(57)【要約】本発明は、一般式（I)の化合物により形成される薬学的に許容され得る塩、それらの誘導体、それらの類縁体、それらの互変異性体、それらの立体異性体、それらの多形体及びそれらを含む薬学的組成物に関する。本発明は、上記薬学的に許容され得る塩、それらの誘導体、それらの類縁体、それらの互変異性体、それらの立体異性体、それらの多形体及びそれらを含む薬学的組成物の調製方法にも関する。
2005507893.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式(I)の化合物
【化１】
2005507893.tif 000027
により形成される薬学的に許容され得る塩、それらの誘導体、それらの類縁体、それらの互変異性体、それらの立体異性体、それらの多形体及びそれらの薬学的組成物。式中、R1は、置換(C1-C6)アルキルであって、前記置換基がモノ(C1-C6)アルキルアミノ又はジ(C1-C6)アルキルアミノから選択されるものを表し；R2は、ヒドロキシを表し；
R3、R4及びR5は、水素を表し；並びに
R6は、水素、置換(C1-C6)アルキルであって、前記置換基がハロゲン、ヒドロキシ又は(C1-C6)アルコキシ基から選択されるものを表す。
【請求項２】
R1が、置換(C1-C6)アルキルを表し、前記置換基がジメチルアミノ基である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記式(I)の一般的化合物を、塩酸若しくは臭化水素酸から選択されるヒドロハロ酸、酢酸、硫酸、硝酸、リン酸、ホウ酸、過塩素酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸,メタンスルホン酸、安息香酸、アスコルビン酸、サリチル酸又はベンゼンスルホン酸から選択される酸により処理することにより得られる請求項１及び２に記載の薬学的に許容され得る塩。
【請求項４】
本発明の特に有用な化合物には、次のものが含まれる
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-ヒドロキシ-[20(S),5(R)]-カンプトテシン塩酸塩；
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-ヒドロキシ-[20(S),5(S)]-カンプトテシン塩酸塩；
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-ヒドロキシ-[20(S),5(RS)]-カンプトテシン塩酸塩；
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-ヒドロキシエトキシ)-[20(S),5(R)]カンプトテシン塩酸塩；
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-ヒドロキシエトキシ)-[20(S),5(S)]-カンプトテシン塩酸塩；
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-ヒドロキシエトキシ)-[20(S),5(RS)]カンプトテシン塩酸塩；
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-メトキシエトキシ)-[20(S),5(R)]カンプトテシン塩酸塩；
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-メトキシエトキシ)-[20(S),5(S)]カンプトテシン塩酸塩；
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-メトキシエトキシ)-[20(S),5(RS)]カンプトテシン塩酸塩；
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-フルオロエトキシ)-[20(S),5(R)]カンプトテシン塩酸塩；
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-フルオロエトキシ)-[20(S),5(S)]カンプトテシン塩酸塩及び
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-フルオロエトキシ)-[20(S),5(RS)]カンプトテシン塩酸塩。
【請求項５】
前記一般式(I)の化合物により形成される薬学的に許容され得る塩の調製のための方法であって、式(II)
【化２】
2005507893.tif 000028
（式中、全ての記号は、先に規定したとおり）の化合物を、溶媒の存在下に、20ないし100℃の範囲の温度で、2〜9時間の範囲の期間、化学量論的量の適切な酸と反応させることを含む方法。
【請求項６】
薬学的組成物であって、請求項１及び４において規定される一般式(I)の前記化合物
【化３】
2005507893.tif 000029
により形成される薬学的に許容され得る塩を有効量と、薬学的に許容され得る担体、希釈剤、エクシピエント又は溶媒和物とを含む薬学的組成物。
【請求項７】
錠剤、カプセル、粉体、シロップ、溶液又は懸濁液の形態にある、請求項６の薬学的組成物。
【請求項８】
黒色腫、前立腺、白血病、リンパ腫、非小肺癌、中枢神経系の癌、乳房、結腸、卵巣又は腎癌を治療する方法であって、請求項１及び４の一般式(I)の化合物により形成される薬学的に許容され得る塩を有効量、それが必要とされる患者に投与することを含む方法。
【請求項９】
請求項１及び４に規定される一般式(I)の化合物により形成される薬学的に許容され得る塩を有効量と、薬学的に許容され得る担体、希釈剤、エクシピエント又は溶媒和物とを含む薬学的組成物。
【請求項１０】
