(57)【要約】本特許出願は、一般式(Ｉ)の環状および分岐ペプチドの調製、および常磁性または放射性の金属で標識されたそれらの複合誘導体について記載する。本発明の化合物は、タイプＡおよび／またはＢコレシストキニンレセプターを過剰発現している主要な腫瘍およびその転移を識別し定位するための診断薬として、並びに治療薬およびコレシストキニンのアゴニストまたはアンタゴニストとして使用される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
【化１】
2005503350.tif 000015
（式中、Ｘａａは互いに独立に任意のアミノ酸であり；
Ｘｂｂは、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ2、−ＳＨおよび−ＯＨからなる群から選択される少なくとも３つの官能基を含むアルファまたはベータアミノ酸であって、好ましくはＬｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｃｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｇａｂａ、イプシロン−Ａｃａおよびデルタ−Ａｖａから選択されるアミノ酸であり；
ｎは０と１５の間であり、
ｍは２と１２の間である）
の化合物および放射性もしくは常磁性の金属または放射性ハロゲンとの錯体、並びにそれらの生理学的に許容される有機もしくは無機塩基との、または生理学的に許容される有機もしくは無機酸の陰イオンとの塩類。
【請求項２】
Ｘａａアミノ酸の少なくとも１つは、メチオニン、チロシンまたはチロシン−ｍ−スルホン酸の残基である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ｍが４と８の間の整数であり、ｎが３と５の間の整数であり、Ｘａａアミノ酸が少なくとも１個のメチオニン残基および１つのチロシン残基またはスルホン化されたチロシン残基を含むもの；
ｍが４と８の間の整数であり、ｎが３と５の間の整数であり、Ｘａａアミノ酸が少なくとも１個のメチオニン残基、１つのチロシン残基またはスルホン化されたチロシン残基および１つのリジン残基を含むもの；
ｍが４と８の間の整数であり、ｎが３と５の間の整数であり、Ｘａａアミノ酸が少なくとも１個のメチオニン残基、１つのチロシン残基またはスルホン化されたチロシン残基、１つのリジン残基またはオルニチン、アスパラギン酸およびグルタミン酸から選ばれる１個のアミノ酸を含むものである請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
一般式（ＩＩ）：
【化２】
2005503350.tif 000016
（式中、
ｍは４であり；
ｎは３と５の間の整数であり；
Ｘａａ１および／またはＸａａ２は存在しなくてもよく；
Ｘａａ３はＡｓｐまたはＧｌｕであり；
Ｘａａ４はＴｙｒまたはＳＯ3Ｈ−Ｔｙｒであり；
Ｘａａ１０はＰｈｅまたは、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｔｒｐ、ＧｌｙおよびＰｒｏから選択されるアミノ酸である）を有する請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
【化３】
2005503350.tif 000017
から選択される請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
一般式（ＩＸ）の化合物：
Ａ−［Ｙ］z−Ｃ            （ＩＸ）
（式中、
Ａは請求項１から５に記載のペプチドであり；
ｚは０と５の間の整数であり；
Ｙは、ペプチドＡの中に存在する個々のアミノ酸の側鎖上に存在する官能基のうちの１つに、またはＡのＮ−末端（−ＮＨ2）基、またはＣ−末端（−ＣＯ2Ｈ）基に、およびＣに結合するスペーサー鎖であり；ｚが２と５の間の整数である場合、ユニットＹは互いに同一でも異なっていてもよく；
Ｃは、スペーサー鎖Ｙに共有結合的に、またはペプチドＡに直接に、またはペプチドＡの多数のアミノ酸単位に結合した、常磁性金属または放射性同位元素と複合し得るキレート剤である）。
【請求項７】
Ｃが、ＥＤＴＡ；ＤＴＰＡ；ＥＯＢ−ＤＴＰＡ；ＢＯＰＴＡ；ＤＴＰＡ−ＢＭＡ；ＤＴＰＡ−ＧＬＵ；ＤＴＰＡ−Ｌｙｓ；ＤＯＴＡ；ＤＯＴＭＡ；ＤＯ３Ａ；ＨＰＤＯ３Ａ；ＭＣＴＡ；ＤＰＤＰ；ＥＤＴＰ；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカノ−１，４，７，１０−テトラキス［メチレン（メチルホスフィン）］酸；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカノ−１，４，７，１０−テトラキス［メチレン（メチルホスホン）］酸；テキサフリン類、ポルフィリン類、フタロシアニン類；式（ＸＩＩＩ）の化合物
（Ｎアミノ／アミド）4-j（Ｓチオール誘導体）j      （ＸＩＩＩ）
（ここでｊは０、１または２の整数値を有する）
から選択される請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｙが以下の式の基である：
【化４】
2005503350.tif 000018
（式中、ｒ、ｌおよびｑは各々独立して０または１であり、ｐは０と１０の間で変わることができ（但し、ｌ、ｒおよびｑの少なくとも１つは０以外である）；
Ｘは、Ｏ原子、または−ＮＲ基（ＲはＨ原子またはアルキル基（Ｃ1〜Ｃ5）である）であり；
Ｋは、置換もしくは非置換のベンゼン核またはＣＨＲ1基（ここでＲ1は水素原子または−ＣＯＯＨ、または−ＳＯ3Ｈ基である）であり；
Ｗは−ＣＯ−または−ＣＳ−基である））請求項６または７に記載の化合物。
【請求項９】
スペーサー鎖Ｙが以下の式（Ｘ）：
【化５】
2005503350.tif 000019
（式中、Ｒ、Ｒ1、ｌ、ｒ、ｐ、ｑおよびｚは上記定義と同じ意味を有する）を有する請求項６、７および８に記載の化合物。
【請求項１０】
スペーサー鎖Ｙが以下の式（ＸＩ）：
【化６】
2005503350.tif 000020
（式中、Ｒ、Ｒ1、ｌ、ｒ、ｐ、ｑおよびｚは上記定義と同じ意味を有する）を有する請求項６、７、８および９に記載の化合物。
【請求項１１】
スペーサー鎖Ｙが以下の式（ＸＩＩ）：
【化７】
2005503350.tif 000021
（式中、Ｒ、Ｒ1、ｌ、ｒ、ｐ、ｑおよびｚは上記定義と同じ意味を有する）を有する請求項６、７および８に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｙが、以下の基：−（ＣＨ2）2−ＣＯ−、−（ＣＨ2）4−ＮＨ−、−（ＣＨ2）4−  ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ2）2−ＣＯ−、−ＣＨ2−Ｐｈ−ＣＨ2−ＣＯ−、−ＣＨ2−Ｐｈ−ＮＨ−ＣＳ−
のうちの１つである請求項６から１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｃが、ＤＴＰＡ、ＤＴＰＡ−Ｌｙｓ、ＤＴＰＡ−ＧＬＵの残基またはそれらの誘導体である請求項６から１２に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｃが、ＤＯＴＡまたはＤＯ３Ａの残基またはそれらの誘導体である請求項６から１２に記載の化合物。
【請求項１５】
コレシストキニンのアゴニストまたはアンタゴニストとしての、請求項１から１４に記載の化合物。
【請求項１６】
非病理学的状況よりも高い量のタイプＡコレシストキニンレセプターを過剰発現している動物およびヒトの主要な腫瘍およびその転移を識別し定位するための請求項１から１４に記載の化合物。
【請求項１７】
非病理学的状況よりも高い量のタイプＢコレシストキニンレセプターを過剰発現している動物およびヒトの主要な腫瘍およびその転移を識別し定位するための請求項１から１４に記載の化合物。
【請求項１８】
非病理学的状況よりも高い量のタイプＡおよび／またはＢコレシストキニンレセプターを過剰発現している動物およびヒトの主要な腫瘍およびその転移を識別し定位するための請求項１から１４に記載の化合物。
【請求項１９】
非病理学的状況よりも高い量のタイプＡおよび／またはＢコレシストキニンレセプターを過剰発現しているヒト腫瘍を治療するための請求項１から１４に記載の化合物。
【請求項２０】
請求項１から１４に記載のキレートまたはそれの塩を含む医薬用、または診断造影もしくはシンチグラム造影用組成物。
【請求項２１】
請求項１から１４に記載の所定量の化合物および試薬をテクネチウム−９９ｍ、レニウム−１８６またはレニウム−１８８で標識するのに十分な量の還元剤を含む無菌的に密封したガラス瓶を含む放射性医薬品組成物調製用の診断キット。
【請求項２２】
核磁気共鳴またはシンチグラフィを使用して、ヒトまたは動物身体の器官および／または組織および／または細胞の画像生成用の診断用処方を調製するための請求項６から１４に記載の化合物またはその塩のキレート化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、常磁性または放射性の金属で標識された、スペーサー分子Ｙおよびキレート剤Ｃと複合された一般式(Ｉ)の環状および分岐ペプチドならびにその誘導体に関する。
