(57)【要約】  微粒子がポリマーマトリックス中に分散された治療薬剤を含有し、上記マトリックスがヒアルロン酸の第１ポリマーおよび非イオン性ポリマー、ポリマーガムまたはその組み合わせのいずれかの第２ポリマーを含有する。上記微粒子は、鼻または肺送達用に処方されてもよい。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリマーマトリックス中に分散された治療薬剤を含有する微粒子であって、該ポリマーマトリックスがヒアルロン酸またはその誘導体から成る第１ポリマーおよび第２生物分解性ポリマーを含有する微粒子。
【請求項２】
前記第２ポリマーが、非イオン性ポリマー、ポリマーガム、またはそれらの組み合わせである請求項１記載の微粒子。
【請求項３】
前記第２ポリマーが、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、またはそれらの混合物である請求項１または２記載の微粒子。
【請求項４】
更に架橋剤を含有する請求項１〜３のいずれか１項記載の微粒子。
【請求項５】
前記治療薬剤が、タンパク質またはペプチドである請求項１〜４のいずれか１項記載の微粒子。
【請求項６】
前記治療薬剤がインスリンである請求項５記載の微粒子。
【請求項７】
直径０．１〜４０μｍを有する請求項１〜６のいずれか１項記載の微粒子。
【請求項８】
直径０．１〜５μｍを有する請求項１〜６のいずれか１項記載の微粒子。
【請求項９】
治療用に用いる請求項１〜８のいずれか１項記載の微粒子。
【請求項１０】
経口送達または鼻孔吸入用に用いる請求項１〜８のいずれか１項記載の微粒子。
【請求項１１】
経皮送達用に用いる請求項１〜８のいずれか１項記載の微粒子。
【請求項１２】
微粒子を含有する組成物であって、該微粒子がポリマーマトリックス中に分散された治療薬剤を含有し、該ポリマーマトリックスがヒアルロン酸またはその誘導体、および２価金属カチオンを含有する組成物。
【請求項１３】
前記治療薬剤が、請求項５または６記載のものである請求項１２記載の組成物。
【請求項１４】
（ａ）治療薬剤をヒアルロン酸ポリマーを混合して水性ゲルを生成する工程、
（ｂ）該ゲルを攪拌した非水性溶媒に加えてゲル微小液滴の分散体を形成する工程、および
（ｃ）該非水性溶媒を除去して乾燥微粒子を形成する工程
を含む肺投与用に好適な微粒子の製造方法。
【請求項１５】
前記溶媒がスプレードライによって除去される請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
前記溶媒が、パーフルオロカーボンである請求項１４または１５記載の方法。
【請求項１７】
前記溶媒が、パーフルオロデカリンまたはパーフルオロ‐ｎ‐オクタンである請求項１４記載の方法。
【請求項１８】
治療薬剤およびヒアルロン酸またはその塩を含有する水溶液と２価金属カチオンとを混合して溶液または懸濁液を生成する工程、および
得られる生成物を加工して微粒子を形成する工程
を含む肺投与用に好適な微粒子の製造方法。
【請求項１９】
前記２価金属カチオンが、亜鉛、リチウム、カルシウム、アンモニウム、マグネシウム、銅およびコバルトから成る群から選択される請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
前記治療薬剤が、タンパク質またはペプチドである請求項１４〜１９のいずれか１項記載の方法。
【請求項２１】
前記治療薬剤がインスリンである請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
前記微粒子が、直径０．１〜４０μｍを有する請求項１４〜２１のいずれか１項記載の方法。
【請求項２３】
前記微粒子が、直径０．１〜５μｍを有する請求項１４〜２２のいずれか１項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、中実微粒子に導入した治療薬剤の徐放性組成物、およびその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
製薬分野において徐放性製品を用いる２つの主な優位性は、長時間にわたって高治療血漿値を維持する能力、および即効型製剤を用いて同様の効果を達成するのに必要な投与回数を低減することによって得られる患者の応諾の増加である。
【０００３】
多くの徐放性送達システムが市販されている。例えば、経口および経皮製剤は両方共に当業者に公知である。経口吸入治療は、喘息、嚢胞性繊維症等の治療における薬剤の送達用に通常用いられる。吸入経路を経て患者に薬剤を投与するのに用いられる多くの異なる送達装置、例えばネブライザー、加圧式定量噴霧式吸入器（ＰＭＤＩｓ）および定量ドライパウダー吸入器（ＤＰＩｓ）がある。
