(57)【要約】抗菌および／または抗炎症性ペプチド組成物およびその治療的使用が提供される。ペプチドおよびそのアナログまたは誘導体は、抗菌剤および／または抗炎症剤として用いられ得る。特定の実施形態では、ペプチドは陽イオン性ペプチドである。ペプチドは、炎症性疾患、例えば微生物が原因の感染、挫瘡および乾癬の治療のために有用である。ペプチドおよびペプチド処方物は、局所的にまたは非経口的に用いられ得る。本発明のペプチドは、本明細書中に記載されている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の配列：１１Ｂ１１、１１Ｂ２４、１１Ｂ３８、１１Ｄ２１、１１Ｆ１１、１１Ｆ３５、１１Ｆ４３、１１Ｆ４６、１１Ｆ６０、１１Ｆ６１、１１Ｆ６５、１１Ｆ８２、１１Ｆ８３、１１Ｆ１１０、１１Ｊ３２、１１Ｊ３３、１１Ｊ３７、１１Ｊ４４、１１Ｊ４５、１１Ｊ８４、１１Ｊ９７、１１Ｊ１０５、１１Ｊ１１５、１１Ｊ１３１、１１Ｊ１３６、１１Ｊ１４８または１１Ｊ１５７のうちの１つを含む３５アミノ酸までのインドリシジンアナログ。
【請求項２】
請求項１記載の前記ペプチドのうちのいずれか１つまたはその組み合わせおよび薬学的に許容可能な賦形剤を含む組成物。
【請求項３】
増粘剤、溶媒、ならびに以下の配列：１１Ｂ７、１１Ｂ１１、１１Ｂ２４、１１Ｂ３８、１１Ｄ２１、１１Ｆ４、１１Ｆ１１、１１Ｆ１２、１１Ｆ１７、１１Ｆ３５、１１Ｆ４３、１１Ｆ４６、１１Ｆ６０、１１Ｆ６１、１１Ｆ６５、１１Ｆ６６、１１Ｆ８２、１１Ｆ８３、１１Ｆ１１０、１１Ｊ０２、１１Ｊ３０、１１Ｊ３２、１１Ｊ３３、１１Ｊ３７、１１Ｊ４４、１１Ｊ４５、１１Ｊ６７、１１Ｊ６８、１１Ｊ８４、１１Ｊ９７、１１Ｊ１０５、１１Ｊ１１５、１１Ｊ１３１、１１Ｊ１３６、１１Ｊ１４８または１１Ｊ１５７のうちの１つを含む３５アミノ酸までのインドリシジンアナログを含む組成物。
【請求項４】
緩衝剤、溶媒、ならびに以下の配列：１１Ｂ７、１１Ｂ１１、１１Ｂ２４、１１Ｂ３８、１１Ｄ２１、１１Ｆ４、１１Ｆ１１、１１Ｆ１２、１１Ｆ１７、１１Ｆ３５、１１Ｆ４３、１１Ｆ４６、１１Ｆ６０、１１Ｆ６１、１１Ｆ６５、１１Ｆ６６、１１Ｆ８２、１１Ｆ８３、１１Ｆ１１０、１１Ｊ０２、１１Ｊ３０、１１Ｊ３２、１１Ｊ３３、１１Ｊ３７、１１Ｊ４４、１１Ｊ４５、１１Ｊ６７、１１Ｊ６８、１１Ｊ８４、１１Ｊ９７、１１Ｊ１０５、１１Ｊ１１５、１１Ｊ１３１、１１Ｊ１３６、１１Ｊ１４８または１１Ｊ１５７のうちの１つを含む３５アミノ酸までのインドリシジンアナログを含む組成物。
【請求項５】
緩衝剤をさらに含む請求項３記載の組成物。
【請求項６】
約３〜約８の範囲のｐＨを有する請求項４または５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記溶媒は水、グリセリン、プロピレングリコール、イソプロパノール、エタノールおよびメタノールからなる群から選択される請求項３または４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記増粘剤はデキストラン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロースからなる群から選択される請求項３記載の組成物。
【請求項９】
防腐剤をさらに含む請求項３または４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記防腐剤は安息香酸、ベンジルアルコール、フェノキシエタノール、メチルパラベン、プロピルパラベンまたはそれらの組み合わせからなる群から選択される請求項９記載の組成物。
【請求項１１】
前記防腐剤は安息香酸を含む請求項９記載の組成物。
【請求項１２】
標的部位の炎症の治療または予防方法であって、以下の配列：１１Ｂ７、１１Ｂ１１、１１Ｂ２４、１１Ｂ３８、１１Ｄ２１、１１Ｆ４、１１Ｆ１１、１１Ｆ１２、１１Ｆ１７、１１Ｆ３５、１１Ｆ４３、１１Ｆ４６、１１Ｆ６０、１１Ｆ６１、１１Ｆ６５、１１Ｆ６６、１１Ｆ８２、１１Ｆ８３、１１Ｆ１１０、１１Ｊ０２、１１Ｊ３０、１１Ｊ３２、１１Ｊ３３、１１Ｊ３７、１１Ｊ４４、１１Ｊ４５、１１Ｊ６７、１１Ｊ６８、１１Ｊ８４、１１Ｊ９７、１１Ｊ１０５、１１Ｊ１１５、１１Ｊ１３１、１１Ｊ１３６、１１Ｊ１４８または１１Ｊ１５７のうちの１つを含む３５アミノ酸までのインドリシジンアナログを標的部位に適用することを包含する方法。
【請求項１３】
標的部位の炎症の改善方法であって、以下の配列：１１Ｂ７、１１Ｂ１１、１１Ｂ２４、１１Ｂ３８、１１Ｄ２１、１１Ｆ４、１１Ｆ１１、１１Ｆ１２、１１Ｆ１７、１１Ｆ３５、１１Ｆ４３、１１Ｆ４６、１１Ｆ６０、１１Ｆ６１、１１Ｆ６５、１１Ｆ６６、１１Ｆ８２、１１Ｆ８３、１１Ｆ１１０、１１Ｊ０２、１１Ｊ３０、１１Ｊ３２、１１Ｊ３３、１１Ｊ３７、１１Ｊ４４、１１Ｊ４５、１１Ｊ６７、１１Ｊ６８、１１Ｊ８４、１１Ｊ９７、１１Ｊ１０５、１１Ｊ１１５、１１Ｊ１３１、１１Ｊ１３６、１１Ｊ１４８または１１Ｊ１５７のうちの１つを含む３５アミノ酸までのインドリシジンアナログを標的部位に適用することを包含する方法。
【請求項１４】
標的部位の炎症の治療または予防方法であって、増粘剤、溶剤、ならびに以下の配列：１１Ｂ７、１１Ｂ１１、１１Ｂ２４、１１Ｂ３８、１１Ｄ２１、１１Ｆ４、１１Ｆ１１、１１Ｆ１２、１１Ｆ１７、１１Ｆ３５、１１Ｆ４３、１１Ｆ４６、１１Ｆ６０、１１Ｆ６１、１１Ｆ６５、１１Ｆ６６、１１Ｆ８２、１１Ｆ８３、１１Ｆ１１０、１１Ｊ０２、１１Ｊ３０、１１Ｊ３２、１１Ｊ３３、１１Ｊ３７、１１Ｊ４４、１１Ｊ４５、１１Ｊ６７、１１Ｊ６８、１１Ｊ８４、１１Ｊ９７、１１Ｊ１０５、１１Ｊ１１５、１１Ｊ１３１、１１Ｊ１３６、１１Ｊ１４８または１１Ｊ１５７のうちの１つを含む３５アミノ酸までのインドリシジンアナログを標的部位に適用することを包含する方法。
【請求項１５】
標的部位の炎症の改善方法であって、増粘剤、溶剤、ならびに以下の配列：１１Ｂ７、１１Ｂ１１、１１Ｂ２４、１１Ｂ３８、１１Ｄ２１、１１Ｆ４、１１Ｆ１１、１１Ｆ１２、１１Ｆ１７、１１Ｆ３５、１１Ｆ４３、１１Ｆ４６、１１Ｆ６０、１１Ｆ６１、１１Ｆ６５、１１Ｆ６６、１１Ｆ８２、１１Ｆ８３、１１Ｆ１１０、１１Ｊ０２、１１Ｊ３０、１１Ｊ３２、１１Ｊ３３、１１Ｊ３７、１１Ｊ４４、１１Ｊ４５、１１Ｊ６７、１１Ｊ６８、１１Ｊ８４、１１Ｊ９７、１１Ｊ１０５、１１Ｊ１１５、１１Ｊ１３１、１１Ｊ１３６、１１Ｊ１４８または１１Ｊ１５７のうちの１つを含む３５アミノ酸までのインドリシジンアナログを標的部位に適用することを包含する方法。
【請求項１６】
炎症の治療、予防または改善方法であって、緩衝剤、溶媒および以下の配列：１１Ｂ７、１１Ｂ１１、１１Ｂ２４、１１Ｂ３８、１１Ｄ２１、１１Ｆ４、１１Ｆ１１、１１Ｆ１２、１１Ｆ１７、１１Ｆ３５、１１Ｆ４３、１１Ｆ４６、１１Ｆ６０、１１Ｆ６１、１１Ｆ６５、１１Ｆ６６、１１Ｆ８２、１１Ｆ８３、１１Ｆ１１０、１１Ｊ０２、１１Ｊ３０、１１Ｊ３２、１１Ｊ３３、１１Ｊ３７、１１Ｊ４４、１１Ｊ４５、１１Ｊ６７、１１Ｊ６８、１１Ｊ８４、１１Ｊ９７、１１Ｊ１０５、１１Ｊ１１５、１１Ｊ１３１、１１Ｊ１３６、１１Ｊ１４８または１１Ｊ１５７のうちの１つを含む３５アミノ酸までのインドリシジンアナログを含む組成物を非経口投与することを包含する方法。
【請求項１７】
前記炎症は、急性、癒着性、萎縮性、カタル性、慢性、クループ性、退行性、滲出性、繊維素性化膿性、繊維素性、肉芽腫性、間質性、壊死性、増殖性、偽膜性、化膿性、硬化性、漿液繊維素性、漿液性および亜急性からなる群から選択される請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記標的部位の炎症は、挫瘡、関節炎、自己免疫疾患、熱傷、クローン病、結腸炎、接触過敏症、遅延型過敏症、湿疹、内毒素ショック症候群、繊維筋炎、移植片拒絶、苔癬、微生物感染、多発性硬化症、類乾癬、乾癬、硬化症および脂漏からなる群から選択される症状と関連する請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記症状は微生物感染である請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
前記症状は挫瘡である請求項１８記載の方法。
【請求項２１】
前記炎症は医療用具に関連する請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ペプチドはアミノ酸配列１１Ｂ７を含む請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記ペプチドはアミノ酸配列１１Ｊ０２を含む請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記ペプチドはアミノ酸配列１１Ｊ６７を含む請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記ペプチドはアミノ酸配列１１Ｊ６８を含む請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（技術分野）
本発明は概して、炎症性疾患および／または感染性疾患の治療に関し、より詳細には、抗菌活性および／または抗炎症活性を有するペプチド（例えば陽イオン性ペプチド）を含む組成物、ならびにその治療的使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
炎症は、多数のヒト疾患の病因の一要素、ならびに物理的、化学的または外傷的損傷の結果である（すなわち炎症は、損傷に対する生体組織の応答である）。概して炎症応答は、内因性化学伝達物質の全身性放出を生じ、これが血管拡張、好中球の遊出、走化性および血管透過性増大を引き起こす。原因とは無関係に、そして傷害が生じる場所に関係なく、炎症性応答に起因する変化は本質的に同じである。炎症性応答は、急性（短命）または慢性（長期存続）であり得る。
【０００３】
炎症反応の発症は、サイトカインにより、血漿酵素系（補体、凝固、キニンおよび繊維素溶解経路）の生成物により、異なる細胞から放出される脂質伝達物質（プロスタグランジンおよびロイコトリエン）により、ならびに肥満細胞、好塩基球および血小板から放出される血管活性伝達物質により、制御される。迅速作用伝達物質、例えば血管活性アミンおよびキニン系の生成物は、即時応答を調整する。その後、新規合成伝達物質、例えばロイコトリエンは、他の細胞の蓄積および活性化に関与する。一旦白血球が炎症部位に到達すると、白血球は、他の細胞のその後の蓄積および活性化を制御する伝達物質を放出する。したがってサイトカイン系は、サイトカイン活性化が局所的である場合の恒常性にとって明らかに重要である（すなわち、すぐ近くに表面結合または拡散性形態として作用する）が、サイトカイン産生が持続性および／または全身性である場合、サイトカインが、炎症性、感染性、自己免疫性および悪性疾患の徴候、症状および病態に関与することは疑いない。
【０００４】
典型的には、炎症の部位が栄養素、酸素、抗体および治療薬との接触増大、ならびにフィブリン形成、毒素希釈および免疫応答の刺激の増大を有するため、炎症応答は有益である。しかしながら炎症応答は、負の結果、例えば炎症細胞（好中球およびマクロファージ）によるリソソーム酵素の放出により引き起こされる組織損傷を有し、あるいは不適当な応答が生命を脅かす過敏症反応（例えば喘息またはアナフィラキシー）を生じ得る。
【０００５】
したがって、このような有害な炎症応答（しばしば炎症性疾患と呼ばれる）はしばしば、抗炎症薬で治療される。２つの主な種類の抗炎症薬、すなわちコルチコステロイドおよび非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が存在する。しかしながら、コルチコステロイドおよびＮＳＡＩＤによる有害結果は、好中球機能の阻害および病原体致死の低減であり，これは、例えば免疫無防備状態の患者においては特に危険であり得る。別の例では、多数の人々が喘息、慢性関節リウマチ、狼瘡またはその他の炎症性疾患のためにコルチコステロイドを摂取した副作用として、クッシング症候群の症状を蒙る。同様にＮＳＡＩＤは、アナフィラキシー様反応を引き起こす、および胃腸毒性を生じるといった副作用を有する。
【０００６】
したがって、免疫抑制性でないおよび／またはその他の望ましくない副作用を引き起こさない抗炎症活性を有する作用物質を同定する必要がある。さらに、尋常性挫瘡におけるような、随伴性炎症が問題である感染性疾患を治療し、予防しまたは改善における使用のために、抗菌活性および抗炎症活性の両方を有する作用物質が必要とされる。このような作用物質は、炎症要素を有する種々の臨床的適応症において有用である。本発明はこのような必要性を満たし、そしてさらにその他の関連利点を提供する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（発明の概要）
本発明は、ペプチド、特にインドリシジンペプチドおよびそのアナログまたは誘導体を提供し、かつ例えば急性炎症（例えば微生物感染または挫瘡によるもの）または慢性炎症（例えば慢性炎症性腸疾患または慢性関節リウマチ）に関連した局所性または全身性炎症疾患を治療し、予防しまたは改善するといったような種々の治療的環境におけるこのようなペプチドの使用方法を提供する。
【０００８】
一態様において、本発明は、以下の配列：１１Ｂ１１、１１Ｂ２４、１１Ｂ３８、１１Ｄ２１、１１Ｆ１１、１１Ｆ３５、１１Ｆ４３、１１Ｆ４６、１１Ｆ６０、１１Ｆ６１、１１Ｆ６５、１１Ｆ８２、１１Ｆ８３、１１Ｆ１１０、１１Ｊ３２、１１Ｊ３３、１１Ｊ３７、１１Ｊ４４、１１Ｊ４５、１１Ｊ６７、１１Ｊ６８、１１Ｊ８４、１１Ｊ９７、１１Ｊ１０５、１１Ｊ１１５、１１Ｊ１３１、１１Ｊ１３６、１１Ｊ１４８または１１Ｊ１５７のうちの１つを含む３５アミノ酸までのインドリシジンアナログまたはそれらの誘導体を提供する。
【０００９】
別の態様において、上述のペプチドのうちのいずれか１つまたはその組み合わせ、および薬学的に許容可能な賦形剤を含む組成物が提供される。ある実施形態において、組成物は、増粘剤、溶媒、ならびに以下の配列：１１Ｂ１１、１１Ｂ２４、１１Ｂ３８、１１Ｄ２１、１１Ｆ１１、１１Ｆ３５、１１Ｆ４３、１１Ｆ４６、１１Ｆ６０、１１Ｆ６１、１１Ｆ６５、１１Ｆ８２、１１Ｆ８３、１１Ｆ１１０、１１Ｊ３２、１１Ｊ３３、１１Ｊ３７、１１Ｊ４４、１１Ｊ４５、１１Ｊ６７、１１Ｊ６８、１１Ｊ８４、１１Ｊ９７、１１Ｊ１０５、１１Ｊ１１５、１１Ｊ１３１、１１Ｊ１３６、１１Ｊ１４８または１１Ｊ１５７のうちの１つを含む３５アミノ酸までのインドリシジンアナログまたはそれらの誘導体を含む。別の実施形態において、上記組成物は緩衝剤をさらに含む。さらに別の実施形態において、さらに緩衝剤を含む組成物は、約３〜約８の範囲のｐＨを有する。さらに別の実施形態において、増粘剤は、デキストラン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルセルロースまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースである。別の実施形態において、本発明は、緩衝剤、溶媒、ならびに以下の配列：１１Ｂ１１、１１Ｂ２４、１１Ｂ３８、１１Ｄ２１、１１Ｆ１１、１１Ｆ３５、１１Ｆ４３、１１Ｆ４６、１１Ｆ６０、１１Ｆ６１、１１Ｆ６５、１１Ｆ８２、１１Ｆ８３、１１Ｆ１１０、１１Ｊ３２、１１Ｊ３３、１１Ｊ３７、１１Ｊ４４、１１Ｊ４５、１１Ｊ６７、１１Ｊ６８、１１Ｊ８４、１１Ｊ９７、１１Ｊ１０５、１１Ｊ１１５、１１Ｊ１３１、１１Ｊ１３６、１１Ｊ１４８または１１Ｊ１５７のうちの１つを含む３５アミノ酸までのインドリシジンアナログまたはその誘導体を含む組成物を提供する。関連の実施形態において、上記組成物は約３〜約８の範囲のｐＨを有する。
【００１０】
他の実施形態において、上記組成物のいずれかの溶媒は水、グリセリン、プロピレングリコール、イソプロパノール、エタノールおよびメタノールからなる群より選択される。さらなる実施形態において、上記組成物のいずれかは防腐剤をさらに含む。さらなる実施形態において、上記防腐剤を含む組成物の防腐剤は、安息香酸、ベンジルアルコール、フェノキシエタノール、メチルパラベン、プロピルパラベンまたはそれらの組み合わせからなる。本明細書で用いられるように、酸に対する言及はいずれも遊離酸、塩、およびそのエステルを含み得る。他の実施形態において、前記組成物のいずれかは保湿剤および防腐剤を含む。
【００１１】
