(57)【要約】  ａ）一般式(Ia)または(Ib)の少なくとも一のアミンおよび/または第四級アンモニウム塩、ここでＲ1はＣ6-18アルキルを表し、Ｒ2はベンジルまたはＣ6-18アルキルを表し、Ｒ3はＣ1-18アルキルまたは-[(CH2)2-O]nR6、ここでｎ＝1〜20を表し、Ｒ4およびＲ5は独立してＣ1-4アルキルを表し、Ｒ6は水素または任意に置換されたフェニルを表し、Ａ-は無機または有機酸の一価の陰イオンまたは多価陰イオンの一当量を表す；並びにｂ）一般式(II)の少なくとも一のアルカノールアミンまたは対応の塩、ここでｎおよび、必要に応じてｍおよびｏは、独立して2または3の値であり、ｘおよびｙは独立して0または1の値である；をI：IIの質量比20：1〜1：20で含有する消毒薬組成物の、とりわけポリオウイルスに対する殺ウイルス剤としての使用を開示する。また前記組成物は、低濃度で使用したときでさえ、優れた殺菌および殺真菌特性を有する。  【化１】2005514427.tif 000010
2005514427.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）下記一般式のアミンおよび/または第四級アンモニウム塩：
【化１】
2005514427.tif 000008
ここでＲ1はＣ6-18-アルキルであり、
Ｒ2はベンジルまたはＣ6-18-アルキルであり、
Ｒ3はＣ1-18-アルキルまたは-[(CH2)2-O]nR6、ここでｎ＝1〜20であり、
Ｒ4およびＲ5は互いに独立してＣ1-4-アルキルであり、
Ｒ6は水素または無置換または置換のフェニルであり、および
Ａ-は無機または有機酸の一価の陰イオンまたは多価陰イオンの一当量である；並びに
ｂ）下記一般式の少なくとも一のアルカノールアミンまたは対応の塩：
【化２】
2005514427.tif 000009
ここで、ｎおよび、存在する場合にはｍおよびｏは、互いに独立して2または3の値であり、および
ｘおよびｙは互いに独立して0または1の値である；
をI：IIの質量比20：1〜1：20で含む消毒薬組成物の、殺ウイルス剤としての使用。
【請求項２】
前記アミンまたは第四級アンモニウム塩が、N,N-ビス(3-アミノプロピル)ドデシルアミン、N,N-ビス(3-アミノプロピル)オクチルアミン、ジデシルジメチルアンモニウム塩、ジオクチルジメチルアンモニウム塩、オクチルデシルジメチルアンモニウム塩、ココアルキルジメチルベンジルアンモニウム塩およびベンジルジメチルオキソエチルアンモニウム塩、およびこれら化合物の混合物から成る群より選択されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記アルカノールアミン(II)が、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミンおよび3-アミノ-1-プロパノールから成る群より選択されることを特徴とする、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
前記I：IIの質量比が、1：5〜5：1の間であることを特徴とする、請求項１〜３の何れか１項に記載の使用。
【請求項５】
前記消毒薬組成物が、溶媒として水を含むことを特徴とする、請求項１〜４の何れか１項に記載の使用。
【請求項６】
前記消毒薬組成物が、有機溶媒、界面活性剤、錯化剤、芳香剤および着色剤から成る群より選択される一以上の補助剤を更に含むことを特徴とする、請求項１〜５の何れか１項に記載の使用。
【請求項７】
表面消毒および機器消毒における、請求項１〜６の何れか１項に記載の使用。
【請求項８】
洗濯物の消毒における、請求項１〜６の何れか１項に記載の使用。
【請求項９】
手の消毒における、請求項１〜６の何れか１項に記載の使用。
【請求項１０】
化学的トイレ（toilets）における、請求項１〜６の何れか１項に記載の使用。
【請求項１１】
パルボウイルスまたはピコナウイルスに対する、とりわけポリオウイルスに対する、請求項１〜１０の何れか１項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミンおよび/または第四級アンモニウム塩をベースとする共力作用性消毒薬組成物（disinfectant composition）の、とりわけポリオウイルスに対する殺ウイルス剤としての使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
