(57)【要約】本発明は、（化１）2005508886.tif 000019のような構造を持つ新規のソマトスタチン類似体に関する。Ｚは存在しなくてもよく、存在している場合は、ＤＯＴＡ、ＤＴＰＡ、ＮＯＴＡを基にしたキレート剤、カルボニル化合物、ヒドラジンニコチンアミド（ｈｙｎｉｃ）、Ｎ４キレート剤、デスフェリオキサミン、ＮｘＳｙキレート剤、全ての任意の錯体化合物、もしくは放射性同位体で標識化された化合物、ハロゲン化のためのチロシン（Ｔｙｒ）、蛍光塗料もしくはビオチンから選択され、Ｌは、存在しなくてもよく、存在している場合は、リンカー分子であり、Ｘ１は、より基本的性質を持たせるための、Ｄ／Ｌ−ジアミノ酪酸（Ｄ／Ｌ−Ｄａｂ）、もしくは第一級、第二級アミノ基とカップリングさせるためのＤ／Ｌ−グルタミン酸のような、キレート剤へのリンカーと共に炭素原子が３〜４連続して結合している対称もしくは非対称のジアミノ酸であり、Ｘ２は、アスパラギンのような中性アミノ酸もしくはシトルリンもしくはアルギニン擬似体もしくは正電気を帯びた中性、中性でないアミノ酸であり、Ｘ３は、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、３−（２−チエニル）アラニンもしくはα−、β−ナフチルアラニンであり、Ｘ４は、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、１６Ｆで任意にハロゲン化された芳香族アミノ酸であり、Ｘ５は、トレオニン（Ｔｈｒ）もしくはセリン（Ｓｅｒ）であり、Ｘ６は、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、３‐（２‐チエニル）アラニンもしくはα−、β−ナフチルアラニンである。
2005508886.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（化１）
2005508886.tif 000017
（Ｚは存在しなくてもよく、存在している場合はＤＯＴＡ、ＤＴＰＡ、ＮＯＴＡを基にしたキレート剤、カルボニル化合物、ヒドラジンニコチンアミド（ｈｙｎｉｃ）、Ｎ４キレート剤、デスフェリオキサミン、ＮｘＳｙキレート剤、その他全ての任意の錯体化合物、もしくは放射性同位体で標識化された化合物、ハロゲン化のためのチロシン（Ｔｙｒ）、蛍光塗料もしくはビオチンから選択され、Ｌは存在しなくてもよく、存在している場合はリンカー分子であり、Ｘ１は、より基本的性質を持たせるため、Ｄ／Ｌ−ジアミノ酪酸（Ｄ／Ｌ−Ｄａｂ）もしくは第一級、第二級アミノ基とカップリングさせるためのＤ／Ｌ−グルタミン酸のような、キレート剤へのリンカーと共に炭素原子が３〜４連続して結合している対称もしくは非対称のジアミノ酸であり、Ｘ２は、アスパラギンのような中性アミノ酸もしくはシトルリンもしくはアルギニン擬似体もしくは正電気を帯びた中性、中性でないアミノ酸であり、Ｘ３は、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、３−（２−チエニル）アラニンもしくはα−、β−ナフチルアラニンであり、Ｘ４は、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、１６Ｆで任意にハロゲン化された芳香族アミノ酸であり、Ｘ５は、トレオニン（Ｔｈｒ）もしくはセリン（Ｓｅｒ）であり、Ｘ６は、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、３‐（２‐チエニル）アラニンもしくはα−、β−ナフチルアラニンである。）で表わされることを特徴とするソマトスタチン類似体。
【請求項２】
前記Ｘ２は、ジアミノプロピオン酸とジアミノ酪酸とからなる群から選択される請求項１に記載のソマトスタチン類似体。
【請求項３】
前記Ｘ２は、リシン（Ｌｙｓ）、Ｉ−Ａｍｐ、オルニチン、Ｌ／Ｄ−Ｐｈｇ（４−ａｍｉｎｏ）からなる群から選択される請求項１または２に記載のソマトスタチン類似体。
【請求項４】
前記Ｘ２は、（Ｒ／Ｓ）−Ｇｌｙ−Ａｌａ−４−Ｐｉｐ（Ｎ−ａｍｉｎｏ）、Ｄ／Ｌ−Ｐｈｅ［４−グアニジノ］、（Ｒ／Ｓ）−２−アミノ−４−[４−（２−アミノ）ピリミジナル]酪酸のようなアルギニン擬似体と、四分の一当量のアンモニウム誘導体（ＮＲ３＋）とからなる群から選択される請求項１または２に記載のソマトスタチン類似体。
【請求項５】
前記Ｘ４は、チロシン（Ｔｙｒ）、ヨウ素化されたチロシンのようにハロゲン化されたチロシン、ジメチルチロシン（ｄｉＭｅ‐Ｔｙｒ）、α−、β−ナフチルアラニン、ヨウ素化されたフェニルアラニンのようにハロゲン化されたフェニルアラニンからなる群から選択される請求項１乃至４のいずれかに記載のソマトスタチン類似体。
【請求項６】
前記Ｌは、チロシン、リシン、β−アラニン、サルコシン、コハク酸、グルタル酸からなる群から選択される請求項１乃至５のいずれかに記載のソマトスタチン類似体。
【請求項７】
前記Ｚと共に錯形成する前記放射性同位体は、１１４ｍＩｎ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、７７Ａｓ、９０Ｙ、６６Ｇａ、６７Ｃｕ、１６９Ｅｒ、１１７ｍＳｎ、１２１Ｓｎ、１２７Ｔｅ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、１４９Ｔｂ、１６１Ｔｂ、１０９Ｐｄ、１６５Ｄｙ、１４９Ｐｍ、１５１Ｐｍ、１５３Ｓｍ、１５７Ｇｄ、１５９Ｇｄ、１６６Ｈｏ、１７２Ｔｍ、１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、１７７Ｌｕ、１０５Ｒｈ、１１１Ａｇ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、２０３Ｂｉ、１０３ｍＲｈからなる群から選択される請求項１乃至６のいずれかに記載のソマトスタチン類似体。
【請求項８】
前記Ｘ２は、アルギニンである請求項１乃至７のいずれかに記載のソマトスタチン類似体。
【請求項９】
前記Ｘ３は、フェニルアラニンである請求項１乃至８のいずれかに記載のソマトスタチン類似体。
