(57)【要約】本発明は、（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の代謝物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物２−（４−｛［（３−カルボキシメトキシ−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェニル）−２−メチル−プロピオン酸、または薬学的に許容することのできるその塩。
【請求項２】
化合物（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸、または薬学的に許容することのできるその塩。
【請求項３】
化合物（３−｛［（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸、または薬学的に許容することのできるその塩。
【請求項４】
化合物（５−｛［（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−ヒドロキシ−フェノキシ）−酢酸、または薬学的に許容することのできるその塩。
【請求項５】
化合物：
２−｛４−［ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホニルアミノ）−メチル］−フェニル｝−２−メチル−プロピオン酸；
（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸グルクロニド；
ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホン酸４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジルアミドの硫酸抱合体；
（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の硫酸抱合体；
ピリジン−３−スルホン酸４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジルアミドの硫酸抱合体；
２−メチル−２−｛４−［（ピリジン−３−スルホニルアミノ）−メチル］−フェニル｝−プロピオン酸；
（３−｛［［４−（１，２−ジヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［［４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［［４−（１，１−ジメチル−２−オキソ−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；もしくは
（３−｛［（４−イソプロペニル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；または薬学的に許容することのできるその塩。
【請求項６】
患者が（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸を投与されたかどうかを測定する方法であって、患者から得られる血漿、尿、胆汁または糞便試料が、
２−（４−｛［（３−カルボキシメトキシ−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェニル）−２−メチル−プロピオン酸；
（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
２−｛４−［ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホニルアミノ）−メチル］−フェニル｝−２−メチル−プロピオン酸；
（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸グルクロニド；
ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホン酸４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジルアミドの硫酸抱合体；
（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の硫酸抱合体；
ピリジン−３−スルホン酸４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジルアミドの硫酸抱合体；
２−メチル−２−｛４−［（ピリジン−３−スルホニルアミノ）−メチル］−フェニル｝−プロピオン酸；
（３−｛［（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（５−｛［（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−ヒドロキシ−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［［４−（１，２−ジヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［［４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［［４−（１，１−ジメチル−２−オキソ−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；および
（３−｛［（４−イソプロペニル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸から成る群から選ばれる１種以上の化合物の存在を示すかどうかを測定する工程を含む、前記方法。
【請求項７】
骨粗鬆症の治療又は骨折の治癒を助ける方法であって、
２−（４−｛［（３−カルボキシメトキシ−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェニル）−２−メチル−プロピオン酸；
（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（５−｛［（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−ヒドロキシ−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［［４−（１，２−ジヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［［４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［［４−（１，１−ジメチル−２−オキソ−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；もしくは
（３−｛［（４−イソプロペニル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；または薬学的に許容することのできるその塩から選ばれる化合物の治療上効果的な量を、それを必要とする患者に投与することを含む、前記方法。
【請求項８】
２−（４−｛［（３−カルボキシメトキシ−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェニル）−２−メチル−プロピオン酸；
（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
２−｛４−［ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホニルアミノ）−メチル］−フェニル｝−２−メチル−プロピオン酸；
（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸グルクロニド；
ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホン酸４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジルアミドの硫酸抱合体；
（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の硫酸抱合体；
ピリジン−３−スルホン酸４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジルアミドの硫酸抱合体；
２−メチル−２−｛４−［（ピリジン−３−スルホニルアミノ）−メチル］−フェニル｝−プロピオン酸；
（３−｛［（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（５−｛［（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−ヒドロキシ−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［［４−（１，２−ジヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［［４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［［４−（１，１−ジメチル−２−オキソ−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；もしくは
（３−｛［（４−イソプロペニル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；または薬学的に許容することのできるその塩から選ばれる１種以上の化合物を含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の代謝物に関する。本発明は、また、（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の代謝物を用いる、骨粗鬆症の治療及び骨折の治癒を助ける方法に関する。加えて、本発明は、患者が（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸を投与されたかどうかを測定する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
化合物（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸は、骨粗鬆症の治療、骨折の治癒の補助、および骨損失を呈する他の症状の治療に用いることができる選択的ＥＰ２アゴニストである。化合物（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸は、ＷＯ９９／１９３００（ＰＣＴ／ＩＢ９８／０１５４０）に開示されている。この化合物は、また、骨切り、小児特発性骨損失、歯周炎が関係する骨損失、グルココルチコイドが誘導する骨粗鬆症、甲状腺機能亢進症が誘導する骨粗鬆症、不動化が誘導する骨粗鬆症、ヘパリンが誘導する骨粗鬆症、免疫抑制が誘導する骨粗鬆症を治療するため、ならびに骨量の増加および維持、顔面再建術後の骨治癒、上顎再建術後の骨治癒、下顎再建術後の骨治癒、脊椎癒合の誘導、長骨伸長増強、骨移植の治癒速度増強ならびに人工補綴物内方生長増強のため用いることができる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の代謝物または薬学的に許容することのできる塩または代謝物のプロドラッグ、またはプロドラッグの塩を提供する。代謝物は、（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸と同じ症状を治療するのに用いることができるか、または化合物（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸が患者に投与されたかどうかを測定するのに用いることができる。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、化合物２−（４−｛［（３−カルボキシメトキシ−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェニル）−２−メチル−プロピオン酸；
（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（５−｛［（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−ヒドロキシ−フェノキシ）−酢酸；
２−｛４−［ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホニルアミノ）−メチル］−フェニル｝−２−メチル−プロピオン酸；
（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸グルクロニド；
ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホン酸４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジルアミドの硫酸抱合体；
（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の硫酸抱合体；
ピリジン−３−スルホン酸４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジルアミドの硫酸抱合体；
２−メチル−２−｛４−［（ピリジン−３−スルホニルアミノ）−メチル］−フェニル｝−プロピオン酸；
（３−｛［［４−（１，２−ジヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［［４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［［４−（１，１−ジメチル−２−オキソ−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；および
（３−｛［（４−イソプロペニル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；または薬学的に許容することのできるその塩を提供する。
【０００５】
やはり提供されるのは、患者が（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸を投与されたかどうかを測定する方法であって、方法には、患者から得られる血漿、尿、胆汁または糞便試料が、２−（４−｛［（３−カルボキシメトキシ−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェニル）−２−メチル−プロピオン酸；
（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
２−｛４−［ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホニルアミノ）−メチル］−フェニル｝−２−メチル−プロピオン酸；
（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸グルクロニド；
ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホン酸４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジルアミドの硫酸抱合体；
（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の硫酸抱合体；
ピリジン−３−スルホン酸４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジルアミドの硫酸抱合体；
２−メチル−２−｛４−［（ピリジン−３−スルホニルアミノ）−メチル］−フェニル｝−プロピオン酸；
（３−｛［（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（５−｛［（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−ヒドロキシ−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［［４−（１，２−ジヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［［４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［［４−（１，１−ジメチル−２−オキソ−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；および
（３−｛［（４−イソプロペニル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸から成る群から選ばれる１種以上の化合物の存在を示すかどうかを測定する工程が含まれる。
【０００６】
やはり提供されるのは、骨粗鬆症を治療する又は骨折の治癒を助ける方法であって、方法には、
２−（４−｛［（３−カルボキシメトキシ−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェニル）−２−メチル−プロピオン酸；
（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（５−｛［（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−ヒドロキシ−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［［４−（１，２−ジヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［［４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［［４−（１，１−ジメチル−２−オキソ−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；もしくは
（３−｛［（４−イソプロペニル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；または薬学的に許容することのできるその塩から選ばれる化合物の治療上効果的な量を、それを必要とする患者に投与することが含まれる。
【０００７】
やはり提供されるのは、２−（４−｛［（３−カルボキシメトキシ−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェニル）−２−メチル−プロピオン酸；
（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
２−｛４−［ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホニルアミノ）−メチル］−フェニル｝−２−メチル−プロピオン酸；
（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸グルクロニド；
ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホン酸４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジルアミドの硫酸抱合体；
（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の硫酸抱合体；
ピリジン−３−スルホン酸４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジルアミドの硫酸抱合体；
２−メチル−２−｛４−［（ピリジン−３−スルホニルアミノ）−メチル］−フェニル｝−プロピオン酸；
（３−｛［（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（５−｛［（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−ヒドロキシ−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［［４−（１，２−ジヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［［４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；
（３−｛［［４−（１，１−ジメチル−２−オキソ−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；もしくは
（３−｛［（４−イソプロペニル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；または薬学的に許容することのできるその塩から選ばれる１種以上の化合物を含む医薬組成物である。
【０００８】
