(57)【要約】  本発明は、NCAM（神経付着分子）シグナル伝達を刺激し、そして/又は細胞付着を妨げることができるNCAM結合化合物に関する。前記化合物は、次の式：L1−A−L2−B−L3−C−L4［式中、A,B又はCはいずれかのアミノ酸残基であり、但し少なくともB又はCは酸性アミノ酸残基であり、そして少なくともA,B又はCは疎水性アミノ酸残基又はYであり、又はA,B又はCはいずれかのアミノ酸残基であり、但し少なくともB又はCは塩基性アミノ酸残基であり、そして少なくともA,B又はCは疎水性アミノ酸残基又はYであり、そしてL1,L2,L3及びL4は、化学結合、又はｎ個のアミノ酸（ここでｎは０〜５の整数である）を有するアミノ酸配列から個々に選択される］で表されるの配列を有するペプチドである。本発明によれば、前記化合物は、中枢及び末梢神経系の種々の疾病又は病状における、正常、変性又は損傷されたNCAM提供細胞の処理のための薬剤の製造のために使用され得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経細胞付着分子（NCAM）シグナル伝達を刺激し、そして/又は細胞付着を妨げることができるNCAM結合化合物であって、下記式：
L1−A−L2−B−L3−C−L4
［式中、A, B又はCはいずれかのアミノ酸残基であり、但し少なくともB又はCは酸性アミノ酸残基であり、そして少なくともA, B又はCは疎水性アミノ酸残基又はYであり、又は
A, B又はCはいずれかのアミノ酸残基であり、但し少なくともB又はCは塩基性アミノ酸残基であり、そして少なくともA, B又はCは疎水性アミノ酸残基又はYであり、そして
L1, L2, L3及びL4は、化学結合、又はｎ個のアミノ酸（ここでｎは０〜５の整数である）を有するアミノ酸配列から個々に選択される］
で表される配列を有するペプチドを含んで成る化合物。
【請求項２】
B, C又はLの少なくとも１つが疎水性アミノ酸残基を示す請求項１項記載の化合物。
【請求項３】
前記疎水性基が、芳香族アミノ酸残基である請求項２記載の化合物。
【請求項４】
下記式：
A−P2−P3−P4−P5−P6−P7
［式中、P2は、アミノ酸残基D, E, P, I, Y,V, G, F, Q, N, W, A 及び Tから成る群から選択され；
P3は、アミノ酸残基D, E, I, X,W, V, N, T, G,  親水性アミノ酸及びYから成る群から選択され；
P4は、アミノ酸残基D, E, W, F,X, T, L, A, G, P, Y 及び Tから成る群から選択され；
P5は、アミノ酸残基D, E, W, A,V, G, N, I 及び Fから成る群から選択され；
P6は、アミノ酸残基D, E, F, S,W, Q, Y, 及びIから成る群から選択され；
P7は、アミノ酸残基D, E, T, S,W, Q, I, V, P, L, N 及び Fから成る群から選択される］
で表される少なくとも７個のアミノ酸残基を含んで成る化合物。
【請求項５】
P2が、アミノ酸残基D, E, P, I, Y, V, G, Q, F, W 及び Tから成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項６】
P2が、アミノ酸残基D, E, P, I, Y, V, N, G, F, W 及び Tから成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項７】
P2が、アミノ酸残基D, E, P, I, Y, V, N, F, Q, W 及び Tから成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項８】
P2が、アミノ酸残基D, E, P, I, Y, V, N, F, G, Q 及び Wから成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項９】
P2が、アミノ酸残基D, E, P, I, V, F 及び Wから成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項１０】
P3が、アミノ酸残基D, E, I, W, V 及び Nから成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項１１】
P3が、アミノ酸残基D, E, I, W, V 及び Tから成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項１２】
P3が、アミノ酸残基D, E, V 又は Iから成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項１３】
P4が、アミノ酸残基D, E, W, F, A, G, P, Y 及び Tから成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項１４】
P4が、アミノ酸残基D, E, W, L, A, G, P, Y 及び Tから成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項１５】
P4が、アミノ酸残基D, E, W, F, L, A, G, P 及び Yから成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項１６】
P4が、アミノ酸残基D, E, W, F 及び Pから成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項１７】
P4が、アミノ酸残基D, E 及び Tから成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項１８】
P5が、アミノ酸残基D, E, W, A, V, E, N, I 及び Fから成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項１９】
P5が、アミノ酸残基D, E, W, A, V, G, E, I 及び Fから成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項２０】
P5が、アミノ酸残基D, E, W, V, I 及び Fから成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項２１】
P6が、アミノ酸残基D, E, F, W, Q, Y 及び Iから成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項２２】
P6が、アミノ酸残基D, E, F, S, W, Y 及びIから成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項２３】
P6が、アミノ酸残基D, E, W 及び Qから成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項２４】
P6が、アミノ酸残基D, E 及び Tから成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項２５】
P7が、アミノ酸残基D, E, T, S, W, I, V, P, L 及び Fから成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項２６】
P7が、アミノ酸残基D, E, T, Q, W, I, V, P, L 及び Fから成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項２７】
P7が、アミノ酸残基D, E, S, W, Q, I, V, P 及び Fから成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項２８】
P2が、アミノ酸残基D, E, P, I, G,N, Q, A 及び Vから成る群から選択され；
P3が、アミノ酸残基D, E, I, W,V, N 及び Tから成る群から選択され；
P4が、アミノ酸残基D, E, T 及びWから成る群から選択され；
P5が、アミノ酸残基D, E, W, V, I 及び Fから成る群から選択され；
P6が、アミノ酸残基D, E, Q 及びWから成る群から選択され；そして
P7が、アミノ酸残基S, W, Q, I,V, P 及び F
から成る群から選択される請求項４記載の化合物。
【請求項２９】
下記式：
A−P2−P3−P4−P5−P6−P7−P8−P9
［式中、Aは、アミノ酸残基Aであり；
P2は、アミノ酸残基K, D, A, L, P, G, 及び Fから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合であり；
P3は、アミノ酸残基K, W, R, Y, L, N, H, V, I 及び Sから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合であり；
P4は、アミノ酸残基K, M, Y, T, F, I, N, S, H 及び Pから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合であり；
P5は、アミノ酸残基W, E, K, N, F, S, Y, V, D, Q, 及び Aから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合であり；
P6は、アミノ酸残基K, A, N, M, F, Q, L, V, Y, 及び Wから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合であり；
P7は、アミノ酸残基K, S, P, W, Y, l, A, L, V, F, 及び Mから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合であり；
P8は、アミノ酸残基K, T, W, P, N, Y, S, V, I, G, A, F, L, 及び Mから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合であり；
P9は、アミノ酸残基W, K, D, S,V, G, A, F, M, Q, 及び Lから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合である］
で表される少なくとも７個のアミノ酸残基を含んで成る化合物。
【請求項３０】
P2が、アミノ酸残基P, L, K, 及び Aから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項３１】
P2が、アミノ酸残基K, A, L, P, A, F, D, 及び Gから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項３２】
P2が、アミノ酸残基D, 及び Kから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項３３】
P3が、アミノ酸残基K, W, R, Y, L, H 及び Vから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項３４】
P3が、アミノ酸残基W, L 又は Yから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項３５】
P3が、塩基性アミノ酸から成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項３６】
P4が、アミノ酸残基K, M, Y, T, F, I, S 及び Hから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項３７】
P4が、アミノ酸残基K, M, Y, F, I, N, S 及び Hから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項３８】
P4が、アミノ酸残基K, M, Y, T, F, I, N 及び Hから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項３９】
P4が、アミノ酸残基M, F 及び Iから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項４０】
P4が、塩基性アミノ酸から成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項４１】
P5が、アミノ酸残基W, E, K, N, F, S, Y, V, D 及び Aから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項４２】
P5が、アミノ酸残基W, K, N, F, S, Y, V, D, Q 及び Aから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項４３】
P5が、アミノ酸残基W, E, K, N, F, S, Y, V, Q 及び Aから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項４４】
P5が、アミノ酸残基W, F, V 又は Yから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項４５】
P5が、塩基性アミノ酸から成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項４６】
P5が、アミノ酸残基W, E, K, N, F, S, Y, V, D 及び Aから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項４７】
P6が、アミノ酸残基K, A, N, M, F, L, V, Y 及び Wから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項４８】
