(57)【要約】  本発明は、ヘテロ芳香族カルボキサミド誘導体、そのようなものを含む組成物、中間体、ヘテロ芳香族カルボキサミド誘導体を製造する方法、並びに癌、炎症、および関節炎などの炎症関連障害を処置する方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2005509645.tif 000082
（式中、Ａは、酸素、窒素または硫黄より独立して選択される１個または２個のヘテロ原子を含有する５員ヘテロ芳香環であり；
Ｒ１は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ３）２、−ＣＯＮ（Ｒ３）２、−ＣＯＯＲ３、−ＮＲ３ＣＯＲ３、Ｓ（Ｏ）ｍＲ３、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ３）２、−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、置換または未置換のアリール、および酸素、窒素または硫黄より独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する置換または未置換の５〜７員ヘテロ芳香環から成る群より選択され、ここにおいて、１個または複数の該置換基は、独立して、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ４）２、−ＣＯＮ（Ｒ４）２、−ＣＯＯＲ４、−ＮＲ４ＣＯＲ４、Ｓ（Ｏ）ｍＲ４、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）２、−ＮＲ４ＳＯ２Ｒ４、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アミノアルキルおよびアリールから成る群より選択され；
Ｒ２は、置換または未置換のアリール、および酸素、窒素または硫黄より独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜７員の置換または未置換のヘテロ芳香環から成る群より選択され、ここにおいて、１個または複数の該置換基は、独立して、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ４）２、−ＣＯＮ（Ｒ４）２、−ＣＯＯＲ４、−ＮＲ４ＣＯＲ４、Ｓ（Ｏ）ｍＲ４、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）２、−ＮＲ４ＳＯ２Ｒ４、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アミノアルキルおよびアリールから成る群より選択され；
Ｒ１およびＲ２は、一緒になっていてよく、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ３）２、−ＣＯＮ（Ｒ３）２、−ＣＯＯＲ３、−ＮＲ３ＣＯＲ３、Ｓ（Ｏ）ｍＲ３、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ３）２、−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、置換または未置換のアリール、および酸素、窒素または硫黄より独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する置換または未置換の５〜７員ヘテロ芳香環から成る群より選択される１個以上の置換基で置換されていてよい５員または６員の飽和環または不飽和環を形成することができ、ここにおいて、１個または複数の該置換基は、独立して、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ４）２、−ＣＯＮ（Ｒ４）２、−ＣＯＯＲ４、−ＮＲ４ＣＯＲ４、Ｓ（Ｏ）ｍＲ４、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）２、−ＮＲ４ＳＯ２Ｒ４、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アミノアルキルおよびアリールから成る群より選択され；
Ｒ３は、水素またはアルキルから成る群より選択され；
Ｒ４は、水素またはアルキルから成る群より選択され；
ｍは、０、１または２の整数である）
を有する化合物；および
その異性体、互変異性体、担体、プロドラッグ、薬学的に許容しうる塩。
【請求項２】
Ｒ１が水素であり；そして
Ｒ２が、置換または未置換のアリール、および酸素、窒素または硫黄より独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜７員の置換または未置換のヘテロ芳香環から成る群より選択され、ここにおいて、１個または複数の該置換基は、独立して、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ４）２、−ＣＯＮ（Ｒ４）２、−ＣＯＯＲ４、−ＮＲ４ＣＯＲ４、Ｓ（Ｏ）ｍＲ４、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）２、−ＮＲ４ＳＯ２Ｒ４、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アミノアルキルおよびアリールから成る群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１およびＲ２が、一緒になって、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ３）２、−ＣＯＮ（Ｒ３）２、−ＣＯＯＲ３、−ＮＲ３ＣＯＲ３、Ｓ（Ｏ）ｍＲ３、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ３）２、−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、置換または未置換のアリール、および酸素、窒素または硫黄より独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する置換または未置換の５〜７員ヘテロ芳香環から成る群より選択される１個以上の置換基で置換されていてよい５員または６員の飽和環または不飽和環を形成し、ここにおいて、１個または複数の該置換基は、独立して、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ４）２、−ＣＯＮ（Ｒ４）２、−ＣＯＯＲ４、−ＮＲ４ＣＯＲ４、Ｓ（Ｏ）ｍＲ４、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）２、−ＮＲ４ＳＯ２Ｒ４、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アミノアルキルおよびアリールから成る群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１が、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ３）２、−ＣＯＮ（Ｒ３）２、−ＣＯＯＲ３、−ＮＲ３ＣＯＲ３、Ｓ（Ｏ）ｍＲ３、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ３）２、−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、置換または未置換のアリール、および酸素、窒素または硫黄より独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する置換または未置換の５〜７員ヘテロ芳香環から成る群より選択され、ここにおいて、１個または複数の該置換基は、独立して、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ４）２、−ＣＯＮ（Ｒ４）２、−ＣＯＯＲ４、−ＮＲ４ＣＯＲ４、Ｓ（Ｏ）ｍＲ４、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）２、−ＮＲ４ＳＯ２Ｒ４、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アミノアルキルおよびアリールから成る群より選択され；そして
Ｒ２が、置換または未置換のアリール、および酸素、窒素または硫黄より独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜７員の置換または未置換のヘテロ芳香環から成る群より選択され、ここにおいて、１個または複数の該置換基は、独立して、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ４）２、−ＣＯＮ（Ｒ４）２、−ＣＯＯＲ４、−ＮＲ４ＣＯＲ４、Ｓ（Ｏ）ｍＲ４、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）２、−ＮＲ４ＳＯ２Ｒ４、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アミノアルキルおよびアリールから成る群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
式II
【化２】
2005509645.tif 000083
（式中、Ｒ１は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ３）２、−ＣＯＮ（Ｒ３）２、−ＣＯＯＲ３、−ＮＲ３ＣＯＲ３、Ｓ（Ｏ）ｍＲ３、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ３）２、−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、置換または未置換のアリール、および酸素、窒素または硫黄より独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する置換または未置換の５〜７員ヘテロ芳香環から成る群より選択され、ここにおいて、１個または複数の該置換基は、独立して、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ４）２、−ＣＯＮ（Ｒ４）２、−ＣＯＯＲ４、−ＮＲ４ＣＯＲ４、Ｓ（Ｏ）ｍＲ４、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）２、−ＮＲ４ＳＯ２Ｒ４、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アミノアルキルおよびアリールから成る群より選択され；
Ｒ２は、置換または未置換のアリール、および酸素、窒素または硫黄より独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜７員の置換または未置換のヘテロ芳香環から成る群より選択され、ここにおいて、１個または複数の該置換基は、独立して、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ４）２、−ＣＯＮ（Ｒ４）２、−ＣＯＯＲ４、−ＮＲ４ＣＯＲ４、Ｓ（Ｏ）ｍＲ４、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）２、−ＮＲ４ＳＯ２Ｒ４、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アミノアルキルおよびアリールから成る群より選択され；
Ｒ１およびＲ２は、一緒になっていてよく、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ３）２、−ＣＯＮ（Ｒ３）２、−ＣＯＯＲ３、−ＮＲ３ＣＯＲ３、Ｓ（Ｏ）ｍＲ３、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ３）２、−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、置換または未置換のアリール、および酸素、窒素または硫黄より独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する置換または未置換の５〜７員ヘテロ芳香環から成る群より選択される１個以上の置換基で置換されていてよい５員または６員の飽和環または不飽和環を形成することができ、ここにおいて、１個または複数の該置換基は、独立して、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ４）２、−ＣＯＮ（Ｒ４）２、−ＣＯＯＲ４、−ＮＲ４ＣＯＲ４、Ｓ（Ｏ）ｍＲ４、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）２、−ＮＲ４ＳＯ２Ｒ４、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アミノアルキルおよびアリールから成る群より選択され；
Ｒ３は、水素またはアルキルから成る群より選択され；
Ｒ４は、水素またはアルキルから成る群より選択され；
ｍは、０、１または２の整数である）
を有する化合物；および
その異性体、互変異性体、担体、プロドラッグ、薬学的に許容しうる塩。
【請求項６】
Ｒ１が水素であり；そして
Ｒ２が、置換または未置換のアリール、および酸素、窒素または硫黄より独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜７員の置換または未置換のヘテロ芳香環から成る群より選択され、ここにおいて、１個または複数の該置換基は、独立して、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ４）２、−ＣＯＮ（Ｒ４）２、−ＣＯＯＲ４、−ＮＲ４ＣＯＲ４、Ｓ（Ｏ）ｍＲ４、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）２、−ＮＲ４ＳＯ２Ｒ４、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アミノアルキルおよびアリールから成る群より選択される、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１およびＲ２が、一緒になって、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ３）２、−ＣＯＮ（Ｒ３）２、−ＣＯＯＲ３、−ＮＲ３ＣＯＲ３、Ｓ（Ｏ）ｍＲ３、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ３）２、−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、置換または未置換のアリール、および酸素、窒素または硫黄より独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する置換または未置換の５〜７員ヘテロ芳香環から成る群より選択される１個以上の置換基で置換されていてよい５員または６員の飽和環または不飽和環を形成し、ここにおいて、１個または複数の該置換基は、独立して、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ４）２、−ＣＯＮ（Ｒ４）２、−ＣＯＯＲ４、−ＮＲ４ＣＯＲ４、Ｓ（Ｏ）ｍＲ４、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）２、−ＮＲ４ＳＯ２Ｒ４、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アミノアルキルおよびアリールから成る群より選択される、請求項５に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ１が、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ３）２、−ＣＯＮ（Ｒ３）２、−ＣＯＯＲ３、−ＮＲ３ＣＯＲ３、Ｓ（Ｏ）ｍＲ３、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ３）２、−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、置換または未置換のアリール、および酸素、窒素または硫黄より独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する置換または未置換の５〜７員ヘテロ芳香環から成る群より選択され、ここにおいて、１個または複数の該置換基は、独立して、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ４）２、−ＣＯＮ（Ｒ４）２、−ＣＯＯＲ４、−ＮＲ４ＣＯＲ４、Ｓ（Ｏ）ｍＲ４、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）２、−ＮＲ４ＳＯ２Ｒ４、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アミノアルキルおよびアリールから成る群より選択され；そして
