(57)【要約】本発明は、微生物感染の処置および感染に対する抵抗性の増強のための方法および組成物に関する。本発明は、微生物感染の病態的状態の処置のために、有効量の細菌溶解物組成物の投与を含む。本発明がまた使用されて免疫系を増強し、有効量のこの組成物の投与によって感染を予防し得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
バクテリオファージによる、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ））、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ））または緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ））のうちの少なくとも１つの細菌株の感染に由来する細菌溶解物を含む組成物。
【請求項２】
前記細菌溶解物が黄色ブドウ球菌の細菌株に由来することを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記溶解物が、受託番号ＣＣＭ  ４９９２、ＣＣＭ  ４９９３、ＣＣＭ  ４９９４、ＣＣＭ  ４９９５、ＣＣＭ  ４９９６、ＣＣＭ  ４９９７またはＣＣＭ  ４９９８でＣｚｅｃｈ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ（ＣＣＭ）に寄託された黄色ブドウ球菌の細菌株に由来することを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記溶解物が、受託番号ＣＣＭ  ４９９２を有する黄色ブドウ球菌の細菌株に由来することを特徴とする請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記溶解物が、受託番号ＣＣＭ  ４９９２、ＣＣＭ  ４９９３、ＣＣＭ  ４９９４、ＣＣＭ  ４９９５、ＣＣＭ  ４９９６、ＣＣＭ  ４９９７またはＣＣＭ  ４９９８でＣＣＭに寄託された１を超える細菌株に由来することを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記黄色ブドウ球菌の細菌株が、ＣＣＭ受託番号ＣＣＭ  ４９９３を有する黄色ブドウ球菌を含むことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記細菌溶解物が、受託番号ＤＳＭ  １４６１４、ＤＳＭ  １４６１５またはＤＳＭ  １４６１６を有するＤｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍＢＨ（ＤＳＭ）に寄託されたバクテリオファージに由来することを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
薬学的賦形剤をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
受託番号ＣＣＭ  ４９９２、ＣＣＭ  ４９９３、ＣＣＭ  ４９９４、ＣＣＭ  ４９９５、ＣＣＭ  ４９９６、ＣＣＭ  ４９９７またはＣＣＭ  ４９９８でＣＣＭに寄託された黄色ブドウ球菌の細菌分離物。
【請求項１０】
バクテリオファージによる黄色ブドウ球菌、肺炎桿菌または緑膿菌のうちの少なくとも１つの細菌株の感染に由来する細菌溶解物を含む組成物を病態的状態にあるヒトまたは動物に投与するステップを含む、ヒトまたは動物における微生物感染による病態的状態を処置する方法。
【請求項１１】
前記組成物が、皮下投与、皮内投与、筋肉内投与、鼻投与または非経口投与されることを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記組成物が、前記ヒトまたは動物に鼻投与されることを特徴とする請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記病態的状態が、慢性上気道疾患、創傷感染、骨髄炎、心内膜炎、皮膚複数菌感染、気管支喘息、慢性静脈洞炎、嚢胞性線維症または尋常性ざ瘡であることを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
受託番号ＤＳＭ  １４６１４、ＤＳＭ  １４６１５またはＤＳＭ  １４６１６でＤＳＭに寄託されたバクテリオファージ。
【請求項１５】
バクテリオファージによる黄色ブドウ球菌、肺炎桿菌または緑膿菌のうちの少なくとも１つの細菌株の感染に由来する細菌溶解物を含む組成物をヒトまたは動物に投与する、微生物感染または病態的状態を予防する方法。
【請求項１６】
前記溶解物が、受託番号ＣＣＭ  ４９９２、ＣＣＭ  ４９９３、ＣＣＭ  ４９９４、ＣＣＭ  ４９９５、ＣＣＭ  ４９９６、ＣＣＭ  ４９９７またはＣＣＭ  ４９９８でＣＣＭに寄託された黄色ブドウ球菌の細菌株に由来することを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記溶解物が、受託番号ＤＳＭ  １４６１４、ＤＳＭ  １４６１５またはＤＳＭ  １４６１６を有するバクテリオファージに由来することを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記溶解物が予防的に投与されることを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
前記溶解物が、入院の３週〜６週前に投与されることを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
前記細菌溶解物が、皮下投与、皮内投与、筋肉内投与、鼻投与または非経口投与されることを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、一般的に微生物感染の処置に関する。より具体的に言えば、本発明は、微生物感染に対するヒトまたは動物における免疫応答の増強のための方法および組成物に関する。
【０００２】
（発明の背景）
感染症の処置についてファージを使用する概念は、最初にｄ’Ｈｅｒｅｌｌｅによって１９１７年に提案された。１９２０年代において、バクテリオファージの発見は、細菌感染の処置に対する解決策であると考えられた。バクテリオファージは、細菌に侵入しそして細菌を破壊し、そして動物宿主または植物宿主に侵入する細菌をノックアウトする選択的な治療弾のようであった。残念ながらファージは、インビトロでの細菌の殺傷ほど宿主生物において細菌の殺傷に有効ではなかった。細菌感染に対する好ましい処置としての１９４０年代の抗生物質の開発は、感染症の処置に対してバクテリオファージを使用する研究を衰退させた。
【０００３】
いくつかの国々（特に東欧およびインド）において、感染症の処置および免疫応答の増強についてバクテリオファージおよび細菌溶解物を使用する研究が継続した。この研究の大半は、他の先進国においていまだ広範に受け入れられていないが、この研究の新たな関心は、抗生物質耐性細菌の出現の結果として増大している。かつて抗生物質を用いて容易に治療可能であった多くの感染症が、現在では深刻な健康脅威である。なぜなら細菌は、たとえすべてではないとしても大半の抗生物質に対して耐性だからである。医学は、なおより耐性の感染性株を導かない様式でこれらの耐性細菌に対して応答し得る処置を探っている。
【０００４】
米国疾病対策および予防センターは、処方された抗生物質のうち２０％〜５０％が無益であると評価する。医学および農業における抗生物質の乱用は、細菌の耐性株の発展を大いに促した。抗生物質で攻め立てられたマイクロ環境において、薬物に耐え得るいくつかの細菌が増殖している。細菌は、以前に「最後の手段」と考えられた抗生物質に対して次第に耐性になっている。
【０００５】
バクテリオファージ治療は、製薬への依存（例えば細菌感染に対する抗生物質処置）にある程度起因して、大半の先進国においてあまり注目も支持も得ていない。増大する細菌耐性の出現とともに、バクテリオファージ治療は、細菌感染の薬学的処置に対する可能な代案として新たな精査を受けた。必要とされるのは、薬学的な抗生物質治療に依存しない微生物感染の処置および予防のための組成物および方法である。このような方法および組成物は、ヒト、動物および植物を有する生物において感染を処置または予防し得るはずである。
【０００６】
（発明の要旨）
