(57)【要約】本発明は、ヒトＣＴＬＡ−４に対するヒト配列抗体を使用する治療方法を提供した。特に、癌治療方法を提供した。【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者の抗原に対する二次免疫応答を促進する方法であって、
前記抗原に対する一次免疫応答が生じている患者に対して、有効量の抗ＣＴＬＡ−４抗体を投与し、この有効量の抗ＣＴＬＡ−４抗体は、前記抗原に触れた前記患者の前記抗原に対する二次免疫応答を促進する工程を備える方法。
【請求項２】
前記抗原は、癌抗原であり、および、前記患者は、事前に抗癌ワクチンによって治療されてきている請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記癌抗原は、メラノーマ抗原である請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記癌は、メラノーマであり、および、前記患者は、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドを含む抗メラノーマワクチンによって治療されてきている請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記癌は、メラノーマであり、および、前記抗癌ワクチンは、ｇｐ１００およびＭＡＲＴ−１から選択された抗原を含む請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記癌抗原は、前立腺癌抗原である請求項２に記載の方法。
【請求項７】
さらに、抗ＣＴＬＡ−４抗体を投与する前に、前記抗原に対する免疫に関して前記患者をテストする工程と、
前記抗原に対する免疫を示した患者のみに対して、抗ＣＴＬＡ−４抗体を投与する工程と、を備える請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記抗原は、癌抗原である請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記抗原は、ウイルス性抗原である請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗原は、細菌性抗原である請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗原は、ウイルス性抗原であり、および、前記患者は、ウイルス性ワクチンによって治療を受けてきている請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記ウイルス性抗原は、肝炎抗原である請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記患者は、人間である請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ヒト抗ＣＴＬＡ−４抗体である請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ヒト化抗ＣＴＬＡ−４抗体である請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ヒト配列抗ＣＴＬＡ−４抗体である請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
患者の抗原に対する免疫応答を誘導または促進する方法であって、
前記患者に抗ＣＴＬＡ−４抗体を投与することによって、前記抗ＣＴＬＡ−４抗体の血中濃度が、少なくとも４ヶ月間検出可能な水準以上に維持される工程を備える方法。
【請求項１８】
抗ＣＴＬＡ−４抗体が、複数回投与されることによって、血中濃度が、少なくとも４ヶ月間検出可能な水準以上に維持される請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗ＣＴＬＡ−４抗体が、間隔をおいて一定量を投与されることによって、前記患者の抗ＣＴＬＡ−４抗体の血中濃度が、少なくとも４ヶ月間少なくとも２μｇ／ｍｌである請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗ＣＴＬＡ−４抗体が、間隔をおいて一定量を投与されることによって、前記患者の抗ＣＴＬＡ−４抗体の血中濃度が、少なくとも４ヶ月間少なくとも５μｇ／ｍｌである請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗ＣＴＬＡ−４抗体が、間隔をおいて一定量を投与されることによって、前記患者の抗ＣＴＬＡ−４抗体の血中濃度が、少なくとも４ヶ月間少なくとも１０μｇ／ｍｌである請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
前記患者は、人間である請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ヒト抗ＣＴＬＡ−４抗体である請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ヒト化抗ＣＴＬＡ−４抗体である請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ヒト配列抗ＣＴＬＡ−４抗体である請求項１７に記載の方法。
【請求項２６】
ＣＴＬＡ４＋Ｔ細胞悪性腫瘍の患者に対する治療の方法であって、
前記患者に、細胞障害性因子に関連した抗ＣＴＬＡ−４抗体を投与することによって、前記患者のＴ細胞悪性腫瘍が治療される工程を備える方法。
【請求項２７】
前記細胞障害性因子は、細胞障害性薬剤である請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記細胞障害性因子は、放射性同位体である請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
Ｔ細胞を介した自己免疫疾患の患者の治療の方法であって、
前記患者に、前記細胞障害性因子に関連した抗ＣＴＬＡ−４抗体を投与することによって、前記患者のＴ細胞を介した自己免疫疾患が治療される工程を備える方法。
【請求項３０】
前記細胞障害性因子は、細胞障害性薬剤である請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記細胞障害性因子は、放射性同位体である請求項２９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、合衆国法典（Ｕ.Ｓ.Ｃ）３５の１１９条（Ｅ）に基づいて、２００２年４月１２日に出願された米国仮特許出願第６０／３７２２８４号、および、２００２年５月１７日に出願された米国仮特許出願第６０／３８１２７４号、の優先権を主張する。これらの仮出願の内容は、全て参照として併合される。
【０００２】
本発明は分子免疫学とヒトの疾患の治療に関連する。より詳細には、ヒトＣＴＬＡ−４に対する抗体を使用する新規な治療方法に関連する。
【背景技術】
【０００３】
脊椎動物免疫システムは、最適な免疫活性を達成するために、複数の信号を必要とする（Janeway,  Cold  Spring  Harbor  Symp.  Quant.  Biol.  1989年  54:1-14,  Paul  William  E.,  ed.  Raven  Press,  N.Y.,  Fundamental  Immunology,  4th  edition  (1998年),  特に12章から13章、411-478）。Ｔリンパ球（Ｔ細胞）と抗原提示細胞（ＡＰＣ）間の相互作用は、免疫応答に不可欠な要素である。Ｔ細胞とＡＰＣに見出された多くの結合分子の水準は、免疫応答中に増加する（Springer  et  al.,  A.  Rev.  Immunol.  1987年  5:223-252、Shaw  and  Shimuzu,  Current  Opinion  in  Immunology,  1988年  Eds.  Kindt  and  Long,  1:92-97、およびHemler,  Immunology  Today  1988年  9:109-113）。これらの分子の増加水準は、なぜ活性化ＡＰＣが、刺激性抗原特異的Ｔ細胞の増殖に対し、非活性化ＡＰＣより効果的であるかを示している（Kaiuchi  et  al.,  J.  Immunol.  1983年  131:109-114、Kreiger  et  al.,  J.  immunol.  1985年  135:2937-2945、McKenzie,  J.  Immunol.  1988年  141:2907-2911、および、Hawrylowicz  and  Unanue,  J.  Immunol.  1988年  141:4083-4088）。
【０００４】
Ｔ細胞免疫応答は、細胞−細胞相互作用、特に、Ｔ細胞およびＡＰＣなどのアクセサリー細胞の間の相互作用と（Springer  et  al.,  A.Rev.Immunol.  1987年  5:223-252）、水溶性免疫伝達物質（サイトカイニンやリンフォカイン）の生成（Dinarello,  New  Engl.J.Med  1987年  317:940-945、Sallusto,  J.Exp.Med.  1997年  179:1109-1118）とに、関連する複雑な過程である。この応答はＴ細胞受容体（Weiss,  Ann.Rev.Immunol.  1986年  4:593-619）および他の“アクセサリー”表面分子（Allison,  Curr.Opin.Immunol.  1994年  6:414-419、Springer,  1987年  上記）を含む複数のＴ細胞表面受容体によって調節される。多くのこれらのアクセサリー分子は、自然発生的な細胞表面分化（ＣＤ）抗原であり、細胞表面上のモノクローナル抗体の反応性によって定められる（McMichael,Ed,Leukocyte  Typing  III,  Oxford  Univ.  Press,  Oxford,  N.Y.,  1987年）。
Ｔヘルパー細胞（Ｔｈ）抗原性応答は、ＡＰＣによって提供される信号を必要とする。第一の信号が、Ｔ細胞受容体複合体（Weiss,  J.Clin.Invest.  1990年  86:1015）とＡＰＣの主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子クラスＩＩに提示される抗原（Allen,  Immunol.  Today  1987年  8:270）との相互作用によって開始される。この抗原特異的信号は、完全な応答を発生するには不十分であり、第二信号がない場合、実際、クローン非活性やクローンアネルギーを導き得る（Schwartz,  Science  1990年  248:1349）。ＭＨＣによって提示される第二の“補助刺激”信号の必要性は、多く実験系で実証されてきている（Schwartz,  上記、Weaver  and  Unanue,  Immunol.Today  1990年  11:49）。第二信号の分子の性質は、インターロイキン（ＩＬ）−１などの水溶性分子（Weaver  and  Unanue,  上記）や、細胞間接着に関連する膜受容体（Springer,  Nature  1990年346:425）もどちらも補助刺激信号を提供することができるなど一部場合においては明らかにされて来ているが、完全に理解されたわけではない。
【０００５】
ＣＤ２８抗原、免疫グロブリンスーパーファミリーのホモダイマー糖タンパク質（Aruffo  and  Seed,  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  1987年  84:8573-8577）は、ほとんどの成熟ヒトＴ細胞上に見出されるアクセサリー分子である（Damle  et  al.,  J.  Immunol,  1983年  131:2296-2300）。この証拠は、この分子が、Ｔ細胞受容体複合体よって開始されるＴ細胞活性化経路とは異なる代替的なＴ細胞活性化経路において機能することを示唆する（June  et  al.,  Mol.Cell.Biol.  1987年  7:4472-4481）。ＣＤ２８抗原と反応するモノクローナル抗体（ＭＡｂｓ）は、多種のポリクローナル刺激によって開始されるＴ細胞応答を増加し得る（参照June  et  al.,  上記）。これらの促進作用は、ｍＲＮＡの安定化を増加した（Lindsten  et  al.,  1989年  上記）結果による、ＭＡｂ−誘導サイトカイニン生成によって生じ得る（Thompson  et  al.,  Proc.Natl.Acad.Sci  1989年  86:1333-1337、およびLindsten  et  al.,  Science  1989年  244:339-343）。抗ＣＤ２８ｍＡｂｓは、さらに抑制効果を有し得、すなわち、抗ＣＤ２８ｍＡｂｓは、自己混合リンパ球反応（Damle  et  al.,  Proc.Natl.Acad.Sci.  1981年  78:5096-6001）と、抗原特異的Ｔ細胞クローンの活性化（Lesslauer  et  al.,  Eur.J.Immunol.  1986年  16:1289-1296）とを阻害し得る。
