(57)【要約】【課題】  動物、特にヒトにおける糖尿病を治療する方法を提供する。【解決手段】  下記化合物；式（Ｉ，II，III ）：2005528353.tif 000010（式中、Ｒはフィトステロール又はフィトスタノール部分を表わし、Ｒ2 はアスコルビン酸から誘導された基を表わし、そしてＲ3 は水素原子又は何れかの金属、アルカリ土類金属若しくはアルカリ金属を表わす。）、並びにそれらの全ての塩の１種以上の無毒性で且つ治療のために有効な量を投与することからなる、動物における糖尿病及び糖尿病に伴う症状を治療する方法。
2005528353.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化合物：
【化１】
2005528353.tif 000006
（式中、Ｒはフィトステロール又はフィトスタノール部分を表わし、Ｒ2 はアスコルビン酸から誘導された基を表わし、そしてＲ3 は水素原子又は何れかの金属、アルカリ土類金属若しくはアルカリ金属を表わす。）、並びにそれらの全ての塩の１種以上の無毒性で且つ治療のために有効な量を投与することからなる、動物における糖尿病及び糖尿病に関連する症状を治療する方法。
【請求項２】
前記フィトステロールがシトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、デスモステロール、チャリノステロール、ポリフェラステロール、クリオナステロール及びその全ての天然形態又は合成形態並びに異性体を含む誘導体からなる群から選択される請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記フィトスタノールが全ての飽和された又は水素添加されたフィトステロール及びその全ての天然形態又は合成形態並びに異性体を包含する誘導体からなる群から選択される請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記フィトスタノールがシトスタノールである請求項１記載の方法。
【請求項５】
式Ｉ中、Ｒ3 がカルシウム、マグネシウム、マンガン、銅、亜鉛、ナトリウム、カリウム及びリチウムからなる群から選択される請求項１記載の方法。
【請求項６】
前記化合物が構造体１であり、そしてフィトスタノールがシトスタノールである請求項１記載の方法。
【請求項７】
前記動物がヒトである請求項１記載の方法。
【請求項８】
下記化合物：
【化２】
2005528353.tif 000007
（式中、Ｒはフィトステロール又はフィトスタノール部分を表わし、Ｒ2 はアスコルビン酸から誘導された基を表わし、そしてＲ3 は水素原子又は何れかの金属、アルカリ土類金属若しくはアルカリ金属を表わす。）、並びにそれらの全ての塩の１種以上の無毒性で且つ治療のために有効な量を投与することからなる、動物における血清グルコースレベルを抑制する方法。
【請求項９】
前記フィトステロールがシトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、デスモステロール、チャリノステロール、ポリフェラステロール、クリオナステロール及びその全ての天然形態又は合成形態並びに異性体を包含する誘導体からなる群から選択される請求項８記載の方法。
【請求項１０】
前記フィトスタノールが全ての飽和された又は水素添加されたフィトステロール及びその全ての天然形態又は合成形態並びに異性体を包含する誘導体からなる群から選択される請求項８記載の方法。
【請求項１１】
前記フィトスタノールがシトスタノールである請求項８記載の方法。
【請求項１２】
式Ｉ中、Ｒ3 がカルシウム、マグネシウム、マンガン、銅、亜鉛、ナトリウム、カリウム及びリチウムからなる群から選択される請求項８記載の方法。
【請求項１３】
前記化合物が構造体１であり、そしてフィトスタノールがシトスタノールである請求項８記載の方法。
【請求項１４】
前記動物がヒトである請求項８記載の方法。
【請求項１５】
下記化合物：
【化３】
2005528353.tif 000008
（式中、Ｒはフィトステロール又はフィトスタノール部分を表わし、Ｒ2 はアスコルビン酸から誘導された基を表わし、そしてＲ3 は水素原子又は何れかの金属、アルカリ土類金属若しくはアルカリ金属を表わす。）、並びにそれらの全ての塩の１種以上の無毒性で且つ治療のために有効な量を投与することからなる、動物における細胞のインスリン感度を向上させる方法。
【請求項１６】
前記フィトステロールがシトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、デスモステロール、チャリノステロール、ポリフェラステロール、クリオナステロール及びその全ての天然形態又は合成形態並びに異性体を包含する誘導体からなる群から選択される請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
前記フィトスタノールが全ての飽和された又は水素添加されたフィトステロール及びその全ての天然形態又は合成形態並びに異性体を包含する誘導体からなる群から選択される請求項１５記載の方法。
【請求項１８】
前記フィトスタノールがシトスタノールである請求項１５記載の方法。
【請求項１９】
式Ｉ中、Ｒ3 がカルシウム、マグネシウム、マンガン、銅、亜鉛、ナトリウム、カリウム及びリチウムからなる群から選択される請求項１５記載の方法。
【請求項２０】
前記化合物が構造体１であり、そしてフィトスタノールがシトスタノールである請求項１５記載の方法。
【請求項２１】
下記化合物：
【化４】
2005528353.tif 000009
（式中、Ｒはフィトステロール又はフィトスタノール部分を表わし、Ｒ2 はアスコルビン酸から誘導された基を表わし、そしてＲ3 は水素原子又は何れかの金属、アルカリ土類金属若しくはアルカリ金属を表わす。）、並びにそれらの全ての塩の１種以上の無毒性で且つ治療のために有効な量を投与することからなる、動物膵臓のβ細胞におけるグルコース感応性及びインスリン分泌のレベルを向上させる方法。
【請求項２２】
前記フィトステロールがシトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、デスモステロール、チャリノステロール、ポリフェラステロール、クリオナステロール及びその全ての天然形態又は合成形態並びに異性体を包含する誘導体からなる群から選択される請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
前記フィトスタノールが全ての飽和された又は水素添加されたフィトステロール及びその全ての天然形態又は合成形態並びに異性体を包含する誘導体からなる群から選択される請求項２１記載の方法。
【請求項２４】
前記フィトスタノールがシトスタノールである請求項２１記載の方法。
【請求項２５】
式Ｉ中、Ｒ3 がカルシウム、マグネシウム、マンガン、銅、亜鉛、ナトリウム、カリウム及びリチウムからなる群から選択される請求項２１記載の方法。
【請求項２６】
