(57)【要約】本発明は、浮腫性網膜障害の治療方法を提供する。本方法は、網膜下および網膜腔からの病理学的外生液の除去を刺激し、それにより網膜剥離および網膜浮腫に関連した前記蓄液を低減するためにＰ２Ｙ受容体アゴニストを含む医薬組成物を投与することを包含する。Ｐ２Ｙ受容体アゴニストは、浮腫性網膜障害を治療するために一般に用いられる治療薬およびアジュバント剤とともに投与され得る。本発明に有用な医薬組成物は、細胞外加水分解に対する耐性強化を示すＰ２Ｙ受容体アゴニスト、例えばジヌクレオシドポリホスフェート化合物を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
浮腫性網膜障害の治療を必要とする被験者においてそれを治療する方法であって、浮腫性網膜障害に関連した網膜内および網膜下腔中の病理学的液蓄積の除去を刺激するのに有効な量でＰ２Ｙ受容体アゴニストを含む医療組成物を前記被験者に投与することを包含し、ここで当該投与は硝子体内、結膜または経強膜投与とする、方法。
【請求項２】
前記浮腫性網膜障害が網膜剥離または網膜浮腫である請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記網膜障害が糖尿病性黄斑浮腫、加齢性黄斑変性、漿液性中心性網膜症および黄斑浮腫からなる群から選択される請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記黄斑浮腫がブドウ膜炎、中心および分枝静脈閉塞、網膜色素変性、漿液性中心性網膜症、ＣＭＶ網膜炎または脈絡膜黒色腫から生じる請求項３記載の方法。
【請求項５】
前記Ｐ２Ｙ受容体アゴニストが約１μモル〜約５００μモルの硝子体内濃度範囲を達成するように投与される請求項１記載の方法。
【請求項６】
前記Ｐ２Ｙ受容体アゴニストが式Ｉ：
【化１】
2005503325.tif 000005
（式中、Ｘは酸素、メチレン、ジハロメチレンまたはイミドであり；
ｎは０、１または２であり；
ｍは０、１または２であり；
ｎ＋ｍは０、１、２、３または４であり；
Ｚ＝ＯＨまたはＨ；
Ｚ’＝ＯＨまたはＨ；
Ｙ＝ＯＨまたはＨ；
Ｙ’＝ＯＨまたはＨ；そして
ＢおよびＢ’は、各々別々に、それぞれ９−または１−位置を介して連結される、式ＩａまたはＩｂで定義されるようなプリンまたはピリミジン残基である：
【化２】
2005503325.tif 000006
（式中、Ｒ１は、水素、塩素、アミノ、一置換化アミノ、二置換化アミノ、アルキルチオ、アリールチオまたはアラルキルチオ（ここで、イオウ上の置換基は最大２０までの炭素原子を含有し、不飽和を伴う場合もある）であり；
Ｒ２は、ヒドロキシ、アルケニル、オキソ、アミノ、メルカプト、チオン、アルキルチオ、アリールチオ、アラルキルチオ、アシルチオ、アルキルオキシ、アリールオキシ、アラルキルオキシ、アシルオキシ、一置換化アルキルアミノ、複素環、一置換化シクロアルキルアミノ、一置換化アラルキルアミノ、一置換化アリールアミノ、ジアラルキルアミノ、ジアリールアミノ、ジアルキルアミノ、アシルアミノまたはジアシルアミノであり；
Ｒｘは、Ｏ、Ｈであるかまたは存在せず；
Ｒ２およびＲｘは任意に一緒になって、下記のようなアルキル、アリールまたはアラルキル部分でエテノ部分の４−または５−位置上で任意に置換される１，Ｎ６−エテノアデニン誘導体の５員縮合イミダゾール環を形成し；
Ｒ３は、下記のような水素、アジド、アルコキシ、アリールオキシ、アラルキルオキシ、アルキルチオ、アリールチオまたはアラルキルチオであるか；あるいはＴ（Ｃ１−６のアルキル）ＯＣＯＮＨ（Ｃ１−６のアルキル）Ｗ（ここで、ＴおよびＷは別々に、アミノ、メルカプト、ヒドロキシまたはカルボキシルである）；あるいはその製薬上許容可能なエステル、アミドまたは塩であるか；あるいは存在せず；
Ｊは炭素または窒素であるが、但し、Ｊが窒素である場合、Ｒ３は存在せず；
前記アルキルは直鎖、分枝鎖または環状であり；
前記アリール基は、低級アルキル、アリール、アミノ、モノ−またはジアルキルアミノ、ＮＯ２、Ｎ３、シアノ、カルボン酸、アミド、スルホンアミド、スルホン酸、ホスフェートまたはハロ基により任意に置換される）；
【化３】
2005503325.tif 000007
（式中、Ｒ４は、ヒドロキシ、オキソ、メルカプト、チオン、アミノ、シアノ、Ｃ７−１２のアリールアルコキシ、Ｃ１−６のアルキルチオ、Ｃ１−６のアルコキシ、Ｃ１−６のアルキルアミノまたはジＣ１−４のアルキルアミノ（ここで、アルキル基は任意に連結されて、複素環を形成する）であり、
Ｒ５は、水素、アセチル、ベンゾイル、Ｃ１−６のアルキル、Ｃ１−５のアルカノイル、アロイルであるかまたは存在せず；
Ｒ６は、ヒドロキシ、オキソ、メルカプト、チオン、Ｃ１−４のアルコキシ、Ｃ７−１２のアリールアルコキシ、Ｃ１−６のアルキルチオ、Ｓ−フェニル、アリールチオ、アリールアルキルチオ、トリアゾイルアミノ、Ｃ１−６のアルキルアミノ、Ｃ１−５の二置換化アミノまたはジＣ１−４のアルキルアミノ（ここで、前記ジアルキル基は任意に連結されて、複素環を形成するか、または連結されて置換化環、例えばモルホリノ、ピロロを形成する）であり；あるいは、
Ｒ５およびＲ６は一緒になって、ピリミジン環の位置３および４間で３，Ｎ４−エテノシトシン誘導体の５員融合イミダゾール環を形成し、ここで、前記エテノ部分はその４位または５位において任意的にＣ１−４のアルキル、フェニルまたはフェニルオキシで置換され、ここで当該Ｃ１−４のアルキル、フェニルまたはフェニルオキシの少なくとも１つの水素が、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−４のアルコキシ、Ｃ１−４のアルキル、Ｃ６−１０のアリール、Ｃ７−１２のアリールアルキル、カルボキシ、シアノ、ニトロ、スルホンアミド、スルホネート、ホスフェート、スルホン酸、アミノ、Ｃ１−４のアルキルアミノおよびジ−Ｃ１−４のアルキルアミノからなる群から選択される部分で任意に置換され、ここで、当該ジアルキル基は任意に結合されて複素環を形成する）；
Ｒ７は、水素、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、Ｃ１−６のアルキルまたはフェニル；置換化Ｃ２−８のアルキニル、ハロゲン、置換化Ｃ１−４のアルキル、ＣＦ３、Ｃ２−３のアルケニル、Ｃ２−３のアルキニル、アリルアミノ、ブロモビニル、エチルプロペノエートまたはプロペン酸およびＣ２−８のアルケニルからなる群から選択され；あるいは
Ｒ６およびＲ７は一緒になって、Ｒ６でＮまたはＯまたはＳを介して結合される５または６員飽和または不飽和環を形成し、このような環は任意に、それら自体が官能価を含有する置換基を含有し；
Ｒ８は、水素、アミノ、ジ−Ｃ１−４のアルキルアミノ、Ｃ１−４のアルコキシ、Ｃ７−１２のアリールアルコキシ、Ｃ１−４のアルキルチオ、Ｃ７−１２のアリールアルキルチオ、カルボキサミドメチル、カルボキシメチル、メトキシ、メチルチオ、フェノキシおよびフェニルチオからなる群から選択される））
のジヌクレオシドポリホスフェート化合物または製薬上許容可能なその塩である請求項１記載の方法。
【請求項７】
一般式Ｉの前記ジヌクレオシドポリホスフェートが、Ｐ３−ジ（ウリジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１−（シトシン５’−）−Ｐ３−ジ（ウリジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１，Ｐ３−ジ（アデノシン５’−）トリホスフェート；Ｐ１−（アデノシン５’−）−Ｐ３−ジ（ウリジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１−（アデノシン５’−）−Ｐ３−（シトシン５’−）トリホスフェート；Ｐ１，Ｐ３−ジ（エテノアデノシン）トリホスフェート；Ｐ１−（ウリジン５’−）−Ｐ３−（チミジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１−（アデノシン５’−）−Ｐ３−（イノシン５’−）トリホスフェート；Ｐ１，Ｐ３−ジ（ウリジン５’−）Ｐ２，Ｐ３−メチレントリホスフェート；Ｐ１，Ｐ３−ジ（ウリジン５’−Ｐ２，Ｐ３−ジフルオロメチレントリホスフェート）；Ｐ１，Ｐ３−ジ（ウリジン５’−Ｐ２，Ｐ３−イミドトリホスフェート）；Ｐ１，Ｐ３−ジ（４−チオウリジン５’−トリホスフェート）；Ｐ１，Ｐ３−ジ（３，Ｎ４−エテノシチジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１，Ｐ３−ジ（イミダゾ［１，２−ｃ］ピリミジン−５（６Ｈ）−オン−２−（３−ニトロ）−フェニル−６−β−Ｄ−リボフラノシド５’−）トリホスフェート、四アンモニウム塩；Ｐ１−（イノシン５’−）Ｐ３−（ウリジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１−（４−チオウリジン５’−）Ｐ３−（ウリジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１−（シトシンβ−Ｄ−アラビノフラノシド５’−）Ｐ３−（ウリジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１−（ウリジン５’−）Ｐ３−（キサントシン５’−）トリホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシウリジン５’−）Ｐ３−（ウリジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１−（３’−アジド−３’−デオキシチミジン５’−）−Ｐ３−（ウリジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１，Ｐ３−ジ（３’−アジド−３’−デオキシチミジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１，Ｐ３−ジ（３’−アジド−３’−デオキシチミジン５’−）トリホスフェート；２’（３’）−ベンゾイル−Ｐ１，Ｐ３−ジ（ウリジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１，Ｐ３−ジ−２’（３’）−ベンゾイルウリジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシグアノシン５’−）Ｐ３−（ウリジン５’）トリホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシアデノシン５’−）Ｐ３−（ウリジン５’）トリホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシイノシン５’−）Ｐ３−（ウリジン５’）トリホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシシチジン５’−）Ｐ３−（ウリジン５’）トリホスフェート；Ｐ１−（４−チオウリジン５’−）Ｐ３−（ウリジン５’）トリホスフェート；Ｐ１−（８−アザアデノシン−５’−）Ｐ３−（ウリジン５’）トリホスフェート；Ｐ１−（６−メルカプトプリンリボシド５’−）Ｐ３−（ウリジン５’）トリホスフェート；Ｐ１−（６−メルカプトプリンリボシド５’−）Ｐ３−（２’−デオキシウリジン５’）トリホスフェート；Ｐ１−（４−チオウリジン５’−）Ｐ３−（アラビノシチジン５’）トリホスフェート；Ｐ１−（アデノシン５’−）Ｐ３−（４−チオメチルウリジン５’）トリホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシアデノシン５’−）Ｐ３−（６−チオヘキシルプリンリボシド５’−��トリホスフェート；およびＰ１−（６−エイコサニルオキシプリンリボシド５’−）Ｐ３−（ウリジン５’）トリホスフェートから成る群から選択されるジヌクレオシドトリホスフェートである請求項６記載の方法。
【請求項８】
一般式Ｉの前記ジヌクレオシドポリホスフェートがＰ１−（ウリジン５’−）Ｐ２−（４−チオウリジン５’−）ジホスフェート；Ｐ１，Ｐ５−ジ（ウリジン５’−）ペンタホスフェート；およびＰ１，Ｐ６−ジ（ウリジン５’−）ヘキサホスフェートからなる群から選択される化合物である請求項６記載の方法。
【請求項９】