さらなる態様において、標的部位の炎症の治療、予防、または改善方法であって、以下の配列：１１Ｂ７、１１Ｂ１１、１１Ｂ２４、１１Ｂ３８、１１Ｄ２１、１１Ｆ４、１１Ｆ１１、１１Ｆ１２、１１Ｆ１７、１１Ｆ３５、１１Ｆ４３、１１Ｆ４６、１１Ｆ６０、１１Ｆ６１、１１Ｆ６５、１１Ｆ６６、１１Ｆ８２、１１Ｆ８３、１１Ｆ１１０、１１Ｊ０２、１１Ｊ３０、１１Ｊ３２、１１Ｊ３３、１１Ｊ３７、１１Ｊ４４または１１Ｊ４５のうちの１つを含む３５アミノ酸までのインドリシジンアナログまたは誘導体を標的部位に適用することを包含する方法が提供される。他の実施形態において、本発明は、標的部位の炎症の治療、予防または改善方法であって、増粘剤、溶剤、ならびに以下の配列：１１Ｂ７、１１Ｂ１１、１１Ｂ２４、１１Ｂ３８、１１Ｄ２１、１１Ｆ４、１１Ｆ１１、１１Ｆ１２、１１Ｆ１７、１１Ｆ３５、１１Ｆ４３、１１Ｆ４６、１１Ｆ６０、１１Ｆ６１、１１Ｆ６５、１１Ｆ６６、１１Ｆ８２、１１Ｆ８３、１１Ｆ１１０、１１Ｊ０２、１１Ｊ３０、１１Ｊ３２、１１Ｊ３３、１１Ｊ３７、１１Ｊ４４、１１Ｊ４５、１１Ｊ６７、１１Ｊ６８、１１Ｊ８４、１１Ｊ９７、１１Ｊ１０５、１１Ｊ１１５、１１Ｊ１３１、１１Ｊ１３６、１１Ｊ１４８または１１Ｊ１５７のうちの１つを含む３５アミノ酸までのインドリシジンアナログまたはその誘導体を標的部位に適用することを包含する方法を提供する。さらなる別の態様において、炎症の治療、予防または改善方法であって、緩衝剤、溶媒および以下の配列：１１Ｂ７、１１Ｂ１１、１１Ｂ２４、１１Ｂ３８、１１Ｄ２１、１１Ｆ４、１１Ｆ１１、１１Ｆ１２、１１Ｆ１７、１１Ｆ３５、１１Ｆ４３、１１Ｆ４６、１１Ｆ６０、１１Ｆ６１、１１Ｆ６５、１１Ｆ６６、１１Ｆ８２、１１Ｆ８３、１１Ｆ１１０、１１Ｊ０２、１１Ｊ３０、１１Ｊ３２、１１Ｊ３３、１１Ｊ３７、１１Ｊ４４、１１Ｊ４５、１１Ｊ６７、１１Ｊ６８、１１Ｊ８４、１１Ｊ９７、１１Ｊ１０５、１１Ｊ１１５、１１Ｊ１３１、１１Ｊ１３６、１１Ｊ１４８または１１Ｊ１５７のうちの１つを含む３５アミノ酸までのインドリシジンアナログまたはその誘導体を含む組成物を非経口投与することを包含する方法が提供される。さらなる別の態様において、炎症の治療、予防または改善方法であって、薬学的に許容可能な希釈剤および以下の配列：１１Ｂ７、１１Ｂ１１、１１Ｂ２４、１１Ｂ３８、１１Ｄ２１、１１Ｆ４、１１Ｆ１１、１１Ｆ１２、１１Ｆ１７、１１Ｆ３５、１１Ｆ４３、１１Ｆ４６、１１Ｆ６０、１１Ｆ６１、１１Ｆ６５、１１Ｆ６６、１１Ｆ８２、１１Ｆ８３、１１Ｆ１１０、１１Ｊ０２、１１Ｊ３０、１１Ｊ３２、１１Ｊ３３、１１Ｊ３７、１１Ｊ４４、１１Ｊ４５、１１Ｊ６７、１１Ｊ６８、１１Ｊ８４、１１Ｊ９７、１１Ｊ１０５、１１Ｊ１１５、１１Ｊ１３１、１１Ｊ１３６、１１Ｊ１４８または１１Ｊ１５７のうちの１つを含む３５アミノ酸までのインドリシジンアナログまたはその誘導体を含む組成物を非経口投与することを包含する方法が提供される。他の実施形態において、上記方法いずれかの炎症は、急性、癒着性、萎縮性、カタル性、慢性、クループ性、退行性、滲出性、繊維素性化膿性、繊維素性、肉芽腫性、間質性、壊死性、増殖性、偽膜性、化膿性、硬化性、漿液繊維素性、漿液性または亜急性である。他の実施形態において、上記方法の標的部位の炎症は、挫瘡、関節炎、自己免疫疾患、熱傷、クローン病、結腸炎、接触過敏症、遅延型過敏症、湿疹、内毒素ショック症候群、繊維筋炎、移植片拒絶、苔癬、微生物感染、多発性硬化症、類乾癬、乾癬、硬化症または脂漏である。別の実施形態において、上記方法のいずれかの炎症は医療用具に関連する。
【００１２】
本発明のこれらのおよびその他の態様は、以下の詳細な説明および添付の図面を参照すれば明らかになる。さらに、ある手法または組成物をより詳細に記載する種々の参考文献が本明細書中に記述されているため、これらの全ては参照により本明細書中に援用される。
【００１３】
（発明の詳細な説明）
上記のように、本発明は、抗菌および／または抗炎症活性を示すペプチドおよびその組成物を提供する。これらのペプチドは、急性または慢性炎症性疾患を治療し、予防しおよび／または改善するための方法に用いるために処方され得る。したがって、本発明は概して抗菌剤として、抗炎症剤として、ならびに抗菌および抗炎症剤の両方として用いるための臨床的に適切な濃度で、ペプチド（特に陽イオン性ペプチドであるが、これに限定されない）が処方され得る、という意外な発見に関する。したがって、本発明によるペプチド（例えばインドリシジンおよびその誘導体またはアナログ）は、種々の治療環境、例えば炎症性および感染性疾患の治療、予防または改善（これらに限定されない）において使用するのに有用である。本発明の範囲内の使用、ならびに例示的な治療的使用に適したペプチドを、以下で詳細に考察する。
【００１４】
本明細書中に列挙された任意の濃度範囲は、別記しない限り、その範囲および分数内の任意の整数の（例えば整数の１０分の１および１００分の１）濃度を含む、と理解されるべきである。
【００１５】
（Ｉ．ペプチドおよびそのアナログまたは誘導体）
本発明は概して、抗菌および／または抗炎症活性を有するペプチドであって、本明細書中に記載されたような炎症性疾患を治療し、予防しまたは改善するのに用いるための種々の方法（例えば化学的または組換え的）により産生され得るペプチドを対象にする。適切な抗菌および／または抗炎症性ペプチドとしては、単離された天然ペプチド、およびその誘導体またはアナログが挙げられるが、これらに限定されない。「単離ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質」とは、細胞要素、例えば炭水化物、脂質、核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）あるいはその自然環境中のポリペプチドに関連したその他のタンパク質様不純物を本質的に夾雑しないアミノ酸配列である。好ましくは単離ペプチドまたはポリペプチドは、所望用量で治療的に使用するために十分に純粋である。
【００１６】
本発明の抗菌ペプチドおよび／または抗炎症性ペプチドは、組換えペプチドまたは合成ペプチドあるいはその組み合わせであり得る。ペプチドは、自動手法による合成を含めた標準的な化学的方法により合成され得る。概して、ペプチドアナログは、カップリング剤としてＨＡＴＵを用いる標準的な固相Ｆｍｏｃタンパク質戦略に基づいて合成される。ペプチドは、側鎖官能基も脱保護化する適切なスカベンジャーを含有するトリフルオロ酢酸により固相樹脂から切断される。粗製ペプチドは、調製用逆相クロマトグラフィー（例えばＲＰ−ＨＰＬＣ）を用いてさらに精製される。その他の精製方法、例えば分配クロマトグラフィー、ゲル濾過、ゲル電気泳動またはイオン交換クロマトグラフィーが用いられ得る。当該技術分野で既知のその他の合成技法、例えばｔＢｏｃ保護戦略，あるいは異なるカップリング試薬の使用等を用いて、同等のペプチドを産生し得る。ペプチドは、線状分子として、または分枝分子として合成され得る。分枝ペプチドは典型的には、付加的ペプチドのための多数の付着点を提供するコアペプチドを含有する。リシンは、１個のカルボキシル官能基および２個（αおよびε）のアミン官能基を有するため、コアペプチドのために最も広く用いられる。その他の二アミノ酸も用いられ得る。好ましくは２個または３個レベルの幾何学的に分枝したリシンが用いられる。これらのコアは、それぞれ四量体および八量体コア構造を形成する（Ｔａｍ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５４０９，１９８８）。
【００１７】
当該技術分野で既知であるように、多数の抗菌性ペプチドが陽イオン性である。例えば陽イオン性ペプチドは、典型的には中性ｐＨで正電荷を示し、少なくとも１つの塩基性アミノ酸（例えばアルギニン、リシン、ヒスチジン）を含有するペプチドである。好ましい一実施形態では、抗菌および／または抗炎症性ペプチドは、陽イオン性ペプチドである。さらに陽イオン性ペプチドは一般に、約０．５ｋＤａ（すなわち約５アミノ酸長）〜約１０ｋＤａ（すなわち約１００アミノ酸長）の分子質量を、あるいは約０．５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の任意の整数またはその分数（例えば整数の１０分の１および１００分の１）の分子質量を有するアミノ酸配列を含む。陽イオン性ペプチドは、好ましくは約０．５ｋＤａ〜約５ｋＤａ（すなわち約５アミノ酸〜約４５アミノ酸長）、より好ましくは約１ｋＤａ〜約４ｋＤａ（すなわち約１０アミノ酸〜約３５アミノ酸長）、もっとも好ましくは約１ｋＤａ〜約２ｋＤａ（すなわち約１０アミノ酸〜約１８アミノ酸長）の範囲の分子質量を有する。別の好ましい実施形態では、陽イオン性ペプチドは、例えば合計１００個までのアミノ酸、より好ましくは５０個までのアミノ酸、さらに好ましくは３５個までのアミノ酸、もっとも好ましくは１５個までのアミノ酸を有する大型ペプチドまたはポリペプチド配列の一部である。本発明は、５〜１００アミノ酸のアミノ酸配列を有する陽イオン性ペプチドを意図し、ペプチド配列を構成するアミノ酸の数は、その範囲の任意の整数を含む。陽イオン性ペプチドは、抗細菌活性、抗内毒素活性、抗真菌活性、抗寄生生物活性、抗ウイルス活性、抗癌活性、抗炎症活性、創傷治癒活性、ならびに他のペプチドまたは抗菌化合物との相乗的活性あるいはそれらの組み合わせを示し得る。
【００１８】
例示的な陽イオン性ペプチドとしては、鱗翅目（Ｓｔｅｉｎｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ２９２：２４６，１９８１）および双翅目（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄら、ＣｉｂａＦｏｕｎｄ．Ｓｙｍｐ．１８６：５，１９９４）によって、ブタの腸によって（Ｌｅｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：９１５９，１９８９）および海洋原索動物の血球（Ｚｈａｏら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．４１２：１４４，１９９７）によって通常作成されるセクロピン類；セクロピンＡ、メリチンおよびセクロピン−メリチンキメラペプチド類の合成アナログ（Ｗａｄｅら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．４０：４２９，１９９２）；セクロピンＢアナログ（Ｊａｙｎｅｓら、Ｐｌａｎｔ  Ｓｃｉ．８９：４３，１９９３）；キメラセクロピンＡ／Ｂハイブリッド（Ｄｅｕｒｉｎｇ，Ｍｏｌ．Ｂｒｅｅｄ．２：２９７，１９９６）；マゲイニン類（Ｚａｓｌｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：５４４９，１９８７）；ヒト、ウシ、ブタ、マウス、ウサギ、およびヒツジの白血球由来のカセリン（ｃａｔｈｅｌｉｎ）関連抗菌性ペプチド（Ｚａｎｅｔｔｉら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３７４：１，１９９５）；ヒト好中球ディフェンシン等の脊柱ディフェンシン類［ＨＮＰ−１−４］；マウスおよびヒト小腸のパネート細胞ディフェンシン類（Ｏｕｌｅｔｔｅ  ａｎｄ  Ｓｅｌｓｔｅｄ，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．１０：１２８０，１９９６；Ｐｏｒｔｅｒら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６５：２３９６，１９９７）；ヒト上皮細胞のＨＢＤ−１等の脊柱β−ディフェンシン類（Ｚｈａｏら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３６８：３３１，１９９５）；ヒトの皮膚の炎症部のＨＢＤ−２（Ｈａｒｄｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ３８７：８６１，１９９７）；ウシβ−ディフェンシン類（Ｒｕｓｓｅｌｌら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６４：１５６５，１９９６）；ラディッシュ種のＲｓ−ＡＦＰ１等の植物のディフェンシン類（Ｆｅｈｌｂａｕｍら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：３３１５９，１９９４）；α−およびβ−チオニン類（Ｓｔｕａｒｔら、Ｃｅｒｅａｌ  Ｃｈｅｍ．１９：２８８，１９４２；Ｂｏｈｌｍａｎｎ  ａｎｄ  Ａｐｅｌ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４２：２２７，１９９１）；γ−チオニン類（Ｂｒｏｅｋａｅｒｔら、Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１０８：１３５３，１９９５）；抗真菌性ドロソマイシン（Ｆｅｈｌｂａｕｍら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：３３１５９，１９９４）；ミツバチ、マルハナバチ、セミキラー（ｃｉｃａｄａ  ｋｉｌｌｅｒ）、スズメバチ、イエロージャケット、およびハチ（ｗａｓｐ）により産生されたアピダエシン類（Ｃａｓｔｅｅｌｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２６１０７，１９９４；Ｌｅｖａｓｈｉｎａら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２３３：６９４，１９９５）；ウシ好中球由来のインドリシジンおよびその誘導体またはアナログ等のカセリシジン類（ｃａｔｈｅｌｉｃｉｄｉｎｓ）（Ｆａｌｌａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：１９２９８，１９９６）；ナイシン等のバクテリオシン類（Ｄｅｌｖｅｓ−Ｂｒｏｕｇｈｔｏｎら、Ａｎｔｏｎｉｅ  ｖａｎ  Ｌｅｅｕｗｅｎｈｏｅｋ  Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６９：１９３，１９９６）；および抗真菌活性、抗菌活性および抗ウイルス活性を有するプロテグリン類およびタキプレシン類（Ｔａｍａｍｕｒａら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １１６３：２０９，１９９３；Ａｕｍｅｌａｓら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２３７：５７５，１９９６；Ｉｗａｎｇａら、Ｃｉｂａ  Ｆｏｕｎｄ．Ｓｙｍｐ．１８６：１６０，１９９４）等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１９】
ある実施形態では、本発明の好ましい陽イオン性ペプチドは、インドリシジンあるいはそのアナログまたは誘導体である（実施例１の表１参照）。天然インドリシジンは、種々の生物体から単離され得る。例えばウシ好中球から単離されるインドリシジンは、トリプトファンリッチであり、Ｃ末端でアミド化される１３アミノ酸ペプチドである（Ｓｅｌｓｔｅｄら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：４２９２，１９９２参照）。上記のように、好ましいインドリシジンあるいはそのアナログまたは誘導体は、５〜４５個のアミノ酸、より好ましくは７〜３５個のアミノ酸、さらにより好ましくは８〜２５個のアミノ酸、もっとも好ましくは１０〜１４個のアミノ酸を含む（例えば表１参照）。ある実施形態では、インドリシジンアナログまたは誘導体は、負の電荷を有するペプチド（例えば１１Ｂ１１）、あるいは中性または疎水性ペプチド（例えば１１Ｂ２４および１１Ｂ３８）を含み得る。本発明のインドリシジンあるいはそのアナログまたは誘導体は、意図された用途および処方物成分によって、約０．０１％〜約１０％、好ましくは約０．５％〜約５％、より好ましくは約１％〜約３％または約４％〜約６％の範囲の濃度で用いられ得る（ここで、「約」とは指示値の±１０％である）。ある実施形態では、ペプチドはインドリシジンあるいはそのアナログまたは誘導体である。好ましい実施形態では、インドリシジンあるいはそのアナログまたは誘導体は、以下の配列：１１Ｂ７、１１Ｂ１１、１１Ｂ２４、１１Ｂ３８、１１Ｄ２１、１１Ｆ４、１１Ｆ１１、１１Ｆ１２、１１Ｆ１７、１１Ｆ３５、１１Ｆ４３、１１Ｆ４６、１１Ｆ６０、１１Ｆ６１、１１Ｆ６５、１１Ｆ６６、１１Ｆ８２、１１Ｆ８３、１１Ｆ１１０、１１Ｊ０２、１１Ｊ３０、１１Ｊ３２、１１Ｊ３３、１１Ｊ３７、１１Ｊ４４、１１Ｊ４５、１１Ｊ６７、１１Ｊ６８、１１Ｊ８４、１１Ｊ９７、１１Ｊ１０５、１１Ｊ１１５、１１Ｊ１３１、１１Ｊ１３６、１１Ｊ１４８または１１Ｊ１５７のうちの１つを含む３５アミノ酸までのペプチドであり、これらは個々に、またはカクテル混合物中で、本明細書中に記載された組成物または当該技術分野で既知の組成物のうちのいずれか１つにおいて用いられ得る。
【００２０】
本発明のペプチドは、そのアナログまたは誘導体であり得る。本明細書中で用いる場合、「誘導体」および「アナログ」という用語は、ペプチド、ポリペプチドまたは融合タンパク質に言及する場合、上記のような天然のペプチドと本質的に同一の（少なくとも５０％、好ましくは７０、８０または９０％より多く）または強化された生物学的機能を保有する任意のペプチド、ポリペプチドまたは融合タンパク質を指す。さらに、陽イオン性ペプチドアナログまたは誘導体は、正電荷をもはや有さない（すなわち、負に帯電；中性または疎水性であり得る）が上記のような機能を保有するものを含む、と理解されるべきである。このようなアナログおよび誘導体の生物学的機能または活性は、標準的な方法（例えば抗菌性、抗炎症性、ＤＮＡおよび／またはタンパク質合成阻害剤）を用いて、例えば本明細書中に記載されたアッセイにより確定され得る。例えばアナログまたは誘導体は、活性抗菌性および／または抗炎症性ペプチドを産生するために切断により活性化され得るプレプロタンパク質またはプロタンパク質であり得る。あるいはその抗菌性および／または抗炎症性ペプチドアナログまたは誘導体は、抗ペプチド抗体と特異的に結合または会合する能力により同定され得る。
【００２１】
抗菌性および／または抗炎症性ペプチドアナログおよび誘導体は、例えば、Ｎ末端またはＣ末端アミノ酸を含む任意のアミノ酸残基に１つまたはそれ以上の欠失、挿入、または修飾を有してもよい。本発明の範囲内では、修飾された抗菌性および／または抗炎症性ペプチド、例えば、アセチル化、アシル化、アクリロイル化、アルキル化、グルコシル化（例えばグルコシル化）、ＰＥＧ化、およびミリスチル化等のペプチドのＮ末端アミノ酸修飾を有する；エステル化、アミド化、ホモセリン／ホモセリンラクトンおよびカプロラクタム等のＣ末端アミノ酸修飾；または任意の遊離アミノ基と結合したポリアルキレングリコール（例えばポリエチレングリコール）を有するペプチドである。Ｃ末端アミノ酸の好ましい修飾はホモセリン／ホモセリンラクトンであり、より好ましくはアミド化である。したがって、本明細書で用いられるように、特定配列を有するペプチドは、天然のペプチドだけではなくその一修飾形態も包含することが理解されるであろう。例えば、ペプチド「１１Ｂ７」を参照する場合、天然ペプチド（１１Ｂ７−ＯＨ）、Ｎ末端アセチル化１１Ｂ７ペプチド（Ａ−１１Ｂ７）、Ｎ末端アクリロイル化１１Ｂ７ペプチド（Ｎｔ−アクリロイル−１１Ｂ７）、Ｎ末端グルコシル化１１Ｂ７ペプチド（Ｎｔ−グルコシル−１１Ｂ７）、カルボキシ末端ホモセリン／ホモセリンラクトン１１Ｂ７（１１Ｂ７ＨＳ）、カルボキシ末端アミド化１１Ｂ７（１１Ｂ７ＣＮ）等が含まれる。
【００２２】
