(57)【要約】本発明は、細胞増殖を保護・促進し、体内の粘膜組織、特に胃腸管粘膜の生理的構造および機能を回復するための、新規組成物および方法を提供する。組成物は、動物、好ましくはヒトの胃腸障害を治療するためまたは全身健康を促進するための、薬剤または栄養剤として用いることができる。組成物は、経口投与剤形であり、少なくとも0.5重量％の濃度のステロール化合物および3〜30重量％の濃度範囲の食用ロウとホモジナイズした食用油を含む。組成物はまた、様々な疾患を治療するために胃腸管に他の活性成分を送達するためにも用いることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下を含む、経口投与に適した組成物：
0.5〜50重量％の濃度範囲の食用ロウとホモジナイズした食用油、および少なくとも0.1重量％の濃度のステロール化合物。
【請求項２】
ステロール化合物の濃度が、0.5〜20重量％である、請求項1記載の組成物。
【請求項３】
ステロール化合物の濃度が、1〜10重量％である、請求項1記載の組成物。
【請求項４】
食用ロウの濃度が、3〜30重量％である、請求項1記載の組成物。
【請求項５】
食用ロウの濃度が、5〜20重量％である、請求項1記載の組成物。
【請求項６】
食用ロウの濃度が、6〜10重量％である、請求項1記載の組成物。
【請求項７】
食用ロウが、蜜ロウ、ヒマロウ、糖ロウ、およびカルナウバロウからなる群より選択される、請求項1記載の組成物。
【請求項８】
食用ロウが蜜ロウである、請求項1記載の組成物。
【請求項９】
食用油が動物または植物油である、請求項1記載の組成物。
【請求項１０】
食用油が、コーン油、麦芽油、大豆油、米ぬか油、菜種油、ゴマ油、および魚油からなる群より選択される、請求項1記載の組成物。
【請求項１１】
食用油がゴマ油である、請求項1記載の組成物。
【請求項１２】
食用油が脂肪酸含有油である、請求項1記載の組成物。
【請求項１３】
ステロール化合物が組成物に含まれる油中の脂肪酸によってエステル化される、請求項12記載の組成物。
【請求項１４】
脂肪酸が、パルミチン酸、リノレン酸、オレイン酸、トランスオレイン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、およびテトラコサン酸からなる群より選択される、請求項12記載の組成物。
【請求項１５】
0.1〜30重量％の濃度範囲の蜂ロウをさらに含む、請求項1記載の組成物。
【請求項１６】
1重量％未満の水を含む、請求項1記載の組成物。
【請求項１７】
0.1重量％未満の水を含む、請求項1記載の組成物。
【請求項１８】
錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、乳剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー、および懸濁剤からなる群より選択される経口投与剤形に調製される、請求項1記載の組成物。
【請求項１９】
軟または硬ゲルカプセルに調製される、請求項1記載の組成物。
【請求項２０】
ステロール化合物が動物ステロールまたはフィトステロールである、請求項1記載の組成物。
【請求項２１】
ステロール化合物が、スチグマステロール、カンペステロール、β-シトステロール、チャリノステロール、クリオナステロール、ブラッシカステロール、α-スピナステロール、ダンコステロール、デスモステロール、ポリフェラステロール、ならびにその全ての天然または合成異性体型および誘導体からなる群より選択されるフィトステロールである、請求項1記載の組成物。
【請求項２２】
ステロール化合物が、スチグマステロール、β-シトステロール、およびカンペステロールの配合物である、請求項1記載の組成物。
【請求項２３】
ステロール化合物がβ-シトステロールである、請求項1記載の組成物。
【請求項２４】
さらにバイカリンを含む、請求項1記載の組成物。
【請求項２５】
バイカリンの濃度が約0.01〜5重量％の範囲である、請求項24記載の組成物。
【請求項２６】
水溶液、有機溶媒、またはその配合液においてオウゴン（スクテラリア・バイカレンシス・ゲオルギ(Scutellaria baicalensis Georgi)）の抽出物をさらに含む、請求項1記載の組成物。
【請求項２７】
食用油が、ゴマ油における1〜50重量％の量のオウゴン抽出物である、請求項26記載の組成物。
【請求項２８】
オウゴンが、シソ科のスクテラリア・ビスシジュラBge、スクテラリア・アモエナC.H.ライト、スクテラリア・レデリアナ・ディエルス、スクテラリア・イコニコビ・ジュズ、スクテラリア・リキアンゲンシス・ディエルス、およびスクテラリア・ハイペリシフォリア・レブルからなる群より選択される、請求項26記載の組成物。
【請求項２９】
さらにオバクラクトンを含む、請求項1記載の組成物。
【請求項３０】
オバクラクトンの濃度が0.01〜50重量％である、請求項29記載の組成物。
【請求項３１】
水溶液、有機溶媒、またはその配合液においてオウバク（フェロデンドロン・アムレンス・ループル）の抽出物をさらに含む、請求項1記載の組成物。
【請求項３２】
食用油が、ゴマ油における1〜50重量％の量のオウバク抽出物である、請求項31記載の組成物。
【請求項３３】
オウバクが、フェロデンドロン・キネンス・シュネイド、フェロデンドロン・キネンス・シュネイド栽培品種グラブリウスクルム・シュネイド、フェロデンドロン・キネンス・シュネイド栽培品種オメイエンス・ヒュアン、フェロデンドロン・シュネイド栽培品種ユンナンエンス・ヒュアン、およびフェロデンドロン・キネンス・シュネイド栽培品種ファルクツム・ヒュアンからなる群より選択される、請求項31記載の組成物。
【請求項３４】
さらにオバベニンを含む、請求項1記載の組成物。
【請求項３５】
オバベニンの濃度が0.001〜5重量％の範囲である、請求項34記載の組成物。
【請求項３６】
水溶液、有機溶媒、またはその配合液においてオウレン（コプティス・キネシス・フランク）の抽出物をさらに含む、請求項1記載の組成物。
【請求項３７】
食用油が、ゴマ油における1〜50重量％の量のオウレン抽出物である、請求項36記載の組成物。
【請求項３８】
オウレンが、キンポウゲ科のコプティス・デルトイデアC.Y. チェン・シャオ、コプティス・オメイエンシス（チェン）C.Y.チェン、およびコプティス・ティートイデスC.Y.チェンからなる群より選択される、請求項36記載の組成物。
【請求項３９】
さらにベルベリンを約0.001〜5重量％の濃度範囲で含む、請求項1記載の組成物。
【請求項４０】
さらにナルコトリンを約0.001〜2重量％の濃度範囲で含む、請求項1記載の組成物。
【請求項４１】
水溶液、有機溶媒、またはその配合液において、ケシさく果（パパウェル・ソムニフェラム L.）の抽出物をさらに含む、請求項1記載の組成物。
【請求項４２】
食用油が、ゴマ油における1〜50重量％の量のケシさく果の抽出物である、請求項41記載の組成物。
【請求項４３】
水溶液、有機溶媒、またはその配合液において、オウゴン、オウバク、およびオウレンの配合物の抽出物をさらに含む、請求項1記載の組成物。
【請求項４４】
食用油が、ゴマ油における1〜50重量％の量のオウゴン、オウバク、およびオウレンの配合物の抽出物である、請求項43記載の組成物。
【請求項４５】
水溶液、有機溶媒、またはその配合液において、オウゴン、オウバク、オウレン、およびケシさく果の配合物の抽出物をさらに含む、請求項1記載の組成物。
【請求項４６】
食用油が、ゴマ油における1〜50重量％の量のオウゴン、オウバク、オウレン、およびケシさく果の配合物の抽出物である、請求項45記載の組成物。
【請求項４７】
水溶液、有機溶媒、またはその配合液において、ミミズの抽出物をさらに含む、請求項1記載の組成物。
【請求項４８】
食用油が、ゴマ油における1〜50重量％の量のミミズの抽出物である、請求項47記載の組成物。
【請求項４９】
水溶液、有機溶媒、またはその配合液においてオウゴン、オウバク、オウレン、ケシさく果、およびミミズの配合物の抽出物をさらに含む、請求項1記載の組成物。
【請求項５０】
食用油が、ゴマ油における1〜50重量％の量のオウゴン、オウバク、オウレン、ケシさく果、およびミミズの配合物の抽出物である、請求項49記載の組成物。
【請求項５１】
食用ロウが室温で微結晶型である、請求項1記載の組成物。
【請求項５２】
食用ロウが蜜ロウである、請求項51記載の組成物。
【請求項５３】
蜜ロウの微結晶型の長さが0.1〜100μmである、請求項52記載の組成物。
【請求項５４】
蜜ロウの微結晶型の長さが0.1〜100μmである、請求項52記載の組成物。
【請求項５５】
蜜ロウの微結晶の少なくとも二つが凝集して微結晶複合体を形成する、請求項52記載の組成物。
【請求項５６】
蜜ロウの微結晶が食用油中で実質的に均一に分散している、請求項52記載の組成物。
【請求項５７】
以下を含む、経口投与に適した組成物：
活性成分；および
3〜30重量％の濃度範囲の食用ロウとホモジナイズした食用油、
ここで、食用ロウは室温で食用油中に実質的に均一に分散される微結晶を形成する。
【請求項５８】
食用ロウが蜜ロウである、請求項57記載の組成物。
【請求項５９】
蜜ロウの微結晶型の長さが0.1〜100μmである、請求項58記載の組成物。
【請求項６０】
蜜ロウの微結晶型の長さが5〜70μmである、請求項58記載の組成物。
【請求項６１】
蜜ロウの微結晶型の長さが10〜50μmである、請求項57記載の組成物。
【請求項６２】
蜜ロウの微結晶の少なくとも二つが凝集して微結晶複合体を形成する、請求項57記載の組成物。
【請求項６３】
0.1〜20重量％の濃度範囲のステロール化合物をさらに含む、請求項56記載の組成物。
【請求項６４】
活性成分が、胃腸薬、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗新生物剤、鎮痛薬、トランキライザー、麻薬拮抗剤、抗うつ剤、抗ヒスタミン剤、抗偏頭痛剤、心血管薬、カルシウムチャンネル遮断剤、食欲抑制剤、避妊薬、コルチコステロイド、局所麻酔剤、利尿剤、抗高血圧剤、ステロイド、プロスタグランジン、抗炎症剤、抗血栓剤、強心配糖体、抗パーキンソン剤、依存性化学物質、酸性薬、およびペプチドからなる群より選択される、請求項56記載の組成物。
【請求項６５】
活性成分がサリチレートである、請求項56記載の組成物。
【請求項６６】
サリチレートがアスピリンである、請求項65記載の組成物。
【請求項６７】
以下を含む、宿主の胃腸管における粘膜の潰瘍化または刺激を予防する方法：
0.5〜50重量％の濃度範囲の食用ロウとホモジナイズした食用油と、少なくとも0.1重量％の濃度のステロール化合物とを含む組成物を、宿主に経口投与する段階。
【請求項６８】
宿主がヒトである、請求項67記載の方法。
【請求項６９】
宿主がアルコールを摂取する前に、組成物が宿主に経口投与される、請求項67記載の方法。
【請求項７０】
宿主が胃を刺激する香辛料に富む食物を摂取する前に、組成物が宿主に経口投与される、請求項67記載の方法。
【請求項７１】
宿主がアルコールまたは香辛料に富む食物を摂取した後に、組成物が宿主に経口投与される、請求項67記載の方法。
【請求項７２】
以下を含む、胃腸障害を有する宿主を治療する方法：
0.5〜50重量％の濃度範囲の食用ロウとホモジナイズした食用油と、少なくとも0.1重量％の濃度のステロール化合物とを含む組成物を、胃腸障害を有する宿主に経口投与する段階。
【請求項７３】
宿主がヒトである、請求項72記載の方法。
【請求項７４】
組成物が0.5〜15 g/日の量で経口投与される、請求項72記載の方法。
【請求項７５】
組成物が2〜8 g/日の量で経口投与される、請求項72記載の方法。
【請求項７６】
組成物が3〜6 g/日の量で経口投与される、請求項72記載の方法。
【請求項７７】
組成物が0.5 g軟ゲルカプセルに調製され、その1〜10個が宿主に1日2回経口投与される、請求項72記載の方法。
【請求項７８】
組成物が0.25 g軟ゲルカプセルに調製され、その1〜30個が宿主に1日2回経口投与される、請求項72記載の方法。
【請求項７９】
胃腸障害が、急性胃炎、慢性表層性胃炎、萎縮性胃炎、前庭胃炎、老人性胃炎、胆汁逆流性胃炎、食道炎、胃十二指腸潰瘍、消化不良、胃神経症、便秘、胃酸過多、低塩酸症、鼓腸、食後の胃腸の不快感、飲酒後の胃の不快感、および空腹による胃の不快感からなる群より選択される、請求項72記載の方法。
【請求項８０】
以下を含む、胃腸癌を有する患者を治療する方法：
0.5〜50重量％の濃度範囲の食用ロウとホモジナイズした食用油と、少なくとも0.1重量％の濃度のステロール化合物とを含む組成物を、胃腸癌を有する患者に経口投与する段階。
【請求項８１】
胃腸癌が、食道癌、胃癌、膵臓癌、肝臓癌、および胆管癌からなる群より選択される上部胃腸癌である、請求項80記載の方法。
【請求項８２】
胃腸癌が、結腸直腸癌、原発性リンパ腫、黒色腫、および大腸の肉腫からなる群より選択される下部胃腸癌である、請求項80記載の方法。
【請求項８３】
以下を含む、宿主の胃腸管において酸性薬による粘膜の潰瘍化または刺激を予防する方法：
酸性薬を宿主に投与する段階；および
0.5〜50重量％の濃度範囲の食用ロウとホモジナイズした食用油と、少なくとも0.1重量％の濃度のステロール化合物とを含む組成物を宿主に経口投与する段階。
【請求項８４】
酸性薬がサリチレートである、請求項83記載の方法。
【請求項８５】
サリチレートがアスピリンである、請求項84記載の方法。
【請求項８６】
酸性薬の投与前に、組成物が宿主に経口投与される、請求項83記載の方法。
【請求項８７】
0.5〜50重量％の濃度範囲の食用ロウとホモジナイズした食用油と、少なくとも0.1重量％の濃度のステロール化合物とを含む組成物を宿主に経口投与する段階を含む、宿主の健康を促進する方法。
【請求項８８】
以下を含む、インビボで粘膜組織に活性成分を送達するための組成物を製造する方法：
食用ロウをその融点より高い温度で加熱する段階；
食用ロウの融点より高い温度で食用油を加熱する段階；
融解したロウと油とを重量比3：97〜20：80の範囲で混合する段階；および
ロウと油の混合物をホモジナイズする段階。
【請求項８９】
ロウと油の混合物をホモジナイズする段階が、混合物をホモジナイザーにおいて6000〜10000 rpmの速度で35〜45℃で15〜20分間ホモジナイズする段階を含む、請求項88記載の方法。
【請求項９０】
ロウと油の混合物をホモジナイズする段階が、混合物をコロイドミルにおいてそのギア距離0.2〜0.8μmでホモジナイズする段階を含む、請求項88記載の方法。
【請求項９１】
オウゴンの根を重量比1：99〜10：90の範囲で食用油に加える段階と、混合物を食用ロウの融点より高い温度で加熱する段階とをさらに含む、請求項88記載の方法。
【請求項９２】
ロウと油のホモジナイズした混合物をゲルカプセルに加える段階をさらに含む、請求項88記載の方法。
【請求項９３】
ゲルカプセルが、ゼラチンおよびグリセリン製の軟ゲルカプセルである、請求項92記載の方法。
【請求項９４】
食用ロウが、融点70〜80℃の蜜ロウである、請求項88記載の方法。
【請求項９５】
食用油がゴマ油である、請求項88記載の方法。
【請求項９６】
活性成分を食用油に加える段階と、油を食用ロウの融点より高く加熱する段階とをさらに含む、請求項88記載の方法。
【請求項９７】
以下を含む、インビボで損傷粘膜組織を保護または治療するための組成物を製造する方法：
ゴマ油とオウゴンの重量比70：30〜98：2の混合物を80〜140℃の温度で30〜120分間加熱する段階；
混合物を濾過して、ゴマ油濾液を得る段階；
ゴマ油濾液を70〜90℃に冷却する段階；
蜜ロウをゴマ油濾液に重量比3：93〜10：90で加える段階；
蜜ロウとゴマ油濾液の混合物を80〜140℃で20〜60分間攪拌しながら加熱する段階；および
蜜ロウとゴマ油濾液の混合物をホモジナイズする段階。
【請求項９８】
蜜ロウとゴマ油濾液の混合物をホモジナイズする段階が、蜜ロウの微結晶が形成されて、室温で油中に実質的に均一に分散するまで、混合物をホモジナイズする段階を含む、請求項97記載の方法。
【請求項９９】
以下を含む、インビボで損傷粘膜組織を保護または治療するための組成物を製造する方法：
ゴマ油と配合物の重量比が70：30〜98：2である、ゴマ油と、乾燥オウゴン、オウバク、オウレン、ケシさく果、およびミミズの配合物との混合物を80〜180℃の温度で10〜120分間加熱する段階；
混合物を濾過して、ゴマ油濾液を得る段階；
ゴマ油濾液を70〜90℃に冷却する段階；
蜜ロウをゴマ油濾液に重量比3：93〜10：90で加える段階；
蜜ロウとゴマ油濾液の混合物を80〜180℃で10〜60分間攪拌しながら加熱する段階；および
蜜ロウとゴマ油濾液の混合物をホモジナイズする段階。
【請求項１００】
蜜ロウとゴマ油濾液の混合物をホモジナイズする段階が、蜜ロウの微結晶が形成され、室温で油中に実質的に均一に分散されるまで、混合物をホモジナイズする段階を含む、請求項99記載の方法。
【請求項１０１】
