(57)【要約】【課題】【解決手段】【化１】2005538032.tif 000007  本発明は、Ｓｉ−Ｏ−Ｒ型（Ｒは、有機部分である）の化学構造を有する、海洋生物のハマジナマコ（Holothuria scabra）由来の、新規化合物多重蛍光性天然色素を提供する。ケイ酸マトリックスが、前記化合物の必須部分であり、動物の代謝において役割を果たしており、種々の適用を有する前記化合物を含む組成物も提供する；また、海洋生物（ハマジナマコ（Holothuria scabra））由来の、新規な多重蛍光性天然色素化合物の抽出、精製および特徴づけの方法も提供する。
2005538032.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
実験式Ｃ22Ｈ48Ｏ66Ｎ2Ｓ10Ｓｉ7を有し、分子量１９１５を有し、かつ添付の図面の図１８または１９で表される構造式を有する新規な多重蛍光性色素化合物。
【請求項２】
図２０に示す構造を有する、分子式Ｃ10Ｈ16Ｎ2Ｏの蛍光体を含む請求項１に記載の新規化合物。
【請求項３】
前記蛍光体の学名が、１−ヒドロキシ，２，５−ジ−メチルアミノベンゼン（ＨＤＡＢ）であり、それが１８０の分子量を有する請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
以下の特徴を有する請求項１に記載の新規化合物：
ｉ．  元素分析による純粋な化合物の有機組成が、炭素８．３５７２、水素１．７３９％、窒素０．９４４９％および硫黄９．４５７％を示し；
ｉｉ．  前記化合物における前記元素についての原子比が、微量分析で示された炭素：水素：窒素：硫黄の比＝２２：４８：２：１０であり；
ｉｉｉ．  前記化合物の無機組成物を原子吸光測光に付すことにより、二酸化ケイ素の割合１２．５８％およびケイ酸を推定し；
ｉｖ．  ケイ酸が、前記化合物の必須部分であり；
ｖ．  ケイ素の原子比が、２２の炭素原子ごとについて７であり；
ｖｉ．  イオン交換クロマトグラフィーによる更なる化合物の精製および、２９１と４５１での吸光度のピークからピークへの比が安定であることが確認され；
ｖｉｉ．  化合物が、糖単位を含み；
ｖｉｉｉ．  そのカラムから純粋な色素を溶離する、逆相Ｃ１８タイプの分析カラムと、０から５０％のアセトニトリルの勾配による前記化合物の純粋なイオン形態のＨＰＬＣにより、保持時間１．９０９の値および非常に鋭利なピークを生じ；
ｉｘ．  １２１０−１１５０および１０６０−１０３０および６５０の範囲に生じた硫酸塩のＦＴ−ＩＲシグナルが、硫黄が、Ｏ−ＳＯ2−型の結合で前記化合物中に存在することを意味し；
ｘ．  １０９０−１０２０（１０６８に）に見られるケイ酸塩の強い吸収帯が、ケイ素が、−Ｓｉ−Ｏ−Ｓｉとして前記化合物中に存在することを意味し；ＣＨ3伸縮シグナルが、２９５０−２８５０に見られ；アミドシグナルが存在せず、前記化合物がタンパク質ではなく；
ｘｉ．  ヒドロキシ伸縮シグナルが強く、かつ幅広であり、それは、フェノール性基を意味し；
ｘｉｉ．  前記化合物が、前記化合物の蛍光体部分にフェノール性基を含有し；
ｘｉｉｉ．  前記化合物が、立体的に保護されたキノノイド環も含み；
ｘｉｖ．  蛍光体部分が、硫酸化糖部分によりＳｉ−Ｏ基と結合され；
ｘｖ．  前記化合物のフェノール性基のみにより、ケトエノール互変異性を生じ、従って、キノン型構造およびフェノール性構造の両方を生じ；かつ
ｘｖｉ．  前記化合物が、多重蛍光性色素として用いられる。
【請求項５】
前記化合物が、以下の特徴を有する請求項１に記載の化合物：
ｉ．  還元剤により脱色されず、
ｉｉ．  前記化合物が、合成の化合物ではなく、
ｉｉｉ．  前記色素の粗抽出物は、その色が黄色がかった緑色であり；
ｉｖ．  精製した化合物の液状色素が、緑色、黄色および赤色の色調で茶色がかっており、
ｖ．  日光の中肉眼で見ると、精製した乾燥化合物は、赤褐色着色粉末であり、
ｖｉ．  真空管ライトの下で、いくらかの緑色色調が発光され、
ｖｉｉ．  水銀ライトの下で、青みがかった緑色を生じ、
ｖｉｉｉ．  Ｘ線の下で、色は緑色で蛍光を発し、
ｉｘ．  前記化合物が、本質的に非結晶であり、
ｘ．  前記化合物が、水溶性で、エタノール、メタノールおよびアセトンを含む有機溶媒に不溶性であり、
ｘｉ．  前記化合物が、負に帯電し、
ｘｉｉ．  前記化合物が、２．８のｐＨを有し、
ｘｉｉｉ．  前記化合物が、キノノイド環を含み、
ｘｉｖ．  前記化合物が、本質的に非タンパク質様であり、
ｘｖ．  前記化合物が、還元糖を有し、
ｘｖｉ．  前記化合物が、バイオサーファクタントとして働き、
ｘｖｉｉ．  前記化合物が、抗菌特性を有し、抗菌アッセイを行ったとき、阻止帯を示し、
ｘｖｉｉｉ．  分光光度計で、Ｘ−線、ＵＶおよび可視スペクトル範囲の異なる波長で励起させたとき、前記化合物が蛍光を発光し、
ｘｉｘ．  前記化合物について、ＵＶ、可視分光が２５０ｎｍ−７００ｎｍであり、ピークが、２９１ｎｍおよび４５１ｎｍ波長に示され、
ｘｘ．  蛍光性分光放射スキャンを、前記化合物を２７０ｎｍで励起することにより行い、蛍光のピークが５５０ｎｍに生じ、
ｘｘｉ．  前記化合物を３４０ｎｍで励起したとき、蛍光のピークが４６０ｎｍに生じ、
ｘｘｉｉ．  励起波長が３６１ｎｍに固定されたとき、蛍光発光は４９０ｎｍで最大量になり、
ｘｘｉｉｉ．  励起波長が４００ｎｍに固定されたとき、蛍光発光は４７０ｎｍで最大量になり、
ｘｘｉｖ．  前記化合物が５２３ｎｍで励起されたとき、前記発光は、６００ｎｍで最大になり、
ｘｘｖ．  ２６０ｎｍ−２８０ｎｍ範囲のＵＶ電球の下で、１：２００００００倍希釈の濃度の、すなわち５×１０-6濃度の化合物における、色素の物理的検査で、青みがかった緑色の蛍光を発し、
ｘｘｖｉ．  異なる蛍光性キューブの下、少なくとも１：２００００００００倍希釈の濃度の、すなわち５×１０-8濃度の化合物における、色素のエピフルオレッセンス顕微鏡検査で、蛍光を発し、
ｘｘｖｉｉ．  エピフルオレッセンス顕微鏡の蛍光性キューブのＵＶおよび可視域の４つの異なる波長で、前記化合物は８つの異なる色に着色された蛍光を発し、
ｘｘｖｉｉｉ．  純粋な化合物が、紫外線キューブＷＵ−３３０ｎｍ−３８５ｎｍの励起範囲下で励起されたとき、インディゴ色の色調を有する蛍光青の発光が、３８０ｎｍ−４００ｎｍ範囲のＵＶＡにおいて生じ、
ｘｘｉｘ．  純粋な化合物が、４５０ｎｍ−４８０ｎｍの励起範囲のＷＢキューブ下で励起されたとき、蛍光緑色発光が、５００ｎｍ−５７０ｎｍの範囲で生じ、
ｘｘｘ．  純粋な化合物が、５１０ｎｍ−５５０ｎｍの励起範囲のＷＧキューブの下、励起されたとき、橙色の色調を有する蛍光赤色の発光が、５７０ｎｍ−６５０ｎｍの範囲で生じ、
ｘｘｘｉ．  １０Ｘ、４０Ｘ、１００Ｘの対物レンズ下で見たとき、前記化合物が、エピフルオレッセンス顕微鏡の通常の透過光電球下で、青みがかった灰色の色調を発し、
ｘｘｘｉｉ．  異なる蛍光性キューブの下で、少なくとも１：２００００００００倍希釈の濃度の、すなわち５×１０-8の濃度の化合物の、蛍光性化合物と結合した海洋動物の卵細胞のエピフルオレッセンス顕微鏡試験により、純粋な化合物とは異なる色の蛍光を発し、
ｘｘｘｉｉｉ．  前記化合物でラベルされた細胞は、エピフルオレッセンス顕微鏡の蛍光性キューブおよび透過光電球のＵＶおよび可視域の４つの異なる波長で、４つの異なる色に着色された蛍光を発し、
ｘｘｘｉｖ．  エピフルオレッセンス顕微鏡のＷＵ−蛍光キューブにより、３３０ｎｍ−３８５ｎｍの範囲で励起されたとき、前記化合物でラベルされた細胞は、青色の蛍光を発し、
ｘｘｘｖ．  ４５０ｎｍ−４８０ｎｍの励起範囲のＷＢキューブの下励起されたとき、前記化合物でラベルされた細胞は、明るい黄色蛍光を発し、
ｘｘｘｖｉ．  ５１０ｎｍ−５５０ｎｍの励起範囲のＷＧキューブの下励起されたとき、前記細胞は、赤色蛍光を発し、
ｘｘｘｖｉｉ．  室温で１年後でさえ、前記化合物の前記蛍光色は持続し、
ｘｘｘｖｉｉｉ．  前記化合物の前記蛍光は、高度に光安定性であり、直接光への長期暴露により、劣化せず、
ｘｘｘｉｘ．  前記化合物は、光退色せず、
ｘｌ．  前記化合物は、蛍光顕微鏡下でスライドをスクリーニングしている間に消光せず；かつ
ｘｌｉ．  発光生物からの抽出物におけるように、分子が、活性化に必要なエネルギーの獲得に不可能な温度で、液体窒素中で凍結した後でさえ、零度以下の温度で凍結したとき、前記化合物の蛍光は、変化しない。
【請求項６】
前記化合物が、非放射性である請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
ケイ素マトリックスを有する最初の天然有機金属化合物である請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
前記化合物中のケイ酸の存在が、生きている生物の必須部分として、初めて同定された請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
前記化合物が、フェノール性硫酸化ケイ酸塩化多糖類（ＰＳＳＰ）である請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
前記化合物が、美容整形外科において、有機ケイ素化合物の関連する生理学的観点を研究するための天然生体内システムを提供する請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
前記化合物が、表３および表４に示すように、より長い波長、狭い帯域幅および小さいストークスシフトを含む請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
前記化合物の前記発光スペクトルが、溶媒極性およびｐＨに非感受性である請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
前記化合物が、より高い光安定性を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
前記化合物が、より長い波長を有し、可視スペクトルにおいて、１以上の発光範囲を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
スペーサが、天然化合物の必須部分を形成する請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
前記化合物が、高い水混和性を有し、化粧用組成物および薬物組成物に必要とされる、適当な添加物を、容易に混合するのを促進する請求項１に記載の化合物。
【請求項１７】
前記化合物が、高く鋭利なピークを有する、Ｘ線、２７０−７４５ｎｍのＵＶおよび可視域の右のスペクトルを包含する、８つの励起（ｅｘ）／８つの発光（ｅｍ）ｎｍ範囲を含む請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】
アルゴンイオン・レーザー（〜４８８ｎｍ）のスペクトル線に整合する、〜４５０−４８０ｎｍの範囲の蛍光性フィルタキューブにおける前記色素の励起および発光スペクトルを有する多重蛍光性化合物である請求項１に記載の化合物。
【請求項１９】
フルオレセインのようなアルゴンイオン・レーザー（〜４８８ｎｍ）のスペクトル線に整合する、〜４５０−４８０ｎｍの範囲の蛍光性フィルタキューブにおける前記色素の励起および発光スペクトルを有する多重蛍光性色素であるが、前記細胞結合体が、多色適用において有用な色素を形成する明るい黄色蛍光を発する請求項１に記載の化合物。
【請求項２０】
前記化合物が、消光に抵抗性であり、色素の希釈および濃度にかかわらず、蛍光強度が、タンパク質に結合した後、増加する請求項１に記載の化合物。
【請求項２１】
前記化合物が、室温で安定で、長い貯蔵寿命を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項２２】
前記化合物の分子および放射性キットが、室温で輸出できる請求項１に記載の化合物。
【請求項２３】
蛍光顕微鏡検査下の前記化合物の蛍光性発光の顕微鏡写真が、他の特別なフィルム要件を有さず、４５−６０秒の範囲の露出時間を有し、コダック４００フィルムを用いて行われる請求項１に記載の化合物。
【請求項２４】
前記化合物が、検体が存在しない細胞遺伝学的スライド上で全ての蛍光下で、細胞および細胞構成成分の対比染色効果を生じる請求項１に記載の化合物。
【請求項２５】
５×１０-8−１０-6の濃度の超純水中で、１：２００００００倍に希釈されてさえ、前記化合物が、Ｘ線、ＵＶ光線および可視スペクトル範囲の８つの波長範囲で励起されたとき、８つの色の蛍光を発する請求項１に記載の化合物。
【請求項２６】
分子式Ｃ10Ｈ16Ｎ2Ｏを有する化合物であり、それが、添付の図面の図２０に示す構造式を有する蛍光体である化合物。
【請求項２７】
前記蛍光体の学名が、１−ヒドロキシ，２，５−ジ−メチルアミノベンゼン（ＨＤＡＢ）であり、１８０の分子量を有する請求項２６に記載の化合物。
【請求項２８】
請求項１に記載の生理活性な、多重蛍光性色素化合物を有効量含む組成物であって、前記化合物が、以下の有用な適用のための、海洋ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から、適当な添加物と共に得られる組成物。
ｉ．  蛍光性色を示す可撓性ポリ塩化ビニルフィルムの調製；
ｉｉ．  塗料、インク、織物における蛍光性色の使用；
ｉｉｉ．  ポリマーの漂白および増白のための蛍光性色素の組成物；
ｉｖ．  全スペクトルの蛍光性色素での漏れ検出；
ｖ．  自動式化学的計測システムにおける使用；
ｖｉ．  破壊された輸送容器の位置に印をつけ、前記容器が、航空機、救命ボート  およびロケットからなる群から選択され；
ｖｉｉ．  海底プローブ；
ｖｉｉｉ．  ＵＶＡが、皮膚癌の光化学療法において用いられ；
ｉｘ．  化粧用クリーム剤およびローション剤の色素体日焼け止め構成成分；
ｘ．  前記色素の水混和性特性により、加湿剤における混和性を容易にし；
ｘｉ．  分子診断用の蛍光性現場ハイブリッド形成適用キット構成成分；
ｘｉｉ．  非放射性標識化および検出キットの構成成分、前記キットは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質および酵素の標識化のための、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学からなる群から選択された目的のために用いられ；
ｘｉｉｉ．  免疫蛍光性検出；
ｘｉｖ．  ＤＩＧ−標識オリゴヌクレオチドプローブおよび抗ＤＩＧ  Ｆａｂ−フラグメントの対比染色；
ｘｖ．  単独および多重のフローサイトメトリー適用；
ｘｖｉ．  エピフルオレッセンス顕微鏡検査用の蛍光染色；
ｘｖｉｉ．  健康食品産業、化粧品産業、医薬品産業、農薬産業および化学産業において、生物汚染の迅速な検査のため；
ｘｖｉｉｉ．  実験室培養における生物汚染物質の迅速な評価のため；
ｘｉｘ．  領域条件下での生物汚染因子の迅速な検査のため；
ｘｘ．  コリンエステラーゼの拮抗阻害剤；
ｘｘｉ．  抗菌組成物において；
ｘｘｉｉ．  洗面用品組成物におけるバイオサーファクタントとして；
ｘｘｉｉｉ．  天然着色剤；
ｘｘｉｖ．  ８つの異なる波長で８つの蛍光と、透過光下の位相差効果とを得るための、超純水中、１：２０００００００の比の前記色素の生理活性組成物；
ｘｘｖ．  零度以下の温度の範囲で実施されるべき様々な蛍光性適用のための色素；
ｘｘｖｉ．  新規蛍光性プローブ用色素の誘導体を作るための塩基として用いられるための化合物；
ｘｘｖｉｉ．  分子試薬用化合物；
ｘｘｖｉｉｉ．  分子適用のための結合体を形成するための化合物；および
ｘｘｉｘ．  透過光下で細胞の異なる生化学的構成要素のための、位相差と組織化学的対比染色効果とを得るため。
【請求項２９】
以下の工程を含むハマジナマコ（Holothuria scabra）ナマコから新規化合物および多重蛍光性色素を抽出する方法：
ａ．  干潮の間に海岸から動物を集め、分類学的同定および更なる使用のため、実験室中、海水含有ガラスタンク中に維持し；
ｂ．  ミリ−Ｑ水で前記動物を完全に洗浄し、閉じた瓶中、クロロホルム／メタノールで麻酔をかけ；
ｃ．凍結乾燥のため、外科用メスで削りおとすことにより、皮をむくことにより、動物の内臓および皮膚部分を除去し；
ｄ．  工程（ｃ）の凍結乾燥された皮膚を、必要量の超純水に取り、振盪機上で４時間保持し、次いでワットマン・ペーパー１および焼結ガラスろ過器でろ過し；
ｅ．  工程（ｄ）のろ液を蒸発させ、有機溶媒を用いて前記化合物を沈殿させ；
ｆ．  最小限の容量の水中に前記沈殿物を溶解させ、塩を除去するために有機溶媒で再沈殿させ；
ｇ．  残渣を集めるために遠心分離し、ろ液を廃棄し；
ｈ．  工程（ｇ）の残渣を乾燥し、乾燥粉末を得；
ｉ．  水中に工程（ｈ）の乾燥粉末を溶解させ、イオン交換カラムに付し；
ｊ．  水で工程（ｉ）のカラムを溶離し；
ｋ．  工程（ｉ）の水溶離画分を凍結乾燥し；
ｌ．  ＤＥＡＥセルロースカラム上に、工程（ｋ）の凍結乾燥された材料を付し、リン酸緩衝液で溶離し、
ｍ．  ＰＤ１０カラムを用いて、工程（ｌ）のリン酸緩衝液溶離フラクションを繰り返し脱塩し、および
ｎ．  図１８または１９により表される、式Ｃ22Ｈ48Ｏ66Ｎ2Ｓ10Ｓｉ7の所望の生理活性化合物を得る。
【請求項３０】
前記海洋生物ハマジナマコ（Holothuria scabra）が、間潮、浸水、浅いおよび深い水から得られ、通常、裂け目、割れ目、岩棚、沼、張り出し、岩の多いおよび砂地の生息地のような、影のある範囲において、豊富であり；明るい着色に鈍感で、外骨格および内骨格を有したり、有さなかったり、無柄の、固着性漂流者、遊泳生物、様々な泳ぐ力を有し、通常、習性で夜行性であり、活性な捕食をしやすく、発光および蛍光性色素あり、または無しで、Ｘ線、ＵＶＢ、ＵＶＡ、可視着色スペクトルおよび赤外スペクトルの全ての波長範囲に対して、手短な発光を生じる請求項２９に記載された方法。
【請求項３１】
前記化合物の実験式が、Ｃ22Ｈ48Ｏ66Ｎ2Ｓ10Ｓｉ7であり、分子量１９１５を有する請求項２９に記載された方法。
【請求項３２】
前記化合物が、蛍光体を含み、前記蛍光体が、実験式Ｃ10Ｈ16Ｎ2Ｏおよび１８０の分子量を有する請求項２９に記載された方法。
【請求項３３】
前記ＨＰＬＣ保持時間が、１．９０９分と確認された請求項２９に記載された方法。
【請求項３４】
前記化合物が、１：２００００００倍の比で水で希釈され、前記化合物が、８つの異なる波長で８色の蛍光を発する請求項２９に記載された方法。
【請求項３５】
前記化合物が、零度以下の温度から３００度セ氏の異なる温度範囲で安定である請求項２９に記載された方法。
【請求項３６】
ＦＴ−ＩＲ分析において前記化合物が、１２１０−１１５０および１０６０−１０３０の範囲および６５０で生じる硫酸塩のシグナルを示し、それが、硫黄が、Ｏ−ＳＯ2−型の結合で前記化合物中に存在することを意味する請求項２９に記載された方法。
【請求項３７】
ＦＴ−ＩＲ分析において前記化合物が、１０９０−１０２０（１０６８で）で、ケイ酸塩について強い吸収帯を示したことが、−Ｓｉ−Ｏ−Ｓｉ−結合の存在を確認する請求項２９に記載された方法。
【請求項３８】
さまざまな産業、生物学上および他の適用において、物質および／または構成成分を殺す方法であって、前記方法は、必要量の請求項１の多重蛍光性化合物を、前記物質および／または構成成分に適用することまたは添加することを含む方法。
【請求項３９】
現場でのハイブリッド形成（Ｆ．Ｉ．Ｓ．Ｈ．）における蛍光性分子プローブの標識化のための請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記色素の青色着色蛍光が、同じ波長励起でＤＡＰＩ蛍光色素による同じ色の前記発光に匹敵し、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化キットの構成成分として用いられる請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
可視域における前記色素の黄色着色蛍光が、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、オーラミンの同じ着色放射に匹敵する請求項３８に記載の方法。
【請求項４２】
