(57)【要約】光学異性体を含む溶液を処理して、（２Ｒ，３Ｓ）標的異性体（式中、Ｐ1がＨまたはヒドロキシル保護基であり、Ｒ1がＨ、アルキル基、オレフィン性基または芳香族基であり、Ｒ2がＨまたはＲ3ＣＯ（式中、Ｒ3はアルキル基、オレフィン性基、芳香族基、Ｏ−アルキル基、Ｏ−オレフィン性基またはＯ−芳香族基である）であり、但し、Ｒ3がＰｈであり且つＰ1がＨであるときには、Ｒ1はＨではない）を得る方法を提供する。この方法は、溶液を標的の異性体およびその光学異性体の一方に対しより大きな親和性を有するＳ，Ｓ  Ｗｈｅｌｋ−Ｏのようなクロマトグラフィー固定相を通過させることを包含する。次に、標的の異性体を含む溶液の部分を回収する。溶液は、（±）−Ｎ−ＣＢＺ−３−フェニルイソセリンエチルエステルのラセミ体混合物であることがある。
2005507859.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数の光学異性体を含む溶液を処理することによって、式
【化１】
2005507859.tif 000045
（上記式中、Ｐ1はＨおよびヒドロキシル保護基から選択され、Ｒ1はＨ、アルキル基、オレフィン性基、および芳香族基から選択され、Ｒ2はＨおよびＲ3ＣＯ（式中、Ｒ3はアルキル基、オレフィン性基、芳香族基、Ｏ−アルキル基、Ｏ−オレフィン性基およびＯ−芳香族基から選択される）から選択され、但し、Ｒ3がＰｈであり、Ｐ1がＨであるときには、Ｒ1はＨではない）を有する（２Ｒ，３Ｓ）標的異性体を得る方法であって、
（ａ）溶液を標的異性体およびその光学異性体の一方に対してより大きな親和性を有するクロマトグラフィー固定相を通過させる工程であって、標的異性体がその光学異性体とは異なる速度で上記固定相を通過するようにした工程、及び
（ｂ）標的異性体を含む溶液の部分を回収する工程、
を含んでなる、方法。
【請求項２】
上記固定相が第一の開口と第二の開口を有するクロマトグラフィーカラムに装填され、溶液を上記固定相を通過させる工程が溶液が上記の第一の開口に注入することによって行われ、標的異性体を含む溶液の上記部分を上記の第二の開口から回収する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
溶液が標的異性体およびその上記光学異性体を互いに第一の比で含み、溶液の上記部分が上記の第一の比より大きい互いの第二の比で標的異性体およびその上記光学異性体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
溶液が標的異性体およびその上記光学異性体のラセミ体溶液である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
溶液が標的異性体のジアステレオ異性体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
上記固定相がシリカに共有結合したクロマトグラフィー媒質を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
上記固定相がＲｅｇｉｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．製品番号７８６１０１、７８６１０２、７８６１０３、７８６１０４、７８６６１５、７８６６２５、７８６６３５、７８６６４５，７８６４１５、７８６４２５、７８６４３５、および７８６４４５から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
上記固定相が、テトラヒドロフェナントレンπ系、ジニトロベンズアミドπ系、およびアミドプロトン水素結合供与体から選択される結合部位を包含するクロマトグラフィー媒質を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
上記固定相がＳ，Ｓ  Ｗｈｅｌｋ−Ｏを含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
上記固定相が１０μクロマジルシリカに結合したＳ，Ｓ  Ｗｈｅｌｋ−Ｏを含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
溶液が、エタノール、イソプロパノールおよびヘキサンから選択された溶媒を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
溶液が２０％イソプロパノール／８０％ヘキサンを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
溶液が１ｍｌイソプロパノール当たり上記光学異性体約０．０２５ｇを含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
Ｒ1がアルキル基である、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
Ｒ2がＲ3ＣＯであり、Ｒ3がＰｈＣＨ2Ｏである、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
Ｐ1がＨである、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
標的異性体が、式
【化２】
2005507859.tif 000046
の（２Ｒ，３Ｓ）エチルエステルである、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
上記固定相がＳ，Ｓ  Ｗｈｅｌｋ−Ｏを含んでなる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
上記Ｓ，Ｓ  Ｗｈｅｌｋ−Ｏがシリカに結合している、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
標的異性体をその光学異性体から分離する方法であって、標的異性体が、式
【化３】
2005507859.tif 000047
（上記式中、Ｐ1はＨおよびヒドロキシル保護基から選択され、Ｒ1はＨ、アルキル基、オレフィン性基、および芳香族基から選択され、Ｒ2はＨおよびＲ3ＣＯ（式中、Ｒ3はアルキル基、オレフィン性基，芳香族基、Ｏ−アルキル基、Ｏ−オレフィン性基およびＯ−芳香族基から選択される）から選択され、但し、Ｒ3がＰｈであり、Ｐ1がＨであるときには、Ｒ1はＨではない）を有し、
（ａ）溶液を、標的異性体およびその光学異性体の一方により大きな親和性を有するクロマトグラフィー固定相中を上流位置から下流位置へ通過させる工程、及び
（ｂ）溶液を、複数の段階であって、各段階がそれぞれの時間間隔にわたって回収されてそれぞれの回収溶液を形成する溶液の部分に相関している段階で回収する工程であって、標的異性体およびその光学異性体が第一の回収溶液中で互いに第一の比であり、第二の回収溶液中で互いに第二の比であり、上記の第一の比が上記の第二の比と異なっている上記工程、
を含んでなる、方法。
【請求項２１】
式
【化４】
2005507859.tif 000048
の（±）−Ｎ−ＣＢＺ−３−フェニルイソセリンエチルエステルのラセミ体混合物を処理することによって、（２Ｒ，３Ｓ）異性体をその鏡像異性体から分離する方法であって、上記ラセミ体混合物をＳ，Ｓ  Ｗｈｅｌｋ−Ｏを含んでなる固定相とエタノール、イソプロパノールおよびヘキサンから選択される溶媒を含む移動相を用いるＨＰＬＣによるクロマトグラフィー処理することを含んでなる、方法。
