(57)【要約】  アレルギー性鼻炎、アレルギー性皮膚炎、薬物アレルギーまたは食物アレルギー、血管浮腫、じんま疹、乳幼児突然死症候群、気管支肺アスペルギルス症、多発性硬化症、または肥満細胞症を処置する医薬組成物の製造における、式Ｉ【化１】2005508846.tif 000011（式中、記号および置換基は本明細書に示されたものと同じ意味を有する）の、Ｎ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体の遊離形態または医薬上許容される塩形態での使用。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アレルギー性鼻炎、アレルギー性皮膚炎、薬物アレルギーまたは食物アレルギー、血管浮腫、じんま疹、乳幼児突然死症候群、気管支肺アスペルギルス症、肥満細胞症または多発性硬化症を処置する薬剤の製造のための、式Ｉ
【化１】
2005508846.tif 000010
［式中、
Ｒ１は４−ピラジニル；１−メチル−１Ｈ−ピロリル；アミノ−もしくはアミノ−低級アルキル置換フェニル(なおここで、各場合においてアミノ基は遊離型であるか、アルキル化またはアシル化されている)；５員環炭素原子において結合している１Ｈ−インドリルもしくは１Ｈ−イミダゾリル；または環炭素原子において結合し、かつ、窒素原子において酸素で置換されていてもされていなくてもよい非置換もしくは低級アルキル−置換ピリジルであり；
Ｒ２およびＲ３は各々他とは独立に水素または低級アルキルであり；
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８基のうち１つまたは２つは各々ニトロ、フルオロ置換低級アルコキシまたは式ＩＩ
−Ｎ(Ｒ９)−Ｃ(＝Ｘ)−(Ｙ)ｎ−Ｒ１０          (ＩＩ)
｛式中、
Ｒ９は水素または低級アルキルであり、
Ｘはオキソ、チオ、イミノ、Ｎ−低級アルキル−イミノ、ヒドロキシイミノまたはＯ−低級アルキル−ヒドロキシイミノであり、
Ｙは酸素またはＮＨ基であり、
ｎは０または１であり、
Ｒ１０は少なくとも５個の炭素原子を有する脂肪族基、または芳香族、芳香−脂肪族、シクロ脂肪族、シクロ脂肪−脂肪族、複素環式もしくは複素環式脂肪族基である}
の基であり、かつ、
残りのＲ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８基は各々他とは独立に水素；非置換、または遊離もしくはアルキル化アミノ、ピペラジニル、ピペリジニル、ピロリジニルまたはモルホリニルにより置換されている低級アルキル；あるいは低級アルカノイル；トリフルオロメチル；遊離、エーテル化もしくはエステル化ヒドロキシ；遊離、アルキル化もしくはアシル化アミノ、または遊離もしくはエステル化カルボキシである］
のＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体、または少なくとも１つの塩形成基を有するかかる化合物の塩の使用。
【請求項２】
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８基のうち１つまたは２つが各々ニトロまたは式ＩＩ
｛式中、
Ｒ９は水素または低級アルキルであり、
Ｘはオキソ、チオ、イミノ、Ｎ−低級アルキル−イミノ、ヒドロキシイミノまたはＯ−低級アルキル−ヒドロキシイミノであり、
Ｙは酸素またはＮＨ基であり、
ｎは０または１であり、かつ、
Ｒ１０は少なくとも５個の炭素原子を有する脂肪族基、または芳香族、芳香−脂肪族、シクロ脂肪族、シクロ脂肪−脂肪族、複素環式もしくは複素環式脂肪族基であり、かつ、
残りのＲ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８基は各々他とは独立に水素；非置換、または遊離もしくはアルキル化アミノ、ピペラジニル、ピペリジニル、ピロリジニルまたはモルホリニルにより置換されている低級アルキル；あるいは低級アルカノイル；トリフルオロメチル；遊離、エーテル化もしくはエステル化ヒドロキシ；遊離、アルキル化もしくはアシル化アミノ、または遊離もしくはエステル化カルボキシであり、
かつ、残りの置換基は請求項１で定義した通りである｝
の基である、請求項１に記載の式Ｉの化合物、または少なくとも１つの塩形成基を有するかかる化合物の医薬上許容される塩の使用。
【請求項３】
Ｒ１が炭素原子において結合しているピリジルであり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６およびＲ８が各々水素であり、
Ｒ４が低級アルキルであり、
Ｒ７が式ＩＩ
｛式中、
Ｒ９は水素であり、
Ｘはオキソであり、
ｎは０であり、かつ、
Ｒ１０は４−メチル−ピペラジニル−メチルである｝
の基である、請求項１に記載の式Ｉの化合物、またはその医薬上許容される塩の使用。
【請求項４】
化合物がＮ−{５−[４−(４−メチル−ピペラジノ−メチル)−ベンゾイルアミド]−２−メチルフェニル}−４−(３−ピリジル)−２−ピリミジン−アミンである請求項１に記載の化合物、またはその医薬上許容される塩の使用。
【請求項５】
化合物がその一メシル酸塩の形態で用いられる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項６】
イヌ肥満細胞腫瘍を処置する薬剤の製造のための、請求項１〜５のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項７】
アレルギー性鼻炎、アレルギー性皮膚炎、薬物アレルギーまたは食物アレルギー、血管浮腫、じんま疹、乳幼児突然死症候群、気管支肺アスペルギルス症、肥満細胞症または多発性硬化症を有する温血動物の処置方法であって、請求項１〜５のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物(この式Ｉの化合物は医薬上許容される塩の形態で提供してもよい)を、上記疾病の少なくとも１つに対して治療上有効な量で動物に投与することを含む、方法。
【請求項８】
イヌ肥満細胞腫瘍を患うイヌを処置する方法であって、かかる処置を必要とするイヌに、イヌ肥満細胞腫瘍に対して有効な量の請求項１〜５のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物を投与することを含む、方法。
【請求項９】
一日量２０〜２００ｍｇの４−(４−メチルピペラジン−１−イルメチル)−Ｎ−[４−メチル−３−(４−ピリジン−３−イル)ピリミジン−２−イルアミノ]フェニル]−ベンズアミドまたはその医薬上許容される塩を成犬に投与する、請求項８または６に記載の使用または方法。
【請求項１０】