錠剤、カプセル、粉体、シロップ、溶液又は懸濁液の形態にある、請求項９の薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般式(I)の化合物により形成される薬学的に許容可能な塩、それらの誘導体、それらの類縁体(analogs)、それらの互変異性体、それらの立体異性体、それらの多形体及びそれらを含有する薬学的組成物に関する。
【化４】
2005507893.tif 000003
【０００２】
本発明は、上記薬学的に許容され得る塩、それらの誘導体、それらの類縁体、それらの互変異性体、それらの立体異性体、それらの多形体及びそれらを含有する薬学的組成物を製造するための方法にも関する。
【０００３】
一般式(I)の化合物により形成される薬学的に許容され得る塩は、黒色腫、前立腺、白血病、リンパ腫、非小肺癌（non-small lung cancers）、中枢神経系の癌、乳房、結腸（colon）、卵巣又は腎癌.の治療に有用である。
【０００４】
本発明は、一般式(I)の化合物により形成される薬学的に許容され得る塩又はそれらの混合物を含有する薬学的組成物にも関する。
【０００５】
一般式(I)の化合物により形成される薬学的に許容され得る塩は、それらの安定性及び溶解性の観点から、有意な処方（significant formulation）及びバルク取扱い性（bulk handling）の利点を有する。
【０００６】
我々の最近付与された米国特許第6,177、439Blにおいて、我々は、式(II)の新規化合物を開示及び記載した。
【化５】
2005507893.tif 000004
【０００７】
式中、R1、R2、R3 及びR4は、独立して水素を表すか、又はヒドロキシ、低級アルコキシ、低級アルカノイル、ニトロ、シアノ、ハロ、カルボキシ、アミノ、置換アミノであって、前記アミノ基はモノ若しくはジ置換でありかつ前記置換基は低級アルキル、低級ハロアルキル、ベンジル、ベンゾイル、カルボキシル、アミド若しくは低級アルキルアミノから選択されるものである；低級アルキル若しくは置換低級アルキルであって、前記置換基は、ヒドロキシ、低級ハロアルキル、ベンジル、低級アルコキシ、ベンジルオキシ、シアノ、ニトロ、アミノ若しくは低級アルキルアミノから選択される基を表すか；又はR2及びR3は、一緒に、-0-(CH2)n-0-を表す、ここで、n=l若しくは2であり、R1、R2、R3及びR4の各々は、R1、R2、R3及びR4の各々が水素である場合を除いて同じではない；
R5は、水素、低級アルキル、置換低級アルキルであって、前記置換基は、ヒドロキシ、ハロゲン、低級アルコキシ、ベンジルオキシ、カルボキシ、アミド、又はアミノを表し、前記アミノ基はモノ若しくはジ置換であって、前記置換基は、低級アルキル、低級ハロアルキル、ベンジル、若しくはベンゾイルから選択され、前記アミノ基がジ置換である場合、前記置換基は、独立しているか若しくは結合している窒素原子と一緒に、式(A)の飽和５若しくは６員複素環を形成する；
【化６】
2005507893.tif 000005
【０００８】
式中、(A)が５員環のとき、YはO、S、NH又はCH2を表し、式(A)が６員環のとき、YはCH2を表す；又はR5は、低級アラルキルを表し、前記アリール基は、フェニル、ビフェニル又はナフチルから選択されるものである；及び
R6は、フェニル又はベンジルであって、前記フェニル基は、無置換又は１つ、２つ若しくは３つの置換基を有し、前記置換基は、ハロゲン、低級アルコキシ、シアノ、ニトロ、低級アルキル、アミノ、又は置換アミノから選択されるものであって、前記アミノ基は低級アルキルによりモノ若しくはジ置換されているものである； シクロアルキル若しくはシクロアルキル低級アルキルであって、前記シクロ環は、３ないし７個の環原子を有し、前記環原子のすべてが、炭素である；式(B)の飽和５又は６員複素環で置換された低級アルキル基,
【化７】
2005507893.tif 000006
【０００９】
式(B)が ５員環のとき、XはCH又はNを表し、かつYはO、S、NH又はCH2を表し、式(B)が６員環のとき、XはCH又はNを表し、かつYはCH2を表す；置換ベンゾイルであって、前記置換基は、低級アルキル、低級ハロアルキル、ハロゲン、低級アルコキシ,チオアルコキシ、シアノ、ニトロ、アミド、アミノ、又は低級アルキルアミノから選択される；低級アルケニル；置換低級アルキル若しくは置換低級アルケニルであって、前記置換基は、ハロゲン、ヒドロキシ、低級アルコキシ、アリールオキシ、チオ、チオアルキル、チオアリール、アリール、ここで前記アリール基は、フェニル、ビフェニル又はナフチルから選択されるものである；ヘテロアリールであって、前記ヘテロアリールは、ピリジル、キノリン、イソキノリン、インドール、ピロール、フラン、ベンゾフラン、チオフェン、チアゾリジン又はイミダゾールから選択されるものである；カルボキシ、シアノ、ニトロ、アミド、又はアミノを表し、前記アミノ基は、無置換又はモノ若しくはジ置換であり、前記置換基は、ヒドロキシ、低級アルキル、低級ハロアルキル、ベンジル、ベンゾイル、低級アルコキシ、カルボキシ、アミド、又は低級アルキルアミノから選択され、前記アミノ基が、ジ置換である場合、前記置換基は、独立しているか又は結合している窒素原子と一緒に式(A)の飽和５又は６員複素環基を形成する
【化８】
2005507893.tif 000007
【００１０】
式(A)が５員環のとき、YはO、S、NH又はCH2を表し、式(A)が６員環のとき、YはCH2を表す；