化合物２−（４−｛［（３−カルボキシメトキシ−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェニル）−２−メチル−プロピオン酸；（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；２−｛４−［ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホニルアミノ）−メチル］−フェニル｝−２−メチル−プロピオン酸；（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸グルクロニド；ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホン酸４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジルアミドの硫酸抱合体；（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の硫酸抱合体；ピリジン−３−スルホン酸４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジルアミドの硫酸抱合体；２−メチル−２−｛４−［（ピリジン−３−スルホニルアミノ）−メチル］−フェニル｝−プロピオン酸；（３−｛［（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；（５−｛［（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−ヒドロキシ−フェノキシ）−酢酸；（３−｛［［４−（１，２−ジヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；（３−｛［［４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；（３−｛［［４−（１，１−ジメチル−２−オキソ−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸；および（３−｛［（４−イソプロペニル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸は、（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の代謝物である。
【０００９】
これらの代謝物または薬学的に許容することのできるその塩もしくはプロドラッグ、またはプロドラッグの塩は、他のＥＰ２アゴニスト詳しくは（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸と同じ疾患および症状を治療するのに用いることができる。ＥＰ２アゴニストを用いて治療することのできる疾患および症状の例は、国際特許出願番号ＷＯ９９／１９３００に開示されており、骨切り、小児特発性骨損失、歯周炎が関係する骨損失、グルココルチコイドが誘導する骨粗鬆症、甲状腺機能亢進症が誘導する骨粗鬆症、不動化が誘導する骨粗鬆症、ヘパリンが誘導する骨粗鬆症、免疫抑制が誘導する骨粗鬆症、ならびに骨量の増加および維持、顔面再建術後の骨治癒、上顎再建術後の骨治癒、下顎再建術後の骨治癒、脊椎癒合の誘導、長骨伸長増強、骨移植の治癒速度増強ならびに人工補綴物内方生長増強が含まれる。好ましい治療には、骨粗鬆症の治療および骨折治癒を助けることが含まれる。
【００１０】
当業者等は、抗骨吸収薬、例えばプロゲスチン、ポリホスホナート、ビスホスホナート、エストロゲンアゴニスト／アンタゴニスト［ＳＥＲＭｓ（選択的エストロゲン受容体モジュレーター）としても知られている］、エストロゲン、エストロゲン／プロゲスチンの組み合わせ、プレマリン(Premarin)（登録商標）（抱合型エストロゲン）、エストロン、エストリオールまたは１７α−もしくは１７β−エチニルエストラジオールを本発明の化合物と組み合わせて用いることができることを認めるはずである。
【００１１】
例示的プロゲスチンは、商業源から入手可能であり、それとしては、アルゲストンアセトフェニド、アルトレノゲスト、酢酸アマジノン、酢酸アナゲストン、酢酸クロルマジノン、シンゲストール、酢酸クロゲストン、酢酸クロメゲストン、酢酸デルマジノン、デソゲストレル、ジメチステロン、ジドロゲステロン、エチネロン、二酢酸エチノジオール、エトノゲストレル(etonogestrel)、酢酸フルロゲストン、ゲスタクロン、ゲストデン、カプロン酸ゲストノロン、ゲストリノン、ハロプロゲステロン、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、レボノルゲストレル、リネストレノール、メドロゲストン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メレンゲストロール、二酢酸メチノジオール、ノルエチンドロン、酢酸ノルエチンドロン、ノルエチノドレル、ノルゲスチマート、ノルゲストメット、ノルゲストレル、フェンプロピオン酸オキソゲストン、プロゲステロン、酢酸キンゲスタノール、キンゲストロン、およびチゲストールが挙げられる。好ましいプロゲスチンは、メドロキシプロゲステロン、ノルエチンドロンおよびノルエチノドレルである。
【００１２】
例示的骨吸収阻害ポリホスホナートとしては、米国特許第３，６８３，０８０号に開示された型のポリホスホナートが挙げられる。好ましいポリホスホナートは、ジェミナルジホスホナート（ビス−ホスホナートとも呼ばれる）である。チルドロナートジナトリウムは、特に好ましいポリホスホナートである。イバンドロン酸は、特に好ましいポリホスホナートである。アレンドロナートは、特に好ましいポリホスホナートである。ゾレドロン酸(zoledronic acid)は、特に好ましいポリホスホナートである。他の好ましいポリホスホナートは、６−アミノ−１−ヒドロキシ−ヘキシリデン−ビスホスホン酸および１−ヒドロキシ−３（メチルペンチルアミノ）−プロピリデン−ビスホスホン酸である。ポリホスホナートは、酸、または可溶性アルカリ金属塩もしくはアルカリ土類金属塩の形態で投与することができる。ポリホスホナートの加水分解可能エステルが、同様に含まれる。特定の例としては、エタン−１−ヒドロキシ１，１−ジホスホン酸、メタンジホスホン酸、ペンタン−１−ヒドロキシ−１，１−ジホスホン酸、メタンジクロロジホスホン酸、メタンヒドロキシジホスホン酸、エタン−１−アミノ−１，１−ジホスホン酸、エタン−２−アミノ−１，１−ジホスホン酸、プロパン−３−アミノ−１−ヒドロキシ−１，１−ジホスホン酸、プロパン−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アミノ−１−ヒドロキシ−１，１−ジホスホン酸、プロパン−３，３−ジメチル−３−アミノ−１−ヒドロキシ−１，１−ジホスホン酸、フェニルアミノメタンジホスホン酸、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメタンジホスホン酸、Ｎ（２−ヒドロキシエチル）アミノメタンジホスホン酸、ブタン−４−アミノ−１−ヒドロキシ−１，１−ジホスホン酸、ペンタン−５−アミノ−１−ヒドロキシ−１，１−ジホスホン酸、ヘキサン−６−アミノ−１−ヒドロキシ−１，１−ジホスホン酸ならびに薬学的に許容することのできるそのエステルおよび塩が挙げられる。
【００１３】
別の態様において、本発明の化合物は、エストロゲンアゴニスト／アンタゴニストと組み合わせることができる。好ましいエストロゲンアゴニスト／アンタゴニストは、米国特許第５，０４７，４３１号に開示されているドロキシフェン：（フェノール，３−（１−（４−（２−ジメチルアミノ）エトキシ）フェニル）−２−フェニル−１−ブテニル）−，（Ｅ）−）および関連化合物である。
【００１４】
別の好ましいエストロゲンアゴニスト／アンタゴニストは、ウィルソン(Willson)等,
Endocrinology, 1997, 138, 3901-3911に開示されている３−（４−（１，２−ジフェニル−ブテ−１−エニル）−フェニル）−アクリル酸である。
【００１５】
別の好ましいエストロゲンアゴニスト／アンタゴニストは、米国特許第４，５３６，５１６号に開示されているタモキシフェン：（エタンアミン，２−（−４−（１，２−ジフェニル−１−ブテニル）フェノキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル，（Ｚ）−２−，２−ヒドロキシ−１，２，３−プロパントリカルボキシラート（１：１））および関連化合物である。
【００１６】
別の関連化合物は、米国特許第４，６２３，６６０号に開示されている４−ヒドロキシタモキシフェンである。
【００１７】
好ましいエストロゲンアゴニスト／アンタゴニストは、米国特許第４，４１８，０６８号に開示されているラロキシフェン：（メタノン，（６−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）ベンゾ［ｂ］チエン−３−イル）（４−（２−（１−ピペリジニル）エトキシ）フェニル）−ヒドロクロリド）である。
【００１８】
別の好ましいエストロゲンアゴニスト／アンタゴニストは、米国特許第４，９９６，２２５号に開示されているトレミフェン：（エタンアミン，２−（４−（４−クロロ−１，２−ジフェニル−１−ブテニル）フェノキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−，（Ｚ）−，２−ヒドロキシ−１，２，３−プロパントリカルボキシラート（１：１）である。
【００１９】
別の好ましいエストロゲンアゴニスト／アンタゴニストは、米国特許第３，８２２，２８７号に開示されているセントクロマン(centchroman)：１−（２−（（４−（−メトキシ−２，２ジメチル−３−フェニル−クロマン−４−イル）−フェノキシ）−エチル）−ピロリジンである。やはり好ましいのは、レボルメロキシフェン(levormeloxifene)である。
【００２０】
別の好ましいエストロゲンアゴニスト／アンタゴニストは、米国特許第４，８３９，１５５号に開示されているイドキシフェン(idoxifene)：（Ｅ）−１−（２−（４−（１−（４−ヨード−フェニル）−２−フェニル−ブテ−１−エニル）−フェノキシ）−エチル）−ピロリジノンである。
【００２１】
別の好ましいエストロゲンアゴニスト／アンタゴニストは、米国特許第５，４８８，０５８号に開示されている２−（４−メトキシ−フェニル）−３−［４−（２−ピペリジン−１−イル−エトキシ）−フェノキシ］−ベンゾ［ｂ］チオフェン−６−オールである。
【００２２】
別の好ましいエストロゲンアゴニスト／アンタゴニストは、米国特許第５，４８４，７９５号に開示されている６−（４−ヒドロキシ−フェニル）−５−（４−（２−ピペリジン−１−イル−エトキシ）−ベンジル）−ナフタレン−２−オールである。
【００２３】
別の好ましいエストロゲンアゴニスト／アンタゴニストは、ＰＣＴ特許出願番号ＷＯ９５／１０５１３に調製法と共に開示されている（４−（２−（２−アザ−ビシクロ［２．２．１］ヘプチ−２−イル）−エトキシ）−フェニル）−（６−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル）−メタノンである。
【００２４】
別の好ましいエストロゲンアゴニスト／アンタゴニストとしては、普通に譲渡された米国特許第５，５５２，４１２号に説明されているような化合物が挙げられる。その中で説明されている特に好ましい化合物は：
シス−６−（４−フルオロ−フェニル）−５−（４−（２−ピペリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−オール；
（−）−シス−６−フェニル−５−（４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−オール；
シス−６−フェニル−５−（４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−オール；
シス−１−（６´−ピロロジノエトキシ−３´−ピリジル）−２−フェニル−６−ヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン；
１−（４´−ピロリジノエトキシフェニル）−２−（４´´−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン；
シス−６−（４−ヒドロキシフェニル）−５−（４−（２−ピペリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−オール；および
１−（４´−ピロリジノールエトキシフェニル）−２−フェニル−６−ヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンである。
【００２５】
特に好ましい化合物は、米国特許第５，９４８，８０９号に開示されている（−）−シス−６−フェニル−５−（４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロ−ナフタレン−２−オール，Ｄ−タートラートである。
【００２６】
別のエストロゲンアゴニスト／アンタゴニストは、米国特許第４，１３３，８１４号に説明されている。米国特許第４，１３３，８１４号は、２−フェニル−３−アロイル−ベンゾチオフェンおよび２−フェニル−３−アロイルベンゾチオフェン−１−オキシドの誘導体を開示する。
【００２７】
別の好ましいエストロゲンアゴニスト／アンタゴニストとしては、ＴＳＥ−４２４（米国特許第５，９９８，４０２号）、アロゾキシフェン(arozoxifene)（米国特許第５，７２３，４７４号）、ＥＭ−６５２、ＥＭ−８００、ＧＷ５６３８、およびＧＷ７６０４、又はその光学もしくは幾何異性体；その薬学的に許容することのできる塩、Ｎ−オキシド、エステル、四級アンモニウム塩、もしくはプロドラッグが挙げられる。
【００２８】
別の好ましいエストロゲンアゴニスト／アンタゴニストとしては、式ＶまたはＶＩの化合物：
【化１】
2005521668.tif 000002
［ここで：
Ｒ１Ｂは、Ｈ、ＯＨ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ１２アルキル（直鎖または分枝）、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ１２アルキル（直鎖または分枝または環式）、またはハロゲンもしくはＣ１−Ｃ４ハロゲン化エーテルから選ばれ；
Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４Ｂ、Ｒ５ＢおよびＲ６Ｂは、Ｈ、ＯＨ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ１２（直鎖または分枝）、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ１２（直鎖または分枝または環式）、ハロゲンもしくはＣ１−Ｃ４ハロゲン化エーテル、シアノ、Ｃ１−Ｃ６アルキル（直鎖または分枝）、またはトリフルオロメチルから独立に選ばれ；
ＸＡは、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、およびハロゲンから選ばれ；
ｓは、２または３であり；
ＹＡは、部分：
【化２】
2005521668.tif 000003
であり｛ここで：
ａ）Ｒ７ＢおよびＲ８Ｂは、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはＣＮ、Ｃ１−Ｃ６アルキル（直鎖または分枝）、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ（直鎖または分枝）、ハロゲン、−ＯＨ、−ＣＦ３、もしくは−ＯＣＦ３により任意に置換されても良いフェニルの群から独立に選ばれる；または
ｂ）Ｒ７ＢおよびＲ８Ｂは、結合して１個の窒素へテロ原子を有する５員の飽和複素環を形成し、この複素環は、水素、ヒドロキシル、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、トリハロメチル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、トリハロメトキシ、Ｃ１−Ｃ４アシルオキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキルチオ、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルフィニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニル、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＮ、−ＣＯＮＨＲ１Ｂ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）２、−ＮＨＳＯ２Ｒ１Ｂ、−ＮＨＣＯＲ１Ｂ、−ＮＯ２、または１−３個の（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで任意に置換されても良いフェニルから成る群から独立に選ばれる１−３個の置換基で任意に置換されてもよい；または
ｃ）Ｒ７ＢおよびＲ８Ｂは、結合して１個の窒素へテロ原子を有する６員の飽和複素環を形成し、この複素環は、水素、ヒドロキシル、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、トリハロメチル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、トリハロメトキシ、Ｃ１−Ｃ４アシルオキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキルチオ、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルフィニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニル、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＮ、−ＣＯＮＨＲ１Ｂ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）２、−ＮＨＳＯ２Ｒ１Ｂ、−ＮＨＣＯＲ１Ｂ、−ＮＯ２、または１−３個の（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで任意に置換されても良いフェニルから成る群から独立に選ばれる１−３個の置換基で任意に置換されてもよい；または
ｄ）Ｒ７ＢおよびＲ８Ｂは、結合して１個の窒素へテロ原子を有する７員の飽和複素環を形成し、この複素環は、水素、ヒドロキシル、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、トリハロメチル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、トリハロメトキシ、Ｃ１−Ｃ４アシルオキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキルチオ、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルフィニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニル、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＮ、−ＣＯＮＨＲ１Ｂ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）２、−ＮＨＳＯ２Ｒ１Ｂ、−ＮＨＣＯＲ１Ｂ、−ＮＯ２、または１−３個の（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで任意に置換されても良いフェニルから成る群から独立に選ばれる１−３個の置換基で任意に置換されてもよい；または
ｅ）Ｒ７ＢおよびＲ８Ｂは、結合して１個の窒素へテロ原子を有する８員の飽和複素環を形成し、この複素環は、水素、ヒドロキシル、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、トリハロメチル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、トリハロメトキシ、Ｃ１−Ｃ４アシルオキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキルチオ、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルフィニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニル、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＮ、−ＣＯＮＨＲ１Ｂ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）２、−ＮＨＳＯ２Ｒ１Ｂ、−ＮＨＣＯＲ１Ｂ、−ＮＯ２、または１−３個の（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで任意に置換されても良いフェニルから成る群から独立に選ばれる１−３個の置換基で任意に置換されてもよい；または
