(57)【要約】本発明は、式（Ｉ）  【化１】2005521737.tif 000024のＦＫ２２８またはその塩を包含する、腎臓癌の治療剤を提供する。本発明の有効成分であるＦＫ２２８またはその塩は、腎臓癌に対してインビボにおける優れた抗腫瘍活性を示す。
2005521737.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2005521737.tif 000014
の化合物又はその塩を哺乳動物に有効量投与することを含む、哺乳動物における腎臓癌の治療方法。
【請求項２】
式（Ｉ）の化合物が、式（ＩＩ）
【化２】
2005521737.tif 000015
の化合物である、請求項１に記載の腎臓癌の治療方法。
【請求項３】
哺乳動物がヒトである、請求項１に記載の腎臓癌の治療方法。
【請求項４】
式（Ｉ）
【化３】
2005521737.tif 000016
の化合物またはその塩を哺乳動物に有効量投与することを含有する、哺乳動物における腎臓の癌性腫瘍の増殖抑制方法。
【請求項５】
式（Ｉ）の化合物が、式（ＩＩ）
【化４】
2005521737.tif 000017
の化合物である、請求項４に記載の腎臓の癌性腫瘍の増殖抑制方法。
【請求項６】
インビボにおいて腎臓の癌性腫瘍の増殖を抑制する、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
インビボはヒトの生体内を意味する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
式（Ｉ）
【化５】
2005521737.tif 000018
の化合物またはその塩を有効成分として含有する腎臓癌治療剤。
【請求項９】
式（Ｉ）の化合物が、式（ＩＩ）
【化６】
2005521737.tif 000019
の化合物である、請求項８に記載の治療剤。
【請求項１０】
インビボにおいて抗腫瘍活性を有する、請求項８に記載の治療剤。
【請求項１１】
ヒトに対して使用するものである、請求項８に記載の治療剤。
【請求項１２】
腎臓癌治療剤の製造のための式（Ｉ）
【化７】
2005521737.tif 000020
の化合物またはその塩の使用。
【請求項１３】
式（Ｉ）の化合物が、式（ＩＩ）
【化８】
2005521737.tif 000021
の化合物である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
上記腎臓癌治療剤がインビボにおいて抗腫瘍活性を有する、請求項１２に記載の使用。
【請求項１５】
上記腎臓癌治療剤がヒトに対して使用するものである、請求項１２に記載の使用。
【請求項１６】
式（Ｉ）
【化９】
2005521737.tif 000022
の化合物またはその塩、および医薬的に許容し得る担体を含有する、腎臓癌治療用医薬組成物。
【請求項１７】
式（Ｉ）の化合物が、式（ＩＩ）
【化１０】
2005521737.tif 000023
の化合物である、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
インビボにおいて抗腫瘍作用を有する、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
ヒトに対して使用するものである、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
請求項１６〜１９のいずれかに記載の医薬組成物およびそれとともに同梱される記載物を含む商業用パッケージであって、該記載物が該医薬組成物を腎臓癌の治療に使用することができるかまたは使用するべきであることを記載している、商業用パッケージ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
技術分野
