(57)【要約】本発明は、選択的に標的化した蛍光、放射性標識、または蛍光および放射線標識組成物を用いる、活動性のアテローム性プラークおよび／または薄い被膜を有する線維性アテローム（「不安定プラーク」）の検出および治療のための装置に関する。本発明はさらに、必要に応じて、蛍光および／または放射性標識組成物を含む選択的に標的化した組成物を用いる、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークの検出および治療のための方法および装置に関する。
2005538751.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第一の所定の波長を有する光を放射可能な発光体；および
第二の所定の波長を有する光を検出可能な光検出器；を含む、血管中でプラークを検出するための装置であって、
所定の量の少なくとも１種類の蛍光組成物が血管に投与され、
前記蛍光組成物がプラークに局在化し、
前記第一の所定の波長を有する光が、プラークに局在化した前記蛍光組成物に前記第二の所定の波長を有する光を放出させることを特徴とする装置。
【請求項２】
前記発光体および前記光検出器が、プローブに含まれることを特徴とする請求項１記載の装置。
【請求項３】
前記プローブが、血管に挿入可能であることを特徴とする請求項２記載の装置。
【請求項４】
第三の所定の波長を有する光を放射可能な治療用発光体をさらに含み、治療的に有効な量の少なくとも１種類の光増感剤組成物が血管に投与され、該光増感剤組成物が標的プラークに局在化し、前記第三の所定の波長を有する光が、前記光増感剤組成物に、標的プラークを安定化させる光毒性種を生じさせることを特徴とする請求項１記載の装置。
【請求項５】
前記治療用発光体が、所定の強さレベルで前記第三の所定の波長を有する光を放射可能であり、該所定の強さレベルの第三の所定の波長を有する光が、標的プラークを含む細胞の壊死を誘導しない量で、前記光増感剤組成物に光毒性種を生じさせることを特徴とする請求項４記載の装置。
【請求項６】
前記第三の所定の波長が約４０５ｎｍであることを特徴とする請求項４記載の装置。
【請求項７】
前記第一の所定の波長が約３３７ｎｍであることを特徴とする請求項１記載の装置。
【請求項８】
前記第二の所定の波長が約６６６ｎｍないし６６８ｎｍであることを特徴とする請求項１記載の装置。
【請求項９】
前記光検出器に連結した膨張式の容器をさらに含み、該膨張式の容器を膨張させると、前記光検出器が血管壁に向かって動くことを特徴とする請求項１記載の装置。
【請求項１０】
前記膨張式の容器が生理食塩水を含むことを特徴とする請求項９記載の装置。
【請求項１１】
外部ユニットをさらに含み、前記膨張式の容器および前記光検出器が、該外部ユニット内に引き込み可能でありかつそこから伸長可能であることを特徴とする請求項９記載の装置。
【請求項１２】
外部ユニットをさらに含むことを特徴とする請求項１記載の装置。
【請求項１３】
前記光検出器に連結した弾性構造をさらに含み、該弾性構造および光検出器が、前記外部ユニット内に引き込み可能でありかつそこから伸長可能であり、弾性構造が外部ユニットから伸長した際に前記光検出器が血管壁に向かって動くことを特徴とする請求項１２記載の装置。
【請求項１４】
熱を検出可能な検出器をさらに含むことを特徴とする請求項１記載の装置。
【請求項１５】
シグナルを検出可能な検出器をさらに含むことを特徴とする請求項１記載の装置。
【請求項１６】
前記シグナルが放射性シグナルを含むことを特徴とする請求項１５記載の装置。
【請求項１７】
前記放射性シグナルが、投与されかつプラークに局在化する放射性標識分子キャリアーを含む組成物から放射されることを特徴とする請求項１６記載の装置。
【請求項１８】
前記放射性シグナルがガンマ線を含むことを特徴とする請求項１６記載の装置。
【請求項１９】
前記放射性シグナルがベータ線を含むことを特徴とする請求項１６記載の装置。
【請求項２０】
前記放射性シグナルがガンマ線を含むことを特徴とする請求項１９記載の装置。
【請求項２１】
前記検出器が、ベータ線に対する第一の所定の感度およびガンマ線に対する第二の所定の感度を有することを特徴とする請求項２０記載の装置。
【請求項２２】
前記第一の所定の感度が、前記第二の所定の感度の約１００倍に等しいことを特徴とする請求項２１記載の装置。
【請求項２３】
前記シグナルが赤外線シグナルを含むことを特徴とする請求項１５記載の装置。
【請求項２４】
前記検出器が画像作成カメラ検出器を含むことを特徴とする請求項１５記載の装置。
【請求項２５】
プラークが活動性のアテローム性プラークを含むことを特徴とする請求項１記載の装置。
【請求項２６】
プラークが不安定プラークを含むことを特徴とする請求項１記載の装置。
【請求項２７】
標的プラークが活動性のアテローム性プラークを含むことを特徴とする請求項１記載の装置。
【請求項２８】
標的プラークが不安定プラークを含むことを特徴とする請求項１記載の装置。
【請求項２９】
血管に挿入可能なプローブを含む、血管中でプラークを検出および治療するための装置であって、前記プローブが：
プラークからの熱を検出可能な検出器；および
所定の波長を有する光を放射可能な発光体；を含み、前記所定の波長を有する光が、投与されかつ標的プラークに局在化する光増感剤組成物に、標的プラークを安定化させる光毒性種を生じさせることを特徴とする装置。
【請求項３０】
プラークが活動性のアテローム性プラークを含むことを特徴とする請求項２９記載の装置。
【請求項３１】
プラークが不安定プラークを含むことを特徴とする請求項２９記載の装置。
【請求項３２】
標的プラークが活動性のアテローム性プラークを含むことを特徴とする請求項２９記載の装置。
【請求項３３】
標的プラークが不安定プラークを含むことを特徴とする請求項２９記載の装置。
【請求項３４】
血管に挿入可能なプローブを含む、血管中でプラークを検出および治療するための装置であって、前記プローブが：
投与されかつプラークに局在化する放射性標識分子キャリアーを含む組成物から放射されるガンマ線を検出可能な検出器；および
所定の波長を有する光を放射可能な発光体；を含み、前記所定の波長を有する光が、投与されかつ標的プラークに局在化する光増感剤組成物に、標的プラークを安定化させる光毒性種を生じさせることを特徴とする装置。
【請求項３５】
プラークが活動性のアテローム性プラークを含むことを特徴とする請求項３４記載の装置。
【請求項３６】
プラークが不安定プラークを含むことを特徴とする請求項３４記載の装置。
【請求項３７】
標的プラークが活動性のアテローム性プラークを含むことを特徴とする請求項３４記載の装置。
【請求項３８】
標的プラークが不安定プラークを含むことを特徴とする請求項３４記載の装置。
【請求項３９】
前記検出器がベータ線を検出可能であることを特徴とする請求項３４記載の装置。
【請求項４０】
前記検出器が、ベータ線に対する第一の所定の感度およびガンマ線に対する第二の所定の感度を有することを特徴とする請求項３９記載の装置。
【請求項４１】
前記第一の所定の感度が、前記第二の所定の感度の約１００倍に等しいことを特徴とする請求項４０記載の装置。
【請求項４２】
第一の所定の波長を有する光を放射する手段；および
第二の所定の波長を有する光を検出する手段；を含む、血管中でプラークを検出するための装置であって、
所定の量の少なくとも１種類の蛍光組成物が血管に投与され、
前記蛍光組成物がプラークに局在化し、
前記第一の所定の波長を有する光が、プラークに局在化した前記蛍光組成物に、前記第二の所定の波長を有する光を放出させることを特徴とする装置。
【請求項４３】
プラークからの熱を検出する手段；および
所定の波長を有する光を放射する手段；を含む、血管中でプラークを検出および治療するための装置であって、
前記所定の波長を有する光が、投与されかつ標的プラークに局在化する光増感剤組成物に、標的プラークを安定化させる光毒性種を生じさせることを特徴とする装置。
【請求項４４】
投与されかつプラークに局在化する放射性標識分子キャリアーを含む組成物からのガンマ線を検出する手段；および
所定の波長を有する光を放射する手段；を含む、血管中でプラークを検出および治療するための装置であって、
前記所定の波長を有する光が、投与されかつ標的プラークに局在化する光増感剤組成物に、標的プラークを安定化させる光毒性種を生じさせることを特徴とする装置。
【請求項４５】
ａ）ベータ線放出組成物を投与する；
ｂ）前記組成物を活動性のアテローム性プラークに局在化させる；
ｃ）前記ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する；および
ｄ）活動性のアテローム性プラークを同定する；工程を含む、被験者において活動性のアテローム性プラークを検出する方法。
【請求項４６】
活動性のアテローム性プラークが、凝集した血小板および単球を蓄積するプラークを含み、５０%を超える狭窄が達成されていることを特徴とする請求項４５記載の方法。
【請求項４７】
薄い線維性の被膜が厚さ約２００マイクロメートルより厚いことを特徴とする請求項４６記載の方法。
【請求項４８】
活動性のアテローム性プラークが、脂質および、平滑筋細胞、白血球、リンパ球、単球、マクロファージ、泡沫細胞、肥満細胞、内皮細胞、血小板、赤血球、および多型核球より成る群から選択される炎症細胞を含むことを特徴とする請求項４６記載の方法。
【請求項４９】
リンパ球がＢ−リンパ球およびＴ−リンパ球を含むことを特徴とする請求項４８記載の方法。
【請求項５０】
多型核球が顆粒球および好中球を含むことを特徴とする請求項４８記載の方法。
【請求項５１】
炎症細胞がマクロファージおよび／または単球を含むことを特徴とする請求項４８記載の方法。
【請求項５２】
前記ベータ線放出組成物が、分子キャリアーと結合した１８Ｆ−フルオロデオキシグルコース、Ｉ１３１、Ｒｅ１８６、およびＲｅ１８８より成る群から選択されるベータ線放出物質を含むことを特徴とする請求項４５記載の方法。
【請求項５３】
前記分子キャリアーが、炎症細胞、脂質、凝血促進因子、および細胞外マトリックス産生の阻害または細胞外マトリックスの分解を促進する物質より成る群から選択される炎症性成分を標的にすることを特徴とする請求項５２記載の方法。
【請求項５４】
炎症細胞が、平滑筋細胞、白血球、リンパ球、単球、マクロファージ、泡沫細胞、肥満細胞、内皮細胞、血小板、赤血球、および多型核球より成る群から選択されることを特徴とする請求項５３記載の方法。
【請求項５５】
リンパ球が、Ｂ−リンパ球およびＴ−リンパ球を含むことを特徴とする請求項５４記載の方法。
【請求項５６】
多型核球が、顆粒球および好中球を含むことを特徴とする請求項５４記載の方法。
【請求項５７】
前記分子キャリアーが、血清タンパク質、受容体リガンド、マイクロスフィア、リポソーム、抗体、増殖因子、ペプチド、ホルモン、およびリポタンパク質より成る群から選択されることを特徴とする請求項５２記載の方法。
【請求項５８】
前記分子キャリアーが、スカベンジャー受容体と結合することを特徴とする請求項５２記載の方法。
【請求項５９】
前記分子キャリアーが、マレイル化アルブミン(maleylated albumin)、ダウノルビシン、ドキソルビシン、酸化低密度リポタンパク質、アセチル化低密度リポタンパク質、酸化高密度リポタンパク質、マロンジアルデヒド処理タンパク質、ホルムアルデヒド処理アルブミン、糖化アルブミン、ポリイノシン酸、糖化リポタンパク質、デキストラン硫酸、陰イオン性リン脂質、フコイジン、カラギーナン、ポリビニル硫酸、ならびにＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１６ａ、ＣＤ３２またはＣＤ６８を認識するモノクローナル抗体より成る群から選択されることを特徴とする請求項５８記載の方法。
【請求項６０】
陰イオン性リン脂質がホスファチジルセリンであることを特徴とする請求項５９記載の方法。
【請求項６１】
前記分子キャリアーが、ベータ線放出組成物にＴリンパ球を標的にさせることを特徴とする請求項５２記載の方法。
【請求項６２】
前記分子キャリアーが、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ４４およびＣＤ７１、ならびにトランスフェリンを認識するモノクローナル抗体より成る群から選択されることを特徴とする請求項６１記載の方法。
【請求項６３】
前記分子キャリアーが、ベータ線放出組成物に活動性のアテローム性プラークの脂質を標的にさせることを特徴とする請求項５２記載の方法。
【請求項６４】
前記分子キャリアーが、リポソーム、クレモホールＥＬ、ＰＥＧ／溶媒混合物、ヨウ化ヒマシ油、ナノ粒子およびミセル調製物より成る群から選択される疎水性賦形剤を含むことを特徴とする請求項６３記載の方法。
【請求項６５】
リポソームがコレステロールを含むことを特徴とする請求項６４記載の方法。
【請求項６６】
リポソームがカルジオリピンを含むことを特徴とする請求項６４記載の方法。
【請求項６７】
前記分子キャリアーが、ベータ線放出組成物にマクロファージを標的にさせることを特徴とする請求項５２記載の方法。
【請求項６８】
前記分子キャリアーが、ベータ線放出組成物に、テネイシンＣ、組織因子、ＭＭＰ１の組織阻害因子、ＭＭＰ２の組織阻害因子、酸化ＬＤＬ受容体、ヘムオキシゲナーゼ−１、ヒト軟骨ｇｐ−３９、ＩＬ−６、ＩＬ−６受容体、ＩＬ−１０、ＩＬ−１０受容体、レクチン様酸化ＬＤＬ−受容体、単球炎症性タンパク質−１(monocyte inflammatory protein-1)、単球炎症性タンパク質−１受容体、およびマクロファージケモアトラクタントプロテイン−１(macrophage chemoattractant protein-1) 受容体より成る群から選択されるマクロファージ生体分子を標的にさせることを特徴とする請求項６７記載の方法。
【請求項６９】
前記分子キャリアーが、ベータ線放出組成物に、ＩＬ−１０、ＩＬ−１０受容体、単球炎症性タンパク質−１、単球炎症性タンパク質−１受容体、およびトランスフェリンより成る群から選択されるＴ細胞生体分子を標的にさせることを特徴とする請求項６１記載の方法。
【請求項７０】
前記分子キャリアーが、ベータ線放出組成物に泡沫細胞を標的にさせることを特徴とする請求項５２記載の方法。
【請求項７１】
前記分子キャリアーが、ベータ線放出組成物に、細胞外マトリックスを分解するプロテアーゼを標的にさせることを特徴とする請求項５２記載の方法。
【請求項７２】
プロテアーゼがメタロプロテイナーゼであることを特徴とする請求項７１記載の方法。
【請求項７３】
前記分子キャリアーが、プロテアーゼ上のエピトープと結合するモノクローナル抗体であることを特徴とする請求項７１記載の方法。
【請求項７４】
ａ）ベータ線放出組成物を投与する；
ｂ）前記組成物を不安定プラークに局在化させる；
ｃ）前記ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する；および
ｄ）不安定プラークを同定する；工程を含む、被験者において不安定プラークを検出する方法。
【請求項７５】
不安定プラークが、炎症性成分、大きな脂質の蓄積、および薄い線維性の被膜を含むことを特徴とする請求項７４記載の方法。
【請求項７６】
薄い線維性の被膜が厚さ約１５０マイクロメートル未満であることを特徴とする請求項７５記載の方法。
【請求項７７】
薄い線維性の被膜が厚さ約１００マイクロメートル未満であることを特徴とする請求項７６記載の方法。
【請求項７８】
炎症性成分が、炎症細胞、脂質、凝血促進因子、および細胞外マトリックス産生の阻害または細胞外マトリックスの分解を促進する物質より成る群から選択されることを特徴とする請求項７５記載の方法。
【請求項７９】
炎症細胞が、平滑筋細胞、白血球、リンパ球、単球、マクロファージ、泡沫細胞、肥満細胞、内皮細胞、血小板、赤血球、および多型核球より成る群から選択されることを特徴とする請求項７８記載の方法。
【請求項８０】
リンパ球がＢ−リンパ球およびＴ−リンパ球を含むことを特徴とする請求項７９記載の方法
【請求項８１】
多型核球が顆粒球および好中球を含むことを特徴とする請求項７９記載の方法。
【請求項８２】
炎症細胞が、約１０%より多いマクロファージおよび／または単球を含むことを特徴とする請求項７９記載の方法。
【請求項８３】
炎症細胞が、約２５%より多いマクロファージおよび／または単球を含むことを特徴とする請求項７９記載の方法。
【請求項８４】
脂質含量が約１０%より多いことを特徴とする請求項７８記載の方法。
【請求項８５】
脂質含量が約２５%より多いことを特徴とする請求項７８記載の方法。
【請求項８６】
前記ベータ線放出組成物が、分子キャリアーと結合した１８Ｆ−フルオロデオキシグルコース、Ｉ１３１、Ｒｅ１８６、およびＲｅ１８８より成る群から選択されるベータ線放出物質を含むことを特徴とする請求項７４記載の方法。
【請求項８７】
前記分子キャリアーが、炎症細胞、脂質、凝血促進因子、および細胞外マトリックス産生の阻害または細胞外マトリックスの分解を促進する物質より成る群から選択される炎症性成分を標的にすることを特徴とする請求項８６記載の方法。
【請求項８８】
炎症細胞が、平滑筋細胞、白血球、リンパ球、単球、マクロファージ、泡沫細胞、肥満細胞、内皮細胞、血小板、赤血球、および多型核球より成る群から選択されることを特徴とする請求項８７記載の方法。
【請求項８９】
リンパ球が、Ｂ−リンパ球およびＴ−リンパ球を含むことを特徴とする請求項８８記載の方法。
【請求項９０】
多型核球が、顆粒球および好中球を含むことを特徴とする請求項８８記載の方法。
【請求項９１】
前記分子キャリアーが、血清タンパク質、受容体リガンド、マイクロスフィア、リポソーム、抗体、増殖因子、ペプチド、ホルモン、およびリポタンパク質より成る群から選択されることを特徴とする請求項８６記載の方法。
【請求項９２】
前記分子キャリアーが、スカベンジャー受容体と結合することを特徴とする請求項８６記載の方法。
【請求項９３】
前記分子キャリアーが、マレイル化アルブミン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、酸化低密度リポタンパク質、アセチル化低密度リポタンパク質、酸化高密度リポタンパク質、マロンジアルデヒド処理タンパク質、ホルムアルデヒド処理アルブミン、糖化アルブミン、ポリイノシン酸、糖化リポタンパク質、デキストラン硫酸、陰イオン性リン脂質、フコイジン、カラギーナン、ポリビニル硫酸、ならびにＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１６ａ、ＣＤ３２またはＣＤ６８を認識するモノクローナル抗体より成る群から選択されることを特徴とする請求項９２記載の方法。
【請求項９４】
陰イオン性リン脂質がホスファチジルセリンであることを特徴とする請求項９３記載の方法。
【請求項９５】
前記分子キャリアーが、ベータ線放出組成物にＴリンパ球を標的にさせることを特徴とする請求項８６記載の方法。
【請求項９６】
前記分子キャリアーが、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ４４およびＣＤ７１、ならびにトランスフェリンを認識するモノクローナル抗体より成る群から選択されることを特徴とする請求項９５記載の方法。
【請求項９７】
前記分子キャリアーが、ベータ線放出組成物に不安定プラークの脂質を標的にさせることを特徴とする請求項８６記載の方法。
【請求項９８】
前記分子キャリアーが、リポソーム、クレモホールＥＬ、ＰＥＧ／溶媒混合物、ヨウ化ヒマシ油、ナノ粒子およびミセル調製物より成る群から選択される疎水性賦形剤を含むことを特徴とする請求項９７記載の方法。
【請求項９９】
リポソームがコレステロールを含むことを特徴とする請求項９８記載の方法。
【請求項１００】
リポソームがカルジオリピンを含むことを特徴とする請求項９９記載の方法。
【請求項１０１】
前記分子キャリアーが、ベータ線放出組成物にマクロファージを標的にさせることを特徴とする請求項８６記載の方法。
【請求項１０２】
前記分子キャリアーが、ベータ線放出組成物に、テネイシンＣ、組織因子、ＭＭＰ１の組織阻害因子、ＭＭＰ２の組織阻害因子、酸化ＬＤＬ受容体、ヘムオキシゲナーゼ−１、ヒト軟骨ｇｐ−３９、ＩＬ−６、ＩＬ−６受容体、ＩＬ−１０、ＩＬ−１０受容体、レクチン様酸化ＬＤＬ−受容体、単球炎症性タンパク質−１、単球炎症性タンパク質−１受容体、およびマクロファージケモアトラクタントプロテイン−１受容体より成る群から選択されるマクロファージ生体分子を標的にさせることを特徴とする請求項１０１記載の方法。
【請求項１０３】
前記分子キャリアーが、ベータ線放出組成物に、ＩＬ−１０、ＩＬ−１０受容体、単球炎症性タンパク質−１、単球炎症性タンパク質−１受容体、およびトランスフェリンより成る群から選択されるＴ細胞生体分子を標的にさせることを特徴とする請求項９５記載の方法。
【請求項１０４】
前記分子キャリアーが、ベータ線放出組成物に泡沫細胞を標的にさせることを特徴とする請求項８６記載の方法。
【請求項１０５】
前記分子キャリアーが、ベータ線放出組成物に、細胞外マトリックスを分解するプロテアーゼを標的にさせることを特徴とする請求項８６記載の方法。
【請求項１０６】
プロテアーゼがメタロプロテイナーゼであることを特徴とする請求項１０５記載の方法。
【請求項１０７】
前記分子キャリアーが、プロテアーゼ上のエピトープと結合するモノクローナル抗体であることを特徴とする請求項１０６記載の方法。
【請求項１０８】
ａ）ベータ線放出組成物を投与する；
ｂ）前記組成物を活動性のアテローム性プラークに局在化させる；
ｃ）前記ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する；および
ｄ）活動性のアテローム性プラークを同定し、そこに適当な治療を施す；工程を含む、被験者において活動性のアテローム性プラークを検出および治療する方法。
【請求項１０９】
ａ）ベータ線放出組成物を投与する；
ｂ）前記組成物を不安定プラークに局在化させる；
ｃ）前記ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する；および
ｄ）不安定プラークを同定し、そこに適当な治療を施す；工程を含む、被験者において不安定プラークを検出および治療する方法。
【請求項１１０】
ａ）検出可能量の少なくとも１種類のベータ線放出組成物を投与し、ベータ線放出組成物を活動性のアテローム性プラークに局在化させる；
ｂ）治療的に有効な量の少なくとも１種類の光増感剤組成物を投与し、光増感剤組成物を活動性のアテローム性プラークに局在化させる；
ｃ）前記ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する；
ｄ）活動性のアテローム性プラークを同定する；
ｅ）活動性のアテローム性プラーク部位で前記光増感剤組成物を光活性化して、光毒性種を産生させる；および
ｆ）活動性のアテローム性プラークを破裂に対して安定化させる；工程を含む、被験者において活動性のアテローム性プラークを検出および治療する方法。
【請求項１１１】
前記光増感剤がクロリンｅ６であることを特徴とする請求項１１０記載の方法。
【請求項１１２】
光が２０〜５００Ｊ／ｃｍの用量で投与されることを特徴とする請求項１１１記載の方法。
【請求項１１３】
光が５０〜３００Ｊ／ｃｍの用量で投与されることを特徴とする請求項１１１記載の方法。
【請求項１１４】
光が１００〜２００Ｊ／ｃｍの用量で投与されることを特徴とする請求項１１１記載の方法。
【請求項１１５】
ａ）検出可能量の少なくとも１種類のベータ線放出組成物を投与し、蛍光組成物を不安定プラークに局在化させる；
ｂ）治療的に有効な量の少なくとも１種類の光増感剤組成物を投与し、光増感剤組成物を不安定プラークに局在化させる；
ｃ）前記ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する；
ｄ）不安定プラークを同定する；
ｅ）不安定プラーク部位で前記光増感剤組成物を光活性化して、光毒性種を産生させる；および
ｆ）不安定プラークを破裂に対して安定化させる；工程を含む、被験者において不安定プラークを検出および治療する方法。
【請求項１１６】
前記光増感剤がクロリンｅ６であることを特徴とする請求項１１５記載の方法。
【請求項１１７】
光が２０〜５００Ｊ／ｃｍの用量で投与されることを特徴とする請求項１１６記載の方法。
【請求項１１８】
光が５０〜３００Ｊ／ｃｍの用量で投与されることを特徴とする請求項１１６記載の方法。
【請求項１１９】
光が１００〜２００Ｊ／ｃｍの用量で投与されることを特徴とする請求項１１６記載の方法。
【請求項１２０】
ａ）分子キャリアーと結合したベータ線放出物質を含むベータ線放出組成物を投与し、ベータ線放出組成物を活動性のアテローム性プラークに局在化させる；
ｂ）分子キャリアーと結合した光増感剤を含む光増感剤組成物を投与し、光増感剤組成物を活動性のアテローム性プラークに局在化させる；
ｃ）前記ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する；
ｄ）活動性のアテローム性プラークを同定する；
ｅ）活動性のアテローム性プラーク部位で前記光増感剤組成物を光活性化して、光毒性種を産生させる；および
ｆ）活動性のアテローム性プラークを破裂に対して安定化させる；工程を含む、被験者において活動性のアテローム性プラークを検出および治療する方法。
【請求項１２１】
ａ）分子キャリアーと結合したベータ線放出物質を含むベータ線放出組成物を投与し、ベータ線放出組成物を不安定プラークに局在化させる；
ｂ）分子キャリアーと結合した光増感剤を含む光増感剤組成物を投与し、光増感剤組成物を不安定プラークに局在化させる；
ｃ）前記ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する；
ｄ）不安定プラークを同定する；
ｅ）不安定プラーク部位で前記光増感剤組成物を光活性化して、光毒性種を産生させる；および
ｆ）不安定プラークを破裂に対して安定化させる；工程を含む、被験者において不安定プラークを検出および治療する方法。
【請求項１２２】
ａ）分子キャリアーと結合したベータ線放出物質および光増感剤を含む組成物を投与し、該組成物を活動性のアテローム性プラークに局在化させる；
ｂ）前記ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する；
ｃ）活動性のアテローム性プラークを同定する；
ｄ）活動性のアテローム性プラーク部位で前記光増感剤組成物を光活性化して、光毒性種を産生させる；および
ｅ）活動性のアテローム性プラークを破裂に対して安定化させる；工程を含む、被験者において活動性のアテローム性プラークを検出および治療する方法。
【請求項１２３】
ａ）分子キャリアーと結合したベータ線放出物質および光増感剤を含む組成物を投与し、該組成物を活動性の不安定プラークに局在化させる；
ｂ）前記ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する；
ｃ）不安定プラークを同定する；
ｄ）不安定プラーク部位で前記光増感剤組成物を光活性化して、光毒性種を産生させる；および
ｅ）不安定プラークを破裂に対して安定化させる；工程を含む、被験者において不安定プラークを検出および治療する方法。
【請求項１２４】
ａ）ベータ線放出組成物を投与する；
ｂ）前記組成物を活動性のアテローム性プラークに局在化させる；
ｃ）前記ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する；
ｄ）プラークを同定する一つ以上の別の手段を用いる；および
ｅ）活動性のアテローム性プラークを同定する；工程を含む、被験者において活動性のアテローム性プラークを検出する方法。
【請求項１２５】
ａ）ベータ線放出組成物を投与する；
ｂ）前記組成物を不安定プラークに局在化させる；
ｃ）前記ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する；
ｄ）プラークを同定する一つ以上の別の手段を用いる；および
ｅ）不安定プラークを同定する；工程を含む、被験者において不安定プラークを検出する方法。
【請求項１２６】
ａ）放射性標識組成物を投与する；
ｂ）前記組成物を不安定プラークに局在化させる；
ｃ）前記放射性標識組成物からのシグナルを検出する；
ｄ）不安定プラークを同定する；工程を含む、被験者において不安定プラークを検出する方法。
【請求項１２７】
ａ）検出可能量の少なくとも１種類の放射性標識組成物を投与し、放射性標識組成物を不安定プラークに局在化させる；
ｂ）前記放射性標識組成物からのシグナルを検出する；および
ｃ）不安定プラークを同定する；工程を含む、被験者において不安定プラークを検出する方法。
【請求項１２８】
ａ）検出可能量の少なくとも１種類の放射性標識組成物を投与し、放射性標識組成物を不安定プラークに局在化させる；
ｂ）治療的に有効な量の少なくとも１種類の光増感剤組成物を投与し、光増感剤組成物を不安定プラークに局在化させる；
ｃ）前記放射性標識組成物からのシグナルを検出する；および
ｄ）不安定プラークを同定する；
ｅ）不安定プラーク部位で前記光増感剤組成物を光活性化して、光毒性種を産生させる；
ｆ）不安定プラークを破裂に対して安定化させる；工程を含む、被験者において不安定プラークを検出および治療する方法。
【請求項１２９】
ａ）分子キャリアーと結合した放射性物質および光増感剤を含む組成物を投与する；
ｂ）前記組成物を不安定プラークに局在化させる；
ｃ）前記放射性標識組成物からのシグナルを検出する；
ｄ）不安定プラークを同定する；
ｅ）不安定プラーク部位で前記光増感剤組成物を光活性化して、光毒性種を産生させる；および
ｆ）不安定プラークを破裂に対して安定化させる；工程を含む、被験者において不安定プラークを検出および治療する方法。
【請求項１３０】
ａ）放射性標識組成物を投与し、放射性標識組成物を不安定プラークに局在化させる；
ｂ）まず放射性標識組成物からのシグナルを検出し、さらに不安定プラークを同定する；
ｃ）治療的に有効な量の少なくとも１種類の光増感剤組成物を投与し、光増感剤組成物を不安定プラークに局在化させる；
ｄ）次いで不安定プラーク部位で前記光増感剤組成物を光活性化して、光毒性種を産生させる；および
ｅ）不安定プラークを破裂に対して安定化させる；工程を含む、被験者において不安定プラークを検出および治療する方法。
【請求項１３１】
血管に挿入可能なプローブを含む、血管中でプラークを検出および治療するための装置であって、前記プローブが：
投与されかつプラークに局在化する放射性標識分子キャリアーを含む組成物からのベータ線を検出可能な検出器；および
所定の波長を有する光を放射可能な発光体；を含み、前記所定の波長を有する光が、投与されかつ標的プラークに局在化する光増感剤組成物に、標的プラークを安定化させる光毒性種を生じさせることを特徴とする装置。
【請求項１３２】
