(57)【要約】エラスチン繊維網状組織の形成に関与する遺伝子における生物学的に重要な多型の存在の検出により、個体の再狭窄発症のリスクを評価する方法が提供される。具体的には、エラスチン、フィブリリン、フィブリリン−１、フィブリリン−２、リジルオキシダーゼ、ミクロフィブリル関連糖タンパク質、バイグリカン、オステオポンチンおよび／またはデコリン遺伝子における多型の検出により、再狭窄発症のリスクの迅速で客観的な予測が可能となる。再狭窄の治療法およびその再発を減少させる方法も提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体における再狭窄発症のリスクを評価する方法であって、
前記個体から得たサンプル中において、エラスチン、フィブリリン、フィブリリン−１、フィブリリン−２、リジルオキシダーゼ、ミクロフィブリル関連糖タンパク質（ＭＡＧＰ）、バイグリカン、オステオポンチンおよびデコリンからなる群から選択される少なくとも一つの遺伝子における１以上の生物学的に重要な多型の存在を検出することを含んでなる、方法。
【請求項２】
個体におけるアテローム性動脈硬化症発症のリスクを評価する方法であって、
前記個体から得たサンプル中において、エラスチン、フィブリリン、フィブリリン−１、フィブリリン−２、リジルオキシダーゼ、ミクロフィブリル関連糖タンパク質（ＭＡＧＰ）、バイグリカン、オステオポンチンおよびデコリンからなる群から選択される少なくとも一つの遺伝子における１以上の生物学的に重要な多型の存在を検出することを含んでなる、方法。  
【請求項３】
前記遺伝子における１以上の多型の存在により、個体における再狭窄またはアテローム性動脈硬化症発症のリスクが高いことが示される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記サンプルが、前記個体の静脈血または動脈血を含んでなるものである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記サンプルが、哺乳動物の血管組織を含んでなるものである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記血管組織が動脈の血管組織である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記多型の有無が、少なくとも一つの遺伝子マイクロアレイを用いて検出される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記多型の有無が、ＰＣＲを用いて検出される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
個体における再狭窄発症のリスクを評価する方法であって、
前記個体から得たサンプル中において、エラスチン、フィブリリン、フィブリリン−１、フィブリリン−２、リジルオキシダーゼ、ミクロフィブリル関連糖タンパク質（ＭＡＧＰ）、バイグリカン、オステオポンチンおよびデコリンからなる群から選択される少なくとも一つの遺伝子の発現レベルをアッセイすることを含んでなる、方法。
【請求項１０】
個体におけるアテローム性動脈硬化症発症のリスクを評価する方法であって、
前記個体から得たサンプル中において、エラスチン、フィブリリン、フィブリリン−１、フィブリリン−２、リジルオキシダーゼ、ミクロフィブリル関連糖タンパク質（ＭＡＧＰ）、バイグリカン、オステオポンチンおよびデコリンからなる群から選択される少なくとも一つの遺伝子の発現レベルをアッセイすることを含んでなる、方法。
【請求項１１】
サンプル中のタンパク質発現レベルをアッセイすることにより、遺伝子発現レベルが測定される、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記サンプルが血液である、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記サンプルがリンパである、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
タンパク質発現レベルがＥＬＩＳＡにより測定される、請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
再狭窄を抑制する方法であって、
再狭窄発症のリスクがある患者に平滑筋細胞増殖または新生内膜過形成を阻害する組成物を投与することを含んでなり、該組成物が、エラスチン、フィブリリン、フィブリリン−１、フィブリリン−２、リジルオキシダーゼ、ミクロフィブリル関連糖タンパク質（ＭＡＧＰ）、バイグリカン、オステオポンチンおよびデコリンからなる群から選択される少なくとも一つの遺伝子の発現を改変するものである、方法。
【請求項１６】
アテローム性動脈硬化症を抑制する方法であって、
アテローム性動脈硬化症発症のリスクがある患者に平滑筋細胞増殖または新生内膜過形成を阻害する組成物を投与することを含んでなり、該組成物が、エラスチン、フィブリリン、フィブリリン−１、フィブリリン−２、リジルオキシダーゼ、ミクロフィブリル関連糖タンパク質（ＭＡＧＰ）、バイグリカン、オステオポンチンおよびデコリンからなる群から選択される少なくとも一つの遺伝子の発現を改変するものである、方法。
【請求項１７】
前記組成物が、再狭窄またはアテローム性動脈硬化症に関与する過程を改善する遺伝子または遺伝子転写産物の発現を誘発するものである、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記組成物が、平滑筋細胞増殖または新生内膜過形成を促進する１以上の遺伝子の発現を阻害するものである、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記組成物がアンチセンスオリゴヌクレオチドを含んでなるものである、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記組成物が、ｍＲＮＡに結合して三重鎖を形成するオリゴヌクレオチドを含んでなるものである、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項２１】
