(57)【要約】本発明は、特に、ＩｇＥ抗体に特異的に結合し得、そして例えば、天然に存在するＳ．ａｕｒｅｕｓエンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）から入手可能であるペプチドに関する。その免疫調節ペプチドは、細菌ＳＥＢとは実質的に異なる。驚くべきことに、本発明のペプチドは、ＳＥＢとは反対に、Ｔ細胞の増殖を誘導しない。それらの特性に起因して、これらのペプチドは、増加した血清ＩｇＥレベルおよび／または増加したインターフェロンγによって特徴付けられる疾患を処置し、そしてＴｈ１およびＴｈ２免疫応答における不均衡によって特徴付けられる疾患（例えば、アトピー性湿疹、紅斑性狼蒼、クローン病、多発性硬化症、乾癬および慢性関節リウマチ）を処置するのに適切である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１０で示されるアミノ酸配列を有するポリペプチド。
【請求項２】
配列番号１５に従うＮ末端アミノ酸配列を示し、Ｓ．ａｕｒｅｕｓエンテロトキシンＢのトリプシン切断によって、１２ｋＤの切断フラグメントとして得られ得ることを特徴とする、ポリペプチド。
【請求項３】
ＩｇＥに結合する、請求項１または２に記載のポリペプチドのホモログまたは誘導体であることを特徴とする、ポリペプチド。
【請求項４】
前記誘導体の場合、１つまたはいくつかのＬ−アミノ酸がＤ−アミノ酸で置換されていることを特徴とする、請求項３に記載のポリペプチド。
【請求項５】
Ｔリンパ球の増殖を誘導しないことを特徴とする、請求項３または４に記載のポリペプチド。
【請求項６】
インターフェロンγにより刺激されたＴリンパ球の合成をインビトロで阻害することを特徴とする、請求項２〜５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項７】
Ｔｈ１およびＴｈ２のリンパ球サブ集団の刺激されたサイトカイン産生および自律的サイトカイン産生の両方をインビトロで調節することを特徴とする、請求項２〜６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項８】
配列番号１１で示されるアミノ酸配列を示すことを特徴とする、請求項２〜７のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードする核酸配列を示すことを特徴とする、核酸分子。
【請求項１０】
配列番号９で示される核酸配列を示すことを特徴とする、請求項９に記載の核酸分子。
【請求項１１】
免疫調節のための薬学的組成物の製造のための、配列番号１０に従う配列、該配列に相同な配列、または該配列由来の配列を含むポリペプチドの使用であって、該ポリペプチドがＩｇＥに結合する、使用。
【請求項１２】
免疫調節のための薬学的組成物の製造のための、請求項１〜8のいずれか１項に記載のポリペプチドの使用。
【請求項１３】
リンパ球のサイトカイン産生を阻害するための薬学的組成物の製造のための、配列番号１０に従う配列、該配列に相同な配列、または該配列由来の配列を含むポリペプチドの使用であって、該ポリペプチドがＩｇＥに結合する、使用。
【請求項１４】
リンパ球のサイトカイン産生を阻害するための薬学的組成物の製造のための、請求項１〜８のいずれか１項に記載のポリペプチドの使用。
【請求項１５】
前記リンパ球がＴリンパ球であることを特徴とする、請求項１３または１４に記載の使用。
【請求項１６】
前記サイトカインが、インターフェロンγ、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−５（ＩＬ−５）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）および/またはインターロイキン−１３（ＩＬ−１３）であることを特徴とする、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
サイトカイン産生の増加および/またはＩｇＥ抗体レベルの上昇に関連する疾患を処置するための薬学的組成物の製造のための、配列番号１０に従う配列、該配列に相同な配列または該配列由来の配列を含むポリペプチドの使用であって、該ポリペプチドがＩｇＥに結合する、使用。
【請求項１８】
サイトカイン産生の増加および/またはＩｇＥ抗体レベルの上昇に関連する疾患を処置するための薬学的組成物の製造のための、請求項１〜８のいずれか１項に記載のポリペプチドの使用。
【請求項１９】
前記サイトカインが、インターフェロンγ、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−５（ＩＬ−５）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）および/またはインターロイキン−１３（ＩＬ−１３）であることを特徴とする、請求項１７または１８に記載の使用。
【請求項２０】
前記疾患が、アトピー性湿疹、気管支喘息、アレルギー性鼻結膜炎、乾癬、慢性関節リューマチ、または多発性硬化症であることを特徴とする、請求項１７または１８に記載の使用。
【請求項２１】
Ｔｈ１またはＴｈ２の免疫応答の誘発または上昇のための薬学的組成物の製造のための、配列番号１０に従う配列、ほぼ該配列である配列、または該配列由来の配列を含むポリペプチドの使用であって、該ポリペプチドが、ＩｇＥに結合する、使用。
【請求項２２】
Ｔｈ１またはＴｈ２の免疫応答の誘発または上昇のための薬学的組成物の製造のための、請求項１〜８のいずれか１項に記載のポリペプチドの使用。
【請求項２３】
Ｔｈ１またはＴｈ２の免疫応答に関連する疾患の処置のための薬学的組成物の製造のための、請求項２１または２２に記載の使用。
【請求項２４】
前記疾患が、尋常性乾癬、自己免疫ブドウ膜炎、アレルギー性接触湿疹、ベーチェット症候群、真性糖尿病、橋本病、ヘリコバクターピロリ感染、エリテマトーデス、クローン病、多発性硬化症、臓器移植拒絶反応、関節症性乾癬、慢性関節リウマチ、および突発性再発性流産であることを特徴とする、請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２５】
前記炎症性腸疾患がクローン病であることを特徴とする、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
ヒトの血液の末梢Ｔリンパ球におけるインターフェロンγの産生のインビトロにおける阻害のための、配列番号１０に従う配列、該配列に相同な配列、または該配列由来の配列を含むポリペプチドの使用であって、該ポリペプチドがＩｇＥに結合する、使用。
【請求項２７】
ヒトの血液の末梢Ｔリンパ球におけるインターフェロンγの産生のインビトロにおける阻害のための、請求項１〜８のいずれか１項に記載のポリペプチドの使用。
【請求項２８】
Ｔｈ１およびＴｈ２のリンパ球サブ集団の刺激されたサイトカイン産生および自律的なサイトカイン産生のインビトロの調節のための、配列番号１０に従う配列、該配列に相同な配列、または該配列由来の配列を含むポリペプチドの使用であって、該ポリペプチドがＩｇＥに結合する、使用。
【請求項２９】
Ｔｈ１およびＴｈ２のリンパ球サブ集団の刺激されたサイトカイン産生および自律的なサイトカイン産生のインビトロの調節のための、請求項１〜８のいずれか１項に記載のポリペプチドの使用。
【請求項３０】
