(57)【要約】本発明は、哺乳動物において毛包の形成を誘導し、引き続き化粧的に受容可能な方向へ毛髪の成長を誘導する組成物及び方法に関する。本方法はさらに、表皮層の下に又はそれと接触して、ベヒクルと共に乳頭細胞又は成長因子を移植して表皮細胞の成長を導き、こうして初期の毛包を形成することを含む。ベヒクルは毛包の形成が始まった後で除去される。本発明はさらに、乳頭細胞をパッケージし、送達する装置を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
固い幹と少なくとも一つの乳頭細胞を含むベヒクルを哺乳動物の皮膚の表皮層と接触させ、ベヒクルを所望の方向へ向けて表皮層に固定し、一定期間の後にベヒクルを表皮層から除去し、これによって所望の方向へ毛髪の成長を誘導することを含む、哺乳動物において所望の方向へ毛髪の成長を誘導する方法。
【請求項２】
哺乳動物がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
固い幹が管である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
固い幹が固いスレッドである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
固い幹がロッドである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
乳頭細胞が自家細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
乳頭細胞が他家細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
乳頭細胞が細胞培養で増殖される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
乳頭細胞がヒトから得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
ベヒクルがさらに成長因子を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
期間が約２日〜約１０日である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
ベヒクルがさらに異常に発現した成長／転写因子を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
異常に発現した成長／転写因子がＷｎｔ成長／転写因子群の一員である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
異常に発現した成長／転写因子がソニック ヘッジホッグ（sonic hedgehog）成長／転写因子群の一員である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
異常に発現した成長／転写因子がＫｒｏｘ−２０成長／転写因子群の一員である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
異常に発現した成長／転写因子がホメオボックス成長／転写因子群の一員である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
異常に発現した成長／転写因子がノッチ（Notch）成長／転写因子群の一員である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
異常に発現した成長／転写因子がトランスフォーミング成長因子−α成長／転写因子群の一員である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１９】
異常に発現した成長／転写因子がインシュリン様成長因子成長／転写因子群の一員である、請求項１２に記載の方法。
【請求項２０】
固い幹を含むベヒクルであって、成長因子又は成長／転写因子を含むベヒクルを哺乳動物の皮膚の表皮層と接触させ、ベヒクルを所望の方向へ向けて表皮層に固定し、一定期間の後にベヒクルを表皮層から除去し、これによって所望の方向へ毛髪の成長を誘導することを含む、哺乳動物において所望の方向へ毛髪の成長を誘導する方法。
【請求項２１】
哺乳動物がヒトである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
固い幹が管である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
固い幹が固いスレッドである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
固い幹がロッドである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
ベヒクルがさらに成長因子を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２６】
