(57)【要約】  本発明は，蛋白質キナーゼ（"ＰＫ"）の活性を調節する，３−（ピロール−２−イルメチリデン）−２−インドリノン誘導体を含む処方に関する。これらの化合物を含む処方を用いて異常なＰＫ活性に関連する疾病を治療する方法およびこれらの処方を製造する方法も開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療上有効量の式（Ｉ），（ＩＩ），（ＩＩＩ），または（ＩＶ）：
【化１】
2005514368.tif 000042
［式中，
Ｒ2は水素であり；
Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，トリハロメタン−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，アミノおよび−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，カルボニル，アセチル，スルホニル，およびトリフルオロメタンスルホニルからなる群より選択されるか，またはＲ11およびＲ12は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，５員または６員のヘテロ脂環式環を形成する）からなる群より選択され，ただし，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6の少なくとも２つは水素であり；または
Ｒ3およびＲ4，Ｒ4およびＲ5，またはＲ5およびＲ6は，一緒になって６員のアリール環，メチレンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成し；
Ｒ7は，水素，アルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，カルボニル，アセチル，Ｃ−アミド，Ｃ−チオアミド，アミジノ，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，スルホニルおよびトリハロメタン−スルホニルからなる群より選択され；
Ｒ8，Ｒ9およびＲ10は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，アミノ，−（ａｌｋ1）Ｚ（式中，ａｌｋ1は，アルキル，アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され，Ｚは，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシ，ニトロ，シアノ，アミノ，グアニジノ，アミド，ウレイド，スルホンアミド，スルフィニル，スルホニル，ホスホネート，モルホリノ，ピペラジニルまたはテトラゾリルである），および−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は上で定義したとおりである）からなる群より選択され；
Ｒ1'は水素またはアルキルであり；
Ｒ2'は，水素，アルキル，アラルキル，アシル，または−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ’）であり；
Ｒ3'およびＲ4'は，独立して，アルキルであるか，またはＲ3'およびＲ4'は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，ヘテロ脂環式環またはヘテロアリール環を形成し；
Ｒ5'はアルキルであり；
ＲおよびＲ’は，独立して，水素，アルキル，アラルキルおよびアリールからなる群より選択され；および
ＲaおよびＲbは，独立して，水素またはアルキルから選択される］
の化合物またはその薬学的に許容しうる塩；
少なくとも１つの薬学的に許容しうる錯化剤または界面活性剤；および
薬学的に許容しうる希釈剤，
を含む，経口または非経口投与用の医薬製剤。
【請求項２】
治療上有効量の式（ＩＩ）：
【化２】
2005514368.tif 000043
［式中，
Ｒ2は水素であり；
Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，トリハロメタン−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，アミノおよび−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，カルボニル，アセチル，スルホニル，およびトリフルオロメタンスルホニルからなる群より選択されるか，またはＲ11およびＲ12は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，５員または６員のヘテロ脂環式環を形成する）からなる群より選択され，ただし，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6の少なくとも２つは水素であり；または
Ｒ3およびＲ4，Ｒ4およびＲ5，またはＲ5およびＲ6は，一緒になって，６員のアリール環，メチレンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成し；
Ｒ7は，水素，アルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，カルボニル，アセチル，Ｃ−アミド，Ｃ−チオアミド，アミジノ，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，スルホニルおよびトリハロメタン−スルホニルからなる群より選択され；
Ｒ8，Ｒ9およびＲ10は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，アミノ，−（ａｌｋ1）Ｚ（式中，ａｌｋ1は，アルキル，アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され，Ｚは，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシ，ニトロ，シアノ，アミノ，グアニジノ，アミド，ウレイド，スルホンアミド，スルフィニル，スルホニル，ホスホネート，モルホリノ，ピペラジニルまたはテトラゾリルである），および−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は上で定義したとおりである）からなる群より選択され；
Ｒ1'は，水素またはアルキルであり；
Ｒ3'およびＲ4'は，独立して，アルキルであるか，またはＲ3'およびＲ4'は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，ヘテロ脂環式環またはヘテロアリール環を形成し，ただし，ヘテロ脂環式環はピペリジン−１−イルまたはモルホリン−４−イルではない］
の化合物またはその薬学的に許容しうる塩；
少なくとも１つの薬学的に許容しうる錯化剤または界面活性剤；および
薬学的に許容しうる希釈剤，
を含む，経口または非経口投与用の医薬製剤。
【請求項３】
薬学的に許容しうる酸または塩基のそれぞれの少なくとも１またはそれ以上；ポリオキシヒドロカルビル化合物；薬学的に許容しうるアルコール；および少なくとも１つの抗酸化剤をさらに含むか；または少なくとも１つの薬学的に許容しうる酸または塩基と少なくとも１つの抗酸化剤との組み合わせをさらに含む，請求項１または２記載の医薬製剤。
【請求項４】
前記薬学的に許容しうる酸が，メタンスルホン酸，クエン酸，酒石酸および乳酸からなる群より選択される，請求項３記載の医薬製剤。
【請求項５】
前記錯化剤がシクロデキストリンである，請求項２記載の医薬製剤。
【請求項６】
前記シクロデキストリンが，スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンおよび／またはヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリンである，請求項５記載の医薬製剤。
【請求項７】
前記界面活性剤が，ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル，グリセリルモノオレエート，ポリビニルアルコール，エチレンオキシドコポリマー，ポリオール成分，ソルビタンエステル，およびエトキシ化ひまし油からなる群より選択される，請求項２記載の医薬製剤。
【請求項８】
前記ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルがＰＯＬＹＳＯＲＢＡＴＥ  ８０であり，前記エトキシ化ひまし油がポリオキシル３５ひまし油である，請求項７記載の医薬製剤。
【請求項９】
前記ポリオキシヒドロカルビル化合物が，水溶性炭水化物，水溶性炭水化物誘導体，水溶性ポリマー，水溶性混合オキシアルキレンポリマー，および高分子型のエチレングリコール，またはこれらの混合物からなる群より選択される，請求項３記載の医薬製剤。
【請求項１０】
前記ポリヒドロキシカルビル化合物が，ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ），ＰＥＧ誘導体，マンニトール，ラクトースおよびショ糖からなる群より選択される，請求項９記載の医薬製剤。
【請求項１１】
前記アルコールが，エタノール，ベンジルアルコール，プロピレングリコール，２−（２−エトキシエトキシ）エタノール，およびグリセロール，またはこれらの混合物からなる群より選択される，請求項３記載の医薬製剤。
【請求項１２】
前記アルコールが，エタノール，ベンジルアルコール，またはこれらの混合物である，請求項１１記載の医薬製剤。
【請求項１３】
前記抗酸化剤が，メタ重亜硫酸ナトリウム，亜硫酸水素ナトリウム，システイン，およびメチオニン，またはこれらの混合物からなる群より選択される，請求項３記載の医薬製剤。
【請求項１４】
前記希釈剤が水または緩衝液である，請求項２記載の医薬製剤。
【請求項１５】
前記緩衝液が，乳酸塩，クエン酸塩，酢酸塩，コハク酸塩およびリン酸塩緩衝液からなる群より選択される，請求項１４記載の医薬製剤。
【請求項１６】
前記式ＩＩの化合物が式：
【化３】
2005514368.tif 000044
を有する，請求項２記載の医薬製剤。
【請求項１７】
約０．１−約２０ｍｇ／ｍｌの式（ＩＩ）：
【化４】
2005514368.tif 000045
［式中，
Ｒ2は水素であり；
Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，トリハロメタン−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，アミノおよび−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，カルボニル，アセチル，スルホニル，およびトリフルオロメタンスルホニルからなる群より選択されるか，またはＲ11およびＲ12は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，５員または６員のヘテロ脂環式環を形成する）からなる群より選択され，ただし，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6の少なくとも２つは水素であり；または
Ｒ3およびＲ4，Ｒ4およびＲ5，またはＲ5およびＲ6は，一緒になって，６員のアリール環，メチレンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成し；
Ｒ7は，水素，アルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，カルボニル，アセチル，Ｃ−アミド，Ｃ−チオアミド，アミジノ，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，スルホニルおよびトリハロメタン−スルホニルからなる群より選択され；
Ｒ8，Ｒ9およびＲ10は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，アミノ，−（ａｌｋ1）Ｚ（式中，ａｌｋ1は，アルキル，アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され，Ｚは，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシ，ニトロ，シアノ，アミノ，グアニジノ，アミド，ウレイド，スルホンアミド，スルフィニル，スルホニル，ホスホネート，モルホリノ，ピペラジニルまたはテトラゾリルである）および−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は上で定義したとおりである）からなる群より選択され；
Ｒ1'は水素またはアルキルであり；
Ｒ3'およびＲ4'は，独立して，アルキルであるか，またはＲ3'およびＲ4'は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，ヘテロ脂環式環またはヘテロアリール環を形成し，ただし，ヘテロ脂環式環はピペリジン−１−イルまたはモルホリン−４−イルではない］
の化合物またはその薬学的に許容しうる塩；
約０．５−約４００ｍｇ／ｍｌの少なくとも１つの薬学的に許容しうる錯化剤または０．５ｍｇ／ｍｌ−約２０ｍｇ／ｍｌの界面活性剤；
式（ＩＩ）の化合物の約１−約３０倍のモル比の量の少なくとも１つの薬学的に許容しうる酸；
０−約２００ｍｇ／ｍｌの少なくとも１つのポリオキシヒドロカルビル化合物；および
医薬組成物が約１．５−約５のｐＨを有するのに十分な水および／または薬学的に許容しうる緩衝液，
を含む，非経口投与用の医薬製剤。
【請求項１８】
約０．５−約８ｍｇ／ｍｌの式：
【化５】
2005514368.tif 000046
の化合物；
約２．５−約１６０ｍｇ／ｍｌの，スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンおよびヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリンのからなる群より選択される薬学的に許容しうる錯化剤；
上述の式の化合物の約１−約２０倍のモル比の量の薬学的に許容しうる酸であって，メタンスルホン酸，乳酸，クエン酸，酒石酸，およびコハク酸からなる群より選択される酸；
０−約１５ｍｇ／ｍｌの，メタ重亜硫酸ナトリウム，亜硫酸水素ナトリウム，システイン，およびメチオニンからなる群より選択される抗酸化剤；および
医薬組成物が約１．５−約５のｐＨを有するのに十分な水および／または乳酸塩，クエン酸塩，または酢酸塩からなる群より選択される薬学的に許容しうる緩衝液，
を含む医薬製剤。
【請求項１９】
約０．５−約３ｍｇ／ｍｌの式：
【化６】
2005514368.tif 000047
の化合物；
約２．５−約６０ｍｇ／ｍｌの，スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンからなる群より選択される薬学的に許容しうる錯化剤；
上述の式の化合物の約１−２０倍のモル比の量の薬学的に許容しうる酸であって，メタンスルホン酸または乳酸からなる群より選択される酸；
０．０５−約１ｍｇ／ｍｌの，メタ重亜硫酸ナトリウムからなる群より選択される抗酸化剤；および
医薬組成物が約２．５−３．５のｐＨを有するのに十分な水および／または乳酸塩，クエン酸塩，または酢酸塩である薬学的に許容しうる緩衝液，
を含む医薬製剤。
【請求項２０】
癌を治療する方法であって，そのような治療を必要とする患者に請求項１記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
【請求項２１】
治療上有効量の式（Ｉ），（ＩＩ），（ＩＩＩ），または（ＩＶ）：
【化７】
2005514368.tif 000048
［式中，
Ｒ2は水素であり；
Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，トリハロメタン−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，アミノおよび−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，カルボニル，アセチル，スルホニル，およびトリフルオロメタンスルホニルからなる群より選択されるか，またはＲ11およびＲ12は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，５員または６員のヘテロ脂環式環を形成する）からなる群より選択され，ただし，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6の少なくとも２つは水素であり；または
Ｒ3およびＲ4，Ｒ4およびＲ5，またはＲ5およびＲ6は，一緒になって，６員のアリール環，メチレンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成し；
Ｒ7は，水素，アルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，カルボニル，アセチル，Ｃ−アミド，Ｃ−チオアミド，アミジノ，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，スルホニルおよびトリハロメタン−スルホニルからなる群より選択され；
Ｒ8，Ｒ9およびＲ10は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，アミノ，−（ａｌｋ1）Ｚ（式中，ａｌｋ1は，アルキル，アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され，Ｚは，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシ，ニトロ，シアノ，アミノ，グアニジノ，アミド，ウレイド，スルホンアミド，スルフィニル，スルホニル，ホスホネート，モルホリノ，ピペラジニルまたはテトラゾリルである）および−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は上で定義したとおりである）からなる群より選択され；
Ｒ1'は，水素またはアルキルであり；
Ｒ2'は，水素，アルキル，アラルキル，アシル，または−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ’）であり；
Ｒ3'およびＲ4'は，独立して，アルキルであるか，またはＲ3'およびＲ4'は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，ヘテロ脂環式環またはヘテロアリール環を形成し；
Ｒ5'はアルキルであり；
ＲおよびＲ’は，独立して，水素，アルキル，アラルキルおよびアリールからなる群より選択され；および
ＲaおよびＲbは，独立して，水素またはアルキルから選択される］
の化合物またはその薬学的に許容しうる塩；
少なくとも１つの薬学的に許容しうる錯化剤または界面活性剤；および
薬学的に許容しうる希釈剤，
を含む凍結乾燥製剤。
【請求項２２】
治療上有効量の式（ＩＩ）：
【化８】
2005514368.tif 000049
［式中，
Ｒ2は水素であり；
Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，トリハロメタン−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，アミノおよび−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，カルボニル，アセチル，スルホニル，およびトリフルオロメタンスルホニルからなる群より選択されるか，またはＲ11およびＲ12は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，５員または６員のヘテロ脂環式環を形成する）からなる群より選択され，ただし，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6の少なくとも２つは水素であり；または
Ｒ3およびＲ4，Ｒ4およびＲ5，またはＲ5およびＲ6は，一緒になって，６員のアリール環，メチレンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成し；
Ｒ7は，水素，アルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，カルボニル，アセチル，Ｃ−アミド，Ｃ−チオアミド，アミジノ，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，スルホニルおよびトリハロメタン−スルホニルからなる群より選択され；
Ｒ8，Ｒ9およびＲ10は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，アミノ，−（ａｌｋ1）Ｚ（式中，ａｌｋ1は，アルキル，アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され，Ｚは，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシ，ニトロ，シアノ，アミノ，グアニジノ，アミド，ウレイド，スルホンアミド，スルフィニル，スルホニル，ホスホネート，モルホリノ，ピペラジニルまたはテトラゾリルである）および−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は上で定義したとおりである）からなる群より選択され；
Ｒ1'は水素またはアルキルであり；
Ｒ3'およびＲ4'は，独立して，アルキルであるか，またはＲ3'およびＲ4'は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，ヘテロ脂環式環またはヘテロアリール環を形成し，ただし，ヘテロ脂環式環はピペリジン−１−イルまたはモルホリン−４−イルではない］
の化合物またはその薬学的に許容しうる塩；
少なくとも１つの薬学的に許容しうる錯化剤または界面活性剤；および
薬学的に許容しうる希釈剤，
を含む，経口または非経口投与用の凍結乾燥医薬製剤。
【請求項２３】
薬学的に許容しうる酸または塩基のそれぞれの少なくとも１またはそれ以上；ポリオキシヒドロカルビル化合物；薬学的に許容しうるアルコール；および少なくとも１つの抗酸化剤をさらに含み，または少なくとも１つの薬学的に許容しうる酸または塩基および少なくとも１つの抗酸化剤の組み合わせをさらに含む，請求項２１または２２記載の医薬製剤。
【請求項２４】
前記薬学的に許容しうる酸がメタンスルホン酸または乳酸である，請求項２３記載の医薬製剤。
【請求項２５】
前記錯化剤がシクロデキストリンである，請求項２２記載の医薬製剤。
【請求項２６】
前記シクロデキストリンが，スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンまたはヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリンである，請求項２５記載の医薬製剤。
【請求項２７】
前記界面活性剤が，ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル，グリセリルモノオレエート，ポリビニルアルコール，エチレンオキシドコポリマー，ポリオール成分，ソルビタンエステル，およびエトキシ化ひまし油からなる群より選択される，請求項２２記載の医薬製剤。
【請求項２８】
前記ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルがＰＯＬＹＳＯＲＢＡＴＥ  ８０であり，前記エトキシ化ひまし油がポリオキシル３５ひまし油である，請求項２７記載の医薬製剤。
【請求項２９】
前記ポリオキシヒドロカルビル化合物が，水溶性炭水化物，水溶性炭水化物誘導体，水溶性ポリマー，水溶性混合オキシアルキレンポリマー，および高分子型のエチレングリコール，またはこれらの混合物からなる群より選択される，請求項２３記載の医薬製剤。
【請求項３０】
前記ポリオキシヒドロカルビル化合物が，ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ），ＰＥＧ誘導体，マンニトール，ラクトースおよびショ糖からなる群より選択される，請求項２３記載の医薬製剤。
【請求項３１】
前記抗酸化剤が，メタ重亜硫酸ナトリウム，亜硫酸水素ナトリウム，システイン，およびメチオニン，またはこれらの混合物からなる群より選択される，請求項２３記載の医薬製剤。
【請求項３２】
前記アルコールが，エタノール，ベンジルアルコール，プロピレングリコール，２−（２−エトキシエトキシ）エタノール，およびグリセロール，またはこれらの混合物からなる群より選択される，請求項２３記載の医薬製剤。
【請求項３３】
前記アルコールが，エタノール，ベンジルアルコール，またはこれらの混合物である，請求項３２記載の医薬製剤。
【請求項３４】
前記希釈剤が水または緩衝液である，請求項２７記載の医薬製剤。
【請求項３５】
前記緩衝液が，乳酸塩，クエン酸塩，酢酸塩，コハク酸塩，またはリン酸塩緩衝液からなる群より選択される，請求項３４記載の医薬製剤。
【請求項３６】
前記式ＩＩの化合物が，式：
【化９】
2005514368.tif 000050
を有する，請求項２２記載の医薬製剤。
【請求項３７】
約１−約４００ｍｇ／バイアルの式（ＩＩ）：
【化１０】
2005514368.tif 000051
［式中，
Ｒ2は水素であり；
Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，トリハロメタン−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，アミノおよび−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，カルボニル，アセチル，スルホニル，およびトリフルオロメタンスルホニルからなる群より選択されるか，またはＲ11およびＲ12は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，５員または６員のヘテロ脂環式環を形成する）からなる群より選択され，ただし，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6の少なくとも２つは水素であり；または
Ｒ3およびＲ4，Ｒ4およびＲ5，またはＲ5およびＲ6は，一緒になって，６員のアリール環，メチレンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成し；
Ｒ7は，水素，アルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，カルボニル，アセチル，Ｃ−アミド，Ｃ−チオアミド，アミジノ，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，スルホニルおよびトリハロメタン−スルホニルからなる群より選択され；
Ｒ8，Ｒ9およびＲ10は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，アミノ，−（ａｌｋ1）Ｚ（式中，ａｌｋ1は，アルキル，アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され，Ｚは，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシ，ニトロ，シアノ，アミノ，グアニジノ，アミド，ウレイド，スルホンアミド，スルフィニル，スルホニル，ホスホネート，モルホリノ，ピペラジニルまたはテトラゾリルである）および−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は上で定義したとおりである）からなる群より選択され；
Ｒ1'は水素またはアルキルであり；
Ｒ3'およびＲ4'は，独立して，アルキルであるか，またはＲ3'およびＲ4'は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，ヘテロ脂環式環またはヘテロアリール環を形成し，ただし，ヘテロ脂環式環はピペリジン−１−イルまたはモルホリン−４−イルではない］
の化合物またはその薬学的に許容しうる塩；
約５−８０００ｍｇ／バイアルの少なくとも１つの薬学的に許容しうる錯化剤または５−約４００ｍｇ／バイアルの界面活性剤；
式（ＩＩ）の化合物の約１−約３０倍のモル比の量の少なくとも１つの薬学的に許容しうる酸；および
０−約１０００ｍｇ／バイアルの少なくとも１つのポリオキシヒドロカルビル化合物，
を含む凍結乾燥医薬製剤。
【請求項３８】
約１−３００ｍｇ／バイアルの式：
【化１１】
2005514368.tif 000052
の化合物；
約５−約６０００ｍｇ／バイアルの，スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンおよびヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリンからなる群より選択される薬学的に許容しうる錯化剤；
上述の式の化合物の約１−約２０倍のモル比の量の薬学的に許容しうる酸であって，メタンスルホン酸，乳酸，クエン酸，酒石酸，およびコハク酸からなる群より選択される酸；および
０−約１５０ｍｇ／バイアルの，メタ重亜硫酸ナトリウム，亜硫酸水素ナトリウム，システイン，およびメチオニンからなる群より選択される抗酸化剤，
を含む医薬製剤。
【請求項３９】
約１−約２００ｍｇ／バイアルの式：
【化１２】
2005514368.tif 000053
の化合物；
約５−約４０００ｍｇ／バイアルの，スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンからなる群より選択される薬学的に許容しうる錯化剤；
上述の式の化合物の約１−２０倍のモル比の量の薬学的に許容しうる酸であって，メタンスルホン酸または乳酸からなる群より選択される酸；および
０−約１５０ｍｇ／バイアルの，メタ重亜硫酸ナトリウムからなる群より選択される抗酸化剤，
を含む凍結乾燥医薬組成物。
【請求項４０】
請求項１記載の医薬製剤を製造する方法であって，式Ｉ，ＩＩ，ＩＩＩまたはＩＶ：
【化１３】
2005514368.tif 000054
の化合物またはその薬学的に許容しうる塩を，界面活性剤または錯化剤と混合する工程を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願のクロスリファレンス
本出願は，米国特許仮出願６０／３３１，８００（２００１年１１月２１日出願）に基づく優先権を主張する。
【０００２】
発明の分野
本発明は，蛋白質キナーゼ（"ＰＫ"）の活性を調節するある種の３−（ピロール−２−イルメチリデン）−２−インドリノン誘導体のプロドラッグの医薬製剤に関する。これらの化合物を含む医薬組成物を用いて異常なＰＫ活性に関連する疾病を治療する方法およびこれらを製造する方法も開示される。
【背景技術】
【０００３】
蛋白質キナーゼ（"ＰＫ"）は，蛋白質のチロシン，セリンおよびトレオニン残基上のヒドロキシ基のリン酸化を触媒する酵素である。ＰＫは，慣用的に２種類に分類することができる：蛋白質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）およびセリン−トレオニンキナーゼ（ＳＴＫ）。ＰＫ活性の主な観点の１つは，成長因子レセプターに対するその関与である。成長因子レセプターは細胞表面蛋白質である。成長因子リガンドが結合すると，成長因子レセプターは活性型に変換され，これが細胞膜の内表面上の蛋白質と相互作用する。この相互作用は，レセプターおよび他の蛋白質のチロシン残基のリン酸化を引き起こし，細胞内部で種々の細胞質シグナリング分子との複合体が形成される。次にこれらの複合体は多くの細胞性応答，例えば，細胞分裂（増殖），細胞分化，細胞成長，細胞外微細環境への代謝的効果の発現等を行う（Ｓｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｕｌｌｒｉｃｈ，Ｎｅｕｒｏｎ，９：３０３−３９１，１９９２を参照）。
【０００４】
ＰＴＫ活性を有する成長因子レセプターはレセプターチロシンキナーゼ（"ＲＴＫ"）として知られている。これらは，多様な生物学的活性を有する貫膜レセプターの大きなファミリーを含む。現在のところ，ＲＴＫの少なくとも１９個の異なるサブファミリーが同定されている。これらのサブファミリーの例は，"ＨＥＲ"ＲＴＫと称されるサブファミリーであり，これにはＥＧＦＲ（上皮成長因子レセプター），ＨＥＲ２，ＨＥＲ３およびＨＥＲ４が含まれる。
【０００５】
別のＲＴＫサブファミリーは，インスリンレセプター（ＩＲ），インスリン様成長因子Ｉレセプター（ＩＧＦ−１Ｒ）およびインスリンレセプター関連レセプター（ＩＲＲ）を含む。ＩＲおよびＩＧＦ−１Ｒはインスリン，ＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ−ＩＩと相互作用して，２つの完全に細胞外のグリコシル化されたαサブユニットと，細胞膜を横断しチロシンキナーゼドメインを含有する２つのβサブユニットのヘテロ４量体を形成する。
【０００６】
第３のＲＴＫサブファミリーは，血小板由来成長因子レセプター（"ＰＤＧＦＲ"）群と称され，これにはＰＤＧＦＲα，ＰＤＧＦＲβ，ＣＳＦＩＲ，ｃ−ｋｉｔおよびｃ−ｆｍｓが含まれる。別の群は，胎児肝キナーゼ（"ｆｌｋ"）レセプターサブファミリーである。この群は，キナーゼ挿入ドメイン−レセプター胎児肝キナーゼ−１（ＫＤＲ／ＦＬＫ−１），ｆｌｋ−１Ｒ，ｆｌｋ−４およびｆｍｓ様チロシンキナーゼ１（ｆｌｔ−１）からなると考えられている。
【０００７】
チロシンキナーゼ成長因子レセプターファミリーの別のメンバーは，線維芽細胞成長因子（"ＦＧＦ"）レセプターサブグループである。この群は，４つのレセプター，ＦＧＦＲ１−４，および７つのリガンド，ＦＧＦ１−７から構成される。まだあまり明確にされていないが，レセプターは，可変数のイムノグロビン様ループを含有するグリコシル化された細胞外ドメイン，およびチロシンキナーゼ配列が関係のないアミノ酸配列の領域により分断されている細胞内ドメインから構成されるようである。
【０００８】
チロシンキナーゼ成長因子レセプターファミリーのさらに別のメンバーは血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ"）レセプターサブグループである。ＶＥＧＦは，ＰＤＧＦに類似する二量体の糖蛋白質であるが，インビボで異なる生物学的機能および標的細胞特異性を有する。特に，ＶＥＧＦは，現在，脈管形成および新脈管形成において必須の役割を果たすと考えられている。
【０００９】
既知のＲＴＫサブファミリーのより完全なリストは，Ｐｌｏｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＤＮ＆Ｐ，７（６）：３３４−３３９（１９９４）（本明細書において完全に記載されているように，図面を含め本明細書の一部としてここに引用する）に記載されている。
【００１０】
ＲＴＫに加え，"非レセプターチロシンキナーゼ"または"細胞性チロシンキナーゼと称される，完全に細胞内のＰＴＫのファミリーが存在する。本明細書においては"ＣＴＫ"と略されるこの後者の定義を用いる。ＣＴＫは細胞外および貫膜ドメインを含有しない。現在のところ，１１個のサブファミリー（Ｓｒｃ，Ｆｒｋ，Ｂｔｋ，Ｃｓｋ，Ａｂｌ，Ｚａｐ７０，Ｆｅｓ，Ｆｐｓ，Ｆａｋ，ＪａｋおよびＡｃｋ）の２４個を越えるＣＴＫが同定されている。Ｓｒｃサブファミリーは，これまでのところ，ＣＴＫのもっとも大きい群であるようであり，Ｓｒｃ，Ｙｅｓ，Ｆｙｎ，Ｌｙｎ，Ｌｃｋ，Ｂｌｋ，Ｈｃｋ，ＦｇｒおよびＹｒｋを含む。ＣＴＫのより詳細な議論については，Ｂｏｌｅｎ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，８：２０２３−２０３１（１９９３）（本明細書において完全に記載されているように，図面を含め本明細書の一部としてここに引用する）を参照されたい。
【００１１】
セリン／トレオニンキナーゼもしくはＳＴＫは，ＣＴＫと同様に，主として細胞内にあるが，ＳＴＫタイプのレセプターキナーゼは少ない。ＳＴＫはもっとも一般的なサイトゾルキナーゼである。すなわち，細胞質オルガネラおよび細胞骨格以外の，細胞質のその部分でその機能を行うキナーゼである。サイトゾルは，細胞の中間代謝および生合成活性のほとんどが生ずる細胞中の領域である。例えば，蛋白質がリボソーム上で合成されるのはサイトゾル内である。
【００１２】
ＲＴＫ，ＣＴＫおよびＳＴＫはすべて，病原性状態，特に癌を含む状態のホストであることが示唆されてきた。ＰＴＫと関連づけられてきた他の病原性状態には，限定されないが，乾癬，肝硬変，糖尿病，動脈硬化，新脈管形成，再狭窄，眼性疾患，慢性関節リウマチおよび他の炎症性疾患，自己免疫疾患等の免疫疾患，アテローム性動脈硬化等の心臓血管疾患，および種々の腎臓疾患が含まれる。
【００１３】
癌に関しては，腫瘍の発達を推進する過剰な細胞増殖を説明する主要な仮説の２つは，ＰＫにより制御されることが知られている機能に関連する。すなわち，悪性細胞成長は細胞分裂および／または分化を調節するメカニズムの故障に起因することが示唆されている。多数のプロトオンコジンの蛋白質産物は，細胞成長および分化を制御するシグナル伝達経路に関与することが示されている。これらのプロトオンコジンの蛋白質産物には，上で議論した，細胞外成長因子，貫膜成長因子ＰＴＫレセプター（ＲＴＫ），細胞質ＰＴＫ（ＣＴＫ）およびサイトゾルＳＴＫが含まれる。
【００１４】
ＰＫに関連する細胞活性と広範な種類のヒト疾患との間の見かけ上の連結の観点から，ＰＫ活性を調節する方法を同定しようとする試みに多大な努力が払われていることは驚くべきことではない。例えば，ＰＫ阻害剤として作用する小分子を同定する試みがなされている。例えば，ビス単環，二環およびヘテロ環アリール化合物（ＰＣＴ  ＷＯ９２／２０６４２），ビニレンアザインドール誘導体（ＰＣＴ  ＷＯ９４／１４８０８）および１−シクロプロピル−４−ピリジルキノロン類（米国特許５，３３０，９９２）が，チロシンキナーゼ阻害剤として記載されている。スチリル化合物（米国特許５，２１７，９９９），スチリル置換ピリジル化合物（米国特許５，３０２，６０６），キナゾリン誘導体（欧州特許出願０５６６２６６Ａ１），セレナインドール類およびセレニド類（ＰＣＴ  ＷＯ９４／０３４２７），三環ポリヒドロキシル化合物（ＰＣＴ  ＷＯ９２／２１６６０）およびベンジルホスホン酸化合物（ＰＣＴ  ＷＯ９１／１５４９５）。さらに，ＰＫ調節能力を示し，異常なＰＫ活性に関連する疾患に対して有益な効果を有する新規ピロール−置換２−インドリノン化合物のファミリーが発見されている（米国特許Ｎｏ．５，７９２，７８３およびＰＣＴ／ＷＯ９９／６１４２２）。種々の化学種のピロール−置換２−インドリノン化合物の投与は，多くの種類の固体腫瘍を治癒させる有効な治療方法であることが示されている。例えば，血管内皮細胞成長因子レセプター（Ｆｌｋ−１／ＫＤＲ）の非常に活性な選択的阻害剤である３−（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンは，チロシンキナーゼの触媒活性，腫瘍脈管形成，および多くのタイプの腫瘍の成長を阻害する（Ｆｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５９：９９−１０６）。しかし，これらの化合物は，非常に親油性であり，生理学的ｐＨにおいて水および最も一般的なベヒクルに対する溶解性が低いため，その処方，したがってその投与が制限されている。
【００１５】
したがって，そのような欠点を示さないＰＫ阻害剤が必要とされている。本発明はこの必要性および関連する必要性を満たすものである。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１６】
１つの観点においては，本発明は，経口または非経口投与用の医薬製剤に関し，該製剤は，治療上有効量の式（Ｉ），（ＩＩ），（ＩＩＩ），または（ＩＶ）：
【化１４】
2005514368.tif 000002
［式中，
Ｒ2は水素であり；
Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，トリハロメタン−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，アミノおよび−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，カルボニル，アセチル，スルホニル，およびトリフルオロメタンスルホニルからなる群より選択されるか，またはＲ11およびＲ12は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，５員または６員のヘテロ脂環式環を形成する）からなる群より選択され，ただし，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6の少なくとも２つは水素であり；または
Ｒ3およびＲ4，Ｒ4およびＲ5，またはＲ5およびＲ6は，一緒になって，６員のアリール環，メチレンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成し；
Ｒ7は，水素，アルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，カルボニル，アセチル，Ｃ−アミド，Ｃ−チオアミド，アミジノ，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，スルホニルおよびトリハロメタン−スルホニルからなる群より選択され；
Ｒ8，Ｒ9およびＲ10は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，アミノ，−（ａｌｋ1）Ｚ（式中，ａｌｋ1は，アルキル，アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され，Ｚは，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシ，ニトロ，シアノ，アミノ，グアニジノ，アミド，ウレイド，スルホンアミド，スルフィニル，スルホニル，ホスホネート，モルホリノ，ピペラジニルまたはテトラゾリルである）および−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は上で定義したとおりである）からなる群より選択され；
Ｒ1'は水素またはアルキルであり；
Ｒ2'は，水素，アルキル，アラルキル，アシル，または−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ’）であり；
Ｒ3'およびＲ4'は，独立して，アルキルであるか，またはＲ3'およびＲ4'は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，ヘテロ脂環式環またはヘテロアリール環を形成し；
Ｒ5'はアルキルであり；
ＲおよびＲ’は，独立して，水素，アルキル，アラルキルおよびアリールからなる群より選択され；および
ＲaおよびＲbは，独立して，水素またはアルキルから選択される］
の化合物またはその薬学的に許容しうる塩；
少なくとも１つの薬学的に許容しうる錯化剤または界面活性剤；および
薬学的に許容しうる希釈剤
を含む。
【００１７】
第２の観点においては，本発明は，経口または非経口投与用の医薬製剤に関し，該製剤は，治療上有効量の式（ＩＩ）：
【化１５】
2005514368.tif 000003
［式中，
Ｒ2は水素であり；
Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，トリハロメタン−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，アミノおよび−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，カルボニル，アセチル，スルホニル，およびトリフルオロメタンスルホニルからなる群より選択されるか，またはＲ11およびＲ12は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，５員または６員のヘテロ脂環式環を形成する）からなる群より選択され，ただし，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6の少なくとも２つは水素であり；または
Ｒ3およびＲ4，Ｒ4およびＲ5，またはＲ5およびＲ6は，一緒になって６員のアリール環，メチレンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成し；
Ｒ7は，水素，アルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，カルボニル，アセチル，Ｃ−アミド，Ｃ−チオアミド，アミジノ，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，スルホニルおよびトリハロメタン−スルホニルからなる群より選択され；
Ｒ8，Ｒ9およびＲ10は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，アミノ，−（ａｌｋ1）Ｚ（式中，ａｌｋ1は，アルキル，アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され，Ｚは，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシ，ニトロ，シアノ，アミノ，グアニジノ，アミド，ウレイド，スルホンアミド，スルフィニル，スルホニル，ホスホネート，モルホリノ，ピペラジニルまたはテトラゾリルである）および−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は上で定義したとおりである）からなる群より選択され；
Ｒ1'は水素またはアルキルであり；
Ｒ3'およびＲ4'は，独立して，アルキルであるか，またはＲ3'およびＲ4'は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，ヘテロ脂環式環またはヘテロアリール環を形成し，ただし，ヘテロ脂環式環はピペリジン−１−イルまたはモルホリン−４−イルではない］
の化合物またはその薬学的に許容しうる塩；
少なくとも１つの薬学的に許容しうる錯化剤または界面活性剤；および
薬学的に許容しうる希釈剤，
を含む。
【００１８】
