(57)【要約】 ａ）サイクリックグアノシンモノホスフェート（ｃＧＭＰ）特異的ホスホジエステラーゼ５型（ＰＤＥ５）阻害薬、および、ｂ）アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬、を含む組合せ製剤は、高血圧の治療に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
本態性高血圧、肺性高血圧、二次性高血圧、孤立収縮性高血圧、糖尿病に関連した高血圧、アテローム性動脈硬化症に関連した高血圧、および腎血管性高血圧を含む高血圧、ならびに、鬱血心不全、狭心症、脳卒中、糖尿病および耐糖能の障害に対する、緩和、治療および予防処置用医薬品を製造するための、サイクリックグアノシンモノホスフェート特異的ホスホジエステラーゼ５型（ＰＤＥ５）の阻害薬およびアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）の阻害薬の組み合わせの使用。
【請求項２】
ＰＤＥ５阻害薬が１００ｎＭより小さいＩＣ50値を有するものである請求項１の使用。
【請求項３】
ＰＤＥ５阻害薬が５０ｎＭより小さいＩＣ50値を有するものである請求項２の使用。
【請求項４】
ＰＤＥ５阻害薬が、
５−〔２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルホニル）フェニル〕−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン（シルデナフィル）；
（６Ｒ，１２ａＲ）―２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ〔２’，１’：６，１〕ピリド〔３，４−ｂ〕インドール−１，４−ジオン（タダラフィル）；
２−〔２−エトキシ−５−（４−エチル−ピペラジン−１−イル−１−スルホニル）−フェニル〕−５−メチル−７−プロピル−３Ｈ−イミダゾ〔５，１−ｆ〕〔１，２，４〕トリアジン−４−オン（バルデナフィル）；
５−〔２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル〕−３−エチル−２−〔２−メトキシエチル〕−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン；および
５−（５−アセチル−２−ブトキシ−３−ピリジニル）−３−エチル−２−（１−エチル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン、
ならびに製薬上受容できるそれらの塩である、請求項１〜３のいずれかの使用。
【請求項５】
ＰＤＥ５阻害薬が、
５−〔２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルホニル）フェニル〕−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン（シルデナフィル）、または、製薬上受容できるそれらの塩である、請求項４の使用。
【請求項６】
ＰＤＥ５阻害薬がシルデナフィルクエン酸塩である、請求項５の使用。
【請求項７】
ＡＣＥ阻害薬が、ベナゼプリル、カプトプリル、シラゼプリル、エナラプリル、エナラプリラート、ファシノプリル、リシノプリル、モエキセプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリルおよびトランドラプリル、ならびに製薬上受容できるそれらの塩である、請求項１〜６のいずれかの使用。
【請求項８】
ＰＤＥ５阻害薬およびＡＣＥ阻害薬の組合せ製剤が、
シルデナフィルクエン酸塩とキナプリル塩酸塩；
シルデナフィルクエン酸塩とベナゼプリル塩酸塩；
シルデナフィルクエン酸塩とカプトプリル；
シルデナフィルクエン酸塩とエナラプリルマレイン酸塩；
シルデナフィルクエン酸塩とフォシノプリル；
シルデナフィルクエン酸塩とリシノプリル；
シルデナフィルクエン酸塩とモエキシプリル；
シルデナフィルクエン酸塩とラミプリル；および
シルデナフィルクエン酸塩とトランドラプリル、
から選ばれる、請求項７の使用。
【請求項９】
医薬品が、高血圧の治療のためのものである、請求項１の使用。
【請求項１０】
サイクリックグアノシンモノホスフェート（ｃＧＭＰ）特異的ホスホジエステラーゼ５型（ＰＤＥ５）阻害薬、および、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬を含む組合せ製剤。
【請求項１１】
サイクリックグアノシンモノホスフェート（ｃＧＭＰ）特異的ホスホジエステラーゼ５型（ＰＤＥ５）阻害薬、および、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬を含む、高血圧治療用の、同時に、分けてまたは順次に投与するための組合せ製剤。
【請求項１２】
ａ）ＰＤＥ５阻害薬を含む第一の組合せ製剤；ｂ）ＡＣＥ阻害薬を含む第二の組合せ製剤；および、ｃ）該組合せ製剤用容器、を含むキットである高血圧治療用キット。
【請求項１３】
ＰＤＥ５阻害薬およびＡＣＥ阻害薬の有効量を患者に対して、同時、分割、または連続治療することを含む、該患者の高血圧の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、心血管系および代謝性疾患、とりわけ高血圧の治療のための、ａ）サイクリックグアノシンモノホスフェート（ｃＧＭＰ）特異的ホスホジエステラーゼ５型（ＰＤＥ５）阻害薬、および、ｂ）アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬の組み合わせの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
血圧（ＢＰ）は、いくつかの血行動態のパラメーターを単独でまたは組み合わせて定義される。心臓収縮期血圧（ＳＢＰ）は、心臓の収縮時に達成される最大動脈圧である。心臓拡張期血圧（ＤＢＰ）は、心臓の弛緩時に達成される最小動脈圧である。該ＳＢＰと該ＤＢＰの間の差が、脈圧（ＰＰ）と定義される。
【０００３】
高血圧、つまり高くなった血圧、は少なくとも１４０ｍｍＨｇの心臓収縮期血圧、および／または、少なくとも９０ｍｍＨｇの心臓拡張期血圧として定義されてきた。この定義によれば、先進国における高血圧の発生頻度は成人人口の約２０％であり、６０歳以上の人口では約６０〜７０％まで上昇している。ただし、これらの高血圧患者のかなりの部分は、非臨床的な場面で測定された時には正常の血圧を示している。この年長者の高血圧人口のおよそ６０％は孤立収縮性高血圧（isolated systolic hypertension;ＩＳＨ）、すなわち、高くなった収縮期血圧と正常な拡張期血圧を示している。高血圧により、脳卒中、心筋梗塞、心房細動、心不全、末梢血管疾患および腎機能障害の危険性が増大する（Fagard, RH; Am. J. Geriatric Cardiology 11巻 (1号), 23-28頁, 2002年；Brown, MJ および Haycock, S; Drugs 59巻 (補遺 2), 1-12頁, 2000年）。
【０００４】
高血圧の病態生理学は絶え間ない論争の主題である。高血圧とは心拍出量と末梢血管抵抗性との間の不均衡の結果であり、そして大部分の高血圧患者には異常な心拍出量の異常と末梢血管抵抗性の増大が見られることは一般に同意されていることではあるが、そのどちらのパラメーターが最初に変化するのかについてはよくわかっていない（Beeyers G等；BMJ 322巻, 912-916頁、2001年）。
【０００５】
