(57)【要約】本発明は、ベンゾジフランイミダゾリン誘導体および眼内圧を低下し、そして眼の神経保護を提供するためのベンゾジフラニミダゾリン誘導体を提供し、ここで、Ａ、ＢおよびＤは、独立してＮまたはＣのいずれかから選択され、但し、Ａ、ＢまたはＤの少なくとも１つが、Ｎであり、；ＥがＣまたはＮであり；ＲがＨまたはＣ１〜４アルキルであり；Ｒ２およびＲ３は、独立してＨ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニルであるかまたはＲ２およびＲ３は、一緒になって五員環または六員環を形成し得；Ｘは、水素、ハロゲン、Ｃ１〜４アルキルまたはＣＦ３であり；そして破線の結合は、単結合または二重結合であり得る。好ましくは、この化合物は、２−（８−ブロモ−ベンゾ−［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン−４−イル）イミダゾリンヒドロクロリドである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下：
【化１】
2005513103.tif 000010
の式の化合物ならびに薬学的に受容可能な塩および溶媒和物であって、
ここで、Ａ、ＢおよびＤは、独立してＮまたはＣのいずれかから選択され、但し、Ａ、ＢまたはＤの少なくとも１つが、Ｎであり、；
ＥがＣまたはＮであり；
ＲがＨまたはＣ１〜４アルキルであり；
Ｒ２およびＲ３は、独立してＨ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニルであるか、またはＲ２およびＲ３は、一緒になって五員環または六員環を形成し得；
Ｘは、水素、ハロゲン、Ｃ１〜４アルキルまたはＣＦ３であり；そして
破線の結合は、単結合または二重結合であり得る、
化合物。
【請求項２】
前記化合物が、２−（８−ブロモ−ベンゾ−［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン−４−イル）イミダゾリンヒドロクロリドである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
眼内圧を低下し、神経保護を提供するための方法であって、該方法は、以下：
【化２】
2005513103.tif 000011
の式の化合物ならびに薬学的に受容可能な塩および溶媒和物を含む治療有効量の組成物を眼内圧を低下し、神経保護を提供するのを必要とする患者に投与する工程を包含し、
ここで、Ａ、ＢおよびＤは、独立してＮまたはＣのいずれかから選択され、但し、Ａ、ＢまたはＤの少なくとも１つが、Ｎであり、；
ＥがＣまたはＮであり；
ＲがＨまたはＣ１〜４アルキルであり；
Ｒ２およびＲ３は、独立してＨ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニルであるか、またはＲ２およびＲ３は、一緒になって五員環または六員環を形成し得；
Ｘは、水素、ハロゲン、Ｃ１〜４アルキルまたはＣＦ３であり；そして
破線の結合は、単結合または二重結合であり得る、
方法。
【請求項４】
前記化合物が、２−（８−ブロモ−ベンゾ−［１，２−ｂ；４，５−ｂ’’］ジフラン−４−イル）イミダゾリンヒドロクロリドである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
正常なまたは増大した眼内圧を低下し、そして制御し、そして目の神経保護を提供するための組成物であって、該組成物は、以下：
【化３】
2005513103.tif 000012
の式の化合物ならびに薬学的に受容可能な塩および溶媒和物を含み、
ここで、Ａ、ＢおよびＤは、独立してＮまたはＣのいずれかから選択され、但し、Ａ、ＢまたはＤの少なくとも１つが、Ｎであり、；
ＥがＣまたはＮであり；
ＲがＨまたはＣ１〜４アルキルであり；
Ｒ２およびＲ３は、独立してＨ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニルであるか、またはＲ２およびＲ３は、一緒になって五員環または六員環を形成し得；
Ｘは、水素、ハロゲン、Ｃ１〜４アルキルまたはＣＦ３であり；そして
破線の結合は、単結合または二重結合であり得る、
組成物。
【請求項６】
前記化合物が、２−（８−ブロモ−ベンゾ−［１，２−ｂ；４，５−ｂ’’］ジフラン−４−イル）イミダゾリンヒドロクロリドである、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
眼科的に受容可能な防腐剤をさらに含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
眼科的に受容可能な界面活性剤をさらに含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項９】
粘性を増加するための薬剤をさらに含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項１０】
前記薬剤が、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロースおよびポリビニルピロリドンからなる群から選択される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
眼科的に受容可能な防腐剤、眼科的に受容可能な界面活性剤および粘度を増加させるための少なくとも１つの薬剤をさらに含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項１２】
約５〜約８のｐＨを有する局所眼用懸濁液または溶液としてさらに規定される、請求項６に記載の組成物。
【請求項１３】
前記化合物の濃度が、０．０１重量％〜５重量％である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記化合物の組成物は、０．２５重量％〜２重量％である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
β−遮断薬、プロスタグランジン、カルボニックアンヒドラーゼ阻害剤、および縮瞳薬からなる群から選択される少なくとも１つの薬剤をさらに含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項１６】
カルシウムチャネル遮断薬およびＮＭＤＡアンタゴニストからなる群から選択される少なくとも１つの薬剤をさらに含む、請求項６に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（１．発明の分野）
本発明は、緑内障の処置および眼の神経保護の分野に関する。より詳細には、本発明は、緑内障を処置し、眼内圧を低下させそして神経保護を提供するための新規の化合物、組成物および方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
（２．関連技術の説明）
