(57)【要約】【課題】  コンブレタスタチンＡ−２プロドラッグの合成方法【解決手段】  フェノール１（ａ）をベンジルフォスファイトで処理してビス（ベンジル）フォスフェイトを生成し、このビス（ベンジル）フォスフェイトを処理してベンジル保護基をクリーブしてリン酸中間体を形成し、得られたリン酸中間体を適当なカチオンプレカーサーで処理してプロドラッグを形成してコンブレタスタチンＡ−２プロドラッグを合成する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）フェノール１（ａ）をジベンジルフォスファイトで処理してビス（ベンジル）フォスフェイトを生じ；
（ｂ）このビス（ベンジル）フォスフェイトを処理してベンジル保護基をクリーブしてリン酸中間体を形成し；そして
（ｃ）得られたリン酸中間体を適当なカチオンプレカーサーで処理してプロドラッグを形成する
段階から成るコンブレタスタチンＡ−２プロドラッグの合成方法。
【請求項２】
該ベンジル保護基はブロモトリメチルシランを用いてクリーブする請求項１の方法。
【請求項３】
段階（ｂ）において、リン酸中間体はナトリュームメトキシドで処理する請求項１の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は概して抗腫瘍性化合物及び親化合物と同一又は改良された生物活性を保持するその水溶性誘導体を生成する改良された方法、及びその合成方法に関する。更に詳しくは、本発明はコンブレタスタチンＡ−２の改良された合成方法、及びコンブレタスタチンＡ−２のプロドラッグの合成方法に関する。
【背景技術】
【０００２】  新血管形成及び脈管形成なしには、腫瘍は休眠のままで数ミリメータ以上のサイズに生長することはできない。ヒトのガン処理を改良するに例外的に有望なアプローチは新しいガン抗脈管形成ドラッグの発見と適用を包含する。ガン処理へのこのようなアプローチは無血管腫瘍の潜在のままにし、あるいは結局のところ壊死および収縮に至る。更に、抗脈管形成剤の細胞障害性ドラッグとの適当な組み合わせは腫瘍性疾患の消去を完全にする。【０００３】  本出願人はコンブレタスタチン族の化合物に関する多数の米国特許を得た。これらの特許はここに参考にする。そして最近のものを次のごとく掲げる。
１６１６２９３０  チューブリン重合を抑制する細胞分裂抑制剤
２５５６９７８６  “コンブレタスタチン”と称する新規抗腫瘍性物質の遊離、構造的エルシデイション及び合成
３５５６１１２２  コンブレタスタチンＡ−４プロドラッグ
４５５２９９８９  パンクラチスタチン  プロドラッグ
５５４０９９５３  “コンブレタスタチン”と称する新規抗腫瘍性物質の遊離、構造的エルシデイション及び合成
６４９９６２３７  コンブレタスタチンＡ−４
７４９４０７２６  コンブレタスタチンＤ−１及びコンブレタスタチンＤ−２と称する細胞生長抑制大環状ラクトン【０００４】１８年前本出願人は南アフリカの樹木Ｃｏｍｂｒｅｔｕｍ  ｃａｆｆｒｕｍからコンブレタスタチンと称するガン細胞生長抑制成分のシリーズの第一メンバーの遊離を報告した（Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ，１９８２）。続いて、本出願人はコンブレタスタチンＡ−２（１ａ）を発見し（Ｐｅｔｔｉｔ  ａｎｄ  Ｓｉｎｇｈ，１９８７）そして最近は微小管アセンブリおよび有糸分裂のこの有効な抑制剤のオリジナル合成を改良すること（Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８  ａｎｄ  １９８９）並びにこれを有用なフォスフェイト  プロドラッグ（２）に変換することに集中した。これらの目的はこの寄与の基礎を形成し、有力な血管のターゲッチング（Ｇｒｏｓｉｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）および密接に関連のあるコンブレタスタチンＡ−４（１ｂ，Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）とそのナトリウムフォスフェイト  プロドラッグ（Ｐｅｔｔｉｔ  ａｎｄ  Ｒｈｏｄｅｓ，１９９８）の制ガン性のため極めて重要に考えられる。後者は現行のＰｈａｓｅＩヒトのガンの臨床試験において有望な結果に導いた。
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】  コンブレタスタチンＡ−２（１ａ）の当初の合成はこの抗腫瘍性スチルベンを得るため効率的な拡大された手段を与えるように修正された。その後の有用なプロドラッグへの変換はジベンジルクロロフォスファイトの本来の形成を用いるリン酸化反応によって、続いてこのベンジルエステル保護基のブロモトリメチルシランでのクリービッジでリン酸中間体１１を得ることによって達成された。後者はナトリウムメトキシドで直接処理してジナトリウムフォスフェイトプロドラッグ（２ａ）への実用的ルートに完了した。リン酸塩２ａのリン酸プレカーサー（１１）はパラレルシリーズの反応に用いて選択した金属とアムモニウムカチオンのプロドラッグカンジデイトを生成した。リン酸塩（２ａ−ｑ）の各々は相対的可溶性、ガン細胞生長抑制および抗菌薬活性に関して評価された。
【０００６】  従って本発明の第一の目的はコンブレタスタチンＡ−２プロドラッグを提供することである。
本発明の他の目的はコンブレタスタチンＡ−２を合成する改良された方法を提供することである。
さらに本発明の目的はコンブレタスタチンＡ−２プロドラッグを合成する改良された方法を提供することである。
これらの目的は、以下に詳細に記載の具体例から容易に認められるごとく、顕著に予期されない態様において本発明によって容易に達成される。
【課題を解決するための手段】
【０００７】  コンブレタスタチンＡ−２（１ａ）およびそのナトリウムフォスフェイトプロドラッグ（２ａ）の両方を得るために、スチルベン１ａの最初の合成（Ｐｅｔｔｉｔ  ａｎｄ  Ｓｉｎｇｈ，１９８７）は修正された。この目的のため三つの大きな改良が用いられた。第一は、ウイッチヒ反応に用いられるフォスフォニウムブロマイド塩とベンズアルデヒドプレカーサーが当初の合成から合成中間体７および８に入れ換えられた。これらはイソバニリンから誘導されるトリフェニルフォスフォニウムブロマイドの生成と関連する問題を無くした。第二は、フォスフォニウムブロマイド７を処理するのに用いられるウイッチヒ反応ベースはｎ−ブチルリチウムからカリウムヘキサメチルシリルアミド（ＫＨＭＤＳ）に変えられた。現行の証拠はリチウム塩の存在がトランス異性体の生成に有利に働くことを示唆した（Ｒｅｉｔｚ，１９９６）。Ｐｅｔｔｉｔ  ａｎｄ  Ｓｉｎｇｈ（１９８７）はシス−スチルベン１ａに導く最初のウイッチヒシェクエンスにおいて１：１６のＺ／Ｅ比を報告した。ＫＨＭＤＳおよび他の同様の反応条件を置き換える時、１：２のＺ／Ｅ比が得られた。第三は、スチルベンシリルエーテル保護した異性体（９ａ  ａｎｄ  ９ｂ）の分離は困難なことが分った。しかしながら、このシリルエーテル保護基をテトラブチルアンモニウムフルオライドでクリーベッジすることによってよって容易に達成された。