前記化合物が構造体１であり、そしてフィトスタノールがシトスタノールである請求項２１記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、動物、特にヒトにおける糖尿病を治療する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病は、一般的にインスリン欠乏又はインスリン抵抗又はその両方を含む複数の病因的要素による、炭水化物代謝の異質性の一次性疾患である。１型、又は若年型、又はインスリン依存性糖尿病は、内因性のインスリン分泌能力をほとんど持たないか又は全く持たない患者に見られる。これらの患者は、著しい高血糖（血流中へのグルコースの蓄積）を発症し、そして、当面の生存のために外因性インスリン治療にもっぱら依存している。２型は、成人型、又は非インスリン依存性糖尿病（”ＮＩＤＤＭ”）とも呼ばれ、ある程度の内因性のインスリン分泌能力を保持しているが、しかし、その大多数がインスリン欠乏性及びインスリン抵抗性の両方である患者に発症する。インスリン抵抗は、不充分なインスリンレセプター発現、低下したインスリン結合性、又はインスリンシグナル経路（非特許文献１を参照）に沿う全ての段階における何らかの異常に起因し得る。
【非特許文献１】オレフスキー(Olefsky) 、１９８８年、”医薬品のセシルテキストブック(Cecil Textbook of Medicine)”、第１８版、第２巻：第１３６０〜８１頁。
【０００３】
全体として、米国においては、糖尿病の罹患率はおそらく２％ないし４％であり、その中に、全患者の７％ないし１０％１型が含まれる。糖尿病の二次的合併症は、重大な臨床的意義を有する。末期腎不全の全ての新規症例のほぼ２５％が、糖尿病を持つ患者に生じる。約２００００の切断（主につま先、足及び脚）が、糖尿病を持つ患者に行われ、米国において行われる非外傷性切断のほぼ半数を示している。更に、糖尿病は盲目の新規症例の発生の主な要因であり、毎年ほぼ５０００人の新規症例が生じている。
【０００４】
食料由来の炭水化物は、腸内でグルコース及び他の単糖に分解される。これらの糖は、血流中に吸収され、そして、（他の栄養素と共に）全ての体細胞に配送される。しかし、血液からグルコースを吸収するためには、細胞は、膵臓で造られるホルモンであるインスリンを必要とする。胃の裏側に位置する大きな分泌器官である膵臓は、複数の機能を有している。膵臓は、腸内での食料の分解を助ける蛋白質である消化酵素を産生する。膵臓は、”ランゲルハンス島”と呼ばれる特異的な細胞群をも含む。これらの島細胞は複数の型からなり、それぞれ、異なるホルモンを産生する。血液グルコースレベルを抑制する２種の主なホルモン、インスリン及びグルカゴン、が存在する。両方とも、ランゲルハンス島内で、グルカゴンはα細胞によりインスリンはβ細胞により産生される。
【０００５】
食後、血流内にグルコースが注れ出ると、血液グルコースレベルの上昇は、β細胞にインスリンを分泌するためのシグナルを送る。インスリンは（グルコースと共に）、血流により、体中の細胞に配送される。種々の体組織、とりわけ、筋肉、肝臓及び脂肪は、それらの細胞表面に、インスリンレセプターと呼ばれる分化した分子を有する。インスリンはこれらのレセプターと結合し、錠における鍵のように、細胞にグルコースが入ることを可能にするチャネルを開口する。
【０００６】
一旦、グルコースが細胞の内側に入ると、それは、エネルギー及び成長のために使用され得る。過剰のグルコースは、グリコーゲンと呼ばれる複雑な炭水化物の形態で肝臓内に貯蔵される。ところで、血液グルコースレベルが低下すると、インスリン分泌が鈍化する。血液グルコースレベルが低下し始めたとき、それは、グルカゴンを分泌させるためにα細胞にシグナルを送る。グルカゴンは、次いで、糖源分解と呼ばれる工程であるグリコーゲンを転換してグルコースに戻すために、肝臓にシグナルを送る。これは、血液グルコー
スレベルが低下し過ぎることを阻止し、体細胞が食間のグルコースの安定供給を受けることを確実にする。グルカゴンはまた、肝臓を刺激して、糖新生と呼ばれる工程によりアミノ酸（蛋白質の構築ブロック）のような他の栄養素から新規なグルコースを造り、これにより、次回の食事まで、グルコースのバックアップ源を確保する。
【０００７】
グルコース、インスリン及びグルカゴンの相互作用は、通常、血液グルコースレベルが特定の制限範囲内に止まることを確実にする。しかしながら、糖尿病の個人においては、この微妙なバランスが崩れている。
【０００８】
現況では、インスリンは、１型糖尿病を持つ全ての患者及び２型糖尿病を持つ多数の患者の治療の主なモードである。１日の注射回数及び使用されるインスリンの種類に応じて、療法は、多かれ少なかれ集中的にならざるを得ない。最も集中的な方法は、基本的に一日２４時間、患者に装着されなければならない小型インスリンポンプからなるオープンループ供給機器を経由する、腹壁中の皮下部位内への不断のインスリン供給からなる。スルホニル尿素のような経口の低血糖剤は２型の患者に有効であるが、しかし、患者の１０％ないし２０％は効き目を示さないか又は治療開始後１２〜２４カ月目に効き目がなくなる。
【０００９】
最も必要とする患者において細心の注意を払ったモードを用いてさえも、グルコースレベルの効果的な制御を長期間に達成するのは困難である。通常インスリンを産生する膵臓又は島細胞の移植が、見込みの有る治療として広く研究されている。加えて、グルコースセンサーが一体化された新規で且つより良い外部の又は移植可能なインスリン供給機器の開発に向かう努力が続いている。
【００１０】
２型糖尿病は通常、成人期（典型的には、４０歳以後）に始まるが、しかし、より若年の人々でも発症し得る。一般的に、この症状を有する人々において、膵臓はインスリンを産生するが、しかし、体細胞は、それに効果的に応答することができない。これは、インスリン抵抗と呼ばれる。ヒトは、インスリン抵抗を克服するために充分なインスリンが存在する限り、糖尿病なしにインスリン抵抗を有し得る。しかし、インスリン抵抗が増加し続けるか、及び／又はインスリン産生が補償を必要とする量を下回るとき、糖尿病が発症する。
【００１１】
大部分の２型糖尿病患者は、膵臓のインスリン分泌を促進するか、及び／又はインスリン抵抗を低下させる経口医薬を用いて治療され得る。しかし、長期にわたると、膵臓β細胞はだんだん応答性が低下し、それにより、血液グルコースレベルが高いとき、インスリンの分泌が減少する。結局、血液グルコースレベルの制御を補助するため、当該患者はインスリン注射を必要とする。
【００１２】
持続性の高血糖は組織の治癒及び免疫性に干渉し得るので、ある人々においては、糖尿病の最初の兆候は、治癒が遅い腫れ物、頻繁な感染又は歯周病であり得る。又は、注目すべき最初の症状は、心臓病又は神経障害のような臓器障害の症状であり得る。糖尿病の神経障害の一般的な症状は、疼き、感覚の喪失又は足及び脚における焼けるような痛みを包含する。正確な原因は知られていないけれども、糖尿病は、遺伝因子と生活習慣因子との間の相互作用の結果から生じるように見える。
【００１３】
糖尿病に対する最も重大な危険因子の一つは肥満体であることである（非特許文献２を参照）。研究により、肥満体であること及び高脂肪食を食べることはインスリン抵抗に関連することが示されている（非特許文献３を参照）。とりわけ、ウエスト以下に過剰の脂肪を有する”西洋なし形状”に対して”リンゴ形状”である過剰の脂肪組織が腹壁の周囲、体の上部、に位置する場合その通りである。この理由はまだ良く理解されていないが、
研究者は、インスリン抵抗が脂肪細胞により分泌されるホルモン（例えば、レプチン及びレシスチン）により増大すると信じている。
【非特許文献２】デ  フロンゾ  アールエイ  フェラニーニ  エイー．(De Fronzo RA Ferrannini E.)、インスリン抵抗性：ＮＩＤＤＭ、肥満症、高血圧、異脂肪症及び粥腫硬化心臓血管症に対する多面的な症候群応答(A multifaceted syndrome responese for NIDDM, obesity, hypertension, atherolsclerotic cardiovascular disease) 、糖尿病のケア(Diabetes)：第１４巻：第１７３頁；１９９１年。