ペプチドアナログまたは誘導体は、融合タンパク質の一部分でもあり得る。融合タンパク質またはキメラ体としては、１つまたはそれ以上の抗菌性および／または抗炎症性ポリペプチドの融合体、ならびに抗菌性および／または抗炎症性ペプチドと非抗菌性および／または抗炎症性ペプチドまたはポリペプチドとの融合体が挙げられる。さらにこのペプチドは、ポリマー修飾化ペプチドを形成するよう修飾され得る。このペプチドはまた、例えば放射性標識、蛍光標識、質量分析タグ、ビオチン等を用いて、当該技術分野で既知の方法により標識され得る。
【００２３】
アナログまたは誘導体の別の例としては、天然ペプチドのアミノ酸配列と比較した場合、１つまたはそれ以上の保存的アミノ酸置換を有する抗菌性および／または抗炎症性ペプチドが挙げられる。一般的アミノ酸の間で、「保存的アミノ酸置換」は、例えば以下の群の各々の中のアミノ酸間の置換により例証される：（１）グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン、（２）フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファン、（３）セリンおよびトレオニン、（４）アスパラギン酸およびグルタミン酸、（５）グルタミンおよびアスパラギン、ならびに（６）リジン、アルギニンおよびヒスチジン、あるいはそれらの組み合わせ。さらに、陽イオン性ペプチドのアナログまたは誘導体としては、例えば非タンパク質アミノ酸、例えば正常アミノ酸の前駆体（例えばホモセリンおよびジアミノピメレート）、異化経路における中間体（例えばピペコリン酸および正常アミノ酸のＤ−エナンチオマー）、ならびにアミノ酸アナログ（例えばアゼチジン−２−カルボン酸およびカナバニン）が挙げられ得る。
【００２４】
本明細書中では、アミノ酸記号は標準的な一文字コードまたは三文字コードのいずれかとして記述される。別記しない限り、指定アミノ酸は、Ｌ−エナンチオマーを指す。極性アミノ酸としては、アスパラギン（ＡｓｐまたはＮ）およびグルタミン（ＧｌｎまたはＱ）；ならびに塩基性アミノ酸、例えばアルギニン（ＡｒｇまたはＲ）、リジン（ＬｙｓまたはＫ）、ヒスチジン（ＨｉｓまたはＨ）およびそれらの誘導体；ならびに酸性アミノ酸、例えばアスパラギン酸（ＡｓｐまたはＤ）およびグルタミン酸（ＧｌｕまたはＥ）およびそれらの誘導体が挙げられる。疎水性アミノ酸としては、トリプトファン（ＴｒｐまたはＷ）、フェニルアラニン（ＰｈｅまたはＦ）、イソロイシン（ＩｌｅまたはＩ）、ロイシン（ＬｅｕまたはＬ）、メチオニン（ＭｅｔまたはＭ）、バリン（ＶａｌまたはＶ）およびそれらの誘導体；ならびにその他の非極性アミノ酸、例えばグリシン（ＧｌｙまたはＧ）、アラニン（ＡｌａまたはＡ）、プロリン（ＰｒｏまたはＰ）、およびそれらの誘導体が挙げられる。中間極性を有するアミノ酸としては、セリン（ＳｅｒまたはＳ）、トレオニン（ＴｈｒまたはＴ）、チロシン（ＴｙｒまたはＹ）、システイン（ＣｙｓまたはＣ）およびそれらの誘導体が挙げられる。大文字は、Ｌ−エナンチオマーアミノ酸を示し、小文字はＤ−エナンチオマーアミノ酸を示す。その抗菌性および／または抗炎症性ペプチドアナログまたは誘導体は、天然ペプチドに対する上記の変更のいずれか１つまたは組み合わせ、あるいは当該技術分野で公知の任意のその他の改変を含み得る。
【００２５】
（Ａ．その他の抗菌性剤および抗炎症性剤）
本発明のインドリシジンおよびそのアナログまたは誘導体は、個々に用いられてもよく、あるいは本明細書中に記載されているように、当該技術分野で公知の１つまたはそれ以上の異なるインドリシジンおよびそのアナログまたは誘導体と、１つまたはそれ以上の陽イオン性ペプチドと、１つまたはそれ以上の従来の抗菌剤と、あるいは１つまたはそれ以上の抗炎症剤と組み合わせて用いられてもよい。したがって、抗菌性および／または抗炎症性ペプチドならびに抗菌剤の相乗的組み合わせは、同様のまたは改善された治療効果を達成するために、一方または両方の薬剤の投薬量の低減を可能にし得る。これは、より少ない用量の使用を可能にし、したがって毒性（例えばアミノグリコシドから）の潜在的な発生率を低減し、高価な抗菌薬（例えばバンコマイシン）の経費を下げる。抗菌性および／または抗炎症性ペプチド処方物ならびに抗菌剤および／または抗炎症剤組成物の同時投与または連続投与は、種々の微生物（例えば細菌、ウイルス、真菌および寄生生物）により引き起こされる感染、および／または炎症性疾患のより有効な処置を提供すると予測される。特に、感染性疾患の上首尾の治療または予防は、これらの抗菌薬および抗炎症薬が別々に用いられる場合の普通の治療的有効用量よりも低い用量で、抗菌性および／または抗炎症性ペプチドを抗菌剤および／または抗炎症剤とともに用いることにより達成され得る。あるいは、抗菌性および／または抗炎症性ペプチドを有する抗菌剤および／または抗炎症剤は、各活性成分に対する通常の有効治療用量を用いて投与され得るが、この場合、２つまたはそれ以上の薬剤の組み合わせは、より強力な効果を提供する。
【００２６】
上記のように、好ましい抗菌性および／または抗炎症性ペプチドは、他の公知の抗菌剤との相乗的組み合わせで用いてもよい。抗菌薬としては、ペニシリン類、セファロスポリン類、カルバセフェム類、セファマイシン類、カルバペネム類、モノバクタム類、アミノグリコシド類、グリコペプチド類、キノロン類、テトラサイクリン類、マクロライド類、およびフルオロキノロン類が挙げられるが、これらに限定されない。抗生物質薬の例としては、ペニシリンＧ（ＣＡＳ登録番号：６１−３３−６）；メチシリン（ＣＡＳ登録番号：６１−３２−５）；ナフシリン（ＣＡＳ登録番号：１４７−５２−４）；オキサシリン（ＣＡＳ登録番号：６６−７９−５）；クロキサシリン（ＣＡＳ登録番号：６１−７２−３）；ジクロキサシリン（ＣＡＳ登録番号：３１１６−７６−５）；アンピシリン（ＣＡＳ登録番号：６９−５３−４）；アモキシリン（ＣＡＳ登録番号：２６７８７−７８−０）；チカルシリン（ＣＡＳ登録番号：３４７８７−０１−４）；カルベニシリン（ＣＡＳ登録番号：４６９７−３６−３）；メズロシリン（ＣＡＳ登録番号：５１４８１−６５−３）；アズロシリン（ＣＡＳ登録番号：３７０９１−６６−０）；ピペラシリン（ＣＡＳ登録番号：６１４７７−９６−１）；イミペネム（ＣＡＳ登録番号：７４４３１−２３−５）；アズトレオナム（ＣＡＳ登録番号：７８１１０−３８−０）；セファロチン（ＣＡＳ登録番号：１５３−６１−７）；セファゾリン（ＣＡＳ登録番号：２５９５３−１９−９）；セファクロル（ＣＡＳ登録番号：７０３５６−０３−５）；セファマンドールホルメートナトリウム（ＣＡＳ登録番号：４２５４０−４０−９）；セフォキシチン（ＣＡＳ登録番号：３５６０７−６６−０）；セフロキシム（ＣＡＳ登録番号：５５２６８−７５−２）；セフォニシド（ＣＡＳ登録番号：６１２７０−５８−４）；セフメタゾール（ＣＡＳ登録番号：５６７９６−２０−４）；セフォテタン（ＣＡＳ登録番号：６９７１２−５６−７）；セフプロジル（Ｃｅｆｐｒｏｚｉｌ）（ＣＡＳ登録番号：９２６６５−２９−７）；ロラカルベフ（Ｌｏｒａｃａｒｂｅｆ）（ＣＡＳ登録番号：１２１９６１−２２−６）；セフェタメト（ＣＡＳ登録番号：６５０５２−６３−３）；セフォペラゾン（ＣＡＳ登録番号：６２８９３−１９−０）、セフォタキシム（ＣＡＳ登録番号：６３５２７−５２−６）；セフチゾキシム（ＣＡＳ登録番号：６８４０１−８１−０）；セフトリアキソン（ＣＡＳ登録番号：７３３８４−５９−５）；セフタジジム（ＣＡＳ登録番号：７２５５８−８２−８）；セフェピム（ＣＡＳ登録番号：８８０４０−２３−７）；セフィキシム（ＣＡＳ登録番号：７９３５０−３７−１）；セフポドキシム（ＣＡＳ登録番号：８０２１０−６２−４）；セフスロジン（ＣＡＳ登録番号：６２５８７−７３−９）；フレロキサシン（ＣＡＳ登録番号：７９６６０−７２−３）；ナリジクス酸（ＣＡＳ登録番号：３８９−０８−２）；ノルフロキサシン（ＣＡＳ登録番号：７０４５８−９６−７）；シプロフロキサシン（ＣＡＳ登録番号：８５７２１−３３−１）；オフロキサシン（ＣＡＳ登録番号：８２４１９−３６−１）；エノキサシン（ＣＡＳ登録番号：７４０１１−５８−８）；ロメフロキサシン（ＣＡＳ登録番号：９８０７９−５１−７）；シノキサシン（ＣＡＳ登録番号：２８６５７−８０−９）；ドキシサイクリン（ＣＡＳ登録番号：５６４−２５−０）；ミノサイクリン（ＣＡＳ登録番号：１０１１８−９０−８）；テトラサイクリン（ＣＡＳ登録番号：６０−５４−８）；アミカシン（ＣＡＳ登録番号：３７５１７−２８−５）；ゲンタマイシン（ＣＡＳ登録番号：１４０３−６６−３）；カナマイシン（ＣＡＳ登録番号：８０６３−０７−８）；ネチルマイシン（ＣＡＳ登録番号：５６３９１−５６−１）；トブラマイシン（ＣＡＳ登録番号：３２９８６−５６−４）；ストレプトマイシン（ＣＡＳ登録番号：５７−９２−１）；アジスロマイシン（ＣＡＳ登録番号：８３９０５−０１−５）；クラリスロマイシン（ＣＡＳ登録番号：８１１０３−１１−９）；エリスロマイシン（ＣＡＳ登録番号：１１４−０７−８）；エリスロマイシンエストレート（ＣＡＳ登録番号：３５２１−６２−８）；エリスロマイシンエチルスクシネート（ＣＡＳ登録番号：４１３４２−５３−４）；エリスロマイシングルコヘプトネート（ＣＡＳ登録番号：２３０６７−１３−２）；エリスロマイシンラクトビオネート（ＣＡＳ登録番号：３８４７−２９−８）；エリスロマイシンステアレート（ＣＡＳ登録番号：６４３−２２−１）；バンコマイシン（ＣＡＳ登録番号：１４０４−９０−６）；テイコプラニン（ＣＡＳ登録番号：６１０３６−６４−４）；クロラムフェニコール（ＣＡＳ登録番号：５６−７５−７）；クリンダマイシン（ＣＡＳ登録番号：１８３２３−４４−９）；トリメトプリム（ＣＡＳ登録番号：７３８−７０−５）；スルファメトキサゾール（ＣＡＳ登録番号：７２３−４６−６）；ニトロフラントイン（ＣＡＳ登録番号：６７−２０−９）；リファンピン（ＣＡＳ登録番号：１３２９２−４６−１）；ムピロシン（ＣＡＳ登録番号：１２６５０−６９−０）；メトロニダゾール（ＣＡＳ登録番号：４４３−４８−１）；セファレキシン（ＣＡＳ登録番号：１５６８６−７１−２）；ロキシスロマイシン（ＣＡＳ登録番号：８０２１４−８３−１）；コ−アモキシクラブアネート（Ｃｏ−ａｍｏｘｉｃｌａｖｕａｎａｔｅ）；ピペラシリンおよびタゾバクタムの組み合わせ；およびこれらの種々の塩、酸、塩基、およびその他の誘導体およびそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２７】
抗菌性および／または抗炎症性ペプチドは、抗真菌剤と組み合わせても用いられ得る。例示的抗真菌剤としては、塩酸テルビナフィン、ナイスタチン、アンフォテリシンＢ、グリセオフルビン、ケトコナゾール、硝酸ミコナゾール、フルシトシン、フルコナゾール、イトラコナゾール、クロトリマゾール、安息香酸、サリチル酸および硫化セレニウムが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２８】
抗菌性および／または抗炎症性ペプチドは、抗ウイルス薬と組み合わせても用いられ得る。例示的抗ウイルス薬としては、塩酸アマンタジン、リマンタジン、アシクロビル、ファムシクロビル、フォスカネット、ガンシクロビルナトリウム、イドクスウリジン、リバビリン、ソリブジン、トリフルオリジン（ｔｒｉｆｌｕｏｒｉｄｉｎｅ）、バラシクロビル、ビダラビン、ジダノシン、スタブジン（ｓｔａｖｕｄｉｎｅ）、ザルシタビン（ｚａｌｃｉｔａｂｉｎｅ）、ジドブジン、インターフェロンαおよびエドクスウジン（ｅｄｏｘｕｄｉｎｅ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２９】
抗菌性および／または抗炎症性ペプチドは、抗寄生生物剤と組み合わせても用いられ得る。例示的抗寄生生物剤としては、ピレトリン（ｐｉｒｅｔｈｒｉｎ）／ピペロニルブトキシド、ペルメトリン、ヨードキノール、メトロニダゾール、クエン酸ジエチルカルバマジン、ピペラジン、ピランテルパモエート、メベンダゾール、チアベンダゾール、プラジカンテル、アルベンダゾール、プログアニル、グルコン酸キニジン注射剤、硫酸キニン、リン酸クロロキン、塩酸メフロキン、リン酸プリマキン、アトバクオン、コ・トリモキサゾール（スルファメトキサゾール／トリメトプリム）およびペンタミジンイセチオネートが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３０】
上記のように、好ましい抗菌性および／または抗炎症性ペプチドは、その他の公知の抗炎症剤との相乗的組み合わせで用いられ得る。抗炎症薬としては、経口または吸入のコルチコステロイド（例えばヒドロコルチゾン、トリアムシノロン）、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）（例えばナブメトン、インドメチシン（ｉｎｄｏｍｅｔｈｉｃｉｎ）、ナプロキセン、イブプロフェン）、抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３）、サイトカインアンタゴニスト（例えばＩＬ−１レセプターアンタゴニスト、ＴＮＦ−αモノクローナル抗体、可溶性ＴＮＦレセプター、血小板因子４）等が挙げられるが、これらに限定されない（例えば米国特許第６，１９０，６９１号；米国特許第５，７７６，８９２号；米国特許第４，８１６，４４９号および米国特許ＲＥ３７，２６３号も参照）。
【００３１】
（Ｂ．抗体）
別の局面では、抗体が、免疫原を形成するために小非免疫原性ペプチジルコアに連結された約８コピーのペプチドを含有する多重抗原性ペプチド（ＭＡＰ）を用いて、特定の抗菌性および／または抗炎症性ペプチドおよびそのアナログまたは誘導体に対して生成され得る（概してＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（編），Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８８参照）。あるいは、標的ペプチドは、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、オボアルブミンまたは別の適切な結合体と結合体化され得る。例えば、ＭＡＰ結合体またはペプチド結合体は、ウサギまたはマウスあるいはその他の齧歯類中に皮下注射され得るが、この場合、それらは抗体産生を促すために十分に長い半減期を有し得る。１２週間後、血液サンプルが採取され、元のペプチドに対してＥＬＩＳＡアッセイで試験するために血清が分離され、陽性結果は、標的ペプチドに特異的な抗体の存在を示す。次に、この血清は保存され得、特異的ペプチドおよび／またはそのアナログもしくは誘導体の量を特異的に測定するためにＥＬＩＳＡアッセイに用いられ得る。あるいは、抗体産生のその他の標準的方法、例えばモノクローナル抗体生成が用いられ得る。
【００３２】
本発明の情況内では、抗体は、とりわけモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗イディオタイプ抗体および抗体フラグメント（例えばＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２、Ｆｖ可変領域または相補性決定領域）を含むと理解される。抗体は一般に、それらが１０−７Ｍ以上、好ましくは１０−８Ｍ以上、より好ましくは１０−９Ｍ以上のＫｄで結合する場合、抗菌性および／または抗炎症性ペプチド、例えばインドリシジンおよびそのアナログまたは誘導体に対して特異的であるとして受容される。モノクローナル抗体または結合パートナーの親和性は、当業者により容易に確定され得る（例えばＳｃａｔｃｈａｒｄ，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５１：６６０−６７２，１９４９参照）。一旦適切な抗体が単離されれば、それらは当業者に周知の多数の技法により、単離または精製され得る。
【００３３】
モノクローナル抗体は、従来の技法を用いて、ハイブリドーマ細胞株からも容易に生成され得る（米国特許ＲＥ３２，０１１号、第４，９０２，６１４号、第４，５４３，４３９号および第４，４１１，９９３号参照；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｎｕａｌ，１９８８も参照）。すなわち、一実施形態内では、対象動物、例えばラットまたはマウスは、選択されたペプチドを注射される。ペプチドは一般に、免疫応答を増大するよう意図されたアジュバント、例えばフロイント完全または不完全アジュバントを含有するエマルジョン中で投与される。動物は一般に、脾臓および／またはリンパ節の採取ならびにこれらの細胞の不死化前に少なくとも１回、追加免疫される。種々の不死化技法、例えばエプスタイン−バーウイルスにより媒介される技法またはハイブリドーマを産生するための融合が用いられ得る。好ましい実施形態では、不死化は、モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを作るための適切な骨髄腫細胞株との融合により起こる。適切な骨髄腫細胞株としては、例えばＮＳ−１（ＡＴＣＣ番号ＴＩＢ  １８）およびＰ３Ｘ６３−Ａｇ８．６５３（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１５８０）が挙げられる。好ましい融合相手は、内因性抗体遺伝子を発現しない。約７日後、特定のペプチドおよびそのアナログまたは誘導体に対して反応性である抗体の存在に関して、ハイブリドーマがスクリーニングされ得る。広範な種々のアッセイが利用され得る（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｎｕａｌ，１９８８参照）。
【００３４】