【請求項２２】
上記固定相がシリカに共有結合したＳ，Ｓ  Ｗｈｅｌｋ−Ｏを含んでなる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
上記移動相が２０％イソプロパノール／８０％ヘキサンである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
上記移動相が溶媒１ｍｌ当たり（±）−Ｎ−ＣＢＺ−３−フェニルイソセリンエチルエステル約０．０２５ｇを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
（２Ｒ，３Ｓ）異性体のＨＰＬＣピークがその鏡像異性体のＨＰＬＣピークからベースラインまで分割されている、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
一般式
【化５】
2005507859.tif 000049
（上記式中、Ｐ1はＨおよびヒドロキシル保護基から選択され、Ｒ1はＨ、アルキル基、オレフィン性基、および芳香族基から選択され、Ｒ2はＨおよびＲ3ＣＯ（式中、Ｒ3はアルキル基、オレフィン性基，芳香族基、Ｏ−アルキル基、Ｏ−オレフィン性基およびＯ−芳香族基から選択される）から選択され、但し、Ｒ3がＰｈであり、Ｐ1がＨであるときには、Ｒ1はＨではない）の光学異性体を含む混合物を処理することによって光学異性体を互いに分離する方法であって、光学異性体のそれぞれに対して異なる親和性を有する固定相を用いるＨＰＬＣによって混合物をクロマトグラフィー処理することを含んでなる、方法。
【請求項２７】
混合物が、式
【化６】
2005507859.tif 000050
の鏡像異性体のラセミ体混合物である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
上記固定相がＳ，Ｓ  Ｗｈｅｌｋ−Ｏを含んでなる、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
エタノール、イソプロパノールおよびヘキサンから選択される溶媒を含む移動相を用いることを包含する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
Ｒ1がアルキル基である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
Ｒ2がＲ3ＣＯであり、Ｒ3がＰｈＣＨ2Ｏである、請求項２６に記載の方法。
【請求項３２】
Ｐ1がＨである、請求項２６に記載の方法。
【請求項３３】
式
【化７】
2005507859.tif 000051
（上記式中、Ｒ1がアルキル基であり、Ｒ3がアルキル基、オレフィン性基、芳香族基、Ｏ−アルキル基、Ｏ−オレフィン性基およびＯ−芳香族基から選択される）の（２Ｒ，３Ｓ）異性体を含み且つ式
【化８】
2005507859.tif 000052
を有するその（２Ｓ，３Ｒ）鏡像異性体を含む混合物を処理する方法であって、該混合物を（２Ｒ，３Ｓ）異性体とその（２Ｓ，３Ｒ）鏡像異性体の一方に対してより大きな親和性を有する固定相を用いて混合物をクロマトグラフィー処理することを含んでなる、方法。
【請求項３４】
Ｒ1がエチル基である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
Ｒ3がＰｈＣＨ2Ｏである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
Ｒ1がエチル基であり、Ｒ3がＰｈＣＨ2Ｏである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
上記固定相がＳ，Ｓ  Ｗｈｅｌｋ−Ｏを含んでなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項３８】
Ｒ1がエチル基であり、Ｒ3がＰｈＣＨ2Ｏであり、上記固定相がＳ，Ｓ  Ｗｈｅｌｋ−Ｏを含んでなる、請求項３３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的にはタキサンの半合成に有用な化合物の調製に関する。更に詳細には、本発明は、パクリタキセルおよび他のタキサンを製造するためのＣ−１３側鎖前駆体として用いることができる標的キラル化合物を提供することを目的とする光学異性体の混合物のキラル分割に関する。本発明は、特にそのラセミ体混合物中の鏡像異性体から標的キラル化合物を分離するためのクロマトグラフィー法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
様々なタキサン化合物は、抗腫瘍活性を示すことが知られている。この活性の結果、タキサンは、科学および医療社会で注目されることが多くなってきている。これらの中で第一のものは、文献では「タキソール」とも呼ばれる「パクリタキセル」として知られている化合物である。パクリタキセルは、幾つかの異なる種類の腫瘍の化学療法治療について承認されており、臨床試験は、パクリタキセルが広範囲の強力な抗白血病および腫瘍増殖阻止活性に有望であることを示している。
【０００３】
パクリタキセルは、幾つかの種のイチイ（Ｔａｘａｃｅａｅ科、Ｔｅｘｕｓ属）に見られる天然に存在するタキサンジテルペノイドである。不運なことには、イチイ中のこの化合物の濃度は極めて低く、この種の常緑樹は生長も遅いのである。イチイの木の樹皮に典型的には最高濃度のパクリタキセルが見られるが、パクリタキセル１kgを生産するには約１６，０００ポンドの樹皮が必要である。従って、単離によるパクリタキセルの入手可能性についての長期予測は、はかばかしいものではない。
【０００４】
イチイの木におけるパクリタキセルの存在量は極めて低濃度であるが、バッカチンＩＩＩ、セファロマニン、１０−デアセチルバッカチンＩＩＩなどのようなイチイの樹皮および葉から抽出することもできる様々な他のタキサン化合物がある。これらの他のタキサン化合物の幾つかは、高収量で一層容易に抽出される。実際に、比較的高濃度の１０−デアセチルバッカチンＩＩＩを、再生可能な供給源としてのイチイの葉から抽出することができる。
【０００５】
従って、前駆体化合物から、式
【化１】
2005507859.tif 000003
を有するパクリタキセル、並びに式
【化２】
2005507859.tif 000004
を有するドセタキセルのような他の関連タキサンの半合成が注目されるようになってきた。パクリタキセルおよび他のタキサンの合成に成功するためには、キラルの非ラセミ体側鎖酸の好都合な入手、並びに使用可能なバッカチンＩＩＩ主鎖の豊富な天然資源が求められる。バッカチンＩＩＩまたは１０−デアセチルバッカチンＩＩＩまたはそれらの誘導体であって、それぞれ式
【化３】
2005507859.tif 000005
を有するものの１３−ヒドロキシルにおけるこのような側鎖酸をエステル化する様々な方法が開発されてきた。次に、カップリングしたエステル生成物を、パクリタキセル、ドセタキセルまたは他のタキサンに転換することができる。例えば、Ｄｅｎｉｓらに対する米国特許第４，９２４，０１１号明細書には、一般式
【化４】
2005507859.tif 000006