期間が約２日〜約１０日である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２７】
ベヒクルがさらに異常に発現した成長／転写因子を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２８】
異常に発現した成長／転写因子がＷｎｔ成長／転写因子群の一員である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
異常に発現した成長／転写因子がソニック ヘッジホッグ（sonic hedgehog）成長／転写因子群の一員である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
異常に発現した成長／転写因子がＫｒｏｘ−２０成長／転写因子群の一員である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
異常に発現した成長／転写因子がホメオボックス成長／転写因子群の一員である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
異常に発現した成長／転写因子がノッチ（Notch）成長／転写因子群の一員である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３３】
異常に発現した成長／転写因子がトランスフォーミング成長因子−α成長／転写因子群の一員である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３４】
異常に発現した成長／転写因子がインシュリン様成長因子成長／転写因子群の一員である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３５】
管の個々の区分に密閉される乳頭細胞を管が含み、これによって乳頭細胞をパッケージしかつ配置する装置が形成される、少なくとも一つの管を含む、乳頭細胞をパッケージしかつ配置するための装置。
【請求項３６】
一又は複数の管が少なくとも一つの柔軟な器具によって相互に連結されている、請求項３５に記載の装置。
【請求項３７】
管の材料が生物学的に不活性なプラスチックを含む、請求項３５に記載の装置。
【請求項３８】
ヒートシール、化学シール及びメカニカルシールから成る手段によって管が密閉される、請求項３５に記載の装置。
【請求項３９】
個々の区分が管から引き離されて固い幹と少なくとも一つの乳頭細胞を含むベヒクルを形成する、請求項３５に記載の装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
毛包は哺乳動物の皮膚に特有のものである。毛包は原始表皮が下方成長したものであり、皮膚の深い層へ広がる。毛包の基底部に毛包乳頭又は真皮乳頭として公知の栓子細胞が存在する（Stenn and Paus, 2002, Physiol. Rev., 81: 449）。乳頭は毛包の正常な毛周期に必要であり（Oliver, 1966, Embryol. Exp. Morph. 15: 331; Oliver, Embryol. Exp. Morph. 16: 231）、従って毛幹の成長に必要である。毛幹は、密に接着した上皮細胞から成る細い形の構造をしており、上皮細胞はケラチンフィラメント及びフィラメント凝集タンパク質で充填されている。
【背景技術】
【０００２】
脱毛は種々の因子で生じる。ヒトの男性型脱毛症の場合には、頭皮の前部及び頂部の毛包がアンドロジェンの影響を受けやすく、影響を受けやすい個人において、大きな毛包から顕微鏡的に小さな毛包への変換が進行し、臨床的には脱毛とみられる。２０％の女性もその生涯にある種の脱毛を経験すると推定されており、これは頭皮の頂部における毛髪の希薄化によって特徴付けられることが多い。加齢に伴って脱毛が広がる。さらに、別の疾病状態、例えばはんこん性の症状、例えばはんこん性脱毛症、熱火傷又は加圧による傷害は顕著な脱毛を生じる可能性がある。原因を問わず、脱毛の結果、自尊心及び自信の喪失を伴う、重大な生理学的な、社会的な、性的な影響が生じる可能性がある。
【０００３】
脱毛の処置及び解決策は時間とともに大きく変化してきた。髪飾り、カツラ、及び毛髪の伸張は無毛の領域を隠蔽することはできるが、新たな成長を生じるものではない。二つの利用可能な医薬（ミノキシジル及びフィナスリド）は脱毛をさらに遅らせるが、いずれも新たな毛包を再生するのに使用することはできない。希薄化し又は失われる毛包を取り戻す現在広く使用されている方法は、毛包移植手術である。
【０００４】
