(57)【要約】イオン選択性電極での使用のためのアンモニウム選択的イオノフォアに関する。
2005538926.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造：
【化１】
2005538926.tif 000027
〔式中、Ｒは、水素及びアルキル、アルコキシアルキル、アルコキシアシル、アルキルアミノ、アルキルニトロソ、アルキルシアノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アルケニル、アルコキシアルケニル、アルケニルアシル、アルケニルアミノ、アルケニルニトロソ、アルケニルシアノ、アルケニルチオ、アルケニルスルフィニル、アルキルスルホニル、アルキニル、アルコキシアルキニル、アルキニルアシル、アルキニルアミノ、アルキニルニトロソ、アルキニルシアノ、アルキニルチオ、アルキニルスルフィニル、及びアルキニルスルホニル並びにヘテロ原子を有する又は有しない置換又は無置換のアリール基からなる集合から選択される化学基である〕を有する化合物。
【請求項２】
更に、構造：
【化２】
2005538926.tif 000028
を有する、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
構造：
【化３】
2005538926.tif 000029
を有する化合物を製造する方法であって、
（ａ）構造：
【化４】
2005538926.tif 000030
を有する化合物を得る工程；
（ｂ）構造：
【化５】
2005538926.tif 000031
を有する化合物を得る工程；
（ｃ）工程（ａ）及び工程（ｂ）で得られた化合物から非環式デプシペプチドを合成する工程；及び
（ｄ）構造：
【化６】
2005538926.tif 000032
を有する化合物を工程（ｃ）の非環式デプシペプチドから合成する工程；を含む方法。
【請求項４】
（ａ）構造：
【化７】
2005538926.tif 000033
〔式中、
（ｉ）Ｒは、水素及びアルキル、アルコキシアルキル、アルコキシアシル、アルキルアミノ、アルキルニトロソ、アルキルシアノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アルケニル、アルコキシアルケニル、アルケニルアシル、アルケニルアミノ、アルケニルニトロソ、アルケニルシアノ、アルケニルチオ、アルケニルスルフィニル、アルキルスルホニル、アルキニル、アルコキシアルキニル、アルキニルアシル、アルキニルアミノ、アルキニルニトロソ、アルキニルシアノ、アルキニルチオ、アルキニルスルフィニル、及びアルキニルスルホニル並びにヘテロ原子を有する又は有しない置換又は無置換のアリール基からなる集合から選択される化学基であり、そして
（ｉｉ）Ｒ′は、窒素又は酸素のいずれかである〕を有するイオノフォア；及び
（ｂ）イオノフォアが位置しているアンモニウムイオン透過性マトリックス材、
を含む、アンモニウムイオン選択的マトリックス。
【請求項５】
マトリックスが、イオン選択性電極での使用に適する、請求項４記載のアンモニウムイオン選択的マトリックス。
【請求項６】
マトリックス材が、ガラス又はポリマーを含む、請求項４記載のアンモニウムイオン選択的マトリックス。
【請求項７】
流体試料中のアンモニウムイオンの存在を検出する方法であって、
（ａ）構造：
【化８】
2005538926.tif 000034
〔式中、
（ｉ）Ｒは、水素及びアルキル、アルコキシアルキル、アルコキシアシル、アルキルアミノ、アルキルニトロソ、アルキルシアノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アルケニル、アルコキシアルケニル、アルケニルアシル、アルケニルアミノ、アルケニルニトロソ、アルケニルシアノ、アルケニルチオ、アルケニルスルフィニル、アルキルスルホニル、アルキニル、アルコキシアルキニル、アルキニルアシル、アルキニルアミノ、アルキニルニトロソ、アルキニルシアノ、アルキニルチオ、アルキニルスルフィニル、及びアルキニルスルホニル並びにヘテロ原子を有する又は有しない置換又は無置換のアリール基からなる集合から選択される化学基であり、そして
（ｉｉ）Ｒ′は、窒素又は酸素のいずれかである〕を有するイオノフォアを含むマトリックスを得る工程；
（ｂ）マトリックスを検出装置に接続する工程；
（ｃ）電気的信号、電位又は電流を、マトリックスを介して検出装置に供給する工程；
（ｄ）流体をマトリックスと接触させる工程；及び
（ｅ）検出装置によって供給される電気的信号を測定する工程；（ここで、電気的信号を、流体試料中のアンモニウムイオンの活量と相関させることができる）を含む方法。
【請求項８】
イオノフォアを含むイオン選択性電極において、構造：
