(57)【要約】驚くべきことにＮＯは爪に浸透して抗真菌効果を発揮し得ることが見出されたので、窒素酸化物生成組成物は、爪下の感染の処置において有用である。
2005501069.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
爪下感染の処置における使用のための、窒素酸化物生成組成物。
【請求項２】
亜硝酸塩および有機酸を含み、これらが使用前に各々もう一方とは別々に適用される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記酸が、最終組成物が５．５以下のｐＨであるに充分な量で存在する、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記酸が：
蟻酸、リンゴ酸、マレイン酸、酢酸、乳酸、クエン酸、安息香酸、酒石酸およびサリチル酸、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル、およびこれらの混合物
から選択される、請求項２または３に記載の組成物。
【請求項５】
前記亜硝酸塩が、アルカリ金属の亜硝酸塩およびアルカリ土類金属の亜硝酸塩から選択される、請求項２〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記亜硝酸塩が：
ナトリウム、カリウム、マグネシウムおよびバリウムの亜硝酸塩
から選択される、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
クエン酸および亜硝酸ナトリウムを含み、これらが使用前に各々もう一方とは別々に適用され、少なくとも１つが水性ビヒクル中に存在する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記爪下感染が爪真菌症である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記亜硝酸塩成分が：
Eudragits、カルボポール（carbopol）、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、およびこれらの混合物
から選択される賦形剤と共に処方される、請求項２〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記酸成分が：
カルボポール、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、メチルセルロース、およびこれらの混合物
から選択される賦形剤と共に処方される、請求項２〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記酸および亜硝酸塩が、水を主体とした製剤中で別々に適用される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
各調製物が、各々をもう一方と混合するに適切なゲル、クリーム、ローション、軟膏および塗料から別々に選択される形態である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記酸および亜硝酸塩が、ゲル、塗料またはラッカーとして各々別々に処方される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記酸および亜硝酸塩が、混合された場合に固体化するかあるいはゲルまたは塗料を形成する液体またはゲルとして各々別々に処方される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記亜硝酸塩が、最終組成物の約０．５〜３０重量％である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記亜硝酸塩が、最終組成物の５〜１５重量％である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記酸が、最終組成物の約５〜３０重量％である、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記酸が、最終組成物の約１０〜１５重量％である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
添付の実施例に記載の、阻害領域を作り出すことが可能な組成物。
【請求項２０】
爪下感染の処置または予防用の医薬品の製造における窒素酸化物生成成分の使用であって、該医薬品が請求項２〜１９のいずれか１項に記載の組成物である使用。
【請求項２１】
爪下感染の処置または予防のための方法であって、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の組成物が、この感染した爪へ有効量で適用される方法。
【請求項２２】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の組成物を含むキット。
【請求項２３】
亜硝酸塩の水性調製物および有機酸の水性調製物を含み、一方がもう一方とは別々に適用され、これらの２つの調製物が処置される爪に適用するに各々適切であり、該亜硝酸塩および酸が反応して、該爪中への浸透用の窒素酸化物を放出することが出来る、請求項２２に記載のキット。
【請求項２４】
各調製物が、ローション、ゲル、クリームおよびラッカーから選択される形態である、請求項２３に記載のキット。
【請求項２５】
前記調製物が再封可能な容器中で提供される、請求項２３または２４に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、手指および足指の爪の感染の処置方法、このような処置において有用な投薬法、ならびにこのような投薬法の準備方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
爪における感染はよくあることであり、重篤な場合は痛くて醜くするものであり得、患者の生活の質に影響を与える。爪における感染に含まれる真菌は主に、汗疱状白癬（または足白癬）を引き起こし、足の溝から爪へと広がって行く真菌である。爪の真菌感染は爪真菌症として知られ、これは爪白癬、皮膚糸状菌爪真菌症または爪「輪癬」としても知られる。
【０００３】
爪真菌症において最も頻繁に単離される病原は、皮膚糸状菌、特に Trichophyton rubrum（足指の爪５６％、手指の爪３６％）および Trichophyton mentagrophytes（足指の爪１９％、手指の爪１１％）である。イースト菌感染は、よりよく見られることではないのであるが、通常 Candida albicans と関連している（足指の爪１０％、手指の爪３０％）。
【０００４】
４０〜６０歳の人口の少なくとも１５〜２０％が爪真菌症を持っており、６０歳を超えた人々の２５〜４０％がこの病状に苦しんでいるが、１８歳より下の人々では３％以下だけであることが推定される。しかしながら、苦しんでいる人々の少なくとも５０％が医学的な助言を探し求めるのに上手く行っていないので、爪真菌症の実際の発生に関する厳密な数字を定めることは難しい。
【０００５】
穏やかな爪真菌症は、単に爪表面における白い斑点または痘痕に限られるかも知れないが、より進展した疾病においては、この症状は、爪床の過角化、爪板の肥厚化、脱色および爪剥離症（爪板の爪床からの分離）を包含してしまう。
【０００６】
多くの要因が患者を爪真菌症へ向かわせてしまうが、これらの要因は、糖尿病、加齢、過水症、爪鉤弯症、外傷、乏しい末梢循環および免疫抑制を包含する。それは男性においてよりよく見られるもので、思春期前および更年期前の女性においては稀である。
【０００７】
爪真菌症は、真菌性の病状、および真菌の成長傾向に適合して爪真菌症の進展を後押しする病状である。従って、８０％の症例が足、特に足の母指、つまり足の親指を含み、例えばスポーツ活動においてよく見掛けられることがあるような、タイトにフィットした足回り品（footwear）および過剰な汗とよく関連がある。しかしながら外傷も、特に足指の爪においては有意な因果関係的要因であり、最も長い足指は特に罹患し易い。
【０００８】
どのようにして病状が獲得されるのかは完全には確かではないが、爪真菌症は伝染性である。感染は、真菌の皮膚から爪への広がりから、あるいは皮膚または爪感染により他の人々から直接やって来ることがある。足指の感染の症例においては、汗疱状白癬真菌は爪へと広がり得、この時しばしば爪の外傷が存在すると、これにより該真菌の進入を許してしまう。
【０００９】
爪真菌症に対しての処置は、この病気の罹患率にも関わらずやや限定されており、この病状は局所的な投薬法に対して非常に耐性である。局所的な処置は、Loceryl（amorolfine）および Penlac（ciclopirox）を包含するが、原因となる微生物に対しての乏しい活性同様、爪を通じて浸透に乏しいので、治癒速度は低く（＜１０％）処置時間は長い（１２ヶ月まで）。
【００１０】
爪真菌症を処置することおよび爪における他の感染に伴う１つの特別な問題は、該感染が、爪自体においてと同様に、一般に爪床中または爪床に隣接して位置されることである。これ故に該感染は、それが醜くしている正にその爪によって、外部攻撃から守られる。あまりにも多くの爪を取り除くのは望ましくないが、処置は爪の材料を除去し、この感染性微生物を曝すことを包含してもよい。加えて処置の期間は、一般に１年以上までである。
【００１１】
より最近では、経口処置が開発され（terbinafine および itraconazole）、これはより速い治癒速度（〜７０％）およびより短い処置期間（１２〜１６週）を達成している。しかしながら、これらの新しい経口治療に関する安全性上の問題があり、これは肝毒性、重篤な皮膚反応および薬物相互作用を包含する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