【非特許文献３】ベック−ニールセン(Beck-Nielsen)、エイチ，ピダーセン(H,Pedersen)、オー，ソレンセン  エヌエス(O,Sorensen)、ＮＳ：細胞のインスリン結合性に関する食事変更の効果及び生体内インスリン感度(Effects of dietary changes on cellular insulin binding and in vivo insulin sensitivity)、代謝(Metabolism)第２９巻：第４８２頁；１９９４年。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
この分野において、糖尿病に対する安全且つ効果的な治療を開発するために、連続的且つ現在進行型の研究が存在する。この分野で公知の不利点及び欠点を除去すること又は緩和することが本発明の目的である。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明は、下記化合物：
【化１】
2005528353.tif 000003
（式中、Ｒはフィトステロール又はフィトスタノール部分を表わし、Ｒ2 はアスコルビン酸から誘導された基を表わし、そしてＲ3 は水素原子又は何れかの金属、アルカリ土類金属若しくはアルカリ金属を表わす。）、並びにそれらの全ての塩の１種以上の無毒性で且つ治療のために有効な量を投与することからなる、動物における糖尿病及び糖尿病に関連する症状を治療する方法を提供する。
【００１６】
本発明は、血清グルコースレベルを抑制する際の、細胞のインスリン感度を向上させる際の、そして膵臓β細胞のグルコース感応性及びインスリン分泌のレベルを向上させる際の、前記化合物の使用も提供する。
【００１７】
本発明の化合物は、動物におけるグルコース耐性の改善において驚く程有効であることが見出された。今まで、このような効果を有する前記種類の化合物は知られていなかった。
【００１８】
この目的のために本発明の特別な化合物を使用することの大きな利点の一つは、それらの水−溶解度である。特に、水のような水性溶液中における溶解度が優れており、それ故
、どのような更なる強化又は変性もなしに、それ自体の経口投与を可能にすることが見出された。従って、本発明の化合物は、調製され、そのまま且つ使用されるか、又は、それらは、食料、飲料、医薬品及び栄養補助食品中に、これら”ビヒクル”が水−ベースであるかどうかにかかわりなく、容易に配合され得る。この向上した溶解度は、一般的に、望ましい治療又は予防効果を達成するための前記化合物の少ない投与量に形を変える。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
これらの効果及び他の大きな利点は、以下のより詳細な説明に記載されている。
【００２０】
本発明を、下記の限定されない図面に基づいて説明する。ここで、
図１は、フィトスタノール−ホスフェート−アスコルベート及びそのナトリウム塩の製造方法を図式的に示すものであり、
図２は、フィトスタノール−カルボネート−アスコルベート及びそのナトリウム塩の製造方法を図式的に示すものであり、
図３は、フィトスタノール−オキサレート−アスコルベート及びそのナトリウム塩の製造方法を図式的に示すものであり、
図４は、痩身体及び肥満体のズッカー(Zucker)ラットにおける、体重及び朝の血液グルコースレベル(morning blood glucose levels)に対するシトスタノール−ホスホリル−アスコルベート（”ＦＭ−ＶＰ４”）治療の効果をグラフ的に示すものである。データは、平均値±標準偏差として示し、各治療群においてｎ＝６である。 *肥満体に対してｐ＜０．０５であり、
図５は、痩身体及び肥満体のズッカーラットにおける、朝の血液グルコースレベルに対するシトスタノール−ホスホリル−アスコルベート（”ＦＭ−ＶＰ４”）治療の効果をグラフ的に示すものである。データは、平均値±標準偏差として示し、各治療群においてｎ＝６である。 *肥満体に対してｐ＜０．０５であり、
図６は、痩身体及び肥満体のズッカーラットにおける、血漿のレプチンレベルに対する３０日治療（後）のＦＭ−ＶＰ４の効果をグラフ的に示すものである。データは、平均値±標準偏差として示し、各治療群においてｎ＝６である。 *治療前に対してｐ＜０．０５であり、
図７は、痩身体のズッカーラットにおける、グルコース耐性に対する３０日治療後のＦＭ−ＶＰ４の効果をグラフ的に示すものである。データは、平均値±標準偏差として示し、各治療群においてｎ＝６である。 *痩身体対照に対してｐ＜０．０５であり、
図８は、肥満体のズッカー（ＶＤＦ）ラットにおける、グルコース耐性に対するＦＭ−ＶＰ４  ３０日治療の効果をグラフ的に示すものである。データは、平均値±標準偏差として示し、各治療群においてｎ＝６である。 *ＶＤＦ対照に対してｐ＜０．０５であり、
図９は、痩身体のズッカーラットにおける、ＯＧＴＴインスリンに対する３０日治療後のＦＭ−ＶＰ４の効果をグラフ的に示すものである。データは、平均値±標準偏差として示し、各治療群においてｎ＝６である。 *痩身体対照に対してｐ＜０．０５であり、そして
図１０は、肥満体のズッカーラットにおける、ＯＧＴＴインスリンに対する３０日治療後のＦＭ−ＶＰ４の効果をグラフ的に示すものである。データは、平均値±標準偏差として示し、各治療群においてｎ＝６である。 *肥満体に対してｐ＜０．０５である。
【００２１】
下記の詳細な説明は、本発明を実施するにあたり当業者を助けるために提供されている。しかしながら、この詳細な説明は、本発明の範囲を不当に限定するものと解釈されるべきではない。本明細書中で論じられている実施態様の改良及び変形は、本明細書の精神及び範囲を離れることなく当業者により行われ得る。
【００２２】
本発明によると、下記化合物：
【化２】
2005528353.tif 000004
（式中、Ｒはフィトステロール又はフィトスタノール部分を表わし、Ｒ2 はアスコルビン酸から誘導された基を表わし、そしてＲ3 は水素原子又は何れかの金属、アルカリ土類金属若しくはアルカリ金属を表わす。）、並びにそれらの全ての塩の１種以上の無毒性で且つ治療のために有効な量を投与することからなる、動物における糖尿病及び糖尿病に関連する症状を治療する方法が提供される。
【００２３】
表現”治療に有効な”は、一つ又はそれより多くの下記の目的：
ａ）高血糖のような糖尿病に関連する症状、及び後天性のインスリン抵抗を包含するインスリン抵抗を治療すること；
ｂ）遺伝性のインスリン抵抗を包含するインスリン抵抗、正常に機能しないグルコース耐性及びインスリン過剰症のような糖尿病の合併症を治療すること；
ｃ）多嚢胞性卵巣症候群及びステロイド誘発性インスリン抵抗及び妊娠性糖尿病を包含するインスリン抵抗に関連する症状を治療すること；
ｄ）腎臓病、とりわけ２型糖尿病、神経障害及び網膜症を包含する糖尿病に関連する合併症を治療すること。２型糖尿病に関連する腎臓病は、腎症、糸球体腎炎、糸球体硬化症、高血圧性腎硬化症及び末期腎臓病を包含する。２型糖尿病に関連する更なる腎臓病は、ネフローゼ症を包含する；
ｅ）グルコース耐性の改善；
ｆ）血清グルコースレベルの抑制；
ｇ）細胞インスリン感度の向上；
ｈ）グルコース感応性及び膵臓β細胞のインスリン分泌のレベルの向上；並びに
ｉ）前糖尿病症状の治療
を達成するために投与される化合物の量を限定することを意図している。
【００２４】
糖尿病症は好ましくは２型糖尿病である。
【００２５】