【０００６】
ＣＴＬＡ−４は、成熟細胞溶解性Ｔ細胞のｃＤＮＡライブラリーのディファレンシャルスクリーニング（Differential  screening）法によって最初に識別されたＴ細胞表面分子である（Brunet  et  al.,  Nature  328:267-270(1987年)）。さらに、ＣＴＬＡ−４は、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーのメンバーであり、ＣＴＬＡ−４は、単一の細胞外Ｉｇドメインを有する。ＣＴＬＡ−４の転写は、細胞障害性活性を有するＴ細胞集団に多く見出されてきており、ＣＴＬＡ４−４は細胞溶解応答内において機能し得ることを示唆する（Brunet  et  al.,  上記;  Brunet  et  al.,  Immunol.Rev.  103-21-36(1998年)）。研究者たちは、ＣＴＬＡ−４に対応するヒトの対応物（Dariavach  et  al.,  Eur.J.Immunol.  18:1901-1905(1998年)）のために、ＣＤ２８の同一の染色体領域（２ｑ３３−３４）（Lafageprochitaloff  et  al.,  Immunogenetics  31:198-201(1990年)）の遺伝子のクローニングとマッピングをし、報告してきた。このヒトＣＴＬＡ−４ＤＮＡと、そのエンコードＣＤ２８タンパク質との配列の比較は、膜近傍および細胞質領域においてホモロジーが最大の度合いを示す、配列の著しいホモロジーを示す（Brunet  et  al.,  1988年,  上記、Dariavach  et  al.,  1988年,  上記）。
【０００７】
ＣＴＬＡ−４は、ＣＤ２８の活性を阻害し、Ｔ細胞活性を抑制するために受容される（Krummel,  J.Exp.Med.  1995年  182:459-465、Krummel  et  al.,  Int’l  Immunol.  1996年  8:519-523、Chambers  et  a.,  Immunity.  1997年  7:885-895）。ＣＴＬＡ−４不全マウスは、大規模なリンパ球増殖に罹患する（Chambers  et  al.,  上記）。ＣＴＬＡ−４遮断が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ（Walunas  et  al.,  Immunity.  1994年  1:405-413）およびｉｎ  ｖｉｖｏ（Kearney,  J.  Immunol.  1995年  155:1032-1036）のＴ細胞応答をさらに増加することと、抗腫瘍免疫を悪化することと（Leach,  Science  1996年  271:1734-1736）、誘導性自己免疫疾患を増加することと（Luhder,  J  Exp.Med.  1998年  189:427-432）が報告されてきている。さらに、ＣＴＬＡ−４がＴ細胞免疫応答の開始形質に代替的な効果または追加的な効果が報告されている（Chambers,  Curr.  Opin.  Immunol.  1997年  9:396-404、Bluestone,  J.Immunol.  1997年  158:1989年-1993年、Thompson,  Immunity  1997年  7:445-450）。これは、一部の自己免疫疾患患者がＣＴＬＡ−４に対する自己抗体を有するという観測結果と一致する。ＣＴＬＡ−４阻害自己抗体が、それらの患者の中で、病原体の役割を果たす可能性がある（Matsui,  J.  Immunol.  1999年  162:4328-4355）。
【０００８】
非ヒトＣＴＬＡ−４抗体は、上述の様々な研究で使用されてきた。さらに、ヒトＣＴＬＡ−４に対するヒト抗体は、ウイルス性感染および細菌性感染の治療および阻害、癌の治療など、多くの疾患の状況において、免疫刺激調節因子として記載されてきた（例えば、ＰＣＴ国際公開公報第０１／１４４２４号とＰＣＴ国際公開公報第００／３７５０４号）。米国特許第５８５５８８７号は、Ｔ細胞にＣＴＬＡ−４阻害剤を混合することによって、抗原刺激に対する哺乳類Ｔ細胞応答を増加する方法を開示している。米国特許第５８１１０９７号はＣＴＬＡ−４阻害剤を投与することによって、非Ｔ細胞腫瘍の成長を減少する方法を開示している。米国特許出願第０９／６４４６６８号および米国特許出願第０９／９４８９３９号はヒトＣＴＬＡ−４抗体を開示し、参照として併合される。
【０００９】
明細書中におけるこの章および他の部分内の引用文および参考文献の議論は、本発明の記載を明確にするためのみに使用され、これらの参考文献が本明細書に記載されたいかなる発明に対する“従来技術”として認めていない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、抗ＣＴＬＡ−４抗体を使用する二次免疫応答または記憶免疫応答の促進または増強の方法を提供する。抗ＣＴＬＡ−４抗体は、癌抗原または病原因子からの抗原などの病原体からの防御抗原にすでに免疫された被験者の防御免疫の大きさを増加する能力を有することを示す。このような初期免疫は、自然暴露、すなわち、切除された腫瘍の癌細胞に対する暴露、感染症の溶解および抑制による暴露により生じて来得る。これらの患者は、病原体に対する防御抗原に対する免疫など、このような暴露の証拠を、試験され得る。あるいは、患者は、病原体に対して予防接種され、この場合、免疫が利用され得、または試験され得る。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
ある実施形態によれば、患者が事前に癌ワクチンを受け、または、腫瘍に対する一定の水準の自然防御免疫があると証明される場合、本発明のＣＴＬＡ−４抗体は、悪性腫瘍の治療に使用され得る。抗体は、単一の因子または、化学療法、放射線療法、サイトカイン、ケモカインおよび他の生体信号分子、腫瘍特異的ワクチン、自己幹細胞および同種幹細胞救済（腫瘍の影響に対して移植片を増補する）、他の治療用抗体、分子標的治療、抗血管治療、治療目的の感染性因子（腫瘍局在細菌など）、および遺伝子治療など一つ以上の因子と混合して使用され得る。抗体は一回または複数回投与され得る。抗体は、それ自体、または上記の治療方法と組み合わせて、アジュバントまたはネオ  アジュバント療法において使用され得る。
【００１２】
抗ＣＴＬＡ−４抗体を使用する治療方法は、癌ワクチンにより治療された患者における事前の記憶応答の活性化に用いられ得る。したがって、ワクチン治療した患者は、免疫応答をさらに誘導または強化するために、抗ＣＴＬＡ−４抗体を使用した更なる治療が選択され得る。
【００１３】
一実施形態において、抗原が、癌抗原であり、事前に患者が抗癌ワクチンにより治療されている。癌抗原は、例えば、メラノーマ抗原または前立腺癌抗原であり得る。別の実施形態において、抗原が、ウイルス抗原であり、患者は、事前にウイルスワクチンで治療されている。ウイルス抗原は、例えば、肝炎抗原であり得る。一実施形態において、患者は、人間であり得る。好適な実施形態において、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ヒト抗ＣＴＬＡ−４抗体である。本発明の好適なヒト抗ＣＴＬＡ−４抗体は、１０Ｄ１であるが、本発明の方法は、いかなるヒト抗ＣＴＬＡ−４抗体でも使用され得る。他の実施形態において、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、キメラ抗ＣＴＬＡ−４抗体またはヒト化抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、ＣＤＲ移植）などの組換抗体である。
【００１４】
本発明の抗体は、これに限定されないが、細菌、ミクロバクテリア、スピロヘータ、菌類、ウイルス、寄生生物、およびプリオンなどを含む感染性微生物よる病原の感染の制御に使用され得る。抗体は、単一の因子として、または、抗生物質、ワクチン、抗体、サイトカイニン、受容体阻害剤、毒性阻害因子などの一つ以上の他の因子と混合して使用され得る。抗体は一回または複数回投与され得る。
【００１５】
本発明の治療方法は、二次免疫応答または記憶免疫応答を刺激するように設計され、疾患の合併症に対する高いリスクを有し得る免疫の弱った患者の治療に特に適切であり得る。このような免疫力の弱った患者の例としては、ＨＩＶなどのレトロウイルス感染患者、先天的な自己免疫疾患、遺伝的な自己免疫疾患、糖尿病および高齢の患者を含む薬剤による免疫不全の患者、創傷、外傷、火傷の患者などを含む。
【００１６】
抗ＣＴＬＡ−４抗体を投与することによって免疫応答を刺激する本発明の方法は、さらに抗原の急性暴露（炭疽菌または天然痘などの生物テロ因子による暴露であり、暴露した患者が以前にそれらの因子に対して予防接種されているなど）、の場合に使用され得、予防接種の追加免疫の代わりに使用され得る。
【００１７】
本発明は、患者が、自己免疫などの、非特異的なＴ細胞活性化など、有害な副作用を経験することなく、長期間抗ＣＴＬＡ−４抗体を使用して治療され得ることを示している。
【００１８】
抗ＣＴＬＡ−４抗体の血中濃度は、予期せぬ免疫結果なく、少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月またはそれ以上の間、検出水準以上に維持され得る。好適な実施形態において、本発明は、患者の抗原に対する免疫応答を誘導または強化する方法を提供し、その方法は、患者に抗ＣＴＬＡ−４抗体を投与することによって、抗ＣＴＬＡ−４抗体が少なくとも少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月の期間、検出水準以上に維持される工程を含む。一実施形態において、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、複数回投与されることによって、血中濃度が少なくとも少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月の期間、検出水準以上に維持される。別の実施形態において、抗ＣＴＬＡ−４抗体が間隔をおいて一定量を投与されることによって、抗ＣＴＬＡ−４抗体の血中濃度が少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月の期間、少なくとも２μｇ／ｍｌである。別の実施形態において、抗ＣＴＬＡ−４抗体が間隔をおいて一定量を投与されることによって、抗ＣＴＬＡ−４抗体の血中濃度が少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月の期間、少なくとも５μｇ／ｍｌである。抗ＣＴＬＡ−４抗体が間隔をおいて一定量を投与されることによって、抗ＣＴＬＡ−４抗体の血中濃度が少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月の期間、少なくとも１０μｇ／ｍｌである。好適な実施形態において、長期間抗ＣＴＬＡ−４抗体を使用して治療された患者は、メラノーマや前立腺がんなどの悪性腫瘍に罹患している。別の好適な実施形態において、患者は、抗ＣＴＬＡ−４抗体によって治療されることに加えて、ワクチンを使用して、治療され、または治療されている。
【００１９】
本発明の別の様態は、細胞障害性因子に関係する抗ＣＴＬＡ−４抗体を使用する方法に関する。細胞障害性因子の例は、細胞障害性薬（ドキシルビシン（doxirubicin）、カリチェアマイシン（calicheamycin）など）や放射性同位体を含む。このような細胞障害性因子に関係する抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ＣＴＬＡ−４＋細胞を除去するために使用され得る。削除され得るＣＴＬＡ−４＋細胞の例は、ＣＴＬＡ−４＋悪性腫瘍、およびＴ細胞性自己免疫疾患において、抗原特異的な活性化Ｔ細胞で発現されるＣＴＬＡ−４を含む。さらに、別の実施形態においては、本発明は、ＣＴＬＡ−４＋悪性腫瘍の患者を治療する方法を提供し、その方法は、患者に細胞障害性因子に関係する抗ＣＴＬＡ−４抗体を投与することによって、患者のＴ細胞悪性腫瘍が治療される工程を含む。別の実施形態において、本発明は、Ｔ細胞性自己免疫疾患の患者を治療する方法を提供し、その方法は、患者に細胞障害性因子に関係した抗ＣＴＬＡ−４抗体を投与することによって、患者のＴ細胞性自己免疫疾患が治療される工程を含む。
【００２０】
好適な実施形態において、本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体は、国際公開公報第０１／１４４２４号に開示されているヒトモノクローナル抗体１０Ｄ１である。
【００２１】
ここで引用される刊行物、図面、ジェンバンク受入照会（GenBank  Accession  references）（配列）、米国菌培養収集所（ＡＴＣＣ）寄託、特許権、特許出願の全ては、それぞれが個別に示されているのと同一程度に汎用の目的で併合されている。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
本発明は、二次免疫応答、又は記憶免疫応答の促進及び増強、およびより効果的な癌治療のための新規の抗ＣＴＬＡ−４抗体に基づく方法を提供する。さらに、抗ＣＴＬＡ−４抗体の好適な血中濃度が開示された。本発明の方法は、癌、感染症、及び他の病気、又は免疫応答に応答する健康状態の治療のための方法を提供する。