アミンおよび/または第四級アンモニウム塩をベースとする多くの消毒薬および保存薬組成物が知られている。しかし、これらは一般に、とりわけ比較的高い希釈度で、真菌類（たとえばAspergillus niger）およびウイルス（とりわけ高抵抗性ウイルス、たとえばポリオウイルス）に対して不満足な活性を示す。
【発明の開示】
【０００３】
したがって本発明の目的は、高い希釈度であっても真菌類およびとりわけウイルスに対して優れた活性を示す、アミンおよび/または第四級アンモニウム塩をベースとする消毒薬組成物を提供することである。
本目的は、請求項１に記載の使用により、本発明に従って達成される。
【０００４】
従前の出願PCT/EP 01/10754 (WO 02/23990 A1として公開) は、アミンおよび/または第四級アンモニウム塩およびアルカノールアミンをベースとする消毒薬組成物、並びにその殺真菌特性を記載している。かかる消毒薬組成物はまた、著しい殺ウイルス特性も示し、とりわけ、ポリオウイルス等の高抵抗性ウイルスに対して優れた活性を示すことが、驚くべきことにここで見出された。かかる消毒薬組成物はまた、他のピコルナウイルス、たとえばECHOウイルス、または対応する動物病原体ウイルス、たとえばECBOウイルスに対して活性であり、パルボウイルス、たとえばイヌパルボウイルスに対しても活性である。
【０００５】
当該組成物は、下記一般式のアミンおよび/または第四級アンモニウム塩：
【化３】
2005514427.tif 000003
ここでＲ1はＣ6-18-アルキルであり、
Ｒ2はベンジルまたはＣ6-18-アルキルであり、
Ｒ3はＣ1-18-アルキルまたは-[(CH2)2-O]nR6、ここでｎ＝1〜20であり、
Ｒ4およびＲ5は互いに独立してＣ1-4-アルキルであり、
Ｒ6は水素または無置換または置換のフェニルであり、および
Ａ-は無機または有機酸の一価の陰イオンまたは多価陰イオンの一当量である；並びに
下記一般式の少なくとも一のアルカノールアミンまたは対応の塩：
【化４】
2005514427.tif 000004
ここで、ｎおよび、存在する場合にはｍおよびｏは、互いに独立して2または3の値であり、および
ｘおよびｙは互いに独立して0または1の値である；
をI：IIの質量比20：1〜1：20で含む。
【０００６】
ここおよび以下において、アルキルは、各々のケースで、特定される炭素数の分枝または非分枝のアルキル基を意味すると解されるが、好ましくは非分枝のアルキル基、特に好ましくは偶数の炭素原子を有するアルキル基である。とりわけ、アルキルはまた、天然原料に由来する同族体の混合物、たとえば「ココアルキル」を意味すると解される。
【０００７】
置換されたフェニルは、とりわけ、一以上のＣ1-8-アルキル基および/または塩素原子で置換されたフェニル基を意味すると解される。
適切な陰イオンＡ-は、原則としては無機または有機の陰イオンのすべてであり、とりわけハロゲン化物、たとえばクロライドまたはブロマイド、または低カルボン酸の陰イオン、たとえばアセテート、プロピオネートまたはラクテートである。
【０００８】
アミンまたは第四級アンモニウム塩(Ia/Ib)は、好ましくは、N,N-ビス(3-アミノプロピル)ドデシルアミン、N,N-ビス(3-アミノプロピル)オクチルアミン、ジデシルジメチルアンモニウム塩、ジオクチルジメチルアンモニウム塩、オクチルデシルジメチルアンモニウム塩、ジココアルキルジメチルアンモニウム塩、ココアルキルジメチルポリ(オキシエチル)アンモニウム塩、ジココアルキルメチルポリ(オキシエチル)アンモニウム塩、デシルジメチルポリ(オキシエチル)アンモニウム塩、ジデシルメチルポリ(オキシエチル)アンモニウム塩、オクチルジメチルポリ(オキシエチル)アンモニウム塩、ジオクチルメチルポリ(オキシエチル)アンモニウム塩、ココアルキルジメチルベンジルアンモニウム塩、ベンジルドデシルジメチルアンモニウム塩またはベンジルジメチルポリ(オキシエチル)アンモニウム塩、またはこれら化合物の２以上の混合物である。特に優れた結果は、ジデシルジメチルアンモニウム塩を用いて得られた。
【０００９】
適切なアルカノールアミン(II)は、原則としてはエタノールアミンおよびプロパノールアミンのすべてであり、とりわけ、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミンおよび3-アミノ-1-プロパノールである。明らかに、前記化合物の混合物を用いることも、本発明の範囲内にある。特に優れた結果は、第一級アミノ基を有する化合物を使用して、すなわちモノエタノールアミンおよび3-アミノ-1-プロパノールを使用して得られた。
