(57)【要約】本発明は、望まない増殖性細胞（癌細胞が挙げられる）にアポトーシスを誘導するために有用な化合物に関する。本発明はまた、本発明の化合物を、望まない急速な細胞増殖によって特徴付けられる障害（癌が挙げられるが、これに限定されない）の発症を処置、予防、または遅延するために使用する方法にも関する。本発明はまた、本発明の化合物を、特定の種類の癌（白血病、非小細胞肺癌、結腸癌、ＣＮＳ癌、黒色腫、卵巣癌、腎臓癌、前立腺癌、膀胱癌、リンパ腫、および乳癌が挙げられるが、これらに限定されない）を処置するために使用する方法にも関する。さらに、アンドロゲン非依存性の癌の発症を処置、予防、および遅延する方法に関する。なおさらに、進行した前立腺癌を処置する方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
増殖性の細胞にアポトーシスを誘導するための式Ｉの化合物、またはその薬学的に受容可能な塩であって：
【化１】
2005528384.tif 000044
ここで、
Ｒ１は、カルボキシアミドであり；
Ｒ２は、アルキルおよびハロアルキルからなる群から選択され；ならびに
Ａｒは、フェニル、ビフェニル、ナフチル、アントリル、フェナントレニル、およびフルオレニルから選択されるアリールラジカルであって、ここで、Ａｒが、必要に応じて、ハロ、アジド、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４アジドアルキル、アリール、アルキルアリール、ハロアリール、ハロアルキルアリール、およびそれらの組合せからなる群から選択される１つ以上のラジカルで置換される、
化合物。
【請求項２】
Ｒ２が、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびトリフルオロメチルから選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ａｒが、２−ナフチル、４−ビフェニル、９−アントリル、２−フルオレニル、４−アジドフェニル、４−アジドメチルフェニル、４−（２−アジドエチル）フェニル、４−（３−アジドプロピル）フェニル、４−（４−アジドブチル）フェニル、４−（４−アジドフェニル）フェニル、４−（４−アジドメチルフェニル）フェニル、４−メチルフェニル、４−エチルフェニル、４−プロピルフェニル、４−ブチルフェニル、４−（２−ブロモエチル）フェニル、４−（３−ブロモプロピル）フェニル、４−（４−ブロモブチル）フェニル、４−（トリフルオロメチル）フェニル、４−（４−メチルフェニル）フェニル、４−（４−ブロモメチルフェニル）フェニル、４−（４−ブチルフェニル）フェニル、４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）フェニル、２−クロロフェニル、４−クロロフェニル、２，４−ジクロロフェニル、３，４−ジクロロフェニル、２，５−ジクロロフェニル、２，４−ジメチルフェニル、２，５−ジメチルフェニル、３，４−ジメチルフェニル、３，５−ジメチルフェニル、４−（４−クロロフェニル）フェニル、４−（３，５−ジクロロフェニル）フェニル、４−（２，３−ジクロロフェニル）フェニル、４−（３，５−ジメチルフェニル）フェニル、４−（２，４，５−トリクロロフェニル）フェニル、４−（４−トリフルオロメチルフェニル）フェニル、２−フェナントレニル、３−インドリル、２−ピロリル、および４−（ベンジル）フェニルからなる群から選択される、請求項２に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩。
【請求項４】
処置を必要とする被験体において癌の発症を処置、阻害、または遅延する方法であって、該方法が、式Ｉの化合物：
【化２】
2005528384.tif 000045
ここで、
Ｒ１は、カルボキシアミドであり；
Ｒ２は、アルキルおよびハロアルキルからなる群から選択され；ならびに
Ａｒは、フェニル、ビフェニル、ナフチル、アントリル、フェナントレニル、およびフルオレニルから選択されるアリールラジカルであって、ここで、Ａｒが、必要に応じて、ハロ、アジド、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４アジドアルキル、アリール、アルキルアリール、ハロアリール、ハロアルキルアリール、およびそれらの組合せからなる群から選択される１つ以上のラジカルで置換される、化合物またはその薬学的に受容可能な塩の治療的有効量を、このような処置を必要とする該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項５】
前記癌が、白血病、非小細胞肺癌、結腸癌、ＣＮＳ癌、黒色腫、卵巣癌、腎臓癌、前立腺癌、膀胱癌、リンパ腫、および乳癌からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記癌が、前立腺癌である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記化合物が、４−［５−（２，４−ジクロロフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（２，５−ジクロロフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（３，４−ジクロロフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−ビフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−ブロモメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（３，５−ジクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−ブチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−ブロモメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（３，５−ジクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−ブチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（２，４，５−トリクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（２，４−ジメチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；またはそれらの薬学的に受容可能な塩からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
前記化合物が、ＣＯＸ−２阻害剤ではない、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
急速に増殖する細胞にアポトーシスを誘導する方法であって、該方法が、式Ｉの化合物：
【化３】
2005528384.tif 000046
ここで、
Ｒ１は、カルボキシアミドであり；
Ｒ２は、アルキルおよびハロアルキルからなる群から選択され；ならびに
Ａｒは、フェニル、ビフェニル、ナフチル、アントリル、フェナントレニル、およびフルオレニルから選択されるアリールラジカルであって、ここで、Ａｒが、必要に応じて、ハロ、アジド、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４アジドアルキル、アリール、アルキルアリール、ハロアリール、ハロアルキルアリール、およびそれらの組合せからなる群から選択される１つ以上のラジカルで置換される、化合物またはその薬学的に受容可能な塩の薬理学的有効量を、該急速に増殖する細胞に導入する工程を包含する、方法。
【請求項１０】
前記急速に増殖する細胞が、癌細胞である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記癌細胞が、白血病、非小細胞肺癌、結腸癌、ＣＮＳ癌、黒色腫、卵巣癌、腎臓癌、前立腺癌、膀胱癌、リンパ腫、および乳癌からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記癌細胞が、前立腺癌である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
処置を必要とする被験体において、癌の発症を処置、阻害、または遅延する方法であって、該方法が、式Ｉ：
【化４】
2005528384.tif 000047
ここで、
Ｒ１は、カルボキシアミドであり；
Ｒ２は、アルキルおよびハロアルキルからなる群から選択され；ならびに
Ａｒは、２−ナフチル、４−ビフェニル、９−アントリル、２−フルオレニル、４−アジドフェニル、４−アジドメチルフェニル、４−（２−アジドエチル）フェニル、４−（３−アジドプロピル）フェニル、４−（４−アジドブチル）フェニル、４−（４−アジドフェニル）フェニル、４−（４−アジドメチルフェニル）フェニル、４−メチルフェニル、４−エチルフェニル、４−プロピルフェニル、４−ブチルフェニル、４−（２−ブロモエチル）フェニル４−（３−ブロモプロピル）フェニル、４−（４−ブロモブチル）フェニル、４−（トリフルオロメチル）フェニル、４−（４−ブロモメチルフェニル）フェニル、４−（４−メチルフェニル）フェニル、４−（４−ブチルフェニル）フェニル、４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）フェニル、２−クロロフェニル、４−クロロフェニル、２，４−ジクロロフェニル、３，４−ジクロロフェニル、２，５−ジクロロフェニル、２，４−ジメチルフェニル、２，５−ジメチルフェニル、３，４−ジメチルフェニル、３，５−ジメチルフェニル、４−（４−クロロフェニル）フェニル、４−（３，５−ジクロロフェニル）フェニル、４−（２，３−ジクロロフェニル）フェニル、４−（３，５−ジメチルフェニル）フェニル、４−（２，４，５−トリクロロフェニル）フェニル、４−（４−トリフルオロメチルフェニル）フェニル、２−フェナントレニル、３−インドリル、２−ピロリル、４−（ベンジル）フェニルからなる群から選択される１つ以上のラジカルで置換される、式Ｉを有する化合物またはその薬学的に受容可能な塩の治療的有効量を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１４】
前記癌が、前立腺癌である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
癌細胞にアポトーシスを誘導するために有用である、式ＩＩの化合物
【化５】
2005528384.tif 000048
またはその薬学的に受容可能な塩であって、ここで、
Ｒ３は、カルボキシアミドおよびスルホンアミドからなる群から選択され；
Ｒ４は、アルキルおよびハロアルキルから選択され；および
Ａｒ’は、４−アジドフェニル、４−（２−アジドエチル）フェニル、４−（３−アジドプロピル）フェニル、４−（４−アジドブチル）フェニル、４−（４−アジドフェニル）フェニル、４−（４−アジドメチルフェニル）フェニル、２，５−ジメチルフェニル、４−プロピルフェニル、４−ブロモメチルフェニル、４−（２−ブロモエチル）フェニル、４−（３−ブロモプロピル）フェニル、４−（４−ブロモブチル）フェニル、４−（４−ブロモメチルフェニル）フェニル、４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）フェニル、９−アントリル、４−（４−ブチルフェニル）フェニル、４−（４−メチルフェニル）フェニル、４−（４−クロロフェニル）フェニル、４−（３，５−ジクロロフェニル）フェニル、４−（２，３−ジクロロフェニル）フェニル、４−（３，５−ジメチルフェニル）フェニル、４−（２，４，５−トリクロロフェニル）フェニル、４−（４−トリフルオロメチルフェニル）フェニル、２−フェナントレニル、３−インドリル、２−ピロリル、４−（ベンジル）フェニル、および２−フルオレニルからなる群から選択される、化合物。
【請求項１６】
４−［５−（４−アジドフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（２−アジドエチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（３−アジドプロピル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（４−アジドブチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（４−ブチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（４−メチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（４−アジドフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（４−アジドメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（４−クロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（３，５−ジクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（２，３−ジクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（３，５−ジメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（２，４，５−トリクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（２−フェナントレニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（３−インドリル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（２−ピロリル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−ベンジルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−アジドフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（２−アジドエチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（３−アジドプロピル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−アジドブチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−アジドフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−アジドメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（２，５−ジメチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−プロピルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（２−ブロモエチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−ブチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−メチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（３−ブロモプロピル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−ブロモブチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−ブロモメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（９−アントリル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（２−フルオレニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−クロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（３，５−ジクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（２，３−ジクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（３，５−ジメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（２，４，５−トリクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（２−フェナントレニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（３−インドリル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（２−ピロリル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；および４−［５−（４−ベンジルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミドからなる群から選択される、請求項１５に記載の化合物、およびその薬学的に受容可能な塩。
【請求項１７】
前記化合物が、４−［５−（２−フェナントレニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミドである、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
急速に増殖する細胞にアポトーシスを誘導する方法であって、該方法が、治療的有効量の式ＩＩ：
【化６】
2005528384.tif 000049
ここで、
Ｒ３は、カルボキシアミドおよびスルホンアミドからなる群から選択され；
Ｒ４は、アルキルおよびハロアルキルから選択され；ならびに
Ａｒ’は、４−アジドフェニル、４−（２−アジドエチル）フェニル、４−（３−アジドプロピル）フェニル、４−（４−アジドブチル）フェニル、４−（４−アジドフェニル）フェニル、４−（４−アジドメチルフェニル）フェニル、２，５−ジメチルフェニル、４−プロピルフェニル、４−ブロモメチルフェニル、４−（２−ブロモエチル）フェニル、４−（３−ブロモプロピル）フェニル、４−（４−ブロモブチル）フェニル、４−（４−ブロモメチルフェニル）フェニル、４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）フェニル、９−アントリル、４−（４−ブチルフェニル）フェニル、４−（４−メチルフェニル）フェニル、４−（４−クロロフェニル）フェニル、４−（３，５−ジクロロフェニル）フェニル、４−（２，３−ジクロロフェニル）フェニル、４−（３，５−ジメチルフェニル）フェニル、４−（２，４，５−トリクロロフェニル）フェニル、４−（４−トリフルオロメチルフェニル）フェニル、２−フェナントレニル、３−インドリル、２−ピロリル、４−（ベンジル）フェニル、および２−フルオレニルからなる群から選択される、
化合物またはその薬学的に受容可能な塩を該急速に増殖する細胞に導入する工程を包含する、方法。
【請求項１９】
前記急速に増殖する細胞が、癌細胞であって、該癌細胞が、白血病、非小細胞肺癌、結腸癌、ＣＮＳ癌、黒色腫、卵巣癌、腎臓癌、前立腺癌、膀胱癌、リンパ腫、および乳癌からなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記癌細胞が、前立腺癌細胞である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記化合物が、４−［５−（２，５−ジメチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミドである請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記化合物が、４−［５−（２−フェナントレニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミドである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