上述の２つの医薬製剤は，非経口または経口投与に適しており，薬学的に許容しうる酸または塩基のそれぞれの少なくとも１またはそれ以上；ポリオキシヒドロカルビル化合物；薬学的に許容しうるアルコール；および少なくとも１つの抗酸化剤をさらに含むことができ；または少なくとも１つの薬学的に許容しうる酸または塩基と少なくとも１つの抗酸化剤との組み合わせをさらに含むことができる。
【００１９】
好ましい態様においては，：
（ａ）酸としては，メタンスルホン酸，クエン酸，酒石酸および乳酸が挙げられ；
（ｂ）錯化剤はシクロデキストリンであり；好ましい態様においては，錯化剤としては，スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンおよび／またはヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリンが挙げられ；
（ｃ）界面活性剤としては，ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル，グリセリルモノオレエート，ポリビニルアルコール，エチレンオキシドコポリマー，ポリオール成分，ソルビタンエステル，およびエトキシ化ひまし油が挙げられ；好ましい態様においては，ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルとしてはＰＯＬＹＳＯＲＢＡＴＥ  ８０が挙げられ，エトキシ化ひまし油としてはポリオキシル３５ひまし油が挙げられ；
（ｄ）ポリオキシヒドロカルビル化合物としては，水溶性炭水化物，水溶性炭水化物誘導体，水溶性ポリマー，水溶性混合オキシアルキレンポリマー，および高分子型のエチレングリコール，またはこれらの混合物が挙げられ；好ましい態様においては，ポリオキシヒドロカルビル化合物としては，ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ），ＰＥＧ誘導体，マンニトール，ラクトースおよびショ糖が挙げられ；
（ｅ）アルコールとしては，エタノール，ベンジルアルコール，プロピレングリコール，２−（２−エトキシエトキシ）エタノール，およびグリセロール，またはこれらの混合物が挙げられ；好ましい態様においては，アルコールとしては，エタノール，ベンジルアルコール，またはこれらの混合物が挙げられ；
（ｆ）抗酸化剤としては，メタ重亜硫酸ナトリウム，亜硫酸水素ナトリウム，システイン，およびメチオニン，またはこれらの混合物が挙げられ；および
（ｇ）希釈剤としては，水または緩衝液が挙げられ；好ましい態様においては，緩衝液としては，乳酸塩，クエン酸塩，酢酸塩，コハク酸塩，またはリン酸塩緩衝液が挙げられる。
【００２０】
好ましい態様においては，第２の観点の医薬組成物は，式：
【化１６】
2005514368.tif 000004
の化合物を含む。
【００２１】
第３の観点においては，本発明は，非経口投与用の医薬製剤に関し，該製剤は，約０．１−約２０ｍｇ／ｍｌの式（ＩＩ）：
【化１７】
2005514368.tif 000005
［式中，
Ｒ2は水素であり；
Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，トリハロメタン−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，アミノおよび−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，カルボニル，アセチル，スルホニル，およびトリフルオロメタンスルホニルからなる群より選択されるか，またはＲ11およびＲ12は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，５員または６員のヘテロ脂環式環を形成する）からなる群より選択され，ただし，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6の少なくとも２つは水素であり；または
Ｒ3およびＲ4，Ｒ4およびＲ5，またはＲ5およびＲ6は，一緒になって６員のアリール環，メチレンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成し；
Ｒ7は，水素，アルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，カルボニル，アセチル，Ｃ−アミド，Ｃ−チオアミド，アミジノ，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，スルホニルおよびトリハロメタン−スルホニルからなる群より選択され；
Ｒ8，Ｒ9およびＲ10は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，アミノ，−（ａｌｋ1）Ｚ（式中，ａｌｋ1は，アルキル，アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され，Ｚは，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシ，ニトロ，シアノ，アミノ，グアニジノ，アミド，ウレイド，スルホンアミド，スルフィニル，スルホニル，ホスホネート，モルホリノ，ピペラジニルまたはテトラゾリルである）および−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は上で定義したとおりである）からなる群より選択され；
Ｒ1'は水素またはアルキルであり；
Ｒ3'およびＲ4'は，独立して，アルキルであるか，またはＲ3'およびＲ4'は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，ヘテロ脂環式環またはヘテロアリール環を形成し，ただし，ヘテロ脂環式環はピペリジン−１−イルまたはモルホリン−４−イルではない］
の化合物またはその薬学的に許容しうる塩；
約０．５−約４００ｍｇ／ｍｌの少なくとも１つの薬学的に許容しうる錯化剤または０．５ｍｇ／ｍｌ−約２０ｍｇ／ｍｌの界面活性剤；
式（ＩＩ）の化合物の約１−約３０倍のモル比の量の少なくとも１つの薬学的に許容しうる酸；
０−約２００ｍｇ／ｍｌの少なくとも１つのポリオキシヒドロカルビル化合物；および
医薬組成物が約１．５−約５のｐＨを有するのに十分な水および／または薬学的に許容しうる緩衝液，
を含む。
【００２２】
好ましい態様においては，第３の観点の医薬製剤は以下のものを含む：
約０．５−約８ｍｇ／ｍｌの式：
【化１８】
2005514368.tif 000006
の化合物；
約２．５−約１６０ｍｇ／ｍｌの，スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンおよびヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリンからなる群より選択される薬学的に許容しうる錯化剤；
上述の式の化合物の約１−約２０倍のモル比の量の薬学的に許容しうる酸であって，メタンスルホン酸，乳酸，クエン酸，酒石酸，およびコハク酸からなる群より選択される酸；
０−約１５ｍｇ／ｍｌの，メタ重亜硫酸ナトリウム，亜硫酸水素ナトリウム，システイン，およびメチオニンからなる群より選択される抗酸化剤；および
医薬組成物が約１．５−約５のｐＨを有するのに十分な水および／または乳酸塩，クエン酸塩，または酢酸塩からなる群より選択される薬学的に許容しうる緩衝液。
【００２３】
好ましい態様においては，第３の観点の医薬製剤は以下のものを含む：
約０．５−約３ｍｇ／ｍｌの式：
【化１９】
2005514368.tif 000007
の化合物；
約２．５−約６０ｍｇ／ｍｌの，スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンからなる群より選択される薬学的に許容しうる錯化剤；
上述の式の化合物の約１−２０倍のモル比の量の薬学的に許容しうる酸であって，メタンスルホン酸または乳酸からなる群より選択される酸；
０．０５−約１ｍｇ／ｍｌの，メタ重亜硫酸ナトリウムからなる群より選択される抗酸化剤；および
医薬組成物が約２．５−３．５のｐＨを有するのに十分な水および／または乳酸塩，クエン酸塩，または酢酸塩である薬学的に許容しうる緩衝液。
【００２４】
第４の観点においては，本発明は，第１の観点の医薬組成物を患者に投与することを含む，治療を必要とする患者において癌を治療する方法に関する。
【００２５】
第５の観点においては，本発明は，凍結乾燥製剤に関し，該製剤は，治療上有効量の式（Ｉ），（ＩＩ），（ＩＩＩ），または（ＩＶ）：
【化２０】
2005514368.tif 000008
［式中，
Ｒ2は水素であり；
Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，トリハロメタン−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，アミノおよび−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，カルボニル，アセチル，スルホニル，およびトリフルオロメタンスルホニルからなる群より選択されるか，またはＲ11およびＲ12は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，５員または６員のヘテロ脂環式環を形成する）からなる群より選択され，ただし，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6の少なくとも２つは水素であり；または
Ｒ3およびＲ4，Ｒ4およびＲ5，またはＲ5およびＲ6は，一緒になって，６員のアリール環，メチレンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成し；
Ｒ7は，水素，アルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，カルボニル，アセチル，Ｃ−アミド，Ｃ−チオアミド，アミジノ，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，スルホニルおよびトリハロメタン−スルホニルからなる群より選択され；
Ｒ8，Ｒ9およびＲ10は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，アミノ，−（ａｌｋ1）Ｚ（式中，ａｌｋ1は，アルキル，アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され，Ｚは，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシ，ニトロ，シアノ，アミノ，グアニジノ，アミド，ウレイド，スルホンアミド，スルフィニル，スルホニル，ホスホネート，モルホリノ，ピペラジニルまたはテトラゾリルである）および−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は上で定義したとおりである）からなる群より選択され；
Ｒ1'は水素またはアルキルであり；
Ｒ2'は，水素，アルキル，アラルキル，アシル，または−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ’）であり；
Ｒ3'およびＲ4'は，独立して，アルキルであるか，またはＲ3'およびＲ4'は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，ヘテロ脂環式環またはヘテロアリール環を形成し；
Ｒ5'はアルキルであり；
ＲおよびＲ’は，独立して，水素，アルキル，アラルキルおよびアリールからなる群より選択され；および
ＲaおよびＲbは独立して，水素またはアルキルから選択される］
の化合物またはその薬学的に許容しうる塩；および
少なくとも１つの薬学的に許容しうる錯化剤または界面活性剤を含む。
【００２６】
第６の観点においては，本発明は，経口または非経口投与用の凍結乾燥医薬製剤に関し，該製剤は，治療上有効量の式（ＩＩ）：
【化２１】
2005514368.tif 000009
［式中，
Ｒ2は水素であり；
Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，トリハロメタン−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，アミノおよび−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，カルボニル，アセチル，スルホニル，およびトリフルオロメタンスルホニルからなる群より選択されるか，またはＲ11およびＲ12は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，５員または６員のヘテロ脂環式環を形成する）からなる群より選択され，ただし，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6の少なくとも２つは水素であり；または
Ｒ3およびＲ4，Ｒ4およびＲ5，またはＲ5およびＲ6は，一緒になって６員のアリール環，メチレンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成し；
Ｒ7は，水素，アルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，カルボニル，アセチル，Ｃ−アミド，Ｃ−チオアミド，アミジノ，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，スルホニルおよびトリハロメタン−スルホニルからなる群より選択され；
Ｒ8，Ｒ9およびＲ10は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，アミノ，−（ａｌｋ1）Ｚ（式中，ａｌｋ1は，アルキル，アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され，Ｚは，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシ，ニトロ，シアノ，アミノ，グアニジノ，アミド，ウレイド，スルホンアミド，スルフィニル，スルホニル，ホスホネート，モルホリノ，ピペラジニルまたはテトラゾリルである）および−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は上で定義したとおりである）からなる群より選択され；
Ｒ1'は水素またはアルキルであり；
Ｒ3'およびＲ4'は，独立して，アルキルであるか，またはＲ3'およびＲ4'は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，ヘテロ脂環式環またはヘテロアリール環を形成し，ただし，ヘテロ脂環式環はピペリジン−１−イルまたはモルホリン−４−イルではない］
の化合物またはその薬学的に許容しうる塩；および
少なくとも１つの薬学的に許容しうる錯化剤または界面活性剤を含む。
【００２７】
第５および第６の観点の医薬製剤は，薬学的に許容しうる酸または塩基のそれぞれの少なくとも１またはそれ以上；ポリオキシヒドロカルビル化合物；および抗酸化剤をさらに含むことができ；または，少なくとも１つの薬学的に許容しうる酸または塩基と少なくとも１つの抗酸化剤との組み合わせをさらに含むことができる。さらに，生成物は，凍結乾燥する前に，アルコールおよび／または少なくとも１つの希釈剤をさらに含むことも企図される。
【００２８】
好ましい態様においては，：
（ａ）酸としてはメタンスルホン酸および乳酸が挙げられ；
（ｂ）錯化剤はシクロデキストリンであり；好ましい態様においては，錯化剤としては，スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンおよびヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリンが挙げられ；
（ｃ）界面活性剤としては，ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル，グリセリルモノオレエート，ポリビニルアルコール，エチレンオキシドコポリマー，ポリオール成分，ソルビタンエステル，およびエトキシ化ひまし油が挙げられ；好ましい態様においては，ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルとしてはＰＯＬＹＳＯＲＢＡＴＥ  ８０が挙げられ，およびエトキシ化ひまし油としてはポリオキシル３５ひまし油が挙げられ；
（ｄ）ポリオキシヒドロカルビル化合物としては，水溶性炭水化物，水溶性炭水化物誘導体，水溶性ポリマー，水溶性混合オキシアルキレンポリマー，および高分子型のエチレングリコール，またはこれらの混合物が挙げられ；好ましい態様においては，ポリオキシヒドロカルビル化合物としては，ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ），ＰＥＧ誘導体，マンニトール，ラクトースおよびショ糖が挙げられ；
（ｅ）抗酸化剤としては，メタ重亜硫酸ナトリウム，亜硫酸水素ナトリウム，システイン，およびメチオニン，またはこれらの混合物が挙げられ；
（ｆ）アルコールとしては，エタノール，ベンジルアルコール，プロピレングリコール，２−（２−エトキシエトキシ）エタノール，およびグリセロール，またはこれらの混合物が挙げられ；好ましい態様においては，アルコールとしては，エタノール，ベンジルアルコール，またはこれらの混合物が挙げられ；および
（ｇ）希釈剤としては，水または緩衝液が挙げられ；好ましい態様においては，緩衝液としては，乳酸塩，クエン酸塩，酢酸塩，コハク酸塩，またはリン酸塩緩衝液が挙げられる。
【００２９】
好ましい態様においては，第６の観点の医薬組成物は，式：
【化２２】
2005514368.tif 000010
の化合物を含む。
【００３０】
第７の観点においては，本発明は，約１−約４００ｍｇ／バイアルの式（ＩＩ）：
【化２３】
2005514368.tif 000011
［式中，
Ｒ2は水素であり；
Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，トリハロメタン−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，アミノおよび−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，カルボニル，アセチル，スルホニル，およびトリフルオロメタンスルホニルからなる群より選択されるか，またはＲ11およびＲ12は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，５員または６員のヘテロ脂環式環を形成する）からなる群より選択され，ただし，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6の少なくとも２つは水素であり；または
Ｒ3およびＲ4，Ｒ4およびＲ5，またはＲ5およびＲ6は，一緒になって，６員のアリール環，メチレンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成し；
Ｒ7は，水素，アルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，カルボニル，アセチル，Ｃ−アミド，Ｃ−チオアミド，アミジノ，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，スルホニルおよびトリハロメタン−スルホニルからなる群より選択され；
Ｒ8，Ｒ9およびＲ10は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，アミノ，−（ａｌｋ1）Ｚ（式中，ａｌｋ1は，アルキル，アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され，Ｚは，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシ，ニトロ，シアノ，アミノ，グアニジノ，アミド，ウレイド，スルホンアミド，スルフィニル，スルホニル，ホスホネート，モルホリノ，ピペラジニルまたはテトラゾリルである）および−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は上で定義したとおりである）からなる群より選択され；
Ｒ1'は水素またはアルキルであり；
Ｒ3'およびＲ4'は，独立して，アルキルであるか，またはＲ3'およびＲ4'は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，ヘテロ脂環式環またはヘテロアリール環を形成し，ただし，ヘテロ脂環式環はピペリジン−１−イルまたはモルホリン−４−イルではない］
の化合物またはその薬学的に許容しうる塩；
約５−８０００ｍｇ／バイアルの，少なくとも１つの薬学的に許容しうる錯化剤または５−約４００ｍｇ／バイアルの界面活性剤；
式（ＩＩ）の化合物の約１−約３０倍のモル比の量の少なくとも１つの薬学的に許容しうる酸；および
０−約１０００ｍｇ／バイアルの少なくとも１つのポリオキシヒドロカルビル化合物，
を含む凍結乾燥医薬製剤に関する。
【００３１】
好ましい態様においては，第７の観点の医薬製剤は，以下のものを含む：
約１−３００ｍｇ／バイアルの式：
【化２４】
2005514368.tif 000012
の化合物；
約５−約６０００ｍｇ／バイアルの，スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンおよびヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリンからなる群より選択される薬学的に許容しうる錯化剤；
上述の式の化合物の約１−約２０倍のモル比の量の薬学的に許容しうる酸であって，メタンスルホン酸，乳酸，クエン酸，酒石酸，およびコハク酸からなる群より選択される酸；および
０−約１５０ｍｇ／バイアルの，メタ重亜硫酸ナトリウム，亜硫酸水素ナトリウム，システイン，およびメチオニンからなる群より選択される抗酸化剤。
【００３２】
第８の観点においては，本発明は，
約１−約２００ｍｇ／バイアルの式：
【化２５】
2005514368.tif 000013
の化合物；
約５−約４０００ｍｇ／バイアルの，スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンからなる群より選択される薬学的に許容しうる錯化剤；
上述の式の化合物の約１−２０倍のモル比の量の薬学的に許容しうる酸であって，メタンスルホン酸または乳酸からなる群より選択される酸；および
０−約１５０ｍｇ／バイアルの，メタ重亜硫酸ナトリウムからなる群より選択される抗酸化剤，
を含む凍結乾燥医薬組成物に関する。
【００３３】
第９の観点においては，本発明は，式Ｉ，ＩＩ，ＩＩＩまたはＩＶの化合物を，界面活性剤または錯化剤と混合することを含む，第１の観点の医薬製剤を製造する方法に関する。化合物と界面活性剤または錯化剤とを混合する前に，化合物を薬学的に許容しうる塩に変換することもさらに企図される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３４】
定義
特に記載しない限り，明細書および特許請求の範囲において用いられる以下の用語は，以下に議論される意味を有する。
【００３５】
"アルキル"とは，飽和脂肪族炭化水素を表し，直鎖基および分枝鎖基を含む。好ましくは，アルキル基は，１−２０個の炭素原子を有する（本明細書において数値範囲，例えば"１−２０"と記載される場合，これはその基（この場合はアルキル基）が，１個の炭素原子，２個の炭素原子，３個の炭素原子，以下同様に，２０個までの炭素原子を含んでいてもよいことを意味する）。より好ましくは，アルキルは１−１０個の炭素原子を有する中程度のサイズのアルキルである。より好ましくは，アルキルは１−４個の炭素原子を有する低級アルキル，例えば，メチル，エチル，ｎ−プロピル，イソプロピル，ブチル，イソブチル，ｔｅｒｔ−ブチル等である。アルキル基は置換されていても置換されていなくてもよい。置換されている場合，置換基は，好ましくは，シクロアルキル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，シアノ，ハロ，カルボニル，チオカルボニル，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，ニトロ，シリル，アミノ，アンモニウムおよび−ＮＲ13Ｒ14（ここで，Ｒ13およびＲ14は，独立して，水素，アルキル，未置換アルキル，シクロアルキル，アリール，カルボニル，アセチル，スルホニル，アミノ，およびトリフルオロメタンスルホニルからなる群より選択されるか，またはＲ13およびＲ14は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，５員または６員のヘテロ脂環式環を形成する）からなる群より独立して選択される１またはそれ以上，より好ましくは１または２個の基である。より好ましくは，置換基は，ヒドロキシ，アミノ，または−ＮＲ13Ｒ14であり，ここで，Ｒ13およびＲ14は，独立して，未置換低級アルキル，アミノまたはヒドロキシで置換されている低級アルキルからなる群より選択されるか，またはＲ13およびＲ14は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，ピロリジン，モルホリン，またはピペラジンを形成する。
【００３６】
"シクロアルキル"基は，３−６個の環原子を有し，１またはそれ以上の環は完全に共役したパイ電子系を有しない全炭素単環（すなわち，隣接する炭素原子の対を共有する環）を表し，例えば，シクロプロピル，シクロブチル，シクロペンチル，シクロヘキシル，シクロブテニル，シクロペンテニル，シクロヘキセニル等が挙げられる。シクロアルキル基の例としては，限定されないが，シクロプロパン，シクロブタン，シクロペンタン，シクロペンテン，シクロヘキサン，アダマンタン，シクロヘキサジエン，シクロヘプタンおよび，シクロヘプタトリエンが挙げられる。シクロアルキル基は置換されていても置換されていなくてもよい。置換されている場合，置換基は，好ましくは，アルキル，未置換アルキル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，未置換ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，シアノ，ハロ，カルボニル，チオカルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，ニトロ，アミノおよび−ＮＲ13Ｒ14（ここで，Ｒ13およびＲ14は上で定義したとおりである）から独立して選択される，１またはそれ以上，より好ましくは１または２個の基である。
【００３７】
"アルケニル"基は，少なくとも２つの炭素原子および少なくとも１つの炭素−炭素二重結合から構成される，本明細書において定義されるアルキル基を表し，例えば，エテニル，プロペニル，ブテニルまたはペンテニルおよびその構造異性体，例えば，１−または２−プロペニル，１−，２−，または３−ブテニル等が挙げられる。
【００３８】
"アルキニル"基は，少なくとも２つの炭素原子および少なくとも１つの炭素−炭素三重結合から構成される，本明細書において定義されるアルキル基を表し，例えば，アセチレン，エチニル，プロピニル，ブチニル，またはペンチニルおよび上で記載されるその構造異性体が挙げられる。
【００３９】
"アリール"基は，６−１２個の環原子を有し，完全に共役したパイ電子系を有する，全炭素単環または縮合多環（すなわち，隣接する炭素原子対を共有する環）を表す。アリール基の例としては，限定されないが，フェニル，ナフタレニルおよびアントラセニルが挙げられる。アリール基は置換されていても置換されていなくてもよい。置換されている場合には，置換基は，好ましくは，ハロ，トリハロメチル，アルキル，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，シアノ，ニトロ，カルボニル，チオカルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，スルフィニル，スルホニル，アミノおよび−ＮＲ13Ｒ14（ここで，Ｒ13およびＲ14は上で定義したとおりである）からなる群より独立して選択される，１またはそれ以上，より好ましくは１，２または３個の置換基である。好ましくは，置換基は，クロロ，フルオロ，ブロモ，メチル，エチル，プロピル（すべての異性体を含む），ブチル（すべての異性体を含む），ヒドロキシ，メトキシ，フェノキシ，チオ，メチルチオ，フェニルチオ，シアノ，ニトロ，カルボキシ，メトキシカルボニル，またはアミノから独立して選択される。
【００４０】
"ヘテロアリール"基は，５−９個の環原子を有し，１，２，３または４個の環原子が窒素，酸素およびイオウからなる群より選択され，残りが炭素である，単環または縮合環（すなわち，隣接する１対の原子を共有する複数の環）の芳香族環を表す。ヘテロアリール基の例としては，限定されないが，ピロール，フラン，チオフェン，イミダゾール，オキサゾール，チアゾール，ピラゾール，テトラゾール，ピリジン，ピリミジン，キノリン，イソキノリン，プリンおよびカルバゾールが挙げられる。ヘテロアリール基は，置換されていても置換されていなくてもよい。置換されている場合，置換基は，好ましくは，アルキル，シクロアルキル，ハロ，トリハロメチル，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，シアノ，ニトロ，カルボニル，チオカルボニル，スルホンアミド，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，スルフィニル，スルホニル，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，アミノおよび−ＮＲ13Ｒ14（ここで，Ｒ13およびＲ14は上で定義したとおりである）からなる群より独立して選択される１またはそれ以上，より好ましくは１または２個の置換基である。好ましくは，置換基は，クロロ，フルオロ，ブロモ，メチル，エチル，プロピル（すべての異性体を含む），ブチル（すべての異性体を含む），ヒドロキシ，メトキシ，フェノキシ，チオ，メチルチオ，フェニルチオ，シアノ，ニトロ，カルボキシ，メトキシカルボニル，またはアミノからなる群より独立して選択される。
【００４１】
"ヘテロ脂環式"基は，環中に，窒素，酸素および−Ｓ（Ｏ）n（ｎは０−２である）からなる群より選択される１個，２個または３個の複素原子を含み，残りの環原子が炭素である，４−９個の環原子を有する単環または縮合環を表す。環はさらに１またはそれ以上の二重結合を有していてもよい。しかし，環は完全に共役したパイ電子系を有しない。ヘテロ脂環式基の例としては，限定されないが，ピロリジン，ピペリジン，ピペラジン，モルホリン，イミダゾリジン，テトラヒドロピリダジン，テトラヒドロフラン，チオモルホリン，テトラヒドロピリジン等が挙げられる。ヘテロ脂環式環は，置換されていても置換されていなくてもよい。置換されている場合，置換基は，好ましくは，アルキル，シクロアルキル，ハロ，トリハロメチル，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，シアノ，ニトロ，カルボニル，チオカルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，スルフィニル，スルホニル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，アミノおよび−ＮＲ13Ｒ14（ここでＲ13およびＲ14は上で定義したとおりである）からなる群より独立して選択される１またはそれ以上，より好ましくは１，２または３個の置換基である。好ましくは，置換基は，クロロ，フルオロ，ブロモ，メチル，エチル，プロピル（すべての異性体を含む），ブチル（すべての異性体を含む），ヒドロキシ，メトキシ，フェノキシ，チオ，メチルチオ，フェニルチオ，シアノ，ニトロ，カルボキシ，メトキシカルボニル，またはアミノからなる群より独立して選択される。
【００４２】
"ヒドロキシ"基は，−ＯＨ基を表す。
【００４３】
"アルコキシ"基は，本明細書において定義される，−Ｏ−未置換アルキル，−Ｏ−置換アルキルおよび−Ｏ−未置換シクロアルキル基を表す。例としては，限定されないが，メトキシ，エトキシ，プロポキシ，ブトキシ，シクロプロピルオキシ等が挙げられ，好ましくはメトキシである。
【００４４】
"アリールオキシ"基は，本明細書において定義される−Ｏ−アリールおよび−Ｏ−ヘテロアリール基の両方を表す。例としては，限定されないが，フェノキシ，ナフチルオキシ，ピリジルオキシ，フラニルオキシ等が挙げられる。
【００４５】
"メルカプト"基は，−ＳＨ基を表す。
【００４６】
"アルキルチオ"基は，本明細書において定義されるＳ−アルキルおよび−Ｓ−シクロアルキル基の両方を表す。例としては，限定されないが，メチルチオ，エチルチオ等が挙げられる。
【００４７】
"アリールチオ"基は，本明細書において定義される−Ｓ−アリールおよび−Ｓ−ヘテロアリール基の両方を表す。例としては，限定されないが，フェニルチオ，ナフチルチオ，ピリジルチオ，フラニルチオ等が挙げられる。
【００４８】
"スルフィニル"基は，−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ"基を表し，ここで，Ｒ"は，以下の定義に加えて，ヒドロキシ基であってもよく，例えば，メチルスルフィニル，フェニルスルフィニル等が挙げられる。
【００４９】
"スルホニル"基は，−Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ"基を表し，ここで，Ｒ"は，以下の定義に加えて，ヒドロキシ基であってもよく，例えば，メチルスルホニル，エチルスルホニル，フェニルスルホニル等が挙げられる。
【００５０】
"トリハロメチル"基は，−ＣＸ3基を表し，ここで，Ｘは，本明細書において定義されるハロ基であり，例えば，トリフルオロメチル，トリクロロメチル，トリブロモメチル，ジクロロフルオロメチル等が挙げられる。
【００５１】
"トリハロメタンスルホニル"基は，Ｘ3ＣＳ（＝Ｏ）2−基を表し，ここでＸは上で定義したとおりであり，例えば，トリフルオロメチルスルホニル，トリクロロメチルスルホニル，トリブロモメチルスルホニル等が挙げられる。
【００５２】
"トリハロメタンスルホニルアミド"基は，−ＮＨ−Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ基を表し，ここで，Ｒは上で定義されるトリハロメチルである。
【００５３】
"カルボニル"および"アシル"は，本明細書において互換的に用いられ，−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ"基を表す。ここで，Ｒ"は，本明細書で定義される，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，ヘテロアリール（環炭素を介して結合）およびヘテロ脂環式（環炭素を介して結合）からなる群より選択される。代表例としては，限定されないが，アセチル，プロピオニル，ベンゾイル，ホルミル，シクロプロピルカルボニル，ピリジニルカルボニル，ピロリジン−１−イルカルボニル等が挙げられる。
【００５４】
"アルデヒド"基は，Ｒ"が水素であるカルボニル基を表す。
【００５５】
"チオカルボニル"基は，−Ｃ（＝Ｓ）−Ｒ"基を表し，ここで，Ｒ"は本明細書において定義されるとおりである。
【００５６】
"Ｃ−カルボキシ"基は，−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ"基を表し，ここで，Ｒ"は本明細書において定義されるとおりであり，例えば，−ＣＯＯＨ，メトキシカルボニル，エトキシカルボニル，ベンジルオキシカルボニル等が挙げられる。
【００５７】
"Ｏ−カルボキシ"基は，−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ"基を表し，ここで，Ｒ"は本明細書において定義されるとおりであり，例えば，メチルカルボニルオキシ，フェニルカルボニルオキシ，ベンジルカルボニルオキシ等が挙げられる。
【００５８】
"エステル"基は，−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ"基を表し（Ｒ"は上で定義したとおりであるがただしＲ"は水素ではありえない），例えば，メトキシカルボニル，ベンジルオキシカルボニル等が挙げられる。
【００５９】
"アセチル"基は，−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ3基を表す。
【００６０】
"カルボン酸"基は，Ｒ"が水素であるＣ−カルボキシ基を表す。
【００６１】
"ハロ"基は，フッ素，塩素，臭素またはヨウ素を表す。
【００６２】
"シアノ"基は−Ｃ≡Ｎ基を表す。
【００６３】
"ニトロ"基は，−ＮＯ2基を表す。
【００６４】
"メチレンジオキシ"基は，−ＯＣＨ2Ｏ−基を表し，ここで２つの酸素原子は隣接する炭素原子と結合している。
【００６５】
"エチレンジオキシ"基は，−ＯＣＨ2ＣＨ2Ｏ−を表し，ここで２つの酸素原子は隣接する炭素原子と結合している。
【００６６】
"Ｓ−スルホンアミド"基は，−Ｓ（＝Ｏ）2ＮＲ13Ｒ14基を表し，Ｒ13およびＲ14は本明細書において定義されるとおりである。代表例としては，限定されないが，ジメチルアミノスルホニル，アミノスルホニル，フェニルメチルアミノスルホニル，フェニルアミノスルホニル等が挙げられる。
【００６７】
"Ｎ−スルホンアミド"基は，−ＮＲ13Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ14基を表し，Ｒ13およびＲ14は本明細書において定義されるとおりであり，例えば，メチルスルホニルアミノ，エチルスルホニルアミノ，フェニルスルホニルアミノ，ベンジルスルホニルアミノ等が挙げられる。
【００６８】
"Ｏ−カルバミル"基は，−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ13Ｒ14基を表し，Ｒ13およびＲ14は本明細書において定義されるとおりである。
【００６９】
"Ｎ−カルバミル"基は，Ｒ14ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ13−基を表し，Ｒ13およびＲ14は本明細書において定義されるとおりである。
【００７０】
"Ｏ−チオカルバミル"基は，−ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ13Ｒ14基を表し，Ｒ13およびＲ14は本明細書において定義されるとおりである。
【００７１】
"Ｎ−チオカルバミル"基は，Ｒ14ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ13−基を表し，Ｒ13およびＲ14は本明細書において定義されるとおりである。
【００７２】
"アミノ"基は，−ＮＲ13Ｒ14基を表し，ここで，Ｒ13およびＲ14は，独立して，水素または未置換低級アルキルであり，例えば−ＮＨ2，ジメチルアミノ，ジエチルアミノ，エチルアミノ，メチルアミノ等が挙げられる。
【００７３】
"Ｃ−アミド"基は，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ13Ｒ14基を表し，Ｒ13およびＲ14は本明細書において定義されるとおりである。好ましくは，Ｒ13は水素または未置換低級アルキルであり，Ｒ14は，水素，または，ヘテロ脂環式，ヒドロキシまたはアミノで任意に置換されていてもよい低級アルキルである。例えば，Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ13Ｒ14は，アミノカルボニル，ジメチルアミノカルボニル，ジエチルアミノカルボニル，ジエチルアミノエチルアミノカルボニル，エチルアミノエチルアミノカルボニル，２−モルホリノエチルアミノカルボニル，３−モルホリノプロピルアミノカルボニル，３−モルホリノ−２−ヒドロキシプロピルアミノカルボニル等である。
【００７４】
"Ｎ−アミド"基は，Ｒ14Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ13−基を表し，Ｒ13およびＲ14は本明細書において定義されるとおりであり，例えば，アセチルアミノ等である。
【００７５】
"アンモニウム"基は，−+ＮＲ15Ｒ16Ｒ17基を表し，ここで，Ｒ15およびＲ16は，独立して，アルキル，シクロアルキル，アリール，およびヘテロアリールからなる群より選択され，およびＲ17は，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，およびヘテロアリールからなる群より選択される。
【００７６】
"アミジノ"基は，Ｒ15Ｒ16ＮＣ（＝ＮＲ17）−基を表し，ここで，Ｒ15，Ｒ16およびＲ17は本明細書において定義されるとおりである。
【００７７】
"モルホリノ"基は，次の化学構造を有する基を表す：
【化２６】
2005514368.tif 000014
【００７８】
"ピペラジニル"基は，次の化学構造を有する基を表す：
【化２７】
2005514368.tif 000015
【００７９】
"インドリノン"，"２−インドリノン"および"インドリン−２−オン"との用語は，化学構造：
【化２８】
2005514368.tif 000016
を有する分子を表すために本明細書において互換的に用いられる。
【００８０】
"ピロール"とは，化学構造：
【化２９】
2005514368.tif 000017
を有する分子を表す。
【００８１】
"ピロール−置換２−インドリノン"および"３−ピロール−１−イル−２−インドリノン"は，次の式ＩＩ：
【化３０】
2005514368.tif 000018
に示される一般構造を有する化学化合物を表すために本明細書において互換的に用いられる。
【００８２】