【００２３】
本発明は、一部において、以下に記載するヒト配列抗ＣＴＬＡ−４抗体による癌の免疫治療の臨床試験中に行われた観察に基づく。試験は、事前に腫瘍抗原に暴露した被験者の治療において抗ＣＴＬＡ−４抗体の効果を示した。更に、抗ＣＴＬＡ−４抗体の単一投与又は複数投与の後の抗ＣＴＬＡ−４抗体の検出可能な血中水準の持続が示される。
【００２４】
Ａ．癌ワクチンにより事前に予防接種された患者の臨床試験
３ｍｇ／ｋｇの抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体１０Ｄ１（Ｍｅｄａｒｅｘ）を静脈注入した、進行性のメラノーマ又は進行性の卵巣癌の９人の患者が研究に参加した。患者は、メラノーマ初期段階において、免疫治療（３人の患者がα−インターフェロンを受け、１人の患者がＱＳ−２１と混合したＧＭ２ガングリオシドを受けている）、外科手術（４人の患者）、放射線（２人の患者）、化学療法（３人の患者）、プロテオソーム阻害剤（１人の患者）を含む事前の治療を受けていた。２人の卵巣癌の患者は複数の化学療法を受けていた。更に全ての患者はワクチン研究の第Ｉ相試験に参加していた。３人のメラノーマの患者と２人の卵巣癌の患者は、ＧＭ−ＣＳＦを分泌するように設計された自己細胞によって免疫されている。これらの患者の一人は、同様にＭＵＣ−１ワクチンを受けている。３人のメラノーマの患者は、ｇｐ１００とＭＡＲＴ−１を発現するように設計された自己樹状細胞によって免疫されている。１人のメラノーマの患者は、ｇｐ１００ペプチドと大量のＩＬ−２によって免疫されている。
【００２５】
ＧＭ−ＣＳＦを分泌する腫瘍細胞に事前に予防接種された３人のメラノーマの患者は、１０Ｄ１の治療の結果により大規模な腫瘍のネクローシスを有する。３人の患者の全てからの切除組織の組織病理は、リンパ球と顆粒球ともにいくつかの損傷した腫瘍血管が腫瘍近傍に浸潤することを示した。１人の患者は、１０Ｄ１の治療後３ヶ月に完全に縦隔腫瘤が削除された。メラノーマ抗原により事前に予防接種された４人の患者は、腫瘍近傍にリンパ球が浸潤したが、腫瘍壊死が無かった。卵巣癌患者は、削除や生体検査を行わなかったが、どちらの患者も１０Ｄ１による治療によりＣＡ−１２５（卵巣癌の主要マーカー）の血中濃度が好適に変化した。
【００２６】
Ｂ．癌抗原に自然暴露した患者の試験
１４人のステージＩＶのメラノーマの患者が、一つ以上の治療サイクルにおいて、２つのｇｐ１００ペプチドとともに抗ＣＴＬＡ−４抗体１０Ｄ１予防接種を受けた。全ての患者は、その原発腫瘍に対して事前に手術を行った。６人の患者は、事前に化学療法を行った。１１人の患者は、事前に免疫療法を行った。臨床反応は、Ｘ線体軸断層撮影（ＣＴ）又は磁気共鳴（ＭＲ）映像法で測定された。事前に手術と化学療法を行った１人の患者は、５回の治療サイクルの後、肺腫瘍、脳腫瘍、皮下腫瘍が完全に消散された。他の２人の患者は、部分的な消失者であった。２人の患者は、“混合”非消失者であった、すなわち、一部の病変が縮小される一方、他の病変は大きさが増加した。組織生検が行われなかったため、混合非消失者の病変の増大は、癌によらない可能性があり得る。例えば、１人の患者（患者３）は、一部の肺病変は消散したが、縦隔リンパ節の病変が増大された。肺管から縦隔リンパ節までのリンパ管と（Schwartz,  et  al.,  Principles  of  Surgery,  1984年  4th  ed.,  p.661）、リンパ節とは、リンパ節の排出領域内の組織の炎症により、拡大し得る。患者３は、癌ではなく、炎症により拡大したリンパ節を有する完全な応答者であり得る。
【００２７】
上記の議論の結果に基づき、本発明は、抗ＣＴＬＡ−４抗体の多くの有利な用法を提供する。これらの抗体は、事前に免疫された患者又は癌に暴露した患者に示されたように、二次免疫刺激、又は記憶免疫刺激を提供する。従って、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ブースターとして使用され得、特に免疫不全の患者に有用である。免疫システム抑制は、他の要因と同様に、病気（ＨＩＶなどの免疫不全病を含む）、加齢、全身腫瘍組織量の増加、癌治療（化学療法および放射線療法）、これに限定されないが、これらを含む、多くの要因により起こり得る。したがって、抗ＣＴＬＡ−４抗体療法は、免疫不全の被験者の免疫の増強を示している。
【００２８】
Ｃ．ＣＴＬＡ−４抗体とメラノーマワクチンを使用した猿の試験
カニクイザルが、０日、２８日、５６日、８４日及び１４０日に、メラノーマワクチンのみと、メラノーマワクチンと抗ＣＴＬＡ−４抗体１０Ｄ１とにより治療が行われた。ワクチンとともに抗ＣＴＬＡ−４抗体の使用は、ワクチンのみの使用よりもメラノーマ細胞に対する著しい抗体応答の増加を生じた。さらに、Ｔ細胞増殖研究は、抗ＣＴＬＡ−４抗体とワクチンを使用した治療が、ＣＤ８＋細胞とＣＤ４＋細胞のＣＴＬＡ−４抗原特異的な増殖を生じたことが示された。抗ＣＴＬＡ−４抗体の血中水準は、１６０日間の期間全体において検出可能な水準以上であった。血中濃度の平均は、６ヶ月の研究の間２０μｇ／ｍｌ以上であった。
【００２９】
本研究は、霊長類の抗ＣＴＬＡ−４抗体の長期間の投与が安全であり、検出可能な血中水準が６ヶ月の期間を通じて維持され得ることが示された。
【００３０】
Ｄ．抗ＣＴＬＡ−４抗体を使用した進行性のメラノーマ患者の試験
１７人の進行性メラノーマ患者が、静脈注射によって、３ｍｇ／ｋｇの抗ＣＴＬＡ−４抗体１０Ｄ１を単回投与された。９人の患者は、事前に免疫治療が行われ、６人の患者は、事前に放射線治療が行われ、５人が事前に化学療法が行われた。抗ＣＴＬＡ−４抗体の血中水準は、４ヶ月まで検出可能な水準を維持された。２人の患者は、柔組織塊の消散と、事前に予防接種された患者の肺塊の５０％以上の減少を含む、部分消失が行われた。
【００３１】
この研究は、血中水準が、抗ＣＴＬＡ−４抗体の単回投与の後に、４ヶ月まで人間の患者において検出可能な水準以上に維持され得ることを示した。さらに、事前に予防接種された患者に見られた肺塊の縮小は、抗ＣＴＬＡ−４抗体が腫瘍に対する事前の免疫応答を活性化し得ることを示した。
【００３２】
Ｅ．抗ＣＴＬＡ−４抗体を使用した進行性前立腺癌の試験
１４人の進行性前立腺癌患者が、静脈注射によって、３ｍｇ／ｋｇのヒトモノクローナル抗ＣＴＬＡ−４抗体１０Ｄ１を単回投与された。抗ＣＴＬＡ−４抗体の血中水準は、４ヶ月まで検出可能な水準を維持された。免疫効果の副作用は、改善可能な発疹と掻痒を除いて無かった。
【００３３】
本発明のこれらの利点や他の利点は以下において、及び実施例において詳細に説明される。
【００３４】
注意しない限り、“患者”又は“被験者”の用語は代替的に使用され、人の患者、及びウサギ、ラット、マウス、他の動物などの実験動物などと同様に、非人間の霊長類などの哺乳類のことを言う。動物は、羊、犬、牛、鶏などの、哺乳類及び非哺乳類、両生類、および爬虫類を含む全ての脊椎動物を含む。
【００３５】
“治療”の用語は、本発明の化合物又は薬を投与することにより、症状、合併症、病気の生化学的な症状の発症を阻害、又は遅延し、症状を緩和し、更なる病気、健康状態、疾患（自己免疫疾患など）の進行を停止し、又は抑制する。治療は、予防（病気の開始の阻害又は遅延、臨床兆候又は、それらの準臨床的な症状を阻害するため）、治療的な抑制、病気が明らかになった後の症状の緩和であり得る。
【００３６】
“進行性癌”の用語は、原発腫瘍部位にもはや位置しない癌、又は対癌米国合同委員会（ＡＪＣＣ）に基づくステージＩＩＩ又はステージＩＶの癌を意味する。
【００３７】
一般的に、“耐用性良好”の句は、治療の結果生じ、治療の決定に影響を与える健康状態が悪化しないことを言う。
【００３８】
ここで使用される“リンパ球”の用語は、この分野における通常の意味を有し、血管、リンパ管、リンパ組織内で見出される単核の非食細胞白血球、すなわちＢリンパ球とＴリンパ球を言う。
【００３９】
“Ｔリンパ球の部分集団”又は“Ｔ細胞部分集合”の句は、特定の細胞表面マーカーの発現（Barclay,  A.  N.  et  al.  (eds.),  1997年、The  Leukocyte  Antigen  Facts  Book,  2nd.  Edition,  Academic  Press,  London,  United  Kingdom）によって、特性化されたＴリンパ球又はＴ細胞を言う。“安定”の用語は、Ｔ細胞部分集合の頻度およびパーセンテージが薬の投与の経過又は期間経て変化しないことを言う。
【００４０】
“細胞障害性Ｔリンパ球関連抗原―４”、“ＣＴＬＡ−４”、“ＣＴＬＡ４”、“ＣＴＬＡ−４抗原”及び“ＣＤ１５２”（e.g.,  Murata(1999年)  Am.J.Pathol.  155:453-460）が、代替的に使用され、ヒトＣＴＬＡ−４の変異体、イソ型、種の同属体、及びＣＴＬＡ−４の少なくとも一つの共通エピトープを有する類似物質（e.g.,  Balzano  (1992年)  Int.  J.  Cancer  Suppl.  7:28-32）を含む。ＣＴＬＡ−４の完全な配列は、ジェンバンク受入紹介第Ｌ１５００６号で見出される。
【００４１】
“エピトープ”の用語は、抗体に特異的に結合する決定基の能力を有するタンパク質を意味する。エピトープは、通常アミノ酸又は糖鎖などの化学的活性分子基からなり、及び通常、特異的な電化特性と同様に、特異的な三次元構造を持つ。配座エピトープと非配座エピトープは、前者に対する結合が変性溶媒の存在下では失われるが、後者に対して失われないことによって識別される。
【００４２】
完全な“抗体”は、少なくとも２つの重（Ｈ）鎖とジスルフィド結合により内部結合されている２つの軽（Ｌ）鎖から構成される。各重鎖は、重鎖可変領域（ここでの略称はＨＣＶＲ又はＶＨ）及び重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３の３つのドメインから構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ここでの略称はＬＣＶＲ又はＶＬ）及び軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬから構成される。さらに、ＶＨとＶＬ領域は、超可変領域、いわゆる相補性決定領域（ＣＤＲ）、より保存される領域とともに広がっている、いわゆるフレームワーク領域（ＦＲ）に細分割することができる。各ＶＨとＶＬは、３つのＣＤＲと４つのＦＲから構成され、アミノ末端からカルボキシル末端まで以下のような順番、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順に配列されている。重鎖と軽鎖の可変領域は抗原と相互作用する結合領域を含んでいる。抗体の定常領域は、宿主組織および、免疫システムの様々な細胞（エフェクター細胞など）、補体活性化古典システムの第１捕体（Ｃ１ｑ）を含む因子と、免疫グロブリンの結合を媒体し得る。抗体の用語は、ＣＴＬＡ−４と結合する能力を保有する無傷抗体のＣＴＬＡ−４抗原結合タンパクを含む。結合の例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価の断片、Ｆａｂ断片、（ｉｉ）ヒンジ領域のジスルフィド結合ブリッチにより連結された２つのＦａｂ断片を含む２価の断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインから構成される、Ｆｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一腕のＶＬとＶＨドメインから構成される、Ｆｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインから構成される、ｄＡｂ断片（Ward  et  al.,  (1989年)Nature  341:544-546）、（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。さらに、Ｆｖ断片の２つの領域、ＶＬとＶＨは、離れた遺伝子によってコードされ、この遺伝子は、人工リンカーによる組換方法を使用して結合され得、この人工リンカーは、ＶＬとＶＨが組になることによって一価の分子を形成する単一のタンパク鎖を作ることを可能にする。（公知の単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）参照として例えば、Bird  et  al.(1998年)、Science  242:423-426、およびHuston  et  al.  (1988年)  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  85:5879-5883）。このような単一鎖抗体は、“抗体”の用語に含まれる。断片は、組換技術、又は完全な抗体の酵素分解または化学分解によって処理され得る。
【００４３】
