(57)【要約】本発明は、電気泳動により両性成分を分離するための方法において、１つのｐＨを有する陽極液と１つのｐＨを有する陰極液（ここで陰極液ｐＨは陽極液ｐＨよりも高い）、陽極液と陰極液の間に配置された１つ以上のイオン透過障壁を含む電気泳動分離システム内に、１つのｐＩ値を有する両性成分を含有する試料を置くステップであって、ここで障壁のうちの少なくとも１つは、陽極液ｐＨよりも高く陰極液ｐＨよりも低いｐＩ値を有する等電性障壁であるステップ；陽極液のｐＨより高く陰極液のｐＨより低くかつ両性試料成分のｐＩ値とは異なり又イオン透過等電性障壁のｐＩ値とも異なっているｐＩ値を有する等電性緩衝液を提供するステップ、及び電気泳動システム内で等電性緩衝液の存在下で非等電性状態にて両性試料成分を捕捉するべく電位に対し試料を暴露するステップを含む方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
電気泳動により両性成分を分離するための方法であって、
１つのｐＨを有する陽極液と、前記陽極駅ｐＨよりも高い１つのｐＨを有する陰極液とを含み、前記陽極液と前記陰極液の間に配設された１つ以上のイオン透過障壁を含む電気泳動分離システム内に、１つのｐＩ値を有する両性成分を含有する試料を置くステップであって、前記障壁のうちの少なくとも１つは、前記陽極液ｐＨよりも高く、前記陰極液ｐＨよりも低いｐＩ値を有する等電性障壁であるステップと、
前記陽極液のｐＨより高く、前記陰極液のｐＨより低く、前記両性試料成分のｐＩ値とは異なり、イオン透過等電性障壁のｐＩ値とも異なっているｐＩ値を有する等電性緩衝液を提供するステップと、
前記電気泳動システム内で前記等電性緩衝液の存在下で、非等電性状態にて前記両性試料成分を捕捉するように、前記試料を電位に晒すステップと、
を含む方法。
【請求項２】
前記電気泳動分離システムは、陽極を備え、前記陽極液を収容するように構成された陽極区画と、陰極を備え、前記陰極液を収容するように構成された陰極区画と、前記陽極区画と前記陰極区画の間に配設され１つのｐＩ値を有するイオン透過等電性障壁の形態である１つのイオン透過障壁と備える、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記電気泳動分離システムは、前記陽極区画と陰極区画の間に第１の分離区画を形成する、前記陽極区画と前記陰極区画の間に配設された、第１及び第２のイオン透過障壁をさらに備える、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記第１及び第２のイオン透過障壁は、各々規定されているが異なるｐＩを有するイオン透過等電性障壁である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記試料は、前記試料区画、陽極区画又は前記陰極区画のうちの少なくとも１つに提供される、請求項３又は４に記載の方法。
【請求項６】
前記試料は、前記試料区画に提供され、前記両性成分は、前記試料区画内で非等電性状態にて分離されている、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記両性成分は、前記試料区画または前記陰極区画または前記陽極区画内で、非等電性状態にて得られる、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記試料は、前記試料区画または前記陰極区画または前記陽極区画、或いは前記試料区画、前記陽極区画または前記陰極区画のうちの２つ以上のものの中で、非等電性状態にて得られる２つ以上の両性成分を含有する、請求項３又は４に記載の方法。
【請求項９】
電気泳動分離システムは、前記第１の分離区画に隣接する第２の分離区画を形成する前記陽極区画と、前記陰極区画との間に配設されたもう１つのイオン透過障壁をさらに備え、前記システムは、第１のｐＩ値を有する第１のイオン透過等電性障壁と該第１のイオン透過等電性障壁の第１のｐＩ値とは異なる第２のｐＩ値を有する第２のイオン透過等電性障壁とを備える、請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
前記イオン透過障壁は、全て等電性障壁であり、各々は、規定されているが異なるｐＩを有する等電性障壁である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記試料は、前記第１の試料区画、前記第２の試料区画、前記陽極区画、前記陰極区画または前記第１及び第２の両方の試料区画に提供される、請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記両性成分は、前記第１の試料区画、前記第２の試料区画、前記陽極区画、または前記陰極区画内で非等電性状態にて得られる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記試料は、前記第１の試料区画又は前記第２の試料区画、或いは前記第１の試料区画及び第２の試料区画の各々の中で非等電性状態にて得られる２つ以上の両性成分を含有する、請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記電気泳動分離システムは、前記陽極区画と陰極区画の間に配設された複数の分離区画を形成する、前記陽極区画と前記陰極区画の間に配置された複数のイオン透過障壁をさらに備え、２つ以上のイオン透過障壁が各々異なるｐＩ値を有するイオン透過等電性障壁である、請求項２に記載の方法。
【請求項１５】
イオン透過障壁のうちの３つ以上が、各々異なるｐＩ値を有するイオン透過等電性障壁である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
全ての前記イオン透過障壁は、各々異なるｐＩ値を有するイオン透過等電性障壁である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
各々異なるｐＩ値を有する第１の等電性緩衝液及び第２の等電性緩衝液が、前記試料区画、前記陽極区画または前記陰極区画のうちの少なくとも２つに提供されている、請求項９〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記イオン透過障壁は、非混和液、多孔質固体、非イオン膜、膜、等電性膜、ヒドロゲル膜、ゲル及びヒドロゲルからなる群から選択される、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ヒドロゲル膜は、ポリエーテルスルホンベース、ポリ（ビニル）アルコールベース又はポリアクリルアミドベースである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記非イオン膜は、ガラス繊維、ろ紙、高分子メッシュ及び紙を支持体とする架橋ポリアクリルアミド及びポリ（ビニル）アルコールからなる群から選択された支持膜である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記イオン透過障壁は、ガラスフリット、セラミクスフリット及び高分子フリットからなる群から選択された多孔質フリットである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記イオン透過障壁は、所定のサイズより大きいサイズ又は水和イオン半径を有する分子の通過を実質的に制限する、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記イオン透過等電性障壁は、等電性多孔質固体、等電性膜及び等電性ゲルからなる群から選択される、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記イオン透過等電性障壁は、等電性膜である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記区画間にいかなる対流混合も実質的に存在しない、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記等電性緩衝液は、試料区画、前記陽極区画及び前記陰極区画のうちの少なくとも１つに提供される、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記等電性緩衝液のｐＩ値は、前記両性試料成分のｐＩ値から少なくとも０．００１ｐＨ単位だけ異なっている、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記等電性緩衝液のｐＩ値に最も近いｐＫａ値とｐＩ値との間の差の絶対値が、約１．５未満である、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記等電性緩衝液は、イミノ二酢酸、Ｎ−メチルイミノ二酢酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシルアスパラギン酸、ｍ−アミノ安息香酸、ヒスチジル−グリシン、ヒスチジル−ヒスチジン、ヒスチジン、１，２−ジアミノプロピオン酸、オルニチン、リジン、リシル−リジン及びアルギニンからなる群から選択される、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記等電性緩衝液は、グルタミン酸又はリジンである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記第１の等電性緩衝液は、グルタミン酸であり、前記第２の等電性緩衝液はリジンである、請求項１７に記載の方法。
