(57)【要約】治療上効果的な量のエストラジオールメタボライトを含む組成物を個体に投与して、循環器疾患に対する個体内の危険因子を予防し又は治療する方法を提供する。危険因子は、肥満症、代謝症候群、糖尿病、血管障害及び腎臓疾患を含む。好適なエストラジオールメタボライトは、２−メトキシエストラジオール、４−メトキシエストラジオール、２−ヒドロキシエストラジオール及び４−ヒドロキシエストラジオール又はそれらのプロドラッグを含む。また、組成物は放出調節製剤の形態でもよい。エストラジオールメタボライトを使用して、インシュリン耐性、血管の内皮機能障害、高脂血症、高血圧、糖尿病性腎障害及びタンパク尿症を治療し又は予防する方法を提供する。また、本発明による方法はグルコース濃度を安定させる方法を提供する。女性化卵胞ホルモン効果が無いため、前記治療法を男性にも女性にも使用できる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療上効果的な量のエストラジオールメタボライトを含む組成物を個体に投与する過程を含むことを特徴とする個体内の循環器疾患危険因子予防法又は治療法。
【請求項２】
循環器疾患危険因子は、肥満症、代謝症候群、糖尿病、血管障害及び腎臓疾患からなる群から選択される請求項１に記載の予防法又は治療法。
【請求項３】
エストラジオールメタボライトは、２−メトキシエストラジオール、４−メトキシエストラジオール、２−ヒドロキシエストラジオール及び４−ヒドロキシエストラジオールからなる群から選択される請求項１に記載の予防法又は治療法。
【請求項４】
組成物は、組成物の放出調節製剤を含む請求項１に記載の予防法又は治療法。
【請求項５】
組成物は、エストラジオールメタボライトのプロドラッグを含む請求項１に記載の予防法又は治療法。
【請求項６】
治療上効果的な量のエストラジオールメタボライトを含む組成物を個体に投与する過程を含むことを特徴とする個体内の肥満症予防法又は治療法。
【請求項７】
エストラジオールメタボライトは、２−メトキシエストラジオール、４−メトキシエストラジオール、２−ヒドロキシエストラジオール及び４−ヒドロキシエストラジオールからなる群から選択される請求項６に記載の予防法又は治療法。
【請求項８】
組成物は、組成物の放出調節製剤を含む請求項６に記載の予防法又は治療法。
【請求項９】
組成物は、エストラジオールメタボライトのプロドラッグを含む請求項６に記載の予防法又は治療法。
【請求項１０】
治療上効果的な量のエストラジオールメタボライトを含む組成物を個体に投与する過程を含むことを特徴とする個体内の代謝症候群予防法又は治療法。
【請求項１１】
エストラジオールメタボライトは、２−メトキシエストラジオール、４−メトキシエストラジオール、２−ヒドロキシエストラジオール及び４−ヒドロキシエストラジオールからなる群から選択される請求項１０に記載の予防法又は治療法。
【請求項１２】
組成物は、組成物の放出調節製剤を含む請求項１０に記載の予防法又は治療法。
【請求項１３】
組成物は、エストラジオールメタボライトのプロドラッグを含む請求項１０に記載の予防法又は治療法。
【請求項１４】
治療上効果的な量のエストラジオールメタボライトを含む組成物を個体に投与する過程を含むことを特徴とする個体内の糖尿病予防法又は治療法。
【請求項１５】
エストラジオールメタボライトは、２−メトキシエストラジオール、４−メトキシエストラジオール、２−ヒドロキシエストラジオール及び４−ヒドロキシエストラジオールからなる群から選択される請求項１４に記載の予防法又は治療法。
【請求項１６】
組成物は、組成物の放出調節製剤を含む請求項１４に記載の予防法又は治療法。
【請求項１７】
組成物は、エストラジオールメタボライトのプロドラッグを含む請求項１４に記載の予防法又は治療法。
【請求項１８】
治療上効果的な量のエストラジオールメタボライトを含む組成物を個体に投与する過程を含むことを特徴とする個体内の腎臓疾患予防法又は治療法。
【請求項１９】
エストラジオールメタボライトは、２−メトキシエストラジオール、４−メトキシエストラジオール、２−ヒドロキシエストラジオール及び４−ヒドロキシエストラジオールからなる群から選択される請求項１８に記載の予防法又は治療法。
【請求項２０】
組成物は、組成物の放出調節製剤を含む請求項１８に記載の予防法又は治療法。
【請求項２１】
組成物は、エストラジオールメタボライトのプロドラッグを含む請求項１８に記載の予防法又は治療法。
【請求項２２】
治療上効果的な量のエストラジオールメタボライトを含む組成物を個体に投与する過程を含むことを特徴とする個体内のインシュリン耐性予防法又は治療法。
【請求項２３】
エストラジオールメタボライトは、２−メトキシエストラジオール、４−メトキシエストラジオール、２−ヒドロキシエストラジオール及び４−ヒドロキシエストラジオールからなる群から選択される請求項２２に記載の予防法又は治療法。
【請求項２４】
組成物は、組成物の放出調節製剤を含む請求項２２に記載の予防法又は治療法。
【請求項２５】
組成物は、エストラジオールメタボライトのプロドラッグを含む請求項２２に記載の予防法又は治療法。
【請求項２６】
治療上効果的な量のエストラジオールメタボライトを含む組成物を個体に投与する過程を含むことを特徴とする個体内の血管の内皮機能障害予防法又は治療法。
【請求項２７】
エストラジオールメタボライトは、２−メトキシエストラジオール、４−メトキシエストラジオール、２−ヒドロキシエストラジオール及び４−ヒドロキシエストラジオールからなる群から選択される請求項２６に記載の予防法又は治療法。
【請求項２８】
組成物は、組成物の放出調節製剤を含む請求項２６に記載の予防法又は治療法。
【請求項２９】
組成物は、エストラジオールメタボライトのプロドラッグを含む請求項２６に記載の予防法又は治療法。
【請求項３０】
治療上効果的な量のエストラジオールメタボライトを含む組成物を個体に投与する過程を含むことを特徴とする個体内の高脂血症予防法又は治療法。
【請求項３１】
エストラジオールメタボライトは、２−メトキシエストラジオール、４−メトキシエストラジオール、２−ヒドロキシエストラジオール及び４−ヒドロキシエストラジオールからなる群から選択される請求項３０に記載の予防法又は治療法。
【請求項３２】
組成物は、組成物の放出調節製剤を含む請求項３０に記載の予防法又は治療法。
【請求項３３】
組成物は、エストラジオールメタボライトのプロドラッグを含む請求項３０に記載の予防法又は治療法。
【請求項３４】
高脂血症は、高コレステロール血症である請求項３０に記載の予防法又は治療法。
【請求項３５】
治療上効果的な量のエストラジオールメタボライトを含む組成物を個体に投与する過程を含むことを特徴とする個体内の高血圧症予防法又は治療法。
【請求項３６】
エストラジオールメタボライトは、２−メトキシエストラジオール、４−メトキシエストラジオール、２−ヒドロキシエストラジオール及び４−ヒドロキシエストラジオールからなる群から選択される請求項３５に記載の予防法又は治療法。
【請求項３７】
組成物は、組成物の放出調節製剤を含む請求項３５に記載の予防法又は治療法。
【請求項３８】
組成物は、エストラジオールメタボライトのプロドラッグを含む請求項３５に記載の予防法又は治療法。
【請求項３９】
治療上効果的な量のエストラジオールメタボライトを含む組成物を個体に投与する過程を含むことを特徴とする個体内の糖尿病性腎障害予防法又は治療法。
【請求項４０】
エストラジオールメタボライトは、２−メトキシエストラジオール、４−メトキシエストラジオール、２−ヒドロキシエストラジオール及び４−ヒドロキシエストラジオールからなる群から選択される請求項３９に記載の予防法又は治療法。
【請求項４１】
組成物は、組成物の放出調節製剤を含む請求項３９に記載の予防法又は治療法。
【請求項４２】
組成物は、エストラジオールメタボライトのプロドラッグを含む請求項３９に記載の予防法又は治療法。
【請求項４３】
治療上効果的な量のエストラジオールメタボライトを含む組成物を個体に投与する過程を含むことを特徴とする個体内のタンパク尿症予防法又は治療法。
【請求項４４】
エストラジオールメタボライトは、２−メトキシエストラジオール、４−メトキシエストラジオール、２−ヒドロキシエストラジオール及び４−ヒドロキシエストラジオールからなる群から選択される請求項４３に記載の予防法又は治療法。
【請求項４５】
組成物は、組成物の放出調節製剤を含む請求項４３に記載の予防法又は治療法。
【請求項４６】