"プロドラッグ"とは，インビボで親薬剤に変換される薬剤を表す。プロドラッグは，場合により，親薬剤より投与が容易であるかもしれないため，しばしば有用である。例えば，プロドラッグは経口投与により生物学的に利用可能であるが，親薬剤はそうではない。プロドラッグはまた，親薬剤よりも医薬組成物中で改良された溶解性を有するかもしれない。プロドラッグは，酵素的方法および代謝的加水分解等の種々のメカニズムにより，親薬剤に変換される（以下の文献を参照されたい：Ｈａｒｐｅｒ，"Ｄｒｕｇ  Ｌａｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ"，Ｊｕｃｋｅｒ，ｅｄ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４：２２１−２９４（１９６２）；Ｍｏｒｏｚｏｗｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，"Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｃａｌ  有機  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｔｏ  Ｐｒｏｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ"，Ｅ．Ｂ．Ｒｏｃｈｅ，ｅｄ．Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｔｈｏｕｇｈ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｓ，ＡＰＨＡ  Ａｃａｄ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．（１９７７）；Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ，Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，Ｔｈｅｏｒｙ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｅ．Ｂ．Ｒｏｃｈｅ，ｅｄ．，ＡＰＨＡ  Ａｃａｄ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．（１９８７）；Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（１９８５）；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．"Ｐｒｏｄｒｕｇ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｄｒｕｇ"，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓｉｇｎ．５（４）：２６５−２８７（１９９９）；Ｐａｕｌｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ  ｉｎ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ：Ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｄｒｕｇ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．２７：２３５−２５６；Ｍｉｚｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）"Ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｅｓｔｅｒｓａｓ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｆｏｒ  Ｏｒａｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  β−Ｌａｃｔａｍ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，"Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１１，：３４５−３６５；Ｇａｉｇｎａｕｌｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）"Ｄｅｓｉｇｎｉｎｇ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ  Ｉ．Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，"Ｐｒａｃｔ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．６７１−６９６；Ａｓｇｈａｒｎｅｊａｄ，"Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ  Ｏｒａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ"，Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｇ．Ｌ．Ａｍｉｄｏｎ，Ｐ．Ｉ．Ｌｅｅ  ａｎｄ  Ｅ．Ｍ．Ｔｏｐｐ，Ｅｄｓ．，Ｍａｒｃｅｌｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ｐ．１８５−２１８（２０００）；Ｂａｌａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，"Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｖｉａ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｒｏｕｔｅｓ  ｏｆ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ"，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．，１５（２）：１４３−５３（１９���０）；Ｂａｌｉｍａｎｅ  ａｎｄ  Ｓｉｎｋｏ，"Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｏｒａｌ  ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ"，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．，３９（１−３）：１８３−２０９（１９９９）；Ｂｒｏｗｎｅ，"Ｆｏｓｐｈｅｎｙｔｏｉｎ（Ｃｅｒｅｂｙｘ）"，Ｃｌｉｎ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０（１）：１−１２（１９９７）；Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，"Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｒｕｇｓ−ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ｉｍｐｒｏｖｅ  ｔｈｅ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｄｒｕｇｓ"，Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍ．Ｃｈｅｍｉ  ８６（１）：１−３９（１９７９）；Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ｈ．"Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｐｒｏｄｒｕｇ  ａｐｐｒｏａｃｈ"，Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  １７：１７９−９６（１９８７）；Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ｈ．"Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ａｓ  ａ  ｍｅａｎｓ  ｔｏ  ｉｍｐｒｏｖｅ  ｔｈｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｄｒｕｇｓ"，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．８（１）：１−３８（１９９２）；Ｆｌｅｉｓｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．"Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｏｒａｌ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ：ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ  ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ  ｏｖｅｒｃｏｍｅ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｐｒｏｄｒｕｇｓ"，Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＲｅｖ．１９（２）：１１５−１３０（１９９６）；Ｆｌｅｉｓｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．"Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｆｏｒ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｂｙ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｅｎｚｙｍｅ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ"，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１１２（Ｄｒｕｇ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ，Ｐｔ．Ａ）：３６０−８１，（１９８５）；Ｆａｒｑｕｈａｒ，Ｄ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  Ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ"，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，７２（３）：３２４−３２５（１９８３）；Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｓ，ｅｔ  ａｌ．，"Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｐｈｏｓｐｈｏ  Ｇｒｏｕｐ：Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｉ−（４−ａｃｅｔｏｘｙ−ｂｅｎｚｙｌ）ｍｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ  ｗｉｔｈ  Ｃａｒｂｏｘｙｅｓｔｅｒａｓｅ，"Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｎｏｃ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，８７５−８７７（１９９１）；Ｆｒｉｉｓ  ａｎｄ  Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，"Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ  ａｎｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ：Ｎｏｖｅｌ  ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ  ａｌｐｈａ−ａｃｙｌｏｘｙａｌｋｙｌｅｓｔｅｒ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−  ｏｒ  ｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｄｒｕｇｓ  ｍａｓｋｉｎｇ  ｔｈｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｃｈａｒｇｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅｓｅ  ｇｒｏｕｐｓ"，Ｅｕｒ．Ｊ；Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．４：４９−５９（１９９６）；Ｇａｎｇｗａｒ  ｅｔ  ａｌ．，"Ｐｒｏ−ｄｒｕｇ，ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ"，Ｄｅｓ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．Ｐｒｏｐ．Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  Ａｎａｌｏｇｓ，［Ｓｙｍｐ．］Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｄａｔｅ  １９７６，４０９−２１．（１９７７）；Ｎａｔｈｗａｎｉ  ａｎｄ  Ｗｏｏｄ，"Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎｓ：ａ  ｃｕｒｒｅｎｔ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｔｈｅｉｒ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｕｓｅ"，Ｄｒｕｇｓ  ４５（６）：８６６−９４（１９９３）；Ｓｉｎｈａｂａｂｕ  ａｎｄ  Ｔｈａｋｋｅｒ，"Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ａｇｅｎｔｓ"，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．１９（２）：２４１−２７３（１９９６）；Ｓｔｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，"Ｐｒｏｄｒｕｇｓ．Ｄｏ  ｔｈｅｙ  ｈａｖｅ  ａｄｖａｎｔａｇｅｓ  ｉｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｒａｃｔｉｃｅ？"，Ｄｒｕｇｓ  ２９（５）：４５５−７３（１９８５）；Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．"Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ＨＩＶ  ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  ａｎａｌｏｇｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｄｒｕｇｓ：Ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｔｈｅｉｒ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ"，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．３９（１−３）：１１７−１５１（１９９９）；Ｔａｙｌｏｒ，"Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｐａｓｓｉｖｅ  ｏｒａｌ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｖｉａ  ｐｒｏｄｒｕｇｓ"，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．，１９（２）：１３１−１４８（１９９６）；Ｖａｌｅｎｔｉｎｏ  ａｎｄ  Ｂｏｒｃｈａｒｄｔ，"Ｐｒｏｄｒｕｇ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｔｏ  ｅｎｈａｎｃｅ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ"，Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ  ２（４）：１４８−１５５（１９９７）；Ｗｉｅｂｅ  ａｎｄ  Ｋｎａｕｓ，"Ｃｏｎｃｅｐｔｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ＨＩＶ  ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｆｏｒ  ｔｒｅａｔｉｎｇ  ｃｅｐｈａｌｉｃ  ＨＩＶ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ"，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．：３９（１−３）：６３−８０（１９９９）；Ｗａｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，"Ｐｒｏｄｒｕｇｓ"，Ｂｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃ．２８：４９７−５０７（１９８９））。
【００８３】
本発明の化合物は，１またはそれ以上の不斉中心を有するかもしれない。したがって，そのような化合物は，出発物質の個々の立体異性体または立体異性体の混合物が用いられるか否かにより，個々の立体異性体として，またはそれらの混合物として製造することができる。特に記載しない限り，特定の化合物の記述または命名は，個々のエナンチオマーおよびその混合物（ラセミまたはそれ以外）の両方を含むことが意図される。立体異性体の立体化学の決定および分離の方法は当該技術分野においてよく知られている（"Ａｄｖａｎｃｅｄ  有機  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ"，４ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ  Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９９２の第４節の考察を参照）。
【００８４】
本明細書に記載される化学式は，互変異性および構造的異性の現象を示すかもしれない。例えば，本明細書に記載される化合物は，２−インドリノン成分をピロール成分につなぐ二重結合のまわりにＥまたはＺコンフィギュレーションをとることができるか，またはＥおよびＺの混合物でありうる。本発明は，すべての互変異性および構造的異性型およびそれらの混合物を包含する。
【００８５】
"方法"とは，所与の作業を遂行するための様式，手段，技術，および手順を表し，限定されないが，化学，薬理学，生物学，生化学，および医学的技術の従業者には周知の，あるいは該従業者によって既知の様式，手段，技術，および手順から容易に開発される様式，手段，技術，および手順を含む。
【００８６】
本明細書において用いる場合，"調節"または"調節する"との用語は，ＲＴＫ，ＣＴＫおよびＳＴＫの触媒活性が変化することを表す。特に，調節するとはＲＴＫ，ＣＴＫおよびＳＴＫの触媒活性が活性化されることを表し，好ましくは，ＲＴＫ，ＣＴＫまたはＳＴＫが暴露される化合物または塩の濃度に依存してＲＴＫ，ＣＴＫおよびＳＴＫの触媒活性が活性化または阻害され，またはより好ましくは，ＲＴＫ，ＣＴＫおよびＳＴＫの触媒活性が阻害されることを表す。
【００８７】
本明細書において用いる場合，"触媒活性"との用語は，ＲＴＫおよび／またはＣＴＫの直接的または間接的な影響下におけるチロシンのリン酸化の速度，またはＳＴＫの直接的または間接的な影響下におけるセリンおよびトレオニンのリン酸化の速度を表す。
【００８８】
本明細書において用いる場合，"接触させる"との用語は，本発明の化合物と標的ＰＫとを，当該化合物がＰＫの触媒活性を直接に，すなわちキナーゼ自体と相互作用することによるか，または間接に，すなわち当該キナーゼの触媒活性が依存している別の分子と相互作用することにより，影響することが可能な様式で一緒に合わせることを表す。このような"接触させる"ことは，インビトロで，すなわち試験管，ペトリ皿等において行うことができる。試験管内では，接触させることは，化合物と目的とするＰＫのみが関与してもよく，あるいは全細胞が関与してもよい。細胞は培養皿中で維持または成長させ，その環境において化合物と接触させることができる。この文脈においては，特定の化合物がＰＫ関連疾患に影響を及ぼす能力，すなわち当該化合物のＩＣ50（以下に定義される）を，より複雑な生体を用いてのインビボでの使用を試みる前に測定することが可能である。生体の外の細胞については，ＰＫを当該化合物と接触させるための多様な方法が存在し，かつ当業者には周知であり，例えば，限定されないが，直接の細胞マイクロインジェクションおよび多数の貫膜担体技術を含む。
【００８９】
"インビトロ"とは，人工的環境，例えば，限定されないが，試験管または培養培地中で行われる手順を表す。当業者は，例えば，単離されたＰＫをインビトロ環境中で調節剤と接触させることができることを理解するであろう。あるいは，単離された細胞をインビトロ環境中で調節剤と接触させることができる。
【００９０】
本明細書において用いる場合，"インビボ"とは，生きている生物，例えば，限定されないが，マウス，ラット，ウサギ，有蹄動物，ウシ，ウマ，ブタ，イヌ，ネコ，霊長類，またはヒトの中で行われる手順を表す。
【００９１】
本明細書において用いる場合，"ＰＫ関連疾患"，"ＰＫ推進性疾患"，および"異常なＰＫ活性"とは，すべて不適切な，すなわち不完全な，あるいはより一般的には過剰な，ＰＫ触媒活性によって特徴づけられる状態を表し，ここで特定のＰＫはＲＴＫ，ＣＴＫ，またはＳＴＫでありうる。不適切な触媒活性は；（１）正常にはＰＫを発現しない細胞におけるＰＫの発現，（２）望ましくない細胞増殖，分化および／または成長に導くＰＫ発現の増加，または（３）細胞増殖，分化および／または成長の望ましくない減少に導くＰＫ発現の減少，のいずれかの結果として生じることができる。ＰＫの過剰な活性は，細胞増殖，分化および／または成長と相関しうる，特定のＰＫをコードしている遺伝子の増幅またはあるレベルのＰＫ活性の産生を表す（すなわち，ＰＫのレベルが増加すると，細胞性障害による１またはそれ以上の症状の激しさが増す）。低い活性は，もちろんその逆であり，ＰＫ活性のレベルが低下すると，細胞性障害による１またはそれ以上の症状の激しさが増加する。
【００９２】
"生物"との用語は少なくとも１つの細胞からなる任意の生きているものを表す。生物は，１つの真核生物細胞程度の単純なものであってもよく，ヒトを含む哺乳動物等の複雑なものであってもよい。
【００９３】
本明細書において用いる場合，"治療上有効量"との用語は，治療される疾患の１またはそれ以上の症状をある程度緩和するであろう，投与される化合物の量を表す。癌の治療に関しては，治療上有効量は，（１）腫瘍の大きさを減少させる，（２）腫瘍の転移を阻害する（すなわち速度をある程度減じる，好ましくは停止する），（３）腫瘍の成長をある程度阻害する（すなわち速度をある程度減じる，好ましくは停止する），および／または（４）癌に関連した１またはそれ以上の症状をある程度緩和する（または，好ましくは除去する）という効果を有する量を表す。
【００９４】
"薬学的に許容しうる塩"とは，遊離塩基の生物学的効力および特性を保持しており，無機または有機酸，例えば，塩酸，臭化水素酸，硫酸，硝酸，リン酸，メタンスルホン酸，エタンスルホン酸，ｐ−トルエンスルホン酸，サリチル酸，リンゴ酸，クエン酸，マレイン酸，コハク酸，酒石酸などとの反応により得られる塩を表す。
【００９５】
"医薬組成物"とは，本明細書に記載される化合物またはその薬学的に許容しうる塩の１またはそれ以上と，他の化学成分，例えば，生理学的に許容しうる担体および賦形剤との混合物を表す。医薬組成物の目的は，化合物の生物への投与を容易にすることである。
【００９６】
"錯化剤"との用語は，溶液中で，または場合によっては固体中で，平衡過程において，本発明の好ましい態様の化合物と包接複合体または配位複合体を形成する物質を表す。
【００９７】
錯化剤の例としては，シクロデキストリン（例えば，α−およびβ−シクロデキストリン），アルキルシクロデキストリン（すなわち，ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン；“アルキル”との用語は上で定義したとおりである），スルホアルキルエーテルシクロデキストリン（例えば，スルホブチルエーテルシクロデキストリン：カプチゾール），ピリドキシン塩酸塩，ニコチンアミド，カフェインが挙げられる。好ましい錯化剤は，スルホアルキルエーテルシクロデキストリンである。最も好ましくは，錯化剤はカプチゾールである。
【００９８】
"界面活性剤"との用語は，疎水性化合物を水性溶液中に可溶化することができる化合物を表す。さらに，本明細書において経口処方に関して用いる場合，"界面活性剤"との用語は，薬学的に許容しうる非イオン性界面活性剤を含む。適当な非イオン性界面活性剤には以下のものが含まれる：
（ａ）ポリオキシエチレンポリプロピレングリコール（例えば，ＰＯＬＯＸＡＭＥＲ６８（ＢＡＳＦ  Ｃｏｒｐ．）またはポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート（ＴＷＥＥＮ  ８０），ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート（ＴＷＥＥＮ  ６０），ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート（ＴＷＥＥＮ  ４０），ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウリレート（ＴＷＥＥＮ  ２０），ＰＯＬＹＳＯＲＢＡＴＥ  ８０（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｆｇ．Ｃｏｒｐ．）等のモノ脂肪酸エステル；
（ｂ）ポリオキシエチレンひまし油誘導体（例えば，ポリオキシエチレングリセロールトリリシノレイン酸またはポリオキシル３５ひまし油（ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ  ＥＬ，ＢＡＳＦ  Ｃｏｒｐ．），ポリオキシエチレングリセロールオキシステアリン酸（ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ  ＲＨ４０（ポリエチレングリコール４０水素化ひまし油）またはＣＲＥＭＯＰＨＯＲ  ＲＨ６０（ポリエチレングリコール６０水素化ひまし油），ＢＡＳＦ  Ｃｏｒｐ．）等））。
【００９９】
非経口処方用は，好ましくは，界面活性剤は薬学的に許容しうる非イオン性界面活性剤である。薬学的に許容しうる好ましい非イオン性界面活性剤には，ＰＯＬＹＳＯＲＢＡＴＥ  ８０および他のポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル，グリセリルモノオレエート，ポリビニルアルコール，エチレンオキシドコポリマー，例えばＰＬＵＲＯＮＩＣ（ポリエーテル；ＢＡＳＦ  Ｃｏｒｐ．）およびＴＥＴＲＯＮＩＣ（ＢＡＳＦ  Ｃｏｒｐ．），ポリオール成分，およびソルビタンエステルが含まれる。最も好ましくは，ＰＯＬＹＳＯＲＢＡＴＥ  ８０またはエトキシ化ひまし油，例えば，ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ  ＥＬ（ＢＡＳＦ  Ｃｏｒｐ．）が処方に用いられる。
【０１００】
本明細書において用いる場合，"エトキシ化ひまし油"との用語は，少なくとも１つの酸素含有成分で修飾されているひまし油を表す。特に，この用語は，少なくとも１つのエトキシル成分（“酸素含有成分”）を含むひまし油を表す。
【０１０１】
"薬学的に許容しうる希釈剤"との用語は，本発明の好ましい態様の化合物の生物学的活性を有害なように変更しない非毒性希釈剤を表す。薬学的に許容しうる希釈剤を加える量は，溶血を回避するのに十分な量であるべきである。薬学的に許容しうる希釈剤の例としては，例えば，ＷＦＩ（注射用水）および等張食塩水を含む溶液が当該技術分野において知られれている。薬学的に許容しうる水性溶液には，０．９％食塩水，０．４５％Ｎ食塩水，ＷＦＩ（注射用水），Ｄ５Ｗ（５％デキストロース／水），およびデキストロース／食塩水溶液（Ｄ２．５Ｗ（すなわち，２．５％デキストロース／水）および０．４５％Ｎ食塩水）が含まれる。あるいは，"薬学的に許容しうる希釈剤"には，処方のｐＨを２．５−１０．５に維持するための緩衝液溶液が含まれる。これらの緩衝液は，乳酸塩，酢酸塩，クエン酸塩，リン酸塩，炭酸塩，トロメタミン，グルタメート，グリシンおよび当該技術分野において知られる他のものから構成されていてもよい。好ましくは，０．９％食塩水等の希釈剤，または乳酸塩，リン酸塩またはトロメタミン緩衝液を用いる。
【０１０２】
薬学的に許容しうる酸または塩基を処方中に含ませてｐＨを調節し，所望の溶解性または安定性を得ることができる。例としては，無機または有機酸，例えば，メタンスルホン酸，乳酸，酒石酸，クエン酸，コハク酸，塩酸，臭化水素酸，硫酸，硝酸，リン酸，エタンスルホン酸，ｐ−トルエンスルホン酸，サリチル酸等，または無機または有機塩基，例えば，水酸化ナトリウム，水酸化カリウム，水酸化アンモニウム，水酸化カルシウム，コリン，ｎ−メチルグルカミン，ジエチルアミン，プロカイン等が挙げられる。好ましくは，メタンスルホン酸または乳酸等の有機酸，および水酸化ナトリウム等の塩基を用いる。
【０１０３】
本明細書において用いる場合，"ポリオキシヒドロカルビル化合物"との用語は，グルコース，ショ糖，マルトトリオース等の水溶性炭水化物，グルコン酸およびマンニトール等の水溶性炭水化物誘導体，セルロース誘導体および多糖類；およびポリビニルピロリドン，ポリ（ビニルアルコール）等の水溶性ポリマー，特に，他のポリオキシアルキレン等のポリエーテル，例えば，ポリ（エチレングリコール），または他の水溶性混合オキシアルキレンポリマー，および高分子型のエチレングリコールを表す。ポリオキシヒドロカルビル化合物は好ましくは，２以上の炭素，酸素，および水素原子を含むが，ある種の分子，例えばポリ（エチレンイミン）もまた含まれる。特に好ましい一群の可溶化ポリオキシヒドロカルビル成分には，ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）およびＰＥＧ誘導体，例えば，ＰＥＧモノメチルエーテルが含まれる。他の適当なＰＥＧ誘導体には，ＰＥＧ−シリコン誘導エーテルが含まれる。これらのポリマーの多くは種々の分子量で市販されている。他のものは，市販の物質から，例えば，アミノ−ＰＥＧ成分をハロアルキルシリルまたはシラン成分にカップリングさせることにより，適宜製造することができる。適当なＰＥＧは，約２００ｇ／ｍｏｌから約２０，０００ｇ／ｍｏｌまたはそれ以上の種々の分子量のものであることができ，より好ましくは，２００ｇ／ｍｏｌ−５，０００ｇ／ｍｏｌ，さらにより好ましくは，２５０ｇ／ｍｏｌ−１，０００ｇ／ｍｏｌ，最も好ましくは，２５０ｇ／ｍｏｌ−５００ｇ／ｍｏｌである。特定の分子量の選択は，選択される特定の疎水性医薬品およびその分子量および疎水性の程度，ならびにその処方が用いられる特定の用途によって異なるであろう。Ｗａｔｅｒ  Ｉｎｓｏｌｕｂｌｅ  Ｄｒｕｇ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ（Ｒｏｎｇ  Ｌｉｕ  ｅｄ．，Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ  Ｐｒｅｓｓ  ２０００）を参照。好ましくは，ＰＥＧ３００または４００等のＰＥＧおよびマンニトール等の糖を用いる。
【０１０４】
本明細書において用いる場合，"薬学的に許容しうるアルコール"との用語は，ほぼ室温（約２０℃）において液体であるアルコールを表す。これらには，プロピレングリコール，エタノール，２−（２−エトキシエトキシ）−エタノール（ＴＲＡＮＳＣＵＴＯＬ，Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ，Ｗｅｓｔｗｏｏｄ，Ｎ．Ｊ．０７６７５），ベンジルアルコール，およびグリセロールが含まれる。好ましくは，エタノール，ベンジルアルコールおよびこれらの組み合わせ等のアルコールを用いる。
【０１０５】
"抗酸化剤"との用語には，親分子を酸化から保護することができる種々の物質が含まれ。例えば，メタ重亜硫酸ナトリウム，亜硫酸水素ナトリウム，亜硫酸ナトリウム，システイン，メチオニン，アスコルビン酸，ＢＨＡ（ブチルヒドロキシアニソール），ＢＨＴ（ブチルヒドロキシトルエン），ビタミンＥ（トコフェロール類），ビタミンＥ  ＰＥＧ１０００スクシネート等が挙げられる。好ましい抗酸化剤には，メタ重亜硫酸ナトリウム，亜硫酸水素ナトリウム，亜硫酸ナトリウム，システインおよびメチオニンが含まれる。抗酸化剤により防止される酸化の種類には，限定されないが，親分子のアルキルまたはアリール基の酸化が含まれる。
【０１０６】
本明細書において用いる場合，"薬学的に許容しうる"または"薬学的"との用語は，治療効果を発揮することを妨害せず，許容しえない有害な副作用を引き起こさない溶液または処方の成分を表す。薬学的に許容しうる試薬の例は，ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ  Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，１９９０年開催）において採択されたＴｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ，Ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，およびＦＤＡ  Ｉｎａｃｔｉｖｅ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｇｕｉｄｅ  １９９０，１９９６（ｔｈｅ  Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎより発行）（いずれも，図面を含めて本明細書の一部としてここに引用する）に提供されている。許容しえない副作用は，種々の疾病により異なる。一般に，疾病がより重篤であれば，より毒性の高い影響が許容されるであろう。種々の疾病についての許容しえない副作用は当該技術分野において知られている。
【０１０７】
疾病を"治療する"または"治療"には，疾病の素因を有するが疾病の症状をまだ経験または示していない動物において疾病が生ずることを防止する（予防的治療），疾病を阻害する（その発達を遅らせるかまたは停止させる），疾病の症状または副作用の軽減を提供する（緩和治療を含む），および疾病を軽減する（疾病の退行を引き起こす）ことが含まれる。癌に関しては，これらの用語は単に，癌に罹患した個体の予測生存率が増加するか，または疾病の１またはそれ以上の症状が軽減することを意味する。
【０１０８】
"モニターする"とは，化合物を特定のＰＫを発現する細胞と接触させる影響を観察または検出することを意味する。観察されるまたは検出される影響は，細胞表現型の変化，ＰＫの触媒活性，またはＰＫと天然の結合パートナーとの相互作用の変化でありうる。そのような影響を観察または検出する手法は当該技術分野においてよく知られている。例えば，ＰＫの触媒活性は，標的分子のリン酸化の速度または量を決定することにより観察することができる。本発明の最後の観点において，上述の影響は，細胞表現型の変化または無変化，前記蛋白質キナーゼの触媒活性の変化または無変化，または前記蛋白質キナーゼと天然の結合パートナーとの相互作用の変化または無変化から選択される。
【０１０９】
"細胞表現型"とは，細胞もしくは組織の外観または細胞もしくは組織の生物学的機能を表す。細胞表現型の例は，限定されないが，細胞サイズ，細胞増殖，細胞分化，細胞生存，アポトーシス，および栄養の取り込みおよび利用である。そのような細胞表現型の特徴は，当該技術分野においてよく知られる手法により容易に測定することができる。
【０１１０】
"天然の結合パートナー"とは，細胞内で特定のＰＫに結合するポリペプチドを表す。天然の結合パートナーは，ＰＫ媒介性シグナル伝達プロセスにおいてシグナルを伝播する役割を果たすことができる。天然の結合パートナーとＰＫとの相互作用の変化は，ＰＫ／天然の結合パートナー複合体の濃度の増加または減少として，およびその結果，ＰＫがシグナル伝達を媒介する能力の観察可能な変化として現れることができる。
【０１１１】
現在好ましい化合物
本発明の好ましい態様の処方に含まれる化合物は，米国特許出願０９／８６３，８１９，０９／８６３，９０５および０９／８６３，８０４（すべて，２００１年５月２４日出願）；および米国特許仮出願６０／２０７，０００および６０／２２５，０４５（それぞれ２０００年５月２４日および２０００年８月１１日出願，これらの開示の全体を本明細書の一部としてここに引用する）に記載される。
【０１１２】
Ａ．式Ｉの化合物を含む処方
本発明の好ましい態様の処方に含まれる化合物の好ましい群は，式（Ｉ）：
【化３１】
2005514368.tif 000019
［式中，
Ｒ2は水素であり；
Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，トリハロメタン−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，アミノおよび−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，カルボニル，アセチル，スルホニル，およびトリフルオロメタンスルホニルからなる群より選択されるか，またはＲ11およびＲ12は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，５員または６員のヘテロ脂環式環を形成する）からなる群より選択され，ただし，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6の少なくとも２つは水素であり；または
Ｒ3およびＲ4，Ｒ4およびＲ5，またはＲ5およびＲ6は，一緒になって，６員のアリール環，メチレンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成し；
Ｒ7は，水素，アルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，カルボニル，アセチル，Ｃ−アミド，Ｃ−チオアミド，アミジノ，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，スルホニルおよびトリハロメタン−スルホニルからなる群より選択され；
Ｒ8，Ｒ9およびＲ10は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，アミノ，−（ａｌｋ1）Ｚ（式中，ａｌｋ1は，アルキル，アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され，Ｚは，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシ，ニトロ，シアノ，アミノ，グアニジノ，アミド，ウレイド，スルホンアミド，スルフィニル，スルホニル，ホスホネート，モルホリノ，ピペラジニルまたはテトラゾリルである）および−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は上で定義したとおりである）からなる群より選択され；
Ｒ1'は水素またはアルキルであり；
Ｒ2'は，水素，アルキル，アラルキル，アシルまたは−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ’）であり，ここで，ＲおよびＲ’は，独立して，水素，アルキル，アラルキルまたはアリールからなる群より選択される］
またはその薬学的に許容しうる塩で表される。
【０１１３】
（ａ）  式Ｉの好ましい態様においては，Ｒ2'およびＲ7は水素である。
この群のうち，より好ましい群の化合物においては，
Ｒ3は，水素または低級未置換アルキルであり，好ましくは，水素またはメチルであり，より好ましくは水素であり；
Ｒ4は，水素，ハロゲン，アリールおよびＳ−スルホンアミドからなる群より選択され，好ましくは，水素，クロロ，フルオロ，ブロモ，フェニルであり，さらにより好ましくは，水素またはフルオロであり，最も好ましくは水素であり；
Ｒ5は，水素，低級アルキル，低級アルコキシ，アリール，およびヘテロアリールからなる群より選択され，好ましくは，水素，メチル，エチル，メトキシ，フェニル，ピリジルであり，より好ましくは水素であり；および
Ｒ6は水素である。
【０１１４】
上述の好ましいおよびより好ましい群のうち，さらにより好ましい群の化合物においては，
Ｒ8およびＲ10は，未置換低級アルキルであり，好ましくはメチルであり；およびＲ9は，水素，Ｃ−アミド，または−（ａｌｋ1）Ｚ（式中，ａｌｋ1は，アルキル，アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され，Ｚは，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシ，ニトロ，シアノ，アミノ，グアニジノ，アミド，ウレイド，スルホンアミド，スルフィニル，スルホニル，ホスホネート，モルホリノ，ピペラジニルまたはテトラゾリルである）であり，好ましくは，水素，２−（ジメチルアミノエチル）アミノカルボニル，２−（ジエチルアミノエチル）アミノカルボニル，２−（ピロリジン−１−イルエチル）アミノカルボニル，２−（モルホリン−４−イルエチル）アミノカルボニル，または３−カルボキシプロピルであり，より好ましくは水素である。
【０１１５】
この群のうち特に好ましい化合物は，（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンおよび３−［５−｛（Ｚ）−［１−（ヒドロキシメチル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−インドール−３−イリジン］メチル｝−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−プロパン酸である。
【０１１６】
（ｂ）  式Ｉの化合物の別の好ましい群においては，Ｒ2'は−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ’）であり，Ｒ7は水素である。
この群のうち，より好ましい群の化合物においては，
Ｒ3は，水素または低級未置換アルキルであり，好ましくは，水素またはメチルであり，より好ましくは水素であり；
Ｒ4は，水素，ハロゲン，アリールおよびＳ−スルホンアミドからなる群より選択され，好ましくは，水素，クロロ，フルオロ，ブロモ，フェニルであり，さらにより好ましくは，水素またはフルオロであり，最も好ましくは水素であり；
Ｒ5は，水素，低級アルキル，低級アルコキシ，アリール，およびヘテロアリールからなる群より選択され，好ましくは，水素，メチル，エチル，メトキシ，フェニル，ピリジルであり，より好ましくは水素であり；および
Ｒ6は水素である。
【０１１７】
上述の好ましいおよびより好ましい群のうち，さらにより好ましい群の化合物においては，
Ｒ8およびＲ10は，未置換低級アルキル，好ましくはメチルであり；およびＲ9は，水素，Ｃ−アミド，または−（ａｌｋ1）Ｚ（式中，ａｌｋ1は，アルキル，アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され，Ｚは，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシ，ニトロ，シアノ，アミノ，グアニジノ，アミド，ウレイド，スルホンアミド，スルフィニル，スルホニル，ホスホネート，モルホリノ，ピペラジニルまたはテトラゾリルであり）であり，好ましくは，水素，２−（ジメチルアミノエチル）アミノカルボニル，２−（ジエチルアミノエチル）アミノカルボニル，２−（ピロリジン−１−イルエチル）アミノカルボニル，２−（モルホリン−４−イルエチル）アミノカルボニル，または３−カルボキシプロピルであり，より好ましくは水素である。
【０１１８】
この群のうち，特に好ましい化合物は，｛（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝メチルリン酸二水素および｛（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−４−（３−カルボキシプロピル）−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝メチルリン酸二水素である。
【０１１９】
式Ｉの化合物のさらに別の好ましい群においては，Ｒ2'はアシルであり，Ｒ7は水素である。
この群のうち，より好ましい群の化合物においては，
Ｒ3は，水素または低級未置換アルキルであり，好ましくは，水素またはメチルであり，より好ましくは水素であり；
Ｒ4は，水素，ハロゲン，アリールおよびＳ−スルホンアミドからなる群より選択され，好ましくは，水素，クロロ，フルオロ，ブロモ，フェニルであり，さらにより好ましくは，水素またはフルオロであり，最も好ましくは，水素であり；
Ｒ5は，水素，低級アルキル，低級アルコキシ，アリール，およびヘテロアリールからなる群より選択され，好ましくは，水素，メチル，エチル，メトキシ，フェニル，ピリジルであり，より好ましくは水素であり；および
Ｒ6は水素である。
【０１２０】
上述の好ましいおよびより好ましい群のうち，さらにより好ましい群の化合物においては，
Ｒ8およびＲ10は，未置換低級アルキルであり，好ましくは，メチルであり；およびＲ9は，水素，Ｃ−アミド，または−（ａｌｋ1）Ｚ（ａｌｋ1は，アルキル，アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され，Ｚは，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシ，ニトロ，シアノ，アミノ，グアニジノ，アミド，ウレイド，スルホンアミド，スルフィニル，スルホニル，ホスホネート，モルホリノ，ピペラジニルまたはテトラゾリルである）であり，好ましくは，水素，２−（ジメチルアミノエチル）アミノカルボニル，２−（ジエチルアミノエチル）アミノカルボニル，２−（ピロリジン−１−イルエチル）アミノカルボニル，２−（モルホリン−４−イルエチル）アミノカルボニル，または３−カルボキシプロピルであり，より好ましくは，水素である。
【０１２１】
この群のうち，特に好ましい化合物は，４−（｛（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝メトキシ）−４−オキソブタン酸および４−（｛（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−４−（３−カルボキシプロピル）−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝メトキシ）−４−オキソブタン酸である。
【０１２２】
Ｂ．式ＩＩの化合物を含む処方
本発明の好ましい態様の処方に含まれる化合物の別の好ましい群は，式（ＩＩ）：
【化３２】
2005514368.tif 000020
［式中，
Ｒ2は水素であり；
Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，トリハロメタン−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，アミノおよび−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，カルボニル，アセチル，スルホニル，およびトリフルオロメタンスルホニルからなる群より選択されるか，またはＲ11およびＲ12は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，５員または６員のヘテロ脂環式環を形成する）からなる群より選択され，ただし，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6の少なくとも２つは水素であり；または
Ｒ3およびＲ4，Ｒ4およびＲ5，またはＲ5およびＲ6は，一緒になって，６員のアリール環，メチレンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成し；
Ｒ7は，水素，アルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，カルボニル，アセチル，Ｃ−アミド，Ｃ−チオアミド，アミジノ，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，スルホニルおよびトリハロメタン−スルホニルからなる群より選択され；
Ｒ8，Ｒ9およびＲ10は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，アミノ，−（ａｌｋ1）Ｚ（式中，ａｌｋ1は，アルキル，アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され，Ｚは，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシ，ニトロ，シアノ，アミノ，グアニジノ，アミド，ウレイド，スルホンアミド，スルフィニル，スルホニル，ホスホネート，モルホリノ，ピペラジニルまたはテトラゾリルである）および−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は上で定義したとおりである）からなる群より選択され；
Ｒ1'は水素またはアルキルであり；および
Ｒ3'およびＲ4'は，独立して，アルキルであるか，またはこれらが結合している窒素原子と一緒になって，ヘテロ脂環式環またはヘテロアリール環を形成する］
またはその薬学的に許容しうる塩により表される。
【０１２３】
現在好ましい式ＩＩの化合物は以下のとおりである：
Ｒ3は水素または低級未置換アルキルであり，好ましくは，水素またはメチルであり，より好ましくは水素であり；