緑内障と称される疾患状態は、視神経に対する不可逆的な損傷に起因する視覚機能の永久的な欠損によって特徴付けられる。緑内障のいくつかの形態学的または機能的に異なる型は、代表的に、上昇したＩＯＰによって特徴付けられ、これは、疾患の病理学的な過程に関係して引き起こされることが考えられる。眼高血圧（ｏｃｕｌａｒ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ）は、眼内圧が上昇されるが視覚機能の見かけ上の欠損は起こらない状態であり；このような患者は、緑内障に付随する視覚欠損の最終的な発病の高い危険性であると考えられる。緑内障の視野欠損を有するいく人かの患者は、相対的に低い眼内圧を有する。いわゆる正常な圧力または低い圧力の緑内障患者もまた、ＩＯＰを低下しそして制御する薬剤から利益を得ることができる。緑内障または眼高血圧が早期に検出され、そして上昇した眼内圧を効果的に低下する医薬ですぐに処置される場合、視覚機能の欠損またはその進行性の悪化は、一般的に改善され得る。眼内圧の低下に効果的であることが証明されている薬物治療剤は、眼房水の生産を増加する薬剤と流出の容易さを増加する薬剤との両方を含む。このような治療剤は、一般的に２つの可能な経路、局所的（眼への直接的な適用）または経口的のうち１つによって投与される。
【０００３】
特定の既存の緑内障治療剤で処置される場合、十分に応答しない幾人かの患者が存在する。従って、ＩＯＰを制御する他の局所的な治療剤が必要である。
【０００４】
セロトニン（５−ヒドロキシトリプタミン；５ＨＴ）は、眼を含む多くの生体組織において十分規定された神経伝達物質機能を有する内因性生体アミンである［ＺｉｆａおよびＦｉｌｌｉｏｎ  １９９２；Ｈｏｙｅｒら、１９９４；Ｔｏｂｉｎら、１９８８］。
【０００５】
５ＨＴは、少なくとも７つの主要な５ＨＴレセプター（５ＨＴ１〜５ＨＴ７）と相互作用することが公知であり、そして、眼内の生化学的事象（例えば、セカンドメッセンジャー（例えば、ｃＡＭＰ，イノシトール三リン酸）の刺激）を開始するこれらのファミリー内のさらなる亜類型は、最終的な生物学的応答（例えば、組織収縮またはホルモン放出などを最終的に導く［Ｈｏｙｅｒら、１９９４；Ｍａｒｔｉｎら、１９９８］。５ＨＴ１ファミリー内のレセプター亜類型は、ネガティブにアデニリルシクラーゼ（ＡＣ）に結合し、そしてｃＡＭＰの生産の阻害を生じ、一方で、５ＨＴ４レセプター、５ＨＴ６レセプターおよび５ＨＴ７レセプターは、ポジティブにＡＣに結合し、従って５ＨＴによって活性化された場合、ｃＡＭＰ産生を刺激する［Ｍａｒｔｉｎら、１９９８］。５ＨＴ２ファミリー中のレセプターは、ポジティブにホスホリパーゼＣ（ＰＬＣ）に結合し、従って、イノシトールリン酸を生成し、そして、５ＨＴの効果を媒介するように活性化された場合、細胞内カルシウムを動員する。５ＨＴ３レセプターは、ナトリウム、カリウムおよびカルシウムをゲートするイオンチャネルに結合する点で、独特である［Ｈｏｙｅｒら、１９９４］。
【０００６】
５ＨＴ２アゴニスト活性を示す公知の化合物は、代表的に、５−ＨＴ２Ｃレセプターの活性化によって、多くの中枢神経系（ＣＮＳ）関連状態（特に、肥満およびうつ病の処置）を処置するために設計されている。従って、公知の５ＨＴ２アゴニスト化合物の１つの所望される特性は、それらが容易に血液脳関門を通過することである。受動的拡散によって血液脳関門を容易に透過する化合物は、一般的に親油性分子であり、この親油性分子は、この拡散を妨害し得る極性官能基を含まない。
【０００７】
緑内障のサルモデルにおけるＩＯＰを制御するための５−ＨＴ２アゴニストの有用性は、確立されている（ＷＯ  ００／１６７６１）。α２アドレナリン受容体アゴニストはまた、ＩＯＰ低下薬剤としてのそれらの使用について公知である。５−ＨＴ１Ａアゴニスト活性を有する化合物は、緑内障の眼ニューロパシー（ｏｐｔｉｃ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）の処置に有用であり得ることもまた公知である（ＷＯ  ０１７０２２３  Ａ１）。本発明まで、α２アドレナリン受容体アゴニスト活性と共に５−ＨＴ２Ａおよび／または５−ＨＴ１Ａアゴニスト活性を有する化合物は１つも知られていなかった。
【０００８】
眼疾患を処置するために、眼組織中に留まり、血液脳関門を越えＣＮＳに進入しない組成物を、局所的に投与することが所望される。必要とされるものは、ＩＯＰ低減効力と眼の神経保護活性の両方を有する抗緑内障薬物である。このような化合物は、血液脳関門を越える傾向を有さないこともまた所望される。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
（発明の要旨）
本発明は、ＩＯＰを低下し、そして神経保護を提供するためのベンゾジフランイミダゾリン誘導体およびベンゾフランミダゾリン化合物を提供することによって、先行技術のこれらおよび他の欠点を克服する。より詳細には、本発明は、以下の式：
【００１０】
【化４】
2005513103.tif 000002
の式の化合物ならびに薬学的に受容可能な塩および溶媒和物を提供し、
ここで、Ａ、ＢおよびＤは、独立してＮまたはＣのいずれかから選択され、但し、Ａ、ＢまたはＤの少なくとも１つが、Ｎであり、；ＥがＣまたはＮであり；ＲがＨまたはＣ１〜４アルキルであり；Ｒ２およびＲ３は、独立してＨ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ２〜３アルケニルであるかまたはＲ２およびＲ３は、一緒になって五員環または六員環を形成し得；Ｘは、水素、ハロゲン、Ｃ１〜４アルキルまたはＣＦ３であり；そして破線の結合は、単結合または二重結合であり得る。好ましくは、この化合物は、２−（８−ブロモ−ベンゾ−［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン−４−イル）イミダゾリンヒドロクロリドである。
【００１１】
別の局面において、本発明は、上記の化合物を含む組成物を提供する。この組成物は、最も好ましくは、眼に送達するための局所眼用処方物の形態である。本発明の化合物は、眼科学的に受容可能な防腐剤、界面活性剤、粘度増強剤、透過増加剤（ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ｅｎｈａｎｃｅｒ）、緩衝化剤、塩化ナトリウムおよび水を組み合わされ、水性の無菌眼用懸濁液または溶液を形成し、本発明の組成物を形成し得る。
【００１２】
本発明の組成物は、好ましくは局所眼科懸濁液または溶液として、約５〜８のｐＨで処方される。上記のような本発明の化合物は、通常は、０．０１重量％〜５重量％の量でこれらの処方物中に含まれるが、好ましくは、０．１重量％〜２重量％の量である。従って、局所的提示のために、それらの処方物の１〜２滴が、熟練臨床医の慣用的な裁量に従って１日あたり１〜４回、眼の表面に送達される。
【００１３】
