(57)【要約】【課題】胆汁分泌促進、結石溶解作用を有する一種の薬物組成物、及びその製造方法。【解決手段】本発明では、胆汁分泌促進と結石溶解作用を持っている一種の薬物組成物およびその製造方法を公開し、また一種のソフトカプセルの、品質管理方法を公開した。本発明の薬物組成物は、薄荷油とひまわり油を主要原料にして生成された。上述した薬物組成物を一定の比例に従って均一に混合した後、常用添加物を入れて臨床で受けられる薬剤の型、例えば丸薬、錠剤、内服液体製剤、カプセル、顆粒剤に作った。本発明で公開したソフトカプセルの品質管理方法によって品質管理をすることによって、生産物の安定性がよく重複率も高い。本発明の薬物組成物は、薬理学試験を通じて明らかな利胆、結石溶解、抗炎、鎮痛などの作用を有することが示された。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一種の薬物組成物であって、該薬物組成物中に、主として、薄荷油およびひまわり油を一定の体積比で含むことを特徴とする薬物組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の薬物組成物であって、前記薬物組成物中に、主として、薄荷油およびひまわり油を2〜6：1〜2の体積比で含むことを特徴とする薬物組成物。
【請求項３】
請求項１に記載の薬物組成物であって、主として、薄荷油およびひまわり油を3：1の体積比で含むことを特徴とする薬物組成物。
【請求項４】
請求項１に記載の薬物組成物であって、主として、薄荷油およびひまわり油を4：1の体積比で含むことを特徴とする薬物組成物。
【請求項５】
請求項１〜４の何れか一項に記載の薬物組成物であって、前記薬物組成物中に常用添加物を加え、臨床でうけられる薬剤形体、例えば丸薬、錠剤、内服液体製剤、カプセル、顆粒剤の形体に作られることを特徴とする薬物組成物。
【請求項６】
請求項１〜４の何れか一項に記載の薬物組成物であって、結石の予防および治療作用を有することを特徴とする薬物組成物。
【請求項７】
請求項１に記載の薬物組成物であって、前記結石の予防および治療作用がグリココール酸、総ビリルビン、遊離ビリルビンの含有量に対する抑制作用であることを特徴とする薬物組成物。
【請求項８】
請求項１〜４の何れか一項に記載の薬物組成物であって、結石溶解作用を有することを特徴とする薬物組成物。
【請求項９】
請求項８に記載の薬物組成物であって、前記結石溶解作用がビリルビン胆石を溶解する作用であることを特徴とする薬物組成物。
【請求項１０】
請求項１〜４の何れか一項に記載の薬物組成物であって、利胆作用を有することを特徴とする薬物組成物。
【請求項１１】
請求項１〜４の何れか一項に記載の薬物組成物であって、抗炎、抗感染作用を有することを特徴とする薬物組成物。
【請求項１２】
請求項１〜４の何れか一項に記載の薬物組成物であって、解熱、鎮痛作用を有することを特徴とする薬物組成物。
【請求項１３】
請求項１〜４の何れか一項に記載の薬物組成物であって、平滑筋痙攣を緩める作用を有することを特徴とする薬物組成物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の薬物組成物であって、前記平滑筋痙攣を緩める作用が、胆嚢筋の収縮を抑制する作用であることを特徴とする薬物組成物。
【請求項１５】
請求項１３に記載の薬物組成物であって、前記平滑筋痙攣を緩める作用が、腸平滑筋の収縮を抑制する作用であることを特徴とする薬物組成物。
【請求項１６】
請求項３または４に記載の薬物組成物のソフトカプセルを鑑別する方法であって、該方法は、
ソフトカプセルの内容物を一滴取って、硫酸３〜５滴とバニリン結晶を少し入れて色がオレンジになり、水を一滴入れたらすぐ紫になる；
ソフトカプセルの内容物を1ml取って、酢酸エチルを10ml入れ、均一に混合し、試料溶液とする；
メントール対照品にゲラニオール対照品を加え、1mlにゲラニオール対照品が1mg含まれるようにする；
薄層クロマトグラフィーを使い、上述の三つの溶液を２μlずつ吸い、同一な珪酸ゲルG薄層板に置き、30〜60℃で12〜18:2〜4の石油エーテル−酢酸エチルを展開剤にし、25℃以下の温度で展開し、取り出して乾燥し、新しく作ったバニリン硫酸溶液を噴射し、斑点が明らかに出るまで熱風に当てる；
試料クロマトで、対照品クロマトに対応している位置に同じカラーの斑点ができる；
ことを具備する方法。
【請求項１７】
請求項１６に記載の薬物組成物のソフトカプセルを鑑別する方法であって、該方法は、
ソフトカプセルの内容物を一滴取って、硫酸３〜５滴とバニリン結晶を少し入れて色がオレンジになり、水を一滴入れたらすぐ紫になる；
ソフトカプセルの内容物を1ml取って、酢酸エチルを10ml入れ、均一に混合し、試料溶液とする；
メントール対照品にゲラニオール対照品を加え、1mlにゲラニオール対照品が1mg含まれるようにする；
薄層クロマトグラフィーを使い、上述の三つの溶液を2μlずつ吸い、同一な珪酸ゲルG薄層板に置き、30〜60℃の中で１５:３の石油エーテル−酢酸エチルを展開剤にし、25℃以下の温度で展開し、取り出して乾燥し、新しく作ったバニリン硫酸溶液を噴射し、斑点が明らかに出るまで熱風を吹かす；
試料クロマトで、対照品クロマトに対応している位置に同じカラーの斑点ができる；
ことを具備する方法。
【請求項１８】
請求項３または４に記載の薬物組成物のソフトカプセルの含有量を測定する方法であって、該方法は、
エステル含量、総アルコール量の測定：ソフトカプセルの内容物を5g取り、フラスコに入れ、フェノールフタレイン指示薬に中性を現す中性のアルコール10mlを加えて混合し、フェノールフタレイン指示薬を２滴いれる；0.1mol/Lアルコール性水酸化カリウム溶液で遊離酸を中和し、精確にアルコール性0.5mol/L水酸化カリウム滴定用溶液を25ml入れ、水浴に還流して0.5〜1.5時間後で冷却し、フェノールフタレイン指示薬0.5mlを入れ、0.5mol/L塩酸滴定用溶液で残余の水酸化カリウムを滴定し、同時に空白試験をする；1mlアルコール性0.5mol/L水酸化カリウム滴定用溶液は99.15mg メンチルアセテート（menthyl acetate）にあたり、一粒のソフトカプセルの内容物のエステル含量はメンチルアセテートで計算して、5〜11%(g/g)にする；
アセチル化：ソフトカプセルの内容物を10ml取り、100ml容量のアセチル瓶に入れ、酢酸10mlと新鮮な無水酢酸ナトリウム2gをいれ、空気凝縮管と145±3℃の油浴あるいは砂浴で0.5〜1.5時間置いてから冷却し、凝縮管を通じて水を50ml入れ、水浴上に置き、攪拌して10〜20分間加熱してから冷却する；分液漏斗の中に移して下層の酸液を除去し、塩化ナトリウム飽和溶液50mlを加えて充分に攪拌してから層化させ、上層の水溶液を除去し、一回に40〜60ml量にして洗浄液がフェノールフタレイン指示薬に中性を現すまで水で何回も洗浄する；得られたアセチル化油25mlを蓋がある三角フラスコに入れ、無水酢酸ナトリウム粉末を3g加えて密封してから時に振動し、一滴のアセチル化油を十滴の二酸化炭素の中に入れた時、混濁が起こらない時まで脱水させ、乾燥した濾紙で濾過する；
鹸化(saponification)：乾燥であるアセチル化油1gを精確に量って100ml容量のフラスコの中に入れ、0.5mol/Lアルコール性水酸化カリウム溶液25mlを加え、水浴に還流して0.5〜1.5時間後で冷却し、凝縮管を取ってフェノールフタレイン指示薬0.5mlを入れ、 0.5mol/L塩酸滴定用溶液で残余の水酸化カリウムを滴定し、同時に空白試験をし、一粒のソフトカプセルの内容物の総アルコール量はゲラニオール(Ｃ10Ｈ18Ｏ）で計算して、50%以下ではいけない；
メントールとグラニオールの含量をガスクロマトグラフィーで測定する；クロマト条件と系統適応性試験：
毛細管クロマトカラム：5%ジフェニル−95%ジメチルシラン共重合体を定常期にする毛細管クロマトカラムが一番よい；SIP(Sample InjectionPort)の温度：200〜250℃；検知器の温度：200〜250℃；シャント比は25-100:1にする；プログラム昇温:70〜90℃の開始温度で2〜3分間維持した後、１分に4〜15℃で150〜180℃まで上げて2〜4分間維持する；キャリアガス流速:1〜2ml/分；理論的棚板数はグラニオールピークで計算して300000以下ではいけない；
補因子測定:直鎖ペンタデカン内標対照品の適宜量を取り、精確に量って酢酸エチルを加え、1mlに2.5mgが含有している溶液を作って内標溶液にする；薄荷脳対照品、ゲラニオール対照品の適宜量を取り、精確に量って酢酸エチルを加え、1mlに薄荷脳6mg、ゲラニオール1mgが含有している溶液を作る；以上の三種の溶液を2mlずつ吸い、酢酸エチルを加えて目盛りまで希釈し、攪拌して均一にしてから1μlを吸い、ガスクロマトグラフィーに入れて補因子を測定する；