Ｒ２が、置換または未置換のアリール、および酸素、窒素または硫黄より独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜７員の置換または未置換のヘテロ芳香環から成る群より選択され、ここにおいて、１個または複数の該置換基は、独立して、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ４）２、−ＣＯＮ（Ｒ４）２、−ＣＯＯＲ４、−ＮＲ４ＣＯＲ４、Ｓ（Ｏ）ｍＲ４、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）２、−ＮＲ４ＳＯ２Ｒ４、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アミノアルキルおよびアリールから成る群より選択される、請求項５に記載の化合物。
【請求項９】
３−アミノ−５−（３−メトキシフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド、
３−アミノ−５−（２−クロロフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド、
３−アミノ−５−（３−シアノフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド、
４−アミノ−５’−クロロ−２，２’−ビチオフェン−５−カルボキサミド、
４−アミノ−２’，５’−ジメチル−２，３’−ビチオフェン−５−カルボキサミド、
４−アミノ−２’，５’−ジクロロ−２，３’−ビチオフェン−５−カルボキサミド、
３−アミノ−５−（３−ニトロフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド、
３−アミノ−５−（２−フェナントリル）チオフェン−２−カルボキサミド、
４−アミノ−５’−メチル−２，２’−ビチオフェン−５−カルボキサミド、
３−アミノ−５−（２−ニトロフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド、
３−アミノ−５−（４−ニトロフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド、
３−アミノ−５−ピリジン−３−イルチオフェン−２−カルボキサミド、
３−アミノ−５−ピリジン−４−イルチオフェン−２−カルボキサミド、
４−アミノ−３’−メチル−２，２’−ビチオフェン−５−カルボキサミド、
３−アミノ−５−（４−メチルフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド、
３−アミノ−５−（３−メチルフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド、
３−アミノ−５−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］チオフェン−２−カルボキサミド、
３−アミノ−５−（３，４−ジクロロフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド、
３−アミノ−５−［４−（メチルスルホニル）フェニル］チオフェン−２−カルボキサミド、
３−アミノ−４，５−ジフェニルチオフェン−２−カルボキサミド、
３−アミノ−５−（３−アミノフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド、
３−アミノ−５−（４−アミノフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド、
３−アミノ−５−（２−アミノフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド、
３−アミノ−５−［３−（アミノカルボニル）フェニル］チオフェン−２−カルボキサミド、
３−アミノ−５−［４−（アミノカルボニル）フェニル］チオフェン−２−カルボキサミド、
３−アミノ−５−［３−（アミノメチル）フェニル］チオフェン−２−カルボキサミド、
３−アミノ−５−｛３−［（エチルスルホニル）アミノ］フェニル｝チオフェン−２−カルボキサミド、
５−［３−（アセチルアミノ）フェニル］−３−アミノチオフェン−２−カルボキサミド、
３−アミノ−５−（３−チエニル）チオフェン−２−カルボキサミド、
３−アミノ−５−（４−シアノフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド、
３−アミノ−５−（２−アニシル）−チオフェン−２−カルボキサミド、
３−アミノ−５−（３−クロロフェニル）−チオフェン−２−カルボキサミド、
３−アミノ−５−フェニルチオフェン−２−カルボキサミド、および
３−アミノベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド
から成る群より選択される請求項５に記載の化合物。
【請求項１０】
請求項１、請求項２、請求項３、請求項４、請求項５、請求項６、請求項７、請求項８または請求項９に記載の化合物および少なくとも一つの薬学的に許容しうる担体を含む組成物。
【請求項１１】
被検体の癌、炎症または炎症関連障害を処置する方法であって、このような癌、炎症または炎症関連障害を有するかまたはそれらに感受性の被検体に、治療的有効量の請求項１、請求項２、請求項３、請求項４、請求項５、請求項６、請求項７、請求項８または請求項９に記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項１２】
癌の処置に用いるための請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
炎症の処置に用いるための請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
炎症関連障害の処置に用いるための請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
炎症関連障害が関節炎である請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
炎症関連障害が痛みである請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
炎症関連障害が発熱である請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
被検体のプロテインキナーゼを阻害する方法であって、プロテインキナーゼ関連障害を有するかまたはそれらに感受性の被検体に、治療的有効量の請求項１、請求項２、請求項３、請求項４、請求項５、請求項６、請求項７、請求項８または請求項９に記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項１９】
前記プロテインキナーゼが、異なったアイソフォームのプロテインキナーゼＣ、サイクリン依存性キナーゼ（ｃｄｋ）、Ｍｅｔ、ＰＡＫ−４、ＰＡＫ−５、ＺＣ−１、ＳＴＬＫ−２、ＤＤＲ−２、Aurora １、Aurora ２、Ｂｕｂ−１、ＰＬＫ、Ｃｈｋｌ、Ｃｈｋ２、ＨＥＲ２、ｒａｆｌ、ＭＥＫ１、ＭＡＰＫ、ＥＧＦ−Ｒ、ＰＤＧＦ−Ｒ、ＦＧＦ−Ｒ、ＩＧＦ−Ｒ、ＶＥＧＦ−Ｒ、ＰＩ３Ｋ、ｗｅｅ１キナーゼ、Ｓｒｃ、Ａｂｌ、Ａｋｔ、ＩＬＫ、ＭＫ−２、ＩＫＫ−２、Ｃｄｃ７、ＮｅｋＩＫＫ１、ＩＫＫ２、ＩＫＫα／ＩＫＫβヘテロ二量体、ＴＢＫおよびＩＫＫｉから成る群より選択される請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記プロテインキナーゼが、ＩＫＫ２、ＩＫＫα／ＩＫＫβヘテロ二量体、ＴＢＫおよびＩＫＫｉから成る群より選択される請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記プロテインキナーゼがＩＫＫ２である請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、本明細書中に記載の通り全体が援用される２００１年１０月３０日出願の米国仮出願第６０／３４０，８１６号に、合衆国法典３５編１１９条に基づいて優先権を主張する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、概して、抗炎症薬剤の分野にあり、具体的には、ヘテロ芳香族カルボキサミド誘導体、それらを含む組成物、並びに癌、炎症、および関節炎などの炎症関連障害を処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
本発明の背景についての以下の説明は、本発明の理解を助けるために与えられているが、本発明の先行技術であるまたはそれを記載していることを承認するものではない。
【０００４】
ＮＦ−κＢは遍在性転写因子であり、多くの初期誘導性遺伝子（前炎症サイトカイン、接着分子、増殖因子、酵素および受容体が含まれる）の転写を制御することにより、免疫系の活性化及びストレス応答において重要な役割を果たす。（Ghosh S., May, M. J., and Kopp. E (1998) Annu. Rev. Immunol. 16,115-260; Zandi, E., and Karin, M. (1999) Mol. Cell. Biol. 19,4547-4551; Karin, M. (1999) J. Biol. Chem. 274,27339-27342）。遺伝子発現の特異性は、ＬＰＳを含めた細菌産物などの多数の多様な外部刺激物質、並びに、サイトカイン、最も重要には、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）およびインターロイキンβ（ＩＬ１β）によって細胞レベルで決定される。他の転写因子との相乗的相互作用によって、多数の機能的に関連した遺伝子を協調的に誘導する大きな潜在能力を維持しながら、更に特異性を得ることができる。ＮＦ−κＢは、Ｒｅｌタンパク質ファミリーのホモ二量体およびヘテロ二量体から構成され、阻害性タンパク質のＩκＢファミリーのメンバーによって細胞質中に不活性型で隔離されている（Ghosh S., May, M. J., and Kopp. E (1998) Annu. Rev. Immunol. 16,115-260; Zandi, E., and Karin, M. (1999) Mol. Cell. Biol. 19, 4547-4551; Karin, M. (1999) J. Biol. Chem. 274, 27339-27342）。ＩκＢは、ＮＦ−κＢ上の核局在化シグナルをマスクして、核トランスロケーションを妨げ、それによって、応答遺伝子のプロモーター領域へのＤＮＡ結合を妨げる。ＮＦ−κＢを活性化するアゴニストによる細胞の刺激は、一連の生化学的シグナルをもたらして、最後には、ＩκＢのリン酸化、ユビキチン化（ubiquitinylation）および分解を引き起こし、それによって、核トランスロケーションのためにＮＦ−κＢを放出する（Ghosh S., May, M. J., and Kopp. E (1998) Annu. Rev. Immunol. 16,115-260; Zandi, E., and Karin, M. (1999) Mol. Cell. Biol. 19,4547-4551; Karin, M. (1999) J. Biol. Chem. 274, 27339-27342）。最近、多数の研究室で、ＩκＢをリン酸化することによってそれらの分解を開始する２種類のＩκＢキナーゼ（ＩＫＫ１またはＩＫＫαおよびＩＫＫ２またはＩＫＫβ）がクローニングされ、キャラクタライズされた（Ghosh S., May, M. J., and Kopp. E (1998) Annu. Rev. Immunol. 16,115-260; Zandi, E., and Karin, M. (1999) Mol. Cell. Biol. 19, 4547-4551; Karin, M. (1999) J.Biol. Chem. 274,27339-27342）。触媒サブユニットであるＩＫＫ１およびＩＫＫ２は、構造的にも酵素的に類似していて、ＩＫＫシグナロソーム（signalsome）と称される大きなタンパク質複合体中にヘテロ二量体として存在する（Regnier, C., Song, H., Gao, X., Goeddel, D., Cao, Z. and Rothe, M. (1997) Cell 90,373-383; DiDonato, J. A., Hayakawa, M., Rothwarf, D. M., Zandi, E. and Karin, M. (1997) Nature 388,548-554; Mercurio, F., Zhu, H., Murray, B. W., Shevchenko, A., Bennett, B. L., Li, J. W., Young, D. B., Barbosa, M., Mann, M., Manning, A. and Roa, A. (1997) Science 278, 860-866; Zandi, E. Rothwarf, D. M., Delhase, M., Hayadawa, M and Karin, M. (1997) Cell 91,243-252; Woronicz, J. D., Gao, X., Cao, Z., Rothe, M. And Goeddel,D. V. (1997) Science 278,866-869）。第三のタンパク質であるＮＥＭＯ（ＩＫＫγ，ＩＫＫＡＰ１）は、ＩＫＫ活性化およびキナーゼ活性に必要な調節アダプタータンパク質である（Yamaoka, S., Courtois, G., Bessia, C., Whiteside, S. T., Weil, R., Agou, F., Kirk, H. E., Kay, R. J., and Ireal, A. (1998) Cell 93, 1231-1240; Rothwarf, D. M., Zandi, E., Natoli, G., Karin, M. (1998) Nature 395, 297; Mercurio, F., Murray, B. W., Shevchenko, A., Bennet, B. L., Young, D. B., Li, J. W., Pascual, G., Motiwala, A., Zhu, H., Mann, M and Manning, A. M. (1999) Mol. Cell. Biol. 2,1526-1538）。ＩＫＫ１およびＩＫＫ２は、大部分のヒト成人組織において、更には、異なった発生段階のマウス胚において共発現される（Regnier, C., Song, H., Gao, X., Goeddel, D., Cao, Z. and Rothe, M. (1997) Cell 90, 373-383; DiDonato, J. A., Hayakawa, M., Rothwarf, D. M., Zandi, E. and Karin, M. (1997) Nature 388, 548-554; Mercurio, F., Zhu, H., Murray, B. W., Shevchenko, A., Bennett, B. L., Li, J. W., Young, D. B., Barbosa, M., Mann, M., Manning, A. and Roa, A. (1997) Science 278, 860-866; Zandi, E. Rothwarf, D. M., Delhase, M., Hayadawa, M and Karin, M. (1997) Cell 91, 243-252; Woronicz, J. D., Gao, X., Cao, Z., Rothe, M. and Goeddel, D. V. (1997) Science 278,866-869; Hu, M. C. T., and Wang, Y. (1998) Gene 222,31-40）。このキナーゼ複合体は、ＴＮＦαおよびＩＬ１βなどのサイトカイン；ＬＰＳなどの微生物産物；およびＴＡＸなどのウイルスタンパク質を含めた種々のアゴニスト；更には、ホルボールエステル、酸化剤およびセリン／チロシンホスファターゼによって刺激される多数のシグナル伝達経路において、ＮＦ−κＢの活性化に決定的な共通因子（common denominator）に相当すると考えられる（Ghosh S., May, M. J., and Kopp. E (1998) Annu. Rev. Immunol. 16,115-260; Zandi, E., and Karin, M. (1999) Mol. Cell. Biol. 19,4547-4551; Karin, M. (1999) J. Biol. Chem. 274,27339-27342）。
【０００５】