【０００４】
いくつかの薬剤、例えばサルメタロールは気管支遅延効果維持のために化学変性されているが、現在市販されている吸入システムの多くは即効型製剤を活性化する。経口投与では吸収が悪いため、通常、注射により投与されているので、ペプチドおよびタンパク質の送達のために、現在この投与経路を使用することが、この技術分野で注意をひいている。更に、繰り返し注射することを回避することも望ましい。
【０００５】
徐放性薬剤製剤に使用するのに好適な生物分解性ポリマーを開発するために、多くの研究が行われている。生物分解性ポリエステル、例えばポリラクチド、ポリグリコライド、ポリ（ラクチド−コ−グリコライド）、ポリ−オルソ−エステルおよびポリアンハイドライド（ｐｏｌｙａｎｈｙｄｒｉｄｅ）は、そのような用途に有効であることは知られていた（非特許文献１）。天然ポリマー材料、例えばゼラチン、コラーゲン、キトサン、カルボキシメチルセルロース、アルギネートおよびヒアルロン酸を使用する他の研究も刊行されている。
【０００６】
非特許文献２には、０．５〜４％のヒアルロン酸を含有するゲルを使用するＧ−ＣＳＦの徐放性製剤が報告されている。しかしながら、投与はゲル状態での注射によって行われている。特許文献１には、１％のヒアルロン酸を含有するインスリンの徐放性注射製剤をウサギに投与する場合、血液グルコース量を抑制する治療効果が２４時間以上持続しないことが開示されている。従って、ヒアルロン酸をベースとする徐放性薬剤製剤は、上記薬剤の放出が２４時間を越えて維持されず、かつ上記ゲルの高い固有粘度のために注射が困難であるという不都合があった。そのような製剤は、肺送達にも適さない。
【０００７】
天然のヒアルロン酸、およびその無機塩は水にのみ溶解する。しかしながら、疎水性ヒアルロン酸誘導体の中実微粒子を含有する薬剤組成物が、従来のエマルジョン−溶媒抽出法によって調製された（非特許文献３）。しかしながら、この方法では、有機溶媒との接触によってタンパク質活性が変性される結果となる。
【０００８】
従って、治療用タンパク質を繰り返し毎日投与することを必要としない徐放性製剤が非常に望ましい。上記送達システムは、また比較的生物学的に利用可能な形での活性成分を提供すべきである。
【特許文献１】特開平１-２８７０４１号公報
【非特許文献１】チャシン（Ｃｈａｓｉｎ）等の「バイオデグレイダブル・ポリマー・アズ・ドラッグ・デリバリー・システムズ（Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  ａｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）」、１９９０年；マーセルデッカー（ＭｅｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ）、およびヘラー（Ｈｅｌｌｅｒ）編、Ａｄｙ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．、１９９３年；１０号；１６３頁
【非特許文献２】メイヤー（Ｍｅｙｅｒ）等の「Ｊ．コントロールド・リリース（Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ）」、１９９５年；３５号：６７頁
【非特許文献３】ナイトリンガー（Ｎｉｇｈｔｌｉｎｇｅｒ）等のＰｒｏｃｅｅｄ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．、１９９５年；第２２号：論文Ｎｏ．３２０５；イラム（Ｉｌｕｍ）等編、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌ．、１９９４年；２９号：１３３頁
【０００９】
（発明の要旨）
本発明は、ポリマーヒアルロン酸、またはその誘導体、および非イオン性ポリマーあるいはヘテロまたはホモポリマーガムであってもよい更なるポリマーを用いて徐放性組成物を製造することができるという驚くべき発見をベースとする。
【００１０】
本発明の第１の態様では、微粒子がポリマーマトリックス中に分散された治療薬剤を含有し、上記ポリマーマトリックスがヒアルロン酸またはその誘導体から成る第１ポリマーおよび生物分解性の第２ポリマーを含有する。
【００１１】
本発明の第１の態様では、肺投与用に好適な微粒子の製造方法は、
（ａ）治療薬剤をヒアルロン酸ポリマーと混合して水性ゲルを生成する工程、
（ｂ）該ゲルを攪拌した非水性溶媒に加えてゲル微小液滴の分散体を形成する工程、および