Ｒ4は，水素，ハロゲン，アリールおよびＳ−スルホンアミドからなる群より選択され，好ましくは，水素，クロロ，フルオロ，ブロモ，フェニルであり，さらにより好ましくは，水素またはフルオロであり，最も好ましくは水素であり；
Ｒ5は，水素，低級アルキル，低級アルコキシ，アリール，およびヘテロアリールからなる群より選択され，好ましくは，水素，メチル，エチル，メトキシ，フェニル，ピリジルであり，より好ましくは水素であり；および
Ｒ6は水素であり；
Ｒ7は水素であり；
Ｒ1'は水素またはメチルであり，特に水素であり；
Ｒ8およびＲ10は，独立して，未置換低級アルキルであり，特にメチルであり；
Ｒ9は，水素，Ｃ−カルボキシで置換された低級アルキル，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ12（式中，Ｒ12は，アミノで置換された低級アルキルである），またはヘテロ脂環式であり，任意にヒドロキシで置換されていてもよく，特に，水素，３−カルボキシプロピル，（２−ジエチルアミノエチル）−アミノカルボニル，（２−エチルアミノエチル）アミノカルボニル，２−（ピロリジン−１−イルエチル）−アミノカルボニル，３−（モルホリン−４−イル）プロピル−アミノカルボニル，３−（モルホリン−４−イル）−２−ヒドロキシプロピルアミノカルボニルであり，特に，水素，３−カルボキシプロピル，（２−ジエチルアミノエチル）アミノカルボニル，または（２−エチルアミノエチル）−アミノカルボニルであり；および
Ｒ3'およびＲ4'は，ヒドロキシで任意に置換された低級アルキルであり，特に，メチル，エチル，２−ヒドロキシエチルであり；または，Ｒ3'およびＲ4'は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，ピロリジン−１−イル，２−（Ｓ）−ヒドロキシメチルピロリジン−１−イル，２−（Ｓ）−カルボキシ−ピロリジン−１−イル，ピペラジン−１−イル，または４−メチルピペラジン−１−イル，特にピロリジン−１−イルを形成し；または
Ｒ3'およびＲ4'は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，ヘテロアリール環，好ましくは，ピロロ−１−イル，ピリジン−１−イル，オキサゾール−３−イル，イソオキサゾール−２−イル，ピラジン−１−イル，ピラジジン−１−イル，キノリン−１−イル，イミダゾール−１−イル，より好ましくは，ピリジン−１−イルを形成する。
【０１２４】
上記に多数の種々の好ましい態様を示し，これらの好ましい態様のいずれか１つに従うことにより，その特定の好ましい態様に従わない化合物より現在のところより好ましい本発明の化合物を得ることができる。しかしながら，これらの好ましい態様は一般に独立しており［ただし，いくつかの（代替の）好ましい態様は互いに両立しない］，かつ付加的である。また，２以上のこれらの好ましい態様にしたがうことにより，より少ない好ましい態様にしたがうよりも，現在のところより好ましい化合物を得ることができる。
【０１２５】
式ＩＩの現在好ましい化合物には以下のものが含まれる：
（ａ）  Ｒ1'，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，Ｒ7，およびＲ9は水素であり；Ｒ8およびＲ10は未置換低級アルキル，特にメチルであり；およびＲ3'およびＲ4'は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，ピロリジン−１−イル，２−（Ｓ）−ヒドロキシメチルピロリジン−１−イル，２−（Ｓ）−カルボキシピロリジン−１−イル，ピペラジン−１−イル，または４−メチルピペラジン−１−イル，特にピロリジン−１−イルを形成する。
【０１２６】
（ｂ）  Ｒ1'，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，およびＲ7は水素であり；Ｒ8およびＲ10は未置換低級アルキル，特にメチルであり；Ｒ9はＣ−カルボキシで置換された低級アルキル，特に３−カルボキシプロピルであり；およびＲ3'およびＲ4'は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，ピロリジン−１−イル，２−（Ｓ）−ヒドロキシメチルピロリジン−１−イル，２−（Ｓ）−カルボキシ−ピロリジン−１−イル，ピペラジン−１−イル，または４−メチルピペラジン−１−イル，特にピロリジン−１−イルを形成する。
【０１２７】
（ｃ）  Ｒ1'，Ｒ3，Ｒ5，Ｒ6，およびＲ7は水素であり；Ｒ4はハロ，特にフルオロであり，Ｒ8およびＲ10は未置換低級アルキル，特にメチルであり；Ｒ9は−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ13（式中，Ｒ13はアミノで置換された低級アルキルである），またはヘテロ脂環式であり，任意にヒドロキシで置換されていてもよく，特に，（２−ジエチルアミノエチル）−アミノカルボニル，（２−エチルアミノエチル）−アミノカルボニル，２−（ピロリジン−１−イルエチル）アミノカルボニル，３−（モルホリン−４−イル）プロピル−アミノカルボニル，３−（モルホリン−４−イル）−２−ヒドロキシプロピルアミノカルボニル，特に（２−ジエチルアミノエチル）アミノカルボニル，または（２−エチルアミノエチル）−アミノカルボニルであり；およびＲ3'およびＲ4'は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，ピロリジン−１−イル，２−（Ｓ）−ヒドロキシメチルピロリジン−１−イル，２−（Ｓ）−カルボキシピロリジン−１−イル，ピペラジン−１−イル，または４−メチルピペラジン−１−イル，特にピロリジン−１−イルを形成する。
【０１２８】
（ｄ）  Ｒ1'，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，Ｒ7，およびＲ9は水素であり；Ｒ8およびＲ10は未置換低級アルキル，特にメチルであり；およびＲ3'およびＲ4'は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，ヘテロアリール環，好ましくは，ピロール−１−イル，ピリジン−１−イル，オキサゾール−３−イル，イソオキサゾール−２−イル，ピラジン−１−イル，ピリダジン−１−イル，キノリン−１−イル，イミダゾール−１−イル，より好ましくはピリジン−１−イルを形成する。
【０１２９】
現在好ましい式ＩＩの化合物には以下のものが含まれる：
（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（１−ピロリジニルメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン；（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（４−メチルピペラジン−１−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン；（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−［２（Ｓ）−ヒドロキシメチル−１−ピロリジニルメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン；（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−［２（Ｓ）−カルボキシ−１−ピロリジニルメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン；（３Ｚ）−３−｛［３，５−ジメチル−４−（２−ジエチルアミノエチルアミノカルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−メチリデン｝−１−（１−ピロリジニルメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン；（３Ｚ）−３−｛［３，５−ジメチル−４−（２−エチルアミノエチルアミノカルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−メチリデン｝−１−（１−ピロリジニルメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン；および（３Ｚ）−３−｛［３，５−ジメチル−４−（３−モルホリン−４−イル−２−ヒドロキシプロピルアミノカルボニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−メチリデン｝−１−（１−ピロリジニルメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン；および１−（｛（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−２−オキソ−１，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝メチル）ピリジニウムクロリド。
【０１３０】
式ＩＩの属に含まれる本発明の好ましい態様の好ましい化合物は，式ＶＩ：
【化３３】
2005514368.tif 000021
［式中，
Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，トリハロメタン−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，アミノおよび−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，カルボニル，アセチル，スルホニル，およびトリフルオロメタンスルホニルからなる群より選択されるか，またはＲ11およびＲ12は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，５員または６員のヘテロ脂環式環を形成する）からなる群より選択され，ただし，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6の少なくとも２つは水素であり；または
Ｒ3およびＲ4，Ｒ4およびＲ5，またはＲ5およびＲ6は，一緒になって，６員のアリール環，メチレンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成し；
Ｒ7は，水素，アルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，カルボニル，アセチル，Ｃ−アミド，Ｃ−チオアミド，アミジノ，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，スルホニル，およびトリハロメタン−スルホニルからなる群より選択され；
Ｒ8，Ｒ9およびＲ10は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，アミノおよび−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は上で定義したとおりである）からなる群より選択される］
の化合物またはその薬学的に許容しうる塩である。
【０１３１】
好ましくは，Ｒ3，Ｒ5およびＲ6は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，トリハロメタン−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，アミノおよび−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，カルボニル，アセチル，スルホニル，トリフルオロメタンスルホニルからなる群より選択されるか，またはこれらが結合している窒素と一緒になって，５員または６員のヘテロ脂環式環を形成する）からなる群より選択され；
特に，Ｒ3，Ｒ5，およびＲ6は水素であり；
Ｒ7は水素であり；
Ｒ4は水素またはハロ，特に水素，フルオロ，またはクロロ，特に水素またはフルオロであり；
Ｒ8およびＲ10は，独立して，未置換低級アルキル，特にメチルであり；および
Ｒ9は，水素，Ｃ−カルボキシで置換された低級アルキルまたは−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ12（式中，Ｒ12は，アミノで置換された低級アルキルである）またはヘテロ脂環式であり，任意にヒドロキシで置換されていてもよく；Ｒ9は，好ましくは，水素，３−カルボキシプロピル，（２−ジエチルアミノエチル）−アミノカルボニル，（２−エチルアミノエチル）アミノカルボニル，３−（モルホリン−４−イル）プロピル−アミノカルボニル，３−（モルホリン−４−イル）−２−ヒドロキシプロピルアミノカルボニルであり；Ｒ9は，最も好ましくは，水素，３−カルボキシプロピル，（２−ジエチルアミノエチル）アミノカルボニル，または（２−エチルアミノエチル）−アミノカルボニルである。
【０１３２】
式ＶＩの化合物の現在好ましい群には以下のものが含まれる：
（ａ）  Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，Ｒ7，およびＲ9は水素であり，Ｒ8およびＲ10は未置換低級アルキル，特にメチルである。
（ｂ）  Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，およびＲ7は水素であり；Ｒ8およびＲ10は未置換低級アルキル，特にメチルであり；およびＲ9は，Ｃ−カルボキシで置換された低級アルキル，特に３−カルボキシプロピルである。
【０１３３】
現在好ましい式ＶＩの化合物には以下のものが含まれる：
（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（１−ピロリジニルメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン；および
（３Ｚ）−３−｛［３，５−ジメチル−４−（３−カルボキシプロピル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−メチリデン｝−１−（１−ピロリジニルメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン。
【０１３４】
Ｃ．式ＩＩＩの化合物を含む処方
本発明の好ましい態様の処方中に含まれる別の好ましい群の化合物は，式ＩＩＩ：
【化３４】
2005514368.tif 000022
［式中，
Ｒ2は水素であり；
Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，トリハロメタン−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，アミノおよび−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，カルボニル，アセチル，スルホニル，およびトリフルオロメタンスルホニルからなる群より選択されるか，またはＲ11およびＲ12は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，５員または６員のヘテロ脂環式環を形成する）からなる群より選択され，ただし，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6の少なくとも２つは水素であり；または
Ｒ3およびＲ4，Ｒ4およびＲ5，またはＲ5およびＲ6は，一緒になって，６員のアリール環，メチレンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成し；
Ｒ7は，水素，アルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，カルボニル，アセチル，Ｃ−アミド，Ｃ−チオアミド，アミジノ，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，スルホニルおよびトリハロメタン−スルホニルからなる群より選択され；
Ｒ8，Ｒ9およびＲ10は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，アミノ，−（ａｌｋ1）Ｚ（式中，ａｌｋ1は，アルキル，アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され，Ｚは，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシ，ニトロ，シアノ，アミノ，グアニジノ，アミド，ウレイド，スルホンアミド，スルフィニル，スルホニル，ホスホネート，モルホリノ，ピペラジニルまたはテトラゾリルである）および−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は上で定義したとおりである）からなる群より選択され；および
Ｒ5'はアルキルである］
またはその薬学的に許容しうる塩で表される。
【０１３５】
この群のうち，化合物のより好ましい群においては，
Ｒ3は，水素または低級未置換アルキル，好ましくは，水素またはメチル，より好ましくは，水素であり；
Ｒ4は，水素，ハロゲン，アリールおよびＳ−スルホンアミドからなる群より選択され，好ましくは，水素，クロロ，フルオロ，ブロモ，フェニルであり，さらにより好ましくは，水素またはフルオロ，最も好ましくは水素であり；
Ｒ5は，水素，低級アルキル，低級アルコキシ，アリール，およびヘテロアリールからなる群より選択され，好ましくは，水素，メチル，エチル，メトキシ，フェニル，ピリジルであり，より好ましくは水素であり；および
Ｒ6およびＲ7は水素である。
【０１３６】
上述の好ましいおよびより好ましい群のうち，化合物のさらにより好ましい群においては，
Ｒ8およびＲ10は，未置換低級アルキル，好ましくはメチルであり；およびＲ9は，水素，Ｃ−アミド，または−（ａｌｋ1）Ｚ（式中，ａｌｋ1は，アルキル，アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され，Ｚは，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシ，ニトロ，シアノ，アミノ，グアニジノ，アミド，ウレイド，スルホンアミド，スルフィニル，スルホニル，ホスホネート，モルホリノ，ピペラジニルまたはテトラゾリルである）であり，好ましくは，水素，２−（ジメチルアミノエチル）アミノカルボニル，２−（ジエチルアミノエチル）アミノカルボニル，２−（ピロリジン−１−イルエチル）アミノカルボニル，２−（モルホリン−４−イルエチル）アミノカルボニル，または３−カルボキシプロピルであり，より好ましくは水素である。
【０１３７】
上述の好ましい群のうち，化合物ＩＩＩのより好ましい群においては，Ｒ5'は，Ｃ−カルボキシで置換されているアルキル，ＮＲ11Ｒ12（Ｒ11およびＲ12は上で定義したとおりである），またはアンモニウムである。
【０１３８】
式ＩＩＩの特に好ましい化合物は，２−｛（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−２−オキソ−１−エタンアミニウムクロリドおよび２−｛（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−４−（３−カルボキシプロピル）−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−２−オキソ−１−エタンアミニウムクロリドである。
【０１３９】
Ｄ．式ＩＶの化合物を含む処方
本発明の好ましい態様のに含まれるさらに別の好ましい群の化合物は，式ＩＶ：
【化３５】
2005514368.tif 000023
［式中，
Ｒ2は水素であり；
Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，トリハロメタン−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，アミノおよび−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アリール，カルボニル，アセチル，スルホニル，およびトリフルオロメタンスルホニルからなる群より選択されるか，またはＲ11およびＲ12は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，５員または６員のヘテロ脂環式環を形成する）からなる群より選択され，ただし，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6の少なくとも２つは水素であり；または
Ｒ3およびＲ4，Ｒ4およびＲ5，またはＲ5およびＲ6は，一緒になって，６員のアリール環，メチレンジオキシまたはエチレンジオキシ基を形成し；
Ｒ7は，水素，アルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，カルボニル，アセチル，Ｃ−アミド，Ｃ−チオアミド，アミジノ，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，スルホニルおよびトリハロメタン−スルホニルからなる群より選択され；
Ｒ8，Ｒ9およびＲ10は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールチオ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミド，アミノ，−（ａｌｋ1）Ｚ（式中，ａｌｋ1は，アルキル，アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され，Ｚは，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシ，ニトロ，シアノ，アミノ，グアニジノ，アミド，ウレイド，スルホンアミド，スルフィニル，スルホニル，ホスホネート，モルホリノ，ピペラジニルまたはテトラゾリルである）および−ＮＲ11Ｒ12（式中，Ｒ11およびＲ12は上で定義したとおりである）からなる群より選択され；および
ＲaおよびＲbは，独立して，水素またはアルキルから選択される］
またはその薬学的に許容しうる塩で表される。
【０１４０】
この群のうち，より好ましい群の化合物においては，
Ｒ3は水素または低級未置換アルキルであり，好ましくは水素またはメチルであり，より好ましくは水素であり；
Ｒ4は，水素，ハロゲン，アリールおよびＳ−スルホンアミドからなる群より選択され，好ましくは，水素，クロロ，フルオロ，ブロモ，フェニルであり，さらにより好ましくは，水素またはフルオロであり，最も好ましくは水素であり；
Ｒ5は，水素，低級アルキル，低級アルコキシ，アリール，およびヘテロアリールからなる群より選択され，好ましくは，水素，メチル，エチル，メトキシ，フェニル，ピリジルであり，より好ましくは水素であり；および
Ｒ6およびＲ7は水素である。
【０１４１】
上述の好ましいおよびより好ましい群のうち，化合物のさらにより好ましい群においては，Ｒ8およびＲ10は，未置換低級アルキル，好ましくはメチルであり；およびＲ9は，水素，Ｃ−アミド，または−（ａｌｋ1）Ｚ（式中，ａｌｋ1は，アルキル，アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され，Ｚは，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシ，ニトロ，シアノ，アミノ，グアニジノ，アミド，ウレイド，スルホンアミド，スルフィニル，スルホニル，ホスホネート，モルホリノ，ピペラジニルまたはテトラゾリルである）であり，好ましくは，水素，２−（ジメチルアミノエチル）アミノカルボニル，２−（ジエチルアミノエチル）アミノカルボニル，２−（ピロリジン−１−イルエチル）アミノカルボニル，２−（モルホリン−４−イルエチル）アミノカルボニル，または３−カルボキシプロピルであり，より好ましくは水素である。
【０１４２】
上述の好ましい群のうち，化合物ＩＶのより好ましい群においては，ＲaおよびＲbは，独立して，水素または未置換低級アルキルであり，好ましくは，水素またはメチルであり，最も好ましくは水素である。
【０１４３】
式ＩＶの特に好ましい化合物は，（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（ジメチルホスホニル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン，（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（ホスホニル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン，（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−４−（３−カルボキシプロピル）−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（ジメチルホスホニル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン，および（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−４−（３−カルボキシプロピル）−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（ホスホニル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンである。
【０１４４】
本発明の化合物の別の好ましい群においては，式Ｉ−ＩＶにおいて，
Ｒ2は水素であり；
Ｒ7は水素であり；
Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6は，水素；未置換低級アルキル；ヒドロキシ，ハロ，Ｃ−カルボキシ（水素および未置換低級アルキルからなる群より選択される基で置換されている），アミノ，または−ＮＲ11Ｒ12からなる群より選択される基で置換されている低級アルキル；未置換低級アルキルアルコキシ；１またはそれ以上のハロ基で置換されている低級アルコキシ；未置換アリール，または未置換低級アルキル，ヒドロキシ，未置換低級アルキルアルコキシ，ハロ，アミノ，未置換低級アルキルＳ−スルホンアミドまたは−ＮＲ11Ｒ12からなる群より独立して選択される１またはそれ以上の基で置換されているアリールからなる群より選択される基で置換されている低級アルコキシ；未置換アリール；または，未置換低級アルキル，未置換低級アルキルアルコキシ，１またはそれ以上のハロ基で置換されている低級アルコキシ，未置換アリール，または未置換低級アルキル，ヒドロキシ，未置換低級アルキルアルコキシ，ハロ，アミノ，未置換低級アルキルＳ−スルホンアミドまたは−ＮＲ11Ｒ12からなる群より独立して選択される１またはそれ以上の基で置換されているアリールからなる群より選択される基で置換されている低級アルコキシ，ヒドロキシ，アミノ，未置換低級アルキルスルホンアミド，水素または未置換低級アルキルからなる群より選択される基で置換されているＣ−カルボキシ，モルホリノ，−ＮＲ11Ｒ12，トリハロメチル，アリール，ヒドロキシ，ハロ，トリハロメチル，アミノ，−ＮＲ11Ｒ12，スルホンアミド，水素または未置換低級アルキルからなる群より選択される基で置換されているＣ−カルボキシ，未置換低級アルキル，またはヒドロキシ，ハロ，水素または未置換低級アルキルからなる群より選択される基で置換されているＣ−カルボキシ，アミノまたは−ＮＲ11Ｒ12からなる群より選択される基で置換されている低級アルキルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の基で置換されているアリールからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の基で置換されているアリール；未置換ヘテロ脂環式；ハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルキル，未置換低級アルキルカルボニル，ヒドロキシ，未置換低級アルキルアルコキシまたは１またはそれ以上のハロ基で置換されているアルコキシからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の基で置換されているヘテロ脂環式；未置換アリールオキシ；未置換低級アルキル，トリハロメチル，ハロ，ヒドロキシ，アミノまたは−ＮＲ11Ｒ12からなる群より独立して選択される１またはそれ以上の基で置換されているアリールオキシ；メルカプト；未置換低級アルキルアルキルチオ；未置換アリールチオ；ハロ，ヒドロキシ，アミノまたは−ＮＲ11Ｒ12からなる群より選択される１またはそれ以上の基で置換されているアリールチオ；水素および未置換低級アルキルからなる群より選択される基で置換されているＣ−カルボキシ；未置換低級アルキルＯ−カルボキシ；未置換低級アルキルＳ−スルホンアミド；ニトロ；未置換低級アルキルＣ−アミド；未置換低級アルキルＮ−アミド；アミノ；および−Ｒ11Ｒ12からなる群より選択される。
【０１４５】
より好ましくは，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6は，独立して，水素；ハロ；未置換低級アルキル；ヒドロキシ，ハロ，水素または未置換低級アルキルからなる群より選択される基で置換されているＣ−カルボキシ，アミノまたは−ＮＲ11Ｒ12からなる群より選択される１またはそれ以上の基で置換されている低級アルキル；未置換低級アルキルアルコキシ；１またはそれ以上のハロ基で置換されている低級アルキルアルコキシ；未置換アリールオキシ；未置換低級アルキル，１またはそれ以上のハロ基で置換されている低級アルキル，ヒドロキシ，未置換低級アルキルアルコキシ，ハロ，アミノまたは−ＮＲ11Ｒ12からなる群より独立して選択される１またはそれ以上の基で置換されているアリールオキシ；Ｓ−スルホンアミド（ここで，Ｒ11およびＲ12は，水素および未置換低級アルキルからなる群より独立して選択される）；未置換アリール；ハロ，未置換低級アルキル，１またはそれ以上のハロ基で置換されている低級アルキル，未置換低級アルキルアルコキシ，アミノまたは−ＮＲ11Ｒ12からなる群より独立して選択される１またはそれ以上の基で置換されているアリール；未置換ヘテロアリール；未置換低級アルキル，１またはそれ以上のハロ基で置換されている低級アルキル，未置換低級アルキルアルコキシ，ヒドロキシ，ハロ，アミノまたは−ＮＲ11Ｒ12からなる群より独立して選択される１またはそれ以上の基で置換されているヘテロアリール；未置換ヘテロ脂環式；ハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルキル，１またはそれ以上のハロ基で置換されている低級アルキル，未置換低級アルキルアルコキシ，アミノまたは−ＮＲ11Ｒ12からなる群より独立して選択される１またはそれ以上の基で置換されているヘテロ脂環式；未置換低級アルキルＯ−カルボキシ；Ｃ−アミド（式中，Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，未置換低級アルキルおよび未置換アリールからなる群より選択される），および，Ｎ−アミド（式中，Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，未置換低級アルキルおよび未置換アリールからなる群より選択される）からなる群より選択される。さらにより好ましくは，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5，およびＲ6は，独立して，水素，ハロ，未置換低級アルキル，１またはそれ以上のヒドロキシ基で置換されている低級アルキル，未置換低級アルコキシ，未置換アリール，１またはそれ以上の未置換低級アルコキシ基で置換されているアリール，および−Ｓ（Ｏ）2ＮＲ11Ｒ12からなる群より選択され，Ｒ5は水素であり，Ｒ6は−ＮＲ11Ｒ12であり，およびＲ11およびＲ12は，独立して，水素，未置換低級アルキルからなる群より選択されるか，または，一緒になって，５員または６員の未置換ヘテロ脂環式環を形成する。特に好ましくは，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5およびＲ6はすべて水素であるか，またはＲ3，Ｒ5およびＲ6は水素であり，Ｒ4は，ハロ，好ましくは，クロロ，ブロモまたはフルオロ，より好ましくは，フルオロである。
【０１４６】
Ｒ8，Ｒ9およびＲ10は−（ａｌｋ1）Ｚであってもよいが，他の２つは，独立して，水素，ヒドロキシ，未置換低級アルキル，未置換低級アルケニル，未置換低級アルキニル，未置換低級アルキルアルコキシ，１またはそれ以上のハロ基で置換されている低級アルコキシ，未置換アリールアルコキシ，アミノ，−ＮＲ11Ｒ12，ハロ，水素または未置換低級アルキルからなる群より選択される基で置換されているＣ−カルボキシ，未置換低級アルキルＯ−カルボキシ，未置換低級アルキルＣ−アミド，未置換低級アルキルＮ−アミド，アセチル，未置換低級アルキルＳ−スルホンアミド，未置換アリール，またはハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルキルアルコキシ，１またはそれ以上のハロ基で置換されているアルコキシ，水素または未置換低級アルキルからなる群より選択される基で置換されているＣ−カルボキシ，未置換低級アルキルＯ−カルボキシ，アミノ，未置換低級アルキルＳ−スルホンアミドおよび−ＮＲ11Ｒ12からなる群より選択される基で置換されているアリールからなる群より選択され，好ましくは，ａｌｋ1は未置換低級アルキル基（より好ましくは，２−４個の炭素原子を有する）であり，Ｚは，ヒドロキシ，アミノ，−ＮＲ11Ｒ12，４級アンモニウム，水素または未置換低級アルキルからなる群より選択される基で置換されているＣ−カルボキシ，水素および未置換低級アルキルからなる群より選択される基で置換されているＣ−アミド，モルホリノ，ピペラジニル，テトラゾロおよびホスホニルからなる群より選択される。好ましくは，Ｒ8およびＲ10は，水素および未置換低級アルキルからなる群より選択され，Ｒ9は，水素およびａｌｋ1Ｚからなる群より選択される。
【０１４７】
同様に，本発明の好ましい特徴においては，Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，未置換低級アルキル，ヒドロキシ，未置換低級アルキルアルコキシ，未置換低級アルキルカルボニル，未置換低級アルキルＯ−カルボキシおよびアセチルを含む群より選択される。
【０１４８】
また，本発明の現在好ましい態様においては，Ｚは，−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ11Ｒ12（Ｒ11およびＲ12は，独立して，水素，未置換低級アルキル，アミノおよび−ＮＲ11Ｒ12からなる群より選択される基で置換されている低級アルキル，未置換アリール，ハロ，ヒドロキシ，未置換低級アルキルアルコキシおよびトリハロメチルからなる群より選択される１またはそれ以上の基で置換されているアリール，未置換ヘテロアリール，未置換ヘテロ脂環式からなる群より選択されるか，または，一緒になって，５員または６員の未置換ヘテロ脂環式を形成する），および，
−ＮＲ11Ｒ12（Ｒ11およびＲ12は，独立して，未置換低級アルキルからなる群より選択されるか，または一緒になって５員または６員の未置換ヘテロ脂環式環を形成する）からなる群より選択される。
【０１４９】
一般的合成スキーム
本発明の好ましい態様の処方に含まれる化合物を製造するために用いられる出発物質および試薬は，Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓ．），Ｂａｃｈｅｍ（Ｔｏｒｒａｎｃｅ，Ｃａｌｉｆ．），またはＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）等の商業的供給元から入手可能であるか，または，Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １−１７（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９９１）；Ｒｏｄｄ’ｓ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １−５  およびＳｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｌｓ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９８９）；Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｖｏｌｕｍｅｓ１−４０（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９９１），Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）およびＬａｒｏｃｋ’ｓ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ（ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  Ｉｎｃ．，１９８９）等の文献に記載される方法にしたがって，当業者に知られる方法により製造する。これらのスキームは本発明の化合物を合成することができるいくつかの方法の例示にすぎず，当業者はこの開示を参照して，これらのスキームに種々の改変を加えることが可能であり，それが示唆されるであろう。反応の出発物質および中間体は，所望の場合には，一般的な手法，例えば，限定されないが，濾過，蒸留，結晶化，クロマトグラフィー等を用いて単離し精製することができる。このような物質は，慣用的な手段，例えば，物理学的定数およびスペクトルデータを用いて特性決定することができる。特記しない限り，本明細書に記載される反応は，大気圧下で，約−７８℃から約１５０℃の温度範囲内，より好ましくは約０℃から約１２５℃，最も好ましくはほぼ室温（周囲温度），例えば約２０℃で実施する。
【０１５０】
Ａ．式Ｉの化合物
式Ｉの化合物は，以下に図示され記載されるようにして製造することができる：
【化３６】
2005514368.tif 000024
【０１５１】
式Ｖの化合物は，当該技術分野においてよく知られる方法により製造することができる。例えば，Ｒ3−Ｒ6，Ｒ7，およびＲ9が水素であり，Ｒ8およびＲ10がメチルである化合物Ｖは，米国特許５，７９２，７８３のカラム２２，６０−６７行に記載される方法にしたがって製造することができる（この開示を本明細書の一部としてここに引用する）。
【０１５２】
Ｒ2'が水素である式Ｉの化合物は，式Ｖの化合物から，Ｖを式Ｒ1'ＣＨＯの適当なアルデヒドと縮合させることにより，容易に製造することができる。反応は，有機塩基，好ましくは，３級窒素塩基，例えば，トリメチルアミン，トリエチルアミン，ピリジン，ジイソプロピルエチルアミン，１，８−ジアザビシクロ−［５．４．１］−ウンデセ−７−エン等の存在下で行うことができる。反応を実施する溶媒は非プロトン性溶媒であってもよい。例としては，限定されないが，ペンタン，ヘキサン，ベンゼン，トルエン，塩化メチレン，四塩化炭素，クロロホルム，テトラヒドロフラン（ＴＨＦ），ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ），ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ），ピリジン等が挙げられる。本発明の現在好ましい態様においては，溶媒は極性の非プロトン性またはプロトン性溶媒であり，好ましくは，アセトニトリル，ジメチルホルムアミド，テトラヒドロフランまたはピリジンである。反応は，室温で行うことができる。式Ｒ1'ＣＨＯのアルデヒドは市販されているか，または当該技術分野においてよく知られる方法により製造することができる。そのような例としては，限定されないが，ホルムアルデヒド，アセトアルデヒド，プロポノアルデヒド，ブチルアルデヒドが市販されている。
【０１５３】
Ｒ2'が水素である式Ｉの化合物は，当該技術分野においてよく知られる方法により，Ｒ2'がアルキル，アラルキル，アリール，アシルまたは−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ’）である式Ｉの別の化合物に変換することができる。そのような方法のいくつかを以下に記載する。
【０１５４】
Ｒ2'がアルキルまたはアラルキルである式Ｉの化合物は，Ｒ2'が水素であるＩを，トリエチルアミン，ピリジン等の塩基の存在下で，式Ｒ2'Ｘ（Ｒ2'は，アルキルまたはアラルキルであり，Ｘは適当な脱離基，例えば，ハロ，トシレートまたはメシレート，トリフレート等である）のアルキル化試薬と反応させることにより製造することができる。アルキル化剤，例えば，臭化メチル，ヨウ化メチル，臭化ベンジル，ヨウ化ベンジル，塩化２−フェニルエチル，臭化エチルは市販されている。
【０１５５】
Ｒ2'がアシルである式Ｉの化合物は，Ｒ2'が水素であるＩを，アシル化試薬，例えば，無水酢酸，無水コハク酸等の酸無水物，塩化アセチル，塩化プロピオニル，塩化ブチリル等の酸ハロゲン化物，およびｐ−ニトロフェニルエステル，ペンタフルオロフェニルエステル等のカルボン酸活性エステルと反応させることにより製造することができる。反応は，ピリジン，ＤＭＡＰ等の有機塩基中で行う。反応は周囲温度で行う。あるいは，Ｒ2'がアシルである式Ｉの化合物は，親３−ピロリジニル−２−インドリノン（Ｖ）を，上述した適当なアシル化試薬Ｒ2'Ｘの存在下で，ホルムアルデヒド，アセトアルデヒド等の適当なアルデヒドと反応させることにより，Ｖの中間体Ｎ−ヒドロキシアルキル誘導体を単離することなく，製造することができる。
【０１５６】
Ｒ2'が−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ）（ＯＲ’）（ＲおよびＲ’は水素ではない）である式Ｉの化合物は，Ｒ2'が水素であるＩを，トリエチルアミン，ピリジン等の有機塩基中でホスホリル化試薬と反応させることにより製造することができる。ジベンジルホスホクロリデートおよびベンジルメチルホスホクロリデート等のホスホリル化試薬が市販されている。ＲおよびＲ’が水素である式Ｉの化合物は，ＲおよびＲ’がベンジルである対応する式Ｉの化合物から，水素化反応条件下でベンジル基を除去することにより製造することができる。反応は塩基の存在下で行うことができる。塩基は有機塩基でも無機塩基でもよい。有機塩基を用いる場合には，好ましくは，これは３級窒素塩基，またはアルカリ金属アルコキシド，例えば，ナトリウムメトキシドである。３級窒素塩基の例としては，限定されないが，トリメチルアミン，トリエチルアミン，ピリジン，および１，８−ジアザビシクロ［５．４．１］ウンデセ−７−エンが挙げられる。無機塩基の例には，限定されないが，アルカリ金属水素化物（例えば水素化ナトリウム），およびアルカリ金属水酸化物（例えばナトリウムメトキシド）が挙げられる。
【０１５７】
反応を実施する溶媒は，ジメチルホルムアミド，テトラヒドロフランまたはジメチルスルホキシド等の非プロトン性溶媒であってもよい。
【０１５８】
Ｂ．式ＩＩ（およびＶＩ）の化合物
Ｒ3'およびＲ4'が，独立してアルキルであるか，または一緒になってヘテロ脂環式環を形成する式ＩＩの化合物は，以下に図示および記載されるようにして製造することができる：
【化３７】
2005514368.tif 000025
【０１５９】
式（ＩＩ）の別の化合物は，米国特許５，７９２，７８３，国際公開ＷＯ９９／６１４２２，および米国特許出願０９／７８３，２６４，（２００１年２月１５日出願，標題“ＰＹＲＲＯＬＥ  ＳＵＢＳＴＩＴＵＴＥＤ  ２−ＩＮＤＯＬＩＮＯＮＥ  ＡＳ  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＫＩＮＡＳＥ  ＩＮＨＩＢＩＴＯＲＳ”，その開示を本明細書の一部としてここに引用する）に記載されるようにして製造することができる。
【０１６０】
Ｒ3−Ｒ10およびＲ1'，Ｒ3'およびＲ4'が発明の概要で記載されるとおりである式ＩＩの化合物は，式Ｖの化合物をホルムアルデヒド，アセトアルデヒド等のアルデヒドおよび適当なアミンと反応させることにより製造することができる。
【０１６１】
反応を実施する溶媒は，プロトン性溶媒であっても非プロトン性溶媒であってもよく，好ましくは，アルコール（例えばメタノールまたはエタノール）または水性アルコールなどのプロトン性溶媒である。反応は，室温より高い温度で行うことができる。温度は一般に約２０℃−約１００℃，好ましくは，約４０℃−約８０℃である。"約"とは，温度範囲が，好ましくは示される温度の１０℃以内，より好ましくは示される温度の５℃以内，最も好ましくは示される温度の２℃以内であることを意味する。すなわち，例えば，"約６０℃"とは，６０℃±１０℃，好ましくは６０℃±５℃，最も好ましくは６０℃±２℃である。
【０１６２】
適当なアミンには，非環状および環状２級アミンが含まれる。これらのアミンはＡｌｄｒｉｃｈ，Ｓｉｇｍａ等から市販されているか，または当該技術分野においてよく知られる方法により製造することができる。第２アミンの例としては，ジメチルアミン，ジエチルアミンおよびビス（２−ヒドロキシエチル）アミンが挙げられる。環状２級アミンの例としては，Ｎ−アルキルピペラジンおよびピロリジンが挙げられる。
【０１６３】
Ｒ3'およびＲ4'が一緒になってヘテロアリール環を形成する式ＩＩの化合物は，親３−ピロリジニル−２−インドリノン（Ｖ）を適当なアルデヒドと反応させてＶの中間体Ｎ−ヒドロキシアルキル誘導体を得，中間体をオキシ塩化リンおよびピリジン等の適当なヘテロアリールと反応させることにより製造することができる。
【０１６４】
反応は，室温より低い温度で行うことができる。温度は一般に約−２０℃−約２０℃，好ましくは，約−１０℃−約１０℃である。"約"とは，温度範囲が，好ましくは示される温度の１０℃以内，より好ましくは示される温度の５℃以内，最も好ましくは示される温度の２℃以内であることを意味する。すなわち，例えば，"約０℃"とは，０℃±１０℃，好ましくは０℃±５℃，最も好ましくは０℃±２℃である。
【０１６５】
Ｃ．式ＩＩＩの化合物
式ＩＩＩの化合物は，以下に示されるようにして，式Ｖの化合物から製造することができる：
【化３８】
2005514368.tif 000026
【０１６６】
