(57)【要約】植物における病原性生物の繁殖を抑制するための組成物であって、前記組成物は、有効な量の、１（種）以上の金属イオン：１（種）以上のキレート剤；ならびに亜リン酸および／または亜リン酸の塩または水和物を含んでなり、農業に適した媒体または担体中に存在する前記組成物。【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物における病原性生物の繁殖を抑制する組成物であって、有効な量の、１（種）以上の金属イオン；１（種）以上のキレート剤；ならびに亜リン酸および／または亜リン酸の塩または水和物を含んでなり、農業に適した担体または媒体中に存在する前記組成物。
【請求項２】
有効な量の酸性化剤をさらに含んでなる、請求項１の組成物。
【請求項３】
１以上の、保護コロイド、接着剤、増粘剤、浸透剤、安定化剤、金属イオン封鎖剤、肥料、不凍剤、防虫剤、着色剤、腐食防止剤、撥水剤、乾燥剤、紫外線安定剤、顔料、染料、および高分子をさらに含んでなる、請求項１の組成物。
【請求項４】
前記金属イオンが、銅、亜鉛、マンガン、カルシウム、鉄、またはアルミニウムである、請求項１の組成物。
【請求項５】
前記キレート剤が、アミノポリカルボキシレート、ヒドロキシカルボキシレート、またはアミノ酸である、請求項１の組成物。
【請求項６】
前記アミノポリカルボキシレートが、EDTA、EDDHA、HEDTA、またはDTPAである、請求項５の組成物。
【請求項７】
前記ヒドロキシカルボキシレートが、シトレート、サッカレート、グルコネート、またはグルコヘプトネートである、請求項５の組成物。
【請求項８】
前記アミノ酸がグリシンである、請求項５の組成物。
【請求項９】
前記亜リン酸塩が、K2HP03、KH2PO3、Na2HPO、またはNaH2PO3である、請求項１の組成物。
【請求項１０】
前記酸性化剤が、クエン酸、フルボ酸、リグノスルホネート、または硫酸である、請求項２の組成物。
【請求項１１】
前記亜リン酸、亜リン酸の塩または水和物が、ウェットの前記組成物の約10重量％〜約70重量％の量で存在する、請求項１の組成物。
【請求項１２】
前記金属イオンが、ウェットの前記組成物の約1重量％〜約10重量％の量で存在する、請求項１の組成物。
【請求項１３】
前記キレート剤が、ウェットの前記組成物の約1重量％〜約10重量％の量で存在する、請求項１の組成物。
【請求項１４】
前記酸性化剤が、ウェットの前記組成物の約１重量％〜約１０重量％の量で存在する、請求項２の組成物。
【請求項１５】
前記組成物が、固体状、粉体状、液体状、ペースト状またはスプレー状である、請求項１の組成物。
【請求項１６】
前記病原性生物が、真菌または細菌である、請求項１の組成物。
【請求項１７】
前記真菌が、疫病菌（Phytophthora）、ツユカビ（Peronospora）、ニセツユカビ（Pseudoperonospora）、フハイカビ（Phythiun）、リゾクトニア菌（Rhizoctonia）、ブレミア（Bremia）、およびシロサビ菌（Albugo）からなる群より選択される、請求項１６の組成物。
【請求項１８】
前記細菌が、シュードモナス（Pseudomonas）、ザントモナス（Xanthomonas）、およびエルウィニア（Erwinia）からなる群より選択される、請求項１６の組成物。
【請求項１９】
植物における病原性生物の繁殖を抑制する方法であって、以下の工程を備えた方法：
前記植物または前記植物を取り囲む土壌を、有効な量の、１（種）以上の金属イオン；１（種）以上のキレート剤；亜リン酸および／または亜リン酸の塩または水和物を含んでなる組成物であって、農業に適した担体中に存在する前記組成物に接触させ、それによって、前記植物における前記病原性生物の繁殖を抑制する工程。
【請求項２０】
前記組成物が、酸性化剤をさらに含んでなる、請求項１９の方法。
【請求項２１】
前記金属イオンが、銅、亜鉛、マンガン、鉄、カルシウム、またはアルミニウムである、請求項１９の方法。
【請求項２２】
前記キレート剤が、アミノポリカルボキシレート、ヒドロキシカルボキシレート、またはアミノ酸である、請求項１９の方法。
【請求項２３】
前記アミノポリカルボキシレートが、EDTA、EDDHA、HEDTA、またはDTPAである、請求項２２の方法。
【請求項２４】
前記ヒドロキシカルボキシレートが、シトレート、サッカレート、グルコネート、またはグルコヘプトネートである、請求項２２の方法。
【請求項２５】
前記アミノ酸がグリシンである、請求項２２の方法。
【請求項２６】
前記亜リン酸塩が、K2HP03、KH2PO3、Na2HPO、またはNaH2PO3である、請求項１９の方法。
【請求項２７】
前記酸性化剤が、クエン酸、フルボ酸、リグノスルホネート、または硫酸である、請求項２０の方法。
【請求項２８】
