(57)【要約】本発明は、過形成及び／又は腫瘍を原因とする発現変化を有する核酸に関するが、この核酸は、配列番号１〜１２及び配列番号１６〜１９からなる群から選択される核酸配列を含むものである。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
過形成及び／又は腫瘍を原因とする発現変化を有する核酸であって、配列番号１〜１２及び配列番号１６〜１９からなる群から選択される核酸配列を含むことを特徴とする核酸。
【請求項２】
腫瘍が、染色体バンド１９ｑ内に何らかの変化を有する各種上皮腫瘍及び染色体バンド１９ｑ１３内に何らかの変化を有する各種腫瘍からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の核酸。
【請求項３】
過形成が甲状腺の各種過形成からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１又は２に記載の核酸。
【請求項４】
配列番号１、２、７、１０、１１及び／又は１２が、ＣＡＴ（特にヒトＣＡＴ）又はこれらの一部をコードすることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の核酸配列。
【請求項５】
配列番号３、４、８、１６及び／又は１７が、ＤＣ２（特にヒトＤＣ２）又はこれらの一部をコードすることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の核酸配列。
【請求項６】
配列番号５、６、９、１８及び／又は１９がＰＫＣγ（特にヒトＰＫＣγ）又はこれらの一部をコードすることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の核酸配列。
【請求項７】
遺伝子コードの縮重がなければ請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸と同じアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の核酸の内の一核酸とハイブリダイズする核酸。
【請求項９】
前出の請求項のいずれか一項に記載の核酸を含むことを特徴とするベクター。
【請求項１０】
プロモーター、ターミネーター及びエンハンサーからなる群から選択される少なくとも一種の要素を更に含むことを特徴とする、請求項９に記載のベクター。
【請求項１１】
ベクターが発現ベクターであることを特徴とする、請求項９又は１０に記載のベクター。
【請求項１２】
少なくとも一個のプロモーターが、ポリペプチドをコードする請求項１〜８のいずれか一項に記載の核酸の少なくとも一部分を有するリーディングフレーム内にあることを特徴とする、請求項９〜１１に記載のベクター。
【請求項１３】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の核酸によりコードされるポリペプチド。
【請求項１４】
改変されていることを特徴とする、請求項１３に記載のポリペプチド。
【請求項１５】
請求項９〜１２のいずれか一項に記載のベクターを含む細胞（特に単離された細胞）。
【請求項１６】
請求項１３又は１４に記載のポリペプチドに対するものであることを特徴とする抗体。
【請求項１７】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の核酸に対するものであることを特徴とする、請求項１６に記載の抗体。
【請求項１８】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の核酸に対するものであることを特徴とするリボザイム。
【請求項１９】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の核酸の少なくとも一部分を含むことを特徴とする、請求項１８に記載のリボザイム。
【請求項２０】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の各種核酸配列の内の一配列と相補的な配列を含むアンチセンス核酸。
【請求項２１】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の各種核酸のうちの一核酸と相補的である又はこれと同一である配列を含むＲＮＡｉであって、好ましくはこのＲＮＡｉが、相補的又は同一である領域の長さが２１〜２３個のヌクレオチドである領域を含む、ＲＮＡｉ。
【請求項２２】
前出の請求項のいずれか一項に記載の核酸の翻訳産物の作用に影響を及ぼす化合物、特に前記作用を阻害する化合物を決定する方法であって、次の各段階、
・翻訳産物と化合物を調製する段階と、
・翻訳産物の作用を体現する系において、翻訳産物と化合物とを接触させる段階と、
・化合物の影響下において翻訳産物の作用に何らかの変化が生じたか否かを決定する段階と
を特徴とする方法。
【請求項２３】
前出の請求項のいずれか一項に記載の核酸の転写産物の作用に影響を及ぼす化合物、特に前記作用を阻害する化合物を決定する方法であって、次の各段階、
・転写産物と化合物を調製する段階と、
・転写産物の作用を体現する系において、転写産物と化合物とを接触させる段階と、
・化合物の影響下において転写産物の作用に何らかの変化が生じたか否かを決定する段階と
を特徴とする方法。
【請求項２４】
系が、細胞発現系、無細胞発現系、化合物と翻訳産物の間の相互作用を測定するアッセイ及び化合物と転写産物の間の相互作用を測定するアッセイからなる群から選択されることを特徴とする、請求項２２又は２３に記載の方法。
【請求項２５】
過形成及び腫瘍の形成、特に甲状腺の過形成及び腫瘍の形成を担う遺伝子を決定する方法であって、次の各段階、
・過形成及び腫瘍の染色体転座部におけるブレークポイントを決定する段階と、
・ブレークポイント領域の両側４００ｋｂｐ、好ましくは１５０ｋｂｐの領域内にある遺伝子を決定する段階と、
・過形成細胞又は腫瘍細胞におけるこの遺伝子の翻訳／転写が、過形成でない細胞又は腫瘍でない細胞と比べて変化しているか否かを決定する段階と
を含む方法。
【請求項２６】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の核酸及び／又は請求項１８又は１９に記載のリボザイム及び／又は請求項２０に記載のアンチセンス核酸及び／又は請求項２１に記載のＲＮＡｉの、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断及び／又は治療のための使用。
【請求項２７】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の核酸及び／又は請求項１８又は１９に記載のリボザイム及び／又は請求項２０に記載のアンチセンス核酸及び／又は請求項２１に記載のＲＮＡｉの、医薬を製造するため、特に、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療及び／又は予防するための医薬を製造するための使用。
【請求項２８】
請求項１３〜１４のいずれか一項に記載のポリペプチドの、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断及び／又は治療のための使用。
【請求項２９】
請求項１３〜１４のいずれか一項に記載のポリペプチドの、医薬の製造、特に、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療及び／又は予防するための医薬を製造するための使用。
【請求項３０】
請求項１６〜１７のいずれか一項に記載の抗体の、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断及び／又は治療のための使用。
【請求項３１】
請求項１６〜１７のいずれか一項に記載の抗体の、医薬を製造するための使用。
【請求項３２】
甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断のためのキットであって、該キットが、それぞれ前出の請求項の一項に記載の核酸、ベクター、ポリペプチド、細胞、抗体、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ及びリボザイムからなる群から選択される少なくとも一種の要素を含むことを特徴とするキット。
【請求項３３】
甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を検出するための方法であって、次の各段階、
・甲状腺材料を、それぞれ前出の請求項の一項に記載の核酸、ベクター、ポリペプチド、抗体、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ、リボザイム及び細胞からなる群から選択される剤に接触させる段階と、
・甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍が存在するか否かを決定する段階と
を特徴とする方法。
【請求項３４】
甲状腺材料がｅｘ  ｖｉｖｏに存在することを特徴とする、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の核酸の、プライマー及び／又はプローブとしての使用。
【請求項３６】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の核酸配列の一部分に相補的であることを特徴とする、核酸を提供する及び／又はスクリーニングする及び／又は検出するためのプライマー。
【請求項３７】
甲状腺腫瘍又は甲状腺腫において検出され得る配列を含む核酸を提供する方法であって、ブレークポイントを有する転座が染色体バンド１９ｑ１３に存在し、前記配列が染色体バンド１９ｑ１３内にあり、
該方法が次の各段階、
・ＰＣＲを実施するための請求項３６に記載のプライマーを調製する段階と、
・ヒト染色体１９のバンド１９ｑ１３から採取した核酸配列又は請求項１〜８のいずれか一項に記載の核酸を調製する段階と、
・核酸配列又は核酸をプライマーと混合する段階と、
・ＰＣＲを実施する段階と、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項３８】
医薬組成物であって、
それぞれ前出の請求項の一項に記載の核酸、ベクター、ポリペプチド、細胞、抗体、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ、リボザイム及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも一種の剤と、
医薬として許容しうる少なくとも一種の担体と
を含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項３９】
腫瘍及び過形成を治療及び／又は予防するための方法であって、前出の請求項のいずれか一項に記載の核酸の発現を変化させる作用を阻害する化合物が患者に投与されることを特徴とする方法。
【請求項４０】
前出の請求項のいずれか一項に記載の核酸の発現を変化させる作用を阻害する化合物の、医薬を製造するための使用。
【請求項４１】
医薬が、腫瘍及び／又は過形成、特に甲状腺の腫瘍及び／又は過形成を治療及び／又は予防するためのものであることを特徴とする、請求項４０に記載の使用。
【請求項４２】
配列番号１〜１２及び配列番号１６〜１９からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体の、医薬（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療するための医薬）を製造するための及び／又は診断手段（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断のための診断手段）を製造するための使用。
【請求項４３】
ポリペプチドが、配列番号１３、配列番号１４及び／又は配列番号１５に従ったアミノ酸配列を有することを特徴とする、請求項４２に記載の使用。
【請求項４４】
核酸が、遺伝子コードの縮重がなければ、配列番号１〜１２及び／又は配列番号１６〜１９の配列の一配列に係る核酸とハイブリダイズすることを特徴とする、請求項４２又は４３に記載の使用。
【請求項４５】
配列番号１３〜１５からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体の、医薬（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療するための医薬）を製造するための及び／又は診断手段（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断のための診断手段）を製造するための使用。
【請求項４６】
甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療するための手段、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を診断するための診断手段をスクリーニングするための方法であって、次の各段階、
ｅ）候補化合物を調製する段階と、
ｆ）発現系及び／又は活性系を調製する段階と、
ｇ）候補化合物を発現系及び／又は活性系と接触させる段階と、
ｈ）候補化合物の影響下において、配列番号１〜１２及び配列番号１６〜１９からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド、及び／又は配列番号１３〜１５に従った配列を有するポリペプチド又はこれらの誘導体の発現及び／又は活性が変化しているか否かを決定する段階と
を含む方法。
【請求項４７】
候補化合物が化合物ライブラリーに含まれることを特徴とする、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
候補化合物がペプチド、蛋白質、抗体、アンチカリン、機能的核酸及び小分子からなる化合物クラス群から選択されることを特徴とする、請求項４６又は４７に記載の方法。
【請求項４９】
機能的核酸が、アプタマー、アプタザイム、リボザイム、スピゲルマー、アンチセンスオリゴヌクレオチド及びＲＮＡｉからなる群から選択されることを特徴とする、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
配列番号１〜１２及び配列番号１６〜１９からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体、及び／又は配列番号１３〜１５に従った配列を有するポリペプチド又はこれらの誘導体、及び／又は配列番号１〜１２及び配列番号１６〜１９からなる群から選択される配列を有する核酸の特に天然相互作用パートナー又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体、及び／又はこれらの核酸、及び／又は配列番号１３〜１５に従った配列を有するポリペプチドの相互作用パートナー又はこれらの誘導体の、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を診断するための診断手段を開発及び／又は製造するためターゲット分子としての、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発及び／又は製造するためのターゲット分子としての使用。
【請求項５１】
医薬又は診断手段が、抗体、ペプチド、アンチカリン、小分子、アンチセンス分子、アプタマー、スピゲルマー及びＲＮＡｉ分子からなる群から選択される剤を含むことを特徴とする、請求項５０に記載の使用。
【請求項５２】
剤が、配列番号１３〜１５に従った配列を有するポリペプチド又はこれらの誘導体又はこれらの相互作用パートナーと相互作用することを特徴とする、請求項５１に記載の使用。
【請求項５３】
剤が、配列番号１〜１２及び配列番号１６〜１９からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は特に天然相互作用パートナーをコードする核酸と、特にｍＲＮＡ、ゲノム核酸又はｃＤＮＡと相互作用することを特徴とする、請求項５１に記載の使用。
【請求項５４】
配列番号１〜１２及び配列番号１６〜１９からなる群から選択される配列を有する核酸によりコードされるペプチド又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は配列番号１３〜１５に従ったポリペプチドと相互に作用する、及び／又はこれらの特に天然相互作用パートナーと相互に作用するポリペプチドの、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を診断するための診断手段を開発又は製造するための、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発又は製造するための使用。
【請求項５５】
ポリペプチドが、抗体及び結合ポリペプチドからなる群から選択されることを特徴とする、請求項５４に記載の使用。
【請求項５６】
配列番号１〜１２及び配列番号１６〜１９からなる群から選択される配列を有する核酸によりコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は配列番号１３〜１５に従ったポリペプチドと相互作用する、及び／又はこれらの特に天然相互作用パートナーと相互に作用する核酸の、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を診断するための診断手段を開発又は製造するための、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発又は製造するための使用。
【請求項５７】
核酸が、アプタマー及びスピゲルマーからなる群から選択されることを特徴とする、請求項５６に記載の使用。
【請求項５８】
配列番号１〜１２及び配列番号１６〜１９からなる群から選択される配列を有する第二の核酸又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は配列番号１３、１４又は１５に従った配列を有するポリペプチドの相互作用パートナーをコードする核酸と相互作用する第一の核酸の、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発又は製造するための使用。
【請求項５９】
相互作用する第一の核酸が、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム及び／又はＲＮＡであることを特徴とする、請求項５８に記載の使用。
【請求項６０】
第二の核酸がｃＤＮＡ又はｍＲＮＡであることを特徴とする、請求項５８又は５９に記載の使用。
【請求項６１】
請求項５０〜６０のいずれか一項に記載の使用に係る群から選択される少なくとも一種の剤と、医薬として許容しうる少なくとも一種類の担体とを含む、特に、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬組成物。
【請求項６２】
請求項５０〜６０のいずれか一項に記載の使用に係る少なくとも一種の剤を含む、甲状腺の状態を特徴付けるためのキット。
【発明の詳細な説明】
【説明】
【０００１】
本発明は、過形成及び／又は腫瘍を原因とする発現変化を有する核酸、ヒトのＣＡＴ及びＤＣ２の相同体（以下単にＣＡＴ及びＤＣ２とも称する）及びＰＫＣγ（特にその相同体）をコードする核酸、これらを含むベクターや細胞、これらによってコードされるポリペプチド、これらに対する抗体、腫瘍を治療するための物質として好適な化合物を決定する方法、甲状腺腫瘍の形成に関与する遺伝子を決定する方法、更にはこれら核酸の使用に関する。
【０００２】
体の成長や発達をコントロールするホルモンを産生する甲状腺の重要性は、少なくともある一部の症例においてこの腺の機能障害がもたらす注目すべき変化と共に、この語の真の意味である「盾」という意義において、医学の分野では古くから知られている。