【０００８】  コンブレタスタチンＡ−２（１ａ）およびコンブレタスタチンＡ−２ジベンジルフォスフェイトエステル（１０）の実用的にスケールアップした合成が達成されたので、生成されたリン酸中間体（１１）の種々の金属カチオンおよびアンモニウム塩（２ａ−ｑ）が調査された。プロドラッグの抗がん活性（表１）及びその可溶性特性（表２）の両方についての種々のカチオンの効果を調査するため種々のリン酸塩が合成された。キニン及び関連アンモニュウムカチオンは、ｐ−グリコプロテイン機構での妨害による多剤抵抗を無効にする能力を有する安定した水溶性ドラッグを得る可能性に関してであった（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３；Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｊａｃｏｂｓ，１９９３；Ｋａｎｇ  ＆  Ｐｅｒｒｙ，１９９４；Ａｄａｍｓ  ＆  Ｋｎｉｃｈ，１９９５；Ｇｅｎｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；Ｓａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；Ｗａｔａｎａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）。製造されたアルカリ金属塩（２ａ−ｄ）はかすかに塩基性メジア（ｐＨ〜９）における生成のため二塩基性である。アルカリ土金属塩（２ｅ−ｈ）は、アンモニュウム塩（２ｉ−ｑ）のごとく、勿論一塩基である。
【０００９】  コンブレタスタチンＡ−２（１ａ）は水に極めて控えめに可溶性である（＜ｍｇ／ｍｌ）。しかしながら、金属リン酸塩２ａ−ｑのごとく、その水溶性は劇的に増大する。その１価金属カチオンプロドラッグ塩、ナトリウム（２ａ，１８ｍｇ／ｍｌ）、リチウム（２ｂ，２１ｍｇ／ｍｌ）、カリウム（２ｃ，＞５０ｍｇ／ｍｌ）及びルビジウム（２ｄ，４０ｍｇ／ｍｌ）は、すべて水に良好な可溶性を発揮したが、亜鉛、カルシウム、マグネシウム及びマンガンから誘導された２価金属カチオン塩は多分オリゴマーの形成のためより不溶性であった。アンモニウムカチオン塩のうち、モルフォリン（２ｍ，４１ｍｇ／ｍｌ）とアンモニウム（２ｐ，３４ｍｇ／ｍｌ）の両誘導体は良好な水溶性を示した。残りのアンモニウムカチオン塩は低い水溶性（０〜１ｍｇ／ｍｌ）を示した。
【００１０】  カチオンプロドラッグ２ａ−ｑのガン細胞生長抑制活性（表１）は強く残り、コンブレタスタチンＡ−２のそれに密接に合致した（表１）。期待されるごとく、コルチシン塩２ｎはカチオンによって助長された高められたポテンシーを発揮した。
【００１１】  ＮＣ１６０−セルスクリーン（Ｂｏｙｄ，１９９７）における１ａ及び２ａの同時テストは、それぞれ８．３３±１．７３及び１６．５±３．０７の平均パネルＧＩ５０値（１０−８±ＳＥ）を生じた。比較対比分析（Ｂｏｙｄ  ＆  Ｐａｕｌｌ，１９９５）は、コンブレタスタチンＡ−２（１）とそのジナトリウム３’−０−リン酸塩プロドラッグ（２ａ）の平均グラフプロファイルは本質的に見分けがつかないことを確認した。
【００１２】  コンブレタスタチンはどちらかと言うと抗菌薬である（Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８；Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０００；Ｐｅｔｔｉｔ  ＆  Ｌｉｐｐｅｒｔ，２０００）。コンブレタスタチンＡ−２（１ａ）は例外でない（表３）。このレポートにスクリーンされた化合物のうち、親化合物（１ａ）とハイドロキニン塩（２１）は最も広い抗菌薬スペクトルを示した（表３）。
【００１３】  化合物は、確立されたブロスマイクロダイリュウション感受性アセイに依って、バクテリアＳｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ，Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｔｅｕｓ，Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ，Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ，Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａｅ，Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ，Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ，及び菌類Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ，Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓに対してスクリーンされた（ＮＣＣＬＳアプルーブされたスタンダードＭ７−Ａ４，１９９７；ＮＣＣＬＳアプルーブされたスタンダードＭ２７−Ａ，１９９７）。最低抑制濃度はテスト生物の全ての可視成長を抑制した化合物の最低濃度として定義された。アセイは別々の日に繰り返された。
【００１４】
【表１】
2005514450.tif 000002
【００１５】
【表２】
2005514450.tif 000003
【００１６】
【表３】
2005514450.tif 000004
【００１７】
【化１】
2005514450.tif 000005
試薬と条件：ａ）ボラックス、ＮａＯＨ、ＤＭＳ，Ｈ２Ｏ、ｒｔ、１２ｈ；
ｂ）ＣａＦ、ＣＨ２Ｂｒ２、ＤＭＦ、１１０℃、１２ｈ、Ａｒ；
ｃ）ＬｉＡｌＨ４；ＴＨＦ、ｒｔ、３ｈ、Ａｒ；
ｄ）ＰＢｒ３、ＤＣＭ，０℃、６ｈ、Ａｒ；
ｅ）ＰＰｈ３、トルエン、１１０℃、１２ｈ、Ａｒ。
【００１８】
【化２】
2005514450.tif 000006
試薬と条件：ａ）ＫＨＭＤＳ、３−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−４−メトキシベンズアルデヒド、ＴＨＦ、７８℃、１２ｈ、Ａｒ；
ｂ）ＴＢＡＦ、ＴＨＦ、０℃、６ｈ、Ａｒ；
ｃ）ＣＣｌ４、ＤＭＡＰ、ＤＩＥＡ，Ｐ（Ｈ）（Ｏ）（Ｏｂｎ２）、ＣＨ３ＣＮ、−１０℃、６ｈ、Ａｒ；
ｄ）ＴＭＳ−Ｂｒ、ＤＣＭ、３０ｍｉｎ、Ａｒ；
ｅ）ＮａＯＣＨ３、ＣＨ３ＣＨ２ＯＨ、０℃、Ａｒ。
【００１９】
【化３】
2005514450.tif 000007
１ａ、Ｒ＝−ＣＨ２−、コンブレタスタチンＡ−２