可視域における前記色素の黄色着色蛍光が、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、ＦＩＴＣの同じ着色放射に匹敵する請求項３８に記載の方法。
【請求項４３】
前記橙色着色蛍光性放射が、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、プロピジウムアイオダイド蛍光色素の橙色蛍光色に匹敵する請求項３８に記載の方法。
【請求項４４】
前記橙色着色蛍光性放射が、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、ローダミン蛍光色素の前記橙色蛍光色に匹敵する請求項３８に記載の方法。
【請求項４５】
前記橙色着色蛍光性放射が、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、ＴＲＩＴＣ蛍光色素の前記橙色蛍光色に匹敵する請求項３８に記載の方法。
【請求項４６】
前記本色素が、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、ヘキスト３３２５８による前記発光の色にも匹敵する請求項３８に記載の方法。
【請求項４７】
前記本色素が、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、同じ波長励起で、ヘキスト３３３４２蛍光色素による前記発光の色にも匹敵する請求項３８に記載の方法。
【請求項４８】
前記化合物が、現在、フィコビリタンパク質が用いられている適用すべてにおいて、用いることができ、それらとは異なり、前記色素が、冷凍により蛍光の消失が進行しない請求項３８に記載の方法。
【請求項４９】
１０Ｘ対物レンズ下で蛍光性顕微鏡の明るい視野で見るとき、青みがかった灰色の色調が、位相差効果を生じ、前記位相差効果が、細胞質遺伝子的、細胞学的および組織化学的スライドの迅速なスクリーニングにおいて有用であり、前記色調が、顕微鏡の余分の位相差付属の構成成分に関する費用を省く請求項３８に記載の方法。
【請求項５０】
前記化合物、通常の透過光顕微鏡の１００×油浸漬対物レンズの下で、卵黄、核質および活性に分裂している分割細胞のクロマチンのタンパク質が、前者には、茶色がかった黄色、後者には黄色、そして最後の細胞構成成分には、暗青色の色調で、染色の異なる色を示し、それは、効果の迅速なバイオアッセイの効果において有用であり、細胞の様々な組織化学的構成成分について見出される請求項３８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
技術分野
本発明は、新規有機ケイ素Ｓｉ−Ｏ−Ｒ型の化合物に関し、その化合物は、門：棘皮動物、綱：ナマコ綱、目：アスピドカイロタ（Aspidochirota）、科：ホロトロイダエ（Holothuroidae）に属する海洋の無脊椎動物ハマジナマコ（Holothuria scabra）の身体内壁抽出物から精製された多重蛍光性天然色素である。前記化合物は、フェノール性蛍光体部分を有する多糖類蛍光色素であり、硫酸塩結合により、その周りに、ケイ素マトリックスに結合している。このケイ素部分は、前記核分子の必須部分であり、動物の代謝に貢献している。前記化合物は、硫黄が豊富である。
【０００２】
本発明はまた、生きている海洋生物、特にナマコから、新規化合物および多重蛍光性色素の、抽出、精製および特徴づけの方法を提供する。
【０００３】
本発明はまた、ケイ素が、有機分子および、その蛍光体のフェノール性型の必須部分となる、新規蛍光性化合物の化学構造を初めて開示した。さらに、前記化合物の独特な性状および前記色素の特徴を提供し、それらの利点を開示した。また、蛍光性現場ハイブリッド形成、フローサイトメトリー、イムノアッセイおよび蛍光顕微鏡検査のための、非放射性標識化のための、多重蛍光性天然色素として、新規蛍光性化合物の産業上有用性を記述した。前記化合物は、高分子量の蛍光性化合物（いくつかの特別な必要条件のため、相当探されてきたが、入手不可能であった）を、蛍光性分子プローブの市場売買において取引している会社に提供することにより、およびまた、その蛍光体部分のみを利用することによる、低分子量蛍光性色素の代替物を、前記会社に提供することにより、前記会社のための別の有用性を有する。高分子量および低分子量ならびに、単独および多重の色適用のための蛍光性プローブのために所望の性状の、幾つかの誘導体色素が、製造された。さらに、前記化合物は、化粧品産業、特に、日焼け止めのための、組成物中、混和容易性処方成分となり、殺虫剤および動物治療薬における薬物となりうる。
【背景技術】
【０００４】
先行技術参照
ケイ素は、植物および動物の発育において、積極的な役割を果たすと記述されている。Ｆ．Ｃ．ラニング（Lanning, F.C.）（「化学元素の百科事典（The encyclopaedia of the chemical elements）」、Ｃ．Ａ．Ｈａｍｐｅｌ著、Ｃｈａｐｍａｎ−Ｒｅｉｎｈｏｌｄの子会社としてのReinhold Book Corporation. Inc, New York、６４７頁、１９６８年）によれば、ケイ素は、地球上で、生命の起源について、重要かつ必須な役割を果たしているかもしれない。生命の下等な形態、例えばケイ藻類は、しばしば、骨格構造において、ケイ酸を用いている。彼は、Ｓｉ−Ｏ−Ｒ型の結合が、生きている生物において、生じているかもしれないと、提案している。しかし、今までのところ、ケイ酸が、有機部分の必須部分になり、前記化合物を蛍光性にするためのマトリックスとして作用するかもしれない、というようなレポートは、先行文献では入手されていない。ワナガット（Wannagat）は、生きている生物のケイ素含有率が、生物発生の複雑さに伴い、減少することを記述している。ケイ素の炭素に対する割合は、地球外層においては２５０：１であり、腐植土においては１５：１であり、プランクトンにおいては１：１であり、シダ類においては１：１００であり、哺乳類においては１：５０００である（wysiwyg: //34/http: //www.pbs.org/ wgbh/ pages /frontline /implants /corp /history.htmlから引用）。同筆者は、ケイ素が、毛髪、爪、骨および羽の成長において、重要な役割を果たしているが、その役割は、完全には理解されていないことを報告している。骨折の部位において、ケイ素含有率は、コラーゲン網において、５０倍増加している。
【０００５】
市場の有機ケイ素型の化合物は、大部分、合成品である。ケイ素は、反復Ｓｉ−Ｏバックボーンを含有する完全な合成ポリマーのための、包括的な記載である。ケイ素−炭素結合を介してケイ素原子に連結している有機基は、シリコーンの集合と定義されている。それらは、市場で、流体、エマルジョン、化合物、潤滑剤、樹脂およびエラストマーまたはゴムとして売られており、化粧用形成外科でも用いられている（wysiwyg://34/http://www.pbs.org/wgbh/pages/frontline/implants/corp/history.htmlから引用）。しかし、生きている生物中のケイ素化合物について、ケイ酸が、有機分子の必須部分であり、単独または多重蛍光性色素の特徴も有するという情報は、文献中では入手されていない。現在市場で入手可能な色素の大部分は、合成である。スタンファイル（Stainfile）−色素Ａは、２６４色素の色素指数が与えられている。そのうち、２５８は、合成であり、ほんの６つが天然色素である（http://members.pgonline.com/−bryand/dyes/dyes.htm）。合成色素の製造は、しばしば、高温で、触媒として、強酸、強アルカリおよび重金属を用いる必要がある。このことにより、これらの方法および排水が、環境分解の問題となる。染料産業は、継続的に、より安価で、より環境的に優しい、現存する色素へのルートを探している（ホブソンおよびウエールズ（Hobson and Wales）、１９９８年、「緑色色素（Green Dyes）」， Journal of the Society of Dyers and colorists （ＪＳＤＣ），１９９８年，１１４巻，４２−４４頁）。入手可能な色素の全ては、蛍光性ではない。ビトプラン（Bitplane）製品は、市場において、１２３の蛍光色素と、それらの励起および発光スペクトルのリストを表示している（http://www.bitplane.ch/public/support/standard/fluorochrome.htm）。蛍光性色素は、蛍光顕微鏡検査による生物学的構造を局在化させるための、分子プローブの標識化に広く用いられており、例えば、イムノアッセイ、現場での  ハイブリッド形成研究のためのヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチドの標識化、高分子マイクロスフェアへの結合、および撮像研究において使用する細胞の染色において、広く用いられている。色素はまた、例えば光化学的療法の技術において、細胞の選択的破壊に用いられる（R.P.ホーランド（Haughland, R.P）およびH.C.カン（Kang, H.C.） US特許第4,774,339号、1988年9月27日発効; R.P.ホーランド（Haughland, R.P）およびH.C.カン（Kang, H.C.）、ＵＳ特許第５，２４８，７８２号、１９９３年９月２８日発効）。
【０００６】
蛍光は、原子または分子が、高い電子状態から低い電子状態へ変化する過程で放射を発する現象である。それはストーク法則に従い、その法則によれば、蛍光性放射の波長は、励起放射の波長より、常に長い。蛍光のプロセスは、リン光や生物発光とは、全く異なっている。用語「蛍光」は、励起の行為と、放射の発光との間隔が、非常に小さい（１０-8−１０-3秒）ときに、用いられる。リン光において、吸収と発光との時間間隔は、１０-3秒から数時間まで、さまざまである（Ｒ．ノーマン・ジョーンズ（R.Norman Jones）、１９６６年、「化学の百科事典（The encyclopaedia of chemistry）」、第２版、１９６６年、４３５−４３６頁）。生物発光は、化学反応が、生きている生物の身体内で、特定の細胞中で、特定な時間に起こった結果、生じた光に用いられる用語である。
【０００７】
多数の蛍光性色素が、「蛍光性プローブおよびリサーチ化学物質のハンドブック（Handbook of Fluorescent probes and Research Chemicals）（リチャード・Ｐ．ホーランド（Richard P. Haughland）、第６版、米国内出版、１９９６年）」に報告されている。同じ本の１−６頁に、イアン・ジョンソン（Ian D. Johnson）（１９９６）が、蛍光のプロセスおよび、彼により蛍光体または蛍光性色素と呼ばれる特定分子（通常、多芳香族炭化水素またはヘテロ環）中での検出方法の詳細を、記述している。現在最も汎用的に用いられる蛍光性色素は、フルオレセインおよびフルオレセインベースのもの、およびＢＯＤＩＰＹ色素ならびにそれらの誘導体である。
【０００８】
その著者は、これら全ての色素の短所を扱っており、色素の特徴の選択を記述している。前記蛍光性色素の多くの誘導体およびそれらの合成は、米国特許に開示されている（R.P.ホーランド（Haughland, R.P）およびH.C.カン（Kang, H.C.）、米国特許第４，７７４，３３９号、１９８８年９月２７日発効；R.P.ホーランド（Haughland, R.P）およびH.C.カン（Kang, H.C.）、米国特許第５，２４８，７８２号、１９９３年９月２８日；R.P.ホーランド（Haughland, R.P）およびH.C.カン（Kang, H.C.）、米国特許第５，１８７，２８８号、１９９３年２月１６日公開；；R.P.ホーランド（Haughland, R.P）およびH.C.カン（Kang, H.C.）、米国特許第５，２７４，１１３号、１９９３年１２月２８日；H.C.カン（Kang,H.C.）およびR.P.ホーランド（Haughland, R.P）、米国特許第５，４３３，８９６号、１９９５年７月１８日；H.C.カン（Kang,H.C.）およびR.P.ホーランド（Haughland, R.P）、米国特許第５，４５１，６６３号、１９９５年９月１９日公開）。ローゼンブルム・バーネット・Ｂ（Rosenblum Barnett B）、スプローゲン・Ｓ（Spurgeon S）、リー・リンダ・Ｇ（Lee Linda G）、ベンソン・スコット・Ｃ（Benson Scott C）およびグラハム・ロナルド・Ｊ（Graham Ronald J）は、国際特許出願第Ｗ０００５８４０６号（２０００年１０月５日公開）において、４，７−ジクロロローダミン色素が、分子プローブとして有用であることを報告している。Ｒ・ノーマン・ジョーンズ（R.Norman Jones）は、「化学の百科事典（the encycopaedia of chemistry）、第２版、１９６６年、４３５−４３６頁」において、良い蛍光体の得手を記述している。彼によれば、蛍光性分子は、蛍光遅延作用が起こる前に、励起エネルギーが、振動運動へ、あまりにも迅速に消失するのを省くために、励起エネルギーの吸収と遮蔽メカニズムとのための、良好な発色団系を有さなければない。彼はまた、分子構造と化合物の蛍光の関係については、よく理解されていないが、特定の基が存在し、その存在が、蛍光と関連していると述べている。例えば、有機分子において、フタレインと芳香族構造、例えば、アントラセンおよびナフタセンとの存在は、明るい蛍光と特に関連している。無機化合物は、液状および固体状で、強い蛍光を発するものはほとんどなく、蛍光は、しばしば、微量の不純物により、変性されている。
【０００９】
本特許出願の発明者ゴスワミ・ウーシャ（Goswami USHA）およびガングリー・アヌートシュ（Ganguly Anutosh）は、海洋の無脊椎動物からの天然蛍光性色素抽出物に関する特許出願を既に出願している（米国特許出願第０９／８２０，６５４）。これは、ハマジナマコ（Holothuria scabra）からの粗抽出物に関するもので、その抽出物は、光のスペクトルの異なるＵＶおよび可視域で、励起されると、３つの異なる波長で蛍光性特性を有する。この発明はまた、この新規色素の抽出、精製および特徴づけ方法も提供しており、この色素は、ナマコ由来の特に精製された天然色素である。現場でのハイブリッド形成研究のための分子プローブの標識化のために有用な、エピフルオレッセンス（epifluorescence）性染料および非放射性蛍光性色素としての前記色素の有用性は、前記色素の薬物としての、他の幾つかの特性に加えて、記述されている。この出願中には、地球上の植物および微生物からの前記色素、合成色素および天然色素についての先行技術の詳細が、記述されている（米国特許第Ｎｏ．４，４５２，８２２、１９８４年６月５日公開；発明者−アンリJシリカンデ（Shrikhande, Anil J）；１９９４年６月１４日の米国特許第Ｎｏ．５，３２１，２６８、クロスビー・デビッド・Ａ（Crosby David A）およびエクストーム・フィリップ・Ａ（Ekstrom Philip A）；米国特許第Ｎｏ．５，４０５，４１６、１９９５年４月１１日公開、著者スウイントン・ロバート・Ｊ（Swinton; Robert J）, 米国特許第Ｎｏ．５．８５８，７６１、１９９９年１月１２日公開，発明者ツボクラ（Tsubokura）ら、１９９９年５月１１日の米国特許第Ｎｏ．５，９０２，７４９、発明者 リッチワルド（Lichtwardt）ら、米国特許第Ｎｏ．５，９０８，６５０、１９９９年６月１日公開、発明者レノブル（Lenoble）ら、米国特許第Ｎｏ．５，９２０，４２９、１９９９年７月６日公開、バーンズ（Burns）ら、１９９９年８月１０日の、ヒルスベルグ（Hirschberg）らの米国特許第Ｎｏ．５，９３５，８０８；１９９９年１１月２３日の米国特許第Ｎｏ．５，９８９，１３５、発明者ウエルチ・デビッド・エマニュエル（Welch； David Emanuel）；米国特許第Ｎｏ．６，０５５，９３６、２０００年５月２日発効；コリン・ピーター・ドナルド（Collin; Peter Donald）；米国特許第Ｎｏ．６，０５６，１６２、２０００年５月２日；レイリー・ケネス・Ｃ（Leighley; Kenneth C.）；米国特許第Ｎｏ．６，１０３，００６、２０００年８月１５日、ジピエトロ・トーマス・Ｃ（DiPietro; Thomas C．）；６，１１０，５６６、２０００年８月２９日；ホワイト（White）ら；６，１４０，０４１、２０００年１０月３１日、ラクレイル・ジェームス・Ｊ（LaClair; James J.） ６，１６５，３８４、２０００年１２月２６日、コーパー（Cooper）ら．；６，１８０，１５４、２００１年１月３０日、ロルスタッド（Wrolstad）ら、欧州特許第ＥＰ０２０６７１８号、１９８６年１２月３０日公開、発明者クラマー・ランダル・Ｊ（Cramer Randall J）；１月３０日１９９１年のＩＥ９０１３７９、リー・リンダ・Ｇ（Lee Linda G）; マイツ・パトリック・Ｄ（Mize Patrick D）；１９９０年７月７日のＷＯ９０１００４４．スウイントン・ロバート・Ｊ（Swinton; Robert J）；ＡＵ７０４１１２、１９９７年１０月７日公開、発明者バーンズ・デビッド・Ｍ（Burns David M）;パバレッカ・リーＡ（Pavelka Lee A）；１９９９年６月２４日のウエイマー・トーマス・Ｄｒ．（Weimer Thomas DR.）のＤＥ１９７５５６４２；ＷＯ９９３８９１９、１９９９年９月２８日、ラクレイル・ジェームス・Ｊ（Laclair James J）；２０００年１０月５日のローゼンブルム・バーネット・Ｂ（Rosenblum Barnett B）らによるＷＯ００５８４０６；ＷＯ９９３８９１６、２０００年８月１５日、発明者ジピエトロ・トーマス・Ｃ（DiPietro; Thomas C）；２０００年８月２９日のＷＯ９９２０６８８、発明者パバレッカ・リー（Pavelka Lee）ら；２０００年８月２９日のＷＯ９９２０６８８、発明者ホワイト（White）ら)。
【００１０】
分子生物学研究、産業上の適用および生命救助装置等における、蛍光性色素の多様な用途も、記述されている。コリン・Ｐ・Ｄ（Collin, P.D）は、１９９８年６月２３日、１９９９年３月２日および１９９９年１１月１６日（それぞれの米国特許番号は、第５，７７０，２０５号、第５，８７６，７６２号および第５，９８５，３３０号）の彼の米国特許において、ナマコのさまざまな身体部分の治療的性状を記述している。これら全ての参照も、本発明に関連する。
【００１１】
本特許において、発明者らは、異なるアプローチを採用している。この発明において、発明者らは、化学化合物と蛍光性色素を精製し、それは、その構造において、および最初に８つの着色発光を示すことにおいて、特有である。前記化合物の化学構造は、ナマコ由来で、初めて開示された。生成物および供給源の両方が新規である。前記化合物の蛍光体部分は、フェノール性であり、化合物全体および蛍光体のみの両方が、天然蛍光性色素の性状を有している。現在入手可能な色素とは異なり、この化合物は、現在市場で売られている色素のいずれの合成誘導体ではない。それは、完全に新規な有機ケイ素Ｓｉ−Ｏ−Ｒ型の化合物であり、この発明において、初めて精製され、開示された。ナマコの身体内壁抽出物からの、この新規な蛍光性多糖類の抽出、精製および特徴づけ方法は、また、新規で、初めて開示された。開示された多糖類の蛍光性性質もまた、新規であり、分子プローブのための天然多重蛍光性色素としてのその用途も新規である。前記化合物が、Ｓｉ−Ｏ−Ｒ型であり、核有機分子が、その周りで、硫酸塩結合により、ケイ素マトリックスと結合されているという開示は、ここで初めてなされた。前記ケイ素マトリックスは、前記化合物の必須部分を形成し、ナマコの代謝活性において、それが役割を果たすという開示も新規である。
【００１２】
別の観点において、この発明は、興味を持っている分子プローブ会社および分子化学薬品会社に、新規天然化合物を提供し、その化合物は、高分子の蛍光性色素、および低分子量の蛍光性色素も、必要条件に応じて、それら会社に提供することができるものである。
【００１３】
さらに別の観点において、この発明は、前記化合物は、硫黄が豊富であり、その様々な組成物は、殺虫剤、農薬および動物薬物としての有用性を示すことである。
【００１４】