（式中、Ｒ2はヒドロキシ保護基である）の（２Ｒ，３Ｓ）側鎖酸を用いるパクリタキセルの製造方法が記載されている。また、Ｃｏｌｉｎらに対する米国特許第４，９２４，０１２号明細書には、式
【化５】
2005507859.tif 000007
（式中、Ｒ1はヒドロキシ保護基である）の酸を用いるドセタキセルのようなタキサンの製造方法が記載されている。ＤｅｎｉｓらおよびＣｏｌｉｎらによって記載された合成では、側鎖酸をバッカチンＩＩＩまたは１０−デアセチルバッカチンＩＩＩ誘導体でエステル化した後、カップリングした生成物を、上記式のＲ2またはＲ1などの任意の保護基をそれぞれ水素に置換することによるなどの脱保護を行う。ＤｅｎｉｓらのＣ6Ｈ5ＣＯＮＨ−基およびＣｏｌｉｎらの（ＣＨ3）3ＣＯＣＯＮＨ−基はそれぞれ生成するパクリタキセルとドセタキセル生成物にとっての最終的に所望な基であって、上記文献に開示された化学合成では窒素位置におけるこれ以上の化学的変換は行われないようになっている点に留意すべきである。
【０００６】
Ｓｗｉｎｄｅｌｌらに対する米国特許第５，７７０，７４５号明細書には、パクリタキセルの半合成におけるもう一つの初期の合成経路であって、タキサン主鎖および側鎖酸の様々な位置を保護するための保護基の使用をパクリタキセルを形成するための化学的方法を改良し且つ特にエステル化工程を改良する手段として検討したものが記載されている。具体的には、一般式
【化６】
2005507859.tif 000008
の側鎖酸であって、Ｒ1がアルキル、オレフィン性または芳香族基（例えば、ＰｈＣＨ2）であることができ、Ｒ3が水素またはＰｈであることができ、Ｐ1がヒドロキシル保護基であることができるものが記載されている。
【０００７】
更に最近では、式
【化７】
2005507859.tif 000009
（式中、Ｐ1は水素化可能な保護基、例えばベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）またはベンジルである）の３−Ｎ−ＣＢＺ−２−Ｏ−で保護された（２Ｒ，３Ｓ）−３−フェニルイソセリン酸の使用が注目されてきている。このような側鎖を用いるパクリタキセルまたはドセタキセルのようなタキサンを製造するための合成経路は、例えば、米国特許第５，６７５，０２５号、第５，６８４，１７５号、第５，６８８，９７７号、第５，７５０，７３７号、第５，９３９，５６６号、第５，９４８，９１９号、第５，９７３，１７０号、第６，０４８，９９０号、第６，０６６，７４９号、第６，０７２，０６０号、第６，１０７，４９７号、第６，１３３，４６２号、第６，１３６，９９９号、および第６，１４３，９０２号明細書に記載されており、上記明細書の開示内容は、その開示の一部として本明細書に引用されている。
【０００８】
例えば、Ｓｉｓｔｉらに対する米国特許第５，６８４，１７５号明細書に教示されているように、３−Ｎ−ＣＢＺ−２−Ｏ−で保護された（２Ｒ，３Ｓ）−３−フェニルイソセリンは、式
【化８】
2005507859.tif 000010
の（２Ｒ，３Ｓ）−３−フェニルイソセリンエチルエステル出発化合物であって、３’−Ｎおよび２’−Ｏ位置は保護され、エステル化工程で使用するために相当する酸にケン化することができるものから製造することができる。
【０００９】
３−フェニルイソセリンアルキルエステルの形成は当該技術分野で知られており、例えば、Ｃｏｌｉｎらに対する米国特許第４，９２４，０１２号明細書に記載されている。特に、Ｃｏｌｉｎらは、式
【化９】
2005507859.tif 000011
（式中、Ｒ4は１−４個の炭素原子を有するアルキル、好ましくはエチルである）のエポキシドであって、Ｆ．Ｗ．Ｂａｃｈｅｌｏｒ及びＲ．Ｋ．Ｂａｎｓａｌ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，３４，３６００−０４（１９６９）に記載の条件下で得ることができるものを記載している。このエポキシドを、加熱状態のエタノール中のアジ化ナトリウムによってエポキシドを開環する既知の方法によって一般式
【化１０】
2005507859.tif 000012
のアジドに転換する。次いで、このアジドを、式
【化１１】
2005507859.tif 000013
の３−フェニルイソセリンアルキルエステルに還元する。
【００１０】
しかしながら、この化合物は２個のキラル中心（それぞれ、Ｃ−２およびＣ−３）を有しているので、この化合物を製造する方法では、それぞれ、例えば式
【化１２】
2005507859.tif 000014
のシス（２Ｒ，３Ｓ）および（２Ｓ，３Ｒ）鏡像異性体、並びにそれぞれ式
【化１３】
2005507859.tif 000015
のそれらのトランス（２Ｒ，３Ｒ）および（２Ｓ，３Ｓ）ジアステレオ異性体を生成することがある。上記の光学異性体は、上記式ではＲ4についてエチル基を用いて示されているが、Ｃｏｌｉｎらに記載されているような他のアルキルエステルを形成することができることを理解すべきである。また、これらの光学異性体の様々な他の誘導体または類似体は、当業者であれば理解されるように、上記特許明細書の教示を考慮すれば、パクリタキセル側鎖を製造する方法で形成することができる。
【００１１】
バッカチンＩＩＩおよびその誘導体を分割剤として用いて所望な（２Ｒ，３Ｓ）配置を有する生成物を選択的に回収することができるが、このような方法は非常に経費がかかり、所望な生成物の収率を実質的に減少させる。従って、タキサンを合成する化学的方法における１以上の点において所望な（２Ｒ，３Ｓ）異性体またはその誘導体を回収するための効率的で経済的な方法が求められている。
【００１２】
パクリタキセルのキラル（２Ｒ，３Ｓ）Ｃ−１３側鎖を調製するための一つの手続きは、ＳｒｉｖａｓｔａｖａとＭｃＣｈｅｓｎｅｙ，「タキソールＣ−１３側鎖；Ｎ−ベンゾイル−（２Ｒ，３Ｓ）−３−フェニルイソセリンの実際的で費用のかからない合成」，Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．６，ｐ．１４７（１９９５）に記載されている。この手続きは、Ｄ−（＋）−エフェドリンを分割剤として用いるシス−３−フェニルグリシド酸の古典的分割を含む。特に、式
【化１４】
2005507859.tif 000016
の光学的に純粋なシス−（２Ｒ，３Ｒ）−３−フェニルグリシド酸−（＋）−エフェドリン塩は、アセトンによる分別結晶によってジアステレオ異性体塩の混合物から回収される。次に、光学的に純粋な中間体を、３−フェニルイソセリン誘導体に転換する。パクリタキセル合成に有用な側鎖誘導体の他の古典的分割は、Ｒａｍａｓｗａｍｙらに対する米国特許第６，０２５，５１６号明細書およびＬｉに対する米国特許第５，８１７，８６７号明細書に記載されている。
【００１３】
