(57)【要約】【化１】2005513066.tif 000035  本発明は、（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモ−プレグナカルシフェロール、医薬的なその使用、及びこの化合物を結晶質の形態で得る精製方法を開示する。この化合物は、分化しない細胞の増殖を抑制し、そしてその単球への分化を誘導する顕著な活性を示し、従って抗癌剤として、及び乾癬、並びに皺、たるんだ皮膚、乾燥皮膚及び不十分な皮脂の分泌のような皮膚の症状のような皮膚疾患の治療に対する使用を証明する。この化合物は、あったとしてもわずかなカルセミック活性を有し、そして従って、ヒトの免疫性疾患、並びに腎性骨ジストロフィーを治療するために使用することができる。
2005513066.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式：
【化１】
2005513066.tif 000028
を有する（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロール（ｂｉｓｈｏｍｏｐｒｅｇｎａｃａｌｃｉｆｅｒｏｌ）。
【請求項２】
結晶質形態の（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロール。
【請求項３】
Ｐ２（１）２（１）２（１）の斜方晶系空間群並びにａ＝６．６Å、ｂ＝１５．５Å、ｃ＝２０．１Å、α＝９０°、β＝９０°及びγ＝９０°の単位格子寸法によって定義される分子充填配列を有する、請求項２に記載の結晶質形態。
【請求項４】
請求項３に記載のパラメーターによって定義されるとおりの、（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールの三次元構造。
【請求項５】
乾癬を持つ患者に、有効な量の以下の式：
【化２】
2005513066.tif 000029
を有する（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールを投与することを含んでなる、乾癬の治療方法。
【請求項６】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、経口的に投与される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、非経口的に投与される、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、経皮的に投与される、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、局所的に投与される、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、約０．０１μｇ／日ないし約１００μｇ／日の投与量で投与される、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
白血病、大腸癌、乳癌又は前立腺癌からなる群から選択される疾患の治療方法であって、前記疾患を持つ患者に、有効な量の以下の式：
【化３】
2005513066.tif 000030
を有する（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールを投与することを含んでなる、前記方法。
【請求項１２】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、経口的に投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、非経口的に投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、経皮的に投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、約０．０１μｇ／日ないし約１００μｇ／日の投与量で投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
多発性硬化症、ルーピス（ｌｕｐｉｓ）、真性糖尿病、宿主対移植片反応、及び器官移植の拒絶からなる群から選択される自己免疫疾患の治療方法であって、前記疾患を持つ患者に、有効な量の以下の式：
【化４】
2005513066.tif 000031
を有する（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールを投与することを含んでなる、前記方法。
【請求項１７】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、経口的に投与される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、非経口的に投与される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、経皮的に投与される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、約０．０１μｇ／日ないし約１００μｇ／日の投与量で投与される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
慢性関節リウマチ、喘息、及び炎症性腸疾患からなる群から選択される炎症性疾患の治療方法であって、前記疾患を持つ患者に、有効な量の以下の式：
【化５】
2005513066.tif 000032
を有する（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールを投与することを含んでなる、前記方法。
【請求項２２】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、経口的に投与される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、非経口的に投与される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、経皮的に投与される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、約０．０１μｇ／日ないし約１００μｇ／日の投与量で投与される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
皺、十分な皮膚の堅さの欠如、十分な真皮の水分補給の欠如及び不十分な皮脂の分泌からなる群から選択される皮膚の症状の治療方法であって、前記疾患を持つ患者に、有効な量の以下の式：
【化６】
2005513066.tif 000033
を有する（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールを投与することを含んでなる、前記方法。
【請求項２７】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、経口的に投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、非経口的に投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、経皮的に投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、局所的に投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、約０．０１μｇ／日ないし約１００μｇ／日の投与量で投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３２】
腎性骨ジストロフィーを持つ患者に、有効な量の以下の式：
【化７】
2005513066.tif 000034
を有する（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールを投与することを含んでなる、腎性骨ジストロフィーの治療方法。
【請求項３３】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、経口的に投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、非経口的に投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、経皮的に投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、約０．０１μｇ／日ないし約１００μｇ／日の投与量で投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３７】