３０年以上にわたって、毛髪移植手術が無毛領域に活性な毛包を取り戻す唯一の方法であった。この方法では、無毛化が進行していない頭皮の領域（後頭部領域）から毛包を外科手術で除去し、無毛領域（前部及び頂部領域）へ移植する。毛髪の移植片は、移植片当たり１〜２の毛包から１０〜１５の毛包の範囲内にある。この方法には限界がある。第１に、移植手術は進行が遅く労働集約的である。１回の移植手術で７５０〜１５００の毛包を移植することもまれではないので、この方法では一般に完全に１日の労働が必要である。毛包を移植する前に提供部位から提供毛包を解剖により取り出す必要があるので、この方法は進行が遅く労働集約的である。第２に、化粧効果を満足するためには、複数回の手術が必要である。最後に、提供部位からの毛包は受容部位のために犠牲にされなければならないことであり、これが最も重要である。提供部位にはんこんが残るのは可能性の問題であるが、数の減った毛包が残されることは確実である。このために、適切な提供領域のない人々にとってこの方法は除外される。毛包の犠牲を最小化するために、新たな毛包の形成を誘導する他の方法が必要となる。元の毛包を犠牲にすることなく新たな毛包を生成するシステムに対する要望が依然としてあり、該システムは多数の毛包を迅速かつ安価に移植し、かつ最適な化粧効果を有するものである。
【０００５】
この目的のために、真皮乳頭細胞は単独で新しい毛包を誘導することができ、従って表皮層の下に移植された場合に毛幹の形成を誘導することができるので、新たな治療方法である基底部として誘導性の乳頭細胞を移植することは最も有望な方法であると考えられる。乳頭細胞は単独で表皮細胞を誘導して新たに成長可能な毛包を形成することができる（Cohen, 1961, Embryol. Exp. Morph., 9: 117; Oliver, 1967, Embryol. Exp. Morph., 18: 43; 1970, Embryol. Exp. Morph., 23: 219; Oliver et al., 米国特許第４，９１９，６６４号; Jahoda, 1992, Development, 115: 1103; Reynolds et al., 1991, Ann. N.Y. Acad. Sci., 642: 226; Reynolds et al., 1999, Nature 402: 33）。自家乳頭移植片が新たな毛包の誘導に有効であるばかりでなく、乳頭細胞には免疫学的寛容性があり、他家移植物も有効であることが示されている（Reynolds et al., 1999, Nature 402: 33）。最後に、誘導性の乳頭細胞は、細胞培養で維持しかつ増殖することができ、（Cooley et al., ＰＣＴ／ＵＳ／９８／１３７５４；Kishimoto et al., 2000, Genes. Dev. 14: 1181）移植のために利用可能な多数の細胞を蓄積することを可能とし、提供組織の放棄の必要性を低下させること、反復する手順の数を減らすこと、及び従来の毛髪移植手術で行われていた提供部位からの健康な毛包を犠牲にし、又は共食いすることを最小化することを可能にする。
【０００６】
乳頭移植手術の問題の一つは、新たな毛包形成能力が低く、移植した毛包の方向付けが予測できないことである。毛包の周期及び毛幹の方向付けに含まれるいくつかの成長のアイデンティティ及び転写因子を解明する最近の進歩は、これらの使用により手術の効率及び化粧効果を強化できることを示している。ＴＧＦα及びその受容体（Nixon et al., 1996, J. Histchem. Cytochem., 44: 377）Ｋｒｏｘ−２、ＴＧＦβＲII（Gambardella et al., 2000, Mech. Dev. 96: 215）、ソニック ヘッジホッグ（sonic hedgehog）（Chiang et al., 1999, Dev. Biol. 205: 1）、ホメオボックスタンパク質（Widelitz et al., 1997, Microsc. Res. Tech., 15: 38）、及びノッチ（Notch）タンパク質（Lin et al., 2000, Development 127: 2421）の全ては毛包中で異常に発現をし、そのため新たな毛包の誘導、形態形成、生存及び方向付けにおいて一定の役割を果たすことが観察されている。
【０００７】
付随する構造を伴わずに乳頭細胞を哺乳動物の皮膚へ導入することを記載する従来の開示は、毛包の方向又は成長を方向付ける方法を記載しておらず、このため、得られた毛幹は予期し得ないかつ化粧的には受け入れがたい方向へ成長する毛幹を生成する可能性がある。
【０００８】
毛包の成長及び方向付けを目的とする固い幹と共に乳頭細胞を移植する方法を記載する従来の開示も、乳頭細胞の移植物の能力を十分に実現していない。Cooley他（ＰＣＴ／ＵＳ９８／１３７５４）は、吸収性縫合材料から成る固い幹と乳頭細胞の同時導入、それに引き続く密閉性のドレッシングによる創傷の被覆又は創傷を密閉しないままにしておくことを記載している。吸収性材料で製造した幹は初期の毛包が形成される前に予測し得ない速度で溶解する可能性がある。さらに、生物学的に活性な材料、例えば吸収性縫合材料を使用することによって、移植部位に炎症性の免疫反応を引き起こす可能性がある。生物学的に活性な材料に対する炎症反応又は異物反応は全て新たな毛包の形成を妨げるものであり、従って再生している毛包の近辺における異物反応を誘発するあらゆる生分解性材料は逆効果−少なくとも効率的でなく、病理学的には最悪である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
