(57)【要約】本発明により、充実性腫瘍、および血管障害の治療における神経栄養性因子として有用な非免疫抑制ラパマイシン２９−エノールが提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラパマイシン２９−エノールまたはその医薬上許容される塩である、化合物。
【請求項２】
ラパマイシン２９−エノールがラパマイシン２９−エノールである、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
ラパマイシン２９−エノールがラパマイシン２９−エノールのエステル、エーテル、オキシム、ヒドラゾンまたはヒドロキシルアミンである、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
ラパマイシンがラパマイシン２９−エノールの４２−エステルまたは４２−エーテルである、請求項３記載の化合物。
【請求項５】
ラパマイシンが３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロピオン酸とのラパマイシン２９−エノール４２−エステルである、請求項４記載の化合物。
【請求項６】
ラパマイシンが４２−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシン２９−エノールである、請求項４記載の化合物。
【請求項７】
哺乳動物の神経細胞増殖を刺激する方法であって、それを必要とする哺乳動物に、有効量の請求項１ないし６のいずれか一項に記載のラパマイシン２９−エノールまたはその医薬上許容される塩を付与することを含む、方法。
【請求項８】
哺乳動物の神経再生を刺激する方法であって、それを必要とする哺乳動物に、有効量の請求項１ないし６のいずれか一項に記載のラパマイシン２９−エノールまたはその医薬上許容される塩を付与することを含む、方法。
【請求項９】
哺乳動物の損傷した末梢神経の増殖を刺激する方法であって、それを必要とする哺乳動物に、有効量の請求項１ないし６のいずれか一項に記載のラパマイシン２９−エノールまたはその医薬上許容される塩を付与することを含む、方法。
【請求項１０】
哺乳動物の神経変性障害を治療または阻害する方法であって、それを必要とする哺乳動物に、有効量の請求項１ないし６のいずれか一項に記載のラパマイシン２９−エノールまたはその医薬上許容される塩を付与することを含む、方法。
【請求項１１】
神経変性障害が痴呆、パーキンソン病、アルツハイマー病または筋萎縮性側索硬化症である、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
哺乳動物の末梢神経損傷を治療する方法であって、それを必要とする哺乳動物に、有効量の請求項１ないし６のいずれか一項に記載のラパマイシン２９−エノールまたはその医薬上許容される塩を投与することを含む、方法。
【請求項１３】
末梢神経損傷が肉体的傷害または外傷により惹起される、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
末梢神経損傷が脊髄損傷および外傷、坐骨または顔面神経病変または損傷により惹起される、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
哺乳動物の充実性腫瘍を治療する方法であって、それを必要とする哺乳動物に、有効量の請求項１ないし６のいずれか一項に記載のラパマイシン２９−エノールまたはその医薬上許容される塩を付与することを含む、方法。
【請求項１６】
充実性腫瘍が星状細胞腫、前立腺癌、乳癌、結腸癌、小細胞肺癌、および卵巣癌；および成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫からなる群より選択される、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
高増殖血管障害を治療または阻害する方法であって、哺乳動物に有効量の請求項１ないし６のいずれか一項に記載のラパマイシン２９−エノールまたはその医薬上許容される塩を付与することを含む、方法。
【請求項１８】
高増殖血管障害が再狭窄である、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
ラパマイシン２９−エノールが血管ステントまたはシャントを介して投与される、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
哺乳動物において神経細胞の増殖を刺激するための医薬の製造における請求項１ないし６のいずれか一項に記載のラパマイシン２９−エノールまたはその医薬上許容される塩の使用。
【請求項２１】
哺乳動物において神経再生を刺激するための医薬の製造における請求項１ないし６のいずれか一項に記載のラパマイシン２９−エノールまたはその医薬上許容される塩の使用。
【請求項２２】
哺乳動物において損傷した末梢神経の増殖を刺激するための医薬の製造における請求項１ないし６のいずれか一項に記載のラパマイシン２９−エノールまたはその医薬上許容される塩の使用。
【請求項２３】
哺乳動物において神経変性障害を治療または阻害するための医薬の製造における請求項１ないし６のいずれか一項に記載のラパマイシン２９−エノールまたはその医薬上許容される塩の使用。