本発明は腎臓癌の治療方法および腎臓癌治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
背景技術
一般的に、インビトロデータのみに基づいて抗腫瘍活性を有するという報告のある物質や化合物では、それらのインビボの結果を予測することはできないことが指摘されている。すなわち、インビトロで抗腫瘍活性を示す物質が、インビボでも抗腫瘍活性を示すとは限らず、従ってインビトロで抗腫瘍活性を示す物質をそのまま抗癌剤として適用することは問題がある。
【０００３】
例えば、式（Ｉ）
【０００４】
【化１】
2005521737.tif 000003
【０００５】
の化合物（配列表配列番号１）は、ヒストンデアセチラーゼを選択的に阻害することにより、強力な抗腫瘍活性を誘導することが報告されている。この物質は、当該物質で処理した細胞にヒストンの高アセチル化を引き起こし、結果として、各種遺伝子の転写調節活性、細胞周期阻害活性およびアポトーシス阻害活性を誘導することも報告されている（特公平７−６４８７２号公報、Ｈ．Ｎａｋａｊｉｍａら，Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．２４１，１２６−１３３（１９９８））。しかしながら、インビトロでの有効性がそのままインビボでも適用できるのか、どの腫瘍に対してもインビボで有効性があるかなど、解決すべき問題が多くあるのが現状である。また腎臓癌に対するインビトロでの抗腫瘍活性はすでに報告されているが、腎臓癌に対するインビボでの抗腫瘍活性は報告されていない。
【０００６】
ヒストンデアセチラーゼは、活性中心にＺｎを配位したメタロ脱アセチル化酵素である（Ｍ．Ｓ．Ｆｉｎｎｉｎら，Ｎａｔｕｒｅ，４０１，１８８−１９３（１９９９））。本酵素は、各種アセチル化ヒストンのＤＮＡに対する親和性を変化させると考えられている。これによってもたらされる直接的な生物現象は、クロマチン構造における変化である。クロマチン構造の最小単位は、ヒストン８量体（Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３及びＨ４、各２分子、コアヒストン）の周りに、１４６ｂｐのＤＮＡが１．８回左巻きに巻き付いたヌクレオソームである。コアヒストンは、各ヒストンタンパク質のＮ末の正電価がＤＮＡと相互作用することにより、ヌクレオソーム構造を安定化している。ヒストンのアセチル化は、ヒストンアセチルトランスフェラーゼが関与するアセチル化反応とヒストンデアセチラーゼが関与する脱アセチル化反応の間の平衡関係により調節されている。ヒストンのアセチル化は、ヒストンタンパク質Ｎ末の進化的に十分に保存されたリジン残基において起こり、これにより、コアヒストンタンパク質は、Ｎ末の電価を失い、ＤＮＡとの相互作用が減弱され、ヌクレオソームの構造が不安定になると考えられている。従って、逆にヒストンの脱アセチル化は、ヌクレオソーム構造を安定化すると考えられている。しかしながら、アセチル化により引き起こされるクロマチン構造の変化がどの程度であるかは不明であり、また、その変化が２次的に誘導される転写調節等とどの様に関係しているのかについても不明である。
【発明の開示】
【０００７】
発明の開示
本発明者らは、上記問題を解決するために鋭意研究を行った結果、インビボ、特にヒト腎臓癌患者においてもその抗腫瘍効果を確認し得る腎臓癌治療剤を見出して本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち本発明は以下の通りである。
（１）式（Ｉ）
【０００９】
【化２】
2005521737.tif 000004
【００１０】
の化合物又はその塩を哺乳動物に有効量投与することを含む、哺乳動物における腎臓癌の治療方法。
（２）式（Ｉ）の化合物が、式（ＩＩ）
【００１１】
【化３】
2005521737.tif 000005
【００１２】