組成物は、エストラジオールメタボライトのプロドラッグを含む請求項４３に記載の予防法又は治療法。
【請求項４７】
治療上効果的な量のエストラジオールメタボライトを含む組成物を個体に投与する過程を含むことを特徴とする個体内のグルコース濃度調節法。
【請求項４８】
エストラジオールメタボライトは、２−メトキシエストラジオール、４−メトキシエストラジオール、２−ヒドロキシエストラジオール及び４−ヒドロキシエストラジオールからなる群から選択される請求項４７に記載の調節法。
【請求項４９】
組成物は、組成物の放出調節製剤を含む請求項４７に記載の調節法。
【請求項５０】
組成物は、エストラジオールメタボライトのプロドラッグを含む請求項４７に記載の調節法。
【請求項５１】
エストラジオールメタボライトは、個体の多尿症を抑制する請求項４７に記載の調節法。
【請求項５２】
エストラジオールメタボライトは、個体の多渇症を抑制する請求項４７に記載の調節法。
【請求項５３】
エストラジオールメタボライトは、個体の糖化ヘモグロビン濃度を減少させる請求項４７に記載の調節法。
【請求項５４】
エストラジオールメタボライトは、個体の経口ブドウ糖耐性を向上させる請求項４７に記載の調節法。
【請求項５５】
エストラジオールメタボライトは、個体の糖尿を抑制する請求項４７に記載の調節法。
【請求項５６】
治療上効果的な量のエストラジオールメタボライトを含む組成物を個体に投与する過程を含むことを特徴とする個体内のレプチン濃度低減法。
【請求項５７】
エストラジオールメタボライトは、２−メトキシエストラジオール、４−メトキシエストラジオール、２−ヒドロキシエストラジオール及び４−ヒドロキシエストラジオールからなる群から選択される請求項５６に記載の低減法。
【請求項５８】
組成物は、組成物の放出調節製剤を含む請求項５６に記載の低減法。
【請求項５９】
組成物は、エストラジオールメタボライトのプロドラッグを含む請求項５６に記載の低減法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願】
【０００１】
本願は、２００１年８月１７日に出願された米国仮特許出願第６０/３１２,７４１号による優先権を主張する。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、概して肥満症、代謝症候群、糖尿病、血管障害及び腎臓疾患等の循環器疾患に対する危険因子の予防又は治療に対し使用する方法及び組成物に関する。特に本発明は、２−ヒドロキシエストラジオール、４−ヒドロキシエストラジオール、２−メトキシエストラジオール及び４−メトキシエストラジオール等の僅かなエストロゲン活性を有するエストラジオールメタボライトの使用に関連し、これら全ては、前記疾患を予防し又は治療する放出調節（徐放性）製剤（controlled release formulation）として供給してもよい。
【背景技術】
【０００３】
肥満症は、世界的に流行し先進国では悪化している（その内容が本願明細書の一部を構成する例えばモクダッド・エー・エイチ（Mokdad,A.H.）他、下記非特許文献１を参照されたい）。重要なことに、肥満症は代謝症候群の一因となり（その内容が本願明細書の一部を構成する例えばグランディー・エス・エム（Grundy, S.M.）、下記非特許文献２（以下「グランディー2000」という）;バーグマン・アール・エヌ（Bergman, R.N.）他、下記非特許文献３（以下「バーグマン2001」という）を参照されたい）、代謝症候群は、高血圧症、インシュリン耐性及び高脂血症により特徴付けられる疾患である（グランディー2000、バーグマン2001）。その結果、代謝症候群は、心臓病及び血管疾患の原因となり（その内容が本願明細書の一部を構成する例えばコルディッツ・ジー・エー（Colditz, G.A.）、下記非特許文献４を参照されたい）、末期腎不全の発症を早める一因となる（その内容が本願明細書の一部を構成する例えばホール・ダブリュ・ディ（Hall, W.D,）他、下記非特許文献５、ホール・ジェイ・イー（Hall, J.E.）他、下記非特許文献６を参照されたい）。残念なことに、肥満症の薬学治療は、循環器疾患を抑制せずに発症させる。例えば、普及しているフェンテルミン／フェンフルラミンの組合せは、弁膜性心疾患を発症する（その内容が本願明細書の一部を構成する例えばレパー・エヌ・イー（Lepor, N.E.）他、下記非特許文献７を参照されたい）一方、普及している治療の他の選択肢であるフェニルプロパノールアミンは発作を招来する（その内容が本願明細書の一部を構成する例えばカーナン・ダブリュ・エヌ（Kernan, W.N.）他、下記非特許文献８を参照されたい）。このように、心臓に悪影響を及ぼさずに、肥満症並びにその代謝、血管及び腎臓の続発症を予防し又は治療する薬は、大いに必要とされる。
【０００４】
体重を減少させると報告された化合物もあった。その内容が本願明細書の一部を構成する例えばオパリル・エス（Opari, S.）他、下記非特許文献９では、１７β−ペストラジオールは、血管を保護しかつラットの体重を減少させるとの報告があった。しかしながら、１７β−エストラジオールの投与による副作用は、男性では好ましくない女性化の効果を生じ、女性では１７β-エストラジオールの卵胞ホルモン効果により乳癌及び子宮ガンの危険性が増す。
【０００５】
肥満症、代謝症候群、糖尿病、血管障害及び腎臓疾患の間に連関性が生ずる点では、個体の性別に関係なく、前記病状の一部又は全てを１つの薬剤により同時に治療できることが重要であり好ましい。
【非特許文献１】
米国医療協会誌（J. Am. Medical Assoc.）284：1650（2000年）
【非特許文献２】
内分泌（Endocrine）13：155（2000年）
【非特許文献３】
薬学研究誌（Journal of Investigative Medicine）49：119（2001年）
【非特許文献４】
スポーツ及び運動の薬学及び科学（Medicine & Science in Sports & Exercise）31：S663（1999年）
【非特許文献５】
米国医療科学誌（American Journal of the Medical Sciences）313：195（1997年）
【非特許文献６】
ニューヨーク科学アカデミー年報（Annals of the New York Academy of Sciences）892：91（1999年）
【非特許文献７】
米国心臓病学誌（American Journal of Cardiology）86：107（2000年）
【非特許文献８】
ニューイングランド医薬誌（New England J. Med.）343：1826（2000年）
【非特許文献９】
米国心臓協会誌（Circulation）95：1301（1997年）
【特許文献１】
米国特許第６,２３８,２８４号
【特許文献２】
米国特許第５,７３６,１５４号
【特許文献３】
米国特許第５,８２７,５３１号
【特許文献４】
米国特許第６,３３９,０６９号
【特許文献５】
米国特許第６,１４３,７１６号
【特許文献６】
米国特許第５,８３０,５０６号
【特許文献７】
米国特許第６,３７２,８１３号
【特許文献８】
米国特許第６,３７２,２４８号
【特許文献９】
米国特許第６,３６７,９２９号
【特許文献１０】
米国特許第６,１０３,２５６号
【特許文献１１】
米国特許第５,７８８,９８０号
【特許文献１２】
米国特許第６,２５１,４１８号
【特許文献１３】
米国特許第５,８７４,０９８号
【特許文献１４】
米国特許第６,０７１,５４４号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
エストラジオールメタボライトを含む組成物の治療上効果的な量を個体に投与して、循環器疾患に対する個体内の危険因子を予防し又は治療する方法を提供する。危険因子は、肥満症、代謝症候群、糖尿病、血管障害及び腎臓疾患を含む。好適なエストラジオールメタボライトは、２−メトキシエストラジオール、４−メトキシエストラジオール、２−ヒドロキシエストラジオール及び４−ヒドロキシエストラジオール又はそれらのプロドラッグを含む。また、組成物は放出調節製剤の形態であってもよい。エストラジオールメタボライトを使用して、インシュリン耐性、血管の内皮機能障害、高脂血症、高血圧、糖尿病性腎障害及びタンパク尿症を治療し又は予防する方法を提供する。また、血糖値を安定化する方法を提供する。女性化卵胞ホルモン効果が無いため、前記治療法を男性にも女性にも使用できる。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の他の特徴及び効果は、以下の好適な実施の形態の説明及び特許請求の範囲から明らかとなろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