（ａ）アセトン、酢酸エチル、イソプロパノール、クロロホルム、ジクロロメタン及びジエチルエーテルからなる群から選択される溶媒を、不活性雰囲気下で沸騰させ；
（ｂ）精製されるべき（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールを含有する生成物を、前記溶媒中に溶解し；
（ｃ）前記溶媒及び溶解された生成物を、周囲温度より低く十分な時間冷却して、（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールの結晶の沈殿物を形成し、そして
（ｄ）（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールの結晶を回収すること；
の工程を含んでなる、（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールの精製方法。
【請求項３８】
前記溶媒及び溶解した生成物を、周囲温度より低く冷却する前に、周囲温度まで冷却させる更なる工程を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記不活性雰囲気が、アルゴン雰囲気である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記溶媒及び溶解した生成物が、約１．７℃（約３５°Ｆ）ないし約７．２℃（約４５°Ｆ）間に冷却される、請求項３７に記載の方法。
【請求項４１】
前記回収工程が、濾過を含んでなる、請求項３７に記載の方法。
【請求項４２】
前記工程（ｄ）から回収された結晶を前記工程（ｂ）の生成物として使用して、前記工程（ａ）ないし工程（ｄ）を繰り返すことを含んでなる更なる工程（ｅ）を含む、請求項３７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の背景
本発明は、ビタミンＤ化合物、そして更に具体的には、（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロール（ｂｉｓｈｏｍｏｐｒｅｇｎａｃａｌｃｉｆｅｒｏｌ）並びにその医薬的な使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
天然のホルモン、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３及びそのエルゴステロール系列の類似体、即ち１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ２は、動物及びヒトのカルシウムホメオスタシスの非常に強力な制御因子として知られ、そして、細胞分化におけるその活性、Ｏｓｔｒｅｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４，２６１０（１９８７）も更に確立されている。これらの代謝物の多くの構造的類似体は、１α−ヒドロキシビタミンＤ３、１α−ヒドロキシビタミンＤ２、各種の側鎖ホモログ化ビタミン及びフッ素化類似体を含み調製され、そして試験されている。これらの化合物の幾つかは、細胞分化及びカルシウム制御における興味ある活性の分離を示す。この活性の差は、腎性骨ジストロフィー、ビタミンＤ抵抗性くる病、骨粗鬆症、乾癬、及びある種の悪性腫瘍のような各種の疾患の治療において有用であることができる。
【０００３】
最近になって、ビタミンＤ類似体の新しい群、即ちいわゆる１９−ノル−ビタミンＤ化合物が発見され、これはビタミンＤ系の典型におけるＡ−環の環外メチレン基（炭素１９）の二つの水素原子による置き換えによって特徴付けられる。このような１９−ノル−類似体（例えば、１α，２５−ジヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ３）の生物学的試験は、細胞分化を誘導することにおける高度の効力を伴なう選択的活性の特性、及び非常に低いカルシウム移動活性を明らかにした。従って、これらの化合物は、悪性腫瘍の治療、又は各種の皮膚疾患の治療のための治療剤として潜在的に有用である。このような１９−ノル−ビタミンＤ類似体の合成の二つの異なった方法が記載されている（Ｐｅｒｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．３１，１８２３（１９９０）；Ｐｅｒｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．３２，７６６３（１９９１）、及びＤｅＬｕｃａ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，０８６，１９１号）。
【０００４】
米国特許第４，６６６，６３４号において、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の２β−ヒドロキシ及びアルコキシ（例えば、ＥＤ−７１）類似体が、Ｃｈｕｇａｉグループによって骨粗鬆症に対する潜在的薬物として、そして抗腫瘍剤として記載され、そして試験されている。更にＯｋａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１６３，１４４４（１９８９）を参照されたい。１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の他の２−置換（ヒドロキシアルキルで、例えばＥＤ−１２０、及びフルオロアルキル基で）Ａ−環類似体も更に調製され、そして試験されている（Ｍｉｙａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．４１，１１１１（１９９３）；Ｎｉｓｈｉｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ  Ｉｎｔ．Ｓｕｐｐｌ．１，１９０（１９９３）；Ｐｏｓｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５９，７８５５（１９９４）、及びＪ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６０，４６１７（１９９５））。
【０００５】
最近、１α，２５−ジヒドロキシ−１９−ノルビタミンＤ３の２−置換類似体、即ち２位において、ヒドロキシ又はアルコキシ基（ＤｅＬｕｃａ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，５３６，７１３号）で、２−アルキル基（ＤｅＬｕｃａ  ｅｔ  ａｌ  米国特許第５，９４５，４１０号）で、そして２−アルキリデン基（ＤｅＬｕｃａ  ｅｔ  ａｌ  米国特許第５，８４３，９２８号）で置換された化合物が更に合成され、これらは興味ある、そして選択的活性の特性を示している。全てのこれらの研究は、ビタミンＤ受容体の結合部位が、合成されたビタミンＤ類似体のＣ−２における異なった置換基を受け入れることができることを示している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
薬理学的に重要なビタミンＤ化合物の１９−ノル群を探査する継続した努力において、炭素２（Ｃ−２）におけるメチレン置換基の存在によって特徴付けられるその類似体が合成され、そして試験されている。特に興味のあるものは、炭素１におけるヒドロキシル基及び炭素２０に接続された短縮された側鎖よって特徴付けられる類似体、即ち（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロール（本明細書中で２−ＭｂｉｓＰと呼ばれる）である。このビタミンＤ類似体は、Ｃ−２における比較的小さいメチレン基が、ビタミンＤ受容体に結合することをを妨害しない筈であるために、興味ある目標に見受けられた。更に、１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビタミンのモデルにおいて行われた分子機構の研究は、このような分子修飾がシクロヘキサンジオール環Ａのコンフォメーションを実質的に変化しないことを示す。しかしながら、２−メチレン基の１９−ノル−ビタミンＤ炭素骨格への導入は、そのＡ−環の１α−及び３β−ヒドロキシルの特質を変化する。これらは、両方ともいまや天然のホルモン、１α，２５−（ＯＨ）２Ｄ３の分子中の１α−ヒドロキシル基（生物学的活性に対して非常に重要）と同様にアリル型位置にある。