荷重ダイバシティアイテム(load diversity item)のソフトカプセル50mgを取り、精確に量って1０ml定容瓶の中にいれ、精確に内標溶液2mlを加え、酢酸エチルを加えて目盛りまで希釈し、攪拌して均一にしてから1μlを吸い、ガスクロマトグラフィーに入れて測定したらできる；一粒のソフトカプセルの内容物の中に、薄荷油の含有量はメントール(menthol)で計算して７９mg以上、ひまわり油の含有量はグラニオールで計算して７mg以上にする；
ことを具備する方法。
【請求項１９】
請求項１８に記載の薬物組成物のソフトカプセルの含有量を測定する方法であって、該方法は、
エステル含量、総アルコール量の測定：ソフトカプセルの内容物を5g取ってフラスコに入れ、フェノールフタレイン指示薬に中性を現す中性のアルコール10mlを加えて混合し、フェノールフタレイン指示薬を２滴いれる；0.1mol/Lアルコール性水酸化カリウム溶液で遊離酸を中和し、精確にアルコール性0.5mol/L水酸化カリウム滴定用溶液を25ml入れ、水浴に還流して0.5〜1.5時間後で冷却し、フェノールフタレイン指示薬0.5mlを入れ、0.5mol/L塩酸滴定用溶液で残余の水酸化カリウムを滴定し、同時に空白試験をする；1mlアルコール性0.5mol/L水酸化カリウム滴定用溶液は99.15mgメンチルアセテート（menthyl acetate）にあたり、一粒のソフトカプセルの内容物のエステル含量はメンチルアセテートで計算して、5〜11%(g/g)にする；
アセチル化：ソフトカプセルの内容物を10ml取って100ml容量のアセチル瓶に入れ、酢酸10mlと新鮮な無水酢酸ナトリウム2gをいれ、空気凝縮管と145±3℃の油浴あるいは砂浴で0.5〜1.5時間置いてから冷却し、凝縮管を通じて水を50ml入れ、水浴上に置き、攪拌して10〜20分間加熱してから冷却する；分液漏斗の中に移して下層の酸液を除去し、塩化ナトリウム飽和溶液50mlを加えて充分に攪拌してから層化させ、上層の水溶液を除去し、一回に50ml量にして洗浄液がフェノールフタレイン指示薬に中性を現すまで水で何回も洗浄する；できたアセチル化油25mlを蓋がある三角フラスコに入れ、無水酢酸ナトリウム粉末を3g加えて密封してから時に振動し、一滴のアセチル化油を十滴の二酸化炭素の中に入れた時、混濁が起こらない時まで脱水させ、乾燥した濾紙で濾過する；
鹸化(saponification)：乾燥であるアセチル化油1gを精確に量って100ml容量のフラスコの中に入れ、0.5mol/Lアルコール性水酸化カリウム溶液を25ml加え、水浴に還流して0.5〜1.5時間後で冷却し、凝縮管を取ってフェノールフタレイン指示薬0.5mlを入れ、0.5mol/L塩酸滴定用溶液で残余の水酸化カリウムを滴定し、同時に空白試験をしたらよい；一粒ソフトカプセルの内容物の総アルコール量はゲラニオール((Ｃ10Ｈ18Ｏ))で計算して、50%以下ではいけない；
メントールとグラニオールの含量はガスクロマトグラフィーで測定する；クロマト条件と系統適応性試験：5%ジフェニル−95%ジメチルシラン共重合体を定常期にした30m×0.32mm×0.25μm毛細管クロマトカラム；SIP(Sample InjectionPort)の温度：240℃；検知器の温度：240℃；シャント比は50:1；プログラム昇温:80℃の開始温度で2〜3分間維持した後、１分に８℃で170℃まで上げて３分間維持する；キャリアガス流速:1.5ml/分;理論的棚板数はグラニオールピークで計算して300000以下ではいけない；
補因子測定:直鎖ペンタデカン内標対照品の適宜量を取り、精確に量って酢酸エチルを加え、1mlに2.5mgが含有している溶液を作って内標溶液にする；薄荷脳対照品、ゲラニオール対照品の適宜量を取り、精確に量って酢酸エチルを加え、1mlに薄荷脳6mg、ゲラニオール1mgが含有している溶液を作る；以上の三種の溶液を2mlずつ吸い、酢酸エチルを加えて目盛りまで希釈し、攪拌して均一にしてから1μｌを吸い、ガスクロマトグラフに入れて補因子を測定する；
ソフトカプセル内容物50mgを取り、精確に量って10ml定容瓶の中にいれ、精確に内標溶液2mlを加え、酢酸エチルを加えて目盛りまで希釈し、攪拌して均一にしてから1μlを吸い、ガスクロマトグラフィーに入れて測定する；
一粒のソフトカプセルの内容物の中に、薄荷油の含有量はメントール(menthol)で計算して７９mg以上、ひまわり油の含有量はグラニオールで計算して７mg以上にする；
ことを具備する方法。
【請求項２０】
請求項３または４に記載の薬物組成物のソフトカプセルの品質管理方法であって、該方法は、
ソフトカプセルの内容物を一滴取って、硫酸３〜５滴とバニリン結晶を少し入れて色がオレンジになり、水を一滴入れたらすぐ紫になる；ソフトカプセルの内容物を1ml取って、酢酸エチルを10ml入れ、均一に混合し、試料溶液にする；メントール対照品にゲラニオール対照品を加え、1mlにゲラニオール対照品が1mg含まれるようにする；薄層クロマトグラフィーを使い、上述の三つの溶液を2μlずつ吸い、同一な珪酸ゲルG薄層板に置き、30〜60℃の中で12〜18:2〜4の石油エーテル−酢酸エチルを展開剤にし、25℃以下の温度で展開し、取り出して乾燥し、新しく作ったバニリン硫酸溶液を噴射し、斑点が明らかに出るまで熱風を当てる；試料クロマトにおいて、対照品クロマトに対応している位置に同じカラーの斑点ができる；
相対密度：ソフトカプセルの内容物を取って相対密度測定方法で測定し、相対密度は0.881〜0.901にする；
屈折率:ソフトカプセルの内容物を取って測定した屈折率は1.456〜1.466にする；
旋光度：相対密度測定項目の内容物を取って測定した旋光度は-14゜〜-22゜にする；
含有量測定：エステル含量、総アルコール量の測定
ソフトカプセルの内容物を5g取ってフラスコに入れ、フェノールフタレイン指示薬に中性を現す中性のアルコール10mlを加えて混合し、フェノールフタレイン指示薬を２滴いれる；0.1mol/Lアルコール性水酸化カリウム溶液で遊離酸を中和し、精確にアルコール性0.5mol/L水酸化カリウム滴定用溶液を25ml入れ、水浴に還流して0.5〜1.5時間後で冷却し、フェノールフタレイン指示薬0.5mlを入れ、0.5mol/L塩酸滴定用溶液で残余の水酸化カリウムを滴定し、同時に空白試験をする；1mlアルコール性0.5mol/L水酸化カリウム滴定用溶液は99.15mgメンチルアセテート（menthyl acetate）にあたり、一粒のソフトカプセルの内容物のエステル含量はメンチルアセテートで計算して、5〜11%(g/g)にする；
アセチル化: ソフトカプセルの内容物を10ml取って100ml容量のアセチル瓶に入れ、酢酸10mlと新鮮な無水酢酸ナトリウム2gをいれ、空気凝縮管と145±3℃の油浴あるいは砂浴で0.5〜1.5時間置いてから冷却し、凝縮管を通じて水を50ml入れ、水浴上に置き、攪拌して10〜20分間加熱してから冷却する；分液漏斗の中に移して下層の酸液を除去し、塩化ナトリウム飽和溶液50mlを加えて充分に攪拌してから層化させ、上層の水溶液を除去し、一回に40〜60ml量にして洗浄液がフェノールフタレイン指示薬に中性を現すまで水で何回も洗浄する；得られたアセチル化油25mlを蓋がある三角フラスコに入れ、無水酢酸ナトリウム粉末を3g加えて密封してから時に振動し、一滴のアセチル化油を十滴の二酸化炭素の中に入れた時、混濁が起こらない時まで脱水させ、乾燥した濾紙で濾過する；
鹸化(saponification)：乾燥であるアセチル化油1gを精確に量って100ml容量のフラスコの中に入れ、0.5mol/Lアルコール性水酸化カリウム溶液を25ml加え、水浴に還流して0.5〜1.5時間後で冷却し、凝縮管を取ってフェノールフタレイン指示薬0.5mlを入れ、0.5mol/L塩酸滴定用溶液で残余の水酸化カリウムを滴定し、同時に空白試験をし、一粒のソフトカプセルの内容物の総アルコール量はゲラニオール((Ｃ10Ｈ18Ｏ))で計算して、50%以下ではいけない；
メントールとグラニオールの含量をガスクロマトグラフィーで測定する：クロマト条件と系統適応性試験：
毛細管クロマトカラム：5%ジフェニル−95%ジメチルシラン共重合体を定常期にする毛細管クロマトカラムが一番よい；SIP (Sample InjectionPort)の温度：200〜250℃;  検知器の温度：200〜250℃；シャント比は25〜100:1にする；プログラム昇温:70〜90℃の開始温度で2〜3分間維持した後、１分に4〜15℃で150〜180℃まで上げて2〜4分間維持する；キャリアガス流速:1〜2ml/分；理論的棚板数はグラニオールピークで計算して300000以下ではいけない；