“ヒト配列抗体”の用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域（もしあれば）を有する抗体を含む。本発明のヒト配列抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされていないアミノ酸残基を含み得る（ｉｎ  ｖｉｔｒｏの無作為突然変異、部位特異的突然変異、またはｉｎ  ｖｉｖｏの体細胞変異によって変異が導入される）。このような抗体は非ヒトトランスジェニック動物から生成される、すなわち、ＰＣＴ国際公開公報第０１／１４４２４号とＰＣＴ国際公開公報第００／３７５０４号に記載され得る。しかしながら、“ヒト配列抗体”の用語は、ここで使用されるように、例えばマウスなどの、他の哺乳類種の生殖系列から由来したＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列（すなわち、ヒト化抗体）に移植された抗体を含むことを意図していない。
【００４４】
“モノクローナル抗体”又は“モノクローナル抗体組成”の用語は、単一分子組成の抗体分子の組成を言う。モノクローナル抗体組成は単一結合特異性と特定のエピトープに対する親和性を有する。したがって、“ヒトモノクローナル抗体”は、単一結合特異性を示し、ヒト生殖系統免疫グロブリン配列由来の可変領域と定常領域（もしあれば）を有する抗体を言う。ある実施形態において、ヒトモノクローナル抗体は、例えば、トランスジェニックマウスなどのヒト以外のトランスジェニック動物から得られたＢ細胞を含むハイブリドーマによって生成される。このハイブリドーマは、ヒト重鎖トランス遺伝子と免疫された細胞に融合される軽鎖トランス遺伝子を含むゲノムを有する。
【００４５】
“ポリクローナル抗体”の用語は、ヒトＣＴＬＡ−４に対する少なくとも１つ以上（２またはそれ以上）の異なる抗体の調合液を言う。このような調合液は、異なるエピトープの範囲に対して結合する抗体を含む。
【００４６】
ＣＴＬＡ−４抗体は、ヒトＣＴＬＡ−４のエピトープに結合し得ることにより、ヒトＣＴＬＡ−４とヒトＢ７接着分子リガンド（Counterreceptor）との相互作用を阻害する。ヒトＣＴＬＡ−４とヒトＢ７との相互作用が、ヒトＣＴＬＡ−４受容体が生じるＴ細胞の非活性化を導くため、相互作用の拮抗作用は、ヒトＣＴＬＡ−４受容体が生じるＴ細胞の活性化の増大や延長を効率的に導き、したがって、免疫応答を延長または増大する。好適な抗ＣＴＬＡ−４抗体が、例えば、米国特許第５８１１０９７号、米国特許第５８５５８８７号、米国特許第６０５１２２７号、ＰＣＴ国際公開公報第０１／１４４２４号、ＰＣＴ国際公開公報第００／３７５０４号、米国出願公開公報第２００２／００３９５８１Ａ１号に記載されている。これらの抗体や、本発明の使用に適切な他の抗体は、当業者に周知の方法及び／または上記の引用文献に記載された方法に基づいて、処理された。好適な実施形態において、本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体は、“ヒト抗体”、すなわち、ヒトから単離された抗体であり、または、“ヒト配列抗体”（上で定義済み）である。例えば、国際特許公報第０１／１４４２４号は、ヒト配列抗ＣＴＬＡ−４抗体がトランスジェニックマウスから単離される方法を記載している。このトランスジェニックマウスは、事前にヒト抗体遺伝子に修正されている。従って、人間でない動物から単離したとしても、これらの抗体は、これらのヒト抗体に対応するアミノ酸配列（定常ドメイン配列と可変ドメイン配列）を有する。特定の好適な抗体は、以下の実施例に使用され、抗体１０Ｄ１と言われる。このヒト配列抗体は、例えば、国際公開公報第０１／１４４２４号に、事前に記載され、十分に特性が明らかにされている。
【００４７】
“免疫細胞応答”の句は、外部および内部の刺激（例えば、抗原、サイトカイン、ケモカイン、他の細胞）に対する免疫システム細胞の応答を言い、免疫細胞の遊走、標的細胞の殺傷、食作用、抗体、他の免疫応答の水溶性エフェクターの生産などを生じる、免疫細胞内の生化学変化を引き起こすことを言う。
【００４８】
“Ｔリンパ球応答”および“Ｔリンパ球活性”は、Ｔリンパ球に応じた免疫応答のコンポーネントを言う（すなわち、ヘルパーＴ細胞、細胞障害性キラーＴ細胞、またはサプレッサーＴ細胞内のＴリンパ球の増殖および／または分化、ヘルパーＴ細胞からＢリンパ球への信号の供給は、抗体生産を生じ、または抑制する。細胞障害性Ｔ細胞による特定の標的細胞の殺傷、サイトカインなどの水溶性の因子の放出は他の免疫細胞の機能を調節する。）
【００４９】
“免疫応答”の用語は、リンパ球、抗原提示細胞、食細胞、顆粒細胞、上記の細胞または肝臓により生産される水溶性巨大分子（抗体、サイトカイン、補体を含む）の共同した働きが、進入する病原体、病原体に感染した細胞または組織、癌性細胞、または自己免疫疾患や病的な炎症の場合、正常なヒト細胞または組織に選択的に傷害し、破壊し、人体内から除去することを生じることを言う。
【００５０】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、免疫応答のコンポーネントは、当業者に周知の様々な方法で検出し得る。例えば、（１）細胞障害性Ｔリンパ球は、放射活性標識した標的細胞とともに培養され得、これらの標的細胞の溶解は、放射活性の放出によって検出された、（２）ヘルパーＴリンパ球は、抗原と抗原提示細胞とともに培養され得、サイトカインの合成および分泌が標準的な方法によって、測定された（Windhagen  A  et  al.,  1995年  Immuniity  2  (4)  :373-80）、（３）抗原提示細胞は、完全なタンパク抗原とともに培養され得、ＭＨＣ上のこの提示抗原がＴリンパ球活性分析または生物物理学的な方法のどちらでも検出された（Harding  et  al.,  1989年,  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.,  86:  4230-4）、（４）マスト細胞は、Ｆｃ−ｅｐｓｉｌｏｎ（ＩｇＥ）受容体と架橋する試薬とともに培養され得、ヒスタミン放出が酵素免疫測定法によって測定される（Siraganian,  et  al.,  1983年  TIPS  4:  432-437）。
【００５１】
同様に、モデル組織（例えば、マウス）またはヒトの患者の双方における免疫応答の生産物は、当業者に周知の様々な方法によって検出され得る。例えば、（１）予防接種に応答した抗体の生産は、例えば、ＥＬＩＳＡなど、現在、臨床研究所で使用される方法によって容易に検出され得る。（２）炎症部位に対する免疫細胞の遊走は、皮膚の表面を傷つけ、遊走細胞を捕捉するために滅菌容器を損傷部位上に置くことによって、検出され得る（Peters  et  al.,  1988年  Blood  72:1310-5）。（３）マイトジェンまたは混合リンパ球反応に応答する末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の増殖は、３Ｈチミジンを使用して測定され得る。（４）顆粒球、マクロファージ、ＰＢＭＣ内の他の食細胞の貪食能は、ＰＢＭＣを標識粒子とともにウェル内に置くことによって測定され得る（Peters  et  al.,  1988年）。（５）免疫システム細胞の分化は、ＣＤ４とＣＤ８などのＣＤ分子に対する抗体を使用してＰＢＭＣを標識し、これらのマーカーを発現するＰＢＭＣの画分を測定することによって、測定され得る。
【００５２】
便宜上、免疫応答は、しばしば、本発明において、“初期”または“二次”免疫応答のいずれかで表現される。初期免疫応答は、また“感染防御”免疫応答と表現され、特定の抗原に対する一部の初期暴露の結果として、個体において生産される免疫応答を言う。このような、免疫付与は、例えば、抗原（抗原を表示または提示する一部の病原体による初期感染からなど）に対する自然暴露、または個体内の癌細胞の一部の腫瘍（切除された癌など）によって提示される抗原からの自然暴露の結果より生じ得る。代替的に、免疫付与は、抗原を含むワクチンを使用して個体に予防接種をした結果により生じ得る。例えば、このワクチンは、（例えば、ウイルス、細菌、寄生虫など）特定の病原体に対するワクチンであり得、または、がん細胞由来の一つ以上の抗原を含む癌ワクチンであり得る。
【００５３】
初期免疫応答は、時間とともに弱体化または減衰され得、さらに消滅し得、または、少なくとも検出不可能なほど減衰される。従って、本発明はさらに“二次”免疫応答に関連し、これはまた“記憶”免疫応答として記載される。二次免疫応答の用語は、初期免疫応答がすでに生産された後に、個体内に誘発される免疫応答を言う。従って、二次免疫応答または免疫応答は、例えば、すでに弱体化または減衰化した既存の免疫応答を強化するため、あるいは消失または長い間検出不可能であった以前の免疫応答を再現するために、誘発され得る。この因子は、初期免疫応答を“追加免疫”するといわれ得るため、二次免疫応答を誘発するために投薬され得る因子は、後に“ブースタ”と言われる。
【００５４】
実施例のように、これに限定されないが、二次免疫応答は、初期免疫応答を誘発される抗原を個体に再導入することによって、誘発され得る（例えば、ワクチンの再投与）。しかしながら、抗原に対する二次免疫応答は、実際の抗原を含み得ない他の因子を投与することによって、また誘発され得る。例えば、本発明は、抗ＣＴＬＡ−４抗体を個体に投与することによって、二次免疫応答を増強するための方法を提供する。このような方法において、実際の抗原は、抗ＣＴＬＡ−４抗体とともに必ずしも投与される必要が無い、そして抗ＣＴＬＡ−４抗体を含む組成は必ずしも抗原を含む必要が無い。二次免疫応答または記憶免疫応答は、液性（抗体）応答または細胞性応答のどちらでもあり得る。二次液性応答、または記憶体液応答は、抗原の一次提示によって発生された記憶Ｂ細胞の刺激により生じる。遅延型過敏反応（ＤＴＨ）は、ＣＤ４＋細胞によって、仲介される細胞性二次免疫応答または記憶免疫応答の型である。抗原に対する初期暴露が免疫システムを準備し、更なる暴露がＤＴＨをもたらす。
【００５５】
ここで使用される、“細胞表面受容体”の句は、信号を受信し、細胞の原形質膜を通じてこの信号を伝達する能力を有する分子と分子の複合体を含む。本発明の“細胞表面受容体”の実施例は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはＣＴＬＡ−４のＢ７リガンドである。
【００５６】
“非特異的Ｔ細胞活性”の用語は、抗体の特異性から独立したＴ細胞の刺激を言う。
【００５７】
“エフェクター細胞”の用語は、免疫応答の認識段階および活性化段階とは対照的に、
免疫応答のエフェクター段階に関する免疫細胞のことを言い。典型的な免疫細胞は、
脊髄性系またはリンパ球系の細胞、例えば、リンパ球（例えば、Ｂ細胞、細胞障害性Ｔ細胞を含むＴ細胞（ＣＴＬｓ））、キラー細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、単球、抗酸球、好中球、多核球、顆粒球、マスト細胞、好塩基球などを含む。エフェクター細胞は、抗体依存性細胞性細胞障害（ＡＤＣＣ）を導入し得、すなわち好中球がＡＤＣＣを導入する能力を有する。例えば、単球、マクロファージ、好中球、好酸球、およびＦｃαＲを発現するリンパ球は、標的細胞の特異的な殺傷と、免疫システムの他のコンポーネントへの抗原提示と、抗原を提示する細胞と結合とに関連する。エフェクター細胞は、また標的抗原、標的細胞、微生物を貪食し得る。
【００５８】
“標的細胞”は、対象（人間または動物）内の組成（ヒト配列抗体、または本発明のヒトモノクローナル抗体、本発明の二重特異性分子、複数特異性分子）より標的とされ得るいかなる好ましくない細胞をも意味する。標的細胞は、ヒトＣＴＬＡ−４発現または過剰発現であり得る。ヒトＣＴＬＡ−４発現細胞は、例えば、リンパ腫を含み得る。
【００５９】
また修飾抗体が、本発明に含まれる。“修飾”抗体は、例えば、抗体の部分の削除、追加、代替などの修飾が行われたモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体などの抗体が含まれる。例えば、抗体は、定常領域を削除し、これをある定常領域と置換することにより、血中半減期などの半減期、安定性、抗体の親和性を増加することを意図する。
【００６０】
本発明の抗体の共役は、寄与の生物学的な応答の修飾や生物学的応答の創出（エフェクター細胞の再生）のために使用され得る。薬剤部分は、古典的な化学治療因子に限定されると解釈されない。例えば、薬剤部分は、タンパク質または所望の生物学的活性を有するポリペプチドであり得る。このようなタンパク質は、例えば、アブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素、ジフテリア毒素などの、例えば、酵素的に活性毒素、またはこれらの活性断片と、腫瘍壊死因子またはインターフェロンαなどのタンパク質と、または、リンフォカイン、インターロイキン１（“ＩＬ−１”）、インターロイキン２（“ＩＬ−２”）、インターロイキン６（“ＩＬ−６”）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（“ＧＭ−ＣＳＦ”）、顆粒球コロニー刺激因子（“Ｇ−ＣＳＦ”）または他の成長因子などの生物学的応答修飾因子と、を含み得る。
【００６１】
