(57)【要約】  内部イメージ抗体群を使用する、光診断および／または光医療のための組成物および方法。これらの内部イメージ抗体群は、染料や光増感剤のような光活性分子とコンジュゲートさせて、生物学的レセプターのような特定領域を標的化する。これらの光活性分子を、次に、診断および治療のために活性化する。有利なことには、本発明の内部イメージ抗体は、生物学的レセプターに特異的であるが、当該レセプターを抗体調製のために分離しなくても標的化診断および治療のための所望の特異性および選択性を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式１
Ａｂ−Ｌ−Ｄｙｅ      式１
式中、Ａｂは、ステロイド化合物、強心配糖体（cardiac glycosides)、ソマトスタチン、ボンベシン、コレシストキネン、ニューロテンシン、および熱感受性バクテリオエンドトキシンからなる群から選択されるレセプターに対する全長のまたはフラグメントの内部イメージ抗体であり；Ｌは、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＳＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，−ＣＯＮＨ−，−Ｓ（ＣＨ２）ｍＣＯＮＨ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであり（但し、ｍおよびｎは１から１０まで変化する）；そして、Ｄｙｅは、シアニン化合物、インドシアニン化合物、フタロシアニン化合物、ローダミン化合物、フェノキサジン化合物、フェノチアジン化合物、フェノセレナジン化合物、フルオレッセイン化合物、ポルフィリン化合物、ベンソポルフィリン化合物、スクワレン化合物、コリン化合物、クロコニウム化合物、アゾ化合物、メチン染料、およびインドレニウム染料からなる群から選択される、クロモフォアまたはフルオロフォアである；
の、抗レセプター内部イメージ抗体コンジュゲート（anti-receptor internal image antibody)を有する化合物。
【請求項２】
Ａｂがステロイドレセプターに対するものであり；Ｌが−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＳＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであり（但し、ｎは１から６まで変化する）；そして、Ｄｙｅがシアニン化合物、インドシアニン化合物、フタロシアニン化合物、ローダミン化合物、フェノチアジン化合物、フルオレッセイン化合物、ポルフィリン化合物、コリン化合物、およびアゾ化合物からなる群から選択される、芳香族または複素芳香族基である；請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ａｂが強心配糖体レセプターに対するものであり；Ｌが−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＳＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであって、ｎは１から６まで変化し；そして、Ｄｙｅがシアニン化合物、インドシアニン化合物、フタロシアニン化合物、ローダミン化合物、フェノチアジン化合物、フルオレッセイン化合物、ポルフィリン化合物、コリン化合物、およびアゾ化合物からなる群から選択される、芳香族または複素芳香族基である；請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ａｂがソマトスタチンレセプターに対するものであり；Ｌが−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＳＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであって、ｎは１から６まで変化し；そして、Ｄｙｅがシアニン化合物、インドシアニン化合物、フタロシアニン化合物、ローダミン化合物、フェノチアジン化合物、フルオレッセイン化合物、ポルフィリン化合物、コリン化合物、およびアゾ化合物からなる群から選択される、芳香族または複素芳香族基である；請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ａｂがボンベシンレセプターに対するものであり；Ｌが−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＳＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであって、ｎは１から６まで変化し；そして、Ｄｙｅがシアニン化合物、インドシアニン化合物、フタロシアニン化合物、ローダミン化合物、フェノチアジン化合物、フルオレッセイン化合物、ポルフィリン化合物、コリン化合物、およびアゾ化合物からなる群から選択される、芳香族または複素芳香族基である；請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ａｂがコレシストキネンレセプターに対するものであり；Ｌが−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＳＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであって、ｎは１から６まで変化し；そして、Ｄｙｅがシアニン化合物、インドシアニン化合物、フタロシアニン化合物、ローダミン化合物、フェノチアジン化合物、フルオレッセイン化合物、ポルフィリン化合物、コリン化合物、およびアゾ化合物からなる群から選択される、芳香族または複素芳香族基である；請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ａｂがニューロテンシンレセプターに対するものであり；Ｌが−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＳＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであって、ｎは１から６まで変化し；そして、Ｄｙｅがシアニン化合物、インドシアニン化合物、フタロシアニン化合物、ローダミン化合物、フェノチアジン化合物、フルオレッセイン化合物、ポルフィリン化合物、コリン化合物、およびアゾ化合物からなる群から選択される、芳香族または複素芳香族基である；請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ａｂが熱感受性バクテリオエンドトキシンレセプターに対するものであり；Ｌが−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＳＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであって、ｎは１から６まで変化し；そして、Ｄｙｅがシアニン化合物、インドシアニン化合物、フタロシアニン化合物、ローダミン化合物、フェノチアジン化合物、フルオレッセイン化合物、ポルフィリン化合物、コリン化合物、およびアゾ化合物からなる群から選択される、芳香族または複素芳香族基である；請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
内部造影抗体を使用する、患者の診断方法であって、
（ａ）ステロイド化合物、強心配糖体、ソマトスタチン、ボンベシン、コレシストキネン、ニューロテンシン、および熱感受性バクテリオエンドトキシンからなる群から選択される生物学的レセプターに結合するリガンドを選択し；
（ｂ）当該レセプター結合リガンドの第一世代抗原を調製し；
（ｃ）当該第一世代抗原に対する第一世代モノクローナル抗体を調製し、そして当該レセプター結合リガンドに対するモノクローナル抗体を単離し；
（ｄ）当該第一世代抗体に対するモノクローナル抗―イデオタイプ抗体を調製し、そして当該抗―イデオタイプ抗体から当該内部イメージ抗―レセプター抗体を単離し；
（ｅ）当該内部イメージ抗―レセプター抗体を光活性分子にコンジュゲートさせ；
（ｆ）有効濃度の（ｅ）段階の当該内部イメージ抗体コンジュゲートを患者に投与し、患者内の標的部位に当該コンジュゲートが蓄積するようにし；そして、
（ｇ）当該標的部位を、当該光活性分子が活性化するに十分量の光に曝して標的部位をイメージ化する；
ことを含んでなる、方法。
【請求項１０】
当該レセプター−結合リガンドが、薬物、ホルモン化合物、ペプチド化合物、炭水化物、ヌクレオシド、ペプチド模倣物（peptidomimetic）、糖模倣物（glycomimetics）、および、生合成中間体（biosynthetic intermediates）からなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
当該光活性分子が、シアニン化合物、インドシアニン化合物、フタロシアニン化合物、ローダミン化合物、フェノキサジン化合物、フェノチアジン化合物、フェノセレナジン化合物、フルオレッセイン化合物、ポルフィリン化合物、ベンゾポルフィリン化合物、スクワレン化合物、コリン化合物、クロコニウム化合物、アゾ化合物、メチン染料、およびインドレニウムからなる群から選択される染料である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
当該内部イメージ抗体コンジュゲートの有効濃度が、約０.１mg/kg体重から約５００mg/kg体重の範囲にある、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
当該内部イメージ抗体コンジュゲートの有効濃度が、約０.５mg/kg体重から約２mg/kg体重の範囲にある、請求項９に記載の方法。
【請求項１４】
当該標的部位のイメージ化が、吸光、蛍光、および散乱法からなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１５】