ｆ）Ｒ７ＢおよびＲ８Ｂは、結合して、６−１２個の炭素原子を有し且つ１個の窒素へテロ原子を有する架橋または縮合のいずれかの飽和二環式複素環を形成し、この複素環は、水素、ヒドロキシル、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、トリハロメチル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、トリハロメトキシ、Ｃ１−Ｃ４アシルオキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキルチオ、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルフィニル、Ｃ１−Ｃ４アルキルスルホニル、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ４）アルキル、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＮ、−ＣＯＮＨＲ１Ｂ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）２、−ＮＨＳＯ２Ｒ１Ｂ、−ＮＨＣＯＲ１Ｂ、−ＮＯ２、または１−３個の（Ｃ１−Ｃ４）アルキルで任意に置換されても良いフェニルから成る群から独立に選ばれる１−３個の置換基で任意に置換されてもよい｝］；又はその光学もしくは幾何異性体；又はその薬学的に許容することのできる塩、Ｎ−オキシド、エステル、四級アンモニウム塩、もしくはプロドラッグが挙げられる。
【００２９】
付け加えられる好ましいエストロゲンアゴニスト／アンタゴニストは、式Ｖａの化合物：
【化３】
2005521668.tif 000004
又はその光学もしくは幾何異性体；又はその薬学的に許容することのできる塩、Ｎ−オキシド、エステル、四級アンモニウム塩、もしくはプロドラッグである。
【００３０】
別の好ましいエストロゲンアゴニスト／アンタゴニストとしては、下記の式ＩＩＩ（ＥＭ−６５２）または式ＩＶ（ＥＭ−８００）の化合物：
【化４】
2005521668.tif 000005
又はその光学もしくは幾何異性体；又はその薬学的に許容することのできる塩、Ｎ−オキシド、エステル、四級アンモニウム塩、もしくはプロドラッグが挙げられる。
【００３１】
当業者等は、骨量増加薬とも呼ばれる他の骨同化作用薬を本発明の化合物と組み合わせて用いることができることを認めるはずである。骨量増加薬は、世界保健機構の研究世界保健機構”骨折のリスクの評価および閉経後骨粗鬆症に対するスクリーニングへのその適用（１９９４）．ＷＨＯ研究グループの報告．世界保健機構テクニカルシリーズ８４３”に詳述されているような骨折閾値を超える水準に骨量を増加させる化合物である。
【００３２】
本発明の化合物を他のＥＰ２アゴニストと組み合わせて用いることも、やはり可能である。好ましいＥＰ２アゴニストとしては、７−［（４−ブチル−ベンジル）−メタンスルホニル−アミノ］−ヘプタン酸，一ナトリウム塩または米国特許第６，２８８，１２０号に開示されている他の化合物が挙げられる。
【００３３】
当業者等は、ＩＧＦ−１、フッ化ナトリウム、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、副甲状腺ホルモンの活性断片、成長ホルモンまたは成長ホルモン分泌促進薬もまた本発明の化合物と組み合わせて用いることができることを認めるはずである。
【００３４】
本発明の化合物は、やはり、プロスタグランジンと組み合わせて用いることもできる。種々のプロスタグランジンが、下記に説明され論及されている。しかしながら、他のプロスタグランジンは、当業者等に知られることになるであろう。例示的プロスタグランジンは、米国特許第４，１７１，３３１号および第３，９２７，１９７号に開示されている。ノルディン(Norrdin)等, The Role of Prostaglandins in Bone In Vivo(インビボでの骨におけるプロスタグランジンの役割),プロスタグランジン  ロイコトリエン
必須脂肪酸41, 139-150, 1990は、骨同化作用プロスタグランジンの概説書である。
【００３５】
本発明の化合物と組み合わせて用いることができる他の化合物としては、骨形成活性に有用な２−デスカルボキシ−２−（テトラゾール−５−イル）−１１−デスオキシ−１５−置換−オメガ−ペンタノルプロスタグランジンを開示する米国特許第３，９３２，３８９号；骨形成活性に有用な１６−アリール−１３，１４−ジヒドロ−ＰＧＥ２ｐ−ビフェニルエステルを開示する米国特許第４，０１８，８９２号；骨形成活性に有用な２，３，６−置換−４−ピロンを開示する米国特許第４，２１９，４８３号；骨形成活性に有用な２，３，６−置換−４−ピロンを開示する米国特許第４，１３２，８４７号；骨形成活性に有用な１６−アリール−１３，１４−ジヒドロ−ＰＧＥ２ｐ−ビフェニルエステルを開示する米国特許第４，０００，３０９号；骨形成活性に有用な１６−アリール−１３，１４−ジヒドロ−ＰＧＥ２ｐ−ビフェニルエステルを開示する米国特許第３，９８２，０１６号；骨形成活性に有用な置換されたシクロペンタンを開示する米国特許第４，６２１，１００号；および骨形成活性に有用なシクロペンタノンを開示する米国特許第５，２１６，１８３号に開示される化合物が挙げられる。
【００３６】
フッ化ナトリウムも、本発明の化合物と組み合わせて用いることができる。用語゛フッ化ナトリウム゛は、その全ての形態のフッ化ナトリウム（例えば、徐放フッ化ナトリウム、持続放出フッ化ナトリウム）を意味する。持続放出フッ化ナトリウムは、その開示物を参照により本明細書に含めるものとする米国特許第４，９０４，４７８号に開示されている。フッ化ナトリウムの活性は、生物学的試験計画の当業者等により容易に測定される（例えば、エリクセン(Eriksen)Ｅ．Ｆ．等, Bone Histomorphometry, ラベン(Raven)出版,ニューヨーク,1994,
1-74頁；グリエル(Grier)Ｓ．Ｊ．等, The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptiometry In Animals,
Inv. Radiol., 1996, 31 (1): 50-62;ワーナー(Wahner)Ｈ．Ｗ．およびフォゲルマン(Fogelman)Ｉ．, The
Evaluation of Osteoporosis: Dual Energy X-Ray Absorptiometry In Clinical
Practice., マーチンダニッツ社(Martin Dunitz Ltd.), ロンドン1994, 1-296頁参照）。
【００３７】
骨形成蛋白質も、本発明の化合物と組み合わせて用いることができる（例えば、オノ等,プロスタグランジンＥ１による組み換えヒト骨形成蛋白質の骨形成活性の促進(Promotion
of the Osteogenetic Activity of Recombinant Human Morphogenetic Protein by
Prostaglandin E1), Bone, 1996, 19(6), 581-588参照）。
【００３８】
いずれの副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）も、本発明の化合物と組み合わせて用いることができる。用語゛副甲状腺ホルモン゛は、副甲状腺ホルモン、骨形成を促進し骨量を増加させることができるその断片または代謝物及びその構造類似体を指す。やはり含まれるのは、副甲状腺ホルモン関連ペプチドおよび活性断片ならびに副甲状腺関連ペプチドの類似体である（ＰＣＴ特許公開番号ＷＯ９４／０１４６０参照）。このような骨同化作用機能活性は、標準測定の当業者等により容易に測定される（例えば、エリクセンＥ．Ｆ．等, Bone Histomorphometry, ラベン出版,ニューヨーク,1994, 1-74頁；グリエルＳ．Ｊ．等,
The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptiometry In Animals, Inv. Radiol., 1996, 31
(1): 50-62;ワーナーＨ．Ｗ．およびフォゲルマンＩ．, The Evaluation of Osteoporosis: Dual Energy
X-Ray Absorptiometry In Clinical Practice., マーチンダニッツ社, ロンドン1994, 1-296頁参照）。これらの種々の化合物が、下記に説明され論及されている。しかしながら、他の副甲状腺ホルモンは、当業者等に知られることになるであろう。例示的副甲状腺ホルモンは、以下の参考文献に開示されている。
【００３９】
゛脊椎の骨粗鬆症のヒト副甲状腺ペプチド治療(Human Parathyroid
Peptide Treatment of Vertebral Osteoporosis)゛, Osteoporosis Int., 3, (増補１):199-203。
【００４０】
゛ホルモン置換療法を加える骨粗鬆症のＰＴＨ１−３４治療：生化学的、動力学的および組織学的応答(PTH 1-34 Treatment of Osteoporosis with Added Hormone Replacement
Therapy: Biochemical, Kinetic and Histological Responses)゛Osteoporosis Int. 1:162-170。
【００４１】
いずれの成長ホルモンまたは成長ホルモン分泌促進薬も、やはり本発明の化合物と組み合わせて用いることができる。用語成長ホルモン分泌促進薬は、成長ホルモンの放出を促進する又は成長ホルモンの作用を模倣する（例えば、増加した骨量に導く骨形成を増加させる）化合物を指す。このような作用は、当業者等に周知の標準測定法の業界の熟練者により容易に測定される。これらの種々の化合物は、以下の公開されたＰＣＴ特許出願物：ＷＯ９５／１４６６６；ＷＯ９５／１３０６９；ＷＯ９４／１９３６７；ＷＯ９４／１３６９６；およびＷＯ９５／３４３１１に開示されている。しかしながら、他の成長ホルモンまたは成長ホルモン分泌促進薬は、当業者等に知られることになるであろう。
【００４２】
特に好ましい成長ホルモン分泌促進薬は、Ｎ−［１（Ｒ）−［１，２−ジヒドロ−１−メタンスルホニルスピロ［３Ｈ−インドール−３，４´−ピペリジン］−１´−イル）カルボニル］−２−（フェニルメチルオキシ）エチル］−２−アミノ−２−メチルプロパンアミド：ＭＫ−６７７である。
【００４３】
他の好ましい成長ホルモン分泌促進薬としては：
２−アミノ−Ｎ−（２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ−［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル）−イソブチルアミド（米国特許第６，１０７，３０６号）又はそのＬ−酒石酸塩；
２−アミノ−Ｎ−｛１（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−［１，３−ジオキソ−８ａ−（Ｓ）−ピリジン−２−イルメチル−２−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−ヘキサヒドロ−イミダゾ−［１，５ａ］ピラジン−７−イル］−２−オキソ−エチル｝−２−メチル−プロピオンアミド（米国特許第６，２５１，９０２号）又はその塩酸塩；
２−アミノ−Ｎ−（１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−（３ａ−（Ｒ）−（４−フルオロ−ベンジル）−２−メチル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−２−オキソ−エチル）イソブチルアミド；
２−アミノ−Ｎ−（２−（３ａ−（Ｒ）−ベンジル−３−オキソ−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−１−（Ｒ）−ベンジルオキシメチル−２−オキソ−エチル）イソブチルアミド；および
２−アミノ−Ｎ−（１−（２，４−ジフルオロ−ベンジルオキシメチル）−２−オキソ−２−（３−オキソ−３ａ−ピリジン−２−イルメチル−２−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−２，３，３ａ，４，６，７−ヘキサヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）−エチル）−２−メチル−プロピオンアミド（米国特許第６，１１０，９３２号）又はそのＬ−酒石酸塩が挙げられる。
【００４４】
本発明の化合物は、通常、薬学的に許容することのできる賦形剤または希釈剤と共に本発明の化合物少なくとも１種を含む医薬組成物の形態で投与される。経口投与には、医薬組成物は、液剤、懸濁剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤等の形態をとることができる。デンプン、好ましくはバレイショまたはタピオカデンプンおよび特定の複合珪酸塩類のような種々の崩壊剤、ならびにポリビニルピロリドン、ショ糖、ゼラチンおよびアラビアゴムのような結合剤と共にクエン酸ナトリウム、炭酸カルシウムおよびリン酸カルシウムのような種々の医薬品添加物を含有する錠剤が、用いられる。更に、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムおよびタルクのような滑沢剤は、錠剤化目的にはしばしば非常に有用である。同様の型の固形組成物も、軟および硬ゼラチンカプセル剤に充填する賦形剤として用いられ、これに関連する好ましい材料としては、やはり、ラクトース即ち乳糖ならびに高分子量ポリエチレングリコール類が挙げられる。経口投与用に水性懸濁剤および／またはエリキシル剤を所望である場合、本発明の化合物を、種々の甘味剤、着香剤、着色剤、乳化剤および／または懸濁化剤、ならびに水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン及びそれらの種々の組み合わせのような希釈剤と組み合わせることができる。
【００４５】
非経口投与の目的には、ゴマもしくは落花生油、または水性プロピレングリコールの液剤および相当する水溶性塩の滅菌水性液剤を用いることができる。このような水性液剤は、必要であれば適切に緩衝化することができ、液体希釈剤は、十分な生理食塩水またはグルコースで初めに等張にすることができる。これらの水性液剤は、静脈、筋肉内、皮下および腹腔内注射目的に特に好適である。これに関連して、用いる滅菌水性媒体は、当業者等に周知の標準技法により全て容易に得ることができる。
【００４６】
経皮（例えば、局所的）投与の目的には、他の点では上記の非経口液剤に類似した、希釈滅菌水性または部分的に水性の液剤（通常、約０．１％から５％濃度）を調製する。
【００４７】
カプセル剤は、本化合物と適切な希釈剤を混合し、適切な量の混合物をカプセルに充填することにより調製される。普通の希釈剤としては、不活性な粉末化物質、例えば多数の異なる種類のデンプン；粉末化セルロース、特に結晶および微結晶セルロース；フルクトース、マンニトールおよびショ糖のような糖類；穀類の粉および類似の食用粉が挙げられる。
【００４８】
錠剤は、直接打錠法、湿式造粒法、または乾式造粒法により調製する。それらの処方物は、通常、希釈剤、結合剤、滑沢剤および崩壊剤ならびに本化合物を包含する。代表的希釈剤としては、例えば、種々の型のデンプン、ラクトース、マンニトール、カオリン、リン酸もしくは硫酸カルシウム、塩化ナトリウムのような無機塩および粉末糖が挙げられる。粉末セルロース誘導体も，有用である。代表的錠剤結合剤は、デンプン、ゼラチンおよび糖類、例えばラクトース、フルクトース、グルコース等のような物質である。アラビアゴム、アルギン酸塩類、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン等を含む天然および合成ゴムも、やはり好都合である。ポリエチレングリコール、エチルセルロースおよびロウも、また、結合剤として役立つ。
【００４９】
滑沢剤は、錠剤および杵がダイスの中で粘着するのを防ぐために錠剤処方物中に必要かもしれない。滑沢剤は、タルク、ステアリン酸マグネシウムおよびカルシウム、ステアリン酸ならびに硬化植物油のような滑りやすい固形物から選ばれる。
【００５０】
錠剤崩壊剤は、錠剤が湿った場合に化合物を放出するために錠剤の崩壊を容易にする物質である。それとしては、デンプン類、粘土類、セルロース類、アルギン類およびゴム類が挙げられ、トウモロコシおよびバレイショデンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、木材セルロース、粉末化天然海綿体、カチオン交換樹脂、アルギン酸、グアガム、柑橘類パルプおよびカルボキシメチルセルロースを、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム同様用いることができる。
【００５１】
錠剤は、しばしば、錠剤の溶解特性を改変するために香料およびシーラントとしての糖で又はフィルムを形成する保護剤で被覆される。本化合物は、現在当業界で十分確立されていることではあるが、処方物中にマンニトールのような食べておいしい多量の物質を用いることによりチュワブル錠剤として処方することもできる。
【００５２】
化合物を坐剤として投与することが所望される場合、代表的基剤を用いることができる。ココアバターは、ロウの添加によりその融点が僅かに上昇するよう改変することのできる伝統的坐剤基剤である。特に種々の分子量のポリエチレングリコールを含む水混和性坐剤基剤は、広い用途がある。
【００５３】
本化合物の効果は、適切な処方により遅延または持続させることができる。例えば、本化合物の緩慢に溶解するペレットを調製し、錠剤またはカプセル剤に包含させることができる。いくつかの異なる溶解速度のペレットを製造し、ペレットの混合物をカプセルに充填することにより、技法を改善することができる。錠剤またはカプセル剤は、予測可能な一定の時間を溶解に耐えるフィルムで被覆することができる。非経口製剤でさえ、血清中に緩慢にしか分散しない油性または乳化賦形剤に本化合物を溶解または懸濁することにより長時間作用にすることができる。
【００５４】
本発明の医薬組成物は、本発明の化合物の０．１％−９５％、好ましくは１％−７０％を含有することができる。いずれにしろ、投与される組成物または処方物は、疾患／症状を治療するのに効果的な量で本発明の化合物の一定量を含有する。
【００５５】
以下のパラグラフは、ヒト以外の動物に有用な例示的処方物および用量を説明する。本発明の化合物の投与は、経口的または非経口的、例えば注射により達成することができる。本発明の化合物の量は、効果的な用量を通常毎日の用量で受け取るように投与され、それは、動物に経口的に投与する場合、通常０．０１から１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．１から５０ｍｇ／ｋｇ体重である。１日に１より多い投与量を必要としてもよく、獣医が個々の状況を考慮に入れて効果的な投与量を決定することができることを指摘する。
【００５６】
都合の良いことには、治療量の本化合物が毎日の水供給と共に摂取されるように、本化合物を飲み水に入れることができる。本化合物は、好ましくは液状の水溶性濃縮物（例えば、水溶性塩の水溶液）の形態で飲み水の中に直接量りいれることができる。都合の良いことには、本化合物は、そのまま、またはプレミックスもしくは濃縮物とも呼ばれる動物飼料サプリメントの形態で飼料に直接加えることもできる。担体中の本化合物のプレミックスまたは濃縮物は、飼料中に薬物を包含させるため、より普通に用いられる。適切な担体は、所望通りの水、アルファルファミール、ダイズミール、綿実油ミール、亜麻仁油ミール、トウモロコシの穂軸ミールおよびトウモロコシミールのような種々のミール、糖蜜、尿素、骨粉、ならびに家禽飼料に普通に用いられるようなミネラルミックスのような液体または固体である。特に効果的な担体は、それぞれの動物の飼料それ自体、即ち少量のこのような飼料である。担体は、プレミックスが混合される完成飼料における化合物の均一な分布を容易にする。化合物を、プレミックス、次に飼料中に徹底的に混合することが重要である。この点で、本化合物は、ダイズ油、トウモロコシ油、綿実油等のような適切な油性賦形剤または揮発性有機溶媒に分散または溶解し、次いで、担体と混合することができる。完成飼料中の活性化合物の量は、所望の水準の化合物を得るように適切な割合のプレミックスと飼料を混合することにより調整することができることから、濃縮物中の化合物の割合は広く変えることができることが理解されるはずである。
【００５７】
高い力価の濃縮物は、動物に直接餌をやるのに適している濃縮サプリメントを製造するために、飼料製造業者により、ダイズ油ミールおよび上述した他のミールのような蛋白様担体と混合されてもよい。このような場合、動物は、通常の食餌を食い尽くすことが許される。あるいは、このような濃縮したサプリメントは、治療に効果的な水準の本発明の化合物を含有する栄養的にバランスの取れた完成飼料を製造するために飼料に直接加えることができる。混合物は、均一性を保障するために標準手法により、例えばツインシェルブレンダー(twin shell blender)内で徹底的に混合される。
【００５８】