２ａ、Ｒ＝−ＣＨ３、コンブレタスタチンＡ
【化４】
2005514450.tif 000008
２、コンブレタスタチンＡ−２プロドラッグ
ａ，２Ｚ＝Ｎａ＋      ｉ，Ｚ＝キニン
ｂ，２Ｚ＝Ｕ＋        ｊ，Ｚ＝イミダゾール
ｃ，２Ｚ＝Ｋ＋        ｋ，Ｚ＝キニジン
ｄ，２Ｚ＝Ｒｂ＋      ｌ，Ｚ＝ヒドロキニン
ｅ，Ｚ＝：Ｃａ＋＋    ｍ，Ｚ＝モルフォリン
ｆ，Ｚ＝Ｍｇ＋＋      ｎ，Ｚ＝コルチシン
ｇ，Ｚ＝Ｚｎ＋＋      ｏ，Ｚ＝ニコチンアミド
ｈ，Ｚ＝Ｍｎ＋＋      ｐ，Ｚ＝アンモニュウム
ｑ，Ｚ＝ピペラジン
【００２０】  エーテルはジエチルエーテルでＡｒはアルゴンガスである。溶剤はすべて再蒸留した。ジメチルフォルムアミド（ＤＭＦ）、リチウムアルミニウムハイドライド、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、トリフェニルフォスフィン、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、カリウムヘキサメチルシリルアミド（ＫＨＭＤＳ）、四塩化炭素、テトラブチルアンモニウムフルオライド（ＴＢＡＦ）、ジベンジルフォスファイト、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、ブロモトリメチルシラン及びアセトニトリルはＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）から得た。酢酸マグネシウムテトラハイドレイト、酢酸カルシウム、酢酸マグネシウム、キニジン、キニン、ヒドロキニン及び濃塩酸はＢａｋｅｒ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙから供給された。ニコチンアミドはＡｌｅｘｉｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから、その他の全ての試薬はＡｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）から購入された。
【００２１】  反応は、長波（３６６ｎｍ）及び短波（２５４ｎｍ）ＵＶ照射の下でビジュアライズされたＡｎａｌｔｅｃｈシリカゲルＧＨＬＦ  Ｕｎｉｐｌａｔｅｓを用いて薄層クロマトグラフによってモニターされた。水溶液の溶媒抽出物は無水硫酸ナトリウムで乾燥した。粗生成物は、Ｅ．Ｍｅｒｋからのシリカゲルカラムクロマトグラフ、フラシュ（２３０−４００メッシュＡＳＴＭ）又はグラビチー（７０−２３０メッシュＡＳＴＭ）シリカゲルによって精製された。
【００２２】  融点はエレクトロサーマルデジタルメルチングポイント装置（モデルＩＡ９２００）で測定したが不正確であった。ＩＲスペクトルはＭａｔｔｓｏｎ器具２０２０ＧａｌａｘｙシリーズＦＴ−ＩＲを用いて得られた。ＥＩＭＳデータはＭＡＴ３１２マススペクトロメータでレコードを取り、ハイレゾリューションＦＡＢスペクトルはＫｒａｔｏｓＭＳ−５０マススペクトロメータで得られた。
【００２３】  全ての１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、特に記さない限り、溶媒としてＣＤＣｌ３（ＴＭＳ内部基準）でＶａｒｉａｎ  Ｇｅｍｉｎｉ  ３００ＭＨｚ機器を用いて記録した。１３Ｃ−及び３１Ｐ−ＮＭＲスペクトルは、特に記さない限り、溶媒としてＣＤＣｌ３でＵｎｉｔｙ５００ＭＨｚ機器を用いて得られた。Ｂｓはブロードシングレットを、ｂｄはブロードダブレットを示す。
【００２４】  コンブレタスタチンＡ−２（１ａ）及びプロドラッグ（ｅ．ｇ．２ａ）の両方の生成の実用的合成方法は本願発明者のスチルベン１ａのオリジナルの合成に基づいて発明された（Ｐｅｔｔｉｔ  ＆  Ｓｉｎｇｈ，１９８７）。リン酸ナトリウム（２ａ）及び他のプロドラッグ（２ｂ−ｑ）の合成は、フェノール１ａをジベンジルフォスファイト（Ｓｉｌｖｅｒｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）で処理して対応するビスベンジルフォスフェイトを生じることに起因する。ベンジル保護基のブロモトリメチルシランでのクリーベイジ（Ｌａｚａｒ  ＆  Ｇｕｉｌｌａｕｍｅｔ，１９９２）及び続いてのリン酸の適当なカチオンプレカーサーでの処理（２ａの場合はナトリウムメトキシド）は容易にプロドラッグ２ａ−ｑを与えた。
【００２５】  リン酸塩誘導体は三つの理由から選ばれた。第一に、リン酸塩は大きな可溶特性を有する（Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，１９９１）。第二に、一旦投与すると、リン酸塩ドラッグは主として腫瘍中で脱ホスホリ化されて非特異性ホスホターゼを経て親化合物を生じ、それから細胞内に運ばれる（Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ，，１９９５ａ；Ｐｅｔｔｉｔ  ＆  Ｒｈｏｄｅｓ，１９９８）。第三に、リン酸塩として、親化合物は活性の少ないＥ−スチルベンへの異性化の可能性が少ない筈である。コンブレタスタチンＡ−２のＥ−異性体はＺ−異性体（１ａ）よりかなり少ない抗有糸分裂活性（Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８）を示す。リン酸塩基に基づくプロドラッグは、パンクラチスタチン、タキソール、チロシン−含有ペプチド及びエトポサイドの如き他の抗がん剤を改良するのに有用なことが分った（Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５ｂ；Ｕｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３；Ｖｙａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３；Ｃｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３；Ｓａｕｌｉｎｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４）。
【００２６】  中間体４−６を得るための次の方法は本願方法の比較的小さいしかし有用なモジフィケイションを示す。
メチル３，４−ジヒドロキシ−５−メトキシベンゾエイト（４）