当該造影標的部位が、腫瘍、病巣、壊疽領域、虚血領域、凝血領域、炎症領域、損傷血管系、およびそれらの組合わせ、からなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１６】
式２
Ａｂ−Ｌ−ＰＳ−Ｑ      式２
式中、Ａｂは、ステロイド化合物、強心配糖体、ソマトスタチン、ボンベシン、コレシストキネン、ニューロテンシン、及び熱感受性バクテリオエンドトキシンからなる群から選択されるレセプターに対する全長のまたはフラグメントの内部イメージ抗体であり；Ｌは、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＳＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，−ＣＯＮＨ−，−Ｓ（ＣＨ２）ｍＣＯＮＨ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであり（但し、ｍおよびｎは１から１０まで変化する）；ＰＳは、ベンゼン化合物、ポリフルオロベンゼン化合物、ナフタレン化合物、ナフトキノン化合物、アンスラセン化合物、アンスラキノン化合物、フェナンスレン化合物、テトラセン化合物、ナフタセンジオン化合物、ピリジン化合物、キノリン化合物、イソキノリン化合物、インドール化合物、イソインドール化合物、ピロール化合物、イミジアゾール化合物、ピラゾール化合物、ピラジン化合物、プリン化合物、ベンツイミダゾール化合物、ベンゾフラン化合物、ジベンゾフラン化合物、カルバゾール化合物、アクリジン化合物、アクリドン化合物、フェナンスリジン化合物、チオフェン化合物、ベンゾチオフェン化合物、ジベンゾチオフェン化合物、キサンテン化合物、キサントン化合物、フラボン化合物、クマリン化合物、およびアンスラサイクリン化合物、からなる群から選択される、光感受性芳香族または複素芳香族基であり；そして
Ｑは、フリーラジカル、ナイトレン、およびカルベン、からなる群から選択される反応性中間体を生成させるための前駆体である；
の、抗レセプター内部イメージ抗体コンジュゲートを有する化合物。
【請求項１７】
当該反応性中間体が、アジド化合物（−Ｎ３）、環状アゾ化合物（−Ｎ＝Ｎ−）、およびスルフェネート化合物（−Ｏ−Ｓ−）からなる群から選択される、芳香族または複素芳香族基である、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
Ａｂが、ステロイド化合物に対するものであり；ＰＳが、テトラフルオロベンゼン化合物、フェナンスリジン化合物、キサントン化合物、アンスラキノン化合物、アクリジン化合物、およびアクリドン化合物、からなる群から選択され；Ｌが、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであって、ｎは１から６まで変化し；そして、Ｑが、アジド化合物（−Ｎ３）、およびスルフェネート化合物（−Ｏ−Ｓ−）、からなる群から選択される；請求項１６に記載の化合物。
【請求項１９】
Ａｂが、強心配糖体レセプターに対するものであり；ＰＳが、テトラフルオロベンゼン化合物、フェナンスリジン化合物、キサントン化合物、アンスラキノン化合物、アクリジン化合物、およびアクリドン化合物、からなる群から選択され；Ｌが、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであって、ｎは１から６まで変化し；そして、Ｑが、アジド化合物（−Ｎ３）、およびスルフェネート化合物（−Ｏ−Ｓ−）、からなる群から選択される；請求項１６に記載の化合物。
【請求項２０】
Ａｂが、ソマトスタチンレセプターに対するものであり；ＰＳが、テトラフルオロベンゼン化合物、フェナンスリジン化合物、キサントン化合物、アンスラキノン化合物、アクリジン化合物、およびアクリドン化合物、からなる群から選択され；Ｌが、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであって、（但し、ｍおよびｎは１から６まで変化する）；そして、Ｑが、アジド化合物（−Ｎ３）、およびスルフェネート化合物（−Ｏ−Ｓ−）、からなる群から選択される；請求項１６に記載の化合物。
【請求項２１】
Ａｂが、ボンベシンレセプターに対するものであり；ＰＳが、テトラフルオロベンゼン化合物、フェナンスリジン化合物、キサントン化合物、アンスラキノン化合物、アクリジン化合物、およびアクリドン化合物、からなる群から選択され；Ｌが、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであって、ｎは１から６まで変化し；そして、Ｑが、アジド化合物（−Ｎ３）、およびスルフェネート化合物（−Ｏ−Ｓ−）、からなる群から選択される；請求項１６に記載の化合物。
【請求項２２】
Ａｂが、コレシストキネンレセプターに対するものであり；ＰＳが、テトラフルオロベンゼン化合物、フェナンスリジン化合物、キサントン化合物、アンスラキノン化合物、アクリジン化合物、およびアクリドン化合物、からなる群から選択され；Ｌが、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであって、ｎは１から６まで変化し；そして、Ｑが、アジド化合物（−Ｎ３）、およびスルフェネート化合物（−Ｏ−Ｓ−）、からなる群から選択される；請求項１６に記載の化合物。
【請求項２３】
Ａｂが、ニューロテンシンレセプターに対するものであり；ＰＳが、テトラフルオロベンゼン化合物、フェナンスリジン化合物、キサントン化合物、アンスラキノン化合物、アクリジン化合物、およびアクリドン化合物、からなる群から選択され；Ｌが、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであって、ｎは１から６まで変化し；そして、Ｑが、アジド化合物（−Ｎ３）、およびスルフェネート化合物（−Ｏ−Ｓ−）、からなる群から選択される；請求項１６に記載の化合物。
【請求項２４】
Ａｂが、熱感受性バクテリオエンドトキシンレセプターに対するものであり；ＰＳが、テトラフルオロベンゼン化合物、フェナンスリジン化合物、キサントン化合物、アンスラキノン化合物、アクリジン化合物、およびアクリドン化合物、からなる群から選択され；Ｌが、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであって、ｎは１から６まで変化し；そして、Ｑが、アジド化合物（−Ｎ３）、およびスルフェネート化合物（−Ｏ−Ｓ−）、からなる群から選択される；請求項１６に記載の化合物。
【請求項２５】
内部造影抗体を使用する、患者への医療操作の実施方法であって、
（ａ）ステロイド化合物、強心配糖体化合物、ソマトスタチン、ボンベシン、コレシストキネン、ニューロテンシン、および熱感受性バクテリオエンドトキシンを含む群から選択される生物学的レセプターに結合するリガンドを選択し；
（ｂ）当該レセプター結合リガンドの第一世代抗原を調製し；
（ｃ）当該第一世代抗原に対する第一世代モノクローナル抗体を調製し、そして当該レセプター結合リガンドに対するモノクローナル抗体を単離し；
（ｄ）当該第一世代抗体に対するモノクローナル抗―イデオタイプ抗体を調製し、そして当該抗―イデオタイプ抗体から当該内部イメージ抗―レセプター抗体を単離し；
（ｅ）当該内部イメージ抗―レセプター抗体を光活性分子および前駆体にコンジュゲートさせ；
（ｆ）有効濃度の（ｅ）段階の当該内部イメージ抗体コンジュゲートを患者に投与して、患者内の標的部位に当該コンジュゲートが蓄積するようにし；そして、
（ｇ）当該標的部位を、当該光増感剤が活性化するに十分な光に曝し、そして損傷組織の処置を誘導する；
ことを含んでなる、方法。
【請求項２６】
当該レセプター−結合リガンドが、薬物、ホルモン化合物、ペプチド化合物、炭水化物、ヌクレオシド、ペプチド模倣物、糖模倣物、および、生合成中間体からなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
当該光活性分子が、光増感剤、反応性中間体を生成させるための前駆体、およびそれらの組合わせ、からなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
当該光活性分子が、ベンゼン化合物、ポリフルオロベンゼン化合物、ナフタレン化合物、ナフトキノン化合物、アンスラセン化合物、アンスラキノン化合物、フェナンスレン化合物、テトラセン化合物、ナフタセンジオン化合物、ピリジン化合物、キノリン化合物、イソキノリン化合物、インドール化合物、イソインドール化合物、ピロール化合物、イミジアゾール化合物、ピラゾール化合物、ピラジン化合物、プリン化合物、ベンツイミダゾール化合物、ベンゾフラン化合物、ジベンゾフラン化合物、カルバゾール化合物、アクリジン化合物、アクリドン化合物、フェナンスリジン化合物、チオフェン化合物、ベンゾチオフェン化合物、ジベンゾチオフェン化合物、キサンテン化合物、キサントン化合物、フラボン化合物、クマリン化合物、およびアンスラサイクリン化合物、からなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
当該前駆体が、アジド化合物（−Ｎ３）、環状アゾ化合物（−Ｎ＝Ｎ−）、およびスルフェネート化合物（−Ｏ−Ｓ−）、からなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
当該内部イメージ抗体コンジュゲートの有効濃度が、約０.１mg/kg体重から約５００mg/kg体重の範囲にある、請求項２５に記載の方法。
【請求項３１】
当該内部イメージ抗体コンジュゲートの有効濃度が、約０.５mg/kg体重から約２mg/kg体重の範囲にある、請求項２５に記載の方法。
【請求項３２】
当該標的部位が、腫瘍、病巣、壊疽領域、虚血領域、凝血領域、炎症領域、損傷血管系、およびそれらの組合わせ、からなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３３】
式１
Ａｂ−Ｄｙｅ      式１
