(57)【要約】皮膚の色素産生細胞（ケラチノサイトおよび／またはメラノサイト）によるメラニンの産生を刺激する方法、特にヒトにおいて皮膚の日焼けを誘導する方法は、α‐ＭＳＨまたはα‐ＭＳＨ類似体を投与して、皮膚を紫外線照射に曝すことを含んでなる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物において外皮メラノサイトを刺激する方法であって、
（ｉ）皮膚または他の表皮組織中のメラノサイトを刺激するために有効な量のα‐ＭＳＨまたはα‐ＭＳＨ類似体を哺乳動物に投与する工程、および
（ii）該皮膚または他の表皮組織を紫外線（ＵＶ）照射に曝す工程
を含んでなる、方法。
【請求項２】
哺乳動物においてメラニン産生を刺激する方法であって、
（ｉ）皮膚または他の表皮組織中でのメラニン産生を刺激するために有効な量のα‐ＭＳＨまたはα‐ＭＳＨ類似体を哺乳動物に投与する工程、および
（ii）該皮膚または他の表皮組織を紫外線（ＵＶ）照射に曝す工程
を含んでなる、方法。
【請求項３】
哺乳動物において日焼けを誘導する方法であって、
（ｉ）皮膚または他の表皮組織における日焼けを誘導するために有効な量のα‐ＭＳＨまたはα‐ＭＳＨ類似体を哺乳動物に投与する工程、および
（ii）該皮膚または他の表皮組織を紫外線（ＵＶ）照射に曝す工程
を含んでなる、方法。
【請求項４】
哺乳動物がヒトである、請求項１、２または３に記載の方法。
【請求項５】
ヒトにおいて皮膚の日焼けを誘導する方法であって、
（ｉ）皮膚または他の表皮組織における日焼けを誘導するために有効な量のα‐ＭＳＨまたはα‐ＭＳＨ類似体をヒトに投与する工程、および
（ii）該皮膚または他の表皮組織を紫外線（ＵＶ）照射に曝す工程
を含んでなる、方法。
【請求項６】
α‐ＭＳＨ類似体が下記式の化合物である、請求項１、２、３または５に記載の方法：
Ｒ１‐Ｗ‐Ｘ‐Ｙ‐Ｚ‐Ｒ２
〔上記式中、
Ｒ１は、Ａｃ‐Ｇｌｙ‐、Ａｃ‐Ｍｅｔ‐Ｇｌｕ‐、Ａｃ‐Ｎｌｅ‐Ｇｌｕ‐、およびＡｃ‐Ｔｙｒ‐Ｇｌｕ‐からなる群より選択され、
Ｗは、‐Ｈｉｓ‐および‐Ｄ‐Ｈｉｓ‐からなる群より選択され、
Ｘは、‐Ｐｈｅ‐、‐Ｄ‐Ｐｈｅ‐、‐Ｔｙｒ‐、‐Ｄ‐Ｔｙｒ‐、および‐（ｐＮＯ２）Ｄ‐Ｐｈｅ７‐からなる群より選択され、
Ｙは、‐Ａｒｇ‐および‐Ｄ‐Ａｒｇ‐からなる群より選択され、
Ｚは、‐Ｔｒｐ‐および‐Ｄ‐Ｔｒｐ‐からなる群より選択され、
Ｒ２は、‐ＮＨ２、‐Ｇｌｙ‐ＮＨ２、および‐Ｇｌｙ‐Ｌｙｓ‐ＮＨ２からなる群より選択される〕。
【請求項７】
α‐ＭＳＨ類似体が、
〔Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ、
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ、
〔Ｄ‐Ｓｅｒ１，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ、
〔Ｄ‐Ｔｙｒ２，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ、
〔Ｄ‐Ｓｅｒ３，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ、
〔Ｄ‐Ｍｅｔ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ、
〔Ｄ‐Ｇｌｕ５，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ、
〔Ｄ‐Ｈｉｓ６，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ、
〔Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ａｒｇ８〕‐α‐ＭＳＨ、
〔Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ｔｒｐ９〕‐α‐ＭＳＨ、
〔Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ｌｙｓ１１〕‐α‐ＭＳＨ、
〔Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ｐｒｏ１２〕‐α‐ＭＳＨ、
〔Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ｖａｌ１３〕‐α‐ＭＳＨ、
〔Ｄ‐Ｓｅｒ１，Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ、
〔Ｄ‐Ｔｙｒ２，Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ、
〔Ｄ‐Ｓｅｒ３，Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ、
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｇｌｕ５，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ、
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｈｉｓ６，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ、
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ａｒｇ８〕‐α‐ＭＳＨ、
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ｔｒｐ９〕‐α‐ＭＳＨ、
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ｌｙｓ１１〕‐α‐ＭＳＨ、
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ｐｒｏ１２〕‐α‐ＭＳＨ、
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ｖａｌ１３〕‐α‐ＭＳＨ、
ｃ〔Ｃｙｓ４，Ｃｙｓ１０〕‐α‐ＭＳＨ、
ｃ〔Ｃｙｓ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｃｙｓ１０〕‐α‐ＭＳＨ、
ｃ〔Ｃｙｓ４，Ｃｙｓ１１〕‐α‐ＭＳＨ、
ｃ〔Ｃｙｓ５，Ｃｙｓ１０〕‐α‐ＭＳＨ、
ｃ〔Ｃｙｓ５，Ｃｙｓ１１〕‐α‐ＭＳＨ、
ｃ〔Ｃｙｓ４，Ｃｙｓ１０〕‐α‐ＭＳＨ４‐１３、
ｃ〔Ｃｙｓ４，Ｃｙｓ１０〕‐α‐ＭＳＨ４‐１２、
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐１０、
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１、
〔Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ５‐１１、
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｔｙｒ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１、
〔（ｐＮＯ２）Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１、
〔Ｔｙｒ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐１０、