P6が、アミノ酸残基K, A, M, F, Q, L, V, Y 及び Wから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項４９】
P6が、アミノ酸残基A, M, F, L, V 及び Wから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項５０】
P6が、塩基性アミノ酸から成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項５１】
P7が、アミノ酸残基K, P, W, Y, I, A, L, V, F 及び Mから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項５２】
P7が、アミノ酸残基P, W, I, A, L, V, F 及び M, 又は Yから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項５３】
P7が、いずれかの塩基性アミノ酸から成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項５４】
P8が、アミノ酸残基T, W, P, N, Y, S, V, I, G, A, F, L 及び Mから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項５５】
P8が、アミノ酸残基W, P, V, I, A, F, L 及びMから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項５６】
P8が、アミノ酸残基T, N及び Yから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項５７】
P8が、Yである請求項56記載の化合物。
【請求項５８】
P8が、アミノ酸残基W, P, V, I, A, F 及びL又はYから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項５９】
P9が、アミノ酸残基W, K, D, S, V, G, A, F, M, Q 及び Lから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項６０】
P9が、アミノ酸残基W, V, A, F, M 及び Lから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項６１】
P9が、アミノ酸残基N, Y 及び Sから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項６２】
P9が、Yである請求項29記載の化合物。
【請求項６３】
P9が、アミノ酸残基K, D, S 及びGから成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項６４】
P9が、塩基性アミノ酸から成る群から選択される請求項29記載の化合物。
【請求項６５】
P8及びP9が、いずれかのアミノ酸から選択されるか、又はP8及びP9が、アミノ酸から選択されない請求項29記載の化合物。
【請求項６６】
前記NCAM Ig2ドメインに結合できる請求項１〜65のいずれか１項記載の化合物。
【請求項６７】
Ig2ドメインにより構成される、Ig1−Ig2ドメインの同種親和性（homophilic）結合部位に結合できる請求項１〜65のいずれか１項記載の化合物。
【請求項６８】
前記NCAM Ig1ドメインに結合できる請求項１〜65のいずれか１項記載の化合物。
【請求項６９】
Ig1ドメインにより構成される、Ig1−Ig2ドメインの同種親和性結合部位に結合できる請求項１〜65のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７０】
前記NCAM Ig3ドメインに結合できる請求項１〜65のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７１】
Ig3ドメインにより構成される、Ig3−Ig4ドメインの同種親和性結合部位に結合できる請求項１〜65のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７２】
NCAM Ig4ドメインに結合できる請求項１〜65のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７３】
前記Ig4ドメインの異種親和性（heterophilic）結合部位に結合できる請求項１〜65のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７４】
NCAM Ig5ドメインに結合できる請求項１〜65のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７５】
前記Ig5ドメインの異種親和性結合部位に結合できる請求項１〜65のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７６】
NCAM FN3,1ドメインに結合できる請求項１〜65のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７７】
前記NCAM FN3,1の異種親和性結合部位に結合できる請求項１〜65のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７８】
NCAM FN3,2ドメインに結合できる請求項１〜61のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７９】
前記NCAM FN3,2ドメインの同種親和性結合部位に結合できる請求項１〜65のいずれか１項記載の化合物。
【請求項８０】
少なくとも２個の塩基性アミノ酸残基を含んで成る結合モチーフを通して前記NCAM Ig1ドメインに結合できる請求項１〜65のいずれか１項記載の化合物。
【請求項８１】
10個のアミノ酸残基配列内の少なくとも２個の塩基性アミノ酸残基を含んで成る請求項76記載の化合物。
【請求項８２】
前記NCAM 1g1ドメイン上のNCAM Ig2結合部位に結合できる請求項１〜65のいずれか１項記載の化合物。
【請求項８３】
前記NCAM Ig1ドメイン上の前記NCAM Ig2結合部位とは異なる結合部位に結合できる請求項１〜65のいずれか１項記載の化合物。
【請求項８４】
前記結合モチーフの配列におけるアミノ酸残基の数が、８個以内のアミノ酸残基である請求項１〜83のいずれか１項記載の化合物。
【請求項８５】
前記結合モチーフの配列におけるアミノ酸残基の数が、７個以内のアミノ酸残基である請求項１〜83のいずれか１項記載の化合物。
【請求項８６】
前記アミノ酸残基の１又は複数の残基が、修飾され、例えばアセチルかされる請求項１〜83のいずれか１項記載の化合物。
【請求項８７】
前記ペプチドが、配列番号1 、又は配列番号2 、又は配列番号3 、又は配列番号4 、又は配列番号5 、又は配列番号6 、又は配列番号7 、又は配列番号8 、又は配列番号9 、又は配列番号10 、又は配列番号11 、又は配列番号12 、又は配列番号13 、又は配列番号14 、又は配列番号15 、又は配列番号16 、又は配列番号17 、又は配列番号18 、又は配列番号19 、又は配列番号20 、又は配列番号21 、又は配列番号22、又は配列番号23 、又は配列番号24 、又は配列番号25 、又は配列番号26 、又は配列番号27 、又は配列番号28 、又は配列番号29 、又は配列番号30 、又は配列番号31 、又は配列番号32 、又は配列番号33 、又は配列番号34 、又は配列番号35 、又は配列番号36 、又は配列番号37 、又は配列番号38 、又は配列番号39 、又は配列番号40 、又は配列番号41 、又は配列番号42、又は配列番号43、又は配列番号44 、又は配列番号45 、又は配列番号46、又は配列番号47 、又は配列番号48 、又は配列番号49、又は配列番号50 、又は配列番号51 、又は配列番号52 、又は配列番号53 、又は配列番号54 、又は配列番号55 、又は配列番号56 、又は配列番号57、又は配列番号58、又は配列番号59 、又は配列番号60 、又は配列番号61 、又は配列番号62 、又は配列番号63 、又は配列番号64 、又は配列番号65 、又は配列番号66 、又は配列番号67 、又は配列番号68 、又は配列番号69 、又は配列番号70、又は配列番号71 、又は配列番号72 、又は配列番号73 、又は配列番号74 、又は配列番号75 、又は配列番号76 、又は配列番号77 、又は配列番号78 、又は配列番号79 、又は配列番号80 、又は配列番号81 、又は配列番号82 、又は配列番号83 、又はそのフラグメント、又はその変異体、又はその模倣体である請求項１〜86のいずれか１項記載の化合物。
【請求項８８】
前記ペプチドが、配列番号31 、又は配列番号32 、又は配列番号33 、又は配列番号34 、又は配列番号35 、又は配列番号36 、又は配列番号37 、又は配列番号38 、又は配列番号39 、又は配列番号40 、又は配列番号41 、又は配列番号42、又は配列番号43、又は配列番号44 、又は配列番号45 、又は配列番号46、又は配列番号47 、又は配列番号48 、又は配列番号49、又は配列番号50 、又は配列番号51 、又は配列番号52 、又は配列番号53 、又は配列番号54 、又は配列番号55 、又は配列番号56 、又は配列番号57、又は配列番号58、又は配列番号59 、又は配列番号60 、又は配列番号61 、又は配列番号62 、又は配列番号63 、又は配列番号64 、又は配列番号65 、又は配列番号66 、又は配列番号67 、又は配列番号68 、又は配列番号69 、又は配列番号70、又は配列番号71 、又は配列番号72 、又は配列番号73、又はそのフラグメント、又はその変異体、又はその模倣体である請求項１〜86のいずれか１項記載の化合物。
【請求項８９】
前記ペプチドが、配列番号31 、又は配列番号32 、又は配列番号33 、又は配列番号34 、又は配列番号35 、又は配列番号36 、又は配列番号37 、又は配列番号38 、又は配列番号39 、又は配列番号40 、又は配列番号41 、又は配列番号42、又は配列番号43、又は配列番号44 、又は配列番号45 、又は配列番号46、又は配列番号47 、又は配列番号48 、又は配列番号49、又は配列番号50 、又は配列番号51 、又は配列番号52 、又は配列番号53 、又は配列番号54 、又は配列番号55 、又は配列番号56 、又は配列番号57、又は配列番号58、又はそのフラグメント、又はその変異体、又はその模倣体である請求項１〜86のいずれか１項記載の化合物。
【請求項９０】
前記アミノ酸残基の１又は複数の残基が修飾され、例えばアセチル化される請求項１〜89のいずれか１項記載の化合物。
【請求項９１】
３〜100個のアミノ酸残基、例えば３〜50個のアミノ酸残基、例えば３〜30個のアミノ酸残基、例えば３〜20個のアミノ酸残基の長さを有する請求項１〜90のいずれか１項記載の化合物。
【請求項９２】
4〜100個のアミノ酸残基、例えば4〜50個のアミノ酸残基、例えば4〜30個のアミノ酸残基、例えば4〜20個のアミノ酸残基の長さを有する請求項１〜90のいずれか１項記載の化合物。
【請求項９３】
5〜100個のアミノ酸残基、例えば5〜50個のアミノ酸残基、例えば5〜30個のアミノ酸残基、例えば5〜20個のアミノ酸残基の長さを有する請求項１〜90のいずれか１項記載の化合物。
【請求項９４】
6〜100個のアミノ酸残基、例えば6〜50個のアミノ酸残基、例えば6〜30個のアミノ酸残基、例えば6〜20個のアミノ酸残基の長さを有する請求項１〜90のいずれか１項記載の化合物。
【請求項９５】
7〜100個のアミノ酸残基、例えば7〜50個のアミノ酸残基、例えば7〜30個のアミノ酸残基、例えば7〜20個のアミノ酸残基の長さを有する請求項１〜90のいずれか１項記載の化合物。
【請求項９６】
8〜100個のアミノ酸残基、例えば8〜50個のアミノ酸残基、例えば8〜30個のアミノ酸残基、例えば8〜20個のアミノ酸残基の長さを有する請求項１〜90のいずれか１項記載の化合物。
【請求項９７】
9〜100個のアミノ酸残基、例えば9〜50個のアミノ酸残基、例えば9〜30個のアミノ酸残基、例えば9〜20個のアミノ酸残基の長さを有する請求項１〜90のいずれか１項記載の化合物。
【請求項９８】
10〜100個のアミノ酸残基、例えば10〜50個のアミノ酸残基、例えば10〜30個のアミノ酸残基、例えば10〜20個のアミノ酸残基の長さを有する請求項１〜90のいずれか１項記載の化合物。
【請求項９９】
10-3M, 例えば10-4M, 例えば10-5Mの平衡定数（Kd）として測定されるNCAMについての結合親和性を有する請求項１〜98のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１００】
そのフラグメントが薬剤としての使用のためのものである請求項１〜99のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１０１】
そのフラグメントが、正常な、変性された又は損傷されたNCAM提供細胞の処理のための薬剤の製造のためのものである請求項100記載の化合物。
【請求項１０２】
NCAM Ig1-1g2ドメインに結合でき、そしてNCAMシグナル伝達を刺激でき、そして/又は細胞付着を妨げることができる請求項１〜101のいずれか１項記載の化合物の使用。
【請求項１０３】
前記化合物が薬剤としての使用のためのものである請求項102記載の使用。
【請求項１０４】
前記化合物が正常な、変性された又は損傷されたNCAM提供細胞の処理のための薬剤の製造のためのものである請求項103記載の使用。
【請求項１０５】
前記化合物が、NCAM提供細胞及び/又はその生存体の分化の刺激を含んで成る処理のための薬剤の製造のためのものである請求項104記載の使用。
【請求項１０６】
中枢及び末梢神経系、又は種々の器官の筋肉の疾病及び病状の処理を含んで成る薬剤の製造のためへの請求項103記載の使用。
【請求項１０７】