当該技術分野で公知のその他の技法を利用して、モノクローナル抗体を構築し得る（Ｈｕｓｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１，１９８９；Ｓａｓｔｒｙら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：５７２８−５７３２，１９８９；Ａｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓら、Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３：１−９，１９９０；組換え技法を記載；参照）。これらの技法は、λＩｍｍｕｎｏＺａｐ（Ｈ）およびλＩｍｍｕｎｏＺａｐ（Ｌ）等の適切なベクターへの重鎖および軽鎖免疫グロブリンｃＤＮＡのクローニングを包含する。これらの組換え体は、個別にスクリーニングされ得るかまたは同時発現されて、Ｆａｂフラグメントまたは抗体を生成し得る（Ｈｕｓｅら、上記；Ｓａｓｔｒｙら、上記、参照）。その後、陽性プラークは非溶解性プラスミドに転換されて、宿主、例えば大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉ中でのモノクローナル抗体フラグメントの高レベルな発現を可能にする。
【００３５】
同様に、抗体の部分またはフラグメント、例えばＦａｂフラグメントおよびＦｖフラグメントも、従来の酵素消化または組換えＤＮＡ技法を利用して構築されて、抗体の単離可変領域を生じ得る。一実施形態内では、当該モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマからの可変領域をコードする遺伝子は、可変領域に対するヌクレオチドプライマーを用いて増幅される。さらに、ペプチドおよびそのアナログまたは誘導体に対する抗体の結合特異性を変更することなく、「マウス」抗体を「ヒト」抗体に変えるための技法が利用され得る。
【００３６】
（ＩＩ．抗菌性および／または抗炎症性ペプチドをコードする核酸）
抗菌性および／または抗炎症性ペプチドをコードする核酸分子は自然源から単離され得るか、核酸分子の自動合成により得られ得るか、あるいは抗菌性および／または抗炎症性ペプチド遺伝子の公知のヌクレオチド配列に基づいたヌクレオチド配列を有するオリゴヌクレオチドプライマーを用いて、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて得られ得る。後者アプローチでは、相互プライミングオリゴヌクレオチドを用いて、抗菌性および／または抗炎症性ペプチド遺伝子が合成される（例えばＡｕｓｕｂｅｌら、（編），Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，第３版，頁８−８〜８−９，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９５参照（以後、「Ａｕｓｕｂｅｌ  （１９９５）」と称す））。ポリメラーゼ連鎖反応を用いて確立された技法は、少なくとも２つのキロベース長のＤＮＡ分子を合成する能力を提供する（Ａｄａｎｇら、Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２１：１１３１，１９９３；Ｂａｍｂｏｔら、ＰＣＲ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ２：２６６，１９９３；Ｄｉｌｌｏｎら、「Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｒａｐｉｄ  Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｇｅｎｅｓ」、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１５：ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｏｎｓ，Ｗｈｉｔｅ（編），頁２６３−２６８，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，１９９３；Ｈｏｌｏｗａｃｈｕｋら、ＰＣＲ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｐｐｌ．４：２９９，１９９５）。
【００３７】
上記のように、本発明は、天然ペプチドのアナログまたは誘導体を意図するが、このアナログまたは誘導体は、本明細書中に記載された方法により組換え的に産生され得る。保存的アミノ酸アナログまたは誘導体をコードするヌクレオチド配列は、例えばオリゴヌクレオチド指向性突然変異誘発、リンカー走査突然変異誘発、ポリメラーゼ連鎖反応を用いた突然変異誘発等により得られ得る（Ａｕｓｕｂｅｌ，１９９５，頁８−１０〜頁８−２２；およびＭｃＰｈｅｒｓｏｎ（編），Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９９１参照）。
【００３８】
ペプチド改変体の構築における一目的は、その活性を改善することであり得るが、天然ペプチドのアミノ酸配列を変更して、組換え宿主細胞中でのその産生を強化するのも所望され得る。特定のコドンの存在は、特定の宿主における発現に悪影響を及ぼし得る。したがって所望のペプチドをコードするＤＮＡ配列は、特定の宿主系、例えば原核生物細胞または真核生物細胞に対して最適化される。例えば、ラディッシュ陽イオン性ペプチドをコードするヌクレオチド配列は、ラディッシュには一般的に見出されるがＥ．ｃｏｌｉにおいては稀であるコドンを含み得る。稀なコドンの存在は、ラディッシュ陽イオン性ペプチドが組換えＥ．ｃｏｌｉ中で発現される場合、タンパク質レベルに悪影響を及ぼし得る。ヌクレオチド配列を変更してコドン用法問題を改善するための方法は、当業者に周知である（例えばＫａｎｅ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６：４９４，１９９５；Ｍａｋｒｉｄｅｓ，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．６０：５１２，１９９６；およびＢｒｏｗｎ（編），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ＬａｂＦａｘ，ＢＩＯＳ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｌｔｄ．，１９９１（これは２４５〜２５３ページにコドン用法表を提供する）参照）。
【００３９】
ペプチドは、組換え技法により合成され（例えば米国特許第５，５９３，８６６号参照）、種々の宿主系（細菌（例えばＥ．ｃｏｌｉ）、酵母（例えばＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、昆虫（例えばＳｆ９）および哺乳動物細胞（例えばＣＨＯ、ＣＯＳ−７）を含む）が、抗菌性および／または抗炎症性ペプチドおよびそのアナログまたは誘導体の産生に適している。多数の発現ベクターが開発されており、これらの宿主の各々に利用可能である。一般に、細菌中で機能的であるベクターが本発明において使用される。しかしながら同時に、他の宿主中で機能的であるベクターを有するのが好ましくあり得る。Ｅ．ｃｏｌｉ中でのクローニングおよび発現のためのベクターおよび手法は、本明細書中で、および例えばＳａｍｂｒｏｏｋら、（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８７）およびＡｕｓｕｂｅｌら、１９９５で考察されている。
【００４０】
ペプチドをコードするＤＮＡ配列は、宿主に適した発現ベクター中に導入される。好ましい実施形態では、遺伝子はベクター中にクローニングされて、融合タンパク質を生成する。陽イオン性ペプチドの場合、融合相手は、細菌宿主が陽イオン性ペプチドの毒性作用から保護されるよう、陰イオン領域を含有するように選択される。この保護領域は、ペプチドの抗菌作用を有効に中和し、そしてまた宿主プロテアーゼによるペプチド分解を防止し得る。本発明の融合相手（担体タンパク質）は、封入体、周辺質、外膜または細胞外環境に融合タンパク質を輸送するようさらに機能し得る。本発明の情況に適した担体タンパク質としては特に、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ由来のプロテインＡ、プロテインＡの２つの合成ＩｇＧ結合ドメイン（ＺＺ）、外膜タンパク質Ｆ、β−ガラクトシダーゼ（ｌａｃＺ）ならびにバクテリオファージλおよびバクテリオファージＴ７の種々の生成物が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書中に提供された教示から、他のタンパク質が担体として用いられ得る、ということが明らかである。さらに、担体タンパク質全体を用いる必要はない。陽イオン性ペプチドと同様に、保護的陰イオン性領域が存在する限り、担体タンパク質全体を用いる必要はない。ペプチド配列の単離を促すために、化学的切断（例えばＣＮＢｒ）または酵素的切断（例えばＶ８プロテアーゼ、トリプシン）を受けやすいアミノ酸を用いて、ペプチドおよび融合相手を架橋する。Ｅ．ｃｏｌｉ中での発現のために、融合相手は好ましくは、封入体形成に向けて発現を導く正常な細胞内タンパク質である。このような場合、最終生成物を放出するための切断後には、ペプチドの再生のための要件は存在しない。本発明においては、融合相手およびペプチド遺伝子を含むＤＮＡカセットは、プラスミド、ウイルスまたは当該技術分野で公知のその他のビヒクルであり得る発現ベクター中に挿入され得る。発現ベクターは、好ましくは宿主中に挿入されたＤＮＡ配列の効率的な転写を促進するために誘導性プロモーターまたは構成性プロモーターを含有するプラスミドである。組換えＤＮＡによる宿主細胞の形質転換は、Ｃａ＋＋媒介性技法により、エレクトロポレーションにより、または当業者に周知のその他の方法により実行され得る。
【００４１】
すなわち、ペプチドをコードするＤＮＡフラグメントは、既存のｃＤＮＡまたはゲノムクローンに由来するか、あるいは合成される。便利な方法は、一本鎖鋳型からの遺伝子の増幅である。鋳型は一般に、自動オリゴヌクレオチド合成の産物である。増幅プライマーは鋳型の５’末端および３’末端に由来し、典型的にはベクターのクローニング部位に関して選択される制限部位を組み込む。必要な場合、翻訳開始コドンおよび終結コドンは、プライマー配列中に設計され得る。タンパク質をコードする配列は、特定宿主中での発現のためにコドンを最適化され得る。したがって、例えばアナログ融合タンパク質が細菌中で発現される場合、コドンは細菌的用法のために最適化される。コドンの最適化は、遺伝子全体または遺伝子領域の自動化合成、複数のオリゴヌクレオチドのライゲーション、ネイティブ配列の突然変異誘発または当業者に公知のその他の技法により成し遂げられる。
【００４２】
好ましい実施形態内では、ベクターは、細菌細胞中での複製が可能である。したがって、ベクターは細菌複製起点を含有し得る。好ましい細菌複製起点としては、ｆ１−ｏｒｉおよびｃｏｌ  Ｅ１  ｏｒｉ、特にｐＵＣプラスミド由来のｏｒｉが挙げられる。特に生成物が宿主に対して有害である場合、低コピー数ベクター（例えばｐＰＤ１００）も用いられ得る。好ましくは、プラスミドは宿主中で機能的である少なくとも１つの選択マーカーも含む。選択マーカー遺伝子は、形質転換された細胞が単離よび／または選択的に増殖れるのを可能にする表現型を宿主に付与する。細菌宿主に適切な選択マーカー遺伝子としては、クロラムフェニコール耐性遺伝子（Ｃｍｒ）、アンピシリン耐性遺伝子（Ａｍｐｒ）、テトラサイクリン耐性遺伝子（Ｔｃｒ）、カナマイシン耐性遺伝子（Ｋａｎｒ）および当該技術分野で公知のその他のものが挙げられる。選択において機能するために、いくつかのマーカーは、宿主における相補的欠損を要し得る。ベクターは、リプレッサー結合部位を含有するプロモーターの転写を抑制し得るリプレッサータンパク質をコードする遺伝子も含有し得る。細胞の生理学的状態の変更は、プロモーターを抑圧し得る。例えば、リプレッサーを競合的に結合する分子が付加され得るか、あるいは増殖培地の温度が変更され得る。リプレッサータンパク質としては、Ｅ．ｃｏｌｉ  ｌａｃＩリプレッサー（ＩＰＴＧによる誘導に応答性）、温度感受性λｃＩ８５７リプレッサー等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４３】
少なくとも、発現ベクターは、発現制御配列、例えばプロモーター配列を含有すべきである。その他の調節配列も含まれ得る。このような配列は、エンハンサー、リボソーム結合部位、転写終結シグナル配列、分泌シグナル配列、複製起点、選択マーカー等、ならびにそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つを含み得る。調節配列は、互いに操作可能に連結されて、転写およびその後の翻訳を可能にする。好ましい局面では、発現のために本明細書中で用いられるプラスミドは、細菌中でのタンパク質の発現のために設計されたプロモーターを包含する。構成性プロモーターおよび誘導性プロモーターの両方を含めた適切なプロモーターは広範に利用可能であり、当該技術分野で周知である。細菌中での発現のために一般的に用いられるプロモーターとしては、Ｔ７、Ｔ３、Ｔ５およびＳＰ６ファージからのプロモーター、ならびにｔｒｐ、ｌｐｐおよびｌａｃオペロンが挙げられる。ハイブリッドプロモーター（米国特許第４，５５１，４３３号参照）、例えばｔａｃおよびｔｒｃも用いられ得る。細菌中での発現のためのプラスミドの例としては、ｐＥＴ発現ベクターｐＥＴ  ３ａ、ｐＥＴ  １１ａ、ｐＥＴ  １２ａ−ｃおよびｐＥＴ  １５ｂが挙げられる（米国特許第４，９５２，４９６号参照；Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩから入手可能）。低コピー数ベクター（例えばｐＰＤ１００）は、Ｅ．ｃｏｌｉ宿主に有害なペプチドの効率的過剰産生のために用いられ得る（Ｄｅｒｓｃｈら、ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．１２３：１９，１９９４）。Ｔ７発現ベクターのための細菌宿主は、Ｅ．ｃｏｌｉ株ＨＭＳ１７４（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ、ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ、ＨＭＳ１７４（ＤＥ３）およびＢＬ２１（ＤＥ３）中に見出されるような誘導性プロモーター（例えば、ｌａｃＵＶプロモーター、米国特許第４，９５２，４９６号参照）に操作可能に連結されるＴ７  ＲＮＡポリメラーゼをコードするＤＮＡの染色体コピーを含有し得る。Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼは、Ｔ７発現ベクターと適合性のプラスミド上にも存在し得る。ポリメラーゼは、λプロモーターおよびリプレッサーの制御下にあり得る（例えばｐＧＰ１−２；ＴａｂｏｒおよびＲｉｃｈａｒｄｓｏｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：１０７４，１９８５）。
【００４４】
いくつかの局面では、ペプチドをコードするヌクレオチドの配列はまた、得られるペプチドが前駆体タンパク質（すなわちプロタンパク質）として合成され、これがその後プロセシングされ、分泌されるように、分泌シグナルもコードする。得られる分泌ペプチドまたは融合タンパク質は、細胞周辺腔または発酵培地から回収され得る。使用に適した分泌シグナルの配列は広範に利用可能であり、周知である（ｖｏｎ  Ｈｅｉｊｎｅ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１８４：９９−１０５，１９８５）。
【００４５】
ペプチド生成物は、標準的な技法により、例えばアフィニティークロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィーまたはイオン交換クロマトグラフィー、ＨＰＬＣ等により単離される。単離されたペプチドは好ましくは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥのクーマシーブルー染色による大きなバンドを示し、これは好ましくは精製されたペプチド、ポリペプチドまたは融合タンパク質の少なくとも７５％、８０％、９０％または９５％である。
【００４６】
（ＩＩＩ．抗菌性および／または抗炎症性ペプチドおよびそのアナログまたは誘導体の試験）
本発明の抗菌性および／または抗炎症性のペプチドおよびそのアナログまたは誘導体は、単独で、あるいは抗菌薬または別のアナログとの組合せで、一連のアッセイを用いて、抗生物質治療薬としてのそれらの能力に関して評価される。好ましくはすべてのペプチドは、最初にインビトロで評価され、もっとも有望な候補がインビボでのさらなる評価のために選択されて、次に、前臨床試験のために候補が選択される。インビトロアッセイとしては、抗生物質活性、毒性、溶解性、薬理学、二次構造、リポソーム易透化等の測定が挙げられる。インビボアッセイとしては、動物モデルにおける効果、抗原性、毒性等の評価が挙げられる。一般に、インビトロアッセイは最初に実施され、その後インビボアッセイが実施される。
【００４７】
一般にペプチドは、（１）インビトロでの抗菌活性、（２）正常哺乳類細胞に対するインビトロ毒性、および（３）動物モデルにおけるインビボ毒性に関して最初に試験される。このような活性は、抗生物質薬の活性を強化するために必要であるというわけではないが、何らかの抗菌活性を有するペプチドが好ましい。また、インビボ使用に関して、ペプチドは好ましくは、標準手法により測定した場合に、受容可能な毒性プロフィールを実証すべきであり、この場合、毒性が低いほうが好ましい。付加的アッセイは、ペプチドが免疫原性でないことを実証するために、そしてインビボでの抗菌活性を調べるために実施され得る。
【００４８】
（Ａ．インビトロアッセイ）
抗菌性および／または抗炎症性のペプチド（インドリシジンアナログを含む）は、例えばアガロース希釈ＭＩＣアッセイ、ブロス希釈、時間−死滅（ｔｉｍｅ−ｋｉｌｌ）アッセイまたは同等の方法によりアッセイされる。抗菌活性は、微生物（例えば細菌、真菌）の増殖の抑制または死滅として測定される。
【００４９】