補因子測定:直鎖ペンタデカン内標対照品の適宜量を取り、精確に量って酢酸エチルを加え、1mlに2.5mgが含有している溶液を作って内標溶液にする；薄荷脳対照品、ゲラニオール対照品の適宜量を取って精確に量って酢酸エチルを加え、1mlに薄荷脳6mg、ゲラニオール1mgが含有している溶液を作る；以上の三種の溶液を2mlずつ吸い、酢酸エチルを加えて目盛りまで希釈し、攪拌して均一にしてから1μlを吸い、ガスクロマトグラフィーに入れて補因子を測定する；ソフトカプセル50mgを取り、精確に量って1０ml定容瓶の中にいれ、精確に内標溶液2mlを加え、酢酸エチルを加えて目盛りまで希釈し、攪拌して均一にしてから1μlを吸い、ガスクロマトグラフィーに入れて測定する；一粒のソフトカプセルの内容物の中に、薄荷油の含有量はメントール(menthol)で計算して７９mg以上、ひまわり油の含有量はグラニオールで計算して７mg以上にする；
ことを具備する方法。
【請求項２１】
請求項２０に記載の薬物組成物のソフトカプセルの品質管理方法であって、該方法は、
ソフトカプセルの内容物を一滴取って、硫酸３〜５滴とバニリン結晶を少し入れて色がオレンジになり、水を一滴入れたらすぐ紫になる；ソフトカプセルの内容物を1ml取って、酢酸エチルを10ml入れ、均一に混合し、試料溶液にする；メントール対照品にゲラニオール対照品を加え、1mlにゲラニオール対照品が1mg含めているようにする；薄層クロマトグラフィーを使い、上述の三つの溶液を2μlずつ吸い、同一な珪酸ゲルG薄層板に置き、30〜60℃の中で１５:３の石油エーテル−酢酸エチルを展開剤にし、25℃以下の温度で展開し、取り出して乾燥し、新しく作ったバニリン硫酸溶液を噴射し、斑点が明らかに出るまで熱風を当てる；試料クロマトにおいて、対照品クロマトに対応している位置に同じカラーの斑点ができる；
相対密度：ソフトカプセルの内容物を取って相対密度測定方法で測定し、相対密度は0.881〜0.901にする；
屈折率：相対密度測定項目の内容物を取って測定した屈折率は1.456〜1.466にする；
旋光度：相対密度測定項目の内容物を取って測定した旋光度は-14゜〜-22゜にする；
エステル含量、総アルコール量の測定：ソフトカプセルの内容物を5g取ってフラスコに入れ、フェノールフタレイン指示薬に中性を現す中性のアルコール10mlを加えて混合し、フェノールフタレイン指示薬を２滴いれる；0.1mol/Lアルコール性水酸化カリウム溶液で遊離酸を中和し、精確にアルコール性0.5mol/L水酸化カリウム滴定用溶液を25ml入れ、水浴に還流して0.5〜1.5時間後で冷却し、フェノールフタレイン指示薬0.5mlを入れ、0.5mol/L塩酸滴定用溶液で残余の水酸化カリウムを滴定し、同時に空白試験をする；1mlアルコール性0.5mol/L水酸化カリウム滴定用溶液は99.15mgメンチルアセテート（menthyl acetate）にあたり、一粒のソフトカプセルの内容物のエステル含量はメンチルアセテートで計算して、5〜11%(g/g)にする；
アセチル化：ソフトカプセルの内容物を10ml取って100ml容量のアセチル瓶に入れ、酢酸10mlと新鮮な無水酢酸ナトリウム2gをいれ、空気凝縮管と145±3℃の油浴あるいは砂浴で0.5〜1.5時間置いてから冷却し、凝縮管を通じて水を50ml入れ、水浴上に置き、攪拌して10〜20分間加熱してから冷却する；分液漏斗の中に移して下層の酸液を除去し、塩化ナトリウム飽和溶液50mlを加えて充分に攪拌してから層化させ、上層の水溶液を除去し、一回に50ml量にして洗浄液がフェノールフタレイン指示薬に中性を現すまで水で何回も洗浄する；得られたアセチル化油25mlを蓋がある三角フラスコに入れ、無水酢酸ナトリウム粉末を3g加えて密封してから時に振動し、一滴のアセチル化油を十滴の二酸化炭素の中に入れた時、混濁が起こらない時まで脱水させ、乾燥した濾紙で濾過する；
鹸化(saponification)：乾燥したアセチル化油1gを精確に量って100ml容量のフラスコの中に入れ、0.5mol/Lアルコール性水酸化カリウム溶液を25ml加え、水浴に還流して0.5〜1.5時間後で冷却し、凝縮管を取ってフェノールフタレイン指示薬0.5mlを入れ、0.5mol/L塩酸滴定用溶液で残余の水酸化カリウムを滴定し、同時に空白試験をする；一粒のソフトカプセルの内容物の総アルコール量はゲラニオール(Ｃ10Ｈ18Ｏ)で計算して、50%以下ではいけない；
メントールとグラニオールの含量をガスクロマトグラフィーで測定する；クロマト条件と系統適応性試験：5%ジフェニル−95%ジメチルシラン共重合体を定常期にした30m×0.32mm×0.25μm毛細管クロマトカラム；SIP(Sample Injection Port)の温度：240℃；検知器の温度：240℃；シャント比は50:1にする；プログラム昇温:80℃の開始温度で2-3分間維持した後、１分に８℃で170℃まで上げて３分間維持する；キャリアガス流速:1.5ml/分;理論的棚板数はグラニオールピークで計算して300000以下ではいけない；
補因子測定:直鎖ペンタデカン内標対照品の適宜量を取って精確に量って酢酸エチルを加え、1mlに2.5mgが含有している溶液を作って内標溶液にする；薄荷脳対照品、ゲラニオール対照品の適宜量を取って精確に量って酢酸エチルを加え、1mlに薄荷脳6mg、ゲラニオール1mgが含有している溶液を作る；以上の三種の溶液を2mlずつ吸い、酢酸エチルを加えて目盛りまで希釈し、攪拌して均一にしてから1μｌを吸い、ガスクロマトグラフィーに入れて補因子を測定する；
ソフトカプセル内容物50mgを取って精確に量り、10ml定容瓶の中にいれ、精確に内標溶液2mlを加え、酢酸エチルを加えて目盛りまで希釈し、攪拌して均一にしてから1μlを吸い、ガスクロマトグラフィーに入れて測定する；
一粒のソフトカプセルの内容物に、薄荷油の含有量はメントール(menthol)で計算して７９mg以上、ひまわり油の含有量はグラニオールで計算して７mg以上にする；
ことを具備する方法。
【請求項２２】
請求項１８〜２１の何れか一項に記載の方法であって、前記方法における直鎖ペンタデカンが直鎖トリデカン、直鎖テトラデカン、ナフタリ、カンファ、あるいはn-uncdecaneで代替可能であることを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一種の薬物組成物およびその製造方法に関し、特に、胆汁分泌促進（利胆）と結石溶解作用を有する一種の薬物組成物及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
胆石症はよく見られる病気、多発病で、人の健康に危害を加える病気であり、国内外でよく見られる急性腹部疾患でもある。従来は、胆石症を治療する時、おもに手術療法を採用しているが、手術療法は手術患者の苦痛を伴うだけでなく、手術後の胆道残留結石の発生率も高い。中でも、肝内胆管結石の発生率は70-92%もあり、往々にして二回目の手術を受けなければならない。二回目の手術は非常に困難である。60年代末から70年代初頭にかけて、国外ではコレステリル酸結石溶解薬物で胆石症を治療して一定の効果をあげているが、現在は国内でもこのような薬物を採用している。症例報告によれば、コレステリル酸結石溶解薬物の胆石症治療効果は約50%（胆の結石が小さくなったり、消失したり、結石の数が減少したことを含める）である。結石溶解の効果から見れば、直径が1.0cmより小さな結石に対して効果が著しいが、直径が2.0cm以上の結石に対しては効果が小さいかまたは効果がなく、ある患者では6カ月の治療を経ても効果が明らかでない。コレステリル酸による結石の溶解は緩慢であり、普通は6〜24ヶ月かかる。このような薬で胆石症を治療する場合、20%に達する患者にSGOTが上昇する現象が生じるため、一定の毒性が存在している。国内でもこの分野で様々な研究が行われているが、比較的に有効なのは、漢方薬で作った結石排除薬で結石を排除することによって胆石症を治療する方法である。その効果は、適用範囲内で肝内胆管結石の排除率が50-80%である。ただし、大直径の結石に対しては、効果が理想的でないか、あるいは効果がない。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００３】
本発明の目的は、胆汁分泌促進（利胆）と結石溶解作用を有する一種の薬物組成物およびその製造方法を提供し、また一種のソフトカプセルの品質管理方法を提供することである。
【０００４】
本発明の目的は、以下の技術方案を通じて実現した：
薄荷油：ひまわり油の体積比が２〜６：１〜２、本研究の薬物組成物の比は、薄荷油：ひまわり油の体積比が３：１、薄荷油：ひまわり油の体積比が４：１でもよい。
【０００５】
以上の薬物を、比率に従って均一に混合し、常用添加物を入れて臨床で処置可能な薬剤形体、例えば丸薬、錠剤、内服液体製剤、カプセル、顆粒剤に作る。