【０００７】
本発明は、更に２−メチレン−１９−ノル−（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−ビス−ホモ−プレグナカルシフェロール（２−ＭｂｉｓＰ）のこれを結晶質の形態に調製することによる精製にも関する。
【０００８】
有機化合物、特に医薬的使用に指定されたものの精製は、このような化合物を合成する化学者にとって非常に重要である。化合物の調製は、通常多くの合成工程を必要とし、そして従って、最終生成物は、手順の最終合成工程から誘導される副産物だけではなく、前の工程で形成された化合物によっても汚染されることができる。非常に有効であるが、しかし比較的時間のかかる方法であるクロマトグラフィーによる精製でさえ、通常薬物として使用するために十分に純粋である化合物を与えることはできない。
【０００９】
１α−ヒドロキシビタミンＤ化合物を合成するために使用される方法にもよるが、異なった少量の所望しない化合物が最終生成物に付随することができる。従って、例えば、ビタミンＤの５，６−ｔｒａｎｓ幾何異性体のＣ−１直接ヒドロキシル化が行われ、続いてＳｅＯ２／ＮＭＯ酸化及び光化学照射が行われた場合［Ａｎｄｒｅｗｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５１，１６３５（１９８６）；Ｃａｌｖｅｒｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４３，４６０９（１９８７）；Ｃｈｏｕｄｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５８，１４９６（１９９３）参照］、最終の１α−ヒドロキシビタミンＤ生成物は、１β−ヒドロキシ−、並びに５，６−ｔｒａｎｓ異性体で汚染されていることができる。方法がプレビタミンＤ化合物の４−フェニル−１，２，４−トリアゾリン−３，５−ジオン付加物のＣ−１アリル酸化、それに続く修飾された付加物の、塩基性条件下の逆付加環化反応からなる場合［Ｎｅｖｉｎｃｋｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４７，９４１９（１９９１）；Ｖａｎｍａｅｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４１，１４１（１９８５）及び４０，１１７９（１９９１）；Ｖａｎｍａｅｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２３，９９５（１９８２）］、所望する１α−ヒドロキシビタミンが、プレビタミンの５（１０），６，８−トリエン及び１β−ヒドロキシ異性体で汚染されることができることが予測できる。非常に広い範囲及び多くの適用を持つ、最も有用なＣ−１ヒドロキシル化法の一つは、Ｐａａｒｅｎ等［Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４５，３２５３（１９８０）及びＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７５，２０８０（１９７８）参照］によって練り上げられた実験的に簡単な手順である。この方法は、ビタミンＤトシラートの緩衝されたソルボリシスから容易に得られる３，５−シクロビタミンＤ誘導体の、ＳｅＯ２／ｔ−ＢｕＯＯＨによるアリル酸化、及びその後の酸触媒による所望する１α−ヒドロキシ化合物への逆付加環化反応からなる。この合成経路を考慮すれば、最終生成物が１α−ヒドロキシエピマー、５，６−ｔｒａｎｓ異性体及びプレビタミンＤの形態で汚染されていることができると仮定することは妥当である。１α−ヒドロキシビタミンＤ４は、ビタミンＤ２又はエルゴステロールから合成される１α−ヒドロキシビタミンＤ化合物中に見出されるもう一つの所望されない汚染物質である。１α−ヒドロキシビタミンＤ４は、ビタミンＤ４のＣ−１酸化から得られ、これは今度は商業的なエルゴステロール物質の汚染から誘導される。典型的には、最終生成物は、約１．５重量％までの１α−ヒドロキシビタミンＤ４を含有することができる。従って、最終生成物中の１α−ヒドロキシビタミンＤ４を除去するか又はその量を約０．１−０．２％より低くまで実質的に減少する精製技術が、非常に好ましい。
【００１０】
ビタミンＤの共役したトリエン系は、熱及び光感受性であるだけではなく、更に酸化される傾向があり、非常に極性な化合物の複合混合物に導く。酸化は、通常ビタミンＤ化合物が長い時間保存された場合に起こる。ビタミンＤ化合物の部分的な分解に導くことができる他の種類の過程は、ある程度の水脱離反応からなり；この推進力は、ヒドロキシ基のアリル型（１α−）及びホモアリル型（３β−）位置である。このような先に記載した酸化及び脱離反応の生成物の存在は、薄層クロマトグラフィーによって容易に検出することができる。従って、例えば、プレコートされたアルミニウムシリカのシート［ＵＶ指示薬を伴う；ＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｃｈｅｒｒｙ  Ｈｉｌｌ，Ｎ．Ｊ．から入手）］及びヘキサン−酢酸エチル（４：６）の溶媒形を使用して、１α−ＯＨ−Ｄ２（Ｒｆ０．２７）及びその脱離生成物（Ｒｆ約０．７−０．９）のスポットは紫外線で可視である。更に、硫酸を噴霧し、そして加熱した後、酸化生成物から誘導される更なるスポットを可視化（Ｒｆ０）することもできる。
【００１１】
通常、全ての１α−ヒドロキシル化の手順は、少なくとも１回のクロマトグラフィーによる精製を必要とする。しかしながら、クロマトグラフィー的に精製された１α−ヒドロキシビタミンＤ化合物でさえ、均質性を示唆する一致した分光学的データを示すが、経口的、非経口的又は経皮的に投与することができる治療剤のために必要な純度の基準に合致しない。従って、２ＭＢＰの適した精製方法が必要とされることは明白である。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
発明の概要
本発明は、（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロール（２−ＭｂｉｓＰ）、その生物学的活性、この化合物の各種の医薬的使用、及びこれを結晶質の形態で得るための化合物の精製方法を指向する。
【００１３】
構造的に、この１９−ノル類似体は、以下に示す一般式Ｉ：
【００１４】
【化１】
2005513066.tif 000003
【００１５】
によって特徴付けられる。
上記の化合物は、所望する、非常に好都合な生物学的活性の様式を示す。この化合物は、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３のそれと比較して、比較的高いビタミンＤ受容体への結合、しかし非常に低い腸管のカルシウム輸送活性によって特徴付けられ、そして骨からカルシウムを移動することに対して、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３と比較して非常に低い活性を有する。従って、この化合物は、あったとしても、わずかなカルセミック（ｃａｌｃｅｍｉｃ）活性を有するものとして特徴付けることができる。従って、これは、腎性骨ジストロフィーの続発性副甲状腺機能亢進症の抑制のための治療法として有用である。
【００１６】
本発明の化合物は、更に免疫系の平衡異常、例えば多発性硬化症、ルーピス（ｌｕｐｉｓ）、真性糖尿病、宿主対移植片反応、及び器官移植の拒絶を含む自己免疫疾患によって特徴付けられるヒトの障害の治療及び予防；並びに更に慢性関節リウマチ、喘息、及びセリアック病及びクローン（ｃｒｏａｎｓ）病のような炎症性腸疾患のような炎症性疾患の治療、並びに骨折の癒合の改良及び改良された骨移植に特に適していることも見出されている。ニキビ、脱毛症及び高血圧は、本発明の化合物で治療することができる他の症状である。
【００１７】
上記の化合物は、更に比較的高い細胞分化活性によっても特徴付けられる。従って、この化合物は、更に乾癬、又は抗癌剤として、特に白血病、大腸癌、乳癌及び前立腺癌の治療のための治療剤をも提供する。更に、その比較的高い細胞分化活性のために、この化合物は、皺、十分な真皮の水分補給の欠如、即ち乾燥皮膚、十分な皮膚の堅さの欠如、即ちたるんだ皮膚、及び不十分な皮脂の分泌を含む各種の皮膚の症状の治療のための治療剤を提供する。従って、この化合物の使用は、皮膚の湿潤化だけではなく、更に皮膚の障壁機能をも改良する。