本発明は、微生物感染を処置および予防する組成物および方法に関する。好ましい方法は、細菌溶解物を含む組成物の投与を有する。本発明は、安定な繁殖力を有し、そして毒素を産生しないかあるいはバクテリオファージまたは得られる溶解物を受け取るヒトもしくは動物のいずれかに対して有毒な効果を有さない任意の細菌の使用を意図する。好ましい細菌溶解物としては、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ））、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ））および緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ））の株に由来する溶解物が挙げられるが、これらに限定されない。最も好ましい細菌株は、受託番号ＣＣＭ  ４９９２、ＣＣＭ  ４９９３、ＣＣＭ  ４９９４、ＣＣＭ  ４９９５、ＣＣＭ  ４９９６、ＣＣＭ  ４９９７、ＣＣＭ  ４９９８を有するＣｚｅｃｈ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ（ＣＣＭ）に寄託された細菌株を含む。最も好ましいバクテリオファージは、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍＢＨ（ＤＳＭ）に寄託され、そして受託番号１４６１４、１４６１５および１４６１６を有するバクテリオファージを含む。
【０００７】
本発明は、バクテリオファージでの黄色ブドウ球菌、肺炎桿菌または緑膿菌のうちの少なくとも１つの細菌株の感染に由来する細菌溶解物を含む組成物を含む。本発明の組成物はさらに、受託番号ＣＣＭ  ４９９２、ＣＣＭ  ４９９３、ＣＣＭ  ４９９４、ＣＣＭ  ４９９５、ＣＣＭ  ４９９６、ＣＣＭ  ４９９７およびＣＣＭ  ４９９８でＣＣＭに寄託された１を超える黄色ブドウ球菌の細菌株に由来する細菌溶解物を含む。本発明はまた、受託番号ＤＳＭ  １４６１４、ＤＳＭ  １４６１５およびＤＳＭ  １４６１６を有するＤＳＭに寄託されたバクテリオファージに由来する細菌溶解物を含む。本発明はさらに、受託番号ＣＣＭ  ４９９２、ＣＣＭ  ４９９３、ＣＣＭ  ４９９４、ＣＣＭ  ４９９５、ＣＣＭ  ４９９６、ＣＣＭ  ４９９７およびＣＣＭ  ４９９８でＣＣＭに寄託された黄色ブドウ球菌の細菌分離物を含む。本発明はまた、受託番号ＤＳＭ  １４６１４、ＤＳＭ  １４６１５およびＤＳＭ  １４６１６でＤＳＭに寄託されたバクテリオファージを含む。
【０００８】
本発明の細菌溶解物は、ヒトまたは動物における微生物感染の病態的状態の処置または予防の方法において使用され得る。本発明の組成物および発明はさらに、適切な薬学的賦形剤を含み得る。本発明によって処置または予防され得る微生物感染の病態的状態としては、慢性上気道疾患、創傷感染、骨髄炎、心内膜炎、皮膚複数菌感染、気管支喘息、慢性静脈洞炎、嚢胞性線維症または尋常性ざ瘡のような状態が挙げられるがこれらに限定されない。
【０００９】
本発明の組成物は、特定の微生物感染の処置と同様にワクチン組成物として使用され得る。本発明の組成物は、バクテリオファージで細菌の特定の株を感染させることによって形成される１以上の細菌溶解物からなり得る。この組成物は、局所性または全身性の細菌感染（慢性または再発性の呼吸器感染または耳感染、術後感染、細菌性肺炎感染、敗血症、皮膚感染、創傷感染、骨髄炎、アレルギー、喘息、静脈洞炎および尋常性ざ瘡が挙げられるがこれらに限定されない）の処置および予防のための方法において使用され得る。さらに本発明の組成物は、免疫刺激のための方法において使用され得る。
【００１０】
（発明の詳細な説明）
本発明は、微生物感染の処置のための組成物および方法を含み、有効量の１以上の細菌溶解物またはそれらの混合物を投与するステップを含む。本発明の免疫原性組成物はさらに、生物中の微生物分布を統制またはこの分布に影響を及ぼすために、少なくとも１以上の免疫原性物質または免疫原性処方物あるいは免疫刺激物質または免疫刺激処方物を含み得る。
【００１１】
本発明はまた、微生物感染に対する予防接種の組成物および方法を含み、１以上の細菌溶解物またはそれらの混合物および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を投与するステップを含む。この溶解物は、個別または組み合わせて使用され得る。本発明のワクチンを使用して、ヒトまたは動物に免疫有効量の細菌溶解物を投与することによって、細菌性疾患に対してヒトを含む動物を免疫状態にする。
【００１２】
本発明の組成物は、選択されたバクテリオファージで選択された細菌を感染させることによって産生される細菌溶解物を含む。本発明は、選択された細菌株において安定に生殖し、そして著しい量の毒素または別の成分（これは、宿主細菌または得られる溶解物のいずれかに対して有毒な効果を有し、これは溶解物を受け取るヒトまたは動物に有害である）の産生をもたらさない任意のバクテリオファージの使用を意図する。このようなバクテリオファージの決定および選択は、微生物学者に公知の技術を使用して行われ、そして一般的な宿主株における長期安定性、ビルレンスの長期持続性、溶解の安定性および再現性、ならびに結果として生じる溶解物の再現性についての試験を有する。この宿主株は、バクテリオファージの溶解性質にきわめて敏感な株である。これは、特定のバクテリオファージに敏感な株から選択される。
【００１３】
本発明の組成物はさらに、選択された細菌に由来する細菌溶解物を含む。本発明は、安定な生殖を有し、そしてバクテリオファージまたは溶解物レシピエントのいずれかに有毒な効果を有する毒素を産生しない任意の細菌の使用を意図する。このような細菌の決定および選択は、当業者に公知の技術を用いて行われ、そして毒素（特に、α毒素、β毒素、δ毒素、γ毒素、エンテロトキシンＡ、Ｂ、ＣおよびＤ、トキシックショック症候群外毒素（ＴＳＳＴ）、表皮剥脱毒素ＡおよびＢ、ロイコシジン、脂肪酸修飾酵素ならびに溶血素）の非存在環境についての試験を有する。試験はまた、ファージ誘導性溶解によって引き起こされる溶解物の安定性および再現性、細菌株の長期感受性、ならびにファージ耐性コロニーの出現を伴わないファージによる溶解に対する細菌の継続的な感受性についての試験を有する。
【００１４】
溶解物組成物の選択は、特定の溶解物組成物に対する使用方法によって決定される。例えば所望の使用が、ブドウ球菌性感染に対する免疫を提供することである場合、１以上の株のブドウ球菌性細菌が、細菌宿主生物として使用される。この同じ例において、ブドウ球菌性細菌に特異的であるかまたはブドウ球菌性細菌において生産的感染を少なくとも有し得る１以上のバクテリオファージを使用して、ブドウ球菌溶解物を産生する。あるいは１つの細菌株が増殖されて、細菌培養物または細菌ブロスを産生し得、次いでこの細菌培養物の別個のアリコートが異なるバクテリオファージで各々感染されて、個々の溶解物を産生する。これらの個々の溶解物は、個別または組み合わせて使用されて組成物を形成し得る。別の実施態様において、異なる細菌株が増殖され、次いで各々が同じバクテリオファージで感染されて溶解物組成物を生じ、この溶解物組成物は、個別または組み合わせて使用されて組成物を形成し得る。本発明の別の実施態様は、異なるバクテリオファージで各々感染される異なる細菌株の使用を意図し、そして得られる溶解物は、個別または組み合わせて使用されて組成物を形成する。
【００１５】
本発明の組成物は好ましくは、少なくとも１つの細菌株、より好ましくは２つ以上の細菌株由来の溶解物を含む組成物を含む。好ましい組成物は、以下の細菌のうちの１つ由来の溶解物を含む。黄色ブドウ球菌、肺炎桿菌および緑膿菌。好ましい組成物は、２００１年１０月１１日にＣｚｅｃｈ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ（ＣＣＭ）に寄託され、そして受託番号ＣＣＭ  ４９９２、ＣＣＭ  ４９９３、ＣＣＭ  ４９９４、ＣＣＭ  ４９９５、ＣＣＭ  ４９９６、ＣＣＭ  ４９９７およびＣＣＭ  ４９９８を有するＳ．ａｕｒｅｕｓ（黄色ブドウ球菌）の細菌株由来の溶解物を含む。好ましい組成物はさらに、２００１年１０月１１日にＣＣＭに寄託され、そして受託番号ＣＣＭ  ４９９２、ＣＣＭ  ４９９３、ＣＣＭ  ４９９４、ＣＣＭ  ４９９５、ＣＣＭ  ４９９６、ＣＣＭ  ４９９７およびＣＣＭ  ４９９８を有する細菌株を含む。
【００１６】
本発明の方法は、所望のバクテリオファージ溶解物を得るためのバクテリオファージの使用を含む。より好ましい方法は、黄色ブドウ球菌、肺炎桿菌および緑膿菌に対してバクテリオファージによって産生される溶解物を含む。最も好ましい方法は、２００１年１１月１９日にＤｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍＢＨ（ＤＳＭ）に寄託され、そして受託番号１４６１４、１４６１５および１４６１６を有するバクテリオファージに由来する溶解物を含む。好ましい組成物はさらに、２００１年１１月１９日にＤｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍＢＨ（ＤＳＭ）に寄託され、そして受託番号１４６１４、１４６１５および１４６１６を有するバクテリオファージを含む。このバクテリオファージは、単独または組み合わせて使用されて、１以上の異なる細菌株を溶解し得る。
【００１７】