ＩＫＫ１（ＩＫＫαとも称される、Regnier, C., Song,H., Gao, X., Goeddel, D., Cao, Z. and Rothe, M. (1997) Cell 90,373-383; DiDonato, J. A., Hayakawa, M., Rothwarf, D. M., Zandi, E. and Karin, M. (1997) Nature 388,548-554; Mercurio, F., Zhu, H., Murray, B. W., Shevchenko, A., Bennett, B. L., Li, J. W., Young, D. B., Barbosa, M., Mann, M., Manning, A. And Roa, A. (1997) Science 278,860-866）は、ＴＮＦαで刺激されたＨｅＬａ  Ｓ３細胞からのＩκＢキナーゼ活性の標準的な生化学的精製によって、そして酵母ツーハイブリッドスクリーニングにおけるＮＦ−κＢ誘導性キナーゼ（ＮＩＫ）であるＭＡＰ３Ｋとのその相互作用によって同時にクローニングされた。ＩＫＫ１は、以前にクローニングされたセリン・トレオニンキナーゼＣＨＵＫと同定された（Connelly, M. and Marcu, K. (1995) Cell. Mol. Biol. Res. 41, 537-549）。ＩＫＫ１（ＩＫＫαとも称される）は、Ｎ末端セリン／トレオニンキナーゼ触媒ドメイン、ロイシンジッパー様両親媒性ヘリックスおよびＣ末端ヘリックス・ループ・ヘリックスドメインを含有する８５ｋＤａの７４５アミノ酸タンパク質である。ＩＫＫ２（ＩＫＫβとも称される）も、ＴＮＦαで刺激されたＨｅＬａ  Ｓ３細胞からＩＫＫ１と共精製する標準的な生化学的精製によって、更には、ＩＫＫ１に配列相同性を有するＥＳＴクローンからの公的データベースで同定されることによってクローニングされた（Mercurio, F., Zhu, H., Murray, B. W., Shevchenko, A., Bennett, B. L., Li, J. W., Young, D. B., Barbosa, M., Mann, M., Manning, A. and Roa, A. (1997) Science 278, 860-866; Zandi, E. Rothwarf, D. M., Delhase, M., Hayadawa, M and Karin, M. (1997) Cell 91,243-252; Woronicz, J. D., Gao, X., Cao, Z., Rothe, M. And Goeddel, D. V. (1997) Science 278, 866-869）。ＩＫＫ２は、Ｃ末端にある１１アミノ酸伸長の付加を除いて、全トポロジーにわたってＩＫＫ１と同じである８７ｋＤａの７５６アミノ酸タンパク質である。ＩＫＫ１およびＩＫＫ２は、キナーゼドメインが６５％同一で且つＣ末端のタンパク質相互作用ドメインが４４％同一で、全体として５２％同一である。一過性哺乳動物発現分析を用いて、in vitro 翻訳実験によっておよびバキュロウイルス系での共発現によって得られたデータは、ＩＫＫ１およびＩＫＫ２が、それらのロイシンジッパーモチーフによってヘテロ二量体として選択的に会合していることを示している。これらの系では、ホモ二量体も記載されたが、このヘテロ二量体は、哺乳動物細胞中のキナーゼの生理学的形態である考えられる（Zandi, E. Rothwarf, D. M., Delhase, M., Hayadawa, M and Karin, M. (1997) Cell 91, 243-252; Li, J., Peet, G. W., Pullen, S. S., Schembri-King, J., Warren, T. C., Marcu, K. B., Kehry,M. R., Barton, R. and Jakes, S. (1998) J. Biol. Chem. 273,30736-30741）。最後に、ＮＥＭＯ（ＩＫＫγとも称される）は、ロイシンジッパーを含めた三つのαらせん領域を含有し、ＩＫＫ２と選択的に相互作用し、そしておそらくはシグナロソーム複合体中に他のタンパク質を引き入れることによるヘテロ二量体キナーゼ複合体の活性化に必要である（Yamaoka, S., Courtois, G., Bessia, C., Whiteside, S. T., Weil, R., Agou, F., Kirk, H. E., Kay, R. J., and Ireal, A. (1998) Cell 93, 1231-1240; Rothwarf, D. M., Zandi, E. , Natoli, G., Karin, M. (1998) Nature 395,297; Mercurio, F., Murray, B. W., Shevchenko, A., Bennet, B. L., Young, D. B., Li, J. W., Pascual, G., Motiwala, A., Zhu, H., Mann, M and Manning, A. M. (1999) Mol. Cell. Biol. 2,1526-1538）。
【０００６】
ＩＫＫ１およびＩＫＫ２のキナーゼ活性は、リン酸化によって調節され、そして二量体化のため自然のままの（intact）ロイシンジッパー（ＬＺ）及び自然のままのヘリックス・ループ・ヘリックス（ＨＬＨ）ドメインを必要とし、ＨＬＨドメインはＩＫＫタンパク質の残りの部分とともにin transで発現される場合にも、キナーゼ活性にに正の調節作用をおよぼすことができる。（Regnier, C., Song, H., Gao, X., Goeddel, D., Cao, Z. and Rothe, M. (1997) Cell 90,373-383; DiDonato, J. A., Hayakawa, M., Rothwarf, D. M., Zandi, E. and Karin, M.(1997) Nature 388, 548-554; Mercurio, F., Zhu, H., Murray, B. W., Shevchenko, A., Bennett, B. L., Li, J. W., Young, D. B., Barbosa, M., Mann, M., Manning, A. and Roa, A. (1997) Science 278,860-866; Zandi, E. Rothwarf, D. M., Delhase, M., Hayadawa, M and Karin, M. (1997) Cell 91,243-252; Woronicz, J. D., Gao, X., Cao, Z., Rothe, M. and Goeddel, D. V.(1997) Science 278,866-869; Dehase, M., Hayakawa, M., Chen, Y., and Karin, M. (1999) Science 284,309-313）。ＩＫＫサブユニットは両方とも、ＮＩＫおよびＭＥＫＫ１などのＭＡＰ３Ｋによるキナーゼ活性の活性化およびリン酸化の標的であるＮ末端付近の規定（canonical）ＭＡＰＫＫ活性化ループモチーフを含有するが、これら二つの上流キナーゼによる生理学的調節は、更に別の特性決定のために用意されている（Zandi, E., and Karin, M. (1999) Mol. Cell. Biol. 19,4547-4551; Karin, M. (1999) J. Biol.Chem. 274,27339-27342; Karin, M., and Delhase, M. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95,9067-9069）。最後に、ＩＫＫ２のＣ末端におけるセリンのリン酸化は、ＩＫＫ活性の減少を引き起こし、そしてそれは、アゴニストでの細胞の刺激後に認められる一過性キナーゼ活性に関与していると考えられる（Dehase, M., Hayakawa, M., Chen, Y., and Karin, M. (1999) Science 284,309-313）。
【０００７】
ＩＫＫ２は、ＩκＢαまたはＩκＢβを基質として用いると、ＩＫＫ１と比較してより強力なキナーゼ活性を示す（Mercurio, F., Zhu, H., Murray, B. W., Shevchenko, A., Bennett, B. L., Li, J. W., Young, D. B., Barbosa, M., Mann, M., Manning, A. and Roa, A. (1997) Science 278,860-866; Zandi, E. Rothwarf, D. M., Delhase, M., Hayadawa, M and Karin, M. (1997) Cell 91,243-252; Woronicz, J. D., Gao, X., Cao, Z., Rothe, M. and Goeddel, D. V. (1997) Science 278,866-869; Dehase, M., Hayakawa, M., Chen, Y., and Karin, M. (1999) Science 284,309-313）。ＭＡＰＫＫ活性化ループ内でのホスホ−受容体セリン残基の突然変異は、ＩＫＫ２キナーゼ活性を変化させる；セリンからアラニンへの置換は、キナーゼ活性の減少を生じるが、セリンからグルタミン酸への置換は、構成的に活性なキナーゼを生じる。ＩＫＫ１における類似のアラニン突然変異は、ＴＮＦαまたはＩＬ１βに応答する全ＩＫＫ活性の刺激の減少を引き起こさない（Dehase, M., Hayakawa, M., Chen, Y., and Karin, M. (1999) Science 284,309-313）。ＩＫＫ複合体内でＩＫＫ２が支配的なキナーゼ活性であることは、ＩＫＫ１またはＩＫＫ２欠損マウスからの線維芽細胞の分析によって更に支持される。ＩＫＫ１を欠いた線維芽細胞は、サイトカインに応答した完全なＩＫＫ活性を保持し、ＮＦ−κＢを活性化しうる。対照的に、ＩＫＫ２を欠いた線維芽細胞は、サイトカインで刺激された場合にＩＫＫ活性を示さないし、それらがＮＦ−κＢを活性化することもない。更に、各々のＩＫＫノックアウトの表現型は、皮膚および骨格の欠陥を引き起こすＩＫＫ１欠損について特異的であり、ＩＫＫ２ノックアウトは、肝細胞アポトーシスのために胚致死性である（Li, Q., Antwerp, D. V., Mercurio, F., Lee, K., and Verma,I. M. (1999) Science 284, 321-325; Takeda, K., Tekeuchi, O., Tsujimura, T., Itami, S., Adachi, O., Kawai, T., Sanjo, H., Yoshikawa, K., Terada, N, and Akira, S. (1999) Science 284,313-316; Hu, Y., Baud, V., Delhase, M., Zhang, P., Deerinck, T., Ellisman, M., Johnson, R., and Karin, M. (1999) Science 284, 315-320; Li, Q., Lu, Q., Hwang, J. Y., Buscher, D., Lee, K., Izpisua-Belmonte, J. C., and Verma,I. M. (1999) Gene and Development 13, 1322-1328; Tanaka, M., Fuentes, M. E., Yamaguchi, K., Durnin, M. H., Dalrymple, S. A., Hardy, K. L., and Goeddel, D. V. (1999) Immunity 10,421-429）。
【０００８】
ＮＦ−κＢが、ＩＬ−６およびＩＬ−８などのサイトカイン；ＩＣＡＭおよびＶＣＡＭなどの細胞接着分子；および誘導性一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）を含めた多数の前炎症メディエーターの調節発現において重要な役割を果たしているということは周知である。このようなメディエーターは、炎症部位での白血球の補充において、そしてｉＮＯＳの場合に、ある役割を果たしていることが知られており、一部の炎症性疾患および自己免疫疾患において臓器破壊をもたらすことがありうる。
【０００９】
ＮＦ−κＢが活性化されることが分かっている喘息を含めた気道炎症の研究によって、炎症性障害におけるＮＦ−κＢの重要性は更に強調される。この活性化は、これら障害に特有の増加したサイトカイン産生および白血球浸潤の基礎となりうる。更に、吸入されたステロイド類は、気道過剰反応性を減少させ、しかも喘息気道の炎症応答を抑制することが知られている。ＮＦ−κＢのグルココルチコイド阻害に関する最近の知見に照らして、これら作用は、ＮＦ−κＢの阻害によって媒介されるということが考えられうる。炎症性障害におけるＮＦ−κＢの役割についての更なる証拠は、リウマチ滑膜の研究から得られる。ＮＦ−κＢは、通常は、不活性な細胞質複合体として存在するが、最近の免疫組織化学的研究では、ＮＦ−κＢは核内に存在し、したがって、リウマチ滑膜を含む細胞中で活性であるということが示された。更に、ＮＦ−κＢは、ＴＮＦ−αでの刺激に応答して、ヒト滑膜細胞中で活性化されることが分かった。このような分布は、この組織に特有のサイトカインおよびエイコサノイド産生の増加の基礎となる機構でありうる。Roshak, A. K., et al., J. Biol. Chem., 271,31496-31501(1996) を参照されたい。
【００１０】
ＮＦ−κＢ／ＲｅｌおよびＩκＢタンパク質は、新生物形成においても重要な役割を果たしていると考えられる。ファミリーメンバーは、過発現、遺伝子増幅、遺伝子再編成またはトランスロケーションのために、in vitro および in vivo の細胞形質転換と関連している（Gilmore TD, Trends Genet 7: 318-322, 1991; Gillmore TD, Oncogene 18: 6925-6937,1999; Rayet B. et al., Oncogene 18: 6938-6947,1991）。更に、これらタンパク質をコードしている遺伝子の再編成および／または増幅は、一定のヒトリンパ系腫瘍の２０〜２５％で認められる。更に、アポトーシス、細胞周期進行、浸潤および転移の調節におけるＮＦ−κＢの役割が報告されており（Bours V. et al., Biochemical Pharmacology 60: 1085-1090,2000）、細胞増殖の制御におけるこの転写因子の役割が強調される。ＮＦ−κＢの阻害は、アポトーシスの増加によってＴＮＦ−および癌療法を増強することが分かった（Wang C-Y et al., Science 274: 784-787, 1996; Wang C-Y et al., Nat Med 5: 412-417,1999）。ヒトＴ細胞白血球ウイルス１型（ＨＴＬＶ１）に感染した細胞（活性化ＣＤ４＋Ｔリンパ球の攻撃的悪性の病因物質）、ＩＫＫαおよびＩＫＫβは、構成発現されるということも分かったが、これらは、通常は一過性で機能する（Chu Z-L et al., J of Biological Chemistry 273: 15891-15894,1998）。ＨＴＬＶ１トランスフォーミングおよびトランス活性化タンパク質（Ｔａｘ）は、ＭＥＫＫ１と結合し、ＩＫＫβの活性を増加させて、その分解をもたらすＩκＢα中のセリン残基のリン酸化を促進することが分かった。
【００１１】
ＷＯ９８／０２４３０号およびＥＰ８５３０８３号には、種々の４−ピリジル誘導体が開示され、ＥＰ９０８４５６号には、種々の３−ピラゾリル誘導体が開示されている。
ＤＥ１９７２５４５０号には、種々の３−ピリジニル誘導体および５−ピリミジル誘導体が開示されている。
【００１２】
ＷＯ９９／４６２４４号、ＷＯ９８５４１６６号およびＥＰ２０２５３８号には、生物学的活性を有するといわれている一連の置換チエニル化合物が開示されている。
ＷＯ０１／５８８９０号には、ＩＫＫ−２の阻害剤であるといわれている一連のヘテロ芳香族カルボキサミド誘導体が開示されている。
【発明の開示】
【００１３】
発明の詳細な説明
癌、炎症および炎症関連障害を処置するのに有用である化合物のクラスは、式Ｉ
【００１４】
【化１】
2005509645.tif 000002
【００１５】
（式中、Ａは、酸素、窒素または硫黄より独立して選択される１個または２個のヘテロ原子を含有する５員ヘテロ芳香環であり；
Ｒ１は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ３）２、−ＣＯＮ（Ｒ３）２、−ＣＯＯＲ３、−ＮＲ３ＣＯＲ３、Ｓ（Ｏ）ｍＲ３、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ３）２、−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、置換または未置換のアリール、および酸素、窒素または硫黄より独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する置換または未置換の５〜７員ヘテロ芳香環から成る群より選択され、ここにおいて、１個または複数のこの置換基は、独立して、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ４）２、−ＣＯＮ（Ｒ４）２、−ＣＯＯＲ４、−ＮＲ４ＣＯＲ４、Ｓ（Ｏ）ｍＲ４、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）２、−ＮＲ４ＳＯ２Ｒ４、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アミノアルキルおよびアリールから成る群より選択され；