利尿剤、アルファ−アドレナリン拮抗薬、ベータ−アドレナリン拮抗薬、カルシウムチャンネルブロッカー、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、およびアンジオテンシン受容体拮抗薬を含む、様々な薬理学的カテゴリーの多くの薬剤が利用可能であるにも関わらず、高血圧に対する効果的な治療の要求については未だに十分に満たされてはいない。
【０００６】
レニン−アンジオテンシン−アルドステロン系の血管収縮作用を阻害する、ＡＣＥ阻害薬は、高血圧に対して第一選択治療として推奨されている。これらの薬剤は有効でありかつ一般的に良く受容されると考えられている。最も普通に見られる副作用は、患者の１０〜２０％で報告されている咳である。他のより頻度の低い副作用として、発疹、血管浮腫、高カリウム血および腎機能不全が報告されている。
【０００７】
ホスホジエステラーゼ５型はサイクリックグアノシンモノホスフェート（ｃＧＭＰ）に特異的なホスホジエステラーゼである。ＰＤＥ５阻害薬はｃＧＭＰの加水分解速度を減少させ、その結果、一酸化窒素の作用を増強する。この阻害薬が男性の勃起障害の治療に有用であることが見出されてきている。
【０００８】
第一の局面では、本発明は疾患、特に心血管系および代謝性疾患、より特定すれば高血圧の治療のための医薬品の製造において、ａ）ＰＤＥ５阻害薬と、ｂ）ＡＣＥ阻害薬とを
組み合わせた使用を提供する。
【０００９】
ここで用いたとき、「治療している」および「治療」という用語は、緩和、治療および予防的な治療を含む。「高血圧」という用語は、本態性高血圧、肺性高血圧、二次性高血圧、孤立収縮性高血圧、糖尿病関連高血圧、アテローム性動脈硬化症関連高血圧および腎血管性高血圧のような、正常域を超えた血圧が特徴である全ての疾患を含み、さらには血圧上昇が知られている危険因子である症状群にまで拡大される。したがって、「高血圧の治療」という用語は、高血圧に起因する併発症の治療または予防を含み、さらに他の関連する共発性疾患（associated co-morbidities）、例えば鬱血心不全、狭心症、脳卒中、緑内障、および、腎不全のような腎機能の障害の治療または予防を包含している。代謝性疾患は、特に代謝性症候群（「症候群Ｘ」としても知られている）、糖尿病および耐糖能の障害、ならびに、その併発症、例えば糖尿病性網膜症および糖尿病性神経障害を包含している。
【００１０】
以下に、特異的なＰＤＥ５阻害薬と特異的なＡＣＥ阻害薬の組み合わせを含む、ＰＤＥ５阻害薬とＡＣＥ阻害薬の組み合わせを本発明の組み合わせと称する。
【００１１】
本発明の組み合わせは、ＰＤＥ５阻害薬もしくはＡＣＥ阻害薬を単独で高血圧の治療に用いたときに比べて、より有効でより強力でより毒性が低く、またその他の好ましい特性を有している。
【００１２】
以下に、「ＰＤＥ５阻害薬」という用語は本発明で使用されるＰＤＥ５阻害薬を意味し、そのＰＤＥ５阻害薬の全ての製薬上受容可能な塩、溶媒和物および多形体を含んでいる。同様に、「ＡＣＥ阻害薬」という用語は本発明で使用されるＡＣＥ阻害薬を意味し、そのＡＣＥ阻害薬の全ての製薬上受容可能な塩、溶媒和物および多形体を含んでいる。
【００１３】
ＰＤＥ５阻害薬およびＡＣＥ阻害薬の適合性は、文献記載の方法でその有効性および選択性を評価し、続いて標準的な薬学の手法に従ってそれらの毒性、薬物動態（吸収、代謝、分布および排泄）等を評価することによって容易に決定することができる。適切な化合物とは、有効で選択性があり治療用量において顕著な毒性がなく、さらに好ましくは経口投与で生物的利用能があるものである。
【００１４】
効力は酵素活性を５０％阻害するために必要な化合物の濃度であるＩＣ50値として定義される。ＰＤＥ５阻害薬のＩＣ50値は以下に記載されるＰＤＥ５アッセイ法を用いて測定できる。ＰＤＥ５阻害薬のＰＤＥ５酵素に対するＩＣ50値は、１００ｎＭ未満であることが好ましく、さらに５０ｎＭ未満であることがより好ましい。
【００１５】
選択比は特定の関連酵素の対応するＩＣ50値との比として当業者が容易に測定できる。ＰＤＥ３およびＰＤＥ４酵素に関するＩＣ50値は文献記載の確立された方法により測定できる（Ballard S A等；Journal of Urology 159巻、2164-2171頁、1998年を参照）。
【００１６】
ＰＤＥ５阻害薬はＰＤＥ５酵素に対する選択性のあるものが好ましい。ＰＤＥ５に対する選択性がＰＤＥ３に比べて１００倍を超えることが好ましく、さらに３００倍を超えることがより好ましい。さらに、ＰＤＥ５に対する選択性がＰＤＥ３とＰＤＥ４の両方に比べて１００倍を超えることが好ましく、さらに３００倍を超えることがより好ましい。
【００１７】
ＰＤＥ５阻害薬はＰＤＥ５に対して１００ｎＭ未満のＩＣ50値を有し、かつＰＤＥ３に比べて１００倍を超える選択性を有することが好ましい。
【００１８】
経口経路での生物学的利用能は、経口投与された薬物の中で体内循環系に到達したもの
の比率として表される。薬物の経口経路での生物学的利用能を決定する要因は、溶解性、膜透過性および肝臓でのクリアランスである。典型的には、最初にインビトロ、続いてインビボという連続するスクリーニング方法（a screening cascade）を用いることにより、経口経路での生物学的利用能が測定される。
【００１９】
分解性、すなわち胃腸管（ＧＩＴ）の水性内容物による薬物の溶解性はこのＧＩＴに模した適当なｐＨでのインビトロの溶解試験から予測することができる。ＰＤＥ５阻害薬は少なくとも５０μｇ／ｍＬの溶解性をもつことが好ましい。溶解性は、Lipinski CA 等；
Adv. Drug Deliv. Rev. 23巻 (1-3号), 3-25頁, 1997年、に記載されたような当業界で周知の標準的手法により測定することができる。
【００２０】
膜透過性はＧＩＴ細胞を経由する化合物の透過性として表される。親油性は膜透過性を予測する上での重要な特性でありインビトロで有機溶媒と緩衝液を用いたＬｏｇＤ7.4測定法により測定される。ＰＤＥ５阻害薬は−２から＋４のＬｏｇＤ7.4を有することが好ましく、さらには−１から＋３のＬｏｇＤ7.4を有することがより好ましい。このＬｏｇＤは、Stopher, D および McClean, S；J. Pharm. Pharmacol. 42巻 (2号), 144頁, 1990年、に記載されたような当業界で周知の標準的方法により測定することができる。
【００２１】
Ｃａｃｏ２のような細胞単層アッセイ法は、Ｐ−糖タンパク質のような汲出しトランスポーター（efflux transporters）の存在下での好都合な膜透過性、いわゆるＣａｃｏ２フラックス（Caco2 flux）の予測法を実質的に付け加える。ＰＤＥ５阻害薬は、２×１０-6ｃｍ・ｓ-1を超えるＣａｃｏ２フラックスを有することが好ましく、さらに５×１０-6ｃｍ・ｓ-1を超えるＣａｃｏ２フラックスを有することがより好ましい。このＣａｃｏ２フラックス値は、Artursson, P およびMagnusson, C；J. Pharm. Sci, 79巻 (7号), 595-600頁, 1990年、に記載されたような当業界で周知の標準的方法により測定することができる。
【００２２】
代謝安定性はＧＩＴの吸収過程での化合物の代謝能力または肝臓における吸収直後の代謝能力；すなわち初回通過効果（first pass effect）に対応している。ミクロソーム、肝細胞等のようなアッセイ系により代謝不安定性が予測される。ＰＤＥ５阻害薬はこのアッセイ系で０.５未満の肝臓での抽出に相応した代謝安定性を示すことが好ましい。アッセイ系およびデータ処理の例は、Obach, RS； Curr. Opin. Drug Disc. Devel. 4巻(1号), 36-44頁, 2001年、および Shibata, Y 等；Drug Met. Disp. 28巻 (12号), 1518-1523頁, 2000年に記載されている。
【００２３】