【請求項３２】
非イオン性可溶化剤を提供するステップをさらに含む、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記可溶化剤は、非イオン性洗剤である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記両性試料成分は、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、アミノフェノール、アミノホスホン酸及びアミノ酸からなる群から選択される、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記両性試料成分は、タンパク質である、請求項３５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
技術分野
本出願の分野は、両性化合物の分離及び濃縮である。より詳細には、本出願は、ｐＨ偏向型等電捕捉技術を用いて、少なくとも１つの両性試料成分を含有する試料の組成を改変するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
背景
電気泳動技術及び等電点電気泳動（ＩＥＦ）技術は、大小、単純、複雑を問わず、両性成分を分離するための主要な技術であり続けている。数多くの分野及び業界で使用されているＩＥＦは、分析規模及び調製規模の両方で実施されている。たとえば、ＩＥＦは、単独でまたはその他の分析若しくは調製技術と連結させた形で、臨床的診断、バイオテクノロジー、製薬及び食品業界などで利用されている。
【０００３】
ＩＥＦにおいては、両性成分は、ｐＨが陽極における比較的低いｐＨ値から陰極における比較的高いｐＨ値まで増大するｐＨ勾配で電界の助けを得て分離される。（ＩＥＦについてのモノグラフに関しては、たとえば、本明細書に参照により援用されているＰ．Ｇ．リゲッティ（Ｐ．Ｇ．Ｒｉｇｈｅｔｔｉ）、「等電点電気泳動法：その理論、方法論及び応用（Ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ  ｆｏｃｕｓｉｎｇ：ｔｈｅｏｒｙ，ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」、エルスヴィア・バイオケミカル（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ）、アムステルダム（Ａｍｓｔｅｒｄａｍ）、１９８３を参照のこと）。両性成分の正味荷電は、その等電状態においてゼロであることから、両性成分の電気泳動による移動速度は、その環境のｐＨがその等電点（ｐＩ）値に等しくなった場合につねにゼロとなる。かくして、異なるｐＩ値を有する両性成分は、ｐＨ勾配内の異なる点で移動を停止する。
【０００４】
複数の手段によって、比較的安定した連続ｐＨ勾配を作り出すことができる。たとえば、担体両性電解質（そのｐＩ値付近で適切な緩衝能力及び導電率を有する化合物）の混合物を使用することができる。同様に、その後固定化ｐＨ勾配ＩＥＦ（ＩＰＧＩＥＦ）のために用いられるｐＨ勾配を予め成形し安定化させるべく、架橋ポリアクリルアミドゲルといったようなイオン透過マトリクス内に、空間的に制御された形で、適切な量の適切な弱酸および弱塩基または弱酸および強塩基または強酸および弱塩基を結合させることができる。（ＩＰＧＩＥＦのモノグラフに関しては、たとえば、本明細書に参照により援用されているＰ．Ｇ．リゲッティ（Ｐ．Ｇ．Ｒｉｇｈｅｔｔｉ）、「固定化ｐＨ勾配：その理論と方法論（Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  ｐＨ  ｇｒａｄｉｅｎｔｓ：ｔｈｅｏｒｙ  ａｎｄ  ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ）」、エルスビア（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）、アムステルダム（Ａｍｓｔｅｒｄａｍ）を参照のこと）。
【０００５】
代替的には、ＩＥＴ分離プロセスの終りで両性試料成分がその等電性状態にて得られる等電性膜ベースの多区画電気分解装置（たとえば、本明細書に参照により援用されているファウベルら（Ｆａｕｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．）の米国特許第５，０８２，５４８号明細書）を用いた等電性捕捉（ＩＥＴ）によって、両性試料成分を互いに分離することも可能である。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
発明の概要
本出願の実施形態は、ＩＥＴプロセスの終りでその非等電性状態にて両性試料成分を得るべく、適切な緩衝能力、滴定能力およびそのｐＩ値付近の導電率を有する１つ以上の適切な等電性緩衝液を添加することによって、ｐＨ偏向型等電捕捉（ＩＥＴ）プロセスを用いて少なくとも１つの両性成分を含有する試料の初期組成を電気泳動的に改変する。
【０００７】
簡単に言うと、本出願に従って実施される方法は、少なくとも１つのイオン透過等電性障壁を有する電気泳動分離システムを選択するステップと、両性試料成分のｐＩ値よりも低いｐＨ値を有する陽極液を選択するステップと、両性試料成分のｐＩ値よりも高いｐＨ値を有する陰極液を選択するステップと、陽極液のｐＨより高く陰極液のｐＨより低くかつ両性試料成分のｐＩ値とは異なっているｐＩ値を有する等電性緩衝液を提供するステップと、電気泳動システム内に試料と等電性緩衝液を導入するステップと、電気泳動分離を実施することによって非導電性状態にて両性試料成分を捕捉するステップと、を提供している。
【０００８】
１つの態様は、１つ以上の分離区画を有する電気泳動分離システムを選択するステップを提供している。もう１つの態様は、両性試料成分及び等電性緩衝液のｐＩ値と異なるｐＩ値を有する２つ以上のイオン透過等電性障壁を選択するステップを提供している。
【０００９】
もう１つの態様は、両性試料成分、第１の等電性緩衝液及び等電性障壁のｐＩ値とは異なるｐＩ値を有する第２の等電性緩衝液を選択するステップを提供している。もう１つの態様は、電気泳動分離を実行することにより等電性障壁のいずれかの側でその非等電性状態で第１の両性試料成分及び第２の両性試料成分を捕捉するステップを提供している。
【００１０】
第一の態様においては、本発明は、電気泳動により両性成分を分離するための方法において、
１つのｐＨを有する陽極液と１つのｐＨを有する陰極液（ここで、該陰極液ｐＨは陽極液ｐＨよりも高い）、該陽極液と陰極液の間に配置された１つ以上のイオン透過障壁を含む電気泳動分離システム内に、１つのｐＩ値を有する両性成分を含有する試料を置くステップであって、ここで障壁のうちの少なくとも１つは、陽極液ｐＨよりも高く陰極液ｐＨよりも低いｐＩ値を有する等電性障壁であるステップと、
陽極液のｐＨより高く陰極液のｐＨより低くかつ両性試料成分のｐＩ値とは異なり又イオン透過等電性障壁のｐＩ値とも異なっているｐＩ値を有する等電性緩衝液を提供するステップと、
電気泳動システム内で等電性緩衝液の存在下で非等電性状態にて両性試料成分を捕捉するべく電位に対し試料を暴露するステップと、
を含む方法を提供している。
【００１１】
好ましくは、電気泳動分離システムは、陽極を含有し陽極液を収容するように構成された陽極区画、陰極を含有し陰極液を収容するように構成された陰極区画および陽極区画と陰極区画の間に配置され１つのｐＩ値を有するイオン透過等電性障壁の形態の１つのイオン透過障壁を備える。
【００１２】
好ましくは、電気泳動分離システムは、陽極区画と陰極区画の間の第１の分離区画を形成する、陽極区画と陰極区画の間に配置された第１及び第２のイオン透過障壁をさらに備える。
【００１３】
１つの好ましい形態においては、第１及び第２のイオン透過障壁は、各々規定されているが異なるものであるｐＩを有する等電性障壁である。
【００１４】
試料は、試料区画、陽極区画または陰極区画のうちの少なくとも１つに提供され得る。１つの好ましい形態においては、試料は試料区画に提供され、両性成分は、試料区画内で非等電性状態にて分離されている。代替的には、両性成分は、試料区画、陰極区画または陽極区画内で非等電性状態にて得ることができる。
【００１５】
試料は、試料区画、陰極区画、陽極区画、試料区画、陽極区画または陰極区画のうちの２つ以上のものの中で非等電性状態にて得られる２つ以上の両性成分を含有し得るということがわかるだろう。
【００１６】