前記組成物が、エラスチン、フィブリリン、フィブリリン−１、フィブリリン−２、リジルオキシダーゼ、ミクロフィブリル関連糖タンパク質（ＭＡＧＰ）、バイグリカン、オステオポンチンおよびデコリンからなる群から選択される少なくとも一つのタンパク質の活性を阻害するものである、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項２２】
前記組成物が、エラスチン、フィブリリン、フィブリリン−１、フィブリリン−２、リジルオキシダーゼ、ミクロフィブリル関連糖タンパク質（ＭＡＧＰ）、バイグリカン、オステオポンチンおよびデコリンからなる群から選択される遺伝子によりコードされるタンパク質に結合する抗体を含んでなるものである、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項２３】
前記組成物がヒト抗体を含んでなるものである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記組成物が可溶性タンパク質受容体を含んでなるものである、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項２５】
前記組成物が、エラスチン、フィブリリン、フィブリリン−１、フィブリリン−２、リジルオキシダーゼ、ミクロフィブリル関連糖タンパク質（ＭＡＧＰ）、バイグリカン、オステオポンチンおよびデコリンからなる群から選択される遺伝子によりコードされるタンパク質の欠損を補うために投与されるタンパク質を含んでなるものである、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項２６】
エラスチンもしくはフィブリリン遺伝子、エラスチン機能の完全性に寄与する任意の遺伝子、またはリジルオキシダーゼ、ミクロフィブリル関連糖タンパク質（ＭＡＧＰ）、バイグリカン、オステオポンチンまたはデコリンをコードする遺伝子の生物学的に有意な多型の検出に適したキットを用いて検出が行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
個体における再狭窄またはアテローム性動脈硬化症の発症のリスクを評価するためのキットであって、
前記個体から得たサンプル中において、エラスチン、フィブリリン、フィブリリン−１、フィブリリン−２、リジルオキシダーゼ、ミクロフィブリル関連糖タンパク質（ＭＡＧＰ）、バイグリカン、オステオポンチンおよびデコリンからなる群から選択される少なくとも一つの遺伝子における１以上の生物学的に重要な多型の有無の検出に適した遺伝子マイクロアレイまたは他の手段を含んでなる、キット。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
冠動脈疾患は欧米社会に特有の疾病である。この疾患では、心筋に血液を供給する動脈が、動脈内部の脂肪物質、繊維性物質または石灰化物質の沈着により狭窄する。これらの沈着物の集積はアテローム性動脈硬化症と呼ばれる。アテローム性動脈硬化症は心臓への血流を減少させ、心筋が酸素不足となり、狭心症（胸痛）、または心筋梗塞（心臓発作）、およびうっ血性心不全をもたらす。
【０００２】
アテローム性動脈硬化症で閉塞した血管を開通させる一つの標準的治療法は、バルーン血管形成術であり、正式には経皮経管冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）と呼ばれる。この治療法は、小さなバルーンを挿入して膨らませ、閉塞プラークを動脈壁に押し付けて位置を変えることにより、閉塞した動脈の血流を改善することを含む。バルーンを収縮させて取り除いた後、動脈の内腔は拡張され、それにより血流が改善される。毎年約１００万件の血管形成処置が行われている。
【０００３】
血管形成術を受けた患者のかなりの数において処置後６ヶ月以内に治療された動脈が再び狭窄し、この過程は再狭窄と呼ばれる。再狭窄は血管形成術直後から始まり、広がった血管内腔（動脈内部の開口チャネル）が平滑筋細胞の増殖により徐々に塞がれていく。血管形成術を受けたすべての患者のうちの約２０〜３０％が、再度の血管形成術または冠動脈バイパス形成術が必要となる程の再狭窄を経験する。
【０００４】
再狭窄の病理は複雑であり、バルーン拡張時の伸長により誘発された血管壁の外傷が引き金となる。エラスチン繊維をはじめとする血管壁のいくつかの構成要素が損傷を受ける。この外傷は平滑筋細胞の移動および増殖を刺激し、それにより新生内膜の蓄積（再狭窄病変を構成する）が起こる。動脈狭窄に寄与するさらなる過程として、炎症および細胞外マトリックスの蓄積がある。血管の狭窄をもたらす血管壁の再構築は、再狭窄の非常に重要な要素である。しかし、これは血管形成術を施した部位の血管の再構築を妨げるステントの留置により完全に排除される。ステント留置術はほぼ日常的に行われており、多くのセンターにおいて全血管形成術処置の７０％を上回る割合で行われている。再狭窄はまた、足に血液を供給する動脈がアテローム性動脈硬化症で狭窄し、血管形成術で治療された場合にも起こる。
【０００５】
現在、再狭窄は、放射線不透過性色素を試験する血管中に注射し、シネアンギオグラム（アンギオグラフィー）を行って狭窄した血管を可視化することにより診断されている。通常、血管形成術後の血管直径が５０％よりも小さくなった場合に再狭窄と診断されるが、この過程はたいてい処置後２〜６ケ月以内に起こる。
【０００６】
糖尿病をはじめとして、処置回数または血管中のステント留置など、いくつかの因子が再狭窄の発生に関係があると見られるが、現在、特定の患者の再狭窄発症のリスクが高いかどうかに関して、大多数の患者のための信頼できる予測指標はない。もし信頼できるリスクプロフィールが得られれば、患者の治療方法に大きく影響するであろう。再狭窄のリスクが非常に高いとみられる患者にはバイパス術が勧められる。その他の患者には先に血管形成術を施し、非常に積極的に内科的治療を行うようにする。さらに、他の患者には、通常の血管形成術に加えて近接照射療法（血管内放射線療法）を追加する。本来ならば、この方法は、すでに多数の再狭窄の症状を発現しているといった、むしろ直接的な評価により再狭窄のリスクが高いとされた患者のために用いられる。従って、再狭窄の検出または治療のための新しい改良法が大いに望まれることは明らかである。
【０００７】