Ｉ．定義
用語「エストラジオールメタボライト」は、エストロゲン活性を僅かに生じかつエストロゲン受容体に対し親和力が弱いカテコレストラジオール及びメトキシエストラジオール等の１７β−エストラジオールのメタボライトであり、例えば２−メトキシエストラジオール、４−メトキシエストラジオール、２−ヒドロキシエストラジオール及び４−ヒドロキシエストラジオールを含む。
【０００９】
「生分解性」は、特定の治療の状況で許容できる期間内に生体内で溶解し又は劣化する高分子を指称する。この期間は、例えば水素イオン濃度範囲ｐＨ６〜９、温度範囲２５〜４０℃等の生理的なｐＨ及び温度に曝露後、典型的には５年未満、通常１年未満である。
【００１０】
用語「個体」は、ヒトの男性若しくは女性、又は動物の雄若しくは雌を指称する。
【００１１】
用語「プロドラッグ」は、エストラジオールメタボライトを放出する化合物を指称する。
【００１２】
用語「肥満症」は、体格指数が２５より大きい状態を指称する。体格指数は、ヒトの体重（キログラム表記）を身長（メートル表記）の二乗で除しものと定義する。
【００１３】
「代謝症候群（メタボリック症候群）」は、耐糖能異常、過インシュリン血症、インシュリン耐性、高脂血症、高血圧症及び肥満症の何れか又は全てにより特徴づけられる症状を指称する。一般に、代謝症候群は肥満体の個体により広まっている。
【００１４】
「糖尿病」は、多くの原因因子から派生し、絶食状態の又はブドウ糖の投与後、経口ブドウ糖負荷試験中の高濃度の血漿グルコース又は高血糖によって、特徴付けられる病気の経過を指称する。
【００１５】
用語「腎臓疾患」は、腎臓の構造又は機能の異常を指称する。腎臓疾患は、タンパク尿症により明らかにされる腎障害、糸球体硬化症並びに深刻な間質性変化及び血管病変等の腎臓の異常な組織変化、又は減少する糸球体濾過率によって、特徴付けることができる。
【００１６】
「インシュリン抵抗性」又は「インシュリン耐性」は、個体の生体内でのインシュリンの生物学的作用の減少を指称し、大動脈から（例えば筋肉、脂肪及び肝臓等のインシュリン感受性組織内へ）のグルコースの処理速度により評価される。この評価は、（その内容が本願明細書の一部を構成する例えばターナー・アール（Turner, R.）他、糖尿病（Diabetes）44：1（1995年）に説明されるように）経口的に又は静脈経路を介するグルコースチャレンジに対する耐性の検査によって、臨床的に評価される。II型糖尿病を有する個体は「インシュリン抵抗性」がある。
【００１７】
II．方法
以下の詳細な説明は、複数の具体的な詳細を含み、明確化のため周知の他の要素を省略するが、本発明の明確な理解に関する要素のより完全な理解を与える。本発明の実施に望ましく及び／又は必要とされる他の要素もあることは当業者に認識されよう。しかしながら、前記他の要素は公知技術であり、本発明の理解を容易にするものではないため、他の要素について説明を省略する。以下、添付の図面を参照して詳細な説明を提供する。
【００１８】
本発明は、様々な健康状態を治療するエストラジオールメタボライトの使用法を提供する。特に、本発明は、肥満症、代謝症候群、糖尿病、血管障害及び腎臓疾患等の循環器疾患の危険因子を予防し又は治療する方法を提供する。また具体的に本発明は、治療上効果的な量のエストラジオールメタボライトを個体に投与して、肥満症、代謝症候群、糖尿病、血管の疾病又は腎臓疾患を予防し又は治療する方法を提供する。本発明の方法の実施に使用するエストラジオールメタボライトは、僅かなエストロゲン活性を生じかつエストロゲン受容体に対して弱い親和力を有するカテコレストラジオール及びメトキシエストラジオール等の１７β-エストラジオールのメタボライトを含み、例えば、２−メトキシエストラジオール、４−メトキシエストラジオール、２−ヒドロキシエストラジオール及び４−ヒドロキシエストラジオールを含む。前記エストラジオールメタボライトを放出調節製剤に含有させることができる。また、エストラジオールメタボライトをプロドラッグから放出することもできる。
【００１９】
また、本発明は、治療上効果的な量のエストラジオールメタボライトを個体に投与して、インシュリン耐性、血管の内皮機能障害、高脂血症、高血圧症、糖尿病性腎障害又はタンパク尿症の予防し又は治療する方法を提供する。本発明により、前記高脂血症が高コレステロール血症であることが判明した。また、放出調節製剤にエストラジオールメタボライトを含有させて、本発明の方法を実施することもできる。更に、エストラジオールメタボライトをプロドラッグから放出することもできる。
【００２０】
本発明は、個体の血糖値を調節するエストラジオールメタボライトの投与法を提供する。エストラジオールメタボライトの投与は、多尿症、多渇症を抑え又は糖化ヘモグロビン濃度を低下させる。また、エストラジオールメタボライトは、経口耐糖能を改善し、放出調節製剤内で投与できることが判明した。また、エストラジオールメタボライトをプロドラッグから放出することもできる。
【００２１】
更に本発明は、放出調節製剤内のエストラジオールメタボライトを個体に投与することを提供する。特に、生分解性微小粒子、生分解性ナノ粒子、パッチ、結晶、ゲル、ヒドロゲル又はリポソーム等にエストラジオールメタボライトを含有させて本発明の方法を実施してもよい。また、インプラント、膣リング、浸透圧ポンプ、拡散装置又は経皮搬送装置にエストラジオールメタボライトを含有させてもよい。
【００２２】
放出調節製剤に使用する生分解性の微小粒子又はナノ粒子は、ポリラクチド、ポリグリコリド、ラクチド−グリコリド共重合体、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、乳酸−グリコール酸共重合体、ポリカプロラクトン、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、無水物ポリマー、ポリアミノ酸、ポリオルトエステル、ポリアセチル、ポリシアノアクリレート、ポリエーテルエステル、ポリジオキサノン、ポリアルキレンアルキレート、ポリエチレングリコール−ポリオルトエステル共重合体、生分解性ポリウレタン並びにこれらの混合物及び共重合体等の１又は２以上の重合体を含む。
【００２３】
エストラジオールメタボライト
本発明に使用するエストラジオールメタボライトは、２−ヒドロキシエストラジオール（エストラ−１,３,５(１０)−トリエン−２,３,１７−トリオール(１７β)）又は４−ヒドロキシエストラジオール（エストラ−１,３,５(１０)−トリエン−３,４,１７−トリオール(１７β)）等のカテコレストラジオール、又は２−メトキシエストラジオール（エストラ−１,３,５(１０)−トリエン−２−メトキシ３,１７−ジオール(１７β)）又は４−メトキシエストラジオール（エストラ−１,３,５(１０)−トリエン−４−メトキシ３,１７−ジオール(１７β)）等のメトキシエストラジオールを含む。これら全ての化合物の市販薬剤は容易に入手できる。
【００２４】
また、エストラジオールメタボライトを放出調節製剤に含有させてもよい。放出調節製剤は、生分解性微小粒子、生分解性ナノ粒子、パッチ、結晶、ゲル、ヒドロゲル、リポソーム等でもよい。また、インプラント、膣リング、浸透圧ポンプ、拡散装置及び経皮搬送装置等の装置内にエストラジオールメタボライトを含有させてもよい。本発明に従って、エストラジオールメタボライトのプロドラッグを使用することもできる。具体例は、ヒドロキシエストラジオール及びメトキシエストラジオールのエステルを含む。
【００２５】
前記化合物は、例示に過ぎず、親エストラジオール化合物上でのヒドロキシル化又はメチル化による様々な変形例を使用できることは当業者に明白である。例えば、多数の部位でエストラジオールを水酸化又はメチル化してもよく、この変形例は従来技術として公知である。
【００２６】
投与形態
治療すべき個体が消化吸収できる添加剤に本発明の治療組成物を調合してもよい。添加剤の例は、水、生理食塩水、リンガー溶液、デキストロース溶液、ハンク溶液及び他の生理的に安定した塩溶液を含む。また、不揮発性油、胡麻油、オレイン酸エチル又はトリグリセリド等の非水系添加剤を使用してもよい。他の有効な添加剤は、ナトリウム・カルボキシメチルセルロース、ソルビトール又はデキストラン等の粘性増強剤を含有する懸濁液を含む。また、添加剤は、少量の添加物、例えば等浸透圧性及び化学的安定性を向上する物質を含んでもよい。