前記ポリペプチドが、配列番号１０由来の配列を有するポリペプチドであり、該ポリペプチドにおいて、１つまたはいくつかのＬ−アミノ酸がＤアミノ酸で置換されていることを特徴とする、請求項１１〜２９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３１】
配列番号１〜８のいずれか１項に記載のポリペプチドを含むことを特徴とする、薬学的組成物。
【請求項３２】
１つまたはいくつかの薬学的に適合性の賦形物質および/またはキャリアをさらに含むことを特徴とする、請求項３１に記載の薬学的組成物。
【請求項３３】
配列番号９で示される前記核酸配列が、発現ベクターに導入され、該発現ベクターが適切な宿主細胞に導入され、該細胞が、タンパク質発現に適切な条件下で培養され、そして該核酸配列によってコードされる該発現されたポリペプチドが単離されることを特徴とする、請求項１に記載のポリペプチドの産生のためのプロセス。
【請求項３４】
Ｓ．ａｕｒｅｕｓ由来のエンテロトキシンＢが、トリプシンで消化され、続いて、反応バッチから１２ｋＤのフラグメントが単離されることを特徴とする、請求項２に記載のポリペプチドの産生のためのプロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特に、ＩｇＥ抗体に特異的に結合し得、そして例えば、天然に存在するＳ．ａｕｒｅｕｓエンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）から入手可能であるペプチドに関する。その免疫調節ペプチドは、細菌ＳＥＢとは実質的に異なる。驚くべきことに、本発明のペプチドは、ＳＥＢとは反対に、Ｔ細胞の増殖を誘導しない。それらの特性に起因して、これらのペプチドは、増加した血清ＩｇＥレベルおよび／または増加したインターフェロンγによって特徴付けられる疾患を処置し、そしてＴｈ１およびＴｈ２免疫応答における不均衡によって特徴付けられる疾患（例えば、アトピー性湿疹、紅斑性狼蒼、クローン病、多発性硬化症、乾癬および慢性関節リウマチ）を処置するのに適切である。
【０００２】
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓは、多くの重度の感染性疾患を誘発し得る広く分布している病原性微生物である。Ｓ．ａｕｒｅｕｓは、エンテロトキシン（エンテロトキシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＴＳＳＴ−１）および内毒素（コアグラーゼ、スタフィロシナーゼ（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｉｎａｓｅ）、リパーゼ、ヒアルロニダーゼ、ＤＮＡａｓｅ）を生成する。異なる抗生物質に対する複数の耐性の発生の結果として、Ｓ．ａｕｒｅｕｓは、病院において感染を引き起こす病原として、最近の数年において非常に重要になってきている。
【０００３】
Ｓ．ａｕｒｅｕｓによって生成されるエンテロトキシン（ＳＥ）は、ヒトにおいて、とりわけ食中毒および敗血性ショックを引き起こし得る（Ｍｅｒｒａｃｋ，Ｐ．およびＫａｐｐｌｅｒ，Ｊ．（１９９０），Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４８，７０５）。
【０００４】
これらは、アミノ酸配列に密接に関連して互いに類似する中程度のサイズのタンパク質（２０〜３０ｋＤ）である。ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓエンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）とＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓエンテロトキシンＥ（ＳＥＥ）との間に９０％より高い類似性が存在する（Ｍｅｒｒａｃｋ，Ｐ．およびＫａｐｐｌｅｒ，Ｊ．（１９９０），Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４８，７０５）。
【０００５】
これらの毒素の免疫学的特性における興味は、１０−１３Ｍ〜１０−１６Ｍの濃度でさえ、それらが最も強いリンパ球増殖の誘導剤のうちのものであり、この増殖がＴ細胞に対して制限されることが発見されて以来、実質的に上昇している（Ｆｌｅｉｓｃｈｅｒ，Ｂ．およびＳｃｈｒｅｚｅｎｍｅｉｅｒ，Ｈ．（１９９８），Ｊ．Ｅｘｐ．１６７，１６９７）。
【０００６】
刺激機構の正確な解明は、ＳＥは、高度に精製したＴ細胞を刺激せず、毒素誘導性増殖は、アクセサリー細胞、単球またはＢリンパ球の存在に依存するという観察から始まった。
【０００７】
しかし、通常の抗原とは対照的に、エンテロトキシンは、ＭＨＣ−ＩＩ分子の抗原結合部位において保有されず、そして存在するのではなく、それらは、単球またはＢ細胞上のＭＨＣ−ＩＩ複合体とＴ細胞レセプターとを架橋する（Ｈｅｒｒｍａｎｎ，Ｔら，（１９９２），Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２，１９３５）。
【０００８】
ヒトの異なるＭＨＣ−ＩＩタンパク質へのエンテロトキシンの結合親和性は、変化する。ほとんどのＳＥは、好ましくは、ＤＱよりは弱くＨＬＡ−ＤＲに結合し、そしてほとんどはＤＰに全く結合しない（Ｆｌｅｉｓｈｃｅｒ，Ｂ．（１９９１），Ｉｍｍｕｎ．Ｉｎｆｅｋｔ．１９，８）。しかし、レクチン（例えば、コンカナバリンＡ）とは対照的に限定される強いＴ細胞刺激に対する理由は、Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）のＶβ鎖の外側へのＳＥの特異的結合に存在する。いわゆるＶβセグメント、ＪセグメントまたはＤセグメントと呼ばれる、Ｔ細胞レセプターの他の成分は、ＳＥに対する結合部位を形成しない。ＴＣＲの特定のＶβ鎖を有するＴリンパ球のみが、特定のＳＥによって刺激されるので、毒素は、分裂促進因子ではなく抗原として言及される。
【０００９】
しかし、特定の毒素によって刺激され得る循環しているＴ細胞の数は、従来の抗原に特異的なＴリンパ球の数より多いので、ＳＥは、「スーパー抗原」として言及される（Ｍｅｒｒａｃｋ，Ｐ．およびＫａｐｐｌｅｒ，Ｊ．（１９９０），Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４８，７０５）。
【００１０】
Ｖβ集団の頻度に依存して、循環しているＴ細胞レパートリーの５〜３０％は、細菌性スーパー抗原によってインビボで刺激され得る（Ｃｈｏｉ，Ｙ．（１９９０），Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７２，９８１）。このＴ細胞刺激は、これまで完全に説明されてこなかった多くの複雑な病態生理学的機構を誘導する。動物モデルだけでなく、ヒトの場合においてもまた、スーパー抗原による中毒は、微熱から循環器ショックまでの範囲であり得る全身性反応に至る（Ｆｌｅｉｓｈｃｅｒ，Ｂ．（１９９１），Ｉｍｍｕｎ．Ｉｎｆｅｋｔ．１９，８）。表１は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓのエンテロトキシンによって誘導される免疫学的反応を示す。これらの反応は、複雑な免疫学的プロセスによって誘発されているようである。ＭＨＣ−ＩＩ複合体およびＴＣＲへの毒素の結合は、サイトカインおよび他の媒介因子の増殖および遊離をもたらし、そして抗体生成をもたらす（表１）。さらに、皮膚リンパ球関連抗原（ＣＬＡ）（これは、Ｔ細胞の皮膚への再循環を制御する）は、より強く発現される（Ｚｏｌｌｎｅｒ，Ｔ．Ｍ．（１９９６）、Ｉｍｍｕｎｏ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４９，１１１）。