【０００３】
甲状腺腫、あるいは一般に甲状腺腫瘍の病因については、包括的な説明を特に分子レベルで与えるには未だ至っていない。現在、２種の考え方があり、その一方では、条件付きではあるが、組織の過形成は刺激ホルモンによる慢性的刺激の結果であると考えられており、究極的にはポリクローナル結節の成長をもたらす。この考え方は非新生物エンドクリン過形成(non-neoplastic endocrine hyperplasia；ＮＮＥＨ）と称される。他方の考え方では、結節は真正なクローン性の腫瘍である。
【０００４】
甲状腺の場合、他の腺に適用可能な非新生物エンドクリン過形成という単純な概念は適用できないことが判明した。この分野における現在の考え方については、スチューダーＨ．（Ｓｔｕｄｅｒ，Ｈ．）（１９９５）の「エンドクリン・レビューズ」、Ｖｏｌ．１６、Ｎｏ．４、４１１〜４２６ページに記載されている。
【０００５】
よって、甲状腺腫や甲状腺腫瘍の治療には、適切な治療コンセプトが採用できるよう早期の診断が必要である。
【０００６】
本発明の目的は、甲状腺機能障害、甲状腺過形成及び甲状腺腫瘍を診断し、治療するための手段を分子レベルで提供することであって、特に病原性をもたらすメカニズムに関与する核酸配列であると共にこのメカニズムを研究するために好適な核酸配列を提供すること、及びこの病原性をもたらすメカニズムに作用するあるいはこれに影響を与えることができる核酸配列を提供することである。
【０００７】
加えて、前記核酸配列に基づく薬剤、及び広く医薬組成物をも提供する。
【０００８】
更には、甲状腺機能障害、甲状腺過形成、及び甲状腺腫瘍の診断及び／治療のためのキット、並びにこれらを検出するための方法をも提供する。
【０００９】
上の目的は本発明に係る各独立請求項に記載の内容をもって達成される。更なる各種実施形態は従属請求項から得られる。
【００１０】
上の目的は本発明の第一の様相においては、過形成及び／又は腫瘍により発現が変化した核酸によって達成されるが、この核酸は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１６、１７、１８、及び１９（以下、配列番号１〜１２及び配列番号１６〜１９とも称する）からなる群から選択される核酸配列を有する。
【００１１】
一実施形態においては、腫瘍は染色体バンド１９ｑに何らかの変化を有する各種上皮腫瘍と染色体バンド１９ｑ１３に何らかの変化を有する各種腫瘍からなる群から選択される。
【００１２】
別の実施形態においては、過形成は甲状腺の各種過形成から選択される。
【００１３】
更に別の実施形態においては、配列番号１、２、７、１０、１１及び／又は１２はＣＡＴ（特にヒトＣＡＴ）あるいはその一部をコードする。
【００１４】
別の実施形態においては、配列番号３、４、８、１６及び／又は１７が、ＤＣ２（特にヒトＤＣ２）又はこれらの一部をコードする。
【００１５】
更に別の実施形態においては、配列番号５、６、９、１８及び／又は１９がＰＫＣγ（特にヒトＰＫＣγ）又はこれらの一部をコードする。
【００１６】
別の様相においては、上の本発明の目的は、遺伝子コードの縮重がなければ本発明に係る核酸と同じアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸によって達成される。
【００１７】
別の様相においては、上の本発明の目的は、本発明の各種核酸の内の一核酸とハイブリダイズする核酸によって達成される。
【００１８】
更に別の様相においては、上の本発明の目的は、ベクターによって達成されるが、このベクターは本発明の各種核酸の内の少なくとも一核酸を含む。
【００１９】
一実施形態においては、ベクターは、プロモーター、ターミネーター及びエンハンサーからなる群から選択される少なくとも一種の要素を更に含む。
【００２０】
別の実施形態においては、ベクターは発現ベクターである。
【００２１】
更に別の実施形態においては、少なくとも一個のプロモーターが、ポリペプチドをコードする請求項１〜８のいずれか一項に記載の核酸の少なくとも一部分を有するリーディングフレーム内にある。
【００２２】
別の様相においては、上の本発明の目的は、本発明の核酸によりコードされるポリペプチドによって達成される。
【００２３】
一実施形態においては、ポリペプチドは改変されている。
【００２４】
別の様相においては、上の本発明の目的は、本発明のベクターを含む細胞（特に単離された細胞）により達成される。
【００２５】
別の様相においては、上の本発明の目的は、本発明のポリペプチドに対する抗体により達成される。
【００２６】
一実施形態においては、抗体は、本発明の核酸に対するものである。
【００２７】
別の様相においては、上の本発明の目的は、本発明の核酸に対するリボザイムにより達成される。
【００２８】
一実施形態においては、リボザイムは、本発明の各種核酸の内の一核酸の少なくとも一部分を含む。
【００２９】
別の様相においては、上の本発明の目的は、本発明の各種核酸の内の一核酸と相補的なあるいはこれと同一の配列を含むアンチセンス核酸により達成される。
【００３０】
別の様相においては、上の本発明の目的は、本発明の各種核酸のうちの一核酸と相補的である又はこれと同一である配列を含むＲＮＡｉにより達成されるが、好ましくはこのＲＮＡｉは、相補的又は同一である領域の長さが２１〜２３個のヌクレオチドである領域を含む。
【００３１】
別の様相においては、上の本発明の目的は、前出の請求項のいずれか一項に記載の核酸の翻訳産物の作用に影響を及ぼす化合物、特に前記作用を阻害する化合物を決定する方法により達成されるが、この方法は次の各段階、
・翻訳産物と化合物を調製する段階と、
・翻訳産物の作用を体現する系において、翻訳産物と化合物とを接触させる段階と、
・化合物の影響下において翻訳産物の作用に何らかの変化が生じたか否かを決定する段階と
を特徴とする。
【００３２】
更に別の様相においては、上の本発明の目的は、前出の請求項のいずれか一項に記載の核酸の転写産物の作用に影響を及ぼす化合物、特に前記作用を阻害する化合物を決定する方法により達成されるが、この方法は次の各段階、
・転写産物と化合物を調製する段階と、
・転写産物の作用を体現する系において、転写産物と化合物とを接触させる段階と、
・化合物の影響下において転写産物の作用に何らかの変化が生じたか否かを決定する段階と
を特徴とする。
【００３３】
前述の二種の本発明方法の一実施形態においては、系は、細胞発現系、無細胞発現系、化合物と翻訳産物の間の相互作用を測定するアッセイ及び化合物と転写産物の間の相互作用を測定するアッセイからなる群から選択される。
【００３４】
別の様相においては、上の本発明の目的は、過形成及び腫瘍の形成、特に甲状腺の過形成及び腫瘍の形成を担う遺伝子を決定する方法により達成されるが、この方法は次の各段階、
・過形成及び腫瘍の染色体転座部におけるブレークポイントを決定する段階と、
・ブレークポイント領域の両側４００ｋｂｐ、好ましくは１５０ｋｂｐの領域内にある遺伝子を決定する段階と、
・過形成細胞又は腫瘍細胞におけるこの遺伝子の翻訳／転写が、過形成でない細胞又は腫瘍でない細胞と比べて変化しているか否かを決定する段階と
を含む。
【００３５】
更に別の様相においては、上の本発明の目的は、本発明の各種核酸の内の一核酸及び／又は本発明のリボザイム及び／又は本発明のアンチセンス核酸及び／又は本発明のＲＮＡｉの、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断及び／又は治療のための使用を提供することにより達成される。
【００３６】
更に別の様相においては、上の本発明の目的は、本発明の各種核酸の内の一核酸及び／又は本発明のリボザイム及び／又は本発明のアンチセンス核酸及び／又は本発明のＲＮＡｉの、医薬の製造、特に、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療及び／又は予防するための医薬を製造するための使用を提供することにより達成される。
【００３７】
別の様相においては、上の本発明の目的は、本発明のポリペプチドの、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断及び／又は治療のための使用を提供することにより達成される。
【００３８】
別の様相においては、上の本発明の目的は、本発明のポリペプチドの、医薬の製造、特に、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療及び／又は予防するための医薬の製造のための使用を提供することにより達成される。
【００３９】
別の様相においては、上の本発明の目的は、本発明の抗体の、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断及び／又は治療のための使用を提供することにより達成される。
【００４０】
別の様相においては、上の本発明の目的は、本発明の抗体の、医薬の製造のための使用を提供することにより達成される。
【００４１】
更に別の様相においては、上の本発明の目的は、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断のためのキットにより達成されるが、該キットは、本発明の核酸、ベクター、ポリペプチド、細胞、抗体、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ及びリボザイムからなる群から選択される少なくとも一種の要素を含むことを特徴とする。
【００４２】
別の様相においては、上の本発明の目的は、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を検出するための方法により達成されるが、この方法は次の各段階、
・甲状腺材料を、それぞれ前出の請求項の一項に記載の核酸、ベクター、ポリペプチド、抗体、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ、リボザイム及び細胞からなる群から選択される剤に接触させる段階と、
・甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍が存在するか否かを決定する段階と
を特徴とする。
【００４３】
一実施形態においては、甲状腺材料はｅｘ  ｖｉｖｏに存在する。
【００４４】
別の様相においては、上の本発明の目的は、本発明の核酸の、プライマー及び／又はプローブとしての使用を提供することにより達成される。
【００４５】
更に別の様相においては、上の本発明の目的は、核酸を提供する及び／又はスクリーニングする及び／又は検出するためのプライマーにより達成されるが、このプライマーは、本発明の各種核酸の内の一核酸の一部分に相補的であるあるいはこれと同一である。
【００４６】
更に別の様相においては、上の本発明の目的は、甲状腺腫瘍又は甲状腺腫において検出され得る配列を含む核酸を提供する方法であって、ブレークポイントを有する転座が染色体バンド１９ｑ１３に存在し、前記配列が染色体バンド１９ｑ１３内にあり、
該方法が次の各段階、
・ＰＣＲを実施するための本発明のプライマーの少なくとも一種を提供する段階と、
・ヒト染色体１９のバンド１９ｑ１３から採取した核酸配列又は本発明の各種核酸の内の一核酸を提供する段階と、
・核酸配列又は核酸をプライマーと混合する段階と、
・ＰＣＲを実施する段階と、
を含むことを特徴とする方法により達成される。
【００４７】
別の様相においては、上の本発明の目的は、医薬組成物であって、
本発明の核酸、ベクター、ポリペプチド、細胞、抗体、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ、リボザイム及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも一種の剤と、
医薬として許容しうる少なくとも一種の担体と
を含むことを特徴とする医薬組成物により達成される。
【００４８】
更に別の様相においては、上の本発明の目的は、腫瘍及び過形成を治療及び／又は予防するための方法により達成されるが、この方法においては、本発明の各種核酸の内の一核酸の発現を変化させる作用を阻害する又は促進させる化合物が患者に投与される。
【００４９】
更に別の様相においては、上の本発明の目的は、前出の請求項のいずれか一項に記載の核酸の発現を変化させる作用を阻害する化合物の、医薬を製造するための使用を提供することにより達成される。
【００５０】
一実施形態においては、医薬は、腫瘍及び／又は過形成、特に甲状腺の腫瘍及び／又は過形成を治療及び／又は予防するためのものである。
【００５１】
別の様相においては、上の本発明の目的は、配列番号１〜１２及び配列番号１６〜１９からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体の、医薬（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療するための医薬）を製造するための及び／又は診断手段（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断のための診断手段）を製造するための使用を提供することにより達成される。
【００５２】
一実施形態においては、ポリペプチドは、配列番号１３、配列番号１４及び／又は配列番号１５に従ったアミノ酸配列を有する。
【００５３】
一実施形態においては、核酸は、遺伝子コードの縮重がなければ、配列番号１〜１２及び／又は配列番号１６〜１９の配列の一配列に係る核酸とハイブリダイズする。
【００５４】
別の様相においては、上の本発明の目的は、配列番号１３〜１５からなる群から選択される配列を有するポリペプチド又はこれらの誘導体の、医薬（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療するための医薬）を製造するための及び／又は診断手段（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断のための診断手段）を製造するための使用を提供することにより達成される。
【００５５】
別の様相においては、上の本発明の目的は、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療するための手段、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を診断するための診断手段をスクリーニングするための方法であって、次の各段階、
ａ）候補化合物を調製する段階と、
ｂ）発現系及び／又は活性系を調製する段階と、
ｃ）候補化合物を発現系及び／又は活性系と接触させる段階と、
ｄ）候補化合物の影響下において、配列番号１〜１２及び配列番号１６〜１９からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド、及び／又は配列番号１３〜１５に従った配列を有するポリペプチド又はこれらの誘導体の発現及び／又は活性が変化しているか否かを決定する段階と
を含む方法により達成される。
【００５６】
一実施形態においては、候補化合物は化合物ライブラリーに含まれる。
【００５７】
別の実施形態においては、候補化合物はペプチド、蛋白質、抗体、アンチカリン、機能的核酸及び小分子からなる化合物クラス群から選択される。
【００５８】
更に別の実施形態においては、機能的核酸は、アプタマー、アプタザイム、リボザイム、スピゲルマー、アンチセンスオリゴヌクレオチド及びＲＮＡｉからなる群から選択される。
【００５９】
別の様相においては、上の本発明の目的は、配列番号１〜１２及び配列番号１６〜１９からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体、及び／又は配列番号１３〜１５に従った配列を有するポリペプチド又はこれらの誘導体、及び／又は配列番号１〜１２及び配列番号１６〜１９からなる群から選択される配列を有する核酸の特に天然相互作用パートナー又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体、及び／又はこれらをコードする核酸、及び／又は配列番号１３〜１５に従った配列を有するポリペプチドの相互作用パートナー又はこれらの誘導体の、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を診断するための診断手段を開発及び／又は製造するためのターゲット分子としての、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発及び／又は製造するためのターゲット分子としての使用を提供することにより達成される。
【００６０】
一実施形態においては、医薬又は診断手段は、抗体、ペプチド、アンチカリン、小分子、アンチセンス分子、アプタマー、スピゲルマー及びＲＮＡｉ分子からなる群から選択される剤を含む。
【００６１】
一実施形態においては、剤は、配列番号１３〜１５に従った配列を有するポリペプチド又はこれらの誘導体又はこれらの相互作用パートナーと相互作用する。
【００６２】
更に別の実施形態においては、剤は、配列番号１〜１２及び配列番号１６〜１９からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は特に天然相互作用パートナーをコードする核酸、特にｍＲＮＡやゲノム核酸、ｃＤＮＡと相互作用する。
【００６３】
別の様相においては、上の本発明の目的は、配列番号１〜１２及び配列番号１６〜１９からなる群から選択される配列を有する核酸によりコードされるペプチド又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は配列番号１３〜１５に従ったポリペプチドと相互作用する、及び／又はこれらの特に天然相互作用パートナーと相互作用するポリペプチドの、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を診断するための診断手段を開発又は製造するための、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発又は製造するための使用を提供することにより達成される。
【００６４】
一実施形態においては、ポリペプチドは、抗体及び結合ポリペプチドからなる群から選択される。
【００６５】
別の様相においては、上の本発明の目的は、配列番号１〜１２及び配列番号１６〜１９からなる群から選択される配列を有する核酸によりコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は配列番号１３〜１５に従ったポリペプチドと相互作用する、及び／又はこれらの特に天然相互作用パートナーと相互作用する核酸の、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を診断するための診断手段を開発又は製造するための、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発又は製造するための使用を提供することにより達成される。
【００６６】
一実施形態においては、核酸は、アプタマー及びスピゲルマーからなる群から選択される。
【００６７】
別の様相においては、上の本発明の目的は、配列番号１〜１２及び配列番号１６〜１９からなる群から選択される配列を有する第二の核酸又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は配列番号１３、１４又は１５に従った配列を有するポリペプチドの相互作用パートナーをコードする核酸と相互作用する第一の核酸の、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発又は製造するための使用を提供することにより達成される。
【００６８】
一実施形態においては、相互作用する第一の核酸は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム及び／又はＲＮＡｉである。
【００６９】
別の実施形態においては、第二の核酸はｃＤＮＡ又はｍＲＮＡである。
