(57)【要約】  生物試料中の生物分子の存在を選択及び同定する方法が開示されている。この方法は：生物試料を獲得し；（２）当該生物試料中の生物分子の検出の容易さを向上させるために当該生物分子を増幅し；（３）前記増幅された生物分子を適切な媒体上に沈着させる段階を含んで成る。次いで、検出段階が、前記増幅及び分離された試料における生物分子の存在を同定及び検出するために使用されている。ここで、前記増幅段階は、前記沈着段階に対して物理的に非常に近接している。前記方法を行うための装置（１）は、当該装置もしくは方法によって生産されたタンパク質チップライブラリーとしても開示されている。
2005513482.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法であって：生物試料を獲得し；当該生物試料中に存在する生物分子の検出の容易さを向上させるために当該生物分子を増幅し（２）；前記増幅された生物試料中の生物分子を分離し；前記増幅された生物分子を適切な媒体上に沈着させ（３）；同定もしくは検出手段を使用し、前記増幅及び分離された試料における生物分子の存在を同定もしくは検出する段階を含んで成り、ここで前記増幅段階が前記沈着段階に物理的に非常に近接して生じる方法。
【請求項２】
前記増幅段階（２）が前記沈着段階（３）の５mm以内で生じる、請求項１に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法。
【請求項３】
前記増幅段階（２）及び前記沈着段階（３）は、当該段階の間に生物試料の体積が０．２５μl未満になるように起こる、請求項１又は２に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法。
【請求項４】
前記沈着段階（３）が接触していないものである、請求項１、２又は３に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法。
【請求項５】
前記方法がフロースルー装置（１）において行われている、請求項１〜４のいずれか１項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法。
【請求項６】
前記方法を行うための装置がワンピース装置（１）である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法。
【請求項７】
前記方法を行うための装置が前記増幅段階を行うための部分（１０）及び前記沈着段階を行うための分離部分（１１）を使用し、前記部分は一緒にサンドイッチ状になってる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法。
【請求項８】
前記増幅された試料が圧電分注、磁歪作動分注（magnetostrictive actuated dispensing）又はバブルジェット分注のうちの１つによってシリコンプレート上に沈着している(３)、請求項１〜５のいずれか１項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法。
【請求項９】
前記増幅及び分離された生物試料がその後保存されている、請求項１〜８のいずれか１項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法。
【請求項１０】
生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定するための装置（１）であって：生物試料を獲得するための手段；当該生物試料中に存在する生物分子の検出の容易さを向上させるために当該生物分子を増幅するための手段（２）；前記増幅された生物試料中の生物分子を分離するための手段；前記増幅された生物分子を適切な媒体上に沈着させるための手段（３）を含んで成り；同定もしくは検出手段を使用し、前記増幅及び分離された試料における生物分子の存在を同定もしくは検出し、ここで前記増幅手段（２）及び前記沈着手段（３）は互いに物理的に非常に近接している装置。
【請求項１１】
前記増幅手段（２）が前記沈着手段（３）の５mm以内にある、請求項１０に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定するための装置。
【請求項１２】
前記増幅手段（２）及び前記沈着手段（３）は、当該手段の間に生物試料の体積が０．２５μl未満になるように配置されている、請求項１０又は１１に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定するための装置。
【請求項１３】
前記装置がワンピース装置である、請求項１０、１１又は１２に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定するための装置。
【請求項１４】