蜜ロウとゴマ油の混合物をホモジナイズする段階が、混合物をホモジナイザーにおいて6000〜10000 rpmの速度で35〜45℃で15〜20分間ホモジナイズする段階を含む、請求項99記載の方法。
【請求項１０２】
蜜ロウとゴマ油の混合物をホモジナイズする段階が、混合物をコロイドミルにおいてそのギア距離0.2〜0.8μmでホモジナイズする段階を含む、請求項99記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
発明者：Rongxiang Xu
【０００２】
関連出願の相互参照
本出願は、参照として本明細書に組み入れられる、2001年6月28日に提出された「インビボおよびインサイチューでの再生幹細胞の培養による生理的組織修復と機能的臓器再生」と題する米国特許仮出願第60/301,961号に対する優先権を主張する。
【０００３】
発明の背景
発明の分野
本発明は、組織の修復および再生のための方法および組成物に関し、より詳しくは、刺激物質によって引き起こされる障害から粘膜組織を保護するため、そして胃腸管において損傷を受けたまたは機能障害の粘膜組織の修復および再生を促進するための方法および組成物、特に胃炎、消化性潰瘍、逆流性食道炎、消化不良、および胃癌のような胃腸障害を治療するため、ならびに粘膜組織の生理的構造および機能を回復するための方法および組成物に関する。
【０００４】
関連技術の説明
粘膜組織（粘膜とも呼ばれる）は、口、鼻、眼瞼および生殖器官、ならびに消化管（例えば、胃腸（GI）管）および呼吸器のような体腔に沿って並ぶ膜である。粘膜は外気に曝されるために、粘液を分泌して、粘膜を湿らせて環境要因の有害な影響から自身を保護する。
【０００５】
粘膜は主に、基底膜に結合した上皮細胞を含む。眼瞼の内部表面の粘膜組織とは異なり、胃内部に沿って並ぶ上皮細胞は、かなり過酷な条件、例えば食物を消化するための酸（例えば、塩酸）、時にアルコール、酵素（例えば、ペプシン）およびそれによって生成された老廃物に曝露される。粘液様の分泌物は、例えば、胃の内層に対する酸の作用のいくつかを中和するために重炭酸塩、および酵素活性を遮断するために阻害剤を提示することによって、本質的に胃および十二指腸内部の細胞を、酸または酵素による障害から保護する。上皮細胞の粘液の分泌が停止すると、胃または十二指腸の内層は最終的に、酸および酵素の複合作用によって侵食され、潰瘍に至る。
【０００６】
現代の医学研究によって、急性胃炎、慢性表層性胃炎、萎縮性胃炎、前庭（antral）胃炎、老人性胃炎、胆汁逆流性胃炎、食道炎、胃十二指腸潰瘍、消化不良、胃神経症、便秘のような様々な胃腸疾患の形成のみならず、胃酸過多、低塩酸症、鼓腸、食後の胃腸の不快感、飲酒後の胃の不快感、および空腹による胃の不快感を含む様々なその後の病態に帰することができる多くの要因が同定された。要因には：（1）飲酒、喫煙、投薬と共に、胃粘膜を直接障害するまたは胃酸分泌を刺激することによって胃粘膜障壁を破壊する他の要因；（2）胃腸粘膜の障害を引き起こす全ての種類の微生物の感染およびその毒素；（3）胃腸液における分泌性IgAの含有量の減少を引き起こし、それによって細菌および毒素の体からの排泄が障害され、胃粘膜障壁をさらに破壊する、免疫機能の低下；（4）胃粘膜表面の粘液を除去して、それによって胃粘膜障壁を破壊する十二指腸の逆流；（5）胃潰瘍に至る慢性胃炎；（6）胃腸疾患を引き起こすまたは関与する便秘；ならびに（7）それによって便秘が起こる腸疾患による腸壁の神経構造の障害、が含まれる。
【０００７】
胃炎および消化性潰瘍疾患における粘膜損傷の生理的メカニズムは、酸の産生またはペプシンのような攻撃的因子と、粘液産生、重炭酸塩、および血流のような防御因子との不均衡であると考えられている。びらん性の胃炎は、通常、重度の疾患または様々な薬剤に関係している。ストレス、エタノール、胆汁、および非ステロイド性抗炎症薬は、胃粘膜障壁を破壊して、正常な胃酸分泌の攻撃を受けやすくする。短いらせん状の微好気性グラム陰性桿菌であるヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori）菌感染症は、消化性潰瘍疾患の主な原因であると広く考えられている。ピロリ菌は、胃粘膜を覆う粘膜ゲルの深部層に定着して、おそらくその保護的性質を破壊する。ピロリ菌は、慢性活動型胃炎のほぼ全ての患者に感染していると考えられている。
【０００８】
GI管における障害を受けたまたは機能障害の粘膜組織に関連した上記の病態を治療するために様々な薬剤が開発されている。一つのアプローチは、胃炎の症状を軽減するために制酸剤を用いることによって胃酸を中和することである。例えば、水酸化アルミニウムおよび水酸化マグネシウム（MAALUX（登録商標）およびMYLANTA（登録商標））は、胃の酸性度を中和して、胃および十二指腸球のpHを上昇させる。アルミニウムイオンは、平滑筋の収縮を阻害して、それによって胃内容物の排出を阻害する。腸機能の変化が起こらないように、アルミニウムとマグネシウム制酸剤の混合物が用いられている。
【０００９】
もう一つのアプローチは、壁細胞に及ぼすヒスタミンの作用を阻害するために、酸分泌を阻害するH2-受容体拮抗剤を用いることである。H2-受容体拮抗剤の例には、シメチジン（TAGAMET（登録商標））、ニザチジン（AXID（登録商標））、塩酸ラニチジン（ZANTAC（登録商標））、ランソプラゾール（PREVACID（登録商標））、およびラベプラゾール（ACIPHEX（登録商標））が含まれる。シメチジンは、胃壁細胞のH2受容体でヒスタミンを阻害して、胃酸分泌、胃容積を減少させて、水素濃度を低下させる。ニザチジンは、胃壁細胞のH2受容体でヒスタミンを競合的に阻害して、同様に、胃酸分泌、胃容積を減少させ、水素濃度を低下させる。ランソプラゾールは、壁細胞のH+/K+ ATPポンプを阻害することによって胃酸分泌を減少させ、活動性十二指腸潰瘍およびびらん性食道炎の症状を軽減する。ラベプラゾールも同様に、壁細胞のH+/K+ ATPポンプを阻害して、胃酸分泌を減少させ、胃炎の短期治療および症状の軽減のために、そして活動性十二指腸潰瘍および全ての進行段階のびらん性食道炎の治療のために用いられている。
【００１０】
これらの制酸剤または抗潰瘍剤は、症状を一時的に緩和することができるが、潰瘍の完全な治癒および再発の防止にはそれほど有効ではないことが示されている。治療後、粘膜は修復される可能性があるが、粘膜の生理的構造および機能は回復していない。さらに、これらの薬剤を高用量で長期間使用すると、便秘、下痢、悪心および嘔吐、腹部不快感および腹痛、ならびに中枢神経、心血管、および肝臓系における他の有害反応のような様々な副作用を引き起こしうる。このように、現在の技術分野の戦略とは異なる戦略を用いて、GI管における粘膜に対する障害を予防して、粘膜を治療するための革新的な組成物および方法を開発する必要がある。
【発明の開示】
【００１１】
発明の概要
障害を受けたまたは機能不全の粘膜に生理的構造および機能を回復するため、体の栄養吸収能を増強するため、健康でバランスのとれた代謝を得るため、および最終的に全身の健康を促進するために、GI管の粘膜を修復および再生を促進する組成物および方法を提供する。組成物は、鼻、肺、肛門、膣、眼、および口腔粘膜のような他の臓器の機能障害粘膜を治療するためのみならず、心臓、肝臓、膵臓、腎臓、および肺のような他の臓器の組織修復および再生に用いられるように適合させてもよいことに注意すべきである。
【００１２】
一つの態様において、GI管における粘膜細胞増殖を促進するために、経口投与に適した組成物が提供される。組成物は、経口投与剤形であり、以下を含む：0.5〜50重量％の濃度範囲の食用ロウとホモジナイズした食用油および少なくとも0.1重量％の濃度のステロール化合物。
【００１３】
ステロール化合物の濃度は、好ましくは約0.5〜20重量％、より好ましくは約1〜10重量％、および最も好ましくは約2〜6重量％の範囲である。
【００１４】
食用ロウの濃度は好ましくは、約3〜30重量％、より好ましくは約5〜20重量％、および最も好ましくは約6〜10重量％の範囲である。
【００１５】
食用ロウは、ヒトに経口投与するために適した如何なる天然または合成のロウであってもよい。食用ロウの例には、蜜ロウ、ヒマロウ、糖ロウ、およびカルナウバロウが含まれるがこれらに限定されない。好ましい態様において、食用ロウは蜜ロウである。
【００１６】
食用油は、ヒトへの経口投与に適した如何なる天然または合成の油であってもよく、好ましくは脂肪酸含有油であり、鉱油を除く。天然油の例には、コーン油、麦芽油、大豆油、米ぬか油、菜種油、ゴマ油、魚油、ならびに他の植物および動物油が含まれるがこれらに限定されない。好ましい態様において、食用油はゴマ油である。
【００１７】
組成物はさらに、蜂ロウを約0.1〜30重量％、より好ましくは約1〜20重量％、および最も好ましくは約5〜10重量％の濃度で含んでもよい。
【００１８】
組成物は、好ましくは、水を最少量含み、より好ましくは水を0.5重量％未満、および最も好ましくは水を0.1重量％未満含む。
【００１９】
経口投与の場合、本発明の組成物は、当技術分野で周知の薬学的に許容される担体と配合することによって、容易に製剤化することができる。そのような担体によって、化合物は、治療すべき患者が経口で摂取するために、錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、乳剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー、懸濁剤等として調製することができる。
【００２０】
好ましい態様において、本発明の組成物はカプセル剤に含まれる。経口投与のために適したカプセル剤には、ゼラチン製の硬カプセルと共に、ゼラチンとグリセロールまたはソルビトールのような可塑剤とで構成される軟密封カプセルが含まれる。より好ましくは、本発明の組成物は軟カプセルに含まれる。本発明の組成物は、脂肪油または液体ポリエチレングリコールのような適した液体に溶解または懸濁してもよい。さらに、安定化剤を加えてもよい。
【００２１】
もう一つの態様において、薬剤または栄養剤として経口投与に適した組成物が提供される。組成物は、活性成分と、3〜30重量％の濃度範囲の食用ロウとホモジナイズした食用油とを含み、食用ロウは、室温で食用油中に実質的に均一に分散する微結晶を形成する。微結晶の大きさは、長さが好ましくは0.1〜100μm、より好ましくは5〜70μm、および最も好ましくは10〜50μmである。微結晶の形は、濃度および温度に応じて変化してもよい。室温では、微結晶は、単一の針状結晶型および／または互いに凝集することによって微結晶複合体を形成する可能性がある。
【００２２】
組成物はさらに、ステロール化合物を0.1〜20重量％、より好ましくは約1〜10重量％、および最も好ましくは約2〜6重量％の濃度範囲で含んでもよい。
【００２３】
活性成分は、以下のクラスの薬剤のような、疾患を治療するため、または全身健康を促進するための如何なる薬剤であってもよい：1）胃腸薬；2）抗生物質；3）抗ウイルス剤；4）抗菌剤；5）抗新生物剤；6）鎮痛薬；7）トランキライザー；8）麻薬拮抗剤；9）抗うつ剤；10）抗ヒスタミン剤；11）抗偏頭痛剤；12）心血管剤；13）カルシウムチャンネル遮断剤；14）食欲抑制剤；15）避妊薬；16）コルチコステロイド；17）局所麻酔剤；18）利尿剤；19）抗高血圧剤；20）ステロイド；21）プロスタグランジン；22）抗炎症剤；23）抗血栓剤；24）強心配糖体；25）抗パーキンソン剤；26）依存性化学物質；27）サリチレート（例えば、アスピリン）のような酸性薬；および28）ペプチド。
【００２４】
上記の任意の態様に従って、ステロール化合物は、動物ステロールまたは植物ステロール（フィトステロールとも呼ばれる）であってもよい。選択的に、食用油が脂肪酸含有油である場合、ステロール化合物は、高温（例えば、＞100℃）のような適した条件で組成物に含まれる油中の脂肪酸によってエステル化してもよい。
【００２５】
動物ステロールの例には、コレステロールならびに全ての天然または合成の異性体およびその誘導体が含まれる。好ましくは、ステロール化合物は、スチグマステロール、カンペステロール、β-シトステロール、チャリノステロール、クリオナステロール、ブラッシカステロール、α-スピナステロール、ダンコステロール、デスモステロール、ポリフェラステロール、ならびに全ての天然または合成の異性体およびその誘導体からなる群より選択される。より好ましくは、ステロール化合物は、スチグマステロール、β-シトステロール、およびカンペステロールの配合物であり、本明細書において集合的に「シトステロール」と呼ぶ。
【００２６】
例えば、側鎖を含めることのようなステロール化合物に対する改変も、本発明の範囲に含まれると理解すべきである。同様に、本発明は、組成物を形成するステロールの如何なる特定の組み合わせにも限定されないと理解すべきである。
【００２７】
上記の任意の態様に従って、本発明の組成物はさらに、バイカリンを約0.01〜5重量％、より好ましくは約0.1〜2重量％、および最も好ましくは約0.1〜1重量％の濃度範囲で含んでもよい。
【００２８】
上記の任意の態様に従って、本発明の組成物は、水溶液、油およびアルコールのような有機溶媒、または水と有機溶媒の配合液において、さらにオウゴン（ラディックス・スクテラリアエ(Radix Scutellariae)）の抽出物を含んでもよい。好ましくは、組成物中の食用油は、油中の1〜50重量％の量のオウゴン抽出物である。好ましくは、オウゴンの根を用い、これは、シソ科のスクテラリア・ビスシジュラ（Scutellaria viscidula）Bge、スクテラリア・アモエナC.H.ライト（Scutellaria amoena C.H. Wright）、スクテラリア・レデリアナ・ディエルス（Scutellaria rehderiana Diels）、スクテラリア・イコニコビ・ジュズ（Scutellaria ikonnikovii Juz）、スクテラリア・リキアンゲンシス・ディエルス（Scutellaria likiangensis Diels）、およびスクテラリア・ハイペリシフォリア・レブル（Scutellaria hypericifolia Levl）からなる群の一つまたはそれ以上のメンバーから選択される植物から得てもよい。
【００２９】
上記の任意の態様に従って、本発明の組成物はさらに、オバクラクトンを好ましくは約0.01〜5重量％、より好ましくは約0.1〜2重量％、および最も好ましくは約0.1％〜1重量％の濃度範囲で含んでもよい。
【００３０】
上記の任意の態様に従って、本発明は、水溶液、油およびアルコールのような有機溶媒、または水と有機溶媒の配合液において、さらに乾燥オウバク（フェロデンドロン・アムレンス・ループル(Phellodendron amurense Rupr)）の抽出物を含んでもよい。好ましくは、組成物中の食用油は、油中の1〜50重量％の量のオウバク抽出物である。好ましくは、オウバクの樹皮を用い、これは、フェロデンドロン・キネンス・シュネイド（Phellodendron chinense Schneid）、フェロデンドロン・キネンス・シュネイド栽培品種グラブリウスクルム・シュネイド（Phellodendron chinense Scheid var. glabriusculum Schneid）、フェロデンドロン・キネンス・シュネイド栽培品種オメイエンス・ヒュアン（Phellodendron chinense Schneid var. omeiense Huang）、フェロデンドロン・シュネイド栽培品種ユンナンエンス・ヒュアン（Phellodendron Schneid var. yunnanense Huang）、およびフェロデンドロン・キネンス・シュネイド栽培品種ファルクツム・ヒュアン（Phellodendron chinense Schneid var. falcutum Huang）からなる群の一つまたはそれ以上のメンバーから選択される植物から得てもよい。
【００３１】
上記の任意の態様に従って、本発明の組成物はさらに、オバベニンを、好ましくは約0.001〜2重量％、より好ましくは約0.002〜0.5重量％、および最も好ましくは約0.003〜0.1重量％の濃度範囲で含んでもよい。
【００３２】
上記の任意の態様に従って、本発明の組成物は、水溶液、油およびアルコールのような有機溶媒、または水と有機溶媒の配合液において、さらにオウレン（コプティス・キネシス・フランク(coptis chinensis Franch)）の抽出物を含んでもよい。好ましくは、組成物中の食用油は、油中の1〜50重量％の量のオウレン抽出物である。好ましくは、オウレンの根が用いられる。オウレンは、キンポウゲ科のコプティス・デルトイデアC.Y. チェン・シャオ（Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao）、コプティス・オメイエンシス（チェン）C.Y.チェン（Coptis omeiensis (Chen) C.Y.Cheng）、およびコプティス・ティートイデスC.Y.チェン（Coptis teetoides C.Y. Cheng）からなる群の一つまたはそれ以上のメンバーから選択してもよい。