【００７０】
別の様相においては、上の本発明の目的は、少なくとも一種の本発明の使用に係る群から選択される少なくとも一種の剤と、医薬として許容しうる少なくとも一種類の担体とを含む、特に、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬組成物により達成される。
【００７１】
別の様相においては、上の本発明の目的は、本発明の使用の内の少なくとも一種に係る少なくとも一種の剤を含む、甲状腺の状態、甲状腺を形成する組織の状態又は甲状腺を形成する一又は複数種類の細胞の状態を特徴付けるためのキットにより達成される。
【００７２】
本発明は、正常な組織とは異なる発現をする一連の遺伝子又は核酸配列が存在し、その発現が腫瘍や過形成の発生と関係していることが疑われ且つそれらが因果関係にあると考えられるという、驚くべき知見に基づいている。
【００７３】
本発明において、或る種の過形成や腫瘍の場合には、或る種の遺伝子あるいは配列の発現において何らかの変化が起こることが確認された。この場合の変化とは、特に、発現上昇や発現低下をいう。また、本明細書では、過形成や腫瘍の細胞とは異なる細胞や組織における目的の遺伝子や配列の発現の程度を基準として使用する。
【００７４】
本明細書において対象とする腫瘍としては、第一の腫瘍グループとして各種上皮腫瘍、特に染色体バンド１９ｑに変化を有する上皮腫瘍、第二の腫瘍グループとして染色体バンド１９ｑ１３に変化を有する各種腫瘍が挙げられる。この場合の変化とは、特に染色体転座や染色体欠失、染色体挿入、染色体逆位をいう。
【００７５】
第一のグループの腫瘍は甲状腺の各種腫瘍を含み、甲状腺の上皮腫瘍が好ましい。第二のグループの腫瘍としては、例えば、白血病（慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病等）やＢ細胞リンパ腫、神経膠腫、悪性線維性組織球腫、骨肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、卵巣腫瘍、乳腫、腎臓癌、膵臓癌、胆嚢癌等が挙げられる。
【００７６】
ＷＨＯの分類によれば、甲状腺の腫瘍は殆どが上皮腫瘍由来であり、良性型と悪性型に分けられる。良性腫瘍においては、「真正の」腺腫と、「腫瘍様病変」とも言われる甲状腺過形成（良性腺腫様甲状腺腫結節）とが区別される。この過形成は、殆どがポリクローナル結節であり、包形成が不完全な様々な大濾胞性構造を有することが多い。一方、甲状腺腺腫は濾胞性上皮由来の被包型腫瘍である。これらの通常単発性の腫瘍は均一に構成され、その構造は隣接する甲状腺組織とは異なる。これらは、顕微鏡的に（組織の細かさという点で）分化の程度に応じて、正常濾胞性（normofollicular）（シンプル／シングル）、大濾胞性（macrofollicular）（コロイド）、小濾胞性（microfollicular）（胎児性）、小柱性（trabecular）（胚性）に分類することができる。
【００７７】
本明細書におけるＣＡＴとは、カチオン性アミノ酸輸送体（カチオン性アミノ酸輸送体、カチオン性アミノ酸を輸送するもの）の略称である。この輸送体は、カチオン性アミノ酸を輸送して細胞にアミノ酸を供給する役割を担っている。これらのアミノ酸の中には神経伝達物質として機能するものがあることから、輸送体の中にも信号伝達に関与しているものがあることになる。現在のところ、ＣＡＴ−Ａがこれとは異なる機能を有する可能性は排除できない。
【００７８】
本発明の枠内で確認される相同性は、ヒトの配列とドブネズミ（Rattus norvegicus）由来のＣＡＴ３との比較に基づくものである。
【００７９】
既知のＤＣ２は、細胞内に遍在する蛋白質であり、ショウジョウバエ（Drosophila）とその初期の胚発達に関係して報告されたのが最初である。ＤＣ２は、プロテインキナーゼ活性を示す。ヒトのＤＣについての最初の報告は、樹状細胞に関係するものであった。
【００８０】
本明細書において、ＰＫＣγとはプロテインキナーゼＣガンマを略したものである。ＰＫＣγは、セリンとトレオニンのリン酸化を仲介することにより転写調節に関与する。これに鑑み、プロテインキナーゼＣガンマのこの一般的機能から、ＰＫＣγが、細胞における転写イベントへ介入でき且つ本明細書に記載の腫瘍や過形成の診断と治療の両方に向けての出発点を提供するターゲットであるということが導かれる。この転写影響因子が本明細書に記載の腫瘍に関係するイベントに中心的重要性を担うという知見は、本発明者にとって驚くべきことであった。
【００８１】
本発明の配列には、それぞれに相補的な配列も含まれることも本発明の範囲に含まれる。
【００８２】
更に、本発明の範囲には、特に、シングルコピー配列を検出するためのノーザンブロットハイブリダイゼーションの標準的な条件において、配列番号１〜１２の各配列とハイブリダイズする核酸配列も含まれる。
【００８３】
本発明の各種核酸の内の一核酸の翻訳産物の作用に影響を及ぼし得る化合物を決定する本発明の方法には、化合物ライブラリーをスクリーニングする方法も含むことができる。このような化合物ライブラリーとしては、低分子量化合物のライブラリーが好ましい。基本的には、この手続きは、或る系において本発明の各種核酸の内の一核酸の翻訳産物を化合物に接触させるものであるが、ここにおいて、この系は、前記翻訳産物の作用、ひいては翻訳産物に対する化合物の作用を示すか、あるいはこの作用を検出可能な信号の形で出力するものである。この作用は、例えば、強度、基板特異性（認識、結合、輸送）及び／又は受容体特異性や受容体親和性や膜会合についての関数をモディファイして、即ち信号伝達として表すことができる。この作用は、細胞における酵素反応に対しても影響を及ぼすであろう。この作用は、無細胞系と細胞系の両方において、細胞培養でもトランスジェニック動物モデルでも（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ及びｉｎ  ｓｉｔｕで）調べることができる。
【００８４】
以下、本発明の方法及び適用において、腫瘍や過形成と言及する場合は、本発明の核酸に関係して示される全ての種類の腫瘍や過形成含むものと理解されたい。
【００８５】
本発明の核酸が甲状腺腫や甲状腺腫瘍、甲状腺癌の診断や治療と、発症に関する機序の調査との両方に用いられるという新しい可能性が開かれている。特に、配列を知ることにより、適切な診断手段あるいは治療手段を直接的あるいは間接的に、薬学的な組成物や医薬という意味において分子レベルで用いることができるようになる。
【００８６】
本発明の核酸配列は、キットや方法と同様、上述の意味において診断や治療において使用される適切な手段を作るために、当業者に既知の方法で使用されることができる。
【００８７】
核酸とは、ＤＮＡ配列とＲＮＡ配列の両方をいう。これには、これらのハイブリッドや、異なるバックボーンを有するＰＮＡやＬＮＡ等由来の誘導体も含まれる。また、核酸は一本鎖構造、二本鎖構造あるいはトリプル構造で存在することができる。
【００８８】
ＤＮＡの鎖性、即ち例えば一本鎖であるか二本鎖であるかは、核酸配列の長さにより異なるものとすることもできる。
【００８９】
更に、本発明の核酸配列は、完全でなくてもよく、断片とすることもできる。
【００９０】
更に、本発明に開示される核酸配列には、その変異体も含まれる。本明細書において、変異とは、核酸配列内に起こり得るものとして当業者に知られている変異全てをいい、点変異と点変異以外の変異、即ち逆位、挿入、欠失を含む。
【００９１】
本発明の核酸とその他の核酸の相互作用に関して、通常の操作において認識されているハイブリダイゼーションの基準を本発明においても用いる。適切なハイブリダイゼーションの条件を選択することにより、特定の領域とのハイブリダイゼーションのストリンジェンシーを変更することができ、従って、本発明の核酸配列は、完全ではないものの対応する配列、即ち相補配列、との差異の程度が様々な核酸配列とハイブリダイズすることができるようになる。
【００９２】
本発明の核酸配列には、もし遺伝子コードの縮重がなければ本発明の各種配列の内の一配列とハイブリダイズしたであろう配列も含まれる。これは、本発明の核酸配列にあるオープンリーディングフレームを見れば、これを遺伝コードを用いてアミノ酸配列に翻訳できることを意味する。しかしながら、遺伝子コードの縮重を鑑み、このようにして得たアミノ酸配列から出発し、遺伝コードを再び用いて、アミノ酸配列を決定するために用いた核酸配列に対してもはやハイブリダイズできない程異なっている核酸配列を得ることもできる。
【００９３】
当業者であれば、本明細書に開示されている核酸から出発して、本発明の核酸配列と相互に作用できる適切なアンチセンス核酸（特にアンチセンスＲＮＡ）を生成することができる。この相互作用により、このアンチセンス核酸は、この核酸配列が関与するプロセスに直接的な影響を及ぼすことができる。この相互作用は、翻訳レベルと同様、例えば転写レベルにおいても起り得る。
【００９４】
本発明の核酸配列は、通常、ｉｎ  ｓｉｔｕやｅｘ  ｖｉｖｏにおいて前記組織、例えば対応する細胞や組織、器官培養物から単離することにより得られる核酸配列をいう。しかしながら、ジーンバンクから単離される核酸配列、特にヒトジーンバンクから、より好ましくはヒト染色体１９のジーンバンクから単離される核酸配列も本発明の核酸配列に含まれる。更に、本発明の核酸配列には、適切な合成技法（例えば、ポリメラーゼ連鎖反応やその他の従来技術において知られている生物化学的、化学的合成方法）により作成される核酸も含まれる。
【００９５】
本発明の配列は、改変されていてもよい。
【００９６】
改変には、例えば、本発明の核酸配列の（一部の）配列の断片化、挿入、欠失、逆変異も含まれる。これには、他の核酸配列が挿入されることも含まれる。これらの核酸配列には、例えば、特定の領域をコードすることができ、翻訳や転写を制御するためのスペーサーや要素として機能することができる。
【００９７】
更に、本発明の核酸は、他の分子と相互作用し得る配列や分子を含むように改変されたものであることができる。これは、例えば、核酸結合タンパクとの結合を仲介する固体キャリアや配列に対する結合部位の形で達成できる。
【００９８】
更に、本発明の核酸配列は標識されたものであることができる。ここで、標識は、基本的には直接標識と間接標識の両方をいう。標識は、従来技術において知られている標識物質と標識方法を用いて達成することができ、例としては放射性標識、非放射性標識、蛍光標識が挙げられる。非放射性標識に用いられる標識物質としては、例えば、ジゴキシゲニン、アビジン、ストレプトアビジン、ビオチンが挙げられる。
【００９９】
本明細書におけるベクターとは、当技術分野において知られている組換えベクターをいう。このようなベクターとしては、例えば、ウィルスベクター（アデノウィルスベクター、レトロウィルスベクター等）、ファージシステム、プラスミドベクター（コスミドベクター等）、原核生物系と真核生物系に使用できる人工染色体等が挙げられる。
【０１００】
本発明のベクターは、本発明の核酸配列に加え、従来技術において知られている要素を更に含むことができる。各要素、例えばプロモーターやターミネーター、エンハンサーは、当業者に知られている方法で宿主細胞系に応じて選択される。ここで特に気をつけなければならないことは、適切な真核生物プロモーターと誘導プロモーターを選択することである。更に、前記要素に加え、これらのベクターは、少なくとも本発明の核酸配列あるいはその一部が宿主細胞システムのゲノムに導入されるという結果をもたらす要素を含むこともできる。
【０１０１】
リーディングフレーム（「インフレーム」）にある前記要素の内の少なくとも一要素が、本発明の核酸配列の少なくとも一個のオープンリーディングフレームと組み合わされるということも可能である。この特別なオープンリーディングフレームの転写速度が付加的に導入したプロモーターにより制御される場合が、特に有利である。ここで、このプロモーターは通常、適切な距離に、このオープンリーディングフレームに対し「インフレーム」に存在するものである。
【０１０２】
更に、本発明の核酸配列のオープンリーディングフレームは、好ましくは前述の条件において、シグナル配列を有することができる。このシグナル配列は、このオープンリーディングフレームがコードしている遺伝子産物に細胞膜を通過させて転座させることができ、またその結果として必要に応じてこの遺伝子産物を更に改変させることができる。このようなシグナル配列としては、合成蛋白質を小胞体やゴルジ体、リオソーム（lyosomes）、細胞小器官（ミトコンドリアや葉緑体等）、細胞コアに輸送するためのシグナル配列が挙げられる。このような方法で別の細胞コンパートメントに通過できることにより、翻訳後修飾をすることができるため、必要に応じて遺伝子産物を更に有利に開発することができる。
【０１０３】
シグナル配列に加え、このような構成に更に付加的な核酸配列を含ませることができる。この付加的な配列は、本発明の核酸配列のオープンリーディングフレームの遺伝子産物が融合産物を形成するという結果をもたらすものである。ここで、このフューズド・オン・パート（fused-on part）は、別の蛋白質の一領域に対応するものであることができ、例えば本発明の核酸配列のオープンリーディングフレームの遺伝子産物を検出するのに使用される。また、生物学的な系における他の分子や構造物との相互作用を検出するのに使用される。ここで生物学的な系とは、好ましくは細胞である。
【０１０４】
本発明の核酸配列の上に述べた利点と、当業者であれば上述の説明から知得できる更なる利点に加え、これらのことも、前記核酸配列から推測することができる、又は該配列によりコードされるポリペプチドに固有のものである。一方、これらのポリペプチドは、本発明の核酸配列のオープンリーディングフレームから直接得ることができる、あるいは本発明のベクターを宿主生物に発現させて当業者に知られている方法で生成することができる。後者の場合、通常、まず本発明のベクターを宿主生物に導入し、宿主生物を増幅し、宿主生物からポリペプチドを得る。あるいは、宿主生物からポリペプチドを培地に分泌させる場合は、この培地からポリペプチドを得る。
【０１０５】
本発明のポリペプチドやこれらポリペプチドをコードする核酸は、甲状腺の組織における「細胞の」イベントに影響を及ぼすように直接使用されるが、これに加え、アフィニティクロマトグラフィー等により細胞イベントに関与する他の成分を精製するために使用することもできる。また、適切な抗体を作成するために使用することもでき、この抗体は例えば、治療や診断の目的で使用することができる。このような方法で、例えば、本発明ポリペプチドの相互作用パートナーを決定し単離することができる。
【０１０６】
翻訳後修飾等の特別な必要性や所望の純度等に応じて、本発明のポリペプチドを宿主生物内で作成するときは、宿主生物としては原核生物や真核生物が有利である。
【０１０７】
本発明のポリペプチドは適切な方法で改変することができる。改変とは、例えば断片化のことであり、特に分子を短くすることをいう。ここで使用する改変の意味には、ポリペプチドを標識することも含まれる。この標識は、高分子化合物と低分子化合物のどちらでも達成でき、例えば放射性標識、非放射性標識、蛍光標識が挙げられる。また、標識は、例えば蛋白質のリン酸化やグリコシル化の形であってもよい。各標識方法や改変方法は当技術分野で知られており（例えば、「蛋白質を用いる各種方法」第二版、Ｄ．Ｍ．ボラグら、ウィリ・リス社、ニューヨーク、１９９６年（Protein Method, 2nd ed., D. M. Bollag etal., Wiley Liss, Inc., New York, NY, 1996）参照）、これら全体をここに引用する。
【０１０８】
本発明における改変には、当業者に知られているいかなる形態の翻訳後修飾も含まれ、特に、ポリペプチドの蛋白質分解処理、Ｎ末端における残基の付加や除去、Ｎ末端のアセチル化、Ｎ末端のミリストイル化、グリコシルホスファチジル基やファルネシル基、ゲラニルゲラニル基のＣ末端への付加、Ｎグリコシル化、Ｏグリコシル化、グリコサミノグリカンの付加、ヒドルキシル化、リン酸化、ＡＤＰリボシル化、ジスルフィド架橋形成をいう。
【０１０９】
本発明のポリペプチドを変異させて、特にアミノ酸変異をさせて得たポリペプチドも本発明の範囲内であり、また実際そのようにして本発明のポリペプチドを得た。アミノ酸変異とは次の両方の変異をいう。即ち、アミノ酸を側鎖が類似している別のアミノ酸で置き換える置換（保存的置換、例えばＩからＬへ、ＤからＥへ）と、アミノ酸を別のアミノ酸に置き換えてもコードされたポリペプチドの機能に好ましくない影響を与えないような置換（サイレント変異）の両方をいう。コードされたポリペプチドの機能は適切なアッセイにより確認できる。ＣＡＴ（即ち、カチオン性アミノ酸輸送体）、ＤＣ２（即ち、各キナーゼ活性）及びＰＫＣγ（即ち、プロテインキナーゼガンマ）のための適切な機能アッセイは当業者に知られている。例えば、ＣＡＴについては、クロス（Closs）ＥＩら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３６（２１）：６４６２〜８やウー（Wu）Ｆ．ら、Ａｍｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｇｕｌ  Ｉｎｔｅｇｒ  Ｃｏｍｐ  Ｐｈｙｓｉｏｌ、２７８（６）：Ｒ１５０６〜１２、パラシン（Palacin）Ｍら、Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｖ７８（４）：９６９〜１０５４に記載されており、ＰＫＣＧについてはベクトン（Becton）ＤＬら、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ、１２５（３）：４８５〜９１やパーソンズ（Persons）ＤＡら、Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒ、２（１）：７〜１４、ペランダー（Perander）Ｍら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ、２７６（１６）：１３０１５〜２４に記載されている。
【０１１０】
更なる各種利点が、本発明に係る細胞で達成され得る。これらには、例えば、この細胞に対応する核酸配列や該配列から得られる遺伝子産物を得ること等が含まれる。
【０１１１】
特に、本発明の核酸配列を細胞のゲノムに挿入することは重要であるが、例えば、このような配列が及ぼす影響、特に細胞環境における影響を更に研究するためには更に重要である。この場合、遺伝子量効果等を検査するあるいは診断及び／又は治療目的で使用することができる。非常に有利であるのは、二倍体細胞から開始したときに、一本の染色体のみが一又は複数の核酸配列を含み、好ましくはバンド１９ｑ１３の対応する位置に挿入されており、第二の染色体については染色体バンド１９ｑ１３に関与する染色体翻訳は行われない、という状態であると思われる。このような細胞は、例えば診断的アプローチにおける陽性対照及び／又は陰性対照として使用することができる。
【０１１２】
本発明の範囲には、本発明に係る各翻訳産物及び／又はこれらをコードする核酸に加え、本明細書に述べるように、各翻訳産物及び／又はこれらをコードする核酸から生じる作用を得るあるいは抑制する他の手段も使用できることも含まれる。このような手段は、所謂スクリーニング法の中から選ぶことができる。この場合、第一のステップにおいて、一又は複数の候補化合物が調製される。本発明に係る候補化合物は、本明細書に記載の疾患、特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の治療に対する適切性や、これらを診断するための診断手段としての使用に対する適切性が、何らかのテスト系にて確認されるべき化合物である。或る候補化合物が、このテスト系において或る相応の作用を示す場合は、これは相応の手段、即ち、主にこれらの疾患の治療に適切な手段を提供するものである。第二の段階では、候補化合物を(翻訳産物)発現系や(翻訳産物)活性系と接触させる。翻訳産物発現系はこの場合、翻訳産物の発現を体現する発現系であり、発現の程度は基本的に様々である。翻訳産物活性化系はこの場合、実質的には発現系であり、この系では焦点は翻訳産物の発現よりもその活性や活性状態、影響の受け易さに当てられている。このため、このような翻訳産物は実際の発現過程を経た結果得られるものである必要はなく、ポリペプチドや蛋白質として各活性系に事前に添加されることもできるということは注目に値する。具体的には、この場合、翻訳産物やこれらをコードする核酸の活性が候補化合物の影響下において変化するか否かが確認される。この場合、それぞれの特定の発現系や活性系の存在の有無にかかわらず、発現や活性が低下することも上昇することも起こり得る。発現系及び／又は活性系は通常、ｉｎ  ｖｉｔｒｏのアタッチメントを含む。例えば、細胞コア抽出物等の細胞抽出物や細胞抽出物の断片等である。本発明に係る翻訳産物発現系は細胞であることができ、好ましくは甲状腺細胞や甲状腺過形成部、甲状腺腫瘍を形成する細胞である。