【化９】
2005538926.tif 000035
〔式中、
（ａ）Ｒは、水素及びアルキル、アルコキシアルキル、アルコキシアシル、アルキルアミノ、アルキルニトロソ、アルキルシアノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アルケニル、アルコキシアルケニル、アルケニルアシル、アルケニルアミノ、アルケニルニトロソ、アルケニルシアノ、アルケニルチオ、アルケニルスルフィニル、アルキルスルホニル、アルキニル、アルコキシアルキニル、アルキニルアシル、アルキニルアミノ、アルキニルニトロソ、アルキニルシアノ、アルキニルチオ、アルキニルスルフィニル、及びアルキニルスルホニル並びにヘテロ原子を有する又は有しない置換又は無置換のアリール基からなる集合から選択される化学基であり、そして
（ｂ）Ｒ′は、窒素又は酸素のいずれかである〕を有する化合物を、イオノフォアとして使用することを含む改良。
【請求項９】
構造：
【化１０】
2005538926.tif 000036
〔式中、
（ａ）Ｒは、水素及びアルキル、アルコキシアルキル、アルコキシアシル、アルキルアミノ、アルキルニトロソ、アルキルシアノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アルケニル、アルコキシアルケニル、アルケニルアシル、アルケニルアミノ、アルケニルニトロソ、アルケニルシアノ、アルケニルチオ、アルケニルスルフィニル、アルキルスルホニル、アルキニル、アルコキシアルキニル、アルキニルアシル、アルキニルアミノ、アルキニルニトロソ、アルキニルシアノ、アルキニルチオ、アルキニルスルフィニル、及びアルキニルスルホニル並びにヘテロ原子を有する又は有しない置換又は無置換のアリール基からなる集合から選択される化学基であり、そして
（ｂ）Ｒ′は、窒素又は酸素のいずれかである〕を有するイオノフォアを含有するアンモニウムイオン透過性マトリックス材を含む、アンモニウムイオン選択的センサー。
【請求項１０】
マトリックス材が、ガラス又はポリマーを含む、請求項９記載のセンサー。
【請求項１１】
マトリックス材が、更にイオン添加剤を含む、請求項９記載のセンサー。
【請求項１２】
マトリックス材が、検出装置に接続される、請求項９記載のセンサー。
【請求項１３】
更に参照電極を含む、請求項９記載のセンサー。
【請求項１４】
イオノフォアが、構造：
【化１１】
2005538926.tif 000037
〔式中、Ｒは、水素及びアルキル、アルコキシアルキル、アルコキシアシル、アルキルアミノ、アルキルニトロソ、アルキルシアノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アルケニル、アルコキシアルケニル、アルケニルアシル、アルケニルアミノ、アルケニルニトロソ、アルケニルシアノ、アルケニルチオ、アルケニルスルフィニル、アルキルスルホニル、アルキニル、アルコキシアルキニル、アルキニルアシル、アルキニルアミノ、アルキニルニトロソ、アルキニルシアノ、アルキニルチオ、アルキニルスルフィニル、及びアルキニルスルホニル並びにヘテロ原子を有する又は有しない置換又は無置換のアリール基からなる集合から選択される化学基である〕を有する、請求項９記載のセンサー。
【請求項１５】
イオノフォアが、構造：
【化１２】
2005538926.tif 000038
を有する、請求項９記載のセンサー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的に、イオン選択的化合物によるイオンの検出に関する。より具体的には、本発明は、アンモニウムイオンの検出に関する。
【背景技術】
【０００２】
多くの受容体分子（「イオノフォア」と呼称される）は、アンモニウムカチオンを結合させることができる。イオノフォアノナクチンは、生物学的流体試料中のアンモニウムイオンの測定のため、イオン選択性電極（ＩＳＥ）で広く使用されてきた。
【０００３】
【化１３】
2005538926.tif 000003
【０００４】
しかしながら、ノナクチンは、カリウムイオン以上にアンモニウムイオンに対し乏しい選択性を有する。また、ノナクチンは、比較的高価である。
【０００５】
したがって、アンモニウムに対する選択性が、ノナクチンのそれより優れているか、又は少なくとも匹敵するが、値段はそれほどひどく高くはないイオノフォアが、当該技術においては必要である。
【０００６】
発明の要約
本発明は、下記の一般構造（Ｉ）:
【０００７】
【化１４】
2005538926.tif 000004
【０００８】