これ故に、このような経口治療と同等かまたはより良い治癒速度を提供する局所的または爪を通した治療に対する必要性があるが、安全性上の問題は押さえ込まれたままである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
驚くべきことに、我々は今、窒素酸化物が爪に浸透し得、爪下の感染の原因微生物の処置において有効であることを見出した。
【００１４】
これ故に、第１の態様において、本発明は、爪下の感染の処置における使用のための窒素酸化物生成組成物を提供する。
【００１５】
酸化窒素（ＮＯ）は、本発明の組成物の主要な産物であり、抗微生物効果および傷を癒す効果を持つことでよく知られている［ＷＯ９５／２２３３５；および Hardwick et al., (2001), Clin. Sci., 100, 395-400 参照］。
【００１６】
酸化窒素は、活性化されたマクロファージにおいてと同様、血管上皮および神経において、体内で合成される。相対的に高いレベルのＮＯは、汗において観測される。厳密にはどのようにしてＮＯが微生物を殺菌するのかは知られていないが、ＮＯがバクテリアＤＮＡを寸断するか、または遷移金属を含有するバクテリアの酵素の機能を妨害するように働くことが推測される。
【００１７】
治療用の酸化窒素は、亜硝酸塩の酸との反応、特に無機亜硝酸塩の有機酸との反応により最も簡便に産生される。これは、結果的に分子形態の亜硝酸の産生をもたらすが、これは容易に水分子および三酸化二窒素分子へと分裂し、今度は後者がＮＯおよび二酸化窒素を形成するように分裂する。これらの反応は、以下に示される。
【００１８】
【化１】
2005501069.tif 000003
【００１９】
Ｎ２Ｏ３はこの反応における中間体であるが、それが独立に存在し得、それが本発明の組成物と関連する殺菌効果に関して少なくとも部分的に一役買っているという証拠がある。
【００２０】
アスコルビン酸のような還元剤の存在下では、ＮＯを形成する三酸化二窒素の反応はより効率的であり、例えば以下：
Ｎ２Ｏ３＋Ｃ６Ｈ８Ｏ６  →  ２ＮＯ＋Ｈ２Ｏ＋Ｃ６Ｈ６Ｏ６
のように表され得る。
【００２１】
亜硝酸は、例えば亜硝酸塩における酸の作用、特に結果的に得られる塩が不溶性である場合の作用により、適切に生成されてもよい。
【００２２】
好ましくは、ＮＯの少なくとも１分画を提供する如何なる適切な窒素酸化物源も本発明において用いられてもよい一方、如何なる窒素酸化物も前記反応の１つ以上に従って生成されることが一般に好ましいことが認められるであろう。
【００２３】
本発明の組成物は、窒素酸化物を提供するに適切な如何なるものであってもよい。１つの実施形態において、本発明の組成物により生成されるＮＯの割合は、少なくとも５０％であることが好ましく、より好ましくは少なくとも８０％である。使用される唯一の酸が還元性の酸である場合、その時この割合は、生成される窒素酸化物の１００％のＮＯ含量までの如何なる割合にまでも上昇することがある。
【００２４】
「窒素酸化物生成」により、本発明の組成物はその場において、つまり感染した爪上に一般にあるであろうそれらが適用される位置において、窒素酸化物を放出するように働くことが意味される。その最も簡単な場合において、および１つの実施形態において、これは軟膏またはゲルまたは如何なる他の適切な局所的なビヒクルをも実は含んでよく、例えばその中に気体状のＮＯは溶解されており、一旦爪へ適用されるとＮＯを放出する。
【００２５】
効果的であるために極めて小量の窒素酸化物だけが要求される場合、その時は、充分な窒素酸化物がその作用部位に到達して殺菌または阻害効果を持つのであれば、気体が爪との界面以外において逃げてしまうのか、小量だけが実際に爪を横切って浸透するのか、窒素酸化物の量が爪を横切るそれらの通過において希薄にされてしまうのかは、問題にならない。
【００２６】
ＮＯおよびその前駆体は一般に短い寿命の成分であり、半減期はたった数秒程と短いが、我々は、それらが爪下の感染を処置するに充分な量でヒトの爪を通過し得ることを立証した。このことは、ＮＯまたは他の窒素酸化物が爪を通過する如何なる形跡が見られるにも数時間かかることがあるだけでなく、一旦ＮＯ／他の窒素酸化物が放出され始めると、該放出は１０時間までの間、または更により長い間続き得るので、一層驚くべきことである。理論により束縛されるのではないが、爪が貯蔵場所または吸い込み場所として作用し、ＮＯまたはこのための前駆体を吸着または吸収するように思われる。このＮＯまたは前駆体は爪を横切って移動し、ＮＯおよび他の窒素酸化物は、もう一方の側にて放出される。これらの気体の半減期が短い場合、それらは爪においてタンパク質と錯体化して行き、ゆっくり横切って拡散していることが考えられ得る。
【００２７】
ＮＯが抗真菌活性を持っていることは知られているが、爪を横切って浸透しているのは必ずＮＯであるということは明らかではなく、一旦前駆体が爪を横切って通過してしまうとＮＯが再生成されるだけなのかも知れない。実は、大量のＮＯを産生する組成物は、必ずしも本発明において最大の効果を持たない。理論により束縛されるのではないが、ＮＯがその短い半減期のために爪を横切って大量には拡散しないので、爪の表面にてＮＯを効率的および速く生成させることは有利ではないと考えられ得る。代わりに、ＮＯを生成するのにより長くかかるそれらの組成物は、殺菌要素がＮＯであってもまたはもう１つ別の窒素酸化物であっても、爪を横切って該要素を送達することにおいてより効率的であるように思われる。
【００２８】
アスコルビン酸または他の類似の還元性の酸、および亜硝酸塩のみを本質的に含む本発明の組成物は、大量のＮＯを急速に産生する傾向がある。爪はやや有孔性であるが、該ＮＯがあまりにも速く生成される場合、産生されたＮＯの多くを爪が吸着するには不充分な時間しかないことがあり、実験は、これらの組成物が、爪を横切るＮＯのより低い全体の流入に関連したものであることを示している。
【００２９】
亜硝酸銀は、酸の存在下にＮＯを産生することが可能であるが、相対的に低い効力を持ち、それで一般に好まれない。しかしながら、亜硝酸ナトリウムおよび亜硝酸カリウムは両方とも、例えば酢酸、クエン酸、マレイン酸およびリンゴ酸と反応して、殺菌試験において阻害領域を作り出すことが見出された。
【００３０】
亜硝酸ナトリウムおよびカリウムに関しての真菌の菌糸の殺菌レベルは、酢酸、クエン酸、マレイン酸またはリンゴ酸と組み合わされた場合、全ての場合が同様に大きな阻害領域を与えることが見出された。同様に、胞子を用いて遂行された実験は、同上の酸−亜硝酸塩混合物に関して同様の抗真菌効果を示すことが見出された。一般的な知見は、菌糸が胞子よりも該抗真菌効果に対してより敏感であることが見出される一方、溶液がクリームに比較してより大きな抗真菌活性を産み出すことであった。しかしながら、該クリームは、一般により長い間窒素酸化物を産生し、このことは、ＮＯまたは他の窒素酸化物の爪表面における生成を引き延ばし、爪を横切っての浸透を促進することが望まれる場合は、利点であり得る。
【００３１】
産生される窒素酸化物の全体量との一般的な相関はあるものの、該酸−亜硝酸塩混合物により産生されるＮＯの量は、必ずしも阻害領域の大きさと相関しない。例えば、亜硝酸カリウムおよびリンゴ酸の組み合わせは、クエン酸の場合の約半分の量のＮＯしか産生しない一方で、大量のＮＯを産生するアスコルビン酸−亜硝酸塩溶液は、幾つかの試験においてわずかな抗真菌活性しか持たなかったが、その阻害領域の大きさは、如何なるより小さなものでも必ずしもなかった。
【００３２】
殺菌するには、少なくとも５分この活性物質に曝すことを一般に要するので、爪の遠い側からの窒素酸化物の遅らせた放出は、特に有用である。抗真菌活性は、一般にこの活性気体に曝した後２時間まで上昇し続けるが、殺菌のピークはおよそ３０分において観測された。
【００３３】
この窒素酸化物生成組成物は、如何なる適切な形態を取ってもよい。しかしながら、窒素酸化物の生成が活発である場合、その時この反応剤は、窒素酸化物が実際に求められるまでお互いに離しておかれるべきであることが認められるであろう。これは一般に好ましいことではあるが、必ずしもいつも適用する必要はない。例えば、閉鎖パッチがゲルまたは基材を用いて構成されてもよく、この中へ窒素酸化物生成成分が充填され、該パッチはその後適切な膜張りにより保護され、気体の放出を防ぐ。
【００３４】
このようなパッチにおいては、該基材またはゲルが接着性であり、この接着の強さが、逃げてこの膜張りを押しやってしまう窒素酸化物の如何なる傾向をも克服するに充分であることが好ましいが、この接着の強さが、該パッチを適用出来るように該膜張りが満足に取り除かれ得ることがないようであるべきではない。更に、ＮＯの寿命を引き延ばし、またはそれが産生される速度を抑えるために、該ゲルまたは基材中において、キレート剤のような適切な安定化剤を提供することが好ましい。加えて、ＮＯは非水性および脂質物質中によりよく溶けるので、このような物質をこの処置へ加えることは、ＮＯの活性および影響を受けている爪および爪床へのＮＯの送達を引き延ばすことがある。
【００３５】
にもかかわらず、遊離のＮＯをいつも含む組成物は、一般に如何なる長時間においても安定ではなく、好ましくは調製後出来るだけすぐに患者により使用されるべきである。
【００３６】
より好ましくは、本発明の組成物を、多くの部分に分けて提供する。これらの部分は、各々別個に活性種または反応剤を含んでもよく、これは混合された場合、窒素酸化物を生成するように働く。これ故に、第１の組成物は、適切なビヒクル中において提供される適切な亜硝酸塩を含んでもよい。第２の組成物は、適切な酸を含んでもよい。この２つの組成物はその後、好ましくは直に混合され、それから感染した爪へ適用され得、またはその場で混合されてもよい。最終的な窒素酸化物生成組成物に到達するためには混合することが必要であるので、組成物の数を最小化することが一般に望まれるが、如何なる数もが提供されてもよいことが認められるであろう。特に、例えば還元性の酸を含む第３の組成物を提供することが好ましいことがある。しかしながら、アスコルビン酸塩のような還元性の酸が使用される場合、その時は、それをそれ自体の資質によって酸として使用するか、またはそれを別個の組成物中の第１の酸と一緒に亜硝酸塩から提供することが、一般には好ましい。