（ｃ）該分散体を乾燥して乾燥微粒子を形成する工程
を含む。
【００１２】
この方法によれば、好適な乾燥方法、例えばスプレードライ法を用いることを可能とする形で、ヒアルロン酸および治療活性薬剤の濃縮液を調製することができる。
【００１３】
本発明の第３の態様では、肺投与用に好適な微粒子の製造方法は、治療薬剤およびヒアルロン酸ポリマー、またはその塩を含有する水溶液または懸濁液と２価金属カチオンとを混合する工程、および得られる生成物を加工して微粒子を形成する工程を含む。
【００１４】
この方法により、結果として延長された放出プロフィールを有する微粒子を形成する。
【００１５】
本発明の微粒子は、微粒子の所望のユニットの投与量を患者に投与する場合に、広範囲の薬物を送達するのに用いられ、かつ再現可能なインヴィヴォでの治療効果を提供するのに用いられる。
【００１６】
（発明の開示）
本発明の微粒子はいくつかの好適な投与経路、即ち、口、眼、直腸、膣等に適合する。例えば、上記微粒子を含有する組成物を、皮下注射、皮膚貫通注射、筋内注射、または弾動／ニードルフリー注射システムを用いる注射を含む注射による送達用に調製してもよい。好ましい態様では、上記微粒子は吸入により送達、即ち、鼻または肺投与される。
【００１７】
上記微粒子は、錠剤、カプセル入り、ペッサリー、坐剤等としての送達用に調製されてもよい。
【００１８】
本発明の微粒子は、上記ポリマーマトリックス中に分散された治療活性薬剤の徐放を提供する。本発明の目的に対して、「徐放（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ）」の語は、治療活性薬剤が、治療に有効な量の材料が延長された期間にわたって患者に送達されるような、例えば、有効量の薬物をインヴィヴォで約１〜約２４時間以上の期間提供する投薬形態を提供するような制御された速度で微粒子から放出されることを意味する。
【００１９】
上記微粒子は、投与経路に依存して、概して直径で１００μｍ未満のサイズを有する。経口または鼻吸入による送達に対して、上記微粒子は通常、直径で約０．１〜５０μｍのサイズを有する。好ましくは、上記微粒子は、直径で約０．１〜５μｍのサイズを有する。より好ましくは、吸引される場合に上記微粒子が肺の肺胞に到達するために、上記微粒子は、直径で約２μｍのサイズを有する。
【００２０】
本発明の上記第１の態様において、上記微粒子は、ヒアルロン酸から成る第１ポリマーおよび生物分解性の第２ポリマーから形成されるポリマーマトリックスを含有する。
【００２１】
本明細書中で用いられるように、「ポリマーマトリックス」の記載により、上記組成物中で用いられるポリマーが、その中に分散される治療薬剤を保持することができるで安定な構造を形成することを意味するものである。ポリマーは、通常、３モノマーユニットを越える多重繰り返しモノマーユニットから生成される。
【００２２】
ヒアルロン酸は市販のポリマーであり、良好な粘液粘着性を示し、生物学的適合性であり、生物分解性であり、食細胞摂取を回避することも可能である。ヒアルロン酸の誘導体は公知であり、エステル化（内部および外部の両方）、架橋（例えば、光架橋またはグルタルアルデヒドによる）または硫酸化により生成することができる。好適な市販材料には、ＨＹＡＦＦ（フィディア（Ｆｉｄｉａ））、ＡＣＰ（フィディア）、インターゲル（Ｉｎｔｅｒｇｅｌ）（ライフコア（ＬｉｆｅＣｏｒｅ））、インサート（Ｉｎｃｅｒｔ）（アニカ（Ａｎｉｃａ））およびハイランス（Ｈｙｌａｎｓ）（バイオマトリックス（ＢｉｏＭａｔｒｉｘ））が挙げられる。特に好ましい誘導体は、結合または共役により得られるもの、例えば、カルボキシメチルセルロースとヒアルロン酸の共役物であるセプラフィルム（ＳｅｐｒａＦｉｌｍ）（ゲンザイム（Ｇｅｎｚｙｍｅ））である。後者の材料に関しては、それが任意の工程であるが、第２のポリマーを含む必要はない。
【００２３】
上記第２のポリマーは、ヒアルロン酸ポリマーとは異なる生物分解性ポリマーである。好適なポリマーには、セルロースまたはセルロース誘導体を含むイオン性または非イオン性ポリマーが挙げられる。好ましい例には、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、またはそれらの混合物が挙げられる。非イオン性ポリマーが好ましい。上記第２ポリマーは、好ましくは１００ｋＤａを越える、最も好ましくは５００ｋＤａを越える分子量を有する。上記第２ポリマーは、アニオン性ヒアルロン酸との共同的ゲル化効果を提供する。
【００２４】