【００２７】
本発明の治療組成物の製剤用緩衝剤の例は、リン酸塩緩衝剤、重炭酸塩緩衝剤及びトリス緩衝液を含むと共に、防腐剤の例は、チメロサール、クレゾール、ホルマリン及びベンジルアルコールを含む。標準的な製剤形態は、注入懸濁液又は注入溶液としての適当な液体に可溶な液体注入物質又は固体物である。従って、非液体製剤では、添加剤は、投与前に滅菌水又は生理食塩水を添加するデキストロース、ヒト血清アルブミン、防腐剤等を含んでもよい。
【００２８】
また、本発明は、本明細書に記載する適切な局所、経口、全身及び非経口の医薬化合物の製剤を提供することを目的とする。投与に対して従来の賦形剤の様々な治療上の投薬形態により前記製剤を投与できる。例えば、タブレット、カプセル（各時限開放性製剤及び放出調節製剤を含む）、錠剤、粉末剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンキ、液剤、懸濁剤、シロップ及びエマルジョンの形態の経口投与用に医薬化合物を調製してもよい。同様に、製薬業界の当業者に周知の全ての製剤を使用して、前記化合物を（塊剤及び注入液の両方とも）静脈内、血管治療／カテーテル導入中、腹膜組織内、皮下、閉塞の有無に拘わらず局所的又は筋肉内に投与することもできる。
【００２９】
本発明の治療組成物は運搬体（キャリア）を含む。運搬体は、治療された個体中で治療組成物の半減期を増大する化合物を含む。適当な運搬体は、重合体の放出調節賦形剤、生分解性移植組織、リポソーム、バクテリア、ウイルス、その他の細胞及びグリコールを含むが、これらに限定されるものではない。
【００３０】
放出調節製剤
本発明の方法は、個体中に本発明の組成物をゆっくり放出できる放出調節製剤を使用してもよい。ここで使用される放出調節製剤は、放出調節賦形剤中に本発明の組成物を含有させることができる。放出調節製剤は周知技術である。適切な放出調節製剤は、生物学的適合性の重合体、その他の重合体の基質、カプセル、マイクロカプセル、微小粒子、ナノ粒子、パッチ（その内容が本願明細書の一部を構成する上記特許文献１及び特許文献２を参照されたい）結晶（その内容が本願明細書の一部を構成する上記特許文献３を参照されたい）、塊状製剤、リポソーム（その内容が本願明細書の一部を構成する上記特許文献４及び特許文献５を参照されたい）、脂肪球、ゲル（その内容が本願明細書の一部を構成する上記特許文献６を参照されたい）、ヒドロゲル（その内容が本願明細書の一部を構成する上記特許文献７、特許文献８及び特許文献９を参照されたい）を含むが、これらに限定されるものではない。また、放出調節製剤のベヒクル（運搬手段）は、膣リング（その内容が本願明細書の一部を構成する上記特許文献１０及び特許文献１１を参照されたい）、インプラント（その内容が本願明細書の一部を構成する上記特許文献１２及び特許文献１３）、浸透圧ポンプ、拡散装置及び経皮搬送システム等の装置を含む。本発明による他の放出調節製剤は、個体に投与すると、その部位で固体又はゲルを形成する液体を含む。好適な放出調節製剤は生分解性を有する。前記放出調節製剤の組成物の全ては周知技術である。
【００３１】
本発明の好適な放出調節製剤は、組成物による治療投与量を達成するのに十分な一定速度により、個体に本発明の組成物を放出できる。治療組成物は、１日から約１２ヵ月までの期間を通じて放出できることが好ましい。前記治療組成物を２、３、４、５、６、７日から３０日の期間を通じて放出することがより好ましい。
【００３２】
投薬
効果的な方法で本発明の治療組成物を投与する許容可能なプロトコール（治療計画書）は、個体に対する組成物の服用サイズ、服用の数、投与頻度及び投与形態を含む。当業者によりプロトコールを判定できる。適当な時間間隔にわたり本発明の治療組成物を１回又はそれ以上投与すると、適切な１回の服用は、病気から個体を保護する（即ち予防又は治療する）ことができる。従来技術の一つにより、患者の与えられた病状に従って、治療組成物の追加投与の必要性を決定できる。
【００３３】
健康状態の予防又は治療
全ての米国人の６０%が体格指数２５を超えると算定された。しかしながら、肥満症は人間だけの問題でない。多くの動物も肥満症に関わる有害な結果に苦しんでいる。例えば、獣医の治療を受診する約１０〜４０%の猫及び２５〜５０%の犬は、過体重であると報告された。肥満症は、定住性の生活様式、屋内での制限及び不妊手術に起因する。肥満体の動物は、骨関節炎、靭帯損傷、会陰部の皮膚炎、糖尿病、心筋症及び泌尿器症候群を含む特定の病気に対する著しい危険を有する。従って、健康な体重を維持し病気の危険を最小限に抑えることが重要である。その内容が本願明細書の一部を構成する上記特許文献１４を参照されたい。
【００３４】
本発明は、治療上効果的な量のエストラジオールメタボライトを個体に投与して、肥満症を予防し又は治療する方法を提供する。エストラジオールメタボライトは、放出調節製剤に含有させることができ、プロドラッグとしても投与できる。
【００３５】
また、本発明は、治療上効果的な量のエストラジオールメタボライトを個体に投与して、代謝症候群を予防し又は治療する方法を提供する。更に本発明は、代謝症候群を有する個体にエストラジオールメタボライトを投与して、糖尿病、腎臓病、耐糖能異常、過インシュリン血症、インシュリン耐性、高脂血症、高血圧症及び肥満症の発症を予防する。他の実施の形態では、エストラジオールメタボライトを代謝症候群を有する個体に投与して、糖尿病、腎臓病、耐糖能異常、過インシュリン血症、インシュリン耐性、高脂血症、高血圧症及び肥満症を治療できる。本発明の実施の形態では、エストラジオールメタボライトを個体に投与して、高コレステロール血症を予防し又は治療できる。他の実施の形態では、エストラジオールメタボライトを個体に投与して血糖値を調節できる。これは、多尿症、多渇症の抑制及び糖化ヘモグロビン濃度の減少によって立証できる。更に、経口耐糖能を改善することもできる。エストラジオールメタボライトを放出調節製剤に含有させ又はプロドラッグとして投与することもできる。
【００３６】
永続的又は抑制不能な高血糖は、罹患及び死亡の増加及び早期化に関係する。異常なグルコース恒常性は、脂質、リポタンパク質及びアポリポタンパク質の代謝変化、他の代謝変化並びに血行障害に対して直接的及び間接的に関係することが多い。従って、II型糖尿病の患者は、虚血性心疾患、発作、末梢血管疾患、高血圧症、腎障害、神経障害及び網膜症を含む大血管の危険並びに大血管合併症の危険が特に増加する。従って、グルコース恒常性、脂質代謝及び高血圧症の治療上の制御は、糖尿病の臨床管理及び糖尿病治療に極めて重要である。
【００３７】
II型糖尿病を発症する危険性を有する個体の早期関与は、異常な高血糖又は耐糖能異常を抑制することに集中して、II型糖尿病への進行並びに関連する合併症及び／又は代謝症候群を予防し又は遅延させる。従って、経口耐糖能異常及び／又は血糖値上昇を治療することによって、II型糖尿病又は代謝症候群に対する病気進行を予防し又は抑制できる。
【００３８】
更に、本発明は、治療上効果的な量のエストラジオールメタボライトを個体に投与して、糖尿病を予防し又は治療する方法を提供する。別法として、糖尿病を発症する危険のある個体にエストラジオールメタボライトを投与できる。個体は、高血糖又は耐糖能異常を示す可能性があり、本発明の方法によるエストラジオールメタボライトの投与は、血糖値を調節するように機能する。別法として、エストラジオールメタボライトをII型糖尿病を有する個体に投与して、末梢血管疾患、高血圧症、腎障害、神経障害及び網膜症を予防し又は治療できる。エストラジオールメタボライトをII型糖尿病を有する個体に投与して、血糖値を調節できる。エストラジオールメタボライトの投与は、多尿症、多渇症を抑制し、糖化ヘモグロビン濃度を減少させることができる。また、経口耐糖能を増加することもできる。全てのエストラジオールメタボライトを放出調節製剤に含有させることができ、又はプロドラッグとして投与できる。
【００３９】
また、本発明は、治療上効果的な量のエストラジオールメタボライトを個体に投与して、腎臓疾患を予防し又は治療する方法を提供する。他の実施の形態では、エストラジオールメタボライトを代謝症候群の個体に投与して、腎臓病の発症を予防できる。また、エストラジオールメタボライトを個体に投与して、糖尿病性腎障害を予防し又は治療し、血管の内皮機能を向上することもできる。エストラジオールメタボライトを投与して、タンパク尿症を予防し又は治療することもできる。エストラジオールメタボライトを放出調節製剤に含有させ、又はプロドラッグとして投与することもできる。