上記のプロセスの相互作用のために、薬物のヒトでの経口的な生物学的利用能へのさらなるサポートは動物でのインビボ実験で得ることができる。絶対的な生物学的利用能はこうした実験において経口経路で個別または混合物として投与することにより測定できる。絶対的な測定（経口で生物学的利用可能な％）のために静脈内経路もまた用いられる。動物における経口生物学的利用能の評価の例は、Ward, KW等； Drug Met. Disp. 29巻 (1号), 82-87頁, 2001年； Berman, J等； J. Med. Chem. 40巻 (6号), 827-829頁, 1997年、ならびに、Han KS および Lee, MG； Drug Met. Disp. 27巻 (2号), 221-226頁, 1999年に見出すことができる。
【００２４】
本発明の使用のためのＰＤＥ５阻害薬の例には以下のものがあげられる：
EP-A-0463756、EP-A-0526004、および、国際特許出願公開WO 93/06104、WO 98/49166、WO 99/54333、WO 00/24745、WO 01/27112およびWO 01/27113で開示されたピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン類；
EP-A-0995750、EP-A-0995751、および国際特許出願公開WO 93/07149で開示されたピラゾロ〔３，４−ｄ〕ピリミジン−４−オン類；
国際特許出願公開WO 01/18004、WO 02/00660およびWO 02/59126で開示されたピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン類；
国際特許出願公開WO 93/12095で開示されたキナゾリン−４−オン類；
国際特許出願公開WO 94/05661で開示されたピリド〔３，２−ｄ〕ピリミジン−４−オン類；
EP-A-1092718および国際特許出願公開WO 94/00453で開示されたプリン−６−オン類；
国際特許出願公開WO 95/19978で開示されたヘキサヒドロピラジノ〔２’，１’：６，１〕ピリド〔３，４−ｂ〕インドール−１，４−ジオン類；
EP-A-1092719および国際特許出願公開WO 99/24433で開示されたイミダゾ〔５，１−ｆ〕〔１，２，４〕トリアジン−オン類；
国際特許出願公開WO 93/07124で開示された二環式化合物；ならびに、
Rotella DP等； J. Med. Chem. 43巻 (7号), 1257-1263頁, 2000年、で開示されたイミダゾキナゾリノン類。
【００２５】
特許出願公開および刊行物論文の内容、ならびに、特にそれらにおいてクレームされた治療用活性化合物の一般式および実施例の化合物は、その全体が参照によりここに組み入れられる。
【００２６】
さらに、本発明の使用のためのＰＤＥ５阻害薬の例としては以下のものが含まれる：
４−ブロモ−５−（ピリジルメチルアミノ）−６−〔３−（４−クロロフェニル）−プロポキシ〕−３（２Ｈ）ピリダジノン；
１−〔４−〔（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）アミノ〕−６−クロロ−２−キノゾリニル〕−４−ピペリジン−カルボン酸一ナトリウム塩；
（＋）−シス−５，６ａ，７，９，９，９ａ−ヘキサヒドロ−２−〔４−（トリフルオロメチル）−フェニルメチル−５−メチル−シクロペンタ−４，５〕イミダゾ〔２，１−ｂ〕プリン−４（３Ｈ）オン；
フラズロシリン；
シス−２−ヘキシル−５−メチル−３，４，５，６ａ，７，８，９，９ａ−オクタヒドロシクロペンタ〔４，５〕−イミダゾ〔２，１−ｂ〕プリン−４−オン；
３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシレート；
３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシレート；
４−ブロモ−５−（３−ピリジルメチルアミノ）−６−（３−（４−クロロフェニル）プロポキシ）−３−（２Ｈ）ピリダジノン；
１−メチル−５−（５−モルホリノアセチル−２−ｎ−プロポキシフェニル）−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ（４，３−ｄ）ピリミジン−７−オン；
１−〔４−〔（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）アミノ〕−６−クロロ−２−キナゾリニル〕−４−ピペリジンカルボン酸一ナトリウム塩；
Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ Ｎｏ．４５１６（グラクソ・ウエルカム）；
Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ Ｎｏ．５０５１（バイエル）；
Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ Ｎｏ．５０６４（協和発酵；ＷＯ ９６／２６９４０を参照）；
Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ Ｎｏ．５０６９（シェーリング・プラウ）；
ＧＦ−１９６９６０（グラクソ・ウエルカム）；
Ｅ−８０１０およびＥ−４０１０（エーザイ）；
Ｂａｙ−３８−３０４５および３８−９４５６（バイエル）、ならびに
Ｓｃｈ−５１８６６。
【００２７】
本発明の使用のための好ましいＰＤＥ５阻害薬には以下のものが含まれる：
５−〔２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルホニル）フェニル〕−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン（シルデナフィル）であって、１−〔〔３−（６，７−ジヒドロ−１−メチル−７−オキソ−３−プロピル−１Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−５−イル）−４−エトキシフェニル〕スルホニル〕−４−メチルピペラジン（ＥＰ−Ａ−０４６３７５６参照のこと）としても知られている；
５−（２−エトキシ−５−モルホリノアセチルフェニル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン（ＥＰ−Ａ−０５２６００４参照のこと）；
３−エチル−５−〔５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル〕−２−ｎ−プロポキシフェニル〕−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン（ＷＯ９８／４９１６６参照のこと）；
３−エチル−５−〔５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル〕−２−（２−メトキシエトキシ）ピリジン−３−イル〕−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン（ＷＯ９９／５４３３３参照のこと）；
（＋）−３−エチル−５−〔５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル〕−２−（２−メトキシ−１（Ｒ）−メチルエトキシ）ピリジン−３−イル〕−２−メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オンであって、３−エチル−５−｛５−〔４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル〕−２−（〔（１Ｒ）−２−メトキシ−１−メチルエチル〕オキシ）ピリジン−３−イル｝−２−メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オンとしても知られている、（ＷＯ９９／５４３３３参照のこと）；