抗体にこのような治療的部分を共役するための技術は、公知であり、参照として例えば、Arnon  et  al.,"Monoclonal  Antibodies  For  Tmmunotargeting  Of  Drugs  In  Cancer  Therapy",  in  Monoclonal  Antibodies  And  Cancer  Therapy,  Reisfeld  et  al.  (eds.),  pp.243-56  (Alan  R.  Liss,  Inc.  1985年)、Hellstrom  et  al.,"Antibodies  For  Drug  Delivery",  in  Controlled  Drug  Delivery  (2nd  Ed.),  Robinson  et  al.  (eds.),  pp.623-53  (Marcel  Decker,  Inc.  1987年)、Thorpe,  "Antibody  Carriers  Of  Cytotoxic  Agents  In  Cancer  Therapy:  A  Review",  in  Monoclonal  Antibodies'84  :  Biological  And  Clinical  Applications,  Pinchera  et  al.  (eds.),  pp.475-506  (1985年)、  "Analysis,  Results,  And  Future  Prospective  Of  The  Therapeutic  Use  Of  Radiolabeled  Antibody  HI  Cancer  Therapy",  in  Monoclonal  Antibodies  For  Cancer  Detection  And  Therapy,  Baldwin  et  al.  (eds.),  pp.303-16  (Academic  Press  1985年)、およびThorpe  et  al.,  "THE  Preparation  And  Cytotoxic  Properties  Of  Antibody-Toxin  Conjugates",  Immunol.  Rev.  ,  62:  119-58  (1982年)などがある。
【００６２】
癌治療
抗体によるＣＴＬＡ−４の遮断は、患者の癌性細胞に対する記憶免疫応答または二次免疫応答を強化し得る。ＣＴＬＡ−４に対する抗体は、癌性細胞、精製した腫瘍抗原（組換タンパク質、ペプチド、炭化水素分子などを含む）、細胞、および免疫刺激サイトカインをコードする遺伝子を導入された細胞、Ｂ７などの細胞表面抗原（例えば、Hurwitz,  A.  et  al.  (1998年)、Proc.  Natl.  Acad.  Sci  U.S.A.  1998;  95:10067-10071を参照）と組合され得、または抗体のみの使用され得、免疫を刺激し得る。
【００６３】
ＣＴＬＡ−４の遮断は、以下の予防接種プロトコルの場合に効果的である。腫瘍に対する予防接種の実験的な方針が立案されている（Rosenberg,  S.,  2000年、  Development  of  Cancer  Vaccines,  ASCO  Educational  Book  Spring:  60-62;  Logothetis,  C.,  2000年、  ASCO  Educational  Book  Spring:  300-302;  Khayat,  D.  2000年、ASCO  Educational  Book  Spring:  414-428;  Foon,  K.  2000年、ASCO  Educational  Book  Spring:  730-738、また参照としてRestifo,  N.  and  Sznol,  M.,  Cancer  Vaccines,  Ch.  61,  pp.3023-3043  in  DeVita,  V.  et  al.  (eds.),  1997年、Cancer:  Principles  and  Practice  of  Oncology,  Fifth  Edition参照）。それらの方針において、ワクチンは、自己腫瘍細胞、または同種腫瘍細胞を使用して準備される。これらの細胞ワクチンが、腫瘍細胞がＧＭ−ＣＳＦを発現するために形質導入された場合、もっとも効果的と示されている。ＧＭ−ＣＳＦは、腫瘍の予防接種のために抗原提示の強力な活性剤として示されている（Dranoff  et  al.  Proc.  Natl.  Acad.  Sci  U.S.A.  1993年  90:3539-43）。
【００６４】
ＧＭＣＳＦ修飾腫瘍細胞ワクチンを追加免疫するために抗ＣＴＬＡ−４遮断は、乳癌（Hurwitz  et  al.,  1998年  上記）、初期前立腺癌（Hurwitz  et  al.,  Cancer  Research  2000年  60:2444-8）、メラノーマ（van  Elsas  et  al.  J.  Exp.  Med.  1999年  190:355-66）など実験的に腫瘍モデルにおけるワクチンの効果を改善する。これらの場合、Ｂ１６メラノーマなどの、非免疫原性腫瘍は、免疫システムよる破壊を受け易くされて来ている。腫瘍細胞ワクチンは、特に、ＩＬ２および補助刺激因子分子、等の他の免疫活性因子を発現するように修飾され得る。
【００６５】
様々な腫瘍における遺伝子発現および大規模遺伝発現パターンの研究は、いわゆる“腫瘍特異性抗原”の定義が導かれた（Rosenberg,  Immunity  1999年  10:281-7）。多くの場合、腫瘍特異性抗原は、腫瘍細胞および腫瘍が生じた細胞から発現される分化抗原であり、例えば、メラニン抗原ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原、Ｔｒｐ−２などである。より重要なことに、これらの抗原の多くは、宿主において見出される腫瘍特異的Ｔ細胞の標的であると示され得る。ＣＴＬＡ−４の遮断は、腫瘍に発現されて見出される組換タンパク質および／またはペプチドに基づくワクチンとともに追加免疫剤として使用され得ることにより、これらのタンパク質に対する二次免疫応答および記憶免疫応答を増強する。これらのタンパク質は通常自己抗原として見なされ、従ってそれらに対して寛容を有する。腫瘍抗原は、タンパク質テロメラーゼを含み得、染色体のテロメア合成に必要とされ、ヒト癌の８５％以上と、限定された数の体細胞のみとで発現される（Kim  et  al.,  Science  1994年  266:  2011-2013）。これらの体組織は様々な手段による免疫攻撃から守られ得る。腫瘍抗原は、さらに癌細胞に発現される“新抗原”であり得る。なぜなら、タンパク質配列を変化し、２つの関連しない配列間の融合タンパク質（すなわち、フィラデルフィア染色体内のｂｃｒ−ａｂｌ）を生成する体細胞変異、またはＢ細胞腫瘍からのイディオタイプによるためである。他の腫瘍ワクチンは、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、肝炎ウイルス（ＨＢＶとＨＣＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＨＳＶ）など、ヒト癌に関連するウイルス由来のタンパク質を含み得る。ＣＴＬＡ−４の遮断とともにＣＴＬＡ−４に使用され得る腫瘍特異抗原の他の形態は、主要組織自身から単離される精製熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）である。その熱ショックタンパク質は、腫瘍細胞由来のタンパク質の断片を含み、これらのＨＳＰは、腫瘍免疫を発現するための抗原提示細胞への搬送が高い効率である（Suot  and  Srivastava,  Science  1995年  269:1585-1588、Tamura  et  al.,  Science  1997年  278:117-120）。
【００６６】
樹状細胞（ＤＣ）は、抗原特異反応を強化するために使用され得る強力な抗原提示細胞である。ＤＣは、生体外で生産され得、腫瘍細胞抽出物と同様の様々な蛋白質やペプチドを取り込み得る(Nestle  et  al.,  Nature  Medicine  1998年  4：328-332)。ＤＣは、また、同様にこれらの腫瘍抗原を発現するために、遺伝子的な方法により変換され得る。ＤＣは、また、免疫化のために、腫瘍細胞に直接融合した(Kugler  et  al.,  Nature  Medicine  2000年  6：332-336)。ワクチン接種法として、ＤＣ免疫化は、ＣＴＬＡ−４遮断によって、効果的に追加免疫されることにより、より強力な抗腫瘍反応を活性化し得る。
【００６７】
ＣＴＬＡ−４遮断と混合され得る他の種類の黒色腫ワクチンは、例えば、MELACINE（登録商標）ワクチンや、２つのヒトメラノーマ細胞株の混合溶解物とDETOX（登録商標）免疫アジュバンドなどの、免疫アジュバントとともに、メラノーマ細胞株溶解液から調合されるワクチンである。追加の化学療法の有無にかかわらず、ワクチン治療は、抗CTLA4によって、追加免疫され得る。
【００６８】
ＣＴＬＡ−４遮断は、また、癌の標準的な治療法により誘導される免疫を高めるために使用され得る。例えば、化学療法における投薬量を減少し得る(Mokyr  et  al.,  Cancer  Research,  1998年  58:5301−5304)。ＣＴＬＡ−４遮断及び化学療法の混合使用の背後にある科学的な理論的根拠は、大部分の化学療法用の合成物の細胞障害性作用に基づく、細胞死が、抗原提示の経路における腫瘍抗原の水準の増加をもたらすことである。従って、ＣＴＬＡ−４は、化学療法による腫瘍細胞の放出が行われる免疫応答を追加免疫し得る。そのうえ、ＣＴＬＡ−４の免疫促進活性は、化学療法による免疫抑制効果を克服するために役立つ。抗ＣＴＬＡ−４治療とともに使用され得る化学療法剤の例は、これに限定されるものではないが、アルデスロイキン（aldesleukin）、アルトレタミン（altretamine）、アミフォスチン（amifostine）、アスパラギナーゼ（asparaginase）、ブレオマイシン（bleomycin）、カペシタビン（capecitabine）、カルボプラチン（carboplatin）、カルムスチン（carmustine）、クラドリビン（cladribine）、シサプリド（cisapride）、シスプラチン（cisplatin）、シクロホスファミド（cyclophosphamide）、シタラビン（cytarabine）、ダカルバジン（dacarbazine）(DTIC)、ダクチノマイシン（dactinomycin）、ドセタキセル（docetaxel）、ドキソルビシン（doxorubicin）、ドロナビノール（dronabinol）、エポエチンアルファ（epoetin  alpha）、エトポシド（etoposide）、フィルグラスチム（filgrastim）、フルダラビン（fludarabine）、フルオロウラシル（fluorouracil）、ゲムシタビン（gemcitabine）、グラニセトロン（granisetron）、ヒドロキシ尿素（hydroxyurea）、イダルビシン（idarubicin）、イホスファミド（ifosfamide）、インターフェロンアルファ（interferon  alpha）、イリノテカン（irinotecan）、ランソプラゾール（lansoprazole）、レバミゾール（levamisole）、ロイコボリン（leucovorin）、メゲストロール（megestrol）、メスナ（mesna）、メトトレキセート（methotrexate）、メトクロプラミド（metoclopramide）、マイトマイシン（mitomycin）、ミトタン（mitotane）、ミトキサントロン（mitoxantrone）、オメプラゾール（omeprazole）、オンダンセトロン（ondansetron）、パクリタキセル（paclitaxel）（Taxol（登録商標））、ピロカルピン（pilocarpine）、プロクロロペラジン（prochloroperazine）、リツキシマブ（rituximab）、タモキシフェン（tamoxifen）、タキソール（taxol）、塩酸ノギテカン（topotecan  hydrochloride）、トラスツズマブ（trastzumab）、ビンブラスチン（vinblastine）、ビンクリスチン（vincristine）、酒石酸ビノレルビン（vinorelbine  tartrate）を含む。前立腺癌治療のために、抗-CTLA-4と混合され得る好適な化学療法剤は、パクリタキセル（Taxol（登録商標））である。メラノーマ治療法のために、抗-CTLA-4と混合され得る好適な化学療法剤は、ダカルバジン（DTIC）である。
【００６９】
細胞死を通じて誘導する免疫システムを生じ得る他の混合療法は、放射線治療、手術、ホルモン遮断療法である（Kwon,  E.  et  al.  Proc.  Natl.  Acad.  Sci  U.S.A.  1999年  96(26):15074-9）。これらのそれぞれのプロトコルは、宿主内において癌抗原の源を作り出す。例えば、手術中のあらゆる操作が、血中における癌細胞数を非常に増加し得る（Schwartz,  et  al.,  Principles  of  Surgery  1984年.  4th  ed.  338ページ）。血管形成阻害薬は、ＣＴＬＡ−４遮断と組合され得る。脈管形成抑制は、腫瘍抗原をホスト抗原提示経路に送り込み得、腫瘍の細胞死を導き得る。これらの全ては、腫瘍の放出と、ＣＴＬＡ−４抗体遮断に追加免疫され得る可能性のある免疫システム刺激とを生じる。