【請求項１０】
前記Ｘ４は、フェニルアラニンである請求項１乃至９のいずれかに記載のソマトスタチン類似体。
【請求項１１】
前記Ｘ４は、チロシンである請求項１乃至９のいずれかに記載のソマトスタチン類似体。
【請求項１２】
前記Ｘ５は、トレオニンである請求項１乃至１１のいずれかに記載のソマトスタチン類似体。
【請求項１３】
前記Ｘ６は、フェニルアラニンである請求項１乃至１２のいずれかに記載のソマトスタチン類似体。
【請求項１４】
前記Ｘ１は、ジアミノ酪酸である請求項１乃至１３のいずれかに記載のソマトスタチン類似体。
【請求項１５】
一般式（化１０）
2005508886.tif 000018
（Ｚは、請求項１で定義した場合と同様である）で示される請求項１乃至１４のいずれかに記載のソマトスタチン類似体。
【請求項１６】
前記Ｚは、ＤＯＴＡである請求項１乃至１５のいずれかに記載のソマトスタチン類似体。
【請求項１７】
前記Ｚは、ＤＯＴＡＧＡである請求項１乃至１６のいずれかに記載のソマトスタチン類似体。
【請求項１８】
前記Ｚは、チロシンである請求項１乃至１７のいずれかに記載のソマトスタチン類似体。
【請求項１９】
前記Ｌは、存在しない請求項１乃至１８のいずれかに記載のソマトスタチン類似体。
【請求項２０】
治療もしくは診断のために用いる請求項１乃至１９のいずれかに記載のソマトスタチン類似体。
【請求項２１】
９９ｍＴｃ、２０３Ｐｂ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、１１１Ｉｎ、１１３ｍＩｎ、１２３Ｉ、１７７Ｌｕ、９７Ｒｕ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、５２Ｆｅ、５２ｍＭｎ、５１Ｃｒ、１２４Ｉ、１８Ｆからなる群から選択される放射性同位（金属）元素で標識化し、診断のために用いる請求項１乃至１９のいずれかに記載のソマトスタチン類似体。
【請求項２２】
一つあるいはそれ以上のソマトスタチンレセプターの過剰発現によって特徴付けられる疾病の処置の薬剤として使用する請求項１乃至１９のいずれかに記載のソマトスタチン類似体。
【請求項２３】
前記処置は、腫瘍を持った一つあるいはそれ以上のソマトスタチンレセプターを対象とする請求項２２に記載のソマトスタチン類似体。
【請求項２４】
１１４ｍＩｎ、１９６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、７７Ａｓ、９０Ｙ、６６Ｇａ、６７Ｃｕ、１６９Ｅｒ、１１７ｍＳｎ、１２１Ｓｎ、１２７Ｔｅ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１９５ｍＰｔ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、１４９Ｔｂ、１６１Ｔｂ、１０９Ｐｄ、１６５Ｄｙ、１４９Ｐｍ、１５１Ｐｍ、１５３Ｓｍ、１５７Ｇｄ、１５９Ｇｄ、１６６Ｈｏ、１７２Ｔｍ、１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、１７７Ｌｕ、１０５Ｒｈ、１０３ｍＲｈ、１１１Ａｇ、１２４Ｉ、１３１Ｉ、２１１Ａｔからなる群から選択される放射性同位体で標識化される請求項２２または２３に記載のソマトスタチン類似体。
【請求項２５】
請求項１乃至１９のいずれかに記載のソマトスタチン類似体を前記処置もしくは診断に応じて医薬組成物を調合することを特徴とするソマトスタチン類似体の使用。
【請求項２６】
前記医薬組成物は、診断上の組成であって、前記ソマトスタチン類似体は、９９ｍＴｃ、２０３Ｐｂ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、１１１Ｉｎ、１１３ｍＩｎ、１２３Ｉ、１７７Ｌｕ、９７Ｒｕ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、５２Ｆｅ、５２ｍＭｎ、５１Ｃｒからなる群から選択される放射性同位（金属）元素で標識化される請求項２５に記載のソマトスタチン類似体の使用。
【請求項２７】
前記処置は、一つあるいはそれ以上のソマトスタチンレセプターの過剰発現によって特徴付けられる疾病に対して行われる請求項２５に記載のソマトスタチン類似体の使用。
【請求項２８】
前記処置は、腫瘍を持った一つあるいはそれ以上のソマトスタチンレセプターを対象とする請求項２７に記載のソマトスタチン類似体の使用。
【請求項２９】
前記医薬組成物は、治療上の組成であって、前記ソマトスタチン類似体は、１１４ｍＩｎ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、７７Ａｓ、９０Ｙ、６６Ｇａ、６７Ｃｕ、１６９Ｅｒ、１１７ｍＳｎ、１２１Ｓｎ、１２７Ｔｅ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、１４９Ｔｂ、１６１Ｔｂ、１０９Ｐｄ、１６５Ｄｙ、１４９Ｐｍ、１５１Ｐｍ、１５３Ｓｍ、１５７Ｇｄ、１５９Ｇｄ、１６６Ｈｏ、１７２Ｔｍ、１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、１７７Ｌｕ、１０５Ｒｈ、１１１Ａｇ、１２４Ｉ、１３１Ｉからなる群から選択される放射性同位（金属）元素で標識化される請求項２５に記載のソマトスタチン類似体の使用。
【請求項３０】
請求項１乃至１９のいずれかに記載の一つあるいはそれ以上ソマトスタチン類似体と、好適な賦形剤とからなる医薬組成物。
【請求項３１】
前記組成物は、診断のために用いられ、前記ソマトスタチン類似体は、９９ｍＴｃ、２０３Ｐｂ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、１１１Ｉｎ、１１３ｍＩｎ、１２３Ｉ、１７７Ｌｕ、９７Ｒｕ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、５２Ｆｅ、５２ｍＭｎ、５１Ｃｒからなる群から選択される放射性同位（金属）元素で標識化される請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