前記増幅手段（２、１０）及び前記沈着手段（３、１１）が一緒にサンドイッチ化されている、請求項１０〜１３のいずれか１項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定するための装置。
【請求項１５】
前記増幅された試料が圧電沈着（３）によってシリコンプレート上に沈着している、請求項１０〜１４のいずれか１項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定するための装置。
【請求項１６】
前記装置がフロースルーによるものである、請求項１０〜１５のいずれか１項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定するための装置。
【請求項１７】
前記増幅及び分離された生物試料がその後保存されている、請求項１０〜１６のいずれか１項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定するための装置。
【請求項１８】
生物試料を獲得し；当該生物試料中に存在する生物分子の検出の容易さを向上させるために当該生物分子を増幅し；前記増幅された生物試料中の生物分子を分離し；この増幅された生物分子を分子量により分離し；同定もしくは検出手段を使用し、前記増幅及び分離された試料における生物分子の存在を同定もしくは検出する方法、によって生産されたタンパク質チップライブラリー。
【請求項１９】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の、凍結組織の薄片、細胞及び生物標本、例えば、クリオスタット切片及び生体材料のフィルムの両方、から総タンパク質組成物を調製するための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タンパク質ワークステーション及びタンパク質を検出する方法に関連する。本発明は更に、前記ワークステーション及び/又は方法によって配置されたタンパク質のライブラリーに関連する。
【０００２】
前記ワークステーションは、生物学的な試料中に存在する生物分子の選択及び同定のための方法及び装置を提供する。複雑な混合物中に存在する生物分子を分離することにより２次元配列が生じる。生物分子の同一性及び相対量は、２次元配列を画像化する公知の方法によって検出されている。
【０００３】
前記ワークステーションは、単結晶シリコン微細加工技術に基づく高感度プロテオミクスプラットフォームを提供する。
【０００４】
前記ステーションの出力により、生物学的な試料からの標的タンパク質及び標的タンパク質複合体の自動同定が可能になる。高感度マススペクトロメトリーに対するインターフェースを伴う技術も、タンパク質同定のための検索ルーチンを使用することで自動的にデータベースを検索する方法として使用されて良い。
【背景技術】
【０００５】
本発明の背景
複雑な生物学的試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法が存在する。しかし、かかる方法は幾分緩慢であり且つ非常に面倒（labour intensive）である。
【０００６】
かかる方法は、生物試料を十分に使用はしない。何故ならそれらは、沈着物が試料プレート上で作製される場合に多量の物質を使用するからである。このことにより、所定の領域で作製されて良い試料沈着物の数も減る。
【０００７】
本発明は、検出能力が増強されており且つ特定の領域においてより多数の試料沈着物が提供されうるワークステーション及び生物分子を選択する方法を提供する。
【発明の開示】
【０００８】
発明の詳細な説明
本発明の一つの形態は、生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法であって：生物試料を獲得し；当該生物試料中に存在する生物分子の検出の容易さを向上させるために当該生物分子を増幅し；前記増幅された生物試料中の生物分子を分離し；この増幅された生物分子を分子量により分離し；同定もしくは検出手段を使用し、前記増幅及び分離された試料における生物分子の存在を同定もしくは検出する段階、を含んで成る方法を含んで成る。
【０００９】
前記増幅及び分離された生物試料は、この後適切な条件下で保存できる。
【００１０】
本発明の他の観点は：生物試料を獲得し；当該生物試料中に存在する生物分子の検出の容易さを向上させるために当該生物分子を増幅し；前記増幅された生物試料中の生物分子を分離し；この増幅された生物分子を分子量により分離し；同定及び検出段階を使用し、前記増幅及び分離された試料における生物分子の存在を同定又は検出する方法、によって生産されたタンパク質チップライブラリーを提供する。
【００１１】
公知の装置において、多量の「デッドスペース」、即ち、抽出又は増幅領域と沈着部分との間の体積がある。このことは、過剰の体積の生物試料が必要となりそして沈着の遅延があることを意味する。本発明は、前記デットスペースを減らすことによって上記の欠点を解消し、一層効率的且つ柔軟性のある装置をもたらす。