パクリタキセルの部分合成に有用なキラルなシス−３−フェニルグリシデートから誘導した中間体を調製するための幾つかの他の手続きは、文献に記載されている。幾つかの例としては、Ｓｈａｒｐｌｅｓｓ非対称ジヒドロキシル化（Ｄｅｎｉｓら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５５，ｐ．１９５７，１９９０；Ｋｏｓｋｉｎｅｎら，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，ｐ．２１，１９９４；およびＢｏｎｉｎｉら，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，ｐ．２７６７，１９９４）、およびＪａｃｏｂｓｅｎの非対称エポキシド化を用いるもの（Ｄｅｎｇら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５７，ｐ．４３２３，１９９２）が挙げられる。他の文献では、化学酵素分割法（Ｃｈｅｎら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５８，ｐ．１２８７；Ｃｈｅｎらに対する米国特許第６，０２０，１７４号明細書；Ｈｏｎｉｇら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，４６，ｐ．３８４１，１９９０；Ｙａｎｇらに対する米国特許第５，７７３，６２９号明細書、およびＰａｔｅｌらに対する米国特許第５，８１１，２９２号、第５，５６７，６１４号、および第５，６８６，２９８号明細書）が報告されている。
【００１４】
しかしながら、タキサン半合成に有用なキラル化合物の効率的且つ経済的な調製の新規且つ改良された方法が求められ続けている。特に、バッカチンＩＩＩ主鎖によるＣ−１３側鎖エステル化の手続きとして有用なキラル化合物の簡単な製造方法が求められ続けている。本発明は、これらの要求を満たすことに関する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
発明の概要
本発明の目的は、タキサン半合成に有用なキラル化合物を調製するための新規且つ有用な方法を提供することである。
【００１６】
もう一つの目的は、３−フェニルイソセリンの光学的に純粋な誘導体の調製方法を提供することである。
【００１７】
更にもう一つの目的は、パクリタキセルおよびドセタキセルのようなタキサンの合成に有用な光学異性体の簡単且つ効率的なキラルクロマトグラフィー分離を行うことである。
【００１８】
更にもう一つの目的は、３−フェニルイソセリン誘導体光学異性体のクロマトグラフィー分離に有用なクロマトグラフィー媒質を提供することである。
【００１９】
更にもう一つの目的は、適当なバッカチンＩＩＩ誘導体とカップリングして様々な合成転換の後にパクリタキセルを提供するのに適したＮ−ＣＢＺ−（２Ｒ，３Ｓ）−３−フェニルイソセリン側鎖誘導体を合成することである。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本発明によれば、ラセミ体溶液のような複数の光学異性体を含む溶液を処理することによって、式
【化１５】
2005507859.tif 000017
（上記式中、Ｐ1はＨおよびヒドロキシル保護基から選択され、Ｒ1はＨ、アルキル基、オレフィン性基、および芳香族基から選択され、Ｒ2はＨおよびＲ3ＣＯ（式中、Ｒ3はアルキル基、オレフィン性基、芳香族基、Ｏ−アルキル基、Ｏ−オレフィン性基およびＯ−芳香族基から選択される）から選択される）を有する（２Ｒ，３Ｓ）標的異性体を得る方法が提供される。この方法は、溶液を標的異性体又はその光学異性体のいずれかに対してより大きな親和性を有するクロマトグラフィー固定相を通過させ、標的異性体がその光学異性体とは異なる速度で上記固定相を通過するようにし、標的異性体を含む溶液の部分を回収する工程を含んでなる。
【００２１】
固定相は、第一の開口と第二の開口を有するクロマトグラフィーカラムに装填し、溶液を上記固定相を通過させる工程を溶液を第一の開口に注入することによって行う。標的異性体を含む溶液の部分を、第二の開口から回収する。好ましくは、溶液は標的異性体およびその光学異性体を互いに第一の比で含み、溶液の回収された部分は標的異性体およびその光学異性体を互いに第一の比より大きな第二の比で含む。
【００２２】
固定相は、テトラヒドロフェナントレンπ系、ジニトロベンズアミドπ系、およびアミド−プロトン水素結合供与体を含むことができ、好ましくはシリカに共有結合することができるＳ，Ｓ  Ｗｈｅｌｋ−Ｏを含んでなる。溶液は、エタノール、イソプロパノール、ヘキサンなど、好ましくは２０％イソプロパノール／８０％ヘキサンを含むことがあり、１ｍｌイソプロパノール当たり光学異性体約０．０２５ｇを含むことができる。
【００２３】
Ｒ1がアルキル基であり、Ｒ2がＲ3ＣＯ（式中、Ｒ3はＰｈＣＨ2Ｏである）であり、Ｐ1が水素であるものなどの様々な光学異性体、特に式
【化１６】
2005507859.tif 000018
の（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−ＣＢＺ−３−フェニルイソセリンエチルエステルが考えられる。
【００２４】
本発明は、特に（±）−Ｎ−ＣＢＺ−３−フェニルイソセリンエチルエステルのラセミ体混合物を処理して、（２Ｒ，３Ｓ）異性体をその鏡像異性体から分離する方法であって、Ｓ，Ｓ  Ｗｈｅｌｋ−Ｏを含んでなる固定相と、エタノール、イソプロパノールまたはヘキサンなどの移動相を用いるＨＰＬＣによってラセミ体混合物をクロマトグラフィー処理することを含んでなる方法を行おうとするものである。（２Ｒ，３Ｓ）異性体についてのＨＰＬＣピークは、好ましくはその鏡像異性体についてのＨＰＬＣピークからベースラインに対して分割される。
【００２５】
更に、本発明は、広義には一般式
【化１７】
2005507859.tif 000019
（式中、Ｐ1はＨまたはヒドロキシル保護基であり、Ｒ1はＨ、アルキル基、オレフィン性基および芳香族基から選択され、Ｒ2はＨおよびＲ3ＣＯ（式中、Ｒ3はアルキル基、オレフィン性基、芳香族基、Ｏ−アルキル基、Ｏ−オレフィン性基およびＯ−芳香族基から選択される）から選択される）の光学異性体を処理することによって、光学異性体を互いに分離する方法であって、光学異性体のそれぞれに対して異なる親和性を有する固定相を用いるＨＰＬＣによってラセミ体混合物をクロマトグラフィー処理することを含んでなる、方法を包含し得る。
【００２６】
本発明のこれらおよび他の目的は、添付図面と一緒に本発明の典型的な態様の下記の詳細な説明を考察することにより一層容易に認識し、理解することができる。
【００２７】
典型的な態様の詳細な説明
式
【化１８】
2005507859.tif 000020
のＮ−ベンゾイル−（２Ｒ，３Ｓ）−３−フェニルイソセリン側鎖は、パクリタキセルの抗腫瘍活性にとって極めて重要である。この側鎖は、パクリタキセルおよびその類似体の部分合成に使用するために高度に鏡像異性体的に純粋な形態で入手可能でなければならない。この側鎖の類似体および誘導体は、癌の治療に用いることができるドセタキセルのような他のタキサンの形成にも有用である。
【００２８】
本発明は、（±）−Ｎ−ＣＢＺ−３−フェニルイソセリンエチルエステルのようなＣ１３側鎖を有するパクリタキセルおよびその類似体の半合成における側鎖前駆体として用いることができる鏡像異性体のラセミ体混合物のキラルクロマトグラフィー分割の方法を提供する。キラル分割は、ラセミ混合物の鏡像異性体の分離に有効なＳ，Ｓ  Ｗｈｅｌｋ−Ｏ、１０μ  ＦＥＣのような適当なクロマトグラフィー媒質を含んでなる固定相を充填したカラムを用いる分取キラルカラムクロマトグラフィーによって行われる。
【００２９】