標的プラークが活動性のアテローム性プラークを含むことを特徴とする請求項１３１記載の装置。
【請求項１３３】
標的プラークが不安定プラークを含むことを特徴とする請求項１３１記載の装置。
【請求項１３４】
前記検出器が、ガンマ線を検出可能であることを特徴とする請求項１３１記載の装置。
【請求項１３５】
前記検出器が、ベータ線に対する第一の所定の感度およびガンマ線に対する第二の所定の感度を有することを特徴とする請求項１３４記載の装置。
【請求項１３６】
前記第一の所定の感度が、前記第二の所定の感度の約１００倍に等しいことを特徴とする請求項１３５記載の装置。
【請求項１３７】
投与されかつプラークに局在化する放射性標識分子キャリアーを含む組成物からのベータ線を検出する手段；および
所定の波長を有する光を放射する手段；を含む、血管中でプラークを検出および治療するための装置であって、
前記所定の波長を有する光が、投与されかつ標的プラークに局在化する光増感剤組成物に、標的プラークを安定化させる光毒性種を生じさせることを特徴とする装置。
【請求項１３８】
血管に挿入可能なプローブを含む、血管中でプラークを検出および治療するための装置であって、前記プローブが：
投与されプラークに局在化する放射性標識分子キャリアーを含む組成物からのベータ線を検出可能な検出器；および
治療用化合物をプラークへ送達可能な送達ユニット；を含み、前記治療用化合物が標的プラークを安定化させることを特徴とする装置。
【請求項１３９】
標的プラークが活動性のアテローム性プラークを含むことを特徴とする請求項１３８記載の装置。
【請求項１４０】
標的プラークが不安定プラークを含むことを特徴とする請求項１３８記載の装置。
【請求項１４１】
前記送達ユニットがステントを含むことを特徴とする請求項１３８記載の装置。
【請求項１４２】
前記送達ユニットが膨張式の容器を含み、該膨張式の容器を膨張させることによってステントが血管の壁に向かって動くことを特徴とする請求項１４１記載の装置。
【請求項１４３】
前記膨張式の容器が透明な無毒性の液を含むことを特徴とする請求項１４２記載の装置。
【請求項１４４】
外部ユニットをさらに含み、前記ステントが前記外部ユニット内に引き込み可能でありかつそこから伸長可能であることを特徴とする請求項１４１記載の装置。
【請求項１４５】
前記外部ユニットが前記治療用化合物を含み、前記ステントが前記外部ユニットへ引き込まれるたびに前記治療用化合物が前記ステントに塗布されることを特徴とする請求項１４４記載の装置。
【請求項１４６】
前記検出器がガンマ線を検出可能であることを特徴とする請求項１３８記載の装置。
【請求項１４７】
前記検出器が、ベータ線に対する第一の所定の感度およびガンマ線に対する第二の所定の感度を有することを特徴とする請求項１４６記載の装置。
【請求項１４８】
前記第一の所定の感度が、前記第二の所定の感度の約１００倍に等しいことを特徴とする請求項１４７記載の装置。
【請求項１４９】
投与されかつプラークに局在化する放射性標識分子キャリアーを含む組成物からのベータ線を検出する手段；および
治療用化合物をプラークへ送達する手段；を含み、該治療用化合物が標的プラークを安定化させることを特徴とする、血管中でプラークを検出および治療するための装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願および引用
本ＰＣＴ出願は、２００２年６月４日出願の特許文献１の一部継続出願である２００２年８月９日出願の特許文献２および特許文献３に基づく優先権を主張し、および２００２年３月１５日出願の特許文献４に基づく優先権を主張し、それらの内容は引用により明示的に本開示に含まれる。本出願はまた、特許文献２の分割出願として２００２年８月９日出願の特許文献５に基づく優先権を主張する。特許文献６として１９９９年３月１８日公開されたＰＣＴ／ＵＳ９８／１８６８５も引用されており、それらの内容は引用により明示的に本開示に含まれる。
【０００２】
本文中で引用された個々の出願および特許、および個々の出願および特許中で引用された文書または参考資料（個々の発行済み特許の出願中は；「出願の引用文献」を含む）、ならびにこれらの出願および特許のいずれかに相当するおよび／または優先権を主張するＰＣＴおよび外国出願または特許、および個々の出願の引用文献で引用または言及された各文書は、引用により明示的に本開示に含まれる。より一般的に、参考資料一覧中でまたは本文自体の中で、本文中に引用された文書または参考資料；および、個々のこれらの文書または参考資料（「文中の参考資料」）、および個々の文中の参考資料中で引用された文書または参考資料（任意の製造規格書、取扱説明書、などを含む）は、引用により明示的に本開示に含まれる。
【０００３】
連邦政府による資金提供を受けた研究開発に関する権利の記載
本研究は一部、米国国防総省からのグラント第１７−９９−２−９００１号の支援を受けた。米国政府は本発明に対して一定の権利を有する。
【０００４】
技術分野
本発明は、選択的に標的化した、蛍光標識、放射性標識、または蛍光および放射性標識組成物を用いた、活動性のアテローム性プラークおよび／または被膜の薄い線維性アテローム（「不安定プラーク」）の検出および治療のための装置に関する。本発明はさらに、必要に応じて、蛍光組成物を含む、選択的に標的化したベータ線放出組成物を用いた、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークの検出および治療のための方法および装置に関する。本発明の別の態様は、下記の開示に説明されるかまたはそれから明らかである（および本発明の範囲内にある）。
【背景技術】
【０００５】
心臓血管疾患は米国における罹患率および死亡率の主要な要因に留まっている；毎日約２６００名の死亡が心臓血管疾患の結果である。米国では、心発作の５０〜６０%が、記録された心臓血管疾患を有しない人に起こる。本疾患の病因の最も重要な因子は、冠状動脈におけるアテローム硬化性すなわち「アテローム性」プラークの形成である（非特許文献１）。アテローム性プラークとは、脂質のわずかな集積から、狭心症を引き起こす閉塞性冠状動脈病変まで、幅広い冠状動脈病変をいう。
【０００６】
アテローム性プラークは、活動性で破裂を起こす傾向があるかまたは、非活動性で比較的安定であってよい。冠動脈アテローム硬化性疾患の進行は５段階(phase)に分けることができる（非特許文献２）。第Ｉ段階は、３０歳未満の人の大多数に国籍にかかわらず存在する小さなプラークに代表され、通常はゆっくり進行する（すなわち、Ｉ型〜ＩＩＩ型病変）。第２段階は、必ずしも非常に狭窄性でない、脂質含量が高く破裂を起こす傾向があるプラーク（すなわち、ＩＶおよびＶａ型病変）に代表される。第３段階のプラークは、外形を変える傾向、および壁性血栓を形成する傾向を有する可能性があり、これらの過程は定義によって第３段階（すなわち、Ｉ型病変）を表し、狭窄のその後の進行がおそらく狭心症または虚血性突然死を結果として生じる。
【０００７】
第３段階および第４段階のプラークからの壁性および閉塞性血栓は、結合組織によって組織されているが、重度に狭窄性または閉塞性である第５段階のプラーク（すなわち、Ｖｂ型およびＶｃ型病変）に代表されるアテローム硬化性過程の進行に寄与する可能性がある。鬱血および／または内皮再生の現象による、第５段階の狭窄性プラークの重症度は、血栓および／または迅速な筋増殖反応によって複雑化する可能性があり、同じく第５段階の閉塞性プラークに繋がる。興味深いことは、冠動脈閉塞の約３分の２はこの後期狭窄性型のプラークの結果でありプラーク破裂とは無関係であることである。狭窄性がより低い、脂質に富むプラークの、閉塞およびそれに続く梗塞またはその他の急性冠動脈症候群に繋がる破裂とは異なり、後期狭窄性プラークに起因するこの閉塞の過程は無症状である傾向を有し、それは先の重度の狭窄および虚血が保護的な側副血行を促進するためである（非特許文献２；非特許文献３）。
【０００８】
一般に、アテローム性プラークは特徴的には、細胞外脂質の中心核を取り囲む線維性の被膜、および肥厚した血管内膜の中心部分に位置する堆積物を含み、「アテローム」として知られる。脂質核の内腔側では、線維性の被膜は主と結合組織、典型的にはコラーゲン、エラスチン、プロテオグリカンおよびその他の細胞外マトリックス材料でできた、密で線維性の細胞外マトリックスから成る。
【０００９】
活動性のアテローム性プラーク上にある線維性の被膜の端では、脂質核が肩の領域を構成し、マクロファージに富む。マクロファージは、酸化ＬＤＬに対して高いリガンド特異性を有するスカベンジャー受容体を通して連続的に酸化ＬＤＬを貪食する。連続的な貪食作用の結果としてアテローム硬化性プラークの証明である泡沫細胞が形成される（非特許文献４）。泡沫細胞は、コラーゲン線維およびプロテオグリカンへの細胞外脂質の結合と共に、脂質に富むアテロームの形成および増殖に重要な役割を果たす。
【００１０】
アテローム性プラークの組織病理学的検討は、線維性の被膜の厚み、アテロームの大きさ、異栄養性石灰化の程度、および主要な細胞型の相対的な寄与に相当な変動があることを明らかにしている（非特許文献５）。活動性のアテローム性プラーク中に存在する常在性の細胞は、単球／マクロファージおよびＴリンパ球といった炎症細胞のかなりの集団を含む。単球の動脈壁への移動、およびその後のマクロファージへの、および究極的には泡沫細胞への分化は、プラーク形成の初期の段階の一つのままである。一旦そこへ移動すると、これらの細胞は、アテローム性動脈硬化にさらに寄与する物質を分泌することに決定的な役割を果たす。
【００１１】
アテローム性プラークの発生および／または血栓形成、またはアテローム性プラークおよび／または血栓形成に伴う過程、および体内の炎症および感染を標的とするように設計した新しい治療が必要とされている。
【００１２】
冠動脈バイパス手術および経皮経管冠動脈形成術といった、アテローム性プラークの冠動脈血流に及ぼす閉塞性効果を改善するように設計された現在の治療は、急性冠動脈症候群の発生を常に防ぐことはない。さらに、動脈形成術を受けた患者の少なくとも５０%は、最初の処置から６ヶ月から１年後の間に再処置のために戻らなければならない。急性冠動脈症候群は、不安定狭心症、急性心筋梗塞、および急性心臓死を含む突発性冠動脈疾患の一群にわたる。急性冠動脈症候群の原因は、「不安定プラーク」として知られる特定の種類のアテローム性プラークの亀裂、侵食または破裂である。不安定プラークは、心発作の大多数、卒中、および突然死の症例の原因である。
【００１３】
検死の結果は、不安定プラーク破裂が、約５０%未満が狭窄した冠動脈の部分で生じることを示唆する。このように、血管形成術およびバイパス処置は、重度に競作した動脈に実施されるが、不安定プラークを除去したり急性冠動脈症候群の発生率を低下させたりすることはほとんど無い（非特許文献６）。脂質降下、血管形成術、およびバイパスといった、現在利用可能な治療手法を用いてさえ急性冠動脈症候群の受け入れがたい高発生率は残る（非特許文献７）。
【００１４】
不安定プラークは構造的におよび機能的に、安定したアテローム性プラークと識別可能である。たとえば、いくつかの組織学的特性が、不安定プラークを安定なアテローム性プラークと区別する。不安定プラークは、豊富な炎症細胞（たとえば、マクロファージおよび／またはＴ細胞）、大きな脂肪の蓄積、および薄い線維性の被膜によって特徴付けられる。
【００１５】
病理学的研究は、不安定プラークが他のアテローム性プラークよりも高い破裂傾向を有する理由についてさらなる理解を与えている。脂質に富む核の上にある線維性の被膜の厚みおよび全体性は、プラークの安定性の主要な因子である。破裂しやすい不安定プラークは、より薄い線維部分、炎症細胞数の増加（たとえば、マクロファージおよびＴ細胞）、および血管平滑筋細胞の相対的な少なさを有することによって特徴づけることができる。
【００１６】
血管平滑筋細胞は細胞外マトリックス産生の主要な起源であり、したがって、不安定プラークに平滑筋細胞が存在しないことは、その線維性の被膜の密度が欠けることに寄与する。
【００１７】
被膜内の線維性組織がプラークに構造的全体性を与える一方、アテロームの内面は柔らかく弱く、高度に血栓原性である。それは細胞外脂質に富み、実質的に生細胞を欠き、しかし脂質を持ったマクロファージに縁取られている（非特許文献８）。脂質核は、高度に血栓原性の組成物であって、既知の最も強力な凝血促進因子の一つである組織因子に富む。病変のマクロファージおよび泡沫細胞は、組織因子を含むさまざまな凝血促進性物質を産生する。線維性の被膜は、脂質核および、血栓を生成するように設計されたその強力な凝集系から循環を分離する唯一の障壁である。本質的に、破裂部位における凝血促進因子の血流中への速やかな放出は、閉塞性凝塊を形成し、急性冠動脈症候群を誘導する。したがって、線維性の被膜が薄いほど、血栓原性脂質核の不安定性は大きく、破裂および血栓形成への傾向は大きい。
【００１８】
いくつかの因子が線維性の被膜の弱化した状態に寄与するであろう。特に、細胞外マトリックス産生の阻害または細胞外マトリックス構成成分の分解は、線維性の被膜の構造的組成に悪影響を及ぼす。マクロファージおよびＴリンパ球は、プラーク破裂または表層侵食の部位で主要な細胞型として同定されており、これらの炎症細胞のそれぞれが阻害および／または分解型路に寄与する。コラーゲンおよびその他のマトリックス構成成分の加速された分解は、プラークの部位で分泌されるマトリックスメタロプロテイナーゼ（「ＭＭＰｓ」）といったマクロファージプロテアーゼによって行われる。ＭＭＰは、間質性コラゲナーゼ（たとえば、ＭＭＰ−Ｉ）、ゼラチナーゼ（たとえば、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９）、およびストロメリシン（たとえば、ＭＭＰ−３）を含む酵素の大きなファミリーを構成する。ストロメリシンはＭＭＰファミリーの他のメンバーを活性化することができ、多数のマトリックス成分間の分解を引き起こす。プラーク中のＴ細胞の存在は、線維性の被膜の弱化にさらに寄与するであろう。活性化Ｔ細胞は、コラーゲン合成の強力な阻害因子であるインターフェロンγを産生し分泌する。したがって、Ｔリンパ球は、マトリックス産生の負の調節を行うことができるインターフェロンγの潜在的に大きな起源を表す。プラーク破裂部位はさらに、同じく線維性の被膜を弱化する活動性の炎症反応を示す、主要組織適合遺伝子の発現（たとえば、炎症細胞および隣接する平滑筋細胞上のヒトリンパ球抗原−ＤＲ）によって特徴づけられる。
【００１９】
プラーク検出の現在の方法は、そのいくつかをここで説明するが、アテローム性プラークの生成および／または血栓形成、またはアテローム性プラークおよび／または血栓形成に伴う過程、および体内の炎症および感染を検出するのには不適当である。プラーク検出の現在の方法はまた、不安定プラークを検出するのにも不適当である。
【００２０】
プラーク 検出の一般的な方法は、血管造影および血管内視鏡法を含む。稀な状況下を除いて、血管造影は、プラーク構成成分の特徴についてほとんど情報を与えない。血管造影は、急性冠動脈症候群 症例の約３３%を占める、血行動態的に有意な病変 （ > ７０% 狭窄）を検出するのに十分な程度の感度を有するだけである。血管内視鏡法は、可視光の光ファイバー伝達に基づく技術で、プラークおよび血栓の内表面の視覚化のための、相対的に低い分解能を有する狭い視野を与える。血管内視鏡法による視覚化はプラークの表面に限られるため、活動的に形成されているアテローム性プラークおよび／または不安定プラークの検出における用途には不十分である。
【００２１】
いくつかの方法が、アテローム性プラークを検出する能力について検討されている。しかし、不安定プラークを検出するかまたはその形成を監視するのに十分な感度を有することはどれについても証明されていない。そのような一つの方法である、血管内超音波法（「ＩＶＵＳ」）は、カテーテル尖端に組み込まれた小型化結晶を用い、三次元再構成能力を有する、動脈壁のリアルタイムの、横断および縦断の、高分解能画像を与える。ＩＶＵＳは薄い被膜を検出および中間密度の領域（たとえば、平滑筋細胞および線維性組織に富む内膜）を明瞭な領域から識別することができるが、現在の技術はどの明瞭な領域が血栓、出血、またはその何らかの組み合わせでなく、コレステロール蓄積から成るかを決定しない。さらに、空間分解能（すなわち、約２ｃｍ）は、中等度に薄い被膜を高リスク被膜（すなわち、約２５〜７５μｍ）から識別せず、また大きな密なカルシウム蓄積が「影になる」音響エコーを生じ、そのため、より深いプラークは画像化されない。
【００２２】
血管内サーモグラフィーは、密なマクロファージ浸潤があるアテローム性プラークは炎症を起こしていないプラークより多くの熱を発するという仮定に基づく（非特許文献９）。プラークの温度は被膜の厚みと逆相関する。しかし、サーモグラフィーは、不安定化またはそうでない、破裂傾向を有する、侵食しているが炎症を生じていない病変については情報を与えない可能性がある。
【００２３】
光干渉断層法（「ＯＣＴ」）は、組織から反射された近赤外光の強度を測定する。それはＩＶＵＳの分解能より約１０から２０倍高い分解能の画像を与える。ＯＣＴは主にアテローム硬化性プラークの形態の評価に用いられる。しかし、長い画像取得時間、高いコスト、限られた透過力、および生理学的データの不足は、この手法を活動的に形成されているアテローム性プラークおよび／または不安定プラークの検出には好ましくないものとしている。
【００２４】
ラマンスペクトル法は、発明者に因んで命名された光スペクトル法の基本原理であるラマン効果を利用する。ラマン効果は、入射光が試料中の分子を励起しその後に試料が光を散乱させる際に生じる。この散乱光の大部分が入射光と同一波長である一方、一部は異なる波長で散乱する。この散乱光の波長シフトはラマンシフトと呼ばれる。波長シフトの量と強度は、分子の大きさ、形状、濃度に依存する。各分子はその固有の異なる「フィンガープリント」ラマンシフトを有する。ラマンスペクトル法は非常に高感度の技術であり、化合物の正確な測定を記録することができる。考えられるところでは、コラーゲンおよびエラスチンといったタンパク質に対する脂質の比は、多量の脂質の蓄積を有する不安定プラークを検出する役に立つ可能性がある。しかし、活動的に形成されているおよび／または不安定プラークが安定プラークからこの比だけに基づいて高い信頼性で識別される可能性は低い。
【００２５】
現在までに用いられたすべての既存の技術および方法は構造的であり、したがって活動的に形成されているかまたは不安定なプラークを検出できない可能性がある。当該分野で既知のすべての血管検出剤は、たとえばガンマ線カメラまたは陽電子カメラといった外部画像処理装置の使用を必要とする。そのような薬剤の有用性は限られており、周囲組織に由来するバックグラウンド活性のため、プラークまたは血栓を正確に検出しない。ＰＥＴおよびＳＰＥＣＴによる３Ｄ画像処理が現在用いられているが大きな周囲組織からの散乱に比べて小さい動脈の大きさが、これらの画像処理形式の有用性を同様に低下させる。
【００２６】
疾患組織の検出のための放射線を基礎とする方法が当該分野で知られている（特許文献７）。特許文献７の装置は不安定プラークを検出するようには設計されておらず、さらに、特許文献７は動脈内ベータ線プローブを開示しない。プラークの検出のためのベータ線感受性プローブの用途は総説がある（非特許文献１０；特許文献８、特許文献９、特許文献１０、特許文献１１、および特許文献１２）。特許文献９はプローブの本体内に前増幅器が組み込まれ、検出器およびシグナル処理のための外部電子装置に接続された、プローブの尖端に位置するイオン埋め込みシリコン放射線検出器に関する。特許文献９および特許文献１０は、がん性腫瘍といった疾患組織の検出のための放射性医薬品を提供し、その後放射性標識分子疾患組織の位置を特定するための１個以上のイオン埋め込みシリコン検出器を尖端に有するプローブを使用する；検出器は優先的にベータ線放出に反応性である。特許文献１１、特許文献１３、および特許文献１４は、シンチレーターおよびそれに接続した光増幅器チューブを組み込んだプローブについての他の設計に関する。しかし、これらの技術は最初にここで説明した通り選択的標的化の精度を欠く
光力学療法（「ＰＤＴ」）は、光増感剤として知られる光活性化可能な化合物を使用して、細胞を選択的に標的化し死滅させる。治療は、光増感剤分子を励起一重項状態に励起するための適当な波長の可視光を供給することを含む。この励起状態は次いで系間交差でわずかにエネルギーの低い三重項状態となることができ、これは次いでさらにＩ型およびＩＩ型光反応として知られる経路の一方または両方によって反応することができる（非特許文献１１）。Ｉ型経路はラジカルイオンを生じる光増感剤三重項からの電子伝達反応を含み、ラジカルイオンは次いで酸素と反応して、スーパーオキシド、ヒドロキシルおよび脂質由来ラジカルといった細胞毒性分子種を生じることができる。ＩＩ型経路は光増感剤三重項から基底状態分子状酸素（三重項）へのエネルギー伝達を含み励起状態一重項酸素を生じ、これは次いでタンパク質、核酸、脂質といった多数の生物分子を酸化することができ、細胞毒性に繋がる。
【００２７】
光力学療法（ＰＤＴ）は近年、米国で食道がんの治療用に、および他の国でいくつかの他の型のがん用に、規制当局の許可を得ている（非特許文献１２）。一部の光増感剤は優先的に悪性組織に蓄積し（非特許文献１３）、二重選択性の利点を生み出す：光増感剤は標的組織について理想的に特異的であるだけでなく、光もまた正確に標的組織に供給され、光増感剤の毒性効果が放出される範囲をそれによって制限する。
【００２８】
光力学療法は二つの大まかな適用について心臓血管医学で用いられている；アテローム性動脈硬化の治療（「光血管形成術」）および血管処置後の内膜過形成が原因の再狭窄の阻害（非特許文献１４，特許文献１５、特許文献１６、特許文献１７、特許文献１８、特許文献１９、および特許文献２０）。ヘマトポルフィリン誘導体（「ＨｐＤ」）は、アテローム性プラーク内の実証可能な選択的蓄積を示すいくつかの光増感剤のうち最初のものであった（非特許文献１５）。その後の研究は、ウサギおよびミニブタにおいて、アテローム性プラークに対するポルフィリン誘導体の親和性を明らかに示した。動脈の内膜表層内に光増感剤の最大の蓄積が存在し、それは動脈培地と比較して減少している。ＨｐＤ、およびＨｐＤのより精製された誘導体であるフォトフリンの両方もまた、ヒトアテローム性プラークによるｉｎ ｖｉｔｒｏの優先的な取り込みを示す。しかし、一般的に、アテローム性プラークについて、およびより具体的には不安定プラークについて、大部分の光増感剤の選択性の相対的な欠如が存在する。さらに、アテローム硬化性プラークの光力学的破壊のための当該分野で既知の方法は一般的に、ＰＤＴの後の炎症反応の結果として失敗する。
【特許文献１】米国特許出願公開第１０／１６３，７４４号明細書
【特許文献２】米国特許仮出願第１０／２１５，９５８号明細書
【特許文献３】米国特許仮出願第１０／２１６，０２６号明細書
【特許文献４】米国特許仮出願第６０／３６５，６７３号明細書
【特許文献５】米国特許出願公開第１０／２１５，６００号明細書
【特許文献６】国際公開第９９／１２５７９号パンフレット
【特許文献７】米国特許第４，９９５，３９６号明細書
【特許文献８】米国特許第５，００８，５４６号明細書
【特許文献９】米国特許第５，７４４，８０５号明細書
【特許文献１０】米国特許第５，９３２，８７９号明細書
【特許文献１１】米国特許第６，０７６，００９号明細書
【特許文献１２】米国特許第６，２９５，６８０号明細書
【特許文献１３】米国特許第５，５６８，５３２号明細書
【特許文献１４】米国特許第５，８６４，１４１号明細書
【特許文献１５】米国特許第５，１１６，８６４号明細書
【特許文献１６】米国特許第５，２９８，０１８号明細書
【特許文献１７】米国特許第５，３０８，８６１号明細書
【特許文献１８】米国特許第５，４２２，３６２号明細書
【特許文献１９】米国特許第５，８３４，５０３号明細書
【特許文献２０】米国特許第６，０５４，４４９号明細書
【非特許文献１】Ｆａｒｂ ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９２； １７０１−１７０９
【非特許文献２】Ｆｕｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３２６； ２４２−２５０
【非特許文献３】Ｃｈｅｓｅｂｒｏ ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ８６ （ｓｕｐｐｌ． １１１）
【非特許文献４】Ｐａｒｔｈａｓａｒａｔｈｙ ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｍｅｄ ４３； ２１９−２２５
【非特許文献５】ｖａｎ ｄｅｒ Ｗａｌ ｅｔ ａｌ． （１９９４） Ｃｏｒｏｎ Ａｒｔｅｒｙ Ｄｉｓ ５； ４６３−４６９
【非特許文献６】Ｐｌｕｔｚｋｙ （１９９９） Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ ８４； １５Ｊ−２０Ｊ
【非特許文献７】Ｓａｃｋｓ ｅｔ ａｌ． （２０００） Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １０２； １８９３−１９００
【非特許文献８】ｖａｎ ｄｅｒ Ｗａｌ ｅｔ ａｌ． （１９９９） Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｒｅｓ ４１； ３３４−３４４
【非特許文献９】Ｃａｓｓｃｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ． （１９９６） Ｌａｎｃｅｔ． ３４７；１４４７−１４５１
【非特許文献１０】Ｄａｇｈｉｇｈｉａｎ ｅｔ ａｌ． Ｍｅｄ Ｐｈｙｓ． ２１； １５３−７ （１９９４）
【非特許文献１１】Ｏｃｈｓｎｅｒ （１９９７） Ｊ Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ Ｂ ３９； １−１８
【非特許文献１２】Ｄｏｕｇｈｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ． （１９９８） Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ ９０； ８８９−９０５
【非特許文献１３】Ｈａｍｂｌｉｎ & Ｎｅｗｍａｎ （１９９４） Ｊ Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ Ｂ ２３； ３−８
【非特許文献１４】Ｒｏｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ． （２０００） Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １０２； ５９１−５９６
【非特許文献１５】Ｌｉｔｖａｃｋ ｅｔ ａｌ． （１９８５） Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ ５６； ６６７−６７１
【非特許文献１６】Ｒａｂｂａｎｉ & Ｔｏｐｏｌ （１９９９） Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｒｅｓ ４１； ４０２−４１７
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２９】
近年、不安定プラーク安定化に繋がる処置戦略が研究の活発な分野となっている（非特許文献１６）。活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークを、炎症反応を誘導することなく検出、安定化、および減少または消失させるよう設計された治療法は非常に望ましい。 
【課題を解決するための手段】
【００３０】
本発明は、好ましくはベータ線放出放射性標識、および必要に応じて、光力学的組成物を含む放射性標識組成物を、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークの炎症性成分（たとえば、炎症細胞、プロテアーゼ、および脂質）に対して選択的に標的化する方法、およびその検出および治療方法のための装置を提供する。
【００３１】
一態様では、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークの検出は、好ましくはプラークに局在化された放射性標識組成物からの、さらにより好ましくはベータ線放出組成物からの、核シグナルを検出する特別に設計された血管内装置を用いて実施することができる。
【００３２】
血管内のベータ線放出物質は、本発明のベータ線検出装置によって、アテローム性プラークおよび／または不安定プラーク内で検出され得ることが特定された。活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークに標的化したベータ線放出組成物は、感度の上昇およびプラークの範囲を正確に測定するのに必要な距離の短縮によって、その検出を改善する。本発明のベータ線放出を基礎とする方法および装置は、プラーク範囲の正確な描写を提供し、それによって治療法を改善し早期検出を助ける。
【００３３】
さらに別の一態様では、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークの表面に励起光を提供し、その中の蛍光組成物を光活性化し、そして分析装置に送られる発された蛍光を受け取る、特別に設計された血管内装置を用いて、検出および／または治療法を実施することができる。必要に応じて、同じ装置を用いて、好ましくはベータ線放出組成物由来の蛍光または核シグナルが最初に検出されたときに、同様の位置にある光増感剤組成物を活性化する治療用の光を運ぶことができる。
【００３４】
加えて、本発明は活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークの同定のための方法を提供する。本発明の方法は、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークから安定なアテローム性病変を有利に識別することができる。そのようなプラークが本発明の方法によっていったん識別されれば、プラークを破裂に対して安定化させる一方、別の方法を用いて、プラーク内またはその周囲の細胞の特定の集団 （たとえば、マクロファージおよびＴ細胞といった炎症細胞）または構成成分 （たとえば、脂質およびプロテアーゼ）を減少させ、したがって、プラークの全体の大きさおよび重症度を軽減させることができる。
【００３５】
