(57)【要約】本発明は、新規スルホキシイミン化合物、これらの化合物を含む組成物およびCYP24の阻害剤としてこれらの化合物を用いる方法を提供する。特に、本発明の化合物は、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3のレベルの調節が有益である疾患、例えば細胞増殖性障害を治療するために有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Iの化合物、ならびにその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物およびプロドラッグ：
2005529183.tif 000097
（式中
R1がOH、OC1-4アルキル、およびハロからなる群より独立に選択され；
R2がH、OH、OC1-4アルキル、およびハロからなる群より独立に選択され；
各R3が両方Hであるか、または一緒になって=CH2を形成し；
R4がC1-4アルキルであり；
----が単結合または二重結合を表し；
各R5が同じでも異なっていてもよく、水素、ハロおよびC1-4アルキルからなる群より選択されるか、または各R5が一緒になってC3-6シクロアルキル環を形成してもよく；
R6がC1-6アルキル、C3-6シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリール（C1-6アルキル、C3-6シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールがそれぞれ無置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、CF3、NO2およびハロからなる群より独立に選択される1〜5個の置換基で置換されている）からなる群より選択され；
R7がH、C1-6アルキルおよびC(O)R8からなる群より選択され；かつ
R8がC1-6アルキル、C3-6シクロアルキル、アリール-C1-4アルキル、アリールおよびヘテロアリール（C1-6アルキル、C3-6シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールがそれぞれ無置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、CF3、NO2およびハロからなる群より独立に選択される1〜5個の置換基で置換されている）からなる群より選択され；
ただしC22とC23との間に二重結合がある場合、C23に結合しているR5基が一つだけで、R5が水素、ハロおよびC1-4アルキルからなる群より選択される）。
【請求項２】
R1がOH、OCH3およびフルオロからなる群より選択される、請求項1記載の化合物。
【請求項３】
R1がOHである、請求項2記載の化合物。
【請求項４】
R2がH、OH、OCH3およびフルオロからなる群より選択される、請求項1〜3のいずれか一項記載の化合物。
【請求項５】
R2がH、OHおよびフルオロからなる群より選択される、請求項4記載の化合物。
【請求項６】
R2がHおよびOHからなる群より選択される、請求項5記載の化合物。
【請求項７】
R1およびR2が両方OHである、請求項1記載の化合物。
【請求項８】
各R3が一緒になって=CH2を形成する、請求項1〜7のいずれか一項記載の化合物。
【請求項９】
各R3がHである、請求項1〜7のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１０】
R4がCH3である、請求項1〜9のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１１】
各R5がF、C1-4アルキルおよびHからなる群より選択されるか、または一緒になってC3-5シクロアルキル環を形成する、請求項1〜10のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１２】
各R5がF、CH3およびHからなる群より選択されるか、または一緒になってC3-4シクロアルキル環を形成する、請求項11記載の化合物。
【請求項１３】
両方のR5がCH3、FもしくはHであるか、または一緒になってシクロプロピル環を形成する、請求項12記載の化合物。
【請求項１４】
各R5がHである、請求項13記載の化合物。
【請求項１５】
各R5が一緒になってシクロプロピル環を形成する、請求項13記載の化合物。
【請求項１６】
R6がC1-4アルキル、C3-5シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリール（C1-4アルキル、C3-5シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールがそれぞれ無置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、CF3、NO2およびハロからなる群より独立に選択される1〜3個の置換基で置換されている）からなる群より選択される、請求項1〜15のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１７】
R6がC1-4アルキル、C3-5シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリール（C1-4アルキル、C3-5シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールがそれぞれ無置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、CF3、NO2およびハロからなる群より独立に選択される1〜2個の置換基で置換されている）からなる群より選択される、請求項16記載の化合物。
【請求項１８】
R6がC1-4アルキルおよびアリール（アリールが無置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、CF3、NO2およびハロからなる群より独立に選択される1〜2個の置換基で置換されている）からなる群より選択される、請求項17記載の化合物。
【請求項１９】
R6がC1-4アルキルおよびフェニル（フェニルが無置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、CF3、NO2およびハロからなる群より独立に選択される1〜2個の置換基で置換されている）からなる群より選択される、請求項18記載の化合物。
【請求項２０】
R6が無置換またはCH3、OCH3、NO2、FおよびClからなる群より独立に選択される1〜2個の置換基で置換されているフェニル基である、請求項19記載の化合物。
【請求項２１】
R6が無置換フェニルまたはCH3、OCH3、NO2、FおよびClからなる群より独立に選択される1個の置換基で置換されているフェニルである、請求項20記載の化合物。
【請求項２２】
R6がt-ブチルである、請求項20記載の化合物。
【請求項２３】
R7がC1-4アルキルおよびHからなる群より選択される、請求項1〜22のいずれか一項記載の化合物。
【請求項２４】
R7がCH3またはHから選択される、請求項23記載の化合物。
【請求項２５】
R7がC(O)R8である、請求項1〜24のいずれか一項記載の化合物。
【請求項２６】
R8がC1-4アルキル、C3-5シクロアルキル、アリール-C1-2アルキル、アリールおよびヘテロアリール（C1-4アルキル、C3-5シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールがそれぞれ無置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、CF3、NO2およびハロからなる群より独立に選択される1〜3個の置換基で置換されている）からなる群より選択される、請求項25記載の化合物。
【請求項２７】
R8がC1-4アルキル、C3-5シクロアルキル、PhCH2およびフェニル（C1-4アルキル、C3-5シクロアルキル、PhCH2およびフェニルがそれぞれ無置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、CF3、NO2、FおよびClからなる群より独立に選択される1〜2個の置換基で置換されている）からなる群より選択される、請求項26記載の化合物。
【請求項２８】
R8がC1-4アルキル、PhCH2およびフェニル（C1-4アルキル、PhCH2およびフェニルがそれぞれ無置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、CF3、NO2、FおよびClからなる群より独立に選択される1個の置換基で置換されている）からなる群より選択される、請求項26記載の化合物。
【請求項２９】
R6がC1-6アルキルであり、C16とC17との間の----が二重結合である、請求項1記載の化合物。
【請求項３０】
C22とC23との間の----が単結合を表す、請求項1〜29のいずれか一項記載の化合物。
【請求項３１】
C16とC17との間の----が単結合を表す、請求項1〜28のいずれか一項記載の化合物。
【請求項３２】
両方の----が単結合を表す、請求項1〜28のいずれか一項記載の化合物。
【請求項３３】
下記の相対立体化学を有する、請求項1〜32のいずれか一項記載の化合物：
2005529183.tif 000098
。
【請求項３４】
下記の相対立体化学を有する、請求項31記載の化合物：
2005529183.tif 000099
。
【請求項３５】
下記の相対立体化学を有する、請求項1記載の化合物：
2005529183.tif 000100
。
【請求項３６】
下記からなる群より選択される、請求項1記載の化合物：
2005529183.tif 000101
2005529183.tif 000102
2005529183.tif 000103
2005529183.tif 000104
。
【請求項３７】
I(a)；I(c)；I(e)；I(g)；I(i)；I(j)；I(l)；I(m)；I(n)；I(o)；I(p)およびI(q)からなる群より選択される、請求項36記載の化合物。
【請求項３８】
I(a)、I(c)、I(e)、I(g)、I(i)、I(j)、I(l)、I(n)I(o)およびI(p)からなる群より選択される、請求項37記載の化合物。
【請求項３９】
請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物および薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
【請求項４０】
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、またはその類似体のレベルの調節が有益である疾患を治療する方法であって、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の有効量をそれを必要とする細胞または動物に投与する段階を含む方法。
【請求項４１】
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、またはその類似体のレベルの上昇が有益である疾患を治療する方法であって、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の有効量をそれを必要とする細胞または動物に投与する段階を含む方法。
【請求項４２】
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、またはその類似体の異化の阻害が有益である疾患を治療する方法であって、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の有効量をそれを必要とする細胞または動物に投与する段階を含む方法。
【請求項４３】
疾患が癌、皮膚障害、副甲状腺障害、自己免疫障害および骨障害からなる群より選択される、請求項41および42のいずれか一項記載の方法。
【請求項４４】
疾患が癌、乾癬、副甲状腺機能亢進症、続発性副甲状腺機能亢進症および骨粗鬆症からなる群より選択される、請求項43記載の方法。
【請求項４５】
細胞増殖を阻害し、かつ/または細胞分化を促進する方法であって、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の有効量をそれを必要とする細胞または動物に投与する段階を含む方法。
【請求項４６】
細胞が癌細胞である、請求項45記載の方法。
【請求項４７】
癌が乳癌、肺癌、前立腺癌、結腸癌、結腸直腸癌、腎臓癌、頭頸部癌、膵臓癌、カポジ肉腫および白血病から選択される、請求項46記載の方法。
【請求項４８】
細胞が皮膚細胞である、請求項45記載の方法。
【請求項４９】
細胞がケラチン細胞である、請求項48記載の方法。
【請求項５０】
細胞のCYP24活性を阻害する方法であって、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の有効量を細胞に投与することによる方法。
【請求項５１】
CYP24活性の阻害が有益である疾患を治療する方法であって、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の有効量をそれを必要とする動物または細胞に投与する段階を含む方法。
【請求項５２】
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、またはその類似体のレベルの調節が有益である疾患を治療するための、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項５３】
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、またはその類似体のレベルの上昇が有益である疾患を治療するための、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項５４】
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、またはその類似体の異化の阻害が有益である疾患を治療するための、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項５５】
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、またはその類似体のレベルの調節が有益である疾患治療用の医薬品を調製するための、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項５６】
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、またはその類似体のレベルの上昇が有益である疾患治療用の医薬品を調製するための、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項５７】
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、またはその類似体の異化の阻害が有益である疾患治療用の医薬品を調製するための、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項５８】
細胞増殖を阻害し、かつ/または細胞分化を促進するための、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項５９】
細胞増殖阻害および/または細胞分化促進用の医薬品を調製するための、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項６０】
CYP24活性を阻害するための、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項６１】
CYP24活性阻害用の医薬品を調製するための、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項６２】
ビタミンD受容体アゴニストの有効性を高める方法であって、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の有効量およびビタミンD受容体アゴニストの有効量をそれを必要とする動物または細胞に同時投与する段階を含む方法。
【請求項６３】
疾患の治療法であって、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の有効量およびビタミンD受容体アゴニストの有効量をそれを必要とする動物または細胞に同時投与する段階を含む方法。
【請求項６４】
ビタミンD受容体アゴニストが1α,25-ジヒドロキシビタミンD3（カルシトリオール）、またはその類似体である、請求項62および63のいずれか一項記載の方法。
【請求項６５】
化合物がI(a)、I(c)、I(e)、I(g)、I(i)、I(j)、I(l)、I(n)およびI(o)からなる群より選択される、請求項62〜64のいずれか一項記載の方法。
【請求項６６】
疾患が癌、皮膚障害、副甲状腺障害、自己免疫障害および骨障害からなる群より選択される、請求項62〜65のいずれか一項記載の方法。
【請求項６７】
疾患が癌、乾癬、副甲状腺機能亢進症、続発性副甲状腺機能亢進症および骨粗鬆症からなる群より選択される、請求項66記載の方法。
【請求項６８】
疾患が癌である、請求項67記載の方法。
【請求項６９】
癌が乳癌、肺癌、前立腺癌、結腸癌、結腸直腸癌、腎臓癌、頭頸部癌、膵臓癌、カポジ肉腫および白血病からなる群より選択される、請求項68記載の方法。
【請求項７０】
ビタミンD受容体アゴニストの有効性を高めるための、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項７１】
ビタミンD受容体アゴニストの有効性増強用の医薬品を調製するための、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項７２】
請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の有効量およびビタミンD受容体アゴニストの有効量の同時投与が有益である疾患を治療するための、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物およびビタミンD受容体アゴニストの使用。
【請求項７３】
請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の有効量およびビタミンD受容体アゴニストの有効量の同時投与が有益である疾患治療用の医薬品を調製するための、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項７４】
ビタミンD受容体アゴニストが1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、またはその類似体である、請求項70〜73のいずれか一項記載の使用。
【請求項７５】
化合物がI(a)、I(c)、I(e)、I(g)、I(i)、I(j)、I(l)、I(n)およびI(o)からなる群より選択される、請求項70〜74のいずれか一項記載の使用。
【請求項７６】
疾患が癌、皮膚障害、副甲状腺障害、自己免疫障害および骨障害からなる群より選択される、請求項70〜75のいずれか一項記載の使用。
【請求項７７】
疾患が癌、乾癬、副甲状腺機能亢進症、続発性副甲状腺機能亢進症および骨粗鬆症からなる群より選択される、請求項76記載の使用。
【請求項７８】
癌、皮膚障害、副甲状腺障害、自己免疫障害または骨障害の治療法であって、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の有効量を、癌、皮膚障害、副甲状腺障害、自己免疫障害または骨障害を治療するための一つまたは複数の治療または治療法との組み合わせで、それを必要とする動物または細胞に投与する段階を含む方法。
【請求項７９】
癌の治療法であって、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の有効量を、癌を治療するための一つまたは複数の治療または治療法との組み合わせで投与する段階を含む方法。
【請求項８０】
癌を治療するための一つまたは複数の治療または治療法が手術、放射線照射、化学療法および生物療法からなる群より選択される、請求項79記載の方法。
【請求項８１】
乾癬の治療法であって、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の有効量を、乾癬を治療するための一つまたは複数の治療または治療法との組み合わせで投与する段階を含む方法。
【請求項８２】
乾癬を治療するための一つまたは複数の治療または治療法が紫外線B照射、化学療法および生物療法からなる群より選択される、請求項81記載の方法。
【請求項８３】
癌、皮膚障害、副甲状腺障害、自己免疫障害または骨障害を治療するための、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の、一つまたは複数の治療または治療法との組み合わせでの使用。
【請求項８４】
癌を治療するための、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の、一つまたは複数の治療または治療法との組み合わせでの使用。
【請求項８５】
乾癬を治療するための、請求項1〜38のいずれか一項記載の化合物の、一つまたは複数の治療または治療法との組み合わせでの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、NIH助成番号CA44530の下、政府の支援により行った。  
【０００２】
発明の分野
本発明は、酵素CYP24の選択的阻害を示す新規24-スルホキシイミンビタミンD3化合物、それらを含む薬学的および診断用組成物、ならびにそれらの医学的使用、特に癌、皮膚障害、骨障害、副甲状腺障害、創傷治癒、骨粗鬆症および自己免疫障害の治療および/または予防における使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
ビタミンD代謝経路は特定の段階で高度に調節され、副甲状腺ホルモンの分泌を制御する代謝物を生成する、生体内分泌系の一部である（Beckman, M.およびDeLuca, H. (1997) Methods in Enzymol. 282、200-223；Jones, G.、Strugnell, S.およびDeLuca, H. (1998) Physiol. Rev. 78、1193-1231）。1α,25-ジヒドロキシビタミンD3はビタミンD経路において生成されるホルモンのカルシトリオール（下記参照）としても知られており、血中のリン酸塩およびカルシウムのレベルを調節し、これらは次いで骨量、骨の状態を制御し、皮膚および免疫系における細胞の分化に影響をおよぼす（Armbrecht, H.J.、Okuda, K.、Wongsurawat, N.、Nemani, R.、Chen, M.、およびBoltz, M. (1992) J. Steroid Biochem. Molec. Biol. 43、1073-1081）。ビタミンD経路において、チトクロームP450群は通常はビタミンD3の1位、25位、および24位でヒドロキシル化により官能基を導入する酵素である（Beckman, M.、およびDeLuca, H. (1997) Methods in Enzymol. 282、200-223）。
2005529183.tif 000002
【０００４】
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3は、CYP24として知られているミトコンドリアP450によって1α,24,25-トリヒドロキシ-D3に変換される（Bell, N.H.、(1998) J. Bone Miner. Res. 13、350-35211）。CYP24は1α,25-ジヒドロキシ-D3によって誘導され、腎臓ならびに副甲状腺細胞、ケラチン細胞、骨芽細胞、および腸細胞などの他のビタミンD標的組織で見いだされる（Jones, G.、Strugnell, S.、およびDeLuca, H. (1998) Physiol. Rev. 78、1193-1231）。
【０００５】