〔式中、（ａ）Ｒは、独立してまたは組み合わせにおいて、水素又はアルキル、アルコキシアルキル、アルコキシアシル、アルキルアミノ、アルキルニトロソ、アルキルシアノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アルケニル、アルコキシアルケニル、アルケニルアシル、アルケニルアミノ、アルケニルニトロソ、アルケニルシアノ、アルケニルチオ、アルケニルスルフィニル、アルキルスルホニル、アルキニル、アルコキシアルキニル、アルキニルアシル、アルキニルアミノ、アルキニルニトロソ、アルキニルシアノ、アルキニルチオ、アルキニルスルフィニル、アルキニルスルホニルあるいはヘテロ原子を有する又は有しない置換又は無置換のアリール基であり、そして
（ｂ）Ｒ′は、窒素又は酸素のいずれかである〕を有する化合物をイオノフォアとして含む、アンモニウムイオン選択的マトリックス又はイオン選択性電極（ＩＳＥ）を提供する。他の適切な基及び本明細書に記載の基についての詳細は、有機化学の教本（例えば、Bruice P Y, Organic Chemistry, Third Edition (Prentice-Hall, 2001) 又は Wade L W, Organic Chemistry, Fourth Edition, (Prentice-Hall, 1999)) を参照することにより、当業者によって決定することができる。異なる立体構造のイオノフォアＩの異性体を、本発明のイオン選択的マトリックス又は電極中に含むことができる。本発明のマトリックス又は電極で使用されるイオノフォアは、ノナクチンよりも優れた又は少なくとも匹敵するアンモニウムイオン選択性を有する。都合のよいことには、イオノフォアは、製造するのにノナクチンよりも容易でかつ安価である。
【０００９】
また、本発明は、イオノフォアＩを含むイオン選択的マトリックス又は電極を製造及び使用する方法を提供する。
【００１０】
また、本発明は、下記の構造（ＩＩ）：
【００１１】
【化１５】
2005538926.tif 000005
【００１２】
〔式中、Ｒは、水素又はアルキル、アルコキシアルキル、アルコキシアシル、アルキルアミノ、アルキルニトロソ、アルキルシアノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アルケニル、アルコキシアルケニル、アルケニルアシル、アルケニルアミノ、アルケニルニトロソ、アルケニルシアノ、アルケニルチオ、アルケニルスルフィニル、アルキルスルホニル、アルキニル、アルコキシアルキニル、アルキニルアシル、アルキニルアミノ、アルキニルニトロソ、アルキニルシアノ、アルキニルチオ、アルキニルスルフィニル、アルキニルスルホニル基あるいはヘテロ原子を有する又は有しない置換又は無置換のアリール基である]を有する化合物を提供する。立体構造おいて違いを有する全ての異性体は、本発明の化合物の範囲に含まれる。本発明の化合物（化合物ＩＩ）を、本発明のアンモニウムイオン選択性電極にイオノフォアとして有効に含んでもよい。
【００１３】
特定の実施態様において、本発明の化合物は、下記の構造（Ｉ）：
【００１４】
【化１６】
2005538926.tif 000006
【００１５】
を有する。
【００１６】
また、本発明は、ブロック化合物から本発明の化合物を合成する有用な方法を提供する。この方法は、化合物ＩＩがエステル結合を含み、かつ化合物ＩＩ内にエステル結合を含むブロックがまず溶液中で合成されるとき、特に上手く機能し、したがって固相法の活用を容易にする。
【００１７】
該方法を説明しそして一般化するのに、下記の構造：
【００１８】
【化１７】
2005538926.tif 000007
【００１９】
〔式中、Ｒ′は、独立してまたは組み合わせにおいて、水素又はアルキル、アルコキシアルキル、アルコキシアシル、アルキルアミノ、アルキルニトロソ、アルキルシアノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アルケニル、アルコキシアルケニル、アルケニルアシル、アルケニルアミノ、アルケニルニトロソ、アルケニルシアノ、アルケニルチオ、アルケニルスルフィニル、アルキルスルホニル、アルキニル、アルコキシアルキニル、アルキニルアシル、アルキニルアミノ、アルキニルニトロソ、アルキニルシアノ、アルキニルチオ、アルキニルスルフィニル、アルキニルスルホニルあるいはヘテロ原子を有する又は有しない置換又は無置換のアリール基である〕が使用される。Pは、使用の際、特定の固相樹脂に適合する、使用可能などのような保護基でもある。保護基の例は、Catalog and Peptide Synthesis Handbook (Calbiochem-Novabiochem Corp; San Diego, CA) 等のペプチド合成用のどのような商業カタログにも見つけることができる良く知られたFmoc, Z, Boc, Trt等である。
【００２０】
一つの実施態様において、化合物１をブロック化合物Ｂ１及びＢ２から合成することができる。