本発明の一態様では、光力学的および／または放射性標識組成物を、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークの内部またはその周囲の炎症性成分（たとえば、マクロファージ、Ｔ細胞、脂質、およびプロテアーゼ）に選択的に標的化させることができる。一実施形態では、光力学的組成物はマクロファージを標的とし、プロテアーゼの分泌を減少または消失させる。プロテアーゼ活性を低下または消失させることは、線維性の被膜の安定性を大きく高める。さらに別の一実施形態では、光力学的組成物はＴ細胞を標的とし、細胞外マトリックス産生を低下させるかまたは阻害する、インターフェロンγといった因子の分泌を減少または消失させる。ＰＤＴの注意深く調節した適用が、標的細胞におけるアポトーシス細胞死を誘導するために用いられる。有利なことに、光線量測定および光力学的化合物の量を含むＰＤＴのパラメータは、標的細胞のアポトーシスだけを誘導し壊死は誘導しないように調節することができる。壊死でなくアポトーシスを誘導することは、ＰＤＴ後の炎症反応を低下または消失させ、全体の治療効果を高める。
【００３６】
本発明のさらに別の一態様では、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークへのＰＤＴの適用は、細胞外マトリックスタンパク質（たとえば、コラーゲン）の架橋を誘導し、線維性被膜を破裂に対してさらに安定化させる。有利なことに、光力学的化合物の細胞内位置を含むＰＤＴのパラメータは、細胞表面上の光力学的化合物のクラスター化を最適化するように調節することができる。これらの条件下では、ＰＤＴは、細胞壊死でなく細胞表面架橋を誘導し、炎症反応を低下または消失させる。 
本発明の他の態様は下記の開示に説明されるかまたはそれから明らかである（そして本発明の範囲内にある）。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３７】
不安定プラークを検出および治療するための方法 
一態様では、本発明は、炎症性成分を選択的に標的とする組成物を検出および／または活性化することによって、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークを検出および／または治療する装置に関する。
【００３８】
「活動性のアテローム性プラーク」は、凝集した血小板および単球を蓄積する、５０%より大きい狭窄が達成されるプラークを含む。好ましくは、５０%狭窄は増殖の開始の１ヶ月以内に達成され、より好ましくは５０%狭窄は増殖の開始の６ヶ月以内に達成され、さらにより好ましくは５０%狭窄は増殖の開始の１年以内に達成される。好ましい一実施形態では、活動性のアテローム性プラークの増殖の開始は、たとえば、血管形成術のような外科的処置といった、アテローム性動脈硬化を治療する処置の後に生じる。
【００３９】
「非活動性のまたは安定したアテローム性プラーク」は、好ましくは厚さ２００マイクロメートルより厚い線維性の被膜、小さな脂質の蓄積またはそれは存在せず、もしあれば脂質をただゆっくり蓄積し、５０%狭窄に満たないものを含む。好ましくは、５０%未満の狭窄は１ヶ月維持され、より好ましくは５０%未満の狭窄は６ヶ月維持され、さらにより好ましくは５０%未満の狭窄は１年維持される。
【００４０】
「不安定プラーク」は、多量の炎症細胞、大きな脂質の蓄積、および薄い線維性の被膜を含む。好ましくは、不安定プラークは厚さ約１５０マイクロメートル未満の線維性の被膜を含む。より好ましくは、不安定プラークは厚さ約１００マイクロメートル未満の線維性の被膜を含む（たとえば、厚さ約６０ないし１００マイクロメートル）。好ましくは、不安定プラークは、約１０%より多くのマクロファージおよび／または単球の含量を有する。より好ましくは、不安定プラークは約２５%より多くのマクロファージおよび／または単球の含量を有する。好ましくは、不安定プラークは約１０%より多くの脂質含量を有する。より好ましくは、不安定プラークは約２５%より多くの脂質含量を有する。
【００４１】
「炎症性成分」は、炎症細胞、脂質、凝血促進因子（たとえば、組織因子）および、細胞外マトリックス産生の阻害または細胞外マトリックス構成成分の分解を促進する酵素またはその他の物質（たとえば、プロテアーゼ）を含む。「炎症細胞」は、平滑筋細胞、白血球、リンパ球（Ｂ−リンパ球およびＴ−リンパ球）、単球、マクロファージ、泡沫細胞、肥満細胞、内皮細胞、血小板、赤血球、および多型核球（たとえば、顆粒球および好中球）を含む。
【００４２】
ここで用いられる、「血栓」の語は、血管内で破裂したプラークから形成された血の塊であって、その発生場所に付着したままであるものを称し、「狭窄」は血管直径の収縮または減少を称する。
【００４３】
一態様では、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークの検出は、好ましくはプラークに局在化された放射性標識組成物からの、さらにより好ましくはベータ線放出組成物からの、核シグナルを検出する特別に設計された血管内装置を用いて実施することができる。
【００４４】
ここで用いられる、「ベータ線放出組成物」は、電子線または陽電子線（「ベータ線」）を放出する放射性核種または常磁性造影剤といったベータ線放出物質を含み、分子キャリアーと結合している。キャリアーとの結合は、直接的であっても間接的であってもよい（たとえば、ビオチン／アビジンまたは一次／二次抗体結合を介して）。好ましくは、ベータ線放出物質はＩ１３１、１８Ｆ−フルオロデオキシグルコース（「ＦＤＧ」）、電子放出性であるＲｅ１８６、または陽電子放出性であるＲｅ１８８である。本発明のベータ線検出装置は、有利なことにベータ線をガンマ線から約１００；１の比（すなわち、ベータ線対ガンマ線が１００；１）、さらにより好ましくは１０００；１の比（すなわち、ベータ線対ガンマ線が１０００；１）で識別する。ベータ線放出組成物の検出は、画像処理または当該分野で既知の標準的手段を含んでいてよい。
【００４５】
「分子キャリアー」は、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークを構成する一種類以上の構成成分に対する標的特異性を有する生体分子を称する。
【００４６】
さらに別の一態様では、励起光を活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークに供給し、その中の蛍光組成物を光活性化し、分析装置へ伝達される放出された蛍光を受け取る、特別に設計された血管内装置を用いて、検出および／または治療を実施することができる。必要に応じて、同じ装置を用いて、好ましくはベータ線放出組成物からの蛍光または核シグナルが最初に検出されたときに、同様の位置にある光増感剤組成物を活性化する治療目的の光を供給することができる。
【００４７】
ここで用いられる、「光増感剤」は、光活性化の際に生体分子に対して光毒性または他の生物学的効果を生じる化合物またはその生物学的前駆体である。「光毒性種」は、光毒性効果を、細胞，細胞構成成分、または生体分子に対して生じるのに十分な量または種類の反応種である。好ましくは、反応種は酸素である。ここで用いられる、「光増感剤組成物」は、分子キャリアーと結合した光増感剤を含む。キャリアーとの結合は直接的であっても間接的であってもよい（たとえば、ビオチン／アビジンまたは一次／二次抗体結合を介して）。
【００４８】
ここで用いられる、「蛍光組成物」は、分子キャリアーと結合した光増感剤、蛍光色素、または光活性色素を含む。キャリアーとの結合は、直接的であっても間接的であってもよい（たとえば、ビオチン／アビジンまたは一次／二次抗体結合を介して）。ここで用いられる、「蛍光色素」の語は、光を照射する場合に蛍光性であるが、しかし光毒性であるかまたは他の方法で生体分子と反応することができる反応種を産生しない色素を称する。光増感剤は特、定の波長および強さの光を照射すると蛍光を発し、さらに、同一または異なる波長および強さの光の下で、光毒性である反応種を産生する。ここで用いられる「光活性色素」の語は、照らされた光増感剤は蛍光種を産生するが、必ずしも光毒性である量で反応種を産生するわけではない（すなわち、光毒性種を産生するわけではない）ことを意味する。与える光の波長および強さに依存して、光増感剤は活性化して蛍光を発することができ、したがって、光活性色素として作用することができるが、光毒性種を産生しない。光の波長および強さは、必要な場合に光毒性効果をもたらすように、当業者に既知の方法によって調節することができる。 
さらに別の一態様では、本発明はさらに、活動性のアテローム性プラークを、前記プラークを構成する炎症性成分をベータ線放出組成物の標的とすることによって検出および／または同定する方法を含む。
【００４９】
一実施形態では、対象中の活動性のアテローム性プラークを検出する方法は下記の工程を含む；
ａ）ベータ線放出組成物を投与する；
ｂ）当該組成物を活動性のアテローム性プラークに局在化させる；
ｃ）ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する；および
ｄ）活動性のアテローム性プラークを同定する。
【００５０】
さらに別の一実施形態では、対象中の不安定プラークを検出する方法は下記の工程を含む；
ａ）ベータ線放出組成物を投与する；
ｂ）当該組成物を不安定プラークに局在化させる；
ｃ）ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する；および
ｄ）不安定プラークを同定する。
【００５１】
さらに別の一態様では、本発明の方法は、検出および治療の組み合わせを含む。
【００５２】
一実施形態では、対象中の活動性のアテローム性プラークを検出および治療する方法は下記の工程を含む；
ａ）ベータ線放出組成物を投与する；
ｂ）当該組成物を活動性のアテローム性プラークに局在化させる；
ｃ）ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する；および
ｄ）活動性のアテローム性プラークを同定し、そこに適当な治療を施す。 
さらに別の一実施形態では、対象中の不安定プラークを検出および治療する方法は下記の工程を含む；
ａ）ベータ線放出組成物を投与する；
ｂ）当該組成物を不安定プラークに局在化させる；
ｃ）ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する；および
ｄ）不安定プラークを同定し、そこに適当な治療を施す。
【００５３】
適当な治療法は、たとえば、スタチン（たとえば、アトルバスタチン、またはプラバスタチン）による治療、コレステロール降下薬、アスピリン、抗炎症剤、ビスホスホネート、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ＡＣＥ阻害剤（たとえば、ラミプリル）、生体分子（たとえば、トロンビン活性化可能な線溶阻害剤、Ａｎｇｐｔｌ３、またはＡｐｏ−Ａ１ミメティックペプチド）、血栓減少剤（たとえば、ＴＰＡ）、または国際公開第ＷＯ０１／０４８１９号および米国特許第６、１８３、７５２号に記載されたものといった、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークの治療のための当該分野で既知のすべてを含む。
【００５４】
さらに別の一態様では、本発明の方法は検出および治療の組み合わせを含み、治療は、たとえば、光力学療法を含んでいてよい。
【００５５】
したがって、一実施形態では、対象中の活動性のアテローム性プラークを検出および治療する方法は下記の工程を含む；
ａ）少なくとも１種類のベータ線放出組成物の検出可能量を投与し、ベータ線放出組成物を活動性のアテローム性プラークに局在化させる；
ｂ）少なくとも１種類の光増感剤組成物の治療的に有効な量を投与し、光増感剤組成物を活動性のアテローム性プラークに局在化させる；
ｃ）ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する；
ｄ）活動性のアテローム性プラークを同定する；
ｅ）活動性のアテローム性プラークの部位で光増感剤組成物を光活性化して、光毒性種を産生させる；および
ｆ）活動性のアテローム性プラークを破裂に対して安定化させる。
【００５６】
さらに別の一実施形態では、対象中の不安定プラークを検出および治療する方法は下記の工程を含む；
ａ）少なくとも１種類のベータ線放出組成物の検出可能量を投与し、蛍光組成物を不安定プラークに局在化させる；
ｂ）少なくとも１種類の光増感剤組成物の治療的に有効な量を投与し、光増感剤組成物を不安定プラークに局在化させる；
ｃ）ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する；
ｄ）不安定プラークを同定する；
ｅ）不安定プラークの部位で光増感剤組成物を光活性化して、光毒性種を産生させる；および
ｆ）不安定プラークを破裂に対して安定化させる。
【００５７】
さらに別の一実施形態では、対象中の活動性のアテローム性プラークを検出および治療する方法は下記の工程を含む；
ａ）分子キャリアーと結合したベータ線放出物質を含むベータ線放出組成物を投与し、ベータ線放出組成物を活動性のアテローム性プラークに局在化させる；
ｂ）分子キャリアーと結合した光増感剤を含む光増感剤組成物を投与し、光増感剤組成物を活動性のアテローム性プラークに局在化させる；
ｃ）ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する；
ｄ）活動性のアテローム性プラークを同定する；
ｅ）活動性のアテローム性プラークの部位で光増感剤組成物を光活性化して、光毒性種を産生させる；および
ｆ）活動性のアテローム性プラークを破裂に対して安定化させる。
【００５８】
さらに別の一実施形態では、対象中の不安定プラークを検出および治療する方法は下記の工程を含む；
ａ）分子キャリアーと結合したベータ線放出物質を含むベータ線放出組成物を投与し、ベータ線放出組成物を不安定プラークに局在化させる；
ｂ）分子キャリアーと結合した光増感剤を含む光増感剤組成物を投与し、光増感剤組成物を不安定プラークに局在化させる；
ｃ）ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する；
ｄ）不安定プラークを同定する；
ｅ）不安定プラークの部位で光増感剤組成物を光活性化して、光毒性種を産生させる；および
ｆ）不安定プラークを破裂に対して安定化させる。
【００５９】
さらに別の一実施形態では、対象中の活動性のアテローム性プラークを検出および治療する方法は下記の工程を含む；
ａ）分子キャリアーと結合したベータ線放出物質および光増感剤を含む組成物を投与し、組成物を活動性のアテローム性プラークに局在化させる；
ｂ）ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する；
ｃ）活動性のアテローム性プラークを同定する；
ｄ）活動性のアテローム性プラークの部位で光増感剤組成物を光活性化し、光毒性種を産生させる；および
ｅ）活動性のアテローム性プラークを破裂に対して安定化させる。
【００６０】
さらに別の一実施形態では、対象中の不安定プラークを検出および治療する方法は下記の工程を含む；
ａ）分子キャリアーと結合したベータ線放出物質および光増感剤を含む組成物を投与し、組成物を活動性の不安定プラークに局在化させる；
ｂ）ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する；
ｃ）不安定プラークを同定する；
ｄ）不安定プラークの部位で光増感剤組成物を光活性化して、光毒性種を産生させる；および
ｅ）不安定プラークを破裂に対して安定化させる。
【００６１】
さらに別の一実施形態では、本発明はさらに、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークを、前記プラークを構成する炎症性成分をベータ線放出組成物の標的とし、および、熱検出、ＯＣＴ、ＭＲＩ、または当該分野で既知の他の検出様式を含むがこれらに限定されない前記プラークを同定する一つ以上の別の手段を用いることによって同定する方法を含む。
【００６２】
したがって、一実施形態では、対象中の活動性のアテローム性プラークを検出する方法は下記の工程を含む；
ａ）ベータ線放出組成物を投与する；
ｂ）当該組成物を活動性のアテローム性プラークに局在化させる；
ｃ）ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する；
ｄ）前記プラークを同定する一つ以上の別の手段を用いる；および
ｅ）活動性のアテローム性プラークを同定する。
【００６３】
さらに別の一実施形態では、対象中の不安定プラークを検出する方法は下記の工程を含む；
ａ）ベータ線放出組成物を投与する；
ｂ）当該組成物を不安定プラークに局在化させる；
ｃ）ベータ線放出組成物からのシグナルを検出する
ｄ）前記プラークを同定する一つ以上の別の手段を用いる；および
ｅ）不安定プラークを同定する。
【００６４】
放射性標識組成物 
本発明の放射性標識組成物は、必要に応じて分子キャリアーと結合した、放射性核種または常磁性造影剤、好ましくはベータ線放出物質を含むがそれらに限定されない当該分野で既知の任意の放射性物質を含んでいてよい。放射性標識分子における用途に適当な放射性核種の例は、１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、９９ｍＴｃ、１８Ｆ、６８Ｇａ、６７Ｇａ、７２Ａｓ、８９Ｚｒ、６２Ｃｕ、１１１Ｃｕ、２０３Ｉｎ、１９８Ｐｂ、１９８Ｈｇ、９７Ｒｕ、１１Ｃ、Ｒｅ１８８、および２０１ＴＩを含むがこれらに限定されない。適当な常磁性造影剤は、ガドリニウム、コバルト、ニッケル、マンガン、および鉄を含むがこれらに限定されない。好ましい放射性核種または常磁性造影剤は本発明のガンマ線検出装置によって検出される。放射性標識組成物の検出は画像処理または当該分野で既知の標準的手段を含んでいてよい。
【００６５】
好ましくは、放射性標識組成物は、放射性核種が１８Ｆ−フルオロデオキシグルコース（「ＦＤＧ」）であるベータ線放出組成物である。その他のベータ線放出組成物は、Ｉ１３１、Ｒｅ１８６、およびＲｅ１８８を含むがこれらに限定されない。
【００６６】
光増感剤組成物
本発明の光増感剤は、フォトフリン．ＲＴＭ、合成ジポルフィリンおよびジクロリン、金属置換基を含むかまたは含まないフタロシアニン、さまざまな置換基を含むかまたは含まないクロロアルミニウムフタロシアニン、クロロアルミニウムスルホン酸フタロシアニン、Ｏ−置換テトラフェニルポルフィリン、３，１−メソテトラキス（ｏ−プロピオンアミドフェニル）ポルフィリン、ベルジン、プルプリン、オクタエチルプルプリンのスズおよび亜鉛誘導体、エチオプルプリン、ヒドロポルフィリン、テトラ（ヒドロキシフェニル）ポルフィリン系列のバクテリオクロリン、クロリン、クロリンｅ６、クロリンｅ６のモノ−ｌ−アスパルチル誘導体、クロリンｅ６のジ−ｌ−アスパルチル誘導体、スズ（ＩＶ）クロリンｅ６、メタ−テトラヒドロキシフェニルクロリン、ベンゾポルフィリン誘導体、ベンゾポルフィリン一酸誘導体、ベンゾポルフィリンのテトラシアノエチレン付加物、ベンゾポルフィリンのジメチルアセチレンジカルボン酸付加物、Ｄｉｅｌｓ−Ａｄｌｅｒ付加物、ベンゾポルフィリンの一酸環"ａ"誘導体、スルホン酸アルミニウムＰＣ、スルホン酸ＡｌＰｃ、ジスルホン酸化、テトラスルホン酸化誘導体、スルホン酸化アルミニウムナフタロシアニン、金属置換基を含むかまたは含まないおよびさまざまな置換基を含むかまたは含まないナフタロシアニン、亜鉛ナフタロシアニン、アントラセンジオン、アントラピラゾール、アミノアントラキノン、フェノキサジン色素、フェノチアジン誘導体、カルコゲナピリリウム色素、陽イオン性セレナおよびテルラピリリウム誘導体、環置換陽イオン性ＰＣ、フェオホルバイド誘導体、フェオホルバイドアルファおよびエーテルまたはエステル誘導体、ピロフェオホルバイドエーテルまたはエステル誘導体、天然に存在するポルフィリン、ヘマトポルフィリン、ヘマトポルフィリン誘導体、ヘマトポルフィリンエステルまたはエーテル、プロトポルフィリン、ＡＬＡ−誘導プロトポルフィリンＩＸ、内因性代謝前駆体、５−アミノレブリン酸ベンゾナフトポルフィラジン、陽イオン性イミニウム塩、テトラサイクリン、ルテチウムテキサフィリン、スズ−エチオ−プルプリン、ポルフィセン、ベンゾフェノチアジニウム、ペンタフィリン、テキサフィリンおよびヘキサフィリン、５−アミノレブリン酸、ヒペリシン、シュードヒペリシン、ヒポクレリン、テルチオフェン、アザポルフィリン、アザクロリン、ローズベンガル、フロキシンＢ、エリスロシン、フルオレセインのヨウ化または臭化誘導体、メロシアニン、ナイルブルー誘導体、フェオフィチンおよびクロロフィル誘導体、バクテリオクロリンおよびバクテリオクロロフィル誘導体、ポルフォシアニン、ベンゾクロリンおよびオキソベンゾクロリン、サフィリン、オキササフィリン、セルコスポリンおよび関連する心筋代謝産物およびその組み合わせ、およびその陽イオン性および／または親油性処方を含むがそれらに限定されない当該分野で既知の任意のものであってよい。当該分野で既知のいくつかの光増感剤はＦＤＡ承認を受けており市販されている。
【００６７】
当該分野で既知のいくつかの光増感剤はＦＤＡ承認を受けており市販されている。好ましい一実施形態では、光増感剤はＢＰＤ−ＭＡといったベンゾポルフィリン誘導体（「ＢＰＤ」）であり、ＢＰＤベルテポルフィンまたは「ＢＰＤ」（ＱＬＴから入手可能）の商品名でも知られている。米国特許第４，８８３，７９０号はＢＰＤ組成物を記載する。ＢＰＤは第二世代化合物であり、フォトフリン（登録商標）の長期にわたる皮膚光毒性を欠く（Ｌｅｖｙ （１９９４） Ｓｅｍｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２１； ４−１０）。ＢＰＤは徹底的に特徴づけられており（Ｒｉｃｈｔｅｒ ｅｔ ａｌ． ， （１９８７） ＪＮＣＩ ７９；１３２７−１３３１）、（Ａｖｅｌｉｎｅ ｅｔ ａｌ． （１９９４） Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ ５９； ３２８−３５）、ＰＤＴのための非常に強力な光増感剤であることが見出されている。ＢＰＤはアテローム性プラーク内に蓄積する傾向がある。本発明の方法に記載の不安定プラークを構成する炎症細胞をＢＰＤの標的にすることは光活性化の特異性を増大させる。
【００６８】
テキサフィリンとして知られる光増感剤もまた、アテローム硬化性 プラーク内に蓄積する傾向がある。本発明の方法に記載の不安定プラークを構成する炎症細胞をテキサフィリンの標的にすることは光活性化の特異性を増大させる。好ましい一実施形態では、光増感剤はアントリン（Ｐｈａｒｍａｃｙｃｌｉｃｓから入手可能、Ｈａｙｓｅ ｅｔ ａｌ． ， （２００１） Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ． Ｒｅｓ． ， ２； ４４９−５５）の名で市販されているモテキサフィンルテチウムといったテキサフィリン光増感剤である。
【００６９】
好ましい一実施形態では、光増感剤はプルリティン（Ｍｉｒａｖａｎｔから入手可能）の名で市販されているスズエチルエチオプルプリンである。 
蛍光組成物
本発明の蛍光組成物は、光増感剤、蛍光色素、および光活性色素を含む、当該分野で既知の任意のものであってよい。
【００７０】
不安定プラークの検出に用いる光増感剤は、前記の通り、当該分野で既知の任意のものであってよい。たとえば、ヘマトポルフィリン誘導体はヒトアテローム硬化性プラークの発生を調査するための蛍光プローブとして用いられている（Ｓｐｏｋｏｊｎｙ （１９８６） Ｊ． Ａｍ． Ｃｏｌｌ． Ｃａｒｄｉｏｌ．８ ； １３８７−１３９２）。ヘマトポルフィリン誘導体は、不安定プラーク、特に広範囲の血管新生を有するプラーク（すなわち、新しい栄養血管に漏れがあり、分子キャリアーによって与えられる選択的標的化に加えて、それがプラークにおけるヘマトポルフィリンの蓄積を促進する）の検出に用いることができる。
【００７１】
本発明の蛍光色素は、６−カルボキシ−４'，５'−ジクロロ−２'，７'−ジメトキシフルオレセインスクシンイミジルエステル；５−（および−６）−カルボキシエオシン；５−カルボキシフルオレセイン；６−カルボキシフルオレセイン；５−（および−６）−カルボキシフルオレセイン；５−カルボキシフルオレセイン−ビス−（５−カルボキシメトキシ−２−ニトロベンジル）エーテル，−アラニン−カルボキサミド、またはスクシンイミジルエステル；５−カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル；６−カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル；５−（および−６）−カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル；５−（４，６−ジクロロトリアジニル）アミノフルオレセイン；２'，７'−ジフルオロフルオレセイン；エオシン−５−イソチオシアネート；エリスロシン−５−イソチオシアネート；６−（フルオレセイン−５−カルボキサミド）ヘキサン酸またはスクシンイミジルエステル；６−（フルオレセイン−５−（および−６）−カルボキサミド）ヘキサン酸またはスクシンイミジルエステル；フルオレセイン−５−ＥＸスクシンイミジルエステル；フルオレセイン−５−イソチオシアネート；フルオレセイン−６−イソチオシアネート；オレゴングリーン４８８カルボン酸，またはスクシンイミジルエステル；オレゴングリーン（登録商標）４８８イソチオシアネート；オレゴングリーン４８８−Ｘスクシンイミジルエステル；オレゴングリーン５００カルボン酸；オレゴングリーン５００カルボン酸，スクシンイミジルエステルまたはトリエチルアンモニウム塩；オレゴングリーン５１４カルボン酸；オレゴングリーンＤ５１４カルボン酸またはスクシンイミジルエステル；ローダミングリーン（登録商標）カルボン酸，スクシンイミジルエステルまたは塩酸；ローダミングリーンカルボン酸，トリフルオロアセトアミドまたはスクシンイミジルエステル；ローダミングリーン−Ｘスクシンイミジルエステルまたは塩酸；ロードールグリーン（登録商標）カルボン酸，Ｎ，Ｏ−ビス−（トリフルオロアセチル）またはスクシンイミジルエステル；ビス−（４−カルボキシピペリジニル）スルホンローダミンまたはｄｉ（スクシンイミジルエステル）；５−（および−６）−カルボキシナフトフルオレセイン，５−（および−６）−カルボキシナフトフルオレセインスクシンイミジルエステル；５−カルボキシローダミン６Ｇ塩酸；６−カルボキシローダミン６Ｇ塩酸，５−カルボキシローダミン６Ｇスクシンイミジルエステル；６−カルボキシローダミン６Ｇスクシンイミジルエステル；５−（および−６）−カルボキシローダミン６Ｇスクシンイミジルエステル；５−カルボキシ−２'，４'，５'，７'−テトラブロモスルホンフルオレセインスクシンイミジルエステルまたはビス−（ジイソプロピルエチルアンモニウム）塩；５−カルボキシテトラメチルローダミン；６−カルボキシテトラメチルローダミン；５−（および−６）−カルボキシテトラメチルローダミン；５−カルボキシテトラメチルローダミンスクシンイミジルエステル；６−カルボキシテトラメチルローダミンスクシンイミジルエステル；５−（および−６）−カルボキシテトラメチルローダミンスクシンイ��ジルエステル；６−カルボキシ−Ｘ−ローダミン；５−カルボキシ−Ｘ−ローダミンスクシンイミジルエステル；６−カルボキシ−Ｘ−ローダミンスクシンイミジルエステル；５−（および−６）−カルボキシ−Ｘ−ローダミンスクシンイミジルエステル；５−カルボキシ−Ｘ−ローダミントリエチルアンモニウム塩；リサミン（登録商標）ローダミンＢスルホニルクロリド；マラカイトグリーンイソチオシアネート；ＮＡＮＯＧＯＬＤ（登録商標）モノ（スルホスクシンイミジルエステル）；ＱＳＹ（登録商標）２１カルボン酸またはスクシンイミジルエステル；ＱＳＹＸ７カルボン酸またはスクシンイミジルエステル；ローダミンレッド（登録商標）−Ｘスクシンイミジルエステル；６−（テトラメチルローダミン−５−（および−６）−カルボキサミド）ヘキサン酸スクシンイミジルエステル；テトラメチルローダミン−５−イソチオシアネート；テトラメチルローダミン−６−イソチオシアネート；テトラメチルローダミン−５−（および−６）−イソチオシアネート；テキサスレッド（登録商標）スルホニル；テキサスレッドスルホニルクロリド；テキサスレッド−ＸＳＴＰエステルまたはナトリウム塩；テキサスレッド−Ｘスクシンイミジルエステル；テキサスレッド−Ｘスクシンイミジルエステル；およびＸ−ローダミン−５−（および−６）−イソチオシアネートを含むがこれらに限定されない、当該分野で既知の任意のものであってよい。
【００７２】