前記亜リン酸、亜リン酸の塩または水和物が、ウェットの前記組成物の約10重量％〜約70重量％の量で存在する、請求項１９の方法。
【請求項２９】
前記金属イオンが、ウェットの前記組成物の約1重量％〜約10重量％の量で存在する、請求項１９の方法。
【請求項３０】
前記キレート剤が、ウェットの前記組成物の約1重量％〜約10重量％の量で存在する、請求項１９の方法。
【請求項３１】
前記酸性化剤が、ウェットの前記組成物の約1％〜約10重量％の量で存在する、請求項２０の方法。
【請求項３２】
前記組成物が、固体状、粉体状、液体状、ペースト状、またはスプレー状である、請求項１９の方法。
【請求項３３】
前記病原性生物が、真菌および細菌からなる群より選択される、請求項１９の方法。
【請求項３４】
前記真菌が、疫病菌（Phytophthora）、ツユカビ（Peronospora）、ニセツユカビ（Pseudoperonospora）、フハイカビ（Phythiun）、リゾクトニア菌（Rhizoctonia）、ブレミア（Bremia）、およびシロサビ菌（Albugo）からなる群より選択される、請求項３３の方法。
【請求項３５】
前記細菌が、シュードモナス（Pseudomonas）、ザントモナス（Xanthomonas）、およびエルウィニア（Erwinia）からなる群より選択される、請求項３３の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
発明の分野
本発明は、植物または植物を取り囲む土壌を、有効な量の、少なくの１つの金属イオン、少なくとも１つのキレート剤、および少なくとも１つの亜リン酸、亜リン酸の塩または水和物を含んでなる組成物に接触させることにより、植物病原体を防除するための組成物および方法に関する。
発明の背景
農薬の使用、特に、管理されていない農薬残留物または不必要な農薬残留物に対して、地球規模で規制することへの要求がより高まっている。そのため、有害な病原体を防除する必要性からより多くの農薬の使用を要望する一方、監督機関による圧力の増大からより少ない農薬の使用を要望するという、相互に矛盾する要望を農業経営者は有している。これらの規制を求める狙いは、農業労働者および一般人の健康と安全とを守ることにある。一般人が果物や野菜に残留化学物質が少ないことを望んでいることは、よく知られている。こういった状況の中、果物や野菜といった植物をより効果的に保護する方法の必要性が高まっている。
【０００２】
植物または植物の一部における菌類の繁殖により、葉、果実、または種子の生産が阻害され、栽培作物の全体的な質が低下する。そのため、植物病原体菌類の防除は、経済的に非常に重要である。農業的および園芸的な栽培における菌の繁殖に関しては経済的に大きな波及効果があるため、広範な殺菌用製品および静菌用製品が一般用途および個別用途向けに開発されてきた。
【０００３】
無機物質が、大規模な作物保護において、病原菌対策を目的として使用された最初のものである。これらの中でも、粉体状で利用される元素状態の硫黄、苛性カルシウムの水溶性混合物中に加えられた硫酸銅（ボルドー液）が有名である。より複雑な、合成有機化合物および有機化合物と金属とを組み合わせたものが、過去100年の間、単位重量の活性物質あたりの相対有効性を増大させつつ、開発されてきた。しかしながら、かかる化合物は環境中でリサイクルされないものが多く、こういった誘導体の中には自然界の野生生物に対して有毒なものさえ見出された。さらに、病原菌はかかる合成農薬に対して耐性を発達させることが多い。そのため、新しい作物保護剤を開発するための絶え間ない努力が促された。
【０００４】
農薬の有機化学は発展したものの、単純な構造の抗病原性化合物の使用が落ち込むことはなく、こういった傾向で新しいアイデアや新しい製品が継続的に現れている。銅、亜鉛、またはマンガンが主成分の殺菌用化合物が、広範囲の植物病原性真菌および植物病原性細菌に対し効果的であることが知られている。これらには、水酸化第二銅（Kocide）、硫酸銅類（ボルドー液）、銅酸塩化物、および酸化銅が含まれる。例えば、1995年のアメリカ合衆国における水酸化銅の推定使用量は、約500万kgである。植物病害を防除するために単純な無機化合物を使用する理由は、２つある：第１は、この種の農薬の大部分が環境中でリサイクルされ得ること、第２は、病原菌類が無機化合物に対して耐性を発達させにくいことである。これらの化合物は、接触した部分において効果を発揮し、葉にスプレーすることにより主に使用される。こういった従来の無機殺菌剤を土壌処理で使用することは、金属イオンが土の粒子に吸収されてしまうため、制限される。
【０００５】