電気泳動分離システムは、さらに、第１の分離区画に隣接する第２の分離区画を形成する、陽極区画と陰極区画の間に配置された第３のイオン透過障壁を備えてよく、該システムは、第１のｐＩ値を有する第１のイオン透過等電性障壁及びこの第１のイオン透過等電性障壁の第１のｐＩ値とは異なる第２のｐＩ値を有する第２のイオン透過等電性障壁を有している。
【００１７】
好ましくは、全てのイオン透過障壁は、各々規定されているが異なるｐＩを有する等電性障壁である。いずれかの１つ以上の障壁が等電性障壁であり得るということがわかるだろう。
【００１８】
この形態においては、試料が第１の試料区画、第２の試料区画、第１及び第２の両方の試料区画、または陽極区画または陰極区画に提供され得る。両性成分は、第１の試料区画又は第２の試料区画、または陽極区画または陰極区画内で非等電性状態にて得ることができる。
【００１９】
試料は、第１の試料区画または第２の試料区画、または陽極区画または陰極区画の中或いは第１の試料区画および第２の試料区画の各々の中で非等電性状態にて得られる２つ以上の両性成分を含有することができる。
【００２０】
もう１つの好ましい形態においては、電気泳動分離システムは、陽極区画と陰極区画の間に配置された複数の分離区画を形成する陽極区画と陰極区画の間に配置された複数のイオン透過障壁を備え、２つ以上のイオン透過障壁は、各々異なるｐＩ値を有するイオン透過等電性障壁である。イオン透過障壁のうちの３つ以上は、各々異なるｐＩ値を有するイオン透過等電性障壁であり得る。全てのイオン透過障壁が、各々異なるｐＩ値を有するイオン透過等電性障壁であり得るということがわかるだろう。
【００２１】
前記方法は、各々異なるｐＩ値を有する第１の等電性緩衝液及び第２の等電性緩衝液を、試料区画又は陽極区画または陰極区画のうちの少なくとも２つに対して提供するステップを含むことができる。
【００２２】
イオン透過障壁は、非混和液、多孔質固体、非イオン膜、膜、等電性膜、ヒドロゲル膜、ゲルおよびヒドロゲルといったような任意の適切な材料または物質の中から選択可能である。
【００２３】
本発明者は、ヒドロゲル膜が好ましくは、ポリエーテルスルホンベース、ポリ（ビニル）アルコールベース又はポリアクリルアミドベースであることを発見した。その他のいかなるタイプのヒドロゲル膜でも、本発明のために使用可能であることがわかるだろう。
【００２４】
好ましくは、非イオン膜は、ガラス繊維、ろ紙、高分子メッシュ及び紙を支持体とする架橋ポリアクリルアミド及びポリ（ビニル）アルコールといったような支持膜である。イオン透過障壁は、ガラスフリット、セラミクスフリット及び高分子フリットといったような多孔質フリットであり得る。
【００２５】
１つの好ましい形態においては、イオン透過障壁は、所定のサイズより大きいサイズ又は水和イオン半径を有する分子の通過を実質的に制限することができる。
【００２６】
イオン透過等電性障壁は、好ましくは、等電性多孔質固体、等電性膜及び等電性ゲルである。より好ましくは、イオン透過等電性障壁は等電性膜である。
【００２７】
イオン透過障壁は好ましくは、障壁間の溶質の実質的な対流混合を防止する。使用中、好ましくは、区画間にいかなる対流混合も実質的に存在しない。
【００２８】
等電性緩衝液は、試料区画、陽極区画及び陰極区画のうちの少なくとも１つに対し提供され得る。好ましくは、等電性緩衝液のｐＩ値は、両性試料成分のｐＩ値から少なくとも０．００１ｐＨ単位だけ異なっている。等電性緩衝液のｐＩ値に最も近いｐＫａ値とｐＩ値の間の差の絶対値は、好ましくは、約１．５未満である。
【００２９】
等電性緩衝液は、実質的に非等電性状態で両性成分を得ることができるようにするあらゆる適切は緩衝液であり得る。適切な緩衝液としては、イミノ二酢酸、Ｎ−メチルイミノ二酢酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシル−アスパラギン酸、ｍ−アミノ安息香酸、ヒスチジル−グリシン、ヒスチジル−ヒスチジン、ヒスチジン、１，２−ジアミノプロピオン酸、オルニチン、リジン、リシル−リジン、及びアルギニンが含まれるが、これらに制限されるわけではない。好ましくは、等電性緩衝液は、グルタミン酸又はリジンである。２つの等電性緩衝液が使用される場合、本発明者らは、グルタミン酸及びリジンが特に適切であることを発見した。
【００３０】
当該方法は、非イオン性可溶化剤を提供するステップをさらに含むことができる。好ましくは、可溶化剤は非イオン性洗剤である。例としては、ＴＷＥＥＮＴＭ２０、ＢｒｉｊＴＭ３０、ＴＲＩＴＯＮＴＭＸ−１００又はＮＤＳＢ−１９５が含まれるがこれらに制限されるわけではない。
【００３１】
該方法は、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、アミノフェノール、アミノホスホン酸及びアミノ酸といった両性試料成分の分離のために特に適している。好ましくは、両性試料成分はタンパク質である。
【００３２】
本発明は、電気泳動分離がはるかに高速であり、成分の溶解度についての問題がさらに少なくなるという点で、成分をその等電性状態にて分離することが必要である先行技術の等電分離に付随する問題点を克服するものである。
【００３３】
本発明のさらなる利点は、等電分離に適合可能なあらゆる電気泳動分離システムの中で実施できるという点にある。該方法は、特別な器具を必要とせず、既知の電気泳動分離システムのより効率の良い使用を結果としてもたらす。
【００３４】
この明細書全体を通して、文脈上他の意味に解釈すべき場合を除き、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」といった変形形態は、記述された要素、整数又はステップ又は一群の要素、整数又はステップの内含を意味するが、その他のあらゆる要素、整数又はステップ又は一群の要素、整数又はステップの除外は意味しないものとして理解されることになる。
【００３５】
本明細書内に内含された文書、行為、材料、装置、物品などについてのあらゆる論述は、本発明のための１つの文脈を提供することのみを目的とするものである。このことは、これらの要件のいずれか又は全てが先行技術の基礎の一部分を成すこと又は、本出願の各クレームの優先日以前にオーストラリアに存在したために本発明に関する分野における一般的共通知識であったことを認めるものとして考えられるべきものではない。
【００３６】
本発明をさらに明確に理解できるようにするために、以下の図面及び例を参考にしながら好ましい形態について以下で記述する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３７】
本発明を実施するための形態
本発明による両性試料成分を有する試料混合物の初期組成を改変するための実施形態は、以下の制限的意味のない詳細の中で記述されている。
【００３８】
図１は、出願中で記述された実施形態を実施するために使用可能な当該技術分野において既知の等電捕捉（ＩＥＴ）ユニットに関するものである。このＩＥＴ分離ユニット（グラディポア（Ｇｒａｄｉｐｏｒｅ）、オーストラリア）においては、陽極１０は、陽極区画１５の中に位置づけされている。陽極液２０が、陽極区画１５を占有している。陽極液２０は酸性溶液であり、たとえばリン酸水溶液（Ｈ３ＰＯ４）である。当然のことながら、当該技術分野において既知のその他の適切な酸性溶液を使用することも可能である。陽極イオン透過障壁３０は、陽極区画１５を隣接する陽極分離区画４０から分離している。イオン透過障壁３０は、イオンの通過を許容するものの、陽極区画１５及び陽極分離区画４０の中味の対流混合を実質的に防止している。イオン透過障壁３０は、同様に一般にイオン透過性対流防止障壁又は制限膜とも呼ばれている。この例では、陽極イオン透過障壁３０はイオン透過性対流防止非等電性障壁であるものの、それは同様に、イオン透過性の対流防止等電性障壁、またはイオンの通過を許容し、かつ、陽極分離区画４０および陽極区画１５の中味の対流混合を防ぐその他のあらゆる障壁であってよい。そのｐＩ値において適切な緩衝及び滴定能力を有するイオン透過等電性分離障壁５０が、陽極分離区画４０と陰極分離区画６０を分離し、区画４０と６０の中味の対流により混合を実質的に防止している。イオン透過等電性障壁５０は、等電性膜、固定化等電性ゲル、等電性ゲートウェイ、またはそのｐＩ値で適切な緩衝及び滴定能力を有する当該技術分野において既知のその他のあらゆる等電性障壁であってよい。
【００３９】
陰極イオン透過障壁７０は、陰極分離区画６０と陰極液８０を含有する陰極区画８５を分離している。陰極イオン透過障壁７０は、イオンの通過を許容するものの、陰極分離区画６０と陰極区画８５の中味の対流混合を実質的に防止する。陰極イオン透過障壁７０は、同様に、一般にイオン透過性対流防止障壁又は制限膜とも呼ばれる。この例では、陰極イオン透過障壁７０は、イオン透過性対流防止非等電性障壁であるものの、それは同様に、イオン透過性の対流防止等電性障壁、またはイオンの透過を許容しかつ陰極分離区画６０陰極区画８５の中味の対流混合を防ぐその他のあらゆる障壁であってよい。陰極液８０は、塩基溶液であり、たとえば、それは、水酸化ナトリウム水溶液（ＮａＯＨ）である。当該技術分野において既知のその他の塩基溶液を使用することも同様に可能である。陰極区画８５は、陰極９０を含有している。