本発明の蛍光色素は、たとえば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓから市販されているｂｏｄｉｐｙ（登録商標）色素であってよく、下記を含むがこれらに限定されない；ＢＯＤＩＰＹ ＦＬ；ＢＯＤＩＰＹ ＴＭＲ ＳＴＰエステル； ＢＯＤＩＰＹ ＴＲ−Ｘ ＳＴＰエステル；ＢＯＤＩＰＹ ６３０／６５０−Ｘ ＳＴＰエステル；ＢＯＤＩＰＹ ６５０／６６５−Ｘ ＳＴＰエステル；６−ジブロモ−４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−プロピオン酸スクシンイミジルエステル；４，４−ジフルオロ−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３，５−ｄｉプロピオン酸；４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−ペンタン酸；４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−ペンタン酸スクシンイミジルエステル；４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−プロピオン酸；４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−プロピオン酸スクシンイミジルエステル；４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−プロピオン酸スルホスクシンイミジルエステルまたはナトリウム塩；６−（（４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−プロピオニル）アミノ）ヘキサン酸；６−（（４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−プロピオニル）アミノ）ヘキサン酸またはスクシンイミジルエステル；Ｎ−（４，４−ジフルオロ−５，７−ジメチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−プロピオニル）システイン酸、スクシンイミジルエステルまたはトリエチルアンモニウム塩；６−４，４−ジフルオロ−１，３−ジメチル−５−（４−メトキシフェニル）−４−ボラ−３ａ，４ａ４，４−ジフルオロ−５，７−ｄｉフェニル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−プロピオン酸；４，４−ジフルオロ−５，７−ｄｉフェニル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−プロピオン酸スクシンイミジルエステル；４，４−ジフルオロ−５−フェニル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−プロピオン酸スクシンイミジルエステル；６−（（４，４−ジフルオロ−５−フェニル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−プロピオニル）アミノ）ヘキサン酸またはスクシンイミジルエステル；４，４−ジフルオロ−５−（４−フェニル−１，３−ブタジエニル）−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−プロピオン酸スクシンイミジルエステル；４，４−ジフルオロ−５−（２−ピロリル）−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−プロピオン酸スクシンイミジルエステル；６−（（（４，４−ジフルオロ−５−（２−ピロリル）−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−イル）スチリルオキシ）アセチル）アミノヘキサン酸またはスクシンイミジルエステル；４，４−ジフルオ���−５−スチリル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−プロピオン酸；４，４−ジフルオロ−５−スチリル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−プロピオン酸スクシンイミジルエステル；４，４−ジフルオロ−１，３，５，７−テトラメチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−８−プロピオン酸；４，４−ジフルオロ−１，３，５，７−テトラメチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−８−プロピオン酸スクシンイミジルエステル；４，４−ジフルオロ−５−（２−チエニル）−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−プロピオン酸スクシンイミジルエステル；６−（（（４−（４，４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−８−プロピオン酸；４，４−ジフルオロ−１，３，５，７−テトラメチル−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−８−プロピオン酸スクシンイミジルエステル；４，４−ジフルオロ−５−（２−チエニル）−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザ−ｓ−インダセン−３−プロピオン酸スクシンイミジルエステル；６−（（（４−（４，４−ジフルオロ−５−（２−チエニル）−４−ボラ−３ａ，４ａ−ジアザｓ−インダセン−３−イル）フェノキシ）アセチル）−アミノ）ヘキサン酸またはスクシンイミジルエステル；および６−（（（４，４−ジフルオロ−５−（２−チエニル）−４−ボラ−３ａ，４ａ−ａｚａ−ｓ−インダセン−３−イル）スチリルオキシ）アセチル）アミノヘキサン酸またはスクシンイミジルエステル。
【００７３】
本発明の蛍光色素は、たとえば、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｂｅｓから市販されているａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ（登録商標）色素であってよく、下記を含むがこれらに限定されない；ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ３５０カルボン酸；ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４３０カルボン酸；ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８カルボン酸；ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５３２カルボン酸；ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５４６カルボン酸；ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５５５カルボン酸；ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５６８カルボン酸；ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５９４カルボン酸；ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６３３カルボン酸；ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７カルボン酸；ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６６０カルボン酸；およびＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６８０カルボン酸。
【００７４】
本発明の蛍光色素は、たとえば、Ａｍｅｒｓｈａｍ−ＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈから市販されているｃｙ色素であってよく、下記を含むがこれらに限定されない；Ｃｙ３ＮＨＳエステル；Ｃｙ５ＮＨＳエステル；Ｃｙ５．５ＮＨＳエステル，およびＣｙ７ＮＨＳエステル。
【００７５】
本発明の光活性色素は、照射された場合に蛍光を発するが必ずしも反応種の光毒性である量を産生しない、当該分野で既知の任意の光増感剤であってよい。用いる光の波長および強さに依存して、光増感剤を活性化して蛍光を発することができ、したがって光活性色素として作用することができるが、一部の場合では光の波長および強さを適当に調整して光毒性効果を導くようにしなければ光毒性効果を生じない。
【００７６】
標的化組成物
本発明の標的組織に対する選択性は、活動性のアテローム性および／または不安定プラークを構成する１種類以上の構成成分に対する標的特異性を有する分子キャリアーとの共有結合体または非共有複合体を用いることによって達成される。したがって、本発明の標的化組成物は、分子キャリアーと「結合」した、一種類以上の光増感剤、放射性標識、およびその組み合わせを含む（Ｈａｓａｎ， Ｔ． （１９９２） Ｉｎ； Ｂ． Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ ａｎｄ Ｔ． Ｄｏｕｇｈｅｒｔｙ （ｅｄｓ．）， Ｐｈｏｔｏｄｙｍａｎｉｃ Ｔｈｅｒａｐｙ； Ｂａｓｉｃ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ． ｐｐ． １８７−２００； Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ）。分子キャリアーの使用は、有利なことに、たとえば、組織標的化効果を与えるのに光増感剤の分子的構造に依存することなく、光学的および光物理的性質に基づいて光増感剤を選択することを可能にする。
【００７７】
一般的に、分子標的化は分子構造の２つの面に基づく。第一に、大きさ、電荷、疎水性、および生分解性といった分子キャリアーの性質は、プラークにおける蓄積または保持を増大させるために操作することができ、そして、第二に、分子キャリアーは抗原、受容体、または炎症細胞上に存在するその他の細胞型特異的構造を認識するように設計することができる。好ましい一実施形態では、分子キャリアーは下記より成る群から選択される：受容体リガンドを含む血清タンパク質（Ｈａｍｂｌｉｎ ｅｔ ａｌ． （１９９４） Ｊ． Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ． Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ． ２６； １４７−１５７； Ｈａｍｂｌｉｎ ａｎｄ Ｎｅｗｍａｎ （１９９４） Ｊ． Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ． Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ． ２６； ４５− ５６）、マイクロスフィア （Ｂａｃｈｏｒ ｅｔ ａｌ． （１９９１） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ． Ｓ． Ａ． ８８； １５８０−１５８４）、リポソーム（Ｐｏｌｏ ｅｔ ａｌ． （１９９６） Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ． １０９； ５７−６１）、ポリマー（Ｈａｍｂｌｉｎ ｅｔ ａｌ． （１９９９） Ｂｒ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ ８１； ２６１−２６８）、モノクローナル抗体（Ｈａｍｂｌｉｎ ｅｔ ａｌ． （２０００） Ｂｒ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ ８３；１５４４−１５５１）、増殖因子（Ｇｉｊｓｅｎｓ ａｎｄ Ｄｅ Ｗｉｔｔｅ （１９９８） Ｉｎｔ． Ｊ． Ｏｎｃｏｌ． １３；１１７１− １１７７）、 ペプチド （Ｋｒｉｎｉｃｋ， （１９９４） Ｊ． Ｂｉｏｍａｔｅｒ． Ｓｃｉ． ポリｍ． Ｅｄ．５ ； ３０３−３２４）、ホルモン（Ａｋｈｌｙｎｉｎａ ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５５； １０１４−１０１９）、およびリポタンパク質（Ｓｃｈｍｉｄｔ−Ｅｒｆｕｒｔｈ ｅｔ ａｌ． （１９９７） Ｂｒ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ ７５；５４−６１）。 
好ましい一実施形態では、本発明の標的化組成物は、「スカベンジャー受容体」と結合するリガンドを含む分子キャリアーと結合している。スカベンジャー受容体は、天然に存在するおよび合成の両方の幅広いリガンドを認識する、マクロファージ、単球、内皮細胞、および平滑筋細胞の表面上に発現された膜タンパク質である（Ｆｒｅｅｍａｎ ｅｔ ａｌ． （１９９７） Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｈｅｍａｔｏｌ． ４； ４１−４７）。現在、スカベンジャー受容体ファミリーの３つのクラスに属する６種類のメンバーが存在する（たとえば、クラスＡ、Ｂ、またはＣ）。スカベンジャー受容体との最初の結合後、リガンドは速やかに取り込まれ、プロテアーゼおよびその他のリソソーム酵素による分解のためにリソソームに送られる。これらの受容体によって認識される構造の広く多様な幅のため、これらは「分子ハエ捕り紙(molecular flypaper)」と称されるようになった（Ｋｒｉｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｃｉ． １７； １４１−１４６，１９９２）。リガンドは、ある種の共通の立体的特性を持つ、強い陰電荷を有するすべての分子である（Ｈａｂｅｒｌａｎｄ ａｎｄ Ｆｏｇｅｌｍａｎ （１９８５） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ． Ｓ． Ａ． ８２； ２６９３−２６９７； Ｔａｋａｔａ （１９８９） Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ． ９８４； ２７３−２８０）。組成物の、Ｊ７７４およびその他のマクロファージ様細胞に対するｉｎ ｖｉｔｒｏでの特異的標的化は、マレイル化アルブミン、ダウノルビシン、およびドキソルビシンとの結合体を用いて達成されている（Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ ｅｔ ａｌ （１９９２） Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ． ２８４； ２３７−２４１； Ｂａｓｕ ｅｔ ａｌ． （１９９４） ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ． ３４２； ２４９−２５４； Ｈａｍｂｌｉｎ ｅｔ ａｌ． （２０００） Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ． ４； ５３３−５４０）。 
当該分野で既知である多数のスカベンジャー受容体リガンド（ポリエチルグリコール化ありおよび無しのいずれか）は、特に限定はされないが、下記のものを含み、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークに本発明の標的化組成物を局在化させるのに用いることができる：マレイル化アルブミン(maleylated albumin)、酸化低密度リポタンパク質、アセチル化低密度リポタンパク質、酸化高密度リポタンパク質、マロンジアルデヒド処理タンパク質、リポテイコ酸、ホルムアルデヒド処理アルブミン、糖化アルブミン、ポリイノシン酸、糖化リポタンパク質、デキストラン硫酸、陰イオン性リン脂質（ホスファチジルセリン）、フコイジン、カラギーナン、ポリビニル硫酸、ならびにＣＤ１１ｂまたはｃ、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１６ａ、ＣＤ３２またはＣＤ６８を認識するモノクローナル抗体。
【００７８】
好ましい一実施形態では、本発明の標的化組成物は、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークのマクロファージおよび／または単球を標的にする分子キャリアーと結合している。これらの分子キャリアーは、たとえば、テネイシンＣ、組織因子、ＭＭＰ１および２の組織阻害因子、酸化ＬＤＬ受容体（当該分野では別名ＣＤ３６）、ヘムオキシゲナーゼ−１、ヒト軟骨ｇｐ−３９、ＩＬ−６、ＩＬ−６受容体、ＩＬ−１０、ＩＬ−１０受容体、レクチン様酸化ＬＤＬ−受容体（「ＬＯＸ−１」）、細菌走化性ペプチド受容体作用因子、好ましくはＦｏｒ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ（「Ｆ−ＭＬＫ」）、マクロファージケモアトラクタントプロテイン−１(macrophage chemoattractant protein-1)受容体（「ＣＣＲ−９」）および単球炎症性タンパク質−１(monocyte inflammatory protein-1)およびその受容体（「ＣＣＲ−５」を含む）を標的とすることができる。そのような分子キャリアーは、たとえば、これらの生体分子に対する抗体、これらの生体分子と結合するリガンドまたはそのアナログであってよい。
【００７９】
好ましい一実施形態では、本発明の標的化組成物は、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークのＴ細胞を標的にする分子キャリアーと結合している。これらの分子キャリアーは、たとえば、ＩＬ−１０、ＩＬ−１０受容体、単球炎症性タンパク質−１およびその受容体、およびトランスフェリンを標的とすることができる。そのような分子キャリアーは、たとえば、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ４４、ＣＤ７１またはトランスフェリンを認識するモノクローナル抗体を含むがそれらに限定されない、これらの生体分子に対する抗体、これらの生体分子と結合するリガンドまたはそのアナログであってよい。
【００８０】
好ましい一実施形態では、本発明の標的化組成物は、特に限定はされないが、疎水性光増感剤、または例えばリポソーム（陽性、中性、または陰性電荷を有し、必要に応じて、コレステロールまたはカルジオリピンを含む）、クレモホールＥＬ、ＰＥＧ／溶媒混合物、ヨウ化ヒマシ油、およびさまざまなナノ粒子およびミセル調製物といった疎水性賦形剤中に含まれて送達される光増感剤を含む、アテロームの脂質プールを標的とする分子キャリアーを介して送達される。
【００８１】
好ましい一実施形態では、本発明の標的化組成物は、特に限定はされないが、プロテアーゼおよびプロテイナーゼ基質に対するモノクローナル抗体等の、細胞外マトリックスを分解するプロテアーゼ（たとえば、メタロプロテイナーゼ）を標的とする分子キャリアーと結合している。
【００８２】
好ましい一実施形態では、本発明の標的化組成物は、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークの内皮細胞を標的とする分子キャリアーと結合している。これらの分子キャリアーは、たとえば、ＩＣＡＭ（当該分野では別名ＣＤ５４）およびＶＣＡＭ（当該分野では別名ＣＤ１０６）、アンギオテンシンＩＩ、アンギオテンシン変換酵素（当該分野では別名ＣＤ１４３）、内皮由来リパーゼ、組織因子、ヘムオキシゲナーゼ−１、ＬＯＸ−１、低密度リポタンパク質（「ＬＤＬ」）、高密度リポタンパク質、（「ＨＤＬ」）、Ｐ−セレクチン、Ｌ−セレクチン、およびＥ−セレクチンを含むがこれらに限定されない内皮接着分子を標的とすることができる。そのような分子キャリアーは、たとえば、これらの生体分子に対する抗体、これらの生体分子と結合するリガンドまたはそのアナログであってよい。本発明の標的化組成物は、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークの内皮下のマトリックスを標的とする分子キャリアーと結合していてよい。
【００８３】
好ましい一実施形態では、本発明の標的化組成物は、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークの好中球を標的とする分子キャリアーと結合している。これらの分子キャリアーは、たとえば、ミエロペルオキシダーゼを標的とすることができる。そのような分子キャリアーは、たとえば、これらの生体分子に対する抗体、これらの生体分子と結合するリガンドまたはそのアナログであってよい。
【００８４】
好ましい一実施形態では、本発明の標的化組成物は、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークのＢ細胞を標的とする分子キャリアーと結合している。これらの分子キャリアーは、たとえば、ＩＬ−６、ＩＬ−６受容体、ＩＬ−１０、およびＩＬ−１０受容体を標的とすることができる。そのような分子キャリアーは、たとえば、これらの生体分子に対する抗体、これらの生体分子と結合するリガンドまたはそのアナログであってよい。
【００８５】
好ましい一実施形態では、本発明の標的化組成物は、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークの平滑筋細胞を標的とする分子キャリアーと結合している。これらの分子キャリアーは、たとえば、ＬＯＸ−１を標的とすることができる。そのような分子キャリアーは、たとえば、これらの生体分子に対する抗体、これらの生体分子と結合するリガンドまたはそのアナログであってよい。
【００８６】
好ましい一実施形態では、本発明の標的化組成物は、標的と直接的にまたは間接的と結合する分子キャリアーと結合している。たとえば、間接的標的化は、最初にビオチニル化分子キャリアーを標的に局在化し、その後、光活性色素，蛍光色素，光増感剤、または放射性物質を含むストレプトアビジン結合組成物を投与することによって達成することができる。
【００８７】
安定なアテローム性プラークから識別可能な、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークの特性は、有利なことに、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークを、安定なアテローム性プラークから、本発明の方法に従って識別する。
【００８８】
「活動性のアテローム性プラーク」は、血小板および単球を蓄積するプラークを構成し、５０%より大の狭窄が達成される。好ましくは、５０%狭窄は増殖の開始の１ヶ月以内に達成され、より好ましくは５０%狭窄は増殖の開始の６ヶ月以内に達成され、さらにより好ましくは５０%狭窄は増殖の開始の１年以内に達成される。好ましい一実施形態では、活動性のアテローム性プラークの増殖の開始は、たとえば、血管形成術のような外科的手順の後に生じる。 
「非活動性のまたは安定したアテローム性プラーク」は、好ましくは厚さ２００マイクロメートルより厚い線維性の被膜、小さな脂質の蓄積またはそれは存在せず、もしあれば脂質をただゆっくり蓄積し、５０%狭窄に満たないものを含む。好ましくは、５０%未満の狭窄は１ヶ月維持され、より好ましくは５０%未満の狭窄は６ヶ月維持され、さらにより好ましくは５０%未満の狭窄は１年維持される。
【００８９】
不安定プラークは、多量の炎症細胞、大きな脂質の蓄積、および薄い線維性の被膜を含む。好ましくは、不安定プラークは厚さ約１５０マイクロメートル未満の線維性の被膜を含む。より好ましくは、不安定プラークは厚さ約１００マイクロメートル未満の線維性の被膜を含む（たとえば、厚さ約６０ないし１００マイクロメートル）。好ましくは、不安定プラークは、約１０%より多くのマクロファージおよび／または単球の含量を有する。より好ましくは、不安定プラークは約２５%より多くのマクロファージおよび／または単球の含量を有する。好ましくは、不安定プラークは約１０%より多くの脂質の含量を有する。より好ましくは、不安定プラークは約２５%より多くの脂質の含量を有する。
【００９０】
したがって、標的化組成物を、活性化したマクロファージまたは細胞外マトリックスを分解するプロテアーゼに、分子キャリアーを介して局在化させることは、たとえば、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークに選択的優位性を与え、組成物の取り込みは安定なアテローム性プラークよりもはるかに大きい。さらに、標的化組成物が蛍光 組成物を含む場合、不安定プラークの光検出または光活性化は、安定なアテローム性プラークに対して微弱なまたは無視し得る影響を有する波長および強さで実施することができる。このように、本発明の方法および装置は、有利なことに、単なる一般的な安定な アテローム性プラークでなく、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークの検出および治療に適している。
【００９１】
本発明の実施は、別に記載の無い限り、当該分野の技術に含まれる、分子生物学（組み換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学の、従来の技術を用いる。そのような技術は、"Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ； Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ"， ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ （Ｓａｍｂｒｏｏｋ， １９８９）；"Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（Ｇａｉｔ，１９８４） ；「Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ」（Ｆｒｅｓｈｎｅｙ， １９８７）；"Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ""Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（Ｗｅｉｒ， １９９６）；"Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ」（Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｃａｌｏｓ， １９８７）；"Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」（Ａｕｓｕｂｅｌ， １９８７）；"ＰＣＲ ； Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ"， （Ｍｕｌｌｉｓ， １９９４）；"Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（Ｃｏｌｉｇａｎ， １９９１）といった文献に十分に説明されている。これらの技術は本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの製造に適用可能であり、また、したがって、本発明の実施において考慮される。特定の実施形態について特に有用な技術は下記の項目で考察する。
【００９２】
活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークの検出に有用である本発明の組成物は、放射性標識分子キャリアーを含んでいてよい。たとえば、本発明の光増感剤組成物は、光増感剤と結合した放射性標識分子キャリアーを含んでいてよい。いくつかの放射性標識分子キャリアーが、アテローム血栓物質と結合およびそのシンチグラフィー検出を可能にする能力について試験されている。これらは、酸化ＬＤＬ、フィブリノーゲン、自家血小板、フィブリン断片Ｅ１、プラスミノーゲン活性化因子に対する標識抗体、および修飾ＬＤＬに対する９９ｍＴｃ−結合抗体を含む（Ｔｓｉｍｉｋａｓ ｅｔ ａｌ． （１９９９） Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｃａｒｄｉｏｌ． ６； ４１−５３）。 
高度に特異的で高感度の標識が放射性核種によって与えられ、その後、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）または単光子放射コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）画像法を用いて検出することができる。代わりに、本発明の装置はベータ波の血管内検出に用いることができる。
【００９３】
そのような放射性標識は、イオン結合またはキャリアーの原子との直接共有結合によって、分子キャリアーに結合させることができる。放射性標識は、キレート構造を介して非共有的に、あるいは共有結合によって、キャリアーと結合させることができる。「キレート構造」は、標識と標的化部分の両方と結合する、任意の分子または分子の複合体を称する。当該分野では多数のそのようなキレート構造が知られている。キレート構造は下記を含むがそれらに限定されない：−Ｎ２Ｓ２、−ＮＳ３、−Ｎ４、ＤＯＴＡ誘導体[１，４，７，１０−テトラキス（カルボキシメチル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン]、イソニトリル、ヒドラジン、ＨＹＮＩＣ（ヒドラジノニコチン酸）、２−メチルチオールニコチン酸、リン、またはカルボン酸塩を含む基；またはマンニトール、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩、酒石酸塩、などといった補助分子を介する。一部の場合には、キレート化は別々のキレート構造を含めることなく達成することができ、それは放射性核種が分子キャリアー中の原子を直接、たとえばさまざまな部分の酸素原子をキレート化するからである。 
キレート構造、補助分子、または放射性核種は、心臓血管組織中の標的部位との標的化分子の相互作用に干渉しない、分子キャリアーの任意の位置の空間的近傍に位置する。したがって、キレート構造、補助分子、または放射性核種は、分子キャリアーの任意の部分と共有結合または非共有的と結合する（分子キャリアーが受容体である場合は受容体結合部分を除き、分子キャリアーが抗体である場合はエピトープ結合領域を除く）。 
放射性核種は、特定の放射性核種のリガンドへのキレート化、会合、または付着を生じさせるかまたは最適化する既知の手順を用いて、分子キャリアーの空間的近傍に位置させることができる。たとえば、１２３Ｉが放射性核種である場合、造影剤はクロラミンＴを用いた直接放射性ヨウ素化、ハロゲンまたは有機金属基の放射性ヨウ素化置換、などといった既知の放射性ヨウ素化手順に従って標識することができる。放射性核種が９９ｍＴｃである場合、造影剤は９９ｍＴｃをリガンド分子に付加するために適当である任意の方法を用いて標識することができる。好ましくは、放射性核種が９９ｍＴｃである場合、マンニトール、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩、または酒石酸塩といった補助分子が標識反応混合物に、キレート構造と共にまたはそれ無しで含まれる。より好ましくは、９９ｍＴｃＯ４を、スズを用いてマンニトールおよび標的化分子の存在下で還元することによって、９９ｍＴｃはキャリアーの空間的近傍の位置に置かれる。酒石酸スズ、または亜ジチオン酸ナトリウムといった非スズ還元剤を含むその他の還元剤もまた、本発明の放射性標識組成物を調製するのに用いることができる。
【００９４】
一般に、標識方法は放射性核種および標識するキャリアーの選択によって異なる。標識方法は、たとえば、Ｐｅｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ． （１９８６） Ｌａｎｃｅｔ ２； ９４６−９４９； Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ ｅｔ ａｌ． （１９８４） Ｓｅｍｉｎ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ １４； ６８−８２； Ｓｉｎｎ ｅｔ ａｌ． （１９８４） Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ． １３； １８０； ＭｃＡｆｅｅ ｅｔ ａｌ． （１９７６） Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ． １７； ４８０−４８７； Ｗｅｌｃｈ ｅｔ ａｌ． ， （１９７７） Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ． １８； ５５８−５６２； Ｔｈａｋｕｒｅｔ ｅｔ ａｌ． （１９８４） Ｓｅｍｉｎ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ． １４； １０７； Ｄａｎｐｕｒｅ ｅｔ ａｌ． （１９８１） Ｂｒ． Ｊ． Ｒａｄｉｏｌ． ５４； ５９７−６０１； Ｄａｎｐｕｒｅ ｅｔ ａｌ． （１９８２） Ｂｒ． Ｊ． Ｒａｄｉｏｌ． ５５； ２４７−２４９； Ｐｅｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ． （１９８２） Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ． ２４； ３９−４４； Ｇｕｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ． （１９８３） Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ １４９； ５６３−５６６、およびＴｈａｋｕｒ ｅｔ ａｌ． （１９８５） Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ． ２６； ５１８−５２３に記載されている。 