【００１１】
【表１】
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【００１２】
表１：Ｓ．ａｕｒｅｕｓエンテロトキシンによって誘導される免疫学的反応
この過剰反応性期後に、スーパー抗原刺激Ｔ細胞は、アネルギー状態に変化し、その結果、強い免疫抑制が生じ得る。他方、自己反応性であるがアネルギー性のＴ細胞が、活性化され得、次いで、自己免疫疾患を誘発する。多発性硬化症（Ｈａｆｌｅｒ，Ｄ．Ａ．（１９９８），Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７，１３１３）および慢性関節リウマチ（Ｐａｌｌｉａｒｄ，Ｘ．（１９９１），Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５３，３２５）の場合において、これらの疾患のスーパー抗原媒介性病態機構に対して重要である特定のＶβ鎖のオリゴクローナル選択が、すでに検出されている。
【００１３】
さらに、ＳＥＢが、アトピー性湿疹（Ｎｅｕｂｅｒ，Ｋ，（１９９３），Ｈａｕｔａｒｚｔ  ４４，１３５；Ｒｉｎｇ，Ｊ．ら（１９９２），Ａｌｌｅｒｇｙ  ４７，２６５；Ｎｅｕｂｅｒ，Ｋ．ら（１９９５），Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０７，１７９）を有する患者において、ＩｇＥ合成およびインターロイキン−４の産生を増大させることを示すことは可能である。さらに、ＳＥＢの湿疹誘発性効果は、外皮試験において検出された（Ｈｏｆｅｒ，Ｍ．Ｆ．（１９９９），Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１２，１７１）。
【００１４】
類似のアレルギー性鼻結膜炎（ｒｈｉｎｏｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｉｔｉｓ）およびアレルギー性気管支喘息、アトピー性湿疹は、病態学的に増大したＩｇＥ合成が生じる疾患に属する。ここまで、症状的にのみこれらの疾患を処置することは可能であり、すなわち、ＩｇＥ合成の抑制は、合成に関与するＴリンパ球の抑制によって非特異的に生じる。この場合に最も頻度が高く全身的に使用される薬物は、コルチゾンまたはシクロスポリンＡである。しばしば、これらの物質は、重度の全身性副作用を有する（皮膚萎縮、糖尿病、高血圧、腎毒性および血液毒性など）。過剰に増大したＩｇＥ合成の特異的な調節によって、このような重度の副作用は、回避できる。同様のこともまた、リンパ球の増大したインターフェロン−γ合成によって達成される疾患に適用される。この状態の良い例は、尋常性乾癬である。この疾患の場合、Ｔ細胞は、増加した量のインターフェロン−γを産生し、この様式で表皮の過剰増殖を誘導する。免疫抑制剤（例えば、コルチゾンまたはシクロスポリンＡ）はまた、乾癬の治療に使用される。サイトカイン産生の選択的な阻害は、この場合においてもまた副作用の率を実質的に減少させる。
【００１５】
多くの疾患において、病理学的Ｔｈ１または減少したＴｈ２反応が示されているか、または、原因としてみなされている（表２ともまた比較のこと）。動物実験の結果は、これらの疾患の場合において、Ｔｈ２の指示における免疫応答の変化は、保護的な効果を有することを示唆している。器官特異的自己免疫疾患としては、例えば、以下が本明細書で言及される：多発性硬化症（Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｅ．Ｍ．ら（１９９９），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｅｍｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．２１，２４９−２６２；Ｌｅｏｎａｒｄ，Ｊ．Ｐ．ら（１９９７），Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７，５４５−５５３）、自己免疫ブドウ膜炎（Ｓｉｎｇｈ，Ｖ．Ｋ．ら（１９９９），Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．２０，１４７−１６１；Ｓｕｎ，Ｂ．ら（１９９９），Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１，１３０７−１３１２；Ｅｇｗｕａｇｕ，Ｃ．Ｅ．ら（１９９９），Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２，５１０−５１７）、インスリンを必要とする真性糖尿病（Ｒａｂｉｎｏｖｉｔｃｈ，Ａ．ら（１９９８），Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５５，１１３９−１１４９）、慢性関節リウマチ（Ｍｕｌｌｅｒ，Ｂ．ら（１９９８），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｅｍｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．２０，１８１−１９６）、ベーチェット症候群（Ｆｒａｓｓａｎｉｔｏ，Ｍ．Ａ．ら（１９９９），Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．４２，１９６７−１９７４）、およびまた、ヘリコバクターピロリ感染（胃潰瘍および萎縮性胃炎などの原因）（Ｓｍｙｔｈｉｅｓ，Ｌ．Ｅ．ら（２０００），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５，１０２２−１０２９；Ｆｏｘ，Ｊ．Ｇ．ら（２０００），Ｎａｔ．Ｍｅｄ．６，５３６−５４２；Ｍａｔｔａｐａｌｌｉｌ，Ｊ．Ｊ．ら（２０００），Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １１８，３０７−３１５）、炎症性腸管疾患（例えば、クローン病および他の疾患）（Ｒｏｍａｇｎａｎｉ，Ｐ．ら（１９９７），Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９，７９３−７９９；ＭａｃＤｏｎａｌｄ，Ｔ．Ｔ．（１９９９），Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３６，１１３−１３５）、急性器官移植拒絶反応（Ｍｏｒｅｌｌｉ，Ａ．Ｅ．ら（２０００），Ｔｒａｎｓｐｌａｎａｔｉｏｎ  ６９，２６４７−２６５７）、ならびに特発性再発性流産（Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｃ．ら（２０００），Ｆｅｒｔｉｌ．Ｓｔｅｒｉｌ．７３，１２０６−１２０８）。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１６】