【００３７】
この亜硝酸塩組成物は、例えば Eudragit L100、カルボポール（carbopol）、カルボキシメチルセルロースまたはヒドロキシメチルセルロースを包含する範囲の賦形剤中に取り込まれてもよく、この酸組成物は、カルボポール、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、メチルセルロースのようなもう１つ別の適切な賦形剤中に、または水性塩基中に取り込まれてもよい。ポリビニルアルコール、プロピレングリコール、ポリビニルピロリドン（ポビドン）、ゼラチン、グアーゴムおよびシェラックのような他の賦形剤は、膜形成を補助することにおいて使用され、該組成物をその場に維持するのに有用である。
【００３８】
特に、角質層が一般に疎水性である一方、効果的に爪は親水性物質であるので、真皮および角質層を横切って物質を導入するに適切な組成物は、一般に爪にとっては適切ではないことがある。これ故に、水に容易に溶解するイオン性またはイオン化可能な物質は、好ましくは爪における取り込みを達成することがあり、これを後押しする賦形剤が好ましい。
【００３９】
浸透において補助するためには、水性塩基化された製剤を使用することが、一般に好ましい。このような製剤は、持ち運び出来る溶液であってもよいが、ＮＯおよび／または他の窒素酸化物を爪へ曝すある最小の長さが最適であると思われるので、その時は窒素酸化物の如何なる生成も、爪界面における取り込みのために充分な時間が許されるために、あまりに速くは終わらないことが一般に好ましく、該製剤がゲル、クリーム、ローション、軟膏の形態またはラッカーのような他の粘稠化した形態であることが一般に好ましい。適切な厚さおよび他の特徴は、前記のような適切な賦形剤の使用により達成されてもよい。例えば、Eudragits が、製剤からの窒素酸化物の放出プロファイルを代える能力を持つことが立証されている。
【００４０】
好ましい実施形態において、該組成物は、有機酸および亜硝酸塩の別個の水性調製物を含む。より好ましくは、各調製物は、ゲル、クリーム、ローション、軟膏、またはもう一方と混合するに適切な塗布剤の形態であり、これも同様の群から選択される。１つまたは両方の調製物が、混合時に窒素酸化物の放出を遅らせるに適切な賦形剤を含むことが、特に好ましい。亜硝酸塩の場合では、好ましい賦形剤は Eudragit L100 のような Eudragit である。両方にとっての他の好ましい賦形剤は、前に例示したようなものである。
【００４１】
選ばれる賦形剤は、単に酸化物の放出を遅らせるためだけでもよいが、一般に粘稠化させる特質も保有しており、該賦形剤の量は、適切なゲルを提供するに必要とされる量により決定されるであろう。これは、当業者により容易に決定され認識されるような、よく知られた範囲内で変動してもよい。しかしながら、案内としては、賦形剤間では大きな差違があるが、適切な量は約１％〜約４０％において変動してもよい。一般に、好ましい賦形剤は３％〜５％のような２％〜１０％の量で使用されることのみ必要であるが、ゲル化用に最初に使用される賦形剤は、組み合わせでも別個でも、その目的を達成するに適切な量で使用されるであろう。例えば、ポリエチレングリコールは、約１０％〜５０％の範囲の量で粘稠化剤として適切に使用されるが、より好ましくは約２０％〜３５％ｗ／ｖである。適切な粘稠化剤はカルボポールおよびセルロース誘導体を包含し、求められる製剤の性質に従って、約２％〜１０％の量で典型的に用いられる。好ましい製剤は、持ち運び可能なゲルである。
【００４２】
本発明の組成物が、所望されるような界面活性剤および／または浸透剤と同様、抗酸化剤、保存剤、着色料および香料のような所望されるような他の成分を含んでもよいが、亜硝酸塩および酸の水性の組み合わせは、このような追加の成分に対しての如何なる必要性もなしに、爪を横切って窒素酸化物を容易に提供し得ることが、理解されるであろう。
【００４３】
本発明は、最終的な窒素酸化物生成組成物を提供するべく混合される２つの組成物に関連して、本明細書中において一般に例示されているが、このような言及は、他に明らかにされていたり指し示されたりしていなくても、２つ以上の初期の組成物に対しての言及を包含することが認められるであろう。
【００４４】
本発明の組成物は、混合用の如何なる適切なビヒクルをも含んでよい。重要なことは、酸および亜硝酸塩または亜硝酸塩前駆体が、所望の窒素酸化物を生成するそのような様式で反応し得ることである。これ故に、最終組成物を提供する初期の組成物の少なくとも１つが、この窒素酸化物生成反応が起こるようにするために、水性成分を好ましくは含んでいるべきである。より好ましくは、これらの初期の組成物の両方が、これらの成分の混合を容易にするために水性成分を含有すべきであるが、該成分がゆっくり反応するだけであるべきということが望まれる場合には、この水の量はこれらの初期の組成物の１つまたは両方において最小化されてもよい。
【００４５】
該最終組成物が窒素酸化物を生成するように働きさえすれば、該最終組成物を得るために混合されてもよい初期の組成物のタイプに関して、制限はない。この面において、および全体を通して、「窒素酸化物」に関しての言及は、これが必ずしも望まれたり好まれるのではないが、１００％のＮＯに関する言及を包含する。
【００４６】
例えば、これらの初期の組成物は、液体、ゲルまたは固体のような如何なる適切な形態であってもよいが、１つが液体である場合、その時もう一方は、好ましくは液体またはゲルである。液体の範疇には、溶液、懸濁およびコロイドが包含され、このような考えはゲルにも適用され、これは一般に液体および固体の間の如何なる状態をも含む。
【００４７】
より特にゲルは、クリーム、軟膏、チンキ、ワックスおよびローションのような状態を包含するが、後者はその特性に依存して、液体の傘下に入るかも知れない。この液体ゲル固体が活性種用のビヒクルとして働けば、特定の除外はないことが認められるであろう。
【００４８】
固体のビヒクルは、例えばパッチ中の基材、またはより長鎖のワックスを包含してもよい。
【００４９】
これらの初期の組成物は、窒素酸化物を生成する最終組成物を提供するために、適用前かその場において、適切に混合されてもよい。このような混合物は、例えば単刀直入にゲル／ゲル混合物であってもよく、これはその後爪へ適用され、所定の場所に残され得る。それらは２つの液体を含んでもよく、これらはそれらの間でゲル、ラッカー、固体もしくは塗布剤、および類似のもの、２つのゲル、または液体およびゲルを形成し、固体化するように働いたり、ラッカーを形成したり、または他の方法で窒素酸化物を生成、保持および調剤するように保護的環境を形成したりしてもよい。
【００５０】
１つの好ましい実施形態において、ゲルは爪、その後硬膏のようなパッチへ適用されてもよく、もう一方の活性種を含有する基材の運搬が該ゲル上で適用され、一旦接触すると、該活性種はゆっくり相互作用して、窒素酸化物を生成する。
【００５１】
もう１つ別の好ましい実施形態において、該活性種は塗布剤またはラッカーとして調剤されてもよい。適切には、１つの成分、例えば前記亜硝酸塩が適用されて乾燥するようにされてもよく、その後２つ目が更にその上に塗布される。２つ目の中の水は、この反応が進行するようにする。所望される場合には、アルコールまたはアセテートのような速乾性の溶媒が用いられてもよいが、このような溶媒および浸透促進剤が必要でないことは、本発明の利点である。しかしながら、例えば混合時にポリマー化反応が起こるように、別個の調製物中で膜の成分を提供することが望まれてもよい。ポリマー化可能なモノマーの選択がもう一方で提供されてもよい一方、触媒が１つの調製物中で提供されてもよい。あるいは、該溶媒の留去が、該調製物中のポリマーを更にゲル化させ、または硬化させることがある。
【００５２】
本発明の組成物の窒素酸化物生成相は、一般に２または３時間で、しばしばこれより少ない時間で衰えて行くが、酸化物産生が有効に停止してしまうまでは、爪の吸い込み効果が、これより非常に長い間爪のもう一方の側に窒素酸化物を提供したり、しばしばそうではないことがある。酸化物産生の間、この配合された組成物をその場に保つことが好ましく、これは該組成物の設定により達成されてもよい。あるいは、爪を例えば閉鎖性の外装で保護することが望ましいことがある。
【００５３】
もう１つ別の好ましい実施形態において、前記パッチの基材または硬膏は、非水性であるが親水性であり、実質的に乾燥形態の前記活性種の混合物を含有する。この場合、用語「乾燥形態」は、例えば結晶水を取り込んでいる結晶を包含してもよい。これ故に、該活性種の両方が該パッチの該基材または硬膏中に存在するが、それらは、反応性の環境を提供するように溶媒として作用する適切な量の水の非存在下には、反応し得ない。該パッチまたは硬膏を適用することが望まれる場合、如何なる保護的な帯紐もが除去され得、数滴のような適切な量の水が該基材に適用されて、この活性成分を活性化し得る。この活性化されたパッチは、その後爪へ適用され、生成される窒素酸化物がそれらの効果を持つようにされてもよい。
【００５４】
水が加えられる実質的に乾燥した組成物を提供するこの成分は、他の組成物に適用してもよい。これらの場合、用語「乾燥」は、遊離の水の含量に適用されることが認められ、それで組成物が例えばゲルであってもよい一方、この水の含量は１％またはこれより更に少ないといったように、非常に低いであろう。このような組成物は、実質的に無水であることが好ましい。
【００５５】
本発明の組成物の活性成分は、当業者には明らかであろうように、如何なる適切な量で存在していてもよい。一般に、亜硝酸塩の量は、最終組成物の約０．５〜３０重量％であることが好ましい。より好ましくは、この亜硝酸塩またはその前駆体の量は、１〜２０％、特に１〜１５％、好ましくは５〜１５％である。好ましい範囲は、１〜１０％または２〜１０％である。より高い濃度が一般に好まれ、８〜１０％の最小濃度が好ましい。クリーム、ローションおよびゲルにおいては、上限は約１３．５％であることが目論まれるが、適切な製剤により高いレベルが許容されることがある。