処置を必要とする患者において癌の発症を治療、阻害、または遅延するための方法であって、該癌が、白血病、非小細胞肺癌、結腸癌、ＣＮＳ癌、黒色腫、卵巣癌、腎臓癌、前立腺癌、膀胱癌、リンパ腫、および乳癌からなる群から選択され、該方法が、治療的有効量の式ＩＩ：
【化７】
2005528384.tif 000050
ここで、
Ｒ３は、カルボキシアミドおよびスルホンアミドからなる群から選択され；
Ｒ４は、アルキルおよびハロアルキルから選択され；ならびに
Ａｒ’は、４−アジドフェニル、４−（２−アジドエチル）フェニル、４−（３−アジドプロピル）フェニル、４−（４−アジドブチル）フェニル、４−（４−アジドフェニル）フェニル、４−（４−アジドメチルフェニル）フェニル、２，５−ジメチルフェニル、４−プロピルフェニル、４−ブロモメチルフェニル、４−（２−ブロモエチル）フェニル、４−（３−ブロモプロピル）フェニル、４−（４−ブロモブチル）フェニル、４−（４−ブロモメチルフェニル）フェニル、４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）フェニル、９−アントリル、４−（４−ブチルフェニル）フェニル、４−（４−メチルフェニル）フェニル、４−（４−クロロフェニル）フェニル、４−（３，５−ジクロロフェニル）フェニル、４−（２，３−ジクロロフェニル）フェニル、４−（３，５−ジメチルフェニル）フェニル、４−（２，４，５−トリクロロフェニル）フェニル、４−（４−トリフルオロメチルフェニル）フェニル、２−フェナントレニル、３−インドリル、２−ピロリル、４−（ベンジル）フェニル、および２−フルオレニルからなる群から選択される、
化合物、またはその薬学的に受容可能な塩をこのような処置を必要とする該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２４】
前記化合物が、４−［５−（２−フェナントレニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミドである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記癌が、前立腺癌である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記前立腺癌が、アンドロゲン非依存的な前立腺癌である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記癌が、アンドロゲン非依存的である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】
前立腺癌の処置のために４−［５−（２−フェナントレニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミドを使用する方法であって、該方法が、治療的有効量の４−［５−（２−フェナントレニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド、またはその薬学的に受容可能な塩をこのような処置を必要とする被験体に導入する工程を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、米国仮特許出願第６０／３７０，６６４号（２００２年４月８日出願）（その全体が、本明細書において参考として援用される）による優先権を主張する。
【０００２】
（連邦の資金提供を受けた研究または開発に関する陳述）
本発明は、少なくとも部分的には、国立癌研究所により授与された国立衛生研究所補助金ＣＡ９２３０７およびＣＡ９４８２９によって、そして、陸軍補助金ＤＡＭＤ１７−０２−１−０１１７の下で政府に支援されてなされた。米国政府は、この発明において一定の権利を有し得る。
【０００３】
本発明は、ヒトの癌、特に前立腺癌および他の癌（特に、アンドロゲン非感受性の癌）を処置するための薬剤および方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
（発明の背景）
転移性前立腺癌のための処置の柱は、ホルモン療法または内分泌療法である（Ｋｏｚｌｏｗｓｋｉ，Ｊ．Ｍ．ら  Ｕｒｏｌ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．  １８：１５−２４（１９９１），およびＢａｌｍｅｒ，Ｃ．ら，Ｆｉｎｌｅｙ，Ｒ．Ｓ．とＢａｌｍｅｒ，Ｃ．（編），Ｃｏｎｃｅｐｔｓ  ｏｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ｐｐ．２１１−２２９，Ｂｅｔｈｅｓｄａ：ＡＳＨＰ（１９９８））。それは、前立腺癌内でのアンドロゲン生産またはアンドロゲンの作用のいずれかによって妨害することによる、アンドロゲン除去を目指す。生化学的証拠および形態学的証拠によって、ホルモン除去が、アンドロゲン感受性前立腺癌においてアポトーシス（プログラム細胞死）を起こす活性プロセスを誘導することが実証されている（Ｋｙｐｒｉａｎｏｕ，Ｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５０：３７４８−５３（１９９０））。しかし、患者の前立腺癌が第一線のホルモン療法を受けている間に進行する場合、または、患者が第一線のホルモン療法に全く応答しない場合、その癌は、アンドロゲン非感受性またはホルモン療法抵抗性の前立腺癌（ＨＲＰＣ）として、分類される（Ｋｙｐｉａｎｏｕ，Ｎ．Ｗｏｒｌｄ  Ｊ．Ｕｒｏｌ．  １２：２９９−３０３（１９９４）およびＢｏｓｌａｎｄ，Ｍ．Ｃ．，Ｂｅｒｔｉｎｏ，Ｊ．Ｒ．（編）  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，第二巻，ｐｐ．１２８３−９６，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９９７））。アンドロゲン非依存的な状態への進行の原因である機構については、分かりにくいままであるが、この機構は、抗アポトーシスタンパク質  ＢＣＬ−２の過剰発現、または、プロアポトーシスタンパク質  ｐ５３の異常と関連する。アポトーシス耐性にも関わらず、アンドロゲン非依存的な前立腺癌細胞は、アポトーシスに必要とされる基本的な機構をまだ保持している。にもかかわらず、ＨＲＰＣは、現在利用できる化学療法レジメンは、ＨＲＰＣを有する患者の生存に対して制限的な影響しか有さないので、常に、致死性の結果を有する（Ｋｏｚｌｏｗｓｋｉ，Ｊ．Ｍ．ら  Ｕｒｏｌ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  ＡＭ．１８：１５−２４（１９９１），およびＴＡＮＮＯＣＬＣ，Ｉ．Ｆ．  Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３：１０１３−２１（１９８５））。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ＨＲＰＣのようなホルモン療法抵抗性の癌を有する患者においてアポトーシスを誘導し得る薬物に対する、長きにわたり感じられていた必要性がある。これらの薬物は、アンドロゲン応答性、ＢＣＬ−２レベル、およびｐ５３の機能的な状態に非依存的に機能すべきである。これらの薬物は、正常な細胞は悪影響を受けないが、癌細胞においてアポトーシスを誘導する高い能力を有するべきである。これらの薬物はさらに、ヒトにおいて十分に許容されるべきであり、あったとしても少しの副作用しか有すべきではない。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の要旨）
増殖性の細胞（癌細胞が挙げられるが、これに限定されない）にアポトーシスを誘導するために有用な化合物を、式Ｉにおいて与える：
【０００７】
【化８】
2005528384.tif 000002
ここで、Ｒ１は、水素結合を形成し得る基であり、Ｒ２は、高い電子密度を有する基であり、Ａｒは、アリール基である。好ましくは、Ａｒは、疎水性を与える１つ以上の置換基を有する。これは、その置換基は、非極性であり、および／または、立体効果を与える、すなわちこのアリール基をかさばるようにするためである。水素結合基Ｒ１は、好ましくはアミド、より好ましくはカルボキシアミドであり；Ｒ２は、高い電子密度を有する基、好ましくはアルキル基またはハロアルキル基、より好ましくはトリフルオロメチル基であり；そして、Ａｒは、フェニル、ビフェニル、ナフチル、アントリル、インドリル、ピロリル、およびフルオレニルから選択される。Ａｒ上の置換基は、ハロ、アジド、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アジドアルキル、アリール、アルキルアリール、ハロアリール、ハロアルキルアリール、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上のラジカルを含む。Ａｒのための好ましい基としては、２−ナフチル、４−ビフェニル、９−アントリル、２−フルオレニル、４−アジドフェニル、４−アジドメチルフェニル、４−（２−アジドエチル）フェニル、４−（３−アジドプロピル）フェニル、４−（４−アジドブチル）フェニル、４−（４−アジドフェニル）フェニル、４−（４−アジドメチルフェニル）フェニル、４−メチルフェニル、４−エチルフェニル、４−プロピルフェニル、４−ブチルフェニル、４−（２−ブロモエチル）フェニル、４−（３−ブロモプロピル）フェニル、４−（４−ブロモブチル）フェニル、４−（トリフルオロメチル）フェニル、４−（４−メチルフェニル）フェニル、４−（４−ブロモメチルフェニル）フェニル、４−（４−ブチルフェニル）フェニル、４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）フェニル、２−クロロフェニル、４−クロロフェニル、２，４−ジクロロフェニル、３，４−ジクロロフェニル、２，５−ジクロロフェニル、２，４−ジメチルフェニル、２，５−ジメチルフェニル、３，４−ジメチルフェニル、３，５−ジメチルフェニル、４−（４−クロロフェニル）フェニル、４−（３，５−ジクロロフェニル）フェニル、４−（２，３−ジクロロフェニル）フェニル、４−（３，５−ジメチルフェニル）フェニル、４−（２，４，５−トリクロロフェニル）フェニル、４−（４−トリフルオロメチルフェニル）フェニル、２−フェナントレニル、３−インドリル、２−ピロリル、および４−（ベンジル）フェニルが挙げられる。式Ｉの化合物は、哺乳動物、特にヒトにおいて、癌（白血病、非小細胞肺癌、結腸癌、ＣＮＳ癌、黒色腫、卵巣癌、腎臓癌、前立腺癌、膀胱癌、リンパ腫、および乳癌が挙げられるが、これらに限定されない）の発病を処置、阻害、および遅延させるために有用である。
【０００８】
本発明のさらなる化合物は、式ＩＩに対応する化合物である：
【０００９】
【化９】
2005528384.tif 000003
ここで、Ｒ３は、水素結合を形成し得る基である。Ｒ３は、好ましくは、カルボキシアミドおよびスルホアミドから選択されるアミドである。Ｒ４は、アルキルおよびハロアルキルから選択され、Ｒ４は、好ましくは、トリフルオロメチルである。Ａｒ’は、疎水性を与える１つ以上の置換基を好ましくは有する。これは、その置換基は、非極性であり、および／または、立体効果を与える、すなわちこのアリール基をかさばるようにするためである。Ａｒ’のための好ましい基としては、４−アジドフェニル、４−（２−アジドエチル）フェニル、４−（３−アジドプロピル）フェニル、４−（４−アジドブチル）フェニル、４−（４−アジドフェニル）フェニル、４−（４−アジドメチルフェニル）フェニル、２，５−ジメチルフェニル、４−プロピルフェニル、４−ブロモメチルフェニル、４−（２−ブロモエチル）フェニル、４−（３−ブロモプロピル）フェニル、４−（４−ブロモブチル）フェニル、４−（４−ブロモメチルフェニル）フェニル、４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）フェニル、9−アントリル、４−（４−ブチルフェニル）フェニル、４−（４−メチルフェニル）フェニル、４−（４−クロロフェニル）フェニル、４−（３，５−ジクロロフェニル）フェニル、４−（２，３−ジクロロフェニル）フェニル、４−（３，５−ジメチルフェニル）フェニル、４−（２，４，５−トリクロロフェニル）フェニル、４−（４−トリフルオロメチルフェニル）フェニル、２−フェナントレニル、３−インドリル、２−ピロリル、４−（ベンジル）フェニル、および２−フルオレニルが挙げられる。
【００１０】
式ＩＩの好ましい化合物としては、以下が挙げられる：４−［５−（４−アジドフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４［５−（４−（２−アジドエチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（３−アジドプロピル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（４−メチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（４−ブチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（４−アジドブチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（４−アジドフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（４−アジドメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（４−クロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（３，５−ジクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（２，３−ジクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（３，５−ジメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（２，４，５−トリクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（２−フェナントレニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（３−インドリル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（２−ピロリル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−ベンジルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−アジドフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（２−アジドエチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（３−アジドプロピル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−アジドブチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−アジドフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−L−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−アジドメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（２，５−ジメチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−プロピルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−ブロモメチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（２−ブロモエチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（３−ブロモプロピル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−ブロモブチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−ブロモメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（９−アントリル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（２−フルオレニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド４−［５−（４−（４−メチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−ブチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド４−［５−（４−（４−クロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（３，５−ジクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（２，３−ジクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（３，５−ジメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（２，４，５−トリクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカ��ボキシアミド；４−［５−（２−フェナントレニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（３−インドリル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（２−ピロリル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；および４−［５−（４−ベンジルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド。４−［５−（２−フェナントレニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミドが、式ＩＩの特に好ましい化合物である。
【００１１】
式ＩおよびＩＩの化合物は、増殖性の細胞（癌細胞が挙げられるが、これに限定されない）にアポトーシスを誘導する際に有用である。この化合物はさらに、哺乳動物、特にヒトにおいて、癌の発症を処置、阻害、および遅延するために有用である。これらの化合物が特によく機能する癌としては、白血病、非小細胞肺癌、結腸癌、ＣＮＳ癌、黒色腫、卵巣癌、腎臓癌、前立腺癌、膀胱癌、リンパ腫、および乳癌が挙げられるが、これらに限定されない。驚くべきことに、本発明の化合物は、Ｂｃｌ−２の発現レベルおよびｐ５３の機能状態から独立して、癌細胞にアポトーシスを誘導し得、これは、本発明の化合物が、ホルモン療法耐性前立腺癌のようなアンドロゲン非依存性である癌に対してさえも、強力であることを意味する。
【００１２】
従って、本発明は、望まない増殖性細胞（癌細胞が挙げられる）にアポトーシスを誘導するために有用な化合物に関する。本発明はまた、本発明の化合物を、望まない急速な細胞増殖によって特徴付けられる障害（癌が挙げられるが、これに限定されない）の発症を処置、予防、または遅延するために使用する方法にも関する。本発明はまた、本発明の化合物を、特定の種類の癌（白血病、非小細胞肺癌、結腸癌、ＣＮＳ癌、黒色腫、卵巣癌、腎臓癌、前立腺癌、膀胱癌、リンパ腫、および乳癌が挙げられるが、これらに限定されない）を処置するために使用する方法にも関する。さらに、アンドロゲン非依存性の癌の発症を処置、予防、および遅延する方法に関する。なおさらに、進行した前立腺癌を処置する方法に関する。