一日量３０〜４００ｍｇの４−(４−メチルピペラジン−１−イルメチル)−Ｎ−[４−メチル−３−(４−ピリジン−３−イル)ピリミジン−２−イルアミノ]フェニル]−ベンズアミドまたはその医薬上許容される塩をヒトに投与する、請求項１または７に記載の使用または方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、アレルギー性鼻炎、アレルギー性皮膚炎、薬物アレルギーまたは食物アレルギー、血管浮腫、じんま疹、乳幼児突然死症候群、気管支肺アスペルギルス症、多発性硬化症または肥満細胞症を処置する医薬組成物の製造における、記号および置換基が下記に示される意味を有する式ＩのＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体の遊離形態または医薬上許容される塩形態での新規な使用、ならびに治療上有効量の式Ｉの化合物を上記疾病の１つを患う温血動物に投与する、温血動物、好ましくはヒトの処置方法に関する。
【０００２】
本発明は、アレルギー性鼻炎、アレルギー性皮膚炎、薬物アレルギーまたは食物アレルギー、血管浮腫、じんま疹、乳幼児突然死症候群、気管支肺アスペルギルス症、肥満細胞症または多発性硬化症を処置する薬剤の製造のための、式Ｉ
【化１】
2005508846.tif 000002
［式中、
Ｒ１は４−ピラジニル；１−メチル−１Ｈ−ピロリル；アミノ−もしくはアミノ−低級アルキル置換フェニル(ここで、各場合においてアミノ基は遊離型であるか、アルキル化またはアシル化されている)；５員環炭素原子において結合している１Ｈ−インドリルもしくは１Ｈ−イミダゾリル；または環炭素原子において結合し、かつ、窒素原子において酸素で置換されていてもされていなくてもよい非置換もしくは低級アルキル置換ピリジルであり；
Ｒ２およびＲ３は各々他とは独立に水素または低級アルキルであり；
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８基のうち１つまたは２つは各々ニトロ、フルオロ置換低級アルコキシまたは式ＩＩ
−Ｎ(Ｒ９)−Ｃ(＝Ｘ)−(Ｙ)ｎ−Ｒ１０            (ＩＩ)
｛式中、
Ｒ９は水素または低級アルキルであり、
Ｘはオキソ、チオ、イミノ、Ｎ−低級アルキル−イミノ、ヒドロキシイミノまたはＯ−低級アルキル−ヒドロキシイミノであり、
Ｙは酸素またはＮＨ基であり、
ｎは０または１であり、
Ｒ１０は少なくとも５個の炭素原子を有する脂肪族基、または芳香族、芳香−脂肪族、シクロ脂肪族、シクロ脂肪−脂肪族、複素環式もしくは複素環式脂肪族基である}
の基であり、かつ、
残りのＲ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８基は各々他とは独立に水素；非置換、または遊離もしくはアルキル化アミノ、ピペラジニル、ピペリジニル、ピロリジニルまたはモルホリニルにより置換されている低級アルキル；あるいは低級アルカノイル；トリフルオロメチル；遊離、エーテル化もしくはエステル化ヒドロキシ；遊離、アルキル化もしくはアシル化アミノ、または遊離もしくはエステル化カルボキシである］
のＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体、または少なくとも１つの塩形成基を有するかかる化合物の塩の使用に関する。
【０００３】
１−メチル−１Ｈ−ピロリルは好ましくは１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イルまたは１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イルである。
【０００４】
アミノ−またはアミノ−低級アルキル−置換フェニルＲ１(なおここで、各場合においてアミノ基は遊離型であるか、アルキル化またはアシル化されている)はいずれかの所望の位置(オルト、メタ、パラ)で置換されたフェニルであり、アルキル化アミノ基は好ましくはモノ−またはジ−低級アルキルアミノ、例えばジメチルアミノであり、アミノ−低級アルキルの低級アルキル部分は好ましくは直鎖Ｃ１−Ｃ３アルキル、例えば特にメチルまたはエチルである。
【０００５】
５員環炭素原子において結合している１Ｈ−インドリルは１Ｈ−インドール−２−イルまたは１Ｈ−インドール−３−イルである。
【０００６】
環炭素原子において結合している非置換または低級アルキル置換ピリジルは低級アルキル置換された、または好ましくは置換されていない２−、４−または好ましくは３−ピリジル、例えば３−ピリジル、２−メチル−３−ピリジルまたは４−メチル−３−ピリジルである。窒素原子において酸素で置換されているピリジルはピリジンＮ−オキシド、すなわちＮ−オキシド−ピリジル由来の基である。
【０００７】
フルオロ置換低級アルコキシは少なくとも１つ、好ましくは数個のフルオロ置換基、特にトリフルオロメトキシまたは１,１,２,２−テトラフルオロ−エトキシを有する低級アルコキシである。
【０００８】
Ｘがオキソ、チオ、イミノ、Ｎ−低級アルキル−イミノ、ヒドロキシイミノまたはＯ−低級アルキル−ヒドロキシイミノであるとき、Ｃ＝Ｘ基は上記の順序でそれぞれＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、Ｃ＝Ｎ−Ｈ、Ｃ＝Ｎ−低級アルキル、Ｃ＝Ｎ−ＯＨまたはＣ＝Ｎ−Ｏ−低級アルキルである。Ｘは好ましくはオキソである。
【０００９】
ｎは好ましくは０であり、すなわちＹ基は存在しない。
【００１０】
存在する場合、Ｙは好ましくはＮＨ基である。
【００１１】
本明細書の範囲内で「低級」とは、７個まで(７個を含む)、好ましくは４個まで(４個を含む)炭素原子を有する基を表す。
【００１２】
低級アルキルＲ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ９は好ましくはメチルまたはエチルである。
【００１３】
少なくとも５個の炭素原子を有する脂肪族基Ｒ１０は好ましくは２２以下の炭素原子、一般に１０以下の炭素原子を有し、このような置換または好ましくは非置換脂肪族炭化水素基、いわゆるＣ５−Ｃ７アルキル、例えばｎ−ペンチルなど、このような置換または好ましくは非置換アルキニル、アルケニルまたは好ましくはアルキル基である。芳香族基Ｒ１０は２０個までの炭素原子を有し、置換されていなくとも置換されていてもよく(例えば各場合において置換されていなくとも、またはナフチル、特に２−ナフチルなど、または好ましくはフェニルで置換されていてもよい)、これらの置換基は好ましくはシアノ、非置換またはヒドロキシ−、アミノ−もしくは４−メチル−ピペラジニル−置換低級アルキル、特にメチル；トリフルオロメチル；遊離、エーテル化もしくはエステル化ヒドロキシ；遊離、アルキル化もしくはアシル化アミノ；および遊離もしくはエステル化カルボキシから選択される。芳香−脂肪族基Ｒ１０では、芳香族部分は上記定義の通りであり、脂肪族部分は好ましくは低級アルキル、特に置換されていないか、または好ましくは例えばベンジル置換されているＣ１−Ｃ２アルキルである。  
【００１４】