【０００２】
本発明の化合物は、タイプＡおよび／またはＢコレシストキニンレセプターを過剰発現している主要なヒト腫瘍およびその転移を識別し定位するための診断薬として、並びに治療薬およびコレシストキニンのアゴニストまたはアンタゴニストとして使用される。
【０００３】
コレシストキニン(ＣＣＫ)は、ホルモンおよび神経伝達物質としてその生物学的作用が発揮されるペプチド分子ファミリーである。ＣＣＫはすべて、１１５個のアミノ酸残基からなるプレホルモンの分割プロセスに続けて、Ｃ−末端フェニルアラニン残基のアルファ−アミド化の翻訳後プロセス、また、場合によってはさらに、Ｃ−末端部分に含まれるチロシン残基の硫酸塩化から生じる。したがって、コレシストキニンは、さまざまな分子の形で存在し、最も重要なものは、５８、３９、３３または８アミノ酸残基の配列を有する。また、それらはすべて同じ８個のアミノ酸残基からなるＣ末端配列：
Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−アミド
を有する。
【０００４】
この配列のみを含む形が、ＣＣＫ８として知られている。
【０００５】
コレシストキニンの生物学的活性は、これと相互作用するレセプターのタイプに依存する。２つのタイプのレセプター、タイプＡおよびタイプＢが知られている。病理学的状態にない場合には、胃、胆嚢、腸および膵臓などの末梢器官の組織の中に、タイプＡレセプターが存在する。タイプＡレセプターとＣＣＫペプチドホルモンとの相互作用による最も重要な生理学的作用は、胆嚢の収縮、膵臓酵素の分泌、消化器管への分泌および吸収の調節である。タイプＢレセプターは、主として中枢神経系に存在し、コレシストキニンとの相互作用は無痛覚、満足感および不安感を引き起こし、ドーパミンの放出を調節する。
【０００６】
コレシストキニンレセプターは両者ともＧタンパク質結合レセプター(ＧＰＣＲ)のクラスに属する。これは、７個の膜貫通へリックスが細胞内外のループによって連結した細胞膜レセプターで、細胞外のＮ−末端腕および細胞内のＣ−末端部分を有する。レセプターは両者とも、さまざまな形のコレシストキニンに高い親和性を有するが、タイプＡレセプターがコレシストキニンの硫酸化形(すなわちＴｙｒ２７残基上の硫黄基を含むもの)により大きな親和性を有するのに対し、タイプＢレセプターはさまざまな非硫酸化形コレシストキニンおよびガストリンに高い親和性を有する。タイプＡおよびタイプＢレセプターに対するアゴニストまたはアンタゴニスト活性を備えた一連のペプチドおよび非ペプチドコレシストキニンアナログ分子が知られている(Ｐ．デ・トゥルリオ(P.De Tullio), Current Medicinal Chemistry, 64, 331, 999; Ｆ．ノーブル(F.Noble),Progress in Neurobiology, 58, 349, 1999)。その低い生物学的利用能および低い可溶性、または高い酵素分解性のため、既知の分子のうちのいずれについても薬学的な応用は、見出されていない。
【０００７】
最近、コレシストキニンレセプターが、主要なヒト腫瘍および転移において識別された(J.C.ロイビ(J.C.Reubi)、Cancer Research, 57, 1377, 1997、国際公開第97/31657号)。ヒト腫瘍を視覚化するために核医学で使用する125Ｉ(Biochemical Journal, 89, 114-123, 1963)、111Ｉｎまたは115Ｉｎなどの放射性金属で標識した機能ペプチドの使用は、特にこの論文、およびJ.C.ロイビ(J.C.Reubi)によって引用された特許に記載されている。
【０００８】
タイプＡレセプターは、特に、膵臓および食道の腫瘍中で過剰発現されるが、タイプＢレセプターは、小肺細胞腫瘍、結腸および胃腸領域の腫瘍、甲状腺髄様腫瘍、星状細胞腫および卵巣間質腫瘍(ovarian stromal tumour)において過剰発現される。
【０００９】
放射性または常磁性の金属のキレート剤で修飾されたコレシストキニンに由来するいくつかのペプチドは、臨床試験で研究されている。特に、111Ｉｎおよび90Ｙなどの放射性金属と複合した、キレート剤ＤＴＰＡまたはＤＯＴＡを含むＣＣＫ８誘導体、並びにタイプＢコレシストキニンレセプターを過剰発現している腫瘍の識別および治療におけるそれらの利用が、報告されている((Ｍ．デ・ヨング(M.De Jong)、Journal of Nuclear Medicine, 40, 2082, 1999)。
【００１０】
硫酸化されていないペプチドＣＣＫ８とタイプＡコレシストキニンレセプター(ペプチドホルモンとの相互作用に関わる)のＮ−末端部分間の錯体のＮＭＲ構造が、最近公表された(Ｍ．ペレグリーニ(M.Pellegrini)、Biochemistry, 38, 14775, 1999)。レセプター(レセプター断片)のＮ−末端部分は４７個のアミノ酸からなり、タイプＡレセプターの細胞外のＮ−末端腕および膜貫通ヘリックス１の第１の部分を表わしている。この断片は、膜貫通ループにＡｒｇ １９７の残基(これはＣＣＫ８のＴｙｒ２７の硫黄基との相互作用の原因である)を含んでおらず、その結果、ペプチドＣＣＫ８は硫酸化された形では使用されていない(Ｖ．ギグー(V.Gigoux)、Protein Science, 8, 2347, 1999)。ＮＭＲ研究で示された詳細な構造情報に加え、レセプター断片およびペプチド上に存在するトリプトファン残基の蛍光変化の観察によりなされた最近の研究は、硫酸化されていないＣＣＫ８とレセプター断片との間に結合を確認し(R.ラゴーネ(R.Ragone)、Biopolymers, 47-53, 56, 2001(未刊))、その親和性定数が決定できた。
【００１１】
（発明の詳細）
本発明の目的である化合物は、一般式(Ｉ)：
【００１２】
【化１】
2005503350.tif 000002
【００１３】
(式中、Ｘａａは互いに独立に任意のアミノ酸であり；
Ｘｂｂは、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ2、−ＳＨおよび−ＯＨからなる群から選択される少なくとも３つの官能基を含むアルファまたはベータアミノ酸であり；
ｎは０と１５の間であり、
ｍは２と１２の間である)
の環状ペプチドである。
【００１４】
Ｘｂｂは、好ましくは以下のものからなる群から選択される：
Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｃｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｇａｂａ、イプシロン−Ａｃａおよびデルタ−Ａｖａ。
【００１５】
本発明はまた、キレート基を使用しまたは直接、放射性もしくは常磁性の金属または放射性のハロゲン並びにそれらの、生理学的に許容される有機もしくは無機塩基とのまたは生理学的に許容される有機もしくは無機酸の陰イオンとの塩類で標識した式(Ｉ)の化合物に関する。
【００１６】
Ｘａａアミノ酸の少なくとも１つは、好ましくはメチオニン(Ｍｅｔ)、チロシン(Ｔｙｒ)またはチロシンｍ−スルホン酸(ＳＯ3Ｈ−Ｔｙｒ)残基である。
【００１７】
硫酸基が、チロシン残基(ＴｙｒまたはＳＯ3Ｈ−Ｔｙｒ)上に存在する場合、コレシストキニンタイプＡレセプターとの相互作用が助けられ、反対に、硫酸化されていないチロシン残基(ＴｙｒまたはＳＯ3Ｈ−Ｔｙｒ)は、場合によってはコレシストキニンタイプＢレセプターとの相互作用を促進するかもしれない。
【００１８】
上に使用する「任意のアミノ酸」という用語は、天然アミノ酸のＬおよびＤ異性体並びに天然ペプチドの合成アナログを調製するためにペプチド化学において一般に使用される「非タンパク質」アミノ酸(ＬおよびＤ配置のアルファおよびベータ位で置換されまたは置換されていないアルファアミノ酸および不飽和アルファ／ベータアミノ酸など)を指す。
【００１９】
「非タンパク質」アミノ酸の例は、ノルロイシン、ノルバリン、アロイソロイシン、アロトレオニン、ホモアルギニン、チオプロリン、デヒドロプロリン、ヒドロキシプロリン、ピペコリン酸、アゼチジン酸、ホモセリン、シクロヘキシルグリシン、アルファアミノｎ−酪酸、シクロヘキシルアラニン、アミノフェニル酪酸、芳香環のオルト、メタおよびパラ位で置換されたフェニルアラニンのモノおよびジ置換体、Ｏ−アルキル化されたセリン、トレオニンおよびチロシン誘導体、Ｓ−アルキル化されたシステイン、イプシロン−アルキル化リジン、デルタ−アルキル化オルニチン、芳香環のメタまたはパラ位で置換された芳香族アミノ酸(フェニルアラニンの硝酸塩、硫酸塩、リン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、メチルスルホン酸、メチルホスホネート、チロシンの硫酸塩、リン酸塩、スルホン酸塩、ホスホネート、パラ−アミド−フェニルアラニンなど)、Ｃ−アルファ，アルファ−ジアルキル化アミノ酸(アルファ，アルファ−ジメチルグリシン(Ａｉｂ)、アルファ−アミノシクロプロパンカルボン酸(Ａｃ３ｃ)、アルファ−アミノシクロブタン−カルボン酸(Ａｃ４ｃ)、アルファ−アミノシクロペンタンカルボン酸(Ａｃ５ｃ)、アルファ−アミノシクロヘキサンカルボン酸(Ａｃ６ｃ)、ジエチルグリシン(Ｄｅｇ)、ジプロピルグリシン(Ｄｐｇ)など)、ジフェニルグリシン(Ｄｐｈ)などである。ベータアミノ酸の例はベータアラニン(ベータＡｌａ)、シスおよびトランス２,３−ジアミノプロピオン酸(Ｄａｐ)である。