【００１２】
マイクロ抽出又は生物試料増幅の段階は、公知の多くの技術を使用することによって行われうる。これらを使用することは、状況に応じて使用するために選択されることが知られるだろう。
【００１３】
前記増幅段階が生じるマイクロ抽出体積又はチャネル（２）は詰められたビーズ（５）で満たされていて良く、この技術は本発明に関連する当業界で公知である。いくつかの理論モデルが開発されてきており、それにより流体流（fluidic flow）プロファイルを正確に特定できるような計算が可能になる。更なるシュミレーションにより正確な最高容量、結合動態及び排水量を計算することが可能になり、これらは全て、タンパク質増幅効率を確保することにおいて有用である。
【００１４】
他の技術は、多孔質膜（図示されていない）の使用である。これらは、低背圧を供する利点を有し、低い背圧により分離が生物分子のサイズ及び形状に基づいてなされ、それによって試料の特定の画分を単離することが可能になる。
【００１５】
前記チャネルには、多孔質チャネル壁が備えられていて良く、この技術により、高い線流れ速度の使用が可能になり、それによって低背圧による高速検体プロセッシングが供される。並行流形態の使用により、同時に複数の試料を扱うこと、即ち、本明細書中に記載されている１つの実施態様が可能になる。
【００１６】
本発明の好適な形態において使用できうる更なる他の技術は、ミクロ及びナノサイズ化されたモノリシック構造即ち、狭小孔サイズ窓（narrow pore size window）を有する構造における非常に良く規定された孔の使用である。高い容量が、小さな体積及びサイズにより獲得されて良く；このことは生物試料中に存在するタンパク質の回収において有用である。
【００１７】
本発明の好適な形態において使用されて良い更なる他の技術は、マイクロ多孔質ポリマー構造即ち、in-situで合成できうる規定の孔サイズを有する特異的ポリマーネットワークの使用であり、それによりタンパク質の非常に調節された分離が可能になる。このパックされた構造を通過する線流れ速度が高くなるにつれ容量を高くでき、それによりこれを必要とする本発明の形態におけるハイスループット操作が可能になる。
【００１８】
上記の各技術は；圧力によって動かされるもしくは電気によって動かされる装置又は他の適切な技術によって行われて良い。
【００１９】
我々が、以下のメカニズムを使用するだろうクロマトグラフィー分離。
【００２０】
化学結合
ｉ/サイズ排除−サイズに基づき分画が必要となる試料の場合。
【００２１】
ii/疎水性相互作用−ペプチド及びタンパク質がその疎水性によって分離されるだろう逆相分離メカニズムの使用。
【００２２】
iii/極性相互作用−シラノール、及び極性ペプチド/タンパク質と容易に相互作用し且つクロマトグラフィー相互作用に基づき分離できうる他の種類の極性官能性（functionalities）。
【００２３】
以下のものによる親和性結合
ｉ/キラル親和性−キラル小分子はそれら自身、タンパク質/ペプチドのための選択的リガンドとして使用されて良く、それによる相互作用により分離物が獲得されるだろう。
【００２４】
ii/金属親和性−アミン、及び又はカルボキシ−ヒドロキシ官能基、並びにニッケルイオン−ヒスチジンペプチド残基、鉄イオン、ガリウムイオン及びペプチドに対し強力に結合するリン酸塩官能性、の金属イオン相互作用によるキレート化。
【００２５】
生化学的な結合：
iii/抗体結合−典型的な生化学結合の、結合定数が１０７〜１０９の範囲の弱−中−強親和性を伴う抗体−抗原免疫親和性結合。
【００２６】
iv/ビオチンアビジン−ペプチドに対して結合したアビジンもしくはビオチンのいずれか及び固相支持体上のアビジンもしくはビオチンのいずれかを使用する親和性試薬は、アビジン/ビオチン間の高い親和性により複雑な試料混合物から選択的にペプチドを単離するだろう。
【００２７】
本発明は、非常に小さな試料サイズを使用し、それ故に、例えば、露出表層による吸着が最小化されていることによって、試料をロスする。標的プレートのサイズの小型化をはかることでも、非常に多くの試料位置を特定の領域で生み出すことが可能になる。例えば、１０００〜３０００の試料位置を所定の領域で生み出せることが発見されており、レーザー脱離の従来技術では、たった１００〜４００である。これは図４に示されている。特定の領域における使用可能な試料の数のかかる増加は、特に、タンパク質又はタンパク質複合体ライブラリーを形成するために標的プレートの保存との関係において特に非常に有利である。
【００２８】
本明細書中に記載されているワークステーション及び方法を使用することで同定されたかかるタンパク質のライブラリーが生産されて今後の参照のために使用されて良い。かかるライブラリーは今後の調査において有用であり、そしてそれらにより、分子の生物学的効果の同定の簡単な方法が供される。前記ライブラリーは１組のタンパク質チップからなり、それらは時間が経つにつれ劣化しないように適切な条件下で保存されている。