【００２１】
【化１８】
2005538926.tif 000008
【００２２】
発明の詳細な説明
本発明は、アンモニウムイオン濃度を選択的に検出し測定するためのイオノフォアとして有用である、上記の化合物ＩＩのクラスの組成物を提供する。有用性の根拠は、本発明の脂肪親和性化合物によるアンモニウムイオンの選択的錯化に起因するアンモニウムの選択的応答である。
【００２３】
ある種のシクロヘキサペプチドが、米国特許第6,080,719号に記載されている。しかしながら、これらがイオノフォア活性を有するとは示されていない。むしろ、それらは、インターロイキン-４のインターロイキン-４レセプターへの結合を阻害するために使用されてきた。したがって、これらのシクロヘキサペプチドは、単にアレルギー及び感染症、例えば、ウイルス性、細菌性、寄生虫性及び菌性の疾患の治療、予防及び診断に適すると示されている。
【００２４】
また、ブロック化合物から本化合物を合成する方法が提供される。一つの実施態様において、ブロック化合物は、線形デプシペプチド（米国特許第6,080,719号、6,146,853号及び6,211,145号参照）を合成するために使用され、該デプシペプチドは、次いで、本発明の化合物を形成するために円形にされる。
【００２５】
更に、本発明は、流体試料中のアンモニウムイオンの検出及び測定のため、イオン選択的マトリックス及びイオン選択性電極（ＩＳＥ）を提供する。本発明のイオン選択性電極は、固体状態の膜電極、ガラス膜電極、イオン選択剤を装填した液膜電極、及び不活性ポリマーマトリックスに保持されるイオノフォア等の電気的に中性なイオン選択剤を含む有機溶液から形成される膜を有する中性液膜電極であり得る。固体状態のイオン選択性電極は、検出部又は電極として固体膜を使用し、該膜はアンモニウムイオンに対して極めて選択的であり、イオン伝導率の変化とともにアンモニウムイオンに反応する。所望のアンモニウムイオン選択性は、化合物Ｉのクラスのイオノフォアをイオン選択性電極に含有させることにより達成される。イオン選択性電極は、更に内部参照電極を含んでもよい。
【００２６】
イオン選択的マトリックスは、化合物Ｉのクラスのイオノフォアを分散させているマトリックス材から形成することができる。マトリックス材は、イオノフォア用の担体あるいは膜として形成されるにしても、例えば、プラスチック材料、例えばポリカーボネート又はアクリルシート、鉱物材料又はガラスから作製することができ、かつ、どのような所望の形、例えばプレート、シリンダー、チューブ、テープ又はファイバー、でも有することができる。特に都合の良い方法は、平面形式のときである（例えば、米国特許第５，５５４，２７２号）。担体上の被覆の厚さは、例えば、０．０１〜１００μm、好ましくは０．１〜５０μm、より好ましくは、０．１〜３０μm、特に好ましくは０．１〜１０μmであり得る。
【００２７】
米国特許第４，９９５，９６０号、５，６０７，５６７号及び５，５３１，８７０号は、種々の異なったイオノフォアを含有するポリマーマトリックス膜を使用するイオン選択性電極を開示している。他の適切なポリマーマトリックス材は、イオン選択性電極を作製する当業者に知られている。例えば、Rundle C C, A Beginners Guide to Ion selective Electrode Measurements (Nico2000 Ltd, London, UK., Nov. 9, 2001) 参照。ポリマーは、例えば、ポリオレフィン、ポリエステル、ポリアミド、ポリエーテル、ポリイミド、ポリエステルアミド、ポリアミドイミド、ポリウレタン、ポリエーテルウレタン、ポリエステルウレタン、ポリウレア、ポリウレタンウレア及びポリシロキサンからなる群から選択することができ、該ポリマーは、イオン性塩基性基（例えば、アミノ基）又はイオン性酸性基（例えば、カルボキシル又はスルホニル基）を含有することが可能であり、脂肪親和性塩の対イオンの代替品として使用してもよく、改善されたイオン輸送を提供することができる。該ポリマーは、便宜上少なくとも５，０００、好ましくは少なくとも１０，０００、特に好ましくは少なくとも２０，０００ダルトン、例えば２０，０００〜２００，０００ダルトンの平均分子量を有する。該ポリマーは、他の成分と混合することができるよう、そして従来のコーティング法により塗膜に変換することができるように、好ましくは有機溶剤に対して十分な溶解性を有する。あるいは、疎水性のバインダー材料、化合物Ｉのクラスのイオノフォア及び溶媒和溶剤を含む本発明の有用なマトリックスは、周知のフィルム・コーティング、キャスティング又はスクリーン印刷技術を使用して作製することができる。本発明のマトリックスを作製するこの方法に有用な可塑剤としては、フタル酸ジオクチル、アジピン酸２−エチルヘキシル又はセバシン酸ジオクチルが挙げられる。