【００１３】
（発明の詳細な説明）
本発明は、望ましくない増殖性の細胞にアポトーシスを誘導するために有用な化合物、およびこれらの化合物を、このような処置を必要としている被験体中の望ましくない増殖性の細胞にアポトーシスを誘導するために使用する方法を提供する。この方法は、このような処置を必要としている被験体を、本発明の化合物またはその誘導体、あるいは薬学的に受容可能なそれらの塩の治療的有効量で処置する工程を包含する。
【００１４】
本発明の化合物および方法は、これらには限られないが、癌の発症を処置、阻害、または遅延するために有用である。この化合物および方法はまた、前癌およびその他の望ましくない細胞増殖の発生を処置する際にも有用である。本発明に従って、式ＩおよびＩＩの化合物は、望ましくない細胞増殖に罹患している被験体に投与される。本化合物および方法は、癌（白血病、非小細胞肺癌、結腸癌、ＣＮＳ癌、黒色腫、卵巣癌、腎臓癌、前立腺癌、膀胱癌、リンパ腫、および乳癌が挙げられるが、これらに限定されない）を処置するために有用である。さらに、それらは、前癌を有する個体、およびこれらの疾患に対する素因を有する個体におけるこれらの癌の予防において有用である。
【００１５】
用語「処置」は、正常な細胞への最小の破壊的効果を有する、望ましくない増殖性の細胞の部分的または全体的破壊を含む。本発明に従って、細胞レベルでの処置の所望される機構は、アポトーシスである。
【００１６】
用語「予防」は、臨床的に明らかな望まない細胞増殖の発生をときに予防すること、または、リスクを有する個体において前臨床的に明らかな段階の望まない急速な細胞増殖の発生を予防することのいずれかを含む。また、悪性細胞の転移の予防、あるいは、悪性細胞の進行を止めるか、または元に戻すことも、この定義に含まれることが意図される。これは、前癌および癌を発症するリスクを有する人の予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）処置を含む。
【００１７】
用語「治療的に有効」および「薬学的に有効」は、代表的には代替的な療法に関連する副作用を避けながら、各薬剤それ自体の処置による疾患の重篤度および発症頻度の改善の目的を達成する各薬剤の量を定めることを意図する。
【００１８】
処置の目的としての用語「被験体」は、望まない急速な細胞増殖によって特徴付けられる障害を有する、任意のヒトまたは動物の被験体を含む。このような疾患としては、癌および前癌が挙げられるが、これらに限定されない。予防する方法について、被験体は、任意のヒトまたは動物の被験体であり、好ましくは、癌のような望まない急速な細胞増殖によって特徴付けられる障害を得るリスクのあるヒト被験体である。被験体は、発癌性因子への曝露、望まない急速な細胞増殖によって特徴付けられる障害に対して遺伝的な素因を有することなどに起因するリスクを有し得る。ヒトの処置に対して有用であることに加えて、本発明の化合物はまた、哺乳動物（ペットおよび家畜（例えば、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヒツジ、およびブタが挙げられるが、これらに限定されない））の獣医学的な処置においても有用である。好ましくは、被験体は、ヒトを意味する。
【００１９】
本発明の化合物は、多数の異なる機構によって細胞死を引き起こし得るが、本発明の化合物の１つの局面は、それらが望まない増殖性の細胞にアポトーシスを誘導し得るということである。用語「アポトーシス」とは、プログラム細胞死のプロセスをいう。全ての人において、数百、数千の古い細胞または損傷した細胞が、アポトーシスのプロセスによって毎日死に、そして置き換えられて、体内の生存する細胞の一定数を維持するように盛衰する。古い細胞および損傷した細胞は、標的細胞に自らを破壊するように細胞表面上で誘導するシグナルに応答して死ぬ。アポトーシスは、炎症（膨らみ、赤み、痛みおよび圧痛を含む）を引き起こす、壊死のような他の細胞死とは区別される。アポトーシスは、このような反応を刺激しない。アポトーシスでは、細胞がしぼみ、壊れて断片となり、そしてその内容物が、炎症を誘導しない方法で速やかに除去される。これらの理由から、癌細胞のような急速に増殖する細胞においては、壊死よりもアポトーシスを誘導することが非常に望ましい。しかし、いくつかの癌細胞における変異によって、これらの細胞はアポトーシスに対して耐性を得る。式ＩおよびＩＩの化合物は、変異のために、他の方法ではアポトーシスに対して耐性である癌細胞においてでさえ、アポトーシスを誘導することが見出された。アポトーシスは、顕微鏡観察のような当該分野で公知の方法によって、他の処置機構とは区別され得る。
【００２０】
用語「増殖性細胞」、「増殖性の細胞」、「急速に増殖する細胞」、「望まれない増殖性の細胞」、「望まれない急速に増殖する細胞」、「望まない増殖性の細胞」、「望まない急速に増殖する細胞」などは、癌細胞、前癌細胞、および被験体中の他の異常な急速に分裂する細胞をいう。
【００２１】
本明細書で使用される場合、用語「ＣＯＸ−２阻害」とは、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）酵素を効果的に阻害し得る化合物であり、一般的にＩＣ５０値（５０％阻害のための濃度）として表現される。不幸なことに、ＣＯＸ−２阻害剤は、非常に重篤な胃腸毒性（ＧＩ潰瘍、大量の出血、潰瘍の形成、および胃、小腸、または大腸の穿孔を含む）を有し、時々死に至ることが見出されている。消化性潰瘍および／または胃腸潰瘍の以前の病歴を有する患者、ならびに抗凝固剤などの特定の投薬を受けているか、または喫煙している患者、ならびに高齢または一般的に健康状態が良くない患者にとっては、これらのリスクは非常に大きい。さらに、これらのリスクは、処置が進行するにつれて増大する。これらのリスクのために、本発明の化合物は、ＣＯＸ−２阻害的ではないことが望ましい。従って、本発明の化合物は、ＣＯＸ−２に対して１００μＭ以上のＩＣ５０を有することが、非常に望ましい。
【００２２】
本発明の化合物は、式Ｉで示される：
【００２３】
【化１０】
2005528384.tif 000004
ここで、Ｒ１は、水素結合を形成し得る基であり、Ｒ２は、好ましくは、高い電子密度を有する基であり、そしてＡｒは、好ましくは、かさ高いアリール基である。水素結合基Ｒ１は、好ましくはアミドであり、最も好ましくはカルボキシアミドである。Ｒ２は、好ましくは、アルキルラジカルまたはハロアルキルラジカルであり、より好ましくは、Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ４のハロアルキル、なお好ましくは、Ｒ２は、トリフルオロメチルである。Ａｒは、フェニル、ビフェニル、ナフチル、アントリル、およびフルオレニルから選択されるアリールラジカルであり、Ａｒは、好ましくは、およびハロ、アジド、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４アジドアルキル、アリール、アルキルアリール、ハロアリール、ハロアルキルアリール、およびそれらの組み合わせから選択される１つ以上のラジカルによって、１つ以上の置換可能な位置で置換されている。
【００２４】
本発明の化合物の好ましいクラスは、Ｒ１が、カルボキシアミドであり、Ｒ２が、トリフルオロメチルであり、そして、Ａｒが、２−ナフチル、４−ビフェニル、９−アントリル、２−フルオレニル、４−アジドフェニル、４−アジドメチルフェニル、４−（２−アジドエチル）フェニル、４−（３−アジドプロピル）フェニル、４−（４−アジドブチル）フェニル、４−（４−アジドフェニル）フェニル、４−（４−アジドメチルフェニル）フェニル、４−メチルフェニル、４−エチルフェニル、４−プロピルフェニル、４−ブチルフェニル、４−（２−ブロモエチル）フェニル、４−（３−ブロモプロピル）フェニル、４−（４−ブロモブチル）フェニル、４−（トリフルオロメチル）フェニル、４−（４−メチルフェニル）フェニル、４−（４−ブロモメチルフェニル）フェニル、４−（４−ブチルフェニル）フェニル、４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）フェニル、２−クロロフェニル、４−クロロフェニル、２，４−ジクロロフェニル、３，４−ジクロロフェニル、２，５−ジクロロフェニル、２，４−ジメチルフェニル、２，５−ジメチルフェニル、３，４−ジメチルフェニル、３，５−ジメチルフェニル、４−（４−クロロフェニル）フェニル、４−（３，５−ジクロロフェニル）フェニル、４−（２，３−ジクロロフェニル）フェニル、４−（３，５−ジメチルフェニル）フェニル、４−（２，４，５−トリクロロフェニル）フェニル、４−（４−トリフルオロメチルフェニル）フェニル、２−フェナントレニル、３−インドリル、２−ピロリル、および４−（ベンジル）フェニルから選択される式Ｉの化合物である。当業者は、使用され得る他の置換アリールラジカルを認識する。
【００２５】
式Ｉの特定の化合物のファミリーは、以下の化合物およびその薬学的に受容可能な塩からなる：４−［５−（２−ナフチル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−ビフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（９−アントリル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（２−フルオレニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−アジドフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−アジドメチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（２−アジドエチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（３−アジドプロピル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−アジドブチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−アジドフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−アジドメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−メチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−エチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−プロピルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−ブチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（２−ブロモエチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（３−ブロモプロピル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−ブロモブチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−メチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−ブロモメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−ブチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（２−クロロフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−クロロフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（２，４−ジクロロフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（３，４−ジクロロフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（２，５−ジクロロフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（２，４−ジメチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（２，５−ジメチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（３，４−ジメチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（３，５−ジメチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−クロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（３，５−ジクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（２，３−ジクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（３，５−ジメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（２，４，５−トリクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（２−フェナントレニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（３−インドリル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（２−ピロリル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；および４−［５−（４−（ベンジル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド。
【００２６】
本発明の第２のクラスの化合物は、式ＩＩの化合物である：
【００２７】
【化１１】
2005528384.tif 000005
ここで、Ｒ３は、水素結合を形成し得る基であり、Ｒ４は、好ましくは、高い電子密度を有する基であり、そしてＡｒは、好ましくは、かさ高いアリール基である。Ｒ３は、好ましくは、カルボキシアミドおよびスルホンアミドから選択される。Ｒ４は、アルキルおよびハロアルキルから選択され、好ましくはＣ１〜Ｃ４アルキルまたはＣ１〜Ｃ４ハロアルキルであり、なおより好ましくはトリフルオロメチルである。Ａｒ’は、４−アジドフェニル、４−（２−アジドエチル）フェニル、４−（３−アジドプロピル）フェニル、４−（４−アジドブチル）フェニル、４−（４−アジドフェニル）フェニル、４−（４−アジドメチルフェニル）フェニル、２，５−ジメチルフェニル、４−プロピルフェニル、４−ブロモメチルフェニル、４−（２−ブロモエチル）フェニル、４−（３−ブロモプロピル）フェニル、４−（４−ブロモブチル）フェニル、４−（４−ブロモメチルフェニル）フェニル、４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）フェニル、９−アントリル、４−（４−ブチルフェニル）フェニル、４−（４−メチルフェニル）フェニル、４−（４−クロロフェニル）フェニル、４−（３，５−ジクロロフェニル）フェニル、４−（２，３−ジクロロフェニル）フェニル、４−（３，５−ジメチルフェニル）フェニル、４−（２，４，５−トリクロロフェニル）フェニル、４−（４−トリフルオロメチルフェニル）フェニル、２−フェナントレニル、３−インドリル、２−ピロリル、４−（ベンジル）フェニル、および２−フルオレニルから選択される。
【００２８】
式ＩＩ内の特に興味深い特定の化合物のファミリーは、以下の化合物ならびにそれらの誘導体、および薬学的に受容可能な塩からなる：４−［５−（４−アジドフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（２−アジドエチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（３−アジドプロピル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（４−アジドブチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（４−ブチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（４−メチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（４−アジドフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（４−アジドメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（４−クロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（３，５−ジクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（２，３−ジクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（３，５−ジメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（２，４，５−トリクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（２−フェナントレニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（３−インドリル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（２−ピロリル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−ベンジルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド；４−［５−（４−アジドフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（２−アジドエチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（３−アジドプロピル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−アジドブチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−アジドフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−アジドメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（２，５−ジメチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−プロピルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（２−ブロモエチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−ブチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−メチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（３−ブロモプロピル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−ブロモブチル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−ブロモメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（９−アントリル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（２−フルオレニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−クロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（３，５−ジクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（２，３−ジクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（３，５−ジメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（２，４，５−トリクロロフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（２−フェナントレニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（３−インドリル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；４−［５−（２−ピロリル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド；および４−［５−（４−ベンジルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンカルボキシアミド。