【００１０】
アミン(Ia)または第四級アンモニウム塩(Ib)の、アルカノールアミン(II)に対する質量比は、好ましくは1：5〜5：1の範囲にある。
【００１１】
本発明に従って使用される消毒薬組成物は、好ましくは溶媒として水を含み、適切な場合には有機溶媒と組合わせられる。好ましくは、本発明に従って使用される消毒薬組成物は、有機溶媒、界面活性剤、錯化剤、芳香剤および着色剤から成る群より選択される一以上の補助剤を更に含む。
【００１２】
当該消毒薬組成物の好ましい使用は、表面消毒および機器消毒である。
更に好ましい使用分野は、洗濯物の消毒および手の消毒である。
当該消毒薬組成物の更に好ましい使用は、たとえば航空機および乗り物に乗っている際の化学的トイレ（toilets）における使用である。
【００１３】
以下の実施例は、本発明の実施を説明するが、記載される態様に限定されると解すべきではない。特に規定しない場合、示される量はすべて、質量％である。各々のケースで使用されたテスト微生物は、Aspergillus niger ATCC 16404であった。特に規定しない限り、CEN 1275で特定される方法を用いて有効性を決定した。
【００１４】
例１
消毒用洗浄製剤（濃縮物）を以下のものから調製した：
5.0%  ジデシルジメチルアンモニウム クロライド (50% 強度溶液)
2.0%  N,N-ビス(3-アミノプロピル)ドデシルアミン
5.0%  モノエタノールアミン
5.0%  Genapol(登録商標) T250 (獣脂脂肪アルコールポリグリコールエーテル、
25 molのエチレンオキシド)
0.5%  メタケイ酸ナトリウム
0.5%  炭酸ナトリウム
2.0%  メチルグリシン二酢酸 三ナトリウム塩 (Trilon(登録商標) M; 40% 強度溶液)
水で100%にする。
【００１５】
希釈液（1部の濃縮物、99部の水）を用いて、20℃において15分の接触時間で有効性を決定した。微生物総数の減少の底10の対数は、4.1であった。
【００１６】
比較例１
例１の手法に従って行ったが、モノエタノールアミンを同量の水に置き換えた点のみ変更した。同じ試験条件下において、製剤は実質的に不活性であった。
【００１７】
例２
消毒用製剤（濃縮物）を以下のものから調製した：
4.9%  N,N-ビス(3-アミノプロピル)ドデシルアミン
4.0%  モノエタノールアミン
2.0%  Genapol(登録商標) T250 (獣脂脂肪アルコールポリグリコールエーテル、
25 molののエチレンオキシド)
5.0%  Hostapur(登録商標) SAS 30 (C13-17 第二級 n-アルカンスルホン酸、
ナトリウム塩)
2.0%  エチレンジアミン四酢酸四ナトリウム塩 (40% 強度溶液)
0.7%  エチレンジアミン四酢酸
水で100%にする。
【００１８】
希釈液（1部の濃縮物、199部の水）を用いて、20℃において15分の接触時間で有効性を決定した。微生物総数の減少の底10の対数は、4.3であった。
【００１９】
例３
消毒用製剤（濃縮物）を以下のものから調製した：
4.2%  N,N-ビス(3-アミノプロピル)ドデシルアミン
2.0%  ジデシルメチルポリ(オキシエチル)アンモニウムプロピオネート (BARDAP 26)
4.0%  モノエタノールアミン
2.0%  Genapol(登録商標) T250 (獣脂脂肪アルコールポリグリコールエーテル、
25 molのエチレンオキシド)
5.0%  Hostapur(登録商標) SAS 30 (C13-17 第二級 n-アルカンスルホン酸、
ナトリウム塩)
2.0%  エチレンジアミン四酢酸四ナトリウム塩 (40% 強度溶液)
0.7%  エチレンジアミン四酢酸
4.0%  ブチルジグリコール
水で100%にする。
【００２０】
希釈液（1部の濃縮物、199部の水）を用いて、20℃において15分の接触時間で有効性を決定した。微生物総数の減少の底10の対数は、＞4.4であった。
その上、CEN 1650で特定される方法を用いて、15分の接触時間、1.0％の濃度、30°fHの水硬度および0.3％アルブミンの有機物負荷で有効性を決定した。微生物総数の減少の底10の対数は、＞4.4であった。
【００２１】
例４〜１９
0.5％アルカノールアミン(II)および0.25％のアミンまたは第四級アンモニウム塩(Ia/Ib)から水溶液を調製し、CEN 1275で特定される方法を用いて試験した。その結果を、以下の表１に要約する。
【００２２】
【表１】
2005514427.tif 000005
【００２３】