【０００６】
本発明のソフトカプセルの品質管理方法は：
鑑別：ソフトカプセルの内容物を一滴取って、硫酸３〜５滴とバニリン結晶を少し入れて色がオレンジになり、水を一滴入れたらすぐ紫になる。ソフトカプセルの内容物を1ml取って、酢酸エチルを10ml入れ、均一に混合し、試料溶液にする。メントール対照にゲラニオール対照を加え、1mlにゲラニオール対照が1mg含まれるようにする。薄層クロマトグラフィーを使い、上述の三つの溶液を2μlずつ吸い、同一な珪酸ゲルG薄層板に置き、30〜60℃の中で12〜18:2〜4の石油エーテル酢酸エチルを展開剤にし、25℃以下の温度で展開し、取り出して乾燥し、新しく作ったバニリン硫酸溶液を噴射し、斑点が明らかに出るまで熱風を当てる。試料クロマトにおいて、対照クロマトに対応している位置に同じカラーの斑点ができる。
【０００７】
相対密度：ソフトカプセルの内容物を取り、相対密度測定方法によって測定し、相対密度を0.881〜0.901にする。
【０００８】
屈折率: ソフトカプセルの内容物を取り、規則（＜中国薬典＞2000年版第一部附録VIIF）に従って測定し、屈折率を1.456〜1.466にする。
【０００９】
旋光度：相対密度測定項目の内容物を取って、規則（＜中国薬典＞2000年版第一部附録VIIＥ）に従って測定し、旋光度を-14゜〜-22゜にする。
【００１０】
＜含量測定＞
１．エステル含量、総アルコール量の測定
ソフトカプセルの内容物を5g取ってフラスコに入れ、フェノールフタレイン指示薬に中性を現す中性のアルコール10mlを加えて混合し、フェノールフタレイン指示薬を２滴加える。0.1mol/Lのアルコール性水酸化カリウム溶液で遊離酸を中和し、精確にアルコール性0.5mol/L水酸化カリウム滴定用溶液を25ml加え、水浴において還流して0.5〜1.5時間後で冷却し、フェノ−ルフタレイン指示薬0.5mlを入れ、0.5mol/L塩酸滴定用溶液で残余の水酸化カリウムを滴定し、同時に空白試験をする。1mlのアルコール性0.5mol/L水酸化カリウム滴定用溶液は、99.15mgメンチルアセテート（menthyl acetate）(Ｃ12Ｈ22Ｏ2)に当たり、一粒のソフトカプセルの内容物のエステル含量をメンチルアセテート(Ｃ12Ｈ22Ｏ2)で計算して、5〜11%(g/g)にする。
【００１１】
アセチル化  :  ソフトカプセルの内容物を10ml取り、100ml容量のアセチル瓶に入れ、酢酸10mlと新鮮な無水酢酸ナトリウム2gをいれ、空気凝縮管と145±3℃の油浴あるいは砂浴で0.5〜1.5時間置いてから冷却し、凝縮管を通じて水を50ml入れ、水浴上に置き、攪拌して10-20分間加熱してから冷却する。分液漏斗の中に移して下層の酸液を除去し、塩化ナトリウム飽和溶液50mlを加えて充分に攪拌してから層化させ、上層の水溶液を除去し、一回に40〜60ml量にして洗浄液がフェノールフタレイン指示薬に中性を現すまで水で何回も洗浄する。得られたアセチル化油25mlを蓋のある三角フラスコに入れ、無水酢酸ナトリウム粉末を3g加えて密封してから時おり振盪し、一滴のアセチル化油を十滴の二酸化炭素の中に入れた時、混濁が起こらなくなるまで脱水し、乾燥した濾紙で濾過する；
鹸化(saponification)：乾燥したアセチル化油1gを精確に量り、100ml容量のフラスコ中に入れ、0.5mol/Lアルコール性水酸化カリウム溶液を25ml加え、水浴で還流して0.5〜1.5時間後で冷却し、凝縮管を取ってフェノールフタレイン指示薬0.5mlを入れ、 0.5mol/L塩酸滴定用溶液で残余の水酸化カリウムを滴定し、同時に空白試験をし、以下の公式に沿って計算する。
【００１２】
総アルコール量  ％  ＝  ｛（Ｂ−Ａ）×Ｎ×0.1543｝／｛Ｗ−（Ｂ−Ａ）×Ｎ×0.04204｝×１００％
Ｂ：空白が消耗した0.5mol/L塩酸標準溶液の体積（ml）
Ａ：アセチル化油が消耗した0.5mol/L塩酸標準溶液の体積（ml）
Ｎ：塩酸標準溶液のモル濃度
Ｗ： アセチル化油の質量（g）
0.1543：ゲラニオールミリグラムモル数
0.04204：酢酸エステルとアルコールのミリグラムモル数の差
一粒のソフトカプセルの内容物の総アルコール量はゲラニオール(Ｃ10Ｈ18Ｏ)で計算して、５０％以下ではいけない。
【００１３】
２．メントールとグラニオールの含量
＜中国薬典＞2000年版第一部附録４０ページのVI  Eガスクロマトグラフィーに従って測定する。
【００１４】
メントールとグラニオールの含量のガスクロマトグラフィーで測定する。クロマトの条件と系統適応性試験：
毛細管クロマトカラム：5%ジフェニル−95%ジメチルシラン共重合体を定常期にする毛細管クロマトカラムが最も好ましい。SIP(Sample Injection Port)の温度：200-250℃;  検知器の温度：200-250℃; シャント比は25〜100:1 にする。プログラム昇温: 70-90℃の開始温度で2〜3分間維持した後、１分に4〜15℃で150〜180℃まで上げ、2〜4分間維持する。キャリアガス流速:1〜2ml/分; 理論的棚板数はグラニオールピークで計算して300000以下ではいけない。
【００１５】
補因子測定: 直鎖ペンタデカン（n-pentradecane）あるいは直鎖トリデカン（n-tridecane）あるいは直鎖テトラデカン（n-tetradecane）あるいはナフタリあるいはカンファあるいはn-uncdecaneなど内標準物質の適宜量を取り、精確に量って酢酸エチルを加え、1mlに2.5mgが含有される溶液を作って内標準溶液にする。薄荷脳対照、ゲラニオール対照の適宜量を取り、精確に量って酢酸エチルを加え、1mlに薄荷脳6mg、ゲラニオール1mgが含有される溶液を作る。以上の三種の溶液を2 mlずつ吸い、酢酸エチルを加えて目盛りまで希釈し、攪拌して均一にしてから1μlを吸い、ガスクロマトグラフィーに供して補因子を測定する。
【００１６】
荷重ダイバシティアイテム(load diversity item)のソフトカプセル50 mgを取り、精確に量って10ml定容瓶の中にいれ、精確に内標準溶液2 mlを加え、酢酸エチルを加えて目盛りまで希釈し、攪拌して均一にしてから1μlを吸い、ガスクロマトグラフィーに供して測定しり。一粒のソフトカプセルの内容物の中に、薄荷油の含有量はメントール(menthol) (Ｃ10Ｈ20Ｏ)で計算して７９mg以上、ひまわり油の含有量はグラニオール(Ｃ10Ｈ18Ｏ)で計算して７mg以上とする。
【００１７】
本発明の薬で薬力学試験をした結果は：本発明の薬物組成物カプセル（利胆結石溶解ソフトカプセル）原液（以下、「LDRS」と称す。）0.077ml、0.154ml、0.307ml/kg・dを、別々に、臨床の体重によって使用する投与量の3.85、7.7、15.4倍にして、一日一回、連続して90日間投与した結果、モルモットの結石生成率が91％から45.4％、27.3％、0.0％に減少した。結石生成組に比べて有意な結石抑制作用があるだけでなく、モルモットとノーマルマウスの血清グリココール酸、血清総ビリルビン、遊離ビリルビンの含有量に対しても抑制作用があり、結石生成モルモットの胆嚢総重量も減少させ、良好な結石予防作用を表した。異なる濃度のLDRSは人体の二種の結石に対して結石溶解作用も異なった。ビリルビン胆石と混合型結石に対して結石溶解スピードも早く、結石溶解効果も良好であり、薬を投与して24〜48h後で結石溶解薬液の中でビリルビン溶解によって生成した赤黄色が現れた。体内結石溶解試験によれば、異なる濃度のLDRSはウサギの胆結石に対しても有意な結石溶解作用を表した。異なる濃度のLDRSはラットの胆汁分泌係数を上昇させ、利胆剤デヒドロコール酸（dehydrocholicum）に比べて、効果が早く、胆汁分泌係数が高く、持続時間も長く、有意な利胆作用を有するだけでなく、胆汁の中の種々のビリルビンの含有量に対しても抑制作用があった。三種の異なる濃度のLDRSで黄色ブドウ球菌に感染されたマウスを治療した時、LDRSは良好な黄色ブドウ球菌感染予防作用を表した。モルモットの分離腸管、胆嚢の筋（Muscle）テストによれば、LDRSは分離（腸、胆嚢）平滑筋に対しても抑制作用があり、アセチルコリン、ヒスタミンと塩化バリウムで起こった腸、胆嚢筋の痙攣にも良好な鎮痙を表した。
【００１８】
上述した三種の投与量のLDRSは、キシレン(xylene)で起こったマウスの耳殻腫にも、あるいはカラジナーン（carrageenan）で起こったラット足腫の急性炎症にも、あるいは寒天で起こった肉芽増殖性炎症にも抗炎作用を表した。LDRSを投与したとき、2,4-ジニトロフェノールで起こったラットの発熱に対して良好な降体温解熱の作用を表し、キシレン(xylene)で起こったマウスの毛細血管通過性の増加も明らかに減少した。異なる投与量のLDRSを投与したとき、酢酸で起こったマウスのねじり試験(torsion test) 及びフォルマリンで起こったマウスの足を舐める回数に有意な抑制作用があり、一定的な鎮痛作用を表した。