一つあるいはそれ以上のソマトスタチンレセプターの過剰発現によって特徴付けられる疾病の処置のために前記組成物を組成する請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
前記処置は、腫瘍を持った一つあるいはそれ以上のソマトスタチンレセプターを対象とする請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
前記医薬組成物は、治療上の組成であって、前記ソマトスタチン類似体は、１１４ｍＩｎ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、７７Ａｓ、９０Ｙ、６６Ｇａ、６７Ｃｕ、１６９Ｅｒ、１１７ｍＳｎ、１２１Ｓｎ、１２７Ｔｅ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、１４９Ｔｂ、１６１Ｔｂ、１０９Ｐｄ、１６５Ｄｙ、１４９Ｐｍ、１５１Ｐｍ、１５３Ｓｍ、１５７Ｇｄ、１５９Ｇｄ、１６６Ｈｏ、１７２Ｔｍ、１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、１７７Ｌｕ、１０５Ｒｈ、１１１Ａｇ、１２４Ｉ、１３１Ｉからなる群から選択される放射性同位（金属）元素で標識化される請求項３２または３３に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ソマトスタチン類似体およびそれらを用いた治療と診断について、さらに新規類似体からなる医薬組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ソマトスタチン（ソマトトロフ放出抑制因子）は、成長ホルモンの分泌を抑制する視床下部神経ホルモンとして発見された。ソマトスタチンは、中枢神経系と抹消神経系との間に広く分布したペプチドであり、膵島、消化管、甲状腺、副腎、腎臓に含まれる末梢組織中にも存在している。加えて、ソマトスタチンは多くの癌細胞と同様に炎症細胞と免疫細胞によって生成される。
【０００３】
哺乳類では、２種類の生体活性ペプチド、ソマトスタチン１４とソマトスタチン２８が発見されている。それらは、一般的な前駆体の組織特異的たんぱく質分解の過程で生成される。天然のソマトスタチンペプチドは、半減期が短く、そのような理由からソマトスタチン類似体が合成されてきた。中でも、オクトレオチド（ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ）、ランレオチド（ｌａｎｒｅｏｔｉｄｅ）、バプレオチド（ｖａｐｒｅｏｔｉｄｅ）が集中的に研究され、末端肥大症と神経内分泌腫瘍の治療法として実際の臨床に用いられている。これらのオクタペプチドは、ペプチド（Ｐｈｅ７、Ｔｙｒ７、Ｄ−Ｔｒｐ８、Ｌｙｓ９、Ｔｈｒ１０、Ｖａｌ１０）の生物学的作用に係わる環状ペプチド骨格のアミノ酸残基（または置換基）を保持し、著しく安定性が向上する。
【０００４】
レセプターのオートグラフィー技術と結合の研究によって、ソマトスタチンの生物学的作用は、正常組織と新生物組織中で同定された特異的なプラズマ細胞膜レセプターで媒介される。５つのソマトスタチンレセプター遺伝子は、人間と哺乳類のライブラリーからクローニングされており、ｓｓｔ１をｓｓｔ５レセプターに指定している。ｓｓｔサブタイプは、７つの膜貫通スパニング領域でのＧたんぱく質共役型レセプターの族に属し、高度な配列の同定（３９〜５７％）を示す。配列の違いは細胞外領域と細胞内領域にあり、信号の特異性が原因と考えられる。
【０００５】
全てのソマトスタチンレセプターは、ソマトスタチン１４に対してわずかであるが高い親和性（ｎＭ範囲）をもつソマトスタチン２８とソマトスタチン１４と結合している。しかしながら、レセプターは、ペプチド類似体に対しての親和力に大きな違いを示す。現在までに知られている類似体は、ｓｓｔ１とｓｓｔ４に対して低い親和力を示している。ところが、ｓｓｔ２とｓｓｔ５レセプターとはソマトスタチン１４の親和力に匹敵する高い親和力で結合し、ｓｓｔ３レセプターとは適度な親和力で結合している。
【０００６】
分泌および腸運動に対する作用に加えて、ソマトスタチンは腫瘍細胞と同様に、通常の増殖を抑制する。ソマトスタチンの抗増殖作用は、レセプターサブタイプと標的細胞に応じて、百日咳毒素感度のＧたんぱく質依存性細胞の成長停止もしくはアポトーシスを起こす５つのｓｓｔレセプターへ信号を伝える。
【０００７】
ＣＨＯ細胞で発現される場合、配位子が活性化するｓｓｔ１、ｓｓｔ２Ａ、ｓｓｔ４とｓｓｔ５レセプターは、Ｇ１細胞周期停止および網膜芽種遺伝子生成物（Ｒｂ）のハイポホスフォリレーション（ｈｙｐｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ）の結果として、成長因子もしくは血清の分裂促進信号を妨げる。
【０００８】
しかしながら、別個のシグナル変換経路は、レセプターサブタイプ次第でソマトスタチンを誘発するＧ１細胞周期停止に係わることとなる。ｓｓｔ１レセプターは、チロシンホスファターゼＳＨＰ−２の刺激と、Ｒａｓ／ＭＡＰキナーゼＥＲＫ経路の活性化と、サイクリン依存性キナーゼ阻害物質ｐ２１Ｗａｆｌ／Ｃｉｐ１を通じて細胞成長停止を媒介する。ところが、ｓｓｔ５レセプターは、グアニル酸シクラーゼ、ｃＧＭＰ依存性プロテインキナーゼＧとＭＡＰキナーゼＥＲＫ１／２の抑制を通じて脱リン酸化カスケードに係わる機構によって作用する。
【０００９】
ｓｓｔ２レセプターによって媒介される抗増殖作用は、チロシンホスファターゼＳＨＰ−１と、活性化された成長因子レセプターの脱リン酸化を生じさせる。それ故、成長因子が誘導する分裂促進信号の負の制御へと通じる。
【００１０】
さらに、ソマトスタチンを活性化させるＳＨＰ−１は、Ｇ１細胞周期停止を誘導し、ハイポホスフォリレーションしたＲｂの累積に至るサイクリン依存型キナーゼ阻害物質ｐ２７Ｋｉｐｉを昂進させる。
【００１１】