新たな毛包を含み、予測可能な成功率を有しかつ化粧効果を有する、毛髪の成長を取り戻すための、破壊的でなくかつ高価でない方法を開発することが長期間要望されてきた。本発明はこの要望に応えるものである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、固い幹と少なくとも一つの乳頭細胞を含むベヒクルを哺乳動物の皮膚の表皮層と接触させることを含む、所望の方向へ毛髪の成長を誘導する方法を含む。本方法はさらに、ベヒクルを所望の方向へ向けて表皮層に固定し、一定期間の後でベヒクルを表皮層から除去し、これによって所望の方向へ毛髪の成長を誘導することを含む。
【００１１】
本発明の他の観点では、哺乳動物はヒトである。
本発明のさらに他の観点では、固い幹は管、固いスレッド、又はロッドである。
本発明のさらに他の観点では、乳頭細胞は自家細胞又は他家細胞である。
本発明のある観点では、乳頭細胞は細胞培養で増殖する。
本発明の他の観点では、乳頭細胞はヒトから得られる。
本発明のさらに他の観点では、約２日〜約１０日の一定期間後にベヒクルが除去される。
本発明のある観点では、ベヒクルは成長因子を含む。
本発明の他の観点では、ベヒクルは異常に発現した成長／転写因子を含み、該成長／転写因子はＷｎｔ、ソニック ヘッジホッグ、Ｋｒｏｘ−２０、ホメオボックス、ノッチ、トランスフォーミング成長因子−α及びインシュリン様成長因子群の一員であってもよい。
【００１２】
本発明はさらに、哺乳動物において所望の方向へ毛髪の成長を誘導する方法を含み、該方法は、成長／転写因子を含み固い幹を含むベヒクルと皮膚の表皮層とを接触させることを含む。本方法はさらに、ベヒクルを所望の方向へ向けて表皮層に固定し、一定期間の後でベヒクルを表皮層から除去し、これによって所望の方向へ毛髪の成長を誘導することを含む。
【００１３】
本発明の他の観点では、哺乳動物はヒトである。
本発明のさらに他の観点では、固い幹は管、固いスレッド、又はロッドである。
本発明のさらに他の観点では、約２日〜約１０日の一定期間後にベヒクルが除去される。
本発明のある観点では、ベヒクルは成長因子を含む。
本発明の他の観点では、ベヒクルは異常に発現した成長／転写因子を含み、該成長／転写因子はＷｎｔ、ソニック ヘッジホッグ、Ｋｒｏｘ−２０、ホメオボックス、ノッチ、トランスフォーミング増殖因子−α及びインシュリン様増殖因子群の一員であってもよい。
【００１４】
本発明はさらに、乳頭細胞をパッケージしかつ配置する装置を含み、該装置において、乳頭細胞を含む管を密閉して管の個々の区分を形成し、これによって乳頭細胞をパッケージし配置する装置を形成する。
本発明のある観点では、一又は複数の管は柔軟な器具によって相互に連結している。
本発明の他の観点では、管は生物学的に不活性なプラスチックを含む。
本発明のさらに他の観点では、ヒートシール、化学シール又はメカニカルシールにより管が密閉されて区分を形成する。
本発明のさらに他の観点では、区分を取り外して固い幹と少なくとも一つの乳頭細胞を含むベヒクルを形成する。
【００１５】
本発明を説明する目的で、本発明の態様が図面中に示されている。しかしながら、本発明は、図面中に示された態様の正確な配置や寸法に制限されない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明は、毛髪誘導性の乳頭細胞又は成長因子をヒトの表皮へ送達し、毛包の成長の成功率が高くかつ化粧的に受け入れ可能な方向性を有する新たな毛包を形成する新規な方法を含む。本方法は、必要な提供組織が最小限であるために、今日の毛髪移植手術の破壊的な又は共食い的な観点を克服する。
【００１７】
本発明は、一部は、ヒトの毛包乳頭細胞を表皮組織又はその下にある組織へ移植することができ、その結果毛包の形成及びそれに引き続く毛髪の成長が可能であるとの発見に基づく。本発明に従うと、皮膚の表皮層の下へ又はそれと接触して乳頭細胞を挿入することができる除去可能な、生物学的に不活性なベヒクルと共に、人の皮膚の中へ又はそれと接触して乳頭細胞が導入される。不活性なベヒクルは乳頭細胞を真皮中へ運搬し、挿入した乳頭細胞の方向へベヒクルに沿って真皮細胞の下方成長を刺激する。誘導性の乳頭細胞が真皮細胞をそれらの方向へ引きつけることは公知である（Arase et al., J. Dermatol. 17: 667; Fuji et al., 2001, J. Dermatol. Sci. 25: 206）。化粧的に受け入れ可能であることが見出された方向へ、上皮層を通って皮膚の中へ又は皮膚と接触してベヒクルが挿入される。乳頭細胞及びベヒクルは皮膚に固定され、挿入部位に残されて、挿入物の下方及び周囲で成長して最終的には毛包を形成する上皮細胞カラムの形成を促進にする。ベヒクルを成長因子又は転写因子又はこれらの因子を発現するもので処理し、又は被覆して、毛包の形成及び毛髪の成長を促進にすることができる。ベヒクルを規定の期間後に表皮層から除去する。