本発明は、さらに哺乳動物において、上記のような構造を有する化合物を含む治療有効量の組成物を、それらを必要とする患者に投与することによって、眼内圧を低下し、そして神経保護を提供する方法を提供する。好ましい実施形態において、この組成物は、眼に局所的に（ｌｏｃａｌｌｙ）（例えば、局所的に（ｔｏｐｉｃａｌｌｙ）、房内（ｉｎｔｒａｃａｍｅｒａｌｌｙ）にまたはインプラントによって）投与され得る。
【００１４】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
意外なことに、５ＨＴ２レセプターでアゴニスト活性を有するセロトニン作動性化合物が、上昇したＩＯＰおよび緑内障を効果的に低減および制御することが発見された。さらに、この化合物は、神経保護活性を提供し、そしてニューロン細胞死に関連する眼疾患に罹患するヒトを処置するために有用である。５−ＨＴ２レセプターでアゴニスト活性を有するセロトニン作用性化合物は、正常なＩＯＰおよび上昇したＩＯＰを効果的に低下および制御し、そして緑内障を処置するために有用であることが見出されている。例えば、共有に係る同時係属中の出願ＰＣＴ／ＵＳ９９／１９８８８を参照のこと。
【００１５】
５−ＨＴ２レセプターでアゴニストとして働く化合物は、公知であり、そして種々の有用性を示している（主として、中枢神経系（ＣＮＳ）に関連する障害または状態について）。米国特許第５，４９４，９２８号は、強迫性障害および他のＣＮＳ由来の人格障害の処置のための５−ＨＴ２Ｃアゴニストである、特定の２−（インドール−１−イル）エチルアミン誘導体を開示する。米国特許第５，５７１，８３３号は、門脈圧亢進症および片頭痛の処置のための５−ＨＴ２アゴニストであるトリプタミン誘導体を開示する。米国特許第５，８７４，４７７号は、５−ＨＴ２Ａ／２Ｃアゴニストを使用してマラリアを処置するための方法を開示する。米国特許第５，９０２，８１５号は、ＮＭＤＡレセプター機能低下の有害な影響を予防するための、５−ＨＴ２Ａアゴニストの使用を開示する。ＷＯ９８／３１３５４Ａ２は、うつ病および他のＣＮＳ状態の処置のための５−ＨＴ２Ｂアゴニストを開示する。５−ＨＴ２Ａレセプターにおけるアゴニスト応答は、幻覚薬活性の原因である主要な活性であると報告されており、いくらか低い５−ＨＴ２Ｃレセプターの関与が可能である（Ｆｉｏｒｅｌｌａら、１９９５）。
【００１６】
セロトニン作用性５−ＨＴ１Ａアゴニストは、動物モデルにおいて神経保護性であると報告されており、そしてこれらの因子の多くは、他の適応症のうちでもとりわけ、急性発作の処置について評価されている。このクラスの化合物は、緑内障の処置（ＩＯＰの低下および制御）について開示されている。例えば、ＷＯ９８／１８４５８およびＥＰ  ０７７１５６３Ａ２を参照のこと。Ｏｓｂｏｒｎｅらは、８−ヒドロキシジプロピルアミノテトラリン（８−ＯＨ−ＤＰＡＴ）（５−ＨＴ１Ａアゴニスト）が、ウサギにおいてＩＯＰを低下させることを教示する（Ｏｓｂｏｒｎｅら、１９９６）。Ｗａｎｇらは、５−メチルウラピジル（α１Ａアンタゴニストかつ５−ＨＴ１Ａアゴニスト）が、サルにおいてＩＰＯを低下させるが、そのα１Ａレセプター活性に起因することを開示する（Ｗａｎｇら、１９９７；Ｗａｎｇら、１９９８）。また、５−ＨＴ１Ａアンタゴニストは、緑内障（上昇したＩＯＰ）の処置のために有用であると開示する（例えば、ＷＯ９２／０３３８）。さらに、ＤｅＳａｉら（ＷＯ９７／３５５７９）およびＭａｃｏｒら（米国特許第５，５７８，６１２号）は、緑内障（上昇した（ＩＯＰ）の処置のための、５−ＨＴ１アゴニストおよび５−ＨＴ１様アゴニストの使用を開示する。これらの抗片頭痛化合物は、５−ＨＴ１Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｆアゴニストであり、例えば、スマトリプタン（ｓｕｍａｔｒｉｐｔａｎ）およびナラトリプタン（ｎａｒａｔｒｉｐｔａｎ）、ならびに関連する化合物である。
【００１７】
本発明は、５−ＨＴ２Ａ活性および５−ＨＴ１Ａ活性と共に、α２アドレナリン受容アゴニスト活性を保有する、式Ｉの一般構造を有する化合物ならびにその薬学的に受容可能な塩および溶媒和物を提供する。
【００１８】
【化５】
2005513103.tif 000003
ここで、Ａ、ＢおよびＤは、独立して、Ｎ、Ｃのいずれかから選択され、但し、Ａ、ＢまたはＤの少なくとも１つは、Ｎであり；Ｅは、ＣまたはＮであり；Ｒは、Ｈ、Ｃ１〜４アルキルであり、Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜３アルキル、またはＣ２〜３アルケニルであり；Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜３アルキル、またはＣ２〜３アルケニルであるか；あるいはＲ２およびＲ３は、一緒になって、五員環または六員環を形成し得；Ｘは、水素、ハロゲン、Ｃ１〜４アルキル、ＣＦ３から選択され；破線の結合は、単結合または二重結合のいずれかが、この結合位置に存在し得ることを示す。好ましい実施形態において、本発明の化合物は、２−（８−ブロモ−ベンゾ−［１．２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン−４−イル）イミダゾリン塩酸塩である。
【００１９】
ＥＳ３２３９８５は、オキシメタゾリンが、鼻うっ血のため、および眼の赤味を軽減するための点眼剤において、現在有用であることを議論する。ＥＳ３２３９８５は、オキシメタゾリンについてのＩＯＰ低下活性を議論するが、オキシメタゾリンの、ＩＯＰの低下および眼の神経保護のための使用を議論しない。さらに、オキシメタゾリンは、フラン構造および／またはエーテル置換基を欠くので、ベンゾフランではない（Ｗａｎｇら、１９９３）。さらに、特許請求される化合物のいずれも、ＥＳ３２３９８５にもＷａｎｇにも開示されていない。
【００２０】
式Ｉの化合物は、１つ以上のキラル中心を含み得ることが認識される。本発明は、全てのエナンチオマー、ジアステレオマー、およびこれらの混合物を企図する。
【００２１】
上記定義において、置換基における炭素原子の総数は、Ｃｉ〜ｊの接頭辞によって示されており、ここで、数字ｉおよびｊは、炭素原子の数を規定する；この定義は、直鎖、分枝鎖、および環状のアルキル基または（環状アルキル）アルキル基の全てを包含する。
【００２２】
置換基は、意図される構造単位に組み込まれる場合、単数または複数のいずれかで存在し得ることを認識することが、重要である。例えば、置換基ハロゲン（これは、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を意味する）は、結合されるその単位が、１つ以上のハロゲン原子（これらは、同じであっても異なっていてもよい）で置換され得ることを意味する。
【００２３】