最後に、再狭窄がアテローム性動脈硬化症と共通で重複する過程およびメカニズムの多くを共有していると、一般に認識されている。これら２つの疾病の重要な相違点の一つは、動脈病変部の機能的に重要な狭窄の発症スピードである。従って、再狭窄はアテローム性動脈硬化症の原因であるメカニズムの多くを理解するための効果的なモデルとして用いることができ、また再狭窄に寄与する遺伝因子も、おそらくアテローム性動脈硬化症に寄与している。
【発明の概要】
【０００８】
従って、本発明の目的は、迅速かつ客観的に再狭窄の発症のリスクを予測することである。
【０００９】
本発明のさらなる目的は、再狭窄をより効果的に治療する方法を提供し、その再発を減らすことである。
【００１０】
これらを目的として、発明者は、動脈の細胞外マトリックスに存在し、血管形成術時に血管が受ける急性外傷、およびアテローム性動脈硬化症の過程中に血管が受ける慢性外傷で損傷されるタンパク質をコードする１組の遺伝子を同定した。同定された該遺伝子は、血管壁のエラスチン繊維網状組織の形成に関与する。これらの遺伝子は、限定されるものではないが、エラスチン／トロポエラスチン、フィブリリン−１およびフィブリリン−２、リジルオキシダーゼおよびミクロフィブリル関連糖タンパク質（ＭＡＧＰ）をコードする遺伝子、ならびにデルマタン硫酸プロテオグリカン、バイグリカン、オステオポンチン（Ｅｔａ−１）およびデコリンをコードする遺伝子からなる。これらの遺伝子のタンパク質産物はエラスチン繊維の形成に寄与し、要するに、細胞から分泌されたトロポエラスチンは、主としてフィブリリン−１および２から次々と形成されるミクロフィブリルからなる細胞骨格マトリックス支持構造に沿って貯蔵される。複雑な生化学的プロセスを経て、可溶性トロポエラスチンは不溶性のエラスチンに変換される。これは酵素リジルオキシダーゼにより部分的に行われ、エラスチン架橋を形成しながら可溶性トロポエラスチンが不溶性エラスチン繊維中へ組み込まれることが示されている。デルマタン硫酸プロテオグリカン、バイグリカンおよびデコリンは、トロポエラスチンに結合することが見出されているが、弾性繊維中におけるそれらの正確な役割は知られていない。オステオポンチンは、ヒト皮膚および大動脈中の正常弾性繊維の構成要素である(L. J. van't Veer et al., Nature 415: 530-536, January 31,2002)。これはヒト冠動脈アテローム硬化型プラーク中に存在するが、正常な血管には存在しない。
【００１１】
本発明の原理を理解するために重要なことは、エラスチン繊維が血管の構造的支持網状組織を形成するだけでなく、無傷の場合に、エラスチンが血管中膜中のＳＭＣ（平滑筋細胞）の休止状態の表現型を誘導することを認識することである。エラスチンが崩壊するか存在しない場合は、ＳＭＣはもはや休止状態の表現型を維持せず、その代わりに増殖および移動して新生内膜の過形成がおこる。これは再狭窄およびアテローム性動脈硬化症の両方に関与する重要な過程である。
【００１２】
エラスチンの遺伝的突然変異は、大動脈弁に対して遠位側の心臓側からあらわれる動脈の狭窄（狭窄）を特徴とする、大動脈弁上狭窄を引き起こすことが見出されている。この狭窄は大動脈中膜に局在するＳＭＣの移動および増殖により引き起こされ、これが新生内膜過形成および最終的には血流の閉塞が発現する大動脈の内腔の狭窄を引き起こす（大動脈弁上狭窄）。フィブリリンタンパク質の遺伝的突然変異もまた、血管疾患の原因となり得る。エラスチン繊維網状組織の形成に関与するタンパク質をコードし、エラスチン機能の完全性を変化させる遺伝子の多型がＳＭＣの移動および増殖の素因となり、それにより冠動脈、大脳動脈または末梢動脈が閉塞するというのが本発明のコンセプトである。これらの過程は、血管形成術に際して再狭窄の素因となり得るか、あるいは、慢性の血管外傷の場合には、アテローム性動脈硬化症の素因となり得る。
【００１３】
本発明者は、これらの遺伝子の示差的発現が血管の外傷に対する治癒応答に関与し、ＳＭＣが静止状態の表現型を回復させるために無傷のエラスチン繊維が必要であり、発現の程度の変化またはエラスチンおよびエラスチン機能の完全性に寄与する遺伝子（上述）が示差的に発現される時間の長さの変化が、異常な治癒パターンをもたらす原因となり得ることを認識している。遺伝子の前提条件が皮膚の外傷に応答して皮膚上に繊維組織の過剰発現をもたらすケロイド瘢痕に類似して、血管壁の損傷に際して（再狭窄のように急性でも、アテローム性動脈硬化症のように慢性であっても）過度の治癒応答が再狭窄またはアテローム性動脈硬化症の発症の一因となる。
【００１４】
さらに、本発明者は、遺伝子発現の程度の変化、または遺伝子が発現される時間の長さの変化は、遺伝子の多型または遺伝子の調節成分の多型により引き起こされ得ることを認識している。疾病発症のリスクを高めるこのような多型は、いくつかの疾病に関連するいくつかの遺伝子に関してすでに同定されている。従って、本発明では、エラスチン／トロポエラスチン、フィブリリン−１およびフィブリリン−２、リジルオキシダーゼおよびミクロフィブリル関連糖タンパク質（ＭＡＧＰ）をコードする遺伝子、ならびにデルマタン硫酸プロテオグリカン、バイグリカン、オステオポンチンおよびデコリンをコードする遺伝子が、その多型が再狭窄またはアテローム性動脈硬化症に罹患しやすくさせ得る遺伝子として同定される。本発明は、これらの特定の遺伝子に限定されるものではなく、そのタンパク質産物がエラスチン繊維の完全性に影響するすべての遺伝子を包含する。従って、以後の再狭窄（またはアテローム性動脈硬化症−以下を参照）の予測のための参考文献は、本発明により同定された遺伝子の多型またはそれらの調節ユニットの多型に関するものである。
【００１５】
これらの同定された遺伝子が再狭窄またはアテローム性動脈硬化症の病因において果たし得る役割の重要性を考慮して、本発明者は、これらの遺伝子発現の操作能力が再狭窄またはアテローム性動脈硬化症の治療に有効であり得ることを認識している。治療方法には、罹患時にダウンレギュレートされる遺伝子の発現を増大させる遺伝子療法も含まれてよい。また、治療には、再狭窄／アテローム性動脈硬化症に際してアップレギュレートされる遺伝子の発現を減少させる方法も含まれてよい。遺伝子発現を減少させる治療法には、限定されるものではないが、アンチセンスｍＲＮＡの発現、三重鎖形成または同時発現による阻害が含まれてよい。
【００１６】