一般に本発明の方法は、１以上の所望の細菌株を所望の濃度まで増殖させるステップを含む。例えば細菌培養物の好ましい濃度範囲は、１×１０６〜１×１０１２細胞／ｍｌ、好ましくは１×１０７細胞／ｍｌ、１×１０８細胞／ｍｌ、１×１０９細胞／ｍｌ、１×１０１０細胞／ｍｌ、１×１０１１細胞／ｍｌである。この選択された時点で、１以上のバクテリオファージが、有効濃度でこの細菌培養物に添加される。例えばバクテリオファージ培養物の好ましい濃度範囲は、１×１０８〜１×１０１２、好ましくは１×１０９、１×１０１０、１×１０１１である。バクテリオファージによる感染および溶解が進行する。細菌培養物とのバクテリオファージすなわちファージのインキュベーションは、３〜４８時間であり得る。次いで得られる細菌溶解物は、０．１μｍ未満〜０．４５μｍの小孔サイズを有するフィルターを用いて濾過滅菌される。
【００１８】
フィルター上に保持された物質（保持物質（ｒｅｎｔｅｎｔａｔｅ））および流動物質（濾液）の両方が維持される。処置および免疫刺激の方法における組成物としてこの濾液を使用することが好ましい。一般にこの濾液は、細胞性物質（例えば細胞壁成分、細胞膜、タンパク質、リボソーム画分、糖タンパク質、ＤＮＡ、ＲＮＡなど）を含む。０．１マイクロメーター未満の小孔サイズを有するフィルターを用いた限外濾過由来の保持物質は、より大きな細胞性物質および未溶解細胞ならびにバクテリオファージを含み、これはまた、本発明の組成物および方法において使用され得る。
【００１９】
溶解物を調製するためのバクテリオファージの使用は、あらゆる型の細菌に対して有効であり、そしてこの溶解物の調製物は、細菌とともに発展し得、そして製薬に一般的な耐性問題を回避し得る。バクテリオファージ溶解物の使用は、１つの細菌株または細菌株の組み合わせから調製される免疫系を調節し得る産物の調製を可能にする。
【００２０】
一般に本発明の方法は、毒素を産生しない特定の細菌ファミリーまたは細菌群の株をこの細菌ファミリーまたは細菌群に見出される最も一般的な抗原パターンを示す選択された細菌についてスクリーニングするステップを含む。この抗原パターンは、免疫原性方法（例えば蛍光抗体同定、ＦＡＣＳ選択、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、ＳＤＳゲル電気泳動）または当業者に公知の他の検出方法によって決定され得る。次いで選択された細菌の培養物が、ファージ相同物の導入によって感染される。この組み合わせは、所定の時間で細菌の量的溶解をもたらす株および最も一般的な抗原パターンを示す株についてスクリーニングされる。次いでこの細菌株およびファージが、好ましくは凍結乾燥によって保存されて安定性を維持する。この細菌株およびファージの安定性は、安定性アッセイ、すなわち培地での反復培養および継代培養を通じて決定される。この細菌株およびファージはまた、溶解物の抗原パターンの抗原感染および再現性について調べられる。結果として生じる溶解物の少なくとも１つ、好ましくは２つ以上が組み合わされて、免疫調節剤組成物を生じる。従って、この溶解由来の得られる溶解物は、ＳＤＳゲル電気泳動によって定量分析および定性分析され得る。
【００２１】
この組成物は、局所性または全身性の細菌感染（慢性または再発性の呼吸器感染または耳感染、感染の予防および微生物感染（例えば術後感染）の病態的状態の処置、細菌性肺炎感染、敗血症、皮膚感染、創傷感染、骨髄炎、皮膚複数菌感染、アレルギー、喘息、心内膜炎、関節炎、膿瘍、静脈洞炎および尋常性ざ瘡が挙げられるがこれらに限定されない）の処置のための方法において使用され得る。さらにバクテリオファージ溶解物は、免疫系をブーストするワクチンのような免疫刺激のための方法において使用され得る。この組成物はまた、予定された手術（例えば膝または股関節置換術）の前に数ヶ月間投与されて、一般的免疫応答をブーストし得、回復時間を減少し得、そして院内感染を予防し得る。
【００２２】
本発明によって意図される処置方法は、感染を有するかまたは免疫刺激を必要とする生物への有効量の細菌溶解物組成物の投与を含む。有効量の細菌溶解物組成物は、このような組成物の既知量を用いて、または少量で処置を開始し、そして所望の効果が達成されるまで用量を増大させることによって決定され得る。有効量を決定するためのこのような技術は、当業者に公知であり、そして決定に過度の実験を必要としない。投与の異なる経路（経口経路、頬経路、鼻経路、エーロゾル経路、局所経路、経皮経路、注入可能経路、持続性経路、制御放出経路、イオン浸透療法経路、超音波導入（ｓｏｎｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）経路、静脈内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、髄腔内経路、鞘内経路、脳室内経路、動脈内経路、皮下経路および鼻内経路が挙げられるがこれらに限定されない）は一般に、異なる有効量を必要として所望の結果を達成する。例えば経口投与は、局所投与される有効量とは異なる有効量を必要とし得る。一般に、０．０００１ｍｇ／ｋｇ／日〜５００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲が、有効量の細菌溶解物組成物を提供する。
【００２３】
好ましい方法は、再建手術（例えば膝または股関節置換術が挙げられるがこれらに限定されない）の３〜６週前の溶解物の投与を含む。例えばこの溶解物は、０．０５ｃｃの用量で１週間に２回の皮内注入で投与される。この最初の用量の投与３日後に、患者は、溶解物の耐性について観察される。局所反応が認められなければ、この用量は、０．１ｃｃ〜０．２ｃｃに増大され得る。次いでこの溶解物は、１日おきに投与される。鼻経路の投与の場合において、好ましくは２〜４滴が、最初の４日間に各外鼻孔に落とされ、そして４日後、この投薬量が１日おきに反復される。処置期間は、一般的に３〜４ヶ月である。投与の多数の方法が、患者の免疫状態に依存して処置期間と連合され得る。
【００２４】
本発明はさらに、宿主の免疫応答を誘導する方法を含み、有効量の免疫原性組成物を投与するステップを含む。この免疫原性組成物は、この組成物が感染の前に投与される予防接種システムの一部として予防的に使用され得るか、または特定の感染の処置において使用され得る。この免疫応答は、体液性免疫応答または細胞媒介性免疫応答であり得る。免疫原性は、抗原のアジュバントとの同時投与によって改良され得る。アジュバントは、抗原を投与部位の近くに局所的に保持することによって作用し得、抗原の細胞へのゆるやかな徐放性放出を容易にする。アジュバントはまた、免疫細胞を注入部位に引き寄せ得、そしてこのような細胞を刺激して免疫応答を誘導させ得る。広範なアジュバントは、免疫応答を引き起こす助けとなり得る。これらとしては、鉱油を含む複数の（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）ポリマー、フロイント完全アジュバント、リピドＡ、リポソームおよびコレラ毒素サブユニットＢまたはその遺伝子修飾改変体が挙げられるがこれらに限定されない。
【００２５】
本発明の方法および組成物の以下の特定の例は、決して限定するように理解されるべきではないが、単に本発明の適用についての例示的な実施態様を提供する。本発明は、細菌感染および他の微生物感染の処置、ならびに一般に免疫系の刺激のための細菌溶解物の使用を意図し、そして他の疾患の処置または組成物は、本明細書中で教示される特定の例によって限定されない。
【００２６】
（黄色ブドウ球菌感染の予防および処置）
ブドウ球菌性細菌、および特に黄色ブドウ球菌は、より一般的かつ有毒な病原体のうちのいくつかである。いくつかのブドウ球菌感染は、極度の化膿、局所組織の壊死および膿瘍の形成によって特徴付けられる。ブドウ球菌感染は、皮膚感染（例えばフルンケル、カルブンケルおよび膿痂疹）、ならびに皮膚から骨、関節、軟組織および軟器官に広がる深部病変の原因である。黄色ブドウ球菌は、熱傷様皮膚症候群、トキシックショック症候群およびブドウ球菌性食中毒を導く毒素を産生し得る。これは、創傷感染の主要な原因であり、そして病院流行の存続原因である。黄色ブドウ球菌は、現在多くのクラスの抗生物質に耐性であり、そして現在最後の手段としてバンコマイシンで処置されている。しかしながらバンコマイシンに耐性の株はすでに出現し始めている。
【００２７】
黄色ブドウ球菌は、先天的または適応性の免疫応答に対して作用する多くのビルレンス因子を有する。任意の特定の理論によって結び付けられて考えることを望んでいないが、黄色ブドウ球菌に対する先天的な応答の一部は、Ｔｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲ）ファミリーを含むと現在考えられる。ＴＬＲは、病原体のパターン認識システムを細胞内シグナリングに関連させる膜貫通レセプターである。ヒトにおいて、このＴＬＲファミリーは、ＴＬＲ（ＴＬＲ１〜ＴＬＲ１０）、ＴＬＲに関連したいくつかのタンパク質（ＲＰ１０５、Ｎｏｄ１、Ｎｏｄ２）、ならびにリポ多糖（ＬＰＳ）レセプター（ＣＤ１４）によって代表される。いくつかのＴＬＲは、パターン認識システムにおいて特定の機能を有するようである。例えばＴＬＲ−２は、グラム陽性の細胞壁成分（ペプチドグリカン）に応答して細胞を活性化すると考えられる。ＴＬＲ−４は、（ＣＤ１４との複合体において）ＬＰＳ（グラム陰性細菌）の認識に重要である。ＴＬＲ−９は、細菌ＤＮＡのＣｐＧモチーフを認識する。先天的な免疫系の活性化は、単球、好中球および内皮細胞によって媒介される初期炎症反応を誘導する。この応答は、白血球動員、前炎症性サイトカイン（ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β）の産生、反応性酸素生成物の産生、およびＴ細胞に対して作用するエフェクターサイトカイン（例えばＩＬ−１２）の産生、抗原提示細胞を導き、そしてＢ細胞に対する間接的なサイトカインのカスケードによる適応性の免疫系の関与とともにまたはこの関与なしに生じ得る。