【００１８】
本発明はさらに、一部には、追加の乳頭細胞のない状態で表皮組織を成長因子と接触させることによって毛包の形成又は再生が誘導可能であるとの発見に関する。本発明に従うと、表皮層と接触可能である、除去可能な、生物学的に不活性なベヒクルが皮膚に挿入される。ベヒクルは化粧的に受け入れ可能であることが見出された方向に向かって上皮層へ挿入され、皮膚に固定され、挿入部位に残されて、最終的に毛包を形成する上皮細胞カラムの形成を促進する。ベヒクルを成長因子又は転写因子又はこれらの因子を発現するもので処理し、又は被覆して、毛包の形成及び毛髪の成長を促進にすることができる。ベヒクルを規定の期間後に表皮層から除去する。
【００１９】
本発明はさらに、乳頭細胞を有するか又は有しないベヒクルの皮膚の上皮層へのパッケージング、挿入及び配置を容易にする新規な装置を含む。本発明に従うと、乳頭細胞を含むか又は含まず、成長因子又は転写因子を含むか又は含まないが、これらの因子の少なくとも一つは含むベヒクルは、相互連結器具によって他のベヒクルに取り付けられる。ベヒクルは、皮膚に挿入するのに必要な長さより長くてもよく、従って、一又は複数の長いベヒクルから短い個々のベヒクルを製造するために区分されてもよい。区分したベヒクルを挿入の前に単に切断し又は折って離して分離することができる。
【００２０】
このように本発明は、哺乳動物において所望の方向へ毛髪の成長を誘導する方法に関する。本方法は、無毛症、特に男性型及び女性型の無毛症のヒト、及びはんこん化（例えば火傷、外傷、放射線障害、化学療法、加圧等によるはんこん）による脱毛を有するヒトにおける毛髪の成長を再生するのに有用である。本方法は頭皮の皮膚へ適用されることが最も多いが、全身の皮膚表面のいずれか（例えばまぶた、眉毛、ひげ、そけい部等）における毛髪の成長に適用することができる。
【００２１】
本発明のある態様において、移植する乳頭細胞を毛髪が成長している頭皮のバイオプシーから得る。他の態様では、移植する乳頭細胞を毛包を含む皮膚の移植片から得る。提供源から乳頭細胞を得る方法は当業者に直ちに明らかである（Jahoda and Oliver, 1981, Br. J. Dermatol., 105: 623; Messenger, 1984, Br. J. Dermatol., 110: 685; Williams et al., 1994, Br. J. Dermatol., 130: 290）。
他の態様では、移植する乳頭細胞を１次細胞培養から得る。好ましい態様では、移植する乳頭細胞を増殖した細胞培養から得る。
ある態様では、乳頭細胞培養を、支持細胞及び／又は乳頭細胞の成長因子の存在下に維持する。誘導性の乳頭細胞培養の維持及び増殖条件及び要件は、当業者に周知である（Kishimoto et al., 2000, Genes. Dev. 14: 1181; Cooley et al., ＰＣＴ／ＵＳ９８／１３７５４）。
【００２２】
本発明では、移植後時間を経て皮膚からベヒクルを除去する。本発明のある態様ではベヒクルは固い材料で作られる。他の態様では、ベヒクルはプラスチック、金属、又は固い繊維状のスレッドを含む材料から作られるが、これに限定されない。ベヒクルのコア材料は物理的及び生物学的に不活性である。他の態様では、ベヒクルは管である。他の態様では、ベヒクルはロッドである。好ましい態様では、ベヒクルは生物学的に不活性なプラスチック管である。ある態様では、挿入する管は外径が約０．０１mm〜約３．０mmであり、長さが約１mm〜約２０cmである。ある態様では、管の内径は約０．０１mm〜約３．０mmである。ある態様では、プラスチック管はポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、TEFLON、及びポリカーボネートを含むが、これに限定されない。さらに他の態様では、ベヒクルは、実在する毛包又は所望の毛包の形に非常によく似た形をしている。これは、ベヒクルの断面の形を所望の形に変更すること、ベヒクル中に曲がり、曲線、又は巻き線を置くこと、又はベヒクルの直径を変えることを含むが、これに限定されない。
【００２３】
本発明のある態様では、管を区分し、分離して短い管を形成し、皮膚へ挿入するベヒクルとして使用する（図２）。本発明の好ましい態様では、ベヒクルは乳頭細胞を含む管の一部であり、管は密閉した区画に区分される。本発明のある態様では、管は、ヒートシール、化学シール（例えばエポキシ及び接着剤）、及び機械的手段（例えばクランプ、圧接、又は有線結着）によるシールを含む方法によって密閉されるが、これに限定されない。
【００２４】