【００２９】
誘導体は、式ＩおよびＩＩの化合物に構造的に関連するか、または、実質的に等価の活性（その誘導体の、実質的なＣＯＸ−２阻害を伴うことなく、急速に増殖する細胞にアポトーシスを誘導する能力によって測定される）を有する任意の化合物を含むことが意図される。例示の様式によって、このような化合物としては、それらのプロドラッグが挙げられ得るが、これらに限定されない。このような化合物は、例えば、代謝機構などによって、インビボで形成され得る。
【００３０】
本発明はまた、望ましくない急速に増殖する細胞（癌細胞が挙げられるが、これに限定されない）にアポトーシスを誘導する治療法に関する。本方法は、障害を有するか、または急速に増殖する細胞を伴う障害の素因を有する被験体に、治療的有効量の式Ｉまたは式ＩＩの化合物を投与する工程を包含する。
【００３１】
単独でか、または他の用語と共に（例えば、ハロアルキル、またはアルキルアリール）、アルキルという用語を使用する場合、それは、Ｃ１〜Ｃ１０の直鎖状かまたは分岐したアルキルラジカルを含み、例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔｅｒｔ−ブチルなどが挙げられる。用語「ハロアルキル」は、１つ以上のハロラジカルで置換された、Ｃ１〜Ｃ１０の直鎖状または分岐したアルキルラジカルを含む。ハロアルキルラジカルのいくつかの例としては、トリフルオロメチル、１，２−ジクロロエチル、３−ブロモプロピルなどが挙げられる。用語「ハロ」は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩから選択されたラジカルを含む。本発明のアルキルラジカルの置換基はまた、アジド（例えば、アジドメチル、２−アジドエチル、３−アジドプロピルなど）のような他の基によって置換され得る。
【００３２】
用語「アリール」は、単独でか、または他の用語と組合わせて（例えば、アルキルアリール、ハロアリール、ハロアルキルアリールなど）使用され、芳香ラジカル（フェニル、ビフェニル、およびベンジルなど）および融合アリールラジカル（例えば、ナフチル、アントリル、フェナントレニル、フルオレニル、およびインデニルなど）を含む。用語「アリール」はまた、芳香環中に炭素および１つ以上のヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、またはＳ）を有するアリールである「ヘテロアリール」を含む。ヘテロアリールの例としては、インドリル、ピロリルなどが挙げられる。「アルキルアリール」または「アリールアルキル」とは、アルキルで置換したアリール基（例えば、ブチルフェニル、プロピルフェニル、エチルフェニル、メチルフェニル、３，５−ジメチルフェニル、ｔｅｒｔ−ブチルフェニルなど）をいう。「ハロアリール」とは、１つ以上の置換可能な位置が、ハロラジカルで置換されている、アリールラジカルをいい、例としては、フルオロフェニル、４−クロロフェニル、２，５−クロロフェニルなどが挙げられる。「ハロアルキルアリール」とは、ハロアルキル置換基を有するアリールラジカルをいう。ハロアルキルアリールの例としては、ブロモメチルフェニル、４−ブロモブチルフェニルなどのラジカルが挙げられる。カルボキシアミドとは、−ＣＯＮＨ２という基をいい、そしてスルホンアミドとは、−ＳＯ２ＮＨ２という基をいう。
【００３３】
それらの薬学的に受容可能な塩もまた、式ＩおよびＩＩの化合物のファミリーに含まれる。語句「薬学的に受容可能な塩」は、アルカリ金属塩を形成するため、および遊離酸または遊離塩基の付加塩を形成するために一般に使用される塩を含む。薬学的に受容可能である場合、その塩の性質は重要ではない。式ＩおよびＩＩの化合物の適した薬学的に受容可能な酸付加塩は、無機酸から、または有機酸から調製され得る。このような無機酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、炭酸、硫酸、およびリン酸である。適切な有機酸は、有機酸の脂肪族、シクロ脂肪族、芳香族、アルリファティック（ａｒａｌｉｐｈａｔｉｃ）、複素環、カルボン酸、およびスルホン酸の有機酸クラスから選択され得、その例としては、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、グルコロン酸（ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、マレイン酸、フマル酸、ピルビン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、安息香酸、アントラニル酸、メシル酸（ｍｅｓｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）、サリチル酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、フェニル酢酸、マンデル酸、アンボン酸（ａｍｂｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、パモイック酸（ｐａｍｏｉｃ  ａｃｉｄ）、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パントテン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、スルファニル酸、シクロへキシルアミノスルホン酸、ステアリン酸、アルゲン酸（ａｌｇｅｎｉｃ  ａｃｉｄ）、β−ヒドロキシブチル酸（β−ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ）、粘液酸、およびガラクツロン酸が挙げられる。式Ｉおよび式ＩＩの化合物の適切な薬学的に受容可能な塩基付加塩としては、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、および亜鉛からなる金属塩が挙げられる。あるいは、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ−メチルグルカミン）およびプロカインからなる有機塩が、式Ｉおよび式ＩＩの化合物の塩基付加塩を形成するために使用され得る。これらの全ての塩は、従来の手段を使用して、例えば、適切な酸または塩基を式Ｉおよび式ＩＩの化合物と反応させることによって、式Ｉおよび式ＩＩの対応する化合物から調製され得る。
【００３４】
本明細書で開示される全ての例は、単なる例示の目的のみであり、いかなる様式でも特許請求される発明を制限することを意味しない。
【００３５】
（一般的合成手順）
式Ｉのカルボキシアミド化合物の合成についての一般的スキームを下に示す。詳細な合成を以下に示す。
【００３６】
【化１２】
2005528384.tif 000006
ａ（ａ）２５％  ＮａＯＣＨ３／ＣＨ３ＯＨ、ＭＴＢＥ、ＣＦ３ＣＯＯＣ２Ｈ５；
（ｂ）（４−カルバモイルフェニル）ヒドラジン−ＨＣｌ、Ｃ２Ｈ５ＯＨ、還流
（  ４−［５−（４−クロロフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼン−カルボキシアミド  ）
表題の化合物を、２工程の合成によって合成した。（工程ａ）  ４，４，４−トリフルオロ−１−（４−クロロフェニル）ブタン−１，３−ジオンの調製を、以下のようにして行った。５ｍＬのメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）中のエチルトリフルオロアセテート（１．０８ｇ、７．６１ｍｍｏｌ）溶液にメタノール（１、８ｍＬ）中の２５％のナトリウムメトキシドを２分間にわたり添加した。２ｍＬのＭＴＢＥ中の４−クロロアセトフェノン（１ｇ，６．４６ｍｍｏｌ）溶液をこの混合物に５分間にわたって滴加した。１６時間の混合後、３Ｎ  ＨＣｌ（３．４ｍＬ）を添加した。有機層を収集し、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、そして濃縮して黄橙色の固体を得た。へキサンからの再結晶化により、ジオン（１．１８ｇ、８６％）を得た。（工程ｂ）  （４−カルバモイルフェニル）ヒドラジン塩酸塩（２２８ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのエタノール中の上述のジオン（３００ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）の攪拌している溶液に添加した。この混合物を２４時間還流下で攪拌し、室温まで冷却し、そして濃縮して乾燥させた。この残留物を酢酸エチルに溶解し、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして濃縮して明るい茶色の固体を得た。酢酸エチルとへキサンからの再結晶化により、表題の化合物を得た（３５０ｍｇ、８０％）。
【００３７】
【化１３】
2005528384.tif 000007
（  ４−［５−（２，４−ジクロロフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼン−カルボキシアミド  ）
上述の２工程の手順を使用して、表題の化合物を２’，４’−ジクロロアセトフェノンから合成した（全体収率  ５２％）。
【００３８】
【化１４】
2005528384.tif 000008
（  ４−［５−（２，５−ジクロロフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼン−カルボキシアミド  ）
上述の２工程の手順を使用して、表題の化合物を２’，５’−ジクロロアセトフェノンから合成した（全体収率  ６０％）
【００３９】
【化１５】
2005528384.tif 000009
（  ４−［５−（３，４−ジクロロフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼン−カルボキシアミド  ）
上述の２工程の手順を使用して、表題の化合物を３’，４’−ジクロロアセトフェノンから合成した。（全体収率  ５５％）
【００４０】
【化１６】
2005528384.tif 000010
（  ４−［５−（４−メチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼン−カルボキシアミド  ）
上述の２工程の手順を使用して、表題の化合物を４’−メチルアセトフェノンから合成した。（全体収率  ６５％）
【００４１】
【化１７】
2005528384.tif 000011
（  ４−［５−（４−トリフルオロメチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］べンゼン−カルボキシアミド  ）
上述の２工程の手順を使用して、表題の化合物を４’−トリフルオロメチルアセトフェノンから合成した。（全体収率  ５３％）
【００４２】
【化１８】
2005528384.tif 000012
（  ４−［５−（４−エチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼン−カルボキシアミド  ）
上述の２工程の手順を使用して、表題の化合物を４’−エチルアセトフェノンから合成した。（全体収率  ４４％）
【００４３】
【化１９】
2005528384.tif 000013
（  ４−［５−（２，４−ジメチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−ｌＨ−ピラゾール−１−イル］ベンゼン−カルボキシアミド  ）
上述の２工程の手順を使用して、表題の化合物を２’，４’−ジメチルアセトフェノンから合成した。（全体収率  ６２％）
【００４４】
【化２０】
2005528384.tif 000014
（  ４−［５−（２，５−ジメチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼン−カルボキシアミド  ）
上述の２工程の手順を使用して、表題の化合物を２’，５’−ジメチルアセトフェノンから合成した。（全体収率  ５８％）
【００４５】
【化２１】
2005528384.tif 000015
（  ４−［５−（３，５−ジメチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼン−カルボキシアミド  ）
上述の２工程の手順を使用して、表題の化合物を３’，５’−ジメチルアセトフェノンから合成した。（全体収率  ５６％）
【００４６】
【化２２】
2005528384.tif 000016
式ＩＩのスルホンアミド化合物の合成についての一般的スキームは、図１に示される。詳細な合成は以下の通りである。
【００４７】
（  ４−［５−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）フェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミドの合成  ）
表題の化合物を３工程の合成によって合成した。（工程ａ）  ４−（４−トリフルオロメチルフェニル）アセトフェノンの調製を以下のようにして行った。４−ブロモベンゾトリフルオライド（１．０ｇ、４．４ｍｍｏｌ）と４−アセチルフェニルボロン酸（０．７３９ｇ、４．４ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１．９７ｍｇ）、Ｋ２ＣＯ３（１．５４ｇ）、Ｂｕ４ＮＢｒ（１．４３ｇ）およびＨ２Ｏ（７ｍＬ）を添加し、この混合物をアルゴン下で３０分間攪拌し、７０℃まで温め、そして１時間攪拌を続けた。この溶液を室温まで冷却し、水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。この中間体をシリカゲルクロマトグラフィーで精製した（収率８６％）。（工程ｂ）  冷却したＣＨ２Ｃl２中のエチルトリフルオロアセテート（１.０ｇ、７.０４ｍｍｏｌ）溶液に、ＮａＨ（３３８ｍｇ、１４．１ｍｍｏｌ）を添加し、１５分間攪拌し、次いで、ＣＨ２Ｃl２中の４−（４−トリフルオロメチルフェニル）アセトフェノン（１．８６ｇ、７．０４ｍｍｏｌ）溶液を添加した。この混合物を室温で６時間攪拌し、シリカゲルクロマトグラフィーにより４，４，４−トリフルオロ−１−（４−（４−トリフルオロメチルフェニル）フェニル）ブタン−１，３−ジオン（２．１ｇ、収率８３％）を得た。（工程ｃ）  ２０ｍＬの酢酸エチル中の上記のジオン（３２０ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）の攪拌している溶液に（４−スルファモイルフェニル）ヒドラジン塩酸塩（２００ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を加熱して還流し、２４時間攪拌した。室温まで冷却した後で、この反応混合物を真空で濃縮した。残存物を酢酸エチルに溶解し、水とブラインで洗浄した。生成物をクロマトグラフィーで精製し、表題の化合物を得た（２９０ｍｇ、収率７１％）。
【００４８】
（  ４−［５−（４−ブチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミドの合成  ）
表題の化合物を２工程の合成によって合成した。（工程ａ）  冷却したＣＨ２Ｃ１２中のエチルトリフルオロアセテート（１．０ｇ、７．０４ｍｍｏｌ）溶液に、ＮａＨ（３３８ｍｇ、１４．１ｍｍｏｌ）を添加し、１５分間攪拌し、次いで、ＣＨ２Ｃ１２中の４−ブチルアセトフェノン（１．２３ｇ、７．０４ｍｍｏｌ）溶液を添加した。この混合物を室温で６時間攪拌した。シリカゲルクロマトグラフィーにより、４，４，４−トリフルオロ−１−（４−ブチルフェニル）ブタン−１，３−ジオン（１．６３ｇ、収率８５％）を得た。（工程ｂ）  （４−スルファモイルフェニル）ヒドラジン塩酸塩（２００ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）を攪拌している２０ｍＬの酢酸エチル中の上述のジオン（２４４ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）に添加し、この混合物を加熱し、還流して、２４時間攪拌した。室温まで冷却した後で、この反応混合物を真空で濃縮した。残留物を酢酸エチルに溶解し、水およびブラインで洗浄した。シリカゲルクロマトグラフィーにより、表題の化合物を得た（２４６ｍｇ、収率６５％）。
【００４９】
（  ４−［５−（２−フェナントレニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミドの合成  ）
表題の化合物をマルチグラム（ｍｕｌｔｉｇｒａｍ）スケールで、以下のスキームに従って合成した：
【００５０】
【化２３】
2005528384.tif 000017
ＮａＨ（１．２当量）の存在下での２−アセチルフェナントレン（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ａ１９２０−２）とエチルトリフルオロアセテート（１.２当量）とのクライゼン縮合により、収率９５％で１，３−ジカルボニル付加物を得た。（４−スルファモイルフェニル）ヒドラジン塩酸塩との反応によって、収率６５％で標的分子を得た。第２の工程で、フェニルヒドラジンのＨＣｌ塩を使用して、優先的に１，５−ジアリールピラゾールを得、１，３−ジアリールピラゾールアイソマーの形成を妨げた。（４−スルファモイルフェニル）ヒドラジン塩酸塩は、スルフィアミド対応物から高い収量で得た。個々の中間体および最終生成物の同定と純度は、１Ｈ  ＮＭＲ、高解像度質量分析、およびＨＰＬＣ分析によって確認した。
【００５１】
精製に関して、１，３−ジカルボニル中間体をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、最終生成物を反応混合物からの結晶化によって９８％よりも大きい純度で単離し得る。全体的に、合成と精製の手順は、簡単であり、大規模な生産に適合しやすい。
【実施例】
【００５２】
（実施例１〜１３）
以下の手順を用いて、サンプル１〜１３を、アポトーシスを誘導する能力にについて試験した。結果を化合物についてのＩＣ５０と共に表１に列挙する。
【００５３】
（アポトーシスについての分析）
（アポトーシスＥＬＩＳＡ）
アポトーシスの誘導もまた、製造者の指示に従って「細胞死検出ＥＬＩＳＡ」アッセイ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を用いて評価した。この試験は、アポトーシス死を誘導した後で、モノヌクレオソームおよびオリゴヌクレオソームの形態の細胞質のヒストン結合ＤＮＡフラグメントの定量的測定に基づく。簡潔には、ＰＣ−３細胞（２．５×１０６）を、実験の２４時間前にＴ−７５フラスコに入れた。細胞を５ｍＬの無血清ＲＰＭＩ１６４０培地で２回洗浄し、次いで、異なる濃度の試験物質またはＤＭＳＯビヒクルで異なる時間間隔の間処理した。浮かんでいる細胞および接着している細胞の両方を収集し、そして、１０４個の細胞と等価の細胞溶解液をＥＬＩＳＡ分析のために使用した。