Ｒ２は、置換または未置換のアリール、および酸素、窒素または硫黄より独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜７員の置換または未置換のヘテロ芳香環から成る群より選択され、ここにおいて、１個または複数のこの置換基は、独立して、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ４）２、−ＣＯＮ（Ｒ４）２、−ＣＯＯＲ４、−ＮＲ４ＣＯＲ４、Ｓ（Ｏ）ｍＲ４、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）２、−ＮＲ４ＳＯ２Ｒ４、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アミノアルキルおよびアリールから成る群より選択され；
Ｒ１およびＲ２は、一緒になっていてよく、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ３）２、−ＣＯＮ（Ｒ３）２、−ＣＯＯＲ３、−ＮＲ３ＣＯＲ３、Ｓ（Ｏ）ｍＲ３、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ３）２、−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、置換または未置換のアリール、および酸素、窒素または硫黄より独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する置換または未置換の５〜７員ヘテロ芳香環から成る群より選択される１個以上の置換基で置換されていてよい５員または６員の飽和環または不飽和環を形成することができ、ここにおいて、１個または複数のこの置換基は、独立して、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ４）２、−ＣＯＮ（Ｒ４）２、−ＣＯＯＲ４、−ＮＲ４ＣＯＲ４、Ｓ（Ｏ）ｍＲ４、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）２、−ＮＲ４ＳＯ２Ｒ４、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アミノアルキルおよびアリールから成る群より選択され；
Ｒ３は、水素またはアルキルから成る群より選択され；
Ｒ４は、水素またはアルキルから成る群より選択され；
ｍは、０、１または２の整数である）；および
その異性体、互変異性体、担体、プロドラッグ、薬学的に許容しうる塩によって定義される。
【００１６】
別の化合物クラスは、式II
【００１７】
【化２】
2005509645.tif 000003
【００１８】
（式中、Ｒ１は、水素、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ３）２、−ＣＯＮ（Ｒ３）２、−ＣＯＯＲ３、−ＮＲ３ＣＯＲ３、Ｓ（Ｏ）ｍＲ３、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ３）２、−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、置換または未置換のアリール、および酸素、窒素または硫黄より独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する置換または未置換の５〜７員ヘテロ芳香環から成る群より選択され、ここにおいて、１個または複数のこの置換基は、独立して、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ４）２、−ＣＯＮ（Ｒ４）２、−ＣＯＯＲ４、−ＮＲ４ＣＯＲ４、Ｓ（Ｏ）ｍＲ４、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）２、−ＮＲ４ＳＯ２Ｒ４、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アミノアルキルおよびアリールから成る群より選択され；
Ｒ２は、置換または未置換のアリール、および酸素、窒素または硫黄より独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する５〜７員の置換または未置換のヘテロ芳香環から成る群より選択され、ここにおいて、１個または複数のこの置換基は、独立して、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ４）２、−ＣＯＮ（Ｒ４）２、−ＣＯＯＲ４、−ＮＲ４ＣＯＲ４、Ｓ（Ｏ）ｍＲ４、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）２、−ＮＲ４ＳＯ２Ｒ４、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アミノアルキルおよびアリールから成る群より選択され；
Ｒ１およびＲ２は、一緒になっていてよく、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ３）２、−ＣＯＮ（Ｒ３）２、−ＣＯＯＲ３、−ＮＲ３ＣＯＲ３、Ｓ（Ｏ）ｍＲ３、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ３）２、−ＮＲ３ＳＯ２Ｒ３、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、置換または未置換のアリール、および酸素、窒素または硫黄より独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有する置換または未置換の５〜７員ヘテロ芳香環から成る群より選択される１個以上の置換基で置換されていてよい５員または６員の飽和環または不飽和環を形成することができ、ここにおいて、１個または複数のこの置換基は、独立して、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ４）２、−ＣＯＮ（Ｒ４）２、−ＣＯＯＲ４、−ＮＲ４ＣＯＲ４、Ｓ（Ｏ）ｍＲ４、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ４）２、−ＮＲ４ＳＯ２Ｒ４、アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルカノイル、アミノアルキルおよびアリールから成る群より選択され；
Ｒ３は、水素またはアルキルから成る群より選択され；
Ｒ４は、水素またはアルキルから成る群より選択され；
ｍは、０、１または２の整数である）；および
その異性体、互変異性体、担体、プロドラッグ、薬学的に許容しうる塩によって定義される。
【００１９】
定義
本発明は、本発明の化合物の水和物、溶媒和化合物、錯体およびプロドラッグ全ての使用を含む。プロドラッグは、式Ｉによる活性な親薬物を in vivo で放出する、任意の共有結合した化合物である。本発明の化合物において、キラル中心または別の形の異性体中心が存在する場合、鏡像異性体およびジアステレオマーを含めたこのような異性体（単数又は複数）の形が全て、本明細書中に包含されるものである。キラル中心を含有する化合物は、ラセミ混合物として用いてもよく、鏡像異性体富化（enantiomerically enriched）混合物またはラセミ混合物は、周知の技法を用いて分離してもよく、そして個々の鏡像異性体は単独で用いてもよい。化合物が不飽和の炭素−炭素二重結合を有する場合、シス（Ｚ）異性体およびトランス（Ｅ）異性体は両方とも、本発明の範囲内である。化合物が、ケトエノール互変異性体等の互変異性体で存在しうる場合、各々の互変異性体は、平衡して存在していようと、優先的に一つの形で存在していようと、本発明の範囲内に含まれることが意図される。
【００２０】
式Ｉまたはその任意の部分式での任意の位置における任意の置換基の意味は、特に断らない限り、他の任意の位置におけるその意味、または他の任意の置換基の意味とは無関係である。
【００２１】
「アルキル」という用語は、単独で、または、「ハロアルキル」および「アルキルスルホニル」などの他の用語中で用いられる；それは、１〜約２０個の炭素原子、または好ましくは、１〜約１２個の炭素原子を有する直鎖状または分岐状の基を含む。より好ましいアルキル基は、１〜約１０個の炭素原子を有する「低級アルキル」基である。最も好ましいのは、１〜約５個の炭素原子を有する低級アルキル基である。このような基の例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、ペンチル、イソアミル、ヘキシル、オクチル等が含まれる。「ヒドリド」という用語は、単一水素原子（Ｈ）を意味する。このヒドリド基は、例えば、酸素原子に結合してヒドロキシル基を形成することができ、２個のヒドリド基は、炭素原子に結合してメチレン（−ＣＨ２−）基を形成することができる。「ハロ」という用語は、フッ素原子、塩素原子および臭素原子またはヨウ素原子などのハロゲンを意味する。「ハロアルキル」という用語は、任意の１以上のアルキル炭素原子が、上に定義されるハロで置換されている基を含む。具体的に含まれるのは、モノハロアルキル基、ジハロアルキル基およびポリハロアルキル基である。モノハロアルキル基は、一例として、その基内にブロモ原子、クロロ原子またはフルオロ原子を有していてよい。ジハロ基は、２個以上の同じハロ原子、または異なったハロ基の組合せを有していてよく、ポリハロアルキル基は、３個以上の同じハロ原子、または異なったハロ基の組合せを有していてよい。「ヒドロキシアルキル」という用語は、いずれか一つが１個以上のヒドロキシル基で置換されていてよい１〜約１０個の炭素原子を有する直鎖状または分岐状のアルキル基を含む。「アルコキシ」および「アルコキシアルキル」という用語は、メトキシ基などの、１〜約１０個の炭素原子を有するアルキル部分を各々有する直鎖状または分岐状のオキシ含有基を含む。「アルコキシアルキル」という用語は、アルキル基に結合した１個以上のアルコキシ基を有する、すなわち、モノアルコキシアルキル基およびジアルコキシアルキル基を形成するアルキル基も含む。これら「アルコキシ」基または「アルコキシアルキル」基は、フルオロ、クロロまたはブロモなどの１個以上のハロ原子で更に置換されて、「ハロアルコキシ」基または「ハロアルコキシアルキル」基を与えることができる。「アルコキシ」基の例には、メトキシ、ブトキシおよびトリフルオロメトキシが含まれる。「アリール」という用語は、単独でかまたは組合せで、１個、２個または３個の環を含有する炭素環式芳香族系を意味し、ここにおいて、このような環は、互いに側鎖状に結合してもよく、縮合していてよい。「アリール」という用語は、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダンおよびビフェニルなどの芳香族基を含む。「複素環式」という用語は、飽和、部分飽和および不飽和のヘテロ原子含有環形状基（heteroatom-containing ring shaped radical）を含み、この場合、ヘテロ原子は、窒素、硫黄および酸素より選択されてよい。飽和複素環式基の例には、ピロリジルおよびモルホリニルが含まれる。「ヘテロアリール」という用語は、不飽和複素環式基を含む。「ヘテロアリール」基とも称される不飽和複素環式基の例には、チエニル、ピロリル、フリル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、イミダゾリル、チアゾリルおよびテトラゾリルが含まれる。この用語は、複素環式基がアリール基と縮合している基も含む。このような縮合二環式基の例には、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン等が含まれる。「複素環式アルキル」という用語は、複素環式化合物に結合したアルキルを含む。「スルホニル」という用語は、単独で用いられようと、アルキルスルホニルなどの他の用語に連結されていようと、それぞれ、二価の基−ＳＯ２−を意味する。「アルキルスルホニル」は、スルホニル基に結合したアルキル基を含み、この場合、アルキルは上のように定義される。「アリールスルホニル」という用語は、アリール基で置換されたスルホニル基を含む。「スルファミル」または「スルホンアミジル」という用語は、単独であろうと、「Ｎ−アルキルスルファミル」、「Ｎ−アリールスルファミル」、「Ｎ，Ｎ−ジアルキルスルファミル」および「Ｎ−アルキル−Ｎ−アリールスルファミル」などの用語と一緒に用いられようと、アミン基で置換され、スルホンアミド（−ＳＯ２−ＮＨ２）を形成しているスルホニル基を意味する。「Ｎ−アルキルスルファミル」および「Ｎ，Ｎ−ジアルキルスルファミル」という用語は、それぞれ、１個のアルキル基で、シクロアルキル環または２個のアルキル基で置換されたスルファミル基を意味する。「Ｎ−アリールスルファミル」および「Ｎ−アルキル−Ｎ−アリールスルファミル」という用語は、それぞれ、１個のアリール基で、および１個のアルキル基および１個のアリール基で置換されたスルファミル基を意味する。「カルボキシ」または「カルボキシル」という用語は、単独で用いられようと、「カルボキシアルキル」などの他の用語と一緒に用いられようと、−ＣＯ２Ｈを意味する。「カルボキシアルキル」という用語は、アルキル基に結合した、上に定義のようなカルボキシ基を有する基を含む。「カルボニル」という用語は、単独で用いられようと、「アルキルカルボニル」などの他の用語と一緒に用いられようと、−（Ｃ＝Ｏ）−を意味する。「アルキルカルボニル」という用語は、アルキル基で置換されたカルボニル基を有する基を含む。「アルキルカルボニル」基の例は、ＣＨ３−（Ｃ＝Ｏ）−である。「アルキルカルボニルアルキル」という用語は、「アルキルカルボニル」基で置換されたアルキル基を意味する。「アルコキシカルボニル」という用語は、酸素原子によってカルボニル（Ｃ＝Ｏ）基に結合した、上に定義のようなアルコキシ基を含有する基を意味する。このような「アルコキシカルボニル」基の例には、（ＣＨ３）３ＣＯ−Ｃ(＝Ｏ）−および−（Ｏ＝）Ｃ−ＯＣＨ３が含まれる。「アルコキシカルボニルアルキル」という用語は、アルキル基に置換された、上に定義された「アルコキシカルボニル」を有する基を含む。このような「アルコキシカルボニルアルキル」基の例には、（ＣＨ３）３ＣＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）２−および−（ＣＨ２）２（Ｏ＝）ＣＯＣＨ３が含まれる。「アミド」という用語は、それだけで、または「アミドアルキル」、「Ｎ−モノ��ルキルアミド」、「Ｎ−モノアリールアミド」、「Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミド」、「Ｎ−アルキル−Ｎ−アリールアミド」、「Ｎ−アルキル−Ｎ−ヒドロキシアミド」および「Ｎ−アルキル−Ｎ−ヒドロキシアミドアルキル」などの他の用語と一緒に用いられる場合、アミノ基で置換されたカルボニル基を含む。「Ｎ−アルキルアミド」および「Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミド」という用語は、それぞれ、１個のアルキル基で、および２個のアルキル基で置換されたアミド基を意味する。「Ｎ−モノアリールアミド」および「Ｎ−アルキル−Ｎ−アリールアミド」という用語は、それぞれ、１個のアリール基で、および１個のアルキル基および１個のアリール基で置換されたアミド基を意味する。「Ｎ−アルキル−Ｎ−ヒドロキシアミド」という用語は、ヒドロキシル基とアルキル基で置換されたアミド基を含む。「Ｎ−アルキル−Ｎ−ヒドロキシアミドアルキル」という用語は、Ｎ−アルキル−Ｎ−ヒドロキシアミド基で置換されたアルキル基を含む。「アミドアルキル」という用語は、アミド基で置換されたアルキル基を含む。「アミノアルキル」という用語は、アミノ基で置換されたアルキル基を含む。「アルキルアミノアルキル」という用語は、アルキル基で置換された窒素原子を有するアミノアルキル基を含む。「アミジノ」という用語は、−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２基を意味する。「シアノアミジノ」という用語は、−Ｃ（＝Ｎ−ＣＮ）−ＮＨ２基を意味する。「ヘテロシクロアルキル」という用語は、ピリジルメチルおよびチエニルメチルのような、複素環で置換されたアルキル基を含む。「アラルキル」という用語は、ベンジル、ジフェニルメチル、トリフェニルメチル、フェネチルおよびジフェネチルのような、アリールで置換されたアルキル基を含む。ベンジルおよびフェニルメチルという用語は、同じ意味である。「シクロアルキル」という用語は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチル等の３〜１０個の炭素原子を有する基を含む。「シクロアルケニル」という用語は、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニルおよびシクロへプテニル等の３〜１０個の炭素原子を有する不飽和基を含む。「アルキルチオ」という用語は、二価の硫黄原子に結合した、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖状または分岐状のアルキル基を含有する基を含む。「アルキルチオ」の例は、メチルチオ（ＣＨ３−Ｓ−）である。「アルキルスルフィニル」という用語は、二価の−Ｓ（＝Ｏ）−原子に結合した、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖状または分岐状のアルキル基を含有する基を含む。「Ｎ−アルキルアミノ」および「Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノ」という用語は、それぞれ、１個のアルキル基で、および２個のアルキル基で置換されたアミノ基を意味する。「アシル」という用語は、単独で用いられようと、「アシルアミノ」などの用語中で用いられようと、有機酸からのヒドロキシルの除去後の残基によって与えられる基を意味する。「アシルアミノ」という用語は、アシル基で置換されたアミノ基を含む。「アシルアミノ」基の例は、アセチルアミノ（ＣＨ３Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−）である。