前記化合物が、中枢及び末梢神経系の疾病又は病状、例えば術後の神経損傷、外傷性神経損傷、神経線維の損なわれた有髄化、発作に起因する後虚血性損傷、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、痴呆、例えば多発脳梗塞性痴呆、硬化症、糖尿病に関連する神経変性、概日時計又は神経−筋肉伝達に影響を及ぼす障害、精神分裂症、気分障害、例えば躁病性うつ病の処理；器官移植後の神経−筋肉連結の損なわれた機能を有する病状、又は遺伝性又は外傷性萎縮性筋肉外傷を包含する筋肉の疾病又は病状の処理；又は種々の器官の疾病又は病状、例えば生殖腺、膵臓、例えばI及びII型糖尿病、腎臓、例えばネフローゼ、及び心臓、肝臓及び腸の変性状態の処理のためのものである請求項106記載の使用。
【請求項１０８】
術後の神経損傷、外傷性神経損傷、神経線維の損なわれた有髄化、発作に起因する後虚血性損傷、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、痴呆、例えば多発脳梗塞性痴呆、硬化症、糖尿病に関連する神経変性、概日時計又は神経−筋肉伝達に影響を及ぼす障害、精神分裂症、気分障害、例えば躁病性うつ病の処理を含んで成る請求項106記載の使用。
【請求項１０９】
前記化合物及び/又は医薬組成物が、創傷−治療の促進のためのものである請求項106記載の使用。
【請求項１１０】
前記化合物及び/又は医薬組成物が、癌の処理のためのものである請求項106記載の使用。
【請求項１１１】
前記化合物及び/又は医薬組成物が、急性心筋梗塞又は脈管形成の後、心筋細胞の細胞死を妨げるためのものである請求項106記載の使用。
【請求項１１２】
前記化合物及び/又は医薬組成物が、血管再生のためのものである請求項106記載の使用。
【請求項１１３】
前記化合物が、学習能力、及び/又は短期及び/又は長期記憶の刺激のためのものである請求項106記載の使用。
【請求項１１４】
１又は複数の請求項１〜101のいずれか１項記載の化合物を含んで成る医薬組成物。
【請求項１１５】
前記化合物が多量体として配合される請求項114の医薬組成物。
【請求項１１６】
前記化合物が、デンドリマー、例えばリシン主鎖に結合されるか、又はタンパク質キャリヤー、例えばBSAに結合される４個のペプチドとして配合される請求項114の医薬組成物。
【請求項１１７】
経口、経皮、筋肉内、頭蓋内、心室内、鼻腔内又は肺投与のために配合される請求項114〜116のいずれか1項記載の医薬組成物。
【請求項１１８】
有効量の１又は複数の請求項１〜101のいずれか１項記載の化合物、又は請求項114〜117のいずれか１項記載の医薬組成物、及び１又は複数の医薬的に許容できる添加剤又はキャリヤーを含んで成る請求項114〜117のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項１１９】
有効量の１又は複数の請求項１〜101のいずれか１項記載の化合物、又は請求項114〜117のいずれか１項記載の医薬組成物、及び１又は複数の医薬的に許容できる添加剤又はキャリヤーを含んで成る、対象における学習、及び/又は長期及び/又は短期記憶の刺激への使用のための請求項114〜118のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項１２０】
補綴装置と組合しての請求項114〜119のいずれか１項記載の医薬組成物の使用。
【請求項１２１】
前記装置が、補綴神経ガイドである請求項120記載の使用。
【請求項１２２】
１又は複数の請求項１〜101のいずれか１項記載の化合物、又は請求項114〜119のいずれか１項記載の医薬組成物を含んで成る補綴神経ガイド。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
神経細胞付着分子（NCAM）は、生長する神経系におけるニューロン連結の形成において重要な役割を演じると思われる。さらに、考慮すべき証拠は、成人の神経系において、NCAMが学習及び再生に関与することを示唆している。
NCAMは、神経系において３種の主要イソフォームとして発現され、それらのうち、２種、すなわちNCAM−180（NCAM−A）及びNCAM−140（NCAM−B）はトランスメンブランであり、そして第３番目のNCAM−120（NCAM−C）はGPI−アンカーを通して膜に結合される。さらに、可溶性形のNCAMは、切断及び分離により生成され得る。
【０００２】
NCAMは、同種親和性（NCAM−NCAM）機構を通して細胞−細胞付着を仲介する。さらに、NCAMは、他の細胞表面受容体及び細胞外マトリックス成分、例えばヘパランスルフェートプロテオグリカン（Cole and Glaser, 1986）及び細胞付着分子L1及びTAG−１/アキソニン−１（Holley and Yu, 1987）に異種親和性的に結合する（Milevなど., 1996）。 NCAMの細胞外部分は、５種の免疫グロブリン様相同体分子（Ig）及び２種のフィブロネクチンIII 型様分子（NF3）から構成される。同種親和性NCAM−結合を仲介するモジュールはまだ明確には同定されていない。
【０００３】
IgIII モジュール（Roaなど., 1994）間の、又は２種のNCAM分子のすべての５種のIg−モジュール（Ranheimなど., 1996）間の相互作用は、同種NCAM−結合を担当できることが示されている。最近、組換えNCAMモジュールIgI及びIgII間の結合は、プラスモン表面共鳴分析により示され（Kiselyovなど., 1997）、そして核磁気共鳴（NMR）（Thomsenなど., 1996; Jensenなど., 1999）及びX−線結晶学（Kasperなど., 2000）により構造的に特徴づけられ、それらは、同種親和性NCAM結合が２種のNCAM−分子のIgI−モジュールとIgII−モジュールとの間の二重相互作用により仲介されることを示唆する。
【０００４】
同種親和性NCAM結合は、線維芽細胞成長因子受容体（FGF−R）−依存性経路（Doherty and Walsh, 1996）及びRas-MAP−キナーゼ経路（Schmidなど., 1999）の活性化を包含するシグナル伝達カスケード（Kolkovaなど., 2000）を開始することが示されている。NCAMは、いわゆるCAM相同ドメイン（CHD）、NCAMに対する相同性を有するFGF−Rにおける配列、及び細胞付着分子L1及びN−カドヘリンと相互作用することによってFGF−Rを結合することが仮定されている。軸索生長のNCAM仲介誘発は、電圧依存性カルシウムチャネル（VDCC）に依存することが示されている。従って、NCAM−依存性軸索生長はVDDCアンタゴニストにより阻害され得（Dohertyなど., 1991）、そして高濃度でのNCAM抗体は分光蛍光計により細胞内カルシウムの上昇を誘発することが示されている（Schuchなど., 1989）。
本発明は、NCAM機能、例えば細胞凝集、軸索生長、及び細胞内カルシウムの調節を変調できる化合物に関する。
【発明の開示】
【０００５】
従って、本発明は、NCAMを発現する細胞の増殖を変調でき、分化を誘発して、そして再生、ニューロン形成性及び生存性を促進する化合物に関する。
１つの観点においては、本発明は、下記式：
L1−A−L2−B−L3−C−L4
［式中、A, B又はCはいずれかのアミノ酸残基であり、但し少なくともB又はCは酸性アミノ酸残基であり、そして少なくともA, B又はCは疎水性アミノ酸残基又はYであり、又は
A, B又はCはいずれかのアミノ酸残基であり、但し少なくともB又はCは塩基性アミノ酸残基であり、そして少なくともA, B又はCは疎水性アミノ酸残基又はYであり、そして
L1, L2, L3及びL4は、化学結合、又はｎ個のアミノ酸（ここでｎは０〜５の整数である）を有するアミノ酸配列から個々に選択される］
で表される配列を有するペプチドを含んで成る、神経細胞付着分子（NCAM）シグナル伝達を刺激し、そして/又は細胞付着を妨げることができるNCAM結合化合物に関する。
本明細書においては、アミノ酸残基について標準の１文字コード、及びアミノ酸についての標準の３文字コードが適用される。
【０００６】
もう１つの態様においては、本発明は、下記式：
A−P2−P3−P4−P5−P6−P7
［式中、Aは、アミノ酸残基Aであり；
P2は、アミノ酸残基D, E, P, I, Y,V, G, F, Q, N, W, A及び Tから成る群から選択され；
P3は、アミノ酸残基D, E, I, W, V, N, T, G,  親水性アミノ酸及びYから成る群から選択され；
P4は、アミノ酸残基D, E, W, F, T, L, A, G, P, S, Y 及び Tから成る群から選択され；
P5は、アミノ酸残基D, E, W, A, V, G, E, N, I 及び Fから成る群から選択され；
P6は、アミノ酸残基D, E, F, S, W, Q, Y 及び Iから成る群から選択され；
P7は、アミノ酸残基D, E, N, T, S, W, Q, I, V, P, L 及び Fから成る群から選択される］
で表される少なくとも７個のアミノ酸残基を含んで成る化合物を開示する。
【０００７】
もう１つの態様においては、本発明は、下記式：
A−P2−P3−P4−P5−P6−P7−P8−P9
［式中、Aは、アミノ酸残基Aであり；
P2は、アミノ酸残基K, D, A, L, P, G, 及び Fから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合であり；
P3は、アミノ酸残基K, W, R, Y, L, N, H, V, I 及び Sから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合であり；
P4は、アミノ酸残基K, M, Y, T, F, I, N, S, H 及び Pから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合であり；
P5は、アミノ酸残基W, E, K, N, F, S, Y, V, D, Q, 及び Aから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合であり；
P6は、アミノ酸残基K, A, N, M, F, Q, L, V, Y, 及び Wから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合であり；
P7は、アミノ酸残基K, S, P, W, Y, I, A, L, V, F, 及び Mから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合であり；
P8は、アミノ酸残基K, T, W, P, N, Y, S, V, I, G, A, F, L, 及び Mから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合であり；
P9は、アミノ酸残基W, K, D, S, V, G, A, F, M, Q, 及び Lから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合である］で表される少なくとも７個のアミノ酸残基を含んで成る化合物に関する。
【０００８】
好ましくは、多くとも２つの位置は結合により支配される。
さらに、本発明は、上記に言及されたような化合物の使用、及び１又は複数の前記化合物を含んで成る医薬組成物、及び前記医薬組成物の使用、並びに前記化合物を用いての処理方法に関する。本発明はまた、１又は複数の本発明の化合物を含んで成る補綴神経ガイドにも関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明の化合物は、適切には、細胞分化の促進、及び神経細胞の増殖及びニューロン形成性の調節、並びにニューロン細胞の生存性及び再生の刺激のために使用される。
【００１０】
軸索生長を促進し、そしてニューロン細胞、例えば一定の内因性栄養因子の生存性、再生及び増殖を刺激し、そして調節する可能性を有する物質が、ニューロン再生及び他の形のニューロン形成を促進する化合物についての研究における主要な標的物である。本発明の化合物の可能性を評価するために、NCAMシグナル伝達を刺激し、細胞付着を妨げ、軸索生長、増殖及び再生を刺激する能力、及びニューロン細胞の生存性が研究され得る。NCAM細胞の１又は複数の位置、特にNCAM Ig1〜NCAM Ig5における位置に結合できる本発明の化合物は、軸索を促進し、そしてニューロン増殖をもたらすことが知られており、そして従って、ニューロン連結の再生の良好なプロモーター、及びそれにより、損傷の後の機能的回復の良好なプロモーター、及びそのような効果が必要とされる他の状態におけるニューロン機能のプロモーターであると思われる。
【００１１】
本発明においては、“分化”とは、ニューロンの成熟、及び前記ニューロンの最後の細胞分裂が終わった後に生じる軸索の延長の工程に関連する。本発明の化合物は、細胞分裂を止めることができ、そして成熟及び/又は延長を開始することができる。
本発明においては、化合物は、対照細胞に比較される場合、例３に記載されるような条件下で培養される細胞の軸索生長を２倍化でき、例えば軸索生長を、３倍、例えば４倍、例えば５倍、例えば６倍、改良できる見込みがあると思われる。
【００１２】
さらに、本発明においては、用語“生存性を刺激する/促進する”とは、用語“細胞死を妨げる”又は“神経保護”と類似して使用される。生存性を刺激し/促進することによって、変性疾患を有する個人における神経系の疾病を妨げるか又はさらなる変性を妨げることが可能である。
“生存性”とは、細胞が損傷され、そして本発明の化合物が前記細胞を変性から妨げるために使用されない場合、高い確立の死亡率を有し、そして従って、前記損傷された細胞の生存性を促進するか又は刺激する正常な環境下にある工程を言及する。
【００１３】
“NCAMシグナル伝達を刺激する”とは、細胞の生理学的応答、例えば軸索長の延長を導くメッセンジャー分子のカスケードの生成及び/又は活性化を開始できる分子を意味する。
本発明はさらに、“細胞付着を妨げる”ことができる化合物を提供する。これは、細胞がお互いに結合され、そして本発明の化合物が前記結合を刺激するか又は阻害できる工程を言及する。