すなわち、カルシウムおよびマグネシウムの両方を補充したミューラー−ヒントンブロス中の候補抗菌性および／または抗炎症性のペプチドは、溶融アガロースと混合される。その他のブロスおよび寒天は、ペプチドが培地中を自由に拡散し得る限り用いられ得る。アガロースをペトリ皿またはウエルに注ぎ入れて固化し、試験菌株をアガロースプレートに適用する。試験菌株は、一部はペプチドの意図された適用に関して選択される。したがって、実例として、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）に対する活性を有するインドリシジンあるいはそのアナログまたは誘導体が望ましい場合、黄色ブドウ球菌株が用いられる。試験種のいくつかの菌株に関しておよび／または臨床的分離株に関して、候補ペプチドをアッセイするのが望ましくあり得る。プレートを一晩インキュベートし、細菌増殖に関して視覚的に検査する。ペプチドの最小阻害濃度（ＭＩＣ）は、生物体の増殖を完全に阻害するペプチドの最低濃度である。典型的には１６μｇ／ｍｌ以下のＭＩＣを有する試験菌株または菌株の群に対して良好な活性を示すペプチドが、さらなる試験のために選択される。好ましい抗菌性および／または抗炎症性のペプチドまたはそのアナログまたは誘導体は、殺菌性または静微生物性であり得る。
【００５０】
あるいは、時間−死滅曲線を用いて、設定時間中の、典型的には２４時間の増殖（例えば細菌コロニー数）における差異を確定し得る。すなわち、既知の濃度での生物体の懸濁液を調製し、候補ペプチドを添加する。懸濁液のアリコートを設定時間に取り出し、希釈し、培地上にプレート化して、インキュベートし、計数する。ＭＩＣは、生物体の増殖を完全に阻害するペプチドの最低濃度として測定され、一般にＭＩＣ値はより低いほうが好ましい。
【００５１】
本明細書中に記載されたような溶媒、ブロスまたは補助溶媒系中のペプチドの溶解度は、試験され得る付加的パラメーターである。いくつかの異なるアッセイ、例えば緩衝液中での外観が用いられ得る。すなわち、候補抗菌性および／または抗炎症性のペプチドまたはそのアナログまたは誘導体は、溶媒、ブロスまたは補助溶媒系と接触され、（ａ）透明、沈殿物なし、（ｂ）明色、拡散沈殿物から（ｃ）濁り、重い沈殿物までの範囲である尺度にしたがって外観が評価される。一般に、沈殿物が少ないことがより望ましいが、多少の沈殿物は受容可能であり得る。溶解度のレベルを評価するために、例えば当業者は組合せを視覚的に評価し得るし、あるいは種々の分光分析技法、例えば適切な波長での紫外線吸収または可視光吸収によるような技法が用いられ得る。
【００５２】
付加的インビトロアッセイを実行して、治療薬としての候補ペプチドまたはそのアナログまたは誘導体の能力を評価し得る。このようなアッセイとしては、処方物へのペプチド溶解度、血中または血漿中の薬理学および安定性、血清タンパク質結合、二次構造の分析（例えば円二色性による）、リポソーム易透化、ならびに細菌膜易透化が挙げられる。一般に好ましい実施形態は、可溶性であり、生物学的流体中で活性であり、安定であり、かつ一般的に、天然ペプチド（例えばインドリシジン）と等しいかまたはそれ以上の抗菌活性を有する候補ペプチドアナログまたはその誘導体を含む。
【００５３】
（Ｂ．インビボアッセイ）
インビトロアッセイからの結果に基づいて選択されるペプチドおよびそのアナログまたは誘導体は、効果、安定性等に関してインビボでさらに試験され得る。微生物感染を改善するそれらの能力に関してインビボで選択された候補ペプチドおよびそのアナログまたは誘導体の抗菌活性を評価するために、種々の方法および動物モデルが利用可能である。これらのアッセイ内では、媒体単独による阻害と比較して微生物増殖の阻害が統計学的に有意である場合、ペプチドは治療法として有用である。この測定は、直接的には体液または身体部位から単離された培養物から、あるいは間接的には感染動物の生存率を評価することにより成され得る。
【００５４】
天然ペプチドと比較した場合の候補ペプチドアナログおよび誘導体の抗菌活性の評価のために、いくつかの動物モデル、例えば、（ａ）正常マウスが致死用量の微生物を摂取する、（ｂ）好中球減少症マウスが致死用量の微生物を摂取する、あるいは（ｃ）ウサギが心臓中に微生物を接種されるものを含めた急性感染モデル、ならびに慢性感染モデルが利用可能である。選択されるモデルは、一部は、ペプチドおよび／またはそのアナログまたは誘導体の意図された臨床適応症によっている。
【００５５】
実例（これに限定されない）として、正常マウスモデルを用いて、致死用量の細菌をマウスに腹腔内（ｉ．ｐ．）または静脈内（ｉ．ｖ．）接種する。典型的には、用量は２日以内に９０〜１００％の動物が死亡する量である。このアッセイのための微生物菌株の選択は、一部は、ペプチドまたはそのアナログまたは誘導体の意図された用途によっており、随伴例においては、アッセイは、３つの異なるブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）株を用いて実行される。すなわち、選択された微生物の接種の直前または直後に（一般的には６０分以内）、適切な処方物緩衝液（本明細書中に記載）中のペプチドまたはそのアナログまたは誘導体が注射される。ペプチド注射は、多数回投与され得る。動物を感染後８日まで観察し、動物の生存を記録する。成功した治療は、動物を死から救出するか、あるいは非治療対照動物と比較して統計学的に有意のレベルに死亡を遅延する。インドリシジンのような天然ペプチドより良好な効果を示す抗菌性および／または抗炎症性のペプチドアナログまたはその誘導体が好ましい。
【００５６】
さらに、インビボ使用に関しては低免疫原性が好ましい。免疫原性を測定するために、ペプチドは、正常動物、一般的にはウサギに注射される。１回または多数回注射後の種々の時間に、血清が得られ、ペプチドあるいはそのアナログまたは誘導体に対する抗体反応性に関して試験される。ペプチドあるいはそのアナログまたは誘導体に対する抗体は、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降アッセイ、ウエスタンブロットおよび当該技術分野で既知のその他の方法により同定され得る（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，１９８８参照）。好ましい実施形態では、目的の抗体は、候補ペプチドあるいはそのアナログまたは誘導体との検出不可能なまたは最小度に検出可能な反応性を有する。さらに、動物における候補ペプチドあるいはそのアナログまたは誘導体の薬物動態ならびにペプチドで処置された動物の組織病理学が，確定され得る。
【００５７】
天然ペプチドと比較した場合の候補ペプチドアナログおよび誘導体の抗炎症性活性の評価のために、マウスモデルが用いられ得る。一実施形態では、当該技術分野で既知であり、かつ本明細書中に記載されているような、オキサゾロン誘導性接触過敏症のマウスモデルが用いられ得る。すなわち、３．０％（ｗ／ｖ）オキサゾロンのアセトン／コーン油（５：１）溶液が、０日目に、ほぼ同一体重およびほぼ同一齢のマウスの剃毛腹部の皮膚に局所的に塗布される。５日目に、片方の耳（他方の耳は対照である）の背側領域に塗布される１％（ｗ／ｖ）オキサゾロンのアセトン溶液でマウスは攻撃誘発され、１時間後に、ペプチド処方物またはペプチドを含有しない処方物で処置される。２４時間後、処置された耳の皮膚生検パンチが採取され、計量される。対照の耳と比較した場合の攻撃誘発した耳の重量の増大は、炎症応答を示す（例えばＣＲＣ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ：Ｄｅｌａｙｅｄ  Ｔｙｐｅ  Ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ｐａｇｅ  ３０３，Ｍ．Ｊ．ＤｅｒｅｌａｎｋｏおよびＭ．Ａ．Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ編、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  ＬＬＣ，１９９５参照）。
【００５８】
天然ペプチドと比較した場合の候補ペプチドアナログおよび誘導体の抗炎症活性を評価するための別の実施形態では、当該技術分野で既知であり、本明細書中に記載されているような１２−ｏ−テトラデカノイルホルボール（ＴＰＡ）誘発性耳浮腫のマウスモデルが用いられる。すなわち、０．００５％のＴＰＡのアセトン溶液が、片方の耳（他方の耳は対照である）の背側領域に局所的に塗布される。直ちに、耳はペプチド処方物またはペプチドを含有しない処方物で処置される。対照の耳と比較した場合の攻撃誘発された耳の重量の増大は、炎症応答を示す（例えばＹｏｕｎｇら、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．８０：４８，１９８２；ならびにＬｌｏｒｅｔおよびＭｏｒｅｎｏ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５０：３４７，１９９５参照）。
【００５９】
さらに別の実施形態では、天然ペプチドと比較した場合の候補ペプチドアナログおよび誘導体の抗炎症活性は、サイトカイン産生および活性化末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の増殖を試験することにより評価され得る。すなわち、ヒトＰＢＬが被験者から採取され、無血清リンパ球増殖培地中に１０６細胞／ｍｌでプレート化されて、候補ペプチドの存在下または非存在下で、１０μｇ／ｍｌのフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）で刺激される。ＰＢＬを５％ＣＯ２で３７℃で４８時間インキュベートし、この時点で上清を回収する。目的のサイトカイン（例えばＩＬ−１、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ）を検出するために上清に関してＥＬＩＳＡが実施され、増殖を測定するために細胞をさらに７２時間インキュベートする（例えばＳｉｇｓｃｈら、Ｊ．Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ．６９：１０９８，１９９８参照）。
【００６０】
潜在的治療法としての抗菌性および／または抗炎症性のペプチドおよびそのアナログまたは誘導体の選択は、典型的にはインビトロおよびインビボでのアッセイ結果に基づく。一般に、低免疫原性、良好なインビボ安定性および低用量レベルでの高い効果を示すペプチドは、好ましい候補ペプチドおよびそのアナログまたは誘導体である。さらに、統計学的に有意の抗炎症活性を示すペプチドも好ましい。
【００６１】
（ＩＶ．ペプチド処方物および治療的使用）
上記のように、本発明は、本明細書中に記載されたような、治療的有効量の抗菌性および／または抗炎症性のペプチド、好ましくはインドリシジンまたはそのアナログまたは誘導体を患者に投与することにより、感染を治療および防止するための方法を提供する。ペプチドは好ましくは、本発明の方法に用いられる場合、薬学的組成物の一部である。薬学的組成物は、１つまたはそれ以上の抗菌性および／または抗炎症性のペプチド、ならびに必要に応じてその他の要素に加えて、少なくとも１つの薬学的に受容可能な媒体、担体、希釈剤または賦形剤を含む。治療的使用のための薬学的に受容可能な賦形剤は薬学業界で周知であり、本明細書中に記載されており、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、第１８巻、１９９０）およびＣＲＣ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｏｏｄ，Ｄｒｕｇ，ａｎｄ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  ＬＬＣ（Ｓ．Ｃ．Ｓｍｏｌｉｎｓｋｉ編、１９９２）に記載されている。
【００６２】
本発明によるペプチド組成物の治療効果は成功した臨床的結果に基づいており、感染に関与する微生物の１００％排除を必要としない。宿主が生存するか、感染を消散するか、または原因となる作用物質を根絶するのを可能にする、感染部位での抗菌性活性および／または抗炎症性活性のレベルを達成することは十分である。宿主防御が最大に有効である場合、例えば他の点では健常な個体においては、最小限の抗菌性作用および／または抗炎症性作用のみで十分であり得る。したがって、抗菌活性に関しては、対数１（１０の因数）だけでも生物体負荷を低減すると、宿主の防御によって感染を制御するのを可能にし得る。さらに臨床的治療の成功は、これが宿主防御機構の活性化のための時間を可能にするため、長期間作用によるというよりむしろ、早期殺菌作用の増大により得る。これは、致命的感染（例えば髄膜炎）およびその他の重篤な慢性感染（例えば感染性心内膜炎）に関して特に言える。同様に、抗炎症活性は、過剰な宿主防御機構反応がさらなる損傷を引き起こさないようにするのに役立ち得る。
【００６３】
感染または炎症を治療するか、予防するかまたは改善するのに十分な量の抗菌性および／または抗炎症性のペプチドを有する本発明の処方物は、例えば局所的（例えばクリーム、軟膏、皮膚パッチ、点眼薬、点耳薬、シャンプー）な塗布または投与に特に適している。その他の典型的投与経路としては、経口、非経口、舌下、膀胱洗浄、膣、直腸、経腸、坐薬、鼻および吸入が挙げられるが、これらに限定されない。非経口という用語は、本明細書中で用いる場合、皮下、静脈内、筋内、動脈内、腹内、腹腔内、関節内、眼内または眼球後、耳内、くも膜下腔内、腔内、脳室内、脊髄内、肺内または経肺、滑液包内および尿道内注射または注入技法を包含する。本発明の薬学的組成物は、被験者への組成物の投与時に、そこに含入される抗菌性および／または抗炎症性のペプチドを生物学的に利用可能にさせるよう処方される。投与後の血清およびその他の組織中のペプチドのレベルは、種々の十分に確立された技法により、例えば細菌、クロマトグラフィーまたは抗体ベースの（例えばＥＬＩＳＡ）アッセイによりモニタリングされ得る。したがって、特定の好ましい実施形態では、本明細書中に記載されたような抗菌性および／または抗炎症性のペプチドおよびそのアナログまたは誘導体は、それを必要とする被験者、例えば動物またはヒトにおける標的部位への局所的塗布のために処方される。
【００６４】
組成物は、単回投薬単位（例えば錠剤、カプセルまたはゲル）として被験者に投与され得、組成物は、複数回投薬単位（例えばエアロゾル形態で）として投与され得る。例えば、抗菌性および／または抗炎症性のペプチド処方物を、滅菌し、ルーチンの測定調剤のために提供されるよう選択された寸法の単回使用のプラスチック積層パウチまたはプラスチックチューブ中に包装し得る。一実施例では、容器は、感染を治療または予防するために、被験者の上または中の標的表面の限られた面積に、０．５ｍｌの抗菌性および／または抗炎症性のペプチド組成物（例えばゲル形態）を投薬するよう予測された寸法を有し得る。典型的標的は、例えば静脈内カテーテルの挿入部位の直ぐ周辺、あるいは関節内では、関節炎を有する関節にある。
【００６５】
抗菌性および／または抗炎症性ペプチド組成物は、存在する種々の薬学的に受容可能な賦形剤の量および数によって、種々の形態で提供され得る。例えばペプチド組成物は、固体、半固体、液体、ローション、クリーム、軟膏、セメント、ペースト、ゲルまたはエアロゾルの形態であり得る。好ましい実施形態では、ペプチド処方物はゲルの形態である。本明細書中に記載されたようなペプチド処方組成物中に用いるのに適した薬学的に受容可能な賦形剤としては、例えば増粘剤、緩衝剤、溶媒、保湿剤、防腐剤、キレート化剤、油性化合物、皮膚軟化薬、酸化防止剤、アジュバント等が挙げられる。これらの賦形剤の各々の機能は、本発明の情況内では、相互排他的でない。例えばグリセリンは、溶媒として、または保湿剤として、または増粘剤として用いられ得る。好ましい一実施形態では、処方物は、抗菌性および／または抗炎症性のペプチド、増粘剤ならびに溶媒を含む組成物であり、これは、例えば本明細書中に記載されているように、移殖または留置医療用具に関連した炎症および／または感染を有する標的部位で有用である。
【００６６】
本発明の組成物中で有用な溶媒は当該技術分野で周知であり、これらとしては、水、グリセリン、プロピレングリコール、イソプロパノール、エタノールおよびメタノールが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、溶媒は、好ましくは約０．１％〜約２０％、より好ましくは約５％〜約１５％、もっとも好ましくは約９％〜１１％の範囲の濃度のグリセリンまたはプロピレングリコールである。その他の実施形態では、溶媒は、好ましくは約９９％まで、より好ましくは約９０％まで、もっとも好ましくは約８５％までの範囲の濃度の水またはエタノールである（別記しない限り、パーセンテージはすべて、ｗ／ｗベースである）。さらに他の実施形態では、溶媒は、水、グリセリン、プロピレングリコール、イソプロパノール、エタノールおよびメタノールのうちの少なくとも１つであり、好ましくはグリセリンまたはプロピレングリコールおよびエタノールであり、より好ましくはグリセリンおよびエタノールであり、もっとも好ましくはグリセリンおよび水である。一実施形態は、抗菌性および／または抗炎症性のペプチド、増粘剤、溶媒を含む組成物であって、この場合、溶媒は、９９％までの濃度の水、２０％までの濃度のグリセリン、２０％までの濃度のプロピレングリコール、９９％までの濃度のエタノールおよび９９％までの濃度のメタノールのうちの少なくとも１つを含む。
【００６７】