【０１１３】
発現系において起こる増加や減少の程度は、発現の各レベルで決定することができる。即ち、例えば、翻訳産物をコードする核酸、特にｍＲＮＡの量の増加あるいは減少、あるいは候補化合物の影響下において発現系で生成される翻訳産物（即ち、各蛋白質）の量の増加あるいは減少により決定することができる。このために必要な技法、例えばｍＲＮＡを定量する方法は当業者に知られており、例えば、サンブルック（Sambrook）ら（サンブルック・ヨゼフ（Sambrook, Joseph）：分子クローニング（Molecular Cloning）：実験室マニュアル（laboratory manual）／Ｊ．サンブルック（Sambrook）；Ｅ．Ｆ．フリッチ（Fritsch）；Ｔ．マニアティス（Maniatis）−コールド・スプリング・ハーバー（Cold Spring Harbor）、ニューヨーク:コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー出版（Cold Spring Harbor Laboratory Press）、１９ＸＸ、第一版、マニアティス（Maniatis）、トーマス（Thomas）Ｐ．、タイトル「分子クローニング（Molecular Cloning）」；第三版の著者:ヨゼフ・サンブルック（Joseph Sambrook）とデービッドＷ．ラッセル（David W. Russell）；書誌的事項  ＩＳＢＮ０−８７９６９−３０９−６  ＩＳＢＮ０−８７９６９−５７６−５  ＩＳＢＮ０−８７９６９−５７７−３  第１〜２版、４ｔｈ［Ｄｒ．］−１９８９）により記載されている。更に、翻訳産物の量を決定する方法は当業者に知られており、例えば、適切な抗体を用いることにより決定する。抗体は一般に知られている方法により作成することができ、方法は例えば「現行のプロトコル（Current Protocols）」(「蛋白質科学における現行のプロトコル（Current Protocols in Protein Science）」コリガン（Coligan）Ｊ．Ｅ．；ダン（Dunn）Ｂ．Ｍ．、ハイド（Hidde）Ｌ．Ｐ．、スパイチャー（Speicher）Ｄ．Ｗ．、ウィングフィールド（Wingfield）Ｐ．Ｔ．；ウィリー＆サンズ（Wiley & Sons）により出版)に記載されている。更に、発現系の範囲内において翻訳産物は標識されていることも可能であり、適切な標識は当業者に知られている。このような適切な標識としては、例えばＨｉｓ６による標識（ジャンクネヒト（Janknecht）Ｒら（１９９１）、Proc Natl Acad Sci USA、８８（２０）：８９７２〜６）が挙げられる。
【０１１４】
翻訳産物活性系の場合は、翻訳産物の活性上昇や活性低下のテストは通常、機能アッセイにおいて行われる。これについては、改変翻訳産物の定義に関連して既に説明してあり、より正確には本発明の改変ポリペプチドに関して既に説明してある。
【０１１５】
通常、候補化合物と翻訳産物発現系や活性系との接触は、候補化合物の溶液好ましくは水溶液を、対応する反応系即ち発現系や活性系に加えることにより達成される。発現系や活性系は、本明細書では纏めてテスト系としても記載されている。この場合、水溶液は好ましくは緩衝液であることができる。
【０１１６】
候補化合物は、通常、どのテストにおいても一度に一種の化合物だけが、対応するテスト系において使用されるような形で使用される。本発明の範囲には、対応する各種テストが同時に高収量系で実施されることも含まれる。本発明に係るスクリーニング法の最後のステップにおいては、翻訳産物やこれをコードする核酸の発現や活性が、候補化合物の存在により変化したか否かを決定するが、その方法は概ね、候補化合物を添加しないテスト系の挙動と候補化合物を添加したテスト系の挙動を比較することにより実施される。好ましくは、候補化合物は化合物ライブラリーに含まれる。化合物クラスに関わらず基本的には全ての化合物ライブラリーを、化合物ライブラリーとして使用できる。適切な化合物ライブラリーは、例えば小分子のライブラリーである。しかしながら、小分子以外の化合物クラス、例えばペプチドや蛋白質、抗体、アンチカリン、機能的核酸等を使用することも本発明の範囲に含まれる。
【０１１７】
本発明に係る翻訳産物やこれをコードする核酸を、前述の化合物クラス、特にペプチドや蛋白質、抗体、アンチカリン、機能的核酸等を生成するためのターゲット分子として使用できることも本発明の範囲に含まれる。対応する各種化合物、即ち、ペプチドや蛋白質、抗体、アンチカリン、機能的核酸は本発明のスクリーニング法において使用できる。
【０１１８】
本発明に係る翻訳産物やこれをコードする核酸に対して生成されるこれらの化合物、即ち、ペプチドや蛋白質、抗体、アンチカリン、機能的核酸が、本発明に係る手段、即ち、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療するための手段や対応する診断手段として使用されることも本発明の範囲に含まれる。
【０１１９】
好ましくは、本発明に係るペプチド及び特に結合ペプチドは、生物学的系において、特に甲状腺又は甲状腺過形成又は甲状腺腫瘍やこれらを形成する細胞において、本発明に係る翻訳産物や本発明に係る翻訳産物の相互作用パートナー、特に天然相互作用パートナーに結合する蛋白質やペプチドである。本発明の使用に関しては、本明細書に記載の抗体やアンチカリン、機能的核酸、小分子についても同様である。同時に、前述の化合物クラスの各メンバーは、好ましくは、本発明に係る翻訳産物やこれをコードする核酸と相互作用し、よって翻訳産物やこれをコードする核酸の対応する活性に影響を及ぼす。
【０１２０】
しかしながら、本発明に係る翻訳産物やこれをコードする核酸の、相互作用パートナー特に天然相互作用パートナーと相互に作用するメンバーを生成し、使用し、スクリーニング法に付し、相互作用パートナーやこれをコードする核酸の発現や活性に影響を及ぼすことも、本発明の範囲に含まれる。本明細書では「影響を及ぼす」とは発現量の増加又は減少をいう。発現や活性の範囲は概ね既に記載した通りである。これらのメンバーが本発明に係る翻訳産物やこれをコードする核酸の相互作用パートナーと相互に作用した結果、翻訳産物に伴う一連の反応が阻害され、本発明に係る翻訳産物又はこれをコードする核酸の通常見られる作用が阻害される。これは、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍に関連して本明細書に開示される治療又は診断の範囲において使用できる。
【０１２１】
これらのペプチド（以下、本明細書では結合ペプチドや結合蛋白質ともいう）は、例えばファージ・ディスプレイ等の従来技術において既に知られている方法を用いてスクリーニングしたり生成したりすることができる。これらの技法は当業者に知られている。これらのペプチドを生成するための典型的な手続は、ペプチドライブラリーを例えばファージの形で構成し、このライブラリーを目的の分子、即ち本発明の場合は例えば翻訳産物や翻訳産物の天然相互作用パートナーと接触させることである。その後、結合ペプチドは通常、ターゲット分子と複合体を形成してライブラリーの他の結合していないメンバーから分けられる。この場合、結合特性は少なくともある程度各場合における特定のテスト条件、例えば塩含有量等により異なることは当業者の知識の範囲内である。ターゲット分子とより高いあるいはより強力な親和性を以って結合しているペプチドをライブラリーの他の結合していないメンバーから分離した後、あるいはターゲット分子を、本発明の場合、本発明に係る翻訳産物から分離した後、これらを特徴付けることができる。場合によっては、特徴付けの前に増幅ステップが必要とされることがある。増幅は、例えば、一又は複数のペプチド又は蛋白質をコードする対応するファージを増殖することにより行う。特徴付けは、好ましくはファージ・ディスプレイ・スクリーニング法においてターゲット分子として使用する翻訳産物あるいはその天然相互作用パートナーに応じてこれら２種の分子のいずれかと結合するペプチドの配列を決定することを含む。これらのペプチドの長さは特に制限されない。しかしながら、典型的には、８〜２０個のアミノ酸を有するペプチドがこのような方法に適用乃至使用される。ライブラリーに含まれるペプチドは、１０２〜１０１８、好ましくは１０８〜１０１５である。アンチカリンは、ターゲット分子に結合するペプチドの特定の形状を示すものであり、例えばドイツ特許出願ＤＥ１９７４２７０６に記載されている。
【０１２２】
本明細書に開示された技術的教示により、遺伝子産物、特に本発明のポリペプチドや核酸配列等の本発明に係る翻訳産物に対する抗体を作成することもできる。即ち、この場合においても、化合物に対する抗体が存在することにより得られる、当業者に知られているこの利点は得られる。これらの利点は、特にｉｎ  ｖｉｔｒｏとｉｎ  ｖｉｖｏにおける使用において得られる。特に、これらの抗体を用いれば、例えば、本発明に係る化合物、即ち本発明の各種核酸及び／又は本発明に係るポリペプチドや翻訳産物を精製すること、これらを検出すること、更に、ｉｎ  ｓｉｔｕ且つｅｘ  ｖｉｖｏの両方、ｉｎ  ｖｉｖｏ及び／又はｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて抗体が指向している化合物の生物学的利用可能性等の生物学的活性に影響を及ぼすことが可能である。より正確には、特にモノクローナル抗体を用いれば、遺伝子産物を特異的にあるいは細胞レベルで検出することができ、遺伝子産物や核酸配列と他の細胞成分との相互作用に影響を及ぼすことができ、よって細胞イベントにおける特定の介入が達成され得る。抗体が指向する化合物次第、あるいは研究下の系において抗体の作用が発現する化合物次第で、その化合物の作用により達成され得るのが原則的に促進作用となるか、阻害作用となるかが決まる。
【０１２３】
抗体は、本明細書においてはポリクローナル抗体とモノクローナル抗体の両方をいう。しかしながら、特異性が高いためモノクローナル抗体の方が特に好ましい。しかしながら、ポリクローナル抗体の純度や特異性が十分使用できる、あるいはポリクローナル抗体により達成される特異性等の特性の多くが有利な形で使用できる場合はポリクローナル抗体も適用可能である。抗体の生成や使用については、例えば、抗体：実験室マニュアル（Ｅ．ハーロー＆Ｄ．レーン、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー、ニューヨーク、１９８８年）（Antibodies: A Laboratory Manual （E. Harlow & D. Lane, Cold Spring Harbor Laboratory, NY, 1988））に記載されており、ここには記載しない。
【０１２４】
更に、抗体が一本鎖抗体であることができることも、本発明の範囲に含まれる。
【０１２５】
抗体が断片化されている、特に短縮化されていることも本発明の範囲に含まれる。これは、抗体が断片化されている、特に短縮化されているということを含む。これは、抗体の特異性が残っている、即ち所定のエピトープに結合する限り、抗体が大きくトランケートされていることを含む。トランケーションは、対応する抗体が細胞レベルで使用される場合に特に有利である。これは、このようにすることにより完全抗体に比べ、透過性や拡散性が向上するためである。
【０１２６】
更に、当業者に知られている他の形状の改変も提供される。これらは、例えば「抗体：実験室マニュアル（Ｅ．ハーロー＆Ｄ．レーン、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー、ニューヨーク、１９８８）（Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow & D. Lane, Cold Spring Harbor Laboratory, NY, 1988））」に記載されている。一般に言えることであるが、原則的には抗体の改変はポリペプチドの改変と同様の方法で、またある程度は核酸と同様の方法で実施することができ、同様の理由で本発明に係る抗体も同様の方法で改変できる。
【０１２７】
本発明に係るスクリーニング方法の範囲において使用でき且つ本発明に係る医薬や診断手段を作成するために使用できる別のクラスの化合物は、機能的核酸である。ここで、機能的核酸は、特にアプタマー、アプタザイム（aptazyme）、リボザイム、スピゲルマー（spiegelmer）、アンチセンスオリゴヌクレオチド及びＲＮＡｉをいう。
【０１２８】
アプタマーは一本鎖又は二本鎖の、ＲＮＡベース又はＤＮＡベースの、ターゲット分子と特異的に結合するＤ−核酸である。アプタマーの製造については、例えば、ヨーロッパ特許第０５３３８３８号に記載されている。次の手続が用いられている。
【０１２９】
核酸の混合物、即ち潜在的アプタマーの混合物を調製する。各核酸は、少なくとも８個の連続的な任意のヌクレオチドから構成されている。この混合物をターゲットと接触させる。即ち、本発明の場合は、翻訳産物、特に本発明に係る翻訳産物やこれをコードする核酸、翻訳産物の相互作用パートナー、特に天然相互作用パートナー、及び／又はこれらをコードする核酸と接触させる。ターゲットと結合する核酸は、候補を含むこの混合物の残りのものと分けられる。この時、必要に応じて、この候補混合物の中で親和性が高いことを利用して分ける。このようにして得た、ターゲットと結合している核酸を増幅する。これらのステップを何回も繰り返し、最終的に、各ターゲット（即ちターゲット分子）と特異的に結合する核酸を、正確に言えば所謂アプタマーを得る。これらのアプタマーは安定化され得ることも本発明の範囲に含まれる。安定化は、例えば、アプタマー開発の分野の当業者には知られている何らかの基を導入することにより行う。アプタマーは、既にこれまで治療において使用されている。このようにして得たアプタマーをターゲットの確認や、医薬特に小分子医薬の開発のための指示物質として使用することも、本発明の範囲に含まれる。
【０１３０】
スピゲルマーの製造や生産も基本的に同様の原則に基づいている。スピゲルマーは、本発明の範囲内において、本発明に係る翻訳産物やこれをコードする核酸、翻訳産物相互作用パートナー、特にその天然相互作用パートナー及び／又はこれをコードする核酸に基づき、ターゲット分子として開発することができる。スピゲルマーの製造については、例えば、国際特許出願ＷＯ９８／０８８５６に記載されている。スピゲルマーは、Ｌ−核酸、即ち、Ｌ−ヌクレオチドから構成されており、その実質的な特徴は、スピゲルマーが生物学的な系において非常に高い安定性を有していること、また、アプタマーと同程度に、ターゲット分子と特異的に相互作用するあるいは結合することである。スピゲルマーの製造において用いられる手続は次の通りである。Ｄ−核酸の不均質な系を作成し、この不均質系をターゲット分子の光学対掌体と接触させる。本発明の場合、例えば、翻訳産物の天然のＬ−鏡像異性体に対するＤ−鏡像異性体と接触させ、ターゲット分子の光学対掌体と相互作用しなかったＤ−核酸を分離する。このようにして、ターゲット分子の光学対掌体と相互作用したＤ−核酸を決定し、必要に応じて分離し配列決定する。これらの配列はＤ−核酸に対しては事前に決定されており、これらと同一の配列を有するＬ−核酸を合成する。ここにおいて、アプタマー製造方法と同様に、これらのステップを何回も繰り返すことにより、適切な核酸、即ち、スピゲルマーを富化するあるいは生産することもできる。これら核酸即ちスピゲルマーは、本発明の翻訳産物と結合するもの、ターゲット分子として使用した上述の化合物に応じた特に天然的な翻訳産物相互作用パートナーの内の一又は複数のものと結合するもの、若しくは翻訳産物をコードする核酸と結合するものである。
【０１３１】
本発明において使用できる機能的核酸の別の形は、所謂アプタザイムである。アプタザイムは、例えば、ピガノー（Piganeau）Ｎ．ら（２０００）、Angew. Chem. Int.、第３９版、Ｎｏ．２９、４３６９〜４３７３ページに記載されている。ここではアプタマーの特定の形が関与しており、その特徴は、ターゲット分子、本発明の場合、翻訳産物や相互作用パートナーと特異的に結合するアプタマー部分に加え、リボザイム部分も含むことができるということである。この結果、ターゲット分子がアプタザイムのアプタマー部分と結合した後、リボザイム部分が活性化される。その結果、アプタザイムのリボザイム部分の基質として機能する核酸が切断される。リボザイム基質の形状に対応して、蛍光の変化を観察することができる。例えば、リボザイム基質上の蛍光ドナーの蛍光アクセプターに対する空間配置の相対変化が起こるために蛍光が変化する。このため、アプタザイムは、特に、翻訳産物やその相互作用パートナーに関するターゲット確認の範囲における使用に適していると共に、本発明に係る診断手段として適している。しかしながら、本明細書に記載したリボザイムに関して開示した範囲内においては、治療における使用もまた可能である。
【０１３２】
前述の各化合物クラスに共通のファクターは、これらが各蛋白質、即ち、翻訳産物、好ましくは本発明の翻訳産物あるいはその相互作用パートナーと実質的に結合するということである。しかしながら、ターゲット分子としてのこれらの化合物クラス、特に機能的核酸が、前述の蛋白質やポリペプチドをコードする核酸をその主体として有することも本発明の範囲に含まれる。
【０１３３】
翻訳産物、好ましくは本発明に係る翻訳産物及び／又はその相互作用パートナー、特にこれらをコードする核酸を用いて作成することができるあるいは開発することができる別の化合物クラスは、リボザイムやアンチセンスオリゴヌクレオチド、ＲＮＡｉである。
【０１３４】
これら化合物クラスの全てに共通するファクターは、翻訳産物のレベル、即ち蛋白質（翻訳産物やその相互作用パートナー）のレベルではこれらの作用を発現せず、各蛋白質をコードする核酸、特に翻訳産物をコードするｍＲＮＡのレベルや翻訳産物の相互作用パートナーをコードするｍＲＮＡのレベルで発現するということである。ゲノムＤＮＡや対応するｃＤＮＡもまた、基本的にはターゲット分子として適している。
【０１３５】
リボザイムは、触媒活性を有する核酸を含む。この核酸は、好ましくはＲＮＡで構成されており、２個の領域部分からなる。第一の領域部分は触媒活性を担う部分であり、第二の部分はターゲット核酸と特異的な相互作用を担う部分である。ターゲット核酸とリボザイムの第二の部分の間に相互作用が起こると、この相互作用は通常は互いに実質的に相補的な塩基領域同士のハイブリダイゼーションにより起こるものであるが、リボザイムの触媒部分はターゲット核酸を分子内的にあるいは分子間的に加水分解することができる。リボザイムの触媒作用がホスホジエステラーゼ活性の場合は、後者の方が好ましい。その結果、コードしている核酸の分解、場合によっては更なる分解が起こる。ここで、核酸レベルと蛋白質レベルの両方において、また細胞内と細胞外の両方において、ターゲット分子の力価を下げることができる。このようにして、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療するための治療アプローチが提供される。使用や構成原則が当業者に知られているリボザイムは、例えば、ドーティ（Doherty）とドナ（Doudna）「リボザイムの構造及びメカニズム（Ribozyme structures and mechanisms）」、Annu Rev Biophys Biomol Struct、２００１；３０：４５７〜７５や、レーウィン（Lewin）とハウスワース（Hauswirth）「リボザイム遺伝子治療：分子医薬への適用（Ribozyme gene therapy: applications for molecular medicine）」、Trends Mod Med、２００１、７：２２１〜８）に記載されている。