ソマトスタチンの増殖抑制作用もまた、アポトーシスを起こす。アポトーシスは、ｐ５３とＢａｘの誘導の結果としてｓｓｔ３によって誘発される。突然変異したｐ５３と内因性ｓｓｔ２レセプターの欠損で発現するヒト膵臓癌細胞で、ｓｓｔ２レセプターの発現による欠損の調整するために細胞死の増加を誘発する。これは、ソマトスタチンはｐ５３依存性機構もしくはｐ５３自立性機構によってアポトーシスを誘発することを示している。
【００１２】
ソマトスタチンの増殖抑制作用は内分泌経路を経由して作用を起こすが、ソマトスタチンは自己分泌／傍分泌経路を経由して作用することも証明されている。免疫反応性ソマトスタチンは、内分泌、リンパ細胞、マクロファージ、乳癌細胞そして結腸腫瘍細胞のようなソマトスタチン陽性レセプターの正常細胞、腫瘍細胞タイプ中で発見されている。その上、ソマトスタチンｍＲＮＡは、ソマトスタチンレセプターを発現することで知られている多種多様の神経内分泌の腫瘍で発見されている。ｓｓｔ２レセプターの発現によるヒト膵臓癌細胞でのｓｓｔ２レセプターの欠損の調整によって、ｓｓｔ２レセプターを誘発した内因性ｓｓｔ２レセプター配位子（ソマトスタチン１４とソマトスタチン２８）の分泌と発現のため、外因性配位子が欠如している負のオートクラインループ（ａｕｔｏｃｒｉｎｅ−ｌｏｏｐ）を誘発する。これは癌細胞増殖の抑制と、ヌードマウスの異種移植片後の生体外と生体内とでの細胞腫瘍形成性の復帰という結果をもたらす。
【００１３】
腫瘍の成長に作用を及ぼすソマトスタチンは、とりわけ腫瘍細胞を制御する成長因子と成長促進ホルモンの分泌の抑制から生じるペプチドの間接的な作用をもたらす。例えば、ＧＨ依存型とＧＨ独立型の機構で肝細胞から生成されるインシュリン様増殖因子ＩＧＦ−１は、ＧＨ分泌に作用する結果としてオクトレオチドによって消極的に制御されている。また、ｓｓｔ２、ｓｓｔ５レセプターは、この作用に関与していることを立証している。付け加えて、ソマトスタチンはＩＧＦ遺伝子発現を減少させることができ、血管形成をも抑制する。ソマトスタチンとオクトレオチドに対して高い親和力を持つ腫瘍周囲の血管にあるソマトスタチンレセプターの過剰発現は、大腸癌、小さな細胞の肺癌、乳癌、腎細胞癌、悪性リンパ腫のようなヒトの腫瘍周囲で報告されている。この発現は腫瘍でのレセプター発現に影響を受けていないように見える。それは内皮細胞と同様に平滑筋細胞の静脈でのｓｓｔレセプターの存在が反映されていると思われる。また、モノサイト遊走と内皮細胞の成長の抑制もしくは腫瘍の局部的な低酸素症が原因となって血管収縮になる。ｓｓｔ２、ｓｓｔ３もしくはｓｓｔ５レセプターはこれらの作用に関わっていると思われる。
【００１４】
それぞれのレセプターサブタイプの細胞分布と生物学的な役割は、まだ完全には解明されていないが、全てのソマトスタチンレセプターサブタイプ（パンソマトスタチンと呼ばれている）に結合している類似体を開発することは、大きな可能性を持っていることは明白である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
このような目的で本発明は、ソマトスタチンよりも高い半減期（高い代謝安定性）を持つ５つのソマトスタチンレセプター全てに結合する新しいソマトスタチン類似体を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明は、下記一般式
（化１）
2005508886.tif 000003
ここでＺは存在しなくてもよく、存在するときはＤＯＴＡ、ＤＴＰＡ、ＮＯＴＡを基にしたキレート剤、カルボニル化合物、２−ヒドラジノニコチンアミド（ｈｙｎｉｃ）、Ｎ４キレート剤、デスフェリオキサミン、ＮｘＳｙキレート剤、その他全ての任意の放射性同位体をもつ錯体化合物、ハロゲン化のためのチロシン（Ｔｙｒ）、蛍光塗料もしくはビオチンからなる群から選択され、Ｌは存在しなくてもよく、存在している場合はリンカー分子であり、Ｘ１はより基本的性質を持たせるため、Ｄ／Ｌ−ジアミノ酪酸（Ｄ／Ｌ−Ｄａｂ）もしくは第一級、第二級アミノ基とカップリングさせるためのＤ／Ｌ−グルタミン酸のような、キレート剤へのリンカーと共に炭素原子が３〜４連続して結合している対称もしくは非対称のジアミノ酸であり、Ｘ２は、アスパラギンのような中性アミノ酸もしくはシトルリンもしくはアルギニン擬似体もしくは正電気を帯びた中性、中性でないアミノ酸であり、Ｘ３は、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、３−（２−チエニル）アラニンもしくはα−、β−ナフチルアラニンであり、Ｘ４は、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、１６Ｆで任意にハロゲン化された芳香族アミノ酸であり、Ｘ５は、トレオニン（Ｔｈｒ）もしくはセリン（Ｓｅｒ）であり、Ｘ６は、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、３‐（２‐チエニル）アラニンもしくはα−、β−ナフチルアラニンであるソマトスタチン類似体によって達成される。
【００１７】
Ｘ１はジアミノプロピオン酸もしくはジアミノ酪酸であることが好ましい。
【００１８】
Ｘ２はリシン（Ｌｙｓ）、ホモリシン、（化２）で示されるＩ−Ａｍｐ、オルニチン、（化３）で示されるＬ／Ｄ−Ｐｈｇ（４−アミジノ）、これらの誘導体から選択されることが好ましい。
（化２）
2005508886.tif 000004
（化３）
2005508886.tif 000005
Ｘ２がアルギニン擬似体の場合、（Ｒ／Ｓ）−Ｇｌｙ／Ａｌａ−４−Ｐｉｐ（Ｎ−アミジノ）（化４）、Ｄ／Ｌ−Ｐｈｅ［４−グアニジノ］（化５）とその誘導体（化６）、第４級アンモニウム誘導体（ＮＲ３＋）の群から選択されることが好ましい。
（化４）
2005508886.tif 000006
（化５）
2005508886.tif 000007
（化６）
2005508886.tif 000008