更に別の態様では、生物分解性の第２ポリマーは、同様の共同的効果を提供するため、天然のヘテロポリマーガムまたはホモポリマーガム、あるいはそれらの組合せであってもよい。この態様において用いられる「ヘテロポリマー」の語は、２以上の異なる糖サブユニットを含有する水溶性多糖類を定義するのに用いられる。上記ヘテロポリマーは、分岐または螺旋配置であってもよい。好ましい態様では、上記ヘテロポリマーは、５００ｋＤａを越える分子量を有する。特に好ましいヘテロポリマーは、高分子量（約１，０００ｋＤａ）ヘテロ多糖類である、キサンテンガムである。
【００２５】
本発明に有用なホモポリマーには、ガラクトマンナンガムが挙げられる。ローカストビーンガムは、ガラクトースに対するマンノースの高い比を有し、他のガラクトマンナン、例えばグアールおよびヒドロキシプロピルグアールと比較して、特に好ましい。食品および製薬分野において当業者に公知の他の天然産出多糖類ガムも、ヒアルロン酸ポリマーと組み合わせて本発明の改良された徐放性キャリアを提供するのに有用である。これらのガムには、アルギン酸誘導体、カラギーナン、トラガカント、アカシア、カライヤ、これらガムのポリエチレングリコールエステル、キチン、キトサン、ムコ多糖類、コンニャク（konjac）、澱粉、置換澱粉、澱粉断片およびデキストリンが挙げられる。上記ホモポリマーは、好ましくは１００ｋＤａを越える、最も好ましくは５００ｋＤａを越える分子量を有する。
【００２６】
各微粒子中の第１および第２のポリマーの相対量は、所望の放出特性に依存して変化してもよい。上記ヒアルロン酸ポリマーは通常、第２のポリマーより多い。通常、上記ヒアルロン酸は、上記組成物の０．１〜９９重量％、好ましくは１０〜８０重量％、最も好ましくは２５〜７５重量％の量で存在する。
【００２７】
好ましい態様（非イオン性ポリマーを用いる場合）では、カチオン性架橋剤を本発明の微粒子中に含んでもよい。上記カチオン性架橋剤は、例えば、１価または多価金属カチオンを含有してもよい。好適なカチオン性架橋剤の特定例には、塩化カルシウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸カリウム、炭酸ナトリウム、塩化リチウム、リン酸三カリウム、ホウ酸ナトリウム、臭化カリウム、フッ化カリウム、炭酸水素ナトリウム、塩化マグネシウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、乳酸カルシウムおよびフッ化ナトリウムが挙げられる。多価金属カチオンも用いてもよい。しかしながら、好ましいカチオン性架橋剤は、１価または２価である。特に好ましい塩は、塩化カリウム、塩化カルシウムおよび塩化ナトリウムである。上記カチオン性架橋剤は、本発明の徐放性吸入製剤中に、非ヒアルロン酸多糖類成分の０．０１〜５０重量％、好ましくは０．１〜２０重量％、より好ましくは１〜１０重量％の量で含まれる。
【００２８】
本発明の第２の態様では、上記微粒子は、治療薬剤をヒアルロン酸ポリマーと混合して水性ゲルを生成し、次いで上記ゲルを攪拌した非水性溶媒に加えて、次いで乾燥され得る分散体を形成することによって作製される。この態様では、それは任意の工程であるが、第２のポリマーを含む必要はない。第２のポリマーを含まれる場合、上記ポリマーは上記ゲルを生成する工程で加える。
【００２９】
好ましい態様では、上記溶媒がパーフルオロカーボン、例えば、パーフルオロデカリンまたはパーフルオロ‐ｎ‐オクタンである。これらの材料は、非反応性であり、それにより上記治療薬剤の対生物活性を保護する。上記溶媒はまた、低い蒸気圧を有し、それで容易に霧化することができる。
【００３０】
第３の態様では、上記微粒子は、（これは任意であるが、）更に第２のポリマーを必要とすることなく、２価の金属カチオンを用いて作製される。好適な２価金属カチオンは、亜鉛、リチウム、カルシウム、アンモニウム、マグネシウム、銅およびコバルト塩を含む前述のものである。この態様では、上記治療薬剤、ヒアルロン酸ポリマーおよび２価金属カチオンを共に加えて水溶液または懸濁液を形成し、次いで微粒子に加工する。
【００３１】
当業者に公知の、いくつかの好適な治療薬剤を本発明に用いてもよい。用いてもよい治療薬剤には、例えば、タンパク質、ペプチド、核酸および小さい有機分子が挙げられる。ヘキサマーまたはモノマーの形のインスリンのような抗炎症性化合物が好ましい。治療薬剤の記載には、タンパク質またはポリペプチドの形のワクチン、減毒したおよび生きた微生物またはウィルスを包含する予防薬剤を含む。好適な補助的薬剤を、そのようなワクチン組成物に導入してもよい。肺経路経由の投与用に特に好適である医薬製剤、特に、抗アレルギー剤、気管支拡張薬、鎮痛薬、抗生物質、抗ヒスタミン剤、抗炎症剤、ステロイド、サイトカイン、心臓疾患薬剤および免疫活性薬剤が好ましい。