【００１８】
化合物は、上記の疾患及び障害を治療するための組成物中に、約０．０１μｇ／ｇｍないし約１００μｇ／組成物ｇｍの量で存在することができ、そして局所的、経皮的、経口的又は非経口的に、約０．０１μｇ／日ないし約１００μｇ／日の投与量で投与することができる。
【００１９】
結晶化による２−ＭｂｉｓＰの精製も更に研究した。溶媒は、結晶化法において重要な役割を演じ、そして典型的には個々の液体物質又は異なった液体の適した混合物である。２−ＭｂｉｓＰの結晶化のために、最も適当な溶媒及び／又は溶媒系は、以下の要素：
（１）低い毒性；
（２）低い沸点；
（３）温度に関する溶解度特性の有意な依存性（十分な結晶化の収率を得るために必要な条件）；及び
（４）比較的低コストであること；
によって特徴付けられる。高度に非極性な溶媒（例えば炭化水素）は、２−ＭｂｉｓＰのこれらの中における低い溶解度のために適していない。全く逆の状況が、高度に極性な溶媒媒体（例えばアルコール）において起こり、この場合２−ＭｂｉｓＰは高すぎる溶解度を示す。従って、２−ＭｂｉｓＰの好結果の結晶化のために、中間の極性の溶媒が必要であることが結論付けられる。興味あることには、結晶化の目的のために非常にしばしば使用されるヘキサンは、２−ＭｂｉｓＰの結晶化に対してはやや適していないことが見出された。しかしながら、個々の溶媒、即ちアセトンは、２−ＭｂｉｓＰの結晶化のために最も有用であることが見出された。更に、酢酸エチル、又はイソプロパノール、又はクロロホルム、又はジクロロメタン、又はジエチルエーテルを使用した溶媒系も、更に良好に働くものであると信じられる。これらの溶媒は、全て蒸発又は他の公知の方法によって除去することが非常に容易である。全ての場合において、結晶化の過程は、容易に、そして効率よく起こり；そして沈殿した結晶は十分に大きくて、濾過によるその回収を確実にする。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
発明の詳細な説明
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロール（本明細書中で２−ＭｂｉｓＰとも呼ばれる）を合成し、そして試験した。構造的に、この１９−ノル類似体は、本明細書中で先に例示した一般式Ｉによって特徴付けられる。
【００２１】
基本構造Ｉを有する（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールの調製は、普通の一般的な方法、即ち、二環式Ｗｉｎｄａｕｓ−Ｇｒｕｎｄｍａｎｎ型ケトンＩＩの、アリル型ホスフィンオキシドＩＩＩとの、対応する２−メチレン−１９−ノル−ビタミンＤ類似体ＩＶへの縮合、それに続く後者の化合物ＩＶのＣ−１及びＣ−３における脱保護によって、化合物Ｉ、即ち２−ＭｂｉｓＰを得ることによって達成することができる。
【００２２】
【化２】
2005513066.tif 000004
【００２３】
構造ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶにおいて、Ｙ１及びＹ２基は、ヒドロキシ保護基であり、縮合反応に敏感であるか、又はそれを妨害することができるいかなる官能基も、当該技術分野において公知であるように適当に保護されることも更に理解されることである。上に示した方法は、収斂型（ｃｏｎｖｅｒｇｅｎｔ）合成の概念の適用を表し、これは、ビタミンＤ化合物の調製のために有効に適用されている［例えば、Ｌｙｔｈｇｏｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．Ｉ，５９０（１９７８）；Ｌｙｔｈｇｏｅ，Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ．９，４４９（１９８３）；Ｔｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４８，１４１４（１９８３）；Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５１，３０９８（１９８６）；Ｓａｒｄｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５１，１２６４（１９８６）；Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５１，１２６９（１９８６）；ＤｅＬｕｃａ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，０８６，１９１号；ＤｅＬｕｃａ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，５３６，７１３号］。
【００２４】
一般構造ＩＩのヒドリンダノンは既知であるか、又は既知の方法によって調製することができる。
必要な一般構造ＩＩＩのホスフィンオキシドの調製のために、商業的な（１Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−（−）−キナ酸からＰｅｒｌｍａｎ等、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．３２，７６６３（１９９１）、及びＤｅＬｕｃａ等、米国特許第５，０８６，１９１号によって記載されているように容易に得られる、キナ酸メチル誘導体から出発する合成経路が開発されている。
【００２５】
化合物Ｉの合成の全体的な方法は、“２−Ａｌｋｙｌｉｄｅｎｅ−１９−Ｎｏｒ−Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”の表題の米国特許第５，８４３，９２８号及び“１α−Ｈｙｄｒｏｘｙ−２−Ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ−１９−Ｎｏｒ−Ｈｏｍｏｐｒｅｇｎａｃａｌｃｉｆｅｒｏｌ  ａｎｄ  ｉｔｓ  Ｕｓｅｓ”の表題の米国特許第６，４４０，９５３号中に更に完全に例示され、そして記載されている。
【００２６】
説明及び請求項において使用される場合、用語“ヒドロキシ保護基”は、例えば、アルコキシカルボニル、アシル、アルキルシリル又はアルキルアリールシリル基（本明細書中で以下簡単に“シリル”基と呼ぶ）及びアルコキシアルキル基のようなヒドロキシ官能基の一時的保護のために普通に使用されるいずれもの基を意味する。アルコキシカルボニル保護基は、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ブトキシカルボニル、イソブトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル又はアリルオキシカルボニルのようなアルキル−Ｏ−ＣＯ−群である。用語“アシル”は、１ないし６個の炭素の、全てのその異性体の形態のアルカノイル基、或いはオキサリル、マロニル、スクシニル、グルタリル基のような１ないし６個の炭素のカルボキシアルカノイル基、或いはベンゾイル、又はハロ、ニトロ若しくはアルキル置換ベンゾイル基のような芳香族アシル基を意味する。請求項の説明において使用される場合、単語“アルキル”は、１ないし１０個の炭素の、全てのその異性体の形態の直鎖又は分枝鎖アルキルラジカルを表す。アルコキシアルキル保護基は、メトキシメチル、エトキシメチル、メトキシエトキシメチル、又はテトラヒドロフラニル及びテトラヒドロピラニルのような群である。好ましいシリル保護基は、トリメチルシリル、トリエチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ジブチルメチルシリル、ジフェニルメチルシリル、フェニルジメチルシリル、ジフェニル−ｔ−ブチルシリル及び類似のアルキル化シリルラジカルである。用語“アリール”は、フェニル−或いはアルキル−、ニトロ−又はハロ−置換フェニル基を規定する。
【００２７】
“保護されたヒドロキシ”基は、ヒドロキシ官能基の一時的又は永久的保護のために普通に使用される上記の基、例えば、先に定義したようなシリル、アルコキシアルキル、アシル又はアルコキシカルボニル基のいずれかによって誘導又は保護されたヒドロキシ基である。用語“ヒドロキシアルキル”、“ジューテロアルキル”、“アミノアルキル”、“ハロゲノアルキル”、“アルコキシアルキル”、“アリールオキシアルキル”、及び“フルオロアルキル”は、それぞれ一つ又はそれより多いヒドロキシ、ジューテリウム、アミノ、ハロゲン、アルコキシ、アリールオキシ、又はフルオロ基によって置換されたアルキルラジカルを指す。“ハロゲン”基は、周期表のＶＩＩＡ族の一部を形成する五つの元素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素及びアスタチンのいずれをも含む。