Ｘ４はチロシン（Ｔｙｒ）、ハロゲン化されたチロシン、特にヨウ素化されたチロシン（Ｉ−Ｔｙｒ）、ジメチルチロシン（ｄｉＭｅ−Ｔｙｒ）、α−、β−ナフチルアラニン、ハロゲン化されたフェニルアラニン、特にヨウ素化されたフェニルアラニン（Ｉ−Ｐｈｅ）からなる群から選択されることが好ましい。Ｘ４がハロゲン化される場合、塩素、臭素もしくはヨウ素でハロゲン化されることが好ましい。
【００１９】
リンカーＬが存在する場合、チロシン、リシン、ジアミノ酪酸、ジアミノプロピオン酸、ポリエチレングリコール、脂肪酸、脂肪酸の誘導体、β−アラニン、５−アミノ吉草酸、サルコシン、グルセロン酸（ｇｌｕｃｅｒｏｎｉ−ａｃｉｄ）からなる群から選択されることが好ましい。もう一つの群として、リンカーの機能はＸ１によって呈するものでもよい。対称リンカーの例として、
（化７）
2005508886.tif 000009
もしくは
（化８）
2005508886.tif 000010
もしくは
（化９）
2005508886.tif 000011
もしくはジアミノ酪酸、４，８−ジアミノオクタン酸のようなジアミノ酸、Ｎ，Ｎ−ビス（Ｎ′−３−アミノプロピル）グリシンのような対称な分子が挙げられる。
【００２０】
Ｚの場合では、放射性同位体が錯形成されており、同位体は６７Ｇａ、６８Ｇａ、１０３ｍＲｈ、１９５ｍＰｔ、１１４ｍＩｎ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、７７Ａｓ、９０Ｙ、６６Ｇａ、６７Ｃｕ、１６９Ｅｒ、１１７ｍＳｎ、１２１Ｓｎ、１２７Ｔｅ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１９８Ａｕ、１４９Ｔｂ、１５１Ｔｂ、１０９Ｐｄ、１６５Ｄｙ、１４９Ｐｍ、１５１Ｐｍ、１５３Ｓｍ、１５７Ｇｄ、１５９Ｇｄ、１６６Ｈｏ、１７２Ｔｍ、１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、１７７Ｌｕ、１０５Ｒｈ、１１１Ａｇ、２１３Ｂｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、２１１Ａｔからなる群から選択される。
【００２１】
本発明の好適な実施例として、（化１）に示したようなソマトスタチン類似体のＸ２はアルギニンで、Ｘ３はフェニルアラニンで、Ｘ４がフェニルアラニンもしくはトレオニンで、Ｘ５はトレオニンで、Ｘ６はフェニルアラニンで、Ｘ１がジアミノ酪酸であるときである。
【００２２】
本発明はさらに、一つまたはそれ以上の上述した置換基が結合している類似体についてにも関する。そのような類似体では、上述した置換基が一つも無い群は一般式（化１）に定義したようになる。
【００２３】
上述した全ての置換基が結合している場合、類似体は一般式（化１０）のような構造をとる。
（化１０）
2005508886.tif 000012
Ｚは存在しても存在しなくてもよく、存在する場合には上述した定義に従う。本発明では、ＺがＤＯＴＡ、ＤＯＴＡＧＡもしくはチロシンの場合好適な実施例となる。
【００２４】
Ｘ１がＤ／Ｌ−Ｇｌｕである場合、ＬはＤ／Ｌ−Ｌｙｓのようなアミン末端分子であり、Ｚはｐ−ＮＨ２−Ｂｚ−ＤＯＴＡ（２−ｐ−アミノベンジル−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ酢酸）、ＤＯＴＡ−ｐ−ＮＨ２−アニリド（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ酢酸モノ（ｐ−アミノアニリド））、ＭｅＯ−ＮＨ２−Ｐｈ−ＤＯＴＡ（５−アミノ−２−メトキシフェニル−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ酢酸）のようなキレート剤である。
【００２５】
Ｚは放射性同位体と錯形成しているか、蛍光染料もしくはビオチンと結合している。診断に使用するため、類似体は９９ｍＴｃ、２０３Ｐｂ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、１１１Ｉｎ、１１３ｍＩｎ、１２３Ｉ、１７７Ｌｕ、９７Ｒｕ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、５２Ｆｅ、５２ｍＭｎ、５１Ｃｒ、１２４Ｉ、１８Ｆからなる群から選択される放射性金属同位体で標識化される。
【００２６】
好適な蛍光塗料はシアニン染料（ｃｙａｎｉｎ−ｄｙｅｗｓ）である。そのような染料は、類似体が生体外と生体内での診断で利用される場合に利用される。ビオチンは組織学の標識として有用である。
【００２７】
本発明のソマトスタチン類似体は、一つ以上のソマトスタチンレセプターの過剰発現によって特徴付けられる疾病の処置の医薬として使用され、特にその処置は腫瘍を持った一つあるいはそれ以上のソマトスタチンレセプターを対象とする。そのような腫瘍の例として、神経内分泌の腫瘍、星状細胞腫（アストロチトーム）、肺癌、リンパ腫、乳癌腫（ｍａｍａ‐ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、膵臓腫瘍、甲状腺癌、結腸・大腸癌、ＳＣＬＣ、腎細胞癌が挙げられる。
【００２８】
治療のために本発明のソマトスタチン類似体は、１１４ｍＩｎ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、７７Ａｓ、９０Ｙ、６６Ｇａ、６７Ｃｕ、１６９Ｅｒ、１１７ｍＳｎ、１２１Ｓｎ、１２７Ｔｅ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１９５ｍＰｔ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、１４９Ｔｂ、１６１Ｔｂ、１０９Ｐｄ、１６５Ｄｙ、１４９Ｐｍ、１５１Ｐｍ、１５３Ｓｍ、１５７Ｇｄ、１５９Ｇｄ、１６６Ｈｏ、１７２Ｔｍ、１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、１７７Ｌｕ、１０５Ｒｈ、１０３ｍＲｈ、１１１Ａｇ、１２４Ｉ、１３１Ｉ、２１１Ａｔからなる群から選択される放射性同位体で標識化される。
【００２９】
本発明は処置もしくは診断のために医薬組成物を調合するためにソマトスタチン類似体を使用することにも関する。