さらに、本発明者は、エラスチン／トロポエラスチン、フィブリリン−１およびフィブリリン−２、リジルオキシダーゼおよびミクロフィブリル関連糖タンパク質（ＭＡＧＰ）をコードする遺伝子、ならびにデルマタン硫酸プロテオグリカン、バイグリカンおよびデコリンをコードする遺伝子（ならびにタンパク質産物がエラスチン機能の完全性に影響を及ぼす他の任意の遺伝子）であって再狭窄／アテローム性動脈硬化症の発症に影響を及ぼす遺伝子を同定することにより、再狭窄／アテローム性動脈硬化症の発症に作用するタンパク質の同定を可能にし得るものと認識している。かかるタンパク質の同定により、それらの発現に作用するか、それらの代謝を変化させる方法の使用が可能になる。発現されたタンパク質の作用を変化させるための方法としては、限定されるものではないが、同定されたタンパク質に結合する特異的抗体または抗体フラグメント、同定されたタンパク質に結合する特異的受容体、または同定されたタンパク質のその生理的標的に対する作用およびその代謝や生物作用を阻害する他のリガンドもしくは小分子などの使用が含まれる。さらに、再狭窄の過程中にダウンレギュレートされるタンパク質を、それらの合成の減少を改善するために体外から補ってもよい。
【００１７】
本発明者は、エラスチン／トロポエラスチン、フィブリリン−１およびフィブリリン−２、リジルオキシダーゼおよびミクロフィブリル関連糖タンパク質（ＭＡＧＰ）をコードする遺伝子、ならびにデルマタン硫酸プロテオグリカン、バイグリカン、オステオポンチンおよびデコリン（ならびにタンパク質産物がエラスチン機能の完全性に影響を及ぼす任意の遺伝子）であって再狭窄／アテローム性動脈硬化症の発症に影響を及ぼす遺伝子を同定することにより、遺伝子発現またはタンパク質機能に作用する方法の予防的使用が可能になり、また、かかる方法は再狭窄／アテローム性動脈硬化症の発症のリスクが高い個体の治療に使用し得るものと理解している。
【００１８】
さらに、本発明者は、エラスチン／トロポエラスチン、フィブリリン−１およびフィブリリン−２、リジルオキシダーゼおよびミクロフィブリル関連糖タンパク質（ＭＡＧＰ）をコードする遺伝子、ならびにデルマタン硫酸プロテオグリカン、バイグリカン、オステオポンチンおよびデコリン（ならびにタンパク質産物がエラスチン機能の完全性に影響を及ぼす他の任意の遺伝子）であって再狭窄／アテローム性動脈硬化症の発症に影響を及ぼす遺伝子の種々の多型が種々の患者における再狭窄／アテローム性動脈硬化症の発症において役割を果たし得るものと認識している。従って、本発明者は、本発明は特定の患者に特徴的な特定の異常の同定を可能にすると認識している。発明者はこのことが治療の特異性を高め得ることを認識している。ある特定の多型プロフィールを持つ患者に有効な療法が、異なる多型プロフィールの第二の患者に有効であるとは限らない。また、かかるプロファイリングにより、特定の患者に有効でない治療戦略の不必要な副作用を回避できるように治療を患者の状態に応じたものとすることが可能になるであろう。
【００１９】
最後に、本発明者は再狭窄がアテローム性動脈硬化症と多くの共通で重複する過程およびメカニズムを共有するものと認識している。これら２つの疾病の重要な相違点の一つは、関与する動脈の機能的に重要な狭窄の発現スピードである。従って、再狭窄はアテローム性動脈硬化症の原因であるメカニズムの多くを理解するための効果的なモデルとして用いることができる。従って、本発明者は以下のようなことを明らかにする。
【００２０】
本発明者は、ラット頚動脈損傷モデルの転写プロファイリング（ＤＮＡアレイ）を行うことにより、外傷を受けた後にエラスチン、フィブリリン−１およびフィブリリン−２をコードする遺伝子が異なった形でアップレギュレートされ、これはエラスチンもしくはフィブリリン遺伝子、または上述したエラスチン機能の完全性に寄与する他の任意の遺伝子などのこれらの遺伝子が、血管外傷に対する応答において重要であることを見いだしている。従って、本発明では、その遺伝子のコーディング領域または調節領域の多型の結果として起こりうるこれらの遺伝子の異常な転写調節が、再狭窄／アテローム性動脈硬化症発症の素因であると予測される。
【００２１】
そして、本発明者は、エラスチンもしくはフィブリリン遺伝子、または上述したエラスチン機能の完全性に寄与する他の任意の遺伝子の多型の同定が再狭窄／アテローム性動脈硬化症を予測し得ることを見いだしている。そのようなものとして、これらの多型の同定はリスクがある患者の予測を助け、それにより再狭窄／アテローム性動脈硬化症の発症を防ぐためにより積極的に治療すべき患者を同定できる。
【００２２】
さらに、本発明者は、エラスチンもしくはフィブリリン遺伝子（または上述したエラスチン機能の完全性に寄与する他の任意の遺伝子）の発現が急性の血管外傷に対する治癒応答時、ひいてはアテローム性動脈硬化症の過程中に変化していることを見いだした。
【００２３】
同定された遺伝子が再狭窄／アテローム性動脈硬化症の病因論において果たし得る役割の重要性を考慮して、本発明者は、これらの遺伝子発現の操作能力が再狭窄／アテローム性動脈硬化症の治療において有効であり得るものと認識している。アテローム性動脈硬化症の治療法には、急性の血管外傷に対する治癒応答時、ひいてはアテローム性動脈硬化症に際してダウンレギュレートされる遺伝子発現を増大させるための遺伝子療法が含まれてよい。治療法にはまた、急性の血管外傷に対する治癒応答時、ひいてはアテローム性動脈硬化症に際してアップレギュレートされる遺伝子発現を減少させる方法も含まれてよい。遺伝子発現を減少させるための治療には、限定されるものではないが、アンチセンスｍＲＮＡの発現、三重鎖形成または同時発現の阻害が含まれてよい。
【００２４】
さらに、本発明者は、エラスチンおよびフィブリリン遺伝子（および上述したエラスチン機能の完全性に寄与する他の任意の遺伝子）が急性の血管外傷に対する治癒応答時、ひいては再狭窄／アテローム性動脈硬化症の発症に関与していることを確認すれば、アテローム性動脈硬化症の発症に作用するタンパク質の同定が可能になるものと認識している。かかるタンパク質を同定することにより、それらの発現に作用するか、それらの代謝を変化させる方法の使用が可能になる。発現されたタンパク質の作用を変化させるための方法としては、限定されるものではないが、同定されたタンパク質に結合する特異的抗体または抗体フラグメント、同定されたタンパク質に結合する特異的受容体、または同定されたタンパク質がその生理的標的に及ぼす影響およびその代謝や生物作用を阻害する他のリガンドもしくは小分子などの使用が含まれる。さらに、急性の血管外傷に対する治癒応答時、ひいては再狭窄／アテローム性動脈硬化症の過程中にダウンレギュレートされるタンパク質を、それらの合成の減少を改善するために体外から補ってもよい。