【００３３】
上記の任意の態様に従って、本発明の組成物はさらに、ベルベリンを、好ましくは約0.001〜2重量％、より好ましくは約0.002〜0.5重量％、および最も好ましくは約0.003〜0.1重量％の範囲の濃度で含んでもよい。
【００３４】
上記の任意の態様に従って、本発明の組成物はさらに、ナルコトリンを、好ましくは約0.001〜2重量％、より好ましくは約0.002〜0.5重量％、および最も好ましくは約0.003〜0.1重量％の濃度範囲で含んでもよい。
【００３５】
上記の任意の態様に従って、水溶液、油およびアルコールのような有機溶媒、または水と有機溶媒の配合液においてケシさく果（パパウェル・ソムニフェラム L.(Papaver somniferam L.)）の抽出物を含んでもよい。好ましくは、組成物中の食用油は、油中の1〜20重量％の量のケシさく果抽出物である。
【００３６】
上記の任意の態様に従って、本発明の組成物はさらに、水溶液、油およびアルコールのような有機溶媒、または水と有機溶媒の配合液においてオウゴン、オウバク、オウレンの抽出物を含んでもよい。好ましくは、組成物中の食用油は、配合物の全量が油中の1〜50重量％である、オウゴン、オウバク、オウレンの配合物の抽出物である。
【００３７】
上記の任意の態様に従って、本発明の組成物は、水溶液、油およびアルコールのような有機溶媒、または水と有機溶媒の配合液においてオウゴン、オウバク、オウレン、およびケシさく果の抽出物をさらに含んでもよい。好ましくは、組成物中の食用油は、配合物の全量が油中の1〜50重量％である、オウゴン、オウバク、オウレン、およびケシさく果の配合物の抽出物である。
【００３８】
上記の任意の態様に従って、本発明の組成物は、さらに、様々なアミノ酸、好ましくは細胞増殖に栄養補助を与えるために天然のアミノ酸18個全てを含んでもよい。アミノ酸は、化学合成してもよく、天然資源から得てもよい。
【００３９】
上記の任意の態様に従って、本発明の組成物は、水溶液、油およびアルコールのような有機溶媒、または水と有機溶媒の配合液において、さらにミミズの抽出物を含んでもよい。好ましくは、組成物中の食用油は、油中の1〜50重量％の量であるミミズの抽出物である。
【００４０】
上記の任意の態様に従って、本発明の組成物は、さらに、水溶液、油およびアルコールのような有機溶媒、または水と有機溶媒の配合液においてオウゴン、オウバク、オウレン、ケシさく果、およびミミズの抽出物を含んでもよい。好ましくは、組成物中の食用油は、配合物の全量が油中の1〜50重量％である、オウゴン、オウバク、オウレン、ケシのさく果、およびミミズの配合物の抽出物である。
【００４１】
もう一つの局面において、本発明は、おそらく再生粘膜細胞の増殖を促進することによって、粘膜を保護および修復する方法を提供する。これらの細胞を用いることによって、障害または機能障害粘膜の生理的構造および機能が回復して、体の栄養吸収能を増強する可能性があり、これによって疾患と闘うために、体の全身健康を改善して、免疫を強化することができる。
【００４２】
一つの態様において、宿主の胃腸管における粘膜の潰瘍形成または刺激を防止する方法が提供される。方法は、0.5〜50重量％の濃度範囲で食用ロウとホモジナイズした食用油と、少なくとも0.1重量％の濃度のステロール化合物とを含む組成物を宿主に経口投与することを含む。
【００４３】
この態様に従って、宿主は好ましくはヒトである。予防として、組成物は、胃へのアルコール、香辛料に富む食物、または他の刺激物の摂取前に宿主に投与してもよい。または、組成物は、これらの刺激物の胃への摂取後に宿主に投与してもよい。
【００４４】
さらにもう一つの態様において、胃腸障害を有する宿主を治療する方法。方法は、0.5〜50重量％の濃度範囲の食用ロウとホモジナイズした食用油と、少なくとも0.1重量％の濃度のステロール化合物とを含む組成物を、胃腸障害を有する宿主に経口投与することを含む。
【００４５】
この態様に従って、宿主は好ましくはヒトである。組成物は、医師の処方によって、または医師の処方なしで薬剤、栄養食品、または健康食品として用いてもよい。投与レジメは宿主の病態の重症度に応じて変化してもよい。組成物は、好ましくは0.5〜10 g/日、より好ましくは2〜8 g/日、および最も好ましくは3〜6 g/日の量で投与される。例えば、組成物を0.5 g軟ゲルカプセルとして提供する場合、カプセル1〜10個を1日2回投与してもよい。
【００４６】
胃腸障害の例には、急性胃炎、慢性表層性胃炎、萎縮性胃炎、前庭胃炎、老人性胃炎、胆汁逆流性胃炎、食道炎、胃十二指腸潰瘍、消化不良、胃神経症、便秘のような胃腸疾患のみならず、胃酸過多、低塩酸症、鼓腸、食後の胃腸の不快感、飲酒後の胃の不快感、および空腹による胃の不快感を含む様々なその後の病態が含まれるがこれらに限定されない。
【００４７】
さらにもう一つの態様において、胃腸癌を有する患者を治療する方法が提供される。方法は、0.5〜50重量％の範囲の濃度の食用ロウとホモジナイズした食用油と、少なくとも0.1重量％の濃度のステロール化合物とを含む組成物を、胃腸癌を有する宿主に経口投与することを含む。
【００４８】
胃腸（GI）癌は、上部または下部GI癌となりうる。上部GI癌の例には、1）食道癌；2）胃癌；3）膵臓癌；4）肝臓癌；および5）胆管癌が含まれるがこれらに限定されない。下部GI癌の例には、結腸直腸癌のような大腸癌、原発性リンパ腫、黒色腫、および大腸の肉腫が含まれるがこれらに限定されない。
【００４９】
同様に、選択的に、本発明の組成物は、治療物質を含む固体疎水性ポリマーの半透過性マトリクスのような徐放性システムを用いて送達してもよい。様々なタイプの徐放性材料が確立されており、当業者に周知である。徐放性カプセルは、その化学特性に応じて本発明の組成物を、数週間から100日間をこえて放出してもよい。
【００５０】
さらにもう一つの態様において、インビボで粘膜組織に活性成分を送達するための組成物を製造する方法が提供される。方法は、食用ロウをその融点より高い温度に加熱する段階；食用油を食用ロウの融点より高い温度に加熱する段階；融解したロウと油とを重量比3：97〜20：80の範囲で混合する段階；およびロウと油の混合物をホモジナイズする段階を含む。
【００５１】
この態様に従って、方法は、さらに、オウゴン（ラディックス・スクテラリア(Radix Scutellaria)）の根を食用油に1：99〜10：90の重量比で加える段階、および食用ロウの融点より高い温度で混合物を加熱する段階を含んでもよい。
【００５２】
この態様に従って、方法は、ロウと油のホモジナイズした混合物をゲルカプセルに加える段階をさらに含んでもよい。ゲルカプセルは硬または軟ゲルカプセルであってもよい。
【００５３】
食用ロウは、好ましくは融点70〜80℃の蜜ロウであり、食用油はゴマ油である。
【００５４】
ロウと油の混合物は、ホモジナイザーによって、好ましくは6000〜10000 rpmで35〜45℃で15〜20分間ホモジナイズしてもよい。または、ロウと油の混合物をコロイドミルによってホモジナイズしてもよい。
【００５５】
さらにもう一つの態様において、インビボで損傷を受けた粘膜組織を保護または治療する組成物を製造する方法が提供される。方法は、ゴマ油とオウゴンの重量比70：30〜98：2の混合物を温度80〜180℃で10〜120分加熱する段階；混合物を濾過して、ゴマ油濾液を得る段階；ゴマ油濾液を70〜90℃に冷却する段階；蜜ロウを重量比3：93〜10：90でゴマ油濾液に加える段階；蜜ロウとゴマ油濾液の混合物を攪拌しながら80〜180℃で10〜60分間加熱する段階；および蜜ロウとゴマ油濾液の混合物をホモジナイズする段階を含む。
【００５６】
さらにもう一つの態様において、インビボで損傷を受けた粘膜組織を保護または治療する組成物を製造する方法が提供される。方法は、ゴマ油と配合物の重量比が70：30〜98：2である、ゴマ油と、乾燥オウゴン、オウバク、オウレン、ケシのさく果およびミミズの配合物との混合物を80〜180℃の温度で10〜120分間加熱する段階；混合物を濾過してゴマ油濾液を得る段階；ゴマ油濾液を70〜90℃に冷却する段階；蜜ロウをゴマ油濾液に重量比3：93〜10：90で加える段階；蜜ロウとゴマ油濾液の混合物を攪拌しながら80〜180℃で10〜60分間加熱する段階；および蜜ロウとゴマ油濾液の混合物をホモジナイズする段階を含む。
【００５７】
上記の組成物を製造する任意の方法に従って、蜜ロウとゴマ油濾液の混合物をホモジナイズすることには、蜜ロウの粒子または微結晶が、室温で油中に実質的に均一に分散されるまで、混合物をホモジナイズすることが含まれてもよい。
【００５８】
発明の詳細な説明
本発明は、体の粘膜組織、特に胃腸（GI）管粘膜の生理的修復および機能的再生のための革新的な方法および組成物を提供する。先駆けとなる革新は、概念および実践の面の双方において多面的であり、インサイチューおよびインビボで再生幹細胞の誘導および増殖を通して組織を修復および臓器を再生する技術に主に重点を置く。
【００５９】
実施例の章に示すように、本発明者らは、本発明の組成物が、インビトロで粘膜細胞の強い増殖を維持して刺激することができ、動物モデルにおいて胃潰瘍の生理的治癒を促進できることを実験的に証明した。本発明者らは、GI管、特に胃において再生条件を提供することによって、損傷を受けた粘膜を有効に修復することができると考えている。GI管に投与すると、本発明の組成物は、胃の粘膜と混合され、粘膜に接着して保護膜を形成する。そのような人工膜は、胃に含まれる酸、アルコール、食物、および他の材料のさらなる刺激から粘膜を保護する。これらの条件では、組成物中の活性成分は、部位に徐々に放出されてそこで再生幹細胞を活性化して、粘膜の迅速な修復を促進する。本発明の組成物は、インサイチューおよびインビボで再生にとって都合のよい状態を提供することから、粘膜は、その生理的構造および／または機能が回復して修復および／または再生されうる。図3Bに示すように、本発明の組成物は、動物モデルにおいて胃潰瘍の治癒に成功したが、治療しなかった対照群のラットはなおも重度の胃潰瘍を有する（図3A）。さらに、その独自の投与剤形により、本発明の組成物は、その形態を変化させることによってピロリ菌の毒性を有効に阻害する可能性がある。健康なGI管の再生によって、ピロリ菌の定着に都合のよい潰瘍条件が破壊され、それによって菌の増殖が間接的に阻害される。さらに、損傷を受けたまたは機能障害粘膜に通常の生理的構造および機能を回復することによって、体の栄養吸収能が増強されて、それによって健康でバランスのとれた代謝、および全身健康が得られる。
【００６０】
酸の中和による、または単剤（例えば、ラニチジン）によるヒスタミンH2-受容体の阻害による、GI管の障害を治療するための従来のアプローチとは異なり、本発明は、以下の根本的原理の指針に従って完全に異なるアプローチを開示する。
【００６１】
1．成体組織修復および臓器再生の根本的原理
本発明は、図1に示す、インビボおよびインサイチューでの成体組織修復および再生の根本的原理を明らかにする。
【００６２】
1）全般的原理
全般的に、成体の十分に発達した体は、再生環境が提供されれば、その損傷組織の修復能およびインサイチューでのその臓器の再生能を有する。図1に示すように、創傷または他の種類の損傷に反応して、損傷臓器における残留生存細胞が活性化されて、それら自身を、胚幹細胞の相対物である成体幹細胞（ASC）に変換する。そのような成体幹細胞の誘導によって、臓器の再生にとって必要な大量かつ多様な細胞がこれらの幹細胞によって提供されることが可能となる。
【００６３】
しかし、これらの新生幹細胞は非常に脆弱で、様々な環境要因によって示される細胞障害作用によって、および損傷に対する制御されない細胞反応のために死滅しやすい。図1に示すように、本発明の組成物によって提供される適した培養条件では、これらの成体幹細胞は増殖して、胚の発達段階で既に遺伝的にプログラムされた方向に従って、様々な多能性組織幹細胞へと発達する。そのような多機能組織幹細胞が生成されることによって、生理的に機能的な組織を形成するために必要な様々なタイプの細胞の豊富な供給が確保される。
【００６４】
図1をなおも参照して、本発明の組成物によって提供された最適な培養条件では、これらの組織幹細胞は増殖して、特定の種類の組織に関して特定のタイプの細胞に分化する。特定のタイプの分化した細胞は、組織特異的細胞接着を通して互いに会合して、新生組織を形成する。そのような組織特異的細胞会合様式を、本明細書において「細胞結合」と呼ぶ。次に、新たに再生された組織は、臓器特異的組織-組織結合を形成して、発達途中の胎児における組織集合プロセスを模倣することによって、新生臓器に集合する。成体におけるそのような臓器特異的組織会合様式を、本明細書において集合的に「組織構造」と呼ぶ。
【００６５】
最後に、再構成された臓器内の新生組織は、本発明の組成物の調節下で、生理的にバランスのとれた細胞タイプおよび数で、個々の機能的組織へと発達して成熟する。そのあいだに、これらの組織は、生きた臓器のネットワーク内で組織の伝達を通してさらなる再形成を受けて、最終的に十分に機能的な成熟臓器を形成する（図1）。
【００６６】
上記の再生経路に従って、損傷または失われた組織を修復して、その生理的構造および機能を回復することができる。実施例の章にラットを用いてモデルとして示すように、潰瘍様の胃組織を、本発明の方法論によって修復することができる。
【００６７】
本発明者らは、最適な発達条件で生体内で再生幹細胞のインサイチュー培養によって、損傷した臓器がその生理的構造および機能を完全に回復して再生できると考えている。この再生プロセスは、本発明によって提供される内因性および外因性材料の双方の調節下で、体内で自発的に起こる。最終的に、臓器再生の成否は、生理的に適切な組織特異的多細胞接着、臓器特異的多細胞集合、および恒常的にバランスのとれた免疫学的に適合性の生体内の多臓器の共存に依存する。
【００６８】
2）「幹細胞」の再定義
この根本的原理および臨床での臓器再生のその応用の成功に基づいて、幹細胞の意味を本発明において再定義する。
【００６９】
幹細胞の古典的な定義は、幹細胞は以下の特性を有するはずであるという点である：1）それ自身が最終分化していない、すなわち分化経路の最後ではない；2）無限にまたは少なくとも動物が生きているあいだ分裂できる；および3）それが分裂すると、それぞれの娘細胞は幹細胞として残るか、または非可逆的に最終分化に至る過程に入ることができる。「Molecular Biology of the Cell」、Albertsら、第3版（1994）、1155〜1156頁、ガーランド出版社、ニューヨークおよびロンドン。
【００７０】
この定義に従って、ヒト胚盤胞の内部細胞塊から単離された胚幹細胞のようなヒト組織から単離された幹細胞は、それらがヒトの生体から完全に単離されて、インビトロ培養培地に存在してもなお幹細胞である。これらのいわゆる幹細胞は、無限に分裂して、様々な組織タイプの細胞に分化することができるが、インビトロで生きた人間になれないことは言うまでもなく、完全に機能的なヒト臓器を再生できないことが示されている。
【００７１】
古典的な定義で呼ばれる幹細胞との混同を避けるために、本発明に従う幹細胞は、「再生幹細胞」と呼ばれる。この再生細胞は以下の特徴を有する：1）これは生体に存在する；2）体の生理的制御および調節下にある；3）体の組織および臓器と共存する；4）生体内で連続的な細胞分裂を行うことができる；5）組織を修復、臓器を再生、および再生した臓器に生理的構造および機能を回復することができる。
【００７２】
3）体における自発的再生
ヒトの体は、少なからぬ再生能を有する。血液および上皮のような細胞代謝回転率が高い組織は、人生のあいだに絶えず再生される。肝臓、骨、筋肉、血管、および副腎皮質のような他の組織は、損傷に反応して再生する。肝臓は代償性過形成によって再生するが、他の組織は、おそらく間葉由来組織の再生を増強することによって、または再生組織内で予備幹細胞または前駆細胞の活性化によって再生する。例えば、T細胞、B細胞、好中球、および赤血球のような造血細胞は、骨髄における造血幹細胞から再生する。指の先端は、末端指骨関節から遠位で切断されれば再生するであろう。しかし、骨または筋肉はいずれもギャップを超えて再生せず、皮膚、膵臓、心臓、および脊髄のような他の臓器は、瘢痕組織の形成によって損傷に反応する。
【００７３】
本発明において開示される明確な新規アプローチは、体の固有の修復および自身の再生能を利用することに重点を置いている。温かい無菌的な羊水浴のような最適な生理的条件において、胎児は、瘢痕および機能喪失を伴わずにその創傷を自然に治癒することができるであろう。残念なことに、完全に発達したヒトは全く異なるより敵意に満ちた環境に曝される。内因性および外因性の双方の条件の影響下で、自然発生的な成体の創傷治癒および臓器再生は、幾分異なる経路を経由して、瘢痕および臓器の機能障害で終わる。この自然発生的な治癒プロセスは全く受動的であり、無秩序な細胞の増殖および分化ならびに再生組織の再構築の経過をたどることによって、治療的介入によって制御されない。さらに、苛酷な酸性環境に耐えず曝されるGIシステムの粘膜は、一度損傷を受けると、治療的介入を行わなければ自然に修復することができない可能性がある。