【００３０】
医薬組成物が診断上の組成である場合、ソマトスタチン類似体は９９ｍＴｃ、２０３Ｐｂ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、１１１Ｉｎ、１１３ｍＩｎ、１２３Ｉ、１７７Ｌｕ、９７Ｒｕ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、５２Ｆｅ、５２ｍＭｎ、５１Ｃｒからなる群から選択される放射性金属同位体で標識化される。医薬組成物が治療上の組成である場合、ソマトスタチン類似体は１１４ｍＩｎ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、７７Ａｓ、９０Ｙ、６６Ｇａ、６７Ｃｕ、１６９Ｅｒ、１１７ｍＳｎ、１２１Ｓｎ、１２７Ｔｅ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、１４９Ｔｂ、１６１Ｔｂ、１０９Ｐｄ、１６５Ｄｙ、１６９Ｐｍ、１５１Ｐｍ、１５３Ｓｍ、１５７Ｇｄ、１５９Ｇｄ、１６６Ｈｏ、１７２Ｔｍ、１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、１７７Ｌｕ、１０５Ｒｈ、１０３ｍＲｈ、１９５ｍＰｔ、１１１Ａｇ、１２４Ｉ、１３１Ｉ、２１１Ａｔからなる群から選択される放射性同位体で標識化される。
【００３１】
さらに、本発明では好適な賦形剤と一つ以上のソマトスタチン類似体とからなる医薬組成物にも関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３２】
本発明についてさらに解明するため実施例を説明する。なお、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例１】
【００３３】
本発明のキレート剤とソマトスタチン類似体の合成の一般的方法について説明する。
【００３４】
直鎖ペプチドの中間体の合成は、すでに確立された固相法で行われ、本発明では一過性アミノ保護基としてＦｍｏｃと、Ａｒｇを保護するためのＰｂｆ、Ｔｒｐ・Ｌｙｓを保護するためのＢＯＣ、Ｔｈｒを保護するためのｔＢｕのようなＴＦＡの不安定側鎖保護基とで行われる。この方法の説明は、インフォメーションプレス・オックスフォード・イングランド、１９８９年出版、Ｅ．アサートン、Ｒ．Ｃ．シェパード著「フルオレニルメトキシカルボニルポリアミド固相合成−実践的なアプローチ」を参照すべきである。固相ペプチド合成は半自動ペプチド合成器で実施した。
【００３５】
ジアミノ酪酸はγ−アミノ保護基としてのＦｍｏｃ、α−アミノ保護基としてのＺと共に用いられる。カップリング反応では、ｉｎ−ｓｉｔｕ（原位置）で、ＤＩＣとヒドロキシベンゾトリアゾールエステルで生成されるが、その他のカップリング剤、例えばイソウレア誘導体（ＨＡＴＵ等）を使用してもよい。最初のアミノ酸（Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ）は、樹脂上で超酸不安定リンカー（トリアルコキシ−ベンズヒドリルまたはクロロ−トリチル）でエステル化させた。合成後、２０％酢酸ジクロロメタン溶液を使用することにより、ペプチドを樹脂から穏やかに切断した。トルエンとの同時蒸着は側鎖の保護基を２度そのままにしておき、その後高希釈したＤＭＦでジシクロヘキシルカルボジイミド／ヒドロキシベンゾトリアゾールを１０当量使用して、カルボキサアミドの生成を経由して環化した。
【００３６】
クルードの生成物は酢酸エチルと５％シュウ酸水溶液とで３回抽出し、有機層は乾燥させて濃縮した。Ｚの保護基はメタノール中、Ｐｄ／Ｃを触媒として触媒的水素化分解で選択的に取り除く。この方法はインドール系に重大な影響を与えることはない。生成物をろ過し、エルエントを水とメタノールにしてセプパク（ＳｅｐＰａｋ）カートリッジＣ１８（ドイツ、デュレン、マシュレ−ナゲル）で精製した。結果として生じる遊離アミノ酸基はカルボキシル基を機能的にするキレート剤誘導体（適切なスペーサーを含むこともある）に対して付随する点として役立つ。プロキレート剤（ｐｒｏｃｈｅｌａｔｏｒ）へのカップリングの後、ペプチド複合体をトリフルオロ酢酸／フェノール／チオアニソール／水８５：５：５：５の溶液で２〜５時間かけて脱保護した。最後の生成物はイソプロピルエーテル／石油エーテル１：１中で沈殿させ、Ｃ１８逆相液体クロマトグラフィー（ドイツ、デュレン、メトロームエルシーＣａＤｉ２２−１４、カラム：マシュレ−ナーゲル）で精製した。純度は９８％以上であった。
【実施例２】
【００３７】
γ−９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−α−ベンジル−オキシカルボニル−Ｄ−ジアミノ酪酸（Ｚ−Ｄａｂ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨ）の合成について説明する。
【００３８】
α−ベンジルオキシカルボニル−Ｄ−ジアミノ酪酸（Ｚ−Ｄａｂ−ＯＨ）は市販されているもの（スイス連邦、ブベンドルフ、バケム）を利用する。この出発原料をアセトン／水１：１に溶かし、炭酸ナトリウムをｐＨが９〜１０となるように加え、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ）で処理する。この反応混合物を室温で１８時間攪拌し、５℃に冷却して酢酸エチルを加え、６Ｎ塩酸を加えて酸性にした。有機層を水で４回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させて濃縮した。生成物を酢酸エチル／石油エーテルで再結晶した。
【実施例３】
【００３９】
キレート剤カップリングについて説明する。
【００４０】