結果的に、本発明の課題は、上昇したＩｇＥレベルおよび／または増大したインターフェロン−γ産生によって特徴付けられる疾患を処置するのに適した新たな活性な成分を提供することからなり、この活性な成分は、当該分野で公知の不利な点を示さない。特に、本発明の課題は、Ｔｈ１免疫反応とＴｈ２免疫反応との比の不均衡によって特徴付けられる疾患の治療に適した活性な成分を提供することである。
【００１７】
本発明の枠組みにおいて、驚くべきことに、上述の課題を達成し得るペプチドが、天然に存在するＳ．ａｕｒｅｕｓエンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）から単離され得ることが十分に見出されている。
【００１８】
特に、特定のＩｇＥ抗体に結合し得るペプチドを単離することは可能である。この局面において、その免疫調節特性は、驚くべきことに、細菌性ＳＥＢの特性とは非常に異なる。アミノ酸配列が配列番号１０に示される、本発明に従うペプチドは、驚くべきことに、ＳＥＢとは対照的にＴ細胞の増殖を誘導しないが、他方では、刺激されたＴリンパ球のインターフェロン−γ合成を阻害する。その特性に起因して、このペプチドは、増大した血清ＩｇＥレベルおよび／または増大したインターフェロン−γの産生によって特徴付けられる疾患の治療に適している。好ましくは、これらの疾患は、アレルギー性鼻結膜炎、アレルギー性気管支喘息および尋常性乾癬からなる。
【００１９】
本発明によるペプチドとは別に、同じかまたは本質的に同じ生物学的特性および／または免疫学的特性を示す、本発明によるさらなるペプチドが、産生された。これらの特別な特性（すなわち、Ｔ細胞増殖を誘導しない、ＩｇＥ抗体の結合およびインターフェロン−γ合成の阻害）に起因して、本発明によるペプチドは、増加したＩｇＥ合成および増加したインターフェロン−γ合成に関連する疾患を処置するため（例えば、アトピー性湿疹（神経皮膚炎）の場合）に、特に適切である。この状態は、アトピー性湿疹の慢性的な形態の場合において記載されている。この場合、インターフェロン−γ産生Ｔリンパ球が、皮膚において増加した規模で、そして増加した血清ＩｇＥ値で存在する。このペプチドの治療効果は、ＩｇＥへの結合を不活性化することによって直接的にか、またはＴリンパ球のサイトカイン産生の調節によって間接的にかのいずれかで起こり得る。この関係で、ＩｇＥ合成を刺激することが公知のさらなるサイトカイン（例えば、ＩＬ−４およびＩＬ−１３）の阻害が、同様に考慮される必要がある。
【００２０】
従って、本発明の主題は、配列番号１５によるＮ末端アミノ酸配列を示し、そしてＳ．ａｕｒｅｕｓ内毒素Ｂのトリプシン切断によって１２ｋＤ切断フラグメントとして入手可能な、ポリペプチドである。
【００２１】
本発明は、特に、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を示し、そして刺激されたＴリンパ球によってインビトロでインターフェロン−γの合成を阻害する、ポリペプチド（以下において、ペプチドＰ１と称される）に関する。
【００２２】
さらに、本発明は、ＩｇＥに結合する、上記ポリペプチドのホモログおよび誘導体を包含する。しかし、ホモログポリペプチドは、１つまたはいくつかのアミノ酸の置換、あるいは１つまたはいくつかのアミノ酸の挿入または欠失の結果として、上記アミノ酸配列、特に、配列番号１０による配列とは異なる物質であり、これらは、約５０〜９９％、好ましくは、少なくとも約７５％の配列相同性を有する。少なくとも８５％の配列相同性が、特に好ましい。本発明によれば、誘導体とは、上記配列、特に、配列番号１０による配列の、１つまたはいくつかのアミノ酸が、立体異性体（すなわち、１つまたはいくつかのＬ−アミノ酸の、Ｄ−アミノ酸による置換）、または対応する修飾アミノ酸によって置換されている場合のポリペプチドを意味し得ることが理解されるべきである。修飾アミノ酸とは、側鎖が、天然に存在するアミノ酸と比較して、例えば、グリコシル化、リン酸化、メチル化などによって、化学的に修飾されたアミノ酸を意味することが理解されるべきである。このような修飾は、当業者に周知である。本発明の好ましい実施形態によれば、ＩｇＥを結合するホモログおよび誘導体は、配列番号１０による上記ペプチドと同じかまたは本質的に同じ特性を有する。すなわち、これらのホモログおよび誘導体は、インターフェロン−γにより刺激されるＴリンパ球の合成を阻害し、そして／またはＴリンパ球の増殖をインビトロで誘導しない。
【００２３】
本発明の好ましい実施形態によれば、ホモログ（以下において、ペプチドＰ２と称される）は、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を示す。本発明はまた、９より多いアミノ酸の長さのポリペプチドを包含し、このアミノ酸は、配列番号１０または１１に示されるアミノ酸配列を含み、そして刺激されたＴリンパ球による、インビトロでのインターフェロン−γの合成を阻害する。
【００２４】
さらに、本発明は、上記ポリペプチドをコードする核酸配列を含む核酸分子に関する。好ましくは、この核酸分子は、配列番号９に示される核酸配列を有する。この核酸分子は、この配列を発現ベクターにクローニングするため、および本発明によるペプチドを組換え産生するために、使用され得る。これらの方法は、当業者に周知である。
【００２５】
本発明の範囲内で、本発明によるペプチド、特に、Ｐ１およびＰ２が、Ｔｈ１細胞とＴｈ２細胞との間の比、およびその結果また、対応するサイトカインの比に影響を与え得ることが、驚くべきほど十分に見出された。
【００２６】
【表２】
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【００２７】
表２：これらのペプチドを用いる治療に適切な、Ｔｈ１／Ｔｈ２の比の不均衡を有する疾患。
【００２８】
本発明によるタンパク質およびポリペプチドの免疫学的特性の結果として、これらは、Ｔｈ２応答を増加させ、そしてＴｈ１応答を減少させること、およびその逆によって、Ｔｈ１またはＴｈ２免疫応答を誘導または増加させるための薬学的組成物の製造のため、特に、Ｔｈ２またはＴｈ１免疫応答に（優勢に）関連する疾患を処置するための薬学的組成物の製造のために、特に適切である。好ましくは、これらの疾患は、多発性硬化症、自己免疫ブドウ膜炎、真正糖尿病、慢性関節リウマチ、ベーチェット症候群、ヘリコバクターピロリ感染、炎症性腸疾患（特に、クローン病）、急性器官移植拒絶反応および自発的再発性流産からなる群由来の疾患である。
【００２９】
本発明の主題はまた、リンパ球（特に、Ｔリンパ球）による免疫調節およびサイトカイン産生の阻害のための薬学的組成物の製造のための、配列番号１０によるアミノ酸配列を示すかまたは含むポリペプチドの使用からなる。サイトカイン（例えば、インターフェロン−γ）の増加した産生および／またはＩｇＥ抗体の増加したレベルに関連する疾患を処置するための、薬学的組成物の製造のための、このようなポリペプチドの使用もまた、包含される。これらの疾患は、特に、アトピー性湿疹（特に、慢性形態）、気管支喘息、アレルギー性鼻腔結膜炎（ａｌｌｅｒｇｉｃ  ｒｈｉｎｏｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｉｔｉｓ）、乾癬、慢性関節リウマチまたは多発性硬化症である。さらなる疾患は、表２に詳述される。１つの特定の実施形態によれば、サイトカインは、インターフェロン−γ、インターロイキン４（ＩＬ  ４）、インターロイキン５（ＩＬ  ５）、インターロイキン１０（ＩＬ  １０）、インターロイキン１２（ＩＬ  １２）および／またはインターロイキン１３（ＩＬ  １３）である。