【００５６】
本発明の組成物は、２つの水性ゲル、ローションまたはクリームとして提供されることが、一般に好ましい。より好ましくは、１つが０．７５％、２．２５％、４．５％、９％および１３．５％ｗ／ｗのような０．５％〜２０％の濃度のクエン酸を含有し、もう一方が、例えば前記のような０．５％、１．５％、３．０％、６％および９％ｗ／ｗの亜硝酸ナトリウムを含有する。好ましい濃度は、各活性成分につき１０％の範囲であり、これは適切に過剰な酸を提供する。両方の活性種が、少なくとも２％、好ましくは５％ｗ／ｗ以上で存在し、有効な投与量の窒素酸化物を爪を横切って提供することも好ましい。好ましい実施形態において、該酸は１３．５％の量、該亜硝酸塩は９％にて存在し、一方もう１つ別の実施形態では、各々が１０％の量で存在する。この好ましい酸はクエン酸であり、一方この好ましい亜硝酸塩は亜硝酸ナトリウムである。
【００５７】
ゲル、ローションまたはクリームは、例えば患者により、如何なる適切な量で混合され、影響を被っている足指または手指の爪の部分を覆ってもよい。各ゲル、ローションまたはクリームの適切な量は、０．０５〜１ｇ、より好ましくは０．１〜０．５ｇの範囲にあってもよく、これらの組成物は反応して窒素酸化物を産生する。
【００５８】
該酸は、該亜硝酸塩またはその前駆体との比較により、少なくとも化学量論量で存在することが好ましい。より好ましくは該酸は、窒素酸化物を生成する充分な量の該亜硝酸塩にとって酸性の環境を確実にするに充分、化学量論的に過剰に存在する。該亜硝酸塩の全てが窒素酸化物を生成することは必要ではないが、あまりに多くの該亜硝酸塩が未反応にされることは一般に非効率的であり、該亜硝酸塩の大部分が窒素酸化物へと変換されることが好ましい。
【００５９】
一般に、該酸は、最終組成物がｐＨ５以下、特にｐＨ４以下であるように充分な量で存在することが好ましい。しかしながら、この窒素酸化物を生成する反応は、より高いｐＨにて起こり、５．５または６に等しいｐＨが、過剰な還元性の酸の存在下に特に許容可能であることがあり、それで該最終組成物のｐＨは、本発明の本質的な部分を形成しないことが認められるであろう。
【００６０】
一般に医薬的に許容可能であること以外は、該亜硝酸塩に関して制約はない。該最終組成物は一般に患者の爪へ適用されるので、この要求さえ主要な重大事項ではなく、それで皮膚の接触が最小化され、これにより潜在的な全身曝露を並行して最小化する。それにも関わらず、安全性上の重大事項に関して、該亜硝酸塩またはその前駆体は、局所投与に関しては一般に安全であることが好ましい。
【００６１】
簡便性のために、該亜硝酸塩の性質は無機的であり、少なくとも部分的に水溶性であろう。好ましいのは、前記アルカリ金属の亜硝酸塩およびアルカリ土類金属の亜硝酸塩であるが、遷移金属化合物のような他の適切な亜硝酸塩も、適切性に、特に溶解性に鑑みて使用されてもよい。特に、ナトリウム、カリウム、マグネシウムおよびバリウム化合物が使用されてもよく、該ナトリウムおよびカリウム化合物は、費用および入手可能性の観点から一般に好ましい。
【００６２】
適切な酸性化剤は無機酸を包含するが、それらの一般的な医薬的非許容可能性のために、一般に好ましくない。これ故により好ましいのは、有機酸、特に水と溶液を形成し、４以下のｐＨを与えることが出来るものである。このような酸は、蟻酸、リンゴ酸、マレイン酸、酢酸、乳酸、クエン酸、安息香酸、酒石酸およびサリチル酸を包含し、このリストは限定的というよりもむしろ包括的であることが認められるであろう。他の適切な酸は、アスコルビン酸およびパルミチン酸アスコルビルを包含するが、これらは必ずしもこのような酸性溶液を形成しないが還元性の酸であり、生成されるＮＯの量を増加させる利点を持ち、これは該ＮＯが一旦生成されると、該ＮＯを安定化するように働くこともある。本明細書中における酸への言及は、水のみと共に、または好ましくは生理学的に許容可能な脱保護剤と共に、該酸の水溶液を提供するに適切な如何なる形態の酸への言及をも包含し、該脱保護剤は混合前に、初期に該亜硝酸塩水溶液または調製物中に存在していてもよい。適切な形態の例は、クエン酸１水和物およびその無水物の形態のような、該酸の水和された、または無水の形態を包含する。
【００６３】
これらの還元性の酸の有利な性質のために、１つの実施形態においては、最終組成物形成時にこの第１の酸に加えて、還元性の酸を提供することが好ましい。適切な割合は、この第１の酸の約５％〜約２００％であり、５％〜約１５０％がより好ましく、特にはこの第１の酸の５％〜４０％であり、より特には１０〜２０％である。
【００６４】
本発明は、特に微生物が T. rubrum である場合の実施例を伴うことにより、阻害領域を作り出すことが出来る如何なる組成物にまでも拡大することが認められるであろう。
【００６５】
本発明は、爪下の感染の処置の方法にまでも拡大し、ここで本明細書中で記載される組成物は、有効な量で感染した爪へ適用される。
【００６６】
本発明は、爪下の感染の処置または予防用の医薬品の製造における窒素酸化物生成組成物の使用にまでも拡大する。
【００６７】
本発明は、本明細書中で定義されるような組成物を含む部分のキットを包含することが好ましい。好ましい実施形態では特に、本発明は、お互いに分離して適用される亜硝酸塩の水性調製物および有機酸の水性調製物を含むキットを提供し、これらの２つの調製物は、処置されるべき爪へ適用するに各々適切であるので、該亜硝酸塩および酸は反応して、爪への浸透目指して窒素酸化物を放出し得る。これらの調製物は、好ましくは本明細書中で記載されるような濃度および／または形態であり、特にローション、ゲル、クリームまたはラッカーであり、再封可能な容器中で適切に提供されるので、各キットは多数回の投与または適用を提供する。
【００６８】
如何なる形態の爪下の感染も、本発明の組成物を使用して処置されてよい。しかしながら一般に、爪真菌症を処置することが好ましい。
【００６９】
処置の適切な期間は、熟練した医師により、一般に容易に決定されるであろう。しかしながら一般に、実際的な治癒、または充分な臨床的な治癒が達成されるまで、処置を続けることが好ましい。前者の場合、手指の爪は生えてくるのに６ヶ月を要することがあり得る一方、足指の爪は１年を要することがあり得るので、原因微生物は殺菌されるが、爪はまだ醜くされたままであることがある。臨床的な治癒は、この感染した爪が更なる感染の兆候を示さない場合に達成され、これは生えてくる爪に依存するので、実際的な治癒よりも有意により長くかかることがあり得る。
【００７０】
一般に、少なくとも２ヶ月、より好ましくは３ヶ月、特に３〜６ヶ月間処置を続けることが好ましい。実際、我々の試験は、原因微生物が数日の処置開始内に殺菌されそうであることを指し示しており、それで、特に組成物が例えば１日２または３回適用される場合、１週間の処置で差し支えなく充分であろう。３ヶ月の処置メニューが、治癒を効果的にするに適切であろうということが目論まれ、このことは、患者が健康な爪が成長して行くのを観察出来るようにもするであろう。しかしながら、治癒および爪の成長を斟酌すると１４ヶ月以上までであるかも知れない臨床的な治癒が達成されるまで、例えば、処置が望まれる限りの間続けられてもよいことが認められるであろう。
【００７１】
適用される組成物の投与量および量は、患者の年齢および体重のようなパラメーターに依存するかも知れないが、より特には、厚さおよび面積のような患者の爪の寸法に依存することがあり、熟練した医師により容易に決定されるであろう。効果的であるには小量の窒素酸化物しか必要でなく、それで異なる患者には処方を違えるということが必ずしも要求されず、１つのタイプの製剤が全ての患者に対して使用されてもよいことが、本発明の利点である。しかしながら、例えば足指におけるしつこい病状用のより高濃度の酸化物を産生する製剤や、手指の爪用のより弱い強さの製剤のような、異なる強さが用いられてもよい。この強さは必ずしも産生される酸化物の量には相関しないが、酸化物が所与の組成物により生成される時間の長さには等しく相関することがある。
【００７２】
１日２回以上、好ましくは１日２または３回本発明の組成物を投与することは、本発明の好ましい実施形態を形成する。これは、前回の投与の効果が消尽する頃に、爪の感染した側にて押し上げられたレベルの窒素酸化物を効果的に提供することがある。投与量は、爪を横切っての窒素酸化物の継続的な移動、または望まれる場合には非継続的な移動を維持するように選択される。
【００７３】
本発明の組成物は、如何なる適切な手段によっても作られてよい。該組成物が水性成分を含む場合、その時は前記活性成分を水または水性調製物に溶解することが一般に好ましく、これはその後要求されるまでその他の活性種から分離して保たれてもよい。第１の活性成分の溶解後に、一般に如何なる賦形剤もが加えられてもよい。該組成物を活性化することが望まれる場合に加えられる水の添加を除いて、乾燥製剤が実質的に完全に調製されてもよい。
【００７４】
最終組成物が液体またはゲルを含む場合、手による混合を包含する如何なる適切な手段によっても適用されてよい。他の手段は、例えば２つのバレルを有するシリンジまたは２段構えで作動する調剤器を含んでもよく、指またはスパーテル、あるいは適切な他の如何なる手段によっても最終的に混合されてよい。
【実施例】
【００７５】
以下の実施例は、本発明に関して非限定的であることが理解されるであろう。該実施例は、添付の図面に言及して例示される。
［方法実施例１］
［気体産生製剤をスクリーニングするための分析 in vitro モデル］