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3（カルシトリオール）およびその合成類似体の生物学的効果は、核ビタミンD受容体（VDR）によって仲介される。カルシトリオールは正常および新生物細胞（例えば前立腺癌細胞）に対する抗増殖および増殖調節効果において重要な役割を有している。VDR配位子は広範な臨床適用の可能性を有するが、多くの場合に、持続的全身投与を妨げる副作用として高カルシウム血症が発生する。カルシトリオールおよびその類似体の生物学的寿命を延ばし、したがってそれらを少量用いてヒトにおける有効な化学療法を可能にするために、これらの化合物の異化を阻害することが期待される。そのような少量投与は、これらの化合物の医薬品としての使用に伴う高カルシウム血性の毒性を回避する、または少なくとも最小限に抑えると思われる。さらに、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の異化の阻害はこのホルモンの内因性レベルを高め、このことも有益な治療効果を有すると思われる。
【０００６】
CYP24の活性を調節し、したがって1α,25-ジヒドロキシビタミンD3およびその類似体のレベルを調節する化合物が必要とされている。
【発明の開示】
【０００７】
発明の概要
特定の24-スルホキシイミンビタミンD3化合物は酵素CYP24の選択的阻害を示すことが明らかにされている。
【０００８】
したがって、本発明は式Iの化合物、ならびにその薬学的に許容される酸付加塩、水和物、溶媒和物およびプロドラッグを提供する：
2005529183.tif 000003
（式中
R1はOH、OC1-4アルキル、およびハロからなる群より独立に選択され；
R2はH、OH、OC1-4アルキル、およびハロからなる群より独立に選択され；
各R3は両方Hであるか、または一緒になって=CH2を形成し；
R4はC1-4アルキルであり；
----は単結合または二重結合を表し；
各R5は同じでも異なっていてもよく、水素、ハロおよびC1-4アルキルからなる群より選択されるか、または各R5は一緒になってC3-6シクロアルキル環を形成してもよく；
R6はC1-6アルキル、C3-6シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリール（C1-6アルキル、C3-6シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールはそれぞれ無置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、CF3、NO2およびハロからなる群より独立に選択される1〜5個の置換基で置換されている）からなる群より選択され；
R7はH、C1-6アルキルおよびC(O)R8からなる群より選択され；かつ
R8はC1-6アルキル、C3-6シクロアルキル、アリール-C1-4アルキル、アリールおよびヘテロアリール（C1-6アルキル、C3-6シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールはそれぞれ無置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、CF3、NO2およびハロからなる群より独立に選択される1〜5個の置換基で置換されている）からなる群より選択され；
ただしC22とC23との間に二重結合がある場合、C23に結合しているR5基は一つだけで、R5は水素、ハロおよびC1-4アルキルからなる群より選択される）。
【０００９】
本発明のもう一つの局面に従い、本発明の化合物および薬学的に許容される担体または希釈剤を含む薬学的組成物が提供される。
【００１０】
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3を代謝する酵素CYP24を選択的に調節することにより、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3（内因性または化学療法の一部として投与されたもののいずれも）、または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3類似体のレベルも調節されることになる。したがって、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3のレベルの調節が有益である疾患を、CYP24の調節剤を用いて治療することができる。さらに、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の異化を阻害することにより、本発明の化合物はこのホルモンの内因性レベルを高め、これにより同様の有益な治療効果が得られることになる。CYP24に優先的に作用することにより、他の酵素および受容体との相互作用による副作用が低減する。したがって、本発明は、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3類似体のレベルの調節が有益である疾患を治療する方法であって、本発明の化合物の有効量をそれを必要とする細胞または動物に投与する段階を含む方法を提供する。本発明は、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3類似体のレベルの調節が有益である疾患を治療するための、本発明の化合物の使用も含む。さらに、本発明は、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3類似体のレベルの調節が有益である疾患治療用の医薬品を調製するための、本発明の化合物の使用も含む。
【００１１】
CYP24の阻害は1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、またはその類似体の異化を阻害し、それによりこれらの化合物の生物学的寿命を延長し、したがってそれらを少量用いて有効な疾患治療が可能となる。そのような少量投与は、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3およびその類似体の医薬品としての使用に伴う高カルシウム血性の毒性を回避する、または少なくとも最小限に抑えると思われる。したがって、一つの態様において、本発明は、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3類似体の異化の阻害が有益である疾患を治療する方法であって、本発明の化合物の有効量をそれを必要とする細胞または動物に投与する段階を含む方法を提供する。本発明は、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3類似体の異化の阻害が有益である疾患を治療するための、本発明の化合物の使用も含む。さらに、本発明は、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3類似体の異化の阻害が有益である疾患治療用の医薬品を調製するための、本発明の化合物の使用も含む。
【００１２】
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3またはその類似体のレベルの調節が有益であると考えられる疾患には下記が含まれるが、これらに限定されることはない：
（i）副甲状腺−副甲状腺機能亢進症および低下症、オスド副甲状腺機能低下症（osudohypoparathyroism）、続発性副甲状腺機能亢進症；
（ii）膵臓−糖尿病；
（iii）甲状腺−髄様癌；
（iv）皮膚−乾癬；創傷治癒；
（v）肺−サルコイドーシスおよび結核；
（vi）腎臓−慢性腎疾患、低リン酸血症性VDRR、ビタミンD依存性くる病；
（vii）骨−抗痙攣治療、骨線維形成不全症（fibrogenesis imperfecta ossium）、嚢腫性線維性骨炎、骨軟化症、骨粗鬆症、骨減少症、骨硬化症、腎性骨形成異常症、くる病；
（viii）腸−グルココルチコイド拮抗作用、特発性高カルシウム血症、吸収不良症候群、脂肪便症、熱帯性下痢；および
（ix）自己免疫障害。
【００１３】
本発明の態様において、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3類似体のレベルの調節が有益である疾患は、癌、皮膚障害（例えば乾癬）、副甲状腺障害（例えば副甲状腺機能亢進症および続発性副甲状腺機能亢進症）、骨障害（例えば骨粗鬆症）および自己免疫障害からなる群より選択される。
【００１４】
本発明のさらなる局面に従い、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3類似体の異化の阻害が有益である疾患は細胞増殖性障害である。したがって、細胞増殖を調節し（好ましくは細胞増殖を阻害し）、かつ/または細胞分化を促進する方法であって、本発明の化合物の有効量をそれを必要とする細胞または動物に投与する段階を含む方法が提供される。本発明は細胞増殖を調節し（好ましくは細胞増殖を阻害し）、かつ/または細胞分化を促進するための、本発明の化合物の使用も含む。本発明は、細胞増殖調節（好ましくは細胞増殖阻害）および/または細胞分化促進用の医薬品を調製するための、本発明の化合物の使用もさらに含む。
【００１５】
本発明のもう一つの態様において、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3類似体のレベルの調節が有益である疾患は癌である。したがって、本発明は、癌の治療法であって、本発明の化合物の有効量をそれを必要とする細胞または動物に投与する段階を含む方法を提供する。本発明は癌を治療するための、本発明の化合物の使用も含む。本発明は、癌治療用の医薬品を調製するための、本発明の化合物の使用もさらに含む。本発明の態様において、癌は乳癌、肺癌、前立腺癌、結腸および結腸直腸癌、腎臓癌、頭頸部癌、膵臓癌、皮膚癌、カポジ肉腫ならびに白血病からなる群より選択される。
【００１６】
もう一つの局面において、本発明は、細胞のCYP24活性を調節する方法であって、本発明の化合物の有効量を投与することによる方法を提供する。さらなる局面において、本発明は、細胞のCYP24活性を阻害する方法であって、本発明の化合物の有効量を投与することによる方法を提供する。本発明はCYP24活性を調節する、好ましくは阻害するための、本発明の化合物の使用も提供する。本発明は、CYP24活性調節、好ましくはCYP24活性阻害用の医薬品を調製するための、本発明の化合物の使用をさらに提供する。
【００１７】
本発明の化合物は、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、もしくはその類似体のレベルの調節、および/または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、もしくはその類似体の異化の阻害が有益である疾患に対して、単独でも、CYP24活性を調節する他の物質との組み合わせでも、または他の型の治療（CYP24を調節してもよく、調節しなくてもよい）との組み合わせでも用いることができる。好ましくは、本発明の化合物は1α,25-ジヒドロキシビタミンD3（カルシトリオール）、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3類似体、または他のビタミンD受容体アゴニストとの組み合わせで投与する。1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、またはその類似体などのビタミンD受容体アゴニストの異化の阻害は、これらの治療の生物学的寿命または有効性を延長し、したがってこの薬物を少量用いてヒトにおける有効な化学療法が可能となる。そのような少量投与は、これらの化合物の医薬品としての使用に伴う高カルシウム血性の毒性を回避する、または少なくとも最小限に抑えると思われる。したがって、本発明は、ビタミンD受容体アゴニスト、好ましくは1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、またはその類似体の有効性を高める方法であって、本発明の化合物の有効量およびビタミンD受容体アゴニスト、好ましくは1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、またはその類似体の有効量を同時投与する段階を含む方法を提供する。さらに本発明は、ビタミンD受容体アゴニスト、好ましくは1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、またはその類似体の有効性を高めるための、本発明の化合物の使用、およびビタミンD受容体アゴニスト、好ましくは1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、またはその類似体の有効性増強用の医薬品を調製するための、本発明の化合物の使用を含む。
【００１８】
本発明の他の特徴および利点は、下記の詳細な説明を読めば明らかになると思われる。しかし、この詳細な説明から当業者には本発明の精神および範囲内の様々な変更および改変が明らかになると思われるため、詳細な説明および特定の実施例は、本発明の好ましい態様を示しているが、これらは例示のために示すにすぎないことが理解されるべきである。
【００１９】
発明の詳細な説明
I.  定義
本明細書において用いられる「C1-4アルキル」という用語は、1個から4個の炭素原子を含む直鎖および/または分枝鎖アルキル基を意味し、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、t-ブチルなどが含まれる。
【００２０】
本明細書において用いられる「C1-4アルコキシ」という用語は、1個から4個の炭素原子を含む直鎖および/または分枝鎖アルコキシ基を意味し、メトキシ、エトキシ、プロピルオキシ、イソプロピルオキシ、t-ブトキシなどが含まれる。
【００２１】
本明細書において用いられる「シクロアルキル」という用語は、3個から6個の炭素原子を含む無置換または置換飽和環を意味し、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが含まれる。
【００２２】
本明細書において用いられる「アリール」という用語は、6個から14個の炭素原子を含む無置換または置換単環式または二環式芳香族基を意味し、フェニルおよびナフチルなどが含まれる。
【００２３】
本明細書において用いられる「ヘテロアリール」という用語は、5個から14個の炭素原子を含み、そのうち1〜3個の原子はS、OおよびNからなる群より選択されるヘテロ原子であってもよい、無置換または置換単環式または二環式複素芳香族基を意味し、フラニル、チエニル、ピロロ、ピリジル、インドロ、ベンゾフラニルなどが含まれる。
【００２４】
本明細書において用いられる「ハロ」という用語はハロゲンを意味し、クロロ、フルオロ、ブロモ、ヨードが含まれる。
【００２５】
一つまたは複数の置換基を含む前述のいかなる基に関しても、当然のことながら、そのような基は立体的に実現不可能および/または合成的に不可能な、いかなる置換または置換パターンも含まないことが理解される。
【００２６】
「薬学的に許容される」という用語は、動物、特にヒトの治療に適合性であることを意味する。
【００２７】
本明細書において用いられる「薬学的に許容される酸付加塩」という用語は、本発明の任意の塩基化合物、またはその任意の中間体の任意の非毒性有機または無機塩を意味する。例えば、本発明の化合物はイミン窒素において酸付加塩を形成することができる（そのような塩の調製については下記を参照されたい：Brandt, J.; Gais, H-J. Tetrahedron; Asymmetry、1997、8、909およびShiner, C. S.; Berks, A. H. J. Org. Chem. 1988、53、5542、Appel, R.; Fehlaber, H.; Hanssgen, D.; Schollhorn, R. Chem, Ber. 1966、99、3108、Akasara, T.; Furukawa, N.; Oae, S. Phosphorus and Sulfur 1985、21、277、Johnson, C. R. Janiga, E. R. Haake, M. J. Am. Chem. Soc. 1968、90、3890およびJohnson, C. R. Janiga, E. R. J. Am. Chem. Soc. 1973、95、7692）。適当な塩を形成する例示的無機酸には、塩酸、臭化水素酸、硫酸およびリン酸、ならびにオルトリン酸一水素ナトリウムおよび硫酸水素カリウムなどの金属塩が含まれる。適当な塩を形成する例示的有機酸には、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、安息香酸、フェニル酢酸、ケイ皮酸およびサリチル酸などのモノカルボン酸、ジカルボン酸、およびトリカルボン酸、ならびにp-トルエンスルホン酸およびメタンスルホン酸などのスルホン酸が含まれる。一酸塩または二酸塩のいずれも形成することができ、そのような塩は水和物、溶媒和物または実質的に無水物のいずれでも存在しうる。一般に、本発明の化合物の酸付加塩はそれらの遊離塩基体に比べて、水および様々な親水性有機溶媒への溶解性が高く、一般により高い融点を示す。適当な塩の選択は当業者には公知であると思われる。他の非薬学的に許容される塩、例えばシュウ酸塩を、例えば本発明の化合物の単離において、実験用、または後に薬学的に許容される酸付加塩に変換するために用いることもできる。
【００２８】
本明細書において用いられる「溶媒和物」という用語は、適当な溶媒の分子が結晶格子に取り込まれている、本発明の化合物を意味する。適当な溶媒は、投与する用量で生理的に耐容できるものである。適当な溶媒の例はエタノール、水などである。水が溶媒である場合、分子は「水和物」と呼ぶ。
【００２９】
本明細書において用いられる「本発明の（一つまたは複数の）化合物」という用語は、式Iの（一つまたは複数の）化合物、ならびにその酸付加塩、水和物、溶媒和物およびプロドラッグを意味する。
【００３０】
本明細書において用いられる物質の「有効量」または「十分な量」という用語は、臨床結果を含む有益な、または所望の結果をもたらすのに十分な量であり、したがって「有効量」はそれが適用されている状況に依存する。例えば、CYP24活性を調節する物質を投与する状況において、物質の有効量は、例えば、その物質を投与せずに得られる反応に比べて、そのようなCYP24活性の調節を達成するのに十分な量である。
【００３１】
本明細書において用いられ、当技術分野において十分に理解されているとおり、「治療」とは臨床結果を含む有益な、または所望の結果を得るためのアプローチである。有益な、または所望の臨床結果には、検出可能または検出不可能のいずれかに関わらず、一つまたは複数の症状または状態の軽減または回復、疾患の程度の低下、安定した疾患の状態（すなわち悪化させない）、疾患の拡散の防止、疾患進行の遅延または緩徐化、疾患状態の回復または緩和、および寛解（部分または全体のいずれか）が含まれうるが、これらに限定されることはない。「治療」は、治療を受けない場合に予想される生存に比べて、生存を延長することも意味する。
【００３２】
疾患または障害を「緩和する」とは、障害を治療しない場合に比べて、障害もしくは疾患状態の程度および/もしくは望ましくない臨床症状が軽減され、かつ／または進行の時間経過が緩徐化または延長されることを意味する。
【００３３】
本明細書において用いられる「調節する」という用語は、機能または活性（CYP24活性など）の阻害または抑制、ならびに機能または活性の増強を含む。
【００３４】
CYP24活性などの機能または活性を「阻害」または「抑制」または「低下」することは、対象となる状態またはパラメーター以外は同じ条件と比べて、あるいは別の条件と比べて、機能または活性を低下させることである。
【００３５】
本明細書において用いられる「動物」という用語は、ヒトを含む動物界のすべてのメンバーを含む。動物は好ましくはヒトである。
【００３６】
本明細書において用いられる「細胞」という用語は複数の細胞を含む。化合物を細胞に投与することは、インビボ、エクスビボ、およびインビトロでの治療を含む。
【００３７】
本明細書において用いられる「癌」という用語は、癌または新生物疾患のすべての型を含む。
【００３８】
本明細書において用いられる「1α,3β-立体化学」という用語は、基R1およびR2の相対的立体配置を意味し、この場合R2はページの平面の上にあり、R1はページの平面の下にある。本明細書において用いられる「1β,3α-立体化学」という用語は、基R1およびR2の相対的立体配置を意味し、この場合R1はページの平面の上にあり、R2はページの平面の下にある。
【００３９】
II.  本発明の化合物
酵素CYP24の選択的阻害を示す新規化合物を調製した。したがって、本発明の化合物は、CYP24活性を調節するため、およびそのような調節が有益である疾患または障害を治療するために有用である。
【００４０】
したがって、本発明は式Iの化合物、ならびにその薬学的に許容される酸付加塩、水和物、溶媒和物およびプロドラッグを提供する：
2005529183.tif 000004
（式中
R1はOH、OC1-4アルキル、およびハロからなる群より独立に選択され；
R2はH、OH、OC1-4アルキル、およびハロからなる群より独立に選択され；
各R3は両方Hであるか、または一緒になって=CH2を形成し；
R4はC1-4アルキルであり；
----は単結合または二重結合を表し；
各R5は同じでも異なっていてもよく、水素、ハロおよびC1-4アルキルからなる群より選択されるか、または各R5は一緒になってC3-6シクロアルキル環を形成してもよく；
R6はC1-6アルキル、C3-6シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリール（C1-6アルキル、C3-6シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールはそれぞれ無置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、CF3、NO2およびハロからなる群より独立に選択される1〜5個の置換基で置換されている）からなる群より選択され；
R7はH、C1-6アルキルおよびC(O)R8からなる群より選択され；かつ
R8はC1-6アルキル、C3-6シクロアルキル、アリール-C1-4アルキル、アリールおよびヘテロアリール（C1-6アルキル、C3-6シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールはそれぞれ無置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、CF3、NO2およびハロからなる群より独立に選択される1〜5個の置換基で置換されている）からなる群より選択され；
ただしC22とC23との間に二重結合がある場合、C23に結合しているR5基は一つだけで、R5は水素、ハロおよびC1-4アルキルからなる群より選択される）。
【００４１】
式Iの化合物は、R1がOH、OC1-4アルキル、およびハロからなる群より選択され、R2がH、OH、OC1-4アルキル、およびハロからなる群より選択されるものを含む。本発明の態様において、R1はOH、OCH3、およびフルオロからなる群より選択され、R2はH、OH、OCH3、およびフルオロからなる群より選択される。本発明のさらなる態様において、R1はOHであり、R2はHおよびOHからなる群より選択される。さらなる態様において、R1およびR2は両方OHである。
【００４２】
本発明は、各R3が両方Hであるか、または一緒になって=CH2を形成する、式Iの化合物を含む。本発明の態様において、R3は=CH2である。本発明のさらなる態様において、R3は両方Hである。
【００４３】
本発明は、R4がC1-4アルキルである、式Iの化合物を含む。本発明の態様において、R4はCH3である。
【００４４】
本発明は、各R5が同じでも異なっていてもよく、水素、ハロおよびC1-4アルキルからなる群より選択されるか、または各R5が一緒になってC3-6シクロアルキル環を形成してもよい、式Iの化合物を含む。本発明の態様において、各R5はF、C1-4アルキル基およびHからなる群より選択されるか、または各R5は一緒になってC3-5シクロアルキル環を形成してもよい。さらなる態様において、各R5基はF、CH3およびHからなる群より選択されるか、または各R5基は一緒になってC3-4シクロアルキル環を形成する。さらなる態様において、両方のR5は両方H、CH3もしくはFであるか、または各R5基は一緒になってシクロプロピル環を形成する。本発明のさらなる態様において、両方のR5はHである。