シクロ脂肪族基Ｒ１０は特に３０個まで、さらに特には２０個まで、最も特には１０個までの炭素原子を有し、単環式または多環式であり、かつ、置換されているか、または好ましくは置換されておらず、例えばこのようなシクロアルキル基、特に５または６員シクロアルキル基、好ましくはシクロヘキシルである。シクロ脂肪−脂肪族基Ｒ１０では、シクロ脂肪族部分は上記定義の通りであり、脂肪族部分は好ましくは低級アルキル、特に置換されている、または好ましくは置換されていないＣ１−Ｃ２アルキルである。複素環式基Ｒ１０は特に２０個までの炭素原子を含み、好ましくは５または６員と、好ましくは窒素、酸素および硫黄から選択される１〜３個のヘテロ原子とを有する、飽和または不飽和単環式基、特に例えばチエニル、または２−、３−もしくは４−ピリジル、あるいは例えば１個または２個のベンゼン基が上記単環式基と環形成(縮合)した二環または三環式基である。複素環式−脂肪族基Ｒ１０では、複素環部分は上記定義の通りであり、脂肪族基は好ましくは低級アルキル、特に置換されている、または好ましくは置換されていないＣ１−Ｃ２アルキルである。
【００１５】
エーテル化ヒドロキシは好ましくは低級アルコキシである。エステル化ヒドロキシは好ましくは低級アルカン酸などの有機カルボン酸、またはハロゲン化水素酸などの無機酸によりエステル化されたヒドロキシ、例えば低級アルカノイルオキシまたは特にヨウ素、臭素または特にフッ素もしくは塩素などのハロゲンである。
【００１６】
アルキル化アミノは例えば、メチルアミノなどの低級アルキルアミノ、またはジメチルアミノなどのジ−低級アルキル−アミノである。アシル化アミノは例えば、低級アルカノイルアミノまたはベンゾイルアミノである。
【００１７】
エステル化カルボキシは例えば、メトキシカルボニルなどの低級アルコキシカルボニルである。
【００１８】
置換フェニル基はフッ素など５個までの置換基を有してもよいが、特に比較的大きな置換基の場合は一般に１〜３個のみの置換基で置換される。特に挙げられる置換フェニルの例としては、４−クロロ−フェニル、ペンタフルオロ−フェニル、２−カルボキシ−フェニル、２−メトキシ−フェニル、４−フルオロ−フェニル、４−シアノ−フェニルおよび４−メチル−フェニルがある。
【００１９】
式Ｉの化合物における塩形成基は塩基性または酸性の特性を有する基または原子団である。少なくとも１つの塩基性基または少なくとも１つの塩基性原子団、例えば遊離アミノ基、ピラジニル基またはピリジル基を有する化合物は例えば塩酸、硫酸もしくはリン酸などの無機酸と、あるいは有機カルボン酸またはスルホン酸、例えば脂肪族モノもしくはジカルボン酸(トリフルオロ酢酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、ヒドロキシマレイン酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸またはシュウ酸など)；またはアルギニンもしくはリジンなどのアミノ酸；安息香酸、２−フェノキシ−安息香酸、２−アセトキシ−安息香酸、サリチル酸、４−アミノサリチル酸などの芳香族カルボン酸；マンデル酸または桂皮酸などの芳香−脂肪族カルボン酸；ニコチン酸またはイソニコチン酸などのヘテロ芳香族カルボン酸；メタン−、エタン−または２−ヒドロキシエタンスルホン酸などの芳香族スルホン酸；あるいはベンゼン−、p−トルエン−またはナフタレン−２−スルホン酸などの脂肪族スルホン酸との酸付加塩が形成できる。数個の塩基性基が存在する場合には一酸付加塩または多酸付加塩が形成し得る。
【００２０】
Ｒ１０基に酸性基、例えば遊離のカルボン酸基を含む式Ｉの化合物はアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩、例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウムもしくはカルシウム塩、あるいはアンモニア、または第三級モノアミン、例えばトリエチルアミンもしくはトリ−(２−ヒドロキシエチル)−アミンなどの好適な有機アミン、または複素環塩基、例えばＮ−エチル−ピペリジンもしくはＮ,Ｎ'−ジメチル−ピペラジンとのアンモニウム塩といった金属またはアンモニウム塩を形成し得る。
【００２１】
酸性および塩基性の両基を有する式Ｉの化合物は内部塩を形成することができる。
【００２２】
単離または精製目的、ならびに中間体としてさらに用いられる化合物の場合には、医薬上許容されるものではない塩を使用することもできる。しかしながら治療目的では医薬上許容される無毒の塩のみを用いるため、これらの塩が好ましい。
【００２３】
式Ｉの化合物は温血動物、好ましくはヒトの処置または処置用薬剤の製造に使用できる。
【００２４】
本明細書において「アレルギー性鼻炎」とは、鼻粘膜のアレルギー反応を意味する。このようなアレルギー反応は例えば周年(例えば春季結膜炎)、あるいは季節的に(例えば花粉症性)起こる。
【００２５】
本明細書において「アレルギー性皮膚炎」とは、特にアトピー性皮膚炎、アレルギー性接触性皮膚炎および湿疹状皮膚炎を意味するが、例えば脂漏性皮膚炎、扁平苔癬、じんま疹およびざ瘡(acne)も含まれる。本明細書で定義されるアトピー性皮膚炎は、皮膚の痒み閾値が低い遺伝的傾向を持つ者に見られる慢性炎症性皮膚疾患である。主として、ひどい痒みが特徴で掻きむしったりこすったりしてしまい、それが次々に局部的湿疹病巣を作る。本明細書で定義されるアレルギー性接触性皮膚炎は、過去にそれに曝された結果としてのアレルゲンに対して後天的過敏性を有する人の皮膚に炎症反応を起こす種々の物質に対するアレルギー感作による皮膚炎の一形態である。
【００２６】
本明細書において「薬物アレルギーまたは食物アレルギー」とは、薬物または例えばイチゴ、牛乳または卵などの摂取抗原によって起こるアレルギー反応に関するものである。
【００２７】
本明細書において「気管支肺アスペルギルス症」とは、肺のアスペルギルス感染に関するものである。
【００２８】
本明細書において「肥満細胞症」とは、全身性肥満細胞症、例えば肥満細胞腫、特にイヌ肥満細胞腫瘍に関するものである。
【００２９】
式Ｉの化合物は下記で「本発明の化合物」と総称される。
【００３０】
肥満細胞は本明細書に記載のアレルギー性疾患において主要エフェクター細胞として重要な役割を果たす。抗原特異的ＩｇＥによって媒介される肥満細胞の脱顆粒は次に化学メディエーターと複数のサイトカインの放出、そしてロイコトリエン合成をもたらす。また、肥満細胞は多発性硬化症の病因にも関与する。
【００３１】
肥満細胞腫瘍はヒトおよび動物の双方で発生する。イヌでは肥満細胞腫瘍は肥満細胞腫と呼ばれ、この疾病は多く、イヌの腫瘍の７〜２１％を占める。通常一時的で無痛性のヒト肥満細胞症と、挙動が予測できず、多くの場合進行性、転移性であるイヌ肥満細胞腫とは区別しなければならない。例えば、孤立性のヒト脂肪細胞腫は実質的に転移することはないが、これに対し、Hottendorf & Nielsen (１９６９)が９３８匹のイヌの腫瘍の４６の公表報告を再検証した後に見積もったところ、イヌ肥満細胞腫の５０％は悪性として挙動する。
【００３２】
ペット集団における癌は突発性疾患である。自分の動物のライフクォリティーを高めたいと願うペットの飼い主は、国中の個人紹介の動物病院や獣医学教育研究病院で腫瘍学の専門獣医の専門的介護・処置を探し求める場合が多い。癌罹患動物の治療法はヒトと同様であり、外科術、化学療法、放射線療法および生物学的療法が挙げられる。米国には４千２百万匹のイヌ、そしておよそ２千万匹のネコがいると推計されている。ざっと見積もった癌罹患率から、年間イヌでほぼ４百万匹、ネコでも同数が新たに癌と診断されている。