【００７４】
4）原理の応用において発達した方法論
本発明は、組織修復および臓器再生の全プロセスを能動的に制御するための方法および組成物を提供する。このプロセスのあいだ、生命の最小単位である細胞は、刺激され、増殖、分化して、互いに統合されて損傷組織を生理的に修復する、または外傷および疾患のような様々な過程で破壊された組織を再生する。次に、これらの新生組織を互いに結合して、完全に機能的な臓器を形成する。
【００７５】
成体においてこの結果を得るためには、特異的で積極的なヒト介入が必要である。本発明の全般的指針は、本発明において、1）損傷または障害を受けた組織に関して、残っている組織における生存細胞は最大限保存されなければならない；2）壊死細胞または組織は可能な限り早く除去しなければならない；3）再生細胞は、自身の本来の生理的条件を模倣する環境において活性化および増殖させなければならない；ならびに4）組織の適切な生理的修復を指示するために、細胞の増殖および分化の調節物質を再生臓器に投与する、という点である。
【００７６】
特に、本発明の方法論は、図2のブロック図によって示されるように、以下の8個の技術を含む。
【００７７】
a）成体幹細胞（ASC）の活性化と調節
多能性成体幹細胞は、a）毛嚢の隆起に存在すると考えられる上皮幹細胞のような休眠期組織幹細胞を活性化することによって、および／またはb）完全に分化した細胞の脱分化を誘導して、それらをASCに変換することによって、インビボおよびインサイチューで産生される；
b）インビボおよびインサイチューでのASCの培養
脆弱な新生ASCは、生理学的に湿潤環境において培養して、急速な増殖および方向性の分化を可能にする；
c）液化壊死組織の排泄または浸出
粘膜の壊死組織は、本発明の組成物および創傷からの浸出物に自動的に接着させることによって除去して、このように残っている生存組織に対する物理的または化学的損傷のリスクを大きく減少させる；
d）外因性培養培地におけるインビボおよびインサイチュー組織培養
ASCおよびその分化細胞を、本発明によって提供される外因性培養培地において培養して、迅速に細胞を増殖、統合および遊走させて、損傷組織を生理的に修復して喪失組織を再生する；
e）非殺菌作用機序による細菌の毒性の阻害
創傷に感染した細菌の毒性は、細菌細胞を殺すために抗生物質を局所適用するのではなくて、細菌細胞を遺伝子複製させて、本発明の組成物によって提供される条件でその形態を変化させることによって毒素の産生を減少させ、このように細菌毒素に対する体の免疫応答によって引き起こされる炎症を大きく減少することによって阻害される。
f）粘膜再生のための生理学的に湿潤の中性環境の作製
胃の粘膜に接着することによって、例えば、本発明の組成物は、潰瘍様粘膜の修復のために再生上皮幹細胞の増殖にとって都合のよい、湿っているがなおより酸性度の低い環境を提供する。
g）外部環境からの創傷の微小孤立
本発明の組成物をGI管に経口投与すると、粘膜に接着することによって人工膜が形成される。この膜は、損傷粘膜を外部の苛酷な環境から孤立させて、なおもその下の組織に活性成分および栄養をゆっくり徐々に放出する。その結果、粘膜およびその下に存在する組織を再生することができ、それによって栄養の取り込みおよび代謝のような、GI管における臓器の正常な機能が回復する。
h）再生に必要な酸素および栄養の供給
天然のアミノ酸、多糖類、脂肪酸、および燐酸塩の完全なスペクトルのような様々な栄養は外部から供給される。細胞増殖に必要な酸素は、この膜を透過して、その下の組織に達することができる。そのあいだに、細菌および他の環境混入物は、修復および再生を受ける組織から分離される。
【００７８】
5）当技術分野における他のアプローチと本発明の方法論との比較
不全臓器および組織を置換するために現在利用可能な臨床アプローチは、臓器移植と生物工学装置の埋め込みである。臓器移植の主な欠点は、ドナー不足と免疫抑制剤の副作用である。生物工学装置の埋め込みアプローチの欠点は、天然の組織の耐久性、強度、機能、および生物学的適合性に匹敵する人工材料を製造できないことである。
【００７９】
実験段階で、20世紀の最後の10年に出現した再生医学は、二つの主な戦略の実施に重点を置いている：移植部位において新しい組織を形成するための細胞の移植と、インビトロで構築された人工生体組織の埋め込み。
【００８０】
細胞の移植は、幹細胞のエクスビボ培養および増殖を含み、次に、損傷臓器が存在する部位にそれらまたはその分化産物を移植することを含む。生物学の進歩によって、臨床で細胞移植を応用することが可能となったが、実際には多数の制限がなおも存在し、臨床結果は生理的または美容上満足できるものではない。このアプローチに関連した制限の一つは、様々な組織からの多能性幹細胞の同定および単離に関する問題である。全能性ヒト胚幹細胞（ESC）系列が最近培養されているが、ESCの方向性分化はなおも謎である。
【００８１】
実験動物から得られた結果は、有望であったが、なおも確信を持ってヒトの治療に機能的に当てはめることはできない。例えば、インビトロで神経幹細胞に由来するマウス神経およびグリア細胞、ならびにインビトロでESCに由来する心筋細胞を、成体の脳および心臓にそれぞれ注射すると、それらは周辺組織に組み入れられる。マウス胚の発達途中の脳に注射した多能性ヒト神経幹細胞は、脳全体に遊走して、部位特異的に分化する。
【００８２】
インビトロで培養した幹細胞を用いた臓器再生が成功するためには、大きい障害がその途上に存在する。インビトロで培養した幹細胞は、それらが病変部位に移植されると、部位特異的表現型に分化するように向けなければならない。インビトロ組織培養条件のデザインを導くためには、このプロセスにとって必要なシグナルの完全な解読が必要である。当技術分野において他の研究者によって得られた実験データから、多能性ヒト間葉、マウス神経幹細胞、およびマウス胚幹細胞は、培養培地に白血病阻止因子（LIF）を加えることによってインビトロで増殖することができるが、マウスESCは、インビトロおよびインビボで無作為に分化することが示されている。当技術分野における進歩によって、マウスESCをインビトロで多能性グリア細胞前駆体に分化誘導して、ミエリン欠損胎児ラットの脳にそれらを移植することが可能となった。しかし、特定の組織から採取したまたはインビトロでESCから分化したこれらの多能性幹細胞が、損傷した成体組織に移植した後に部位特異的組織を作製するか否かに関する疑問は、まだ答えが見つかっていない。
【００８３】
移植体の免疫拒絶は、細胞移植に関連したもう一つの主要な問題である。場合によっては自家細胞（例えば、骨髄に由来する間葉幹細胞）を用いることができるが、ほとんどの移植細胞は同種異系であろう。遺伝子改変と細胞生物学的戦略とを用いて、二倍体体細胞を徐核したヒトまたは他の哺乳類の卵子に融合させて、得られた胚盤胞を用いて幹細胞を作製するような、同種異系または異種移植体の宿主寛容を促進する試みがなされている。そのようなアプローチは、生物倫理的懸念を誘発して、問題の解決はより一層難しくなる。
【００８４】
インビトロで構築された人工生物組織の埋め込みもまた、新しい障害に直面する。例えば、細胞の遊走、接着、増殖および分化を促進するために必須の局所解剖、表面特性、ならびに増殖および分化シグナルを有する生物工学移植体の足場材料を合成することのみならず、様々な組織および臓器の形状に成形できることは、なおも大きい課題である。現在用いられているまたは調べられている人工生物材料の例には、様々なセラミクス、ポリウレタンエラストマー、ポリエステル、ポリ無水物、およびポリホスファゼンが含まれる。これらの材料は、細胞にとっての機械的支持体、遊走の通路、および接着表面を提供する。
【００８５】
先に簡単に概説したこの技術的背景に対して、本発明は、成体組織修復および臓器再生のための革新的方法論を提供する。当技術分野のほとんどの当業者によって用いられるインビトロ幹細胞培養の一般的なアプローチとは鋭い対比をなして、方法論は、インビボおよびインサイチューで成体幹細胞の活性化および培養に重点を置いている。体の固有の修復および再生能を利用することによって、体の自発的再生のための最適な条件、胎児の健康な発達にとって必要な環境を模倣する再生環境を提供する方法論が開発された。本発明の組成物は、休眠期幹細胞を活性化して増殖させる、または成体組織細胞の再生幹細胞への変換を誘導するために、そしてこれらの幹細胞の能動的増殖およびインビボおよびインサイチューで再生に必要な全ての細胞への方向性の分化を維持するために提供される。活性成分の新規製剤はまた、生理的水分、栄養、恒常的にバランスのとれた維持環境を促進して、その生理的構造および機能が完全に回復した組織および臓器の修復および再生を確実にする。
【００８６】
2．GI管の再生医学
先に述べた根本的原理および方法論の指針に従って、細胞生物学の分野および医学の実践において広く多様な応用を想像することができる。特に、組成物は、正常な機能を維持するため、またはGI管における損傷した粘膜および他の組織を修復するための薬剤または栄養剤として開発される。
【００８７】
インビトロおよびインビボでの実験モデルにおいて収集された強い証拠によって支持されて、本発明者らは、適当な再生条件が提供される限り、ヒト体内の任意の臓器における組織細胞を、組織の修復、例えば創傷および潰瘍のシグナルに反応して再生幹細胞を産生するように活性化させることができると考えている。胎児の妊娠初期段階での瘢痕のない創傷治癒とは異なり、完全に発達した成体における生理的組織修復および機能的臓器再生は、成体幹細胞の迅速な増殖および方向性の分化を刺激および維持するために、そしてその構造および機能が実質的に失われることなく、様々な組織臓器特異的な適切な集合を特異的に確実にするために、単にインビボおよびインサイチューで外因性の培養培地を提供することによって得ることができる。
【００８８】
本発明者らは、標識および単離することが難しいが、多能性成体幹細胞（ASC）を、休眠期組織幹細胞を活性化することによって、および／または成体組織細胞のASCへの変換を誘導することによって、インビボおよびインサイチューで産生することができると考えている（図1）。この考え方は、幹細胞研究における最近の進歩、ならびに本発明において解明された根本的原理の応用において得られた実験および臨床データによって支持される。
【００８９】
ASCは、肝臓、膵臓、および中枢神経系において最近発見された。間葉幹細胞は、骨髄から単離されており、類似の細胞が、体全体の組織の結合組織区画にも存在する可能性がある証拠がいくつかある。ASCの存在部位は十分に研究されており、他の研究者によって特異的適所に存在すると推測されている。
【００９０】
様々なACSの正確な位置がわかっているにもかかわらず、本発明によって提供された方法および組成物を用いて、体内でACSを活性化して、損傷組織を修復して、機能障害臓器をインサイチューおよびインビボで再生することができる。この革新的方法論は、哺乳類、特にヒトの体の任意の組織および任意の臓器の生理的構造および機能を回復するために用いることができる。以下の章は、GI管における障害を予防および治療するための適応を示す。
【００９１】
一つの局面において、本発明の方法論を用いて、GI管における臓器の疾患または損傷を有する粘膜を修復するために、GI管における組織において再生幹細胞を活性化または誘導することができる。
【００９２】
小腸の内層において、細胞は単層上皮として配列している。この上皮は、腸の内腔に突出する絨毛の表面を覆う。粘液を分泌する杯状細胞は、上皮における吸着性の刷子縁膜細胞のあいだに散在している。上皮はまた、下に存在する結合組織に下行する陰窩に沿って並ぶ。それぞれの陰窩は、その中に上皮幹細胞が含まれる上皮細胞約250個から構成されることが判明している。これらの多能性幹細胞は、それぞれの陰窩基部近傍または基部に存在する。Loefflerら（1993）、J. Theor. Biol. 160：471〜491。腸上皮幹細胞は、生存および分化のための間葉系の合図に反応する。通常、これらの細胞は再循環が遅く、毛嚢の幹細胞にかなり似ている。それらのいくつかは、体節中央に移動して、その後吸着性の刷子縁膜腸細胞、粘液分泌杯状細胞、または絨毛の腸内分泌細胞のいずれかに分化する、急速にしかし一過性に増殖する細胞に変換される。恒常性を維持するために、分化した細胞は死滅して、絨毛から管内腔へと落ちる。
【００９３】
体が歳をとるにつれて、腸上皮幹細胞の増殖能は弱まり、幹細胞を活性化することはより難しくなる。結果として、腸が栄養の健康な取り込みを維持できる能力が損なわれ、栄養不良に至り、加齢を加速する。
【００９４】
この悪循環を停止させるために、本発明は、哺乳類、特にヒトの栄養の取り込みを増強するために用いることができる組成物および方法を提供する。下記の「組織修復および臓器再生のための製剤および投与経路」の章に詳しく記述するように、本発明の組成物は、粘膜に対して非常に接着性で、組織の修復および再生のためにASCを刺激するために様々な栄養および／または活性成分（類）を送達するために用いることができる。経口送達すると、組成物は、GI管粘膜に接着して、アルコール、香辛料に富む食物等によって引き起こされた刺激から粘膜を保護する。下記の「実施例」の章に示すように、天然物の抽出物によって調製した本発明の組成物の態様は、「一般的に安全であると見なされる」部類に入る。このように、本発明の組成物は、粘膜を保護し、障害または弱められた粘膜に関連した様々な障害の発症を予防するための、健康な人のための栄養補助剤または栄養剤として用いることができる。さらに、本発明の組成物の独自の投与剤形のために、体の再生を刺激するための活性成分は、徐放的に送達されて、インサイチューおよびインビボで粘膜および他のタイプの組織細胞の増殖を支持および刺激するために一定で適当な栄養を提供することができる。さらに、食物および他の起源からの栄養のよりよい取り込みに至る、GI管における加齢組織細胞の若返りによって、体の他の組織および臓器の生理的機能も同様に、血流による栄養の送達を通して改善することができる。
【００９５】
関連する局面において、本発明の組成物はまた、ヒト患者における消化障害を治療するために用いることができる。消化障害は、口、食道、胃、ならびに大腸および小腸を含む消化管（digestive tract）または消化管（alimentary canal）の臓器に対する障害および損傷の結果としてのヒトの病態となる可能性がある。消化管障害には、消化性潰瘍疾患、炎症性腸疾患および他の傷害が含まれる。
【００９６】
GI管障害の一般的な原因の一つは、ピロリ菌によって引き起こされる細菌炎症である。ピロリ菌感染症は、活動性の慢性胃炎を引き起こし、十二指腸潰瘍、胃潰瘍、胃癌、MALTリンパ腫、またはメネトリエ症候群のような関連症候群がしばしば起こる。ピロリ菌を撲滅または阻害すれば、十二指腸および胃潰瘍の再発が減少するはずである。
【００９７】
ピロリ菌感染症に関連した長期間の胃炎はしばしば、胃粘膜における腸様特徴の発現に関連している。腸の化生（IM）と呼ばれるこの病態は、胃癌のリスクの増加のシグナルとなる可能性があり、癌関連死の原因の第二位である。
【００９８】
IMの疫学は不明であるが、ピロリ菌感染症に対する変異的適応または防御を表しうる。化生性粘膜は、ピロリ菌に対して敵対する環境を作製する粘液または他の物質を産生する可能性があると推測されている。このように、ピロリ菌を広範に治療すれば、胃癌の発生率が低下するはずである。
【００９９】
本発明者らは、GI管、特に胃における再生状態を提供することによって、損傷粘膜を有効に修復することができると考えている。GI管に投与すると、本発明の組成物は、胃の粘液と混合され、ムチンを含む保護膜を形成して、粘膜を酸、アルコール、食物および胃に含まれる他の材料のさらなる刺激から隔離する。これらの条件では、ステロール化合物および組成物中の他の選択的活性成分が、その部位に放出され、再生幹細胞をその場で活性化して粘膜の速やかな治癒を促進する。図3Bに示すように、本発明の組成物は、動物モデルにおいて胃潰瘍の治癒に成功した。さらに、本発明の組成物はまた、その形態を変化させることによって、細菌のピロリ菌の毒性を有効に阻害する可能性がある。健康なGI管の再生によって、ピロリ菌の定着に都合がよい潰瘍様病態が破壊され、それによって細菌の増殖が間接的に阻害される。
【０１００】
本発明の方法および組成物は、ピロリ菌感染症およびピロリ菌感染症に関連する病態（例えば、潰瘍、胃癌、非潰瘍性消化不良、胃炎、および胃食道逆流疾患に関連した食道病変）の治療に用いることができる。本発明の組成物は、胃腸（GI）管に及ぼすその全般的保護作用のために、これらの疾患の治療のために有用である。さらに、これは粘膜の完全性の維持を促進する。
【０１０１】
本発明の組成物は、ピロリ菌による粘膜への接着または粘膜のコロニー形成を阻害するために用いることができる。同様に、ピロリ菌感染症に関連した病態によって障害を受けた組織の治癒を促進するために用いてもよい。この点において、本発明の組成物をコンフルエント腸上皮細胞の損傷した単層に加えると、陰窩の上皮幹細胞を活性化して、創傷への上皮細胞の遊走率を増加させると推定される。
【０１０２】