【００２０】
他の非タンパク質アミノ酸はウェブサイトhttp://CHEMLIBRARY.BRI.NRC.CA/上に示されている。
【００２１】
式(Ｉ)の好ましい化合物は以下のものである：
ａ)ｍが４と８の間の整数であり、ｎが３と５の間の整数であり、Ｘａａアミノ酸が少なくとも１個のメチオニン残基およびスルホン化されたかスルホン化されていない形の１つのチロシン残基を含むもの；
ｂ)ｍが４と８の間の整数であり、ｎが３と５の間の整数であり、Ｘａａアミノ酸が少なくとも１個のメチオニン残基およびスルホン化されたかスルホン化されていない形の１つのチロシン残基および１つのリジン残基を含むもの；
ｃ)ｍが４と８の間の整数であり、ｎが３と５の間の整数であり、Ｘａａアミノ酸が少なくとも１個のメチオニン残基およびスルホン化されたかスルホン化されていない形の１つのチロシン残基、１つのリジン残基またはオルニチン、アスパラギン酸およびグルタミン酸から選ばれる１個のアミノ酸を含む。
【００２２】
特に好ましい化合物は一般式(ＩＩ)のペプチド：
【００２３】
【化２】
2005503350.tif 000003
【００２４】
（式中、
ｍは４であり；
ｎは３と５の間の整数であり；
Ｘａａ１および／またはＸａａ２は存在しなくてもよく；
Ｘａａ３はＡｓｐまたはＧｌｕであり；
Ｘａａ４はＴｙｒまたはＳＯ3Ｈ−Ｔｙｒであり；
Ｘａａ１０はＰｈｅまたは、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｔｒｐ、ＧｌｙおよびＰｒｏから選択されるアミノ酸である）である。
【００２５】
さらにより好ましくは、式(ＩＩＩ−ＶＩＩＩ)のペプチドが好ましい：
【００２６】
【化３】
2005503350.tif 000004
【００２７】
本発明の化合物は、固相ペプチド合成、溶液中でのペプチド合成、有機化学合成方法またはそれらの手法の任意の組合せなどの知られた技術から合成される。固相法および溶液での従来法の適当な組合せに基づく合成方法(それらは生産コストが低い)は、特に商業的規模で、好ましくは使用されるであろう。これらの方法は、オルソゴナル機能を備えた保護アミノ酸の使用による分岐を含むペプチドの固相合成(おそらくは、マクロサイクル(macrocycle)固相複合、樹脂からの保護ペプチドの開裂、希釈された濃度での溶液環化および化合物の精製)を含む。
【００２８】
一般式(Ｉ)によって調製された化合物には、放射性もしくは常磁性の金属または放射性ハロゲンで、または直接あるいはキレート基を使用することで標識できる。
【００２９】
本発明のさらなる目的は、一般式(ＩＸ)の化合物である：
Ａ−［Ｙ］z−Ｃ            （ＩＸ）
（式中、
Ａは一般式(Ｉ)のペプチドであり；
ｚは０と５の間の整数であり；
Ｙは、ペプチドＡの中に存在する個々のアミノ酸の側鎖上に存在する官能基のうちの１つに、またはＡのＮ−末端(−ＮＨ2)基またはＣ−末端(ＣＯ2Ｈ)基に、およびＣにそれぞれ結合するスペーサー鎖であり；ｚが２と５の間の整数である場合、ユニットＹは互いに同一または異なっていてもよく；
Ｃは、スペーサー鎖Ｙに共有結合的に、またはペプチドＡに直接に、またはペプチドＡの１個または複数のアミノ酸単位に結合した、常磁性金属または放射性同位元素と複合し得るキレート剤であり；
Ｙは好ましくは以下の式の基である：
【００３０】
【化４】
2005503350.tif 000005
【００３１】
(式中、ｒ、ｌおよびｑは各々独立して０または１であり、ｐは０と１０の間で変わることができ(但し、ｌ、ｒおよびｑの少なくとも１つは０以外である)；
Ｘは、Ｏ原子、または−ＮＲ基(ＲはＨ原子またはアルキル基(Ｃ1〜Ｃ5)である)であり；
Ｋは、置換もしくは非置換のベンゼン核または−ＣＨＲ1基(ここでＲ1は水素原子または−ＣＯＯＨ、または−ＳＯ3Ｈ基である)であり；
Ｗは−ＣＯ−または−ＣＳ−基である)。
【００３２】
式(ＩＸ)の好ましい化合物は、スペーサー鎖Ｙが、以下の式(Ｘ)、(ＸＩ)および(ＸＩＩ)を有する。
【００３３】
【化５】
2005503350.tif 000006
【００３４】
特に、Ｙが次の群：
−（ＣＨ2）2−ＣＯ−、−（ＣＨ2）4−ＮＨ−、−（ＣＨ2）4−  ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ2）2−ＣＯ−、−ＣＨ2−Ｐｈ−ＣＨ2−ＣＯ−、−ＣＨ2−Ｐｈ−ＮＨ−ＣＳ−
のうちの１つを表わす化合物(ＩＸ)が好ましい。
【００３５】
Ｃは、好ましくは以下のものからなる群から選択されるキレート基を表わす：
ポリアミノポリカルボン酸およびその誘導体の残基、特にジエチレントリアミノ五酢酸(DTPA)、1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−1,4,7,10−四酢酸(DOTA)、1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−1,4,7−三酢酸(DO3A)、［10−(2−ヒドロキシプロピル)−1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−1,4,7−三酢酸(HPDO3A)、4−カルボキシ−5,8,1１−トリス(カルボキシメチル)−1−フェニル−2−オキサ−5,8,11−トリアザトリデカン−13−酸(ＢＯＰＴＡ)およびＮ−［2−[ビス(カルボキシメチル)アミノ]−3−(4−エトキシフェニル)プロピル］−Ｎ−[2−[ビス（カルボキシメチル）アミノ]エチルグリシン(EOB-DTPA)、Ｎ，Ｎ−ビス[2−(カルボキシメチル)(メチルカルバモイル)メチル]アミノ]エチル］−グリシン(DTPA-BMA)、2−メチル−1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−1,4,7,10−四酢酸(MCTA)、(α，α'，α''，α''')−テトラメチル−1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−1,4,7,10−四酢酸(DOTMA)；または、ポリアミノリン酸配位子およびその誘導体の残基、特に、Ｎ，Ｎ’−ビス(ピリドキサール−5−ホスフェート)エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−二酢酸(DPDP)およびエチレンジニトリロテトラキス(メチルホスホン)酸(EDTP)；またはポリアミノホスホン酸配位子およびその誘導体もしくはポリアミノホスホン酸およびその誘導体の残基、特に、1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−1,4,7,10−テトラキス[メチレン(メチルホスホン)]酸および1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−1,4,7,10−テトラキス［メチレン−(メチルホスフィン)］酸；または、テキサフリン類(texaphrines)、ポルフィリン類、フタロシアニン類などの大環状キレート剤残基；またはＮ，Ｎ−ビス[2−[ビス(カルボキシメチル)アミノ]エチル]Ｌ−グルタミン酸(DTPA-GLU)またはＬｙｓと結合したＤＴＰＡ(DTPA-Lys)。
【００３６】
環状および／または分岐したペプチドＡは、ＡとＣの２つの官能基間の共有結合によってキレート基Ｃに直接結合してもよいし、またはスペーサー鎖Ｙによって連結してもよく、これは、例えば、配位子の酸性基を用いて、または、配位子の出発物質中に存在する適当な反応基(例えば、アミノ基)またはフェニル基などに存在する官能基によって得ることができる。
【００３７】
ＣまたはＹに存在する特に好ましい反応基は、−ＣＯ2Ｈ、−ＮＨ2、−ＮＣＳ、−ＮＨＣＳＮＨＮＨ2、−ＮＨＣＳＮＨ(ＣＨ2)2ＮＨ2、−ＮＣＯ、−ＮＨＮＨ2、−ＮＨＣＯＮＨＮＨ2、−ＣＨＯからなる群から選ばれる。
【００３８】
特に、Ｃが配位子ＤＴＰＡ、ＤＯ３ＡまたはＤＯＴＡの残基である式(ＩＸ)の化合物が好ましい。
【００３９】
キレート基Ｃのさらなる例は、特に放射性核種(Ｔｃ、Ｒｅ、Ｃｕ、Ｇａなど)のキレート剤として用い得るもので、一般式(ＸＩＩＩ)(ここでＪは０÷２の範囲内に含まれており、一般に一つの値である)によって表わすことができるアミノ/アミドチオール誘導体である。
【００４０】
（Ｎアミノ／アミド）4-j（Ｓチオール誘導体）j      （ＸＩＩＩ）
式(ＸＩＩＩ)の好ましいキレート基は、Ｎ4アミノプロピレンオキシム類、ジアミンジオキシム類、ヒドラジン類、Ｎ3Ｓトリアミドモノチオール類、Ｎ2Ｓ2ジアミドジチオール類、ジアミンジチオール類、モノアミドモノアミンジチオール類およびモノアミンモノアミドジチオール類を含む。
【００４１】