【００２２】
式Ｉおよび式IIの化合物は、被検体の炎症の処置に、および他の炎症関連障害の処置に、痛みおよび頭痛の処置における鎮痛薬として、または発熱の処置用の解熱薬として有用であると考えられるが、これに制限されるわけではない。例えば、式Ｉおよび式IIの化合物は、関節炎を処置するのに有用であると考えられ、関節炎には慢性関節リウマチ、脊椎関節症（spondylo arthopathies）、痛風関節炎、変形性関節症、全身性エリテマトーデスおよび若年性関節炎が含まれるがこれに制限されるわけではない。このような式Ｉおよび式IIの化合物は、喘息、気管支炎、月経痙攣、腱炎、滑液包炎、および乾癬、湿疹、熱傷および皮膚炎などの皮膚関連状態の処置において有用であると考えられる。式Ｉおよび式IIの化合物は、更に、炎症性腸疾患、クローン病、胃炎、過敏性腸症候群および潰瘍性大腸炎などの胃腸状態を処置するのに、および結腸直腸癌の予防に有用であると考えられる。式Ｉおよび式IIの化合物は、血管性疾患、片頭痛、結節性動脈周囲炎、甲状腺炎、再生不良性貧血、ホジキン病、強皮症（sclerodoma）、リウマチ熱、Ｉ型糖尿病、重症筋無力症、サルコイドーシス、ネフローゼ症候群、ベーチェット症候群、多発性筋炎、歯肉炎、過敏症、結膜炎、傷害後に生じる腫脹、心筋虚血等のような疾患における炎症を処置する場合に有用であると考えられる。これら化合物は、有害な副作用がほとんどないという追加の利点とともに、関節炎の処置用などの抗炎症薬として有用である。式Ｉまたは式IIの化合物は、癌を処置するための薬剤としてまたは抗癌薬として有用である。式Ｉまたは式IIの化合物は、プロアポトーシス性、抗アポトーシス性、抗細胞周期進行性、抗浸潤性および抗転移性でありうる。より具体的には、本発明の化合物は、膀胱癌、乳癌、結腸癌、腎臓癌、肝癌、小細胞肺癌を含めた肺癌、食道癌、胆嚢癌、卵巣癌、膵臓癌、胃癌、頸部癌、甲状腺癌、前立腺癌、および扁平上皮癌を含めた皮膚癌などの癌；白血病、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、毛様細胞リンパ腫およびバーキットリンパ腫（Burkett's lymphoma）を含めたリンパ系の造血組織腫瘍；急性および慢性の骨髄性白血病、骨髄異形成症候群および前骨髄球性白血病を含めた骨髄系の造血組織腫瘍；線維肉腫および横紋筋肉腫を含めた間葉器官の腫瘍；星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫およびシュワン細胞症を含めた中枢および末梢神経系の腫瘍；黒色腫、セミノーマ、奇形癌、骨肉腫、色素性乾皮症、角膜黄色腫、甲状腺卵胞癌（thyroid follicular cancer）およびカポジ肉腫を含めた他の腫瘍が含まれるがこれに制限されるわけではない種々の癌の処置において有用である。細胞増殖の調節におけるプロテインキナーゼの重要な役割のために、これら化合物は、種々の細胞増殖性障害、例えば、良性前立腺肥大、家族性大腸腺腫症、ポリポーシス、神経線維腫症、乾癬、アテローム性動脈硬化症に関連した血管平滑細胞増殖、肺線維症、関節炎糸球体腎炎、および手術後の狭窄および再狭窄などの処置においても有用である。式Ｉまたは式IIの化合物は、抗ウイルス薬として用いることができる。本発明の化合物は、プロテインキナーゼの阻害剤として有用である。本発明の化合物は、ＩＫＫｌおよび／またはＩＫＫ２、ＩＫＫα／ＩＫＫβヘテロ二量体、ＴＢＫまたはＩＫＫｉの阻害剤として有用である。本発明の化合物は、他のプロテインキナーゼ、例えば、異なったアイソフォームのプロテインキナーゼＣ、サイクリン依存性キナーゼ（ｃｄｋ）、Ｍｅｔ、ＰＡＫ−４、ＰＡＫ−５、ＺＣ−１、ＳＴＬＫ−２、ＤＤＲ−２、Aurora １、Aurora ２、Ｂｕｂ−１、ＰＬＫ、Ｃｈｋｌ、Ｃｈｋ２、ＨＥＲ２、ｒａｆｌ、ＭＥＫ１、ＭＡＰＫ、ＥＧＦ−Ｒ、ＰＤＧＦ−Ｒ、ＦＧＦ−Ｒ、ＩＧＦ−Ｒ、ＶＥＧＦ−Ｒ、ＰＩ３Ｋ、ｗｅｅ１キナーゼ、Ｓｒｃ、Ａｂｌ、Ａｋｔ、ＩＬＫ、ＭＫ−２、ＩＫＫ−２、Ｃｄｃ７、Ｎｅｋなどの阻害剤としても有用でありうるし、したがって、他のプロテインキナーゼに関連した疾患の処置において有効でありうる。本発明は、好ましくは、ＩＫＫ１よりもＩＫＫ２を選択的に阻害する化合物を含む。好ましくは、これら化合物は、１μＭ未満のＩＫＫ２  ＩＣ５０を有し、そして少なくとも５０、より好ましくは、少なくとも１００のＩＫＫ２阻害対ＩＫＫ１阻害の選択的比率を有する。なお一層好ましくは、これら化合物は、１０μＭを超える、より好ましくは、１００μＭを超えるＩＫＫ１  ＩＣ５０を有する。これら式の化合物は、血管新生関連心臓血管障害、眼科障害および骨粗鬆症障害を処置するために用いることもできる。本発明の化合物は、スポーツ傷害などの膝傷害の処置に用いることもできる。
【００２３】
活性成分を未精製化学品として単独で投与することは可能であるが、それを医薬製剤として与えることは好ましい。本発明は、治療的有効量の本発明の化合物を、少なくとも一つの薬学的に許容しうる担体、アジュバントまたは希釈剤と一緒に含む医薬組成物を含む。本発明は、更に、被検体の炎症または炎症関連障害を処置する方法であって、このような炎症または障害を有する被検体に、治療的有効量の本発明の化合物を投与することを含む方法を含む。本発明の化合物のファミリー中に更に含まれるのは、それらの薬学的に許容しうる塩である。「薬学的に許容しうる塩」という用語は、アルカリ金属塩を形成するのに一般的に用いられる塩、および遊離酸または遊離塩基の付加塩を形成するのに一般的に用いられる塩を含む。塩の性質は、それが薬学的に許容しうる限り、決定的ではない。本発明の化合物の適当な薬学的に許容しうる酸付加塩は、無機酸からまたは有機酸から製造することができる。このような無機酸の例は、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、炭酸、硫酸およびリン酸である。適当な有機酸は、脂肪族、環状脂肪族、芳香族、芳香脂肪族、複素環式、カルボン酸およびスルホン酸のクラスの有機酸より選択されてよく、これらの例は、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、グルクロン酸、マレイン酸、フマル酸、ピルビン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、安息香酸、アントラニル酸、メシル酸、サリチル酸（salicyclic）、オキシ安息香酸（phydroxybenzoic）、フェニル酢酸、マンデル酸、エンボン酸（embonic）（パモ酸（pamoic））、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パントテン酸、トルエンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、スルファニル酸、ステアリン酸、シクロヘキシルアミノスルホン酸、アルギン酸（algenic）、β−ヒドロキシ酪酸、サリチル酸（salicyclic）、ガラクタル酸およびガラクツロン酸である。本発明の化合物の適当な薬学的に許容しうる塩基付加塩には、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウムおよび亜鉛から作られる金属塩、またはＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ−メチルグルカミン）およびプロカインから作られる有機塩が含まれる。これら塩は全て、本発明の対応する化合物から慣用的な手段によって、例えば、適当な酸または塩基と本発明の化合物とを反応させることによって製造することができる。
【００２４】
本発明の範囲内に更に含まれるのは、本発明の一つ以上の化合物を、一つ以上の無毒性の薬学的に許容しうる担体および／または希釈剤および／またはアジュバントおよび／または賦形剤（まとめて、本明細書中において「担体」物質と称される）と、所望ならば、他の活性成分と一緒に含む医薬組成物である。したがって、本発明の化合物は、薬剤の製造において用いることができる。前述の通り製造される本発明の化合物の医薬組成物は、非経口投与用の液剤または凍結乾燥粉末剤として製剤化することができる。粉末剤は、使用前に、適当な希釈剤または他の薬学的に許容しうる担体の添加によって再構成させることができる。液状製剤は、緩衝化等張水溶液であってよい。本発明の化合物は、いずれか適当な経路によって、好ましくは、このような経路に適合した医薬組成物の形でおよび予定の処置に有効な用量で投与することができる。一つまたは複数の組成物は、例えば、脈管内、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内、髄内、経口または局所的に投与することができる。経口投与には、医薬組成物は、例えば、錠剤、カプセル剤、懸濁剤または液剤の形であってよい。活性成分は、例えば、規定等張塩水溶液、水中の標準５％デキストロース、または緩衝化酢酸ナトリウムまたは酢酸アンモニウム溶液が適当な担体として用いられていてよい組成物として、注射によって投与することもできる。このような製剤は、非経口投与に特に適しているが、経口投与用に単独で用いられてよいし、または定量吸入器若しくは吹入用ネブライザー中に入れられてよい。ポリビニルピロリドン、ゼラチン、ヒドロキシセルロース、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、マンニトール、塩化ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムなどの賦形剤を加えることが望まれることがありうる。医薬組成物は、好ましくは、特定量の活性成分を含有する投与単位の形で作られる。このような投与単位の例は、錠剤またはカプセル剤である。投与される治療的活性化合物の量、および本発明の化合物および／または組成物で疾患状態を処置するための投薬計画は、被検体の年齢、体重、性別および医学的状態、疾患の重症度、投与の経路および頻度、用いられる具体的な化合物を含めたいろいろな因子に依存し、したがって、広範囲に異なることがありうる。これら医薬組成物は、活性成分を約０．１〜２０００ｍｇの範囲内で、好ましくは、約０．５〜５００ｍｇの範囲内で、最も好ましくは、約１〜１００ｍｇ含有してよい。約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ（体重）、好ましくは、約０．１〜約５０ｍｇ／ｋｇ（体重）、最も好ましくは、約１〜２０ｍｇ／ｋｇ（体重）の１日用量が適当でありうる。この１日用量は、１〜４回／日の用量で投与することができる。治療目的には、本発明の化合物は、通常は、指示された投与経路に適当な一つ以上のアジュバントと混合される。経口投与される場合、これら化合物は、ラクトース、スクロース、デンプン粉末、アルカン酸のセルロースエステル、セルロースアルキルエステル、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸および硫酸のナトリウム塩およびカルシウム塩、ゼラチン、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドンおよび／またはポリビニルアルコールと混合後、好都合な投与用に錠剤成形されてよく、カプセル化されてもよい。このようなカプセル剤または錠剤は、グリセリルモノステアラート、グリセリルジステアラート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの単独のまたはロウと一緒の持続放出材料中の活性化合物分散系で与えることができるような制御放出製剤を含有してよい。非経口投与用製剤は、水性または非水性の等張滅菌注射液剤または懸濁剤の形であってよい。これら液剤および懸濁剤は、経口投与用製剤での使用について述べられている１以上の担体または希釈剤を有する滅菌粉末剤または顆粒剤から製造することができる。これら化合物は、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール、トウモロコシ油、綿実油、ラッカセイ油、ゴマ油、ベンジルアルコール、塩化ナトリウムおよび／または種々の緩衝剤中に溶解させることができる。これら医薬製剤は、必要な場合には、錠剤形について微粉砕、混合、造粒および圧縮を含む慣用的な薬剤学的技術にしたがって；ゼラチン硬カプセル剤形について微粉砕、混合および充填をを含む慣用的な薬剤学的技術にしたがって；作られる。液状担体を用いる場合、製剤は、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤、または水性または非水性の懸濁剤の形であろう。このような液状製剤は、経口投与されてもよく、ゼラチン軟カプセル剤中に充填されてもよい。直腸投与用には、本発明の化合物は、カカオ脂、グリセリン、ゼラチンまたはポリエチレングリコールなどの賦形剤と混合されて、坐剤に成形されてもよい。本発明の方法には、本発明の化合物の局所投与が含まれる。局所投与とは、表皮、口腔への本発明の化合物の外用、および耳、眼および鼻中へのこのような化合物の滴下を含めた非全身性投与を意味し、この場合、化合物は血流中に有意には入らない。全身性投与とは、経口、静脈内、腹腔内および筋肉内の投与を意味する。局所投与の際の治療的または予防的作用に必要な本発明の化合物（以下、活性成分と称される）の量は、当然ながら、選択された化合物、処置されている状態の性質および重症度、および動物が受けている処置で異なるであろうし、最後には、医師の裁量である。
【００２５】
本発明の局所製剤は、獣医学的使用にもヒトの医学的使用にも、活性成分を、一つ以上の許容しうる担体と、場合により、いずれか他の治療的成分と一緒に含む。この担体は、製剤の他の成分と相溶性であり、そしてその受容者に有害でないという意味で「許容しうる」べきである。局所投与に適した製剤には、処置が必要とされる部位への皮膚を介する浸透に適した液状または半液状の製剤（例えばリニメント剤、ローション剤、クリーム剤、軟膏剤またはペースト剤、および眼、耳および鼻への投与に適した滴剤など）が含まれる。活性成分は、局所投与用に、０．０１〜５．０ｗｔ％の製剤を含んでよい。
【００２６】
本発明による滴剤は、滅菌水性または油状の液剤または懸濁剤を含んでよく、殺細菌薬および／または殺真菌薬および／または他の任意の保存剤の適切な水溶液中（好ましくは界面活性剤を含む）に、活性成分を溶解させることによって製造することができる。次に、得られた溶液を濾過によって清澄化し、適当な容器に移した後、それを密封し、そしてオートクレーブによって滅菌してよいし、または９０〜１００℃で半時間維持してよい。或いは、この溶液は、濾過によって滅菌し、無菌技術によって容器に移すことができる。これら滴剤中への包含に適した殺細菌薬および殺真菌薬の例は、硝酸または酢酸フェニル水銀（０．００２１７ｃ）、塩化ベンザルコニウム（０．０１％）および酢酸クロルヘキシジン（０．０１％）である。油状液剤の製造に適した溶媒には、グリセロール、希釈アルコールおよびプロピレングリコールが含まれる。
【００２７】
本発明によるローション剤には、皮膚または眼への適用に適したものが含まれる。眼用ローション剤は、殺細菌薬を場合により含有する滅菌水性液剤を含んでよく、滴剤の製造方法に類似した方法によって製造することができる。皮膚への適用のためのローション剤またはリニメント剤には、乾燥を促進し且つ皮膚を冷却するための物質（例えば、アルコールまたはアセトンなど）、および／または保湿剤（例えば、グリセロールまたはヒマシ油若しくはラッカセイ油などの油など）が含まれてもよい。本発明によるクリーム剤、軟膏剤またはペースト剤は、外用のための活性成分の半固体製剤である。それらは、細粒または粉末の形の活性成分を単独で、または水性または非水性流体中の溶液または懸濁液中で、適当な機械を利用して、脂肪性または非脂肪性の基剤と混合することによって製造することができる。この基剤は、硬、軟または流動パラフィン、グリセロール、蜜蝋、金属石けんなどの炭化水素；植物粘液質；扁桃油、トウモロコシ油、ラッカセイ油、ヒマシ油またはオリーブ油などの天然由来の油；羊毛脂若しくはその誘導体、またはプロピレングリコールまたはマクロゴールなどのアルコールと一緒になったステアリン酸またはオレイン酸などの脂肪酸を含んでよい。この製剤は、ソルビタンエステルまたはそれらのポリオキシエチレン誘導体のような陰イオン、陽イオンまたは非イオン界面活性剤などのいずれか適当な界面活性剤を配合してよい。天然ガム、セルロース誘導体、または珪質シリカなどの無機物のような懸濁化剤、およびラノリンなどの他の成分も含まれていてよい。他のアジュバントおよび投与方式は、当薬学技術分野において充分に且つ広く知られている。本発明を、具体的な態様に関して記載してきたが、これら態様の詳細は、制限として解釈されるべきではない。
【００２８】
一般的な合成法