【００２８】
ＴＬＲ−２またはシグナリング分子（ＭｙＤ８８）欠損マウスは、黄色ブドウ球菌感染にきわめて影響を受けやすかった（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５、５３９２〜５３９６、２０００）。さらに野生型のマウスは、ＣｐＧ  ＤＮＡでの処置後に急性複数菌性敗血症により耐性になり（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５、４５３７〜４５４３、２０００）、これは現在ではＴＬＲ−９を介して作用すると考えられる。ＴＬＲ−２は、黄色ブドウ球菌敗血症性ショックに関連したＴＬＲ−２多型の検出によって立証されるように、ヒト黄色ブドウ球菌感染において重要な役割を果たすようである（Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６８、６３９８、２０００）。黄色ブドウ球菌細胞壁成分でのＴＬＲ−２レセプターの活性化は、Ｔｈ−１経路（ＴＮＦ−α、インターフェロンγ、ＩＬ−１など）のアップレギュレーションをもたらす。これらの前炎症性サイトカインの増大は、先天的および適応性の免疫の複数の応答を活性化および調節する。
【００２９】
黄色ブドウ球菌は、正常な免疫応答を妨げるいくつかの機構を有する。この細菌は、抗菌タンパク質に対する耐性を発達させただけではなく、好中球内部で生存もし得る。さらに種々の株の黄色ブドウ球菌は、いくつかの一連の毒素および酵素、ならびに感染性および細菌生存および増殖を増強する他の産物を有する。毒素および酵素ならびに他の可溶性産物に対して特異的な抗体は、毒素の活性を中和させるが、一方細胞および細胞性成分に対して特異的な抗体は、標的化細胞をオプソニン作用し、そしてそれらの食作用を増強する。
【００３０】
ブドウ球菌感染および特に黄色ブドウ球菌感染の処置は、本発明によって提供される。１または複数の株のブドウ球菌およびバクテリオファージ由来の溶解物を含む選択されたブドウ球菌溶解物組成物は、種々の経路（鼻ドロップおよび皮下経路またはそれらの組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない）を通じて投与される。異なる株のブドウ球菌由来の溶解物または異なるバクテリオファージ接種から生じる溶解物は、好ましくは等しい割合で組み合わされる。
【００３１】
ブドウ球菌溶解物（ＳＰＬ）は、成人のあらゆるブドウ球菌感染、ならびに小児化学の慢性状態（慢性上気道疾患、気管支喘息、慢性静脈洞炎、嚢胞性線維症）および皮膚科学の慢性状態（尋常性ざ瘡）の処置に臨床的に有効である。
【００３２】
ＳＰＬは、黄色ブドウ球菌培養物の多価バクテリオファージでの溶解によって調製される。大半のブドウ球菌ファージは、シホウイルス科（例えば二本鎖直鎖状ＤＮＡおよび長い非収縮性テイルを有するファージ）に属する。ＳＰＬは、リボソーム起源、細胞質起源、核起源、細胞壁起源および膜起源の抗原性成分の複合体である。ＳＰＬの精製された成分は、特定の経路（ＴＬＲ−２を介したペプチドグリカン、ＴＬＲ−９を介したＣｐＧ  ＤＮＡが挙げられるがこれらに限定されない）の特異的な刺激について使用され得る。
【００３３】
あるいは動物およびヒトは、ＳＰＬ組成物で予防接種され得、その結果ブドウ球菌感染は阻止される。このような処置は、皮下注入、鼻ドロップ適用および骨髄炎フィステルの洗浄を含む投与経路を介した溶解された細菌およびファージを含むＳＰＬ組成物の投与を含む。この溶解物組成物の投与は、ブドウ球菌感染の発生前に予防的に、ならびにブドウ球菌感染の間に行われ得る。予防投与の好ましい時期は、３歳以後可能性がある感染状況前の３〜６週間、または一般的に予防接種プログラムの一部としてである。
【００３４】
（肺炎桿菌感染の予防および処置）
本発明が有効な別の細菌群は、クレブシエラ属細菌、特に肺炎桿菌である。肺炎桿菌は、腸において一般に見出される非日和見病原体である。腸以外に、これは肺炎および尿路感染症を引き起こす院内感染の高まる原因である。慢性呼吸器疾患を有する患者、糖尿病患者、アルコール症者および高齢の人々、ならびに呼吸療法デバイス、静脈内カテーテルおよび尿カテーテルを使用する人々は、感染性のクレブシエラ属の獲得に特に影響を受けやすい。
【００３５】
古典的に、気道の肺炎桿菌感染は、肺領域の破壊をしばしばもたらす重篤で急速に発症する病気を引き起こす。処置を行っても、肺炎桿菌に起因した死亡率は５０％である。感染した人は、一般的に高熱、悪寒、インフルエンザ様症状および多くの粘液を生じる咳を生じる。正常な細菌性肺炎は、合併症を伴わずにしばしば自然治癒するが、肺炎桿菌は、しばしば肺破壊および膿瘍を引き起こす。
【００３６】
クレブシエラ属はまた、あまり重くない呼吸器感染（例えば気管支炎）を引き起こし得、これは通常院内感染である。クレブシエラ属によって引き起こされる他の一般的な院内感染は、尿路感染症、術後創傷感染および菌血症である。これらの感染のすべては、攻撃的な様式で早期に処置されなければ、ショックを起こさせそして死へ進行し得る。
【００３７】
クレブシエラ属感染、および特に肺炎桿菌感染の処置方法は、本発明によって提供される。１または複数の株のクレブシエラ属またはバクテリオファージを含む選択されたクレブシエラ属溶解物組成物は、種々の経路（鼻ドロップおよび皮下経路、またはそれらの組み合わせを含むがこれらに限定されない）を介して投与される。この溶解物組成物は、所望の処置が達成されるまで毎日投与される。
【００３８】
あるいは動物およびヒトは、クレブシエラ属感染が阻止されるように細菌溶解物組成物を用いて予防接種または予防的に処置され得る。このような処置は、クレブシエラ属の感染前の時期に鼻ドロップおよび皮下投与を含む投与経路を通じた１または複数の株のクレブシエラ属およびファージ由来の溶解物を含むクレブシエラ属溶解物組成物の投与を含む。ヒトについての好ましい予防投与は、３歳以後可能性がある感染状況（例えば入院）前の３〜６週間、または一般的に予防接種プログラムの一部としてである。
【００３９】
（緑膿菌感染の予防および処置）
別の頻発する病院汚染物質である緑膿菌は、土壌、低湿地および海辺の海洋生息地、ならびに植物組織および動物組織で生育する不定のグラム陰性細菌である。緑膿菌は、蒸留水を含む水溶液中で生育し得る。この能力は、静脈内流体、レスピレータ、麻酔装置および他の病院装置の頻繁な汚染をもたらす。嚢胞性線維症を有する人々、熱傷被害者、癌を有する個体および集中治療室での長期滞在を必要とする患者は、特に緑膿菌感染の危険にさらされる。多くの環境性細菌とは異なり、緑膿菌は、影響をうけやすい宿主において疾患を引き起こす顕著な能力を有する。緑膿菌は、水および土壌から植物組織および動物組織へと多くの生態的地位に適応し、そしてこの生態的地位において成長する能力を有する。緑膿菌は、多くの毒性タンパク質を産生し得、これは広範な組織損傷を引き起こすだけでなく、免疫系の防御機構も妨げる。これらのタンパク質は、コロニー形成部位またはこの部位の近傍で宿主細胞に侵入しそして宿主細胞を殺傷する強力な毒素から、種々の器官の細胞膜および結合組織を永久的に崩壊する分解酵素に及ぶ。
【００４０】
緑膿菌感染は、嚢胞性線維症を有する個体における特定の問題である。嚢胞性線維症は、一般的な致死的遺伝子疾患である（発生率１：２０００、コーカソイドの出生）。この疾患は、慢性肺疾患、再発性肺炎、咳および気管支拡張症の病歴を生じさせる。嚢胞性線維症患者の肺は、緑膿菌、特に致死的な合併症の一因となる独特のムコイド株によってコロニー形成され得る。黄色ブドウ球菌は、同様に頻繁に存在する。
【００４１】
シュードモナス属感染および特に緑膿菌感染の処置は、本発明によって提供される。１または複数の株由来の溶解物を含む選択されたシュードモナス属溶解物組成物は、種々の経路（鼻ドロップおよび皮下経路、またはそれらの組み合わせを含むがこれらに限定されない）を介して投与される。
【００４２】
あるいは動物およびヒトは、シュードモナス属感染および肺炎球菌感染が阻止されるようにシュードモナス属溶解物組成物を用いて予防接種され得る。このような処置は、シュードモナス属の感染前の時期に鼻注入および皮下注入を含む投与経路を通じた細菌およびファージ由来の溶解物を含むシュードモナス属溶解物組成物の投与を含む。予防投与の好ましい時期は、３歳以後可能性がある感染状況（例えば計画された入院）前の３〜６週間、または一般的に予防接種プログラムの一部としてである。