〔Ｔｙｒ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１、
〔Ｎｌｅ４〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１、
〔Ｎｌｅ４，（ｐＮＯ２）Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１、
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｈｉｓ６〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１、
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｈｉｓ６，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１、
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ａｒｇ８〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１、
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｔｒｐ９〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１、
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ｔｒｐ９〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１、
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐９、および
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ｔｒｐ９〕‐α‐ＭＳＨ４‐９
からなる群より選択される化合物である、請求項１、２、３または５に記載の方法。
【請求項８】
α‐ＭＳＨ類似体が、
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ、
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐１０、
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１、
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ｔｒｐ９〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１、および
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐９
からなる群より選択される化合物である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
α‐ＭＳＨ類似体が〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ＵＶ照射へ曝露する工程が、α‐ＭＳＨまたはα‐ＭＳＨ類似体を投与する工程の後に行われる、請求項１、２、３または５に記載の方法。
【請求項１１】
投与が、経口、非経口または経皮投与である、請求項１、２、３または５に記載の方法。
【請求項１２】
紫外線（ＵＶ）照射が、ＵＶ‐Ｂ照射からなるか、またはそれを含んでなる、請求項１、２、３または５に記載の方法。
【請求項１３】
哺乳動物において外皮メラノサイトを刺激する方法におけるα‐ＭＳＨまたはα‐ＭＳＨ類似体の使用であって、
（ｉ）皮膚または他の表皮組織中のメラノサイトを刺激するために有効な量のα‐ＭＳＨまたはα‐ＭＳＨ類似体を哺乳動物に投与する工程、および
（ii）該皮膚または他の表皮組織を紫外線（ＵＶ）照射に曝す工程
を含んでなる、使用。
【請求項１４】
哺乳動物においてメラニン産生を刺激する方法におけるα‐ＭＳＨまたはα‐ＭＳＨ類似体の使用であって、
（ｉ）皮膚または他の表皮組織中でのメラニン産生を刺激するために有効な量のα‐ＭＳＨまたはα‐ＭＳＨ類似体を哺乳動物に投与する工程、および
（ii）該皮膚または他の表皮組織を紫外線（ＵＶ）照射に曝す工程
を含んでなる、使用。
【請求項１５】
哺乳動物において日焼けを誘導する方法におけるα‐ＭＳＨまたはα‐ＭＳＨ類似体の使用であって、
（ｉ）皮膚または他の表皮組織における日焼けを誘導するために有効な量のα‐ＭＳＨまたはα‐ＭＳＨ類似体を哺乳動物に投与する工程、および
（ii）該皮膚または他の表皮組織を紫外線（ＵＶ）照射に曝す工程
を含んでなる、使用。
【請求項１６】
哺乳動物がヒトである、請求項１、２または３に記載の使用。
【請求項１７】
ヒトにおいて皮膚の日焼けを誘導する方法におけるα‐ＭＳＨまたはα‐ＭＳＨ類似体の使用であって、
（ｉ）皮膚または他の表皮組織における日焼けを誘導するために有効な量のα‐ＭＳＨまたはα‐ＭＳＨ類似体をヒトに投与する工程、および
（ii）該皮膚または他の表皮組織を紫外線（ＵＶ）照射に曝す工程
を含んでなる、使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
本発明に至る研究のための資金の一部は、米国立衛生研究所（ＮＩＨ）から提供されたものである。従って、米国政府は、本明細書に記載された発明について一定の権利を有している。
【０００２】
発明の分野
本発明は、広く、皮膚の色素産生細胞（ケラチノサイトおよび／またはメラノサイト）によるメラニンの産生を刺激する方法、特にヒトにおける皮膚の日焼けを誘導する方法に関する。
【０００３】
背景技術
メラノコルチン類（メラノトロピンとも称されている）には、表皮でメラノコルチン１レセプター（ＭＣ１Ｒ）との相互作用により色素形成を誘導するペプチドホルモン群が含まれる１。非ヒト動物の一部で下垂体の中間部から放出され、また、ヒト皮膚でＵＶ‐Ｂ曝露ケラチノサイトから放出される一次色素ホルモンが、αメラノサイト刺激ホルモン（α‐ＭＳＨ）である１。この１３アミノ酸ペプチドは、ＭＣ１Ｒと結合して、ＤＯＰＡ前駆体からメラニンポリマーの合成に至るサイクリックＡＭＰ媒介シグナル伝達を誘導する１。２つのタイプのメラニンがヒトで発現されうる。褐色様‐黒色色素のユーメラニンは、日光によるダメージからの保護を誘導すると考えられており、一方で、赤色様の含イオウ色素であるフェオメラニンは、日光への日焼け応答をあまり示さない白色人種で多く発現される２。Fitzpatrickスケール３でタイプ１〜２に分類され、日焼けしにくく火傷しやすいこれらの人種は、ＭＣ１Ｒ遺伝子４に欠損を有していることがあり、通常、皮膚癌を生じるリスクが大きいと考えられている５，６。
【０００４】
α‐ＭＳＨの非常に強力な誘導体であるメラノタン‐１（Ｎｌｅ４‐Ｄ‐Ｐｈｅ７‐αＭＳＨ）は、このような日焼けしにくい皮膚タイプのヒトボランティアで日焼けを誘導することができ、一方で、特に日焼けしやすい皮膚タイプ（Fitzpatrickスケール３‐４）７の被験者で日焼けを誘導しうることが既に報告されている７。メラノタン‐１（ＭＴ‐１）は２つのアミノ酸置換を有しており、カエル皮膚バイオアッセイ８のような実験系または培養ヒトケラチノサイト８において色素形成を誘導する上で、天然ホルモンよりも約１００〜１０００倍強力である。ヒトの場合、ＭＴ‐１は、その日焼け効果において、主に皮膚中でのユーメラニン合成を誘導する９。メラノトロピン類は免疫学的変化をもたらすと考えられてきたが１０‐１２、日焼けに必要な用量よりも多く投与されないかぎり、すべての先行試験において顔面潮紅および一過性ＧＩ不調のような最少限の副作用が報告されているにすぎない１３。