【００２８】
更に、マトリックス材は、アンモニウムイオンに対して透過性である。マトリックスを作製するためのポリマーのガラス転移温度は、好ましくは-１３０〜０℃である。ポリマーの誘電率は、１００ヘルツ、室温で、好ましくは２〜２５、特に好ましくは５〜１５である。ガラス転移温度は、例えば極性、鎖長及び構造ユニットの内容によって調節することができる。
【００２９】
一つの実施態様において、イオノフォアは、共有結合でマトリックス材に結合する。もう一つの実施態様においては、マトリックス材は、イオン添加剤を含有する。例えば、イオン添加剤は、塩化トリドデシルメチルアンモニウム、塩化テトラデシルメチルアンモニウム又は他の脂肪親和性塩であり得る。更にもう一つの実施態様において、内部参照電解質を塩橋により内部参照電極（例えば、Ａｇ／ＡｇＣｌ）から分離することができたり、あるいは、グラファイトを内部参照電極として使用することができる（参考のために示された米国特許第5,554,272号参照、更に米国特許第6,126,801号参照）。
【００３０】
イオン選択性電極におけるイオノフォアの試験は、公知の技術であり、そして多くのフォームを取ることができる(例えばIon Selective Electrode Methodology, Vol. 1, Covington, A. K., ed., (CRC Press, Inc., 1979) pp. 32-33参照)。
【００３１】
ヘルスケア分野、特に臨床診断の領域において、イオン選択性電極は、流体試料、特に生物学的試料に存在する多様なイオン及び代謝物の活量又は濃度を測定するためによく使用される。”生物学的試料“とは、分析前に化学的又は物理的に処理、希釈又は濃縮されてきた生物起源の流体をはじめ、生物起源のどのような流体も意味する。生物学的試料の例として、血清、尿、プラズマ、全血、脳脊髄液、羊水、唾液及び涙が挙げられる。
【００３２】
本発明のイオン選択的マトリックス又は電極を使用しての測定は、電位差測定の又は電流測定の電気化学過程を使用し、そしてそれは、試料中のアンモニウムイオンの活量と関係があるポテンシャル信号又は電流信号を発生させる。一般的には、マトリックスまたは電極内で発生する信号は、既知のネルンスト式に従う電位差測定分析のためのアンモニウムイオンの活量の対数に一次従属している。アンモニウムイオンの活量は、活量係数を乗じたその濃度として定義され、ここで活量係数は、一般に当該技術において既知であるか、又は入手することができる。例えば、Rundle C C, A Beginners Guide to Ion selective Electrode Measurements (Nico2000 Ltd, London, UK, Nov. 9, 2001) 参照。
【００３３】
操作においては、本発明のイオン選択的マトリックス又は電極の一つの表面を、アンモニウムイオンを含有していると推測される流体試料に浸漬する。アンモニウムイオン依存電位は、溶液とイオン選択的マトリックス又は電極との界面においてこのイオン選択的マトリックス又は電極を横切って発生する。電位差測定センサーにおいては、この電位は、溶液中のアンモニウムイオンの濃度によって変化し、その大きさは、電圧として測定される。検出膜表面で発生した電圧を参照イオン溶液を用いる参照電極によって発生した電圧と比較することによって、当業者は、アンモニウムイオン濃度を計算することができる。イオン選択性電極からの電気的出力の測定用検出装置は、当該技術において既知であり、市販されている。
【００３４】
本発明の一つ以上の実施態様の詳細は、添付の明細書本文に述べられている。明細書に記載されているのと類似の又は同等のどのような方法及び材料でも、本発明の実際で又は試験で使用することができるが、好ましい方法と材料を今ここに記載する。本発明の他の特徴、目的及び効果は、明細書本文から及び請求項から明白であろう。明細書及び添付された請求項において、文脈上明らかに別の方法で指図されている場合を除き、単数形は、複数の対象を含む。別に定義されている場合を除いて、本明細書で使用される全ての技術及び科学用語は、本発明が属する技術における通常の当業者が一般に理解するのと同一の意義を有する。本明細書で引用される全ての特許及び出版物を参考のために組み込まれる。
【００３５】
下記実施例は、本発明の好ましい実施態様をより十分に説明するために提示される。これらの実施例が、添付の請求項によって定義されるように、本発明の範囲を限定すると決して解釈されるべきではない。
【００３６】
実施例１
本発明の化合物の合成