用語“変調”とは、変化、例えば刺激又は阻害のいずれかを意味する。
用語“リガンド”とは、本発明の化合物を結合し、そして模倣する化合物として定義される。リガンドはまた、結合部位の一部ではなく、そして妨害が単なる立体的妨害であるNCAMの一部への結合により、天然に存在する相互作用を阻害することができる。
【００１４】
本発明の化合物はまた、ニューロン細胞死の予防に関する。末梢神経細胞は、種々の外傷の後、それらの標的物との機能的連結を再生し、そして再確立する能力を一定の限定された程度有する。しかしながら、機能的回復はめったに完全ではなく、そして末梢神経細胞損傷は相当な問題のまま存続する。中枢神経系においては、再生のための能力は、さらに制限される。従って、末梢及び中枢神経系におけるニューロン細胞死を妨げる能力を有する物質の同定が有意であり、そして非常に商業的価値のものである。
【００１５】
新規化合物：
従って、本発明は、新規化合物、すなわち下記式：
L1−A−L2−B−L3−C−L4
［式中、A, B又はCはいずれかのアミノ酸残基であり、但し少なくともB又はCは酸性アミノ酸残基であり、そして少なくともA, B又はCは疎水性アミノ酸残基又はYであり、又は
A, B又はCはいずれかのアミノ酸残基であり、但し少なくともB又はCは塩基性アミノ酸残基であり、そして少なくともA, B又はCは疎水性アミノ酸残基又はYであり、そして
L1, L2, L3及びL4は、化学結合、又はｎ個のアミノ酸（ここでｎは０〜５の整数である）を有するアミノ酸配列から個々に選択される］
で表される配列を有するペプチドを含んで成る、神経細胞付着分子（NCAM）シグナル伝達を刺激し、そして/又は細胞付着を妨げることができるNCAM結合化合物を含んで成る化合物に関する。
１つの態様においては、B, C又はLの少なくとも１つは疎水性アミノ酸残基を示し、そしてもう１つの態様においては、前記疎水性基は、芳香族アミノ酸残基である。
【００１６】
１つの態様においては、本発明は、本発明は、下記式：
A−P2−P3−P4−P5−P6−P7
［式中、Aは、アミノ酸残基Aであり；
P2は、アミノ酸残基D, E, P, I, Y,V, G, F, Q, N, W, A及び Tから成る群から選択され；
P3は、アミノ酸残基D, E, I, W, V, N, T, G,  親水性アミノ酸及びYから成る群から選択され；
P4は、アミノ酸残基D, E, W, F, T, L, A, G, P, S, Y 及び Tから成る群から選択され；
P5は、アミノ酸残基D, E, W, A, V, G, E, N, I 及び Fから成る群から選択され；
P6は、アミノ酸残基D, E, F, S, W, Q, Y 及び Iから成る群から選択され；
P7は、アミノ酸残基D, E, N, T, S, W, Q, I, V, P, L 及び Fから成る群から選択される］
で表される少なくとも７個のアミノ酸残基を含んで成る化合物に関する。
【００１７】
１つの好ましい態様においては、P2は、D, E, P, I, Y, V, G, Q, F, W 及び Tから成る群、又はD, E, P, I, Y, V, N, G, F, W 及び Tから成る群から、又はD, E, P, I, G, N, Q, W, A, V 及び Fから成る群、又はD, E, P, I, Y, V, N, F, Q, W 及び Tから成る群、又はD, E, P, I, Y, V, N, F, G, Q 及び Wから成る群から選択される。
さらにより好ましい態様は、P2がD, E, P, I, G, N, Q, A 及び Vから成る群から選択される場合である。
好ましい態様においては、P3は、D, E, l, W, V及びNから成る群、又はD, E, I, W, V 及び Tから成る群から選択される。
【００１８】
もう１つの態様においては、P3は、D, E, W 又は Nから成る群、又はD, E, V 又は Iから成る群から選択される。
好ましい態様においては、P4は、D, E, W, F, A, G, P, Y 及び Tから成る群、又はD, E, W, F, P, T, Y, S 及び Lから成る群から、又はD, E, W, F, G, T, Y, S 及び Lから成る群、又はD, E, W, L, A, G, P, Y 及び Tから成る群、又はD, E, W, F, L, A, G, P 及び Yから成る群から選択される。
もう１つの態様においては、P4は、アミノ酸残基D, E, W, F 及び Pから成る群から選択される。もう１つの態様においては、P4は、アミノ酸残基D, E 及び Wから成る群、又はアミノ酸残基D, E 及び Tから成る群から選択される。
【００１９】
１つの態様においては、PＶは、アミノ酸残基E, W, N, I, F, A, V 及び Gから成る群、又はアミノ酸残基D, E, W, I, A, V, N, 及び Gから成る群から選択される。
さらなる態様においては、P5は、アミノ酸残基D, E, W, V, I 及び Fから成る群から選択される。
１つの態様においては、P6は、アミノ酸残基D, E, W, Y, F, I, 及び Sから成る群、又はアミノ酸残基D, E, W, F, Y, I, 及び Qから成る群から選択される。
さらなる態様においては、P6は、アミノ酸残基D, E, F 及び Yから成る群から選択される。
【００２０】
さらなる態様においては、P6は、アミノ酸残基D, E, Q 及び Wから成る群から選択される。
本発明の１つの好ましい態様においては、P7は、アミノ酸残基D, E, W, P, V, T, I, F, S, N, 及び Qから成る群、又はアミノ酸残基D, E, T, S, W, I, V, P, L 及び Fから成る群から、又はアミノ酸残基D, E, T, Q, W, I, V, P, L 及び Fから成る群、又はアミノ酸残基D, E 及びS, W, Q, I, V, P 及び Fの少なくとも1つから成る群から選択される。
【００２１】
本発明の好ましい態様においては、
P2は、アミノ酸残基D, E, P, I, G, N, Q, A 及び Vから成る群から選択され、
P3は、アミノ酸残基D, E, I, W, V, N 及び Tから成る群から選択され、
P4は、アミノ酸残基D, E, T 及び Wから成る群から選択され、
P5は、アミノ酸残基D, E, W, V, I 及び Fから成る群から選択され、
P6は、アミノ酸残基D, E, Q 及び Wから成る群から選択され、そして
P7は、アミノ酸残基S, W, Q, I, V, P 及び Fから成る群から選択される。
【００２２】
本発明のもう１つの観点は、下記式：
A−P2−P3−P4−P5−P6−P7−P8−P9
［式中、Aは、アミノ酸残基Aであり；
P2は、アミノ酸残基K, D, A, L, P, G, 及び Fから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合であり；
P3は、アミノ酸残基K, W, R, Y, L, N, H, S, I, 及び Vから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合であり；
P4は、アミノ酸残基K, M, Y, T, F, I, N, S, P, 及び Hから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合であり；
P5は、アミノ酸残基W, E, K, N, F, S, Y, V, D, Q,及びAから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合であり；
P6は、アミノ酸残基K, A, N, M, F, Q, L, V, Y, 及び Wから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合であり；
P7は、アミノ酸残基K, S, P, W, Y, 1, A, L, V, F, 及び Mから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合であり；
P8は、アミノ酸残基K, T, W, P, N, Y, S, V, I, G, A, F, L, 及び Mから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合であり；
P9は、アミノ酸残基W, K, D, S, V, G, A, F, M, Q, 及び Lから成る群から選択された１つのアミノ酸、又は結合である］
で表されるペプチドを含んで成る化合物に関する。
【００２３】
多くとも２つの位置が結合であることが好ましく、ここで結合は化学的連鎖又は化学的結合を意味する。好ましくは、P8及び/又はP9は結合である。
１つの態様においては、位置P2−P9の個々は、アミノ酸残基T, N及びYからなる群からそれぞれ選択される。
好ましい態様おいては、P2は、アミノ酸残基K, L, P, A, F, D, 及び Gから成る群、又はアミノ酸残基P, L, K, 及び Aから成る群から選択される。
もう１つの態様においては、P2は、アミノ酸残基D 及び K（二次荷電されたアミノ酸）から成る群から選択される。
【００２４】
さらにもう１つの態様においては、P3は、アミノ酸残基K, H, V, L, 及び Iから成る群、又はアミノ酸残基K, W, R, Y, L, H 及び Vから成る群、又はアミノ酸残基W, L 又はYから成る群から選択される。
さらなる態様においては、P3は、アミノ酸残基K, H及び Yから成る群から選択される。
本発明はさらに、P4が、アミノ酸残基K, T, 1, M, Y, N, P, 及び Fから成る群、又はアミノ酸残基K, M, Y, T, F, I, S 及び Hから成る群、又はアミノ酸残基K, M, Y, T, F, I, N 及び Hから成る群、又はアミノ酸残基K, T, I, M, Y, N, S, 及び Hから成る群から成る群から選択される化合物にも関する。
【００２５】
さらに、本発明はさらに、P4が、アミノ酸残基K, T 及びIから成る群、又はアミノ酸残基M, F 及び Iから成る群から選択される化合物にも関する。
もう１つの態様においては、P5は、アミノ酸残基K, A, F, W, Q, V, D, E, 及び Sから成る群、又はアミノ酸残基W, E, K, N, F, S, Y, V, D 及び Aから成る群、又はアミノ酸残基W, K, N, F, S, Y, V, D, Q 及び Aから成る群、又はアミノ酸残基W, E, K, N, F, S, Y, V, Q 及び Aから成る群、又はアミノ酸残基K, A, F, W, Q, V, D, S, 及びNから成る群から選択される。
さらに、本発明の１つの態様においては、P5は、アミノ酸残基W, F, V 又は Yから成る群から選択される。
【００２６】
さらに、もう１つの態様においては、P5は、アミノ酸残基K, A, F, W, V, S, Y, 及び Dから成る群から選択される。
もう１つの態様においては、P6は、アミノ酸残基K, A, M, F, Q, L, V, Y 及び Wから成る群、又はアミノ酸残基K, A, N, M, F, L, V, Y 及び Wから成る群から選択される。
さらなる態様においては、P6は、アミノ酸残基A, M, F, L, V 及び Wから成る群から選択される。
P6の好ましい態様は、アミノ酸残基K, A, or N 及び Qから成る群、又はアミノ酸残基K, A, N, 及び Mから成る群から選択される。
【００２７】
１つの態様においては、P7は、アミノ酸残基K, P, L, V, 1, W, S, A, F,及び Yから成る群、又はアミノ酸残基K, P, W, Y, 1, A, L, V, F 及び Mから成る群、又はアミノ酸残基P, L, V, F, W, S, F, A, 及び M, 又は Yから成る群、又はアミノ酸残基P, W, I, A, L, V, F 及び M, 又は Yから成る群から成る群から選択される。
１つの態様においては、P8は、アミノ酸残基T, W, P, N, Y, S, V, I, G, A, F, L 及び Mから成る群、又はアミノ酸残基W, P, V, I, A, F, L 及び Mから成る群から選択される。
もう１つの態様においては、P8は、アミノ酸残基W, P, V, I, A, F 及び L 又は Yから成る群、又はアミノ酸残基T, N 及び Yから成る群から選択される。
【００２８】
１つの態様においては、P8は、Yである。
本発明の１つの態様においては、P9は、アミノ酸残基W, K, D, S, V, G, A, F, M, Q 及び Lから成る群、又はアミノ酸残基W, V, A, F, M 及び Lから成る群から選択される。
さらなる態様においては、P9は、アミノ酸残基N, Y 及び Sから成る群、又はアミノ酸残基K, W, D, 及び Sから成る群から選択される。
位置P2−P9の少なくとも１つは、疎水性アミノ酸残基により支配されることが好ましい。さらに、位置P2−P9の少なくとも１つは親水性アミノ酸残基により支配されることが好ましい。また、位置P2−P9の少なくとも１つは酸性又は塩基性アミノ酸残基により支配されることが好ましい。
【００２９】
好ましい態様においては、化合物は、１又は複数の次のアミノ酸配列を含んで成るペプチドを含んで成る：
配列番号1 、又は配列番号2 、又は配列番号3 、又は配列番号4 、又は配列番号5 、又は配列番号6 、又は配列番号7 、又は配列番号8 、又は配列番号9 、又は配列番号10 、又は配列番号11 、又は配列番号12 、又は配列番号13 、又は配列番号14 、又は配列番号15 、又は配列番号16 、又は配列番号17 、又は配列番号18 、又は配列番号19 、又は配列番号20 、又は配列番号21 、又は配列番号22、又は配列番号23 、又は配列番号24 、又は配列番号25 、又は配列番号26 、又は配列番号27 、又は配列番号28 、又は配列番号29 、又は配列番号30 、又は配列番号31 、又は配列番号32 、又は配列番号33 、又は配列番号34 、又は配列番号35 、又は配列番号36 、又は配列番号37 、又は配列番号38 、又は配列番号39 、又は配列番号40 、又は配列番号41 、又は配列番号42、