【０００５】
米国特許第４，４５７，８６４号明細書（１９８４年７月３日発行）には、Ｎｌｅ４‐Ｄ‐Ｐｈｅ７‐αＭＳＨを含めたα‐ＭＳＨのアナログが開示されている。α‐ＭＳＨの環状アナログは、米国特許第４，４８５，０３９号明細書（１９８４年１１月２７日発行）に開示されている。外皮メラノサイトによるメラニンの産生を刺激するための、α‐ＭＳＨのこれらのアナログおよび他のアナログの使用は、オーストラリア特許第５９７６３０号明細書（１９８７年１月２３日付）、ならびに米国特許第４，８６６，０３８号明細書（１９８９年９月１２日発行）、同４，９１８，０５５号明細書（１９９０年４月１７日発行）および同５，０４９，５４７号明細書（１９９１年９月１７日発行）に開示されている。オーストラリア特許第６１８７３３号明細書（１９８８年５月２０日付）、ならびに米国特許第５，６７４，８３９号明細書（１９９７年１０月７日発行）および同５，７１４，５７６号明細書（１９９８年２月３日発行）には、別の直鎖状および環状α‐ＭＳＨフラグメントアナログ、ならびにメラノサイトを刺激するためのこれら生物活性アナログの使用について開示されている。発行されたこれらすべてのオーストラリア特許明細書および米国特許明細書の内容は、参照により本明細書の一部とされる（参考文献２５，２６も参照）。
【０００６】
ＭＴ‐１に関して先に報告された臨床試験のすべては、日光を避け、ＳＰＦ３０の日焼け止め剤をすべての露光皮膚部位へ塗布するように指示されたヒトボランティアについて行われた７，９，１３。従って、日光または人工ＵＶ照射と組み合わされたＭＴ‐１のヒトにおける効果は、試験または報告されていない。
【０００７】
本発明へ至るまでの研究において、本発明者らは、直射日光またはソラーシミュレーターから放射される少量のＵＶ‐ＢとＭＴ‐１とを組み合わせて、ヒトボランティアで臨床試験を行った。これら研究の目的は、ヒトの皮膚の日焼けに関してＭＴ‐１の効果を試験すること、特に、皮膚のＵＶ‐Ｂ応答において追加の色素形成または変化の証拠があるか否かを日焼け細胞の存在により測定してみることであった。加えて、ＭＴ‐１を与えられた患者群では、免疫状態に関するＭＴ‐１の効果を評価するために、１７種の異なるＢおよびＴリンパ球群について詳細な分析を行なった。
【０００８】
これら臨床試験の結果として、本発明者らは、ＭＴ‐１のようなメラニン産生ペプチドおよびＵＶの併用が、予想外のレベルの皮膚日焼けおよび色素形成の長期継続をもたらすことを見出した。従って、本発明による方法によれば、露光による皮膚色素形成の向上、外見上明白な皮膚日焼けに必要な露光量の減少、光防御皮膚日焼け形成の安全な促進、および露光部位で長期ユーメラニン発現の即時誘導による日光性皮膚ダメージの減少をもたらすことが可能となる。
【発明の概要】
【０００９】
この明細書で参照番号により示された文献の詳細な目録は、明細書の最後に一括して記載されている。
【００１０】
本明細書の全体を通して、前後関係から他の意味に解されないかぎり、「含んでなる」という用語、または他の類似バリエーションは、言及された整数もしくは工程または整数もしくは工程の群を含むが、他の整数もしくは工程または整数もしくは工程の群を除外するわけではないものと理解される。
【００１１】
本明細書に記載された発明について、具体的に記載されたもの以外のバリエーションおよび改変を加えてもよいことは、当業者に明らかであろう。本発明はこのようなすべてのバリエーションおよび改変を含み、本発明は、個別にまたは包括的に、本明細書で言及または記載されたすべての工程、特徴、組成物および化合物のすべて、およびその工程または特徴のあらゆるすべてのまたはいずれか２以上の組合せも含んでいる、と理解される。
【００１２】
本発明の一つの態様によれば、哺乳動物において外皮メラノサイトを刺激する方法が提供され、該方法は、
（ｉ）皮膚または他の表皮組織中のメラノサイトを刺激するために有効な量のα‐ＭＳＨまたはα‐ＭＳＨ類似体を哺乳動物に投与する工程、および
（ii）該皮膚または他の表皮組織を紫外線（ＵＶ）照射に曝す工程
を含んでなる。
【００１３】
本発明の他の態様によれば、哺乳動物においてメラニン産生を刺激する方法が提供され、該方法は、
（ｉ）皮膚または他の表皮組織中でのメラニン産生を刺激するために有効な量のα‐ＭＳＨまたはα‐ＭＳＨ類似体を哺乳動物に投与する工程、および
（ii）該皮膚または他の表皮組織を紫外線（ＵＶ）照射に曝す工程
を含んでなる。
【００１４】
本発明の他の態様によれば、哺乳動物において日焼けを誘導する方法が提供され、該方法は、
（ｉ）皮膚または他の表皮組織における日焼けを誘導するために有効な量のα‐ＭＳＨまたはα‐ＭＳＨ類似体を哺乳動物に投与する工程、および
（ii）該皮膚または他の表皮組織を紫外線（ＵＶ）照射に曝す工程
を含んでなる。
【００１５】
本発明は、哺乳動物において外皮メラノサイトを刺激する方法、より具体的にはメラニン産生を刺激する方法、さらに具体的には哺乳動物において日焼けを誘導する方法における、α‐ＭＳＨまたはα‐ＭＳＨ類似体の使用をも包含する。この態様において、本発明は、特に、ヒトにおいて皮膚の日焼けを誘導する方法における、α‐ＭＳＨまたはα‐ＭＳＨ類似体の使用をも包含する。
【発明の具体的説明】
【００１６】
上述のように、本発明によれば、哺乳動物において外皮メラノサイトを刺激する方法が提供され、該方法は、
（ｉ）皮膚または他の表皮組織中のメラノサイトを刺激するために有効な量のα‐ＭＳＨまたはα‐ＭＳＨ類似体を哺乳動物に投与する工程、および
（ii）該皮膚または他の表皮組織を紫外線（ＵＶ）照射に曝す工程
を含んでなる。
【００１７】
本発明は、哺乳動物においてメラニン産生を刺激する方法をも包含する。好ましくは、哺乳動物はヒトであるが、しかしながら本発明による方法は、例えば外皮（毛）の色を変えるためにメラニン産生の増加が望まれる他の哺乳動物へも及ぶ。特に、本発明は、哺乳動物において日焼けを誘導する方法、より具体的にはヒトにおいて皮膚の日焼けを誘導する方法に関する。
【００１８】
皮膚または他の表皮組織をＵＶ照射に曝す工程は、α‐ＭＳＨまたはα‐ＭＳＨ類似体を皮膚または他の表皮組織へ投与する工程と同時に、またはそれに続いて行われる。好ましくは、ＵＶ照射に曝す前記工程は、α‐ＭＳＨまたはα‐ＭＳＨ類似体の投与に続いて行われる。
【００１９】
ＵＶ照射に曝す工程は、ソラーシミュレーターまたは類似ＵＶ源からの人工ＵＶ‐Ｂおよび／またはＵＶ‐Ａ照射への曝露、または好ましくは自然光への曝露により行われる。好ましくは、ＵＶ照射は、ＵＶ‐Ｂ照射からなるか、またはそれを含んでなる。
【００２０】
本発明による方法での使用に適したα‐ＭＳＨ類似体には、米国特許第４，４５７，８６４号明細書、同４，４８５，０３９号明細書、同４，８６６，０３８号明細書、同４，９１８，０５５号明細書、同５，０４９，５４７号明細書、同５，６７４，８３９号明細書および同５，７１４，５７６号明細書、ならびにオーストラリア特許第５９７６３０号明細書および同６１８７３３号明細書で開示されたものがあり、これら各特許文献の開示内容は参照により本明細書の一部とされる（参考文献２５，２６も参照）。
【００２１】