本発明の組成物は、腸のような胃腸管または消化管の他の部分を保護するために用いることができるのと同様に、放射線療法または化学療法によって引き起こされた障害から口および食道を保護するために用いることができる。放射線および抗癌剤の全身投与は、リンパ球、粘膜細胞および毛細胞のような急速に増殖する細胞に対して細胞障害作用を有し、それぞれ骨髄抑制、粘膜炎、および脱毛症を引き起こす。抗癌治療のこれらの副作用は、患者のクオリティオブライフを有意に低下させるのみならず、患者および／またはその家族に多くの苦痛および苦しみを与える。特に、粘膜に対する障害によって、癌と闘うために体の免疫を強化するために必要である栄養の摂取不良が起こる。このように、本発明の組成物を用いることによって、損傷粘膜は修復され、その生理的機能が回復して、それによって癌の増殖および転移を間接的に阻害する可能性がある。
【０１０３】
さらにもう一つの局面において、本発明の方法論および組成物は、過増殖疾患、または胃腸（GI）管の臓器のような内部臓器の上皮細胞に影響を及ぼす前癌状態を治療または予防するために用いてもよい。本発明の組成物を経口投与すると、前癌様細胞と宿主の健康な細胞との細胞間相互作用を再度確立することによって、これらの臓器の恒常性バランスを回復する可能性がある。
【０１０４】
癌は一般的に、細胞内および細胞間恒常性調節が壊れた結果であると見なされる。恒常性バランスが失われて悪性のトランスフォーメーションが起こると、マトリクス成分の分解および宿主-腫瘍相互作用のような微小環境要因は、悪性細胞の生存および増殖にとって必須である。
【０１０５】
本発明の組成物および方法を用いることによって、組織の恒常性バランスは、生理的機能を失うことなく回復する可能性がある。下記の「実施例」の章に示すように、本発明の組成物が腸および胃細胞の増殖を促進してインビトロで組織を形成できることは、本発明の組成物がおそらく、コネキシンおよびカドヘリンのような様々な細胞膜タンパク質によって媒介される相互作用を刺激することによって、細胞間の連絡を調節して細胞間相互作用を促進できることを示している。これによって、細胞増殖、分化、アポトーシス、および遊走の協調した制御が得られる。
【０１０６】
本発明の組成物は、前癌または癌細胞と宿主細胞とのあいだにギャップ接合部の形成を促進することによって、組織の恒常性バランスを回復する機能を発揮する可能性がある。ギャップ接合部は、ほとんどの動物細胞タイプに認められる独自のタイプの細胞内接合部である。隣接する二つの細胞は、ギャップ接合部を形成する細胞膜タンパク質であるコネキシンを通して互いに相互作用する。同一のコネキシン6個がコネキソンを形成し、二つのコネキソンが細胞内ギャップを超えて結合すると、細胞2個を結合する持続的な水性チャンネルを形成する。それぞれのギャップ接合部は、細胞質膜の細胞質切断面に関連した均一な膜内粒子の集団である。それぞれの膜内粒子がコネキソンに対応する。ギャップ接合部は、小分子の細胞内通過を可能にして、発達、細胞代謝、および細胞増殖制御のような多様な生物プロセスに関係している。
【０１０７】
コネキシンの大多数は、主にセリンアミノ酸での燐酸化によって翻訳後改変される。コネキシンは、多数のタンパク質キナーゼによってターゲティングされ、そのいくつかが同定されている：タンパク質キナーゼC、マイトゲン活性化タンパク質キナーゼ、およびv-srcチロシンタンパク質キナーゼ。燐酸化は、移動、集合／解離、分解と共にギャップ接合部チャンネルの開閉のような、広く多様なコネキシンプロセスの調節に関係している。
【０１０８】
さらに、もう一つの細胞膜タンパク質であるカドヘリンも同様に、細胞-細胞接着および遊走において重要な役割を果たす。カドヘリン媒介細胞-細胞接着は、タンパク質チロシンキナーゼ（PTK）形質転換細胞において混乱していることが判明している。カドヘリン自身は、よいPTK基質ではないように思われるが、その細胞質結合パートナーであるArmカテニンは、優れたPTK基質であり、したがってカドヘリンの挙動におけるPTK誘導変化を媒介するためによい候補物質である。例えば、β-カテニンは、古典的なカドヘリンの細胞質領域に結合して、接着を媒介および／またはカドヘリンをアクチン細胞骨格に結合させるように機能する
【０１０９】
本発明の組成物は、これらのキナーゼを活性化して、次にキナーゼはコネキシンおよびカテニンのようなカドヘリンの細胞結合パートナーを燐酸化する可能性がある。細胞間接着に関連したこれらのタンパク質の適切な燐酸化によって、腫瘍細胞と宿主細胞とのあいだの連絡チャンネルが回復する。腫瘍-宿主連絡が回復すると、腫瘍細胞は宿主の調節を受ける。宿主の調節下では、腫瘍細胞は、アポトーシス（プログラムされた細胞死）を受けるように、または非腫瘍形成性となるように分化するように誘導される可能性がある。このように、組織の恒常性バランスが回復して、腫瘍の悪性度を予防または阻害する。
【０１１０】
特定の局面において、本発明の方法論は、上部および下部GI管の癌を治療するために用いられる。上部GI癌の例には、1）アルコールの過剰な摂取、アルカリ液の摂取、アカラシア、喫煙、ニトロアミンに対する曝露、バレット粘膜、チロース、マイコトキシン、ヒト乳頭腫ウイルス（HPV）、単純ヘルペスウイルス（HSV）、サイトメガロウイルス（CMV）、およびエプスタイン-バーウイルス（EBV）のようなトランスフォームウイルスによる感染症、プランマー-ヴィンソン症候群、によって引き起こされた食道癌；2）無塩酸症、ヘリコバクター・ピロリ感染症、胃の切除経験、およびビルロートII技法、によって引き起こされた胃癌；3）喫煙、β-ナフチルアミンに対する曝露、ベンジジン、および慢性膵炎、によって引き起こされた膵臓癌；4）B型肝炎ウイルス、慢性活動性肝炎および肝硬変のような慢性肝疾患、マイコトキシン、電離放射線、ステロイドホルモンおよびヒ素に対する曝露、によって引き起こされた肝臓癌；ならびに5）硬化性胆管炎、寄生虫感染症、およびステロイドホルモン、によって引き起こされた胆管癌が含まれるがこれらに限定されない。下部GI癌の例には、結腸直腸癌、原発性リンパ腫、黒色腫、および大腸の肉腫のような大腸の癌が含まれる。大腸癌の90％を超える割合を腺癌が占める。癌様腫瘍は、結腸直腸に発生する悪性新生物の残りのほとんどを占める。
【０１１１】
3．組織修復および臓器再生のための製剤と投与経路
本発明は、動物、好ましくはヒトにおいて薬剤としてまたは栄養剤として用いられる新規組成物を提供する。医薬品は、医師の処方によって、または処方なしで疾患状態を治癒する薬剤として用いられる組成物である。栄養剤は、全身健康を促進するために、または体の特定の状態を治療するために栄養補助剤として用いられる組成物である。栄養剤は、通常、健康食品店で販売され、医師の処方箋なしで供給される。
【０１１２】
一つの局面において、好ましくはインビボで細胞増殖、組織修復および臓器再生を促進する組成物が提供される。組成物は、インビトロで細胞増殖培養培地としてまたはエクスビボで組織および／または臓器の再構築のために用いられるように適合させてもよいことに注意すべきである。
【０１１３】
特に、損傷または機能障害粘膜に対して生理的構造および機能を回復するため、体の栄養吸収能を増強するため、健康でバランスのとれた代謝を得るため、そして最終的に全身健康を促進するために、GI管の粘膜を修復および再生を促進する組成物が提供される。組成物は、鼻、肺、肛門、膣、眼、および口腔粘膜のような他の臓器の機能障害粘膜の治療に用いるように適応させてもよいことに注意すべきである。
【０１１４】
一つの態様において、GI管における粘膜細胞増殖を促進するために、経口投与に適した組成物が提供される。組成物は、経口投与剤形であり、以下を含む：0.5〜50重量％の濃度範囲の食用ロウとホモジナイズした食用油、および少なくとも0.1重量％の濃度のステロール化合物。
【０１１５】
ステロール化合物の濃度は好ましくは、約0.5〜20重量％、より好ましくは約1〜10重量％、および最も好ましくは約2〜6重量％の範囲である。
【０１１６】
食用ロウの濃度は、好ましくは、約3〜30重量％、より好ましくは約5〜20重量％、および最も好ましくは約6〜10重量％の範囲である。
【０１１７】
ステロール化合物は動物ステロールまたは植物ステロール（フィトステロールとも呼ばれる）であってもよい。選択的に、食用油は脂肪酸含有油であり、ステロール化合物は、高温（例えば、＞100℃）のような適した条件で組成物に含まれる油中の脂肪酸によってエステル化してもよい。動物ステロールの例には、コレステロールならびにその全ての天然または合成の異性体および誘導体が含まれる。好ましくは、ステロール化合物は、スチグマステロール、カンペステロール、β-シトステロール、チャリノステロール、クリオナステロール、ブラッシカステロール、α-スピナステロール、ダウコステロール、デスモステロール、ポリフェラステロール、ならびに全ての天然または合成の異性体およびその誘導体からなる群より選択される。より好ましくは、ステロール化合物は、本明細書において集合的に「シトステロール」と呼ばれるスチグマステロール、β-シトステロール、およびカンペステロールの配合物である。
【０１１８】
組織修復および臓器再生におけるステロール化合物の作用機序に関して理論に拘束するつもりはないが、本発明者らは、ステロール化合物が細胞膜の流動性および透過性を変化させることによって、細胞の形態形成を誘導するために重要な役割を果たす可能性があると考えている。その結果、キナーゼおよびホスファターゼのような多くの細胞膜会合タンパク質が活性化されて細胞増殖を刺激する可能性がある。同様に、休眠期幹細胞が膜の形態形成変化のために活性化されることもありうる。さらに、分化した成体組織細胞も同様に、非分化型の表現型へのトランスフォーメーション、すなわち「脱分化」と呼ばれるプロセスを受けるように誘導される可能性がある。細胞膜の透過性の変化によって、生理的組織修復および機能的臓器再生にとって必要な広く多様な細胞のバランスのとれた増殖を刺激するために、他のマイトゲンおよび調節分子が、細胞によってより容易に取り込まれる可能性がある。その上、おそらく形態形成プロセスの際の膜結合タンパク質の活性化によって、細胞接着分子（CAM）の発現および燐酸化が刺激されて、このように同源の細胞の会合を増強して特異的組織を形成し、同源の組織の集合体を増強して体内で完全に機能的な臓器を形成する可能性がある。さらに、ステロール化合物によってプロスタグランジン（PG）の産生が刺激される可能性があり、これは次に、胃粘膜の分泌を刺激して、粘膜に対する刺激に抵抗するために有効な障壁を形成することができる。
【０１１９】
ステロール化合物の改変、すなわち側鎖を含める様な改変もまた、本発明の範囲に含まれると理解すべきである。同様に、本発明は、組成物を形成するステロールの如何なる特定の組み合わせに限定されないと理解すべきである。言い換えれば、単独のまたは最終的な製剤の特性に応じて必要な様々な比で他のステロール化合物と配合した如何なるステロール化合物も、本発明の範囲に含まれる。
【０１２０】
本発明において用いられるステロール化合物は、多様な天然資源から調達してもよい。例えば、フィトステロールは、コーン油、麦芽油、大豆抽出物、米抽出物、米ぬか、菜種油、ゴマ油、および他の植物油および魚油のような植物油（水性植物を含む）の加工から得てもよい。前述の一般性に限定されずに、そこから本発明の組成物を調製してもよい海洋動物のような他のフィトステロール源が存在すると理解すべきである。例えば、フィトステロールは、メタノールのような溶媒を用いて植物油のスラッジから調製してもよい。または、フィトステロールは、林業の副産物であるトール油のピッチまたは石けんから得てもよい。
【０１２１】
食用油は、ヒトに経口投与するために適した如何なる天然または合成油であってもよい。天然油の例には、トウモロコシ油、麦芽油、大豆抽出物、米抽出物、ぬか、菜種油、ゴマ油、および他の植物油および魚油が含まれるがこれらに限定されない。
【０１２２】
食用ロウは、ヒトへの経口投与に適した天然または合成の如何なるロウであってもよい。食用ロウの例には、蜜ロウ、ヒマロウ、糖ロウ、およびカルナウバロウが含まれるがこれらに限定されない。
【０１２３】
食用ロウ、例えば蜜ロウは、通常食用油（例えば、ゴマ油）より高い融点を有する。蜜ロウは室温では固体であり、約70〜80℃に加熱すると融解する。融解すると、ロウは適当に攪拌することによって油と混合することができる。しかし、蜜ロウとゴマ油との混合物を室温（すなわち、20〜25℃）まで冷却すると、それらの熱物理特性が異なるために、蜜ロウは油よりかなり早く冷却する。その結果、固化ロウは、その中に油滴が封入された小さい「分室（pigeonhole）」を有する三次元構造を形成する。図4Aは、分室を形成する蜜ロウとその中に封入された油滴とのモデル構造を示す。図4Bは、約10％蜜ロウと約90％ゴマ油を含む混合物のエレクトログラフを示す。図4Bに示すように、蜜ロウは穴の寸法の平均値が19μmで、その中に封入された個々の油滴を有する三次元の分室様構造を形成する。
【０１２４】
比較のために、蜜ロウとゴマ油の混合物を標準的なタイプのミキサーによってホモジナイズすると、かなり均一に分布したロウが得られる。ロウと油のホモジナイゼーションは、ホモジナイザーまたはコロイドミルによる乳化によって得てもよい。絶えず循環する粉砕プロセスを通して剪断力と逆圧の双方を提供することができることから、コロイドミルが好ましい。
【０１２５】
肉眼で確認すると、蜜ロウとゴマ油のホモジナイズした混合物は、コロイド型となるように思われる。室温で顕微鏡下で調べると、蜜ロウの個々の微結晶が形成され、構造全体を通して多少均一に分布する。図5A〜Bは、ゴマ油約92％とホモジナイズした約7％の蜜ロウを含む組成物の態様における蜜ロウの微結晶を示す顕微鏡である。図5A〜Bに示すように、二つの主要な型の微結晶：針状微結晶（図5A）と束状または様々な星形の微結晶複合体（図5B）が存在する。油滴が蜜ロウによって形成された「分室」構造に封入されている図4Bに示した混合物とは対照的に、蜜ロウの微結晶は、ここでは連結した三次元網目構造を形成することなく、全く均一に油中に分散する。針状微結晶の大きさは、小さい（例えば、長さ7μmで幅0.4μm）、中等度（例えば、長さが28μmおよび幅が0.6μm）から大きい（例えば、長さが52μmで幅が0.8μm）まで多様である。微結晶複合体の大きさは、小さい（例えば、直径18μm）、中等度（例えば、直径36μm）から大きい（例えば、直径50μm）まで多様である。
【０１２６】
意外にも、ロウと油とのホモジナイズによって形成された組成物のこの独自の特徴は、優れた粘膜接着能および動物モデルにおけるアルコールによって引き起こされた急性潰瘍の治療においてはるかに高い有効性を組成物に与える。実験的研究において、水のみを与えた対照群のラット7匹は、無水アルコールを経口針によって投与した後に潰瘍を形成し、潰瘍の面積は平均で68 mm2であった。無水アルコールを投与する2時間前にラット（n＝7匹）に組成物を1回限り投与すると、蜜ロウが分室構造をとる組成物（図4B）は胃潰瘍の発生に対してラットを保護できなかった。これらのラットでは潰瘍が発生して潰瘍の面積は平均で110 mm2であった。それよりも、ラット（n＝8）において潰瘍の発生を予防するためには、多数回投与（1日1回3日間）が必要であった。対照的に、コロイド状の構造を通して蜜ロウの微結晶が均一に分布する組成物は、無水アルコールの投与2時間前に組成物を1回限り投与すると、ラット（n＝8）において潰瘍形成を防止するために非常に有効であった。これらのラットにおける平均潰瘍面積は約15 mm2であり、蜜ロウが分室構造をとる組成物によって処置したラットの場合より同じ治療条件で7倍未満小さかった。
【０１２７】
これらの結果は、油とホモジナイズしたロウを有する本発明の組成物が、GI管の粘膜に接着するため、およびアルコールの潰瘍作用から保護するために特に有効であることを示している。比較すると、蜜ロウが油滴を封入した分室構造をとる組成物は、アルコールに曝露される前の胃粘膜に対する接着が悪い、および／またはかなり遅いと予想される。
【０１２８】
理論に拘束するつもりはないが、本発明者らは、蜜ロウの微結晶が、大きい粒子のまたは分室構造をとる蜜ロウよりGI管において粘液とより容易に混合されうる可能性があると考えている。同様に、粘液と混合すると、蜜ロウの微結晶は、コロイド状の人工膜の形成を誘導して粘膜の上に重なり、このようにアルコールの潰瘍作用から粘膜を保護する。粘膜表面に堅固に接着することによって、この人工膜は微小循環を改善する、局所粘膜毛細管を拡大する、血液およびリンパの循環を加速する、ならびに結合組織の活性な代謝を促進することができる可能性がある。その上、この人工膜が胃において徐々の侵食されると、コロイドに捕獲された活性成分が粘膜およびその下に存在する組織に徐々に放出されうる。そのような持続的放出は、活性成分の送達において、修復および再生のために粘膜および他の組織細胞の増殖を刺激するために有利となるはずである。
【０１２９】
構造の完全性および化学的安定性を維持するために、組成物は、最少量の水、好ましくは1重量％未満、より好ましくは0.1重量％未満、および最も好ましくは0.01重量％未満含む。