【００３０】
本発明は、配列番号１０に相同のアミノ酸配列または配列番号１０由来のアミノ酸配列を示す、上記ポリペプチドの１つの使用を包含する。相同配列またはこれらに由来する配列に関して、上記「ホモログ」および「誘導体」の定義に対して参照がなされ、インビトロでＴリンパ球を刺激することによって、Ｔリンパ球の増殖を誘導せず、そして／またはインターフェロン−γの合成を阻害するＩｇＥ結合ポリペプチドが、特に包含される。本発明の特定の実施形態によれば、使用されるポリペプチドは、配列番号１１による配列を有する。本発明が、配列番号１０または配列番号１１による配列、あるいはより長いアミノ酸配列の部分と同じかまたは本質的に同じ生物学的特性または免疫学的特性を有する、これらに相同であるかまたはこれらに由来する配列を含むポリペプチドの使用に関する限り、３０アミノ酸までの長さ、特に、１５アミノ酸までの長さを有するポリペプチドが好ましい。
【００３１】
それらの特定の生物学的特性の結果として、本発明によるポリペプチドは、リンパ球において、特に、ヒトにおいては血液の末梢Ｔリンパ球において、インターフェロン−γ産生のインビトロでの阻害に適切である。
【００３２】
本発明によるペプチドは、Ｔｈ１およびＴｈ２リンパ球部分集団の、刺激されたサイトカイン産生と自発的なサイトカイン産生との両方を調節する。ペプチド誘導効果の方向に関して、リンパ球の内因性活性化状態が、重要な役割を果たすようである。アトピー性湿疹を罹患する患者において、本発明によるペプチドＰ１による、全てのサイトカインの内因性の増加した合成の阻害が観察される。一方で、これらの患者において、上昇したＴｈ２サイトカインのみでなく、増加したＩＦＮγ産生もまた、特に、慢性的に静止した形態の症例において観察され得ることが、公知になっている。本発明によるペプチドＰ１は、特に、これらの患者のリンパ球のＴｈ２サイトカイン合成のみでなく、ＩＦＮγ産生もまた阻害し得、これは、例えば、治癒する程度まで症状を減少させることによる治療の関連に匹敵する。
【００３３】
乾癬の場合において、本発明によるペプチドによる、非常に増加されたＩＬ−１０の放出の誘導が、特に興味深い。ＩＬ−１０が乾癬の臨床的局面に好ましく影響を与えることの、様々な支持が存在する。乾癬のリンパ球のＩＬ−１０産生に対する、本発明によるペプチドの標的化された効果は、ここで、他のサイトカインに対する効果との相互作用において（例えば、治癒する程度まで症状を減少させることによって）、治療的に特に重要である。
【００３４】
免疫系の異なる病理学的活性化状態の場合において、自発的および／または内因性のサイトカイン合成に対する、本発明によるペプチドの分化した効果は、これらのペプチドが、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスの変化によって引き起こされる他の疾患と比較して、免疫調節効果をまた示すことを示す（表２）。
【００３５】
本発明はまた、活性原理として、本発明による１つまたはいくつかのポリペプチド、ならびに必要であればまた、１つまたはいくつかの薬学的に適合性の補助薬剤および／またはキャリア物質を含有する、薬学的組成物に関する。
【００３６】
ＳＥＢから単離されたペプチドは、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ由来の内毒素Ｂをトリプシンで消化し、引き続いて、１２ｋＤのフラグメントを、反応バッチから単離することによって入手可能である。代替として、産生のための遺伝子技術方法はまた、明らかに、配列番号９に示される核酸配列を発現ベクターに導入し、この発現ベクターを適切な宿主細胞に導入し、この宿主細胞を、タンパク質発現のために適切な条件下で培養し、そしてこの核酸配列によってコードされる、発現されたポリペプチドを単離することによって、可能である。
【００３７】
本発明は、ここで、実施例、配列プロトコルおよび図によって説明される。
【実施例】
【００３８】
（実施例１：ＳＥＢに対する特異的ＩｇＥ抗体の検出のための免疫ブロット）
タンパク質のゲル電気泳動分離（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を、Ｌｕｇｈｔｅｎｂｅｒｇらの方法（Ｌｕｇｈｔｅｎｂｅｒｇ，Ｂ．（１９７５）、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．５８，２５４）に従って実施した。１２．５％のポリアクリルアミド分離ゲルを使用した。標準的なタンパク質混合物（Ｂｉｏｒａｄ、ＭＷ標準、２０３ｋＤ〜７．５ｋＤ）を分子量の決定のために平行して分離した。タンパク質の染色を、Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ  Ｂｌｕｅ  Ｇ−２５０を用いて行った。収集ゲルにおいて、１０個のポケットをサンプルを受容するために準備し、使用されるタンパク質の量を１０μｇと１００μｇとの間にした。分離されるべきタンパク質溶液（２０μｌ）を、２０μｌのサンプル緩衝液と混合し、収集ゲルポケット内に導入し、引き続いて、電極緩衝液を上面で重ねた。電気泳動を、電極緩衝液において、そして２０ｍＡの一定電流で実施した。一旦、ブロモフェノールブルーバンドが分離ゲルの終端に達する（２時間までの展開時間）と、電気泳動を終えた。試験されるべきタンパク質混合物を、ゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって分離し、そしてウェスタンブロット法によってニトロセルロース（孔サイズ０．４５μｍ）に移した。０．２〜０．３Ａの一定の電流強度で１８〜２０時間、ゲル電気泳動の直後、エレクトロブロットチャンバ（ＢｉｏＲａｄ，Ｍｕｎｉｃｈ）で冷却しながら、移動させた。
【００３９】
ニトロセルロースブロットを、ＲＴで回転テーブルで４時間ヒト血清とともにインキュベートした（Ｄｉａｎｏｖａ，Ｈａｍｂｕｒｇ）。後に、ブロットを５回洗浄し、そしてヒトＩｇＥに対する二次抗体（抗ヒトＩｇＥ抗体、Ｓｅｒｖａ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ）とともにＲＴで４時間再びインキュベートし、そして結合を酵素色素反応によって可視化した。
【００４０】
イムノブロットの結果を図１に示す。イムノブロットによって、アトピー性湿疹を有する患者の血清のＳＥＢに対する特異的なＩｇＥ抗体を検出することが可能であった。
【００４１】
イムノブロットにおいて、ペルオキシダーゼ標識抗体を使用した。図１に示されるブロット（スキャンされる）の結果が、裸眼で認識可能な実際の色の変化に対応しないことが指摘されるべきである。影として認識可能なバンドは、非特異的な反応として評価されなければならないアトピーの血清とともにインキュベートされたバンドと比較して、オリジナルのブロットで非常に弱い。
【００４２】
（実施例２．トリプシンを用いるＳＥＢの切断）
ＳＥＢ（１００μｇ／１０μｌ）を、３７℃で１８時間、１０μｌのトリプシン（４ｍｇ／ｍｌの蒸留水）を用いて、酵素的に消化した。次いで、溶液を、ＳＤＳゲル上に適用し、そして対応する切断産物を分離した。ゲル電気泳動についての条件は、実施例１に示される条件に対応した。切断産物を、実施例１に詳述されるアトピー性湿疹を有する患者からの血清を用いるイムノブロットでインキュベートした。健康なコントロールのヒトからの血清をコントロールとして使用した。トリプシン消化の結果を図２に示す。