式中、Ａｂは、ステロイド化合物、強心配糖体化合物、ソマトスタチン、ボンベシン、コレシストキネン、ニューロテンシン、および熱感受性バクテリオエンドトキシンからなる群から選択される生物学的レセプターに対する全長のまたはフラグメントの内部イメージ抗体であり、そして、Ｄｙｅは光活性染料である；
を有する光診断用組成物。
【請求項３４】
当該染料が、シアニン化合物、インドシアニン化合物、フタロシアニン化合物、ローダミン化合物、フェノキサジン化合物、フェノチアジン化合物、フェノセレナジン化合物、フルオレッセイン化合物、ポルフィリン化合物、ベンゾポルフィリン化合物、スクワレン化合物、コリン化合物、クロコニウム化合物、アゾ化合物、メチン染料、およびインドレニウム染料からなる群から採択される、芳香族または複素芳香族基である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
ＡｂおよびＤｙｅに結合しているリンカーＬをさらに含んでなる、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３６】
Ｌが、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＳＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，−ＣＯＮＨ−，−Ｓ（ＣＨ２）ｍＣＯＮＨ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択され、そして、ｍおよびｎは１から１０まで変化する；請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
Ａｂが、ステロイドレセプターに対するものであり、Ｌが、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＳＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであり、ｎは１から６まで変化し；当該染料が、シアニン化合物、インドシアニン化合物、フタロシアニン化合物、ローダミン化合物、フェノチアジン化合物、フルオレッセイン化合物、ポルフィリン化合物、コリン化合物、およびアゾ化合物からなる群から採択される、芳香族または複素芳香族基である、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３８】
Ａｂが、強心配糖体レセプターに対するものであり、Ｌが、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＳＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであり、ｎは１から６まで変化し；当該染料が、シアニン化合物、インドシアニン化合物、フタロシアニン化合物、ローダミン化合物、フェノチアジン化合物、フルオレッセイン化合物、ポルフィリン化合物、コリン化合物、およびアゾ化合物からなる群から採択される、芳香族または複素芳香族基である、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３９】
Ａｂが、ソマトスタチンレセプターに対するものであり、Ｌが、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＳＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであり、ｎは１から６まで変化し；当該染料が、シアニン化合物、インドシアニン化合物、フタロシアニン化合物、ローダミン化合物、フェノチアジン化合物、フルオレッセイン化合物、ポルフィリン化合物、コリン化合物、およびアゾ化合物からなる群から採択される、芳香族または複素芳香族基である、請求項３５に記載の組成物。
【請求項４０】
Ａｂが、ボンベシンレセプターに対するものであり、Ｌが、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＳＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであり、ｎは１から６まで変化し；当該染料が、シアニン化合物、インドシアニン化合物、フタロシアニン化合物、ローダミン化合物、フェノチアジン化合物、フルオレッセイン化合物、ポルフィリン化合物、コリン化合物、およびアゾ化合物からなる群から採択される、芳香族または複素芳香族基である、請求項３５に記載の組成物。
【請求項４１】
Ａｂが、ＣＣＫレセプターに対するものであり、Ｌが、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＳＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであり、ｎは１から６まで変化し；当該染料が、シアニン化合物、インドシアニン化合物、フタロシアニン化合物、ローダミン化合物、フェノチアジン化合物、フルオレッセイン化合物、ポルフィリン化合物、コリン化合物、およびアゾ化合物からなる群から採択される、芳香族または複素芳香族基である、請求項３５に記載の組成物。
【請求項４２】
Ａｂが、ニューロテンシンレセプターに対するものであり、Ｌが、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＳＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであり、ｎは１から６まで変化し；当該染料が、シアニン化合物、インドシアニン化合物、フタロシアニン化合物、ローダミン化合物、フェノチアジン化合物、フルオレッセイン化合物、ポルフィリン化合物、コリン化合物、およびアゾ化合物からなる群から採択される、芳香族または複素芳香族基である、請求項３５に記載の組成物。
【請求項４３】
Ａｂが、ＳＴレセプターに対するものであり、Ｌが、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＳＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであり、ｎは１から６まで変化し；当該染料が、シアニン化合物、インドシアニン化合物、フタロシアニン化合物、ローダミン化合物、フェノチアジン化合物、フルオレッセイン化合物、ポルフィリン化合物、コリン化合物、およびアゾ化合物からなる群から採択される、芳香族または複素芳香族基である、請求項３５に記載の組成物。
【請求項４４】
患者のある身体領域における症状の診断方法であって、
当該患者に、光感受性染料にコンジュゲートした生物学的レセプターに対する内部イメージ抗体を含んでなる光診断用組成物を、光診断に有効な投与量で投与して；
診断しようとする当該身体領域に当該光診断用組成物を蓄積させ；
その後、当該身体領域内で当該光感受性染料を活性化するために十分な量の光を供給し；そして
当該身体領域をイメージ化して当該患者の症状を診断する；
ことを含んでなる、方法。
【請求項４５】
当該抗体が、ステロイド化合物、強心配糖体、ソマトスタチン、ボンベシン、コレシストキネン、ニューロテンシン、および熱感受性バクテリオエンドトキシンからなる群から選択されるレセプターに対するものである；請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
波長約３００から１２００nmの範囲にある光が供給される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
当該イメージ化が、吸光、蛍光、散乱、およびそれらの組合わせからなる群から選択される方法による、請求項４４に記載の方法。
【請求項４８】
当該有効投与量が、約０.１mg/kg体重から約５００mg/kg体重の範囲にある、請求項４４に記載の方法。
【請求項４９】
式２
Ａｂ−ＰＳ−Ｑ      式２
式中、Ａｂは、生物学的レセプターに対する全長のまたはフラグメントの内部イメージ抗体であり；ＰＳは、光増感剤であり；そして、Ｑは、前駆体である；
を有する、医療用組成物。
【請求項５０】
当該レセプターが、ステロイド化合物、強心配糖体、ソマトスタチン、ボンベシン、コレシストキネン、ニューロテンシン、および熱感受性バクテリオエンドトキシンからなる群から選択される化合物に対するものである、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５１】
さらにＡｂとＰＳを結合するリンカーＬを含んでなる、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５２】
Ｌが、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＳＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，−ＣＯＮＨ−，−Ｓ（ＣＨ２）ｍＣＯＮＨ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択され；そして、ｍおよびｎは１から１０まで変化する、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５３】
当該光増感剤が、ベンゼン化合物、ポリフルオロベンゼン化合物、ナフタレン化合物、ナフトキノン化合物、アンスラセン化合物、アンスラキノン化合物、フェナンスレン化合物、テトラセン化合物、ナフタセンジオン化合物、ピリジン化合物、キノリン化合物、イソキノリン化合物、インドール化合物、イソインドール化合物、ピロール化合物、イミジアゾール化合物、ピラゾール化合物、ピラジン化合物、プリン化合物、ベンツイミダゾール化合物、ベンゾフラン化合物、ジベンゾフラン化合物、カルバゾール化合物、アクリジン化合物、アクリドン化合物、フェナンスリジン化合物、チオフェン化合物、ベンゾチオフェン化合物、ジベンゾチオフェン化合物、キサンテン化合物、キサントン化合物、フラボン化合物、クマリン化合物、およびアンスラサイクリン化合物、からなる群から採択される、光感受性の芳香族または複素芳香族基である、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５４】