キレート剤は、数百年間にわたって、植物成長に欠かせない微量元素（すなわち、鉄、亜鉛、マンガン、銅など）の肥料として農業において用いられてきた。キレート分子は、土壌中の微量元素の移動性を改善するため、根の周囲への微量元素の移動が可能になる。さらに、キレート分子により、植物の根による吸収のための、微量元素の取り込まれやすさが確保される。
【０００６】
イスラエル特許IL97676において請求されているように、金属イオンとキレート剤との組み合わせ（キレートされた金属）は、植物の病害体を防除するための効果的な殺菌剤として使用することができる。しかしながら、キレートされた金属の殺菌剤は、殺菌に最適な用量において植物に有毒であり、商業上実用的でない。
【０００７】
亜リン酸（H3PO3）または亜リン酸塩類（亜リン酸塩またはホスホン酸塩）が卵菌類（Oomycetes fungi）に対して活性を有することが知られている。抗菌剤としての亜リン酸塩の作用形態には、耐性が誘起されることと直接的な菌の阻害との両方がある。植物の病害を防除するために亜リン酸塩を含む組成物を使用することは、米国特許第5674536号に開示されている。かかる特許は、殺菌剤組成物を開示しており、その活性物質は、亜リン酸塩、レシチン、およびメタケイ酸ナトリウムおよびソーダ水ガラスから選択される２つの化合物の少なくとも１つである。米国特許第4,075,324号には、植物における菌による病害に対して有効な殺菌剤として、亜リン酸または亜リン酸塩を使用することが開示されている。
【０００８】
上記の亜リン酸塩を主成分とする組成物およびそれに基づく方法の欠点は、合成有機殺菌剤と比べて、病害の重症度（severity）を抑制する効果が限定されることに関する。さらに、亜リン酸塩が主成分の組成物は土壌粒子に吸収されやすく、植物の根による吸収が低下してしまうため、上記の組成物はスプレー状であり、直接土壌に使用することはできない。
【０００９】
したがって、安全であり、環境中でリサイクルされ得る、使い勝手のよい、植物病原体を防除する組成物および方法を取得することは、極めて有利であって、それは、効果的であり、費用効率が高く、枝葉感染病原体類および土壌感染病原体類から植物を治療、保護する。
発明の概要
本発明は、植物における病原性生物の繁殖を抑制するための組成物を提供し、前記組成物は、有効な量の、１（種）以上の金属イオン；１（種）以上のキレート剤；ならびに亜リン酸および／または亜リン酸の塩または水和物を含んでなり、前記組成物は農業に適した担体または媒体中に存在する。
【００１０】
好ましい実施態様において、前記組成物には、低pH溶液を形成するための酸性化剤がさらに含まれる。pHが低くなると、金属イオンの溶解性および植物の根による金属イオンの吸収が増大する。
【００１１】
キレート剤は、金属イオンに保護被覆を提供し、土壌粒子へ金属イオンが吸収されることを防止し、水に対する金属の溶解性および湿った土壌における金属の移動性を増大させる。
【００１２】
本発明は、植物における病原性生物の繁殖を抑制する方法をさらに提供し、前記方法は、前記植物または前記植物を取り囲む土壌を、１（種）以上の金属イオン；１（種）以上のキレート剤；および亜リン酸および／または亜リン酸の塩または水和物を含んでなる、有効な量の組成物であって、農業に適した担体中に存在する前記組成物に接触させ、それによって、前記植物における前記病原性生物の繁殖を抑制する。
【００１３】
前記組成物の成分は、植物における病原性生物の繁殖を抑制することについて、予期せぬ相乗作用を有する。それゆえ、本発明の組成物の成分が有する驚くべき相乗効果により、環境中でリサイクルされ得る溶液が提供され、これは、病害を防除する処置として保護的にも治療的にも、使用することができる。相乗効果を有する前記組成物中の３つの異なる成分の存在により、病原体の耐性の発達が防止され、付加的な植物成長上の栄養の恩恵が与えられ、人間およびほ乳類に対する殺菌剤の細胞毒性が低下され、使い勝手のよい使用方法が可能になった（灌漑システムを介して使用することができる）。
【００１４】
本発明は、添付図面とともに以下の詳細な説明を参照することにより、より詳細に理解され、認識されるだろう。
「植物を取り囲む土壌」という用語は、植物が成長している半径約２メートル以内の土壌を指す。
【００１５】
「金属イオン」という用語は、金属イオンを指し、例えば、第２主族（main group）元素のイオン（具体的には、銅, 亜鉛およびマグネシウム）、または第３主族元素および第４主族元素のイオン（具体的には、アルミニウム、スズ、鉛）、および第１〜第８副族（sub-group）元素のイオン（具体的には、クロム、マンガン、 鉄、コバルト、ニッケル、銅、亜鉛、およびその他）である。特に、第４周期の副族元素の金属イオンが好ましい。金属は、取り得る種々の価数で存在することができる。
【００１６】