比較のために、表１に列挙したすべての化合物を、0.5％強度溶液で個々の物質として試験した。これら化合物の何れも、著しい殺真菌活性を示さなかった（log10微生物の減少＜2）。
【００２４】
例２０
消毒用製剤（濃縮物）を以下のものから作製した：
9.9%  ジデシルジメチルアンモニウム クロライド (70% 強度溶液)
8.0%  モノエタノールアミン
5.0%  Genapol(登録商標) T250 (獣脂脂肪アルコールポリグリコールエーテル、
25 molのエチレンオキシド)
5.0%  炭酸カリウム(無水)
6.0%  エチレンジアミン四酢酸四ナトリウム塩 (Trilon(登録商標) B; 40% 強度溶液)
水で100%にする。
【００２５】
例２１
例２０に記載の濃縮物を、6％強度の希釈液で、30、60および120分の接触時間を用いて、ポリオウイルスタイプ1（Mahoney株）に対する有効性について試験した。
【００２６】
試験方法：
“Richtlinie des Bundesgesundheitsamtes und der Deutschen Vereinigung zur Bekampfung der Viruskrankheiten zur Prufung von chemischen Desinfektionsmitteln auf Wirksamkeit gegen Viren” [ウイルスに対する有効性について化学的消毒薬を試験するための、ドイツ連邦健康機関およびウイルス性疾患を規制するためのドイツ協会のガイドライン] (Bundesgesundheitsbl. 1982, 25, 397) に従って、試験を行った。Vero細胞培養のための増殖培地は、10％胎仔ウシ血清および10 U/mLペニシリン、更に10μg/mLストレプトマイシンを添加した「ダルベッコの改変イーグル培地」であった。組織培養の後、3％胎仔ウシ血清のみを含有した組織培養培地にポリオウイルスを接種した。ポリオ感染細胞を実質的に完全に剥離した後、ウイルス懸濁液を、細胞および細胞構成成分の遠心（3000×g、15分）により精製した。細胞培養培地が3％胎仔ウシ血清を含有していたので、消毒薬試験においても、また小さなタンパク質負荷が、2回蒸留水（twice-distilled water）を用いた試験バッチに存在した。
【００２７】
消毒薬試験のために、ウイルス懸濁液1部を、消毒薬濃縮物の7.5％強度の希釈液8部（最終濃度6％に相当）と混合し、各ケースにおいて1部の2回蒸留水または2％強度の血清アルブミンもしくは胎仔ウシ血清と混合し、30、60および120分間20℃でインキュベートした。その後、胎仔ウシ血清を含有しない冷却培地で100倍希釈することにより、消毒薬の活性を停止させた。各ケースにおいて、Vero細胞の密なローン（lawn）を含有する6つの凹部を有するマルチウェルプレート（Becton Dickinson Labware, Lincoln Park, NJ, Type FalconTM353046）の2ウェルに、この希釈液（ウイルス懸濁液の10-3希釈液に相当）および順次10倍の希釈液を各ケース1 mL接種した。室温での吸着時間から１時間後、上清の液体を抜取った。その後、ウェルの細胞ローンを、煮沸により液化された2 mLの2％強度アガロース（Serva high EEO, Cat. No. 11397）で被覆し、これを5％強度の胎仔ウシ血清を含有する2倍濃度の培地と1：1の比率で混合し、水浴で40℃に冷却した。室温でアガロースを固化した後、プレートを2日間37℃でCO2インキュベーションキャビネット内でインキュベートした。
【００２８】
ウイルス懸濁液の感染性をプラーク試験で試験した。この試験において、破壊された細胞の各領域は、ポリオウイルスの一つの感染ユニットに相当する。よってプラークの数は、試験バッチの規定の希釈液中に存在する感染性ウイルス粒子の数を示す。20％メタノールおよび5％酢酸を含有する水溶液中で30分間、各ケース1.0 mLの0.1％ブリリアントブルーＲ溶液（Sigma, Cat. No. B0149）で染色することにより、プラークを可視化した。このとき未染色のプラークは、青色の細胞ローンと明らかに区別された。平均プラーク総数は、各ケースの希釈液の2つのバッチから計算した。
【００２９】