一般式Ｉの前記ジヌクレオシドポリホスフェートが、Ｐ１，Ｐ４−ジ（ウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（シトシン５’−）−Ｐ４−（ウリジン５’）テトラホスフェート；Ｐ１，Ｐ４−ジ（アデノシン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（アデノシン５’−）−Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（アデノシン５’−）−Ｐ４−（シトシン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１，Ｐ４−ジ（エテノアデノシン）テトラホスフェート；Ｐ１−（ウリジン５’−）−Ｐ４−（チミジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（アデノシン５’−）−Ｐ４−（イノシン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１，Ｐ４−ジ（ウリジン５’−）Ｐ２，Ｐ３−メチレンテトラホスフェート；Ｐ１，Ｐ４−ジ（ウリジン５’−Ｐ２，Ｐ３−ジフルオロメチレンテトラホスフェート）；Ｐ１，Ｐ４−ジ（ウリジン５’−Ｐ２，Ｐ３−イミドテトラホスフェート）；Ｐ１，Ｐ４−ジ（４−チオウリジン５’−テトラホスフェート）；Ｐ１，Ｐ４−ジ（３，Ｎ４−エテノシチジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１，Ｐ４−ジ（イミダゾ［１，２−ｃ］ピリミジン−５（６Ｈ）−オン−２−（３−ニトロ）−フェニル−６−β−Ｄ−リボフラノシド５’−）テトラホスフェート、四アンモニウム塩；Ｐ１−（イノシン５’−）Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（４−チオウリジン５’−）Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（シトシンβ−Ｄ−アラビノフラノシド５’−）Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（ウリジン５’−）Ｐ４−（キサントシン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシウリジン５’−）Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（３’−アジド−３’−デオキシチミジン５’−）−Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１，Ｐ４−ジ（３’−アジド−３’−デオキシチミジン５’−）テトラホスフェート２Ｐ４；Ｐ１，Ｐ４−ジ（３’−アジド−３’−デオキシチミジン５’−）テトラホスフェート；２’（３’）−ベンゾイル−Ｐ１，Ｐ４−ジ（ウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１，Ｐ４−ジ−（２’，３’）−ベンゾイルウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシグアノシン５’−）Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシアデノシン５’−）Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシイノシン５’−）Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシシチジン５’−）Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（４−チオウリジン５’−）Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（８−アザアデノシン−５’−）Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（６−メルカプトプリンリボシド５’−）Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（６−メルカプトプリンリボシド５’−）Ｐ４−（２’−デオキシウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（４−チオウリジン５’−）Ｐ４−（アラビノシチジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（アデノシン５’−）Ｐ４−（４−チオメチルウリジン５’−）テトラホ��フェート；Ｐ１−（２’−デオキシアデノシン５’−）Ｐ４−（６−チオヘキシルプリンリボシド５’−）テトラホスフェート；およびＰ１−（６−エイコサニルオキシプリンリボシド５’−）Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェートから成る群から選択されるジヌクレオシドテトラホスフェートである請求項６記載の方法。
【請求項１０】
浮腫性網膜障害の治療を必要とする被験者においてそれを治療する方法であって、浮腫性網膜障害に関連した網膜内および網膜下腔中の病理学的液蓄積の除去を刺激するのに有効な量でＰ２Ｙ受容体アゴニストを含む医薬組成物を前記被験者に投与することを包含し、ここで前記Ｐ２Ｙ受容体アゴニストを浮腫性網膜障害を処置するために用いられる一次治療または添加剤と同時投与する、方法。
【請求項１１】
前記一次治療が、外科手術、グリッドおよびレーザー光凝固術ならびに薬物療法からなる群から選択される請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
前記外科手術が強膜バックリング、空気網膜癒着術、硝子体切除および黄斑転位からなる群から選択される請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
前記薬物療法が、コルチコステロイド、カルボニックアンヒドラーゼ阻害剤、抗炎症薬、ならびに硝子体および網膜を結合するコラーゲンおよび繊維組織の消化を促す製剤からなる群から選択される請求項１１記載の方法。
【請求項１４】
前記ジヌクレオシドポリホスフェート化合物が、水性、ゲル、ゲル様および固体処方物からなる群から選択される処方物中に調製される請求項６記載の方法。
【請求項１５】
前記ゲルまたはゲル様処方物が、眼内外科手術使用を認可されたＯＥヒアルロン酸およびヒアルロン酸含有処方物からなる群から選択される請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
前記投与が、硝子体内投与である、請求項１記載の方法。
【請求項１７】
前記医薬組成物の硝子体内投与が前記化合物の注射可能形態の投与により達成される、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
前記医薬組成物が、硝子体への注射またはボーラスにより、硝子体への持続性注入により、硝子体腔への持続放出により、眼球後結膜注射、放出または注入により、経強膜注射により、持続経強膜放出または注入により、あるいは急性および慢性注射または注入により前記被験者に投与される請求項１記載の方法。
【請求項１９】
硝子体への注射が５０〜１００μｌの注射容積での１回または多数回硝子体内注射による請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
前記Ｐ２Ｙ受容体アゴニストが約０．１０〜約４．０ ｍｇ／眼の量で投与される請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
前記医薬組成物が有効量の前記Ｐ２Ｙ受容体アゴニストまたはその製薬上許容可能な塩を、水性電解質溶液、ポリエーテル、ポリビニル、アクリル酸のポリマー、ラノリンおよびグルコサミノグリカンからなる群から選択される生理学的適合性ビヒクルと一緒に含む眼用処方物中で投与される請求項１記載の方法であって、前記処方仏が浮腫性網膜障害に関連した網膜内および網膜下腔からの病理学的液の除去を刺激する方法。
【請求項２２】
式Ｉ’：
【化４】
2005503325.tif 000008
（式中、Ｘは酸素、メチレン、ジハロメチレンまたはイミドであり；
ｎは０、１または２であり；
ｍは０、１または２であり；
ｎ＋ｍは０、１、２、３または４であり；
Ｚ＝ＯＨまたはＨ；
Ｚ’＝ＯＨまたはＨ；
Ｙ＝ＯＨまたはＨ；
Ｙ’＝ＯＨまたはＨ；そして
ＢおよびＢ’は、各々別々に、それぞれ９−または１−位置を介して連結される、式ＩａまたはＩｂで定義されるようなプリンまたはピリミジン残基である：
【化５】
2005503325.tif 000009
（式中、Ｒ１は、水素、塩素、アミノ、一置換化アミノ、二置換化アミノ、アルキルチオ、アリールチオまたはアラルキルチオ（ここで、イオウ上の置換基は最大２０までの炭素原子を含有し、不飽和を伴う場合もある）であり；
Ｒ２は、ヒドロキシ、アルケニル、オキソ、アミノ、メルカプト、チオン、アルキルチオ、アリールチオ、アラルキルチオ、アシルチオ、アルキルオキシ、アリールオキシ、アラルキルオキシ、アシルオキシ、一置換化アルキルアミノ、複素環、一置換化シクロアルキルアミノ、一置換化アラルキルアミノ、一置換化アリールアミノ、ジアラルキルアミノ、ジアリールアミノ、ジアルキルアミノ、アシルアミノまたはジアシルアミノであり；
Ｒｘは、Ｏ、Ｈであるかまたは存在せず；
Ｒ２およびＲｘは任意に一緒になって、下記のようなアルキル、アリールまたはアラルキル部分でエテノ部分の４−または５−位置上で任意に置換される１，Ｎ６−エテノアデニン誘導体の５員縮合イミダゾール環を形成し；
Ｒ３は、下記のような水素、アジド、アルコキシ、アリールオキシ、アラルキルオキシ、アルキルチオ、アリールチオまたはアラルキルチオであるか；あるいはＴ（Ｃ１−６のアルキル）ＯＣＯＮＨ（Ｃ１−６のアルキル）Ｗ（ここで、ＴおよびＷは別々に、アミノ、メルカプト、ヒドロキシまたはカルボキシルである）；あるいはその製薬上許容可能なエステル、アミドまたは塩であるか；あるいは存在せず；
Ｊは炭素または窒素であるが、但し、Ｊが窒素である場合、Ｒ３は存在せず；
前記アルキルは直鎖、分枝鎖または環状であり；
前記アリール基は、低級アルキル、アリール、アミノ、モノ−またはジアルキルアミノ、ＮＯ２、Ｎ３、シアノ、カルボン酸、アミド、スルホンアミド、スルホン酸、ホスフェートまたはハロ基により任意に置換される）；
【化６】
2005503325.tif 000010
（式中、Ｒ４は、ヒドロキシ、オキソ、メルカプト、チオン、アミノ、シアノ、Ｃ７−１２のアリールアルコキシ、Ｃ１−６のアルキルチオ、Ｃ１−６のアルコキシ、Ｃ１−６のアルキルアミノまたはジＣ１−４のアルキルアミノ（ここで、アルキル基は任意に連結されて、複素環を形成する）であり、
Ｒ５は、水素、アセチル、ベンゾイル、Ｃ１−６のアルキル、Ｃ１−５のアルカノイル、アロイルであるかまたは存在せず；
Ｒ６は、ヒドロキシ、オキソ、メルカプト、チオン、Ｃ１−４のアルコキシ、Ｃ７−１２のアリールアルコキシ、Ｃ１−６のアルキルチオ、Ｓ−フェニル、アリールチオ、アリールアルキルチオ、トリアゾイルアミノ、Ｃ１−６のアルキルアミノ、Ｃ１−５の二置換化アミノまたはジＣ１−４のアルキルアミノ（ここで、前記ジアルキル基は任意に連結されて、複素環を形成するか、または連結されて置換化環、例えばモルホリノ、ピロロを形成する）であり；あるいは、
Ｒ５およびＲ６は一緒になって、ピリミジン環の位置３および４間で３，Ｎ４−エテノシトシン誘導体の５員融合イミダゾール環を形成し（ここで、前記エテノ部分はその４位または５位において任意的にＣ１−４のアルキル、フェニルまたはフェニルオキシで置換され、ここで当該Ｃ１−４のアルキル、フェニルまたはフェニルオキシの少なくとも１つの水素が、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−４のアルコキシ、Ｃ１−４のアルキル、Ｃ６−１０のアリール、Ｃ７−１２のアリールアルキル、カルボキシ、シアノ、ニトロ、スルホンアミド、スルホネート、ホスフェート、スルホン酸、アミノ、Ｃ１−４のアルキルアミノおよびジ−Ｃ１−４のアルキルアミノからなる群から選択される部分で任意に置換され、（ここで、当該ジアルキル基は任意に結合されて複素環を形成する））；
Ｒ７は、水素、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、Ｃ１−６のアルキルまたはフェニル；置換化Ｃ２−８のアルキニル、ハロゲン、置換化Ｃ１−４のアルキル、ＣＦ３、Ｃ２−３のアルケニル、Ｃ２−３のアルキニル、アリルアミノ、ブロモビニル、エチルプロペノエートまたはプロペン酸およびＣ２−８のアルケニルからなる群から選択され；あるいは
Ｒ６およびＲ７は一緒になって、Ｒ６でＮまたはＯまたはＳを介して結合される５または６員飽和または不飽和環を形成し、このような環は任意に、それら自体が官能価を含有する置換基を含有し；
Ｒ８は、水素、アミノ、ジ−Ｃ１−４のアルキルアミノ、Ｃ１−４のアルコキシ、Ｃ７−１２のアリールアルコキシ、Ｃ１−４のアルキルチオ、Ｃ７−１２のアリールアルキルチオ、カルボキサミドメチル、カルボキシメチル、メトキシ、メチルチオ、フェノキシおよびフェニルチオからなる群から選択されるが、但し、Ｒ８がアミノまたは置換化アミノである場合、Ｒ７は水素である））
の化合物であって、式Ｉ’のフラノシル糖部分が３’−デオキシリボフラノシル、２’，３’−ジデオキシリボフラノシル、アラビノフラノシル、３’−デオキシアラビノフラノシル、キシロフラノシル、２’−デオキシキシロフラノシルおよびリキソフラノシルから成る群から独立に選択される化合物又は製薬上許容可能なその塩。
【請求項２３】
Ｐ１−（６−メルカプトプリンリボシド５’−）Ｐ４−（ウリジン５’）テトラホスフェート；Ｐ１−（６−メルカプトプリンリボシド５’−）Ｐ４−（２’−デオキシウリジン５’）テトラホスフェート；Ｐ１−（４−チオウリジン５’−）Ｐ４−（アラビノシチジン５’）テトラホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシアデノシン５’−）Ｐ４−（６−チオヘキシルプリンリボシド５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（６−エイコサニルオキシプリンリボシド５’−）Ｐ４−（ウリジン５’）テトラホスフェート；Ｐ１−（アラビノアデノシン５’−）Ｐ４−（ウリジン５’）テトラホスフェート；Ｐ１−（リキソフラノシルチミン−５’−）Ｐ４−（ウリジン−５’−）テトラホスフェート；およびＰ１−（キシロフラノシルウラシル−５’−）Ｐ４−（ウリジン−５’−）テトラホスフェートから成る群から選択される化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
産業上の利用分野
本発明は、眼疾患の治療方法に関する。特に本発明は、網膜下および網膜内腔中の病理学的蓄液の除去方法に関する。
【０００２】
発明の背景