【００３２】
特に好ましい治療薬剤には、ヒト成長ホルモン、ウシソマトトロピン、ブタソマトトロピン、成長ホルモン放出ペプチド、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、エリスロポエチン、骨形成タンパク質、インターフェロン、インスリン（ヒトインスリンおよびインスリンの化学変性形、インスリンリスプロ、ブタインスリン、ＮＰＨインスリン、プロタミン−インスリン、インスリンアスパルト、インスリングラルギンおよびインスリンデテミール）、アトリオペプチン−ＩＩＩ、モノクローナル抗体、ＴＮＦ、マクロファージ−活性因子、インターロキン、腫瘍変性因子、インスリン様成長因子、上皮細胞増殖因子、組織プラスミノーゲンアクチベーターおよびウロキナーゼが挙げられる。
【００３３】
上記治療薬剤は、上記ポリマーマトリックス中に「分散されている」。この語は、本明細書中で、上記ポリマー中での上記治療薬剤の保持を表すのに用いられる。通常、上記治療薬剤は、これは本発明の実施のために必ずしも必要ではないが、上記マトリックス中に均一に分散される。
【００３４】
上記治療薬剤が生理学的有効量で処方されるべきであることは当業者に公知である。即ち、ユニット投与量の形で送達される場合、所望の応答を達成するのに十分な量の治療薬剤が存在するべきである。
【００３５】
上記微粒子が吸入装置中でドライパウダーとしての送達用に用いられる場合、ユニット投与量には、１回の吸息で患者に送達される予め決定した量の微粒子を含有する。好ましい態様では、上記微粒子は、ドライパウダー吸入器中に含まれるため、単一ユニット投与の形として作製される。この態様では、単一ユニット投与量は、約１〜１５ｍｇ、好ましくは５〜１０ｍｇである。
【００３６】
各微粒子中に存在する治療薬剤の量は、上記治療薬剤によって示される生物学的活性のレベルをベースとして決定される。上記治療薬剤が高い活性を有する場合、ポリマー材料剤に対して、上記薬剤は０.００１％ｗ／ｗ程度であってもよい。通常、上記微粒子は、５％、２０％、３０％または更に４０％ｗ／ｗを超える治療薬剤を含む。上記量は、上記微粒子を形成する前に上記ポリマーを用いて溶液中の上記薬剤の濃度を調節することによって、制御することが可能である。
【００３７】
患者に送達される上記組成物は、安定剤または賦形剤として、他の成分、例えば炭水化物または他のガラス形成物質を含有してもよい。上記微粒子の特性を改良するために、更なる成分が望ましい。例えば、粒子の剛性または放出プロフィールを向上するために、更なる成分を加えることが望ましい。
【００３８】
上記微粒子は主に、肺または鼻吸入による送達用である。好ましい送達システムは、患者の吸息に頼って、上記微粒子をドライパウダーの形で肺の中に導入する、ドライパウダー吸入器（ＤＰＩ）である。しかしながら、別の吸入装置を使用してもよい。例えば、上記微粒子は、上記微粒子を強制的に呼吸管に入れるのに、通常、高い蒸気圧推進剤を必要とする、計量投与吸入器（ＭＤＩ）を用いる送達用に処方してもよい。噴霧器を用いてもよい。当業者には明らかであるが、これらにはエーロゾル配合を必要とする。好適な賦形剤は当業者には明らかである。例えば、肺または鼻投与に関して、好適な賦形剤には緩衝剤、界面活性剤、密度調節剤、浸透促進剤（ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ｅｎｈａｎｃｅｒ）等が挙げられる。
【００３９】
ドライパウダー吸入器に関して、上記微粒子は、送達を補助するバルクキャリア粒子を更に含有する組成物中に処方してもよい。好適なキャリア粒子は公知であり、通常、直径３０〜３００μｍ、より普通には５０〜２５０μｍを有する結晶性ラクトース粒子およびマンニトール粒子が挙げられる。
【００４０】
上記微粒子は、他の好適な経路を経由して送達されてもよい。１つの態様では、経皮送達を用いてもよい。これに関連して、上記微粒子は、非水性ビヒクル、密度調節剤、補助的薬剤等の好適な賦形剤と処方されてもよい。
【００４１】