ウイルスのスターティング濃度を決定する「ウイルスコントロール」は、消毒薬を同体積の2回蒸留水で置き換えたバッチとした。このようにして決定されたウイルス濃度は、試験される消毒薬のウイルス不活性化作用を計算するための基準として用いた。消毒薬による組織培養細胞の任意の損傷を検出するための「毒性コントロール」は、ウイルス懸濁液を同体積の2回蒸留水で置き換えたバッチとした。これらのバッチを、胎仔ウシ血清を含まない培地を用いて、1：100〜1：1000の比率で希釈した（消毒薬試験バッチにおいてウイルス懸濁液の10-3〜10-4の希釈液に相当する）。その後、これを組織培養物に添加し、消毒薬作用を試験するためのバッチと同様に、1時間後、上清の液体を抜取った。2日間37℃でインキュベーションした後、染色を使用して、細胞ローンが消毒薬により損傷を受けたか否かを試験した。
【００３０】
試験ウイルスの抵抗性の指標として、および他の研究との比較のために、「ホルムアルデヒドコントロール」を実施した。このために、1部のウイルス懸濁液を、4部のリン酸緩衝化食塩水（0.1 M; pH 7;“ダルベッコのPBS”）と混合し、その全体積を、1.4 gのホルムアルデヒドを100 mL溶液中に含有するホルマリン溶液（最終濃度：0.7 gのHCHO/100 mL）に添加した。5、15および60分の接触時間の後、消毒薬試験と同様に、1：100に希釈することによりホルムアルデヒドの作用を停止させ、ポリオウイルスの残存する感染性を、プラーク試験において順次10倍の希釈液で決定した。
【００３１】
結果：
コントロール実験：
2回蒸留水を用いたバッチの「ウイルスコントロール」は、1.6・108感染ユニット/mLのウイルス濃度を示し、血清アルブミンを含有するバッチでは、1.2・108感染ユニット/mLのウイルス濃度を示し、胎仔ウシ血清を含有するバッチでは、1.0・108感染ユニット/mLのウイルス濃度を示した。「毒性コントロール」は、試験バッチを1：100に希釈した後（ウイルス懸濁液の10-3希釈液に相当する）、細胞ローンに僅かな損傷がみられた。1：1000の希釈液では、毒性はもはや観察できなかった。したがって、該試験条件下において、消毒薬の作用の下でのウイルス濃度の減少は、ウイルス懸濁液中5・103感染ユニット/mLのウイルス濃度まで追跡することができ（10-4希釈の両ウェルにおいて、このときプラークはもはや見えない）、少なくとも108感染性ウイルス粒子/mLのスターティング濃度において、少なくとも10の4.5乗を超えるウイルス濃度の減少が観察可能である。消毒薬の有効性を検出するための試験ガイドラインは、少なくとも10の4乗のウイルス濃度の減少のみを要求するため、この条件に従って、選択された実験バッチを用いて検出することができる。
【００３２】
0.7％強度のホルムアルデヒドを含有するバッチにおいて、5分の接触時間の後、1.05・106/mLのウイルス濃度が測定され、15分後、1・103/mL、60分後、＜5・102/mLであった。これらは、以前の実験の結果：0.7％強度のホルマリンは、通常30分以内に10の4乗以上、ポリオウイルスの濃度を低減することができるという結果を確証する予測される値である。
【００３３】
ポリオウイルスに対する消毒薬の有効性：
例２０以降の消毒薬組成物の6％強度希釈液に30、60および120分接触させた後、ウイルス希釈10-4で胎仔ウシ血清を含有するバッチにおいて、2つのテストウェルともに、プラークはもはや観察されなかった。よって消毒薬処理の後、＜5・103感染ユニット/mLのウイルス濃度が存在した。この結果は、低タンパク質負荷（2回蒸留水を用いたバッチ）だけでなく、培地（2％強度血清アルブミンを含有するバッチ）および高タンパク質負荷（胎仔ウシ血清を含有するバッチ）でもみられた。よって、消毒薬なしのコントロール測定と比較して、少なくとも4.5 log10または10の4.5乗、ウイルス濃度は減少した。したがって、ドイツ連邦共和国における機器消毒薬としての登録のための有効性条件は満たしている。
【００３４】
例２２
ECBOウイルスに対する有効性：
例２０に記載の濃縮物を、ウイルスに対する有効性について化学的消毒薬を試験するための (ドイツ) 連邦健康機関（Federal Health Agency）およびthe Deutsche Vereinigung zur Bekampfung der Viruskrankheiten e.V.のガイドライン (Bundesgesundheitsbl. 1982, 25, 397-398; comment: Bundesgesundheitsbl. 1983, 26, 413-414) に従って、ECBOウイルス株LCR-4に対する殺ウイルス特性に関して定量的懸濁試験で試験した。試験は、濃縮物の2回蒸留水中の1.0％、3.0％および5.0％希釈液で、15、30、60および120分の接触時間で行った。