Ｈ２Ｏ（１Ｌ）中ホウ酸ナトリウム１０水塩（ボラックス、８０ｇ）の攪拌混合物に室温においてメチル没食子酸（３，１５．０ｇ，８２ｍｏｌ）を加えた。１時間撹拌後、ジメチル硫酸（３０ｍｌ，３１７ｍｍｏｌ）とＮａＯＨ（５０ｍｌ，６．５Ｍ）を１時間のコースで別々の追加ファンネルから同時に滴下添加した。更に１２時間攪拌後、Ｈ２ＳＯ４（６５ｍｌ，濃）でメチル化を終わり、更に数時間撹拌を続けた。生成物はＤＣＭでの抽出（５ｘ５００ｍｌ，度毎に２０分間溶液を攪拌）によって取り出した。集めたＤＣＭ抽出物はブライン（３００ｍｌ）で洗浄し、乾燥し、真空で濃縮し、残留物はメタノールーベンゼンから結晶して軽いタン固体としてメチルエーテル４（１３．７％，８５％）を得た。ｍｐ１１０−１１１℃（ｌｉｔ．ｍｐ１１０−１１１℃、Ｐｅｔｔｉｔ  ＆  Ｓｉｎｇｈ，１９８７）；１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ）：３．８９（３Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ３），３．９４（３Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ３），５．４０（２Ｈ，ｂｓ，−ＯＨ），５．４０（２Ｈ，ｂｓ，−ＯＨ），５．８０（２Ｈ，ｂｓ，−ＯＨ），７．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，ＡｒＨ）。
【００２７】  メチル３，４−メチレンジオキシ−５−メトキシベンゾエイト（５）
Ａｒ下室温においてＤＭＦ（８０ｍｌ）中ジオール４（７．７ｇ，３９ｍｍｏｌ）の攪拌溶液にセシュームフルオライド（２６．５ｇ，１７４ｍｍｏｌ）を速やかに加えた。１時間撹拌後、ジブロモメタン（５．４ｍｌ，７８ｍｍｏｌ）を室温において滴下添加し混合物を１１０℃に１２時間加熱した。室温に冷却した時、エーテル（３００ｍｌ）を加え、混合物を冷水（３ｘ５０ｍｌ）で洗浄した。混合した水性相はエーテル（２ｘ１００ｍｌ）で抽出し、乾燥し、真空で濃縮した。得られた粗生物はシリカゲル（グラビチー）で吸収し、シリカゲルクロマトグラフ（グラビチー，１．５；ｎ−ヘキサン中ＥＴＯＡｃ）で精製し，無色の粉末としてメチレンジオキシ誘導体５（８．１ｇ，９９％）を得た；ｍ．ｐ．８９〜９１                          ℃                                    ；
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ）：３．８９（３Ｈ，ｓ−ＯＣＨ３），３．９４（３Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ３），６．０５（２Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ２Ｏ−），７．２１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，ＡｒＨ），７．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，ＡｒＨ）。
【００２８】  ３，４−メチレンジオキシ−５−メトキシベンジルアルコール（６）
Ａｒ下０℃においてＴＨＦ（５０ｍｌ）中水素化リチウムアルミニウム（３．４ｇ，９０ｍｌ）の撹拌した褐色のサスペンジョンにＴＨＦ（５０ｍｌ）中メチルエステル（１１．９ｇ，５７ｍｍｏｌ）を徐々に滴下した。室温で３時間撹拌後、サスペンジョンは０℃に冷却し、還元は発泡が止むまでＮａ２ＳＯ４（飽和水溶液）を注意深く添加して終わった。沈殿は集め、ろ過物は乾燥し真空で濃縮して無色の粉末としてベンジルアルコール６（９．３ｇ，９１％）を得た。ｍ．ｐ．６６−６７℃；
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ）；１．５９（１Ｈ，ｂｓ，−ＯＨ），３．９１（３Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ３），４．５９（２Ｈ，ｂｓ，−ＡｒＣＨ２Ｏ−），５．９７（２Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ２Ｏ−），６．５６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，ＡｒＨ）。
【００２９】  ３，４−メチレンダイオキシ−５−メトキシベンジルトリフェニルフォスフォニウムブロマイド（７）
ＤＭＣ（２５０ｍｌ）中ベンジルアルコール６（３１．９ｇ，１７５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に三臭化リン（２０．０ｍｌ，２１３ｍｍｏｌ）を滴下添加した（Ａｒ下０℃）。８時間撹拌の後、臭素化はＮａＨＣＯ３で終わった（１０％，水性、０℃）。有機相は乾燥し真空で濃縮して、淡褐色の固体としてベンジルブロマイド中間体を得た。このベンジルブロマイドは直ちにトルエン（３５０ｍｌ）に溶かし、室温においてＡｒ下でトリフェニルフォスフィン（４５．８ｇ，１７５ｍｍｏｌ）を加えた。３０分間撹拌し、混合物は１２時間還流加熱した。室温まで冷却した後、白色のサスペンジョンはろ過し固体はエーテルで摩砕し、次にエタノールから再結晶して無色の結晶としてホスホニウム塩７（８２．８ｇ，９３％）を得た。ｍ．ｐ．２４１−２４３℃、
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：３．５４（３Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ３），４．８４（２Ｈ，ｓ，ＡｒＣＨ２Ｐ−），５．９１（２Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ２Ｏ−），６．１４（１Ｈ，ｂｓ，ＡｒＨ），６．１８（１Ｈ，ｂｓ，ＡｒＨ），７．７０（１５Ｈ，ｍ，Ｐｈ３），１３Ｃ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：２８．１４，２８．５２，５５．９９，１０１．５９，１０４．５４，１０１．７１，１１７．４１，１１８．０９，１２１．２０，１２１．２７，１３０．０３，１３０．１２，１３４．０５，１３４．１２，１３４．８０，１３５．０６，１４２．９０，１４８．４９，３１Ｐ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：２５．７５；
ＩＲ（ＫＢｒ）：３６３９，３００５，２８４５，１６３１，１５１０  １４４８，１３１３，１０９１，１０３５；
ＨＲＭｓ  ｍ／ｚ  ４２７．１４６１［Ｍ−Ｂｒ］＋；Ｃ２７Ｈ２４Ｏ３ＰＢｒに対する分析値：Ｃ，６３．９２；
Ｈ，４．７７．実際値：Ｃ，６２．６０；Ｈ，５．３０。
【００３０】  ３’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−コンブレタスタチンＡ−２（９ａ，９ｂ）