【００４０】
また、本発明は、治療上効果的な量のエストラジオールメタボライトを個体に投与して、インシュリン耐性を予防し又は治療する方法を提供する。エストラジオールメタボライトをII型糖尿病を有する個体に投与できる。別法として、エストラジオールメタボライトをII型糖尿病を発病する危険性を有する個体に投与できる。また、エストラジオールメタボライトを代謝症候群を有する個体に投与することもできる。別法として、エストラジオールメタボライトを代謝症候群を発病する危険性を有する個体に投与できる。エストラジオールメタボライトを放出調節製剤に含有させ、又はプロドラッグとして投与できる。
【００４１】
更に、以下に示す本発明の例は、下記実施例に限定されるものではない。本発明の実施に適切に機能するものとして発明者が発見した技術を実施例に記載したもので、従ってこの実施に対し現在好適な実施の形態を構成することは当業者に明白であろう。しかしながら、本発明の趣旨及び範囲から逸脱せずに、特定の実施の形態で材料及び方法の両方を種々変更できることは、当業者に明白でなければならない。
【実施例】
【００４２】
実施例１
雄ZSF1ラットの２−ヒドロキシエストラジオール治療２６週間による耐肥満、耐糖尿性、コレステロール低下及び腎臓の影響の評価
【００４３】
ラットモデル生成
１２週齢の雄の肥満ZSF1ラット（ジェネティック・モデル社（Genetic Models Inc.）インディアナ州インディアナポリス）を使用した。肥満ZSF1ラットは、痩身の雌のザッカー糖尿病肥満ラット（Zucker Diabetic Fatty rats(ZDF +/fa)）と、痩身の雄の自然発生高血圧心不全ラット（Spontaneously Hypertensive Heart Failure rats(SHHF/Mcc-facp, +/cp)）とを交配して開発された。その内容が本願明細書の一部を構成する「腎不全」22：387（2000年）トフォヴィック・エス・ピー（Tofovic, S.P.）他に最近記載されたように、ウィスター−キョウト正常血圧ラット（Wistar-Kyoto normotensive rats）、自発発生高血圧ラット及び肥満SHHF/Mcc-facpラットを含む異なる複数のラット系統と比較して、肥満ZSF1ラットは、代謝症候群（即ち高血圧症、糖尿病及び高脂血症）、左心室の機能障害を有し、大量のタンパク尿症、腎臓の異常な組織変化（糸球体硬化症並びに深刻な間質性変化及び血管病変）及び糸球体濾過率の低下等の腎障害を発病する。従って、このラット系統は、肥満症、代謝症候群及び代謝症候群に関する末端器官の続発症を発病する。
【００４４】
動物実験
基準（０週）では、代謝ケージ内に動物を配置し、食物摂取量、摂水量、排尿量、尿タンパク質量（ビシンコニン酸法）及びグルコース量（Infinity(商標)グルコース試薬、シグマ・ダイアグノスティックス（Sigma Diagnostics）、ミズーリ州セント・ルイス）を決定した。次に、賦形剤（ポリエチレングリコール４００、２.５ul/時間）又は２−ヒドロキシエストラジオール（１０ug/kg/時間）を注入する小型浸透圧ポンプを皮下に移植した（無作為の割当）。３３日毎に小型ポンプを交換した。治療開始後１２週目及び２４週目に代謝ケージによる実験を繰り返した。９週間及び２５週間治療した後、動物を終夜絶食させて、コレステロール測定用の血液試料（尾静脈）を採取した。血漿試料のコレステロール濃度を２回分析した（シグマ・ダイアグノスティックス、ミズーリ州セント・ルイス）。２６週間治療した後、動物を終夜絶食させて、経口ブドウ糖負荷試験を実施し、全糖化ヘモグロビン濃度を決定した（シグマ・ダイアグノスティックス）。プレジション（Precision）QID血糖試験帯キット（メディセンス社（Medisense, Inc.）、マサチューセッツ州ベッドフォード）により血漿グルコース濃度を測定した。
【００４５】
２６週間治療した後、動物に麻酔をかけ器具を装備して、心機能、腎血行動態及び腸間膜血管反応性を検査した。PE-50カテーテルを頸動脈を介し左心室まで挿入すると共に、心臓性能分析装置（マイクロメッド社（Micro-Med, Inc.）、ケンタッキー州ルイスヴィル）に連結して、時間／圧力の変数を連続して１０回測定した。PE-50カテーテルを大腿動脈に挿入し、血圧分析装置（マイクロメッド社）に連結して動脈圧を測定した。PE-10カテーテルを左尿管に挿入して尿を採取し、流量計プローブ（トランソニック・システムズ社（Transonic Systems, Inc.）、ニューヨーク州イサカ）を左の腎動脈に配置して腎臓の血流量を決定した。14Ｃ−イヌリンの注入（０.０３５uCi/20ul生理食塩水/分）を開始し、６０分後、３０分２回のクリアランス（浄化）期間を実施した。放射能測定に対する中間点の血液試料（３００ul）を採取した。血漿及び尿の14Ｃ−イヌリン放射能を測定し、14Ｃ−イヌリンの腎臓クリアランス値を算出した。流量計プローブを腸間膜動脈上に配置して腸間膜血流量を決定し、３２ゲージ針を腸間膜動脈内に挿入すると共に、腸間膜内動脈への２回の注入（各２５ul/分）のためにＹ−コネクタに接続した。腸間膜内動脈の注入線を通じて腸間膜血管床に、メトキサミン（３ug/分）を加えたアンギオテンシンII（３０ng/分）を供給して、腸間膜血管床を予備収縮させた。次に、他の腸間膜内動脈の注入線を通じて腸間膜の血管床に前記薬剤を注入することにより、アセチルコリン（０.３、１.０及び３.０ug/分、投与毎５分）及びニトロプルシドナトリウム（０.５、１.５及び５.０ug/分、投与毎５分）の投与量増加に対する血管の反応を誘発した。動脈圧を血流量で割って血管抵抗を算出した。
【００４６】
統計分析
全数値は、各群内９〜１０匹の動物の平均値±標準誤差（means±SEM）とする。統計の有意差は、対応のないスチューデント式ｔ検定又は２因子分散分析を使用して算出され（測定を繰り返した）、その後、適切な場合にはフィッシャー最小有意差試験が実行された。有意差の基準はp<0.05であった。
【００４７】
結果
基準（０週）では、対照群及び２−ヒドロキシエストラジオール群の体重は、それぞれ４８４±４グラム及び４８３±９グラムであった。１２週及び２６週の治療後、２−ヒドロキシエストラジオール治療ラットの体重は低下した（対照ラット対２−ヒドロキシエストラジオール治療ラットは、それぞれ１２週では６１１±９グラム対５４５±１３グラム、及び２６週では７６８±１４グラム対５７１±１３グラム）。基準では、対照群及び２−ヒドロキシエストラジオール群の食物摂取量が近似した（それぞれ４１.４±１.６グラム/日及び４３.９±１.４グラム/日）。１２週及び２４週の治療後、２−ヒドロキシエストラジオール治療ラットの食物摂取量は低下した（P<0.001）（対照ラット対２−ヒドロキシエストラジオール治療ラットは、それぞれ１２週では３５.２±１.９グラム/日対２６.４±１.３グラム/日、及び２４週では４４.６±１.０グラム/日対３６.６±０.９グラム/日）。
【００４８】
基準では、両群が糖尿を示した（対照群及び２−ヒドロキシエストラジオール群では、それぞれ９.８±０.２グラム/日及び８.５±１.０グラム/日）。糖尿は、１２週及び２４週の２−ヒドロキシエストラジオール治療により減少した（P<0.001）（対照ラット対２−ヒドロキシエストラジオール治療ラットは、それぞれ１２週では５.５±０.８グラム/日対０.２±０.２グラム/日、及び２４週では６.５の±０.４グラム/日対１.７±０.５グラム/日）。また、２−ヒドロキシエストラジオールによる２６週間の治療は、経口ブドウ糖負荷試験の値を改善した（P<0.01）（対照ラット対２−ヒドロキシエストラジオール治療ラットでは、体重１kg毎にグルコース２グラム経口投与後２時間の血漿グルコース量は、それぞれ３２６±１２mg/100ml及び２６５±１３mg/100mlであった）。更に、２６週間の実験では、対照ラット対２−ヒドロキシエストラジオールの糖化ヘモグロビン量（グルコース制御の時間平均指標）は、それぞれ１２.５±１.７%対３.８±０.７%であった。基準では、両群は、多尿症（対照群及び２−ヒドロキシエストラジオール群は、それぞれ９４.８±８.２ml尿/日及び１０２±９.２ml尿/日）と共に、多渇症（対照群及び２−ヒドロキシエストラジオール群は、それぞれ１１５±１０ml尿/日及び１３５±１０ml尿/日）を示した。１２週及び２４週の２−ヒドロキシエストラジオールの治療により多尿症は抑制された（P<0.001）（対照ラット対２−ヒドロキシエストラジオール治療ラットは、それぞれ１２週では５７.６±７.５ml尿/日対２３.６±０.２ml尿/日、及び２４週では８６.５の±３.０ml尿/日対４５.６±３.８ml尿/日）。また、多渇症は、１２週及び２４週の２−ヒドロキシエストラジオールの治療により抑制された（P<0.001）（対照ラット対２−ヒドロキシエストラジオール治療ラットは、それぞれ１２週では６７.０±７.２ml水/日対４０.１±４.０ml水/日、及び２４週では１３１.８の±７.０ml水/日対６７.４±４.５ml水/日）。