本明細書中で用いられる出発物質は、商業的に入手可能であるかまたは当業者に周知の常套法によって製造され、COMPENDIUM OF ORGANIC SYNTHETIC METHODS, Vol.I-VI（Wiley-Interscience 発行）などの標準的な参考書に見出されうる。
【００２９】
本発明の化合物は、参考文献で知られている、または実験手順に例示されているような他の標準的な操作に加えて、下のスキームに示されるような反応を用いることによって製造することができる。これらスキームは、したがって、挙げられた化合物に制限されず、例示の目的に用いられたいずれの具体的な置換基にも制限されない。
【００３０】
合成スキームＩは、出発物質１からのチオフェンの製造を示している。合成スキームＩの工程１では、ＤＭＦ中の三塩化リンで低温においてメチルケトンを処理後、ヒドロキシルアミン塩酸塩で処理して、クロロアクリロニトリル化合物を生じる。合成スキームＩの工程２では、そのクロロアクリロニトリルを、アルコールなどの溶媒中に溶解させ、２−メルカプトアセトアミドで処理後、ナトリウムメトキシドなどの塩基で処理する。
【００３１】
スキームＩ
【００３２】
【化３】
2005509645.tif 000004
【００３３】
合成スキームIIは、該当するエステルからのアミノアミドチオフェンの製造を示す。合成スキームIIの工程１では、エステルをヒドラジンでカルバジドに変換する。工程２では、そのヒドラジドを、ラネーニッケルで還元することによってアミドに変換する。
【００３４】
スキームII
【００３５】
【化４】
2005509645.tif 000005
【００３６】
合成スキームIIIは、該当するエステルからのアミノアミドチオフェンの製造を示す。合成スキームIIIの工程１では、エステルをヒドラジンでカルバジドに変換する。工程２では、そのヒドラジドを、ラネーニッケルで還元することによってアミドに変換する。
【００３７】
スキームIII
【００３８】
【化５】
2005509645.tif 000006
【００３９】
いったんチオフェン核が確定されたら、当該技術分野において周知の標準的な官能基相互変換技術を用いることによって、更に別の化合物を製造することができる。
本開示に引用される全ての刊行物、特許および特許出願の完全な内容は、個々の刊行物、特許または特許出願各々が具体的にそして個別に援用されているように、本明細書中に援用される。前述の発明は、理解を明確にするための例示および実施例によって若干詳細に記載されたが、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、変更および修正を行うことができるということは、本発明の教示に照らして当業者に容易に明らかであろう。次の実施例は、単に例示の目的で与えられ、広範な用語で上に記載された発明の範囲を制限するためのものではない。
【００４０】
化合物は、ＡＣＤ／ネームソフトウェアを用いて命名した。ＡＣＤ／ネームは、ＣＡＳネームよりむしろＩＵＰＡＣネームを生じるが、全ての場合に正確なＩＵＰＡＣネームを生じる保証はない。
【実施例】
【００４１】
実施例１
【００４２】
【化６】
2005509645.tif 000007
【００４３】
３−アミノ−５−（３−メトキシフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド
工程１：３−クロロ−３−（３−メトキシフェニル）プロパ−２−エンニトリルの製造。
【００４４】
窒素下のジメチルホルムアミド（２００ｍｌ）中の３’−メトキシアセトフェノン（１０ｇ，６６．６ｍｍｏｌ）の溶液を、氷水浴中で冷却した。この溶液に、三塩化リン（１１．６ｍＬ，１８．３ｇ，１３３ｍｍｏｌ）を滴加した。氷水浴を除去し、得られた反応混合物を窒素下で２時間撹拌した。ヒドロキシルアミン塩酸塩（１３．９ｇ，２００ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えて、発熱反応を引き起こした。その反応混合物を室温で一晩撹拌した。飽和水性ＮａＨＣＯ３を反応混合物に加え、それを酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。この物質を、更に精製することなく用いた。
【００４５】
工程２．  ３−アミノ−５−（３−メトキシフェニル）チオフェン−２−カルボキサミドの製造。
２−メルカプトアセトアミド（１８．２ｇ，２００ｍｍｏｌ）を、工程１からの物質のメタノール（１００ｍＬ）溶液に窒素下で加えた。この混合物に、ナトリウムメトキシド（７．１９ｇ，１３３ｍｍｏｌ）のメタノール（２００ｍＬ）溶液を滴加した。得られた反応混合物を室温で５時間撹拌した。飽和水性ＮａＨＣＯ３を加えた後、１Ｎ  ＨＣｌを、ガス発生が認められるまで加えた。水を加え、その混合物を酢酸エチルで３回抽出し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過した。濾液を真空中で濃縮し、酢酸エチル／ヘキサンから再結晶させて、白色固体（３ｇ）を生じた。この物質をメタノール中に入れ、メタノール中の１当量のナトリウムメトキシドを加えた。得られた反応混合物を室温で２時間撹拌した。その混合物を濃縮した。水および酢酸エチルを加え、層を分離した。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。生成物を、シリカゲルカラムでのクロマトグラフィーにより、７０％酢酸エチル対ヘキサンで溶離して精製した。所望の生成物を含有する画分を一緒にし、濃縮し、酢酸エチル／ヘキサンから再結晶させて、標題化合物を黄色／橙色固体として与えた。
【００４６】
（１．２８ｇ，７．７％）：ｍｐ１１３．８〜１１６．６℃。
【００４７】
【化７】
2005509645.tif 000008
【００４８】
実施例２
【００４９】
【化８】
2005509645.tif 000009
【００５０】
３−アミノ−５−（２−クロロフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド
工程１．  ３−クロロ−３−（２−クロロフェニル）プロパ−２−エンニトリルの製造。
【００５１】
窒素下の２’−クロロアセトフェノン（５ｇ，３２．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１００ｍＬ）溶液を、氷水浴中で冷却した。この冷溶液に、三塩化リン（８．８８ｇ，６４．７ｍｍｏｌ）を滴加した。ＰＣｌ３の添加完了時に、氷水浴を除去し、得られた反応混合物を窒素下で２時間撹拌した。次に、ヒドロキシルアミン塩酸塩（６．７４ｇ，９７．０ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えて、発熱反応を引き起こした。反応混合物を室温で一晩撹拌した。酢酸エチルを加え、層を分離した。有機相をブラインで３回洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。この物質を、更に精製することなく次の反応で用いた。
【００５２】
工程２．  ３−アミノ−５−（２−クロロフェニル）チオフェン−２−カルボキサミドの製造。
２−メルカプトアセトアミド（８．８３ｇ，９７．０ｍｍｏｌ）を、工程１からの物質の窒素下のメタノール（５０ｍＬ）溶液に加えた。この混合物に、メタノール中のナトリウムメトキシド（０．５Ｍ，３８８ｍＬ，１９４ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を室温で７２時間撹拌した。この反応を真空中で濃縮し、水を加えた。固体を濾過し、水で数回洗浄して、標題化合物が固体として得られた。
【００５３】
（２．２４ｇ，２７％）：ｍｐ１２９．６〜１２９．７℃。
【００５４】
【化９】
2005509645.tif 000010
【００５５】
実施例３
【００５６】
【化１０】
2005509645.tif 000011
【００５７】
３−アミノ−５−（３−シアノフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド
工程１．  実施例２の工程１に見出される手順を用いることによって製造される。
工程２．  ３−アミノ−５−（３−シアノフェニル）チオフェン−２−カルボキサミドの製造。
【００５８】
２−メルカプトアセトアミド（５．６５ｇ，６２．１ｍｍｏｌ）を、窒素下における工程１からの物質（２０．７ｍｍｏｌ）のメタノール（１００ｍＬ）溶液に加えた。この混合物に、メタノール中のナトリウムメトキシドの溶液（０．５Ｍ，１６６ｍＬ，８２．８ｍｍｏｌ）を滴加した。室温で一晩撹拌後、反応混合物をその容量の半分まで真空中で濃縮し、水を加えた。固体を濾過し、水で数回洗浄し、酢酸エチル／ヘキサンから再結晶させて、標題化合物を固体として与えた。
【００５９】
（２．６１ｇ，５２％）：ｍｐ１９３．２〜１９３．５℃。
【００６０】
【化１１】
2005509645.tif 000012
【００６１】
実施例４
【００６２】
【化１２】
2005509645.tif 000013
【００６３】
４−アミノ−５’−クロロ−２，２’−ビチオフェン−５−カルボキサミド
標題化合物を、実施例３に見出される手順を用いて製造した。
ｍｐ１８５．６〜１８８．３℃。
【００６４】
【化１３】
2005509645.tif 000014
【００６５】
実施例５
【００６６】
【化１４】
2005509645.tif 000015
【００６７】
４−アミノ−２’，５’−ジメチル−２，３’−ビチオフェン−５−カルボキサミド
標題化合物を、実施例３に見出される手順を用いて製造した。
ｍｐ１５１．４〜１５２．３℃。
【００６８】
【化１５】
2005509645.tif 000016
【００６９】
実施例６
【００７０】
【化１６】
2005509645.tif 000017
【００７１】
４−アミノ−２’，５’−ジクロロ−２，３’−ビチオフェン−５−カルボキサミド
標題化合物を、実施例３に見出される手順を用いて製造した。
ｍｐ１７５．２〜１７６．４℃。
【００７２】
【化１７】
2005509645.tif 000018
【００７３】
実施例７
【００７４】
【化１８】
2005509645.tif 000019
【００７５】
３−アミノ−５−（３−ニトロフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド
標題化合物を、実施例３に見出される手順を用いて製造した。
ｍｐ２１０．５〜２１０．９℃。
【００７６】
【化１９】
2005509645.tif 000020
【００７７】
実施例８
【００７８】
【化２０】
2005509645.tif 000021
【００７９】
３−アミノ−５−（２−フェナントリル）チオフェン−２−カルボキサミド
標題化合物を、実施例３に見出される手順を用いて製造した。
ｍｐ＞３００℃。
【００８０】
【化２１】
2005509645.tif 000022
【００８１】
実施例９
【００８２】
【化２２】
2005509645.tif 000023
【００８３】
４−アミノ−５’−メチル−２，２’−ビチオフェン−５−カルボキサミド
標題化合物を、実施例３に見出される手順を用いて製造した。
ｍｐ２０５．６〜２０６．４℃。
【００８４】
【化２３】
2005509645.tif 000024
【００８５】
実施例１０
【００８６】
【化２４】
2005509645.tif 000025
【００８７】
３−アミノ−５−（２−ニトロフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド
標題化合物を、実施例３に見出される手順を用いて製造した。
【００８８】
【化２５】
2005509645.tif 000026
【００８９】
実施例１１
【００９０】
【化２６】
2005509645.tif 000027
【００９１】
３−アミノ−５−（４−ニトロフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド
標題化合物を、実施例３に見出される手順を用いて製造した。
【００９２】
【化２７】
2005509645.tif 000028
【００９３】
実施例１２
【００９４】
【化２８】
2005509645.tif 000029
【００９５】
３−アミノ−５−ピリジン−３−イルチオフェン−２−カルボキサミド
標題化合物を、実施例３に見出される手順を用いて製造した。
ｍｐ２０７．３〜２０７．５℃。
【００９６】
【化２９】
2005509645.tif 000030
【００９７】
実施例１３
【００９８】
【化３０】
2005509645.tif 000031
【００９９】
３−アミノ−５−ピリジン−４−イルチオフェン−２−カルボキサミド
標題化合物を、実施例３に見出される手順を用いて製造した。
ｍｐ２４５．８〜２４６．７℃。
【０１００】
【化３１】
2005509645.tif 000032
【０１０１】
実施例１４
【０１０２】
【化３２】
2005509645.tif 000033
【０１０３】
４−アミノ−３’−メチル−２，２’−ビチオフェン−５−カルボキサミド
標題化合物を、実施例３に見出される手順を用いて製造した。
ｍｐ１６１．９〜１６１．９℃。
【０１０４】
【化３３】
2005509645.tif 000034
【０１０５】
実施例１５
【０１０６】
【化３４】
2005509645.tif 000035
【０１０７】
３−アミノ−５−（４−メチルフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド
標題化合物を、実施例３に見出される手順を用いて製造した。
ｍｐ２５４．３〜２５４．８℃。
【０１０８】
【化３５】
2005509645.tif 000036
【０１０９】
実施例１６
【０１１０】
【化３６】
2005509645.tif 000037
【０１１１】
３−アミノ−５−（３−メチルフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド
標題化合物を、実施例３に見出される手順を用いて製造した。
ｍｐ１９３．３〜１９４．１℃。
【０１１２】
【化３７】
2005509645.tif 000038
【０１１３】
実施例１７
【０１１４】
【化３８】
2005509645.tif 000039
【０１１５】
３−アミノ−５−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］チオフェン−２−カルボキサミド
標題化合物を、実施例３に見出される手順を用いて製造した。
【０１１６】
ｍｐ１６６．６〜１６７．２℃。
【０１１７】
【化３９】
2005509645.tif 000040
【０１１８】
実施例１８
【０１１９】
【化４０】
2005509645.tif 000041
【０１２０】
３−アミノ−５−（３，４−ジクロロフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド
標題化合物を、実施例３に見出される手順を用いて製造した。
ｍｐ２１７．０〜２１７．１℃。
【０１２１】
【化４１】
2005509645.tif 000042
【０１２２】
実施例１９
【０１２３】
【化４２】
2005509645.tif 000043
【０１２４】
３−アミノ−５−［４−（メチルスルホニル）フェニル］チオフェン−２−カルボキサミド
標題化合物を、実施例３に見出される手順を用いて製造した。
【０１２５】
【化４３】
2005509645.tif 000044
【０１２６】
実施例２０
【０１２７】
【化４４】
2005509645.tif 000045
【０１２８】
３−アミノ−４，５−ジフェニルチオフェン−２−カルボキサミド
標題化合物を、実施例３に見出される手順を用いて製造した。
ｍｐ２０８．４〜２０８．９℃。
【０１２９】
【化４５】
2005509645.tif 000046
【０１３０】
実施例２１
【０１３１】
【化４６】
2005509645.tif 000047
【０１３２】
３−アミノ−５−（３−アミノフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド
実施例７の生成物である３−アミノ−５−（３−ニトロフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド（１ｇ，３．８０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２０ｍＬ）および炭素上１０％パラジウムを、加熱して沸騰させた後、ギ酸（０．７５ｇ，１６．３ｍｍｏｌ）を滴加した。得られた混合物を、還流しながら３時間加熱した。その反応を冷却し、Celite のプラグを介してメタノールで溶離して濾過した。濾液を真空中で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーにより、５％メタノール／ジクロロメタンで溶離して精製した。所望の生成物を含有する画分を濃縮して、黄色固体を生じた。その固体をメタノールで洗浄して、黄色固体を生じた。
【０１３３】
（７４６Ｍｇ）：２２５．３〜２２９．４℃。
【０１３４】
【化４７】
2005509645.tif 000048
【０１３５】
実施例２２
【０１３６】
【化４８】
2005509645.tif 000049
【０１３７】