【００３５】
試験温度は20±1℃とし、使用するタンパク質負荷は胎仔ウシ血清(FCS)または血清アルブミン(ウシ血清アルブミン、BSA)とした。
ウイルス懸濁液を調製するために、最少必須培地(MEM、イーグル)を含有するRouxフラスコ中の胎仔ウシ肺細胞(FCL 107)に、細胞あたり約10 PFU(プラーク形成単位)のウイルス（Dr W. Herbst, Institute for Hygiene and Infectious Animal Diseases at the Justus-Liebig University in Giessenより入手）を感染させ、細胞変性効果の出現後（約12時間後）、3倍の凍結/融解操作を行った。続いて、770×gで10分間遠心し、これにより上清としてウイルス懸濁液を得た。
【００３６】
不活性化バッチを調製するため、所望の1.25倍の濃度である8体積部の消毒薬を、ウイルス懸濁液および2回蒸留水（それぞれ1体積部）と混合した。タンパク質負荷を用いた実験では、2回蒸留水の代わりに、1体積部のFCS（Flow Laboratories）または2％強度のBSA溶液（Behringwerke AG）を使用した。
不活性化実験は、密閉ガラス管で行った。適切な時間の後、サンプルを回収し、残存する感染性を決定した。
【００３７】
感染性は、マイクロ法で最終希釈滴定（end-dilution titration）を用いて決定した。このために、採取した直後のサンプルを、最少必須培地（MEM）を用いて、希釈率として選択される10の整数乗で希釈した。各ケースにおいて、100μLの希釈サンプルを、平坦な底を有する滅菌ポリスチレンプレートの8つの容器（basin）に移した。その後、各ケースにおいて、KOP-R細胞の新たにトリプシン処理した（trypsinized）懸濁液100μL（ウシ食道咽頭（oesopharyngeal）組織、Dr R. Riebe, Bundesforschungsanstalt fur Viruskrankheiten der Tiere auf der Insel Riems, Catalogue No. RIE 244から入手）を添加した。この懸濁液を、各容器において約10〜15×103細胞となるように調整した。その後、サンプルを37℃でCO2インキュベーションキャビネット（5体積％CO2）内でインキュベートした。5〜7日後、感染用量（ID50/mL）をSpearmann-Karberの方法により決定した。
【００３８】
殺ウイルス活性は、（最も長時間の接触時間の後に）平行して行われた各々のコントロール滴定と比較した、滴定量（titre）の減少を計算することにより決定した。その差は、Δlog10 ID50として報告した。
消毒薬の細胞毒性を決定するため、2体積部のPBS（リン酸緩衝化食塩水）を、8体積部の消毒薬希釈液（1.25倍濃度）と混合し、対応させて希釈し、細胞培養物に適用した。細胞毒性用量は、（ID50値との類推により）log10 CD50/mLとして報告した。
不活性化試験の結果を、以下の表２に要約し、細胞毒性決定の結果を表３に要約する。
【００３９】
【表２】
2005514427.tif 000006
【００４０】
【表３】
2005514427.tif 000007
【００４１】
結果は、試験組成物（濃縮物）が、3.0％の使用濃度で60分の接触時間後に、および5.0％で30分後に、ECBOウイルスに対してガイドラインに規定される有効性（Δlog10 ID50＞4.0；99.99％の不活性化に相当）を有することを示す。
【００４２】
例２３
イヌパルボウイルスに対する有効性：
例２０に記載される濃縮物の希釈液を、イヌパルボウイルスタイプ2（Dr Parrish, Cornell Universityから入手）に対する有効性について、NLFK細胞（Norden Lab Feline Kidney）において、22℃、10分の接触時間で試験した。
5％有機物負荷（胎仔ウシ血清）を含有する脱塩水または硬水（400 ppm AOAC硬水）中の1：35の比率での希釈液は、十分な殺ウイルス有効性を示した。
【国際調査報告】
2005514427.tif 000011
2005514427.tif 000012
2005514427.tif 000013
2005514427.tif 000014
2005514427.tif 000015
2005514427.tif 000016
2005514427.tif 000017
2005514427.tif 000018