「キレート剤」という用語は、本明細書および特許請求の範囲において、金属イオンに結合する合成分子または天然分子を指す。キレート剤は、２価および多価の金属イオンを溶液状態に維持するために用いられる。キレート剤としては、例えば、EDTA、EDDHA、HEDTA、DTPA、シトレート、サッカレート、グルコネート、グルコヘプトネート、またはグリシンがある。
【００１７】
「亜リン酸または亜リン酸の塩および水和物」という用語は、例えば、K2HPO3、KH2PO3、Na2HP03、NaH2PO3、またはH3PO3を指す。
「Ed90」という用語は、明細書および実施例において、コントロールの葉または植物に対して、処理対象の葉または植物全体における病害の発病度（severity）が90％阻害されるために必要な濃度を指す。
本発明の詳細な説明
本発明は、植物病原体を防除するための組成物および方法を提供する。本発明は、植物病原体の抑制における、金属イオン、キレート剤、ならびに亜リン酸および／または亜リン酸の塩および水和物との間の驚くべき相乗的相互作用に基づく。この相乗作用によって、より低濃度で各成分を使用することが可能になり、これは経済的に好ましいものである。
【００１８】
好ましい実施態様において、酸性化剤が本発明の複合体に加えられる。酸性化剤の添加により、pHの低い溶液が得られる。pHが低いことは、イオン状態の微量元素（例えば、銅、亜鉛、およびマンガンが挙げられるが、これに限定されない）の溶解性に寄与する。さらに、植物の根へのイオン状態の微量元素の取り込まれやすさが、低pHにおいて大きくなる。それゆえ、本発明の組成物中の酸性化剤により、溶解性、土壌中の移動性、および殺真菌性（fungicidal）および殺細菌性（bacteriocidal）のイオン状態の金属（例えば、銅および亜鉛）の植物への取り込まれやすさが改善される。
【００１９】
上述の組成物により、可溶性錯体ができ、その中には、沈殿を生じる成分がないため、土壌中または植物への液体混合物の吸収が促進される。したがって、この組成物は、植物に取り込まれやすい形態である。
【００２０】
好ましい態様において、本発明は、植物病原体により引き起こされる病害から植物を治療する方法に関する。植物病原体は、真菌や細菌といった微生物である。
他の態様において、本発明の組成物は、亜リン酸および／または亜リン酸の塩または水和物が、ウェットの組成物の約10重量％〜約70重量％ の量で存在することを特徴とする。
【００２１】
他の態様において、本発明の組成物は、金属イオンが、ウェットの組成物の約1重量％〜約10重量％の量で存在することを特徴とする。
他の態様において、本発明の組成物は、キレート剤が、ウェットの組成物の約1重量％〜約10重量％の量で存在することを特徴とする。
【００２２】
他の態様において、本発明の組成物は、酸性化酸が、ウェットの組成物の約1重量％〜約10重量％の量で存在することを特徴とする。
好ましい態様において、本発明の組成物中のCu：Znの比（重量／重量）はそれぞれ1：2である。亜リン酸および／または亜リン酸の塩または水和物と、金属イオンおよびキレート剤との比（重量／重量）は、それぞれ5：1〜1：5の範囲であることができる。
【００２３】
土壌に使用するために用いる本発明の組成物の総量は、1000平方メートルあたり活性成分が0.1〜10 kgの範囲であることができる。枝葉にスプレーして使用するために用いる本発明の組成物の用量は、0.1%〜2%の範囲であることができ、総量は1000平方メートルあたり10〜100Lの範囲であることができる。実際の適用率は、植物、病原体、および基質の状況によって様々であることに注意すべきである。
【００２４】
この組成物は、適した担体をさらに含んでなる。前記担体は、天然物であっても合成物であっても、有機物であっても無機物であってもよく、活性成分に結合し、植物への活性成分の使用が容易になる材料である。したがって、この媒体は、一般に不活性であり、農業において受け入れられるはずである。この媒体は、固体（例えば、クレー、天然シリケートまたは合成シリケート、シリカ、樹脂、ワックス類、または固体肥料）であっても、液体（例えば、水、アルコール類、ケトン類、石油分留物、芳香族またはパラフィン系の炭化水素、塩素化炭化水素、または液化ガス）であってもよい。
【００２５】
また、この組成物は、本発明と両立する他の成分（例えば、保護コロイド、接着剤、増粘剤、浸透剤、安定化剤、金属イオン封鎖剤、肥料、不凍剤、防虫剤、着色剤、腐食防止剤、撥水剤、乾燥剤、紫外線安定剤、顔料、染料、または高分子）をいかなる種類であっても含んでよい。
【００２６】
本発明の組成物は、固体状、散布または分散用の粉体状（活性化合物を100％まで含んでもよい）、水和剤状、および分散または溶解しやすい顆粒状であってもよい。