【００４３】
（乳腺炎）
本発明は、乳腺炎、特に乳牛における乳腺炎の予防および処置に有効であるが、任意の乳腺炎が、本発明を用いて処置され得る。乳牛における乳腺炎は、乳房内の細菌感染、機械的外傷または化学的外傷に反応した乳腺の炎症である。乳腺炎に起因した経済的損失は、米国だけで１年間に１７億ドルである。伝染性の乳腺炎は、主に黄色ブドウ球菌および連鎖球菌性の乳汁分泌欠如（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）によって引き起こされると考えられる。環境性乳腺炎は、例えば以下に挙げられる、種々の異なる細菌肺炎桿菌、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、クレブシエラ・オキシトカ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｏｘｙｔｏｃａ）、エンテロバクラー・アエロゲネス菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、連鎖球菌性ウベリス（菌）（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ  ｕｂｅｒｉｓ）、連鎖球菌性ボヴィス（菌）（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ  ｂｏｖｉｓ）および連鎖球菌性ダイスガラクチア（菌）（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ  ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａ）によって、ただしこれらに限定されない菌によって引き起こされ得る。
【００４４】
ウシ乳腺炎の伝統的な予防策は、消毒液で毎日乳首を浸す複雑な処方計画を伴い、そして抗生物質を含む乳首浸液を伴い得る。感染が生じる場合、抗生物質の乳房内注入が指示されるが、しかしこれは、ますます細菌の耐性株を導く。抗生物質治療は、産生される乳汁が売り物になるように感染を減少し得るが、これは一般的に、原因となる生物の完全な排除を導かない。任意の特定の理論によって結び付けられて考えることを望んでいないが、乳腺炎に対する研究は、乳腺炎の処置における問題の一部が、著しい数の細菌が乳腺において貪食性の多形核好中性白血球（ＰＭＮ）内部に生存したままであることを示している。白血球の溶解が生じる場合、この食作用された細菌は、例えばブドウ球菌の再成長を生じる乳腺炎の新たな供給源を提供し得る。結び付けられて考えることを望んでいないが、細菌溶解物の使用は記憶細胞の発生を可能にし、残存する細菌が出現し得る時にはいつでも雌ウシはこの細菌に応答し得ると現在考えられる。
【００４５】
一般にウシ乳腺炎は、雌ウシに有効量の細菌溶解物を投与することによって処置される。この投与は、群れのすべてのウシ類が細菌溶解物組成物で処置される場合に予防投与であり得、またはこの投与は、感染が個々の雌ウシにおいて発生する場合に生じ得る。例えば未経産雌ウシにおいて、予防接種は生後６ヶ月で開始する。溶解物の３回の皮下注入（各々５ｃｃ）は、生後６ヶ月と２４ヶ月との間に行われる。
【００４６】
本発明はまた、他の家畜動物における皮膚感染（イヌおよびネコのブドウ球菌性皮膚感染を含む）、皮膚炎ならびに他の慢性感染の処置において有用である。処置方法は、家畜動物への有効量の細菌溶解物の投与を含む。
【００４７】
細菌抗原は、インビボで免疫調節効果を引き起こすことが公知である。例えばブドウ球菌性生物、他の細菌およびいくつかのウイルスによる宿主の感染において、ブドウ球菌溶解物組成物は、動物およびヒトにおいて細胞媒介性免疫ならびに体液性免疫を強力にすると考えられる。ブドウ球菌溶解物での処置は、抗原特異的ならびに総体的な体液性の抗体および免疫グロブリンレベルを上昇させ、これは同様に体液性応答に対して有効なイムノアジュバントを生成する。
【００４８】
（送達および投薬量）
本発明の方法は、経口経路、頬経路、鼻経路、エーロゾル経路、局所経路、経皮経路、注入可能経路、持続性経路、制御放出経路、イオン浸透療法経路、超音波導入経路が挙げられるがこれらに限定されない投与経路、ならびに他の送達デバイスおよび送達方法を含む。注入可能方法としては、静脈内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、髄腔内経路、鞘内経路、脳室内経路、動脈内経路、皮下経路および鼻内経路が挙げられるがこれらに限定されない。
【００４９】
本発明によって病状を処置するための組成物はさらに、薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を有し得る。この組成物はまた、他の薬剤、医薬品、キャリア、アジュバント、希釈剤および当業者に公知の他の薬学的調製物を有し得る。これらの因子は、当業者に公知であり、そして一般的に生物学的に不活性であると記載され、そして活性成分と有害な相互作用を引き起こすことなく患者に投与され得る。
【００５０】
本発明に従って、少なくとも１つの薬学的組成物が、吸入による治療剤の投与について当該分野で公知の任意の種々の吸入デバイスまたは鼻デバイスによって送達され得る。患者の洞腔または肺胞中にエーロゾル化処方物を送達し得るデバイスは、定量吸入器、噴霧器、乾燥粉末発生器、スプレーなどを有する。肺投与または鼻投与の実施に適切な他のデバイスはまた、当該分野で公知である。
【００５１】
本発明の化合物を投与するための吸入デバイスにはいくつかの望ましい特徴が存在する。例えば吸入デバイスによる送達は、有利に信頼性が高く、再現性が高くそして正確である。肺投与について、少なくとも１つの薬学的組成物が、肺または洞の下気道に到達するに有効な粒子サイズで送達される。
【００５２】
あらゆるこのような吸入デバイスは、エーロゾルにおける薬学的組成物の投与について使用される。このようなエーロゾルは、溶液（水溶液および非水溶液の両方）または固体粒子のいずれかを含み得る。Ｖｅｎｔｏｌｉｎ（登録商標）定量吸入器のような定量吸入器は代表的に推進ガスを使用し、そして吸息の間の作動を必要とする。例えばＷＯ  ９８／３５８８８、ＷＯ  ９４／１６９７０を参照のこと。Ｔｕｒｂｕｈａｌｅｒ（登録商標）（Ａｓｔｒａ）、Ｒｏｔａｈａｌｅｒ（登録商標）（Ｇｌａｘｏ）、Ｄｉｓｋｕｓ（登録商標）（Ｇｌａｘｏ）、Ｓｐｉｒｏｓ（登録商標）吸入器（Ｄｕｒａ）、Ｉｎｈａｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによって販売されるデバイス、およびＳｐｉｎｈａｌｅｒ（登録商標）粉末吸入器（Ｆｉｓｏｎｓ）のような乾燥粉末吸入器は、混合粉末の呼吸作動を使用する。各々全面的に明白に本明細書中で参考として援用される米国特許第５，４５８，１３５号、同第４，６６８，２１８号、ＷＯ  ９７／２５０８６、ＷＯ  ９４／０８５５２、ＷＯ９４／０６４９８およびＥＰ  ０  ２３７  ５０７を参照のこと。ＡＥＲｘ（登録商標）、Ａｒａｄｉｇｍ、Ｕｌｔｒａｖｅｎｔ（登録商標）噴霧器（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ）およびＡｃｏｒｎ  ＩＩ（登録商標）噴霧器（Ｍａｒｑｕｅｓｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）、全面的に明白に本明細書中で参考として援用される上記の参考文献のような噴霧器は、溶液からエーロゾルを産生するが、一方定量吸入器、乾燥粉末吸入器などは、小さな粒子のエーロゾルを作製する。市販される吸入デバイスのこれらの特定の例は、本発明の実施に適切な特定のデバイスの代表であることが意図され、そして本発明の範囲を限定するように意図されない。
【００５３】
キャリアが液体である場合の投与に適切な処方物（例えば鼻スプレーまたは鼻ドロップ）は、活性成分の水溶液または油性溶液を有する。
【００５４】
本発明の薬学的組成物を含むスプレーは、本明細書中で開示される化合物の懸濁液または溶液を圧力をかけてノズルを通じて押し出すことによって産生され得る。ノズルのサイズおよびノズルの形状、加えられる圧力ならびに液体供給速度は、所望の産出量および粒子サイズを達成するように選択され得る。電気スプレーは、例えば毛細管またはノズル供給装置に連結された電界によって産生され得る。
【００５５】
本発明の薬学的組成物は、噴霧器（例えばジェット噴霧器または超音波噴霧器）によって投与され得る。代表的にはジェット噴霧器において、圧縮空気源が使用されて、オリフィスを通じて高速のエアジェットを生成する。ガスがノズルを越えて広がる時に低圧領域が生成され、これは液体タンクに連結された毛細管を通じて組成物のタンパク質溶液を汲み出す。毛細管からの液体流動は、この管が存在するために不安定なフィラメントおよび小滴に剪断され、エーロゾルを生成する。形状、流速およびバッフル型の範囲は、所定のジェット噴霧器から所望の性能特性を達成するように利用され得る。超音波噴霧器において、高周波電気エネルギーが使用されて、振動エネルギー、機械エネルギーが生成され、これは代表的には圧電変換器を利用する。このエネルギーは、直接または結合流体を通じてのいずれかで組成物のタンパク質処方物に伝導され、組成物のタンパク質を有するエーロゾルを作製する。