【００４０】
図１は、適切なＩＥＴ分離ユニットの単なる１例にすぎないものの、その他のＩＥＴ分離ユニット形態も同様に使用可能である。根本的なＩＥＴ原理に従った適切なＩＥＴユニットの要素を選択するための基準は、当該技術分野において周知である（たとえば、本明細書に参照により援用されているフォーペルら（Ｆａｕｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．）米国特許第５，０８２，５４８号明細書）。たとえば、陽極イオン透過障壁３０と陰極イオン透過障壁７０の間に１つの分離区画のみを使用することができ、そうでなければ陽極イオン透過障壁３０と陰極イオン透過障壁７０との間に２つ以上の分離区画を使用することができる。さらに、陽極イオン透過障壁３０および陰極イオン透過障壁７０は、類似の構成のものであっても異なる構成のものであってもよい。たとえば、これらは、障壁３０及び７０がイオン透過性を有し、それらが分離している隣接する区画の中味の対流混合を実質的に防止するような形で、イオン透過性、対流防止、非等電性障壁か、またはイオン透過性、対流防止、等電性障壁か、または当該技術分野において既知のその他のあらゆる障壁であってよい。
【００４１】
図１は、３つのイオン透過障壁を有する電気泳動ユニット又はシステムを示しているものの、本発明は、陰極区画のために陽極区画を分離する１つの等電性障壁しかもたないシステムの中で実施することができる。この形態では、試料及び等電性緩衝液を、陽極および陰極区画、及び陽極および陰極区画のいずれかの中で非等電性状態にて分離された成分のうちの１つ以上のものに対して提供することができる。
【００４２】
図２は、本出願によるＩＥＴプロセスの最初における図１に示されたＩＥＴユニットの区画の中の代表的溶液の特性を示す概略図である。１つの特長は、等電性緩衝液がそのｐＩ値で適切な緩衝及び滴定能力及び導電率を有する、ＩＥＴユニットの分離区画内の等電性緩衝液の使用にある。たとえば、陽極分離区画４０は、第１の等電性緩衝液がそのｐＩ値で適切な緩衝および滴定能力および導電率を有する第１の等電性緩衝液１２０および両性試料成分１００および１１０の混合物を含有し、陰極分離区画６０は、両性試料成分１００および１１０、および同じくそのｐＩ値で適切な緩衝能力、滴定能力および導電率を有する第２の等電性緩衝液１３０の混合物を含有している。等電性分離障壁５０のｐＩ値は、第１の両性試料成分１００および第２の両性試料成分１１０のｐＩ値と異なるものになるように選択されている。たとえば、図２では、両性試料成分１００および１１０のｐＩ値の間の１つのｐＩ値を有するように等電性分離障壁５０が選択されている。
【００４３】
第１および第２の等電性緩衝液１２０および１３０のｐＩ値は、ＩＥＴ分離プロセスの最後で第１および第２の両性試料成分がその非等電性状態にて存在することになるように、共に第１および第２の両性試料成分１００および１１０のｐＩ値、等電性分離障壁５０のｐＩ値、および陽極液２０及び陰極液８０のＰＨ値と異なるように選択される。図２では、両性試料成分１００は、たとえば、ｐＩ＝４のタンパク質であり、一方両性試料成分１１０は、たとえば、ｐＩ＝６のタンパク質である。等電性分離障壁５０は、５というｐＩ値を有し、第１の等電性緩衝液１２０は約３．３のｐＩ値を有し、第２の等電性緩衝液１３０は、約１０のｐＩ値を有し、陽極液２０は約２というｐＨ値を有し、陰極液８０は約１２というｐＩ値を有する。この例においては、等電性緩衝液１２０は、２０ｍＭのグルタミン酸溶液であり、等電性緩衝液１３０は２０ｍＭのリジン溶液であり、陽極液２０はリン酸水溶液であり、陰極液８０は水酸化ナトリウム水溶液である。
【００４４】
周知のＩＥＴ指針に従うと、陽極１０と陰極９０の間に電位差を適用すると、全ての両性成分はＩＥＴユニットのそれぞれの区画内に移動するように強制される。ＩＥＴ分離プロセスの終りで、陽極液２０のｐＨ値よりも高く等電性分離障壁５０のｐＩ値よりも低いｐＩ値を有する全ての両性成分は、陽極分離区画４０内に捕捉され（すなわち、第１の両性試料成分１００および等電性緩衝液１２０は陽極分離区画４０内に捕捉される）、陰極液８０のｐＨ値よりも低く等電性分離障壁５０のｐＩ値よりも高いｐＩ値を有する全ての両性成分は、陰極分離区画６０内に捕捉される（すなわち、第２の両性試料成分１１０および等電性緩衝液１３０は陰極分離区画６０中に捕捉される）。しかしながら、陽極分離区画４０内の等電性緩衝液１２０の存在に起因して、第１の両性試料成分１００がＩＥＴプロセスの終りでその非等電性状態にて得られる。同様に、陰極分離区画６０内の等電性緩衝液１３０の存在に起因して、第２の両性試料成分１１０がＩＥＴプロセスの終りでその非等電性状態にて得られる。
【００４５】
当業者であれば、試料内に任意の１時点で３つ以上の両性試料成分が存在し得るということがわかるだろう。当業者であれば、第１の等電性緩衝液１２０及び第２の等電性緩衝液１３０が区画４０および／または６０内に互いに別々に（たとえば、等電性緩衝液１２０は陽極分離区画４０内に導入され得、等電性緩衝液１３０は陰極分離区画６０内に導入され得る）、個別に試料と混合された状態で（たとえば、等電性緩衝液１２０および両性試料成分１００と１１０の混合物を陽極分離区画４０内に導入し、等電性緩衝液１３０および両性試料成分１００と１１０の混合物を陰極分離区画６０内に導入することができる）、互いに混合された状態で（たとえば、等電性緩衝液１２０および１３０を両方共区画４０および／または６０内に導入することができる）、または相互に、そして試料と混合された状態で（たとえば、等電性緩衝液１２０、等電性緩衝液１３０、両性試料成分１００および１１０を、区画４０および／または６０に導入することができる）導入され得るということもわかるであろう。当業者であればさらに、任意の１時点で、３つ以上の両性試料成分、３つ以上の分離区画、３つ以上の等電性緩衝液そして２つ以上の等電性分離障壁が存在しうるということがわかるだろう。
【００４６】
さらに、当業者であれば、分離ユニットに対する試料及び等電性緩衝液（単複）の導入の順序または序列が変動しうる、すなわち試料または緩衝液は分離ユニットに一緒にまたは任意の順序で導入され得るということがわかるだろう。
【００４７】
制限的な意味のない例として、異なるｐＩ値を有する複数の両性試料成分の混合物を２つの部分に分離することができる。この例では本出願に従ったＩＥＴ分離プロセスの終りで、第１の両性試料成分１００は、等電性分離障壁５０のｐＩ値よりも低いｐＩ値を有する両性試料成分の混合物を含む可能性があり、一方、第２の両性試料成分１１０は等電性分離障壁５０のｐＩ値よりも高いｐＩ値を有する両性試料成分の混合物を含むことができる。両性試料成分１００及び１１０は、等電的電気泳動法または等電性捕捉法の原理に従って分離可能なあらゆる両性試料成分であり得る。
【００４８】
図２においては、等電性分離障壁５０は、第１の両性試料成分１００のｐＩ値よりも高いｐＩ値を有するように選択されている。第１の等電性緩衝液１２０は、等電性分離障壁５０のｐＩ値よりも低いｐＩ値を有するように選択されている。第１の等電性緩衝液１２０は、等電性分離障壁５０より低いｐＩ値を有するものの、ＩＥＴ分離の終りで両方共第１の両性試料成分１００を非等電性状態へと強制することになるという理由で、第１の等電性緩衝液１２０は、第１の両性試料成分１００のｐＩ値より高いｐＩ値または低いｐＩ値を有することができる。たとえば、図２において、等電性緩衝液１２０は、第１の両性試料１００のｐＩ値よりも低いｐＩ値を有している。しかしながら、等電性緩衝液１２０は、第１の両性試料成分１００のｐＩ値よりも高いｐＩ値を有することもできる。
【００４９】
同様にして、図２では、等電性分離障壁５０は、第２の両性試料成分１１０のｐＩ値よりも低いｐＩ値を有するように選択されている。第２の等電性緩衝液１３０は、等電性分離障壁５０のｐＩ値よりも高いｐＩ値を有するように選択されている。第２の等電性緩衝液１３０は、等電性分離障壁５０のｐＩ値より高いｐＩ値を有するものの、ＩＥＴ分離の終りで両方共第２の両性試料成分１１０を非等電性状態へと強制することになるという理由で、第２の等電性緩衝液１３０は、第２の両性試料成分１１０のｐＩ値よりも高いｐＩ値又は低いｐＩ値を有することができる。たとえば、図２において、第２の等電性緩衝液１３０は、第２の両性試料１１０のｐＩ値よりも高いｐＩ値を有している。しかしながら、等電性緩衝液１３０は、第２の両性試料成分１１０のｐＩ値よりも低いｐＩ値を有することもできる。
【００５０】
もう１つの実施形態においては、等電性緩衝液１２０のｐＩ値は等電性緩衝液５０のｐＩ値よりも高く、等電性緩衝液１３０のｐＩ値は等電性緩衝液５０のｐＩ値よりも低い。等電性緩衝液１２０のｐＩ値は等電性緩衝液５０のｐＩ値よりも高いものの、等電性緩衝液１２０のｐＩ値は第２の両性試料成分１１０のｐＩ値よりも低い。同様にして、等電性緩衝液１３０のｐＩ値は等電性分離障壁５０のｐＩ値よりも低いものの、等電性緩衝液１３０のｐＩ値は、第１の両性試料成分１００のｐＩ値よりも高い。もう１つの実施形態においては、等電性緩衝液１２０のｐＩ値は等電性障壁５０のｐＩ値よりも高く、第２の両性試料成分１１０のｐＩ値よりも高く、等電性緩衝液１３０のｐＩ値は等電性分離障壁５０のｐＩ値よりも低く、第１の両性試料成分１００のｐＩ値よりも低い。