本発明の化合物は、全身投与され得るか、または眼に局所投与（例えば、局所的にか、眼房内（ｉｎｔｒａｃａｍｅｒａｌｌｙ）にか、または移植物を介して）され得る。これらの化合物は、好ましくは、眼への送達のための局所眼用処方物に組み込まれる。これらの化合物は、眼科学的に受容可能な防腐剤、界面活性剤、粘度増強剤、浸透増強剤、緩衝剤、塩化ナトリウム、および水と組み合わせられて、水性滅菌眼用懸濁液または溶液を形成し得る。眼用溶液処方物は、化合物を、生理学的に受容可能な等張水性緩衝液に溶解することによって、調製され得る。さらに、眼用溶液は、眼科学的に受容可能な界面活性剤を含有して、この化合物の溶解を補助し得る。さらに、眼用溶液は、粘度を増加させるための薬剤（例えば、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドンなど）を含有して、結膜嚢におけるこの処方物の保持を改善し得る。ゲル化剤もまた使用され得、これには、ゲラン（ｇｅｌｌａｎ）およびキサンタンガムが挙げられるが、これらに限定されない。滅菌眼用軟膏処方物を調製するためには、活性成分は、適切なビヒクル（鉱油、液体ラノリン、または白色鉱油）中で、防腐剤と組み合わせられる。滅菌眼用ゲル処方物は、活性成分を、親水性ベース中に懸濁させることによって、調製され得、この親水性ベースは、類似の眼用調製物についての公開された処方に従って、例えば、カルボポール−９４０などの組み合わせから調製される；防腐剤および糖張剤もまた、組み込まれ得る。
【００２４】
本発明の化合物は、好ましくは、局所眼用の懸濁物または溶液として、約５〜８のｐＨで処方される。これらの化合物は、通常、０．０１重量％〜５重量％の量であるが好ましくは０．１重量％〜２重量％の量で、これらの処方物中に含有される。従って、局所的な提供については、１〜２滴のこれらの処方物が、熟練した臨床医の慣用的な決定に従って、１日当たり１〜４回、眼の表面に送達される。
【００２５】
これらの化合物はまた、他のＩＯＰ低下剤（例えば、β−遮断薬、プロスタグランジン、カルボニックアンヒドラーゼインヒビター、および縮瞳薬であるが、これらに限定されない）と組み合わせて使用され得る。これらの化合物はまた、緑内障を処置するために有用な他の薬剤（例えば、カルシウムチャネル遮断薬およびＮＭＤＡアンタゴニストであるが、これらに限定されない）と組み合わせて使用され得る。これらの薬剤は、局所投与され得るが、通常、全身投与される。
【００２６】
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を示すために含まれる。以下の実施例に開示される技術は、本発明の実施において良好に機能することが本発明者らによって発見された技術を提示し、従って、その実施のために好ましい様式からなるとみなされ得ることが、当業者によって理解されるべきである。しかし、当業者は、本開示を考慮して、開示される特定の実施形態において多くの変化がなされ得、そして依然として、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、同様または類似の結果を得ることを理解するはずである。
【実施例】
【００２７】
（実施例１  ２−（８−ブロモ−ベンゾ−［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン−４−イル）イミダゾリン塩酸塩についての合成スキーム）
本発明の化合物の実施例は、スキーム１によって記載される合成経路によって調製され得る。簡単にいえば、市販のビスエタノールエーテルを、有機塩基（好ましくは、ピリジン）の存在下で、塩化メチレンのような溶媒中で、塩化チオニルで処理して、２を形成する。ハロゲン化エーテル２を、塩化亜鉛のようなルイス酸の存在下で、酢酸のようば溶媒中で、臭素を使用して臭素化し、化合物３を得る。この二臭化物を、−４０から０℃の温度に維持されたジオキサンまたはテトラヒドロフランのような溶媒中で、ｎ−ブチルリチウムで環化して、４にする。塩化第二スズの存在下で、塩化メチレンのような不活性溶媒中での、ジクロロメチルメチルエーテルでのホルミル化によって、５を得る。このアルデヒドの、エタノールまたはイソプロピルアルコールのような溶媒中での臭化水素酸ナトリウムでの還元により、アルコール６を得る。このアルコールを、ピリジンの存在下で、塩化メチレンのような溶媒中で、塩化チオニルで処理することによって、塩化物７に転換する。７を、ＤＭＳＯのような溶媒中で、４０〜８０℃の温度でシアン化ナトリウムと反応させることによって、ニトリル８を形成する。このニトリルを、臭素と酢酸との混合物で、０〜２０℃の温度で臭素化して、化合物９を得る。このビスジヒドロフランを、ジオキサンのような溶媒中で、８０℃〜１３０℃の間の温度で、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）で還元して、化合物１０を得る。ニトリル１０を、エタノールおよびエーテルの溶液中で、塩化水素ガスで処理することにより、イミノエステル１１が得られる。このイミノエステルを、エタノール中でエチレンジアミンで環化し、そしてこの生成物を、塩化水素のエタノール溶液を使用して塩酸塩に転換して、イミダゾリンベンゾジフラン１２を得る。
【００２８】
【化６】
2005513103.tif 000004
（実施例２．２−（８−ブロモ−ベンゾ−［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン−４−イル）イミダゾリンヒドロクロリド）
２−（８−ブロモ−ベンゾ−［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン−４−イルイミダゾリンヒドロクロリドを、下記の多工程手順によって調製した。
【００２９】
（工程Ａ：１，４−ビス（２−クロロエトキシ）ベンゼン）
ビス（２−ヒドロキシエチル）ヒドロキノン（５０ｇ、０．２５ｍｏｌ）を、５００ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、そして０℃まで冷却し、ピリジン（４８ｍｌ、０．６ｍｏｌ）およびチオニルクロリド（４１ｍｌ、０．５８ｍｌ）を、温度が５℃を超えないように滴下した。この混合物を室温まで加温し、そして一晩撹拌した。溶媒の容量を、１５０ｍｌまで減らした。２ＮのＨＣｌ水溶液（１５０ｍｌ）をゆっくりと添加し、そして層を分離した。この水層を、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を、２ＮのＨＣｌ（１５０ｍｌ）および飽和ＮａＣｌ溶液（１５０ｍｌ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして白色固体になるまでエバポレートした。エタノールからの再結晶によって、白色固体（７３ｇ）を得た。ＣＩＭＳ  ｍ／ｚ  ２３６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３０】
（工程Ｂ：１，４−ビス（２−クロロエトキシ）−２，５−ジブロモベンゼン）
１，４−ビス（２−クロロエトキシ）ベンゼン（４０ｇ、０．１７ｍｏｌ）を、酢酸（４００ｍｌ）に懸濁し、そして塩化亜鉛（５６ｇ、０．４１ｍｏｌ）を添加した。酢酸（８０ｍｌ）に溶解した臭素（５７、０．３６ｍｏｌ）を、この懸濁液に、１．５時間かけて滴下した。この反応物を、室温で一晩撹拌し、この間に、沈殿物が形成された。この固体を濾過し、酢酸およびエタノールで洗浄し、そして乾燥した。結晶性の白色の生成物を得た（４５ｇ）、ＣＩＭＳ  ｍ／ｚ  ３９３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３１】