【００３０】
又は配列番号43、又は配列番号44 、又は配列番号45 、又は配列番号46、又は配列番号47 、又は配列番号48 、又は配列番号49、又は配列番号50 、又は配列番号51 、又は配列番号52 、又は配列番号53 、又は配列番号54 、又は配列番号55 、又は配列番号56 、又は配列番号57、又は配列番号58、又は配列番号59 、又は配列番号60 、又は配列番号61 、又は配列番号62 、又は配列番号63 、又は配列番号64 、又は配列番号65 、又は配列番号66 、又は配列番号67 、又は配列番号68 、又は配列番号69 、又は配列番号70、又は配列番号71 、又は配列番号72 、又は配列番号73 、又は配列番号74 、又は配列番号75 、又は配列番号76 、又は配列番号77 、又は配列番号78 、又は配列番号79 、又は配列番号80 、又は配列番号81 、又は配列番号82 、又は配列番号83；
又はより好ましくは、配列番号31 、又は配列番号32 、又は配列番号33 、又は配列番号34 、又は配列番号35 、又は配列番号36 、又は配列番号37 、又は配列番号38 、又は配列番号39 、又は配列番号40 、又は配列番号41 、又は配列番号42、又は配列番号43、又は配列番号44 、又は配列番号45 、又は配列番号46、又は配列番号47 、又は配列番号48 、又は配列番号49、又は配列番号50 、又は配列番号51 、又は配列番号52 、又は配列番号53 、又は配列番号54 、又は配列番号55 、又は配列番号56 、又は配列番号57、又は配列番号58、又は配列番号59 、又は配列番号60 、又は配列番号61 、又は配列番号62 、又は配列番号63 、又は配列番号64 、又は配列番号65 、又は配列番号66 、又は配列番号67 、又は配列番号68 、又は配列番号69 、又は配列番号70、又は配列番号71 、又は配列番号72 、又は配列番号73；
例えば配列番号31 、又は配列番号32 、又は配列番号33 、又は配列番号34 、又は配列番号35 、又は配列番号36 、又は配列番号37 、又は配列番号38 、又は配列番号39 、又は配列番号40 、又は配列番号41 、又は配列番号42、又は配列番号43、又は配列番号44 、又は配列番号45 、又は配列番号46、又は配列番号47 、又は配列番号48 、又は配列番号49、又は配列番号50 、又は配列番号51 、又は配列番号52 、又は配列番号53 、又は配列番号54 、又は配列番号55 、又は配列番号56 、又は配列番号57、又は配列番号58。
【００３１】
さらなる態様においては、他の化学的実在物、例えば糖、コレステロール及び脂肪酸を含むことができる。好ましくは、前記化学的実在物は、化合物のペプチドのN−末端又はC−末端に結合される。
化合物は、同種親和性又は異種親和性結合部位のいずれかでNCAM分子に結合できることが、本発明の観点である。
【００３２】
理論的には知られていないが、本発明者は、NCAM Ig1及び/又はNCAM Ig2及び/又はNCAN  Ig3及び/又はNCAM Ig4及び/又はNCAM Ig5ドメインに対する活性リガンドは、NCAM Ig1及び/又はNCAM Ig2及び/又はNCAN  Ig3及び/又はNCAM Ig4及び/又はNCAM Ig5ドメインに結合し、そして開始されるシグナル伝達カスケードをもたらすドメインのコンホメーション変化を誘発するリガンドであり、ここで前記シグナル伝達は、細胞における生理学的変化、例えば細胞の増殖及び/又は軸索生長への影響をもたらす。従って、本発明の化合物は、下流のシグナル伝達をもたらす、NCAM Ig1及び/又はNCAM Ig2及び/又はNCAN  Ig3及び/又はNCAM Ig4及び/又はNCAM Ig5ドメインのコンホメーション変化を誘発できる上記に記載される化合物中のいずれかの化合物であり得る。
【００３３】
従って、１つの態様においては、本発明の化合物は、NCAM Ig1ドメインに結合でき、より特定には、Ig1ドメインにより構成されるIg1−Ig2ドメインとの同種親和性結合部位に結合できる。さらに、本発明の化合物は、NCAM Ig1ドメイン上のNCAM Ig2結合部位に結合できる。さらに、本発明の化合物は、NCAM Ig1ドメイン上のNCAM Ig2結合部位に結合できるペプチドであり得る。本発明の１つの観点においては、化合物は、NCAM Ig2結合部位とは異なる、NCAM Ig1ドメイン上の結合部位に結合できる。
もう1つの態様においては、本発明の化合物は、NCAM Ig2ドメインに結合でき、より特にには、Ig2ドメインにより構成される、Ig1−Ig2ドメインの同種親和性結合部位に結合できる。
【００３４】
本発明によれば、本発明の化合物は、少なくとも２個の塩基性アミノ酸残基を含んで成る結合モチーフを通してNCAM Ig1ドメインに結合するペプチドであり得る。10個のアミノ酸残基の配列、好ましくは３個のアミノ酸残基の配列以内の少なくとも２個の塩基性アミノ酸残基を含んで成るペプチドは、本発明の範囲内である。
NCAM Ig3ドメインに結合できる化合物を提供することにはまた、本発明の範囲内である。１つのそのような態様においては、化合物は、Ig3ドメインの同種親和性結合部位に結合できる。
本発明のもう１つの態様においては、化合物は、NCAM Ig4ドメインに結合でき、例えばIg4ドメインの同種親和性又は異性親和性結合部位、例えばIg2ドメインを結合できる同種親和性結合部位、又はL1細胞付着分子に結合する異種親和性結合部位に結合できる。
【００３５】
さらなる態様においては、本発明の化合物は、NCAM Ig5ドメインに結合でき、例えばIg5ドメインの同種親和性又は異性親和性結合部位、例えばIg1ドメインを結合できる同種親和性結合部位、又はいずれかの異種親和性パートナー、例えばIg5ドメインに結合されるポりシアル酸のための受容体を結合できる異種親和性結合部位に結合できる。
化合物が同種親和性又は異種親和性結合部位を通してNCAM FN3, 1ドメインに結合できることは、本発明の範囲内である。従って、１つの態様においては、化合物は、NCAM FN3, 1ドメインの異種親和性結合部位に結合できる。本発明のさらなる観点においては、化合物はNCAM FN3, 2ドメインに結合でき、例えば化合物はNCAM FN3, 2ドメインの異種親和性結合部位に結合できる。さらなる態様においては、結合部位の１つは、異種親和性結合部位、例えばATPのための受容体である。
【００３６】
本明細書においては、天然のアミノ酸についての３文字コード又は１文字コードが使用される。L又はD形が特定されていない場合、問題のアミノ酸は天然のL形（Pure & Appl. Chem. Vol. (565)pp. 595-624 (1984)）、又はD形を有し、その結果、形成されるペプチドはL形、又はD形のアミノ酸、又は混合されたL形及びD形の配列から構成され得ることが理解されるべきである。
何も明記されていない場合、本発明のポリペプチドのC−末端アミノ酸は遊離カルボン酸として存在し、これはまた“−OH”としても明記され得ることが理解されるべきである。しかしながら、本発明の化合物のC−末端アミノ酸は、“−NH2”として示されるアミド化された誘導体であり得る。他に言及されない場合、ポリペプチドのN−末端アミノ酸は、遊離アミノ基（これはまた、“H−”としても明記される）を含んで成る。
【００３７】
他に明記されない場合、アミノ酸は、天然に存在するか又は否かにかかわらず、いずれかのアミノ酸、例えばαアミノ酸、βアミノ酸、及び/又はγアミノ酸から選択され得る。従って、前記基は次のものを含んで成るが、但しそれらだけには限定されない：Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Trp, Met, Gly, Ser, Thr, Cys, Tyr, Asn, Gln, Asp, Glu, Lys, Arg, His Aib, Nal, Sar, Orn, リシン類似対, DAP, DAPA 及び 4Hyp。
また、本発明によれば、化合物/ペプチドの修飾、例えばアミノ酸のグリコシル化及び/又はアセチル化が行われ得る。
【００３８】
本発明の化合物は、種々の長さを有することができ、従って、化合物は、３〜100個のアミノ酸残基、例えば３〜50個のアミノ酸残基、例えば３〜30個のアミノ酸残基、例えば３〜20個のアミノ酸残基の長さを有する。
もう１つの態様においては、本発明の化合物は、4〜100個のアミノ酸残基、例えば4〜50個のアミノ酸残基、例えば4〜30個のアミノ酸残基、例えば4〜20個のアミノ酸残基の長さを有する。
さらなる態様においては、本発明の化合物は、5〜100個のアミノ酸残基、例えば5〜50個のアミノ酸残基、例えば5〜30個のアミノ酸残基、例えば5〜20個のアミノ酸残基の長さを有する。
【００３９】
さらなる態様においては、本発明の化合物は、6〜100個のアミノ酸残基、例えば6〜50個のアミノ酸残基、例えば6〜30個のアミノ酸残基、例えば6〜20個のアミノ酸残基の長さを有する。
本発明はまた、7〜100個のアミノ酸残基、例えば7〜50個のアミノ酸残基、例えば7〜30個のアミノ酸残基、例えば7〜20個のアミノ酸残基の長さを有する化合物を開示する。
本発明の化合物はさらに、8〜100個のアミノ酸残基、例えば8〜50個のアミノ酸残基、例えば8〜30個のアミノ酸残基、例えば8〜20個のアミノ酸残基の長さを有する。
【００４０】
9〜100個のアミノ酸残基、例えば9〜50個のアミノ酸残基、例えば9〜30個のアミノ酸残基、例えば9〜20個のアミノ酸残基の長さを有する本発明の化合物はまた、本発明の範囲内である。
さらなる態様においては、本発明の化合物は、10〜100個のアミノ酸残基、例えば10〜50個のアミノ酸残基、例えば10〜30個のアミノ酸残基、例えば10〜20個のアミノ酸残基の長さを有する。
【００４１】
本発明に使用される化合物は好ましくは、モノマー（個々のモノマーは上記化合物について定義される通りである）のオリゴマー（マルチマー）である。特に、マルチマーペプチド、例えばデンドリマーは、複数の柔軟ペプチドモノマーの存在のために、コンホメーション決定基又はクラスターを形成することができる。１つの態様においては、化合物はダイマーである。より好ましくは態様においては、化合物は、デンドリマー、例えばリシン主鎖に結合されるか、又はポリマーキャリヤー、例えばタンパク質キャリヤー、例えばBSAに結合される４個のペプチドである。重合、例えば反復性配列、又は種々のキャリヤー、例えばリシン主鎖、例えば４個のペプチド、８個のペプチド、16個のペプチド又は32個のペプチドを担持するリシンデンドリマーへの結合体は、当業界において良く知られている。他のキャリヤーは、親油性デンドリマー、又は親油性誘導体により形成されるミセル様キャリヤー、スターバースト（星状の）炭素鎖ポリマー接合体であり得る。
【００４２】
本発明の化合物は好ましくは、NCAM受容体シグナル伝達を刺激し、そして/又はNCAMを提供する細胞、及び/又はNCAMリガンド/カウンター−受容体提供細胞の細胞付着をそれぞれ妨げることができるモノマーを含んで成る。
個々のモノマーは相同であり、すなわちお互い同一であり得るか、又は個々のモノマーは異種であり、すなわちお互い異なることができる。後者のタイプのモノマーは、少なくとも２種の異なったモノマーを含んで成る。一般的に、ダイマー及びマルチマーは、複数の同一のモノマー、又はお互い異なる複数のモノマーを含んで成る。
【００４３】
本発明の化合物は好ましくは、10-2M〜10-10M, 10-3M〜10-5M、例えば好ましくは10-4〜10-5Mの範囲の、NCAMに対する結合親和性（Kd値/平衡定数）を有する。本発明によれば、結合親和性は、次のアッセイの１つにより決定される：表面プラスモン共鳴分析又は核磁気共鳴分光計。
【００４４】
種々の適切な化合物が、上記に論じられてきた。NCAM結合分子の機能を試験するために、本発明者は、種々のリガンドの定量的評価を可能にする単純な細胞培養システム（凝集細胞培養）を確立した。海馬細胞がラット胚から提供される。前記細胞が所定の培地において増殖され、そして解離された細胞がマイクロタイタープレートに接種される。24時間後、凝集体の量が計数される。試験されるべき化合物が、マイクロ−ウェルへの細胞の接種の直前、細胞懸濁液に添加される。
【００４５】
NCAM結合化合物が細胞の凝集の間、存在する場合、より小さいが、しかしより多くの細胞凝集体が、細胞の接種の24時間後、定量化される場合に見出される。リガンドの阻害効果は、NCAMの付着性質が阻止されるにつれて、多くの小さな凝集体からの大きな凝集体の形成の遮断をもたらす。従って、小さいが、しかしより多くの細胞凝集体が、活性リガンドの存在下で見出される。そのような効果は、細胞の凝集の間、本発明の種々の化合物の存在のためである。このシステムは、処理された細胞の分離の試験を可能にする。
【００４６】
本発明はまた、上記で定義されるような１又は複数の化合物を含んで成る医薬組成物にも関する。前記化合物は好ましくは、上記に論じられるようなダイマー又はマルチマーとして配合される。本発明においては、用語、医薬組成物は、用語、薬剤と類似して使用される。
【００４７】
さらに、本発明の範囲は、インビトロ又はインビボで細胞の死を妨げることができる医薬組成物に関し、ここで前記組成物は、神経細胞の細胞増殖及び増殖の変調、及びニューロン形成性、及び本明細書において論じられるようないくつかの組織及び器官におけるNCAM提供細胞及び/又はNCAMリガンド提供細胞の生存性及び再生の刺激を促進するために、有効量の１又は複数の上記に記載される化合物、又は下記に記載されるような組成物で、インビトロ又はインビボで対象に投与される。本発明の薬剤は、有効量の１又は複数の上記に定義される化合物、又は上記に定義されるような組成物を、医薬的に許容できる添加剤と組合して含んで成る。そのような薬剤は、経口、経皮、筋肉内、静脈内、頭蓋内、鞘内、大脳心室内、鼻腔内又は肺投与のために、適切に配合され得る。
【００４８】