【００４９】
２−ヒドロキシエストラジオールによる治療は、（P<0.001）高コレステロール血症を抑制した（対照ラット対２−ヒドロキシエストラジオール治療ラットは、それぞれ９週では２０５±１１mgコレステロール/100ml対１５１±９mgコレステロール/100ml、及び２５週では３９９±２４mgコレステロール/100ml対２４７±２８mgコレステロール/100ml）。
【００５０】
２６週間の２−ヒドロキシエストラジオールによる治療は、平均動脈圧を低減した（P<0.05）（対照ラット対２−ヒドロキシエストラジオール治療ラットはそれぞれ１３３±６mmHg対１２２±５mmHg）。２−ヒドロキシエストラジオールによる２６週間の治療は、（下表１に示すように）腎臓の血流量、腎臓の血管抵抗又は糸球体濾過率に影響しないが、２−ヒドロキシエストラジオールは、尿タンパク質排泄量に著しく影響を与えた。基準（１２週齢）では、対照動物は、大量のタンパク質を排泄し（２２７±２９mgタンパク質/日）、タンパク尿は加齢と共に増加し続けた（P<0.001）。重要なことに、２−ヒドロキシエストラジオールは、大幅に（P<0.001）タンパク尿の進行を抑制した（図１）。
【００５１】
【表１】
2005501096.tif 000002
【００５２】
２６週間の治療では、腸間膜の血管拡張反応を評価した。対照ラットと比較して、２−ヒドロキシエストラジオール治療ラットは、アセチルコリンにより誘発される腸間膜血管抵抗の減少がより顕著であった（図２）。２−ヒドロキシエストラジオールは、ニトロプルシドナトリウムにより誘発される血管拡張をほんの僅かだけ（非有意に）増加し（図３）、アセチルコリンに対する反応性の増強作用は、内皮依存性弛緩因子の放出が増加することにより、大部分が伝えられたことを示した。
【００５３】
本実験では心機能に関する２−ヒドロキシエストラジオールによる長期治療（２６週間）の効果は無かった。（下表２に示すように）心拍数、心室最高収縮期血圧、心室最高収縮期血圧変化の割合、心室最高拡張期血圧変化の割合、心室拡張終期血圧、心室最小拡張期血圧、心室収縮継続時間、心室拡張継続時間、心室拡張の半分の時間、心室拡張時定数又は心拍数と血圧との積を含む心室拡張期又は収縮期の機能の指数について、治療群と対照群との間に差異は認められなかった。
【００５４】
【表２】
2005501096.tif 000003
【００５５】
実施例２
雄及び雌ZSF1ラットの２−ヒドロキシエストラジオール又はメトキシエストラジオール治療２４週間による耐肥満症、耐糖尿病、コレステロール低下及び腎臓の影響の評価
【００５６】
実験計画
ポリエチレングリコール４００（PEG400）（シグマ（Sigma）、ミズーリ州セント・ルイス）により、雄ZSF1ラットを２４週間連続的に治療し、又は２−ヒドロキシエストラジオール若しくは２−メトキシエストラジオール（ステラロイズ社（Steraloids, Inc.）、ロードアイランド州ニューポート）の３種の投与の一群をポリエチレングリコール４００に溶解した。３種の投与法は、１ug/kg/hr、３ug/kg/hr又は１０ug/kg/hrであった。ポリエチレングリコール４００又は２−ヒドロキシエストラジオール１０ug/kg/hrにより、雌のZSF1ラットを２４週間連続的に治療した。１１週齢で雌ZSF1ラットの卵巣を摘出した。全ての動物、雄及び雌の両方に対して、エストラジオールメタボライトによる治療を約１３週齢から開始した。雄ZSF1ラットの一群は、ポリエチレングリコール４００だけを摂取するが、２−ヒドロキシエストラジオール１０ug/kg/hrにより治療した雄ZSF1ラットと同一の食物量を毎日摂取したペアフェッド（pair fed）であった。皮下の移植ポンプを通じて治療薬を投与した（アルゼット浸透圧ポンプ、モデル2ML4、アルザ社（Alza Corporation）、カリフォルニア州パロ・アルト）。実験では、体重、食物摂取量、摂水量、尿排出量、尿タンパク質排泄量、コレステロール濃度、血漿グルコース濃度及び耐糖能に関する治療効果及び投与反応性を評価するように設計した。
【００５７】
治療
ポリエチレングリコール４００にエストラジオールメタボライトの必要量を溶解することにより、２−ヒドロキシエストラジオール及び２−メトキシエストラジオールの原液を生成した。ポリエチレングリコール４００により本液を希釈し、各治療群の平均体重及び本実験の浸透圧ポンプの各ロットの所定の容積送出量に基づいて、３種の必要な投与量を供給した。各群の各浸透圧ポンプを移植する前に、新鮮な本原液を調製した。ポリエチレングリコール４００の対照溶液も前記同様に生成した。
【００５８】
小型浸透圧ポンプ
皮下に移植された浸透圧ポンプを通じて全ての治療薬を投与した（アルゼット浸透圧ポンプ、モデル2ML4、アルザ社、カリフォルニア州パロ・アルト）。各ロット所定の送出量に基づき、浸透圧ポンプの各ロットでは所定の送出量により供給され、１、３又は１０ug/kg/hrの送出量を確保するように製剤濃度を調節した。小型浸透圧ポンプの体内移植２４時間前に得られた治療群の動物の平均体重に対し投与量を調整した。
【００５９】
ハロタン（吸入麻酔剤）及び酸素（２.５リットル/分）をフルオテック３麻酔装置（Fluotec 3 anesthetic device）（オーメダ（Ohmeda）、英国スティートン）により供給して、小型浸透圧ポンプの体内移植前の動物に麻酔をかけた。各動物に軽く麻酔をかけた後に、背中の毛を剃り、小型浸透圧ポンプを挿入する切り込みを半インチ形成して体内移植を実行した。その後、創傷クリップにより切り込みを閉塞し、７日間で創傷クリップを除去した。小型浸透圧ポンプを３３日間隔で交換し、特定の動物が小型浸透圧ポンプを収容する毎に挿入位置を変更した。
【００６０】
体内に移植する前に、製造者の指示書に従って、小型浸透圧ポンプを装填した。ロット番号及び各ロット注入量を記録した。一度取り外した小型浸透圧ポンプを適正な容器中に配置して、将来の分析用に−８０℃で保存した。
【００６１】
代謝ケージ
代謝ケージ（ナルジェン（Nalgene）、ニューヨーク州ロチェスター）を本実験に使用した。４８時間代謝ケージで動物を飼育した。最初の２４時間の期間を順化期間と判断し、次の２４時間の期間に食物摂取量、液体摂取量及び尿容積を測定した。更に、尾静脈試料を採取し、血糖、ナトリウム、カリウム、アルブミン及びクレアチニンを計量した。更に血液を分析して、クレアチニンクリアランス、微小ナトリウム排泄量、微小カリウム排泄量及び微小アルブミン排泄量を算定した。また、代謝ケージ内に動物を飼育しながら下記基準を評価した：体重、飼料摂取量、摂水量、尿排出量、尿タンパク質量、尿アルブミン量、尿グルコース量、尿ナトリウム量及び尿カリウム量。
【００６２】
実験データ分析
ポンプを体内に移植する２４時間前に体重を測定し、これらの体重を用いて各群の平均体重に基づく各動物に投与すべき薬剤又は賦形剤の投与量を算出した。代謝ケージ内に配置する前各２ヶ月に約１回、動物の体重を測定した。
【００６３】
全重量２５０グラムまで食物容器に標準の粉末実験室用食物を充填して、食物摂取量を測定した。食物容器の重量を２４時間以内に再度測定し、２つの重量差により算出される食物摂取量を決定した。
【００６４】
ラベル付き水瓶に２５０mlまで水を満たして、摂水量を測定した。その後、水位を２４時間後に測定し、２つの測定値間の差として摂水量を算出した。
【００６５】
尿量は、２４時間にわたって尿を採取し、質量を量り測定された。
【００６６】
ビシンコニン酸試薬（ピアス（Pierce）、イリノイ州ロックフォード）を使用して分光光度定量法により尿タンパク質排泄量を測定した。２４時間の尿排出量と尿タンパク質濃度との積として、２４時間の尿タンパク質排泄量を算出した。