水和剤（またはスプレー用粉体）は、分散しやすい顆粒と同様に、一般に、約20％〜約95％の活性物質を含み、固体媒体に加えて、0〜約5％の湿潤剤、約3〜約10％の分散剤、および必要ならば0〜約10％の１以上の安定化剤および／または他の添加剤（例えば、顔料、染料、浸透剤、接着剤、反凝集剤）を含む。これらの組成物のいくつか（例えば、水和剤または分散しやすい顆粒）は、使用時に液体組成物を構成することを意図していることは、よく知られている。
【００２７】
本発明の組成物は、液体組成物、具体的には、水溶性濃縮物、懸濁濃縮物、またはペーストの形態であることができる。
この溶解可能な濃縮物は、約10〜約80％の活性物質を含んでなることがほとんどである。使用に適したこの溶液は、約0.01〜約20％の活性物質を含む。上述のように、水性分散物（例えば、水和剤を本発明にしたがって水で希釈して得られた組成物）は、本発明の一般的な範囲内にある。
【００２８】
懸濁濃縮物は、スプレーにより使用することもできるが、安定な液体製品であり、貯蔵後に濃縮せず、沈殿を生じない。懸濁濃縮物は、一般に約10〜約75％の活性物質、約0.5〜約15％の界面活性剤、約0.1〜約10％のチキソトロピック剤、および約0〜約10％の適した添加剤（例えば、顔料、染料、消泡剤、腐食防止剤、安定化剤、浸透剤、および接着剤）、および媒体として、活性物質が溶解可能またはほぼ溶解可能である水または有機液体を含む。ある種の有機固体材料または無機塩を、沈殿の発生を防止するために、この媒体中に溶解させることができる。
【００２９】
したがって、スプレー用の粉体や水和剤を得るには、活性物質を添加物質と適した混合機においてしっかりと混合し、その混合物をミルまたは他の粉砕機で粉砕する。これにより、優れたぬれ性と懸濁性とを有するスプレー用の粉体が得られる。これは、所望のいかなる濃度においても水で懸濁することができ、この懸濁液は、極めて有利に使用することができる。
【００３０】
ペーストまたは懸濁濃縮物を、水和剤に代えて製造することができる。このペーストを製造および使用する条件および方法は、水和剤やスプレー用粉体の条件および方法と同様であって、液体媒体中で粉砕操作の一部を行う必要があるだけである。
【００３１】
本発明の組成物における成分間の相乗作用により、広範囲の植物病原体の真菌および細菌に対する活性が高められ、具体的には、フハイカビ属（genera Pythium）、疫病菌（Phytophthora）、ツユカビ（Peronospora）、ニセツユカビ（Pseudoperonospora）、ブレミア（Bremia）、およびシロサビ菌（Albugo）の種を含む卵菌類の真菌に対する活性が高められる。
【００３２】
本発明による組成物の成分間の相乗作用には、治療的、予防的、かつ浸透性の有利な殺菌効果があり、植物（具体的には、栽培植物）を保護する。本発明の組成物は、植物または植物の一部（例えば、微生物によって感染され、被害をうけ、破壊された、果物、（果樹の）花、花、枝葉、茎、根、塊茎）を保護するために用いられ、それによって、植物のその後に成長する部分がかかる微生物から保護される。
【００３３】
本発明の組成物は、浸透活性を示す。この組成物は、土壌から発生する植物病原体菌の駆除のみならず、種となるもの（果実、塊茎、穀物）の消毒、および植物切断物の処理にも使用することができる。本発明の組成物は、（低使用量において）植物にとって許容しやすく、環境的な問題を有しないため、特に魅力的である。
【００３４】
本発明の活性成分の組み合わせを使用することができる幅広い栽培植物の例として、例えば、穀物類（例えばコムギ、オオムギ、ライムギ、オートムギ類、コメ、 モロコシおよび類似のもの）；ビート類（例えば、甜菜および飼料用ビート）；ナシ状果および石果類および液化類（例えば、リンゴ類、ナシ類、プラム類、モモ類、アーモンド類、サクランボ類、イチゴ類、ラズベリー類およびブラックベリー類）；豆科植物類（例えば、マメ類、レンティル類、エンドウマメ類、大豆類）；油を含む植物類（例えば、セイヨウアブラナ、カラシナ、ケシ、オリーブ、ヒマワリ、ココナツ、トウゴマ、ココア、ラッカセイ類）；ウリ類（例えば、カボチャ類、小キュウリ類、メロン類、キュウリ類、スカッシュ類）；繊維質の植物類（例えば、コットン、麻、大麻、ジュート）；柑橘類の果物（例えば、オレンジ、レモン、グレープフルーツ、マンダリン）；野菜類（例えば、ホウレンソウ、レタス、アスパラガス、アブラナ（例えば、キャベツ類およびカブ類）、ニンジン類、タマネギ類、トマト類、ポテト類、トウガラシ類および甘トウガラシ類）；月桂樹のような植物（例えば、アボカド、シナモン、クスノキ）；または観賞植物類（例えば、花類、低木類、針葉樹類などの落葉樹類および常緑樹類）のみならず、トウモロコシ、タバコ、ナッツ類、コーヒー、サトウキビ、茶、ツル植物類、ホップ類、バナナ類、ゴムの木類といった植物類、が挙げられる。栽培植物類のこういった例示は、本発明を説明するためであって、これらに限定するために挙げられている訳ではない。