又はR6は、置換低級アルカノイルを表し、前記置換基は、ハロゲン、低級アルコキシ、アリールオキシ、チオ、チオアルキル、チオアリール、アリールであって、前記アリール基は、フェニル、ビフェニル、若しくはナフチルから選択される；ヘテロアリールであって、前記ヘテロアリールはピリジル、キノリン、イソキノリン、インドール、ピロール、フラン、ベンゾフラン、チオフェン、チアゾリジン又はイミダゾールから選択される；カルボキシ、シアノ、ニトロ、アミド、又はアミノから選択され、前記アミノ基は無置換であってもよいし、又はモノ若しくはジ置換であり、前記置換基は、ヒドロキシ、低級アルキル、低級ハロアルキル、ベンジル、ベンゾイル、低級アルコキシ、カルボキシ、アミド、アミノ又は低級アルキルアミノから選択され、前記アミノ基がジ置換であるとき、前記置換基は、独立しているか又は結合している窒素原子と一緒に、式(A)の飽和５又は６員複素環基を形成する
【化９】
2005507893.tif 000008
【００１１】
式(A)が５員環のとき、YはO、S、NH又はCH2を表し；式(A)が６員環のとき、YはCH2を表す；並びにR1がヒドロキシ、アミノ又はニトロを表す場合、R2、R3、R4及びR5は水素を表し、かつR6は水素、低級アルキル基、アルカノイル基又はベンゾイル基を表す。
【背景技術】
【００１２】
少数の近接して関連するカンプトテシン誘導体及びそれらの類縁体が、癌の治療に有用であると報告されている。従来技術に記載されるそのような化合物のいくつかを以下に示す：
(i)EP公開第0074256A1号、米国特許第4473692号及び第4545880号には、式（III）
【化１０】
2005507893.tif 000009
【００１３】
ここで、R1は、水素原子、アルキル基、ヒドロキシル基、アルコキシ基又はアシルオキシ基を意味し；R2は水素原子、アルキル基、アラルキル基、ヒドロキシメチル基、カルボキシメチル基、又はアシルオキシメチル基を意味し、かつR3は、-XR'基(ここで、R'は水素原子、アルキル基、又はアシル基であり、及Xは酸素原子又は硫黄原子である。)、ニトロ基、アミノ基、アルキルアミノ基、アシルアミノ基、又はハロゲン原子を表す。ただし、R1及びR2の両者が水素原子であるとき、R3は、ヒドロキシル基、メトキシ基又はアセトキシ基であってはならない。
【００１４】
これらの化合物の例は、式(IIIa)に示されている。
【化１１】
2005507893.tif 000010
【００１５】
(ii) 英国特許第2056973号には、式(IV)の化合物が開示されている。
【化１２】
2005507893.tif 000011
【００１６】
ここで、XはH、CH2OH、COOH、アルキル基、アラルキル基、又はCH2OR1若しくはCH2OR2であり、ここで、R1は、アルキル基、又はアシル基であり、及びR2 は、低級アルキル基であり、Yは、H、OH又はOR3基であり、ここで、R3は、低級アルキル基、又はアシル基であり、及びZはH又はアシル基であるが、ある種の組み合わせが除かれている、並びにそれらの水溶性アルカリ金属塩が、X又はYへの置換基の導入により製造され、場合に応じて、それら及び／又は他の置換の修飾がその後に続く。
【００１７】
これらの化合物の例が式(IVa)に示されている。
【化１３】
2005507893.tif 000012
【００１８】
(iii) ヨーロッパ公開第EP 321122号には、式(III)のトポテカン(topotecan)が開示され、これは既に上市されている。
【化１４】
2005507893.tif 000013
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
したがって、本発明の主な目的は、一般式(I)の20(S)-カンプトテシン誘導体により形成される薬学的に許容され得る塩、それらの類縁体、それらの互変異性体、それらの立体異性体、それらの多形体及び薬学的に許容し得る組成物、良好な安定性及び溶解性を有するそれら又はそれらの混合物を含有する薬学的組成物であって、黒色腫、前立腺、白血病、リンパ腫、非小肺癌、中枢神経系の癌、乳癌、結腸癌、卵巣癌、腎癌又は他の癌の治療のために使用することができ、アドリアマイシン（Adriomycin）、トポテカン、イリノテカン（Irinotecan）、シスプラチネート（Cisplatinate）等のような薬剤に対して耐性であり、よりよい薬効(efficacy)、効力（potency）及びより低い毒性を有するものを提供することである。
【００２０】
また、本発明の別の目的は、上で定義した一般式(I)の20(S)-カンプトテシン誘導体により形成される薬学的に許容され得る塩、それらの類縁体、それらの互変異性体、それらの立体異性体及びそれらの多形体の製造方法を提供することである。
【００２１】
本発明のさらに別の目的は、一般式(I)の化合物により形成される薬学的に許容され得る塩、それらの類縁体、それらの誘導体、それらの互変異性体、それらの立体異性体、それらの多形体、又はそれらの混合物を含有する薬学的組成物であって、好適なキャリヤ、溶媒、希釈剤及びそのような組成物の製造に通常使用される他の媒体と組み合わせて含有するものを提供することである。
【課題を解決するための手段及び発明の詳細な説明】
【００２２】
本発明は、一般式(I)
【化１５】
2005507893.tif 000014
【００２３】
の化合物により形成される薬学的に許容され得る塩、それらの誘導体、それらの類縁体、それらの互変異性体、それらの立体異性体、それらの多形体及びそれらの薬学的に許容し得る組成物に関する。
【００２４】
式中、R1は、置換(C1-C6)アルキルであって、前記置換基がモノ(C1-C6)アルキルアミノ又はジ(C1-C6)アルキルアミノから選択されるものを表し；R2は、ヒドロキシを表し；R3、R4及びR5は、水素を表し；並びに
R6は、水素、置換(C1-C6)アルキルであって、前記置換基は、ハロゲン、ヒドロキシ又は(C1-C6)アルコキシ基から選択されるものを表す。
【００２５】