【００４５】
本発明は、R6がC1-6アルキル、C3-6シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリール（C1-6アルキル、C3-6シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールはそれぞれ無置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、CF3、NO2およびハロからなる群より独立に選択される1〜5個の置換基で置換されている）からなる群より選択される、式Iの化合物を含む。本発明の態様において、R6はC1-4アルキル、C3-5シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリール（C1-4アルキル、C3-5シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールはそれぞれ無置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、CF3、NO2およびハロからなる群より独立に選択される1〜3個の置換基で置換されている）からなる群より選択される。本発明のさらなる態様において、R6はC1-4アルキル、C3-5シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリール（C1-4アルキル、C3-5シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールはそれぞれ無置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、CF3、NO2およびハロからなる群より独立に選択される1〜2個の置換基で置換されている）からなる群より選択される。さらなる態様において、R6はC1-4アルキルおよびアリール（アリールは無置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、CF3、NO2およびハロからなる群より独立に選択される1〜2個の置換基で置換されている）からなる群より選択される。さらなる態様において、R6はC1-4アルキルおよびフェニル（フェニルは無置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、CF3、NO2およびハロからなる群より独立に選択される1〜2個の置換基で置換されている）からなる群より選択される。さらなる態様において、R6は無置換またはCH3、OCH3、NO2、FおよびClからなる群より独立に選択される1〜2個の置換基で置換されているフェニル基である。さらなる態様は、R6が無置換フェニルまたはCH3、OCH3、NO2、FおよびClからなる群より独立に選択される1個の置換基で置換されているフェニルである、式Iの化合物を含む。R6がt-ブチルであることも、本発明の態様である。
【００４６】
本発明は、R7がH、C1-6アルキルおよびC(O)R8からなる群より選択される、式Iの化合物を含む。本発明の態様において、R7はHまたはC1-4アルキルである。さらなる態様において、R7はHまたはCH3である。本発明のさらなる態様において、R7はHである。本発明の他の態様において、R7はC(O)R8である。
【００４７】
本発明は、R8がC1-6アルキル、C3-6シクロアルキル、アリール-C1-4アルキル、アリールおよびヘテロアリール（C1-6アルキル、C3-6シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールはそれぞれ無置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、CF3、NO2およびハロからなる群より独立に選択される1〜5個の置換基で置換されている）からなる群より選択される、式Iの化合物を含む。本発明の態様において、R8はC1-4アルキル、C3-5シクロアルキル、アリール-C1-2アルキル、アリールおよびヘテロアリール（C1-4アルキル、C3-5シクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールはそれぞれ無置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、CF3、NO2およびハロからなる群より独立に選択される1〜3個の置換基で置換されている）からなる群より選択される。本発明のさらなる態様において、R8はC1-4アルキル、C3-5シクロアルキル、PhCH2およびフェニル（C1-4アルキル、C3-5シクロアルキル、PhCH2およびフェニルはそれぞれ無置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、CF3、NO2、FおよびClからなる群より独立に選択される1〜2個の置換基で置換されている）からなる群より選択される。本発明のさらなる態様において、R8はC1-4アルキル、PhCH2およびフェニル（C1-4アルキル、PhCH2およびフェニルはそれぞれ無置換またはC1-4アルキル、OC1-4アルキル、CF3、NO2、FおよびClからなる群より独立に選択される1個の置換基で置換されている）からなる群より選択される。さらなる態様において、R8はメチル、t-ブチル、PhCH2およびフェニルからなる群より選択される。
【００４８】
本発明は、----が単結合または二重結合を表す、式Iの化合物も含む。C22とC23との間の結合が単結合であることは、本発明の態様である。C16とC17との間の結合が単結合であることは、さらなる態様である。さらなる態様において、C22とC23との間の結合およびC16とC17との間の結合が両方単結合である。
【００４９】
本発明の態様において、C16とC17との間の結合が二重結合である場合、R6はC1-6アルキルであり、R7はHおよびC1-6アルキルからなる群より選択される。
【００５０】
式Iの化合物はすべて複数の不斉中心を有している。本発明の化合物が複数の不斉中心を有する場合、これらはジアステレオマーとして存在することがある。そのような異性体およびそのいかなる比率の混合物もすべて、本発明の範囲内に含まれることが理解されるべきである。本発明の化合物のA環、C環およびD環ならびにC20位の立体化学は、好ましくは天然の1α,25-ジヒドロキシビタミンD3のものである。スルホキシイミン硫黄原子の立体化学はRでもSでもよい。したがって、本発明は下記の相対立体化学を有する式Iの化合物、ならびにその薬学的に許容される酸付加塩、水和物、溶媒和物およびプロドラッグを提供する：
2005529183.tif 000005
（式中R1〜R8および----は前述の定義のとおりである）。
【００５１】
本発明のさらなる態様において、C16とC17との間の結合は単結合であり、式Iの化合物は下記の相対立体化学を有する：
2005529183.tif 000006
（式中R1〜R8および----は前述の定義のとおりである）。
【００５２】
本発明のさらなる態様において、C22とC23との間の結合が二重結合であり、C16とC17との間の結合が単結合である場合、式Iの化合物は下記の相対立体化学を有する：
2005529183.tif 000007
（式中R1〜R8および----は前述の定義のとおりである）。
【００５３】
式Iの化合物の相対立体化学は、好ましくは前述のとおりであるが、そのような式Iの化合物は、特定の量（例えば、20％未満、好ましくは10％未満、より好ましくは5％未満）の別の立体化学を有する式Iの化合物を含みうることが理解されるべきである。例えば、前述の天然1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の1α,3β-立体化学を有する式Iの化合物は、20％未満、好ましくは10％未満、より好ましくは5％未満の非天然の1β,3α-立体化学を有する式Iの化合物を含んでいてもよい。
【００５４】
本発明の特定の態様において、本発明の化合物は下記の化合物、ならびにその薬学的に許容される酸付加塩、水和物、溶媒和物およびプロドラッグを含む。
2005529183.tif 000008
2005529183.tif 000009
2005529183.tif 000010
2005529183.tif 000011
【００５５】
本発明は、その範囲内に、本発明の化合物のプロドラッグを含む。一般に、そのようなプロドラッグは、概念的な親化合物にインビボで容易に変換される、本発明の化合物の機能的誘導体である。適当なプロドラッグを選択および調製するための通常の方法は、例えば「Design of Prodrugs」H. Bundgaard編、Elsevier、1985に記載されている。
【００５６】
本発明は、本発明の化合物の放射性同位体標識された形、例えば、3Hもしくは14Cまたは125Iなどの放射性ハロゲンの構造内への取り込みによって標識された本発明の化合物を含む。
【００５７】
III.  本発明の化合物の調製法
本発明のもう一つの局面に従い、本発明の化合物は当技術分野において確立されているものと類似の方法によって調製することができる。したがって、本発明の化合物は、例えばスキーム1に示す一連の反応によって調製することができる。
スキーム1
2005529183.tif 000012
式IIIのケトン（R4〜R7および----は式Iの定義のとおりである）を式IVのホスフィンオキシド（R1〜R3は式Iの定義のとおりである）と、標準のホーナー-ワズワース-エモンズ（HWE）カップリング条件下で反応させることができる。したがって、ホスフィンオキシドIVを、不活性雰囲気および溶媒、例えばテトラヒドロフラン（THF）中の無水条件下、約-60℃から約-90℃の範囲、適切には約-78℃の温度で、強塩基、例えばn-ブチルリチウムなどのアルキルリチウムで処理する。得られた中間体ホスフィンオキシドアニオンに、THFなどの不活性溶媒中で冷却した、好ましくは約-78℃のケトンIIIの溶液を、無水条件を維持しながら加える。いかなる保護基も標準的化学を用いて除去（必要があれば）した後、式Iの化合物を得ることができる。
【００５８】
式IIIのケトン（R4、R5、R6およびR7は式Iの定義のとおりである）は、例えばスキーム2に示すとおりに調製することができる。
スキーム2
2005529183.tif 000013
適当に保護したフェニルスルホキシイミンV（R4〜R7および----は式Iの定義のとおりであり、PGは適当な保護基である）をまず脱保護し、次いで酸化して、ケトンIIIを得る。例えば、PGがトリエチルシリルなどのトリアルキルシリルである場合、脱保護は式Vの化合物をTHFなどの不活性溶媒および不活性雰囲気中、適切にはほぼ室温で、フッ化テトラブチルアンモニウム（TBAF）と反応させることにより達成することができる。得られたアルコールの酸化を、例えば、塩化メチレンなどの不活性溶媒中、標準的条件下で、二クロム酸ピリジニウム（PDC）、または任意の他の適当な酸化剤を用いて実施することができる。
【００５９】
式Vの化合物（R4〜R7は式Iの定義のとおりであり、----は単結合であり、PGは適当な保護基である）は、例えばスキーム3に示すとおりに得ることができる。
スキーム3
2005529183.tif 000014
式VIの化合物（R4および----は式Iの定義のとおりであり、PGは適当な保護基である）を式VIIの化合物（R5〜R7は式Iの定義のとおりである）のアニオンと、無水条件下、約-60℃から約-90℃の範囲、適切には約-78℃の温度で反応させることができる。式VIIの化合物のアニオンは、式VIIの化合物を不活性条件下、例えばヘキサメチルホスホルアミド（HMPA）またはN1,N,N1,N1-テトラメチルエチレンジアミン（TMEDA）存在下、強塩基、例えばn-ブチルリチウムなどのアルキルリチウムで処理して調製することができる。R7がHである場合、スルホキシイミンの窒素は適当な保護基、例えばトリアルキルシランで保護することが好ましく、この保護基は式VIの化合物の式VIIの化合物との反応後に、標準法を用いて除去することができる。
【００６０】
式Vの化合物（R5の一方または両方はフルオロであり、R4、R6、R7および----は式Iの定義のとおりであり、PGは適当な保護基である）は、式Vの化合物（R5基は両方Hである）の化合物から、そのような化合物をアルキルリチウムなどの強塩基の一つまたは複数の等価物で逐次または同時に処理し、続いて(PhSO2)2NFなどの「F+」源で処理することにより調製することもできる。
【００６１】
式Iの化合物（R1〜R7およびC16とC17との間の----は式Iの定義のとおりであり、C22とC23との間の----は二重結合である）は、例えばスキーム4に示すとおりに得ることができる。
スキーム4
2005529183.tif 000015
式VIIIの化合物（R1〜R4および----は式Iの定義のとおりである）を式IXの化合物（R5〜R7は式Iの定義のとおりである）のアニオンと、無水条件下、約-60℃から約-90℃の範囲、適切には約-78℃の温度で反応させることができる。式IXの化合物のアニオンは、式IXの化合物を不活性溶媒、例えばテトラヒドロフラン中、無水条件下、約-60℃から約-90℃の範囲、適切には約-78℃の温度で、強塩基、例えばカリウムt-ブトキシドで処理することにより、調製することができる。R7がHである場合、IXのスルホキシイミンの窒素は適当な保護基、例えばトリアルキルシランで保護することが好ましく、この保護基は式VIIIの化合物の式IXの化合物との反応後に、標準法を用いて除去することができる。
【００６２】
式Iの化合物（R1〜R7およびC16とC17との間の----は式Iの定義のとおりであり、C22とC23との間の----は単結合である）は、スキーム5に示すとおりに調製することもできる。
スキーム5
2005529183.tif 000016
式Xの化合物（R1〜R4および----は式Iの定義のとおりである）を式VIIの化合物（R5〜R7は式Iの定義のとおりである）のアニオンと、無水条件下、約-60℃から約-90℃の範囲、適切には約-78℃の温度で反応させることができる。式VIIの化合物のアニオンは、式VIIの化合物を不活性条件下、例えばヘキサメチルホスホルアミド（HMPA）またはN1,N,N1,N1-テトラメチルエチレンジアミン（TMEDA）存在下、強塩基、例えばn-ブチルリチウムなどのアルキルリチウムで処理して調製することができる。R7がHである場合、VIIのスルホキシイミンの窒素は適当な保護基、例えばトリアルキルシランで保護することが好ましく、この保護基は式Xの化合物の式VIIの化合物との反応後に、標準法を用いて除去することができる。
【００６３】
式VIIの化合物（R5、R6およびR7は式Iの定義のとおりである）は市販されているか、または当技術分野において公知の方法を用いて調製することができる（(±)-N,S-ジメチル-S-フェニルスルホキシイミンの調製については下記を参照されたい：Johnson, C.R.; Haake, M.; Schroeck. J. Am. Chem. Soc. 1970、92、6594およびShiner, C. S.; Berks, A. H. J. Org. Chem. 1988、53、5542；(±)-S-メチル-S-フェニルスルホキシイミンの調製については下記を参照されたい：Johnson, C.R.; Haake, M.; Schroeck. J. Am. Chem. Soc. 1970、92、6594；および分割については下記を参照されたい：Brandt, J.; Gais, H-J. Tetrahedron; Asymmetry、1997、8、909およびShiner, C. S.; Berks, A. H. J. Org. Chem. 1988、53、5542；S-(4-メチフェニル)-S-メチルスルホキシイミンの調製については下記を参照されたい：Johnson, Carl R.; Kirchhoff, Robert A.; Corkins, H. Glenn. J. Org. Chem. 1974、39(16)、2458-9；S-(4-メトキシフェニル)-S-メチルスルホキシイミンの調製については下記を参照されたい：Akutagawa, Kunihiko; Furukawa, Naomichi; Oae, Shigeru. Phosphorus Sulfur 1984、19(3)、369-74；S-(4-クロロフェニル)-S-メチルスルホキシイミンの調製については下記を参照されたい：Oae, S.; Harada, K.; Tsujihara, K.; Furukawa, N. Int. J. Sulfur Chem., Part A 1972、2(1)、49-61；S-(4-ニトロフェニル)-S-メチルスルホキシイミンの調製については下記を参照されたい：Oae, S.; Harada, K.; Tsujihara, K.; Furukawa, N. Int. J. Sulfur Chem., Part A 1972、2(1)、49-61。
【００６４】
一例として、式VIIの化合物（R5〜R7は式Iの定義のとおりである）はスキーム6に示すとおりに調製することができる。
スキーム6
2005529183.tif 000017
式XIのスルフィド（R5およびR6は式Iの定義のとおりである）を標準的条件を用いて、例えば一当量のmCPBAで処理して酸化し、対応するスルホキシドにすることができる。次いで、このスルホキシドをクロロホルムなどの不活性溶媒中、約-10℃から約25℃の範囲、適切には約0℃の温度で、アジ化ナトリウムおよび酸、例えば硫酸により処理することができる。反応混合物に酸を加えた後、混合物を室温に戻し、適度の加熱を用いて反応を完了させてもよい。得られた式VIIの化合物（R7はHである）を式XIIの化合物（R7はC1-6アルキル、C(O)R8（R8は式Iの定義のとおりである）または適当な保護基、例えばトリアルキルシランから選択され、LGは適当な脱離基、例えばハロゲン、特に塩素である）と、標準的アルキル化条件下で反応させて、式VIIの化合物（R7はC1-6アルキル、C(O)R8（R8は式Iの定義のとおりである）または適当な保護基から選択される）を得ることができる。
【００６５】
式IXの化合物（R5〜R7は式Iの定義のとおりである）は、例えば式VIIの化合物（R5〜R7は式Iの定義のとおりである）から、スキーム7に示すとおりに調製することができる。
スキーム7
2005529183.tif 000018
式VIIの化合物（R5〜R7は式Iの定義のとおりである）をまず、不活性溶媒、例えばテトラヒドロフラン中、無水条件下、約-60℃から約-90℃の範囲、適切には約-78℃の温度で強塩基、例えばアルキルリチウムにより処理し、続いて同様に無水条件下、約-60℃から約-90℃の範囲、適切には約-78℃の温度で、例えばクロロリン酸ジエチルにより処理して、式IXの化合物（R5〜R7は式Iの定義のとおりである）を得ることができる。R7がHである場合、VIIのスルホキシイミンの窒素は適当な保護基、例えばトリアルキルシランで保護することが好ましく、この保護基は式VIIの化合物のクロロリン酸エステルとの反応後に、標準法を用いて除去することができる。
【００６６】
式Vの化合物（R4〜R7および----は式Iの定義のとおりであり、PGは適当な保護基である）への代替経路をスキーム8に示す。
スキーム8
2005529183.tif 000019
式VIIの化合物（R5〜R7は式Iの定義のとおりである（R7がHである場合、前述の一連の反応のために、Hを適当な保護基、例えばトリアルキルシランで置換することが好ましい））を、無水条件下、約-60℃から約-90℃の範囲、適切には約-78℃の温度で強塩基、例えばアルキルリチウムにより処理し、続いて式XIIIの化合物（R4および----は式Iの定義のとおりであり、PGは適当な保護基である）を加えて、式XIVの化合物（R4〜R7および----は式Iの定義のとおりであり、PGは適当な保護基である）を得ることができる。式XIVの化合物のC22のヒドロキシル基は、任意の公知の方法、例えば、スキーム8に示すフリーラジカル化学を用いて除去し、式Vの化合物（R4〜R7および----は式Iの定義のとおりであり、PGは適当な保護基である）を得ることができる。前述の反応スキームは、C16とC17との間の結合が二重結合である式Vの化合物を調製するために特に有用である。ここでも、R7がHである場合、VIIのスルホキシイミンの窒素は適当な保護基、例えばトリアルキルシランで保護することが好ましく、この保護基は前述の一連の反応後に、標準法を用いて除去することができる。
【００６７】
スキーム9に示すとおり、式XIVの化合物（R4、R6、R7および----は式Iの定義のとおりであり、R5の少なくとも一つはHである）を用いて、標準的条件下、酸で処理することにより、式Vの化合物（R4、R6、R7およびC16とC17との間の----は式Iの定義のとおりであり、R5の少なくとも一つはHであり、C22とC23との間の----は二重結合である）を調製することもできる。下記の化合物において、それはR5がHであるという本発明の一つの態様である。
スキーム9
2005529183.tif 000020
【００６８】
式VIの化合物（R4は式Iの定義のとおりであり、PGは適当な保護基である）の調製は当技術分野において公知である。したがって、式VIの化合物はPosner, G. H.ら、J. Org. Chem. 1997、62、3299-3314に記載のとおりに調製することができ、その内容は参照として本明細書に組み込まれる。
【００６９】
式IVの化合物（R1およびR2は式Iの定義のとおりである）の調製は当技術分野において公知である。したがって、式IVの化合物はPosner, G. H.ら、J. Med. Chem. 1992、35、3280-3287に記載のとおりに調製することができ、その内容は参照として本明細書に組み込まれる。
【００７０】
式Xの化合物（R1〜R4および----は式Iの定義のとおりである）は対応するアルコールから、Manchand, S.M.ら、J. Org. Chem. 1995、60、6574-6581によって報告されているとおりに調製することができる。
【００７１】
式XIIIの化合物（R4は式Iの定義のとおりであり、----は二重結合である）は、Lars, K.L.ら、J. Org. Chem. 2003、68、1367-1374に記載のとおりに調製することができる。----が単結合である対応する化合物は、C16-C17二重結合の標準法を用いた水素添加または還元によって調製することができる。
【００７２】
式Iの鏡像異性的に純粋な化合物の調製は、スキームIに示す反応において、式IIIおよびIVの鏡像異性的に純粋な化合物を用いることによって達成することができる。この反応において、1α,3βおよび1β,3αジアステレオマーの混合物が典型的に得られ、1α,3βジアステレオマーが主生成物である。これらのジアステレオマーはクロマトグラフィを用いて、例えば高性能液体クロマトグラフィ（HPLC）を用いて分離することができる。
【００７３】
いくつかの場合には、前述の化学を、例えば置換基として結合されているものなどの反応性基による副作用を防止するために、保護基を用いて改変しなければならないこともある。これは、通常の保護基、例えば「Protective Groups in Organic Chemistry」McOmie, J.F.W.編、Plenum Press、1973ならびにGreene, T.W.およびWuts, P.G.M.、「Protective Groups in Organic Synthesis」、John Wiley & Sons、1991に記載されている保護基によって達成することができる。
【００７４】
本発明の化合物の溶媒和物の生成は、化合物および溶媒和物に応じて変動することになる。一般に溶媒和物は、化合物を適当な溶媒に溶解し、冷却または貧溶媒の使用によって溶媒和物を単離することにより生成する。溶媒和物は典型的には周囲条件下で乾燥または共沸させる。
【００７５】
本発明の化合物のプロドラッグは、利用可能なヒドロキシ、チオール、アミノまたはカルボキシル基と形成した通常のエステルであってもよい。例えば、本発明の化合物において、R1および/またはR2がOHである場合、これを塩基存在下、選択的に不活性溶媒中で、活性化酸（例えば、ピリジン中の酸塩化物）を用いてアシル化することができる。プロドラッグとして用いられているいくつかの一般的エステルは、フェニルエステル、脂肪族(C8〜C24)エステル、アシルオキシメチルエステル、カーバメートおよびアミノ酸エステルである。