【００２８】
以下のスキームＩ−ＩＩＩにおいて、ビタミンＤ２から出発する２−ＭｂｉｓＰの合成の三つの異なった方法が例示されている。最初の五つの工程は、保護された２０（Ｓ）−アルデヒドを得るためのそれぞれの合成法において同一である（スキームＩに示す）。その後、スキームＩ及びＩＩにおいては、アルデヒドは、保護された２０（Ｓ）−アルコールに転換され、これは今度はその側鎖を、二つの異なった方法（スキームＩ対スキームＩＩ）でビス−ホモに転換される。対照的に、スキームＩＩＩは、保護された２０（Ｓ）−アルデヒドのビス−ホモ側鎖への直接転換を例示する。
【００２９】
【化３】
2005513066.tif 000005
【００３０】
【化４】
2005513066.tif 000006
【００３１】
【化５】
2005513066.tif 000007
【００３２】
【化６】
2005513066.tif 000008
【００３３】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールの生物学的活性
１α−ヒドロキシ−１９−ノル−プレグナカルシフェロールの２位へのメチレン基の導入は、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３と比較して、ブタの腸内ビタミンＤ受容体への結合に対してわずかに影響するか、又は影響しなかった。この化合物は、標準的な１，２５−（ＯＨ）２Ｄ３と比較して、同等に良くブタの受容体に結合した（図２）。この化合物が同等な生物学的活性を有するものであることが、これらの結果から予測することができた。しかしながら、驚くべきことに、２−ＭｂｉｓＰの２−メチレン置換は、独特な生物学的活性を伴う非常に選択的な類似体を産出した。
【００３４】
図４Ｂは、２−ＭｂｉｓＰが、腸内カルシウム輸送を刺激することにおいて、天然のホルモン、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（１，２５（ＯＨ）２Ｄ３）のそれと比較して、非常にわずかな活性を有することを示す。
【００３５】
図５Ｂは、２−ＭｂｉｓＰが、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３と比較して、非常にわずかな骨カルシウム移動活性を有することを証明する。
従って、図４Ｂ及び図５Ｂは、２−ＭｂｉｓＰが、あったとしても、わずかなカルセミック活性しか有しないと特徴付けることができることを例示する。
【００３６】
図３は、２−ＭｂｉｓＰが、ＨＬ−６０分化において、殆ど１，２５（ＯＨ）２Ｄ３と同じように強力であり、これを、乾癬並びに癌、特に白血病、大腸癌、乳癌及び前立腺癌に対する治療のための優れた候補物質とすることを例示する。更に、その比較的高い細胞分化活性のために、この化合物は、皺、十分な真皮の水分補給の欠如、即ち乾燥皮膚、十分な皮膚の堅さの欠如、即ちたるんだ皮膚、及び不十分な皮脂の分泌を含む各種の皮膚の症状の治療のための治療剤を提供する。従って、この化合物の使用は、皮膚の湿潤化だけではなく、更に皮膚の障壁機能をも改良する。
【００３７】
図６は、２−ＭｂｉｓＰの長期にわたる投与の投与後のラットの血清カルシウムの分析を示す。これらのデータは、２−ＭｂｉｓＰが非常にわずかなカルセミック活性を有し、そして従って、推奨する投与量において高カルシウム血症を生じる比較的低い危険度を有することを示す、図４Ｂ及び図５Ｂのデータに対する更なる支持を提供する。
【００３８】
Ｓｉｃｉｎｓｋｉ等（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４１，４６６２−４６７４，１９９８）に記載されている一群のｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏアッセイを、化合物、２−Ｍｐｒｅｇｎａ、２−ＭｂｉｓＰ及び２−ＭＰの生物学的活性を、１，２５（ＯＨ）２１９−ノル−Ｄ３、及び天然のビタミンＤホルモン、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３と比較するために使用した。
【００３９】
ＨＬ−６０前骨髄球の単球への分化は、Ｏｓｔｒｅｍ等（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２，１４１６４−１４１７１，１９８７）によって記載されているように決定した。
【００４０】
データの解釈
ＶＤＲ結合及びＨＬ６０細胞分化  ２−ＭｂｉｓＰ、２−Ｍｐｒｅｇｎａ及び２−ＭＰは、［３Ｈ］−１，２５−（ＯＨ）２Ｄ３の全長の、組換えラットビタミンＤ受容体への結合に対して競合するこれらの能力において、殆ど同等（２−Ｍｐｒｅｇｎａ、２−ＭｂｉｓＰ及び２−ＭＰに対してＫｉ＝０．３、０．６及び０．３ｎＭ）である（図２）。更に、これらの三つの化合物の競合結合活性は、１，２５（ＯＨ）２１９−ノル−Ｄ３（Ｋｉ＝０．２ｎＭ）、並びに天然のホルモン、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３（Ｋｉ＝０．１ｎＭ）のそれと同様である。これらの五つの化合物のいずれものＨＬ６０の分化を促進するその能力（有効性又は効力）間にわずかな差があり、２−Ｍｐｒｅｇｎａ（ＥＣ５０＝１７ｎＭ）の考えられる例外があり、これは２−ＭｂｉｓＰ（ＥＣ５０＝７ｎＭ）、２−ＭＰ（ＥＣ５０＝６ｎＭ）、１，２５（ＯＨ）２１９−ノル−Ｄ３（ＥＣ５０＝４ｎＭ）及び１，２５（ＯＨ）２Ｄ３（ＥＣ５０＝５ｎＭ）よりわずかに強力ではない（図３参照）。この結果は、２−ＭｂｉｓＰが、これが、細胞分化を起こし、そして細胞増殖を抑制することにおいて直接的な細胞活性を有するために、乾癬において非常に有効であるものであることを示唆する。これが、抗癌剤として、特に白血病、大腸癌、乳癌及び前立腺癌に対して、並びに乾燥皮膚（真皮の水分補給の欠如）、過度の皮膚のたるみ（不十分な皮膚の堅さ）、不十分な皮脂の分泌及び皺のような皮膚の症状に対して有意な活性を有するものであることも更に示している。
【００４１】
ビタミンＤが欠乏した動物における骨からのカルシウム移動及び腸内カルシウム吸収  低カルシウム規定食（０．０２％）飼育のビタミンＤ欠乏ラットを使用して、腸及び骨におけるこれらの化合物の活性を試験した。予測したように、天然のホルモン（１，２５（ＯＨ）２Ｄ３）は、血清カルシウム濃度を全ての投与量で増加した（図４）。図４は、更に２−ＭｂｉｓＰ、２−Ｍｐｒｅｇｎａ及び２−ＭＰが、骨からのカルシウム移動に、あったとしても、わずかな活性しか有しないことも示す。２−ＭｂｉｓＰ、２−Ｍｐｒｅｇｎａ、２−ＭＰ又は１，２５（ＯＨ）２１９−ノル−Ｄ３の７日間の２６０ｐｍｏｌ／日の投与により、骨カルシウムの移動は得られず、そして１３００ｐｍｏｌ／日（５倍）に増加した２−ＭｂｉｓＰ、２−Ｍｐｒｅｇｎａ及び２−ＭＰの量も効果がなかった。同様な結果は、１，２５（ＯＨ）２１９−ノル−Ｄ３で得られた。
【００４２】
腸内カルシウム輸送を、同じ動物のグループで、外転腸嚢法（ｅｖｅｒｔｅｄ  ｇｕｔ  ｓａｃ  ｍｅｔｈｏｄ）を使用して評価した（図５）。これらの結果は、２−ＭｂｉｓＰ及び２−Ｍｐｒｅｇｎａが、２６０又は１３００ｐｍｏｌ／日のいずれかで投与した場合、腸内カルシウム輸送を促進せず、一方、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３は、２６０ｐｍｏｌ／日の投与量で有意な増加を促進することを示す。２−ＭｂｉｓＰ及び２−Ｍｐｒｅｇｎａと対照的に、２−ＭＰは、この濃度及び５倍高い濃度において１，２５（ＯＨ）２Ｄ３と同等のカルシウム輸送活性を示したが、しかしより高い投与量では、この活性は実際に減少した。図４に示すように、１，２５（ＯＨ）２１９−ノル−Ｄ３は、２−ＭｂｉｓＰ及び２−Ｍｐｒｅｇｎａ誘導体と同様に、腸内カルシウム輸送活性に欠ける。
【００４３】