【００２５】
本発明者は、エラスチンおよびフィブリリン遺伝子（および上述したエラスチン機能の完全性に寄与する他の任意の遺伝子）が急性の血管外傷に対する治癒応答時、ひいては再狭窄／アテローム性動脈硬化症の発症に関与していることを確認すれば、遺伝子発現またはタンパク質機能に作用する方法の予防的使用が可能になり、またかかる方法はアテローム性動脈硬化症の発症のリスクが高い個体の治療に使用し得るものと理解している。
【００２６】
さらに、本発明者は、種々の多型が種々の患者における再狭窄／アテローム性動脈硬化症の発症において役割を果たし得るものと認識している。従って、本発明者は、本発明が特定の患者に特徴的な特定の異常の同定を可能にするものと認識している。本発明者は、このことが治療の特異性を高め得るものと認識している。ある特定の多型プロフィールを持つ患者に有効な療法が、異なる多型プロフィールの第二の患者に有効であるとは限らない。また、かかるプロファイリングにより特定の患者に有効でない治療戦略の不必要な副作用を回避できるように、治療を患者の状態に応じたものとすることが可能になるであろう。
【００２７】
本発明の他の目的、特性および利点は、以下の詳細な説明から明らかになるであろう。しかし、この詳細な説明は本発明の好ましい実施態様を示す一方で、単に例示する目的で示されたものであり、本発明の精神およびその範囲内の種々の変更および改変は、この詳細な説明から当業者にとって明らかであることを理解すべきである。
【００２８】
図面の簡単な説明
図１は、ラット頚動脈の急性血管外傷後の、トロポエラスチン遺伝子およびフィブリリン−１遺伝子の示差的発現を示す。
【発明の具体的説明】
【００２９】
本発明によれば、再狭窄およびアテローム性動脈硬化症の予測、予防および治療のための新規かつ改良された方法が提供される。急性の血管外傷に対する治癒応答時、ひいては再狭窄およびアテローム性動脈硬化症に際して、エラスチンおよびフィブリリン遺伝子（および上述したエラスチン機能の完全性に寄与する他の任意の遺伝子）の発現レベルが変化していることが確認された。
【００３０】
これらの遺伝子の示差的発現が血管外傷に対する治癒応答に関与するため、発現の程度の変化または発現時間の長さの変化が異常な治癒パターンをもたらす原因となり得る。血管壁の損傷に際して（再狭窄のように急性でも、アテローム性動脈硬化症のように慢性であっても）過度の治癒応答が再狭窄またはアテローム性動脈硬化症の発症に寄与する。遺伝子発現の程度の変化または遺伝子が示差的に発現される時間の長さの変化は、遺伝子または遺伝子の調節成分における多型により引き起こされる。従って、本発明では、エラスチン遺伝子または上述したエラスチン機能の完全性に寄与する他の任意の遺伝子が、その多型が再狭窄またはアテローム性動脈硬化症を発症させやすくする遺伝子として同定される。
【００３１】
エラスチンおよびフィブリリン遺伝子（ならびに上述したエラスチン機能の完全性に寄与する他の任意の遺伝子）が急性の血管外傷に対する治癒応答に関与していることが確認されれば、遺伝子の多型により発現程度および発現持続時間が変化しているこれらの遺伝子を、再狭窄またはアテローム性動脈硬化症のリスクを変化させる遺伝的異常を同定するための標的として同定することが可能となる。リスクを高めるこのような多型の同定により、血管形成術の処置に先立って患者の再狭窄発症のリスクを予測することが可能となる。この処置前のリスク予測が、患者の治療法に大きく影響する。再狭窄のリスクが非常に高いとみられる患者にはバイパス術が勧められる。その他の患者には先に血管形成術を施し、非常に積極的に内科的治療を行うようにする。さらに他の患者には通常の血管形成術に加えて近接照射療法（血管内放射線療法）を追加する。この方法は、通常、すでに多数の再狭窄の症状を発現しているといったむしろ直接的な評価によって、再狭窄のリスクが高いとされた患者のために用いられる。従って、本発明が再狭窄のリスクを予測するための新しい改良法を提供することは明らかである。
【００３２】
さらに、エラスチンおよびフィブリリン遺伝子（ならびに上述したエラスチン機能の完全性に寄与する他の任意の遺伝子）が急性の血管外傷に対する治癒応答時に活性化される遺伝子として同定されれば、それらの遺伝子の好適なセットまたはサブセットの発現の標的化された阻害により、疾病の予防、改善、または治療のための新規な方法が提供される。
【００３３】
さらに、再狭窄はアテローム性動脈硬化症と多くの共通で重複する過程およびメカニズムを共有する。従って、急性の血管外傷に対する治癒応答時に示差的に発現される遺伝子の多くは、アテローム性動脈硬化症をもたらすような慢性の血管外傷に際して示差的に発現される遺伝子と同じものである。従って、本発明はまた、臨床学的に重要なアテローム性動脈硬化症の実際の発症に先立ち、（すなわち関連する心臓の動脈または末梢動脈の検出可能または顕著な狭窄の発現に先立ち）アテローム性動脈硬化症の発症に関する個体のリスクプロファイリングを可能にする。従って、この情報は、アテローム性動脈硬化症の予防および疾病過程を遅延または改善させるための迅速な検出のための、予防的診療を可能にする。
【００３４】
本発明はまた、エラスチン遺伝子または上述したエラスチン機能の完全性に寄与する他の任意の遺伝子の、アテローム性動脈硬化症のリスクを高める多型に関して分析される遺伝子としての同定を可能にする。種々の多型が種々の患者におけるアテローム性動脈硬化症の発症において役割を果たし、本発明は、特定の患者に特徴的な特定の異常の同定を可能にする。従って、本発明は治療の特異性を高め得る。ある特定の多型プロフィールを有する患者に有効な療法が、異なる多型プロフィールの第二の患者に有効であるとは限らない。また、かかるプロファイリングは特定の患者に有効でない治療戦略の不必要な副作用を回避できるように、治療を患者の状態に応じたものとすることが可能になるであろう。
【００３５】
再狭窄/アテローム性動脈硬化症における遺伝子発現の変化の説明