化合物の要素を以下に更に詳細に記載する。本開示を通じて、用語”化合物”、”誘導体”、”構造体”及び”同族体”は、フィトステロール又はフィトスタノール及びアスコルビン酸の両方に関連しており、そして糖尿病、糖尿病に関連する症状及び糖尿病に関連する合併症の治療に有効であることが見出された上記構造体を記載するために、互換可能に使用され得ることに注意すべきである。
【００２６】
フィトステロール／フィトスタノール
本明細書中で使用されているように、用語”フィトステロール”は限定することなく全てのフィトステロール、例えば、シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、デスモステロール、チャリノステロール、ポリフェラステロール、クリオナステロール及びその全ての天然形態又は合成形態並びに異性体を含む誘導体
を包含する。用語”フィトスタノール”は、全ての飽和された又は水素添加されたフィトステロール及びその全ての天然形態又は合成形態並びに異性体を含む誘導体を包含する。フィトステロール及びフィトスタノールの変性、即ち側鎖を含むための変性も、本発明の範疇に含まれると理解されるべきである。本明細書を通読して迷う場合には、用語”フィトステロール”はフィトステロール及びフィトスタノールの両方を表わす、即ち、特記しない限りこれら用語は互換可能に使用され得ると理解されるべきである。
【００２７】
本発明に従って誘導体を形成する際に使用するフィトステロール及びフィトスタノールは、種々の自然源から製造され得る。例えば、それらはトウモロコシ油及び他の植物油、小麦の胚芽油、大豆抽出物、米抽出物、米糠、ナタネ油、ヒマワリ油、ゴマ油のような植物（水性植物を包含する。）油及び魚（及び他の海産源）油の加工から得られ得る。本発明は、何れか１種のフィトステロール源に限定されない。米国特許第４４２０４２７号明細書は、メタノールのような溶媒を使用する、植物油スラッジからのステロールの製法を教示している。もう一つの方法として、フィトステロール及びフィトスタノールは、本文中に参考文献として取り込まれている米国特許第５７７０７４９号明細書に記載されている林業の副生成物であるトール油ピッチ又は石鹸、から得られ得る。
【００２８】
好ましい態様の一つにおいて、本発明の誘導体は、天然産又は合成されたβ−シトステロール、カンペスタノール、シトスタノール及びカンペステロールを用いて形成され、そして、その後、そのように形成されたこれらの誘導体の各々は、種々の比率にて配送前に組成物に混合されても良い。他の好ましい態様において、本発明の誘導体は、天然産若しくは合成されたシトスタノール又は天然産若しくは合成されたカンペスタノール或いはこれらの混合物を用いて形成される。
【００２９】
好ましくは形態において、シトスタノールはフィトスタノールである。最も好ましい形態において、前記化合物は、何れかのフィトスタノール−ホスホリルアスコルベート又はその塩である。
【００３０】
Ｒ2 
Ｒ2 はアスコルビン酸又はその何れかの誘導体を含む。本発明の範疇にて達成されるものは、フィトステロール又はフィトスタノール部分がアスコルビン酸に化学的に結合している新規構造体又は化合物の創成である。この結合はこの新規構造体の両方の部分に利益があり、質を高める。以前には溶解性に乏しかったフィトステロール部分は、新規誘導体の一部として、水性媒体並びに油及び脂肪のような非水性媒体に、非常に容易に溶けるようになる。従って、その配送を変化させるための如何なる別の強化剤をも用いることなく、ステロールの投与が可能となる。
【００３１】
Ｒ3 
Ｒ3 は水素原子であってもよく又は親化合物を塩に変換してもよい。適当な塩の選択において最優先に考慮すべきことは、それらは医薬において、栄養補助食品において又は食料、飲料等における使用のために許容され得るということである。このような塩は許容し得るアニオン又はカチオンを含有しなくてはならない。本発明の範疇において、適する酸付加塩は、塩酸、臭化水素酸、燐酸、メタ燐酸、硝酸、スルホン酸及び硫酸のような無機酸、並びに酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グリコン酸、グリコール酸、イソチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、コハク酸、トルエンスルホン酸及び酒石酸のような有機酸から誘導されるものを包含する。
【００３２】
適する塩基塩は、アンモニウム塩、或いは、金属、アルカリ土類金属又はアルカリ金属の何れかの塩を包含する。好ましくは、Ｒ3 は、カルシウム、マグネシウム、マンガン、
銅、亜鉛、ナトリウム、カリウム及びリチウムのうちの１種から選択される。最も好ましくは、Ｒ3 はナトリウムである。
【００３３】
本発明の最も好ましい態様において、前記化合物は上記構造体１であり、フィトスタノールはシトスタノールであり、そしてＲ3 はナトリウムである。
【００３４】
誘導体形成
ａ）エステル形成
フィトステロール及び／又はフィトスタノールとアスコルビン酸とを含む新規構造体を形成することができる多くの方法がある。一般的に、選択されたフィトステロール又はスタノール（又はそれらのハロホスフェート誘導体、ハロカルボネート誘導体若しくはハロ−オキサレート誘導体）及びアスコルビン酸は、”酸”部分と”アルコール”（フィトステロール）との縮合を可能とせしめる、反応条件下で一緒に混合される。これらの条件は、酸成分とアルコール成分とが直接又は鉱酸、硫酸、燐酸、ｐ−トルエンスルホン酸のような適する酸触媒の存在下で反応することが可能であるフィッシャーエステル化法のような、他の通常のエステル化反応において使用される条件と同一である。このようなエステル化反応において一般的に用いられる有機溶媒は、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランのようなエーテル、又はベンゼン、トルエン又は同様の芳香族溶媒であり、そして温度は、反応させる反応物の反応性に応じて、室温から高められた温度まで変化し得る。
【００３５】
好ましい態様において、エステル誘導体を形成する方法は、アスコルビン酸又はエステル（例えば、アセテートエステル）若しくはエーテル（メチルエーテル）としてのその誘導体のヒドロキシル基を”保護”し、その後、適する反応条件下で、保護されたアスコルビン酸をフィトステロール／フィトスタノールのハロホスフェート、ハロカルボネート若しくはハロ−オキサレートと縮合することを含む。一般的に、このような縮合反応は、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、又はベンゼン、トルエン又は同様の芳香族溶媒のような有機溶媒中で行われる。反応物の性質及び反応性に応じて、反応温度は低い温度（−１５℃）から高められた温度まで変化し得る。
【００３６】
図１は、”保護された”アスコルビン酸の形成（段階ａ）、中間体であるクロロホスフェート／スタノール誘導体の形成（段階ｂ）、及び式Ｉに基づく本発明の新規誘導体の１種：フィトスタノール−ホスフェート−アスコルベート（構造体６として示されている。）を与える縮合反応（択一的に段階ｃ又は段階ｄ）を図式的に示している。
【００３７】
