過後、残留物をエーテルで微粉化すると誘導体５が得られた。
【実施例２１】
【０２１４】
誘導体６の調製
反応式２１及び反応式２２に示すように前駆体１６及び前駆体１７から誘導体６を調製した。ＷＯ０２／０５５０１１号（実施例２４、その明細書の反応式１２の前駆体１０のモノメチル化体）に記載される通りに前駆体１６を調製した。２−メトキシエタノール中３−クロロプロピル−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド及びヨウ化ナトリウムを還流下で２４時間反応させることによって前駆体１６から前駆体１７を得た。溶媒を減圧除去し残留物を、溶離剤としてメタノール及びクロロホルムを用いたシリカゲルカラムによって精製した。Ｄｏｗｅｘカラムを使用することによってヨウ化イオン（反応式２２中のＸ＝Ｉ−）を塩素イオンで交換し、よって誘導体６を得た。
【実施例２２】
【０２１５】
誘導体７の調製
反応式２３に示すように前駆体１から誘導体７を以下のように調製した。無水アセトン２ｍｌ中の前駆体１（Ｘ＝Ｂｒ）０．４４９ｇ（１ｍｍｏｌ）に、０．１６５ｇ（１ｍｍｏｌ）のニコチンを加え溶液を３時間還流した。溶離剤としてクロロホルム及びメタノール（１：１、ｖ／ｖ）を使用するカラムクロマトグラフィにより反応混合物から第四級塩を分離した。
Ｃ３１Ｈ５１Ｎ２Ｏ５Ｂｒの元素分析計算値：Ｂｒ１３％、実測値１１．９％
【実施例２３】
【０２１６】
前駆体１８の合成
本明細書反応式２４に示し、且つＷＯ０２／０５５０１１号（実施例３３）に記載される通りに、トリベルノリンからクロロアクトキシ（ｃｈｌｏｒｏａｃｔｏｘｙ）及びブロモアセトキシ誘導体として前駆体１８を調製した。
【実施例２４】
【０２１７】
両親媒性誘導体８の調製
反応式２５に示すように前駆体１８から誘導体８を以下のように調製した。粗トリス−クロロアセトキシ前駆体１８（１ｍｍｏｌ含む１．７３ｇ）及びＮ，Ｎ−ジメチルアミノエチルアセタート（０．３９３ｇ、３ｍｍｏｌ）をアセトン４ｍｌ中で３時間還流した。溶媒を減圧除去し残留物を室温で減圧乾燥すると油として誘導体８が得られた。銀滴定法によって定量したこの生成物の塩素イオン量は３．４９％（理論値４．０３％）に等しい。第四級の収率は８６．６％であった。
Ｃ１０５Ｈ２００Ｏ１５Ｎ３Ｃｌ３（ＭＷ＝１８４８．５）の元素分析計算値：Ｃｌ５．７６％；Ｎ２．２７％。（生成物の７０％）：Ｃｌ＝５．７６×０．７＝４．０３％；Ｎ＝２．２７×０．７＝１．５９％、実測値：Ｃｌ４．０％；Ｎ１．８５％。
【０２１８】
誘導体８は上記の条件と同一の条件下でトリス−ブロモアセトキシ前駆体からも得られる。
【実施例２５】
【０２１９】
誘導体９の調製
反応式２６〜２８に記載されるようにアジド前駆体１９を対応するアミン（前駆体２０）に触媒還元することよって誘導体９を調製し、続いて１，２−ジブロモエタンと反応させることによって前駆体２１を得、次いでｐ−アミノ−フェニルアラニンを用いて求核置換すると誘導体９が得られた。
【実施例２６】
【０２２０】
両親媒性誘導体１０の調製
【化２５】
2005521645.tif 000034
【０２２１】
先に述べた通り塩化チオニルの存在下でメチルベルノラートをグルタミン酸と反応させることによってグルタミン酸のγ−エステル［式中Ｒはベルノル酸残基］である誘導体１０を調製した。（Ｗｉｄｍｅｒ及びＫｅｌｌｅｒ−Ｓｃｈｉｅｒｌｅｉｎ、１９７４年；Ｈａｎｂｙら、１９５０年、を参照のこと）。
【実施例２７】
【０２２２】
誘導体１１（ＰＥＧ誘導体）の調製
反応式２９に示すように前駆体３を異なる分子量（４００、６００及び２、０００）を有するＰＥＧと（Ｃ２Ｈ５）２Ｏ．ＢＦ３の存在下で反応させることによって誘導体１１を調製した。
【実施例２８】
【０２２３】
誘導体１２の調製
反応式３０〜３１に示すように誘導体１２を以下のように調製した。
【０２２４】
ジブチルエーテル５０ｍｌ中１，６−オクタン二酸１ｇ（５．７ｍｍｏｌ）と１、１２ジアミノドデカンの混合物１１．５ｇ（５７ｍｍｏｌ）を５時間還流した。冷却後、反応混合物を室温に戻し（ＲＴ）、生成物をシリカゲル６０でのカラムクロマトグラフィにより精製するとジアミド前駆体２２  ０．９ｇ（収率：２９％）が得られた。