大部分の他の公知蛍光性合成色素と異なり、我々の色素は、エピフルオレッセンス顕微鏡検査において異なる波長で異なる蛍光色調を得るために、別の色素と混合する必要がない。生体分子と接触した後、それは、８つの異なる励起波長において、８つの異なる色に着色された蛍光を発し、それは多様な用途を持ちうる。それは、細胞膜を染色し、蛍光顕微鏡の異なる放射波長の下、青色、黄色および橙色気味の赤色の色調を発光する。さらに、我々の色素は、本質的に非タンパク質様であり、数ヶ月間、室温で非常に安定で、微生物により、汚染されない。その蛍光特性は、ある藻類および発光生物の抽出物とは異なり、高温および低温で、劣化しない。この色素は、細胞試料が、顕微鏡下で光にさらされたときに、迅速な消光効果を示さない。
【００１５】
この蛍光性色素の重要な観点のひとつは、分子プローブの非放射性標識化と、対比染色とのための組成物およびキットを作ることである。その化学構造は、開示されており、そのため、色素製造業は、大量スケールで合成することができる。異なる波長励起において、現在市場で知られている、少なくとも１２３の蛍光色素の波長スペクトルの色と等しい効果を生じる（インターネット上のBitplane製品（蛍光色素）を参照（http://www.bitplane.ch/public/support/standard/Fluorochrome.htm）)。
【００１６】
さらに別の観点において、前記色素は、高エネルギーのＸ線で励起されたとき、より長い範囲において、発光を示す。それは、黄色がかった緑色蛍光を発する。
【００１７】
さらに別の観点は、エピフルオレッセンス顕微鏡における蛍光色素染料としての用途であり、それは、海洋の天然色素として、初めてここに報告される。前記色素は、異なる細胞構成成分の対比染色効果を生じる。この出願により、多様な用途、例えば、蛍光性現場ハイブリッド形成技術を用いた分子診断、組織培養における生物汚染の迅速な診断、産業上の調剤、実験室および野原状況における水特性チェックのような、用途のための、細胞遺伝学的試料をチェックするための簡単で、迅速な方法を提供する。
【００１８】
前記色素の、さらに別の観点は、進歩した分子生物学適用のための非放射性標識化キットの構成成分としての用途と、医学および動物調剤における薬物としての用途である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
本発明の目的
本発明の主な目的は、ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から、前記化合物および多重蛍光性色素の、抽出、精製および特徴づけの方法を提供することである。
【００２０】
本発明の別の目的は、その大量スケールで、産業上の適用のために、精製された化合物の化学式、分子量および構造を提供することである。
【００２１】
本発明のさらなる目的は、ナマコの身体内壁抽出物から得られた、純粋な化合物および蛍光色素を用いる組成物を提供することである。
【００２２】
本発明のさらなる目的は、その性質について、ケイ素マトリックスの分析である。
【００２３】
本発明のさらなる目的は、ケイ素マトリックスが、核有機分子の必須部分であることである。
【００２４】
本発明のさらに別の目的は、ケイ素マトリックスが、前記化合物に安定性を提供し、前記蛍光体が、前記化合物に蛍光を発することである。
【００２５】
本発明のさらに別の目的は、本発明のさらに別の目的は、精製された蛍光性化合物が、多糖類であることである。前記Ｓｉ−Ｏ−Ｒ型の化合物の前記核有機分子は、その周りに、硫酸塩結合により、ケイ素マトリックスに結合されている。
【００２６】
本発明のさらに別の目的は、前記色素が、更なるスペーサーの必要なしに、直接その構造体と結合することである。硫酸塩基は、スペーサーの役割を果たす。
【００２７】
本発明のさらに別の観点は、色素が、タンパク質生体分子と結合した後、異なる色を発光することである。
【００２８】
さらに別の観点において、本発明は、興味を持っている分子プローブ会社および分子化学試薬会社に、新規な天然化合物を供給し、その化合物により、彼らに、高分子量の蛍光性色素を提供することができ、その色素はまた、必要条件に応じて、その蛍光体部分のみを使用することにより、低分子量としても使用されることができる。
【００２９】
本発明のさらに別の観点は、前記化合物のフェノール性およびキノノイド構造の両方が、蛍光に責任を負っていることを明確にさせることである。
【００３０】
本発明のさらに別の目的は、ケイ酸マトリックスが、ナマコの代謝活性において、役割を果たすことである。
【００３１】
本発明のさらに別の観点は、前記化合物は硫黄が豊富であり、その様々な組成物は、殺虫剤および農薬として有用性を示すことである。
【００３２】
本発明のさらに別の目的は、前記化合物に、フェノール性硫酸化ケイ酸塩化（silicated）多糖類（ＰＳＳＰ−１）としての化学的分類学的名前を、付けることである。
【００３３】
本発明のさらに別の目的は、前記蛍光体に、１−ヒドロキシ，２，５−ジ−メチルアミノベンゼン（ＨＤＡＢ−１）としての化学的分類学的名前を、付けることである。
【００３４】
本発明のさらに別の目的は、哺乳類において軟骨性骨格部分の再構築において、結合組織成長を阻害するための、薬物としてのその適用である。
【００３５】
本発明のさらに別の目的は、日焼け止め化粧用における化合物の有用性である。
【００３６】
本発明のさらに別の目的は、海洋動物の細胞／幼虫の顕微鏡スライドが、染色されたとき、色素が、８つの異なる色の蛍光を発し、前記純粋な色素は、異なる色調を有し、前記結合細胞構成要素は、異なる色を有することである。
【００３７】
本発明のさらに別の目的は、Ｘ線のような高エネルギー線で励起されたときでさえ、前記色素が、緑色蛍光を発することである。
【００３８】
本発明のさらに別の目的は、蛍光および可視分光分析ならびに放射波長の範囲を観測することである。
【００３９】
本発明のさらに別の目的は、前記色素が、蛍光性分子プローブの非放射性ラベルとして有用であることである。
【００４０】
本発明のさらに別の目的は、前記色素が、励起光において、すばやく消光せず、光退色が、スクリーニングスライドの間、起こらないことである。
【００４１】
本発明の別の目的は、色素が、本質的に非タンパク質様であり、長年室温で高度に安定であることである。
【００４２】
本発明のさらに別の目的は、その蛍光特性が、極度に高温および低温でさえ、劣化しないことである。
【００４３】
本発明のさらに別の目的は、分子プローブおよび対比染色の非放射性標識化のためのキットを発展させることである。
【００４４】
本発明のさらに別の目的は、フローサイトメトリー、マイクロアレイ、イムノアッセイおよび幾つかの他の分子適用のための蛍光性色素の誘導体を合成するための前記化合物の産業上の用途である。
【課題を解決するための手段】
【００４５】
本発明の要旨
従って、本発明は、ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から得られた、新規な天然有機ケイ素型の化合物および多重蛍光性色素を提供する。本発明はまた、蛍光性分子プローブ、化粧用、薬物および他の産業用の、前記化合物および多重蛍光性天然色素の、抽出、精製および特徴づけの方法を提供する。さらに、本発明は、その蛍光体および蛍光色素部分を含む精製された化合物の全化学構造を提供する。また、本発明は、その蛍光の原因である、フェノール性およびキノノイドフォームの前記化合物の両方も提供する。化学構造に基づき、本発明はまた、ＰＳＳＰ−１は、「フェノール性硫酸化ケイ酸塩化多糖類」、「１」は最初の化合物を表すように、化合物および市場性の高い蛍光性色素の同定のための名前を提供し、いくつかの誘導体は、この特許に従うであろう。さらに、本発明は、蛍光体の構造、その命名、例えば、１−ヒドロキシ，２，５−ジ−メチルアミノベンゼンを提供し、この色素をＨＤＡＢ−１と命名した。このＨＤＡＢは、所定の命名に関連し、「１」これは、最初で幾つかの結合体であり、この蛍光体を元にした色素が、従うであろう。
【００４６】
さらに、本発明は、海洋動物の細胞、その抗菌、殺虫剤および農薬活性に関し、分子プローブとして、試験するための前記化合物付（cum）蛍光性色素の組成物を提供する。前記色素は、動物および化粧用適用のための薬物の性質を有する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４７】
本発明の詳細な記述
多くの研究の後、本発明者らは、新規な有機ケイ素型の化合物および新規な多重蛍光性天然色素を、ここに、同定し、精製し、構造的に解明し、特徴付けた。前記蛍光性色素は、海洋動物、特に無脊椎動物、より詳細には、ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から得られる。ナマコは、以下の分類学的位置にある。ナマコは、エコデルム（echnoderm）、であり、ヒトデおよびウニも含む、体表がとげにおおわれた動物の群の一員である。
亜界：  後生動物
門：  棘皮動物
亜門：  遊在類
綱：  ナマコ綱
亜綱：  楯手亜綱
目：  楯手亜綱
科：  ホロトロイダエ（Holothuroidae）
属：  ナマコ類
種：  スカブラ（scabra）
前記化合物は、蛍光性性質で、多糖類である。この精製された化合物は、フェノール性蛍光体部分を有する多重蛍光性色素である。それは、硫酸塩結合により、その周りで、ケイ素マトリックスに結合している。このケイ素部分は、前記核分子の必須部分であり、動物の代謝において、役割を果たしている。前記化合物は、硫黄が豊富である。本発明はまた、生きている生物、特にナマコからの、この新しい蛍光性化合物の抽出、精製および特徴づけの方法も提供する。本出願はまた、ケイ素が有機分子の必須部分となる、新規化合物の化学構造も、初めて開示する。また、本出願は、蛍光の原因である、前記化合物のフェノール性およびキノノイド構造の両方を、明らかにする。本出願は、さらに、前記化合物の珍しい性状と、その利点を提供する。本発明はまた、分子生物学、分子プローブおよび薬物の様々な適用において、分子プローブの非放射性標識化のための色素としての、その新規な蛍光性化合物の産業上利用性を扱う。前記化合物の幾つかの化学的誘導体は、異なる適用のための、多様な分子プローブのために、作られることができる。さらに、本発明は、殺虫剤、農薬および治療用途のための前記色素を含む組成物を提供する。
【００４８】
従って、本発明は、実験式Ｃ22Ｈ48Ｏ66Ｎ2Ｓ10Ｓｉ7を有し、分子量１９１５を有し、添付の図面の図１８または１９に表される構造式を有する、新規な多重蛍光性色素化合物を提供する。
【００４９】
本発明の実施形態において、前記新規化合物は、以下の特徴を有する：
ｉ．  元素分析による純粋な化合物の有機組成が、炭素８．３５７２、水素１．７３９％、窒素０．９４４９％および硫黄９．４５７％を示し；
ｉｉ．  前記化合物における前記元素についての原子比が、微量分析で示された炭素：水素：窒素：硫黄の比＝２２：４８：２：１０であり；
ｉｉｉ．    前記化合物の無機組成物を原子吸光測光に付すことにより、二酸化ケイ素の割合１２．５８％およびケイ酸を推定し；
ｉｖ．  ケイ酸が、前記化合物の必須部分であり；
ｖ．  ケイ素の原子比が、２２の炭素原子ごとについて７であり；
ｖｉ．  イオン交換クロマトグラフィーによる更なる化合物の精製および、２９１と４５１での吸光度のピークからピークへの比が安定であることが確認され；
ｖｉｉ．  化合物が、糖単位を含み；
ｖｉｉｉ．  そのカラムから純粋な色素を溶離する、逆相Ｃ１８タイプの分析カラムと、０から５０％のアセトニトリルの勾配による前記化合物の純粋なイオン形態のＨＰＬＣにより、保持時間１．９０９の値および非常に鋭利なピークを生じ；
【００５０】
ｉｘ．  １２１０−１１５０および１０６０−１０３０および６５０の範囲に生じた硫酸塩のＦＴ−ＩＲシグナルが、硫黄が、Ｏ−ＳＯ2−型の結合で前記化合物中に存在することを意味し；
ｘ．  １０９０−１０２０（１０６８に）に見られるケイ酸塩の強い吸収帯が、ケイ素が、−Ｓｉ−Ｏ−Ｓｉとして前記化合物中に存在することを意味し；ＣＨ3伸縮シグナルが、２９５０−２８５０に見られ；アミドシグナルが存在せず、前記化合物がタンパク質ではなく；
ｘｉ．  ヒドロキシ伸縮シグナルが強く、かつ幅広であり、それは、フェノール性基を意味し；
ｘｉｉ．  前記化合物が、前記化合物の蛍光体部分にフェノール性基を含有し；
ｘｉｉｉ．  前記化合物が、立体的に保護されたキノノイド環も含み；
ｘｉｖ．  蛍光体部分が、硫酸化糖部分によりＳｉ−Ｏ基と結合され；
ｘｖ．  前記化合物のフェノール性基のみにより、ケトエノール互変異性を生じ、  従って、キノン型構造およびフェノール性構造の両方を生じ；ならびに
ｘｖｉ．  前記化合物が、多重蛍光性色素として用いられる。
【００５１】
本発明の別の実施形態は、前記化合物が、以下の特徴を有する：
ｉ．  還元剤により脱色されず、
ｉｉ．  前記化合物が、合成の化合物ではなく、
ｉｉｉ．  前記色素の粗抽出物は、その色が黄色がかった緑色であり；
ｉｖ．  精製した化合物液状色素が、緑色、黄色および赤色の色調で茶色がかっており、
ｖ．  日光の中肉眼で見ると、精製した乾燥化合物は、赤褐色着色粉末であり、
ｖｉ．  真空管ライトの下でいくらかの緑色色調が発光され、
ｖｉｉ．  水銀ライトの下で、青みがかった緑色を生じ、
ｖｉｉｉ．  Ｘ線の下で、色は緑色で蛍光を発し、
ｉｘ．  前記化合物が、本質的に非結晶であり、
ｘ．  前記化合物が、水溶性で、エタノール、メタノールおよびアセトンを含む有機溶媒に不溶性であり、
【００５２】
ｘｉ．  前記化合物が、負に帯電し、
ｘｉｉ．  前記化合物が、２．８のｐＨを有し、
ｘｉｉｉ．  前記化合物が、キノノイド環を含み、
ｘｉｖ．  前記化合物が、本質的に非タンパク質様であり、
ｘｖ．  前記化合物が、還元糖を有し、
ｘｖｉ．  前記化合物が、バイオサーファクタントとして働き、
ｘｖｉｉ．  前記化合物が、抗菌特性を有し、抗菌アッセイを行ったとき、阻止帯を示し、
ｘｖｉｉｉ．  分光光度計で、Ｘ−線、ＵＶおよび可視スペクトル範囲の異なる波長で励起させたとき、前記化合物が蛍光を発光し、
ｘｉｘ．  前記化合物について、ＵＶ、可視分光が２５０ｎｍ−７００ｎｍであり、ピークが、２９１ｎｍおよび４５１ｎｍ波長に示され、
ｘｘ．  蛍光性分光放射スキャンを、前記化合物を２７０ｎｍで励起することにより行い  蛍光のピークが５５０ｎｍに生じ、
ｘｖｉｉ．  前記化合物を３４０ｎｍで励起したとき、蛍光のピークが４６０ｎｍに生じ、
ｘｖｉｉｉ．  励起波長が３６１ｎｍに固定されたとき、蛍光発光は４９０ｎｍで最大量になり、
ｘｉｘ．  励起波長が４００ｎｍに固定されたとき、蛍光発光は４７０ｎｍで最大量になり、
ｘｘ．  前記化合物が５２３ｎｍで励起されたとき、前記発光は、６００ｎｍで最大になり、
【００５３】
ｘｘｉ．  ２６０ｎｍ−２８０ｎｍ範囲のＵＶ電球の下で１：２００００００倍希釈の濃度の、すなわち５×１０-6濃度の化合物における、色素の物理的検査で、青みがかった緑色の蛍光を発し、
ｘｘｉｉ．  異なる蛍光性キューブの下、少なくとも１：２００００００００倍希釈の濃度の、すなわち５×１０-8濃度の化合物における、色素のエピフルオレッセンス顕微鏡検査で、蛍光を発し、
ｘｘｉｉｉ．  エピフルオレッセンス顕微鏡の蛍光性キューブのＵＶおよび可視域の４つの異なる波長で、前記化合物は８つの異なる色に着色された蛍光を発し、
ｘｘｉｖ．  純粋な化合物が、紫外線キューブＷＵ−３３０ｎｍ−３８５ｎｍの励起範囲下で励起されたとき、インディゴ色の色調を有する蛍光青の発光が、３８０ｎｍ−４００ｎｍ範囲のＵＶＡにおいて生じ、
ｘｘｖ．  純粋な化合物が、４５０ｎｍ−４８０ｎｍの励起範囲のＷＢキューブ下で励起されたとき、蛍光緑色発光が、５００ｎｍ−５７０ｎｍの範囲で生じ、
ｘｘｖｉ．  純粋な化合物が、５１０ｎｍ−５５０ｎｍの励起範囲のＷＧキューブの下、励起されたとき、橙色の色調を有する蛍光赤色の発光が、５７０ｎｍ−６５０ｎｍの範囲で生じ、
ｘｘｖｉｉ．  １０Ｘ、４０Ｘ、１００Ｘの対物レンズ下で見たとき、前記化合物が、エピフルオレッセンス顕微鏡の通常の透過光電球下で、青みがかった灰色の色調を発し、
ｘｘｖｉｉｉ．  異なる蛍光性キューブの下で、少なくとも１：２００００００００倍希釈の濃度の、すなわち５×１０-8の濃度の化合物の、蛍光性化合物と結合した海洋動物の卵細胞のエピフルオレッセンス顕微鏡試験により、純粋な化合物とは異なる色の蛍光を発し、
ｘｘｉｘ．  前記化合物でラベルされた細胞は、エピフルオレッセンス顕微鏡の蛍光性キューブおよび透過光電球のＵＶおよび可視域の４つの異なる波長で、４つの異なる色に着色された蛍光を発し、
【００５４】
ｘｘｘ．  エピフルオレッセンス顕微鏡のＷＵ−蛍光キューブにより、３３０ｎｍ−３８５ｎｍの範囲で励起されたとき、前記化合物でラベルされた細胞は、青色の蛍光を発し、
ｘｘｘｉ．  ４５０ｎｍ−４８０ｎｍの励起範囲のＷＢキューブの下励起されたとき、前記化合物でラベルされた細胞は、明るい黄色蛍光を発し、
ｘｘｘｉｉ．  ５１０ｎｍ−５５０ｎｍの励起範囲のＷＧキューブの下励起されたとき、前記細胞は、赤色蛍光を発し、
ｘｘｘｉｉｉ．  室温で１年後でさえ、前記化合物の前記蛍光色は持続し、
ｘｘｘｉｖ．  前記化合物の前記蛍光は、高度に光安定性であり、直接光への長期暴露により、劣化せず、
ｘｘｘｖ．  前記化合物は、光退色せず、
ｘｘｘｖｉ．  前記化合物は、蛍光顕微鏡下でスライドをスクリーニングしている間に消光せず；ならびに
ｘｘｘｖｉｉ．  発光生物からの抽出物におけるように、分子が、活性化に必要なエネルギーの獲得に不可能な温度で、液体窒素中で凍結した後でさえ、零度以下の（sub zero）温度で凍結したとき、前記化合物の蛍光は、変化しない。
【００５５】
さらに別の実施形態において、前記化合物は、非放射性であり、ケイ素マトリックスを有する最初の天然有機金属化合物である。
【００５６】
さらに別の実施形態において、化合物中のケイ酸の存在が、生きている生物の必須部分として、初めて同定された。
【００５７】
さらに別の実施形態において、前記化合物は、フェノール性硫酸化ケイ酸塩化多糖類（ＰＳＳＰ）であり、前記化合物は、美容整形外科において、有機ケイ素化合物の関連する生理学的観点を研究するための天然生体内システムを提供する。
【００５８】
別の実施形態において、前記化合物が、表３および表４に示すように、より長い波長、狭い帯域幅および小さいストークスシフトを含み、前記化合物の前記発光スペクトルが、溶媒極性およびｐＨに非感受性である。
【００５９】
前記化合物は、より高い光安定性を有し、より長い波長を有し、かつ可視スペクトルにおいて、１以上の発光範囲を有し、スペーサが、天然化合物の必須部分を形成する。
【００６０】
さらに別の実施形態において、前記化合物は、高い水混和性を有し、化粧用組成物および薬物組成物に必要とされる、適当な添加物を、容易に混合するのを促進する。
【００６１】
さらに別の実施形態において、前記化合物は、高く鋭利なピークを有する、Ｘ線、２７０−７４５ｎｍのＵＶおよび可視域の右のスペクトルを包含する、８つの励起（ｅｘ）／８つの発光（ｅｍ）ｎｍ範囲を含む。
【００６２】
さらに別の実施形態は、〜４５０−４８０ｎｍの範囲の蛍光性フィルタキューブにおける前記色素の励起および発光スペクトルを有する多重蛍光性化合物を提供し、それは、アルゴンイオン・レーザー（〜４８８ｎｍ）のスペクトル線に整合する。
【００６３】
さらに別の実施形態は、〜４５０−４８０ｎｍの範囲の蛍光性フィルタキューブにおける前記色素の励起および発光スペクトルを有する多重蛍光性色素を提供し、それは、フルオレセインのようなアルゴンイオン・レーザー（〜４８８ｎｍ）のスペクトル線に整合するが、前記細胞結合体が、多色適用において有用な色素を形成する明るい黄色蛍光を発する。
【００６４】
さらに別の実施形態において、前記化合物が、消光に抵抗性であり、色素の希釈および濃度にかかわらず、蛍光強度が、タンパク質に結合した後、増加する。
【００６５】
さらに別の実施形態において、前記化合物が、室温で安定であり、長い貯蔵寿命を有する。
【００６６】
さらに別の実施形態において、前記化合物の分子および放射性キットは、室温で、輸出することができる。
【００６７】
さらに別の実施形態において、蛍光顕微鏡検査下の前記化合物の蛍光性発光の顕微鏡写真が、他の特別なフィルム要件を有さず、４５−６０秒の範囲の露出時間を有し、コダック４００フィルムを用いて行われる。