【請求項２４】
神経変性障害が痴呆、パーキンソン病、アルツハイマー病または筋萎縮性側索硬化症である、請求項２３記載の使用。
【請求項２５】
哺乳動物において末梢神経損傷を治療するための医薬の製造における請求項１ないし６のいずれか一項に記載のラパマイシン２９−エノールまたはその医薬上許容される塩の使用。
【請求項２６】
末梢神経損傷が肉体的傷害または外傷により惹起される、請求項２５記載の使用。
【請求項２７】
末梢神経損傷が脊髄損傷および外傷、坐骨または顔面神経病変または損傷により惹起される、請求項２６記載の使用。
【請求項２８】
哺乳動物において充実性腫瘍を治療するための医薬の製造における請求項１ないし６のいずれか一項に記載のラパマイシン２９−エノールまたはその医薬上許容される塩の使用。
【請求項２９】
充実性腫瘍が星状細胞腫、前立腺癌、乳癌、結腸癌、小細胞肺癌、および卵巣癌；および成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫からなる群より選択される、請求項２８記載の使用。
【請求項３０】
哺乳動物において高増殖血管障害を治療または阻害するための医薬の製造における請求項１ないし６のいずれか一項に記載のラパマイシン２９−エノールまたはその医薬上許容される塩の使用。
【請求項３１】
高増殖血管障害が再狭窄である、請求項３０記載の使用。
【請求項３２】
ラパマイシン２９−エノールが血管ステントまたはシャントを介して投与される、請求項３１記載の使用。
【請求項３３】
請求項１ないし６のいずれか一項に記載のラパマイシン２９−エノールまたはその医薬上許容される塩と、医薬上許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項３４】
（２Ｅ，４Ｓ，６Ｒ）-６-［（５Ｓ，６Ｒ）-５-ヒドロキシ−６−メトキシ−４−メチル−２，３，７−トリオキサビシクロ［２．２．１]へプト−１−イル]−４−メチルへプト−２−エナールである、化合物。
【請求項３５】
請求項１に記載のラパマイシン２９−エノールの製法であって、以下の一の工程：
ａ）ラパマイシン（例えば、ラパマイシン、３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロピオン酸とのラパマイシン４２−エステルまたは４２−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシン）をオゾン分解に付し、ラパマイシン２９−エノール（例えば、ラパマイシン２０−エノール、３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロピオン酸とのラパマイシン２９−エノール４２−エステルまたは４２−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシン２９−エノール）を生成するか；または
ｂ）反応性置換基で保護されていてもよい、ラパマイシン２９−エノールをアシル化剤（例えば、ＲＡ基を含有するアシル化剤）でアシル化し、ラパマイシン２９−エノール、例えば、式（ＩＩ）：
【化１】
2005501868.tif 000014
［式中、ＲＡはエステル形成基（例えば、アシル基）を意味する］
で示されるその４２−エステル誘導体を得、いずれの保護基も除去するか；または
ｃ）反応性置換基で保護されていてもよい、ラパマイシン２９−エノールをエーテル化剤（例えば、ＲＡ基を含有するエーテル化剤）でエーテル化し、ラパマイシン２９−エノール（例えば、上記した式（ＩＩ）で示されるその４２−エーテル誘導体であって、ＲＡは選択されたエーテル形成基である）を得、いずれの保護基も除去する、工程を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経分化誘導物質として、充実性腫瘍および血管疾患の治療に有用な、非免疫抑制性ラパマイシン２９−エノール、その調製法、およびそれらを含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ラパマイシンは、インビトロおよびインビボの両方で特にカンジダ・アルビカンス（Candida albicans）に拮抗して抗真菌活性を有することが判明した［C.Vezinaら、J. Antibiot. ２８、７２１（１９７５）；S.N.Sehｇalら、J. Antibiot. ２８、７２７（１９７５）；H.A.Bakerら、J. Antibiot. ３１、５３９（１９７８）；米国特許第３９２９９９２号および米国特許第３９９３７４９号］、ストレプトマイセス・ヒグロスコピカス（Streptomyces hygroscopicus）により産生される大環状トリエン抗生物質である。加えて、ラパマイシンは単独で（米国特許第４８８５１７１号）またはピシバニルと組み合わせて（米国特許第４４０１６５３号）抗腫瘍活性を有することが示されている。
【０００３】