ＩＲｃｍ−１：１６５０ｃｍ−１
【０２２５】
トルエン２５ｍｌ中前駆体２２  １ｇ（１．８６ｍｍｏｌ）、α−ブロモメチルアセタート０．６ｇ及びピリジン０．３１ｇを含む溶液を５時間還流した。反応物を冷却後、沈殿したピリジン塩酸塩をろ過した。溶媒を減圧除去し生成物をシリカゲル６０でのカラムクロマトグラフィにより精製し、それによって前駆体２３  ０．４ｇを得た。
ＩＲｃｍ−１：１７３５、１６５０
【０２２６】
ジクロロメタン２５ｍｌ中前駆体２３  １ｇ（１．５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエタノール１．３ｇ及び２Ｎ―ＮａＯＣＨ３（メタノール）０．１ｍｌを含む溶液を８時間還流した。反応の終了後、ｐＨ＝７になるまで混合物を水で洗浄し、粗生成物をカラムクロマトグラフィにより精製すると高純度前駆体２４  ０．４ｇが得られた。
ＩＲｃｍ−１：２７７３、１７３５、１６５０
【０２２７】
アセトン２５ｍｌ中前駆体２４  １ｇ（１．２６ｍｍｏｌ）及びヨードメタン１ｇを含む溶液を５時間還流した。溶媒を減圧除去するとヨード塩（Ｘ−＝Ｉ−）として誘導体１２が得られた。Ｉ−実測値２３％；Ｉ−計算値２３．５％。イオン交換樹脂（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ５０）を通過させることによって誘導体１２（Ｘ−＝Ｃ１−）のクロロ誘導体を得た。
【実施例２９】
【０２２８】
小胞／リポソームの調製方法
本発明によれば、リポソーム及び小胞は、多くの現況技術の手順のどの１つによっても製造することができ、例えば、非限定的に：（ｉ）乾燥リン脂質の振盪又は混合による水和によって多区画リポソームを自発形成させる、（ｉｉ）適当な有機溶媒に溶解させた脂質を凍結乾燥し、次いでその乾燥物質を水性溶液に添加する、（ｉｉｉ）ポリカーボナート膜を通して押出すと多区画リポソームがもたらされる、（ｉｖ）プローブ又は槽中で超音波処理する、（ｖ）脂質のアルコール溶液を小口径のＨａｍｉｌｔｏｎ注射器によってウェル中へ注入し、脂質の相移行より高い温度で水性溶液を攪拌する、（ｖｉ）洗浄剤で脂質を共溶解し、次いでこの洗浄剤をろ過又は透析によって除去する、（ｖｉｉ）脂質分散液をパワープレス（フレンチプレス）の小孔を通して注入し、逆相蒸発と組み合わせ、ポリカーボナート膜を通して逐次押出する、（ｖｉｉｉ）水性溶液中で脂質フィルムを徐々に膨張させる、（ｉｘ）脂質−エーテル溶液を温かい水性溶液中に注入する、（ｘ）水−油エマルジョンから有機相を減圧下で除去する、（ｘｉ）脂質を溶解している水不混和性有機溶媒を水に注入し、続いて溶媒を蒸発させる、（ｘｉｉ）有機溶媒を含む水に両親媒性物質を分散させ、溶解させて油中水エマルジョンを形成する。次いで、これらの小胞を水性溶媒に懸濁させ水性コアを持たせる。２つの水性区画は両親媒性層によって互いに分離する。溶媒を蒸発させると非常に高い捕捉収率で小胞が得られる。
【０２２９】
これらの手順は、例えば、以下の参照文献に記載されている：Ｂｅｎｉｔａ、１９９６；Ｆｅｎｄｅｒ、１９８２；Ｔｏｓｈｉｎｏｒｉ及びＳｕｎａｍｏｔｏ、１９９２；Ｋｕｎｉｔａｋｅら、１９８１ａ；Ｋｕｎｉｔａｋｅら、１９８１ｂ；Ｋｕｎｉｔａｋｅ及びＯｋａｈａｔａ、１９７７；Ｂｏｄｅｒら、１９８１；Ｆｕｈｒｈｏｐ及びＭａｔｈｉｅｕ、１９８４、これらの参照文献の各々及び全てを本明細書で完全に開示した場合と同様に参照により本明細書に組み込む。
【０２３０】
一般に、多くの異なる非水溶性化合物のエマルジョンは、超音波処理又は相転移条件にさらした場合に膜小胞を形成する内在的特性を有することは既に分っている。それぞれの方法がある型の小胞をもたらす。従って、同じ両親媒性誘導体に対して異なる方法又は変形形態を選ぶことによって様々な異なるサイズの小胞を製造することができる。生物学的障壁の通過が要求される多くの適用例では、直径１００ｎｍ未満の小胞をもたらす調製方法が好ましく約２０ｎｍ未満の範囲のサイズが最も好ましい。