【００６８】
さらに別の実施形態において、前記化合物が、検体が存在しない細胞遺伝学的スライド上で全ての蛍光下で、細胞および細胞構成成分の対比染色効果を生じる。
【００６９】
さらに別の実施形態において、５×１０-8−１０-6の濃度の超純水中で、１：２００００００倍に希釈されてさえ、前記化合物は、Ｘ線、ＵＶ光線および可視スペクトル範囲の８つの波長範囲で励起されたとき、８つの色の蛍光を発する。
【００７０】
実施形態において、本発明は、分子式Ｃ10Ｈ16Ｎ2Ｏを有する新規化合物に関し、それが、添付の図面の図２０に示す構造式を有する蛍光体である。
【００７１】
さらに別の本発明の実施形態において、前記蛍光体の学名は、１−ヒドロキシ，  ２，５−ジ−メチルアミノベンゼン（ＨＤＡＢ）であり、１８０の分子量を有する。
【００７２】
本発明のさらに１つの実施形態は、生理活性な、多重蛍光性色素化合物を有効量含む組成物に関し、前記化合物は、以下の有用な適用のための、海洋ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から、適当な添加物と共に得られる。
ｉ．  蛍光性色を示す可撓性ポリ塩化ビニルフィルムの調製；
ｉｉ．  塗料、インク、織物における蛍光性色の使用；
ｉｉｉ．  ポリマーの漂白および増白のための蛍光性色素の組成物；
ｉｖ．  全スペクトルの蛍光性色素での漏れ検出；
ｖ．  自動式化学的計測システムにおける使用；
ｖｉ．  破壊された輸送容器の位置に印をつけ；前記容器が、航空機、救命ボート（life crafts）およびロケットからなる群から選択され；
ｖｉｉ．  海底プローブ；
ｖｉｉｉ．  ＵＶＡが、皮膚癌の光化学療法において用いられ；
ｉｘ．  化粧用クリーム剤およびローション剤の色素体日焼け止め構成成分；
ｘ．  前記色素の水混和性特性により、加湿剤における混和性を容易にし；
【００７３】
ｘｉ．  分子診断用の蛍光性現場ハイブリッド形成適用キット構成成分；
ｘｉｉ．  非放射性標識化および検出キットの構成成分、前記キットは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質および酵素の標識化のための、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学からなる群から選択された目的のために用いられ；
ｘｉｉｉ．  免疫蛍光性検出；
ｘｉｖ．  ＤＩＧ−標識オリゴヌクレオチドプローブおよび抗ＤＩＧ  Ｆａｂ−フラグメントの対比染色；
ｘｖ．  単独および多重のフローサイトメトリー適用；
ｘｖｉ．  エピフルオレッセンス顕微鏡検査用の蛍光染色；
ｘｖｉｉ．  健康食品産業、化粧品産業、医薬品産業、農薬産業および化学産業において、生物汚染の迅速な検査のため；
ｘｖｉｉｉ．  実験室培養における生物汚染物質の迅速な評価のため；
ｘｉｘ．  領域条件下での生物汚染因子の迅速な検査のため；
ｘｘ．  コリンエステラーゼの拮抗阻害剤；
【００７４】
ｘｘｉ．  抗菌組成物において；
ｘｘｉｉ．  洗面用品組成物におけるバイオサーファクタントとして；
ｘｘｉｉｉ．  天然着色剤；
ｘｘｉｖ．  ８つの異なる波長で８つの蛍光と、透過光下の位相差効果とを得るための、超純水中、１：２０００００００の比の前記色素の生理活性組成物；
ｘｘｖ．  零度以下の温度の範囲で実施されるべき様々な蛍光性適用のための色素；
ｘｘｖｉ．  新規蛍光性プローブ用色素の誘導体を作るための塩基として用いられるための化合物；
ｘｘｖｉｉ．  分子試薬用化合物；
ｘｘｖｉｉｉ．  分子適用のための結合体を形成するための化合物；ならびに
ｘｘｉｘ．  透過光下で細胞の異なる生化学的構成要素のための、位相差と組織化学的対比染色効果とを得るため。
【００７５】
本発明の別の実施形態は、ハマジナマコ（Holothuria scabra）ナマコからの新規化合物および多重蛍光性色素を抽出する方法に関し、前記方法は、以下の工程を含む：
ａ．  干潮の間に海岸から動物を集め、分類学的同定および更なる使用のため、実験室中、海水含有ガラスタンク中に維持し、
ｂ．  ミリ−Ｑ水で前記動物を完全に洗浄し、閉じた瓶中、クロロホルム／メタノールで麻酔をかけ；
ｃ．  凍結乾燥のため、外科用メスで削りおとすことにより、皮をむくことにより、動物の内臓および皮膚部分を除去し；
ｄ．  工程（ｃ）の凍結乾燥された皮膚を、必要量の超純水に取り、振盪機上で４時間保持し、次いでワットマン・ペーパー１および焼結ガラスろ過器でろ過し；
ｅ．  工程（ｄ）のろ液を蒸発させ、有機溶媒を用いて前記化合物を沈殿させ；
ｆ．  最小限の容量の水中に前記沈殿物を溶解させ、塩を除去するために有機溶媒で再沈殿させ；
ｇ．  残渣を集めるために遠心分離し、ろ液を廃棄し；
ｈ．  工程（ｇ）の残渣を乾燥し、乾燥粉末を得；
ｉ．  水中に工程（ｈ）の乾燥粉末を溶解させ、イオン交換カラムに付し；
ｊ．  水で工程（ｉ）のカラムを溶離し；
ｋ．  工程（ｊ）の水溶離画分を凍結乾燥し；
ｌ．  ＤＥＡＥセルロースカラム上に、工程（ｋ）の凍結乾燥された材料を付し，  リン酸緩衝液で溶離し；
ｍ．  ＰＤ１０  カラムを用いて、工程（ｌ）のリン酸緩衝液溶離フラクションを繰り返し脱塩し；ならびに
ｎ．  図１８または１９により表される、式Ｃ22Ｈ48Ｏ66Ｎ2Ｓ10Ｓｉ7の所望の生理活性化合物を得る。
【００７６】
本発明の実施形態において、前記海洋生物ハマジナマコ（Holothuria scabra）は、間潮、浸水、浅いおよび深い水から得られ、通常、裂け目、割れ目、岩棚、沼、張り出し、岩の多いおよび砂地の生息地のような、影のある範囲において、豊富であり；明るい着色に鈍感で、外骨格および内骨格を有したり、有さなかったり、無柄の、固着性漂流者、遊泳生物、様々な泳ぐ力を有し、通常、習性で夜行性であり、活性な捕食をしやすく、発光および蛍光性色素あり、または無しで、Ｘ線、ＵＶＢ、ＵＶＡ、可視着色スペクトルおよび赤外スペクトルの全ての波長範囲に対して、手短な発光を生じる。
【００７７】
本発明の別の実施形態において、記化合物の実験式は、Ｃ22Ｈ48Ｏ66Ｎ2Ｓ10Ｓｉ7であり、分子量１９１５を有する。
【００７８】
さらに本発明の別の実施形態において、前記化合物は、蛍光体を含み、前記蛍光体が、実験式Ｃ10Ｈ16Ｎ2Ｏおよび１８０の分子量を有する。
【００７９】
さらに本発明の別の実施形態において、多重蛍光性色素化合物のＨＰＬＣ保持時間は、１．９０９分であった。
【００８０】
別の実施形態において、前記化合物は、１：２００００００倍の比で水で希釈され、前記化合物は、８つの異なる波長で８つの蛍光を発する。
【００８１】
別の実施形態において、前記化合物は、零度以下の温度から３００℃の間の、異なる温度範囲で安定である。
【００８２】
別の実施形態において、ＦＴ−ＩＲ分析において、前記化合物は、１２１０−１１５０および１０６０−１０３０の範囲および６５０で起こる硫酸塩のシグナルを示し、それは、硫黄が、Ｏ−ＳＯ2−型の結合で前記化合物中に存在することを意味する。
【００８３】
別の実施形態において、ＦＴ−ＩＲ分析において、前記化合物が、１０９０−１０２０（１０６８で）で、ケイ酸塩について強い吸収帯を示したことが、−Ｓｉ−Ｏ−Ｓｉ−結合の存在を確認する
本発明のさらに１つの実施形態は、さまざまな産業、生物学上および他の適用において、物質および／または構成成分を殺す（dying）方法を提供し、前記方法は、必要量の請求項１の多重蛍光性化合物を、前記物質および／または構成成分に適用することまたは添加することを含む。
【００８４】
別の実施形態において、前記化合物は、現場でのハイブリッド形成（Ｆ．Ｉ．Ｓ．Ｈ．）における蛍光性分子プローブの標識化のために用いられる。
【００８５】
別の実施形態において、前記色素の青色着色蛍光が、同じ波長励起でＤＡＰＩ蛍光色素による同じ色の前記発光に匹敵し、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化キットの構成成分として用いられる．
別の実施形態において、可視域における前記色素の黄色着色蛍光が、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、オーラミンの同じ着色放射に匹敵する．
さらに別の実施形態において、可視域における前記色素の黄色着色蛍光は、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、ＦＩＴＣの同じ着色放射と匹敵する。
【００８６】
さらに別の実施形態において、前記橙色着色蛍光性放射は、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、プロピジウムアイオダイド（Propidium Iodide）蛍光色素の橙色蛍光色に匹敵する。
【００８７】
さらに別の実施形態において、前記橙色着色蛍光性放射は、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、ローダミン蛍光色素の前記橙色蛍光色に匹敵する。
【００８８】
別の実施形態において、前記橙色着色蛍光性放射は、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、ＴＲＩＴＣ蛍光色素の前記橙色蛍光色に匹敵する。
【００８９】
さらに別の実施形態において、前記本色素は、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、ヘキスト３３２５８による前記発光の色にも匹敵する。
【００９０】
さらに別の実施形態において、前記本色素は、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、同じ波長励起で、ヘキスト３３３４２蛍光色素による前記発光の色にも匹敵する。
【００９１】
さらに別の実施形態において、前記化合物は、現在、フィコビリ（Phycobil）タンパク質が用いられている適用すべてにおいて、用いることができ、それらとは異なり、前記色素は、冷凍により蛍光の消失が進行しない。
【００９２】
さらに別の実施形態において、１０Ｘ対物レンズ下で蛍光性顕微鏡の明るい視野で見るとき、青みがかった灰色の色調が、位相差効果を生じ、前記位相差効果が、細胞質遺伝子的（cytogentical）、細胞学的および組織化学的スライドの迅速なスクリーニングにおいて有用であり、前記色調は、顕微鏡の余分の位相差付属の構成成分に関する費用を省く。
【００９３】
さらに別の実施形態において、前記化合物、通常の透過光顕微鏡の１００Ｘ油浸漬対物レンズの下で、卵黄、核質および活性に分裂している分割細胞のクロマチンのタンパク質は、前者には、茶色がかった黄色、後者には黄色、そして最後の細胞構成成分には、暗青色の色調で、染色の異なる色を示し、それは、効果の迅速なバイオアッセイの効果において有用であり、細胞の様々な組織化学的構成成分について見出される。
【００９４】
本発明は、新規蛍光性色素をさらに提供し、その色素は、動物の皮膚から得られる。また、本発明は、その色素の物理的および化学的性質ならびに直接光におけるその安定性、特に高温および低温での、安定性も記述している。前記色素は、蛍光分光光度計およびエピフルオレッセンス顕微鏡の、紫外線光および可視スペクトルおよびＸ線の範囲の８つの異なる波長で励起されたとき、８つの着色蛍光を発する。緑色スペクトルの前記励起および放射範囲が、最も大きい。本発明はまた、蛍光顕微鏡の下、不純物の迅速な検査のための、細胞のスクリーニングおよび細胞遺伝学的スクリーニングに関する。本発明はまた、高等な分子診断、染色体、細胞および組織の単独および二重の染色のためのエピフルオレッセンス顕微鏡検査、蛍光現場ハイブリッド形成適用、バイオサーファクタント、動物治療薬、生物汚染および漏れチェック、光化学療法、新規リモートセンシング装置、水面下ローブ、救命装置、破砕航空機、救命いかだおよび防衛装備、例えば、ロケットの位置に印をつける、零度以下の温度より極度に高いおよび低い状況における種々の蛍光適用、およびさらに多数のための、タンパク質、ＤＮＡおよびＲＮＡ分子プローブの非放射性ラベルとしての、前記色素の使用に関する。
【００９５】
本発明は、海洋動物から得られた蛍光性色素について記述し、その色素は、それらの生理学的機能のため、日光を吸収するか、または、より長い持続時間、日光に暴露され、異なる波長で、蛍光の放出メカニズムを有するようである。植物プランクトンと同様、ピコプラクトン（picoplankton）および光合成細菌は、光合成機能のため、日光を吸収し、必要な波長の光スペクトルを、化学経路で用い、余分の光を、ストークスの法則に従い、放射する。
【００９６】
無脊椎動物は、殻のような余分の外側防護器官と顕著な防護器官とを有さず、生物有機化学沈着と硬くとげ状の皮膚とを有し、小骨および骨片から形成された強い内骨格を有し、固着性または遅移動性、プランクトン性、底性および遊泳生物であり、直射日光に長時間暴露され、砂または割れ目に住んでおり、蛍光を示すであろう。
【００９７】
本発明は、海洋の無脊椎動物からの蛍光性色素である化合物の、抽出、精製および特徴づけのための高度に効果的かつ選択的な方法と、非放射性ラベルを用いる分子診断、分子マーカー、エピフルオレッセンス顕微鏡、光化学療法、地面プローブおよび水面下プローブのための新規器具装置の構成成分、化粧品産業、食品産業等のためのキットを製造するための、その多様な使用とを提供することにより、先行技術において本来存在していた欠点を克服することを目的としている。
【００９８】
前記海洋の無脊椎動物は、分類学的に、鋼ナマコ綱に属するハマジナマコ（Holothuria scabra）と呼ばれる棘皮動物である。本発明の産物は、新規有機ケイ素化合物であり、その構造により、高分子量および低分子量の両方の蛍光性色素として、蛍光の可能性を提供する。前記多重蛍光性天然色素は、初めて報告された。前記動物を、干潮の間にインド中央西沿岸から集め、実験室に運搬し、基準毎に塩分３０−３２％の海水を含有するガラスタンクに、保持した。前記動物は成体であり、性的に成熟していた。前記分類学的位置は、上述のようにして同定した。実際、入手可能な色素の大部分は、本質的に、合成的である。市場には、ほんの６つの型の天然色素が存在している。これには、生きている生物全てから得られる色素を含む。本発明において報告される蛍光性色素は、海洋生物からの唯一の種類である。
【００９９】
ここで用いられる用語「有機ケイ素化合物」は、「Ｒ」が有機部分である、Ｓｉ−Ｏ−Ｒ型の化学化合物に用いられる。用語「前記化合物のフェノール性およびキノノイドフォーム」は、前記化合物の蛍光体部分の化学構造に用いられ、異なる電子状態および炭素結合の分布パターンに応じ、前記フェノール性およびキノノイドフォームの間をあちこち動き、かつ、蛍光および色を発する。
【０１００】
用語「色素」は、還元剤により脱色されない色素に用いられる。前記色素は、繊維、セルロース、細胞膜および他の細胞構成要素等に、蛍光性色を、与える。それは、供給源が、海岸の、浅いか深い水世界に沿って、自然において一般に見いだされる海洋動物からであり、合成色素ではないので、天然色素と呼ばれる。蛍光性色素は、特定波長において励起されると、より高い電子状態から、より低い電子状態への変化の間に、非常に短い持続時間内に、それは光を放射するものである。
【０１０１】
多重着色蛍光色素は、異なる範囲の波長において励起されたときの、異なる着色光の前記発光を意味する。Ｘ線、ＵＶおよび可視光の異なる波長スペクトルでの励起により、それは、インディゴ、青色、青みがかった緑色、緑色、黄色がかった緑色、黄色、橙色および赤色着色色調の蛍光を発する。前記色素で染色された細胞は、青色、黄色および橙色蛍光を発する。バイオサーファクタントは、もし振れば、石鹸のような泡を生じ、抗菌特性を示す色素溶液を意味する。ここで用いられる前記分子診断は、分子細胞遺伝学における蛍光性現場ハイブリッド形成適用のための分子プローブの非放射性ラベルとして、ならびにマイクロアレイおよび分子生物学的研究におけるマーカーとしての、色素の使用を意味する。ここで、前記エピフルオレッセンス性顕微鏡検査は、異なるキューブ形状下に観察され、公知の蛍光色素で励起された際、特定の着色放射を発するとき、前記本色素を染料として用い、異なる着色蛍光を記録することによる、細胞遺伝学的なスライドの試料の顕微鏡研究に関する。前記蛍光色素キューブＷＵＢ、ＷＢ、ＷＧは、異なる波長用の、オリンパスＢＸ−ＦＬＡ反射光蛍光付属の指定されたフィルタキューブ形状である。
【０１０２】
以下の工程は、前記化合物付蛍光性色素の化学構造ならびに他の化学的および物理学的特徴を評価する：
０１．  前記化合物付蛍光性色素の構造分析
０２．  化学性状および実験式
０３．  前記蛍光体の同定
０４．  物理的特徴
０５．  安定性
０６．  電荷
０７．  バイオサーファクタント分析、
０８．  ＦＴ−ＩＲ分析、
０９．  蛍光分光光度法
１０．  ２６０−２８０ｎｍの範囲において、ＵＶ電球下で、放射の物理的検査、
１１．  空気乾燥法による、細胞遺伝学的スライドの調製、
【０１０３】
１２．  蛍光色素キューブＷＵ、ＷＢ、ＷＧおよび明るい視野の下、前記純粋な色素のエピフルオレッセンス顕微鏡検査、
１３．  蛍光色素キューブＷＵ、ＷＢ、ＷＧおよび明るい視野の下、前記細胞のエピフルオレッセンス顕微鏡検査、
１４．  前記色素による細胞遺伝学的スライドの染色および、その下でのスクリーニング、
１５．  ＢＸ−６０オリンパス顕微鏡の蛍光色素キューブＷＵ、ＷＢ、ＷＧおよび明るい視野、
１６．  蛍光色素キューブＷＵ、ＷＢ、ＷＧおよび明るい視野の下、純粋な色素の発せられた蛍光の顕微鏡写真、ならびに
１７．  蛍光色素キューブＷＵ、ＷＢ、ＷＧおよび明るい視野の下、前記細胞の発せられた蛍光の顕微鏡写真、ならびに、
１８．  放射の蛍光性色調の波長範囲および、蛍光色素キューブの励起範囲の検査、
１９．  農薬効果
２０．  動物治療薬
２１．  抗菌テスト
２２．  抗増殖対生物作用。
【０１０４】
従って、本発明は、天然蛍光性の精製された化合物および、海洋動物由来の多重蛍光性天然色素を提供し、それは、Ｘ線、ＵＶおよび可視光スペクトル波長において、８つの異なる範囲の波長で励起されたとき、インディゴ、青色、青みがかった緑色、緑色、黄色がかった緑色、黄色、橙色および赤色の色調で、８つの異なる色に着色された蛍光を発する。
【０１０５】
本発明は、蛍光分光光度計および可視光分光光度計のそれぞれの示度を記録することによる、様々な範囲の励起波長の放射のピークにさらに、関する。本発明は、エピフルオレッセンス性顕微鏡染料としてこの色素を用いることによる、空気乾燥試料についての、細胞遺伝学的物質のエピフルオレッセンス顕微鏡検査にさらに関する。この色素は、様々な分子、生物医学的および工学科学における蛍光性現場ハイブリッド形成により、分子診断用非放射性標識化キットを形成するのに用いることができる。
【０１０６】
実施形態において、この色素の供給源は、亜界：後生動物、門：棘皮動物；亜門：遊在類、綱：ナマコ綱、名前：ハマジナマコ（Holothuria scabra）に属する、無脊椎動物海洋動物である。
【０１０７】
さらに別の実施形態において、前記ハマジナマコ（Holothuria scabra）は、ナマコからなる群から選択され、世界中、特にインド洋−西太平洋地域の、海岸、浅い水、深い水中に広く分布する。ナマコの最も近いよく知られた関連生物は、ウニおよびヒトデ等である。
【０１０８】
さらに別の実施形態において、ハマジナマコ（Holothuria scabra）の皮膚組織の切開の前に、前記動物は、完全にミリ−Ｑ水で洗浄され、閉じた瓶中、クロロホルム／メタノールで麻酔をかけられた。前記動物はその後、解剖され、皮膚部分をその後、外科用メスを用いて擦ることにより剥皮した。
【０１０９】
さらに別の実施形態において、前記皮膚は、市販の凍結乾燥機中で凍結乾燥され、室温で、ゴムバンドで口を縛り、プラスチックバッグ中で保管された。
【０１１０】
さらに別の実施形態において、前記色素の抽出および部分的精製を行う。約２０ｇｍの前記皮膚サンプル（凍結乾燥されたもの）を、検量し、２００ｍｌのミリ−Ｑ水をそこへ加えた。その後、それを振盪機上で保持し、前記動物から色素を完全に抽出した（４時間）。
【０１１１】
さらに別の実施形態において、前記抽出物された色素をその後、傾瀉により前記皮膚から集め、その後、ワットマンろ過器紙ｎｏ１、次いで真空ユニットに接続された焼結ガラスろ過器を用いた、ろ過に付した。