サプリメントを飼料用トップドレッシング(top dressing)として用いる場合、それは、同様に、仕上げられた飼料の上面全面への化合物の分布の均一性を確実にするのに役立つ。
【００５９】
動物における非経口投与には、本発明の化合物を、ペーストまたはペレットの形態に調製し、通常は動物の頭部または耳の皮膚下に移植物として投与することができる。
【００６０】
ペースト処方物は、落花生油、ゴマ油、トウモロコシ油等のような薬学的に許容することのできる油中に本発明の化合物を分散することにより調製することができる。
【００６１】
効果的な量の本発明の化合物を含有するペレットは、本発明の化合物とカルボワックス、カルナウバろう等のような希釈剤を混合することにより調製することができる。ステアリン酸マグネシウムまたはカルシウムのような滑沢剤を加えて、ペレット処理を改善することができる。
【００６２】
当然のことながら、所望の用量水準を達成するために一つより多いペレットを動物に投与することができることが認められる。更に、動物の体内の適切な活性物質水準を維持するために、動物治療期間中に定期的に移植を行うことができることが分かっている。
【００６３】
本明細書で用いる場合゛治療゛には、予防的（たとえば、予防薬）および緩和的治療が含まれ、本明細書で用いる場合゛治療する゛は、予防的および／または緩和的治療を提供する行為を指す。
【００６４】
用語゛治療上効果的な量゛は、一つ以上の症候を改善する又は疾患もしくは症状の一つ以上の症候の発症を予防もしくは遅らせる量の本発明の化合物または本発明の化合物と更なる化合物との組み合わせを意味する。
【００６５】
本明細書で用いる゛患者゛は、哺乳類、特にヒトを意味する。
【００６６】
゛グルクロン酸゛は、代謝物に転移されるか又は親化合物に転移されて相ＩＩ抱合反応のグルクロニド化により得られる代謝物を形成する置換基である。グルクロン酸は、代謝物または親化合物上の酸またはアルコールまたはフェノール部分と反応して゛グルクロニド゛を形成する。グルクロニド置換基は、本明細書の式中で゛Ｇｌｕ゛または゛グルクロニド゛と略語で示す。
【００６７】
゛硫酸゛は、代謝物に転移されるか又は親化合物に転移されて抱合反応の硫酸化により得られる代謝物を形成する置換基である。硫酸は、代謝物または親化合物上のアルコールまたはフェノール部分と反応して゛サルフェート゛または゛硫酸抱合体゛を形成する。
【００６８】
本発明の化合物および更なる１種の化合物または更なる複数の化合物の多剤併用投与は、これらの化合物を、同時に又は異なる時間に投与される組成物として又は同じ単一の剤形もしくは別々の剤形の一部として共に投与することができることを意味する。
【００６９】
通常の技術を有する化学者は、本発明の特定の化合物が、立体異性体、互変異性体、位置および立体配置異性体を生ずる特定の立体化学、互変異性、または幾何学的立体配置にあってもよい１個以上の原子を有することを認めるはずである。全てのこのような異性体及びその混合物が、本発明に含まれる。本発明の化合物の水和物および溶媒和物も、やはり含まれる。
【００７０】
本発明には、また、1個以上の原子が、天然に普通に見出される原子質量または質量数と異なる原子質量または質量数を有する原子により置換されているという事実を除いては、本発明の化合物と同一である同位体標識した化合物も含まれる。本発明の化合物に組み込まれることのできる同位体の例としては、それぞれ、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、および３６Ｃｌのような水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素および塩素の同位体が挙げられる。前述の同位体および／または他の原子の他の同位体を含有する本発明の化合物、そのプロドラッグ、及びこれらの化合物又はこれらのプロドラッグの薬学的に許容することのできる塩は、本発明の範囲内にある。本発明の特定の同位体標識化合物、例えば、３Ｈおよび１４Ｃのような放射性同位体を組み込んでいるものは、薬物および／または基質組織分布測定に有用である。トリチウム化、即ち３Ｈ、および炭素−１４、即ち、１４Ｃ同位体は、調製の容易さ及び検出能ゆえに特に好ましい。更に、ジウテリウム、即ち、２Ｈのようなより重い同位体での置換は、より大きい代謝安定性に起因する特定の治療上の有利性、例えば、増大したインビボ半減期または減少した必要量を得ることができ、従って、ある状況では好ましいかもしれない。本発明の同位体標識化合物及びそのプロドラッグは、通常、下記に例示した手法または当業界で公知のそれらを実行することにより調製することができる。
【００７１】
本発明の化合物は、インビトロまたはインビボ代謝研究のための分析標準として、または新規な化学物質の化学合成もしくは生合成のための中間体として用いることができる。代謝物は、固形物として又は溶液中に単離することができる。本発明の化合物は、また、（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸または薬学的に許容することのできるその塩もしくはプロドラッグ、またはプロドラッグの塩を投与された患者を確認するのに用いることができる。（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸または薬学的に許容することのできるその塩もしくはプロドラッグまたはプロドラッグの塩を投与された患者を確認するには、血清、尿、糞便または胆汁試料を患者から採取し、試料を、本発明の１種以上の化合物の存在について分析する。本発明の化合物について分析する一方法は、クロマトグラフ法および質量分析法を用いる。他の分析法は、当業者等に周知である。血清、尿、糞便または胆汁試料中の本発明の１種以上の化合物の存在は、患者が、（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸または薬学的に許容することのできるその塩もしくはプロドラッグ、またはプロドラッグの塩を投与されたことを示す。
【００７２】
本発明の治療法において、本発明の化合物は、例えば錠剤に入れて患者に直接投与することができるし、または化合物は、代謝を通じて患者の体内で生成されることにより投与することができる。更に、代謝により本発明の化合物を生ずる化合物の投与経路および用量は、本発明の化合物の所望のインビボ濃度および生成速度を得るよう望みどおりに変えることができる。
【００７３】
本発明の化合物の薬学的に許容することのできる酸付加塩は、化合物それ自体又はそのいずれかのエステルから形成することができ、製薬化学でしばしば用いられる薬学的に許容することのできる塩が含まれる。例えば、塩は、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、ナフタレンスルホン酸、メタンスルホン酸およびトルエンスルホン酸のような物質を含むスルホン酸、硫酸、硝酸、リン酸、酒石酸、ピロ硫酸、メタリン酸、コハク酸、ギ酸、フタル酸、乳酸等のような無機または有機酸と共に、最も好ましくは塩酸、クエン酸、安息香酸、マレイン酸、酢酸およびプロピオン酸と共に形成することができる。
【００７４】
医薬として用いる場合、ヒトまたは他の患者に投与される本発明の化合物の用量は、かなり広く変えることができ、主治医または獣医の判断に委ねられる。その塩形成部分がかなりの分子量を有するラウリン酸塩のような塩の形態で投与される場合、化合物の用量を調整することが必要かもしれないことを指摘すべきである。本化合物の効果的な投与割合の通常の範囲は、約０．００１ｍｇ／日から約２００ｍｇ／日である。好ましい範囲は、約０．０１ｍｇ／日から約１００ｍｇ／日である。当然のことながら、化合物の毎日の用量を分けて１日のさまざまな時間に投与することが、しばしば実施しやすい。しかしながら、どうあろうと、投与される化合物の量は、有効成分の溶解度、用いる処方物および投与経路のような因子に依存する。
【００７５】
プロドラッグは、インビボで変換されて本発明の化合物を生ずる化合物である。変換は、血中での加水分解を通じるような種々のメカニズムにより起こり得る。プロドラッグの使用に関する良い考察は、Ｔ．ヒグチおよびＷ．ステラ(W. Stella),゛新規な送達システムとしてのプロドラッグ(Pro-drugs as Novel Delivery Systems)゛,Ａ．Ｃ．Ｓ．シンポジウムシリーズの１４巻により、および薬物設計における生体可逆担体(Bioreversible
Carriers in Drug Design),エドワードＢ．ロシェ(Edward B. Roche)編,アメリカンファーマシューティカルアソシエーションアンドパーガモンプレス(American
Pharmaceutical Association and Pergamon Press),1987に提供されている。
【００７６】
例えば、本発明の化合物がカルボン酸官能基を有するならば、プロドラッグは、（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ２−Ｃ１２）アルカノイルオキシメチル、４個から９個の炭素原子を有する１−（アルカノイルオキシ）エチル、５個から１０個の炭素原子を有する１−メチル−１−（アルカノイルオキシ）−エチル、３個から６個の炭素原子を有するアルコキシカルボニルオキシメチル、４個から７個の炭素原子を有する１−（アルコキシカルボニルオキシ）エチル、５個から８個の炭素原子を有する１−メチル−１−（アルコキシカルボニルオキシ）エチル、３個から９個の炭素原子を有するＮ−（アルコキシカルボニル）アミノメチル、４個から１０個の炭素原子を有する１−（Ｎ−（アルコキシカルボニル）アミノ）エチル、３−フタリジル、４−クロトノラクトニル、ガンマ−ブチロラクトン−４−イル、ジ−Ｎ，Ｎ−（Ｃ１−Ｃ２）アルキルアミノ（Ｃ２−Ｃ３）アルキル（例えば、α−ジメチルアミノエチル）、カルバモイル−（Ｃ１−Ｃ２）アルキル、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ２）アルキルカルバモイル−（Ｃ１−Ｃ２）アルキルおよびピペリジノ−、ピロリジノ−またはモルホリノ（Ｃ２−Ｃ３）アルキルのような基での酸基の水素原子の置換により形成されたエステルを含むことができる。
【００７７】
同様に、本発明の化合物がアルコール官能基を含むならば、プロドラッグは、（Ｃ１−Ｃ６）アルカノイルオキシメチル、１−（（Ｃ１−Ｃ６）アルカノイルオキシ）エチル、１−メチル−１−（（Ｃ１−Ｃ６）アルカノイルオキシ）エチル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシカルボニルオキシメチル、Ｎ−（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシカルボニルアミノメチル、スクシノイル、（Ｃ１−Ｃ６）アルカノイル、α−アミノ（Ｃ１−Ｃ４）アルカノイル、アリールアシルおよびα−アミノアシル、またはα−アミノアシル−α−アミノアシル｛ここで、各α−アミノアシル基は、天然に存在するＬ−アミノ酸から独立に選ばれる｝、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（Ｏ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２またはグリコシル（ヘミアセタール型の炭水化物のヒドロキシル基の除去により生じる基）のような基でのアルコール基の水素原子の置換により形成することができる。
【００７８】
本発明の化合物がアミン官能基を含むならば、プロドラッグは、ＲＸ−カルボニル、ＲＸＯ−カルボニル、ＮＲＸＲＸ´−カルボニル｛ここで、ＲＸおよびＲＸ´は、それぞれ独立に（（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ３−Ｃ７）シクロアルキル、ベンジルであるか、またはＲＸ−カルボニルは、天然のα−アミノアシルもしくは天然のα−アミノアシル−天然のα−アミノアシルである｝、−Ｃ（ＯＨ）Ｃ（Ｏ）ＯＹＸここで、（ＹＸは、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルまたはベンジルである）、−Ｃ（ＯＹＸ０）ＹＸ１｛ここで、ＹＸ０は、（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、そしてＹＸ１は、（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、カルボキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アミノ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルまたはモノ−Ｎ−もしくはジ−Ｎ，Ｎ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノアルキルである｝、−Ｃ（ＹＸ２）ＹＸ３｛ここで、ＹＸ２は、Ｈまたはメチルであり、そしてＹＸ３は、モノ−Ｎ−もしくはジ−Ｎ，Ｎ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、モルホリノ、ピペリジン−１−イルまたはピロリジン−１−イルである｝のような基でのアミン基内の水素原子の置換により形成することができる。
【００７９】
有利なことには、本発明は、また、疾患を治療するための、消費者による使用のためのキットも提供する。キットは、ａ）本発明の化合物および薬学的に許容することのできる担体、賦形剤または希釈剤を含む医薬組成物；ならびにｂ）特定の疾患を治療するためにこの医薬組成物を用いる方法を説明する指示書を含む。
【００８０】
本出願物で用いる゛キット゛は、分かれた瓶または分かれた箔パッケージのような別々の単位剤形を入れるための容器を含む。容器は、薬学的に許容することのできる物質でできている当業界で公知のいずれの従来の形状または形態、例えば、紙もしくはボール箱、ガラスもしくはプラスチックのビン若しくはつぼ、再密封可能な袋（例えば、異なる容器に入れるための錠剤の゛レフィル゛をいれる）、または治療スケジュールに従ってパックから押し出すための個々の服用量を有するブリスタパックであってもよい。用いる容器は、関係する正確な剤形に依存しても良く、例えば、従来のボール箱は、通常、液状懸濁剤を入れるためには用いられないであろう。単一の剤形を市販するのに単一のパッケージの中に一つより多い容器を共に用い得るということは、実行可能である。例えば、錠剤は、順次、箱の中に入れられる瓶の中に入っていても良い。
【００８１】
このようなキットの一例は、いわゆるブリスタパックである。ブリスタパックは、包装産業界で周知であり、医薬単位剤形（錠剤、カプセル剤等）の包装に広く用いられている。ブリスタパックは、通常、好ましくは透明なプラスチック材料の箔で覆われた比較的固い材料のシートから成る。包装処理中、プラスチック箔に窪みが形成される。窪みは、包装しようとする個々の錠剤またはカプセル剤の大きさと形状を有するか、または包装しようとする複数の錠剤および／またはカプセル剤を収容するための大きさおよび形状を有しても良い。次に、錠剤またはカプセル剤を適宜窪みに置き、比較的固い材料のシートを、窪みが形成された方向の反対側にある箔面でプラスチック箔に対して密封する。結果として、錠剤またはカプセル剤が、プラスチック箔とシートの間の窪みに所望通りに個々に密封または集合的に密封される。好ましくは、シートの強度は、窪みに掛けられた手先の圧力によりシートの窪みの場所に開口が形成されることによりブリスタパックから錠剤またはカプセル剤を取り出すことができるほどのものである。錠剤またはカプセル剤は、次いで、この開口を通じて取り出すことができる。
【００８２】
書いた記憶の手助けとなるものが、例えば、そのように指定された錠剤またはカプセル剤を取るべき養生計画の日と数が一致する錠剤またはカプセル剤の隣の数の形態で、医師、薬剤師または対象者用の情報および／または指示が入っている型のもの、または同じ型の情報が入っているカードである、書いた記憶の手助けとなるものを提供することが望ましいかもしれない。このような記憶の手助けになるものの別の例は、例えば、次のように゛第１週、月曜日、火曜日、゛…等…゛第二週、月曜日、火曜日、…゛等のカード上に印刷されたカレンダーである。記憶の手助けとなるものの他の変形例は、容易に明白である。゛毎日の用量゛は、所定の日に取るべき只一つの錠剤もしくはカプセル剤または数錠の錠剤もしくはカプセル剤であってもよい。
【００８３】
キットの別の特定の態様は、一度に一つ毎日の用量を調剤するように設計された調剤器である。好ましくは、本調剤器は、養生計画の服薬遵守が更に容易になるように記憶の手助けとなるものを装備している。このような記憶の手助けとなるものの一例は、調合されている毎日の用量の数を示す機械的計数器である。このような記憶の手助けとなるものの別の例は、例えば、最後に毎日の用量をとった日を読み出す、および／または次の用量をいつとることになっているか患者に思い出させる、液晶読み出し又は聞き取れる思い出させるシグナルと結び付けた電池を動力とするマイクロチップメモリーである。
【００８４】
キットの更に別の態様において、医薬組成物は、本発明の化合物と組み合わせて用いることができる更なる化合物も含むことができるか、またはキットは、一方が本発明の化合物を含有しており、他方が本発明の化合物と組み合わせて用いることができる更なる化合物を含有する２種の医薬組成物を含むことができる。
【００８５】
いずれの特許および特許出願物も含め本明細書で引用した書類は、参照により本明細書に含めるものとする。
【００８６】
ここで示す実施例は、本発明の特定の態様を具体的に説明することを意図しており、明細書または特許請求の範囲をどのようにも制限するものではない。
【実施例】
【００８７】
スプラギュ−ドーリー(Sprague-Dawley)ラットにおける１４Ｃ−（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の放射性標識物質収支および代謝プロフィール
目的
１５ｍｇ／ｋｇ投与量の１４Ｃ−（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸を静脈経由で単回投与した後のスプラギュ−ドーリーラットの尿、糞便、胆汁および血漿中の（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の放射性標識物質収支および代謝プロフィールの測定
物質および方法
放射性標識化合物
１４Ｃ−（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸（比活性４．３６ｍＣｉ／ミリモル）は、＞９９％の放射能純度を示した。
【化５】
2005521668.tif 000006
＊１４Ｃ−標識の部位
１４Ｃ−（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸は、下記に示した模式図に従って製造することができる。
【化６】
2005521668.tif 000007
【化７】
2005521668.tif 000008
【００８８】
放射性標識アルデヒド（ケムシンラボラトリーズ(ChemSyn
Laboratories),レネキサ(Lnenxa), KS)およびアミンＡを、塩化メチレン中で、室温で一晩攪拌し（一部をＮａＢＨ４でクエンチしＨＰＬＣ分析によりイミン形成を監視しながら）、ＮａＢＨ４で処理して化合物Ｂを得、次いで、過剰の塩化ピリジン−３−スルホニルおよび塩化メチレン中のヒュニグ(Hunig)塩基（ジイソプロピルエチルアミン）で処理して化合物Ｃを形成し、塩化メチレン中のトリフルオロ酢酸と反応して１４Ｃ−（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸を形成する。
化合物Ａは、次の通りに製造することができる：
【化８】
2005521668.tif 000009
■  アセトン中の１ｅｑ（当量）のアルデヒド、１ｅｑの炭酸塩、１．２５ｅｑのブロモ酢酸ｔ−ブチル
■  還流２０−２４時間
■  水でクエンチ
■  酢酸エチル中に抽出、次の工程のために２−プロパノール（ＩＰＯ）で置換
【化９】
2005521668.tif 000010
■  ＩＰＯ中の１ｅｑの化合物Ｄ、２ｅｑのヒドロキシルアミン・ＨＣｌ、２ｅｑのピリジン（Ｐｙ）
■  加熱還流３−４時間
■  酢酸エチル＆水性ＨＣｌで仕上げ
■  次の工程のために２Ｂエタノール（トルエンで変性）で置換
【化１０】
2005521668.tif 000011
■  ２Ｂエタノール中の化合物Ｅ、３０％ＲａＮｉ（ラネーニッケル）添加、２８％アンモニウム
■  イソプロピルエーテル抽出；油状物質へと濃縮
■  ＩＰＯに油状物質を溶解し、ＩＰＯ中のマレイン酸を添加
■  イソプロピルエーテルを加えて塩を粉砕析出
【００８９】
動物モデル
一群の３匹の雄性および３匹の雌性の頸静脈カニューレ挿入したスプラギュ−ドーリーラット（２３０−２４０ｇ）を、尿および糞便を集めるように設計されたステンレススチールの代謝ケージ内で個々に飼育し、１５ｍｇ／ｋｇ投与量の１４Ｃ−（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸を単回静脈投与する。
【００９０】