正常カルシウム規定食飼育のビタミンＤが十分な動物における血清カルシウム反応  ２−ＭｂｉｓＰ、２−Ｍｐｒｅｇｎａ及び２−ＭＰの望ましいことは、正常な動物において、１，２５（ＯＨ）２１９−ノル−Ｄ３及び１，２５（ＯＨ）２Ｄ３と比較して、高カルシウム血症を生じることができないことによって例示される。図６に示した実験において、正常なメスのラットに、７日間、２５００ｐｍｏｌ／日の１，２５（ＯＨ）２Ｄ３、或いは５０００ｐｍｏｌ／日の２−ＭｂｉｓＰ、２−Ｍｐｒｅｇｎａ、２−ＭＰ又は１，２５（ＯＨ）２１９−ノル−Ｄ３を与えた。投与量を、経口又は腹膜経路のいずれかによって二つの別個の動物のグループに投与し、そして血清カルシウム濃度を、最後の投与の４時間後に評価した。１，２５（ＯＨ）２Ｄ３をいずれかの経路で投与された動物は、高カルシウム血症を示し、あるものは安楽死を必要とするほど重度であった。同様に、１，２５（ＯＨ）２１９−ノル−Ｄ３は、明らかな高カルシウム血症を生じた。対照的に、化合物、２−ＭＰ、２−ＭｂｉｓＰ又は２−Ｍｐｒｅｇｎａを投与された動物のいずれにおいても血清カルシウムの増加は見られなかった。
【００４４】
これらの結果は、２−ＭｂｉｓＰが、多くのヒトの治療法に対して優れた候補物質であり、そしてこれが自己免疫疾患、癌、及び乾癬のような多くの状況において有用であることができることを例示する。２−ＭｂｉｓＰは：（１）これが、有意なＶＤＲ結合及び細胞分化活性を有し；（２）これが、１，２５（ＯＨ）２１９−ノル−Ｄ３及び１，２５（ＯＨ）２Ｄ３と異なり高カルシウム血症の傾向に欠けており；そして（３）これが、容易に合成されるために、乾癬の治療のための優れた候補物質である。２−ＭｂｉｓＰが、ビタミンＤ受容体に対する有意な結合活性を有するが、しかし、血液の血清カルシウムを上昇するわずかな能力しか有しないために、これは、腎性骨ジストロフィーの治療のためにも更に有用であることができる。
【００４５】
治療の目的のために、式Ｉによって定義される本発明の化合物は、医薬的適用のために無害の溶媒中の溶液として、或いは適した溶媒又は担体中の乳液、懸濁液若しくは分散物として、或いは固体担体と共に丸薬、錠剤又はカプセルとして、当該技術分野において既知の慣用的な方法によって処方することができる。いずれものこのような製剤は、更に安定剤、抗酸化剤、結合剤、着色剤又は乳化剤或いは味覚改良剤のような他の医薬的に受容可能な、そして非毒性の賦形剤を含むこともできる。
【００４６】
化合物は、経口的、局所的、非経口的又は経皮的に投与することができる。化合物は、注射若しくは静脈注入、又は適した滅菌溶液によって、或いは液体又は固体の投与の形態で消化管を経由して、或いはクリーム、軟膏、貼布、又は経皮適用のために適した同様なベヒクルの形態で都合よく投与される。日量０．０１μｇないし１００μｇの化合物の投与量が治療の目的に適当であるが、しかしこのような投与量は、治療される疾患、その重度及び患者の反応によって、当該技術分野においてよく理解されているように調節される。化合物が作用の特異性を示すために、それぞれは、単独で、或いは異なった程度の骨ミネラル移動及びカルシウム輸送刺激が好都合であることが見出される状況では、段階的な投与量の他の活性なビタミンＤ化合物−−例えば、１α−ヒドロキシビタミンＤ２又はＤ３、或いは１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３−−といっしょに適切に投与することができる。
【００４７】
上述の治療において使用するための組成物は、活性成分としての有効な量の上記の式Ｉによって定義されるとおりの（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロール、及び適した担体を含んでなる。本発明によって使用するためのこのような化合物の有効な量は、組成物のｇｍ当たり約０．０１μｇないし約１００μｇであり、そして局所的、経皮的、経口的又は非経口的に、約０．０１μｇ／日ないし約１００μｇ／日の投与量で投与することができる。
【００４８】
化合物は、クリーム、ローション、軟膏、局所貼布、丸薬、カプセル又は錠剤、或いは医薬的に無害な、そして受容可能な溶媒又は油中の溶液、乳剤、分散物、若しくは懸濁液としての液体の形態として処方することができ、そしてこのような調合品は、更に、安定剤、抗酸化剤、乳化剤、着色剤、結合剤又は味覚改良剤のような他の医薬的に無害な或いは有益な成分を含有することができる。
【００４９】
化合物は、前骨髄球の正常なマクロファージへの分化に影響するために十分な量で都合よく投与される。先に記載したような投与量は適切であるが、しかし与えられた量が、当技術においてよく理解されているように、疾患の重度、並びに患者の症状及び反応によって調節されることは理解されることである。
【００５０】
本発明の製剤は、活性成分を、医薬的に受容可能なその担体及び所望により他の治療成分と共に含んでなる。担体は、製剤の他の成分と混和性であるという意味において“受容可能”で、そしてその受容者にとって有害であってはならない。
【００５１】
経口投与のために適した本発明の製剤は、それぞれ所定の量の活性成分を含有するカプセル、サッシェ、錠剤又はロザンジのような個別の単位の形態；散薬又は顆粒の形態；水性液体又は非水性液体中の溶液若しくは懸濁液の形態；或いは水中油乳剤又は油中水乳剤の形態であることができる。
【００５２】
直腸投与のための製剤は、活性成分及びココアバターのような担体を組込んだ座薬、又は浣腸剤の形態であることができる。
非経口投与のために適した製剤は、都合よくは活性成分の滅菌油性又は水性調合物を含んでなり、これは好ましくは受容者の血液と等張である。
【００５３】
局所投与のために適した製剤は、リニメント、ローション、アプリカント（ａｐｐｌｉｃａｎｔｓ）のような液体又は半液体調合物、クリーム、軟膏又はペーストのような水中油若しくは油中水乳剤；或いは滴剤のような溶液又は懸濁液；或いは噴霧剤を含む。
【００５４】
喘息の治療のために、スプレー缶、ネブライザー又はアトマイザーにより投与される、散薬の吸入、自己噴射又は噴霧製剤を使用することができる。製剤は、投与された場合、好ましくは１０ないし１００μの範囲の粒子の大きさを有する。
【００５５】
製剤は、投与量単位の形態で都合よく与えることができ、そして調剤の技術において公知の方法のいずれによっても調製することができる。用語“投与量単位”によって、活性成分そのもの、或いは固体又は液体の医薬的希釈剤若しくは担体とのその混合物のいずれかを含んでなる、物理的及び化学的に安定な単位投与量として患者に投与することが可能である単位、即ち単一投与量を意味する。
【００５６】
２−ＭｂｉｓＰの結晶化
本発明は、更に結晶質の形態の２−メチレン−１９−ノル−（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−ビス−ホモ−プレグナカルシフェロール（２−ＭｂｉｓＰ）を提供する。本発明は、更に２−ＭｂｉｓＰの価値ある精製方法を提供する。この精製技術は、結晶質の形態の２−ＭｂｉｓＰ生成物を、結晶化の手順を使用することによって得ることを含み、この方法では、精製される２−ＭｂｉｓＰ物質をアセトン、酢酸エチル、イソプロパノール、クロロホルム、ジクロロメタン、又はジエチルエーテルを含んでなる単一溶媒系を、溶媒として使用して溶解する。好ましい溶媒は、アセトンである。その後、溶媒は、真空を伴う又は伴わない蒸発によって、或いは公知である他の方法によって除去することができる。この技術は、広範囲のいずれもの既知の合成法から得られる２−ＭｂｉｓＰを含有する、そして変化する濃度、即ちマイクログラムの量ないしキログラムの量の最終生成物を精製するために使用することができる。当業者にとって公知であるように、使用される溶媒の量は、精製される２−ＭｂｉｓＰの量によって最小化及び／又は調節されなければならない。
【実施例】
【００５７】
本発明の結晶化手順の有用性及び利益は、以下の具体的な実施例１及び２に示す。結晶化後、沈殿した物質を顕微鏡下で観察して、それが結晶質の形態であることを確認した。更に、Ｘ線回折分析を行った。再結晶化の収率は高く、そして得られた結晶は、比較的鋭い１６２−１６４℃の融点を示した。
【００５８】
ここに記載した合成２−ＭｂｉｓＰ生成物の結晶化の方法は、価値ある精製方法を表し、これは、合成経路から誘導されるいくつかの副産物だけではなく、更に、汚染物質１α−ヒドロキシビタミンＤ４も除去することができる。このような不純物は、天然のエルゴステロールの、その２２，２３−ジヒドロ類似体による汚染の結果である。
【００５９】
実施例１
アセトンからの結晶化
（ａ）精製される２−ＭｂｉｓＰ生成物を、アルゴン雰囲気下で沸騰アセトン（１．２ｍＬ、Ａｌｄｒｉｃｈ）中に溶解することができ、室温（２０℃（６８°Ｆ））で数時間（１−３時間）、そして次いで冷蔵庫（約１．７−７．２℃（３５−４５°Ｆ））で一晩（８−１２時間）放置した。沈殿した結晶は濾過により取り出さなければならず、少量の冷（０℃）アセトンで洗浄し、そして乾燥した。
【００６０】