【０１３０】
本発明の組成物が粘膜に接着するための構造的支持体を提供する以外に、蜜ロウはまた、多くの有用な生化学的性質を有する。蜜ロウは、外用薬を製造するための賦形剤として長い間用いられてきた。伝統的な漢方薬では、蜜ロウは、解毒、顆粒化促進のため、疼痛および心臓痛を軽減するため、ならびに下痢、膿および血便、膣出血による切迫流産、敗血症、難治性潰瘍、および熱損傷を治療するための薬剤である（「A Dictionary of Chinese Materia Medica」、中国語版「Zhong Yao Da Ci Dian」、科学技術出版、上海、1986、2581頁）。
【０１３１】
蜜ロウの構成成分は、四つの分類、すなわちエステル、遊離の酸、遊離のアルコール、およびパラフィンに分けることができる。蜜ロウはまた、微量の精油および色素を含む。エステルでは、ミリシル・パルミテート、ミリシル・セロテート、およびミリシル・ヒポガエートが存在する。遊離の酸では、セロチン酸、リグノセリン酸、モンタン酸、メリシン酸、サイリン酸、ヒポガエン酸、およびネオセロチン酸が存在する。遊離のアルコールでは、n-オクタコサノールおよびミリシルアルコールが存在し、パラフィンでは、ペンタコサン、ヘプタコサン、ノナコサンおよびヘントリアコンタン、ならびにメレンと呼ばれるオレフィンが存在する。セロレインと呼ばれる芳香物質も同様に蜜ロウに認められる。
【０１３２】
理論に拘束するつもりはないが、本発明者らは、蜜ロウのこれらの成分は、粘膜上の本発明の組成物によって形成された人工膜から放出されると、体に対して有用な作用を有する可能性があると考えている。蜜ロウのこれらの成分はまた、本発明の組成物における活性成分（例えば、ステロール化合物）と相乗的に作用して、全身健康をさらに促進するおよび体の様々な障害を治癒する可能性がある。例えば、いくつかの成分は、組織球の透過性および体の代謝のみならず単核球マクロファージ系の貪食能を増強することができる可能性がある。蜜ロウにおけるいくつかの成分はまた、抗炎症および抗潰瘍作用を有する可能性がある。蜜ロウに含まれるオクタコサンアルコールは、スタミナ、エネルギー、および力を増強するために、筋力を増強するために、反射感受性を増加するために、有害物質による刺激に対する体の抵抗能を増強するため、性ホルモン分泌を加速するため、攣縮を阻害するため、筋および心筋機能を改善するため、ならびに収縮期圧を低下させて、基礎代謝率を増加させるために有用となる可能性がある。
【０１３３】
組成物はさらに、蜂ロウを約0.1〜30重量％、より好ましくは約1〜20重量％、および最も好ましくは約5〜10重量％の濃度範囲で含んでもよい。
【０１３４】
蜂ロウは、ミツバチの巣を形成するために用いられる粘着性のゴム様物質として知られている。無傷の蜂ロウでは、多様な微量の成分が、主成分としての樹脂、蜜ロウ、精油および花粉と共に、フラボノイドおよびフェノールカルボン酸のような他の成分との均一な混合物の形で存在する。天然の蜂ロウは水に難溶性で、特異な臭いを有する。蜂ロウは、蜂の巣をエトノール（ethonol）、エーテル、およびクロロホルムのような有機溶媒によって抽出することによって調製することができる。蜂ロウに含まれる成分は、病原性微生物に対する抵抗活性および抗プロトプラスト活性、ヒトの体の免疫機能増強活性、ならびに組織再生および抗酸化の促進活性を有する可能性がある。
【０１３５】
組成物中の食用油は、活性成分を溶解して蜜ロウ粒子または微結晶を分散するためにの溶媒として作用する。好ましくは、組成物を調製するためにゴマ油が用いられる。理論に拘束するつもりはないが、本発明者らは、ゴマ油は以下の有用な作用を体に及ぼす可能性があると考えている：1）大腸を緩くして便秘を軽減する；2）炎症に対する抵抗性、抗感染症、組織修復の促進；3）胃粘膜の直接保護；4）ゴマ油に含まれるオレイン酸およびリノレン酸による胃粘液分泌の促進による胃粘膜の間接的保護および潰瘍に対する保護；5）フリーラジカルを消失させる、生体膜の構造および機能を保護する、ならびに胃腸粘膜を保護するために強い抗酸化活性を有するセサモールおよびビタミンEを含むゴマ油に含まれる成分の抗酸化活性；6）正常細胞の代謝を促進する作用を有するゴマ油に含まれるセサミン；7）アミノ酸、脂質、および胃腸粘膜の修復に必要な微量元素のような栄養の提供；ならびに8）薬物の刺激および薬物の治療効率に及ぼす胃からの排出および食物の影響を減少させるための賦形剤として作用すること。
【０１３６】
経口投与の場合、本発明の組成物は、当技術分野で周知の薬学的に許容される担体と配合することによって容易に調製することができる。そのような担体によって、化合物は、治療すべき患者が経口的に摂取させるために、錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、乳剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー、懸濁液等として調製することができる。
【０１３７】
好ましい態様において、本発明の組成物は、カプセルに含まれる。経口投与に適したカプセルには、ゼラチンで構成される硬カプセルと共に、ゼラチンとグリセロールまたはソルビトールのような可塑剤とで構成される軟密封カプセルが含まれる。硬カプセルは、乳糖のような増量剤、デンプンのような結合剤、および／またはタルクまたはステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、および選択的に安定化剤との混合物において活性成分を含みうる。より好ましくは、本発明の組成物は軟カプセルに含まれる。本発明の組成物は、脂肪油または液体ポリエチレングリコールのような適した液体に溶解または懸濁してもよい。さらに、安定化剤を加えてもよい。経口投与のための全ての製剤は、そのような投与に適した用量でなければならない。
【０１３８】
選択的に、経口で用いるための本発明の組成物は、本発明の組成物を固体賦形剤と混合して、選択的に得られた混合物をすりつぶし、および錠剤または糖衣錠のコアを得るために、望ましければ適した補助剤を加えた後に顆粒混合物を加工することによって得ることができる。適した賦形剤は、特に、乳糖、蔗糖、マンニトール、またはソルビトールを含む糖；例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、および／またはポリビニルピロリドン（PVP）のようなセルロース調製物のような増量剤である。望ましければ、クロスリンクしたポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウムのようなその塩のような崩壊剤を加えてもよい。
【０１３９】
糖衣錠のコアは、適したコーティングと共に提供される。この目的のため、濃縮した糖溶液を用いてもよく、これらは選択的にアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポルゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、および適した有機溶媒または溶媒混合物を含んでもよい。活性化合物の用量の異なる配合を同定または特徴づけるために、錠剤または糖衣錠のコーティングに染料または色素を加えてもよい。
【０１４０】
本発明の組成物はさらに、バイカリンを好ましくは0.01〜5重量％の濃度で、より好ましくは約0.1〜2重量％、および最も好ましくは約0.1〜1重量％の濃度で含んでもよい。
【０１４１】
理論に拘束するつもりはないが、本発明者らは、バイカリンが、損傷または疾患組織に対して抗炎症作用を有する可能性があり、臓器の再生のために炎症の少ない環境を提供して、その初期妊娠段階での胎児の瘢痕のない創傷治癒を模倣するために役立つと考えている。同様に、バイカリンはセレクチンのような多糖類の細胞膜受容体に結合してさらに細胞接着を促進する可能性がある。バイカリンの他の有用な作用には、1）抗炎症作用；2）抗アレルギー作用；3）おそらく過酸化脂質の形成を阻害してフリーラジカルを消失させることによる抗脂質過酸化作用；4）血小板凝集阻害および血液循環の促進；5）腸平滑筋の痙縮の阻害および平滑筋機能の改善；6）細菌、真菌、およびウイルスのような抗病原性微生物作用；ならびに7）それによって痙縮強度の減少および死亡率の低下が得られる解毒作用が含まれる。
【０１４２】
バイカリンは、水溶液、油、アルコール、または他の有機溶媒、好ましくは油において100℃より高い温度、より好ましくは約120〜200℃、および最も好ましくは約160〜180℃でオウゴン（ラディックス・スクテラリアエ）を抽出することによって得てもよい。好ましくは、オウゴンの根を用い、シソ科のスクテラリア・ビスシジュラBge、スクテラリア・アモエナC.H.ライト、スクテラリア・レデリアナ・ディエルス、スクテラリア・イコニコビ・ジュズ、スクテラリア・リキアンゲンシス・ディエルス、およびスクテラリア・ハイペリシフォリア・レブルからなる群の一つまたはそれ以上のメンバーから選択される植物から得てもよい。「A Dictionary of Chinese Materia Medica」、上海科学技術出版、1988、2017〜2021頁。
【０１４３】
本発明の組成物はさらに、オバクラクトン（リモナ酸とも呼ばれる）を好ましくは約0.01〜5重量％、より好ましくは約0.1〜2重量％、および最も好ましくは約0.1〜1重量％の濃度で含んでもよい。オバクラクトンは、オウバク（フェロデンドロン・アムレンス・ループル）を油、アルコール、または他の有機溶媒において、好ましくは油において、100℃より高い温度、より好ましくは約120〜200℃、および最も好ましくは約160〜180℃で抽出することによって得てもよい。またはオバクラクトンは、エタノールのようなアルコール中でオウバクを抽出することによって得てもよい。好ましくはオウバクは、フェロデンドロン・キネンス・シュネイド、フェロデンドロン・キネンス・シュネイド栽培品種グラブリウスクルム・シュネイド、フェロデンドロン・キネンス・シュネイド栽培品種オメイエンス・ヒュアン、フェロデンドロン・シュネイド栽培品種ウンナンエンス・ヒュアン、およびフェロデンドロン・キネンス・シュネイド栽培品種ファルクツム・ヒュアンからなる群の一つまたはそれ以上のメンバーから選択される植物から得てもよい。「A Dictionary of Chinese Materia Medica」、上海科学技術出版、1988、2031〜2035頁。
【０１４４】
選択的に、本発明の組成物はさらに、オバベニンを、好ましくは約0.001〜2重量％、より好ましくは約0.002〜0.5重量％、および最も好ましくは約0.003〜0.1重量％の範囲の濃度で含んでもよい。
【０１４５】
オバベニンは、オウゴン、オウバク、および／またはオウレン（コプティス・キネシス・フランク）を、水溶液、油およびアルコールのような有機溶媒において抽出することによって得てもよい。好ましくはオウレンの根を用いる。オウレンは、キンポウゲ科のコプティス・デルトイデアC.Y. チェン・シャオ、コプティス・オメイエンシス（チェン）C.Y.チェン、およびコプティス・ティートイデス・C.Y.チェンからなる群の一つまたはそれ以上のメンバーから選択してもよい。「A Dictionary of Chinese Materia Medica」、上海科学技術出版、1988、2022〜2030頁。
【０１４６】
同様に選択的に、本発明の組成物はさらに、ベルベリンを、好ましくは約0.001〜2重量％、より好ましくは約0.002〜0.5重量％、および最も好ましくは約0.003〜0.1重量％の範囲の濃度で含んでもよい。
【０１４７】
同様に選択的に、本発明の組成物はさらに、ナルコトリンを、好ましくは約0.001〜2重量％、より好ましくは約0.002〜0.5重量％、および最も好ましくは約0.003〜0.1重量％の濃度範囲で含んでもよい。
【０１４８】
オバベニン、ベルベリン、およびナルコトリンは単独または併用して、平滑筋の収縮を阻害することによって損傷組織の疼痛を抑制する可能性がある。
【０１４９】
選択的に、本発明の組成物は、さらに、細胞増殖に対する栄養補助を提供するために、様々なアミノ酸、好ましくは天然のアミノ酸18個全てを含んでもよい。アミノ酸は、化学合成してもよく、または天然起源から得てもよい。例えば、豊富なタンパク質／アミノ酸源であるミミズを油またはアルコール中で抽出することによって、天然のアミノ酸の完全なスペクトルを得てもよい。本発明の組成物はさらに、アデニン、シチジン、グアニン、チミン、およびウリジンのような核酸塩基を含んでもよい。
【０１５０】
もう一つの局面において、本発明は、おそらく再生粘膜細胞の増殖を促進することによって、粘膜を保護および修復する方法を提供する。これらの方法を用いることによって、損傷したまたは機能障害粘膜の生理的構造および機能を回復して、体の栄養吸収能を増強し、これによって体の全身健康を改善して、疾患と闘うために免疫系を強化することができる。
【０１５１】
さらにもう一つの態様において、宿主の胃腸管における粘膜の潰瘍形成または刺激を予防する方法が提供される。方法は、0.5〜50重量％の濃度範囲の食用ロウとホモジナイズした食用油と、少なくとも0.1重量％の濃度のステロール化合物とを含む組成物を宿主に経口投与することを含む。
【０１５２】
この態様に従って、宿主は好ましくはヒトである。予防として、組成物は、胃へのアルコール、香辛料に富む食物、または他の刺激物の摂取前に宿主に投与される。または、組成物は、これらの刺激物の胃への摂取後に宿主に投与してもよい。
【０１５３】
なおもう一つの態様において、胃腸障害を有する宿主を治療する方法が提供される。方法は、0.5〜50重量％の濃度範囲の食用ロウとホモジナイズした食用油と、少なくとも0.1重量％の濃度のステロール化合物とを含む組成物を宿主に経口投与することを含む。
【０１５４】
この態様に従って、宿主は好ましくはヒトである。組成物は、医師の処方によってまたは処方なしで薬剤、栄養剤、または健康食品として用いてもよい。投与レジメは、宿主の病態の重症度に応じて変化してもよい。組成物は、好ましくは0.5〜10 g/日の量で、より好ましくは2〜8 g/日、および最も好ましくは3〜6 g/日の量で投与される。例えば、組成物が0.5 g軟ゲルカプセルとして供給される場合、カプセル1〜10個を1日2回投与してもよい。
【０１５５】
胃腸障害の例には、急性胃炎、慢性表層性胃炎、萎縮性胃炎、前庭胃炎、老人性胃炎、胆汁逆流性胃炎、食道炎、胃十二指腸潰瘍、消化不良、胃神経症、便秘のような様々な胃腸疾患のみならず、胃酸過多、低塩酸症、鼓腸、食後の胃腸の不快感、サリチレート（例えば、アスピリン）のような酸性薬物の服用によって引き起こされた胃炎、飲酒後の胃の不快感、および空腹による胃の不快感を含むその後の様々な病態が含まれるがこれらに限定されない。
【０１５６】
なおもう一つの態様において、胃腸癌を有する患者を治療する方法が提供される。方法は、0.5〜50重量％の濃度範囲の食用ロウとホモジナイズした食用油と、少なくとも0.1重量％の濃度のステロール化合物とを含む組成物を胃腸癌を有する患者に経口投与することを含む。
【０１５７】
胃腸（GI）癌は、上部または下部GI癌でありうる。上部GI癌の例には、1）食道癌、2）胃癌、3）膵臓癌、4）肝臓癌、および5）胆管癌が含まれるがこれらに限定されない。下部GI癌の例には、結腸直腸癌のような大腸癌、原発性リンパ腫、黒色腫、および大腸の肉腫が含まれるがこれらに限定されない。
【０１５８】
同様に選択的に、本発明の組成物は、治療物質を含む固体の疎水性ポリマーの半透過性マトリクスのような徐放性システムを用いて送達してもよい。様々なタイプの徐放性材料が確立されており、当業者に周知である。徐放性カプセルは、その化学特性に応じて、本発明の組成物を数週間から100日を超えるまで放出してもよい。
【０１５９】
4．薬剤の経口投与のための送達媒体
食用ロウ（例えば、蜜ロウ）と食用油（例えば、ゴマ油）とをホモジナイズすることによって形成された組成物の独自の物理的および生化学的特性に基づいて、薬物を経口送達するための薬学的送達媒体が提供される。薬学的送達媒体は、食用ロウが室温で食用油に実質的に均一に分散される微結晶を形成する、0.5〜50重量％の濃度範囲の食用ロウとホモジナイズした食用油を含む。
【０１６０】
微結晶の大きさは、好ましくは長さが0.1〜100μm、より好ましくは5〜70μm、および最も好ましくは10〜50μmである。微結晶の形は、濃度および温度に応じて変化してもよい。室温では、微結晶は単一の針状結晶型および／または互いに凝集することによって微結晶複合体を形成する可能性がある。
【０１６１】
組成物はさらに、ステロール化合物を約0.1〜20重量％、より好ましくは約1〜10重量％、および最も好ましくは約2〜6重量％の濃度で含んでもよい。
【０１６２】
「組織修復および臓器再生のための処方および投与経路」の章において先に説明したように、ゴマ油に分散させた蜜ロウの微結晶は、粘膜に対する優れた接着能を有し、油に分散または微結晶に捕獲された活性成分を徐々に放出してその下の粘膜および他の組織に到達させる。さらに、蜜ロウとゴマ油の酸および酸化に対する強い抵抗性のために、組成物に含まれる活性成分は、胃の酸性および酸化環境において分解から保護することができる。これらの特徴は、生物学的利用率を増強するのみならず、活性成分の治療指数を上昇させるために都合がよく、望ましい。