Ｒ5’が発明の概要で定義したとおりである式ＩＩＩの化合物は，式Ｖの化合物を適当な試薬，例えば，無水酢酸，無水コハク酸等のカルボン酸無水物，塩化アセチル，塩化ブチリル等のカルボン酸塩化物，またはカルボン酸活性エステルでアシル化することにより容易に製造することができる。反応は，有機塩基，好ましくは，三級窒素塩基の存在下で実施することができる。三級窒素塩基の例としては，限定されないが，トリメチルアミン，トリエチルアミン，ピリジン，および１，８−ジアザビシクロ［５．４．１］ウンデセ−７−エンが挙げられる。
【０１６７】
反応を実施する溶媒は，非プロトン性溶媒でありうる。"プロトン性溶媒"は，水素原子を適切に酸性にし，したがって水素が水素結合を介して溶質と"共有"されるようにする，酸素または窒素原子に共有結合した水素原子を有する溶媒である。"非プロトン性溶媒"は極性であっても非極性であってもよいが，いずれの場合にも，酸性水素を含まず，したがって，溶質と水素結合をすることができない。非極性非プロトン性溶媒の例としては，限定されないが，ペンタン，ヘキサン，ベンゼン，トルエン，塩化メチレンおよび四塩化炭素が挙げられる。極性非プロトン性溶媒の例は，クロロホルム，テトラヒドロフラン，ジメチルスルホキシドおよびジメチルホルムアミドおよびピリジンである。本発明の現在好ましい態様においては，溶媒は極性非プロトン性溶媒であり，好ましくはジメチルホルムアミド，テトラヒドロフランまたはピリジンである。反応は，典型的には，室温で行う。
【０１６８】
Ｄ．式ＩＶの化合物
式ＩＶの化合物は，式Ｖの化合物から，以下に示されるようにして製造することができる：
【化３９】
2005514368.tif 000027
【０１６９】
Ｒ2−Ｒ10が発明の概要において定義されるものであり，ＲaおよびＲbが水素ではない式ＩＶの化合物は，式Ｖの化合物を，リン酸化剤，例えばホスホリルハロゲン化物（例えば，ジメチルクロロホスフェート）と反応させることにより製造することができる。反応は，強塩基（例えば水素化ナトリウム）の存在下で，有機溶媒（例えば，ＴＨＦ，ＤＭＦ等）中で行う。メチル基は，適当な脱メチル化反応条件下で，例えば，臭化トリメチルシリルの存在下でＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミドで処理することにより，除去することができる。反応は，極性有機溶媒，例えばアセトニトリル中で行う。
【０１７０】
式Ｉ−ＩＶの化合物の製造は，さらに，保護基を除去する工程を含んでいてもよい。"保護基"とは，その基を除去するまで反応性成分を不活性にするために用いられる基を表す。反応性成分は当業者にはよく知られている。好ましい反応性成分には，反応性窒素，酸素，イオウ，カルボキシルおよびカルボニル基が含まれる。窒素保護基の例には，限定されないが，ベンジル，ベンジルオキシカルボニル，ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル，シリル基（例えばｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル），９−フルオレニルメトキシカルボニル，９−フェニル−９−フルオレニルおよびアリールスルホニル基（例えばトルエンスルホニル）が含まれる。酸素保護基の例には，限定されないが，アリルオキシカルボニル，ベンゾイル，ベンジル，ｔｅｒｔ−ブチル，シリル基（例えばｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル），２−エトキシエチル，ｐ−メトキシベンジル，メトキシメチル，ピバロイル，テトラヒドロピラン−２−イルおよびトリチルが含まれる。カルボキシル保護基の例には，限定されないが，メチル，アリル，ベンジル，シリル基（例えばｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）およびｐ−ニトロベンジルが含まれる。カルボニル保護基の例には，限定されないが，アセチル基（例えばＯ，Ｏ−アセタール）が含まれる。
【０１７１】
保護基は，文献から知られる方法を用いて除去することができる。例えば，窒素保護基の除去については，Ｇｒｅｅｎｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  無機  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ  ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ｐｐ．３０９−４０５およびＫｏｃｉｅｎｓｋｉ（１９９４）Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ，Ｔｈｉｅｍｅ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ｐｐ．１８５−２４３を参照。特定の保護基を除去する方法は本明細書中に例示される。
【０１７２】
用途
その触媒活性が本発明の好ましい態様の処方に含まれる化合物により調節されるＰＫには，蛋白質チロシンキナーゼが含まれ，これには２つのタイプがある：レセプターチロシンキナーゼ（ＲＴＫ）および細胞性チロシンキナーゼ（ＣＴＫ），およびセリン−トレオニンキナーゼ（ＳＴＫ）である。ＲＴＫに媒介されるシグナル伝達は，特定の成長因子（リガンド）との細胞外相互作用により開始され，次にレセプターが二量化し，固有の蛋白質チロシンキナーゼ活性が過渡的に刺激され，リン酸化する。このことにより，内部シグナル伝達分子用の結合部位が形成され，種々の細胞質シグナリング分子との複合体の形成につながり，これは，適切な細胞応答（例えば，細胞分裂，細胞外微小環境に及ぼす代謝的効果等）を促進する。Ｓｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｕｌｌｒｉｃｈ，１９９２，Ｎｅｕｒｏｎ  ９：３０３−３９１を参照。
【０１７３】
成長因子レセプターのチロシンリン酸化部位がシグナリング分子のＳＨ２（ｓｒｃホモロジー）ドメインの高親和性結合部位として機能することが示されている（Ｆａｎｔｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｃｅｌｌ  ６９：４１３−４２３，Ｓｏｎｇｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４：２７７７−２７８５），Ｓｏｎｇｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃｅｌｌ７２：７６７−７７８，およびＫｏｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５２：６６８−６７８）。ＲＴＫと会合するいくつかの細胞内基質蛋白質が同定されている。それらは二つの主要なグループに分けられる：（１）触媒ドメインを有する基質，および（２）そのようなドメインを欠くが，アダプターとして働き，触媒活性のある分子と会合する基質（Ｓｏｎｇｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．１９９３，Ｃｅｌｌ  ７２：７６７−７７８）。レセプターとその基質のＳＨ２ドメインとの間の相互作用の特異性は，リン酸化されたチロシン残基を直接取囲んでいるアミノ酸残基によって決定される。ＳＨ２ドメインと，特定のレセプターのホスホチロシン残基を取り囲んでいるアミノ酸配列との間の結合親和性の差異は，それらの基質リン酸化のプロファイルに見られる差異と一致している（Ｓｏｎｇｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．１９９３，Ｃｅｌｌ  ７２：７６７−７７８）。これらの知見は，各々のＲＴＫの機能が，その発現パターンならびにリガンド利用可能性によるのみならず，特定のレセプターによって活性化される下流の一連のシグナル伝達経路によっても決定されることを示唆している。したがって，リン酸化は特異的な成長因子レセプター，ならびに分化因子レセプターによってリクルートされる，シグナリング経路の選択性を決定する重要な段階を提供する。
【０１７４】
ＳＴＫは，本来細胞質ゾル性であり，しばしばＰＴＫ事象についての下流方向の応答として，細胞内部の生化学に影響を及ぼす。ＳＴＫは，細胞増殖に導くＤＮＡ合成とそれに続く細胞分裂とを開始する，シグナリング過程に関与することが示唆されている。
【０１７５】
したがって，ＰＫシグナル伝達は，種々の応答の中で特に，細胞増殖，分化，成長，および代謝をもたらす。異常な細胞増殖は，癌腫，肉腫，神経膠芽細胞腫，および血管腫等の新生物，白血病，乾癬，動脈硬化症，関節炎，および糖尿病性網膜炎等の疾患，および制御されない新脈管形成および／または脈管形成に関連する他の疾患を含む，広い範囲の疾患および疾病という結果をもたらしうる。
【０１７６】
別の観点においては，本発明の化合物と接触させることによりその触媒活性が調節される蛋白質キナーゼは，蛋白質チロシンキナーゼであり，より詳細には，レセプター蛋白質チロシンキナーゼである。本発明の化合物またはその塩によりその触媒活性を調節することができるレセプター蛋白質チロシンキナーゼには，限定されないが，ＥＧＦ，ＨＥＲ２，ＨＥＲ３，ＨＥＲ４，ＩＲ，ＩＧＦ−１Ｒ，ＩＲＲ，ＰＤＧＦＲα，ＰＤＧＦＲβ，ＣＳＦＩＲ，Ｃ−Ｋｉｔ，Ｃ−ｆｍｓ，Ｆｌｋ−１Ｒ，Ｆｌｋ４，ＫＤＲ／Ｆｌｋ−１，Ｆｌｔ−１，ＦＧＦＲ−１Ｒ，ＦＧＦＲ−２Ｒ，ＦＧＦＲ−３ＲおよびＦＧＦＲ−４Ｒが含まれる。
【０１７７】
本発明の化合物またはその塩と接触させることによりその触媒活性が調節される蛋白質チロシンキナーゼはまた，非レセプターまたは細胞性蛋白質チロシンキナーゼ（ＣＴＫ）であってもよい。すなわち，ＣＴＫ，例えば，限定されないが，Ｓｒｃ，Ｆｒｋ，Ｂｔｋ，Ｃｓｋ，Ａｂｌ，ＺＡＰ７０，Ｆｅｓ，Ｆｐｓ，Ｆａｋ，Ｊａｋ，Ａｃｋ，Ｙｅｓ，Ｆｙｎ，Ｌｙｎ，Ｌｃｋ，Ｂｌｋ，Ｈｃｋ，ＦｇｒおよびＹｒｋの触媒活性は，本発明の化合物または塩と接触させることにより調節することができる。
【０１７８】
本発明の化合物と接触させることによりその触媒活性が調節されるＰＫのさらに別の群は，セリン−トレオニン蛋白質キナーゼ，例えば，限定されないが，ＣＤＫ２およびＲａｆである。
【０１７９】
別の観点においては，本発明は，治療上有効量の本発明の化合物またはその塩を生物に投与することによりＰＫ関連疾患を治療または予防する方法に関する。
【０１８０】
ＰＫ関連疾患の治療または予防の目的で本発明の化合物またはその塩を含む医薬組成物を生物に投与することもまた本発明の１つの観点である。
【０１８１】
したがって，本発明は，ＲＴＫ，ＣＴＫおよび／またはＳＴＫの酵素活性に影響を与え，このことによりそのような蛋白質により伝達されるシグナルを妨害することによりＰＫシグナル伝達を調節する化合物に関する。より詳細には，本発明は，多くの種類の固形腫瘍，例えば，限定されないが，癌腫，肉腫，例えばカポジ肉腫，赤芽球腫，神経膠芽細胞腫，髄膜腫，星状細胞腫，黒色腫および筋原細胞腫を治癒するための治療方法として，ＲＴＫ，ＣＴＫおよび／またはＳＴＫに媒介されるシグナル伝達経路を調節する化合物に関する。非固形腫瘍癌，例えば白血病の治療又は予防もまた本発明により企図される。適応症には，限定されないが，脳癌，膀胱癌，卵巣癌，胃癌，膵臓癌，結腸癌，血液癌，肺癌および骨癌が含まれる。
【０１８２】
本明細書に記載される化合物がその予防，治療および研究に有用であろう，不適切なＰＫ活性に関連する疾患のタイプのさらなる例には，限定されないが，細胞増殖性疾患，繊維性疾患，代謝性疾患および感染性疾病が含まれる。
【０１８３】
本発明により予防，治療またはさらに研究することができる細胞増殖性疾患には，癌，血管増殖性疾患およびメサンギウム細胞増殖性疾患が含まれる。
【０１８４】
血管増殖性疾患とは，異常な脈管形成（血管の形成）および新脈管形成（血管の拡散）に関連する疾患を表す。脈管形成および新脈管形成は胚発生，黄体形成，創傷治癒，および臓器再生等の種々の正常な生理学的過程において重要な役割を果たすが，それらはまた腫瘍を生かしておくために必要な新しい毛細血管をそれらが形成させる癌の発生においても中枢的な役割を演じる。血管増殖疾患の他の例は，新しい毛細血管が関節に侵入して軟骨を破壊する関節炎，および糖尿病性網膜炎のように，網膜内の新しい毛細血管が硝子体に侵入し，出血させ，さらに失明を引起す眼性疾患を含む。
【０１８５】
高い親和性をもってＶＥＧＦに結合する２つの構造的に関連するＲＴＫが同定されている：ｆｍｓ様チロシン１（ｆｉｔ−１）レセプター（Ｓｈｉｂｕｙａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，５：５１９−５２４；ＤｅＶｒｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５５：９８９−９９１）およびＫＤＲ／ＦＬＫ−１レセプター（ＶＥＧＦ−Ｒ２としても知られる）。血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）は，インビトロ内皮細胞成長促進活性を有する内皮細胞特異的有糸分裂促進物質であることが報告されている（Ｆｅｒｒａｒａ＆Ｈｅｎｚｅｌ，１９８９，Ｂｉｏｃｈｅｉｎ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，１６１：８５１−８５８；Ｖａｉｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６５：１９４６１−１９５６６）。米国特許出願０８／１９３，８２９，０８／０３８，５９６および０７／９７５，７５０に記載される情報は，ＶＥＧＦが内皮細胞増殖の原因となるのみならず，正常および病的な新脈管形成の主要な調節剤であることを強く示唆する。一般に，Ｋｌａｇｓｂｕｒｎ＆Ｓｏｋｅｒ，１９９３，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３（１０）６９９−７０２；Ｈｏｕｃｋ，  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６７：２６０３１−２６０３７を参照。
【０１８６】
正常な脈管形成および新脈管形成は，種々の生理学的プロセス，例えば，胚発生，創傷治癒，臓器再生等の種々の生理学的過程，および排卵期の黄体における濾胞形成と妊娠後の胎盤の成長等の女性の生殖過程において重要な役割を果たしている（Ｆｏｌｋｍａｎ＆Ｓｈｉｎｇ，１９９２，Ｊ．ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍ．，２６７（１６）：１０９３１−３４）。制御されない脈管形成および／または新脈管形成は，糖尿病等の疾病ならびに成長が血管形成に依存する悪性固形腫瘍に関連づけられてきた（Ｋｌａｇｓｂｕｒｎ＆Ｓｏｋｅｒ，１９９３，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３（１０）：６９９−７０２；Ｆｏｌｋｈａｍ，１９９１，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，８２：４−６；Ｗｅｉｄｎｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３２４：１−５）。
【０１８７】
現在理解されているところによれば，新脈管形成および脈管形成の間の内皮細胞増殖および移動におけるＶＥＧＦの役割は，これらのプロセスにおけるＫＤＲ／ＦＬＫ−１レセプターの重要な役割を示す。糖尿病（Ｆｏｌｋｍａｎ，１９８，ＸＩｔｈ  Ｃｏｎｇｒｅｓｓ  ｏｆ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ（Ｖｅｒｓｔｒａｅｔａ，  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．），ｐｐ．５８３−５９６，Ｌｅｕｖｅｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｅｕｖｅｎ）および関節炎等の疾病，ならびに悪性腫瘍成長は，制御されない新脈管形成により引き起こされうる。例えば，Ｆｏｌｋｍａｎ，１９７１，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，２８５：１１８２−１１８６を参照。ＶＥＧＦが特異的に結合するレセプターは，脈管形成および／または新脈管形成，およびそのようなプロセスにより引き起こされる異常な細胞成長が関与する種々の重症の疾病の制御および調節の重要かつ強力な治療標的である（Ｐｌｏｗｍａｎ，  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＤＮ＆Ｐ，７（６）：３３４−３３９）。より詳細には，血管新生におけるＫＤＲ／ＦＬＫ−１レセプターの高度に特異的な役割のため，これは，血管の制御されない形成が関与する癌および他の疾病の治療に対する治療方法の選択すべき標的であろう。
【０１８８】
すなわち，本発明の１つの観点は，新脈管形成および／または脈管形成を阻害または促進するために，チロシンキナーゼシグナル伝達，例えばＫＤＲ／ＦＬＫ−１レセプターシグナル伝達を制御および／または調節しうる化合物，すなわち，ＶＥＧＦ等のリガンドにより活性化されたときにＫＤＲ／ＦＬＫ−１により伝達されるシグナルを阻害，妨害または干渉する化合物に関する。本発明の化合物はレセプターまたはチロシンキナーゼシグナル伝達経路に沿った他の成分に作用すると考えられるが，これらはまた，制御されない新脈管形成に起因する腫瘍細胞に直接作用することができる。
【０１８９】
一般的な"ｆｌｋ−１"レセプターの，ヒトおよびマウスの同等物の命名は異なるが，それらは多くの点において交換可能である。マウスのレセプターＦｌｋ−１と，ヒトにおけるその同等物であるＫＤＲは，細胞内ドメインのうちの９３．４％の配列相同性を共有している。同様に，マウスＦｌｋ−１は，マウスＶＥＧＦと同じ親和性をもってヒトＶＥＧＦと結合し，したがっていずれの種に由来するリガンドによっても活性化される。Ｍｉｌｌａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃｅｌｌ，７２：８３５−８４６；Ｑｕｉｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：７５３３−７５３７。Ｆｌｋ−１はまた，２９３細胞（ヒト胚性腎臓の線維芽細胞）において同時発現された場合，ヒトＲＴＫの基質（例えばＰＬＣ−γまたはｐ８５）と結合し，続いてチロシンをリン酸化する。
【０１９０】
したがって，Ｆｌｋ−１レセプターに依存したモデルは，ＫＤＲレセプターの理解に直接適用することができる。例えば，マウスのシグナル伝達経路を調節する化合物を同定する方法においてマウスＦｌｋ−１レセプターを使用することは，ヒトのシグナル伝達経路を調節するために用いることができる化合物，すなわちＫＤＲレセプターに関連した活性を調節する化合物の同定に直接適用することができる。すなわち，インビトロにおいてＫＤＲ／ＦＬＫ−１の阻害剤として同定された化学的化合物は，適当なインビボのモデルにおいて確認することが可能である。インビボでのマウスおよびラット双方の動物モデルは，ＫＤＲ／ＦＬＫ−１に誘導されるシグナル伝達経路に作用する薬剤の，臨床上の潜在能力を調べるために優れた価値があることが証明されている。
【０１９１】
すなわち，１つの観点においては，本発明は，ＫＤＲ／ＦＬＫ−１レセプターの酵素活性を変化させ，ＫＤＲ／ＦＬＫ−１により伝達されるシグナルを妨害することにより脈管形成および／または新脈管形成を制御，調節および／または阻害する化合物に関する。別の観点においては，本発明は，多くの種類の固形腫瘍，例えば，限定されないが，神経膠芽細胞腫，黒色腫およびカポジ肉腫，および卵巣，肺，乳，前立腺，膵臓，結腸および類表皮癌腫を治療するための治療方法として，ＫＤＲ／ＦＬＫ−１に媒介されるシグナル伝達経路を制御，調節および／または阻害する化合物に関する。さらに，データは，ＫＤＲ／Ｆｌｋ−１媒介性シグナル伝達経路を阻害する化合物の投与はまた，血管腫，再狭窄，および糖尿病性網膜症の治療にも用いられることを示唆する。
【０１９２】
本発明のさらに別の観点は，他のレセプターが媒介する経路，例えば，ｆｌｔ−１レセプターを含む経路による脈管形成および新脈管形成の阻害に関する。
【０１９３】
レセプターチロシンキナーゼに媒介されるシグナル伝達は，特定の成長因子（リガンド）との細胞外相互作用により開始され，次にレセプターが二量化し，固有の蛋白質チロシンキナーゼ活性が過渡的に刺激され，自己リン酸化する。このことにより，内部シグナル伝達分子用の結合部位が形成され，種々の細胞質シグナリング分子との複合体の形成につながり，これは，適切な細胞応答（例えば，細胞分裂，細胞外微小環境に及ぼす代謝的効果等）を促進する。Ｓｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｕｌｌｒｉｃｈ，１９９２，Ｎｅｕｒｏｎ  ９：１−２０を参照。
【０１９４】
ＫＤＲ／ＦＬＫ−１の細胞内領域と，ＰＤＧＦ−βレセプターの細胞内領域（５０．３％の相同性），および／または関連するｆｌｔ−１レセプターとの緊密な相同性は，重複したシグナル伝達経路の誘導を示している。例えばＰＤＧＦ−βレセプターについては，ｓｒｃファミリーのメンバー（Ｔｗａｍｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：７６９６−７７００），ホスファチジルイノシトール−３’−キナーゼ（Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１２：９８１−９９０），ホスホリパーゼｃγ（Ｋａｓｈｉｓｈｉａｎ＆Ｃｏｏｐｅｒ，１９９３，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，４：４９−５１），ｒａｓ−ＧＴＰａｓｅ活性化蛋白質（Ｋａｓｈｉｓｈｉａｎら，１９９２，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１１：１３７３−１３８２），ＰＴＰ−ＩＤ／ｓｙｐ（Ｋａｚｕｌａｕｓｋａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０９０：６９３９−６９４３），Ｇｒｂ２（Ａｒｖｉｄｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１４：６７１５−６７２６），およびアダプター分子ＳｈｃおよびＮｕｋ（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１３：６８８９−６８９６）が，異なる自己リン酸化部位に関与する領域に結合することが示されている。全般的には，Ｃｌａｅｓｓｏｎ−Ｗｅｌｓｈ，１９９４，Ｐｒｏｇ．Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｓ．，５：３７−５４参照のこと。したがって，ＫＤＲ／ＦＬＫ−１により活性化されるシグナル伝達経路は，ｒａｓ経路（Ｒｏｚａｋｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｎａｔｕｒｅ，３６０：６８９−６９２），ＰＩ−３’−キナーゼ，ｓｒｃ介在性，およびｐｌｃγ介在性の経路を含むと考えられる。これらの経路の各々は，内皮細胞におけるＫＤＲ／ＦＬＫ−１の新脈管形成および／または脈管形成効果において，重要な役割を果たすかもしれない。したがって本発明のさらなる観点は，本明細書に記載される有機化合物を，新脈管形成および脈管形成を調節するべく用いることに関するが，それはかかる過程がこれらの経路によって調節されるためである。
【０１９５】
逆に，再狭窄などの，血管の収縮，狭窄，または閉鎖に関連した疾患にも関与することが示唆されており，本発明の方法により治療または予防することができる。
【０１９６】
繊維性疾患とは，細胞外マトリックスの異常な形成を表す。繊維性疾患の例には，肝硬変およびメサンギウム細胞増殖性疾患が含まれる。肝硬変は，肝臓瘢痕の形成を引き起こす細胞外マトリックスの組成の増加を特徴とする。肝臓瘢痕を引き起こす細胞外マトリックスの増加はまた，肝炎ウイルス等のウイルス感染に起因する。脂肪細胞は，肝硬変において主要な役割を果たすようである。示唆されている他の繊維性疾患には，アテローム性動脈硬化症が含まれる。
【０１９７】
メサンギウム細胞増殖疾患とは，メサンギウム細胞の異常な増殖により引き起こされる疾患を表す。メサンギウム増殖疾患には，種々のヒト腎臓疾病，例えば，糸球体腎炎，糖尿病性ネフロパシー，悪性腎硬化症，ならびに血栓性細小血管症候群，移植拒絶，および糸球体症が含まれる。ＲＴＫ  ＰＤＧＦ−Ｒは，メサンギウム細胞増殖の維持に関与することが示唆されている（Ｆｌｏｅｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ４３：４７Ｓ−５４Ｓ）。
【０１９８】
多くの癌は細胞増殖性疾患であり，先に記載されるように，ＰＫは細胞増殖性疾患と関連づけられてきた。すなわち，ＰＫ，例えば，ＲＴＫファミリーのメンバーが癌の発達と関連づけられてきたことも驚くべきことではない。ＥＧＦＲ（Ｔｕｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ６３：２２７−２３３，Ｔｏｒｐ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，ＡＰＭＩＳ  １００：７１３−７１９），ＨＥＲ２／ｎｅｕ（Ｓｌａｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：７０７−７１２），およびＰＤＧＦ−Ｒ（Ｋｕｍａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，７：６２７−６３３）等のこれらのレセプターのいくつかは多くの腫瘍において過剰発現され，および／またはオートクリンループにより持続的に活性化される。事実，ほとんどの一般的かつ重症の癌においては，これらのレセプターの過剰発現（Ａｋｂａｓａｋ  ａｎｄ  Ｓｕｎｅｒ−Ａｋｂａｓａｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．，１１１：１１９−１３３，Ｄｉｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｒｅｓ．６１：２４９−２７３，Ｋｏｒｃ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９０，１３５２−１３６０），およびオートクリンループ（Ｌｅｅ  ａｎｄ  Ｄｏｎｏｇｈｕｅ，１９９２，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１８：１０５７−１０７０，Ｋｏｒｃ  ｅｔ  ａｌ．，前掲，Ａｋｂａｓａｋ  ａｎｄ  Ｓｕｎｅｒ−Ａｋｂａｓａｋ  ｅｔ  ａｌ．，前掲）が示されている。例えば，ＥＧＦＲは扁平上皮癌，星状細胞腫，神経芽細胞腫，頭頚部癌，肺癌，および膀胱癌と関連づけられている。ＨＥＲ２は乳，卵巣，胃，肺，膵臓，および膀胱の癌と関連づけられている。ＰＤＧＦ−Ｒは神経芽細胞腫，黒色腫，ならびに肺，卵巣および前立腺の癌と関連づけられている。ＲＴＫｃ−ｍｅｔはまた，悪性腫瘍形成と関連づけられている。例えば，ｃ−ｍｅｔは，他の癌の中でも特に，結腸直腸，甲状腺，膵臓，胃および造血細胞癌腫およびリンパ腫と関連づけられている。さらに，ｃ−ｍｅｔは白血病と結びつけられている。ｃ−ｍｅｔ遺伝子の過剰発現はまた，ホジキン病およびバーキット病を有する患者において検出されている。
【０１９９】
ＩＧＦ−ＩＲは，栄養上の支持およびＩＩ型糖尿病に関係づけられていることに加えて，いくつかの型の癌に関係づけられている。例えば，ＩＧＦ−Ｉはいくつかの型の腫瘍，例えばヒト乳癌の癌腫細胞（Ａｒｔｅａｇａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８４：１４１８−１４２３），および小細胞肺腫瘍（Ｍａｃａｕｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５０：２５１１−２５１７）のオートクリン成長刺激因子として示唆されている。さらに，ＩＧＦ−Ｉは神経系の正常な成長および分化に完全に関与しており，ヒトの神経膠腫のオートクリン刺激因子であるように見える。Ｓａｎｄｂｅｒｇ−Ｎｏｒｄｑｖｉｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：２４７５−２４７８。細胞増殖におけるＩＧＦ−ＩＲとそのリガンドの重要性は，培養されている多くの細胞型（線維芽細胞，上皮細胞，平滑筋細胞，Ｔリンパ球，骨髄性細胞，軟骨細胞，および骨芽細胞（骨髄の幹細胞）がＩＧＦ−Ｉによって成長するよう刺激されるという事実によってさらに支持される。Ｇｏｌｄｒｉｎｇ  ａｎｄ  Ｇｏｌｄｒｉｎｇ，１９９１，Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，１：３０１−３２６。Ｂａｓｅｒｇａは，最近の一連の発表において，ＩＧＦ−ＩＲが形質転換の機構において中心的な役割を果たしていること，またそれ自体がヒトの広範囲の悪性腫瘍に対する治療的介入のための好ましい標的となり得ることを示唆している。Ｂａｓｅｒｇａ，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５５：２４９−２５２，Ｂａｓｅｒｇａ，１９９４，Ｃｅｌｌ  ７９：９２７−９３０，Ｃｏｐｐｏｌａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１４：４５８８−４５９５。
【０２００】
ＳＴＫは，特に乳癌を含む多くの型の癌に関与することが示唆されている（Ｃａｎｃｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，５４：５７１−７７（１９９３））。
【０２０１】
異常なＰＫ活性と疾病との関連性は，癌に限られない。例えば，ＲＴＫは，疾病，例えば，乾癬，糖尿病，子宮内膜症，新脈管形成，じゅく状斑の発達，アルツハイマー疾病，フォン・ヒッペル−リンダウ症候群，表皮過増殖および神経変性性疾病，加齢性黄斑変性および血管腫と関連づけられている。例えば，ＥＧＦＲは，角膜および皮膚の創傷治癒における関与が示唆されている。タイプＩＩ糖尿病においてインスリン−ＲおよびＩＧＦ−１Ｒの欠陥が示されている。特定のＲＴＫとその治療適応症との間のより完全な相関はＰｌｏｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＤＮ＆Ｐ７：３３４−３３９に記載されている。
【０２０２】
先に記載されているように，ＲＴＫのみならず，ＣＴＫ，例えば，限定されないが，ｓｒｃ，ａｂｌ，ｆｐｓ，ｙｅｓ，ｆｙｎ，ｌｙｎ，ｌｃｋ，ｂｌｋ，ｈｃｋ，ｆｇｒおよびｙｒｋ（Ｂｏｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．，６：３４０３−３４０９により概説）もまた，増殖および代謝性シグナル伝達経路に関与しており，したがって，本発明にかかる多くのＰＴＫ媒介性疾患に関与することが予測され，このことが実際に示されている。例えば，変異したｓｒｃ（ｖ−ｓｒｃ）は，トリにおいて発癌蛋白質（ｐｐ６０v-src）であることが示されている。さらに，その細胞性ホモログであるプロトオンコジンｐｐ６０c-srcは，多くのレセプターの発癌シグナルを伝達する。腫瘍におけるＥＧＦＲまたはＨＥＲ２／ｎｅｕの過剰発現は，悪性細胞に特徴的であるが正常細胞では見られないｐｐ６０c-srcの構成的活性化につながる。一方，ｃ−ｓｒｃの発現に欠陥を有するマウスは大理石骨病的表現型を示し，このことは，ｃ−ｓｒｃが破骨細胞機能において鍵となるよう関与していること，および関連する疾患に関与している可能性を示唆する。
【０２０３】
同様に，Ｚａｐ７０は，自己免疫疾患に関連するかもしれないＴ−細胞シグナリングにおける関与が示唆されている。
【０２０４】
ＳＴＫは，炎症，自己免疫疾患，免疫応答，および過増殖疾患，例えば再狭窄，繊維症，乾癬，変形性関節症および慢性関節リウマチと関連づけられている。
【０２０５】
ＰＫはまた，胚着床における関与も示唆されている。すなわち，本発明の化合物は，そのような胚着床を防止する有効な方法を提供することができ，したがって，産児調節剤として有用であろう。
【０２０６】
さらに別の観点においては，本発明の化合物はまた抗感染症剤として用いることができる。例えば，インドリノン化合物は，抗菌および抗真菌活性を示すことが知られている。例えば，Ｓｉｎｇｈ  ａｎｄ  Ｊｈａ（１９８９）"Ｉｎｄｏｌｉｎｏｎｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ａｇｅｎｔｓ，"Ｚｅｒａ，Ｍ．Ｍｉｋｒｏｂｉｏｌ．１４４（２）：１０５−１０９を参照。さらに，インドリノン化合物は，有意な抗ウイルス活性を示すことが報告されている。例えば，Ｍａａｓｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）"Ｖｉｒａｌ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｔｈｉａｚｏｌｏ−ｉｓｏ−ｉｎｄｏｌｉｎｏｎｅｓ，ａ  ｎｅｗ  ｃｌａｓｓ  ｏｆ  ｎｏｎｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  １  ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ，"Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．３７（１２）：２６１２−２６１７を参照。
【０２０７】
最後に，現在，ＲＴＫおよびＣＴＫの両方とも過剰免疫疾患に関与していることが疑われている。
【０２０８】
上で議論される蛋白質キナーゼの１またはそれ以上の触媒活性を調節する化学化合物を同定する方法は本発明の別の観点である。該方法は，所望の蛋白質キナーゼを発現する細胞を本発明の化合物（またはその塩）と接触させ，化合物が及ぼす影響について細胞をモニターすることを含む。影響は，裸眼または装置を使用して観察可能な細胞表現型の変化または無変化でありうる。モニターされる細胞表現型の変化または無変化は，例えば，限定されないが，細胞内における蛋白質キナーゼの触媒活性の変化または無変化，または蛋白質キナーゼと天然の結合パートナーとの相互作用の変化または無変化でありうる。
【０２０９】
医薬組成物および投与
本発明の化合物またはその薬学的に許容しうる塩は，そのままでヒト患者に，または，上述の物質が適当な担体または賦形剤と混合されている医薬組成物中で投与することができる。薬剤の処方および投与の手法は，"Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，"Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ．，の最新版に見いだすことができる。
【０２１０】
投与の経路
本明細書において用いる場合，"投与する"または"投与"とは，本発明の化合物または塩，または本発明の化合物または塩を含む医薬組成物を，ＰＫ関連疾患の予防または治療の目的で生物に輸送することを表す。
【０２１１】
適当な投与経路には，限定されないが，経口，直腸内，経粘膜，または腸内投与，または筋肉内，皮下，骨髄内，髄腔内，直接心室内，静脈内，硝子体内，腹腔内，鼻腔内，または眼内注射が含まれる。好ましい投与経路は経口および非経口である。
【０２１２】
あるいは，化合物は，全身的方法ではなく局所に，例えば化合物を固形癌内に直接，しばしばデポ剤または持続放出処方中で注射することにより投与してもよい。
【０２１３】
さらに，薬物はターゲティングされたドラッグデリバリーシステムにおいて，例えば腫瘍特異的抗体により被覆されたリポソーム中で投与してもよい。リポソームは腫瘍にターゲティングされ，選択的に取り込まれるであろう。
【０２１４】
組成物／処方
本発明の医薬組成物は，当該技術分野においてよく知られる方法，例えば，慣用の混合，溶解，顆粒化，糖衣作成，研和，乳化，カプセル封入，捕捉，凍結乾燥法またはスプレー乾燥により製造することができる。
【０２１５】
本発明にしたがって使用するための医薬組成物は，活性化合物を薬剤として使用することができる製剤に加工することを容易にする賦形剤および補助剤を含む，１またはそれ以上の生理学的に許容しうる担体を用いて，慣用の方法で処方することができる。適切な処方は，選択される投与経路に依存する。
【０２１６】
注射用には，本発明の化合物を水性溶液，好ましくは生理学的に適合性の緩衝液中で処方することができ，このような緩衝液は低濃度の界面活性剤または共溶媒を含んでいても含まなくてもよく，あるいは生理学的食塩水緩衝液中で処方することができる。経粘膜投与用には，浸透すべき障壁に適した浸透剤が処方に用いられる。そのような浸透剤は当該技術分野において一般に知られている。
【０２１７】
経口投与のためには，活性化合物を当該技術分野においてよく知られる薬学的に許容しうる担体と混合することにより化合物を処方することができる。そのような担体は，本発明の化合物を，治療すべき患者による経口摂取のための錠剤，丸薬，トローチ剤，糖衣剤，カプセル，液体，ゲル，シロップ，スラリー，懸濁液等として処方することを可能とする。経口で使用するための医薬製剤は，固体賦形剤を用いて，得られた混合物を任意にすりつぶし，所望の場合には適当な助剤を加えた後に，顆粒の混合物を加工して，錠剤または糖衣錠コアを得ることができる。
【０２１８】
適当な賦形剤には，特に，ラクトース，ショ糖，マンニトール，またはソルビトール等の糖類；トウモロコシデンプン，小麦デンプン，米デンプン，およびジャガイモデンプン等のセルロース製品，ゼラチン，トラガカントゴム，メチルセルロース，ヒドロキシプロピルメチルセルロース，カルボキシメチルセルロースナトリウム，および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）等の増量剤などの賦形剤が含まれる。所望の場合には，架橋されたポリビニルピロリドン，寒天，またはアルギン酸等の崩壊剤を加えてもよい。その塩，例えばアルギン酸ナトリウムを用いてもよい。
【０２１９】
糖衣剤のコアは，適当なコーティングとともに供給される。この目的のためには，濃縮された糖溶液を用いることができる。これは，アラビアゴム，タルク，ポリビニルピロリドン，カルボポールゲル，ポリエチレングリコール，および／または二酸化チタン，ラッカー溶液，および適当な有機溶媒または溶媒混合物を任意に含むことができる。識別のため，あるいは活性化合物の用量の異なる組合せを特徴づけるため，染料または色素を錠剤または糖衣剤コーティングに添加してもよい。
【０２２０】
経口で使用することができる医薬組成物は，ゼラチンから作成されるプッシュフィットカプセル，ならびにゼラチンおよびグリセロール，ソルビトール等の可塑剤から作成される密封軟カプセルを含む。プッシュフィットカプセルは，活性成分を，ラクトース等の増量剤，デンプン等の結合剤，および／またはタルクおよびステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤，さらに任意に安定剤との混合物中に含むことができる。軟カプセルにおいては，活性化合物は脂肪油，流動パラフィン，液体ポリエチレングリコールクレモフォア，カプマル，中鎖または長鎖モノ−，ジ−またはトリ−グリセリド等の適当な液体中に溶解または懸濁することができる。これらの処方にはさらに安定剤を添加してもよい。
【０２２１】
吸入による投与用には，本発明に従って用いられる化合物は，加圧されたパックまたはネブライザーおよび適当な噴射剤，例えば，限定されないが，ジクロロジフルオロメタン，トリクロロフルオロメタン，ジクロロテトラフルオロエタン，または二酸化炭素を用いて，エアーゾルスプレイの形状で便利に輸送される。加圧されたエアーゾルの場合，用量単位は計量された量を送達するべく備えられたバルブにより調節することができる。例えば吸入器または注入器において使用するためのゼラチン製のカプセルおよびカートリッジは，化合物の粉末混合物と，ラクトースまたはデンプン等の適当な粉末基剤とを含むよう処方することができる。
【０２２２】
化合物は，例えばボーラス注射または連続注入による非経口投与用に処方することができる。注射用の処方は，単位用量にて，例えばアンプルにて，あるいは添加された保存料と共に多用量容器中で提供することができる。組成物は油性または水性のベヒクル中で，懸濁液，溶液，または乳濁液等の形状をとることができ，懸濁剤，安定剤および／または分散剤等の製剤物質を含んでいてもよい。
【０２２３】
非経口投与用の医薬組成物は，活性化合物の水溶性の形態，例えば，限定さないが，塩の水性溶液を含む。さらに，活性化合物の懸濁液は，親油性ベヒクル中に製造することができる。適切な親油性ベヒクルには，ゴマ油等の脂肪油，オレイン酸エチルまたはトリグリセリド等の合成脂肪酸エステル，またはリポソーム等の物質を含む。水性の注射用懸濁液は，カルボキシメチルセルロースナトリウム，ソルビトール，またはデキストラン等の，懸濁液の粘度を増加させる物質を含んでいてもよい。任意に，懸濁液はまた，高度に濃縮された溶液の調製を可能にする，当該化合物の溶解性を増加させる適当な安定剤および／または薬剤を含んでいてもよい。
【０２２４】
あるいは，活性成分は粉体の形態であって，適当なベヒクル，例えば滅菌された発熱物質を含まず，追加の界面活性剤または共溶媒，例えばポリソルベート８０，クレモフォア，シクロデキストリンスルホブチルエチル，プロピレンブリコール，またはポリエチレングリコール，例えばＰＥＧ−３００またはＰＥＧ４００，を含むか含まない滅菌水を用いて，使用前に構成することができる。
【０２２５】
化合物はまた，例えばカカオバターまたは他のグリセリド等の慣用の坐剤基剤を用いて，坐剤または停留浣腸等の直腸用組成物に処方することができる。
【０２２６】
上述した処方に加えて，化合物はまたデポ製剤として処方することができる。そのような長時間作用性の処方は，埋込み（例えば皮下または筋肉内への）によるか，または筋肉内注射により投与することができる。本発明の化合物は，この投与経路用に，適当な高分子性または疎水性物質と共に（例えば許容される油剤中の乳濁液として），イオン交換樹脂と共に，溶けにくい塩等の溶けにくい誘導体として，処方することができる。
【０２２７】
あるいは，疎水性の医薬化合物のための他の輸送系を用いてもよい。リポソームおよび乳剤は，疎水的薬剤のための輸送用ベヒクルまたは担体の例としてよく知られている。さらに，ある種の有機溶媒，例えばジメチルスルホキシドもまた用いることができるが，しばしば毒性がより高くなる。
【０２２８】
さらに，化合物は，持続放出系，例えば治療薬剤を含む固体疎水性ポリマーの準透過性マトリックスを用いて輸送することができる。種々の持続放出材料が確立されており，当業者にはよく知られている。持続放出カプセルはその化学的性質に応じて，数週間から１００日を越える期間，化合物を放出する。治療薬剤の化学的性質および生物学的安定性に応じて，さらに別の蛋白質安定化戦略を用いてもよい。
【０２２９】
本明細書に記載される医薬組成物は，適当な固体またはゲル相の担体または賦形剤を含んでいてもよい。そのような担体または賦形剤の例には，限定されないが，炭酸カルシウム，リン酸カルシウム，種々の糖，デンプン，セルロース誘導体，ゼラチン，およびポリエチレングリコールなどのポリマーが含まれる。
【０２３０】
本発明のＰＫ調節化合物の多くは，本発明の化合物が負にまたは正に荷電した種を形成する，生理学的に許容しうる塩として提供することができる。化合物が正に荷電した成分を形成する塩の例には，限定されないが，四級アンモニウム（本明細書において定義される），四級アンモニウム基の窒素原子が適切な酸と反応させた本発明の選択された化合物の窒素である塩，例えば，塩酸，硫酸，炭酸，乳酸，酒石酸，マレイン酸，コハク酸の塩が含まれる。本発明の化合物が負に荷電した種を形成している塩には，限定されないが，化合物中のカルボン酸基を適当な塩基（例えば水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ），水酸化カリウム（ＫＯＨ），水酸化カルシウム（Ｃａ（ＯＨ）2）等）と反応させることにより形成されるナトリウム，カリウム，カルシウムおよびマグネシウム塩が含まれる。
【０２３１】
投与量
本発明において使用するのに適した医薬組成物には，活性成分がその意図される目的，例えば，ＰＫ活性の調節またはＰＫ関連疾患の治療または予防を達成するのに有効な量で含まれている組成物が含まれる。
【０２３２】
より詳細には，治療上有効量とは，疾病の症状を予防，緩和または改善するのに，または治療している被験者の生存を長くするのに有効な化合物の量を意味する。式Ｉ−ＩＶおよびＶＩの化合物の治療上有効量は，約１０／ｍ2−４００／ｍ2の範囲であることができ，好ましくは５０／ｍ2−３００／ｍ2，より好ましくは１００／ｍ2−２２０／ｍ2，さらに好ましくは１９５／ｍ2である。
【０２３３】
本発明の方法において用いられる任意の化合物について，治療上有効な量または用量は，最初は細胞培養アッセイから見積もることができる。次に，動物モデルにおいて，培養細胞において決定されたＩＣ50（すなわちＰＫ活性の最大阻害の半分を達成する試験化合物の濃度）を含む循環濃度範囲を達成するような用量を処方することができる。次にそのような情報を用いてヒトにおける有用な用量をさらに正確に決定することができる。
【０２３４】
本明細書に記載される化合物の毒性および治療有効性は，培養細胞または実験動物における標準的な薬理学的方法により，例えば対象化合物についてＩＣ50およびＬＤ50（いずれも本明細書において議論される）を決定することにより，決定することができる。これらの培養細胞アッセイおよび動物研究から得られるデータは，ヒトにおいて用いるためのある範囲の投与量を処方するために用いることができる。投与量は，用いる投与形態および用いる投与経路により様々でありうる。正確な処方，投与経路，および投与量は，個々の医師が，患者の状態を考慮して選択することができる（例えば，Ｆｉｎｇｌ  ｅｔ  ａｌ．１９７５，"Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ"，Ｃｈ．１，ｐ．１を参照）。
【０２３５】
投与量および間隔は，個々に，活性成分がキナーゼ調節効果を維持するのに十分な血漿レベルを与えるよう調節することができる。このような血漿レベルは最小有効濃度（ＭＥＣ）と称される。ＭＥＣは，各化合物について異なるが，インビトロのデータ，例えば，本明細書に記載されるアッセイを用いて，キナーゼの５０−９０％の阻害を達成するのに必要な濃度から見積もることができる。ＭＥＣを達成するのに必要な投与量は，個々の特性および投与経路に依存するであろう。ＨＰＬＣアッセイまたはバイオアッセイを用いて血漿濃度を決定することができる。