本発明の別の有用な薬学的賦形剤は、増粘剤である。特定の実施形態では、本発明の抗菌性および／または抗炎症性のペプチド組成物は増粘剤を含み、その例としてはデキストラン、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびヒドロキシプロピルセルロースならびにそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施形態では、増粘剤は、好ましくは約０．５％〜約５％、より好ましくは約１％〜約３％、もっとも好ましくは約１．３％〜１．７％の範囲の濃度のヒドロキシエチルセルロースまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースである。さらに他の好ましい実施形態では、ペプチド組成物は、一次増粘剤、例えばヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、デキストランまたはポリビニルピロリドン、ならびに二次増粘剤、例えばヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、デキストランまたはポリビニルピロリドンを有する。一次増粘剤または二次増粘剤のいずれかとして用いる場合、デキストランおよびポリビニルピロリドンが、好ましくは約０．１％〜約５％、より好ましくは約０．５％〜約１％の範囲の濃度で用いられる。好ましい一実施形態では、一次増粘剤は３％までの濃度のヒドロキシエチルセルロースであり、二次増粘剤は３％までの濃度のヒドロキシプロピルメチルセルロースである。当該技術分野で既知であるように、増粘剤の量は、液体からゲルにそして半固体形態に組成物の形態を転じるよう増大され得る。したがって、処方物中に用いられる増粘剤の量は、本明細書中に提供されたペプチド組成物の意図された用途および投与位置によって変わり得る。
【００６８】
ある用途においては、生理学的に受容可能な範囲内に、ならびにペプチドあるいはそのアナログまたは誘導体の活性を最適化する範囲内に、本発明により意図されたペプチド組成物のｐＨを保持するのが望ましくあり得る。ペプチドは、わずかに塩基性（すなわちｐＨ８）である組成物中で依然として抗菌性活性および／または抗炎症活性を有するが、例えば本発明の陽イオン性ペプチドは、中性または多少酸性である組成物中で最良に機能する。したがって、ペプチド、増粘剤および溶媒を含む組成物は、緩衝剤をさらに含み得る。ある実施形態では、緩衝剤は、一カルボン酸塩または二カルボン酸塩を含み、より具体的には、酢酸塩、フマル酸塩、乳酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩または酒石酸塩であり得る。好ましくは、緩衝剤を含むペプチド組成物は、約３〜約８、より好ましくは約３．５〜約７の範囲のｐＨを有する。別の好ましい実施形態では、緩衝剤は約１ｍＭ〜約２００ｍＭ、より好ましくは約２ｍＭ〜約２０ｍＭ、もっとも好ましくは約４ｍＭ〜約６ｍＭの範囲の濃度である。
【００６９】
その他の任意の薬学的に許容可能な賦形剤は、例えば処方物の投与を助けるもの（例えば抗刺激剤、ポリマー担体、アジュバント）、あるいは処方物の要素の完全性の保護を助けるもの（例えば酸化防止剤および防腐剤）であり得るものである。さらに、例えば１．０％陽イオン性ペプチド組成物は、２℃〜８℃で保存され得る。特定の実施形態では、ペプチド、増粘剤および溶媒を含む組成物は、保湿剤（好ましくはソルビトール、グリセロール等）または防腐剤（好ましくは安息香酸、ベンジルアルコール、フェノキシエタノール、メチルパラベン、プロピルパラベン等）をさらに含み得る。本明細書中で用いる場合、酸についての任意の言及は、その遊離酸、塩および任意のエステルを含み得る。その他の実施形態では、上記の組成物のいずれかは、保湿剤および防腐剤をさらに含む。特定の実施形態では、ペプチドあるいはそのアナログまたは誘導体は、それ自体が、最終処置用組成物の防腐剤として機能し得る。例えば、防腐剤は、ゲルがオートクレーブ処理により滅菌され得、さらに、クリームのような他の処方物より最適率でペプチドを放出する（すなわち生物学的に利用可能とする）という意外性を示すため、本明細書中に記載されたゲル処方物においては随意である。さらに、特定の実施形態は、単一処方物中に、保湿剤、防腐剤および緩衝剤またはそれらの組合せを有し得る。従って、好ましい実施形態は、ペプチド、増粘剤、溶媒、保湿剤および緩衝剤を含む組成物である。別の好ましい実施形態は、ペプチド、増粘剤、緩衝剤および溶媒を含む組成物である。さらに別の好ましい実施形態では、組成物は、ペプチド、緩衝剤および溶媒を含む。上記の処方物各々を用いて、感染を処置し、予防し、または改善し、被験者（すなわち動物またはヒト）におけるカテーテル挿入部位のような標的部位での微生物叢を低減し得るか、あるいは標的部位での炎症を低減し得る。
【００７０】
さらにその他の実施形態では、組成物は、抗菌性および／または抗炎症性ペプチド（好ましくは感染を処置または予防するのに十分な量で）および油性化合物を含む軟膏の形態である。例えば、油性化合物は、ペトロラタムであり得る。一実施形態では、油性化合物は、約５０％〜約１００％、より好ましくは約７０％〜約１００％、さらにより好ましくは約８０％〜約１００％、最も好ましくは約９５％〜約１００％の範囲の濃度で存在する。特定の他の実施形態では、軟膏組成物は、少なくとも１つの皮膚軟化薬をさらに含み得る。皮膚軟化薬は、約１％〜約４０％、より好ましくは約５％〜約３０％、さらにより好ましくは約５％〜約１０％の範囲の濃度で存在し得る。特定の好ましい実施形態では、皮膚軟化薬は、鉱油、セトステアリルアルコール、ステアリン酸グリセリルおよびそれらの組合せであり得る。
【００７１】
別の局面では、組成物は、抗菌性および／または抗炎症性ペプチド（好ましくは感染を処置または予防するのに十分な量で）、溶媒、緩衝剤、少なくとも１つの皮膚軟化薬および少なくとも１つの乳化剤を含む半固体乳濁液（例えばクリーム）の形態であり得る。好ましい実施形態では、半固体乳濁液またはクリームは、保湿剤（例えばソルビトールおよび／またはグリセリン）、油性化合物（例えばペトロラタム）、増粘剤（例えばデキストラン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルセルロースおよび／またはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、酸化防止剤（例えばブチル化ヒドロキシトルエン、好ましくは約０．０１％〜約０．１％の範囲の濃度で）、防腐剤（例えば安息香酸、ベンジルアルコール、フェノキシエタノール、メチルパラベン、プロピルパラベンまたはそれらの組合せ）あるいはそれらの組合せのうちの少なくとも１つをさらに含む。特定の好ましい実施形態では、皮膚軟化薬は、ステアリルアルコール、セチルアルコールおよび鉱油のうちの１つまたはそれ以上であり得る。特定の他の好ましい実施形態では、乳化剤は、ステアリルアルコール，セチルアルコール、ステアリン酸ポリオキシエチレン４０および一ステアリン酸グリセリルのうちの１つまたはそれ以上であり得る。好ましい実施形態では、乳化剤は、約１％〜約２０％、より好ましくは約５％〜約１０％、最も好ましくは約１％〜約１．５％の範囲の濃度で存在する。上記のように、これらの乳化剤および皮膚軟化薬の各々の機能は、当該技術分野で既知であるように、そして本明細書中に記載されているように、特定の処方物によって、皮膚軟化薬が乳化剤として機能し得、かつ、乳化剤は皮膚軟化薬として機能し得るという点で、相互排他的でない。特定の好ましい実施形態では、本明細書中に記載されているように、溶媒は水等を含み、緩衝剤は一カルボン酸塩または二カルボン酸塩等を含む。
【００７２】
ペプチド処方物を用いた処置に適した被験者は、疾患発症に対する危険についての十分に確立された指標により、あるいは既存の疾患の十分に確立された特徴により同定され得る。例えば、感染の指標としては、発熱、膿、微生物陽性培養、炎症等が挙げられる。本発明により提供されるペプチドで処置され得る感染としては、感染が一次であれ、二次であれ、日和見等であろうと、微生物によりまたは微生物のために引き起こされるものが挙げられるが、これらに限定されない。微生物の例としては、細菌（例えばグラム陽性、グラム陰性）、真菌（例えば酵母およびカビ）、寄生生物（例えば原生動物、線虫、条虫および吸虫）、ウイルス（例えばＨＩＶ、ＨＳＶ、ＶＳＶ）、藻類およびプリオンが挙げられる。これらのクラス中の特定の生物体は、周知である（例えばＤａｖｉｓら、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｈａｒｐｅｒ  ＆  Ｒｏｗ，１９８０；およびＳｔａｎｉｅｒら、Ｔｈｅ  Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｗｏｒｌｄ，５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｒｅｎｔｉｃｅ  Ｈａｌｌ，１９８６を参照のこと）。感染としては、毒物ショック症候群、ジフテリア、コレラ、チフス、髄膜炎、百日咳、ボツリヌス中毒、破傷風、化膿性感染、副鼻腔炎、肺炎、歯肉炎、粘膜炎、毛包炎、蜂巣炎、挫瘡および尋常性挫瘡、膿痂疹、骨髄炎、心内膜炎、潰瘍、熱傷、赤痢、尿路感染、胃腸炎、炭疽、ライム病、梅毒、風疹、敗血症およびペスト；ならびに例えば外傷、外科手術、気管内挿管、気管切開および嚢胞性繊維症に関連した一次、二次および日和見感染が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７３】
被験者は、本発明の組成物および方法により処置可能または予防可能な感染または炎症に関連したその他の臨床的適応症を有し得る。これらの適応症としては、移殖可能、留置または同様の医療デバイス、例えば血管内カテーテル（例えば静脈内および動脈内）、右心臓流特定カテーテル、ヒックマンカテーテル、動静脈瘻、血液透析および腹膜透析に用いられるカテーテル（例えばサイラスティック、中枢神経、テンクホッフ（Ｔｅｎｃｋｈｏｆｆ）、およびテフロン（登録商標）カテーテル）、血管アクセス口、留置尿カテーテル、尿カテーテル、シリコーンカテーテル、心室カテーテル、合成血管プロテーゼ（例えば大動脈大腿動脈および大腿膝窩動脈）、人工心臓弁、人工関節、整形外科移植片、陰茎移植片、シャント（例えばスクリブナー、トルキルドセン、中枢神経系、門脈系、心室、心室腹腔）、子宮内デバイス、タンポン、コンタクトレンズ、歯科インプラント、尿管ステント、ペースメーカー、移殖可能除細動器、チュービング、カニューレ、プローブ、血液監視デバイス、針等に関する適応症が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書中で用いる場合、「医療用具」とは、被験者、例えば動物またはヒトにおいて用いるための任意のデバイスを指す。
【００７４】
本明細書中に記載されたように処方されるインドリシジンまたはそのアナログまたは誘導体を伴うデバイス挿入のための標的部位の消毒が、デバイス挿入前および／またはデバイス挿入後、ならびに用具関連感染および炎症の危険を低減するバリア用法注意と組合せて達成され得ることが、本発明の利点である。従って、本発明の組成物および方法は、例えば局在性感染および／または炎症（例えば外傷、外科手術またはその他の医学的手順後の）を処置し、予防しまたは改善するための、ならびに医療デバイス関連敗血症を予防するための皮膚消毒に特に有用である。さらに、例えば陽イオン性ペプチドを用いることの一利点は、抗菌薬耐性微生物を選択する危険性を低減することである。
【００７５】
背景として、ならびに上記のように、炎症は、感染性因子、抗原誘発攻撃またはまさに物理的、化学的または外傷性損傷による侵襲に対する身体の反応である。傷害に対する身体の応答の引き金に関するメカニズムは、非常に感応性である。従って、身体は、小損傷（例えば挫傷、引っかき傷、切り傷および擦過傷）、ならびに大損傷（例えば重症熱傷および四肢の切断損傷）の両方に応答する能力を有する。損傷は、皮膚または内部表面の完全性を破り得、下層の結合組織、筋肉および血管に影響を及ぼし得る。この情況では、感染は、有害生物体の進入に対する正常バリアが破られたために、生じ得るし、しばしば生じる。免疫系の細胞は、身体全体に広範に分布されるが、しかし感染または組織損傷が起きた場合、身体は損傷部位に免疫応答を集中させなければならない。損傷部位周囲の組織に対する自己損傷の可能性を最小限にするために、炎症性応答は、十分に指令され、制御されねばならない。身体は、血液の損失を低減するかまたは停止するようにいくつかの情況において迅速に作用できなければならないが、一方、組織修復および再構築は遅延され得る。従って、広範な種々の相互連結細胞性および体液性（可溶性）メカニズムは、組織損傷および感染が起こる場合、活性化される。
【００７６】
細胞および組織に対して損傷を誘導し得る内因性因子および外因性因子が存在する。外因性因子としては、機械的（外傷性損傷）、物理的（極低または高温、電離性放射線、マイクロ波）、化学的（腐食剤、毒物、毒液、遺伝毒性およびタンパク質毒性化合物）、栄養的（酸素、ビタミンおよび基礎栄養素の欠乏）ならびに生物学的（ウイルス、微生物、原生動物および後生動物寄生体）因子が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書中に記載されたようなペプチドおよびその薬学的組成物は、これらの内因性因子および外因性因子により引き起こされる損傷を処置し、予防しそして改善するための抗炎症剤として有用である。特定の実施形態では、本発明のペプチドおよび薬学的組成物は、本明細書中に記載されたような炎症性疾患を処置し、予防し、そして改善するための方法に用いられる。好ましくはペプチド処方物は、単独で、あるいは抗生物質および／または抗炎症剤と組合せて、臨床的適応症、例えば挫瘡、関節炎、自己免疫疾患、熱傷、クローン病、結腸炎、接触過敏症、遅延型過敏症、湿疹、内毒素ショック症候群、繊維筋炎、移植片拒絶、苔癬、微生物感染、多発性硬化症、類乾癬、乾癬、硬化症および脂漏を処置し、予防しまたは改善するための方法に用いられる。
【００７７】
内因性損傷因子としては、免疫病理学的反応、ならびにいくつかの神経学的障害および遺伝学的障害が挙げられる。しかし、外因性抗原もまた、免疫病理学的反応の引き金となり得る。炎症をもたらす遺伝子的に引き起こされる改変は、膜構造の破壊により、輸送メカニズムの撹乱により、および欠陥性代謝的または伝達物質活性により例示される。（例えば代謝中間体、例えば異なるフリーラジカル、アルデヒドおよびケトンは蓄積され得る。）同様に、免疫応答中、免疫メカニズムに関与するエフェクター細胞および分子が宿主を損傷し得、これは、免疫病理学的応答（すなわち慢性炎症）であると考えられる。当該技術分野で既知であるように、多数の異なる種類の炎症、例えば急性および慢性炎症が存在する。特定の好ましい実施形態では、本発明のペプチドおよびそのアナログまたは誘導体は、炎症を処置し、予防しまたは改善するための方法に用いられ、ここで、炎症は、急性、癒着性、萎縮性、カタル性、慢性、クループ性、退行性、滲出性、繊維素性化膿性、繊維素性、肉芽腫性、間質性、壊死性、増殖性、偽膜性、化膿性、硬化性、漿液繊維素性、漿液性および亜急性であり得る。
【００７８】
本発明のペプチドおよびそのアナログまたは誘導体の使用は、局所的抗菌性または抗炎症剤が感染および／または炎症の処置、予防または改善に有用である多数の用途を包含する。例えば、Ｉ型過敏症は、アレルゲンとの接触の直後に起こるアレルギー反応により特性付けされる。いくつかの個体においては、特定のアレルゲンは、肥満細胞および好塩基球に非特異的に結合するＩｇＥ抗体の産生を刺激するような傾向を有する。細胞結合ＩｇＥ抗体への抗原の引き続く付着は、細胞質粒状含有物（例えばヒスタミン）の放出を、そしてアラキドン酸の生物学的に活性な生成物（例えばロイコトリエン）の合成および分泌を引き起こす。レアギン反応は、蕁麻疹、季節性鼻炎、喘息およびアトピー性皮膚炎（すなわちアトピー性疾患）のようなアレルギー現象に関与する。多量のアレルゲンが宿主循環に進入する環境において、全身性アナフィラキシーが、蕁麻疹から血管性浮腫（例えば唇、舌、口蓋および喉頭の粘膜の腫脹）、悪心および嘔吐（消化管の浮腫および平滑筋収縮）、喘息（気管支平滑筋収縮）および低血圧（組織中への血液容積の損失を、したがって血圧低下を生じる血管透過性増大；心臓の収縮性低減も低血圧に寄与する）までの範囲の症状発現を伴って生じ得る。致命的反応は、喉頭浮腫、重症喘息または重症低血圧および循環性虚脱を包含する。ＩｇＥ媒介アナフィラキシーを誘発する外因性因子としては、ペニシリン、昆虫毒液、食物、ならびに時として免疫療法（すなわちアレルギー性疾患を処置するためにヒトがアレルギー性であるアレルゲンの注射）が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、ペプチド処方物は、単独で、または抗生物質および／または抗炎症剤と組合せて、経口的に、最も好ましくは吸入により投与される。全身投与はまた、静脈内、筋肉内または皮下注射または注入によるものであり得る。
【００７９】
同様に、本発明の組成物および方法のための別の使用は、ＩＩ型過敏症を生じる免疫病理学的反応の処置におけるものである。ＩＩ型すなわち抗体依存性細胞傷害性過敏症は、抗体が細胞上の自己抗原または外来抗原のいずれかに結合する場合に生じ、食作用、キラー細胞活動または補体媒介溶解をもたらす。ＩＩ型反応は、特定の細胞および組織の表面の抗原に向けられるＩｇＧおよびＩｇＭ抗体を包含し；したがってＩＩ型反応により引き起こされる損傷は、局在化される傾向がある。これらの過敏反応は、微生物および大型多細胞性寄生生物に対して観察される正常免疫応答に関連する。実際、病原体に対する反応を仕掛けるに際して、大げさな免疫反応は、時としては病原体それ自体の作用と同様に、宿主に対する損傷となり得る。ＩＩ型過敏症においては、抗体は標的細胞の細胞表面抗原に結合して、免疫複合体を形成し、この複合体は、補体またはエフェクター細胞と相互作用して、標的細胞に損傷をもたらす。組織抗原に結合する抗体は、古典的経路を活性化することにより補体と相互作用し、これが、膜攻撃複合体による溶解細胞を生じる。あるいは、抗体は、標的細胞をエフェクター細胞（例えばマクロファージ、好中球および好酸球）に連結し得、これが抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を生じる。食細胞のリソソーム活性を強化し、そして反応性酸素中間体を産生するそれらの能力を増強することにより、抗体は、過敏反応における免疫病理学的損傷の確率を増大する。