【００５１】
図２は、２つの等電性緩衝液を使用しているものの、唯一の等電性緩衝液を使用しても当該出願の実施形態は実施される。たとえば、等電性緩衝液１３０を用いることなく等電性緩衝液１２０を使用することができる。同様にして、等電性緩衝液１２０を使用することなく等電性緩衝液１３０を用いることもできる。たとえば、単一の等電性緩衝液の使用は、試料が類似でないｐＩ値の複数の両性成分を含有する場合に有利であり得る。
【００５２】
唯一の等電性緩衝液を用いるこの原理の制限的意味のない例としては、ＩＥＴ分離の終りで等電性緩衝液１２０が選択された両性試料成分（たとえば、第１の両性試料成分１００）と同じ分離区画の中に存在し、かつその試料成分を非等電性にするということを保証するｐＩ値を有するように、等電性緩衝液１２０が選択される。たとえば、第１の両性試料成分１００が等電性分離障壁５０のｐＩ値よりも高いｐＩ値を有する場合、等電性緩衝液１２０は、また、等電性分離障壁５０のｐＩ値よりも高いｐＩ値を有するように選択される。同様にして、第１の両性試料成分１００が等電性分離障壁５０よりも低いｐＩ値を有する場合、等電性緩衝液１２０は等電性分離障壁５０のｐＩ値よりも低いｐＩ値を有するように選択される。等電性緩衝液１２０は第１の両性試料成分１００のｐＩ値と異なるｐＩ値を有することから、等電性緩衝液１２０のｐＩ値は第１の両性試料成分１００のｐＩ値よりも高いまたは低いものであり得る。１つの実施形態においては、等電性緩衝液１２０は、第１の両性試料成分１００のｐＩ値よりも高いｐＩ値を有するように選択される。もう１つの実施形態においては、等電性緩衝液１２０は、第１の両性試料成分１００のｐＩ値よりも低いｐＩ値を有するように選択される。
【００５３】
もう１つの制限的意味のない実施形態においては、ＩＥＴ分離の終りで等電性緩衝液１２０が第１および第２の両性試料成分１００および１１０と異なる分離区画内に存在することを保証するｐＩ値を有するように、等電性緩衝液１２０を選択することができる。このようにして、非電解質試料成分が等電性分離障壁５０の一方の側にとどまっている間に等電性分離障壁５０のもう一方の側で両性試料成分を得ることができる。たとえば、１つの実施形態においては、試料溶液は、非電解質試料成分１１５と共に異なるｐＩ値を有する両性試料成分１００および１１０を含有する。等電性分離障壁５０のｐＩ値は、両性試料成分１００および１１０がＩＥＴ分離プロセスの終りで等電性分離障壁５０の同じ側にあるように選択される。たとえば、この例では、等電性障壁５０のｐＩ値は、両方の両性試料成分１００および１１０のｐＩ値よりも低くなるように選択されている。等電性緩衝液１２０は、ＩＥＴ分離プロセスの終りで等電性緩衝液１２０が両性試料成分１００および１１０とは別の等電性分離障壁５０の側にあるようなｐＩ値を有するように選択される。たとえば、この実施形態においては、等電性緩衝液１２０は、両性試料成分１００および１１０及び等電性分離障壁５０のｐＩ値の両方よりも低いｐＩ値を有するように選択される。陰極分離区画６０には等電性緩衝液１２０が充てんされ、一方、陽極分離区画４０には試料溶液単独または試料溶液と等電性緩衝液１２０の混合物が充てんされ得る。ＩＥＴ分離プロセスの終りで、陽極分離区画は非電解質試料成分１１５および等電性緩衝液１２０を含有し、後者は陽極分離区画４０内で適切な導電率を提供する。ＩＥＴ分離プロセスの終りで、陰極分離区画６０は、両性試料成分１００および１１０の混合物を含有し、これが陰極分離区画６０内に適切な導電率を提供する。
【００５４】
試料がＩＥＴユニットの分離区画の１つの中にのみ入れられる場合、必ずしも必要というわけではないものの、緩衝液１２０がＩＥＴユニットを横断する電位分布を改善し、より高速のＩＥＴ分離に導くことから、水よりもむしろ等電性緩衝液１２０でその他の分離区画を充てんすることが有利であり得る。
【００５５】
適切な等電性緩衝液１２０および１３０は、そのｐＩ値付近で適切な緩衝および滴定能力と導電率を有する。等電性緩衝液がそのｐＩ値において適切な緩衝能力および適切な導電率を有するためには、そのｐＩ値およびその最も近いｐＫａ値の間の差が１未満、好ましくは０．７５未満そしてより好ましくは０．５未満であることが好ましい。たとえば、適切な等電性緩衝液には、Ｎ−メチルイミノ二酢酸、イミノ二酢酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシル−アスパラギン酸、ｍ−アミノ安息香酸、ヒスチジル−グリシン、ヒスチジル−ヒスチジン、ヒスチジン、１，２−ジアミノプロピオン酸、オルニチン、リジン、リシル−リジンおよびアルギニンが含まれる。当業者であれば、適切な緩衝および滴定能力を有するその他の適切な等電性緩衝液も使用できるということがわかるだろう。
【００５６】
図２は、単一の２成分分離を例示しているが、その他の実施形態は逐次的２成分分離を実施する。各々の逐次的ＩＥＴ分離のために選択される等電性緩衝液は同じであっても異なるものであってもよい。たとえば、第１の逐次的ＩＥＴ分離の終りで、第１の両性試料成分１００および１１０を両方共含有するように等電性緩衝液１２０を使用することができる。第２の逐次的ＩＥＴ分離の所望の標的が第１の等電性試料成分１００であり、それを等電性緩衝液１３５の溶液内で得ることが望まれる場合、第２の逐次的分離のための等電性分離障壁５０は、第１及び第２の等電性試料成分１００および１１０のｐＩ値の間にそのｐＩ値を有するように選択され得、等電性緩衝液１２０は、両方の等電性試料成分１００および１１０および等電性分離障壁５０のｐＩ値より大きいｐＩ値を有するように選択される。１実施形態においては、陽極および陰極分離区画４０および６０に、等電性試料成分１００および１１０、及び等電性緩衝液１２０および１３５の混合物を充てんすることができる。もう１つの実施形態においては、陽極分離区画４０に等電性緩衝液１３５を充てんし、陰極分離区画６０に等電性試料成分１００及び１１０及び等電性緩衝液１２０及び１３５の混合物を充てんすることができる。もう１つの実施形態においては、陽極分離区画４０に等電性緩衝液１３５を充てんし、陰極分離区画６０に等電性試料成分１００および１１０、および等電性緩衝液１２０の混合物を充てんすることができる。もう１つの実施形態においては、陽極分離区画４０に等電性緩衝液１３５を充てんし、陰極分離区画６０に等電性試料成分１００および１１０と等電性緩衝液１２０および１３５の混合物を充てんすることができる。
【００５７】
その他の実施形態においては、任意の逐次的分離ステップで新鮮な等電性緩衝液を添加することができ、そうでなければ、先行する分離ステップから等電性緩衝液を持ち越すことができる。その他の実施形態では、多数の等電性緩衝液を用いて（たとえば、Ｉｓｏ  ＰｒｉｍｅＴＭユニット（アマシャムファルマシア（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ））上で実施される）同時多重カット分離が実施される。
【００５８】
等電性緩衝液の存在は標準的に、両性試料成分を非等電性にすることによって、その溶解度を増強する一方、本出願においては、ＩＥＦシステム内で使用された適切な可溶化剤を同様に使用することもできる。たとえば、試料成分の溶解度を増大させるために、当該技術分野において既知の非イオン性及び両性イオン性可溶化剤を使用することもできる。たとえば、ＴＷＥＥＮＴＭ２０、ＢｒｉｊＴＭ３０、ＴＲＩＴＯＮＴＭＸ−１００（アルドリッチ（Ａｌｄｒｉｃｈ））またはその他の任意の適切な非イオン性可溶化剤も同様に用いることができる。同様にして、ＮＤＳＢ−１９５ＴＭ（カナダオンタリオ州ノースヨークのトロントリサーチケミカルズ（Ｔｏｒｏｎｔｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ））または当該技術分野において既知のその他の任意の両性イオン可溶化剤を使用することもできる。
【００５９】
本出願の理解を助けるために以下の実施例が内含されており、これらは、一連の実験の結果を記述している。本発明に関係する以下の実施例は、本発明および本書に記述され請求されている通りの本発明の範囲内に入る現在既知のまたは今後開発されるような本発明の変形形態を特定的に制限するものとみなされるべきものではない。
【実施例】
【００６０】
実施例１
鶏卵卵白試料のフルカラムＵＶ吸光度画像形成型キャピラリ等電点電気泳動法
脱イオン水中に１対２５の率で希釈させた鶏卵卵白を、両性成分を含む試料として使用した。鶏卵卵白試料を分析するために、ｉＣＥ２８０計器（カナダ、トロントのコンヴァージェントバイオサイエンス（Ｃｏｎｖｅｒｇｅｎｔ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ））上でのフルカラムＵＶ吸光度画像形成型キャピラリ等電点電気泳動法を使用した。石英ガラス分離キャピラリの長さは５ｃｍで、その内径は７５マイクロメートルであった。
【００６１】