【００７６】
放射性同位体標識した本発明の化合物は、当技術分野において公知の標準的方法をもちいて調製することができる。例えば、標準法を用いて、例えば適当な前駆体をトリチウムガスおよび触媒を用いて水素添加し、本発明の化合物を生成することにより、トリチウムを本発明の化合物に組み込むことができる。または、放射性ヨードを含む本発明の化合物を、ジメチルホルムアミドなどの適当な溶媒中、クロラミン-T存在下、[125I]ヨウ化ナトリウムなどの標準的ヨウ素化条件を用いて、対応するトリアルキルスズ（適切にはトリメチルスズ）誘導体から調製することもできる。トリアルキルスズ化合物は、標準的パラジウム触媒スズ化条件、例えば、ジオキサンなどの不活性溶媒中、高温、適切には50〜100℃で、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)存在下、ヘキサメチル二スズを用いて、対応する非放射性ハロ、適切にはヨード化合物から調製することができる。
【００７７】
IV.  使用
本明細書において前述したとおり、式Iの新規化合物を調製した。したがって、本発明は、CYP24活性を調節するための治療法および組成物における使用、診断アッセイ法における使用、ならびに研究手段としての使用を含む、本発明の化合物のすべての使用を含む。
【００７８】
それを通じて1α,25-ジヒドロキシビタミンD3が異化される（主にC-24ヒドロキシル化を介して）、チトクロームP450酵素経路を選択的に阻害することは、このホルモン、またはその類似体の寿命を延長するための一つの重要な方法である。したがって、式Iの化合物を、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の24-ヒドロキシル化を担う酵素、CYP24を特異的に阻害する能力について、標準的プロトコルを用いてインビトロで試験した。ヒト前立腺癌の化学療法のために臨床で用いられる薬物の抗真菌ケトコナゾール（Trachtenberg, J.ら、J. Urol. 1984、J32、61-63）を、CYP24の阻害についての対照標準として用いた。化合物I(a)、I(c)、I(e)、I(g)、I(i)、I(j)、I(k)、I(l)、I(m)、I(n)、I(o)、I(p)、I(q)、I(r)およびI(s)はCYP24を選択的に阻害することが明らかにされた。
【００７９】
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3を代謝する酵素CYP24を選択的に調節することにより、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3（内因性または化学療法の一部として投与されたもののいずれも）、またはその類似体のレベルも調節することができる。したがって、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3のレベルの調節、特に上昇が有益である疾患を、CYP24の調節剤を用いて治療することができる。CYP24に優先的に作用することにより、他の酵素および受容体との相互作用による副作用を低減させることができる。したがって、本発明は1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3類似体のレベルの調節、好ましくは上昇が有益である疾患を治療する方法であって、本発明の化合物の有効量をそれを必要とする細胞または動物に投与する段階を含む方法を提供する。本発明は、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3類似体のレベルの調節、好ましくは上昇が有益である疾患を治療するための、本発明の化合物の使用も含む。さらに、本発明は、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3類似体のレベルの調節、好ましくは上昇が有益である疾患治療用の医薬品を調製するための、本発明の化合物の使用も含む。
【００８０】
CYP24の阻害は1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、またはその類似体の異化を阻害し、このことはこれらの化の生物学的寿命を延長し、したがってそれらを少量用いて有効な疾患治療が可能となると考えられる。そのような少量投与は、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3およびその類似体の医薬品としての使用に伴う高カルシウム血性の毒性を回避する、または少なくとも最小限に抑えると思われる。さらに、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の異化を阻害することにより、本発明の化合物はこのホルモンの内因性レベルを高め、これにより同様の有益な治療効果が得られることになる。したがって、一つの態様において、本発明は、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3類似体の異化の阻害が有益である疾患を治療する方法であって、本発明の化合物の有効量をそれを必要とする細胞または動物に投与する段階を含む方法を提供する。本発明は、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3類似体の異化の阻害が有益である疾患を治療するための、本発明の化合物の使用も含む。さらに、本発明は、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3類似体の異化の阻害が有益である疾患治療用の医薬品を調製するための、本発明の化合物の使用も含む。
【００８１】
1α,25-ジヒドロキシビタミンD3のレベルの調節が有益であると考えられる疾患には下記が含まれるが、これらに限定されることはない：
i.  副甲状腺−副甲状腺機能亢進症および低下症、オスド副甲状腺機能低下症、続発性副甲状腺機能亢進症；
ii.  膵臓−糖尿病；
iii.  甲状腺−髄様癌；
iv.  皮膚乾癬；創傷治癒；
v.  肺−サルコイドーシスおよび結核；
vi.  腎臓−慢性腎疾患、低リン酸血症性VDRR、ビタミンD依存性くる病；
vii.  骨−抗痙攣治療、骨線維形成不全症（fibrogenesis imperfecta ossium）、嚢腫性線維性骨炎、骨軟化症、骨粗鬆症、骨減少症、骨硬化症、腎性骨形成異常症、くる病；
viii.  腸−グルココルチコイド拮抗作用、特発性高カルシウム血症、吸収不良症候群、脂肪便症、熱帯性下痢；および
ix.  自己免疫障害。
【００８２】
本発明の態様において、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3類似体のレベルの調節が有益である疾患は、癌、皮膚障害（例えば乾癬）、副甲状腺障害（例えば副甲状腺機能亢進症および続発性副甲状腺機能亢進症）、骨障害（例えば骨粗鬆症）および自己免疫障害からなる群より選択される。
【００８３】
本発明のさらなる局面に従い、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3類似体のレベルの調節、特に上昇が有益である疾患は、細胞増殖性障害である。したがって、細胞増殖を調節し（好ましくは細胞増殖を阻害し）、かつ/または細胞分化を促進する方法であって、本発明の化合物の有効量をそれを必要とする細胞または動物に投与する段階を含む方法が提供される。本発明は細胞増殖を調節し（好ましくは細胞増殖を阻害し）、かつ/または細胞分化を促進するための、本発明の化合物の使用も含む。本発明は、細胞増殖調節（好ましくは細胞増殖阻害）および/または細胞分化促進用の医薬品を調製するための、本発明の化合物の使用もさらに含む。
【００８４】
特に、本発明の方法は、正常細胞ではなく、異常細胞の増殖を阻害する際に有用である。異常細胞は、疾患または状態の原因であるか、またはそれに関与し、かつその疾患または状態を治療するために、異常細胞の増殖を調節もしくは阻害すること、またはその分化を促進することが望ましい、いかなる型の細胞も含む。異常細胞の例には、悪性または癌性細胞、ならびに乾癬などの炎症状態において過剰増殖する細胞が含まれる。
【００８５】
本発明のもう一つの態様において、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3類似体のレベルの調節、特に上昇が有益である疾患は癌である。したがって、本発明は、癌の治療法であって、本発明の化合物の有効量をそれを必要とする細胞または動物に投与する段階を含む方法を提供する。本発明は癌を治療するための、本発明の化合物の使用も含む。本発明は、癌治療用の医薬品を調製するための、本発明の化合物の使用もさらに含む。本発明の態様において、癌は乳癌、肺癌、前立腺癌、結腸および結腸直腸癌、腎臓癌、頭頸部癌、膵臓癌、皮膚癌、カポジ肉腫ならびに白血病からなる群より選択される。
【００８６】
もう一つの局面において、本発明は、細胞のCYP24活性を調節する方法であって、本発明の化合物の有効量を投与することによる方法を提供する。さらなる局面において、本発明は、細胞のCYP24活性を阻害する方法であって、本発明の化合物の有効量を投与することによる方法を提供する。本発明はCYP24活性を調節する、好ましくは阻害するための、本発明の化合物の使用も提供する。本発明は、CYP24活性調節、好ましくはCYP24活性阻害用の医薬品を調製するための、本発明の化合物の使用をさらに提供する。
【００８７】
本発明の化合物は、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、もしくはその類似体のレベルの調節、好ましくは上昇、および/または1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、もしくはその類似体の異化の阻害が有益である疾患に対して、単独でも、CYP24活性を調節する他の物質との組み合わせでも、または他の型の治療（CYP24を調節してもよく、調節しなくてもよい）との組み合わせでも用いることができる。好ましくは、本発明の化合物は1α,25-ジヒドロキシビタミンD3（カルシトリオール）、1α,25-ジヒドロキシビタミンD3類似体、または他のビタミンD受容体アゴニストとの組み合わせで投与する。1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、またはその類似体などのビタミンD受容体アゴニストの異化の阻害は、これらの治療の生物学的寿命または有効性を延長し、したがってこの薬物を少量用いてヒトにおける有効な化学療法が可能となる。そのような少量投与は、副作用、例えばこれらの化合物の医薬品としての使用に伴う高カルシウム血性の毒性を回避する、または少なくとも最小限に抑えると思われる。したがって、本発明は、ビタミンD受容体アゴニストの有効性を高める方法であって、本発明の化合物の有効量およびビタミンD受容体アゴニストの有効量を同時投与する段階を含む方法を提供する。さらに本発明は、ビタミンD受容体アゴニストの有効性を高めるための、本発明の化合物の使用、およびビタミンD受容体アゴニストの有効性増強用の医薬品を調製するための、本発明の化合物の使用を含む。本発明の態様において、ビタミンD受容体アゴニストは1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、またはその類似体である。1α,25-ジヒドロキシビタミンD3類似体とは、ビタミンD受容体アゴニストである1α,25-ジヒドロキシビタミンD3の化学的に修飾された類似体を意味し、したがって1α,25-ジヒドロキシビタミンD3と類似の治療特性を示す。そのような化合物の例は下記の総説論文において見いだすことができ、その内容は参照として本明細書に組み込まれる：Pinette, K.Vら、「Vitamin D Receptor as a Drug Discovery Target」、Mini Reviews in Med. Chem. 2003、3:193-204; Mathieu, C.およびAdorini, L.「The Coming of Age of 1,25-Dihydroxy Vitamin D3 Analogs as Immunomodulatory Agents」、Trends in Mol. Med. 2002、8:174-179; Carlberg, C.「Molecular Basis of the Selective Activity of Vitamin D Analogues」、J. Cell. Bio. 2003、88:274-281; Stein, M. S.およびWark, J.D.「An update on the therapeutic potential of vitamin D analogues」、Expert Opin. Invest. Drugs 2003、12:825-840; Bouillon, R.ら「Structure-Function Relationships in the Vitamin D Endocrine System」Endocr. Rev. 1995、16:200-257;およびNagpal, S.ら「Vitamin D Analogs: Mechanism of Action and Therapeutic Applications」、Current Med. Chem. 2001、8:1661-1679。
【００８８】
本発明の化合物との組み合わせで用いる治療は、疾患の型に基づいていてもよく、CYP24活性またはVDRを特異的に標的とする必要はない。本発明の特定の局面において、本発明の化合物は、皮膚障害、骨障害、癌および自己免疫障害を治療するための他の治療および治療法との組み合わせで用いる。そのような治療には、下記が含まれるが、これらに限定されることはない：癌に対して：手術、放射線照射、化学療法および生物療法；乾癬に対して：紫外線B照射、化学療法および生物療法。
【００８９】
当業者であれば、本発明のどの化合物が治療上の、例えば任意の種類の癌または細胞増殖性障害において細胞増殖を阻害する際の有用性を有するか、決定することができる。化合物を、マウスケラチン細胞（細胞株PE）の増殖阻害などの細胞増殖アッセイ法における細胞増殖阻害の有効性について、および米国特許第5,830,885号（内容は参照として本明細書に組み込まれる）に記載のTPA誘導性オルニチンデカルボキシラーゼ（ODC）の阻害について、試験することもできる。
【００９０】
癌に加えて、本発明の化合物は、異所性または異常細胞増殖に関与する他の状態を治療する際にも有用である。本発明によって治療することができる他の細胞増殖性障害には、炎症性疾患、アレルギー、自己免疫疾患、移植片拒絶、乾癬、再狭窄、アテローム性硬化症、および細胞増殖を阻害、防止または抑制することが望ましいいかなる他の障害も含まれる。本発明の化合物を、当業者には公知のアッセイ法および技術を用いて、特定の細胞増殖性障害における有効性について試験することができる。例えば、下記の引用文献は様々な状態についてのアッセイ法を提供する：慢性関節リウマチ：C. S.Kasyapaらの「Regulation of IL-15 - Simulated TNF-alpha Production by Rolipram」、Journal of Immunology (1999) 第163巻、p.8236；アレルギー：T. Adachiらの「A novel Lyn-Binding Peptide Inhibitor Blocks Eosinophil Differentiation, Survival, and Airway eosinophilic inflammation」、Journal of Immunology (1999) 第163巻、p.939；乾癬：R. UechertのJournal of Immunology (2000) 第165巻、p.224「Inhibition of Keratinocyte apoptosis by IL-15: a new parameter in the pathegenosis of psoriasis」；および乾癬：A. H. EnkのInternational Archives of allergy and Immunology (2000) 第123巻、p.275「T-cell receptor mimic peptides and their potential application in T-cell mediated disease」。
【００９１】
本発明の化合物は好ましくは、インビボでの投与に適した生体適合性の形でヒト被験者に投与するための薬学的組成物に製剤する。したがって、もう一つの局面において、本発明は、本発明の化合物を適当な希釈剤または担体との混合物で含む薬学的組成物を提供する。本発明はさらに、本発明の化合物およびビタミンD受容体アゴニストを適当な希釈剤または担体との混合物で含む薬学的組成物を含む。本発明の態様において、ビタミンD受容体アゴニストは1α,25-ジヒドロキシビタミンD3、またはその類似体である。
【００９２】
本発明の化合物を含む組成物は、活性物質の有効量が薬学的に許容される媒体と混合されるように、被験者に投与することができる薬学的に許容される組成物を調製するための公知の方法によって調製することができる。適当な媒体は、例えばRemington's Pharmaceutical Sciences（Remington's Pharmaceutical Sciences、Mack Publishing Company、Easton、Pa.、USA 1985）に記載されている。これにもとづき、組成物には、これらに限定されることはないが、適当なpHおよび生理学的液体と等しい浸透圧を有する緩衝液に含まれる、一つまたは複数の薬学的に許容される媒体または希釈剤と合わせた物質の溶液が含まれる。
【００９３】
本発明の化合物は遊離塩基、溶媒和物および水和物の形で用いることができる。すべての形は本発明の範囲内である。
【００９４】
本発明の方法に従い、記載した化合物またはその溶媒和物は、当業者には理解されるとおり、選択した投与経路に応じて様々な形で患者に投与することができる。本発明の組成物は、例えば経口、非経口、口腔内、舌下、鼻内、直腸内、パッチ、ポンプまたは経皮（局所）投与により、それに応じて製剤した薬学的組成物で投与することができる。非経口投与には、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、経上皮、鼻内、肺内、くも膜下腔内、直腸内および局所様式の投与が含まれる。非経口投与は選択した期間の持続注入によるものであってもよい。
【００９５】
その本発明の化合物は、例えば不活性希釈剤もしくは同化可能な食用カーダー（carder）と共に経口投与することもでき、またはゼラチン硬もしくは軟カプセルに封入してもよく、または圧縮して錠剤としてもよく、または食物と共に直接取り込むこともできる。経口での治療用投与のために、本発明の化合物を賦形剤と混合し、摂取可能な錠剤、口腔錠、トローチ、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、カシェ剤などの形で用いることもできる。
【００９６】
本発明の化合物は非経口投与することもできる。本発明の化合物の液剤を、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と適当に混合した水中で調製することができる。分散剤を、アルコールを加えた、または加えないグリセロール、液体ポリエチレングリコール、DMSOおよびその混合物中、ならびに油中で調製することもできる。通常の保存および使用条件下で、これらの製剤は微生物の増殖を防ぐための保存剤を含む。当業者であれば、適当な製剤の調製法を知っていると考えられる。適当な製剤の選択および調製のための通常の方法および成分が、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences (1990 - 第18版)および1999年に発行された米国薬局方：The National Formulary (USP 24 NF19)に記載されている。
【００９７】
注射用に適した医薬品剤形には、滅菌水性液剤または分散剤および滅菌注射用液剤または分散剤の即時調製用の滅菌散剤が含まれる。すべての場合に、剤形は無菌でなければならず、注射操作が容易になる程度に流動性でなければならない。アンプルは都合のよい単位用量である。
【００９８】
鼻内投与用の組成物は、エアロゾル、滴剤、ゲル剤および散剤として都合よく製剤することができる。エアロゾル製剤は典型的に、生理的に許容される水性または非水性溶媒中の活性物質の溶液または微懸濁液を含み、通常は密封容器中の一回または複数用量の滅菌剤形で提供され、これらはカートリッジの形または噴霧器と共に用いるレフィルの形を取ることができる。または、密封容器は、使用後に廃棄することが意図される一回用量の鼻吸入器または計量器具が取り付けられたエアロゾル投薬器などの単位投薬器具であってもよい。剤形がエアロゾル投薬器を含む場合、これは噴射剤を含むことになり、噴射剤は圧縮空気などの圧縮ガスまたはフルオロクロロ炭化水素などの有機噴射剤でありうる。エアロゾル剤形はポンプ噴霧器の形を取ることもできる。
【００９９】
口腔内または舌下投与に適した組成物には、活性成分が糖、アカシア、トラガカント、またはゼラチンおよびグリセリンなどの担体と共に製剤される、錠剤、ロゼンジ、および香錠が含まれる。直腸内投与用の組成物は、カカオ脂などの通常の坐剤用基剤を含む坐剤の形が好都合である。
【０１００】
局所投与用の組成物は、例えばプロピレングリコール、イソプロピルアルコール、鉱油およびグリセリンを含んでいてもよい。局所投与に適した製剤には、リニメント、ローション、塗布剤（Applicant）、水中油もしくは油中水乳剤（クリーム、軟膏またはペーストなど）、または液剤もしくは懸濁剤（滴剤など）などの液体または半液体製剤が含まれる。前述の成分に加えて、局所製剤は、希釈剤、緩衝剤、着香剤、結合剤、界面活性剤、増粘剤、滑沢剤、保存剤、例えばヒドロキシ安息香酸メチル（抗酸化剤を含む）、乳化剤などの、一つまたは複数の追加の成分を含んでいてもよい。
【０１０１】
徐放性または直接放出組成物を、例えばリポソーム、または活性化合物がマイクロカプセル化、多層コーティングなどによる区別的分解性コーティングで保護されているものとして製剤することができる。本発明の化合物を凍結乾燥し、得られた凍結乾燥物を、例えば注射用製剤を調製するために用いることも可能である。
【０１０２】
本発明の化合物は前述のとおり、動物に単独で、または薬学的に許容される担体との組み合わせで投与することができ、その比率は化合物の溶解性および化学的性質、選択した投与経路、ならびに標準の薬学的慣例によって決定される。
【０１０３】
本発明の化合物および/または組成物の用量は、化合物の薬力学的特性、投与様式、受容者の年齢、健康および体重、症状の性質および程度、治療頻度および併用療法があればその種類、ならびに治療する動物における化合物の排出速度などの多くの因子に応じて変動しうる。当業者であれば、前述の因子に基づいて適当な用量を決定することができる。例えば、局所治療では、1〜1000μg/kgの本発明の化合物を含む軟膏、クリーム、またはローションを投与してもよい。経口製剤は、好ましくは投与単位あたり0.5〜1000μgの本発明の化合物を含む錠剤、カプセル剤、または滴剤として製剤することができる。本発明の化合物は最初は適当な用量で投与し、その量を必要があれば臨床応答に応じて調節することもできる。短時間、例えば30分から1時間またはそれ以上のエクスビボでの細胞の治療では、長期インビボ療法より高用量の化合物を用いてもよい。
【０１０４】
前述の治療的使用に加えて、本発明の化合物は診断アッセイ法、スクリーニングアッセイ法において、および研究手段としても有用である。
【０１０５】
診断アッセイ法において、本発明の化合物は細胞増殖性障害を同定または検出する際に有用でありうる。そのような態様において、本発明の化合物を放射性同位体標識し（前述のとおり）、細胞集団と接触させてもよい。細胞上の放射性同位体標識の存在が細胞増殖性障害を示すと考えられる。
【０１０６】