５−〔２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル〕−３−エチル−２−〔２−メトキシエチル〕−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オンであって、１−｛６−エトキシ−５−〔３−エチル−６，７−ジヒドロ−２−（２−メトキシエチル）−７−オキソ−２Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−５−イル〕−３−ピリジルスルホニル｝−４−エチルピペラジンとしても知られている（ＷＯ０１／２７１１３、実施例８参照のこと）；
５−〔２−イソ−ブトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル〕−３−エチル−２−（１−メチルピペリジン−４−イル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン（ＷＯ０１／２７１１３、実施例１５参照のこと）；
５−〔２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル〕−３−エチル−２−フェニル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン（ＷＯ０１／２７１１３、実施例６６参照のこと）；
５−（５−アセチル−２−プロポキシ−３−ピリジニル）−３−エチル−２−（１−イソプロピル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン（ＷＯ０１／２７１１２、実施例１２４参照のこと）；
５−（５−アセチル−２−ブトキシ−３−ピリジニル）−３−エチル−２−（１−エチル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン（ＷＯ０１／２７１１２、実施例１３２参照のこと）；
（６Ｒ，１２ａＲ）―２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ〔２’，１’：６，１〕ピリド〔３，４−ｂ〕インドール−１，４−ジオン（タダラフィル、ＩＣ−３５１）、すなわち、国際特許出願公開ＷＯ９５／１９９７８の実施例７８および９５の化合物、ならびに実施例１、３、７および８の化合物；
２−〔２−エトキシ−５−（４−エチル−ピペラジン−１−イル−１−スルホニル）−フェニル〕−５−メチル−７−プロピル−３Ｈ−イミダゾ〔５，１−ｆ〕〔１，２，４〕トリアジン−４−オン（バルデナフィル）であって、１−〔〔３−（３，４−ジヒドロ−
５−メチル−４−オキソ−７−プロピルイミダゾ〔５，１−ｆ〕−ａｓ−トリアジン−２−イル）−４−エトキシフェニル〕スルホニル〕−４−エチルピペラジン、すなわち、国際特許出願公開ＷＯ９９／２４４３３の実施例２０、１９、３３７および３３６の化合物；
〔７−（３−クロロ−４−メトキシベンジルアミノ）−１−メチル−３−プロピル−１Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−５−イルメトキシ〕酢酸（ＷＯ０２／５９１２６、実施例１参照のこと）；
４−（４−クロロベンジル）アミノ−６，７，８−トリメトキシキナゾリン（国際特許出願公開ＷＯ９３／０７１２４（エーザイ）、実施例１１参照のこと）；ならびに、
７，８−ジヒドロ−８−オキソ−６−〔２−プロポキシフェニル〕−１Ｈ−イミダゾ〔４，５−ｇ〕キナゾリン、および、１−〔３−〔１−〔（４−フルオロフェニル）メチル〕−７，８−ジヒドロ−８−オキソ−１Ｈ−イミダゾ〔４，５−ｇ〕キナゾリン−６−イル〕−４−プロポキシフェニル〕カルボキサミド（Rotella DP等； J. Med. Chem. 43巻 (7号), 1257-1263頁, 2000年の化合物３および１４）。
【００２８】
本発明の使用のためのより好ましいＰＤＥ５阻害薬は、以下のグループおよび製薬上受容できるそれらの塩から選ばれる：
５−〔２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルホニル）フェニル〕−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン（シルデナフィル）；
（６Ｒ，１２ａＲ）―２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ〔２’，１’：６，１〕ピリド〔３，４−ｂ〕インドール−１，４−ジオン（タダラフィル、ＩＣ−３５１）；
２−〔２−エトキシ−５−（４−エチル−ピペラジン−１−イル−１−スルホニル）−フェニル〕−５−メチル−７−プロピル−３Ｈ−イミダゾ〔５，１−ｆ〕〔１，２，４〕トリアジン−４−オン（バルデナフィル）；
５−〔２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル〕−３−エチル−２−〔２−メトキシエチル〕−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン；および
５−（５−アセチル−２−ブトキシ−３−ピリジニル）−３−エチル−２−（１−エチル−３−アゼチジニル）−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン。
【００２９】
とりわけ好ましいＰＤＥ５阻害薬は、５−〔２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルホニル）フェニル〕−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン（シルデナフィル）（１−〔〔３−（６，７−ジヒドロ−１−メチル−７−オキソ−３−プロピル−１Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−５−イル）−４−エトキシフェニル〕スルホニル〕−４−メチルピペラジンとしても知られている）および製薬上受容できるその塩である。クエン酸シルデナフィルは好ましい塩である。
【００３０】
本発明での使用のためのＡＣＥ阻害薬の例には、直接作用を及ぼすＡＣＥ阻害薬およびそれらのプロドラッグを含み、アラセプリル、アリンダプリル、アルチオプリル、ベナゼプリル、ベナゼプリラート、カプトプリル、セロナプリル、シラザプリル、シラザプリラート、デラプリル、エナラプリル、エナラプリラート、フォシノプリル、イミダプリル、インドラプリル、リベンザプリル、リシノプリル、モエキセプリル、モベルチプリル、ペントプリル、ペリンドプリル、キナプリル、キナプリラート、ラミプリル、レンチアプリル、スピラプリル、テモカプリル、テプロチド、トランドラプリル、および、ゾフェノプリルが含まれる。さらに、ＡＣＥ阻害薬は「デュアルＡＣＥ／ＮＥＰ阻害薬」、すなわちＡＣＥと中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰ）の両方を阻害する化合物、例えば、オマパト
リラート、ファシドトリル、ミキサンプリル、サンパトリラート、ＢＭＳ−１８９９２１、ＭＤＬ−１００２４０およびＺ１３７５２Ａ、であっても良い。
【００３１】
高血圧を治療するための好ましいＰＤＥ５阻害薬およびＡＣＥ阻害薬の組み合わせには以下のものがあげられる：
シルデナフィルとキナプリル塩酸塩；
シルデナフィルとベナゼプリル塩酸塩；
シルデナフィルとカプトプリル；
シルデナフィルとエナラプリルマレイン酸塩；
シルデナフィルとフォシノプリル；