ＴＨＦ（Ａｒ  下室温で２５０ｍｌ）中臭化ホスホニウム７（４０．０ｇ，７８．８ｍｍｏｌ）の撹拌サスペンションに１８−クラウン−６（５５．５ｇ，２１０ｍｍｏｌ）を加えた。３０分の撹拌時サスペンションは−１０℃に冷却し、４５分のコースにわたってＫＨＭＤＳ（１６０．０ｍｌ，１６０．０ｍｍｏｌ，ＴＨＦ中０．５Ｍ溶液）を滴下添加した。室温で３時間撹拌し、暗赤色の混合物を−７８℃に冷却し、１時間にわたってＴＨＦ（７５ｍｌ）中溶液として３−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−４−メトキシベンズアルデヒド−８（２０．０ｇ，７５．０ｍｍｏｌ，Ｐｅｔｔｉｔ  ＆  Ｒｈｏｄｅｓ，１９９８）を滴下添加した。室温で１２時間撹拌の後Ｈ２Ｏ（２００ｍｌ）の添加によってウィッチヒ反応を停止し、なお４５分撹拌した。相を分離し、水相を酢酸エチル（５ｘ３００ｍｌ）で抽出した。有機抽出物は乾燥し、真空で凝縮した。得られた油はシリカゲル（グラビチー）に吸収し、シリカゲルクロマトグラフ（フラッシュ，１：９；ｎ−ヘキサン中ＥｔＯａｃ）によって分離された。Ｚ（９ａ）及びＥ（９ｂ）オレフィンは混合物（３１．３ｇ，９６％）として集められた。混合物の１Ｈ−Ｎ分析はＺ：Ｅ比２：５を示した。
【００３１】コンブレタスタチンＡ−２（１ａ）
ＴＨＦ（１００ｍｌ）中のＺおよびＥ（９ａ，９ｂ）異性体（１９．１ｇ，４６．１ｍｍｏｌ）溶液にフッ化テトラブチルアンモニューム（５５．０ｍｌ，５５．０ｍｍｏｌ）を加え（Ａｒ下０℃にて）撹拌した。６時間撹拌した後、脱保護基処理を完成させ、そしてＨＣｌ（７５ｍｌ，６Ｍ０℃）をゆっくり加えた。３０分間撹拌し、この溶液をエチルアセテート（５ｘ２００ｍｌ）で抽出した。この複合有機抽出物を乾燥し、真空で凝縮した。得られた油をシリカゲル（重力）に吸着させそしてシリカゲルクロマトグラフィー（フラッシュ，１：９；ＥｔＯＡｃｎ−ヘキサンによる）で分離した。このＺフェノル（１ａ）は透明な油（４．６９ｇ，３４％）として集められた。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ）：３．７５（３Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ３），３．８７（３Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ３），５．９３（２Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ２Ｏ−），６．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），６．４１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），６．４６（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−２），６．４９（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−６），６．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−５’），６．７６（１Ｈ，ｂｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−６’），６．８７（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−２’）。更に、Ｚ及びＥフェノル（３．１７ｇ，２３％）の混合物及び純粋なＥフェノル（５．０６ｇ，３７％）を得た。
【００３２】３’−Ｏ−ビス（ベンジル）フォスフェリル−Ｚ−コンブレタスタチンＡ−２（１０）
Ａｒ−１０℃下でアセトニトリル（７０ｍｌ）中のコンブレタスタチンＡ−２（１ａ，９．２９ｇ，３０．９ｍｍｏｌ）を撹拌し四塩化炭素（１５．０ｍｌ，１５５ｍｍｏｌ）を加えた（滴下）。１０分間撹拌した後、ジイソプロピルエチルアミン（１１．０ｍｌ，６３．０ｍｍｏｌ）及び４−ジメチルアミノピリジン（ｃａｔ）を加えた。５分後、ジベンジル亜リン酸塩（１１．６ｍｌ，５２．５ｍｍｏｌ）を加えた（−１０℃でゆっくり滴下）。５時間撹拌し、このリン酸化反応をＫＨ２ＰＯ４（５０ｍｌ，０．５Ｍ）の点滴添加によって終了した。混合物をエチル  アセテート（４ｘ５０ｍｌ）で抽出した。この複合有機抽出物を乾燥し、真空で凝縮し、そしてこの油性残留物をシリカ（重力）に吸着させシリカゲルクロマトグラフィー（フラッシュ，１：９；ＥｔＯＡｃ  ｎ−ヘキサンによる）で分離して、明るいタン色の油（１５．５ｇ，９０％）リン酸塩１０を得た。１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）：３．７２（３Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ３），５．１２（２Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ２Ａｒ），５．１４（２Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ２Ａｒ），５．８５（２Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ２Ｏ−），６．３５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），６．４１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２，０Ｈｚ），６．４４（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−２），６．４５（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−６），６．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，Ｈ−５’），７．０５（１Ｈ，ｂｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，Ｈ−６’），７．１４（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−２’），７．３１（１０Ｈ，ｓ，ＡｒＨ）；１３Ｃ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）；５５．９０，５６．３１，６９，６８，１０１．２６，１０２．８３，１０８．２２，１１２．２５，１２１．９９，１２６．３９，１２７．７４，１２８．１３，１２８．３５，１２９．２８，１２９．９４，１３１．３８，１３４．２７，１３５．６０，１３５．６７，１３９．３１，１３９．３９，１４３．３０，１４８．５３，１４９．６３；３１Ｐ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）：−７．８１；ＩＲ（ＫＢｒ）：３０５５，２９８５，２６８５，２３０７，１６２２，１５２１，１４２７，１２６７，１１３０，９９８；ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ５６０．１６［Ｍ］＋；Ｃ３１Ｈ２９Ｏ８Ｐとしての分析計算値：Ｃ，６６．４２；Ｈ，５．２１，実験値：Ｃ，６６．３１；Ｈ，５．２４。