典型的な方法では、ラセミ体Ｎ−ＣＢＺ−３−フェニルイソセリンエチルエステルを、下記に説明するように図１および２に関して示す順序に準じて合成した。しかしながら、本発明は、以下において更に詳細に説明するように、３−アミノ基を有する化合物のような他のタキサン側鎖前駆体化合物、ＣＢＺ以外の３−Ｎ−保護基を用いる化合物、２−Ｏ−位が保護された化合物、エチル基以外のエステル置換基、例えば他のアルキル基などを有する化合物、または側鎖エステル化合物のカルボン酸誘導体等の混合物のキラルクロマトグラフィー分割に関するものであることを理解すべきである。
【００３０】
Ａ．ラセミ体フェニルイソセリンの形成
式
【化１９】
2005507859.tif 000021
のラセミ体フェニルイソセリンが、下記のように最初に形成される。本明細書に記載の方法で用いられる出発材料および試薬は、当業者によって理解されるように、化学薬品供給業者から容易に入手できることを理解すべきである。更に、本明細書の様々な化学工程の説明から明らかなように、この方法のある化学工程を様々な規模で反復して次工程で用いる中間生成物の量を蓄積し、一方他の工程は前工程で生成した中間生成物の総量より少なく用いたことを理解すべきである。しかしながら、材料の量の調整は一般的な本発明の概念から離反することなく行うことができ、特に本明細書に記載の個々の化学工程は前工程で生成した材料の量を収容する規模にすることができることを理解すべきである。
【００３１】
最初に、メタノール中でナトリウムメトキシドの存在下におけるベンズアルデヒドとメチルクロロアセテートとのＤａｒｚｅｎ縮合により、下記のように、トランス−メチル＝３−フェニルグリシデート（式１）が提供される。
【化２０】
2005507859.tif 000022
【００３２】
ここで、ベンズアルデヒド（１．７６Ｋｇ，１．０当量）およびメチルクロロアセテート（２．７０Ｋｇ，１．５当量）を、機械攪拌機、冷却器、温度計、添加漏斗、窒素パージ、および氷／メタノール槽を備えた乾燥した２２リットルの三つ口丸底フラスコのメタノール（２．５５Ｌ／Ｋｇベンズアルデヒド）に加えた。攪拌しながら、反応混合物を０℃〜−１０℃に冷却し、１．５当量のナトリウムメトキシド（２５％メタノール溶液）を冷却温度にて反応混合物に徐々に滴加した。次に、冷却槽を外し、フラスコを一晩攪拌することによって自然に室温まで暖めた。反応はＴＬＣによって観察し、出発材料が消失することによって完結したと考えた。減圧下および≦４０℃の温度で出発容積の約２０％まで混合物を濃縮することによって、反応を進ませた。次に、濃縮物を精製水（１０Ｌ／Ｋｇベンズアルデヒド）で反応停止し、エチルエーテル（１０Ｌ／Ｋｇベンズアルデヒド）に抽出し、抽出物を硫酸ナトリウム（１．１Ｋｇ／Ｋｇベンズアルデヒド）上で乾燥し、活性炭で処理し、濾過し、濃縮して油状生成物とし、式１のトランス異性体を８１％の収率で得た。
【００３３】
次に、式１のトランスエポキシドを、下記のように、クロロホルム中ガス状ＨＣｌでオキシラン開環によってクロロヒドリン誘導体（式２）を形成した後、テトラブチルアンモニウムブロミドのような相間移動触媒の存在下にてクロロホルムおよび水中でナトリウムメトキシドで閉環することによってシス異性体（式３）に転換する。
【化２１】
2005507859.tif 000023
【００３４】
ここで、溶媒、好ましくはクロロホルム（１０Ｌ／Ｋｇトランスエポキシド）を、機械攪拌機、還流冷却器、窒素パージ、ガス散布管、および温度計を備えた三つ口の丸底フラスコに加えた。クロロホルム、クロロホルム／ヘキサン（１０：９０）、トルエンおよびベンゼンなどの様々な溶媒が考えられる。攪拌を行いながら、式１のメチルフェニルオキシランカルボキシレート（２．４Ｋｇ，１．０当量）を加え、溶解した後、一定攪拌を継続し、ＨＣｌガスを溶液中に少なくとも３時間通じた後、反応混合物を室温から５０℃の温度で一晩攪拌した。反応混合物を、減圧下≦４０℃の温度で濃縮して油状生成物とした。油状生成物にエチルエーテル（１．２５Ｌ／Ｋｇトランスエポキシド）を滴加し、０℃まで冷却して、式２の生成物を白色固形物として結晶させた。固形物を濾過によって集め、ヘキサン：エチルエーテル（４：１）溶液（６．２５Ｌ／Ｋｇトランスエポキシド）で洗浄し、母液を２４時間以上０℃まで冷却して、更に生成物を回収した。更に行った実験は、トランス−エチル＝３−フェニルグリシデートを用いることにより、純度は同一水準に保持しながらこの工程の収率をかなり増加したことを示している。
【００３５】
次に、溶媒、好ましくはクロロホルム（８Ｌ／Ｋｇクロロヒドリン）と精製水（２Ｌ／Ｋｇクロロヒドリン）を、機械攪拌機、還流冷却器、窒素パージ、添加漏斗、および温度計を備えた三つ口の丸底フラスコに加えた。ＴＨＦまたはメタノールのような他の溶媒の使用が考えられる。攪拌しながら、式２のクロロヒドリン誘導体（０．８１Ｋｇ；１．０当量）を０．１−０．３当量のテトラブチル−Ｎ−ブロミド（ＢＵ4ＮＢｒ）のような相間移動触媒と共に加えた。これらの反応物を溶解させた後、１．５−２．０当量のナトリウムメトキシド（２５％メタノール溶液）を室温で１５分間かけて加えた。ＮａＯＨまたはＡｍｂｅｒｌｉｔｅのような他の塩基を、例えばＴＨＦ溶媒と共にこの工程で用いることができることを理解すべきである。溶解度が高い弱塩基を用いるときには相間移動触媒を用いる必要がないことがある点にも留意すべきである。反応の進行はＴＬＣによって観察し、室温で攪拌３０分後に完結したと考えた。生成物（式３）を相分離によって処理し、有機相を精製水で２回洗浄した後、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、濃縮して油状生成物とした。特に、式３のシス生成物は、単離後には≦１０℃で窒素下であっても不安定であり、この工程に関する反応および処理時間をできるだけ短くするのが望ましい。
【００３６】
生成するシス−メチル＝３−フェニルグリシデート（式３）を、エタノール中ＫＯＨでケン化した後、水性ＨＣｌ、水およびエーテルの存在下にてアンモニアガスと反応させることによってアンモニウム塩に転換した。
【化２２】
2005507859.tif 000024
【００３７】
ここで、溶媒、好ましくはエタノール（３Ｌ／Ｋｇシスエポキシド）を、機械攪拌機、還流冷却器、添加漏斗、温度計、氷水槽および窒素パージを備えた三つ口丸底フラスコに加えた。メタノールのような他の溶媒の使用も考えられる。ＫＯＨ（１．３−１．８当量）を、温度を０−５℃に保持しながら攪拌しながら加えた後、式３のオキシラン誘導体をエタノールに溶解したもの（０．６６Ｋｇ，１．０当量を２Ｌ／Ｋｇシスエポキシドに溶解）を１５−３０分間かけてゆっくり加えた。温度は、添加過程中は０−５℃に保持し、氷水槽を外すことによって周囲温度までゆっくり上昇させた。
【００３８】
生成する反応混合物を３時間攪拌し、反応の完結についてＴＬＣによって観察した。反応混合物を０−５℃まで冷却して、中間生成物である（±）−カリウム−（＋）−３−フェニルオキシランカルボキシレートを白色固形物として完全に沈澱させ、これを濾過して、冷エタノールで洗浄し、真空オーブンで３５℃で乾燥した。
【００３９】