【００５４】
本明細書に記載される全ての化合物を、３つの別の細胞系統（アンドロゲン依存性ＬＮＣａＰ（ｐ５３＋／＋）、アンドロゲン非依存性ＰＣ−３（ｐ５３−／−）およびＢｃｌ−２過剰発現ＰＣ−３（ＰＣ−３／Ｂｃｌ−２）を含む）においてアポトーシス死を誘導する能力について評価した。個々の化合物の能力は、指示する濃度で５０％のアポトーシス死を生じさせるために必要な時間を示すＴ１／２として表した。これらの細胞系列を用いて得られた結果はほとんど同じであり、これは、アポトーシスの誘導が、アンドロゲン感受性、ｐ５３の機能的状態、およびＢｃｌ−２の発現レベルに非依存的であったことを示す。
【００５５】
【表１−１】
2005528384.tif 000018
【００５６】
【表１−２】
2005528384.tif 000019
（実施例１４−７１）
本発明の化合物を、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｐｒｏｇｒａｍによって、以下の細胞系統について試験した。
【００５７】
実施例１４〜１９  白血病
ＣＣＲＦ−ＣＥＭ  
ＨＬ−６０
Ｋ−５６２  
ＭＯＬＴ−４  
ＲＰＭＩ−８８２６  
ＳＲ
実施例２０〜２８  非小細胞肺癌  
Ａ５４９／ＡＴＣＣ  
ＥＫＶＸ  
ＨＯＰ−６２  
ＨＯＰ−９２  
ＮＣＩ−Ｈ２２６  
ＮＣＩ−Ｈ２３  
ＮＣＩ−Ｈ３２２Ｍ  
ＮＣＩ−Ｈ４６０  
ＮＣＩ−５２２  
実施例２９〜３４  結腸癌  
ＣＯＬＯ  ２０５  
ＨＣＴ−１１６  
ＨＣＴ−１５  
ＨＴ２９  
ＫＭ１２  
ＳＷ−６２０  
実施例３５〜４０  ＣＮＳ癌  
ＳＦ−２６８  
ＳＦ−２９５  
ＳＦ−５３９  
ＳＮＢ−１９  
ＳＮＢ−７５  
Ｕ２５１  
実施例４１〜４７  黒色腫  
ＬＯＸ  ＩＭＶＩ  
ＭＡＬＭＥ−３Ｍ  
Ｍ１４  
ＳＫ−ＭＥＬ−２  
ＳＫ−ＭＥＬ−５  
ＵＡＣＣ−２５７  
ＵＡＣＣ−６２  
実施例４８〜５３  卵巣癌  
ＩＧＲＯＶ１  
ＯＶＣＡＲ−３  
ＯＶＣＡＲ−４  
ＯＶＣＡＲ−５  
ＯＶＣＡＲ−８  
ＳＫ−ＯＶ−３  
実施例５４〜６１  腎臓癌  
７８６−０  
Ａ４９８  
ＡＣＨＮ  
ＡＫＩ−１  
ＲＸＦ  ３９３  
ＳＮ１２Ｃ 
ＴＫ−１０  
ＵＯ−３１  
実施例６２〜６３  前立腺癌  
ＰＣ−３  
ＤＵ−１４５  
実施例６４〜７１  乳癌  
ＭＣＦ−７  
ＮＣＩ／ＡＤＲ−ＲＥＳ  
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１／ＡＴＣＣ  
ＨＳ  ５７８Ｔ  
ＭＤＡ−ＭＢ−４３５  
ＭＤＡ−Ｎ
ＢＴ−５４９  
Ｔ−４７Ｄ
本発明は、望ましくない急速に増殖する細胞に、例えば、このような処置を必要とする被験体における癌の発症を処置、予防、または遅延するために、アポトーシスを誘導するための薬学的組成物を含む。薬学的組成物は、少なくとも１種類の薬学的に受容可能なキャリア、アジュバント、または希釈剤（本明細書では、集合的に「キャリア材料」という）、および所望の場合には、他の活性成分と組合わせて、治療的有効量の式ＩまたはＩＩの化合物、あるいはその薬学的に受容可能な塩を含む。本発明の活性化合物は、当業者に公知の任意の適切な経路によって、好ましくはこのような経路に適合した薬学的組成物の形態で、および意図する処置について有効な用量で投与され得る。例えば、活性化合物および活性組成物は、経口投与、脈菅内投与、腹腔内投与、鼻腔内投与、気管支内投与、皮下投与、筋肉内投与または局所投与（エアロゾルを含む）され得る。いくつかの被験体については、全身投与ではなく、局所投与が好ましい。液体ビヒクル内への処方が、生物利用性を増大させるために使用され得る。
【００５８】
本発明の投与は、予防目的または処置目的のいずれかのためであり得る。本明細書で使用される方法および組成物は、単独で、または、望まない細胞の急速な増殖によって特徴付けられる障害の予防または処置において当業者に公知のさらなる治療剤と組合わせて使用され得る。あるいは、本明細書で記載される方法および組成物は、付属的療法として使用され得る。例として、本発明のアポトーシス誘導性化合物は、単独で、あるいは他の抗新生物薬剤、または他の成長阻害薬剤または他の薬物または栄養分と組合わせて、投与され得る。
【００５９】
商業的使用、臨床的評価、および前臨床的開発に利用可能な抗新生物薬剤は多く存在し、癌または、細胞の急速な増殖によって特徴付けられる他の障害の多剤併用化学療法による処置のために選択され得る。このような抗新生物薬剤は、いくつかの主要なカテゴリー、すなわち、抗生物質型薬剤、アルキル化薬剤、抗代謝産物薬剤、ホルモン薬剤、免疫学的薬剤、インターフェロン型薬剤、および混合薬剤のカテゴリーに入る。あるいは、ＭＭＰ−１３阻害剤（バチアスタット（ｂａｔｉａｓｔａｔ）、マリマスタット（ｍａｒｉｍａｓｔａｔ）、Ａｇｏｕｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ＡＧ−３３４０、およびＲｏｃｈｅ  ＲＯ−３２−３５５５が挙げられる）のようなメタロマトリクス  プロテアーゼ  インヒビター（ＭＭＰ）またはα１’β３阻害剤などの他の抗新生物薬剤が使用され得る。併用療法において使用され得る適切な薬剤は、当業者によって認識される。同様に、併用療法が望ましい場合、当業者に公知の放射線防護活性の薬剤もまた使用され得る。
【００６０】
語句「補助療法」（または「併用療法」）は、本発明の化合物と１種類以上の他の薬学的薬剤の使用を定義している場合、薬物の併用の有効な効果を提供する治療レジメンにおいて、連続的な様式での各薬剤の投与を含むことが意図され、同様に、実質的に同時の様式（例えば、固定した比のこれらの活性薬剤を有する１回の処方として、または複数回の各薬剤の別個の処方として）でのこれらの薬剤の同時投与を含むことも意図される。
【００６１】
経口投与について、薬学的組成物は、例えば、錠剤、カプセル、懸濁液または液体の形態であり得る。薬学的組成物は、好ましくは、特定の量の活性成分を含む投薬単位の形態で製造される。このような投薬単位の例は、カプセル、錠剤、粉末、顆粒または懸濁液であり、従来の添加物（例えば、ラクトース、マンニトール、コーンスターチまたはポテトスターチ）を有する；結合剤（例えば、結晶セルロース、セルロース誘導体、アカシア、コーンスターチまたはゼラチン）を有する；崩壊剤（ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｏｒ）（例えば、コーンスターチ、ポテトスターチまたは、ナトリウムカルボキシメチル−セルロース）を有する；および潤滑剤（例えば、タルクまたはステアリン酸マグネシウム）を有する。活性成分はまた、組成物としての注射により投与され得、ここで、例えば、生理食塩水、ブドウ糖または水が適切なキャリアとして使用され得る。
【００６２】
静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、または腹腔内投与について、化合物は、好ましくはレシピエントの血液と等張性である滅菌した水溶液と組合わせられ得る。生理学的に適合性の物質（例えば、塩化ナトリウム、グリシンなど）を含有し、生理学的条件に適合性のｐＨに緩衝した水に、固体の活性成分を溶解して水溶液を作製し、そしてこの溶液を滅菌状態にすることによって、このような処方物を調性し得る。この処方物は、単位容器または多用量容器（例えば、密封されたアンプルまたはバイアル）中に存在し得る。
【００６３】
望まない増殖性の細胞が、Ｇ．Ｉ．菅に局在している場合、化合物は、当該分野で公知の酸安定性で、塩基不安定性であるコーティングにと共に処方され得、このコーティングは、ｐＨが高い小腸において溶解し始める。局所的な薬理学的効果を増強し、全身での取り込みを軽減するための処方物が、好ましい。
【００６４】
非経口的投与に適した処方物は、好ましくは等張性にされた、滅菌した活性化合物の水性調製物を好都合に含む。注射のための調製物はまた、非水性溶媒（例えば、植物油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステル、またはプロピレングリコール）に化合物を懸濁するか、または乳化することによっても処方され得る。
【００６５】
局所的使用のための処方物は、公知のゲル、クリーム、オイルなどを含む。エアロゾル送達について、化合物は、生理食塩水のような公知のエアロゾル賦形剤と共に処方され得、市販の噴霧器を使用して投与され得る。脂肪酸供給源中への処方は、生物適合性を増大させるために使用され得る。
【００６６】
直腸投与について、活性成分は、室温では固体であり、体温では溶けるか、または溶解する基材を用いて、坐剤中に処方され得る。一般的に使用される基材としては、カカオ脂、グリセリンゼラチン、水素添加した植物油、種々の分子量のポリエチレングリコール、およびポリエチレンステアレートの脂肪酸エステルが挙げられる。
【００６７】
投薬形態および投薬量は、公知の処置または予防レジメンを参照して、容易に確立され得る。投与される治療的活性化合物の量、ならびに、本発明の化合物および／または組成物で疾患状態を処置するための投薬レジメンは、種々の因子（被験体の年齢、体重、性別、および医学的状態、疾患の重篤度、投与の経路および頻度、ならびに使用される特定の化合物、望まない増殖性の細胞の位置、ならびに処置される個体の薬物速度論的特性が挙げられる）に依存し、従って、大きく変動し得る。化合物が全身的ではなく局所的に投与される場合、および治療のためではなく予防のために投与される場合、投薬量は、一般的にはより低い。このような処置は、必要な頻度で、および処置医によって必要と判断された期間で、行われ得る。投薬プログラムまたは投与される阻害剤の治療的有効量は、各個体について最適化される必要があり得ることを当業者は理解する。薬学的組成物は、約０．１〜２０００ｍｇの範囲、好ましくは約０．５〜５００ｍｇの範囲、そして最も好ましくは約１ｍｇと２００ｍｇとの間で、活性成分を含み得る。１日の用量は、体重１ｋｇあたり約０．０１〜１００ｍｇ、好ましくは体重１ｋｇあたり約０．１と約５０ｍｇとの間が適切であり得る。１日の用量は、１日あたり１〜４回で投与され得る。
【００６８】
（シクロオキシゲナーゼ−２、前立腺癌細胞でのシクロオキシゲナーゼ−２阻害剤誘導性アポトーシスにおけるプレイヤーまたはスペクテーター）
（背景：）シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）阻害剤の抗腫瘍活性は、ＣＯＸ−２酵素の阻害およびアポトーシスの誘導に関すると考えられているが、ＣＯＸ−２の阻害が、アポトーシスに必要であるのか否かについては未解明である。種々のＣＯＸ−２阻害剤は、ＣＯＸ−２の阻害については類似するＩＣ５０値（５０％阻害についての濃度）を有するが、アポトーシスを誘導する能力においては非常に異なり、このことは、ＣＯＸ−２非依存的な経路が、アポトーシスに関与しているかもしれないことを示唆する。この仮説を試すために、本発明者らは、アンドロゲン非依存性前立腺癌細胞系統ＰＣ−３において、ＣＯＸ−２除去のアポトーシスに対する影響を調査し、ＣＯＸ−２阻害剤であるセレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）の構造−活性研究を行った。（方法：）Ｔｅｔ−Ｏｎ  ＣＯＸ−２アンチセンスクローンを単離して、ＣＯＸ−２阻害剤によるアポトーシス誘導に対する細胞の生存および感受性についてのＣＯＸ−２発現の影響を評価した。差次的にＣＯＸ−２を発現する未処理のＴｅｔ−Ｏｎクローン、およびドキシサイクリンで処理したクローンからＣＯＸ−２を除去した。本発明者らは、種々のＣＸ−２阻害活性を有する種々のセレコキシブアナログを合成して、特徴づけし、そして、ＰＣ−３細胞において、それらのアポトーシス活性を測定した。アポトーシスは、４回の試験で評価した。全ての統計的試験は、両側試験である。
【００６９】
（結果：）アポトーシスを誘導するＣＯＸ−２阻害剤の効果とは対照的に、ＣＯＸ−２除去は、細胞死を誘導しなかった。ＣＯＸ−２阻害剤誘導性のアポトーシスの感受性は、ＣＯＸ−２発現のレベルに非依存的であった。構造−活性分析により、アポトーシス誘導とＣＯＸ−２阻害との間に相関は見出せなかった。逆に、ＣＯＸ−２活性阻害活性を欠乏した親化合物のいくつかの誘導体は、アポトーシスを促進した。さらに、セレコキシブおよびアポトーシス活性セレコキシブ誘導体は、ＡｋｔおよびＥＲＫ２シグナル伝達を阻害することによって、細胞死を媒介した。
【００７０】
（結論：）本発明者らは、ＣＯＸ−２阻害剤であるセレコキシブの構造的改変によって、アポトーシス誘導活性をＣＯＸ−２阻害活性から切り離した。この活性の分離により、新たなクラスのアポトーシス誘導性薬剤の開発のための分子的な基礎が与えられ得る。
【００７１】
癌細胞にアポトーシス死を媒介するために、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）阻害剤によって使用されるシグナル伝達機構は、多くの調査の焦点である（１〜１０）。まだ解明されていない重要な問題は、ＣＯＸ−２阻害が、ＣＯＸ−２阻害剤によるアポトーシスの誘導において、必須の役割を果たしているのか否かということである（１１）。ＣＯＸ−２阻害は、抗腫瘍効果に必要であるという前提は、プロスタグランジンおよび他のＣＯＸ−２が生成する下流メディエーターが、オートクラインおよび／またはパラクリンの様式で、腫瘍細胞の増殖、生存、ならびに血管新生を促進する（１２〜１６）という推定に基づく。ＣＯＸ−２の過剰発現は、胃腸系の上皮細胞（１７、１８）、およびＰＣ−１２褐色細胞腫細胞（１９）において、アポトーシスの阻害、または細胞周期速度の変化を誘導することが報告された。さらに、ＣＯＸ−２遺伝子のノックアウトは、ポリープ形成についての遺伝学的素因を有するマウスにおいて、腫瘍新生を抑制し得る（２０）。動物での研究により、効果的な腫瘍の成長には、腫瘍宿主中にＣＯＸ−２の存在が必要であること（８）、およびＣＯＸ−２発現の増強は、乳腺での腫瘍新生を誘導するために十分であること（２１）が示されている。他方、いくつかの証拠は、ＣＯＸ−２非依存的な機構が、ＣＯＸ−２阻害剤の抗腫瘍効果に関連し得ることを示す。例えば、スリンダク代謝物は、ＣＯＸ活性を阻害しないが、高い効力で前立腺癌細胞にアポトーシスを誘導した（２２）。胃腸の細胞およびＰＣ−１２細胞とは対照的に、不死化ヒト臍帯静脈上皮細胞である、ＨＥＫ−２９３細胞、ＣＯＸ−７細胞、およびＮＩＨ３Ｔ３細胞におけるＣＯＸ−２の過剰発現は、細胞死の増大および／または細胞周期の停止を誘導した（２３、２４）。細胞成長に対するＣＯＸ−２の過剰発現の両面性効果は、部分的には、異なる細胞型の間の生理学的差異に起因し得る。さらに、報告によると、胚性線維芽細胞における悪性の形質転換は、ＣＯＸ発現の状態に非依存的であった。
【００７２】
既に、本発明者らは、セレコキシブは、複数のシグナル伝達を行う標的（Ａｋｔ、ＥＲＫ２、および小胞体Ｃａ２＋−ＡＴＰａｓｅが挙げられる）を妨害することにより、前立腺癌細胞にアポトーシスを誘導したことを示した（１０、１５）。これらのシグナル伝達経路の破壊により、従来の抗癌剤とは大きく異なる機構である、アポトーシスが迅速に誘導される。セレコキシブのアポトーシスに対する効果は、癌細胞中のアンドロゲン応答性、Ｂｃｌ−２発現のレベル、およびｐ５３の機能的状態に非依存的であった（１０、２５）ことは、注目すべきである。にもかかわらず、他のＣＯＸ−２阻害剤（レフェコシブ、ＮＳ３９８、およびＤｕＰ６９７が挙げられる）のアポトーシスを誘導する能力は、セレコキシブよりもはるかに低かったので、アポトーシスのこの迅速な誘導は、セレコキシブに特有のものであった（２５）。この相違は、これらのＣＯＸ−２阻害剤が、前立腺癌細胞にアポトーシスを媒介する機構の相違を強調する。ＣＯＸ−２阻害剤誘導性のアポトーシスは、ＣＯＸ−２酵素阻害を必要とするか否かという問題を整理するために、本発明者らは、テトラサイクリン−オン（Ｔｅｔ−Ｏｎ）アンチセンスＣＯＸ−２  ＰＣ−３クローンにおけるアポトーシスに対するＣＯＸ−２除去の影響を試験し、アンドロゲン非依存性ＰＣ−３前立腺癌細胞において、種々のセレコキシブ誘導体の構造−活性分析を行った。
【００７３】
（細胞および試薬）
本発明者らは、３つの異なる前立腺癌細胞系統を使用して、セレコキシブおよびその誘導体によるアポトーシスの誘導に対する、アンドロゲン応答性およびｐ５３の機能的状態の影響を評価した。使用した細胞系統としては、アンドロゲン応答性ＬＮＣａＰ（ｐ５３＋／＋）ならびに、アンドロゲン非応答性ＰＣ−３およびＤＵ−１４５（ｐ５３−／−）が挙げられた。アンチセンスＣＯＸ−２構築物は、Ｒｅｂｅｃｃａ  Ｃｈｉｎｅｒｙ博士とＪａｓｏｎ  Ｍｏｒｒｏｗ博士（Ｖａｎｄｅｒｂｉｌｔ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｈｏｏｌ）から贈られたものであった。それは、ＴＲＥ（テトラサイクリン応答エレメント）−応答性プラスミドｐＵＨＤ．２ｎｅｏのＸｂａＩ／ＥｃｏＲＶ部位にクローニングされた、ほぼ完全なヒトＣＯＸ−２挿入物（１．９３キロベース）を含んでいた（２６）。このテトラサイクリン誘導性アンチセンスＣＯＸ−２構築物を結腸直腸癌細胞中で使用して、細胞増殖におけるプロスタグランジンの役割が評価された（２６）。セレコキシブおよびレフェコシブを、溶媒抽出によって市販のカプセルから得て、続いて、再結晶化した。ＤｕＰ６９７は、Ｈｓｉｎ−Ｈｓｉｕｎｇ  Ｔａｉ教授（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｋｅｎｔｕｃｋｙ）から贈られたものであり、ＮＳ３９８は、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ  （Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）から入手した。４−［５−（４−クロロフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド（化合物１）、４−［５−フェニル−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド（化合物２）、４−［５−（４−アミノフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド（化合物３）、４−［５−（４−エチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド（化合物４）、４−［５−（４−トリフルオロメチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド（化合物５）、４−［５−（２，５−ジクロロフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド（化合物６）、４−［５−（２，５−ジメチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼンスルホンアミド（化合物７）は、公開されている手順（２７）に従って合成した。ウサギ抗ＣＯＸ−２抗体は、Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）から得た。Ａｋｔ、ホスホ−Ｓｅｒ４７３−Ａｋｔ、ＥＲＫ、およびホスホ−ＥＲＫに対するウサギポリクローナル抗体は、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ（Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）から購入し、マウス抗アクチンモノクローナル抗体は、ＩＣＮ（Ｃｏｓｔａ  Ｍｅｓａ，ＣＡ）から入手した。ヤギ抗ウサギＩｇＧ−セイヨウワサビペルオキシダーゼ結合体は、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ（Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｏｖｅ，ＰＡ）から購入した。ウサギ抗ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）抗体は、ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）���ら入手した。
【００７４】
（ＰＣ−３  Ｔｅｔ−ＯｎアンチセンスＣＯＸ−２クローンの開発）