（工程Ｃ：２，３，６，７−テトラヒドロベンゾール［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン）
乾燥ＴＨＦ（３００ｍｌ）中の１，４−ビス（２−クロロエトキシ）−２，５−ジブロモベンゼン（１５ｇ、０．０３６ｍｏｌ）の溶液を、窒素下で０℃まで冷却した。ヘキサン中２．５Ｍのｎ−ブチルリチウムの溶液（３０ｍｌ、０．０７５ｍｏｌ）を、このよく撹拌した溶液に、非常に迅速に、シリンジを介して添加した。この反応混合物を、０℃で１０分間撹拌し、そして溶媒を減圧下で除去した。残渣を、エーテル（３００ｍｌ）と水（２００ｍｌ）との間で分配した。有機層を、水（２００ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、そして濾過した。この溶液を、固体が形成するまで、ロータリーエバポレーターでエバポレートした。この固体を濾過し、乾燥して、４．３ｇの２，３，６，７−テトラヒドロベンゾール［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフランを得た。ＣＩＭＳ  ｍ／ｚ  １６３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３２】
（工程Ｄ：４−ホルミル−２，３，６，７−テトラヒドロベンゾール［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン）
塩化スズ（ＩＶ）（１１．７ｍｌ、０．１ｍｏｌ）を、３００ｍｌの乾燥ＣＨ２Ｃｌ２中の２，３，６，７−テトラヒドロベンゾール［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン（１２．６ｇ、０．０７８ｍｏｌ）の溶液に、０℃、Ｎ２下で、シリンジを介して添加し、この混合物を、５分間撹拌した。２０ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２中のジクロロメチルメチルエーテル（７ｍｌ、０．０７８ｍｏｌ）を、この混合物に、１０分間かけて滴下した。この混合物を３０分間撹拌した後、この反応を、１００ｍｌの氷水を添加することによってクエンチした。水層を、ＣＨ２Ｃｌ２（２×１００ｍｌ）で抽出した。有機層を合わせ、そして得られた溶液を、３ＮのＨＣｌ（３×１５０ｍｌ）、Ｈ２Ｏ（２００ｍｌ）および飽和ＮａＣｌ溶液（２００ｍｌ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして白色固体になるまでエバポレートした。ＣＨ２Ｃｌ２−ヘキサンから再結晶して、１２．２ｇの生成物を、黄色の固体として得た。ＣＩＭＳ  ｍ／ｚ  １９１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３３】
（工程Ｅ：４−ヒドロキシメチル−２，３，６，７−テトラヒドロベンゾール［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン）
４０ｍｌの９０％  ＥｔＯＨ中のＮａＢＨ４（２ｇ、０．０５３ｍｏｌ）の溶液を、２００ｍｌのＥｔＯＨ中の４−ホルミル−２，３，６，７−テトラヒドロベンゾール［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン（１０ｇ、０．０５３ｍｏｌ）の溶液に滴下した。この溶液を、室温で３０分間撹拌し、そして６０℃で１０分間撹拌した。０℃まで冷却した後、１ＮのＨＣｌ（５ｍｌ）を添加し、そして溶媒をエバポレートした。酢酸エチル（８０ｍｌ）を、この残渣に添加し、そして得られた混合物を、Ｈ２Ｏ（５０ｍｌ）、飽和ＮａＣｌ溶液（５０ｍｌ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして残渣になるまでエバポレートした。この残渣を、シリカゲルのクロマトグラフィーにかけ、ヘキサン中３０％の酢酸エチルで溶出して、７．５ｇの４−ヒドロキシメチル−２，３，６，７−テトラヒドロベンゾール［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフランを、白色固体として得た。ＣＩＭＳ  ｍ／ｚ  １９３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３４】
（工程Ｆ：４−クロロメチル−２，３，６，７−テトラヒドロベンゾール［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン）
ピリジン（４ｍｌ、０．０５ｍｏｌ）を、５０ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２中の４−ヒドロキシメチル−２，３，６，７−テトラヒドロベンゾール［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン（４ｇ、０．０２１ｍｏｌ）の溶液に添加し、そしてこの混合物を、０℃まで冷却した。塩化チオニル（３．５ｍｌ、０．０４８ｍｏｌ）を、滴下した。この得られた混合物を、室温まで加温し、そして６時間撹拌した。冷却した後、この混合物を、１ＮのＮａＯＨ（２×５０ｍｌ）、飽和ＮａＣｌ溶液（１００ｍｌ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして残渣になるまでエバポレートした。この残渣を、シリカゲルのクロマトグラフィーにかけ、ヘキサン中１０％の酢酸エチルで溶出して、２．５ｇの生成物を、白色固体として得た。ＣＩＭＳ  ｍ／ｚ  ２１１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３５】
（工程Ｇ：４−アセトニトリル−２，３，６，７−テトラヒドロベンゾール［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン）
２０ｍｌのＤＭＳＯ中の４−クロロメチル−２，３，６，７−テトラヒドロベンゾール［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン（２ｇ、０．０１ｍｏｌ）を、２０ｍｌのＤＭＳＯ中のシアン化ナトリウム（０．７５ｇ、０．０１５ｍｏｌ）の溶液に、７０℃で滴下した。この混合物を、７０℃で４０分間撹拌した。冷却した後、５０ｍｌの氷水を添加した。形成した沈殿物を濾過し、水で洗浄し、そして乾燥して、白色固体８（１．４ｇ）を得た。ＣＩＭＳ  ｍ／ｚ  ２０２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３６】
（工程Ｈ：４−アセトニトリル−８−ブロモ−２，３，６，７−テトラヒドロベンゾール［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン）