【０１１２】
さらに別の実施形態において、ろ過の後、そのろ液を集め、水浴上で６０度セ氏で加熱した。それを、２５０ｍｌ容量の分液漏斗に移し、それに、１００−１５０ｍｌの無水アルコールを加えた。
【０１１３】
さらに別の実施形態において、メタノールアセトンは、前記色素を沈殿させることができることも、観察された。これは、アルコール、メタノールまたはアセトンを添加した後、その溶媒の極性が変化することによる。そのとき、それを徐々に振り、前記色素の完全に沈殿させるため、１時間の間、保持した。
【０１１４】
さらに別の実施形態において、前記沈殿された色素を、分液漏斗のコックを開けることにより、ビーカー中に集めた。
【０１１５】
さらに別の実施形態において、その後、それは、固定された角度回転機とガラス遠心機を用いて、毎分２０００回転の速度で遠心分離された。
【０１１６】
さらに別の実施形態において、遠心分離の後、沈殿された色素を、集めた。
【０１１７】
さらに別の実施形態において、前記色素のさらなる精製を、水中に繰り返し溶解させ、沈殿を繰り返すことにより、海塩を除去して行った。
【０１１８】
さらに別の実施形態において、前記沈殿した色素を、最小限の容量の水（約１０ｍｌ）中に溶解させ、無水エタノールをそこに添加した（５０ｍｌ）。再度、遠心分離を行い、その沈殿物を集めた。前記色素を充分に精製するために、このプロセスを５回繰り返した。
【０１１９】
さらに別の実施形態において、これらの工程の後、前記色素を、空気乾燥し、検量し、検量により２．５７ｇｍｓと判明した。
【０１２０】
さらに別の実施形態において、前記化合物の有機組成が、判明した。炭素、水素、窒素および硫黄の微量分析を、精製した色素の乾燥粉末０．２５ｇｍｓから行った。
【０１２１】
さらに別の実施形態において、先の元素分析の結果を共にした、微量分析および原子吸光の結果は、以下のとおりである−炭素８．３５７２％、水素１．７３９％、窒素０．９４４９％および硫黄９．４５７％、二酸化ケイ素１２．５８％（表１）。
【０１２２】
前記化合物の無機組成を判明させるための、さらに別の実施形態において、前記乾燥粉末を、原子吸光測光およびケイ酸評価（二酸化ケイ素１２．５８％）に付した。
【０１２３】
さらに別の実施形態において、ケイ素の原子比は、２２の炭素原子毎に対して７であろう。微量分析および硫黄評価の結果は、ほとんんど同じであることが注目される。
【０１２４】
さらに別の実施形態において、前記化合物における前記元素についての原子比は、炭素：水素：窒素：硫黄：ケイ酸：：２２：４８：２：１０：７の比であることが判明した。
【０１２５】
別の実施形態において、さらなる精製を、イオン交換クロマトグラフィーで行った。陽イオン交換クロマトグラフィーを、ダウエックス（バイオラッド）カラム１００篩サイズを用いて行った。その樹脂を、１Ｎの塩酸で洗浄し、前記塩酸中で一晩中浸した。次の日、それを別の容器に移し、ミリ−Ｑ水で数回洗浄した。その後、それを１２−インチ長さの０．５インチ直径のガラスカラムに注いだ。そのカラムをその後、そこから出る水溶離液のｐＨが６．５−７になるまで、ミリ−Ｑ水で洗浄した。この方法で、そのカラムを水で平衡化させた。前記化合物の水溶液を、そのカラム１０ｍｌのミリ−Ｑ水中２．０７ｇｍｓに充填させた。その後、前記化合物を、そのカラムを通して５つの２５ｍｌ画分にミリ−Ｑ水で溶離し、各画分について、その吸光度を２９１および４５１でチェックし、ピーク対ピークの比を行い、純度をチェックした（表２）。前記化合物のピーク対ピーク比は、ほとんど同一であることが表から理解できる。
【０１２６】
さらに別の実施形態において、精製を陰イオン交換クロマトグラフィーにより行い、負に帯電した化合物を分離した（図３ａ）。
【０１２７】
さらに別の実施形態において、金属イオンを除去した後、前記色素を蒸発により乾燥させ、その後、凍結乾燥させた。
【０１２８】
さらに別の実施形態において、ケイ酸評価の原子吸光測光を行った。金属イオンは存在しないようだが、ケイ酸評価により判明したケイ酸の量は、同じであり、１２．５９％であった。上記により、ケイ酸は、前記化合物の組み込まれた部分であり、不純物として存在しているのではないことが確認された。
【０１２９】
さらに別の実施形態において、前記化合物の構造解明を行った。カラムクロマトグラフィーによる精製後の前記化合物を、酸加水分解に付した。実験の詳細は、以下のとおりである：約５０ｍｌの溶離されたサンプルを、取り、１−Ｎ塩酸２５ｍｌと混合した。その後、それを還流冷却器に取り付け、ブンゼンバーナーを用いて、１時間の間、加熱した。水を連続的に還流冷却器じゅう、循環させ、１時間後、その溶液を、デシケータ中で、水酸化カリウムペレットを用いて除去し、蒸発乾固させた。そのサンプルを、一晩後、デシケータから移し、フェーリング溶液に添加し、沈殿を観察した。この実験により、前記色素における糖単位の存在を確認した。
【０１３０】
さらに別の実施形態において、実験式および分子量を明らかにした。原子比に従い、前記化合物の式は、：Ｃ22Ｈ48Ｏ66Ｎ2Ｓ10Ｓｉ7、分子量＝１９１５である。
【０１３１】
さらに別の実施形態において、前記化合物は、高度に負に帯電し、原子間の結合は本質的に、イオン性である。
【０１３２】
さらに別の実施形態において、金属は、前記化合物に配位によって結合しておらず、全てがイオン型の結合である。
【０１３３】
さらに別の実施形態において、カラムクロマトグラフィーにより精製された前記化合物は、蛍光体の同定のため、化学分析に付された。
【０１３４】
さらに別の実施形態において、５ｍｌの精製画分に、ひとつまみの亜鉛末を添加し、そこへ、希ＨＣｌ（塩酸）を添加し、その溶液の脱色を観察した。このことは、キノノイド環の存在を意味する。
【０１３５】
さらに別の実施形態において、５ｍｌの化合物の精製画分に、メルカプトエタノールを添加した。前記化合物は、脱色を起こさなかった。それは、強還元剤のみが、前記化合物を脱色させ、キノノイド（quinoniod）環が立体的に保護されており、ケトエノール互変異性を生じ得、キノン型の構造およびフェノール性構造の両方を生じうるのが、フェノール性基のみであることを意味している。
【０１３６】
さらに別の実施形態において、前記化合物の純度は、純粋なイオン形態のＨＰＬＣ分析でチェックした。純粋な色素をカラムから溶離するための、５０％アセトニトリル（アイソクラティック（Isocratic））を用いた逆相Ｃ１８型の分析カラムにより、左右対称的なピークを生じた。
【０１３７】
さらに別の実施形態において、前記化合物は、水溶液中で、非常に希釈された形態で（５×１０-6濃度）、肉眼で、色は薄黄色であった。
【０１３８】
さらに別の実施形態において、その濃縮溶液は、色は、赤褐色であり、前記化合物付色素は、安定で、室温で活性が変わらなかった。
【０１３９】
さらに別の実施形態において、前記色素は、３００度セ氏まで加熱した後でさえ、その蛍光性スペクトル性状が変わらず、１年以上、汚染または化学的崩壊がなく、その安定性が変わらず残っており、露光後に、光分解が進行しなかった。
【０１４０】
さらに別の実施形態において、前記海洋色素は、より長い貯蔵寿命のために添加される安定化剤を必要としない。
【０１４１】
さらに別の実施形態において、ゲル電気泳動による前記色素の電荷検査により、前記色素自体は、負に帯電した化合物であることが示され、それは、正に荷電した電極に向かって引き付けられた。
【０１４２】
さらに別の実施形態において、ｍｌ溶液毎に０．００１ｍｇ−０．０１ｍｇを振ることにより、バイオサーファクタント性質を評価し、起泡が見られた。
【０１４３】
さらに別の実施形態において、ＦＴ−ＩＲ分析を行った。前記化合物が著しく吸湿性であるので、そのＩＲは困難な仕事である。カラムクロマトグラフィー後の前記化合物を、凍結乾燥機で乾燥させ、臭化カリウムと混合し、ペレットを調製し、ＦＴ−ＩＲを取った。
【０１４４】
さらに別の実施形態において、ＩＲにおいて、１２１０−１１５０および１０６０−１０３０の範囲および６５０で生じる硫酸塩のシグナルが、見られ、このことは、硫黄が、Ｏ−ＳＯ2−型の結合で前記化合物中に存在することを意味する。
【０１４５】
さらに別の実施形態において、ケイ酸塩について強い吸収帯が、１０９０−１０２０（１０６８で）の間で見られた。このことは、ケイ素が、−Ｓｉ−Ｏ−Ｓｉとして前記化合物中に存在することを意味する。
【０１４６】
さらに別の実施形態において、ＣＨ3伸縮シグナルが、２９５０−２８５０に見られた。
【０１４７】
さらに別の実施形態において、アミドシグナルが存在しないので、化合物はタンパク質ではないことが確かである。
【０１４８】
さらに別の実施形態において、ヒドロキシ伸縮シグナルはまた、強くかつ広いので、フェノール性基であることを意味する。
【０１４９】
本発明者らは、前記色素の性質について研究し、異なる波長の励起により、多色の放射を生じ、それは市場に既に存在する蛍光色素顕微鏡染料に匹敵することを見出した。前記本色素の前記青色着色蛍光は、同じ波長励起でＤＡＰＩ蛍光色素による同じ色の前記発光に匹敵し、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化キットの構成成分として用いられる。前記色素の可視域における前記黄色着色蛍光は、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、オーラミンの同じ着色放射に匹敵する。
【０１５０】
可視域における前記色素の黄色着色蛍光は、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、ＦＩＴＣの同じ着色放射に匹敵する。
【０１５１】
前記橙色着色蛍光性放射は、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、プロピジウムアイオダイド蛍光色素の橙色蛍光色に匹敵する。
【０１５２】
前記橙色着色蛍光性放射は、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、ＴＲＩＴＣ蛍光色素の前記橙色蛍光色に匹敵する。
【０１５３】
前記色素は、室温で安定であり、長い貯蔵寿命を有する。前記色素の前記分子キット及び放射性キットは、室温で輸出することができる。前記色素は、少なくとも１２３の異なる蛍光色素、すなわち、ＤＡＰＩ、ヘキスト（Hoechst）３３２５８、ヘキスト３３３４２、ＦＩＴＣ、アクリジン橙色、オーラミン、ローダミン、ＴＲＩＴＣおよびプロピジウムアイオダイド等（それらは、現在、市場に存在する（ビトプラン・プロダクツ（Bitplane products）））の特徴を有する。前記色素は、顕微鏡の通常光の下、灰色の色調は、位相差効果を生じ、前記位相差効果は、細胞質遺伝子的、細胞学的および組織化学的スライドの迅速なスクリーニングにおいて有用であり、顕微鏡の余分の位相差付属の構成成分に関する費用を省く。前記蛍光色放射は、蛍光のストークスの法則に従う。
【０１５４】
さらに別の実施形態において、純粋な化合物の蛍光が、蛍光分光光度法により見られる。前記化合物（ゲルろ過後、凍結乾燥されたもの）を、水に溶解し（濃度０．００１ｇｍ／ｍｌ）、蛍光分光光度法に付した。それを、励起スキャニングに最初に付し、前記化合物は、３６１ｎｍおよび５２３ｎｍ波長で、最大量に励起されたことが見られた。
【０１５５】
さらに別の実施形態において、前記化合物が２７０ｎｍで励起されたとき、蛍光のピークが５５０ｎｍで見られた。
【０１５６】
さらに別の実施形態において、前記化合物が３４０ｎｍで励起されたとき、蛍光のピークは、４６０ｎｍであった。
【０１５７】
さらに別の実施形態において、前記化合物が３６１ｎｍで励起されたとき、蛍光ピークは、４９０ｎｍであった。
【０１５８】
さらに別の実施形態において、前記化合物が４００ｎｍで励起されたとき、蛍光ピークは、４７０ｎｍであった。
【０１５９】
さらに別の実施形態において、前記化合物が５２３ｎｍで励起されたとき、前記発光は、６００ｎｍで最大であった。
【０１６０】
さらに別の実施形態において、ＢＸ６０−オリンパス顕微鏡用異なる蛍光フィルタキューブで励起されたとき、５Ｘ１０-8の希釈の、純粋な化合物付色素のエピフルオレッセンス顕微鏡検査および光の放射を記録し、公知蛍光色素が有する色色調と比較。純粋な希釈色素を、スライドに添加し、カバーグラスでカバーした。そのスクリーニングを、ＵＶ光および、以下の波長範囲の反射光の、前記オリンパスのＷＵ、ＷＢおよびＷＧキューブによる可視光スペクトルの励起を用いて、行った。
【０１６１】
さらに別の実施形態において、ＷＵキューブの波長範囲は、３３０ｎｍ−３８５ｎｍであり、ＷＢキューブの波長範囲は、４５０ｎｍ−４８０ｎｍであり、ＷＧキューブの波長範囲は、５１０ｎｍ−５５０ｎｍである。
【０１６２】
さらに別の実施形態において、異なる励起範囲での前記発光範囲が判明した。ＷＵ３３０ｎｍ−３８５ｎｍ範囲での励起は、４６０ｎｍ−４９０ｎｍ範囲において蛍光を発することが見られた。
【０１６３】
さらに別の実施形態において、４５０ｎｍ−４８０ｎｍの範囲のスペクトルを有するＷＢフィルタでの励起は、５１０ｎｍ−５５０ｎｍ範囲において、蛍光を発する。
【０１６４】
さらに別の実施形態において、５１０ｎｍ−５５０ｎｍ範囲のスペクトルを有するＷＧフィルタでの励起は、６１０ｎｍ−７００ｎｍ範囲において、蛍光を発する。この結果は、「ストークスの法則」に従う。
【０１６５】
さらに別の実施形態において、実験室飼育された海洋動物の海水中の卵細胞懸濁液のエピフルオレッセンス顕微鏡検査を、スライド上に置き、これに、１μｌの５×１０-8の色素を加え、カバーグラスを配置した。
【０１６６】
さらに別の実施形態において、スライドのスクリーニングを、エピフルオレッセンス顕微鏡で行い、ＢＸ６０−オリンパス顕微鏡用の異なる蛍光フィルタキューブで励起されたとき、光の放射を記録し、公知蛍光色素が有する色色調と比較。前記スクリーニングは、ＵＶおよび、オリンパス社によるＷＵ、ＷＢおよびＷＧキューブと呼ばれる、可視光スペクトルの透過光および蛍光性フィルタキューブの下、行われる。
【０１６７】
さらに別の実施形態において、異なる励起範囲における前記発光範囲が、判明した。ＷＵ３３０ｎｍ−３８５ｎｍ範囲での励起で、細胞は、４６０ｎｍ−４９０ｎｍ範囲において、蛍光を発するのが見られた。
【０１６８】
さらに別の実施形態において、４５０−４８０ｎｍ範囲を有するＷＢフィルタでの励起で、前記発光は、５７０−６１０ｎｍ範囲のスペクトル範囲である。
【０１６９】
さらに別の実施形態において、５１０ｎｍ−５５０ｎｍのスペクトル範囲を有するＷＧフィルタでの励起で、蛍光発光は、６１０ｎｍ−７００ｎｍの範囲である。
【０１７０】
さらに別の実施形態において、可視スペクトルの完全白範囲で放射された透過光放射光を用い、細胞処方成分の密度に応じる、明るい領域下での、細胞遺伝学的スライドのエピフルオレッセンス性顕微鏡スクリーニングにより、青みがかった灰色の色調に、位相差用効果を与えた。
【０１７１】
さらに別の実施形態において、異なる励起範囲下の前記色素の蛍光性色放射が見られ、放射された色の色調が書き留められ、公知蛍光色素と、色の色調が比較された。
【０１７２】
異なる染料が、蛍光性顕微鏡の異なる励起キューブに、用いられた。例えば、ＤＡＰＩ（ＤＮＡ染色、青色を発する）、フルオレセイン−ｄＵＴＰ；ヘキスト３３２５８、３３３４２は、３３０ｎｍ−３８５ｎｍ励起キューブでの励起下に見られ；ＦＩＴＣ、アクリジン橙色（ＤＮＡ、ＲＮＡ用、緑色がかった／黄色がかった色調を発する）、４５０ｎｍ−４８０ｎｍ励起キューブ下のオーラミンならびに、５１０ｎｍ−５５０ｎｍ励起キューブ下のローダミン、ＴＲＩＴＣおよびプロピジウムアイオダイド（ＤＮＡ、橙色色調を発する）。
【０１７３】
さらに別の実施形態において、励起スペクトル範囲およびエピフルオレッセンス（epiflouorescence）顕微鏡検査における放射蛍光色は、表４中に示した。
【０１７４】
さらに別の実施形態において、前記動物の精製された抽出物、精製された化合物（それは蛍光性色素である）と、色素で標識された細胞との間に認められた、放射された波長のシフトが存在した。
【０１７５】
さらに別の実施形態において、前記色素の細胞構成要素への結合が、蛍光性プローブとしての、その有用性を明らかに示していた。
【０１７６】
さらに別の実施形態において、エピフルオレッセンス顕微鏡検査染料として用いられた、前記色素でのスライドの顕微鏡写真が行われた。
【０１７７】
さらに別の実施形態において、ＷＵ３３０ｎｍ−３８５ｎｍ範囲、ＷＢ４５０ｎｍ−４８０ｎｍ範囲、ＷＧ５１０ｎｍ−５５０ｎｍ範囲、および明るい領域下に、前記色素で、スライドの範囲内の放射された蛍光の顕微鏡写真を、４００ＡＳＡスピードのコダックカラーフィルムにより、５０−６０秒の異なる露出を用いて、行った。
【０１７８】
別の実施形態において、ＷＵ３３０ｎｍ−３８５ｎｍ範囲下に、前記色素で、スライドの範囲内の放射された蛍光の顕微鏡写真を、４００ＡＳＡスピードのコダックフィルムにより、５０秒−６０秒の異なる露出を用いて、行った。青色蛍光において、インディゴの色調が放射された。
【０１７９】
別の実施形態において、ＷＢ４５０ｎｍ−４８０ｎｍ範囲下に、前記色素で、スライド範囲内の放射された蛍光の顕微鏡写真を、５０秒−６０秒の異なる露出を用いて、４００ＡＳＡスピードのコダックフィルムにより、行った。緑色蛍光の色調が、放射された。
【０１８０】
別の実施形態において、ＷＧ５１０ｎｍ−５５０ｎｍ範囲下に、前記色素で、スライド範囲内の放射された蛍光の顕微鏡写真を、５０秒−６０秒の異なる露出を用いて、４００ＡＳＡスピードのコダックフィルムにより、行った。薄暗赤色蛍光の色調が、放射された。
【０１８１】
別の実施形態において、ＷＢ４５０ｎｍ−４８０ｎｍ範囲下に、前記細胞で、スライド範囲内の放射された蛍光の顕微鏡写真を、５０秒−６０秒の異なる露出を用いて、４００ＡＳＡスピードのコダックフィルムにより、行った。明るい黄色蛍光の色調が、放射された。
【０１８２】
別の実施形態において、ＷＧ５１０ｎｍ−５５０ｎｍ範囲下に、前記細胞で、スライド範囲内の放射された蛍光の顕微鏡写真を、５０秒−６０秒の異なる露出を用いて、４００ＡＳＡスピードのコダックフィルムにより、行った。橙色蛍光の色調が、放射された。
【０１８３】
さらに別の実施形態において、前記化合物付色素の農薬効果が認められた。前記化合物は、昆虫に対して有毒である。それは、蟻のような昆虫に対して毒性を示した。前記色素中に浸したろ紙を、作業台上に放置した。次の日、満載の死んだ蟻が認められた。
【０１８４】
さらに別の実施形態において、細胞遺伝学的染色用色素の使用が行われた。異なる供給源からの、氷酢酸およびメタノールで固定された組織を、スライド上にとり、前記色素溶液を、予備処理せずに、そこへ添加した。前記細胞のこれらの異なる部分は、色素溶液を様々に、取り入れることが観察した。細胞質、核および染色体は、異なる着色を示した。海洋の色素は、染色体のタンパク質を染色するので、それは、細胞の核型を研究するのに、価値を付加する。
【０１８５】
さらに別の実施形態において、零度以下の温度での前記化合物付色素の安定性が、見られた。希釈型５×１０-6での前記化合物を、マイクロフュージ（microfuge）チューブ中にとり、−２０度セ氏で維持し、ＵＶ光下、凍結状態で観察した。蛍光は、劣化することなく、持続した。さらに別の実験において、色素を液体窒素中で凍結させ、その蛍光は、変化せず、残っていた。
【０１８６】
さらに別の実施形態において、ペットのダニやノミのための動物治療薬としての、前記色素の有用性が、確かめられた。前記抽出物は、イヌのダニ／ノミを殺す、動物治療薬として用いられた。１：２００希釈の５×１０-6濃度の色素は、２０秒以内に、ダニおよびノミを殺した。
【０１８７】
さらに別の実施形態において、これは、ペット用ダニ／ノミ治療薬のための色素組成物であり、また、この組成物は、動物石鹸＆化粧用等の処方成分として、有用である。
【０１８８】
さらに別の実施形態において、前記化合物付色素の抗菌試験を行った。海洋色素がフェノール性化合物であり、フェノール性化合物が通常、抗菌活性を有するので、抗菌アッセイを、この化合物で行い、阻止帯を観察した。
【０１８９】
さらに別の実施形態において、本発明は、８つの異なる波長で８色の蛍光と、透過光下の位相差効果とを得るための、海洋ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から得られた、精製した化合物付蛍光性色素を、超純水中、１：２００００００の比で含む生理活性組成物を提供する。