このカリウム塩を、機械攪拌機、還流冷却器、添加漏斗、温度計、氷水槽および窒素パージを備えた三つ口丸底フラスコに加えた。水（６Ｌ／Ｋｇカリウム塩）を加えた後、≦１０℃に冷却した。この溶液に、≦１０℃で激しく攪拌しながらエーテル（５Ｌ／Ｋｇカリウム塩）および１Ｎ  ＨＣｌ（５Ｌ／Ｋｇカリウム塩）を加えた。氷水槽を外して攪拌を３０分間継続することによって、温度を周囲温度まで徐々に上昇させた。有機相を分離し、水性相をエーテルで抽出した。有機層を合わせて、三つ口丸底フラスコに移し、これにアンモニアガスを周囲温度で３０分間攪拌を継続しながら通じた。反応混合物を０−５℃に冷却し、攪拌を更に３０分間継続した。生成する固形物を濾過して、冷エーテルで洗浄し、乾燥して、式４のアンモニウム塩を６９％の収率で得た。
【００４０】
生成する（±）−アンモニウム−（＋）−３−フェニルオキシランカルボキシレート（式４）をメタノール中水酸化アンモニウムと共に還流して、ラセミ体フェニルイソセリン（式５）を得た。
【化２３】
2005507859.tif 000025
【００４１】
ここで、式４のアンモニウム塩（０．１５Ｋｇ，１．０当量）を、機械攪拌機、還流冷却器、温度計、および加熱マントルを備えた三つ口丸底フラスコ中で攪拌しながらメタノール（４５Ｌ／Ｋｇアンモニウム塩）に加えた。水酸化アンモニウム（０．２６Ｋｇ／Ｋｇアンモニウム塩）を３回に分けて１６時間かけて加え、消費したアンモニアを補給した。反応を２４時間還流し、混合物を出発容積の約１５％まで濃縮し、≦１０℃まで冷却して沈澱を形成し、濾過し、エチルエーテルで洗浄して、式５のラセミ体生成物を９０％を上回る収率で得た。
【００４２】
本発明は、本明細書に記載の方法によって、または当業者が理解する範囲の他の方法によって形成したラセミ体フェニルイソセリンの使用を考えていることを理解すべきである。更に、本発明は、所望な（２Ｒ，３Ｓ）異性体の鏡像異性体の１以上に加えて、その（２Ｒ，３Ｒ）および（２Ｓ，３Ｓ）ジアステレオ異性体の１以上を含むラセミ体フェニルイソセリン混合物の使用を考えていることを理解すべきである。
【００４３】
Ｂ．Ｎ−保護エステル前駆体への転換
（±）−フェニルイソセリン（式５）を、次に、下記のようにベンジルクロロホルメート、重炭酸ナトリウムおよび水の存在下にてＳｃｈｏｔｔｅｎ−Ｂａｕｍａｎｎ条件を用いて、そのＮ−ＣＢＺ誘導体として保護し、（±）−Ｎ−ＣＢＺフェニルイソセリン（式６）を得た。
【化２４】
2005507859.tif 000026
【００４４】
ここで、式５のラセミ体３−フェニルイソセリン（０．０８Ｋｇ，１．０当量）を、窒素ブランケット下で重炭酸ナトリウムの１０％水性溶液（１３５Ｌ／Ｋｇフェニルイソセリン）を含む反応フラスコに攪拌しながら加え、これを溶解するまで攪拌した。次に、反応混合物を０−５℃まで冷却し、約３当量のベンジルクロロホルメートを、混合物の温度を保持しながら滴加した。生成する溶液を、≦５℃で６時間、またはラセミ体３−フェニルイソセリン反応物の消失がＴＬＣによって確かめられるまで攪拌した。塩酸を室温で攪拌しながら滴加し、混合物のｐＨを≦４とした。混合物を酢酸エチル（２００Ｌ／Ｋｇフェニルイソセリン）で抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、≦４５℃で減圧下にて濃縮し、式６の粗生成物を得て、これを５０：５０ヘキサン／クロロホルムでスラリー状にすることによって精製した。
【００４５】
式６は本発明の好ましい態様に関するものであるが、当業者の理解の範囲で他のアシル化剤をベンジルクロロホルメートの代わりに用いて、一般式
【化２５】
2005507859.tif 000027
（式中、Ｒはアルキル基、オレフィン性基、芳香族基、例えばＰｈ、Ｏ−アルキル、Ｏ−オレフィン性またはＯ−芳香族基（例えば、ＣＢＺ基の場合にはＰｈＣＨ2Ｏ−）であることができる）の化合物のような３−Ｎ−位に異なる化学基を有する化合物を得ることができることを理解すべきである。あるいは、本発明は、３−アミノ基が下記に説明するキラル分離工程の間も保護されないままであってもよい。
【００４６】
式６のラセミ体Ｎ−ＣＢＺ−３−フェニルイソセリンを、次にエタノール中でメタンスルホン酸と共に還流して、（±）−Ｎ−ＣＢＺ−３−フェニルイソセリンエチルエステル（式７）を得て、キラルクロマトグラフィー分離を行った。
【化２６】
2005507859.tif 000028
【００４７】
ここで、式６（０．０７２Ｋｇ，１．０当量）を、機械攪拌機、窒素パージ、加熱マントルおよび温度計を備えた三つ口丸底フラスコの過剰量のエタノール（２３０Ｌ／Ｋｇフェニルイソセリン）と０．５当量のメチルスルホン酸に加えた。反応混合物を３時間還流した後、≦４５℃で減圧下にて濃縮し、油状生成物を得た。油状生成物をクロロホルムに溶解し、有機相を５％  ＮａＨＣＯ3で１回、精製水で２回洗浄して、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過した後、濃縮して油状生成物とし、これを放置したところ、固化して灰白色残渣となった。固形物をヘキサン中でスラリー状にし、濾過して、乾燥し、精製した式７のラセミ体３−Ｎ−ＣＢＺ−３−フェニルイソセリンエチルエステルを９０％を上回る収率で得た。
【００４８】
また、当該技術分野で知られているように、式６の酸の他のエステルを形成して、本発明で使用することができることを理解すべきである。例えば、式６の酸のメチルエステルなどの他のアルキルエステル並びに芳香族やオレフィンエステルが考えられる。また、上記で示したように、様々な他のアシル基をＣＢＺ基の代わりに３−Ｎ−位で用いることができ、あるいは化合物がアミンまたはアミン塩として遊離のままであり、以下に説明するキラル分離工程を行うこともできる。更に、本発明は、２−ヒドロキシルをキラル分離工程の前に以下に説明する方法などで代わりに保護することができるようにしようとするものである。
【００４９】
従って、本発明は、一般式
【化２７】
2005507859.tif 000029
（上記式中、Ｐ1はＨおよびヒドロキシル保護基から選択され、Ｒ1はＨ、アルキル基、オレフィン性基、および芳香族基から選択され、Ｒ2はＨおよびＲ3ＣＯ（式中、Ｒ3はアルキル基、オレフィン性基、芳香族基、Ｏ−アルキル基、Ｏ−オレフィン性基およびＯ−芳香族基から選択される）から選択される）の化合物のような本発明のキラル分離で使用される様々な化合物を形成しようとするものである。下記の表Ａは、本発明によって考えられる一般式７ａの様々な化合物を制限なしに示している。
【００５０】
【表１−１】
2005507859.tif 000030
【表１−２】
2005507859.tif 000031
【表１−３】
2005507859.tif 000032
【表１−４】
2005507859.tif 000033
【表１−５】
2005507859.tif 000034
【００５１】
上表ＡのＰ1について考えられる種々のヒドロキシル保護基としては、ベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）、ベンジル、置換ベンジル、ベンゾイルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５２】
Ｃ．エステル前駆体のキラル分割
図３に関して示され且つ下記に説明するように、式７のラセミ体（±）−Ｎ−ＣＢＺ−３−フェニルイソセリンエチルエステル（または一般式７ａの化合物）を、次にキラルクロマトグラフィー精製によって精製し、光学異性体に対して異なる親和性を有し、光学異性体が固定相を異なる速度で通過し、従って完全にまたは部分的に、互いにクロマトグラフィー分離されるようにするクロマトグラフィー固定相を用いることによって所望な（２Ｒ，３Ｓ）−３−Ｎ−ＣＢＺ−３−フェニルイソセリンエチルエステル（式８）をその鏡像異性体（および存在する場合には、ジアステレオ異性体）から分離する。