種々のクリームおよび溶液の殺菌領域をアッセイする方法は、図１において示されているようであった。キー（Key）は、この試験の構成要素を示している。２ｍｌのエッペンドルフチューブからの蓋が、サブロー（Sabouraud）デキストロース寒天の層中に包埋され、該寒天の表面は A. niger の胞子で覆われた。Aspergillus niger の胞子が、菌糸に比較して、抗菌活性に対し遙かにより耐性であることが知られているので使用された。皿は、菌糸を得るためにその後インキュベートされたか、または胞子を殺菌する本発明の混合物の能力を試験するために直ぐに使用された。本発明の混合物は、エッペンドルフのキャップ中に置かれ、ピペットの末端で１０回攪拌された。これらの試験プレートは、壁に囲まれたウェルを有する阻害領域プレートとして本明細書中で言及されてもいる。各製剤は３回試験された。
【００７６】
このＮＯ産生混合物は該寒天と接触するようにはならないので、この技術は優れた結果を提供し、コントロールは、この空のウェルによる成長阻害がないことを示した。このアッセイは鋭敏でもある。
【００７７】
使用された該コントロールは、以下のようであった：
ｉ）空のエッペンドルフの蓋のみをサブローデキストロース寒天の中に；
ｉｉ）０．１ｍｌの亜硝酸ナトリウム（１０％）をエッペンドルフの蓋の中に；
ｉｉｉ）０．１ｍｌのクエン酸（１３．５％）をエッペンドルフの蓋の中に；
ｉｖ）０．１ｍｌの亜硝酸ナトリウム（９％）をエッペンドルフの蓋の中に；および
ｖ）０．１ｍｌのクエン酸（１０％）をエッペンドルフの蓋の中に。
成長阻害は、該コントロールのいずれでも見られなかった。
【００７８】
［方法実施例２］
［指標微生物］
爪真菌症と関連した皮膚糸状菌は、ゆっくり成長する微生物であり、２５℃にてインキュベートされた場合、サブローデキストロース寒天プレート上に全て敷き詰められるまでの成長に至るまで最低５日を要する。１組の結果を生み出すのに最低１週間を要するので、これは活性な製剤をスクリーニングすることにおける限定要因である。これ故に、幾つかの組成物の有効性は T. rubrum で確認されたが、該製剤の有効性をアッセイするには、より速く成長する指標微生物を使用することが一般に決められた。この選ばれた微生物は、美容および局所製剤の保存および抗微生物効率をモニターするのにしばしば使用される微生物である Aspergillus niger 菌であった。
【００７９】
爪真菌症に関連した真菌用の指標微生物として A. niger が使用され、試験は真菌の胞子および菌糸両方に関して行われた。該菌糸が使用される場合、殺菌領域は真菌の胞子の成長の欠落により指し示され（黒／茶）、白い領域は成長阻害を示している。真菌の胞子のプレート上で、成長阻害は菌糸の成長がないことにより指し示され（白／クリーム）、寒天のみが見られる。
【００８０】
［方法実施例３］
［ＮＯ検出］
産生されたＮＯは、ＷＰＩ（World Precision Instruments, Inc.）ＮＯ検出器を使用して測定された。このセンサーを使用する場合、ＮＯの測定は水性環境中で行われる必要があり、この実験はこの要求に適合するように適応された。これらの装置は、該方法の化学物質および小さな修飾の追加により、ＮＯ２／ＮＯ３産生をモニターする能力も持つ。
【００８１】
フランツ（Franz）槽が組み立てられ、該気体の分散が膜に浸透するのを確実にするための磁気攪拌子を含有する下部受容器中の脱イオン化された水を伴って、磁気攪拌器上へ室温にて置かれた。２分の１インチ（１３ｍｍ）の円盤が、このＮＯ産生製剤の亜硝酸ナトリウム成分で含浸された。この含浸された円盤は、等体積のクエン酸成分をその上へピペッティングする前に、該膜の上の該フランツ槽の上の方の区画中に置かれた。産生されたＮＯの量は、該ＷＰＩのＮＯプローブを使用してモニターされた。この実験は、図２に示されるように設定された。
【００８２】
測定されたＮＯレベルがプラトーに達した時、亜硝酸ナトリウムおよびクエン酸の混合物を含有する円盤は除去され、０．１ｍｌの０．１ＭのＨ２ＳＯ４および０．１ＭのＫＩの溶液がこの受容器の区画へ加えられ、ＮＯ２／ＮＯ３の量がＷＰＩ検出器を使用して（変換により）測定された。
【００８３】
［実施例１］
［A. niger の胞子に関する、亜硝酸塩溶液と混合された酸調製物の効果］
選択された酸は、クエン酸、酢酸、アスコルビン酸、マレイン酸およびリンゴ酸であった。選択された亜硝酸塩は、亜硝酸ナトリウム、亜硝酸カリウムおよび亜硝酸銀であった。
【００８４】
方法実施例１において記載されたアッセイの設定が使用された。他に指し示されなければ、殺菌領域を含む本明細書中の全ての実施例は、方法実施例１の設定を使用した。
【００８５】
以下の酸溶液（ｗ／ｖ）が、蒸留水中で調製された。
１）クエン酸２．５％
２）クエン酸５％
３）クエン酸７．５％
４）クエン酸１０％
５）アスコルビン酸２．５％
６）アスコルビン酸５％
７）アスコルビン酸７．５％
８）アスコルビン酸１０％
９）マレイン酸２．５％
１０）マレイン酸５％
１１）マレイン酸７．５％
１２）マレイン酸１０％
１３）リンゴ酸２．５％
１４）リンゴ酸５％
１５）リンゴ酸７．５％
１６）リンゴ酸１０％
１７）酢酸２．５％
１８）酢酸５％
１９）酢酸７．５％
２０）酢酸１０％
【００８６】
２ｍｌのエッペンドルフミクロチューブの蓋が除去され、滅菌され、該蓋をペトリ皿中に置いてそれらの周りに２５ｍｌの寒天を注ぐことにより、サブローデキストロース寒天プレート中へ取り込まれた。該寒天は固まるようにされ、その後 A. niger を用いて播種された。前記の各溶液は、精確に０．１ｍｌの量の各溶液を該ミクロチューブの蓋中へ加え、該プレートを優しく回転させることにより混合することにより、２．５、５、７．５および１０％の亜硝酸ナトリウム／カリウム／銀溶液と混合された。個別のプレートは、前記にリストアップされたこれらの酸溶液の各々について設定され、３２℃にてインキュベートされた。各プレート上の成長阻害領域は、２４時間後に測定された。この結果が、以下の表１および２において示される。
【００８７】
【表１】
2005501069.tif 000004
【００８８】
【表２】
2005501069.tif 000005
【００８９】
亜硝酸銀と共に試験された酸のいずれに関しても阻害領域は見られなかったので、亜硝酸銀に関しては表は示されていない。
【００９０】
幾つかのアスコルビン酸混合物は混合時に膨潤し、それらが前記ウェルの頂上部の上でドーム状に盛り上がるような拡大に至り、時折結果的に該プレートの該インキュベーターへの移動の間に、該寒天上へ小量こぼれ、これは阻害領域を作り出した。こぼれなかった場合には、アスコルビン酸溶液を用いて阻害領域は見られなかった。他の酸は、膨潤の吹きこぼれの如何なる兆候をも明示しなかった。これらの試験から、亜硝酸銀またはアスコルビン酸を含むものは別にして、試験された全ての混合物が効果的であると思われるだろう。
【００９１】
［実施例２］
［A. niger の菌糸に関する、亜硝酸塩溶液と混合された酸調製物の効果］
酸溶液が、実施例１に記載のように調製された。気体産生製剤の添加の前に、該プレートが終夜３２℃にてインキュベートされ、全体に敷き詰められるまでの成長を確立した。溶液はその後、実施例１に記載されたようなウェルに加えられた。該プレートはその後、更に２４時間３２℃にてインキュベートされた。胞子形成領域（黒）と胞子形成のない領域（白／クリーム）とが出会う点として、成長阻害領域が測定された。結果は表３、４および５において示される。
【００９２】
【表３】
2005501069.tif 000006
【００９３】
【表４】
2005501069.tif 000007
【００９４】
【表５】
2005501069.tif 000008
【００９５】
これらの試験から、亜硝酸銀またはアスコルビン酸を含むものは別にして、試験された全ての混合物が効果的であると思われるだろう。
【００９６】
［実施例３］
［A. niger の胞子に関する、亜硝酸塩溶液と混合された酸の水性クリーム調製物の効果］
同じ濃度の酸および亜硝酸塩の両方を使用し、水性クリームが溶液の代わりに使用されたこと以外は、実施例１に記載されたのと同じ手順が伴われた。結果は表６および７に示される。
【００９７】
【表６】
2005501069.tif 000009
【００９８】
【表７】
2005501069.tif 000010
【００９９】
亜硝酸銀と共に混合された酸のクリームのいずれに関しても阻害領域が見られなかったので、亜硝酸銀に関しては表は示されていない。これらの試験から、亜硝酸銀またはアスコルビン酸を含むものは別にして、試験された全ての混合物が効果的であると思われるだろう。
【０１００】
［実施例４］
［A. niger の菌糸に関する、亜硝酸塩溶液と混合された酸の水性クリーム調製物の効果］
同じ濃度の酸および亜硝酸塩の両方を使用し、水性クリームが溶液の代わりに使用されたこと以外は、実施例２に記載されたのと同じ手順が伴われた。結果は表８、９および１０に示される。
【０１０１】
【表８】
2005501069.tif 000011
【０１０２】
【表９】
2005501069.tif 000012
【０１０３】
【表１０】
2005501069.tif 000013
【０１０４】
これらの試験から、亜硝酸銀またはアスコルビン酸を含むものは別にして、試験された全ての混合物が効果的であると思われるだろう。
【０１０５】
［実施例５］
［酸および亜硝酸塩の混合により産生されるＮＯの量］
各酸および亜硝酸塩溶液により産生されるＮＯの量の大まかな見積もりは、方法実施例３に記載されたように、ＷＰＩのＮＯプローブを使用して計算された。この亜硝酸塩成分（５０μｌ）が、各実験において１０ｍｌの酸の溶液に加えられた。
【０１０６】
最初に該ＮＯプローブが、この酸成分（各実験について１０％溶液）中に浸された。該プローブは、亜硝酸塩が加えられる前に、該酸中で平衡するように置かれた。一旦ベースラインが確立されてしまったら、この器具は０にセットされ、該亜硝酸塩が加えられた。最低濃度が最初に加えられ、一旦この曲線が平らになり始めたら、引き続いての添加が行われた。作り出されたグラフは、産生されたＮＯの量の大まかな指標を提供するだけであり、この値はこの機会には測定されなかった。ＷＰＩにより示唆されるように、異なる温度におけるＮＯ検出における如何なる僅かな変化をも斟酌するために、ＷＰＩにより詳細が定められている標準プロトコールを使用した各組の読み取りの前に、較正曲線が作り出された。