R1により表される好適な基は、置換(C1-C6)アルキル、例えば、置換メチル、置換エチル、置換n-プロピル、置換イソプロピル等から選択され；ここで、前記置換基は、(C1-C6)アルキルアミノ、例えば、メチルアミノ、エチルアミノ、n-プロピルアミノ、イソ-プロピルアミノ等であるか、又はジ(C1-C6)アルキルアミノ、例えば、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ジプロピルアミノ等から選択される。
【００２６】
R6により表される好適な基は、水素、又は置換(C1-C6)アルキル、例えば、置換メチル、置換エチル、置換n-プロピル、置換イソ-プロピル等；ここで、前記置換基は、ハロゲン原子、例えば、フッ素、塩素、臭素、沃素から選択される；ヒドロキシキ基又は(C1-C6)アルコキシ、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ等から選択される。
【００２７】
本発明の特に有用な化合物には、以下のものが含まれる：
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-ヒドロキシ-[20(S),5(R)]-カンプトテシン塩酸塩；
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-ヒドロキシ-[20(S),5(S)]-カンプトテシン塩酸塩；
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-ヒドロキシ-[20(S),5(RS)]-カンプトテシン塩酸塩；
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-ヒドロキシエトキシ)-[20(S),5(R)]カンプトテシン塩酸塩；
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-ヒドロキシエトキシ)-[20(S),5(S)]-カンプトテシン塩酸塩；
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-ヒドロキシエトキシ)-[20(S),5(RS)]カンプトテシン塩酸塩；
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-メトキシエトキシ)-[20(S),5(R)]カンプトテシン塩酸塩；
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-メトキシエトキシ)-[20(S),5(S)]カンプトテシン塩酸塩；
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-メトキシエトキシ)-[20(S),5(RS)]カンプトテシン塩酸塩；
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-フルオロエトキシ)-[20(S),5(R)]カンプトテシン塩酸塩；
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-フルオロエトキシ)-[20(S),5(S)]カンプトテシン塩酸塩及び
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-フルオロエトキシ)-[20(S),5(RS)]カンプトテシン塩酸塩。
【００２８】
本発明によれば、一般式(I)の化合物により形成される薬学的に許容され得る塩の調製のためのプロセスであって、次の反応を含むものを提供する：
式(II)の化合物
【化１６】
2005507893.tif 000015
【００２９】
（全ての記号は、先に規定したとおり）を、化学量論的量の適切な酸と、溶媒の存在下に、20ないし100℃の範囲の温度で2〜9時間の範囲の期間反応させる。
【００３０】
使用される式(II)の化合物は、光学的に純粋な形態でも、あるいはラセミ体でもよく、米国特許第6,177,439B1号に報告される方法により製造される。
【００３１】
薬学的に許容され得る塩は、式(II)の化合物を塩酸又は臭化水素酸から選択されるヒドロハロ酸(hydrohalo acid)、酢酸、硫酸、硝酸、リン酸、ホウ酸、過塩素酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸,メタンスルホン酸、安息香酸、アスコルビン酸、サリチル酸、ベンゼンスルホン酸等と反応させることにより調製することができる。使用する溶媒は、アセトン、ジエチルケトン、メチルエチルケトンのようなケトン又はそれらの混合物、メタノール、エタノール、n-ヘキサン、酢酸エチル、ベンゼン、ジエチルアミン、ホルムアルデヒド、クロロホルム、ジクロロメタン又はそれらの混合物から選択することができる。
【００３２】
一般式(I)の化合物により形成される薬学的に許容され得る塩の多くの多形体であって、本発明の一部を構成するものは、異なる条件下における一般式(I)の化合物により形成される薬学的に許容され得る塩の環化により調製することができる。異なる条件下とは、例えば、再結晶化のために通常使用される異なる溶媒又はそれらの混合物を使用すること、異なる温度における結晶化、さまざまな冷却の様式、結晶化中の非常に速いから非常に遅いまでに亘る冷却である。多形体は、化合物を加熱又は溶解し、次いで、ゆっくり又は速く冷却することによっても得ることができる。多形体の存在は、固形プローブ(solid probe)NMR分光学、IR分光学、示差走査熱量測定(DSC)、粉体X-腺回折又はそのような他の技術によって決定することができる。
【００３３】