【０１３６】
医薬組成物が医薬として許容しうる担体に加えリボザイムを含むこと、即ち本発明のリボザイムを医薬として特に甲状腺の機能障害や過形成、腫瘍を治療するための医薬として使用することを目的として、リボザイムの構成を、リボザイムが本発明の各種核酸配列の内一又は複数の配列に対し特異的に作用するように、またこれによりリボザイムが細胞レベルにおける発現や翻訳を制御するようにすることも可能である。これは、治療的観点から見て特に重要であるが、診断的観点からも重要である。リボザイムは分子間触媒作用と分子内触媒作用の両方を示すため、本発明の核酸配列を改変して、これら配列の各種領域自体が、改変された領域のリボザイム活性により切断されるようにするということも可能である。当業者であれば本明細書で入手可能となった配列情報を用いて特定の治療を開発することも可能である。
【０１３７】
本発明の核酸配列と同様、リボザイム自体も特に有利であるが、有利なのは、例えば遺伝子治療により、リボザイムをエフェクター細胞に組み込むことができるときだけではない。しかしながら、対応する改変がｅｘ  ｖｉｖｏでなされ、この改変細胞が同種再移植や自己再移植で使用されることも実現可能である。リボザイムの製造及び使用については、リボザイム・プロトコル（フィリップＣ．ターナー編、ヒューマン・プレス、トトワ、ニューヨーク、１９９７）（Ribozyme Protocols (Phillip C. Turner, Ed., Humana Press, Totowa, NY, 1997）に開示されており、ここに引用する。
【０１３８】
本発明に係る医薬の製造や診断手段の作成におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用は、基本的に同様の作用機序に基づいている。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、相補的な塩基があるために、典型的にはターゲットＲＮＡと、通常はｍＲＮＡとハイブリダイズし、これによりＲＮａｓｅＨを活性化する。ＲＮａｓｅＨは、ホスホジエステルやホスホロチオエートと結合したＤＮＡによっても活性化される。しかしながら、ホスホロジエステル結合ＤＮＡは細胞ヌクレアーゼにより急速に分解される（但しホスホロチオエート結合ＤＮＡは除く）。これら抵抗性を有する非天然ＤＮＡ誘導体は、ＲＮＡとハイブリダイズするとＲＮａｓｅＨを阻害しなくなる。言い換えると、アンチセンスポリヌクレオチドは、ＤＮＡ−ＲＮＡ複合体となったときのみ有効である。このようなアンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば米国特許第５８４９９０２号や第５９８９９１２号等に記載されている。元来、アンチセンスオリゴヌクレオチドの基本概念は、あるＲＮＡに対して相補的な核酸を提供することである。言い換えると、塩基相補性を用いて、翻訳産物やその相互作用パートナーの核酸配列、特にそれらのｍＲＮＡの核酸配列を知ることから出発すると、コードする核酸、特にｍＲＮＡの分解を導く適切なアンチセンスオリゴヌクレオチドを生産することは可能である。この分解を、発現系や活性系において定性的、定量的に測定記録することができる。
【０１３９】
本発明における医薬や診断手段として使用、同定、製造できる他の化合物クラスは、所謂ＲＮＡｉである。ＲＮＡｉは、ＲＮＡ干渉を仲介する二本鎖のＲＮＡであり、通常２１〜２３個のヌクレオチドの長さである。この場合、２本のＲＮＡ鎖の内の一本は、分解される遺伝子の配列に対応する。言い換えると、翻訳産物及び／又はその相互作用パートナーをコードする核酸、特にｍＲＮＡを知ることから出発し、二本鎖のＲＮＡを製造することができる。ここで、二本のＲＮＡ鎖の内の一方は、翻訳産物及び／又はその相互作用パートナーをコードする前記核酸と、好ましくはｍＲＮＡと相補的であり、このため対応するコードする核酸の分解が導かれ、これをもって各翻訳産物、即ち蛋白質の力価の低下が導かれる。ＲＮＡｉの医薬や診断手段としての生産や使用については、例えば、国際特許出願ＷＯ００／４４８９５やＷＯ０１／７５１６４に記載されている。
【０１４０】
これまで述べた化合物クラス、即ちリボザイムやアンチセンスオリゴヌクレオチド、ＲＮＡｉの作用機序を鑑み、本発明に係る翻訳産物、即ち、これらのポリペプチドや蛋白質、その特に天然相互作用パートナーに加え、これらをコードする各種核酸、特に対応するｍＲＮＡやｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡを、直接あるいはターゲット分子として、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療するための医薬の製造や、上述の疾患や機能障害を診断するための診断手段あるいは疾患や使用されている治療の経過をモニターするための診断手段の製造に用いることも本発明の範囲に含まれる。
【０１４１】
本発明に係る翻訳産物、これをコードする核酸、翻訳産物の相互作用パートナー、特に天然相互作用パートナー及び／又はこれらをコードする核酸を、ターゲット分子として、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を処置あるいは治療するための医薬の製造や開発に、またこれらを診断するための手段の製造及び／又は開発に使用する場合は、小分子のライブラリーを使用することもできる。またこの場合、ターゲット分子をライブラリーに接触させ、ライブラリーのメンバーの内、該分子に結合したものを決定し、必要な場合はライブラリーに含まれる他のメンバーからあるいはターゲット分子から分離する。任意ではあるが、更に特徴付けを行ってもよい。ここでもまた、小分子の特徴付けは、当業者に知られている方法を用いて実施される。例えば、化合物を同定し、分子構造を決定する。ライブラリーに含まれるメンバーの数は、２個〜数十万個である。
【０１４２】
本明細書に開示した、本発明の治療手段や診断手段として使用できる各種化合物クラスに関連して、本発明の別の一様相においては、或る化合物クラスは、翻訳産物やその相互作用パートナーと直接的に相互作用する、あるいはこれに結合する。しかしながら、前記各種クラス化合物は、特にペプチドや抗体、アンチカリン、アプタマー、アプタザイム、スピゲルマーが関与する場合に、翻訳産物と何らかの特異的相互作用をするため、翻訳産物の相互作用パートナーを阻害する、ということも本発明の範囲に含まれる。このような観点から、翻訳産物の使用という概念は、一又は複数の翻訳産物相互作用パートナー、例えば、受容体や転写因子、翻訳因子等を使用することも含むと理解されるべきである。従って、本明細書に記載した方法は、翻訳産物蛋白質やこれをコードする核酸に代えてその相互作用パートナーを使用する限りにおいて変更することができ、各種選択方法やアッセイ、スクリーニング方法、製造方法に使用される。ＰＫＣＧの相互作用パートナーは、例えば、リン脂質やホスファチジルセリン残基を有する化合物である。後者の結合はリン脂質とは無関係であるが、Ｃａ２＋に依存している（パウェルシクＴ、コワラＲ、マテキＡ（Pawelcyk T, Kowara, R. Matecki, A）； Mol. Cell Biochem. ２０００年６月；２０９（１〜２）：６６〜７７））。ＰＫＣＧの別の結合パートナーは、ホルボールジブチレート（ＰＤＢｕ）／ジアシルグリセロール及び脂質結合ドメイン（ＣａＬＢ）である（クエストＡＦ、ベルＲＭ（Quest AF, Bell, RM）；J. Biol. Chem.、１９９４年８月５日：２６９（３１）：２００００〜１２）。更に、ＰＫＣＧは、Ｔｅｃファミリー蛋白質チロシンキナーゼＴｔｋ及びＥｍｔ（ｌｔｋやＴｓｋに類似）のＰＨドメインとの相互作用を示し結合する。この場合、ＰＫＣ遺伝子との相互作用が起こる（パウェルシクＴ、マテキＡ、デトラフＡ(Pawelczyk T, Matecki A, Dettlaff A）；FEBS Lett、１９９８年２月１３日；４２３（１）：３１〜４）。ＣＡＴ−ＡやＣＡＴ−Ａ１の相互作用パートナーは、例えば、一般に、アミノ酸やウィルスである。
【０１４３】
本発明の範囲においては、翻訳産物の相互作用パートナー、特に本発明に係る翻訳産物の相互作用パートナー、特に天然相互作用パートナーは、前記翻訳産物が相互作用する分子や構造として記載される。特に含まれるものとしては、正常な状態及び／又は病的な状態の生物学的な系において蛋白質と相互作用する分子や構造が挙げられる。
【０１４４】
甲状腺の機能障害や過形成、腫瘍を診断及び／又は治療するためのキットの構成に関して説明する。ここで特筆すべき点は、このようなキットの厳密な構成、即ちキットに明らかに含まれなければならない要素は、当業者に知られていることである。特に、本明細書に開示されている本発明の核酸配列やこれらの翻訳産物の上述の作用や利用性に関して用いた理由付けに照らせば明らかである。本発明に係るキットは、本発明に係る要素の内の少なくとも一個を含む。この要素は、本明細書で特徴づけられた、本発明に係る核酸、ベクター、ポリペプチド、細胞、抗体、リボザイム及び各種クラスの各種化合物からなる群から選択され、特に、抗体、ペプチド、蛋白質、アンチカリン、小分子、アプタマー、スピゲルマー、リボザイム、アプタザイム、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＲＮＡｉから選択される。これらは、本発明の各種核酸あるいは本発明に係る翻訳産物やこれらの相互作用パートナー、特にこれらの天然相互作用パートナーやこれらをコードする核酸に特異的なものである。好ましくは、これらはそれぞれ本発明に係る定義におけるものである。本発明に係るキットに含まれる更なる要素は、緩衝液、陰性対照、陽性対照及び使用指示書からなる群から選択される。通常、キットに含まれる各化合物や構成要素は乾燥しているか、液状であり、好ましくは使用１回分の量に分けられている。このキットは、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍であることを判断するために使用できる。本発明の細胞の使用に関しては、この細胞は、特に再移植用の細胞として、あるいは対応する診断的あるいは治療的な試みにおける陽性対照や陰性対照として使用することができる。
【０１４５】
本発明の方法は、甲状腺の機能障害、過形成及び／又は腫瘍（癌腫や甲状腺腫を含む）を検出するものであるが、本発明の方法において、甲状腺材料はｉｎ  ｓｉｔｕ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏで存在することもできる。ここで使用する「甲状腺材料」という概念は、特に、正常な及び／又は病的な状態にある甲状腺の材料、好ましくは甲状腺の細胞材料をいう。従って、甲状腺材料という概念には、機能障害を有する甲状腺から得られる材料、甲状腺過形成から得られる材料、癌腫や甲状腺腫を含む甲状腺の腫瘍から得られる材料も含まれる。機能障害、過形成及び／又は腫瘍が存在するか否かは、最終的には、本発明において使用される剤が対象の甲状腺材料に及ぼす作用と、「正常な」甲状腺組織に及ぼす作用とを比較することにより決定される。本発明の方法の更なる実施形態は、当業者であれば本明細書に記載された開示に基づき得られるであろう。
【０１４６】
各種実施形態やこれらにより達成し得る各種利点に関する上の説明は、本発明の医薬、特に、甲状腺の機能障害、過形成及び／又は腫瘍を診断及び／又は治療するための手段にも同様に適用され、該医薬や該手段は、本明細書に開示される本発明の配列、本発明のベクターと、本発明のポリペプチド、本発明の細胞、本発明のリボザイム及びこれらの使用という形態をとる。本発明に従い作成される化合物や、結合ペプチド、アンチカリン及び機能的核酸からなる群から選択される化合物についても同様である。これら化合物に共通のファクターは、これら化合物が、本発明の核酸配列又はこれらにコードされるポリペプチド、これらの相互作用パートナー又はこれらをコードする核酸に対するものである、即ち、これら化合物はこれらに対してターゲット分子として製造されるあるいは選択されるということである。これら医薬は、一又は複数のこれらの剤や化合物を成分とすることもできる。
【０１４７】
本発明の医薬組成物も同様である。この場合、医薬組成物は、前述の化合物の内の一個のみを含むものであることができ、これに医薬として許容しうる担体を加えて作られる。あるいは、医薬組成物が医薬として許容しうる担体に加え複数の前述の化合物を含むものであることも、本発明の範囲に含まれる。
【０１４８】
医薬として許容しうる担体は、本明細書においては、当業者に知られている担体全てと理解されるべきであり、これらは通常、使用される形態に応じて選択される。医薬として許容しうる担体としては、例えば、水、緩衝液、アルコール溶液等が挙げられる。
【０１４９】
本発明のプライマーを製造するための方法に関して留意すべきことは、このプライマーには、本発明に係る各種核酸配列又はこれらの一部を特異的に提供することができるものが含まれることである。
【０１５０】
本発明に係る核酸配列を提供する方法においては、どのソースから得られるものであっても、本発明に係る各種核酸配列や、本発明のプライマーを用いてこれらをＰＣＲに付して得られる核酸に対応する配列は、これらの各種設計物はすべて本発明のものとして使用することができる。適切なプライマーの設計やＰＣＲの実施については、「ＰＣＲ＆ＰＣＲ２：実用アプローチ（Ｍ．Ｊ．マクファーソン、Ｐ．クアーク、Ｇ．Ｒ．テイラー編、ＩＲＬプレス、オックスフォード、イギリス、１９９１年；及びＭ．Ｊ．マクファーソン、Ｂ．Ｄ．ヘイムス編、ＩＲＬプレス、オックスフォード、イギリス、１９９５年）（PCR & PCR 2: A practical approach （M. J. McPherson, P. Quirke and G. R. Taylor, Eds., IRL Press, Oxford, England 1991, & M. J. McPherson and B. D. Hames, Eds., IRL Press, Oxford, England 1995））」に記載されており、これをここに引用する。
【０１５１】
本発明に係る各種核酸は、本発明に係る核酸配列を含むが、一方で、本明細書に開示されたヒトＣＡＴ遺伝子の相同体（これら相同体は、単にＣＡＴと表示することもあるし、あるいは本発明に係るＣＡＴ相同体の特別の表示形態としてＣＡＴ−Ａ、ＣＡＴ−Ａ１として表示すこともある）、ヒトＤＣ２遺伝子、及びＮ末端が知られているＰＫＣγ遺伝子の相同体でもある。
【０１５２】
本発明に係る核酸や核酸配列は、特に、後に記載される、本明細書において「配列番号〜」で示される核酸配列を含む核酸でもある。これらの核酸配列は、「配列番号〜」で示される核酸配列を部分的にあるいは完全に含むものである。また、これら核酸配列は更にヌクレオチドを含み、特に５’末端及び／又は３’末端においてヌクレオチドを含む。これらヌクレオチドは、本明細書で「配列番号〜」で示される配列に加え、更に各種ヌクレオチドを含む。本発明に係るＣＡＴ−ＡやＣＡＴ−Ａ１の配列あるいは遺伝子の場合は、ＢＣ９３５０４から得られるヌクレオチドが更に付加され、ＰＫＣＧ遺伝子の場合は、ＢＣ２７７４９７やＢＣ８２９６５１から得られるヌクレオチドが更に付加され、ＤＣ２、即ち、本発明に係るＤＣ２相同体の場合はＢＣ２８０７２３やＢＣ９３５０４から得られるヌクレオチドが更に付加される。上述のクローンの相対配置を図１１に示す。
【０１５３】
更に、本発明に係る各種核酸は、本明細書において一又は複数の「配列番号〜」で示される配列を有するあるいは含むポリペプチドをコードする核酸である。また、本明細書に開示された一又は複数の本発明に係る各種核酸が有する一又は複数のエクソン及び／又は一又は複数のイントロンを含む核酸もまた、本発明に係る各種核酸の一種である。
【０１５４】
本発明のポリペプチド（本明細書においては簡略化のため、単にポリペプチドということもある）は、特に、一又は複数の本発明に係る各種核酸の翻訳産物である。この翻訳産物は、完全長のもの又は短縮化されたものであることができる。一般に、これらの翻訳産物は、本明細書においては、翻訳産物あるいは本発明に係る翻訳産物として記載される。本発明に係る翻訳産物、あるいは本発明に係るポリペプチドは、特に、ドメイン構造の一部であるポリペプチドの一部（中でも、細胞系の細胞外に存在するドメイン構造の一部であるポリペプチドの一部）とする。
【０１５５】
本発明に係る各種核酸、特に本発明に係るＣＡＴ相同体や、従来技術において知られていないＤＣ２相同体、ＰＫＣγの核酸は、次の各核酸配列により特徴付けられる、あるいは示される。１９ｑ１３．４のゲノム配列は、コスミド１５８４１から始まり、ＢＡＣ２８０７２３を経由してＢＡＣ８２９６５１の最後のｂｐを終焉とする。この配列は、受託番号ＡＣ０１１４５３（ＢＡＣ２８０７２３）、ＡＣ００８７５３（ＢＡＣ８２９６５１）で公開されている。このゲノム配列の長さは２９３３９５ｂｐである。ＰＫＣγのＣ末端をコードする核酸配列は次のように特徴付けられるあるいは示されることができる。このゲノム配列は１９ｑ１３．４を起源とし、受託番号ＡＣ００８４４０で寄託されている配列の中に記載されている。この配列は、ＢＡＣ８２９６５１の下流側にある、あるいはこれと重複している。この核酸の長さは２４３０８５ｂｐである。ＰＫＣγのＣ末端をコードする核酸配列は、次の各配列により更に特徴付けられる。このゲノム配列は１９ｑ１３．４を起源とし、受託番号ＡＣ０２２３１８で寄託されており、配列ＢＡＣ８２９６５１の下流側にある、あるいはこれと重複している。この配列の合計長さは１９１４２２ｂｐである。
【０１５６】
本明細書で開示される配列は、特に、次のヒト配列を含む。
配列番号１：ＣＡＴ  ＡやＣＡＴ−Ａ１のＥＳＴ（受託番号ＢＥ５６４７６４）に対応。
配列番号２：ＣＡＴ−ＡやＣＡＴ−Ａ１のＥＳＴ（受託番号ＢＦ０２９１６８）に対応。
配列番号３：ヒトＤＣ２遺伝子のＥＳＴ（受託番号ＡＦ２０１９３７）に対応。
配列番号４：ヒトＤＣ２遺伝子のＥＳＴ（受託番号ＢＥ２７１４９１）に対応。
配列番号５：ヒトＰＫＣＧ遺伝子のＥＳＴ（受託番号ＡＦ３４５９８７）に対応。
配列番号６：ヒトＰＫＣＧ遺伝子のＥＳＴ（受託番号Ｘ６２５３３６）に対応。
配列番号７：１９ｑ１３．４のＣＡＴ相同遺伝子のｃＤＮＡ配列（６４７ｂｐ）を示す。
配列番号８：１９ｑ１３．４のＤＣ２相同遺伝子のｃＤＮＡ配列（７４９ｂｐ）（本発明配列）を示す。
配列番号９：１９ｑ１３．４のＰＫＣγ相同遺伝子のｃＤＮＡ配列（３４５７ｂｐ）を示す。比較し得る限りにおいて略１００％相同。受託番号Ｘ６２５３３７とＡＦ３４５９８７からなる。
配列番号１０：ＣＡＴ相同遺伝子のｃＤＮＡ配列を示す。本明細書ではＣＡＴ−Ａとして記載される。
配列番号１１：ＣＡＴ−Ａのスプライス変異体ｃＤＮＡ配列を示す。本明細書ではＣＡＴ−Ａ１として記載される。
配列番号１２：ＣＡＴ−Ａ又はＣＡＴ−Ａ１のゲノム配列を示す。
配列番号１３：ＣＡＴ−Ａリーディングフレーム（ＯＲＦｓｔａｒｔ１）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４：ＣＡＴ−Ａリーディングフレーム（ＯＲＦｓｔａｒｔ２）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１５：ＣＡＴ−Ａリーディングフレーム（ＯＲＦ３）のアミノ酸配列を示す。
配列番号１６：従来技術において知られているＤＣ２遺伝子に相同である本発明ＤＣ２遺伝子のゲノム配列を示す。よって、ＤＣ２遺伝子ファミリーの別の形態を示す。