【００２９】
物質を沈着させる様々な手段（３）は当業界で公知であり、本発明には例えば；圧電分注、磁歪作動分注（magnetostrictive actuated dispensing）又はバブルジェット分注が関連する。これらの技術は、分注を行う手段によりもたらされる利点と欠点を有する。例えば、バブルジェット分注は、分注される物質の加熱を引き起こし、従って熱感受性試料とともに使用するためには適切ではないことが明らかである。
【００３０】
最後に、当業者によって、本発明は１つ以上の好適な実施態様において記載されており、そして付属の特許請求の範囲に規定された本発明の範囲から出発せずとも多くの方法で変更が加えられて良いことが理解されるだろう。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】本発明の好適な形態の装置の部分断面図である。前記装置は、生物試料を沈着又は分注するために圧電素子を使用する。
【図２】図１に示している装置の平面図である。
【図３】生物試料のある体積における増幅が生じる本発明の特に好適な形態である。それは、装置の残りの部分から分離可能であり、迅速な交換が可能になる。
【図４】生物試料のある体積における増幅が生じる本発明の特に好適な形態である。それは、堰（６）によって分割されている。
【図５】生物試料の体積が１組の平行直立メンバー（７）によって分割されている、図３に示した本発明の代わりの形態である。
【図１】
2005513482.tif 000003
【図２】
2005513482.tif 000004
【図３】
2005513482.tif 000005
【図４】
2005513482.tif 000006
【図５】
2005513482.tif 000007
【手続補正書】
【提出日】平成16年2月26日(2004.2.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法であって：生物試料を獲得し；当該生物試料中に存在する生物分子の検出の容易さを向上させるために当該生物分子を増幅し（２）；前記増幅された生物試料中の生物分子を分離し；前記増幅された生物分子を適切な媒体上に沈着させ（３）；同定又は検出手段を使用し、前記増幅及び分離された試料中の生物分子の存在を同定又は検出する段階を含んで成り、ここで前記増幅段階が前記沈着段階に物理的に非常に近接して生じ、そして当該物理的な近接は、距離にして５mm未満に対応する方法。
【請求項２】
前記増幅段階（２）及び前記沈着段階（３）は、当該段階の間に生物試料の体積が０．２５μl未満になるように生じる、請求項１に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法。
【請求項３】
前記沈着段階（３）が接触していないものである、請求項１又は２に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法。
【請求項４】
前記方法がフロースルー装置（１）において行われている、請求項１〜３のいずれか１項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法。
【請求項５】
前記方法を行うための装置がワンピース装置（１）である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法。
【請求項６】
前記方法を行うための装置が、前記増幅段階を行うための部分（１０）及び前記沈着段階を行うための分離部分（１１）を使用し、前記部分は一緒にサンドイッチ状になっている、請求項１〜５のいずれか１項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法。
【請求項７】
前記増幅された試料が圧電分注、磁歪作動分注（magnetostrictive actuated dispensing）又はバブルジェット分注のうちの１つによってシリコンプレート上に沈着している(３)、請求項１〜６のいずれか１項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法。
【請求項８】
前記増幅及び分離された生物試料がその後保存されている、請求項１〜７のいずれか１項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法。
【請求項９】