【００５６】
定量吸入器（ＭＤＩ）において、推進剤、本発明の化合物および任意の賦形剤または他の添加剤は、液化圧縮ガスを有する混合物としてキャニスター中に収容される。メータリングバルブの作動は、この混合物をエーロゾルとして放出する。
【００５７】
定量吸入器デバイスを用いた使用のための薬学的組成物は、非水性媒体中の懸濁剤（例えば界面活性剤の助けによって推進剤中に懸濁される）として本明細書中において開示される化合物を含む微細に分割された粉末を一般的に有する。この推進剤は、この目的について利用される任意の従来型の物質（例えばクロロフルオロカーボン、ヒドロクロロフルオロカーボン、ヒドロフルオロカーボン、またはトリクロロフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタノールおよび１，１，１，２−テトラフルオロエタン、ＨＦＡ−１３４ａ（ヒドロフルオロアルカン−１３４ａ）、ＨＦＡ−２２７（ヒドロフルオロアルカン−２２７）などを有する炭化水素であり得る。当業者は、本発明の方法が、本明細書中で開示されないデバイスを介して本明細書中で開示される化合物の肺投与によって達成され得ることを認識する。
【００５８】
本発明の簡便な溶解物送達システムは、溶解物の別々にコーティングされたペレットを含むカプセルを含む。このカプセルからの放出の際に、コーティングされないペレットは、溶解物組成物の初期量を体に提供し、そしてコーティングされたペレットは、溶解物組成物をある期間にわたって提供する。別のシステムはヒドロゲル物質を有し、コーティングされた丸剤は、例えば米国特許第４，６５９，５５８号に教示されるヒドロゲル中に埋め込まれる。例えば米国特許第４，６５９，５５８号に教示される未膨張ヒドロゲルが嚥下され、そして胃液の存在環境下において膨張し、その結果このヒドロゲルが胃に停留される。このコーティングされた丸剤は、ヒドロゲルが分解するにつれて放出される。この溶解物はまた、自動注入デバイス（例えば米国特許第５，５１４，０９７号、同第１５９，１９２号および同第５，６４３，２１４号、ならびに欧州特許第０５１６４７３Ｂ１において記載されるデバイス）の使用を通じて投与され得る。
【００５９】
本発明において意図される制御放出システムにおいて、経口摂取後に溶解物は、著しく腸管の全体に渡る拡散および侵食によって放出される。胃の停留時間の延長についての本発明の方法は、脂肪酸の組込みを有し、生理的に胃が空の状態および生体接着性ポリマーの使用を減少する。このようなシステムは当業者に公知であり、そしてポリカルボフィル（ｐｏｌｙｃａｒｂｏｐｈｙｌｌ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、トラガカントゴム、アクリレートおよびメタクリレート、改変セルロースならびに多糖ゴムのようなポリマーの使用を含む。
【００６０】
胃が空の状態を避けながら胃への溶解物の標的化について本発明によって意図される別の送達システムは、流体力学的平衡システムとして公知である。このシステムは、胃液よりも低いかさ密度を有するカプセルまたは錠剤に基づく。従ってこの投薬形態は、胃に浮遊したまま留まる。これらの投薬形態は、２０〜７５％の１以上の親水コロイド（例えばヒドロキシエチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース）から構成される。
【００６１】
これらのデバイスの他の型は、浸透圧的に活性な塩を含む浸透圧区画を有する。本発明において、胃液によるこれらの塩の溶解は、溶解物組成物を汲み出す。他の型は、浮遊二分子層圧縮基質に基づく。この層のうちの１つは、親水性ポリマーおよび二酸化炭素発生組成物から構成される。二酸化炭素は浮力を維持し、そして他の親水層は基質から薬物を放出する。胃への溶解物標的化のためのさらなる方法は、ポリエチレンまたはポリエチレンブレンドからなる胃内部で停留される形状を含む。
【００６２】
上記の送達システムがまた本発明において使用されて、溶解物組成物を小腸上部に標的化し得る。しかし小腸の他の領域への標的化は、いくつかのさらなるシステムを含み得る。低い胃のｐＨおよび胃の酵素の存在は、腸溶性コーティングの開発を導いた。このコーティングは、胃粘膜を溶解物刺激から保護する。コーティングは、選択的に不溶性の物質を用いて行われ、そして溶解物を胃酵素および／または低ｐＨによる不活性化から保護する。
【００６３】
要するに本発明は、微生物感染の処置のために溶解物組成物を投与する方法を含む。すべての投与経路があらゆる患者に有効であるとは限らない。従って本発明は種々の方法を含み、これらの方法は、溶解物組成物の異なる処方物を必要とする。この処方物は、経口投与、直腸投与、眼投与（硝子体内（ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ）投与もしくは前眼房内投与を有する）、鼻投与、局所投与（頬投与および舌下投与を有する）、膣投与または非経口投与（皮下投与、経皮投与、筋肉内投与、静脈内投与、皮内投与、気管内投与および硬膜外投与を有する）に適した処方物を有する。この処方物は簡便に、単位投薬形態で存在し得、そして従来の製薬技術によって調製され得る。
【００６４】
錠剤は、必要に応じて１以上の補助成分とともに圧縮または成形によって作製され得る。圧縮錠剤は、適切な機械において活性成分を流動性形態（例えば粉末または顆粒）に圧縮することによって調製され得、これは必要に応じて結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、表面活性剤または分散剤と混合される。不活性な液体希釈剤で湿った粉状化合物の混合物の適切な機械における成形は、成形錠剤を作製し得る。この錠剤は、必要に応じてコーティングまたは刻み目を入れられ得、そして体内で溶解物の持続性放出または制御放出を提供するように処方され得る。
【００６５】
口における局所投与に適切な処方物は、成分を香味主剤（通常スクロースおよびアカシアまたはトラガカント）中に含むロゼンジ、活性成分を不活性主剤（例えばゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシア）中に含む香錠、ならびに溶解物を適切な液体キャリア中に含むうがい薬を有する。
【００６６】
本発明はさらに、局所投与の方法を含む。本発明に従った局所組成物を調製するために、スキンケア製品を調製するための通常の様式が利用され得る。活性成分は一般的に、従来様式で皮膚科学的に受容可能なキャリア中に組み込まれる。これは、エーロゾルスプレーを有する別個の単位でパッケージされ得、各々所定量の活性成分を粉末、スティックまたは顆粒として、クリーム、パスタ、ゲル、ローション剤、シロップまたは軟膏として、スポンジまたは綿塗布具上に、あるいは水性液体、非水性液体、水中油滴型エマルジョンまたは油中水滴型液体エマルジョンにおける溶液または懸濁液として含む。この溶解物は、水または別の溶媒あるいは組成物中に組み込まれるべき液体の一部中に適切に第一に溶解または分散され得る。この組成物はまた、いわゆる「洗い流し」製品（例えばバスジェルまたはシャワージェル）の形態であり得、すすぎの間に皮膚への付着を促進するための溶解物に対する送達システムを含み得る。最も好ましくはこの製品は、「残したままの」製品（皮膚への塗布直後に意図的なすすぎステップを伴わずに皮膚へ塗布されるべき製品）である。このような組成物は、任意の薬学方法によって調製され得るが、すべての方法は、溶解物組成物とのキャリアの結合をもたらすステップを有する。一般にこの組成物は、活性成分を液体キャリアまたは微細に分割された固体キャリアあるいはその両方と均一および均質に混合し、次いで必要ならば、この製品を所望の体裁に形作ることによって調製される。この組成物は、従来様式で任意の適切な方法（例えばジャー、瓶、チューブ、ロール・ボールなど）でパッケージされ得る。
【００６７】
膣投与に適切な処方物は、溶解物に加えて当該分野で適切であることが公知のようなキャリアを含む膣坐薬、タンポン（ｔａｍｐｏｒｔ）、クリーム、ゲル、パスタ、フォームまたはスプレー処方物として与えられ得る。
【００６８】
非経口投与に適切な処方物は、酸化防止剤、緩衝剤、静菌薬およびこの処方物を意図されるレシピエントの血液と等張にする溶質を含み得る水性および非水性の滅菌注入溶液、ならびに懸濁剤および濃化剤を有し得る水性および非水性の滅菌懸濁剤を有する。この処方物は、単位用量容器または複数用量容器において与えられ得る。即時注入溶液および懸濁剤は、以前に記載された種類の滅菌粉末、顆粒および錠剤から調製され得る。好ましい単位投薬処方物は、投与される成分の本明細書中上記で列挙されるような日用量または１日の単位、１日の副用量、あるいはそれらの適切な画分を含む処方物である。
【００６９】