その最も広範な態様において、本発明は、これらα‐ＭＳＨ類似体のいずれの使用をも包含する。これらのアナログは、上記の特許文献または他の参考文献に記載された手順に従い、あるいは合成α‐ＭＳＨを製造する上で用いられる当業者に周知の方法に従い、例えば固相ペプチド合成法により合成される。
【００２２】
本発明での使用に適したα‐ＭＳＨ類似体には、下記式の化合物がある：
Ｒ１‐Ｗ‐Ｘ‐Ｙ‐Ｚ‐Ｒ２
〔上記式中、
Ｒ１は、Ａｃ‐Ｇｌｙ‐、Ａｃ‐Ｍｅｔ‐Ｇｌｕ‐、Ａｃ‐Ｎｌｅ‐Ｇｌｕ‐、およびＡｃ‐Ｔｙｒ‐Ｇｌｕ‐からなる群より選択され、
Ｗは、‐Ｈｉｓ‐および‐Ｄ‐Ｈｉｓ‐からなる群より選択され、
Ｘは、‐Ｐｈｅ‐、‐Ｄ‐Ｐｈｅ‐、‐Ｔｙｒ‐、‐Ｄ‐Ｔｙｒ‐、および‐（ｐＮＯ２）Ｄ‐Ｐｈｅ７‐からなる群より選択され、
Ｙは、‐Ａｒｇ‐および‐Ｄ‐Ａｒｇ‐からなる群より選択され、
Ｚは、‐Ｔｒｐ‐および‐Ｄ‐Ｔｒｐ‐からなる群より選択され、
Ｒ２は、‐ＮＨ２、‐Ｇｌｙ‐ＮＨ２、および‐Ｇｌｙ‐Ｌｙｓ‐ＮＨ２からなる群より選択される〕。
【００２３】
上記および下記で用いられているように、Ａｌａ＝アラニン、Ａｒｇ＝アルギニン、Ｇｌｕ＝グルタミン酸、Ｇｌｙ＝グリシン、Ｈｉｓ＝ヒスチジン、Ｌｙｓ＝リジン、Ｍｅｔ＝メチオニン、Ｎｌｅ＝ノルロイシン、Ｐｈｅ＝フェニルアラニン、（ｐＮＯ２）Ｐｈｅ＝パラニトロフェニルアラニン、Ｐｌｇ＝フェニルグリシン、Ｐｒｏ＝プロリン、Ｓｅｒ＝セリン、Ｔｒｐ＝トリプトファン、ＴｒｐＦｏｒ＝Ｎ１‐ホルミル‐トリプトファン、Ｔｙｒ＝チロシン、Ｖａｌ＝バリンである。すべてのペプチドは左側がアシル末端および右側がアミノ末端として記載されている；アミノ酸の前の接頭語“Ｄ”はＤ‐異性体配置を表わし、特に示さないかぎり、すべてのアミノ酸はＬ‐異性体配置である。
【００２４】
本発明での使用に適した化合物としては、以下に示すものがある：
〔Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ；
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ；
〔Ｄ‐Ｓｅｒ１，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ；
〔Ｄ‐Ｔｙｒ２，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ；
〔Ｄ‐Ｓｅｒ３，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ；
〔Ｄ‐Ｍｅｔ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ；
〔Ｄ‐Ｇｌｕ５，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ；
〔Ｄ‐Ｈｉｓ６，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ；
〔Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ａｒｇ８〕‐α‐ＭＳＨ；
〔Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ｔｒｐ９〕‐α‐ＭＳＨ；
〔Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ｌｙｓ１１〕‐α‐ＭＳＨ；
〔Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ｐｒｏ１２〕‐α‐ＭＳＨ；
〔Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ｖａｌ１３〕‐α‐ＭＳＨ；
〔Ｄ‐Ｓｅｒ１，Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ；
〔Ｄ‐Ｔｙｒ２，Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ；
〔Ｄ‐Ｓｅｒ３，Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ；
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｇｌｕ５，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ；
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｈｉｓ６，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ；
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ａｒｇ８〕‐α‐ＭＳＨ；
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ｔｒｐ９〕‐α‐ＭＳＨ；
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ｌｙｓ１１〕‐α‐ＭＳＨ；
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ｐｒｏ１２〕‐α‐ＭＳＨ；
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ｖａｌ１３〕‐α‐ＭＳＨ；
ｃ〔Ｃｙｓ４，Ｃｙｓ１０〕‐α‐ＭＳＨ；
ｃ〔Ｃｙｓ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｃｙｓ１０〕‐α‐ＭＳＨ；
ｃ〔Ｃｙｓ４，Ｃｙｓ１１〕‐α‐ＭＳＨ；
ｃ〔Ｃｙｓ５，Ｃｙｓ１０〕‐α‐ＭＳＨ；
ｃ〔Ｃｙｓ５，Ｃｙｓ１１〕‐α‐ＭＳＨ；
ｃ〔Ｃｙｓ４，Ｃｙｓ１０〕‐α‐ＭＳＨ４‐１３；
ｃ〔Ｃｙｓ４，Ｃｙｓ１０〕‐α‐ＭＳＨ４‐１２；
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐１０；
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１；
〔Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ５‐１１；
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｔｙｒ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１；
〔（ｐＮＯ２）Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１；
〔Ｔｙｒ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐１０；
〔Ｔｙｒ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１；
〔Ｎｌｅ４〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１；
〔Ｎｌｅ４，（ｐＮＯ２）Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１；
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｈｉｓ６〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１；