配列番号１７：ＤＣ２相同遺伝子のｃＤＮＡ配列、即ち配列番号１６に従った配列。
配列番号１８：ＰＫＣＧのゲノム配列。
配列番号１９：配列番号１８のＰＫＣＧのｃＤＮＡ。
【０１５７】
本発明に係る一又は複数のポリペプチドや、本発明ポリペプチドから得られる本明細書に開示した一又は複数の化合物（小分子や結合ペプチド、抗体、アンチカリン、機能的核酸等）それぞれの使用について本明細書に開示したが、前述の他の各種分子や各種化合物も基本的に同様に使用されることも、本発明の範囲に含まれる。
【０１５８】
本発明を図面、実施例、配列プロトコルを参照しつつ以下、説明する。これにより、本発明の更なる特徴や各種実施形態、利点が得られるものである。
【０１５９】
実施例１：甲状腺過形成及び甲状腺腺腫の細胞遺伝学的分析
甲状腺過形成や甲状腺腺腫は、しばしば見られる甲状腺の上皮の変化の一種である。これらの病変は、クローン性の染色体変化を伴う病変と、表面的には正常に見える核型における病変とに区別され得る。細胞遺伝学的変化が腫瘍の発生に関連している可能性が非常に高い。我々の調査では、症例の約２０％においてクローン性の異常を認めることができた。その中で最も頻繁に認められた構造的異常は、染色体バンド１９q１３における変化である。これまで、甲状腺腫瘍の形成と進行に転座が重要な役割を果たしていることは知られていなかった。我々は、分子遺伝学的調査により、バンド１３ｑの染色体１９の転座におけるブレークポイントが、ゲノム領域の１５０ｋｂｐ部分に集まっていることを示すことができた。
【０１６０】
細胞培養と染色体分析を、耳化腺の多形態性腺腫に関して既に記載されている方法（ブラディーク（Bullerdiek）ら、１９８７)を用いて実施した。各核型の記載は、ＩＳＣＮ１９９５に準拠する。各種細胞株は、ＳＶ４０「初期領域」（ベルグ（Belge）ら、１９９２）を含む構成体で形質転換することにより得た。原発性腫瘍Ｓ１７２とＳ２９０．１から二種類の新規な細胞株を得た。これらの細胞株と４種類の原発性腫瘍を用いてＦＩＳＨ実験を行った。核型の説明を表１に示す。ブレークポイントの局在化のために、ＰＡＣクローン１３１７４（ゲノム・システムズ（Genome Systems）、米国）、コスミドクローン１５８４１と２９５７３、ＢＡＣクローン４１３７２、２８０７２及び８２９５１を用いた。これらについては、ローレンス・リバモア国立研究所命名法（Lawrence Livermore National Laboratory (LLNL) nomenclature）（アッシュワース（Ashworth）ら、１９９５）を用いて記載する。コスミドクローンは、ＬＬＮＬのヒト染色体−１９−特異的「フロー・ソーテッド（flow-sorted）」コスミド・ライブラリー（デジョン（deJong）ら、１９９８；トラスク（Trask）ら、１９９２；アッシュワース（Ashworth）ら、１９９５）から得た。ＢＡＣクローンはヒトライブラリーＣＩＴ−ＨＳＰＣ由来のものであり、ＬＬＮＬにより単離されたものである。コスミド断片及びＢＡＣ断片をＥ−ｃｏＲＩで分解し、０．８％アガロースゲルで分離後、ゲルから切り出し、グラスビーズ技法（ＱＩＡＥ×ＩＩ、キアゲン（QIAGEN）、ヒルデン、ドイツ）によりゲル片から単離した後、ｐＧＥＭ１１ｚｆ（＋）ベクター（プロメガ（Promega）、マンハイム、ドイツ）でクローニングした。プラスミド、コスミド、ＰＡＣ及びＢＡＣ−ＤＮＡを標準的な方法でアルカリ分解させて単離し、陰イオン交換カラム（キアゲン、ヒルデン、ドイツ)により精製した。ＤＮＡの分解は、製造者の情報を考慮し標準的な手続で行った。配列決定は、３７３ＤＮＡシーケンサー（アプライド・バイオシステムズ、ヴァイターシュタット、ドイツ）により、ベクター特異的プライマーとインサート特異的プライマーを用いて行った。ＳＴＳ、コスミド、ＰＡＣ及びＢＡＣを位置的に局在化させるために、これらのＤＮＡを制限酵素ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ又はＨｉｎｄＩＩＩを用いて分解し、０．８％アガロースゲルにて分離し、Ｈｙｂｏｎｄ  Ｎ＋（アマシャム・ファルマシア、フライベルグ、ドイツ）タイプのナイロンメンブレンに移行させた。ＳＴＳ又はプラスミドのＤＮＡをＰＣＲで増幅し、ＤＩＧ−ｄＵＴＰ（ロシュ、マンハイム、ドイツ）で標識して、これをプローブとして用いた。標識は、ランダムプライム法によりＤＩＧ−ｄＵＴＰをＤＮＡに組み込むことにより行った。プレハイブリダイゼーションとハイブリダイゼーションには、ＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂハイブリダイジング溶液（クロンテック・ラボラトリーズ、パロ・アルト、米国）を用いた。プローブは、蛍光発光（ロシュ、マンハイム、ドイツ）を用いて可視化した。ＰＣＲは、表２に記載した温度とプライマーを用いて実施した。ＰＣＲ分析は、標準的な手続により行った。鋳型となるＤＮＡ（約６０ｎｇ）を、各プライマー（４００ｎｇ）、３００μＭのｄＮＴＰ、１×ＰＣＲ緩衝液（１．５ｍＭのＭｇＣｌ２��含む）及び２．５ＵのＡｍｐｌｉＴａｑ（パーキン・エルマー・アプライド・バイオシステムズ、ヴァイターシュタット、ドイツ）を含む溶液（５０μＬ）中で増幅した。得られたＰＣＲ産物を１．５％アガロースゲル上で分離後、ゲルから切り出し、グラスビーズ技法（ＱＩＡＥ×ＩＩ、キアゲン、ヒルデン、ドイツ）によりゲル片から単離し、ｐＣＲ２．１ベクター（インビトロゲン、サンジエゴ、カリフォルニア)でクローニングした。蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）をＧＴＧバンド法により行い、同じメタフェーズ期にある染色体を解析した。メタフェーズ期にある染色体を処理し、ＦＩＳＨによる検討をキービッツ（Kievits）ら（１９９０）により提案されたプロトコルを用いて行った。コスミド、ＰＡＣ及びＢＡＣ−ＤＮＡをビオチン−１４−ｄＡＴＰ(ギブコＢＲＬ（Gibco BRL）、ライフ・テクノロジー（Life Technologies GmbH）、エッゲンシュタイン、ドイツ)でニックトランスレーション法により標識し、プローブを得た。コスミドプローブ、ＰＡＣプローブ、ＢＡＣプローブそれぞれに対し２０種類のメタフェーズ期染色体を調査したが、Ｓ５３２．１は例外で２種類のメタフェーズ期染色体のみが評価できた。染色体をヨウ化プロピジウムで対比染色し、ＦＩＴＣフィルター（Zeiss Oberkochem、ドイツ)を用いたツァイス・アクシオフォト（Zeiss Axiophot）蛍光顕微鏡で解析し、パワージーン・カリオタイピング・システム（PowerGene Karyotyping System）（ＰＳＩ、ハラダール（Halladale）、イギリス）を用いて記録した。ＦＩＳＨを、甲状腺の４種の原発性腫瘍（Ｓ４７６．１、Ｓ１４１．２、Ｓ１７２、Ｓ５３２．１）と甲状腺過形成から得た２種の細胞株とに対して行った。この両細胞株も、原発性腫瘍と同様に、染色体バンド１９q１３における変化を示した。これらの解析の結果、全ての原発性腫瘍において、ブレークポイントがＢＡＣクローン２８０７２３の範囲に亘る領域に局在化していることが示された。これと共に、ＢＡＣクローンシグナルが、正常な染色体１９と２種類の誘導染色体との両方において得られた。更にＦＩＳＨで検討したところ、コスミド１５８４１と２９５７３、ＰＡＣ１３１７４及びＢＡＣ４１３７２においてはブレークポイントに近位のシグナルが得られたが、ＢＡＣ８２９６５１においてはブレークポイントから遠位のシグナルが得られた。原発性腫瘍Ｓ１７２から得られた細胞株、即ち細胞株Ｓ１７２／ＳＶ４０も、ＢＡＣクローン２８０７２３とハイブリダイゼーションした後、正常な染色体１９と両方の誘導染色体上においてシグナルが見られた。細胞株Ｓ２９０．１／ＳＶ４０は、ＰＡＣクローン１３１７４とハイブリダイゼーションしている間に、誘導染色体と正常な染色体１９においてシグナルが見られた。このことは、検討対象の全ての腫瘍の染色体１９におけるブレークポイントが、コスミド１５８４１とＢＡＣクローン８２９６５１の間に位置する配列に対応する約１５０ｋｂｐの領域に局在化していることを意味している。この領域を更に特徴付けるため、ＢＡＣクローン９３５０４、４１３７２、２８０７２３及び８２９６５１（ＬＬＮＬ）、ＰＡＣクローン１３１７４（ゲノム・システムズ、米国）、並びにコスミドクローン３０３１６、１５８４１、２９５７３及び２００１９（ＬＬＮＬ）から、制限酵素地図と配列決定データを用いてコンティグを構築した。１０種類の新しいＳＴＳがこの配列データから得られた。これらは、プラスミドやコスミドの挿入端の配列を決定することにより、あるいはＢＡＣクローン、ＰＡＣクローン及びコスミドクローンに関して内部配列決定を行うことにより得られた。これらＰＣＲアタッチメントのオリゴヌクレオチド配列とＰＣＲ増幅産物のサイズを表２に示す。このコンティグは４７０ｋｂｐの長さを含み、得られたＳＴＳの内の３種類はブレークポイント領域にあり、１種類はブレークポイントの下流にあり、６種類はブレークポイントの近位に局在化されていた。
【０１６１】
配列分析により、３種類のＥＳＴに対して相同的な各種配列がブレークポイント領域の直近にあるいはブレークポイント領域内に確認された。これらのＥＳＴをこの領域のゲノム配列と比較することにより、この遺伝子の構造を再構築することができた。この内、一個目のＥＳＴ（受託番号ＢＥ２７１４９２、ＡＦ２０１９３７）は、１５０ｋｂｐのブレークポイント領域、即ち、コスミドクローン１５８４１と２９５７３の間にある。ＢＥ２７１４９２のｃＤＮＡは、卵巣腺腫の細胞株ライブラリーＮＩＨ＿ＭＧＣ＿９から単離した。ＡＦ２０１９３７のｃＤＮＡは、樹枝状細胞（ジーンバンクエントリーＡＦ２０１９３７参照）から単離した。これは３個のエクソン（４６９ｂｐ、２５０ｂｐ及び８０ｂｐ）を含み、エクソン間は約３２０ｂｐのイントロンと約３４０ｂｐのイントロンで隔てられている。この遺伝子はテロメアの方向に指向している。これらのエクソンは、ブレークポイント領域の配列に対し約９５〜８５％の相同性を有している。この遺伝子のｍＲＮＡは蛋白質ＤＣ２をコードしているが、ＤＣ２は普遍的に発現する蛋白質である。この遺伝子のｃＤＮＡは、例えば、脂肪組織等の広範なタイプの組織や脳、腸、目、心臓、肝臓、膵臓、甲状腺、精巣、皮膚等から単離できた。
【０１６２】
２個目のＥＳＴ（ＢＥ５６４７６４、ＢＦ０２９１６８）は、コスミドクローン１５８４１上にあるＳＴＳマーカーＲＳＴＳ５の約４ｋｂ上流から始まっている。両方のＥＳＴとも、膀胱癌細胞株から得られたライブラリーＮＩＨ＿ＭＧＣ＿５３を起源とする。これらＥＳＴはセントロメアの方を向いているため、この遺伝子はなおブレークポイント領域内の３’ＵＴＲにある。このゲノム領域と比較することにより、エクソン／イントロン構造を明らかにすることができた。この配列データを見る限りでは、この遺伝子は少なくとも５ｋｂｐに亘っている。比較対象のゲノム配列に対する相同性は、１〜３番目のエクソンは１００％、４番目は９３％、５番目は６８％である。１１０ｂｐの或る領域では、ノルウェーラットのカチオン性アミノ酸輸送体（ＣＡＴ）の遺伝子に対するこれらＥＳＴの相同性は８５％である。これらイントロンのサイズは約５００ｂｐ〜約２ｋｂｐである。
【０１６３】
３個目のＥＳＴ（ＡＦ３４５９８７、Ｘ６２５３３）はブレークポイントの下流に認められた。ブレークポイントの下流におけるこのゲノム配列の相同性は、比較し得る限り略１００％である。この関連遺伝子はセントロメアの方を指向している。この遺伝子はプロテインキナーゼＣγをコードしている。第一の既知のエクソンは、ブレークポイント領域の約１４５ｋｂｐ下流から始まっている。このエクソンには、エクソンの約１１００ｂｐ上流に翻訳開始点がある。別の開始点が、この既知の配列の約１６００ｂｐ上流にある。このゲノム配列と比較することにより、イントロン／エクソン構造を構築することができる。このデータからわかる限りでは、この遺伝子は少なくとも６個のエクソンから構成されている。この既知の配列の５’側、即ちブレークポイントの方向に、より多くのエクソンがあることが予想される。最初の２個のエクソンのサイズは、イントロン１は約５００ｂｐ、イントロン２は約１０００ｂｐと見積もられる。これまでに、ＰＫＣγのｃＤＮＡは脳組織や胃組織、白血球から単離されている。
【０１６４】
前述の各ＥＳＴのｃＤＮＡ配列又はｍＲＮＡ配列の発現について、ヴァーチャル・ノーザン（Virtual Northern）（ＳＡＧＥ、遺伝子発現のシリアル分析；http://www.ncbi.nlm.nih.gov/SAGE/）にて調べた。このオンライン分析において、選択された各ＥＳＴの配列（タグ）をライブラリー中の各配列と比較した。これらの結果は実際の遺伝子発現というよりはむしろタグの頻度（frequency）を示すものであるが、最初の評価としては信頼できるものである。ＢＥ２７１４９２とＡＦ２０１９３７（ＤＣ２）のＥＳＴのタグは多くのライブラリーにおいて確認され、髄芽腫、乳腺癌、正常な血管内皮細胞株、正常な皮膚及び前立腺癌のライブラリーにおいてはとりわけ強い「発現」が認められた。ＡＦ３４５９８７とＸ６２５３３（ＰＫＣγ）のＥＳＴのタグは、２個のライブラリーにおいてのみ、即ち正常な脳から得られたライブラリーと星細胞腫細胞株から得られたライブラリーにおいてのみ認められた。ＢＥ５６４７６４とＢＦ０２９１６８のＥＳＴのタグは、これらのライブラリーにおいては認められなかった。
【０１６５】
アッシュワースＬＫ、バツラーＭＡ、バドリフＢ、ブランドスコップＥ、デ・ヨンＰ、ガルシアＥ、ガーネスＪＡ、ゴードンＬＡ、ラマディンＪＥ、レノンＧ、モレンヴァイザーＨ、オルセンＡＳ、スレツァクＴ、カラーノＡＶ（Ashworth LK, Batzer MA, Bradriff B, Brandscop E, de Jong P, Garcia E, Garnes JA, Gordon LA, Lamardin JE, Lennon G, Mohrenweiser H, Olsen AS, Slezak T, Carrano AV）：「ヒト染色体１９の一体化メトリック染色体地図（An integrated metric physical map of human chromosome 19）」、Nature Genet 11：４４２〜４２７（１９９５）
【０１６６】
デ・ヨンＰＪ、ヨカバタＫ、シェンＣ、ローマンＦ、ペダーソンＬ、マクニンヒＪ、ファン・ディラＭ（de Jong PJ, Yokabata K, Chen C, Lohman F, Pederson L, McNinch J, van Dilla M）「ラムダベクター及びコスミドベクターにおけるヒト染色体特異的部分分解ライブラリー（Human chromosome-specific partial digest libraries in lambda and cosmid vectors）」Cytogenet. Cell Genet 51：９８５（１９８５）
【０１６７】
ブラディークＪ、ボッフェンＣ、バルトニツクＳ（Bullerdiek J, Boschen C, Bartnitzke S）「混合唾液腺腫瘍における染色体８の異常：７症例における細胞遺伝学的知見（Aberrations of chromosome 8 in mixed salivary gland tumors: cytogenetic findings on seven cases）」Cancer Genet Cytogenet 24：２０５〜２１２（１９８７）
【０１６８】
ベルグＧ、カツミールツァクＢ、メーヤー−ボルテＫ、バルトニツクＳ、ブラディークＪ（Belge G, Kazmierczak B, Meyer-Bolte K, Bartnitzke S, Bullerdiek J）「染色体転座ｔ（３，１２）を伴うＳＶ４０  Ｔ抗原の脂肪腫における発現は、直接的不死化には十分ではない（Expression of SV40 T-antigen in lipoma with a chromosomal translocation t(3; 12) is not sufficient for direct immortalization）」Cell Biol Int Rep 16：３３９〜３４７（１９９２）
【０１６９】
ＩＳＣＮ（１９９５）：細胞遺伝学に関する国際命名システム（An International System for Cytogenetic Nomenclature）、ミッテルマンＦ（Mitelman F）編、（Ｓカーガー（S Karger）、ベイセル（Basel）、１９９５）
【０１７０】
キービッツＴ、ドウワースＪＧ、ヴィガンＪ、デウィリーＰ、ブラウニングＭＨ、コルネリゼＣＪ、ファン・オメンＧＪＢ、ピアソンＰＬ（Kievits T, Dauwerse JG, Wiegant J, Devilee P, Breuning MH, Cornelisse CJ, van Ommen GJB, Pearson PL）「非放射線ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションによるコスミドの急速なサブ染色体転座（Rapid subchromosomal localization of cosmids by nonradioactive in situ hybridisation）」Cytogenet Cell Genet 53：１３４〜１３６（１９９０）
【０１７１】
トラスクＢ、クリンテンセンＭ、フェルチッタＡ、バーグマンＡ、アッシュワースＬ、ブランスコンプＥ、カラーノＡ、ファン・デン・エングＧ（Trask B, Christensen M, Fertitta A, Bergmann A, Ashworth L, Branscomp E, Carrano A, Van den Engh G）「ヒト染色体１９の蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション・マッピング：ランダム制限酵素フィンガープリントにより形成されたコスミド・コンティグのマッピングと検証（Fluorescence in situ hybridization mapping of human chromosome 19: Mapping and verification of cosmid contigs formed by random restriction enzyme fingerprinting）」Genomics 14：１６２〜１６７（１９９２）
【０１７２】
【表１】
2005503123.tif 000003
【０１７３】
【表２】
2005503123.tif 000004
【０１７４】
実施例２：ヒトＣＡＴ相同遺伝子の特徴付け
甲状腺腫瘍のブレークポイント領域に発生した遺伝子を特徴付ける際に、新規なヒト遺伝子を発見した。この遺伝子は、ノルウェーラットの対応する配列に基づくと、ＣＡＴ遺伝子と相同である。ＣＡＴ遺伝子はカチオン性アミノ酸の輸送体蛋白質をコードする遺伝子である。本発明者により発見されたこの遺伝子は、本明細書では以下、ＣＡＴ−ＡあるいはＣＡＴ−Ａ１として示される。ＣＡＴ−Ａ１はＣＡＴ−Ａのスプライス変異体であり、この後、更に検証する。
【０１７５】
ＣＡＴ−Ａ遺伝子やＣＡＴ−Ａ１遺伝子は、ヒト染色体１９の正しくｑ１３．４領域内にある。それは、部分的には甲状腺腫瘍のブレークポイント領域にある。ＣＡＴ−Ａ／Ａ１遺伝子は、ＢＡＣのＣＴＢ−１６７Ｇ５（ＢＣ９３５０４）（ジーンバンク番号ＡＣ０１１４８７）内にある。この遺伝子はセントロメアを指向している、即ち、この３’末端はセントロメア側にある。
【０１７６】
ＣＡＴ−Ａの概略位置を図４に示す。
【０１７７】
現在、ＣＡＴ−ＡのｍＲＮＡは１４３７個のヌクレオチドを有するものとされており、配列番号１０のｃＤＮＡとして表される。ＣＡＴ−ＡとＣＡＴ−Ａ１はヒトＣＡＴファミリーのメンバーより概して実質的に短いということに注目される。
【０１７８】
実施例３：ＣＡＴ−Ａのゲノム構成