生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定するための装置（１）であって：生物試料を獲得するための手段；当該生物試料中に存在する生物分子の検出の容易さを向上させるために当該生物分子を増幅するための手段（２）；前記増幅された生物試料中の生物分子を分離するための手段；前記増幅された生物分子を適切な媒体上に沈着させるための手段（３）を含んで成り；同定又は検出手段を使用し、前記増幅及び分離された試料における生物分子の存在を同定又は検出し、ここで前記増幅手段が、詰められたビーズ、多孔質膜、多孔質チャネル壁、マイクロサイズ化されたモノリシック構造、ナノサイズ化されたモノリシック構造又は多孔質ポリマー構造、又はこれらの組み合わせのいずれかが備えられたチャネルもしくは体積を含んで成るマイクロ抽出もしくは生物試料増幅手段を含んで成り；そして前記沈着手段は、圧電分注器もしくは磁歪作動分注器もしくはバブルジェット分注器のいずれかを含んで成り、そして当該増幅手段（２）及び当該沈着手段（３）は互いに物理的に非常に近接して配置されており且つここで当該物理的な近接は距離にして５mm未満に対応する、装置。
【請求項１０】
前記増幅手段（２）及び前記沈着手段（３）は、当該手段の間に生物試料の体積が０．２５μl未満になるように配置されている、請求項９に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定するための装置。
【請求項１１】
前記装置がワンピース装置である、請求項９又は１０に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定するための装置。
【請求項１２】
前記増幅手段（２、１０）及び前記沈着手段（３、１１）が一緒にサンドイッチ化されている、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定するための装置。
【請求項１３】
前記増幅された試料が圧電沈着（３）によってシリコンプレート上に沈着している、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定するための装置。
【請求項１４】
前記装置がフロースルーによるものである、請求項９〜１３のいずれか１項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定するための装置。
【請求項１５】
前記増幅及び分離された生物試料がその後保存されている、請求項９〜１４のいずれか１項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定するための装置。
【請求項１６】
請求項１に記載の方法によって生産されたタンパク質チップライブラリー。
【請求項１７】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の、凍結組織の薄片、細胞及び生物標本、例えば、クリオスタット切片及び生体材料のフィルムの両方、から総タンパク質組成物を調製するための方法。
【手続補正書】
【提出日】平成16年10月7日(2004.10.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法であって：生物試料を獲得し；
当該生物試料中に存在する生物分子の検出の容易さを向上させるために当該生物分子を増
幅し（２）；前記増幅された生物試料中の生物分子を分離し；前記増幅された生物分子を
適切な媒体上に沈着させ（３）；同定又は検出手段を使用し、前記増幅及び分離された試
料中の生物分子の存在を同定又は検出する段階を含んで成り、ここで前記増幅段階が前記
沈着段階に物理的に非常に近接して行われ、そして当該物理的な近接は、距離にして５mm未満に対応する方法。
【請求項２】
前記増幅段階（２）及び前記沈着段階（３）は、当該段階の間に生物試料の体積が０．
２５μl未満になるように行う、請求項１に記載の生物試料中に存在する生物分子を選
択及び同定する方法。
【請求項３】
前記沈着段階（３）が接触していないものである、請求項１又は２に記載の生物試料中
に存在する生物分子を選択及び同定する方法。
【請求項４】
前記方法がフロースルー装置（１）において行われている、請求項１〜３のいずれか１
項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法。
【請求項５】
前記方法を行うための装置がワンピース装置（１）である、請求項１〜３のいずれか１
項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法。
【請求項６】
前記方法を行うための装置が、前記増幅段階を行うための部分（１０）及び前記沈着段
階を行うための分離部分（１１）を使用し、前記部分は一緒にサンドイッチ状になってい
る、請求項１〜５のいずれか１項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定
する方法。
【請求項７】
前記増幅された試料が圧電分注、磁歪作動分注（magnetostrictive actuated dispensi
ng）又はバブルジェット分注のうちの１つによってシリコンプレート上に沈着している(
３)、請求項１〜６のいずれか１項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同