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｈｉｓ６，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１；
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ａｒｇ８〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１；
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｔｒｐ９〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１；
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ｔｒｐ９〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１；
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐９；
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ｔｒｐ９〕‐α‐ＭＳＨ４‐９。
【００２５】
好ましい化合物としては、以下に示すものがある：
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ；
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐１０；
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１；
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７，Ｄ‐Ｔｒｐ９〕‐α‐ＭＳＨ４‐１１；
〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨ４‐９。
【００２６】
本発明による方法において使用上最も好ましいα‐ＭＳＨ類似体は、〔Ｎｌｅ４，Ｄ‐Ｐｈｅ７〕‐α‐ＭＳＨであり、以下「メラノタン‐１」または「ＭＴ‐１」という。
【００２７】
本発明において有用な化合物は、経口、非経口または経皮を含めた様々な経路で投与することができる。本明細書において「非経口」という用語は、本発明による化合物が体循環中へ導入されるあらゆる方法を包含した意味で用いられており、静脈内、筋肉内および皮下注射を含む。本明細書において用いらる「経皮」という用語は、経口腔または皮膚パッチ、鼻内または気管スプレーのような局所法、点眼剤用の溶液、膣または肛門投与経路用の坐剤、あるいは局所経皮送達用のクリームまたはゲルのような常用局所製剤による、化合物の投与を包含している。
【００２８】
化合物は、当業者に周知の方法および手順に従い、意図した投与手段により決定される適切な組成物として製剤化される（例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences,18th Edition,Mack Publishing Company,Pennsylvania,USA参照）。例えば、本発明での使用に適した化合物は、経口または非経口投与用の希釈剤またはキャリアのような固体または液体の医薬用賦形剤と一緒に、本発明による少くとも１種の化合物を含んでなる医薬組成物中に製剤化され、または配合される（該組成物は、本発明による１種の化合物またはその混合物を含んでもよい）。注射媒体としては、注射液用の標準的な医薬添加物、例えば安定剤、可溶化剤および緩衝剤を含有した水が好ましい。このタイプの添加物には、例えば酒石酸およびクエン酸緩衝剤、エタノール、錯体形成剤、例えばエチレンジアミン四酢酸、および高分子量ポリマー、例えば粘度調整用の液体ポリエチレンオキシドがある。固体キャリア物質には、例えばデンプン、ラクトース、マンニトール、メチルセルロース、タルク、高分散ケイ酸、高分子量脂肪酸、例えばステアリン酸、ゼラチン、寒天、リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、動物および植物脂肪、ならびに高分子量ポリマー、例えばポリエチレングリコールがある。経口投与用に適した組成物は、所望であれば、香味剤および／または甘味剤を含有しうる。局所投与の場合、化合物は、好ましくは、個体への諸成分の望ましい送達様式に応じて、クリーム、軟膏、ゲル、ローションまたはスプレーのような局所製剤用の様々な標準的な基剤と共に用いてよい。このような製剤を製造する際には、組成物は、増粘剤、皮膚軟化剤、界面活性剤、顔料、香料、保存剤、フィラーおよび乳化剤のような標準的な不活性賦形剤と混合してもよく、それらはすべて周知であり、経皮または他の製剤の処方で常用されている。典型的には、これらの非活性成分が最終製剤の大部分を占めることになる。好ましくは、組成物は、制御的および／または持続的放出送達を行えるように製造される。
【００２９】
本発明による化合物の実際の投与量は、投与様式、用いられる賦形剤、および望まれる刺激の程度に応じて、広範囲に異なる。このような量を決定することは薬科学者の知識の範囲内に属し、哺乳動物へ投与される量は、例えばキャリアとしてポリ（Ｄ，Ｌラクチド‐コ‐グリコリド）ポリマー２４または類似した生分解性生体適合性ポリマーを用いたインプラントとしての製剤化により、メラニン産生活性を刺激するように選択される量とすることができる。
【００３０】
下記の実施例において詳細に記載するように、本発明へ至るまでの研究では、非常に強力なメラニン産生ペプチドであるメラノタン‐１（ＭＴ‐１）に関し、日焼け皮膚タイプ３‐４（Fitzpatrickスケール）の正常ヒトボランティアについて、２回の臨床試験が行われた。被験者１２例の初回研究では、日焼け相乗作用を評価するために、１０日間にわたる０．１６ｍｇ／ｋｇ／日＋臀部へのＵＶ‐Ｂ照射を採用した。その結果によれば、ＭＴ‐１処置被験者、特にＵＶ‐Ｂ照射臀部皮膚部位において有意の日焼けが示されている。免疫学的パラメーターは、これら被験者のうちの７例で変化しなかった。第二の研究では、プラセボ＋背面への３〜５日間の日光（ｎ＝３）、または日光＋４週間にわたる０．１６ｍｇ／ｋｇ／日×２０日間のＭＴ‐１（ｎ＝５）に、被験者を無作為に分けた。ＭＴ‐１群では有意の全身日焼けがあり、背面における同等の日焼けに必要とされる日光は５０％少なかった。加えて、背面の日焼けは、コントロールの６週間と比較して、ＭＴ‐１処置群では３月間にわたり維持された。これらの結果によれば、ＭＴ‐１が日光と相乗作用して、褐色の長期にわたる皮膚色素形成を生じることが実証されている。
【００３１】
以下の非限定的な実施例を参照して、本発明をさらに説明する。
【実施例】
【００３２】
物質および方法：
実験計画：２回の臨床試験をアリゾナ医科大学で１９９１年〜１９９４年に行い、日光または人工紫外線Ｂレンジ（ＵＶ‐Ｂ）と組み合わせたときのＭＴ‐１へのヒト皮膚の応答を評価した。史的に日焼けしやすい皮膚タイプの正常被験者を、２〜４週間にわたり０．１６ｍｇ／ｋｇ／日の皮下メラノタンＩ（ＭＴ‐１）で処置した。皮膚色素形成の効果は、ＭＴ‐１処置の前から、処置終了時および処置後４週間以内にわたり、８つの解剖学的部位での連続反射度測定により評価した。プラセボコントロールはプロトコール２（背面の半分へＭＴ‐１＋昼時日光）で用いた。プロトコール１は、ＭＴ‐１処置の開始時（Ａ群）またはＭＴ‐１の１０日間コースを終えた直後（Ｂ群）における臀部へのＵＶ‐Ｂ曝露に被験者を無作為に分けた。
【００３３】