スクリーニングアッセイ法において、本発明の化合物を細胞増殖またはCYP24活性を調節する他の化合物を同定するために用いることができる。研究手段としては、本発明の化合物を受容体結合アッセイ法およびCYP24の位置を調べるアッセイ法において用いることができる。そのようなアッセイ法において、化合物を放射性同位体標識することもできる。
【０１０７】
以下の非限定例は本発明を例示するものである：
【０１０８】
実施例
実施例1〜20の材料と方法
特に記載がないかぎり、すべての反応は乾燥器で乾燥したガラス容器中、超高純度アルゴン雰囲気下で撹拌して実施した。使用直前に、THFはNa/ベンゾフェノンケチルから蒸留し、CH2Cl2はCaH2から蒸留した。有機リチウムは、使用前に公知の方法に従って滴定した（Suffert, J. J. Org. Chem. 1989、54、509-512）。他の試薬はすべて商業的供給元から受け取ったままで使用した。TLC分析は、あらかじめコーティングされた裏がガラスのシリカゲルプレート（Merck Kieselgel 60 F254、厚さ250mm）上で行い、p-アニスアルデヒドまたはKMnO4染色で可視化した。フラッシュカラムクロマトグラフィは、フラッシュシリカゲル（粒径230〜400メッシュ）上で、Stillら、J. Org. Chem. 1978、43、1404によって報告されているとおりに実施した。中圧液体クロマトグラフィ（MPLC）はFMIポンプおよびあらかじめ充填されたシリカゲルカラム（Merck、Labor Column、LiChroprep Si 60、40〜63mm）を用いて実施した。HPLCは、二つの25mL/調製用ポンプヘッドを備えたRaininHPLX（商標）システムで、（1）10μmシリカゲル基体上のトリス(4-メチル安息香酸)セルロースが充填されたChiral TechnologiesCHIRALCEL（登録商標）OJ 10mm×250mm（半調製用）カラムまたは（2）C-18-結合シリカとして110Åシリカゲル（細孔径5μm）が充填されたPhenomenexLUNA（商標）10mm×250mm（半調製用）カラム、および254nmに設定したRaininDynamax（商標）UV-C二光束可変波長検出器を用いて実施した。収率は純粋な生成物（クロマトグラフィおよび分光学的均一性に基づいて＞95％）について報告し、最適化はしていない。融点はMel-Temp金属ブロック装置を用いて開放毛細管中で測定し、未補正である。旋光度はJASCO、P-1100モデル旋光計（Japan Spectroscopic Co.）を用いてNa線で測定した。NMRスペクトルは、Varian XL-400分光計で1Hについては400MHz、19Fについては376MHz、および13Cについては100MHzで操作し、Bruker 300 AMX分光計で1Hについては300MHzで操作して得た。化学シフトをCDCl3（1Hについては7.26ppm、13Cについては77.0ppm）、テトラメチルシラン（TMS、1Hについて0.00ppm）、およびCFCl3（19Fについて0.00ppm）を基準としてppm（δ）で報告した。IRスペクトルは、Perkin Elmer 1600 Series FT-IR装置を用いて得た。HRMS（高分解能質量スペクトル）は、オハイオ州立大学の質量分析施設で、Micromass QTOF Electrospray質量分析計で得た。(-)-(R)-N-トリメチルシリル-S-メチル-S-フェニルスルホキシイミンおよび(+)-(S)-N-トリメチルシリル-S-メチル-S-フェニルスルホキシイミンは以前に報告されたとおりに調製した（Hwang, K-J. J. Org. Chem. 1986、51、99-101. b) Hwang, K-J.; Logusch, E. W.; Brannigan, L. J. Org. Chem. 1987、52、3435-3441を参照されたい。S-メチル-S-フェニルスルホキシイミンのN-アルキル化は以前に報告されたとおりに実施した（Johnson, C.R.; Lavergne, O. M. J. Org. Chem. 1993、58、1922、およびRaguse, B.; Ridley, D. D. Aust. J. Chem. 1986、39、1655を参照されたい）。(-)-(R)-S-メチル-S-フェニルスルホキシイミン、(+)-(S)-S-メチル-S-フェニルスルホキシイミン、(-)-(R)-N,S-ジメチル-S-フェニルスルホキシイミンおよび(+)-(S)-N,S-ジメチル-S-フェニルスルホキシイミンは市販の原料から調製した。
【０１０９】
実施例1：式Vの化合物（R7は水素であり、C22-C23は単結合である）調製のための一般法
磁気撹拌子、還流冷却器、セプタムならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した10mLナスフラスコに、適当なスルホキシイミンVII（50mg、0.32mmol）を加え、無水アセトニトリル（0.6mL）に溶解して、0.5M溶液を得た。次いで、フラスコを60℃の油浴につけた。この溶液に、Et2NTMS（72μL、0.38mmol）をシリンジから数分間かけて滴加した。滴加完了後、混合物を60℃で約30分間撹拌した。薄層クロマトグラフィ（TLC）で出発原料の完全な消費が示された時点で、フラスコを室温まで冷却した。混合物を減圧濃縮し、1H NMRで評価して本質的に純粋なN-トリメチルシリルスルホキシイミン生成物を得た。これをそれ以上精製せずに用いた。
【０１１０】
磁気撹拌子、セプタムならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した10mLナスフラスコに、新しく蒸留したTHF（3.2mL）およびHMPA（0.32mL）に溶解した適当なN-トリメチルシリルスルホキシイミンVII（73mg、0.32mmol）を加えた。次いで、フラスコをイソプロパノール/ドライアイス浴中で-78℃に冷却した。この溶液にn-BuLi（0.23mL、0.33mmol、1.44Mヘキサン溶液）を数分間かけて滴加し、この間に淡黄色が生じた。この混合物を-78℃でさらに30分間撹拌し、次いで0℃まで10分間加温した。フラスコを再度-78℃に冷却した。その間に、セプタムならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した10mLナスフラスコに、新しく蒸留したTHF（0.5mL）に溶解したヨウ化物(+)-VI（50mg、0.11mmol）を加え、イソプロパノール/ドライアイス浴中で-78℃に冷却した。ヨウ化物(+)-VIの溶液を、リチオ化スルホキシイミンを含むフラスコに-78℃でカニューレから数分間かけて移した。添加完了後、混合物を室温まで徐々に加温し、この温度で約10時間撹拌した。TLCにより出発原料の完全な消費が示された。3N HCl水溶液（2mL）を加えて反応を停止し、30分間撹拌した。混合物をジエチルエーテルで希釈し、1N NaOH水溶液を用いてpHが約9になるまで塩基性化し、次いで分液漏斗にジエチルエーテルで洗い込んだ。混合物をジエチルエーテル（3×25mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（1×25mL）、および食塩水（1×25mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィで精製した。
【０１１１】
a）トリエチルシリル保護アルコール(+)-V(a)
スキーム10に示すとおり、前述の式V（R7は水素である）の化合物調製のための一般法に従い、(+)-(S)-S-メチル-S-フェニルスルホキシイミンVII(a)から式(+)-V(a)の化合物を得た。
スキーム10
2005529183.tif 000021
フラッシュカラムクロマトグラフィで50％酢酸エチル/ヘキサンにより溶出し、(+)-V(a)（28mg）を収率53％で得た。(+)-V(a)のデータ：
2005529183.tif 000022
【０１１２】
b）トリエチルシリル保護アルコール(+)-V(a')
スキーム11に示すとおり、前述の式V（R7は水素である）の化合物調製のための一般法に従い、(-)-(R)-S-メチル-S-フェニルスルホキシイミンVII(a')から式(+)-V(a')の化合物を得た。
スキーム11
2005529183.tif 000023
フラッシュカラムクロマトグラフィで50％酢酸エチル/ヘキサンにより溶出し、アルキル化生成物(+)-V(a')（38mg）を粘稠油状物として収率72％で得た。(+)-V(a')のデータ：
2005529183.tif 000024
【０１１３】
実施例2：C,D環ケトンIII（R7は水素であり、C22-C23は単結合である）調製のための一般法
スキーム12
2005529183.tif 000025
一般的脱保護法
磁気撹拌子、セプタムならびにAr風船を備え、アルゴンパージした5mLポリプロピレンバイアルに、無水アセトニトリル（1.6mL）に溶解した適当なトリエチルシリル保護アルコール（30mg、0.065mmol）を加え、約0.04M溶液を得た。このよく撹拌した溶液に、HF（0.26mL、0.46mmol、49％水溶液）をシリンジから室温で加え、次いで混合物を室温、暗所で4時間撹拌した。TLCにより反応の完了が示された。この反応混合物をエーテル（25mL）で希釈し、NaHCO3の飽和溶液を、それ以上二酸化炭素が発生しなくなるまで加えた。次いで、反応混合物を分液漏斗に酢酸エチルで洗い込み、酢酸エチル（4×25mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（1×25mL）および食塩水（1×25mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物を得た。
【０１１４】
一般的酸化法
磁気撹拌子、セプタムならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した10mLナスフラスコに、新しく蒸留したCH2Cl2（1mL）に溶解した適当なアルコール（15mg、0.043mmol）を加え、約0.04M溶液を得た。次いで、この溶液にPDC（34mg、0.09mmol）および乾燥器で乾燥したセライト（21mg）を室で一度に加えた。得られた混合物を室温で約12時間撹拌した。TLCにより出発原料の完全な消費が示された。混合物をカラムクロマトグラフィで直接精製した。
【０１１５】
実施例2(a)：C,D環ケトン(+)-III(a)の調製：
スキーム13
2005529183.tif 000026
無水アセトニトリル（1.6mL）に溶解したトリエチルシリル保護アルコール(+)-V(a)（30mg、0.065mmol）の溶液を調製して、約0.04M溶液を得た。このよく撹拌した溶液に、HF（0.26mL、0.46mmol、49％水溶液）をシリンジから室温で加え、次いで混合物を室温、暗所で4時間撹拌した。TLCにより反応の完了が示された。この反応混合物をエーテル（25mL）で希釈し、NaHCO3の飽和溶液を、それ以上二酸化炭素が発生しなくなるまで加えた。次いで、反応混合物を分液漏斗に酢酸エチルで洗い込み、酢酸エチル（4×25mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（1×25mL）および食塩水（1×25mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物を得た。フラッシュカラムクロマトグラフィで100％酢酸エチルにより溶出し、対応するアルコール（19.4mg）を粘稠油状物として収率86％で得た。対応するアルコールのデータ：
2005529183.tif 000027
【０１１６】
新しく蒸留したCH2Cl2（1mL）に溶解した対応するアルコール（15mg、0.043mmol）から、約0.04M溶液を得た。次いで、この溶液にPDC（34mg、0.09mmol）および乾燥器で乾燥したセライト（21mg）を室で一度に加えた。得られた混合物を室温で約12時間撹拌した。TLCにより出発原料の完全な消費が示された。混合物をカラムクロマトグラフィで直接精製した。フラッシュカラムクロマトグラフィで100％酢酸エチルにより溶出し、ケトン(+)-III(a)（12mg）を収率81％で得た。(+)-III(a)のデータ：
2005529183.tif 000028
【０１１７】
実施例2(b)：C,D環ケトン(+)-III(a')の調製
スキーム14
2005529183.tif 000029
無水アセトニトリル（1.6mL）に溶解したトリエチルシリル保護アルコール(+)-V(a')（30mg、0.065mmol）を調製して、約0.04M溶液を得た。このよく撹拌した溶液に、HF（0.26mL、0.46mmol、49％水溶液）をシリンジから室温で加え、次いで混合物を室温、暗所で4時間撹拌した。TLCにより反応の完了が示された。この反応混合物をエーテル（25mL）で希釈し、NaHCO3の飽和溶液を、それ以上二酸化炭素が発生しなくなるまで加えた。次いで、反応混合物を分液漏斗に酢酸エチルで洗い込み、酢酸エチル（4×25mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（1×25mL）および食塩水（1×25mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物を得た。フラッシュカラムクロマトグラフィで100％酢酸エチルにより溶出し、対応するアルコール（20.1mg）を粘稠油状物として収率89％で得た。対応するアルコールのデータ：
2005529183.tif 000030
【０１１８】
新しく蒸留したCH2Cl2（1mL）に溶解した対応するアルコール（15mg、0.043mmol）から、約0.04M溶液を得た。次いで、この溶液にPDC（34mg、0.09mmol）および乾燥器で乾燥したセライト（21mg）を室で一度に加えた。得られた混合物を室温で約12時間撹拌した。TLCにより出発原料の完全な消費が示された。混合物をカラムクロマトグラフィで直接精製した。フラッシュカラムクロマトグラフィで100％酢酸エチルにより溶出し、ケトン(+)-III(a')（13mg）を収率87％で得た。(+)-III(a')のデータ：
2005529183.tif 000031
【０１１９】
実施例3a：24-フェニルスルホキシイミンI(a)およびI(b)
スキーム15
2005529183.tif 000032
反応前に、ホスフィンオキシド(±)-IV(a)（Posner, G. H.ら、J. Med. Chem. 1992、35、3280-3287）およびCD環ケトン(+)-III(a)をベンゼンと共沸乾燥し、減圧下に48時間放置した。フレーム乾燥した10mLフラスコ内で、アルゴン雰囲気下、ホスフィンオキシド(±)-IV(a)（65mg、0.11mmol）を新しく蒸留したTHF（1.1mL）に溶解して約0.1M溶液を得、フラスコをイソプロパノール/ドライアイス浴中で-78℃に冷却した。この溶液にn-BuLi（68μL、0.11mmol、1.6Mヘキサン溶液）を数分間かけて滴加し、この間に濃赤色が生じて持続した。この混合物を-78℃でさらに10分間撹拌した。その間に、磁気撹拌子、セプタムならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した10mLナスフラスコに、新しく蒸留したTHF（1mL）に溶解したCD環ケトン(+)-III(a)（12mg、0.036mmol）を加え、イソプロパノール/ドライアイス浴中で-78℃に冷却した。CD環ケトンの溶液を、ホスフィンオキシドアニオンを含むフラスコに-78℃でカニューレから数分間かけてゆっくり移した。添加完了後、濃赤色は持続し、混合物を78℃で約15時間撹拌し、その間、目視によりチェックした。淡黄色が観察されれば、-78℃でpH7の緩衝液（5mL）を加えて反応を停止し、室温に戻した。次いで、混合物を分液漏斗に酢酸エチルで洗い込み、酢酸エチル（3×25mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（1×25mL）および食塩水（1×25mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィで1％トリエチルアミン存在下、50％酢酸エチル/ヘキサンにより溶出して精製し、カップリング生成物を得た。
【０１２０】
磁気撹拌子を備え、アルゴンパージした5mLポリプロピレンバイアル中、カップリング生成物（13mg、0.018mmol）を無水アセトニトリル（0.9mL）に溶解して、約0.02M溶液を得た。このよく撹拌した溶液に、HF（75μL、1.8mmol、49％水溶液）をシリンジから室温で加え、次いで混合物を室温、暗所で2時間撹拌した。TLCにより反応の完了が示された。この反応混合物をエーテル（25mL）で希釈し、NaHCO3の飽和溶液を、それ以上二酸化炭素が発生しなくなるまで加えた。次いで、反応混合物を分液漏斗に酢酸エチルで洗い込み、酢酸エチル（5×25mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（1×25mL）、および食塩水（1×25mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィで精製した。
【０１２１】
フラッシュカラムクロマトグラフィで1％トリエチルアミン存在下、99％酢酸エチルにより溶出し、(+)-I(a)および(+)-I(b)のジアステレオマー混合物（8.4mg）を収率92％、それぞれ2.5：1の比で得た。次いで、ジアステレオマー混合物をHPLCでChiralcel OJカラム（半調製用（1×25cm）、流速＝2.0mL/分）を用い、13％エタノール/ヘキサンで溶出して分離し、(+)-I(a)（1.9mg）および(+)-I(b)（1.0mg）をそれぞれ収率21％および11％で得た。(+)-I(a)の保持時間は58.1分、(+)-I(b)の保持時間は45.7分であった。
【０１２２】
(+)-I(a)のデータ：
2005529183.tif 000033
(+)-I(b)のデータ：
2005529183.tif 000034
【０１２３】
実施例3b：24-フェニルスルホキシイミンI(c)およびI(d)
スキーム16に示すとおり、同様の様式で、化合物I(c)およびI(d)を調製することができる。
スキーム16
2005529183.tif 000035
CD環ケトン(+)-III(a)の代わりにCD環ケトン(+)-III(a')を、前述の実施例3aに開示されているとおりに、ホスフィンオキシド(±)IV(a)とカップリングさせる。カップリング反応と、その後の脱保護段階の後、フラッシュカラムクロマトグラフィで1％トリエチルアミン存在下、99％酢酸エチルにより溶出し、7.2mgの(+)-I(c)および(+)-I(d)のジアステレオマー混合物を収率82％、それぞれ2.9：1の比で得た。次いで、ジアステレオマー混合物をHPLCでChiralcel OJカラム（半調製用（1×25cm）、流速＝2.0mL/分）を用い、13％エタノール/ヘキサンで溶出して分離し、(+)-I(c)（2.2mg）および(+)-I(d)（1.0mg）をそれぞれ収率25％および11％で得た。(+)-I(c)の保持時間は49.2分、(+)-I(d)の保持時間は40.2分であった。
【０１２４】
(+)-I(c)のデータ：
2005529183.tif 000036
（+)-Idのデータ：
2005529183.tif 000037
【０１２５】
実施例4：式Vの化合物（R7は水素ではなく、C22-C23は単結合である）調製のための一般法
磁気撹拌子、セプタムならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した10mLナスフラスコに、適当なスルホキシイミンVII（スキーム3参照）（43mg、0.25mmol）を加え、新しく蒸留したTHF（1.7mL）およびHMPA（0.17mL）に溶解した。次いで、フラスコをイソプロパノール/ドライアイス浴中で-78℃に冷却した。この溶液にn-BuLi（0.156mL、0.25mmol、1.6Mヘキサン溶液）を数分間かけて滴加し、この間に淡黄色が生じた。この混合物を-78℃でさらに30分間撹拌し、次いで0℃まで10分間加温した。フラスコを再度-78℃に冷却した。その間に、セプタムならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した10mLナスフラスコに、新しく蒸留したTHF（0.5mL）に溶解したヨウ化物VI（スキーム3参照）（37mg、0.0845mmol）を加え、イソプロパノール/ドライアイス浴中で-78℃に冷却した。ヨウ化物VIの溶液を、リチオ化スルホキシイミンを含むフラスコに-78℃でカニューレから数分間かけて移した。添加完了後、混合物を室温まで徐々に加温し、約4時間撹拌した。TLCにより出発原料の完全な消費が示された。蒸留水（5mL）を加えて反応を停止し、次いで分液漏斗に酢酸エチルで洗い込んだ。混合物を酢酸エチル（3×25mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（1×25mL）、および食塩水（1×25mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィで精製した。
【０１２６】
a）トリエチルシリル保護アルコール(+)-V(a)
スキーム17に示すとおり、前述の式V（R7は水素ではない）の化合物調製のための一般法に従い、(+)-(S)-N,S-ジメチル-S-フェニルスルホキシイミンVII(b)から式V(b)の化合物を得た。
スキーム17
2005529183.tif 000038
フラッシュカラムクロマトグラフィで30％酢酸エチル/ヘキサンにより溶出し、(+)-V(b)（32.4mg）を収率80％で得た。(+)-V(b)のデータ：
2005529183.tif 000039
【０１２７】
b）トリエチルシリル保護アルコール(-)-V(b')
スキーム18に示すとおり、前述の式V（R7は水素ではない）の化合物調製のための一般法に従い、(-)-(R)-N,S-ジメチル-S-フェニルスルホキシイミンVII(b')から式V(b')の化合物を得た。
スキーム18
2005529183.tif 000040
フラッシュカラムクロマトグラフィで30％酢酸エチル/ヘキサンにより溶出し、アルキル化生成物(-)-V(b')（35mg）を粘稠油状物として収率86％で得た。(-)-V(b')のデータ：
2005529183.tif 000041
【０１２８】
実施例5：C,D環ケトンIII（R7は水素ではなく、C22-C23は単結合である）調製のための一般法
スキーム19
2005529183.tif 000042
一般的脱保護法
磁気撹拌子、セプタムならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した10mLナスフラスコに、新しく蒸留したTHF（1.4mL）に溶解した適当なトリエチルシリル保護アルコール（35mg、0.073mmol）を加え、約0.05M溶液を得た。フラスコを氷浴中で0℃に冷却した。この溶液に、TBAF（0.21mL、0.22mmol、1.0M THF溶液）を数分間かけて滴加し、黄色溶液を得た。滴加完了後、混合物を室温まで徐々に加温し、次いでこの温度で約12時間撹拌した。TLCにより出発原料の完全な消費が示された。この混合物を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィで直接精製した。
【０１２９】
一般的酸化法
磁気撹拌子、セプタムならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した10mLナスフラスコに、適当なアルコール（25mg、0.068mmol）を加え、新しく蒸留したCH2Cl2（1.7mL）に溶解して、約0.04M溶液を得た。次いで、この溶液にPDC（54mg、0.14mmol）および乾燥器で乾燥したセライト（34mg）を室で一度に加えた。得られた混合物を室温で約12時間撹拌した。TLCにより出発原料の完全な消費が示された。混合物をカラムクロマトグラフィで直接精製した。
【０１３０】
実施例5(a)：C,D環ケトン(+)-III(b)の調製：
スキーム20
2005529183.tif 000043