化合物１の合成は、多くの方法で実施することができる。当業者に既知の特に都合のよい方法は、固相法（ＳＰＳ）による。Zaragoza Dorwald F, Organic Synthesis on Solid Phase (Wiley-VCH, Weinheim, 2000) 参照。化合物１内にエステル結合を含有するブロックをまず溶液中で合成する場合、本方法は特別によく機能する。具体的には、下記の二つのブロック化合物（Ｂ１及びＢ２）を合成する。
【００３７】
【化１９】
2005538926.tif 000009
【００３８】
ブロック化合物Ｂ１の合成：合成は、ベンジルエステルＬ−乳酸（Ｃ１）の製造から始めた。
【００３９】
【化２０】
2005538926.tif 000010
【００４０】
Ｌ−乳酸１０ｇ（１１１mmol）を、無水ベンジルアルコール１５０mlに溶解した。溶液を、塩酸ガスで飽和し、１８時間攪拌した。そして溶液をジクロロメタン（ＤＣＭ）２００mlで希釈した。有機層を、１Ｎ ＫＯＨ １００mlで３回、次いで１０％クエン酸１００mlで洗浄し、そしてＮａ2ＳＯ4で乾燥した。その後、ＤＣＭを、真空下、４０℃で除去した。ベンジルアルコールを、減圧蒸留（２．５mmHg）で除去し、そして生成物を、１２０°Cで無色油状物１０．３ｇ（収率５１．３％）として回収した。
製造されたＣ１の測定値は、下記のとおりであった：
【００４１】
【表１】
2005538926.tif 000011
【００４２】
ベンジルエステルＬ−ｌａｃｔｉｃ−Ｄ−Ｖａｌｉｎｅ−Ｎ−ｆｍｏｃ（Ｃ２）を、下記のとおり製造した。
【００４３】
【化２１】
2005538926.tif 000012
【００４４】
Ｄ−Ｖａｌｉｎｅ−Ｎ−ｆｍｏｃ１９．４ｇ（５７．２mmol）を、ＤＣＭ １７５mlに溶解し、それにジイソプロピルカルボジイミド８．９２ml（１当量）を加えた。溶液を２５分間攪拌し、その後形成されたベンジルエステルＬ−乳酸 １０．３ｇ（１当量）及び４−ジメチルアミノピリジン ０．６９６ｇ（０．１当量）を添加した。その後、この混合物を、更に１８時間攪拌した。このように形成された不溶性の尿素を、濾過して取り除き、そして溶液を、水１００mlで１回、飽和ＮａＨＣＯ3 １００mlで３回、１０％クエン酸 １００mlで３回洗浄し、次いでＮａ2ＳＯ4で乾燥した。その後、ＤＣＭを、真空下、４０°Cで取り除くことにより、黄色いガム状物を得た。冷たいエーテルを使用する分別再結晶により、生成物を得、白い固体２２．６（収率７９％）を産出した。
製造されたＣ２の測定値は、下記のとおりであった：
【００４５】
【表２】
2005538926.tif 000013
【００４６】
また、製造されたＣ２に関して、MS-EIS 502.2 (M+H+), 524.4 (M+Na+), 540.2 (M+K+)。
ブロック化合物Ｌ−乳酸−Ｄ−Ｖａｌｉｎｅ−Ｎ−ｆｍｏｃ（Ｂ１）を、下記のとおり製造した。
【００４７】
【化２２】
2005538926.tif 000014
【００４８】
形成されたベンジルエステルＬ−ｌａｃｔｉｃ−Ｄ−ｖａｌｉｎｅ−Ｎ−ｆｍｏｃ ２２．６ｇ（４５mmol）を、ＤＣＭ １５０mlに溶解した。１０重量％Ｐｄ活性炭２ｇ及び常圧でのＨ2を３時間にわたって使用することにより、ベンジルエステル基を除去した。使用済みの触媒を、濾過して取り除き、そして溶液を、飽和ＮａＨＣＯ3 １００mlで３回洗浄した。水相を、３Ｎ ＨＣｌで酸性化し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を、ブライン１００mlで洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、そして真空下、４０℃で完全に濃縮することにより、白い結晶固体として標記化合物１８．５ｇを定量的収率で得た。
製造されたＢ１の測定値は、下記のとおりであった。：
【００４９】
【表３】
2005538926.tif 000015
【００５０】
また、製造されたＢ１に関しては、MS-EIS 434.2 (M+Na+), 456.2 (M+K+)。
【００５１】
ブロック化合物Ｂ２の合成：Ｂ２の合成を、ベンジルエステルＤ−ヒドロキシイソバレリアン酸（Ｃ３）の製造から始めた。
【００５２】
【化２３】
2005538926.tif 000016
【００５３】
この化合物を、Ｄ−ヒドロキシイソバレリアン酸１９．５ｇ（１３９mmol）を使用して、ベンジルエステルＬ−乳酸（上記）と同様に製造することにより、２９．０ｇ（収率８４．４％）を得た。
製造されたＣ３の測定値は、下記のとおりであった：
【００５４】
【表４】
2005538926.tif 000017
【００５５】
ベンジルエステルＤ−hydroxisovaleric−Ｌ−ｖａｌｉｎｅ−Ｎ−ｆｍｏｃ（Ｃ４）を、下記のとおり製造した。
【００５６】
【化２４】
2005538926.tif 000018
【００５７】