ＰＣ−３細胞を、加湿したＣＯ２インキュベーター中で３７℃で、Ｔ−２５フラスコ中の１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を補充したＲＰＭＩ１６４０培地で、８０％の密集度（ｃｏｎｆｌｕｅｎｃｙ）になるまで培養した。各フラスコを６ｍＬの無血清Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）で洗浄し、次いで、３ｍＬの無血清Ｏｐｔｉ−ＭＥＭを添加した。１５０μＬの無血清ＯＰＴＩ−ＭＥＭ培地中に０．１２μｇのＴｅｔ−Ｏｎ調節プラスミド  ｐＴｅｔ−Ｏｎ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ；Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）および０．１２μｇのアンチセンスＣＯＸ−２構築物を含むアリコートを、ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ  Ｐｌｕｓ  Ｒｅａｇｅｎｔキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）からの３μＬのＰｌｕｓ試薬で、２５℃で１５分間プレインキュベートし、続いて、１５０μＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ培地中の１２μＬのＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ試薬を添加した。生じた混合物を２５℃で１５分間インキュベートし、次いで、穏やかに混合しながら各フラスコに添加した。３７℃で５時間後、トランスフェクション培地を、１０％  Ｔｅｔ−Ｓｙｓｔｅｍ−ａｐｐｒｏｖｅｄ  ＦＢＳ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を含有する５ｍＬのＰＲＭＩ１６４０培地で置き換えた。４８時間後、細胞を１００μｇ／ｍＬでＧ４１８を含有する新鮮な培地で培養し、トランスフェクトされたクローンを選択した。Ｇ４１８補充培地を４日ごとに交換した。３週間後、Ｇ４１８耐性細胞を、最終細胞濃度が１ウェルあたり約０．５細胞である限界希釈によって、９６ウェルプレートにサブクローニングした。１２日後（４日ごとにＧ４１８含有培地を交換した）、生存クローンをさらに１２ウェルプレートにサブクローニングした。４または５日後、各ウェルの細胞を３つのＴ−２５フラスコに分割した。細胞をドキシサイクリン（２μｇ／ｍＬ）に曝露した１２０時間後に、ウエスタンブロット分析によって、ＣＯＸ−２発現のレベルを決定した。この手順によって、以下の４個の独立したクローン（２Ｆ６、１Ｆ２、３Ｄ９、および７Ｄ９）を分析のために選択した：２Ｆ６はＣＯＸ−２欠損クローンであり、１Ｆ２、３Ｄ９、および７Ｄ９は、ドキシサイクリンの非存在下で異なるレベルのＣＯＸ−２を発現した。
【００７５】
（イムノブロッティング）
ウエスタンブロット分析のために、細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）ゲル充填バッファー（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ６．８、１００ｍＭ  ジチオトレイトール、２％  ＳＤＳ、０．１％  ブロモフェノールブルー、および１０％  グリセロールからなる）に再懸濁し、超音波ソニケーター（Ｖｉｒｓｏｎｉｃ  ３００、出力４．５）で５秒間音波破砕し、そして、５分間煮沸した。簡単な遠心分離の後で、可溶画分由来の等量のタンパク質（６０〜１００μｇ）をＭｉｎｉｇｅｌ装置上で１０％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルで分離し、セミドライ式トランスファーセル中のニトロセルロース膜へと移転した。トランスブロットした膜を、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＴｒｉｓ緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）（ＴＢＳＴ）で２回洗浄した。５％脱脂ミルクを含有するＴＢＳで６０分間ブロッキングした後で、膜を、適切な１次抗体（抗ＣＯＸ−２抗体、抗Ａｋｔ抗体、抗Ｐ−４７３Ｓｅｒ  Ａｋｔ抗体、抗ＥＲＫ抗体、および抗ホスホ−ＥＲＫ抗体（１：１，０００希釈）；抗アクチンモノクローナル抗体（１：５，０００希釈））と、ＴＢＳ−１％脱脂ミルクにおいて４℃で１２時間インキュベートし、ＴＢＳＴで２回洗浄した。膜をヤギ抗ウサギＩｇＧ−セイヨウワサビペルオキシダーゼ結合体（１：５，０００希釈）で室温で１時間プローブし、ＴＢＳＴで２回洗浄した。バンドを増強化学発光によって可視化した。
【００７６】
（プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）免疫アッセイ）
ドキシサイクリン（２μｇ／ｍＬ）前処理をしたか、またはしていない親細胞およびトランスフェクトした細胞を、Ｔ−７５フラスコ中で、ドキシサイクリンを有するか、または有さない１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ１６４０培地で、１０×１０６細胞になるまで増殖させた。培養培地を交換し、そして、２４時間後に馴化培地を収集して、ＰＧＥ２をアッセイした。馴化培地を遠心分離して粒子状物質を除去し、次いで、細胞を擦り取ることで収集し、タンパク質濃度を決定した。製造者の指示（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．；Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）に従って、ＰＧＥ２を３連で１００μＬの培地中でアッセイした。ＰＧＥ２のデータをタンパク質含量について規格化した。
【００７７】
（細胞生存）
ドキシサイクリン（２μｇ／ｍＬ）前処理をしたか、またはしていない親タンパク質またはトランスフェクトしたＰＣ−３細胞を１２ウェルプレートにプレートし、２μｇ／ｍＬのドキシサイクリンの非存在下または存在下で、１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ１６４０培地で４８時間培養した。次いで、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ；最終濃度０．１％）に溶解させた種々の濃度のＣＯＸ−２阻害剤を血清飢餓ＲＰＭＩ１６４０培地中の細胞に添加した。コントロール細胞は、同じ濃度のＤＭＳＯビヒクルを受容した。処理の間、浮いている細胞のパーセンテージは、経時的に増加した。処理の終了時に、接着している細胞をトリプシン処理によって収集し、そして浮いている細胞を遠心分離（３，２００×ｇ、５分間）によって回収した。細胞の形態を光学顕微鏡を用いて×４００で評価した。接着している細胞および浮いている細胞の両方を混ぜて、そして細胞生存をトリパンプルー染料排除によって評価した。
【００７８】
（アポトーシスの分析）
位相差顕微鏡により観察される表面の形態変化に加えて、４つの方法を用いて、薬物誘導性のアポトートーシス細胞死を評価した。
【００７９】
（ホスファチジルセリン外部化（ｅｘｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ））
約２．５×１０５個の細胞をガラス性のカバーガラスで２４時間増殖させた。薬物処理後の種々の時間で、細胞をＰＢＳで穏やかに洗浄し、次いで、０．５ｍＬの結合バッファー（１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、２．５ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、および４％  ウシ血清アルブミンを含有する１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４））に曝露し、続いて、０．６ｍＬのアネキシンＶ−イソチオシアン酸フルオレセイン（ＦＩＴＣ）（２００μｇ／ｍＬ）に３０分間曝露した。結合バッファーで洗浄した後、蛍光顕微鏡の下で外側の膜上にアネキシンＶ−ＦＩＴＣを有する細胞として、アポトーシス細胞を直接的に同定した。コントロールの集団では、試験薬物の代わりにＤＭＳＯビヒクルを含有する培地を受容した。
【００８０】
（核の４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）染色）
異なる試験物質を用いた処理の後の種々の時間で、ＤＮＡ結合蛍光色素であるＤＡＰＩを用いた染色によって、形態変化をアポトーシス細胞の核において検出した。接着しているＰＣ−３細胞について、細胞をガラス性のカバーガラス上で約７０％の密集度まで増殖させ、種々の時間で５０μＭの試験物質に曝露した。次いで、上澄液を注意深く除去し、接着している細胞をＰＢＳ、ＤＡＰＩ（０．５μｇ／ｍＬ）で洗浄し、固定溶液（ＰＢＳ中、４％  パラホルムアルデヒド、２ｍＭ  ＥＧＴＡ（エチレングリコールビス（β−アミノエチルエーテル）Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸）、および１３．７％  スクロース）に添加し、この混合物を暗黒下で室温で２０分間インキュベートした。次いで、細胞をＰＢＳで２０分間隔で洗浄した。浮いているＰＣ−３細胞は、上記の方法の変法によって試験した。ＰＣ−３細胞をＴ−２５フラスコで培養し、試験物質で処理した。次いで、浮いている細胞を収集し、洗浄し、上述のようにＤＡＰＩで染色した。細胞をポリ−Ｌ−リシンでコーティングしたカバーガラスに接着させ、顕微鏡によって４００×の倍率で観察した。
【００８１】
（酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によるアポトーシスの検出）
また、アポトーシスの誘導を、製造者の指示に従って「Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ＥＬＩＳＡ」アッセイ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を用いることによっても、評価した。この試験は、アポトーシス死を誘導した後のモノヌクレオソームおよびオリゴヌクレオソームの形態の細胞質のヒストン結合ＤＮＡフラグメントの定量的決定に基づく。簡潔には、２．５×１０６個のＰＣ−３細胞をＴ−７５フラスコ中で、実験の２４時間前に培養した。細胞を５ｍＬの無血清ＲＰＭＩ培地で２回洗浄し、次いで、示すように、試験物質またはＤＭＳＯビヒクルで処理した。浮いている細胞および接着している細胞の両方を収集し、１０４個の細胞と等価の細胞溶解液をＥＬＩＳＡにおいて使用した。
【００８２】
（ＰＡＲＰ切断のウエスタンブロット分析）
薬物処理した細胞を収集し、氷冷ＰＢＳで洗浄し、そして溶解バッファー（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８）、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、１０％  グリセロール、１％  Ｎｏｎｉｄｅｔ  Ｐ−４０，０．５％  デオキシコレート、０．１％  ドデシル硫酸ナトリウム、１００μＭ  ４−（２−アミノエチル）ベンゼンスルホニルフルオライド、１０μｇ／ｍＬ  ロイペプチン、および１０μｇ／ｍＬ  アプロチニン）に再懸濁した。１，５００×ｇで５分間の遠心分離の後で、可溶性の細胞溶解液を収集した。各溶解液に由来する等量のタンパク質（６０〜１００μｇ）を１０％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル中で分離した。バンドをニトロセルロース膜に移転し、上述のように、抗ＰＡＲＰ抗体を用いて、免疫ブロッティングにより分析した。
【００８３】
（統計学的分析）
各実験を３連で行った。全ての実験を少なくとも２回、異なる機会に行った。適切である場合、データは平均値±９５％信頼区間として示される。
【００８４】
（Ｔｅｔ−ＯｎアンチセンスＣＯＸ−２クローンの単離および特徴付け）
ＣＯＸ−２酵素活性の細胞増殖に対する影響を評価するために、本発明者らは、親ＰＣ−３細胞をテトラサイクリン誘導性プロモーターの制御下にあるアンチセンスＣＯＸ−２  ｃＤＮＡ構築物でトランスフェクトすることによって、Ｔｅｔ−ＯｎアンチセンスＣＯＸ−２クローンを調製した。Ｇ４１８耐性細胞を限界希釈によってサブクローニングした後で、４つのＴｅｔ−ＯｎアンチセンスＣＯＸ−２クローン（２Ｆ６、１Ｆ２、３Ｄ９、および７Ｄ９）を選択した。２Ｆ６は、ＣＯＸ−２欠損クローンであり、ＣＯＸ−２タンパク質がほぼ検出できない。１Ｆ２、３Ｄ９、および７Ｄ９は、アンチセンスＣＯＸ−２クローンである。これらのクローンにおいて、ドキシサイクリンの非存在下では、ＣＯＸ−２が異なるように発現されるが、ドキシサイクリンの存在下では、ＣＯＸ−２は、取り除かれる（図２Ｂ）。図２Ａは、Ｔｅｔ−Ｏｎクローン３Ｄ９における、１０日間の期間にわたるドキシサイクリン（２μｇ／ｍＬ）のＣＯＸ−２発現に対する効果のウエスタンブロット分析を示す。ドキシサイクリンの添加後４日目までは、３Ｄ９細胞において、ＣＯＸ−２タンパク質は取り除かれており、ドキシサイクリンが存在する限り、ＣＯＸ−２は検出されなかった。これらのクローンでは、ＣＯＸ−１発現は微々たる物であったので（データは示さず）、ＣＯＸ−２が、主要なプロスタグランジンの生産者であった。従って、ＣＯＸ−２発現のレベルは、ＰＧＥ２生産のレベルに反映した。１Ｆ２細胞と親ＰＣ−３細胞でのＰＧＥ２のレベルは匹敵していたが、親細胞のレベルよりも、３Ｄ９でのレベルは２倍高く、７Ｄ９でのレベルは１０倍高かった（図２Ｃ）。しかし、５０μＭのロフェコキシブ、ＮＳ３９８、またはＤｕＰ６９７で処理した場合、ＰＧＥ２の生産は、１Ｆ２、３Ｄ９，および７Ｄ９、ならびに親ＰＣ−３細胞において同程度にまで減少した（データは示さず；セレコキシブ処理した細胞のＰＧＥ２は、急速なアポトーシスに起因して決定できなかった）。抗アポトーシス性タンパク質Ｂｃｌ−２の発現の減少は、ＣＯＸ−２阻害剤であるＳＣ−５８１２５およびＮＳ−３９８のアポトーシス機構には関係ない（１、２）ので、ＣＯＸ−２切断は、本質的にＢｃｌ−２の発現に対して影響を与えない（図２Ｄ）ことも注目される。
【００８５】
（前立腺癌細胞におけるＣＯＸ−２切断およびその後のアポトーシスに対する効果）
これらのＣＯＸ−２アンチセンスクローンを用いて、本発明者らは、ＣＯＸ−２阻害剤のアポトーシスに対する効果が、ＣＯＸ−２阻害活性に依存しないということの２つの証拠を得た。第１に、アンチセンスＣＯＸ−２  ｃＤＮＡおよびＣＯＸ−２阻害剤の両方が、プロスタグランジン生産を完全に阻止したが、その細胞生存に対する効果は、顕著に異なっていた。ＰＣ−３細胞または４つのクローンのいずれかを個々のＣＯＸ−２阻害剤によって処理することにより、アポトーシス死が引き起こされたが、一方で、アンチセンスｃＤＮＡによるＣＯＸ−２の除去、従ってＰＧＥ２生産の阻害は、これらのアンチセンスクローンの生存に悪影響を与えない、すなわち、この処理は、細胞死を誘導しなかった。
【００８６】
第２に、これらの４つのクローンにおけるＣＯＸ−２の基本レベルは異なるが、全てのクローンおよび親ＰＣ−３細胞は、ＣＯＸ−２阻害剤によって誘導されるアポトーシスに等しく感受性であり、この感受性は、ドキシサイクリン誘導性のＣＯＸ−２除去の後で変化しなかった。言い換えると、ＣＯＸ−２阻害剤誘導性のアポトーシスに対する感受性は、ＣＯＸ−２発現のレベルに非依存的であった。図３Ａは、ＰＣ−３細胞、ＣＯＸ−２欠損２Ｆ６細胞、およびＣＯＸ−２を過剰発現する７Ｄ９細胞における、ＣＯＸ−２除去の存在下または非存在下での５０μＭのセレコキシブの存在下での細胞死の時間経過を示す。５０μＭのセレコキシブと共にインキュベートされた全てのクローンの５０％の細胞死に必要な時間（Ｔ１／２）は、約２時間であった。同様の結果が１Ｆ２細胞および３Ｄ９細胞について記された。
【００８７】
既に、本発明者らは、セレコキシブは、ＡｋｔおよびＥＲＫシグナル伝達経路を阻害することによって、アンドロゲン応答性ＬＮＣａＰ（ｐ５３＋／＋）およびアンドロゲン非応答性ＰＣ−３（ｐ５３−／−）前立腺癌細胞の両方に迅速なアポトーシス死を誘導することを実証した（１０、２５）。この研究では、４つのクローン全てにおいて誘導されたアポトーシス死もまた、親ＰＣ−３細胞において観察されるように、ＡｋｔおよびＥＲＫ２のリン酸化の減少に関連しており、７Ｄ９細胞において、ＡｋｔおよびＥＲＫ２の脱リン酸化の時間経過（図２Ｂ）は、細胞死の時間経過と一致していた。同様の結果を他の３つのクローンについて得た。
【００８８】
他の３つのＣＯＸ−２阻害剤である、ロフェコキシブ、ＮＳ３９８、およびＤｕＰ６９７によって誘導されるアポトーシスに対するＣＯＸ−２除去の影響もまた、ＣＯＸ−２アンチセンスクローンにおいて試験した。これらの化合物は、セレコキシブとは異なる機構によって、親ＰＣ−３細胞にアポトーシスを引き起こした（２５）。アポトーシスの発生は、セレコキシブと比べて有意に遅れ、ロフェコキシブ、ＮＳ３９８、またはＤｕＰ６９７（それぞれ１００μＭ）についてのＴ１／２値は、９６時間〜１２０時間の範囲であった。図４は、ドキシサイクリンによる前処理をした場合、またはしない場合の７Ｄ９細胞の１００μＭのロフェコキシブへの曝露の後での細胞生存を示す。セレコキシブのデータと一致するように、ＣＯＸ−２発現の消失は、これらのクローンのロフェコキシブによるアポトーシスの誘導に対する感受性を変えなかった。同様の結果をＮＳ３９８およびＤｕＰ６９７について得た（データは示さず）。
【００８９】
（構造−活性分析）
本発明者らの仮説をさらに裏付けるために、セレコキシブの構造改変を行い、ＣＯＸ−２阻害とアポトーシスの誘導を分離した。本発明者らは、末端フェニル環に異なる置換基を有する一連のセレコキシブ誘導体を合成し、各々のアポトーシス誘導能力を試験した。図５は、セレコキシブおよび７つの代表的アナログの、構造、ＣＯＸ−２阻害活性（ＩＣ５０＝５０％までＣＯＸ−２活性を阻害する薬物の濃度）、およびアポトーシス誘導活性（Ｔ１／２）をまとめている。
【００９０】
構造−活性分析により、ＣＯＸ−２阻害とアポトーシス誘導活性との間に相関は見出せなかった。末端フェニル環の極性の増大（すなわち、４−アミノ−導入化合物  ３ａ）または大きさの増大（すなわち、４−エチル−、４−トリフルオロメチル−、２，５−ジクロロ−、および２，５−ジメチル−導入化合物  それぞれ４ａ〜７ａ）により、これらの化合物のＣＯＸ−２活性を阻害する能力は減少した。対照的に、置換フェニル環の一定の程度の大きさおよび疎水性は、アポトーシス誘導活性について高度に望ましいものであった。例えば、化合物２ａは、セレコキシブの４−メチル部分が水素原子で置換されており、高度に強力なＣＯＸ−２阻害剤であった（ＩＣ５０＝３２ｎＭ）が、アポトーシス誘導活性は欠落していた（Ｔ１／２＞１００時間）。逆に、化合物６ａおよび７ａは、ＣＯＸ−２阻害活性を全く有していなかった（ＩＣ５０＞１００μＭ）が、ＰＣ−３細胞において、高度に強力なアポトーシス死のメディエーターであった（Ｔ１／２≦２時間）。化合物７ａの細胞生存に対する時間依存的かつ用量依存的な効果が、図６Ａに示される。細胞の５０μＭの化合物７ａへの曝露により、セレコキシブの２時間と比較して、１時間以内に細胞生存の５０％の減少が生じた。ＰＣ−３細胞におけるアポトーシス死の特徴を図６Ｂ〜Ｄに示す。図６Ｂは、化合物７ａによる処理の後の形態および膜組成の明らかな変化を示す。位相差顕微鏡によって示されるように、処理した細胞は、縮んでおり、丸くなっており、そしてディッシュから離れており、化合物７ａを添加した１時間後にはブレブ形成が明らかであった（左パネル）。アポトーシスの形態学的証拠は、細胞をＤＡＰＩで染色することにより検出される核のフラグメント化として評価され、化合物７ａで処理した細胞は、凝集した核およびフラグメント化した核を有することが見出された（中央パネル）。化合物７ａによって誘導されるアポトーシスについての別の試験は、ＦＩＴＣ結合体化アネキシンＶと蛍光顕微鏡によって検出する際のホスファチジルセリンの外部化（ｅｘｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ）であった（右パネル）。他の指標のうち、ＤＮＡのヌクレオソームフラグメントへの分解、および、ＰＡＲＰのアポトーシス特異的な８５ｋＤａのフラグメントへの切断もまた、アポトーシス細胞死のよく特徴付けられた事象である。これらの試験の結果をそれぞれ図６ＣおよびＤに示す。