本発明の化合物の立体異性体であって、本発明の一部を構成するものは、前記プロセスにおいて、単一のジアステレオマーの形態にある一般式(I)の化合物により形成される薬学的に許容され得る塩を従来の方法により立体異性体の混合物を溶解することによって調製することができる。通常使用される方法は、ジャックス（Jaques）らによる「エナンチオマー、ラセミ体及び分解能（Resolution)」、(ウィエルーインターサイエンス(Wiley Interscience)、1981)により編纂されている。
【００３４】
本発明は、薬学的組成物を提供する。この薬学的組成物は、上で規定された一般式(I)の化合物により形成される薬学的に許容され得る塩により形成される塩、それらの誘導体、それらの類縁体、それらの互変異性体、それらの立体異性体、それらの多形体、それらの薬学的に許容され得る溶媒和物(solvates)を、通常の薬学的に使用される担体(carriers)、希釈剤等と組み合わせて含有し、白血病、リンパ腫、非小肺癌、中枢神経系の癌、乳房、結腸、卵巣、腎癌又は他の癌であって、アドリアマイシン、トポテカン、イリノテカン、シスプラチネート等のような薬剤に耐性ある癌の治療に有用なものである。
【００３５】
本発明の薬学的組成物は、錠剤、カプセル、粉体、シロップ、溶液、サスペンジョンなどのような通常使用される形態にあることができ、好適な固体又は液体担体若しくは希釈剤中に又は好適な滅菌媒体中に矯味矯臭薬（flavorants）、甘味料等を含有して、注射可能な溶液又はサスペンジョンを形成することができる。そのような組成物は、典型的には、１ないし20重量％、好ましくは１ないし10重量％の活性化合物を含有し、組成物の残部は、薬学的に許容され得る担体、希釈剤又は溶媒である。
【００３６】
好適な薬学的に許容され得る担体には、固体充填剤又は希釈剤及び滅菌水性又は有機溶液が含まれる。活性成分は、そのような薬学的組成物中に、上述した範囲の所望する投与量を提供するために十分な量存在するであろう。すなわち、経口投与のためには、活性成分は、好適な固体又は液体担体又は希釈剤と組み合わされて、カプセル、錠剤、粉体、シロップ、溶液、サスペンジョン等を形成する。所望に応じて、薬学的組成物は、矯味矯臭薬、甘味料、エクシピエント(excipients)等のような追加の成分を含有することができる。非経口投与ためには、活性成分は、滅菌水性又は有機媒体と組み合わせて、注射可能な溶液又はサスペンジョンを形成することができる。例えば、ゴマ又はピーナツオイル中の溶液、水性プロピレングリコール等、さらには、水溶性薬学的に許容され得る酸付加塩又は化合物の塩基との塩を使用することができる。ポリヒドロキシル化ヒマシ油中に溶解された活性成分を有する水性溶液を注射可能な溶液として使用することもできる。このようにして調製される注射可能な溶液は、次いで、静脈内に、腹腔内に、皮下に、又は筋内に投与することができ、筋内投与がヒトには好ましい。
【００３７】
鼻投与のために、処方には、アエロゾール適用のための液体担体、特に、水性担体中に懸濁又は溶解された本発明の活性成分が含まれ得る。担体には、界面活性剤、プロピレングリコールの様な可溶化剤、シクロデキストリン又はレシチン（ホスファチジルコリン）のような吸収エンハンサ、パラベンのような保存剤等の添加成分を含むことができる。
【００３８】
タルク及び／又は炭水化物担体等を有するカプセル、錠剤又は糖剤は、いずれもの経口投与のために好適である。好ましくは、錠剤、糖剤又はカプセルのための担体には、乳糖、コーンスターチ及び／又はポテトスターチが含まれる。甘味ビヒクルを使用できる場合に、シロップ又はエリキシルを使用する場合がある。
【００３９】
上で規定した一般式（I）の化合物により形成される薬学的に許容され得る塩は、経口、鼻、肺、経皮又は非経口のいずれか、直腸、蓄積（depot）、皮下、静脈内、尿道内、筋内、鼻腔内、眼溶液又は軟膏で、ヒトを含む哺乳類に臨床的に投与される。経口による投与は、より都合がよく、潜在的な痛み及び注射の刺激を回避する。しかしながら、疾病によりまたは他の異常によって、薬剤を飲み込むことができないか、又は経口投与の後の吸収が減じられる場合、薬剤は非経口的に投与されることが必要である。いずれの経路であっても、投与量は、単一で、又は分割投与として、１日当たり患者の体重１ｋｇ当たり、約0.01ないし約100mg、好ましくは、1日当たり体重１ｋｇ当たり、約0.01ないし約30mgの範囲である。しかしながら、治療される個々の対象への最適投与量は、治療に責任のある人によって決定され、一般的には、初めは小投与量が投与され、その後、増加して、最も好適な投与量を決定する。
【００４０】
本発明の化合物は、黒色腫、前立腺、白血病、リンパ腫、非小肺癌、中枢神経系の癌、乳房、結腸、卵巣、腎癌 又はアドリアマイシン、トポテカン、イリノテカン,シスプラチネート等のような薬剤に対して耐性のある他の癌の治療に成功裏に実施される。このことが、イン・ビトロで、さらにはイン・ビボ動物実験によって例証された。
【００４１】
本発明を以下に示す例において詳細に説明するが、これらは説明のみのために提供されるものであり、したがって、本発明の範囲を限定するように解されるべきではない。
【００４２】
調製１
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-ヒドロキシ-20(S)-カンプトテシ
【化１７】
2005507893.tif 000016
【００４３】