【０２３１】
本発明によるナノ小胞を形成するための好ましい一の方法は超音波処理によるものである。カプセル化効率を向上させるために、本発明者らは上記方法（ｘｉｉ）と超音波処理の組合せを使用し、この超音波処理を溶媒の蒸発後に行った。より大型の小胞を得るために、本発明者らは、個々の実施例に記載された上記手順の１つを使用した。別の場合には、１つの頭基と乾燥両親媒性誘導体を混合水和すると多区画小胞が自己形成された。この方法によって得られた小胞は不均一であり、球形タマネギ様長楕円の管状構造を有していた。しかし、それらは全て閉じており、その水性区画は互いに分離していた。これらの多区画異分散（ｈｅｔｅｒｏｄｉｓｐｅｒｓｅｄ）小胞は直径１８００Å〜８０００Åであった。
【０２３２】
別の場合には、均一で所定のサイズの多区画小胞は、単頭基の両親媒性誘導体を（相移行より高い）３５℃で１ミクロンのＮｕｃｌｅｏｐｏｒｅ膜を通して押し出すことよって調製した。単層小胞を双極性両親媒性誘導体から形成し、水性緩衝液を両親媒性物質誘導体のエーテル溶液中に導入し、続いてエーテルを除去することによって行った。
【０２３３】
大型の単一区画小胞も、２頭両親媒性物質のアルコール溶液を小口径のＨａｍｉｌｔｏｎ注射器によってウェル中に注入し（両親媒性誘導体の相移行より高い）室温で溶液を攪拌し、続いて蒸発によってエタノールを除去することによって超音波処理をせずに得た。
【０２３４】
大型の単一区画２層小胞を、両親媒性フィルムを徐々に膨張させることによって製造すると０．８ミクロンの小胞が得られた。
【実施例３０】
【０２３５】
活性物質のカプセル化方法
生体活性化合物は、小胞の形成工程中にカプセル化することができ、又はその形成後小胞中に搭載することができる。小胞中への薬物のカプセル化を実現する様々な方法は、当技術分野で知られており、原則的にその全てを本発明の両親媒性誘導体に使用することができる。親油分子は、脂質層に閉じ込めることができる。この場合、小型の多層小胞を製造してカプセル化し得る薬物量を最大にすることが有利である。本発明の別の実施形態では、小胞を形成する両親媒性誘導体を、薬物に対する吸収及び吸収部位数が最大になるように設計することができる。
【０２３６】
親水性薬物のカプセル化には、単層小胞が最高のカプセル化をもたらす。搭載する薬物のｐＫａ（酸解離定数）に応じて様々なｐＨ勾配法を使用して形成後に小胞に搭載することによって、さらに高い搭載能力を実現することもできる。
【０２３７】
親水性薬物は、小胞形成後に小胞中に搭載することができる。イオン化が可能なアミン基を有する薬物では、搭載はアンモニウムイオン勾配による。小胞中のアンモニウムイオンは、自由に透過可能なアンモニアと平衡状態にあり、アンモニアがリポソームから消失するにつれて水素イオンが蓄積する。それによって低い内部／高い外部ｐＨ勾配がもたらされる。勾配の確立後、リポソーム内の過剰なアンモニウムイオンは、水素イオン貯蔵部を提供して長時間にわたってｐＨ勾配を維持する。すなわち、アミン薬物が膜を透過してリポソームに入ると、アミン薬物は、それらの捕捉を維持するアンモニウムイオンに変換される。
【０２３８】
イオン化状態で負に帯電するイオン化が可能な薬物の高濃度薬物搭載にも同様の手法を使用することができる。この場合は、リポソームを高い内部／低い外部ｐＨ勾配を有する（ギ酸、酢酸、プロパン酸などの）弱酸によって形成する。本明細書に完全に開示された場合と同様に参照により本明細書に組み込む米国特許第５，９３９，０９６号で先に記載されているように、勾配によって弱酸化合物を搭載することができる。
【実施例３１】
【０２３９】
特異的酵素加水分解を受ける両親媒性誘導体頭基の感受性の評価
新規な両親媒性誘導体を、小胞を形成するために設計した。この小胞は、主として又は専ら標的器官で、頭基の加水分解を促進し、それによって小胞の不安定化、及び標的器官内での内容物の放出をもたらし、このような条件と合致するまでは安定している。べルノニア油から合成した３つの新規な両親媒性誘導体を選択してこの概念を評価した。