３当量のプロキレート剤（例えば、ＤＯＴＡＧＡ（ｔＢｕ）４：（１−（１−カルボキシ−３−カルボターシャリーブトキシプロピル）−４，７，１０−（カルボターシャリーブトキシメチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン）、ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）３：（１，４，７−トリス（カルボターシャリーブトキシメチル）−１０−カルボキシメチル−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン）、ＤＴＰＡ（ｔＢｕ）４：（１，１，７，７−テトラキス（カルボターシャリーブトキシメチル）−４−カルボキシ−１，４，７−トリアザペンタン）をＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）中のＨＡＴＵ（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）と共に３０分間温置する。ジアミノ酸（上記参照）を脱保護されたＺは、室温で４時間この溶液で処理される。
【００４１】
濃縮後、混合物を酢酸エチルに溶解させ、５％炭酸水素ナトリウム水溶液と酢酸エチルとで３回抽出した。有機層を乾燥させるために蒸発させ、クルード生成物を脱保護した（上記参照）。
【００４２】
１１１Ｉｎと９０Ｙによる代表的な標識化の手順を以下に説明する。パンソマトスタチンは本発明のソマトスタチン類似体の一つである。
【００４３】
超純度の水１０ｍｌに酢酸ナトリウム３２８ｍｇとゲンチジン酸３７０ｍｇとを溶解させて緩衝溶液を調整し、水酸化ナトリウム１ＭでｐＨを５に調節した。
【００４４】
ペプチド（ＤＯＴＡ−パンソマトスタチン）１０μｇ、緩衝溶液１００μｌとイットリウム−９０クロライド（２．９ＧＢｑ／ｍｌ、０．０５ＭＨＣｌ）１２０μｌを９５℃で４０分間温置し、その後室温に冷却した。標識収率と放射化学的純度はＲＰ−ＨＰＬＣ（マシュレ−ナゲル、ニュークレオシリ−Ｃ１８カラム）と、３０分間の５％アセトニトリル／０．１％トリフルオロ酢酸から６０％アセトニトリル／０．１％トリフルオロ酢酸のリニアーグラディエント（ｌｉｎｅａｒ−ｇｒａｄｉｅｎｔ）で決定した。標識収率は９８％以上であった。
【００４５】
ペプチド（ＤＯＴＡ−パンソマトスタチン）１０μｇ、緩衝溶液１００μｌとインジウム１１１クロライド（３７０ＭＢｑ／ｍｌ、０．０５ＭＨＣｌ）１００μｌを９５℃で４０分間温置し、その後室温に冷却した。標識収率と放射化学純度はＲＰ−ＨＰＬＣ（マシュレ−ナゲル、ニュークレオシリ−Ｃ１８カラム）と、３０分間の５％アセトニトリル／０．１％トリフルオロ酢酸から６０％アセトニトリル／０．１％トリフルオロ酢酸のリニアーグラディエント（ｌｉｎｅａｒ−ｇｒａｄｉｅｎｔ）で決定した。標識収率は９８％以上であった。１００００倍と過剰なＤＴＰＡ中に一週間放置しても安定性は８７％以上あった。また、新たに生成した血清中に一週間放置しても安定性は７６％であり、これらの測定はＨＰＬＣで行った。血清たんぱく質はメタノールを入れると沈殿し、遠心分離機で分離し、メタノール層を上述したのと同様のリニアーグラディエントを用いてＨＰＬＣに注入した。
【００４６】
ペプチド（ＤＯＴＡＧＡ−パンソマトスタチン）１０μｇ、緩衝溶液１００μｌとイットリウム９０クロライド（１．８ＧＢｑ／ｍｌ、０．０５ＭＨＣｌ）２０μｌを９５℃で４０分間加温し、その後室温に冷却した。標識収率と放射化学純度はＲＰ−ＨＰＬＣ（マシュレ−ナゲル、ニュークレオシリ−Ｃ１８カラム）と、３０分間の５％アセトニトリル／０．１％トリフルオロ酢酸から６０％アセトニトリル／０．１％トリフルオロ酢酸のリニアーグラディエント（ｌｉｎｅａｒ−ｇｒａｄｉｅｎｔ）で決定した。標識収率は９８％以上であった。７２時間後の放射化学純度は９７％以上であった。７２時間後の安定性は８７％以上であり、１００００倍と過剰なＤＴＰＡ中に一週間放置しても７４％であった。４５分間９５℃に加熱しても放射性ペプチドが減じることはなかった。
【実施例４】
【００４７】
ソマトスタチンレセプターｓｓｔ１〜ｓｓｔ５の様々な類似体のアフィニティープロフィール（ａｆｆｉｎｉｔｙ−ｐｒｏｆｉｌｅ）の分析について説明する。
【００４８】
ヒトｓｓｔ１とｓｓｔ５を安定に発現させる細胞培養ＣＨＯ−Ｋ１細胞は、レイジン・シング博士（ペンシルベニア州フィラデルフィア、ペンシルベニア大学）の好意で提供して頂いた。また、ヒトｓｓｔ２、ｓｓｔ３、ｓｓｔ４を安定に発現させるＣＣＬ３９細胞は、Ｄ．ホイヤー博士（スイス、バセル、ノバルティスファーマ株式会社）の好意で提供して頂いた。
【００４９】
ＣＨＯ−Ｋ１細胞はハムＦ−１２培地で培養され、ＣＣＬ３９細胞はダルベッコ変法イーグル培地／ハムＦ−１２培地（１：１）と、子牛血清１０％、ペニシリン１００Ｕ／ｍｌとストレプトマイシン１００μｇ／ｍｌを補充した混合物は、３７℃で５％の二酸化炭素を含んだ湿った空気中で培養され、ジェネティシン（Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ：Ｇ４１８−サルファイト；アメリカ、ジブコ）は、発現した細胞であるｓｓｔ２（ｓｓｔ５のための２８５μｇ／ｍｌ）からｓｓｔ４には４００μｇ／ｍｌでの終末濃度で淘汰圧に保持する必要がある個所で使用される。これについては、Ｓ．レンス−ドミアノ・Ｔ．ライシン著、ソマトスタチンレセプターの生物化学と機能的な性質、ジャーナルオブニューロケミストリー（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．）５８巻１９６７−１９９６頁１９９４年；Ａ．オキャロル等著、クローンヒトソマトスタチンレセプターＳＳＴＲ５の性質、モレキュラーファーマコル（Ｍｏｌｅｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．）４６巻２９１−２９８頁１９９４年；Ｓ．シーラー等著、［１２５Ｉ］Ｔｙｒ１０−コーティスタチン１４による５つ全てのソマトスタチンレセプターの標識化、ナウニン−シュミーデベルグズアーチ．ファーマコル．３５７巻４８３−４８９頁１９９８年に前述されている。
【００５０】
培養試薬は全て、ニューヨーク州グランドアイランド、ジブコＢＲＬ、ライフテクノロジーで入手した。
【実施例５】
【００５１】