ラパマイシンの免疫抑制作用が、ＦＡＳＥＢ３、３４１１（１９８９）に開示されている。シクロスポリンＡとＦＫ−５０６、他の大環状分子も免疫抑制剤として効果的であり、したがって移植片拒絶反応の防止に有用であることが示されている［ＦＡＳＥＢ３、 ３４１１（１９８９）；ＦＡＳＥＢ３、５２５６（１９８９）；R.Y.Calneら、Lancet １１８３（１９７８）；および米国特許第５１００８９９号］。R.Martelら［Can. J. Physiol. Pharmacol. ５５、４８（１９７７）］は、ラパマイシンが、多発性硬化症のモデルである、実験的アレルギー性脳脊髄炎モデルに、関節リウマチのモデルである、アジュバント関節炎のモデルに効果的であり、ＩｇＥ−様抗体の形成を効果的に阻害することを開示する。ＦＫ−５０６およびいくつかの合成ＦＫＢＰ−１２結合リガンドは、神経保護性および神経再生性であることが示されている［米国特許第５６９６１３５号、米国特許第５７２１２５６号、米国特許第５７８０４８４号、米国特許第５８１１４３４号および米国特許第５８４０７３６号]。
【０００４】
ラパマイシンはさらに、全身性エリテマトーデス［米国特許第５０７８９９９号]、肺炎［米国特許第５０８０８９９号]、インスリン依存性真性糖尿病［米国特許第５３２１００９号]、乾癬などの皮膚疾患［米国特許第５２８６７３０号]、内臓疾患［米国特許第５２８６７３１号]、平滑筋細胞増殖および血管傷害後の脈管内膜肥厚［米国特許第５２８８７１１号および５５１６７８１号]、成人Ｔ−細胞白血病／リンパ腫［ヨーロッパ特許出願第５２５９６０Ａ１号]、眼の炎症［米国特許第５３８７５８９号]、悪性癌［米国特許第５２０６０１８号]、心臓炎症疾患［米国特許５４９６８３２号]、貧血［米国特許５５６１１３８号]を予防または治療するのにも有用であり、および神経突起の生長を増す［Parker,E.M.ら、Neuropharmacoloｇy ３９、１９１３-１９１９、２０００]。
【０００５】
ＣＣＩ−７７９としても知られる３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロピオン酸とのラパマイシンエステル、ラパマシン４２−エステル［米国特許第５３６２７１８号に開示されている]は、種々の腫瘍細胞系に拮抗して抗腫瘍活性を有することが、インビボ動物腫瘍モデルにて、およびフェーズＩ臨床試験にて示されている［Gibbons,J.、Proc. Am. Assoc. Can. Res. ４０：３０１（１９９９）；Geoerｇer,B.、Proc. Am. Assoc. Can. Res. ４０：６０３（１９９９）；Alexandre,J.、Proc. Am. Assoc. Can. Res. ４０：６１３（１９９９）；および Alexandre,J.、Clin. Cancer. Res. ５（November Supp.）：Abstr.７ （１９９９）]。
【０００６】
本発明は、非免疫抑制性ラパマイシン２９−エノール、および本明細書に開示するそれらを用いる方法を提供する。本明細書に記載される「ラパマイシン２９−エノール」なる語は、ラパマイシン２９−エノール核（以下に示す）を基礎として含有する一連の神経分化誘導化合物を定義する。これらの化合物は無傷のラパマイシン核に伴う免疫抑制特性を欠く。本発明のラパマイシン２９−エノールは、ラパマイシン２９−エノール核の誘導体として化学的または生物学的に修飾されていてもよいが、なおも神経分化誘導特性を保持する化合物を包含する。従って、「ラパマイシン２９−エノール」なる語は、ラパマイシンのエステル、エーテル、オキシム、ヒドラゾンおよびヒドロキシルアミン、ならびにラパマイシン２９−エノール核の官能基が、例えば還元または酸化を介して修飾されている、ラパマイシン２９−エノールを包含する。「ラパマイシン２９−エノール」なる語は、酸性または塩基性基を含有しているためにそのような塩を形成することができる、ラパマイシン２９−エノールの医薬上許容される塩も包含する。
【０００７】
【化１】
2005501868.tif 000002
【０００８】
ラパマイシン２９−エノールのエステルおよびエーテルはラパマイシン２９−エノール核の４２−位がヒドロキシル基のもの、オキシム、ヒドラゾンおよびヒドロキシルアミンはラパマイシン２９−エノールの４２−位置がケトンのもの（４２−ヒドロキシル基を酸化した後のもの）および２７−ケトンのものが好ましい。
【０００９】
対応するラパマイシン２９−エノールの出発物質として役立つラパマイシンの好ましい４２-エステルおよびエーテルは、以下の特許公報に開示されている、そのすべてを出典明示により本明細書の一部とする：アルキルエステル（米国特許第４３１６８８５号）；アミノアルキルエステル（米国特許第４６５０８０３号）；フッ素化エステル（米国特許第５１００８８３号）；アミドエステル（米国特許第５１１８６７７号）；カルバミン酸エステル（米国特許第５１１８６７８号）；シリルエーテル（米国特許第５１２０８４２号）；アミノエステル（米国特許第５１３０３０７号）；アセタール（米国特許第５５１４１３号）；アミノジエステル（米国特許第５１６２３３３号）；スルホン酸および硫酸エステル（米国特許第５１７７２０３号）；エステル（米国特許第５２２１６７０号）；アルコキシエステル（米国特許第５２３３０３６号）；Ｏ-アリール、-アルキル、-アルケニルおよび-アルキニルエーテル（米国特許第５２５８３８９号）；炭酸エステル（米国特許第５２６０３００号）；アリールカルボニルおよびアルコキシカルボニルカルバメート（米国特許第５２６２４２３号）；カルバメート（米国特許第５３０２５８４号）；ヒドロキシエステル（米国特許第５３６２７１