【０２４０】
３１Ａ．アセチルコリンエステラーゼによるコリンエステル頭基の加水分解
２つの方法を使用して誘導体１及び２を加水分解するコリンエステラーゼ（ＣｈＥ）の能力を評価した。
【０２４１】
（ｉ）ｐＨ−ｓｔａｔ法：誘導体１及びアセチルコリン（ＡＣｈ）のアセチルコリンエステル頭基は、コリンエステラーゼ（ＣｈＥ）によって加水分解され、これによって酢酸が溶液中に放出される。ＣｈＥによる誘導体２の加水分解によって、コリン及び遊離脂肪酸が放出される。どちらの場合も、酸の放出はｐＨ降下をもたらす。これらの化合物の加水分解速度は、加水分解中に発生した酸の中和に必要とされるＮａＯＨの量を測定することによって定量することができる。３つの溶液、それぞれ１００ｍＭ濃度のアセチルコリン（ＡＣｈ）水溶液、誘導体１及び２のメタノール溶液を調製し、次いで水（１０ｍｌ）で１００倍に希釈し、そのｐＨを０．１Ｍ−ＮａＯＨを使用してｐＨ９．０に調整した。ｐＨを１０分間（基準）安定したままになるまでモニターした。この段階で、ＣｈＥを含むヒト血清（０．１ｍｌ）を加え、ｐＨ９．０を維持するために個々の溶液を０．０５Ｍ−ＮａＯＨで滴定した。１５分間一定のｐＨを維持するために必要とされるＮａＯＨの量を測定した。図１にまとめて示す結果は個々の３つの化合物は異なる速度で加水分解されることを示し、最も早い加水分解速度はＡＣｈで観察され、最も遅い加水分解速度は誘導体２で観察された。３つの化合物全ての加水分解がＣｈＥ阻害剤、ピリドスチグミン（１０−５Ｍ）によって完全に中断されたことは、加水分解がコリンエステラーゼ特異的であったことを示す。これらの結果は、加水分解の速度が頭基の性質によって定量できることを示唆している。従って、誘導体１から調製される小胞は、ＣｈＥの存在下で誘導体２から製造した小胞よりも早く破裂すると予想される。
【０２４２】
（ｉｉ）Ｅｌｍａｎ法を使用する競合検定：アセチルチオコリン（ＡＴＣ）の加水分解によってチオコリンが放出され、これは５，５’−ジチオビス−２−ニトロベンゾアート（ＤＴＮＢ）を還元し溶液に黄色を生じさせる。同様にＣｈＥによって加水分解するがチオコリンを放出しない基質の添加は黄色の発色を阻害する。それはＡＴＣとの間の競合、及び加水分解酵素のための他の基質による。一連の様々な濃度の誘導体１及び２のメタノール溶液、それと共にアセチルチオコリン（１．５ｍＭ）、ＤＴＮＢ（０．５ｍＭ）、及び３単位のアセチルコリンエステラーゼ（ＡＣｈＥ）を含むリン酸緩衝食塩水を調製した。個々の反応混合物で黄色出現速度を定量した。図２にまとめて示す結果は、誘導体１は誘導体２よりも高い程度でアセチルチオコリンと競合することを示している。これらの結果はｐＨ−ｓｔａｔ実験から得た結果と一致し、誘導体１の頭基は好ましくはコリンエステラーゼ酵素によって認識され、従って、誘導体２の頭基と比較して速く加水分解を受けることを示唆している。従って、コリンエステラーゼに曝露された場合、誘導体１から調製される小胞は誘導体２から調製される小胞よりも早く破裂すると予想される。
【０２４３】
３１Ｂ．芳香族アミノ酸脱炭酸酵素（ＡＡＤＣ）での脱炭酸によるレボドパ頭基の除去
誘導体５は、頭基として芳香族アミノ酸部分を含む。この生理学的ｐＨで負に帯電した頭基は、酵素である芳香族Ｌ−アミノ酸脱炭酸酵素（ＡＡＤＣ）の適当な基質であり得る。ＡＡＤＣに曝露すると、誘導体５の頭基はアミンに変換されるはずであり、従って、誘導体５から製造した小胞を不安定化することができる形で、頭基の性質を（カルボキシルからアミンへ）変化させる。
【０２４４】