【０１６３】
広く多様な薬剤を、上記の薬学的基剤において調製することができる。好ましくは、薬物は経口投与に適している。しかし、生物学的利用率が不良であるために経口投与に適していないと思われる他の製剤におけるそれらの薬剤も同様に、そのような組成物によって薬物の生物学的利用率の改善が得られれば、本発明の薬学的送達媒体と組み合わせるための候補となる可能性がある。
【０１６４】
薬物は、1）胃腸薬；2）抗生物質；3）抗ウイルス剤；4）抗真菌剤；5）抗新生物剤；6）鎮痛薬；7）トランキライザー；8）麻薬拮抗剤；9）抗うつ剤；10）抗ヒスタミン剤；11）抗偏頭痛剤；12）心血管剤；13）カルシウムチャンネル遮断剤；14）食欲抑制剤；15）避妊薬；16）コルチコステロイド；17）局所麻酔剤；18）利尿剤；19）抗高血圧剤；20）ステロイド；21）プロスタグランジン；22）抗炎症剤；23）抗血栓剤；24）強心配糖体；25）抗パーキンソン剤；26）依存性化学物質；27）酸性薬；および28）ペプチドのクラスであってもよい。
【０１６５】
胃腸薬の例には、ニザチジン、ファモチジン、シメチジン、ラニチジンのようなヒスタミンH2受容体拮抗剤、ドキュセートナトリウムのような緩下剤、ビサコジル、およびメクリジン、メトクロプラミド、ドロペリドール、ハロペリドール、およびプロメタジンのような制吐剤が含まれるがこれらに限定されない。
【０１６６】
鎮痛薬の例には、ブプレノルフィン、コデイン、フェンタニル、モルヒネ、およびヒドロモルホンが含まれるがこれらに限定されない。
【０１６７】
抗炎症剤の例には、イブプロフェン、インドメタシン、ナプロキセン、ジクロフェナク、トルフェナム酸、およびピロキシカムが含まれるがこれらに限定されない。
【０１６８】
トランキライザーの例には、ジアゼパム、ドロペリドール、フルスピリレン、ハロペリドール、およびロラゼパムが含まれるがこれらに限定されない。
【０１６９】
強心配糖体の例には、ジゴキシンおよびウワバインが含まれるがこれらに限定されない。
【０１７０】
麻薬拮抗剤の例には、ナロキソンおよびナロルフィンが含まれるがこれらに限定されない。
【０１７１】
抗パーキンソン病拮抗剤の例には、ブロモクリプチン、ビペリジン、ベンズヘキソール、およびベンズトロピンが含まれるがこれらに限定されない。
【０１７２】
抗うつ剤の例には、イミプラミン、トルトリプチリン、およびプリチプチリンが含まれるがこれらに限定されない。
【０１７３】
抗新生物剤の例には、ブレオマイシン、シクロスポリンA、フルオロウラシル、メルカプトプリン、メソトレキセート、カンプトテシン、パクリタキセル、ドキソルビシン、およびマイトマイシンが含まれるがこれらに限定されない。
【０１７４】
抗ウイルス剤の例には、イドクスウリジン、アシクロビル、インターフェロン、AZT、およびビダラビンが含まれるがこれらに限定されない。
【０１７５】
抗生物質の例には、クリンダマイシン、エリスロマイシン、フシジン酸、ゲンタマイシン、およびテトラサイクリンが含まれるがこれらに限定されない。
【０１７６】
抗真菌剤の例には、ミコナゾール、ケトコナゾール、メトロニダゾール、クロトリマゾール、アンフォテリシンB、およびナイスタチンが含まれるがこれらに限定されない。
【０１７７】
食欲抑制剤の例には、フェンフルラミン、マジンドール、およびフェンテルミンが含まれるがこれらに限定されない。
【０１７８】
抗ヒスタミン剤の例には、クロルフェニラミン、テルフェナジン、およびトリプロリジンが含まれるがこれらに限定されない。
【０１７９】
抗偏頭痛剤には、ジヒドロエルゴタミン、エルゴタミン、およびピゾチリンが含まれるがこれらに限定されない。
【０１８０】
心血管剤の例には、ニフェジピン、ジルチアゼム、硝酸グリセリル、硝酸イソソルビド、モルシドミン、ベラパミール等が含まれるがこれらに限定されない。
【０１８１】
カルシウムチャンネル遮断剤の例には、ベラパミール、ニフェジピン、ジルチアゼム、およびニカルジピンが含まれるがこれらに限定されない。
【０１８２】
ステロイドの例には、エストラジオール、エストロン、エストリオール、ポリエストラジオール、ポリエストリオール、ジエネストロール、ジエチルスチルベストロール、ジヒドロエルゴステロン、シプロテロン、ダナゾール、テストステロン、プロゲステロン、ノルエチンドロン、レボノルゲストロール、エチノジオール、ノルゲスチメート、ゲスタニン、3-ケトン-デソゲストレル、デメゲストン、プロメトエストロール、テストステロン、スピロノラクトン、およびそのエステルが含まれるがこれらに限定されない。
【０１８３】
抗血栓剤の例には、ヘパリンおよびワルファリンが含まれるがこれらに限定されない。
【０１８４】
利尿剤の例には、ヒドロクロロサイアザイド、フルナリジン、およびミノキシジルが含まれるがこれらに限定されない。
【０１８５】
抗高血圧剤の例には、プロプラノロール、メトプロロール、クロニジン、およびピンドロールが含まれるがこれらに限定されない。
【０１８６】
依存性化学物質の例には、ニコチンおよびメタドンが含まれるがこれらに限定されない。
【０１８７】
局所麻酔剤の例には、リドカイン、プリロカイン、およびベンゾカインが含まれるがこれらに限定されない。
【０１８８】
コルチコステロイドの例には、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、クロベタゾル、デソニド、デスオキシメタゾン、デキサメタゾン、ジフルコルトロン、フルメタゾン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロンアセトニド、ブデソニド、およびハルシノニドが含まれるがこれらに限定されない。
【０１８９】
酸性薬の例には、アスピリンのようなサリチレートが含まれるがこれらに限定されない。
【０１９０】
ペプチドの例には、成長ホルモン放出因子、増殖因子（上皮細胞増殖因子（EGF）、神経生長因子（NGF）、TGF、PDGF、インスリン増殖因子（IGF）、線維芽細胞増殖因子（aFGF、bFGF等）等）、ソマトスタチン、カルシトニン、インスリン、バソプレッシン、インターフェロン、IL-2、ウロキナーゼ、セラチオペプチダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ（SOD）、トリロトロピン（tryrotropin）放出ホルモン（TRH）、黄体形成ホルモン放出ホルモン（LH-RH）、副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン（CRF）、成長ホルモン放出ホルモン（GHRH）、オキシトシン、エリスロポエチン（EPO）、およびコロニー刺激因子（CSF）が含まれるがこれらに限定されない。
【０１９１】
本発明に従って用いられる活性成分の他の特定の例には、イミダゾールおよびマゾールおよびその誘導体のようなアゾール誘導体；例えば、硝酸アミル、ニトログリセリン、および硝酸イソソルビドのようなニトロ化合物；例えば、ピロカイン、オキシアブチニンクロリド、リドカイン、ベンゾカイン、ニコチン、クロルフェニラミン、テルフェナジン、トリプロリジン、プロプラノロール、メトロプロロールおよびその塩のようなアミン化合物；例えば、ピロキシカムのようなオキシカム誘導体；例えば、チオムカジーのようなムコ多糖類；例えば、モルヒネならびにブプレノルフィン、オキシモルホン、ヒドロモルホン、レボルファノール、フェンタニルおよびフェンタニル誘導体および類似体のようなモルヒネ様薬物のようなオポイド（opoid）化合物；例えば、ミソプロストールまたはエナプロスチルのような、例えばPGA、PGB、PGE、またはPGFシリーズメンバーのようなプロスタグランジン；例えば、メトクロプラミド、スコポラミンのようなベンズアミド；例えば、カフェイン、テオフィリンのようなキサンチン；例えば、エフェドリン、サルブタモール、テルブタリンのようなカテコラミン；例えば、ニフェジピンのようなジヒドロピリジン；例えば、ヒドロクロロチアジド、フルナリジンのようなサイアザイド；例えば、モルシドミンのようなシドノニミン；例えば、ヘパリンのような硫酸化多糖類が含まれる。
【０１９２】
実施例
以下は、本発明の組成物の態様（「GIカプセル」と呼ぶ）の製造プロセスの実施例を提供する。GIカプセルの安全性プロフィールおよび治療有効性も同様に記述する。
【０１９３】
1．GIカプセルの製造プロセス
GIカプセルの製造プロセスを図6のフローチャートに示す。第一に、GIカプセルの産生のための原料を、工業的標準に従って精製する。ゴマ油を濾過して、油タンクに移した。フラボノイドを含む植物オウゴン（ラディックス・スクテラリアエ）の根を洗浄して、小片に切断して、粉砕してふるいにかけ、貯蔵タンクに移す。蜜ロウは、水煎出によって精製した。
【０１９４】
第二に、精製したゴマ油とオウゴン（100 kg：5 kg）とを反応タンクに加えて攪拌し、120℃で50分間加熱した。かすを濾過して捨てた。濾液を薬物油Iと表示した。
【０１９５】
第三に、薬物油Iをもう一つの反応タンクにポンプで送り、加熱して、85℃に温めて維持した精製蜜ロウと重量比93 kg：7 kg（薬物油I：蜜ロウ）で混合した。混合物を十分に攪拌し、温度が120℃に達したら加熱を止めた。混合物を20分間絶えず攪拌すると、薬物油IIが得られた。
【０１９６】
最後に、薬物油IIを、そのギア距離を0.6〜0.8μm、および出力速度15 kg/15分に調節したコロイドミルにおいて粉砕した。または薬物油IIを、ホモジナイザーにおいて、40±2℃で15〜20分間6000〜10000 rpmでホモジナイズすることができる。
【０１９７】
ホモジナイズした混合物を100 rpmで攪拌して、温度を40±2℃で50分間維持しながら0.09 MP未満の真空にした。温度が約20℃に低下して、真空の程度が0.6〜0.8 MPに達すると、ホモジナイズした薬物油IIを20分間放置してGIカプセルの内容物を得た。
【０１９８】
次に、GIカプセルの内容物を、標準的な技法に従ってゼラチンおよびグリセリン製の軟ゲルカプセルに充填した。簡単に説明すると、ゼラチンと保存剤とをタンクに加えて12時間浸漬した。攪拌しながら水、グリセリン、および保存剤を適当な比率で加えて、混合物を65℃に加熱してゼラチンを融解させた。ゼラチンが完全に融解した後、混合物を真空にして絶えず攪拌しながら2時間温めてから約32℃に冷却した。軟ゲルカプセル装置に、GIカプセルの内容物（例えば、500 mg/カプセル）を、上記のようにゼラチンおよびグリセリン製の外皮に充填した。カプセルは卵形であり、その軟ゲルの外皮の壁厚は0.7〜0.8 mmである。
【０１９９】
2．GIカプセルにおける特定の成分の濃度
GIカプセルにおける特定の成分濃度、すなわち総フラボン、β-シトステロール、リノレン酸、およびオレイン酸の濃度を、P.R.C.薬局方、2000年版、第2巻に記述の技法に従ってガスクロマトグラフィーを用いて決定した。表1は、GIカプセルの内容物100 g中のこれらの成分濃度範囲を示す。
【０２００】
【表１】
2005508976.tif 000002
【０２０１】
3．GIカプセルの内容物の毒性試験
1）急性毒性
GIカプセルの内容物をウィスター系ラット（体重：180〜200 g）およびクンミンマウス（体重：18〜20 g）に、表2および3に明記した様々な用量で経口投与した。試験試料投与の16時間前、試験動物の給餌を停止した。試験期間中、動物は毛つやも良く正常な行動を示し、観察可能な変化を認めなかった。試験結果をウィスター系ラットおよびクンミンマウスに関してそれぞれ、表2および3に概要する。表2および3に示すように、GIカプセルの内容物を経口投与すると、極めて高い用量、例えば21.5 g/kgであっても、試験動物に如何なる死亡も引き起こさなかった。このように、GIカプセルの内容物は、動物における急性毒性を等級付けするための標準では非毒性等級に入る。このように、試験動物の半数に死亡を引き起こす致死量（LD50）は、21.5 g/kgより多いと推定される。
【０２０２】
【表２】
2005508976.tif 000003
【０２０３】
【表３】
2005508976.tif 000004
【０２０４】
2）微小核試験
体重24〜28 gのクンミンマウスを、1群あたり雌性マウス5匹および雄性マウス5匹の10匹ずつの5群に分けた。三つの用量群に、GIカプセルの内容物0.083 g/kg（提案されるヒトの1日摂取量）の100倍、50倍、10倍、すなわちそれぞれ、8.3 g/kg、4.2 g/kg、および0.83 g/kgを投与した。二つの対照群、すなわち陽性対照（35 mg/kgシクロホスファミド（CP））と陰性対照（通常食を与えた）も採用した。試験試料は全て、24時間の間隔で2日間連続的に動物に投与した。最後の投与の6時間後に頚椎の脱臼によって動物を屠殺して、その胸骨骨髄を切片のために採取して、染色して、標準的なプロトコールに従って顕微鏡試験を行った。それぞれの動物を1000 PCEに関して観察して、微小核PCEの量を、微小核発生率の計算のために記録してこれを表4に要約する。
【０２０５】
【表４】
2005508976.tif 000005
【０２０６】
表4に示すように、用量群を陰性対照群と比較したところ、微小核発生率に有意差を認めなかった（P＞0.05）。対照的に、陽性対照と陰性対照群のあいだには有意差を認めた（P＜0.01）。精子の異常を引き起こすことが知られている変異原物質であるシクロホスファミドを処置した群は、陰性対照群よりかなり高い微小核発生率を有する。試験結果は、GIカプセルの内容物が、調べた用量範囲内で微小核発生率の増加を誘導しなかったことを示している。
【０２０７】
3）精子異常試験
体重24〜28 gのクンミンマウスを1群10匹の5群に分けた。三つの用量群にGIカプセルの内容物0.083 g/kg（提案されるヒトの1日摂取量）の100倍、50倍、10倍、すなわち8.3 g/kg、4.2 g/kg、および0.83 g/kgを投与した。二つの対照群、すなわち陽性対照（35 mg/kgシクロホスファミド（CP））と陰性対照（通常食を与えた）も採用した。試験試料は全て、24時間の間隔で2日間連続的に動物に投与した。初回投与の35日後に頚椎の脱臼によって動物を屠殺して、双方の精巣上体を切片のために採取して、染色して、標準的なプロトコールに従って顕微鏡試験を行った。各動物を精子1000個について観察して、精子の量を精子異常発生率を計算するために記録してこれを表5に要約する。
【０２０８】
【表５】
2005508976.tif 000006
【０２０９】
表5に示すように、用量群と陰性対照群とを比較したところ、精子異常発生率に有意差を認めなかった（P＞0.05）。対照的に、陽性対照と陰性対照群のあいだには有意差を認めた。シクロホスファミドを処置した群は、陰性対照群よりかなり高い精子異常発生率を有する。試験結果は、GIカプセルの内容物が、調べた用量範囲内で精子の異常を引き起こさなかったことを示している。
【０２１０】
4）エームス試験
GIカプセルの内容物の変異原性を調べるため、四つのサルモネラ株についてエームス試験を行った：TA97a、TA98フレームシフト変異株、TA100、およびTA102塩基置換変異株。Ames（1983）、Mutation Research 113：173〜215。試験の必要条件を満たすために、これらの四つの株の五つの遺伝的特徴を決定した。五つの濃度のGIカプセルの内容物を調べた：5 mg/プレート、2.5 mg/プレート、1.0 mg/プレート、0.5 mg/プレート、0.1 mg/プレート。陰性対照はPBSであった。陽性対照は、2-AF 100μg/プレート、MMS 2μl/プレート、フルオレノン0.2μg/プレート、および2-AA 12μg/プレートであった。
【０２１１】
表6は、試験試料、陽性対照、および陰性対照の変異データを示す。
【０２１２】
【表６】
2005508976.tif 000007
【０２１３】
表6に示すように、S9代謝および-S9非代謝活性化条件では、GIカプセルの内容物は、サルモネラの四つの株において変異を誘発せず、このように調べた用量範囲で非変異原性である。
【０２１４】
4．GIカプセルの内容物の緩下効果
GIカプセルの内容物を、マウスの便秘モデルについて緩下効果に関して、すなわち大腸を緩くして便秘を軽減する効果に関して試験した。健康なクンミンマウスを無作為に各群20匹の5群に分けた。三つの用量群を用いてGIカプセルの内容物を調べた：動物の体重（BW）1 kgあたり低用量の83.3 mg（提案されるヒトの1日量）；中等度の用量833 mg/kg BW（提案される1日量の10倍）；および高用量1666 mg/kg BW（提案される1日量の20倍）。陰性対照群は、通常の餌を与えたマウス20匹からなり、陽性対照群のマウス20匹にはジフェノキシレート50 mg/kg BWを与えた。
【０２１５】