【００１９】
試験例１：利胆結石溶解ソフトカプセルの動物実験性結石に対した結石予防作用
1.  試験材料
1.1  被検薬物：一粒の利胆結石溶解ソフトカプセルには油状物（以下、「原液」と称す。）0.4mlが含まれる。本試験ではカプセルに入れなかった原液で、淡緑色の油状液体を使った。利胆結石溶解ソフトカプセル（以下、「LDRS」と称す。）の薬物バッチ番号は970101で、原液希釈に便利のため、それを1％トゥイーン(tween)―８０に入れて乳化を行い、乳化を行った薬物は冷蔵庫で保存し、使用する際は0.5％カルボキシメチルセルロース（carboxymethylcellulose）を希釈剤にして、必要な濃度まで希釈する。LDRS原液は、連雲港康縁製薬有限責任会社によって提供された。試験では0.077ml／kg・d、0.154ml/kg・d、0.307ml/kg・dのように高、中、低の三種の投与量を使ったが、それぞれ臨床の体重によって使う投与量の3.85、7.7、15.4倍にあたる。以下の試験は全部上述な三種の投与量で行った。
【００２０】
陽性対照薬：Eulektrol (Ivy extract (2:1) 100mg, ひまわり油100mg) (輸入した胆石症を治療するカプセルで、外形はLDRSに似ており、一粒に油状液体の含有量は0.2mlで、有效成分の含有量は100mg, ソフトカプセル内容物はドイツアイホ製薬会社から生産され、中国輸入許可証は880209REGHK-22425，薬物バッチ番号1291chB11742EXPl295。)。薬物の配合製造：油液を1％トゥイーン(tween)―８０に入れて乳化を行ってから、0.5％カルボキシメチルセルロース（carboxymethylcellulose）で0.015ml/mlに希釈する。モルモットの体重によって使う投与量は0.15ml/kg・dで、臨床の体重によって使う投与量の15倍に当たる。
【００２１】
1.2 主な被険薬
結石生成飼料：模型剤、基礎飼料＋高脂飼料
基礎飼料：とうもろこしの粉50％、むぎのふすま10％、砕いた米の粉10％、魚粉6％、豆白粉17％、炭酸カルシウム1％、食塩1％、酵母粉1％、アリューロンまたは穀粉4％からできたもの。四川省中薬研究所から提供された。
【００２２】
高脂飼料：1％カゼイン  (casein) (北京海淀区微生物培養基制品会社から生産された物)、1％セルロース(cellulose) (四川瀘州化工場ら生産された物，バッチ番号970101)、0.02％コラル酸(重慶化学試剤商店がスイスから輸入した物)、0.5％コレステロール(重慶化学試剤商店がドイツMERCK製薬工場から輸入した物)、1.5％サッカロース、1％豚の油(サッカロースと豚の油は当地の市場から購入した物)。
【００２３】
125I放射免疫定量試薬：中国原子能科学研究院から生産され、バッチ番号はIMK-407，免許文番号は(94)衛薬字R-13。
【００２４】
1.3  主な試験機械：
半自動生化学分析器,フランスSecomam会社製、型番号S-500P; 免疫測定器,中国西安262工場製; 光電子天秤、型番号BP3100, TOPO3型多能自動プリンターを備え、秤量は600、1200、3200g：感量は0.01、0.02、0.05g, ドイツSartorius電子会司製; 光電子天秤，TP1000，秤量は1000g, 感量は0.1g，湖南湘儀衛器厂製，バッチ番号961183；LDs-2A型遠心器，北京医用遠心器工場製，バッチ番号970609；GALEN-III型両眼生物ミクロスコープ1台，上海江南顕微鏡工場製，輸出する生産品で自動光源を持ち、拡大倍数は1600倍までに達する；JN-A型精確トションバランス：秤量は500mg, 感量は1mg，上海第二天秤工場製。
【００２５】
1.4 試験動物：
モルモット：  試験では250〜300gの健康なモルモットを採用し、動物は華西医科大学基礎医学院実験動物センターから提供された。
【００２６】
マウス：  昆明種遠交系(outbred strain Inbred strain) (クローズトコロニー(closed colony)30代以上)I級合格マウスを採用，合格証登記番号：川寶動管質(95)第85号。
【００２７】
ラット：SD種種遠交系(outbred strain Inbred strain) (クローズトコロニー(closed colony)30代以上)I級合格ラットを採用，合格証登記番号：(95)川寶動管質第92号。ラット、マウスは四川アンチバイオチック工業研究所実験動物センターから提供された。
【００２８】
日本大耳シロウサギ：2〜2.5kg体重で雌雄兼用する。合格証番号(95)一医動字第24361040号，地方番号：川寶動管質(95)第40号，四川省中薬研究所から提供された。
【００２９】
1.5 試験環境：
本試験は四川省中医薬管理局新薬薬理試験基地で行われた。試験室温度は18〜28℃に制御し、相対湿度は40〜60％，照明は蛍光と日光を結合して12hr(明)，12hr(暗)環境にし、室に自動換気装置がある。試験動物はケージを分けて飼養し、一つのケージに入っている動物は五匹以内にする。常用飼料(with whole potential nutrition values)で飼育し、一匹のラットは一日に20gの飼料(with whole potential nutrition values)/100g・bw、マウスは6gの飼料(with whole potential nutrition values)/10g・bwを与え、青飼料も適宜量を飼った。
【００３０】
1.6 データ処理：
計量データはx±SDで表し、TあるいはT`で結果を検証した(試験組と対照組の比較、あるいは薬を投与する前と投与した後の比較)。
【００３１】
計数データはX2(2×2)テストを採用して、試験組と対照組の比較を行った。
【００３２】
2.LDRSのモルモット実験性結石に対する結石予防作用
250〜300g体重の健康な雌性雑色モルモット61匹を採用する。モルモットは買って来て一周間飼って環境に適応させてから、体重によってランダムに組み分けをする。全部で6組に分けるが、その中で5組は試験組にする。試験組第１組は11匹で結石生成組（以下、「成石組」と称し、この組は一匹のモルモットに一日20g／100gbw(bwは体重を示す)で結石生成飼料を投与する。以下の各組も結石生成飼料を投与する時は同じ投与量を使う。）である。第2、3、4組も11匹ずつで、別々にLDRS原液0.077ml/kg.d、0.154ml/kg.d、0.307ml/kg・dと結石生成飼料を投与し、第5組の11匹はEulektrol (Ivy extract (2:1) 100mg, ひまわり油100mg)0.15ml/kg・dと結石生成飼料を投与する。以上の5組の動物は毎日午前8〜9時に対照薬と被検薬を投与し、午後は結石生成飼料を別々に量って投与する。ほかの6匹は毎日基礎飼料だけを投与する。投与する薬の量を保証するため、試験ではシングル 飼育ケージを使ってモルモットを別々に飼養する。動物は組み分けをしてから昼の時に摂食の練習をし、摂食の時に食物と薬物を充分に混合する。モルモットの飼槽の食べ口は口しか入れないようにし、上から始めて摂食させる。摂食は二回に分けるが、第一回は薬が含有している飼料(あるいは結石生成飼料)を投与し、イサン薬試料が食べ終わった後で基礎飼料を投与する。試験組の動物は、連続的に薬と結石生成飼料を90日間投与する。各組は最後の薬を投与して24h後に、大腿静脈から血を採取した後（血清を分離する）断頭し、死後直ちに開腹し、止血かんし出総胆管を遮断し、胆嚢を取って拡大鏡で観察し、結石が生成したモルモットの数を記録し、結石生成率（結石ができたモルモットの数/試験モルモットの数）を計算する。その結果は表１に示す。血清は125Iグリココール酸放射免疫定量試薬で試薬の操作規則によって、r免疫測定器でグリココール酸の含有量を測定する。中国科学院生物研究所上海栄盛試薬工場の胆汁色素分析試薬を使ってカフェイン法で、別々に血清総ビリルビン、抱合ビリルビンの含有量を測定し、遊離ビリルビンの含有量を計算する。その結果は表１、表2に示す。
【００３３】
表１から見ると、LDRS原液を0.307ml/kg・d、0.154ml/kg・d、0.077ml/kg・dで連続的に90日間投与した場合、結石生成飼料で起こったモルモットのビリルビン胆石の生成率に対して異なる程度の抑制を表した。その中で、0.307ml、0.154ml/kg・d投与量はビリルビン胆石の生成率が0.0％、27.3％で、成石組に比べて抑制率が90.9％、63.6％であり、成石組の結石生成率に比べて有意に低かった(P<0.01あるいは0.001）。この結果は、連続的にLDRSを投与した時、結石生成飼料で起こったモルモットのビリルビン胆石の生成率に対して良好な予防作用を持っていることを示している。