エタノール(20 ml)中に溶解された10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノエチル-20(S)-カンプトテシン(200 mg) [(1) J. L. Wood らの J. Org. Chem.、5739-5740 (1995) ； (2)A. Pochini らの Synthesis、906 (1983)に記載される手順に従い調製]及び塩化第二鉄(200 mg)の混合物に、硫酸(2 ml)を滴下添加し、80℃で20時間加熱した。過剰の酸及びエタノールを減圧下に除去し、残渣を炭酸カリウム溶液により中和し、酢酸エチルで抽出した。有機相を水、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。溶媒を蒸発させることにより、固形物質が得られた。この固形残渣を、溶出液としてメタノール−クロロホルムを用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-エトキシ-20(S)-カンプトテシン(160 mg)が黄色味の粉隊として得られた。
【００４４】
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-エトキシ-20(S)-カンプトテシン(160 mg)をエタノール(10 ml)中に溶解し、50%HC1(10 ml)で処理した。溶液を加熱し、20時間還流した。反応が終わると、過剰の水及びエタノールを共沸混合物として除去し、残渣を炭酸カリウム溶液で中和し、酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。溶媒を濃縮することにより、10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-ヒドロキシ-20(S)-カンプトテシン(100 mg)が、溶出液として酢酸エチル-クロロホルムを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した後に得られた。mp :245 ℃。
【００４５】
1H-NMR (DMSO):δ 11.7 (s,D2O 交換可能,1H), 10.0(s,D2O 交換可能,1H), 8.95(s,1H), 8.10(d,J=10.OHz,1H), 7.70(d,J=10.0 Hz,1H), 7.20(s,1H), 6.95 (s,0.5H), 6.85 (s,1H), 5.40(s,2H), 4.70(s,2H), 2.40(s,6H), 1.95-1. 80(m,2H), 0.95-0.75(m,3H)。
【００４６】
調製２
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-ヒドロキシエトキシ)-20(S)-カンプトテシン
【化１８】
2005507893.tif 000017
【００４７】
エチレングリコール(8 ml)中に溶解された10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノエチル-20(S)-カンプトテシン(50 mg)[(1) J. L. Wood らの J. Org. Chem.、5739-5740 (1995) ； (2)A. Pochini らの合成、906 (1983)に記載される手順に従い調製] 及び塩化第二鉄 (50 mg)の混合物に、硫酸硫酸(0.6ml)を滴下添加し、90℃で10時間加熱した。過剰の酸及びエチレングリコールを減圧除去し、残渣を炭酸カリウム溶液で中和し、5%メタノール-酢酸エチルで抽出した。有機相を水、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。溶液の濃縮により、固形物質が得られた。この固体残渣を、溶出液として.メタノール−クロロホルムを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製により、10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2-ヒドロキシエトキシ)-20(S)-カンプトテシン(25 mg)が黄色味の粉体として得られた。mp:220 ℃。
【００４８】
1H-NMR (DMSO): δ 11.7 (s,D20 交換可能,1H), 9.90 (s,D2O 交換可能,1H), 8.85 (s,1H), 8.20(d,J=10.OHz,1H), 7.70(d,J=10.Ohz,1H), 7.20(s,1H), 6.95(s,0.5H), 6.85(s,0.5H), 5.40(s,2H), 4.75(s,2H), 3.90-3. 70(m,4H), 2.80(s,6H), 1.95-1.75(m,2H), 0.95-0.75(m,3H)。
【００４９】
調製３
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-フルオロエトキシ)-20(S)-カンプトテシン
【化１９】
2005507893.tif 000018
【００５０】
ジクロロメタン(10 ml)中に懸濁した10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-ヒドロキシ-20(S)-カンプトテシン(50 mg)(調製１で得た)及び硫酸(0.1 ml)の混合物に、2-フルオロエタノール(0.2 ml)を添加し、混合物を還流温度で12時間加熱した。反応を水で停止し、酢酸エチルで抽出した。有機相を水、食塩水で洗浄し、濃縮して乾燥した。残渣を、溶出液としてアセトン-クロロホルムを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-フルオロエトキシ)-20(S)-カンプトテシン(25 mg).が得られた。 mp :200℃。
【００５１】
1H-NMR (DMSO):δ 8.97(s,1H), 8.18(d,J=9.4Hz,1H), 7.78(d,J=9.4 Hz,1H), 7.19-7.17(s,1H), 6.94(s,1H), 6.88(s,1H), 5.40(br,s,2H), 4.80(br,s,2H), 4.70(m,2H), 4.20(m,2H), 2.80(br,s,3H), 1.87(br,m,2H), 0.88(br,m,3H)。