【化２８】
2005507859.tif 000035
【００５３】
多数のカラムおよび条件を、最初に式
【化２９】
2005507859.tif 000036
のＮ−ベンゾイルエチルエステルのラセミ体混合物を用いて評価した。
【００５４】
この評価の結果を、下記の表１に示す。
【００５５】
【表２】
2005507859.tif 000037
【００５６】
これらの結果に基づいて、次に様々な移動相を含む多数の条件を、評価して、下表２に示す式７のＮ−ＣＢＺフェニルイソセリンエチルエステルの鏡像異性体を分離する。
【００５７】
【表３】
2005507859.tif 000038
【００５８】
正の表示が「分割したベースラインの有無」についての最終欄にある場合には、クロマトグラムは一般的には２本の別個のピークであって、それぞれが近似ベースラインから生じ且つそれぞれ２個の鏡像異性体に相当するものを示しており、それらが実質的に完全に分離していることを示している。最終欄に、ベースラインが「僅か」に分割していることを示す場合には、クロマトグラムは一般的にはベースライン上で幾らかの重なり合いが見られる２個の異なるピークを示し、鏡像異性体が部分的にではあるが不完全に分離していることを示唆している。「ｎ．ｓ」が最終欄で示される場合には、クロマトグラムは一般的には単一ピークを示し、鏡像異性体がほとんどまたは全く分離しないことを示唆している。アルコール／ヘキサン移動相のある種の混合物の下では、２本の追加ピークがクロマトグラム上に現れ、これらはジアステレオ異性体であると考えられる点に留意すべきである。さらなる小ピークが当該技術分野で一般に理解されているように、クロマトグラム上に観察されることがあることも理解すべきである。
【００５９】
興味深いことには、式
【化３０】
2005507859.tif 000039
のベンゾイル酸のラセミ体混合物は、表１および２に記載したような試験した条件のいずれにおいても分離されなかった。
【００６０】
式７のエチルエステル鏡像異性体の分離について達成された最良の条件では、１０μのＫｒｏｍａｓｉｌシリカに結合したＳ，Ｓ  Ｗｈｅｌｋ−Ｏを含んでなる固定相を用いた。このＳ，Ｓ  Ｗｈｅｌｋ−Ｏ固定相は、Ｍｏｒｔｏｎ  Ｇｒｏｖｅ，ＩＬにあるＲｅｇｉｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．から得ることができる。特に、１０μおよび５μなど様々な粒度の球状シリカ、不整シリカ、または球状Ｋｒｏｍａｓｉｌシリカに共有結合した様々なカラム長さのＳ，Ｓ  Ｗｈｅｌｋ−Ｏは、Ｒｅｇｉｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手することができる。Ｒｅｇｉｓ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓによってＳ，Ｓ  Ｗｈｅｌｋ−Ｏ  １として識別されたこのＳ，Ｓ  Ｗｈｅｌｋ−Ｏ固定相の１つのバージョンは、下記のような式を有する。
【化３１】
2005507859.tif 000040
【００６１】
Ｒｅｇｉｓ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓによってＳ，Ｓ  Ｗｈｅｌｋ−Ｏ  ２として識別されたＳ，Ｓ  Ｗｈｅｌｋ−Ｏ固定相の１変形物は、シリカ支持体に対する三官能価共有結合を有する。本発明は、これらの固定相並びに本明細書に記載の他の固定相／クロマトグラフィー媒質のいずれかを使用しようとするものである。
【００６２】
好ましい方法では、ラセミ体ＣＢＺ−フェニルイソセリンエチルエステルを、１０／１００  Ｋｒｏｍａｓｉｌシリカに共有結合した完全に末端キャップしたＳ，Ｓ  Ｗｈｅｌｋ−Ｏを含んでなる固定相８００ｇを含む直径が８ｃｍのカラムを有するＰｒｏＣｈｒｏｍ  ＨＰＬＣ系を用いてそのそれぞれの鏡像異性体に分割した。クロマトグラフィー分離に影響するＷｈｅｌｋ−Ｏのキーとなる結合部位は、アミド−プロトン水素結合供与体の他にテトラヒドロフェナントレンπ系およびジニトロベンズアミドπ系である。移動相は、２０％イソプロパノール／８０％ヘキサンであり、流速は、３００ｍｌ／分であり、検出器波長は２２０ｎｍであった。イソプロパノール１ｍｌ当たりラセミ体０．０２５ｇの溶液を調製し、６０ｍｌ分量（ラセミ体材料１．５ｇと同等）を連続的に注入した。所望な鏡像異性体が最初に溶出し、分離回収した。溶媒を減圧下にて留去し、光学的に純粋な（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−ＣＢＺ−３−フェニルイソセリンエチルエステル生成物を白色粉末として８５％の回収率で得た。
【００６３】
他の種類のクロマトグラフィー媒質を本発明で用いることができ、このようなクロマトグラフィー媒質は、ラセミ体フェニルイソセリンエチルエステルの鏡像異性体および／または本発明で考えられる他の化合物をキラルクロマトグラフィー分割によって分離するのに有効であることを理解すべきである。例えば、キーとなる結合部位として１個以上のテトラヒドロフェナントレンπ系、ジニトロベンズアミドπ系、またはアミド−プロトン水素結合供与体、または他の同様な結合部位を有するクロマトグラフィー媒質を本発明の固定相においてＳ，Ｓ  Ｗｈｅｌｋ−Ｏの代わりに用いることができる。また、シリカ基質を当該技術分野で知られている範囲で他の適当なクロマトグラフィー基質に代えることもできることを理解すべきである。
【００６４】
また、鏡像異性体が完全に分離して、それらに相当するクロマトグラフィーピークがＨＰＬＣベースラインまで分割されるのが好ましいが、本発明は、分離が余り効率的でなく、ＨＰＬＣピークの幾らかの重なり合いが見られることが起こることを認めていることも理解すべきである。
【００６５】
Ｄ．タキサン合成におけるエステル前駆体の使用
キラルクロマトグラフィー精製の後、生成する光学的に純粋な（２Ｒ，３Ｓ）−３−Ｎ−ＣＢＺ−３−フェニルイソセリンエチルエステルを、例えば当該技術分野で知られている様々な方法により所望なタキサンの製造に用いることができる。例えば、図４に関して示し且つ以下に説明するように、式８は２−Ｏ−位をＢＯＭ、ベンジル、置換ベンジル、ベンゾイルなどのような適当な保護基で保護した後、相当するカルボン酸にケン化することによってバッカチンＩＩＩ誘導体とのカップリングに適する側鎖前駆体を得て、パクリタキセル、ドセタキセルまたはそれらの類似体のような所望なタキサンを形成することができる。（２Ｒ，３Ｓ）−３−Ｎ−ＣＢＺ−３−フェニルイソセリンエチルエステル前駆体を用いるタキサンの典型的な調製は、例えば、米国特許第５，６７５，０２５号、第５，６８４，１７５号、第５，６８８，９７７号、第５，７５０，７３７号、第５，７７０，７４５号、第５，９３９，５６６号、第５，９４８，９１９号、第６，０４８，９９０号、第６，０６６，７４９号、第６，０７２，０６０号、第６，１０７，４９７号、第６，１３６，９９９号、および第６，１４３，９０２号明細書に教示されており、その教示内容は、その開示の一部として本明細書に引用されている。
【００６６】