【００３３】ナトリウム  コンブレタスタチンＡ−２  ３’−Ｏ−リン酸塩（２ａ）
方法  Ａ．０℃Ａｒ下でＤＣＭ（５ｍｌ）の中のジベンジル  エステル１０（０．３８ｇ，０．６７８ｍｍｏｌ）撹拌溶液へブロモトリメチルシラン（０．１８５ｍｌ，１．４０ｍｌ）を加えた。４５分間撹拌した後、チオ硫酸ナトリウム（１％水溶液．，５ｍｌ）を加え、さらに５分間この混合物を撹拌した。この相を分離し、水相を酢酸エチル（３ｘ５ｍｌ）で抽出した。複合有機抽出物を真空で凝縮し透明な油としてリン酸中間物を得た。１時間乾燥（高真空度）した後、直ちにこの油をエタノール（１０ｍｌ）に溶解し同時にナトリウム・メトキサイド（７４ｍｇ，１．３７ｍｍｏｌ）を添加した。３０分撹拌して、沈殿物をエーテルで集め粉砕し無色の粉末のナトリウム塩２ａを得た。水−アセトンで再結晶化し無色の結晶２ａ（０．２４ｇ，８４％）を得た。融点１２５−１２６℃；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）；３．６７（３Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ３），３．６９（３Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ３），５．９３（２Ｈ，ｓ，−ＯＣＨ２Ｏ−），６．３２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），６．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ１２．０Ｈｚ），６．４４（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−２），６．５６（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−６），６．７５（２Ｈ，Ｍ，Ｈ−５’，Ｈ−６’），７．４４（１Ｈ，ｂｓ，Ｈ−２’），１３Ｃ−ＮＭＲ（５００Ｈｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：５５．５６，５５．９９，１０１．０８，１０２．１７，１０８．５０，１１１．９８，１２０．７７，１２１．１１，１２７．９２，１２８．８６，１２９．３８，１３１．４１，１３３．８４，１４２．９２，１４３．９１，１４８．１０，１４９．２０，１４９．２５；３１Ｐ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ−６）：−１．５９：ＩＲ（ＫＢｒ）：３５２８，２９７２，２８８０，１６３２，１５１２，１４４９，１３２３，１２６７，１１８０，１１１７，１０３８，９３２；及びＨＲＭＳ  ｍ／ｚ４２５．０４［Ｍ＋Ｎ］＋。
【００３４】方法  Ｂ．ＤＣＭ（４０ｍｌ）の中のジベンジル  エステル１０（９．０ｇ，１６．１ｍｍｏｌ）の溶液を室温で撹拌しブロモトリメチルシラン（４．５０ｍｌ，３４．１ｍｍｏｌ）を加えた（滴下）。
３５分後、水（２０ｍｌ）を加え更に５分間連続して撹拌した。この水相をエチルアセテート（３ｘ２０ｍｌ）で抽出した。複合有機抽出物を真空で凝縮し透明な汕としてリン酸を得、それを直ちにエタノール（４０ｍｌ）の中に溶解した。同時にナトリウム・メトキサイド（１，７５ｇ，３２．４ｍｍｏｌ）を加えた（０℃）。３５分してから、沈殿物をエーテルで集め粉砕し無色の粉末のナトリウムフォスフェイト２ａを得た。水−アセトンで再結晶化しフォスフェイトプロドラッグ２ａ（５．８ｇ，８５％）を得た。しかし、方法Ｂは反応／分離段階の間のｃｉｓからｔｒａｎｓ構成への不完全な変換がために概して分離問題を引き起こす。このｔｒａｎｓ異性体が水−アセトンで再結晶化の後１６１−１６２℃で溶け１６．４Ｈｚのｔｒａｎｓ１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ）結合定数を示すことを見いだした。
【００３５】  大量のコンブレタスタチンＡ−２（１ａ）及びそのリン酸ナトリウム  プロドラッグ（２ａ）を得るためにスチルベン１ａの修正合成方法（Ｐｅｔｔｉｔ  ＆  Ｓｉｎｇｈ，１９８７）を用いた。この目的のために、少なくとも三つの主な改良が行われた。まず、Ｗｉｔｔｉｇ反応に使用する臭化ホスホニウム塩及びベンズアルデヒド前駆物質を元の合成から合成中間体７及び８をそれぞれ入れ換えた。それでイソバニリンに由来する臭化トリフェニルフォスホニウムの生成と結びつく問題が除かれる。
【００３６】  次に、Ｗｉｔｔｉｇ反応をベースに扱われている臭化ホスホニウム７をｎ−ブチルリチュームからポタジウム  ヘキサメチルシリラミド（ＫＨＭＤＳ）に変換する。リチウム塩の存在がｔｒａｎｓ異性体（Ｒｅｉｔｚ，１９９６）の生成に好ましいことを示唆する証拠である。Ｐｅｔｔｉｔ  ＆  Ｓｉｎｇｈ，（１９８７）はｃｉｓ−スチルベン１ａのつながりを当初のＷｉｔｔｉｇ列に於いて１：１６のＺ／Ｅ率を報告している。ＫＨＭＤＳに置換すること或いは類似の反応状態で，１：２のＺ／Ｅ率を得た。第三に、スチルベンシリルエーテル保護異性体（９ａ及び９ｂ）の分離は困難さを示した。
【００３７】  上述した困難さにもかかわらず、コンブレタスタチンＡ２の有効な水溶性プロドラッグを得た。有用な量が得られるなら、化合物は抗新生物化合物として下記に述べる方法で使用されるであろう。
【００３８】  投与される用量は、新生物疾患の正体、年齢や健康状態や体重を含めた患者のタイプ、同時治療をもし行なっていればその種類、処置頻度や治療比率、などに依存するであろう。
【００３９】  具体的には、投与する活性成分の用量レベルは患者の体重あたりでは、静脈内投与では０．１から約２００ｍｇ／ｋｇ、筋肉内投与では１から約５００ｍｇ／ｋｇ、経口投与では５から約１０００ｍｇ／ｋｇ、経鼻投与では５から約１００ｍｇ／ｋｇ、そしてエアゾールでは５から約１０００ｍｇ／ｋｇである。
【００４０】  濃度を用いて表わすと、経皮、経鼻、経咽喉、経気管支、経膣、経直腸または経眼についての本発明組成物中に存在する活性成分は組成物の約０．０１から  約５０％ｗ／ｗの濃度であり、好ましくは組成物の約１から約２０％ｗ／ｗの濃度であり；そして非経口投与のためには、組成物の約０．０５から約５０％ｗ／ｖの濃度であり、好ましくは組成物の約５から約２０％ｗ／ｖの濃度である。
【００４１】  好ましくは本発明の組成物はヒトや動物に対して、活性成分の適量を含む単位投与形態、たとえば錠剤、カプセル、ピル、粉末、顆粒、坐薬、滅菌非経口溶液または懸濁液、滅菌非非経口溶液または懸濁剤、および経口溶液または懸濁剤などとして投与するために提供される。