さらに、本発明は、中枢及び末梢神経系、筋肉又は種々の器官の疾病及び病状の処理のための薬剤に関し、ここで前記薬剤は、有効量の１又は複数の上記に定義されるような化合物又は上記に定義されるような組成物を、医薬的に許容できる添加剤又はキャリヤーと組合して含んで成る。そのような薬剤は、経口、経皮、筋肉内、静脈内、頭蓋内、鞘内、大脳心室内、鼻腔内又は肺投与のために、適切に配合され得る。
【００４９】
ほとんどの徴候に関しては、局在化された又は実質的に局在化された適用が好ましい。化合物は特に、補綴装置、例えば補綴神経ガイドと組合して使用される。従って、さらなる観点においては、本発明は、１又は複数の上記に定義される化合物又は組成物を含んで成る、補綴神経ガイドに関する。神経ガイドは当業界において知られている。
神経ガイドへの使用に関しては、投与は連続的であり得るか、又は活性化合物の調節された開放に基づいて少量ずつであり得る。さらに、前駆体が開放速度及び/又は開放の部位を調節するために使用され得る。他の種類の移植片及び経口投与は同様に、前駆体の調節された開放性及び/又は使用に基づかれる。
【００５０】
本発明の化合物に基づいての薬剤及び組成物の配合開発の手段は、一般的に、いずれか他のタンパク質基材の薬物製品についての配合手段に対応する。可能性ある問題及びそれらの問題を克服するために必要とされる指図が、いくつかのテキストブック、例えば"Therapeutic Peptides and Protein Formulation. Processing and Delivery Systems", Ed. A. K. Banga, Technomic Publishing AG, Basel, 1995において扱われている。
【００５１】
注射可能物質は通常、液体溶液又は懸濁液、注射の前、液体中、溶液又は懸濁液のために適切な固体形として調製される。製剤はまた、乳化され得る。活性成分はしばしば、医薬的に許容でき、そして活性成分と適合できる賦形剤と組み合わされる。適切な賦形剤は、例えば水、塩溶液、デキストロース、グリセロール、エタノール又は同様のもの、及びそれらの組合せである。さらに、所望には、製剤は、製剤の有効性又は輸送を増強する少量の助剤物質、例えば湿潤剤又は乳化剤、pH緩衝剤を含むことができる。
本発明の化合物の配合物は、当業者に知られている技法により調製され得る。前記配合物は、医薬的に許容できるキャリヤー及び賦形剤、例えば微小球、リポソーム、マイクロカプセル、超微粉子又は同様のものを含むことができる。
【００５２】
製剤は好ましくは、任意には、活性成分がその効果を発揮する部位で、注射により投与され得る。他の型の投与のために適切である追加の配合物は、坐剤、鼻、肺、及び多くの場合、経口配合物を包含する。坐剤に関しては、従来の結合剤及びキャリヤーは、ポリアルキレングリコール又はトリグリセリドを包含する。そのような坐剤は、0.5％〜10％、好ましくは１〜2％の範囲で活性成分を含む混合物から配合され得る。経口配合物は、例えば医薬品種のマンニトール、ラクトース、スターチ、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、セルロース、炭酸マグネシウム及び同様のものとして、そのような通常使用される賦形剤を包含する。それらの組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、ピル、カプセル、持効性配合物又は粉末の形を取り、そして一般的には、10〜95％、好ましくは25〜70％の活性成物を含む。
【００５３】
鼻腔内及び肺投与のために適切な他の配合物は、吸入器及びエアロゾルである。
活性化合物は、中性形又は塩形として配合され得る。医薬的に許容できる塩は、無機酸、例えば塩酸又はリン酸、又は有機酸、例えば酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸及び同様のものにより形成される酸付加塩（ペプチド化合物の遊離アミノ基により形成される）を包含する。遊離カルボニル基により形成される塩はまた、無機塩基、例えば水酸化ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム又は鉄、及び有機塩基、例えばイソプロピルアミン、トリメチルアミン、２−エチルアミンエタノール、ヒスチジン、プロカイン及び同様のものに由来することができる。
【００５４】
製剤は、用量配合物と適合できる態様で、及び治療的有効な量で投与される。投与されるべき量は、処理されるべき対象、例えば対象の体重及び年齢、処理される疾病及び疾病の段階に依存する。適切な用量範囲は、投与当たり数百μgの活性成分の程度であり、そして好ましくは、約0.1μg〜100mg、例えば約１μg〜100mg、及び特に約10μg〜50mgの範囲である。投与は１回で行われ得るか、又は続く投与を伴うことができる。用量はまた、投与の経路に依存し、そして処理される対象の年齢及び体重により変化するであろう。好ましい用量は、体重70kg当たり0.5mg〜50mgである。
【００５５】
本発明のいくつかの化合物は十分に活性的であるが、しかし他に関しては、効果は、製剤がさらに、医薬的に許容できる添加剤及び/又はキャリヤーを含んで成る場合、増強されるであろう。そのような添加剤及びキャリヤーは、当業界において知られている。いくつかの場合、活性物質のその標的物への供給を促進する化合物を含むことが好都合であろう。
もう１つの態様においては、相乗効果を得るための他の物質と共に本発明の化合物を投与することが好都合である。そのような他の物質の例は、分化を誘発できる生長因子、又はホルモン、又は細胞の移植片、例えば幹細胞の移植片、又は遺伝子療法又は免疫療法であり得る。
【００５６】
それらの言及された化合物及び組成物は、末梢及び/又は中枢神経系及び/又は筋肉、及びNCAM又はNCAMリガンドを発現する他の組織に影響を及ぼす病状、及びNCAM機能又はNCAMリガンドの機能の刺激が有益である他の病状を処理するために使用され得る。
本発明の１つの観点においては、本発明の化合物の使用による処理は、種々の要因、例えば外傷及び損傷、急性疾患、慢性疾患及び/又は障害、特に細胞死を通常導く変性疾患、他の外的要因、例えば遊離基の形成を引き起こすことができるか又は他方では、細胞毒性効果を有する、医学的及び/又は手術処理及び/又は診断方法、例えばX−線及び化学療法のために、変性するか又は乾燥の危険性のある細胞の再生の刺激のために有用である。化学療法に関しては、本発明のNCAM結合化合物は、癌の処理のために有用である。
【００５７】
また、本発明の化合物は、インプラントされるか又は移植される細胞の細胞死を妨げるために使用され得る。これは、長期効果を有する化合物を用いる場合、特に有用である。
本発明のもう１つの観点においては、化合物は、インプラントされるか又は移植される遺伝子操作された細胞から合成され、そして分泌され得る。
【００５８】
従って、前記処理は、中枢及び末梢神経系の疾病又は病状、例えば例えば術後の神経損傷、外傷性神経損傷、神経線維の損なわれた有髄化、発作に起因する後虚血性損傷、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、痴呆、例えば多発脳梗塞性痴呆、硬化症、糖尿病に関連する神経変性、概日時計又は神経−筋肉伝達に影響を及ぼす障害、精神分裂症、気分障害、例えば躁病性うつ病の処理；器官移植後の神経−筋肉連結の損なわれた機能を有する病状、又は遺伝性又は外傷性萎縮性筋肉外傷を包含する筋肉の疾病又は病状の処理；又は種々の器官の疾病又は病状、例えば生殖腺、膵臓、例えばI及びII型糖尿病、腎臓、例えばネフローゼ、及び心臓、肝臓及び腸の変性状態の処理のためへの前記化合物の使用を含んで成る。
【００５９】
また、本発明の化合物は、器官移植後の神経−筋肉連結の損なわれた機能を有する病状、又は遺伝性又は外傷性萎縮性筋肉外傷を包含する筋肉の疾病又は病状の処理に関して使用され得；又は種々の器官の疾病又は病状、例えば生殖腺、膵臓、例えばI及びII型糖尿病、腎臓、例えばネフローゼ、及び心臓、肝臓及び腸の変性状態の処理に関しては、本発明の化合物が、細胞死を妨げるために、すなわち生存性を刺激するために使用され得る。
【００６０】
さらに、本発明の化合物及び/又は医薬組成物は、急性心筋梗塞又は脈管形成の後、心筋細胞の細胞死を妨げるために使用され得る。さらに、１つの態様においては、本発明の化合物及び/又は医薬組成物は、心筋細胞の存在性を刺激し、例えば急性心筋梗塞の後の存在性を刺激する。もう１つの観点においては、本発明の化合物及び又は医薬組成物は、例えば外傷の後、血管再生のために使用される。
もう１つの観点においては、本発明の化合物及び/又は組成物は、学習能力、及び/又は短期及び/又は長期記憶の刺激のために使用される。
さらに、本発明の化合物及び/又はそのフラグメントは、正常な、変性又は損傷を受けたNCAM及び/又はNCAMリガンド提供細胞の処理のための薬剤の製造のために使用され得る。
【００６１】
特に、本発明の化合物、及び/又は、医薬組成物は、次の臨床症状の処理に使用され得る：例えば新生物、例えば悪性新生物、良性新生物、本来の位置での腫瘍及び不確実な挙動性の新生物、内分泌腺の疾病、例えば糖尿病、精神病、例えば老齢、及び初老性の器質精神病状態、アルコール精神病、薬物精神病、一過性器質精神病状態、  アルツハイマー性疾病、脳の類脂症、癲癇、進行麻痺黴毒、肝レンズ核変性症、ハンチントン舞踏病、ヤコブ-クロイツフェルト病、多発性硬化症、脳のピック病、梅毒、精神分裂病、感情的な精神病、神経症疾患、 性格疾患、例えば性格神経症、脳器質症候群に関連する非精神異常性人格障害、妄想性人格障害、熱狂性性格、妄想性人格(疾患)、偏執傾向、性偏向及び疾患、精神遅滞、神経系及び感覚器官の疾病、認識的な奇形、中枢神経系の脳膜炎、例えば炎症性疾患、脳炎、脳の変性、例えばアルツハイマー病、ピック病、
【００６２】
老人性脳変性症、交通性水頭、閉塞性水頭、パーキンソン病、例えば他の付加的な錐体疾患及び異常な運動障害、脊髄小脳疾患、小脳性失調症、Marie’s,Sanger-Brown、協調運動障害小脳性ミオクローヌス、一次小脳性変性、例えば脊髄筋萎縮、家族、少年、及び、成人性筋萎縮、運動神経疾患、筋萎縮性側索硬化症、運動神経疾患、進行性球麻痺、偽性延髄麻痺、原発側索硬化、他の前角赤血球症、前角赤血球症、脊髄の不特定の、及び、他の疾病、脊髄空洞症及び延髄空洞、血管性ミエロパシー、急性の脊髄梗塞(塞栓性) (非塞栓性)、動脈の血栓症、脊髄の水腫、亜急性壊死性脊髄症、ほかの場所で分類された疾病における亜急性の組合された変性、脊髄障害、薬物誘発性放線誘発脊髄炎、不随意神経系の疾患、辺縁自律神経の、同情的、副交感神経性、又は、
【００６３】
付随系システムの障害、家族性自律神経失調症「Riley-Day症候群」、特発性末梢性自律神経ニューロパシー、頚動脈洞失神又は症候群、頚部の交感神経ジストロフィー又は麻痺症、他の場所で分類された疾患における辺縁自律性ニューロパシー、アミロイドーシス、末梢神経系の疾患、腕神経そう病巣、頚肋症候群、肋鎖の症候群、前斜角筋症候群、胸郭出口症候群、上腕の神経炎、多発性神経根炎（新生児を包含する）、炎症性及び毒性ニューロパシー、例えば急性感染性多発神経炎、ギラン-バーレ症候群、感染後の多発神経炎、膠原病における多発ニューロパシー、目の多発構造に影響する疾患、化膿性内眼内炎、耳と乳様突起の疾病、慢性リウマチ性心疾患、虚血性心臓病、不整脈、肺のシステムの疾病、新生児、例えば神経系における臓器及び軟組織の異常性、麻酔薬の管理及び分娩出と分娩における他の鎮静剤の併発症、
【００６４】
皮膚、例えば感染における疾病、不十分な循環問題、手術後、挫傷損傷、及び火傷後の損傷、神経及び脊髄の損傷、例えば神経の裂創、連続性の外傷(開口性損傷のあるなしにかかわらず)、外傷性神経腫(開口性損傷のあるなしにかかわらず)、外傷性の一時的な麻痺症(開口性損傷のあるなしにかかわらず)、医学的処理の間の偶然の穿刺又は裂創、視神経及び経路の損傷、視神経損傷、二次頭部自律系、視交叉の損傷、視神経路の損傷、皮質視覚の損傷、不特定の失明、その他の脳神経の損傷、他の及び不特定神経の損傷、医学的及び生物学的物質、遺伝的又は傷性の萎縮性の筋障害、又は種々の器官、例えば生殖腺、膵臓の変性状態、例えばＩ型やII糖尿病、腎臓の変性状態、例えばネフローゼ。
【００６５】
特に、本発明の化合物及び/又は医薬組成物は、中枢及び末梢神経系の疾病又は病状、例えば術後の神経損傷、外傷性神経損傷、神経線維の損なわれた有髄化、発作に起因する後虚血性損傷、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、痴呆、例えば多発脳梗塞性痴呆、硬化症、糖尿病に関連する神経変性、概日時計又は神経−筋肉伝達に影響を及ぼす障害、精神分裂症、気分障害、例えば躁病性うつ病の処理；器官移植後の神経−筋肉連結の損なわれた機能を有する病状、又は遺伝性又は外傷性萎縮性筋肉外傷を包含する筋肉の疾病又は病状の処理；
【００６６】
又は種々の器官の疾病又は病状、例えば生殖腺、膵臓、例えばI及びII型糖尿病、腎臓、例えばネフローゼ、及び心臓、肝臓及び腸の変性状態の処理のために；及び術後の神経損傷、外傷性神経損傷、神経線維の損なわれた有髄化、発作に起因する後虚血性損傷、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、痴呆、例えば多発脳梗塞性痴呆、硬化症、糖尿病に関連する神経変性、概日時計又は神経−筋肉伝達に影響を及ぼす障害、精神分裂症、気分障害、例えば躁病性うつ病の処理のために使用され得る。
【００６７】
創傷治癒のために本発明の化合物及び/又は医薬組成物を使用することはまた、本発明の範囲内である。本発明の化合物は、細胞付着を妨げることができ、そしてそれにより創傷治癒工程を促進する。
本発明はさらに、癌の処理への本発明の化合物及び/又は医薬組成物の使用も開示する。NCAMは、癌の運動性を調節し、そして癌細胞の拡張を阻害する。
本発明のさらなる態様においては、本発明の化合物及び/又は医薬組成物の使用は、学習能力及び/又は短期及び/又は長期記憶の刺激のためである。
【００６８】