ラットは血管研究のためのヒトのモデルとして広く認められており、ラットで得られた結果からヒトで得られる結果を十分予測できると考えられている。従って、ラットで認められたように、ヒトにおいて急性または慢性血管外傷に対する治癒応答に際して、エラスチンおよびフィブリリン遺伝子（ならびに上述したエラスチン機能の完全性に寄与するいくつかの他の遺伝子）の遺伝子発現に違いがあると予想される。これらの遺伝子の発現程度、または遺伝子が示差的に発現される時間の長さの過度の変化は、再狭窄／アテローム性動脈硬化症を発症する素因となる。通常、このような過度の変化は、遺伝子または遺伝子の調節成分における多型によりもたらされるため、急性の血管外傷に対する治癒応答時に示差的に調節されることが確認されているラット遺伝子は、その多型が再狭窄に罹患しやすくすることが見出されるヒト遺伝子と相同なものであろう。再狭窄はアテローム性動脈硬化症と多くの過程およびメカニズムを共有し、かつ、両方とも血管外傷の結果であることから、ラットの急性血管外傷に対する治癒応答モデルで同定された遺伝子はまた、その異常発現がアテローム性動脈硬化症の発病素因となる遺伝子であろう。これは、エラスチン発現の欠損をもたらすエラスチン遺伝子の突然変異がＳＭＣの移動および増殖、そして大動脈弁上狭窄を引き起こすことが実証された実験により示唆される。さらに、フィブリリン遺伝子の突然変異もまた、血管疾患を引き起こすことが示されている。
【００３６】
この特定の異常は、再狭窄／アテローム性動脈硬化症に関連するエラスチンまたはフィブリリン遺伝子（または上述したエラスチン機能の完全性に寄与する他の任意の遺伝子）の多型を同定することにより判定される。このような多型はまた、治療的介入に際してどの遺伝子を標的とすべきかの指標をもたらし、その多型が遺伝子転写のアップレギュレーションをもたらす遺伝子は、遺伝子発現またはその遺伝子がコードするタンパク質の機能を低減させるよう設計された治療法の標的となり得る；同定された多型が転写のダウンレギュレーションをもたらす遺伝子は、遺伝子発現またはその遺伝子がコードするタンパク質の機能を増大させるよう設計された治療法の標的となり得る。
【００３７】
ひとたび機能的に関連のある多型が再狭窄／アテローム性動脈硬化症と結びつけられると、所与の患者にかかる多型が存在するかどうかを確認することにより、再狭窄／アテローム性動脈硬化症の発症のリスクを予測できるであろう。
【００３８】
エラスチンまたはフィブリリン遺伝子（または上述したエラスチン機能の完全性に寄与する他の任意の遺伝子）発症に影響を及ぼす多型の存在をアッセイすることにより、血管形成術処置に先立って再狭窄の発症のリスクを、また臨床学的に検出可能なアテローム性動脈硬化症が発現する前にアテローム性動脈硬化症のリスクを予測することができる。このような早期の予測は、臨床医に再狭窄またはアテローム性動脈硬化症の過程を減速させたり止めたりする機会を与える。さらに、本発明によれば、再狭窄およびアテローム性動脈硬化症を阻止し、減速させ、または予防し得る新規の組成物が提供される。
【００３９】
エラスチンまたはフィブリリン遺伝子（または上述したエラスチン機能の完全性に寄与する他の任意の遺伝子）の調節不全
エラスチンまたはフィブリリン遺伝子（または上述したエラスチン機能の完全性に寄与する他の任意の遺伝子）の発現における生物学的に重要な過度の変化をもたらす遺伝子多型の同定は、患者由来のサンプルで直接測定できる。これらのサンプルは、末梢血液から最も都合よく得られるＤＮＡである。しかし、遺伝子発現の変化を測定するための他の方法も、当技術分野で周知である。例えば、タンパク質レベルはＥＬＩＳＡのような定量的免疫アッセイにより組織サンプル単離物中で測定できる。ＥＬＩＳＡ法により多くのタンパク質のレベルを測定するためのキットは、R&D Systems（Minneapolis, MN）のような供給元から市販されており、また、ＥＬＩＳＡ法は周知の方法を用いて行うことができる。抗体の例に関しては以下を参照のこと：A Laboratory Manual (Harlow and Lane Eds. Cold Spring Harbor Press)。ＥＬＩＳＡ法で用いるための抗体は、市販のものでもよく、周知の方法により調製してもよい。
【００４０】
多様なタンパク質を定量分析する他の方法には、例えば同位体標識アフィニティータグ試薬、ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ／ＴＯＦタンデム質量分析、および２Ｄ-ゲル／質量分析技術のようなプロテオミクス技術がある。これらの技術は、例えば、Large Scale Proteomics Inc. (Germantown MD)およびOxford Glycosystems (Oxford UK)から商業的に利用可能である。
【００４１】
あるいは、メッセージレベルにおける遺伝子発現の変化を測定するために、定量的ＲＴ−ＰＣＲのような定量的ｍＲＮＡ増幅法を用いることができる。これらの方法を行うためのシステムもまた市販されており、例えば、ＴａｑＭａｎシステム(Roche Molecular System, Alameda, CA)およびＬｉｇｈｔ Ｃｙｃｌｅｒシステム(Roche Diagnostics, Indianapolis, IN)がある。ＲＴ−ＰＣＲおよび関連する方法で使用するための適当なプライマーを設計するための方法は、当技術分野において周知である。特に、ＰＣＲプライマー配列を設計するための多数のソフトウエアパッケージが市販されている。
【００４２】
多様な遺伝子の発現を研究するためには、核酸アレイ提示は特に魅力的な方法である。特に、アレイによれば、多数の遺伝子の発現を同時にアッセイする方法が提供される。かかる方法は、現在、当技術分野で周知であり、市販のシステムが、例えばAffymetrix (Santa Clara, CA)、Incyte (Palo Alto, CA)、Researchgenetics(Huntsville, AL) および Agilent (Palo Alto, CA)から入手可能である。また、米国特許第５,４４５,９３４号明細書、同第５,７００,６３７号明細書、同第６,０８０,５８５号明細書、同第６,２６１,７７６号明細書も参照のこと。これらの全開示内容は、参照することにより本明細書の一部とする。
【００４３】