式(ＸＩＩＩ)のキレート化合物の適用例としては、テクネチウムまたはレニウムで標識されたものが文献において多数知られている。
【００４２】
金属イオンの好ましいキレート剤Ｃ、特に式(ＸＩＶａ)、(ＸＩＶｂ)、(ＸＩＶｃ)および(ＸＶ)のレニウムまたはテクネチウムにおけるものは、ＥＰ629,617、ＥＰ544,412、米国特許第5,663,307号および米国特許第5,651,954号にそれぞれ示されており、その内容は、特に基Ｑ、Ｒ、Ｒ*、Ｇ１、Ｇ２およびＲ１の定義が関わる限りにおいて、参照により本明細書に組み込まれている。
【００４３】
【化６】
2005503350.tif 000007
【００４４】
式(ＸＩＩＩ)のキレート基Ｃとして使用することができる化合物のさらなる例は、ジメチルグリシン−Ｌ−セリン−Ｌ−システイニルグリシンアミド(ＸＶＩ)であり、これは非常に興味深く、ペプチドおよびタンパク質への複合用の二官能性化配位子として使用するために、また放射性核種99mＴｃまたは188Ｒｅの錯体化に適していることが判明した。キレート剤Ｃとして使用できる他の誘導体は、WO9933863(その内容は参照により本明細書に組み込まれている)に開示される。
【００４５】
【化７】
2005503350.tif 000008
【００４６】
式(ＸＩＩＩ)のキレート基の官能化によって、それらを広範囲の生物学的に活性な分子に対し共有結合で結合させて使用できるようになる。
【００４７】
特に、核医学診断で使用する式(ＩＸ)の化合物の調製では、キレート化合物Ｃは、ガンマを放射する、ベータまたはポジトロン放射線を放つ放射性同位体と対応する安定した錯体を得るように選択される、例えば、Ｔｃ、Ｒｅ、Ｔｌ、Ｉｎ、Ｃｕ、Ｇａ、ＲｂまたはＹといった放射性同位体が選択される。
【００４８】
核医学診断における99mＴｃの使用は知られている。また、これは多くの利点を示すため、最も一般に用いられている放射性核種のうちの１つである。その６時間という半減期は、患者の健康に危険を伴わずに高品質画像を得るためには、放射線投与時間として十分短い。
【００４９】
抗体、タンパク質およびペプチドなどの生物学的に活性なさまざまな分子へのＴｃの結合を可能にする多数の技術が開発されている。
【００５０】
分子と放射性核種の間の結合は、通常、下記方法のうちの１つによって得られる：
ａ)対象分子を直接に放射性核種に結合させる(これは、例えば、ペプチドまたはタンパク質のジスルフィド架橋を２つのヒドロスルフィド基(これらは直接Ｔｃ(Ｖ)に結合する)に還元する還元剤を使用するなどして行われる)；
ｂ)一般に二官能性である上記タイプのキレート剤Ｃを使用する(一方の官能性はペプチド(またはＡに結合した一般式Ｙに従う化合物)に直接に結合するために使用し、他方は生物学的に活性な分子と結合する前に、または結合した後に、放射性核種との結合のために使用する(事前形成キレート法または最終工程標識化法などで用いられる))。
【００５１】
放射性錯体は、適当な還元剤の存在下に、塩(好ましくはＴｃ−９９ｍ過テクネチウム塩を使用する)を用いた官能化キレート化合物の反応など、文献に記載された方法によって調製される。
【００５２】
使用する還元剤は、次亜硫酸塩、第１鉄および第１錫イオン(例えば、酒石酸塩、塩化物およびフッ化物)または他の固体状態還元剤など文献中に報告されたものを含む。
【００５３】
このタイプの錯体は、通常、事前に無菌条件下で調製された不活性な診断のキットにより調製される。これは、所定量の化合物をキレート剤と複合し冷凍乾燥された粉末の形で、また、所定量の還元剤(両者とも適当な安定剤の存在で処方したもの)、界面活性剤および／またはバッファー(製薬バルク製品を調製するために使用することができるもの)を含む。
【００５４】
キレート剤を含む溶液は、通常適宜処方され、続いてバイアルに分配され、組成物中に存在する還元剤(例えば塩化錫)の特性が維持されるように窒素雰囲気下に冷凍乾燥され封じられる。
【００５５】
このように調製された不活性なキットは、後に、例えば過テクネチウム酸ナトリウム溶液で再構成して、99mＴｃとの対応する錯体を形成させる。これは人体器官の機能および形態の検査のため放射線学的診断、および特に、本発明の化合物については、コレシストキニンレセプターを過剰発現する腫瘍のイメージングのために使用される。
【００５６】
テクネチウム同位体の代わりに放射性のレニウム同位体を使用することは、ウォンら(Wong et al.)(Wong, Inorganic Chemistry, Vol.36, 5799-5808, 1997)によって提案され、特に配位状態(Ｖ)および同位体186Ｒｅおよび188Ｒｅが、放射性医薬品治療に多数の用途を有し、核医学的に特に興味深いことが判明した。
【００５７】
キレート化合物Ｃの別のクラスは、本発明の化合物との複合に適し、常磁性の金属(MRI)だけでなく放射性金属(放射線療法および放射線診断)のキレート化剤にも使用することができるもので、式(ＸＶＩＩ)のポリアザマクロサイクル(polyazamacrocycles)からなる。これらのキレート化合物は少なくとも１つのアミン、チオール、カルボキシルもしくはカルボキシル派生基またはチオカルボン酸を含み、自由な官能性として示し、スペーサー鎖ＹまたはペプチドＡへの複合反応で使用するのに適し、一般式(ＩＸ)による。
【００５８】
【化８】
2005503350.tif 000009
【００５９】
式(ＸＶＩＩ)の化合物の完全な記載については、米国特許第6,093,382号(これは参照により本明細書に組み込まれている)を参照されたい。
【００６０】
化合物(Ｉ)および(ＩＸ)は、原子番号が２０と３１、３９、４２、４３、４４、４９の間、および５７と８３の間の範囲に及ぶ金属元素の２価または３価のイオン、金属またはハロゲン(123Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、75Ｂｒ、76Ｂｒ、74Ｂｒ、77Ｂｒおよび82Ｂｒ)の放射性同位体または常磁性金属(99mＴｃ、203Ｐｂ、67Ｇａ、68Ｇａ、72Ａｓ、111Ｉｎ、113Ｉｎ、90Ｙｔ、97Ｒｕ、82mＲｂ、62Ｃｕ、64Ｃｕ、52Ｆｅ、52mＭｎ、140Ｌａ、175Ｙｂ、153Ｓｍ、166Ｈｏ  149Ｐｍ、177Ｌｕ、142Ｐｒ、159Ｇｄ、212Ｂｉ、47Ｓｃ、149Ｐｍ、67Ｃｕ、111Ａｇ、199Ａｕ、188Ｒｅ、l86Ｒｅ、161Ｔｂおよび51Ｃｒ)とキレート化合物を形成し、生理学的に適合性を有する塩基または酸との塩の形態を取り得る。
【００６１】
特に、Ｆｅ(2+)、Ｆｅ(3+)、Ｃｕ(2+)、Ｃｒ(3+)、Ｇｄ(3+)、Ｅｕ(3+)、Ｄｙ(3+)、Ｌａ(2+)、Ｙｂ(3+)またはＭｎ(2+)との錯体、または51Ｃｒ、67Ｇａ、68Ｇａ、111Ｉｎ、99mＴｃ、140Ｌａ、175Ｙｂ、153Ｓｍ、166Ｈｏ、90Ｙ、149Ｐｍ、177Ｌｕ、47Ｓｃ、142Ｐｒ、159Ｇｄおよび212Ｂｉなどの放射性同位体との錯体が好ましい。
【００６２】
本発明の錯体塩を形成するのに適した無機塩基の好ましい陽イオンは、特に、カリウム、ナトリウム、カルシウム、マグネシウムなどのアルカリまたはアルカリ土類金属イオンを含む。
【００６３】
有機塩基の好ましい陽イオンは、エタノールアミン、ジエタノールアミン、モルホリン、グルカミン、Ｎ−メチルグルカミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルグルカミンなどの第一級、第二級と第三級アミンの陽イオンを含む。
【００６４】
無機酸の好ましい陰イオンは、特に、塩化物、臭化物、ヨウ化物などのハロ酸のイオン、または硫酸塩などの他のイオンを含む。
【００６５】
有機酸の好ましい陰イオンは、酢酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩などの塩基性物質の塩形成のために製薬技術において慣用されている酸の陰イオンを含む。
【００６６】
アミノ酸の好ましい陽イオンおよび陰イオンは、例えば、タウリン、グリシン、リジン、アルギニンまたはオルニチン、またはアスパラギン酸、グルタミン酸のイオンを含む。
【００６７】
化合物(Ｉ)および(ＩＸ)も、コレシストキニンのアゴニストまたはアンタゴニストとして、また、キレート基を用いるか、放射性もしくは常磁性の金属または放射性のハロゲンのいずれかで直接に標識した後、タイプＡおよび／またはＢコレシストキニンレセプターを過剰発現する主要なヒト腫瘍およびそれらの転移を識別し定位する治療および診断薬として、有用である。レセプターへの結合後、細胞の内部移行プロセスが続き得る。
【００６８】
特に、常磁性金属で標識された式(ＩＸ)の化合物は、磁気共鳴のための有用な造影剤、特にタイプＡおよび／またはタイプＢのコレシストキニンレセプターを過剰発現する動物腫瘍細胞のイメージングのために有用であると判明した。
【００６９】
化合物(Ｉ)は、それらを上記目的に適したものにする特別の特性を有する。すなわち、
ａ)それらはタイプＡおよび／またはタイプＢのコレシストキニンレセプターと特異的に相互作用するような構造を溶液中で取り、少なくともＣＣＫ８に匹敵する親和性を有する；
ｂ)環が存在する結果、それらは、生理学的条件下では酵素による分解に対し特に安定している；