【表１】
2005514343.tif 000002
【表２】
2005514343.tif 000003
【００３４】
表2は、各組のモルモットの血清グリココール酸と各種のビリルビン含有量の測定結果を示している。表2から見ると、異なる投与量のLDRSカプセルを連続的に90日間投与した結果、LDRSは成石モルモット組のグリココール酸に対して抑制率が31.3％、32.0％、35.4％で、成石組に比べて有意な抑制作用を表した。この結果は、LDRSが成石モルモットの胆汁鬱積で起こったグリココール酸とビリルビン含有量の上昇に対して有意な拮抗作用を備えることを示し、ビリルビン胆石の生成を阻止するのに良好な作用を有している。
【００３５】
3：LDRSのノーマルマウス血清グリココール酸、総ビリルビンに対する影響
28〜32g体重の健康な雌性マウス32匹を採用し、体重によってランダムに4組に組み分けをし、一組に8匹とする。第1組と第2組はLDRS原液を0.154ml/kg・d、0.307ml/kg・dで、第3組はEulektroを0.15ml/kg・dで投与する。第4組は空白対照組で、同じ体積の0.5％カルボキシメチルセルロース（carboxymethylcellulose）（以下、「CMC」と称す。）を投与する。各組は一日に一回ずつ連続的に10日間投与し、最後の薬を投与して2h後に抜眼して血を採取し、3000r/minで15分間遠心して血清を分離する。放射免疫検定法とカフェイン法を採用して、血清の中のグリココール酸と各種のビリルビンの含有量を測定する。その結果を表3に示す。
【表３】
2005514343.tif 000004
【００３６】
表3から見ると、LDRS原液を0.154ml/kg・d、0.307ml/kg・dで10日間投与した場合、ノーマルマウス血清グリココール酸、血清総ビリルビン、抱合ビリルビン(直接ビリルビン)、遊離ビリルビンの含有量に対して異なる程度の抑制作用が表れた。その中、大投与量組の血清グリココール酸、総ビリルビン、遊離ビリルビンに対して抑制作用が有意でP<0.05あるいは0.01だったが、Eulektrolはこのような作用が明らかではなかった。この結果は成石動物の結果と類似し、LDRSが胆汁鬱積で起こったグリココール酸と総ビリルビン、遊離ビリルビン含有量の上昇を降下あるいは減少する作用を有し、胆石の生成を予防あるいは阻止可能なことが分かる。
【００３７】
試験例２：LDRSの結石溶解試験
１．結石標本
１．１  結石標本：全ての結石は四川省人民病院外科から提供され、−人の患者から採った泥沙様胆管結石で、結石の大きさが均一であり、重量と成分が似ているものを選択した。結石の型は四川省中薬研究所により鑑別された。
【００３８】
１．２  ビリルビン胆石：別々にコレステリンとビリルビン、カルシウムの含有量を測定した。
【００３９】
２．方法と結果
高圧滅菌した清潔なストレプトマイシン瓶45個を取り、3組に分けて一組に15個にする。第１組は瓶の中にコレステリン結石を約100mg(体積は約0.11±0.01ml)ずつ入れ、第２組はコレステリン結石を約100mg(体積は約0.12±0.01ml)ずつ入れ、第３組は混合型結石を約100mg(0.10±0.1ml)ずつ入れる。各組の結石は75％アルコールで10分間浸漬して無菌ガラス皿で乾燥して使う。結石を入れてから、各組の１〜３番瓶の中に0.5％カルボキシメチルセルロース(CMC)10mlを加え、4〜6番瓶の中には0.5％CMCで希釈したEulektrol(0.015ml/ml)を加え、各組の7〜9、10〜12、13〜15番瓶の中には0.5％CMCで希釈した利胆結石溶解溶液を加え、量は別々に0.0077ml/ml、0.0154ml/ml、0.0307ml/mlにする。各瓶の中の液体の体積は全部10mlでｐＨは7.0である。二重ガーゼで瓶の口を密封して37℃恒温箱の中に60日間置く。その期間に一日おきに薬液を一回変え、第10日と第60日目に残余結石の重量(瓶の中の液体を慮過し、50℃で48h乾燥してから量る。総重量−(ガーゼ＋瓶の重量)＝残余結石の重量)を量り、その体積を計算する。その結果を表４に示す。
【表４】
2005514343.tif 000005
【００４０】
表4から見ると、LDRS薬液0.0077ml/ml、0.0154ml/ml、0.0307ml/ml三種の投与量は人体の三種の結石に対して異なる程度の結石溶解作用を示し、結石溶解作用の強弱は薬の投与量、投与時間と関係があった。連続的に60日間投与した時、二つの投与量は三種の結石に対する溶解作用が有意であったが(P<0.05或0.001)、Eulektrolは三種の結石に対する溶解作用が有意でなかった。
【００４１】
３．体内結石溶解試験
健康なウサギ32匹を採用し、体重によってランダムに4組に組み分けをし、一組に8匹とし、耳介静脈から30mg/kgのべントバルビタールナトリウムで麻酔する。はさみで2x6cm程度の面積の腹部の毛を除去し、その上に硫化バリウム脱毛剤を付けて２分間置いてから水道の水で脱毛剤をあらい、また生理食塩水でもう一回洗う。皮膚が露出したら、ヨードチンキとアルコールで消毒する。無菌環境で開腹して胆嚢を現し、肉眼で肝胆の外形を観察して異常がなかったら、胆汁を除去する。胆嚢の上部を切開し、胆汁色素結石を一枚植え込み、同時に植え込んだ結石の重量を量る。先に胆嚢の切開の縫合を行い、開腹切開の縫合を行う。感染を予防するため、手術後２日は毎日一匹のウサギにペニシリン40万単位を注射し、三日以内に死んだウサギは補足する。手術後３日から各組は体重によって薬を投与し、投与量はLDRS  0.2ml/kg、0.1mg/mgにし、第3組はEulektrol  0.15ml/kgを、第４組はサラダオイルを投与する。薬液をカプセルの中に入れ、カプセルをウサギの舌根部に置いたらウサギはゆっくり飲んでしまう。一日に一回ずつ連続的に14日投与し、最後の薬を投与して4時間後で大腿静脈から瀉血して死んだら、胆嚢の中に植え込んだ胆汁色素結石を取り出し、濾紙で薬液と胆汁を除去する。結石を全部捜して、60℃恒温箱の中において定量になったら残余結石の重量を量って、対照組と比較する。
【表５】
2005514343.tif 000006
【００４２】
表5から見ると、ウサギに人体胆汁色素結石を植え込んだあとで、連続的に異なる投与量のLDRSを14日間内服したとき、植え込んだ結石に対して異なる程度の溶解作用がみられ、植え込んだ結石軽減し、軽減率は52.6％、60.4％で、対照組に比べて有意だった（P<0.001）。Eulektrol組も異なる程度の軽減があり、軽減率は22.8％で、対照組に比べて有意でなかった（P<0.05）。この結果はLDRSが人体胆汁色素結石に対して溶解作用を有することを示している。
【００４３】
試験例３：LDRSのラットに対する利胆試験
体重が280〜410gの健康な雄性ラット70匹を採用し、体重によって7組に分け、組み分けは表5に書いている。試験の前、被検のラットは16時間絶食させ、カルバニン酸エチル1g/kgipで麻酔して四肢を固定し、開腹して胃の幽門部を捜す。胃の幽門部を基準にして総胆管を捜し、ピンセットで被膜を分離して総胆管を表し、下段を結紮してから小さな切開をする。肝に近づいている総胆管の中に外直径が1mmぐらいのプラスチック管を入れて胆汁を排除させる。胆汁の流量が安定して0.5時間後、胆汁の収集量を測定し、2回重複する。各組は別々に十二指腸から薬か対照薬2m1/100g・bwを投与し、投与後4時間内に各区間の胆汁分泌係数(胆汁分泌係数＝実際の胆汁収集量／bw×l00％)を測定して対照組の胆汁分泌係数と比較する。結果を表6に示す。
【表６】
2005514343.tif 000007
【００４４】
表6のように、LDRS原液0.0163ml、0.0325ml、0.0650ml/kg，Eulektrol  0.15ml/kg、コラル酸100mg/ml、デヒドロコール酸100ml/kgをラットの十二指腸から投与した結果、薬後1時間の時各組の胆汁分泌係数は対照組に比べて別々に26.2％、49.4％、51.0％、-7.1％、6.4％、5.8％上昇し、薬後2時間の時は別々に37.6％、81.2％、101.3％、-3.4％、26.8％、57.0％上昇し、薬後3時間の時は別々に86.4％、91.0％、127.3％、102.7％上昇し、薬後4時間の時試験組は対照組に比べて別々に51.3％、69.9％、76.1％、13.3％、45.1％、85.8％上昇した。以上の結果から見ると、LDRSカプセル大、中、小投与量はラットに対して有意な利胆作用があり、その作用は4時間以上まで維持し、線量効果関係が明らかであるのが分かる。Eulektrolは利胆作用を持っているが、作用が遅くて薬後3時間で胆汁分泌が増加するから、Eulektrolは利胆作用が遅いのが分かる。コラル酸とデヒドロコール酸は利胆作用が確かにあるが、効果が２時間後で表れ、LDRSより遅かった。デヒドロコール酸は利胆作用維持時間が比較的長かったが、コラル酸は利胆作用が遅く短かった。試験結果はLDRSが比較的強い利胆作用を持っていることを示している。