ＣＡＴ−Ａとそのスプライス変異体ＣＡＴ−Ａ１のゲノム構成を図４に示す。ヒトＤＣ２遺伝子の相同遺伝子のゲノムＤＮＡ配列は従来技術において既に知られているが、本明細書において初めて開示される。このゲノム配列の長さは５２７８ｂｐとされている。ここで特筆すべきことは、現在の時点でこの５’末端は未だ決定されていないことである。しかしながら、本明細書に開示された内容から出発し、更に配列決定を行うことができ、これにより配列を完全なものとすることができる。一方、本明細書に記載されている情報から配列を完成させることは可能であり、特に、本明細書に開示された内容に基づきペプチド、蛋白質、抗体、アンチカリン、機能的核酸の各種化合物類を生産あるいは選択することができることは、当業者によって理解されるものである。
【０１７９】
ＣＡＴ−Ａの場合は合計４個のエクソンが知られており、エクソンの長さは、エクソン１が３１２ｂｐ、エクソン２が１６７ｂｐ、エクソン３が１０８ｂｐ、エクソン４が８５０ｂｐである。
【０１８０】
一方、ＣＡＴ−Ａ１は５個のエクソンを有している。これは、エクソン４が別のスプライス部位を有しているからである。このため、ＣＡＴ−Ａ１のエクソン１から３はＣＡＴ−Ａの最初の３個のエクソンと同一である。ＣＡＴ−Ａ１の４番目のエクソン、即ちエクソン４ａの長さは２００ｂｐしかなく、ＣＡＴ−Ａ１のエクソン５は３８１ｂｐである。
【０１８１】
ＣＡＴ−ＡのｍＲＮＡの特徴付け
一般に、ＣＡＴ−ＡのｍＲＮＡの長さは１４３７個のヌクレオチドであるとされている。この場合、一個の開始コドンを有するリーディングフレームが２種類存在する。２種類のリーディングフレームとこれらの翻訳産物を、本明細書ではＯＲＦｓｔａｒｔ１及びＯＲＦｓｔａｒｔ２と示す。３番目のリーディングフレームは、ＣＡＴ−Ａに含まれるのと同様、本明細書ではＯＲＦ３と示すが、これは開始コドンを有さず（即ち、まだ配列決定が進んでおらず、これが特有のものとして同定されるに至っていない）、ＯＲＦｓｔａｒｔ２を含む。従って、ＯＲＦ３とＯＲＦ２は同一のリーディングフレームを有する。
【０１８２】
ＣＡＴ−Ａ１のｍＲＮＡの特徴付け
現在、ＣＡＴ−Ａ１のｍＲＮＡは１１６８個のヌクレオチドを有するものとされている。これとＣＡＴ−ＡのｍＲＮＡとが異なる点は３’末端が異なることであるが、３’末端はコードしない可能性がある。この配列は、本明細書では配列番号１１として開示される。
【０１８３】
実施例４：ＣＡＴ’ＡのｍＲＮＡの各種リーディングフレームの特徴付け
１．リーディングフレームＯＲＦｓｔａｒｔ１の特徴付け
各リーディングフレームに存在すると考えられる膜貫通ドメインは、合計３種類のソフトウェア・プログラムを用いて決定した。これらのソフトウェア・プログラムは、“ＤＡＳ”膜貫通  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎのもので、これは次のＵＲＬアドレスhttp://www.sbc.su.se/〜miklos/DAS/からダウンロードすることができる。この方法は、セルツォ（Cserzo）らによって開発された（Ｍセルツォ、Ｅウォリン、Ｉシモン、Ｇフォン・ハイン、Ａエロフソン（M. Cserzo, E. Wallin, I. Simon, G. von Heijne and A Elofsson）「原核細胞膜タンパク質における膜貫通アルファ・へリックスの予測：デンス・アライメント表面法（Prediction of 膜貫通 alpha-helices in procariotic membrane proteins: Dense Alignment Surface method）」Prot. Eng. vol. 10, No. 6、６７３〜６７６、１９９７）。
【０１８４】
図１２に示した結果によれば、ＯＲＦｓｔａｒｔ１リーディングフレームは２種類の膜貫通ドメインを有する。
【０１８５】
膜貫通ドメインを決定する別の方法は、所謂ＨＭＭＴＯＰサーバーにより提供される。ＨＭＭＴＯＰは、膜貫通へリックスや蛋白質のトポロジーを予測するための自動サーバーであり、酵素学研究所（Institute of Enzymology）のＧ．Ｅ．チュズナディ（G. E. Tusnady）により開発された。このＵＲＬアドレスは、http://www.enzim.hu/hmmtop/index.htmlである。この方法は、チュズナディＧ．Ｅ．（Tusnady, G. E.）ら（Ｇ．Ｅ．チュズナディとＩシモン（G. E. Tusnady and I. Simon）（1998）「膜内在性蛋白質のアミノ酸組成を統御する原則：トポロジー予測への適用（Principles Governing Amino Acid Composition of Integral Membrane proteins: Applications to Topology Prediction）」J. Mol. Biol.、２８３、４８９〜５０６）に記載されている。
【０１８６】
リーディングフレームＯＲＦｓｔａｒｔ１に関してＨＭＭＴＯＰサーバーを用いて検討した結果は次のようにまとめることができる。ここで２種類の膜貫通へリックスが７２〜８８と９５〜１１２の位置にあることも同定された。また、このＮ末端は外側に配置される、即ち細胞外にある。
【０１８７】
膜貫通領域を予測する別の方法は、所謂ＴＭｐｒｅｄプログラムである。このアルゴリズムは、ＴＭｂａｓｅ（即ち、天然膜貫通蛋白質のデータベース）の統計的分析に基づくものである。予測は、複数の加重マトリックスの組合せを用いて行う。このＵＲＬアドレスは、www.ch.embnet.org/software/TMPRED form.htmlである。この方法は、ホフマン（Hofmann）ら（ＫホフマンとＷストッフェル（K. Hofmann & W. Stoffel）（１９９３）「ＴＭｂａｓｅ−細胞膜に亘る蛋白質セグメントのデータベース（TMbase - A database of membrane spanning protein segments）」Biol. Chem. Hoppe-Seyler 374、１６６）にも記載されている。
【０１８８】
ＴＭｐｒｅｄを用いて得た結果から、２種類のモデルが検討される。これらは、膜貫通へリックスの数が異なる。この内の１種類は明らかに好ましいモデルであるが、このモデルにおいては、Ｎ末端が細胞内に位置すると共に３種類の強力な膜貫通へリックスを含む。位置１〜２１における配向は内側から外側であり、位置６６〜８７のアミノ酸における配向は外側から内側であり、アミノ酸９５〜１１４における配向は内側から外側である。
【０１８９】
この別法として提案されている他方のモデルは、２種類の強力な膜貫通へリックスを有する。第一のへリックスは、位置８〜３０のアミノ酸を含み、配向は外側から内側である。第二のへリックスは、位置９５〜１１４のアミノ酸を含み、配向は内側から外側である。
【０１９０】
２．リーディングフレームＯＲＦｓｔａｒｔ２の特徴付け
本明細書においては、このリーディングフレームにコードされるアミノ酸配列を配列番号１４で示す。
【０１９１】
前述した、膜貫通へリックスを決定する３種類のソフトウェア・プログラムを用いて、リーディングフレームＯＲＦｓｔａｒｔ２の特徴付けを行った結果を次に示す。
【０１９２】
３種類の膜貫通へリックスを、“ＤＡＳ”膜貫通蛋白質プログラムを用いて決定した。この場合、Ｎ末端は細胞内に置かれる。このリーディングフレームのアミノ酸配列の長さは、アミノ酸１１９個分である。
【０１９３】
ＤＡＳプログラムを用いて実施した分析の結果を図１３に示す。
【０１９４】
ＨＭＭＴＯＰサーバーを同様に用いてリーディングフレームＯＲＦｓｔａｒｔ２をより詳細に解析した結果、３種類の膜貫通へリックスがアミノ酸３８〜５７、７０〜８９及び９８〜１１７に存在することが確認された。
【０１９５】
また、考えられる２種類のモデルを、ＴＭｐｒｅｄ法を用いて検討した。非常に好ましいモデルにおいては、３種類の強力な膜貫通へリックスが確認された。アミノ酸位置３８〜５７のへリックスは内側から外側に向かう配向性で延びており、アミノ酸位置６９〜９０のへリックスは外側から内側に向かう配向性で延びており、アミノ酸位置９９〜１１９のへリックスは内側から外側に向かう配向性で延びている。
【０１９６】
他方のモデルも同様に、強力な３種類の膜貫通へリックスを含み、へリックスの形成については、位置３８〜５８のアミノ酸は外側から内側に向かう配向を有する膜貫通へリックスとなっており、位置７２〜９０のアミノ酸は内側から外側に向かう配向を有する膜貫通へリックスとなっており、位置１００〜１１８のアミノ酸は外側から内側に向かう配向を有する膜貫通へリックスとなっている。
【０１９７】
３．リーディングフレームＯＲＦ３の特徴付け
本明細書においては、このリーディングフレームによりコードされる蛋白質を配列番号１５に開示する。この蛋白質は合計１４０個のアミノ酸を含む。このリーディングフレームは、３メンバー（カチオン性アミノ酸輸送体、Ｙ＋）系を含む溶質キャリア・ファミリー７のアミノ酸１〜１３０に対し３４％の相同性を有する。これは、ジーンバンクに受託番号ＡＡＬ３７１８４でエントリーされている。
【０１９８】
これとは別に、ノルウェーラットのエクトロピック・レトロウィルス受容体のアミノ酸１０７〜１３０に対する相同性も有する。ここでは６２％の相同性が見られる。この配列のジーンバンクエントリーはＢＡＢ８３８９３である。
【０１９９】
このリーディングフレームをＤＡＳ法を用いて特徴付けしたところ、合計３種類の膜貫通ドメインが存在することが確認された。この解析結果を図１４に示す。更に、ＨＭＭＴＯＰプログラムを用いて解析したところ、３種類の膜貫通へリックスがアミノ酸５９〜７８、９１〜１１０及び１１９〜１３８に形成されていることが確認された。
【０２００】
最終的に行ったＴＭｐｒｅｄを用いた解析においてもまた、２種類のモデルに基づく３種類の強力な膜貫通へリックスを得た。好ましいモデルでは、位置７９〜８０のアミノ酸により内側から外側への配向性を有するヘリックスが、位置９０〜１１０のアミノ酸により外側から内側への配向性を有するヘリックスが、位置１２０〜１４０のアミノ酸により内側から外側への配向性を有するヘリックスが形成されている。
【０２０１】
他方のモデルにおいても同様に、３種類の強力な膜貫通へリックスが存在し、位置５９〜７９のアミノ酸により外側から内側への配向性を有するヘリックスが、位置９３〜１１１のアミノ酸により内側から外側への配向性を有するヘリックスが、位置１２１〜１３９のアミノ酸により外側から内側への配向性を有するヘリックスが形成されている。
【０２０２】
本発明に関して、特に、本発明の配列の翻訳産物や本発明に係るポリペプチドの翻訳産物、例えば配列番号１３〜１５の配列の翻訳産物等の各種翻訳産物を用いる場合、これらはターゲット分子として機能することができる。この場合、膜貫通蛋白質が関与していることが特に注目される。このことは、本明細書に記載した各種化合物クラスの分子の開発、即ち、ペプチドや蛋白質、抗体、アンチカリン、機能的核酸の分子だけでなく、小分子の分子の開発においても重要である。膜貫通ドメインの前述の説明からわかるように、これらターゲット分子の一部が細胞外に配置されている限り、これらの配列の各部分に対するアクセスが特に容易であるためである。
【０２０３】
実施例５：甲状腺癌細胞におけるＰＫＣＧの過剰発現
半定量的ＰＣＲとノーザンブロット分析を用いて、甲状腺癌細胞におけるＰＫＣＧの過剰発現の程度を調べた。
【０２０４】
甲状腺未分化癌Ｓ２２７、甲状腺腺腫細胞株Ｓ４０．２、正常な甲状腺組織、細胞株ＨｅＬａ、乳癌細胞株ＭＣＦ−７及び細胞株ＥＦＭ−１９のｃＤＮＡに対して半定量的ＲＴ−ＰＣＲを行った。
【０２０５】
ＨＰＫＣＧｕｐ１（５’−ｃｃｔｔｇｃｃｃｃｔｃｔｃｃｔｇｃｃｃａｃｃｔｃ−３’）及びＨＰＫＣＧｌｏ２（５’−ｇｇｇａｃｇｇｃｔｇｔａｇａｇｇｃｔｇｔａｔｇｇａｇｔｔｃａｇａａｇ−３’）をプライマーとして用いた。これらは、ｍＲＮＡレベルの２０９１ｂｐのＰＫＣ？オープンリーディングフレームを含み、２４２４ｂｐの断片を増幅するプライマーである。
【０２０６】
ＰＫＣ？遺伝子のＲＴ−ＰＣＲを比較するために、前述の組織のｃＤＮＡに対するＲＴ−ＰＣＲも平行して行った。用いたプライマーは、ＧＡＰＤＨプライマーのＧＡＰＤＨ２（５’ｇｔｇａａｇｇｔｃｇｇａｇｔｃａａｃｇ−３’）とＧＡＰＤＨ３（５’−ｇｇｔｇａａｇａｃｇｃｃｃａｇｔｇｇａｃｔｃ−３’）である。これらは、２９９ｂｐの産物を増幅するプライマーである。アタッチメント（アタッチメントあたり合計５０μＬ）は、ｃＤＮＡ（２μＬ）、１０×ＰＣＲ緩衝液（５μＬ）、各プライマー（１μＬ）、２ｍＭ  ｄＮＴＰ混合物（１μＬ）、１５ｍＭ  ＭｇＣｌ２（１．５μＬ）、Ｔａｑポリメラーゼ（０．５μＬ）、２回蒸留した水（３８μＬ）を含むものであった。
【０２０７】
ＲＴ−ＰＣＲは、前記２セットのプライマー（ＨＰＣＫＧｕｐ１／１ｏ２とＧＡＰＤＨ２／３）に対して、アニーリング温度（ＨＰＣＫＧｕｐ１／１ｏ２は６８℃、ＧＡＰＤＨ２／３は５２℃、２セットとも３０秒）以外は同じ条件で行った。変性は９５℃（３０秒）、伸長は７２℃（４５秒）であった。これらのステップを合計３５回繰り返した。開始前に変性を１回（９５℃、３分）、終了時に更に伸長（７２℃、１０分）を行った。
ＲＴ−ＰＣＲにおける検出は、ゲル電気泳動により行った。
【０２０８】
ノーザンブロット解析は次のように行った。
【０２０９】
このＯＲＦを含む２．４ｋｂｐのＰＫＣＧ特異的断片を分子プローブとして使用した。３２Ｐによる放射線標識を「ランダムプライマー伸長」法を用いて実施した。この細胞膜をＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂＴＭハイブリダイズ溶液（クロンテック・ラボラトリーズ、パロ・アルト、米国）中６８℃で３０分間プレハイブリダイズさせた後、この細胞膜をＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂＴＭハイブリダイズ溶液中６８℃で６０分間、１００ｎｇのプローブとハイブリダイズさせた。次に、この細胞膜に対し、２×ＳＳＣ／０．０５％ＳＤＳ中、室温、２０分間の洗浄を２回、０．１×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中、５０℃、１０分間の洗浄を４回行った。
【０２１０】
シグナルは、ＳＴＯＲＭ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒ（モレキュラー・ダイナミクス（Molecular Dynamics）、サニーベール、米国）で検出した。
【０２１１】
ノーザンブロット解析の結果を図９に、半定量的ＰＣＲの結果を図１０に示す。
【０２１２】
ヒトＰＫＣＧ遺伝子は、甲状腺腫瘍のブレークポイント領域から約１５０ｋｂの位置にある。ＰＫＣＧ遺伝子の調節要因は、ブレークポイント領域内における再構成により影響される。これらの領域に対して、ＰＫＣＧは、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍に関連するターゲット分子である。ＰＫＣＧ遺伝子の相対位置を図８に示す。ノーザンブロット解析からわかるように、ＰＫＣＧは甲状腺癌細胞において過剰発現している。検出は、ハイブリダイゼーション目的で用いたＰＫＣＧ特異的プローブを用いて行った。ここにおけるハイブリダイゼーションの条件は、一般にも具体的にもこの実施例に記載した条件に対応する。
【０２１３】
甲状腺癌を、染色体１９に何らかの変化がある細胞株に導入し、この実施例に記載した検討の対象とした。
【０２１４】
ノーザンブロット解析に関連して既に記載されている結果を、半定量的ＰＣＲを用いて更に確認した。甲状腺癌細胞における発現を、ＰＫＣＧ特異的プライマーを用いた半定量的ＲＴ−ＰＣＲにより測定した。図１０に示すアガロースゲルには、次のものがプロットされている。レーン１：マーカー（ＭａｒｋｅｒＩＩＩ（ロシュ）、ＨｉｎｄＩＩＩ−ＥｃｏＲＩで切断されたλ−ＤＮＡ）、レーン２：甲状腺未分化癌細胞株Ｓ２７７、レーン３：甲状腺腺腫細胞株Ｓ４０．２、レーン４：正常な甲状腺組織、レーン５：Ｈｅｌａ細胞、即ち乳癌（mammary carcinoma）、レーン６：ＭＣＦ７細胞株（ＡＴＣＣ番号ＨＴＢ−２２、同腺腫）、レーン７：ＥＦＭ１９細胞株、ヒト乳癌（breast cancer）細胞株（ＤＳＭＺ番号ＡＣＣ２３１）、レーン８：陰性対照、レーン９：陽性対照（ｃＤＮＡが単離されていることを確認するためにＧＡＰ脱水素酵素を検出）。
【０２１５】
図１０に示されているように、甲状腺未分化癌Ｓ２７７の場合は、ＰＫＣＧ遺伝子（この場合は２４４２ｋｂの長さを有する）の発現を検出できた。ＰＫＣＨ遺伝子活性は、ＭＣＦ７細胞株においても検出できた。図１０において各バンドを矢印で示す。
【０２１６】
上の記載、配列プロトコル及び請求の範囲に開示した本発明の各特徴は、個別にも、組み合わせても、本発明の各種実施形態において本発明を実施するために重要となる。請求の範囲に開示した内容を、本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する。
【図面の簡単な説明】
【０２１７】
【図１】（ａ）Ｇバンド法により染色した後の、ｔ（２；１９）（ｐ１２；ｑ１３）を有する細胞株Ｓ１４１．２のメタフェーズ期染色体。染色体１９、（１９）及び（２）を矢印で示す。（ｂ）は、ＢＡＣクローン２８０７２３とのＦＩＳＨ後の同一のメタフェーズ期染色体（ハイブリダイゼーションシグナルは染色体１９、（１９）及び（２）に局在化している）。
【図２】１９ｑ１３異常を有する良性甲状腺腫瘍のブレークポイントクラスター領域の概略ダイアグラム。トライアルでテストした６種類の腫瘍のＦＩＳＨマッピングデータは、ＲＩＴＡの約１５０ｋｂｐ３’マップの領域における１９ｑ１３転座を有する良性甲状腺腫瘍のブレークポイントを示す。コスミドクローン、ＢＡＣクローン及びＰＡＣクローンは、ローレンス・リバモア国立研究所（Lawrence Livermore National Laboratory）で同定された染色体１９の染色体地図と一致する。丸で囲んだ数字は、新たに確認されたＳＴＳマーカーＲＳＴＳ１〜ＲＳＴＳ１０を示す（比較のため、表２を参照）。
【図３】甲状腺腺腫細胞株Ｓ１２１／ＳＶ４０と繊維芽細胞から単離されたＲＮＡを、エクソン１からエクソン５の１０９２ｂｐのｃＤＮＡプローブを用いてノーザンブロットハイブリダイゼーションさせた結果を示す。５．５ｋｂと６．２ｋｂの転写部位が繊維芽細胞と腺腫細胞株に確認された。
【図４】ＣＡＴ−Ａ遺伝子のゲノム位置を示す。
【図５】ＣＡＴ−Ａのゲノム構成を示す。
【図６】ＣＡＴ−ＡのｍＲＮＡの構成を示すスケッチである。
【図７】各種オープンリーディングフレーム、及び本明細書においてＯＲＦｓｔａｒｔ１、ＯＲＦｓｔａｒｔ２及びＯＲＦ３として示されている、考えられるアミノ酸配列を有するオープンリーディングフレームを示す。
【図８】ＰＫＣＧ遺伝子の位置を示す。
【図９】甲状腺癌細胞と甲状腺の正常組織におけるＰＫＣＧを検出するためのノーザンブロットである。
【図１０】ＰＫＣＧ遺伝子の半定量的ＲＴ−ＰＣＲの結果である。
【図１１】ＣＡＴ−Ａ又はＣＡＴ−Ａ１、ＤＣ−２相同体及びプロテインキナーゼＣγに関連して、本明細書で初めて記載された各種遺伝子配列あるいは遺伝子部分配列のダイアグラムである。
【図１２】ＤＡＳプログラムを用いてＯＲＦｓｔａｒｔ１の遺伝子産物の膜貫通ドメイン解析を行った結果を示す。
【図１３】ＤＡＳプログラムを用いてＯＲＦｓｔａｒｔ２の遺伝子産物の膜貫通ドメイン解析を行った結果を示す。
【図１４】ＤＡＳプログラムを用いてＯＲＦ３の遺伝子産物の膜貫通ドメイン解析を行った結果を示す。
【図１５】ＣＡＴ−ＡのｃＤＮＡを示す。
【図１６】ＣＡＴ−Ａ−ｃＤＮＡのＯＲＦｓｔａｒｔ１の蛋白質、即ちアミノ酸配列を示す。
【図１７】ＣＡＴ−Ａ−ｃＤＮＡのＯＲＦｓｔａｒｔ２の蛋白質、即ちアミノ酸配列を示す。
【図１８】ＣＡＴ−Ａ−ｃＤＮＡのＯＲＦ３の蛋白質、即ちアミノ酸配列を示す。
【図１９】ＣＡＴ−Ａ１のｃＤＮＡを示す。
【図２０】より広範囲の配列情報を含む、ＣＡＴ−ＡあるいはＣＡＴ−Ａ１のゲノム構成、即ち配列を示す。
【図２１】より広範囲の配列情報を含む、ＣＡＴ−ＡのｃＤＮＡを示す。
【図２２】本発明に係るＤＣ２相同体遺伝子のゲノム配列を示す。
【図２３】より広範囲の配列情報を含む、本発明に係るＤＣ２相同体遺伝子のゲノム配列を示す。