多くの場合、配合物を複数回、投与する必要があろう。投与は、複数回の用量、例えば１日、複数回、毎日、１週当たり複数回、又は毎週、連続投与、例えば心室内注入又は投与であり得る。好ましくは、薬剤の投与は、個人が細胞死を導くことができる要因にゆだねられる前又はその直後に開始される。好ましくは、薬剤は、要因開始から８時間以内、例えば要因開始から５時間以内で投与される。多くの化合物は、長期効果を示し、それにより、それらの化合物の投与は長い間隔、例えば１週又は２週ごとに行われ得る。
【００６９】
本発明の１つの態様においては、本発明の化合物の投与は、本発明の化合物が細胞生存性に対して刺激的効果を有するよう、急性外傷、例えば急性発作の直後、又は前記発作の８時間後であり得る。さらに、増殖及び/又は分化に関する場合、本発明の投与は時間依存性でなく、すなわちそれは、いずれの時でも投与され得る。
もう1つの観点においては、本発明は、有効量の１又は複数の本発明の化合物、又は本発明の医薬組成物を、１又は複数の医薬的に許容できる添加剤又はキャリヤーとを混合することを含んで成る、医薬組成物の生成方法、及び有効量の少なくとも１つの前記化合物、又は前記医薬組成物を対象に投与する方法に関する。
【００７０】
上記に言及されたような方法の１つの態様においては、前記化合物は、補綴神経ガイドである補綴装置と組合して使用される。
前記方法のさらなる観点においては、補綴神経ガイドは、それが本発明により定義されるような少なくとも１つの化合物又は医薬組成物を含んで成ることによって特徴付けられる。
本発明のさらなる観点は、NCAMシグナル伝達を刺激でき、そして/又は細胞付着を妨げることができるNCAM（神経細胞付着分子）結合化合物の使用に関する。
本発明の１つの態様においては、化合物及び/又は医薬組成物の使用は、薬剤の製造のためである。そのような使用は、本発明の化合物のいずれかのものであり得る。
１つの態様においては、前記化合物の使用は、正常、変性又は損傷を受けたNCAM提供細胞の処理のための薬剤の製造のためであり得る。
【００７１】
本発明はまた、前記化合物がNCAM提供細胞の分化及び/又はその生存性の刺激を含んで成る処理のための薬剤の製造のためへの使用も開示する。
本発明の１つの観点においては、使用は、中枢及び末梢神経系、又は上記で論じられたような筋肉又は種々の器官の疾病及び病状の処理を含んで成る、薬剤の製造のためである。
さらなる観点においては、本発明は、上記で論じられたような1又は複数の疾病を有する個人に、本明細書に記載されるような化合物、又は前記化合物を含んで成る医薬組成物を投与することによって、前記個人を処理する方法に関する。
【００７２】
実験：
次のものは、本発明の非制限的例示である。
材料：
Fura-2-AM、fura-2ペンタカリウム塩及びCaEGTA/K2EGTA緩衝液は、Molecular Probes (Eugene, OR, USA) から入手された。カルシウムチャネルアンタゴニストω−コノトキシンMVIIA及びニフェジピンは、Alomone Labs (Jerusalem, Israel)から入手された。いわゆるCAM相同ドメインに隣接して位置するニワトリFGF−Rのアミノ酸119−144に対応する合成ペプチドに対して生ぜしめられたウサギFGF−R抗血清（1：100）、及びF38 MAP
キナーゼインヒビターSB203580は、Upstate Biotechnology (Lake Placid, MY, USA)から入手された。MEKインヒビターPD98059は、New England Biolabs (Beverly, MA, USA) からであった。
【００７３】
細胞内カルシウム代謝TMB−８（８−（N, N−ジエチルアミノ）オクチル−３，４，５−トリメトキシベンゾエート塩酸塩）の推定されるインヒビター及びSrcファミリーのチロシンキナーゼインヒビターPP1は、Calbiochem（La Jolla, CA, USA）から入手された。TentaGel樹脂は、Rapp Polymere (Tubingen, Germany)から入手された。リンクアミドリンカー及びFmoc−保護されたアミノ酸は、Novabiochem (Laufelfingen, Switzerland)から入手された。DMEM、EDTA及びB27は、Gibco BRL (Paisley, Scotland)から入手された。細胞培養のためのプラスチック製造は、NONC A/S (Roskilde, Denmark)から入手された。すべての他の試薬は、Sigma（St. Louis, Mo, USA）から入手された。生後10日目のラット脳からのNCAMは、前記のようにして精製された（Rasmussenなど., 1982）(Krogなど., 1992）。
【００７４】
細胞培養物：
NCAM−140又は空のベクターのいずれかにより安定してトランスフェクトされた繊維芽細胞様L929−細胞を、10％ウシ胎児血清（FBS）、ペニシリン（100U/ml）及びストレプトマイシン（100μg/ml）により補充されたダルベッコ変性イーグル培地（DMEM）において、37℃及び5％CO2下で、湿潤された雰囲気下で増殖した。同時培養のための単層の確立のために、L−細胞を、トリプシン（0.5mg/ml）及びEDTA（0.75mM）により取り除き、フィブロネクチンにより被覆されたプラスチックの増殖表面を有する４又は８ウェルLabTeKチャンバースライドにおいて、約55,000細胞/cm2の密度で接種し、そして24時間、増殖した。
【００７５】
妊娠18日目のラット胚から調製された、分離された海馬細胞を、前記のようにして、ウェル当たり15μlの培地を含むマイクロウェルプレートに、50,000細胞で接種した（Maarなど., 1997）(Ronnなど., 1999)。すべての動物は、動物福祉についての国のガイドに従って取り扱われた。細胞を、B27、 20mMのHEPES、 ペニシリン（100U/ml）、ストレプトマイシン（100μg/ml）及び0.4％（w/v）ウシ血清アルブミンにより補充されたNeurobasal培地において増殖した。24時間の培養の後、ウェル当たりの凝集体の数を決定した。軸索生長のために、5,000細胞/ウェルを、Permanoxプラスチックの増殖表面を有する18ウェルLabTek Tissue Culture Chamber Slidesに接種した。24時間後、ニューロンの像を、捕獲し、そしてRonnなど., 2000に記載のようにして、コンピューター助力の顕微鏡により分析した。
【００７６】
同時培養のために、一次海馬ニューロンを、２％（v/v）のFBSにより補充されたNeurobasal培地において繊維芽細部の単層上に接種した。24時間後、培養物を固定し、そしてSkladchikovaなど., 1999に記載のようにして、ニューロンの選択的可視化のために、GAP−43免疫反応性のために染色した。
【００７７】
PC12−E2細胞系は、Dr. Klaus Seedorf, Hagedorn Research Institute, Denmarkからの贈与であった。細胞を、５％（v/v）のFBS及び10％（v/v）のウマ血清（HS）により補充されたDMEMにおいて増殖した。カルシウムイメージングのために、PC12E2細胞を、軽くたたくことによって機械的に取り除き、そしてフィブロネクチン（10μg/mg）により被覆されたプラスチックの増殖表面を有する４又は８ウェルLabTekチャンバーカバー−スライド（NUNC）において、５−30,000細胞/cm2の密度で接種し、そして１〜５日間、増殖した。多くの場合、ニューロン分化は、培地を、１％（v/v）のFBS、１％（v/v）のHS及びNGF（50ng/ml）又はFGF−２（10ng/ml）により補充されたDMEMに変えることによって誘発した。
【００７８】
カルシウムイメージング：
細胞を、KCl（5.4mM）、NaCl（137mM）、NaHCO3（2mM）、MgSO4（0.8mM）、Na2HPO4（0.27mM）、グルコース（5.6mM）、CaCl2（1.25mM）及びKH2PO4（0.44mM）を含んで成るハンクス溶液により洗浄し、そしてジメチルスルホキシド（DMSO）に溶解されたfura-2アセトメチルエステル（Fura-2AM、2μM、Molecular Probes, Eugene, OR, USA）により、暗室において20℃で35分間、充填した。この後、細胞を４度、洗浄し、そして油含浸UV対物レンズ（Zeiss Fluar 40倍、1.3開口数）を備えた逆転Axiovert 100 TV顕微鏡（Zeiss, Gottingen, Germany）の段階上に配置した。
【００７９】
イメージングを、Sensicam 12ビット冷却CCDカメラ（PCO, Keiheim, Germany）及びJ&Mモノクロメーター（J&M, Aalen, Germany）を用いて行った。ソフトウェア  イメージングWorkbench（Axon, Foster City, CA, USA）を、データ獲得及び分析のための使用した。比率−像を、0.1〜1Hzのサンプリング速度で、それぞれ340及び380nmでの励起の後、510nm以上の波長で集められた像からのバックグラウンド控除の後に得た。検量を、既知濃度の遊離カルシウム及びfura-2ペンタカリウム塩（5μM）と共に、CaEGTA/K2EGTA緩衝液を用いて行った。
【００８０】
遊離カルシウムの濃度を、次の式を用いて推定した：[Ca2+]i=Kd・(R-Rmin)/(Rmax-R)・(F380max/F380min)[式中、Rは、それぞれ340及び380nmでの励起で得られる、バックグラウンド控除された蛍光強度の比率であり、Rmaxは飽和カルシウムでの比率であり、Rminはゼロ遊離カルシウムでの比率であり、F380minは380nmで励起する飽和遊離カルシウムでの強度であり、そしてF380maxはゼロ遊離カルシウムでの強度である]。Rmaxは、イノマイシン（5μM）及び高い細胞外カルシウム（10mM）の存在下で、Fura-2AM充電された細胞を用いて、現場決定された。決定された値は次の通りであった：Rmax 9.0；Rmin 0.68；F380max/F380min 7.0。使用されるKdは236nMであった（Grodenなど.,1991）。試験されるペプチドを、均等な分布を確保するために、適用の前、チャンバーに存在する体積の半分に対応する体積で、細胞培養チャンバーに直接的に適用した。
【００８１】
ペプチドの合成：
ペプチドを、TentaGel樹脂上で合成した。すべてのペプチドは、N−末端にアラニンを有した。
【００８２】
NMR分光分析法：
次の２種のサンプルを、NCAM Ig1上でのP10結合部位の特徴化に使用した：(A) 15NラベルされたIg1 0.025mM, (B) 15NラベルされたIg1 0.025mM及び0.2mMのP10d−ペプチドの混合物。両サンプルは、90％H2O：10％D2O, 150mMのNaCl, 5mMのリン酸ナトリウム、0.02％のアジ化ナトリウム、pH7.34緩衝液におて調製された。２種の15N-HSQC NMRスペクトルを、298KでのVarian Unity Inova 800MHz 分光計上で、1200Hzスペクトル幅、t2における3792複合点及びt1における170インクレメントにより記録した（42）。スペクトルの転位及び分析を、それぞれMNMR及びPRONTOコンピュータープログラムを用いて行った（43）。
【００８３】
ペプチド：
配列NBP10（配列番号１＝AKKMWKKTW）及びNBP9（AWKEASWK）（両者とも、トリプトファンを両端に有するリシンを含む）を有するペプチドを、例に使用した。ファージ表示ペプチドライブラリーにより同定されるマルチマー形のペプチドリガンドが、モノマー形よりも受容体活性化のために高い能力を有することが報告されている（Lamなど., 1991）。従って、ペプチドを、モノマーとして、及びモノマー及びマルチマーリガンドの効果を比較するために、リシン主鎖に結合される４種のモノマー、又はウシ血清アルブミン（BSA）に結合される20マーから構成されるデンドリマーとして合成した。
【実施例】
【００８４】
例１：
NBP10−ペプチドは細胞凝集を阻害する：
NCAMの重要な機能は、細胞付着の仲介である。同定されたペプチド配列からNCAMの機能的リガンドを選択するために、細胞凝集を可能にする条件下で増殖された海馬ニューロンの一次培養物における海馬細胞間の細胞凝集を阻害するペプチドの能力を試験した（Maarなど., 1997）。このモデルシステムにおいては、組み換えNCAMモジュール又は抗体認識NCAMは、細胞凝集を効果的に阻害することが示されている（Maarなど., 1997）（Kiselyovなど., 1997）(4349)。
【００８５】
BSA−結合されたマルチマーペプチドとして試験される場合、NBP10−ペプチドは、細胞付着の阻害を示す、小さいが、しかしより多くの凝集体の形成をもたらした（図１A）。NBP10は、モノマー及びデンドリマーの両者において細胞凝集を阻害し、デンドリマー形が最も有能である。細胞凝集に対するNBP10の効果を、低ペプチド濃度で定量化した（図１CD）。高ペプチド濃度は、単一細胞の網状構造の形成、又は多くの薄工程により相互連結される細胞の非常に小さなクラスターの形成を劇的に導く培養物の形態を変えた（図１EF）。それらの条件下で、凝集体の数は定量化され得なかった。
【００８６】
従ってNBP10モノマー（NBP10m）は、60μMの濃度で、小さいが、しかし明白な凝集体の形成を誘発し（図１C, I）、そして200μMの濃度でNBP10mの存在下で増殖される細胞培養物は明白な細胞凝集体を有さない、非常に異なった形態を有した（図１E, J）。同様に、NBP10デンドリマー（NBP10）は、１又は2μMの濃度で、小さいが、しかし明白な凝集体の形成を誘発し（図１D, H）、そして6μMの濃度で、NBP10dの存在下で増殖される細胞培養物は明白な細胞凝集体を有さなかった（図１F）。それらの発見は、NBP10−ペプチドが細胞付着、すなわち良く知られているNCAM機能を妨げることを示した。ペプチドデンドリマーは、ペプチドモノマーの使用される濃度よりも約50倍、低い濃度で、匹敵できる効果を有する能力を有した。
【００８７】
例２：
NBP10は同種親和性NCAM−結合により誘発される軸索生長を変調する：