【００９１】
さらに、Ｂｃｌ−２に非依存的なＡｋｔおよびＥＲＫ２の即時の脱リン酸を介してアポトーシスを促進するために、化合物１ａおよび４ａ〜７ａによって使用される機構は、親化合物によって使用される機構と同じであったことに注目すべきである。図７Ａ〜Ｃは、それぞれ、ＰＣ−３細胞における、化合物７ａのＢｃｌ−２の発現レベルに対する影響ならびに、ＡｋｔおよびＥＲＫ２のリン酸化状態を示す。
【００９２】
ＰＣ−３細胞に加えて、本発明者らは、アンドロゲン応答性ＬＮＣａＰ（ｐ５３＋／＋）およびアンドロゲン非依存性ＤＵ−１４５（ｐ５３−／−）前立腺癌細胞系統における、化合物１ａおよび４ａ〜７ａのアポトーシスに対する影響についても試験した。ＬＮＣａＰ細胞およびＤＵ−１４５細胞において、セレコキシブならびに化合物１ａおよび４ａ〜７ａによって、アポトーシスが誘導され、感受性はＰＣ−３細胞と同じであった（データは示さず）。従って、これらのデータは、これらの活性化合物がアポトーシスを媒介する機構は、アンドロゲンの状態、ｐ５３の機能的状態、およびＢｃｌ−２の発現レベルに非依存的であることを示す。
【００９３】
（考察）
化学予防法におけるＣＯＸ−２阻害剤の臨床的関連性は実証されているが、これらの化合物によって使用される抗腫瘍機構は、よく規定されていない（１１）。癌細胞において非ステロイド性抗炎症薬物により誘導されるアポトーシスを説明するために、種々のシグナル伝達性の標的を伴う機構が提案されている。これらの推定上の機構は、Ｂｃｌ−２発現の阻害（１、２）、アラキドン酸の蓄積（２８）、セラミド生産の刺激（３）、Ａｋｔタンパク質およびＥＲＫ２タンパク質の脱リン酸化（１０、２５）、ＰＰＡＲδ（ペルオキシソーム増殖体活性化レセプター）の阻害（２９）、および核因子ＮＦ−κＢシグナル伝達経路の妨害（３０）を含む。種々の異なるＣＯＸ−２阻害剤は、異なる機構を介してアポトーシスを媒介しているということももっともらしい。しかし、ＣＯＸ−２阻害が、ＣＯＸ−２阻害剤のアポトーシス効果において必須の役割を果たしているか否かは、まだ解明されていない。この研究において、本発明者らは、この問題を解明するために、アンチセンスＣＯＸ−２  ｃＤＮＡを介したＣＯＸ−２除去および、セレコキシブ誘導体の構造−活性分析を使用した。
【００９４】
Ｔｅｔ−ＯｎアンチセンスＣＯＸ−２クローンの使用は、これらのクローンが同系の細胞系統を示し、それによって、異なる細胞系統間の遺伝的変化の問題を緩和するため、および、これらのクローンが、ドキシサイクリン処理によって停止され得る異なるＣＯＸ−２発現を示すために、有利であった。本発明者らは、ＣＯＸ−２阻害剤のアポトーシスに対する効果が、ＣＯＸ−２阻害活性に非依存的であることを実証した。ＣＯＸ−２除去およびＣＯＸ−２阻害剤の両方が、ＰＧＥ２生産を阻害したが、これらの２つの処理は、細胞生存に対して非常に異なる影響を有していた。ＣＯＸ−２阻害剤による処理は、細胞死を引き起こしたが、ＣＯＸ−２除去は引き起こさなかった。ＣＯＸ−２阻害剤が誘導するアポトーシスへの感受性は、アンチセンスクローンにおいて、ＣＯＸ−２発現のレベルに非依存的であり、実際に、親ＰＣ−３細胞のアポトーシスと変わらなかった。
【００９５】
本発明者らは、セレコキシブの構造的改変を介して、アポトーシス誘導活性をＣＯＸ−２阻害活性から分離することができた。この発見は、スリンダク代謝物である、スリンダクスルフィドおよびスリンダクスルホンは、ＣＯＸ−非依存的な機構を介して、前立腺癌細胞においてアポトーシスを誘導し得る（２２）という以前の報告を思わせる。いくつかのセレコキシブ誘導体は、ＣＯＸ−２阻害活性を欠いていたが、ＰＣ−３細胞にアポトーシスの誘導において、親化合物と同程度に強力であった。これらの化合物は、ホルモン応答性の前立腺癌細胞およびホルモン非応答性の前立腺癌細胞の両方にアポトーシスを誘導する。さらに、これらの化合物および親化合物であるセレコキシブがアポトーシスを誘導する機構は、同じままであった、すなわち、ＡｋｔおよびＥＲＫ２の脱リン酸化を促進していた。
【００９６】
（新たなクラスのアポトーシス誘導性薬剤を開発するための分子的プラットフォームとしてのシクロオキシゲナーゼ−２阻害剤）
（背景：）本発明者らは、既に、前立腺癌細胞において、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）阻害剤のアポトーシスに対する効果が、ＣＯＸ−２阻害活性に非依存的であることを実証した。この発見により、機構様式が従来の化学療法薬の機構様式とは大きく異なる、新たなクラスの抗癌化合物の開発のための分子的基盤が与えられる。ここで、本発明者らは、これらの化合物がアポトーシスを媒介する構造的基礎を理解するため、およびそれらの前立腺癌細胞においてアポトーシスを誘導する能力を最適化するための分子的プラットフォームとして、セレコキシブおよびレフェコシブを使用する計画を開始する。（方法：）構造−活性分析とコンピューターモデリングを組合わせた統合アプローチを使用した。種々のＣＯＸ−２阻害剤の構造改変を系統だった様式で行い、アポトーシスの誘導における個々の機能的部分の役割を評価した。さらに、アポトーシス誘導におけるセレコキシブとロフェコキシブとの間の機能の大きな相違の観点から、分子モデリングを行い、不規則な構造の関与を解明した。（結果：）構造分析およびコンピューター分析に基づいて、本発明者らは、アポトーシスを引き起こすために必須の種々の構造的特徴を示す作業モデルを提案した。アポトーシス誘導についての構造的要求は、ＣＯＸ−２阻害のものとは異なっている。それらの中でも、スルファモイル部分への水素結合、および複素環式環の周囲の負の静電ポテンシャルが特に注目される。このモデルは、このモデルによって示される構造を満足させるロフェコキシブ構造の変化を介してアポトーシス誘導能力が１０倍に増大したことによって立証される。（結論：）本発明者らは、既存のＣＯＸ−２阻害剤の分子的プラットフォームに基づいて、新たなクラスのアポトーシス誘導性薬剤を開発し得る。
【００９７】
最近の疫学的研究および動物モデル研究によって、特に結腸癌における化学的予防薬剤としての、非ステロイド性抗炎症性薬物（ＮＳＡＩＤ）の臨床的適用が示唆されている（３１〜３９）。ＣＯＸ−２が生成する生物学的メディエーターの細胞増殖における重要性を考慮すると（４０〜４４）、ＮＳＡＩＤは、ＣＯＸ−２酵素活性をブロックすることによって、癌細胞をアポトーシスに対して感作していることが考えられるが、正確な機構は不明なままである。それにもかかわらず、多くの証拠により、ＣＯＸ−２阻害はＮＳＡＩＤ媒介性アポトーシス細胞死において主要な役割を果たしていないことが示唆されている（４５）。例えば、スリンダクの代謝物である、スリンダクスルフィドおよびスリンダクスルホンは、ＣＯＸ非依存的な機構を介して、癌細胞にアポトーシスを媒介し得ることが報告された（４６〜４８）。より最近に、Ｔｅｔ−ＯｎＴＭアンチセンスＣＯＸ−２クローンを開発することによって、本発明者らは、ＣＯＸ−２阻害剤誘導性のアポトーシスに対する前立腺癌細胞の感受性がＣＯＸ−２の発現状態に非依存的であることを実証した（Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，印刷中）。臨床的観点から、これらの２つの薬理学的効果の分離は、重要な治療的含蓄を有する。この発見により、作用様式が、従来の化学療法薬剤の機構とは大きく異なる、新たなクラスの抗癌化合物の設計のための分子的基板が提供される。本発明者らのセレコキシブについての最近の研究は、それは、前立腺癌細胞において、複数のシグナル伝達性の標的（ＡｋｔおよびＥＲＫ２（細胞外シグナル調節性キナーゼ２）を含む）を妨害することを示す（４９、５０）。これらのシグナル伝達経路を破壊することにより、細胞増殖および細胞生存を支配する細胞機能の調節の消失が生じ、急速なアポトーシス死が引き起こされる。
【００９８】
しかし、試験した他のＣＯＸ−２阻害剤（例えば、ロフェコキシブ、ＮＳ３９８、およびＤｕＰ６９７）は、同等のＣＯＸ−２阻害能力を有するにも関わらず（５０）、セレコキシブに対してほぼ２桁低いアポトーシス誘導能力を示すので、このアポトーシスの急速な誘導は、セレコキシブに独特なものである。従って、本発明者らは、この相違の背景にある構造的基礎を理解するため、およびそれらの前立腺癌細胞においてアポトーシスを誘導する能力を最適化するための分子的プラットフォームとして、セレコキシブおよびレフェコシブを使用する計画を開始した。構造的データおよびコンピューターモデリングデータに基づいて、本発明者らは、前立腺癌細胞に急速なアポトーシス死を引き起こすために必須の構造的特徴についての知見を提供する作業モデルを描くことができた。より重要なことには、高い能力を有する一連の新しいアポトーシス誘導性薬剤を開発した。これらの合成的誘導体は、前立腺癌細胞において、アンドロゲン感受性、ｐ５３の機能的状態、およびＢｃｌ−２の発現レベルに関わりなく、アポトーシス死を媒介し、従って、前立腺癌の治療または予防において強力な適応を有する。
【００９９】
（材料）
セレコキシブおよびロフェコキシブは、溶媒抽出、それに続く再結晶化によって、市販のカプセルから入手した。ＮＳ３９８は、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から購入した。以下の化合物を合成するために、公開された手順を使用した：１ｂおよび１ｂ−ＮＨ２（５１）、２ｂ〜２９ｂおよび４０ｂ（５２）、４１ｂ（５３）、４３ｂ〜４６ｂ（５４）。これらの公知の化合物の同定は、１Ｈ  ＮＭＲ分析および質量スペクトル分析によって確認した。Ａｋｔ、ホスホ−４７３Ｓｅｒ  Ａｋｔ、ｐ４４／４２  ＥＲＫ、およびｐｈｏｓｐｈｏ−Ｐ４４／４２  ＥＲＫに対するウサギポリクローナル抗体は、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）から購入した。ウサギ抗ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）ポリクローナル抗体は、ＰｈａｒｍＭｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）の製品であった。使用した他の化学試薬および生化学試薬は、Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から入手した。
【０１００】
（  ４−［５−（４−クロロフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−ｌＨ−ピラゾール−１−イル］ベンゼン−カルボキシアミド（３０ｂ）  ）
表題の化合物を２工程の合成により合成した。（工程ａ．）４，４，４−トリフルオロ−１−（４−クロロフェニル）ブタン−１，３−ジオンの調製を以下のように行った。５ｍＬのメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）中のエチルトリフルオロアセテート（１．０８ｇ、７．６１ｍｍｏｌ）溶液中に、メタノール（１．８ｍＬ）中の２５％  ナトリウムメトキシドを２分間にわたって添加した。２ｍＬのＭＴＢＥ中の４’−クロロアセトフェノン（１ｇ、６．４６ｍｍｏｌ）溶液にこの混合物を５分間にわたって滴下した。１６時間の攪拌後、３Ｎ  ＨＣｌ（３．４ｍＬ）を添加した。この有機層を集め、ブラインで洗浄し、硫化マグネシウムで乾燥し、そして濃縮して黄橙色の固体を得た。へキサンからの再結晶化により、ジオン（１．１８ｇ、８６％）を得た。（工程ｂ．）（４−カルバモイルフェニル）ヒドラジンヒドロクロライド（２２８ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）を、２０ｍＬ中のエタノール中の上記のジオン（３００ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）の攪拌している溶液に添加した。この混合物を還流下で２４時間攪拌し、室温まで冷却し、そして乾燥するまで濃縮した。この残留物を酢酸エチルに溶解し、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして濃縮して明茶色の固体を得た。酢酸エチルとへキサンからの再結晶化により、３０ｂを得た（３５０ｍｇ、８０％）：
【０１０１】
【化２４】
2005528384.tif 000020
（  ４−［５−（２，４−ジクロロフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］べンゼン−カルボキシアミド（３１ｂ）  ）
表題の化合物を上記の２工程の手順を用いて、２’，４’−ジクロロアセトフェノンから合成した（全収率５３％）。
【０１０２】
【化２５】
2005528384.tif 000021
（  ４−［５−（２，５−ジクロロフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼン−カルボキシアミド（３２ｂ）  ）
表題の化合物を上記の２工程の手順を用いて、２’，５’−ジクロロアセトフェノンから合成した（全収率６０％）。
【０１０３】
【化２６】
2005528384.tif 000022
（  ４−［５−（３，４−ジクロロフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼン−カルボキシアミド（３３ｂ）  ）
表題の化合物を上記の２工程の手順を用いて、３’，４’−ジクロロアセトフェノンから合成した（全収率５５％）。
【０１０４】
【化２７】
2005528384.tif 000023
（  ４−［５−（４−メチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼン−カルボキシアミド（３４ｂ）  ）
表題の化合物を上記の２工程の手順を用いて、４’−メチルアセトフェノンから合成した（全収率６５％）。
【０１０５】
【化２８】
2005528384.tif 000024
（  ４−［５−（４−トリフルオロメチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］べンゼン−カルボキシアミド（３５ｂ）  ）
表題の化合物を上記の２工程の手順を用いて、４’−トリフルオロメチルアセトフェノンから合成した（全収率５３％）。
【０１０６】
【化２９】
2005528384.tif 000025
（  ４−［５−（４−エチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼン−カルボキシアミド（３６ｂ）  ）
表題の化合物を上記の２工程の手順を用いて、４’−エチルアセトフェノンから合成した（全収率４４％）。
【０１０７】
【化３０】
2005528384.tif 000026
（  ４−［５−（２，４−ジメチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼン−カルボキシアミド（３７ｂ）  ）
表題の化合物を上記の２工程の手順を用いて、２’，４’−ジメチルアセトフェノンから合成した（全収率６２％）。
【０１０８】
【化３１】
2005528384.tif 000027
（  ４−［５−（２，５−ジメチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ベンゼン−カルボキシアミド（３８ｂ）  ）
表題の化合物を上記の２工程の手順を用いて、２’，５’−ジメチルアセトフェノンから合成した（全収率５８％）。
【０１０９】
【化３２】
2005528384.tif 000028
（  ４−［５−（３，５−ジメチルフェニル）−３−（トリフルオロメチル）−ｌＨ−ピラゾール−１−イル］ベンゼン−カルボキシアミド（３９ｂ）  ）
表題の化合物を上記の２工程の手順を用いて、３’，５’−ジメチルアセトフェノンから合成した（全収率５６％）。
【０１１０】
【化３３】
2005528384.tif 000029
（  ３−（４’−メチルスルホニルフェニル）−４−フェニル−２（５Ｈ）−フラノン（４７ｂ）  ）
合成をスキーム２に記載したように行った。（工程．ａ）４−（メチルスルホニル）アセトフェノン（５．５ｇ、２７．８ｍｍｏｌ）、モルホリン（２．５ｍＬ）、およびイオウ（０．８９ｇ、２７．８ｍｍｏｌ）の混合物を１０時間還流し、氷に注いだ。沈殿した固体を濾過し、そして冷やした酢酸エチルで洗浄した。この固体を１０％水酸化ナトリウム（５５ｍＬ）に添加し、１２時間で８４℃まで加熱し、そしてこのアルカリ溶液を１２Ｎ  ＨＣｌで酸性化した。生じた固体を濾過し、乾燥し、そしてへキサン−酢酸エチル（１：１）から再結晶化して、４−メチルスルホニルフェニル酢酸（白色固体、４．２ｇ、全収率５２％）を得た。（工程ｂ．）アセトニトリルに溶解した２−ブロモアセトフェノン（１．０２ｇ、５．１２ｍｍｏｌ）をＥｔ３Ｎ（１．７４ｍＬ）に添加し、続いて４−メチルスルホニルフェニル酢酸（１ｇ、４．６７ｍｍｏｌ）を添加した。室温で１．５時間後、１，８−ジアザビシクロ［５，４，０］ウンデク−７−エン（１．６７ｍＬ）を添加した。この反応混合物をさらに１時間攪拌し、次いで１Ｎ  ＨＣｌ（３５ｍＬ）で処理した。この生成物を酢酸エチルで抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥し、そして酢酸エチル−へキサン（１：１）から再結晶化して４６ｂ（８８０ｍｇ、全収率６０％）を得た。
【０１１１】
【化３４】
2005528384.tif 000030
（  ３−（４−スルファモイルフェニル）−４−フェニル−２（５Ｈ）−フラノン（４８ｂ）  ）
表題の化合物を４７ｂと同様の様式で、４−スルファモイルフェニル酢酸および２−ブロモアセトフェノンから合成した（収量４０％）。
【０１１２】
【化３５】
2005528384.tif 000031
（  ３−（４−スルファモイルフェニル）−４−（３’，４’−ジクロロフェニル）−２（５Ｈ）−フラノン（４９ｂ）  ）
表題の化合物を４７ｂと同様の様式で、４−スルファモイルフェニル酢酸および２−ブロモ−ｌ−（３’，４−ジクロロフェニル）アセトフェノンから合成した（収量３２％）。
【０１１３】
【化３６】
2005528384.tif 000032
（  ３−（４−スルファモイルフェニル）−４−（２’，４’−ジクロロフェニル）−２（５Ｈ）−フラノン（５０ｂ）  ）
表題の化合物を４７ｂと同様の様式で、４−スルファモイルフェニル酢酸および２−ブロモ−ｌ−（２’，４−ジクロロフェニル）アセトフェノンから合成した（収量３０％）。
【０１１４】
【化３７】
2005528384.tif 000033
（細胞培養）
ヒト前立腺癌細胞系統であるＬＮＣａＰおよびＰＣ−３は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  （Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から購入した。細胞を、１０％胎仔性ウシ血清（ＦＢＳ）を補充したＲＰＭＩ１６４０培地で、３７℃、湿らせた５％ＣＯ２のインキュベーターで培養した。細胞には毎日新しい培地を補充し、３日ごとに新しい培地で１：４で継代した。
【０１１５】
（細胞生存分析）
前立腺癌細胞を１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ１６４０培地中で４８時間増殖させ、血清飢餓ＲＰＭＩ培地中で、異なる時間間隔で、ＤＭＳＯ（最終濃度は、０．１％）に溶解させた種々の濃度のセレコキシブに曝露した。コントロールは、セレコキシブ処理した細胞と等しい濃度のＤＭＳＯビヒクルを受容した。処理の間、培地中に浮いている細胞のパーセンテージは経時的に増大した。接着している細胞をトリプシン処理によって収穫し、浮いている細胞は、３，２００×ｇで５分間の遠心分離により回収した。細胞形態を光学顕微鏡で２００×で観察した。接着している細胞および浮いている細胞の両方を細胞生存についての評価のために混合した。細胞生存は、トリパンブルー排除によって決定した。
【０１１６】
（アポトーシスについての分析）