【０２３６】
投与間隔もまた，ＭＥＣ値を用いて決定することができる。化合物は，１０−９０％の時間，好ましくは３０−９０％の時間，最も好ましくは５０−９０％の時間，ＭＥＣより高い血漿レベルを維持する投与計画を用いて投与すべきである。局所投与または選択的取り込みの場合には，薬剤の有効な局所濃度は血漿濃度とは関係ないであろう。当該技術分野において知られる他の方法を用いて，正確な投与量および間隔を決定することができる。
【０２３７】
投与される組成物の量は，もちろん，治療中の患者，苦痛の激しさ，投与方法，および担当医師の判断等に依存するであろう。
【０２３８】
包装
組成物は，所望の場合には，活性成分を含む１またはそれ以上の単位用量形を含んでいてもよいパックまたはディスペンサー装置，例えばＦＤＡに認可されたキット中で提供することができる。パックは，例えば，ブリスターパックなどの金属またはプラスチック箔を含むことができる。パックまたはディスペンサー装置には，投与の指示が添付されていてもよい。パックまたはディスペンサー装置はまた，薬剤の製造，使用，または販売を規制する政府機関によって規定された形式の，容器に付随した注意書が添付されていてもよく，その注意書はヒトまたは獣医学的投与用の化合物の形状の当該機関による承認を反映するものである。そのような注意書は，例えば米国食品医薬品局により処方箋調剤薬として承認されたラベルによるものか，または承認された製品に差込まれたものでもよい。適合した薬学的担体中に処方された，本発明の化合物を含む組成物もまた製造され，適当な容器内に配置され，さらに指示された状態の治療のためにラベルを付すことができる。ラベル上に示される適切な状態としては，腫瘍の治療，新脈管形成の阻害，線維症，糖尿病等の治療が挙げられる。
【０２３９】
本発明の１つの観点においては，上述した疾病および疾患の治療のために，本明細書に記載される化合物またはその塩またはプロドラッグを他の化学療法剤と組み合わせることができる。例えば，本発明の化合物または塩は，アルキル化剤，例えば，フルオロウラシル（５−ＦＵ）単独で，またはさらにロイコボリンと組み合わせて；または，他のアルキル化剤，例えば，限定されないが，他のピリミジン類似体，例えば，ＵＦＴ，カペシタビン，ゲムシタビンおよびシタラビン，アルキルスルホネート，例えばブルスファン（慢性顆粒球性白血病の治療に用いられる），イムプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン類，例えばベンゾデパ，カルボコン，メツレデパおよびウレデパ；エチレンイミン類およびメチルメラミン類，例えばアルトレタミン，トリエチレンメラミン，トリエチレンホスホルアミド，トリエチレンチオホスホルアミドおよびトリメチロールメラミン，およびナイトロジェンマスタード類，例えばクロラムブシル（慢性リンパ性白血病，原発性マクログロブリン血症および非ホジキンリンパ腫の治療において用いられる），シクロホスファミド（ホジキン病，多発性骨髄腫，神経芽細胞腫，乳癌，卵巣癌，肺癌，ウイルムス腫瘍および横紋筋肉腫の治療において用いられる），エストラムスチン，イフォスファミド，ノベムブリチン，プレドニムスチンおよびウラシルマスタード（原発性血小板増加症，非ホジキンリンパ腫，ホジキン病および卵巣癌用）；およびトリアジン類，例えばダカルバジン（軟組織肉腫用）と組み合わせることができる。
【０２４０】
同様に，本発明の化合物または塩はまた，他の抗代謝化学療法剤，例えば，限定されないが，葉酸類似体（例えば，メトトレキセート（急性リンパ性白血病，絨毛癌腫，菌状息肉腫，乳癌，頭頸部癌および肺癌，骨形成性肉腫の治療に用いられる）およびプテロプテリン），プリン類似体，例えばメルカプトプリンおよびチオグアニン（急性顆粒球性白血病，急性リンパ性白血病および慢性顆粒球性白血病の治療に用いられる）と組み合わせて用いることができる。
【０２４１】
さらに，本発明の化合物または塩は，天然産物化学療法剤，例えば，限定されないが，ビンカアルカロイド（例えばビンブラスチン（乳癌および精巣癌に用いられる），ビンクリスチン，ビンデシン），エピポドフィロトキシン類（例えばエトポシド，テニポシド（両方とも精巣癌およびカポジ肉腫の治療に用いられる）），抗生物質化学療法剤（例えばダウノルビシン，ドキソルビシン，エピルビシン，マイトマイシン（胃癌，子宮頸癌，結腸癌，乳癌，膀胱癌および膵臓癌に用いられる），ダクチノマイシン，テモゾロミド，プリカマイシン，ブレオマイシン（皮膚癌，食道癌および尿生殖器管癌に用いられる）および酵素的化学療法剤，例えばＬ−アスパラギナーゼと組み合わせて用いることができる。
【０２４２】
上述に加えて，本発明の化合物または塩は，白金配位錯体（例えばシスプラチン），置換尿素（例えばヒドロキシウレア），メチルヒドラジン誘導体（例えばプロカルバジン），副腎皮質抑制剤（例えばミトーテン，アミノグルテチミド），ならびにホルモンおよびアンタゴニスト，例えばアドレノコルチコステロイド（例えばプレドニゾン），プロゲスチン（例えばヒドロキシプロゲステロンカプロネート），エストロゲン（例えばジエチルスチルベストロール），抗エストロゲン（例えばタモキシフェン）およびアンドロゲン（例えばテストステロンプロピオネート），およびアロマターゼ阻害剤（例えばアナストロゾール）と組み合わせて用いることができる。
【０２４３】
最後に，本発明の化合物の組み合わせは，カンプトサール（登録商標），グリーベック（登録商標），ハーセプチン（登録商標），エンドスタチン（登録商標），Ｃｏｘ−２阻害剤，ミトザントロン（登録商標）またはパクリタキセル（登録商標）との組み合わせにおいて，固形腫瘍癌または白血病，例えば，限定されないが，急性骨髄性（非リンパ球）白血病の治療に特に有効であることが予測される。
【実施例１】
【０２４４】
以下の製造例および実施例は，当業者が本発明をより明確に理解し，これを実施することを可能とする。これらの実施例は，本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではなく，単に例示的なものであり，本発明の代表例である。
【０２４５】
一般に，ＨＰＬＣデータは，Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ  Ｃ１８カラム（４．６ｍｍＩＤｘ７．５ｃｍ）を用いて，１０％アセトニトリル／水，０．１％ＴＦＡ（溶媒Ａ）から９０％アセトニトリル／水（溶媒Ｂ）まで流速１．５ｍＬ／ｍｉｎで運転するようプログラムしたＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒシリーズ２００ポンプで得た。溶媒Ａで０．１分後，溶媒Ｂへの５分間の直線プログラムを走らせ，次に溶媒Ｂで３分間，次に再び溶媒Ａ（２分間）。検出は，Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒダイオードアレイ検出器を用い，２１５および２８０ｎｍで記録した。ＮＭＲスペクトルはＢｒｕｋｅｒ装置を用いて３００ＭＨｚで記録した。
【０２４６】
合成実施例
Ａ．オキシメチル置換インドリノン（Ｉ）
実施例１
３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンの合成
水性ホルムアルデヒド（１５．０ｇの３８％溶液，１９０ｍｍｏｌ）を，ジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）中の３−（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチリデン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（２３．８ｇ，１００ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１５．０ｇ，１５０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。１時間後，溶液を水で希釈し，沈殿物を濾別し，水で洗浄し，乾燥して，２６．４ｇの標題化合物を得た。ｍｐ１９６−２００℃．ＨＰＬＣ  Ｒｔ５．７１分。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ２．３４（ｓ，６Ｈ），３．１４（ｔ，１Ｈ），５．４４（ｄ，２Ｈ），５．９８（ｄ，１Ｈ），７．０８（ｍ，２Ｈ），７．１８（ｍ，１Ｈ），７．３６（ｓ，１Ｈ），７．４８（ｄｄ，１Ｈ）および１３．０（ｂｒｓ，１Ｈ）．分析；計算値：Ｃ16Ｈ16Ｎ2Ｏ2：Ｃ，７１．６２；Ｈ，６．０１；Ｎ，１０．４４．実測値：Ｃ，７１．３３；Ｈ，６．０９；Ｎ，１０．４３．サンプルを酢酸エチルから再結晶した。ｍｐ２００−２０２℃
【０２４７】
実施例２
｛３（Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝メチルアセテートの合成
無水酢酸（５．０ｍＬ，５０ｍｍｏｌ）を，ピリジン（３０ｍＬ）中の（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン（１）（２．６８ｇ，１０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。ＨＰＬＣは１時間でアセチル化が完了したことを示し，このとき，溶液を水（８０ｍＬ）で希釈した。沈殿物を濾別し，水で洗浄し，乾燥して，２．９４ｇの標題化合物を得た。ｍｐ１４５−１５２℃．生成物をメタノールから再結晶して，２．７５ｇを得た。ｍｐ１５０−１５２℃．ＨＰＬＣ  Ｒｔ６．５８分。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ２．０９（ｓ，３Ｈ），２．３３（ｓ，３Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ），５．９４（ｓ，２Ｈ），５．９９（ｄ，１Ｈ），７．１０（ｍ，２Ｈ），７．２０（ｍ，１Ｈ），７．３９（ｓ，１Ｈ），７．５０（ｄｄ，１Ｈ）および１３．０（ｂｒｓ，１Ｈ）．分析；計算値：Ｃ18Ｈ18Ｎ2Ｏ3：Ｃ，６９．６６；Ｈ，５．８５；Ｎ，９．０３．実測値：Ｃ，６９．５７；Ｈ，５．８５；Ｎ，９．０６
【０２４８】
実施例３
４−（｛（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝メトキシ）−４−オキソブタン酸の合成
無水コハク酸（５．０ｇ，５０ｍｍｏｌ）を，ピリジン（３０ｍＬ）中の（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン（１）（２．６８ｇ，１０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。ＨＰＬＣは，１８時間後に反応が９０％完了したことを示した。このとき，溶液を−１０℃に冷却し，沈殿物を濾別し，水性ピリジンで，次に水で洗浄し，乾燥して，３．５７ｇの標題化合物のピリジニウム塩を得た。ｍｐ２００−２０２℃．ＨＰＬＣ  Ｒｔ５．８５分。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ２．３５（ｓ，３Ｈ），２．４０（ｓ，３Ｈ），２．７０（ｓ，４Ｈ），６．０１（ｓ，３Ｈ），７．１０（ｍ，２Ｈ），７．１８（ｍ，１Ｈ），７．４３（ｓ，１Ｈ），７．５０（ｍ，３Ｈ），７．９３，（ｍ，１Ｈ），８．６８（ｍ，１Ｈ）．ＨＰＬＣ  Ｒｔ５．８５分。1Ｈ  ＮＭＲ［（ＣＤ3）2ＳＯ］δ２．３３（ｓ，３Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ），２．５０（ｍ，４Ｈ），５．９１（ｓ，２Ｈ），６．０７（ｄ，１Ｈ），７．１５（ｍ，３Ｈ），７．４０（ｍ，２Ｈ），７．６７（ｓ，１Ｈ），７．８０（ｍ，２Ｈ），８．５８，（ｄｄ，１Ｈ），１２．２（ｓ，１Ｈ），および１３．１（ｓ，１Ｈ）．分析；計算値：Ｃ20Ｈ20Ｎ2Ｏ5．Ｃ5Ｈ5Ｎ：Ｃ，６７．１０；Ｈ，５．６３；Ｎ，９．３９．実測値：Ｃ，６７．１１；Ｈ，５．７０；Ｎ，９．４２
塩酸溶液（２０ｍＬ，１．０Ｎ）を，テトラヒドロフラン（２５ｍＬ）中の上述の塩（２．９４ｇ）の撹拌溶液に加えた。水（１００ｍＬ）を加え，生成物の沈殿物を濾別し，乾燥して，２．３８ｇの標題化合物を得た。ｍｐ１６０−１６３℃．生成物の大部分を酢酸エチルから再結晶して，２．０８ｇを得た。ｍｐ１６０−１６２℃．ＨＰＬＣ  Ｒｔ５．８５分。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ２．３２（ｓ，３Ｈ），２．３７（ｓ，３Ｈ），２．６６（ｓ，４Ｈ），６．０１（ｓ，３Ｈ），７．０５−７．２５（ｍ，３Ｈ），７．４０（ｓ，１Ｈ），７．４９（ｄｄ，１Ｈ），および１３．０（ｓ，１Ｈ）．1Ｈ  ＮＭＲ［（ＣＤ3）2ＳＯ］δ２．３２（ｓ，３Ｈ），２．３５（ｓ，３Ｈ），２．５２（ｍ，４Ｈ），５．９０（ｓ，２Ｈ），６．０６（ｄ，１Ｈ），７．０５−７．２５（ｍ，３Ｈ），７．６４（ｓ，１Ｈ），７．８０（ｄｄ，１Ｈ），１２．２（ｓ，１Ｈ），および１３．１（ｓ，１Ｈ）．分析；計算値：Ｃ20Ｈ20Ｎ2Ｏ5：Ｃ，６５．２１；Ｈ，５．４７；Ｎ，７．６０．実測値：Ｃ，６５．１４；Ｈ，５．４９；Ｎ，７．６０
【０２４９】
実施例４
１−｛（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝酢酸エチルの合成
ＤＭＦ（３０ｍＬ）中の無水酢酸（２．１ｇ，２０ｍｍｏｌ），アセトアルデヒド（４．４ｇ，１００ｍｍｏｌ），トリエチルアミン（２．０ｇ，２０ｍｍｏｌ）および３−（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチリデン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（２．３８ｇ，１０ｍｍｏｌ）の混合物を室温で３日間撹拌した。溶媒を除去し，残留油状物をシリカゲルでクロマトグラフィーを行い，カラムから溶出された最初の生成物，すなわち２．５ｇの生成物をエーテルから結晶化して，２．１ｇの標題化合物を得た。ｍｐ１０７−１１０℃．ＨＰＬＣ  Ｒｔ６．７８分。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１．８１（ｄ，３Ｈ），２．０９（ｓ，３Ｈ），２．３３（ｓ，３Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ），５．９８（ｓ，２Ｈ），７．００−７．２０（ｍ，３Ｈ），７．２５（ｄｄ，１Ｈ），７．３９（ｓ，１Ｈ），７．５１（ｄｄ，１Ｈ）および１３．０（ｂｒｓ，１Ｈ）．分析；計算値：Ｃ19Ｈ20Ｎ2Ｏ3：Ｃ，７０．３５；Ｈ，６．２１；Ｎ，８．６４．実測値：Ｃ，７０．３３；Ｈ，６．１８；Ｎ，８．６０
カラムを続けて溶出して，０．２ｇの（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチリデン］−１−（１−ヒドロキシエチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンを得た。ｍｐ１４５（ｄｅｃ）．1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１．７６（ｄ，３Ｈ），２．３３（ｓ，３Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ），３．７１（ｂｒｓ，１Ｈ），５．９８（ｄ，２Ｈ），６．１５（ｑ，１Ｈ），７．００−７．２５（ｍ，３Ｈ），７．３４（ｓ，１Ｈ），７．４７（ｄｄ，１Ｈ）および１３．０（ｂｒｓ，１Ｈ）．分析；計算値：Ｃ17Ｈ18Ｎ2Ｏ2：Ｃ，７２．３２；Ｈ，６．４３；Ｎ，９．９２．実測値：Ｃ，７２．２２；Ｈ，６．５２；Ｎ，９．７９
あるいは，（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチリデン］−１−（１−ヒドロキシエチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンは，１−｛（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝酢酸エチル（５００ｍｇ）を水性アセトニトリル（１０ｍＬ）およびギ酸（２００ｍｇ）で一晩処理することにより，＞９０％の収率で製造した。
【０２５０】
実施例５
３−［５−｛（Ｚ）−［１−（ヒドロキシメチル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−インドール−３−イリジン］メチル｝−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−プロパン酸の合成
水性ホルムアルデヒド（５００ｍｇの３８％溶液，５ｍｍｏｌ）を，ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）中の３−［５−｛（Ｚ）−［１，２−ジヒドロ−３Ｈ−インドール−３−イリジン］メチル｝−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−プロパン酸（３１０ｍｇ，１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２００ｍｇ，２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。１時間後，溶液を１Ｎ塩酸（５ｍＬ）で希釈し，沈殿物を濾別し，水で洗浄し，乾燥して，２１０ｍｇの標題化合物を得た。ＨＰＬＣ  Ｒｔ５．９１分。1Ｈ  ＮＭＲ［（ＣＤ3）2ＳＯ］δ２．２７（ｓ，３Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），２．３６（ｔ，２），２．６５（ｔ，２Ｈ），５．２５（ｄ，２），６．２６（ｔ，１Ｈ），７．０５（ｍ，１Ｈ），７．１５（ｍ，２Ｈ），７．６２（ｓ，１Ｈ），７．７９（ｄ，１Ｈ），１２．０（ｂｒｓ，１Ｈ）および１３．３（ｂｒｓ，１Ｈ）
【０２５１】
実施例６
ジベンジル｛（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝メチルホスフェートの合成
標題化合物は，（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンおよびジベンジルホスホロクロリデートから製造した（｛３（Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝メチルアセテート）を製造するのに用いた方法の改変）。
【０２５２】
実施例７
｛（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝メチルリン酸二水素の合成
ジベンジル｛（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝メチルホスフェート（６）の水素化により標題化合物を製造した（（３Ｚ）−１−（アミノアセチル）−３−｛［３，５−ジメチル−４−（２−カルボキシエチル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−メチリデン｝−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン（２０）を製造するのに用いた方法の改変，下記参照）。
【０２５３】
実施例８
ベンジル｛（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝メチルリン酸メチルの合成
（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンおよびベンジルメチルホスホロクロリデートから標題化合物を製造した（｛３（Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝メチルアセテートを製造するのに用いた方法の改変）。
【０２５４】
実施例９
｛（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝メチルリン酸水素メチルの合成
ベンジル｛（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝メチルメチルホスフェートの水素化により標題化合物を製造した（（３Ｚ）−１−（アミノアセチル）−３−｛［３，５−ジメチル−４−（２−カルボキシエチル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−メチリデン｝−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン（２０）を製造するのに用いた方法の改変，下記参照）。
【０２５５】
実施例１０
｛（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝メチル（ジメチルアミノ）アセテートの合成
実施例２の方法にしたがって，２−クロロ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−オキソエタンアミニウムクロリドおよび（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンから標題化合物を製造した。
【０２５６】
実施例１１
２−（｛（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝メトキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−２−オキソエタンアミニウムクロリドの合成
実施例２の方法にしたがって，２−クロロ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−２−オキソエタンアミニウムクロリドおよび（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンから標題化合物を製造した。
【０２５７】
Ｂ．アミノメチル置換インドリノン（ＩＩ）
実施例１２
１−（｛（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−２−オキソ−１，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝メチル）ピリジニウムクロリドの合成
オキシ塩化リン（３．１ｇ，１０ｍｍｏｌ）を０℃でピリジン（２０ｍＬ）中の（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン（２．６８ｇ，１０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。１３０分後，溶液を水（２０ｍＬ）でゆっくり希釈し，沈殿物を濾別し，水で洗浄し，乾燥して，３．３ｇの標題化合物を得た。ｍｐ＞２８０℃．ＨＰＬＣ  Ｒｔ４．７８分。1Ｈ  ＮＭＲ［（ＣＤ3ＯＤ］δ２．３５（ｓ，３Ｈ），２．３７（ｓ，３Ｈ），６．０７（ｄ，１Ｈ），６．７１（ｓ，２Ｈ），７．１２−７．３２（ｍ，３Ｈ），７．６２（ｓ，１Ｈ），７．６８（ｄｄ，１Ｈ），８．１７，（ｍ，２Ｈ），８．６７（ｍ，１Ｈ），９．３（ｄ，１Ｈ），および１３．１（ｂｒｓ，１Ｈ）．分析；計算値：Ｃ21Ｈ20ＣｌＮ3Ｏ：Ｃ，６８．９４；Ｈ，５．５１；Ｃｌ，９．６９；Ｎ，１１．４８．実測値：Ｃ，６８．６３；Ｈ，５．５３；Ｃｌ，９．５３；Ｎ，１１．４５
【０２５８】
実施例１３
（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−［１−（４−メチルピペラジニル）メチル］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンの合成
Ｎ−メチルピペラジン（１０ｇ，１００ｍｍｏｌ）を，メタノール（１００ｍＬ）中の水性ホルムアルデヒド（１０ｇの３８％溶液，１００ｍｍｏｌ）および３−（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチリデン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，（２．３８ｇ，１０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。溶液を６０℃で１時間加熱し，低容量に濃縮し，沈殿物を濾別し，メタノールで洗浄し，乾燥して，２．３８ｇの標題化合物を得た。ｍｐ１６０−１６４℃．ＨＰＬＣ  Ｒｔ４．７２分。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ２．２６（ｓ，３Ｈ），２．３３（ｓ，３Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ），２．４３（ｂｒｓ，４Ｈ），２．７０（ｂｒｓ，４Ｈ），４．５９（ｓ，２Ｈ），５．９６（ｄ，１Ｈ），７．０２−７．０８（ｍ，２Ｈ），７．１５（ｄｄ，１Ｈ），７．３８（ｓ，１Ｈ），７．４８（ｄｄ，１Ｈ）および１３．０（ｂｒｓ，１Ｈ）．分析；計算値：Ｃ21Ｈ26Ｎ4Ｏ：Ｃ，７１．９７；Ｈ，７．４８；Ｎ，１５．９９．実測値：Ｃ，７１．７５；Ｈ，７．４６；Ｎ，１５．８７
（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−［１−（４−メチルピペラジニル）−メチル］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンを二塩酸塩に変換した。
【０２５９】
実施例１４
（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（１−ピロリジニルメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンの合成
ピロリジン（４５０ｍｇ，６．３ｍｍｏｌ）をメタノール（５０ｍＬ）中の水性ホルムアルデヒド（５００ｍｇの３８％溶液，６．０ｍｍｏｌ）および３−（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチリデン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，（９００ｍｇ，３．８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。１５分後，溶液を０℃に冷却し，沈殿物を濾別し，水で洗浄し，乾燥して，１．０８ｇの標題化合物を得た。ｍｐ１２９−１３２℃．ＨＰＬＣ  Ｒｔ４．８７分。1Ｈ  ＮＭＲ［（ＣＤ3）2ＳＯ］δ１．６５（ｍ，４Ｈ），２．３２９ｓ，３Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ），２．６２（ｍ，４Ｈ），４．７２（ｓ，２Ｈ）６．０７（ｄ，１Ｈ），７．００（ｍ，１Ｈ），７．１５（ｍ，２Ｈ），７．６１（ｓ，１Ｈ），７．７６（ｄ，２Ｈ）および１３．１（ｂｒｓ，１Ｈ）．分析；計算値：Ｃ20Ｈ23Ｎ3Ｏ：Ｃ，７４．７４；Ｈ，７．２１；Ｎ，１３．０７．実測値：Ｃ，７４．６１；Ｈ，７．２５；Ｎ，１３．０３
【０２６０】
式（ＩＩ）の他の化合物は，本出願人の米国特許出願６０／２６８，６８３（２００１年２月１５日出願，標題“３−（４−ＡＭＩＤＯ  ＰＹＲＲＯＬ−２−ＹＬＭＥＴＨＹＬＩＤＥＮＥ）−２−ＩＮＤＯＬＩＮＯＮＥ  ＤＥＲＩＶＡＴＩＶＥＳ−−ＰＲＯＴＥＩＮ  ＫＩＮＡＳＥ  ＩＮＨＩＢＩＴＯＲＳ”），および米国特許出願０９／７８３，２６４（２月１５日出願２００１年，標題“ＰＹＲＲＯＬＥ  ＳＵＢＳＴＩＴＵＴＥＤ  ２−ＩＮＤＯＬＩＮＯＮＥ  ＡＳ  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＫＩＮＡＳＥ  ＩＮＨＩＢＩＴＯＲＳ”，これらの開示を本明細書の一部としてここに引用する）に記載されるようにして製造することができる。
【０２６１】
Ｃ．アシル置換インドリノン（ＩＩＩ）
実施例１５
（３Ｚ）−１−アセチル−３−［（３，５−ジメチル−４−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンの合成
標題化合物は方法１または方法２にしたがって製造した。
方法１：水素化ナトリウム（２００ｍｇ，６０％，オイル中）をＤＭＦ（３０ｍＬ）中の３−（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチリデン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（１．１９ｇ，５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。１０分後，ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の無水酢酸（１．０２ｇ，１０ｍｍｏｌ）を加えた。水（８０ｍＬ）を加えて生成物を完全に沈殿させた。乾燥生成物をシリカゲルでクロロホルムを溶出液として用いてクロマトグラフィーを行って，１．０５ｇの標題化合物を得た。これをエーテル中で破砕した。ｍｐ１９３−１９６℃．ＨＰＬＣ  Ｒｔ６．９８分。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ２．３４（ｓ，３Ｈ），２．４２（ｓ，３Ｈ），２．７９（ｓ，３Ｈ），６．０６（ｄ，１Ｈ），７．１９（ｍ，２Ｈ），７．３８（ｓ，１Ｈ），７．４２（ｍ，１Ｈ），８．２４（ｍ，１Ｈ）および１２．６（ｂｒｓ，１Ｈ）．分析；計算値：Ｃ17Ｈ16Ｎ2Ｏ2：Ｃ，７２．８４；Ｈ，５．７５；Ｎ，９．９９．実測値：Ｃ，７２．５５；Ｈ，５．５０；Ｎ，９．８６
【０２６２】
方法２：３−（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチリデン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（９３０ｍｇ，３．９ｍｍｏｌ）および無水酢酸（１５ｍＬ，過剰量）の混合物を９５℃で数日間加熱した。ＴＬＣは出発物質がないことを示した。反応液を室温に冷却し，得られた沈殿物を真空濾過により回収し，水で洗浄し，乾燥して，１．０３ｇ（９４％）の標題化合物を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．５４（ｖ  ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．１０（ｍ，１Ｈ），７．８５（ｍ，１Ｈ），７．６４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．２（ｍ，２Ｈ），６．１２（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），２．７０（ｓ，３Ｈ，ＣＯＣＨ3），２．３８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．３４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ  ＭＨ+２８１．２
【０２６３】
実施例１６
（３Ｚ）−１−［（ジメチルアミノ）アセチル）−３−［（３，５−ジメチル−４−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンの合成
標題化合物は，３−（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチリデン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンおよび２−クロロ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−オキソエタンアミニウムクロリドから製造した（（３Ｚ）−１−アセチル−３−［（３，５−ジメチル−４−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンを製造するのに用いた方法の改変）。
【０２６４】
実施例１７
２−｛（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−２−オキソ−１−エタンアミニウムクロリドの合成
標題化合物は，３−（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチリデン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンおよび２−クロロ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−２−オキソエタンアミニウムクロリドから製造した（（３Ｚ）−１−アセチル−３−［（３，５−ジメチル−４−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンを製造するのに用いた方法の改変）。
【０２６５】
実施例１８
４−｛（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝−４−オキソブタン酸の合成
標題化合物は，３−（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチリデン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンおよび無水コハク酸から製造した（（３Ｚ）−１−アセチル−３−［（３，５−ジメチル−４−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンを製造するのに用いた方法の改変）。
【０２６６】
実施例１９
ベンジル２−｛（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝−２−オキソエチルカルバメートの合成
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中のＮ−（ベンジルオキシカルボニル）グリシン（４．９ｇ，２３ｍｍｏｌ），３−（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチリデン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（２．３８ｇ，１０ｍｍｏｌ），ジメチルアミノピリジン（１．２８ｇ，１０ｍｍｏｌ）の混合物を５５℃で２時間加熱した。溶液を冷却し，エーテル（１０ｍＬ）を加え，標題化合物の沈殿物を濾別し，乾燥して，２．３５ｇを得た。ｍｐ１９３−１９６℃．ＨＰＬＣ  Ｒｔ７．０４分。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ２．３４（ｓ，３Ｈ），２．４２（ｓ，３Ｈ），４．８７（ｄ，２Ｈ），５．１８（ｓ，２Ｈ），５．７４（ｔ，１Ｈ），６．０６（ｄ，１Ｈ），７．２（ｍ，３Ｈ），７．３−７−６５（ｍ，７Ｈ），７．４９（ｍ，１Ｈ），および８．２３（ｍ，１Ｈ）．分析；計算値：Ｃ25Ｈ23Ｎ3Ｏ4：Ｃ，６９．９２；Ｈ，５．４０；Ｎ，９．７８．実測値：Ｃ，６９．９１；Ｈ，５．５０；Ｎ，９．８６
【０２６７】
実施例２０
（３Ｚ）−１−（アミノアセチル）−３−｛［３，５−ジメチル−４−（２−カルボキシエチル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−メチリデン｝−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンの合成
ベンジル２−｛（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝−２−オキソエチルカルバメート（１６０ｍｇ）を酢酸エチル（７０ｍＬ）に溶解した。１０％パラジウム担持炭素（２００ｍｇ）を加え，混合物を５０ｐｓｉ水素圧で１時間水素化して，標題化合物を３５％収率で得た。ＨＰＬＣ  Ｒｔ４．６３分。
【０２６８】
実施例２１
（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（ジメチルホスホリル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンの合成
（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン（５２１ｍｇ，２．１９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６０ｍｌ）に溶解した。反応混合物を−７８℃に冷却した。ブチルリチウム（２．７ｍｌ，４．３２ｍｍｏｌ；１．６Ｍ，ヘキサン中）を滴加し，次にジメチルクロロホスフェート（０．４６ｍｌ，４．２７ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を−７８℃で１時間撹拌し，次に混合物を４時間かけて０℃まで暖めた。反応混合物を氷水に注加し，ＥｔＯＡｃ（２Ｘ）で抽出した。有機層をブラインで洗浄し，硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を除去し，残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2／ＥｔＯＡｃ：１０／１；２５０ｍｌ；ＣＨ2Ｃｌ2／ＥｔＯＡｃ：３／１；３００ｍｌ）により精製して，標題化合物を赤色固体として得た（８７％）。
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ6−ＤＭＳＯ）δ２．３５（ｓ，３Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ），３．８０（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，６Ｈ），６．１２（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．１３−７．２０（ｍ，２Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｄｄ，Ｊ＝２．０，７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝２．０，７．０Ｈｚ，１Ｈ），１２．６４（ｓ，１Ｈ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ｄ6−ＤＭＳＯ）δ−１．０５
【０２６９】
実施例２２
（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（ホスホリル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンの合成
（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（ジメチルホスホリル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン（６４８ｍｇ，１．８７ｍｍｏｌ）をＣＨ3ＣＮ（１１ｍｌ）に溶解した。Ｎ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（０．５３ｍｌ，２．１４ｍｍｏｌ）およびトリメチルシリルブロミド（０．５３ｍｌ，４．０２ｍｍｏｌ）を室温で滴加した。暗赤色溶液を室温で１４時間撹拌した。溶液を２つのシンチレーションバイアルに入れ，水（０．２ｍｌ／バイアル）を加えた。生成物が沈殿した。バイアルを遠心分離し，溶媒をデカントした。橙色／赤色固体をＥｔＯＡｃ（３Ｘ）で洗浄して，標題化合物（９４％）を得た。
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ6−ＤＭＳＯ）δ２．３３（ｓ，３Ｈ），２．３５（ｓ，３Ｈ），６．０８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０５−７．１５（ｍ，２Ｈ），７．６１（ｓ，１Ｈ），７．７８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），１２．９９（ｓ，１Ｈ）；31ＰＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ｄ6−ＤＭＳＯ）δ−６．９８
【０２７０】
生物学的評価
任意の一連の化合物において，ある範囲の生物学的活性が観察されるであろうことは理解されるであろう。現在好ましい態様においては，本発明は，蛋白質キナーゼ活性を調節，制御および／または阻害しうる３−ピロリジニル−２−インドリノンをインビボで生成することができる新規な１−置換−３−ピロリジニル−２−インドリノンに関する。以下のアッセイを用いて，最適な程度の所望の活性を示す化合物を選択することができる。
【０２７１】
アッセイ方法
以下のインビトロアッセイを用いて，活性のレベルおよび本発明の種々の化合物が１またはそれ以上のＰＫに及ぼす影響を決定することができる。任意のＰＫについて，当該技術分野においてよく知られる手法を用いて同じように同様のアッセイを設計することができる。
【０２７２】
本明細書に記載されるアッセイのいくつかは，ＥＬＩＳＡ（酵素結合イムノソルベントサンドイッチアッセイ）フォーマットで行う（Ｖｏｌｌｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，"Ｅｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  Ａｓｓａｙ，"Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２ｄｅｄ．，Ｒｏｓｅ  ａｎｄ  Ｆｒｉｅｄｍａｎ，Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，ｐｐ．３５９−３７１）。一般的方法は以下のとおりである：試験キナーゼを発現する（天然にまたは組換え的に）細胞に化合物を導入し，選択された時間が経過した後，試験キナーゼがレセプターである場合には，レセプターを活性化することが知られているリガンドを加える。細胞を溶解させ，溶解物を酵素的リン酸化反応の基質を認識する特定の抗体で予め被覆したＥＬＩＳＡプレートのウエルに移す。細胞溶解物の非基質成分を洗い流し，ホスホチロシンを特異的に認識する抗体で基質上のリン酸化の量を検出し，試験化合物と接触していない対照細胞と比較する。
【０２７３】
特定のＰＫについてのＥＬＩＳＡ実験を実施するための現在好ましいプロトコルを以下に記載する。しかし，他のＲＴＫ，ならびにＣＴＫおよびＳＴＫに対する化合物の活性を決定するためにこれらのプロトコルを適合させることは，十分に当業者の技術の範囲内である。本明細書に記載される他のアッセイは試験キナーゼの活性化に応答して生成されたＤＮＡの量を測定するものであり，これは増殖性応答の一般的尺度である。このアッセイの一般的方法は以下のとおりである：試験キナーゼを発現する（天然にまたは組換え的に）細胞に化合物を導入し，選択された時間が経過した後，試験キナーゼがレセプターである場合には，レセプターを活性化することが知られているリガンドを加える。少なくとも一夜インキュベートした後，ＤＮＡ標識試薬，例えば５−ブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）またはＨ3−チミジンを加える。抗ＢｒｄＵ抗体を用いて，または放射活性を測定することにより標識ＤＮＡの量を検出し，試験化合物と接触していない対照細胞と比較する。
【０２７４】
ＧＳＴ−ＦＬＫ−１バイオアッセイ
このアッセイは，ポリ（ｇｌｕ，ｔｙｒ）ペプチドにおけるＧＳＴ−Ｆｌｋ１のチロシンキナーゼ活性を分析する。
【０２７５】
材料および試薬：
１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥＬＩＳＡプレート（ＣｏｒｎｉｎｇカタログＮｏ．２５８０５−９６）
２．ポリ（ｇｌｕ，ｔｙｒ）４：１，凍結乾燥物（Ｓｉｇｍａカタログ＃Ｐ０２７５）。滅菌ＰＢＳ中１ｍｇ／ｍｌ
３．ＰＢＳ緩衝液：１Ｌにつき，０．２ｇＫＨ2ＰＯ4，１．１５ｇＮａ2ＨＰＯ4，０．２ｇＫＣｌおよび８ｇＮａＣｌを約９００ｍｌのｄＨ2Ｏ中で混合する。すべての試薬が溶解したとき，ＨＣｌでｐＨを７．２に調節する。ｄＨ2Ｏで総容量を１Ｌとする。
４．ＰＢＳＴ緩衝液：１ＬのＰＢＳ緩衝液に１．０ｍｌＴｗｅｅｎ２０を加える。
５．ＴＢＢ−ブロッキング緩衝液：１Ｌにつき，１．２１ｇＴＲＩＳ，８．７７ｇＮａＣｌ，１ｍｌＴＷＥＥＮ−２０を約９００ｍｌのｄＨ2Ｏ中で混合する。ＨＣｌでｐＨを７．２に調節する。１０ｇＢＳＡを加え，撹拌して溶解させる。ｄＨ2Ｏで総容量を１Ｌとする。濾過して粒子状物質を除去する。
６．１％ＢＳＡ，ＰＢＳ中：１０ｇＢＳＡを約９９０ｍｌのＰＢＳ緩衝液に加え，撹拌して溶解させる。ＰＢＳ緩衝液で総容量を１Ｌに調節し，濾過して，粒子状物質を除去する。
７．５０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ  ｐＨ７．５
８．ｓｆ９組換えバキュロウイルストランスフォーメーションから精製したＧＳＴ−Ｆｌｋｌ  ｃｄ（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）。
９．４％ＤＭＳＯ，ｄＨ2Ｏ中
１０．１０ｍＭＡＴＰ，ｄＨ2Ｏ中
１１．４０ｍＭ  ＭｎＣｌ2
１２．キナーゼ希釈緩衝液（ＫＤＢ）：１０ｍｌ  Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．５），１ｍｌの５Ｍ  ＮａＣｌ，４０μｌの１００ｍＭオルトバナジン酸ナトリウムおよび０．４ｍｌの５％ＢＳＡ（ｄＨ2Ｏ中）を８８．５６ｍｌのｄＨ2Ｏ中で混合する。
１３．ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレート，Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ＃ＡＳ−７２０９２
１４．ＥＤＴＡ：１４．１２ｇエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を約７０ｍｌｄＨ2Ｏに混合する。ＥＤＴＡが溶解するまで１０ＮＮａＯＨを加える。ｐＨを８．０に調節する。ｄＨ2Ｏで総容量を１００ｍｌに調節する。
１５．一次および二次抗体希釈緩衝液：１０ｍｌのＰＢＳ緩衝液中５％ＢＳＡを８９．５ｍｌのＴＢＳＴと混合する。
１６．抗ホスホチロシンウサギポリクローナル抗血清（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）
１７．ヤギ抗ウサギＨＲＰコンジュゲート