の化合物である、（１）に記載の腎臓癌の治療方法。
（３）哺乳動物がヒトである、（１）に記載の腎臓癌の治療方法。
（４）式（Ｉ）
【００１３】
【化４】
2005521737.tif 000006
【００１４】
の化合物またはその塩を哺乳動物に有効量投与することを含有する、哺乳動物における腎臓の癌性腫瘍の増殖抑制方法。
（５）式（Ｉ）の化合物が、式（ＩＩ）
【００１５】
【化５】
2005521737.tif 000007
【００１６】
の化合物である、（４）に記載の腎臓の癌性腫瘍の増殖抑制方法。
（６）インビボにおいて腎臓の癌性腫瘍の増殖を抑制する、（４）に記載の方法。
（７）インビボはヒトの生体内を意味する、（６）に記載の方法。
（８）式（Ｉ）
【００１７】
【化６】
2005521737.tif 000008
【００１８】
の化合物またはその塩を有効成分として含有する腎臓癌治療剤。
（９）式（Ｉ）の化合物が、式（ＩＩ）
【００１９】
【化７】
2005521737.tif 000009
【００２０】
の化合物である、（８）に記載の治療剤。
（１０）インビボにおいて抗腫瘍活性を有する、（８）に記載の治療剤。
（１１）ヒトに対して使用するものである、（８）に記載の治療剤。
（１２）腎臓癌治療剤の製造のための式（Ｉ）
【００２１】
【化８】
2005521737.tif 000010
【００２２】
の化合物またはその塩の使用。
（１３）式（Ｉ）の化合物が、式（ＩＩ）
【００２３】
【化９】
2005521737.tif 000011
【００２４】
の化合物である、（１２）に記載の使用。
（１４）上記腎臓癌治療剤がインビボにおいて抗腫瘍活性を有する、（１２）に記載の使用。
（１５）上記腎臓癌治療剤がヒトに対して使用するものである、（１２）に記載の使用。
（１６）式（Ｉ）
【００２５】
【化１０】
2005521737.tif 000012
【００２６】
の化合物またはその塩、および医薬的に許容し得る担体を含有する、腎臓癌治療用医薬組成物。
（１７）式（Ｉ）の化合物が、式（ＩＩ）
【００２７】
【化１１】
2005521737.tif 000013
【００２８】
の化合物である、（１６）に記載の医薬組成物。
（１８）インビボにおいて抗腫瘍作用を有する、（１６）に記載の医薬組成物。
（１９）ヒトに対して使用するものである、（１６）に記載の医薬組成物。
（２０）（１６）〜（１９）のいずれかに記載の医薬組成物およびそれとともに同梱される記載物を含む商業用パッケージであって、該記載物が該医薬組成物を腎臓癌の治療に使用することができるかまたは使用するべきであることを記載している、商業用パッケージ。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
発明の詳細な記述
本発明の腎臓癌治療剤は、有効成分として式（Ｉ）の化合物（以下、ＦＫ２２８ともいう）またはその塩を含む。また、本発明の腎臓癌の治療方法はＦＫ２２８を、ヒトを含む哺乳動物に有効量投与することを包含する。式（Ｉ）化合物の中でも、立体異性体である式（ＩＩ）の化合物（以下、ＦＲ９０１２２８ともいう）が好ましい。これらの化合物は強力なヒストンデアセチラーゼ阻害活性を有し（Ｎａｋａｊｉｍａ，Ｈ．ら；上述（１９９８））、特にＦＲ９０１２２８はより強力なヒストンデアセチラーゼ阻害活性を有する。従って、その化合物は、本発明の腎臓癌治療剤に好適に含まれ、本発明の腎臓癌の治療方法に好適に使用される。
【００３０】
本明細書中、特に断りのない限り、単にＦＫ２２８という場合には式（ＩＩ）の化合物も含む、立体異性を問わない化合物群を意味する。
【００３１】