【００４５】
試験例４：胆汁中のビリルビン測定
【表７】
2005514343.tif 000008
【００４６】
対照組に比べて*P<0.0  **P<0.01(n=8，BIL単位：mmol/LX±SD)
表7から見ると、コラル酸、デヒドロコール酸と異なる投与量のLDRSは胆汁中の総ビリルビン、抱合ビリルビン、遊離ビリルビンに対して異なる程度の抑制作用を示した。LDRS大投与量とデヒドロコール酸は投与して1〜4時間の胆汁中の総ビリルビン、抱合ビリルビン、遊離ビリルビンに対する抑制作用が明らかで、対照組に比べてP<0.05或0.01で有意な差異があった。
【００４７】
試験例５：黄色ブドウ球菌に感染したマウスに対するLDRSの治療作用
試験方法：臨床で分離した黄色ブドウ球菌を取って牛肉汁液体培地に接種し、37℃の孵化箱の中で16〜18時間培養する。培養した菌液を生理食塩水(NS)で10-2希釈して、二倍量の5g/d1胃ムチン(Gastric mucin)の懸濁液を加えて細菌の毒性を強くし、マウスを感染させるのに使う。
【００４８】
体重が18〜22gマウス40匹を採用し、体重と性別によって４組に分け、一組に10匹で雌雄5匹ずつにする。LDRS大、中、小投与量と薬を使わない対照組に分ける。予備試験の時選択した、マウスに対する死亡率が90％である菌液濃度で被試験のマウスに注射する。腹腔内注射を使い、注射量は0.2ml/10g・bwで菌数は約(5×109個菌/マウス)にする。試験各組には感染前1−2時間の時、別々にLDRS  0.077ml、0.154ml、0.307ml/kgを、対照組には0.5％  CMCを投与し、感染後もう一度投与する。その後は毎日一回で連続的に５日間投与する。毎日マウスの成長と死亡状況を観察し、感染後７日後の生存率を観察項目にする。その結果は表8に示す。
【表８】
2005514343.tif 000009
【００４９】
表8から見ると、感染前2時間、感染後５日間異なる投与量のLDRSを投与して７日間観察した結果、黄色ブドウ球菌に感染したマウスの生存率が異なる程度に上昇し、この作用は明らかな線量効果関係を表した。低、中、高三種投与量のLDRSは薬を使わなかった対照組に比べて生存率が別々に30％、60％、80％上昇し、良好な黄色ブドウ球菌感染に対した予防作用を示した。中、高投与量組は対照組に比べて有意な差異があり（P<0.05,P<0.001）、低投与量組はサンプルが小さいため対照組に比べて有意な差異がなかったが（P>0.05）、生存率が30％上昇した。この結果は体外(離体)試験の結果と一致している。
【００５０】
試験例９：Achで起こったモルモットの胆嚢平滑筋収縮に対するLDRSの影響
24時間絶食した300g以上のモルモット9匹を取って、棒で叩いて失神させてから瀉血し、開腹して胆嚢を表す。胆嚢底と頚部に結紮してから総胆嚢管を切断し、胆嚢を取り出して4℃のKrebs液が入っている培養皿にいれる。眼科鋏で胆嚢を縦に二つに分け、10mmの長さ、Btam幅の二つの胆嚢筋肉を取る。胆嚢筋肉を恒温37℃のKrebs液マグヌス浴槽(20ml)の中にいれ、下段は浴槽底の鉤に固定し、上段はエネルギー変換器と繋げ、酸素供給気泡を均一に調節してから、エネルギー変換器を二道生理記録器前置の拡大器に連結する。試験溶液を加えて3分以上観察し、最大作用まで待ってから、灌流液で浴槽を三回洗浄して15分間休憩する。収縮曲線が平穏になってからほかの試験を行う。試験の時0.1μg/mlアセチルコリン0.2-0.4mlを加えて、胆嚢筋肉の収縮反応があるかどうかを観察する(この試験で注意するものは：胆嚢筋肉を取るとき速く軽くし、筋肉を損傷しないようにし、Krebs液は２次蒸留水で製造する)。ァセチルコリンを加えてから胆嚢筋肉の収縮曲線を記録したら、収縮曲線の振幅が大きくなるのが見え、収縮曲線が平穏になってから異なる濃度のLDRS液を加える。薬液を加えたら、胆嚢筋肉の収縮曲線の振幅が下がるのが見える。各段階振幅高度の統計方法は：薬液を加える前、胆嚢筋肉収縮曲線の上点、下点から横座標の平行する直線を作り、二つの平行線の高度を量って振幅にする（薬前平行線の下点を基準線にする）。収縮曲線が平穏になってから異なる濃度のAch液を加えたら、胆嚢筋肉の収縮曲線が高くなるのが見える。振幅の最高点から基準線に平行する直線を作り、二つの平行線の高度を量ってAchの振幅にする。収縮曲線が平穏になってから異なる濃度のLDRS液を加え、振幅の最低点から基準線に平行する直線を作り、基準線から最低点までの高度を量る。結果は表９に示す。
【表９】
2005514343.tif 000010
【００５１】
表9から見ると、異なる濃度のLDRS  10-2、10-3を加えたら、Ach-4の振幅高度が別々に61.9％、50.2％下がり、LDRSがAchで起こった離体胆能筋肉の振幅増大に有意な抑制作用があり、Ach組の振幅高度に比べてP<0.01，P<0.001で、良好な鎮痙作用を表した。
【００５２】
試験例１０：モルモットの分離腸平滑筋に対するLDRSの作用
24時間絶食した雄性モルモット３匹を取って、棒で叩いて失神させ、開腹して3-4cm長さの回腸を数個取り、回腸に付いている脂肪と膜を除去してから、酸素が入れている（CO2を5％含める）37℃の保温液の中にいれる。内容物をきれいに洗ってから回腸を1.5cmの長さにし、両端に線を付け、一端はL型スタンドの上に掛けて浴槽の中にいれ、一端はエネルギー変換器と繋げ、応力は1.0gにする。二道生理記録器（成都機器工場LMS-2B型）で腸管収縮曲線を記録してから、栄養液の中に以下の薬液を加える。1:10000アセチルコリン(Ach)0.05ml，1:1000ヒスタミン(HT)，1:1000塩化バリウム(BaCl2)を入れたら、すぐ腸筋が痙攣し、腸筋収縮振幅が明らかに増加する。収縮振幅が最高ピークの時、被検薬LDRSを加えた結果は図１に示す。図１からみると、LDRSが正常的な腸平滑筋に対しても抑制作用があり、アセチルコリン、ヒスタミンと塩化バリウムで起こった腸、胆嚢筋の痙攣を除去して、モルモットの腸平滑筋を弛緩できることが分かる。
【００５３】
試験例１１：LDRSの抗炎作用
１．キシレン(xylene)で起こったマウスの耳殻炎症に対する影響
【表１０】
2005514343.tif 000011
【００５４】
表10から見ると、LDRSとEulektrolはキシレン(xylene)で起こったマウスの耳殻腫に有意な抑制作用あり、対照組に比べてP<0.01，P<0.001で、明らかな線量効果関係を表したが、その抑制作用はインドメサシンに比べると弱かった。
【００５５】
２．寒天肉芽腫重量に対したLDRSの影響
【表１１】
2005514343.tif 000012
【００５６】
表11から見ると、異なる投与量のLDRS原液0.077ml、0.154ml、0.307ml/kg・dを連続的に10日間投与したとき、ラット棉球肉芽腫係数に対する抑制率は32.3％、50.7％、64.6％で、LDRSがラット寒天肉芽腫に対して異なる程度の抑制作用があることが分かる。中、大投与量のLDRS原液は、ラット寒天肉芽腫に対した抑制作用が対照組に比べてP<0.05，P<0.01で、有意な抑制作用があった。大投与量組をプレドニゾンに比べてはP>0.05で有意な差異がなかった。このことから、ソフトカプセルが慢性の炎症に良好な抗炎作用を持っていることが分かる。
【００５７】
３．LDRSのラット足腫に対した抗炎試験
【表１２】
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【００５８】
表１２から見ると、LDRS 0.077ml、0.154ml、0.307ml(原液)/kg・dと30mg/kgの酢酸プレドニゾンは、カラジナーン（carrageenan）で起こったラット足腫に良好な抑制作用があり、0.5％  CMCに比べて薬後2〜4時間の期間有意な抑制作用があった。LDRS大投与量組は酢酸プレドニゾンと比べて有意な差異がなかった（P>0.05）。これは、ソフトカプセルがPG型炎症に対して良好な抗炎作用を持っていることを説明している。
【００５９】
試験例１２：2.5％フォルマリンで起こったマウスの足を舐める回数に対するLDRSの影響