誘導体５がＡＡＤＣの基質として役立つことが可能かを試験するために、ＡＡＤＣ源としてラット肝臓のホモジネートを利用し以下の実験を行った。誘導体５のメタノール溶液（０．００５ｍｌ）を、リン酸カリウム（５０ｍＭ、ｐＨ＝７．０）、ジチオトレイトール（ｌｍＭ）、ＥＤＴＡ（０．２ｍＭ）、ピリドキサール５’−リン酸塩（０．０１ｍＭ）、パルジリン（０．１ｍＭ）、及び蛋白質５ｍｇに調整したラット肝臓ホモジネートを含む反応混合物（０．５ｍｌの最終容量）に加えた。誘導体５の最終濃度は１ｍＭであった。反応混合物を３７℃で６０分間インキュベートし、続いて過塩素酸（７０％）０．０５ｍｌを添加し４Ｍ−ＫＯＨによって中和した。次いで、２０．０００ｇ混合物を、４℃で１０分間遠心分離機にかけ、上清０．１ｍｌをＣ１８−ＨＰＬＣカラム中に注入した。反応中に形成されたアミンの存在を電気化学検出器によって定量した。移動相は、７５ｍＭのクエン酸ナトリウム（ｐＨ＝３．１）、２０ｍＭのトリクロロ酢酸、１．５ｍＭのナトリウムドデシル硫酸塩、２×１０−６ＭのＥＤＴＡ、１４％アセトニトリル、及び７％メタノールからなる。誘導体５の脱炭酸から形成されたアミンを示す、参照化合物と同じ保持時間を有するピークを反応混合物から溶出させ、誘導体５が脱炭酸されたことを示唆させた。知られている脱炭酸酵素阻害剤であるベンセラジドを５×１０−５Ｍの濃度で反応混合物に加えた場合、このピークは検出不可能であった。さらに、アミンに相当するピークの出現は反応混合物中の肝臓ホモジネートの存在に依存した（結果を図示せず）。この実験は誘導体５がＡＡＤＣによって脱炭酸されたことを示唆していた。
【０２４５】
３１Ｃ．機能性頭基による小胞の安定性の制御
アセチルチオコリン（ＡＴＣ）を搭載した小胞を両親媒性誘導体１及び５、並びにジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）から以下のように調製した。個々の両親媒性誘導体１及び５（２０ｍｇ／ｍｌ）を、ＡＴＣ（０．１Ｍ）のリン酸緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ７．０）溶液に加え超音波処理によって小胞を調製した。小胞以外（ｅｘｔｒａｖｅｓｉｃｕｌａｒ）のＡＴＣを、リポソームをＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５Ｍカラムによるクロマトグラフィにかけることによって除去し、続いてリン酸緩衝液に対して透析した。ナトリウムジチオニトロベンゾアート（ＤＴＮＢ）を最終濃度０．５ｍＭでリポソーム懸濁液に加えた。次いで、リポソーム懸濁液を４１２ｎｍの分光光度計で安定した読取り値が得られるまでモニターした。
【０２４６】
アセチルコリンエステラーゼ（デンキウナギ由来のＡＣｈＥ）１０単位を、誘導体１から製造した小胞に添加すると、ＡＴＣとＤＴＮＢの相互作用から生じた黄色の発色により吸光度の上昇が観察された。この反応は、ＡＴＣがリポソームから放出されＤＴＮＢと接触した場合にのみ生ずる。誘導体５又はＤＰＰＣから製造した小胞、或いは誘導体１から製造した小胞に同じ手順を行った場合、ＡＣｈＥが存在しない場合は吸光度にいかなる変化も観察されなかった。
【０２４７】
しかし、（ＡＡＤＣ及びＡＣｈＥを含む）ヒト血清を、誘導体１、誘導体５、又はＤＰＰＣから製造した小胞に添加すると誘導体１及び５から製造した小胞にのみ黄色が出現し、ＤＰＰＣから製造した小胞では出現しなかった。５×１０−５Ｍの濃度のベンセラジドは、ヒト血清の添加からもたらされた黄色の発色を誘導体５から製造した小胞においてのみ阻害したが、誘導体１から製造した小胞での黄色の発色はベンセラジドにより影響を受けなかった。最後に、１％ＴｒｉｔｏｎＸ１００の存在下で、上記の３つ全ての小胞調製物で黄色が発色した。図３に示す結果は、小胞構造が破裂した場合にのみ黄色が発色し、誘導体１から製造した小胞はＡＣｈＥの不在下では安定しているがＡＣｈＥの存在下では破壊されるが、誘導体５から製造した小胞はＡＣｈＥの存在下且つＡＡＤＣの不在下では安定しているが、ＡＡＤＣ（ヒト血清）の存在下では破壊されることを示している。最後に、分解可能な頭基を含まないＤＰＰＣから製造した小胞は、これらの酵素のどれにも感受性ではない。
【実施例３２】
【０２４８】
腸壁を経由する血液循環へのインスリンの送達