例えば、Ｓｉｓｔｉらに対する米国特許第５，７５０，７３７号明細書に教示されているように、（２Ｒ，３Ｓ）−３−Ｎ−ＣＢＺ−３−フェニルイソセリンエチルエステルは、下記のように２−ヒドロキシ位をベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）基で保護することができる。
【化３２】
2005507859.tif 000041
【００６７】
ここで、式８のエチルエステルを窒素雰囲気下で無水ＴＨＦに溶解し、例えば、ドライアイス／アセトン槽で−４０℃または−７８℃のような低温に冷却した後、ｎ−ブチルリチウムのようなアルキルリチウム化合物を滴加するが、アルキルリチウム化合物は直鎖アルキルであるのが望ましい。とにかく、反応は、０℃を上回らない温度で行うのが最善である。生成する混合物を、約１０分間攪拌する。次に、ベンジルオキシメチルクロリド（ＢＯＭ−Ｃｌ）を約５分間かけて滴加し、混合物を約２−５時間低温で攪拌した。その後、溶液を０℃まで加温し、水を加えて反応を停止し、過剰のｎ−ブチルリチウムを除去した。生成する混合物を真空濃縮して残渣とした後、この残渣を酢酸エチルにとり、水および食塩水で洗浄し、望ましくない塩を除去した。次に、有機層を真空で乾燥して濃縮し、残渣を酢酸エチル：ヘキサンから再結晶させ、または酢酸エチル：ヘキサンでクロマトグラフィー処理を行い、式９のエチルエステルを得た。
【００６８】
次に、式９を下記のようにケン化して、その相当する酸とすることができる。
【化３３】
2005507859.tif 000042
【００６９】
ここで、式９をエタノール／水（比８：１）中に溶解する。水酸化リチウム（または他の適当な水酸化アルカリ）を溶液に加え、生成する混合物を約３時間攪拌して、化合物をケン化する。次に、混合物を酸性にして（１Ｎ塩酸）、酢酸エチルで抽出する。生成する有機層を分離して、乾燥し、真空濃縮する。次に、残渣の酸を単離して、更に精製することなく使用する。これにより、式１０の酸が生成する。
【００７０】
図５に示し且つ下記において説明するように、式１０を、当該技術分野で知られているように、保護されたバッカチンＩＩＩまたは１０−デアセチルバッカチンＩＩＩ主鎖のような適当なタキサン主鎖にカップリングした後、カップリングした生成物をパクリタキセルまたは他のタキサンに転換することができる。例えば、米国特許第５，７５０，７３７号明細書に教示されているように、式１０は、下記のように、７−ＣＢＺバッカチンＩＩＩでエステル化することができる。
【化３４】
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【００７１】
ここで、式１１（１当量）と式１０の酸側鎖（６当量）をトルエンに溶解する。この混合物にジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）０．５当量と好ましくはジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）６当量を加え、生成する混合物を７０℃で３０分間−１時間加熱するが、温度の範囲は６０℃−８０℃とすることができる。他のジアルキルカルボジイミドをＤＣＣの代わりに用いることができ、一例はジイソプロピルカルボジイミドである。次に、溶液を室温まで冷却し、等容の酢酸エチルまたはジエチルエーテルを溶液に加える。次に、生成する混合物を０℃まで冷却し、この温度で２４時間保持した。その後、混合物を濾過して、残渣をジエチルエーテルまたは酢酸エチルで洗浄する。次に、合わせた有機相を塩酸（５％）、水、および最後に塩水で洗浄する。有機相を分離して、乾燥し、真空濃縮する。次に、生成する残渣を酢酸エチル：ヘキサンに溶解し、シリカゲルプラグ上で溶出する。次に、溶離液を真空濃縮して式１２のエステル化化合物を得る。
【００７２】
米国特許第５，７５０，７３７号明細書に更に教示されているように、３’−Ｎ−ＣＢＺおよび７−Ｏ−ＣＢＺ保護基を水素化によって外すことができ、３’−Ｎ−アミノ基は、塩化ベンゾイルをアシル化剤として用いてアシル化して、ベンゾイル基を３’−Ｎ−位に加え、２’−Ｏ−ＢＯＭ保護基を水素化によって除去することにより、パクリタキセルを製造することができる。
【化３５】
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【００７３】
ここで、式１２のカップリングした生成物をＰｅａｒｌｍａｎ触媒を加えたイソプロパノールに溶解する。生成する混合物を４０ｐｓｉで２４時間水素化するが、あるいは混合物を１気圧の水素下で２４時間攪拌することもできる。その後、混合物を珪藻土で濾過し、真空濃縮して残渣とする。好ましくは、残渣をトルエンにとり、無水炭酸カリウムを加える。あるいは、残渣を酢酸エチルまたはトルエンにとり、トリエチルアミンのような第三アミン塩基を加える。いずれの場合にも、次に塩化ベンゾイルを滴加し、混合物を２時間攪拌する。次に、生成する混合物を、水および最後に塩水で洗浄する。次に、生じる有機相を分離して、乾燥し、減圧下にて濃縮し、Ｃ２’−ＯＢＯＭパクリタキセルを得る。ＢＯＭ基は、Ｐｅａｒｌｍａｎ触媒を加えたイソプロパノールにＣ２’−ＯＢＯＭパクリタキセルを溶解することによって除去する。この混合物を、４０ｐｓｉの水素下で２４時間水素化して、パクリタキセルを得る。
【００７４】
他の様々な適当な側鎖前駆体とバッカチンＩＩＩ主鎖を用いるパクリタキセル、ドセタキセルなどのタキサンの半合成の方法は、例えば、米国特許第５，６７５，０２５号、第５，６８４，１７５号、第５，６８８，９７７号、第５，９３９，５６６号、第５，９４８，９１９号、第５，９７３，１７０号、第６，０４８，９９０号、第６，０６６，７４９号、第６，０７２，０６０号、第６，１０７，４９７号、第６，１３３，４６２号、第６，１３６，９９９号、および第６，１４３，９０２号明細書に記載されており、その教示内容は、その開示の一部として本明細書に引用されている。本発明は、特にこのような過程で用いる（２Ｒ，３Ｓ）側鎖前駆体を提供するのに適していることを理解すべきである。
【００７５】
従って、本発明を、本発明の典型的な態様に関してある程度具体的に記載してきた。しかしながら、本発明は、従来の技術に照らして特許請求の範囲によって定義され、本明細書に含まれる発明の概念から離反することなく本発明の典型的な態様を修飾しまたは変化させることができることを理解すべきである。
【図面の簡単な説明】
【００７６】
【図１】ラセミ体３−フェニルイソセリンの調製のための本発明による典型的な化学的方法を示す。
【図２】図１で形成したラセミ体３−フェニルイソセリンをラセミ体３−Ｎ−ＣＢＺエチルエステルに転換する典型的な化学的方法を示す。
【図３】図２で形成したラセミ体エチルエステルからキラル３−Ｎ−ＣＢＺ−（２Ｒ，３Ｓ）−エチルエステルを提供するための典型的なキラルクロマトグラフィー分離を示す。
【図４】図３で形成したキラルエチルエステルの保護およびケン化のための典型的な化学的方法を示す。
【図５】図４で形成したキラル３−Ｎ−ＣＢＺ−２−Ｏ−ＢＯＭ−（２Ｒ，３Ｓ）−３−フェニルイソセリン化合物を用いるパクリタキセルの一般化した半合成を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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