（アポトーシスＥＬＩＳＡ）アポトーシスの誘導もまた、製造者に指示に従って「Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ＥＬＩＳＡ」アッセイ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を用いて、評価した。この試験は、誘導されたアポトーシス死の後でのモノヌクレオソームおよびオリゴヌクレオソームの形態の細胞質のヒストン結合ＤＮＡフラグメントの定量的決定に基づく。簡潔には、実験の２４時間前に、ＰＣ−３細胞（２．５×１０６）をＴ−７５フラスコにプレートした。細胞を５ｍＬの無血清ＲＰＭＩ１６４０培地で２回洗浄し、次いで、異なる時間間隔で、異なる濃度の試験物質またはＤＭＳＯビヒクルで処理した。浮いている細胞および接着している細胞の両方を収集し、そして、１０４個の細胞と等価の細胞溶解液をＥＬＩＳＡ分析のために使用した。
【０１１７】
（切断のウエスタンブロット分析）薬物で処理した細胞を収集し、氷冷したＰＢＳで洗浄し、そして、溶解バッファー（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８）、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、１０％グリセロール、１％  Ｎｏｎｉｄｅｔ  Ｐ−４０、０．５％  デオキシコレート、０．１％ドデシル硫酸ナトリウム、１００μＭ  ４−（２−アミノエチル）ベンゼンスルホニルフルオライド、１０μｇ／ｍＬ  ロイペプチン、および１０μｇ／ｍＬ  アプロチニンからなる）に再懸濁した。１，５００×ｇで５分間の遠心分離の後で、可溶性の細胞溶解液を収集した。等しいタンパク質濃縮物を１０％  ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルで分解し、そして、ニトロセルロース膜に移転した。抗−ＰＡＲＰ抗体によるイムノブロッティングを上述のように行った。
【０１１８】
（イムノブロッティング）Ａｋｔ、ホスホ−Ａｋｔ、ＥＲＫ、およびホスホ−ＥＲＫのウエスタンブロット分析についての一般的な手順を以下のように記載する。細胞をＰＢＳ中で洗浄し、ＳＤＳ−ゲル充填バッファーに再懸濁し、超音波ソニケーターで５秒間音波破砕し、そして、５分間煮沸した。簡単な遠心分離の後で、可溶性画分由来の等しいタンパク質濃縮物をＭｉｎｉｇｅｌ装置上で１０％  ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルにおいて分離し、そして、セミドライトランスファーセルを使用してニトロセルロース膜に移転した。トランスブロットした膜を０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＴＢＳ（ＴＢＳＴ）で２回洗浄し、５％脱脂乳を含有するＴＢＳで６０分間ブロッキングした後、この膜を、ＴＢＳ−１％低脂肪乳中において、１次抗体（１：１，０００希釈）と４℃で１２時間インキュベートし、そして、ＴＢＳＴで２回洗浄した。この膜をヤギ抗ウサギＩｇＧ−ＨＲＰ結合体（１：５，０００希釈）で室温で１時間プローブし、そして、ＴＢＳＴで２回洗浄した。イムノブロットを増強化学発光により可視化した。
【０１１９】
（分子モデリング実験）セレコキシブ、ロフェコキシブおよび４７ｂ（図１１）のそれぞれの化合物を、まず、Ｍａｃｒｏｍｏｄｅｌ７．０中で利用可能なＭｅｒｃｋ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｆｏｒｃｅ  Ｆｉｅｌｄ  （ＭＭＦＦ）を用いる１０００工程のＭｏｎｔｅ−Ｃａｒｌｏ（ＭＣ）シミュレーションに供した（５５）。次いで、ＭＣシミュレーションによって到達した最小構成を、気相において、Ｇａｕｓｓｉａｎ  ９８Ａ７を用いて、Ｂ３ＬＹＰ／６−３１Ｇ＊のＤｅｎｓｉｔｙ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｔｈｅｏｒｙ（ＤＦＴ）レベルで完全に最適化した。３つの最小エネルギー構造の全てを、通常モードの分析で確認し、ネガティブ周波数は見出されなかった。次いで、静電ポテンシャル（ＥＰ）および電子密度についての計算を、Ｇａｕｓｓｉａｎ  ９８Ａ７を用いて、２１６，０００ポイントのグリッドで、完全に最適化された構造の各々について行った。各化合物についての静電ポテンシャル地図の写真をｇＯｐｅｎＭｏｌ（５７、５８）によって生成し、静電ポテンシャルを電子密度上にマッピングした。アイソサーフィス（ｉｓｏｓｕｒｆａｃｅ）値は、０．０００４であり、ＥＰについての範囲は、−０．０３〜０．０３であった。
【０１２０】
（統計学的分析）各実験を３連で行い、種々の条件において、少なくとも２回は繰り返した。
【０１２１】
（結果）
（戦略Ａ：）末端芳香環を種々の置換基で改変するか（化合物２ｂ〜２３ｂ、表２）、または別の環系によって置換した（２４ｂ〜２９ｂ、表２）。
【０１２２】
（戦略Ｂ：）スルホンアミド活性基（ｐｈａｒｍａｃｏｐｈｏｒｅ）およびメチルスルホン活性基は両方とも、ＣＯＸ−２阻害においては同等の能力を示す（５２）が、セレコキシブのスルファモイル部分をメチルスルホニル基で置換した場合、アポトーシス誘導活性はなくなる。本発明者らは、カルボキシアミド基が、一連のセレコキシブアナログ（３０ｂ〜３９ｂ、図１０）のスルホンアミドにとって適した生物学的同配体（ｂｉｏｉｓｏｓｔｅｒｅ）であるのか否かをさらに調査した。
【０１２３】
（戦略Ｃ：）本発明者らは、化合物４０ｂ〜４６ｂを調製し、アポトーシス誘導能力の調節における複素環系の効果を評価した。セレコキシブ  対  ロフェコキシブのコンピュータモデリング分析は、複素環系の周囲の表面静電ポテンシャルとアポトーシス誘導能力との間の相関を示唆する。最終的なより理解しやすい戦略は、表面静電ポテンシャル（前述）に関して、活性セレコキシブおよび不活性ロフェコキシブの全ての分子について比較することであった。この比較により電子密度の重要な相違が明らかになったので、ロフェコキシブ分子を改変して、セレコキシブの表面静電ポテンシャルに近づける努力によって、構造的改変体４７ｂ〜５０ｂを設計した。
【０１２４】
【化３８】
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本明細書に記載する全ての化合物を、３つの別個の細胞系統（アンドロゲン依存性ＬＮＣａＰ（ｐ５３＋／＋）、アンドロゲン非依存性ＰＣ−３（ｐ５３−／−）、およびＢｃｌ−２を過剰発現するＰＣ−３（ＰＣ−３／Ｂｃｌ−２）が挙げられる）においてアポトーシス死を誘導する能力について、評価した（４９）。個々の化合物の能力を、示した濃度で５０％のアポトーシス死を引き起こすために必要な時間を示すＴ１／２として表現した。これらの細胞系統から得られた結果はほぼ同じであり、このことは、アポトーシスの誘導は、アンドロゲン感受性、ｐ５３の機能状態、およびＢｃｌ−２の発現レベルに非依存的であることを示した。選択した化合物を、ＡｋｔおよびＥＲＫ２（これらは、セレコキシブ誘導性のアポトーシス死と相関する（４９、５０））のリン酸化状態に与える影響について評価した。
【０１２５】
（スルファモイル部分は、セレコキシブのアポトーシスに対する作用において中心的な役割を果たしている）ＣＯＸ−２阻害において類似するＩＣ５０値を有する別のＣＯＸ−２阻害剤は、前立腺癌細胞におけるアポトーシス誘導能力に大きな相違を示す。従って、ＣＯＸ−２阻害剤は、速効性のアポトーシス誘導剤および遅効性のアポトーシス誘導剤に分類することができた（図８）。遅効性のアポトーシス誘導剤の代表としては、ロフェコキシブ、ＮＳ３９８、ＤｕＰ６９７、およびテルフェニル誘導体１ｂが挙げられた。この相違は、これらのＣＯＸ−２阻害剤のアポトーシス作用の背景にある生化学的機構の相違を明らかにする。図８に示すように、セレコキシブと遅効性アポトーシス誘導性ＣＯＸ−２阻害剤との間には明らかな構造的相違（すなわち、スルホンアミド  対  メチルスルホン）がある。この大きな相違は、アポトーシスの誘導におけるセレコキシブの高い能力において、スルファモイル部分が役割を果たしていることを示唆している。この前提は、セレコキシブのメチルスルホン対応物への変換の後での高い能力の消失によって裏付けられる（図８Ｂ、左パネル）。さらに、化合物１ｂから１ｂ−ＮＨ２への変換（５１）により、アポトーシス誘導活性が１桁の増大した（図８Ｂ、右パネル）。しかし、ロフェコキシブおよびＤｕＰ６９７のスルホンアミド対応物への変換は、それぞれのアポトーシス誘導活性に優位な変化を有さず、このことは、他の構造要素がアポトーシス機構の活性化に関与していることを示した。
【０１２６】
（戦略Ａ．）一連の誘導体を合成して、末端フェニル環のアポトーシス誘導能力に対する影響を評価した（この誘導体の多くはまた、強力なＣＯＸ−２阻害剤でもあった（５２））（表２）。本発明者らの予備的なデータ（Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，印刷中）と比較して、アポトーシス誘導活性とＣＯＸ−２阻害活性との間には直接的な相関はなく、このことから、これらの２つの薬理学的活性が分離され得ることが確認された。
【０１２７】
【化３９】
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【０１２８】
【表２】
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いくつかの化合物はアポトーシスを誘導する高い能力を示したが、それらは、有意なＣＯＸ−２阻害活性を欠いていた。その逆の場合もあった。アポトーシス誘導のための構造的要件に関して、５−アリール環の一定の程度のかさ高さおよび疎水性が望ましく、これはＣＯＸ−２阻害の構造的要件とは異なる。サイズの減少（すなわち、ＣＨ３→ＨまたはＦ）または極性の増大（ＣＨ３→ＯＨ、ＮＨ２、またはＮＯ２）は、活性を激しく弱めた。試験した２８個の誘導体のうち、化合物１０ｂ、１４ｂ、および２０ｂは、ＰＣ−３細胞に細胞死を引き起こす最も高い能力を示し（５０μＭでのＴ１／２が、１．５時間）、それに化合物６ｂ〜９ｂ、１５ｂ、１９ｂ、および２１ｂが続き（５０μＭでのＴ１／２が、２〜４時間）、一方で残りは弱い能力を示した（＞１００時間）。これらの活性化合物がアポトーシスを促進する機構は、セレコキシブに関しては変わらないままである、すなわちＡｋｔおよびＥＲＫ２を同時に脱リン酸化する。図９は、ＰＣ−３細胞における、化合物１０ｂの時間依存性および／または用量依存性の細胞生存に対する効果（パネルＡ）、アポトーシス死についての証拠（パネルＢ）、およびＡｋｔおよびＥＲＫ２のリン酸化状態（パネルＣ）を示し、これは、セレコキシブを用いて観察されたもの（４９、５０）を連想させる。
【０１２９】
（戦略Ｂ．）スルホンアミド化合物とメチルスルホン化合物との間のアポトーシス誘導活性における不一致は、前者の活性基（ｐｈａｒｍａｃｏｐｈｏｒｅ）が、アポトーシス誘導において最適な能力を与えることを示唆する。本発明者らはさらに、この官能基が活性を失うことなくカルボキシアミド部分で置換され得るのか否かを調査した。従って、本発明者らは、セレコキシブおよび化合物６ｂ、８ｂ〜１０ｂ、１５ｂ、および１８ｂ〜２１ｂに存在するスルホンアミドの位置にカルボキシアミド基を有する化合物３０ｂ〜３９ｂを調査した（図１０Ａ）。図１０Ａに示されるように、８ｂ→３１ｂ、９ｂ→３２ｂ、１０ｂ→３３ｂ、および１９ｂ→３７ｂにおける−ＣＯＮＨ２による−ＳＯ２ＮＨ２の置換は、アポトーシス誘導の能力において感知できる違いを有していなかった。しかし、試験した残りの化合物について、この置換は、活性の有意な減少を生じた。この観察は、これらの２つの活性基の標的タンパク質との相互作用の様式が異なることを示唆する。しかし、この構造改変は、これらのカルボキシアミドがアポトーシスを媒介する、すなわち、ＡｋｔおよびＥＲＫ２の脱リン酸化を促進する機構は変更しなかった。例として化合物３７ｂを用いて、図１０ＢおよびＣはそれぞれ、アポトーシス死およびＡｋｔとＥＲＫに対する得時間依存的な影響の証拠を示す。
【０１３０】
（戦略Ｃ．）前述のように、ロフェコキシブおよびＤｕＰ６９７のスルホンアミド対応物は、アポトーシス誘導において弱い活性を示した。さらに、本発明者らは、ＰＣ−３細胞の細胞生存に対する、異なる複素環式環を有する多数のベンゼンスルホンアミド（４０ｂ〜４５ｂ）の効果を試験した。スルホンアミド基が存在するにも関わらず、これらの化合物の全てが、アポトーシス誘導において弱い能力を示した（５０μＭでのＴ１／２は、＞１００時間）。トリフルオロメチル部分の除去（化合物４０ｂ）のようなセレコキシブのピラゾール環の少しの改変でさえ、高い能力の喪失を生じた。これらのデータは、複素環式環が、アポトーシスを担うシグナル伝達の標的と相互作用する際に必須の役割を果たしているという概念を思わせた。従って、本発明者らは、これら２つの基本型薬物（セレコキシブとロフェコキシブ）の分子モデリング分析を行い、それぞれの複素環系の周囲の静電ポテンシャルを試験した（図１１ＡおよびＢ）。個々の領域の電子密度を色によって印をつけ、青および赤は、それぞれ負の静電ポテンシャルおよび正の静電ポテンシャルを示す。これらの間の変化は、青から赤への変換として見られる。示されるように、かなりの違いが、ピラゾール環とラクトン環との間に示され、これらは、赤色と青色が示すように反対の電子密度プロフィールを有するようである。この知見は、ロフェコキシブの複素環式環が、セレコキシブよりも正電荷性であることを示唆する。
【０１３１】
これらのコンピュータモデリングのデータに基づいて、本発明者らは、ラクトンカルボニルを反対の方向に再配置することにより、ロフェコキシブの表面ポテンシャルを変え、セレコキシブの表面ポテンシャルを模倣した（図１１Ｃ）。この変化を起こした場合、生じる異性体４７ｂの全体的電子密度地図は、セレコキシブの全体的電子密度地図と類似した（Ａ対Ｃ）。しかし、メチルスルホン４７ｂは、ＰＣ−３細胞においてアポトーシスを引き起こす弱い活性を示すので、本発明者らは、対応するスルホンアミド対応物４８ｂ、ならびにそのジクロロ−アナログである４９ｂおよび５０ｂに本発明者らの関心を向けた。
【０１３２】
【化４０】
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それらの中でも、化合物４９ｂは、ロフェコキシブ、４８ｂ、および５０ｂ（１００μＭでのＴ１／２は、＞１００時間）に対して、アポトーシス誘導活性が有意に増大していた（５０μＭでのＴ１／２は、１５時間）ので、最も注目すべきであった。化合物４９ｂの静電ポテンシャル地図は、ピラゾール対応物８ｂ（５０μＭでのＴ１／２は、２時間）と高い程度の類似を示すこと、４９ｂと８ｂとの間の電子密度の相関（図１１ＤおよびＥ）が、セレコキシブと４７ｂとの間の電子密度の相関と同様であるが、５−アリール部分に改良があることに注目すべきである。
【０１３３】
これらのデータは、全体的結合系の立体電子効果が、構造的変化をアポトーシス誘導活性と相関付ける新規の方法を示し得ることを実証する。
【０１３４】
本研究において、本発明者らは、セレコキシブおよびロフェコキシブの分子プラットホームに基づく構造改変を介して、アポトーシス誘導活性およびアポトーシス誘導能力を最適化するための計画を始めた。構造−活性データに従い、本発明者らは、セレコキシブと、前立腺癌細胞におけるアポトーシスを引き起こすその標的タンパク質との間の相互作用を説明するために図１２に示すような作業モデルを提案する。
【０１３５】
ＰＣ−３細胞におけるアポトーシス死の誘導について、アミド部分および複素環系に関してストリンジェントな構造要件がある。対照的に、末端フェニル環は、構造的変化において高い程度の耐性を示す。本発明者らのデータは、アポトーシス誘導能力が、メチル基を種々の極性置換基で置換することによって増強され得ることを示す。しかし、これらの置換基のサイズの減少また親水性の増大は、活性を激しく弱める。
【０１３６】
総括して、本研究の成果は多岐にわたる。第１に、臨床的観点から、ＣＯＸ−２阻害活性をアポトーシス誘導効果から分離することによって、新たなクラスのアポトーシス誘導薬剤の設計のための分子的基盤が提供される。第２に、ＰＣ−３細胞に加えて、これらの分子は、アンドロゲン依存性ＬＮＣａＰ前立腺癌細胞およびＢｃｌ−２過剰発現ＰＣ−３細胞において同等に有効である（データは示さず）。この観察は、これらの新規の薬剤によるアポトーシスの誘導が、アンドロゲン感受性および進行した前立腺癌に関連する遺伝子的異常に非依存的であることを示す。同時に、これらのアポトーシス誘導性薬剤は、ヒト前立腺癌の化学的予防または療法についての強力な候補を示す。
【０１３７】
本明細書で参考とした全ての文章は、参考として援用される。
【０１３８】
本発明を特定の実施形態に関して記載してきたが、これらの実施形態の詳述は、制限として解釈されるべきではない。
【０１３９】
（参考文献）
【０１４０】
【化４１】
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【０１４１】
【化４２】
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【０１４２】
【化４３】
2005528384.tif 000040
【０１４３】
【化４４】
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【０１４４】
【化４５】
2005528384.tif 000042
【０１４５】
【化４６】
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【図面の簡単な説明】
【０１４６】
【図１】図１は、本発明の化合物を調製するための一般的な合成スキームを示す。
【図２】図２は、ウエスタンブロット分析を介した、アンチセンス  シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）のＰＣ−３トランスフェクト体の特徴付けを示す。
【図３】図３Ａは、ＰＣ−３細胞およびＣＯＸ−２欠失クローン２Ｆ６についての細胞生存率  対  時間  のグラフ、および、ドキシサイクリン前処理ありの場合となしの場合での、ＣＯＸ−２アンチセンスクローン  ７Ｄ９についての細胞生存率  対  時間  のグラフを示す。図３Ｂは、ドキシサイクリンありの場合となしの場合の７Ｄ９のウエスタンブロットを示す。
【図４】図４は、細胞生存率  対  時間のグラフであり、ドキシサイクリン処理ありの場合となしの場合での、ロフェコキシブ（ｒｏｆｅｃｏｘｉｂ）ビヒクルおよびジメチルスルホキシドビヒクルのＣＯＸ−２アンチセンスクローン７Ｄ９の生存率に対する効果を示す。
【図５】図５は、セレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）および１ａ〜７ａの化合物の構造および特徴付けを示す。
【図６】図６Ａは、ＰＣ−３細胞の細胞生存率に対する、化合物７ａの用量および時間依存性の効果を示す。図６Ｂは、ＤＡＰＩで染色した後の位相差顕微鏡写真、蛍光顕微鏡観察、およびＤＭＳＯまたは化合物７ａで処置した後のＰＣ−３細胞について、蛍光顕微鏡観察によるアポトーシス細胞の表面へのアネキシンＶの結合の検出を示す。図６Ｃは、ＤＭＳＯおよび化合物７ａで処置した後のＰＣ−３細胞についてのヌクレオソーム形成（４０５ｎｍでのＯ．Ｄ．）  対  時間のグラフである。図６Ｄは、ＰＡＲＰの誘導を示すウエスタンブロットである。
【図７】図７Ａは、化合物７ａのＢｃｌ−２発現レベルに対する時間依存的な効果を示す。図７Ｂは、Ａｋｔのリン酸化状態を示す。そして、図７Ｃは、ＰＣ−３細胞中のＥＲＫ２のリン酸化状態を示す。
【図８】図８Ａは、種々のＣＯＸ−２阻害剤の、構造、ＣＯＸ−２阻害におけるＩＣ５０、およびアポトーシス誘導能力（Ｔ１／２）を示す。図８Ｂは、スルホンアミド  対  メチルスルホンの細胞生存率に対する効果の比較を示す。
【図９】図９Ａは、血清飢餓ＲＰＭＩ  １６４０培地における、化合物１０ｂのＰＣ−３細胞の細胞生存率に対する時間依存的かつ用量依存的な効果を示す。図９Ｂは示す。
【図１０】図１０Ａは、化合物３０ｂ〜３９ｂの効力を示す表である。図１０Ｂは、ＤＭＳＯまたは化合物３７ｂで処理したＰＣ−３細胞におけるヌクレオソームＤＮＡの形成の時間経過、および化合物３７ｂによるＰＡＲＰ切断の誘導を示すウエスタンブロットを示す。図１０Ｃは、化合物３７のＡｋｔおよびＥＲＫ−２リン酸化に対する時間依存性の効果を示すウエスタンブロットである。
【図１１】図１１は、セレコキシブ、ロフェコキシブ、化合物４７ｂ、化合物４９ｂ、化合物８ｂのコンピューターモデリングを示す。
【図１２】図１２は、セレコキシブとそのタンパク質標的との間の相互作用を示す、作業モデルである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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