新しく蒸留したTHF（1.4mL）中のトリエチルシリル保護アルコール(+)-V(b)（35mg、0.073mmol）の溶液を調製して、約0.05M溶液を得た。フラスコを氷浴中で0℃に冷却した。この溶液に、TBAF（0.21mL、0.22mmol、1.0M THF溶液）を数分間かけて滴加し、黄色溶液を得た。滴加完了後、混合物を室温まで徐々に加温し、次いでこの温度で約12時間撹拌した。TLCにより出発原料の完全な消費が示された。この混合物を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィで直接精製した。フラッシュカラムクロマトグラフィで100％酢酸エチルにより溶出し、対応するアルコール（24.3mg）を収率98％で得た。生成物をアセトンから、ゆっくり蒸発させることにより再結晶した。
2005529183.tif 000044
【０１３１】
対応するアルコール（25mg、0.068mmol）を新しく蒸留したCH2Cl2（1.7mL）に溶解し、約0.04M溶液を得た。次いで、この溶液にPDC（54mg、0.14mmol）および乾燥器で乾燥したセライト（34mg）を室で一度に加えた。得られた混合物を室温で約12時間撹拌した。TLCにより出発原料の完全な消費が示された。混合物をカラムクロマトグラフィで直接精製した。フラッシュカラムクロマトグラフィで100％酢酸エチルにより溶出し、ケトン(+)-III(b)を粘稠油状物として収率82％で得た。(+)-III(b)のデータ：
2005529183.tif 000045
【０１３２】
実施例5(b)：C,D環ケトン(-)-III(b')の調製
スキーム21
2005529183.tif 000046
新しく蒸留したTHF（1.4mL）中のトリエチルシリル保護アルコール(-)-V(b')（35mg、0.073mmol）の溶液を調製して、約0.05M溶液を得た。フラスコを氷浴中で0℃に冷却した。この溶液に、TBAF（0.21mL、0.22mmol、1.0M THF溶液）を数分間かけて滴加し、黄色溶液を得た。滴加完了後、混合物を室温まで徐々に加温し、次いでこの温度で約12時間撹拌した。TLCにより出発原料の完全な消費が示された。この混合物を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィで直接精製した。フラッシュカラムクロマトグラフィで100％酢酸エチルにより溶出し、対応するアルコール（24.8mg）を白色固体として収率93％で得た。生成物をアセトンから、ゆっくり蒸発させることにより再結晶した。
2005529183.tif 000047
【０１３３】
対応するアルコール（25mg、0.068mmol）を新しく蒸留したCH2Cl2（1.7mL）に溶解し、約0.04M溶液を得た。次いで、この溶液にPDC（54mg、0.14mmol）および乾燥器で乾燥したセライト（34mg）を室で一度に加えた。得られた混合物を室温で約12時間撹拌した。TLCにより出発原料の完全な消費が示された。混合物をカラムクロマトグラフィで直接精製した。フラッシュカラムクロマトグラフィで100％酢酸エチルにより溶出し、ケトン(-)-III(b')（23.5mg）を収率95％で得た。(-)-III(b')のデータ：
2005529183.tif 000048
【０１３４】
実施例6a：24-フェニルN-メチルスルホキシイミンI(e)およびI(f)
スキーム22
2005529183.tif 000049
反応前に、ホスフィンオキシド(±)-IV(a)（Posner, G. H.ら、J. Med. Chem. 1992、35、3280-3287）およびCD環ケトン(+)-III(b)をベンゼンと共沸乾燥し、減圧下に48時間放置した。10mLフラスコ内で、アルゴン雰囲気下、ホスフィンオキシド(±)-IV(a)（70mg、0.12mmol）を新しく蒸留したTHF（2.4mL）に溶解して約0.05M溶液を得た。フラスコをイソプロパノール/ドライアイス浴中で-78℃に冷却した。この溶液にn-BuLi（78μL、0.12mmol、1.53Mヘキサン溶液）を数分間かけて滴加し、この間に濃赤色が生じて持続した。この混合物を-78℃でさらに10分間撹拌した。その間に、磁気撹拌子を備え、CD環ケトン(+)-IIIb（22mg、0.06mmol）を含む、フレーム乾燥した10mLナスフラスコを、新しく蒸留したTHF（1mL）にアルゴン雰囲気下で溶解し、イソプロパノール/ドライアイス浴中で-78℃に冷却した。CD環ケトン(+)-IIIbの溶液を、ホスフィンオキシドアニオンを含むフラスコに-78℃でカニューレから数分間かけてゆっくり移した。添加完了後、濃赤色は持続し、混合物を78℃で約10時間撹拌し、その間、目視によりチェックした。淡黄色が観察されれば、-78℃でpH7の緩衝液（5mL）を加えて反応を停止し、室温に戻した。次いで、混合物を分液漏斗に酢酸エチルで洗い込み、酢酸エチル（3×25mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（1×25mL）および食塩水（1×25mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィで1％トリエチルアミン存在下、50％酢酸エチル/ヘキサンにより溶出して精製し、カップリング生成物をろう状固体として得た。
【０１３５】
カップリング生成物（17mg、0.023mmol）を、磁気撹拌子を備え、アルゴンパージした5mLポリプロピレンバイアルに加え、アルゴン雰囲気下で無水アセトニトリル（1.0mL）に溶解して、約0.02M溶液を得た。このよく撹拌した溶液に、HF（0.1mL、2.3mmol、49％水溶液）をシリンジから室温で加え、次いで混合物を室温、暗所で2時間撹拌した。TLCにより反応の完了が示された。この反応混合物をエーテル（25mL）で希釈し、NaHCO3の飽和溶液を、それ以上二酸化炭素が発生しなくなるまで加えた。次いで、反応混合物を分液漏斗に酢酸エチルで洗い込み、酢酸エチル（4×25mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（1×25mL）、および食塩水（1×25mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィで精製した。
【０１３６】
フラッシュカラムクロマトグラフィで1％トリエチルアミン存在下、99％酢酸エチルにより溶出し、(+)-I(e)および(+)-I(f)の混合物（10.3mg）を収率89％、それぞれ2.7：1の比で得た。次いで、このジアステレオマー混合物をHPLCでChiralcel OJカラム（半調製用（1×25cm）、流速＝2.5mL/分）を用い、7％エタノール/ヘキサンで溶出して分離し、(+)-I(e)（6.62mg）および(+)-I(f)（2.73mg）をそれぞれ収率57％および23％で得た。(+)-I(e)の保持時間は52.08分、(+)-I(f)の保持時間は43.08分であった。
【０１３７】
(+)-I(e)のデータ：
2005529183.tif 000050
(+)-I(f)のデータ：
2005529183.tif 000051
【０１３８】
実施例6b：24-フェニルN-メチルスルホキシイミンI(g)およびI(h)
スキーム23に示すとおり、同様の様式で、化合物(+)-I(g)および(-)-I(h)を調製することができる。
スキーム23
2005529183.tif 000052
CD環ケトン(+)-III(b)の代わりにCD環ケトン(-)-III(b')を、前述の実施例6aに開示されているとおりに、ホスフィンオキシド(±)IV(a)とカップリングさせる。カップリング反応と、その後の脱保護段階の後、フラッシュカラムクロマトグラフィで1％トリエチルアミン存在下、99％酢酸エチルにより溶出し、(+)-I(g)および(-)-I(h)の混合物（9.5mg）を収率82％、それぞれ3：1の比で得た。次いで、ジアステレオマー混合物をHPLCでChiralcel OJカラム（半調製用（1×25cm）、流速＝2.5mL/分）を用い、7％エタノール/ヘキサンで溶出して分離し、(+)-I(g)（3.39mg）および(-)-I(h)（1.12mg）をそれぞれ収率29％および10％で得た。(+)-I(g)の保持時間は45.19分、(-)-I(h)の保持時間は39.84分であった。
【０１３９】
(+)-I(g)のデータ：
2005529183.tif 000053
(-)-I(h)のデータ：
2005529183.tif 000054
【０１４０】
実施例7a：24-フェニルスルホキシイミン19-ノル-ビタミンD3 I(i)
スキーム24
2005529183.tif 000055
反応前に、ホスフィンオキシド(±)-IV(b)（Posner, G. H.ら、J. Med. Chem. 1992、35、3280-3287）およびCD環ケトン(+)-III(a)をベンゼンと共沸乾燥し、減圧下に48時間放置した。フレーム乾燥した10mLフラスコ内で、アルゴン雰囲気下、ホスフィンオキシド(±)-IV(b)（76mg、0.13mmol）を新しく蒸留したTHF（0.8mL）に溶解して約0.1M溶液を得、フラスコをイソプロパノール/ドライアイス浴中で-78℃に冷却した。この溶液にn-BuLi（83μL、0.13mmol、1.6Mヘキサン溶液）を数分間かけて滴加し、この間に濃赤色が生じて持続した。この混合物を-78℃でさらに10分間撹拌した。その間に、磁気撹拌子、セプタムならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した10mLナスフラスコに、新しく蒸留したTHF（1mL）に溶解したCD環ケトン(+)-IIIa（14mg、0.040mmol）を加え、イソプロパノール/ドライアイス浴中で-78℃に冷却した。CD環ケトンの溶液を、ホスフィンオキシドアニオンを含むフラスコに-78℃でカニューレから数分間かけてゆっくり移した。添加完了後、濃赤色は持続し、混合物を78℃で約15時間撹拌し、その間、目視によりチェックした。淡黄色が観察されれば、-78℃でpH7の緩衝液（5mL）を加えて反応を停止し、室温に戻した。次いで、混合物を分液漏斗に酢酸エチルで洗い込み、酢酸エチル（3×25mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（1×25mL）および食塩水（1×25mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィで1％トリエチルアミン存在下、50％酢酸エチル/ヘキサンにより溶出して精製し、カップリング生成物を得た。
【０１４１】
磁気撹拌子を備え、アルゴンパージした5mLポリプロピレンバイアル内で、カップリング生成物（15mg、0.021mmol）を無水アセトニトリル（1.0mL）に溶解し、約0.02M溶液を得た。このよく撹拌した溶液に、HF（87mL、2.1mmol、49％水溶液）をシリンジから室温で加え、次いで混合物を室温、暗所で2時間撹拌した。TLCにより反応の完了が示された。この反応混合物をエーテル（25mL）で希釈し、NaHCO3の飽和溶液を、それ以上二酸化炭素が発生しなくなるまで加えた。次いで、反応混合物を分液漏斗に酢酸エチルで洗い込み、酢酸エチル（5×25mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（1×25mL）、および食塩水（1×25mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィで精製した。
【０１４２】
フラッシュカラムクロマトグラフィで1％トリエチルアミン存在下、99％酢酸エチルにより溶出し、(+)-I(i)（3.7mg）を収率70％で得た。次いで、この類似体をHPLCでChiralcel OJカラム（半調製用（1×25cm）、流速＝2.5mL/分）を用い、15％エタノール/ヘキサンで溶出してさらに精製し、(+)-I(i)（2.3mg）を収率43％で得た。(+)-I(i)の保持時間は35.22分であった。
【０１４３】
(+)-I(i)のデータ：
2005529183.tif 000056
【０１４４】
実施例7b：24フェニルスルホキシイミン19-ノル-ビタミン-D3 I(j)
スキーム25に示すとおり、同様の様式で、化合物I(j)を調製することができる。
スキーム25
2005529183.tif 000057
CD環ケトン(+)-III(a)の代わりにCD環ケトン(+)-III(a')を、前述の実施例7aに開示されているとおりに、ホスフィンオキシド(±)IV(b)とカップリングさせる。カップリング反応と、その後の脱保護段階の後、フラッシュカラムクロマトグラフィで1％トリエチルアミン存在下、99％酢酸エチルにより溶出し、(+)-I(j)（9.1mg）を収率91％で得た。次いで、この類似体をHPLCでChiralcel OJカラム（半調製用（1×25cm）、流速＝2.5mL/分）を用い、15％エタノール/ヘキサンで溶出してさらに精製し、(+)-I(j)（7mg）を収率70％で得た。(+)-I(j)の保持時間は30.25分であった。
【０１４５】
(+)-I(j)のデータ：
2005529183.tif 000058
【０１４６】
実施例8a：24-フェニルN-メチルスルホキシイミン19-ノル-ビタミンD3 I(k)
スキーム26
2005529183.tif 000059
反応前に、ホスフィンオキシド(±)-IV(b)（Posner, G. H.ら、J. Med. Chem. 1992、35、3280-3287）およびCD環ケトン(+)-III(b)をベンゼンと共沸乾燥し、減圧下に48時間放置した。10mLフラスコ内で、アルゴン雰囲気下、ホスフィンオキシド(±)-IV(b)（53mg、0.092mmol）を新しく蒸留したTHF（0.9mL）に溶解して約0.01M溶液を得た。フラスコをイソプロパノール/ドライアイス浴中で-78℃に冷却した。この溶液にn-BuLi（55μL、0.093mmol、1.7Mヘキサン溶液）を数分間かけて滴加し、この間に濃赤色が生じて持続した。この混合物を-78℃でさらに10分間撹拌した。その間に、磁気撹拌子を備え、CD環ケトン(+)-IIIb（16mg、0.044mmol）を含む、フレーム乾燥した10mLナスフラスコを、新しく蒸留したTHF（1mL）にアルゴン雰囲気下で溶解し、イソプロパノール/ドライアイス浴中で-78℃に冷却した。CD環ケトン(+)-III(b)の溶液を、ホスフィンオキシドアニオンを含むフラスコに-78℃でカニューレから数分間かけてゆっくり移した。添加完了後、濃赤色は持続し、混合物を78℃で約10時間撹拌し、その間、目視によりチェックした。淡黄色が観察されれば、-78℃でpH7の緩衝液（5mL）を加えて反応を停止し、室温に戻した。次いで、混合物を分液漏斗に酢酸エチルで洗い込み、酢酸エチル（3×25mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（1×25mL）および食塩水（1×25mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィで1％トリエチルアミン存在下、50％酢酸エチル/ヘキサンにより溶出して精製し、カップリング生成物をろう状固体として得た。
【０１４７】
カップリング生成物（21mg、0.029mmol）を磁気撹拌子を備え、アルゴンパージした5mLポリプロピレンバイアルに加え、無水アセトニトリル（1.5mL）にアルゴン雰囲気下で溶解し、約0.02M溶液を得た。このよく撹拌した溶液に、HF（0.12mL、2.9mmol、49％水溶液）をシリンジから室温で加え、次いで混合物を室温、暗所で1.5時間撹拌した。TLCにより反応の完了が示された。この反応混合物をエーテル（25mL）で希釈し、NaHCO3の飽和溶液を、それ以上二酸化炭素が発生しなくなるまで加えた。次いで、反応混合物を分液漏斗に酢酸エチルで洗い込み、酢酸エチル（4×25mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（1×25mL）、および食塩水（1×25mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィで精製した。
【０１４８】
フラッシュカラムクロマトグラフィで1％トリエチルアミン存在下、99％酢酸エチルにより溶出し、(+)-I(k)（10.7mg）を収率72％で得た。次いで、この類似体をHPLCでChiralcel OJカラム（半調製用（1×25cm）、流速＝2.5mL/分）を用い、10％エタノール/ヘキサンで溶出してさらに精製し、(+)-I(k)（3.2mg）を収率30％で得た。(+)-I(k)の保持時間は27.26分であった。
【０１４９】
(+)-I(k)のデータ：
2005529183.tif 000060
【０１５０】
実施例8b：24フェニルN-メチルスルホキシイミン19-ノル-ビタミン-D3 I(l)
スキーム27に示すとおり、同様の様式で、化合物(+)-I(l)を調製することができる。
スキーム27
2005529183.tif 000061
CD環ケトン(+)-III(b)の代わりにCD環ケトン(-)-III(b')を、前述の実施例8aに開示されているとおりに、ホスフィンオキシド(±)IV(b)とカップリングさせる。カップリング反応と、その後の脱保護段階の後、フラッシュカラムクロマトグラフィで1％トリエチルアミン存在下、99％酢酸エチルにより溶出し、(+)-I(l)（11.3mg）を収率79％で得た。次いで、この類似体をHPLCでChiralcel OJカラム（半調製用（1×25cm）、流速＝2.5mL/分）を用い、10％エタノール/ヘキサンで溶出してさらに精製し、(+)-I(l)（2.9mg）を収率26％で得た。(+)-I(l)の保持時間は25.88分であった。
【０１５１】
(+)-I(l)のデータ：
2005529183.tif 000062
【０１５２】
実施例9：24-フェニルスルホキシイミン1-ノルビタミンD3 I(m)
スキーム28
2005529183.tif 000063
反応前に、ホスフィンオキシド(±)-IV(c)（Kutner, A.ら、Bioorg. Chem. 1995、23、22-32）およびCD環ケトン(+)-III(a)をベンゼンと共沸乾燥し、減圧下に48時間放置した。フレーム乾燥した10mLフラスコ内で、アルゴン雰囲気下、ホスフィンオキシド(+)-IV(c)（76mg、0.13mmol）を新しく蒸留したTHF（0.8mL）に溶解して約0.1M溶液を得、フラスコをイソプロパノール/ドライアイス浴中で-78℃に冷却した。この溶液にn-BuLi（83μL、0.13mmol、1.6Mヘキサン溶液）を数分間かけて滴加し、この間に濃赤色が生じて持続した。この混合物を-78℃でさらに10分間撹拌した。その間に、磁気撹拌子、セプタムならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した10mLナスフラスコに、新しく蒸留したTHF（1mL）に溶解したCD環ケトン(+)-IIIa（14mg、0.040mmol）を加え、イソプロパノール/ドライアイス浴中で-78℃に冷却した。CD環ケトンの溶液を、ホスフィンオキシドアニオンを含むフラスコに-78℃でカニューレから数分間かけてゆっくり移した。添加完了後、濃赤色は持続し、混合物を78℃で約15時間撹拌し、その間、目視によりチェックした。淡黄色が観察されれば、-78℃でpH7の緩衝液（5mL）を加えて反応を停止し、室温に戻した。次いで、混合物を分液漏斗に酢酸エチルで洗い込み、酢酸エチル（3×25mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（1×25mL）および食塩水（1×25mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィで1％トリエチルアミン存在下、50％酢酸エチル/ヘキサンにより溶出して精製し、カップリング生成物を得た。
【０１５３】
磁気撹拌子を備え、アルゴンパージした5mLポリプロピレンバイアル内で、カップリング生成物（15mg、0.021mmol）を無水アセトニトリル（1.0mL）に溶解し、約0.02M溶液を得た。このよく撹拌した溶液に、HF（87mL、2.1mmol、49％水溶液）をシリンジから室温で加え、次いで混合物を室温、暗所で2時間撹拌した。TLCにより反応の完了が示された。この反応混合物をエーテル（25mL）で希釈し、NaHCO3の飽和溶液を、それ以上二酸化炭素が発生しなくなるまで加えた。次いで、反応混合物を分液漏斗に酢酸エチルで洗い込み、酢酸エチル（5×25mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（1×25mL）、および食塩水（1×25mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィで精製した。
【０１５４】
フラッシュカラムクロマトグラフィで1％トリエチルアミン存在下、99％酢酸エチルにより溶出し、(+)-I(m)（10.6mg）を収率88％で得た。次いで、この類似体をHPLCでChiralcel OJカラム（半調製用（1×25cm）、流速＝2.5mL/分）を用い、10％エタノール/ヘキサンで溶出してさらに精製し、(+)-I(m)（3.0mg）を収率28％で得た。(+)-I(m)の保持時間は31.47分であった。
【０１５５】
(+)-I(m)のデータ：
2005529183.tif 000064
【０１５６】
実施例10：式Vの化合物（R7は水素であり、両方のR5は一緒になってシクロプロピル環を形成する）調製のための一般法
スキーム29
2005529183.tif 000065
磁気撹拌子、還流冷却器、セプタムならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した10mLナスフラスコに、(±)-S-シクロプロピル-S-フェニルスルホキシイミンVII(c)（100mg、0.55mmol）を加え、無水アセトニトリル（1.1mL）に溶解して、0.5M溶液を得た。次いで、フラスコを60℃の油浴につけた。この溶液に、Et2NTMS（125μL、0.66mmol）をシリンジから数分間かけて滴加した。滴加完了後、混合物を60℃で約30分間撹拌した。TLCで出発原料の完全な消費が示された時点で、フラスコを室温まで冷却した。混合物を減圧濃縮し、1H NMRで評価して本質的に純粋なN-トリメチルシリルスルホキシイミン生成物を得た。これをそれ以上精製せずに用いた。
【０１５７】
磁気撹拌子、セプタムならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した10mLナスフラスコに、新しく蒸留したTHF（2.8mL）およびHMPA（0.28mL）に溶解した適当なN-トリメチルシリルスルホキシイミン（0.163mg、0.55mmol）を加えた。次いで、フラスコをイソプロパノール/ドライアイス浴中で-78℃に冷却した。この溶液にn-BuLi（0.34mL、0.55mmol、1.6Mヘキサン溶液）を数分間かけて滴加し、この間に淡黄色が生じた。この混合物を-78℃でさらに30分間撹拌し、次いで0℃まで10分間加温した。フラスコを再度-78℃に冷却した。その間に、セプタムならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した10mLナスフラスコに、新しく蒸留したTHF（0.5mL）に溶解したヨウ化物(+)-VI（80mg、0.18mmol）を加え、イソプロパノール/ドライアイス浴中で-78℃に冷却した。ヨウ化物(+)-VIの溶液を、リチオ化スルホキシイミンを含むフラスコに-78℃でカニューレから数分間かけて移した。添加完了後、混合物を室温まで徐々に加温し、この温度で約10時間撹拌した。TLCにより出発原料の完全な消費が示された。3N HCl水溶液（2mL）を加えて反応を停止し、30分間撹拌した。混合物をジエチルエーテルで希釈し、1N NaOH水溶液を用いてpHが約9になるまで塩基性化し、次いで分液漏斗にジエチルエーテルで洗い込んだ。混合物をジエチルエーテル（3×25mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（1×25mL）、および食塩水（1×25mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物TMS-保護-V(c)を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィで精製した。
【０１５８】
実施例11：C,D環ケトンIII（R7は水素であり、両方のR5は一緒になってシクロプロピル環を形成する）調製のための一般法
スキーム30