18-30g体重の健康な雄性マウス60匹を取って、体重によって６組に分ける。第１組は0.5％CMC 10ml/kgを、第２組はSC塩酸モルフィン10mg/kgを、第３組はEulektrol0.15ml/kgを、第4、5、6組はLDRS 0.077ml、0.154ml、0.307ml/kg・dを投与する。各組は薬を投与して15分後、右側後足の甲にSC 2.5％フォルマリン液0.03ml/匹を注入した後、マウスの足を舐める回数を15分間測定する。その結果は表13に示す。
【表１３】
2005514343.tif 000014
【００６０】
表15に示したように、LDRSがフォルマリンで起こったマウスの足を舐める回数を明らかに減少することから、良好な鎮痛作用を持っていることが分かる。陽性対照薬の塩酸モルフィンは抑制率が98％以上に達したが、Eulektrolは鎮痛作用が明らかでなかった(P>0.05)。LDRSの鎮痛作用は投与量が増加することによって強くなり、良好な線量効果関係を表した。しかし、LDRSの鎮痛作用の強度はモルフィンより弱く、大投与量の抑制率もモルフィンに比べては弱く、有意な差異があった(P<0.001)。
【００６１】
試験例１３：2,4-ジニトロフェノールで起こったラットの発熱に対するLDRSの影響
180〜220g体重の健康な雄性ラット49匹を取って、体重によって６組に分け、一組に8匹にする。第１組は0.5％  CMC 10ml/kgを、第２組はアミノビリン80mg/kを、第３組はEulektrol0.15ml/kgを、第4、5、6組はLDRS 0.077ml、0.154ml、0.307ml/kg・dを投与する。各組は薬を投与して15分後、背中からSC2,4-ジニトロフェノール25mg/ml匹を注入する。薬前O時間、薬後0.25時間、0.5時間、1時間、2時間、4時間の時ラットの肛温を量る。その結果は表1４に示す。
【表１４】
2005514343.tif 000015
【００６２】
薬後の同一時間に各組を0.5％  CMCに比べて  *p<0.05  **P<0.01
表14から見ると、異なる投与量のLDRSを投与した場合アミノビリンの作用と似て、2,4-ジニトロフェノールで起こったラットの発熱に対して有意な抑制作用があり、抑制作用の強弱は投与量と関係があることが分かる。
【実施例】
【００６３】
本発明の実施例は全部上述の効果を実現できる。
【００６４】
＜実施例１＞薄荷油320ml    ひまわり油80ml
以上2種の薬物を比例によって均一に混合し、0.4ml/粒のカプセルを1000粒作る。
【００６５】
＜実施例２＞薄荷油300ml    ひまわり油100ml
以上2種の薬物を比例によって均一に混合し、0.4ml/粒のてきがん(Dropping Pill)を1000粒作る。
【００６６】
＜実施例３＞
本発明のソフトカプセルの品質管理方法は：
鑑別：ソフトカプセルの内容物を一滴取って、硫酸３−５滴とバニリン結晶を少し入れて色がオレンジになり、水を一滴入れたらすぐ紫になる。ソフトカプセルの内容物を1ml取って、酢酸エチルを10ml入れ、均一に混合し、試料溶液にする。メントール対照品にゲラニオール対照品を加え、1mlにゲラニオール 対照品が1mg含めているようにする。薄層クロマトグラフィー（＜中国薬典＞2000年版第一部附録VIＢ）を使い、上述の三つの溶液を2μlずつ吸い、同一な珪酸ゲルG薄層板に置き、30-60℃の中で1５:３の石油エーテル−酢酸エチルを展開剤にし、25℃以下の温度で展開し、取り出して乾燥し、新しく作ったバニリン硫酸溶液を噴射し、熱風で斑点が明らかに出るまで吹かす。試料クロマトで、対照品クロマトに対応している位置に同じカラーの斑点ができる。
【００６７】
相対密度：ソフトカプセルの内容物を取って相対密度測定方法（＜中国薬典＞2000年版第一部附録VIIＡ比重瓶法）で測定し、相対密度は0.881-0.901にする。
【００６８】
屈折率: ソフトカプセルの内容物を取って規則（＜中国薬典＞2000年版第一部附録VIIF）に沿って測定し、屈折率は1.456-1.466にする。
【００６９】
旋光度：相対密度測定項目の内容物を取って、規則（＜中国薬典＞2000年版第一部附録VIIＥ）に沿って測定し、旋光度は-14゜〜-22゜にする。
【００７０】
＜含量測定＞
エステル含量、総アルコール量の測定ソフトカプセルの内容物を5gを取ってフラスコに入れ、フェノールフタレイン指示薬に中性を現す中性のアルコール10mlを加えて混合し、フェノールフタレイン指示薬を２滴いれる。0.1mol/Lアルコール性水酸化カリウム溶液で遊離酸を中和し、精確にアルコール性0.5mol/L水酸化カリウム滴定用溶液を25ml入れ、水浴に還流して0.5-1.5時間後で冷却し、フェノールフタレイン指示薬0.5mlを入れ、 0.5mol/L塩酸滴定用溶液で残余の水酸化カリウムを滴定し、同時に空白試験をする。1mlアルコール性0.5mol/L水酸化カリウム滴定用溶液は99.15mg メンチルアセテート（menthyl acetate）(Ｃ12Ｈ22Ｏ2)にあたり、一粒ソフトカプセルの内容物のエステル含量はメンチルアセテート (Ｃ12Ｈ22Ｏ2)で計算して、5-11%(g/g)にする。
【００７１】
アセチル化: ソフトカプセルの内容物を10ml取って100ml容量のアセチル瓶に入れ、酢酸10mlと新鮮な無水酢酸ナトリウム2 gをいれ、空気凝縮管と145±3℃の油浴あるいは砂浴で0.5-1.5時間置いてから冷却し、凝縮管を通じて水を50ml入れ、水浴上に置き、攪拌して10-20分間加熱してから冷却する。分液漏斗の中に移して下層の酸液を除去し、塩化ナトリウム飽和溶液50mlを加えて充分に攪拌してから層化させ、上層の水溶液を除去し、一回に50ml量にして洗浄液がフェノールフタレイン指示薬に中性を現すまで水で何回も洗浄する。できたアセチル化油25mlを蓋がある三角フラスコに入れ、無水酢酸ナトリウム粉末を3g加えて密封してから時に振動し、一滴のアセチル化油を十滴の二酸化炭素の中に入れた時、混濁が起こらない時まで脱水させ、乾燥した濾紙で濾過する。
【００７２】
鹸化(saponification)：乾燥したアセチル化油1g を精確に量って100ml容量のフラスコの中に入れ、0.5mol/Lアルコール性水酸化カリウム溶液を25ml加え、水浴に還流して0.5-1.5時間後で冷却し、凝縮管を取ってフェノールフタレイン指示薬0.5mlを入れ、 0.5mol/L塩酸滴定用溶液で残余の水酸化カリウムを滴定し、同時に空白試験をし、以下の公式に沿って計算する。
【００７３】
総アルコール量  ％  ＝  ｛（Ｂ−Ａ）×Ｎ×0.1543｝／｛Ｗ−（Ｂ−Ａ）×Ｎ×0.04204｝×１００％
Ｂ：空白が消耗した0.5mol/L塩酸標準溶液の体積（ml）
Ａ：アセチル化油が消耗した0.5mol/L塩酸標準溶液の体積（ml）
Ｎ：塩酸標準溶液のモル濃度
Ｗ： アセチル化油の質量（g）
0.1543：ゲラニオールミリグラムモル数
0.04204：酢酸エステルとアルコールのミリグラムモル数の差
一粒のソフトカプセルの内容物の総アルコール量はゲラニオール((Ｃ10Ｈ18Ｏ))で計算して、5０%以下ではいけない。
【００７４】
メントールとグラニオールの含量は、＜中国薬典＞2000年版第一部附録４０ページVIＥガスクロマトグラフィーで測定する。
【００７５】
クロマト条件と系統適応性試験：5%ジフェニル−95%ジメチルシラン共重合体を定常期にした30m×0.32mm×0.25μm毛細管クロマトカラム。SIP (Sample InjectionPort)の温度：2４0℃;  検知器の温度：2４0℃;   シャント比は50:1 にする。プログラム昇温: ８0℃ の開始温度で2-3分間維持した後、１分に８℃で1７0℃まで上げて ３分間維持する。キャリアガス流速:1.5ml/min; 理論的棚板数はグラニオールピークで計算して300000以下ではいけない。
【００７６】
補因子測定: 直鎖ペンタデカン内標対照品の適宜量を取って精確に量って酢酸エチルを加え、1mlに2.5mgが含有している溶液を作って内標溶液にする。薄荷脳対照品、ゲラニオール 対照品の適宜量を取って精確に量って酢酸エチルを加え、1mlに薄荷脳6mg、ゲラニオール1mgが含有している溶液を作る。以上の三種の溶液を2 mlずつ吸い、酢酸エチルを加えて目盛りまで希釈し、攪拌して均一にしてから1μlを吸い、ガスクロマトグラフに入れて補因子を測定する。
【００７７】
ソフトカプセル内容物50 mgを取って精確に量って10ml定容瓶の中にいれ、精確に内標溶液2 mlを加え、酢酸エチルを加えて目盛りまで希釈し、攪拌して均一にしてから1μlを吸い、ガスクロマトグラフに入れて測定したらできる。
【００７８】
一粒のソフトカプセルの内容物の中に、薄荷油の含有量はメントール(menthol) (Ｃ10Ｈ20Ｏ)で計算して７９mg以上、ひまわり油の含有量はグラニオール(Ｃ10Ｈ18Ｏ)で計算して７mg以上にする。
【国際調査報告】
2005514343.tif 000016
2005514343.tif 000017