医薬的に適した界面活性剤を、上記治療薬剤の徐放性を改良するか、または溶解性を改良するのに十分な量で、本発明の組成物に添加することが望ましい。そのような態様では、上記界面活性剤は、約０．０１〜約１０重量％、好ましくは約０．１〜約２重量％の徐放性キャリアを含有する。本発明に用いられる界面活性剤は一般的に、医薬的に適したアニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性（両親媒性（ａｍｐｈｉｐａｔｈｉｃ／ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ））界面活性剤および非イオン性界面活性剤が挙げられる。好適な医薬的に適したアニオン性界面活性剤には、例えば、１価のアルキルカルボキシレート、アシルラクチレート、アルキルエーテルカルボキシレート、Ｎ‐アシルサルコシネート、多価アルキルカルボキシレート、Ｎ‐アシルグルタメート、脂肪酸‐ポリペプチド縮合物、硫酸エステルおよびアルキルスルフェートが挙げられる。
【００４２】
好適な医薬的に適した非イオン性界面活性剤には、例えばポリオキシエチレン化合物、レシチン、エトキシ化アルコール、エトキシ化エステル、エトキシ化アミド、ポリオキシプロピレン化合物、プロポキシ化アルコール、エトキシ化／プロポキシ化ブロックポリマー、およびプロポキシ化エステル、アルカノールアミド、酸化アミン、多価アルコールの脂肪酸エステル、エチレングリコールエステル、ジエチレングリコールエステル、プロピレングリコールエステル、グリセリルエステル、ポリグリセリル脂肪酸エステル、ＳＰＡＮ’ｓ（例えば、ソルビタンエステル）、ＴＷＥＥＮ’ｓ、スクロースエステル、およびグルコース（デキストロース）エステルが挙げられる。上記界面活性剤は、粘膜が炎症を起こさないように非くしゃみ誘発性を有するべきである。
【００４３】
他の好適な医薬的に適した界面活性剤／共溶媒（可溶化）薬剤には、アカシア、塩化ベンザルコニウム、コレステロール、乳化ワックス、ドキュセイトナトリウム、グリセリルモノステアレート、ラノリンアルコール、レシチン、ポロキサマー、ポロキシエチレン、ひまし油誘導体、ポロキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポロキシエチレンステアレート、ラウリル硫酸ナトリウム、ソルビタンエステル、ステアリン酸、およびトリエタノールアミンが挙げられる。
【００４４】
混合界面活性剤／湿潤剤系もまた、本発明に関連して有用である。そのような混合系の例には、例えばラウリル硫酸ナトリウム／ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）６０００およびラウリル硫酸ナトリウム／ＰＥＧ６０００／ステアリン酸が挙げられる。上記微粒子は、糖類、例えばスクロース、デキストロース、ラクトース、ガラクトース、フルクトース、トレハロース、それらの混合物、そして糖アルコール、例えばマンニトール、ソルビトール、キシリトール、ラクチトール、マルチトールおよびガラクチトールを含む好適な充填剤を用いて作製してもよい。可溶性医薬用充填剤、例えばラクトース、デキストロース、ガラクトース、スクロース、またはそれらの混合物を用いることが好ましい。加えて、前述の材料に代えて、または前述の材料に加えて、前述の糖類および糖アルコールをキャリアとして使用可能であることがわかる。
【００４５】
本発明の微粒子は、スプレードライ法、減圧乾燥、超臨界加工（例えば、ＳＥＤＳ、ＲＥＳＳ、ＰＣＡ）、凍結乾燥および微粉砕（ｍｉｌｌｉｎｇ）法を含む如何なる好適な技術を用いて作製（加工）してもよい。
【００４６】
特に好適な技術は、スプレーフリーズドライ法である。スプレーフリーズドライ法の加工には、マトリックス形成ポリマーおよび治療材料の溶液または分散体の霧化、次いで得られる液滴を液化ガス、通常、液体窒素中または極低温表面に誘導する。上記液滴は接触時に凍結し、次いでフリーズドライ工程により乾燥して残存水分を除去してもよい。得られる微粒子は、ポリマーマトリックス中に分散した治療薬剤を含有する。
【００４７】
微粒子形成前に、上記治療薬剤は溶液中にあってもよく、あるいは供給原料中の微粒子またはナノ粒子の分散体（任意に安定剤と共に）として存在してもよい。
【００４８】
初期液滴を作製するのに用いられる装置および加工条件は、当業者には明らかである。供給濃度、ポンプ速度、霧化圧力およびノズルのタイプはすべて、従来の加工条件をベースとして選択することができ、次いで供給原料濃度および粘度に従って最適化することができる。
【００４９】
上記微粒子のサイズは、上記スプレーフリーズドライ法に用いた霧化によって一部決定される。上記霧化／スプレー段階は、従来の霧化方法、例えば圧力または２流体ノズルを用いてもよく、または超音波霧化方法（マー（Ｍａａ）等のファーマシューティカル・リサーチ（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、１９９９年；１６巻２号）を用いてもよい。上記微粒子は、通常、平均空力的粒径０．１〜４０μｍ、好ましくは０．１〜１０μｍ、最も好ましくは０．１〜５μｍを有する。これは、当業者に公知のエーロサイザー（ａｅｒｏｓｉｚｅｒ）を用いて測定してもよい。