本発明のある態様では、管は相互に連結している。本発明のさらに他の態様では、管は柔軟な器具で相互に連結されていて、管又はベヒクルを所望の方向へ配置し取り扱うことが可能となる。本発明のある態様では、柔軟な器具は、スレッド、ストリング ペーパー（string paper）、金属の薄片、プラスチック片、及び接着テープを含むが、これに限定されない。本発明の好ましい態様では、柔軟な器具は約１〜約１０００個の管を相互に連結する。より好ましくは、柔軟な器具は約２〜約１００個の管を相互に連結する。さらに好ましくは、柔軟な器具は約３〜約５０個の管を相互に連結する。さらに一層好ましくは、柔軟な器具は約３〜約５個の管を相互に連結する。
【００２５】
本発明のある態様では、管は複数の位置で柔軟な器具によって相互に連結している。本発明の好ましい態様では、柔軟な器具は約５mmごとから約２０cmごとに管に結合している。
【００２６】
好ましい態様では、移植の前に乳頭細胞が管に含まれる。ある態様では、移植の前に水性媒体に懸濁された乳頭細胞を管の各区分へ密閉する。他の態様では、移植の前に一群の乳頭細胞を管の各区分へ密閉する。本発明のある態様では、管の区分へ約１〜約１０7の乳頭細胞が密閉される。好ましい態様では、管の密閉した個々の区分が切り離されて挿入のためのベヒクルを形成する。本発明のある態様では、切断器具、機械的手段又は熱を使用して移植の前に各区分を管から切り離してベヒクルを形成する。
【００２７】
本発明のある態様では、ベヒクルは乳頭細胞を伴って又は伴わずに、成長因子又は転写因子をタンパク質又は核酸の形態として含む。成長因子又は転写因子を含むベヒクルの製造方法が本明細書に記載されている。
【００２８】
本発明の好ましい態様において、ベヒクルを皮膚の表皮細胞と接触させて配置して、下方成長する隣接の表皮によってベヒクルの成長及び“ウォールオフ”を促進し、それは表皮が不活性な異物と反応して周囲の組織からベヒクルをウォールオフしようとするからである（Clark et al., 1988, Mol. Cell. Biol. of Wound Repair, Plenum Pub., Co. New York）。このような下方成長をする細胞は、乳頭の誘導特性に応答することができる集団を含む（Ferraris et al., 1997, Int J Dev Biol, 41: 491）。本発明のさらに他の態様では、初期の毛包の形成後にベヒクルが除去される。
【００２９】
本発明のある態様では、誘引、運動性を促進し、その結果ベヒクルの周囲で表皮細胞の成長を促進する成長因子をベヒクルは含むか又はそれで被覆されている。意図した成長因子は以下の成長因子群の一部を含むがこれに限定されない：塩基性繊維芽細胞成長因子、フィブロネクチン、表皮成長因子、ノギン、トランスフォーミング成長因子−β、トランスフォーミング成長因子−α、トレフォイル（trefoil）因子、血小板誘導成長因子、血管内皮成長因子、インシュリン様成長因子、肝細胞成長因子、フィブリン、コラーゲン、及びラミニン（Sigma Chemical Co. St. Louis, MO）。意図した成長因子を溶液でベヒクルに適用し乾燥し、又は乾燥固形物としてベヒクルに適用することができ、又はベヒクルの材料に取り込むこともできる。これらの成長因子をベヒクルへ導入する他の方法は当業者に周知である。ベヒクルに取り込まれる成長因子の濃度は、ベヒクル当たり成長因子の最終乾燥質量で約０．０１ng〜約１００mgである。
【００３０】
他の態様では、成長因子をベヒクルへ、上記の非制限的に挙げた成長因子を発現することが可能なＤＮＡ体として取り込むこともできる。ある態様では、成長因子はベヒクルへベクター又は発現ベクターとして取り込まれる。ある態様では、ベヒクルは無細胞転写及び翻訳のための成分を含む。これらの成分はＲＮＡポリメラーゼ及び真核細胞源又は原核細胞源からの細胞抽出物を含むことができる。これらの成分は当業者に周知であり、多数の発売元から入手可能である（Ambion, Austin, TX）。
【００３１】
ベクター及び発現ベクターを製造し、使用する方法は当業者に周知である（Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York）。
【００３２】
他の態様では、非制限的に挙げた成長因子は、ウィルスベクターとしてベヒクルに取り込まれ又は該ベヒクルと共に送達される。これを実施するための方法は当業者に周知である（Sato et al., 1999, J. Clin. Invest. 104: 855）。
【００３３】