８号）；ヒンダード型エステル（米国特許第５３８５９０８号）；複素環式エステル（米国特許第５３８５９０９号）；ｇｅｍ-二置換エステル（米国特許第５３８５９１０号）；アミノアルカン酸エステル（米国特許第５３８９６３９号）；ホスホリルカルバミン酸エステル（米国特許第５３９１７３０号）；カルバミン酸エステル（米国特許第５４１１９６７号）；カルバミン酸エステル（米国特許第５４３４２６０号）；アミジノカルバミン酸エステル（米国特許第５４６３０４８号）；カルバミン酸エステル（米国特許第５４８０９８８号）；カルバミン酸エステル（米国特許第５４８０９８９号）；カルバミン酸エステル（米国特許第５４８９６８０号）；ヒンダード型Ｎ-オキシドエステル（米国特許第５４９１２３１号）；ビオチンエステル（米国特許第５５０４０９１号）；Ｏ-アルキルエーテル（米国特許第５６６５７７２号）；およびラパマイシンのＰＥＧエステル（米国特許第５７８０４６２号）。これらのエステルおよびエーテルの調製は、前記特許公報に開示されている。ラパマイシン２９−エノールの対応するエステルおよびエーテルの調製は、これらの特許公報に記載されている方法を用いて、ラパマイシンにて出発し、つづいて本明細書中に記載する開環反応を行うことにより達成することができる。ラパマイシンの４２-エステルおよびエーテルの改良合成法は、米国特許第６２７７５３９号に開示されており、これを出典明示により本明細書の一部とする。
【００１０】
従って、ラパマイシン２９−エノールの例には、式（ＩＩ）：
【００１１】
【化２】
2005501868.tif 000003
【００１２】
［式中、ＲＡは、水素、および前記した米国特許／欧州特許公報のいずれか１つの開示されているようなエステルまたはエーテル形成基（例えば、アシル基および置換されていてよいアルキル基）から選択される]
で示されるラパマイシン２９−エノールおよび４２−エステルおよび エーテル化合物が挙げられる。
【００１３】
ラパマイシンの好ましいオキシム、ヒドラゾンおよびヒドロキシルアミンが米国特許第５３７３０１４号、第５３７８８３６号、第５０２３２６３号、第５０２３２６４号および第５５６３１４５号に開示されており、それらを出典明示により本明細書の一部とする。対応するラパマイシン２９−エノールの出発物質として供する、これらのオキシム、ヒドラゾンおよびヒドロキシルアミンの調製は上記した特許公報に開示されている。ラパマイシン２９−エノールの対応するオキシム、ヒドラゾンおよびヒドロキシルアミンの調製は、これらの特許公報に記載の方法を用い、ラパマイシンで開始し、つづいて本明細書に記載の開環反応に付すことで達成することができる。
【００１４】
特に好ましいラパマイシン２９−エノールは、ラパマイシン２９−エノール、３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロピオン酸とのラパマイシン２９−エノール４２−エステル［例えば、３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロピオン酸とのラパマイシン４２−エステルの調製については米国特許第５３６２７１８号および第６２７７５３９号を参考のこと］および４２−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシン２９−エノール［例えば、４２−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシンの調製についての米国特許第５６６５７７２号を参考のこと］を包含する。
【００１５】
適用する場合、医薬上許容される塩は、ラパマイシンが適当な塩基性基を含む場合、例えば、酢酸、プロピオン酸、乳酸、クエン酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、マロン酸、マンデル酸、リンゴ酸、フタル酸、塩化水素酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸、メタンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、樟脳スルホン酸、およびに同様に公知の許容される酸などの有機および無機酸から形成することができる。塩は、ラパマイシンが適当な酸性基を含む場合、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム、リチウム、またはカリウム）、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、各アルキル基において１−６個の炭素原子を含んでいるアルキルアンモニウム塩、または各アルキル基において１−６個の炭素原子を含んでいるジアルキルアンモニウム塩、および各アルキル基において１−６個の炭素原子を含んでいるトリアルキルアンモニウム塩などの、有機および無機塩基から形成されてもよい。
【００１６】
本発明に従って用いられる、本発明の範囲の及ぶ化合物または物質を提供することに関して、「提供する」なる語は、そのような化合物または物質を直接投与すること、または体内で有効量の化合物または物質を形成するであろう、プロドラッグ、誘導体、または類似体を投与することのいずれも意味する。
【００１７】