【００３３】
イヌの皮膚肥満細胞腫瘍は一般的な問題となっている。ほとんどの肥満細胞腫瘍は良性であって簡単な切除で治癒するが、再発または離れた部位に転移した場合の治療の選択肢は限られている。再発病巣の処置の選択肢としては外部からの光線照射療法が挙げられる。遠位転移または散在疾患では、化学療法プロトコールを含むロムスチン(登録商標)およびビンブラスチンの使用がいくつかの効果を示している。肥満細胞腫瘍の転移部位としては皮膚、局所リンパ節、脾臓、肝臓および骨髄が挙げられる。
【００３４】
いくつかの肥満細胞株でＫＩＴの構成的活性化をもたらすいくつかの突然変異が検出されたという知見により、肥満細胞の病因におけるＫＩＴレセプターの関与が示唆されている。例えば、ホスホトランスフェラーゼドメインのＡｓｐ８１６からＶａｌへの置換とレセプターの自己活性化を引き起こすヒトｃ−ＫＩＴの点突然変異が長期ヒト肥満細胞白血病株(ＨＭＣ−１)および２種の齧歯類肥満細胞株の対応するコドンで見られる。さらに、この活性化突然変異はヒト肥満細胞腫のいくつかの例でｉｎ ｓｉｔｕにて確認されている。他の２つの活性化突然変異、すなわちヒトＨＭＣ−１肥満細胞株におけるＶａｌ５６０Ｇｌｙ置換およびＦＭＡ３と呼ばれる齧歯類肥満細胞株における７つのアミノ酸欠失(Ｔｈｒ５７３−Ｈｉｓ５７９)はＫＩＴの細胞内膜近傍領域に見出されている。
【００３５】
本発明の化合物または各場合におけるその医薬上許容される塩が本明細書に記載される疾病の少なくとも１つの効果的な予防、または好ましくは処置をもたらすことは、確立された試験モデルおよび特に本明細書に記載の試験モデルにより示すことができる。当業者ならば、以上および以下に示される治療適応および有益な効果を証明する適切な試験モデルを十分選択することができる。その薬理活性は例えば基本的に以下に記載されるような臨床研究または試験法で証明できる。
パートＡ
【実施例１】
【００３６】
本実施例はKinoshita T, Sawai N, et alのBlood 1999, 94, 496-508に記載の培養系を用いてＣＤ３４＋臍帯血細胞から確立した培養ヒト肥満細胞増殖のＳＣＦ依存的発達に対する本発明の化合物のｉｎ ｖｉｔｒｏ作用を証明するものである。フローサイトメトリー分析によれば単離細胞の９０％を超えるものがＣＤ３４陽性であった。
【００３７】
試薬および抗体
本発明の化合物を１０−２Ｍの濃度でＰＢＳに溶解し、−８０℃で保存する。全てｔｒａｎｓのレチノイン酸(Sigma)を１０−２Ｍの濃度でエタノールに溶解し、遮光バイアルにて−８０℃で保存する。トリプターゼの精製ｍＡｂ(ＭＡＢ１２２２)はChemicon International Inc., CAより購入できる。フローサイトメトリー分析用として、ＣＤ３４(８Ｇ１２, ＦＩＴＣ)およびＣＤ１１ｂ(Ｌｅｕ１５, ＰＥ)のｍＡｂはBecton Dickinson Immunocytometry Systems (Mountain View, CA)から購入し、ＣＤ４１のｍＡｂ(ＳＺ２２, ＦＩＴＣ)はImmunotech S.A. (Marseilles, France)から購入する。グリコホリンＡのｍＡｂ(ＧＰＡ, ＪＣ１５９, ＦＩＴＣ)はDako(Glostrup, Denmark)から入手できる。ウエスタンブロッティングおよび免疫沈降用として、ｃ−ｋｉｔ(ＮＵ−ｃ−ｋｉｔ)およびホスホチロシン(４Ｇ１０)のｍＡｂはそれぞれNichireiおよびUpstate Biotechnology, Inc (Lake Placid, NY)から購入できる。
【００３８】
懸濁培養
２４ウェル培養プレート(#3047；Becton Dickinson)にて血清涸渇液体培養を行う。２万個のＣＤ３４＋細胞を、１％ＢＳＡ、３００μｇ／ｍＬ完全鉄飽和ヒトトランスフェリン(純度およそ９８％, Sigma)、１６μｇ／ｍＬダイズレシチン(Sigma)、９.６μｇ／ｍＬコレステロール(Nakalai Chemicals Ltd., Japan)および２０ｎｇ／ｍＬのＳＣＦ、１０ｎｇ／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦ、２Ｕ／ｍＬのＥＰＯ、１０ｎｇ／ｍＬのＴＰＯ、種々の濃度の本発明の化合物の単独または組合せを添加した２ｍＬのα−培地を含む各ウェルで培養する。ＳＣＦに依存する肥満細胞の発達に対する本発明の化合物の作用を調べるため、ＣＤ３４＋臍帯血細胞由来のＳＣＦ２０ｎｇ／ｍｌで増殖させた１０週目の培養細胞を標的細胞として用いる。５〜１０×１０４の１０週目の培養細胞を、種々の濃度の本発明の化合物を含む、または含まないＳＣＦ２０ｎｇ／ｍＬを含む２４ウェル培養プレートで２週間インキュベートする。これらのプレートを３７℃、５％ ＣＯ２、５％ Ｏ２および９０％ Ｎ２の混合物でフラッシした加湿雰囲気下でインキュベートする。４週目まで培養を継続する場合は培地の半分を２週間ごとに因子を含む新鮮培地に交換する。生細胞数を血球算定器を用い、トリパンブルー排除によって求める。
【００３９】
クローン細胞培養物
肥満細胞コロニーアッセイは３５ｍＭ Ｌｕｘ懸濁培養ディッシュ(#171099; Nunc, IL)で行う。培養物は１０ｎｇ／ｍＬのＳＣＦ、α−培地、０.９％メチルセルロース(Shinetsu Chemical, Japan)、１％ ＢＳＡ、３００μｇ／ｍＬの完全鉄飽和ヒトトランスフェリン、１６μｇ／ｍＬのダイズレシチン、９.６μｇ／ｍＬのコレステロールおよび１０−６Ｍの本発明の化合物を含む、または含まない１００ｎｇ／ｍＬのＳＣＦで増殖させた１０週目の培養細胞(４,０００細胞/ｍＬ)からなる。ディッシュを３７℃、５％ ＣＯ２、５％ Ｏ２および９０％ Ｎ２の混合物でフラッシした加湿雰囲気下でインキュベートする。４週間後、３０個以上の細胞からなる塊を肥満細胞コロニーとして数え、１０〜２９細胞からなるものを肥満細胞クラスターとして数える。３０個の個々のコロニーおよびクラスターを採取し、アルカリ性ホスファターゼ抗アルカリホスファターゼ(ＡＰＡＡＰ)法を用いて抗トリプターゼｍＡｂまたはマウスＩｇＧ１で染色する。ほぼ全ての構成細胞がトリプターゼ陽性である。
【００４０】
細胞化学的染色と免疫学的染色
サイトスピンＩＩを用いて培養細胞をスライドグラス上に広げる。ペルオキシダーゼ(ＰＯＸ)との細胞化学的反応は従来の方法によって行う。トリプターゼに対するｍＡｂとの反応は、F. Ma, K. Koike, et alがBr. J. Haematol. 1998, 100, 427-35で記載したように、ＡＰＡＡＰ法(Dako APAAP Kit System, Dako Corp., CA)を用いて検出する。
【００４１】
免疫沈降およびウェスタンブロッティング
免疫沈降およびウェスタンブロッティングはT. Kamijo, K. Koike, et al.がLeuk. Res. 1997, 21, 1097-106で記載したようにして行う。