１０ｍｌの酢酸中の臭素（１．１ｇ、０．００７ｍｏｌ）を、２０ｍｌの酢酸中の４−アセトニトリル−２，３，６，７−テトラヒドロベンゾール［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン（１．４ｇ、０．００７ｍｏｌ）の懸濁液に、１５℃で添加した。この混合物を、１５℃で１５分間撹拌した。形成した沈殿物を濾過し、酢酸およびエタノールで洗浄し、そして乾燥して、１．４ｇの生成物を白色固体として得た。ＣＩＭＳ  ｍ／ｚ  ２８１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３７】
（工程Ｉ：４−アセトニトリル−８−ブロモ−［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン）
７０ｍｌのジオキサン中のＤＤＱの溶液を、７０ｍｌのジオキサン中の４−アセトニトリル−８−ブロモ−２，３，６，７−テトラヒドロベンゾール［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン（１．４ｇ、０．００５ｍｏｌ）の溶液に滴下した。この混合物を、２４時間、還流状態で撹拌した。冷却した後、形成した沈殿物を濾過し、そしてジオキサンで洗浄した。濾液を、残渣になるまでエバポレートし、この残渣を、シリカゲルのクロマトグラフィーにかけ、ヘキサン中１０％の酢酸エチルで溶出して、０．６１ｇの１０を白色固体として得た。ＣＩＭＳ  ｍ／ｚ  ２７７（Ｍ＋Ｈ）＋。ｍｐ  １６９〜７０℃。
【００３８】
（工程Ｊ：エチル（８−ブロモ−［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン−４−イル）アセチミデートヒドロクロリド）
過剰の乾燥ＨＣｌガスを、５０ｍｌの無水エーテルおよび３ｍｌの無水エタノール中の４−アセトニトリル−８−ブロモ−［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン（０．６ｇ、０．００２２ｍｏｌ）の溶液に、０℃で通した。この得られた混合物を、０℃で１時間撹拌し、そして室温で一晩撹拌した。形成した白色固体を、濾過によって回収し、エーテルで洗浄し、乾燥して、生成物の白色結晶（０．６ｇ）を得た。ＥＳＭＳ  ｍ／ｚ  ３２３（Ｍ＋Ｈ）＋、ｍｐ  ２３９−２４０℃（分解）。
【００３９】
（工程Ｋ：２−（８−ブロモ−ベンゾ−［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン−４−イル）イミダゾリンヒドロクロリド）
無水エタノール（５ｍｌ）中のエチレンジアミン（０．８ｍｌ、０．０１２ｍｏｌ）の溶液を、無水エタノール（５０ｍｌ）中のエチル（８−ブロモ−［１，２−ｂ；４，５−ｂ’］ジフラン−４−イル）アセチミデートヒドロクロリド（０．５４ｇ、０．００１５ｍｏｌ）の懸濁液に、０℃で滴下した。得られた混合物を、０℃で１時間撹拌し、次いで、２０分間還流した。溶媒をエバポレートし、そして残渣を、２０ｍｌのエタノールに溶解した。エーテル中１ＮのＨＣｌの溶液を、上記溶液に添加し、ｐＨを３にし、そしてこの混合物を、室温で一晩撹拌した。形成した白色固体（０．４ｇ）を濾過し、乾燥し、そしてＭｅＯＨ／エーテルから再結晶して、生成物（０．３２ｇ）を得た。ＡＰＣＩＭＳ  ｍ／ｚ  ３２０（Ｍ＋Ｈ）＋，ｍｐ  ２６４−２６５℃（分解）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）  ８．２１−８．１９（ｓ，２Ｈ），７．４３（ｓ，１Ｈ）、７．０８（ｓ，１Ｈ），４．４７（ｓ，２Ｈ），３．８３（ｓ，４Ｈ），３．３２（ｓ，２Ｈ），１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）  １６８．１０（Ｃ），１４９．４５（Ｃ），１４８．４９（Ｃ），１４７．９９（ＣＨ），１４７．６３（ＣＨ），１２６．２６（Ｃ），１２６．１３（Ｃ），１０６．６４（ＣＨ），１０６．５３（ＣＨ），１０６．２４（Ｃ），９３．４０（Ｃ），４４．２４（ＣＨ２），２４．１５（ＣＨ２）。分析（Ｃ１４Ｈ１１ＢｒＮ２Ｏ２・ＨＣｌ）；計算値：Ｃ，４７．２９％；Ｈ，３．４０％；Ｎ，７．８７％；実測値：Ｃ，４７．０５％；Ｈ，３．５６％；Ｎ，７．９８％。
【００４０】
（実施例３．５−ＨＴ２レセプター結合アッセイ）
５−ＨＴ２レセプターにおけるセロトニン作用性化合物の相対親和性を決定するために、脳５−ＨＴ２レセプターに対するアゴニストの放射性リガンド［１２５Ｉ］ＤＯＩの結合について競合する能力を、わずかに変更を加えた文献の手順（Ｊｏｈｎｓｏｎら、１９８７）を用いて、以下に記載されるようにして決定する。５０ｍＭのＴｒｉｓＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．４）中に分散させた死亡後のラットの大脳皮質ホモジネートのアリコート（４００μｌ）を、メチオセピン（ｍｅｔｈｉｏｔｈｅｐｉｎ）（最終１０μＭ）の非存在下および存在下で、［１２５Ｉ］ＤＯＩ（最終８０ｐＭ）と共にインキュベートして、それぞれ、全結合および非特異的結合を、０．５ｍｌの全容量において規定する。このアッセイ混合物を、２３℃で１時間、ポリプロピレンチューブ中でインキュベートし、そしてこのアッセイを、氷冷緩衝液を使用して０．３％のポリエチレンイミン中に予め浸漬したＷｈａｔｍａｎ  ＧＦ／Ｂガラス繊維フィルターで迅速に真空濾過することによって、終結させる。試験化合物（異なる濃度）を、メチオセピンと置換した。フィルターに結合した放射能を、ベータカウンターでシンチレーション分光法によって決定する。このデータを、非線形反復性曲線あてはめコンピュータープログファム（Ｂｏｗｅｎら、１９９５）を使用して分析して、化合物の親和性パラメーターを決定する。最大値の５０％だけ［１２５Ｉ］ＤＯＩ結合を阻害するのに必要な化合物の濃度を、ＩＣ５０値またはＫｉ値と呼ぶ。化合物は、そのＩＣ５０値またはＫｉ値が、５０ｎＭ以下である場合、５−ＨＴ２レセプターに対して高い親和性を有するとみなされる。
【００４１】
（実施例４  ５−ＨＴ２機能的アッセイ：ホスホイノシチド（ＰＩ）ターンオーバーアッセイ）