網膜色素上皮（ＲＰＥ）は、脊椎動物の眼の裏側に位置し、網膜を脈絡膜血管供給から分離するバリアを形成する。ＲＰＥの重要な機能は、網膜およびＲＰＥ間に存在する細胞外容積である網膜下腔の水和を保持および調節することである（Ｍａｒｍｏｒ， ｐｐ．３−１２， ｉｎ Ｔｈｅ Ｒｅｔｉｎａｌ， Ｐｉｇｍｅｎｔ Ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ， Ｅｄｓ． Ｍ．Ｆ． Ｍａｒｍｏｒ ａｎｄ Ｔ．Ｊ． Ｗｏｌｆｅｎｓｂｅｒｇｅｒ， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， （１９９８））。この機能は、網膜下腔および脈絡膜血管供給間の液、イオンおよび代謝産物の調節輸送により達成される（Ｍａｒｍｏｒ， ｐｐ．３−１２， ｉｎ Ｔｈｅ Ｒｅｔｉｎａｌ， Ｐｉｇｍｅｎｔ Ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ， Ｅｄｓ． Ｍ．Ｆ． Ｍａｒｍｏｒ ａｎｄ Ｔ．Ｊ． Ｗｏｌｆｅｎｓｂｅｒｇｅｒ， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， （１９９８）； Ｐｅｄｅｒｓｏｎ， ｐｐ． １９５５−１９６８， ｉｎ Ｒｅｔｉｎａ， Ｅｄ． Ｓ．Ｊ． Ｒｙａｎ， Ｍｏｓｂｙ， Ｓｔ． Ｌｏｉｕｓ， （１９９４））。すべての上皮と同様に、ＲＰＥは２つの機能的および解剖学的に別個の膜：即ち網膜に面する先端膜、ならびに脈絡膜血管供給に面する基底外側膜を有する。正常網膜では、液は網膜下腔の方向にＲＰＥを通して脈絡膜に吸収される。しばしば「ＲＰＥポンプ」と呼ばれるＲＰＥによる液のこの活発な吸収は、網膜腔から液をポンプ輸送することにより、ＲＰＥの先端膜への光受容体の適正な付着を保持するのに重要な役割を演じる（Ｍａｒｍｏｒ， ｐｐ．１９３１−１９５４， ｉｎ Ｒｅｔｉｎａ， Ｅｄ． Ｓ．Ｊ． Ｒｙａｎ， Ｍｏｓｂｙ， Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ， （１９９４）； Ｈｕｇｈｅｓ， ｅｔ ａｌ．， ｐｐ． ｘｖｉｉ，７４５， ｉｎ Ｔｈｅ Ｒｅｔｉｎａｌ Ｐｉｇｍｅｎｔ Ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ， Ｅｄｓ． Ｍ．Ｆ． Ｍａｒｍｏｒ ａｎｄ Ｔ．Ｊ． Ｗｏｌｆｅｎｓｂｅｒｇｅｒ， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， （１９９８））。
【０００３】
網膜剥離は、下層網膜色素上皮からの網膜の剥離をもたらす網膜下腔中の液の異常蓄積により特性化される。網膜浮腫は、網膜それ自体内部の液の異常蓄積を指す。網膜剥離または網膜の中心部（黄斑）における浮腫は視力の有意の損失を生じ、そして最終的には不可逆的失明を引き起こし得る（Ｙａｎｏｆｆ ａｎｆ Ｄｕｋｅｒ， Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ， Ｍｏｓｂｙ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， （１９９９）； Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｍｉｃｈｅｌｓ’ Ｒｅｔｉｎａｌ Ｄｅｔａｃｈｍｅｎｔ， ２ｎｄ ｅｄ． Ｍｏｓｂｙ， Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ， （１９９７））。広範な種々の眼の病状は、網膜剥離または網膜浮腫を生じ得る。最も一般的な種類の網膜剥離は裂孔原性網膜剥離で、これは、液化硝子体を網膜下腔に進入させて網膜剥離を生じさせる網膜中の単一または多数個の裂孔または円孔の結果として起こる。
【０００４】
裂孔原性網膜剥離（ＲＲＤ）の治療に用いられる薬理学的アプローチは存在しない。ＲＲＤのための唯一の一般的治療は、外科手術（強膜バックリング、空気網膜癒着術または硝子体切除）である（Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ， Ｍｉｃｈｅｌｓ’ Ｒｅｔｉｎａｌ Ｄｅｔａｃｈｍｅｎｔ， ２ｎｄ ｅｄ． Ｍｏｓｂｙ， Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ， （１９９７））ＲＲＤ手術成功のための２つの不可欠な構成要素が存在する：即ち、網膜の復位と網膜破損の修復である。ＲＲＤを治療するための３つの外科技法の間の主な差異は、網膜復位を促すために用いられる方法にある。
【０００５】
強膜バックルは、剥離網膜に向けて強膜に縫い付けられる眼球外バックル（通常はシリコーンスポンジまたは固体シリコーン）を用いる（Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｍｉｃｈｅｌｓ’ Ｒｅｔｉｎａｌ Ｄｅｔａｃｈｍｅｎｔ， ２ｎｄ ｅｄ．， Ｍｏｓｂｙ， Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ （１９９７））。網膜は通常は２〜３日の期間中に復位するが、しかし２〜３週間までかかることもある。外科医は、強膜、脈絡膜およびＲＰＥを通して針を挿入することにより、手術時に網膜下液を排液するよう選択し得る。概して、バックルは恒久的に強膜に縫合されたままである。空気網膜癒着術では、気泡が硝子体中に直接注入され、そして気泡がタンポナーデとして作用して、網膜破損を被覆するよう、頭部が位置決定される（Ｔｏｒｎａｍｂｅ ａｎｄ Ｈｉｌｔｏｎ， Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ ９６（６）： ７７２−８３ （１９８９））。網膜下液は通常は１〜２日以内に消散するが、しかし気泡が網膜破損を被覆するのを確実にするためには精確な頭部位置決定が必要とされる（Ｔｏｒｎａｍｂｅ， １０ ｅｔ ａｌ．， Ａｍ． Ｊ． Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． １２７（６）： ７４１−３ （１９９９））。硝子体切除術は通常は、硝子体牽引または出血に関連した複雑なＲＲＤのために用いられるが、しかし時々、単純ＲＲＤのために用いられる（Ｃｈａｎｇ， ｐｐ． ８．３４．１−８．３４．６， ｉｎ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ， Ｅｄｓ． Ｍ． Ｙａｎｏｆｆ ａｎｄ Ｊ．Ｓ． Ｄｕｋｅｒ， Ｍｏｓｂｙ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， （１９９９））。当該手法は、強膜を通して３つの小切開を作製して、硝子体腔中の器具の導入を可能にする。硝子体は除去され、特定生理食塩溶液と置き換えられる。剥離の種類および原因によって、次に種々の器具および技法が用いられて、網膜を復位する。単純剥離に関しては、網膜は、網膜裂孔を通した針の挿入により、網膜下腔の前方ドレナージを介して網膜が平らにされる。
【０００６】
強膜バックルおよび硝子体切除はしばしば全身麻酔を要し、入院を伴う。空気網膜癒着術は通常は医者の診察室で実行されるが、しかし成功のためには患者のコンプライアンスを要する（Ｈｉｌｔｏｎ ａｎｄ Ｔｏｒｎａｍｂｅ， Ｒｅｔｉｎａ １１（３）： ２８５−９４ （１９９１）； Ｈｉｌｔｏｎ ａｎｄ Ｂｒｉｎｔｏｎ， ｐｐ． ２０９３−２１１２， ｉｎ Ｒｅｔｉｎａ， Ｅｄ． Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｊ． Ｒｙａｎ， Ｍｏｓｂｙ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， （１９９９）； Ｈａｎ， ｅｔ ａｌ．， Ａｍ． Ｊ． Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． １２６（５）： ６５８−６８ （１９９８））。外科的技法および外科医によって、成功率は１回手術後で変動し、空気網膜癒着術に関しては低く、強膜バックルに関しては高い（Ｔｏｒｎａｍｂｅ， ｅｔ ａｌ．， Ａｍ． Ｊ． Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． １２７（６）： ７４１−３ （１９９９）； Ｈａｎ， ｅｔ ａｌ．， Ａｍ． Ｊ． Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． １２６（５）： ６５８−６８ （１９９８））。網膜剥離手術の成功は、術後の任意の時点（数時間〜数週間の範囲）での網膜復位に換算して測定される。視力結果および患者のクオリティーオブライフといったパラメーターは、網膜剥離手術の成功を査定するためには用いられない。
【０００７】
より重症形態の網膜内浮腫に一般的に関連した症状は、糖尿病性黄斑浮腫、滲出性加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）および臨床的に有意の類嚢胞黄斑浮腫である（Ｊａｍｐｏｌ ａｎｄ Ｐｏ， ｐｐ． ９９９−１００８， ｉｎ Ｒｅｔｉｎａ， Ｅｄ． Ｓ．Ｊ． Ｒｙａｎ， Ｍｏｓｂｙ， Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ， （１９９４））。網膜内または網膜下腔中のその他の病理学的症状関連異常液蓄積としては、ブドウ膜炎、中心および分枝静脈閉塞、網膜色素変性、漿液性中心性網膜症、ＣＭＶ網膜炎および脈絡膜黒色腫が挙げられる。ある種の外科的手法（例えば白内障手術）後の眼損傷に関連した物理的外傷も、網膜剥離または浮腫を生じ得る（Ａｈｍｅｄ ａｎｄ Ａｉ， ｐｐ． ８．３４．１−８．３４．６， ｉｎ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ， Ｅｄｓ． Ｍ． Ｙａｎｏｆｆ ａｎｄ Ｊ． Ｄｕｋｅｒ， Ｍｏｓｂｙ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， （１９９９））。
【０００８】
黄斑における液の網膜内蓄積は視力鋭敏性を低減し、そして糖尿病性網膜症、ＡＭＤおよびその他の虚血性網膜症、例えば分枝および中心網膜静脈閉塞を有する患者における視力損失の最も一般的な原因である（Ｊａｍｐｏｌ ａｎｄ Ｐｏ， ｐｐ． ９９９−１００８， ｉｎ Ｒｅｔｉｎａ， Ｅｄ． Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｊ． Ｒｙａｎ， Ｍｏｓｂｙ， Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ， （１９９４）； Ｋｅｎｔ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ． Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． ８４（５）： ５４２−５ （２０００））。黄斑浮腫はブドウ膜炎の高頻度合併症であり、網膜色素変性患者において一般的に認められる（Ｒｏｔｈｏｖａ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ． Ｊ． Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． ８０（４）： ３３２−６ （１９９６）； Ｆｅｔｋｅｎｈｏｕｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｔｒａｎｓ． Ａｍ． Ａｃａｄ． Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ． ８３（３） Ｐｔ １： ＯＰ５１５−２１ （１９７７））。黄斑浮腫も、眼内手術後の視力低下の主因である（類嚢胞黄斑浮腫と呼ばれる）（Ｍｉｙａｋｅ， Ｓｕｒｖ． Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． ２８ Ｓｕｐｐｌ： ５５４−６８ （１９８４））。網膜内液の蓄積は、内部および／または外部血管−網膜バリアの破壊に起因すると考えられる（Ｋｅｎｔ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ． Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． ８４（５）： ５４２−５ （２０００））。内部網膜バリアは網膜血管系の内皮細胞から成り、そして外部バリアは網膜色素上皮から成る。血管−網膜バリアの破壊は、血管系からの液の局部的漏出および網膜層内または網膜下腔中の液蓄積を生じ得る。網膜浮腫のための本発明の治療は、コルチコステロイド、アセタゾラミドおよび非ステロイド系抗炎症薬の全身および局所投与、ならびに外科的オプション、例えば水晶体切除、グリッドおよび局所レーザー光凝固術を包含する。これらの療法は、患者における限定有用性を示す。
【０００９】
モデムデイＲＲＤ術は相対的に高い成功率（６０〜９０％）を有するが、しかし、外科手術が失敗した場合に網膜を復位し得る医薬組成物は、患者に大きな利益をもたらすと考えられる。さらに医薬組成物が外科的介入の非存在下で網膜を復位し得る場合、それは、特に裂孔原性網膜剥離の治療において、最も治療的に有用である。
【００１０】