ファーマコキネティックスおよび血漿同定のために、二つの群の動物に１５ｍｇ／ｋｇ量の１４Ｃ−（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸を静脈投与する（ファーマコキネティックスについては３匹の雄性および３匹の雌性ならびに血漿同定については２匹の雄性および２匹の雌性）。
【００９１】
４群目の動物（胆管および頸静脈カニューレ挿入した、性別毎のｎ＝２）に、胆汁および尿の採集のため薬物投与して排泄経路および胆汁代謝物を評価する。
【００９２】
試料採集
尿および糞便を、群１の動物から薬物投与後７日間０−２４、２４−４８、４８−７２、７２−９６、９６−１２０、１２０−１４４および１４４−１６８時間に集める。全血を、ファーマコキネティックス分析用に薬物投与後５分、１５分、１、２、４、６、８、２４および４８時間に、そして循環代謝物の同定用に薬物投与後１および４時間に取る。血漿を、遠心分離により全血から分離する。胆汁および尿を、胆管カニューレ挿入した動物から薬物投与後０−８、８−２４および２４−４８時間に集める。
【００９３】
試料分析
放射能の測定
尿、胆汁および血漿中の放射能を、液体シンチレーションカウンティングにより測定する。尿（０．１ｇ）、胆汁（０．０２５ｇ）または血漿（０．０２５ｇ）の一部を、５ｍｌのエコライト(Ecolite)（＋）シンチレーションカクテルと混合し、ワラク(Wallac)＃１４０９液体シンチレーションカウンター（ガイザースバーグ(Gaithersburg),MD)内でカウントする。各時点の糞便試料を、水と共に均質化し、糞便ホモジネートの全重量を記録する。ホモジネートの一部（０．１−０．３ｇ）を、シンチレーションカウンティングの前にパッカード(Packard)オキシダイザー(パッカードインストリューメント社(Packard
Instrument Co.),ダウナーズグローブ(Downer's Grove),IL)で酸化する。
【００９４】
投与量中の放射能を、１００％の全放射能と決める。尿および糞便の各採取時点の放射能を、それぞれのマトリックスに排泄された薬物のパーセンテージと定義する。
【００９５】
血漿中の測定された放射能を、１９．７５ｄｐｍ／ｎｇの薬物投与担体の比活性に基づき（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸のｎｇ当量に変換する。
【００９６】
代謝物排泄の量的評価
代謝物の定量化を、β−ＲＡＭ（ＩＮ／ＵＳ、ウィン−フロー(Win-flow))を用い個々に分かれたＨＰＬＣピークの面積を測定することにより実施する。β−ＲＡＭは、ＣＰＭにおける積分したピーク表現のプリントアウトおよび放射性標識物質のペーセンテージを提供する。β−ＲＡＭは、固体シンチレーションセルを用いて操作する。
【００９７】
生物学的試料からの代謝物の抽出
尿試料（約１０ｍｌ）を、窒素下で一晩、蒸発させる。試料残渣を、１ｍｌの０．１％ギ酸／アセトニトリル（５０：５０）に再構成する。これらの溶液を約１分間攪拌し、１．５ｍｌのエッペンドルフチューブに移し、次いで、１４，０００ｒｐｍで約２分間遠心分離する。上澄の一部（１０−２０μｌ）を、更に精製することなくＨＰＬＣカラムに注入する。
【００９８】
最も高い水準の排泄された放射能を有する糞便ホモジネート（０−４８時間）を、プールする。プールした試料（約８０−１３５ｇ）から、一部（約５ｇ）を１５ｍｌのアセトニトリルに懸濁する。懸濁液を音波処理し（約３０分）、攪拌し、３２００ｒｐｍで１０分間遠心分離する。上澄を清浄な１５ｍｌコニカルチューブに移した後、残分を、上述したように１５ｍｌのアセトニトリルで更に２回抽出する。各抽出物の一部（２００μｌ）を、液体シンチレーションカウンターでカウントする。抽出された放射能の回収率は、９２−９６％の範囲であった。上澄を、窒素下、ターボバップ(Turbo Vap)ＬＶエバポレーター(ジマーク(Zymark),ホプキントン(Hopkinton), MA)内で蒸発乾固し、残渣を２ｍｌの移動相に再構成する。濃縮した糞便抽出物の一部（１０−２０μｌ）を、ＨＰＬＣカラムに注入する。
【００９９】
循環代謝物の同定用血漿を、２倍容量のアセトニトリルを用いて沈殿させる。懸濁液を音波処理し（約３０分）、攪拌し、そして３２００ｒｐｍで１０分間遠心分離する。上澄を清浄な１５ｍｌコニカルチューブに移した後、残分を、上述したように２Ｘ１５ｍｌのアセトニトリルで更に抽出する。上澄を合せ、窒素下、ターボバップＬＶエバポレーター内で蒸発乾固し、残渣を０．５ｍｌの移動相に再構成する。濃縮した血漿抽出物の一部（５０−１００μｌ）を、ＨＰＬＣカラムに注入する。
【０１００】
胆汁を、更に精製することなく分析のため直接ＨＰＬＣ／ＭＳシステムに注入する。
【０１０１】
高速液体クロマトグラフィー
ＨＰＬＣシステムは、ＨＰ−１１００溶媒供給システム、ＨＰ−１１００膜脱気器、ＨＰ−１１００自動注入器（ヒューレットパッカード(Hewlett Packard))およびＩＮ／ＵＳ放射能モニター（β−ＲＡＭ）から成る。クロマトグラフィーを、ＹＭＣ  ＡＱ（Ｃ−１８）カラム（４．６ｍｍｘ１５０ｍｍ、３μｍ）（ウォーターズ(Waters),ミルフォード(Milford),MA)上で実施する。移動相は、初めに１０ｍＭのギ酸アンモニウムｐＨ５．０（溶媒Ａ）およびアセトニトリル（Ｂ）から成る。溶媒供給段階勾配プログラムは、次の通りである：
【表１】
2005521668.tif 000012
【０１０２】
システムを、次の注入の前に１０分間平衡にする。１．０ｍｌ／分の流速を、分析の間中維持する。血漿代謝物の定量化には、ＨＰＬＣ溶出液を、β−ｒａｍ放射能検出器のフローセルに注ぎいれる。β−ｒａｍおよびＨＰＬＣを、低水準の放射能カウンティングのためＡＲＣ（正確な放射性同位体カウンティング(Accurate radioisotope counting)システムを用いて外側から制御する。
【０１０３】
質量分析法
代謝物の同定を、ＡＰＩ−２エレクトロスプレーインターフェースを備えたフィニガン(Finnigan)ＴＳＱ７０００三重の四重極質量分析計（フィニガン、サンホセ、ＣＡ）を用いて実施する。約５０μｌ／分がＡＰＩインターフェースに導入されるように、ＨＰＬＣカラム溶出液を分ける。残りの溶出液を、β−ＲＡＭのフローセルに注ぎいれる。β−ＲＡＭ応答を、ＭＳデータ収集システムによりリアルタイムのアナログシグナルとして記録する。放射能およびＭＳ検出器から集められたデータを、ＭＳから放射能検出器までのフローのドゥエル容量（約０．２分のドゥエルタイムに対応する）により分ける。質量分析計が正のイオンモードでデータを集めるようにエレクトロスプレー電圧を−４．５ｅＶで操作する。衝突誘発解離（ＣＩＤ）研究を、３０−３５ｅＶの衝突エネルギーおよび約２．１ｍトールの衝突ガス濃度を用いＱ２（Ｑ２は、第二の四重極である）でアルゴンガスを用いて実施する。
【０１０４】
結果および考察
代謝物の同定
代謝物Ｍ８
代謝物Ｍ８は、１０：２６−１１：３５（分：秒）の保持時間を有し、ｍ／ｚ３５１でプロトン化分子イオンを示した。それは、尿（雄）および胆汁中に検出された。Ｍ８のＣＩＤフラグメンテーションパターンは、ｍ／ｚ３０５、１４６および１３１に目立つフラグメントを有した。分子イオンから４６ａｍｕ喪失であるｍ／ｚ３０５のイオンは、カルボン酸部分の存在を示唆した。ｍ／ｚ１３１および１４６のイオンは、ギ酸の付随する喪失と共に、それぞれ、カルボキシイソプロピルベンジルおよびカルボキシイソプロピルベンジルアミン部分に起因するかもしれない。そのフラグメンテーションパターンおよび分子イオンに基づき、Ｍ８は、フェノキシ酢酸部分のＮ−脱ベンジル化、続いてｔ−ブチル部分のカルボン酸への酸化およびピリジン環のヒドロキシル化から形成されたことが示唆される。この代謝物と三塩化チタン（リン酸中の２０％溶液）との反応は、この代謝物の保持時間が約１分増える、且つその結果生じたＭ＋Ｈ＋イオンが１６ａｍｕ減少する原因となり、この代謝物がＮ−オキシドであることを示唆する。このデータに基づき、Ｍ８は、２−｛４−［ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホニルアミノ）−メチル］−フェニル｝−２−メチル−プロピオン酸と同定された。
【化１１】
2005521668.tif 000013
【０１０５】
代謝物Ｍ１３
代謝物Ｍ１３は、ＨＰＬＣ上で約１０：４７（分：秒）の保持時間を有し、胆汁（雄）のみに検出された。それは、親化合物よりも１９２ａｍｕ大きいｍ／ｚ６６１でプロトン化分子イオンを示した。そのＣＩＤ生成物イオンスペクトルは、ｍ／ｚ４８５、４６７、３４２、３２４、１６５および１４５で目立つフラグメントイオンを示した。ｍ／ｚ４８５のイオンは、分子イオンからのグルクロン酸の喪失のせいであった。ｍ／ｚ４６７のイオンは、ｍ／ｚ４８５のイオンからの水の喪失により生じた。ｍ／ｚ３４２および３２４のイオンは、スルホニルピリジン部分および水の以後の喪失に起因した。親化合物のそれと類似しているｍ／ｚ１６５のイオンは、プロトン化メチルフェノキシ酢酸部分のせいであった。ｍ／ｚ１４５のイオンは、ヒドロキシｔ−ブチルベンジル部分からの水の喪失を示した。これらのデータに基づき、Ｍ１３は、（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸グルクロニドと同定された。
【化１２】
2005521668.tif 000014
【０１０６】
代謝物Ｍ９
代謝物Ｍ９は、ｍ／ｚ４１７でプロトン化分子イオンを有し、雌性ラットの尿のみに検出された。それは、ＨＰＬＣ上で約１１：３５（分：秒）の保持時間を有した。親化合物より５２ａｍｕ小さいｍ／ｚ４１７のプロトン化分子イオンは、Ｍ９が分解生成物であることを示唆した。Ｍ９のＣＩＤ生成物イオンスペクトルは、ｍ／ｚ３１９、１６０および１４５に目立つイオンを示した。プロトン化分子イオンより９８ａｍｕ小さいｍ／ｚ３１９のイオンは、分子からの水およびサルフェートの喪失を示唆した。ｍ／ｚ１４７の親化合物のそれより２ａｍｕ小さいｍ／ｚ１４５のイオンは、ｔ−ブチルベンジルがヒドロキシル化され水の分子がフラグメンテーション中に失われたことを示唆した。更に、この代謝物と三塩化チタン（リン酸中の２０％溶液）との反応は、この代謝物の保持時間が約２分増える、且つその結果生じたＭ＋Ｈ＋イオンが１６ａｍｕ減少する原因となり、この代謝物がＮ−オキシドであることを示唆する。これらのデータに基づき、Ｍ９の構造は、ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホン酸４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジルアミドの硫酸抱合体と指名された。
【化１３】
2005521668.tif 000015
【０１０７】
代謝物Ｍ６
代謝物Ｍ６は、ＨＰＬＣ上で約１１：２３−１２：３７（分：秒）の保持時間を有し、糞便、胆汁および血漿中に見られた。それは、１原子の酸素および１個のサルフェート基の付加を示唆するｍ／ｚ５６５（親化合物よりも９６ａｍｕ大きい）のプロトン化分子イオンを示した。Ｍ６のＣＩＤ生成物イオンスペクトルは、ｍ／ｚ４８５、４６７、３４２、３２４、１６５および１４５で目立つフラグメントイオンを示した。ｍ／ｚ４８５および４６７のイオンは、プロトン化分子イオンからのサルフェートおよび水の以後の喪失のせいであった。ｍ／ｚ１６５のイオンは親化合物のそれと類似しており、メチルフェノキシ酢酸部分が変化していないことを示した。ｍ／ｚ３４２（親化合物で観察されたものより１６ａｍｕ大きい）のイオンは、１原子の酸素の付加がｔ−ブチルベンジル部分上で起きたことを示した。ｍ／ｚ３２４および１４５のイオンは、親化合物のスペクトルの対応するそれらより２ａｍｕ小さく、再びｔ−ブチルベンジル部分への酸素の付加、およびフラグメンテーションにより水分子を失ったことを示唆した。このデータに基づき、Ｍ６は、（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の硫酸抱合体と同定された。
【化１４】
2005521668.tif 000016
【０１０８】
代謝物Ｍ１０
代謝物Ｍ１０は、ｍ／ｚ４０１でプロトン化分子イオンを有し、糞便および雌の尿中のみに見られた。それは、ＨＰＬＣ上で約１３：２６（分：秒）の保持時間を有した。親化合物より６８ダルトン小さいｍ／ｚ４０１の分子イオンは、それが分解生成物であることを示唆した。Ｍ１０のＣＩＤ生成物イオンスペクトルは、ｍ／ｚ３０３、１６０および１４５に目立つイオンを示した。プロトン化分子イオンより９８ａｍｕ小さいｍ／ｚ３０３のイオンは、分子からの硫酸の喪失を示唆した。ｍ／ｚ１４７の親化合物のそれより２ａｍｕ小さいｍ／ｚ１４５のイオンは、ｔ−ブチルベンジルがヒドロキシル化され１分子の水がフラグメンテーション中に失われたことを示唆した。これらのデータに基づき、Ｍ１０の構造は、ピリジン−３−スルホン酸４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジルアミドの硫酸抱合体と指名された。
【化１５】
2005521668.tif 000017
【０１０９】
代謝物Ｍ１１
代謝物Ｍ１１は、約１２：０４−１４：２０（分：秒）の保持時間を有し、尿および胆汁中に見られ、そしてｍ／ｚ３３５でプロトン化分子イオンを示した。親化合物より１３４ダルトン小さいｍ／ｚ３３５の分子イオンは、それが分解生成物であることを示唆した。Ｍ１１のＣＩＤフラグメンテーションパターンは、ｍ／ｚ２８９、１４６および１３１に目立つフラグメントを有した。分子イオンからの４６ａｍｕ喪失であるｍ／ｚ２８９のイオンは、カルボン酸部分の存在を示唆した。ｍ／ｚ１３１および１４６のイオンは、ギ酸の付随する喪失と共に、それぞれ、カルボキシイソプロピルベンジルおよびカルボキシイソプロピルベンジルアミン部分に起因したかもしれない。これらのデータに基づき、Ｍ１１の構造は、２−メチル−２−｛４−［（ピリジン−３−スルホニルアミノ）−メチル］−フェニル｝−プロピオン酸と指名された。
【化１６】
2005521668.tif 000018
【０１１０】
代謝物Ｍ３
代謝物Ｍ３は、ＨＰＬＣ上で約１２：３３−１４：２１（分：秒）の保持時間を有し、胆汁（雄）および糞便中に見られた。それは、ｍ／ｚ４９９（親化合物より３０ａｍｕ大きい）でプロトン化分子イオンを示した。ＣＩＤ生成物イオンスペクトルは、ｍ／ｚ４５３、３５６、３１０、１６５および１３１に目立つフラグメントを示した。ｍ／ｚ１６５のイオンは、親化合物のそれと似ており、メチルフェノキシ酢酸部分が変化していないことを示唆した。ｍ／ｚ３５６のイオンは、親化合物で観察されたそれより３０ａｍｕ大きく、２原子の酸素の付加および２個の水素原子の喪失を示唆した。ｍ／ｚ３１０および１３１のイオンは、それぞれ、ｍ／ｚ３５６および１７７のイオンからの４６ａｍｕの喪失のせいであり、カルボン酸部分の存在を示唆した。これらのデータに基づき、代謝物Ｍ３は、２−（４−｛［（３−カルボキシメトキシ−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェニル）−２−メチル−プロピオン酸と同定された。
【化１７】
2005521668.tif 000019
【０１１１】
代謝物Ｍ４
代謝物Ｍ４は、ＨＰＬＣ上で約１３：２０−１５：００（分：秒）の保持時間を有し、糞便、胆汁、血漿および雌の尿中に見られた。それは、ｍ／ｚ４８５（親化合物より１６ａｍｕ大きい）でプロトン化分子イオンを示した。ｍ／ｚ４８５のＣＩＤ生成物イオンスペクトルは、ｍ／ｚ４６７、３４２、３２４、１６５および１４５に目立つフラグメントイオンを示した。ｍ／ｚ４６７のイオンは、分子からの水の喪失により生じた。ｍ／ｚ３４２のイオンは、スルホニルピリジン部分の喪失に起因し、続いて水の喪失によりｍ／ｚ３２４のイオンを形成した。親化合物のそれに類似したｍ／ｚ１６５のイオンは、プロトン化メチルフェノキシ酢酸部分に負った。ｍ／ｚ１４５のイオンは、ヒドロキシｔ−ブチルベンジル部分からの水の喪失を示した。これらのデータに基づき、Ｍ４は、（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸と同定された。
【化１８】
2005521668.tif 000020
【０１１２】
代謝物Ｍ５
代謝物Ｍ５は、ＨＰＬＣ上で約１５：２３（分：秒）の保持時間を有し、血漿および胆汁中に見られた。それは、ｍ／ｚ４８５（親化合物より１６ａｍｕ大きい）でプロトン化分子イオンを示した。Ｍ５のＣＩＤ生成物イオンスペクトルは、ｍ／ｚ４３９、３２６、１６５および１４７に目立つフラグメントイオンを示した。ｍ／ｚ４３９のイオンは、分子からのギ酸の喪失により生じた。ｍ／ｚ３２６、１６５および１４７のイオンは、親化合物のそれと似ており、メチルフェノキシ酢酸およびｔ−ブチルベンジル部分が変化していないことを示唆した。これらのデータに基づき、Ｍ５は、（３−｛［（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−Ｎ−オキシド−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸と同定された。
【化１９】
2005521668.tif 000021
【０１１３】
代謝物Ｍ１４
代謝物Ｍ１４は、ＨＰＬＣ上で約１６：９０分の保持時間を有し、胆汁中のみに見られた。それは、親化合物のそれより１７６ダルトン大きいｍ／ｚ６４５でプロトン化分子イオンを示し、それがグルクロニド抱合体であることを示唆した。ｍ／ｚ６４５のＣＩＤ生成物イオンスペクトルは、ｍ／ｚ４６９、４２３、４１３、３２６、１６５および１４７に目立つフラグメントイオンを示した。ｍ／ｚ４６９のイオンは、分子からのグルクロン酸部分の喪失により生じた。ｍ／ｚ４２３のイオンは、分子からのギ酸の喪失により生じた。ｔ−ブチル基の喪失は、ｍ／ｚ４１３のイオンに帰した。ｍ／ｚ３２６のイオンは、スルホニルピリジン部分の喪失に起因した。ｍ／ｚ１６５のイオンは、プロトン化メチルフェノキシ酢酸部分に負った。これらのデータに基づき、この代謝物は、（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸グルクロニドと同定された。
【化２０】
2005521668.tif 000022
【０１１４】
代謝物Ｍ１２
代謝物Ｍ１２は、ＨＰＬＣ上で約１５：５０−１７：５０（分：秒）の保持時間を有し、糞便および胆汁中に見られた。それは、ｍ／ｚ４８５（親化合物より１６ａｍｕ大きい）でプロトン化分子イオンを示した。代謝物Ｍ１２のＣＩＤ生成物イオンスペクトルは、ｍ／ｚ４８５、３４２、３０５、１８１、１６２および１４７に目立つフラグメントを示した。ｍ／ｚ１６２および１４７のイオンは、親化合物に見られるものと似ており、ｔ−ブチルベンジル部分が変化していないことを示唆した。ｍ／ｚ１８１および３４２のイオンは、親化合物で観察されるもの（それぞれｍ／ｚ１６５およびｍ／ｚ３２６）より１６ａｍｕ大きく、メチルフェノキシ酢酸部分への１個の酸素原子の付加を示した。ｍ／ｚ３０５のイオンは、ヒドロキシフェノキシ酢酸部分の喪失によるものであった。これらのデータに基づき、Ｍ１２は、（５−｛［（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−ヒドロキシ−フェノキシ）−酢酸と同定された。この化学名を本出願物で用いる場合、フェニル環上のヒドロキシル基の位置は、指定されておらず、名称は、それぞれの可能な位置のヒドロキシル基を包含することを意図していることを指摘する。
【化２１】
2005521668.tif 000023
Ｍ１２
【０１１５】
（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の代謝経路の概略を、模式図１に示す。主要な酸化経路は、ヒドロキシメチル代謝物Ｍ４（雄１９．７％；雌６．５％）を形成するｔ−ブチル部分の酸化に負う。Ｍ４は、更に酸化されてカルボン酸代謝物Ｍ３を形成するか（雄３２．８％；雌１．６６％）または硫酸と抱合して代謝物Ｍ６を形成する（雄１２．７％；雌３６．２％）。他の少ない代謝物は、ピリジン環のＮ−酸化（Ｍ５）ならびにメチル−フェノキシ酢酸部分のヒドロキシル化およびＮ−脱アルキル化に続く相ＩＩ抱合による。親化合物に加え、循環代謝物には、Ｍ４、Ｍ５およびＭ６が含まれる。
【化２２】
2005521668.tif 000024
模式図１．１５ｍｇ／ｋｇの１４Ｃ−（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸を静脈経由で単回投与した後のスプラギュ−ドーリーラットにおける（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の代謝経路
【０１１６】
ラット、イヌ、サルおよびヒトの肝臓ミクロソームおよび肝細胞中の（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸のインビトロ代謝物の同定
（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸は、ラット、イヌ、サルおよびヒトの肝臓ミクロソームおよび肝細胞で広く代謝される。主要な代謝経路は、アルコールを形成するｔ−ブチル部分の酸化、ピリジン部分の酸化、および／またはメチルフェノキシ酢酸部分のＮ−脱アルキル化に負う。アルコール代謝物Ｍ４は、対応するカルボン酸Ｍ３へと更に酸化される。肝細胞において、Ｍ４は、硫酸と抱合する。イヌの肝細胞において、代謝物の一つＭ１２は、メチルフェノキシ酢酸部分の芳香族酸化による。