【００４２】
フローサイトメトリー分析
培養細胞の表面マーカーの分析のため、１〜２×１０５細胞をプラスチック管に採取し、Kinoshita T, Sawai N, et alがBlood 1999, 94, 496-508で記載したように、適宜希釈したＦＩＴＣ−またはＰＥ−ｍＡｂとともにインキュベートする。細胞を２回洗浄した後、表面マーカーをＦＡＣＳｃａｎフローサイトメーターで分析する。生細胞を前方光散乱特性および側方散乱特性のゲートで制御する。陽性細胞の割合をＦＩＴＣ−またはＰＥコンジュゲートマウスイソ型適合Ｉｇで染色した細胞と比較することにより求める。
【００４３】
細胞アポトーシスの検出
細胞アポトーシスの分析は、N. Sawai, K. Koike, et alがStem Cells. 1999, 17, 45-53に記載した手順に従いヨウ化プロピジウム(PI, Sigma)を用いるフローサイトメトリー分析によって行う。アポトーシス、壊死を受けている細胞またはすでに死んでいる細胞を少なくするためには、パーコール密度勾配遠心分離を利用できる。１０週目の培養細胞をα−培地中２７％パーコール(Sigma)およびＰＢＳ中５４％パーコールの上に重層する。遠心分離後、２種の異なる濃度のパーコール溶液の境界から細胞を回収し、ＰＢＳで洗浄し、室温で４０分間、１ｍＬのＯｒｔｈｏ ＰｅｒｍｅａＦｉｘ(商標)で処理した。次に細胞をＤＮアーゼフリーＲＮアーゼ(Sigma)とともに３７℃にて１５分間インキュベートし、ＰＩで１５分間染色する。２×１０４細胞のＤＮＡ含量をフローサイトメーターでモニタリングする。ＳＣＦ、またはＳＣＦおよび本発明の化合物に曝した１０週目の培養細胞(２×１０６)を１００μＬの低張溶解バッファー[１０ｍＭトリス(ｐＨ７.５)、１０ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ８.０、０.５％トリトンＸ−１００]中、氷上で１０分間溶解する。１４,０００ｇで１０分間遠心分離した後、上清を新しい試験管に移し、０.２ｍｇ／ｍＬ ＲＮアーゼＡ(Sigma)および０.２ｍｇ／ｍＬプロテイナーゼＫ(Sigma)で処理する。ＤＮＡを−２０℃にて一晩、１２０μＬイソプロパノールおよび２０μＬ ５Ｍ ＮａＣｌで沈降させる。１４,０００ｇで遠心分離した後、ペレットを乾燥させ、２０μＬトリス−ＥＤＴＡに溶解した後、２％アガロースにてゲル電気泳動によりサンプルを分析し、臭化エチジウム染色する。
【００４４】
ヒスタミン、トリプターゼおよびサイトカインレベルのアッセイ
培養細胞の０.５％ Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ−４０処理により得られた細胞溶解物中および上清中のヒスタミン濃度を、Kinoshita T, Sawai N, et alがBlood １９９９, ９４, ４９６−５０８で記載したようにヒスタミンラジオイムノアッセイ(RIA)キット(Immunotech)によって測定する。
【００４５】
統計分析
実験は全て３回行わなければならない。２つの独立した群の間の差の有意性を判定するには片側ｔ検定が使用でき、あるいはデータが正規分布しない場合には、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ−Ｕ検定が使用できる。
【００４６】
Ｎ−{５−[４−(４−メチル−ピペラジノ−メチル)−ベンゾイルアミド]−２−メチル−フェニル}−４−(３−ピリジル)−２−ピリミジン−アミン一メシル酸(ＳＴＩ５７１Ｂ)に関して得られる結果
１０−６Ｍ以上のＳＴＩ５７１ＢをＳＣＦとともに培養物に添加すると次世代はほぼ完全に阻害される。
ＳＣＦ＋ＳＴＩ５７１Ｂでは、２日目では生細胞数は変化せず、その後経時的に減少する。１４日目、細胞総数は無視できるレベルに達する。１０週目の培養肥満細胞で得られた結果に一致して、１０−６ＭのＳＴＩ５７１ＢはＳＣＦの刺激下でのＣＤ３４＋細胞による細胞産生を著しく抑制する。さらに、ＳＴＩ５７１ＢはＳＣＦの刺激下で増殖させた培養肥満細胞のプログラムされた細胞死を誘導する。二倍体に満たない核のパーセンテージは培養期間とともに増加する。この知見はゲル電気泳動にてＳＣＦ＋ＳＴＩ５７１Ｂに曝された細胞におけるＤＮＡラダーによって確認することができる。ＳＴＩ５７１Ｂは肥満細胞の発達初期ならびに後期出現肥満細胞の増殖においてその阻害作用を発揮する。
【００４７】
得られた結果は本発明の化合物、例えばＳＴＩ５７１Ｂ によるＳＣＦ依存性のヒト肥満細胞増殖の阻害を証明するものである。よって、本発明の化合物が本明細書に記載の疾病の処置に使用できることが示される。
パートＢ： 肥満細胞症
【実施例２】
【００４８】
方法
試薬：これらの実験に用いる塩Ｉは、Novartis Pharma; Basel, Switzerlandからのものである。各実験の前に、リン酸緩衝生理食塩水(PBS; Gibco-BRL)１ｍｌに化合物を溶解することで阻害剤の新鮮な１０ｍＭ母液を作製した。
【００４９】
抗体：ポリクローナルウサギ抗ＫＩＴ抗体(c-kit Ab-1)は１：５００の希釈率で用いた(c-kit Ab-1; Oncogene, Cambridge, MA)。抗ホスホチロシン抗体(PY20)は１：１０００の希釈率で用いた(PY20 Transduction Laboratories；Lexington, KY)。ペルオキシダーゼ結合ヤギ抗マウス抗体は１：５０００の希釈率で用い、ヤギ抗ウサギ抗体は１：１０,０００の希釈率で用いた(Pierce; Rockford, IL)。
【００５０】
細胞株：ＢＲおよびＣ２イヌ肥満細胞腫細胞株はDr. George Caughey (University of California at San Francisco, San Francisco, CA)から入手した。両細胞株は２％ ウシ胎児血清、１ｍＭ Ｌ−グルタミン、１２.５ｍＭ ＨＥＰＥＳ (ｐＨ７.５)、０.２５ｍｇ／ｍｌヒスチジン、１％ペニシリン−ストレプトマイシンおよび１％フンギゾンを添加したＤＭＥＭ中で維持した。このＢＲおよびＣ２細胞はイヌ肥満細胞腫瘍由来のものであり、免疫欠陥マウスで初期継代した後、長期培養して独自に確立されたものである(DeVinney R et al., Am J Respir Cell Mol Biol 1990; 3(5): 413-420; Lazarus SC et al., Am J Physiol 1986; 251(6 Pt 1): C935-C944)。ＢＲ細胞株は点突然変異(Ｔ１７５２Ｃ)を有し、その結果、５７５番のアミノ酸(膜近傍ドメイン)でロイシンからプロリンに置換されている。Ｃ２細胞株はＫＩＴ膜近傍領域の内部タンデム重複(ＩＴＤ)を有する。このＩＴＤが翻訳されるとエクソン１１の３'末端でアミノ酸残基の再重複が起こる(London CA et al., Exp Hematol 1999; 27(4): 689-697; Ma Yet al., J Invest Dermatol 1999; 112(2): 165-170)。