多数の薬理学的および外科的アプローチが類嚢胞性および糖尿病性黄斑浮腫を治療するために用いられるが、しかしそれらは一般に経験的であり、そしてしばしば有効でないと考えられる。非特異的抗炎症治療はすべての種類の黄斑浮腫に用いられるが、但し、レーザー治療が示される虚血性網膜症に関連した場合を除く（Ｋｅｎｔ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ． Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． ８４（５）： ５４２−５ （２０００））。コルチコステロイドはしばしば黄斑浮腫を治療するために用いられるが、しかし、無作為化プラシーボ対照化試験において有効でないことが示された（Ｆｌａｃｈ， ｅｔ ａｌ．， Ａｍ． Ｊ． Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． １０３（４）： ４７９−８６ （１９８７）； Ｆｌａｃｈ， ｅｔ ａｌ．， Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ ９７（１０）： １２５３−８ （１９９０））。アセタゾラミドもある種の黄斑浮腫を軽減しそしてＲＰＥポンプの活性化により作用すると推測されるが、しかしアセタゾラミドに対する全身耐性は不十分である（Ｃｏｘ， ｅｔ ａｌ．， Ａｒｃｈ． ＯｐｈｔｈａＺｍｏＺ． １０６（ｇ）： １１９０−５ （１９８８））。局所またはグリッドレーザー光凝固は、糖尿病性網膜症に関連した網膜血管性漏出を低減するために一般に用いられ、限定症状に有用である（Ｉｐ， ｅｔ ａｌ．， Ｉｎ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ， Ｌｏｎｄｏｎ； Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ： Ｍｏｓｂｙ， ８．４．１−８．４．２ （１９９９）； Ｔｈｅ Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ Ｓｔｕｄｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｇｒｏｕｐ， Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ ８８（７）： ５８３−６００ （１９８１）； Ｅａｒｌｙ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ Ｓｔｕｄｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｇｒｏｕｐ， Ａｒｃｈ． Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． １０３（１２）： １７９６−８０６ （１９８５）； Ｔｈｅ Ｂｒａｎｃｈ Ｖｅｉｎ Ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ Ｓｔｕｄｙ Ｇｒｏｕｐ， Ａｍ． Ｊ． Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． ９８（３）：２７１−８２ （１９８４））。さらに硝子体切除は、硝子体出血および／または硝子体網膜牽引に関連した糖尿病性網膜症を治療するために用いられる（Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｍｉｃｈｅｌｓ’ Ｒｅｔｉｎａｌ Ｄｅｔａｃｈｍｅｎｔ， ２ｎｄ ｅｄ．， Ｍｏｓｂｙ， Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ （１９９７））。黄斑浮腫の安全、有効な治療に対する多大な未だ果たされていない医学的必要性が依然として存在する（Ｋｅｎｔ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ． Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． ８４（５）： ５４２−５ （２０００））。
【００１１】
ＲＰＥの先端（網膜面）膜は、脈絡膜血液供給に対して網膜下腔の方向にＲＰＥを横断して液輸送を刺激するために活性化され得るＰ２Ｙ受容体を含有する、ということを前の研究は示しており、この作用メカニズムは、網膜剥離における網膜下液の除去を促すために提唱された（Ｐｅｔｅｒｓｏｎ， ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． １７（７）： ２３２４−３７ （１９９７））。しかしながらＰ２Ｙ２受容体のための天然リガンドはＡＴＰおよびＵＴＰであり、これらはともに、偏在性細胞外ヌクレオチダーゼにより迅速に分解される。したがって、網膜剥離の治療においてＡＴＰおよびＵＴＰが有効であるためには、これらの化合物は網膜下腔に直接送達される必要がある。しかしながら網膜下腔への薬剤送達は広範に、それが、合併症および失明を生じ得る網膜およびＲＰＥ間の針の挿入を包含するため、患者にとって許容不可能的に危険であるとみなされる。したがって、ＡＴＰまたはＵＴＰが治療的に有用であるためには、それが硝子体内腔中に送達されねばならず、それは極低侵襲性手法である。しかしながらＡＴＰまたはＵＴＰがＲＰＥ先端膜に達するためには、それは網膜を通して拡散しなければならない。硝子体内ＡＴＰまたはＵＴＰが、それがＲＰＥ先端膜に達するときまでに分解され、したがって網膜復位の刺激に際して有効であるか否かは不明である。本発明の実施例は、硝子体内ＵＴＰが網膜復位を刺激するのに有効でなく、そして新規の加水分解耐性アゴニストが網膜復位を刺激するのに有効である、ということを示す。
【００１２】
発明の要約
このような治療を必要とする被験者における網膜または網膜下腔における外生液の除去を刺激するための医薬組成物およびその使用方法が開示される。本発明に開示される方法および組成物は、任意の理由のために外生網膜内または網膜下液の除去を刺激するために用いられ、その例としては、裂孔原性網膜剥離、漿液性網膜剥離、全形態の類嚢胞性黄斑浮腫（ブドウ膜炎、術後、中心および分枝静脈閉塞、ならびに遺伝性網膜疾患、例えば網膜色素変性症）ならびに全形態の網膜および黄斑浮腫（増殖性および非増殖性、滲出性加齢性黄斑変性および未熟児網膜症）の主および補助治療が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１３】
本発明は、硝子体内注射、硝子体内持続性放出または送達、眼球表面点眼、経強膜注射または注入、あるいは全身注射または注入を介して式Ｉの医薬組成物を投与することによる、網膜障害、例えば網膜剥離または網膜浮腫を有する被験者の治療方法を開示する。
【００１４】
本発明で有用な医薬組成物は、Ｐ２Ｙ受容体アゴニストを含み、その例としては、例えばある種のアデニン−、ウリジン−およびシチジン含有ジヌクレオシドポリホスフェートが挙げられるが、これらは網膜色素上皮の上皮細胞上のＰ２Ｙ受容体の選択的アゴニストである。このようなアゴニストによるＰ２Ｙ受容体の活性化は、細胞内カルシウムレベル上昇およびＲＰＥを通した液輸送増大に関連する。
【００１５】
本発明は、式Ｉの化合物の新規組成物も提供するが、この場合、式Ｉのフラノシル糖部分は、３’−デオキシリボフラノシル、２’，３’−ジデオキシリボフラノシル、アラビノフラノシル、３’−デオキシアラビノフラノシル、キシロフラノシル、２’−デオキシキシロフラノシルおよびリキソフラノシルからなる群から選択される。
【００１６】
本発明の詳細な説明
本発明は、網膜剥離および網膜浮腫をもたらす疾患を治療するために眼の後部からの外生網膜内または網膜下液の除去を促すための網膜色素上皮（ＲＰＥ）を通した液吸収を増大する方法を提供する。本方法は、浮腫性網膜障害に関連した網膜内および網膜下腔中の病理学的蓄液の除去を刺激するのに有効な量でＰ２Ｙ受容体アゴニストを被験者に投与することを包含する。
【００１７】
Ｐ２Ｙ受容体アゴニストは、網膜剥離および網膜浮腫を治療または管理するために一般に用いられるその他の治療薬および補助薬とともに、または伴わずに投与される。有効用量は、網膜色素上皮細胞の網膜面（先端）膜でＰ２Ｙ受容体を活性化するためにそしてＲＰＥを通しての液吸収（網膜−脈絡膜方向）を強化するために必要なこのようなアゴニストの量である。本発明は、網膜および網膜下腔からの外生液の除去を刺激するための方法を提供し、したがって浮腫性網膜障害、例えば網膜剥離および網膜浮腫の予防、管理および治療に有用であり得る。
【００１８】
本発明の方法は、網膜剥離および網膜浮腫に関連したすべての障害、例えば裂孔原性網膜剥離、漿液性網膜剥離、全形態の類嚢胞性黄斑浮腫（ブドウ膜炎、術後、中心および分枝静脈閉塞、ならびに遺伝性網膜疾患、例えば網膜色素変性症）ならびに全形態の網膜および黄斑浮腫（増殖性および非増殖性糖尿病性黄斑浮腫、滲出性加齢性黄斑変性および未熟児網膜症）（これらに限定されない）の管理および／または治療に有用である。
【００１９】
本発明は、網膜下および網膜内腔中の病理学的蓄液を除去するためにＰ２Ｙ受容体アゴニストを含む医薬組成物を被験者に投与する方法を提供する。Ｐ２Ｙ受容体アゴニストとしては、Ｐ２Ｙ１、Ｐ２Ｙ２、Ｐ２Ｙ４、Ｐ２Ｙ６およびＰ２Ｙ１１、好ましくはＰ２Ｙ２受容体を活性化するジヌクレオシドポリホスフェートおよびそれらの類似体が挙げられる。
【００２０】
化合物の説明
本発明に有用なジヌクレオシドポリホスフェートは、一般式Ｉの化合物またはその製薬上許容可能な非毒性塩である：
【００２１】
【化７】
2005503325.tif 000002
【００２２】
（式中、Ｘは酸素、メチレン、ジハロメチレン（ジフルオロメチレンおよびジクロロメチレンが好ましい）またはイミドであり；
ｎは０、１または２であり；
ｍは０、１または２であり；
ｎ＋ｍは０、１、２、３または４であり；
Ｚ＝ＯＨまたはＨ；
Ｚ’＝ＯＨまたはＨ；
Ｙ＝ＯＨまたはＨ；
Ｙ’＝ＯＨまたはＨ；そして
ＢおよびＢ’は、各々別々に、それぞれ９−または１−位置を介して連結される、式ＩａまたはＩｂで定義されるようなプリン残基またはピリミジン残基である：
【００２３】
【化８】
2005503325.tif 000003
【００２４】
（式中、Ｒ１は、水素、塩素、アミノ、一置換化アミノ、二置換化アミノ、アルキルチオ、アリールチオまたはアラルキルチオ（ここで、イオウ上の置換基は最大２０までの炭素原子を含有し、不飽和を伴う場合もある）であり；
Ｒ２は、ヒドロキシ、アルケニル、オキソ、アミノ、メルカプト、チオン、アルキルチオ、アリールチオ、アラルキルチオ、アシルチオ、アルキルオキシ、アリールオキシ、アラルキルオキシ、アシルオキシ、一置換化アルキルアミノ、複素環、一置換化シクロアルキルアミノ、一置換化アラルキルアミノ、一置換化アリールアミノ、ジアラルキルアミノ、ジアリールアミノ、ジアルキルアミノ、アシルアミノまたはジアシルアミノであり；
Ｒｘは、Ｏ、Ｈであるかまたは存在せず；
Ｒ２およびＲｘは任意に一緒になって、下記のようなアルキル、アリールまたはアラルキル部分でエテノ部分の４−または５−位置上で任意に置換される１，Ｎ６−エテノアデニン誘導体の５員融合イミダゾール環を形成し；
Ｒ３は、下記のような水素、アジド、アルコキシ、アリールオキシ、アラルキルオキシ、アルキルチオ、アリールチオまたはアラルキルチオであるか；あるいはＴ（Ｃ１−６のアルキル）ＯＣＯＮＨ（Ｃ１−６のアルキル）Ｗ（ここで、ＴおよびＷは別々に、アミノ、メルカプト、ヒドロキシまたはカルボキシルである）；あるいはその製薬上許容可能なエステル、アミドまたは塩であるか；あるいは存在せず；
したがって、アデニンの置換化誘導体としては、アデニン１−オキシド；１，Ｎ６−（４−または５−置換化エテノ）アデニン；Ｎ６−置換化アデニン；またはＮ−置換化８−アミノアデニンが挙げられ、この場合、６−または８−ＨＮＲ‘基のＲ’は、下記のように任意に官能化されるアリール部分を有するアリールアルキル（Ｃ１−６）基；アルキル；およびその中に官能基を有するアルキル、例えば：（［６−アミノヘキシル］カルバモイルメチル）−、およびω−アシル化−アミノ（ヒドロキシ、チオールおよびカルボキシ）アルキル（Ｃ２−１０）−およびそれらのω−アシル化−アミノ（ヒドロキシ、チオールおよびカルボキシ）誘導体（ここで、アシル基はアセチル、トリフルオロアセチル、ベンゾイル、置換化ベンゾイル等から選択されるが、これらに限定されないし、あるいはカルボン酸部分はそのエステルまたはアミド誘導体、例えばエチルまたはメチルエステルあるいはそのメチル、エチルまたはベンズアミド誘導体として存在する）の中から選択され、ω−アミノ（ヒドロキシ、チオール）部分はＣ１−４のアルキル基でアルキル化され得るし；
Ｊは炭素または窒素であるが、但し、Ｊが窒素である場合、Ｒ３は存在せず；
前記アルキルは直鎖、分枝鎖または環状であり；
前記アリール基は、低級アルキル、アリール、アミノ、モノ−またはジアルキルアミノ、ＮＯ２、Ｎ３、シアノ、カルボン酸、アミド、スルホンアミド、スルホン酸、ホスフェートまたはハロ基により任意に置換される）；
【００２５】
【化９】
2005503325.tif 000004
【００２６】
（式中、Ｒ４は、ヒドロキシ、オキソ、メルカプト、チオン、アミノ、シアノ、Ｃ７−１２のアリールアルコキシ、Ｃ１−６のアルキルチオ、Ｃ１−６のアルコキシ、Ｃ１−６のアルキルアミノまたはジＣ１−４のアルキルアミノ（ここで、アルキル基は任意に連結されて、複素環を形成する）であり、
Ｒ５は、水素、アセチル、ベンゾイル、Ｃ１−６のアルキル、Ｃ１−５のアルカノイル、アロイルであるかまたは存在せず；
Ｒ６は、ヒドロキシ、オキソ、メルカプト、チオン、Ｃ１−４のアルコキシ、Ｃ７−１２のアリールアルコキシ、Ｃ１−６のアルキルチオ、Ｓ−フェニル、アリールチオ、アリールアルキルチオ、トリアゾイル、アミノ、Ｃ１−６のアルキルアミノ、Ｃ１−５の二置換化アミノまたはジＣ１−４のアルキルアミノ（ここで、前記ジアルキル基は任意に連結されて、複素環を形成するか、または連結されて置換化環、例えばモルホリノ、ピロロを形成する）であり；あるいは、