Ｌ−ｖａｌｉｎｅ−Ｎ−ｆｍｏｃ ２４．０ｇ（７０．７mmol）、形成されたベンジルエステルＤ−ヒドロキシイソバレリアン酸１４．５ｇ（１当量）、Ｐｙｂｏｐ３６．２ｇ（１当量）、ＨＯＢＴ９．５ｇ（１当量）及びジイソプロピルエチルアミン２５ml（２当量）を、ＤＣＭ ２００mlに添加した。その後、この混合物を、４時間撹拌した。このような時間の後に、溶液を、飽和ＮａＨＣＯ3 １００mlで３回、１Ｎ 塩酸１００mlで３回洗浄し、次いで、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥した。その後、ＤＣＭを、真空下、４０℃で取り除いた。フラッシュクロマトグラフィ（Biotage Flash４０カラム １５cm×７cm、ヘキサン／ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ  ６０／３５／５）により、生成物を得、無色油状物１９．０ｇ（収率５１．５％）を産出した。
製造されたＣ４の測定値は、下記のとおりであった：
【００５８】
【表５】
2005538926.tif 000019
【００５９】
また、製造されたＣ４に関して、MS-EIS 552.2 (M+Na+), 568.2 (M+K+)。
【００６０】
Ｄ−ヒドロキシイソバレリアン酸−Ｌ−ｖａｌｉｎｅ−Ｎ−ｆｍｏｃ（Ｂ２）を、下記のとおり製造した。
【００６１】
【化２５】
2005538926.tif 000020
【００６２】
１４．５ｇ（２７mmol）を、ＤＣＭ １００mlに溶解した。１０重量％Ｐｄ活性炭２ｇ及び常圧でのＨ2を２時間にわたって使用することにより、ベンジルエステル基を除去した。使用済みの触媒を、濾過して取り除き、そして溶液を、飽和ＮａＨＣＯ3 １００mlで３回洗浄した。水相を、３Ｎ ＨＣｌで酸性化し、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、真空下４０℃で完全に濃縮することにより、白い結晶固体としての標記化合物９．６ｇ（収率８０％）を得た。
製造されたＢ２の測定値は、下記のとおりであった：
【００６３】
【表６】
2005538926.tif 000021
【００６４】
また、製造されたＢ２に関して、MS-EIS 462.4 (M+Na+), 478.2 (M+K+)。
【００６５】
非環式デプシペプチド（Ｄ１）の合成：
【００６６】
【化２６】
2005538926.tif 000022
【００６７】
固相法を、Ｗａｎｇ樹脂２．９ｇ（１．１mmol／ｇ）で実施した。ＤＭＦ ２０mlを加え、Ｎ2と３０分間混合することにより、樹脂を調製し、ここでＤＭＦを濾過して取り除いた。この間に、樹脂充填材の２．５当量（３．２８ｇ）のＢ１を、ＤＣＭ ５０mlに溶解し、それにジイソプロピルカルボジイミド１．２５mlを加えた。これを、２５分間攪拌し、ここでＤＣＭを真空下、４０℃で除去した。ＤＭＦ １０mlを、乾燥残渣に添加し、次いで、膨張した樹脂に添加した。更に、４−ジメチルアミノピリジン０．１当量（４０mg）を添加し、そして混合物をＮ2と１時間混合した。反応溶液を濾過し、そして樹脂を、ＤＭＦ ２０mlで３回、ＭｅＯＨ ２０mlで３回洗浄し、そして真空下、乾燥した。ＤＭＦ中２０％ピペリジンで、既知質量の樹脂（２０mg）からｆｍｏｃ保護基を開裂させ、そして２９０nmでＵＶ吸収を観察することにより、充填を試験した。モル吸光係数値４９５０を使用して、充填５０％を得た。充填７０％を得るため、この過程を完全に繰り返した。
【００６８】
残存樹脂をＤＭＦ中の２０％ピペリジン（３０ml、１０分）で、除去した。溶液を濾過し、そして樹脂を、ＤＭＦ ２０mlで３回、ＭｅＯＨ ２０mlで３回、ＤＭＦ２０mlで３回洗浄した。ＤＭＦ ３０mlに、Ｂ２ を２．５当量（３．５０ｇ）、及びＰｙＢＯＰ ４．１５ｇ（２．５当量）、ＨＯＢＴ １．０８ｇ（２．５当量）、及びジイソプロピルエチルアミン０．２７８ml（５当量）を添加した。その後、この混合物を、樹脂に添加し、そして４時間、Ｎ2と混合した。溶液を濾過し、そして樹脂を、ＤＭＦ ２０mlで３回、ＭｅＯＨ ２０mlで３回、ＥｔＯＨで１回洗浄し、そして真空下、乾燥した。完全なカップリングが遊離アミンに対するKaiser試験により、確認された。
【００６９】
最終ブロックＢ１の添加のため、基本手順を再び繰り返した。直鎖状デプシペプチドを、Ｎ2と混合することにより、２時間にわたりＴＦＡ／Ｈ2Ｏ／ＴＩＳ  ９５／２．５／２．５で乾燥樹脂から開裂した。開裂混合物を、濾過し、そして完全に濃縮した。茶色の残渣を、溶解し、そしてトルエンで２倍以上濃縮した。粗製品をフラッシュクロマトグラフィー（Biotage Flash ４０カラム １５cm×７cm、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ９５／５）で精製することにより、オフホワイトの粉末３８０mgを得た。