【００４２】  経口投与のためには、固体または液体の投与形態で製造される。
【００４３】  粉末は、活性成分を適当に細かい大きさに粉砕し、そして同じように粉砕した希釈剤と混合することによって極めて簡単に製造される。希釈剤は、たとえば乳糖やデンプンのような可食性の炭水化物材料であってよい。より好くは、香料油と同様に甘味剤や砂糖が存在している。
【００４４】  カプセル剤は、上述のようにして粉末混合物を作り、そして形成されたゼラチンの鞘の中へ充填して製造される。より好くは充填作業前に、補助剤として、たとえばタルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、などのような潤滑剤を粉末混合物に加える。
【００４５】  軟ゼラチンカプセル剤は、活性成分のスラリーを、許容可能な植物油、液体軽油またはその他の不活性油やトリグリセライドと共に機械的カプセル化により製造される。
【００４６】  錠剤は、粉末混合物を作製し、顆粒またはスラグとし、潤滑剤を添加し、そして打錠して製造される。粉末混合物は、適当に粉砕した活性成分を、たとえばデンプン、乳糖、カオリン、リン酸ジカルシウムのような希釈剤や基剤と混合して製造される。粉末混合物は、たとえばコーンシロップ、ゼラチン溶液、メチルセルロース溶液またはアラビアゴム粘液のような結合剤で湿らせ、そしてスクリーンを強制通過させて顆粒化させる。顆粒化の別法として、粉末混合物をスラグ化、すなわち打錠機を通過させ得られた不完全な形の錠剤を粉砕（スラグ）とする。このスラグにステアリン酸、ステアリン酸塩、タルクまたは鉱物油を添加することによって製錠用の型への付着を防ぐため潤滑化することができる。ついで潤滑化した混合物を圧縮して錠剤とする。
【００４７】  より好くは錠剤は、シェラックの密閉被膜または腸溶性被膜から成る保護被覆、砂糖とメチルセルロースの被覆、およびカルナウバ蝋の研磨被覆をすることができる。
【００４８】  シロップ、エリキシル及び懸濁液のような経口投与のための液体単位投与形態は、組成物の１匙分が投与のための活性成分の一定量を含むように製造することができる。この水溶性の形態のものは、砂糖、香料および保存剤と共に水性のビヒクルに溶解してシロップとすることができる。エリキシルは、香料と共に適当な甘味剤を水性アルコールのビヒクルを使って製造する。懸濁剤は、アラビアゴム、トラガカント、メチルセルロースなどのような懸濁用剤を補助剤として適当なビヒクルと共に不溶性の形態として製造することができる。
【００４９】  非経口投与のために、液体単位投与形態は、活性成分と滅菌ビヒクル（水が好ましい）を用いて製造される。形態と使用濃度により、活性成分はビヒクルに懸濁または溶解することができる。溶液を製造するときは、水溶性の活性成分は注射用水に溶解し、そして適当なバイアルまたはアンプルに充填して、密封する前に滅菌濾過する。より好くは、たとえば局所麻酔剤、保存剤および緩衝剤のような補助剤をビヒクルに溶解することができる。活性成分をビヒクルに溶解せずに懸濁させ滅菌は濾過によって行なわない、ということ以外は実質的に上記と同様にして非経口剤を製造する。滅菌ビヒクルに懸濁する前にエチレンオキサイドに曝露させることで、活性成分を滅菌することができる。より好くは、界面活性剤または湿潤剤を組成物に包含させて、活性成分を均一に分布させる。
【００５０】  経口および非経口投与に加えて、直腸や膣経由もまた用いられる。活性成分は坐薬という手段で投与することができる。おおむね体温での融点をもつビヒクルまたは容易に溶けるビヒクルを用いることができる。たとえば、カカオ脂や種々のポリエチレングリコール（カルナウバワックス）がビヒクルとして用いられる。
【００５１】  経鼻滴下のために、液体単位投与形態を、活性成分と適当な医薬用ビヒクル好ましくはＰ．Ｆ．水を用いて製造する。吹入剤が好ましい投与であるときは乾燥粉末が処方される。
【００５２】  エアロゾルとしての使用のために活性成分は、必要または所望に応じてたとえば共溶媒や湿潤剤のような通常の補助剤と共に、たとえばジクロロジフルロメタン、二酸化炭素、窒素、プロパンなどのような気体や液体の噴射剤と一緒に加圧エアロゾル容器に詰めることができる。
【００５３】  本明細書や請求の範囲で用いる「単位用量形態」という用語は、ヒトや動物の対象のための単位用量として適当な物理的に分離された単位であって、各々の単位は、必要な医薬用希釈剤、担体またはビヒクルと共に所望の治療効果を生じるように計算した一定量の活性剤を含むものである。本発明の新規な単位投与形態の明細は記載されそして、（ａ）活性成分のユニークな特性および得られるべき特定の治療効果、そして（ｂ）本発明の特徴である本明細書に開示のヒトにおける治療的使用のためのそのような活性材料の配合技術に本質的な限定に直接に依存する。本発明における適当な単位投与形態の例は、錠剤、カプセル、トローチ、坐剤、粉末のパケット、ウェーファー剤、カシェ剤、茶さじ用剤、スプーン用剤、滴剤、アンプル、バイアル、それらの適当な組合わせ、およびここに記載のその他の形態である。
【００５４】  抗新生物剤として用いられる活性成分は、それ自体が当該技術で入手可能であり確立された方法で製造可能な医薬材料を用いて容易に上記の単位用量形態にすることができる。つぎの製法は本発明の単位用量形態の製造の説明であって限定ではない。本発明の態様として種々の投与形態を製造した。それらは以下の例に示されており、「活性成分」という用語はコンブレタスタチンＡ２，コンブレタスタチンＡ４，のプロドラックまたはここに記載したその他のいかなる化合物をも意味する。
【００５５】  組成物Ａ
硬ゼラチンカプセル剤
各々のカプセルが２００ｇの活性成分を含有する１０００個の経口用２部分型ゼラチンカプセル剤を、次のタイプと量の成分から製造した。
活性成分、微粉末化                          ２００ｇ
コーンスターチ                                ２０ｇ
タルク                                        ２０ｇ
ステアリン酸マグネシウム                        ２ｇ
【００５６】  空気微粉砕機で細かく粉砕した活性成分を別の微粉砕した成分に加え、完全に混合し、ついで常法によりカプセルに封入した。
【００５７】  上記のカプセル剤は、１日１ないし４回、１ないし２カプセルの経口投与により、新生物疾患の治療に有用である。
【００５８】  上の方法を用いて、上記の２００ｇの活性成分を５０ｇ、２５０ｇおよび５００ｇに代えて５０ｍｇ、２５０ｍｇおよび５００ｍｇの活性成分を含有するカプセル剤を同様にして製造する。
【００５９】  組成物Ｂ
軟カプセル剤
まず０．５ｍｌのトウモロコシ油に化合物を懸濁し材料をカプセル化可能とし次いで上記のようにしてカプセル充填して、空気微粉砕機で細かく粉砕した活性成分を各２００ｍｇ含有する経口用の一体型軟ゼラチンカプセル剤を製造する。