ｉｎ−ｓｉｔｕハイブリッド形成法による組織化学について説明する。
【００５２】
細胞原料の妥当性を制御するために、ヒトｓｓｔ・ｍＲＮＡｓのためのｉｎ−ｓｉｔｕハイブリッド形成法は、異なったｓｓｔレセプターサブタイプを発現しているＣＨＯ−Ｋ１とＣＣＬ３９細胞で行った。
【００５３】
細胞は、パック塩水（Ｐｕｃｋ’ｓ−Ｓａｌｉｎｅ）Ａで洗浄し、トリプシン（０．５ｍｇ／ｍｌ）／ＥＤＴＡ（０．２ｍｇ／ｍｌ）で短時間培養することによって培養フラスコから分離し、遠心分離で集められ、約６×１０４ｃｅｌｌｓ／μｌの終末細胞密度でリン酸緩衝生理食塩水で再懸濁した。細胞懸濁液のアリコート２５μｌを顕微鏡のスライドにスポットし、乾燥させ、−２０℃で保存した。
【００５４】
その後それらを４％ホルムアルデヒドで凝固させ、リン酸緩衝生理食塩水で洗浄、乾燥させ、乾燥状態のもと４℃で保存した。細胞の油分は、ｉｎ−ｓｉｔｕハイブリッド形成法によってｓｓｔ１、ｓｓｔ２、ｓｓｔ３、ｓｓｔ４、ｓｓｔ５のｍＲＮＡ検出のために使用される。本来、その後のプロトコールは、ＪＣ．ロウビ等著、ｉｎ−ｓｉｔｕハイブリッド形成法を用いて原発腫瘍でのＳＳＴＲ１、ＳＳＴＲ２およびＳＳＴＲ３のｍＲＮＡｓのソマトスタチンレセプターの位置と発現、キャンサーレス（Ｃａｎｃｅｒ−Ｒｅｓ）５４巻３４５５〜３４５９頁１９９４年、で前述している。
【００５５】
オリゴヌクレオチドは上述したロウビの著書にｓｓｔ１、ｓｓｔ２、ｓｓｔ３を補足的にプローブしており、ｓｓｔ４、ｓｓｔ５（ＶＳ．トス等著、脳と脳下垂体の５つのソマトスタチンレセプターｍＲＮＡｓの発現、ナウニン−シュミーデベルグズアーチ．ファーマコル．３５４巻４１１−４１９頁１９９６年）ｍＲＮＡｓは合成され、２０％ポリアクリルアミド（スイス連邦、バルガッハ、マイクロシンセ、８Ｍ尿素シークエンシングゲル）で精製した。それらは［α３２Ｐ］ｄＡＴＰ（３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ以下、マサチューセッツ州、ボストン、ニューライフサイエンスプロダクツ）と比活性度が３３．３〜７４ＧＢｑ／ｍｍｏｌの末端デオキシヌクレオチド転移酵素（ドイツ、マンハイム、ボエリンゲル）とを用いて３’末端を標識化した。対照実験は、前述した文献（ロウビ、１９９４年）のように、得られたハイブリッド形成信号の特異性を決定するための現在の研究で用いられたプローブで行われた。
【００５６】
これらのコントロールしたｉｎ−ｓｉｔｕハイブリッド形成法の研究において、研究用に使用された５つの細胞株はｓｓｔｍＲＮＡを発現させることを確認した。
【実施例６】
【００５７】
レセプターオートラジオグラフィーについて説明する。
【００５８】
細胞をよく冷した０．０５Ｍのトリス塩酸（ｐＨ７．４）で２回洗浄してからこすり、遠心分離で集めて、同様の緩衝溶液中で回転子／固定子スラッシュシステム（スイス連邦、リッタウ、ポリトロン、キネマチカ有限会社製）で均一化した。１２０Ｇで５分間４℃で遠心分離をした後、上澄みを集め、再び４８０００Ｇで３０分間４℃で遠心分離をした。その結果として得たペレットをよく冷したトリス緩衝溶液で再懸濁し、マイクロフュージ（ｍｉｃｒｏｆｕｇｅ）管へ移し、２００００Ｇで１５分間４℃で遠心分離した。上澄みを回収後、薄膜ペレットを−８０℃で保存した。
【００５９】
レセプターオートラジオグラフィーは薄膜ペレットの部位に厚さ２０μｍの低温維持装置（ニュージャーシー州ロックレイグ、レイツ１７２０製）を装着して行い、顕微鏡のスライドの上に載せ、−２０℃で保存した。それぞれの試験をした化合物について、０．１〜１０００ｎＭにわたり標識化されていないペプチドの濃度を増加させる方法を使用して普遍的なソマトスタチン放射性配位子１２５Ｉ−［Ｌｅｕ８、Ｄ−Ｔｒｐ２２、Ｔｙｒ２５］−ソマトスタチン２８で完全な変位実験を行った。標識化されていない普遍的なソマトスタチン２８も同様に濃度を増加させる方法を平行して行った。
【００６０】
ＩＣ５０値は前述したようにＪＣ．ロウベ等著、カルチノイドと島細胞癌腫の外科および経皮針生検のサンプル中のソマトスタチンレセプターの検出、キャンサーレス（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ）５０巻５９６９〜５９７７頁１９９０年で述べられた画像処理システムのコンピューターを使用してデータの数量化をした後計算した。既知の量の同位体を含んでいる組織標準（微小規模のオートラジオグラフィー［１２５Ｉ］）は、組織等価配位子濃度にクロスキャリブレートを数量化のために用いられる（詳細はＪＣ．ロウベ著、腫瘍の血管作動性腸管ペプチドレセプターの生体内での同定−腫瘍の画像も含めて、ニュークリアーメディカル誌（Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．）３６巻１８４６〜１８５３頁１９９５年に記載）。同様なはめこみ式ペレットを連続実験のために使用することができて以来、細胞の均一化を比較するための細胞ペレットを区切ったレセプターオートラジオグラフィーを使用した現在の方法は、有利性と細胞の経済性と柔軟性に加えてより相互分析の信頼性と再現性が向上している。僅かな欠点として、ＩＣ５０値が均一化結合測定法よりも若干高い。
【００６１】
この結果を表１に示す。化合物Ａは以下に示す構造をとる。Ｚは表１に示したように変化する。
（化１１）
2005508886.tif 000013
【００６２】
【表１】
2005508886.tif 000014
ここで、表１中の１）はソマトスタチン２８のことであり、２）は（化１２）に示した構造をとり、３）は（化１３）に示した構造をとる。ａｂはアミノ酪酸を示す。
（化１２）
2005508886.tif 000015
（化１３）
2005508886.tif 000016
本発明では、ＩＣ５０値は１〜１０ｎＭの範囲内であることが好ましい。表１から、本発明の化合物はレセプターサブタイプの大部分もしくは全てが特許請求の範囲内のＩＣ５０値を示すことがわかる。
【国際調査報告】
2005508886.tif 000020
2005508886.tif 000021