集束媒質は、０．２８％のメチルセルロース水溶液中でｐＨ３〜１０の範囲を網羅する８％の担体両性電解質（ファルマライト（Ｐｈａｒｍａｌｙｔｅ）３〜１０、（アマシャムファルマシア（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ）））を含有していた（平均分子量＝８０，０００、アルドリッチ（Ａｌｄｒｉｃｈ））。分析すべき試料７５マイクロリットルを、１５０マイクロリットルの集束媒質と混合させた。この溶液のアリコートを分離キャピラリ内に充てんし、３０００Ｖで５分間集束させた。ｐＩマーカーとしては、ダンシルフェニルアラニン（近似ｐＩ＝３．５２）およびターブタリン（近似ｐＩ＝９．６１）を使用した。図３は、鶏卵卵白試料のフルカラムＵＶ吸光度画像形成型キャピラリＩＥＦエレクトロフェログラムを示している。オボアルブミンは、画素４５０〜６５０に対応するキャピラリの領域内で集束した。オボトランスフェリンは、画素１０５０〜１１５０に対応するキャピラリの領域内で集束した。
【００６２】
実施例２
既知のＩＥＴ方法による鶏卵卵白試料の調製規模の分離（先行技術）
当該出願を既知のＩＥＴ方法と比較するため、以下に記述された条件下で既知のＩＥＴ方法を用いて両性成分を含む試料の調製規模の分離を実施した。
【００６３】
先行技術を表わすこの分離は、オーストラリアのグラディポア（Ｇｒａｄｉｐｏｒｅ）により製造されているＩＥＴユニット上で得られた。ＩＥＴカートリッジ（米国特許第６，３２８，８６９号明細書）は、５０００Ｄ公称カットオフポリエーテルスルホン膜で作られた陽極イオン透過障壁３０（ジェルマン（Ｇｅｌｍａｎ））、陽極分離区画４０、ＩｍｍｏｂｉｌｉｎｅＴＭ化学物質（アマシャムファルマシア（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ））、アクリルアミド及びＮ−Ｎ’メチレンビス−アクリルアミド（アマシャムファルマシア（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ））から調製されたｐＩ＝４．７の等電性分離障壁５０（グラディポア（Ｇｒａｄｉｐｏｒｅ））、陰極分離区画６０および、５０００Ｄ公称カットオフポリエーテルスルホン膜で作られた陰極イオン透過障壁７０（ジェルマン（Ｇｅｌｍａｎ））を含有していた。２Ｌ／分の流速で５０ｍＭのリン酸溶液（約ｐＨ＝１．８）８０ｍＬを、陽極区画１５を通して循環させた。２Ｌ／分の流速で陰極区画８５を通して５０ｍＭの水酸化ナトリウム溶液（約ｐＨ＝１２．４）８０ｍＬを循環させた。ろ過された鶏卵卵白溶液（１対２５の比率で、脱イオン水で希釈した鶏卵卵白を含有するもの）各４０ｍＬを、それぞれ２０ｍＬ／分の流速で陽極および陰極分離区画４０および６０を通して循環させた。陽極１０を陽極区画１５内に入れ、陰極９０を陰極区画８５内に入れた。適用された電位は、最初は２５０Ｖで、４００ｍＡの電流を生成した。分離区画に鶏卵卵白溶液を１０回通した後、電流は３７ｍＡまで低下した。その後、電位は５００Ｖまで上昇し、７４ｍＡの電流を生成した。分離は、２５ｍＡでの最終的電流横ばい状態により表わされているように、さらなる７回の通過後事実上完了し、結果として合計分離時間は４０分となった。陽極および陰極分離区画４０および６０から、鶏卵卵白溶液を通過させる度毎にアリコートを取り、これを実施例１に記述した通り、フルカラムＵＶ吸光度画像形成型キャピラリ−ＩＥＦ計器により分析した。
【００６４】
このＩＥＴ分離の結果として、オボアルブミンといったような（近似ｐＩ＝４．６）４．７未満のｐＩ値を有するタンパク質が、ｐＩ＝４．７の等電性分離障壁５０の陽極側（「下流」とラベル付けされた、図４中の下部図版）で陽極分離区画４０内に蓄積した。オボトランスフェリンといったような（近似ｐＩ＝６．１）４．７超のｐＩ値を有するタンパク質が、等電性分離障壁５０の陰極側（「上流」とラベル付けされた図４中の上部図版）で陰極分離区画６０内に蓄積した。オボアルブミン及び下部ｐＩタンパク質の事実上全てが陽極分離区画４０内に移動した。このＩＥＴ分離の終りで分離カートリッジの内部を目視することで、陽極分離区画４０内の沈殿タンパク質の存在が明らかになった。
【００６５】
実施例３
ＩＥＴ分離による鶏卵卵白試料の調製規模の分離
両性成分を含有する試料の調製規模の分離は、以下で記述する条件の下で、本出願に従った２つの等電性緩衝液の存在下で実施された。
【００６６】
本出願に従ったＩＥＴ分離は、実施例２で使用されたＩＥＴユニット上で得られた。ＩＥＴカートリッジ（米国特許第６，３２８，８６９号明細書）は、５０００Ｄ公称カットオフポリエーテルスルホン膜で作られた陽極イオン透過障壁３０（ジェルマン（Ｇｅｌｍａｎ））、陽極分離区画４０、ＩｍｍｏｂｉｌｉｎｅＴＭ化学物質（アマシャムファルマシア（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ））、アクリルアミド及びＮ−Ｎ’メチレンビス−アクリルアミド（アマシャムファルマシア（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ））から調製されたｐＩ＝４．８の等電性分離障壁５０（グラディポア（Ｇｒａｄｉｐｏｒｅ））、陰極分離区画６０及び、５０００Ｄ公称カットオフポリエーテルスルホン膜で作られた陰極イオン透過障壁７０（ジェルマン（Ｇｅｌｍａｎ））を含有していた。２Ｌ／分の流速で５０ｍＭのリン酸溶液（約ｐＨ＝１．８）８０ｍＬを、陽極区画１５を通して循環させた。２Ｌ／分の流速で陰極区画８５を通して５０ｍＭの水酸化ナトリウム溶液（約ｐＨ＝１２．４）８０ｍＬを循環させた。ろ過された鶏卵卵白溶液（１対２５の希釈率でそれぞれ２０ｍＭのグルタミン酸および２０ｍＭのリジン中に溶解させた鶏卵卵白を含有するもの）各４０ｍＬを、それぞれ２０ｍＬ／分の流速で陽極および陰極分離区画４０および６０を通して循環させた。陽極１０を陽極区画１５内に入れ、陰極９０を陰極区画８５内に入れた。適用された電位は、２５０Ｖでありこれは最初、４８０ｍＡの電流を生成した。分離は、５３ｍＡでの最終的電流横ばい状態により表わされるように、分離区画中での鶏卵卵白溶液の１０回の通過の後に事実上完了し、結果として合計分離時間は２５分となった。陽極および陰極分離区画４０および６０から、通過毎にアリコートを取り、これを実施例１に記述した通り、フルカラムＵＶ吸光度画像形成型キャピラリ−ＩＥＦ計器により分析した。
【００６７】
本出願に従ったＩＥＴ分離の結果として、オボアルブミンといったような（近似ｐＩ＝４．６）４．８未満のｐＩ値を有するタンパク質が、ｐＩ＝４．８の等電性分離障壁５０の陽極側（「下流」とラベル付けされた、図５中の下部図版）で陽極分離区画４０内に蓄積した。オボトランスフェリンといったような（近似ｐＩ＝６．１）４．８超のｐＩ値を有するタンパク質が、等電性分離障壁５０の陰極側（「上流」とラベル付けされた図５中の上部図版）で陰極分離区画６０内に蓄積した。オボアルブミン及び下部ｐＩタンパク質の事実上全てが陽極分離区画４０内に移動した。このＩＥＴ分離の終りで分離カートリッジの内部を目視することで、タンパク質の沈殿が陽極分離区画４０または陰極分離区画６０のいずれの中でも発生しなかった。
【００６８】
かくして、事実上、実施例２の場合と同じ分離が実施例３でも達成されたが、分離作業全体を通して適用される電位がより低いものであったという事実にも関わらず、この分離のためにＩＥＴカートリッジにこれらの溶液を通過させる所要回数は少なく、所要時間は短くて済んだ。さらに、既知のＩＥＴ分離の主要な制限の１つ、すなわち、その等電性状態で回収される両性試料成分の溶解度が低いためにそれらの沈殿がひき起こされるという制限は緩和された。
【００６９】
実施例４
ＩＥＴ分離による鶏卵卵白試料の調製規模の逐次的２成分分離
両性成分を含有する試料の調製規模の逐次的２成分分離は、近い間隔のｐＩ値を有する両性成分からの画分を得るため以下に記述した条件で本出願に従って２つの等電性緩衝液の存在下で実施された。
【００７０】
この実施例では、実施例３で陽極分離区画４０から回収された試料を、再び、５０００Ｄ公称カットオフポリエーテルスルホン膜で作られた陽極イオン透過障壁３０（ジェルマン（Ｇｅｌｍａｎ））、陽極分離区画４０、ＩｍｍｏｂｉｌｉｎｅＴＭ化学物質（アマシャムファルマシア（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ））、アクリルアミドおよびＮ−Ｎ’メチレンビス−アクリルアミド（アマシャムファルマシア（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ））から調製されたｐＩ＝４．５の等電性分離障壁５０（グラディポア（Ｇｒａｄｉｐｏｒｅ））、陰極分離区画６０および、５０００Ｄ公称カットオフポリエーテルスルホン膜で作られた陰極イオン透過障壁７０（ジェルマン（Ｇｅｌｍａｎ））を含有するＩＥＴカートリッジ（米国特許第６，３２８，８６９号明細書）を用いたＩＥＴ分離に付した。２Ｌ／分の流速で５０ｍＭのリン酸溶液（約ｐＨ＝１．８）８０ｍＬを、陽極区画１５を通して循環させた。２Ｌ／分の流速で陰極区画８５を通して５０ｍＭの水酸化ナトリウム溶液（約ｐＨ＝１２．４）８０ｍＬを循環させた。４．８のｐＩ値を有する等電性分離障壁５０を用いた実施例３でのＩＥＴ分離の後、陽極分離区画４０から回収した３８ｍＬの液体を、２０ｍＬ／分の流速で陽極分離区画４０を通って循環させた。かくして、当初、この流れの中には、ｐＩが４．８未満のタンパク質と実施例３中で添加されたグルタミン酸の両方が存在していた。２０ｍＭのリジン溶液４０ｍＬを、２０ｍＬ／分の流速で陰極分離区画６０を通って循環させた。陽極１０を陽極区画１５内に入れ、陰極９０を陰極区画８５内に入れた。適用された電位は２５０Ｖであり、８７ｍＡの初期電流を生成した。予め分画させた鶏卵卵白溶液の６回の通過後、電流は６８ｍＡで横ばい状態となった。各通過の後、陽極分離区画４０及び６０からアリコートを取り、これを実施例１に記述した通り、フルカラムＵＶ吸光度画像形成型キャピラリＩＥＦ計器により分析した。