【０１１７】
目的
ヒト、ラット、イヌおよびサル由来の肝臓ミクロソームおよび肝細胞における（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の代謝経路を確定すること。
【０１１８】
材料
放射性標識化合物
１４Ｃ−（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸（比活性４．３６ｍＣｉ／ミリモル）は、＞９９％の放射能純度を示しており、上述の通りに合成される。
【化２３】
2005521668.tif 000025
【０１１９】
ミクロソームのインキュベーション
ヒト（ＨＬ−ｍｉｘ１２）、ラット、サルおよびイヌの肝臓ミクロソームを、標準手法を用いて分画遠心法により調製する。使用前に、肝臓ミクロソームを、氷上で解凍し、１００ｍＭのリン酸カリウムｐＨ７．４を用いて再構成する。［１４Ｃ］−（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸を、２０μＭの最終基質濃度で１００ｍＭのリン酸カリウムｐＨ７．４に溶解する。試料を、３７℃の振とう水浴中でミクロソーム（ＣＹＰ４５０；０．５μＭ）と共に３分間プレ−インキュベートする。インキュベーションは、１ｍｌのインキュベーション混合物当たり１００μｌの補因子（１．１ｍＭのＮＡＤＰＨ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２）の添加により開始する。インキュベーションは、３０分後、同じ容量の冷アセトニトリルの添加により停止する。
【０１２０】
肝細胞インキュベーション
ヒトの肝細胞を、３個の肝臓の混合物から得る。ラットおよびサルの肝細胞を、スプラギュドーリーラット（１２個の肝臓）、サイノモルガス(Cynomolgus)サル（１個の肝臓）およびビーグル犬（２個の肝臓）を用いて得る。凍結保存した肝細胞を、ｍｌ当たり２百万の生存細胞カウントになるよう１０％ＦＢＳを含有するウィリアム(William)のＥ培地に懸濁し、インキュベーションの初め及び１時間毎に９５／５のＯ２／ＣＯ２を通気する。２０μＭの（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の２５ｍｌのエルレンマイヤーフラスコへの添加後、２．５ｍｌの肝細胞懸濁液を加え、３７℃の振とう水浴中で４時間インキュベートする。
【０１２１】
試料分析
量的評価
代謝物の定量化を、β−ＲＡＭ（ＩＮ／ＵＳ、ウィン−フロー)を用い個々に分かれたＨＰＬＣピークの面積を測定することにより実施する。β−ＲＡＭは、ＣＰＭでの積分したピーク表現のプリントアウトおよび放射性標識物質のペーセンテージを提供する。β−ＲＡＭは、固体シンチレーションセルを用いて操作する。
【０１２２】
代謝物のインビトロマトリックスからの抽出
同じ容量の冷アセトニトリルの添加によりインキュベーションを停止し、音波処理し、そして３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離する。上澄を取り除き、窒素下で蒸発乾固する。残渣を５０：５０（アセトニトリル：水）に再構成し、一部（５０−９０μｌ）を分析のためＨＰＬＣシステムに注入する。
【０１２３】
高速液体クロマトグラフィー
ＨＰＬＣシステムは、ＨＰ−１１００溶媒供給システム、ＨＰ−１１００膜脱気器、ＨＰ−１１００自動注入器（ヒューレットパッカード)およびＩＮ／ＵＳ放射能モニター（β−ＲＡＭ）から成る。クロマトグラフィーを、ＹＭＣ  ＡＱ（Ｃ−１８）カラム（４．６ｍｍｘ１５０ｍｍ、３μｍ）（ウォーターズ,ミルフォード,MA)上で実施する。移動相は、初めに、ギ酸（溶媒Ａ）およびアセトニトリル（溶媒Ｂ）を有する１０ｍＭの酢酸アンモニウムｐＨ３．５から成る。溶媒供給段階勾配プログラムは、次の通りである：
【表２】
2005521668.tif 000026
【０１２４】
システムを、次の注入の前に１０分間平衡にする。１．０ｍｌ／分の流速を、分析の間中維持する。
【０１２５】
質量分析法
代謝物の同定を、ＡＰＩ−２エレクトロスプレーインターフェースを備えたフィニガンＴＳＱ７０００三重の四重極質量分析計を用いて実施する。約５０μｌ／分がＡＰＩインターフェースに導入されるように、ＨＰＬＣカラム溶出液を分ける。残りの溶出液を、β−ＲＡＭのフローセルに注ぎいれる。β−ＲＡＭ応答を、ＭＳデータ収集システムによりリアルタイムのアナログシグナルとして記録する。放射能およびＭＳ検出器から集められたデータを、ＭＳから放射能検出器までのフローのドゥエル容量（約０．２分のドゥエルタイムに対応する）により分ける。質量分析計が正のイオンモードでデータを集めるようにエレクトロスプレー電圧を−４．５ｅＶで操作する。衝突誘発解離（ＣＩＤ）研究を、３０−３５ｅＶの衝突エネルギーおよび約２．１ｍトールの衝突ガス濃度を用いＱ２でアルゴンガスを用いて実施する。
【０１２６】
結果および考察
ミクロソームにおける代謝回転
肝臓ミクロソームにおける（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の代謝回転は、ラットで最も大きく（９４．３％）、続いてヒト（９２．８％）、サル（７４．９％）およびイヌ（４１．６％）である。ミクロソームのインキュベーション物の代表的ＨＰＬＣ放射性クロマトグラムを、図１に示す。代謝物を、インライン(in-line)放射能カウンティングにより定量化し、相対的パーセンテージを表１に示す。
【０１２７】
肝細胞における代謝回転
（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸を、ラット、イヌ、サルおよびヒトの肝臓細胞と共にインキュベートする。４つの種の相対的代謝回転速度は、ラット＝サル＞ヒト＞イヌであった。肝細胞インキュベーション物における代謝物の相対的パーセンテージを、表２に示す。肝細胞インキュベーション物の代表的ＨＰＬＣ放射性クロマトグラムを、図２に示す。
【０１２８】
ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによる（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸のフラグメンテーション
（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸は、ＨＰＬＣ上で１７−１７：２８（分：秒）の保持時間を有し、ｍ／ｚ４６９でプロトン化分子イオンを示した。ｍ／ｚ４６９のＣＩＤ生成物イオンスペクトルは、ｍ／ｚ４２３、４１３、３２６、１６５および１４７で目立つフラグメントを示した（図３）。ｍ／ｚ４２３のイオンは、分子からのギ酸の喪失により生じた。ｔ−ブチル基の喪失は、ｍ／ｚ４１３のイオンに帰した。ｍ／ｚ３２６のイオンは、スルホニルピリジン部分の喪失に起因した。ｍ／ｚ１６５のイオンは、プロトン化メチルフェノキシ酢酸部分のせいであり、ｍ／ｚ１４７のイオンは、ｔ−ブチルトロポリウム(tropolium)イオンのせいであった。（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の提唱されるフラグメンテーションを、下記に示す：
【化２４】
2005521668.tif 000027
【０１２９】
代謝物の同定
代謝物Ｍ２１
代謝物Ｍ２１は、ｍ／ｚ３２１でプロトン化分子イオンを有し、ＨＰＬＣ上で１０：５８（分：秒）の保持時間を有した。それは、ラット、イヌおよびサルの肝細胞中に見られた。ｍ／ｚ３２１の分子イオンは、親化合物がＮ−脱ベンジル化およびヒドロキシル化されたことを示唆した。Ｍ２１のＣＩＤ生成物イオンスペクトルは、ｍ／ｚ１７８、１６０、１４５、１３３および７８に目立つイオンを示した（図４）。ｍ／ｚ１７８のイオンは、スルホンアミド結合の切断に起因した。ｍ／ｚ１７８のイオンからの水の喪失は、ｍ／ｚ１６０のイオンに帰した。ｍ／ｚ１４７の親化合物のそれより２ａｍｕ小さいｍ／ｚ１４５のイオンは、分子がｔ−ブチル部分上でヒドロキシル化されたことを示唆した。ｍ／ｚ７８のイオンは、ピリジン環上の荷電安定化が原因であった。これらのデータに基づき、Ｍ２１の構造は、ピリジン−３−スルホン酸４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジルアミドと同定された。
【化２５】
2005521668.tif 000028
【０１３０】
代謝物Ｍ１１
代謝物Ｍ１１は、ＨＰＬＣ上で９：４８−１０：４８（分：秒）の保持時間を有し、ｍ／ｚ３３５でプロトン化分子イオンを示した。それは、ラットおよびサルの肝臓ミクロソーム中に見られた。親化合物より１３４ダルトン小さいｍ／ｚ３３５の分子イオンは、それが分解生成物であることを示唆した。Ｍ１１のＣＩＤ生成物イオンスペクトルは、ｍ／ｚ２８９、１４６および１３１にフラグメントを示した（図５）。分子イオンからの４６ａｍｕ喪失であるｍ／ｚ２８９のイオンは、カルボン酸部分の存在を示唆した。ｍ／ｚ１３１および１４６のイオンは、ギ酸の付随する喪失と共に、修飾されたｔ−ブチルベンジルおよびｔ−ブチルベンジルアミン部分に起因したかもしれない。そのフラグメンテーションパターンおよび分子イオンに基づき、Ｍ１１は、フェノキシ酢酸部分のＮ−脱ベンジル化に続いてカルボン酸を形成するｔ−ブチル部分の酸化により形成されたことが示唆される。従って、それは、２−メチル−２−｛４−［（ピリジン−３−スルホニルアミノ）−メチル］−フェニル｝−プロピオン酸と同定された。
【化２６】
2005521668.tif 000029
【０１３１】
代謝物Ｍ２
代謝物Ｍ２は、ＨＰＬＣ上で１２：２４（分：秒）の保持時間を有し、ｍ／ｚ５０１（親化合物より３２ａｍｕ大きい）でプロトン化分子イオンを示した。Ｍ２は、ラットおよびイヌの肝細胞中に見られた。それは、ｍ／ｚ４８３、３４２、３２４、１６５および１４５に目立つフラグメントイオンを示した（図６）。ｍ／ｚ４８３のイオンは、分子からの水の喪失により生じた。ｍ／ｚ３４２のイオンは、スルホニルピリジン部分の喪失に起因し、続いて水の喪失がｍ／ｚ３２４のイオンを形成した。親化合物のそれと似ているｍ／ｚ１６５のイオンは、メチルフェノキシ酢酸部分が原因であった。ｍ／ｚ１４５のイオンは、修飾されたｔ−ブチルベンジル部分からの水の喪失を示した。これらのデータに基づき、Ｍ２は、ジヒドロキシ（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸と同定された。この化学名を本出願物で用いる場合、ピリジル環上のヒドロキシル基の位置は、指定されておらず、名称は、それぞれの可能な位置のヒドロキシル基を包含することを意図していることを指摘する。
【化２７】
2005521668.tif 000030
【０１３２】
代謝物Ｍ３
代謝物Ｍ３は、ＨＰＬＣ上で１１：５５−１３：５４（分：秒）の保持時間を有し、ｍ／ｚ４９９（親化合物より３０ａｍｕ大きい）でプロトン化分子イオンを示した。それは、ラット、サルおよびヒト肝臓ミクロソームならびに全ての種の肝細胞中に見られた。Ｍ３のＣＩＤ生成物イオンスペクトルは、ｍ／ｚ４５３、３５６、３１０、１７７、１６５および１３１に目立つフラグメントを示した（図７）。ｍ／ｚ１６５のイオンは、親化合物のそれと似ており、メチルフェノキシ酢酸部分が変化していないことを示唆した。ｍ／ｚ３５６のイオンは、親化合物で観察されたそれより３０ａｍｕ大きく、２原子の酸素の付加および２個の水素原子の喪失を示唆した。ｍ／ｚ３１０および１３１のイオンは、それぞれ、ｍ／ｚ３５６および１７７のイオンからの４６ａｍｕの喪失のせいであり、カルボン酸部分の存在を示唆した。これらのデータに基づき、代謝物Ｍ３は、カルボキシ（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸と同定された。
【化２８】
2005521668.tif 000031
【０１３３】
代謝物Ｍ４
代謝物Ｍ４は、ＨＰＬＣ上で１３：２９（分：秒）の保持時間を有し、ｍ／ｚ４８５（親化合物より１６ａｍｕ大きい）でプロトン化分子イオンを示した。それは、ラット、サル、イヌおよびヒト肝臓ミクロソームならびにヒト肝細胞中に見られた。そのＣＩＤ生成物イオンスペクトルは、ｍ／ｚ４６７、３４２、３３５、３２４、１６５および１４５に目立つフラグメントイオンを示した（図８）。ｍ／ｚ４６７のイオンは、分子からの水の喪失により生じた。ｍ／ｚ３４２のイオンは、スルホニルピリジン部分の喪失に起因し、続いて水の喪失によりｍ／ｚ３２４のイオンを形成した。親化合物のそれに類似したｍ／ｚ１６５のイオンは、プロトン化メチルフェノキシ酢酸部分が原因であった。ｍ／ｚ１４５のイオンは、修飾されたｔ−ブチルベンジル部分からの水の喪失を示した。これらのデータに基づき、Ｍ４は、ヒドロキシ（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸と同定された。
【化２９】
2005521668.tif 000032
【０１３４】
代謝物Ｍ１９
代謝物Ｍ１９は、ＨＰＬＣ上で１４：４０（分：秒）の保持時間を有し、ｍ／ｚ３２１（親化合物より１４８ａｍｕ小さい）でプロトン化分子イオンを示した。それは、分析された全ての種のミクロソーム中に見られた。Ｍ１９のＣＩＤ生成物イオンスペクトルは、ｍ／ｚ３２１、２６５および１４７に目立つフラグメントイオンを示した（図９）。ｍ／ｚ１６２および１４７のイオンは、親化合物のＣＩＤ生成物イオンスペクトルで観察されており、フェニルｔ−ブチル基が変化していないこと及び分子がＮ−脱アルキル化を受けたことを示唆した。ｍ／ｚ２６５のイオンは、ｔ−ブチル部分の喪失に起因しており、酸化がピリジン部分で生じたことを示唆した。これらのデータに基づき、Ｍ１９は、５−ヒドロキシ−ピリジン−３−スルホン酸４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジルアミドと同定された。この化学名を本出願物で用いる場合、ピリジル環上のヒドロキシル基の位置は、指定されておらず、名称は、それぞれの可能な位置のヒドロキシル基を包含することを意図していることを指摘する。
【化３０】
2005521668.tif 000033
【０１３５】
代謝物Ｍ６
代謝物Ｍ６は、ＨＰＬＣ上で約１１：５２（分：秒）の保持時間を有し、１原子の酸素および１個のサルフェート基の付加を示唆する、親化合物よりも９６ａｍｕ大きいｍ／ｚ５６５のプロトン化分子イオンを示した。Ｍ６は、ラット、サルおよびヒト肝細胞中に見られた。Ｍ６のＣＩＤ生成物イオンスペクトルは、ｍ／ｚ４８５、４６７、３４２、３２４、１６５および１４５で目立つフラグメントを示した（図１０）。ｍ／ｚ４８５および４６７のイオンは、プロトン化分子イオンからのサルフェートおよび水の喪失により生じた。ｍ／ｚ１６５のイオンは親化合物のそれと類似しており、メチル−フェノキシ酢酸部分が変化していないことを示した。ｍ／ｚ３４２（親化合物で観察されたものより１６ａｍｕ大きい）のイオンは、１個の酸素原子の付加がｔ−ブチルベンジル部分上で起きたことを示した。ｍ／ｚ３２４および１４５のイオンは、親化合物のスペクトルの対応するそれらより２ａｍｕ小さく、再びｔ−ブチルベンジル部分への酸素の付加、およびフラグメンテーションにより１分子の水を失ったことを示唆した。これらのデータに基づき、Ｍ６は、ヒドロキシ−（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の硫酸抱合体と同定された。
【化３１】
2005521668.tif 000034
【０１３６】
代謝物Ｍ５
代謝物Ｍ５は、ＨＰＬＣ上で約１５：２９分の保持時間を有し、ｍ／ｚ４８５（親化合物より１６ａｍｕ大きい）でプロトン化分子イオンを示した。Ｍ５は、ラット、イヌ、サルおよびヒト肝臓ミクロソームに存在した。ｍ／ｚ４８５のＣＩＤ生成物イオンスペクトルは、ｍ／ｚ４３９、３２６、１６５および１４７に目立つフラグメントイオンを示した（図１１）。ｍ／ｚ３２６、１４７および１６５のイオンは、全て親化合物のＣＩＤスペクトルに見られるそれらに類似しており、フェニルｔ−ブチルおよびフェノキシ酢酸部分が修飾されていないことを示唆した。ｍ／ｚ４３９のイオンは、親化合物で観察されるそれより１６ａｍｕ大きかった。このデータは、ピリジン部分がヒドロキシル化されたことを示唆した。更に、この代謝物の三塩化チタンでの処理は、１５．３分のピークの消失に帰し、そしてクロマトグラムにおける（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の相対的面積の増加に帰し、Ｍ５が親化合物のＮ−オキシドであることを示唆した。これらのデータに基づき、Ｍ５は、（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸Ｎ−オキシドと同定された。
【化３２】
2005521668.tif 000035
【０１３７】
代謝物Ｍ１２
代謝物Ｍ１２は、ＨＰＬＣ上で約１６：０１（分：秒）の保持時間を有し、イヌの肝臓ミクロソーム中にのみ見られた。それは、ｍ／ｚ４８５（親化合物より１６ａｍｕ大きい）でプロトン化分子イオンを示した。代謝物Ｍ１２のＣＩＤ生成物イオンスペクトルは、ｍ／ｚ４８５、３４２、３０５、１８１、１６２および１４７に目立つフラグメントを示した（図１２）。ｍ／ｚ１６２および１４７のイオンは、親化合物に見られるものと似ており、ｔ−ブチルベンジル部分が変化していないことを示唆した。ｍ／ｚ１８１および３４２のイオンは、親化合物で観察されるもの（それぞれｍ／ｚ１６５および３２６）より１６ａｍｕ大きく、メチル−フェノキシ酢酸部分への１個の酸素原子の付加を示した。ｍ／ｚ３０５のイオンは、フェノキシ酢酸部分の喪失によるものであった。これらのデータに基づき、Ｍ１２は、ヒドロキシ（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸と同定された。この化学名を本出願物で用いる場合、フェニル環上のヒドロキシル基の位置は、指定されておらず、名称は、それぞれの可能な位置のヒドロキシル基を包含することを意図していることを再度指摘する。
【化３３】
2005521668.tif 000036
【０１３８】
代謝物Ｍ２０
代謝物Ｍ２０は、ＨＰＬＣ上で約１９：４５分の保持時間を有し、ｍ／ｚ３０５（親化合物より１６４ａｍｕ小さい）でプロトン化分子イオンを示した。Ｍ２０のＣＩＤ生成物イオンスペクトルは、ｍ／ｚ１６２および１４７に目立つフラグメントイオンを示した（図１３）。これらのイオンは、親化合物のＣＩＤ生成物イオンスペクトルで観察されており、従って、（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸がｍ／ｚ３０５の分解代謝物に帰するＮ−脱アルキル化を受けたことを示唆した。これらのデータに基づき、Ｍ２０は、ピリジン−３−スルホン酸４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジルアミドと同定された。
【化３４】
2005521668.tif 000037
【０１３９】
（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸は、ラット、イヌ、サルおよびヒト肝臓ミクロソームならびに肝細胞で広く代謝された。提唱される代謝経路を、模式図２に示す。主要な代謝経路は、アルコールを形成するｔ−ブチル部分の酸化、ピリジン部分の酸化、および／またはメチルフェノキシ酢酸部分のＮ−脱アルキル化に負うものであった。アルコール代謝物Ｍ４は、対応するカルボン酸Ｍ３へと更に酸化された。肝細胞において、Ｍ４は、硫酸と抱合した。イヌの肝細胞において、代謝物の一つＭ１２は、メチルフェノキシ酢酸部分の芳香族酸化に負うものであった。
表１．  ラット、イヌ、サルおよびヒト肝臓ミクロソームにおける（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の代謝物のパーセンテージ
【表３】
2005521668.tif 000038
親化合物は、（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸であり；ＲＴは、分：秒での保持時間である。
表２．  ラット、イヌ、サルおよびヒト肝細胞における（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の代謝物のパーセンテージ
【表４】
2005521668.tif 000039
＊サルおよびヒト肝細胞試料は、移動相が酢酸アンモニウム（１０ｍＭ）ｐＨ５．０を含有することを除いては同じ勾配およびカラムを用いてＨＰＬＣにより分析した。示された保持時間は、上記で指定された勾配により具体化されている。
【化３５】
2005521668.tif 000040
模式図２．肝臓ミクロソームおよび肝細胞におけるインビトロでのインキュベーション後の１４Ｃ−（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の提唱される代謝経路
【０１４０】
組み換えヒトＰ−４５０を用いた代謝物の生成