ｃ)それらは、キレート置換基の存在がレセプターへの結合に干渉しないようなコンフォメーションを取る。
【００７０】
式(ＩＸ)の化合物は、慣用の合成方法で調製できる。特に式(ＩＸ)の化合物は収束的合成(これは以下の工程を含む)により得ることができる：
１)官能化された配位子(すなわち常磁性の金属イオンまたは放射性の金属(それらはまた、直接または適当な官能基を介してペプチドに安定的に結合できる)の同位体に配位結合し得る配位子)の合成；
２)ペプチドの合成；
３)スペーサーユニットＹの使用を含む２つの異なるシントン間のカップリング反応；
４)任意の保護基の開裂；
５)常磁性または放射性の金属イオンとの複合化。
【００７１】
２つのシントンは、例えば、アミド、チオ尿素またはエステルの形成を含む、合成に使用されるさまざまな既知のカップリング方法(例えば、ブリンクリー(Brinkley),M.、Bioconjugate Chem. 1992, 3, 2)によって複合することができる。
【００７２】
治療および診断に使用する放射性ハロゲンは知られている。例えば、123Ｉはイメージングでのその使用で知られており、一方、131Ｉはイメージングだけでなく治療においても好ましく使用できる。臭素の放射性核種75Ｂｒおよび76Ｂｒは診断のために使用され、一方、77Ｂｒは放射線療法において使用される。18Ｆおよび211Ａｔは、診断および放射線療法において使用される。
【００７３】
放射性核種が放射性ハロゲンの同位体である場合、それは、ＴｒｐまたはＴｙｒの残基と反応させることによりペプチド(Ｉ)に直接接合することができる。
【００７４】
ヨウ素同位体による標識方法は、酸化法による直接ヨウ素化だけでなく求核置換反応および同位体交換反応も含む。この場合、標識方法の選択は、前駆体の構造、精製法に関連した問題および使用する方法の費用対効果に依存する。
【００７５】
式(Ｉ)の化合物に使用できる放射性ハロゲンによる間接的標識方法の例は、米国特許第5,290,937号(その内容は参照により本明細書に組み込まれている)に記載されており、これによれば、式(ＸＶＩＩＩ)の放射性標識されたタンパク質が得られる。
【００７６】
【化９】
2005503350.tif 000010
【００７７】
(式中、Ｘは、125Ｉ、131Ｉ、123Ｉ、75Ｂｒ、76Ｂｒおよび77Ｂｒから選択され放射線核種であり、Ａは式(Ｉ)の化合物について上に記載した意味を有する)。
【００７８】
ガンマ線またはアルファもしくはベータ粒子を放射する放射性同位体で標識された対応する化合物の使用は、細胞毒性を有する十分な量の生産を可能にし、問題部位に搬送することを可能にする。同位体の放射性崩壊は腫瘍結合部位で生じ、腫瘍細胞に対して有毒となるために十分な量の局所的なイオン化放射線の存在が決定される。
【００７９】
これらの化合物はコレシストキニンレセプターを過剰発現する細胞に対する結合特異性を有するため、正常細胞の細胞毒素剤への暴露を最小限にすることができ、それにより、副作用が低減された有効な治療法が提供される。
【００８０】
式(Ｉ)および(ＩＸ)の化合物の場合、可溶な化合物もそれほど可溶でない化合物も経口投与および非経口投与に適している。
【００８１】
非経口投与のための化合物は、好ましくは無菌の水性懸濁液または溶液として処方され、そのｐＨは、例えば６．０〜８．５の間に及ぶことができる。
【００８２】
これらの水性懸濁液または溶液は、０．００２と１．０モルの範囲に及ぶ濃度で投与できる。
【００８３】
これらの処方物は、冷凍乾燥して粉末状とし使用時に再構成することができる。胃腸への使用または体腔中への注入では、これらの薬剤は、例えば、その粘性を調節するのに適した添加物を含む懸濁液または溶液として処方できる。
【００８４】
経口投与については、製薬技術で一般に使用する調製方法に従って処方することができる(可能なものとしては、胃酸ｐＨからさらに保護するためにコーティングを施した処方とする)。これによりキレート化された金属イオン(それは、胃液に典型的なｐＨ値で特に生じる)の放出を防ぐ。
【００８５】
甘味料および／または香料などの他の賦形剤も知られた技術に従って加えることができる。
【００８６】
式(Ｉ)および(ＩＸ)の化合物は、適切に処方された場合、膵臓および食道腫瘍、およびタイプＡコレシストキニンレセプターを過剰発現する他の腫瘍、並びに肺の小細胞腫瘍、結腸および胃腸管、骨髄様甲状腺腫瘍、星状細胞腫、卵巣実質腫瘍およびタイプＢコレシストキニンレセプターを過剰発現する他の腫瘍を視覚化するのに特に有用である。
【００８７】
実験部分は、式(ＩＶ)の化合物の合成について記載する。
【００８８】
【化１０】
2005503350.tif 000011
【００８９】
式(ＩＶ)の化合物は、ペプチドＣＣＫ８とレセプターＣＣＫ−Ａの間のＮＭＲ錯体に似たコンフォメーション挙動を示す。
【００９０】
図１は、ａ)はタイプＡ ＣＣＫレセプターのＮ末端断片１〜４７を備えた錯体に結合したペプチドＣＣＫ８の構造を示し、Ｍ．ペレグリーニ(M. Pellegrini)によってBiochemistry, 38, 147, 75, 1999で報告されたもの、およびｂ)は式(ＩＶ)の環状化合物の予想される構造を示す図である。
【００９１】
ペプチドホルモンとの相互作用の原因である硫酸化されていないペプチドＣＣＫ８とタイプＡコレシストキニンレセプターのＮ−末端部分の間の錯体の構造は、コード「ｐｄｂｌＤ６Ｇ．ｅｎｔ」でタンパク質データバンク(http：//www.rcsb.org)に登録されている。レセプター(レセプターフィラメント)のＮ−末端の部分は４７個のアミノ酸残基からなり、このレセプターは細胞外のＮ−末端腕、およびタイプＡレセプターの膜貫通ヘリックス１の第１の部分を表わす。
【００９２】
錯体(タイプＡ ＣＣＫレセプターの断片１〜４７およびペプチドＣＣＫ８)の構造に関する研究をＮＭＲ分光学、次いで、硫酸化されていない形のペプチドＣＣＫ８を用いて蛍光分光学により結合研究を行った。
【００９３】
略語のリスト
アミノ酸の命名法および略語については、生化学の命名法に関するＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ合同委員会の勧告を参照されたい(Eur.J.Biochem. 1984, 138、 P.9)；アミノ酸は、特に断らない限りＬ配置である。
【００９４】
使用する他の略語は次のとおりである：
Ｏｒｎ＝オルニチン、Ｎｌｅ、ノルロイシン、Ｈｙｐ＝ヒドロキシプロリン、デルタ−Ｐｒｏ＝デヒドロプロリン、デルタ−Ｇｌｕ＝アルファ−ベータ−デヒドログルタミン酸、アルファ−Ｍｅ−Ｇｌｕ＝アルファ−メチルグルタミン酸、Ｃｈａ＝シクロヘキシルアラニン、ａｔ＝アロイソロイシン、Ｃｈｇ＝シクロヘキシルグリシン、Ｓａｒ＝サルコシン、Ｄｅｇ＝ジエチルグリシン、Ｄｐｇ＝ジプロピルグリシン、Ａｉｂ＝アルファアミノイソ酪酸、Ｄａｐ＝２，３−ジアミノプロピオン酸、Ｄａｂ＝２，４ジアミノ酪酸、イプシロン−Ａｃａ＝イプシロン−アミノカプロン酸、デルタ−Ａｖａ＝デルタ−アミノ吉草酸、ベータ−Ａｌａ＝ベータ−アラニン、Ａｃ3ｃ＝アルファ−アミノシクロプロパンカルボン酸、Ａｃ4ｃ＝アルファ−アミノシクロブタンカルボン酸、Ａｃ5ｃ＝アルファ−アミノシクロペンタンカルボン酸、Ａｃ6ｃ＝アルファ−アミノシクロヘキサンカルボン酸、アルファ−Ａｃ5ｃ＝アルファ−アミノシクロペンタンカルボン酸、アルファ−Ａｃ6ｃ＝アルファ−アミノシクロヘキサンカルボン酸、ＮＯ2−Ｐｈｅ＝ニトロフェニルアラニン、ＳＯ3Ｈ−Ｐｈｅ＝スルホン化されたフェニルアラニン、ＰＯ3Ｈ2−Ｐｈｅ＝ホスホネート化されたフェニルアラニン、ＰＯ4Ｈ2−Ｐｈｅ＝フェニルアラニンリン酸塩、ＳＯ4Ｈ−Ｐｈｅ＝フェニルアラニン硫酸塩、ＳＯ3Ｈ−Ｔｙｒ＝ｍ−スルホン化されたチロシン、ＰＯ3Ｈ2−Ｔｙｒ＝ｍ−ホスホネート化チロシン、Ｂｏｃ＝ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、Ｆｍｏｃ＝フルオレニルメトキシカルボニル(fluorenylmethoxycarbonyl)、ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸、ＤＣＭ＝ジクロロメタン、ＤＩＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド、Ｏｂｚｌ＝ベンジルエーテル、ＥＤＴ＝エタンジチオール、ＴＩＳ＝トリイソプロピルシラン、ＨＡＴＵ＝Ｏ−(７−アザベンゾトリアゾール−イル)−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート、ＰｙＢｏｐ＝ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジニウム−ホスホニウム−ヘキサフルオロホスフェート、Ｔｒｔ＝トリチル、Ｐｍｃ＝２，２，５，７，８−ペンタメチル−クロマン−６−スルホニル基、Ｍｔｔ＝４−メチルトリチル、Ｄｄｅ＝１−(４，４−ジメチル−２，６−ジオキソ−シクロヘキシリデン)−エチル、Ｏｐｆｐ＝ペンタフルオロフェニルエステル、ｔＢｕ＝tert−ブチルエーテル、ＯｔＢｕ＝tert−ブチルエステル、Ａｃ＝アセチル、ＨＰＬＣ＝高圧液体クロマトグラフィー。