好ましい態様では、新たに形成された毛包の成長及び位置決めに役割を果たす異常に発現した成長／転写因子をベヒクルは含むか又はそれでベヒクルが被覆されている。意図した成長／転写因子は以下を含むがこれに限定されない：Ｋｒｏｘ−２０、ＴＧＦ−βＲII（Gambardella et al., 2000, Mech. Dev. 96: 215）、ソニック ヘッジホッグ（sonic hedgehog）（Chiang et al., 1999, Dev. Biol. 205: 1）、ホメオボックスタンパク質（Widelitz et al., 1997, Microsc. Res. Tech., 38: 452）、Ｗｎｔ群タンパク質（Kishimoto et al., 2000, Genes. Dev. 14: 1181）、トランスフォーミング成長因子−α、インシュリン様成長因子（Philpott et al., 1994, J. Invest. Derm., 102: 857）及びノッチ（Notch）タンパク質（Lin et al., 2000, Development, 127: 2421）。意図した成長／転写因子を溶液でベヒクルに適用し乾燥し、又は乾燥固形物としてベヒクルに適用することができ、又はベヒクルの材料に取り込むこともできる。成長／転写因子をベヒクルへ導入する他の方法は当業者に周知である。ベヒクルに取り込まれる成長／転写因子の濃度は、ベヒクル当たり成長／転写因子の最終乾燥質量で約０．０１ng〜約１００mgである。
【００３４】
他の態様では、上記の非制限的に挙げた成長／転写因子を、タンパク質を発現することが可能なＤＮＡ体としてベヒクルへ取り込むことができる。ある態様では、成長／転写因子はベヒクルへベクターとして取り込まれる。ある態様では、ベヒクルは無細胞転写及び翻訳のための成分を含む。これらの成分はＲＮＡポリメラーゼ及び真核細胞源又は原核細胞源からの細胞抽出物を含むことができる。これらの成分は当業者に周知であり、多数の発売元から入手可能である（Ambion, Austin, TX）。
【００３５】
他の態様では、非制限的に挙げた成長／転写因子は、ウィルスベクターとしてベヒクルに取り込まれ又は該ベヒクルと共に送達される。これを実施するための方法は当業者に周知である（Sato et al., 1999, J. Clin. Invest. 104: 855）。
【００３６】
本発明のある態様では、ベヒクルと乳頭細胞が挿入される皮膚の領域は、毛包の形成及び毛髪の成長を促進する物理的、薬理学的な方法で処置されてもよい。このような処置は、超音波、紫外線照射、マッサージ、ミノキシジル（Sigma Chemical Co. St. Louis, MO）のような局所用組成物の適用を含むが、これに限定されない。毛包の形成を促進する他の方法は当業者に周知である。
【００３７】
本発明の好ましい態様では、天然表皮細胞を乳頭細胞と接触させ、毛包の化粧的に受け入れ可能な配置を達成するために、ベヒクルと乳頭細胞を皮膚へ挿入する。ベヒクルと乳頭細胞を挿入する深さ、位置、及び角度は当業者に直ちに明らかである。所定の時間後、移植の約２日〜約１０日後にベヒクルを除去する。初期毛包の形成速度に依存して、ベヒクルを早い時期又は遅い時期に除去することができる。移植から除去までの時間は当業者に明らかである。
【００３８】
ベヒクルと乳頭細胞を、化粧的に受容可能な毛包の配置と方向付けを達成するいずれの方法によっても、挿入することができる。本発明の好ましい態様では、ベヒクルと乳頭細胞が移植される皮膚の領域において、自然には生じないオリフィスを作る。本発明の他の態様では、単一の自然には生じないオリフィスを皮膚に一度に１個作り、ベヒクルと乳頭細胞を一つずつ移植する。本発明のさらに他の態様では、複数の自然には生じないオリフィスを一度に作り、ベヒクルと乳頭細胞を一つずつ移植する。本発明の好ましい態様では複数の自然には生じないオリフィスを一度に作り、ベヒクルと乳頭細胞をグループで移植する。本発明のさらに他の態様では、多数のベヒクルと乳頭細胞を支持体に配置し、同時に移植する。複数のベヒクルを皮膚へ移植するのを容易にするいずれかの器具を使用してベヒクルを移植することができる。
【００３９】
本発明のある態様では、ベヒクルと乳頭細胞を一度に一つの手順で移植する。本発明の他の態様では、ベヒクルと乳頭細胞を異なる時期に多数の手順で移植する。
【００４０】
本発明の好ましい態様では、ベヒクルは皮膚に固定されて、ベヒクルに隣接する表皮細胞の移動と成長が可能になる。ある態様では、皮膚におけるベヒクルの配置によってベヒクルは固定される。さらに他の態様では、ベヒクルは医用接着剤によって固定され、それはDERMABONDTM又はLIQUIDERMTM（Closure Medical Corp. Raleigh, NC）を含むが、これに限定されない。他の態様では、ベヒクルは所定の場所に縫合糸、止め金、又は接着テープで保持される。本発明では、ベヒクルは所定の場所で所定の時間保持され、次いで皮膚から除去される。ベヒクルの周囲に表皮細胞を含む初期の毛包の形成が可能となるのに必要な時間の長さは、当業者に直ちに明らかである。
【００４１】
定義
“一つの“という冠詞は、本明細書では、その冠詞の文法的な目的語が１又は１より大きいこと（すなわち、少なくとも１）を意味するように使用される。例えば、“一つの要素”は、１の要素又は１を越える要素を意味するように使用される。
“複数の”という用語は、本明細書では２又はそれを越えることを意味するように使用される。
“乳頭細胞”という用語は、本明細書では、真皮乳頭細胞又は毛包乳頭細胞として知られ、又は他のどのような名称によって解釈されることを意図されていようとも、毛包を誘導する特性を有する毛包の基底部から誘導した一群の細胞として知られている細胞型を意味するように使用される。