Ｒ５およびＲ６は一緒になって、ピリミジン環の位置３および４間で３，Ｎ４−エテノシトシン誘導体の５員融合イミダゾール環を形成し、ここで、前記エテノ部分はその４−または５−位において任意的にＣ１−４のアルキル、フェニルまたはフェニルオキシで置換され、このＣ１−４のアルキル、フェニルまたはフェニルオキシの少なくとも１つの水素が、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−４のアルコキシ、Ｃ１−４のアルキル、Ｃ６−１０のアリール、Ｃ７−１２のアリールアルキル、カルボキシ、シアノ、ニトロ、スルホンアミド、スルホネート、ホスフェート、スルホン酸、アミノ、Ｃ１−４のアルキルアミノおよびジ−Ｃ１−４のアルキルアミノからなる群から選択される部分で任意に置換され、（ここで、このジアルキル基は任意に結合されて複素環を形成する）；
Ｒ７は、水素、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、Ｃ１−６のアルキルまたはフェニル；置換化Ｃ２−８のアルキニル、ハロゲン、置換化Ｃ１−４のアルキル、ＣＦ３、Ｃ２−３のアルケニル、Ｃ２−３のアルキニル、アリルアミノ、ブロモビニル、エチルプロペノエートまたはプロペン酸およびＣ２−８のアルケニルからなる群から選択され；あるいは
Ｒ６およびＲ７は一緒になって、Ｒ６でＮまたはＯまたはＳを介して結合される５または６員飽和または不飽和環を形成し、このような環は任意に、それら自体が官能価を含有する置換基を含有し；
Ｒ８は、水素、アミノ、ジ−Ｃ１−４のアルキルアミノ、Ｃ１−４のアルコキシ、Ｃ７−１２のアリールアルコキシ、Ｃ１−４のアルキルチオ、Ｃ７−１２のアリールアルキルチオ、カルボキサミドメチル、カルボキシメチル、メトキシ、メチルチオ、フェノキシおよびフェニルチオからなる群から選択されるが、但し、Ｒ８がアミノまたは置換化アミノである場合、Ｒ７は水素である））。
【００２７】
リボシル部分は、図示されているようにＤ−配置であるが、しかしＬ−、またはＤ−およびＬ−配置であり得る。Ｄ−配置が好ましい。ヌクレオシド残基としては、糖部分リボフラノシル、アラビノフラノシル、２’−デオキシリボフラノシル、３’−デオキシリボフラノシル，２’，３’−ジデオキシリボフラノシル、キシロフラノシル、２’−デオキシキシロフラノシルおよびリキソフラノシルが挙げられ、そしてα−またはβ−およびＤ−またはＬ−配置であり得るが、しかし最も好ましくはβ−Ｄ−配置である。
【００２８】
前記の式Ｉ、ＩａおよびＩｂの一般構造式中で、２−〜６−位置における点線は、これらの位置における単結合または二重結合の存在を示すよう意図される。侍従結合または単結合の相対位置は、Ｒ、ＲおよびＲ置換基がケト−エノール互変異性が可能であるか否かにより確定される。
【００２９】
前記の式Ｉの一般構造式中、アシル基は、アルカノイルまたはアロイル基を含む。アルキル基は、下記のように、１つまたはそれ以上の適切な置換基により任意に置換される１〜８個の炭素原子、特に１〜４個の炭素原子を含有する。アリールオキシのような基のアリール部分を含めたアリール基は、好ましくは、下記のように、１つまたはそれ以上の適切な置換基により任意に置換されるフェニル基である。前記のアルケニルおよびアルキニル基は、下記のように、１つまたはそれ以上の適切な置換基により任意に置換される２〜８個の炭素原子、特に２〜６個の炭素原子を含有し、例えばエテニルまたはエチニルである。
【００３０】
前記のアルキル、アルケニル、アルキニルおよびアリール基上の適切な置換基は、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−４のアルコキシ、Ｃ１−４のアルキル、Ｃ６−１２のアリール、Ｃ６−１２のアリールアルコキシ、カルボキシ、シアノ、ニトロ、スルホンアミド、スルホネート、ホスフェート、スルホン酸、アミノおよび置換化アミノ（ここで、アミノはＣ１−４のアルキルにより単一にまたは二重に置換され、そして二重に置換される場合、アルキル基は任意に連結されて複素環を形成する）から選択される。
【００３１】
一般式Ｉのジヌクレオシドポリホスフェートとしては、Ｐ１，Ｐ４−ジ（ウリジン５’−）テトラホスフェート（ＵＰ４Ｕ）；Ｐ１−（シトシン５’−）−Ｐ４−（ウリジン５’）テトラホスフェート；Ｐ１，Ｐ４−ジ（アデノシン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（アデノシン５’−）−Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（アデノシン５’−）−Ｐ４−（シトシン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１，Ｐ４−ジ（エテノアデノシン）テトラホスフェート；Ｐ１−（ウリジン５’−）−Ｐ４−（チミジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（アデノシン５’−）−Ｐ４−（イノシン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１，Ｐ４−ジ（ウリジン５’−）Ｐ２，Ｐ３−メチレンテトラホスフェート；Ｐ１，Ｐ４−ジ（ウリジン５’−Ｐ２，Ｐ３−ジフルオロメチレンテトラホスフェート）；Ｐ１，Ｐ４−ジ（ウリジン５’−Ｐ２，Ｐ３−イミドテトラホスフェート）；Ｐ１，Ｐ４−ジ（４−チオウリジン５’−テトラホスフェート）；Ｐ１，Ｐ４−ジ（３，Ｎ４−エテノシチジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１，Ｐ４−ジ（イミダゾ［１，２−ｃ］ピリミジン−５（６Ｈ）−オン−２−（３−ニトロ）−フェニル−６−β−Ｄ−リボフラノシド５’−）テトラホスフェート、四アンモニウム塩；Ｐ１−（イノシン５’−）Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（４−チオウリジン５’−）Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（シトシンβ−Ｄ−アラビノフラノシド５’−）Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（ウリジン５’−）Ｐ４−（キサントシン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシウリジン５’−）Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（３’−アジド−３’−デオキシチミジン５’−）−Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１，Ｐ４−ジ（３’−アジド−３’−デオキシチミジン５’−）テトラホスフェート２Ｐ４；Ｐ１，Ｐ４−ジ（３’−アジド−３’−デオキシチミジン５’−）テトラホスフェート；２’（３’）−ベンゾイル−Ｐ１，Ｐ４−ジ（ウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１，Ｐ４−ジ−（２’，３’）−ベンゾイルウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシグアノシン５’−）Ｐ４−（ウリジン５’）テトラホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシアデノシン５’−）Ｐ４−（ウリジン５’）テトラホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシイノシン５’−）Ｐ４−（ウリジン５’）テトラホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシシチジン５’−）Ｐ４−（ウリジン５’）テトラホスフェート；Ｐ１−（４−チオウリジン５’−）Ｐ４−（ウリジン５’）テトラホスフェート（ｄＣＰ４Ｕ）；Ｐ１−（８−アザアデノシン−５’−）Ｐ４−（ウリジン５’）テトラホスフェート；Ｐ１−（６−メルカプトプリンリボシド５’−）Ｐ４−（ウリジン５’）テトラホスフェート；Ｐ１−（６−メルカプトプリンリボシド５’−）Ｐ４−（２’−デオキシウリジン５’−）テトラホスフェート；Ｐ１−（４−チオウリジン５’−）Ｐ４−（アラビノシチジン５’）テトラホスフェート；Ｐ１−（アデノシン５’−）Ｐ４−（４−チオメチルウリジン５’��）テトラホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシアデノシン５’−）Ｐ４−（６−チオヘキシルプリンリボシド５’−）テトラホスフェートおよびＰ１−（６−エイコサニルオキシプリンリボシド５’−）Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェートから成る群から選択されるジヌクレオシドテトラホスフェートが挙げられる。ＵＰ４ＵおよびｄＣＰ４Ｕが好ましい化合物である。
【００３２】
一般式Ｉのジヌクレオシドポリホスフェートとしては、Ｐ３−ジ（ウリジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１−（シトシン５’−）−Ｐ３−ジ（ウリジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１，Ｐ３−ジ（アデノシン５’−）トリホスフェート；Ｐ１−（アデノシン５’−）−Ｐ３−ジ（ウリジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１−（アデノシン５’−）−Ｐ３−（シトシン５’−）トリホスフェート；Ｐ１，Ｐ３−ジ（エテノアデノシン）トリホスフェート；Ｐ１−（ウリジン５’−）−Ｐ３−（チミジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１−（アデノシン５’）−Ｐ３−（イノシン５’−）トリホスフェート；Ｐ１，Ｐ３−ジ（ウリジン５’−）Ｐ２，Ｐ３−メチレントリホスフェート；Ｐ１，Ｐ３−ジ（ウリジン５’−Ｐ２，Ｐ３−ジフルオロメチレントリホスフェート）；Ｐ１，Ｐ３−ジ（ウリジン５’−Ｐ２，Ｐ３−イミドトリホスフェート）；Ｐ１，Ｐ３−ジ（４−チオウリジン５’−トリホスフェート）；Ｐ１，Ｐ３−ジ（３，Ｎ４−エテノシチジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１，Ｐ３−ジ（イミダゾ［１，２−ｃ］ピリミジン−５（６Ｈ）−オン−２−（３−ニトロ）−フェニル−６−β−Ｄ−リボフラノシド５’−）トリホスフェート、四アンモニウム塩；Ｐ１−（イノシン５’−）Ｐ３−（ウリジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１−（４−チオウリジン５’−）Ｐ３−（ウリジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１−（シトシンβ−Ｄ−アラビノフラノシド５’−）Ｐ３−（ウリジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１−（ウリジン５’−）Ｐ３−（キサントシン５’−）トリホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシウリジン５’−）−Ｐ３−（ウリジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１−（３’−アジド−３’−デオキシチミジン５’−）−Ｐ３−（ウリジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１，Ｐ３−ジ（３’−アジド−３’−デオキシチミジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１，Ｐ３−ジ（３’−アジド−３’−デオキシチミジン５’−）トリホスフェート；２’（３’）−ベンゾイル−Ｐ１，Ｐ３−ジ（ウリジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１，Ｐ３−ジ−（２’（３’）−ベンゾイルウリジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシグアノシン５’−）Ｐ３−（ウリジン５’）トリホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシアデノシン５’−）Ｐ３−（ウリジン５’）トリホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシイノシン５’−）Ｐ３−（ウリジン５’）トリホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシシチジン５’−）Ｐ３−（ウリジン５’）トリホスフェート；Ｐ１−（４−チオウリジン５’−）Ｐ３−（ウリジン５’）トリホスフェート；Ｐ１−（８−アザアデノシン−５’−）Ｐ３−（ウリジン５’）トリホスフェート；Ｐ１−（６−メルカプトプリンリボシド５’−）Ｐ３−（ウリジン５’）トリホスフェート；Ｐ１−（６−メルカプトプリンリボシド５’−）Ｐ３−（２’−デオキシウリジン５’）トリホスフェート；Ｐ１−（４−チオウリジン５’−）Ｐ３−（アラビノシチジン５’）トリホスフェート；Ｐ１−（アデノシン５’−）Ｐ３−（４−チオメチルウリジン５’−）トリホスフェート；Ｐ１−（２’−デオキシアデノシン５’−）Ｐ３−（６−チオヘキシルプリンリボシド��’−）トリホスフェート；およびＰ１−（６−エイコサニルオキシプリンリボシド５’−）Ｐ３−（ウリジン５’）トリホスフェートから成る群から選択されるジヌクレオシドトリホスフェートが挙げられる。
【００３３】