【図２４】より広範囲の配列情報を含む、ＤＣ２相同体遺伝子のｃＤＮＡを示す。
【図２５】より広範囲の配列情報を含む、ＰＫＣＧのｃＤＮＡを示す。
【図２６】より広範囲の配列情報を含む、ＰＫＣＧのゲノム配列を示す。
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図８】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図２１−１】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５−１】
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【図２６−１】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2005503123.tif 000173
【手続補正書】
【提出日】平成15年8月4日(2003.8.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
過形成及び／又は腫瘍を原因とする発現変化を有する核酸であって、配列番号１、２、７、１０、１１及び１２からなる群から選択される核酸配列を含むことを特徴とする核酸。
【請求項２】
腫瘍が、染色体バンド１９ｑ内に何らかの変化を有する各種上皮腫瘍及び染色体バンド１９ｑ１３内に何らかの変化を有する各種腫瘍からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の核酸。
【請求項３】
過形成が甲状腺の各種過形成からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１又は２に記載の核酸。
【請求項４】
配列番号１、２、７、１０、１１及び／又は１２が、ＣＡＴ（特にヒトＣＡＴ）又はこれらの一部をコードすることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の核酸配列。
【請求項５】
遺伝子コードの縮重がなければ請求項１〜４のいずれか一項に記載の核酸と同じアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の核酸の内の一核酸とハイブリダイズする核酸。
【請求項７】
前出の請求項のいずれか一項に記載の核酸を含むことを特徴とするベクター。
【請求項８】
プロモーター、ターミネーター及びエンハンサーからなる群から選択される少なくとも一種の要素を更に含むことを特徴とする、請求項７に記載のベクター。
【請求項９】
ベクターが発現ベクターであることを特徴とする、請求項７又は８に記載のベクター。
【請求項１０】
少なくとも一個のプロモーターが、ポリペプチドをコードする請求項１〜８のいずれか一項に記載の核酸の少なくとも一部分を有するリーディングフレーム内にあることを特徴とする、請求項７〜９に記載のベクター。
【請求項１１】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸によりコードされるポリペプチド。
【請求項１２】
改変されていることを特徴とする、請求項１１に記載のポリペプチド。
【請求項１３】
請求項７〜１０のいずれか一項に記載のベクターを含む細胞（特に単離された細胞）。
【請求項１４】
請求項１１又は１２に記載のポリペプチドに対するものであることを特徴とする抗体。
【請求項１５】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸に対するものであることを特徴とする、請求項１４に記載の抗体。
【請求項１６】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸に対するものであることを特徴とするリボザイム。
【請求項１７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸の少なくとも一部分を含むことを特徴とする、請求項１６に記載のリボザイム。
【請求項１８】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の各種核酸配列の内の一配列と相補的な配列を含むアンチセンス核酸。
【請求項１９】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の各種核酸のうちの一核酸と相補的である又はこれと同一である配列を含むＲＮＡｉであって、好ましくはこのＲＮＡｉが、相補的又は同一である領域の長さが２１〜２３個のヌクレオチドである領域を含む、ＲＮＡｉ。
【請求項２０】
前出の請求項のいずれか一項に記載の核酸の翻訳産物の作用に影響を及ぼす化合物、特に前記作用を阻害する化合物を決定する方法であって、次の各段階、
・翻訳産物と化合物を調製する段階と、
・翻訳産物の作用を体現する系において、翻訳産物と化合物とを接触させる段階と、
・化合物の影響下において翻訳産物の作用に何らかの変化が生じたか否かを決定する段階と
を特徴とする方法。
【請求項２１】
前出の請求項のいずれか一項に記載の核酸の転写産物の作用に影響を及ぼす化合物、特に前記作用を阻害する化合物を決定する方法であって、次の各段階、
・転写産物と化合物を調製する段階と、
・転写産物の作用を体現する系において、転写産物と化合物とを接触させる段階と、
・化合物の影響下において転写産物の作用に何らかの変化が生じたか否かを決定する段階と
を特徴とする方法。
【請求項２２】
系が、細胞発現系、無細胞発現系、化合物と翻訳産物の間の相互作用を測定するアッセイ及び化合物と転写産物の間の相互作用を測定するアッセイからなる群から選択されることを特徴とする、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項２３】
過形成及び腫瘍の形成、特に甲状腺の過形成及び腫瘍の形成を担う遺伝子を決定する方法であって、次の各段階、
・過形成及び腫瘍の染色体転座部におけるブレークポイントを決定する段階と、
・ブレークポイント領域の両側４００ｋｂｐ、好ましくは１５０ｋｂｐの領域内にある遺伝子を決定する段階と、
・過形成細胞又は腫瘍細胞におけるこの遺伝子の翻訳／転写が、過形成でない細胞又は腫瘍でない細胞と比べて変化しているか否かを決定する段階と
を含む方法。
【請求項２４】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸及び／又は請求項１６又は１７に記載のリボザイム及び／又は請求項１８に記載のアンチセンス核酸及び／又は請求項１９に記載のＲＮＡｉの、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断及び／又は治療のための使用。
【請求項２５】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸及び／又は請求項１６又は１７に記載のリボザイム及び／又は請求項１８に記載のアンチセンス核酸及び／又は請求項１９に記載のＲＮＡｉの、医薬を製造するため、特に、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療及び／又は予防するための医薬を製造するための使用。
【請求項２６】
請求項１１〜１２のいずれか一項に記載のポリペプチドの、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断及び／又は治療のための使用。
【請求項２７】
請求項１１〜１２のいずれか一項に記載のポリペプチドの、医薬の製造、特に、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療及び／又は予防するための医薬を製造するための使用。
【請求項２８】
請求項１４〜１５のいずれか一項に記載の抗体の、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断及び／又は治療のための使用。
【請求項２９】
請求項１４〜１５のいずれか一項に記載の抗体の、医薬を製造するための使用。
【請求項３０】
甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断のためのキットであって、該キットが、それぞれ前出の請求項の一項に記載の核酸、ベクター、ポリペプチド、細胞、抗体、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ及びリボザイムからなる群から選択される少なくとも一種の要素を含むことを特徴とするキット。
【請求項３１】
甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を検出するための方法であって、次の各段階、
・甲状腺材料を、それぞれ前出の請求項の一項に記載の核酸、ベクター、ポリペプチド、抗体、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ、リボザイム及び細胞からなる群から選択される剤に接触させる段階と、
・甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍が存在するか否かを決定する段階と
を特徴とする方法。
【請求項３２】
甲状腺材料がｅｘ  ｖｉｖｏに存在することを特徴とする、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸の、プライマー及び／又はプローブとしての使用。
【請求項３４】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸配列の一部分に相補的であることを特徴とする、核酸を提供する及び／又はスクリーニングする及び／又は検出するためのプライマー。
【請求項３５】
プライマーが請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸配列の一部分に相補的であることを特徴とする、核酸（特に前出の請求項のいずれか一項に記載の核酸）を提供する及び／又はスクリーニングする及び／又は検出するためのプライマーの使用。
【請求項３６】
甲状腺腫瘍又は甲状腺腫において検出され得る配列を含む核酸を提供する方法であって、ブレークポイントを有する転座が染色体バンド１９ｑ１３に存在し、前記配列が染色体バンド１９ｑ１３内にあり、
該方法が次の各段階、
・ＰＣＲを実施するための請求項３６に記載のプライマーを調製する段階と、
・ヒト染色体１９のバンド１９ｑ１３から採取した核酸配列又は請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸を調製する段階と、
・核酸配列又は核酸をプライマーと混合する段階と、
・ＰＣＲを実施する段階と、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項３７】
医薬組成物であって、
それぞれ前出の請求項の一項に記載の核酸、ベクター、ポリペプチド、細胞、抗体、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ、リボザイム及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも一種の剤と、
医薬として許容しうる少なくとも一種の担体と
を含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項３８】
腫瘍及び過形成を治療及び／又は予防するための方法であって、前出の請求項のいずれか一項に記載の核酸の発現を変化させる作用を阻害する化合物が患者に投与されることを特徴とする方法。
【請求項３９】
前出の請求項のいずれか一項に記載の核酸の発現を変化させる作用を阻害する化合物の、医薬を製造するための使用。
【請求項４０】
医薬が、腫瘍及び／又は過形成、特に甲状腺の腫瘍及び／又は過形成を治療及び／又は予防するためのものであることを特徴とする、請求項３９に記載の使用。
【請求項４１】
配列番号１、２、７、１０、１１及び１２からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体の、医薬（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療するための医薬）を製造するための及び／又は診断手段（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断のための診断手段）を製造するための使用。
【請求項４２】
ポリペプチドが、配列番号１３及び／又は配列番号１５に従ったアミノ酸配列を有することを特徴とする、請求項４１に記載の使用。
【請求項４３】
核酸が、遺伝子コードの縮重がなければ、配列番号１、２、７、１０、１１及び１２の配列の一配列に係る核酸とハイブリダイズすることを特徴とする、請求項４１又は４２に記載の使用。
【請求項４４】
配列番号１３及び配列番号１５からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体の、医薬（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療するための医薬）を製造するための及び／又は診断手段（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断のための診断手段）を製造するための使用。
【請求項４５】
甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療するための手段、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を診断するための診断手段をスクリーニングするための方法であって、次の各段階、
ｅ）候補化合物を調製する段階と、
ｆ）発現系及び／又は活性系を調製する段階と、
ｇ）候補化合物を発現系及び／又は活性系と接触させる段階と、
ｈ）候補化合物の影響下において、配列番号１、２、７、１０、１１及び１２からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド、及び／又は配列番号１３又は１５に従った配列を有するポリペプチド又はこれらの誘導体の発現及び／又は活性が変化しているか否かを決定する段階と
を含む方法。
【請求項４６】
候補化合物が化合物ライブラリーに含まれることを特徴とする、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
候補化合物がペプチド、蛋白質、抗体、アンチカリン、機能的核酸及び小分子からなる化合物クラス群から選択されることを特徴とする、請求項４５又は４６に記載の方法。
【請求項４８】
機能的核酸が、アプタマー、アプタザイム、リボザイム、スピゲルマー、アンチセンスオリゴヌクレオチド及びＲＮＡｉからなる群から選択されることを特徴とする、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
配列番号１、２、７、１０、１１及び１２からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体、及び／又は配列番号１３又は１５に従った配列を有するポリペプチド又はこれらの誘導体、及び／又は配列番号１、２、７、１０、１１及び１２からなる群から選択される配列を有する核酸の特に天然相互作用パートナー又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体、及び／又はこれらの核酸、及び／又は配列番号１３又は１５に従った配列を有するポリペプチドの相互作用パートナー又はこれらの誘導体の、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を診断するための診断手段を開発及び／又は製造するためターゲット分子としての、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発及び／又は製造するためのターゲット分子としての使用。
【請求項５０】
医薬又は診断手段が、抗体、ペプチド、アンチカリン、小分子、アンチセンス分子、アプタマー、スピゲルマー及びＲＮＡｉ分子からなる群から選択される剤を含むことを特徴とする、請求項４９に記載の使用。
【請求項５１】
剤が、配列番号１３又は１５に従った配列を有するポリペプチド又はこれらの誘導体又はこれらの相互作用パートナーと相互作用することを特徴とする、請求項５０に記載の使用。
【請求項５２】
剤が、配列番号１、２、７、１０、１１及び１２からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は特に天然相互作用パートナーをコードする核酸と、特にｍＲＮＡ、ゲノム核酸又はｃＤＮＡと相互作用することを特徴とする、請求項５０に記載の使用。
【請求項５３】
配列番号１、２、７、１０、１１及び１２からなる群から選択される配列を有する核酸によりコードされるペプチド又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は配列番号１３又は１５に従ったポリペプチドと相互に作用する、及び／又はこれらの特に天然相互作用パートナーと相互に作用するポリペプチドの、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を診断するための診断手段を開発又は製造するための、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発又は製造するための使用。
【請求項５４】
ポリペプチドが、抗体及び結合ポリペプチドからなる群から選択されることを特徴とする、請求項５３に記載の使用。
【請求項５５】
配列番号１、２、７、１０、１１及び１２からなる群から選択される配列を有する核酸によりコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は配列番号１３又は１５に従ったポリペプチドと相互作用する、及び／又はこれらの特に天然相互作用パートナーと相互に作用する核酸の、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を診断するための診断手段を開発又は製造するための、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発又は製造するための使用。
【請求項５６】
核酸が、アプタマー及びスピゲルマーからなる群から選択されることを特徴とする、請求項５５に記載の使用。
【請求項５７】
配列番号１、２、７、１０、１１及び１２からなる群から選択される配列を有する第二の核酸又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は配列番号１３又は１５に従った配列を有するポリペプチドの相互作用パートナーをコードする核酸と相互作用する第一の核酸の、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発又は製造するための使用。
【請求項５８】
相互作用する第一の核酸が、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム及び／又はＲＮＡであることを特徴とする、請求項５７に記載の使用。
【請求項５９】
第二の核酸がｃＤＮＡ又はｍＲＮＡであることを特徴とする、請求項５７又は５８に記載の使用。
【請求項６０】
請求項４９〜５９のいずれか一項に記載の使用に係る群から選択される少なくとも一種の剤と、医薬として許容しうる少なくとも一種類の担体とを含む、特に、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬組成物。
【請求項６１】
請求項４９〜５９のいずれか一項に記載の使用に係る少なくとも一種の剤を含む、甲状腺の状態を特徴付けるためのキット。
【国際調査報告】
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