５−ＨＴ２レセプターにおけるセロトニン作用性化合物の相対的アゴニスト活性を、酵素ホスホリパーゼＣを活性化するそれらの能力によって、化合物が［３Ｈ］ｍｙｏ−イノシトール標識したＡ７ｒ５ラット血管平滑筋細胞における［３Ｈ］イノシトールリン酸の産生を刺激する能力を使用して、インビトロで決定し得る。これらの細胞を、培養プレート中で増殖させ、５％  ＣＯ２および９５％空気の加湿雰囲気中で維持し、そして４．５ｇ／１グルコースを含み、２ｍＭグルタミン、１０μｇ／ｍｌゲンタマイシンおよび１０％ウシ胎仔血清を補充したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）で、週に２回供給する。ホスホイノシチド（ＰＩ）ターンオーバー実験を実施するために、Ａ７ｒ５細胞を、以前に記載されたように（Ｇｒｉｆｆｉｎら、１９９８）、２４ウェルプレート中で培養する。コンフルエントの細胞を、０．５ｍｌの無血清培地中の１．５μＣｉ［３Ｈ］−ｍｙｏ−イノシトール（１８．３Ｃｉ／ｍｍｏｌ）に、２４〜３０時間曝露する。次いで、細胞を、１０ｍＭ  ＬｉＣｌを含むＤＭＥＭ／Ｆ−１２で１回リンスし、その後、試験因子（またはコントロールとしての溶媒）と共に、１．０ｍｌの同じ培地中で、３７℃で１時間インキュベートし、その後、この培地を吸引し、そして１ｍｌの冷０．１Ｍ蟻酸を添加して、反応を停止させる。ＡＧ−１−Ｘ８カラムでの［３Ｈ］−イノシトールリン酸（［３Ｈ］−ＩＰ）のクロマトグラフィー分離を、Ｈ２Ｏおよび５０ｍＭ  蟻酸アンモニウムでの連続洗浄、その後の０．１Ｍ蟻酸を含む１．２Ｍ蟻酸アンモニウムでの、総［３Ｈ］−ＩＰ画分の溶出を用いて、以前に記載されたように（Ｇｒｉｆｆｉｎら、１９９８）実施する。溶離液（４ｍｌ）を収集し、１５ｍｌのシンチレーション流体と混合し、そして総［３Ｈ］−ＩＰを、βカウンターでのシンチレーション計数によって決定する。濃度応答データを、Ｏｒｉｇｉｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｇｒａｐｈｉｃｓソフトウェア（Ｍｉｃｒｏｃａｌ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｎｏｒｔｈａｍｐｔｏｎ，ＭＡ）のＳ字適合関数（ｓｉｇｍｏｉｄａｌ  ｆｉｔ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ）によって分析して、アゴニストの効力（ｐｏｔｅｎｃｙ）（ＥＣ５０値）および有効性（ｅｆｆｉｃａｃｙ）（Ｅｍａｘ）を決定する。セロトニン（５−ＨＴ）を、ポジティブコントロール（標準）アゴニスト化合物として使用し、試験化合物の有効性を、５−ＨＴの有効性（１００％に設定）と比較する。［３Ｈ］−ＩＰの産生を、最大応答の５０％だけ刺激するのに必要な化合物の濃度を、ＥＣ５０値と称する。化合物は、この機能的アッセイにおけるそのＥＣ５０値が＜１μＭである場合、強力なアゴニストであるとみなされ、そしてその有効性が５−ＨＴの有効性の＞８０％である場合、完全なアゴニストとみなされる。
【００４２】
上記手順を使用して、表１に示されるデータを生じた。
【００４３】
（表１．５−ＨＴ２レセプター結合および機能的データ）
【００４４】
【表１】
2005513103.tif 000005
（実施例５  意識のあるカニクイザルのレーザー照射した（高血圧の）眼における、急性ＩＯＰ応答）
眼内圧（ＩＯＰ）は、０．１％プロパラカインを用いた軽い角膜麻酔後に、Ａｌｃｏｎ  Ｐｎｅｕｍａｔｏｎｏｍｅｔｅｒを用いて決定され得る。眼を、各測定後に、生理食塩水で洗浄する。ベースラインＩＯＰの測定後、１つの３０μＬアリコート中の試験化合物を、９匹のカニクイザルの右眼だけに注入する。ビヒクルを、６匹のさらなる動物の右眼に注入する。引き続くＩＯＰ測定値を、１時間、３時間および６時間にて取得する。
【００４５】
（実施例６  ５−ＨＴ１Ａレセプター結合アッセイ）
５−ＨＴ１Ａ結合研究を、リガンドとして（３Ｈ）８−ＯＨ  ＤＰＡＴを使用して、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞において発現された、クローニングされたヒトレセプターを用いて実施した。クローニングされた５−ＨＴ１Ａレセプターを発現するチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）由来の膜（ＮＥＮについて、Ｂｉｏｓｉｇｎａｌ，Ｉｎｃ．，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｃａｎａｄａによって製造された）を、約４０容積の５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）中で、５秒間ホモジナイズした。薬物希釈を、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００ロボット（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＣＡ）を使用して作製した。インキュベーションを、同じ緩衝液中の膜プレップ、試験化合物および０．２５ｎＭ  ［３Ｈ］８−ＯＨ−ＤＰＡＴ（ＮＥＮ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）と共に、２７℃で１時間実施した。アッセイを、０．３％ポリエチレンイミン中に予め浸漬されたＷｈａｔｍａｎ  ＧＦ／Ｂガラスファイバーフィルタでの、迅速減圧濾過によって終了した。結合した放射活性を、液体シンチレーション分光法を使用して測定した。データを、非線形極性適合プログラム（Ｓｈａｒｉｆら、１９９９）を使用して分析した。
【００４６】
リガンド結合研究もまた、ウシおよびラットの脳（局所的供給源）およびヒト皮質膜由来の膜調製物を使用して行い得る。特定の脳領域を切り出し、１０容積の０．３２Ｍスクロース中でホモジナイズし、そして７００×ｇで１０分間遠心分離した。得られた上清を、４３，５００×ｇで１０分間遠心分離し、そしてペレットを、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．７，２５℃）中に、１０秒間のポリトロン処理を用いて再懸濁した。アリコートを、−１４０℃で保存した。内因性セロトニンを除去するため、これらのプレップを、実験前に３７℃で１０分間インキュベートした。アッセイインキュベーションを、Ｂｒａｎｄｅｌ細胞回収機を使用して、Ｗｈａｔｍａｎ  ＧＦ／Ｃフィルタでの迅速濾過によって終了した。Ｋｉ値を、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ等式（Ｄｅ  Ｖｒｙら、１９９８）を使用して計算した。
【００４７】
（実施例７  ５−ＨＴ１Ａ機能的アッセイ）