【０１０７】
亜硝酸ナトリウムおよび亜硝酸カリウムに関しては、２．５、５、７．５および１０％溶液が、各酸の種々の時点にて加えられた。亜硝酸銀は非常に不溶性で、非常に低い濃度しか使用され得ないであろうから、０．０２５、０．０５、０．０７５および０．１％溶液しか該酸に加えられなかった。
【０１０８】
較正曲線およびＮＯ放出プロファイルが、全ての酸および亜硝酸塩について作り出された。アスコルビン酸と混合された亜硝酸ナトリウムおよび亜硝酸カリウムの両方に関しては、磁気攪拌子の周りおよびＮＯプローブの周り両方に、泡が形成した。
【０１０９】
幾つかの製剤において、ＮＯ２／ＮＯ３の相対量を見積もるための簡単な研究が行われた。これは、一旦このＮＯ産生製剤が最大に到達してしまったら、１ｍｌの０．１ＭのＨ２ＳＯ４および０．１ＭのＫＩを加えることにより、前記方法実施例３に記載されたように行われた。この０．１ＭのＨ２ＳＯ４および０．１ＭのＫＩは、ＮＯ２／ＮＯ３をＮＯへ変換し、これはＷＰＩのＮＯプローブを使用して記録される。得られた結果は：
・１０ｍｌクエン酸（１０％）＋５０μｌＮａＮＯ２（１０％）が、４０００ｐＡのＮＯを産生した。０．１ＭのＨ２ＳＯ４および０．１ＭのＫＩの添加時に、ピーク値は２００００ｐＡに到達した。約２０％のＮＯ産生があり、８０％はＮＯ２／ＮＯ３となることが推定された。
・１０ｍｌクエン酸（１０％）＋５０μｌＫＮＯ２（１０％）が、２２００ｐＡのＮＯを産生した。０．１ＭのＨ２ＳＯ４および０．１ＭのＫＩの添加時に、ピークは１０７００ｐＡに到達した。約２０％のＮＯ産生があり、８０％はＮＯ２／ＮＯ３となることが推定された。
・１０ｍｌアスコルビン酸（１０％）＋５０μｌＡｇＮＯ２（０．１％）が、５２００ｐＡのＮＯを産生した。０．１ＭのＨ２ＳＯ４および０．１ＭのＫＩの添加時に、ピークにおいて変化は観測されなかった。約１００％のＮＯ産生があり、ＮＯ２／ＮＯ３はないことが推定された。
・１０ｍｌ酢酸（１０％）＋５０μｌＡｇＮＯ２（０．１％）が、７０ｐＡのＮＯを産生した。０．１ＭのＨ２ＳＯ４および０．１ＭのＫＩの添加時に、ピーク値は２７００ｐＡに到達した。約３％のＮＯ産生があり、９７％はＮＯ２／ＮＯ３となることが推定された。
【０１１０】
前記実施例の結果にも関わらず、アスコルビン酸を用いる混合物について阻害領域が同定されない場合に、アスコルビン酸を使用する組み合わせが非常に多くの量のＮＯを産生するように思われることは、書き留めるに驚くべきことであった。アスコルビン酸はしかしながら、亜硝酸銀とは僅かしか、または全くＮＯ２／ＮＯ３を産生しなかった。試験された全ての他の酸は、ＮＯよりもより多くの量のＮＯ２／ＮＯ３を産生した。
【０１１１】
リンゴ酸−亜硝酸カリウムのＮＯプロファイル、およびクエン酸−亜硝酸カリウムのＮＯプロファイルは、より若い番号の実施例において見られた、産生されたＮＯの量および領域の大きさ間の相関を殆ど示さないことも、書き留めるに値することである。これらの２つの酸は非常に似た領域の大きさを作り出したが、リンゴ酸は亜硝酸銀と共に、約３分の１の量のＮＯしか作り出さなかった。
【０１１２】
［実施例６］
［製剤の評価］
［Eudragit］
Eudragit を主体としたラッカーは、製剤のＮＯ放出プロファイルを代替するそれらの能力に関して調べられた。一般に、ポリメタクリレート（Eudragit）は、膜コーティング剤としての経口錠剤／カプセル製剤に使用される。異なる膜の選択が、異なる薬剤放出速度を作り出し得る。入手可能な異なる Eudragits は、Eudragit E、Eudragit L および Eudragit S を包含する。Eudragit E は素の絶縁膜形成物として使用され、ｐＨ５を下回る胃液中に可溶である。Eudragit L および Eudragit S は腸溶剤として使用され、胃液には耐性でもある。異なる形態の Eudragit L および Eudragit S は、異なるｐＨレベルにて可溶であり、例えば Eudragit L 100 はｐＨ６より高ければ可溶であり、Eudragit S 100 はｐＨ７より高ければ可溶である。Eudragit は、薬剤放出の異なる特徴を得るために組み合わされ得る。活性気体の産生用の酸および亜硝酸塩両方を含有する Eudragit 製剤に関して、調査が行われた。
【０１１３】
Eudragit L 100 が、亜硝酸ナトリウムと組み合わせて試験され、５から２５〜３０分間ＮＯの放出を延長させた（データーは示されていない）。酸成分を reverse Eudragit (E100) 中に処方することは、ＮＯ産生の延長に関しては殆どまたは全く効果を持たないように思われた。これ故に、適切な製剤は L100 中の亜硝酸ナトリウムであり、酸成分はゲル中に豊富に存在した。
【０１１４】
［実施例７］
［代替のゲル製剤］
種々のゲル化剤の製剤中の亜硝酸塩および酸の組み合わせは、視覚的にアッセイされた。使用されたゲル化剤は、以下のようであった：
３％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）；
３％メチルセルロース（ＭＣ）；
３％カルボポール（Carbopol）９３４；
３％ゼラチンＡ；
３％ゼラチンＢ；
２０％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４００；
２０％ＰＥＧ６００；
２０％ＰＥＧ１０００；
３％ヒドロキシメチルセルロース（ＨＭＣ）；および
３％ポリビニルアルコール（ＰＡ）。
【０１１５】
全てのゲルは：
（ｉ）クエン酸の１０％溶液、および
（ｉｉ）亜硝酸ナトリウムの１０％溶液
を用いて調製された。
視覚的な査定およびｐＨ試験（リトマス紙を使用）も行われた。結果は表１１および１２に示される。
【０１１６】
【表１１】
2005501069.tif 000014
【０１１７】
表１１から、ＣＭＣ、ＨＭＣおよびカルボポールの全てが、１０％亜硝酸ナトリウムの存在下に安定なゲルを形成したことが判る。
【０１１８】
【表１２】
2005501069.tif 000015
【０１１９】
表１２から、ＨＭＣ、ＣＭＣ、ＭＣおよびカルボポールの全てが、１０％クエン酸の存在下に安定なゲルを形成したことが判る。
【０１２０】
これらの試験は、幾つかの予備的な示唆を提供する。特に、ゼラチンは好ましいゲル化剤であり、これを、２０〜４０％、より一般には約３０％のような従来のより高いレベルにて使用することが好ましい。
【０１２１】
［実施例８］
［T. rubrum に関する、ＮＯ−産生製剤の効果］
壁に囲まれたウェルを有する阻害領域プレートを使用する方法実施例２における前記方法は、種々のＮＯ−産生製剤の皮膚糸状菌殺菌活性を試験するために適応された。以下の製剤が作製され、T. rubrum を用いて予め播種された、壁に囲まれたウェルを有する寒天プレートに加えられた：
・１０％亜硝酸ナトリウム（５０μｌ）を含有する Eudragit L100 と混合された、１０％クエン酸（５０μｌ）を含有するカルボポール。
・１０％亜硝酸ナトリウム（５０μｌ）を含有するＣＭＣと混合された、１０％クエン酸（５０μｌ）を含有するＣＭＣ。
・１０％亜硝酸ナトリウム（５０μｌ）を含有する水性クリームと混合された、１０％クエン酸（５０μｌ）を含有する水性クリーム。
・１０％亜硝酸ナトリウム（５０μｌ）を含有するＨＭＣと混合された、１０％クエン酸（５０μｌ）を含有するＨＭＣ。
・１０％亜硝酸ナトリウム（５０μｌ）を含有する Eudragit L100 と混合された、１０％クエン酸（５０μｌ）を含有する Eudragit E100。
・１０％亜硝酸ナトリウム（５０μｌ）を含有する Eudragit L100 と混合された、１０％クエン酸（５０μｌ）を含有するＭＣ。
・１０％亜硝酸ナトリウム（５０μｌ）溶液と混合された、５０μｌの１０％クエン酸。
・１０％亜硝酸ナトリウム（５０μｌ）を含有する Eudragit L100 と混合された、５０μｌの１０％クエン酸。
・陽性コントロール（製剤は何も加えられなかった）。
【０１２２】
【表１３】
2005501069.tif 000016
【０１２３】
これらの結果は、T. rubrum が本発明の製剤による殺菌に対して非常に敏感であることを示し、大きな殺菌領域が見られた。
【０１２４】
［実施例９］
［ラッカー／ゲル化剤からのＮＯ産生のＷＰＩ測定］
ＮＯ−産生製剤からのＮＯ放出時間の長さを分析する実験が設定された。該製剤を直接フランツ槽中の０．２μｍ孔フィルターの表面上へ置くことにより、結果的に該製剤は該フィルターを通じて浸出し、反応はフランツ槽の下部受容器で起こった。従って、前記円盤は、該ＮＯ産生製剤の亜硝酸ナトリウム成分で浸透され、該円盤は、膜の更にその上の該フランツ槽の上の方の区画中に置かれ、その後この浸透された円盤上へ、等体積のクエン酸成分をピペッティングした。産生されたＮＯの量は、ＷＰＩのＮＯプローブを使用してモニターされた。この実験は、図２に示されたように設定された。
【０１２５】
３つの製剤が査定された。
・カルボポール９３４中の１０％クエン酸、および Eudragit L100 中の１０％亜硝酸ナトリウム
・ＨＭＣ中の１０％クエン酸、および Eudragit L100 中の１０％亜硝酸ナトリウム
・溶液中の１０％クエン酸、および溶液中の１０％亜硝酸ナトリウム
【０１２６】