【００７１】
逐次的に適用された第２のＩＥＴ分離の結果として、４．５未満のｐＩ値を有するタンパク質が、ｐＩ＝４．５の等電性分離障壁５０の陽極側（「下流」とラベル付けされた、図６中の下部図版）で陽極分離区画４０内に残った。オボアルブミンといったような（近似ｐＩ＝４．６）４．５超のｐＩ値を有するタンパク質が、等電性分離障壁５０の陰極側（「上流」とラベル付けされた図６中の上部図版）で陰極分離区画６０内に蓄積した。オボアルブミンの移送は、陽極分離区画４０内のグルタミン酸及び陰極分離区画６０内のリジンの存在に助けられて、６回の通過で約９０％完了していた。特に、陰極分離区画６０は、ｐＩが４．５未満のタンパク質を全く含有していなかった（これらは陽極分離区画４０内にとどまっていた）。陽極分離区画４０は、幾分かの残りのｐＩ４．５超のタンパク質を含有していた。また、ここでも、本発明に従ったＩＥＴ分離の終りでのＩＥＴカートリッジの内部の目視によって、陽極分離区画４０または陰極分離区画６０のいずれの中にもタンパク質の沈殿が全く存在しなかったということが明らかになった。
【００７２】
実施例５
ＩＥＴ分離による両性成分を含有する鶏卵卵白試料の調製規模の分離
両性成分を含有する試料の調製規模の分離を、以下で記述する条件下で本出願に従った１つの等電性緩衝液の存在下で実施した。
【００７３】
本出願に従った分離は、１０００Ｄ公称カットオフポリアクリルアミド膜で作られた陽極イオン透過障壁３０（グラディポア（Ｇｒａｄｉｐｏｒｅ））、陽極分離区画４０、ＩｍｍｏｂｉｌｉｎｅＴＭ化学物質（アマシャムファルマシア（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ））、アクリルアミドおよびＮ−Ｎ’メチレンビス−アクリルアミド（アマシャムファルマシア（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ））から調製されたｐＩ＝５．０の等電性分離障壁５０（グラディポア（Ｇｒａｄｉｐｏｒｅ））、陰極分離区画６０および、１０００Ｄ公称カットオフポリアクリルアミド膜で作られた陰極イオン透過障壁７０（グラディポア（Ｇｒａｄｉｐｏｒｅ））を含有するＩＥＴカートリッジ（米国特許第６，３２８，８６９号明細書）を用いて実施例３および４内で使用されたＩＥＴユニット上で得られた。２Ｌ／分の流速で２ｍＭの酢酸溶液（約ｐＨ＝３．９）６０ｍＬを、陽極区画１５を通して循環させた。２Ｌ／分の流速で陰極区画８５を通して１５ｍＭのエタノールアミン溶液（約ｐＨ＝１０．５）６０ｍＬを循環させた。ろ過された鶏卵卵白溶液（１対２５の比率で、脱イオン水で希釈した鶏卵卵白を含有するもの）３０ｍＬを、２０ｍＬ／分の流速で陽極分離区画４０を通して循環させた。ろ過された鶏卵卵白溶液（５ｍＭのリジン溶液中で１対２５の比率で希釈した鶏卵卵白を含有するもの）３０ｍＬを、２０ｍＬ／分の流速で陰極分離区画６０を通して循環させた。陽極１０を陽極区画１５内に入れ、陰極９０を陰極区画８５内に入れた。適用された電位は、２５０Ｖで、これは２８０ｍＡの初期電流を生成した。陽極および陰極分離区画４０および６０から、通過毎にアリコートを取り、これを実施例１に記述した通り、フルカラムＵＶ吸光度画像形成型キャピラリ−ＩＥＦ計器により分析した。ＩＥＴ分離は、図７に示した通り鶏卵卵白溶液の３回の通過後ほぼ完了しており、合計６分の分離時間が必要であった。
【００７４】
このＩＥＴ分離の結果として、オボアルブミンといったような（近似ｐＩ＝４．６）５．０未満のｐＩ値を有するタンパク質が、ｐＩ＝５．０の等電性分離障壁５０の陽極側（「下流」とラベル付けされた、図７中の下部図版）で陽極分離区画４０内に蓄積した。オボトランスフェリンといったような（近似ｐＩ＝６．１）５．０超のｐＩ値を有するタンパク質が、等電性分離障壁５０の陰極側（「上流」とラベル付けされた図７中の上部図版）で陰極分離区画６０内に蓄積した。オボアルブミン及び下部ｐＩタンパク質の事実上全てが陽極分離区画４０内に移動した。
【００７５】
実施例６
ＩＥＴ分離による両性試料混合物の調製規模の脱塩
両性成分含有試料の調製規模の脱塩は、以下で記述する条件の下で、本出願に従った１つの等電性緩衝液の存在下で実施された。
【００７６】
本出願に従った脱塩プロセスは、実施例２で使用されたＩＥＴユニット上で得られた。ＩＥＴカートリッジ（米国特許第６，３２８，８６９号明細書）は、架橋ポリ（ビニルアルコール）膜（グラディポア（Ｇｒａｄｉｐｏｒｅ））で作られた陽極イオン透過障壁３０及び架橋ポリ（ビニルアルコール）（グラディポア（Ｇｒａｄｉｐｏｒｅ））膜で作られた陰極イオン透過障壁７０を含有していた。２Ｌ／分の流速で８０ｍＭのリン酸溶液（約ｐＨ＝１．６）２００ｍＬを、陽極区画１５を通して循環させた。２Ｌ／分の流速で陰極区画８５を通して４００ｍＭの水酸化ナトリウム溶液（約ｐＨ＝１３．２）２００ｍＬを循環させた。３０ｍＬの試料溶液（当初両性試料成分として３０ｍＭのチラミン、等電性緩衝液としての３０ｍＭのｍ−アミノ安息香酸及び強電解質塩としての３０ｍＭのパラ−トルエンスルホン酸ベンジルトリメチルアンモニウムを含有する）を、２０ｍＬ／分の流速で分離区画を通して循環させた。陽極１０を陽極区画１５内に入れ、陰極９０を陰極区画８５内に入れた。当初、適用された電位は５Ｖであり、これは５００ｍＡの電流を生成した。両性試料成分チラミンが非常に長い時間（７．５時間）、（等電性緩衝液ｍ−アミノ安息香酸と混合されて）非等電性状態でＩＥＴユニット内に捕捉され得るということを実証するために、循環させた溶液を４５０分間電気泳動させた。４５０分の時点で、８０Ｖの適用された電位は、３００ｍＡの電気泳動電流を生成した。実験全体にわたり分離区画からアリコートを取り、Ｗ．Ａ．ウイリアムズ（Ｗｉｌｌｉａｍｓ）とＧ．ヴィフ（Ｖｉｇｈ）「キャピラリ電気泳動法のための迅速で正確な移動度決定方法（Ａ  Ｆａｓｔ，Ａｃｃｕｒａｔｅ  Ｍｏｂｉｌｉｔｙ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｃａｐｉｌｌａｒｙ  Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）」、分析化学（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）６８（１９９６）１１７４に記述されているような圧力媒介型キャピラリ電気泳動法（ＰｒｅＭＣＥ）によってこれを分析した。初期試料のＰｒｅＭＣＥＵＶ吸光度検出器のトレースが、図８の上部図版（Ｔ０分とラベル付けされている）に示され、最終アリコートのものは図８の下部図版（Ｔ４５０分とラベル付けされている）に示されている。検出器トレースにおいて、ラベルＢＴＡは、ベンジルトリメチルアンモニウムイオンに対応するピークを表わしており、ラベルＰＴＳＡは、パラ−トルエンスルフォネートイオンに対応するピークを表わし、ラベルｍＡＢＡは、ｍ−アミノ安息香酸に対応するピークを表わし、一方、ラベルＮＭ１、ＮＭ２及びＮＭ３は、ＰｒｅＭＣＥ分析における内部標準であるニトロメタンに対応するピークを表わしている。
【００７７】
本出願に従ったＩＥＴ分離の結果として、両性成分チラミンを含有した試料から、強い電解質塩パラ−トルエンスルホン酸ベンジルトリメチルが取出された。チラミンは、ｍ−アミノ安息香酸と共に分離区画内で捕捉され、その非等電性状態にあった。かくして、試料の初期組成をうまく改変することができ、両性試料成分は、その非等電性状態でＩＥＴユニット内に捕捉された。
【００７８】
実施例７
ＩＥＴ分離による鶏卵卵白試料の調製規模の脱塩
両性成分を含有する試料の調製規模の脱塩は、以下で記述する条件下で、本出願に従った２つの等電性緩衝液の存在下で実施された。
【００７９】