【００５１】
増殖アッセイ：９６ウェルプレートに通常培地および種々の濃度の塩Ｉ中、４０,０００細胞/ウェルの濃度で細胞を加えた。４８〜７２時間目にＸＴＴに基づくアッセイ(Roche Molecular Biochemicals; Indianapolis, IN)を用いて増殖を測定した(Heinrich MC et al.,  Blood 2000; 96(3): 925-932)。
【００５２】
タンパク質溶解物：ＢＲおよびＣ２細胞をＰＢＳで２回洗浄した後、３７℃で約１８時間Ｏｐｔｉｍｅｍ(Gibco-BRL)中で休止させた。次に細胞を種々の濃度の塩Ｉの存在下で９０分間インキュベートした。このインキュベーション後、細胞をペレット化し、１００〜２５０μlのタンパク質溶解バッファー(５０ｍＭトリス、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ ＮＰ−４０、０.２５％デオキシコレート、さらに阻害剤アプロチニン、ロイペプチン、ペプスタチン、ＰＭＳＦ、およびオルトバナジン酸ナトリウム[Sigma]を添加)を用いて溶解した。ウエスタン免疫ブロット解析はこれまでに記載されている通り行った(Hoatlin MEet al.,  Blood 1998; 91(4): 1418-1425; Heinrich MC et al., Blood 2000; 96(3): 925-932)。
【実施例３】
【００５３】
化合物Ｉはイヌ肥満細胞腫瘍に関連する構成的活性化ＫＩＴキナーゼを阻害する
化合物Ｉが変異型イヌＫＩＴのキナーゼ活性を阻害する効力を調べるため、発明者らは２種の異なる構成的活性化ＫＩＴイソ型を発現する２種の細胞株(ＢＲおよびＣ２)を用いた。これらの細胞株におけるＫＩＴ突然変異はいずれも膜近傍ドメインに位置し、ヒト胃腸間質腫瘍(ＧＩＳＴ)で見られる突然変異と同種である(Lux ML et al., Am J Pathol 2000; 156(3): 791-795; Rubin BP et al., Cancer Res 2001; 61(22): 8118-8121)。ＢＲまたはＣ２細胞から調製した溶解液を抗Ｐ−Ｔｙｒ抗体でプロービングし、ＫＩＴレセプターの活性化を自己リン酸化を測定することで評価した。これまでに報告されているように、ＳＬＦの不在下でこれらの細胞におけるＫＩＴ自己リン酸化が見られた(Ma Yet al., J Invest Dermatol 1999; 112(2): 165-170; Ma Yet al., Journal of Investigative Dermatology 2000; 114(2): 392-394)。化合物ＩによるＫＩＴ自己リン酸化の阻害は１０および１.０μＭ量を用いた場合に見られる完全阻害に依存的であった。０.１μＭ量を用いた場合でほぼ完全な阻害が見られた。０.００１〜０.０１μＭ量の化合物Ｉを用いた場合にはｃ−ｋｉｔのリン酸化は限られたものであった。このように化合物Ｉはこれらの細胞における変異型ｃ−ｋｉｔレセプターの自己リン酸化を阻害するだけでなく、野生型ｃ−ｋｉｔレセプターの阻害剤というよりこの変異型レセプターのより強力な阻害剤である(ＩＣ５０ １００〜２００ｎＭ)(Heinrich MC et al., Blood 2000; 96(3): 925-932)。化合物ＩがＫＩＴタンパク質発現を調節したかどうかを判定するため、膜をはがして抗ｃ−ｋｉｔ抗体で再びプロービングした。化合物Ｉで処理した細胞でのｃ−ｋｉｔタンパク質の発現に変化はなかった。従って、化合物ＩはＫＩＴタンパク質の発現をダウンレギュレートすることではなくＫＩＴキナーゼ活性を阻害することにより変異型イヌＫＩＴポリペプチドの自己リン酸化を低下させる。
【実施例４】
【００５４】
化合物Ｉはイヌ肥満細胞腫瘍細胞株の増殖を阻害する
変異型ｃ−ｋｉｔレセプターのキナーゼ活性を阻害する生物作用を調べるため、発明者らはＢＲまたはＣ２細胞を種々の濃度の化合物Ｉの存在下で４８〜７２時間培養した。阻害剤濃度０.１〜１０μＭで増殖は、培地のみで処理した細胞に比べ９０〜９５％低下した。化合物Ｉ ０.００１〜０.０１μＭ量では部分的な増殖阻害が見られた。０.０１〜１０μＭ量の阻害剤で見られた増殖低下は統計学的に有意であった(ｐ＜０.００１)。従って、化合物Ｉはレセプターの自己リン酸化の阻害に関して見られたものと同様の用量応答範囲でＢＲおよびＣ２細胞の増殖を阻害する。阻害剤で処理した細胞の形態観察を行ったところアポトーシスと一致する変化が明らかになった(データは示されていない)。
表１：ＢＲ細胞
【表１】
2005508846.tif 000003
【００５５】
表２：Ｃ２細胞
【表２】
2005508846.tif 000004
【００５６】
表１および２：ＢＲまたはＣ２細胞を４０,０００細胞/ウェルの濃度で９６ウェルプレートにプレーティングし、通常の増殖培地および種々の濃度の化合物Ｉ中で培養した。７２時間後、ＸＴＴに基づくアッセイ系を用いて細胞増殖を測定した。各化合物Ｉ濃度につき３回アッセイした。結果は最大増殖(細胞単独で化合物１を含まない)のパーセンテージ±１標準偏差として表した。６回の独立した実験のうちの１回で得られた典型的な結果を示す。
ペット用およびヒト用組成物
【実施例５】
【００５７】
４−[(４−メチル−１−ピペラジン−１−イルメチル)−Ｎ−[４−メチル−３−[[４−(３−ピリジニル)−２−ピリミジニル]アミノ]フェニル]ベンズアミドメタンスルホネートβ結晶型を含むカプセル
化合物Ｉ(遊離塩基)１０ｍｇ相当の１１.９５mgの標題化合物(塩Ｉ)を有効物質として含有するカプセルを以下の組成で調製する。
組成：
【表３】
2005508846.tif 000005
カプセルはこれらの成分を混合し、その混合物をゼラチン硬カプセル、サイズ１に充填することで作製した。
【実施例６】
【００５８】
４−[(４−メチル−１−ピペラジン−１−イルメチル)−Ｎ−[４−メチル−３−[[４−(３−ピリジニル)−２−ピリミジニル]アミノ]フェニル]ベンズアミドメタンスルホネートβ結晶型を含むカプセル
１０.０ｍｇの標題化合物(塩Ｉ)を有効物質として含有するカプセルを以下の組成で調製する。
組成：
【表４】
2005508846.tif 000006
カプセルはこれらの成分を混合し、その混合物をゼラチン硬カプセル、サイズ１に充填することで作製した。
【実施例７】
【００５９】
４−[(４−メチル−１−ピペラジン−１−イルメチル)−Ｎ−[４−メチル−３−[[４−(３−ピリジニル)−２−ピリミジニル]アミノ]フェニル]ベンズアミドメタンスルホネートβ結晶型を含むカプセル
化合物Ｉ(遊離塩基)１００ｍｇ相当の１１９.５ｍｇの標題化合物(化合物Ｉのメシル酸塩)を有効物質として含有するカプセルを以下の組成で調製する。
組成：
【表５】
2005508846.tif 000007
カプセルはこれらの成分を混合し、その混合物をゼラチン硬カプセル、サイズ１に充填することで作製した。
【実施例８】
【００６０】
測定可能な皮膚の肥満細胞腫瘍を有するペット犬の予測症例の例