ＦＫ２２８およびその塩は、公知の物質であり、入手可能である。例えば、ＦＫ２２８の立体異性体の一つであるＦＲ９０１２２８は、それを産生しうるクロモバクテリウム属に属する菌株を好気性条件下に培養し、培養ブロスから回収することによって得ることができる。ＦＲ９０１２２８を産生しうるクロモバクテリウム属に属する菌株としては、例えばクロモバクテリウム・ビオラセウムＷＢ９６８（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１９６８）が例示される。ＦＲ９０１２２８物質は特公平７−６４８７２号公報の記載に従って当該生産菌から得ることができる。ＦＲ９０１２２８は、より容易に入手できるという点で、ＦＲ９０１２２８を生産しうるクロモバクテリウム属に属する菌株からの回収が好ましいが、さらなる精製工程が不要あるいは簡単ですむという点で、合成あるいは半合成のＦＲ９０１２２８もまた有利である。同様にＦＲ９０１２２８以外のＦＫ２２８についても、従来公知の方法により合成あるいは半合成することができる。より具体的にはＫｈａｎ  Ｗ．Ｌｉらによって報告されている方法（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，ｖｏｌ．１１８，７２３７−７２３８（１９９６））に準じて製造することができる。
【００３２】
ＦＫ２２８の塩は通常無毒の生物学的に許容される塩であり、アルカリ金属塩（例えばナトリウム塩、カリウム塩等）、アルカリ土類金属塩（例えばカルシウム塩、マグネシウム塩等）、アンモニウム塩といったような無機塩基との塩；有機アミン塩（例えばトリエチルアミン塩、ジイソプロピルエチルアミン塩、ピリジン塩、ピコリン塩、エタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩等）といったような有機塩基との塩；無機酸付加塩（例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩等）、有機カルボン酸・スルホン酸付加塩（例えばギ酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩等）、塩基性あるいは酸性アミノ酸（例えばアルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸等）との塩等を含む、塩基との塩または酸付加塩が例示される。
【００３３】
ＦＫ２２８は、不斉炭素原子および二重結合に基づく、光学異性体または幾何異性体等の立体異性体を有するが、これらすべての異性体及びそれらの混合物もこの発明に含まれる。
【００３４】
さらに、ＦＫ２２８、ＦＲ９０１２２８またはそれらの塩の溶媒和化合物（例えば包接化合物（例えば水和物等））もこの発明に含まれる。
【００３５】
本発明において、インビボ、インビトロとは通常、当分野で用いられている用語どおりを意味し、すなわち、「インビボ」とは、対象とする生体の機能や反応が生体内で発現される状態を意味し、例えば後述する各種哺乳動物の体内、好ましくはヒト生体内を意図する。「インビトロ」とはそのような機能や反応が試験管内（組織培養系、細胞培養系、無細胞系等）で発現されることを意味する。
【００３６】
ヒストンデアセチラーゼ阻害剤であるＦＫ２２８は種々の腫瘍に対して抗腫瘍活性を発揮するが、とりわけ腎臓癌に対してインビボおよびヒトにおける効果が顕著である。
【００３７】
本発明の腎臓癌治療剤は、ヒト、イヌ、ウシ、ウマ、ラット、モルモット等の哺乳動物に対して使用される。
【００３８】
本発明の腎臓癌治療剤は、有効成分としてのＦＫ２２８またはその塩を、経口または非経口適用に適した有機または無機の担体または賦形剤と混合して含有する固体、半固体または液体形態の医薬製剤の形で使用できる。該活性成分は、例えば、散剤、錠剤、ペレット剤、カプセル剤、坐剤、液剤、乳濁液、懸濁液、エアロゾル剤、スプレー剤、使用に適したその他の形態などの剤形に適した、通常の、無毒性で、医薬として許容しうる担体と混ぜ合わせることができる。更に、必要ならば、助剤、安定剤、増粘剤等を使用してもよい。これらの担体、賦形剤は必要に応じて無菌化処理を施してもよく、また製剤化した後に無菌化処理を行うこともできる。ＦＫ２２８およびその塩は、周囲組織への浸潤、遠隔部への転移および癌の増殖の抑制等の腎臓癌の治療的な効果を生じるのに十分な量で当該腎臓癌治療剤に含有される。