【００８０】
例えば慢性関節リウマチ患者の滑液からの好中球は、刺激された場合、末梢血からの好中球より多くのスーパーオキシドを産生する。従って、リウマチ様関節中の好中球の活性化は、上記の免疫複合体および補体フラグメントのような媒介によるものであり得る。細胞傷害性過敏には、以下の３つの主なサブタイプが存在する：（１）同種免疫（これは同一種のメンバー間の反応である（例えば輸血反応、新生児溶血性疾患、移植拒絶））；（２）自己免疫ＩＩ型過敏反応は、自己抗原に対して向けられる宿主中の抗体（自己抗体）により誘発される（例えば自己免疫性溶血性貧血、橋本甲状腺炎、特発性血小板減少性紫斑病、グッドパスチャー症候群）；および（３）薬剤反応は、ハプテンから完全抗原への転換を受ける身体要素に結合される薬剤から生じ得、これは特定の個体に感受性であり得る（例えばクロルプロマジンまたはフェナセチンの連続投与に関連した溶血性貧血、アミドピリンまたはキニジンの摂取に関連した顆粒球減少症、血小板減少性紫斑病）。好ましい実施形態では、ＩＩ型過敏反応、例えば移植片拒絶に関連した炎症は、本明細書中に記載されたような抗菌性および／または抗炎症性ペプチド組成物の全身または局所投与により、処置、予防または改善される。
【００８１】
本発明の組成物および方法のさらなる使用は、ＩＩＩ型過敏反応に関連した炎症の処置、予防または改善においてである。ＩＩＩ型過敏は、免疫複合体が大量に形成された場合、あるいは細網内皮系により適切に除去され得ず、血清疾患型反応を生じた場合に発症する。局所組織中の免疫複合体の沈着とその結果としての炎症は、リウマチ性疾患において一般的である。このような複合体は、小血管に局在化され得、局所的炎症および血管炎を引き起こす。マクロファージによる免疫複合体の食作用は、サイトカイン（例えばＩＬ−１およびＴＮＦ−α）の放出を生じ得、これらが発熱を開始する。糸球体基底膜中の免疫複合体の沈着は、糸球体炎症を引き起こし得る。関節炎は、同様のメカニズムに起因し得る；慢性関節リウマチは、局所免疫複合体反応の多数の特性を有し、一方、全身性紅斑性狼瘡は血清疾患の多数の臨床的特長を有する。
【００８２】
ＩＩＩ型過敏反応の一例は、低段階持続性感染（例えばα−溶血性緑色連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｖｉｒｉｄａｎｓ）またはブドウ球菌感染性心内膜炎を伴って、または三日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）のような寄生生物に伴って、あるいはウイルス性肝炎において起きる）から弱抗体応答と一緒に発症するものであり、これは慢性免疫複合体形成を生じ、組織中の複合体の終局的沈着を伴う。別の例は、単核食細胞、赤血球および補体系（複合体の除去に関与する）が過負荷になり、全身性紅斑性狼瘡で起きるのと同様に、複合体が組織中に沈着される場合である。ＩＩＩ型過敏のさらに別の例は、外因性アレルギー性肺胞炎（例えば農夫肺、ハト愛好者肺）であり、これはカビ、植物または動物からの抗原性物質の吸入から生じる。好ましい実施形態では、本明細書中に記載されたペプチド組成物は、緩衝剤、溶媒、ならびに以下の配列のうちの１つを含む３５アミノ酸までのインドリシジンアナログを含む組成物を非経口的に投与することにより炎症を処置し、予防しまたは改善するための方法に用いられる：１１Ｂ７、１１Ｂ１１、１１Ｂ２４、１１Ｂ３８、１１Ｄ２１、１１Ｆ４、１１Ｆ１１、１１Ｆ１２、１１Ｆ１７、１１Ｆ３５、１１Ｆ４３、１１Ｆ４６、１１Ｆ６０、１１Ｆ６１、１１Ｆ６５、１１Ｆ６６、１１Ｆ８２、１１Ｆ８３、１１Ｆ１１０、１１Ｊ０２、１１Ｊ３０、１１Ｊ３２、１１Ｊ３３、１１Ｊ３７、１１Ｊ４４、１１Ｊ４５、１１Ｊ６７、１１Ｊ６８、１１Ｊ８４、１１Ｊ９７、１１Ｊ１０５、１１Ｊ１１５、１１Ｊ１３１、１１Ｊ１３６、１１Ｊ１４８または１１Ｊ１５７。別の好ましい実施形態では、薬学的に許容可能な希釈剤、および以下の配列のうちの１つを含む３５アミノ酸までのインドリシジンアナログを含む組成物が投与される：１１Ｂ７、１１Ｂ１１、１１Ｂ２４、１１Ｂ３８、１１Ｄ２１、１１Ｆ４、１１Ｆ１１、１１Ｆ１２、１１Ｆ１７、１１Ｆ３５、１１Ｆ４３、１１Ｆ４６、１１Ｆ６０、１１Ｆ６１、１１Ｆ６５、１１Ｆ６６、１１Ｆ８２、１１Ｆ８３、１１Ｆ１１０、１１Ｊ０２、１１Ｊ３０、１１Ｊ３２、１１Ｊ３３、１１Ｊ３７、１１Ｊ４４、１１Ｊ４５、１１Ｊ６７、１１Ｊ６８、１１Ｊ８４、１１Ｊ９７、１１Ｊ１０５、１１Ｊ１１５、１１Ｊ１３１、１１Ｊ１３６、１１Ｊ１４８または１１Ｊ１５７。
【００８３】
本発明のペプチド組成物および方法のさらなる使用は、ＩＶ型過敏反応の処置においてである。ＩＶ型すなわち遅延型過敏（ＤＴＨ）は、抗原（例えばヒト結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）のもの）がマクロファージ中に捕らえられ、排除され得ない場合に、最も重篤に症状発現される。次いで、Ｔ細胞が刺激されてリンホカインを作り出し、これが炎症性応答の範囲を媒介する。ＤＴＨ反応のその他の局面は、移植片拒絶およびアレルギー性接触皮膚炎において観察される。ＤＴＨは、発症に１２時間以上を要し、体液性免疫反応というよりむしろ細胞媒介免疫反応を伴うすべての過敏反応を説明するための一般的なカテゴリーとして用いられる。アレルギー反応は数秒および数分以内に起こり、そして免疫複合体反応は数時間〜１日以内に起こるが、一方、ＤＴＨ反応は２〜３日でピークに達する。接触過敏（例えば接触皮膚炎、これは特定の単純な化学物質に対する感作により引き起される）およびツベルクリン型過敏はともに、抗原投与の７２時間以内に起こるが、一方、肉芽腫性反応は数週間の期間にわたって発症する。いくつかの場合、例えば小児期の慢性肉芽腫性疾患の場合、肉芽腫形成は生体構造（例えば食道または尿管）の閉塞を引き起し得る。ＤＴＨ反応はおそらくは、細胞内寄生生物、例えばヒト結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、特定のウイルスに対する宿主防御のために、ならびに特定の疾患例えばサルコイドーシス、ウェーゲナー肉芽腫症および多発性筋炎において重要である。好ましい実施形態では、ＩＶ型過敏反応に関連した炎症（例えば、接触皮膚炎）は、本明細書中に記載されたようなペプチド組成物の全身または局所投与により、処置、予防または改善される。
【００８４】
本発明の組成物および方法の別の使用は、依然として広範熱傷患者における罹患率および死亡率の最も一般的原因である急性炎症に関連した熱傷創傷の処置においてである。さらに、感染は、創傷治癒、合併症の出現率および熱傷患者の結果の主要決定因子である。関与する主な生物体は、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）および種々のグラム陰性生物である。高頻度の壊死組織除去ならびに表皮または代理物（例えば、移植片または代用皮膚）の確立は、感染防止に不可欠である。好ましくは、ペプチド処方物は、単独でまたは抗菌性および／または抗炎症性剤と組合せて、ゲル、軟膏またはクリームとして熱傷創傷に塗布されるか、かつ／または全身投与される。局所適用は、表在性コロニー形成後の全身感染を予防し得るか、あるいは表在感染を撲滅し得る。抗菌性および／または抗炎症性ペプチド組成物は、本明細書中に記載されたように、好ましくは０．５％〜２％ゲルクリームまたは軟膏として投与される。皮膚への適用は、１日１回、あるいは包帯が取り替えられる頻度と同じ頻度で実行され得る。全身投与は、静脈内、筋肉内または皮下注射または注入によるものであり得る。当該技術分野で公知の他の投与経路も用いられ得る。
【００８５】
本発明の組成物および方法のさらに別の使用は、外科的創傷、特に外来物質に関連したもの（例えば縫合糸）の処置においてである。院内感染は、外科手術患者の７１％という多さで起こり、そのうちの４０％が手術現場での感染である。感染予防の努力にもかかわらず、５００，０００〜９２０，０００件の外科的創傷感染が、米国で年間実施される約２３００万件の外科手術に併発すると概算される。感染生物は種々であるが、しかし連鎖球菌類（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ  ｓｐｐ．）がこの感染における重要な生物体である。好ましくはペプチド処方物は、単独でまたは抗生物質と組合せて、ゲル、軟膏、クリームまたは液体として創傷部位に、あるいは創傷中に液体として、創傷閉鎖の前または閉鎖中に塗布される。閉鎖後、本発明のペプチド組成物はまた、包帯交換時にも塗布され得る。感染される外科的または外傷的創傷に対しては、本明細書中に記載されたペプチド処方物が、局所的におよび／または全身的に塗布され得る。
【００８６】
さらに別の実例では、滅菌ガーゼ包帯は長年、カテーテル処置におけるケアの標準であったが、しかし、カテーテル処置部位の連続検査を可能にし、確実に用具を固定し、患者が包帯をずぶ濡れにすることなく入浴することおよびシャワーを浴びることを可能にするという理由から、透明ポリウレタンフィルム包帯が優れている、ということも実証されている。したがって特定の好ましい実施形態は、感染および炎症を最小限にするために、滅菌ガーゼまたはポリウレタンフィルム包帯とともに用いるための本明細書中に記載されたようなペプチド組成物を含む。
【００８７】
さらに本発明の組成物および方法は、標的部位での挿入の前に医療用具を直接被覆することにより、あるいは製造時に医療用具の外表面を含浸することにより、用具関連感染および炎症の危険を低減するために用いられ得る。本発明のさらに別の局面では、処方物は、医療用具を含浸または被覆するのに適したペプチドまたはペプチド組成物を含む。したがって本発明の抗菌性および／または抗炎症性ペプチドは、医療用具またはその要素の表面を処理するのに適した被覆または含浸物質として処方され得る。ある実施形態では、このような被覆および含浸物質は、医療用具またはその要素の内および／または外表面へのペプチドおよびそのアナログまたは誘導体の共有結合および／または非共有結合を含み得る。その他の実施形態では、このような被覆および含浸物質は、ヒドロゲル層または生腐食性層中のペプチドの封じ込めを包含し得る。
【００８８】
その他の実施形態は、ペプチドコーティング、ゲル、軟膏および含浸組成物の、単独での、あるいは例えば血液透析装置とともに用いられるフィルターユニットまたはカテーテル要素と組み合わせての使用を包含する。一実施形態では、動静脈シャント、例えばスクリブナーシャントは、抗菌性および／または抗炎症性ペプチドを含有するフィルターに含浸され、被覆されまたは適合され得る。その他の実施形態は、動静脈瘻とともに用いるための同一のコーティング、ゲル、軟膏および含浸組成物を包含する。さらに別の実施形態では、コーティングは網状繊維血管シャントとともに用いるのに適切であり得る。
【００８９】
さらに他の実施形態は、ペプチド処方物および方法を、医療用具を挿入するために用いられる一時的アクセス部位とともに用いることを包含する。好ましい一実施形態では、ペプチド処方物は、大腿静脈カテーテル処置中に用いられ得る。その他の好ましい実施形態は、カテーテル、例えば血管透析カテーテル、肺動脈カテーテル、腹腔透析カテーテル、臍帯カテーテルおよび鎖骨下静脈カテーテルに伴うペプチド処方物の使用を包含する。
【００９０】
例（これらに限定されない）として、局所感染および全身感染ならびに炎症はともに、汚染血管内用具、例えばＣＶＣに起因し、典型的に関与する生物体は、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌（ＣｏＮＳ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、腸球菌類（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．）、大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）およびカンジダ類（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｐｐ．）である。それゆえ、抗菌性および／または抗炎症性ペプチドあるいはそのアナログまたは誘導体は、好ましくはゲルまたはクリームの形態で、カテーテル挿入前にカテーテル部位に適用され得、次いで各包帯交換時にも適用され得る。好ましくはペプチドは、約０．８５％〜約１．１５％の範囲の濃度である。したがって典型的実施形態では、組成物は、約０．０１％〜約１０％の範囲の濃度での抗菌性および／または抗炎症性ペプチド；デキストラン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルセルロースまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースから選択される増粘剤；および水、グリセリン、プロピレングリコール、イソプロパノール、エタノールまたはメタノールの溶媒を、約３〜約８の範囲のｐＨで含有する。
【００９１】
好ましい実施形態では、本発明は、標的部位での微生物相の低減方法であって、抗菌性および／または抗炎症性ペプチド、増粘剤および溶媒を含む組成物を標的部位に適用することを包含する方法において有用である。本明細書中で用いる場合、標的部位は、一次または二次または日和見感染（これらの感染は被験者の外側または内側である）が存在するか、あるいはその危険がある被験者上の任意の部位であり、また、本発明の処方物が投与または適用され得る任意の部位である。ある実施形態では、標的部位で低減されている微生物相は、原核生物、真核生物またはウイルスであり、好ましくは原核生物であり得る。その他の実施形態では、標的部位での微生物相の低減方法は、ペプチド、増粘剤および溶媒を含有する組成物を標的部位に適用することを包含し、そしてさらに組成物の適用の前および／または後に標的部位に医療用具を挿入することを包含する。別の実施形態では、組成物は、上記のような緩衝剤をさらに含み得、約３．５〜約７の範囲のｐＨを有し得る。さらに、組成物は、防腐剤（例えば安息香酸、ベンジルアルコール、フェノキシエタノール、メチルパラベン、プロピルパラベン等ならびにそれらの組合せ）をさらに含有し得る。好ましくは、ペプチドは、本明細書中に記載されたようなインドリシジンあるいはそのアナログまたは誘導体である。
【００９２】
別の好ましい実施形態は、増粘剤、溶媒、ならびに以下の配列：１１Ｂ７、１１Ｂ１１、１１Ｂ２４、１１Ｂ３８、１１Ｄ２１、１１Ｆ４、１１Ｆ１１、１１Ｆ１２、１１Ｆ１７、１１Ｆ３５、１１Ｆ４３、１１Ｆ４６、１１Ｆ６０、１１Ｆ６１、１１Ｆ６５、１１Ｆ６６、１１Ｆ８２、１１Ｆ８３、１１Ｆ１１０、１１Ｊ０２、１１Ｊ３０、１１Ｊ３２、１１Ｊ３３、１１Ｊ３７、１１Ｊ４４、１１Ｊ４５、１１Ｊ６７、１１Ｊ６８、１１Ｊ８４、１１Ｊ９７、１１Ｊ１０５、１１Ｊ１１５、１１Ｊ１３１、１１Ｊ１３６、１１Ｊ１４８または１１Ｊ１５７のうちの１つを含む３５アミノ酸までのペプチドを含む組成物である。さらに好ましい実施形態では、ペプチドは、約０．８％〜約１．２％の範囲の濃度である。このような組成物は、例えば局所または全身投与のために有用である。別の実施形態では、組成物は、炎症、例えば移殖または留置医療用具に関連した炎症を治療し、予防しまたは改善するために標的部位に適用され得る。好ましくは、組成物は、挫瘡、関節炎、自己免疫疾患、熱傷、クローン病、結腸炎、接触過敏症、遅延型過敏症、湿疹、内毒素ショック症候群、繊維筋炎、移植片拒絶、苔癬、微生物感染、多発性硬化症、類乾癬、乾癬、硬化症および脂漏といった症状に関連した炎症を治療し、予防しまたは改善するために、標的部位に適用される。別の実施形態では、組成物は、異なる種類の炎症、例えば急性、癒着性、萎縮性、カタル性、慢性、クループ性、退行性、滲出性、繊維素性化膿性、繊維素性、肉芽腫性、間質性、壊死性、増殖性、偽膜性、化膿性、硬化性、漿液繊維素性、漿液性および亜急性炎症を治療し、予防しまたは改善するために標的部位に適用される。
【００９３】
本発明の組成物および方法は、挫瘡、例えば重症尋常性挫瘡または痘瘡状挫瘡を有効に治療し、予防しまたは改善するために、治療的に用いられ得る。挫瘡は、プロピオン酸菌（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅ）による毛包および皮脂嚢胞のコロニー化および感染によるものである。ほとんどの場合、軽症のままで瘢痕を生じないが、しかし小派の患者が大型炎症嚢胞および結節を発症し、これが排出し、有意の散乱瘢痕を生じ得る。本明細書中に記載されたようなペプチド処方物は石鹸中に混入され得るか、あるいはクリーム、ローションまたはゲルとして罹患領域に局所的に適用され得る。ペプチド処方物は、１日１回、または１日の間に多数回適用され得、治療期間は病変が存在する間または病変再発を予防するための長さであり得る。あるいは、ペプチド組成物は、挫瘡病変を治療または予防するために経口または全身投与されるよう処方され得る。好ましくは、ペプチド組成物は、局所的投与または適用のために処方される。好ましい実施形態は、増粘剤、溶媒、ならびに以下の配列：１１Ｂ７、１１Ｂ１１、１１Ｂ２４、１１Ｂ３８、１１Ｄ２１、１１Ｆ４、１１Ｆ１１、１１Ｆ１２、１１Ｆ１７、１１Ｆ３５、１１Ｆ４３、１１Ｆ４６、１１Ｆ６０、１１Ｆ６１、１１Ｆ６５、１１Ｆ６６、１１Ｆ８２、１１Ｆ８３、１１Ｆ１１０、１１Ｊ０２、１１Ｊ３０、１１Ｊ３２、１１Ｊ３３、１１Ｊ３７、１１Ｊ４４、１１Ｊ４５、１１Ｊ６７、１１Ｊ６８、１１Ｊ８４、１１Ｊ９７、１１Ｊ１０５、１１Ｊ１１５、１１Ｊ１３１、１１Ｊ１３６、１１Ｊ１４８または１１Ｊ１５７のうちの１つを含む３５アミノ酸までのペプチドを含む組成物である。別の好ましい実施形態は、緩衝剤、溶媒、ならびに以下の配列：１１Ｂ７、１１Ｂ１１、１１Ｂ２４、１１Ｂ３８、１１Ｄ２１、１１Ｆ４、１１Ｆ１１、１１Ｆ１２、１１Ｆ１７、１１Ｆ３５、１１Ｆ４３、１１Ｆ４６、１１Ｆ６０、１１Ｆ６１、１１Ｆ６５、１１Ｆ６６、１１Ｆ８２、１１Ｆ８３、１１Ｆ１１０、１１Ｊ０２、１１Ｊ３０、１１Ｊ３２、１１Ｊ３３、１１Ｊ３７、１１Ｊ４４、１１Ｊ４５、１１Ｊ６７、１１Ｊ６８、１１Ｊ８４、１１Ｊ９７、１１Ｊ１０５、１１Ｊ１１５、１１Ｊ１３１、１１Ｊ１３６、１１Ｊ１４８または１１Ｊ１５７のうちの１つを含む３５アミノ酸までのペプチドを含む組成物である。さらに好ましい実施形態では、ペプチドは、約０．８％〜約１．２％の範囲の濃度である。別の好ましい実施形態では、ペプチド組成物は、挫瘡薬、例えばレチノイド、ビタミンＤ３またはコルチコステロイド、ならびにそれらのアナログまたは誘導体をさらに含み得る。したがって、標的部位での微生物相または炎症を低減するための、あるいは感染を治療または予防するためのある好ましい方法では、標的部位は皮膚であり得、そして皮膚はさらに挫瘡を含み得る。