被験者：正常被験者を新聞広告で募集し、Fitzpatrickスケール３でタイプ３‐４皮膚を有すること、および皮膚癌、形成異常母斑症候群または異型黒あざを含めた皮膚病歴をいずれも欠くこと、という基準で選抜した。すべての被験者については、連続化学検査（ＳＭＡＣ‐２０）、ＣＢＣおよび尿検査により、正常な試験値を有することを必須とした。すべての女性について、妊娠陰性と判定され、能動的な避妊で妊娠を避けることに同意することを必須とした。ＦＤＡによりモニタリングが必要とされている追加試験には、血清コルチゾール、ＬＨおよびＦＳＨがあり、これらは処置前および２週間の処置期間終了時に測定した。
【００３４】
メラノタン‐Ｉ：Ｎｌｅ４‐Ｄ‐Ｐｈｅ７αメラノサイト刺激ホルモン（ＭＴ‐１）は、Bachem Inc,Torrance Caにおいて、ＧＭＰ条件下で、固相化学法により製造した。その白色粉末を注射用の静菌塩化ナトリウムで再調製したところ、これはLimulusアメボサイト溶離物（ＬＡＬ）アッセイ１４により発熱物質が陰性と判定された。それを凍結保存して、被験者への注射直前に解凍した。２５ゲージ針を用いて、すべての用量を上腕または腿へ皮下投与した。１日当たり０．１６ｍｇ／ｋｇ／日のＭＴ‐１を送達しうるように、実際の体重を用いて用量を計算した。プロトコール１で２週連続（計１０回の注射）およびプロトコール２で４週連続（計２０回の注射）にわたり、ＭＴ‐１を月曜日から金曜日まで毎日投与した。少数の被験者で第Ｉ相試験後に、これらのプロトコールで０．１６ｍｇ／ｋｇ用量を用いたところ、これが最少の副作用で日焼けするために最大限に有効な１日量であることが示された９。
【００３５】
ＵＶは、プロトコール１でソラーシミュレーターにより、またはプロトコール２で３月〜６月の数ヶ月間にわたる一連の定時昼時露光により照射した。
【００３６】
両プロトコールの評価項目として、８つの異なる解剖学的体部位：額、頬、後頸部、内前腕、肩甲骨、腹部、臀部および前脚部で皮膚反射度として色素形成を測定した。皮膚色度は、Minolta CR200 ChromameterＲ(Minolta Camera,Osaka,Japan)で記録される光反射度により測定した。反射光を受け、３フラクションに分割した。輝度（またはＬスケール）は黒色から白色までの相対明度を示し、日焼けと共に減少する。２つの色スケールがある；日焼けでも変化しない黄色‐赤色のａスケール、および青‐黄色相を示して日焼けと共に増加するｂスケール１５‐１７。これらの研究ではＬスケールおよびｂスケール応答のみを記録して、携帯式コンピューターに保管した。解剖学的部位毎に８回の測定を行う。各被験者が自らのコントロールとして働き、反射度を基準時（投与前）、次いで投与終了時、その後通常反射値が各被験者で基準レベルに戻るまで数週間にわたり連続測定した。すべての被験者は、各研究の開始時にＵＶ‐Ｂの最少紅斑線量（ＭＥＤ）を定めた。ＭＥＤは、ソラー照射シミュレーター（Model 600 MultiportＲ Solar Ultraviolet Simulator,Solar Light Co.,Philadelphia,PA）から送られるＵＶ‐Ｂの一連の勾配線量を用いて定めた。
【００３７】
生物学的な副次的評価項目をプロトコール１で評価した。１７の異なる免疫学的パラメーターをＭＴ‐１で処置された患者７例から採取された血液サンプルでフローサイトメトリー試験により評価した。そこでは、全Ｂ細胞および数種のＴリンパ球サブセット：ナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞、ＣＤ‐８（サプレッサー）およびＣＤ‐４（ヘルパー）細胞、ＩＬ‐２レセプター＋（ＣＤ３）細胞、トランスフェリンレセプターポジティブＴ細胞、および皮膚でみられる３クラスのＴ細胞（ＣＤ４／ＣＤ４ＲＰ、ＬＦＡ‐３およびＨＥＣＡ４５２／ＣＤ３  Ｔ細胞）を含めた、各種免疫機能細胞タイプの定量を末梢血で行った。これらの研究では、投与前に２回、１０回の皮下投与終了時に再び、次いで投与終了後１０日目の、日焼け応答が通常最大となるときに、末梢静脈穿刺により採血した。白血球フラクションをFicolＲ遠心により分離し、異なるサブタイプのリンパ球および単球を自動蛍光活性化細胞選別機（FacscanＲ,Becton-Dickinson,San Jose,California）により検出および定量した。
【００３８】
試験後の分散分析、Student Neuman Keuls検定を用い、有意（ｐ＜０．０５）ＡＮＯＶＡ差について、両プロトコールの反射（日焼け）データで統計分析を行った。考察するためには、有意に黒ずんだ部位は、Ｌスケールおよびｂスケールの双方において、ＡＮＯＶＡ次いでマルチレンジ試験で各々ｐ＜０．０５の統計学的変化を要した。プロトコール２で所定レベルまで皮膚日焼けさせるための累積露光時間も、ＡＮＯＶＡを用いて比較した。免疫学的パラメーターを２つの基準時、次いで投与５回目の日、投与１０回目の日、および投与終了後１０日目に比較した。９５％信頼区間を２つの基準値、これら基準の中間および他の時点で分析した。Bonferroni調整を用いて多変量検定のｐ値を補正したところ、有意差は０．０５／１７（免疫学的変数の数）、即ちｐ＜０．００２９で有意となった。
【００３９】
結果：
プロトコール１：メラノタン０．１６ｍｇ／ｋｇ／日＋ＭＴ‐１投与期間の最初または最後にＵＶ‐Ｂの５日間照射の効果
この研究の目的は３つ：（１）先行試験におけるＭＴ‐１用量の２倍で日焼けの効果を調べ；（２）ＭＴ‐１投与期間の最初または最後にＵＶ‐Ｂ照射されたとき、付加的な日焼けがあるかどうかを評価し；および（３）ＭＴ‐１投与被験者で免疫機能パラメーターを評価することであった。Fitzpatrick皮膚タイプ３‐４の被験者１２例をこの研究で無作為に分けた。群Ａ（ｎ＝７）はＭＴ‐１投与の開始５日間で臀部へＵＶ‐Ｂを浴びた。群Ｂ（ｎ＝５）は、ＭＴ‐１の最終投与が行われてから３日目に開始して、連続５日間にわたり臀部へ同じ３線量レベルのＵＶ‐Ｂを浴びた。個別の被験者ＭＥＤは、ＭＴ‐１投与前に反対側臀部へ勾配ＵＶ‐Ｂ曝露して、視覚的に調べた。ＭＥＤは、ＵＶ‐Ｂ照射後２４時間測定して、４つの明瞭な境界でかすかな紅斑を生じる、１５．７５〜４２mjoule／ｃｍ２の線量として規定した。ＭＴ‐１と組み合わせたとき、ＵＶ‐Ｂは、５．２５mjoule／ｃｍ２、１０．５mjoule／ｃｍ２および１５．７５mjoule／ｃｍ２に各々相当する０．２５、０．５０および０．７５の３ソラーシミュレーター設定値で、臀部へ連続５日間にわたり毎日照射した。ＭＴ‐１を両群において２週連続で月曜日〜金曜日に上腕へ皮下注射により投与した。計１０回の投与であり、各々０．１６ｍｇ／ｋｇであった。各群の特徴は表１でまとめられている。
【００４０】
【表１】
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【００４１】
被験者１１例の日焼け結果は表２でまとめられている。一人を除く全員の一部体部位で有意の皮膚黒ずみがあり、１０／１１被験者の全体応答率を示した。非応答被験者はＮｏ．０７３であった（特徴については表１参照）。有意な皮膚色素形成の部位は被験者毎に異なり、最も応答しやすい皮膚部位は額、頬および肩甲骨であり、６／１１被験者が各部位で応答した。奇妙なことに、頸部は応答性がかなり低く、３／１１被験者のみが輝度およびｂスケール反射値の双方で基準から有意の変化を示した。臀部、腹部および前脚部のような以前の非応答部位がこの試験では被験者計１１例中４または５例で有意の皮膚黒ずみを示したという点で、表２の結果は我々の以前の研究とは異なる。もう１つの差異は長期間の有意な黒ずみである。表２の結果は、ほとんどの被験者が６週目（ＭＴ‐１投与終了後４週目）の最終評価で基準反射値に戻らなかったことも示している。最後に、先の“Ａ”スケジュールまたは後の“Ｂ”スケジュールの双方において、ＭＴ‐１および臀部への５回のＵＶ‐Ｂ照射で有意の増強があった。