【００４３】
トリプシン切断に続いて、約１２ｋＤのサイズの切断産物を得、これを用いて、アトピー性湿疹を有する患者の血清からのＩｇＥがイムノブロットで検出可能なバンドを形成した（図２）。実施例１に記載の抗ヒトＩｇＥ抗体（Ｓｅｒｖａ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ）を用いて検出を行った。
【００４４】
（実施例３：ＩｇＥ結合切断産物の配列決定）
ＩｇＥ結合として同定される約１２ｋＤの分子量を有する切断産物をゲルから溶出し、続いて、Ｐ  Ｅｄｍａｎ（Ｅｄｍａｎ，Ｐ．（１９５０），Ａｃｔａ  Ｃｈｅｍ．Ｓｃａｎｄ．４，２８３）の方法に従って機械的に配列決定し、Ｎ末端配列ＫＶＴＡＱＥＬＤＹＬを決定した。このように、配列分析は、ＳＥＢ分子の１８１位（Ｎ末端から）で開始する配列を与えた。図３は、配列分析の結果を示す。
【００４５】
（実施例４：短ペプチドの合成）
１２ｋＤの切断産物の部分的に配列決定された配列から開始して、重複する配列を有するいくつかのペプチドを、部分的に配列決定された領域の前および後ろで産生した：
（ａ）ＨＮＧＮＱＬＤＫＹＲＳＩＴＶＲＶＦＥ（配列番号１）
（ｂ）ＶＲＶＦＥＤＧＫＮＬＬＳＦＤＶＱＴＮＫ（配列番号２）
（ｃ）ＶＱＴＮＫＫＫＶＴＡＱＥＬＤＹＬＴＲＨ（配列番号３）
（ｄ）ＹＬＴＲＨＹＬＶＫＮＫＫＬＹＥＦＮＮＳ（配列番号４）
（ｅ）ＥＦＮＮＳＰＹＥＴＧＹＩＫＦＩＥＮＥＮ（配列番号５）
（ｆ）ＩＥＮＥＮＳＦＷＹＤＭＭＰＡＰＧＤＫＦＤ（配列番号６）
（ｇ）ＧＤＫＦＤＱＳＫＹＬＭＭＹＮＤＮＫＭＶＤ（配列番号７）
（ｈ）ＮＫＭＶＤＳＫＤＶＫＩＥＶＹＬＴＴＫＫＫ（配列番号８）
（注記：使用される「配列番号（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：）」は、ＷＩＰＯ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  ＳＴ．２５に従う配列番号＜４００＞に対応する）。
【００４６】
次いで、配列（ａ）〜（ｈ）を有するペプチドを、実施例２に記載されるように試験した。ペプチド（ｃ）（１２ｋＤの切断産物を除いて）は、ＩｇＥ結合を示す唯一のものであった。
【００４７】
ペプチド（ｃ）の配列決定されたアミノ酸配列を、可能な相同性についての他の公知の分子と、データバンク（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ）によって比較した。これに関して、８９％の相同性が、このペプチドのＩｇＥ結合配列とヒト低アフィンＩｇＥレセプター（ＣＤ２３）の細胞外ドメインのアミノ酸配列との間に存在することが見出された（図４を比較）。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムによって、ＳＥＢとＣＤ２３との間の相同性を有意である（ｐ＝０．０３）として計算することが可能であった。
【００４８】
続いて、ＱＥＬＤＹＬＴＲＨ（Ｐ１；配列番号１０）およびＱＥＥＤＦＬＴＬＨ（Ｐ２；ＣＤ２３分子からの相同な配列部分に対応する配列番号１１）を示す２つのさらなるペプチドを合成した。
【００４９】
次いで、これら２つのペプチドを、リンパ球を刺激するためのさらなる実験で使用した（実施例６および７を比較する）。
【００５０】
（実施例５：ペプチドへの血清ＩｇＥの結合の検出についてのドットブロット）
ドットブロットによって、本発明に従う２つのペプチドが、アトピー性湿疹を有する患者の血清由来のＩｇＥ抗体を結合し得ること示すことが可能であった。この目的のために、アトピー性湿疹を有する５人の異なる患者の血清を、最初にプロテインＧカラム（１ｍｌ、Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を介して予備精製した。この血清を、０．８μｍのシリンジアダプターで予備濾過した。続いて、カラムを１０ｍｌの結合緩衝液（２０ｍＭ  ＰＢＳ、ｐＨ７．０）とともに「ドロップトゥードロップ」で結合し、そして１ｍｌ／分の流速で洗浄した。続いて、１ｍｌの血清を、各々の場合で濾過し、そして淡黄色を呈するとすぐに濾液を集めた。これを５ｍｌのＰＢＳで洗浄し、そして残りの濾液を、透明になるまで収集した。濾過した血清を、１：２の比で２０ｍＭ  ＰＢＳで希釈した。
【００５１】
ドットブロットを実施するために、２０μｇのペプチドＰ１およびＰ２ならびに１μｇのＳＥＢを膜の上に置き、一晩乾燥した。膜を５％スキムミルク／ＰＢＳ  Ｔｗｅｅｎでブロックした。続いて、血清およびポジティブコントロール（ヒツジ抗ＳＥＢ  ＩｇＧ、１０μｌ／ｍｌ、ＳＥＲＶＡ）を使用して、ＲＴで１時間インキュベートした。続いて、膜を３回洗浄した。血清ＩｇＥ抗体の検出のために、ビオチン標識抗ヒトＩｇＥ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を、４μｇ／５ｍｌの濃度で１時間ＲＴでインキュベートし、そして膜を続いて、３回洗浄した。第２のストレプトアビジン標識抗体および３回の洗浄操作とともに、１時間ＲＴでのさらなるインキュベーションに続いて、色素反応を、基質として、ＢＣＩＰおよびＮＢＴを用いて行った。ドットブロットの結果を、図５に示す。本発明に従う両方のペプチドが、血清４、５および６との弱いが明確に検出可能なＩｇＥ結合を示すことが見られ得る。全ての血清は、ＳＥＢに結合するＩｇＥを示した。
【００５２】
（実施例６：ペプチドの免疫調節特性）
健常なボランティアのドナー由来の末梢血リンパ球（ＰＢＭＣ）を、Ｆｉｃｏｌｌ勾配を介して単離し、そしてＲＰＭＩ１６４０培地および１０％ＦＣＳ（ウシ胎仔血清）中で、１０６細胞／ｍｌの濃度で培養した。ＳＥＢ（１μｌ／１０６細胞）およびペプチド（５μｇ／１０６細胞）を刺激として使用した。
【００５３】
細胞の増殖ならびにインターフェロン−γおよびインターロイキン−４の細胞内産生を、３７℃および５％ＣＯ２で２日間インキュベートした後、フローサイトメトリーで測定した。Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ勾配遠心分離によって末梢血リンパ球を単離した後、細胞数を２×１０６細胞／ｍｌに設定した。細胞を円錐形の１５ｍｌのポリプロピレン容器に導入し、続いて、インキュベーターで２日間インキュベートした。増殖のため、ＰＢＭＣを、インキュベーション期間の最後の５時間の間、６０μＭブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）とともにインキュベートした。細胞内サイトカインを測定するために、Ｂｒｅｆｅｌｄｒｉｎ  Ａ（ＢＦＡ、２０μｌ／１ｍｌ  ＰＢＭＣ）を最後の５時間加えた。続いて、２０ｍＭ  ＥＤＴＡ（１００μｌ／１ｍｌ  ＰＢＭＣ）を加え、続いて、１０ｍｌの冷ＰＢＳを加えた。遠心分離に続いて、３ｍｌの「ＦＡＣＳ溶解溶液」（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ）を、洗浄工程の後に、細胞および「ＦＡＣＳ透過溶液」（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ）に加えた。続いて、ＤＮａｓｅ（増殖）と抗ＢｒｄＵ−ＦＩＴＣ抗体または抗サイトカイン抗体（細胞内サイトカイン決定）を細胞顆粒に加えて、そして３０分間インキュベートした。続いて、細胞を洗浄し、そして２００μｌの１％パラホルムアルデヒドで固定した。蛍光を、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳｃａｎ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）によって測定し、そして評価した。