【００９５】
以下の例はさらに本発明の具体例を示すものである。
【００９６】
（例１）
式(ＩＶ)の環状ペプチドの合成：
【００９７】
【化１１】
2005503350.tif 000012
【００９８】
式(ＩＶ)のペプチドは非天然アミノ酸Ｄａｐ(２，３−ジアミノプロピオン酸)を含み、
２，３−ジアミノプロピオン酸のアミノ酸リジンのＣ末端カルボキシル基と位置３のアミノ基の間のアミド結合形成を利用して、この残基を、環状ペプチドを形成のために使用する。
【００９９】
ペプチドは、島津製作所のバッチ合成用自動ペプチドシンセサイザーを使用して、固相ペプチド合成戦略で合成した。特に、Ｆｍｏｃ基をアルファ−アミノ官能基の保護基として用いる方法を用いた。合成のために使用した固体媒体は、塩化２−クロロ−トリチル樹脂(これは、２−クロロ−トリチルの塩化物基で官能化された２％ジビニルベンゼンを含むポリスチレン媒体からなる)とした。この樹脂は、アミノ酸の側鎖上の完全に保護されているカルボキシルを含むＣ−末端ペプチドが弱酸条件での加水分解によって得られることを可能にする。
【０１００】
０．１７６mmolesの合成スケールを使用した。この合成スケールは、下記操作に従って、４００ｍｇの樹脂(これは事前に第１のアミノ酸、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)ＯＨで部分的に官能化されている)を使用することにより得た。手動式のバッチリアクターを使用し、樹脂(０．８３mmoles/g)上に存在する官能基に対して不足したアミノ酸(０．６当量)を、ＤＣＭに加えた。使用するアミノ酸の量に関して１当量のＰｙＢｏｐおよび４当量のＤＩＥＡを加えた。樹脂に結合するアミノ酸のmmoles数は、リジン残基のアルファ位置のアミノ基上に存在するＦｍｏｃ基の量の評価により、１分量当たりで評価し、２０体積％のピペリジンを含むＤＭＦ塩基性溶液を除去し、ＵＶ領域(ラムダ＝２９０、イプシロン290＝５．１０3)で影響された発色団の吸光度を測定した。この操作の後に、２−クロロ−トリチル−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｆｍｏｃ樹脂の置換度は、０．４４mmoles/gであった。次いで、シンセサイザーのリアクターに第１のアミノ酸(Ｆｍｏｃ−(Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−)に結合した樹脂を移し、下記操作による合成をプログラムすることによりペプチド合成を完了させた：過剰な各アミノ酸２．５当量、アミノ酸に対して１当量活性ＰｙＢｏｐ、アミノ酸に対して１．５当量のＤＩＥＡ、およびＰｙＢｏｐ、無水ＤＭＦ溶媒、カップリング時間６０分(単一カップリング)。配列に使用するアミノ酸は以下のとおりとした：Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ(ＯｔＢｕ)−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ(Ｄｄｅ)−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)−ＯＨおよびＢｏｃ−Ａｓｐ(ＯｔＢｕ)−ＯＨ。樹脂上のペプチドの組立てが終了した時点で、Ｄａｐ残基の側鎖のＤｄｅ保護基を、ヒドラジンの４％ＤＭＦ溶液でそれを処理することにより除去した。この脱保護反応のために１０分の処理を連続２回用いた。次に、樹脂によって部分的に保護されたペプチドの開裂反応を行った。樹脂を多孔性隔壁上に置き、３〜５分間、ＴＥＡの０．５(体積)％ジクロロメタン溶液で処理し、この操作を１０回繰り返した。酸性の洗液を１０％のピリジンを含むフラスコに回収した。減圧下、蒸発によって出発溶液の９０％体積を除去した後に、冷水の添加によってペプチドを沈殿させ、続いて水洗した。Ｄａｐ側鎖上のもの(分子量１６９１)を除いて全保護基を備えたペプチドの存在をMaldi質量分光法でチェックした後に、環化反応を実行した。リジン残基上のＣ−末端のカルボキシル基は、２，３−ジアミノプロピオン酸の３位のアミノ基とアミド結合を形成した。反応は、ＤＭＦ中５．１０-4Ｍのペプチド濃度で、過剰量のカルボキシル官能性活性化剤ＨＡＴＵ４当量およびＤＩＥＡ塩基を加えることによりｐＨ８．５にして行った。混合物を、４０℃で５時間撹拌下に維持した。次いで、溶媒を減圧下に除去し、下記操作によって保護基を開裂させた。撹拌下、環状ペプチドを、ＥＤＴ(２．５％)、ＴＩＳ(１％)および水(２．５％)を含むＴＦＡの混合物で２時間、フラスコ中で処理した。粗製物の均質性をＨＰＬＣ分析によってチェックした。粗製物は、保持時間１６．７分(カラム：逆相Ｃ１８；溶離剤：１％のＴＦＡを加えた水および１％のＴＦＡを加えたアセトニトリル；��離勾配：２５分で８０％から２０％までの水の含有率)に主ピークを示した。分析スケールで使用したのと同じ分離方法で生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。得られた生成物の純度は９８％を超え(ＨＰＬＣ分析によって確認)、予想される理論収率の５０％を超過した。製品の同一性は、Maldi質量分光法(予想される質量値１２０２でピークに示した)で確認した。
【０１０１】
（例２）
式(ＩＶ)の化合物とコレシストキニンのタイプＡレセプターの断片１〜４７  ＣＣＫA−Ｒ(１〜４７)の間の結合の測定
結合例１に記載するようにして調製した化合物とコレシストキニンタイプＡレセプターの断片１〜４７との結合を蛍光分光学で検討した。式(ＩＶ)の化合物は、チロシン残基上に硫酸塩官能性を有していないため、タイプＢコレシストキニンレセプターに、より大きな親和性を持つべきであるが、実験を行った結果、得られた結果は完全に正当である。なぜなら、用いたレセプター断片は硫酸塩基との相互作用の原因であると知られている残基(Ａｒｇ １９７)を含まないからである。錯体の構造に関する研究：タイプＡ ＣＣＫレセプター断片１〜４７／ペプチドＣＣＫ８についてＮＭＲ分光学で実行し、続いて結合研究を非硫酸塩形のペプチドＣＣＫ８を使用して蛍光分光学で行った。
【０１０２】
タイプＡレセプターの断片１〜４７、ＣＣＫA−Ｒ(１〜４７)と式(ＩＶ)の化合物は、両方とも固相ペプチド合成法によって合成したものを用いた。化合物(ＩＶ)の合成については例１参照。レセプター断片の合成については、Ｒ．ラゴーネ(R.Ragone)、47-53, 56, 2001, Biopolymers参照）。
【０１０３】
レセプター断片ＣＣＫA−Ｒ(１〜４７)と化合物(ＩＶ)の間の相互作用は、トリプトファン蛍光のモニタリングにより観察した。放射スペクトルはJasco FP750分光蛍光計を使用して室温で記録した(トリプトファンを選択的に励起させる波長：２９６ｎｍ)。ｐＨ７．２でリン酸塩バッファーに溶解させた化合物(ＩＶ)濃縮溶液の小分量を、細胞膜を模倣するのに使用されるナトリウムドデシルサルフェートミセルの１０ｍＭ溶液の存在下に、同じ溶媒に溶解したＣＣＫA−Ｒ(１〜４７)溶液の固定体積に加えた。計算において使用する最終スペクトルは、希釈および個々の単離された分子の寄与について修正した。
【０１０４】
図２に示すように、グラフの評価によって、式(ＩＶ)のペプチドのコレシストキニンタイプＡレセプターの断片１〜４７、ＣＣＫＡ−Ｒ(１〜４７)への結合(ここでＳＤＳミセル１０ｍＭ溶液の存在下、レセプター濃度は１０ｍＭのリン酸塩バッファーｐＨ７．２中２．６μＭである(２８０ｎｍで吸光度によって測定した値))の測定値が得られる。式(ＩＶ)の化合物の量を１０ｍＭ ＳＤＳミセルを含む濃縮マスター溶液から増加させて加えた。蛍光は３３５ｎｍで測定し、実験による結合曲線は、Ｋd＝２５５ｎＭの値に合致する。
【０１０５】
図２(典型的な飽和曲線を示す)に見られるように、蛍光信号は、結合の結果徐々に消光される。実験をさまざまなレセプター濃度で実行したが、蛍光消光は常に観察された。同じ滴定カーブは、計算を実行するために選ばれた放射波長にかかわらず所与の実験について見出される。結合が引き起こした蛍光における修正分を識別するため、レセプターおよび単離されたペプチドの蛍光の寄与を差し引き、測定した値に対する蛍光における小さな変化が得られた。これは大きな統計偏差を含むが、それは蛍光消光の正確な評価を妨げない。当て嵌め操作を用いることにより、５０〜２００ｎＭ範囲でＫdの値を評価し、平均値１２０ｎＭ(標準偏差±２７ｎＭ)を得ることができた。この値は、タイプＡレセプターの１〜４７断片またはタイプＢレセプター全体のＣＣＫ８の硫酸化されていない線形結合で見出されるのと同じサブマイクロモルの親和性の範囲内である。
【０１０６】
（例３）
式(ＩＶ)のペプチドの生物学的活性の評価
式(ＩＶ)の環式化合物の活性を確認するために、タイプＡコレシストキニンレセプターを発現する神経細胞を使用して生物学的試験を行った。式(ＩＶ)の化合物の活性は、チロシン残基上の硫酸化されていない形のペプチドＣＣＫ８と比較した。これらの化合物は両方とも、チロシン残基上の硫酸塩基を含む対応する類似体より低い活性レベルを示すはずである。生物学的活性試験では、レセプターを発現する細胞として腸管筋ニューロンを使用し、また、ペプチド活性を測定する適当なパッケージソフトを備えた共焦点顕微鏡を使用した。この試験は次の仮定に基づく：