誘導体１から製造した小胞に以下のようにインスリンを搭載した。誘導体１  ２０ｍｇをリン酸緩衝食塩水中インスリン２ｍｇ／ｍｌを含む溶液に加え、混合液を２０分間超音波処理した。この手順によって直径２０〜３０ｎｍのインスリン搭載小胞が得られた。未カプセル化インスリンをＳｅｐｈａｄｅｘＧ−１５０でのゲルろ過によって除去した。空隙容量の後、直に小胞が溶出した。小胞の投与前２４時間絶食させたアロキサン処理したラット（糖尿病用動物モデル）の小腸にカテーテル法によってこの小胞調製物を投与した（実験前２週間１５０ｍｇ／ｋｇ）（地元産ラット、体重３００〜４００ｇ、イスラエル国Ｂｅｎ−Ｇｕｒｉｏｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｇｅｖの動物設備において制御状態で飼育）。インスリン用量を体重ｋｇ当たり１５単位で固定し、カテーテル処置後の様々な時間に血糖を定量した。対照として空の小胞を小腸に投与した。インスリン搭載小胞で処理した動物においてのみ血糖の著しい減少（血液１００ｍｌ当たりのグルコースは平均２５５ｍｇから平均１３０ｍｇへ）が観察され、小胞が腸壁を貫通し、血液循環中で破裂し、その中に閉じ込められていたインスリンが放出されたことを示唆している。
【実施例３３】
【０２４９】
ＢＢＢを通過する［１４Ｃ］デキストラン搭載リポソームの送達
誘導体５から製造した小胞に以下のように［１４Ｃ］デキストランを搭載した。誘導体５  ２０ｍｇをリン酸緩衝生理食塩水中［１４Ｃ］デキストラン１μＣｉ／ｍｌを含む溶液に加え混合液を２０分間超音波処理した。この手順によって直径２０〜３０ｎｍ［１４Ｃ］デキストラン搭載小胞がもたらされた。ラットにベンセラジド５０ｍｇ／ｋｇを（筋肉内）注射し、注射３０分後にこれらの動物の頚動脈中に［１４Ｃ］デキストラン搭載小胞を注射した。同様に、同量の放射能を含む［１４Ｃ］不含デキストランを第２群のラットに注射した。注射動物の深麻酔後の様々な時間で、動物から血液試料を採取し脳を取り出した。手で自由に切開することによって大脳皮質を脳から分離し水でホモジナイズした。このホモジネートを２０，０００ｇで１０分間遠心分離機にかけ上清中の放射能を定量した。血液の放射能に対する大脳皮質のホモジネートで検出された放射能の割合を定量した。表１から分るように小胞を注射した動物で高い割合が見られ、小胞がＢＢＢを貫通し脳中で破裂しそこで標識［１４Ｃ］デキストランが放出されたことを示唆していた。
【０２５０】
【表１】
2005521645.tif 000035
【実施例３４】
【０２５１】
誘導体１及び５に由来する小胞の調製
誘導体１、誘導体５、又はジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）（５０ｍｇ）をエタノール１ｍｌに溶解した。一定攪拌下で、ｐＨ６．８、室温の０．０１Ｍトリス緩衝液２ｍｌ及び０．１５Ｍ−ＮａＣｌ溶液の表面下にこの溶液１００μｌを注入した。得られた溶液を２５℃で３０分間超音波処理（３２０Ｗ）した。透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）によって可視化された直径２０〜３０ｎｍの範囲の小胞が得られた。誘導体１から得られた小胞を図４に示す。
【０２５２】
参考文献
2005521645.tif 000036
2005521645.tif 000037
【０２５３】
【化２６】
2005521645.tif 000038
【０２５４】
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【０２５７】
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【０２５９】
【化３２】
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【０２６０】
【化３３】
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【０２６１】
【化３４】
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【０２６２】
【化３５】
2005521645.tif 000047
【０２６３】
【化３６】