実施例
実施例１〜６で説明する第１の系列の実験は、フィトフソラ・インフェスタンス（Phytophthora infestans (P.infestans））およびピシウム・アルティマム（Pvthiun ultimum (P.ultimum)）を用いて、評価した。
材料および方法：
P.infestansの数種の単離物であって、メタラキシルに対し感受性のあるものまたは耐性のあるものを、予め接種させるために使用した。キュウリから単離したP.ultimumの１つの単離物を使用した。P.infestansの胞子嚢を、感染させたポテト塊茎の薄片から得た。P.ultimumの接種菌（inoculunm）を、ホモジナイズしたポテトデキストロース寒天（PDA）培地とこの菌によって、調製した。
【００３５】
P.infetansの胞子嚢を、ポテトの葉あるいはトマトの葉、またはその植物全体に用い、P.infestansによって生じた疫病が防除されるかを評価した。また、P.infetansの胞子嚢をキュウリにてポットの中の土壌混合物に用い、P.ultimumによって生じた立枯病の防除効果を評価した。P.infestansでの試験は、グロースチャンバ中で18〜21℃にて行い、P.ultimumでの試験は、温室中で20〜33℃にて行った。
実験結果
実施例１
葉の生物学的検定法により試験した、金属イオンおよびキレート剤のin vitroにおける殺菌活性
金属イオンおよびキレート剤（本明細書において、「AG組成物」とする）の濃度（g/L）は、以下のとおりである：ZnO 66 g/L；クエン酸 254 g/L；CuS04・5H20 104 g/L。
【００３６】
AG組成物は、図１に示すように、in vitroのP.infestansの胞子嚢に対し、in vitroで大きな殺菌活性を示した。活性成分を0.06 %まで希釈したAG組成物の場合、胞子嚢の発芽が、P.infestansの２つの単離物、すなわちUS-7およびリーム（Reem）に対し、それぞれ82％および93％に減少した。
【００３７】
トマトの葉における疫病の発病度は、P.infestans単離物である367および317に対して、50 ppmのAG組成物によって、それぞれ86％および79％阻害され（図２）、100 ppmでは81％および87％阻害された（図３）。単離されたミブタヒム（Mivtahim）では、62 ppmのAG組成物ですべてが阻害された（データは示さず）。図４は、AG組成物の0.12％の活性成分によって、病害のすべてが阻害されたことを示す。AG組成物を0.25％の活性成分にて使用した場合、僅かな薬害が見られた。50〜100 ppmのAG組成物によって、べと病病原菌（Pseudoperonospora cubensis）のメタラキシル耐性単離物を感染させたメロンの葉において、べと病の発達がほぼ根絶された。（データは示さず）。
実施例２
in vitroでの菌の抑制における、亜リン酸（PA）または亜リン酸カリウム塩（PP）とともに使用したAG組成物の相乗効果
トマトの葉での疫病の防除における、亜リン酸（PA）または亜リン酸カリウム塩 （PP）と組み合わせたAG組成物の効果を、以下のように評価した：AG組成物、PAおよびPPを別々に使用した場合、およびAG組成物をPAまたはPPと組み合わせて使用した場合の用量反応曲線を導いた。ED90値(感染させたコントロールの葉に対して、治療対象の葉において病害を90％阻害するために必要な濃度）を用い、ワドリー法（Wadely）により相乗係数（SF）を求めた。１を超えるSF値により、相乗的な相互効果が示唆される。下の表１により、AG組成物とPAとの組み合わせ、およびAG組成物とPPとの組み合わせの双方において、１：１または２：１の比にて、相乗効果があることが明確に示された。したがって、AG組成物とPAまたはPPとの顕著な相乗効果は、葉の生物学的検定法により明確である。本実施例により、AG組成物と一緒に投与したH3PO3とKH2PO3との双方が、各成分を単独で投与したときより、低いED90を有することが示唆される。
【００３８】
【表１】
2005503324.tif 000002
【００３９】
実施例３
植物全体の検定での菌の抑制における、亜リン酸カリウム塩（PP）とともに使用されたAG組成物の相乗効果
未処理の鉢に入れられたトマトおよびポテトにおけるP.infestansにより生じる疫病の防除に対する、亜リン酸（PA）または亜リン酸カリウム塩（PP）と組み合わせたAG組成物の効果を、実施例２で評価した。下の表２により、AG組成物とPPとが、トマトでは１：３の比で、ポテトでは１：１の比で、相乗的に相互作用していることが明確に示される。
【００４０】
【表２】
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【００４１】