【００４２】
【表２】
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【００４３】
プロトコール１の副作用は、以前の研究と定量的および定性的に類似していた７，９，１３。最も一般的な副作用は、ＭＴ‐１注射後、数分以内で様々に生じる、体上部の潮紅であった。被験者の約半分は、２週投与期間中に時々、中央値で３回のこの自己制限反応を起こした。これらの反応は数分間から１時間にわたり続き、他の続発症を伴わなかった。軽度の悪心は被験者１１例中４例で報告された。この作用は２回目または３回目のＭＴ‐１注射後に典型的にみられ、３０分間から数時間にわたり続いた。軽度であるため、制吐治療はどの被験者でも不要であったが、数例の被験者は注射日の夕方遅くに軽度の食欲不振を覚えた。疲労感も、通常注射日の午後に、被験者のうち約１／３で報告された。これは程度が様々であったが、いずれもベッドでの休息を要するほど重度ではなかった。更に、潮紅反応のように、午後の疲労感は連続投与でも再発または増強しなかった。
【００４４】
免疫学的所見：急性薬物法が１７種の異なるタイプの白血球で変化を生じるかどうかを調べるために、このプロトコールでは被験者７例からＭＴ‐１投与前、中および後に血液サンプル５本を集めた。投薬前と約８週間離して採取された最初の２サンプルが基準であり、統計学的に比較された。この分析では、２つの基準で計１７のパラメーターについて、ゼロが９５％信頼区間に含まれることを示した。次いで、これら２基準の平均を計算し、他の３時点：投薬５および１０日目とその後１０日目の比較に用いた。その結果は、２パラメーター、Ｔ記憶細胞（ｐ＝０．０５）およびＴ細胞ＬＣＡ２細胞（ｐ＝０．０１）が投薬５日目にほぼ倍加したことを示している。投薬１０日目に、ＴヘルパーＬＣＡ細胞レベルは約５０％減少した（ｐ＝０．０１）。最終投与が行われてから１０日目の最終時点で、有意な変化はみられなかった。しかしながら、これらの個別的統計差は、マルチ分析にBonferroni補正を加えたところ、有意ではなかった。
【００４５】
プロトコール２：背面への日光と組み合わせた長期メラノタン‐１の効果
タイプ３‐４皮膚をもつ被験者８例におけるこのオープンラベル試験では、４週間にわたるＭＴ‐１  ０．１６ｍｇ／ｋｇ／日で注射２０回（月‐金／週）の長期スケジュールの効果を評価した。これは、日焼けが見た目に明らかとなるまで、３〜４日間にわたる背面の半分への全日光曝露と組み合わせた。露光は、ＭＴ‐１投薬の開始時（ｎ＝３）または計２０回のうち１０回投薬された後（ｎ＝２）で、無作為に行われた。後の群に属する学生被験者１例は時間的制約のせいで投薬途中で脱落し、したがって２例の被験者のみが分析に利用しうる。曝露半背面部位で同等に日焼けさせる時間の比較を行うために、被験者３例のコントロール群もＭＴ‐１なしで背面へ同様の露光をうけた。
【００４６】
表３はこの試験における被験者の日光応答特徴をまとめている。ＭＴ‐１群の曝露背面部位で目に見える日焼けに必要な平均（ＳＤ）露光時間は８７（４．５）分間であった。これが中央値で３日間にわたり行われ、各１日当たりの曝露平均は３０分間であった。比較のため、日光のみのコントロール群では、５回曝露の中央値で各２５〜３５分間が、曝露背面部位で同程度の日焼けを行わせるために必要であった。この群で全平均（ＳＤ）露光時間は１６５（１５）分間であり、ＭＴ‐１群の倍である（ｐ＜０．００１）。
【００４７】
【表３】
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【００４８】
コントロール被験者３例は、輝度で平均７．５単位の減少および平均ｂ値で４単位の増加を伴う、露光背面の有意な黒ずみを生じた（図１）。予想されるように、これらの日焼けは露光部位に限定され、非露光背面部位は試験の過程で実際上白くなった（図１、丸印）。加えて、露光背面部位は露光５週間以内で基準反射値に戻った。図２はＭＴ‐１投薬の初日に始められた組合せ露光の効果を比較しており、対照は被験者の隣接非露光背面部位であった。この比較は、その組合せが露光背面部位で急速な深い皮膚黒ずみを生じたことを示している（図２、黒印）。これは隣接（非露光）背面部位でＭＴ‐１単独（図２、白印）により生じる黒ずみよりも有意に大きかった。その組合せのとき反射単位の絶対変化は大きく、我々がこれまでに記録してきた最大反射変化度に相当する：輝度で１０〜１５単位の減少、およびｂ値で５〜１０単位の増加。
【００４９】
最初の２週間の投薬の最後の時点でＭＴ‐１処置に露光が加えられたときも、隣接非露光背面部位と比較して、露光背面部位における黒ずみの同様の増加があった（図３）。しかしながら、この場合に、黒ずみの開始は１〜２週間遅れた。ＭＴ‐１投薬の初日における日光と比較したとき、これは有意差を示す。図２および３は、黒ずみの期間が日光＋ＭＴ‐１の全被験者で有意に伸びたことを示している。この場合に、日光がＭＴ‐１投薬期間の開始時または中間で加えられるかどうかは重要でない。実際に、１１週間の反射モニターの結論として、すべてのＭＴ‐１処置被験者は露光および非露光双方の背面部位で有意な日焼けをなお維持していた。これは、反射値が５週間後にすべて基準に戻った日光単独コントロールとは劇的に異なる（図１）。コントロールが背面へ全部でほぼ２倍の露光を浴びたことを考慮に入れると、その差異はなお一層著しい。
【００５０】
プロトコール２でＭＴ‐１の群は現在までのところ最大の蓄積薬物曝露をうけているため、副作用の問題は特に重要である。最も一般的な副作用は、様々に生じる顔面および上半身潮紅であった。被験者５例中３例で９回の潮紅があった。我々の以前の研究のように、開始はＭＴ‐１注射から数分以内であり、それは典型的には３０〜６０分間で消失した。最も重度の副作用は悪心であり、５例中２例の被験者で生じた。これは被験者Ｎｏ．８１７で初回注射から４０分以内で始まった。悪心を防止するため、この被験者で次の３回の注射は、プロクロルペラジン（CompazineＲ）１０ｍｇが経口投与された後に行った。他の被験者Ｎｏ．８１６も２回目の投薬後に悪心を覚え、次の３回の投薬前に経口プロクロルペラジン１０ｍｇを飲んだ。その後のＭＴ‐１投薬は制吐剤なしで行われ、ひどい悪心はなかった。他に唯一報告された副作用は午後の疲労感または眠気であり、３被験者で報告された。例えば、３週目に、被験者１例は各注射後に２時間にわたる疲労感を覚えた。他の被験者は、全身疲労を注射の２週目中ずっと覚え、ＭＴ‐１が投与されなかった週末にややひどかった。これらの副作用はいずれも中度または重度であったが、蓄積毒性の証拠はなかった。実際に、ほとんどの副作用は４週法の始め２週間で報告され、各々１回のみの潮紅および疲労感がＭＴ‐１投薬の最終（第四）週に報告された。
【００５１】
考察：