さらに、一般式ＩＩＩのジヌクレオシドポリホスフェートとしては、Ｐ１−（ウリジン５’−）Ｐ２−（４−チオウリジン５’−）ジホスフェート；Ｐ１，Ｐ５−ジ（ウリジン５’−）ペンタホスフェート；およびＰ１，Ｐ６−ジ（ウリジン５’−）ヘキサホスフェートからなる群から選択される化合物が挙げられる。
【００３４】
好ましいヌクレオチドアゴニストは、加水分解耐性アゴニストである。加水分解耐性アゴニストは、修飾化ホスフェートエステル主鎖、例えばメチレン、イミドまたはホスフェートエステル結合が容易に加水分解されないよう保護するその他の基を有するヌクレオチドである。ジヌクレオチドも，末端ホスフェート基の欠乏のために加水分解に対して耐性である。ある種のジヌクレオチドは、加水分解に対して特に耐性である。例えばＰ１−（シトシン５’）−Ｐ４−（ウリジン５’）テトラホスフェートは、Ｐ１，Ｐ４−ジ（ウリジン５’−）テトラホスフェートと比較して、より耐性である。さらにモノヌクレオチドのホスフェート鎖の末端上に置かれる基、例えば簡単なアルキルホスフェートエステル（メチル、エチル、ベンジル等）またはチオ基（例えばＵＴＰγＳ）は、加水分解に対して多少の安定性を付与する。
【００３５】
本発明は、式Ｉの化合物の新規の組成物であって、式Ｉのフラノシル糖部分が３’−デオキシリボフラノシル、２’，３’−ジでオキシリボフラノシル、アルビノフラノシル、３’−デオキシアラビノフラノシル、キシロフラノシル、２’−デオキシキシロフラノシルおよびリキソフラノシルから成る群から選択される組成物も提供する。
【００３６】
以下の特定の化合物も新規である：Ｐ１−（６−メルカプトプリンリボシド５’−）Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート、Ｐ１−（６−メルカプトプリンリボシド５’−）Ｐ４−（２’−デオキシウリジン５’−）テトラホスフェート、Ｐ１−（４−チオウリジン５’−）Ｐ４−（アラビノシチジン５’−）テトラホスフェート、Ｐ１−（２’−デオキシアデノシン５’−）Ｐ４−（６−チオヘキシルプリンリボシド５’−）テトラホスフェート、Ｐ１−（６−エイコサニルオキシプリンリボシド５’−）Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート、Ｐ１−（アラビノアデノシン５’−）Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート、Ｐ１−（リキソフラノシルチミン５’−）Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェートおよびＰ１−（キシロフラノシルウラシル−５’−）Ｐ４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート。
【００３７】
本発明に包含される化合物は、縮合剤、例えばカルボニルジイミダゾールまたはジシクロヘキシルカルボジイミド（これらに限定されない）で活性化されるヌクレオシドモノ−、ジ−またはトリホスフェートの、同一または異なるモノ−、ジ−またはトリホスフェートの第二分子との縮合により調製されて、所望のジヌクレオチドポリホスフェートを生成し得る。別の調製方法は、所望のジヌクレオチドポリホスフェートを産生するための、前記のように活性化されるヌクレオシドホスフェートの、非ヌクレオシドモノ−、ジ−またはトリホスフェート部分、例えばモノホスフェートまたはピロホスフェート陰イオンとの逐次縮合であって、このような場合における非単離中間体は、モノヌクレオチドポリホスフェートである。さらに別の調製アプローチは、所望のジヌクレオチドポリホスフェートを産生するための、前記のように活性化されるか、あるいは酸ハロゲン化物または求核性置換に対して反応性であるその他の誘導体の形態でのモノ−、ジ−またはポリホスフェート部分の、ヌクレオシドホスフェートまたはポリホスフェートとの逐次縮合である。所望のジヌクレオチドポリホスフェートは、プリン、ピリミジンまたは炭水化物環上の単数または複数の部分の置換または誘導化による予備生成ジヌクレオチドポリホスフェートの修飾により生成され得る。出発物質として用いられるヌクレオシドホスフェートは市販されており、あるいは当業者に周知の方法により、対応するヌクレオシドから製造され得る。同様に、ヌクレオシドが市販されていない場合、それらはその他の容易に入手可能なヌクレオシドの修飾により、あるいは当業者に周知の方法による複素環式および炭水化物前駆体からの合成により製造され得る（ＷＯ ９６／４００５９、ＷＯ ９６／０２５５４Ａ１、ＷＯ−Ａ−９８１５５６３およびＷＯ ９８／５５４９４；Ｔｈｅｏｃｌｉｔｏｕ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｔ． Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ． Ｉ， ２００９−２０１９ （１９９６）； Ｇｕｒａｎｏｗｓｋｉ， ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ａｎｄ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ １４， ７３１−７３４ （１９９５）； Ｖｉｓｓｃｈｅｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０， ５７４９−５７５２ （１９９２）； Ｈｏｌｌｅｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２２， ４９２４−１０ ４９３３ （１９８３）； Ｏｒｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ６７３−６７７ （１９８８）； Ｐｌａｔｅａｕ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２４， ９１４−９２２ （１９８５）； Ｈａｇｍｅｉｅｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ２３７， １７４−１７７ （１９８２）； Ｓｃｈｅｆｆｚｅｋ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３５， ９７１６−９７２７ （１９９６）； Ｓｔｒｉｄｈ， ｅｔ ａｌ．， Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．， ９７−１０５ （１９８１）； Ｔａｒａｓｏｖａ， ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｅｍ． Ａｂｓ． １１０， １５４７７０ （１９８８）； Ｈａｔａ， ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ．， ９８７−９９０ （１９７６）； Ｈｕｈｎ， ｅｔ ａｌ．， ２８， １９５９−１９７０ （１９９３）； Ｔｕｍ��ｎｏｖ， ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｅｍ． Ａｂｓ． １０９−６８６７ｄ （１９８７）； Ｐｉｎｔｏｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ５１， ２７７−２８４ （１９９７）；および米国特許第４，８５５，３０４号；第５，６３５，１６０号；第５，４９５，５５０号および第５，６８１，８２３号）。
【００３８】
以下の実施例により実証されるように、本発明に包含される化合物を生成するために、出発物質は変更され得るし、そして付加的過程が用いられ得ると当業者は認識する。いくつかの場合には、ある種の反応性官能基の保護は、前記の変態のいくつかを達成するために有用である。概して、このような保護基に対する必要性は、このような基を結合および除去するために必要な条件とともに、有機合成の当業者には明らかである。
【００３９】
本発明の化合物は、それらの非毒性の製薬上許容可能な塩、例えばアルカリ金属塩、例えばリチウム、ナトリウムまたはカリウム塩；アルカリ土類金属塩、例えばマンガン、マグネシウムまたはカルシウム塩；あるいはアンモニウムまたはテトラアルキルアンモニウム塩、即ちＮＸ４＋（式中、ＸはＣ１−４である）（これらに限定されない）も包含する。製薬上許容可能な塩は、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、望ましくない毒物学的作用を付与しない塩である。本発明は、本明細書中に開示された化合物のアシル化プロドラッグも包含する。当該化合物の非毒性の製薬上許容可能な塩およびアシル化プロドラッグを調製するために用いられ得る種々の合成方法を、当業者は認識している。
【００４０】
本発明の化合物は主にヒト被験者の治療に関係するが、しかしそれらは獣医学的目的のためにその他の哺乳類被験者、例えばイヌおよびネコの治療のためにも用いられ得る。
【００４１】
本発明の化合物の医薬的用途は、Ｐ２Ｙ２およびその他のＰ２Ｙ受容体活性に関するイノシトールホスフェート検定により示される。この広範に用いられる検定は、Ｌａｚａｒｏｗｓｋｉ， ｅｔ ａｌ．（１９９５）（Ｂｒｉｔ． Ｊ． Ｐｈａｒｍ． １１６， １６１９−２７）に記載されているように、Ｇ−プロテインを介してホスホリパーゼＣに連結される受容体を活性化する化合物の活性の測定としてのイノシトールホスフェート生成の測定に頼っている。
【００４２】
これらの化合物の効力は、網膜剥離および網膜浮腫を含めた浮腫性網膜障害に関連した網膜下および網膜内腔中の病理学的蓄液の除去を促すそれらの能力に反映される。有効用量は、個々の患者の特性、用いられる特定化合物の活性、投与方式および疾患または障害の特性によっており、そして当業者により確定され得る。
【００４３】
網膜内または網膜下腔内の外生液を除去するための投薬レベルは、１０ μｇ／眼〜１０ ｍｇ／眼の範囲、好ましくは５０ μｇ／眼〜６ ｍｇ／眼の範囲、最も好ましくは０．１ ｍｇ／眼〜４ ｍｇ／眼の範囲である。
【００４４】
化合物の投与
本明細書中に開示された活性化合物は、任意の適切な手段により患者の眼に投与され得るが、しかし好ましくは点眼剤、噴霧剤またはゲルの形態で活性化合物の液体またはゲル懸濁液を投与することにより投与される。あるいは活性化合物は、リポソームを介して眼に適用され得る。さらに活性化合物は、ポンプ−カテーテル系を介して涙膜中に注入され得る。本発明の別の実施態様は、連続的または選択的放出用具、例えば膜、例えばＯｃｕｓｅｒｔＴＭ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｌｚａ Ｃｏｒｐ．， Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ， ＣＡ）に用いられるもの（これに限定されない）内に含入される活性化合物を包含する。付加的実施態様として、活性化合物は、眼の上に置かれるコンタクトレンズ内に含入され、それにより保有され、あるいはそれに付着され得る。本発明の別の実施態様は、眼球表面に適用され得るスワブまたはスポンジ内に含入される活性化合物を包含する。本発明の別の実施態様は、眼球表面に適用され得る液体噴霧剤内に含入される活性化合物を包含する。本発明の別の実施態様は、涙腺組織中または眼球表面への直接的活性化合物の注入を包含する。
【００４５】
本明細書中に開示された活性化合物は、好ましくは硝子体中に水性懸濁液を投与することにより投与される。硝子体内投与は、以下を包含する：１回または多数回硝子体内注射；別々にあるいは眼内刺激溶液、または硝子体網膜手術中にルーチンに用いられるその他の同様の溶液または用具とともに、外科手術中に硝子体腔中への直接的な投与；リポソームまたはその他の適切な製剤担体を介した投与；連続的または選択的放出硝子体内−移植可能用具を介した投与、例えばＯｃｕｓｅｒｔＴＭ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｌｚａ Ｃｏｒｐ．， Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ， ＣＡ）およびＶｉｔｒａｓｅｒｔ（Ｂａｕｓｃｈ ａｎｄ Ｌｏｍｂ， Ｉｎｃ．， Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ， ＮＹ）（これらに限定されない）。活性化合物を含有する硝子体内溶液は、眼業界の当業者が慣用的判定基準を用いて選定し得るような生理学的適合性ビヒクルを任意に含有する。ビヒクルは既知の眼用ビヒクルから選択され、その例としては食塩溶液、水ポリエーテル、例えばポリエチレングリコール、ポリビニル、例えばポリビニルアルコールおよびポビドン、セルロース誘導体、例えばメチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース、石油誘導体、例えば鉱油および白色ワセリン、動物脂肪、例えばラノリン、アクリル酸のポリマー、例えばカルボキシポリメチレンゲル、植物脂肪、例えば落花生油、ならびに多糖、例えばデキストラン、およびグルコサミノグリカン、例えばヒアルロン酸ナトリウムおよび塩、例えば塩化ナトリウムおよび塩化カリウムが挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施態様は、中性ｐＨおよび生理学的容量オスモル濃度で活性化合物および生理的食塩水を含む硝子体内溶液である。
【００４６】