（ｂ）次いでこれらの２−ＭｂｉｓＰの結晶を、アセトン（０．５ｍＬ）で実施例１（ａ）に記載したように再結晶した。沈殿した結晶は、比較的鋭い１６２−１６４℃の融点を有し、そして顕微鏡下で観察して、これらが結晶質であることを確認した。
【００６１】
実施例２
実験
０．４０×０．２５×０．０３ｍｍの寸法の、無色の板状の結晶を、構造分析に使用した。強度データを、プラットフォーム型ゴニオメーターに設置したＳｉｅｍｅｎｓ  ＨＩＳＴＡＲ面積検出器で、Ｇｏｅｂｅｌ光学系で焦点を合わせるＣｕ  Ｋα放射（λ＝１．５４１７８Å）を使用して収集した。結晶を細いナイロン繊維に真空グリースで設置し、そしてデータを周囲温度、２９３°Ｋで収集した。強度データを、それぞれ０．２５°の一連のω振幅フレームで測定し；これらは、−８５°の検出器の２θで５回のスキャン（それぞれ５００イメージ、４０秒／イメージ）及び−４０°の検出器の２θで２回のスキャン（それぞれ５００イメージ、２０秒／イメージ）で構成した。検出器を、５１２×５１２のモードで操作し、そして試料から６．０ｃｍに位置させた。ユニークデータの範囲は、５８．８８度までのθで９５．４％の完全さであった。最初の５０フレームを、データ収集の最後に繰り返し、そしてデータ収集中に本質的に結晶の回折に減衰がなかったことが示された。４．３８＜θ＜５８．８８°の範囲で、合計６９１７個のデータを測定した。ＳＡＩＮＴ（Ｂｒｕｋｅｒ−ＡＸＳ，Ｉｎｃ．）を使用してデータを総合し、そしてスケールファクターに応じて計算して、２６９７個の独立データの組をＲ（ｉｎｔ）＝０．０５６２で形成した。
【００６２】
斜方晶系空間群Ｐ２（１）２（１）２（１）を、系統的非存在及び統計的試験によって決定し、そしてその後の精密化によって確認した。構造を直説法によって解き、そしてＳＨＥＬＸＬ−９７（Ｇ．Ｍ．Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ，１９９４；ＳＨＥＬＸＴＬ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ５  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｍａｎｕａｌ，Ｂｒｕｋｅｒ−ＡＸＳ，Ｉｎｃ．）を使用して、Ｆ２に対するフルマトリックス最小二乗法によって精密化した。水素原子の位置を、最初Ｆｏｕｒｉｅｒの差の分布図に位置させたが、しかし理想化された幾何配置によるライディングモデルによって精密化した。非水素原子を、異方性変位パラメーターで精密化した。合計２２９個のパラメーターを、０個の制約及び２６９７個のデータに対して精密化して、ｗ＝１／［ｓ２（Ｆ２）＋（０．０８２４Ｐ）２］の加重値に対して、ｗＲ（Ｆ２）＝０．１３６９及びＳ＝１．０８８を得たが、ここでＰ＝［Ｆｏ２＋２Ｆｃ２］／３である。最終的なＲ（Ｆ）は、２６９７個の観察された［Ｆ＞２ｓ（Ｆ）］データに対して０．０５４４であった。最終的な差の分布図は、それぞれ０．１２６及び−０．１５３ｅ／Å３の最大値及び最小値を有していた。
【００６３】
本明細書中に記載され、そして計算された以下の物理的データ及び原子配置パラメーターによって定義されたとおりの２−ＭｂｉｓＰの三次元構造を、図７に例示する。
表１．  ２−ＭｂｉｓＰの結晶データ及び構造の精密化。
【００６４】
【表１】
2005513066.tif 000009
【００６５】
表２．  ２−ＭｂｉｓＰの原子座標（×１０４）及び同等な異方性変位パラメーター（Å２×１０３）。Ｕ（ｅｑ）は、直交化されたＵｉｊテンソールの軌跡の１／３と定義される。
【００６６】
【表２】
2005513066.tif 000010
【００６７】
表３．  ２−ＭｂｉｓＰの結合長［Å］及び角度［°］。
【００６８】
【表３】
2005513066.tif 000011
【００６９】
表４．  ２−ＭｂｉｓＰの異方性変位パラメーター（Å２×１０３）。異方性変位係数の指数は、−２π２［ｈ２ａ＊２Ｕ１１＋…＋２ｈｋａ＊ｂ＊Ｕ１２］の形態をとる。
【００７０】
【表４】
2005513066.tif 000012
【００７１】
表５．  ２−ＭｂｉｓＰの水素座標（×１０４）及び等方性変位パラメーター（Å２×１０３）。
【００７２】
【表５】
2005513066.tif 000013
【００７３】
表６．  ２−ＭｂｉｓＰの捩れ角度［°］。
【００７４】
【表６】
2005513066.tif 000014
【００７５】
表７．  ２−ＭｂｉｓＰの観察された及び計算された構造因子。
【００７６】
【表７Ａ】
2005513066.tif 000015
【００７７】
【表７Ｂ】
2005513066.tif 000016
【００７８】
【表７Ｃ】
2005513066.tif 000017
【００７９】
【表７Ｄ】
2005513066.tif 000018
【００８０】
【表７Ｅ】
2005513066.tif 000019
【００８１】
【表７Ｆ】
2005513066.tif 000020
【００８２】
【表７Ｇ】
2005513066.tif 000021
【００８３】
【表７Ｈ】
2005513066.tif 000022
【００８４】
【表７Ｉ】
2005513066.tif 000023
【００８５】
【表７Ｊ】
2005513066.tif 000024
【００８６】
【表７Ｋ】
2005513066.tif 000025
【００８７】
【表７Ｌ】
2005513066.tif 000026
【００８８】
【表７Ｍ】
2005513066.tif 000027
【図面の簡単な説明】
【００８９】
【図１】図１Ａ−１Ｅは、本明細書中に記載され、そして試験された化合物、即ち、本明細書中で以下１，２５（ＯＨ）２１９−ノル−Ｄ３と呼ぶ、１α，２５−ジヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ３（図１Ａ）；本明細書中で以下１，２５（ＯＨ）２Ｄ３と呼ぶ、天然のホルモン１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（図１Ｂ）；本明細書中で以下２−Ｍｐｒｅｇｎａと呼ぶ、１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−プレグナカルシフェロール（図１Ｃ）；本明細書中で以下２−ＭｂｉｓＰと呼ぶ、（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロール（図１Ｄ）を；そして本明細書中で以下２−ＭＰと呼ぶ、１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ホモプレグナカルシフェロール（図１Ｅ）；の構造を例示し；
【図２】図２は、全長の組換えラットビタミンＤ受容体への［３Ｈ］−１，２５−（ＯＨ）２−Ｄ３の結合と競合する、１，２５−（ＯＨ）２１９−ノル−Ｄ３、２−Ｍｐｒｅｇｎａ、２−ＭｂｉｓＰ、２−ＭＰ及び１，２５（ＯＨ）２Ｄ３の相対的な活性を例示するグラフであり；
【図３】図３は、１，２５−（ＯＨ）２１９−ノル−Ｄ３、２−Ｍｐｒｅｇｎａ、２−ＭｂｉｓＰ、２−ＭＰ及び１，２５（ＯＨ）２Ｄ３の濃度の関数としてのＨＬ−６０細胞の分化のパーセントを例示するグラフであり；
【図４】図４Ａ−４Ｃは、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３及び１，２５（ＯＨ）２１９−ノル−Ｄ３の骨カルシウム移動活性を、２−ＭｂｉｓＰ（図４Ａ）、２−Ｍｐｒｅｇｎａ（図４Ｂ）、及び２−ＭＰ（図４Ｃ）と比較して例示する棒グラフであり；
【図５】図５Ａ−５Ｃは、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３及び１，２５（ＯＨ）２１９−ノル−Ｄ３の腸管のカルシウム輸送活性を、２−ＭｂｉｓＰ（図４Ａ）、２−Ｍｐｒｅｇｎａ（図４Ｂ）、及び２−ＭＰ（図４Ｃ）と比較して例示する棒グラフであり；
【図６】図６は、１，２５（ＯＨ）２Ｄ３及び１，２５（ＯＨ）２１９−ノル−Ｄ３の長期にわたる投与を伴う治療後のメスのラットの血中の血清カルシウム濃度を、２−ＭｂｉｓＰ（図６Ａ）、２−Ｍｐｒｅｇｎａ（図６Ｂ）、及び２−ＭＰ（図６Ｃ）と比較して例示する棒グラフであり；そして
【図７】図７は、本明細書中で発見され、そして記載された原子位置パラメーターによって定義された２−ＭｂｉｓＰの三次元構造の例示である。
【図１】
2005513066.tif 000036
【図２】
2005513066.tif 000037
【図３】
2005513066.tif 000038
【図４】
2005513066.tif 000039
【図５】
2005513066.tif 000040