１８．ＡＢＳＴ溶液：約９００ｍｌのｄＨ2Ｏに，１９．２１ｇのクエン酸および３５．４９ｇのＮａ2ＨＰＯ4を加える。リン酸でｐＨを４．０に調節する。２，２’−アジノビス（３−エチル−ベンゾチアゾリン−６−スルホン酸を加える（ＡＢＴＳ，Ｓｉｇｍａ，Ｃａｔ．Ｎｏ．Ａ−１８８８）。約１／２時間放置し，濾過する。
１９．３０％過酸化水素
２０．ＡＢＳＴ／Ｈ2Ｏ2：３μｌのＨ2Ｏ2を１５ｍｌのＡＢＳＴ溶液に加える。
２１．０．２ＭＨＣｌ
【０２７６】
方法：
１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥＬＩＳＡプレートを１００μｌのＰＢＳ中の２μｇのポリＥＹペプチド／ウエルで被覆する。室温で２時間または４℃で一夜放置する。蒸発を防止するためにプレートをカバーする。
２．プレートを逆さにすることにより未結合液体をウエルから除去する。ＴＢＳＴで１回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて，過剰の液体を除去する。
３．１００μｌの１％ＢＳＡ（ＰＢＳ中）を各ウエルに加える。振盪しながら室温で１時間インキュベートする。
４．工程２を繰り返す。
５．ウエルを５０ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５，１５０μｌ／ウエル）に浸漬する。
６．試験化合物を９６−ウエルポリプロピレンプレート中でｄＨ2Ｏ／４％ＤＭＳＯで所望の最終アッセイ濃度の４倍に希釈する。
７．２５μｌの希釈試験化合物をＥＬＩＳＡプレートの各ウエルに加える。対照ウエルには，２５μｌのｄＨ2Ｏ／４％ＤＭＳＯを加える。
８．ＧＳＴ−Ｆｌｋ１をＫＤＢで０．００５μｇ（５ｎｇ）／ウエルに希釈する。
９．５０μｌの希釈酵素を各ウエルに加える。
１０．２５μｌの０．５ＭＥＤＴＡを陰性対照ウエルに加える。
１１．２５μｌの４０ｍＭＭｎＣｌ2および４ｘＡＴＰ（２μＭ）をすべてのウエルに加える。（各ウエル中，１００μｌの最終容量，０．５μＭのＡＴＰ最終濃度）
１２．振盪しながら室温で１５分間インキュベートする。
１３．２５μｌの５００ｍＭＥＤＴＡを各ウエルに加えることにより反応を停止する。
１４．ＴＢＳＴで３回洗浄し，プレートをペーパータオル上で軽くたたいて過剰の液体を除去する。
１５．抗体希釈緩衝液中で１：１０，０００に希釈した抗ホスホチロシン抗血清を１００μｌ／ウエルで加える。振盪しながら室温で９０分間インキュベートする。
１６．工程１４と同様に洗浄する。
１７．１００μｌ／ウエルのヤギ抗ウサギＨＲＰコンジュゲート（抗体希釈緩衝液中１：６，０００）を加える。振盪しながら室温で９０分間インキュベートする。
１８．工程１４と同様に洗浄する。
１９．１００μｌの室温ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液を各ウエルに加える。
２０．振盪しながら室温で１５−３０分間インキュベートする。
２１．必要ならば，１００μｌの０．２ＭＨＣｌを各ウエルに加えることにより反応を停止する。
２２．Ｄｙｎａｔｅｃｈ  ＭＲ７０００  ＥＬＩＳＡリーダーで，試験フィルタ４１０ｎＭ，参照フィルタ６３０ｎＭで結果を読む。
【０２７７】
ＰＹＫ２ＢＩＯアッセイ
このアッセイを用いて，ＥＬＩＳＡアッセイにおいて，ＨＡエピトープタグ付け全長ｐｙｋ２（ＦＬ．ｐｙｋ２−ＨＡ）のインビトロキナーゼ活性を測定する。
【０２７８】
材料および試薬：
１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥｌｉｓａプレート
２．１２ＣＡ５モノクローナル抗ＨＡ抗体（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）
３．ＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝化食塩水（Ｇｉｂｃｏカタログ＃４５０−１３００ＥＢ）
４．ＴＢＳＴ緩衝液：１Ｌにつき，８．７６６ｇＮａＣｌ，６．０５７ｇＴＲＩＳおよび１ｍｌの０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を約９００ｍｌｄＨ2Ｏ中で混合する。ｐＨを７．２に調節し，容量を１Ｌとする。
５．ブロッキング緩衝液：１Ｌにつき，１００ｇ１０％ＢＳＡ，１２．１ｇ１００ｍＭＴＲＩＳ，５８．４４ｇ１ＭＮａＣｌおよび１０ｍＬの１％ＴＷＥＥＮ  ２０を混合する。
６．ｓｆ９細胞溶解物からのＦＬ．ｐｙｋ２−ＨＡ（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）
７．４％ＤＭＳＯ，ＭｉｌｌｉＱｕｅＨ2Ｏ中
８．１０ｍＭＡＴＰ，ｄＨ2Ｏ中
９．１ＭＭｎＣｌ2
１０．１ＭＭｇＣｌ2
１１．１Ｍジチオスレイトール（ＤＴＴ）
１２．１０Ｘキナーゼ緩衝液リン酸化：５．０ｍｌ１ＭＨｅｐｅｓ（ｐＨ７．５），０．２ｍｌ１ＭＭｎＣｌ2，１．０ｍｌ１ＭＭｇＣｌ2，１．０ｍｌ１０％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を２．８ｍｌｄＨ2Ｏ中で混合する。使用直前に０．１ｍｌ１ＭＤＴＴを加える。
１３．ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレート
１４．５００ｍＭＥＤＴＡ，ｄＨ2Ｏ中
１５．抗体希釈緩衝液：１００ｍＬにつき，１ｍＬ５％ＢＳＡ／ＰＢＳおよび１ｍＬ１０％Ｔｗｅｅｎ−２０を８８ｍＬＴＢＳ中で混合する。
１６．ＨＲＰ−コンジュゲート化抗ＰｔｙｒＰＹ９９），Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  ＢｉｏｔｅｃｈＣａｔ．Ｎｏ．ＳＣ−７０２０
１７．ＡＢＴＳ，Ｍｏｓｓ，Ｃａｔ．Ｎｏ．ＡＢＳＴ−２０００
１８．１０％ＳＤＳ
【０２７９】
方法：
１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートを１００μｌＰＢＳ中の０．５μｇ／ウエルの１２ＣＡ５抗ＨＡ抗体で被覆する。４℃で一夜保存する。
２．プレートを逆さにすることにより未結合ＨＡ抗体をウエルから除去する。プレートをｄＨ2Ｏで洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて，過剰の液体を除去する。
３．１５０μｌのブロッキング緩衝液を各ウエルに加える。振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。
４．プレートをＴＢＳ−Ｔで４回洗浄する。
５．溶解物をＰＢＳ中で希釈する（１．５μｇ溶解物／１００μｌＰＢＳ）。
６．１００μｌの希釈溶解物を各ウエルに加える。室温で１時間振盪する。
７．工程４と同様に洗浄する。
８．５０μｌの２Ｘキナーゼ緩衝液を捕捉ｐｙｋ２−ＨＡを含むＥＬＩＳＡプレートに加える。
９．２５μｌの４％ＤＭＳＯ中４００μＭ試験化合物を各ウエルに加える。対照ウエルには４％ＤＭＳＯのみを用いる。
１０．２５μｌの０．５ＭＥＤＴＡを陰性対照ウエルに加える。
１１．２５μｌの２０ｐＭＡＴＰをすべてのウエルに加える。振盪しながら１０分間インキュベートする。
１２．２５μｌの５００ｍＭＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）をすべてのウエルに加えることにより反応を停止する。
１３．工程４と同様に洗浄する。
１４．１００μｌのＨＲＰコンジュゲート化抗Ｐｔｙｒ（１：６０００に希釈，抗体希釈緩衝液中）を各ウエルに加える。振盪しながら室温で１時間インキュベートする。
１５．プレートをＴＢＳＴで３回，ＰＢＳで１回洗浄する。
１６．１００μｌのＡＢＳＴ溶液を各ウエルに加える。
１７．必要ならば，２０μｌの１０％ＳＤＳを各ウエルに加えることにより発色反応を停止する。
１８．ＥＬＩＳＡリーダーで，試験フィルタ４１０ｎＭ，参照フィルタ６３０ｎＭでプレートを読む。
【０２８０】
ＦＧＦＲ１バイオアッセイ
このアッセイを用いて，ＥＬＩＳＡアッセイでＦＧＦ１−Ｒのインビトロキナーゼ活性を測定する。
【０２８１】
材料および試薬：
１．Ｃｏｓｔａｒ９６−ウエルＥｌｉｓａプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ＃３３６９）
２．ポリ（Ｇｌｕ−Ｔｙｒ）（Ｓｉｇｍａカタログ＃Ｐ０２７５）
３．ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏカタログ＃４５０−１３００ＥＢ）
４．５０ｍＭＨｅｐｅｓ緩衝液溶液
５．ブロッキング緩衝液（５％ＢＳＡ／ＰＢＳ）
６．精製ＧＳＴ−ＦＧＦＲ１（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）
７．キナーゼ希釈緩衝液：５００μｌの１ＭＨｅｐｅｓ（ＧＩＢＣＯ），２０μｌの５％ＢＳＡ／ＰＢＳ，１０μｌの１００ｍＭオルトバナジン酸ナトリウムおよび５０μｌの５ＭＮａＣｌを混合する。
８．１０ｍＭＡＴＰ
９．ＡＴＰ／ＭｎＣｌ2リン酸化ミックス：２０μｌのＡＴＰ，４００μｌの１ＭＭｎＣｌ2および９．５６ｍｌのｄＨ2Ｏを混合する。
１０．ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレート（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ＃ＡＳ−７２０９２）
１１．０．５ＭＥＤＴＡ
１２．０．０５％ＴＢＳＴ
５００μｌのＴＷＥＥＮを１リットルのＴＢＳに加える。
１３．ウサギポリクローナル抗ホスホチロシン血清（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）
１４．ヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシダーゼコンジュゲート（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ，カタログ＃ＡＬＩ０４０４）
１５．ＡＢＴＳ溶液
１６．ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液
【０２８２】
方法：
１．Ｃｏｓｔａｒ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートを１μｇ／ウエルの１００μｌＰＢＳ中ポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）で被覆する。４℃で一夜保存する。
２．被覆したプレートをＰＢＳで１回洗浄する。
３．１５０μｌの５％ＢＳＡ／ＰＢＳブロッキング緩衝液を各ウエルに加える。振盪しながら室温で１時間インキュベートする。
４．プレートをＰＢＳで２回，次に５０ｍＭＨｅｐｅｓで１回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて過剰の液体および泡を除去する。
５．２５μｌの０．４ｍＭ試験化合物（４％ＤＭＳＯ中），または４％ＤＭＳＯ単独（対照）をプレートに加える。
６．精製ＧＳＴ−ＦＧＦＲ１を希釈緩衝液（５μキナーゼ／５０μｌＫＤＢ／ウエル）で希釈する。
７．５０μｌの希釈キナーゼを各ウエルに加える。
８．２５μｌ／ウエルの新たに調製したＡＴＰ／Ｍｎ＋＋（０．４ｍｌ１ＭＭｎＣｌ2，４０μｌ１０ｍＭＡＴＰ，９．５６ｍｌｄＨ2Ｏ，新たに調製）を加えることによりキナーゼ反応を開始する
９．２５μｌの０．５ＭＥＤＴＡを加えることにより反応を停止する。
１０．プレートを新たなＴＢＳＴで４回洗浄する。
１１．抗体希釈緩衝液を作成する：５０ｍｌにつき，５ｍｌの５％ＢＳＡ，２５０μｌの５％ミルクおよび５０μｌの１００ｍＭバナジン酸ナトリウムを混合し，０．０５％ＴＢＳＴで最終容量とする。
１２．１００μｌ／ウエルの抗ホスホチロシン（１：１００００希釈，ＡＤＢ中）を加える。振盪しながら室温で１時間インキュベートする。
１３．工程１０と同様に洗浄する。
１４．１００μｌ／ウエルのＢｉｏｓｏｕｒｃｅヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシダーゼコンジュゲート（１：６０００希釈，ＡＤＢ中）を加える。振盪しながら室温で１時間インキュベートする。
１５．工程１０と同様に洗浄し，次にＰＢＳで洗浄して泡および過剰のＴＷＥＥＮを除去する。
１６．１００μｌのＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液を各ウエルに加える。
１７．振盪しながら１０−２０分間インキュベートする。泡を除去する。
１８．ＤｙｎａｔｅｃｈＭＲ７０００Ｅｌｉｓａリーダーで，試験フィルタ４１０ｎＭ，参照フィルタ６３０ｎＭでアッセイを読む。
【０２８３】
ＥＧＦＲバイオアッセイ
このアッセイを用いて，ＥＬＩＳＡアッセイにおいてＥＧＦＲのインビトロキナーゼ活性を測定する。
【０２８４】
材料および試薬：
１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥｌｉｓａプレート
２．ＳＵＭＯ１モノクローナル抗ＥＧＦＲ抗体（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）
３．ＰＢＳ
４．ＴＢＳＴ緩衝液
５．ブロッキング緩衝液：１００ｍｌにつき，５．０ｇカーネーション（登録商標）インスタント無脂ミルクを１００ｍｌＰＢＳと混合する。
６．Ａ４３１細胞溶解物（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）
７．ＴＢＳ緩衝液：
８．ＴＢＳ＋１０％ＤＭＳＯ：１Ｌにつき，１．５１４ｇＴＲＩＳ，２．１９２ｇＮａＣｌおよび２５ｍｌＤＭＳＯを混合し，ｄＨ2Ｏで総容量１リットルとする。
９．ＡＴＰ（アデノシン−５’−三リン酸，ウマ筋肉，ＳｉｇｍａＣａｔ．Ｎｏ．Ａ−５３９４），１．０ｍＭ溶液，ｄＨ2Ｏ中。この試薬は，使用直前に作成し氷上に保持しなければならない。
１０．１．０ｍＭＭｎＣｌ2
１１．ＡＴＰ／ＭｎＣｌ2リン酸化ミックス：１０ｍｌを作成するには，３００μｌの１ｍＭＡＴＰ，５００μｌのＭｎＣｌ2および９．２ｍｌのｄＨ2Ｏを混合する。使用直前に調製し，氷上に保持する。
１２．ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレート
１３．ＥＤＴＡ
１４．ウサギポリクローナル抗ホスホチロシン血清（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）
１５．ヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシダーゼコンジュゲート（ＢｉｏｓｏｕｒｃｅＣａｔ．Ｎｏ．ＡＬＩ０４０４）
１６．ＡＢＴＳ
１７．３０％過酸化水素
１８．ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2
１９．０．２ＭＨＣｌ
【０２８５】
方法：
１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートをウエルあたり１００μｌＰＢＳ中の０．５μｇのＳＵＭ０１で被覆する。４℃で一夜保存する。
２．プレートを逆さにして液体を除去することにより未結合ＳＵＭＯ１をウエルから除去する。ｄＨ2Ｏで１回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて，過剰の液体を除去する。
３．１５０μｌのブロッキング緩衝液を各ウエルに加える。振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。
４．プレートを脱イオン水で３回，次にＴＢＳＴで１回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて，過剰の液体および泡を除去する。
５．溶解物をＰＢＳ中で希釈する（７μｇ溶解物／１００μｌＰＢＳ）。
６．１００μｌの希釈溶解物を各ウエルに加える。室温で１時間振盪する。
７．プレートを上述の４と同様に洗浄する。
８．１２０μｌのＴＢＳを捕捉ＥＧＦＲを含むＥＬＩＳＡプレートに加える。
９．試験化合物をＴＢＳ中に１：１０で希釈し，ウエル中に入れる。
１０．１３．５μｌの希釈試験化合物をＥＬＩＳＡプレートに入れる。対照ウエルには１０％ＤＭＳＯ中１３．５μｌのＴＢＳを加える。
１１．振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。
１２．１５μｌのリン酸化ミックスを陰性対照ウエルを除くすべてのウエルに加える。最終ウエル容量は約１５０μｌであり，各ウエル中３μＭＡＴＰ／５ｍＭＭｎＣｌ2の最終濃度となるはずである。振盪しながら５分間インキュベートする。
１３．振盪しながら１６．５μｌのＥＤＴＡ溶液を加えることにより反応を停止させる。さらに１分間振盪する。
１４．脱イオン水で４回，ＴＢＳＴで２回洗浄する。
１５．ウエルあたり１００μｌの抗ホスホチロシン（１：３０００希釈，ＴＢＳＴ中）を加える。振盪しながら室温で３０−４５分間インキュベートする。
１６．上述の４と同様に洗浄する。
１７．１００μｌのＢｉｏｓｏｕｒｃｅヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシダーゼコンジュゲート（１：２０００希釈，ＴＢＳＴ中）を各ウエルに加える。振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。
１８．上述の４と同様に洗浄する。
１９．１００μｌのＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液を各ウエルに加える。
２０．振盪しながら５−１０分間インキュベートする。泡を除去する。
２１．必要ならば，１００μｌの０．２ＭＨＣｌ／ウエルを加えることにより反応を停止させる。
２２．ＤｙｎａｔｅｃｈＭＲ７０００ＥＬＩＳＡリーダーでアッセイを読む：試験フィルタ４１０ｎＭ，参照フィルタ６３０ｎＭ。
【０２８６】
ＰＤＧＦＲバイオアッセイ
このアッセイを用いて，ＥＬＩＳＡアッセイにおいてＰＤＧＦＲのインビトロキナーゼ活性を測定する。
【０２８７】
材料および試薬：
１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥｌｉｓａプレート
２．２８Ｄ４Ｃ１０モノクローナル抗ＰＤＧＦＲ抗体（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）
３．ＰＢＳ
４．ＴＢＳＴ緩衝液
５．ブロッキング緩衝液（ＥＧＦＲバイオアッセイと同じ）
６．ＰＤＧＦＲ−β発現ＮＩＨ３Ｔ３細胞溶解物（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）
７．ＴＢＳ緩衝液
８．ＴＢＳ＋１０％ＤＭＳＯ
９．ＡＴＰ
１０．ＭｎＣｌ2
１１．キナーゼ緩衝液リン酸化ミックス：１０ｍｌにつき，２５０μｌ１ＭＴＲＩＳ，２００μｌ５ＭＮａＣｌ，１００μｌ１ＭＭｎＣｌ2および５０μｌ１００ｍＭＴｒｉｔｏｎＸ−１００を十分なｄＨ2Ｏ中で混合して，１０ｍｌとする。
１２．ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレート
１３．ＥＤＴＡ
１４．ウサギポリクローナル抗ホスホチロシン血清（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）
１５．ヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシダーゼコンジュゲート（ＢｉｏｓｏｕｒｃｅＣａｔ．Ｎｏ．ＡＬＩ０４０４）
１６．ＡＢＴＳ
１７．過酸化水素，３０％溶液
１８．ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2
１９．０．２ＭＨＣｌ
【０２８８】
方法：
１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートをウエルあたり１００μｌのＰＢＳ中０．５μｇ２８Ｄ４Ｃ１０で被覆し，４℃で一夜保存する。
２．プレートを逆さにして液体を除去することにより未結合２８Ｄ４Ｃ１０をウエルから除去する。ｄＨ2Ｏで１回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて過剰の液体を除去する。
３．１５０μｌのブロッキング緩衝液を各ウエルに加える。振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。
４．プレートを脱イオン水で３回，次にＴＢＳＴで１回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて，過剰の液体および泡を除去する。
５．溶解物をＨＮＴＧ中で希釈する（１０μｇ溶解物／１００μｌＨＮＴＧ）
６．１００μｌの希釈溶解物を各ウエルに加える。室温で６０分間振盪する。
７．プレートを工程４に記載されるように洗浄する。
８．８０μｌの作業キナーゼ緩衝液ミックスを捕捉ＰＤＧＦＲを含むＥＬＩＳＡプレートに加える。
９．試験化合物を９６−ウエルポリプロピレンプレート中でＴＢＳ中で１：１０に希釈する。
１０．１０μｌの希釈試験化合物をＥＬＩＳＡプレートに加える。対照ウエルには，１０μｌのＴＢＳ＋１０％ＤＭＳＯを加える。振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。
１１．１０μｌのＡＴＰを陰性対照ウエルを除くすべてのウエルに直接加える（最終ウエル容量は約１００μｌであり，各ウエルは２０μＭＡＴＰであるはずである）。振盪しながら３０分間インキュベートする。
１２．１０μｌのＥＤＴＡ溶液を各ウエルに加えることにより反応を停止する。
１３．脱イオン水で４回，ＴＢＳＴで２回洗浄する。
１４．ウエルあたり１００μｌの抗ホスホチロシン（１：３０００希釈，ＴＢＳＴ中）を加える。振盪しながら室温で３０−４５分間インキュベートする。
１５．工程４と同様に洗浄する。
１６．１００μｌのＢｉｏｓｏｕｒｃｅヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシダーゼコンジュゲート（１：２０００希釈，ＴＢＳＴ中）を各ウエルに加える。振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。
１７．工程４と同様に洗浄する。
１８．１００μｌのＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液を各ウエルに加える。
１９．振盪しながら１０−３０分間インキュベートする。泡を除去する。
２０．必要ならば，１００μｌ／ウエルの０．２ＭＨＣｌを加えることにより反応を停止させる。
２１．ＤｙｎａｔｅｃｈＭＲ７０００ＥＬＩＳＡリーダーで，試験フィルタ４１０ｎＭ，参照フィルタ６３０ｎＭでアッセイを読む。
【０２８９】
細胞性ＨＥＲ−２キナーゼアッセイ
このアッセイを用いて，全細胞におけるＨＥＲ−２キナーゼ活性をＥＬＩＳＡフォーマットで測定する。
【０２９０】
材料および試薬：
１．ＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯカタログ＃１１９６５−０９２）
２．ウシ胎児血清（ＦＢＳ，ＧＩＢＣＯカタログ＃１６０００−０４４），水浴中で５６℃で３０分間熱不活性化する。
３．トリプシン（ＧＩＢＣＯカタログ＃２５２００−０５６）
４．Ｌ−グルタミン（ＧＩＢＣＯカタログ＃２５０３０−０８１）
５．ＨＥＰＥＳ（ＧＩＢＣＯカタログ＃１５６３０−０８０）
６．成長培地：５００ｍｌＤＭＥＭ，５５ｍｌ熱不活性化ＦＢＳ，１０ｍｌＨＥＰＥＳおよび５．５ｍｌＬ−グルタミンを混合する。
７．血清飢餓培地：５００ｍｌＤＭＥＭ，２．５ｍｌ熱不活性化ＦＢＳ，１０ｍｌＨＥＰＥＳおよび５．５ｍｌＬ−グルタミンを混合する。
８．ＰＢＳ
９．平底９６−ウエル組織培養マイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ＃２５８６０）
１０．１５ｃｍ組織培養皿（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ＃０８７５７１４８）
１１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥＬＩＳＡプレート
１２．ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレート
１３．Ｃｏｓｔａｒトランスファーカートリッジ，Ｔｒａｎｓｔａｒ９６（Ｃｏｓｔａｒカタログ＃７６１０）用
１４．ＳＵＭＯ１：モノクローナル抗ＥＧＦＲ抗体（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）
１５．ＴＢＳＴ緩衝液
１６．ブロッキング緩衝液：５％カーネーション（登録商標）インスタントミルク，ＰＢＳ中
１７．ＥＧＦリガンド：ＥＧＦ−２０１，Ｓｈｉｎｋｏ  Ａｍｅｒｉｃａｎ，Ｊａｐａｎ．。粉体を１００μｌの１０ｍＭＨＣｌに懸濁する。１００μｌの１０ｍＭＮａＯＨを加える。８００μｌのＰＢＳを加え，エッペンドルフチューブに移し，使用するまで−２０℃で保存する。
１８．ＨＮＴＧ溶解緩衝液：保存５ＸＨＮＴＧ用には，２３．８３ｇＨｅｐｅｓ，４３．８３ｇＮａＣｌ，５００ｍｌグリセロールおよび１００ｍｌＴｒｉｔｏｎＸ−１００および十分なｄＨ2Ｏを混合して１Ｌの溶液とする。１ＸＨＮＴＧ＊用には，２ｍｌＨＮＴＧ，１００Ｌ０．１ＭＮａ3ＶＯ4，２５０μｌ０．２ＭＮａ4Ｐ2Ｏ7および１００μｌＥＤＴＡを混合する。
１９．ＥＤＴＡ
２０．Ｎａ３ＶＯ４．保存溶液を作成するためには，１．８４ｇＮａ３ＶＯ４を９０ｍｌｄＨ2Ｏと混合する。ｐＨを１０に調節する。電子レンジで１分間沸騰させる（溶液は透明になる）。室温に冷却する。ｐＨを１０に調節する。ｐＨが１０で安定するまで加熱／冷却のサイクルを繰り返す。
２１．２００ｍＭＮａ４Ｐ２Ｏ７
２２．ホスホチロシン特異的ウサギポリクローナル抗血清（抗Ｐｔｙｒ抗体，ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）
２３．アフィニティー精製抗血清，ヤギ抗ウサギＩｇＧ抗体，ペルオキシダーゼコンジュゲート（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅカタログ＃ＡＬＩ０４０４）
２４．ＡＢＴＳ溶液
２５．３０％過酸化水素溶液
２６．ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2
２７．０．２ＭＨＣｌ
【０２９１】
方法：
１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ中１．０μｇ／ウエルのＳＵＭ０１で被覆する。最終容量１００μｌ／ウエル。４℃で一夜保存する。
２．使用の日に，被覆緩衝液を除去し，プレートをｄＨ2Ｏで３回，ＴＢＳＴ緩衝液で１回洗浄する。このアッセイにおいては，特に記載しない限り，すべての洗浄はこのように行う。
３．１００μｌのブロッキング緩衝液を各ウエルに加える。プレートを振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。使用直前にプレートを洗浄する。
４．このアッセイにはＥＧＦｒ／ＨＥＲ−２キメラ／３Ｔ３−Ｃ７細胞株を用いる。
５．８０−９０％コンフルエントの皿を選択する。トリプシン処理により細胞を回収し，１０００ｒｐｍで室温で５分間遠心分離する。
６．細胞を血清飢餓培地に懸濁し，トリパンブルーで計数する。９０％より高い生存度が必要である。細胞を血清飢餓培地に２，５００細胞／ウエルの密度で，９０μｌ／ウエルで９６ウエルマイクロタイタープレートに播種する。播種した細胞を３７℃，５％ＣＯ2で一夜インキュベートする。
７．播種の２日後にアッセイを開始する。
８．試験化合物を４％ＤＭＳＯに溶解する。次に試料をプレート上で直接血清飢餓ＤＭＥＭでさらに希釈する。典型的には，この希釈は１：１０またはそれより高い。次にすべてのウエルを細胞プレートにさらに１：１０希釈して加える（１０μｌの試料および培地を９０μｌの血清飢餓培地に加える。最終ＤＭＳＯ濃度は１％以下でなければならない。標準的連続希釈を用いてもよい。
９．５％ＣＯ2，３７℃で２時間インキュベートする。
１０．保存ＥＧＦ（１６．５μＭ）を暖めたＤＭＥＭで１５０ｎＭに希釈することによりＥＧＦリガンドを調製する。
１１．１００μｌ／ウエルに十分な量のＨＮＴＧ＊を新たに調製する。氷上に置く。
１２．試験化合物とともに２時間インキュベートした後，調製したＥＧＦリガンドを細胞に５０μｌ／ウエルで加える。最終濃度は５０ｎＭである。陽性対照ウエルには同量のＥＧＦを加える。陰性対照にはＥＧＦを加えない。３７℃で１０分間インキュベートする。
１３．試験化合物，ＥＧＦ，およびＤＭＥＭを除去する。細胞をＰＢＳで１回洗浄する。
１４．ＨＮＴＧ＊を細胞に１００μｌ／ウエルで移す。氷上に５分間置く。この間にブロッキング緩衝液をＥＬＩＳＡプレートから除去し，洗浄する。
１５．細胞をマイクロピペッターでプレートから掻き取り，ＨＮＴＧ＊溶解緩衝液を繰り返し吸引分配することにより細胞材料をホモジナイズする。溶解物を，被覆しブロッキングし洗浄したＥＬＩＳＡプレートに移す。
１６．振盪しながら室温で１時間インキュベートする。
１７．溶解物を除去し，洗浄する。新たに希釈した抗Ｐｔｙｒ抗体（１：３０００，ＴＢＳＴ中）をＥＬＩＳＡプレートに１００μｌ／ウエルで加える。
１８．振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。
１９．抗Ｐｔｙｒ抗体を除去し，洗浄する。新たに希釈したＢＩＯＳＯＵＲＣＥ抗体をＥＬＩＳＡプレートに加える（１：８０００，ＴＢＳＴ中，１００μｌ／ウエル）。
２０．振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。
２１．ＢＩＯＳＯＵＲＣＥ抗体を除去し，洗浄する。新たに調製したＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液をＥＬＩＳＡプレートに１００μｌ／ウエルで加える。
２２．振盪しながら５−１０分間インキュベートする。泡を除去する。
２３．１００μｌ／ウエルの０．２ＭＨＣｌを加えて反応を停止する。
２４．ＤｙｎａｔｅｃｈＭＲ７０００ＥＬＩＳＡリーダーで，試験フィルタセット４１０ｎＭおよび参照フィルタ６３０ｎＭでアッセイを読む。
【０２９２】
ＣＤＫ２／サイクリンＡアッセイ
このアッセイを用いて，シンチレーションプロキシミティーアッセイ（ＳＰＡ）におけるヒトｃｄｋ２／サイクリンＡのインビトロセリン／トレオニンキナーゼ活性を測定する。
【０２９３】
材料および試薬：
１．Ｗａｌｌａｃ９６−ウエルポリエチレンテレフタレート（ｆｌｅｘｉ）プレート（Ｗａｌｌａｃカタログ＃１４５０−４０１）
２．Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｒｅｄｉｖｕｅ［γ33Ｐ］ＡＴＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍカタログ＃ＡＨ９９６８）
３．Ａｍｅｒｓｈａｍストレプトアビジン被覆ポリビニルトルエンＳＰＡビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍカタログ＃ＲＰＮＱ０００７）。ビーズはＰＢＳ中でマグネシウムまたはカルシウムなしで２０ｍｇ／ｍｌで再構成しなければならない。
４．Ｓｆ９細胞から精製した活性化ｃｄｋ２／サイクリンＡ酵素複合体（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）
５．ビオチニル化ペプチド基質（Ｄｅｂｔｉｄｅ）．ペプチドビオチン−Ｘ−ＰＫＴＰＫＫＡＫＫＬをｄＨ2Ｏに５ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解する。
６．２０％ＤＭＳＯ，ｄＨ2Ｏ中
７．キナーゼ緩衝液：１０ｍｌにつき，９．１ｍｌのｄＨ2Ｏ，０．５ｍｌのＴＲＩＳ（ｐＨ７．４），０．２ｍｌの１ＭＭｇＣｌ2，０．２ｍｌの１０％ＮＰ４０を混合し，使用直前に０．０２ｍｌの１ＭＤＴＴを新たに加える。
８．１０ｍＭＡＴＰ，ｄＨ2Ｏ中
９．１ＭＴｒｉｓ，ＨＣｌでｐＨを７．４に調節する。
１０．１ＭＭｇＣｌ2
１１．１ＭＤＴＴ
１２．ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏカタログ＃１４１９０−１４４）
１３．０．５ＭＥＤＴＡ
１４．停止溶液：１０ｍｌにつき，９．２５ｍｌのＰＢＳ，０．０５ｍｌの１０ｍＭＡＴＰ，０．１ｍｌの０．５ＭＥＤＴＡ，０．１ｍｌの１０％ＴｒｉｔｏｎＸ１００および１．５ｍｌの５０ｍｇ／ｍｌＳＰＡビーズを混合する。
【０２９４】
方法：
１．試験化合物の溶液を５％ＤＭＳＯ中に所望の最終濃度の４倍で調製する。１０μｌを各ウエルに加える。陽性および陰性対照については，ウエル中１０μｌの２０％ＤＭＳＯのみを用いる。
２．ペプチド基質（ｄｅｂ−ｔｉｄｅ）をｄＨ2Ｏで１：２５０に希釈して，最終濃度０．０２ｍｇ／ｍｌとする。
３．２４μｌの０．１ｍＭＡＴＰを２４μＣｉγ33Ｐ−ＡＴＰおよび十分量のｄＨ2Ｏと混合して６００μｌとする。
４．希釈ペプチドおよびＡＴＰ溶液を１：１で混合する（６００μｌ＋６００μｌ／プレート）。１０μｌのこの溶液を各ウエルに加える。
５．５μｌのｃｄｋ２／ｃｙｃｌｉｎＡ溶液を２．１ｍｌの２ｘキナーゼ緩衝液（プレートあたり）中に希釈する。２０μｌ／ウエルの酵素を加える。陰性対照には，２０μｌの２ｘキナーゼ緩衝液を加え，酵素を加えない。
６．プレート振盪器で軽く混合し，６０分間インキュベートする。
７．２００μｌ／ウエルの停止溶液を加える。
８．少なくとも１０分間放置する。
９．プレートを約２３００ｒｐｍで１０−１５分間遠心分離する。
１０．リーダーでプレートを計数する。
【０２９５】
ＭＥＴトランスリン酸化アッセイ
このアッセイを用いて，基質のｍｅｔトランスリン酸化のアゴニスト／アンタゴニストを同定する手段として，ポリ（グルタミン酸：チロシン（４：１））基質のホスホチロシンレベルを測定する。
【０２９６】
材料および試薬：
１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥｌｉｓａプレート，Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ＃２５８０５−９６
２．ポリ（ｇｌｕ，ｔｙｒ）４：１，Ｓｉｇｍａ，Ｃａｔ．Ｎｏ；Ｐ０２７５
３．ＰＢＳ，Ｇｉｂｃｏカタログ＃４５０−１３００ＥＢ
４．５０ｍＭＨＥＰＥＳ
５．ブロッキング緩衝液：２５ｇのウシ血清アルブミン，ＳｉｇｍａＣａｔ．ＮｏＡ−７８８８，を５００ｍｌＰＢＳに溶解し，４μｍフィルターを通して濾過する。
６．Ｍｅｔキナーゼドメインを含む精製ＧＳＴ融合蛋白質，Ｓｕｇｅｎ，Ｉｎｃ
７．ＴＢＳＴ緩衝液
８．１０％水性（ＭｉｌｌｉＱｕｅＨ2Ｏ）ＤＭＳＯ
９．１０ｍＭ水性（ｄＨ2Ｏ）アデノシン−５’−三リン酸，ＳｉｇｍａＣａｔ．Ｎｏ．Ａ−５３９４
１０．２Ｘキナーゼ希釈緩衝液：１００ｍｌにつき，１０ｍＬ１ＭＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．５，０．４ｍＬ５％ＢＳＡ／ＰＢＳ，０．２ｍＬ０．１Ｍオルトバナジン酸ナトリウムおよび１ｍＬ５Ｍ塩化ナトリウムを８８．４ｍＬｄＨ2Ｏ中で混合する。
１１．４ＸＡＴＰ反応混合物：１０ｍＬにつき，０．４ｍＬ１Ｍ塩化マンガンおよび０．０２ｍＬ０．１ＭＡＴＰを９．５６ｍＬｄＨ2Ｏ中で混合する。
１２．４Ｘ陰性対照混合物：１０ｍＬにつき，０．４ｍＬ１Ｍ塩化マンガンを９．６ｍＬｄＨ2Ｏ中に混合する。
１３．ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレート，Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ＃Ｓ−７２０９２
１４．５００ｍＭＥＤＴＡ
１５．抗体希釈緩衝液：１００ｍＬにつき，１０ｍＬ５％ＢＳＡ／ＰＢＳ，０．５ｍＬ５％カーネーション（登録商標）インスタントミルク，ＰＢＳ中，および０．１ｍＬ０．１Ｍオルトバナジン酸ナトリウムを８８．４ｍＬＴＢＳＴ中で混合する。
１６．ウサギポリクローナル抗ホスホチロシン抗体，Ｓｕｇｅｎ，Ｉｎｃ
１７．ヤギ抗ウサギ西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲート化抗体，Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ，Ｉｎｃ
１８．ＡＢＴＳ溶液：１Ｌにつき，１９．２１ｇクエン酸，３５．４９ｇＮａ２ＨＰＯ4および５００ｍｇＡＢＴＳを十分なｄＨ2Ｏ中で混合し，１Ｌとする。
１９．ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2：１５ｍＬＡＢＳＴ溶液と２μｌＨ2Ｏ2を使用の５分前に混合する。
２０．０．２ＭＨＣｌ
【０２９７】
方法：
１．ＥＬＩＳＡプレートを１００μｌＰＢＳ中２μｇのポリ（Ｇｌｕ−Ｔｙｒ）で被覆し，４℃で一夜保存する。
２．プレートを１５０μｌの５％ＢＳＡ／ＰＢＳで６０分間ブロッキングする。
３．プレートをＰＢＳで２回，次に，５０ｍＭＨｅｐｅｓ緩衝液，ｐＨ７．４で１回洗浄する。
４．５０μｌの希釈キナーゼをすべてのウエルに加える。（精製キナーゼはキナーゼ希釈緩衝液中で希釈する。最終濃度は１０ｎｇ／ウエルとなるはずである）。
５．２５μｌの試験化合物（４％，ＤＭＳＯ中）または対照にはＤＭＳＯ単独（４％，ｄＨ2Ｏ中）をプレートに加える。
６．キナーゼ／化合物混合物を１５分間インキュベートする。
７．２５μｌの４０ｍＭＭｎＣｌ2を陰性対照ウエルに加える。
８．２５μｌのＡＴＰ／ＭｎＣｌ2混合物を他のすべてのウエル（陰性対照を除く）に加える。５分間インキュベートする。
９．２５μｌの５００ｍＭＥＤＴＡを加えて反応を停止させる。
１０．プレートをＴＢＳＴで３回洗浄する。
１１．抗体希釈緩衝液中で１：１０，０００に希釈した１００μｌのウサギポリクローナル抗Ｐｔｙｒを各ウエルに加える。振盪しながら室温で１時間インキュベートする。
１２．プレートをＴＢＳＴで３回洗浄する。
１３．ＢｉｏｓｏｕｒｃｅＨＲＰコンジュゲート化抗ウサギ抗体を抗体．希釈緩衝液中に１：６，０００で希釈する。１００μｌ／ウエルを加え，振盪しながら室温で１時間インキュベートする。
１４．プレートをＰＢＳで１回洗浄する。
１５．１００μｌのＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液を各ウエルに加える。
１６．必要ならば，１００μｌ／ウエルの０．２ＭＨＣｌを加えることにより発色反応を停止させる。
１７．ＤｙｎａｔｅｃｈＭＲ７０００ｅｌｉｓａリーダーで，試験フィルタ４１０ｎＭ，参照フィルタ６３０ｎＭでプレートを読む。
【０２９８】
ＩＧＦ−１トランスリン酸化アッセイ
このアッセイを用いて，基質のｇｓｔ−ＩＧＦ−１トランスリン酸化のアゴニスト／アンタゴニストを同定するために，ポリ（グルタミン酸：チロシン）（４：１）中のホスホチロシンレベルを測定する。
【０２９９】
材料および試薬：
１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥｌｉｓａプレート
２．ポリ（Ｇｌｕ−ｔｙｒ）（４：１），ＳｉｇｍａＣａｔ．Ｎｏ．Ｐ０２７５
３．ＰＢＳ，Ｇｉｂｃｏカタログ＃４５０−１３００ＥＢ
４．５０ｍＭＨＥＰＥＳ
５．ＴＢＢブロッキング緩衝液：１Ｌにつき，１００ｇＢＳＡ，１２．１ｇＴＲＩＳ（ｐＨ７．５），５８．４４ｇ塩化ナトリウムおよび１０ｍＬ１％ＴＷＥＥＮ−２０を混合する。
６．ＩＧＦ−１キナーゼドメインを含む精製ＧＳＴ融合蛋白質（Ｓｕｇｅｎ，Ｉｎｃ．）
７．ＴＢＳＴ緩衝液：１Ｌにつき，６．０５７ｇＴｒｉｓ，８．７６６ｇ塩化ナトリウムおよび０．５ｍｌＴＷＥＥＮ−２０を混合し，ｄＨ2Ｏで１リットルとする。
８．４％ＤＭＳＯ，Ｍｉｌｌｉ−ＱＨ2Ｏ中
９．１０ｍＭＡＴＰ，ｄＨ2Ｏ中
１０．２Ｘキナーゼ希釈緩衝液：１００ｍＬにつき，１０ｍＬ１ＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５），０．４ｍＬ５％ＢＳＡ，ｄＨ2Ｏ中，０．２ｍＬ０．１Ｍオルトバナジン酸ナトリウムおよび１ｍＬ５Ｍ塩化ナトリウムを混合し，ｄＨ2Ｏで１００ｍＬとする。
１１．４ＸＡＴＰ反応混合物：１０ｍＬにつき，０．４ｍＬ１ＭＭｎＣｌ2および０．００８ｍＬ０．０１ＭＡＴＰおよび９．５６ｍＬｄＨ2Ｏを混合する。
１２．４Ｘ陰性対照混合物：０．４ｍＬの１Ｍ塩化マンガンを９．６０ｍＬｄＨ2Ｏと混合する。
１３．ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレート
１４．５００ｍＭＥＤＴＡ，ｄＨ2Ｏ中
１５．抗体希釈緩衝液：１００ｍＬにつき，１０ｍＬ５％ＢＳＡ（ＰＢＳ中），０．５ｍＬ５％カーネーションインスタント無脂ミルク（ＰＢＳ中）および０．１ｍＬ０．１Ｍオルトバナジン酸ナトリウムを８８．４ｍＬＴＢＳＴと混合する。
１６．ウサギポリクローナル抗ホスホチロシン抗体，Ｓｕｇｅｎ，Ｉｎｃ
１７．ヤギ抗ウサギＨＲＰコンジュゲート化抗体，Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ
１８．ＡＢＴＳ溶液
２０．ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2：使用の５分前に１５ｍＬＡＢＴＳを２μｌＨ2Ｏ2と混合する。
２１．０．２ＭＨＣｌｄＨ2Ｏ中
【０３００】
方法：
１．ＥＬＩＳＡプレートを１００μｌＰＢＳ中の２．０μｇ／ウエルのポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１（ＳｉｇｍａＰ０２７５）で被覆する。プレートを４℃で一夜保存する。
２．プレートをＰＢＳで１回洗浄する。
３．１００μｌのＴＢＢブロッキング緩衝液を各ウエルに加える。プレートを振盪しながら室温で１時間インキュベートする。
４．プレートをＰＢＳで１回，５０ｍＭＨｅｐｅｓ緩衝液ｐＨ７．５で２回洗浄する。
５．２５μｌの４％ＤＭＳＯ中の試験化合物（１０ｍＭ試験化合物の１００％ＤＭＳＯ中の保存溶液をｄＨ2Ｏで希釈することにより得る）をプレートに加える。
６．１０．０ｎｇのｇｓｔ−ＩＧＦ−１キナーゼ（５０μｌキナーゼ希釈緩衝液中）をすべてのウエルに加える。
７．２５μｌの４ＸＡＴＰ反応混合物をすべての試験ウエルおよび陽性対照ウエルに加えることによりキナーゼ反応を開始させる。２５μｌの４Ｘ陰性対照混合物をすべての陰性対照ウエルに加える。振盪しながら室温で１０分間インキュベートする。
８．２５μｌの０．５ＭＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）をすべてのウエルに加える。
９．プレートをＴＢＳＴ緩衝液で４回洗浄する。
１０．ウサギポリクローナル抗ホスホチロシン抗血清を，１００μｌの抗体希釈緩衝液中１：１０，０００の希釈ですべてのウエルに加える。振盪しながら室温で１時間インキュベートする。
１１．プレートを工程９と同様に洗浄する。
１２．１００μｌのＢｉｏｓｏｕｒｃｅ抗ウサギＨＲＰを抗体希釈緩衝液中１：１０，０００の希釈ですべてのウエルに加える。振盪しながら室温で１時間インキュベートする。
１３．プレートを工程９と同様に洗浄し，さらにＰＢＳで１回洗浄して，泡および過剰のＴｗｅｅｎ−２０を減少させる。
１４．１００μｌのＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2を各ウエルに加えることにより発色させる。
１５．約５分後，試験フィルタ４１０ｎｍ，参照フィルタ６３０ｎｍでＥＬＩＳＡリーダーを読む。
【０３０１】
ＢｒｄＵ取り込みアッセイ
以下のアッセイは，選択されたレセプターを発現するよう遺伝子工学的に改変された細胞を使用して，ＤＮＡ中へのＢｒｄＵ取り込みを決定することにより，リガンド−誘導性ＤＮＡ合成の活性に及ぼす目的化合物の影響を評価する。
以下の材料，試薬および方法は，以下のＢｒｄＵ取り込みアッセイのそれぞれについて一般的である。特定のアッセイにおける変更は特に記載される。
【０３０２】
一般的材料および試薬：
１．適当なリガンド
２．工学的に改変した適当な細胞
３．ＢｒｄＵ標識試薬：１０ｍＭ，ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）
４．ＦｉｘＤｅｎａｔ：固定溶液（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）
５．抗−ＢｒｄＵ−ＰＯＤ：マウスモノクローナル抗体，ペルオキシダーゼとコンジュゲート化（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ，Ｔｅｍｅｃｕｌａ，ＣＡ）
６．ＴＭＢ基質溶液：テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ，即使用可，Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）
７．ＰＢＳ洗浄溶液：１ＸＰＢＳ，ｐＨ７．４
８．アルブミン，ウシ（ＢＳＡ），画分Ｖ粉体（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）
【０３０３】
一般的方法：
１．細胞を８０００細胞／ウエルで，１０％ＣＳ，２ｍＭＧｌｎ，ＤＭＥＭ中で９６ウエルプレートに播種する。細胞を３７℃で５％ＣＯ2で一夜インキュベートする。
２．２４時間後，細胞をＰＢＳで洗浄し，次に無血清培地（０％ＣＳＤＭＥＭ，０．１％ＢＳＡ）中で２４時間血清飢餓とする。
３．第３日に，適当なリガンドおよび試験化合物を細胞に同時に加える。陰性対照ウエルには無血清ＤＭＥＭ，０．１％ＢＳＡのみを加える。陽性対照細胞にはリガンドを加えるが試験化合物は加えない。試験化合物は，無血清ＤＭＥＭ中でリガンドとともに９６ウエルプレート中で調製し，連続希釈して７種類の試験濃度とする。
４．リガンド活性化の１８時間後，希釈ＢｒｄＵ標識試薬（１：１００，ＤＭＥＭ中，０．１％ＢＳＡ）を加え，細胞をＢｒｄＵ（最終濃度＝１０μＭ）とともに１．５時間インキュベートする。
５．標識試薬とともにインキュベートした後，デカントし逆さにしたプレートをペーパータオル上で軽くたたくことにより培地を除去する。ＦｉｘＤｅｎａｔ溶液を加え（５０μｌ／ウエル），プレートをプレート振盪器で室温で４５分間インキュベートする。
６．デカントし逆さにしたプレートをペーパータオル上で軽くたたくことによりＦｉｘＤｅｎａｔ溶液をよく除去する。ミルク（５％脱水ミルク，ＰＢＳ中，２００μｌ／ウエル）をブロッキング溶液としてを加え，プレートをプレート振盪器で室温で３０分間インキュベートする。