【００７０】
感染症
本発明の他の方法は、特定の毒素または病原体に暴露された患者を治療するために使用される。上記の腫瘍に対する適用と同様に、抗体媒介性ＣＴＬＡ−４遮断は、単独で、アジュバンドとして、または、ワクチンと組み合わせて、病原体、毒素および自己抗原に対する二次免疫応答または記憶免疫反応を活性化するために使用され得る。CTLA-4遮断は、Nippostrongylus  brasiliensis（McCoy,  K.  et  al.1997年  186  (2)、183−187）とLeishmania  Donovani（Murphy,  M.  et  al.  1998年  J.  Immunol.  161:4153−4160）の感染症の急性期に効果的であると示されてきた。本治療手法が特に有用であり得る病原体の例は、病原体に対して現在効果的なワクチンが無い病原体、または、病原体に対して従来のワクチンが完全に効果的というわけではない病原体を含む。これらの病原体は、これに限定されないが、ＨＩＶ、肝炎（Ａ型、Ｂ型及びＣ型）、インフルエンザ、ヘルペス、ジアルジア（Giardia）、マラリア、リーシュマニア属（Leishmania）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus  Aureus）および緑膿菌（Pseudomonas  aeruginosa）を含む。CTLA-4遮断は、感染の経過を通じて変化した抗原を提示するＨＩＶなどの因子より生じた感染に対する免疫を追加免疫する際に特に有用である。これらの新規のエピトープは、抗ヒトＣＴＬＡ−４の投与時に異物だと認識され、したがって、強いＴ細胞応答を増強し、ＣＴＬＡ−４を通じた負の信号によって抑制されない。
【００７１】
本発明の方法によって、治療し得る感染症を引き起こしている病原ウイルスの例の一部は、肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型）、ヘルペスウイルス（例えば、ＶＺＶ、ＨＳＶ−１、ＨＡＶ−６、ＨＳＶ−II、ＣＭＶ、エプスタイン・バールウイルス（Epstein  Barr  virus））、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウィルス、コクサッキーウィルス、コロノウイルス（cornovirus）、呼吸器合胞体（respiratory  syncytial）ウイルス、おたふくかぜウイルス（mumps  virus）、ロタウイルス、はしかウイルス（measles  virus）、風疹ウイルス（rubella  virus）、パルボウイルス、ワクチニアウイルス（vaccina  virus）、ＨＴＬＶウイルス、デング熱ウイルス（dengue  virus）、パピローマウイルス（papillomavirus）、軟属腫ウイルス、ポリオウィルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルスおよびアルボウィルス脳炎ウイルスを含む。
【００７２】
本発明の方法によって、治療し得る感染症を引き起こしている病原細菌の例は、クラミジア、リケッチア性バクテリア、ミコバクテリウム、ブドウ球菌、連鎖球菌、肺球菌、髄膜炎菌およびコノコッカ（conococci）、クレブシェラ菌、プロテウス菌、セラチア菌、プソイドモナス菌、レジオネラ菌、ジフテリア菌、サルモネラ菌、細菌、コレラ、破傷風、ボツリヌス菌中毒、炭疽菌、疫病、レプトスピラ症およびライム病バクテリアを含む。
【００７３】
本発明の方法によって、治療し得る感染症を引き起こしている病原菌類の例は、カンジダ（アルビカンス（albicans）、クルセイ(krusei)、グラブラタ（glabrata）、トロピカリス(tropicalis)等）、クリプトコックス  ネオフォルマンス、アスペルギルス（フミガーツス、黒色、等）、ケカビ目（ケカビ属、アブシディア属、クモノスカビ属（Rhizophus））、スポロトリクス属シェンキー、ブラストミセス  デルマチチジス、ブラジル  パラコクシジオイデス、コクシジオイデス  イミティス、ヒストプラスマ・カプスラーツムを含む。
【００７４】
本発明の方法によって、治療し得る感染症を引き起こしている病原寄生虫の例は、赤痢アメーバ、バランチジウム属大腸菌、ネグレリア  フォーレリー（Naegleria  fowleri）、アカントアメーバ属、ランブル鞭毛虫（Giardia  lambia）、クリプトスポリジウム属、ニューモシスティス  カリニ、三日熱マラリア、ネズミバベシア（Babesia  microti）、トリパノソーマ  ブルーセイ、トリパノソーマ  クルーズ、ドノバン  リーシュマニア、トキソプラズマ原虫（Toxoplasma  gondi）、ニッポストロンギルス  ブラジリエンシス（Nipostrogylus  brasiliensis）を含む。
【００７５】
有益な“自己免疫”反応の促進
自己免疫反応を誘発し増幅する抗ＣＴＬＡ−４抗体の能力は、数多くの実験系において説明されてきている（EAE（実験的な自己免疫脳脊髄炎）のＭＳに対するマウスのモデル（Perrin  et  al.,  J  Immunol  1996年  157:1333−1336）、糖尿病に対するマウスのモデル（Luhder  et  al.,  1998年  上記）。実際、腫瘍細胞およびペプチドワクチンを使用した抗腫瘍応答の誘導は、抗腫瘍反応が抗自己反応に関連することを明らかにする（抗ＣＴＬＡ−４＋ＧＭ−ＣＳＦ修飾Ｂ１６メラノーマにおいて、色素消失が観察された。上記van  Elsas  et  al、Ｔｒｐ−２予防接種したマウスにおいて、色素消失が観察された(Overwijk  et  al.,  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  U.S.A.  1999年  96:2982−2987)、ＴＲＡＭＰ腫瘍細胞ワクチンによって自己免疫性前立腺炎が誘導される(Hurwitz  2000年  上記)、メラノーマペプチド抗原予防接種と白斑がヒト臨床試験で観察された(Rosenberg  and  White,  J  Immunother  Emphasis  Tumor  Immunol  1996年  19:81−4）。
【００７６】
従って、疾患治療のために、これらの自己タンパク質に対して免疫応答を効率的に生成する予防接種のプロトコルを考案するために、様々な自己タンパクとともに抗ＣＴＬＡ−４による追加免疫を使用することが可能である。例えば、アルツハイマー病は、脳内のアミロイド沈着におけるＡβペプチドの不適切な蓄積に関連し、アミロイドに対する抗体反応は、これらのアミロイド沈着を消去することが可能である（Schenk  et  al.,  Nature  1999年  400  173−177）。
【００７７】
アレルギーや喘息の治療のためにＩｇＥ、および関節リウマチに対するＴＮＦなど、他の自己タンパク質は、標的として使用され得る。最後に、様々なホルモンに対する抗体反応は、抗ＣＴＬＡ−４抗体の使用によって誘導され得る。生殖ホルモンに対する中和抗体応答は、避妊のために使用され得る。ホルモンおよび特定の腫瘍の成長のために必要な他の可溶性因子に対する中和抗体応答は、可能な予防接種目標として考えられ得る。
【００７８】
上記の抗ＣＴＬＡ−４使用に類似する方法は、アルツハイマー病におけるＡβを含むアミロイド沈着、ＴＮＦα、ＩｇＥなどの他の自己抗原の不適切な蓄積を持つ患者の治療のための治療的自己免疫応答の誘導に使用され得る。
【００７９】
実施例
本発明は、以下の実施例の手段により記載される。しかし、これらの実施例、または他の詳細な説明のいかなる実施例の使用は、説明のためのみであり、本発明または例示された用語の範囲と意味を制限するものではない。同様に、本発明は、本願明細書において、記載されているいかなる特定の好適な実施例に限定されない。実際に、本発明の多くの修正および変更が、本明細書を読む当業者にとって明らかであり得、本発明の精神と範囲から逸脱することなくなされ得る。従って、本発明は、請求項によって権利が与えられる等価物について完全な範囲と同様に添付した請求の範囲によってのみ限定される。
【００８０】
実施例1：抗ＣＴＬＡ−４治療がカニクイザルにおけるメラノーマワクチンに対する二次的抗体及びT細胞応答を増強する。
メラノーマ細胞に対する抗体を増強させ、T細胞の反応を増加させるヒト抗CTLA-4抗体の能力が、カニクイザルを使って実験された（マイアミとフロリダにて霊長類生産者から調達した）。それぞれ６匹の猿（３匹が雄で３匹が雌）の試験グループは、１）メラノーマワクチンのみ（ＳＫ−ｍｅｌ−３、ＧＭ−ＣＳＦを発現するように組替えたヒトメラノーマ腫瘍細胞株）を使用して、２）ＳＫ−ｍｅｌ−３および国際公開公報第０１／１４４２４号に記載されている抗ＣＴＬＡ−４抗体１０Ｄ１の両方を使用して、治療された。細胞性ワクチンがヒト由来のものであるにも関わらず、全てのワクチンは、この動物モデルにおける様々な通常組織に対する自己免疫応答の研究を可能にし得た。
【００８１】
ワクチンの準備をするために、ＳＫ−ｍｅｌ細胞を密集して成長させ、採取した。細胞は、マイトマイシンＣで処理され、数回洗浄され、生理食塩水によって濃度１×１０７／mlに再懸濁された。抗体は、投薬量１０ｍｇ／ｋｇ、体積１．３ｍｌ／ｋｇで、静脈投与された。ＳＫ−ｍｅｌ−３細胞は、固定量（5×10６細胞/検体、0.5ml/検体）を皮下に投与された。各ワクチンの調製は、エンドトキシン（＜2  EU/ml）と４８時間後のGM-CSF生産（106細胞あたり2-8ng/ml）を分析された。適切な抗体および／またはワクチンが、０日、２８日、５６日、８４日、１４０日に投与された。メラノーマ細胞ワクチンに対する抗体応答は、フローサイトメトリを使用して、１３日、４１日、６９日、９７日に評価された。猿の健康状態は、週２回評価され、体重は週ごとに記録された。血液学、薬物動態分析、および機能分析は、研究開始前に行われ、研究期間を通じて周期的に行われた。完全な肉眼検査および顕微鏡による病理学試験が１６７日に行われた。
【００８２】
メラノーマワクチンと抗ＣＴＬＡ−４抗体を使用して治療された実験体の抗体応答の特異性が試験された。ＳＫ−ｍｅｌ−３ワクチンおよびｍＡｂ１０Ｄ１を使用して処置された６匹のカニクイザルの血漿が治療４１日に採取され、保存された。その血漿は、１：１０００で希釈され、フローサイトメトリによって、多様なメラノーマ細胞株および非メラノーマ細胞株に対する反応性を試験された。その結果は、図1に示され、図１は、猿の抗体応答がヒトの非メラノーマ細胞株や非ヒト細胞株と比較して、ヒトメラノーマ細胞株に対して著しい特異性を示すことを示している。
【００８３】
抗体および／またはワクチンを使用して治療された猿の長期投薬の影響は、１４０日目における以下の追加薬の投与により評価された。抗ＣＴＬＡ−４抗体の血中濃度は、研究期間を通じて研究終了の１６０日にいたるまで様々な時点において組換抗ＣＴＬＡ−４抗体を使用したＥＬＩＳＡによって観測された。長期間投与中の１０Ｄ１の血中濃度のデータは、図２に示され、治療された６匹の動物の平均と、＋／−ＳＥＭが示される。この結果は、抗ＣＴＬＡ−４抗体の血中水準は、１６０日間の期間を全体を通じて、検出可能な水準以上に維持されることを明らかにし、治療期間を通じてＣＴＬＡ−４遮断が維持されることを示唆する。治療された猿のｍＡｂ１０Ｄ１に対する平均血中濃度は、注入日の翌日の１７５μｇ／ｍｌと３１５μｇ／ｍｌが最高であり、６ヶ月の研究期間中２０μｇ／ｍｌ以上が維持された。臨床化学、ケージ観察、完全な組織学分析は、抗体またはワクチン投与に関連したいかなる顕著な変化を示さなかった。臨床投与は、自己反応性抗メラノーマ応答を確立するＣＴＬＡ−４遮断の潜在的能力にもかかわらず、２匹の猿のワクチン注入部位におけるわずかな炎症を除いて治療に関連する病変が生じなかった。猿は、１０Ｄ１に対するいかなる検出可能な抗体応答を発達させず、研究の継続時間中高水準の血中抗体が、維持された。さらに、抗ＣＴＬＡ−４抗体を使用した臨床投与は、治療の有効性に関連し、有害な副作用に関連しない（例えば、非特異的Ｔ細胞活性化など）。従って、この実験は、霊長類が、例えば、深刻な副作用がなく血中濃度が少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月またはそれ以上の期間検出可能な水準以上で維持されるなど、抗ＣＴＬＡ−４抗体を使用により長期間、治療され得ることを示す。
【００８４】
実施例２：ヒトにおける遅延型過敏症（ＤＴＨ）からの抗原特異的なＴ細胞増殖の証拠
ステージＩＩＩ（２人の患者）またはステージＩＶ（１７人の患者）のメラノーマを削除した１９人の患者は、段階的に増加する投薬量（０．３、１、３ｍｇ／ｋｇ）のＣＴＬＡ−４抗体１０Ｄ１を受け、それぞれフロイント不完全アジュバンドとともに、ｇｐ１００／チロシナーゼ／ＭＡＲＴ−１ペプチドワクチンが注入された。チロシナーゼ３６８−３７６（３７０Ｄ）、ＭＡＲＴ−１２６−３５（２７Ｌ）、ｇｐ１００２０９−２１７（２１０Ｍ）ペプチドはそれぞれＨＬＡ結合強化のため一つのアミノ酸修飾されることにより、野生種と異なっている。ワクチンは、１ｍｇ／投薬量／ペプチドを１２ヶ月の間に８回投与された。ＤＴＨ反応性によって測定された免疫応答は、９人中４人の患者がｇｐ１００に応答し、９人中２人の患者がＭＡＲＴ−１に応答する。ＥＬＩＳＰＯＴ分析は、試験された１６人中４人の患者が、新しいＣＤ８Ｔ細胞を使用する免疫応答を示した。