【００６０】  上記のカプセル剤は、１日１ないし４回、１ないし２カプセルの経口投与により、新生物疾患の治療に有用である。
【００６１】  組成物Ｃ
錠剤
各々の錠剤が２００ｍｇの活性成分を含有する１０００個の錠剤を、次のタイプと量の成分から製造した。
活性成分、微粉末化                        ２００ｇ
乳糖                                      ３００ｇ
コーンスターチ                              ５０ｇ
ステアリン酸マグネシウム                      ４ｇ
軽油                                          ５ｇ
【００６２】  空気微粉砕機で細かく粉砕した活性成分を別の微粉砕した成分に加え、ついで完全に混合しスラグとする。スラグを１６号スクリーンを通し力を加えて破砕する。得られた顆粒を打錠して、各錠剤が２００ｍｇの活性成分を含有するようにする。
【００６３】  上記の錠剤は、１日１ないし４回、１ないし２錠の経口投与により、新生物疾患の治療に有用である。
【００６４】  上の方法を用いて、上記の２００ｇの活性成分を２５０ｇおよび１００ｇに代えて２５０ｍｇおよび１００ｍｇの活性成分を含有する錠剤を同様にして製造する。
【００６５】  組成物Ｄ
経口用懸濁剤
各茶さじ（５ｍｌ）用量が５０ｍｇの活性成分を含有する経口用の水性懸濁剤１リットルを、次のタイプと量の成分から製造する。
活性成分、微粉化                          １０ｇ
クエン酸                                    ２ｇ
安息香酸                                    １ｇ
蔗糖                                    ７９０ｇ
トラガカントガム                            ５ｇ
レモン油                                    ２ｇ
脱イオン水、適量  １０００ｍｌ
【００６６】  クエン酸、安息香酸、蔗糖、トラガカントガム、およびレモン油を充分な量の水に分散して８５０ｍｌの懸濁液とする。微粉末機で細かく粉砕した活性成分を、均一に分布したシロップ単位の中へ攪拌する。充分な量の水を加えて１０００ｍｌとする。
【００６７】  このようにして製造した組成物は、１日３回、茶さじ１杯（１５ｍｌ）の用量で新生物疾患の治療に有用である。
【００６８】  組成物Ｅ
非経口製品
新生物疾患治療のため  １ｍｌあたり３０ｍｇの活性成分含有の非経口注射のための滅菌水性懸濁剤を、次のタイプと量の成分から製造する。
活性成分、微粉化                          ３０ｇ
ポリソルベート８０                          ５ｇ
メチルパラベン                          ２．５ｇ
プロピルパラベン                      ０．１７ｇ
注射用水、適量１０００ｍｌ
【００６９】  活性成分以外のすべての成分を水に溶かし、その溶液を濾過により滅菌する。この滅菌溶液に、微粉砕機で細かく粉砕した滅菌活性成分を加え、そして最終懸濁液を滅菌バイアルに充填し、バイアルを密封する。
【００７０】  このようにして製造した組成物は、１日３回、１ｍｌの用量で新生物疾患の治療に有用である。
【００７１】  組成物Ｆ
坐剤、直腸および膣
新生物疾患治療のための、各々が２．５ｇの重量であり２００ｍｇの活性成分を含有する１０００個の坐剤を、次のタイプと量の成分から製造する。
活性成分、微粉化                              １５ｇ
プロピレングリコール                        １５０ｇ
ポリエチレングリコール＃４０００適量      ２５００ｇ
【００７２】  活性成分を空気微粉砕機で細かく粉砕し、プロピレングリコールに添加し、混合物が均一に分散されるまでコロイドミルを通過させる。ポリエチレングリコールを溶融し、プロピレングリコール分散液を攪拌しながらゆっくりと添加する。この懸濁液を、非冷却の型へ４０℃で注ぐ。組成物を放冷固化させ、ついで型から外し、各々の坐剤をホイルで包む。
【００７３】  上記の坐剤を、新生物疾患の治療のために直腸または膣に挿入する。
【００７４】  組成物Ｇ
経鼻用懸濁剤
１ｍｌあたり２０ｍｇの活性成分を含む経鼻滴下のための滅菌水性懸濁液１リットルを次のタイプと量の成分から製造する。
活性成分、微粉化                            １５ｇ
ポリソルベート８０                            ５ｇ
メチルパラベン                            ２．５ｇ
プロピルパラベン                        ０．１７ｇ
脱イオン水  適量                        １０００ｍｌ
【００７５】  活性成分以外のすべての成分を水に溶かし、その溶液を濾過により滅菌する。この滅菌溶液に、微粉砕機で細かく粉砕した滅菌活性成分を加え、そして最終懸濁液を無菌的に滅菌容器に充填する。
【００７６】  このようにして製造した組成物は、１日１−３回、０．２から０．５ｍｌの経鼻滴下により新生物疾患の治療に有用である。
【００７７】  活性成分はまた、経皮、経鼻、経径咽頭、経気管支または経口での局所的使用のために非希釈の純粋な形態でも存在することができる。
【００７８】  組成物Ｈ
粉末
バルク形態の活性成分５ｇを空気微粉砕機で細かく粉砕する。この微粉砕化した粉末を振盪型の容器に入れる。
【００７９】  上記の組成物は１日１−４回、粉末を局所部位に適用することにより新生物疾患の治療に有用である。
【００８０】  組成物Ｉ
経口用粉末
バルク型の活性成分１００ｇを空気微粉砕機で細かく粉砕する。この微粉砕化した粉末を、２００ｍｇの個々の用量に分けて包装する。
【００８１】  上記の組成物は１日１−４回、コップ１杯の水に１−２包装を経口投与することにより新生物疾患の治療に有用である。
【００８２】  組成物Ｊ
吹入剤
バルク型の活性成分１００ｇを空気微粉砕機で細かく粉砕する。
【００８３】  上記の組成物は１日１−４回、３００ｍｇを吹入することにより新生物疾患の治療に有用である。
【００８４】  上述したところから、それに基づく新規で有用な抗新生物薬剤および新規で有用な抗新生物製剤がここに記載され説明されており、それは上記の目的のすべてを極めて予期しない態様で満たしている。この開示に直面する当業者において容易に起こるその修飾、変更および適用は、請求の範囲で定義される本発明の精神の範囲内にあると意図されることは当然に理解される。
【国際調査報告】
2005514450.tif 000009