この結果は図３に示され、これは、選択された亜硝酸塩および酸を含有するゲル化剤からの、時間に関したＮＯ産生を示している。カルボポールおよび L100 のＮＯ産生製剤は、５００００ｐＡにてピークに達したが、これはＷＰＩメーターの検出限界を上回っている。しかしながらこのグラフから、この製剤が、この実験が終結された時間である２３分間、非常に堅実で首尾一貫した速度にてＮＯを放出したことが判る。比較すれば、溶液により産生されたＮＯは、遙かに早くにスローダウンし始め、恐らくこの産生されたＮＯの大部分は、該溶液から泡となって出て行き大気中へと放出された。同様のパターンがＨＭＣを用いた試料について見られた。このことは、製剤アプローチが、ＮＯの異なる放出プロファイルを得るのに使用され得ることを示している。
【０１２７】
［実施例１０］
［試験用製剤］
表１４にリストアップされた製剤は、阻害領域、ＮＯ放出プロファイル、およびＮＯ２／ＮＯ３放出に関して調べられた。表１４にリストアップされた成分の濃度は、混合前のものである（脱イオン化水中での％ｗ／ｗ）。
【０１２８】
【表１４】
2005501069.tif 000017
【０１２９】
表１５の組み合わせは、阻害領域に関してのみ査定された。
【０１３０】
【表１５】
2005501069.tif 000018
【０１３１】
リストアップされた個々の成分は、混合前の初期の濃度（脱イオン化された水（ＤＷ）中％ｗ／ｗ）を表す。
＊および＊＊は、それぞれ陽性および陰性コントロールを表す。
【０１３２】
阻害領域は、代わりの還元剤α−トコフェロールに関しても査定された。この物質を使用する査定用の組み合わせは、表１６にリストアップされる。アスコルビン酸（試料番号２４）、Ｎａ２Ｓ２Ｏ４（試料番号３３）またはアスコルビン酸ナトリウム（試料番号３４）との、亜硝酸ナトリウムおよびクエン酸の組み合わせを含有する製剤も、比較例として包含された。
【０１３３】
【表１６】
2005501069.tif 000019
【０１３４】
リストアップされた個々の成分は、混合前の初期の濃度（％ｗ／ｗ）を表す。
＊は、陰性コントロールを表す。
【０１３５】
［実施例１１］
［Ａ）阻害領域］
図４、５および６は、阻害領域に関する実施例１０の製剤の効果を示す。試料番号３２（高濃度のアスコルビン酸を有する低濃度のクエン酸）および試料番号３９（エタノール中処方されたα−トコフェロール）が他の製剤よりもより低活性を呈したが、明らかに、調べられた製剤の大部分に関して観察された阻害領域において明らかな違いはないと結論づけられる。しかしながら、高濃度（２０％）のアスコルビン酸（試料２４〜３１）の組み合わせを含有する他の製剤は、阻害領域アッセイにおいて示されたように、抗真菌活性において明らかな抑制を示さなかった。
【０１３６】
図４は、表１４にリストアップされた溶液およびゲルを主体とした製剤に関しての阻害領域を示す。
図５は、表１５にリストアップされた還元剤の存在下に調べられた製剤に関しての阻害領域を示す。
図６は、表１６にリストアップされたα−トコフェロールおよび他の還元剤の存在下に調べられた製剤に関しての阻害領域を示す。
【０１３７】
［Ｂ）ＮＯおよびＮＯ２／ＮＯ３の放出］
ＷＰＩの器具から生成される、産生されるＮＯの量に関してのデーターは、ｐＡの単位で定量された。較正プロットが、放出されたＮＯの濃度を計算するために構成された（データーは示されていない）。一般に、得られたプロファイルは、溶液を主体とした製剤がゲルを主体とした製剤よりもより速くＮＯを放出したということを示している。溶液を主体とした製剤の中でも、試料番号２０（亜硝酸ナトリウムおよびクエン酸の溶液）が、最短時間中にＮＯの高い放出を示した。しかしながら、カルボポール（試料番号１６）およびＣＭＣ（試料番号１９）中の亜硝酸ナトリウム溶液およびクエン酸を含有する溶液製剤の組み合わせは、延長された期間の時間に亘って最高量のＮＯを産生するように思われた。放出されたＮＯの最低量は、ＣＭＣを主体とした製剤と共に発生するのが一般に見出された。
【０１３８】
図７は、調べられた種々の製剤により産生される平均ピークのＮＯおよびＮＯ２／ＮＯ３の濃度を示している。調べられたゲルを主体とした製剤の内、ＣＭＣ製剤が、残りのゲルを主体とした製剤（Ｌ１００、ＨＭＣおよびカルボポール）に比較してより低濃度のＮＯを産生することが見出された。調べられた種々の製剤から産生された、時間の関数としての平均ピークのＮＯ濃度が、図８に示される。試料番号１９（これはＣＭＣを含有していた）の例外はあるが、このデーターは、溶液（試料番号５、１０、１６〜２０）がゲル製剤に比較された場合、ピークＮＯ濃度に達することにおいて有意により速いことを論証した。
【０１３９】
図７は、調べられた種々の製剤から産生される平均ピークのＮＯおよびＮＯ２／ＮＯ３の濃度を示している。
図８は、調べられた種々の製剤からの最大のＮＯ産生に到達する平均時間を示している。
【０１４０】
［実施例１２］
［ヒトの爪を横切るＮＯの通過］
［１８時間、１０％溶液］
図１１に示される設定が用いられた。Ｔ０において、１００μｌの１０％亜硝酸ナトリウムおよび１００μｌの１０％クエン酸の１回の適用が、爪フランツ槽（曝露表面０．１９６３ｃｍ２）中に盛られた１片のヒトの爪の表面上へピペッティングされた。該爪を通過したＮＯの量は、１８時間の期間に亘って、ＷＰＩのＮＯ検出器を使用してモニターされた。この結果は、図９に示される。
【０１４１】
［１８時間、５％溶液］
図１１に示される設定が用いられた。Ｔ０において、１００μｌの５％亜硝酸ナトリウムおよび１００μｌの５％クエン酸の１回の適用が、爪フランツ槽（曝露表面０．１９６３ｃｍ２）中に盛られた１片のヒトの爪の表面上へピペッティングされた。該爪を通過したＮＯの量は、１８時間の期間に亘って、ＷＰＩのＮＯ検出器を使用してモニターされた。この結果は、図１０に示される。
【０１４２】
［陰性コントロール］
陰性コントロールは、２００μｌの脱イオン化水を含み、これは爪フランツ槽中に盛られた１片のヒトの爪の表面上へピペッティングされ、この他は前記１０％および５％の手順に関してと同じ条件が用いられた。
【０１４３】
これらの図から判るように、これらの１０％溶液は、ＮＯの初期の明らかな減少を提供した。しかしながら、約４時間後（異なる実験は異なる時間の遅れを与えたが、これらのデーターは示されていない）、ＮＯは突然増加し、その後約１０時間の期間、高レベルに維持される。前記５％溶液は正のレベルのＮＯを産生したが、前記１０％製剤よりもやや低かった。この陰性コントロールは、この実験の開始時の初期の浸塗後は、決してベースラインから脱離しなかった（データーは示されていない）。
【０１４４】
［実施例１３］
［１０％アスコルビン酸および１０％亜硝酸ナトリウムを使用した、ヒトの爪を横切るＮＯの通過の測定］
この実験の第１の部分において、図１１の２つの腕を有する爪フランツ槽が設定されたが、ヒトの爪の代わりに１片の気体浸透性膜を使用した。この系は、製剤が加えられる前、約４０分間このままにされた。１００μｌの１０％アスコルビン酸および１００μｌの１０％亜硝酸ナトリウム溶液が、実施例１２中のようなフランツ槽の頂上部へ加えられ、このフランツ槽の頂上部は、パラフィルムで覆われた。
【０１４５】
該実験の間産生されたＮＯの量は、ＮＯ検出器の検出限界を超え、ちょうど１時間後、プロットが目盛り（１０μＭ）から逸脱した。ピークにおける初期の減少は、観測されなかった。産生されたＮＯの量は、クエン酸（１０％）および亜硝酸ナトリウム（１０％）を用いた時に見られたものよりも、約２０倍高かった。
【０１４６】
該実験がその後繰り返され、この時は１片のヒトの爪を使用した。１００μｌの１０％アスコルビン酸および１００μｌの１０％亜硝酸ナトリウムが、その後直接爪の頂上部表面へ適用され、混合された。フランツ槽はパラフィルムで覆われ、爪を通過するＮＯの量が、ＷＰＩ計量器を使用してモニターされた。この結果は、図１２に示される。
【０１４７】
ピークにおける落ち込みは、ヒトの爪およびＮＯ産生製剤を含む実験における標準的なアーティファクトであるように思われる。ピークにおけるこの減少を伴う増加は、一方からもう一方へと徐々に起こる変化は伴わず、非常に突然であった。
【０１４８】
図１２から、アスコルビン酸を含む混合物が、爪を横切るＮＯの持続された放出を提供し得る一方、そのレベルは、クエン酸を使用する場合よりも約１０倍低いことが判る。
【０１４９】
［実施例１４］
［ヒトの爪を横切る抗真菌気体浸透に関するフランツ槽爪バイオアッセイ］
フランツ槽が図１３に示されるように設定され、低い方の区分は、排出口より低い８ｍｍ（の高さ）まで、溶融したサブローデキストロース寒天で満たされた。該寒天が冷えて固まった後、２５μｌの A. niger 胞子の懸濁が該寒天の表面上へピペッティングされ、ヒトの爪の区分が該排出口より上で空気が漏れないような様式で適合され、所定の場所にクランプで留められた。該槽は、その後２４時間３２℃にてインキュベートされ、敷き詰められた菌糸を得た。
【０１５０】
一旦菌糸が育ってしまったら、該槽は該インキュベーターから除去され、０．１ｍｌのクエン酸および０．１ｍｌの亜硝酸ナトリウムが該フランツ槽の漏斗中へピペッティングされ、このピペットのチップを使用して混合された。陰性コントロールは、１０％亜硝酸の０．２ｍｌの溶液、または０．２ｍｌの１０％クエン酸が加えられた。すべてのフランツ槽に関しての漏斗の頂上部が、その後パラフィルムで覆われた。該槽は、室温に置かれた。２時間１０分の期間の後、各フランツ槽中の溶液は除去され、当価の溶液で置き換えられ、このプロセスは、更に２回の適用のために２時間１０分毎に繰り返され、合計４回の適用を与えた。溶液の最後の適用の後、該槽は室温にて覆われたままにしておかれ、２４時間この微生物がゆっくり成長するようにした。
【０１５１】
２４時間後、クエン酸および亜硝酸ナトリウムの混合物を有する６つの全ての槽が、爪／製剤に対して最も近くに A. niger のコロニーの中央域を持ち、これは該活性気体により殺菌されてしまった。このことはハロー効果により証拠づけられ、ここで死んだ白い菌糸の領域は、黒くて胞子形成している菌糸の環によって囲まれていた。更に２４時間後、該 A. niger は、殺菌されていない最も外側の領域から中心へ向かって成長することにより回復した。
【０１５２】
亜硝酸ナトリウムまたはクエン酸を有する全ての槽は、一面に敷き詰められて成長した菌糸を示し、これは固体の黒い環により証拠づけられるように、胞子を形成した。