本発明の化合物は、市場入手可能な出発物質を用いてラパマイシンから、または文献記載の方法に従い調製され得る出発物質から作製することができる。所望のラパマイシン２９−エノールは、所望の生成物が形成されるまで反応の進行をモニターすることによるオゾンでのラパマイシンの処置により調製することができる。
【００１８】
従って、本発明は、本明細書中に定義するラパマイシン２９−エノールを調製するための方法であって、以下の１つを含む方法を提供する。
ａ）ラパンシン（例えば、ラパマイシン、３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロピオン酸とのラパマイシン４２−エステル、または４２−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシン）をオゾン分解して、ラパマイシン２９−エノール（例えば、ラパマイシン２０−エノール、３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロピオン酸とのラパマイシン２９−エノール４２−エステルまたは４２−Ｏ−（２−ヒドキシ）エチルラパマイシン２９−エノール）を得るか、または、
【００１９】
ｂ）反応性置換基にて保護されていてもよいラパマイシン２９−エノールをアシル化剤（例えば、前記のような基ＲＡを含むアシル化剤）にてアシル化して、ラパマイシン２９−エノール、例えば式（ＩＩ）：
【００２０】
【化３】
2005501868.tif 000004
【００２１】
（式中、ＲＡは、選択されるエステル形成基（例えば、アシル基）である）
で示されるその４２−エステル誘導体を得、いずれの保護基も除去するか；または、
ｃ）反応性置換基にて保護されていてもよいラパマイシン２９−エノールをエーテル化剤（例えば、前記の基ＲＡを含んでいるエーテル化剤）にてエーテル化してラパマイシン２９−エノール（例えば、ＲＡが選択されるエーテル形成基である前記式（ＩＩ）のその４２−エーテル誘導体）を得、いずれの保護基も除去することを含む。
【００２２】
ラパマイシン２９−エノールの生成に加えて、対応するラパマイシンジアルデヒドがまたオゾン分解の酸化の間に生成される。ラパマイシンジアルデヒドの構造を以下に示す。
【００２３】
【化４】
2005501868.tif 000005
【００２４】
加えて、ラパマイシンのオゾン分解中、以下に示す構造を有する（２Ｅ，４Ｓ，６Ｒ）−６−[（５Ｓ，６Ｒ）−５−ヒドロキシ−６−メトキシ−４−メチル−２，３，７−トリオキサビシクロ[２．２．１]ヘプト−１−イル]−４−メチルヘプト−２−エナールを得た（実施例３）。
【００２５】
【化５】
2005501868.tif 000006
【００２６】
本発明の代表的な化合物として、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞に対して、ラパマイシンジアルデヒド（実施例１）およびラパマイシン２９−エノール（実施例２）をインビトロにて評価することで、標準的薬理試験操作にて、本発明の化合物の神経再生活性を確認した［Goldら、Exp Neurol １４７：２６９−２７８、１９９７］。簡単に言えば、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞をアフィジコリンで処理した６−ウェルプレートに５日間置き、つづいて６−ウェルプレートを用いて試験化合物で処理した。対照として、ウェルは非処理であるか、または神経生長因子（ＮＧＦ）単独で処理した。試験ウェルをＮＧＦと実施例１、実施例２またはラパマイシンで処理した。細胞を１６８時間撮影した。神経突起の長さの分析を、適当なソフトウェアを有するＩＢＭ ＸＴコンピューター（Bioquant IV, R&M BIometrics, Nashville, TN）に連結した、Ｈｏｕｓｔｏｎ装置ＨＩ−ＰＡＤデジタイジングタブレットを用いて写真プリント上で行った。軸索領域の平均値をＡＮＯＶＡ（STATVIEW, Abacus Concepts, Inc., Berkeley, CA）により比較した。以下において、得られた結果を表にする。
【００２７】
【表１】
2005501868.tif 000007
【００２８】
標準的な薬理学的試験法にて得られた結果により、本発明の化合物が、神経分化誘導物質として有用であること、および特に、神経再生および機能回復を促進するのに、および神経突起の生長を刺激し、次いでそれにより肉体的傷害により惹起される末梢神経および中枢神経系に対する障害を含む種々の神経病理状態（例えば、脊髄傷害および外傷、坐骨または顔面神経病変または傷害）、疾患（例えば、糖尿病性神経障害）、癌化学治療（例えば、ビンカアルカロイドおよびドキソルビシンによる）、卒中に伴う脳障害および卒中に伴う虚血、および制限されるものではないが、種々の末梢神経系、および制限されるものではないが、三叉神経痛、舌咽神経痛、ベル麻痺、重症性筋無力症、筋ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、進行性筋萎縮症、進行性延髄遺伝性筋萎縮症、ヘルニア、椎間板または脱椎板症候群、頚部脊椎症、脈管疾患、胸部大血管破壊症候群、鉛、アクリルアミド、ガンマ−ジケトン（グルー−スニッファーズ神経障害（glue-sniffer's neuropathy））、二硫化炭素、ダプソンにより惹起されるものなどの末梢神経障害、チック、ポリフィリン症、Gullain-Barre症候群、痴呆、アルツハイマー疾患、パーキンソン病、およびハンチントン舞踏病を含む神経病理疾患を含む神経病理疾患を治療するのに有用である。