１)(腸壁の)腸管筋ニューロンは、通常、タイプＡ ＣＣＫレセプターを発現する
２)ＣＣＫとレセプターの間の結合は、細胞の興奮(膜電位の変化)を引き起こし、これは電気生理学的試験によって記録できる
３)細胞の興奮は外部から細胞内部への特定の細胞膜チャンネルを通じてのカルシウムの通過を伴う
４)カルシウムが蛍光性(それらが特定の波長で励起された場合、放射波長を修正するカルシウムキレート化剤を使用して)となった場合、刺激に応じて細胞内のカルシウムの増加した濃度が記録できる
５)したがって、共焦点レーザー顕微鏡を使用すれば、特定のソフトウェアの援助によってこれらの現象が記録可能となり、蛍光は細胞内のカルシウム濃度に変換され得る。
【０１０７】
ニューロンが、硫酸化されていないペプチドＣＣＫ８、および例１(６０秒間潅留)に記載した環状類似体にさらされた時、両方の物質が細胞内のカルシウム濃度の増加を引き起こすことが見出された。
【０１０８】
試験方法を図３に示す。グラフ(これは２本の別個のカーブを示す)は同じ細胞の２つの異なる時点に関する。すなわち、硫酸化されていないペプチドＣＣＫ８の注入前と例１に記載した式(ＩＶ)の環状ペプチドによる洗い出し(およそ５分間)後である。ｙ−軸は蛍光単位をｘ−軸は潅留時間(秒)を示す。グラフは、最初の最大のピーク(７５ｍＭ Ｋ+による潅留後の興奮)を示し、これはニューロンを機能的に識別するために使用した刺激であり、次いで、ＣＣＫ８ペプチドおよび式(ＩＶ)の環状ペプチドに対する反応、そして最後に７５ｍＭ Ｋ+で再び細胞の生存を確認した。
【０１０９】
実験は検査した２つの分子の作用の効力を評価するものではないが、結果は、合成した類似体が特定のレセプターに結合することができ細胞応答を引き起こすことができることを示す。
【０１１０】
（例４）
式(ＸＩＸ)の官能化した環状ペプチドの調製。
【０１１１】
【化１２】
2005503350.tif 000013
【０１１２】
化合物(ＸＩＸ)のペプチド成分は、例１に記載されるのと同じもので、式(ＩＶ)の化合物のペプチド部分中に存在するリジン残基の側鎖、すなわちＮ，Ｎ−ビス[２−[ビス(カルボキシメチル)アミノ]エチル]Ｌ−グルタミン酸(ＤＴＰＡ−ＧＬＵ)もキレート剤を共有結合するために使用する。
【０１１３】
式(ＸＩＸ)の化合物は、化合物(ＩＶ)の合成と同様に、マニュアルリアクターおよび島津製作所のバッチ合成用自動ペプチドシンセサイザー内での合成操作を用いて、固相ペプチド合成戦略で合成した。特に、Ｆｍｏｃ基をアルファ−アミノ官能基の保護基として用いる方法が使用された。合成のために使用した固体媒体は、塩化２−クロロ−トリチル樹脂(これは、２−クロロ−トリチルの塩化物基で官能化された２％ジビニルベンゼンを含むポリスチレン媒体からなる)であった；この樹脂は、アミノ酸の側鎖上の完全に保護されているカルボキシルを含むＣ−末端ペプチドが弱酸条件での加水分解によって得られるようにする。
【０１１４】
０．１８０mmolesの合成スケールを使用した。この合成スケールは、下記操作に従って、４００ｍｇの樹脂(これは事前に第１のアミノ酸、Ｄｄｅ−Ｌｙｓ(Ｆｍｏｃ)−ＯＨで部分的に官能化されている)を使用することにより得た。手動式のバッチリアクターを使用し、樹脂(１．０．８mmoles/g)上に存在する官能基に対して不足したアミノ酸(０．８当量)をＤＣＭに加えた。使用するアミノ酸の量に関して１当量のＰｙＢｏｐおよび４当量のＤＩＥＡを加えた。樹脂に結合するアミノ酸のmmoles数は、リジン残基のイプシロン位置のアミノ基上に存在するＦｍｏｃ基の量の評価により、１分量当たりで評価し、２０体積％のピペリジンを含むＤＭＦ塩基性溶液を除去し、ＵＶ領域(ラムダ＝２９０、イプシロン290＝＝５．１０3)で影響された発色団の吸光度を測定した。この操作の後に、２−クロロ−トリチル−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−Ｆｍｏｃ樹脂の置換度は、０．４４mmoles/gであった。
【０１１５】
次いで、Ｆｍｏｃ保護基を、２０％ピペリジンＤＭＦ溶液で処理することにより、それをＬｙｓ残基のイプシロン位置のアミノ官能基から開裂させた。脱保護反応のために７分の処理を連続２回用いた。後段ではキレート剤ＤＴＰＡ−ＧＬＵ(その６個のカルボキシル基のうち５個がターシャリーブチル基で保護されている)を、その１個の遊離カルボキシル基を介して、樹脂に結合しているリジン残基のイプシロン位置のアミノ基と縮合反応させた。反応はＨＡＴＵを活性化剤として用い、ＤＴＰＡ−ＧＬＵを２．５当量過剰とし、ＤＩＥＡ塩基を用いてｐＨを８．５に安定して行った。カイザー試験によってカップリング反応の終了を確認した。次いで、リジン残基のアルファ位置のアルミ基上に存在するＤｄｅ保護基を、４％ヒドラジンＤＭＦ溶液でそれを処理することにより開裂させた。この脱保護反応のために１０分の処理を連続２回用いた。これにより、続けて行うアミノ酸Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨのカップリング反応を再び手動式システムを用いて、キレート剤ＤＴＰＡ−ＧＬＵについて記載したのと同一の条件で行うことが可能となる。ここでも、カイザー試験によってカップリング反応が終了していることを確認した。
【０１１６】
次いで、自動式シンセサイザーのリアクターにＬｙｓ(Ｇｌｕ−ＤＴＰＡ)−Ｐｈｅ−Ｆｍｏｃ樹脂を移し、下記操作による合成をプログラムすることによりペプチド合成を完了させた：過剰な各アミノ酸２．５当量、アミノ酸に対してＰｙＢｏｐ活性化剤１当量、アミノ酸に対して１．５当量のＤＩＥＡ、およびＰｙＢｏｐ、無水ＤＭＦ溶媒、カップリング時間６０分(単一カップリング)。配列に使用するアミノ酸は以下のとおりとした：Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ(ＯｔＢｕ)−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ(Ｂｏｃ)−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ(Ｄｄｅ)−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｔｙｒ(ｔＢｕ)−ＯＨおよびＢｏｃ−Ａｓｐ(ＯｔＢｕ)−ＯＨ。樹脂上のペプチドの組立てが終了した時点で、Ｄａｐ残基の側鎖のＤｄｅ保護基を、４％ヒドラジンＤＭＦ溶液でそれを処理することにより除去した。この脱保護反応のために１０分の処理を連続２回用いた。
【０１１７】
次に、樹脂によって部分的に保護されたペプチドの開裂反応を行った。樹脂を多孔性隔壁上に置き、３〜５分間、ＴＥＡの０．５(体積)％ジクロロメタン溶液で処理し、この操作を１０回繰り返した。酸性の洗液を１０％ピリジンを含むフラスコに回収した。減圧下、蒸発によって体積で出発溶液の９０％を除去した後に、冷水の添加によってペプチドを沈殿させ、続いて水洗した。Ｄａｐ側鎖上のもの(分子量２３２０)を除いて全保護基を備えたペプチドの存在をMaldi質量分光法でチェックした後に、環化反応を実行した。リジン残基上のＣ−末端のカルボキシル基は、２，３−ジアミノプロピオン酸の３位のアミノ基とのアミド結合を形成した。反応は、ＤＭＦ中５．１０-4Ｍのペプチド濃度で、過剰量のカルボキシル官能性活性化剤ＨＡＴＵ４当量およびＤＩＥＡ塩基を加えることによりｐＨ８．５にして行った。混合物を、４０℃で５時間撹拌下に維持した。次いで、溶媒を減圧下に除去し、下記操作によってアミノ酸側鎖およびＤＴＰＡキレート剤のカルボキシ官能基地上の保護基を開裂させた。撹拌下、ペプチド化合物を、ＥＤＴ(２．５％)、ＴＩＳ(１％)および水(２．５％)を含むＴＦＡの混合物で２時間、フラスコ中で処理した。粗製物の均質性をＨＰＬＣ分析によってチェックした。粗製物は、保持時間１６．３分(カラム：逆相Ｃ１８；溶離剤：１％のＴＦＡを加えた水および１％のＴＦＡを加えたアセトニトリル；溶離勾配：２５分で８０％から２０％までの水含有率)に主ピークを示した。分析スケールで使用したのと同じ分離方法で生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。得られた生成物の純度は９８％を超え(ＨＰＬＣ分析によって確認)、予想される理論収率の５０％を超過した。製品の同一性は、Maldi質量分光法(予想される質量値１６５０でピークに示した)で確認した。
【０１１８】
（例５）
式(ＸＸ)とのインジウム錯体の調製
【０１１９】
【化１３】
2005503350.tif 000014
【０１２０】
例４に記載するようにして、式(ＸＩＸ)の化合物を三塩化インジウムと反応させて、式(ＸＸ)の化合物を合成した。インジウム塩(ＩＩ)は３％クエン酸塩バッファーの水溶液に溶解し生じた溶液を、式(ＸＸ)の化合物を含む溶液(０．５インジウム当量)に水中、ｐＨ７．８で加えた。２４時間後に、生成物をＨＰＬＣで精製し、Maldi質量分光法(予想される質量値１７６２でピークに示した)で同定した。
【図面の簡単な説明】
【０１２１】