実施例４
スプレーによって植物に投与した場合の、菌の抑制に対する、亜リン酸カリウム塩（PP）とともに使用されるAG組成物の相乗効果
スプレーによって植物に投与した場合の、菌の抑制に対する、亜リン酸カリウム塩（PP）と組み合わせたAG組成物の効果を、実施例２で評価した。下の表３により、AG組成物とPPとが、トマトでは１：３の比、ポテトでは１：３の比で、相乗的に相互作用することが明確に示される。
【００４２】
【表３】
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【００４３】
実施例５
スプレーによって植物に投与した場合の、菌の抑制における、亜リン酸（PA）とともに使用されたAG組成物の相乗効果
スプレーによって植物に投与した場合の、菌の抑制における、亜リン酸（PA）と組み合わせたAG組成物の効果を、実施例２で評価した。下の表４により、AG組成物とPAとが、トマトでは１：１、５：１、および10：1の比、ポテトでは1：1および1：1の比で、相乗的に相互作用することが明確に示される。
【００４４】
【表４】
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【００４５】
実施例６
P.ultimumの抑制における、亜リン酸（PA）または亜リン酸カリウム塩（PP）とともに使用したAG組成物の相乗効果
もう一つの実験系列をP.ultimumで行った。菌を基質（１：１（体積／体積）の比の泥炭とパーライト）と混合し、10 mlの化合物またはその混合物（１：１の比のみ）に浸し、キュウリの種を植えた。立枯病の発生が、一週間後に確認された。単独では、病害のすべてを抑制するために0.5%のAG組成物が必要となるが、混合物では、同程度に病原菌を抑制するために0.06%のAGおよび0.06%のPAを含む混合物、または0.12%のAGおよび0.12%のPPを含む混合物で充分だったこと（データは示さず）が、その結果から示唆された。
【００４６】
したがって、上のすべての実施例により、卵菌類（Oomycetes）の菌の病原体が、AG組成物、亜リン酸、および亜リン酸カリウム塩化合物のいずれに対しても感受性を有することが示唆される。しかし、卵菌類（Oomycetes）は、組成物と亜リン酸または亜リン酸カリウム塩との組み合わせに対して、より感受性がある。この感受性は、葉に対して使用した後に、トマトの葉における疫病、トマトおよびポテト植物類における菌病を防除する能力、および土壌に浸した後にキュウリの立枯病を防除する能力によって、示される。
実施例７〜１０で説明するもう一つの実験系列を、以下の成分（g/L）を含んでなる組成物（以下、「AG3」とする）により行った： H3PO3 101.4 g/L；KOH 145.5 g/L；クエン酸 46.8 g/L；ZnS04*7H20 9.2 g/L；CuSO4*5H2O 4.0 g/L（pH = 6.8、15%の活性成分）。
（なぜKOHがAG3組成物に添加されたのかアドバイスしてください）
実施例７
AG3組成物によるin vitroでのピシウム・アファニデルマタム（Pythium aphanidermatum）菌糸の繁殖の阻害
病原体菌であるピシウム・アファニデルマタム(P.aphanidermatum)を、1.5 %のコレステロールを添加した希釈したV-8ジュース寒天上で培養した。この培地に、AG3組成物を異なる濃度（0〜0.3 %の範囲の活性成分）で添加した。P.aphanidermatumの菌糸ディスクを9 cm のプレートの端に置き、暗闇中で24時間、25℃にて培養し、次いで、直交するコロニーの直径を測定した。AG3組成物の効果を、市販の殺菌剤（推奨されている活性成分濃度0.07%におけるホセチル・Al(アリエット（Aliette）80% WP）と比較した。その結果（図６）から、活性成分を0.006 %または0.01 %まで希釈したAG3組成物によりP.aphanidermatumの放射状の繁殖がin vitroで50％阻害されること（これは、推奨用量である活性成分0.07%の市販の殺菌剤ホセチル・Al（アリエット）によって生じる阻害と同レベルである）が示された。
実施例８
AG3組成物によるキュウリ苗のフハイカビ（Pythium）立枯病の抑制
市販の鉢植用混合物（プロミックス（ProMix））を砂と混合し（1：5）、１キロのプロミックス・砂混合物に3Lの水道水を加えた。人工的に感染させるためのP.aphanidermatumの接種材料を、オートクレーブしたV-8ジュース・コレステロール培養液中で調製し、これは、2×103cfu/mlの卵胞子からなり、水性浸漬液として使用する。AG3組成物を水道水でいくつかの濃度まで希釈し、植え付けの前に浸漬液として添加した。AG3組成物の効果を、推奨濃度である0.07%の活性成分において同様に使用した市販の殺菌剤ホセチル・Al（アリエット）と比較した。プロミックス・フラット（プロミックス充填の平箱（30×15×8 cm））にキュウリの種を撒き（品種名ストレートエイト（Straight  Eight）)、グロースルーム（growth room）で培養した。10日後、立枯病を生き残った苗の数を記録し、生存（発生）率を計算した。各処理の３つの複製物を完全にランダム化した配置で置き、実験を少なくとも１回は繰り返した。