さらに、本発明者は、遺伝子発現の程度の変化、または遺伝子が示差的に発現される時間の長さの変化が、遺伝子の多型または遺伝子の調節成分の多型により引き起こされ得ることを認識している。疾病発症のリスクを高めるこのような多型は、いくつかの疾病に関連するいくつかの遺伝子に関してすでに同定されている。従って、本発明では、エラスチンまたはフィブリリン遺伝子（または上述したエラスチン機能の完全性に寄与する他の任意の遺伝子）であって、その多型が再狭窄またはアテローム性動脈硬化症に対し罹患しやすくさせ得る遺伝子が同定される。従って、再狭窄（またはアテローム性動脈硬化症−以下参照）の予測のための以下の参考文献は、これらの遺伝子またはそれらの調節ユニットの多型に関連するものである。
【００４４】
関連遺伝子発現に対して生物学的に重要な変化をもたらす多型の存在を判定するためにサンプリングされた組織
ＤＮＡを含むいずれの組織でも適当であるが、最も簡単に採取できるのは末梢静脈血または末梢動脈血である。
【００４５】
表１に記載された遺伝子の多型を研究する方法
多型は、塩基配列決定法および短鎖縦列反復配列関連試験、単一ヌクレオチド多型関連試験等を含むいくつかの方法により同定できる。これらの方法は当業者に周知である。
【００４６】
また、遺伝子発現はタンパク質レベルでも試験できる。各々の細胞核は遺伝子の完全なセットを担持しているが、各々の細胞内で発現される遺伝子のみがｍＲＮＡに転写され、次いでタンパク質に翻訳される。その結果、遺伝子発現は、組織特異的、または細胞特異的でさえある。一般に、転写されるＲＮＡ分子の数が多いほど、それらから翻訳されるタンパク質分子の数も多く、従って、タンパク質分析により得られた結果は、少なくとも遺伝子発現レベルの相対的変化という点からは同じであるはずである。従って、遺伝子発現の分析は、特定のｍＲＮＡ転写の量またはそれから翻訳されたタンパク質の量を対象とすればよい。しかし、遺伝子多型は、末梢血をはじめとして、いずれの起源由来の組織を用いても確実に検出されるが、遺伝子発現レベルにおける関連のある変化を測定するためのｍＲＮＡのアッセイ、またはエラスチンおよびフィブリリン遺伝子（ならびに上述したエラスチン機能の完全性に寄与する任意の他の遺伝子）によりコードされるタンパク質のアッセイは、サンプリングされた組織に大きく依存する。遺伝子発現の変化は再狭窄発症部位またはアテローム性動脈硬化症発症部位で起こるというある考え方は、末梢血液をサンプリングして試験することから得られるが、遺伝子発現のより信頼できる評価は再狭窄またはアテローム性動脈硬化症を実際に発症している動脈をサンプリングすることにより得られるであろう。
【００４７】
ＲＮＡ発現
組織からＲＮＡを単離する方法は、当技術分野で周知である。例えば、Sambrook et al. Molecular Cloning : A Laboratory Manual (Third Edition) Cold Spring Harbor Press, 2001を参照のこと。ＲＮＡを単離するための市販の試薬もまた入手可能である。
【００４８】
簡潔に言えば、例えば細胞または組織を溶解させ、溶解させた細胞を遠心分離して核ペレットを除去する。次いでその上清を回収し、フェノール／クロロホルム抽出液を用いて核酸を抽出し、次いでエタノールで沈殿させる。これにより総ＲＮＡが得られ、２６０〜２８０ｎｍで光学密度を測定することにより定量できる。
【００４９】
ｍＲＮＡは、ｍＲＮＡの「ポリＡ」末端を利用して、市販のいくつかのキットを用いて総ＲＮＡから単離できる。ＱＩＡＧＥＮｍＲＮＡ Ｍｉｄｉキット（Ｃａｔ.Ｎｏ.７００４２）；Ｐｒｏｍｅｇａ ＰｏｌｙＡ Ｔｔｒａｃｔ（商標）ｍＲＮＡ単離システム（Ｃａｔ.Ｎｏ.Ｚ５２００）。このＱＩＡＧＥＮキットは、ポリＡ ｍＲＮＡの単離のために設計されたＯｌｉｇｏｔｅｘ Ｒｅｓｉｎを用いるスピンカラムを備え、３０分以内に総ＲＮＡから本質的に純粋なｍＲＮＡが得られる。プロメガシステムはビオチン化オリゴｄＴプローブを使用して、ｍＲＮＡポリＡ末端とハイブリダイズし、純粋なｍＲＮＡを単離するのに約４５分間を要する。
【００５０】
遺伝子マイクロアレイ分析
マイクロアレイ技術は、ただ一つのｍＲＮＡサンプルから多数の遺伝子の発現をアッセイするための非常に有力な方法である。例えば、Affymetrix Inc.(Santa Clara, Ca)から市販されているＧｅｎｅ Ｃｈｉｐ（商標）技術は何千もの既知の遺伝子のプローブと、発現された配列タグ（ＥＳＴ）が平板化されている。ビオチン化ｃＲＮＡ（線形に増幅されたＲＮＡ）を調製し、チップ上のプローブとハイブリダイズさせる。次に、相補的配列を可視化し、そのシグナルの強度が遺伝子により発現されたｍＲＮＡの複製数に相応する。
【００５１】
定量的ＰＣＲ
定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）では、標的配列と基準テンプレートの連続希釈液との同時増幅を行う。標的の増幅産物を標準希釈液の曲線に内挿することにより、標的配列の濃度を概算で求め得る。定量的逆転写ＰＣＲ（ＲＴＰＣＲ）は、例えばApplied BioSystems(Foster City, CA) および Stratagene(La Jolla, CA)から市販されているキットおよび方法によりｍＲＮＡを用いて行ってよい。Kochanowsi, Quantitative PCR Protocols"Humana Press, 1999も参照のこと。例えば、ランダムヘキサマーおよびＴａｑＭａｎ逆転写試薬キット(Perkin Elmer)を使用説明書に従って用いて、総ＲＮＡを逆転写してもよい。AmpErase UNGdNTP,AmpliTaq Gold、プライマーおよびＴａｑＭａｎプローブを含むＴａｑｍａｎ ＰＣＲマスターミックスを使用説明書に従って用いてｃＤＮＡを増幅する。このＴａｑＭａｎプローブは、標的遺伝子配列に特異的であり、５'末端を蛍光レポーター（ＦＡＭ）で、３'末端を消光剤（例えばＴＡＭＲＡ）で標識してある。内因性対照および標的遺伝子両方に対して標準曲線を作成し、処置細胞および未処置細胞中の対照に対する標的遺伝子のＣＴ（閾値周期数）の比の比較を行う。この技術は遺伝子発現を特徴付けるために広く用いられている。
【００５２】
タンパク質の発現
遺伝子発現はまた、タンパク質レベルで試験することもできる。第一に標的組織を単離し、次いで総タンパク質を周知の方法で抽出する。例えば、標的タンパク質に特異的な一組の抗体を用いるＥＬＩＳＡ法により定量分析を行う。
【００５３】