本研究の第一目的は、ＵＶ光と組み合わされたＭＴ‐１の効果を特徴付けることであった。その結果は、合成超効力メラノトロピンＭＴ‐１が、ソラーシミュレーターからの少量のＵＶ‐Ｂと、または全日光への短時間曝露と、安全に組み合わせることを示している。後者の組合せは皮膚日焼けの著しい増強を生じ、最も早い開始は日光がＭＴ‐１投薬の開始時に加えられた場合にみられた。我々は更に、蓄積的な、更に強いまたは異なる副作用を生じることなく、ＭＴ‐１が０．１６ｍｇ／ｋｇの１日量で４週間にわたり投与しうることを示した。０．１６ｍｇ／ｋｇ用量のＭＴ‐１は、日焼けの程度、および黒ずみで応答する解剖学的部位の数の双方に関して、初回臨床研究７で用いられた０．０８ｍｇ／ｋｇ用量より優れている。例えば、男性被験者２８例で０．０８ｍｇ／ｋｇの我々の初回研究では、有意の皮膚日焼けが額、頬および頸部のみで観察された７。逆に、プロトコール１からの結果は、一部の場合には、メラノコルチンレセプター密度が非常に低い臀部を含めて、ほとんどの体部位で、有意の黒ずみが得られることを示している１８。我々は、ソラーシミュレーターから同時ＵＶ‐Ｂを浴びた部位で、有意の増強を証明することもできた。いかなる皮膚部位でも０．１６ｍｇ／ｋｇ用量のＭＴ‐１に応答しなかった、史的にタイプ４皮膚の女性被験者が１例いた。これは完全非応答性個人で最初の観察であり、このときの明確な理由は定かでない。
【００５２】
天然ホルモンα‐ＭＳＨは、炎症の実験モデルで広い抗炎症活性を有することが報告された１０。これらの効果として、ラットモデルで関節炎の阻害１１、敗血症性ショックモデルで内毒素性肝炎の抑制１２、および内毒素血症および腹膜炎のモデルで生存率の改善１０がある。これらの効果は、好中球でサイトカインおよび化学誘引性サイトカインの合成および活性のα‐ＭＳＨ性阻害により媒介されることがある１０。一方で、好中球遊走およびスーパーオキシドジスムターゼ産生の直接効果１９が報告されている。プロトコール１は、０．１６ｍｇ／ｋｇの注射１０回を受けたヒトで、ＭＴ‐１に関する免疫活性の問題を間接的に扱っていた。２週投薬期間の最後に、我々はこれら被験者７例の末梢血で１７種の異なる白血球サブタイプの絶対数にいかなる有意の変化も証明できなかった。しかしながら、免疫反応を開始させるこれら末梢血球の有効性は評価されなかったため、我々はＭＴ‐１により誘導される免疫応答の変化を除外しえないのである。他方、現在までＭＴ‐１で処置された正常被験者約１００例のいずれでも感染は観察されなかった７，９，１３。そのため、ＭＴ‐１がヒトで免疫学的変化を誘導するかどうかの問題はほとんど未解決のままであるが、それが末梢血で数クラスの免疫白血球の数を実際には変化させないことを我々は知っている。ＭＴ‐１に関する免疫効果の欠如も、天然ホルモンが接触過敏症応答性を阻止したが、ＭＴ‐１はしなかった、というマウスでの皮膚研究と一致する。
【００５３】
この研究でみられるメラノタン‐１の別な副作用は、以前に報告されたものと類似している７，９，１３。ＭＴ‐１で誘導される悪心は本被験者の約２０％でみられ、被験者２例のみで制吐治療を要した。この作用は、動物の消化管組織でみられたメラノコルチン‐３レセプター（ＭＣ３Ｒ）とのＭＴ‐１の相互作用により媒介されているのかもしれない２１。これら軽度の胃腸副作用がまれで、蓄積性でないという事実は、ＭＴ‐１によるＭＣ３Ｒの活性化が用量限定的でないことを示唆している。他のＭＴ‐１副作用、特に顔面潮紅および疲労感に関する生化学経路は未知である。上半身の急性潮紅反応がＭＣ１Ｒのメラニン向性活性化により媒介されることは、ありそうもない。その反応の開始は早く、ＭＴ‐１刺激後におけるメラニンの合成および放出には更に時間が必要であろう。そのため、他の血管作動性経路がこの希少副作用を媒介する際に関与しているにちがいない。他の唯一の副作用、疲労感も我々の以前の第Ｉ相用量漸増研究でみられ、程度は用量依存的であった１３。我々の本研究では、性質の軽い疲労感が被験者の約１／３で時々みられた。他の毒性のように、それは各用量で再発せず、それが再発したときの程度は蓄積的でなかった。脳でみられた２２、ＭＣ３ＲおよびＭＣ４Ｒとの結合により、これらの作用が媒介されるかどうかは未知である。しかしながら、以前（未公表）の薬物動態研究では放射線標識ＭＴ‐１投与ラットの脳中への有意な薬物取込みを検出できなかっため、これはありそうもない。
【００５４】
おそらく、ＭＴ‐１および光の２つの臨床研究で最も重要な観察は、ＵＶ‐Ｂ光（プロトコール１）および日光（プロトコール２）の組合せで、著しい日焼け相乗作用の観察である。双方の露光部位で測定された皮膚黒ずみの程度は、光または薬物単独で得られる場合よりも有意に大きかった。実際に、プロトコール２の露光背面で観察された日焼けが、我々がこれまでに測定した中では最も強い。更に、ＭＴ‐１＋日光の組合せは露光背面部位で長期間の日焼けを生じた。これはＭＴ‐１投薬が開始された後１１週間でも基準反射値になお戻らず、０．１６ｍｇ／ｋｇ用量でＭＴ‐１の２週間コースを用いて我々が以前に観察したよりも有意に長かった１３。プロトコール２で用いられたＭＴ‐１の４週間コースは、これまでで最大の蓄積的薬物曝露も示す。重要なことに、我々はＭＴ‐１へのこの２倍曝露でも新たな副作用またはより強い副作用を観察しなかった。
【００５５】
メラノタン‐１は表皮のメラノコルチン１レセプター（ＭＣ１Ｒ）に高い結合親和性を有している１。おそらく、実験系におけるその高い効力のおかげで、分子の７貫膜ドメインで様々な部位に変異を有したレセプターをそれは活性化しうるが、その特性は天然α‐ＭＳＨと共通していない２３。これはＭＣ１Ｒ遺伝子変異をもつ個人で重要な意味を有しているかもしれず、これらの人々は日焼けしにくく、基底および扁平上皮癌の双方に高リスクであるためである。加えて、他の研究では、メラノーマのリスクもＭＣ１Ｒ変異型対立遺伝子をもつ個人で増加することを示唆している６。そのため、ＭＣ１Ｒに対してより強いアゴニストを入手できれば、ＭＴ‐１が変異レセプター遺伝子をもつ個人でさえ防御日焼けを誘導しうる可能性を生じるのである。これは全タイプの日光性皮膚癌についてリスクを減少しうるが、本研究ではこの仮説を試験しなかった。むしろ、３つの本プロトコールにおける被験者は、火傷せずに日焼けすることで日光に応答する能力により選別された（Fitzpatrick皮膚タイプ３‐４）。したがって、ＭＣ１Ｒ遺伝子変異を有するヒトがＭＴ‐１に応答するかどうかは、我々はわからないのである。
【００５６】
参考文献
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【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】図１は、臨床試験の結果を示しており、コントロール群（日光のみ）の露光背面（四角）または反対側の非露光部位（丸）において、６週間にわたり背面の平均（ｎ＝３）反射変化度を比較している。反射値は輝度（黒印）およびｂスケール（青‐黄）色相（白印）である。
【図２】図２は、臨床試験の結果を示しており、ＭＴ‐１投与開始時に背面へ日光を浴びた被験者において、１０週間にわたり背面の平均（ｎ＝３）反射変化度を比較している。日焼けは、露光背面部位（黒印）および非露光背面部位（白印）で、輝度（四角）の減少およびｂスケール色相（丸）の増加により示される。
【図３】図３は、臨床試験の結果を示しており、ＭＴ‐１終了後から１週間目に背面への日光浴を開始した被験者（ｎ＝２）において、１０週間にわたり背面の平均反射変化度を比較している。日焼けは、露光背面部位（黒印）および非露光背面部位（白印）で、輝度（四角）の減少およびｂスケール色相（丸）の増加により示される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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