当該前駆体が、フリーラジカル、ナイトレン類、カルベン類およびそれらの類似物、のような反応性中間体を生成するためのものであり、アジド化合物（−Ｎ３）、環状アゾ化合物（−Ｎ＝Ｎ−）、およびスルフェネート化合物（−Ｏ−Ｓ−）からなる群から選択される、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５５】
Ａｂが、ステロイド化合物からなる群から選択される生物学的レセプターを指向するものであり；ＰＳが、テトラフルオロベンゼン化合物、フェナンスリジン化合物、キサントン化合物，アンスラキノン化合物、アクリジン化合物、およびアクリドン化合物からなる群から選択され；Ｌが、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーであり、ｎは１から６まで変化し；そして、Ｑが、アジド化合物（−Ｎ３）、環状アゾ化合物（−Ｎ＝Ｎ−）、およびスルフェネート化合物（−Ｏ−Ｓ−）からなる群から選択される、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５６】
Ａｂが、強心配糖体からなる群から選択される生物学的レセプターを指向するものであり；ＰＳが、テトラフルオロベンゼン化合物、フェナンスリジン化合物、キサントン化合物，アンスラキノン化合物、アクリジン化合物、およびアクリドン化合物からなる群から選択され；Ｌが、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーユニットであり、ｎは１から６まで変化し；そして、Ｑが、アジド化合物（−Ｎ３）およびスルフェネート化合物（−Ｏ−Ｓ−）からなる群から選択される、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５７】
Ａｂが、ソマトスタチンからなる群から選択される生物学的レセプターを指向するものであり；ＰＳが、テトラフルオロベンゼン化合物、フェナンスリジン化合物、キサントン化合物，アンスラキノン化合物、アクリジン化合物、およびアクリドン化合物からなる群から選択され；Ｌが、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーユニットであり、ｎは１から６まで変化し；そして、Ｑが、アジド化合物（−Ｎ３）、環状アゾ化合物およびスルフェネート化合物（−Ｏ−Ｓ−）からなる群から選択される、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５８】
Ａｂが、ボンベシンからなる群から選択される生物学的レセプターを指向するものであり；ＰＳが、テトラフルオロベンゼン化合物、フェナンスリジン化合物、キサントン化合物，アンスラキノン化合物、アクリジン化合物、およびアクリドン化合物からなる群から選択され；Ｌが、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーユニットであり、ｎは１から６まで変化し；そして、Ｑが、アジド化合物（−Ｎ３）およびスルフェネート化合物（−Ｏ−Ｓ−）からなる群から選択される、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５９】
Ａｂが、ＣＣＫからなる群から選択される生物学的レセプターを指向するものであり；ＰＳが、テトラフルオロベンゼン化合物、フェナンスリジン化合物、キサントン化合物，アンスラキノン化合物、アクリジン化合物、およびアクリドン化合物からなる群から選択され；Ｌが、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーユニットであり、ｎは１から６まで変化し；そして、Ｑが、アジド化合物（−Ｎ３）およびスルフェネート化合物（−Ｏ−Ｓ−）からなる群から選択される、請求項５１に記載の組成物。
【請求項６０】
Ａｂが、ニューロテンシンからなる群から選択される生物学的レセプターを指向するものであり；ＰＳが、テトラフルオロベンゼン化合物、フェナンスリジン化合物、キサントン化合物，アンスラキノン化合物、アクリジン化合物、およびアクリドン化合物からなる群から選択され；Ｌが、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーユニットであり、ｎは１から６まで変化し；そして、Ｑが、アジド化合物（−Ｎ３）およびスルフェネート化合物（−Ｏ−Ｓ−）からなる群から選択される、請求項５１に記載の組成物。
【請求項６１】
Ａｂが、ＳＴからなる群から選択される生物学的レセプターを指向するものであり；ＰＳが、テトラフルオロベンゼン化合物、フェナンスリジン化合物、キサントン化合物，アンスラキノン化合物、アクリジン化合物、およびアクリドン化合物からなる群から選択され；Ｌが、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−からなる群から選択されるリンカーユニットであり、ｎは１から６まで変化し；そして、Ｑが、アジド化合物（−Ｎ３）およびスルフェネート化合物（−Ｏ−Ｓ−）からなる群から選択される、請求項５１に記載の組成物。
【請求項６２】
患者の身体領域における病理学的症状に対する医療操作の実施方法であって、
光増感剤および反応性中間体を生成する前駆体にコンジュゲートした、生物学的レセプターに対する内部イメージ抗体を含む光医療用組成物を、光医療に有効用量、当該患者に投与すること；
光医療用組成物を当該処置すべき身体領域に蓄積させること；および
その後、当該身体領域にある当該前駆体および当該光増感剤を活性化するのに十分量の光を供給して当該患者を処置すること、
を含む方法。
【請求項６３】
当該抗体が、ステロイド化合物、強心配糖体、ソマトスタチン、ボンベシン、コレシストキネン、ニューロテンシン、および熱感受性バクテリオエンドトキシンからなる群から選択されるレセプターに対するものである、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
波長約３００から１２００nmの範囲にある光が供給される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
当該有効用量が、約０.１mg/kg体重から約５００mg/kg体重の範囲にある、請求項６２に記載の方法。
【請求項６６】
当該医療操作が、虚血を処置すること、損傷血管系を処置すること、凝血を処置すること、壊疽を誘導すること、アポトーシス（細胞死）を誘導すること、およびそれらの組み合わせ、からなる群から選択される、請求項６２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
技術分野
本発明は、総括して言えば、光活性化合物を使用する診断並びに医療に関する。より詳しくは、本発明は、光活性分子（photoactive molecule）に付着した内部イメージ抗体群（internal image antibodies）またはそれらのフラグメント群（their fragments）を含むバイオコンジュゲート（bioconjugate）に関する。
【０００２】
背景技術
臨床現場における可視、近赤外（ＮＩＲ）、および低エネルギー紫外線の使用は、急速に伸びつつある。電磁スペクトルの可視、ＮＩＲ、または長波長（ＵＶ−Ａ、＞３５０ｎｍ）領域を吸光または発光する化合物は、断層放射線撮影法、平面造影法、内視鏡検査、光音響効果造影法および音響蛍光造影法などの診断技術にとって潜在的に有用である。
光診断的応用も重要であるが、生物学的医療用光学材料の主要な利点は、その治療的応用での潜在能力にある。光医療は、内外両側の各種表面病変の処置に安全かつ効果的な手法であることが立証されてきた。その有効性は放射線療法に匹敵するものだけでなく、それは、非標的器官に対して臨床的に有害な放射性毒性を伴わないものである。
【０００３】
蛍光染料や共有染料コンジュゲートを体液中の各種物質の検出に使用することは、インビトロの免疫診断法の分野でよく知られている。蛍光染料は化学センサーとしてもあるいは蛍光顕微鏡術においても使用されてきた。染料および染料―免疫コンジュゲートは、免疫ヒストロジーにおいても、また、酵素―連携免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）操作を用いての体液中の各種大小生物分子の免疫化学的検出においても広範に使用されてきている。さらに最近では、インドシアニングリーンという、高度蛍光ポリエン染料が、心臓出力のモニター、肝臓機能の評価、および腫瘍の断層レントゲン撮影造影術等に使用されてきている。
【０００４】
腫瘍等の特定部位に対して蛍光染料を特定的に標的化することは、各種組織中にこれらの染料を非特定的に局所化するよりずっと有利である。既知の標的化手法は、特定部位に結合する抗体に染料その他のエフェクター分子を付着させることによるものである。抗体類には、それらの結合性能をなお実質的に保持させながらその表面に合理的な数のハプテン、例えば約５ハプテンまで、を付着させることができる。これに反して、分子の大きさが類似している薬物やホルモン等へのハプテン類のコンジュゲーションは、概してレセプターに対するエフェクター分子の結合性能を失わせる。これは、大サイズの抗体類では、該抗体類の結合部位からずっと離れたところにハプテン類を付着させ得ることによる。
【０００５】
本発明者らは、Achilefu et al., Investigative Radiology, 2000, vol. 35, p. 479 によって報告されているように、オクトレオテートに共有的に付着したインドシアニングリーン染料が、そのソマトスタチンレセプター結合性能を保持することを実証した（同報告はその全部を参照して明示的に本明細書の一部とする）。しかしながら、この知見は一般的なものではなく、小分子の生物コンジュゲートの結合性能を演繹的に信頼性よく予測することは現時点では不可能である。これに反して、抗体コンジュゲート類の結合性能は一般的に予測可能である。