標識反応の完了後、必要に応じて、ＳｅｐＰａｃｋ（商標）または高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）といった１種類以上のクロマトグラフィー工程を用いて、反応混合物を精製できる。精製工程を実施する場合は、任意の適当なＨＰＬＣ系を用いることができ、ＨＰＬＣ工程から得られる心臓血管造影剤の収率は、当該分野で既知である通り、ＨＰＬＣ系のパラメータを変化させることによって最適化することができる。任意のＨＰＬＣパラメータを、本発明の心臓血管造影剤の収率を最適化するために変化させることができる。たとえば、ｐＨを変化させることができ、たとえば上昇させて、放射性標識キャリアーに相当するピークの溶出時間を低下させることができる。
【００９５】
ここで用いられる「カップリング剤」の語は、組成物 （たとえば、光活性 色素、蛍光 色素、光増感剤 、または放射性 物質）を分子キャリアーと、または、「骨格(backbone)」または「架橋(bridge)」部分と結合させることができる試薬を称する。生理学的条件下で投与および治療に必要な時間にわたって安定であるように構成成分を結合することができる任意の結合が適当であるが、しかし共有結合が好ましい。２つの構成成分の間の結合は、たとえば、光増感剤が直接に分子キャリアーと結合している場合のように直接的であってよく、または、たとえば、光増感剤がたとえば骨格と結合した媒介物と結合し、その媒介物が分子キャリアーと結合している場合のように間接的であってよい。カップリング剤は、温度、ｐＨ、塩、溶媒系、およびその他の、光増感剤、骨格（あれば）、および分子キャリアーの化学的安定性を実質的に保持する反応物質の条件下で機能する。
【００９６】
カップリング剤は常に必要なわけではなく、たとえば、蛍光化合物がスルホニルクロリド、イソチオシアネート、またはスクシンイミジルエステルの形である場合は、カップリング剤は不要である。
【００９７】
カップリング剤は、結合した構成成分へのカップリング剤の要素の付加無しに、構成成分と結合することができるその他のカップリング剤は、結合した構成成分へのカップリング剤の要素の付加を結果として生じる。たとえば、カップリング剤は、ホモまたはヘテロ二官能性であって、その物質の１種類以上の構成原子が組成物中に保持される架橋剤であってよい。架橋剤でないカップリング剤は、カップリング反応の間に完全に除去することができ、そのため分子産物は完全に、光増感剤、標的化部分、および骨格部分（あれば）から成る。
【００９８】
多数のカップリング剤が、アミンおよびカルボン酸と反応してアミドを形成し、またはアルコールおよびカルボン酸と反応してエステルを形成する。カップリング剤は当該分野で既知であり、たとえば、ここで参照のＭ． Ｂｏｄａｎｓｋｙ，"Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ"， ２ｎｄ ｅｄ．およびＴ． Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ． Ｗｕｔｓ，「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，"２ｎｄ Ｅｄ， １９９１， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ， ＮＹを参照のこと。カップリング剤は、構成成分部分を安定に結合させるが、光増感剤または分子キャリアーの変性または不活性化を最小限にしなければならない。
【００９９】
本発明の光増感剤組成物は、下記の実施例に記載された方法を用いて、または当該分野で既知の方法で、光増感剤を分子キャリアーと結合させることによって調製することができる。架橋剤を含むさまざまな カップリング剤を、共有結合に用いることができる。架橋剤の例は、Ｎ，Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチル−チオアセタート（ＳＡＴＡ）、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、オルトフェニレンジマレイミド（ｏ−ＰＤＭ）、およびスルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−ｌ−カルボキシレート（スルホ−ＳＭＣＣ）（Ｋａｒｐｏｖｓｋｙ ｅｔ ａｌ． （１９８４） Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １６０； １６８６； Ｌｉｕ， ＭＡ ｅｔ ａｌ． （１９８５） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８２； ８６４８）を含む。その他の方法は、Ｐａｕｌｕｓ ａｎｄ Ｂｅｈｒｉｎｇ （１９８５） Ｉｎｓ． Ｍｉｔｔ． ， ７８； １１８−１３２ ； Ｂｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ． （１９８５） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９； ８１−８３およびＧｌｅｎｎｉｅ ｅｔ ａｌ． ， （１９８７） Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ， １３９； ２３６７−２３７５によって記載されたものを含む。ペプチドおよびタンパク質のための多数のカップリング剤が、緩衝液、溶媒、および使用方法と共にＰｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．カタログＴ１５５−Ｔ−２００ページ（１９９４年）（３７４７ Ｎ． Ｍｅｒｉｄｉａｎ Ｒｄ． ， Ｒｏｃｋｆｏｒｄ ＩＬ， ６１１０５， Ｕ． Ｓ． Ａ．； Ｐｉｅｒｃｅ Ｅｕｒｏｐｅ Ｂ． Ｖ． ， Ｐ． Ｏ． Ｂｏｘ １５１２，３２６０ ＢＡ Ｏｕｄ Ｂｅｉｊｅｒｌａｎｄ， Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）に記載されており、その内容は引用によって本開示に含まれる。
【０１００】
ＤＣＣは有用なカップリング剤である（Ｐｉｅｒｃｅ＃２０３２０；イリノイ州ロックランド）。それはアルコールＮＨＳのクロリンｅ６とのＤＭＳＯ（Ｐｉｅｒｃｅ＃２０６８４）中での結合を促進し、活性化エステルを形成し、それはポリリジンと架橋することができる。ＤＣＣ（Ｎ，Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド）は、ペプチド合成においてカップリング剤として一般的に用いられているカルボキシ反応性架橋剤であり、分子量２０６．３２である。もう一つの有用な架橋剤はＳＰＤＰ（Ｐｉｅｒｃｅ＃２１５５７）であり、第一アミンおよびスルフヒドリル基を用いた用途のためのヘテロ二官能性架橋剤である。ＳＰＤＰは分子量３１２．４であり、スペーサーアーム長は６．８オングストロームであり、ＮＨＳ−エステルおよびピリジルジチオ基と反応して、解裂可能な架橋を形成し、そのためその後の反応の際に本物質は除去されて、光増感剤が骨格または分子キャリアーと直接的と結合することができる。その他の有用な結合剤は、二段階架橋用の保護されたＳＨ基を導入するためのＳＡＴＡ（Ｐｉｅｒｃｅ＃２６１０２）で、保護されたＳＨ基はヒドロキシルアミン−２５−ＨＣｌ（Ｐｉｅｒｃｅ＃２６１０３）で保護を解除され、そしてアミンおよびスルフヒドリルと反応するスルホ−ＳＭＣＣ（Ｐｉｅｒｃｅ＃２２３２２）である。その他の架橋剤およびカップリング剤もまたＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．（イリノイ州ロックフォード）から入手可能である。別の化合物および方法、特に、タンパク質の他のタンパク質とのまたは他の組成物との、たとえばレポーター基とのまたはタンパク質の金属イオン標識のためのキレーターとの結合のために、媒介物としてシッフ塩基を含むものは、ＥＰＯ２４３，９２９Ａ２（１９８７年１１月４日公開）に開示されている。
【０１０１】
カルボキシル基を含む光増感剤は、標的ポリペプチド中のリジンｓ−アミノ基と、予め形成した反応性エステル（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルのような）またはｉｎ ｓｉｔｕでカルボジイミド媒介反応によって結合されたエステルのどちらかによって結合することができる。同じことが、スルホン酸基を含む光増感剤に当てはまり、スルホン酸基をスルホニルクロリドに変形することができ、スルホニルクロリドはアミノ基と反応する。カルボキシル基を有する光増感剤は、ｉｎ ｓｉｔｕカルボジイミド法によって、ポリペプチド上のアミノ基と結合することができる。光増感剤はまた、セリンまたはスレオニン残基の水酸基と、またはセリンまたはスレオニン残基のスルフヒドリル基と、またはシステイン残基のスルフヒドリル基とも結合することができる。 
組成物の構成成分を結合させる方法、たとえば、光増感剤を持つポリアミノ酸鎖を抗菌性ポリペプチドと結合させることは、ヘテロ二官能性架橋試薬を用いて行うことができる。これらの物質は、一つの鎖の一つの官能基、および第二の鎖の別の官能基と結合する。これらの官能基は典型的には、アミノ、カルボキシル、スルフヒドリル、およびアルデヒドである。これらを結合するための、これらの基および別に構成された構造と反応する適当な部分の多数の置換が存在する（ＰｉｅｒｃｅカタログおよびＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ． （１９９４） Ｃｉｂａ Ｆｏｕｎｄ Ｓｙｍｐ． １８６； ５−２０に記載）。 
分子キャリアーと結合した光増感剤の製造および精製は、当該分野で既知の方法によって実施することができる。カップリング反応からの収率は、精製の最終工程において、クロマトグラフィー分画から溶出する産物のスペクトル法によって評価することができる。結合していない光増感剤、および光増感剤を含む反応産物の存在は、光増感剤部分が特徴的な波長の光を吸収するという物理的性質、および減衰係数によって追跡することができ、そのため産物への組み込みはその波長または類似波長での吸収によって監視することができる。一種類以上の光増感剤分子の、分子キャリアーまたは骨格への結合は、たとえば、適当に選択されたＳｅｐｈａｄｅｘ（商標）Ｇ５０、６１００、または６２００またはその他のそのようなマトリックス（Ｐｈａｒｍａｃｉａ−Ｂｉｏｔｅｃｈ， Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ ＮＪ）を用いたサイズ分画ゲル クロマトグラフィーを用いて溶出された画分の溶出プロファイルにおいて吸収ピークを移動させる。たとえばＳｅｐｈａｄｅｘゲルのような適当なサイズ分画ゲルの選択は、大きすぎてビーズと相互作用しない物質の排除体積より後の画分に光増感剤が溶出する、すなわち、結合していない開始光増感剤組成物が分画ビーズとある程度相互作用し、付随してある程度保持されるゲルによって決定することができる。正しい有用なゲルは、結合していない光増感剤の分子量から予測することができる。付加部分と結合した光増感剤組成物の、成功した反応産物は一般的に、特徴的なより大きい分子量を有し、そのためクロマトグラフィービーズと相互作用する程度がより小さくなり、したがって、結合していない光増感剤基質を含む画分より早く溶出する画分に出現する。未反応の光増感剤基質は一般的に、開始材料に特徴的な画分に出現し、各反応からの収率はしたがって、より大きな分子量の物質のピークの大きさ、および特徴的な開始材料のピークの減少の両方から評価することができる。産物画分のピーク下面積は、モル減衰係数を用いて収率の大きさに変換される。 
産物はＮＭＲを用いて分析することができ、適当な産物ピークの面積を積算して、異なるカップリング剤を用いた相対収率を決定する。光増感剤の吸収の赤方偏移は、ポリアミノ酸との結合後にしばしば観察されている。タンパク質のようなより大きなキャリアーとの結合は、抗体との結合の結果として遊離の増感剤の吸収と比較してその方向に約３−５ｎｍの偏移を生じたように、類似の偏移を生じる可能性がある。０．１ＭＮａＯＨ／１%ＳＤＳ中での関連する吸収極大および減衰係数は、クロリンｅ６について４００ｎｍおよび１５０，０００Ｍ−１ｃｍ−１、ベンゾポルフィリン誘導体について４３０ｎｍおよび６１，０００Ｍ−１ｃｍ−１である。
【０１０２】
本発明の光増感剤組成物は、スカベンジャー受容体リガンドのような、光増感剤が直接的に分子キャリアーと結合しているものを含む。その他の本発明の光増感剤組成物は、骨格が光増感剤とおよび分子キャリアーとの両方と結合している、ポリアミノ酸のような、「骨格」または「架橋」部分を含む。
【０１０３】
光増感剤および分子キャリアーを含む組成物に骨格を含めることは、骨格につき結合される光増感剤および分子キャリアーのより大きな化学量論的範囲の提供を含む、いくつかの利点を与えることができる。骨格が標的生物に対して固有の親和性を有する場合は、骨格への結合によって組成物の親和性を向上させることができる。１種類の組成物を用いて標的にすることができる生物の特定の範囲は、２種類以上の異なる分子キャリアーを単一の光増感剤−骨格組成物と結合することによって拡張することができる。
【０１０４】
骨格部分の設計および特徴づけについて本発明の方法および化合物において有用なペプチドはポリアミノ酸を含み、そのポリアミノ酸は、Ｌ−、Ｄ−、ラセミＤＬ−または混合Ｌ−およびＤ−アミノ酸組成物のホモおよびヘテロポリマーであってよく、さらに規定のまたはランダムな混合組成物および配列であってよい。これらのペプチドは、特定の天然ペプチドに倣って組み立てることができ、ファージディスプレイおよび選ばれた標的に対する結合の増大についての選択の技術によって最適化し、そのため最高の親和性を有する選択されたペプチドが特徴づけられ、次いで合成によって製造される。官能基の他の修飾を、たとえば、溶解度の増大、凝集の低下、および疎水性の程度の変化の目的で導入することができる。非ペプチド骨格の例として下記のものが挙げられる：ＤＮＡ、ＲＮＡ、およびペプチド核酸といった核酸および核酸の誘導体；デンプン、ペクチン、キチン、セルロース、およびヘミメチル化セルロースといった多糖および誘導体；トリグリセリド誘導体およびセレブロシドといった脂質；ポリエチレングリコール（ＰＥＧＳ）およびＰＥＧ星形ポリマーといった合成ポリマー；デキストラン誘導体、ポリビニルアルコール、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）−メタクリルアミドコポリマー、ポリ（ＤＬ−グリコール酸−乳酸）；およびこれらの分類の化合物のうち任意の要素を含む組成物。
【０１０５】
光増感剤組成物の親和性は、組成物の構成成分の電荷を修飾することによって改善することができる。ポリ−Ｌ−リジンクロリンｅ６のような結合体は、さまざまな大きさおよび電荷（陽イオン性，中性、および陰イオン性）に作製することができ、たとえば、ポリリジンの遊離ＮＨ２基にはアセチル、スクシニル、またはその他のＲ基が結合し、最終組成物の電荷を変化させる。本発明の組成物の正味の電荷は等電点電気泳動（ＩＥＦ）によって測定することができる。この技術は、印加電圧を用いてｐＨ勾配を非篩別アクリルアミドまたはアガロースゲル中に、両性電解質（合成緩衝成分）の系を使用することによって生じさせる。荷電したポリペプチドがゲルに負荷された場合、それらはより高いｐＨ領域へ、またはより低いｐＨ領域へ、それらが非荷電となりそのためそれ以上移動できなくなる位置に従って移動する。この位置は、一連の既知のマーカータンパク質の位置を参照することによって測定することができる。
【０１０６】
本発明の光増感剤組成物は、当該分野で「光免疫結合体」として知られる、抗体と結合した光増感剤を含んでいてよい。光免疫結合体の抗体構成成分は、不安定プラークを構成する細胞の表面上に存在するエピトープと特異的と結合することができる。ここで用いられる、「特異的に結合」の語は、そのエピトープを発現しない細胞はその抗体によってわずかにしか認識されないことを意味する。
【０１０７】
本発明で用いられる「抗体」の語は、完全な分子および、ＦａｂおよびＦａｂ'のような、エピトープ決定基と結合することができるその断片を含む。Ｆａｂ断片は軽鎖全体および重鎖の半分を保持し、両方の鎖がカルボキシ末端ジスルフィド結合によって共有結合している。Ｆａｂ断片は抗原結合部位に関しては一価である。本発明の抗体は、完全な天然抗体、二特異性抗体；キメラ抗体；Ｆａｂ、Ｆａｂ'、一本鎖可変領域断片（ｓｃＦｖ）、および融合ポリペプチドを含む。好ましくは、本発明の抗体はモノクローナルである。
【０１０８】
本発明の抗体はいくつかの方法で調製することができる。完全な天然抗体、二特異性抗体；キメラ抗体；Ｆａｂ、Ｆａｂ'、一本鎖可変領域断片（ｓｃＦｖ）、および融合ポリペプチドを作製する方法は当該分野で既知である。たとえば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ （１９８８） Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ； Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，１９８８）を参照。 
抗体は、抗体を発現するように遺伝子操作されたハイブリドーマ細胞から非常に便利に得ることができる。ハイブリドーマを作製する方法は当該分野でよく知られている。ハイブリドーマ細胞は適当な培地中で培養することができ、使用済みの培地を抗体の起源として使用することができる。抗体をコードするポリヌクレオチドを今度は抗体を産生するハイブリドーマから得ることができ、次いで抗体を合成によってまたはこれらのＤＮＡ配列から組み換えによって作製することができる。大量の抗体の製造のためには、一般的に腹水を得るのがより便利である。腹水を生じる方法は、一般的に、ハイブリドーマ細胞を、免疫学的に未使用である組織適合性または免疫寛容(immunotolerant)哺乳類、特にマウスに注射することを含む。哺乳類は、たとえば、プリスタンといった適当な組成物を予め投与することによって腹水産生の準備をすることができる。
【０１０９】
抗体を得るもう一つの方法は、適当な宿主動物を抗原で免疫化し、ポリクローナルまたはモノクローナル産生の標準的手順に従うことである。このように作製されたモノクローナル抗体（Ｍａｂｓ）は、当該分野で既知の方法によって「ヒト化」することができる。ヒト化抗体の例は、たとえば、米国特許第５，５３０，１０１号および第５，５８５，０８９号で提供される。
【０１１０】
「ヒト化」抗体は、ヒト免疫グロブリンにより似るように、配列の少なくとも一部がその最初の形から変化させられた抗体である。一つの種類では、重鎖および軽鎖Ｃ領域がヒト配列で弛緩されている。別の一つの種類では、ＣＤＲ領域が目的の抗原の認識のためのアミノ酸配列を含み、一方、可変枠領域は同じくヒト配列に変えられている。たとえば、ＥＰ０３２９４００を参照。もう一つの種類では、可変領域はヒトおよびマウス可変領域の共有配列を設計することによってヒト化されており、共通配列の間で異なるＣＤＲの外側の残基を変換している。本発明はヒト化Ｍａｂｓを包含する。
【０１１１】
本発明はまた、重鎖および軽鎖の一対が一つめの抗体から得られる一方、重鎖および軽鎖のもう一つの対が異なる二つめの抗体から得られる、ハイブリッド抗体も包含する。そのようなハイブリッドはまた、ヒト化重鎖および軽鎖を用いて形成することもできる。
【０１１２】
抗体、特に抗体のＦａｂまたはｓｃＦｖ部分の発現についてのファージディスプレイ ライブラリーの構築は当該分野でよく知られている（Ｈｅｉｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ． （２００１） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４８； １７−３０）。抗体を発現するファージディスプレイ抗体ライブラリーは、引用によって本開示に含まれる、米国特許第５，２２３，４０９号に記載の方法に従って調製することができる。その一般的方法の手順は、本発明の抗体を製造するために本開示を用いて適応させることができる。ヒトモノクローナル抗体を製造するための方法は一般的に下記を含む：（１）ヒト免疫グロブリン遺伝子をライブラリーの起源として用いて、クローニングベクターに別々の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子ライブラリーを作製する，（２）重鎖および軽鎖をコードする遺伝子ライブラリーを組み合わせて、ヘテロ二量体抗体分子を発現し組み立てることができる単一の２シストロン性発現ベクターとする、（３）組み立てたヘテロ二量体抗体分子をフィラメントファージ粒子の表面上で発現する、（４）表面発現したファージ粒子を、予め選択した抗原に対するファージ粒子のパンニングといった免疫親和性技術を用いて単離し、それによって特定の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子を含む一種以上のファージミドおよび予め選択した抗原と免疫反応する抗体分子を単離する。
【０１１３】
一本鎖可変領域断片は、短い結合ペプチドを用いて軽鎖および重鎖可変領域を結合することによって作製される。十分な可塑性および長さを有する任意のペプチドをｓｃＦｖでリンカーとして用いることができる。通常、リンカーは免疫原性をほとんどまたは全く有しないように選択される。結合ペプチドの例は（ＧＧＧＧＳ）３であり、これは一つの可変領域のカルボキシ末端ともう一つの可変領域のアミノ末端との間の約３．５ｎｍを架橋する。別のリンカー配列もまた用いることができる。重鎖または軽鎖の全体または任意の部分を任意の組み合わせで用いることができる。典型的には、可変領域全体がこれらのｓｃＦｖに含まれる。たとえば、軽鎖可変領域は重鎖可変領域と結合することができる。代わりに、軽鎖可変領域の一部を重鎖可変領域またはその一部と結合することができる。また、一つの構成成分が抗原を認識するポリペプチドでありもう一つの構成成分が、たとえばＴ細胞エピトープといった別の抗原を認識するポリペプチドである、二相性(biphasic)ｓｃＦｖを含む組成物もまた考えられている。
【０１１４】
ＳｃＦｖは組み換えによってまたは合成によって製造することができる。ｓｃＦｖの合成による製造のためには、自動化合成装置を用いることができる。ｓｃＦｖの組み換えによる製造のためには、ｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドを含む適当なプラスミドを、たとえば酵母、植物、昆虫、または哺乳類細胞といった真核細胞、またはたとえばＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉといった原核細胞のような適当な宿主細胞に導入することができ、そしてそのポリヌクレオチドによって発現されたタンパク質は標準的なタンパク質精製技術を用いて単離することができる。
【０１１５】
ｓｃＦｖの製造のために特に有用な系は、Ｅ． ｃｏｌｉにおけるプラスミドｐＥＴ−２２ｂ （＋） （Ｎｏｖａｇｅｎ， Ｍａｄｉｓｏｎ， ＷＩ）である。ｐＥＴ−２２ｂ（＋）は６個の連続したヒスチジン残基から成るニッケルイオン結合ドメインを含み、それによって発現されたタンパク質を適当なアフィニティ樹脂で精製することが可能である。適当なベクターのもう一つの例は、上記のｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ）である。
【０１１６】
発現条件は、ｓｃＦｖが機能性のおよび好ましくは最適の三次構造を取ることを確実にすべきである。使用するプラスミド（特にプロモーターの活性）および宿主細胞に応じて、産生の速度を調節することが必要であるかまたは有用である可能性がある。たとえば、より弱いプロモーターの使用、またはより低い温度での発現が、適切に折りたたまれたｓｃＦｖの原核細胞系での産生に必要であるかまたは有用であろう；または、ｓｃＦｖを真核細胞で発現することが好ましい可能性がある。抗体精製方法は、塩析（たとえば、硫酸アンモニウムを用いて）、イオン交換クロマトグラフィー（たとえば、陽イオンまたは陰イオン交換カラムに中性ｐＨで流し、漸増するイオン強度の段階勾配で溶出）、ゲル濾過クロマトグラフィー（ゲル濾過ＨＰＬＣを含む）、および、プロテインＡ、プロテインＧ、ヒドロキシアパタイト、および抗免疫グロブリンといった、アフィニティ樹脂でのクロマトグラフィーを含んでいてよい。
【０１１７】
光増感剤は、当該分野で既知の任意の方法に従って、抗体と結合させることができる。たとえば、ポリマーまたはポリペプチド結合を介して光増感剤に抗体を直接結合させることができる。対象のポリマーとして、特に限定はされないが、ケトン、酸、アルデヒド、イソシアネート、またはさまざまなその他の基によって構成成分に誘導体化された、ポリアミン、ポリエーテル、ポリアミンアルコールが挙げられる。ポリペプチド結合は、たとえばポリ−Ｌ−リジン結合を含んでいてよい（Ｄｅｌ Ｇｏｖｅｒｎａｔｏｒｅ ｅｔ ａｌ． （２０００） Ｂｒ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ ８２； ５６−６４ ； Ｈａｍｂｌｉｎ ｅｔ ａｌ． （２０００） Ｂｒ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ ８３； １５４４−４１ ； Ｍｏｌｐｕｓ ｅｔ ａｌ． （２０００） Ｇｙｎｅｃｏｌ Ｏｎｃｏｌ ７６； ３９７−４０４）。抗体は、それぞれ独立に直接の共有結合を介して抗体と結合する、光増感剤および少なくとも１つの可溶化剤と結合することができる。直接の共有結合はたとえば、その内容が引用によって本開示に含まれる米国特許出願第１０／１３７，０２９号に記載の通り、抗体のリジン残基とのアミド結合であってよい。
【０１１８】
本発明の光増感剤組成物は、天然に存在するタンパク質およびペプチドの配列、それらペプチドの変異体または断片由来の配列、および生物学的にまたは化学的に合成されたペプチドまたはペプチド断片由来の配列を含む分子キャリアーと結合した光増感剤を含んでいてよい。一種類以上の標的細胞に対して親和性を有する天然に存在するペプチドは、たとえばより高い親和性または特異性といった目的の性質を有する別のペプチドを、個別にまたは関連するペプチドのライブラリーの一員としてそこから合成することができる配列を提供することができる。そのようなペプチドは標的細胞に対する親和性に基づいて選択することができる。
【０１１９】
本発明においておよび本発明のポリペプチドとの関連において用いられる「またはその断片」の語句は、ここで開示する通り、そのポリペプチドの特定のペプチド、一続きのアミノ酸を含む。前記「その断片」は機能性断片であることが好ましい「機能性断片」の語は、少なくとも部分的に、本発明のポリペプチドの生理学的におよび／または構造的に関連する活性を達成する、上記で特定された本発明のポリペプチドを意味する。本発明のポリペプチドは、哺乳類細胞のような真核細胞で発現された組み換えポリペプチドであってよい。
【０１２０】
一般的に、組み換えＤＮＡ技術は、選択した細胞株における外来（異種）タンパク質の発現を可能にしている。この方法において、異種ＤＮＡ配列の一部にコードされたタンパク質を産生するよう細胞に指示する遺伝物質を含むベクターが宿主に導入され、形質転換された宿主細胞を発酵させ、培養し、あるいは、目的のタンパク質の多量産生をもたらす異種ＤＮＡの発現を促進させる条件に供する。プラスミドはＤＮＡ分子をクローニングするためのベクターとして広く用いられている。大多数のプラスミドベクターは、さまざまなレプリコン（プラスミド、バクテリオファージ染色体、および細菌染色体）からＤＮＡを採取し、ＤＮＡを結合させて（制限酵素およびＤＮＡリガーゼを用いて）、複製起点、選択マーカー（通常は抗生物質耐性遺伝子）、および必要な宿主細胞で目的の遺伝子を発現するのに必要なプロモーターを有するプラスミドを形成することによって作製する。ベクターは、たとえば、米国特許第５，９９０，０９１号および第６，００４，７７７号の通り、およびＰＣＴ／ＵＳ００／０４２０３の通りであってよい。組み換えベクターの作製の方法およびｉｎｖｉｔｒｏでの用途は当該分野でよく知られている。Ｓａｍｂｒｏｏｋ， Ｆｒｉｔｓｃｈ ａｎｄ Ｍａｎｉａｔｉｓ， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， ２ｎｄ Ｅｄ．， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， １９８９を参照（たとえば、ＤＮＡの単離、組み換えベクターの構築、細胞の遺伝子導入および形質転換、および異種ペプチドの産生のための手順）。
【０１２１】
さらに、組み換えベクターは、本発明の核酸配列（たとえば、標的化ペプチドまたはその機能性断片をコードするもの）に加えて、適当な宿主においてコード領域の適当な発現を可能にする発現調節配列を含んでいてよい。そのような調節配列は当該分野で既知であり、プロモーター、スプライスカセット、翻訳開始コドン、挿入部をベクター中に導入するための翻訳および挿入部位を含んでいてよい。好ましくは、核酸分子は、真核または原核細胞における発現を可能にする発現調節配列に調節可能と結合している。
【０１２２】