【０１９０】
本発明はまた、蛍光性色を示す可撓性ポリ塩化ビニルフィルムの調製に有用な、海洋ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から得られた、精製した化合物付蛍光性色素を、通常の添加物と共に含む組成物を提供する。
【０１９１】
実施形態において、本発明は、コーティング組成物およびインクの調製に有用な、海洋ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から得られた、精製された化合物付蛍光性色素を、通常の添加物と共に含む組成物を提供する。
【０１９２】
別の実施形態において、本発明は、漏れの検出に有用な、海洋ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から得られた、精製された化合物付蛍光性色素を、通常の添加物と共に含む組成物を提供する。
【０１９３】
さらに別の実施形態において、本発明は、海底プローブにおいて有用な、海洋ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から得られた、精製された化合物付蛍光性色素を、通常の添加物と共に含む組成物を提供する。
【０１９４】
さらに別の実施形態において、本発明は、皮膚癌の光化学療法において有用な、海洋ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から得られた、精製された化合物付蛍光性色素を、通常の添加物と共に含む組成物を提供する。
【０１９５】
さらに別の実施形態において、本発明は、海洋ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から得られた、精製された化合物付蛍光性色素を、通常の添加物と共に含む化粧用組成物を提供する。
【０１９６】
さらに別の実施形態において、本発明は、分子診断用現場ハイブリッド形成キットにおける蛍光性プローブとして有用な、海洋ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から得られた、精製された化合物付蛍光性色素を、通常の添加物と共に含む組成物を提供する。
【０１９７】
さらに別の実施形態において、本発明は、非放射性標識化ならびに生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の検出キットの構成成分として有用な、海洋ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から得られた、精製された化合物付蛍光性色素を、通常の添加物と共に含む組成物を提供する。
【０１９８】
さらに別の実施形態において、本発明は、免疫蛍光性検出において有用な、海洋ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から得られた、精製された化合物付蛍光性色素を、通常の添加物と共に含む組成物を提供する。
【０１９９】
さらに別の実施形態において、本発明は、ＤＩＧ−標識オリゴヌクレオチドプローブおよび抗ＤＩＧ  Ｆａｂ−フラグメントの対比染色として有用な、海洋ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から得られた、精製された化合物付蛍光性色素を、通常の添加物と共に含む組成物を提供する。
【０２００】
さらに別の実施形態において、本発明は、フローサイトメトリーにおける、単独および多重の細胞量蛍光において有用な、海洋ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から得られた、精製された化合物付蛍光性色素を、通常の添加物と共に含む組成物を提供する。
【０２０１】
さらに別の実施形態において、本発明は、エピフルオレッセンス顕微鏡検査用の蛍光染色として有用な、海洋ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から得られた、精製された化合物付蛍光性色素を、通常の添加物と共に含む組成物を提供する。
【０２０２】
さらに別の実施形態において、本発明は、健康食品産業、化粧品産業、医薬品産業および化学産業における生物汚染の迅速な検査に有用な、海洋ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から得られた、精製された化合物付蛍光性色素を、通常の添加物と共に含む組成物を提供する。
【０２０３】
さらに別の実施形態において、本発明は、実験室培養における生物汚染物質の迅速な評価に有用な、海洋ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から得られた、精製された化合物付蛍光性色素を、通常の添加物と共に含む組成物を提供する。
【０２０４】
さらに別の実施形態において、本発明は、領域条件下での生物汚染因子の迅速な検査に有用な、海洋ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から得られた、精製された化合物付蛍光性色素を、通常の添加物と共に含む組成物を提供する。
【０２０５】
さらに別の実施形態において、本発明は、抗菌組成物において有用な、海洋ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から得られた、精製された化合物付蛍光性色素を、通常の添加物と共に含む組成物を提供する。
【０２０６】
さらに別の実施形態において、本発明は、洗面用品組成物におけるバイオサーファクタントとして有用な、海洋ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から得られた、精製された化合物付蛍光性色素を、通常の添加物と共に含む組成物を提供する。
【０２０７】
さらに別の実施形態において、本発明は、天然着色剤として有用な、海洋ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から得られた、精製された化合物付蛍光性色素を、通常の添加物と共に含む組成物を提供する。
【０２０８】
表の説明
表−１：純粋な化合物の元素分析結果。
表−２：純粋な化合物の分光光度計データ。
表−３：励起放射波長および対応するスペクトルの色を示す、純粋な化合物の蛍光分光光度法。
表−４：結合体有りまたは無しで、オリンパスエピフルオレッセンス顕微鏡の、異なる波長蛍光性フィルタキューブで励起されたときの、純粋な化合物付蛍光性色素の異なる着色蛍光の前記発光。
【０２０９】
本発明は、新規色素の抽出、部分的精製および特徴づけ工程に関連し、その新規色素は、世界のインドおよびインド太平洋領域の中央西沿岸領域に沿って広く分布している棘皮動物（ナマコ綱：ハマジナマコ（Holothuria scabra））由来の天然色素である。
【０２１０】
本発明は、動物の皮膚色素由来の新規蛍光性純粋な色素をさらに提供し、その色素は、−２０度セ氏以下で保管することにより、同じ検体から３−４回繰り返し抽出することができ、そのため、天然資源の搾取から保全することができる。
【０２１１】
本発明は、また、前記色素は、光スペクトル（Ｘ線、ＵＶおよび可視光スペクトル）の８つの異なる励起波長で、８つの着色蛍光性放射を有することを意図している。従って、蛍光性化合物付色素は、染色体、細胞および組織の単一および二重の染色のための、エピフルオレッセンス顕微鏡検査の１つのフルロクローム（flurochrome）色素において、８として、以下の簡単なプロトコルに従い、製品化されることができる。前記色素は、現在実用的に重要な、少なくとも２２の異なる蛍光体（Ｒ−フィコエリトリン、テキサス赤色、ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬ、オレゴン緑色、フルオレセイン、ローダミン赤色−Ｘ、テトラメチルローダミン、ＢＯＤＩＰＹ  ＴＭＲ、ＢＯＤＩＰＹ  ＴＲ、ＹＯＹＯ−１、ＤＡＰＩ、インド−１、カスケード青色、フラ−２、アミノメチルクマリン、ＦＭ  １−４３、ＤｉｌＣ18、ＮＢＤ、カルボキシ−ＳＮＡＲＦ−１、ルシファ黄色、ダンシル＋Ｒ＋ＮＨ2、プロピジウムアイオダイド（Propdium Iodide）等）による放射に対し、等価な波長スペクトルにおいて、放射する。多色蛍光性検出に現在用いられているフィコビリ（pycobili）タンパク質。前記色素は、蛍光性プローブ用に市場で現在市販されている１２３の蛍光色素の波長発光スペクトルを、実際カバーする。
【０２１２】
本発明は、分子生物学における蛍光性現場ハイブリッド形成適用のためのタンパク質、ＤＮＡおよびＲＮＡプローブの非放射性標識化における、前記色素の使用も意図している。
【０２１３】
従って、使用の好ましいモードにおいて、前記色素は、分子標識化および検出キットの構成成分であり、その大部分は、高い値段で、輸入され、販売されている。
【０２１４】
これらの標識化キットは、迅速な分子細胞遺伝学的およびマイクロアレイ技術を用いる分子診断のため、広く求められている。
【０２１５】
有用性の、さらに別の好ましいモードにおいて、Ｘ線を有する蛍光の特性は、幾つかの医療適用において、用いることができる。
【０２１６】
この特性は、生命救助装置において、救命胴衣の構成成分として、破壊された航空機、救命ボートおよび防衛装備、例えば、ロケットの位置をマークし、産業における漏れチェックに、用いることができる。
【０２１７】
本発明は、単独および多重の細胞のためのフローサイトメ−ターにおける、蛍光の定量的測定において、有用であろう。
【０２１８】
本発明は、天然および制御された環境（例えば組織培養）における生物汚染、汚染、健康食品および化粧用産業における産業上の汚染の迅速な評価においても、有利であろう。
【０２１９】
ＵＶ照射の低い波長で励起されたとき、ＵＶＡ範囲において、蛍光を発する色素の能力は、皮膚癌の選択的光化学療法に、有用である。
【０２２０】
さらに別の有用性は、前記色素が、バイオサーファクタントであり、抗菌洗面用品および組成物において、用いることができることである。
【０２２１】
使用のさらに好ましいモードにおいて、前記色素は、蛍光性分光光度計分析でチェックされるように、室温で長い貯蔵寿命を有する。
【０２２２】
使用のさらに別の好ましいモードにおいて、前記本蛍光色素は、天然色を化粧品に生じ、色添加物にかかる費用を節約するであろう。
【０２２３】
前記蛍光性色素の別の有用性は、データに基づく光波長感受性を必要とする、新規リモートセンシング装置および海底プローブの構成成分としてである。
【０２２４】
有用性のさらに別の好ましいモードにおいて、色素は、多色標識化実験が、前もって必須である（例えば、ＤＮＡ塩基配列決定法、フローサイトメトリー、蛍光性現場ハイブリッド形成および蛍光顕微鏡検査のような）、現代の研究の全てのタイプにおいて、有利であろう。
【０２２５】
有用性のさらに別の好ましいモードにおいて、色素は、極地および周囲の位置におけるように、周囲温度が零度以下である地理的位置における多色実験において、有利であろう。
【０２２６】
高分子量の多重蛍光性色素の別の有用性は、それは高分子量色素であるが、蛍光体部分は、低分子量であり、従って、前記色素は、両方の選択において、有用でありうるというものである。
【０２２７】
前記蛍光性色素の別の有用性は、それが、塩基として用いることができ、幾つかの誘導体および結合体を、産業上の適用のため、製造することができる。
【０２２８】
本発明は、以下の実施例により説明されるが、これは、本発明の範囲を説明するもので、いずれの形態においても、限定することを意図しない。
【０２２９】
実施例
前記純粋な化合物付蛍光性色素の抽出、精製、特徴づけの方法、前記化合物の化学構造の説明、フェノール性およびキノノイドフォームの両方、蛍光体の構造が、開示されている。Ｘ−線、ＵＶおよび可視スペクトル範囲の波長で励起した後の、前記発光波長および蛍光色を検出するための、蛍光性分光光度計およびエピフルオレッセンス（epifluorscence）顕微鏡で行った実験の詳細も、開示している。
【実施例１】
【０２３０】
実施例：１
材料の収集
亜界：  後生動物
門：  棘皮動物
亜門：遊在類
綱：  ナマコ綱
亜綱：  楯手亜綱
目：  アスピドカイロタ（Aspidochirota)
属：  ナマコ類
種：  スカブラ（scabra）
これらに属する動物を、干潮の間に、インドの中央西沿岸の海岸から収集した。これらの動物を、実験室に運び、分類学的同定および更なる使用について、基準ごとに塩分３０−３２（３０％0）の海水を含むガラスタンク中に維持した。前記動物は成体であり、性的に成熟していた。
【実施例２】
【０２３１】
実施例２：
前記動物の組織の切開
動物をミリ−Ｑで完全に洗浄し、水で閉じた瓶中、クロロホルム／メタノールで麻酔をかけた。前記動物をその後、解剖し、皮膚部分を外科用メスでこすることにより、剥いて、その皮膚を、約−１１０度セ氏の冷却温度で、凍結乾燥機中で凍結乾燥した（ＨＥＴＯ  凍結乾燥機付遠心分離液体濃縮システム）。
【実施例３】
【０２３２】
実施例：３
前記色素の抽出および部分的精製：
約２０ｇｍの前記皮膚サンプル（凍結乾燥されたもの）を、その後検量し、２００ｍｌのミリ−Ｑ水をそこへ加えた。それをその後振盪機上で保持し、前記動物から前記色素を完全に抽出した（４時間の間）。前記抽出物された色素は、その後、前記皮膚から傾瀉により集められ、その後、ワットマンろ過器紙ｎｏ１、次いで真空ユニットに接続された焼結ガラスろ過器を用いた、ろ過に付された。ろ過後、前記ろ液を集め、水浴上で、６０℃で加熱した。それを、２５０ｍｌ容量の分液漏斗に移し、そこへ、１００−１５０ｍｌの無水アルコールを添加した。メタノールおよびアセトンが、前記色素を沈殿させるのも、観察された。それは、アルコール、メタノールまたはアセトンの溶媒の極性の変化のためである。それを、その後、穏やかに振り、１時間放置して、前記色素を完全に沈殿させた。沈殿した色素を、分液漏斗のコックを開けることにより、ビーカーに、分離した。それをその後、固定角度回転機とガラス遠心分離機を用いて、毎分２０００回転の速度で遠心分離した。遠心分離後、沈殿された色素を集めた。
【実施例４】
【０２３３】
実施例４：
海塩を除去するための前記色素の精製：
前記色素のさらなる精製を、水に繰り返し溶解させ、繰り返し沈殿させることにより、海塩を除去して、行った。沈殿した色素を、最小限の容量の水（約１０ｍｌ）に溶解させ、無水エタノールをそれに添加した（５０ｍｌ）。再度、遠心分離を行って、前記沈殿物を集めた。この方法を５回繰り返して、前記色素を充分精製した。以下の工程を行った後、前記色素を空気乾燥し、その後、重さは２．５７ｇｍｓであった。
【実施例５】
【０２３４】
実施例５：
対イオンを除去するための前記色素の精製：
陽イオン交換クロマトグラフィーを、ダウエックス（バイオラッド）カラム１００篩サイズの助けを借りて、行った。この樹脂を塩酸（ＨＣｌ）１規定で洗浄し、その中に一晩中浸した。次の日、それを別の容器に移し、ミリ−Ｑ水で数回洗浄した。それを、その後、ガラスカラム１２−インチ長さおよび０．５インチ直径に注いだ。前記カラムを、その後、そこから溶離された水のｐＨが６．５−７になるまで、再度ミリ−Ｑ水で洗浄した。この方法で、前記カラムを水で平衡させた。水溶液中の前記化合物を、前記カラム１０ｍｌのミリ−Ｑ水中２．０７ｇｍｓ上に、充填させた。その後、前記化合物を、そのカラムを通じてミリ−Ｑ水で２５ｍｌの５つの画分に溶離し、各画分について、吸光度を２９１および４５１でチェックし、ピークからピークへの比を行って、その純度をチェックした。前記化合物のピークからピークへの比は、ほとんど同じのままであったことが、表から分った。金属イオンを除去した後、前記色素を蒸発により乾燥させ、その後、凍結乾燥させた。
【実施例６】
【０２３５】
実施例６：
部分的に精製された色素から純粋な化合物の分離：
前記化合物の負の構成成分を、ＤＥＡＥセルロースクロマトグラフィーにより分離した。カラム１１０ｍｌ床容量を、ｐＨ７．５でリン酸緩衝液で予備膨潤させたＤＥＡＥセルロースにより、準備した。そのカラムを、リン酸緩衝液０．０５（Ｍ）で平衡させた。凍結乾燥された粉末を、リン酸緩衝液に溶解させ、そのカラム（５−ｍｌ）中に充填した。２Ｍ  ＮａＣｌの勾配を、カラムに通した。５ｍｌアリコートに、画分を集めた。２００ｍｌまで、勾配回避を行った。そのカラムをリン酸緩衝液０．０５Ｍ中２Ｍ  ＮａＣｌで洗浄した後、その画分を、５ｍｌのアリコートに集めた。ＤＥＡＥセルロース精製ピークを、脱塩カラム（ＰＤ１０）を用いて脱塩し、われわれの化合物が、空の容量にではなく、床容量へ来るのを観察した。微量の塩が存在しなくなるまで、前記化合物を繰り返し脱塩した。各運転後、それを凍結乾燥した（図３ａ）。
【実施例７】
【０２３６】
実施例７：
生理活性ピークの同定：
対生物作用および蛍光性分析を、クロマトグラフィーで精製したピークすべてに行った。最後のピーク（２Ｍ  ＮａＣｌで洗浄したときに出たきたもの）が、生物活性なものであることが判明した。ケイ酸の評価を、原子吸光分析により行い、ＣＨＮＳ分析機により他の構成成分全ての評価を行った。このピークの元素分析により、Ｃ：Ｈ：Ｎ：Ｓ：Ｓｉが、炭素８．３５７２％、水素１．７３９％、窒素９．４４９％、硫黄９．４５７％および二酸化ケイ素１２．５８％の割合であることが示された。元素比に変換すると、それは、Ｃ：Ｈ：Ｎ：Ｓ：Ｓｉ＝２２：４８：２：１０：７である（表１）。
【実施例８】
【０２３７】
実施例８：
前記化合物の純度チェック：
脱塩およびＤＥＡＥセルロース精製したピークを、水中５０％アセトニトリル中に溶解させ、テトラ（ｔｅｒ）ブチルアンモニウムリン酸塩１ｍＭを、イオン対試薬として添加した。その後、それを、１ｍＭ  テトラ（ｔｅｒ）ブチル（ｂｙｔｙｌ）アンモニウムリン酸塩を含む、５０％アセトニトリルを用いて、分析工程に付した。左右対称的なピークが、観察され、それにより、前記化合物純度を確認した（図３ｂ）。純粋な化合物のＵＶ可視スキャニングを取り、図３ｃに示した。
【実施例９】
【０２３８】
実施例：９
前記化合物の構造的説明：
カラムクロマトグラフィーによる精製後の前記化合物を、酸加水分解に付した。実験の詳細は、以下のとおりである：約５０ｍｌの溶離されたサンプルをとり、１規定の塩酸２５ｍｌと混合した。その後、それを、還流冷却器に取り付け、ブンゼンバーナーを用いて、１時間加熱し、水を連続的に還流冷却器じゅう、循環させた。１時間後、その溶液を、デシケータ中で、水酸化カリウムペレットを用いて除去し、蒸発乾固させた。そのサンプルを、一晩後、デシケータから移し、フェーリング溶液の上部に加え、沈殿を観察した。この実験により、前記色素における糖単位の存在を確認した。
【実施例１０】
【０２３９】
実施例１０：
化学的性状および実験式：
原子比に従い、前記化合物の式は：Ｃ22Ｈ48Ｏ66Ｎ2Ｓ10Ｓｉ7、分子量＝１９１５である。前記化合物は、高度に負に帯電し、釣合いには、それは、塩型であった。金属は、前記化合物に配位によって結合しておらず、全てがイオン型の結合である。
【実施例１１】
【０２４０】
実施例１１：
フルオロポア（fluropore）の同定：
カラムクロマトグラフィーにより精製された前記化合物は、フルオロポアの同定のため、化学分析に付された。
（Ａ）  約５ｍｌの精製画分をとり、そこへ、中性の塩化第２鉄を添加した。紫色の着色を観察した。このことは、フェノール性基が、前記化合物中に存在することを意味する。５ｍｌの精製画分に、ひとつまみの亜鉛末を添加し、そこへ、希ＨＣｌ（塩酸）を添加し、その溶液の脱色を観察した。このことは、キノノイド環の存在を意味する。
【０２４１】
５ｍｌの前記化合物精製画分に、メルカプト（marcapto）エタノールを添加した。前記化合物は、脱色しなかった。それは、強還元剤のみが、前記化合物を脱色することができ、キノノイド（quinoniod）環が立体的に保護されており、ケトエノール互変異性を与えることができ、キノン型の構造とフェノール性構造の両方を生じうるのは、フェノール性基のみであることを意味する。
【実施例１２】
【０２４２】
実施例１２：
前記化合物の物理的特徴：
純粋な水素フォームの前記化合物は、ｐＨ２．８を有する。塩フォームの前記化合物は、物理的および化学的性質が変化することなく、３００℃まで安定である。前記化合物は、水溶液中で、非常に希釈された形態で（５×１０-6濃度）、肉眼で、色は薄黄色であり、その濃縮溶液は、色は、赤褐色であった。