本出願に従った脱塩プロセスは、実施例２で使用されたＩＥＴユニット上で得られた。ＩＥＴカートリッジ（米国特許第６，３２８，８６９号明細書）は、５０００Ｄ公称カットオフポリエーテルスルホン膜で作られた陽極イオン透過障壁３０（ジェルマン（Ｇｅｌｍａｎ））および、５０００Ｄ公称カットオフポリエーテルスルホン膜（ジェルマン（Ｇｅｌｍａｎ））で作られた陰極イオン透過障壁７０を含有していた。２Ｌ／分の流速で５０ｍＭのリン酸溶液（約ｐＨ＝１．８）２００ｍＬを、陽極区画１５を通して循環させた。２Ｌ／分の流速で陰極区画８５を通して５０ｍＭの水酸化ナトリウム溶液（約ｐＨ＝１２．４）２００ｍＬを循環させた。８０ｍＬのろ過済み鶏卵卵白溶液（第１の等電性緩衝液としての２０ｍＭのグルタミン酸、第２の等電性緩衝液としての２０ｍＭのリジンおよび強電解質塩としての２５ｍＭのパラ−トルエンスルホン酸ベンジルトリメチルアンモニウムを同様に含有する溶液中で１対２５の比率で溶解した両性試料成分として鶏卵卵白を含有する）を、４０ｍＬ／分の流速で分離区画を通して循環させた。陽極１０を陽極区画１５内に入れ、陰極９０を陰極区画８５内に入れた。当初適用された電位は３５Ｖであり、これは５００ｍＡの電流を生成した。２４ｍＡでの最終的電流横ばい状態により表されるように、５５分という短い時間で、再循環された鶏卵卵白溶液からパラ−トルエンスルホン酸ベンジルトリメチルアンモニウム塩の大部分を取出した。実験全体にわたり分離区画からアリコートを取り、Ｗ．Ａ．ウイリアムズ（Ｗｉｌｌｉａｍｓ）とＧ．ヴィフ（Ｖｉｇｈ）「キャピラリ電気泳動法のための精確な移動度決定方法」、分析化学６８（１９９６）１１７４に記述されているような圧力媒介型キャピラリ電気泳動法（ＰｒｅＭＣＥ）によってこれを分析した。初期試料のＰｒｅＭＣＥＵＶ吸光度検出器のトレースが、図９の上部図版（Ｔ０分とラベル付けされている）に示され、最終アリコートのものは図９の下部図版（Ｔ５５分とラベル付けされている）に示されている。検出器トレースにおいて、ラベルＢＴＡは、ベンジルトリメチルアンモニウムイオンに対応するピークを表わしており、ラベルＰＴＳＡは、パラ−トルエンスルフォネートイオンに対応するピークを表わし、一方ラベルＮＭ１、ＮＭ２およびＮＭ３は、ＰｒｅＭＣＥ分析における内部標準であるニトロメタンに対応するピークを表わしている。
【００８０】
本出願に従ったＩＥＴ分離の結果として、試料から強電解質塩、パラ−トルエンスルホン酸ベンジルメチルアンモニウムを取出し、一方、両性試料成分、鶏卵卵白タンパク質はその非等電性状態で、リジンおよびグルタミン酸の両方と混合されて、分離区画内に捕捉された。かくして、試料の初期組成は、うまく改変され、両性試料成分は、２つの等電性緩衝液の存在下でその非等電性状態で、ＩＥＴユニット内で捕捉された。
【００８１】
実施例８
ＩＥＴ分離による鶏卵卵白試料の調製規模の分離
両性成分を含有する試料の調製規模の分離を、以下で記述する条件下で本出願に従った２つの等電性緩衝液の存在下で実施した。
【００８２】
本出願に従ったＩＥＴ分離は、実施例２に使用されたＩＥＴユニット上で得られた。ＩＥＴカートリッジ（米国特許第６，３２８，８６９号）は、ＩｍｍｏｂｉｌｉｎｅＴＭ化学物質（アマシャムファルマシア（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ））、アクリルアミドおよびＮ−Ｎ’−メチレンビス−アクリルアミド（アマシャムファルマシア（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ））から調製されたｐＩ＝３．０の等電性障壁（グラディポア（Ｇｒａｄｉｐｏｒｅ））から作られた陽極イオン透過障壁３０、陽極分離区画４０、ＩｍｍｏｂｉｌｉｎｅＴＭ化学物質（アマシャムファルマシア（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ））、アクリルアミドおよびＮ−Ｎ’−メチレンビス−アクリルアミド（アマシャムファルマシア（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ））から調製されたｐＩ＝５．０の等電性分離障壁５０（グラディポア（Ｇｒａｄｉｐｏｒｅ））、陰極分離区画６０、およびＩｍｍｏｂｉｌｉｎｅＴＭ化学物質（アマシャムファルマシア（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ））、アクリルアミドおよびＮ−Ｎ’−メチレンビス−アクリルアミド（アマシャムファルマシア（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ））から調製されたｐＩ＝８．２の等電性障壁（グラディポア（Ｇｒａｄｉｐｏｒｅ））で作られた陰極イオン透過障壁７０を含有していた。２Ｌ／分の流速で、陽極区画１５を通して１０ｍＭのリン酸溶液８０ｍＬを循環させた。２Ｌ／分の流速で陰極区画８５を通して１０ｍＭのトリエタノールアミン溶液８０ｍＬを循環させた。（それぞれ１対２５の希釈率で２０ｍＭのグルタミン酸および２０ｍＭのヒスチジン中に溶解させられた鶏卵卵白を含有する）各々３０ｍＬのろ過済み鶏卵卵白溶液を、２０ｍＬ／分の流速でそれぞれ陽極および陰極分離区画４０および６０を通して循環させた。陽極１０を陽極区画１５内に入れ、陰極９０を陰極区画８５内に入れた。初期電気泳動電流は２５０ｍＡであった。分離区画に鶏卵卵白溶液を８回通した後、分離は事実上完了しており、その結果、合計分離時間は１６分であった。通過毎に陽極および陰極分離区画４０および６０からアリコートを取り、これを実施例１に記述した通り、フルカラムＵＶ吸光度画像形成型キャピラリ−ＩＥＦ計器により分析した。
【００８３】
本出願に従ったＩＥＴ分離の結果として、オボアルブミンといったような（近似ｐＩ＝４．６）５．０未満のｐＩ値を有するタンパク質が、ｐＩ＝５．０の等電性分離障壁５０の陽極側（「下流」とラベル付けされた、図１０中の下部図版）で陽極分離区画４０内に蓄積した。オボトランスフェリンといったような（近似ｐＩ＝６．１）５．０超のｐＩ値を有するタンパク質が、等電性分離障壁５０の陰極側（「上流」とラベル付けされた図１０中の上部図版）で陰極分離区画６０内に蓄積した。オボアルブミンおよび下部ｐＩタンパク質の事実上全てが陽極分離区画４０内に移動した。このＩＥＴ分離の終りに分離カートリッジの内部を目視することにより、陽極分離区画４０または陰極分離区画６０のいずれの中にもタンパク質の沈殿は全く発生していないことがわかった。
【００８４】
当業者であれば、広範に記述されている通りの本発明の精神または範囲から逸脱することなく、特定の実施形態内に示されている通り本発明に対し数多くの変更および／または修正を加えることができる、ということがわかるだろう。従って本実施形態は、あらゆる観点から、制限的な意味のない一例としてみなされるべきものである。
【図面の簡単な説明】
【００８５】
【図１】本出願の実施形態を実施するために使用可能である等電性捕捉（ＩＥＴ）ユニット（先行技術）（オーストラリアのグラディポア（Ｇｒａｄｉｐｏｒｅ））の概略図である。
【図２】本出願に従った分離プロセスの始めにおける、図１に示されたＩＥＴユニットの区画内の代表的溶液の特性を表わす概略図である。
【図３】実施例１で記述された通りのキャピラリ等電点電気泳動法により分析された鶏卵卵白試料のフルカラム画像形成型ＵＶ吸光度検出器のトレースである。
【図４】実施例１に記述されているようにキャピラリ等電点電気泳動法によって分析された、実施例２に記述されている通りに作動させられた図１に示されているＩＥＴユニットの陰極及び陽極分離区画からＩＥＴ分離の終りで取出されたアリコートのフルカラム画像形成型ＵＶ吸光度検出器トレースである。
【図５】実施例１に記述されているようにキャピラリ等電点電気泳動法によって分析された、実施例３に記述されている通りに作動させられた図１に示されているＩＥＴユニットの陰極及び陽極分離区画からＩＥＴ分離の終りで取出されたアリコートのフルカラム画像形成型ＵＶ吸光度検出器トレースである。
【図６】実施例１に記述されているようにキャピラリ等電点電気泳動法によって分析された、実施例３で陽極分離区画から得られた試料のＩＥＴ分離の終わりで、実施例４に記述されている通りに作動させられた図１に示されているＩＥＴユニットの陰極及び陽極分離区画から取出されたアリコートのフルカラム画像形成型ＵＶ吸光度検出器トレースである。
【図７】実施例１に記述されているようにキャピラリ等電点電気泳動法によって分析された、実施例５に記述されている通りに作動させられた図１に示されているＩＥＴユニットの陰極及び陽極分離区画からＩＥＴ分離の終りで取出されたアリコートのフルカラム画像形成型ＵＶ吸光度検出器トレースである。
【図８】実施例６に記述されている通りに作動させられたＩＥＴユニットの分離区画からＩＥＴ分離の始めと終りに取出されたアリコートの圧力媒介型キャピラリ電気泳動分離中に記録されたＵＶ吸光度検出器トレースである。
【図９】実施例７に記述されている通りに作動させられたＩＥＴユニットの分離区画からＩＥＴ分離の始めと終りに取出されたアリコートの圧力媒介型キャピラリ電気泳動分離中に記録されたＵＶ吸光度検出器トレースである。
【図１０】実施例１に記述されているようにキャピラリ等電点電気泳動法によって分析された、実施例８に記述されている通りに作動させられた図１に示されているＩＥＴユニットの陰極及び陽極分離区画から８回の通過後にＩＥＴ分離の終りで取出されたアリコートのフルカラム画像形成型ＵＶ吸光度検出器トレースである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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