真核または原核細胞における発現を確実にする調節配列は当業者によく知られている。上述の通り、それらは通常は、転写開始を確実にする調節配列、および必要に応じて、転写の終了および転写産物の安定化を確実にするポリ−Ａシグナルを含む。追加の調節配列は、転写および翻訳エンハンサー、および／または天然と結合するかまたは異種のプロモーター領域を含んでいてよい。たとえば哺乳類細胞における発現を許可する可能な調節配列は、ＣＭＶ−ＨＳＶチミジンキナーゼプロモーター、ＳＶ４０、ＲＳＶ−プロモーター（ラウス肉腫ウイルス）、ヒト伸長因子１α−プロモーター、ａＰＭ−Ｉプロモーター（Ｓｃｈａｆｆｅｒ ｅｔ ａｌ． （１９９９） Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ． ２６０； ４１６−４２５）、またはメタロチオネインまたはテトラサイクリンのような誘導性プロモーター、またはＣＭＶエンハンサーまたはＳＶ４０−エンハンサーのようなエンハンサーを含む。原核細胞における発現については、たとえば、ｔａｃ−ｌａｃ−プロモーターまたはｔｒｐプロモーターを含む多数のプロモーターが記載されている。転写開始を担う配列の他に、そのような調節配列はまた、ポリヌクレオチドの下流のＳＶ４０−ポリ−Ａ部位またはｔｋ−ポリ−Ａ部位のような転写終了シグナルも含んでいてよい。これに関連して、Ｏｋａｙａｍａ−ＢｅｒｇｃＤＮＡ発現ベクターｐｃＤＶ１（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐｃＤＮＡｌ、ｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐＳＰＯＲＴｌ（ＧＩＢＣＯＢＲＬ）、Ｃａｓｐｅｒ、Ｃａｓｐｅｒ−ＨＳ４３、ｐＵＡＳＴといった適当な発現ベクター、またはλｇｔ１１のような原核発現ベクターが当該分野で知られている。
【０１２３】
さらに、発現系によっては、ポリペプチドを細胞内区画に導くことができるリーダー配列を本発明の核酸分子のコード配列に加えることができ、当該分野でよく知られている。リーダー配列は適当な時期に翻訳、開始および終止配列と共に組み立てられ、好ましくは、リーダー配列は翻訳されたタンパク質、またはそのタンパク質の、ペリプラズム間隙または細胞外培地への分泌を指示することができる。必要に応じて、異種配列は、たとえば発現された組み換え産物の安定化といった目的の特性を与えるＣ−またはＮ−末端同定ペプチドを含む融合タンパク質をコードすることができる。いったんベクターが適当な細胞株に組み込まれると、細胞は当該ヌクレオチド配列の高レベル発現に適した条件下で維持される。 
細胞は本発明の標的化ペプチドをコードする組み換えベクターを用いて遺伝子導入または形質転換することができる。形質転換および遺伝子導入の方法は当該分野でよく知られている。形質転換された細胞は培養装置で増殖させ、最適の細胞増殖を達成するために当該分野で既知の技術に従って培養することができる。結果として得られる形質転換または遺伝子導入された細胞株は、本発明に記載の核酸分子を用いて、またはそのような核酸分子を含むベクターを用いて遺伝子組み換えされている。「遺伝子組み換えされた」の語句は、細胞がその天然のゲノムに加えて、細胞または宿主またはその祖先／親の１つに導入された本発明に記載の核酸分子またはベクターを含むことを意味する。核酸分子またはベクターは、ゲノム外の独立した分子として、好ましくは複製することができる分子として遺伝子組み換えされた細胞中に存在することができ、またはそれは細胞のゲノムに安定的に組み込まれることができる。
【０１２４】
本発明は、任意の適当な原核または真核細胞を利用することができる。適当な原核細胞は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉまたはＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓのように、一般的にクローニングに用いられるものである。真核細胞は、たとえば、真菌または動物細胞を含み、一般的に特異性分析を実施するために用いられる。動物細胞は好ましくは特異性分析を実施するために用いられる。適当な動物細胞は、たとえば、昆虫細胞、脊椎動物細胞、好ましくは哺乳類細胞である。当該分野で既知であるさらに適当な細胞株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ （ＡＴＣＣ）およびＡＩＤＳ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｐｒｏｇｒａｍ Ｃａｔａｌｏｇのような細胞株寄託施設から入手可能である。動物、好ましくは哺乳類、さらにより好ましくはヒト由来の初代細胞からの逸脱はまた、適当な細胞株を樹立する目的でも行うことができる。
【０１２５】
標的化組成物投与
本発明の標的化組成物は、水、生理食塩水、水溶性ブドウ糖、グリセリン、またはエタノールといった、医薬的に受容可能な 添加物中で投与することができる。組成物はまたその他の 医薬、薬剤、賦形剤、および湿潤剤または乳化剤といった補助物質、およびｐＨ 緩衝剤を含んでいてよい。
【０１２６】
不要な実験無しで適当な組成物および投与のための処方を調製するために、引用により本開示に含まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ； Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， １７ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙのような標準的テキストを参照することができる。適当な 投与量もまた、ここで引用するテキストおよび文書に基づくことができる。適当な投与量の決定は、その中のパラメータを与えられれば当該分野の技術範囲内である。
【０１２７】
「治療的に有効な量」は、有益なまたは目的の臨床結果をもたらすのに十分な量である。治療的に有効な量は一回以上の投与で投与することができる。治療に関しては、有効量は、不安定プラークの存在によって特徴づけられる心臓血管疾患の進行を緩和する、改善する、安定化する、逆転化するかまたは鈍化する、または差し迫った破裂の病理的結果を低減するのに十分な量である。治療的に有効な量は、一回または一連の投与によって与えることができる。有効量は一般的に医師によって個別的な基準で決定され、当業者の技術班以内である。 
原則として、ｉｎ ｖｉｖｏ治療薬または診断薬のための投与量は幅がある。適当な投与量を決定する際にはいくつかの因子が典型的には考慮される。これらの因子は、患者の年齢、性別、および体重、治療されている症状、症状の重症度、および投与する抗体の形を含む。
【０１２８】
本発明の放射性標識組成物は、必要に応じて、分子キャリアーまたは分子キャリアーおよび光増感剤と結合するが、たとえば、約１から約３０ｍＣｉまでの放射性核種を医薬的に受容可能なキャリアーと組み合わせて含んでいてよい。そのような組成物は溶液でまたは凍結乾燥形態で供給することができる。適当な滅菌されたおよび生理学的に受容可能な再構成媒体は、水、生理食塩水、緩衝生理食塩水、などを含む。患者への注射の前に、放射性核種を、非標識分子キャリアー／キレート剤および還元剤と、放射性核種を分子キャリアーにキレート化するのに十分な時間にわたり十分な温度で合わせてもよい。
【０１２９】
本発明の放射性標識組成物は、本発明に記載の方法に従って、たとえば核医学の専門家といった当業者によって、被験者の心臓血管系のプラークを画像化するのに用いることができる。画像は、被験者のさまざまな組織および器官に蓄積する組成物の空間的分布の差に基づいて生成される。蓄積した組成物の空間的分布は、本発明の装置を用いて測定することができる。安定なアテローム性プラークはより強度の低いシグナルが検出される場合に明瞭に認められ、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークに蓄積する濃度と比較して低い濃度の放射性標識組成物が蓄積する組織の存在を示す。代わりに、活動性のアテローム性プラークおよび／または不安定プラークはより強いシグナルとして検出することができ、ｉ安定なアテローム性プラークに蓄積する濃度と比較してその部位で放射性標識組成物の高い濃度の領域を示す。放射性標識組成物の蓄積の程度は、放射性排出物を定量するための既知の方法を用いて定量することができる。特に有用な画像処理手法は、同時に試験を実施するための１種類より多い造影剤を使用する。たとえば、潅流および代謝機能の同時試験によって、代謝の流れのカップリングおよび脱カップリングの試験が可能になり、そのようにして心臓傷害後の組織生存度の判定を促進する。そのような判定は心虚血、心筋症、組織生存度、冬眠心、その他の心臓異常の診断において有用である。
【０１３０】
少なくとも１種類の分子キャリアーおよび放射性標識（たとえば約１ないし約５０ｍＣｉの放射性核種）、または分子キャリアー、光増感剤、および放射性標識を含む放射性標識組成物の有効量は、検出および／または治療的方法における使用について、医薬的に受容可能なキャリアーと組み合わせることができる。本発明に従って、本発明の「放射性標識組成物の有効量」は、臨床用途に使用可能な装置を用いて受容可能なシグナルを得るために十分な量と定義される。本発明の放射性標識組成物の有効量は、一回より多い投与で投与することができる。本発明の放射性標識組成物の有効量は、個人の感受性の程度、個人の年齢、性別、体重、個人の特異体質的反応、および線量測定といった因子に従って変動する。本発明の造影剤の有効量もまた、装置およびフィルムに関係する因子に従って変動する。
【０１３１】
そのような因子の最適化は、十分に当該分野の技術範囲内である。一般に、有効量は注射で約０．１ないし約１０ｍｇまたは経口で約５ないし約１００ｍｇの範囲内にある。
【０１３２】
放射性標識組成物は、必要に応じて、分子キャリアーまたは分子キャリアーおよび光増感剤を含むが、被験者の心臓血管系へのその物質の蓄積を促進する任意の手段に従って被験者に投与することができる。好ましくは、本発明の放射性標識組成物 は動脈注射または静脈注射によって投与され、滅菌されたパイロジェンフリーの非経口的に受容可能な水溶液として処方されている。ｐＨ、等張性、安定性、などについて然るべき注意がなされたそのような非経口的に受容可能な溶液の調製は、当該分野の技術範囲内である。静脈注射用の好ましい処方は、塩化ナトリウム注射液、リンゲル液、ブドウ糖注射液、ブドウ糖および塩化ナトリウム注射液、乳酸加リンゲル液、または当該分野で既知のその他の賦形剤といった等張の賦形剤を含むべきである。 
診断目的で用いられる放射性標識組成物 の量および試験期間は、治療されている症状の性質および重症度、患者が受けてきた治療の性質、および患者の特異体質的反応に依存する。究極的には、個々の患者に投与する放射性標識組成物の量および画像化試験の時間を主治医が決定する。
【０１３３】
たとえば光増感剤組成物を含む、蛍光組成物の投与量は、約０．１ないし約１０ｍｇ／ｋｇの範囲にわたることができる。蛍光組成物を投与する方法は当該分野で既知であり、たとえば、米国特許第５，９５２，３２９号、第５，８０７，８８１号、第５，７９８，３４９号、第５，７７６，９６６号、第５，７８９，４３３号、第５，７３６，５６３号、第５，４８４，８０３号に、および（Ｓｐｅｒｄｕｔｏ ｅｔ ａｌ． （１９９１） Ｉｎｔ． Ｊ． Ｒａｄｉａｔ． Ｏｎｃｏｌ． Ｂｉｏｌ． Ｐｈｙｓ． ２１； ４４１−６；Ｗａｌｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ． （１９９７） Ｕｒｏｌｏｇｙ ５０ ； １９９−２０６）によって記載されている。そのような投与量は、たとえば、反復投与が行われるかどうか、組織型、および投与経路、個人の状態、所期の目的、および当業者に既知であるその他の因子によって変動し得る。蛍光組成物が、抗体と結合した光増感剤すなわち「光免疫結合体」を含む場合、投与量は約０．０１ｍｇ／ｍ２ないし約５００ｍｇ／ｍ２、好ましくは約０．１ｍｇ／ｍ２ないし約２００ｍｇ／ｍ２、非常に好ましくは約０．１ｍｇ／ｍ２ないし約１０ｍｇ／ｍ２と変動し得る。用量範囲を確認することは十分に当業者の技術範囲内である。たとえば、ｓｃＦｖの濃度は典型的には、治療的に有効であるためには天然の抗体の濃度ほど高い必要は無い。投与は、たとえば疾患徴候の減少といった目的の測定可能なパラメータが検出されるまで、低い頻度で、または規則的に週毎に実施することができる。投与はその後、必要に応じて二週間毎または月毎に減らすことができる。
【０１３４】
本発明の組成物は組成物の形態に適切である様式で投与される。利用可能な投与経路は、皮下、筋肉内、腹腔内、皮内、経口、鼻腔内、肺内（すなわちエアロゾルによって）、経静脈的に、筋肉内に、皮下に、腔内、髄腔内に、または経皮的に、単独でまたは他の薬剤と組み合わせて含む。光増感剤の治療用組成物はしばしば注射によってまたは逐次的な潅流によって投与される。
【０１３５】
経口、鼻腔内、または局所投与のための組成物は、錠剤、カプセル剤、散剤、液剤、および懸濁剤を含む、固形、半固形、または液体の形で供給することができる。注射用の組成物は液体の溶液または懸濁剤として、乳剤として、または注射前に溶解または懸濁に適した固体の形で供給することができる。気道を介した投与用には、好ましい組成物は、適当なエアロゾル化装置と使用する場合に固体、粉末、または液体エアロゾルを与えるものである。必要ではないが、組成物は好ましくは 正確な量の投与に適した単位投与量形態で供給される。また本発明によって徐放または持続放出形態が考えられ、それによって活性化合物の比較的一定の濃度が長期に渡って与えられる。 
もう一つの投与方法は血管内であり、たとえば血管、プラーク、または周辺部分への直接注射による。
【０１３６】
さらに、治療を必要とする部分に組成物を局所的に投与することが望ましい場合がある；これは、たとえば、手術中の局所注入によって、注射によって、カテーテルによって、またはインプラントによって達成することができ、前記インプラントは多孔性、非多孔性、またはゼラチン状材質であり、シラスチック膜のような膜、または繊維を含む。適当なそのような膜はＧｕｉｌｆｏｒｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．が供給するＧｌｉａｄｅｌ（登録商標）である。
【０１３７】
蛍光組成物の投与後、蛍光組成物がプラーク部位で有効な組織濃度に達するまで光活性化の前に待つ必要がある。待ち工程の長さは、投与経路、腫瘍の位置、および光増感剤の体内での移動速度といった因子に依存して変動する。加えて、蛍光組成物が受容体または受容体結合エピトープを標的とする場合、光増感剤の取り込み速度は、細胞の表面上での受容体発現レベルに依存して変動する。たとえば、高レベルの受容体発現が存在する場合、結合および取り込みの速度は上昇する。待ち工程の有用な幅の決定は当該分野の通常の技術範囲内であり、蛍光画像処理技術を利用することによって最適化することができる。
【０１３８】
光増感剤組成物活性化のための装置および方法
待ち工程の後に、蛍光組成物はプラーク部位に適用する光活性化光によって活性化される。これは適当な波長および強度の光を有効な長さ、プラークの部位に適用することによって達成される。ここで用いられる「光活性化」は、光増感剤の光に誘導される化学反応を意味し、生物学的効果を生じる。
【０１３９】
標的組織は、好ましくは赤色光を用いて照射される。赤色光および／または近赤外光が哺乳類組織に最も良く透過することを考慮すると、６００ｎｍから９００ｎｍの範囲に強い吸収を有する光増感剤がＰＤＴに最適である。適当な波長、または波長の範囲は、使用する特定の光増感剤に依存する。光活性化のための波長特異性は光増感剤の分子構造に依存する。光活性化は低侵襲光用量で生じる。適当な波長、光強度、および照射時間の決定は当該分野の通常技術の範囲内である。
【０１４０】
光活性化のためには、光子が光増感剤によって吸収され目的の光化学反応が生じるように、光の波長を、光増感剤の電子吸収スペクトルに適合させる。治療される血管が非常に表在性である場合を除いて、活性化光の範囲は典型的には６００ないし９００ｎｍである。これは、内因性分子、特にヘモグロビンが、６００ｎｍ未満の光を強力に吸収し、したがって入ってくる光子の大部分を捕捉するためである（Ｐａｒｒｉｓｈ ｅｔ ａｌ． ， （１９７８） Ｏｐｔｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｋｉｎ ａｎｄ ｅｙｅｓ． Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＮＹ； Ｐｌｅｎｕｍ）。正味の効果は、組織を通しての活性化光の透過の減損となる。９００ ｎｍの上限の理由は、この波長のエネルギー特性は、必ずしも何らかの１つの理論に縛られることを望まないが、酸素の活性化状態でありおそらくＰＤＴの成功に決定的に重要である、１Ｏ２を生じるのに十分でない可能性があることである。加えて、約９００ｎｍより大きい波長で水が吸収を始める。
【０１４１】
任意の波長の光の有効透過深度δｅｆｆは、吸収および散乱といった組織の光学的性質の関数である。組織におけるフルエンス（光用量）は深さｄと次の相関がある；ｅ−ｄ／δｅｆｆ。典型的には、有効透過深度は６３０ｎｍで約２から３ｍｍで、より長い波長（７００〜８００ｎｍ）では約５から６ｎｍに増加する（Ｓｖａａｓａｎｄ ａｎｄ Ｅｌｌｉｎｇｓｅｎ， （１９８３） Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ． ３８； ２９３−２９９）。これらの値は、光増感剤の生物学的相互作用および物理的性質を変化させることによって変えることができる。一般に、より長い吸収波長およびこれらの波長でより高いモル吸収係数を有する光増感剤が、より有効な光力学的物質である。
【０１４２】
ＰＤＴ投与量は、投与された光増感剤の量、光活性化光の波長、光活性化光の強度、および、光活性化光による照射の長さを含むさまざまな因子に依存する。したがって、これらの因子のうち一種類以上を調節することによって、ＰＤＴの用量を治療的に有効な用量に調節することができる。そのような調節は当該分野の通常技術の範囲内である。
【０１４３】
光活性化のための光は、当該分野で既知の任意の適当な方法によって、発生しプラーク部位に供給することができる。光活性化光は、レーザーまたは光ファイバーといった光源から、プラーク部位に供給することができる。好ましくは、光活性化光はプラーク部位を直接照射する光ファイバー装置によって供給される。たとえば、小ゲージの皮下針を通った光ファイバーによって光を供給することができる。光は、米国特許第６，２４６，９０１号および第６，０９６，２８９号に記載されたもののような、光ファイバーを入れることができる、適当な血管内カテーテルによって供給することができる。光ファイバーはまた、関節鏡を通すこともできる。加えて、光は光ファイバーまたはカニューレ挿管した導波管を用いた経皮的器具によって伝達することができる。開口された手術部については、適当な光源は、広帯域の従来の光源、幅広いＬＥＤ、およびデフォーカスレーザービームを含む。
【０１４４】
送達は透視法を含む当該分野で既知のすべての方法によることができる。一部の光増感剤は、他の波長より生物組織に深く透過することができる、近赤外光によって活性化することができる。したがって、近赤外光は透視法に有利である。透視法はさまざまな装置を用いて実施することができる。装置はレーザーおよび非レーザー光源（たとえば、ライトボックスまたは収束光線）を利用することができる。
【０１４５】
治療が必要な場合は、光増感剤組成物の投与量および、光増感剤組成物を活性化する光は、光毒性種を生じるのに十分な量で投与される。たとえば、光増感剤組成物がクロリンｅ６を含む場合、ヒトへの投与は約０．５〜１０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約１〜５ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約２〜４ｍｇ／ｋｇの投与量範囲で、光の供給時間は約３０分間から約３日間、好ましくは約１２時間から約４８時間、より好ましくは約２４時間の間隔を置く。投与する光の用量は約２０〜５００Ｊ／ｃｍ、好ましくは約５０〜３００Ｊ／ｃｍ、より好ましくは約１００〜２００Ｊ／ｃｍの範囲である。フルエンス率は約２０〜５００ｍｗ／ｃｍ、好ましくは約５０〜３００ｍｗ／ｃｍ、より好ましくは約１００〜２００ｍｗ／ｃｍの範囲である。光増感剤組成物と光用量との間には相互関係があり、したがって、適当な波長、光強度、および照射時間は当該分野の通常技術の範囲内である。
【０１４６】
好ましくは、光毒性種は不安定プラークを構成する細胞の壊死でなくアポトーシスを誘導する。フルエンス率を下げることはアポトーシスに有利に働く（たとえば、１００ｍｗ／ｃｍ未満、たとえばクロリンｅ６については１０〜６０ｍｗ／ｃｍ）。光増感剤組成物についての適当なフルエンス率の決定は当該分野の通常技術の範囲内である。
【０１４７】
蛍光組成物が光活性色素を含む場合、光の波長および強さは、光毒性種の産生を調節するために当該分野で既知の標準的方法に従って調節することができる。したがって、ある種の条件下では（たとえば、低出力、低いフルエンス率、より短い波長の光またはそのある種の組み合わせ）、蛍光種が光活性色素から生じ、生じた反応種はいずれも無視し得る効果を有する。これらの条件は光毒性種の産生を引き起こすために容易に変えることができる。たとえば、光活性色素がクロリンｅ６を含む場合は、蛍光種および微弱な反応種を生じるために投与される光用量は約１０Ｊ／ｃｍ未満、好ましくは約５Ｊ／ｃｍ未満、より好ましくは約１Ｊ／ｃｍ未満である。適当な波長、光強度、および照射時間の決定は、当該分野の通常技術の範囲内である。
【０１４８】
好ましい一実施形態では、光活性化は、励起光を動脈の内側のプラーク表面に供給し、分析機器へ伝達される生じた蛍光またはその他の検出可能なシグナル（たとえば、熱または放射能）を受け取る、特別に設計された血管内装置によって実施することができる。同じ装置は、必要に応じて、蛍光シグナル、またはその他の測定可能なシグナル（たとえば、熱または放射能）が検出される場合、治療用の光を供給するのに用いることができる。
【０１４９】
図１Ａは、本発明の一実施形態に従って不安定プラークを、不安定プラークを検出するおよび／または標的にするおよび／または治療するための検出／治療系１００を図解する。図１Ａに示す通り、検出／治療系１００は、制御ユニット１０５および、光源／レーザー１１３を含む検出／治療ユニット１１０、およびプローブ、カテーテル、などを含む検出／治療装置１１５を含んでいてよい。
【０１５０】
制御ユニット１０５は電源を含んでいてよく、たとえば、制御ユニットは検出／治療ユニット１１０に電源を供給するための電源と連動させることができる。制御ユニット１０５はまた、入力されたパラメータおよび／または検出された特性に基づいて、検出／治療ユニット１１０、光源／レーザー１１３、および検出／治療装置１１５を制御するための制御ハードウェアおよび／またはソフトウェアを有する演算装置を含むこともできる。
【０１５１】
図１Ｂは本発明の一実施形態に従った制御ユニット１０５の設定を図解する図式である。図１Ｂに示す通り、制御ユニット１０５は、汎用コンピューター（たとえばＰＣ）、ワークステーション、大型コンピューターシステム等の演算装置１２５を含んでいてよい。演算装置１２５は、処理装置（または中央演算処理装置「ＣＰＵ」）１３０、メモリ装置１３５、記憶装置１４０、ユーザーインターフェイス１４５、システムバス１５０、および通信インターフェイス１５５を含んでいてよい。ＣＰＵ１３０は、指示の実行、データ処理、などのための任意の型の処理装置であってよい。メモリ装置１３５は、ランダムアクセスメモリ（「ＲＡＭ」）、読み出し専用メモリ（「ＲＯＭ」）、フラッシュメモリ、電気的消去可能プログラム可能読み出し専用メモリ（「ＥＥＰＲＯＭ」）、などのうち任意の一種類以上のメモリ装置であってよい。記憶装置１４０はリムーバブルおよび／または一体化光学式、磁気式、および／または光学−磁気式記憶媒体、などから／への読み出し／書き込み用の任意の記憶装置であってよい（たとえば、ハードディスク、読み出し専用コンパクトディスク「ＣＤ−ＲＯＭ」、書き込み可ＣＤ「ＣＤ−ＲＷ」、デジタル多用途ディスク−ＲＯＭ「ＤＶＤ−ＲＯＭ」、ＤＶＤ−ＲＷ、など）。記憶装置１４０はまた、システムバス１５０への接続用の制御装置／インターフェイス（記載せず）を含んでいてよい。このように、メモリ装置１３５および記憶装置１４０は、データ保存および、ＣＰＵ１３０での実行のためのプログラムされた処理の指示に適している。ユーザーインターフェイス１４５は、タッチスクリーン、コントロールパネル、キーボード、キーパッド、ディスプレイ、または任意のその他の型のインターフェイスを含んでいてよく、対応する入力／出力装置インターフェイス／アダプター（記載せず）を介してシステムバス１５０に接続することができる。通信インターフェイス１５５は、検出／治療ユニット１１０を含む任意の型の外部装置と通信するよう適合させることができる。通信インターフェイス１５５はさらに、ローカルエリアネットワーク（「ＬＡＮ」）、広域ネットワーク（「ＷＡＮ」）、インターネット、などの上の１つ以上の演算装置といった、任意のシステムまたはネットワーク（記載せず）と通信するよう適合させることができる。インターフェイス１５５はシステムバス１５０と直接接続することができ、または適当なインターフェイス（記載せず）を介して接続することができる。制御ユニット１０５は、このように、それ自身でおよび／または、本発明に従った検出／治療ユニット１１０を制御するためのアルゴリズムを含む１つ以上の別の装置と共同して、処理の実行を与えることができる。制御ユニット１０５は、任意の通信プロトコル、または任意のプラットフォーム上のプログラム言語に従ってこれらの処理を実施するようにプログラムされるかまたは指示される。したがって、処理はデータおよびメモリ装置１３５および／または記憶装置１４０に保存された指示に組み込まれるかまたは、インターフェイス１５５および／またはユーザーインターフェイス１４５でＣＰＵ１３０上での処理のために受け取ることができる。
【０１５２】
図１Ａの参照に戻ると、検出／治療ユニット１１０は手持ち式装置、自動化装置、などであってよい。図１Ａに示す通り、検出／治療装置１１５は、組織１２５中の、たとえば動脈といった血管１２０に挿入され伸長することができる。検出／治療装置１１５は手持ち式装置、自動化装置、などであってよい。検出／治療系１００の要素は単一の物理的ユニットに一体化することができるかまたは、任意の数の別個のユニットを構成することができ、そのためこれらの要素の任意の数またはその機能を１つの物理的装置に組み込むことができることはさらに注目される。下記にさらに詳細に記載される通り、検出／治療装置１１５は、標的化されたプラークからの検出された光を検出、治療光の供給、および／または検出／励起光の供給のための、いくつかの光供給要素を含んでいてよい。
【０１５３】
本発明の一実施形態によると、光源１１３は、検出／治療装置１１５を介して検出または励起光を供給するためのパルス青色レーザーを含んでいてよい。上記の通り色素および／または標的プラークに及ぼす励起効果に依存して、標的プラークから反射されたおよび／または放出された光は、特定の波長および／または周波数を有する光を含む可能性があり、それを次いで検出／治療装置１１５を通して検出することができる。多数の蛍光プローブ（たとえば、光増感剤、蛍光色素、または光活性色素）およびその使用の方法（たとえば、励起および放出波長）が、その内容が引用によって本開示に含まれるＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ， Ｉｎｃ．のカタログ（Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏｂｅｓ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ， ６ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ ｂｙ Ｒｉｃｈａｒｄ Ｈａｕｇｌａｎｄ）に記載されている。
【０１５４】
蛍光組成物または光増感剤組成物がクロリンｅ６を含む本発明の一実施形態に従って、検出／励起光は波長３３７ｎｍ（たとえば、窒素レーザー）を含んでいてよく、治療光は波長４０５ｎｍ（たとえば、ポンプ色素レーザー）を含んでいてよく、検出／励起光による励起の結果として標的プラークから放出された光または蛍光は、波長６６６〜６６８ｎｍを含んでいてよい。検出／励起光の強さは、たとえば、使用した特定の蛍光または光増感剤組成物の特異的な励起または放出波長に従って調節することができる。検出／励起光の強さは、たとえば、血管１２０の大きさおよび／または寸法に従って調節することができる。治療光の強さは、たとえば、血管１２０の大きさおよび／または寸法および／または標的プラークから検出された光のレベルに従って調節することができる。
【０１５５】
本発明の一実施形態に従って、検出／治療系１００はいくつかの設定および機器を含んでいてよい。異なる型の手順、設定、および／または機器のために設計されたアルゴリズムを、制御ユニット１０５のために含んでいてよい。
【０１５６】
検出／治療系１００は遠隔操作できることが注目される。たとえば、制御ユニット１０５と検出／治療ユニット１１０の間の接続は、制御ユニット１０５に光源１１３および検出／治療装置１１５の遠隔制御を与えるリモート接続（有線または無線）であってよい。
【０１５７】
上記の典型的な検出／治療系１００が本発明の用途に適当である系の基本的構成成分を説明する一方、本発明を離れることなくハードウェア設定の多数の変形が可能であるため、示された構造は制限的であると考えるべきでない。
【０１５８】
本発明はさらに、本発明およびその多数の利点のより良い理解を与える、下記の説明的で非制限的な実施例によって記載される。
【０１５９】
前述の通り、標的プラークは、血管、たとえば動脈、などの壁に蓄積する。したがって、本発明を体化する検出／治療装置１１５は、これらの血管の壁上の標的プラークを検出、標的プラークを非標的プラークから識別、および／または標的プラークをこれらの血管からの血流を妨げることなく治療するためのいくつかの要素を含むプローブ／カテーテルなどを、下記の通り含んでいてよい。
【０１６０】