【００２９】
本発明の化合物の抗腫瘍活性は、本発明の典型的な化合物（実施例１−５）の抗腫瘍活性を６つの腫瘍細胞株に対してインビトロで評価することにより確認した。簡単には、６つの細胞株からの腫瘍細胞を９６ウェルのマイクロタイタープレートのウェルに入れた。以下の腫瘍細胞株を用いた：３Ｔ３（卵巣）、３Ｔ３／Ｈ２Ｎ（卵巣−シスプラチンに対して抵抗性のある）、Ａ４３１（陰門類表皮起源）、ＳＷ６２０（結腸）、ＳＫＢＲ３（乳房）、およびＭＤＡ−４３５（乳房）。腫瘍細胞を評価すべき一連の希釈度の化合物の存在下にて４８時間増殖させ、細胞増殖を比色法（スルホローダミンＢ）を用いて測定した。増殖の阻害を、試験化合物を添加した時点での細胞の数と計測比較した。結果をＩＣ５０（μｇ／ｍｌ）として示し、表２に示した。
【００３０】
【表２】
2005501868.tif 000008
【００３１】
この標準的な薬理学的試験法の結果により、本発明の化合物が抗腫瘍剤として有用であることが立証される。特に、本発明の化合物は、肉腫および癌を含む充実性腫瘍、および詳細には星状細胞腫、前立腺癌、乳癌、結腸癌、小細胞肺癌、および卵巣癌；および成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫に対して有用である。
【００３２】
本発明の化合物は、再狭窄などの高増殖性血管傷害の治療または阻害にも有用である。
再狭窄に用いられる場合、本発明の化合物は、以下の血管形成術後に生じる再狭窄を治療するのに用いることが好ましい。血管形成術後のこの治療再狭窄を治療するのに用いる場合、本発明の化合物は手術前、手術中、手術後、または前記のいずれかの組み合わせにて投与することができる。
【００３３】
ラパマイシン２９−エノールの有効投与量は、用いられる特定の化合物、投与様式、疾患、および処置されるべき疾患の重篤度、ならびに処置されるべき個人に関連する種々の身体的要因に応じて変化してよい。発明に従い用いられるように、満足の得られる結果は、ラパマイシン２９−エノールを、活性化合物のおおよその意図される毎日投与量が、０．１μｇ／ｋｇ−１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．００１−２５ｍｇ／ｋｇ、およびより好ましくは０．００１−５ｍｇ／ｋｇである毎日傾向投与にて投与される。企画される毎日投与量、投与の経路と共に変化することが期待される。
【００３４】
ラパマイシン２９−エノールをコンビネーション投与計画の一部として用いる場合、コンビネーションの成分のそれぞれの投与量が、所望される治療期間中に投与される。コンビネーションの成分は、同時に、両成分を含んでいる単一投与、または別個の投与ユニットとしてのいずれかで投与されてよく、コンビネーションの成分は、治療期間中の別の時点で投与することができ、または１つが他の前処置として投与されてよい。
【００３５】
そのような投与は、経口、インプラントにより、非経口にて（静脈内、腹腔内、および皮下投与を含む）、直腸、鼻腔内、経膣にて、および経皮にてレシピエントの血流に本明細書中の活性化合物を指向するのに有用なあらゆる方法にて投与されてよい。この開示の目的のために、経皮投与には、体の表面を横切る全投与、および上皮および粘膜組織を含む体管の内層を横切る全投与が含まれると理解される。そのような投与は、本発明の化合物または医薬上許容されるその塩を、ローション、クリーム、泡、パッチ、懸濁液、溶液、および坐薬（直腸および膣）中に用いて行われてよい。
【００３６】
本発明の活性化合物を含む経口製剤は、錠剤、カプセル、頬面製剤、トローチ、飴剤、および経口液、懸濁液、または溶液を含むいずれかの都合よく用いられる経口製剤を含んでよい。カプセルは、不活性充填剤および／または希釈剤、例えば医薬上許容されるデンプン（例えば、トウモロコシ、ジャガイモ、またはタピオカデンプン）、砂糖、人工甘味剤、クリスタリンセルロースおよびミクロクリスタリンセルロースなどの粉末セルロース、小麦粉、ゼラチン、ガムなどとの活性化合物の混合物を含んでよい。有用な錠剤製剤は、常套の圧縮、湿式造粒または乾燥造粒法により製造されてよく、および制限するものではないが、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム、ミクロクリスタリンセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、アルギン酸、アカシアガム、キサンタンガム、クエン酸ナトリウム、複合シリカ、炭酸カルシウム、グリシン、デキストリン、スクロース、ソルビトール、リン酸２カルシウム、硫酸カルシウム、ラクトース、カオリン、マンニトール、塩化ナトリウム、タルク、乾燥デンプンおよび乾燥砂糖を含む、医薬上許容される希釈剤、結合剤、滑剤、崩壊剤、表面改質剤（界面活性剤を含む）、懸濁もしくは安定剤を用いてよい。好ましい表面改質剤には、非イオン性およびアニオン性表面改質剤が含まれる。表面改質剤の典型的な例には、制限するものではないが、ポロクサマー１８８、塩化ベンズアルコニウム、ステアリン酸カルシウム、セトスチールアルコール、セトマクロゴル乳化ワックス、ソルビタンエステル、コロイド状二酸化シリコン、リン酸塩、ドデシル硫酸ナトリウム、珪酸マグネシウムアルミニウム、およびトリエタノールアミンが含まれる。本明細書中の経口製剤は、常套の遅延または時間放出製剤を用いて活性化合物の吸収を変化させてよい。ラパマイシンの好ましい経口製剤は、米国特許第５５５９１２１号；第５５３６７２９号；５９８９５９１号；および第５９８５３２５号に開示されており、これらを出典明示により本明細書の一部とする。