【００５４】
ＢｒｄＵをリンパ球に組み込むことによって、フローサイトメーターで増殖を決定した。本発明に従う異なる濃度のペプチドＰ１およびＰ２とのリンパ球のインキュベーションは、増殖に対するペプチドのいかなる有意な効果も軽くしなかった（図６Ａ）。ＳＥＢ誘導増殖は、ペプチド単独（図６Ａ）によってもＳＥＢ＋ペプチドＰ１（図６Ｂ）での同時刺激によっても実質的に改変しなかった。ＳＥＢ誘導リンパ球増殖の阻害は、高濃度においてのみ生じた（図６Ｂ）。
【００５５】
次の工程において、細胞内のＩＦＮγ（図７）およびＩＬ４産物を、ＳＥＢおよび本発明に従うペプチドＰ１およびＰ２を用いる刺激に続いて、調べた（図７）。これに関して、Ｐ１が、投薬量の関数として、Ｐ２よりもより強力に、ＩＦＮγ（多くの免疫学的機能を媒介するサイトカイン）の産生を抑制する（図７Ａ）こと、およびＩＬ−４（図７Ｂ）が投薬量の関数として刺激されることが見出された。これらの実験において調べられたリンパ球は、健常な候補に由来した。従って、ＩＦＮγとＩＬ−４との間の比を、ＩＬ−４産生Ｔｈ２リンパ細胞を選んで、投薬量の関数としてペプチドによって改変した（図７Ｃ）。
【００５６】
（実施例７：分泌性サイトカイン産生に対するペプチドの効果）
健常なボランティアドナー由来の末梢血リンパ球を、Ｆｉｃｏｌｌ勾配を介して単離し、そして１０６細胞／ｍｌの濃度で、ＲＰＭＩ１６４０培地＋１０％ＦＣＳ（ウシ胎仔血清）中で吸収した。細胞を、２４ウェルのプレート内に導入し、そしてインキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２）において、２つのペプチド（２００μｇ／１０６細胞）とともに２日間インキュベートした。続いて、上清溶液を収集し、最初に−２０℃で凍結した。ヒトＴｈ１サイトカインＩＬ−２、ＩＬ−２、ＩＦＮγおよびＴＮＦαならびにＴｈ２サイトカインＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１０を、Ｂ＆Ｄ（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ）製の血球計算ビーズアレイ（ＣＢＡ）を使用して、細胞培養上清溶液で測定した。試験を、製造業者の指示に正確に従って実施した。
【００５７】
第１シリーズの実験において、健常な候補（ｎ＝３）の末梢血リンパ球の自然なサイトカイン分泌に対する本発明に従うペプチドＰ１およびＰ２の効果を試験した。図８は、Ｔｈ１サイトカイン（ＩＬ−２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα）に対する効果およびＴｈ２サイトカイン（ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０）に対する効果を示す。
【００５８】
Ｐ１が、Ｔｈ１サイトカインＩＬ−２およびＩＦＮγの上記全ての自然な産生を阻害する（ここで、Ｐ２は、ＴＮＦαをより強力に阻害する）ことを見出した。Ｐ２は、健常な候補においてＴｈ２サイトカイン（ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０）の合成を誘導するが、Ｐ１はまた、ＩＬ−４およびＩＬ−５の合成を完全に阻害する。
【００５９】
これらの調査の結果は、Ｐ１およびＰ２が、Ｔｈ１サイトカインおよびＴｈ２サイトカインの比に影響することを示す。
【００６０】
結果として、同じ実験を、重篤なアトピー性湿疹を有する患者（Ｔｈ２＞Ｔｈ１）または重篤な尋常性乾癬を有する患者（Ｔｈ１＞Ｔｈ２）からの末梢血リンパ球を使用して、次の工程で実行した。結果を図９および図１０に示す。
【００６１】
アトピー性湿疹または乾癬を有する患者において、いくつかの症例において、内因的にすでに改変された自然なサイトカイン分泌に対する対抗効果が生じることが明らかになった。アトピー性湿疹を有する患者（図９）において、全てのサイトカイン（すなわち、Ｔｈ１サイトカインおよびＴｈ２サイトカインの両方）の自然な産生は、実質的に増加した。Ｐ１は、これらの患者の場合において、特に、慢性アトピー性湿疹の場合に上昇するＩＦＮγ合成の場合において、すべてのＴｈ集団の増加したサイトカイン産生を阻害する。
【００６２】
尋常性乾癬を有する患者において、Ｐ１によるＩＬ−１０およびＩＬ−５の合成の実質的な刺激が明らかになった（図１０）。
【図面の簡単な説明】
【００６３】
【図１】図１を参照のこと。
【図２】図２を参照のこと。
【図３】図３を参照のこと。
【図４】図４を参照のこと。
【図５】図５を参照のこと。
【図６】図６を参照のこと。
【図７】図７を参照のこと。
【図８】図８を参照のこと。
【図９】図９を参照のこと。
【図１０】図１０を参照のこと。
【配列表】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【手続補正書】
【提出日】平成17年2月4日(2005.2.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2005531289000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成17年2月4日(2005.2.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１０で示されるアミノ酸配列を有するポリペプチド。
【請求項２】
配列番号１５に従うＮ末端アミノ酸配列を示し、Ｓ．ａｕｒｅｕｓエンテロトキシンＢのトリプシン切断によって、１２ｋＤの切断フラグメントとして得られ得ることを特徴とする、ポリペプチド。
【請求項３】
ＩｇＥに結合する、請求項１または２に記載のポリペプチドのホモログまたは誘導体であり、該ホモログが、約５０〜９９％の配列相同性を示すことを特徴とする、ポリペプチド。
【請求項４】
前記ホモログが、少なくとも約７５％の配列相同性を示す、請求項３に記載のポリペプチド。
【請求項５】
前記誘導体の場合、１つまたはいくつかのＬ−アミノ酸がＤ−アミノ酸で置換されていることを特徴とする、請求項３および４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項６】
Ｔリンパ球の増殖を誘導しないことを特徴とする、請求項３〜５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項７】
インターフェロンγにより刺激されたＴリンパ球の合成をインビトロで阻害することを特徴とする、請求項２〜６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項８】
Ｔｈ１およびＴｈ２のリンパ球サブ集団の刺激されたサイトカイン産生および自律的サイトカイン産生の両方をインビトロで調節することを特徴とする、請求項２〜７のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項９】
配列番号１１で示されるアミノ酸配列を示すことを特徴とする、請求項２、３および５〜８のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードする核酸配列を示すことを特徴とする、核酸分子。