シルデナフィルとリシノプリル；
シルデナフィルとモエキシプリル；
シルデナフィルとラミプリル；
シルデナフィルとトランドラプリル；
タダラフィルとキナプリル塩酸塩；
タダラフィルとベナゼプリル塩酸塩；
タダラフィルとカプトプリル；
タダラフィルとエナラプリルマレイン酸塩；
タダラフィルとフォシノプリル；
タダラフィルとリシノプリル；
タダラフィルとモエキシプリル；
タダラフィルとラミプリル；
タダラフィルとトランドラプリル；
バルデナフィルとキナプリル塩酸塩；
バルデナフィルとベナゼプリル塩酸塩；
バルデナフィルとカプトプリル；
バルデナフィルとエナラプリルマレイン酸塩；
バルデナフィルとフォシノプリル；
バルデナフィルとリシノプリル；
バルデナフィルとモエキシプリル；
バルデナフィルとラミプリル；および
バルデナフィルとトランドラプリル。
【００３２】
本発明の組合せ製剤は、心血管系および代謝性疾患を含む疾患の治療に有用であり、また血栓症のような他の疾患の治療の治療にも、さらに経皮経管冠動脈形成拡張術後（「ＰＴＣＡ後の患者」）の患者管理にも有用である。
【００３３】
治療される心血管系疾患は高血圧症、鬱血心不全、狭心症、脳卒中または腎不全が好ましい。さらに、心血管系疾患は、本態性高血圧、肺性高血圧、二次性高血圧、孤立収縮性高血圧、糖尿病に関連した高血圧、アテローム性動脈硬化症に関連した高血圧、腎血管性高血圧、鬱血心不全、狭心症、脳卒中または腎不全がより好ましい。特に好ましい実施態様では、治療される疾患は本態性高血圧である。他の特に好ましい実施態様では、治療される疾患は肺性高血圧である。他の特に好ましい実施態様では、治療される疾患は二次性高血圧である。他の特に好ましい実施態様では、治療される疾患は孤立収縮性高血圧である。他の特に好ましい実施態様では、治療される疾患は糖尿病関連高血圧である。他の特に好ましい実施態様では、治療される疾患はアテローム性動脈硬化症関連高血圧である。他の特に好ましい実施態様では、治療される疾患は腎血管性高血圧である。
【００３４】
治療される代謝性疾患は耐糖能の障害または糖尿病が好ましく、それらの併発症、例えば、糖尿病性網膜症および糖尿病性神経障害も含んでいる。さらに、代謝性疾患は耐糖能
の障害、１型糖尿病、インシュリン非依存性２型糖尿病またはインシュリン依存性２型糖尿病がより好ましい。
【００３５】
本発明の組合せ製剤は単独でも投与できるが、通常は意図する投与経路および標準的な製薬上の慣行に従って選択された適切な製薬用賦形剤、希釈剤または担体との混合剤として投与されるだろう。
【００３６】
例えば、本発明の組合せ製剤は、経口、頬内または舌下の経路で、即時−、遅延−、修飾−、持続−、パルス−または放出制御型の適用のために、錠剤、カプセル剤、多微粒子剤、ゲル剤、フィルム剤、オビュール剤（ovules）、エリキシル剤、溶液または懸濁液の形態（香味矯正剤または色素剤を含んでも良い）で投与することができる。また、本発明の組合せ製剤は、迅速な拡散性もしくは迅速な溶解性の投与形態もしくは高エネルギー性拡散形態、または被覆粒子として投与することができる。適切な製剤形は、所望によって、被覆したまたは被覆されない形態であって良い。
【００３７】
そうした固形の製薬組成物は、例えば、微結晶性セルロース、乳糖、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、二塩基性リン酸カルシウム、グリシンおよび澱粉（好ましくは、トウモロコシ、ジャガイモまたはタピオカ澱粉）のような賦形剤、スターチグリコレートナトリウム、クロスカルメロースナトリウムおよび特定のケイ酸塩複合体のような崩壊剤、ならびに、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ショ糖、ゼラチンおよびアカシアのような粒子結合剤を含むことができる錠剤である。さらに、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸およびタルクのような潤滑剤を含むことができる。
【００３８】
以下の、製剤例は、単に説明のためであり、本発明の範囲を限定することを意図してはいない。活性成分とは、本発明の組合せ製剤を意味している。
【００３９】
製剤１：
錠剤は次の成分を用いて製造された：
活性成分（５０ｍｇ）をセルロース（微結晶性）、二酸化ケイ素、ステアリン酸（燻蒸性）と混合しその混合物を錠剤に圧縮成形する。
【００４０】
製剤２：
静脈内投与用製剤は、活性成分（１００ｍｇ）と等張性生理食塩水（１０００ｍＬ）を組み合わせて製造することができる。
【００４１】
錠剤は、標準的な方法、例えば直接圧縮法または湿潤もしくは乾燥造粒法により製造される。錠剤の核は適切な被覆でコーテイングすることができる。
【００４２】
また、同様のタイプの固形組成物もゼラチン中の充填剤またはＨＰＭＣカプセル剤として用いることができる。このための好ましい賦形剤は、ラクトース、澱粉、セルロース、乳糖（milk sugar）または高分子のポリエチレングリコールを含む。水性懸濁液および／またはエリキシル剤のためには、ＰＤＥ５阻害薬およびＡＣＥ阻害薬は種々の甘味剤または香味矯正剤、発色物質または色素や、乳化剤および／または懸濁剤、ならびに水、エタノール、ポリエチレングリコールおよびグリセリンのような希釈剤、ならびにそれらを組合せたものと、組み合わせることができる。
【００４３】
修飾された放出およびパルス放出の投与形態は、即時放出の投与形態のために詳しく説明される賦形剤と放出速度調整剤として作用する追加の賦形剤の組合せのような賦形剤を含むことができ、それらはその上に被覆されてもよく、および／または、剤の本体の中に
含まれていてもいい。放出速度調整剤には、それのみに限定されないが、ヒドロキシメチルセルロース、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、酢酸セルロース、ポリエチレンオキシド、キサンタンガム、カルボメール、アンモニオメタクリル酸コポリマー、水素化ヒマシ油、カルナウバワックス、パラフィンワックス、酢酸セルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルローズフタレート、メタクリル酸コポリマー、およびそれらの混合物があげられる。修飾された放出およびパルス放出製剤には、放出速度調整用賦形剤の一つまたは組合せを含ませることができる。放出速度調整用賦形剤は、製剤中すなわちマトリックスの中、および／または、製剤の上すなわち表面または被覆の上に存在させることができる。
【００４４】
迅速拡散化または溶解化製剤（ＦＤＤＦｓ）は、以下の成分を含むことができる：アスパルテーム、アセスルファームカリウム、クエン酸、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ジアスコルビン酸、アクリル酸エチル、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、メタクリル酸メチル、ミント香味矯正剤、ポリエチレングリコール、ヒュームドシリカ、二酸化ケイ素、スターチグリコール酸ナトリウム、ステアリルフマール酸ナトリウム、ソルビトール、キシリトール。ＦＤＤＦｓを記述するためにここで用いられる拡散化または溶解化という用語は、用いられる医薬品物質の溶解性に従い、すなわち、医薬品物質が不溶性のときは迅速拡散化投与形態を、および、医薬品物質が可溶性のときは迅速溶解化投与形態を調製することができることを述べるものとする。
【００４５】