この化合物はまた、例えばコアセルベーション技術または界面重合によって調製されるマイクロカプセル（例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ（メチルメタクリレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセル）、コロイド薬物送達システム（例えばリポソーム、アルブミンミクロスフェア、ミクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）あるいはマクロエマルジョン中に捕捉され得る。ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ（Ａ．Ｏｓｏｌ編、第１６版（１９８０））。
【００７０】
特定の実施態様において、本明細書中で開示される化合物は、リポソームとして処方される。本発明の化合物を含むリポソームは、当該分野で公知の方法によって調製される。例えば米国特許第５，０１３，５５６号；同第４，４８５，０４５号；同第４，５４４，５４５号；ＷＯ  ９７／３８７３１；Ｅｐｓｔｅｉｎら、８２  ＰＲＯＣ．ＮＡＴＬ．ＡＣＡＤ．ＳＣＩ．ＵＳＡ  ３６８８（１９８５）；およびＨｗａｎｇら、７７  ＰＲＯＣ．ＮＡＴＬ．ＡＣＡＤ．ＳＣＩ．ＵＳＡ  ４０３０（１９８０）を参照のこと。本発明の化合物はまた、リポソーム送達システムの形態（例えば小さな単層小胞、大きな単層小胞および多層小胞）で投与され得る。リポソームは、種々のリン脂質（例えばコレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリン（ｐｈｏｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅｓ）から形成され得る。
【００７１】
本発明は、薬学的使用または獣医学的使用に適切な防腐剤ならびに多目的の保存処方物を含む安定な処方物ならびに保存溶液および保存処方物を提供し、これは本明細書中に開示される少なくとも１つの化合物を薬学的に受容可能な処方物中に含む。本発明に従った処方物は、必要に応じて少なくとも１つの公知の防腐剤を含み得る。
【００７２】
さらに、本発明の化合物および他の治療剤（例えば化学療法剤、免疫抑制剤、サイトカイン、細胞傷害性因子、核分解性（ｎｕｃｌｅｏｌｙｔｉｃ）化合物、放射性同位体、レセプターおよびプロドラッグ活性化酵素（これらは天然に存在し得るかまたは組換え方法によって産生され得る））の同時投与または逐次投与が望ましくあり得る。組み合わせ投与は、別個の処方物または１つの薬学的処方物を用いた同時投与、および順序を問わない連続投与（ここで好ましくは、両方（またはすべて）の活性な治療剤が、それらの生物学的活性を同時に発揮する時間が存在する）を有する。
【００７３】
別の実施態様において、他の治療剤はサイトカインを含む。用語「サイトカイン」は、別の細胞に対して細胞間メディエータとして作用する１細胞集団によって放出されるタンパク質に対する総称用語である。このようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカインおよび伝統的なポリペプチドホルモンである。サイトカインに含まれるのは、成長ホルモン（例えばヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモン）、副甲状腺ホルモン、チロキシン、インスリン、プロインスリン、リラキシン、プロリラキシン、糖タンパク質ホルモン（例えばろ胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）および黄体形成ホルモン（ＬＨ））、肝細胞増殖因子、線維芽細胞増殖因子、プロラクチン、胎盤性ラクトゲン、腫瘍壊死因子αおよび腫瘍壊死因子β、ミュラー阻害物質、マウスゴナドトロピン結合ペプチド、インヒビン、アクチビン、血管内皮増殖因子、インテグリン、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、神経成長因子（例えばＮＧＦ−β）、血小板増殖因子、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）（例えばＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−β）、インスリン様増殖因子−Ｉおよびインスリン様増殖因子−ＩＩ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、骨誘導性因子、インターフェロン（例えばインターフェロン−αおよびインターフェロン−γ）、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）（例えばマクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ））、顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）、および顆粒球−ＣＳＦ（ＧＣＳＦ）、インターロイキン（ＩＬ）（例えばＩＬ−１、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５）、腫瘍壊死因子（例えばＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−β）、ならびに他のポリペプチド因子（ＬＩＦおよびｋｉｔリガンド（ＫＬ）を有する）である。本明細書中で使用される場合、用語サイトカインは、天然の供給源由来のタンパク質、または組換え細胞培養物由来のタンパク質、ならびにネイティブ配列のサイトカインの生物学的に活性な等価物を有する。
【００７４】
特に上記で言及される成分に加えて、本発明の処方物は、当該処方物の型との関連を有する当該分野で従来型の他の因子を有し得ることが理解されるべきであり、例えば経口投与に適切な処方物は、香味剤を有し得る。
【００７５】
本明細書中および添付の請求の範囲において使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかにそうではないと示さない限り複数の言及を有する。従って例えば「化合物」への言及は、１以上のこのような化合物への言及であり、そして当業者に公知のこの等価物などを有する。別段の規定がない限り、本明細書中で使用されるすべての専門用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者に一般的に理解されるのと同じ意味を有する。
【００７６】
本明細書中で言及されるすべての出版物および特許は、例えばこの出版物に記載される構成体および方法論を記載および開示する目的について本明細書中で参考として援用され、これは本明細書中で記載される本発明との関連において使用され得る。上記および本文にわたって議論される出版物は、単に本出願の出願日前の開示について提供される。本発明者らが先行発明に基づいてこのような開示に先行する権利を与えられない容認として解釈されるべきことは、本明細書中で何もない。
【００７７】
本発明は、本明細書中で開示される特定の処方物、特定のプロセスステップおよび特定の物質に限定されないことが理解されるべきである。なぜならこのような処方物、プロセスステップおよび物質は、多少変化し得るからである。本明細書中で利用される術語が、特定の実施態様のみを記載する目的について使用され、そして限定されることは意図されないことがまた理解されるべきである。なぜなら本発明の範囲は、添付の請求の範囲およびその等価物によってのみ限定されるからである。
【００７８】
上記の開示は一般的に本発明を記載する。より完全な理解は、以下の実施例に対する参照によって得られ得る。これらの実施例は、単に例示の目的について記載され、そして本発明の範囲を限定することは意図されない。特定の用語が本明細書中で利用されているが、このような用語は記述的意味において意図され、そして限定の目的について意図されない。
【実施例】
【００７９】
（実施例１）
（黄色ブドウ球菌溶解物の調製および使用）
黄色ブドウ球菌の細菌の株を、Ｃｚｅｃｈ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ（ＣＣＭ）に寄託し、そして受託番号ＣＣＭ  ４９９２、ＣＣＭ  ４９９３、ＣＣＭ  ４９９４、ＣＣＭ  ４９９５、ＣＣＭ  ４９９６、ＣＣＭ  ４９９７、ＣＣＭ  ４９９８を付与された。使用されるバクテリオファージは、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｉｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ（ＤＳＭ）に寄託され、そして受託番号ＤＳＭ  １４６１４、ＤＳＭ  １４６１５、ＤＳＭ  １４６１６を有する群由来であった。
【００８０】