【００３７】
いくつかの場合において、化合物は、エアゾールの形態で気道に直接投与することが望まれ得る。
化合物は、非経口または腹腔内投与されてもよい。遊離塩基または医薬上許容される塩としてのこれらの活性化合物の溶液または懸濁液を、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と適当に混合された水中に調製することができる。分散剤は、グリセロール、液体ポリエチレングリコールおよびそのオイル中の混合物にて調製することもできる。貯蔵および使用の常套の条件の下、これらの製剤は微生物の増殖を妨げる保存剤を含む。
【００３８】
注射可能使用に適した医薬製剤は、無菌注射可能溶液または懸濁液の即席調製のための無菌水溶液または分散液および無菌粉末を含む。全場合において、製剤は無菌でなければならず、容易な注射可能性が存在する程度まで流動的でなければならない。製造および貯蔵の条件下でそれは安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染活性から保護されなければならない。キャリアは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）を含む溶媒または分散媒質、適当なその混合物および植物油であり得る。ラパマイシンを投与するのに好ましい非経口製剤は、米国特許第５５３０００６号；第５５１６７７０号；および第５６１６５８８号に開示されており、これらを出典明示により本明細書の一部とする。
【００３９】
坐薬製剤は、坐薬の融点を変更するためのワックス、およびグリセリンを必要に応じて添加した、ココアバターを含む常套の物質から作製されてよい。水溶性の坐薬基剤、種々の分子量のポリエチレングリコールなどを用いてよい。
ラパマイシン２９−エノールを用いて再狭窄などの高増殖血管疾患を治療または阻害する場合、ラパマイシンジアルデヒドは、ラパマイシン２９−エノールでコートした、またはそれを染み込ませた血管ステントまたはシャントにより提供されることが好ましい。
以下により、本発明の典型的な化合物の調製法が提供される。
【００４０】
実施例１（方法Ａ）
ラパマイシンジアルデヒド
ラパマイシン（５.０ｇ、５.５ミリモル）を１００ｍＬのジオキサンおよび３５ｍＬの水に溶解した。次いで６１ｍｇのＯｓＯ４を添加し、反応を室温にて行った。３０分間攪拌後、溶液は濃緑色になった。メタ過ヨウ素酸ナトリウム（２.３４ｇ、１０.９ミリモル）をバッチ毎に３０分にて添加した。反応物を一夜攪拌した。反応混合物を２００ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、後処理することにより反応を停止させ、５．１ｇの粗生成物（ＷＡＹ-１８１３４０については全ピーク領域の６６％、１２％の未反応のラパマイシン）を得た。粗生成物をＰｒｅｐ Ｎｏｖａ-ｐａｋ ＨＲ Ｃ １８カラム（３００×１９ｍｍ）上６５％Ａおよび３５％Ｂを初めの５分間維持し、次いで６５％Ａおよび３５％Ｂから１０％Ａおよび９０％Ｂに３０分にて変化させる勾配法を用いる分取ＨＰＬＣにより精製した。バッファーＡは、９０％水および１０％アセトニトリルである。バッファーＢは、１０％水および９０％アセトニトリルである。流速は、２０ｍＬ/分である。２０−２１分でのフラクションを回収し、塩化メチレンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥した。有機溶媒をロータリーエバポレーションシステムを用いて除去した。残存物を３ｍＬの塩化メチレンに溶解し、１５ｍＬのヘキサンを添加することにより沈殿させた。濾過後、白色固体をスピード-バック（speed-vac）にて一晩乾燥した。生成物が十分純粋でない場合、同じカラム上５１％Ｂおよび４９％Ａにより再精製した。１３分でのピーク物を回収し、再度前記したように後処理した。白色固体を得た。
【００４１】
【表３】
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【００４２】
【表４】
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【００４３】
擬似分子イオンを、負および正の電子噴射方法により、各々、[Ｍ−Ｈ]−イオンをｍ／ｚ９４４にて、および[Ｍ＋ＮＨ４]＋イオンをｍ／ｚ９６３にて観察した。
【００４４】
実施例１（方法Ｂ）
ラパマイシン４２−ジアルデヒド