【００５２】
例１
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-ヒドロキシ-20(S)-カンプトテシン塩酸塩
【化２０】
2005507893.tif 000019
【００５３】
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-ヒドロキシ-20(S)-カンプトテシン(50 mg) (調製１で得た)の混合物に、0.4N HCl(5 ml)水溶液を攪拌しながら4時間加熱した。次いで、酢酸エチル(40 ml)を３ロットの反応混合物に注いだ。おのおのについて、〜10分間環流した。各有機相をデカントした。10%アセトン:クロロホルムで洗浄した。最後に、回転蒸発器(rotavapour)で80℃において水相をベンゼン共沸物として蒸発させた。得られた固形物を酢酸エチルで洗浄し、乾燥した。
【００５４】
1H-NMR (DMSO,200MHz) :δ 11.78(s,1H), 10.0(bs,1H), 8.9(s,1H), 8.1(dd,2H), 7.18 d,1H), 6.9(d,1H), 5.4(s,2H), 4.7(s,2H), 2.8(d,6H), 1.8(bs,2H), 0.9(bs,3H)。
【００５５】
例２
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-ヒドロキシエトキシ)-20(S)-カンプトテシン塩酸塩
【化２１】
2005507893.tif 000020
【００５６】
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5- (2'-ヒドロキシエトキシ)20(S)-カンプトテシン(60 mg)(調製２で得た)及び0.4 N HC1水溶液(6 ml)の混合物を攪拌しながら4時間加熱した。次いで、酢酸エチル(50 ml)を３ロットの反応混合物に注いだ。おのおのについて、〜10分還流した。有機層をデカントした。10%アセトン:クロロホルムで洗浄した。最後に、回転蒸発器で80℃において水をベンゼン共沸物として蒸発させた。得られた固形物を酢酸エチルで洗浄し、乾燥した。
【００５７】
1H-NMR (DMSO,200MHz) : δ 8.63 (s,1H), 7.95 (d,1H), 7.4 (m,2H), 6.9 (d,1H), 5.4(dd,2H), 4.3-3.3(bs,8H), 2.5(s,6H), 1.9(q,2H), 0.9(t,3H)。
【００５８】
例３
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-フルオロエトキシ)-20(S)-カンプトテシン塩酸塩
【化２２】
2005507893.tif 000021
【００５９】
10-ヒドロキシ-9-N,N-ジメチルアミノメチル-5-(2'-フルオロエトキシ)20(S)-カンプトテシン(5 g)を 0.1N 塩酸(120 ml)に溶解し、ろ過し、不溶物質を除去した。ろ液を酢酸エチル(25 ml×4)で連続的に洗浄し、水溶液を凍結乾燥した。凍結乾燥の後、得られた生成物を減圧下、16時間室温で乾燥し、エタノール(50 ml)及びヘキサン(100 ml)から結晶化した。生成物をろ過し、室温で24時間減圧下に乾燥した。収量: 4.5 g。
【００６０】
1H-NMR (DMSO,200MHz) :δ 5 8.97(s,1H), 8.18(d,J=9.4 Hz,1H), 7.78(d,J=9.4 Hz,1H), 7.19-7.17(s,1H), 6.94(s,1H), 6.88(s,1H), 5.40(br,s,2H), 4.80(br,s,2H), 4.70(m,2H), 4.20(m,2H), 2.80(br,s,3H), 1.87(br,m,2H), 0.88(br,m,3H)。
【００６１】
抗癌活性
本発明において調製された化合物は、多くのヒト腫瘍細胞株に対するイン・ビトロ抗癌活性において非常に良好であった。
【００６２】
各々の試験化合物について、8種類の異なる癌を代表する細胞株のバッテリーに対してスクリーニングした。典型的な手順において、抗生物質及び10%FCSを含有するRPMI 1640 培地100μL中の96ウエルプレートの各々のウエルに、1×104細胞を接種した。
【００６３】
プレートをCO2の存在下37℃においてインキュベートした。24時間後、試験化合物を、100から0.01μMにわたる５つの10倍希釈率で評価した。各々の試験ウエルに、100μLの試験化合物溶液を添加し、ビヒクルを伴う培地を添加し、ウエルを制御し、プレートを更にインキュベートした。48時間のインキュベートの後、プレートをスルホローダミンB方法により終端処理した。
【００６４】
次いで、蛋白質量に比例する光学濃度を、515nmの波長において自動分光光度プレートリーダーによって読んだ。読みをマイクロコンピュータに移送し、平均50%成長阻害（GI50）及び平均総成長阻害を計算した。以下の表１：異なる細胞株についての成長阻害(GI50)及び総成長阻害(TGI)値（例１）に示すデータから明らかなように、本発明の化合物は抗癌活性を示した。
【表１】
2005507893.tif 000022
【表２】
2005507893.tif 000023
【表３】
2005507893.tif 000024
【００６５】
HPLC法による溶解性:
過剰の化合物を、室温で24時間pH5.0の0.1M酢酸ナトリウム緩衝液0.5ml中に浸した。溶液を0.45ミクロンPVDFシリンジフィルター (Gelman Sciences)でろ過した。ろ液を異なる体積のHPLCに注入した(10及び20μl)。クロマトグラムを記録した。記録した反応を検量線から外挿し、化合物の溶解性を計算した(J. Med. Chem., 1995, 38, 400)。