【００４７】
その結果（図７）によると、フハイカビを接種したフラットにおいて、殺菌剤処理していないフラットには植物が生き残らなかった。一方、AG3組成物（活性成分は0.1%）に浸したフハイカビ接種フラットでは、すべての植物（100%）が生き残った。市販の殺菌剤であるアリエット（推奨濃度である活性成分0.07%にて使用）に浸したフハイカビ接種フラットでは、70〜80%の植物しか生き残らなかった。
実施例９
AG3組成物によるトマト苗のリゾクトニア（Rhizoctonia）立枯病の抑制
病原体菌リゾクトニア・ソラニ（Rhizoctonia solani）の菌糸のバイオマスをろ過し、浸漬した菌糸(2×104cfu/mL)をフラット中のプロミックス（ProMix）に加えた。AG3組成物を、種を撒く前に、水性浸漬液として３段階の用量（0.025 %, 0.05 % and 0.1 %の活性成分）にて使用した。立枯病の兆候を示したトマトの苗(品種名ボニーベスト（Bonny Best）)を、温室にて25℃で21日培養した後、カウントし、立枯病の率を、7日後までに現れた苗の数に基づいて計算した。
【００４８】
リゾクトニア・ソラニ（R.solani）によるトマトの苗における立枯病の発生率は、人為的に感染させたプロミックス（ProMix）に水性AG3組成物を種植え前に浸漬させることにより、顕著に減少した。0.1 %の活性成分の AG3組成物により達成された病害の抑制水準は、未処理のコントロール（示していない）と比較して、92%だった。
実施例１０
柑橘類の苗における疫病菌による根の病害の抑制
柑橘類の苗(品種名ウォークマリナ（Walkmarina）)がフラットにおいて発生した。AG3組成物を、１ヶ月の苗に対し、水性浸漬液として３つの用量（0.1 %、0.5 %および1 %の活性成分）にて使用した。水のみ（0％）による処理を、コントロールとして用いた。24時間後、すべての苗を除去し、洗浄し、根を接種懸濁液に8時間浸した。
【００４９】
病原体菌である褐色腐敗病菌（Phytophthora citrophthora）(P.citrophthora)の接種を、5日間の培養物の遊走子を滅菌冷水で洗浄することにより、調製した。接種された苗を、水で浸した砂で満たされている６インチのポット（6"pot）中に植え付けた。３つの異なる用量でのAG3組成物、または水だけのコントロールを、水性浸漬液として、植え付け後にそれぞれの鉢に使用した。接種から６週間後、苗を除去し、健常な細根の数と葉の数を記録した。
【００５０】
表５は、P.citrophthoraに感染させ、活性成分が0.1％のAG3組成物で処理した柑橘類の苗は、感染させ、殺菌処理していない苗と比較して、13倍も根が発育し、9.8倍も葉が発育したことを示す。
【００５１】
【表５】
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【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】図１は、in vitroにおける、疫病菌群棲の胞子嚢に対する殺菌活性を表したものである。
【図２】図２は、本発明の組成物（50 ppm）による、トマトの葉における疫病の阻害を表したものである。
【図３】図３は、本発明の組成物（100 ppm）による、トマトの葉における疫病の阻害を表したものである。
【図４】図４は、本発明の組成物による、植物全体の病害の阻害を表わしたものである。
【図５】図５は、べと病病原菌（Pseudoperonospora cubensis）のメタラキシル耐性単離物を接種したメロンの葉において、べと病の発達が根絶されたことを表したものである。
【図６】図６は、ピシウム・アファニデルマタム（Pythium aphaniderrmatum）のコロニーの増殖における、様々な濃度のAG3の効果を表したものである。
【図７】図７は、ピシウム・アファニデルマタム（Pythium aphaniderrmatum）を接種したキュウリの苗の生存率を、様々な量のAG3に対して表したものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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