本発明の化合物の機能を、５−ＨＴ１Ａアゴニストの機能的活性を評価するための種々の方法を使用して、決定し得る。１つのこのようなアッセイは、雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット由来の海馬スライスを使用して実施されて、フォルスコリン刺激アデニル酸シクラーゼの阻害を測定する（Ｌｏｐｅｚ−Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚら、１９９９；Ｍｏｒｉｎら、１９９１；Ｄｅ  Ｖｒｙら、１９９８）。ラット海馬膜を、２５容積の０．３Ｍスクロース（１ｍＭ  ＥＧＴＡ，５ｍＭ  ＥＤＴＡ，５ｍＭ  ジチオトレイトールおよび２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）を含む）中でホモジナイズした。このホモジネートを、１，０００×ｇで１０分間遠心分離した。その上清を、引き続き、３９，０００×ｇで１０分間遠心分離した。得られたペレットを、ホモジナイゼーション緩衝液中に、約１ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度で再懸濁し、そしてアリコートを、−１４０℃で保存した。使用前に、膜を、Ｐｏｔｔｅｒ−Ｅｌｖｅｈｊｅｍホモジナイザーを用いて、再ホモジナイズした。５０μｌの膜懸濁物（５０μｇタンパク質）を、１００ｍＭ  ＮａＣｌ，２ｍＭ  酢酸マグネシウム，０．２ｍＭ  ＡＴＰ，１ｍＭ  ｃＡＭＰ，０．０１ｍＭ  ＧＴＰ，０．０１ｍＭ  フォルスコリン，８０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，５ｍＭ  クレアチンリン酸，０．８Ｕ／μｌ  クレアチンホスホキナーゼ，０．１ｍＭ  ＩＢＭＸ，１〜２μＣｉ  α−［３２Ｐ］ＡＴＰを含むインキュベーション緩衝液に添加した。試験化合物とのインキュベーション（３０℃で１０分間）を、インキュベーション混合物（３０℃で５分間予め温めた）への膜溶液の添加によって開始した。［３２Ｐ］ｃＡＭＰを、Ｓａｌｏｍｏｎ（Ｓａｌｏｍｏｎ  １９７９）の方法に従って測定した。タンパク質を、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイ（Ｂｒａｄｆｏｒｄ  １９７６）を使用して測定した。
【００４８】
機能的活性もまた、Ｓｃｈｏｅｆｆｔｅｒら（１９９７）の方法に従って、組換えヒトレセプターにおいて決定し得る。組換えヒト５−ＨＴ１ＡレセプターでトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞を、２４ウェルプレート中でコンフルエントまで増殖させた。細胞を、１ｍｌのＨｅｐｅｓ緩衝化生理食塩水（ｍＭで）ＮａＣｌ  １３０，ＫＣｌ  ５．４，ＣａＣｌ２，１．８，ＭｇＳＯ４  ０．８，ＮａＨ２ＰＯ４  ０．９，グルコース  ２５，Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．４）２０およびフェノールレッド５ｍｇ／１で、リンスした。これらの細胞を、０．５ｍｌの生理食塩水中６μＣｉ／ｍｌの［３Ｈ］アデニン（２３Ｃｉ／ｍｍｏｌ，Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ｒａｈｎ  ＡＧ，Ｚｕｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）で、３７℃で２時間標識した。これらのプレートを、引き続いて、１ｍｌの緩衝化生理食塩水（１ｍＭ  イソブチルメチルキサンチンを含む）で２回リンスした。これらの細胞を、１０μＭのフォルスコリンおよび試験化合物の存在下または非存在下で、この溶液１ｍｌ（３７℃）中で１５分間インキュベートした。次いで、この緩衝液を除去し、そして１ｍｌの５％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）（０．１ｍＭ  ｃＡＭＰおよび０．１ｍＭ  ＡＴＰを含む）を添加して、サンプルを抽出した。４℃での３０分間の後、ＴＣＡ抽出物を、Ｄｏｗｅｘ  ＡＧ  ５０Ｗ−Ｘ４カラムおよびアルミナカラムでのクロマトグラフィーによる分離に供した（Ｓａｌｏｍｏｎ  １９９１）。サイクリックＡＭＰ生成を、比［３Ｈ］ｃＡＭＰ／（［３Ｈ］ｃＡＭＰ＋［３Ｈ］ＡＴＰ）として計算した。
【００４９】
（表２．５−ＨＴ１Ａレセプターの結合および機能的データ）
【００５０】
【表２】
2005513103.tif 000006
（実施例８  α−２アドレナリン作用性レセプターアッセイ法）
（細胞培養）α−２Ａアッセイについて、ＨＴ２９ヒトクローン性腺癌細胞を、１０％（ｖ／ｖ）熱不活化ウシ胎仔血清を補充されたＭｃＣｏｙ’ｓ  ５Ａ  Ｍｅｄｉｕｍ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ中で、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気下で増殖させた。細胞を、４８ウェルプレートにおいて、０．５％トリプシン／５．３ｍＭ  ＥＤＴＡと共に継代培養し、約４日でコンフルエントに達した。増殖培地を、栄養の消耗を回避するために、コンフルエントな細胞のアッセイの２４時間前に、新鮮な培地で置換した。
【００５１】
（サイクリックＡＭＰ機能的アッセイ）ＨＴ２９細胞のコンフルエント培養物を、０．５ｍｌの１５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ緩衝化ＤＭＥＭ（ＤＭＥＭ／Ｆ１２）で２回洗浄し、次いで、０．２５ｍＭ  ３−イソブチル−１−メチル−キサンチン（ＩＢＭＸ）を含む０．５ｍｌのＤＭＥＭ／Ｆ１２と共に、２０分間インキュベートした。この期間の終了時に、適切な連続希釈されたα２−アドレナリン作用性アゴニストを添加し、そして細胞をさらに１０分間インキュベートした。次いで、適切な濃度のフォルスコリン（ＨＴ２９細胞について、４μＭ）を添加し、細胞を、さらに１０分間インキュベートした。このインキュベーション期間の終了時に、培地を吸引し、そして１５０μｌの０．１Ｍ  酢酸（ｐＨ３．５）を添加した。これらのプレートを、４℃で２０分間インキュベートした。次いで、２２０μｌの０．１Ｍ  酢酸ナトリウム（ｐＨ  １１．５〜１２）を添加した。これらのプレートを、−２０℃で保存した。この後、市販のｃＡＭＰ  ＥＬＩＳＡキットを使用して、レセプターアッセイにおいて生じたｃＡＭＰの量を定量した。これら全てのα−２レセプターアッセイにおいて、ｃＡＭＰ生成の阻害は、レセプター媒介性プロセスを反映した。
【００５２】
（表３．α２Ａレセプターの結合および機能的データ）
【００５３】
【表３】
2005513103.tif 000007
本明細書中に開示および特許請求される組成物および／または方法の全てが、本開示を鑑みて、過度の実験を伴わずに作製され得、そして実行される。本発明の組成物および方法を、好ましい実施形態に関して記載してきたが、本発明の概念、精神および範囲から逸脱することなしに、本明細書中に記載される組成物および／または方法に対して、そして本明細書中に記載される方法の工程もしくは一連の工程において、改変が適用され得ることが、当業者に明らかである。より具体的には、化学的かつ構造的に関連する特定の薬剤が、同様の結果を達成するために、本明細書中に記載される薬剤を置換し得ることが、明らかである。当業者に明らかな全てのこのような置換および改変は、添付の特許請求の範囲によって規定されるような、本発明の精神、範囲および概念に包含されると考えられる。
【００５４】
（参考文献）
以下の参考文献は、これらが例示的な手順または本明細書中に示されるこれらに対して補充的な他の詳細を提供する範囲で、本明細書中に特に参考として援用される。
【００５５】
【表４】
2005513103.tif 000008
【００５６】
【表５】
2005513103.tif 000009
【国際調査報告】
2005513103.tif 000013