より詳細には、図１に示す方法は以下の通りである：アスコルビン酸はまず、５，６−イソプロピリデン−アスコルビン酸（構造体２）の形成により、分解から保護される。これは、適する反応条件下で、アセトンをアスコルビン酸及び、硫酸又は塩酸のような酸性触媒と混合することにより達成され得る（以下の実施例１を参照）。フィトスタノールクロロホスフェート（構造体４）は、トルエン中のフィトスタノールとピリジン（或いは、脂肪族アミン及び芳香族アミンのような他の窒素塩基を使用してもよい。）とからなる溶液を形成し、そしてこの溶液をオキシ塩化燐のような燐誘導体で処理して製造する。母液の濾過及び濃縮後に生成する残渣は、フィトスタノールクロロホスフェート（構造体４）である。その後、後者を５，６−イソプロピリデン−アスコルビン酸と混合し、そしてエタノールのような適するアルコール及びＨＣｌを添加（段階ｄ）した後、濃縮する。もう一つの方法としては、ピリジン／ＴＨＦを添加（段階ｃ）し、そして生成物を濃縮してもよい。最終洗浄及び乾燥（段階ｅ）の後、両方の段階ｃ又は段階ｄから得られる新規生成物は、フィトスタノール−ホスフェート−アスコルベート（構造体６）である。
【００３８】
もう一つの方法として、５，６−イソプロピリデン−アスコルビン酸としてではなくて、エステルとして（例えば、アセテート、ホスフェート等として）、アスコルビン酸がヒ
ドロキシル部位にて保護される。後者はその後、最終的に本発明の構造体を製造するために、公知のエステル化法を使用して、フィトステロール又はフィトスタノールと縮合され、上記の様に誘導体化される。アスコルビン酸のモノ及びジホスフェートの形成は、文献中に充分に記載されている。例えば、参考として内容が本明細書中に取り込まれている、加藤らによる米国特許第４９３９１２８号明細書は、アスコルビン酸の燐酸エステルの形成を教示している。同様に、参考として内容がまた本明細書中に充分に取り込まれている、ドブラー(Dobler)らによる米国特許第４９９９４３７号明細書は、アスコルビン酸２−ホスフェートの製法を記載している。ドブラー(Dobler)らでは、第三アミンの存在下でのアスコルビン酸又はアスコルビン酸誘導体とＰＯＣｌ3 とのホスホリル化のコア反応（ドイツ国特許出願公開第ＤＯＳ２７１９３０３号明細書中に記載されている。）は、反応溶液にマグネシウム化合物、好ましくはマグネシウム化合物の水溶液を添加することにより改良されている。これらの公知のアスコルビン酸誘導体のどれでも、本発明の範疇にて使用することができる。
【００３９】
図２は、”保護された”アスコルビン酸の形成（段階ａ）、中間体であるクロロカルボネート／スタノール誘導体の形成（段階ｂ）、及び式IIに基づく本発明の新規誘導体の１種：フィトスタノール−カルボネート−アスコルベートである、構造体９（構造体１０も同様）を与える縮合反応（所望により、段階ｃ又は段階ｄ）を図式的に示している。これらのクロロカルボネート誘導体は、図１に関して上で詳細に説明された方法と同一方法にて製造され得る；しかしながら、オキシ塩化燐は（図２の段階ｂに示されるように）ホスゲンにより置き換えられる。
【００４０】
図３は、”保護された”アスコルビン酸の形成（段階ａ）、中間体であるクロロ−オキサレート／スタノール誘導体の形成（段階ｂ）、及び式III に基づく本発明の新規誘導体の１種：フィトスタノール−オキサレート−アスコルベート（構造体１４として認識。）である、新規構造体１３（構造体１４も同様）を与える縮合反応（所望により、段階ｃ又は段階ｄ）を図式的に示している。これらのクロロ−オキサレート誘導体は、図１に関して上で詳細に説明された方法と同一方法にて製造され得る；しかしながら、オキシ塩化燐は（図３の段階ｂに示されるように）オキサリルクロリドにより置き換えられる。
【００４１】
ｂ）塩形成
本発明は、フィトステロール又はフィトスタノールとアスコルビン酸とを含む親構造体（例えば、図１中の構造体５及び構造体６、図２中の構造体９及び構造体１０、並びに図３中の構造体１３及び構造体１４として示される好ましい構造体）のみならず、その塩をもまた包含するものである。これらの塩は、対応する親化合物よりも更に一層水溶解性であり、従って、インビトロ及びインビボの両方におけるそれらの有効性及び評価は非常に向上されている。
【００４２】
本発明の誘導体の塩形成は、親化合物を一連の塩基（例えば、ナトリウムメトキシド又は他の金属アルコキシド）で処理し、対応するアルカリ金属塩を製造することにより、容易に行うことができる。カルシウム、マグネシウム、マンガン、銅、亜鉛等の他の金属の塩は、親化合物を適する金属アルコキシドと反応させることにより生成させることができる。式Ｉにおいて、Ｒ3 は水素原子（親化合物）又は何れかの金属、アルカリ土類金属、又はアルカリ金属を表わす（塩）。
【００４３】
ｃ）触媒的（水素添加）及び化学的方法による還元
所望により、本発明のフィトステロール誘導体又は誘導体形成の前又は後のその構成部分（フィトステロール又はアスコルビン酸の何れか）は、水素添加又は飽和されてよい。ヘテロ環系の部分的又は完全に還元された同族体への水素添加は、周知の方法である。例えば、アスコルビン酸の環の対応するジヒドロ同族体への触媒的及び／又は化学的還元は
、水素雰囲気及び白金、パラジウム又はラネーニッケルのような金属触媒下で容易に行われる。一般的に、この還元は、エタノール、酢酸エチル又は同様な媒体のような有機溶媒中、そして大気圧下又は低圧（３〜５ｐｓｉ；０．０２０７〜０．０３４５ＭＰａ）下、室温又は僅かに高められた温度にて行われる。
【００４４】
このような系の化学的還元は、水素化硼素ナトリウム、水素化アルミニウムリチウム及びそれらの同族体のような”水素化物”試薬の群を用いる還元を含む。これらの還元は、一般的に、エチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、又はベンゼン、トルエン若しくは同種の芳香族溶媒を包含する無水不活性媒体中、室温ないし還流温度にて行われる。
【００４５】
同様な触媒的又は化学的方法は、本発明のフィトステロール同族体の全てに適用することができる。従って、本発明の方法の範囲内で使用する化合物は、アスコルビン酸の環が部分的に又は完全に還元されているか及び／又はフィトステロール部分が完全に又は部分的に水素添加されている、全ての完全に又は部分的に還元された誘導体を包含する。
【００４６】
誘導体
本発明は、下記一般式：
【化３】
2005528353.tif 000005
（式中、Ｒはフィトステロール又はフィトスタノール部分を表わし、Ｒ2 はアスコルビン酸から誘導された基を表わし、そしてＲ3 は水素原子又は何れかの金属、アルカリ土類金属若しくはアルカリ金属を表わす。）で表わされるフィトステロール及び／又はフィトスタノールとアスコルビン酸とからなる誘導体であって、それらの塩を包含するもの１種以上を投与することからなる、動物における糖尿病及び糖尿病に関連する症状を治療する方法、血清グルコースレベルを抑制し且つ細胞のインスリン感度を向上させる方法、及び膵臓β細胞のグルコース感応性及びインスリン分泌のレベルを向上させる方法を含む。最も好ましくは、前記化合物は、構造体５、６、７、９、１０、１１、１３、１４及び１５として図１ないし図３に示されているハロホスフェート、ハロカルボネート及びハロ−オキサレート／フィトスタノール／アスコルベート誘導体である。しかしながら、これらの構造体は、式Ｉ，II及びIII の範囲内に含まれる、本発明の方法に従い使用し得る多数の新規誘導体から選択されたものにすぎないことを明確に理解すべきである。ナトリウム塩が構造体７、１１及び１５で示されているけれども、上記のように、他の塩類も本発明の範疇に包含されることもまた理解すべきである。
【００４７】
作用機序
本明細書に記載された化合物の種々の治療効果に関して何らかの一つの理論に結びつけることを意図するものではないが、多くは、これらの化合物により得られる改善されたグルコース耐性にあると考えられる。
【００４８】