組み換えヒト  チトクロームＰ−４５０アイソフォームｒＣＹＰ３Ａ４、ｒＣＹＰ３Ａ５およびｒＣＹＰ２Ｃ８は、ジェンテスト(Gentest)(ウォバーン(Woburn),マサチューセツ）から購入する。各インキュベーションに用いる発現ｒＣＹＰの量は、約１ｍｇ蛋白質／ｍｌのインキュベーション液である。使用前に、ミクロソームを、氷上で解凍し、（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸（５０μＭ）を含有する１００ｍＭのリン酸カリウムｐＨ７．４を用いて再構成する。試料を、３７℃の振とう水浴中で組み換えＣＹＰｓと共に３分間プレ−インキュベートする。インキュベーションは、１００μｌの補因子（１．１ｍＭのＮＡＤＰＨ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２）の添加により開始する。６０分のインキュベーション後、試料を酢酸でｐＨ３．０へと酸性にし、同じ容量のメチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）に対して抽出する。ＭＴＢＥ層を、窒素ガス下で乾燥するまで蒸発させ、ＬＣ／ＭＳ分析のため１０ｍＭの酢酸アンモニウム：アセトニトリル（１：１）に再構成する。
【０１４１】
Ｐ−４５０代謝物のＬＣ／ＭＳ構造確認
ＨＰＬＣシステムは、ＨＰ−１１００溶媒供給システム、ＨＰ−１１００膜脱気器、ＨＰ−１１００自動注入器（ヒューレットパッカード)およびＩＮ／ＵＳ放射能モニター（β−ＲＡＭ）から成る。クロマトグラフィーを、ＹＭＣ  ＯＤＳ  ＡＱ（Ｃ−１８）カラム（４．６ｍｍｘ１５０ｍｍ、３μｍ）上で実施する。移動相は、初めに酢酸（溶媒Ａ）およびアセトニトリル（溶媒Ｂ）を有する１０ｍＭの酢酸アンモニウムｐＨ５．０から成る。代謝物の同定を、エレクトロスプレーインターフェースを備えたマイクロマス((Micromass)Ｑ−Ｔｏｆ２（ビバリー(Beverly),
MA)質量分析計を用いて実施する。約５０μｌ／分がＡＰＩインターフェースに導入されるように、ＨＰＬＣカラム溶出液を分ける。残りの溶出液を、β−ＲＡＭのフローセルに注ぎいれる。β−ＲＡＭ応答を、ＭＳデータ収集システムによりリアルタイムのアナログシグナルとして記録する。放射能およびＭＳ検出器から集められたデータを、ＭＳから放射能検出器までのフローのドゥエル容量（〜０．１分のドゥエルタイムに対応する）により分ける。質量分析計が正のイオンモードでデータを集めるようにエレクトロスプレー電圧を−３ｅＶで操作する。衝突誘発解離（ＣＩＤ）研究を、２０−３０ｅＶの衝突エネルギーおよび〜５ｘ１０−５トールのペニング圧を用いＱ２でアルゴンガスを用いて実施する。インターナルロックマス（internal
lock mass)（キニジン、ｍ／ｚ３２５．１９１６）を、校正物質が５秒毎に質量分析計に導入されるのを可能にする指標付きロックスプレーを介して分析の間中用いる。
【０１４２】
代謝物Ｍ２２：（３−｛［［４−（１，２−ジヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸
代謝物Ｍ２２は、ＨＰＬＣ上で１４分の保持時間およびｍ／ｚ４８７（親化合物より１８ａｍｕ大きい）でプロトン化分子イオンを有した。代謝物Ｍ２のＣＩＤ生成物イオンスペクトルは、ｍ／ｚ４６９、４５１、４２３、３９５、３３５、３２６、１６５および１４７に目立つフラグメントを示した（図１４）。ｍ／ｚ１６５のイオンは、親薬物で観察されるそれと似ており、フェノキシ酢酸部分が変化していないことを示唆した。プロトン化分子イオンからの１８ａｍｕの２回の連続する喪失であるｍ／ｚ４６９および４５１のイオンは、２分子の水が失われたことを示唆した。実験式情報は、Ｃ２４Ｈ２７Ｎ２Ｏ７Ｓの実験式を示唆する高分解能質量スペクトル（Ｑ−Ｔｏｆ）から得られた。これらのデータおよび支持するＬＣ−ＮＭＲデータに基づき、Ｍ２２は、（３−｛［［４−（１，２−ジヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸と同定された。
【化３６】
2005521668.tif 000041
【０１４３】
代謝物Ｍ２３：（３−｛［［４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸
代謝物Ｍ２３は、ＨＰＬＣ上で１６．９の保持時間およびｍ／ｚ４７１（親化合物より２ａｍｕ大きい）でプロトン化分子イオンを有した。Ｍ２３のＣＩＤ生成物イオンスペクトルは、ｍ／ｚ４５３、３３５、３１０、１６５および１３１に目立つフラグメントイオンを示した（図１５）。ｍ／ｚ１６５のイオンは、親薬物で観察されるそれと似ており、フェノキシ酢酸部分が変化していないことを示唆した。プロトン化分子イオンからの１８ａｍｕの喪失であるｍ／ｚ４５３のイオンは、１分子の水が失われたことを示唆した。ｍ／ｚ３１０および１３１（親化合物で観察されるそれらより１６ａｍｕ小さい）のイオンは、メチル基がフラグメンテーション中に１分子の水により置換され次いで失われたことを示唆した。これらのデータおよび支持するＬＣ−ＮＭＲデータに基づき、Ｍ２３は、（３−｛［［４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸と同定された。
【化３７】
2005521668.tif 000042
【０１４４】
代謝物Ｍ２４：（３−｛［［４−（１，１−ジメチル−２−オキソ−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸
代謝物Ｍ２４は、ＨＰＬＣ上で１８．６分の保持時間およびｍ／ｚ４８３（親化合物より１４ａｍｕ小さい）でプロトン化分子イオンを有した。Ｍ２４のＣＩＤ生成物イオンスペクトルは、ｍ／ｚ４８３、４３７、４０９、３４０、１６５および１６１に目立つフラグメントイオンを示した（図１６）。ｍ／ｚ４２３、３４０および１６１のイオンは、親薬物のスペクトルで観察されるそれらより１４ａｍｕ大きく、２個の水素原子の付随する喪失と共に１原子の酸素の付加を示唆した。この代謝物に関して得られる高分解能質量スペクトルにより、４８３．１５９０の分子量およびＣ２５Ｈ２７Ｎ２Ｏ６Ｓの実験式を得た。これらのデータおよび支持するＬＣ−ＮＭＲデータに基づき、Ｍ２４は、（３−｛［［４−（１，１−ジメチル−２−オキソ−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸と同定された。
【化３８】
2005521668.tif 000043
【０１４５】
代謝物Ｍ２６：（３−｛［（４−イソプロペニル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸
代謝物Ｍ２６は、ＨＰＬＣ上で２２分の保持時間およびｍ／ｚ４５３（親化合物より１６ａｍｕ小さい）でプロトン化分子イオンを有した。ＣＩＤ生成物イオンは、ｍ／ｚ４５３、４０７、３１０、１６５および１３１に目立つフラグメントイオンを示した（図１７）。ｍ／ｚ１６５のイオンは、親化合物で観察されるそれと似ており、フェノキシ酢酸部分が変化していないことを示唆した。４０７、３１０および１３１のイオンは、親化合物のスペクトルで観察されるイオンより１６ａｍｕ小さく、１６質量単位がｔ−ブチル部分から失われたことを示唆した。この代謝物に関して得られる高分解能質量スペクトルにより、４５３．１４８７の分子量およびＣ２４Ｈ２５Ｎ２Ｏ５Ｓの示唆される実験式を得た。この代謝物のＬＣ−ＮＭＲと合せたこれらのデータは、（３−｛［（４−イソプロペニル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸としての末端オレフィン基の形成と一致する。
【化３９】
2005521668.tif 000044
【０１４６】
合成プロトコール
以下の調製例は、実施例１および２の化合物の合成で用いられる中間体の合成に関する。
【０１４７】
調製例１
｛３−［（ピリジン−３−スルホニルアミノ）−メチル］−フェノキシ｝−酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
工程Ａ
（３−ホルミル−フェノキシ）−酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル．  ＤＭＦ（４０ｍＬ）中の３−ヒドロキシベンズアルデヒド（５．００ｇ、４０．９ミリモル）の溶液に、ｔｅｒｔ−ブタノール中の１Ｍのカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（４０．９ｍＬ、４０．９ミリモル）を加えた。反応物を２分間攪拌し、ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチル（６．６１ｍＬ、４０．９ミリモル）を加えた。反応物を１時間攪拌し、２００ｍＬの水でクエンチした。生成物をＥｔＯＡｃ中に抽出し、有機溶液を水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、濾過し、そして減圧下で濃縮した。シリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー（９：１ヘキサン類：ＥｔＯＡｃ）を通じた精製により、標記化合物を透明な油状物質（３．５３ｇ）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．９４（ｓ，１Ｈ），７．４８（ｍ，２Ｈ），７．３２（ｓ，１Ｈ），７．２１（ｍ，１Ｈ），４．５６（ｓ，２Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ）．
【０１４８】
工程Ｂ
［３−（ヒドロキシイミノ−メチル）−フェノキシ］−酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル．  ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中の（３−ホルミル−フェノキシ）−酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．０５ｇ、８．６８ミリモル）の溶液に、ＮＨ２ＯＨ・ＨＣｌ（０．６６ｇ、９．５４ミリモル）およびピリジン（３．５ｍＬ、４３．４ミリモル）を加え、反応物を２時間攪拌した。ＭｅＯＨを減圧下で除去し、残分をＥｔＯＡｃおよび１ＮのＨＣｌで希釈した。層を分離し、水溶液をＥｔＯＡｃで洗浄した。合せた有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、濾過し、そして減圧下で濃縮して標記化合物（１．９９ｇ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．０７（ｓ，１Ｈ），７．２３−７．２８（ｍ，２Ｈ），７．１２（ｍ，１Ｈ），６．９３（ｄ，１Ｈ），４．５１（ｓ，２Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ）．
【０１４９】
工程Ｃ
（３−アミノメチル−フェノキシ）−酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル．  ＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中の［３−（ヒドロキシイミノ−メチル）−フェノキシ］−酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．２５ｇ、５．９６ミリモル）の溶液に、１００ｍＬのエタノール中のラネーニッケル（約１ｇ、水に続いてＥｔＯＨで洗浄した）を加えた。更なるＥｔＯＨ（９０ｍＬ）を、移動のために必要とした。水酸化アンモニウム（１０ｍＬ）を加え、混合物を４５ｐｓｉのＨ２下で４時間振とうした。セライト(Celite)（登録商標）（珪藻土）を通じた濾過を介して触媒を除去し、溶液を透明な油状物質へと濃縮した。シリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー（９６．５／３．５／０．１から９／１／０．１のＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ）を通じた精製により、標記化合物を黄色油状物質として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２３（ｍ，１Ｈ），６．９２（ｍ，２Ｈ），６．７２（ｄ，１Ｈ），４．５０（ｓ，２Ｈ），３．８２（ｓ，２Ｈ），１．９６（ｍ，２Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ）；ＭＳ２３８（Ｍ＋１）．
【０１５０】
工程Ｄ
｛３−［（ピリジン−３−スルホニルアミノ）−メチル］−フェノキシ｝−酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル．  ０℃のＣＨ２Ｃｌ２中の（３−アミノメチル−フェノキシ）−酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２９６ｍｇ、１．２５ミリモル）の溶液に、塩化ピリジン−３−スルホニル塩酸塩（２７９ｍｇ、１．３１ミリモル）に続いてＥｔ３Ｎ（０．３６ｍＬ、２．６ミリモル）を加えた。反応物を室温で２４時間攪拌し、水および飽和水性ＮａＨＣＯ３の１：１溶液でクエンチした。水溶液を、ＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ）で洗浄した。合せた有機溶液を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして濃縮した。中圧クロマトグラフィー（１：１ヘキサン類：ＥｔＯＡｃ）により、標記化合物を白色固形物（３６９．５ｍｇ）として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．０４（ｓ，１Ｈ），８．７５（ｍ，１Ｈ），８．０９（ｄ，１Ｈ），７．４４（ｍ，１Ｈ），７．１５（ｍ，１Ｈ），６．７６（ｍ，３Ｈ），５．２３（ｂｓ，１Ｈ），４．４４（ｓ，２Ｈ），４．１６（ｄ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ）；ＭＳ３７９（Ｍ＋１）．
【０１５１】
調製例２
２−（４−ブロモメチル−フェニル）−２−メチル−プロピオン酸エチルエステル
工程Ａ
２−メチル−２−ｐ−トリル−プロピオン酸エチルエステル．  ＮａＨ（油中の６０重量％、３．９ｇ、９８．２ミリモル）を、ＤＭＦで洗浄し、新たなＤＭＦ（１７５ｍＬ）を加えた。混合物を０℃に冷却し、ＭｅＩ（６．１ｍＬ、９８．２ミリモル）に続いてＤＭＦ（１５ｍＬ）中のｐ−トリル−酢酸エチルエステル（５．０ｇ、２８．０５ミリモル）の溶液を加えた。反応物を、室温で４８時間攪拌した。水を加え、水溶液をＥｔＯＡｃ（３ｘ）で洗浄した。合せた有機溶液を、水（４ｘ）および飽和水性ＮａＨＣＯ３（１ｘ）で洗浄した。有機溶液を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして濃縮した。中圧クロマトグラフィー（９５：５ヘキサン類：ＥｔＯＡｃ）により、２−メチル−２−ｐ−トリル−プロピオン酸エチルエステル（１．２ｇ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２１（ｄ，２Ｈ），７．１１（ｄ，２Ｈ），４．１０（ｑ，２Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），１．５４（ｓ，６Ｈ），１．１７（ｔ，３Ｈ）．
【０１５２】
工程Ｂ
２−（４−ブロモメチル−フェニル）−２−メチル−プロピオン酸エチルエステル．  ＣＣｌ４（１５ｍＬ）中の２−メチル−２−ｐ−トリル−プロピオン酸エチルエステル（２６３ｍｇ、１．２７ミリモル）およびＮ−ブロモスクシンイミド（２７２ｍｇ、１．５３ミリモル）の溶液に、１，１´−アゾビス（シクロヘキサンカルボニトリル）（１５．５ｍｇ、０．０６ミリモル）を加えた。反応物を１時間加熱還流し、水およびＣＨ２Ｃｌ２で希釈した。層を分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ）で洗浄した。合せた有機溶液を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして濃縮した。中圧クロマトグラフィー（９５：５ヘキサン類：ＥｔＯＡｃ）により、２−（４−ブロモメチル−フェニル）−２−メチル−プロピオン酸エチルエステル（３５４ｍｇ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３１（ｍ，４Ｈ），４．４７（ｓ，２Ｈ），４．１０（ｑ，２Ｈ），１．５４（ｓ，６Ｈ），１．１７（ｔ，３Ｈ）．
【０１５３】
調製例３
［２−（４−ブロモメチル−フェニル）−２−メチル−プロポキシ］−ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラン
工程Ａ
２−メチル−２−ｐ−トリル−プロパン−１−オール．  ０℃のＴＨＦ（１０ｍＬ）中の２−メチル−２−ｐ−トリル−プロピオン酸エチルエステル（５１０ｍｇ、２．４７ミリモル）の溶液に、水素化アルミニウムリチウム（Ｅｔ２Ｏ中の１Ｍ、２．６ｍＬ、２．６ミリモル）を加えた。反応物を０．５時間攪拌し、反応物を、水（０．１ｍＬ）、１５％ＮａＯＨ（０．１ｍＬ）および水（０．３ｍＬ）の連続添加によりクエンチした。反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして濃縮して２−メチル−２−ｐ−トリル−プロパン−１−オール（４０５ｍｇ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２７（ｄ，２Ｈ），７．１５（ｄ，２Ｈ），３．５８（ｓ，２Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），１．３１（ｓ，６Ｈ）；ＭＳ１６５（Ｍ＋１）．
【０１５４】
工程Ｂ
ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−（２−メチル−２−ｐ−トリル−プロポキシ）−シラン．  ＤＭＦ（５ｍＬ）中の２−メチル−２−ｐ−トリル−プロパン−１−オール（４０５ｍｇ、２．４６ミリモル）の溶液に、イミダゾール（３３５ｍｇ、４．９２ミリモル）に続いて塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（４６５ｍｇ、３．０８ミリモル）を加えた。反応物を２４時間攪拌し、水を加えた。水溶液をＥｔＯＡｃ（３ｘ）で洗浄した。合せた有機溶液を水（４ｘ）で洗浄した。有機溶液を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして濃縮した。中圧クロマトグラフィー（ヘキサン類）により、ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−（２−メチル−２−ｐ−トリル−プロポキシ）−シラン（６１９ｍｇ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２６（ｄ，２Ｈ），７．１０（ｄ，２Ｈ），３．４９（ｓ，２Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），１．２７（ｓ，６Ｈ），０．８５（ｓ，９Ｈ），−０．０６（ｓ，６Ｈ）．
【０１５５】
工程Ｃ
［２−（４−ブロモメチル−フェニル）−２−メチル−プロポキシ］−ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラン．  標記化合物を、出発物質としてｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−（２−メチル−２−ｐ−トリル−プロポキシ）−シラン（３９８ｍｇ、１．４２ミリモル）を用い調製例２の工程Ｂで説明した手法に従って調製した。反応時間は２４時間であり、化合物は、溶出液としてヘキサン類を用いる中圧クロマトグラフィーを介して精製した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３１（ｍ，４Ｈ），４．４６（ｓ，２Ｈ），３．４８（ｓ，２Ｈ），１．２６（ｓ，６Ｈ），０．８１（ｓ，９Ｈ），−０．１０（ｓ，６Ｈ）．
【０１５６】
実施例１
２−（４−｛［（３−カルボキシメトキシ−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェニル）−２−メチル−プロピオン酸
工程Ａ