凍結乾燥培養物として保存された細菌を、トリプトン寒天培地または類似の栄養寒天培地上に塗りつけた。３７℃での２４〜４８時間のインキュベーション後、５０ｍｌのトリプトン培地を、寒天プレート上で成長した細菌で接種した。この接種された培地を、３７℃で１８〜２０時間インキュベートし、そしてこの容量を５００ｍｌ培地に添加し、そして１〜２時間（６００ｎｍで測定されるＯＤに基づいて）インキュベートした。次いでファージストックを添加し、そしてこの混合物を、室温で１２〜１８時間静置した。得られる溶解物を、５，０００ｒｐｍで１時間遠心分離し、そして０．２２μｍの小孔サイズを有するフィルターを用いて濾過した。この混合物を、血液寒天を用いて滅菌について試験し、そして２層寒天技術を用いてファージ力価（ｔｉｔｒａｔｉｏｎ）について試験した。
【００８１】
（実施例２）
（細菌株のスクリーニング）
細菌株を、免疫原性方法（例えば蛍光抗体同定、ＦＡＣＳ選択、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、ＳＤＳゲル電気泳動）を用いて、または当業者に公知の他の検出方法によって最も一般的な抗原パターンについてスクリーニングした。一般的にこの抗原パターンを、ＳＤＳゲル電気泳動によって測定した。ＳＰＬの成分をゲル中で分離し、そして銀染色した。この抗原パターンを、ゲル中の特定のバンドの存在環境／非存在環境によって決定した。
【００８２】
次いで選択された細菌の培養物を、ファージ相同物の導入によって感染させた。ファージおよび細菌の結合物を、所定の時間内に細菌の量的溶解をもたらしたファージ株、および上記の方法を通じて最も一般的な抗原パターンを示した株についてスクリーニングした。再現可能な溶解結果を示した細菌株およびファージ株の結合物を選択した。１つの細菌株および異なるファージの結合物は、異なる抗原性結合物をもたらし、これはまた利用され得る。この選択された細菌株およびファージ株を凍結乾燥によって保存した。
【００８３】
（実施例３）
（凍結乾燥）
ファージを、１ｍｌ当たり１０９〜１０１０ファージ粒子を生じる宿主細菌を溶解することによって調製した。
【００８４】
０．５ｍｌのファージ含有細菌溶解物をチューブに配置し、これに０．２ｍｌのスキムミルクを添加した。次いでこのチューブを滅菌多孔質カバーで覆った。このチューブを、クライオデシケーター器具（例えば３０Ｐ２またはＥｄｗａｒｄｓＥＦ０３）を使用して、４時間の第一の乾燥および６時間の第二の乾燥を用いて凍結乾燥した。次いでこのチューブを密閉した。
【００８５】
各々のバッチのファージ含有細菌溶解物を、１つのチューブの内容物を宿主細菌層上にプレーティングし、そしてその力価を２倍希釈から得ることによって生存能力について試験した。この力価を、凍結乾燥前の開始力価と比較した。
【００８６】
（実施例４）
（安定性分析）
溶解物培養物の安定性を、安定性アッセイを通じて決定し、これはプレート上および液体培地中での反復培養および継代培養であった。この安定性研究を行って、保存の際に最も安定な細菌株およびファージ株を選択した。当業者に公知の方法によって測定される規準は、ＳＤＳゲル電気泳動による抗原パターンの測定およびファージビルレンスの測定であり、感染について使用されるファージに耐性になる株を排除した。この培養物をまた、溶解物の抗原パターンの再現性について確認した。ファージによる細菌細胞の標準化接種材料は、極めて再現性の高い溶解プロセスをもたらした。得られる溶解物を、ＳＤＳゲル電気泳動によって定量分析および定性分析した。
【００８７】
（実施例５）
（免疫調節剤の調製）
生物学的アッセイ（例えば芽球化転換、ウェスタンブロットによって検出される主要な抗原タンパク質、免疫調節など）を使用して、結果として生じる溶解物における生物学的に活性な物質を同定した。末梢リンパ球の芽球化転換を、クロマトグラフィー技術によって分別されたＳＰＬ由来の個々の画分を用いて測定した。活性化マーカーまたはチミジン取り込みをこのアッセイにおいて使用した。活性な画分（末梢リンパ球の活性を刺激／阻害する画分）をさらに分別し、そして所望の免疫調節剤の単離について使用した。次いで１以上のこれらの物質を、結果として生じる１以上の溶解物から精製し、同定し、そして所望の活性を有する結合物が形成された。結果として生じる２つ以上の同定された溶解物を互いに混合して、最終的なポリクローナル免疫調節剤を得た。
【００８８】
（実施例６）
（黄色ブドウ球菌溶解物での処置）
患者は、実施例５において記載されるように調製された濾液の０．０５ｃｃ〜０．２ｃｃ（５ｃｃボトル）の皮下用量を前腕に受けた。この用量は、患者の年齢、臨床状態および免疫学的状態に依存した。過敏性患者においては、この用量は０．０２ｃｃ〜０．０３ｃｃであるべきであった。このより少ない用量を半分に分割し、そして両方の前腕に適用し、同じ量を各々繰り返して投与した。用量を、あらゆる以前の局所反応の消散後に３〜５日おきに投与した。この用量を、患者の個々の反応に従って非過敏性患者においては皮下投与で０．０５ｃｃまで徐々に増大した。重篤な場合においては、この用量は１回の用量当たり皮下投与で１．０ｃｃまで増大し得た。局所反応が４日を超えて続く場合には、同じ用量を引き続く投与において反復するべきであった。
【００８９】
小児適用において（すなわち３〜１０歳の子供について）、この投薬量を、上記の投薬計画から５０％まで減少するか、または個別化反応に従って投与し得た。
【００９０】
処置期間は、患者の臨床状態および免疫学的状態に依存した。一般的にこの溶解物を、３〜５日おきに３ヶ月間投与した。この投薬計画を、ブースターとして定期的に反復し得た。
【００９１】
より軽症の感染または小児適用の場合において、この溶解物を鼻ドロップとして投与し得た。この用量は各外鼻孔に４滴であり、毎日４日間行いその後１日おきに行った。異なる投与経路が組み合わされ得た。
【００９２】
（実施例７）
（インビトロでのヒト血液中の食細胞（単球および多形核白血球）における代謝バーストの刺激）
血液サンプルを収集し、そしてヘパリンとともに保存した。このヘパリン化血液を、収集の２時間後および７時間後に使用し、そして１００マイクロリットルのサンプルを、ＳＰＬならびに他のネガティブコントロール（添加なし）およびポジティブコントロール（ペプチド、ホルミル−ＭｅｔＬｅｕＰｈｅ（ＦＭＬＰ）（生理学的刺激物質）、ホルボール−１２−ミリステート−１３−アセテート（ＰＭＡ：強力な刺激物質）を有する）とともにインキュベートした。
【００９３】
ｂｕｒｓａｔｅｓｔキット（Ｏｒｐｅｇｅｎ  Ｐｈａｒｍａ）を、それぞれ単球および多形核白血球における代謝バーストの検出について使用した。セルソーター（ＦＡＣＳｔｒａｋ）を使用して、ポジティブな細胞数および総細胞数を計数した。
【表１】
2005516631.tif 000002
【００９４】
ブドウ球菌溶解物（ＳＰＬ）は、収集の２時間後および７時間後に処理された血液サンプル中の単球および多形核白血球両方において代謝バーストを誘導した。この処理は、コントロールに対して２．５〜３．２倍の単球の増大、および３．６〜４．３倍の多形核白血球の増大を導いた。
【００９５】
（実施例８）
（インビトロでのヒト血液中のＴ細胞の部分集団の活性化）
ヘパリン化血液を、ＳＰＬならびに他のネガティブコントロール（添加なし）およびポジティブコントロール（ペプチド、ホルミル−ＭｅｔＬｅｕＰｈｅ（生理学的刺激物質）、ホルボール−１２−ミリステート−１３−アセテート（ＰＭＡ：強力な刺激物質）、血清オプソニン作用化Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ（大腸菌）細胞（Ｅ．ｃｏｌｉ−ｏ）（リポ多糖を含むグラム陰性細菌）およびフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ；Ｔ細胞刺激物質）を有する）とともに６時間インキュベートした。三重蛍光を用いた高速免疫試験（Ｆａｓｔｉｍｍｕｎｅ  Ｔｅｓｔ）およびＦＡＣＳｔｒａｋを使用して、初期活性化（ＣＤ６９＋）およびインターフェロンγ（ＩＦＮ−ｇ）の産生を、ＣＤ４＋Ｔ細胞において測定した。アイソタイプコントロールを使用して、バックグラウンド染色を減じた。
【表２】
2005516631.tif 000003
【００９６】
ＳＰＬは、ｆＭＬＰまたはＥ．ｃｏｌｉ−ｏよりもＣＤ４＋Ｔ細胞の初期および強度の活性化（ＣＤ６９＋）を誘導し、そしてこのレベルは、マイトジェンＰＭＡまたはＰＨＡによって誘導されたレベルのおよそ２０％に達した。
【００９７】
ＩＦＮ−γを産生する細胞を、ＳＰＬで刺激されたＣＤ４＋Ｔリンパ球のＣＤ６９＋部分集団において計数した場合、このレベルは、マイトジェンＰＭＡまたはＰＨＡで刺激されたレベルの３０％であった。
【００９８】
Ｅ．ｃｏｌｉ（大腸菌）刺激されたＣＤ４＋Ｔリンパ球またはｆＭＬＰ刺激されたＣＤ４＋Ｔリンパ球は、ＣＤ６９＋部分集団においてＩＦＮ−γのいかなる際立った産生も示さなかった。対照的にＳＰＬ刺激された細胞は、初期活性化（ＣＤ６９＋）細胞においてＩＦＮ−γの際立った産生を示した。
【国際調査報告】
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2005516631.tif 000005
2005516631.tif 000006