【実施例１３】
【０２４３】
実施例１３：
色素の安定性チェック：
前記色素は安定であり、室温で活性は残り、３００度セ氏までそれは変わらず、このことは、そのような処理の後、スペクトル特性の変質が起こらないことにより、証明された。前記化合物は、汚染または化学的崩壊なしに、約１年、その安定性を保持した。前記海洋色素は、光処理後、光分解が進行しなかった。そのため、前記海洋色素は、安定化剤を必要としない。
【実施例１４】
【０２４４】
実施例１４：
ゲル電気泳動による前記色素の検査電荷
色素サンプル（１０ｍｌ）を、０．５Ｘ  ＴＢＥで調製した１％アガロースゲルに充填した。そのゲルを、１時間の間６５ボルトで、流した。それを、そのゲルキャスティング系から除去し、肉眼およびＵＶ光透過機下で、観察した。前記色素を、正に荷電した電極に向かって動かし、それにより、色素自体は、負に帯電化合物であることが判明した。したがって、それは、正に荷電した電極に向かって引き付けられた。
【実施例１５】
【０２４５】
実施例１５：
バイオサーファクタント：
ｍｌ溶液毎に０．００１ｍｇ−０．０１ｍｇを振ることにより、前記化合物のバイオサーファクタント性質を評価し、起泡が見られた。
【実施例１６】
【０２４６】
実施例１６：
ＦＴ−ＩＲ分析：
前記化合物は、本質的に非常に吸湿性であるので、ＩＲスペクトルは、難しい仕事であった。カラムクロマトグラフィー後の前記化合物を、凍結乾燥機で乾燥し、臭化カリウムと混合し、ペレットを調製し、その後、ＦＴ−ＩＲ分析で用いた。ＩＲにおいて、１２１０−１１５０および１０６０−１０３０の範囲および６５０で生じる硫酸塩のシグナルが、見られ、このことは、硫黄が、Ｏ−ＳＯ2−型の結合で前記化合物中に存在することを意味する。ケイ酸塩について、１０９０−１０２０（１０６８で）の間で強い吸収帯が見られた。このことは、ケイ素が、−Ｓｉ−Ｏ−Ｓｉとして前記化合物中に存在することを意味する。ＣＨ3伸縮シグナルが、２９５０−２８５０の間で見られた。アミドシグナルが全く存在しないので、タンパク質ではないことは確実である。ヒドロキシ伸縮シグナルも強く、幅広いので、フェノール性基を意味している。
【実施例１７】
【０２４７】
実施例１７：
蛍光分光光度法による純粋な化合物の蛍光特性：
前記化合物（ゲルろ過後凍結乾燥された）を、水中に溶解させ（濃度０．００１ｇｍ／ｍｌ）、蛍光分光光度法に付した。
【０２４８】
それをまず、励起スキャニングに付し、前記化合物が、３６１ｎｍおよび５２３ｎｍの、これらの波長で、最大量に、励起されたことが、確認された。
【０２４９】
前記化合物（蛍光性色素である）が、２７０で励起されたとき、蛍光のピークは、５５０で観察された。
励起が３４０ｎｍで行われたとき、その蛍光ピークは４６０であった。
励起が３６１ｎｍで行われたとき、その蛍光ピークは４９０であった。
励起が４００ｎｍで行われたとき、その蛍光ピークは４７０であった。
前記化合物が５２３ｎｍで励起されたとき、前記発光は６００ｎｍで最大値であった。
【実施例１８】
【０２５０】
実施例１８：
純粋な色素のエピフルオレッセンス顕微鏡検査：
５×１０-8の希釈における前記色素のエピフルオレッセンス顕微鏡研究および、ＢＸ  ６０−オリンパス顕微鏡用の異なる蛍光フィルタキューブで励起されたときの、光の放射を記録し、公知の蛍光色素と色調を比較した。純粋な希釈色素をスライドに添加し、カバーグラスでカバーした。スクリーニングを、以下の波長範囲のオリンパス反射光のＷＵ、ＷＢおよびＷＧキューブにより、ＵＶ光および可視光スペクトルの励起を用いて、行った。
ＷＵキューブの波長範囲は、３３０ｎｍ−３８５ｎｍであった。
ＷＢキューブの波長範囲は、４５０ｎｍ−４８０ｎｍであった。
ＷＧキューブの波長範囲は、５１０ｎｍ−５５０ｎｍであった。
【０２５１】
異なる励起範囲での前記発光範囲が、判明した。ＷＵ３３０ｎｍ−３８５ｎｍ範囲での励起は、４６０ｎｍ−４９０ｎｍ範囲において蛍光を発することが観察された。４５０ｎｍ−４８０ｎｍのスペクトル範囲を有するＷＢフィルタでの励起は、５１０ｎｍ−５５０ｎｍ範囲における蛍光を発した。５１０ｎｍ−５５０ｎｍのスペクトル範囲を有するＷＧフィルタでの励起は、６１０ｎｍ−７００ｎｍ範囲における蛍光を発した。この結果は、「ストークスの法則」に従う。
【実施例１９】
【０２５２】
実施例１９：
細胞のエピフルオレッセンス顕微鏡検査：
実験室飼育した海洋動物の海水中卵細胞懸濁液を、スライドに載せ、これに、１μｌの５×１０-8色素を添加し、カバーグラスを置いた。スライドのスクリーニングを、エピフルオレッセンス顕微鏡下で行い、ＢＸ６０−オリンパス顕微鏡用の異なる蛍光フィルタキューブにより励起されたときの光の放射を記録し、公知蛍光色素で色調を比較した。スクリーニングを、オリンパス社によるＷＵ、ＷＢおよびＷＧキューブと呼ばれるＵＶおよび可視光スペクトルの透過光および蛍光性フィルタキューブの下、行った。細胞により放射された色に基づいた放射波長を行った。
【０２５３】
異なる励起範囲での前記発光範囲を、見出した。ＷＵ３３０ｎｍ−３８５ｎｍ範囲を有する励起で、細胞は、４６０ｎｍ−４９０ｎｍ範囲において蛍光を発することが確認された。
【０２５４】
４５０−４８０ｎｍ範囲を有するＷＢフィルタでの励起で、前記発光は、スペクトル範囲５７０−６１０ｎｍ範囲であった。
【０２５５】
スペクトル範囲５１０ｎｍ−５５０ｎｍを有するＷＧフィルタでの励起で、蛍光発光は、６１０ｎｍ−７００ｎｍの範囲であった。
【０２５６】
明るい領域下で、可視光の完全白範囲で透過光放射光を用い、細胞処方成分の密度に応じることによる細胞遺伝学的スライドのエピフルオレッセンス性顕微鏡スクリーニングにより、青みがかった灰色の色調に、位相差様効果を生じた。
【実施例２０】
【０２５７】
実施例２０：
異なる励起範囲下での色素の蛍光性色放射：
放射された前記色調の色を、記録した。前記励起スペクトル範囲および放射された蛍光色は、表５中に示した。動物の精製抽出物と、精製化合物（色素であり、細胞は前記色素で染色される）との間に、前記色素が、細胞懸濁液で励起されたとき、放射波長のシフトが認められた。これは、前記色素が細胞構成要素に結合したせいであろう。蛍光性プローブとしての有用性が明らかに示された。
【実施例２１】
【０２５８】
実施例２１
エピフルオレッセンス顕微鏡検査染料として用いられる色素での、スライドの顕微鏡写真
細胞なしおよび検体細胞有りでの、ＷＵ３３０ｎｍ−３８５ｎｍ範囲、ＷＢ４５０ｎｍ−４８０ｎｍ範囲、ＷＧ５１０ｎｍ−５５０ｎｍ範囲下および明るい領域での、スライドの範囲における放射蛍光の顕微鏡写真を、５０−６０秒の様々な露出時間で４００ＡＳＡスピードのコダックカラーフィルムで行った。同じものの、全てまたは一部を、白黒図に変換した。
【実施例２２】
【０２５９】
実施例２２
農薬効果
前記化合物は、昆虫に有毒であった。それは、蟻のような昆虫に毒性を示した。前記色素に浸したろ紙を、作業台上に放置した。次の日、多数の死んだ蟻が認められた。
【実施例２３】
【０２６０】
実施例２３
前記色素での細胞遺伝学的染色
異なる由来からの、氷酢酸およびメタノールで固定された組織を、スライド上にとり、前記色素溶液を予備処理なしに、そこに添加した。異なる部分の細胞が、色素溶液を異なって、取り入れることが観察された。細胞質、核および染色体は、異なる着色を示した。前記海洋色素は、染色体のタンパク質を染色するので、細胞の核型研究において、価値を高めた。
【実施例２４】
【０２６１】
実施例２４
零度以下の温度における前記化合物付色素の安定性：
その希釈フォーム５×１０-6における前記化合物を、ミクロファージチューブにとり、−２０度セ氏で維持し、ＵＶ光下で凍結状態で観察した。蛍光は、劣化なく、持続した。別の実験において、色素を液体窒素中で凍結させ、前記蛍光は、変化せず、残っていた。
【実施例２５】
【０２６２】
実施例２５：
動物治療薬：
前記抽出物を、イヌのダニ／ノミを殺すための動物治療薬として用いた。５×１０-8濃度の精製化合物付色素は、ダニおよびノミを、２０秒未満で殺した。
【実施例２６】
【０２６３】
実施例２６
抗菌テスト
海洋色素が、フェノール性化合物であり、フェノール性化合物は通常抗菌活性を有するので、抗菌アッセイを、この化合物で行い、阻止帯を認めた。大腸菌（野生型）培養株は、一晩中、マッコンキーのブロス５０ｍｌ中、コニカルフラスコ（１００ｍｌ）中で成長した。抗菌物質バイオアッセイ寒天培地を調製し、滅菌した。その後、５０度セ氏の温度にし、１ｍｌの大腸菌（野生株）培養株をそこへ添加した。その培養株を抗菌物質バイオアッセイ寒天培地と混合し、固化させた。１０ｍｇ／ｍｌのサンプルを調製し、ろ紙ディスク中に浸した。その後、それを大腸菌を接種した、前記抗菌物質バイオアッセイ寒天培地上に置いた。その後、それを、細菌培養器中で２４時間の間、３７℃で培養した。ろ紙ディスクの周りに、阻止帯が観察された。このことにより、前記色素は、大腸菌のような、グラム陰性生物に対して、抗菌活性を有することが照明された。
【０２６４】
市場に存在する蛍光体／蛍光色素／蛍光性色素に対する利点
１．  前記化合物は、色素で、非放射性であり、天然供給源由来の蛍光性色素であって、人工ではない。
２．  前記化合物は、ケイ素マトリックスを有するとして開示された最初の天然有機ケイ素化合物であって、ケイ酸は、前記化合物の必須部分になった。これにより、有機ケイ素化合物の関連する生理学的観点を研究するための天然生体内システムが提供され、そのシステムは、美容整形外科において広く用いられている。
３．  現在市販されている蛍光性色素の大部分は、低分子量である。分子プローブＩＮＣ．（Ｐｇ．１０９）は、低分子量蛍光性色素の限界を報告している。
【０２６５】
４．  前記蛍光性色素は、これら色素すべてに対して、利点を有する。これが、天然フォームで高分子量だからである。
５．  前記化合物の蛍光体部分は、低分子量である。従って、前記色素は、高分子量および低分子量の蛍光性色素の両方の可能性を有する。
６．  前記化合物は、負に帯電しており、従って、正に荷電したバイオポリマーの分子標識化について、有用である。
【０２６６】
７．  前記蛍光体部分は、中性荷電を有し、従って、全てのタイプの分子に結合する可能性を有する。
８．  前記化合物は、細胞構成要素に浸透性である。
９．  結合基の同定のための前記化合物のＨＰＬＣが、可能である。
【０２６７】
１０．  前記発光スペクトルは、蛍光性顕微鏡検査で用いられる普通の光フィルタに整合し、特別なフィルタを必要としない。
１１．  ＢＯＤＩＰＹ色素と異なり、前記色素は、アルゴンレーザー光のスペクトルに整合する、２つの発光スペクトル範囲を有する。
１２．  色素は、より長い波長、狭い帯域幅および小さいストークスシフトを有する。
【０２６８】
１３．  色素のスペクトルは、溶媒極性とｐＨに鈍感である。
１４．  前記色素は、光安定性がより大きい。
１５．  色素は、より長い波長を有し、可視スペクトルにおいて、１以上の発光範囲を有する。
【０２６９】
１６．  色素の合成には、スペーサの添加が必要であり、一方、前記本色素は、その構造中にスペーサが内在する。
１７．  前記色素は、水混和性であり、化粧用および薬物組成物用の混合容易な処方成分でありうる。
１８．  現在の単一フォームの、この蛍光性化合物付色素は、現在ビトプラン（Bitplane）により市場で売られている１２３の蛍光体／蛍光色素（それぞれのリストとして、http://www. bitplane.ch/public/support/standard/Fluorochrome.htm）および分子プローブ社（Molecular Probes, INC.）の約９６の蛍光体（Richard P. Haughlandによる、蛍光性プローブおよび研究薬品のハンドブック中、６１２−６１４頁）の、励起および放射のスペクトル範囲をカバーする。
【０２７０】
１９．  前記色素は、すべて、ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬおよびフルオレセインベースの色素の良好な質を有するが、分子プローブ社による、蛍光性プローブおよび研究薬品のハンドブック（１４、１５、１０９頁）中に示された、それらの欠点を有さない。
２０．  前記色素は、フルオレセインおよびフルオレセインベースの色素のような、高い吸光率を有し、それが、市場において、顕著な緑色蛍光体である。
２１．  前記本色素の水溶解性は、フルオレセインの溶解性より高い。
【０２７１】
２２．  前記色素は、高く鋭利なピークを有する、Ｘ線、２７０−７４５ｎｍのＵＶおよび可視域の右のスペクトルを包含する、８つの励起（ｅｘ）／８つの発光（ｅｍ）ｎｍ範囲を含み、一方、フルオレセインは、〜４９４ｅｘ／ｅｍ  ５２０ｎｍの励起および放射範囲のみを有し、そのピークは幅広い。
２３．  〜４５０−４８０ｎｍ範囲の蛍光性フィルタキューブ中の前記色素の励起および発光スペクトルは、フルオレセインのような、アルゴンイオンレーザー（〜４８８ｎｍ）のスペクトル線と整合し、両方の場合、放射色は、緑色蛍光であり、これにより、前記本色素を、フルオレセインに匹敵する競争者にし、これは、共焦点レーザースキャニング顕微鏡検査およびフローサイトメトリー適用のための、現在顕著な緑色蛍光体である。
【０２７２】
２４．  〜４５０−４８０ｎｍの範囲の蛍光性フィルタキューブにおける前記色素の励起および発光スペクトルは、フルオレセインのように、アルゴンイオンレーザー（〜４８８ｎｍ）のスペクトル線に整合するが、前記細胞結合体は、多色適用において有用な色素を形成する明るい黄色蛍光を発する。
２５．  前記色素は、光退色を示さず、従って、フルオレセインの強みを越えた利点を有する。
２６．  前記本色素は、現在市場で入手可能な蛍光性色素とは異なり、ｐＨに無反応性である。これにより、蛍光の様々な適用のための組成物を形成することができると同時に、利益になる。
【０２７３】
２７．  前記色素は、消光に抵抗性である。前記蛍光強度は、タンパク質への結合の後、色素の希釈および濃度にかかわらず増加する。
２８．  蛍光発光スペクトルは、幅広くなく、狭いスペクトル帯域幅だが、幅広い範囲の発光スペクトルを有する。前記ピークは、鋭いが、多色適用において、他の色素を超えた利点を有するであろう。
２９．  色素は、蛍光性現場ハイブリッド形成（Ｆ．Ｉ．Ｓ．Ｈ．）において、適用のための分子プローブの標識化のために用いることができる。
【０２７４】
３０．  高分子量および低分子量を有する前記色素は、様々な適用に望ましい。しかし、現在入手可能な色素の大部分は、低分子量色素である。我々の色素は、高分子量色素である。また、前記化合物の一部は、蛍光体であり、低分子量色素置換が必要なとき、有用になるであろう。
３１．  前記色素は、顕微鏡の位相差付属品の余分の費用なく、かつ検体の固着および保存の長いプロトコルなしに、特に、生体サンプルの現場での特性チェックに、位相差効果を与える、迅速な顕微鏡染料として用いることができる。
３２．  室温でのより長い持続時間、非分解性であり、輸出の際、冷却を必要としない。現在市場で市販されている蛍光性色素は、−２０度セ氏に等しい温度で、冷却下に、輸出されている。
【０２７５】
３３．天然光に対して、より長い持続時間、非分解性であり、保管に暗さを必要としない。
３４．  海洋のクラゲ由来の緑色蛍光性タンパク質（ＧＦＰ）と異なり、本化合物付色素は、レポーター遺伝子ではない。その蛍光発光結果は直接的である。前記色素は、純粋なフォームおよび細胞との結合フォームにおいて、Ｘ線、ＵＶおよび可視光スペクトルの８つの異なる蛍光性励起波長で、８つの蛍光性色の色調を発する。
３５．  高度に水溶性である前記色素は、水溶性蛍光性色素が必要な、組成物において、容易に混合される。前記色素は、エタノール、メタノールおよびアセトンのような有機溶媒において、不溶性である。
【０２７６】
３６．  前記色素は、負に帯電しており、正荷電を有する、すべての細胞構成要素と結合することができる。
３７．  前記色素は、２．８のｐＨを有し、それらのスペクトル放射は、異なるｐＨ範囲、すなわち、ｐＨ２．８−８．０で、影響されない。
３８．  前記色素は、本質的に非タンパク質様であり、天然条件下で、非分解性である。
【０２７７】
３９．  前記色素は、バイオサーファクタントの性質を有し、それにより、石鹸および洗面用品組成物において、有用になる。
４０．  前記色素は、抗菌特質を有する。
４１．  前記色素は、１：２００００００倍の希釈範囲でさえ、これらの蛍光色を発する。前記抽出物の蛍光は、少なくとも１年後でさえ、室温で持続される。
【０２７８】
４２．  励起の異なる波長における前記色素の多色放射は、既に市場にある蛍光色素顕微鏡染料に匹敵する。
４３．  前記本色素の青色着色蛍光は、同じ波長励起でＤＡＰＩ蛍光色素による同じ色の前記発光に匹敵し、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化キットの構成成分として用いられる。
４４．  前記本色素の青色着色蛍光は、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、ヘキスト３３２５８による色の発光にも匹敵する。
【０２７９】
４５．  前記本色素の青色着色蛍光は、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、同じ波長励起でのヘキスト３３３４２蛍光色素による色の前記発光にも匹敵する。
４６．  可視域における前記色素の橙色着色蛍光は、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられるアクリジン橙色の同じ着色放射に匹敵する。
４７．  可視域における前記色素の黄色着色蛍光は、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、オーラミンの同じ着色放射に匹敵する。
【０２８０】
４８．  可視域における前記色素の黄色着色蛍光は、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、ＦＩＴＣの同じ着色放射に匹敵する。
４９．  前記橙色着色蛍光性放射は、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、プロピジウムアイオダイド蛍光色素の橙色蛍光色に匹敵する。
５０．  前記橙色着色蛍光性放射は、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、ローダミン蛍光色素の前記橙色蛍光色に匹敵する。
【０２８１】
５１．  前記橙色着色蛍光性放射は、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、ＴＲＩＴＣ蛍光色素の前記橙色蛍光色に匹敵する。
５２．  前記本色素の青色着色蛍光は、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられるヘキスト３３２５８の色の前記発光にも匹敵する。
５３．  前記本色素の青色着色蛍光は、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる同じ波長励起での、ヘキスト３３３４２による色の前記発光にも匹敵する。
【０２８２】
５４．  同じ目的のために用いられる人工の市販色素とは異なり、前記本色素は、室温で安定であり、長い貯蔵寿命を有する。前記色素の分子非放射性キットは、室温で輸出することができる。
５５．  前記単一色素は、現在市場に出ている、少なくとも１２３の異なる蛍光色素（ＤＡＰＩ、ヘキスト３３２５８、ヘキスト３３３４２、ＦＩＴＣ、アクリジン橙色、オーラミン、ローダミン、ＴＲＩＴＣおよびプロピジウムアイオダイド等）の特徴を有する。
５６．  本多重蛍光性色素は、フィコビリタンパク質が用いられている適用すべてにおいて、現在用いることができ、それらとは異なり、前記色素は、冷凍により蛍光の消失が進行しない。
【０２８３】
５７．  前記化合物および多重蛍光性色素により、超純水中（５Ｘ１０-6濃度）、１：  ２００００００倍の希釈においてさえ、８つの波長範囲のＸ線、ＵＶ光線および可視スペクトル範囲において励起されたとき、８つの色の蛍光が生じる。