【００３９】
本発明の腎臓癌治療剤の投与方法は、上記のような腎臓癌の治療的な効果が得られれば、特に限定されない。特に、本発明の腎臓癌治療剤を使用する場合には、非経口的投与、即ち静脈内投与、筋肉内投与、組織内直接投与、鼻腔内投与、皮内投与、髄液内投与、胆管内投与、膣内投与等が好ましく、また、リポソーム法等も好適に使用することができる。該治療剤をヒトに適用するには、静脈内、筋肉内または経口投与によってこれを適用するのが好ましい。有効成分であるＦＫ２２８またはその塩の治療上有効な量は、処置すべき個々の患者の年齢および状態、ならびに癌の種類によっても相違するが、通常、静脈内投与の場合には、ヒトの体表面積１ｍ２あたりＦＫ２２８の量で１日量０．１〜１００ｍｇ、好ましくは１〜５０ｍｇ、更に好ましくは５〜３０ｍｇであり、連続点滴投与して腫瘍を処置する。また、連続点滴投与時間は投与量によっても異なるが、好ましくは３〜６時間、さらに好ましくは３．５〜４．５時間で、最も好ましくは４時間である。投与間隔は、１８〜３０日の１サイクルで１〜４回投与し、そのサイクルを２〜７サイクル行うことが好ましい。更に、ＦＫ２２８とレチノイックアシッド（好ましくはＡＴＲＡ：all-trans-retinoic acid）との併用療法も好ましい。
【実施例】
【００４０】
以下、本発明を実施例にて具体的且つ詳細に説明するが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。
【００４１】
実施例１
ヒト腎臓腫瘍異種移植片におけるＦＫ２２８の抗腫瘍効果
（１）薬剤調製
ＦＲ９０１２２８を必要量計り、溶媒（１０％  ＨＣＯ−６０（日本サーファクタント工業株式会社製）／生理食塩水）を加え、超音波をかけ溶解する。陽性対照物質タキソール（Ｔａｘｏｌ）は、試験に先立って２４ｍｇ／ｍＬとなるようＣｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（ＳＩＧＭＡ）／エタノール（１：１））液に溶解し、冷蔵保存した。用時、９倍量の生理食塩水を加えて希釈し２．４ｍｇ／ｍＬ（溶媒成分：５％  Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ−５％  エタノール−９０％  生理食塩水）とした。
（２）動物
薬剤の抗腫瘍活性試験には、日本チャールスリバー（横浜、日本）よりＢＡＬＢ／ｃＡＮｎＮＣｒｊ−ｎｕ／ｎｕマウス（雌、６週齢）を購入し、一週間以上の馴化飼育の後、実験に用いた。マウスはＳＰＦ環境下飼育し、水と餌を自由に摂取させた。
（３）腫瘍
２−３×１０７ヒト腎臓腫瘍（ＲＸＦ−６３１Ｌ：Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｃｅｎｔｅｒ，  Ｊａｐａｎ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、東京、日本）はＢＡＬＢ／ｃＡＮｎＮＣｒｊ−ｎｕ／ｎｕマウスの皮下に、連続継代によって維持された。
（４）実験移植および群分け
ＲＸＦ−６３１Ｌ腫瘍の断片（３×３×３ｍｍ）はＢＡＬＢ／ｃＡＮｎＮＣｒｊ−ｎｕ／ｎマウスの右腹の皮下に移植された。腫瘍移植後、腫瘍容量が１００〜３００ｍｍ３に達した時点で、腫瘍容量のばらつきが無くなるように群分けした（１群：６匹）。腫瘍の容量は以下の式によって計算された。：腫瘍容量（ｍｍ３）＝１／２×Ｌ×Ｗ２、式中、ＬおよびＷはそれぞれ腫瘍質量の長さと幅を表す。
（５）投与