2005529183.tif 000066
一般的脱保護法
磁気撹拌子、セプタムならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した10mLナスフラスコに、新しく蒸留したTHF（1.8mL）に溶解した適当なトリエチルシリル保護アルコールVを加え、約0.04M溶液を得た。フラスコを氷浴中で0℃に冷却した。この溶液に、TBAF（0.75mL、49％溶液）を数分間かけて滴加し、黄色溶液を得た。滴加完了後、混合物を室温まで徐々に加温し、次いでこの温度で約4時間撹拌した。TLCにより出発原料の完全な消費が示された。この混合物を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィで直接精製した。
【０１５９】
一般的酸化法
磁気撹拌子、セプタムならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した10mLナスフラスコに、適当なアルコール（50mg、0.133mmol）を加え、新しく蒸留したCH2Cl2（3.3mL）に溶解して、約0.04M溶液を得た。次いで、この溶液にPDC（105mg、0.279mmol）および乾燥器で乾燥したセライト（66mg）を室温で一度に加えた。得られた混合物を室温で約12時間撹拌した。TLCにより出発原料の完全な消費が示された。混合物をカラムクロマトグラフィで直接精製した。
【０１６０】
実施例11(a)：C,D環ケトンIII(c)の調製：
スキーム31
2005529183.tif 000067
新しく蒸留したTHF（1.8mL）に溶解したトリエチルシリル保護アルコール(+)-V(c)の溶液を調製して、約0.04M溶液を得た。フラスコを氷浴中で0℃に冷却した。この溶液に、HF（0.75mL、49％水溶液）を数分間かけて滴加し、黄色溶液を得た。滴加完了後、混合物を室温まで徐々に加温し、次いでこの温度で約4時間撹拌した。TLCにより出発原料の完全な消費が示された。この混合物を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィで直接精製した。フラッシュカラムクロマトグラフィで50％酢酸エチルにより溶出し、対応するアルコール（50.0mg）を収率73％で得た。生成物データ：
2005529183.tif 000068
【０１６１】
対応するアルコール（50mg、0.133mmol）を新しく蒸留したCH2Cl2（3.3mL）に溶解し、約0.04M溶液を得た。次いで、この溶液にPDC（105mg、0.279mmol）および乾燥器で乾燥したセライト（66mg）を室で一度に加えた。得られた混合物を室温で約12時間撹拌した。TLCにより出発原料の完全な消費が示された。混合物をカラムクロマトグラフィで直接精製した。フラッシュカラムクロマトグラフィで50％酢酸エチルにより溶出し、ケトンIII(c)をジアステレオマーの混合物（ほぼ1：1）で粘稠油状物として収率85％で得た。III(c)のデータ：
2005529183.tif 000069
【０１６２】
実施例12：24-フェニルスルホキシイミンI(n)およびI(o)
スキーム32
2005529183.tif 000070
反応前に、ホスフィンオキシド(±)-IV(a)（Posner, G. H.ら、J. Med. Chem. 1992、35、3280-3287）およびCD環ケトン(+)-III(c)をベンゼンと共沸乾燥し、減圧下に48時間放置した。フレーム乾燥した10mLフラスコ内で、アルゴン雰囲気下、ホスフィンオキシド(±)-IV(a)（63.5mg、0.11mmol）を新しく蒸留したTHF（1.1mL）に溶解して約0.1M溶液を得、フラスコをイソプロパノール/ドライアイス浴中で-78℃に冷却した。この溶液にn-BuLi（82μL、0.11mmol、1.33Mヘキサン溶液）を数分間かけて滴加し、この間に濃赤色が生じて持続した。この混合物を-78℃でさらに10分間撹拌した。その間に、磁気撹拌子、セプタムならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した10mLナスフラスコに、新しく蒸留したTHF（1mL）に溶解したCD環ケトン(+)-III(c)（15mg、0.04mmol）を加え、イソプロパノール/ドライアイス浴中で-78℃に冷却した。CD環ケトンの溶液を、ホスフィンオキシドアニオンを含むフラスコに-78℃でカニューレから数分間かけてゆっくり移した。添加完了後、濃赤色は持続し、混合物を78℃で約8時間撹拌し、その間、目視によりチェックした。淡黄色が観察されれば、-78℃でpH7の緩衝液（5mL）を加えて反応を停止し、室温に戻した。次いで、混合物を分液漏斗に酢酸エチルで洗い込み、酢酸エチル（4×25mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（1×25mL）および食塩水（1×25mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィで1％トリエチルアミン存在下、50％酢酸エチル/ヘキサンにより溶出して精製し、カップリング生成物を得た。
【０１６３】
磁気撹拌子を備え、アルゴンパージした5mLポリプロピレンバイアル中、カップリング生成物（15mg、0.02mmol）を無水アセトニトリル（1.0mL）に溶解して、約0.02M溶液を得た。このよく撹拌した溶液に、HF（83μL、2.0mmol、49％水溶液）をシリンジから室温で加え、次いで混合物を室温、暗所で2時間撹拌した。TLCにより反応の完了が示された。この反応混合物をエーテル（25mL）で希釈し、NaHCO3の飽和溶液を、それ以上二酸化炭素が発生しなくなるまで加えた。次いで、反応混合物を分液漏斗に酢酸エチルで洗い込み、酢酸エチル（5×25mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（1×25mL）、および食塩水（1×25mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィで精製した。
【０１６４】
フラッシュカラムクロマトグラフィで1％トリエチルアミン存在下、99％酢酸エチルにより溶出し、(+)-I(n)および(+)-I(o)のジアステレオマー混合物（8.2mg）を収率79％、それぞれ1：1の比で得た。次いで、ジアステレオマー混合物をHPLCでChiralcel OJカラム（半調製用（1×25cm）、流速＝2.0mL/分）を用い、7％エタノール/ヘキサンで溶出して分離し、(+)-I(n)（1.2mg）および(+)-I(o)（1.9mg）をそれぞれ収率30％および48％で得た。(+)-I(n)の保持時間は123.3分、(+)-I(o)の保持時間は137.5分であった。
【０１６５】
(+)-I(n)のデータ：
2005529183.tif 000071
(+)-I(o)のデータ：
2005529183.tif 000072
【０１６６】
実施例13：TBSClで保護されたp-フルオロフェニルメチルスルホキシイミンVII(d)
スキーム33
2005529183.tif 000073
磁気撹拌子、セプタム、滴加漏斗ならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した25mLナスフラスコに、4-フルオロフェニルメチルスルフィド（1g、7mmol）を加え、新しく蒸留したCH2Cl2（14mL）に溶解した。次いで、フラスコを氷浴中で0℃に冷却した。この溶液に、mCPBA（1.9g、7.7mmol、70％）をCH2Cl2（5mL）の溶液として滴加漏斗から数分間かけて滴加した。  この混合物を0℃でさらに2時間撹拌した。TLCにより出発原料の完全な消費が示された。水を加えて反応を停止し、次いで分液漏斗にCH2Cl2（50mL）で洗い込んだ。混合物をCH2Cl2（3×25mL）で抽出した。合わせた抽出物を飽和NaHCO3溶液（1×10mL）、食塩水（1×10mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィで100％酢酸エチルによりまず溶出して精製し、対応するスルホキシドを油状物として収率90％で得た（1g、6.3mmol）。
【０１６７】
磁気撹拌子、セプタム、および滴加漏斗ならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した25mLナスフラスコに、スルホキシド（1g、6.3mmol）を加え、CHCl3（6.3mL）に溶解した。次いで、NaN3（0.45g、6.9mmol）をフラスコに一度に加えた。その間に、濃H2SO4（1.53mL）を滴加漏斗に加え、反応フラスコに0℃で数分間かけて滴加した。次いで、滴加漏斗を還流冷却器に替え、フラスコを油浴につけて45℃で終夜加熱した。TLCにより出発原料の完全な消費が示された。反応フラスコを室温まで冷却し、水を加えて反応を停止し、次いで分液漏斗にCHCl3（50mL）で洗い込んだ。混合物をCHCl3（3×25mL）で抽出した。合わせた抽出物を食塩水（1×10mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィで100％酢酸エチルにより溶出して精製し、スルホキシイミンVII(d)（0.81g）を固体として収率74％で得た。これを酢酸エチルから再結晶した。p-フルオロフェニルメチルスルホキシイミンの生成物データ：
2005529183.tif 000074
【０１６８】
磁気撹拌子、セプタム、ならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した5mLナスフラスコに、p-フルオロフェニルメチルスルホキシイミン（0.1g、0.58mmol）を加え、無水ピリジン（1.1mL）に溶解して、約0.5M溶液を得た。この溶液にTBSCl（0.1g、0.69mmol）をニートで一度に加えた。この混合物を室温で12時間撹拌した。TLCにより出発原料の完全な消費が示された。水を加えて反応を停止し、次いで分液漏斗に酢酸エチル（25mL）で洗い込んだ。混合物を酢酸エチル（3×25mL）で抽出した。合わせた抽出物を食塩水（1×10mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィで10％酢酸エチルにより溶出して精製し、スルホキシイミンTBS-保護VII(d)を油状物として収率90％で得た（0.15g、0.52mmol）。
2005529183.tif 000075
【０１６９】
実施例14：24-フェニルスルホキシイミンI(p)およびI(q)
スキーム34
2005529183.tif 000076
磁気撹拌子、セプタム、ならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した5mLナスフラスコに、(±)-VII(a)（8.4mg、0.029mmol）を加え、新しく蒸留したTHF（0.5mL）に溶解した。次いで、フラスコをイソプロパノール/ドライアイス浴中で-78℃に冷却した。この溶液にn-BuLi（19μL、0.03mmol、1.6Mヘキサン溶液）を数分間かけて滴加した後、HMPA（50μL）を加え、黄色が生じた。この混合物を-78℃でさらに30分間撹拌した。その間に、セプタムならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した5mLナスフラスコに、新しく蒸留したTHF（0.5mL）に溶解したヨウ化物(+)-IX（5mg、0.0073mmol）を加え、イソプロパノール/ドライアイス浴中で-78℃に冷却した。ヨウ化物(+)-IXの溶液を、リチオ化スルホキシイミンを含むフラスコに-78℃でカニューレから数分間かけて移した。添加完了後、混合物を-78℃で約4〜5時間撹拌した。TLCにより(+)-IXのほぼ完全な消費が示された。pH7の緩衝液（2mL）を加えて反応を停止し、次いで分液漏斗に酢酸エチルで洗い込んだ。混合物を酢酸エチル（3×10mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（1×10mL）および食塩水（1×10mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮してカップリング生成物を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィで100％ヘキサン（100mL）と、次いで10％酢酸エチル/ヘキサンにより溶出して精製した。
【０１７０】
磁気撹拌子ならびにキャップを備え、アルゴンパージした5mLポリプロピレンバイアルに、カップリング生成物（3.4mg、0.004mmol）を加え、無水アセトニトリル（0.4mL）に溶解して、約0.01M溶液を得た。このよく撹拌した溶液に、HF（0.16μL、0.44mmol、49％水溶液）をシリンジから室温で加え、次いで混合物を室温、暗所で4時間撹拌した。TLCにより反応の完了が示された。この反応混合物をエーテル（10mL）で希釈し、NaHCO3の飽和溶液を、それ以上二酸化炭素が発生しなくなるまで加えた。次いで、反応混合物を分液漏斗に酢酸エチルで洗い込み、酢酸エチル（4×10mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（1×10mL）、食塩水（1×10mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィで、1％トリエチルアミン存在下、99％酢酸エチルにより溶出して精製し、(+)-I(p)および(+)-I(q)（1.7mg）を収率84％で得た。これをHPLCでChiralcel OJカラム（半調製用（1×25cm）、流速＝2.5mL/分）を用い、13％エタノール/ヘキサンで溶出してさらに精製し、(+)-I(p)（0.51mg）および(+)-I(q)（0.37mg）をそれぞれ収率19％および26％で得た。(+)-I(p)の保持時間は78.0分、(+)-I(q)の保持時間は61.0分であった。
【０１７１】
(+)-I(p)のデータ：
2005529183.tif 000077
(+)-I(q)のデータ：
2005529183.tif 000078
【０１７２】
実施例15：スルホキシイミンIXの調製
スキーム35
2005529183.tif 000079
磁気撹拌子、セプタム、ならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した10mLナスフラスコに、(+)-S-メチル-S-フェニルスルホキシイミン（43mg、0.1595mmol）を加え、新しく蒸留したTHF（1.5mL）に溶解した。次いで、フラスコをイソプロパノール/ドライアイス浴中で-78℃に冷却した。この溶液にt-BuLi（0.16mL、0.1755、1.1Mペンタン溶液）を数分間かけて滴加し、黄色が生じた。この混合物を-78℃でさらに30分間撹拌した。この溶液にクロロリン酸ジエチル（41.3mg、35μL、0.2393mmol）を加えた。添加完了後、混合物を-78℃で約1時間撹拌した。TLCにより出発原料が完全に消費されたことが示された。水（5mL）を加えて反応を停止し、次いで混合物を分液漏斗に洗い込み、酢酸エチル（3×10mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（1×10mL）、食塩水（1×10mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィで酢酸エチル：ヘキサンの9：1混合物により溶出して精製し、(+)-IX（34mg）を油状物として収率53％で得た。(+)-IXのデータ：
2005529183.tif 000080
【０１７３】
実施例16：24-フェニルスルホキシイミンI(r)およびI(s)（C22-C23二重結合）
スキーム36
2005529183.tif 000081
磁気撹拌子、セプタム、ならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した5mLナスフラスコに、(±)-IX（4.2mg、0.01mmol）を加え、新しく蒸留したTHF（0.5mL）に溶解した。次いで、フラスコをイソプロパノール/ドライアイス浴中で-78℃に冷却した。この溶液にt-BuOK（13μL、0.013mmol、1.0M THF溶液）を数分間かけて滴加し、黄色が生じた。この混合物を-78℃でさらに30分間撹拌した。その間に、セプタムならびにAr風船を備え、フレーム乾燥した5mLナスフラスコに、新しく蒸留したTHF（1.0mL）に溶解したVIII（5.0mg、0.0087mmol）を加え、イソプロパノール/ドライアイス浴中で-78℃に冷却した。VIIIの溶液を、(±)-IXのアニオンを含むフラスコに-78℃でカニューレから数分間かけて移した。添加完了後、混合物を-78℃で約1.0時間撹拌した。次いでフラスコを室温まで加温し、1.5時間撹拌した。TLCにより出発原料の消費が示された。水（5mL）を加えて反応を停止し、次いで混合物を分液漏斗に洗い込み、酢酸エチル（3×10mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（1×10mL）、食塩水（1×10mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮してカップリング生成物を得た。カップリング生成物をフラッシュクロマトグラフィで10％酢酸エチル/ヘキサンにより溶出して精製し、5.4mgを収率71％で得た。
【０１７４】
磁気撹拌子ならびにキャップを備え、アルゴンパージした5mLポリプロピレンバイアルに、カップリング生成物（5.0mg、0.006mmol）を加え、無水アセトニトリル（0.6mL）に溶解して、約0.01M溶液を得た。このよく撹拌した溶液に、HF（0.25μL、0.6mmol、49％水溶液）をシリンジから室温で加え、次いで混合物を室温、暗所で4時間撹拌した。TLCにより反応の完了が示された。この反応混合物をエーテル（10mL）で希釈し、NaHCO3の飽和溶液を、それ以上二酸化炭素が発生しなくなるまで加えた。次いで、反応混合物を分液漏斗に酢酸エチルで洗い込み、酢酸エチル（3×10mL）で抽出した。合わせた抽出物を水（1×10mL）、食塩水（1×10mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して粗生成物を得、これをシリカゲルパッドを通して、(+)-I(r)および(+)-I(s)の混合物（2.3mg）を収率79％で得た。これをHPLCでChiralcel OJカラム（半調製用（1×25cm）、流速＝2.5mL/分）を用い、17％酢酸エチル/ヘキサンで溶出してさらに精製し、(+)-I(r)（800μg）および(+)-I(r)（540μg）をそれぞれ収率28％および19％で得た。(+)-I(r)のデータ：
2005529183.tif 000082
【０１７５】
(+)-I(r)のデータ：
2005529183.tif 000083
【０１７６】
実施例17：化合物(S)-I(t)の提唱される調製−方法A
2005529183.tif 000084
同様の様式で、化合物(R)-I(t)をTBS-保護(R)-VII(a)から調製することができる。
【０１７７】
実施例18：化合物(S)-I(t)の提唱される調製−方法B
2005529183.tif 000085
同様の様式で、化合物(R)-I(t)をTBS-保護(R)-VII(e)から調製することができる。
【０１７８】
実施例19：化合物(S)-I(u)の提唱される調製
2005529183.tif 000086
同様の様式で、化合物(R)-I(u)を(R)-VII(f)から調製することができる。
【０１７９】
実施例20：化合物(S)-I(v)の提唱される調製
2005529183.tif 000087
同様の様式で、化合物(R)-I(v)を(R)-VII(f)から調製することができる。
【０１８０】
実施例21：CYP24酵素アッセイ法（誘導HPK1A-ras細胞）
（i）材料と試薬：
1,25(OH)2D3 10-5M（Sigma、ミズーリ州セントルイス）；
10-5M希釈標準溶液の調製は下記のとおりである。
1mgの1,25(OH)2D3を480μlのイソプロパノールに溶解して5×10-3M保存溶液を作る。必要になるまで-70℃で保存する。1μlの1,25(OH)2D3 5×10-3M保存溶液を499μlのイソプロパノールに等分して加え、1,25(OH)2D3 10-5希釈標準溶液を作る。必要になるまで-20℃で保存する。
[3H]-1,25(OH)2D3 16,000cpm/μL、8μM（Perkin Elmer、マサチューセッツ州ボストン）
HPK1A-ras細胞（Dr. Glenville Jones、Queens University、カナダ、オンタリオ州キングストンから入手）
48穴プレート
メタノール
ジクロロメタン
飽和KCI：KCI 30g、H2O 400ml
1,2-ジアニリノエタン（DPPD）
ケトコナゾール（Sigma、ミズーリ州セントルイス）
【０１８１】
（ii）手順：
1.  HPK1A-ras細胞の誘導（アッセイの前日）
HPK1A-ras細胞が80〜90％コンフルエントになった時点で、10-5M 1,25(OH)2D3（1μL）をプレートの培地（1mL）に加えた（最終濃度10-8M）。
2.  細胞懸濁液の調製
18時間から20時間の誘導後、培地を除去し、細胞をPBSで二回洗浄した。次いで、プレートからの細胞をトリプシン処理し、遠心沈降（2,000rpm、5分間）し、細胞ペレットをDMEM培地+1％BSA中に懸濁した。
細胞を計数し、細胞密度を250,000/150μLに調節し、細胞懸濁液（150μL）を48穴プレートの各ウェルに加えた（無細胞対照として3ウェルと、対照として薬物または阻害剤を含まない細胞3ウェルを含む）。
3.  ケトコナゾール（25μL）（最終濃度10-5M、10-6M、10-7M、10-8M）または薬物（最終濃度10-6M、10-7M、10-8M、10-9M）をそれぞれ指定のウェルに加えた。プレートを37℃で10分間維持した。
4.  基質の調製
必要とされる各1mlにつき、DMEM+1％BSA培地（972μl）、3H-1,25(OH)2D3（20μl）、100nM DPPD（8μL）を試験管に加え、ボルテックスで混合した。
5.  インキュベーション
基質（25μL）を各ウェルに加え、プレートを37℃で2時間インキュベートした。
基質（25μL）を全カウントとして計数プレート（2ウェル）に加えた。
6.  脂質抽出および計数
メタノール（500μL）を各ウェルに加えて反応を停止し、試験管に移した。
ジクロロメタン（250μL）を加え、ボルテックスにかけた。
ジクロロメタン（250μL）および飽和KCI（250μL）を加え、ボルテックスにかけた。
4000rpmで5分間遠心沈降した。
水相（上相）（100μL）を計数用プラスティック計数プレートに移した。シンチレーション液（600μL）を各ウェルに加えた。シンチレーション計数器でプレートを計数した。
7.  酵素活性の計算
細胞対照のCPMから無細胞対照（NCC）のCPMを引いた後の値を100％酵素活性とした。
酵素活性＝(試験化合物ウェルのCPM−NCCウェルのCPM)/(細胞対照のCPM−NCCウェルのCPM)*100％
ケトコナゾールの希釈
保存液10-2M
2005529183.tif 000088
試験化合物の希釈
保存液10-3M
2005529183.tif 000089
【０１８２】
（iii）結果を表1に示す。
【０１８３】
（iv）引用文献：
Ray S、Ray R、Holick M. Metabolism of 3H-1alpha, 25-dihydroxy vitamin D3 in the cultured human keratinocytes (1995) 59: 117-122 
Dilworth F J、Scott I、Green A、Strugnell S、Guo Y D、Roberts E A、Kremer R、Calverley、M J、Makin H L J、Jones G. Different mechanisms of hydroxylation site selection by liver and kidney cytochrome P450 species (CYP27 and CYP24) involved in Vitamin D metabolism. (1995) J Biochem 270(28):16766-16774. 