【００７０】
製造されたＤ１の測定値は、下記のとおりであった：
【００７１】
【表７】
2005538926.tif 000023
【００７２】
また、製造されたＤ１に関して、MS-EIS 560.4 (M+H+), 582.4 (M+Na+)。
１の合成：
【００７３】
【化２７】
2005538926.tif 000024
【００７４】
非環式デプシペプチド（Ｄ１）１５０mg（０．２７６mmol）を、塩化チオニル２０mlに溶解し、１．５時間混合し、そこで溶液を完全に濃縮し、白い固体を得た。残渣を、すぐに無水ベンゼン１５０ml及びトリエチルアミン０．１４４ml（１．０５mmol）に溶解し、そして１８時間混合した。溶媒を真空下、４０℃で除去した。残渣を、ＤＣＭ １００mlに溶解し、そして１０％ クエン酸１００ml、飽和ＮａＨＣＯ3 １００mlで洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、そして有機層を完全に濃縮することにより、標記化合物１のオフホワイトの粉末７５mg（収率５０％）を得た。
製造された１に関して、MS-EIS 542.6 (M+H+), 564.4 (M+Na+), 580.4 (M+K+)。
【００７５】
実施例２
イオン選択性電極（ISE）における本発明の化合物
ＩＳＥにおけるイオノフォアの試験は、公知の技術であり、そして多くのフォームを取ることができる（例えば、参考のため本明細書に組み込まれた、Ion Selective Electrode Methodology, Vol. 1, Covington, A. K., ed., (CRC Press, Inc., 1979) pp. 32-33参照）。特に都合の良い方法は、平面形式のときである（例えば、米国特許第５，５５４，２７２号）。我々は、このような形式で化合物１を試験した。
【００７６】
我々は、内部電解質ポリマー層を使用して、米国特許第５，５５４，２７２号のような平面形式で３個のセンサーを組み立てた（米国特許第５，９１１，８６２号及び第５，８０４，０４９号参照）。イオン選択的膜は、３０重量％塩化ポリビニル、６９重量％フタル酸ジオクチル及び１重量％化合物１で構成された。該膜は、また脂肪親和性塩、例えばカリウムテトラ(ｐクロロフェニル)ボレートを含んでもよいが、これらの化学物質は必要とされない。
【００７７】
ＮＨ4Ｃｌ（０．５〜１００mM）、トリス緩衝液１００mM及びＢｒｉｊ７００  ０．０５ｇ/lを含む溶液を使用して、センサーを試験した。ｍＶで測定したセンサーの出力を、時間に関してプロットした（図１参照）。ここで、各々、１＝０．０５mM、２＝１mM、３＝５mM、４＝１０mM、５＝５０mM、６＝１００mMＮＨ4Ｃｌであり、そしてＡ、Ｂ、Ｃは各々センサー＃１、＃２及び＃３である。
【００７８】
センサーの勾配及び直線性を、表１に示す。
【００７９】
【表８】
2005538926.tif 000025
【００８０】
センサーの選択性(logKa/jPOT)を、カリウム及びナトリウムに関する、一定の干渉法 (Frant MS et al. Pure Appl. Chem. 48, 127 (1976)) により決定した。
【００８１】
【表９】
2005538926.tif 000026
【００８２】
要約すれば、この実施例に示されたデータは、本発明の化合物がアンモニウムイオノフォアとして機能し、そしてアンモニウムイオンの濃度を測定するために、イオン選択性電極内で使用することができることを確かに示している。
【００８３】
前述の明細書本文は、単に説明の目的のために提供され、そして開示された明確なフォームに本発明を限定する意図はなく、添付された請求項によって限定される。
【図面の簡単な説明】
【００８４】
【図１】図１は、本発明のイオノフォアを含むアンモニウム選択性電極を使用しての、長時間にわたるアンモニウム濃度の測定である。３個のセンサーを、内部電解質ポリマー層に化合物１を使用して、平面形式で組み立てた。イオン選択的膜を、３０重量％塩化ポリビニル、６９重量％フタル酸ジオクチル及び１重量％の１で構成した。ＮＨ4Ｃｌ（０．５〜１００mM）、１００mMトリス緩衝液及び０．０５ｇ/ｌＢｒｉｊ７００を含む溶液を使用して、センサーを試験した。ｍＶで測定したセンサーの出力は、時間に関してプロットされる。図１において、各々、１＝０．０５mM、２＝１mM、３＝５mM、４＝１０mM、５＝５０mM、６＝１００mMのＮＨ4Ｃｌであり、そしてＡ、Ｂ及びＣは、各々センサー＃１、＃２及び＃３である。
【図１】
2005538926.tif 000039
【国際調査報告】
2005538926.tif 000040
2005538926.tif 000041