【０００６】
しかしながら、抗体類を用いてあるレセプターを標的化するには、抗−レセプター抗体類が必要となる。抗−レセプターモノクローナル抗体を調製するための在来法では、純粋なレセプターの単離が必要であるが、これはしばしば不可能である。それは、多くの生物学的レセプターが安定性を欠くこと等、多様な理由による。従って、抗−レセプター抗体類によるレセプターの標的化の多くは避けられてきたのである。
Jerne (Immunological Reviews, 1984, 79, 5-24) のイデオタイプのネットワーク理論は、抗体類の可変領域〔即ち、イデオタイプ（idiotypes）〕が免疫原として作用して、抗−イデオタイプと呼ばれる、一群の二次的な抗体を生起させる、と提唱する。抗−イデオタイプ抗体は、一次抗体に対して生起した抗体である。
【０００７】
抗体の結合部位は、抗体分子が認識したエピトープに特異的に結合する特定の領域である。特に、当該生体内のあるレセプターに結合するあるリガンドに対して抗体群が開発された場合であれば、生じてくる抗−イデオタイプポピュレーション（本明細書では“内部イメージ”と呼ぶ）のサブポピュレーションは、当該リガンドと当該内部イメージ間で共通のエピトープが共有されるために、同様にして同じレセプターに結合する抗体群を含有し得る。本質的に、この抗−イデオタイプ抗体は、特定の生物学的レセプターに特異的なもとのリガンドまたは薬物をコピーするものである。
【０００８】
Jerne によって提唱されたこの原理を適用することにより、天然のレセプターを単離したり精製したりする要なく、各種の生物学的レセプターを指向する多数の内部イメージ抗体の単離が導かれた。これらのレセプターの例には、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、グルココルチコイド、およびアデノシン、に対するレセプター等が含まれる。Lue et al. (Proceedings of the National Academy of Sciences, 1994, 91, 10690-10694) は、このアプローチを用いて抗―癌化合物、タキソールの機構について研究した。従って、光診断および光医療の目的で、光活性分子とともに内部イメージ抗体を使用することが望まれていた。
【０００９】
本発明の概要
特定のレセプターを単離することが不要な、光診断的および光医療的適用における特異性を達成するための、内部イメージ抗体コンジュゲートの組成物および使用を開示する。本発明は、内部イメージ抗−イデオタイプ抗体の新規なバイオコンジュゲート、または所望の結合のためのエピトープを含有する抗体フラグメント類（以下、本明細書では、抗体フラグメント、と呼ぶ）、それらは光診断および光医療の目的で光活性分子（ＰＭ）に付着させてある、を開示する。これらは、総括的に、次の構造：
Ａｂ−ＰＭ
により表わされる。但し、Ａｂは、特定の生物学的レセプターを指向する全長内部イメージ抗体または抗体フラグメントであり、ＰＭは、光活性分子例えば、染料、光増感剤または反応性中間体を生成するための前駆体である。内部イメージ抗体は生物学的レセプター、例えば、ステロイド化合物、強心配糖体、ソマトスタチン、ボンベシン、コレシストキネン（ＣＣＫ）、ニューロテンシン、および熱感受性バクテリオエンドトキシン（ＳＴ）、等に対するレセプターを指向するものである。幾つかの実施態様では、ＡｂとＰＭとをリンカーで連結してもよく、Ａｂ−Ｌ−ＰＭのように表わす。かかるリンカーとしては、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＳＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，−ＣＯＮＨ−，−Ｓ（ＣＨ２）ｍＣＯＮＨ−，または、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−（但し、ｍおよびｎは１から１０まで変化する）等があげられる。
【００１０】
ある実施態様において、本発明は、光診断目的のための、ある光活性染料に付着させた内部イメージ抗体（群）または抗体フラグメント（群）の新規なバイオコンジュゲート（群）を開示する。この実施態様において、ＰＭは、染料であり、該コンジュゲートは一般式：
Ａｂ−Ｌ−Ｄｙｅ
を有する。但し、式中、Ａｂは、特定の生物学的レセプターを指向する全長のまたはフラグメントの内部イメージ抗体であり、Ｌは、任意のリンカーである。この染料は、光診断の目的に有用なクロモフォアまたはフルオロフォアであることができ、そして、シアニン化合物、インドシアニン化合物、フタロシアニン化合物、ローダミン化合物、フェノキサジン化合物、フェノチアジン化合物、フェノセレナジン化合物、フルオレッセイン化合物、ポルフィリン化合物、ベンソポルフィリン化合物、スクワレン化合物、コリン化合物、クロコニウム化合物、アゾ化合物、メチン染料、および／またはインドレニウム染料等から採択することができる。
【００１１】
別の実施態様では、本発明は、光医療の目的のための、１またはそれ以上の光活性分子に付着させた内部イメージ抗体（群）または抗体フラグメント（群）の新規なバイオコンジュゲート（群）を開示する。この実施態様において、ＰＭは、光増感剤（ＰＳ）であり、それ自身でまたは前駆体（Ｑ）との組合わせのいずれかで、反応性中間体（群）を生成するものである。この実施態様において、該コンジュゲートは一般式：
Ａｂ−Ｌ−ＰＳ−Ｑ
を有する。但し、式中、Ａｂは、上記したとおりのものであり；Ｌは、上記したとおりに任意であり；ＰＳは、ベンゼン化合物、ポリフルオロベンゼン化合物、ナフタレン化合物、ナフトキノン化合物、アンスラセン化合物、アンスラキノン化合物、フェナンスレン化合物、テトラセン化合物、ナフタセンジオン化合物、ピリジン化合物、キノリン化合物、イソキノリン化合物、インドール化合物、イソインドール化合物、ピロール化合物、イミジアゾール化合物、ピラゾール化合物、ピラジン化合物、プリン化合物、ベンツイミダゾール化合物、ベンゾフラン化合物、ジベンゾフラン化合物、カルバゾール化合物、アクリジン化合物、アクリドン化合物、フェナンスリジン化合物、チオフェン化合物、ベンゾチオフェン化合物、ジベンゾチオフェン化合物、キサンテン化合物、キサントン化合物、フラボン化合物、クマリン化合物、およびアンスラサイクリン化合物、から採択される光感受性の芳香族または複素芳香族基であり；Ｑは、フリーラジカル、ナイトレン類、カルベン類、およびそれらの類似物、のような反応性中間体を生成させるための前駆体であるか、または、アジド化合物（−Ｎ３）、環状アゾ化合物（−Ｎ＝Ｎ−）、またはスルフェネート化合物（−Ｏ−Ｓ−）であるか、のいずれかであることができる。
【００１２】
本発明は、内部イメージ抗体バイオコンジュゲート類を使用する診断操作を実施する方法をも開示する。この方法では、生物学的レセプター、例えば、ステロイド化合物、強心配糖体、ソマトスタチン、ボンベシン、コレシストキネン、ニューロテンシン、および熱感受性バクテリオエンドトキシン、等に対するレセプターに結合するものからリガンドが選択される。このレセプター−結合リガンドは、１種またはそれ以上の薬物、ホルモン化合物、ペプチド化合物、炭水化物、ヌクレオシド、ペプチド模倣物（peptidomimetic）、糖模倣物（glycomimetics）、または、生合成中間体（biosynthetic intermediates）であり得る。第一世代抗原として使用されるリガンドは、完全なリガンドであることができ、また、該リガンドのある領域、例えば高い親和性でレセプターに結合するフラグメント等であることもできる。このレセプター結合リガンドは、場合によっては免疫原性キャリヤーに対するレセプター結合リガンドとコンジュゲートしている、第一世代抗原として調製される。この免疫原性キャリヤーは、例えば、牛血清アルブミン、兎血清アルブミン、またはヒト血清アルブミンであり得る。
【００１３】
第一世代モノクローナル抗体（群）は、第一世代抗原に対して生成され、所望のレセプター結合リガンド（群）を指向するこれらの特異的モノクローナル抗体（群）が単離される。次いで、第一世代抗体（群）に対するモノクローナル抗−イデオタイプ抗体（群）が生成し、そして抗−イデオタイプ性抗体のポピュレーション由来の内部イメージ抗−レセプター抗体（群）が単離される。この内部イメージ抗−レセプター抗体（群）を、次いで当業者に既知の常法により、染料とコンジュゲートさせる。
【００１４】
使用に際しては、内部イメージ抗体コンジュゲートの有効量を患者に投与し、そして標的部位に当該コンジュゲートが蓄積するようにする。標的部位を次いで、波長が３００から１２００nmの範囲にあり、かつ標的組織を例えば、吸収剤、蛍光剤、あるいは散乱法を用いてイメージ化するに十分な光量と集束数を有する光にさらす。このイメージ化は、ＣＣＤカメラにより、または光学式断層撮影装置を使用して得ることができる。これらの操作はすべて当業者に既知である。
【００１５】
本発明は、内部イメージ抗体バイオコンジュゲートを使用する光治療操作の実施方法をも開示する。内部イメージ抗体およびリガンドは、光診断法での使用について記載したとおりのものである。しかしながら、染料よりはむしろ光増感剤（ＰＳ）を、内部イメージ抗体およびリンカーとコンジュゲートさせる。ＰＳは、ベンゼン化合物、ポリフルオロベンゼン化合物、ナフタレン化合物、ナフトキノン化合物、アンスラセン化合物、アンスラキノン化合物、フェナンスレン化合物、テトラセン化合物、ナフタセンジオン化合物、ピリジン化合物、キノリン化合物、イソキノリン化合物、インドール化合物、イソインドール化合物、ピロール化合物、イミジアゾール化合物、ピラゾール化合物、ピラジン化合物、プリン化合物、ベンツイミダゾール化合物、ベンゾフラン化合物、ジベンゾフラン化合物、カルバゾール化合物、アクリジン化合物、アクリドン化合物、フェナンスリジン化合物、チオフェン化合物、ベンゾチオフェン化合物、ジベンゾチオフェン化合物、キサンテン化合物、キサントン化合物、フラボン化合物、クマリン化合物、および／またはアンスラサイクリン化合物、から採択される光感受性の芳香族または複素芳香族基であることができる。ＰＳはまた、アジド化合物（−Ｎ３）、環状アゾ化合物（−Ｎ＝Ｎ−）、またはスルフェネート化合物（−Ｏ−Ｓ−）である前駆体（Ｑ）と結合していてもよい。