【００５０】
上記乾燥工程は、従来のフリーズドライ装置を用いて行われてもよい。乾燥は通常、上記微粒子の残存水分含量１０重量％未満、好ましくは５重量％未満、最も好ましくは３重量％未満を達成するために行われる。
【実施例】
【００５１】
以下の実施例により、本発明の様々な態様を説明するが、それらによって特許請求の範囲を限定しようとするものではない。
【００５２】
（実施例１）
この例は、マトリックス形成剤としてヒアルロン酸のみを用いた比較例である。
組み換えヒトインスリンを０．７７ミリリットルの０．０５ＭのＨＣｌ中に静かに攪拌しながら溶解した。ここに０．０５ミリリットルの１ＭのＮａＯＨ液滴を、静かに攪拌しながら加えた。この溶液に、１５５．６ミリリットルの０．３％ｗ／ｖのヒアルロン酸（２ＭＤａ）を加え、次いで上記溶液を１７．５８ミリリットルの精製水で所望の体積にした。次いで、この供給原料１８５ミリリットルを、以下の条件下で（供給速度２．０ｇ／分、入口温度１３０℃、出口温度８９℃、霧化：二流体ノズル、霧化圧力１．１バール（ｂａｒｇ）、霧化流速１５リットル／分、乾燥空気圧１バール（ｂａｒｇ）、乾燥空気流速４．５リットル／秒）内部スプレードライヤーを用いて乾燥した。総回収率は低かった（１１％）。最終生成物は、インスリン：ＨＡの質量比１：９を有した。第２の製剤を、インスリン：ＨＡの比１：２で調製した。これら製剤を、ソマトスタチンの投与（ｉ．ｖ．ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）によって内生インスリンを抑制したビーグル犬に投与した。各ドライパウダー投与量をペン−センチュリー（Ｐｅｎｎ−Ｃｅｎｔｕｒｙ）装置経由で気管孔（ｔｒａｃｈｅｏｓｔｏｍｅ）を通して送達した。得られた血漿インスリンを図１に示した。
【００５３】
（実施例２）
２５％ｗ／ｗのＨＰＣ（例えば、日本国の日本曹達（株）製）、１０％ｗ／ｗの組み換えヒトインスリンおよび６５％ｗ／ｗの高分子量ヒアルロン酸を含有する製剤を以下のように調製した。１５４ｍｇのインスリンに２．１６ミリリットルの０．０５ＭのＨＣｌを加え、次いでインスリンが溶解するまで静かに攪拌した。この溶液に０．１４ミリリットルの１ＭのＮａＯＨ液滴を、１６５ミリリットルの精製水と共に加えた。この溶液を、０．４％ｗ／ｗのＨＰＣ溶液９６．２５ミリリットルに加え、次いで高分子量ヒアルロン酸の０．４％ｗ／ｗ溶液２５０ミリリットルを加え、上記混合物を均一になるまで攪拌した。この供給原料約５００ミリリットルを以下の設定で（供給速度２．１ｇ／分、入口温度１３０℃、出口温度６６℃、霧化：二流体ノズル、霧化圧力２バール（ｂａｒｇ）、霧化空気流速２１リットル／分、乾燥空気圧１バール（ｂａｒｇ）、乾燥空気流速５リットル／秒）スプレードライした。少量のパウダー投与量を、実施例１と同様にして、犬に送達した。
【００５４】
上記結果を図２に示した。上記プロフィールによって、実施例１のＨＡ：インスリン等量二成分製剤に比較して、本発明により得られた組成物を用いて観察された放出の持続時間が増加したことを示す。
【００５５】
（実施例３）
この実施例は、本発明の第３の態様を説明するものである。
インスリン（０．１ｇ）をヒアルロン酸（０．０５Ｍ、１．４ミリリットル）に溶解した。水酸化ナトリウム（１Ｍ、０．０９ミリリットル）を、初期に沈殿したインスリンが溶解するまで、上記溶液に滴下して加えた。次いで、上記インスリン溶液を、１０６．８ミリリットルの水（Ｚｎ２＋含有溶液に対して９９．３ミリリットル）を用いて蒸留した。すべての供給原料を調製して、ドライパウダー中の１０％ｗ／ｗインスリン充填量とした。
【００５６】
ＺｎＣｌ（０．０１ｇ）を水（１０ミリリットル）中に溶解した。ヒアルロン酸ナトリウム（０．８９ｇ）を水（２２２．５ミリリットル）中に静かに溶解した。上記亜鉛溶液を上記ＨＡ溶液に加え、次いですぐに上記インスリン溶液を加え；すべての供給原料を静かに攪拌して気泡を除去した。
【００５７】
すべての場合、合計固形分１ｇを含有する供給原料０．３％ｗ／ｖを調製した。この溶液を十分に霧化させた。かなり高濃度のものは、ＨＡの高粘度のために使用できなかった。その結果を図２に示した。上記ＨＡ／Ｚｎ／インスリン製剤は、上記インスリン／ＨＡブレンドより、長い放出プロフィールを示した。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】ヒアルロン酸のみを処方した微粒子からのインスリンの放出を説明するグラフ図である。