【０１８４】
実施例22：CYP24酵素アッセイ法（安定細胞株−V79-CYP24細胞を用いて）
（i）材料と試薬：
イソプロパノール中で再構成した1α,25(OH)2D3 1mM
イソプロパノール中で再構成した基質（1mM）
V79-CYP24細胞
ハイグロマイシンおよび10％ウシ胎仔血清を補足したDMEM培地
DMEM+1％BSA培地
DPPD
48穴プレート
メタノール
ジクロロメタン
飽和KCl：KCl 30g、H2O 400ml
ケトコナゾール
【０１８５】
（ii）手順：
1.  細胞懸濁液の調製
アッセイ当日、V79-CYP24細胞の単層を1×PBS緩衝液で一回洗浄し、次いで室温（約22℃）で5分間トリプシン処理した。1×PBSを加えた。細胞を試験管に回収し、遠心沈降（500×g、5分間）し、DMEM培地+1％BSA培地中に再懸濁した。細胞を計数し、細胞密度を250,000/150μL（167万/1mL）に調節した。
2.  細胞播種
細胞懸濁液（150μL）を48穴プレートの適当に標識したウェルに加えた。細胞をウェルに接着させるため、プレートを、5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で30分間インキュベートした。
3.  化合物の添加
阻害剤（25μL）（10-6〜10-9M）を加え、次いで10分後、基質[3H-1β]-1α,25(OH)2D3（20nM）（25μl）を加え、5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で2時間インキュベートした。阻害剤および基質はいずれも100μM DPPD存在下および非存在下、DMEM+1％BSA培地中で調製した。
4.  脂質抽出および計数
メタノール（500μL）を加えて反応を停止した。試験管に移した。ジクロロメタン（250μL）を加え、ボルテックスにかけた。ジクロロメタン（250μL）および飽和KCL（250μL）を加え、ボルテックスにかけた。4000rpmで5分間遠心沈降した。三組の水相（100μL）をシンチレーション液（600μL）と混合し、シンチレーション計数器を用いて放射能を測定した。すべての値をバックグラウンドについて補正した。
【０１８６】
（iii）結果
表1に示す
【０１８７】
（iv）引用文献
1.  国際特許出願番号PCT/CA03/00620
【０１８８】
実施例23：CYP27A1酵素アッセイ法
（A）手順：
下記に記載のとおり：
Dilworth F J、Black S M、Guo Y D、Miller W L、Jones G. Construction of a P450c27 fusion enzyme: a useful tool for analysis of vitamin D3 25-hydroxylase (1996) Biochem J 320:267-271
Sawada N、Sakaki T、Ohta M、Inouye K. Metabolism of vitamin D (3) by human CYP27A1 (2000) Biochem Biophys Res Commun 273(3):977-84
【０１８９】
（B）結果：
表1参照のこと。
【０１９０】
実施例24：VDR結合アッセイ法
（i）試薬と材料
1.  VDR 9.4pmol/μl（ヒト、組換え、Biomol）
2.  エタノール中の[3H]-1,25(OH)2D3
3.  エタノール中の1,25(OH)2D3
4.  TEK300
トリス-HCI  50mM
EDTA  1.5mM
KCI  300mM
pHを7.4（25℃）に調節する
5.  TEDK300
TEK300
DTT（ジチオスレイトール）  10mM（MW 154.24）
6.  トリス緩衝液
トリス-HCI  22.50g
H2O  500ml
トリス-塩基  13.25g
H2O  500ml
4℃に維持
7.  デキストラン-T70（Mol 70,000）Pharmacia
8.  炭（炭素脱色中性、ノーライト）Fisher Scientific
9.  ゼラチン（G-2625 Sigma）
【０１９１】
（ii）試薬の調製
1.  炭デキストラン溶液
（1）トリス緩衝液
トリス-HClおよびトリス-塩基を等量混合した。
（2）ノーライト脱色中性炭  2.0g
トリス緩衝液  150mL
撹拌
（3）デキストランT-70  0.2g
トリス緩衝液  50ml
（4）懸濁したデキストランを炭溶液に撹拌しながらゆっくり滴加した。
終夜冷蔵した。
使用の30分前に、持続的に撹拌しながら氷上に保存する。
2.  TEK300/ゼラチン溶液
ブタゼラチン  50mg
TEDK300溶液  5ml
加熱、撹拌、次いで4℃に冷却。
TEDK300溶液  5ml
3.  エタノール中の1,25(OH)2D3および試験化合物の調製
1,25(OH)2D3：125pg、250pg、500pg、1000pg、2000pg、4000pg/25μl（保存液10-5M/25μL＝100,000pg/25μL）
2005529183.tif 000090
試験化合物：12,500pg、25,000pg、50,000pg、100,000pg、200,000pgおよび400,000pg/25μL。（4*10-5M/25μL＝400,000pg/25μL）
4.  VDRの希釈：
TEDK300/ゼラチン溶液2.5ml中VDR保存液1μl（500μl/試験管）、（氷上に維持）
【０１９２】
（iii）手順：
1.  反応準備
試験管をそれぞれ三組、下記の図に従って標識する。
2005529183.tif 000091
すべての試験管をボルテックスで混合し、室温で1時間インキュベートした。3H-1,25(OH)2D3希釈標準溶液（10μL）を加え、ボルテックスで混合し、室温で1時間インキュベートした。
2.  試料処理
添加の30分前に、炭/デキストラン溶液を氷上に置き、持続的に撹拌した。炭/デキストラン溶液（100μL）を各試験管に加え、よく混合し、氷上で30分間インキュベートした。4℃、2000rpmで10分間遠心沈降した。
3.  計数
上相の水相（100μL）を24穴シンチレーション計数プレートにピペットで分注し、各ウェルにシンチレーション液（600μL）を加え、ふたをしてよく混合した。シンチレーション計数器を用いてプレートを5分/試料で計数した。
【０１９３】
（iv）計算：
50パーセントの[3H]-1,25(OH)2D3をVDRから置換するための1,25(OH)2D3の量を1,25(OH)2D3のB50として計算する。他の化合物のVDR結合を1,25(OH)2D3の値1に対するB50として計算する。
1,25(OH)2D3の連続希釈
2005529183.tif 000092
試験化合物の連続希釈
2005529183.tif 000093
【０１９４】
（v）結果：
表1参照のこと。
【０１９５】
（vi）引用文献：
1. Ross T K、Prahl J M、DeLuka H. Overproduction of rat 1,25-dihydroxy vitamin D3 receptor in insect cells using the baculovirus expression system. (1991) Proc Natl Acd Sci USA 88:6555-6559 
2. Wecksler W R、Norman A W. An hydroxylapatite batch assay for the quantitation of 1alpha,25-dihydroxy vitamin D3-receptor complexes (1979) Anal Biochem 92:314-323
【０１９６】
実施例25：MCF-7細胞による[3H]-チミジン増殖アッセイ法
（i）材料と方法：
MCF-7細胞（ATCC）
ピルビン酸ナトリウム、可欠アミノ酸、ウシインスリン、ゲンタマイシンおよび10％ウシ胎仔血清を補足したMEM（成長（growth）培地）
トリヨードチロシン、ヒドロコルチゾン、トランスフェリン、ウシインスリンおよび5％ウシ胎仔血清を補足したRPMI1640（増殖（proliferation）培地）
イソプロパノール中で再構成した1α,25(OH)2D3 1mM
イソプロパノール中で再構成した基質（1mM）
トリプシン：EDTA溶液
1×PBS
75cm2組織培養フラスコ
96穴組織培養プレート
液体シンチレーション液
96穴フィルタープレート（Millipore）
【０１９７】
（ii）手順
1.  細胞懸濁液の調製
MCF-7細胞が70〜80％コンフルエントになった時点で培地を吸引した。細胞を1×PBSで洗浄した。プレートからトリプシン-EDTAでトリプシン処理し、細胞培養フラスコから細胞を回収し、遠心沈降（500×g、5分）し、培地中に再度懸濁した。
2.  細胞播種
細胞を計数し、細胞密度を25,000/mlに調節した。96穴プレートの各ウェルに200μl加えた。プレートを5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で24時間インキュベートした。用いた培地を吸引し、代わりに各ウェルに150μlの増殖培地を加えた。
3.  基質添加
それぞれ指定のウェルに1α,25(OH)2D3（25μl、最終濃度10-6M、10-7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M）を加えた。それぞれ指定のウェルに基質（25μl、最終濃度10-7M、5×10-8M、10-8Mまたは10-9M）を加えた。プレートを5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で3日間インキュベートした。
4.  3H-チミジン取り込み
各ウェルに0.02μCiの3H-チミジンを加え、5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で6時間インキュベートした。
5.  プレート回収
すべての培地を吸引し、細胞を1×PBSで洗浄した。細胞を5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で30分間トリプシン処理した。Tomtec Cell Harvestorを製造者の指示に従って用い、細胞を96穴フィルタープレート（Millipore）上に回収した。
6.  シンチレーション計数
各ウェルにシンチレーション液（25μl）を加えた。プレートをシンチレーション計数器を用いて計数した。
7.  結果
化合物I(g)、I(e)、I(a)、I(i)、I(m)およびI(n)についての結果を示すグラフを、それぞれ図1〜5に示す。
【０１９８】
実施例26：SCC-25細胞による[3H]-チミジン増殖アッセイ法
（i）材料と方法：
SCC-25細胞（ATCC）
ヒドロコルチゾンおよび5％ウシ胎仔血清を補足したDMEM-F12
イソプロパノール中で再構成した1α,25(OH)2D3 1mM
イソプロパノール中で再構成した基質（1mM）
トリプシン：EDTA溶液
1×PBS
75cm2組織培養フラスコ
96穴組織培養プレート
液体シンチレーション液
96穴フィルタープレート（Millipore）
【０１９９】
（ii）手順：
1.  細胞懸濁液の調製
SCC-25細胞が70〜80％コンフルエントになった時点で培地を吸引した。細胞を1×PBSで洗浄した。プレートからトリプシン-EDTAでトリプシン処理し、細胞培養フラスコから細胞を回収し、遠心沈降（500×g、5分）し、培地中に再度懸濁した。
2.  細胞播種
細胞を計数し、細胞密度を10,000/mlに調節した。96穴プレートの各ウェルに200μl加えた。プレートを5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で24時間インキュベートした。用いた培地を吸引し、代わりに各ウェルに150μlの培地を加えた。
3.  化合物添加
それぞれ指定のウェルに1α,25(OH)2D3（25μl、最終濃度10-6M、10-7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M）を加えた。それぞれ指定のウェルに基質（25μl、最終濃度10-7M、5×10-8M、10-8Mまたは10-9M）を加えた。プレートを5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で3日間インキュベートした。
4.  3H-チミジン取り込み
各ウェルに0.02μCiの3H-チミジンを加え、5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で6時間インキュベートした。
5.  プレート回収
すべての培地を吸引し、細胞を1×PBSで洗浄した。細胞を5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で30分間トリプシン処理した。Tomtec Cell Harvestorを製造者の指示に従って用い、細胞を96穴フィルタープレート（Millipore）上に回収した。
6.  シンチレーション計数
各ウェルにシンチレーション液（25μl）を加えた。プレートをシンチレーション計数器を用いて計数した。
7.  結果
化合物I(g)、I(e)、I(c)、I(a)、I(j)、I(l)、I(i)、I(o)およびI(n)についての結果を、それぞれ図6〜14に示す。
【０２００】
実施例27：ヒト表皮ケラチン細胞増殖（HEK）アッセイ法
（i）材料と方法：
正常HEK細胞（Cambrex、メリーランド州ウォーカーズビル）
BulletキットKGM-Ca培地（Cambrex、メリーランド州ウォーカーズビル）
試薬パック（Cambrex、メリーランド州ウォーカーズビル）
塩化カルシウム（Cambrex、メリーランド州ウォーカーズビル）
25cm2組織培養フラスコ
96穴組織培養プレート
[3H]-チミジン（Perkin Elmer、マサチューセッツ州ボストン）
イソプロパノール中で再構成したカルシトリオール（1mM）（Sigma、ミズーリ州セントルイス）
96穴フィルタープレート
シンチレーション液
シンチレーション計数器
Tomtec細胞回収器（Tomtec、コネチカット州ハムデン）
【０２０１】
（ii）試薬調製
1.  HEK細胞培地
KGM培地に、bulletキット中に提供される追加試薬を供給元の指示に従って補足した。
塩化カルシウムを最終濃度0.3mMまで加えた。
2.  カルシトリオールの希釈
保存液：カルシトリオール（1mM）
2005529183.tif 000094
3.  基質の希釈
保存液：基質（0.1mM）
2005529183.tif 000095
【０２０２】
（iii）手順：
1.  細胞培養
少なくとも500Kを含むHEK細胞のバイアル1本を解凍し、HEK細胞培地（5ml）を  含む5つの25cm2フラスコに分割した。24時間後、培地を除去し、新鮮培地（5m    l）を補充した。48時間後、培地を再度交換した。
2.  細胞懸濁液の調製
アッセイ当日、HEK細胞の単層を1×PBS緩衝液（試薬パック内）で一回洗浄し、  次いで37℃で5分間トリプシン処理した。トリプシン中和溶液（試薬パック内）  を加えた。細胞を試験管に回収し、遠心沈降（500×g、5分）し、HEK細胞培地  中に再度懸濁した。細胞を計数し、密度を150,000細胞/mlに調節した。細胞をHEK細胞培地でさらに1：30希釈した。
2.  細胞播種
細胞懸濁液（150μl）を96穴プレートの適当に標識したウェルに加えた。細胞  をウェルに接着させるため、プレートを、5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で  48時間インキュベートした。
3.  化合物の添加
カルシトリオール（25μL）（10-6〜10-11M、最終）を加え、基質（25μl、10-7〜10-10M、最終）を加え、5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で32時間インキュベートした。
4.  細胞回収および計数
各ウェルにHEK細胞培地（20μl）中0.2μCi/ウェルの[3H]-チミジンを加えた。プレートを5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で18時間インキュベートした。培地を吸引し、1×PBSで洗浄した。細胞を5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で30分間トリプシン処理した。Tomtec細胞回収器を製造者の指示に従って用い、細胞をフィルタープレート上に回収した。各ウェルにシンチレーション液（25μl）を加えた。シンチレーション計数器を用いて放射能を計数した。すべての値をバックグラウンドについて補正した。
5.  結果：
化合物I(e)、I(a)、I(i)、I(o)およびI(n)についての結果を示すグラフを、それぞれ図15〜19に示す。
【０２０３】
実施例28：本発明の化合物を含む提唱される局所組成物：
本発明の化合物（1mg）をアーモンド油（1g）に溶解する。この溶液に鉱油（40g）および自己乳化型蜜蝋（20g）を加える。混合物を加熱して液化し、湯（40mL）を加え、混合物をよく撹拌して、1gあたり約10μgの本発明の化合物を含むクリームを得る。
【０２０４】
実施例29：1gあたり50μgの本発明の化合物を含む提唱されるクリーム

本発明の化合物  50mg
セトマクロゴール1000  25g
セトステアリルアルコール  75g
クロロアリルヘキサアミニウムクロリド  0.5g
グリセロール  30g
リン酸水素二ナトリウム  2g
リン酸二水素ナトリウム  0.1g
液体パラフィン  60g
ポリオキシエチレンステアリルエーテル  12g
白色ワセリン  160g
精製水で1000gに合わせる                      
本発明の化合物を、グリセロール、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素ナトリウムおよびポリオキシエチレンステアリルエーテルを水に溶解した溶液に溶解する。融解したセトマクロゴール1000、液体パラフィン、セトステアリルアルコールおよび白色ワセリンと混合する。乳濁液をホモジナイズして冷却する。クロロアリルヘキサアミニウムクロリドを水の一部に溶解し、乳濁液と均質になるまで混合する。クリームをアルミニウムチューブに充填する。
【０２０５】
実施例30：1gあたり100μgの本発明の化合物を含む提唱されるクリーム

本発明の化合物  100mg
セトマクロゴール1000  30g
セトステアリルアルコール  60g
クロロアリルヘキサアミニウムクロリド  0.5g
プロピレングリコール  30g
リン酸水素二ナトリウム  2g
リン酸二水素ナトリウム  0.1g
液体パラフィン  50g
白色ワセリン  170g
精製水で1000gに合わせる                      
セトマクロゴール1000、セトステアリルアルコール、液体パラフィンおよび白色ワセリンを75℃で融解する。プロピレングリコールを水に75℃で溶解し、溶液を脂肪相と混合する。乳濁液をホモジナイズし、30℃まで冷却する。本発明の化合物を粒径5μm未満に粉砕し、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素ナトリウムおよびクロロアリルヘキサアミニウムクロリドの水溶液に懸濁する。懸濁液を乳濁液に加え、クリームをチューブに充填する。
【０２０６】
実施例31：1gあたり50μgの本発明の化合物を含む提唱されるローション

本発明の化合物  50mg
無水アルコール  400g
ヒドロキシプロピルセルロース  1g
メントール  1g
クエン酸ナトリウム  1g
プロピレングリコール  40g
精製水で1000mlに合わせる                    
ヒドロキシプロピルセルロース、クエン酸ナトリウムおよびプロピレングリコールを水に溶解する。本発明の化合物および無水アルコール中のメントールと混合する。ローションをポリエチレンプラスティックの瓶に充填する。
【０２０７】
実施例32 本発明の化合物を含む提唱されるカプセル
本発明の化合物を、落花生油に最終濃度5μg/mlまで懸濁する。10重量部のゼラチン、5重量部のグリセリン、0.08重量部のソルビン酸カリウム、および14重量部の蒸留水を加熱しながら混合し、ゼラチン軟カプセルを形成する。次いで、各カプセルが化合物0.5μgを含むように、カプセルに油懸濁液中の化合物（100μl）を充填する。
【０２０８】
（表１）実施例21〜24の結果の概要
2005529183.tif 000096
【図面の簡単な説明】
【０２０９】
本発明は添付の図面と関連して記載されている。
【図１】化合物I(g)およびカルシトリオールがMCF-7細胞の増殖阻害作用を有することを示すグラフである。MCF-7細胞を規定濃度のカルシトリオールおよび化合物I(g)で3日間処理した。次いで、細胞を[3H]-チミジンと共に5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で6時間インキュベートした。プレートを回収し、放射能を測定した。0.1nM I(g)（■）、1nM I(g)（▲）、10nM I(g)（▼）および50nM I(g)（◆）の用量反応曲線を示す。
【図２】化合物I(e)およびカルシトリオールがMCF-7細胞の増殖阻害作用を有することを示すグラフである。MCF-7細胞を規定濃度のカルシトリオールおよび化合物I(e)で3日間処理した。次いで、細胞を[3H]-チミジンと共に5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で6時間インキュベートした。プレートを回収し、放射能を測定した。I(e)非存在下（■）、1nM I(e)（▲）、10nM I(e)（▼）および50nM I(e)（◆）の用量反応曲線を示す。
【図３】化合物I(a)およびカルシトリオールがMCF-7細胞の増殖阻害作用を有することを示すグラフである。MCF-7細胞を規定濃度のカルシトリオールおよび化合物I(a)で3日間処理した。次いで、細胞を[3H]-チミジンと共に5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で6時間インキュベートした。プレートを回収し、放射能を測定した。0.1nM I(a)（■）、1nM I(a)（▲）、10nM I(a)（▼）および50nM I(a)（◆）の用量反応曲線を示す。
【図４】化合物I(i)およびカルシトリオールがMCF-7細胞の増殖阻害作用を有することを示すグラフである。MCF-7細胞を規定濃度のカルシトリオールおよび化合物I(i)で3日間処理した。次いで、細胞を[3H]-チミジンと共に5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で6時間インキュベートした。プレートを回収し、放射能を測定した。0.1nM I(i)（■）、1nM I(i)（▲）、10nM I(i)（▼）および50nM I(i)（◆）の用量反応曲線を示す。
【図５】化合物I(n)およびカルシトリオールがMCF-7細胞の増殖阻害作用を有することを示すグラフである。MCF-7細胞を規定濃度のカルシトリオールおよび化合物I(n)で3日間処理した。次いで、細胞を[3H]-チミジンと共に5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で6時間インキュベートした。プレートを回収し、放射能を測定した。I(n)非存在下（■）、1nM I(n)（▲）、10nM I(n)（▼）および50nM I(n)（◆）の用量反応曲線を示す。
【図６】化合物I(g)およびカルシトリオールがSCC-25細胞の増殖阻害作用を有することを示すグラフである。SCC-25細胞を規定濃度のカルシトリオールおよび化合物I(g)で3日間処理した。次いで、細胞を[3H]-チミジンと共に5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で6時間インキュベートした。プレートを回収し、放射能を測定した。0.1nM I(g)（■）、1nM I(g)（▲）、10nM I(g)（▼）および100nM I(g)（◆）の用量反応曲線を示す。
【図７】化合物I(e)およびカルシトリオールがSCC-25細胞の増殖阻害作用を有することを示すグラフである。SCC-25細胞を規定濃度のカルシトリオールおよび化合物I(e)で3日間処理した。次いで、細胞を[3H]-チミジンと共に5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で6時間インキュベートした。プレートを回収し、放射能を測定した。0.1nM I(e)（■）、1nM I(e)（▲）、10nM I(e)（▼）および100nM I(e)（◆）の用量反応曲線を示す。
【図８】化合物I(c)およびカルシトリオールがSCC-25細胞の増殖阻害作用を有することを示すグラフである。SCC-25細胞を規定濃度のカルシトリオールおよび化合物I(c)で3日間処理した。次いで、細胞を[3H]-チミジンと共に5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で6時間インキュベートした。プレートを回収し、放射能を測定した。0.1nM I(c)（■）、1nM I(c)（▲）、10nM I(c)（▼）および100nM I(c)（◆）の用量反応曲線を示す。
【図９】化合物I(a)およびカルシトリオールがSCC-25細胞の増殖阻害作用を有することを示すグラフである。SCC-25細胞を規定濃度のカルシトリオールおよび化合物I(a)で3日間処理した。次いで、細胞を[3H]-チミジンと共に5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で6時間インキュベートした。プレートを回収し、放射能を測定した。0.1nM I(a)（■）、1nM I(a)（▲）、10nM I(a)（▼）および100nM I(a)（◆）の用量反応曲線を示す。
【図１０】化合物I(j)およびカルシトリオールがSCC-25細胞の増殖阻害作用を有することを示すグラフである。SCC-25細胞を規定濃度のカルシトリオールおよび化合物I(j)で3日間処理した。次いで、細胞を[3H]-チミジンと共に5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で6時間インキュベートした。プレートを回収し、放射能を測定した。0.1nM I(j)（■）、1nM I(j)（▲）、10nM I(j)（▼）および100nM I(j)（◆）の用量反応曲線を示す。
【図１１】化合物I(l)およびカルシトリオールがSCC-25細胞の増殖阻害作用を有することを示すグラフである。SCC-25細胞を規定濃度のカルシトリオールおよび化合物I(l)で3日間処理した。次いで、細胞を[3H]-チミジンと共に5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で6時間インキュベートした。プレートを回収し、放射能を測定した。0.1nM I(l)（■）、1nM I(l)（▲）、10nM I(l)（▼）および100nM I(l)（◆）の用量反応曲線を示す。
【図１２】化合物I(i)およびカルシトリオールがSCC-25細胞の増殖阻害作用を有することを示すグラフである。SCC-25細胞を規定濃度のカルシトリオールおよび化合物I(i)で3日間処理した。次いで、細胞を[3H]-チミジンと共に5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で6時間インキュベートした。プレートを回収し、放射能を測定した。0.1nM I(i)（■）、1nM I(i)（▲）、10nM I(i)（▼）および100nM I(i)（◆）の用量反応曲線を示す。
【図１３】化合物I(o)およびカルシトリオールがSCC-25細胞の増殖阻害作用を有することを示すグラフである。SCC-25細胞を規定濃度のカルシトリオールおよび化合物I(o)で3日間処理した。次いで、細胞を[3H]-チミジンと共に5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で6時間インキュベートした。プレートを回収し、放射能を測定した。0.1nM I(o)（■）、1nM I(o)（▲）、10nM I(o)（▼）および100nM I(o)（◆）の用量反応曲線を示す。
【図１４】化合物I(n)およびカルシトリオールがSCC-25細胞の増殖阻害作用を有することを示すグラフである。SCC-25細胞を規定濃度のカルシトリオールおよび化合物I(n)で3日間処理した。次いで、細胞を[3H]-チミジンと共に5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で6時間インキュベートした。プレートを回収し、放射能を測定した。0.1nM I(n)（■）、1nM I(g)（▲）、10nM I(n)（▼）および50nM I(n)（◆）の用量反応曲線を示す。
【図１５】化合物I(e)およびカルシトリオールが正常ヒト表皮ケラチン細胞（NHEK）の増殖阻害作用を有することを示すグラフである。NHEKを規定濃度のカルシトリオールおよび化合物I(e)で3日間処理した。次いで、細胞を[3H]-チミジンと共に5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で18時間インキュベートした。プレートを回収し、放射能を測定した。I(e)非存在下（■）、1nM I(e)（▲）、10nM I(e)（▼）および50nM I(e)（◆）の用量反応曲線を示す。
【図１６】化合物I(a)およびカルシトリオールが正常ヒト表皮ケラチン細胞（NHEK）の増殖阻害作用を有することを示すグラフである。NHEKを規定濃度のカルシトリオールおよび化合物I(a)で3日間処理した。次いで、細胞を[3H]-チミジンと共に5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で18時間インキュベートした。プレートを回収し、放射能を測定した。I(a)非存在下（■）、1nM I(a)（▲）、10nM I(a)（▼）および50nM I(a)（◆）の用量反応曲線を示す。
【図１７】化合物I(i)およびカルシトリオールが正常ヒト表皮ケラチン細胞（NHEK）の増殖阻害作用を有することを示すグラフである。NHEKを規定濃度のカルシトリオールおよび化合物I(i)で3日間処理した。次いで、細胞を[3H]-チミジンと共に5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で18時間インキュベートした。プレートを回収し、放射能を測定した。I(i)非存在下（■）、1nM I(i)（▲）、10nM I(i)（▼）および50nM I(i)（◆）の用量反応曲線を示す。
【図１８】化合物I(o)およびカルシトリオールが正常ヒト表皮ケラチン細胞（NHEK）の増殖阻害作用を有することを示すグラフである。NHEKを規定濃度のカルシトリオールおよび化合物CTA112で3日間処理した。次いで、細胞を[3H]-チミジンと共に5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で18時間インキュベートした。プレートを回収し、放射能を測定した。I(o)非存在下（■）、1nM I(o)（▲）、10nM I(o)（▼）および50nM I(o)（◆）の用量反応曲線を示す。
【図１９】化合物I(n)およびカルシトリオールが正常ヒト表皮ケラチン細胞（NHEK）の増殖阻害作用を有することを示すグラフである。NHEKを規定濃度のカルシトリオールおよび化合物CTA113で3日間処理した。次いで、細胞を[3H]-チミジンと共に5％CO2を含む加湿雰囲気中、37℃で18時間インキュベートした。プレートを回収し、放射能を測定した。I(n)非存在下（■）、1nM I(n)（▲）、10nM I(n)（▼）および50nM I(n)（◆）の用量反応曲線を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【国際調査報告】
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