被験体は測定可能で組織学的に確認される肥満細胞腫瘍を有するペット犬である。生検が可能で測定可能な病巣を有するものに限る。
適格基準は次の通りである。
・組織学的に確認される測定可能な皮膚肥満細胞腫瘍
・療法前後に２ｍｍキーズパンチで一連の生検が必要な場合
・組織学的等級(II−中間型またはIII−分化不十分)
・一般全身状態０またはI(改変型カルノフスキー−表３)
・インフォームド・オーナー・コンセント
【００６１】
(a)排除基準は次の通りである。
・細胞傷害性化学療法を伴う場合
・３０日の試験期間内にプレドニソンおよび非ステロイド系抗炎症薬が始められない場合。プレドニソンおよび非ステロイド系抗炎症薬が３０日を過ぎて投与された場合には継続してもよい。
・血清胆汁酸試験(肝機能)が異常な場合
表３：一般全身状態(改変型カルノフスキー)
【表６】
2005508846.tif 000008
【００６２】
全てのケースの前処理評価には身体検査、完全血球総数、軟膜、血清生化学、検尿、血清胆汁酸(絶食中および食事後)、局部リンパ節サイズの記録、腹部レントゲン写真、および腹部超音波が含まれる。処置計画は２５ｍｇ／ｋｇ ＰＯ ＱＤ×６０日の塩Ｉとする。
【００６３】
疾病の進行が見られなければ全てのケースにおいて処置を６０日続ける。部分応答または完全応答が見られる場合、さらに６０日の治療を進めることが考えられる。上手く治療が全うできた場合は反復試験に入るに適格なものとなる。
表４：処置および臨床評価プラン
【表７】
2005508846.tif 000009
１ 第一段階は身体検査、ＣＢＣ、軟膜、血清生化学、肝機能試験(血清胆汁酸)、検尿、腹部レントゲン写真、および腹部超音波からなる。再評価は身体検査および腫瘍荷重の測定のみか、あるいは臨床段階の繰り返しからなり得る。
２ 腫瘍荷重は０、７、１４、２８日目、以降は１４日毎に測定する。処置応答は測定可能な皮膚病巣およびその他の病巣で段階識別して判定する(ＣＲ、ＰＲ、ＳＤ、ＰＤ−下記に定義)。
３ 最初の５つの試験開始例からの血漿採取は１回目の塩Ｉ投与後０、０.５、１、２、５、８、１２、１６、２４時間目に行う。
４ 全てのケースから０日目と２８日目に所定の測定可能な病巣から切開生検を採取する。部分応答(ＰＲ)時および目標とする完全応答(ＣＲ)後にさらなる生検を採取する。
【００６４】
化合物Ｉの効力は臨床終点を用い、測定可能な皮膚肥満細胞腫瘍で評価する。生物学的終点は皮膚腫瘍から採取した一連の生検および処置経過を通じて利用できる血液サンプルから引き出せる。
【００６５】
臨床終点としては測定可能な腫瘍の応答率、測定可能な腫瘍に対する目標応答、および測定可能な腫瘍の進行時間が挙げられる。全ての副作用を記録する。
【００６６】
下記に定義されるような「目標腫瘍応答」は化合物Ｉでの処置下で見られ、処置計画の効力を示す。
【００６７】
特に化合物Ｉ処理に対する完全応答および部分応答が見られ得る。また、処置を受けた動物の多くが安定疾病を示し、少数が進行性の疾病を示すことが見られる場合がある。また、非処置動物に比べて少ない処置動物が再発を示すことが見られる場合もある。化合物Ｉでの処置下の動物では進行時間、緩解期間および生存は高まり得る。
【００６８】
「完全応答(ＣＲ)」とは、癌の全臨床証拠および癌関連のいずれの徴候もなくなることと定義される。
【００６９】
「部分応答(ＰＲ)」とは、いずれの病巣も大きくならず、あるいはいずれの新しい病巣も出現せず、典型的な病巣の測定値の和が５０％以上低下することと定義される。
【００７０】
「安定疾病(ＳＤ)」とは、全く応答しないか、あるいは部分応答またはいずれの新しい病巣も出現せず、もしくは臨床徴候の悪化のない進行性疾病に関して定義されたものよりも低い応答と定義される。
【００７１】
「進行性疾病(ＰＤ)」とは、いずれかの測定可能な病巣の大きさが少なくとも５０％明らかに増大すること、または新しい病巣が出現することと定義される。
【００７２】
「再発(Ｒ)」とは、完全応答を示していたイヌにおける新しい病巣の出現、または古い病巣の再出現として定義され、部分応答のみを示していたイヌでは、再発は最大応答時に得られた測定値と比べて、典型的な病巣の測定値の和が少なくとも５０％増加することと定義される。
【００７３】
「進行時間(ＴＴＰ)」は本プロトコールの０日目から記録する。ＴＴＰは治療開始(０日目)から再発(Ｒ)までの日数として定義される。
【００７４】
「緩解期間」とは、目標応答(ＰＲまたはＣＲ)から再発までの日数として定義される。
【００７５】
「生存」とは、化合物Ｉ処理開始から死に至るまでの日数として定義される。死因を記録するが、これには疾病の進行、毒性その他が含まれる。
【００７６】
得られた結果は本発明の化合物、例えばＳＴＩ５７１Ｂによる肥満細胞腫瘍の阻害を示す。
【００７７】
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８基の１つまたは２つが各々ニトロまたは式ＩＩ｛式中、Ｒ９は水素または低級アルキルであり、Ｘはオキソ、チオ、イミノ、Ｎ−低級アルキル−イミノ、ヒドロキシイミノまたはＯ−低級アルキル−ヒドロキシイミノであり、Ｙは酸素またはＮＨ基であり、ｎは０または１であり、かつ、Ｒ１０は少なくとも５個の炭素原子を有する脂肪族基、または芳香族、芳香−脂肪族、シクロ脂肪族、シクロ脂肪−脂肪族、複素環式もしくは複素環式脂肪族基である｝の基であり、
残りのＲ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８基が各々他とは独立に水素；非置換、または遊離もしくはアルキル化アミノ、ピペラジニル、ピペリジニル、ピロリジニルまたはモルホリニルにより置換されている低級アルキル；あるいは低級アルカノイル；トリフルオロメチル；遊離、エーテル化もしくはエステル化ヒドロキシ；遊離、アルキル化もしくはアシル化アミノ、または遊離もしくはエステル化カルボキシであり、
残りの置換基が上記定義の通りである
本発明の化合物が好ましい。
【００７８】
Ｒ１が、各々炭素原子において結合しているピリジルまたはＮ−オキシド−ピリジルであり、
Ｒ２およびＲ３が各々水素であり、
Ｒ４が水素または低級アルキルであり、
Ｒ５が水素、低級アルキルまたはトリフルオロメチルであり、
Ｒ６が水素であり、
Ｒ７がニトロ、フルオロ−置換低級アルコキシまたは式ＩＩ｛式中、Ｒ９は水素であり、Ｘはオキソであり、ｎは０であり、かつ、Ｒ１０は炭素原子において結合しているピリジル、置換されていなくとも、あるいはハロゲン、シアノ、低級アルコキシ、カルボキシ、低級アルキルまたは４−メチル−ピペラジニル−メチルによって置換されていてもよいフェニル、またはＣ５−Ｃ７アルキル、チエニル、２−ナフチルまたはシクロヘキシルである｝の基であり、かつ、
Ｒ８が水素である
本発明の化合物が特に好ましい。
【００７９】
Ｒ４およびＲ８基の少なくとも一方が低級アルキルであり、残りの置換基が上記定義の通りである、本発明の化合物が特に好ましい。
【００８０】
Ｒ１が炭素原子において結合しているピリジルであり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６およびＲ８基が各々水素であり、