活性化合物を含有する局所溶液も、眼業界の当業者が慣用的判定基準を用いて選定し得るような生理学的適合性ビヒクルを含有し得る。ビヒクルは既知の眼用ビヒクルから選択され、その例としては食塩溶液、水ポリエーテル、例えばポリエチレングリコール、ポリビニル、例えばポリビニルアルコールおよびポビドン、セルロース誘導体、例えばメチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース、石油誘導体、例えば鉱油および白色ワセリン、動物脂肪、例えばラノリン、アクリル酸のポリマー、例えばカルボキシポリメチレンゲル、植物脂肪、例えば落花生油、ならびに多糖、例えばデキストラン、およびグルコサミノグリカン、例えばヒアルロン酸ナトリウムおよび塩、例えば塩化ナトリウムおよび塩化カリウムが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４７】
前記の局所的投与方法のほかに、本発明の活性化合物を全身的に投与する種々の方法がある。このような一手段は、被験者が吸入する活性化合物で構成される呼吸可能な粒子のエーロゾル懸濁液を包含する。活性化合物は、肺を介して血流中に吸収されるか、あるいは鼻涙管を介して眼組織と接触し、その後、製薬的有効量で網膜色素上皮細胞と接触する。呼吸可能粒子は液体または固体であり得るし、吸入時に口および喉頭を通過するのに十分に小さい粒子サイズを有し、概して約１〜１０μの範囲の粒子、さらに好ましくは１〜５μのサイズの粒子が呼吸可能であると考えられる。
【００４８】
被験者の眼に活性化合物を全身的に投与する別の手段は、液体処方物の点眼剤または洗眼液または点鼻剤、あるいは被験者が吸入する呼吸可能粒子の鼻噴霧剤の形態で液体／液体懸濁液を投与することを包含する。鼻噴霧剤あるいは点鼻剤または点眼剤を製造するための活性化合物の液体医薬組成物は、当業者に既知の技法により、活性化合物を適切なビヒクル、例えば滅菌発熱物質無含有水または滅菌生理的食塩水と組合せることにより調製され得る。
【００４９】
活性化合物の全身投与のその他の手段は、式Ｉの化合物を含有する医薬組成物が錠剤、ロゼンジ、水性または油性懸濁液、分散性粉末または顆粒、エマルション、硬質または軟質カプセルあるいはシロップまたはエリキシルの形態である経口投与を包含する。経口使用を意図される組成物は、医薬組成物の製造に関して当業界に既知の任意の方法により調製され、そしてこのような組成物は、製薬上簡潔高性能で且つ味のよい調製物を提供するために、以下の：甘味剤、風味剤、着色剤および防腐剤から成る群から選択される１つまたはそれ以上の作用物質を含有し得る。錠剤は、錠剤の製造に適した非毒性の製薬上許容可能な賦形剤との混和物中に活性成分を含有する。これらの賦形剤としては、例えば不活性希釈剤、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム；造粒および崩壊剤、例えばトウモロコシデンプンまたはアルギン酸；結合剤、例えばデンプン、ゼラチンまたはアラビアゴム；ならびに滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクが挙げられる。錠剤は、ひふくされないか、または既知の技法により被覆されて、消化管中での崩壊および吸収を遅延し、それにより長期間にわたって持続性作用を提供し得る。例えば時間遅延物質、例えばグリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートが用いられ得る。経口使用のための処方物は、活性成分が不活性固体希釈剤、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合される硬質ゼラチンカプセルとして、あるいは活性成分が水または油媒質、例えば落花生油、液体パラフィンまたはオリーブ油と混合される軟質ゼラチンカプセルとしても存在し得る。
【００５０】
被験者の眼への活性化合物の全身投与の付加的手段は、治療的有効量の化合物が全身性吸収および循環を介して眼に到達するよう、座薬形態の活性化合物を包含する。
【００５１】
活性化合物の全身投与のさらなる手段は、ゲル、クリームまたは液体懸濁液形態の治療的有効量の活性化合物の直接的術中点眼を包含する。
【００５２】
本発明の方法は、網膜剥離および網膜浮腫に関連した障害を治療および管理するために用いられる外科手術、薬物療法および補助剤の効果を強化するために用いられる。外科的アプローチとしては、強膜バックル、空気網膜癒着術、黄斑転位および硝子体切除が挙げられる。薬物療法薬、例えばコルチコステロイドおよびアセタゾラミドは、黄斑浮腫を管理するために用いられてきた。
【００５３】
いくつかの治療薬が目標応答を成し遂げるためのレベルを達成するためには高用量が必要とされ得るが、しかしそれはしばしば、より高頻度の用量関連副作用と関連し得る。したがって本発明の化合物と、網膜剥離および網膜浮腫を治療するために一般的に用いられる作用物質との併用は、このような作用物質の相対的低用量を可能にして、このような治療薬の長期投与に伴う副作用の頻度を低くし得る。したがって本発明の化合物の別の指標は、アセタゾラミドによる全身作用の発現のような、網膜剥離および網膜浮腫を治療するために用いられる薬剤の副作用を低減することである。
【００５４】
以下の実施例により本発明をさらに説明するが、本発明は、それらに記載された特定の手法に本発明の範囲または精神を限定するよう意図されない。
【００５５】
実施例
実施例１．  網膜およびＲＰＥ中のＰ２Ｙ２−受容体ｍＲＮＡの位置決め
非同位体ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション技法を用いることにより、アルビノウサギ網膜／ＲＰＥ／脈絡膜組織の新鮮凍結横断切片中のＰ２Ｙ２−受容体ｍＲＮＡの細胞局在を調べた。図１は、Ｐ２Ｙ２受容体ｍＲＮＡ配列を基礎にして工学処理されたアンチセンスおよびセンスジゴキシゲニン（ＤＩＧ）標識化リボプローブからの代表的ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション結果を示す。アルカリ性ホスファターゼ接合抗ＤＩＧ抗体を用いた免疫組織化学により、アンチセンスおよびセンスリボプローブのハイブリダイゼーションを可視化し、そしてアルカリ性ホスファターゼに対する発色団反応を用いて、紫／黒染色を生じることにより、ＤＩＧ特異的シグナルを検出した。核ファストレッドにより、組織をさらに対比染色した。対照センスプローブ（右）は、非特異的標識を示す。アンチセンスプローブによる標識は、光受容体の神経節細胞および内顆粒層中の、ならびに内節を通しての層散乱核中におけるＰ２Ｙ２受容体ｍＲＮＡ局在を示した。ＲＰＥの全体で、そして脈絡膜血管の内皮細胞中でも強標識を検出した。
【００５６】
実施例２．  クローン化ヒトＰ２Ｙ２受容体に及ぼす合成Ｐ２Ｙ２アゴニストＵＰ４ｄＣ（ＩＮＳ３７２１７）の作用
ＩＮＳ３７２１７としても既知であるジヌクレオチド［Ｐ１−（ウリジン５’−）−Ｐ４−（２’−デオキシシチジン５’−）テトラホスフェート四ナトリウム塩］（ＵＰ４ｄＣ）を、１３２１Ｎ１星状細胞腫細胞中で安定的に発現されるクローン化ヒトＰ２Ｙ受容体サブタイプで、その活性（潜在能力、効力および選択性）に関して試験した。細胞活性の２つのｉｎ ｖｉｔｒｏ指標：即ち１）細胞内カルシウム貯蔵の動員、および２）［３Ｈ］−イノシトールホスフェート（［３Ｈ］−ＩＰ）の蓄積を用いて、活性を検定した。Ｐ２Ｙ１、Ｐ２Ｙ２、Ｐ２Ｙ４またはＰ２Ｙ６受容体を発現する細胞に対する両検定における活性に関して、ＵＰ４ｄＣを評価した。
【００５７】
ＵＴＰおよびＵＰ４ｄＣは、ヒトＰ２Ｙ２（図２）受容体を発現する１３２１Ｎ１星状細胞腫細胞中での細胞質ゾルカルシウムの動員を誘導し、ＥＣ５０値はそれぞれ０．２２ μＭおよび０．８ μＭであった。１００ ＰＭＵＰ４ｄＣに対するカルシウム応答はＰ２Ｙ２受容体でのＵＴＰに対する最大応答の１００％であった。要するに、ＵＰ４ｄＣは、ＵＴＰと比較して、Ｐ２Ｙ２受容体でのカルシウム動員に関して完全アゴニストである。
【００５８】
ＵＴＰおよびＵＰ４ｄＣは、ヒト１０Ｐ２Ｙ（図３）受容体を発現する１３２１Ｎ１細胞中で［３Ｈ］−ＩＰ蓄積を刺激し、ＥＣ５０値は１．１および２．２ μＭであった。１００ μＭＵＰ４ｄＣに対するイノシトールホスフェート応答は、ＵＴＰに対する最大応答とほぼ同一であった。要するに、ＵＰ４ｄＣは、試験系におけるＵＴＰと比較して、Ｐ２Ｙ２受容体でのイノシトールホスフェート放出に関して完全アゴニストである。
【００５９】
実施例３．  ＵＰ４ｄＣ（ＩＮＳ３７２１７）は新鮮単離ＲＰＥ単分子層中の蓄液を刺激する
変法キャパシタンスプローブ技法（Ｆｒａｍｂａｃｈ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｊ． ４７（４）： ５４７−５２ （１９８５）； Ｈｕｇｈｅｓ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｇｅｎ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． ８３（６）： ８７５−９９ （１９８４））を用いて、新鮮単離無傷ウシおよびヒト胎児ＲＰＥ単分子層を通過する液輸送を試験した。
【００６０】
浴溜め中に保持されたリンガー溶液に、先端および基底外側膜が別々に曝露されるよう、変法Ｕｓｓｉｎｇ小室中に垂直にＲＰＥを載せた。ステンレススチール製容量消息子を先端および基底外側浴溜め中に下げて、消息子と液凹面との間の空隙のキャパシタンスを検知した。先端および基底外側浴での空隙キャパシタンスにおける液移動誘導性変化をモニタリングすることにより、液輸送速度Ｊｖ（μＬ／ｃｍ２／時）を確定した。
【００６１】
ヒト胎児ＲＰＥにおけるＪに及ぼすアゴニストの代表的作用を図４に示す。正のＪｖ値は液吸収（先端−基底外側）を反映し、そして負のＪｖ値は液分泌（基底外側−先端）を反映する。図４に示した実験において、新鮮単離ヒト胎児ＲＰＥ単分子層を通過する対照液移動は、〜５μＬ／ｃｍ２／時の速度で吸収性である。先端膜を浸液するリンガー溶液への５０ Μｍアゴニストの付加は、前刺激レベルに戻る前に、〜４０μＬ／ｃｍ２／時への液吸収の一過性増大を引き出した。１時間処理期間中、ＵＰ４ｄＣ（ＩＮＳ３７２１７）は、３つのうちの１因子とほぼ同じだけ、総液吸収を増大した。
【００６２】
ＲＰＥは普通は液吸収性上皮であるが、しかし新鮮単離ＲＰＥ調製物において、液分泌が時々観察された。ｉｎ ｖｉｖｏでの液分泌は、ある種の条件下では、例えば明暗間移行後、あるいは病理学的状態下、例えば漿液性網膜剥離においては、ＲＰＥ生理学の正常構成要素であり得ると推測された。図５は、Ｊｖ分泌が対照条件下で観察される新鮮単離ウシＲＰＥ単分子層において、アゴニストは液輸送の方向を吸収逆転し得る、ということを示す。このようなｉｎ ｖｉｖｏでのアゴニストの作用は、異常ＲＰＥ媒介性液分泌が網膜下腔への脈絡膜液の輸送の作用を媒介すると推測される中心漿液性網膜症のような漿液性網膜剥離の治療において治療可能性を提供する。
【００６３】
実施例４．  新鮮単離網膜組織におけるＵＰ４ｄＣ（ＩＮＳ３７２１７）およびＵＴＰの代謝安定性の比較
ＵＶ−関連検出を伴う高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法を用いて、新鮮単離ブタ網膜組織におけるＵＰ４ｄＣ（ＩＮＳ３７２１７）およびＵＴＰの代謝率を確定した。安楽死若年ブタ（２〜３ヶ月）から均一サイズの新鮮単離網膜組織を単離し、網膜組織を、３７℃のインキュベーション小室に個別に入れた。３０分間の平衡期間後、各組織を生理学的緩衝液中の１００ μＭＵＰ４ｄＣまたはＵＴＰでスパイクして、０．５、１、２および４時間インキュベートした。次に各小室からの緩衝液のアリコートを、各時点での親ＵＰ４ｄＣおよびＵＴＰ化合物のクロマトグラムに関するＷ−結合ＨＰＬＣ検出のために加工処理して、各親化合物の代謝率を追跡した。図６は、これらの実験条件下で、ＵＰ４ｄＣがＵＴＰより４倍大きい代謝半減期を有することを示す。
【００６４】
実施例５．  ＵＰ４ｄＣは大水泡性網膜剥離のブタモデルにおいて網膜下液再吸収を増大する
目的
本試験は、ブタにおける大型実験的網膜剥離における正常外科的条件下での網膜下液再吸収に関するＵＰ４ｄＣの臨床的利点を評価するよう意図されている。
【００６５】
方法
１２匹のブタの各々の片眼における網膜下腔中に平衡塩生理的食塩水プラス（ＢＳＳ＋）３００ μｌを注入することにより、中心硝子体切除および１〜２四分円に伸びる大型網膜剥離を作製した。ＢＳＳ＋またはＵＰ４ｄＣ（５．６ ｍＭ）を伴うＢＳＳ＋を中央硝子体腔中に注入して、倒像眼底検査、超音波およびＯＣＴ画像形成により、３〜７日間に亘って観察した。
【００６６】
結果
ＵＰ４ｄＣで処置したすべての眼において３６時間以内に、そしてすべての対照眼においては５〜７日後に、大型網膜剥離における網膜下液の完全再吸収を観察した。これらの結果を図７に示す。
【００６７】
結論
ＵＰ４ｄＣの硝子体内適用は、小規模および大規模網膜剥離の実験動物モデルにおける網膜下液の再吸収率を強化した。したがってＵＰ４ｄＣは、網膜剥離において、あるいはヒトにおける限定黄斑転位手術において、網膜下液再吸収を刺激するための外科的付加物として有用であり得る。
【００６８】
実施例６．  ウサギモデル法における網膜下および硝子体内ＵＰ４ｄＣの作用
網膜下濾過胞を誘導するための外科的手法
体重約１．５ ｋｇのニュージーランドシロウサギ（２〜３月齢）を、体重１ ｋｇ当たり０．３ｍｌの塩酸ケタミン（１００ ｍｇ／ｍｌ）および０．５ ｍｌの塩酸キシラジン（１００ ｍｇ／ｍｌ）の筋内注射により麻酔した。必要な場合には、塩酸ケタミンを付加した。眼底の観察を要する実験のために、臭化水素酸スコポラミン０．２５％、シクロギル１％および塩酸フェニレフリン２．５％点眼剤を用いて瞳孔を拡張させた。
【００６９】
各眼に、１つの局所網膜剥離を作製した。ワイヤ開瞼器を設置し、３および９時位置に分節性結膜周囲切開（約２時間幅）を作製した。輪部後方から毛様体にかけて０．５ ｍｍに、１９ゲージＭＶＲ刃を用いて、２つの強膜切開を作製した。自己保持式平凹コンタクトレンズを角膜表面に載せた。照明に用いたシャンデリア光（Ｇｒｉｅｓｈａｂｅｒ ＆ Ｃｏ．， ＡＧ Ｓｃｈａｆｆｈａｕｓｅｎ， Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を、レンズと接触しないように注意深く硝子体腔中の強膜切開部位の１つを通して導入した。