【００６７】
製造者の指示書に従い、Infinity(商標)グルコース試薬（シグマ・ダイアグノスティックス）を使用して分光光度定量法により、尿グルコース排泄量を測定した。２４時間の尿排出量と尿中のグルコース濃度との積として、２４時間の尿グルコース排泄量を算出した。
【００６８】
尾静脈から血液を１滴採取し、ブドウ糖試験帯（プレジションQID血糖試験帯キット）上に滴下することにより血糖を測定し、プレジションQIDグルコメータにより測定結果を読み込んだ。
【００６９】
動物を１６時間絶食させ、尾静脈から血液を１滴採取して、グルコースの経口投与に対する応答を得た。その後、経口強制投与により２グラム/4ml/kg水溶液の経口グルコースを各動物に与え、３０、６０及び１２０分後に血液を採取した。前記の通り血糖値を評価した。
【００７０】
マウス・レプチン・エリサ・キット（mouse leptin ELISA kit）（クリスタル・ケミカル社（Crystal Chem, Inc.）、イリノイ州シカゴ）によりレプチン濃度を測定した。
【００７１】
A1cNow(商標)モニタ（メトリカ（Metrika）、カリフォルニア州サニーヴェール）を使用して糖化ヘモグロビン（HbA1c）濃度を測定した。
【００７２】
結果
実施例２の２−メトキシエストラジオールによるZSF1ラットの治療は、実施例１に記載した２−ヒドロキシエストラジオールに発見した結果と同等であることが判明した。
【００７３】
基準では、雄の動物の治療群又は対照群の体重に差異が無かった（図４）。２−メトキシエストラジオール又は２−ヒドロキシエストラジオールによる治療により、殆ど体重が増加せず、食物摂取量が低下した（図４及び図５）。２−ヒドロキシエストラジオール１０ug/kg/hrによる治療後の雌の治療動物にも同様の結果が認められた（図６）。
【００７４】
また、基準の尿タンパク質排泄量は、雄の動物の全ての群の間で近似した。２−ヒドロキシエストラジオール又は２−メトキシエストラジオール１、３又は１０ug/kg/hrによる２４週間治療した後、エストラジオールメタボライト治療の雄の動物は、対照動物より、尿タンパク質排泄量が低かった（図７）。雌の動物の尿タンパク質排泄量は、初期濃度がより低いため、エストラジオールメタボライトの投与による尿タンパク質排泄量の改善は殆ど無かった。また、雌の動物の尿タンパク質排泄量はそれ程急激には増加しなかった。
【００７５】
また、２g/４ml/kgグルコース投与後のグルコースの血漿濃度（mg%）では、２−ヒドロキシエストラジオール又は２−メトキシエストラジオール１０ug/kg/hrにより１４〜１５週間治療した雄の動物は、明らかに対照群より低いことを示した（図８及び図９）。雌の動物は、雄の動物より低い血漿グルコースの基準濃度を示した。グルコースの投与は、血漿グルコース濃度の初期増加を生じ、雌の動物は雄の動物に見られる濃度より低濃度まで急減した。初期の血漿グルコースが低濃度であり、既に許容濃度であったため、エストラジオールメタボライトの投与は、血漿グルコース濃度に対する影響が殆ど無かった。
【００７６】
２−ヒドロキシエストラジオール又は２−メトキシエストラジオール１０ug/kg/hrにより２４週間治療した雄及び雌の動物は、対照群より低い血中尿素窒素量を示した（図１０）。
【００７７】
２−ヒドロキシエストラジオール又は２−メトキシエストラジオール１０ug/kg/hrによる２０週間治療後の雄の動物のレプチン濃度は、対照動物と比較して明らかに減少した（図１１参照）。同様に、２−ヒドロキシエストラジオール１０ug/kg/hrにより治療した雌の動物のレプチン濃度も対照動物と比較して減少した（図１１）。
【００７８】
また、２４時間摂水量では、２−メトキシエストラジオール及び２−ヒドロキシエストラジオール１０ug/kg/hrにより治療した雄の動物は、対照動物と比較してより少量であった（図１２）。
【００７９】
また、２４時間尿排出量では、２−メトキシエストラジオール及び２−ヒドロキシエストラジオール１０ug/kg/hrにより治療した雄の動物は、対照動物と比較してより少量であった（図１３）。
【００８０】
また、糖化ヘモグロビン（HbA1c）では、２−メトキシエストラジオール及び２−ヒドロキシエストラジオール１０ug/kg/hrにより治療した雄の動物は、対照動物と比較してより低濃度であった。
【００８１】
開示した方法及び組成物を本発明の特定の実施の形態について記載したが、特許請求の範囲の発明の思想、趣旨及び範囲から逸脱することのない変形例を適用できることは当業者に明白であろう。特に、化学的かつ生理的に関係しかつ同一又は類似の結果が得られる特定の薬剤を本願明細書に記載される薬剤と置換できることは明白であろう。当業者に自明な類似する代替物及び変更態様は、添付の特許請求の範囲に定義される本発明の範囲内に包含される。従って、図面及び明細書の説明は、単に本発明の理解を容易にするに過ぎず、発明の範囲を限定して解釈すべきではない。
【図面の簡単な説明】
【００８２】
【図１】賦形剤（□）又は２−ヒドロキシエストラジオール（■）により治療したZSF1ラットの基準（０週）、１２週及び２４週での尿タンパク質排泄量を示す。記号「a」は、基準との有意差があることを示し（賦形剤群内）、記号「b」は、賦形剤に対する有意差を示す（賦形剤群と２−ヒドロキシエストラジオール群との間）（フィッシャー最小有意差試験）。２因子分散分析（差異分析）は、時間と治療との有意な（p<0.001）相互作用のみならず、時間と治療との間の有意な（p<0.001）効果を示した。数値は、各群内９〜１０匹の動物に対する平均値±標準誤差（means±SEM）を示す。
【図２】賦形剤（□）又は２−ヒドロキシエストラジオール（■）により治療したZSF1ラットの２６週での腸間膜血管抵抗に対するアセチルコリンの影響を示す。２因子分散分析は、アセチルコリンに対する２−ヒドロキシエストラジオールの有意な効果を示した（P<0.006）。数値は、各群内９〜１０匹の動物に対する平均値±標準誤差を示す。
【図３】賦形剤（□）又は２−ヒドロキシエストラジオール（■）により治療したZSF1ラットの２６週目での腸間膜血管抵抗に関するニトロプルシドナトリウムの影響を示す。２因子分散分析は、ニトロプルシドナトリウムに対する２−ヒドロキシエストラジオールの無有意差の効果を示した（p<0.201）。数値は、各群内９〜１０匹の動物に対する平均値±標準誤差を示す。
【図４】雄又は雌のZSF1ラットの体重増加について、非治療雄（「対照雄」）、非治療雌（「対照雌」）及び１０ug/kg/hr２−ヒドロキシエストラジオール投与ラットに対応する食物量を与えた非治療雄（「対照対」）と比較して、２４週間にわたり１、３又１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール又は２−メトキシエストラジオールによる治療効果を示す。「2-HE-1」「2-HE-3」及び「2-HE-10」は、それぞれ１、３及び１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール治療雄を示し、「2-HE-F-10」は、１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール治療雌を示す。「2-ME-1」、「2-ME-3」及び「2-ME-10」は、それぞれ１、３及び１０ug/kg/hrの２−メトキシエストラジオール治療雄を示す。
【図５】２４週間にわたる雄ZSF1ラットの体重増加率について、非治療雄（「対照雄」）及び１０ug/kg/hr２−ヒドロキシエストラジオール投与ラットに対応する食物量を与えた非治療雄（「対照対」）と比較して、１、３又１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール（それぞれ「2-HE-1」、「2-HE-3」及び「2-HE-10」）又は２−メトキシエストラジオール（それぞれ「2-ME-1」、「2-ME-3」及び「2-ME-10」）による治療効果を示す。
【図６】非治療対照雌と比較して、２４週間にわたる雌のZSF1ラットの体重増加率について、１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオールによる治療効果を示す。