【００１６】
使用に際しては、内部イメージ抗体コンジュゲートの有効量を患者に投与し、そして標的部位に当該コンジュゲートが蓄積するようにする。標的部位を次いで、波長が３００から１２００nmの範囲にあり、かつ標的組織を例えば、吸収剤,蛍光剤、あるいは散乱法を用いてイメージ化するに十分な光量と集束数を有する光にさらして、例えば、壊疽またはアポトーシス（細胞死）の誘発により損傷した組織を処置する。
本発明は、以下の各図、詳細な説明、および各実施例に照らして一層よく評価されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、光診断用コンジュゲート合成経路の図解である。
【図２】図２は、光治療用コンジュゲート合成経路の図解である。
【００１８】
発明の詳細な説明
本発明は、光活性分子または分子群とコンジュゲートしている、生物学的レセプター（抗−レセプター内部イメージ抗体）に対する内部イメージ抗体の診断用および／または医療用組成物に関する。この組成物は、一般式：
Ａｂ−ＰＭ
を有する。但し、式中、Ａｂは、特定の生物学的レセプターを指向する全長のまたはフラグメントの内部イメージ抗体であり、ＰＭは、光活性の分子または分子群、例えば、染料、または光増感剤（それは、それ自身であるか反応性中間体を生成するための前駆体に結合しているものかのいずれかである）である。場合によっては、ＡｂとＰＭとをリンカーＬで連結していてもよく、Ａｂ−Ｌ−ＰＭのように表わす。
【００１９】
診断用組成物では、内部イメージ抗体と染料とによりコンジュゲートを構成する。医療用組成物では、内部イメージ抗体と反応性中間体を生成する光増感剤とによりコンジュゲートを構成する。内部イメージ抗体は、全長の抗体であってもよく、酵素的にまたは化学的に開裂されて抗原結合性能を保持するＦａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ')２、または他の小フラグメントを生成するような結合、のための所望のエピトープを含有する抗体フラグメントであってもよい。抗体を開裂して上記のようなフラグメントにする方法、およびこれらのフラグメントの使用は、当業者に既知である。抗体フラグメントを調製する方法は、例えば、Parham et al. (J. Immunol Methods, 1982, 53, 133-173) および Mariani et al. (Molecular Immunology, 1991, 1991, 69-77) により記述されたパパインまたはペプシンによる酵素的消化による等、当業者に既知である（両文献の該当部分を参照して本明細書の一部とする）。
【００２０】
本発明は、抗−レセプター内部イメージ抗体コンジュゲートの組成物の有効量を投与することによる、光治療操作の実施方法をも開示する。光診断および／または光治療剤を、所望の部位を標的にし、レセプター−特異的内部イメージ抗体をこれらのレセプターに発現しているレセプターに向けて使用する。この方法は、各種のバイオ医療適用、例えば、数種の冠疾患、ある種の型の腫瘍、ある種の型の病巣、等の診断および／または治療に使用できる。これらにはアポトーシスが望ましい損傷血管系等を含む、壊疽、虚血、凝血、炎症等領域の診断および／または治療が含まれるが、それらに限定はされない。
【００２１】
内部イメージ抗体を、標的化光診断および光医療への適用のための担体として使用することは、小分子のバイオコンジュゲートに随伴する諸問題を伴わずに、高度な特異性という利点を提供するので、望ましいものである。診断用および医療用医薬での内部イメージ抗体の使用は、本発明者らによってはじめて提唱された（Rajagopalan, Tissue specific imaging agents using internal image anti-idiotypic antibodies, WO 93/00934）。本明細書に開示した、特異的レセプターを標的とするために内部イメージ抗体を利用する発明的アプローチは、数種の点で有利である。抗−レセプター抗体の開発のために純化したレセプターを使用することが必要でない；ということは、純粋、かつ安定な免疫化のためのレセプターを単離することがしばしば困難であり、時には不可能であるので有利なことである。もとのリガンドおよび対応する内部イメージ抗体のレセプター結合親和性は極めて近似している。光活性剤または光増感剤のようなエフェクター分子が一つくらい、大きな抗体分子に付着しても、そのレセプター結合能力が有意に変動することはない。
【００２２】
光増感剤は、１型および２型と称する２つの別個の経路を介して作用する。１型のメカニズムは、次のスキームで示される。
【化１】
2005508880.tif 000002
１型メカニズムでは、光増感剤から細胞成分への直接的なエネルギーまたは電子の伝達が関与し、それにより細胞死を引き起こす。２型プロセスは、次のスキームに示すように２つの別個の段階が関与する：
【化２】
2005508880.tif 000003
【００２３】
第１段階で、三重項励起状態の光増感剤から組織周辺の酸素分子へのエネルギー伝達により、一重項酸素が発生する。第２段階で、一重項酸素と組織の衝突が組織損傷を進める。１型と２型の両メカニズムにおいて、光増感剤の最低の三重項状態を介して光反応が進行する。故に、効果的な光治療には、比較的長い三重項寿命が必要とされる。対照的に、光診断では、光損傷を避けるために、比較的短い三重項寿命が必要とされる。本発明方法は、Jori (EPA Newsletter, 1997, No.60, 12-18) に記載（その全部を参照して明示的に本明細書の一部とする）されているように操作して、１型または２型いずれかのメカニズムにより、光診断適用または光治療適用に使用できる。
【００２４】
抗−イデオタイプ抗体は、体内で、ある所望のレセプターを指向するある種のリガンドと特異的に結合する、ある一次抗体に対する抗体群を開発することにより調製した抗体である。得られる抗−イデオタイプ抗体は、当該抗−イデオタイプ抗体と上記リガンドとの位相学的類似性（topological similarity)により、リガンドと同じレセプターに結合する。本発明で採用する抗−イデオタイプ抗体は、十分に確立され、当業者に既知の、Kohler および Milstein によるハイブリドーマ手法、さらには他者により修飾された手法（欧州特許０３８６２７５号）によって調製される。前記のように、所望の結合のためのエピトープを保持している抗体フラグメントを使用することができる。全長またはフラグメントにした、天然のまたは組換え体の、抗−イデオタイプ抗体を、光活性分子、例えば、クロモフォア、フルオロフォア,または光増感剤と、当業者に既知である数種の方法のいずれかにより、カップリングさせることができる。
【００２５】
本発明の診断用組成物は、式１
Ａｂ−Ｄｙｅ
の、抗−レセプター内部イメージ抗体コンジュゲートを含む。但し、式中、Ａｂは、特定の生物学的レセプターを指向する結合親和性を保持している、全長のまたはフラグメントの内部イメージ抗体である。本発明の内部イメージ抗体は、ステロイド化合物、強心配糖体（例えば、ジゴキシン）、ソマトスタチン、ボンベシン、ニューロテンシン、コレシストキネン（ＣＣＫ）および熱感受性バクテリオエンドトキシン（ＳＴ）等のレセプターを指向するものである（例えば、その全部を参照して明示的に本明細書の一部とする米国特許第５５１８８８８号参照）。幾つかの実施態様では、リンカー（Ｌ）が、ＡｂとＰＭとを連結しており、Ａｂ−Ｌ−ＰＭのように表わす。かかるリンカーとしては、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＳＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，−ＣＯＮＨ−，−Ｓ（ＣＨ２）ｍＣＯＮＨ−，および、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−等であることができ、ここでｍおよびｎは１から１０まで変化する。染料は、波長が３００から１２００nmの範囲の光を吸収または放射し得るフルオロフォアまたはクロモフォアである。
【００２６】
診断用コンジュゲートのある特定実施態様では、Ａｂは、ステロイド化合物、強心配糖体、ボンベシン、ニューロテンシン、またはＳＴ等のレセプターを指向するものであり；Ｌはリンカーであって、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＳＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，または、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−等であることができ、そしてｎは１から６まで変化し；さらに染料は、シアニン化合物、インドシアニン化合物、フタロシアニン化合物、ローダミン化合物、フェノキサジン化合物、フェノチアジン化合物、フェノセレナジン化合物、フルオレッセイン化合物、ポルフィリン化合物、ベンソポルフィリン化合物、スクワレン化合物、コリン化合物、クロコニウム化合物、アゾ化合物、メチン染料、インドレニウム染料、およびこれらの類似物から採択されるフルオロフォアまたはクロモフォアである。
【００２７】
診断用コンジュゲートの別の特定実施態様では、Ａｂは、ステロイド化合物、ボンベシン、ニューロテンシン、または熱感受性バクテリオエンドトキシン等のレセプターを指向するものであり；Ｌはリンカーであって、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，または、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−等であることができ、そしてｎは１から６まで変化し；そして染料は、シアニン化合物、インドシアニン化合物、ローダミン化合物、フェノチアジン化合物、フルオレッセイン化合物、またはアゾ化合物等から採択される芳香族または複素芳香族基である。