【００７０】
度盛機械的注射器ポンプ（モデル３５１、Ｓａｇｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ， Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ， Ｍａｓｓ）により駆動される１ ｍｌ注射器に延長管で結合された斜め３６ゲージ網膜針（Ｇｒｉｅｓｈａｂｅｒ ＆ Ｃｏ．， ＡＧ Ｓｃｈａｆｆｈａｕｓｅｎ， Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いて、網膜剥離を作製した。手術用顕微鏡を用いた間接観察下で、網膜針を、二次強膜切開を通して、徐々に進行させて、鼻または側頭部ミエリン翼に挿入した。これらの部位は、薄い無血管網膜の隣接領域と比較した場合、ミエリン翼が付加的構造支持体を生じるので、注射のために選択した。眼内圧を低レベルに保持して、ＲＰＥからの脆弱網膜の緩徐ハイドロディセクションを可能にした。３６ゲージ針の先端を注意深くミエリン翼下に挿入した。機械的注射器ポンプを用いて網膜下腔中に〜５０ μｌのリン酸塩緩衝化生理食塩水液を注入することにより、網膜の局在化ドーム形剥離を作製した。眼から器具を除去して、強膜切除部位を開いたままにして、眼内圧を一定に維持した。これらの実験的網膜剥離は非常に小型の網膜円孔を有するが、しかしそれらは非裂孔原性網膜剥離と同様に機能的に作用し、そして網膜下液再吸収のメカニズムを試験するために用いられてきた。
【００７１】
注射溶液
すべての網膜下および硝子体内注射のために用いられる変法リン酸塩緩衝化生理食塩水（ＭＰＢＳ）溶液は、１３．６ ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４、６．２ ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、１３０．５ ｍＭのＮａＣｌおよび５ ｍＭのＫＣｌで構成され、〜３００ ｍＯｓｍの浸透圧および７．２のｐＨを有した。ＵＰ４ｄＣ（ＭＷ ８６２）をＭＰＢＳ溶液に付加して、１２ ｍＭ、１．４ ｍＭ、１．０ ｍＭおよび０．１５ ｍＭの目標薬剤濃度を達成した。実験および対照溶液は、等浸透圧で保持した。１ ｍＭＵＰ４ｄＣまたはそれ未満の濃度に関しては、適量のＮａＣｌをＭＰＢＳ溶液に付加して、ＵＰ４ｄＣの浸透圧関与（１ ｍＭのＵＰ４ｄＣは〜４−５ ｍＯｓｍに寄与する）を補償した。１ ｍＭＵＰ４ｄＣより高い濃度に関しては、ＵＰ４ｄＣの付加の代わりに、ＭＰＢＳ溶液中の等オスモルのＮａＣｌを低減することにより、溶液等張性を保持した。最終浸透圧が互いに±２ ｍＯｓｍであるよう、各投与コホートに関するすべての実験および対照溶液を処方した。滅菌溶液を用意し、検査者には知らされない条件下で評価した。
【００７２】
試験計画
各動物に関して、片眼を実験眼として用い、反対側眼は対照とした。ＵＰ４ｄＣを網膜下または硝子体内に送達して、実験的誘導性網膜剥離における網膜下液の再吸収に及ぼすその作用を評価した。第一シリーズの実験では、ＭＰＢＳ溶液を、ＵＰ４ｄＣ（１ ｍＭ）とともにまたは伴わずに、網膜下腔中に注入した。第二シリーズの実験では、ＭＰＢＳ溶液を含有する網膜下濾過胞を作製し、次に５０ μｌのＭＰＢＳ溶液を、ＵＰ４ｄＣ（１２ ｍＭ、１．４ ｍＭ、１．０ ｍＭおよび０．１５ ｍＭ）とともにまたは伴わずに、網膜下濾過胞に隣接して、１００ μｌハミルトン注射器を用いて硝子体腔中に投与した。外科医は、投与溶液の内容物に関しては知らされなかった。
【００７３】
術後観察
メチルセルロースの層で角膜上皮を保護して、角膜清澄性を保持した。選定症例においては眼底カメラ（ＴＲＣ−Ｗ， ＴＯＰＣＯＮ， Ｊａｐａｎ）を用いて眼底写真を得た。観察者は、倒像眼底検査により初期濾過胞サイズを確定したが、濾過胞サイズは３０分間隔で３時間測定した。参照マーカーとして隣接光学円板を用いて、各網膜下濾過胞の垂直および水平寸法を円板直径で記録した（アルビノウサギからの１０の眼球摘出眼において顕微鏡下であらかじめ測定した場合、光学円板の平均参照直径は約１ ｍｍである）。垂直寸法と水平寸法を掛けることにより各評価時点での濾過胞サイズを先ず定量し、次にその結果生じた値を各濾過胞の初期サイズと比較して無次元比として表した。各評価時点でのこの無次元（正規化）濾過胞サイズを次にプロットして、時間の一関数として分析した。
【００７４】
結果
網膜下および硝子体内ＵＰ４ｄＣの作用
第一シリーズの実験では、１ ｍＭのＵＰ４ｄＣを含有する等張ＭＰＢＳ溶液を網膜下腔に直接注入した。反対側の眼には、等張ＭＰＢＳ溶液単独の網膜下注射を施した。図８は、ＵＰ４ｄＣ含有網膜下濾過胞が、ＭＰＢＳ溶液単独を含有する濾過胞より有意に迅速に溶解したことを示す。網膜の復位は、ＵＰｄＣ処置濾過胞においては１２０〜１５０分で観察されたが、一方、対照網膜下濾過胞は、３時間の観察期間中に溶解しなかった。反復測定ＡＮＯＶＡを用いて、３０、６０および９０分で、網膜下再吸収における有意差が認められた（ｐ＜０．０５）。
【００７５】
第二シリーズの実験では、ＭＰＢＳ溶液を用いて網膜下濾過胞を先ず誘導し、次にその直後に、ＭＰＢＳ溶液を、ＵＰ４ｄＣ（１２ ｍＭ、１．４ ｍＭおよび０．１５ ｍＭ）を用いてまたは用いずに、濾過胞のすぐ隣に５０ μｌ硝子体内注射した。図９ＡおよびＢは、２つの高用量のＵＰ４ｄＣが、ビヒクルと比較して、網膜下濾過胞再吸収および網膜復位の速度を有意に強化する、ということを示す。ＵＰ４ｄＣで処置した眼とビヒクル単独処置眼との間には、３０、６０および９０分で、網膜下再吸収における有意差が認められた（ｐ＜０．０５）。ＵＰ４ｄＣ処置眼は〜９０分までにほぼ完全な網膜復位を示したが、一方、対照濾過胞は１８０分で完全に再吸収しなかった。
【００７６】
図９Ｃは、０．１５ ｍＭ硝子体内ＵＰ４ｄＣまたはビヒクル単独で処置された眼における網膜下濾過胞の再吸収速度を示す。ビヒクル単独と比較して、０．１５ ｍＭＵＰ４ｄＣによる任意の時点での網膜下液の再吸収には統計学的有意差は認められなかった。
【００７７】
実施例７．  ラットモデル法における網膜復位に及ぼすＵＰ４ｄＣの作用
ｉｎ ｖｉｖｏ調製：ラット試験計画
網膜下腔中に２〜３ μｌの変法リン酸塩緩衝化生理食塩水（ＭＰＢＳ）リンガー溶液を注入することにより、Ｌｏｎｇ−Ｅｖａｎｓ雌ラットにおいて網膜剥離を作製した（１匹のラットに関して片眼のみを用いた）。ＣＣＤカメラを用いて、１分間隔で数時間で、網膜下濾過胞の像を得た。画像獲得に関して、以下でさらに詳細に説明する。各実験の対照部分（網膜剥離作製後０〜３０分）では、見かけの濾過胞サイズが定常状態サイズに達し、これは麻酔経過中（数時間）、ずっと変わらなかった。ＭＰＢＳ溶液を、ＵＰ４ｄＣ（５ ｍＭ）を用いてまたは用いずに処方し、マスク化および無作為化条件下でラット眼の硝子体中に注入した（３ μｌ）。バイアルおよびそれらの内容物は、区別不可能であった。硝子体注射後、図１０に示した７つの等級スケール（０±３）を用いて実験者が判定した場合、見かけの濾過胞サイズは単調に増大するかまたは減少し、あるいは、次の６０分間に亘って一定であった。薬剤またはプラシーボ硝子体注入後３０〜９０分での見かけの濾過胞サイズの変化を観察することにより、等級を割り当てた。翌日、動物に再び麻酔を施し、別個の等級概算値を得た。負の３つの等級は、網膜濾過胞が外見的に平らになったことを意味する。正の３つの等級は、濾過胞が外見上サイズを倍加したことを意味する。ゼロ等級は、見かけの濾過胞サイズが長時間変化しなかったことを意味する。全実験が完了した後、各バイアルの内容物を明らかにして、薬剤またはプラシーボ投与後、３０〜９０分および１日目に得られた画像の観察に基づいた実験者の結論と比較した。
【００７８】
結果
１２匹のラットにおける網膜復位に及ぼす硝子体内ＵＰ４ｄＣ（１眼／動物に投与した）の作用を、図１０に示す。マスク化方式で実験を実行して、実験的生成網膜下濾過胞からの液再吸収に及ぼすＵＰ４ｄＣの作用の厳密且つ客観的評価を提供した。これらの実験では、濾過胞の作成後に、薬剤またはプラシーボ溶液をマスク化方式（バイアルおよびそれらの内容物は区別不可能であった）でラット眼の硝子体中に注入した。１２個すべての眼を採点後、鍵を非マスク化して、１および２４時間での観察に基づいた要約結果と比較した。図１０に要約した結果は、網膜下濾過胞の評価に関してＵＰ４ｄＣ（中白バー）およびビヒクル対照（プラシーボ、中黒バー）間の有意差（ｐ＜０．０５）を示す。処置の１時間後に、ＵＰ４ｄＣ処置眼はすべて、濾過胞サイズの低減を示し、一方、対照眼はすべて、濾過胞サイズの増大を示した。翌日、ＵＰ４ｄＣ処置眼からの網膜下濾過胞はほぼ完全に消失していたが、一方、ビヒクル処置眼からの網膜下濾過胞は依然として本質的に変化していなかった。６つのＵＰ４ｄＣ処置眼のうちの４つにおいては、網膜は２４時間時点で完全に平らに見えた。
【００７９】
実施例８．  黄斑外裂孔原性網膜剥離を有する被験者のための一次治療
患者は、中心視力損失の突発を呈し、１時間未満のサイズの上部網膜の単一破損を伴う黄斑外裂孔原性網膜剥離と診断される。患者の結膜（結膜嚢）を局所ベタジンを用いて、表面ならびに睫毛および眼瞼をこすり、そして覆うことにより殺菌する。キシロカインの結膜下注入により、局所麻酔を施す。
【００８０】
次に眼の毛様体扁平部領域で強膜を通して０．２５ ｃｃまたは０．５０ ｃｃのツベルクリン注射器からの２９または３０ゲージ針の挿入により、滅菌医薬組成物の５０ μＬの硝子体内注射を１回、ゆっくりと患者に投与する。医薬組成物は、生理的食塩水中に等張（２８０〜３００ ｍＯｓｍ）にそして生理学的ｐＨ（７．０〜７．５）に処方された代謝的耐性Ｐ２Ｙ２受容体アゴニストからなる。
【００８１】
患者の眼を両側でパッチを当てて、患者を水平位で４時間休憩させたままにして、この時点で、網膜復位に関して眼を検査する。網膜が４時間の時点で完全に復位されていなかった場合には、翌日（投与後２０〜２４時間）まで患者の眼を両側ともパッチを当てたままにしておいて、その時点で復位に関して網膜を再検査する。網膜復位後、慣用的方法により、例えば低温療法またはレーザー光凝固により、網膜裂孔を適切に処置する。
【００８２】
本発明、ならびにその製造および使用の様式および方法は、それに関係する任意の当業者がそれらを製造し、使用し得るよう、ここにこのように詳細に、明確に、簡潔にそして精確に説明されている。前記は、本発明の好ましい実施態様を説明したものであり、そして特許請求の範囲に記載されたような本発明の範囲を逸脱しない限り修正がなされ得る、と理解されるべきである。本発明とみなされる対象物を特定的に示しそして明確に主張するために、以下の特許請求の範囲で本明細書を締めくくる。
【図面の簡単な説明】
【図１】
非同位体ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション技法を用いたアルビノウサギ網膜／ＲＰＥ／脈絡膜組織の新鮮凍結横断切片中のＰ２Ｙ２受容体ｍＲＮＡの細胞局在を示す。特に、Ｐ２Ｙ２受容体ｍＲＮＡ配列を基礎にして工学処理されたアンチセンスおよびセンスジゴキシゲニン（ＤＩＧ）標識化リボプローブからの代表的ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション結果が示されている。ＧＣＬ：神経節細胞層。ＩＰＬ：内網状層。ＩＮＬ：内顆粒層。ＯＮＬ：外顆粒層。ＩＳ：内節。ＯＳ：外節。
【図２】
Ｐ２Ｙ２受容体を過剰発現する１３２１Ｎ１細胞中の細胞質ゾルカルシウム動員に及ぼすＩＮＳ３７２１７（ＵＰ４ｄＣ）対ＵＴＰの作用を示す。
【図３】
Ｐ２Ｙ２受容体を過剰発現する１３２１Ｎ１細胞中のイノシトールホスフェート生成に及ぼすＩＮＳ３７２１７（ＵＰ４ｄＣ）対ＵＴＰの作用を示す。
【図４】
ヒト胎児ＲＰＥにおける液吸収に及ぼすＩＮＳ３７２１７（ＵＰ４ｄＣ）の作用を示す。
【図５】
ウシＲＰＥにおける液輸送の大きさおよび方向に及ぼすＩＮＳ３７２１７（ＵＰ４ｄＣ）の作用を示す。
【図６】
新鮮単離ブタ網膜組織からのＩＮＳ３７２１７（ＵＰ４ｄＣ）およびＵＴＰの代謝率を示す。
【図７】
若年ブタにおいて作製された大型網膜剥離における間接眼底検査を用いて評価した場合の網膜下濾過胞のサイズに及ぼす硝子体内ＩＮＳ３７２１７の作用を示す。
【図８】
網膜下濾過胞の再吸収に及ぼす網膜下ＩＮＳ３７２１７の作用を示す。網膜下濾過胞は、ＩＮＳ３７２１７（１ ｍＭ）を用いてまたは用いずに、網膜下腔中にＭＰＢＳ溶液を注入することにより作製した。要約結果（平均±ＳＥＭ）は、ＩＮＳ３７２１７が、ビヒクル対照と比較した場合、網膜下濾過胞のクリアランス速度を増大した、ということを示す。
【図９】
（Ａ〜Ｃ）は、網膜下濾過胞の再吸収に及ぼす硝子体内ＩＮＳ３７２１７の作用を示す。ＭＰＢＳ溶液を網膜下に注入して、網膜下濾過胞を作製し、その直後に、ＩＮＳ３７２１７（１２ ｍＭ、１．４ ｍＭおよび０．１５ ｍＭ）を用いてまたは用いずに、ＭＰＢＳ溶液を硝子体内注入した。要約結果は、１２ ｍＭおよび１．４ ｍＭで投与したＩＮＳ３７２１７は、ビヒクル対照と比較した場合、網膜下濾過胞のクリアランス速度を増大したが、しかし０．１５ ｍＭで投与したＩＮＳ３７２１７は増大しなかったということを示す。
【図１０】
網膜下濾過胞の評価に関するＩＮＳ３７２１７（中白バー）およびビヒクル対照（プラシーボ、中黒バー）間の有意差（ｐ＜０．０５）を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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