【図７】２４週間にわたる雄又は雌のZSF1ラットの尿タンパク質排泄量（「UPE」）について、非治療雄（「対照雄」）、非治療雌（「対照雌」）及び１０ug/kg/hr２−ヒドロキシエストラジオール投与ラットに対応する食物量を与えた非治療雄（「対照対」）と比較して、１、３又１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール又は２−メトキシエストラジオールによる治療効果を示す。「2-HE-1」、「2-HE-3」及び「2-HE-10」は、それぞれ１、３及び１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール治療雄を示し、「2-HE-F-10」は、それぞれ１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール治療雌を示す。「2-ME-1」、「2-ME-3」及び「2-ME-10」は、それぞれ１、３及び１０ug/kg/hrの２−メトキシエストラジオール治療雄を示す。
【図８】１２０分にわたる経口ブドウ糖負荷試験による雄又は雌のZSF1ラットの血漿グルコース濃度について、非治療雄（「対照雄」）、非治療雌（「対照雌」）及び１０ug/kg/hr２−ヒドロキシエストラジオール投与ラットに対応する食物量を与えた非治療雄（「対照対」）と比較して、１、３又は１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール又は２−メトキシエストラジオールによる１４〜１５週間の治療効果を示す。「2-HE-1」、「2-HE-3」及び「2-HE-10」は、それぞれ１、３及び１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール治療雄を示し、「2-HE-F-10」は、それぞれ１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール治療雌を示す。「2-ME-1」、「2-ME-3」及び「2-ME-10」は、それぞれ１、３及び１０ug/kg/hrの２−メトキシエストラジオール治療雄を示す。
【図９】グルコース濃度曲線に基づく領域として表示された１２０分にわたる経口ブドウ糖負荷試験による雄又は雌のZSF1ラットの血漿グルコース濃度について、非治療雄（「対照雄」）、非治療雌（「対照雌」）及び１０ug/kg/hr２−ヒドロキシエストラジオール投与ラットに対応する食物量を与えた非治療雄（「対照対」）と比較して、１、３又は１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール又は２−メトキシエストラジオールによる１４〜１５週間の治療効果を示す。「2HE-1」、「2HE-3」及び「2HE-10」は、それぞれ１、３及び１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール治療雄を示し、「2HE-F-10」は、１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール治療雌を示す。「2ME-1」、「2ME-3」及び「2ME-10」は、それぞれ１、３及び１０ug/kg/hrの２−メトキシエストラジオール治療雄を示す。
【図１０】雄又は雌ZSF1ラットで血中尿素窒素（「BUN」）濃度について、非治療雄（「対照雄」）、非治療雌（「対照雌」）及び１０ug/kg/hr２−ヒドロキシエストラジオール投与ラットに対応する食物量を与えた非治療雄（「対照対」）と比較して、１、３又は１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール又は２−メトキシエストラジオールによる２４週間の治療効果を示す。「2HE-1」、「2HE-3」及び「2HE-10」は、それぞれ１、３及び１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール治療雄を示し、「2HE-F-10」は、それぞれ１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール治療雌を示す。「2ME-1」、「2ME-3」及び「2ME-10」は、１、３及び１０ug/kg/hrの２−メトキシエストラジオール治療雄を示す。
【図１１】雄又は雌のZSF1ラットの血漿レプチン濃度について、非治療雄（「対照雄」）、非治療雌（「対照雌」）及び１０ug/kg/hr２−ヒドロキシエストラジオール投与ラットに対応する食物量を与えた非治療雄（「対照対」）と比較して、１、３又は１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール又は２−メトキシエストラジオールによる２０週間の治療効果を示す。「2HE-1」、「2HE-3」及び「2HE-10」は、それぞれ１、３及び１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール治療雄を示し、「2HE-F-10」は、それぞれ１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール治療雌を示す。「2ME-1」、「2ME-3」及び「2ME-10」は、それぞれ１、３及び１０ug/kg/hrの２−メトキシエストラジオール治療雄を示す。
【図１２】非治療雄（「対照雄」）、非治療雌（「対照雌」）及び１０ug/kg/hr２−ヒドロキシエストラジオール投与ラットに対応する食物量を与えた非治療雄（「対照対」）と比較して、１、３又は１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール又は２−メトキシエストラジオールによる２４週間の治療に続く２４時間の雄又は雌のZSF1ラットの摂水量を示す。「2HE-1」、「2HE-3」及び「2HE-10」は、それぞれ１、３及び１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール治療雄を示し、「2HE-F-10」は、１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール治療雌を示す。「2ME-1」、「2ME-3」及び「2ME-10」は、それぞれ１、３及び１０ug/kg/hrの２−メトキシエストラジオール治療雄を示す。
【図１３】非治療雄（「対照雄」）、非治療雌（「対照雌」）及び１０ug/kg/hr２−ヒドロキシエストラジオール投与ラットに対応する食物量を与えた非治療雄（「対照対」）と比較して、１、３又は１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール又は２−メトキシエストラジオールによる２４週間の治療に続く２４時間の雄又は雌のZSF1ラットの尿量を示す。「2HE-1」、「2HE-3」及び「2HE-10」は、それぞれ１、３及び１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール治療雄を示し、「2HE-F-10」は、１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール治療雌を示す。「2ME-1」、「2ME-3」及び「2ME-10」は、それぞれ１、３及び１０ug/kg/hrの２−メトキシエストラジオール治療雄を示す。
【図１４】非治療雄（「対照雄」）、非治療雌（「対照雌」）及び１０ug/kg/hr２−ヒドロキシエストラジオール投与ラットに対応する食物量を与えた非治療雄（「対照対」）と比較して、１、３又は１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール又は２−メトキシエストラジオールによる２８週間の治療に続く雄又は雌のZSF1ラットの糖化ヘモグロビン（HbA1c）濃度を示す。「2HE-1」、「2HE-3」及び「2HE-10」は、それぞれ１、３及び１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール治療雄を示し、「2HE-F-10」は、１０ug/kg/hrの２−ヒドロキシエストラジオール治療雌を示し、「2ME-1」、「2ME-3」及び「2ME-10」は、１、３及び１０ug/kg/hrの２−メトキシエストラジオール治療雄を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2005501096.tif 000069
【国際調査報告】
2005501096.tif 000070
2005501096.tif 000071