Ｒ４が低級アルキルであり、
Ｒ７が式ＩＩ｛式中、Ｒ９は水素であり、Ｘはオキソであり、ｎは０であり、かつ、Ｒ１０は４−メチル−ピペラジニル−メチルである｝の基である
本発明の化合物がとりわけ好ましい。
【００８１】
ＣＧＰ ５７１４８Ｂ {Ｎ−{５−[４−(４−メチル−ピペラジノ−メチル)−ベンゾイルアミド]−２−メチルフェニル}−４−(３−ピリジル)−２−ピリミジン−アミン一メシル酸塩}である式Ｉの本発明の化合物がとりわけ特に好ましい。
【００８２】
本発明の化合物は、その一メシル酸塩の形態で用いるのが極めて好ましい。
【００８３】
本発明のある好ましい実施形態では、処置される疾病はアレルギー性鼻炎、アレルギー性皮膚炎、薬物アレルギーおよび食物アレルギーから選択される。本発明のもう１つの好ましい実施形態では、処置される疾病は多発性硬化症である。本発明のさらなる実施形態では、処置される疾病は血管浮腫、じんま疹、乳幼児突然死症候群および気管支肺アスペルギルス症から選択される。さらにまた、本発明の化合物は全身性肥満細胞症、特に肥満細胞腫の処置に使用できる。この疾病は特にイヌにおいては拡張性転移を伴う悪性疾患である。よって、本発明の化合物はイヌ肥満細胞腫瘍を処置する薬剤の製造に特に有用である。
【００８４】
本発明の化合物は特許出願ＥＰ０５６４４０９Ａ１およびＷＯ９９／０３８５４で特に化合物クレームおよび実施例の最終生成物として包括的かつ詳細に開示されており、主題の最終生成物、医薬製剤およびクレームはこれらの公報の出典明示により本願の一部とする。そこに開示されている対応する立体異性体ならびに対応する多形体、例えば結晶変種も同様に含まれる。
【００８５】
欧州特許ＥＰ０５６４４０９Ａ１では、本発明の化合物は癌、血栓症、乾癬、繊維症、硬皮症およびアテローム性動脈硬化症の治療に有用であるとの記載がある。今般、本発明によれば、本発明の化合物が驚くことにアレルギー性鼻炎、アレルギー性皮膚炎、薬物アレルギーもしくは食物アレルギー、血管浮腫、じんま疹、乳幼児突然死症候群、気管支肺アスペルギルス症、多発性硬化症、さらには肥満細胞症、特にイヌ肥満細胞腫瘍に有益な作用を持つことが判明した。
【００８６】
本発明の特定の発見によれば、本発明はまたヒトを含む温血動物の処置方法も提供し、本明細書に記載の疾病の１つを患うこのような温血動物、好ましくはヒトまたはイヌ、極めて好ましくはヒトに治療上有効量の本発明の化合物を投与する。
【００８７】
本発明はまた、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩をイヌ肥満細胞腫瘍を有するイヌ被験体に投与する方法であって、医薬上有効量の本発明の化合物またはその医薬上許容される塩を好ましくは１ヶ月、２ヶ月あるいはまた３ヶ月を超える期間一日一回イヌに投与することを含む方法にも関する。本発明は特に、一日量約２０〜２００ｍｇ、好ましくは８０〜１６０ｍｇ、特に１２５ｍｇの塩Ｉを投与する方法に関する。
【００８８】
好ましくは本発明は式Ｉの４−(４−メチルピペラジン−１−イルメチル)−Ｎ−[４−メチル−３−(４−ピリジン−３−イル)ピリミジン−２−イルアミノ]フェニル]−ベンズアミドの一メタンスルホン酸塩の一日量をイヌに投与する使用または方法に関し、この一日量は少なくとも０.２μＭの血漿レベルを維持するに十分な一メタンスルホン酸塩量を含む。
【００８９】
本明細書において「処置方法」とはまた特に、本明細書に記載の疾病の予防方法、すなわち本明細書に記載の疾病の発生を予防するために健康な被験体に対する本発明の化合物を含む医薬組成物の予防的投与にも関する。
【００９０】
本発明はまた、本発明の化合物を含む本明細書に記載の疾病の少なくとも１つの処置のための医薬組成物にも関する。本明細書に記載の疾病の少なくとも１つの処置のための医薬組成物は有効量の本発明の化合物を、局所、腸管、例えば経口もしくは直腸、または非経口投与に適し、無機または有機、固形または液体であり得る医薬上許容される担体とともに含む。経口投与に関しては特に、本発明の化合物を希釈剤および／または滑沢剤、例えば珪酸、タルク、ステアリン酸もしくはその塩、および／またはポリエチレングリコールを含む錠剤またはゼラチンカプセル剤が用いられるが、ローション、ジェルまたはクリームであってもよい。錠剤は結合剤、デンプン、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび／またはポリビニルピロリドン、崩壊剤および／または起沸性混合物、または吸収剤、色素、香味剤および甘味剤を含んでもよい。本発明の化合物はまた、非経口投与組成物の形態または点滴液の形態で用いてもよい。例えば皮膚へ局所投与してもよい。局所投与のさらなる形態としては、例えば春季節結膜炎の処置を目的とした眼への投与がある。これらの医薬組成物は滅菌可能であり、かつ／または賦形剤、例えば保存剤、安定剤、湿潤剤、および／または乳化剤、可溶化剤、浸透圧調節のための塩、および／またはバッファーを含んでもよい。本医薬組成物はそれ自体公知の方法、例えば従来の混合、造粒、糖菓剤調剤、溶解または凍結乾燥法によって調製し、およそ１％〜１００％、特におよそ１％〜およそ２０％の有効成分を含む。
【００９１】
本発明の化合物は例えばＷＯ９９/０３８５４の実施例４または６に開示されているように製剤化することができる。
【００９２】
用いる本発明の化合物の用量範囲は温血動物の種、体重および齢、投与様式、用いる特定の物質、および処置する疾病をはじめとする当業者に公知の因子によって異なる。本明細書中で特に断りのない限り、本発明の化合物は１日に１〜４回投与するか、あるいはアレルギー反応が見られた際には即投与することが好ましい。また、本発明の化合物、特にＮ−{５−[４−(４−メチル−ピペラジノ−メチル)−ベンゾイルアミド]−２−メチルフェニル}−４−(３−ピリジル)−２−ピリミジン−アミン(ＳＴＩ５７１Ｂ)は温血動物、特にヒトに約１０〜７５０ｍｇ/日、好ましくは３０〜６００ｍｇ/日、より好ましくは３０〜３００ｍｇ/日の範囲の用量で投与するのが好ましい。
【００９３】
イヌでは、種、齢、個々の状態、投与様式、および着目する臨床像に応じて、有効量、例えば体重約５ｋｇの温血動物に対して一日量約２０〜２００ｍｇ、好ましくは８０〜１６０ｍｇ、特に１２５ｍｇを投与する。切除不能かつ／または転移性の悪性イヌ肥満細胞腫瘍を有する約５ｋｇの成犬では、一日１２５ｍｇの開始用量が奨励され得る。一日１２５ｍｇの治療に対する応答を評価した後、応答が不十分であったイヌには用量の段階的増加を安全に考えることができ、制限毒性がなく処置からの利益が受けられる限りイヌに処置を施すことができる。用量は少なくとも０.２μＭ、好ましくは少なくとも０.５μＭ、より好ましくは少なくとも１μＭの血漿レベルとなるように力価調整する。約１μＭの血漿レベルを達成および／または維持することが特に好ましい。
【国際調査報告】
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