７．デカントすることによりブロッキング溶液を除去し，ウエルをＰＢＳで１回洗浄する。抗−ＢｒｄＵ−ＰＯＤ溶液（１：２００希釈，ＰＢＳ中，１％ＢＳＡ，５０μｌ／ウエル）を加え，プレートをプレート振盪器で室温で９０分間インキュベートする。
８．デカントし，ウエルをＰＢＳで５回すすぐことにより抗体コンジュゲートを除去し，プレートを逆さにし，ペーパータオル上で軽くたたくことにより乾燥する。
９．ＴＭＢ基質溶液を加え（１００μｌ／ウエル），プレート振盪器で室温で２０分間，発色が光学的検出に十分となるまでインキュベートする。
１０．試料の吸収をＤｙｎａｔｅｃｈＥＬＩＳＡプレートリーダーで４１０ｎｍで測定する（"デュアル波長"モード，参照波長として４９０ｎｍでフィルターを読む）。
【０３０４】
ＥＧＦ−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ
材料および試薬：
１．マウスＥＧＦ，２０１（ＴｏｙｏｂｏＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）
２．３Ｔ３／ＥＧＦＲｃ７
その他の材料および試薬および方法は上述の通りである。
【０３０５】
ＥＧＦ−誘導性Ｈｅｒ−２−推進性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ
材料および試薬：
１．マウスＥＧＦ，２０１（ＴｏｙｏｂｏＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）
２．３Ｔ３／ＥＧＦｒ／Ｈｅｒ２／ＥＧＦｒ（ＥＧＦｒおよびＨｅｒ−２キナーゼドメイン）
その他の材料および試薬および方法は上述の通りである。
【０３０６】
ＥＧＦ−誘導性Ｈｅｒ−４−推進性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ
材料および試薬：
１．マウスＥＧＦ，２０１（ＴｏｙｏｂｏＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）
２．３Ｔ３／ＥＧＦｒ／Ｈｅｒ４／ＥＧＦｒ（ＥＧＦｒおよびＨｅｒ−４キナーゼドメイン）
その他の材料および試薬および方法は上述の通りである。
【０３０７】
ＰＤＧＦ−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ
材料および試薬：
１．ヒトＰＤＧＦＢ／Ｂ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）
２．３Ｔ３／ＥＧＦＲｃ７
その他の材料および試薬および方法は上述の通りである。
【０３０８】
ＦＧＦ−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ
材料および試薬：
１．ヒトＦＧＦ２／ｂＦＧＦ（ＧｉｂｃｏＢＲＬ，ＵＳＡ）
２．３Ｔ３ｃ７／ＥＧＦｒ
その他の材料および試薬および方法は上述の通りである。
【０３０９】
ＩＧＦ１−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ
材料および試薬：
１．ヒト，組換え（Ｇ５１１，Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．，ＵＳＡ）
２．３Ｔ３／ＩＧＦｌｒ
その他の材料および試薬および方法は上述の通りである。
【０３１０】
インスリン−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ
材料および試薬：
１．インスリン，結晶，ウシ，亜鉛（１３００７，ＧｉｂｃｏＢＲＬ，ＵＳＡ）
２．３Ｔ３／Ｈ２５
その他の材料および試薬および方法は上述の通りである。
【０３１１】
ＨＧＦ−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ
材料および試薬：
１．組換えヒトＨＧＦ（Ｃａｔ．Ｎｏ．２４９−ＨＧ，Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．ＵＳＡ）
２．ＢｘＰＣ−３細胞（ＡＴＣＣＣＲＬ−１６８７）
その他の材料および試薬および方法は上述の通りである。
【０３１２】
方法：
１．細胞をＲＰＭＩ１０％ＦＢＳ中で９６ウエルプレートに９０００細胞／ウエルで播種する。細胞を３７℃で５％ＣＯ2中で一夜インキュベートする
２．２４時間後，細胞をＰＢＳで洗浄し，次に１００μｌの無血清培地（ＲＰＭＩ，０．１％ＢＳＡ）中で２４時間血清飢餓とする。
３．第３日に，リガンド（１μｇ／ｍｌでＲＰＭＩ，０．１％ＢＳＡ中で調製；最終ＨＧＦ濃度２００ｎｇ／ｍｌ）および試験化合物を含有する２５μｌを細胞に加える。陰性対照ウエルには２５μｌの無血清ＲＰＭＩ，０．１％ＢＳＡのみを加える。陽性対照細胞にはリガンド（ＨＧＦ）を加えるが試験化合物は加えない。試験化合物は，９６ウエルプレートで，リガンドを含む無血清ＲＰＭＩ中でその最終濃度の５倍で調製し，一連の希釈を作成して７種類の試験濃度とする。典型的には，試験化合物の最高最終濃度は１００μＭであり，１：３希釈を用いる（すなわち，最終試験化合物濃度範囲は０．１３７−１００μＭである）。
４．リガンド活性化の１８時間後，１２．５μｌの希釈ＢｒｄＵ標識試薬（１：１００，ＲＰＭＩ，０．１％ＢＳＡ）を各ウエルに加え，細胞をＢｒｄＵ（最終濃度は１０ｐＭ）とともに１時間インキュベートする。
５．一般的方法と同じ。
６．一般的方法と同じ。
７．デカントすることによりブロッキング溶液を除去し，ウエルをＰＢＳで１回洗浄する。抗−ＢｒｄＵ−ＰＯＤ溶液（１：１００希釈，ＰＢＳ中，１％ＢＳＡ）を加え（１００μｌ／ウエル），プレートを室温でプレート振盪器で９０分間インキュベートする。
８．一般的方法と同じ。
９．一般的方法と同じ。
１０．一般的方法と同じ。
【０３１３】
指数関数的ＢｒｄＵ取り込みアッセイ
このアッセイを用いて指数関数的に成長しているＡ４３１細胞の増殖（ＤＮＡ合成）を測定する。このアッセイは，細胞サイクル進行を阻害する化合物のスクリーニングに用いる。
材料および試薬：
健康な成長しているＡ４３１細胞。その他の材料および試薬は一般的プロトコルの節に記載されるものと同じである。
【０３１４】
方法：
１．Ａ４３１細胞を，１０％ＦＢＳ，２ｍＭＧｌｎ／ＤＭＥＭ中で，９６ウエルプレートに８０００細胞／ウエルで播種する。細胞を３７℃で５％ＣＯ2で一夜インキュベートする。
２．第２日に，試験化合物を９６ウエルプレート上で同じ成長培地中で連続的に希釈して７種類の試験濃度とし，次に９６ウエル組織培養プレート上の細胞に加える。
３．２０−２４時間インキュベートした後，希釈したＢｒｄＵ標識試薬（１：１００，ＤＭＥＭ，０．１％ＢＳＡ）を加え，細胞をＢｒｄＵ（最終濃度１０μＭ）とともに２時間インキュベートする。
一般的方法の工程５−１０を用いてアッセイを完了する。
【０３１５】
ＺｅｎＳｒｃアッセイ
このアッセイを用いて，チロシンキナーゼＳｒｃの阻害剤をスクリーニングする。
材料および試薬：
１．被覆緩衝液：アジ化ナトリウム（０．２ｍｇ／ｍｌ）を含むＰＢＳ
２．ＰＢＳ中１％ｗ／ｖＢＳＡ
３．洗浄緩衝液：０．０５％ｖ／ｖＴｗｅｅｎ２０（ＰＢＳ−ＴＷＥＥＮ）を含むＰＢＳ
４．５００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．４
５．蒸留水中，ＡＴＰ（４０μＭ）＋ＭｇＣｌ2（８０ｍＭ）
６．蒸留水中，ＭｇＣｌ2（８０ｍＭ）（ＡＴＰなしのブランク用）
７．試験化合物，ＤＭＳＯ中１０ｍＭ
８．アッセイ緩衝液：１００ｍＭＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．４，２ｍＭＤＴＴ，０．２ｍＭオルトバナジン酸ナトリウムおよび０．２ｍｇｓ／ｍｌＢＳＡを含む
９．部分的に精製された組換えヒトＳｒｃ（ＵＢＩ（１４−１１７））
１０．抗ホスホチロシン（ＳＵＧＥＮウサギポリクローナル抗ＰＹ）
１１．ＨＲＰ結合ヤギ抗ウサギＩｇ（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＃６４３０）
１２．ＨＲＰ基質ＡＢＴＳまたはＰｉｅｒｃｅペルオキシダーゼ基質
１３．Ｃｏｒｎｉｎｇ  ＥＬＩＳＡプレート
【０３１６】
方法：
１．０．０１％アジ化ナトリウムを含む１００μｌの２０μｇ／ｍｌポリ（Ｇｌｕ−Ｔｙｒ）（Ｓｉｇｍａ  Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｐ０２７５）でプレートを被覆する。４℃で一夜保存する。
２．１００μｌ／ウエルの１％ＢＳＡで室温で１時間ブロッキングする。
３．試験化合物（１０ｍＭ，ＤＭＳＯ中）を，ｄＨ2Ｏで希釈し反応プレートにプレーティングしうるＣｏｓｔａｒプレートに２μｌ／ウエルで加える。
４．Ｓｒｃキナーゼを反応緩衝液中で１：１０，０００に希釈する。以下のようにして，５枚のプレート用に２５ｍｌを作成する：２．５ｍｌの１ＭＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．４（無菌的に４℃で保存），２１．８５ｍｌの蒸留水，０．１ｍｌの５％ＢＳＡ，０．５ｍｌの１０ｍＭオルトバナジン酸ナトリウム（無菌的に４℃で保存），５０μｌの１．０ＭＤＴＴ（−２０℃で凍結保存），および２．５μｌのＳｒｃキナーゼ（−８０℃で凍結保存）。
５．希釈プレート中の２μｌの各化合物に４８μｌの蒸留水を加え，次にその２５μｌ／ウエルを反応プレートに加える。
６．５０μｌのＨＲＰを各反応緩衝液ウエルに加え，次に２５μｌのＡＴＰ−ＭｇＣｌ2／ウエル（ＡＴＰなしブランクにはＭｇＣｌ2のみ）を加える。プレート振盪器上で室温で１５分間インキュベートする。２５μｌの０．５ＭＥＤＴＡを各ウエルに加えることにより反応を停止させる。
７．ＰＢＳ−ＴＷＥＥＮで４回洗浄する。
８．１００μｌの抗ホスホチロシン（１：１０，０００の抗−ｐＴｙｒ血清または１：３，０００の１０％グリセロール希釈ＰＡ−アフィニティー精製抗体）を，０．５％ＢＳＡ，０．０２５％無脂粉ミルクおよび１００μＭオルトバナジン酸ナトリウムを含むＰＢＳ−ＴＷＥＥＮに加える。連続的に撹拌しながら室温で１時間インキュベートする。
９．プレートをＰＢＳ−ＴＷＥＥＮで４回洗浄する。
１０．０．５％ＢＳＡ，０．０２５％無脂粉ミルク，１００Ｍオルトバナジン酸ナトリウムを含むＰＢＳ−ＴＷＥＥＮ中の１００μｌのＨＲＰ結合Ｉｇ（１：５，０００）を加える。振盪しながら室温で１時間インキュベートする。
１１．プレートをＰＢＳ−ＴＷＥＥＮで４回洗浄し，次にＰＢＳで１回洗浄する。
１２．ＡＢＴＳまたは他のペルオキシダーゼ基質を用いてプレートを発色させる。
【０３１７】
細胞サイクル分析：
標準的成長培地中のＡ４３１細胞を所望の濃度の試験化合物に３７℃で２０−２４時間暴露する。次に細胞を回収し，ＰＢＳに懸濁し，７０％氷冷メタノールで固定し，ヨウ化プロピジウムで染色する。次にＦＡＣＳｃａｎフローサイトメータを用いてＤＮＡ含量を測定する。次に，ＣｅｌｌＦＩＴソフトウエア（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて細胞サイクル期の分布を概算することができる。
【０３１８】
ＨＵＶ−ＥＣ−Ｃアッセイ
このアッセイを用いて，ＰＤＧＦ−Ｒ，ＦＧＦ−Ｒ，ＶＥＧＦ，ａＦＧＦまたはＦｌｋ−１／ＫＤＲ（これらはすべてＨＵＶ−ＥＣ細胞により天然に発現されている）に対する化合物の活性を測定する。
【０３１９】
第０日
１．  ＨＵＶ−ＥＣ−Ｃ細胞（ヒト臍静脈内皮細胞，（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ；カタログＮｏ．１７３０ＣＲＬ）を洗浄し，トリプシン処理する。ダルベッコリン酸緩衝化食塩水（Ｄ−ＰＢＳ；Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ；カタログＮｏ．１４１９０−０２９から入手）で２回，約１ｍｌ／１０ｃｍ2組織培養フラスコで洗浄する。非酵素細胞解離溶液（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ；カタログＮｏ．Ｃ−１５４４）中で０．０５％トリプシン−ＥＤＴＡでトリプシン処理する。０．０５％トリプシンは，０．２５％トリプシン／１ｍＭＥＤＴＡ（Ｇｉｂｃｏ；カタログＮｏ．２５２００−０４９）を細胞解離溶液中で希釈することにより作成する。約１ｍｌ／２５−３０ｃｍ2組織培養フラスコで３７℃で約５分間トリプシン処理する。細胞をフラスコからはがした後，等量のアッセイ培地を加え，５０ｍｌ滅菌遠心分離管（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；カタログＮｏ．０５−５３９−６）に移す。
２．  ５０ｍｌ滅菌遠心分離管中にアッセイ培地を加えることにより，細胞を約３５ｍｌのアッセイ培地で洗浄し，約２００ｇで１０分間遠心分離し，上清を吸引し，３５ｍｌのＤ−ＰＢＳに再懸濁する。Ｄ−ＰＢＳでさらに２回洗浄し，細胞を約１ｍｌ／組織培養フラスコ１５ｃｍ2のアッセイ培地に再懸濁する。アッセイ培地は，Ｆ１２Ｋ培地（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ；カタログＮｏ．２１１２７−０１４）＋０．５％熱不活性化ウシ胎児血清からなる。Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｃｏｕｎｔｅｒ（商標）（Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．）で細胞を計数し，アッセイ培地を細胞に加えて０．８−１．０ｘ１０5細胞／ｍｌの濃度とする。
３．  細胞を９６ウエル平底プレートに１００μｌ／ウエルまたは０．８−１．０ｘ１０4細胞／ウエルで加える；３７℃，５％ＣＯ2で約２４時間インキュベートする。
【０３２０】
第１日
１．  試験化合物の２倍滴定を別々の９６ウエルプレート中に作成する。一般に，５０μＭから０μＭまで。上述の第０日，工程２と同じアッセイ培地を用いる。滴定は，９０μｌ／ウエルの試験化合物を２００μＭ（４Ｘ最終ウエル濃度）で特定のプレートカラムの最上のウエルに加えることにより行う。試験化合物保存液濃度は通常ＤＭＳＯ中２０ｍＭであるため，２００μＭの薬剤濃度は２％ＤＭＳＯを含む。
したがって，ＤＭＳＯ濃度を一定に保持しながら薬剤を希釈するために，アッセイ培地中（Ｆ１２Ｋ＋０．５％ウシ胎児血清）２％ＤＭＳＯとした希釈剤を，試験化合物滴定の希釈剤として用いる。この希釈物をカラム中の残りのウエルに６０μｌ／ウエルで加える。カラムの最上ウエル中の１２０μｌの２００μＭ試験化合物希釈物から６０μｌを採取し，カラムの第２のウエル中の６０μｌと混合する。このウエルから６０μｌを採取し，カラム中の第３のウエル中の６０μｌと混合し，２倍滴定が完了するまでこれを続ける。最後から２番目のウエルが混合されたとき，このウエル中の１２０μｌの６０μｌを採取し，これを廃棄する。最後のウエルには薬剤非含有対照として６０μｌのＤＭＳＯ／培地希釈物を加える。以下のアッセイの，滴定する試験化合物の三重のウエルに十分な９つのカラムを作成する：（１）ＶＥＧＦ（Ｐｅｐｒｏ  Ｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．，から入手，カタログＮｏ．１００−２００，（２）内皮細胞成長因子（ＥＣＧＦ）（酸性線維芽細胞成長因子またはａＦＧＦとしても知られる）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａから入手，カタログＮｏ．１４３９６００）；または（３）ヒトＰＤＧＦ  Ｂ／Ｂ（１２７６−９５６，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）およびアッセイ培地対照。ＥＣＧＦはヘパリンナトリウムを有する調製物として得た。
２．  ５０μｌ／ウエルの試験化合物希釈物を，第０日からのＨＵＶ−ＥＣ−Ｃ細胞０．８−１．０ｘ１０4細胞／１００μｌ／ウエルを含む９６ウエルアッセイプレートに移し，３７℃，５％ＣＯ2で約２時間インキュベートする。
３．  三重に，８０μｇ／ｍｌＶＥＧＦ，２０ｎｇ／ｍｌＥＣＧＦ，または各試験化合物の条件に対する培地対照を５０μｌ／ウエルで加える。試験化合物については，成長因子濃度は所望の最終濃度の４倍である。第０日，工程２からのアッセイ培地を用いて，成長因子の濃度を調節する。３７℃，５％ＣＯ2で約２４時間インキュベートする。各ウエルに５０μｌの試験化合物希釈物，５０μｌの成長因子または培地，および１００μｌの細胞を加え，総量２００μｌ／ウエルとする。すなわち，すべてをウエルに加えたとき，４倍濃度の試験化合物および成長因子は１倍となる。
【０３２１】
第２日
１．  3Ｈ−チミジン（Ａｍｅｒｓｈａｍ；カタログＮｏ．ＴＲＫ−６８６）を１μＣｉ／ウエル（ＲＰＭＩ培地＋１０％熱不活性化ウシ胎児血清中で調製した１００μＣｉ／ｍｌ溶液を１０μｌ／ウエル）で加え，３７℃，５％ＣＯ2で約２４時間インキュベートする。ＲＰＭＩはＧｉｂｃｏ  ＢＲＬから入手する，カタログＮｏ．１１８７５−０５１
第３日
１．  プレートを−２０℃で一夜凍結する。
第４日
１．  プレートを融解し，９６ウエルプレート回収器（Ｔｏｍｔｅｃ  Ｈａｒｖｅｓｔｅｒ９６（登録商標））でフィルターマット（Ｗａｌｌａｃ；カタログＮｏ．１２０５−４０１）上に回収する；Ｗａｌｌａｃ  Ｂｅｔａｐｌａｔｅ（商標）液体シンチレーション計数機で計数する。
【０３２２】
血管透過性アッセイ
腫瘍依存性新脈管形成における血管透過性の増加は，血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）に応答したギャップジャンクションの喪失に起因する。本発明の化合物がインビボでＶＥＧＦ誘導性血管透過性を阻害する能力を評価するために，血管透過性のマイルスアッセイ（Ｍｉｌｅｓ  ａｎｄ  Ｍｉｌｅｓ，Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１１８：２２８−２５７（１９５２））を無胸腺マウスに適用した。
【０３２３】
一般的方法：
試験化合物またはベヒクルを，ＶＥＧＦ注入の前（典型的には４時間前）に投与する。１００μｌのＰＢＳ中０．５％エバンスブルー染料を２７ゲージ針を用いて尾部血管側面注射により静脈内に注射する。６０分後，イソフルオラン吸入を用いて動物を麻酔する。麻酔後，各動物の背面のグリッドパターンに，ＶＥＧＦ（１００ｎｇのＶＥＧＦ，２０μｌのＰＢＳ中）を２つのスポットにＰＢＳ（２０μｌ）を２つのスポットに経皮的に注射する。ＶＥＧＦ注射の１時間後までの所定の時間に，動物をＣＯ2で安楽死させ，皮膚パッチを切開して写真撮影する。発表されている報告に基づいて（Ａｌｉｃｉｅｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  ４：９１５−９１４（１９９９）），皮膚パッチからの染料の溶出にしたがって，マウス皮膚中へのＶＥＧＦ依存性染料漏出の定量的評価を行うことができる。
【０３２４】
インビボ動物モデル
異種移植片動物モデル
ヒト腫瘍が無胸腺マウス（例えば，Ｂａｌｂ／ｃ，ｎｕ／ｎｕ）中で異種移植片として成長する能力は，ヒト腫瘍の治療に対する生物学的応答を研究するのに有用なインビボモデルを提供する。ヒト腫瘍の無胸腺マウスへの最初の成功的な異種移植（Ｒｙｇａａｒｄ  ａｎｄ  Ｐｏｖｌｓｅｎ，１９６９，Ａｃｔａ  Ｐａｔｈｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ．Ｓｃａｎｄ．７７：７５８−７６０）以来，多くの異なるヒト腫瘍細胞株（例えば，乳房，肺，尿生殖器，胃腸，頭頸部，神経膠芽細胞腫，骨，および悪性黒色腫）が移植され，ヌードマウス中での成長に成功してきた。以下のアッセイを用いて，本発明の種々の化合物の活性，特異性および効果のレベルを決定することができる。３種類の一般的アッセイ，すなわち細胞／触媒，細胞／生物学的およびインビボアッセイが化合物の評価に有用である。細胞／触媒アッセイの目的は，ＴＫが細胞中の既知の基質上のチロシンをリン酸化する能力に及ぼす化合物の影響を判定することである。細胞／生物学的アッセイの目的は，細胞中でＴＫにより刺激される生物学的応答に及ぼす化合物の影響を判定することである。インビボアッセイの目的は，特定の疾患，例えば癌の動物モデルにおける化合物の影響を判定することである。
【０３２５】
皮下異種移植片実験に適した細胞株としては，Ｃ６細胞（神経膠腫，ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ１０７），Ａ３７５細胞（黒色腫，ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ１６１９），Ａ４３１細胞（類表皮癌腫，ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ１５５５），Ｃａｌｕ６細胞（肺，ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ５６），ＰＣ３細胞（前立腺，ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ１４３５），およびＥＧＦＲ，ＰＤＧＦＲ，ＩＧＦ−１Ｒまたは任意の他の試験キナーゼを過剰発現するように遺伝子工学処理されたＳＫＯＶ３ＴＰ５細胞およびＮＩＨ３Ｔ３線維芽細胞が挙げられる。以下のプロトコルを用いて異種移植片実験を行うことができる。
【０３２６】
雌無胸腺マウス（ＢＡＬＢ／ｃ，ｎｕ／ｎｕ）はＳｉｍｏｎｓｅｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｇｉｌｒｏｙ，ＣＡ）から入手する。すべての動物は，クリーンルーム条件下で，マイクロアイソレーターケージでアルファドライ敷きわらで維持する。動物には，滅菌齧歯類食および水を任意に与える。
【０３２７】
細胞株は，適当な培地（例えば，ＭＥＭ，ＤＭＥＭ，Ｈａｍ'ｓＦ１０，またはＨａｍ'ｓＦ１２プラス５％−１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）および２ｍＭグルタミン（ＧＬＮ））中で成長させる。すべての細胞培養培地，グルタミン，およびウシ胎児血清は，特に断らない限り，Ｇｉｂｃｏ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）から購入する。すべての細胞は，９０−９５％空気および５−１０％ＣＯ2の湿潤環境下で３７℃で成長させる。すべての細胞株は，週に２回，定期的に継代し，Ｍｙｃｏｔｅｃｔ法（Ｇｉｂｃｏ）により判定して，マイコプラズマについては陰性である。
【０３２８】
細胞は，コンフルエント，またはそれに近い状態で，０．０５％トリプシン−ＥＤＴＡで回収し，４５０ｘｇで１０分間ペレット化する。ペレットを滅菌ＰＢＳまたは培地（ＦＢＳなし）中に懸濁して特定の濃度とし，細胞をマウス（１群あたり，８−１０匹のマウス，２−１０ｘ１０6細胞／動物）の後側腹部内に移植する。腫瘍成長は，ベニエカリパスを用いて３−６週間にわたり測定する。腫瘍体積は，とくに記載のないかぎり，長さｘ幅ｘ高さの積として計算する。Ｐ値は，スチューデントｔ−テストを用いて計算する。５０−１００μｌの賦形剤（ＤＭＳＯ，またはＶＰＤ：Ｄ５Ｗ）中の試験化合物は，通常は移植後の第１日から初めて，異なる濃度でＩＰ注入により輸送することができる。
【０３２９】
腫瘍侵襲モデル
以下の腫瘍侵襲モデルが開発されており，ＫＤＲ／ＦＬＫ−１レセプターを選択的に阻害すると同定された化合物の治療的価値および有効性を評価するために用いることができる。
【０３３０】
方法
８週齢のヌードマウス（雌）（Ｓｉｍｏｎｓｅｎ  Ｉｎｃ．）を実験動物として用いる。腫瘍細胞の移植は，層流フード内で行うことができる。麻酔用に，キシラジン／ケタミンカクテル（１００ｍｇ／ｋｇケタミンおよび５ｍｇ／ｋｇキシラジン）を腹膜内に投与する。中線切開を行って，腹腔を露出して（約１．５ｃｍの長さ），容量１００μｌの培地中の１０7個の腫瘍細胞を注入する。細胞は，膵臓の十二指腸葉または結腸の漿膜下に注入する。腹膜および筋肉を６−０絹連続縫糸により縫合し，皮膚は創傷クリップを用いて縫合する。動物は毎日観察する。
【０３３１】
分析
動物の全体的所見により２−６週間後，マウスを殺し，局所腫瘍の種々の臓器（肺，肝臓，脳，胃，脾臓，心臓，筋肉）への転移を調べ，分析する（腫瘍サイズ，侵襲の程度，免疫化学，およびインサイチオハイブリダイゼーション測定等）。
【０３３２】
細胞毒性の測定
治療用化合物は，細胞毒性効果を示すよりもレセプターチロシンキナーゼ活性においてより強力でなければならない。化合物の有効性および細胞毒性の尺度は，治療指数，すなわち，ＩＣ50／ＬＤ50を決定することにより得ることができる。ＩＣ50（５０％の阻害を達成するのに必要な用量）は，本明細書に記載されるもの等の標準的な手法を用いて測定することができる。ＬＤ50（５０％の毒性をもたらす用量）もまた，放出されるＬＤＨの量を測定することにより（Ｋｏｒｚｅｎｉｅｗｓｋｉ  ａｎｄ  Ｃａｌｌｅｗａｅｒｔ，１９８３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，６４：３１３，Ｄｅｃｋｅｒ  ａｎｄ  Ｌｏｈｍａｎｎ−Ｍａｔｔｈｅｓ，１９８８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１１５：６１），または動物モデルにおける致死用量を測定することにより，標準的な手法により測定することができる（Ｍｏｓｓｍａｎ，１９８３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，６５：５５−６３）。より大きい治療指数を有する化合物が望ましい。治療指数は，２より高くあるべきであり，好ましくは少なくとも１０，より好ましくは少なくとも５０である。
【０３３３】
追加のアッセイ
本発明の化合物を評価するために用いることができる追加のアッセイには，限定されないが，ｂｉｏ−ｆｌｋ−１アッセイ，全細胞におけるＥＧＦレセプター−ＨＥＲ２キメラレセプターアッセイ，ｂｉｏ−ｓｒｃアッセイ，ｂｉｏ−ｌｃｋアッセイおよびｒａｆのリン酸化機能を測定するアッセイが含まれる。これらのアッセイのそれぞれのプロトコルは，米国特許出願０９／０９９，８４２（図面を含め本明細書の一部としてここに引用する）に見いだすことができる。さらに，米国特許５，７９２，７８３（１９９６年６月５日出願）および米国特許出願０９／３２２，２９７（１９９９年５月２８日出願）は，本明細書に完全に記載されているように本明細書の一部としてここに引用する。
【０３３４】
血漿安定性試験：
プロドラッグである（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（１−ピロリジニルメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンを２ｍｇ／ｍＬでイヌに静脈内投与した。プロドラッグおよび薬剤（３（Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン）のレベルを血漿のＨＰＬＣ分析により投与後４時間追跡した。この実験は，プロドラッグが薬剤に変換される半減期は７．３分間であることを示した。薬剤濃度対時間のプロットから，曲線の下の面積は，プロドラッグの８０％が薬剤に変換されたことを示した。
【０３３５】
処方
Ａ．  処方の好ましい態様
本発明の好ましい態様の処方中に含まれる好ましい化合物は，式Ｉ−ＩＶおよびＶＩの化合物であり，より好ましくは式ＩＩの化合物であり，最も好ましくは，式：
【化４０】
2005514368.tif 000028
の化合物である。
【０３３６】
本発明の好ましい態様の１つの観点においては，医薬製剤は，約０．１−約２０ｍｇ／ｍｌ，より好ましくは０．５−８ｍｇ／ｍｌ，最も好ましくは０．５−３ｍｇ／ｍｌの式Ｉ，ＩＩＩ，ＩＶおよびＶＩの化合物を含む。
【０３３７】
本発明の好ましい態様の別の観点においては，医薬製剤は，約０．１−約２０ｍｇ／ｍｌ，より好ましくは０．５−８ｍｇ／ｍｌ，最も好ましくは０．５−３ｍｇ／ｍｌの式ＩＩの化合物を含む。
【０３３８】
最も好ましくは，式ＩＩの化合物は式：
【化４１】
2005514368.tif 000029
の化合物である。
【０３３９】
本発明の好ましい態様の別の観点においては，医薬製剤は，薬学的に許容しうる錯化剤または薬学的に許容しうる界面活性剤を含む。典型的には，錯化剤は，活性成分（すなわち，式Ｉ−ＩＶおよびＶＩの化合物）に対して，約２−３０の重量比，より好ましくは約５−２０の重量比，最も好ましくは７−１５の重量比である。例えば，式Ｉ−ＩＶおよびＶＩの化合物が０．１ｍｇ／ｍｌ−２０ｍｇ／ｍｌである水性処方においては，錯化剤は好ましくは０．５−４００ｍｇ／ｍｌであり，式Ｉ−ＩＶおよびＶＩの化合物が０．５ｍｇ／ｍｌ−８ｍｇ／ｍｌである水性処方においては，錯化剤は好ましくは２．５−１６０ｍｇ／ｍｌであり，式Ｉ−ＩＶおよびＶＩの化合物が０．５ｍｇ／ｍｌ−３ｍｇ／ｍｌである水性処方においては，錯化剤は，好ましくは２．５−６０ｍｇ／ｍｌである。例えば，式Ｉ−ＩＶおよびＶＩの化合物が１−４００ｍｇ／バイアルである凍結乾燥製剤においては，錯化剤は，好ましくは５−８０００ｍｇ／バイアルであり，式Ｉ−ＩＶおよびＶＩの化合物が１−３００ｍｇ／バイアルである凍結乾燥製剤においては，錯化剤は，好ましくは５−６０００ｍｇ／バイアルであり，および式Ｉ−ＩＶおよびＶＩの化合物が１−２００ｍｇ／バイアルである凍結乾燥製剤においては，錯化剤は，好ましくは５−４０００ｍｇ／ｍｌである。
【０３４０】
水性処方においては，界面活性剤は，好ましくは０．１−５０ｍｇ／ｍｌ，より好ましくは０．５−２０ｍｇ／ｍｌである。凍結乾燥製剤においては，界面活性剤は，好ましくは５−１０００ｍｇ／バイアル，好ましくは，５−４００ｍｇ／バイアルおよび最も好ましくは，５−３００ｍｇ／バイアルである。
【０３４１】
本発明の好ましい態様においては，錯化剤は，スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンまたはヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリンであり，最も好ましくは，スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンである。好ましい界面活性剤には，以下の非イオン性界面活性剤が含まれる：ＰＯＬＹＳＯＲＢＡＴＥ  ８０および他のポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル，グリセリルモノオレエート，ポリビニルアルコール，エチレンオキシドコポリマー，例えばＰＬＵＲＯＮＩＣ（ポリエーテル；ＢＡＳＦ  Ｃｏｒｐ．）およびＴＥＴＲＯＮＩＣ（ＢＡＳＦ  Ｃｏｒｐ．），ポリオール成分，およびソルビタンエステル。最も好ましくは，ＰＯＬＹＳＯＲＢＡＴＥ  ８０またはエトキシ化ひまし油，例えば，ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ  ＥＬ（すなわち，ポリオキシル３５ひまし油；ＢＡＳＦ  Ｃｏｒｐ．）である。最も好ましい界面活性剤は，ＰＯＬＹＳＯＲＢＡＴＥ  ８０およびＣＲＥＭＯＰＨＯＲ  ＥＬ（ポリオキシル３５ひまし油）である。
【０３４２】
本発明の好ましい態様の別の観点においては，医薬製剤は，少なくとも１つの薬学的に許容しうる酸を，式Ｉ−ＩＶおよびＶＩの化合物の約１−約３０倍，より好ましくは，１−約２０倍，最も好ましくは，１−１６倍のモル比の量で含む。好ましい態様においては，酸は，メタンスルホン酸，乳酸，クエン酸，酒石酸またはコハク酸であり，最も好ましくは，メタンスルホン酸または乳酸である。
【０３４３】
本発明の好ましい態様の別の観点においては，水性医薬製剤は，０−約２００ｍｇ／ｍｌ，より好ましくは，１−１５０ｍｇ／ｍｌの，少なくとも１つのポリオキシヒドロカルビル化合物を含む。凍結乾燥医薬製剤は，０−約１５００ｍｇ／バイアル，より好ましくは，０−１０００ｍｇ／バイアル，最も好ましくは，０−５００ｍｇ／バイアルの，少なくとも１つのポリオキシヒドロカルビル化合物を含む。好ましい態様においては，ポリオキシヒドロカルビル化合物は，ポリエチレングリコール，マンニトール，ラクトース，ショ糖，ＰＥＧ３００またはＰＥＧ４００である。
【０３４４】
本発明の好ましい態様の別の観点においては，医薬製剤は，０−約６００ｍｇ／ｍｌ，より好ましくは，０−３００ｍｇ／ｍｌ，最も好ましくは，０−１５０ｍｇ／ｍｌの，少なくとも１つの薬学的に許容しうるアルコールを含む。好ましい態様においては，アルコールは，エタノール，ベンジルアルコール，プロピレングリコール，２−（２−エトキシエトキシ）エタノールまたはグリセロール，またはこれらの混合物である。
【０３４５】
本発明の好ましい態様の別の観点においては，水性医薬製剤は，０−約２０ｍｇ／ｍｌ，より好ましくは，０−約１５ｍｇ／ｍｌ，最も好ましくは，０．０５−１ｍｇ／ｍｌの，少なくとも１つの抗酸化剤を含む。凍結乾燥医薬製剤は，０−約２００ｍｇ／バイアル，より好ましくは，０−１５０ｍｇ／バイアルの，少なくとも１つの抗酸化剤を含む。好ましい態様においては，抗酸化剤は，メタ重亜硫酸ナトリウム，亜硫酸水素ナトリウム，システイン，およびメチオニンである。最も好ましくは，抗酸化剤はメタ重亜硫酸ナトリウムである。
【０３４６】
本発明の好ましい態様の別の観点においては，医薬製剤は，医薬組成物が約１．５−約５，より好ましくは，２．５−約３．５のｐＨを有するのに十分な水および／または薬学的に許容しうる緩衝液を含む。好ましい態様においては，緩衝液は，乳酸またはクエン酸緩衝液である。
【０３４７】
Ｂ．  （３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（１−ピロリジニルメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンを含む処方
（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（１−ピロリジニルメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンはマンニッヒ塩基であり，生理学的ｐＨにおいて加水分解されて３−（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンとなるよう設計されている。（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（１−ピロリジニルメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンの安定性は，より低いｐＨでより高い。分子は生理学的ｐＨで急速に加水分解されて３−（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンとなる。ｐＨ７．２およびｐＨ７．６における，（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（１−ピロリジニルメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンのｐＨ安定性のプロファイルを図１に示し，表１にまとめる。
【０３４８】
【表１】
2005514368.tif 000030
【０３４９】
分子の物理学的な不安定性を解決するために，２つの処方，すなわち，固体処方および非水性溶液処方を評価した。固体処方は凍結乾燥ケークまたは滅菌ＡＰＩフィルのいずれかであり，投与前にこれを再構成して，２ｍｇ／ｍＬまたはこれより高い濃度の安定な注入剤とする。溶液法は，これを安定なｐＨ（ｐＨ１．５−３．０）で，水性希釈剤で希釈して安定な注入剤を得ることができるように十分に高い濃度で，非水性濃縮物として処方する。注入剤中の（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（１−ピロリジニルメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンの濃度は，少なくとも０．５ｍｇ／ｍＬであり，ｐＨ３で許容可能なレベルの賦形剤を含む。
【０３５０】
評価した処方は表２および３に挙げられ，以下に記載される：
Ａ．  再構成して安定な注入剤を得るための固体処方（表２）：
（１）凍結乾燥製剤：
（ａ）カプチゾール系：この処方はカプチゾールおよび酸性試薬を用いて，１．５−２．０のｐＨでインシトゥー塩を形成して，（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（１−ピロリジニルメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンの２０．０−２５．０ｍｇ／ｍＬの濃度の溶液を調製し，凍結乾燥する。凍結乾燥ケークをＩＶ液で再構成して，ｐＨ３で２ｍｇ／ｍＬまたはこれより高い濃度の安定な注入剤を得る。
【０３５１】
（ｂ）非カプチゾール系：この処方は，少量の界面活性剤，例えば，ＰＯＬＹＳＯＲＢＡＴＥ−８０またはＣＲＥＭＯＰＨＯＲ  ＥＬおよび酸性試薬を用いて，１．５−２．０のｐＨでインシトゥー塩を形成して，（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（１−ピロリジニルメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンの２０．０−２５．０ｍｇ／ｍＬの濃度の溶液を製造し，凍結乾燥する。凍結乾燥ケークを共溶媒−界面活性剤系水性希釈剤，例えば，ＰＥＧ−３００−ＰＯＬＹＳＯＲＢＡＴＥ  ８０またはＰＥＧ−３００−ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ  ＥＬで再構成して，２ｍｇ／ｍＬまたはそれ以上の濃度のｐＨ３の安定な注入剤を得る。
【０３５２】
（２）滅菌ＡＰＩフィル：
（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（１−ピロリジニルメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンを滅菌粉体フィルとして容器中に充填し，特定の共溶媒−界面活性剤系水性希釈剤で再構成して，ｐＨ３で２ｍｇ／ｍＬまたはそれより高い濃度の（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（１−ピロリジニルメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンの安定な注入剤を得る。この処方プロセスは実行可能である。
【０３５３】
Ｂ．  希釈して安定な注入剤とするための濃縮溶液（表３）：
（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（１−ピロリジニルメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンを，水性希釈剤で希釈して安定な注入剤とすることができるよう，共溶媒と界面活性剤との非水性混合物中で高濃度で溶解する。注入剤中の（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（１−ピロリジニルメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンの濃度は，ｐＨ３で２ｍｇ／ｍＬまたはそれより高い濃度である。共溶媒の総レベルは１５％より低く，界面活性剤のレベルは０．５％より低い。
【０３５４】
【表２】
2005514368.tif 000031
【０３５５】
実施例１
注入剤処方の組成
【表３】
2005514368.tif 000032
製造順序
１．１．３倍のメタンスルホン酸（０．５Ｍ強度溶液）で溶解する。必要な場合には，追加のメタンスルホン酸でｐＨを１．５−２．５に調節する。
２．３０−５０％の注射用水，ＵＳＰ（ＷＦＩ，予めｐＨを１．５−２．５に調節）を加え，均一になるまで混合する。
３．カプチゾールを溶液に加え，カプチゾールが完全に溶解するまで混合する。
４．メタ重亜硫酸ナトリウムを加え，完全に溶解するまで混合する。
５．総容量の９０％とするのに十分な量の予め調節したＷＦＩを加える。
６．ｐＨを調べ，必要な場合にはメタンスルホン酸で１．５−２．５に調節する。
７．総容量の１００％とするのに十分な量の予め調節したＷＦＩを加える。このことにより，２０ｍｇ／ｍｌのＡＰＩの強度の溶液となる。
８．次にこの混合物をガラスバイアルに入れ，凍結乾燥する。
９．投与前に，凍結乾燥混合物を０．９％塩化ナトリウム（注射用，ＵＳＰ）で濃度２ｍｇ／ｍｌに再構成する。この注入剤の組成は上の表に示される。
【０３５６】
実施例２
注入剤処方の組成
【表４】
2005514368.tif 000033
製造順序
１．注射用水（ＵＳＰ）中で２．０Ｍ強度の乳酸溶液を調製する。
２．ＡＰＩを乳酸（２．０Ｍ強度溶液）に溶解する。
３．カプチゾールを溶液に加え，カプチゾールが完全に溶解するまで混合する。
４．メタ重亜硫酸ナトリウムを加え，完全に溶解するまで混合する。
５．十分なＷＦＩを加えて総容量の１００％とする。
６．次にこの混合物をガラスバイアルに充填し，凍結乾燥する。
７．投与の前に凍結乾燥混合物を０．９％塩化ナトリウム（注射用，ＵＳＰ）で再構成して，２ｍｇ／ｍｌの濃度とする。この注入剤の組成は上述の表に示される。
【０３５７】
実施例３
【表５】
2005514368.tif 000034
製造順序
溶液Ａ
１．ＡＰＩを１．３倍のモル比のメタンスルホン酸（０．５Ｍ強度の溶液）に溶解する。必要ならば，追加のメタンスルホン酸でｐＨを１．５−２．５に調節する。
２．３０％注射用水（ＵＳＰ，ＷＦＩ，予めｐＨを１．５−２．５に調節）を加え，均一となるまで混合する。
３．カプチゾールを溶液に加え，カプチゾールが完全に溶解するまで混合する。
４．メタ重亜硫酸ナトリウムを加え，完全に溶解するまで混合する。
５．容量を総処方の５０％とするのに十分なＷＦＩを加える。
溶液Ｂ
６．乳酸を混合し，２０％の未調節ＷＦＩを加える。
７．水酸化ナトリウム溶液でｐＨを３．２（３．０−３．４の範囲）に調節する。
８．塩化ナトリウムを加え，よく撹拌する。ｐＨを調べ，必要であれば調節する。
９．未調節ＷＦＩで容量を全処方の５０％とするのに十分な液体を加える。
ＡとＢとの混合物
１０．溶液Ａと溶液Ｂとを一緒に混合する。ｐＨを調べる。
１１．完成した処方を０．２μｍのフィルターを通して濾過し，適当な清浄な容器に入れる（処方の最初の２ｍｌは廃棄する）
【０３５８】
実施例４
【表６】
2005514368.tif 000035
製造順序
１．適当なメスフラスコ中でＡＰＩ，クエン酸，およびカプチゾールを混合する。
２．必要な水の５０％に溶解する。
３．ｐＨを調べる。
４．塩化ナトリウムを加え，完全に溶解するまで混合する。
５．撹拌しながら０．２Ｎ水酸化ナトリウム溶液を滴加して，ｐＨを３．０（２．８−３．２の範囲）に調節する。
６．水で１００％とし，均一となるまで混合する。
７．完成した処方を０．２μｍのフィルターを通して濾過し，適当な清浄な容器に入れる（処方の最初の５ｍｌは廃棄する）。
【０３５９】
実施例５
【表７】
2005514368.tif 000036
製造順序
１．ＡＰＩを０．５Ｍメタンスルホン酸に溶解する。
２．４０％の水を加える。
３．マンニトールを加え，よく混合して溶解する。
４．ＰＥＧ３００およびＰｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ８０を加え，よく混合する。
５．クエン酸緩衝液を加え，よく振盪する。
６．ｐＨを調べる。
７．撹拌しながら０．１Ｎ水酸化ナトリウムまたは０．１Ｍクエン酸溶液を滴加して，ｐＨを３．０（２．８−３．２の範囲）に調節する。
８．水で１００％とし，次に均一となるまで混合する。
９．完成した処方を０．２μｍフィルターを通して濾過し，適当な清浄容器に入れる（処方の最初の２ｍｌは廃棄する）。
【０３６０】
実施例６
【表８】
2005514368.tif 000037
製造順序
１．ＡＰＩを０．５Ｍメタンスルホン酸に溶解する。
２．４０％の水を加える。
３．マンニトールを加え，よく混合して溶解させる。
４．ＰＥＧ３００およびＰｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ８０を加え，よく混合する。
５．水で１００％とし，均一となるまで混合する。
６．完成した処方を０．２μｍのフィルターを通して濾過し，適当な清浄な容器に入れる（処方の最初の２ｍｌは廃棄する）。
【０３６１】
実施例７
【表９】
2005514368.tif 000038
【化４２】
2005514368.tif 000039
＊実施例７のＡＰＩ
製造順序
１．適当なフラスコ中でＡＰＩおよびカプチゾールを混合する。
２．７０％の水に溶解する。
３．水で１００％とし，均一になるまで混合する。
４．ｐＨをチェックする。
５．完成した処方を０．２μｍのフィルターを通して濾過し，適当な清浄容器に入れる（処方の最初の０．５ｍｌは廃棄する）。
【０３６２】
実施例８
【表１０】
2005514368.tif 000040
【化４３】
2005514368.tif 000041
＊実施例８のＡＰＩ
製造順序
１．ＡＰＩおよびカプチゾールを適当なフラスコ中で一緒に混合する。
２．３０％の水に懸濁する。
３．混合物に乳酸を透明になるまで加える。ｐＨを調べる。
４．水で１００％とし，均一となるまで混合する。
５．完成した処方を０．２μｍのフィルターを通して濾過し，適当な清浄な容器に入れる（処方の最初の０．５ｍｌは廃棄する）。
【０３６３】
本発明は，例示される態様によってその範囲を制限されない。例示される態様は，本発明の１つの観点の例示であることが意図され，機能的に同等のいかなるクローン，ＤＮＡまたはアミノ酸配列も本発明の範囲内である。実際，当業者には，上述の記載および図面から，本明細書の開示に加えられる本発明の種々の改変が明らかとなるであろう。そのような改変は特許請求の範囲の範囲内に含まれることが意図される。
【０３６４】
本明細書に引用されるすべての参考文献はその全体を本明細書の一部としてここに引用する。
【図面の簡単な説明】
【０３６５】
【図１】図１は，ｐＨ７．２および７．６における（３Ｚ）−３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メチリデン］−１−（１−ピロリジニルメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オンのｐＨ加水分解を示す。
【図１】
2005514368.tif 000055
【国際調査報告】
2005514368.tif 000056