図２Ａ、２Ｂ、２Ｃ、２Ｄ、２Ｅ、および２Ｆは、本発明の一実施形態に従ったプローブ／カテーテル２００を示す図式である。図２Ａに示す通り、プローブ／カテーテル２００は、外部ユニット２０２、およびいくつかの光供給要素２０５および光偏向要素２１０および先端２１５を含む伸長可能な内部ユニットを含んでいてよい。一例として、外部ユニット２０２は任意のプラスチックおよび／または金属性材料（たとえば、ニチノール合金）などを含んでいてよい。図２Ａは、内部ユニットが中に引き込まれ外部ユニット２０２から伸長した、プローブ／カテーテル２００を図解する。図２Ｂは、内部ユニットが伸長し展開した、プローブ／カテーテル２００を図解する。本発明の一実施形態に従って、内部ユニットは標的プラークを検出するために伸長し展開することができ、その後に引き込まれてプローブ／カテーテル２００を血管１２０といった中の別の部分へ移動する。たとえば、プローブ／カテーテル２００は、血管１２０を走査するために用いることができ、プローブ／カテーテル２００は血管１２０に沿って移動し、内部ユニットは１から６ミリメートル毎に伸長して検出を行う。ガイドワイヤ２２３はプローブ／カテーテル２００を血管１２０に沿って導くおよび／または外部ユニット２０２から／へ内部ユニットを伸長／引き込み（たとえば、光供給要素２０５および光偏向要素２１０、など）するために用いることができる。一例として、ガイドワイヤ２２３は任意のプラスチックおよび／または金属性材料（たとえば、ニチノール合金）などを含んでいてよい。光偏向要素２１０は、血管１２０の壁に接触するための平滑な表面を含んでいてよく、そのようにしてプローブ／カテーテル２００が移動している間に検出を可能にする。検出は壁に接触すること無く行うことができ、またはプローブ／カテーテル２００はまたそのような検出を行うために停止することができる。プローブ／カテーテル２００は、それぞれが光偏向要素２１０を含む４個の光供給要素２０５を含んでいてよい。４個の光供給要素２０５のそれぞれが、図２Ｃおよび２Ｄに断面図で示すように、対応する光偏向要素２１０が９０度で分割された円周を形成するように配置することができる。プローブ／カテーテル２００は、血管１２０の取り囲む壁の分割された部分をカバーするために、円周の周りの対応する角度で分割された任意の数の光供給要素２０５（および光偏向要素２１０）を含んでいてよいことに注意する。プローブ／カテーテル２００はまた、血管１２０の円周をカバーするために回転式であってよい。本発明の好ましい実施形態に従って、プローブ／カテーテル２００は３個から６個の光供給要素２０５（および光偏向要素２１０）を含んでいてよい。もちろん、光供給要素２０５は検出／治療ユニット１１０に接続された単一の要素から分割することができ、またはそれらは検出／治療ユニット１１０に別々に接続することができることに注意する。
【０１６１】
下記により詳細に記載される通り、光偏向要素２１０は、血管１２０から光供給要素２０５に受け取られた外部光を偏向することができ、光供給要素２０５は、次いで、受け取った光を、検出／治療ユニット１１０および／または制御ユニット１０５へ分析のために供給することができる。光偏向要素２１０はまた検出／励起光を偏向することもでき、検出／励起光は検出／治療ユニット１１０から光供給要素２０５を通って供給され、検出／励起光で血管１２０中の標的範囲を照らす。そこで、反射された光および／または励起された標的プラークから放出された光は、上記の通り受け取られる。前述の通り色素および／または標的プラークに対する励起効果に依存して、標的プラークは、特定の波長および／または周波数を有する光を反射および／または放出する。このようにして、血管１２０から受け取られた光から、そのような特定の波長および／または周波数を有する光を検出および同定することによって、標的プラークは同定および位置を見つけることができる。
【０１６２】
光供給要素２０５は、対応する光偏向要素２１０で受け取った光を治療ユニット１１０および／または制御ユニット１０５へ供給するための光ファイバーを含んでいてよい。光供給要素２０５はまた、検出／励起光を光源１１３からその対応する光偏向要素２１０へ供給することもでき、光偏向要素２１０で検出／励起光は偏向され血管１２０を照らす。図２Ａに示す通り、光供給要素２０５ は先端２１５へ伸長してそこで結合することができる。
【０１６３】
図２Ｂに示す通り、光供給要素２０５は外側へ向かって動くことができ、そのため光偏向要素２１０は周囲の血管１２０の壁に向かって動き、そのようにしてより良好なプラーク検出が可能になる。本発明の一実施形態に従って、光供給要素２０５は、剛性のおよび／またはばね様の構造、たとえば、プラスチック構造を含んでいてよく、その構造は伸長した場合に図２Ｂに示す通り拡張し、外部ユニット２０２引き込んだ場合に図２Ａに示す通り外部ユニット内に圧縮される。剛性の構造は任意の弾性材料を含んでいてよく、そのためその構造は図２Ｂに示す通り、伸長する際はいつでも実質的に同じ大きさおよび形状に拡張する。
【０１６４】
本発明の一実施形態に従って、プローブ／カテーテル２００は、液体で満たすことによって拡張することができる容器（または「バルーン」）２２０を含んでいてよい。そのようにして、図２Ｂに示す通り拡張した場合、容器２２０は液体で満たされて拡張することができ、光偏向要素２１０を周囲の血管１２０の壁に向かって押しやる。液体は、生理食塩水などといった任意の無毒性の液体であってよい。一例として、容器２２０はゴムやラテックスなどといった任意の弾性材料を含んでいてよい。制御ユニット１０５および／または検出／治療ユニット１１０は容器２２０へおよび容器２２０からの流量を制御することができ、そのためプローブ／カテーテル２００が伸長する場合液はそこへ送られ、プローブ／カテーテル２００が引き込まれる場合は排出される。有利なことに、液の量は周囲の血管１２０の大きさに合うように調節することができる。言い換えると、血管１２０が比較的小さい場合はより少ない液が送られ、血管１２０が比較的大きい場合はより多くの液が送られる。したがって、光偏向要素２１０は任意の大きさの血管１２０の壁に向かって動くことができる一方、光偏向要素２１０がより小さい血管１２０の壁に押しつけられることを防ぐ。
【０１６５】
図２Ｃおよび２Ｄそれぞれ図２Ａおよび２Ｂの断面図を示す図式である。容器２２０を拡張するかまたはさもなければ光偏向要素２１０を血管１２０の壁に向かって動かす場合、血管１２０を通る血流が妨げられないことが重要である。ゆえに、本発明の一実施形態に従って、液で満たされた際に容器２２０の特定の部分だけが拡張するように、容器２２０はいくつかの剛性要素２２５を含んでいてよい。一例として、固定式要素２２５は剛性材料、たとえば任意のプラスチックおよび／または金属性材料（たとえば、ニチノール合金）、などを含んでいてよい。図２Ｃおよび２Ｄに示す通り、容器２２０はプラスチック肋材などといった４個の剛性要素２２５を含んでいてよい。図２Ｄに示す通り、容器２２０の光供給要素２０５および光偏向要素２１０に隣接する領域だけが外側に拡張できる場合、剛性要素２２５は容器２２０を定位置に保つことができる。したがって、容器２２０は拡張する際に実質的に血管１２０を塞がない。光偏向要素２１０は、したがって、血流を妨げること無く血管１２０の壁へ向かって外へ動くことができる。
【０１６６】
図２Ｅおよび２Ｆは、本発明の一実施形態に従ったプローブ／カテーテル２００の断面図を図解する。図２Ｅおよび２Ｆに示す通り、容器２２０は特定の光偏向要素２１０に対応する孤立した室を含んでいてよい。したがって、任意の数の特定の光偏向要素２１０のそれぞれが容器２２０中のそのような室と対応することができ、そのため要素２１０は、各室を個別に膨張および収縮させることによって、血管１２０の壁へ向かってまたは壁から離れて個別に動かすことができる。治療光がたとえば先端２１５から血管１２０の対応する領域に向けられる場合、対応する領域が何らかの理由で検出または監視する必要が無い場合、または血管の特定の寸法に合わせるため、たとえば、図２Ｆに示す通り、室２３０は個別に収縮させる（すなわち、液を排出させる）ことができる。
【０１６７】
図３Ａ、３Ｂ、および３Ｃは、本発明の一実施形態に従ったプローブ／カテーテル３００を示す図式である。プローブ／カテーテル３００は、図３Ａおよび３Ｂに示す通り、プローブ／カテーテル３００はただ１個の光供給要素２０５および対応する光偏向要素２１０を含み得ることを除いて、図２Ａおよび２Ｂに示すプローブ／カテーテル２００とそれぞれ類似している。有利なことに、プローブ／カテーテル３００の断面積は、伸長して展開した場合に、さらに減少させることができる。たとえば、図３Ｃに示す通り、プローブ／カテーテル３００は、図２Ｄでプローブ／カテーテル２００について示される４本の突起と比較して、ただ１本の突起を含んでいてよい。結果として、血流の妨害はさらに減少するであろう。プローブ／カテーテル２００は、たとえば容器２２０を支持するために、基盤３０５を含んでいてよい。一例として、基盤３０５は剛性材料、たとえば任意のプラスチックおよび／または金属性材料（たとえば、ニチノール合金）、などを含んでいてよく、そのため基盤３０５は容器２２０が拡張し光偏向要素２１０を外側へ押しやる際に定位置に保たれる。前述の通り、光供給要素２０５は外部ユニット２０２から伸長した際に外側へ押す剛性構造を含んでいてよい。基盤３０５はそのような構造を支持することができる。
【０１６８】
図４Ａおよび４Ｂは、本発明の一実施形態に従ったプローブ／カテーテル４００を示す。図４Ａおよび４Ｂに示す通り、プローブ／カテーテル４００は、外部ユニット２０２に入れられている場合は図４Ａに示す通り圧縮され、伸長している場合は図４Ｂに示す通り拡張する、剛性構造上に配置された供給要素２０５を含んでいてよい。前述の通り、剛性構造は任意の弾性材料を含んでいてよく、そのためその構造は図４Ｂに示す通り、伸長する際はいつでも実質的に同じ大きさおよび形状に拡張する。一例として、剛性構造は任意のプラスチックおよび／または金属性材料（たとえば、ニチノール合金）などを含む。
【０１６９】
図５Ａおよび５Ｂは、本発明のそれぞれの実施形態に従った、光供給要素２０５および光偏向要素２１０を図解する図式である。図５Ａに示す通り、光偏向要素２１０は、光を標的範囲から偏向させて検出／治療ユニット１１０へ光供給要素２０５を通って戻らせる、および／または検出／励起光を光源１１３から標的範囲へ偏向させるための、反射面５０５および／または屈折要素５１０を含んでいてよい。本発明の一実施形態に従って、光源１１３は、別の波長および／または周波数を有する治療光のための光源を含んでいてよい。したがって、光偏向要素２１０は検出／励起光だけを偏向することができる一方、治療光を通過させることができる。図２Ａおよび２Ｂに戻って参照すると、周囲の血管１２０の壁上で治療を実施するために、通過した治療光は先端２１５で偏向させることができる。治療を実施する際、先端２１５からの治療光が光偏向要素２１０によってカバーされる範囲に届くことを確実にするため、プローブ／カテーテル２００はさらに部分的に伸長および／または引き込むことができる。
【０１７０】
図５Ｂは、図４Ａおよび４Ｂに示す通り、本発明の一実施形態に従って、プローブ／カテーテル４００に用いることができる光偏向要素２１０を図解する。図５Ｂに示す通り、治療光偏向ユニット５１５は光偏向要素２１０に隣接して配置することができる。検出されたプラークを取り囲む組織をカバーするようにより広く治療光の標的とするのが有利であるため、治療光偏向ユニット５１５は、周囲の血管１２０の壁をカバーするために、治療光を全方向に広げるまたは拡散させるための屈折材料を含んでいてよい。本発明の一実施形態に従って、治療光偏向ユニット５１５はまた、治療光を一般的方向または特定の範囲へ向けるための反射要素５２０を含むこともできる。このように、図４Ａおよび４Ｂに戻って参照すると、治療光偏向ユニット５１５は、光偏向要素２１０のそれぞれの末端すなわち先端に配置することができる。
【０１７１】
本発明の一実施形態に従って、検出／励起光および治療光は別々の光供給要素で伝えることができる。
【０１７２】
図６Ａ、６Ｂ、および６Ｃは、本発明の一実施形態に従ったプローブ／カテーテル６００を図解する。図６Ａに示す通り、プローブ／カテーテル６００は、放出されたおよび／または反射された光、放射性シグナル（たとえば、ガンマ線、ベータ線、など）、核同位体、ラジオ周波数／マイクロ波シグナル、磁場、電界、温度（たとえば熱）、振動、などを検出するための、シンチレーション検出器などといった検出器６０５を含んでいてよい。前記のうちいずれか１種類以上を検出することによって、周囲のプラーク／組織から標的プラークを同定および／または位置を特定することができる。図６Ａでさらに示す通り、プローブ／カテーテル６００はまた、治療光を周囲のプラーク／組織へ拡散するための、拡散ファイバーのような治療光偏向器６１０を含むこともできる。図６Ｂに示す通り、検出器６０５は独立して引き込むことができ、そのため治療光は標的プラーク／組織が検出される一般的方向または特定の範囲へ向けることができる。さらに、図６Ｃに示す通り、治療光偏向器６１０は、治療光が非標的方向へ拡散するのを遮断するため、シールドなどのような反射要素６１５を含んでいてよい。たとえば、検出器６０５が標的プラーク／組織を検出した後、検出器６０５を引き込むことができ、治療光偏向器６１０および反射要素６１５が治療光を検出器６０５によってカバーされる一般的方向および／または標的範囲だけへ拡散させることができる。本発明の一実施形態に従って、プローブ／カテーテル６００はたとえば血管１２０の中で回転することができ、そのため検出器６０５および治療光はその中で任意の方向へ向けることができる。
【０１７３】
図１６Ａおよび１６Ｂは、本発明の一実施形態に従ったプローブ／カテーテル１６００を図解する図式である。プローブ／カテーテル１６００は、開いた、すなわち中空の、中心領域１６０５を有する円筒形構造を含んでいてよく、そのためプローブ／カテーテル１６００が血管１２０中展開する場合、図１６Ｂに示す通り、血液は中心領域１６０５を通って流れることができる。１個以上の光供給および／または偏向要素１６１０を、円筒形構造の外表面に沿って配置することができる。光供給／偏向要素１６１０は、検出／励起光および／または治療光を光源１１３から送り、検出／励起光および／または治療光で円筒形構造の円周から周囲の血管１２０の壁に向かって外向きに照らすことができる。プローブ／カテーテル１６００は光供給／偏向要素１６１０のそれぞれについて対応する黒色シールマッシュ１６１５を含んでいてよい。黒色シールマッシュ１６１５は光供給／偏向要素１６１０からのプローブ／カテーテル１６００の円筒形構造の内側部分の周囲に配置することができる。プローブ／カテーテル１６００はまた、円筒形構造の両端に黒色シールリング１６２０の一対を含むこともできる。好ましくは、図１６Ｂに示す通り、黒色シールリング１６２０は血管１２０の壁１６３０に埋め込まれる。黒色シールリング１６２０および黒色シールマッシュ１６１５は、光を吸収するおよび／または外向きに反射する材料を含んでいてよい。結果として、黒色シールリング１６２０および黒色シールマッシュ１６１５は、検出／励起光および／または治療光に標的にされる血管壁１６３５上の領域の周りに光シールを形成することができる。このようにして、黒色シールリング１６２０および黒色シールマッシュ１６１５は逸れた検出／励起光および／または治療光をいずれも吸収または外向きに偏向することができる。有利なことに、中心領域１６０５を通って流れる血液は逸れた検出／励起光および／または治療光のいずれからも保護される。プローブ／カテーテル１６００はさらに、液を満たすことによって拡張することができる容器（または「バルーン」）１６２５を含んでいてよい。液は任意の無毒性の液であってよいが、好ましくは透明な液である。容器１６２５は、ゴムまたはラテックスなどといった任意の弾性材料を含んでいてよく、好ましくは透明な材料を含む。制御ユニット１０５および／または検出／治療ユニット１１０は容器１６２５へのおよび容器１６２５からの流量を制御することができ、そのため図１６Ｂに示す通り、容器１６２５が液で満たされ拡張していて、血管１２０の壁１６３５に埋まる場合、液はそこへ送られる。結果として、黒色シールリング１６２０および容器１６２５光供給／偏向要素１６１０と周囲の血管１２０の壁１６３５との間にシールを形成することができる。言い換えれば、このシールは容器１２０中の血液が光供給／偏向要素１６１０と血管１２０の壁１６３５との間を流れることを防ぐ。有利なことに、検出／励起光および／または治療光は、血管１２０を通って流れる血液からの干渉は何も無しに、光供給／偏向要素１６１０から周囲の壁１６３５へ供給／偏向され得る。
【０１７４】
図１７Ａおよび１７Ｂは、本発明の一実施形態に従ったプローブ／カテーテル１７００を示す。図１７Ａおよび１７Ｂに示す通り、プローブ／カテーテル１７００は、外部ユニット１７０２、ａ治療用構造１７０５、ａ検出器１７１０、および容器１７１５を含んでいてよい。外部ユニット１７０２、検出器１７１０、および容器１７１５は、上記の通りの外部ユニット２０２、検出器６０５、および容器２２０とそれぞれ同様の方法で動作する。そのような動作の説明はここでは繰り返さない。
【０１７５】
プローブ／カテーテル１７００は、有利なことに、アテローム硬化性傷害へのより正確な薬剤の送達を可能にする治療放出系を含んでいてよい。本装置および方法は、プラークが診断された領域の直接の範囲への治療法の配置を可能にする。検出器１７１０は蛍光、温度、またはベータ線検出プローブを含んでいてよく、治療用構造１７０５は薬物を加えたステントを含んでいてよい。 
図１７Ａおよび１７Ｂに示す通り、検出器１７１０およびステント１７０５は、バルーンカテーテル法に用いられるカテーテル型上に搭載することができる。プローブ／カテーテル１７００は、カテーテル法の医師によって用いられるように、大腿動脈または頸動脈へ挿入することができる。プローブ／カテーテルは、不安定プラークまたはプラーク域が、動脈壁上でのそれらのベータ放射線、温度、または蛍光放出の量の増加によって検出されるまで、動脈を通して動かすことができる。上記の通り、検出は、予め注射された、プラークを標的とする診断薬のベータ線放出シグナルまたは蛍光色の増加、または炎症過程のための温度上昇によって判定することができる。プラーク形成領域、プラーク、または不安定プラークの位置が検出された後ステント１７０５を外部ユニット１７０２から、図１７Ｂに示す通り押し出すことができる。ステント１７０５は、このようにして、容器１７１５を膨張させることによって、動脈壁上またはその近くの正確な位置へ移動することができる。ステント１７０５は、プローブ／カテーテル１７００の下側の部分に付けることができ、プラークの正確な位置が決定された後、ステント１７０５をスリーブの動作と似た動作によって配置することができる。別の一実施形態に従って、ステント１７０５はプローブ／カテーテル１７００のカバーであってよく、容器１７１５を診断されたプラークの範囲で膨張させることによって展開することができる。プローブ／カテーテル１７００は、次いで膨張したステント１７０５から切り離すことができる。
【０１７６】
ステント１７０５の被覆中にまたはステント１７０５上の多孔性支持体の一体化された一部として組み込まれている、内膜過形成または不安定プラークを治療するかまたはその形成を妨げる治療用化合物が、不安定プラークまたは再狭窄が起こり得る正確な位置で放出される。薬物または放射線治療は、ステント１７０５上の小さい多孔性の空洞で組み立てられるかまたは吸収され、直接にまたは別の薬物の送達を介して患者の体へゆっくりと放出される。さらに、薬物、ペプチド、糖ペプチドタンパク質、糖タンパク質、アンチセンス、ＤＮＡ、またはそれらの改変物がステント１７０５上に付加または固定される。生分解性ポリマーまたは特別に修飾された送達ポリマー、および薬物を、有機または無機化学マトリックスに封じ、ステント１７０５上に固定することができる。ステント１７０５は、ステント１７０５と組み合わせてプラーク形成または血栓をコントロール、防止、または治療するために時々全身投与される抗感染薬またはその他のプラーク防止薬から選択される薬物を誘引および／または結合し得る、抗体またはリガンドまたは化合物で被覆するかまたは他の形でそれらに結合させることができる。ステント１７０５は、ゾルゲル、フルレン、またはその他の不活性な無機または有機マトリックスといった形の捕捉された酵素を有していてよい。
【０１７７】
検出器１７１０がベータ線放出放射能検出器である場合、ステント１７０５は、プラークの位置を見出す動作中に、検出器１７１０から十分遠い距離を引き戻される。これは不安定プラークにおける放射能蓄積からの誤測定を防ぐことができる。ベータ線は数ミリメートルの動脈切開術ではレンジが短いため、検出器１７１０の測定値に影響を与えるものは何でも、ステント１７０５をそのような距離引き込むことによって防ぐことができる。
【０１７８】
治療化合物の例は下記を含む；短い治療のためには、組織を治療するのに必要である放射線を発することができる放射性核種に組織を物理的に曝露することなく、適当な治療放射性核種をマトリックス中に封じることができる；マトリックス中の６ＣＤ３９または類似の構造のようなＮＴＰａｓｅといった酵素で、酵素またはポリマー由来酵素が組織と接触することがない。化学的前駆体はマトリックスを通って自由に動くことができ、プラーク防止型に変換される。ＮＴＰａｓｅの場合は、ＡＤＰの分解が、プラーク内過形成が作られるのを防ぐことができる。
【０１７９】
本発明はさらに、本発明およびその多数の利点のよりよい理解を与える、下記の説明的で非制限的な実施例によって説明される。
【実施例１】
【０１８０】
光増感剤組成物の調製および精製
マレイル化アルブミンと結合したクロリンｅ６（「ｃｅ６」）を含む）光増感剤組成物を、不安定プラーク動物モデル系のマクロファージへの最適標的化のために調製した。
【０１８１】
結果
４種類の光増感剤組成物を試験した（すなわち、２種類のＢＳＡ−ｃｅ６結合体およびその対応するマレイル化物）。ｃｅ６のＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステルは、約１．５当量のジシクロヘキシルカルボジイミドと約１．５当量のＮＨＳを約１当量のｃｅ６ （Ｐｏｒｐｈｙｒｉｎ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ， Ｌｏｇａｎ， ＵＴ）と乾燥ＤＭＳＯ中で反応させることによって調製した。暗所室温で約２４時間放置後、ＮＨＳエステルをその後の使用のために分割して凍結した。ＢＳＡ （Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ， Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ， ＭＯ）（約２×５０ｍｇ）をＮａＨＣＯ３緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ９．３、約３ｍｌ）に溶解し、約３０μｌおよび約１２０μｌのｃｅ６−ＮＨＳエステルをそれぞれの試験管に加えてボルテックスで混合した。暗所で室温にて約６時間放置後、粗結合体調製物をそれぞれ２つのほぼ等しい部分に分割した。それぞれの結合体調製物の一部分を、固体無水マレイン酸（約２０ｍｇ）を少しずつタンパク質調製物に加え、ボルテックスで混合し、ｐＨを約７．０より高く保つのに必要なだけ飽和ＮａＨＣＯ３溶液を加えることによって、マレイル化した（Ｔａｋａｔａ ｅｔ ａｌ． （１９８９） Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ ９８４； ２７３）。反応混合物を室温で暗所にて約３時間放置した（図７）。結合体の細胞取り込みの対象としておよび競合物質として作用させるために、未修飾のＢＳＡもまたマレイル化した。
【０１８２】
粗結合体調製物（約５ｍｇ／ｍｌ）を約１０×容量のアセトン（ＡＣＳグレード）にゆっくりと約４℃で加え、約４℃で約６時間保ち、その後約４０００×ｇで約１５分間、約４℃で遠心分離した。上清を除去し、沈澱を再び概ね同量のアセトンに懸濁し、遠心分離を繰り返した。各沈澱工程後に、沈澱は薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって観察した。非共有結合したクロリン種を完全に除去するためには、約５回の沈澱工程が必要であった。最後に、沈澱を約２ｍｌのＰＢＳに溶解し、痕跡量のアセトンを除去するために、２０ＬのＰＢＳに対して一夜、約２回透析した。
【０１８３】
約５０ｍｇのＢＳＡと約５ｍｇのｃｅ６−ＮＨＳエステルとの結合からの反応混合物を５０×１ｃｍのＳｅｐｈａｄｅｘカラムに負荷し、ＰＢＳを用いて約４℃で溶出することによって、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ５０カラムクロマトグラフィーを実施した。溶出画分の吸光度を４００ｎｍおよび２８０ｎｍで観察した。
【０１８４】
テトラピロール光増感剤（ＰＳ）のタンパク質との共有結合体の調製において直面し得る問題は、色素が固く結合した非共有結合複合体を、結合体と同様に形成する傾向である。これらの混合物は、純粋な結合体と非結合色素に分離するのが困難であろう。これは、ＢＳＡ−ｃｅ６結合体を未反応のＣｅ６−ＮＨＳエステルおよびその後の反応生成物から分離するためのＳｅｐｈａｄｅｘＧ５０カラムの使用の試みによって説明される。４００ｎｍおよび２８０ｎｍでの溶出画分の監視は、ｃｅ６およびタンパク質の両方を含む単一のピークを示した。しかし、画分を合わせて得られた材料をＴＬＣで調べた場合、図８Ａに示す通り、相当な量の非結合色素が存在したことが明らかであった。ＴＬＣのレーン１は、サイズ排除カラムから単離された単一のピークを示し、速く展開されるスポットとしてまだ相当な非結合ｃｅ６が存在したことを実証する。この材料が細胞取り込み実験に用いられた場合、受容体陽性および受容体陰性細胞の両方による非結合ｃｅ６の無差別の取り込みが原因で、Ｊ７７４とＥＭＴ−６細胞の間の受容体標的化を識別するのが困難であった。同様に、レーン３はマレイル化後の粗混合物を示し、また、非結合ｃｅ６が存在したことを示す。
【０１８５】
したがって、結合体は、親油性のｃｅ６種がアセトン上清に保持され、沈澱した結合体が精製形で再溶解されることを可能にする、アセトン沈澱を用いて精製された。ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミド（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）ゲルは蛍光画像処理で観察しクマシーブルーで染色後にｃｅ６の位置を特定した。図８Ｂは、ＢＳＡ、遊離ｃｅ６と混合したＢＳＡ、およびＳｅｐａｈａｄｅｘカラムクロマトグラフィー後であるがアセトン沈澱前の結合体（ＢＳＡ−ｃｅ６１およびｍａｌ−ＢＳＡ−ｃｅ６１）の、対応する蛍光およびクマシー画像を示す。ＢＳＡとｃｅ６の混合物（レーン２ａおよび２ｂ）は、蛍光はゲル上のタンパク質バンドに保持されていないことを示し、したがってタンパク質と共に局在化している蛍光バンドは共有結合の証拠であることを実証した。結合体のレーン（３ａおよび３ｂ、４ａおよび４ｂ）は、ゲルフロントに展開される蛍光バンドがＳｅｐｈａｄｅｘクロマトグラフィー後に残ったことを示す。
【０１８６】
結合体のアセトン沈澱による精製の効率性は、図８Ｃに示すゲル電気泳動画像によって確認された。速く展開する蛍光バンドがＢＳＡ−ｃｅ６およびｍａｌ−ＢＳＡ−ｃｅ６（レーン２ｃと２ｄ、３ｃと３ｄ）の両方から消失したのが見られる一方、ＴＬＣもまた速く展開するスポットの消失を示した（図８Ａ、レーン２および４）
結合体中の成分の濃度および、したがって置換率は、吸光度スペクトル法によって測定した。結合体の部分標本を約０．１ＭＮａＯＨ／１%ＳＤＳで希釈し、２４０ｎｍないし７００ｎｍの吸光度を走査した。ＢＳＡの２８０ｎｍでの減衰係数は約４７０００ｃｍ−１Ｍ−１（Ｍａｒｋｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ． （１９７８） Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ８７； ２０６）である一方、ｃｅ６の４００ｎｍでの減衰係数は約１５００００ｃｍ−−１Ｍ−１である。薄層クロマトグラフィーをシリカゲルプレートで実施した（Ｐｏｌｙｇｒａｍ ＳＩＬ Ｇ／ＵＶ２５４， Ｍａｃｈｅｒｅｙ Ｎａｇｅｌ， Ｄｕｒｅｎ， Ｇｅｒｍａｎｙ）。クロマトグラムは約１０%塩化アンモニウム水溶液とメタノールの約１；１混合物を用いて展開し、スポットは蛍光および吸光度画像処理を用いて観察した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥは本質的に当該分野で既知の方法に従って実施した（Ｌａｅｍｍｌｉ （１９７０） Ｎａｔｕｒｅ ２２７； ６８０）。非還元ゲル中の４−１０%アクリルアミドの勾配を用いて、Ｃｅ６は蛍光光度計によってゲル上で位置を特定された（励起は４００〜４４０ｎｍバンドパスフィルターで、放出は５８０〜７２０ｎｍロングパスフィルターから走査（ＣｈｅｍｉＩｍａｇｅｒ ４０００， Ａｌｐｈａ Ｉｎｎｏｔｅｃｈ Ｃｏｒｐ， Ｓａｎ Ｌｅａｎｄｒｏ， ＣＡ）。 タンパク質はクマシーブルー染色によって局在化した。
【０１８７】
ほぼ等しいタンパク質濃度で測定した２つの置換比を有する精製ｍａｌ−ＢＳＡ−ｃｅ６結合体のＵＶ−可視吸収スペクトルを、ｍａｌ−ＢＳＡ−ｃｅ６２に存在するのとほぼ同じ濃度での遊離ｃｅ６と共に図９に示す。ＢＳＡ−ｃｅ６１および２について同様のスペクトルが得られた。ＢＳＡの２８０ｎｍで約４７０００ｃｍ−１Ｍ−１（Ｍａｒｋｗｅｌｌｅｔａｌ（１９７８）ＡｎａｌＢｉｏｃｈｅｍ８７；２０６）およびＣｅ６の４００ｎｍで約１５００００ｃｍ−１Ｍ−１のモル減衰係数の値を用い、ｃｅ６の２８０ｎｍでの小さい吸収について補正し、その後、置換率は、ｍａｌ−ＢＳＡ−ｃｅ６１比は約１タンパク質対約１色素に等しく、ｍａｌ−ＢＳＡ−ｃｅ６２比は約１タンパク質対約３色素に等しいと計算することができる。
【実施例２】
【０１８８】
光増感剤のマクロファージ標的化
実施例１に記載のマレイル化アルブミンと結合したクロリンｅ６を含む光増感剤組成物は、ヒトの不安定プラークに類似した動物モデル系のマクロファージに富むプラークに蓄積することが示された。したがって、本発明の方法は不安定プラークの高度に特異的な血管内検出および治療を提供する。
【０１８９】
細胞培養
Ｊ７７４．Ａ１（Ｊ７７４）およびＲＡＷ２６４．７マウスマクロファージ様細胞株は、ＥＭＴ−６マウス乳腺線維肉腫細胞と共に、ＡＴＣＣ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ， ＭＤ）から入手した。細胞は、ＨＥＰＥＳ、グルタミン、１０%ウシ胎児血清（ＦＣＳ）、１００Ｕ／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ１６４０培地で増殖させた。細胞は、Ｃａ２＋およびＭｇ２＋を含まないリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、トリプシン−ＥＤＴＡをプレートに１０分間３７℃で加えることによって継代した。
【０１９０】
ウサギ
雄性ニュージーランドホワイトウサギ、体重２．５〜３．０ｋｇ（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ Ｌａｂ）は２% コレステロール−６% ピーナツ油飼料 （ＩＣＮ）で６ 週間飼育した。
【０１９１】
結果