【図２】本発明の微粒子からのインスリンの放出を説明するグラフ図である。
【図１】
2005513098.tif 000002
【図２】
2005513098.tif 000003
【手続補正書】
【提出日】平成16年2月5日(2004.2.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリマーマトリックス中に分散された治療薬剤を含有する微粒子であって、該ポリマーマトリックスがヒアルロン酸またはその誘導体から成る第１ポリマーおよび第２生物分解性ポリマーを含有する微粒子。
【請求項２】
前記第２ポリマーが、非イオン性ポリマー、ポリマーガム、またはそれらの組み合わせである請求項１記載の微粒子。
【請求項３】
前記治療薬剤がタンパク質またはペプチドであり、前記第２ポリマーが２以上の異なる糖サブユニットを含有する水溶性多糖類であり、前記微粒子が直径３０μｍ未満を有する請求項１または２記載の微粒子。
【請求項４】
前記治療薬剤がタンパク質またはペプチドであり、前記第２ポリマーがホモポリマーガムであり、前記微粒子が直径３０μｍ未満を有する請求項１または２記載の微粒子。
【請求項５】
前記第２生物分解性ポリマーが、セルロースまたはセルロースの誘導体である請求項１または２記載の微粒子。
【請求項６】
前記第２ポリマーが、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、またはそれらの混合物である請求項５記載の微粒子。
【請求項７】
更に架橋剤を含有する請求項１〜６のいずれか１項記載の微粒子。
【請求項８】
前記治療薬剤が、タンパク質またはペプチドである請求項１〜７のいずれか１項記載の微粒子。
【請求項９】
前記治療薬剤がインスリンである請求項８記載の微粒子。
【請求項１０】
直径０．１〜４０μｍを有する請求項１〜９のいずれか１項記載の微粒子。
【請求項１１】
直径０．１〜５μｍを有する請求項１〜９のいずれか１項記載の微粒子。
【請求項１２】
治療用に用いる請求項１〜１１のいずれか１項記載の微粒子。
【請求項１３】
経口送達または鼻孔吸入用に用いる請求項１〜１２のいずれか１項記載の微粒子。
【請求項１４】
経皮送達用に用いる請求項１〜１２のいずれか１項記載の微粒子。
【請求項１５】
微粒子を含有する組成物であって、該微粒子がポリマーマトリックス中に分散された治療薬剤を含有し、該ポリマーマトリックスがヒアルロン酸またはその誘導体、および２価金属カチオンを含有する組成物。
【請求項１６】
前記治療薬剤が、請求項８または９記載のものである請求項１５記載の組成物。
【請求項１７】
（ａ）治療薬剤をヒアルロン酸ポリマーを混合して水性ゲルを生成する工程、
（ｂ）該ゲルを攪拌した非水性溶媒に加えてゲル微小液滴の分散体を形成する工程、および
（ｃ）該非水性溶媒を除去して乾燥微粒子を形成する工程
を含む肺投与用に好適な微粒子の製造方法。
【請求項１８】
前記溶媒がスプレードライによって除去される請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
前記溶媒が、パーフルオロカーボンである請求項１７または１８記載の方法。
【請求項２０】
前記溶媒が、パーフルオロデカリンまたはパーフルオロ‐ｎ‐オクタンである請求項１７記載の方法。
【請求項２１】
治療薬剤およびヒアルロン酸またはその塩を含有する水溶液と２価金属カチオンとを混合して溶液または懸濁液を生成する工程、および
得られる生成物を加工して微粒子を形成する工程
を含む肺投与用に好適な微粒子の製造方法。
【請求項２２】
前記２価金属カチオンが、亜鉛、リチウム、カルシウム、アンモニウム、マグネシウム、銅およびコバルトから成る群から選択される請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
前記治療薬剤が、タンパク質またはペプチドである請求項１７〜２２のいずれか１項記載の方法。
【請求項２４】
前記治療薬剤がインスリンである請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
前記微粒子が、直径０．１〜４０μｍを有する請求項１７〜２４のいずれか１項記載の方法。
【請求項２６】
前記微粒子が、直径０．１〜５μｍを有する請求項１７〜２５のいずれか１項記載の方法。
【国際調査報告】
2005513098.tif 000004
2005513098.tif 000005
2005513098.tif 000006
2005513098.tif 000007
2005513098.tif 000008