試験試料を蒸留水で、必要な濃度および容積の0.1 ml/10 g BWに希釈して、経口針によってマウスに1日1回、14日間連続投与した。マウスにはこの期間、通常飼料を与えた。投与最終日、マウスを一晩24時間絶食したが水は与えた。GIカプセルの内容物を経口針によって三つの投与群のマウスに投与した。20分後、ジフェノキシレート（50 mg/kg）を、0.1 ml/10 gの用量を経口投与した陰性対照群のマウスを除く全ての動物に投与した。10分後、カーボンインク（5％活性炭素、10％アラビアゴム）を0. ml/10 gの用量で全ての動物に経口針によって投与した。各群の動物を全て二つのサブグループに分けて、各サブグループは1群10匹であった。各群のサブグループ1群の排泄物を24時間観察した。他は、20分後に屠殺して、腹部を開いて小腸の長さ、および幽門からカーボンインクの先端までの距離を測定して、炭素の移動速度を計算した。
【０２１６】
表7は、5群におけるマウスの体重に及ぼす治療効果を示す。表7に示すように、陰性対照群と比較すると、GIカプセルの内容物は、調べた用量範囲内でマウスに如何なる異常な体重変化も引き起こさなかった。
【０２１７】
【表７】
2005508976.tif 000008
【０２１８】
表8は、5群のマウスの排泄物に及ぼす治療効果を示す。表8に示すように、三つの用量群における初回排泄時間と総排泄量は、陰性対照群と類似である。対照的に、ジフェノキシレートによって便秘となるように誘導した陽性対照群は、かなり長い初回排泄時間を有し、より少ない総排泄量を有した。これらの結果は、GIカプセルの内容物が便秘マウスに対して緩下効果を有することを示している。
【０２１９】
【表８】
2005508976.tif 000009
* 陽性対照群との比較、p＜0.05
【０２２０】
表9は、5群のマウスにおいてカーボンインクに染色した大腸内容物の移動速度を示す。表9に示すように、三つの投与群の移動速度は、陰性対照群と類似である。対照的に、陽性対照群は、かなり遅い移動速度を有した。これらの結果は、GIカプセルの内容物が、腸を緩くして、ジフェノキシレートによって誘導された便秘を解放することができ、このように便秘マウスに対して緩下効果を有することを確認する。
【０２２１】
【表９】
2005508976.tif 000010
* 陽性対照群との比較P＜0.05
【０２２２】
5．胃腸管粘膜に及ぼすGIカプセルの内容物の保護作用
GIカプセルの内容物を、無水アルコールの潰瘍形成作用からのラット胃粘膜の保護活性に関して調べた。体重60〜100 gの健康なウィスター系雄性ラットを無作為に1群10匹の5群に分けた。三つの投与群を用いてGIカプセルの内容物を調べた：低用量417 mg/kg；中等度の用量834 mg/kg；および高用量1667 mg/kg、これらはヒトの投与に関して提案される1日量の5倍、10倍、および20倍に相当する。各ラット10匹からなる陰性および陽性対照群も同様に確立した。
【０２２３】
三つの用量群のラットに、蒸留水で所望の濃度および容積（1 ml/100 g重量）に希釈したGIカプセルの内容物を経口針によって1日1回、30日間連続して投与した。試験後、実験動物を全て48時間絶食して、水は与えた。その後、陰性対照群を除く全ての動物に無水アルコール（1 ml/動物）を経口針によって投与した。1時間後、動物を全て屠殺して解剖した。胃を1％ホルムアルデヒドによって固定して、胃粘膜に対する損傷の重症度を観察した。長さが1 mmより長い線条損傷を測定して、線条1 mm毎に1のスコアを与え、幅が1 mmより大きい場合には2倍のスコアを与えて、潰瘍指数を計算した。累積スコアが潰瘍指数である。
【０２２４】
表10は、5群におけるラットの潰瘍指数を示す。表10に示すように、GIカプセルの内容物を処置したラットの潰瘍指数は、陽性対照群のラットの指数よりかなり低い。これらの結果は、GIカプセルの内容物がアルコールの潰瘍作用から胃粘膜を保護できることを示している。
【０２２５】
【表１０】
2005508976.tif 000011
* 陽性対照群との比較P＜0.05
【０２２６】
6．インビトロでマウス胚からの腸組織の外植体の増殖
本実施例において、本発明の組成物が細胞および組織の増殖を臓器特異的に促進する独自の活性を有することを証明するために、インビトロ実験をデザインした。マウス小腸の粘膜をマウス胚から採取して、インビトロで培養した。組織培養物を2群に分けた：正常組織培養培地（完全なMEM）において培養した対照群および本発明の組成物を加えた完全なMEMにおいて培養した処置群。
【０２２７】
本発明の組成物の態様をインビトロ実験において用いた。組成物は、7％蜜ロウと約1％シトステロールとを含み、これを、乾燥オウゴン（2％w/w）、オウバク（2％w/w）、オウレン（2％w/w）、ケシのさく果（2％w/w）、およびミミズ（2％w/w）の配合物のゴマ油抽出物と共にホモジナイズする。
【０２２８】
妊娠16日のクンミンマウスの胚から屠殺後直ちに小腸粘膜（約2 cm）を採取して、これを1 mm×1 mm片に切断して、DonaldsonおよびKapadia（1980）の「Organ culture of gastric mucosa：advantages and limitations」、Methods in Cell Biology、アカデミック出版インク、21B：349のプロトコールに従って、12ウェル培養プレート（2.5 ml培地/ウェル、粘膜小片5個/ウェル）においてMEM中で培養した。本発明の組成物約3 gを処置群に加えて、MEM 3 mlを対照群に加えた。双方の群の培養物の増殖培地は、4〜5日ごとに交換した。培養物を97日間観察して、培養物の顕微鏡による外観を記録した。
【０２２９】
図7A〜Hはそれぞれ、24、30、38、42、50、85、90および97日での本発明の組成物の存在下および非存在下でのマウス腸粘膜培養に関するインビトロ試験の結果を示す。左の欄の写真は対照群から得て、右の欄の写真は処置群から得た。培養の最初の7日間において、対照および処置群の双方における粘膜はその完全性を維持した。培養8日目から双方の群の粘膜は、裸眼ではほぼ検出不可能な小さい小片に崩壊し始めた。顕微鏡下で観察すると、双方の群に単細胞およびクローンが出現した。しかし、培養18日目から、対照群の細胞は徐々に暗色となり、縮んで、死滅した。図7A〜Hの左のパネルを参照されたい。
【０２３０】
対照的に、処置群の細胞は強い増殖を維持し、生存細胞の典型的な形態を維持した。図7Aの右のパネルに示すように、培養24日目では、多数の単一の腸細胞を認めたがクローンは認めなかった。しかし、培養30日では、多数のクローンが出現して、その内部の細胞数も培養時間と共に増加した。図7Bの右のパネルを参照されたい。より有意にそして意外にも、38日目までに、比較的完全な腸粘膜小片が培養において形成されたことが認められた。粘膜における細胞はインビボの腸と類似のように互いに接着した。時間が経過するにつれて、粘膜小片の数は増加して、培養物全体に散在した。図7C〜Eの右のパネルを参照されたい。培養97日目での実験終了時、小さい粘膜片が互いに接着することによって大きい粘膜片が形成された。対照的に、対照群の細胞は全てかなり前に、少なくとも培養24日以内に死滅した。
【０２３１】
これらの結果は、本発明の組成物が腸の粘膜細胞の増殖を促進できるのみならず、その同源の組織に対する細胞の接着を促進して、培養における粘膜の形成を促進できることを証明している。対照群と処置群の対比は、本発明の組成物が、組織特異的な細胞増殖および接着の刺激において独自の活性を有することを強く示している。細胞の連続的な増殖および培養における粘膜組織の形成も同様に、再生幹細胞が、粘膜細胞の増殖および分化を維持するために多数の細胞を産生するように活性化されて、最終的にインビトロで粘膜を形成したことを示唆している。これはまた、本発明の組成物によって処置した動物における粘膜細胞に及ぼす作用と一致する。
【０２３２】
7．インビトロでのマウス胚からの胃の外植体の増殖
本実施例において、本発明の組成物が同様に粘膜細胞および胃組織の増殖を臓器特異的に促進する活性を有することを証明するために、インビトロ実験をデザインした。胃の組織をマウス胚から採取してインビトロで培養した。組織培養物を2群に分けた：正常組織培養培地（完全なMEM）において培養した対照群および本発明の組成物を加えた完全なMEMにおいて培養した処置群。
【０２３３】
本発明の組成物の態様をインビトロ実験において用いた。組成物は、7％蜜ロウ、約1％シトステロール、約0.5％オバクラクトン、約0.3％バイカリン、および約0.2％ベルベリンを含み、これらをゴマ油において混合する。
【０２３４】
全胃の胃組織を妊娠16日のクンミンマウスの胚から屠殺後直ちに採取して、1 mm×1 mm片に切断して、DonaldsonおよびKapadia（1980）の「Organ culture of gastric mucosa：advantages and limitations」、Methods in Cell Biology、アカデミック出版インク、21B：349のプロトコールに従って、12ウェル培養プレート（2.5 ml培地/ウェル、組織片5個/ウェル）においてMEM中で培養した。本発明の組成物約3 gを処置群に加えて、MEM 3 mlを対照群に加えた。双方の群の増殖培地は4〜5日ごとに交換した。培養物は90日間観察して、培養物の顕微鏡下での外観を記録した。
【０２３５】
図8A〜Hは、それぞれ、24、30、38、42、50、70、85、および90日での本発明の組成物の存在下および非存在下でのマウス腸粘膜培養に関するインビトロ試験の結果を示す。左の欄の写真は対照群から得て、右の欄の写真は処置群から得た。培養の最初の7日間において、対照および処置群の双方における粘膜はその完全性を維持した。培養8日目から双方の群の粘膜は、裸眼ではほぼ検出不可能な小さい小片に崩壊し始めた。顕微鏡下で観察すると、双方の群に単細胞およびクローンが出現した。しかし、培養18日目から、対照群の細胞は徐々に暗色となり、縮んで、死滅した。図8A〜Hの左のパネルを参照されたい。
【０２３６】
対照的に、処置群の細胞は強い増殖を維持し、生存細胞の典型的な形態を維持した。図8Aの右のパネルに示すように、培養24日目では、培養において増殖する胃細胞のクローンを認めた。クローンは増殖し続け、内部の細胞は強い生存性を示した。図8B〜Cの右のパネルを参照されたい。培養90日目での実験終了時、クローンの増殖は、図8D〜Hに示すように、培養物における胃組織の連続的な増殖と共になおも強く維持された。対照的に、対照群の細胞は全てかなり前に、少なくとも培養24日以内に死滅した。
【０２３７】
上記の腸粘膜外植体について認められた結果と一致して、本発明の組成物はまた、インビトロで胃細胞の強い増殖および組織特異的細胞間接着による胃組織の形成を促進することが可能であった。培養における細胞の連続的な増殖および胃組織の形成はまた、再生幹細胞、おそらく上皮幹細胞が多数の細胞を産生するように活性化されて、胃細胞の増殖および分化を維持し、最終的にインビトロで胃組織の形成に至ることを示唆している。これはまた、本発明の組成物によって処置した動物における胃細胞に及ぼす作用と一致する。
【図面の簡単な説明】
【０２３８】
【図１】本発明に従う成体組織の修復および臓器再生の根本的原理を示す。
【図２】成体再生幹細胞を培養するためおよび生理的組織修復および機能的臓器再生を促進するために用いられる特異的技術を示す。
【図３Ａ】無水アルコールを摂取後の重度の潰瘍を有するラットの胃を示す。
【図３Ｂ】無水アルコールを摂取後の重度の潰瘍を有し、GIカプセルの内容物0.8 g/kgによって3週間治療したラットの胃を示す。
【図４Ａ】ホモジナイゼーションを行わずにゴマ油と混合した場合に蜜ロウがとる分室構造のモデルを示す。
【図４Ｂ】ホモジナイゼーションを行わずにゴマ油を混合した場合の蜜ロウのエレクトログラフを示す。
【図５Ａ】蜜ロウの単針状微結晶を示す、ゴマ油とホモジナイズした場合の蜜ロウのマイクログラフを示す。
【図５Ｂ】蜜ロウの微結晶複合体を示す、ゴマ油とホモジナイズした場合の蜜ロウのマイクログラフを示す。
【図６】本発明の組成物の一つの態様の製造プロセスを示す。
【図７】図7A〜7Hは、培養24、30、38、42、50、85、90、および97日でのマウス腸組織の培養のマイクログラフをそれぞれ示す。左のパネルは対照群であり、右のパネルは治療群である。
【図８】図8A〜8Hは、培養24、30、38、42、50、70、85、および90日でのマウス腸組織の培養のマイクログラフをそれぞれ示す。左のパネルは対照群であり、右のパネルは治療群である。
【図１】
2005508976.tif 000012
【図２】
2005508976.tif 000013
【図３】
2005508976.tif 000014
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
2005508976.tif 000018
【図７Ｂ】
2005508976.tif 000019
【図７Ｃ】
2005508976.tif 000020
【図７Ｄ】
2005508976.tif 000021
【図７Ｅ】
2005508976.tif 000022
【図７Ｆ】
2005508976.tif 000023
【図７Ｇ】
2005508976.tif 000024
【図７Ｈ】
2005508976.tif 000025
【図８Ａ】
2005508976.tif 000026
【図８Ｂ】
2005508976.tif 000027
【図８Ｃ】
2005508976.tif 000028
【図８Ｄ】
2005508976.tif 000029
【図８Ｅ】
2005508976.tif 000030
【図８Ｆ】
2005508976.tif 000031
【図８Ｇ】
2005508976.tif 000032
【図８Ｈ】
2005508976.tif 000033
【手続補正書】
【提出日】平成16年7月1日(2004.7.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下を含む、哺乳類への経口投与に適した組成物：
組成物の総重量に基づいて0.5〜50重量％の濃度範囲の食用ロウとホモジナイズした食用油、および組成物の総重量に基づいて少なくとも0.1重量％の濃度のステロール化合物。
【請求項２】
ステロール化合物の濃度が、0.5〜20重量％である、請求項1記載の組成物。
【請求項３】
食用ロウの濃度が、3〜30重量％である、請求項1記載の組成物。
【請求項４】
食用ロウが、蜜ロウ、ヒマロウ、糖ロウ、およびカルナウバロウからなる群より選択される、請求項1記載の組成物。
【請求項５】
食用油が、コーン油、麦芽油、大豆油、米ぬか油、菜種油、ゴマ油、および魚油からなる群より選択される、請求項1記載の組成物。
【請求項６】
1重量％未満の水を含む、請求項1記載の組成物。
【請求項７】
ステロール化合物が、スチグマステロール、カンペステロール、β-シトステロール、チャリノステロール、クリオナステロール、ブラッシカステロール、α-スピナステロール、ダンコステロール、デスモステロール、ポリフェラステロール、ならびにその全ての天然または合成異性体型および誘導体からなる群より選択されるフィトステロールである、請求項1記載の組成物。
【請求項８】
ゴマ油の総重量に基づいてゴマ油における1〜50重量％の量のオウゴン（Scutellaria baicalensis Georgi）の抽出物をさらに含む、請求項1記載の組成物。
【請求項９】
食用油、食用ロウ、およびステロール化合物がホモジナイズされて、室温で微結晶型をとる食用ロウとコロイドを形成する、請求項1記載の組成物。
【請求項１０】
食用ロウが蜜ロウであり、蜜ロウの微結晶型の長さが0.1〜100μmである、請求項9記載の組成物。
【請求項１１】
薬学的活性成分をさらに含む、請求項1記載の組成物。
【請求項１２】
以下を含む、胃腸障害を有する宿主を治療する方法：
0.5〜50重量％の濃度範囲の食用ロウとホモジナイズした食用油と、少なくとも0.1重量％の濃度のステロール化合物とを含む組成物を、胃腸障害を有する宿主に経口投与する段階。
【請求項１３】
胃腸障害が、急性胃炎、慢性表層性胃炎、萎縮性胃炎、前庭胃炎、老人性胃炎、胆汁逆流性胃炎、食道炎、胃十二指腸潰瘍、消化不良、胃神経症、便秘、胃酸過多、低塩酸症、鼓腸、食後の胃腸の不快感、飲酒後の胃の不快感、および空腹による胃の不快感からなる群より選択される、請求項12記載の方法。
【請求項１４】
以下を含む、インビボで哺乳類に活性成分を送達するための組成物を製造する方法：
食用ロウをその融点より高い温度で加熱する段階；
食用ロウの融点より高い温度で食用油を加熱する段階；
融解したロウと油とを重量比3：97〜20：80の範囲で混合する段階；および
組成物を作製するためにロウと油の混合物をホモジナイズする段階。
【請求項１５】
ロウと油の混合物をホモジナイズする段階が、混合物をホモジナイザーにおいて6000〜10000 rpmの速度で35〜45℃で15〜20分間ホモジナイズする段階を含む、請求項14記載の方法。
【国際調査報告】
2005508976.tif 000034
2005508976.tif 000035