本発明の組合せ製剤は、例えば、海綿体内投与、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、クモ膜下投与、脳室内投与、尿道内投与、胸骨内投与、頭蓋内投与、筋肉内投与もしくは皮下投与のような非経口的投与ができ、または、輸液もしくは無針注入技術によって投与することもできる。そうした非経口投与のためには、他の物質、例えば溶液を血液と等張にするために十分な塩類またはグルコースを含むことができる無菌水溶液の形態で用いるのが最も良い。水溶液は必要に応じて適切に緩衝化されるべきである（好ましくは、ｐＨ３から９に）。無菌下の適切な非経口製剤の製造は当業者に周知の標準的な製薬学技術により容易に達成される。
【００４６】
以下の投薬量およびここでの他の投薬量は体重の範囲が約６５から７０ｋｇの範囲の平均的なヒト患者のためのものである。当業者は体重がこの範囲から外れる、例えば子供や老人のような患者のために必要とされる投与量を容易に決定することができる。
【００４７】
本発明のそうした製剤形での組合せ製剤の投与量はその効力に依存するが、一日三回までの投与のためにＰＤＥ５阻害薬を１〜５００ｍｇおよびＡＣＥ阻害薬を１〜１００ｍｇの範囲とすることが期待できる。好ましい投与量は、ＰＤＥ５阻害薬の１０〜１００ｍｇの範囲（例えば、１０、２５、５０および１００ｍｇ）、ならびに、ＡＣＥ阻害薬の５〜５０ｍｇの範囲（例えば、５、１０、２５および５０ｍｇ）であって、一日当たり一回、二回または三回（好ましくは一回）投与することができる。しかし、正確な投与量は、処方する医師により決定され、患者の年齢および体重ならびに症状の重症度に従う。
【００４８】
ヒト患者に対する経口および非経口投与のために、本発明の組合せ製剤の一日投与量は通常５〜５００ｍｇ／ｋｇ（単回または分割投与で）である。
【００４９】
従って、錠剤またはカプセル剤は、必要に応じて、単回または同時に二回以上の投与のために、本発明の組合せ製剤を５〜２５０ｍｇ（例えば、１０〜１００ｍｇ）含むことができる。医師はいかなる場合でも全ての個々の患者に最も適した実際の投与量を決定でき、それは特定の患者の年齢、体重および応答性によって異なるだろう。上記の投与量は平均的な場合の例示である。もちろん、個々の例でより高いかより低い投与量の範囲が有利であり、そうした場合も本発明の範囲の内である。当業者は、本発明の組合せ製剤は必要に応じてまたは望む場合は（すなわち、ｐｒｎ）、単回投与で服用できることを理解できるだろう。全てのここでの治療に関する引用は、急性的治療（必要に応じて服用される）および慢性的治療（長期の連続する治療）を含んでいる。
【００５０】
本発明の組合せ製剤は、また、経鼻的または吸入により投与でき、適当な推進薬（propellant）、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、ヒドロフルオロアルカン（例えば、１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＡ１３４(R)）もしくは１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＡ２２７ＥＡ(R)））、二酸化炭素もしくは他の適当なガスを使用し、または、使用せずに、圧縮型容器、ポンプ、スプレー、アトマイザーもしくはネブライザーからのドライパウダーの吸入またはエアゾールスプレーの提示（aerosol spray presentation）の形態で都合よく送達される。圧縮化エアゾールの場合は、投与単位は計量された量を放出するためのバルブの提供により決定できる。圧縮型容器、ポンプ、スプレー、アトマイザーまたはネブライザーは、例えばエタノールと推進薬の混合物を溶媒として、場合によっては、ソルビタントリオレエートのような潤滑剤を含んでもいい活性化合物の溶液または懸濁液を含有することができる。吸入器またはインサフレーター（insufflator）での使用のためのカプセル剤およびカートリッジ剤（例えば、ゼラチンから作られている）は、本発明の組合せ製剤および適切な粉末基剤（例えば、乳糖または澱粉）との混合粉末を含むように製剤化できる。
【００５１】
エアゾールまたはドライパウダー製剤は、好ましくは、それぞれの計量された投与量、または「ひと吹き（puff）」が１μｇから５０ｍｇであるの本発明の組合せ製剤を、患者への投与のために含むように調製される。エアゾールの一日の総投与量は、１μｇから５０ｍｇであり、単回投与量として、または一日の中で分割された投与量であっていい。
【００５２】
別法として、本発明の組合せ製剤は、坐薬もしくはペッサリーの形態で投与でき、または、ゲル、ハイドロゲル、ローション、溶液、クリーム、軟膏もしくは粉剤の形態で局所的に投与できる。また、本発明の組合せ製剤は、皮膚上または経皮的に投与でき、例えば、皮膚パッチ、貯留剤（depot）または皮下注射を使用することができる。これらの製剤はまた肺または直腸の経路により投与することもできる。
【００５３】
皮膚への局所適用のために、本発明の組合せ製剤は、適切な軟膏として製剤化することができ、この軟膏は、例えば、以下の、鉱油、流動パラフィン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレン化合物、乳化蝋および水、の一つまたはそれ以上との混合物に溶解または懸濁された活性化合物を含んでいる。別法として、これらの製剤は、例えば、以下の、鉱油、ソルビタンモノステアレート、ポリエチレングリコール、流動パラフィン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリールアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水、の一つまたはそれ以上との混合物に溶解または懸濁した、適切なローションまたはクリームとして製剤化することができる。
【００５４】
本発明の組合せ製剤はシクロデキストリンと組合せても使用できる。シクロデキストリンは、薬物分子と抱合または非抱合複合体を形成することが知られている。薬物とシクロデキストリンの複合体の形成は、薬物分子の、溶解度、分解速度、生物学的利用性、および／または安定性を改良することができる。薬物とシクロデキストリンの直接複合化の代わりに、シクロデキストリンは、補助添加物、例えば、担体、希釈剤もしくは溶解剤として使用することができる。アルファー、ベータおよびガンマーシクロデキストリンは、最も一般に使用されており、適切な例は、国際特許出願公開ＷＯ９１／１１１７２、ＷＯ９４／０２５１８およびＷＯ９８／５５１４８に記載されている。
【００５５】
本発明の組合せ製剤の経口投与は、好ましい経路であり、最も便利である。経口投与後の嚥下障害または薬物吸収の障害を被っている被投与者（レシピエント）の場合、薬物は、非経口的、舌下または頬内の経路で投与される。
【００５６】
本発明の組合せ製剤は、トリプルセラピー投与計画、すなわち、三種の医薬品による治療を受けている患者用の治療計画の一部として使用することができる。トリプルセラピーの第三の薬剤は、第二のＰＤＥ５阻害薬もしくはＡＣＥ阻害薬であってよく、または、第三の薬理学的グループから選ばれてもいい。例えば、それは、中性エンドペプチターゼ阻害薬、アンジオテンシンII受容体拮抗薬、カルシウムチャンネルブロッカー（例えば、アムロジピン）、スタチン（例えば、アトルバスタチン）、ベータブロッカー（すなわち、ベータアドレナリン受容体拮抗薬）または利尿剤であっていい。
【００５７】
本発明は、以下のさらなる態様を含むものと理解され、また第１の態様としてこれまでに特記した実施態様は、そうした態様に拡張される；
ｉ）高血圧を治療するための本発明の組合せ製剤（同時、別個、または順次投与）；
ii）高血圧を治療するための：ａ）ＰＤＥ５阻害薬を含む第一の医薬組成物；ｂ）ＡＣＥ阻害薬を含有する第二の医薬組成物；およびｃ）その組成物のための容器、を含むキット；
iii）本発明の組合せ製剤の有効量による患者の治療を含む、該患者の高血圧の治療方法。