以下の実施例において提供されたデータは、糖尿病のグルコース耐性曲線を示す肥満体群におけるグルコース耐性について、非常に大きな改善があることを示している。経口グルコースに対するインスリン応答性は、糖尿病でない痩身体動物において大きな変化を示さないけれども、本発明の化合物を用いた治療後の肥満体群において、インスリン分泌プロフィールにおいて変化がある。肥満体動物は非常にインスリン抵抗性であり、そしてインスリン過剰症である。インスリン過剰症は、目標組織に対するインスリンの有効性の欠如（インスリン抵抗性）を補償する一つの試みであると考えられる。これらの動物は、グルコースに対する鈍化したインスリン応答性によっても特徴付けられる。これは、図５に見られる（検討前の群）、経口グルコースに対するほとんど平坦なインスリン応答性によって示される。本発明の化合物が、肥満体の（遺伝的な）糖尿病のラットにおけるグルコース耐性を改善することは明らかである。
【００４９】
使用方法
本明細書に記載された望ましい効果は、多数の異なる方法で達成され得る。これらの化合物は、医薬品、栄養補助食品、食料、飲料等と一緒に使用され得るどのような慣用の手段によっても投与され得る。
【００５０】
所望の効果を達成するのに要する前記化合物の量は、勿論、選択された特定の化合物、投与モード及び患者の症状のような多数の因子に依存するであろう。
【００５１】
本発明の化合物は、そのままで又は、該化合物が適するキャリア又は賦形剤と混合されている医薬組成物中での何れかにより、患者に投与してよい。
【００５２】
本明細書に開示された化合物を全身投与のために適する投与量に製剤化するための医薬的に許容され得るキャリアの使用は、本発明の範疇にある。キャリア及び適する製造方法を適宜選択して、本発明の化合物、特に、溶液として製剤化されたものは、患者に、例えば静脈注射により、投与され得る。前記化合物は、この分野で周知の医薬的に許容され得るキャリアを使用して、経口投与のために適する投与量に容易に製剤化され得る。本発明の化合物に使用され得るこのようなキャリアは、治療される患者による経口摂取のために、タブレット、ピル、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液等に製剤化される。
【００５３】
１種又はそれより多くの本発明の化合物を含む医薬組成物は、有効成分が、それらの意図された目的を達成するために有効な量で含まれる組成物を包含する。前記有効な量の決定は、とりわけ、本明細書にて提供される詳細な開示を考慮すると、充分に当業者の能力内にある。
【００５４】
前記有効成分に加えて、これらの医薬組成物は、医薬的に使用され得る製剤への有効化合物の加工を容易にする賦形剤及び助剤を含む、適する医薬的に許容され得るキャリアを含有してよい。経口投与のために製剤化された製剤は、タブレット、糖衣錠、カプセル又は溶液であってよい。
【００５５】
本発明の医薬組成物は、公知の方法、例えば、慣用の混合法、溶解法、顆粒化法、糖衣化法、粉末化法、乳剤化法、カプセル封止法、取り込み法又は凍結乾燥法の手段により、製造され得る。
【００５６】
患者への投与のための医薬製剤は、水−溶解性形態の有効化合物の水溶液を包含する。加えて、前記有効化合物の懸濁液は、適切な油状の注射懸濁液として製造され得る。
【００５７】
適する脂肪親和性の溶媒又はビヒクルは、ゴマ油のような脂肪油、又はオレイン酸エチル若しくはトリグリセリドのような合成脂肪酸エステル、或いはリポソームを包含する。水性の注射懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール又はデキストランのような、懸濁液の粘度を増加させる物質を含み得る。所望により、前記懸濁液は、高濃度の溶液の製造を可能にするために、前記化合物の溶解度を向上させる適する安定剤又は薬剤も含み得る。
【００５８】
経口使用のための医薬製剤は、有効化合物を固体賦形剤と混合し、所望により、得られた混合物を粉砕し、そして、必要に応じて、タブレット又は糖衣錠コアを得るため、適する助剤を添加した後、この混合物を顆粒に加工することにより、得ることができる。適する賦形剤は、特に、乳糖、蔗糖、マンニトール又はソルビトールを包含する砂糖；例えば、トウモロコシ澱粉、小麦澱粉、米澱粉、ジャガイモ澱粉、ゼラチン、ガムトラガカント(gum tragacanth)、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び／又はポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）のようなセルロース組成物、のような充填剤である。必要に応じて、崩壊剤、例えば、架橋したポリビニルピロリドン、寒天、又はアルギン酸若しくは、アルギン酸ナトリウムのようなその塩、を添加してよい。
【００５９】
糖衣錠コアには、適するコーティングが施される。この目的のために、所望によりアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル(carbopol gel)、ポリエチレングリコール及び／又は二酸化チタン、ラッカー溶液、及び適する有機溶媒又は溶媒混合物を含み得る濃縮された砂糖溶液を使用してよい。異なる有効化合物投与量の組み合わせを識別するか又は特徴付けるために、染料又は顔料をタブレット又は糖衣錠コーティングに添加してよい。
【００６０】
経口的に使用することができる医薬製剤は、ゼラチン製のプッシュ−フィット(push-fit)カプセル、並びに、ゼラチン製のソフト封止カプセル、及び、グリセロール又はソルビトールのような可塑剤を包含する。プッシュ−フィットカプセルは、乳糖のような充填剤、澱粉のような結合剤、及び／又は、タルク又はステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤並びに、所望により、安定剤と混合して、有効成分を含むことができる。ソフトカプセル中で、前記有効成分は、脂肪油、液体パラフィン又は液体ポリエチレングリコールのような適する液体中に溶解又は懸濁され得る。加えて、安定剤を添加してもよい。
【００６１】
経口液体製剤は、例えば、エマルジョン、シロップ又はエリキシル剤の形態であってもよいし、或いは、使用前に水又は他の適するビヒクルを用いて再構成するための乾燥製品として製造されてもよい。このような液体製剤は、懸濁剤、例えばソルビトール、シロップ、メチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル、水素添加された食用脂；エマルジョン、例えばレシチン、ソルビタン、モノオレエート又はアカシア；非水性ビヒクル（食用油を含み得る。）、例えば、アーモンド油、分画されたココナッツ油、グリセリンエステルのような油状エステル、プロピレングリコール又はエチルアルコール；防腐剤、例えばメチル又はプロピルｐ−ヒドロキシベンゾエート又はソルビン酸；並びに、必要に応じて、慣用の香料及び着色料、のような慣用の添加剤を含み得る。
【００６２】
本発明の他の態様において、本発明の前記化合物は、限定されることなく、下記のもの：
１）乳製品−チーズ、バター、ミルク及び他の乳製品の飲料、スプレッド及び乳製品の混合物、アイスクリーム及びヨーグルトのようなもの、
２）脂肪をベースとした製品−マーガリン、スプレッド、マヨネーズ、ショートニング、調理用及びフライ用の油並びにドレッシングのようなもの、
３）穀物をベースとした製品−穀類（例えば、パン及びパスタ）を含み、これらの商品は調理され、焼かれ又はその他の加工をされている、
４）菓子類−チョコレート、キャンディー、チューインガム、デザート、非乳製品トッピング〔例えば、クールホイップ（登録商標）；Cool Whip 〕、シャーベット、糖衣及び他のフィリングのようなもの、