【表４】
2005507893.tif 000025
【００６６】
単一投与量経口薬物速度論試験：
動物：
オスのスイスシロネズミ（Swiss Albino Mice）(20〜30 g)を実験に用いた。動物を標準の実験条下に置き、餌及び水には自由に接近できるようにし、任意に与えた。試験前に、動物は一晩(〜15時間)絶食させ、その間、水に自由接近できるようにし、任意に与えた。
【００６７】
投与製剤及び投与：
薬物10mgと等価量を正確に秤量し、清浄な乳鉢に移し、摩砕し、微細粉体を得た。これに、500μlのDMSO(10%)を添加し、透明な溶液を得た。これに、4.5mlのカルボキシメチルセルロースナトリウム(ナトリウムCMC)を添加し、体積を5mlにした。動物の体重に基づいて、調製した溶液を適切な体積(体重（ｇ）×10＝与えるべき投与量のμl数)経口強制餌養を通して投与した。
【００６８】
動物実験：
投与後、計画した時点（0.5、1、2、3、5、8及び12時間)において、100μlの血液を、後眼窩叢（retro orbital plexus）から、EDTA(5μlのミリQ水(Milli Q water)中の200mg/ml溶液)を含有する0.5mlエッペンドルフ管に回収した。血液を、12,800rpmで2分遠心し、血漿を分離し、ラクトン及びカルボキシレートの両形態にある化合物の評価をするために、遅滞なく直ちに分析した。
【００６９】
バイオ分析手順：
50μl血漿を清浄な2mlマイクロ遠心管に移した。これに氷冷メタノールを添加し(450μl)、ベルテックス（vertex）で15秒間混合し、化合物を抽出した。これらの内容物を12,800rpmで２分間、乾燥遠心管で遠心した。透明な上澄みを、４℃に維持された300μlの自動試料バイアルに分離し、これの20μlをHPLCカラムに注入した。
【００７０】
HPLC 条件：
システムコントローラー(SCL-lOAVP)、アイソクラティックポンプ(LC-10ATVP)、自動サンプラー (SIL-10ADVP)、蛍光検出器 (RF-10AXL) 及び25 ℃のカラムオーブン(CTO-10ASVP)からなるHPLC システム(Shimadzu)をClass-VPソフトウエアーで制御した。1.0ml／分の流動速度でポンプ輸送する動相[1% TEAA (pH = 5.5): アセトニトリル: MeOH :: 80: 15: 5)を用いて、試料をカラムに通して溶出し(Supelcosil-LC318, 5μ, 4.6×250mm,300°A)、溶離液をEx. 370 nm/Em. 537 nmにセットした蛍光検出器を用いて検出した。おおよそのRTは、カルボキシレートが(CA1=4.1分, CA2=4.8分)であり、ラクトンが (LA1=7.9分, LA2=11.6分)であった。
【００７１】
濃度の検量及び測定
薬剤濃度の測定のために、カルボキシレート及びラクトン形の両者について、内部標準に対する薬剤のピーク面積比対濃度(範囲: 0.05〜10μg/ml)を別々にプロットし、ソフトウエアー"Sigma Plot"(Jandel Scientific version, 2.0, USA)を用いて、直線回帰を適用した。0.99又はそれよりもよい相関係数(r2)が得られた。
【００７２】
計算法及びデータ分析：
薬物速度論パラメータを、カルボキシレート及びラクトンの両形について、別々に非コンピュータ化モデル分析により計算した。ピーク血漿濃度(Cmax)及び対応する時間(Tmax)を生データから直接得た。直線及びlog-直線台形加算（log-linear trapezoidal summation)により、最後の計量可能な時点AUC(0-t)までの、血漿濃度対時間曲線下の面積を得た。Clast／Kelの商を加えることにより、AUC(0-t)を無限大まで外挿した（すなわち、AUC(0-∞））。ここで、Clastは、最後の測定可能な時間濃度を表し、Kelは、見かけ終端速度定数を表す。Kelを、終端相における薬剤のlog-変換濃度の直線回帰により計算した。終端排出相の半減期を、t1/2=0.693/Kelの関係を用いて得た。
【表５】
2005507893.tif 000026
【国際公開パンフレット】
2005507893.tif 000030
2005507893.tif 000031
2005507893.tif 000032
2005507893.tif 000033
2005507893.tif 000034
2005507893.tif 000035
2005507893.tif 000036
2005507893.tif 000037
2005507893.tif 000038
2005507893.tif 000039
2005507893.tif 000040
2005507893.tif 000041
2005507893.tif 000042
2005507893.tif 000043
2005507893.tif 000044
2005507893.tif 000045
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2005507893.tif 000047
2005507893.tif 000048
2005507893.tif 000049
2005507893.tif 000050
2005507893.tif 000051
2005507893.tif 000052
2005507893.tif 000053
【国際調査報告】
2005507893.tif 000054
2005507893.tif 000055
2005507893.tif 000056
2005507893.tif 000057
2005507893.tif 000058