【請求項１１】
配列番号９で示される核酸配列を示すことを特徴とする、請求項１０に記載の核酸分子。
【請求項１２】
免疫調節のための薬学的組成物の製造のための、配列番号１０に従う配列、該配列に約５０〜９９％相同な配列、または該配列由来の配列を含むポリペプチドの使用であって、該ポリペプチドがＩｇＥに結合する、使用。
【請求項１３】
前記配列が、配列番号１０に少なくとも約７５％相同である、請求項１２に記載のポリペプチドの使用。
【請求項１４】
免疫調節のための薬学的組成物の製造のための、請求項１〜９のいずれか１項に記載のポリペプチドの使用。
【請求項１５】
リンパ球のサイトカイン産生を阻害するための薬学的組成物の製造のための、配列番号１０に従う配列、該配列に約５０〜９９％相同な配列、または該配列由来の配列を含むポリペプチドの使用であって、該ポリペプチドがＩｇＥに結合する、使用。
【請求項１６】
前記配列が、配列番号１０に少なくとも約７５％相同である、請求項１５に記載のポリペプチドの使用。
【請求項１７】
リンパ球のサイトカイン産生を阻害するための薬学的組成物の製造のための、請求項１〜９のいずれか１項に記載のポリペプチドの使用。
【請求項１８】
前記リンパ球がＴリンパ球であることを特徴とする、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１９】
前記サイトカインが、インターフェロンγ、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−５（ＩＬ−５）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）および/またはインターロイキン−１３（ＩＬ−１３）であることを特徴とする、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
サイトカイン産生の増加および/またはＩｇＥ抗体レベルの上昇に関連する疾患を処置するための薬学的組成物の製造のための、配列番号１０に従う配列、該配列に約５０〜９９％相同な配列または該配列由来の配列を含むポリペプチドの使用であって、該ポリペプチドがＩｇＥに結合する、使用。
【請求項２１】
前記配列が、配列番号１０に少なくとも約７５％相同である、請求項２０に記載のポリペプチドの使用。
【請求項２２】
サイトカイン産生の増加および/またはＩｇＥ抗体レベルの上昇に関連する疾患を処置するための薬学的組成物の製造のための、請求項１〜９のいずれか１項に記載のポリペプチドの使用。
【請求項２３】
前記サイトカインが、インターフェロンγ、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−５（ＩＬ−５）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）および/またはインターロイキン−１３（ＩＬ−１３）であることを特徴とする、請求項２０〜２２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２４】
前記疾患が、アトピー性湿疹、気管支喘息、アレルギー性鼻結膜炎、乾癬、慢性関節リューマチ、または多発性硬化症であることを特徴とする、請求項２０〜２２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２５】
Ｔｈ１またはＴｈ２の免疫応答の誘発または上昇のための薬学的組成物の製造のための、配列番号１０に従う配列、該配列に約５０〜９９％相同な配列、または該配列由来の配列を含むポリペプチドの使用であって、該ポリペプチドが、ＩｇＥに結合する、使用。
【請求項２６】
前記配列が、配列番号１０に少なくとも約７５％相同である、請求項２５に記載のポリペプチドの使用。
【請求項２７】
Ｔｈ１またはＴｈ２の免疫応答の誘発または上昇のための薬学的組成物の製造のための、請求項１〜９のいずれか１項に記載のポリペプチドの使用。
【請求項２８】
Ｔｈ１またはＴｈ２の免疫応答に関連する疾患の処置のための薬学的組成物の製造のための、請求項２５〜２７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２９】
前記疾患が、尋常性乾癬、自己免疫ブドウ膜炎、アレルギー性接触湿疹、ベーチェット症候群、真性糖尿病、橋本病、ヘリコバクターピロリ感染、エリテマトーデス、クローン病、多発性硬化症、臓器移植拒絶反応、関節症性乾癬、慢性関節リウマチ、および突発性再発性流産であることを特徴とする、請求項２５〜２８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３０】
前記炎症性腸疾患がクローン病であることを特徴とする、請求項２９に記載の使用。
【請求項３１】
ヒトの血液の末梢Ｔリンパ球におけるインターフェロンγの産生のインビトロにおける阻害のための、配列番号１０に従う配列、該配列に約５０〜９９％相同な配列、または該配列由来の配列を含むポリペプチドの使用であって、該ポリペプチドがＩｇＥに結合する、使用。
【請求項３２】
前記配列が、配列番号１０に少なくとも約７５％相同である、請求項３１に記載のポリペプチドの使用。
【請求項３３】
ヒトの血液の末梢Ｔリンパ球におけるインターフェロンγの産生のインビトロにおける阻害のための、請求項１〜９のいずれか１項に記載のポリペプチドの使用。
【請求項３４】
Ｔｈ１およびＴｈ２のリンパ球サブ集団の刺激されたサイトカイン産生および自律的なサイトカイン産生のインビトロの調節のための、配列番号１０に従う配列、該配列に約５０〜９９％相同な配列、または該配列由来の配列を含むポリペプチドの使用であって、該ポリペプチドがＩｇＥに結合する、使用。
【請求項３５】
前記配列が、配列番号１０に少なくとも約７５％相同である、請求項３４に記載のポリペプチドの使用。
【請求項３６】
Ｔｈ１およびＴｈ２のリンパ球サブ集団の刺激されたサイトカイン産生および自律的なサイトカイン産生のインビトロの調節のための、請求項１〜９のいずれか１項に記載のポリペプチドの使用。
【請求項３７】
配列番号１〜９のいずれか１項に記載のポリペプチドを含むことを特徴とする、薬学的組成物。
【請求項３８】
１つまたはいくつかの薬学的に適合性の賦形物質および/またはキャリアをさらに含むことを特徴とする、請求項３７に記載の薬学的組成物。
【請求項３９】
配列番号９で示される前記核酸配列が、発現ベクターに導入され、該発現ベクターが適切な宿主細胞に導入され、該細胞が、タンパク質発現に適切な条件下で培養され、そして該核酸配列によってコードされる該発現されたポリペプチドが単離されることを特徴とする、請求項１に記載のポリペプチドの産生のためのプロセス。
【請求項４０】
Ｓ．ａｕｒｅｕｓ由来のエンテロトキシンＢが、トリプシンで消化され、続いて、反応バッチから１２ｋＤのフラグメントが単離されることを特徴とする、請求項２に記載のポリペプチドの産生のためのプロセス。
【手続補正２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図４】
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【国際調査報告】
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