NCAM−仲介された細胞付着に対するNBP10ペプチドの効果を調べるために、NCAM−140感染の線維芽細胞及び海馬ニューロンの同時培養物における同種親和性NCAM結合により誘発された軸索生長を研究した。それらの条件下で、軸索生長が、ニューロンがNCAM−発現を伴わないで単層の線維芽細胞上で増殖される培養物に比較して、ニューロンが−発現線維芽細胞の単層上で増殖される場合、同種親和性NCAM結合により特異的に刺激されることは、これまで示されている（Williamsなど., 1994）(4180)。
【００８８】
本研究においては、同種親和性NCAM結合により誘発された軸索生長の類似する刺激が観察された。この刺激は、細胞−細胞凝集を阻害することが見い出され濃度（図１）に類似する濃度で、BSA−結合されたNBP10−ペプチドにより用量依存性態様で阻害され（図２）、そしてNBP9−BSA又はBSAは単独で、効果を有さず、このことは、NBP10−BSAが同種親和性NCAM−結合を特異的に妨げ、これにより、基本的軸索生長を妨げないで、NCAM−誘発された軸索生長を妨げる。
【００８９】
ニューロンがNCAM−発現を伴わないで線維芽細胞上で維持される場合、NBP10−BSAによる約25％の軸索生長の小さな刺激が観察された（図２）。それらの条件下で、軸索生長は、同種親和性NCAM−相互作用、例えばインテグリン−結合及びたぶん、異種親和性NCAM−相互作用以外の認識現象に依存する。従って、ニューロンに対するNCAMが同種親和性結合に従事されない場合、NBP10−ペプチドはNCAMに結合でき、そしてそれにより、軸索の生長を刺激するが、但し、線維芽細胞単層により提供される場合、NCAM分子自体ほど効果的ではない。
【００９０】
例３：
NBP10による一次海馬ニューロンの解離された培養物における軸索生長の刺激：
プラスチック基層上で増殖した一次海馬ニューロンの解離された培養物におけるNBP10の効果を試験した。それらの条件下で、デンドリマーNBP10−ペプチド（NBP10d）は、1μMの濃度で軸索生長に対して強い刺激効果を有した（図３AB）。モノマーNBP10ペプチド（NBP10m）はまた、NBP10dよりもより低い能力であるが、軸索生長を刺激した（図３C）。しかしながら、NBP10d及びNBP10mの最大効果は同じレベルで存在し、そして両者とも、それぞれ約1μM（NBP10d）及び100μM（NBP10m）の濃度での最大効果を伴って、ベル形状の用量−応答関係を示した。BSA−結合されたNBP10ペプチド（NBP10BSA）は、22μMの濃度で軸索生長を刺激したが、ところがNBP9BSA及びBSAは単独では、効果を有さなかった（図３D）。
【００９１】
モノマーNBP10−配列における単一置換の効果（図３E）を試験した。アミノ酸残基W9のアラニン置換は軸索生長において統計学的に有意な上昇をもたらし、そしてアミノ酸残基A1のフェニルアラニン置換は前記効果の有意な阻害をもたらした。これは、アミノ酸残基A１及びW9がたぶん、NBP10−ペプチドの観察される軸索形成効果のために重要なものであることを示す。
【００９２】
例４：
NBP10はNCAM−依存性シグナルトランスダクションを誘発する：
NBP10−ペプチドにより誘発された軸索生長における推定されるNCAM−依存性シグナルトランスダクション経路の関与を取り組んだ。NBP10−デンドリマーは１μMの濃度でその最大の効果を有し、そしてモノマーは100μMの濃度で匹敵できる最大の効果を有し（図1C）、このことは、マルチマーデンドリマーペプチドによるNCAM−クラスター化がNBP10−ペプチドの軸索形成効果を高めることができることを示す。
【００９３】
用量−応答関係は、NCAM Ig1モジュール、すなわちC3の最近報告される合成ペプチドリガンドに関する（Ronnなど., 1999）、及び両者ともNCAM−依存性シグナル伝達経路の下流の成分であると思われる、線維芽細胞生長因子−２（FGF−２）及びアラキドン酸（AA）に関する（Doherty and Walsh, 1996）、発現に類似して、ベル形成であった。従って、NCAM−NCAM−結合により誘発された軸索生長が、FGF−受容体（FGF−R）とNCAMとの相互作用、続いて、カルシウムの細胞内濃度の上昇を導くシグナル伝達経路の活性化に依存することが示されている（Williamsなど., 1994）(Doherty and Walsh, 1996)。さらに、Ras-MAP-キナーゼ経路のp59fyn−依存性活性化は、NCAM−誘発された軸索生長に関与している（Schmidなど., 1999）(Kolkovaなど., 2000)。
【００９４】
NBP10−誘発された軸索生長が、NCAM−依存性シグナル伝達を阻害することがこれまでに報告されている多くの化合物の効果を試験することによって類似するシグナルトランスダクション経路の活性化に依存するかどうか調べられた（図３F）。NBP10−ペプチドの軸索生長応答が、同種親和性NCAM−結合により誘発された軸索生長を特異的に阻害することがこれまでに示されている抗体により部分的に阻害されることが観察されており（Williamsなど., 1994）、このことは、NBP10の軸索効果がFGF−R依存性シグナル伝達経路のNCAM−依存性活性化により仲介され得ることを示す。
【００９５】
NBP10−誘発された軸索生長がまた、PP1、すなわちp59fyn及び他のSrcファミリーのチロシンキナーゼのインヒビターにより、PD98059、すなわちMEKのインヒビター、及びSB203580、すなわちP38MAPキナーゼのインヒビターにより部分的に阻害され、このことは、NCAM−依存性軸索生長のために必要であることがこれまで示されているRas−MAPキナーゼシグナル伝達経路の関与を示す（Kolkovaなど., 2000）。本明細書において使用されるインヒビターのいくつかは所望しない副作用を有するが、NBP−10−誘発された軸索生長に対するそれらの阻害効果と、NCAM−誘発された軸索生長に対するそれらのこれまで報告されている阻害効果との間に著しい相互関係が存在し、このことは、NBP10がNCAM−結合を通して軸索生長を特異的に誘発することを示す。
【００９６】
細胞内及び細胞外カルシウム貯蔵からのカルシウム代謝のアンタゴニストの効果が試験され、そしてニフェジピン、L−型VDCCアンタゴニスト、ω−コノトキシンMVIIA, N-型VDCCアンタゴニストによる、NBP10−誘発された軸索生長の部分的阻害、及びTMB-8、すなわち細胞内カルシウム代謝の推定されるインヒビターによる完全な阻害が観察された。これは、形質膜VDCCを通してカルシウム流入が、同時培養モデルにおいて同種親和性NCAM−結合により誘発される軸索生長についてのこれまでの観察（Dohertyなど., 1991）に従ってNBP10−誘発された軸索生長に関与することを示す。しかしながら、NBP10−誘発された軸索生長がTMB−８により阻害される本発明の発見は、細胞内カルシウム貯蔵からのカルシウムの代謝がまた、NCAM−依存性軸索生長に関与することを示す。
【００９７】
例５：
NBP10はPC12E2細胞において細胞内カルシウムを高める：
NBP10−誘発された軸索生長はVDCC及び細胞内カルシウム貯蔵に依存するように見えるので、NBP10がニューロン細胞において細胞内カルシウムに直接的に影響を与えることができるかどうかを試験した。NBP10−dがfura-2負荷されたPC12E2細胞に50μMの濃度で適用される場合、細胞内カルシウムの持続した上昇が、340nmの波長での励起に続いての蛍光の上昇、及び図４に示されるように380nmでの励起に続いて記録される蛍光の同時低下により明らかなように、観察された。より低い濃度のNBP10がPC12E2細胞に適用される場合、細胞の一部のみが細胞内カルシウムの検出できる上昇を示した（示されていない）。それらの観察はさらに、シグナルトランスダクション及びNBP10−ペプチド及びNCAMにより誘発された続く軸策生長応答が高められた細胞内カルシウムに依存する仮説を支持する。
【００９８】
例６：
NBP10はNCAM Ig1モジュールを結合する：
核磁器共鳴分析（NMR）によれば、NBP10ペプチドデンドリマーは、NCAMの組換えIg1モジュールを結合することが見出された（図５）。NBP10dの結合に基づいて、図に示されるアミノ酸残基は化学シフトを示した。
【００９９】
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Skladchikova, G. , Ronn, L. C. , Berezin, V. , and Bock, E. (1999) Joumal of Neuro- science Research 57,207-218. 
Thomsen, N. K. , Soroka, V. , Jensen, P. H. , Berezin, V., Kiselyov, V. V. , Bock, E., and Poulsen, F. M. (1996) Nature Structural Biology 3,581-585. 
Williams, E. J. , Furness, J., Walsh, F. S. , and Doherty, P. (1994) Neuron 13,583-594.
【図面の簡単な説明】
【０１０５】
【図１】図１は、細胞凝集に対するNCAM結合ペプチド（NBP10）の効果を示す。A)示される濃度でのモノマー（m）(菱形)、デンドリマー（ｄ）（四角）又はBSA−結合された20−マー（丸）としてのNBP10の存在下での凝集体の数。データ点は、３〜７の独立した実験の平均+/- SEMである。B-F)  60μMのNBP10m（C）、1μMのNBP10ｄ(D), 200μMのNBP10m(E), 又は6μMのNBP10d（F）の不在（B）、又は存在下で24時間、増殖された海馬凝集体培養物の顕微鏡写真。G-J）2μMのNBP10ｄ（H）、60μMのNBP10m（I）又は200μMのNBP10m（J）の不在（G）又は存在下で増殖された培養物の高倍率での顕微鏡写真。バー：25μm。
【図２】図２は、同種親和性NCAM結合により誘発される軸索生長に対するNBP10の効果を示す。A)示される濃度でのNBP10−BSAの存在下で、NCAM−トランスフェクトされた線維芽細胞の単層（菱形）、又はNCAM発現を伴わないでの単層（丸）上で増殖された一次海馬ニューロンからの軸索の長さ。データは、NCAM発現を伴わないで、線維芽細胞単層上で増殖されたニューロンの対照培養物に対して標準化される。個々のデータ点は、２〜５の独立した実験の平均を表す。B)NBP10−BSA、NBP9−BSA又はBSAのみ（100μg/ml）の存在下で、NCAM発現を伴わないでの単層（LVN, 白色カラム）、又はNCAM−トランスフェクトされた線維芽細胞の単層（LBN、黒色のカラム）上で増殖された海馬細胞からの軸索の長さ。データ点は、３〜５の独立した実験の平均を表す。*：LVN対照に比較される場合、P＜0.05。＋＋：LBN対照に比較される場合、P＜0.01；スチューデントT試験。
【図３】図３は、軸索生長に対するNBP10の効果を示す。A, B) NBP10d (1μM)の不在（A）又は存在（B）下で24時間、増殖された一次海馬ニューロンの顕微鏡写真。バー：20μm。C）示される濃度でのNBP10m（円）又はNBP10d（菱形）の存在下で増殖された一次海馬ニューロンからの軸索の長さ。データ点は、３〜４の独立した実験の平均+/- SEMである。D)NBP10-BSA, NBP9-BSA又はBSAのみ（20μM）の存在下での軸索の長さ。データ点は、３〜４の独立した実験の平均+/- SEMである。*：P＜0.05、対にされた下試験。E)アラニン又はフェニルアラニンによる単一位置により修飾されたモノマーNBP10−ペプチドの軸索生長に対する効果。*：NBP10の効果に比較される場合、P＜0.05、スチューデントT-試験。F)NBP10d（1μM）により誘発された軸索生長に対するNCAM依存性シグナルトランスダクションの推定上のインヒビターの効果。aFGFR：いわゆるCAM相同ドメインに隣接して位置するニワトリFGF−受容体のアミノ酸119−144に対応する合成ペプチドに対して生ぜしめられたウサギ抗血清（1：1000）；N:f：＝フィジピン（10μM）、MVIIA：ω−コノトキシンMVIIA（1μM）、P38inh：SB203580 (1μM)、Mekinh：PD98-59（10μM）。NBP10dの効果に比較される場合、*P＜0.05、**＜0.001、***P＜0.001、対されたT−試験。
【図４】図４は、PC12E2細胞における細胞内カルシウムに対するNBP10の効果を示す。A-D)fura-2-AM付加されたPC12E2細胞における細胞内カルシウム濃度に対するNBP10d適用（50μM）の効果を示す顕微鏡写真。それらの条件下で、細胞内カルシウムの上昇は、340nmの励起波長での高められた蛍光、及び380nmの励起波長での蛍光の同時低下により影響されるであろう。A)NBP10dの適用の前、340nmでの励起により得られる蛍光像。B）NBP10dの適用の50秒後、340nmでの励起により得られる蛍光像。C)NBP10dの適用の前、380nmでの励起により得られる蛍光像。D)NBP10dの適用の50秒後、380nmでの励起により得られる蛍光像。E)NBP10dの適用の後、PC12E2細胞における細胞内カルシウムの濃度の変化の時間経過。カルシウムの細胞内濃度を、340nm（A, B）及び380nm（C, D）での励起により得られる蛍光像間の比から計算した。個々の線は、１つの個々の細胞を表す。６種の独立した実験の代表。
【図５】図５は、NCAM−Ig１の構造上のNBP10dの結合部位のマッピングを示す。NBP10dへの結合に基づいての1Hについての＞0.01pppの化学シフト変化及び15Nについての＞0.007ppmの化学シフト変化を示すIg1のアミノ酸残基が示されている。
【配列表】
2005508899.tif 000002
2005508899.tif 000003
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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