2005521645.tif 000048
【０２６４】
【化３７】
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【０２６５】
【化３８】
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【０２６６】
【化３９】
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【０２６７】
【化４０】
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【０２６８】
【化４１】
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【０２６９】
【化４２】
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【０２７０】
【化４３】
2005521645.tif 000055
【０２７１】
【化４４】
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【０２７２】
【化４５】
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【０２７３】
【化４６】
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【０２７４】
【化４７】
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【０２７５】
【化４８】
2005521645.tif 000060
【０２７６】
【化４９】
2005521645.tif 000061
【０２７７】
【化５０】
2005521645.tif 000062
【０２７８】
【化５１】
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【０２７９】
【化５２】
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【０２８０】
【化５３】
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【０２８１】
【化５４】
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【０２８２】
【化５５】
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【０２８３】
【化５６】
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【図面の簡単な説明】
【０２８４】
【図１】コリンエステラーゼ（ＣｈＥ）によるアセチルコリン（Ａｃｈ）並びに誘導体１及び２の加水分解中のＨＡの放出を示す図である。
【図２】ジチオニトロベンゾアート（ＤＴＮＢ）と、誘導体１及び２の存在下及び不在下でアセチルチオコリン（ＡＴＣ）から放出されたチオコリンとの相互作用後の黄色発色の動態を示す図である。
【図３】破裂化条件に曝露した小胞からのカプセル化ＡＴＣの放出を示す図である。両親媒性誘導体１及び５、或いはジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）から製造した小胞にＡＴＣを搭載した。小胞外（ｅｘｔｒａｖｅｓｉｃｕｌａｒ）ＡＴＣの除去後にＤＴＮＢを加え、小胞を（ｉ）アセチルコリンエステラーゼ（ＡＣｈＥ）、（ｉｉ）ヒト血清、（ｉｉｉ）ＴｒｉｔｏｎＸ１００の条件に曝露した。ＡＴＣとＤＴＮＢ間の相互作用の結果としての黄色の発色を分光光度計４１２ｎｍでモニターした。
【図４】誘導体１から製造した小胞のＴＥＭ（透過型電子顕微鏡）写真である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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