【図６】
2005513066.tif 000041
【図７】
2005513066.tif 000042
【手続補正書】
【提出日】平成17年1月5日(2005.1.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式：
【化１】
2005513066.tif 000043
を有する（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロール（ｂｉｓｈｏｍｏｐｒｅｇｎａｃａｌｃｉｆｅｒｏｌ）。
【請求項２】
結晶質形態の（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロール。
【請求項３】
Ｐ２（１）２（１）２（１）の斜方晶系空間群並びにａ＝６．６Å、ｂ＝１５．５Å、ｃ＝２０．１Å、α＝９０°、β＝９０°及びγ＝９０°の単位格子寸法によって定義される分子充填配列を有する、請求項２に記載の結晶質形態。
【請求項４】
請求項３に記載のパラメーターによって定義されるとおりの、（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールの三次元構造。
【請求項５】
有効な量の以下の式：
【化２】
2005513066.tif 000044
を有する（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールを含んでなる、乾癬を治療するための組成物。
【請求項６】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、経口的、非経口的、経皮的、または局所的に投与される、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、約０．０１μｇ／組成物ｇｍないし約１００μｇ／組成物ｇｍの量で存在する、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
白血病、大腸癌、乳癌又は前立腺癌からなる群から選択される疾患を治療するための組成物であって、有効な量の以下の式：
【化３】
2005513066.tif 000045
を有する（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールを含んでなる、前記組成物。
【請求項９】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、経口的、非経口的、又は経皮的に投与される、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、約０．０１μｇ／組成物ｇｍないし約１００μｇ／組成物ｇｍの量で存在する、請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
多発性硬化症、ルーピス（ｌｕｐｉｓ）、真性糖尿病、宿主対移植片反応、及び器官移植の拒絶からなる群から選択される自己免疫疾患を治療するための組成物であって、有効な量の以下の式：
【化４】
2005513066.tif 000046
を有する（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールを含んでなる、前記組成物。
【請求項１２】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、経口的、非経口的、又は経皮的に投与される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、約０．０１μｇ／組成物ｇｍないし約１００μｇ／組成物ｇｍの量で存在する、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】
慢性関節リウマチ、喘息、及び炎症性腸疾患からなる群から選択される炎症性疾患を治療するための組成物であって、有効な量の以下の式：
【化５】
2005513066.tif 000047
を有する（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールを含んでなる、前記組成物。
【請求項１５】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、経口的、非経口的、又は経皮的に投与される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、約０．０１μｇ／組成物ｇｍないし約１００μｇ／組成物ｇｍの量で存在する、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
皺、十分な皮膚の堅さの欠如、十分な真皮の水分補給の欠如及び不十分な皮脂の分泌からなる群から選択される皮膚の症状を治療するための組成物であって、有効な量の以下の式：
【化６】
2005513066.tif 000048
を有する（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールを含んでなる、前記組成物。
【請求項１８】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、経口的、非経口的、経皮的、又は局所的に投与される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、約０．０１μｇ／組成物ｇｍないし約１００μｇ／組成物ｇｍの量で存在する、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
有効な量の以下の式：
【化７】
2005513066.tif 000049
を有する（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールを含んでなる、腎性骨ジストロフィーを治療するための組成物。
【請求項２１】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、経口的、非経口的、又は経皮的に投与される、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールが、約０．０１μｇ／組成物ｇｍないし約１００μｇ／組成物ｇｍの量で存在する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２３】
（ａ）アセトン、酢酸エチル、イソプロパノール、クロロホルム、ジクロロメタン及びジエチルエーテルからなる群から選択される溶媒を、不活性雰囲気下で沸騰させ；
（ｂ）精製されるべき（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールを含有する生成物を、前記溶媒中に溶解し；
（ｃ）前記溶媒及び溶解された生成物を、周囲温度より低く十分な時間冷却して、（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールの結晶の沈殿物を形成し、そして
（ｄ）（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールの結晶を回収すること；
の工程を含んでなる、（２０Ｓ）−１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールの精製方法。
【請求項２４】
前記溶媒及び溶解した生成物を、周囲温度より低く冷却する前に、周囲温度まで冷却させる更なる工程を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記不活性雰囲気が、アルゴン雰囲気である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記溶媒及び溶解した生成物が、約１．７℃（約３５°Ｆ）ないし約７．２℃（約４５°Ｆ）間に冷却される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
前記回収工程が、濾過を含んでなる、請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】
前記工程（ｄ）から回収された結晶を前記工程（ｂ）の生成物として使用して、前記工程（ａ）ないし工程（ｄ）を繰り返すことを含んでなる更なる工程（ｅ）を含む、請求項２３に記載の方法。
【国際調査報告】
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