【００５８】
アッセイ法
本発明に従って使用するために適した好ましい化合物は、強力で選択的なＰＤＥ５阻害薬である。インビトロでの、サイクリックグアノシン３’，５’−モノホスフェート（ｃＧＭＰ）およびサイクリックアデノシン３’，５’−モノホスフェート（ｃＡＭＰ）ホスホジエステラーゼに対するＰＤＥ阻害活性は、それらのＩＣ50値（酵素活性を５０％阻害するために必要な化合物の濃度）を測定することにより決定できる。
【００５９】
必要なＰＤＥ酵素は、ヒトの遺体由来海綿体組織、ヒトおよびウサギの血小板、ヒトの心室、ヒト骨格筋およびウシ網膜を含む、種々のソースから、基本的に、Thompson, WJ等
; Biochemistry 18巻 (23号), 5228-5237頁, 1979年の方法を、Ballard SA 等; J. Urology 159巻 (6号), 2164-2171頁, 1998年により記載されたように、改良した方法によって単離される。特にｃＧＭＰ特異的ＰＤＥ５およびｃＧＭＰに阻害されたｃＡＭＰのＰＤＥ３は、ヒト遺体の海綿体組織、ヒト血小板またはウサギ血小板より；ｃＧＭＰで刺激されたＰＤＥ２はヒト遺体の海綿体組織より；カルシウム／カルモデュリン（Ｃａ／ＣＡＭ）依存性ＰＤＥ１はヒト心室より；ｃＡＭＰ特異的ＰＤＥ４はヒト骨格筋より；および光受容体ＰＤＥ６はウシ網膜より、それぞれ単離できる。
【００６０】
ホスホジエステラーゼ７〜１１は、ＳＦ９細胞を形質転換させた完全長ヒト組換え体クローンから作成できる。
【００６１】
アッセイは、Thompson WJ およびAppleman MM; Biochemistry 10巻 (2号), 311-316頁，1971年の方法を、Ballard SA 等; J. Urology 159巻 (6号), 2164-2171頁，1998年により基本的に記載されたように改良した改良「バッチ」法を用いるか、または、Amersham plcにより製品コードTRKQ7090/7100として記載されたプロトコールを改良した〔3Ｈ〕−標識ＡＭＰ／ＧＭＰの直接検出用のシンチレーション近接アッセイ法を用いるか、のいずれかにより実施される。要約すれば、シンチレーション近接アッセイ法に関して、ＰＤＥ阻害薬の作用は、種々の濃度の阻害薬および低分子基質の存在下、（Ｋmの１／３またはそれ以下の濃度で〔3Ｈ〕−標識に対する非標識の割合が３：１であるｃＧＭＰまたはｃＡＭＰ）ＩＣ50がほぼＫiとなるような、固定した量の酵素の活性を測定することによって調べることができる。最終的なアッセイ容量をアッセイ用緩衝液〔２０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７.４、５ｍＭのＭｇＣｌ2、１ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン〕により１００μＬとする。反応は、酵素により開始し、＜３０％の基質の変換が得られるまで３０℃で３０〜６０分インキュベートし、５０μＬのイットリウムシリケートＳＰＡビーズ（ＰＤＥ９および１１用には３ｍＭのそれぞれの非標識サイクリックヌクレオチドを含んでいる）により終結させた。プレートを再シールし、２０分間振盪し、ビーズが落ち着くまで暗所で３０分間放置後、ＴｏｐＣｏｕｎｔプレートリーダー（Ｐａｃｋａｒｄ，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ）によりカウントした。放射能単位は非阻害対照（１００％）に対する活性％に変換し、阻害薬濃度に対してプロットし、ついで、「適合曲線（Fit Curve）」Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ拡張（extension）から阻害薬のＩＣ50が得られた。
【００６２】
動物実験
本発明の組合せ製剤の効果を、ヒト高血圧の動物モデルにより、代表的なＡＣＥ阻害薬であるエナプリル、および、代表的なＰＤＥ５阻害薬、３−エチル−５−〔５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）−２−（２−メトキシエトキシ）−ピリジン−３−イル〕−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン（国際特許出願公開ＷＯ９９／５４３３３の実施例４の化合物）を用いて論証した。
【００６３】
動物
自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）は広くヒト高血圧のモデルとして使用されている。雄性ＳＨＲラット（２０〜２２週令）に、公表された方法（Gardiner, SM 等 ; Br. J. Pharmacol. 132巻 (8号), 1625-1629頁, 2001年）に従って、腸間膜、後部および腎臓の血流量、大動脈血圧、ならびに心拍数の測定用、ドップラー・フロー・プローブを取り付けた。
【００６４】
薬物
エナラプリル溶液（７.５μｇ／ｍＬ）、ＰＤＥ５阻害薬（２００μｇ／ｍＬ）、および、エナラプリル溶液とＰＤＥ５阻害薬の組合せ製剤（７.５μｇ／ｍＬ＋２００μｇ／ｍＬ）を、実験を通して０.４ｍＬ／時の流速で注入した。対照群の動物には化合物のビヒクル、すなわち塩酸でｐＨ４に調整した等張生理食塩水を与えた。
【００６５】
プロトコール
基準となる血流力学パラメーターを記録した。動物（一群当たり７または８匹）はランダム化され、ついで、薬物溶液を４日間連続注入して処置した。血液力学パラメーターの変化はそれぞれの日に７時間の実験期間中モニターした。ビヒクル応答との差異により表現された結果のまとめは、以下の表に示されている。
【表１】
2005529927.tif 000002
【００６６】
結果は、特に腎臓のコンダクタンスに関して、組み合わされた二つの薬剤は、それぞれ単独の効果の総和より高い効果を示した。
【手続補正書】
【提出日】平成16年5月19日(2004.5.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本態性高血圧、肺性高血圧、二次性高血圧、孤立収縮性高血圧、糖尿病に関連した高血圧、アテローム性動脈硬化症に関連した高血圧、および腎血管性高血圧を含む高血圧、ならびに、鬱血心不全、狭心症、脳卒中、糖尿病および耐糖能の障害に対する、緩和、治療および予防的な処置用医薬品、を製造するための、
４−ブロモ−５−（ピリジルメチルアミノ）−６−〔３−（４−クロロフェニル）−プロポキシ〕−３（２Ｈ）ピリダジノン；
１−〔４−〔（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）アミノ〕−６−クロロ−２−キノゾリニル〕−４−ピペリジン−カルボン酸一ナトリウム塩；
（＋）−シス−５，６ａ，７，９，９，９ａ−ヘキサヒドロ−２−〔４−（トリフルオロメチル）−フェニルメチル−５−メチル−シクロペンタ−４，５〕イミダゾ〔２，１−ｂ〕プリン−４（３Ｈ）オン；
フラズロシリン；
シス−２−ヘキシル−５−メチル−３，４，５，６ａ，７，８，９，９ａ−オクタヒドロシクロペンタ〔４，５〕−イミダゾ〔２，１−ｂ〕プリン−４−オン；
３−アセチル−１−（２−クロロベンジル）−２−プロピルインドール−６−カルボキシレート；
４−ブロモ−５−（３−ピリジルメチルアミノ）−６−（３−（４−クロロフェニル）プロポキシ）−３−（２Ｈ）ピリダジノン；
１−メチル−５−（５−モルホリノアセチル−２−ｎ−プロポキシフェニル）−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ（４，３−ｄ）ピリミジン−７−オン；
１-〔４−〔（１，３−ベンゾジオキソール−５−イルメチル）アミノ〕−６−クロロ−２−キナゾリニル〕−４−ピペリジンカルボン酸一ナトリウム塩；