細胞取り込み試験については、細胞は２４ウェルプレートで約９０%集密まで増殖し、結合体または光増感剤を、約１０%の血清を含む約１ｍｌの培地中で各ウェルに加えた。結合体および遊離ｃｅ６の濃度範囲は約０．５ないし４μＭｃｅ６当量で、インキュベート時間は約３時間であった。３７℃でインキュベート後、培地を除去し細胞を約３回、約１ｍｌの滅菌ＰＢＳを用いて洗浄し、約１ｍｌトリプシン−ＥＤＴＡと共に約２０分間（ＯＶＣＡＲ−５）または６０分間（Ｊ７７４）インキュベートした。細胞懸濁液をその後除去して遠心分離した（約５分間、約２５０×ｇ）。トリプシン上清を吸飲して保存し、沈澱（しばしば長波ＵＶ下で目に見えて蛍光を発する）を約１．５ｍｌの約０．１Ｍ ＮａＯＨ／１%ＳＤＳに少なくとも約２４時間溶解し、均一な溶液を与えた。トリプシン上清は蛍光の存在についてチェックし、トリプシンによって容易に除去される何らかの表面結合を定量した。蛍光は励起波長４００ｎｍを用いて測定し、放出はピーク面積を計算するために５８０から７００ｎｍまでを走査した（λｍａｘ＝６６４ｎｍ）。測定されたピーク面積のモルｃｅ６当量への変換によってｃｅ６の定量を可能にするように較正曲線を作成するために、それぞれ別々の結合体および光増感剤の既知の濃度の、約１．５ｍｌの０．１Ｍ ＮａＯＨ／１%ＳＤＳ中の系列希釈を上記の通り蛍光について走査した。細胞抽出物全体のタンパク質含量をその後、較正曲線を作成するために約０．１Ｍ ＮａＯＨ／１%ＳＤＳに溶解したＢＳＡを用いて、改変Ｌｏｗｒｙ法（Ｍａｒｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ （１９７８） Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ８７；２９６）によって測定した。結果は細胞タンパク質ｍｇ当たりのｃｅ６のモル数で表した。４℃での細胞取り込みを測定するために、予冷した培地を用い、細胞を含むプレートは光増感剤溶液の添加前および添加後に氷浴中で約２０分間、約４℃に冷却した。インキュベートは通常の雰囲気下で暗所にて実施した（たとえば、アルミ箔に包んだプレート）。
【０１９２】
細胞は約１ｍｌの培地中に細胞約１００，０００個の密度で２４ウェルプレートに播種した。約２４時間後、細胞に１０%血清および特定の結合体または遊離ｃｅ６を含む約１ｍｌの新しい培地を与え（ウェル当たり役４ｎｍｏｌのｃｅ６当量濃度）、約３時間３７℃でインキュベートした。照射の直前に、細胞はＭｇ２＋／Ｃａ２＋を含むＰＢＳで約３回洗浄し、ウェルにはＨＥＰＥＳおよび約１０%のＦＣＳを含む培地約１ｍｌを補給した。光（６６０ｎｍ）はウェルの下から、約５０ｍＷ／ｃｍ２のフルエンス率でダイオードレーザーから、光ファイバーと組み合わせた顕微鏡対物レンズを通じて供給した。ウェルは２４ウェルプレートの下に置いた黒色マスクで規定した４つのブロックとして照射した。フルエンスは約２、５、および１０Ｊ／ｃｍ２であった。照射の完了後、培養皿はさらに約２４時間の培養のためインキュベーターに戻した。細胞生存率は、ミトコンドリアデヒドロゲナーゼ活性を測定する、臭化３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム（ＭＴＴ）分析法によって測定した。それはＰＤＴ後に培養細胞の生存度を測定するために広く用いられており、コロニー形成分析法と密な相関を有することが示されている（ＭｃＨａｌｅ ｅｔ ａｌ （１９８８） Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４１； ３１５）。照射後約２４時間、細胞に新しい培地を供給し、約１００μｌのＭＴＴ（５ｍｇ／ｍｌ）溶液を各ウェルに加え、細胞を３７℃でインキュベートした。約１時間インキュベート後、上清培地を静かに吸引し、約１ｍｌのＤＭＳＯを加えて細胞を溶解し、深青のホルマザンを溶解する。プレートをオービタル振とう機で暗所にて約１５分間緩やかに振とうし、ホルマザン結晶があれば溶解を完了し、青色のＤＭＳＯ溶液を９６ウェルプレートに移した（ウェル当たり約２００μｌ、２４ウェルプレートの１ウェル当たり５ウェル）。吸光度は、自動プレートリーダーにおいて５７０ｎｍで読み取った（Ｍｏｄｅｌ ２５５０ ＥＩＡ， Ｂｉｏ− Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｈｅｒｃｕｌｅｓ， ＣＡ）。データ点は２４ウェルプレートの３ウェルの平均であった（９６ウェルプレートの１５ウェル）。 
スカベンジャー受容体によって認識されることが知られているリガンドと取り込みを競合することによって生じる、光増感剤の細胞含量の減少を測定することによって、これらの結合体の取り込みにおけるスカベンジャー受容体の役割を試験した。次に、細胞取り込みの減少を、光毒性からの細胞の保護と関係づけた。非標識ｍａｌ−ＢＳＡの増加する量を、結合体と同時にＪ７７４およびＯＶＣＡＲ−５細胞に加え、約３時間インキュベートした。約０、５０、１００、および２００μｇ／ｍｌのｍａｌ−ＢＳＡを使用し、約４μＭのＢＳＡ−ｃｅ６またはｍａｌ−ＢＳＡ−Ｃｅ６に含まれるＢＳＡの約０．２５から３倍のモル数過剰の範囲に相当した。細胞取り込みおよび光毒性は上記の通り測定した。
【０１９３】
マウス−マクロファージ細胞（Ｊ７７４またはＲＡＷ２６４．７）は、非標的ＥＭＴ−６細胞の１０倍より多い色素を取り込み、適当なレベルの赤色光の照射に際して、約１０００倍多く死滅した。マレイル化結合体はより大きなマクロファージ選択性を有し、したがって、その非マレイル化対応物より高い光毒性を有した（図１０）。
【０１９４】
ピーナツオイル食で１週間後、腹部大動脈から改変Ｂａｕｍｇａｒｔｅｎｅｒ法によって内皮を剥離した。要約すると、各動物をケタミンおよびキシラジンの混合物で麻酔し、右大腿動脈を単離した。その後、４Ｆ Ｆｏｇａｒｔｙ塞栓摘出術カテーテルを、動脈切開術を経由して導入し、蛍光透視法の誘導で横隔膜のレベルまで進めた。バルーンをその後バルーン膨張圧の３ｐｓｉ上まで膨張し、膨張したカテーテルを用いて腹部大動脈を下って３つの流路が作られた。大腿動脈はその後結紮され創は閉じられた。
【０１９５】
ｅｘ ｖｉｖｏ大動脈内での蛍光局在化のためには、大動脈切片を切り開いて平らにし、内腔側を分光蛍光法によって、露出した内膜表面の全範囲にわたって放出スペクトル（励起４００ｎｍ、放出５８０〜７２０ｎｍ）が約３ｍｍ毎に集められる、ファイバー束に基づく２単色光分光蛍光計（ＳｋｉｎＳｃａｎ、ＳｐｅｘＦｉｇｕｒｅ）、または多チャンネル分光器（図１１）によって検討する。
【０１９６】
共焦点蛍光顕微鏡法のためには、大動脈の選択された部分を液体窒素中で急速凍結し、約１０〜２０μｍの凍結切片を調製した。これらの切片はレーザー走査共焦点蛍光顕微鏡法を受け、ｃｅ６の組織分布を検出した。Ｃｅ６からの細胞内の赤色蛍光を緑色の組織自己蛍光と共に１０μｍ凍結切片中の細胞で画像化した。切片はレーザー走査共焦点蛍光顕微鏡を用いて調べた。ライカＤＭＲ共焦点レーザー蛍光顕微鏡（Ｌｅｉｃａ Ｍｉｋｒｏｓｋｏｐｉｅ ｕｎｄ Ｓｙｓｔｅｍｅ ＧｍｂＨ， Ｗｅｔｚｌｅｒ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（励起４８８ｎｍアルゴンレーザー）および４×〜４０×空気浸レンズまたは１００×油浸対物レンズを用いて１０２４ｘ１０２４ピクセルの解像度で画像化した。２つのチャンネルが蛍光シグナルを緑色範囲（５８０ｎｍ二色性鏡に加えて５３０ｎｍ（＋／−１０ｎｍ）バンドパスフィルター）または赤色範囲（５８０ｎｍ二色性鏡に加えて５９０ｎｍロングパスフィルター）のいずれかで回収し、擬似彩色画像として表示した。これらのチャンネルはＴＣＳＮＴソフトウェア（バージョン１．６．５５１， Ｌｅｉｃａ Ｌａｓｅｒｔｅｃｈｎｉｋ， Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ， Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて重ね合わせ、赤および緑蛍光の重ね合わせの視覚化を可能にした。これらの切片はまた、免疫組織化学法によってマクロファージ特異的モノクローナル抗体および従来のＨ&Ｅ染色を用いて染色した。正常およびアテローム硬化性大動脈のその他の部分は小片に切断し、重量測定して水酸化ナトリウム／ＳＤＳに溶解し、ｃｅ６の組織含量を前記の通り蛍光分光法によって測定した（Ｈａｍｂｌｉｎ ｅｔ ａｌ （２０００） Ｂｒ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ ８３； １５４４）。 
図１２は、結合体（約２ｍｇ／ｋｇ、ＰＢＳ溶液）ありまたは無しの注射を受けたウサギ由来の大動脈切片の、結合体の注射の約２４時間後の分析を示す。１行目は凍結大動脈切片の共焦点蛍光顕微鏡写真を示す（赤＝クロリンｅ６、緑＝弾性板自己蛍光）。２行目はｅｘ ｖｉｖｏの大動脈切片の内膜表面の蛍光発光スペクトル（励起＝４００ｎｍ）を示す。３行目はホルマリン固定パラフィン包埋大動脈切片のヘマトキシリンおよびエオシン染色を示す。４行目はＶｅｒｈｏｅｆｆの弾性組織染色を示す。共焦点顕微鏡写真は、ＰＳ（ｃｅ６）由来の赤色蛍光および主に動脈の弾性板由来の緑色自己蛍光を示した。１列目は結合体を注射しないアテローム硬化性ウサギを示す。組織断面中に赤色ｃｅ６蛍光は無く、内膜表面からの蛍光シグナルも無かった。２列目は結合体を注射した正常な非アテローム硬化性ウサギを示す。蛍光顕微鏡写真には、内膜でなく外膜に見える少量の赤色蛍光があり、内膜表面からの小さい蛍光放出シグナルがある。３列目は結合体を注射したアテローム硬化性ウサギを示す。プラーク中に見える多量の赤色蛍光があり、これは内膜表面からの対応する大きな蛍光放出シグナルを与えた。
【０１９７】
内膜性蛍光シグナルは、アテローム硬化性および正常ウサギに由来する大動脈の異なる切片から測定した。バルーン傷害を受けた腹部大動脈の範囲は、近傍の胸大動脈および下側腹部大動脈より多量のプラークを生じた。内膜性蛍光測定からの結果は、大動脈の切片を抽出し、組織切片中のｃｅ６分子の数の指標を与える分光蛍光計で蛍光を測定することによって確認された。
【０１９８】
図１３は、アテローム硬化性ウサギ由来のすべての切片における、結合体を注射された正常ウサギ由来の対応する大動脈切片と比較した、内膜表面からの有意な蛍光シグナルを示すが（ＳｋｉｎＳｃａｎで測定）、バルーンで傷害された部分に由来する切片で特に高い。切片１は胸大動脈を表し、切片２は横隔膜下の上側腹部大動脈を表し、切片３は中間部腹部大動脈を表し、切片４は下側腹部大動脈を表し、および切片５は分岐の直上の下部大動脈を表す。各動脈切片から少なくとも６回の別個の測定が行われた。バルーン傷害の性質上、切片３および４は一般的に他の切片よりも重度の内皮傷害を受け、ゆえにより重度のアテローム性動脈硬化を生じた。これらのプラークは極めてマクロファージに富み、したがって、ヒトにおける不安定プラークと非常に類似している。そのような病変は、不安定プラークの特性を研究するために当業者によって用いられる動物モデル系を務める。アテローム硬化性ウサギの切片３からのシグナルは正常対照の切片３よりも大きく（ｐ<０．０００５）、アテローム硬化性切片４からのシグナルは正常対照切片４よりも大きかった（ｐ<０．００５）。
【０１９９】
内膜表面蛍光の第二の測定は、上記のＯＭＡ−ＬＩＦ系によって行われた。少なくとも１５回の別個の蛍光測定が各動脈断片から取られた。加えて、バルーンを通した腸骨動脈もまた、大動脈切片５と比較して相対的に小さい直径が原因で傷害を受け、したがって、傷害を受けていない腸骨動脈と比較してアテローム性動脈硬化を発症した。図１３は炎症性プラークを有する動脈（すなわち、バルーンで傷害された大動脈および腸骨動脈）における蛍光の高度に有意な増加と共に見ることができるＳｋｉｎＳｃａｎ測定と類似したパターンを示す。正常対照と比較してアテローム硬化性の切片３、４および傷害された腸骨動脈はｐ値<０．０００１であった一方、切片５および傷害されていない腸骨動脈はｐ値<０．０００５であった。したがって、重症度がより低い切片５のプラークは、切片３および４のマクロファージに富むプラークから識別可能である。切片１および２はアテローム硬化性ウサギと正常ウサギで有意差が無かった。
【０２００】
マクロファージを標的とする結合体の炎症性プラークに対する選択性を確認するため、予め重量を測定した組織切片から、ｃｅ６蛍光を保存するように設計された溶媒（１Ｍ ＮａＯＨ／０．２%ＳＤＳ）に組織を溶解することによって色素分子を抽出した。これらの溶解した組織切片はその後分光蛍光計で測定し、蛍光シグナルは組織重量で割って組織グラム当たりの値を出した。各データ点について少なくとも４片の組織が溶解された。アテローム硬化性ウサギと正常ウサギの間の差は、切片１、２、および４について有意であった（ｐ<０．０５）。この分析における有意水準がより低いことはおそらく、表面蛍光測定について可能であったほどに多数の点を標本にすることができなかったことが原因であった。加えて、マクロファージはプラークの炎症性表面に集中している可能性がより高いため、マクロファージ集団を検出するには蛍光の表面測定が大量抽出よりも高感度である可能性がある。
【０２０１】
図１４ａで、大きな大動脈プラークと腹部大動脈のプラークの５ｍｍ下の部分との間に顕著な対照が見られた。図１４ｂでは、同一のウサギのバルーンで傷害された腸骨動脈と対側の正常動脈との間に別の顕著な対照が見られた。同様に、図１４ｃはアテローム硬化性ウサギのプラークを持つ大動脈と正常ウサギの大動脈の同じ部分の間の対照を示す。これらのスペクトルは、過量の麻酔を与えられたウサギで得られた。ウサギは腹部大動脈および腸骨動脈を露出する開腹術を受けた。ウサギはまた大腿動脈を露出するために左足に動脈切開術を受けた。ＯＭＡ−ＬＩＦ装置の光ファイバーカテーテルは大腿動脈および腸骨動脈を通って腹部大動脈へ、胸大動脈まで進められた。スペクトルが得られ、光ファイバーカテーテルは連続的なスペクトルが得られるたびに約５ｍｍ引き返した。動脈の外側の触診によって、プラークに対するカテーテルの位置が決められた。
【０２０２】
このようにして、不安定プラークの活性化されたマクロファージを高い特異性で光増感剤組成物の標的とする新規の方法が開発された。
【実施例３】
【０２０３】
Ｉｎ ｖｉｖｏ光力学療法
ウサギ冠動脈中の（ウサギに限らないが）不安定プラークからの蛍光シグナルを、血流を通じて効率的に局在化させる血管内蛍光カテーテルが開発された。加えて、光の適当な波長、フルエンス、およびフルエンス率で、不安定プラークを、血流を通じて照射し、目的の治療効果を達成する、治療的血管内光供給系が開発された。
【０２０４】
結果
ウサギ大動脈におけるＰＤＴが、ｉｎ ｖｉｖｏで生きたウサギにおいて血流を通じて、ウサギへの必要以上の害無しでまた短期毒性無しで可能であることが実証された。以前に測定されたプラーク病変における色素局在化と治療効果とを相関させることができるように、動脈切開術では上記と同じパラメータが用いられた（光増感剤組成物、容量、および時間間隔）。動物（アテローム硬化性ウサギ１個体および正常ウサギ１個体、それぞれ２４時間前にＭａｌ−ＢＳＡ−ｃｅ６を注射された；および注射されていないアテローム硬化性ウサギ１個体）は前と同様に麻酔し、円筒形の、拡散先端を有する光ファイバー（先端の長さ＝２ｃｍ、直径＝１ｍｍ）が、バルーンで傷害された腹部大動脈に沿って中間の位置まで進められた。ファイバーは近い側の末端にＳＭＡコネクターを有し、Ｍａｌ−ＢＳＡ−ｃｅ６のための約６６５ｎｍの光を発するダイオードレーザーと接続することができる。光は拡散先端の約１００ｍＷ／ｃｍのフルエンス率で供給され、総フルエンス約１００Ｊ／ｃｍが供給された。照射の終了時に、ファイバーを回収し、動脈切開およびその上の創部を閉じた。動物は４８時間時間後に屠殺した。動物は開腹術を受け、大動脈と周囲組織を外科的に曝露した（図１５Ａ）。図１５Ａの上図は大腿動脈に挿入された拡散先端カテーテルを介した腹部大動脈への光供給を示し、動脈内照射の実現可能性を実証する。図１５Ａの中図は、大動脈外の組織へ光が透過しないほど厚いアテローム硬化性大動脈を示す。図１５Ａの下図は、光が透過して腰筋にわずかであるが明らかな損傷を与えるほど薄い正常大動脈を示す。完全な大動脈および腸骨動脈を、ＰＤＴ処理正常ウサギおよびアテローム硬化性ウサギおよび対照（Ｍａｌ−ＢＳＡ−ｃｅ６注射無し）アテローム硬化性ウサギから取り出し、Ｈ&Ｅ、マッソントリクロームおよびＶｅｒｈｏｅｆｆｓ染色を用いて組織学的に検査した。
【０２０５】
光増感剤組成物と光の両方を与えられた２個体のウサギは、屠殺前に生存した２日間に治療の悪影響を示さなかった。剖検で、アテローム硬化性ウサギは照射した大動脈切片または周囲組織に目に見える肉眼的損傷は無かった。対照的に、正常ウサギは、大動脈周囲の筋肉に出血および紫斑から成るいくらかの小さい損傷があった理論に縛られることなく、この損傷は、正常動脈の厚さはアテローム硬化性大動脈よりもはるかに少なく、結果として多量の光が動脈を透過して周囲組織を照射したために生じたと仮定される。光を与えられたが結合体は投与されなかったアテローム硬化性ウサギは、動脈または周囲組織のいくらかの変化を伴った。
【０２０６】
動脈の組織検査（図１５Ｂ．上図；ＰＤＴ処理アテローム硬化性大動脈の組織病理検査；下図；光を与えられたが結合体を投与されなかったアテローム硬化性大動脈の組織病理検査）は、結合体と光の両方を与えられたアテローム硬化性ウサギの照射された切片における変化を示し、標的組織におけるＰＤＴ効果と合致した。プラーク中にアポトーシスの証拠（萎縮核）および炎症性浸潤物が存在し（図１５Ｂ、左図）、一部の凝固壊死（図１５Ｂ、中図）、および脈管の脈管およびプラークにおける可視的損傷に由来した可能性がある血管外赤血球を伴う（図１５Ｂ、右図）。総合して、これらの組織学的データは、治療はプラークの組織像に有利な変化を生じ、不安定性を低下させたことを示す。組織学的変化は光増感剤組成物および光を与えられた正常ウサギでは観察されず、光を与えられたが結合体は投与されなかったアテローム硬化性ウサギでは何の変化も観察されなかった。
【０２０７】
この技術は、冠状動脈における不安定プラークの局所的安定化を可能にし、結果として破裂のリスクを低下させる、新しい治療に対する明らかな必要を満足する。
【実施例４】
【０２０８】
放射性核種の放射シグナルのｉｎ ｖｉｖｏ検出
本発明の方法および装置は当業者に容易に使用される。
【０２０９】
９９ｍＴｃ標識Ａｐ４Ａ誘導体の合成
塩化第一スズおよびマンニトールをコリガンドとして用いてＴｃＯ４−還元によって、９９ｍＴｃ標識Ａｐ４Ａ誘導体（図１８）が合成されＨＰＬＣで特徴づけられた。製法はより高い収率および濃度のために最適化された。便利に合成された９９ｍＴｃ前駆体[９９ｍＴｃ（Ｃｏ）３（Ｈ２Ｏ３）]＋もまた使用した。前駆体[９９ｍＴｃ（Ｃｏ）３（Ｈ２Ｏ３）]＋を利用することによって、別のＴｃ−Ａｐ４Ａ複合体が誘導体プールから単離された。その前駆体は９９ｍＴｃＯ４の生理食塩水溶液および標準圧のＣＯから調製された。有機金属前駆体の新規のワンポット合成が、放射性医薬品における用途のために設計された（Ｓｃｈｕｂｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ． （１９９８） Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ １２０；７９８７−７９８８）。 
実験的 アテローム硬化性 病変の作製
体重２．５〜３． ０ ｋｇの雄性ニュージーランドホワイトウサギ （Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を２% コレステロール−６% ピーナツ油飼料（ＩＣＮ）で ３ヶ月飼育した。 高脂血症食の１週間後、腹部 大動脈の内皮を改変Ｂａｕｍｇａｒｔｅｎｅｒ法で剥離した（Ｎａｒｕｌａ， Ｊ． ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９２；４７４−４８４）。要約すると、各動物をケタミンおよびキシラジンの混合物（１００ ｍｇ／ｍｌ、１０； １ｖｏｌ／ｖｏｌ ； １．５−２． ５ ｍｌ皮下） で麻酔し、右大腿動脈を単離した。４Ｆ Ｆｏｇａｒｔｙ塞栓摘出術カテーテル（品番１２−０４０−４Ｆ； Ｅｄｗａｒｄｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｓａｎｔａ Ａｎａ， ＣＡ） を、動脈切開術を経由して導入し、蛍光透視法の誘導で横隔膜のレベルまで進めた。放射線用造影剤（Ｃｏｎｒａｙ， Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ）を用いてカテーテルをバルーン膨張圧の３ｐｓｉ上まで膨張し、膨張したカテーテルを用いて腹部大動脈を下って３つの流路が作られた。大腿動脈はその後結紮され創は閉じられた。動物は麻酔から回復させられその後ケージに戻された。
【０２１０】
アテローム硬化性ウサギおよび正常ウサギのガンマ線カメラ画像処理 
２から４ミリキュリーの９９ｍＴｃ−Ａｐ４Ａ−グルコヘプトン酸、９９ｍＴｃ−ＡｐｐＣＨＣｌｐｐＡ−グルコヘプトン酸、または９９ｍＴｃ−グルコヘプトン酸（対照）を、実験的アテローム硬化性病変を有するウサギ３個体の耳介辺縁静脈に注射した。対照として、病変の無い動物３個体に２〜４ｍＣｉの９９ｍＴｃ−Ａｐ４Ａ−グルコヘプトン酸を注射した。放射性医薬品の投与後、連続ガンマ線画像を、最初の５分間について毎分、次の２５分間について２分毎に、次の２．５時間について５分ごとに得た。高分解能平行孔コリメータを装備し専用コンピューターシステム（Ｔｅｃｈｎｉｃａｒｅ ５６０， Ｓｏｌｏｎ， ＯＨ）と接続された標準視野のガンマ線カメラ（Ｓｅｒｉｅｓ １００， Ｏｈｉｏ Ｎｕｃｌｅａｒ， Ｓｏｌｏｎ， ＯＨ）を用いることによって、すべてのウサギで、前方向および側位方向で心臓および大動脈を含む画像を得た。波高分析器は９９ｍＴｃの１４０ＫｅＶの光電ピークを記録するように調整され、すべての画像は２５６ｘ２５６マトリックスに記録された。
【０２１１】
最後の画像を取り込み後、動物を過量のペントバルビタールナトリウムで屠殺した。大動脈を摘出し、腹側表面に沿って開き、発泡スチレンブロックに乗せた。大動脈を次いでガンマ線カメラの表面に置き、ｅｘ ｖｉｖｏ画像を１０分間記録した。
【０２１２】
９９ｍＴｃ−Ａｐ４Ａの血中クリアランス
９９ｍＴｃ−Ａｐ４Ａ−グルコヘプトン酸の血中クリアランスは迅速であった。対照ウサギでは、循環中の放射能の濃度（%ＩＤ／ｇ）は注射後２分間で平均０．２５%となり、６０分間で０．０８%ＩＤ／ｇに減少し、その後はわずかでしかなかった（すなわち、最大１８０分間まで）。すべての群のウサギについて、血中クリアランスは（ｔ１／２ｓ）がそれぞれ約４および２５０分の速い構成成分および遅い構成成分についての二指数関数によってよく表される（図１９）。血中クリアランスは、アテローム硬化性病変を有するウサギと対照との間に有意差は無かった。
【０２１３】
結果 
実験的アテローム性動脈硬化を有するすべてのウサギが、病変部位で迅速な放射能の蓄積を示した；典型的な画像を図２０に示す。病変は注射後２０分以内に明瞭に可視的となり、放射能は画像処理時間の３時間全部にわたって病変に保持された。大動脈をｅｘ ｖｉｖｏで画像化した際、放射能分布のパターンは画像処理結果とよく似ていた（図２０）。切除した大動脈の目視検査で、ｉｎ ｖｉｖｏおよびｅｘ ｖｉｖｏ画像処理の結果と事実上同一の病変パターンが明らかになった（図２０）。対照的に、ｉｎ ｖｉｖｏおよびｅｘ ｖｉｖｏガンマ線カメラ画像処理の両方とも、病変の無いウサギの大動脈における限局性のトレーサーの蓄積の証拠を実証することはできなかった；典型的な画像は図２１に示す。大動脈標本の目視検査は血管損傷の証拠を示さなかった。アテローム硬化性ウサギの９９ｍＴｃ標識グルコヘプトン酸を用いた画像処理は、大動脈病変における特異的蓄積の証拠を示さず、画像は９９ｍＴｃ標識Ａｐ４ＡまたはＡｐｐＣＨＣｌｐｐＡを用いて画像処理した対照ウサギで得られたものと区別できなかった（データ記載せず）。このトレーサーを用いると、放射能はすべての器官から迅速に消失し（ｔｌ／２ｓ；５〜１０分）、腎臓および膀胱に蓄積した。
【０２１４】
１８Ｆ−ＦＤＧベータ線プローブを用いた不安定プラークの特徴づけ
さらに、ＦＤＧを２個体の別のウサギに経静脈投与した。ＦＤＧは選択的に不安定プラークに蓄積する。その後、薄さ１．６ｍｍの可塑性のベータ線プローブを大動脈に挿入した。このプローブは選択的に陽電子放出に対して感受性があり、直径１ｍｍ、長さ２ｍｍのプラスチックシンチレーターをＰＭＴに、長さ４０ｃｍの光ファイバーを介して光学的と結合して作られた。ＦＤＧ活性の測定は３連で、測定当たり２秒間で、バルーン傷害の範囲内の目視で見えるプラークの部位で；コレステロール給餌ウサギの非損傷部位で；および対照大動脈の対応する範囲で実施した。プラークおよび対照範囲の以前に評価した部位の大動脈切片を摘出し、標準のウェル計測によるＦＤＧの取り込みのために検査した。
【０２１５】
プローブの感度は８５０±１１ｃｐｓ／ｍＣｉ（平均値±ＳＤ）であった。カテーテルで測定した活性はウェル計測測定値とよく相関した（ｒ−０．８９、Ｐ<０．００１、図２２）。さらに、アテローム硬化性領域は、カテーテルに搭載したベータ線プローブによって対照から容易に識別された（１１．９±２．１[ｎ＝９、範囲９．７±１５．３]対４．８±１．９[ｎ＝１４、範囲１．３±７．３]、ｃｐｓ、それぞれアテローム硬化性領域、対、対照領域、Ｐ<０．００１）。 
陽電子 放出の血管内 検出は、ｉｎ ｖｉｖｏ系で感度および特異性とともに達成された。
【図面の簡単な説明】
【０２１６】
【図１】図１Ａは、本発明の実施形態に従って不安定プラークを検出するおよび／または標的にするおよび／または治療するための検出／治療系を図解する。図１Ｂは図１Ａの制御ユニットの設定を図解する図式である。
【図２】図２Ａおよび２Ｂは、本発明の一実施形態に従ったプローブ／カテーテルを示す図式である。図２Ｃおよび２Ｄは、それぞれ図２Ａおよび２Ｂの別の視点を示す図式である。図２Ｅおよび２Ｆは、本発明の一実施形態に従ったプローブ／カテーテルを図解する。
【図３】図３Ａ、３Ｂ、および３Ｃは、本発明の一実施形態に従ったプローブ／カテーテルを示す図式である。
【図４】図４Ａおよび４Ｂは、本発明の一実施形態に従ったプローブ／カテーテルを示す。
【図５】図５Ａおよび５Ｂは、本発明のそれぞれの実施形態に従った、光供給要素および光偏向要素を図解する図式である。
【図６】図６Ａ、６Ｂ、および６Ｃは、本発明の一実施形態に従ったプローブ／カテーテルを図解する。
【図７】図７は、クロリンｅ６結合型光増感剤を調製するための体系を示す。
【図８】図８は、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ５０カラムおよびアセトン沈澱を用いて未反応Ｃｅ６−ＮＨＳエステルから精製したＢＳＡ−ｃｅ６を示す（８Ａ；薄層クロマトグラフィー；８Ｂ；アセトン沈澱前に蛍光（左）およびクマシー染色（右）で可視化したＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル；８Ｃ；アセトン沈澱後に蛍光（左）およびクマシー染色（右）で可視化したＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル）。
【図９】図９は精製ｍａｌ−ＢＳＡ−ｃｅ６ 結合体および遊離Ｃｅ６のＵＶ−可視吸収スペクトルを示す。
【図１０】図１０はマレイン酸化ＢＳＡ−ｃｅ６結合体の選択的標的化および光毒性を示す。
【図１１】図１１はｅｘ ｖｉｖｏ大動脈内の蛍光局在化に用いる多チャンネル光分析装置を示す。
【図１２】図１２は結合体の注射２４時間後の、結合体ありまたは無しの注射を受けたウサギ由来の大動脈切片の分析を示す（１行目；共焦点蛍光，赤＝クロリンｅ６，緑＝弾性板自己蛍光；２行目；ｅｘ ｖｉｖｏの大動脈切片の内膜表面の蛍光発光スペクトル；３行目；ホルマリン固定パラフィン包埋大動脈切片のヘマトキシリンおよびエオシン染色；４行目；Ｖｅｒｈｏｅｆｆの弾性組織染色）。１列目は結合体を注射しないアテローム硬化性ウサギを示す。２列目は結合体を注射した正常な非アテローム硬化性ウサギを示す。３列目は結合体を注射したアテローム硬化性ウサギを示す。
【図１３】図１３は、アテローム硬化性ウサギ由来のすべての切片における、結合体を注射された正常ウサギ由来の対応する大動脈切片と比較した、内膜表面からの有意な蛍光シグナルを示す（ＳｋｉｎＳｃａｎで測定）。（上；１＝胸大動脈，２＝横隔膜下の上側腹部大動脈、３＝中間部腹部大動脈，４＝下側腹部大動脈、５＝分岐の直上の下部大動脈；中；ＯＭＡ−ＬＩＦ系による内膜表面蛍光の測定；下；総組織試料の抽出物からのデータ）。
【図１４】図１４は、大きな大動脈プラークと腹部大動脈のプラーク下５ｍｍの部分の間（１４Ａ）、同一のウサギのバルーン損傷した腸骨動脈と対側の正常動脈の間（１４Ｂ）、およびアテローム硬化性ウサギのプラークを持つ大動脈と正常ウサギの大動脈の同じ部分の間（１４Ｃ）の対照を示す。
【図１５】図１５は、開腹および大動脈と周囲組織の外科的曝露（１５Ａ）、および動脈の組織学検査を示す（１５Ｂ；上−ＰＤＴ処理アテローム硬化性大動脈の組織病理検査；下−結合体を投与されなかったアテローム硬化性大動脈の組織病理検査）。
【図１６】図１６Ａおよび１６Ｂは、本発明の一実施形態に従ったプローブ／カテーテル１６００を図解する図式である。
【図１７】図１７Ａおよび１７Ｂは、本発明の一実施形態に従ったプローブ／カテーテル１７００を示す。
【図１８】図１８はＡｐ４ＡおよびＡｐｐＣＨＣＩｐｐＡの化学構造を表す。
【図１９】図１９はアテローム硬化性および対照ウサギにおける９９ｍＴｃ−標識Ａｐ４ＡおよびＡｐｐＣＨＣｌｐｐＡの血中クリアランスを表す。二指数のデータとの適合も示す；アテローム硬化性ウサギ中の９９ｍＴｃ−Ａｐ４Ａ（実線）、対照ウサギ中の９９ｍＴｃ−Ａｐ４Ａ（一点破線）、およびアテローム硬化性ウサギ中の９９ｍＴｃ−ＡｐｐＣＨＣｌｐｐＡ（破線）。各点は３個体の平均ＳＥＭである。
【図２０】図２０は対照ウサギの大動脈の画像を表す。９９ｍＴｃ−Ａｐ４Ａ−グルコヘプトン酸塩の注射後１５分（左）および２時間（中央）に取得したｉｎ ｖｉｖｏガンマ線カメラ画像。対応するｅｘ ｖｉｖｏガンマ線カメラ画像および病変部分のスケッチもまた示す（右）。
【図２１】図２１は実験的アテローム性動脈硬化を有するウサギの大動脈の画像を表す。９９ｍＴｃ−Ａｐ４Ａ−グルコヘプトン酸塩の注射後１５分（左）および２時間（中央）に取得したｉｎ ｖｉｖｏガンマ線カメラ画像。対応するｅｘ ｖｉｖｏガンマ線カメラ画像および病変部分のスケッチもまた示す（右）。
【図２２】図２２はカテーテル測定活性とカウント測定値との間の相関を示すグラフを表す（ｒ−０．８９、Ｐ<０．００１）。
【図２３】図２３はプラークおよび非プラークにおけるベータ線プローブカウント（ｃｐｓ）を示す棒グラフを表す。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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