【０１５３】
この結果は、爪を横切って有効な気体状成分を生成させる本発明の製剤の能力を、明確に論証している。それは、該気体がヒトの完全な足指の爪に浸透しており、直接 A. niger の成長に影響を及ぼしていることを、決定的に示している。加えて、該製剤は爪に浸透しており、更なる８ｍｍの距離を超えて微生物の成長に影響を及ぼしており、in vivo での分離は事実上無視できるものである。コントロールは、前記ハロー効果を引き起こしているのは該活性気体であることを確証させるものである。
【０１５４】
［実施例１５］
［キット］
２つの水性ゲル調製物を含むキットが作製された。該調製物は、以下の処方を持っていた：
Ａ．亜硝酸ナトリウムゲル（２ｍｌ）
亜硝酸ナトリウム                ６．６％
ヒドロキシメチルセルロース    １０．０％
ポリビニルピロリドン            ５．０％
ポリエチレングリコール        ２０．０％
ベンジルアルコール              １．０％
着色料                          ０．００５％
水                          １００％までｑｓ
Ｂ．クエン酸ゲル（２ｍｌ）
クエン酸                      １０．０％
カルボポール                    ５．０％
ポリビニルピロリドン            ５．０％
ポリエチレングリコール        ３０．０％
メチルパラベン                  ０．２％
プロピルパラベン                ０．０２％
水                          １００％までｑｓ
着色料                          ０．００５％
処方ＡおよびＢは、爪への適用の直前に、または爪自体の上で混合するために、再封可能な、搾ることが可能なチューブ中に、別個に提供された。
【図面の簡単な説明】
【０１５５】
【図１】図１は、阻害領域を測定するために使用される試験を例示する。
【図２】図２は、本発明の組成物からの窒素酸化物の発生を測定するために調えられたフランツ（Franz）槽を示す。
【図３】図３は、亜硝酸塩および酸を含有する選択されたゲル化剤からの、時間に関するＮＯの産生を示す。
【図４】図４は、所定の溶液、およびゲルを主体とした製剤についての阻害領域を示す。
【図５】図５は、還元剤存在下に調べられた所定の製剤についての阻害領域を示す。
【図６】図６は、α−トコフェロールおよび他の還元剤存在下に調べられた所定の製剤についての阻害領域を示す。
【図７】図７は、種々の製剤により産生された平均ピークのＮＯおよびＮＯ２／ＮＯ３濃度を示す。
【図８】図８は、調べられた種々の製剤からの最大のＮＯ産生に到達する平均時間を示す。
【図９】図９は、１８時間の期間に亘って１０％の酸および１０％の亜硝酸塩の溶液から爪を通過したＮＯの量を示す。
【図１０】図１０は、１８時間の期間に亘って５％の酸および５％の亜硝酸塩の溶液から爪を通過したＮＯの量を示す。
【図１１】図１１は、図９および１０において爪を通過したＮＯの量を測定するのに使用された設定を示す。
【図１２】図１２は、１８時間の期間に亘って１０％のアスコルビン酸および１０％の亜硝酸塩の溶液から爪を通過したＮＯの量を示す。
【図１３】図１３は、ヒトの爪に適用された本発明の組成物により達成された阻害領域を測定するために使用されたフランツ槽の設定を示す。
【図１】
2005501069.tif 000020
【図２】
2005501069.tif 000021
【図３】
2005501069.tif 000022
【図４】
2005501069.tif 000023
【図５】
2005501069.tif 000024
【図６】
2005501069.tif 000025
【図７】
2005501069.tif 000026
【図８】
2005501069.tif 000027
【図９】
2005501069.tif 000028
【図１０】
2005501069.tif 000029
【図１１】
2005501069.tif 000030
【図１２】
2005501069.tif 000031
【図１３】
2005501069.tif 000032
【国際公開パンフレット】
2005501069.tif 000033
2005501069.tif 000034
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2005501069.tif 000091
2005501069.tif 000092
【手続補正書】
【提出日】平成15年5月5日(2003.5.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
爪下感染の処置または予防用の医薬品の製造における窒素酸化物生成成分の使用であって、該成分が亜硝酸塩および有機酸を含み、これら各成分が使用前にもう一方とは別個に適用される使用。
【請求項２】
前記酸が、最終組成物が５．５以下のｐＨであるに充分な量で存在する、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記酸が：
蟻酸、リンゴ酸、マレイン酸、酢酸、乳酸、クエン酸、安息香酸、酒石酸およびサリチル酸、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル、およびこれらの混合物
から選択される、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
前記亜硝酸塩が、アルカリ金属の亜硝酸塩およびアルカリ土類金属の亜硝酸塩から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
前記亜硝酸塩が：
ナトリウム、カリウム、マグネシウムおよびバリウムの亜硝酸塩
から選択される、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
クエン酸および亜硝酸ナトリウムを含み、少なくとも１つが水性ビヒクル中に存在する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７】
前記爪下感染が爪真菌症である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８】
前記亜硝酸塩成分が：
Eudragits、カルボポール（carbopol）、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、およびこれらの混合物
から選択される賦形剤と共に処方される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
前記酸成分が：
カルボポール、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、メチルセルロース、およびこれらの混合物
から選択される賦形剤と共に処方される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
前記酸および亜硝酸塩が、水を主体とした製剤中で別々に適用される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
各調製物が、各々をもう一方と混合するに適切なゲル、クリーム、ローション、軟膏および塗料から別々に選択される形態である、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
前記酸および亜硝酸塩が、ゲル、塗料またはラッカーとして各々別々に処方される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３】
前記酸および亜硝酸塩が、混合された場合に固体化するかあるいはゲルまたは塗料を形成する液体またはゲルとして各々別々に処方される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
前記亜硝酸塩が、最終組成物の約０．５〜３０重量％である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１５】
前記亜硝酸塩が、最終組成物の５〜１５重量％である、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
前記酸が、最終組成物の約５〜３０重量％である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１７】
前記酸が、最終組成物の約１０〜１５重量％である、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
添付の実施例に記載の、阻害領域を作り出すことが可能な組成物。
【請求項１９】
爪下感染の処置または予防のための方法であって、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の組成物が、この感染した爪へ有効量で適用される方法。
【請求項２０】
請求項１〜１８のいずれか１項に記載の組成物を含むキット。
【請求項２１】
亜硝酸塩の水性調製物および有機酸の水性調製物を含み、一方がもう一方とは別々に適用され、これらの２つの調製物が処置される爪に適用するに各々適切であり、該亜硝酸塩および酸が反応して、該爪中への浸透用の窒素酸化物を放出することが出来る、請求項２０に記載のキット。
【請求項２２】
各調製物が、ローション、ゲル、クリームおよびラッカーから選択される形態である、請求項２１に記載のキット。
【請求項２３】
前記調製物が再封可能な容器中で提供される、請求項２１または２２に記載のキット。
【国際調査報告】
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