【００８５】
実施例３：ＭＡｂ１０Ｄ１メラノーマ（ＭＤＸＣＴＬＡ４−０２）のヒトの臨床第Ｉ相試験の結果
ＭＤＸＣＴＬＡ４−０２は、進行性の、切除不能、悪性メラノーマの１７人の患者におけるＭＡｂ１０Ｄ１の安全性と薬物動態学の評価のための第Ｉ相非盲検、多施設臨床試験である。平均年齢は、５９歳（２９歳−７９歳の範囲）であった。９人の患者が事前に免疫療法を受け、６人が事前に放射線、５人が事前に化学療法を受けていた。全ての患者は、単一の投薬量（３ｍｇ／ｋｇの１０Ｄ１）で９０分間静脈注入を受け、毒性、薬物動態学、血中Ｔ細胞活性および臨床転帰を追跡調査した。全ての注入は、軽度な副作用のみで完了した。７人の患者は、軽度な、治療可能な発疹または掻痒を有した。抗体の血中濃度は、１ヶ月から４ヶ月の間持続される。活性化抹消Ｔ細胞の著しい増加や、軽度な発疹以上の臨床自己免疫の兆候は無かった。２人の患者は、３つの柔組織塊の分解や肺塊の５０％以上の減少を含む部分的な応答を経験した。さらに、５０％以上の減少を経験した患者は、事前にメラノーマワクチンを使用して治療されており、抗ＣＴＬＡ−４抗体が腫瘍に対する先在する記憶応答を活性化する能力を有することを示唆する。本研究のこの結果は、抗ＣＴＬＡ−４治療が免疫学および抗腫瘍活性の明確な証拠とともに耐用性良好を示している。
【００８６】
１０Ｄ１を使用して治療された患者におけるリンパ球亜母集団が、抗体治療後の様々な時点においてフローサイトメトリによって分析された。これらの結果は、以下の表１において要約される。
【表１】
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【００８７】
前立腺癌患者（以下の実施例６参照）において観察された結果と似て、メラノーマの研究における結果は、１０Ｄ１治療が、時間の経過により、約５０％のＣＤ４／ＨＬＡ−ＤＲ＋亜母集団の増加を導くことを示す。他のリンパ球の亜母集団が、時間の経過によって基本的に一定に維持される。上記のように、抗ＣＴＬＡ−４抗体を評価する場合（抗ＣＴＬＡ−４抗体の区分は、ＣＤ４／ＨＬＡ−ＤＲ＋亜母集団を増加するための能力を評価され得、時間の経過とともにこれらの亜母集団を増加する能力を有する抗体が選択され得る）、時間経過によるＣＤ４／ＨＬＡ−ＤＲ＋亜母集団の増加する抗ＣＴＬＡ−４抗体治療の能力は、選択的な形状で使用され得る。さらに、時間経過によりリンパ球亜母集団、特にＣＤ４／ＨＬＡ−ＤＲ＋亜母集団のモニタは、抗体の効果の一つの指標として抗ＣＴＬＡ−４を使用して治療された被験者において、実行され得る。
【００８８】
実施例４：事前に予防接種されたメラノーマおよび卵巣癌患者における抗ＣＴＬＡ−４抗体遮断の人体研究
９人の事前免疫された進行性癌患者が抗ＣＴＬＡ−４抗体１０Ｄ１を投与された。外科的に削除不能なステージＩＩＩまたはＩＶのメラノーマ、症状の進行、少なくとも１２週の平均余命、適切な末端器官機能、安定的な鎮痛療法、および少なくとも６０％のカルノフスキー一般状態の適切な基準を備える患者１−６が、ＭＤＸＣＴＬＡ４−０２の第I相試験の間登録された。二次悪性腫瘍（非メラノーマ皮膚癌または表皮膀胱癌を除く）、自己免疫疾患、活性感染症、カナマイシン過敏症を有していた場合、コルチコステロイドを使用された場合、それらの患者は除外された。患者７−９は、転移性メラノーマ、転移性卵巣癌、転移性非小細胞肺癌腫、急性骨髄性白血病伴う患者に対する第I相試験の間登録された。
【００８９】
４人の患者は、早期メラノーマの治療を受けている（３人の患者はαインターフェロン、１人の患者はＱＳ−２１と混合したＧＭ２ガングリオシド、１人の患者が放射線を受けた）。転移性メラノーマに対する事前の非免疫治療は、外科手術（４人の患者）、放射線（２人の患者）、化学療法（３人の患者）、プロテアソームインヒビター（１人の患者）が含まれる。２人の卵巣癌患者は、研究前の３年から４年を通じて、病気の再発に対して複数回の化学療法を受けた。
【００９０】
全ての患者は、この研究に参加する前に、転移性の疾患に対するワクチン研究の第I相試験に参画した。３人のメラノーマ患者および２人の卵巣癌患者は、照射され、アデノウイルス媒介とした遺伝子導入によって、ＧＭ−ＣＳＦを分泌するように設計された自己腫瘍細胞を使用して免疫された。これらの患者の１人（患者８）は、ＭＵＣ−１ワクチンも受けた。３人のメラノーマ患者は、アデノウイルス媒介とした遺伝子導入によって、ｇｐ１００とＭＡＲＴ−１を発現するように設計された自家樹状細胞によって免疫された。１人のメラノーマ患者は、修正ｇｐ１００ペプチドおよび大量のインターロイキン２によって予防接種された。
【００９１】
最初に、１０Ｄ１が、潜在的な過敏反応を識別するため１０ｍｌの通常生理食塩水に０．２ｍｇの試験投薬量で１０分間静脈投与された。その後、残りの３ｍｇ／ｋｇの１０Ｄ１の投薬量が、９０分間静脈から入れられた。以下の抗体投与において、１日ごとに３日間、１週間ごとに４週間、その後１月ごとに患者は、臨床評価、研究所評価、および放射線評価を行われた。
【００９２】
１人の患者は、注入中に軽度な低血圧と悪感による明らかな急性過敏応答を有した。この反応は、抗ヒスタミンにより簡単に管理され、注入は無事終了した。５人の患者は、注入後２日から７日の期間、筋肉痛、関節病、食欲不振、倦怠感、鼻閉および咳を含む一時的な悪性度Ｉ／ＩＩ全身症状を有した。１人の患者は、数ヶ月間、断続的に症状が再発した。１人の患者は、一時的に悪性度ＩＩＩの肝臓機能不全を示した。
【００９３】
事前に、照射され、自己のＧＭ−ＣＳＦを分泌する腫瘍細胞を使用して予防接種された３人のメラノーマ患者は、１０Ｄ１を使用した治療の後に多くの腫瘍が壊死を起こした。患者１は、研究参加時において、中央神経系、肺、腹部および柔組織に転移を有していた。１０Ｄ１投与後１ヶ月、患者１は、神経状態において臨床的な変化を示し、皮下の損傷が急速に炎症を起こした。患者１は６日後に死亡した。病理解剖において、著しい出血を伴う腫瘍壊死が、脳、硬膜外、および内臓の転移において示された。組織病理学検査において、出血を伴う（少なくとも９０％）著しい腫瘍の破壊が示された。腫瘍血管がひどく損傷を受けて、虚血性壊死が生じた。可視腫瘍細胞の周辺は、顆粒球とリンパ球反応が生じる各損傷部において維持された。
【００９４】
患者２は、１０Ｄ１注入後の１月後に悪性度ＩＩの全身症状が再発した。縦隔損傷の生検は、リンパ球および顆粒球浸潤を伴う著しい腫瘍壊死を示した。免疫組織学はＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞と予備免疫グロブリン産生ＣＤ２０＋Ｂリンパ球の存在を示した。縦隔損傷部は２ヵ月後には完全に削除された。損傷部の病理学的な分析は、高密度の繊維症、広範囲な壊死、持続的なリンパ球および顆粒球の応答を示した。閉塞血管壁の円周方向へのリンパの浸潤によって特性付けられる血管症が示された。腫瘍壊死は、血管の損傷と空間的に関係していた。
【００９５】
患者７は、１０Ｄ１注入後の３週間、皮下の大きな損傷部において炎症が発達した。注入後に損傷部が削除された。損傷部の病理学的試験は、広範囲の腫瘍壊死、繊維症、顕著な血管症が示された。
【００９６】
定義されたメラノーマ抗原により事前に免疫化された４人の患者において、劇的ではない抗腫瘍効果が示された。患者３は、注入後拡大した縦隔損傷部の削除が行われた。病理学的な分析は、腫瘍壊死が無く、高密度のリンパの浸潤が示された。免疫組織化学は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の存在が示されたが、ＣＤ４＋細胞およびＣＤ２０＋細胞の存在が示されなかった。患者４は、同様のＣＤ４＋細胞の浸潤が示され、リンパ節転移における腫瘍の壊死が無かった、これは、抗原注入後２ヶ月で削除された。患者５は、皮下の損傷部において、リンパの浸潤や腫瘍の壊死が無かった。損傷部は抗体注入後２ヶ月で削除された。患者６は生検されず、腫瘍が進行した。
【００９７】
抗体注入は、２人の卵巣癌患者のＣＡ−１２５水準に変化を生じなかった。ＣＡ−１２５は卵巣癌細胞から生じ、病状の有用な指標である。（Jacobs,I(1994年)  Gyn.  Oncol.  55  :S22-27）患者８は、抗体注入後２ヶ月で、ＣＡ−１２５値が４３％（２３０から１３２）減少した。患者９は、腹水症の付随減少を伴って、抗体注入後、１月ＣＡ−１２５値が安定化した。患者９は、注入前に急速なＣＡ−１２５の上昇があった。
【００９８】
１〜２ヶ月持続する自己抗体（抗核抗体、抗チログロブリン抗体、リウマチ因子）の低力価が４人の患者で観察された。自己免疫性疾患の臨床的証拠は無かった。
【００９９】
全てのメラノーマ患者は、抗体注入後の３日から３週間の間に胴体および四肢に無症性の悪性度Ｉの網膜および紅斑性発疹を生じた。７人の患者が皮膚の生検された。生検された７人のうち５人の患者は、表皮まで達する真皮上層への突出した血管周囲のＴ細胞浸潤が起きた。ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞が志望したメラノーマ細胞からともに見出された。白斑は臨床的に明らかではない。軽度な、網膜の病巣の低色素沈着が１人の患者で見出されたが、視力は影響を受けなかった。１人の卵巣癌患者が、注入後２週間で顔と胴体に紅斑性の発疹が生じた。皮膚生検は、真皮上層において血管周囲のＴ細胞浸潤が示されたが、メラノーマ細胞に対して反応を示さなかった。
【０１００】
１０Ｄ１は、血中好中球の著しい増加を導き、好中球は腫瘍壊死に関連する。
【０１０１】
これらの結果は、１０Ｄ１抗ＣＴＬＡ−４抗体の単一注入が著しい抗腫瘍効果を有し得、ヒト患者に対して安全に投与し得ることを示す。低力価の自己抗体の生成は、この治療が、少なくとも部分的には、全身の耐性を弱め得るが、自己免疫疾患の臨床上の証拠が示されなかった。
【０１０２】
実施例５：メラノーマ患者に対するペプチドを伴う抗ＣＴＬＡ−４抗体１０Ｄ１の投与の研究
進行段階ＩＶのメラノーマである１４人の患者は、２つのＨＬＡ−Ａ＊０２０１に限定したｇｐ１００ペプチドを伴って、抗ＣＴＬＡ−４抗体１０Ｄ１を使用して予防接種された。患者の特性は以下の表２に要約される。
【表２】
2005529873.tif 000003
【０１０３】
全ての患者は、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１であり、カルノフスキー・パフォーマンスステータス≧６０％であった。６人の患者は、内臓転移を有していた。患者は、自己免疫疾患や免疫不全症の兆候は示されなかった。全ての患者は、初期損傷部に対して事前に外科削除を有した。６人の患者は、事前に化学療法をされた。１１人の患者は、インターフェロンα（患者２、患者５〜８、患者１０、患者１２、患者１３）、低薬量ＩＬ−２（患者２、患者５、患者１３）、大用量静脈投与ＩＬ−２（患者４、患者７、患者８）、全細胞メラノーマワクチン（患者１、患者２、患者６）、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチドワクチン（患者４、患者７および８）、ＧＭ−ＣＳＦ（患者９）を含む免疫療法を事前に受けていた。患者は、治療前の３週間、事前にｇｐ１００による免疫付与を受けず、全身治療を受けなかった。
【０１０４】
治療サイクルは、３週ごとに投与され、治療サイクルはフロイント不完全アジュバンドに乳化された１ｍｇのｇｐ１００：２０９−２１７（２１０Ｍ）ペプチド（ＩＭＤＱＶＰＦＳＶ）が一方の四肢に静脈注入され、ＩＦＡに乳化された１ｍｇのｇｐ１００：２８０−２８８（２８８Ｖ）ペプチド（ＹＬＥＰＧＶＴＶ）がもう一方の四肢に静脈注入された後に、３ｍｇ／ｋｇの抗ＣＴＬＡ−４抗体１０Ｄ１が９０分以上静脈注入されることからなる（合成ペプチドは国立癌研究所癌治療評価プログラムにより提供される）。患者は治療前、および２回の治療サイクルごとに３週間、血漿交換を受けた。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）がフィコールハイパック（Ficol-Hypaque）法により単離され、１０％ジメチルスルホキシド入りの熱非活性化ヒトＡＢ血清に低温保存され、将来の使用のため−１８０度で保存された。患者は１から６の治療サイクルを受けた（表２）。
【０１０５】
臨床応答は、胸部、腹部および骨盤のコンピュータ軸断層撮影法（ＣＴ）および脳の磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）を使用して評価された。これらの画像研究は、治療開始から４週以内で行われ、その後２治療サイクルごとに行われた。追加の放射線研究は、必要に応じて、疾病部位を評価するために使用された。患者ごとの腫瘍の最長直径の合計が（世界保健機構のＲＥＣＩＳＴ基準）、治療の前後で計算された。部分消失は、全ての測定可能な転移性癌の最長直径の合計が、少なくとも１ヶ月継続して、少なくとも３０％減少（しかし、１００％未満）し、新規の癌および拡大した癌がないことと定義された。完全消失は、全ての測定可能な転移性癌の最長直径の合計が、少なくとも１ヶ月継続して、１００％減少し、新規の癌がないことと定義される。非消失は、部分消失および完全消失ではない消失と定義された。