投与は群分け当日（０日目）に開始した。ＦＲ９０１２２８投与群には４日毎に３回（ｑ４ｄ×３）、ＦＲ９０１２２８を静脈内投与した（３．２および１．８ｍｇ／ｋｇ）。陽性対照物質タキソール投与群は５日間連続（ｑｄ×５）でタキソールを静脈内投与した（２４ｍｇ／ｋｇ）。対照群には、溶媒（１０％  ＨＣＯ−６０／生理食塩水）のみを投与した（ｑ４ｄ×３）。各投与液量は投与日に測定した体重をもとに算出した（０．１ｍＬ／１０ｇ体重）。なお、ＦＲ９０１２２８の３．２ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ（ｑ４ｄ×３）およびタキソールの２４ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ（ｑｄ×５）はそれぞれのＭＴＤ（最大耐用量）である。
（６）腫瘍サイズおよび体重の測定
腫瘍サイズ（長さ、幅）および体重を０日目より週２回測定した。
【００４２】
結果を図１に示す。−●−対照群、−■−はＦＲ９０１２２８を１．８ｍｇ／ｋｇ投与した場合、−▲−はＦＲ９０１２２８を３．２ｍｇ／ｋｇ投与した場合、−◆−はタキソールを２４ｍｇ／ｋｇ投与した場合の腫瘍の大きさの推移を示す。ＦＲ９０１２２８はインビボにおいて、ヒト腎臓癌の増殖を抑制した。
【００４３】
実施例２
抗悪性反応
一人の患者（患者番号３１−００−８３−２）が部分的な反応を示した。この患者は３８歳の女性で、１９９６年に明細胞腎癌と診断された病歴があった。患者は全部で１０回のＦＲ９０１２２８の投与を受けた。ＦＲ９０１２２８の投与は、１サイクル（２１日間）の１日目と５日目に９．１０ｍｇ／ｍ２を、２サイクル（２１日間）の１日目に９．１０ｍｇ／ｍ２を、３サイクル（２８日間）の１日目と５日目に９．１０ｍｇ／ｍ２を、４サイクル（２２日間）の１日目に９．１０ｍｇ／ｍ２を、５サイクル（２０日間）の１日目に１２．７０ｍｇ／ｍ２を、６サイクル（２３日間）の１日目に１７．８ｍｇ／ｍ２を、７サイクル（２３日間）の１日目に１７．８ｍｇ／ｍ２を、８サイクル（２１日間）の１日目に１７．８ｍｇ／ｍ２をそれぞれ４時間持続点滴投与した。治療効果をＲＥＣＩＳＴ  ｃｒｉｔｅｒｉａに基づいて評価した。この患者は最初の２サイクル後に部分的な反応を示し、サイクル８の後に病気の進行がみられた。
【００４４】
本発明は米国特許出願６０／３６９，８６８に基づいており、その内容はここに言及することにより本明細書に含まれる。
【産業上の利用可能性】
【００４５】
産業上の利用可能性
ヒストンデアセチラーゼ阻害活性を有するＦＫ２２８（特にＦＲ９０１２２８）またはその塩を有効成分として含む本発明の腎臓癌の治療剤はインビトロのみならずインビボにおいても優れた抗腫瘍活性を示す。また、本発明の腎臓癌の治療剤はヒト腎臓癌患者においても優れた抗腫瘍活性を示す。従って、本発明は腎臓癌治療に好適に適用できる。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】図１はマウスに移植したヒト腎臓腫瘍（ＲＸＦ−６３１Ｌ）に対するＦＲ９０１２２８の抗腫瘍活性を示すグラフである。
【配列表フリーテキスト】
【００４７】
配列番号１：Ｘａａは式ＮＨ２Ｃ（ＣＨＣＨ３）ＣＯＯＨによって表されるアミノ酸である。式ＣＯＯＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨＣＨＣ２Ｈ４ＳＨ）ＯＨにおいて、カルボキシル基は最初のアミノ酸であるバリンのアミノ基と結合しており、ヒドロキシル基は４番目のアミノ酸であるバリンのカルボキシル基と結合しており、ＳＨ基は２番目のアミノ酸であるシスティンのＳＨ基とジスルフィド結合を介して結合している。
【図１】
2005521737.tif 000025
【配列表】
2005521737000001.app
【国際調査報告】
2005521737.tif 000026
2005521737.tif 000027
2005521737.tif 000028
2005521737.tif 000029