３−アミノ−５−（４−アミノフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド
標題化合物を、実施例２１に見出される手順を用いて製造した。
ｍｐ２３５．８〜２４１．０℃。
【０１３８】
【化４９】
2005509645.tif 000050
【０１３９】
実施例２３
【０１４０】
【化５０】
2005509645.tif 000051
【０１４１】
３−アミノ−５−（２−アミノフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド
標題化合物を、実施例２１に見出される手順を用いて製造した。
ｍｐ１４９．９〜１５０．３℃。
【０１４２】
【化５１】
2005509645.tif 000052
【０１４３】
実施例２４
【０１４４】
【化５２】
2005509645.tif 000053
【０１４５】
３−アミノ−５−［３−（アミノカルボニル）フェニル］チオフェン−２−カルボキサミド
実施例３の生成物である３−アミノ−５−（３−シアノフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド（２００ｍｇ，０．８２ｍｍｏｌ）および硫酸（３ｍＬ）を、蒸気浴上で３０分間加熱した。その反応混合物を、氷／水（５０ｍＬ）に注入し、１時間撹拌した。ＮａＨＣＯ３で中和後、混合物を酢酸エチルで３回抽出した。有機抽出物を一緒にし、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。固形物を酢酸エチルで研和し、濾過して、所望の生成物（５０ｍｇ）を与えた。
【０１４６】
ｍｐ２４２．０〜２４２．３℃。
【０１４７】
【化５３】
2005509645.tif 000054
【０１４８】
実施例２５
【０１４９】
【化５４】
2005509645.tif 000055
【０１５０】
３−アミノ−５−［４−（アミノカルボニル）フェニル］チオフェン−２−カルボキサミド
標題化合物を、実施例２４に見出される手順を用いて製造した。
【０１５１】
【化５５】
2005509645.tif 000056
【０１５２】
実施例２６
【０１５３】
【化５６】
2005509645.tif 000057
【０１５４】
３−アミノ−５−［３−（アミノメチル）フェニル］チオフェン−２−カルボキサミド
標準反応ビンに、３−アミノ−５−（３−シアノフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド（１ｇ，４．１２ｍｍｏｌ）、炭素上１０％パラジウムおよびメタノール（４０ｍＬ）を入れた。その標準ビンを４０ｐｓｉに加圧し、室温で３日間撹拌した。混合物を、Celite のプラグを介してメタノールで溶離して濾過した。濾液を真空中で濃縮し、酢酸エチル／ヘキサンで再結晶させて、標題化合物を黄色固体（１６８ｍｇ）として生じた。
【０１５５】
ｍｐ１８２．１〜１８５．０℃。
【０１５６】
【化５７】
2005509645.tif 000058
【０１５７】
実施例２７
【０１５８】
【化５８】
2005509645.tif 000059
【０１５９】
３−アミノ−５−｛３−［（エチルスルホニル）アミノ］フェニル｝チオフェン−２−カルボキサミド
実施例２１の生成物である３−アミノ−５−（３−アミノフェニル）チオフェン−２−  カルボキサミド（１．１６ｇ，４．９８ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（２０ｍＬ）およびピリジン（２０ｍＬ）を、室温で撹拌した。この混合物に、塩化エチルスルホニル（５００μＭ，０．６７ｇ，５．２３ｍｍｏｌ）を滴加した。室温で３時間撹拌後、水を加え、その混合物を酢酸エチルで３回抽出した。有機抽出物を一緒にし、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。この物質を、シリカゲルカラム上において酢酸エチルで溶離するクロマトグラフィーで分離した。所望の生成物を含有する画分を一緒にし、真空中で濃縮して、固体（１７．１ｍｇ）が得られた。
【０１６０】
ｍｐ２４０．２〜２４０．７℃。
【０１６１】
【化５９】
2005509645.tif 000060
【０１６２】
実施例２８
【０１６３】
【化６０】
2005509645.tif 000061
【０１６４】
５−［３−（アセチルアミノ）フェニル］−３−アミノチオフェン−２−カルボキサミド
標題化合物を、実施例２７に見出される手順を用いて製造した。
【０１６５】
ｍｐ２３０．９〜２３３．４℃。
【０１６６】
【化６１】
2005509645.tif 000062
【０１６７】
実施例２９
【０１６８】
【化６２】
2005509645.tif 000063
【０１６９】
３−アミノ−５−（３−チエニル）チオフェン−２−カルボキサミド
３−アセチルチオフェン（１００ｍｍｏｌ，１２．６２ｇ）およびＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）を、０℃で撹拌した。三塩化リン（２００ｍｍｏｌ，２７．４７ｇ）を、２０℃未満に温度を維持しながら滴加した。添加を終了後、混合物を室温に暖め、３時間撹拌した。０℃に再冷却後、ヒドロキシルアミン塩酸塩（３００ｍｍｏｌ，２０．８５ｇ）を、２０℃未満に温度を維持しながら少量ずつ加えた。その混合物を室温に暖め、１時間撹拌した。５０ｍＬに濃縮後、酢酸エチル（２００ｍＬ）を加え、混合物をブラインで洗浄した。飽和重炭酸ナトリウム水溶液を、ガス発生が止むまで加えた。層を分離し、有機層をブラインで２回洗浄した。硫酸マグネシウム上で乾燥後、混合物を濃縮し、メタノール（２５０ｍＬ）中に溶解させた。２−メルカプトアセトアミド（３００ｍｍｏｌ，２７．３４ｇ）を加えた後、ナトリウムメトキシド（２５ｗｔ％，２００ｍｍｏｌ，４３．２２ｇ）を滴加した。その混合物を、それら物質が全て溶解するまで撹拌させた。飽和水性重炭酸ナトリウム（１００ｍＬ）を加えた後、塩酸（１Ｎ）を、ガス発生が認められるまで加えた。水を加えて１Ｌの全容量とし、その混合物を１６時間放置した。淡褐色固体を濾過によって集めた。
【０１７０】
（１４．３ｇ，６４％）：ｍｐ２０８．５〜２１０．９℃。
【０１７１】
【化６３】
2005509645.tif 000064
【０１７２】
実施例３０
【０１７３】
【化６４】
2005509645.tif 000065
【０１７４】
３−アミノ−５−（４−シアノフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド
工程１：４−［ｌ−クロロ−２−シアノエテニル］ベンゾニトリルの製造。
４−アセチルベンゾニトリル（１０ｍｍｏｌ，１．４５ｇ）を、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中において室温で撹拌した。三塩化リンを、大きい発熱量を伴って滴加した。１時間撹拌後、ヒドロキシルアミン塩酸塩を少量ずつ加えた。１６時間撹拌後、酢酸エチル（１００ｍＬ）を加え、そして混合物を、ブライン、飽和水性重炭酸ナトリウムおよび２回のブラインで洗浄した。硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濃縮した後、酢酸エチル／ヘキサンからの結晶化によって黄褐色固体を得た。
【０１７５】
（１．６ｇ，８５％）：ｍｐ１５７．５〜１５９．０℃
【０１７６】
【化６５】
2005509645.tif 000066
【０１７７】
工程２：３−アミノ−５−（４−シアノフェニル）チオフェン−２−カルボキサミドの製造。
４−［ｌ−クロロ−２−シアノエテニル］ベンゾニトリル（２ｍｍｏｌ，３７７Ｍｇ）を、メタノール（２５ｍＬ）中において室温で撹拌した。ナトリウムメトキシド（２５ｗｔ％，４ｍｍｏｌ，８６４Ｍｇ）を加えた直後に、２−メルカプトアセトアミド（６ｍｍｏｌ，５４７Ｍｇ）を加えた。１時間後、水（１００ｍＬ）を加え、黄色〜橙色固体を濾過した。
【０１７８】
（２３０Ｍｇ，４７％）：ｍｐ２５０．４〜２５１．６℃。
【０１７９】
【化６６】
2005509645.tif 000067
【０１８０】
実施例３１
【０１８１】
【化６７】
2005509645.tif 000068
【０１８２】
３−アミノ−５−（２−アニシル）−チオフェン−２−カルボキサミド
２’−メトキシアセトフェノン（１０ｍｍｏｌ，１．５ｇ）を、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）中において室温で撹拌した。三塩化リン（２０ｍｍｏｌ，２．７５ｇ）を滴加した。２時間撹拌後、ヒドロキシルアミン塩酸塩（３０ｍｍｏｌ，２．０８ｇ）を少量ずつ加えた。１時間後、混合物を濃縮し、酢酸エチル（１００ｍＬ）を加えた。ブライン、飽和水性重炭酸ナトリウムおよびブラインで逐次的に洗浄後、混合物を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濃縮した。メタノール（５０ｍＬ）を加えた後、２−メルカプトアセトアミド（３０ｍｍｏｌ，２．７３ｇ）を加えた。この混合物を室温で撹拌し、その時にナトリウムメトキシド（２５ｗｔ％，２０ｍｍｏｌ，４．３２ｇ）を滴加した。２時間後、飽和水性重炭酸ナトリウムを加えた後、１Ｎ塩酸を、ガス発生が認められるまで加えた。水を加えて５００ｍＬの全容量とし、その混合物を１６時間放置した。黄色固体を濾過し、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド／水から再結晶させた。
【０１８３】
（１．１ｇ，４４％）：ｍｐ１５５．２〜１５５．３℃。
【０１８４】
【化６８】
2005509645.tif 000069
【０１８５】
実施例３２
【０１８６】
【化６９】
2005509645.tif 000070
【０１８７】
３−アミノ−５−（３−クロロフェニル）チオフェン−２−カルボキサミド
３’−クロロアセトフェノン（１０ｍｍｏｌ，１．５ｇ）を、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）中において０℃で撹拌した。三塩化リン（２０ｍｍｏｌ，２．７５ｇ）を滴加した。冷却浴を除去し且つ２時間撹拌後、混合物を０℃に再冷却し、ヒドロキシルアミン塩酸塩（３０ｍｍｏｌ，２．０８ｇ）を少量ずつ加えた。室温で１６時間撹拌後、混合物を濃縮し、酢酸エチル（１５０ｍＬ）を加えた。ブラインで３回洗浄後、その混合物を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濃縮した。メタノール（５０ｍＬ）を加えた後、２−メルカプトアセトアミド（３０ｍｍｏｌ，２．７３ｇ）を加えた。この混合物を室温で撹拌し、その際にナトリウムメトキシド（２５ｗｔ％，２０ｍｍｏｌ，４．３２ｇ）を滴加した。出発物質が全て溶解した時点で、飽和水性重炭酸ナトリウムを加えた後、１Ｎ塩酸を、ガス発生が認められるまで加えた。水を加えて４００ｍＬの全容量とし、混合物を１６時間放置した。黄褐色固体を濾過した。
【０１８８】
（１．６ｇ，６３％）：ｍｐ１６８．４〜１７１．３℃。
【０１８９】
【化７０】
2005509645.tif 000071
【０１９０】
実施例３３
【０１９１】
【化７１】
2005509645.tif 000072
【０１９２】
３−アミノ−５−フェニルチオフェン−２−カルボキサミド
工程１：３−アミノ−５−フェニルチオフェン−２−カルボヒドラジドの製造。
３−アミノ−５−フェニルチオフェン−２−カルボン酸メチル（０．２５０ｇ，１．０７ｍｍｏｌ）を、ヒドラジン一水和物（５ｍＬ）に加え、８０℃で３時間加熱した。その反応混合物を室温に冷却し、得られた固体を濾過し、水で洗浄した（０．１９５ｇ，７８％）。
【０１９３】
【化７２】
2005509645.tif 000073
【０１９４】
工程２：３−アミノ−５−フェニルチオフェン−２−カルボキサミドの製造。
３−アミノ−５−フェニルチオフェン−２−カルボヒドラジド（０．１５０ｇ，０．６４３ｍｍｏｌ）を、熱エタノール（１０ｍＬ）中に溶解させた。ラネーニッケル（０．５ｍＬ，水中の５０／５０ｗｔ％スラリー）を加えた。還流しながら１６時間加熱後、その混合物を、熱い間にセライトを介して濾過し、エタノールですすぎ洗浄し、濃縮した。
【０１９５】
（１０ｍＬ）２４ｍｇ（１７％）。
【０１９６】
【化７３】
2005509645.tif 000074
【０１９７】
実施例３４
【０１９８】
【化７４】
2005509645.tif 000075
【０１９９】
３−アミノベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド
標題化合物を、実施例３３に見出される手順を用いて製造した。
工程１および工程２：
【０２００】
【化７５】
2005509645.tif 000076
【０２０１】
表１は、例示化合物の生物活性を、ＩＣ５０として表されるヘテロ二量体アッセイで示す。
【０２０２】
【表１−１】
2005509645.tif 000077
【０２０３】
【表１−２】
2005509645.tif 000078
【０２０４】
【表１−３】
2005509645.tif 000079
【０２０５】
【表１−４】
2005509645.tif 000080
【０２０６】
【表１−５】
2005509645.tif 000081
【０２０７】
生物学的評価
材料
ＳＡＭ２  ＴＭ９６ Biotin 捕捉プレートは、Promega 製であった。抗ＦＬＡＧアフィニティー樹脂、ＦＬＡＧ−ペプチド、ＮＰ−４０（Nonidet Ｐ−４０）、ＢＳＡ、ＡＴＰ、ＡＤＰ、ＡＭＰ、ＬＰＳ（E.coli 血清型０１１１：Ｂ４）およびジチオトレイトールは、Sigma Chemicals より入手した。ＮＥＭＯ（ＩＫＫγ）（ＦＬ−４１９）、ＩＫＫ１（Ｈ−７４４）、ＩＫＫ２（Ｈ−４７０）およびＩκＢα（Ｃ−２１）に特異的な抗体は、Santa Cruz Biotechnology より購入した。Ｎｉ−ＮＴＡ樹脂は、Qiagen より購入した。ペプチドは、American Peptide Company より購入した。プロテアーゼインヒビターカクテル錠は、Boehringer Mannheim 製であった。Sephacryl Ｓ−３００カラムは、Pharmacia ＬＫＢ Biotechnology 製であった。１０ｋＤａの分画分子量を有する Centriprep−１０濃縮器および３０ｋＤａの分画分子量を有するメンブランは、Amicon より入手した。［γ−３３Ｐ］ＡＴＰ（２５００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）および［γ−３２Ｐ］ＡＴＰ（６０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）は、Amersham より購入した。用いられた他の試薬は、商業的に入手可能な最高グレードであった。
【０２０８】
クローニングおよび発現
ヒトＩＫＫ１およびＩＫＫ２のｃＤＮＡを、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応によってヒト胎盤ＲＮＡ（Clonetech）から増幅させた。ｈＩＫＫ１を、ｐＦａｓｔＢａｃ  ＨＴａ（Life Technologies）中にサブクローニングし、Ｎ末端Ｈｉｓ６タグ融合タンパク質として発現させた。ｈＩＫＫ２  ｃＤＮＡは、ＩＫＫ２コーディング領域（ＤＹＫＤＤＤＤＫＤ）のＣ末端にＦＬＡＧ−エピトープタグのペプチド配列を取り込んだ逆オリゴヌクレオチドプライマーを用いて増幅させた。ｈＩＫＫ２：ＦＬＡＧ  ｃＤＮＡを、バキュロウイルスベクターｐＦａｓｔＢａｃ中にサブクローニングした。ｒｈＩＫＫ２（Ｓ１７７Ｓ，Ｅ１７７Ｅ）突然変異体を、野生型ｒｈＩＫＫ２について用いられたのと同じベクター中において、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅＴＭ突然変異誘発キット（Stratagene）を用いて構築した。各々の構成物（construct）のウイルス原液を用いて、４０Ｌ懸濁培養物中で増殖した昆虫細胞に感染させた。それら細胞を、最大の発現およびｒｈＩＫＫ活性が示された時点で溶解させた。細胞溶解物は、組換タンパク質の精製を下記のように行うまで、−８０℃で貯蔵した。
【０２０９】
酵素単離
精製手順は全て、特に断らない限り、４℃で行った。用いられる緩衝液は、緩衝液Ａ：５０ｍＭ  ＮａＣｌ、２０ｍＭ  ＮａＦ、２０ｍＭ  β−グリセロリン酸塩、５００ｕＭオルトバナジン酸ナトリウム、２．５ｍＭメタ重亜硫酸塩、５ｍＭベンズアミジン、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５ｍＭ  ＥＧＴＡ、１０％グリセロール、１ｍＭ  ＤＴＴ、１Ｘ CompleteＴＭプロテアーゼインヒビターを含有する２０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．６；緩衝液Ｂ：１５０ｍＭ  ＮａＣｌを除いて、緩衝液Ａと同様；および緩衝液Ｃ：５００ｍＭ  ＮａＣＩを除いて、緩衝液Ａと同様である。
【０２１０】
ｒｈＩＫＫ１ホモ二量体の単離