定する方法。
【請求項８】
前記増幅及び分離された生物試料がその後保存されている、請求項１〜７のいずれか１
項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法。
【請求項９】
生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定するための装置（１）であって：生物試
料を獲得するための手段；当該生物試料中に存在する生物分子の検出の容易さを向上させ
るために当該生物分子を増幅するための手段（２）；前記増幅された生物試料中の生物分
子を分離するための手段；前記増幅された生物分子を適切な媒体上に沈着させるための手
段（３）を含んで成り；同定又は検出手段を使用し、前記増幅及び分離された試料におけ
る生物分子の存在を同定又は検出し、ここで前記増幅手段が、詰められたビーズ、多孔質
膜、多孔質チャネル壁、マイクロサイズ化されたモノリシック構造、ナノサイズ化された
モノリシック構造又は多孔質ポリマー構造、又はこれらの組み合わせのいずれかが備えら
れたチャネルもしくは体積を含んで成るマイクロ抽出もしくは生物試料増幅手段を含んで
成り；そして前記沈着手段は、圧電分注器もしくは磁歪作動分注器もしくはバブルジェッ
ト分注器のいずれかを含んで成り、そして当該増幅手段（２）及び当該沈着手段（３）は
互いに物理的に非常に近接して配置されており且つここで当該物理的な近接は距離にして
５mm未満に対応する、装置。
【請求項１０】
前記増幅手段（２）及び前記沈着手段（３）は、当該手段の間に生物試料の体積が０．
２５μl未満になるように配置されている、請求項９に記載の生物試料中に存在する生物
分子を選択及び同定するための装置。
【請求項１１】
前記装置がワンピース装置である、請求項９又は１０に記載の生物試料中に存在する生
物分子を選択及び同定するための装置。
【請求項１２】
前記増幅手段（２、１０）及び前記沈着手段（３、１１）が一緒にサンドイッチ化され
ている、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及
び同定するための装置。
【請求項１３】
前記増幅された試料が圧電沈着（３）によってシリコンプレート上に沈着している、請
求項９〜１２のいずれか１項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する
ための装置。
【請求項１４】
前記装置がフロースルーによるものである、請求項９〜１３のいずれか１項に記載の生
物試料中に存在する生物分子を選択及び同定するための装置。
【請求項１５】
前記増幅及び分離された生物試料がその後保存されている、請求項９〜１４のいずれか
１項に記載の生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定するための装置。
【請求項１６】
請求項１に記載の方法によって生産されたタンパク質チップライブラリー。
【請求項１７】
生物試料として凍結組織、細胞及び生物標本の薄片、例えば、クリオスタット切片及び生体材料のフィルムの両方を使用する段階を含む、総タンパク質組成物を調製するために使用される請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
発明の詳細な説明
本発明の一つの形態は、生物試料中に存在する生物分子を選択及び同定する方法であっ
て：生物試料を獲得し；当該生物試料中に存在する生物分子の検出の容易さを向上させる
ために当該生物分子を増幅し；前記増幅された生物試料中の生物分子を分離し；この増幅
された生物分子を分子量により分離し；同定もしくは検出手段を使用し、前記増幅及び分
離された試料における生物分子の存在を同定もしくは検出する段階、を含んで成る方法を
含んで成る。前記増幅段階及び前記沈着段階は、当該段階の間に生物試料の体積が０．
２５μl未満になるように行われ、生物試料中に存在する生物分子が選択及び同定される。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
本発明の好適な形態において使用できうる更なる他の技術は、ミクロ及びナノサイズ化
されたモノリシック構造即ち、狭小孔サイズ窓（narrow pore size window）を有する構
造における非常に良く規定された孔の使用である。高い容量が、小さな体積及びサイズに
より獲得されて良く；このことは生物試料中に存在するタンパク質の回収において有用で
ある。生物試料としては凍結組織、細胞及び生物標本の薄片、例えば、クリオスタット切片及び生体材料のフィルムの両方を使用し総タンパク質組成物が調製される。
【国際調査報告】
2005513482.tif 000008
2005513482.tif 000009
2005513482.tif 000010
2005513482.tif 000011
2005513482.tif 000012