【００９４】
本発明の組成物および方法の治療価値の別の例は、院内感染の治療にある。例えば、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）による感染は、膿痂疹病変または感染創傷を生じ得、また、疾患誘導性および医原性である心臓手術、血液透析、整形手術および好中球減少後の感染率増大に関連する。ブドウ球菌類（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ  ｓｐｐ．）の鼻および鼻外輸送は、患者または病院従業者の鼻通路または鼻外部位にコロニー形成している同一ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）株の病院内大発生を生じ得る。鼻コロニー形成の根絶には多大な注意が払われてきたが、しかし治療の結果は一般に満足のいくものではなかった。局所的抗菌物質、例えばバシトラシン，テトラサイクリンおよびクロルヘキシジンの使用は、根絶とは対照的に、鼻コロニー形成の抑制を生じる。
【００９５】
したがって、好ましい実施形態は、緩衝剤、溶媒、ならびに以下の配列：１１Ｂ７、１１Ｂ１１、１１Ｂ２４、１１Ｂ３８、１１Ｄ２１、１１Ｆ４、１１Ｆ１１、１１Ｆ１２、１１Ｆ１７、１１Ｆ３５、１１Ｆ４３、１１Ｆ４６、１１Ｆ６０、１１Ｆ６１、１１Ｆ６５、１１Ｆ６６、１１Ｆ８２、１１Ｆ８３、１１Ｆ１１０、１１Ｊ０２、１１Ｊ３０、１１Ｊ３２、１１Ｊ３３、１１Ｊ３７、１１Ｊ４４、１１Ｊ４５、１１Ｊ６７、１１Ｊ６８、１１Ｊ８４、１１Ｊ９７、１１Ｊ１０５、１１Ｊ１１５、１１Ｊ１３１、１１Ｊ１３６、１１Ｊ１４８または１１Ｊ１５７のうちの１つを含む３５アミノ酸までのペプチドを含む組成物である。より好ましい実施形態では、ペプチドは約０．８％〜約１．２％の範囲、または約２．５％〜約３．５％の範囲の濃度である。
【００９６】
これらの好ましい組成物は、本明細書中に記載されたペプチド処方物を標的部位に適用することにより、標的部位での微生物相を低減するための方法、あるいは感染を治療または予防するための方法に用いられ得る。別の実施形態では、標的部位は粘膜、好ましくは鼻通路または前内鼻腔の粘膜であり得る。これらの好ましい組成物は、本明細書中に記載されたペプチド処方物を標的部位に適用することにより、標的部位での炎症を治療し、予防しまたは改善するための方法にも用いられ得る。
【００９７】
本発明の薬学的組成物は、治療される感染または疾患に適した方法で投与される。投与の量および頻度は、患者の症状、感染原因、ならびに感染の重症度といった因子、あるいは当該技術分野で既知の任意のその他の適切なパラメーターにより決定される。適切な投薬量は臨床試験により決定され得るが、一般に約０．１〜５０ｍｇ／ｋｇの範囲である。
【００９８】
さらに本発明の組成物は、一般的消毒薬のように、あるいは微生物または炎症が望ましくない任意の状況で用いられ得る。例えば、これらのペプチドは、例えば細菌の増殖を抑制するためまたは蚊の忌避のために、表面消毒薬、医療用具のためのコーティング（例えば共有結合）衣類のためのコーティングとして、空気清浄用フィルター中に、例えば飛行機で、水精製において、シャンプーおよび石鹸、食品防腐剤、化粧品防腐剤、媒質防腐剤、除草剤または殺虫剤の構成分として、建築材料の構成分として、例えばシリコーン封止剤中に、ならびに動物産物加工処理に、例えば動物皮膚の硬化に用いられ得る。
【００９９】
ペプチド、特にその標識化アナログおよび誘導体は、画像分析および診断アッセイに、あるいは多細胞および単細胞生物における部位を標的化するために用いられ得る。ターゲッティング系として、アナログは、他のペプチド、タンパク質、核酸、抗体、化学化合物（例えば蛍光タグ）等と結合され得る。
【０１００】
例示の目的で以下の実施例を提供するが、それらは本発明を限定するものではない。
【実施例】
【０１０１】
（実施例１）
（ペプチドおよびアナログの合成、精製および特性化）
ペプチド合成は、標準固相Ｆｍｏｃ保護戦略に基づく。用いられる機器は、９０５０プラスペプシンセサイザー（Ｐｌｕｓ  ＰｅｐＳｙｎｔｈｅｓｉｓｅｒ）（ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ  ＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓ，  Ｉｎｃ．）である。ポリエチレングリコールポリスチレン（ＰＥＧ−ＰＳ）グラフト樹脂を、Ｃ末端アミド合成のためのＦｍｏｃ保護化アミノ酸リンカーで誘導される固相として用いる。ＨＡＴＵ（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロ−ホスフェート）を、カップリング試薬として用いる。合成中、カップリング過程を継続的にモニタリングして、各アミノ酸が高収率で混入されることを保証する。ペプチドを、トリフルオロ酢酸および適切なスカベンジャーを用いて固相樹脂から切断し、粗製ペプチドを、分取用逆相クロマトグラフィーを用いて精製する。典型的には、ペプチドはトリフルオロ酢酸塩として調製されるが、その他の塩、例えば酢酸塩、塩化物および硫酸塩も塩交換により調製され得る。
【０１０２】
ペプチドはすべて、質量分光分析により分析して、生成物が予測分子量を有することを保証する。生成物は、ペプチドの疎水性による分離方法である分析的逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）に付した場合、総ピーク面積の＞９５％を占める単一ピークを有する必要がある。さらに、ペプチドは、酸−尿素ゲル電気泳動、キャピラリー電気泳動、あるいはペプチドの電荷質量比に基づいた任意のその他の分離方法に付した場合、総帯域強度の＞９０％を占める単一帯域を示す必要がある。
【０１０３】
保持される水、塩または溶媒というよりむしろペプチドである生成物の量であるペプチド含量を、定量的アミノ酸分析、遊離アミン誘導化または分光分析的定量により測定する。アミノ酸分析は、ペプチド中に存在するアミノ酸の比に関する情報も提供するが、この情報は、ペプチドの確実性を確証するのを助ける。
【０１０４】
ペプチドアナログおよびそれらの名称を以下に列挙する。この一覧表ならびに他の箇所において、一文字アミノ酸コードでアミノ酸を表示し、小文字はＤ型アミノ酸を表す。
【０１０５】
【表１】
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（実施例２）
（修飾ペプチドの合成）
合成に際して修飾アミノ酸を用いることにより、あるいは合成後修飾により、抗菌性および／または抗炎症性ペプチド、例えばインドリシジンアナログまたはその誘導体を修飾して、元のペプチドの物性を変更する。このような修飾としては、Ｎ末端でのアセチル化、Ｆｍｏｃ−誘導化Ｎ末端、ポリメチル化、ペルアセチル化および分枝誘導体が挙げられる。本明細書中に記載した手法を用いて修飾されるペプチドを、表４に列挙する。
【０１０６】
α−Ｎ末端アセチル化：樹脂からペプチドを切断し、それを脱保護化する前に、完全保護ペプチドを室温で１時間ＤＭＦ中のＮ−アセチルイミダゾールで処理して、α−Ｎ末端での選択的反応を生じさせる。次にペプチドを脱保護化／切断し、非修飾ペプチドの場合と同様に精製する。
【０１０７】
Ｆｍｏｃ−誘導化α−Ｎ末端：最終Ｆｍｏｃ脱保護化過程が実行されない場合、α−Ｎ末端Ｆｍｏｃ基は依然としてペプチド上にある。次にペプチドを側鎖脱保護化／切断し、非修飾ペプチドの場合と同様に精製する。
【０１０８】
ポリメチル化：メタノール溶液中の精製ペプチドを過剰量の重炭酸ナトリウムで、その後過剰量のヨウ化メチルで処理する。反応混合物を室温で一晩撹拌し、有機溶媒で抽出し、中和して、非修飾ペプチドの場合と同様に精製する。この手法を用いる場合、ペプチドは完全にメチル化されるというわけではない。１１ＣＮのメチル化は、平均で６個のメチル基を生じた。したがって修飾ペプチドは、メチル化産物の混合物である。
【０１０９】
カプロラクタム修飾：ＤＭＦ溶液中の精製ペプチドを、撹拌しながら氷上で０℃に冷却する。ペプチド溶液に、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートおよびＮ−メチルモルホリンを加える。反応混合物を氷浴から取り出し、反応ミックスが室温に上がるまで１時間撹拌する。水を加え、その結果生じたカプロラクタムペプチド溶液をＣ８ＲＰ−ＨＰＬＣにより精製する。
【０１１０】
ペルアセチル化：ＤＭＦ溶液中の精製ペプチドを、室温で１時間、Ｎ−アセチルイミダゾールで処理する。粗製生成物を濃縮し、水中に溶解して、凍結乾燥し、水中に再溶解させて、非修飾ペプチドの場合と同様に精製する。第一級アミン基の完全アセチル化が観察される。
【０１１１】
４／８分枝誘導体：樹脂に結合された４−または８−分枝コア上で、分枝鎖ペプチドを合成する。合成および脱保護化／切断は、非修飾ペプチドの場合と同様に進行する。これらのペプチドを、４Ｍ塩酸グアニジンに対する、次に水に対する透析により精製し、質量分析により分析する。
【０１１２】
【表２】
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（実施例３）
（候補ペプチドおよびそのアナログの抗菌活性）
下記のようなｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを用いて、ペプチドの抗菌活性を試験し得る。
【０１１３】
（アガロース希釈アッセイ）
アガロース希釈アッセイは、ペプチドおよびペプチドアナログの抗菌活性を測定する。活性は、ペプチドの最小阻害濃度（ＭＩＣ）（μｇ／ｍｌ）として表す。
【０１１４】
ｉｎ  ｖｉｖｏ条件を模倣するために、細菌増殖培地として、カルシウムおよびマグネシウム補充ミューラー・ヒントンブロスを、低ＥＥＯアガロースと組合せて用いる。寒天というよりむしろアガロースを、寒天中の荷電基として用いて、培地全体のペプチド拡散を防止する。培地をオートクレーブ処理し、次に水浴中で５０〜５５℃に冷却した後、ペプチド溶液を無菌添加する。同一容積の異なる濃度のペプチド溶液を冷却溶融アガロースに添加し、次にこれをペトリ皿に注ぎ入れて、３〜４ｍｍの深さとして、固化させる。
【０１１５】
細菌接種物を０．５マックファーランド混濁度標準（ＰＭＬ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）に調整し、次に１：１０に希釈した後、アガロースプレート上に適用する。アガロースに適用される最終接種物は、直径５〜８ｍｍスポット中に約１０４ＣＦＵである。アガロースプレートを３５〜３７℃で１６〜２０時間インキュベートする。
【０１１６】
視覚的検査により確定した場合に生物体の増殖を完全に阻害する最低濃度のペプチドとして、ＭＩＣを記録する。細菌および酵母に対する種々のペプチドアナログの代表的ＭＩＣ値を、表３に示す。
【０１１７】
【表３】
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（実施例４）
（サイトカイン産生に及ぼすインドリシジンペプチドの活性）
ヒト末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を健常成人男性から採集し、９６ウエルプレート中の無血清リンパ球増殖培地中で１０６細胞／ｍｌでプレート化した。ＰＢＬを、試験サンプルの存在下または非存在下で１０μｇ／ｍｌのＰＨＡで刺激して、３７℃で５％ＣＯ２で４８時間インキュベートした。採集およびプール化上清を−２０℃で保存し、次に市販ＥＬＩＳＡキット（Ｅｎｄｏｇｅｎ  ａｎｄ  Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ）を用いてアッセイし、ＬＤＨ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を用いて生育可能性に関してアッセイした。上清除去後に残存する細胞をインキュベーターに戻して、アラマーブルー（ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ）（Ａｌａｍａｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて、７２時間で増殖を確定した。化合物を１、１０、１００および１０００μｇ／ｍｌで試験した。ペプチドは、サイトカイン産生およびＰＢＬ増殖の抑制に有効であった（表４）。これは、これらのペプチドが抗炎症剤として機能し得ることを示す。
【０１１８】
【表４】
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（実施例５）
（オキサゾロン接触過敏モデルにおけるインドリシジンペプチド）
ＣＤ−１マウスの剃毛腹部を、コーン油：アセトン中の３％オキサゾロン（Ｓｉｇｍａ）（３０ｍｇ／ｍｌ）を用いて処置する。全溶液を７分間超音波処理する。５日後、アセトン中の２％オキサゾロン（２０ｍｇ／ｍｌ）で、マウスの左耳をチャレンジし、右耳は非処置のままにする（対照）。チャレンジ１時間後、７０％ＥｔＯＨ／３０％プロピレングリコール処方物（賦形剤）中の候補ペプチドを左耳に適用し、右耳は非処置のまま放置する。２４時間後、７ｍｍ耳パンチをマウスの各耳から採取する。耳パンチを目盛り上に乗せて、処置および非処置耳間の差を比較した。各処置群  対  対照群の平均を比較することにより、炎症の抑制％を算定した。陽性対照は、ヒドロコルチゾン（既知の抗炎症剤）である。インドリシジンペプチドのほとんどがヒドロコルチゾンと同様に炎症を抑制した。
【０１１９】
【表５】
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（実施例６）
（ＴＰＡ耳浮腫モデルにおけるインドリシジンペプチドの抗炎症活性）
局所適用および全身適用した候補ペプチドの抗炎症作用を調べるために、１２−ｏ−テトラデカノイルホルボール酢酸（ＴＰＡ）により誘導される耳炎症のマウスモデルを用いた。耳浮腫は、ＴＰＡの局所適用により誘導する。ＴＰＡ適用直後、適切な処方物中の種々の濃度で、局所的または全身的に候補ペプチドを適用する。ＥＤ５０を耳生検重量で確定し、終点として用いた。浮腫性応答は、プロスタグランジン、ヒスタミンおよびセロトニンの放出により伝達される血管透過性増大によるものである。抗炎症性化合物、例えば糖質コルチコイドおよび非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）は、いくつかの酵素、例えばプロスタグランジンの合成に関与する酵素であるシクロオキシゲナーゼの作用を阻害することにより、浮腫を低減する。
【０１２０】
体重２４〜３７グラム、５〜６週齢の雄スイス（Ｓｗｉｓｓ）ＣＤ１マウスを試験に用いた。アセトン中のＴＰＡの０．００５％（ｗ／ｖ）溶液を調製した。インドリシジンアナログを、９５％エタノールまたは５０％エタノール、５ｍＭの乳酸−乳酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ４．０中で０．１％、１．０％および５．０％で調製した。抗炎症活性を、デキサメタゾンおよびエリスロマイシンと比較した。対照群中の動物は、０．００５％ＴＰＡ溶液２０μｌを右耳の背側域に１回局所適用として投与することで処置した。処方（賦形剤）群の動物は、０．００５％ＴＰＡ溶液２０μｌで処置し、その直後に同一耳に処方物賦形剤２０μｌを局所適用した。ペプチド組成物群の動物は、０．００５％ＴＰＡ溶液２０μｌで処置し、その直後に、同一耳に選択されたペプチド組成物を局所適用した。陽性対照群の動物は、０．００５％ＴＰＡ溶液２０μｌで処置し、その直後に、同一耳にデキサメタゾンまたはエリスロマイシン溶液を局所適用した。全動物群の左耳は非処置のまま残し、対照として用いた。種々の処置の施行の６時間後、ＣＯ２ガス吸入により全動物を安楽死させた。両耳を切除し、皮膚生検パンチを用いて皮膚生検を得た。生検サンプルを計量し、右および左耳間の生検重量の差を算定した。ＡＮＯＶＡ（一元配置分散分析）を、その後、ダネットの多重比較アッセイを用いて、データを分析した。
【０１２１】
【表６】
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ほとんどのインドリシジンアナログおよび誘導体が、全身的にまたはマウス耳に局所的に適用した場合、用量依存方式でＴＰＡ誘導性耳浮腫を有意に抑制した（ｐ＜０．００１）（表６）。したがってこれらのインドリシジンアナログおよび誘導体は、有意の抗炎症活性を示す。
【０１２２】
上記から、例証のために本発明の特定実施形態を本明細書中で説明してきたが、本発明の精神および範囲を逸脱しない限り、種々の修正が成され得る、と理解される。したがって本発明は、添付の特許請求項による場合を除いて、限定されるものではない。
【図面の簡単な説明】
【０１２３】
【図１】図１は、マウスオキサゾロン接触遅延型過敏症モデルにおける５％インドリシジンアナログペプチド処方物による慢性炎症の抑制を示す（実施例５も参照）。
【図２】図２は、マウス耳浮腫モデルＴＰＡにおける５％インドリシジンアナログペプチド処方物による急性炎症の抑制を示す（実施例６も参照）。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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