５）飲料−アルコール飲料又は非アルコール飲料であり、そしてコーラ及び他のソフトドリンク、ジュースドリンク、栄養補助食品並びに、登録商標名ブースト(Boost) 及び登録商標名エンシュア(Ensure)の名の下に販売されているような食事代わりの飲料、並びに
６）種々雑多な製品−卵及び卵製品、スープ、予め製造されたパスタソース、予め製造された食事などの加工食品、
を包含する食料、飲料及び栄養補助食品を通して投与され得る。
【００６３】
本発明の前記化合物は、直接及び更に変形することなく、混合、注入、射出、配合、分散、乳化、浸漬、噴霧及び混練のような技術により、食料、栄養補助食品又は飲料に配合し得る。もう一つの方法として、前記化合物は、摂取前に消費者により、食料上に直接塗るか又は飲料中に直接投入してもよい。これらは単純で経済的な配送法である。
【実施例】
【００６４】
実施例
下記の限定的でない実施例により、本発明を記載する。
【００６５】
実施例１−アスコルビン酸の保護
油剤（２４％、８．３ｇ）をアセトン（５０ｍＬ）に滴下添加した。アスコルビン酸（１２ｇ）を０℃にてこの混合物に導入し、そして反応混合物を０℃にて６時間撹拌した。得られた結晶を吸引濾過し、濾過したケーキを押圧乾燥し、その後、アセトン（３０ｍＬ）を用いて洗浄した。生成物５，６−イソプロピリデンアスコルビン酸（１４ｇ）を得た。
【００６６】
実施例２−フィトスタノールへの結合
トルエン（５００ｍＬ）及びピリジン（２５ｍＬ）中のフィトスタノール混合物（２４ｇ）（カンペスタノール：３６．４％；シトスタノール：６２．３％）の溶液を、０℃にて、トルエン（２００ｍＬ）中のオキシ塩化燐（９ｍＬ）の混合物中に滴下して添加した。この混合物を、室温にて３時間撹拌した。ピリジン塩酸塩を濾別し、そして母液を濃縮してトルエンを回収した。残渣を乾燥ＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解し、そして乾燥ＴＨＦ（４００ｍＬ）中の、上で製造した保護されたアスコルビン酸（１４ｇ）の溶液を、０℃にて、滴下して添加した。室温での撹拌を１時間維持した。この溶液を濃縮して溶媒を除去した。エタノール（４００ｍＬ）及び３Ｎ  ＨＣｌ（２００ｍＬ）を添加し、この混合物を５０℃に３０分間加熱し、そして濃縮した。酢酸エチル（６００ｍＬ）を添加し、得られた溶液を水（３×３００ｍＬ）を用いて洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮し、そして生成物（フィトスタノール−ホスフェート−アスコルベート）を、白色粉末２２ｇとして得た。
【００６７】
実施例３−ナトリウム塩への転換
上で製造した酸（１７ｇ）をエタノール（１００ｍＬ）に溶解し、そしてエタノール（５０ｍＬ）中のナトリウムメトキシド（２．７ｇ）の溶液を、撹拌しながら且つ室温にて添加した。撹拌を添加後３０分間維持した。得られた白色ケーキを濾別し、乾燥し、そして秤量して、白色粉末２０ｇ（フィトスタノール−ホスフェート−アスコルベートナトリウム）を得た。
【００６８】
実施例４−ズッカー（ｆａ／ｆａ）肥満体ラットにおける検討
成体の雄のズッカー（ｆａ／ｆａ）肥満体ラット及び痩身体ラット（３４０ｇ〜４１０ｇ）を、４週治療プロトコル及び［ 3Ｈ］−コレステロールＧＩ吸収検討の両方で使用した。ラットは、経口投与後の、腸の特性（例えば、解剖学的、代謝的及び生化学的特性）並びにラットとヒトの間の食餌コレステロールの処理及び吸収における類似性のゆえに、コレステロールの胃腸（ＧＩ）吸収を研究するための適切な動物モデルである。食餌コレステロールの同様の処理及び吸収もまた、ズッカーラットにおいて観察される。
【００６９】
グルコースインスリン濃度、レプチン濃度及び血漿脂質濃度の決定
グルコースは、シュアステップ(Surestep)血液グルコース監視システム［カナダ国のライフスキャン(Lifescan)社製］を使用して測定した。インスリンレベル及びレプチンレベルは、放射免疫測定［ＲＩＡキットリンコ社(RIA kits LINCO corp.)］により測定した。血漿コレステロール及びトリグリセリドは、先に記載したような酵素キット［ミズーリ州、セントルイスのシグマ(Sigma) 社製］を使用して測定した。
【００７０】
研究設計
１２齡の一組の雌の肥満体（ｎ＝６）及び痩身体（ｎ＝６）のＶＤＦラットを、この検討のために使用した。”ＦＭ−ＶＰ４”（シトスタノール−ホスフェート−アスコルベート）として記載された、本発明の化合物の一つを投与する前に、動物を秤量し、そして一晩絶食させ、そしてグルコース、インスリン、レプチン、コレステロール及びトリグリセリドを測定するために、血液試料を採取した。その後、動物を、（飲料水に溶解した２％ＦＭ−ＶＰ４溶液を使用する）３０日間の経口強制飼養により、２５０ｍｇ／ｋｇＦＭ−ＶＰ４を用いて毎日２回処置した。２日毎に、動物を秤量し、そして、朝の血液グルコースレベルを測定した。３０日の最後に、全ての動物を一晩絶食させ、そして、第二の経口グルコース耐性試験を行った。グルコース、インスリン及びレプチン測定のために、絶食血液試料を、全ての動物から採取した。先に述べたように知覚が抑制されていない動物に関して行われた経口グルコース耐性試験（ＯＧＴＴ）が、これに続いた。グルコース（４０％溶液として１ｇ／ｋｇ）を経口強制飼養により与え、そして、グルコース及びインスリン測定のために、血液試料を１０分目、２０分目、３０分目、６０分目及び１２０分目に採取した。
【００７１】
ＦＭ−ＶＰ４投与後の血漿［ 3Ｈ］−コレステロール濃度
ＦＭ−ＶＰ４−［ 3Ｈ］−コレステロール経口強制飼養製剤の開発
製剤は、２５μＣｉ［ 3Ｈ］−コレステロール［比放射能１１０ｍＣｉ／ｍｇをベースとするコレステロール２２７．３ｎｇに相当する；カナダ国、オンタリオ州、ミシソウグのアマーシャム(Amersham)社製］、非標識コレステロール（６，７）１ｍｇ及び増加量のＦＭ−ＶＰ４（１ｍｇ〜２０ｍｇ）を含んでいた。この製剤を、検討日に、イントラリピッド［登録商標(Intralipid)；米国、イリノイ州、ディアフィールドのクリンテックニュートリショナルカンパニー(Clintec Nutritinal Company)製］１ｍＬと混合し、そして穏やかに攪拌した。イントラリピッド（登録商標）は、カロリー源及び必須脂肪酸として投与するために製造された滅菌非加熱脂肪エマルジョンであり、そして、良く知られた経口製剤中に外因性の［ 3Ｈ］−コレステロール及びＦＭ−ＶＰ４を可溶化し且つ共投与するためのビヒクルとして、使用された。液体クロマトグタフィー−マススペクトル分析は、既に刊行物に記載されているように、外因性のコレステロール（標識されたもの及び非標識のもの）及びＦＭ−ＶＰ４の添加前の、イントラリポイド（登録商標）の１０％以内の極小の総コレステロール及び植物性スタノール含有率を明らかにした。
【００７２】
処置群及び対照群の間の経口グルコース耐性試験及び［ 3Ｈ］−コレステロールＧＩ吸収の後の体重、血液グルコース、血漿レプチン、グルコース及びインスリンレベルにおける差異を、差分分析［ＰＣＡＮＯＶＡ；ヒューマンダイナミックシステムズ(Human Dynamic Systems) 社］を使用して測定した。統計的な差異は、ニューマン・クールズポスト−
ホック試験(Newman Keuls post-hoc test)を使用して測定した。ｐ＜０．０５のとき、有意差有りと考えた。全てのデータを、平均値±標準偏差として示す。
【００７３】
結果
体重
３０日にわたる薬剤処置期間の体重プロフィール（図４）は、処置後の痩身体又は肥満体の群の何れでも、体重における大きな変化を示さない。