ラパマイシン（１.０ｇ、１.０９ミリモル）を２５０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解した。丸底フラスコをドライアイス浴に入れた。オゾンガスを該溶液に６分間通気した（６Ｌ／分、コントロールノブセッティングの出力７）。次いで反応混合物を１時間攪拌した。硫化メチル（１００μl）を添加し、反応液をさらに１時間攪拌した。反応を２００ｍＬの水を反応混合液に添加することにより停止した。後処理の後、約０．９７ｇの粗生成物（オフ−ホワイト固体、ＷＡＹ-１８１３４０についての全ピーク領域の４４％）を得た。ＬＣ／ＭＳの結果より、主なピークがＷＡＹ-１８１３４０であることが分かる。
【００４５】
実施例２および３
ラパマイシン２９−エノール（実施例２）および（２Ｅ、４Ｓ、６Ｒ）−６−[（５Ｓ，６Ｒ）−５−ヒドロキシ−６−メトキシ−４−メチル−２，３，７−トリオキサビシクロ[２．２．１]ヘプト−１−イル]−４−メチルヘプト−２−エナール（実施例３）
ラパマイシン（１．３ｇ、１．４０ミリモル）を、オゾンガスを５０分間通気する以外は実施例１Ｂと同じ方法で処理した。約１．１ｇの粗生成物を後処理の後に得た（オフホワイト固体、実施例２のジアルデヒドについての全ピーク領域の４４％）。２つの主なピーク（９．５分および１４分）を分取ＨＰＬＣにより単離した。実施例２（１４分）を白色固体（５０ｍｇ）として得、次いで実施例３（９．５分）を透明なオイル（２３ｍｇ）として得た。
【００４６】
【表５】
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【００４７】
【表６】
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【００４８】
化合物ＩＩに関する擬似分子イオンを[Ｍ−Ｈ]−イオンをｍ／ｚ７０６にて、およびフラグメントイオン４２４で観察した。
実施例３に関して、１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ-ｄ６，４００ＭＨｚ）δ ９.５（１Ｈ，−ＣＨＯ）、６.８（１Ｈ，Ｃ＝ＣＨ）、６.１（１Ｈ，Ｃ＝ＣＨ）、５.０７（１Ｈ，ＯＨ）、３.８８、３.７６、３.３（３Ｈ，-ＯＣＨ３）、２.６、２.２、１.７、１.５、１.４、１.１０。１３Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ-ｄ６，１００ＭＨｚ）δ １９４.７、１６３.５、１３１.６、１１２.０、１１０.４、８１.１、７３.９、５９.０、３５.６、２８.０、２０.３、１４.０。実施例３に関する擬似分子イオンを、[Ｍ−Ｈ]−イオンをｍ／ｚ３０１にて、および[Ｍ＋ＮＨ４]＋イオンをｍ／ｚ３２０にて、負および正の電子噴射方法にてそれぞれ観察した。
【００４９】
【化６】
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【００５０】
実施例３、（２Ｅ，４Ｓ，６Ｒ）-６-［（５Ｓ，６Ｒ）-５-ヒドロキシ−６−メトキシ−４−メチル−２，３，７−トリオキサビシクロ［２．２．１]へプト−１−イル]−４−メチルへプト−２−エナールについての化学構造
【００５１】
実施例４および５
４２−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシンジアルデヒド（実施例４）および４２−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシン２９−エノール（実施例５）
４２−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシン（１０ｍｇ、０．０１ミリモル）を１０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解した。丸底フラスコをドライアイス浴に入れた。オゾンガスを溶液に１分間通気した（２Ｌ／分、コントロールノブセッティングの出力７）。次いで反応混合物を１時間攪拌した。硫化メチル（５μｌ）を添加し、反応物をさらに０．５時間攪拌した。後処理の後、約９ｍｇの粗生成物を得た。分取ＨＰＬＣの後、０．５ｍｇの実施例４を得、０．２４ｍｇの実施例５を得た。
【００５２】
実施例４モードに関する負のイオンは、[Ｍ−Ｈ]−イオンをｍ／ｚ９８８．６にて示した。ラパマイシンおよび４２−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシンを内部基準として用いることにより、未知イオンに関する正確な質量測定値は、Ｃ５３Ｈ８２ＮＯ１６の元素組成を有する９８８.５６１２Ｄａであった（理論質量＝９８８.５６３４、Δ＝２.２ｍＤａ）。実施例４の化合物は、４２−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシンと比較して２つ多くの酸素を含んだ。分子量をさらに、正の電子噴射モードによりさらに確認し、ｍ／ｚ１００７.６にて強い[Ｍ＋ＮＨ４]＋イオンを示した。
【００５３】
実施例５は、ｍ／ｚ７６９.４にて擬似分子イオンを示した（[Ｍ＋ＮＨ４]＋）。７６９.４４８７Ｄａの測定された正確な質量は、Ｃ３９Ｈ６５Ｎ２Ｏ１３の元素組成（理論質量＝７６９.４４８７、Δ＝０.０ｍＤａ）に対応する。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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