【００２８】
本発明の治療用組成物は、式２
Ａｂ−ＰＳ−Ｑ
の、抗−レセプター内部イメージ抗体コンジュゲートを含む。但し、式中、Ａｂは、特定の生物学的レセプターを指向する、全長またはフラグメントにした内部イメージ抗体である。本発明の内部イメージ抗体は、ステロイド化合物、強心配糖体（例えば、ジゴキシン）、ソマトスタチン、ボンベシン、コレシストキネン、ニューロテンシン、または熱感受性バクテリオエンドトキシン等のレセプターを指向するものである。リンカーＬは、ＡｂとＰＳまたはＰＳ−Ｑとを連結することができ、Ａｂ−Ｌ−ＰＳ（−Ｑ）のように表わされ、そしてＬは、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＳＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，−ＣＯＮＨ−，−Ｓ（ＣＨ２）ｍＣＯＮＨ−，または、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−等であることができ、ここでｍおよびｎは１から１０まで変化する。ＰＳは、ベンゼン化合物、ポリフルオロベンゼン化合物、ナフタレン化合物、ナフトキノン化合物、アンスラセン化合物、アンスラキノン化合物、フェナンスレン化合物、テトラセン化合物、ナフタセンジオン化合物、ピリジン化合物、キノリン化合物、イソキノリン化合物、インドール化合物、イソインドール化合物、ピロール化合物、イミジアゾール化合物、ピラゾール化合物、ピラジン化合物、プリン化合物、ベンツイミダゾール化合物、ベンゾフラン化合物、ジベンゾフラン化合物、カルバゾール化合物、アクリジン化合物、アクリドン化合物、フェナンスリジン化合物、チオフェン化合物、ベンゾチオフェン化合物、ジベンゾチオフェン化合物、キサンテン化合物、キサントン化合物、フラボン化合物、クマリン化合物、またはアンスラサイクリン化合物、から採択される光感受性の芳香族または複素芳香族基である。Ｑは、フリーラジカル、ナイトレン類、カルベン類、およびそれらの類似物、のような反応性中間体を生成させるための前駆体であるか、または、アジド化合物（−Ｎ３）、環状アゾ化合物（−Ｎ＝Ｎ−）、またはスルフェネート化合物（−Ｏ−Ｓ−）であるか、のいずれかであることができる。
【００２９】
医療用コンジュゲートのある特定実施態様では、このコンジュゲートは一般式
Ａｂ−Ｌ−ＰＳ−Ｑ
を有するものである。但し、式中、Ａｂは、ステロイド化合物、ボンベシン、ニューロテンシン、または熱感受性バクテリオエンドトキシン等のレセプターを指向するものであり；Ｌは、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＳＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，または、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−等のリンカーであり、ここでｎは１−６で変化し；ＰＳは、ベンゼン化合物、ポリフルオロベンゼン化合物、アンスラセン化合物、アンスラキノン化合物、ナフタセンジオン化合物、キノリン化合物、イソキノリン化合物、インドール化合物、アクリジン化合物、アクリドン化合物、フェナンスリジン化合物、キサンテン化合物、キサントン化合物、またはアンスラサイクリン化合物であり；そしてＱは、アジド化合物（−Ｎ３）、またはスルフェネート化合物（−Ｏ−Ｓ−）である。
【００３０】
医療用コンジュゲートの別の特定実施態様では、このコンジュゲートは一般式
Ａｂ−Ｌ−ＰＳ−Ｑ
を有するものである。但し、式中、Ａｂは、ステロイド化合物、ボンベシン、ニューロテンシン、または熱感受性バクテリオエンドトキシン等のレセプターを指向するものであり；Ｌは、−ＨＮＣＯＮＨ−，−ＨＮＣＯ−，または、−Ｓ−（Ｎ−スクシンイミド）−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨ−等のリンカーであり、ここでｎは１−６で変化し；ＰＳは、テトラフルオロベンゼン化合物、フェナンスリジン化合物、キサントン化合物、アンスラキノン化合物、アクリジン化合物、またはアクリドン化合物であり；そしてＱは、アジド化合物（−Ｎ３）である。
【００３１】
内部イメージ抗体は、非選択的または選択的のいずれかのやり方で染料または光増感剤（即ち、エフェクター分子類）により標識化またはカップリングすることができる。非選択的標識化では、光増感剤分子を抗−イデオタイプ抗体上の任意の位置で結合させる。これは、例えば、クロモフォア、フルオロフォア、または光増感剤の活性エステルを用いて行うことができる。選択的標識化またはカップリングでは、光活性分子を抗体のレセプター結合部位から離れて結合させる。これは、例えば、フラグメント化した抗体中に一般的に見出される遊離スルフヒドリル基と反応する二官能性マレイミド試薬を用いて行うことができる。選択的および非選択的標識のいずれも当業者に既知であり、Nicolotti et al. (米国特許第４７３２９７４号) および Achilefu et al. (Investigative Radiology, 2000, 35(8), 479-485)により記載されており、それらの全部を参照して本明細書の一部とする。クロモフォアまたはフルオロフォアを伴っている全長またはＦａｂ'内部イメージ抗体コンジュゲートの代表的な調製を図１に示し、光増感剤を伴っている場合については図２に示した。両タイプの調製とも実施例で詳しく記載している。
【００３２】
本発明の組成物を用いて診断および／または医療操作を実施する方法もまた記載している。これらの方法には、医薬的に受容可能な製剤に含有させた本発明の組成物の有効量を患者に投与することも含まれている。
【００３３】
これらの組成物は、所望の診断または医療の目的を達成するのに有効な用量または濃度で投与する。そのような用量または濃度は採用した特定の複合体、検定する器官や組織、臨床操作で採用する機器、その他に応じて、広範囲に変化し得る。ある実施態様では、光活性コンジュゲートの用量は、約０.１mg/kg体重から約５００mg/kg体重まで変化し得る。より典型的には、この用量は、約０.５mg/kg体重ないし約２mg/kg体重の範囲にある。別の実施態様では、非経腸投与用１回用量が、光活性コンジュゲートを約１μＭから約０.５Ｍの濃度で含有する。好ましい非経腸投与用製剤は、約１ｍＭないし約１０ｍＭの範囲の濃度のものである。光診断および光治療の目的で、異なる用量および組成物のコンジュゲートを投与する方法は当業者に既知である。
【００３４】
本発明の組成物は、経腸（経口または経直腸）、非経腸、局所または経皮投与のための診断用または治療用製剤に調製できる。局所または経皮送達にはエアゾル製剤も含まれる。これらの組成物は、企図する投与タイプに適応した常用担体および賦形剤を含有することもできる。その他、安定化剤や皮膚透過促進剤等の試薬も含め得る。それら溶液は、医薬的に受容可能な緩衝剤、乳化剤、表面活性剤、および塩化ナトリウムのような電解質も含有し得る。受容可能な担体には、水性緩衝液のような注射に適したもの、例えば、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンおよびその塩類、ホスフェート、サイトレート、重炭酸塩、およびそれらの類似物、注射用滅菌水、生理的食塩水、およびＣａ２＋、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋のような通常血漿カチオンのクロライドおよび／または重炭酸塩含有のバランス化イオン溶液等も含まれる。これらの担体は、キレート化剤、例えば、エチレンジアミンテトラ酢酸、カルシウムジナトリウム塩、またはその他の医薬的に受容可能なキレート化剤を含有し得る。
【００３５】
経腸投与用製剤には、当技術分野でよく知られているように各種のものがあり得る。一般に、それらの製剤は、水性溶液または懸濁液中に有効量の複合体を含む液体である。それらの経腸用組成物は、場合により緩衝剤、表面活性剤、乳化剤、揺変剤（thixotropic agent）、およびそれらの類似物を含んでいてもよい。経口投与用組成物は、芳香剤その他の感覚受容性能増強成分（ingredients for enhancing organoleptic qualities）をも含み得る。局所投与用製剤は、光活性分子の浸透または噴霧を助ける液体または半固体の賦形剤をも含み得る。
【００３６】
投与後、本発明の光活性コンジュゲートが意図した領域に蓄積するようにする。光活性化には、波長が３００から１２００nmの範囲の光、好ましくは約３５０から約８５０nmの範囲の光で当該領域を照射する。光治療操作においては、損傷組織の壊疽またはアポトーシスを誘導する光増感剤および／または前駆体を活性化するに十分な光に、標的部位をさらす。光増感剤を活性化するには、通常低エネルギーの光が必要であり、前駆体を活性化するには高エネルギーの光が必要となる。もし意図した領域が、例えば、皮膚表面上の病巣であるならば、当該領域を直接照射できる。別の方法では、光診断効果および／または光治療効果を提供するために光源を装着した内視鏡カセットを採用する。照射強度、照射パワー、照射時間、および光の波長は、身体の位置、病巣部位、達成効果などにより広範に変化し得る。流束レートは、好ましくは、しかしいつもではないが、温度効果を最小とするために２００ｍＷ／ｃｍ２以下に保つ。当業者に知られているように、適当なパワーは、病巣の大きさ、深さ、および病状によって変る。局所組織中のクロモフォアまたはフルオロフォアの検出は、当技術分野で既知の吸光法、蛍光法、散乱法、平面造影法、または断層放射線造影法によることができる。
【００３７】