エラスチン機能の完全性に関係する遺伝子によりコードされたタンパク質のサブセットは、可溶性であるかまたは分泌される。このような場合、該タンパク質は血液、血漿またはリンパ中に見出され、それらのタンパク質の分析法はそのような組織中のタンパク質分析のために記載された任意の方法により行ってよい。これにより、再狭窄または動脈硬化症の発症のリスクを評価するために患者サンプルを得る最も侵襲の少ない方法が提供される。
【００５４】
再狭窄の治療
血管外傷に対する治癒応答時に発現が変化しているエラスチンまたはフィブリリン遺伝子（または上述したエラスチン機能の完全性に寄与する他の任意の遺伝子）を含む遺伝子のセットを同定することにより、再狭窄またはアテローム性動脈硬化症を治療する新しい機会が提供される。血管外傷に対する治癒応答時にアップレギュレートされる遺伝子を同定することにより、それらの転写または翻訳に抑制的に作用する方法を用いることができる。同様に、血管外傷に対する治癒応答時にダウンレギュレートされている遺伝子を同定することにより、それらの発現に促進的に作用する方法を用いることができる。最終的に、これらの遺伝子によりコードされるタンパク質を同定することにより、そのタンパク質活性を改善または増強するための適当な方法の使用が可能となり、その結果、再狭窄またはアテローム性動脈硬化症の発症に影響を及ぼし得る。
【００５５】
遺伝子発現の増強方法
血管外傷に対する治癒応答時にその発現が低下する、エラスチンまたはフィブリリン遺伝子（または上述したエラスチン機能の完全性に寄与する他の任意の遺伝子）に関しては、１以上のこれらの遺伝子の発現を増強することにより再狭窄またはアテローム性動脈硬化症を改善または予防することが可能である。遺伝子転写は、多くの方法により意図的に改変し得る。例えば、相同的組換えによる形質導入により、遺伝子の外来性のコピーを血管組織の細胞ゲノム中に挿入してもよい。形質導入による発現は比較的安定であるが、その効率は低い。別の方法としては一過性形質導入があり、ベクター中に該遺伝子を挿入し、ベクター特異的プロモーターを利用してゲノム対立遺伝子とは独立したその転写を可能にする。さらにもう一つの方法は、裸のＤＮＡを用いるトランスフェクションである。しかし、一般にこの方法の発現程度は非常に低い。
【００５６】
遺伝子発現の阻害方法
本発明はまた、血管外傷に対する治癒応答時にアップレギュレートされているエラスチンまたはフィブリリン遺伝子（または上述したエラスチン機能の完全性に寄与する他の任意の遺伝子）の発現に抑制的に作用する能力を提供する。遺伝子をダウンレギュレートするための方法は周知である。細胞に導入されたアンチセンスＲＮＡはこれに相補的なｍＲＮＡに結合し、その分子の翻訳を阻害することが示されている。同様に、アンチセンス一本鎖ｃＤＮＡを細胞内に導入してもよく、同じ結果が得られる。さらに、異所的に組み込まれた配列は内因性遺伝子の発現を損なうため、相同的導入遺伝子による遺伝子のコサプレッションも有効であり(Cogoni et al. Antonie van Leeuwenhoek, 1994; 65 (3): 205-9)、またアンチセンスＲＮＡの転写も起こり得る(Hamada w and Spanu PD; Mol. Gen Genet 1998)。真核細胞中での遺伝子発現を特異的に阻害するための短鎖干渉ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）を用いる方法が、最近記述されている。Tuschl et al., Nature 411: 494-498 (2001)を参照されたい。
【００５７】
さらに、オリゴデオキシリボヌクレオチド（ＯＤＮ）を二本鎖ＤＮＡのポリプリントラクトに連結することにより、安定な三重鎖構造を形成できる(例えば、Rininsland, Proc.Nat'l Acad. Sci. USA 94: 5854-5859 (1997)を参照）。三重鎖の形成は、伸長の転写を阻害することによってＤＮＡ複製を阻害することができ、非常に安定な分子である。
【００５８】
特定のタンパク質活性の阻害方法
ある特定のタンパク質が再狭窄またはアテローム性動脈硬化症の発症経路に関与している場合、いくつかの方法によりその活性を変えることができる。第一に、該タンパク質に結合させてその活性を阻害するために、特異的抗体を用いてもよい。かかる抗体は従来のハイブリドーマ技術によって得てもよく、またDyax (Cambridge, MA)、 MorphoSys (Martinsried, Germany)、 Biosite (San Diego, CA) および Cambridge Antibody Technology (Cambridge, UK)から市販されているライブラリーから単離してもよい。さらに、タンパク質は、通常、細胞の受容体と結合することによりその細胞効果を発揮している。本発明により再狭窄またはアテローム性動脈硬化症に寄与するとされているタンパク質が結合する受容体を同定することにより、再狭窄またはアテローム性動脈硬化症の発症をもたらす作用を媒介する経路を阻害する特異的リガンドアンタゴニストの設計が可能となるであろう。
【００５９】
急性の血管外傷に対する治癒応答時にダウンレギュレートされる遺伝子を同定することにより、それらのタンパク質産物の同定が可能となる。次いで、ダウンレギュレートされたタンパク質を補うことにより、それらの合成の減少による影響が改善される。
【００６０】
本発明による方法は、リスクの高い個体において再狭窄またはアテローム性動脈硬化症の発症を防ぐために予防的に用いることができる。
【００６１】
また、本発明によれば、エラスチンまたはフィブリリン遺伝子（または上述したエラスチン機能の完全性に寄与する他の任意の遺伝子）の生物学的に重要な多型のＤＮＡを含むチップを備えたキットが提供される。かかるチップにより、多型の迅速な検出が可能となり、再狭窄またはアテローム性動脈硬化症の発症のリスクの高いまたは低い個体の迅速な検出のための、便利な方法が提供される。特定の患者における特定の多型の検出により、再狭窄および／またはアテローム性動脈硬化症を予防または軽減するためにそれぞれの患者に関して非常に特異的で患者の状態に応じた治療戦略を考案することが可能になる。
【００６２】
本発明を一般的に説明してきたが、本発明は、以下の実施例を参照することにより、より容易に理解されるであろう。なお、これらの実施例は例示のために示すものであって、本発明を限定するものではない。
【国際調査報告】
2005531287.tif 000002
2005531287.tif 000003