朝の血液グルコース
３０日にわたる薬剤処置期間の朝の血液グルコースプロフィール（図５）は、処置後の痩身体又は肥満体の群の何れでも、朝（食餌後）の血液グルコースにおける大きな変化を示さない。動物が、グルコースの測定時間（午前８時）において、食餌状態に関して変化し得るので、これらの読み取りにおいて、変動が常に存在する。しかしながら、これらの検討中、血液グルコースレベルは、検討期間を通じて比較的一定に維持される。更に、ＦＭ−ＶＰ４処置は、痩身体及び肥満体のズッカーラットの毎日の飼料及び／又は水分摂取を変えなかった（図示せず）。
血漿レプチンレベル
飽満ホルモンレクチンのレベルは、それぞれの群において、薬剤処置後に有意に変化しなかった（図６）。肥満体のズッカーラットにおける主な問題点は、異常な視床下部の食欲抑制を招く中枢レプチンレセプターにおける突然変異であることに注意すべきである。結果として、ｆａ／ｆａ肥満体動物は、非常に高められたレプチンレベルを有する。肥満体動物においてＦＭ−ＶＰ４処置後にレプチンレベルが低下するが、しかし、差異は有意でないことが示唆されている。
【００７４】
経口グルコース耐性試験（ＯＧＴＴ）−グルコースデータ
図７及び図８は、痩身体動物及び肥満体動物のそれぞれにおける、ＦＭ−ＶＰ４処置前後のＯＧＴＴグルコースデータを示す。糖尿病でない正常血糖の痩身体動物におけるグルコース耐性の変化がないのに対して、糖尿病のグルコース耐性曲線を示す肥満体群におけるグルコース耐性の非常に有意な改善が存在する。
【００７５】
経口グルコース耐性試験（ＯＧＴＴ）−インスリンデータ
図９及び図１０は、痩身体動物及び肥満体動物のそれぞれにおける、ＦＭ−ＶＰ４処置前後のＯＧＴＴインスリンデータを示す。糖尿病でない痩身体動物において経口グルコースに対するインスリン応答性は有意な変化を示さない（図９）のに対して、ＦＭ−ＶＰ４処置後の肥満体群におけるインスリン分泌プロフィールには変化が存在する（図１０）。
【００７６】
議論
これらの検討の目的は、ズッカー（ｆａ／ｆａ）肥満体及び痩身体ラットにおける、インスリン抵抗及び高血糖に対するフィトスタノール−ホスホリル−アスコルベート（ＦＭ−ＶＰ４）の効果を測定することであった。ＦＭ−ＶＰ４処置は、体重、朝のグルコース及びレプチンを変化させなかった。これらの知見は、ＦＭ−ＶＰ４は、全身的及び遺伝的に予め決定されたグルコース代謝及びホルモン的に抑制された食欲を変化させないことを示唆している。
【００７７】
加えて、糖尿病でない正常血糖の痩身体群におけるグルコース耐性に関して変化が存在しないのに対し、糖尿病のグルコース耐性曲線を示す肥満体群におけるグルコース耐性に関して、非常に有意な改善が存在することを示している。しかしながら、糖尿病でない痩身体動物において、経口グルコースに対するインスリン応答性は有意な変化を示さないけ
れども、ＦＭ−ＶＰ４処置後の肥満体群において、インスリン分泌プロフィールにおける変化が存在する。肥満体動物は、非常にインスリン抵抗性であり、そして高血糖である。高血糖は、その目標組織（インスリン抵抗性）におけるインスリンの効果の欠如を補償するための試みであると考えられる。これらの動物は、グルコースに対する鈍化したインスリン応答性によっても特徴付けられる。これは、図８に示される、経口グルコースに対するほとんど平坦なインスリン応答性（検討前の群）により示される。
【００７８】
経口グルコース投与１０分後におけるインスリン分泌の初期ピークは、ＦＭ−ＶＰ４処置後のこれらの動物における改善されたグルコース耐性を伴うことは興味深い。これは、このような処置の結果としての、これらの動物におけるインスリン分泌性膵臓β細胞の向上したグルコース反応性を示している。初期相におけるグルコースにより刺激されたインスリン分泌の欠如は、我々の肥満体のズッカーラットのコロニーを包含する、２型糖尿病のヒト及び動物モデルにおける２型（成体型糖尿病）の証明である。ＦＭ−ＶＰ４処置による改善されたグルコース耐性の機序にかかわらず（拒食症又は減量が原因でなく；図４参照）、低下した高血糖はおそらく、インスリン抵抗性の深刻さを低減するために効果的であり、そして、これはまた、インスリンに対する要求を低減し、そして、より応答性の膵臓をもたらす。
【００７９】
要するに、ＦＭ−ＶＰ４の投与は、痩身体のラット及び肥満体のラットの両方における体重及び朝のグルコース、インスリン及びレプチンレベルを変化させることなく、肥満体のズッカーラットにおけるグルコース耐性を有意に改善する。
【００８０】
参考文献：
１．オレフスキー(Olefsky) 、１９８８年、”医薬品のセシルテキストブック(Cecil Textbook of Medicine)”、第１８版、第２巻：第１３６０〜８１頁。
２．デ  フロンゾ  アールエイ  フェラニーニ  エイー．(De Fronzo RA Ferrannini E.)、インスリン抵抗：ＮＩＤＤＭ、肥満症、高血圧、異脂肪症及び粥腫硬化心臓血管症に対する多面的な症候群応答(A multifaceted syndrome responese for NIDDM, obesity, hypertension, atherolsclerotic cardiovascular disease) 、糖尿病のケア(Diabetes)：第１４巻：第１７３頁；１９９１年。
３．ベック−ニールセン(Beck-Nielsen)、エイチ，ピダーセン(H,Pedersen)、オー，ソレンセン  エヌエス(O,Sorensen)、ＮＳ：細胞のインスリン結合性に関する食事変更の効果及び生体内インスリン感度(Effects of dietary changes on cellular insulin binding and in vivo insulin sensitivity)、代謝(Metabolism)第２９巻：第４８２頁；１９９４年。
【図面の簡単な説明】
【００８１】
【図１】図１は、フィトスタノール−ホスフェート−アスコルベート及びそのナトリウム塩の製造方法を示す図である。
【図２】図２は、フィトスタノール−カルボネート−アスコルベート及びそのナトリウム塩の製造方法を示す図である。
【図３】図３は、フィトスタノール−オキサレート−アスコルベート及びそのナトリウム塩の製造方法を示す図である。
【図４】図４は、痩身体及び肥満体のズッカーラットにおける、体重及び朝の血液グルコースレベルに対するシトスタノール−ホスホリル−アスコルベート（”ＦＭ−ＶＰ４”）治療の効果を示す図である。
【図５】図５は、痩身体及び肥満体のズッカーラットにおける、朝の血液グルコースレベルに対するシトスタノール−ホスホリル−アスコルベート（”ＦＭ−ＶＰ４”）治療の効果を示す図である。
【図６】図６は、痩身体及び肥満体のズッカーラットにおける、血漿のレプチンレベルに対する３０日治療（後）のＦＭ−ＶＰ４の効果を示す図である。
【図７】図７は、痩身体のズッカーラットにおける、グルコース耐性に対する３０日治療後のＦＭ−ＶＰ４の効果を示す図である。
【図８】図８は、肥満体のズッカー（ＶＤＦ）ラットにおける、グルコース耐性に対するＦＭ−ＶＰ４  ３０日治療の効果を示す図である。
【図９】図９は、痩身体のズッカーラットにおける、ＯＧＴＴインスリンに対する３０日治療後のＦＭ−ＶＰ４の効果を示す図である。
【図１０】図１０は、肥満体のズッカーラットにおける、ＯＧＴＴインスリンに対する３０日治療後のＦＭ−ＶＰ４の効果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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