バキュロウイルスで発現され、Ｈｉｓペプチドで標識されたＩＫＫ１の８リットル発酵からの細胞を遠心分離し、その細胞ペレット（ＭＯＩ  ０．１，Ｉ＝７２時間）を、１００ｍｌの緩衝液Ｃ中に再懸濁させた。それら細胞をマイクロ流動化し、１００，０００Ｘｇで４５分間遠心分離した。上澄みを集め、イミダゾールを１０ｍＭの最終濃度まで加え、２５ｍｌのＮｉ−ＮＴＡ樹脂と一緒に２時間インキュベートした。その懸濁液を、２５ｍｌカラムに注入し、２５０ｍｌの緩衝液Ｃで洗浄後、１２５ｍｌの緩衝液Ｃ中５０ｍＭイミダゾールで洗浄した。ｒｈＩＫＫ１ホモ二量体を、緩衝液Ｃ中３００ｍＭイミダゾールを用いて溶離した。それら酵素画分に、ＢＳＡおよびＮＰ−４０を０．１％の最終濃度まで加えた。酵素を緩衝液Ｂに対して透析し、小分けし、−８０℃で貯蔵した。
【０２１１】
ｒｈＩＫＫ２ホモ二量体の単離
バキュロウイルスで発現され、ＦＬＡＧペプチドで標識されたＩＫＫ２の１０リットル培養物を遠心分離し、その細胞ペレット（ＭＯＩ＝０．１およびＩ＝７２時間）を緩衝液Ａ中に再懸濁させた。これら細胞をマイクロ流動化し、１００，０００Ｘｇで４５分間遠心分離した。上澄みを、緩衝液Ａで平衡されたＧ−２５カラムに通過させた。タンパク質ピークを集め、緩衝液Ｂ中において抗ＦＬＡＧアフィニティー樹脂と一緒に回転器上で一晩インキュベートした。その樹脂を、バッチにおいて１０〜１５ベッド容量の緩衝液Ｃで洗浄した。洗浄された樹脂をカラムに注入し、ｒｈＩＫＫ２ホモ二量体を、ＦＬＡＧペプチドを含有する５床容量の緩衝液Ｂを用いて溶離した。溶離した酵素に、５ｍＭ  ＤＴＴ、０．１％ＮＰ−４０およびＢＳＡ（最終量中０．１％に濃縮される）を加えた後、３０ｋＤａの分画分子量を有する Amicon メンブランを用いて濃縮した。酵素を小分けし、−８０℃で貯蔵した。
【０２１２】
ｒｈＩＫＫ１／ＩＫＫ２ヘテロ二量体の単離
ヘテロ二量体酵素を、バキュロウイルス系における共感染によって生じさせた（ＦＬＡＧ  ＩＫＫ２／ＩＫＫ１  Ｈｉｓ；ＭＯＩ＝０．１およびＩ＝７２時間）。感染した細胞を遠心分離し、その細胞ペレット（１０．０ｇ）を、５０ｍｌの緩衝液Ａ中に懸濁させた。タンパク質懸濁液をマイクロ流動化し、１００，０００Ｘｇで４５分間遠心分離した。その上澄みに、イミダゾールを１０ｍＭの最終濃度まで加えた。そのタンパク質に、２５ｍｌのＮｉ−ＮＴＡ樹脂を２時間混合することによって結合させた。タンパク質−樹脂スラリーを、２５ｍｌカラムに注入し、そして１０ｍＭイミダゾールを含有する２５０ｍｌの緩衝液Ａで洗浄後、１２５ｍｌの５０ｍＭイミダゾール含有緩衝液Ａで洗浄した。次に、３００ｍＭイミダゾールを含有する緩衝液Ａを用いて、タンパク質を溶離した。７５ｍｌプールを集め、ＮＰ−４０を０．１％の最終濃度まで加えた。次に、タンパク質溶液を緩衝液Ｂに対して透析した。次に、透析されたヘテロ二量体酵素を、２５ｍｌの抗ＦＬＡＧ  Ｍ２アガロースアフィニティーゲルに、絶えず混合しながら一晩結合させた。次に、タンパク質−樹脂スラリーを、２，０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上澄みを回収し、その樹脂を、０．１％ＮＰ−４０を含有する１００ｍｌの緩衝液Ｃ中に再懸濁させた。樹脂を、０．１％ＮＰ−４０を含有する３７５ｍｌの緩衝液Ｃで洗浄した。タンパク質−樹脂を２５ｍｌカラムに注入し、そしてＦＬＡＧペプチドを含有する緩衝液Ｂを用いて酵素を溶離した。酵素画分（１００ｍｌ）を集め、３０ｋＤａの分画分子量を有する Amicon メンブランを用いて２０ｍｌに濃縮した。濃縮された酵素に、ウシ血清アルブミンを０．１％の最終濃度まで加えた。次に、酵素を小分けし、−８０℃で貯蔵した。
【０２１３】
細胞培養物
野生型（ｗｔ）ヒトプレＢ細胞系７０Ｚ／３およびその突然変異体１．３Ｅ２は、Dr. Carol Sibley によって快く提供された。Ｗｔ７０Ｚ／３および１．３Ｅ２細胞を、７％規定ウシ血清（Hyclone）および５０μＭの２−メルカプトエタノールを補充したＲＰＭＩ１６４０（Gibco）中で増殖させた。ＡＴＣＣより入手したヒト単球性白血病ＴＨＰ−１細胞を、１０％規定ウシ血清、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１．０ｍＭピルビン酸ナトリウムおよび５０μＭの２−メルカプトエタノールを補充したＲＰＭＩ１６４０中で培養した。実験用には、細胞を、６ウェルプレート中において新しい培地中に１ｘ１０６個細胞／ｍｌで平板培養した。プレＢ細胞を、１０μｇ／ｍｌのＬＰＳの添加により、０〜４時間のいろいろな時間長さで刺激した。ＴＨＰ−１細胞は、１μｇ／ｍｌのＬＰＳの４５分間の添加によって刺激した。細胞をペレット化し、０．１５Ｍ  ＮａＣｌを含有する５０ｍＭの冷リン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．４で洗浄し、そして５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、１ｍＭオルトバナジン酸ナトリウム、１０ｍＭ  β−グリセロリン酸塩、１ｍＭ  ＮａＦ、１ｍＭ  ＰＭＳＦ、１ｍＭ  ＤＴＴおよび０．５％ＮＰ４０を含有する２０ｍＭ Hepes 緩衝液、ｐＨ７．６（溶解緩衝液）中において４℃で溶解させた。１０，０００Ｘｇでの遠心分離後に得られたサイトゾル画分を、用いられるまで−８０℃で貯蔵した。
【０２１４】
免疫沈降法およびウェスタンブロット法
ｒｈＩＫＫを含有するＳＦ９細胞ペーストを遠心分離して（１００，０００Ｘｇ，１０分）、破片を除去した。ｒｈＩＫＫを、その細胞上澄みから、３μｇの抗ＮＥＭＯ抗体（ＦＬ−４１９）を用いて免疫沈降させ（１００μｇの細胞ペースト）、その後、プロテインＡセファロースビーズにカップリングさせた。また、ｒｈＩＫＫは、アフィニティークロマトグラフィーで精製されたタンパク質標品（１μｇ）から、抗ＦＬＡＧ、抗Ｈｉｓまたは抗ＮＥＭＯ抗体（１〜４μｇ）を用いて免疫沈降させた後、プロテインＡセファロースカップリングを行った。天然のヒトＩＫＫ複合体は、ＴＨＰ−１細胞ホモジネート（３００μｇ／状態）から、抗ＮＥＭＯ抗体を用いて免疫沈降させた。免疫複合体をペレット化し、１ｍｌの冷溶解緩衝液で３回洗浄した。免疫沈降したｒｈＩＫＫを、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（８％トリス−グリシン）によるクロマトグラフィーで分離し、ニトロセルロース膜（Novex）に移し、そして化学発光（SuperSignal）により、特異的抗ＩＫＫ抗体（ＩＫＫ２  Ｈ−４７０，ＩＫＫ１  Ｈ−７４４）を用いて検出した。サイトゾル溶解物（２０〜８０μｇ）からの天然のＩＫＫ２、ＩκＢαおよびＮＥＭＯタンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し、特異的抗体を用いる化学発光によって可視化した。
【０２１５】
ホスファターゼ処理
免疫沈降したｒｈＩＫＫを、０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＤＴＴ、１ｍＭ  ＰＭＳＦおよび２ｍＭ  ＭｎＣｌ２を含有する５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．２中で２回洗浄し、５０μｌ中に再懸濁させた。ホスファターゼ（λＰＰアーゼ，１０００Ｕ）を、同緩衝液中で予め希釈し、ＩＫＫ試料に加えた。室温で断続的に混合しながら３０分間インキュベーション後、試験管に冷溶解緩衝液を加えて、反応を停止させた。数回洗浄後、１０％のビーズをウェスタン分析用に取り出し、そして残りの材料は、ペレット化して、in vitro キナーゼアッセイに用いられる１００μｌの緩衝液中に再懸濁させた。
【０２１６】
ＩＫＫαＳＡＭ酵素アッセイ
ＩＫＫαキナーゼ活性を、ビオチニル化ＩκＢαペプチド（Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ３２−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ３６−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ）、ＳＡＭ２  ＴＭ９６ Biotin 捕捉プレートおよび真空システムを用いて測定した。標準的な反応混合物は、５０μｌの最終容量中に、５μＭビオチニル化ＩκＢαペプチド、１μＭ  ［γ−３３Ｐ］ＡＴＰ（約１Ｘ１０５ｃｐｍ）、１ｍＭ  ＤＴＴ、５０ｍＭ  ＫＣｌ、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２ｍＭ  ＭｎＣｌ２、１０ｍＭ  ＮａＦ、２５ｍＭ Hepes 緩衝液、ｐＨ．７．６および酵素溶液（１〜１０μｌ）を含有した。２５℃で３０分間インキュベーション後、２５μｌの反応混合物を抜き取り、ＳＡＭ２  ＴＭ９６ Biotin 捕捉９６ウェルプレートに加えた。次に、各々のウェルを、８００μｌの２Ｍ  ＮａＣｌ、１．２ｍｌの１％Ｈ３ＰＯ４含有ＮａＣｌ、４００μｌのＨ２Ｏおよび２００μｌの９５％エタノールで逐次的に洗浄した。そのプレートをフード中において２５℃で１時間乾燥させた後、２５μｌのシンチレーション液（Microscint ２０）を各ウェルに加えた。［γ−３３Ｐ］ＡＴＰの取込みを、Top-Count ＮＸＴ（Packard）を用いて測定した。各々のアッセイ条件下において、ＩκＢαペプチド基質のリン酸化度は、全ての精製酵素について、時間および濃度に関して直線的であった。ビオチニル化ペプチド検定による結果は、ＧＳＴ−ＩκＢα１−５４および［γ−３３Ｐ］ＡＴＰを利用したキナーゼ反応のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析によって確かめた。得られた放射性標識基質は、Phosphoimager（Molecular Dynamics）によって定量した。イオン交換樹脂アッセイも、［γ−３３Ｐ］ＡＴＰおよびＧＳＴ−ＩκＢα１−５４融合タンパク質を基質として用いて行った。各々のアッセイシステムは、精製キナーゼアイソフォーム各々のＫｍおよび比活性に関して一貫した結果を生じた。酵素活性の１単位は、１分当たり１ｎｍｏｌｅのリン酸塩をＡＴＰからＩκＢαペプチドへ転移させるのを触媒するために必要な量として定義した。比活性は、タンパク質のｍｇ当たりの単位として表した。精製酵素のＫｍ決定に関する実験のため、いろいろな濃度のＡＴＰまたはＩκＢαペプチドを、一定のＩκＢαかまたはＡＴＰ濃度でアッセイを行った。ＩκＢαペプチドについてのＫｍアッセイは、０．１μｇの酵素、５μＭ  ＡＴＰおよび０．５〜２０μＭのＩκＢαペプチドで行った。ＡＴＰについてのＫｍアッセイは、０．１μｇの酵素、１０μＭのＩκＢαペプチドおよび０．１〜１０μＭのＡＴＰで行った。ｒｈＩＫＫ１ホモ二量体はＩκＢαペプチドについて活性が低く、Ｋｍが高いため、そのＫｍの決定には、ｒｈＩＫＫｌホモ二量体（０．３μｇ）を、ＡＴＰ  Ｋｍ実験について１２５μＭのＩκＢαペプチド及び５倍高い比活性のＡＴＰ（０．１〜１０μＭ）で、ＩκＢαペプチドＫｍ実験について５倍高い比活性の５μＭ  ＡＴＰおよびＩκＢαペプチド（５〜２００μＭ）でアッセイした。
【０２１７】
ＩＫＫβ樹脂酵素アッセイ
ＩＫＫβキナーゼ活性を、ビオチニル化ＩκＢαペプチド（Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ３２−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ３６−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ）（American Peptide Co.）を用いて測定した。２０ｕｌの標準的な反応混合物は、５０μｌの最終容量中に、５μＭビオチニル化ＩκＢαペプチド、０．１μＣｉ／反応の［γ−３３Ｐ］ＡＴＰ（Amersham）（約１Ｘ１０５ｃｐｍ）、１μＭ  ＡＴＰ（Sigma）、１ｍＭ  ＤＴＴ（Sigma）、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２（Sigma）、２ｍＭ  ＭｎＣｌ２（Sigma）、１０ｍＭ  ＮａＦ（Sigma）、２５ｍＭ Hepes（Sigma）緩衝液、ｐＨ７．６および２０μｌの酵素溶液および１０ｕｌの阻害剤を含有した。２５℃で３０分間のインキュベーション後、９００ｍＭギ酸塩、ｐＨ３．０中の１５０μｌの樹脂（Dowex 陰イオン交換樹脂ＡＧ１Ｘ８  ２００〜４００メッシュ）を各々のウェルに加え、反応を停止させた。樹脂を１時間沈降させ、５０ｕｌの上澄みを、Micolite−２平底プレート（Dynex）に取り出した。１５０μｌのシンチレーション液（Microscint ４０）（Packard）を各ウェルに加えた。［γ−３３Ｐ］ＡＴＰの取込みを、Top-Count ＮＸＴ（Packard）を用いて測定した。
【０２１８】
ＩＫＫヘテロ二量体樹脂酵素アッセイ
ＩＫＫヘテロ二量キナーゼ活性を、ビオチニル化ＩκＢαペプチド（Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ３２−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ３６−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ）（American Peptide Co.）を用いて測定した。２０ｕｌの標準的な反応混合物は、５０μｌの最終容量中に、５μＭビオチニル化ＩκＢαペプチド、０．１μＣｉ／反応の［γ−３３Ｐ］ＡＴＰ（Amersham）（約１Ｘ１０５ｃｐｍ）、１μＭ  ＡＴＰ（Sigma）、１ｍＭ  ＤＴＴ（Sigma）、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２（Sigma）、２ｍＭ  ＭｎＣｌ２（Sigma）、１０ｍＭ  ＮａＦ（Sigma）、２５ｍＭ Hepes（Sigma）緩衝液、ｐＨ７．６および２０μｌの酵素溶液および１０μｌの阻害剤を含有した。２５℃で３０分間のインキュベーション後、９００ｍＭギ酸塩、ｐＨ３．０中の１５０μｌの樹脂（Dowex 陰イオン交換樹脂ＡＧ１Ｘ８  ２００〜４００メッシュ）を、各々のウェルに加えて、反応を停止させた。樹脂を１時間沈降させ、５０ｕｌの上澄みを、Micolite−２平底プレート（Dynex）に取り出した。１５０μｌのシンチレーション液（Microscint ４０）（Packard）を各ウェルに加えた。［γ−３３Ｐ］ＡＴＰの取込みを、Top-Count ＮＸＴ（Packard）を用いて測定した。
【手続補正書】
【提出日】平成16年6月11日(2004.6.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１１】
癌、炎症または炎症関連障害を処置するための請求項１−９の何れかに記載の化合物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１２】
癌の処置のための請求項１１に記載の化合物。
【手続補正３】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１３】
炎症の処置のための請求項１１に記載の化合物。
【手続補正４】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１４】
炎症関連障害の処置のための請求項１１に記載の化合物。
【手続補正５】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１５】
炎症関連障害が関節炎である請求項１４に記載の化合物。
【手続補正６】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１６】
炎症関連障害が痛みである請求項１４に記載の化合物。
【手続補正７】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１７】
炎症関連障害が発熱である請求項１４に記載の化合物。
【手続補正８】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１８】
プロテインキナーゼ阻害剤である請求項１−９の何れかに記載の化合物。
【手続補正９】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１９】
前記プロテインキナーゼが、異なったアイソフォームのプロテインキナーゼＣ、サイクリン依存性キナーゼ（ｃｄｋ）、Ｍｅｔ、ＰＡＫ−４、ＰＡＫ−５、ＺＣ−１、ＳＴＬＫ−２、ＤＤＲ−２、Aurora １、Aurora ２、Ｂｕｂ−１、ＰＬＫ、Ｃｈｋｌ、Ｃｈｋ２、ＨＥＲ２、ｒａｆｌ、ＭＥＫ１、ＭＡＰＫ、ＥＧＦ−Ｒ、ＰＤＧＦ−Ｒ、ＦＧＦ−Ｒ、ＩＧＦ−Ｒ、ＶＥＧＦ−Ｒ、ＰＩ３Ｋ、ｗｅｅ１キナーゼ、Ｓｒｃ、Ａｂｌ、Ａｋｔ、ＩＬＫ、ＭＫ−２、ＩＫＫ−２、Ｃｄｃ７、ＮｅｋＩＫＫ１、ＩＫＫ２、ＩＫＫα／ＩＫＫβヘテロ二量体、ＴＢＫおよびＩＫＫｉから成る群より選択される請求項１８に記載の化合物。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項２０】
前記プロテインキナーゼが、ＩＫＫ２、ＩＫＫα／ＩＫＫβヘテロ二量体、ＴＢＫおよびＩＫＫｉから成る群より選択される請求項１８に記載の化合物。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項２１】
前記プロテインキナーゼがＩＫＫ２である請求項１８に記載の化合物。
【国際調査報告】
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