２−（４−｛［（３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメトキシ−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェニル）−２−メチル−プロピオン酸エチルエステル．  ＮａＨ（油中の６０重量％、２３ｍｇ、０．５５ミリモル）を、ＤＭＦ（５ｍＬ）で洗浄し、新たなＤＭＦ（５ｍＬ）を加えた。反応物を０℃に冷却し、ＤＭＦ（１ｍＬ）中の｛３−［（ピリジン−３−スルホニルアミノ）−メチル］−フェノキシ｝−酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１８４ｍｇ、０．４８６ミリモル）の溶液を加えた。反応物を１時間攪拌し、ＤＭＦ（１ｍＬ）中の２−（４−ブロモメチル−フェニル）−２−メチル−プロピオン酸エチルエステル（１４５ｍｇ、０．５１ミリモル）を加えた。反応物を室温に温め、１００℃で２時間加熱した。水を加え、水溶液をＥｔＯＡｃ（３ｘ）で洗浄した。合せた有機溶液を、水（５ｘ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（２：１ヘキサン類：ＥｔＯＡｃ）により、２−（４−｛［（３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメトキシ−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェニル）−２−メチル−プロピオン酸エチルエステル（１３８ｍｇ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．０１（ｓ，１Ｈ），８．７６（ｍ，１Ｈ），７．９７（ｍ，１Ｈ），７．４０（ｍ，１Ｈ），７．１９（ｄ，２Ｈ），７．１３（ｍ，１Ｈ），７．０２（ｄ，２Ｈ），６．７６（ｍ，１Ｈ），６．６７（ｍ，２Ｈ），４．４１（ｓ，２Ｈ），４．３３（ｓ，４Ｈ），４．１０（ｑ，２Ｈ），１．５２（ｓ，６Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ），１．１７（ｔ，３Ｈ）．
【０１５７】
工程Ｂ
２−（４−｛［（３−カルボキシメトキシ−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェニル）−２−メチル−プロピオン酸エチルエステル  ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中の２−（４−｛［（３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメトキシ−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェニル）−２−メチル−プロピオン酸エチルエステル（１３８ｍｇ、０．２３７ミリモル）の溶液に、水性ＮａＯＨ（２Ｎ、０．３６ｍＬ、０．７２ミリモル）を加えた。反応物を、１００℃で１時間加熱し、室温に冷ました。反応物を減圧下で濃縮し、水およびＥｔＯＡｃで希釈した。ｐＨを、１ＮのＨＣｌで約５に調整した。水溶液をＥｔＯＡｃ（３ｘ）で洗浄した。合せた有機溶液を、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして濃縮した。塩化ナトリウムを水溶液に加え、溶液をＥｔＯＡｃ（３ｘ）で洗浄した。合せた有機溶液を、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして濃縮した。合せた標記化合物（１０４ｍｇ）を、更に精製することなく次の工程に用いた。ＭＳ５２７（Ｍ＋１）．
【０１５８】
工程Ｃ
２−（４−｛［（３−カルボキシメトキシ−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェニル）−２−メチル−プロピオン酸．  ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の２−（４−｛［（３−カルボキシメトキシ−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェニル）−２−メチル−プロピオン酸エチルエステル（８３ｍｇ、０．１５７ミリモル）の溶液に、水（１ｍＬ）およびＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（６６ｍｇ、１．５８ミリモル）を加えた。反応物を２４時間加熱還流した。更なる水（２ｍＬ）中のＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（６６ｍｇ、１．５８ミリモル）を加え、反応物を３０時間加熱還流した。混合物を減圧下で濃縮し、残分にＴＨＦ（３ｍＬ）および水（１．５ｍＬ）を加えた。反応物を２４時間加熱還流し、室温に冷ました。溶液を水で希釈し、ｐＨを、１ＮのＨＣｌの添加により約５に調整した。塩化ナトリウムを加え、水溶液をＥｔＯＡｃ（３ｘ）で洗浄した。合せた有機溶液を、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして濃縮して標記化合物（７４ｍｇ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．９４（ｓ，１Ｈ），８．７３（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｄ，１Ｈ），７．５５（ｍ，１Ｈ），７．２３（ｄ，２Ｈ），７．１１（ｍ，３Ｈ），６．７８（ｄ，１Ｈ），６．７３（ｄ，１Ｈ），６．６８（ｓ，１Ｈ），４．９０（ｓ，２Ｈ），４．３９（ｓ，２Ｈ），３．３０（ｓ，２Ｈ），１．５０（ｓ，６Ｈ）；ＭＳ４９７（Ｍ−１）．
【０１５９】
実施例２
（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸
工程Ａ
（３−｛［｛４−［２−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−１，１−ジメチル−エチル］−ベンジル｝−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル．  標記化合物を、実施例１の工程Ａのために説明した手法に従い［２−（４−ブロモメチル−フェニル）−２−メチル−プロポキシ］−ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラン（１２１ｍｇ、０．３３９ミリモル）を用いる｛３−［（ピリジン−３−スルホニルアミノ）−メチル］−フェノキシ｝−酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１２２ｍｇ、０．３２２ミリモル）のアルキル化により調製した。反応時間は、１時間であった。粗製生成物（２３８ｍｇ）を精製することなく次の工程に用いた。ＭＳ６５５（Ｍ＋１）．
【０１６０】
工程Ｂ
（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル．  ＴＨＦ（２ｍＬ）中の（３−｛［｛４−［２−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−１，１−ジメチル−エチル］−ベンジル｝−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２１０ｍｇ、０．３２１ミリモル）の溶液に、フッ化テトラブチルアンモニウム（ＴＨＦ中の１Ｍ、０．３４ｍＬ、０．３４ミリモル）を加えた。反応物を１時間加熱還流し、更なるフッ化テトラブチルアンモニウム（ＴＨＦ中の１Ｍ、０．３４ｍＬ、０．３４ミリモル）を加えた。反応物を２４時間加熱還流し、更なるフッ化テトラブチルアンモニウム（ＴＨＦ中の１Ｍ、０．３４ｍＬ、０．３４ミリモル）を加えた。反応物を４５分間加熱し、室温に冷ました。水およびＣＨ２Ｃｌ２を加え、層を分離した。水溶液をＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ）で洗浄した。合せた有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして濃縮した。中圧クロマトグラフィー（１：１ヘキサン類：ＥｔＯＡｃから３：２ＥｔＯＡｃ：ヘキサン類）により、（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１０８ｍｇ）を得た。ＭＳ５４１（Ｍ＋１）．
【０１６１】
工程Ｃ
（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸．  ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）中の（３−｛［［４−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチル−エチル）−ベンジル］−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１０８ｍｇ、０．１９９ミリモル）の溶液を０℃に冷却し、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加えた。反応物を室温で１時間攪拌した。溶液を、ＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ）との共沸により減圧下で濃縮した。残分をＴＨＦに溶解し、１ＮのＨＣｌ（０．４ｍＬ）を加えた。溶液を、ＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ）との共沸により減圧下で濃縮した。溶媒勾配（ＣＨ２Ｃｌ２からＣＨ２Ｃｌ２中の２０％ＭｅＯＨ）を用いる放射状クロマトグラフィーによる精製により、標記化合物（３４ｍｇ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．７９（ｓ，１Ｈ），８．６９（ｓ，１Ｈ），８．１１（ｄ，１Ｈ），７．５２（ｍ，１Ｈ），７．２１（ｄ，２Ｈ），７．０９（ｍ，１Ｈ），７．０２（ｄ，２Ｈ），６．７６（ｄ，１Ｈ），６．７０（ｍ，２Ｈ），４．８６（ｓ，２Ｈ），４．３２（ｍ，４Ｈ），３．４８（ｓ，２Ｈ），１．２２（ｓ，６Ｈ）；ＭＳ４８５．２（Ｍ＋１），４８３．４（Ｍ−１）．
【０１６２】
ＮＭＲスペクトルを、プロトン核について４００ＭＨｚで約２３℃でバリアンユニティ(Varian
Unity)４００分光計（バリアン社(Varian Co.),パロアルト(Palo Alto),カリフォルニア）上で記録した。化学シフトは、百万分率で表す。ピークの形状は、次の通りに表す：ｓ，一重線；ｄ，二重線；ｔ，三重線；ｑ，四重線；ｍ，多重線；ｂｓ，幅広一重線。大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）質量スペクトルを、フィソンズプラットフォーム(Fisons
Platform)ＩＩ分光計（マイクロマス社、ビバリー、マサチューセツ）により得た。塩素または臭素を有するイオンの強度が説明される場合、予想される強度比率が観察され（３５Ｃｌ／３７Ｃｌを有するイオンでは約３：１および７９Ｂｒ／８１Ｂｒを有するイオンでは１：１）、より小さいマスイオンのみの強度を示す。
【０１６３】
中圧クロマトグラフィーは、窒素圧下、バイオテージ(Biotage)精製システム（バイオテージ,ダイアックスコーポレーション(Dyax
Corporation),チャロッテスビル(Charlottesville),バージニア）を用いて実施した。フラッシュクロマトグラフィーは、低窒素圧下でガラスのカラム内のベーカーシリカゲル(Baker
Silica Gel)(４０μｍ）（Ｊ．Ｔ．ベーカー、フィリップスバーグ(Phillipsburg),Ｎ．Ｊ．）またはシリカゲル(Silica Gel)６０（ＥＭサイエンシーズ(Sciences),ギブスタウン(Gibbstown),Ｎ．Ｊ．）のいずれかを用いて実施した。放射状クロマトグラフィーは、クロマトトロン(Chromatotron)(モデル７９２４Ｔ，ハリソンリサーチ(Harrison
Research), パロアルト,カリフォルニア）を用いて実施した。反応溶媒として用いたジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、およびジクロロメタン（ＣＨ２Ｃｌ２）は、アルドリッヒケミカルカンパニー(Aldrich
Chemical Company)(ミルウォーキー、ウィスコンシン）により供給される無水物等級であった。用語゛濃縮した゛は、ロータリーエバポレーターによる水流ポンプ圧での溶媒の除去を指す。用語゛ＥｔＯＡｃ゛は、酢酸エチルを意味する。用語゛ジクロロメタン゛および゛塩化メチレン゛は、同義であり、この説明ならびに実施例および調製例を通じて交換可能に用いられる。
【０１６４】
ラットＥＰ２受容体結合測定
プロスタグランジンＥ２受容体への結合についての測定
全鎖長のＥＰ２受容体を、ネモト等,Prostaglandins
and other Lipid Mediators, 1997, 54, 713-725に開示されている通りに作製する。この全鎖長の受容体を用いてＥＰ２受容体を発現する２９３Ｓ細胞を調製する。
【０１６５】
ラットのＥＰ２プロスタグランジンＥ２受容体を発現する２９３Ｓ細胞を、当業者等に公知の方法により得る。代表的には、公開された全鎖長の受容体の５´および３´末端に対応するＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応法）プライマーを、上記の開示された周知の方法により作製し、源としてラットの腎臓由来の全ＲＮＡを用いＲＴ−ＰＣＲ反応に用いる。ＰＣＲ生成物は、ｐＣＲ２．１（インビトロゲン(Invitrogen),カールスバッド(Carlsbad),ＣＡ）中にＴＡオーバーハング(overhang)法によりクローンされ、クローンされた受容体の同一性は、ＤＮＡ配列決定により確認される。発現には、確認されたｃＤＮＡを、ピューロマイシン耐性の選択可能マーカーを哺乳類の発現ベクターｐＣＩ中にサブクローンすることにより得られるベクターである哺乳類の発現ベクターＰＵＲｐＣＩ（プロメガ(Promega),マジソン(Madison),ＷＩ）中にサブクローンする。
【０１６６】
２９３Ｓ細胞を、脂質仲介トランスフェクションによりＰＵＲｐＣｉ中のクローンされた受容体でトランスフェクションする。受容体を発現する安定な細胞系を、トランスフェクションされた細胞のピューロマイシンによる選択に従い確立する。
【０１６７】
最大数の受容体を発現するクローン細胞系を、競合物質としての非標識ＰＧＥ２を用い全細胞３Ｈ−ＰＧＥ２結合測定に従って選択する。
【０１６８】
膜調製：  全ての操作は、４℃で実施する。プロスタグランジンＥ２２型（ＥＰ２）受容体を発現するトランスフェクションされた細胞を回収し、バッファーＡ［５０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのペファブロク(Pefabloc)ペプチド（ベーリンガーマンハイム社(Boehringer Mannheim Corp.),インジアナポリス，ＩＮ）、１０ｕＭのホスホラミドンペプチド（シグマ(Sigma),セントルイス,ＭＯ）、１ｕＭのペプスタチンＡペプチド（シグマ,セントルイス,ＭＯ）、１０ｕＭのエラスタチナールペプチド（シグマ,セントルイス,ＭＯ）、１００ｕＭのアンチパインペプチド（シグマ,セントルイス,ＭＯ）］中にｍｌ当たり２百万個の細胞になるよう懸濁する。ブランソン  ソニファイヤー(Branson
Sonifier)（ブランソン  ウルトラソニックス  コーポレーション(Branson Ultrasonics Corporaton),ダンブリ(Danbury),ＣＴ）を用いる２回の１５秒バーストでの音波処理により、細胞を溶解する。溶解しなかった細胞および破片を、１００ｘｇで１０分間の遠心分離により除去する。膜を、次いで、４５，０００ｘｇで３０分間の遠心分離により回収する。ペレット状になった膜を、ｍｌ当たり３−１０ｍｇ蛋白質になるように再懸濁し、蛋白質濃度は、ブラッドフォード(Bradford)の方法［Bradford,
M., Anal. Biochem., 72, 248 (1976)]で測定する。再懸濁した膜を、次いで、用いるまで−８０℃で冷凍保存する。
【０１６９】
結合測定：  上記のように調製した冷凍膜を解凍し、上記のバッファーＡにｍｌ当たり１ｍｇ蛋白質になるよう希釈する。１容量の膜調製物を、０．０５容量の試験化合物またはバッファーおよび１容量のバッファーＡ中の３ｎＭの３Ｈ−プロスタグランジンＥ２（アマーシャム(Amersham),アーリントンハイツ(Heights),ＩＬ）と合せる。混合物（２０５μＬの合計容量）を、２５℃で１時間インキュベートする。膜を、次いで、トムテック回収器（トムテック(Tomtec),オレンジ(Orange),ＣＴ）を用いＧＦ／Ｃ型ガラス繊維フィルター（ワラク,ガイザースバーグ,ＭＤ)を通す濾過により回収する。結合した３Ｈ−プロスタグランジンＥ２を有する膜を、フィルターによりトラップすると同時に、バッファーおよび結合しなかった３Ｈ−プロスタグランジンＥ２を、廃物入れへとフィルターを通過させる。各試料を、次いで、３ｍｌの［５０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＤＴＡ］で３回洗浄する。次いで、フェイルターを、電子レンジ内で加熱することにより乾燥する。膜に結合した３Ｈ−プロスタグランジンの量を測定するために、乾燥したフィルターを、シンチレーション液が入っているプラスチックバッグに入れ、ＬＫＢ１２０５ベータプレート読み取り器（（ワラク,ガイザースバーグ,ＭＤ)内でカウントする。ＩＣ５０ｓを、特異的に結合した３Ｈ−プロスタグランジンＥ２の５０％を置換するのに必要とされる試験化合物の濃度から決定する。
実施例１ラットＥＰ２結合ＩＣ５０＝７５０ｎＭ
実施例２ラットＥＰ２結合ＩＣ５０＝１７０ｎＭ
【０１７０】
以下の略号を本明細書で用いる：
Ｉ．Ｖ．    静脈経由
ＨＰＬＣ    高速液体クロマトグラフィー
ＣＰＭ      分当たりのカウント
ｍｉｎ      分
ＭＳ        質量分析法
ＣＩＤ      衝突誘起解離
ＡＭＵ      原子質量単位
ＦＢＳ      胎児ウシ血清
ＬＣ        液体クロマトグラフィー
ＤＭＦ      ジメチルホルムアミド
ＥｔＯＡｃ  酢酸エチル
ＭｅＯＨ    メタノール
ＮＭＲ      核磁気共鳴
Ｅｔ３Ｎ    トリエチルアミン
ＴＨＦ      テトラヒドロフラン
Ｈ          時間
【図面の簡単な説明】
【０１７１】
【図１】ラット、イヌ、サルおよびヒト肝臓ミクロソームにおける（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の代謝物の代表的ＨＰＬＣ放射性クロマトグラム。
【図２】ラット、イヌ、サルおよびヒト肝細胞における（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸の代謝物の代表的ＨＰＬＣ放射性クロマトグラム。
【図３】（３−｛［４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−（ピリジン−３−スルホニル）−アミノ］−メチル｝−フェノキシ）−酢酸（ｍ／ｚ４６９）のＣＩＤ生成物イオンスペクトル。
【図４】代謝物Ｍ２１（ｍ／ｚ３２１）のＣＩＤ生成物イオンスペクトル。
【図５】代謝物Ｍ１１（ｍ／ｚ３３５）のＣＩＤ生成物イオンスペクトル。
【図６】代謝物Ｍ２（ｍ／ｚ５０１）のＣＩＤ生成物イオンスペクトル。
【図７】代謝物Ｍ３（ｍ／ｚ４９９）のＣＩＤ生成物イオンスペクトル。
【図８】代謝物Ｍ４（ｍ／ｚ４８５）のＣＩＤ生成物イオンスペクトル。
【図９】代謝物Ｍ１９（ｍ／ｚ３２１）のＣＩＤ生成物イオンスペクトル。
【図１０】代謝物Ｍ６（ｍ／ｚ５６５）のＣＩＤ生成物イオンスペクトル。
【図１１】代謝物Ｍ５（ｍ／ｚ４８５）のＣＩＤ生成物イオンスペクトル。
【図１２】代謝物Ｍ１２（ｍ／ｚ４８５）のＣＩＤ生成物イオンスペクトル。
【図１３】代謝物Ｍ２０（ｍ／ｚ３０５）のＣＩＤ生成物イオンスペクトル。
【図１４】代謝物Ｍ２２（ｍ／ｚ４８７）のＣＩＤ生成物イオンスペクトルおよび１Ｈ  ＮＭＲ。
【図１５】代謝物Ｍ２３（ｍ／ｚ４７１）のＣＩＤ生成物イオンスペクトルおよび１Ｈ  ＮＭＲ。
【図１６】代謝物Ｍ２４（ｍ／ｚ４８３）のＣＩＤ生成物イオンスペクトルおよび１Ｈ  ＮＭＲ。
【図１７】代謝物Ｍ２６（ｍ／ｚ４５３）のＣＩＤ生成物イオンスペクトルおよび１Ｈ  ＮＭＲ。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２Ａ】
2005521668.tif 000049
【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
2005521668.tif 000051
【図２Ｄ】
2005521668.tif 000052
【図３】
2005521668.tif 000053
【図４】
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【図５】
2005521668.tif 000055
【図６】
2005521668.tif 000056
【図７】
2005521668.tif 000057
【図８】
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【図９】
2005521668.tif 000059
【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
2005521668.tif 000062
【図１３】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【国際調査報告】
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2005521668.tif 000073
2005521668.tif 000074
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