５−〔２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルホニル）フェニル〕−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン（シルデナフィル）；
５−（２−エトキシ−５−モルホリノアセチルフェニル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン；
３−エチル−５−〔５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル〕−２−ｎ−プ
ロポキシフェニル〕−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２．６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン；
３−エチル−５−〔５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル〕−２−（２−メトキシエトキシ）ピリジン−３−イル〕−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン；
（＋）−３−エチル−５−〔５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル〕−２−（２−メトキシ−１（Ｒ）−メチルエトキシ）ピリジン−３−イル〕−２−メチル−  ２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン；
（６Ｒ，１２ａＲ）―２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ〔２’，１’：６，１〕ピリド〔３，４−ｂ〕インドール−１，４−ジオン（タダラフィル、ＩＣ−３５１）；
２−〔２−エトキシ−５−（４−エチル−ピペラジン−１−イル−１−スルホニル）−フェニル〕−５−メチル−７−プロピル−３Ｈ−イミダゾ〔５，１−ｆ〕〔１，２，４〕トリアジン−４−オン（バルデナフィル）；
〔７−（３−クロロ−４−メトキシベンジルアミノ）−１−メチル−３−プロピル−１Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−５−イルメトキシ〕酢酸；
４−（４−クロロベンジル）アミノ−６，７，８−トリメトキシキナゾリン；  
７，８−ジヒドロ−８−オキソ−６−〔２−プロポキシフェニル〕−１Ｈ−イミダゾ〔４，５−ｇ〕キナゾリン；および
１−〔３−〔１−〔（４−フルオロフェニル）メチル〕−７，８−ジヒドロ−８−オキソ−１Ｈ−イミダゾ〔４，５−ｇ〕キナゾリン−６−イル〕−４−プロポキシフェニル〕カルボキサミド、
から選ばれる、サイクリックグアノシンモノホスフェート特異的ホスホジエステラーゼ５型（ＰＤＥ５）の阻害薬、ならびに、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）の阻害薬の組み合わせの使用。
【請求項２】
ＰＤＥ５阻害薬が１００ｎＭより小さいＩＣ50値を有するものである請求項１の使用。
【請求項３】
ＰＤＥ５阻害薬が５０ｎＭより小さいＩＣ50値を有するものである請求項２の使用。
【請求項４】
ＰＤＥ５阻害薬が、
５−〔２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルホニル）フェニル〕−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン（シルデナフィル）；
（６Ｒ，１２ａＲ）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−６−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−ピラジノ〔２’，１’：６，１〕ピリド〔３，４−ｂ〕インドール−１，４−ジオン（タダラフィル，ＩＣ−３５１）；
２−〔２−エトキシ−５−（４−エチル−ピペラジン−１−イル−１−スルホニル）−フェニル〕−５−メチル−７−プロピル−３Ｈ−イミダゾ〔５，１−ｆ〕〔１，２，４〕トリアジン−４−オン（バルデナフィル）；および、
５-〔２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル）ピリジン−３−イル〕−３−エチル−２−〔２−メトキシエチル〕−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン、
から選ばれる、請求項１〜３のいずれかの使用。
【請求項５】
ＰＤＥ５阻害薬が、
５−〔２−エトキシ−５−（４−メチル−１−ピペラジニルスルホニル）フェニル〕−１−メチル−３−ｎ−プロピル−１，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オン（シルデナフィル）、または、製薬上受容できるそれらの塩である、請求項４の使用。
【請求項６】
ＰＤＥ５阻害薬がシルデナフィルクエン酸塩である、請求項５の使用。
【請求項７】
ＡＣＥ阻害薬が、ベナゼプリル、カプトプリル、シラゼプリル、エナラプリル、エナラプリラート、ファシノプリル、リシノプリル、モエキセプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリルおよびトランドラプリル、ならびに製薬上受容できるそれらの塩である、請求項１〜６のいずれかの使用。
【請求項８】
ＰＤＥ５阻害薬およびＡＣＥ阻害薬の組合せ製剤が、
シルデナフィルクエン酸塩とキナプリル塩酸塩；
シルデナフィルクエン酸塩とベナゼプリル塩酸塩；
シルデナフィルクエン酸塩とカプトプリル；
シルデナフィルクエン酸塩とエナラプリルマレイン酸塩；
シルデナフィルクエン酸塩とフォシノプリル；
シルデナフィルクエン酸塩とリシノプリル；
シルデナフィルクエン酸塩とモエキシプリル；
シルデナフィルクエン酸塩とラミプリル；および
シルデナフィルクエン酸塩とトランドラプリル、
から選ばれる、請求項７の使用。
【請求項９】
医薬品が、高血圧の治療のためのものである、請求項１の使用。
【請求項１０】
サイクリックグアノシンモノホスフェート（ｃＧＭＰ）特異的ホスホジエステラーゼ５型（ＰＤＥ５）阻害薬、および、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬を含む組合せ製剤。
【請求項１１】
３−エチル−５−〔５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル〕−２−（２−メトキシエトキシ）ピリジン−３−イル〕−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オンおよびエナラプリルを含む、高血圧治療用、同時に、分けてまたは順次に投与のための組合せ製剤。
【請求項１２】
ａ）ＰＤＥ５阻害薬を含む第一の組合せ製剤；ｂ）ＡＣＥ阻害薬を含む第二の組合せ製剤；および、ｃ）該組合せ製剤用容器、を含むキットである、高血圧治療用キット。
【請求項１３】
３−エチル−５−〔５−（４−エチルピペラジン−１−イルスルホニル〕−２−（２−メトキシエトキシ）ピリジン−３−イル〕−２−（ピリジン−２−イル）メチル−２，６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ〔４，３−ｄ〕ピリミジン−７−オンおよびエナラプリルの有効量を患者に対して、同時に、分けて、または順次に処置することを含む、該患者の高血圧の治療方法。
【国際調査報告】
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