【図１】ａ)はタイプＡ ＣＣＫレセプターのＮ末端断片１〜４７を備えた錯体に結合したペプチドＣＣＫ８の構造を示し、(Ｍ．ペレグリーニ(M.Pellegrini)によってBiochemistry, 38, 147, 75, 1999で報告されたものおよび、ｂ)は式(ＩＶ)の環状化合物の予想される構造を示す図である。
【図２】式(ＩＶ)のペプチドのコレシストキニンタイプＡレセプターの断片１〜４７、ＣＣＫＡ−Ｒ(１〜４７)への結合の測定値を示すグラフである。
【図３】例３の結果を示すグラフである。
【図２】
2005503350.tif 000022
【図３】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【手続補正書】
【提出日】平成15年6月16日(2003.6.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
【化１】
2005503350.tif 000066
（式中、Ｘａａは互いに独立に、任意のアミノ酸であり、メチオニン、チロシンまたはチロシン−ｍ−スルホン酸の少なくとも１つの残基を含み；
Ｘｂｂは、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ2、−ＳＨおよび−ＯＨからなる群から選択される少なくとも３つの官能基を含むアルファまたはベータアミノ酸であって、好ましくはＬｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｃｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｇａｂａ、イプシロン−Ａｃａおよびデルタ−Ａｖａから選択されるアミノ酸であり、２つのＸｂｂは共有結合的に結合しており；
ｎは３と５の間であり、
ｍは４と８の間である）
の化合物および放射性もしくは常磁性の金属または放射性ハロゲンとの錯体、並びにそれらの生理学的に許容される有機もしくは無機塩基との、または生理学的に許容される有機もしくは無機酸の陰イオンとの塩類。
【請求項２】
Ｘａａアミノ酸は、１つのメチオニン残基、１つのチロシンもしくはチロシン−ｍ−スルホン酸の残基、１つのリジン残基、またはオルニチン、アスパラギン酸およびグルタミン酸から選ばれる１つのアミノ酸、の少なくとも１つを含む請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
一般式（ＩＩ）：
【化２】
2005503350.tif 000067
（式中、
ｍは４であり；
ｎは３と５の間の整数であり；
Ｘａａ１および／またはＸａａ２は存在しなくてもよく；
Ｘａａ３はＡｓｐまたはＧｌｕであり；
Ｘａａ４はＴｙｒまたはＳＯ3Ｈ−Ｔｙｒであり；
Ｘａａ１０はＰｈｅまたは、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｔｒｐ、ＧｌｙおよびＰｒｏから選択されるアミノ酸である）を有する請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
【化３】
2005503350.tif 000068
から選択される請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
一般式（ＩＸ）の化合物：
Ａ−［Ｙ］z−Ｃ            （ＩＸ）
（式中、
Ａは請求項１から４に記載のペプチドであり；
ｚは０と５の間の整数であり；
Ｙは、ペプチドＡの中に存在する個々のアミノ酸の側鎖上に存在する官能基のうちの１つに、またはＡのＮ−末端（−ＮＨ2）基、またはＣ−末端（−ＣＯ2Ｈ）基に、およびＣに結合するスペーサー鎖であり；ｚが２と５の間の整数である場合、ユニットＹは互いに同一でも異なっていてもよく；
Ｃは、スペーサー鎖Ｙに共有結合的に、またはペプチドＡに直接に、またはペプチドＡの多数のアミノ酸単位に結合した、常磁性金属または放射性同位元素と複合し得るキレート剤である）。
【請求項６】
Ｃが、ＥＤＴＡ；ＤＴＰＡ；ＥＯＢ−ＤＴＰＡ；ＢＯＰＴＡ；ＤＴＰＡ−ＢＭＡ；ＤＴＰＡ−ＧＬＵ；ＤＴＰＡ−Ｌｙｓ；ＤＯＴＡ；ＤＯＴＭＡ；ＤＯ３Ａ；ＨＰＤＯ３Ａ；ＭＣＴＡ；ＤＰＤＰ；ＥＤＴＰ；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカノ−１，４，７，１０−テトラキス［メチレン（メチルホスフィン）］酸；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカノ−１，４，７，１０−テトラキス［メチレン（メチルホスホン）］酸；テキサフリン類、ポルフィリン類、フタロシアニン類；式（ＸＩＩＩ）の化合物
（Ｎアミノ／アミド）4-j（Ｓチオール誘導体）j      （ＸＩＩＩ）
（ここでｊは０、１または２の整数値を有する）
から選択される請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｙが以下の式の基である：
【化４】
2005503350.tif 000069
（式中、ｒ、ｌおよびｑは各々独立して０または１であり、ｐは０と１０の間で変わることができ（但し、ｌ、ｒおよびｑの少なくとも１つは０以外である）；
Ｘは、Ｏ原子、または−ＮＲ基（ＲはＨ原子またはアルキル基（Ｃ1〜Ｃ5）である）であり；
Ｋは、置換もしくは非置換のベンゼン核またはＣＨＲ1基（ここでＲ1は水素原子または−ＣＯＯＨ、または−ＳＯ3Ｈ基である）であり；
Ｗは−ＣＯ−または−ＣＳ−基である））請求項５または６に記載の化合物。
【請求項８】
スペーサー鎖Ｙが以下の式（Ｘ）：
【化５】
2005503350.tif 000070
（式中、Ｒ、Ｒ1、ｌ、ｒ、ｐ、ｑおよびｚは上記定義と同じ意味を有する）を有する請求項５、６および７に記載の化合物。
【請求項９】
スペーサー鎖Ｙが以下の式（ＸＩ）：
【化６】
2005503350.tif 000071
（式中、Ｒ、Ｒ1、ｌ、ｒ、ｐ、ｑおよびｚは上記定義と同じ意味を有する）を有する請求項５、６、７および８に記載の化合物。
【請求項１０】
スペーサー鎖Ｙが以下の式（ＸＩＩ）：
【化７】
2005503350.tif 000072
（式中、Ｒ、Ｒ1、ｌ、ｒ、ｐ、ｑおよびｚは上記定義と同じ意味を有する）を有する請求項５、６および７に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｙが、以下の基：−（ＣＨ2）2−ＣＯ−、−（ＣＨ2）4−ＮＨ−、−（ＣＨ2）4−  ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ2）2−ＣＯ−、−ＣＨ2−Ｐｈ−ＣＨ2−ＣＯ−、−ＣＨ2−Ｐｈ−ＮＨ−ＣＳ−
のうちの１つである請求項５から１０に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｃが、ＤＴＰＡ、ＤＴＰＡ−Ｌｙｓ、ＤＴＰＡ−ＧＬＵの残基またはそれらの誘導体である請求項５から１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｃが、ＤＯＴＡまたはＤＯ３Ａの残基またはそれらの誘導体である請求項５から１１に記載の化合物。
【請求項１４】
コレシストキニンのアゴニストまたはアンタゴニストとしての、請求項１から１３に記載の化合物。
【請求項１５】
非病理学的状況よりも高い量のタイプＡコレシストキニンレセプターを過剰発現している動物およびヒトの主要な腫瘍およびその転移を識別し定位するための請求項１から１３に記載の化合物。
【請求項１６】
非病理学的状況よりも高い量のタイプＢコレシストキニンレセプターを過剰発現している動物およびヒトの主要な腫瘍およびその転移を識別し定位するための請求項１から１３に記載の化合物。
【請求項１７】
非病理学的状況よりも高い量のタイプＡおよび／またはＢコレシストキニンレセプターを過剰発現している動物およびヒトの主要な腫瘍およびその転移を識別し定位するための請求項１から１３に記載の化合物。
【請求項１８】
非病理学的状況よりも高い量のタイプＡおよび／またはＢコレシストキニンレセプターを過剰発現しているヒト腫瘍を治療するための請求項１から１３に記載の化合物。
【請求項１９】
請求項１から１３に記載のキレートまたはそれの塩を含む医薬用、または診断造影もしくはシンチグラム造影用組成物。
【請求項２０】
請求項１から１３に記載の所定量の化合物および試薬をテクネチウム−９９ｍ、レニウム−１８６またはレニウム−１８８で標識するのに十分な量の還元剤を含む無菌的に密封したガラス瓶を含む放射性医薬品組成物調製用の診断キット。
【請求項２１】
核磁気共鳴またはシンチグラフィを使用して、ヒトまたは動物身体の器官および／または組織および／または細胞の画像生成用の診断用処方を調製するための請求項５から１３に記載の化合物またはその塩のキレート化合物の使用。
【国際調査報告】
2005503350.tif 000073
2005503350.tif 000074
2005503350.tif 000075
2005503350.tif 000076
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