内部イメージ抗−イデオタイプ抗体および対応する光活性コンジュゲートは、実施例１に記載したジゴキシンレセプターに関する典型的な操作に従って調製できるが、この操作に限定されるわけではない。ジゴキシンは、ステロイド化合物と同様に、一般的にペルヒドロシクロペンタノフェナンスレン分子の分類に属し、特殊なタイプの心筋ナトリウム−カリウムＡＴＰ―アーゼであるジゴキシンレセプターに結合する。標識化ジゴキシン内部イメージ抗体は、数種の冠疾患の診断に有用であり、および／または、心筋灌流剤の使用から得られた情報を補足するものであると信じられている。
【００３８】
実施例１
ジゴキシン内部イメージ抗体Ｆａｂ'フラグメントの調製および光学的診断剤とのコンジュゲーション
（ａ）マウス骨髄腫細胞と、Ｂａｌｂ−Ｃマウス抗−ジゴキシン抗体で免疫化したＡＪマウスの脾臓細胞との融合
当業者に既知の標準的ハイブリドーマ手法を用いてモノクローナル抗体群を産生させた。簡単に言えば、２匹のＡＪマウスを、マウスの（Ｂａｌｂ−Ｃ）モノクローナル抗−ジゴキシン抗体（Medex Laboratories製）で免疫化した。最初の免疫化から３週間後にbooster injectionを行い、３日後に脾臓を摘出した。マウス骨髄腫と脾臓の細胞をDulbecco's Modified Eagle Medium (ＤＭＥ）で３回洗い、次いでＤＭＥ（１０ml）中に懸濁させた。これらの細胞懸濁液の各５mlづつを混合し、遠心分離した。上澄み液を捨て、ペレットを、１mlのポリエチレングリコール（４５秒間で加える）、３mlのＤＭＥ（３０秒間で加える）、および３０秒間で加えた追加のＤＭＥ３mlで処理した。細胞を、室温に８分間、次いで３７℃に２分間放置した。細胞を遠心分離し、ヒポキサンチン、アミノプテリン,およびチミヂンを含有する媒体（ＨＡＴ培地）（１０ml）に懸濁させ、次いでマイクロタイタープレートに配置させた。細胞を成育させ、融合３週間後、放射線免疫アッセイによってスクリーンした。
【００３９】
（ｂ）ジゴキシンに対する抗−イデオタイプ抗体のスクリーニング
親和性精製やぎ抗−マウス抗体（２mg/mL）の７５μＬ部を燐酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（１５０mL）で希釈し、その２００μＬ部をマイクロタイタープレートの各ウエル内に配置した。これらのプレートを３７℃で４時間インキュベートした。各ウエルを水で（３回）洗い、３％ＢＳＡ溶液（２００μＬ）で処理し、それから１時間インキュベートした。各ウエルを再び水で（３回）洗い、細胞培養物からの上澄み液（１５０μＬ）で処理し、それから室温で約１８時間インキュベートした。これらのウエルを水で（３回）洗い、１２５Ｉ標識化やぎ抗−ジゴキシン（１００μＬ）で処理し、４時間インキュベートした。次いでこれらのプレートを洗浄し、各ウエルを１２５Ｉについてカウントした。合計３９の陽性ウエルを特定した。
【００４０】
対応する陽性ウエルからの各上澄み液（１００μＬ）を、１２５Ｉ−ジゴキシン（５０μＬ）と混合し、予めモノクローナルマウス抗−ジゴキシン抗体約０.５μｇで被覆したマイクロタイタープレート内に配置して１時間置いた。これらのプレートを水で３回洗い、放射線活性量を測定した。対照と比較したときの１２５Ｉ−ジゴキシン結合の阻害が、抗−イデオタイプの陽性テストを示す。陽性４ウエルを特定した。
【００４１】
（ｃ）のＦａｂ'フラグメントの調製
通常のやり方で、マウスの腹膜内に、上記（ａ）部で概要を示した操作に従って調製した、ハイブリドーマ細胞を注入することにより腹水液を採取した。抗−イデオタイプジゴキシン抗体を、該液から、２０ｍＭ，ｐＨ６.８燐酸緩衝液中の飽和硫酸アンモニウム溶液により連続して３回、沈殿させて精製した。それから、沈殿したタンパク質を、２０ｍＭ，ｐＨ６.８燐酸緩衝液に対して徹底的に透析した。可溶化したモノクローナル抗体を、イオン交換クロマトグラフィー（Whatman C-52 カラム、０から５００ｍＭＮａＣｌ漸増ｐＨ６.８燐酸ナトリウム緩衝溶液）で精製した。抗−イデオタイプジゴキシン抗体を含有する目的のフラクションを集め、同じ緩衝液中に４℃で貯蔵した。
【００４２】
このＦａｂ'フラグメントは、Parham et al., J. Immunol. Methods, 1982, 53, 133-173 に報告されている方法の修飾法を使用して取得した。１：２０の比率の、抗−イデオタイプジゴキシン抗体（１％溶液の２８０ｎｍにおける吸収＝１４.４）の所望量、およびシステイン不含パパイン（Worthington, ２回再結晶品）を、１０倍容量の消化緩衝液（１００ｍＭ酢酸ナトリウム，３ｍＭジナトリウムＥＤＴＡ，ｐＨ５.５）を使用して、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により反応完了が測定されるまで（３−１６時間）、３７℃でインキュベートした。当該消化混合物を４℃で、５ｍＭ Tris-HCl 緩衝液 pH7.2 を用いて透析濾過（Amicon flow cell, PM-10 membrane）した。この混合物から、イオン交換クロマトグラフィー（Whatman 52 カラム、５ｍＭ Tris-HCl 緩衝 pH7.2溶液中、０ないし１００mM NaClグラジエント）により、アニオン性Ｆｃフラグメントを除去した。このＦ（ａｂ')２フラグメントと不活性化パパインとが、ボイド容量中に含有されていた。このＦ（ａｂ')２フラグメントを、さらにパパインからSephadex G-100サイズ排除クロマトグラフィーにより、溶出液として５ｍＭ Tris-HCl 緩衝液 pH7.2 を用いて精製した。所望の抗体フラグメントをボイド容量中に溶出させ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより特性確認した。このＦ（ａｂ')２フラグメント群の各画分を−７０℃で貯蔵した。
【００４３】
全長の抗体からパパイン消化により得たこのＦ（ａｂ')２ダイマーを、さらにシステインまたはβ２−メルカプトエタノールのようなチオール試薬を用いて所望のＦａｂ'に分裂させた。このＦ（ａｂ')２は、室温で反応が完了するまで（１ないし４時間）、１０ｍＭシステインまたはβ２−メルカプトエタノールのいずれかの存在下にインキュベートした。反応はヨウド酢酸アミド３０ｍＭの添加により停止し、それはＳＤＳ−ＰＡＧＥにより測定された。過剰の還元剤、ヨウド酢酸アミド、およびその他の低分子量フラグメント群をサイズ排除Sephadex G-２５クロマトグラフィーにより、燐酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７.４、（ＰＢＳ）を溶出液として除去した。このようにして得たＦａｂ'フラグメントは、スルフヒドリル基の酸化を防ぐためにできるだけ速やかに使用する。
【００４４】
（ｄ）光診断剤によるＦａｂ'フラグメントのコンジュゲーション
このコンジュゲーションの操作は、Achilefu et al., Investigative Radiology, 2000, 35, 479-485 （その全部を明示的に参照して本明細書の一部とする）に報告されている抗−ＣＥＡ抗体に対する場合と同様のやり方で実施する。
【００４５】
第１図に示すように、Ｆａｂ'フラグメント（２）と約２０倍モル過剰量の染料活性エステル（１）との混合物を、ＰＢＳ中で４時間インキュベートした。それから、光診断コンジュゲート（３）をSephadex G-２５サイズ排除クロマトグラフィーにより、ＰＢＳを溶出液として使用して精製し、次いで凍結乾燥した。
【００４６】
実施例２
ジゴキシン内部イメージ抗体Ｆａｂ'フラグメントの調製および光治療用剤とのコンジュゲーション
実施例１の（ｃ）段階で得たＦａｂ'フラグメント群（２）を使用して、光治療用剤へのコンジュゲーションを行った。このコンジュゲーションの操作は、ヒト血清アルブミンについて以前に刊行されたもの（Achilefu et al., Investigative Radiology, 2000, 35, 479-485）（その全部を明示的に参照して本明細書の一部とする）と同様のやり方で実施した。
【００４７】
第２図に示すように、Ｆａｂ'フラグメント（２）と約２０倍モル過剰量の光増感剤活性エステル（４）との混合物を、ＰＢＳ中で４時間インキュベートした。それから、光治療コンジュゲート（５）をSephadex G-２５サイズ排除クロマトグラフィーにより、ＰＢＳを溶出液として使用して精製し、次いで凍結乾燥した。
【００４８】
実施例３  
全長のジゴキシン内部イメージ抗体群の調製および光学的診断剤とのコンジュゲーション
実施例１の段階ａおよび段階ｂで得た、全長のジゴキシン内部イメージ抗体群を、光学的診断用剤とのコンジュゲーションに使用した。このコンジュゲーション操作は、ヒト血清アルブミンについて以前に刊行されたもの（Pandurangi et al., Journal of Organic Chemistry, 1998,63,9019-9030)と同様のやり方で実施した。
【００４９】
実施例４
実施例１の段階ａおよび段階ｂで得た、全長のジゴキシン内部イメージ抗体群を、光治療用剤とのコンジュゲーションに使用した。このコンジュゲーション操作は、ヒト血清アルブミンについて以前に刊行されたもの（Pandurangi et al., Journal of Organic Chemistry, 1998,63,9019-9030)と同様のやり方で実施した。
【００５０】
本明細書中に示しかつ記載した本発明の実施態様は、当業者である発明者による特定の実施態様に過ぎず、いかなる意味においても限定的なものでないことが理解さるべきである。それ故、これらの実施態様について、本発明の精神および下記する特許請求の範囲から逸脱しない限りにおいて、多様な変化、修飾または変更を加えあるいはなすことができる。加えて、以前に開示された各参照文献は、それらの全部を参照して明示的に本明細書中に取り込む。
【図１】
2005508880.tif 000004
【図２】
2005508880.tif 000005