“化粧的に受容可能な”という用語は、本明細書では、移植手順を行う実施者が決定する予測可能な方向へ移植した毛包が方向付けられるように乳頭細胞移植物が配置されることを意味するように使用される。
“所望の方向付け”という用語は、本明細書では、移植手順を行う実施者が決定する予測可能な方向へ移植した毛包が方向付けられるように乳頭細胞移植物が配置されることを意味するように使用される。
【００４２】
“自家”という用語は、本明細書では、ある個人から同一の個人への組織の移植物を意味するように使用される。
“他家”という用語は、本明細書ではある個人から同一種の別の個人への移植物を意味するように使用される。
“成長因子”という用語は、本明細書では、表皮細胞と接触した場合にその増殖、成長、形態形成、方向付け又は運動性を促進するペプチド又はタンパク質を含む生物学的な成長因子を意味するように使用される。
“成長／転写因子”という用語は、本明細書では、表皮細胞と接触した場合にその増殖、成長、形態形成、方向付け又は運動性を促進するペプチド又はタンパク質を含む生物学的な成長因子を意味するように使用される。
“異常に発現した”という用語は、本明細書では、空間的、時間的に不正規な形態の分子の存在を意味するように使用される。
“表皮層”という用語は、本明細書では、真皮を覆い、身体の外皮を形成する組織の層を意味するように使用される。
【００４３】
“ベクター”は、分離した核酸を含む組成物であり、細胞の内部へ分離した核酸を送達するのに使用することができるものである。多数のベクターが本技術分野で知られており、以下を含むがこれに限定されない：直鎖ポリヌクレオチド、イオン性又は両性化合物と会合したポリヌクレオチド、プラスミド、及びウィルス。このように、“ベクター”という用語は、独立して複製するプラスミド及びウィルスを含む。この用語はさらに、細胞への核酸の移転を容易にする非−プラスミド及び非−ウィルスコンパウンドを含み、例えばポリリシンコンパウンド、リポソーム等を含むと解すべきである。ウィルスベクターの例はアデノウィルスベクター、アデノ−会合ウィルスベクター、レトロウィルスベクター等を含むが、これに限定されない。
【００４４】
“発現ベクター”は、発現すべきヌクレオチド配列に制御可能に結合した発現制御配列を含む組換えポリヌクレオチドを含むベクターを意味する。発現ベクターは発現のための十分なシス作用領域を含み；発現に必要な他の領域を宿主細胞又はインビトロ発現系によって供給することができる。発現ベクターはこの分野で公知の全てのものを含み、例えばコスミド、プラスミド（例えば裸の又はリポソームに含まれたもの）及びウィルスを含み、これは組換えポリヌクレオチドを取り込む。
【００４５】
動物の“自然には生じない”オリフィスは、疾病又は病気にかかっていない動物に正常には存在しないオリフィス（例えば切り込み、穴、創傷等）である。
“生物学的に不活性な”という用語は、本明細書では、生物学的な構成要素と接触しても該要素中で反応を生じることがなく、該要素も物質中で反応を生じない物質を意味するように使用される。
【００４６】
本明細書で引用した特許、特許出願、及び刊行物の開示は、言及することによってそれらの全てを本明細書に取り込む。
特定の態様に言及して本発明を開示してきたが、本発明の他の態様及び変形例は、本発明の本来の精神及び範囲から離れることなく当業者によって考え得るものである。添付の特許請求の範囲は、これらの全ての態様及び均等な変形例を含むように解釈されることを意図している。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１Ａ】図１Ａは、ベヒクルと乳頭細胞を哺乳動物の表皮層へ移植して化粧的に受け入れ可能な方向へ新たな毛包を生成させる方法を示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、ベヒクルと乳頭細胞を哺乳動物の表皮層へ移植して化粧的に受け入れ可能な方向へ新たな毛包を生成させる方法を示す。
【図１Ｃ】図１Ｃは、ベヒクルと乳頭細胞を哺乳動物の表皮層へ移植して化粧的に受け入れ可能な方向へ新たな毛包を生成させる方法を示す。
【図１Ｄ】図１Ｄは、ベヒクルと乳頭細胞を哺乳動物の表皮層へ移植して化粧的に受け入れ可能な方向へ新たな毛包を生成させる方法を示す。
【図２】図２は、ベヒクルと乳頭細胞のパッケージング、挿入、及び配置を容易にする装置を示す。本装置は、柔軟な器具によって相互に連結し区分に分割された複数の長い管を含み、該区分は長い管から取り外された場合に移植のためのベヒクルを形成する。
【図３】図３は、乳頭細胞を長い管へパッケージングする方法を示す。
【図４】乳頭細胞の移植後における初期の毛包の形成を示す。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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