【０１０６】
患者は、自己免疫応答について評価された。患者は、治療前および治療開始から３ヶ月眼科診察を受けた。全ての患者は、サイログロブリンＡｂ、リウマチ因子および抗核抗体に対する研究の開始前に陰性血清血液試験を行った。ヒト抗ヒト（抗イディオタイプ）Ａｂ、赤血球沈降速度、抗核Ａｂ、甲状腺刺激ホルモン、遊離Ｔ４の水準が、研究中３週間ごとに測定された。
【０１０７】
１０Ｄ１の血中濃度は、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇにコートされたマイルロタイタウェル（Ｒ＆Ｄシステム、ミネアポリス、ミネソタ）を使用した標準ＥＬＩＳＡを使用して定められた。血漿検体の希釈はプレート上でインキュベートされた。抗ＣＴＬＡ−４Ａｂの結合は、ｐ−ＮＰＰ基質を使用して生産された、アルカリホスファターゼによって標識されたヤギ抗ヒトＩｇＧＦ（ａｂ）特異プローブを使用して検出された。
【０１０８】
１２日のｉｎ  ｖｉｖｏ感度分析は（ＥＬＩＳＰＯＴや四量体（teramer）分析よりも感度が高い）、試験のために準備されたＰＢＭＣを使用して１１人全ての患者における免疫応答の評価のために使用された（Rosenberg,S.A.  et  al.,Nat.  Med.  1998年  4：321−327）。低温保存されたＰＢＭＣは、解凍され、さらに１０％熱非活性化ヒトＡＢ血清、1μMの天然gp100:209-217ペプチドまたは天然gp100:280-288ペプチド、および300IU/mlのＩＬ−２を伴う完全Iscove培地で培養された。細胞は培養開始後１１日から１３日に回収され、腫瘍細胞またはペプチド−パルスＴ２細胞とともに一晩培養された。上清内に放出されたインターフェロンγ（ＩＮＦ−γ）は商用ＥＬＩＳＡ分析を使用して測定された（Pierce-Endogen,  ロックフォード、イリノイ）。１１人全ての患者が、１から４治療サイクル後、天然gp100:209-217に対する十分な免疫を示した。６人の患者は、天然gp100:280-288ペプチドに対して十分に免疫化された。
【０１０９】
Ｆｃ受容体遮断、および抗体（ＢＤ  バイオサイエンス、サン  ディエゴ、カルフォルニア）または四量体（Beckman  Coulter  Immunomics、サン  ディエゴ、カルフォルニア）を使用した染色後に、フローサイトメトリ分析が実行された。２治療サイクルの前後に９人の患者のＰＢＭＣ上の表面マーカーの発現が比較された。ＨＬＡ−ＤＲ（活性化マーカー）の発現は、治療後のＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞（Ｐ＝０．０００４、対応するt-検定）およびＣＤ３＋ＣＤ４＋（おそらくＣＤ８＋）細胞（Ｐ＝０．０４）において著しく増加した。ＣＤ３＋ＣＤ４＋細胞はまた治療後にＣＤ４５ＲＯ（記憶細胞マーカー）の著しい発現の増加を示した。ＣＤ６９、ＣＤ２５、およびＣＴＬＡ−４を発現する細胞集団のパーセントは、変化しなかった。
【０１１０】
患者１、患者１１、患者１３は応答者（表１５）。患者１は、２治療サイクル後、孤立性の肺損傷部の収縮が起きた。患者１３は、２治療サイクル後、孤立性の肺損傷部の収縮および皮下損傷部の完全分解が起きた。患者１１は、３１つの肺損傷部、２つの皮下の損傷部、１つの脳損傷部を有する。脳の損傷部は、２治療サイクル後０．５ｃｍから約１．０ｃｍに成長した。さらなる３治療サイクル後、患者１１は、脳損傷部を含む、全ての損傷部が完全分解した。
【０１１１】
患者３は、４治療サイクル後、いくつかの肺損傷部が分解されたが縦隔リンパ節が拡大するという、混合応答した。患者１０は、２治療サイクル後、肺門損傷部と、一部の肺損傷部の著しい収縮があったが、別の肺損傷部が拡大した。
【０１１２】
悪性度Ｉ／ＩＩの副作用として、下痢（患者３、患者５、患者１４）、皮膚発疹（患者１４）、肺浸潤および軽度な胸膜炎性胸痛（患者４）、白斑（患者２、患者６）が含まれる。
【０１１３】
６人の患者に生じた７つの悪性度ＩＩＩ／ＩＶの副作用として、皮膚炎（患者１、患者２、患者１３）、大腸炎／腸炎（患者１および患者９）、下垂体炎（下垂体の炎症）（患者１１）、および肝炎（患者１２）。全ての患者は、治療の中断、対処療法の投与および／またはステロイド療法の後、回復した。自己免疫作用の再発や新たな自己免疫作用が起きなかった。
【０１１４】
自己免疫スクリーニング血液検査は、抗核Ａｂが生じた患者５と患者１２を除いて正常であった。
【０１１５】
本研究は、２つのペプチドワクチンとともに抗ＣＴＬＡ−４抗体１０Ｄ１を受けた患者において、転移性のメラノーマ腫瘍の後退の客観的な証拠が示された。
【０１１６】
実施例６：前立腺癌（ＭＤＸＣＴＬＡ４−０１）に対するＭＡｂ１０Ｄ１の第I相の臨床試験
ＭＤＸＣＴＬＡ４−０１は、進行性、転移性、対ホルモン性前立腺癌の患者における抗細胞障害性Ｔ細胞関連抗原４（抗ＣＴＬＡ−４）抗体モノクローナル抗体１０Ｄ１の非盲検である。治療は、３．０ｍｇ／ｋｇにおいて、注入として、静脈投与されるＭＡｂ１０Ｄ１の単一投薬であった。
【０１１７】
アンドロゲン剥奪および少なくとも一回の全身非ホルモン性操作の後、前立腺の初期腺症、および前立腺の進行性転移性癌腫の組織学的診断を行った患者が、この研究の参加のためにスクリーニングされた。登録基準は、進行性測定可能な疾患、進行性ＰＳＡ、ＰＳＡ＞５ｎｇ／ｍｌ、テストステロン＜５０ｎｇ／ｄｌ、初期性腺アンドロゲン抑制、平均余命＞１２週、およびカルノフスキー・パフォーマンスステータス≧６０％であった。
【０１１８】
試験における患者の免疫状態のモニタと抗ＣＴＬＡ−４抗体によるＴ細胞活性化に対する全身影響をモニタすることが重要なため、本研究の登録基準は、それぞれＣＤ４Ｔ細胞およびＣＤ８Ｔ細胞の最低水準がそれぞれ、≧５００／ｍｌ、≧５００／ｍｌであった。しかし、ＣＤ４Ｔ細胞およびＣＤ８Ｔ細胞が明らかに存在するのにも関わらず、前立腺癌患者のＴ細胞数の著しい減少が、研究の開始初期に観察された。多くの患者が、初期に上記の登録基準に基づいて除外された。前立腺癌患者への癌予防接種に関係する治療に関連を持ち得る前立腺癌患者の非公開の観測により、Ｔ細胞数の明らかな減少が観測された。これらの観測により、登録基準は、それぞれＣＤ４Ｔ細胞およびＣＤ８Ｔ細胞を、≧３００／ｍｌ、≧２００／ｍｌ有する患者を含むように補正された。
【０１１９】
検体は、健康診断、ＥＣＧ、胸部Ｘ線、画像診断、組織学、生化学、免疫機能診断のために血液のサンプリングを受けた。月ごとの電話面接が、病気の進行後の自己免疫副作用を含む、副作用の一部の情報を収集し記憶するために治療後６ヶ月まで行われた。ＰＳＡ（減少、継続期間の減少、進行、進行までの時間）および病気の消失（完全、部分、定常、進行）が観測された。ＭＡｂ１０Ｄ１の血中濃度が、注入直前、注入中、注入後２ヶ月まで評価された。
【０１２０】
ＨＲＰＣの１４人が登録された。平均年齢は６９歳であった（５６歳から７９歳の範囲）。７人の患者は、事前に化学療法を受けた。全ての患者は、９０分以上、３ｍｇ／ｋｇの１０Ｄ１を静脈から１回投与され、次に毒性、薬物動態学、臨床転帰が追跡調査された。全ての注入は、軽度な注入関連副作用（ＡＥ）のみで、計画通りに完了した。軽度で治療可能な発疹および掻痒が、経口のステロイド治療により消失した。１０Ｄ１に関する悪性度３またはそれ以上のＡＥはなかった。薬物動態プロフィールが図３に示され、μｇ／ｍｌで血中濃度が示される。平均＋／−ＳＥＭが、１４人の患者（ｎ＝１４）に対して示される。図３に示された結果は、抗体の血中濃度が３ヶ月まで検出可能であり、追加のモニタにより、血中濃度が４ヶ月までも検出可能であり得ることが見出された。活性化末梢Ｔ細胞の著しい増加が無く、臨床自己免疫が認められなかった。７人の患者中２人が化学療法を受けておらず、ＰＳＡ応答（合意基準）が３ヶ月から５ヶ月続き、１人が症状を改善した。他の患者は、ＰＳＡの曲線の傾きの著しい変化が生じた。患者は１０Ｄ１（３ｍｇ／ｋｇ）の第２回目の投与によって再治療され、事前に消失した患者は、著しいＡＥが無くＰＳＡの減少が再び経験された。治療は、免疫学的な抗腫瘍活性の明らかな証拠とともに耐用性良好を示した。従って、研究は、ヒト患者が抗ＣＴＬＡ−４抗体を使用して治療され得ることによって、抗体の血中濃度が有害な副作用なく１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月までも検出可能な水準以上に維持されることを示される。
【０１２１】
１０Ｄ１を使用して治療された患者のリンパ球の亜母集団は、抗体治療後の様々な時点のフローサイトによって分析される。結果は以下の表３に要約される（データは平均、＋／−）。
【表３】
2005529873.tif 000004
【０１２２】
結果は、１０Ｄ１の治療は、時間の経過とともに、ＣＤ４／ＨＬＡ−ＤＲ＋亜集団の約５０％の増加を導くことを示した。他のリンパ球亜母集団は、時間が経過しても基本的に一定のままであった。
【０１２３】
ＭＡｂ１０Ｄ１の投与が好ましくない非特異的Ｔ細胞活性化を導き得るか否かを評価するため、前立腺癌被験者からの末梢血リンパ球は、以下のマーカー、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ４４、ＣＤ６９およびＨＬＡ−ＤＲに対してそれぞれフローサイトメトリによって分析された。これのマーカーの頻度（frequency）の著しい変化は、これまでのところ治療を受けた各前立腺癌被験者に対する治療期間中において観察されなかった。これらの分析の一例が、被験者のうち２人に対するＭＡｂ１０Ｄ１の投与前、投与中、投与後のＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ６９陽性細胞およびＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ６９陽性細胞の頻度を示す表４において、示される。これらのデータは、ＭＡｂ１０Ｄ１が非特異的なＴ細胞活性化を生じないことを示す。
【０１２４】
表４、３．０ｍｇ／ＫｇＭＡｂ１０Ｄ１を使用して治療された前立腺癌被験者のＴ細胞活性化マーカーのフローサイトメトリ分析
【表４】
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【０１２５】
ＭＤＸＣＴＬＡ４−０１の臨床試験による結果は、注入が軽微な反応のみで耐用性良好を示した。約３ヶ月から４ヶ月の間に血中の抗体が維持され、長期にわたる抗体の血中濃度半減期が見られる。著しい非特異的なＴ細胞活性化が起きずに、免疫効果の明らかな証拠が観察された。前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）水準の症状の緩和および減少が、抗ＣＴＬＡ−４抗体を使用して治療された前立腺癌患者において観察された。ＰＳＡ水準の減少にたいする代表的な結果が図４に示され、図４は、０日目に、３ｍｇ／ｋｇ抗ＣＴＬＡ−４抗体を注入した後、様々な時点における２人の患者（１人は閉鎖式循環、１人は開放式循環）のＰＳＡ水準（ｉｎ  ｎｇ／ｍｌ）を示している。この結果は、血中の抗ＣＴＬＡ−４抗体の存在に関連して、ＰＳＡ水準が抗体注入後に減少され、治療後約３から４月の間抑制が維持されることを示した。免疫介在の発疹や掻痒、自己抗体陽性への一時的なセロコンバージョン、メラノーマ患者のメラニン色素の変化、腫瘍領域の炎症反応を含む、一部の他の軽微な免疫効果が観察された。発疹や掻痒を除いて、全ての潜在的な免疫的な副作用は無症状であった。要約すると、抗ＣＴＬＡ−４抗体治療を使用したヒト臨床試験による継続的な結果は、抗体が耐用性良好で、受容者の免疫効果を刺激することを示している。
【０１２６】
特許、特許出願、様々な刊行物を含む多くの参考文献は、引用され、本発明の説明において論じられた。これらの参考文献の引用および／または議論は、単に本発明の記載を明確にするために提供され、いかなるこのような文献が記載された本発明に対する「従来技術」であることを認容しない。本明細書において引用され論じられた全ての参考文献は、それぞれの参考文献がここに参考として併合されているように、全部および同じ範囲に参考文献として併合されている。
【図面の簡単な説明】
【０１２７】
【図１】メラノーマワクチンと抗ＣＴＬＡ−４抗体１０Ｄ１で治療した動物のメラノーマ特異的抗体の応答を示す。治療した動物からのプール血清サンプル内の抗体反応性は、フローサイトメトリによって測定された。
【図２】霊長類の長期投与中の抗ＣＴＬＡ−４抗体１０Ｄ１の薬物動態学的プロファイルを示す。抗体は０日、２８日、５６日、８４日、１４０日に投与され、１０Ｄ１の血中濃度は、ＥＬＩＳＡによって分析された。治療した６匹の動物の平均と＋／−ＳＥＭが示されている。
【図３】０日に抗ＣＴＬＡ−４抗体１０Ｄ１により治療された前立腺癌患者内のＣＴＬＡ−４抗原１０Ｄ１の薬物動態学的プロファイルを示す。血中濃度（μｇ／ｍｌ）が示されている。治療された１４人の患者の平均と＋／−ＳＥＭが示されている。
【図４】０日に抗ＣＴＬＡ−４抗体を注入後の様々な時点における２人の患者の前立腺特異抗原（ＰＳＡ）水準（ｎｇ／ｍｌ）を示している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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