５８．  前記化合物および多重蛍光性色素により、顕微鏡の通常光の下、超純水中（５×１０-8濃度）、１：２００００００００倍の希釈においてさえ、８つの波長範囲のＸ線、ＵＶ光線および可視スペクトル範囲において励起されたとき、８つの色の蛍光を生じる。灰色の色調により、前記位相差効果を生じ、前記効果が細胞質遺伝子的、細胞学的および組織化学的スライドの迅速なスクリーニングにおいて有用であり、前記色調が、顕微鏡の位相差付属の構成成分に関する余分な費用を省く。前記蛍光色放射は、蛍光のストークスの法則に従う。
５９．  前記化合物および我々の多重蛍光性色素は、高分子量および低分子量の両方の蛍光性色素の可能性を有する。
【０２８４】
６０．  蛍光（flyuorescence）の顕微鏡写真を、現在市場で入手が容易なコダック４００フィルムで行うことができ、新しいフィルムへの依存性は必要ない。
６１．  検体が存在しないが、色素のみが存在するバックグラウンドにおいて、全ての蛍光下で見られる細胞遺伝学的スライドにより、細胞の対比染色効果を生じる。
６２．  前記色素は、蛍光性色を示す、ポリ塩化ビニルフィルムの調製に用いることができる。また、様々な塗料、インクおよび織物において、蛍光性色において用いることもできる。
【０２８５】
６３．  前記色素は、漂白用蛍光性色素および増白ポリマーの組成物において、用いることができる。前記色素は、全スペクトル蛍光性色素で、漏れ検出において、用いることができる。また、自動式化学的計測システムにおいても、用いることができる。また、崩壊した航空機、救命ボートおよび装備、例えばロケットの位置を印をつけるためにも用いることができる。さらに、海底プローブにおいて、用いることができる。前記色素は、皮膚癌の光化学療法において、用いることができる。
６４．  前記色素は、化粧用クリーム剤およびローション剤の色素体日焼け止め構成成分として用いることができる。
【０２８６】
６５．  前記色素の水混和性特性により、加湿剤における混和性を容易にできる。それは、分子診断用の蛍光性現場ハイブリッド形成適用キット構成成分として、用いることができる。それは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質および酵素、免疫蛍光性検出、ＤＩＧ−標識オリゴヌクレオチドプローブおよび抗ＤＩＧ  Ｆａｂ−フラグメントの対比染色、フローサイトメトリーにおける単独および多重の細胞定量的蛍光、エピフルオレッセンス顕微鏡検査用の蛍光染色の標識化のための、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分としても、用いることができる。
６６．  前記色素は、健康食品産業、化粧品産業、医薬品産業および化学産業における生物汚染の迅速な検査のため、実験室培養における生物汚染物質の迅速な評価のため、領域条件下での生物汚染因子の迅速な検査のため、用いることができる。それは、また、コリンエステラーゼの拮抗阻害剤でもある。
【０２８７】
６７．  前記色素は、抗菌組成物において用いることができる。前記色素は、洗面用品組成物におけるバイオサーファクタントとして、用いることができる。
６８．  前記色素は、８つの異なる波長で８つの蛍光と、透過光下の位相差効果とを得るための、超純水中１：２００００００の比の、海洋色素の天然着色剤Ａ生理活性組成物において、用いることができる。
６９．  結合剤としての水での１：２００００００００倍希釈の比において、前記色素の生理活性組成物により、８つの異なる波長で８つの蛍光を生じる。
【０２８８】
【表１】
2005538032.tif 000003
【０２８９】
【表２】
2005538032.tif 000004
【０２９０】
【表３】
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【０２９１】
【表４】
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【図面の簡単な説明】
【０２９２】
【図１】図１は、前記化合物／多重蛍光性色素の抽出および精製のための、フローチャートを示す。
【図２】図２は、前記化合物／多重蛍光性色素の更なる精製と、特徴付けのためのフローチャートを示す。
【図３】図３は、ＤＥＡＥセルロースクロマトグラフィーによる前記化合物の分離を示す。図３ｂは、純粋な化合物の逆相クロマトグラフィー、図３ｃは、純粋な化合物のスキャニング。
【図４】図４は、純粋な化合物のＩＲ分析。
【図５】図５は、２７０ｎｍで励起された蛍光分光光度法。
【図６】図６は、３４０ｎｍで励起された蛍光分光光度法。
【図７】図７は、３６１ｎｍで励起された蛍光分光光度法。
【図８】図８は、４００ｎｍで励起された蛍光分光光度法。
【図９】図９は、５２３ｎｍで励起された蛍光分光光度法。
【図１０】図１０は、３３０−３８５ｎｍの励起範囲を有するＷＵキューブによる、エピフルオレッセンス顕微鏡青色蛍光性放射の白黒図。
【図１１】図１１は、３３０−３８５ｎｍの励起範囲を有するＷＵキューブによる、エピフルオレッセンス顕微鏡青色蛍光性放射の着色写真。前記色素が、バックグラウンドとして、細胞なしの場合、蛍光の色が、インディゴの色調を有し、一方、色素と結合した細胞の蛍光が、青色である。
【図１２】図１２は、４５０−４８０ｎｍの励起範囲を有するＷＢキューブによる、エピフルオレッセンス顕微鏡緑色＆黄色蛍光性放射の白黒図である。
【図１３】図１３は、４５０−４８０ｎｍの励起範囲を有するＷＢキューブによる、エピフルオレッセンス顕微鏡青色蛍光性放射の着色写真である。前記色素がバックグラウンドとして、細胞なしの場合、蛍光の色が緑色であり、一方、色素と結合した細胞の蛍光が、黄色である。
【図１４】図１４は、５００−５５０ｎｍの励起範囲を有するＷＧキューブによる、エピフルオレッセンス顕微鏡赤色＆橙色蛍光性放射の白黒図である。
【図１５】図１５は、５００−５５０ｎｍの励起範囲を有するＷＧキューブによる、エピフルオレッセンス顕微鏡赤色蛍光性放射の着色写真である。
【図１６】図１６は、位相差効果を示す、１００Ｘでの透過光細胞下のエピフルオレッセンス顕微鏡の白黒図である
【図１７】図１７は、対比染色および位相差効果を生じる、青みがかった灰色の色調の色素と、灰色の色調の細胞と、その構成要素とを示す、１００Ｘでの透過光細胞下でのエピフルオレッセンス顕微鏡の着色写真。
【図１８】図１８は、純粋な化合物フェノール性フォームの化学構造。
【図１９】図１９は、純粋な化合物キノノイドフォームの化学構造。
【図２０】図２０は、前記蛍光体の構造。
【図１】
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【図２】
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【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図３ｃ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【手続補正書】
【提出日】平成15年9月29日(2003.9.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
実験式Ｃ22Ｈ48Ｏ66Ｎ2Ｓ10Ｓｉ7を有し、分子量１９１５を有し、かつ添付の図面の図１８または１９で表される構造式を有する新規な多重蛍光性色素化合物。
【請求項２】
図２０に示す構造を有する、分子式Ｃ10Ｈ16Ｎ2Ｏの蛍光体を含む請求項１に記載の新規化合物。
【請求項３】
前記蛍光体の学名が、１−ヒドロキシ，２，５−ジ−メチルアミノベンゼン（ＨＤＡＢ）であり、それが１８０の分子量を有する請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
以下の特徴を有する請求項１に記載の新規化合物：
ｉ．  元素分析による純粋な化合物の有機組成が、炭素８．３５７２、水素１．７３９％、窒素０．９４４９％および硫黄９．４５７％を示し；
ｉｉ．  前記化合物における前記元素についての原子比が、微量分析で示された炭素：水素：窒素：硫黄の比＝２２：４８：２：１０であり；
ｉｉｉ．  前記化合物の無機組成物を原子吸光測光に付すことにより、二酸化ケイ素の割合１２．５８％およびケイ酸を推定し；
ｉｖ．  ケイ酸が、前記化合物の必須部分であり；
ｖ．  ケイ素の原子比が、２２の炭素原子ごとについて７であり；
ｖｉ．  イオン交換クロマトグラフィーによる更なる化合物の精製および、２９１と４５１での吸光度のピークからピークへの比が安定であることが確認され；
ｖｉｉ．  化合物が、糖単位を含み；
ｖｉｉｉ．  そのカラムから純粋な色素を溶離する、逆相Ｃ１８タイプの分析カラムと、０から５０％のアセトニトリルの勾配による前記化合物の純粋なイオン形態のＨＰＬＣにより、保持時間１．９０９の値および非常に鋭利なピークを生じ；
ｉｘ．  １２１０−１１５０および１０６０−１０３０および６５０の範囲に生じた硫酸塩のＦＴ−ＩＲシグナルが、硫黄が、Ｏ−ＳＯ2−型の結合で前記化合物中に存在することを意味し；
ｘ．  １０９０−１０２０（１０６８に）に見られるケイ酸塩の強い吸収帯が、ケイ素が、−Ｓｉ−Ｏ−Ｓｉとして前記化合物中に存在することを意味し；ＣＨ3伸縮シグナルが、２９５０−２８５０に見られ；アミドシグナルが存在せず、前記化合物がタンパク質ではなく；
ｘｉ．  ヒドロキシ伸縮シグナルが強く、かつ幅広であり、それは、フェノール性基を意味し；
ｘｉｉ．  前記化合物が、前記化合物の蛍光体部分にフェノール性基を含有し；
ｘｉｉｉ．  前記化合物が、立体的に保護されたキノノイド環も含み；
ｘｉｖ．  蛍光体部分が、硫酸化糖部分によりＳｉ−Ｏ基と結合され；
ｘｖ．  前記化合物のフェノール性基のみにより、ケトエノール互変異性を生じ、従って、キノン型構造およびフェノール性構造の両方を生じ；かつ
ｘｖｉ．  前記化合物が、多重蛍光性色素として用いられる。
【請求項５】
前記化合物が、以下の特徴を有する請求項１に記載の化合物：
ｉ．  還元剤により脱色されず、
ｉｉ．  前記化合物が、合成の化合物ではなく、
ｉｉｉ．  前記色素の粗抽出物は、その色が黄色がかった緑色であり；
ｉｖ．  精製した化合物の液状色素が、緑色、黄色および赤色の色調で茶色がかっており、
ｖ．  日光の中肉眼で見ると、精製した乾燥化合物は、赤褐色着色粉末であり、
ｖｉ．  真空管ライトの下で、いくらかの緑色色調が発光され、
ｖｉｉ．  水銀ライトの下で、青みがかった緑色を生じ、
ｖｉｉｉ．  Ｘ線の下で、色は緑色で蛍光を発し、
ｉｘ．  前記化合物が、本質的に非結晶であり、
ｘ．  前記化合物が、水溶性で、エタノール、メタノールおよびアセトンを含む有機溶媒に不溶性であり、
ｘｉ．  前記化合物が、負に帯電し、
ｘｉｉ．  前記化合物が、２．８のｐＨを有し、
ｘｉｉｉ．  前記化合物が、キノノイド環を含み、
ｘｉｖ．  前記化合物が、本質的に非タンパク質様であり、
ｘｖ．  前記化合物が、還元糖を有し、
ｘｖｉ．  前記化合物が、バイオサーファクタントとして働き、
ｘｖｉｉ．  前記化合物が、抗菌特性を有し、抗菌アッセイを行ったとき、阻止帯を示し、
ｘｖｉｉｉ．  分光光度計で、Ｘ−線、ＵＶおよび可視スペクトル範囲の異なる波長で励起させたとき、前記化合物が蛍光を発光し、
ｘｉｘ．  前記化合物について、ＵＶ、可視分光が２５０ｎｍ−７００ｎｍであり、ピークが、２９１ｎｍおよび４５１ｎｍ波長に示され、
ｘｘ．  蛍光性分光放射スキャンを、前記化合物を２７０ｎｍで励起することにより行い、蛍光のピークが５５０ｎｍに生じ、
ｘｘｉ．  前記化合物を３４０ｎｍで励起したとき、蛍光のピークが４６０ｎｍに生じ、
ｘｘｉｉ．  励起波長が３６１ｎｍに固定されたとき、蛍光発光は４９０ｎｍで最大量になり、
ｘｘｉｉｉ．  励起波長が４００ｎｍに固定されたとき、蛍光発光は４７０ｎｍで最大量になり、
ｘｘｉｖ．  前記化合物が５２３ｎｍで励起されたとき、前記発光は、６００ｎｍで最大になり、
ｘｘｖ．  ２６０ｎｍ−２８０ｎｍ範囲のＵＶ電球の下で、１：２００００００倍希釈の濃度の、すなわち５×１０-6濃度の化合物における、色素の物理的検査で、青みがかった緑色の蛍光を発し、
ｘｘｖｉ．  異なる蛍光性キューブの下、少なくとも１：２００００００００倍希釈の濃度の、すなわち５×１０-8濃度の化合物における、色素のエピフルオレッセンス顕微鏡検査で、蛍光を発し、
ｘｘｖｉｉ．  エピフルオレッセンス顕微鏡の蛍光性キューブのＵＶおよび可視域の４つの異なる波長で、前記化合物は８つの異なる色に着色された蛍光を発し、
ｘｘｖｉｉｉ．  純粋な化合物が、紫外線キューブＷＵ−３３０ｎｍ−３８５ｎｍの励起範囲下で励起されたとき、インディゴ色の色調を有する蛍光青の発光が、３８０ｎｍ−４００ｎｍ範囲のＵＶＡにおいて生じ、
ｘｘｉｘ．  純粋な化合物が、４５０ｎｍ−４８０ｎｍの励起範囲のＷＢキューブ下で励起されたとき、蛍光緑色発光が、５００ｎｍ−５７０ｎｍの範囲で生じ、
ｘｘｘ．  純粋な化合物が、５１０ｎｍ−５５０ｎｍの励起範囲のＷＧキューブの下、励起されたとき、橙色の色調を有する蛍光赤色の発光が、５７０ｎｍ−６５０ｎｍの範囲で生じ、
ｘｘｘｉ．  １０Ｘ、４０Ｘ、１００Ｘの対物レンズ下で見たとき、前記化合物が、エピフルオレッセンス顕微鏡の通常の透過光電球下で、青みがかった灰色の色調を発し、
ｘｘｘｉｉ．  異なる蛍光性キューブの下で、少なくとも１：２００００００００倍希釈の濃度の、すなわち５×１０-8の濃度の化合物の、蛍光性化合物と結合した海洋動物の卵細胞のエピフルオレッセンス顕微鏡試験により、純粋な化合物とは異なる色の蛍光を発し、
ｘｘｘｉｉｉ．  前記化合物でラベルされた細胞は、エピフルオレッセンス顕微鏡の蛍光性キューブおよび透過光電球のＵＶおよび可視域の４つの異なる波長で、４つの異なる色に着色された蛍光を発し、
ｘｘｘｉｖ．  エピフルオレッセンス顕微鏡のＷＵ−蛍光キューブにより、３３０ｎｍ−３８５ｎｍの範囲で励起されたとき、前記化合物でラベルされた細胞は、青色の蛍光を発し、
ｘｘｘｖ．  ４５０ｎｍ−４８０ｎｍの励起範囲のＷＢキューブの下励起されたとき、前記化合物でラベルされた細胞は、明るい黄色蛍光を発し、
ｘｘｘｖｉ．  ５１０ｎｍ−５５０ｎｍの励起範囲のＷＧキューブの下励起されたとき、前記細胞は、赤色蛍光を発し、
ｘｘｘｖｉｉ．  室温で１年後でさえ、前記化合物の前記蛍光色は持続し、
ｘｘｘｖｉｉｉ．  前記化合物の前記蛍光は、高度に光安定性であり、直接光への長期暴露により、劣化せず、
ｘｘｘｉｘ．  前記化合物は、光退色せず、
ｘｌ．  前記化合物は、蛍光顕微鏡下でスライドをスクリーニングしている間に消光せず；かつ
ｘｌｉ．  発光生物からの抽出物におけるように、分子が、活性化に必要なエネルギーの獲得に不可能な温度で、液体窒素中で凍結した後でさえ、零度以下の温度で凍結したとき、前記化合物の蛍光は、変化しない。
【請求項６】
前記化合物が、非放射性である請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
ケイ素マトリックスを有する最初の天然有機金属化合物である請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
前記化合物中のケイ酸の存在が、生きている生物の必須部分として、初めて同定された請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
前記化合物が、フェノール性硫酸化ケイ酸塩化多糖類（ＰＳＳＰ）である請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
前記化合物が、美容整形外科において、有機ケイ素化合物の関連する生理学的観点を研究するための天然生体内システムを提供する請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
前記化合物が、表３および表４に示すように、より長い波長、狭い帯域幅および小さいストークスシフトを含む請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
前記化合物の前記発光スペクトルが、溶媒極性およびｐＨに非感受性である請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
前記化合物が、より高い光安定性を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
前記化合物が、より長い波長を有し、可視スペクトルにおいて、１以上の発光範囲を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
スペーサが、天然化合物の必須部分を形成する請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
前記化合物が、高い水混和性を有し、化粧用組成物および薬物組成物に必要とされる、適当な添加物を、容易に混合するのを促進する請求項１に記載の化合物。
【請求項１７】
前記化合物が、高く鋭利なピークを有する、Ｘ線、２７０−７４５ｎｍのＵＶおよび可視域の右のスペクトルを包含する、８つの励起（ｅｘ）／８つの発光（ｅｍ）ｎｍ範囲を含む請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】
アルゴンイオン・レーザー（〜４８８ｎｍ）のスペクトル線に整合する、〜４５０−４８０ｎｍの範囲の蛍光性フィルタキューブにおける前記色素の励起および発光スペクトルを有する多重蛍光性化合物である請求項１に記載の化合物。
【請求項１９】
フルオレセインのようなアルゴンイオン・レーザー（〜４８８ｎｍ）のスペクトル線に整合する、〜４５０−４８０ｎｍの範囲の蛍光性フィルタキューブにおける前記色素の励起および発光スペクトルを有する多重蛍光性色素であるが、前記細胞結合体が、多色適用において有用な色素を形成する明るい黄色蛍光を発する請求項１に記載の化合物。
【請求項２０】
前記化合物が、消光に抵抗性であり、色素の希釈および濃度にかかわらず、蛍光強度が、タンパク質に結合した後、増加する請求項１に記載の化合物。
【請求項２１】
前記化合物が、室温で安定で、長い貯蔵寿命を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項２２】
前記化合物の分子および放射性キットが、室温で輸出できる請求項１に記載の化合物。
【請求項２３】
蛍光顕微鏡検査下の前記化合物の蛍光性発光の顕微鏡写真が、他の特別なフィルム要件を有さず、４５−６０秒の範囲の露出時間を有し、コダック４００フィルムを用いて行われる請求項１に記載の化合物。
【請求項２４】
前記化合物が、検体が存在しない細胞遺伝学的スライド上で全ての蛍光下で、細胞および細胞構成成分の対比染色効果を生じる請求項１に記載の化合物。
【請求項２５】
５×１０-8−１０-6の濃度の超純水中で、１：２００００００倍に希釈されてさえ、前記化合物が、Ｘ線、ＵＶ光線および可視スペクトル範囲の８つの波長範囲で励起されたとき、８つの色の蛍光を発する請求項１に記載の化合物。
【請求項２６】
請求項１に記載の生理活性な、多重蛍光性色素化合物を有効量含む組成物であって、前記化合物が、以下の有用な適用のための、海洋ナマコのハマジナマコ（Holothuria scabra）から、適当な添加物と共に得られる組成物。
ｉ．  蛍光性色を示す可撓性ポリ塩化ビニルフィルムの調製；
ｉｉ．  塗料、インク、織物における蛍光性色の使用；
ｉｉｉ．  ポリマーの漂白および増白のための蛍光性色素の組成物；
ｉｖ．  全スペクトルの蛍光性色素での漏れ検出；
ｖ．  自動式化学的計測システムにおける使用；
ｖｉ．  破壊された輸送容器の位置に印をつけ、前記容器が、航空機、救命ボートおよびロケットからなる群から選択され；
ｖｉｉ．  海底プローブ；
ｖｉｉｉ．  ＵＶＡが、皮膚癌の光化学療法において用いられ；
ｉｘ．  化粧用クリーム剤およびローション剤の色素体日焼け止め構成成分；
ｘ．  前記色素の水混和性特性により、加湿剤における混和性を容易にし；
ｘｉ．  分子診断用の蛍光性現場ハイブリッド形成適用キット構成成分；
ｘｉｉ．  非放射性標識化および検出キットの構成成分、前記キットは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質および酵素の標識化のための、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学からなる群から選択された目的のために用いられ；
ｘｉｉｉ．  免疫蛍光性検出；
ｘｉｖ．  ＤＩＧ−標識オリゴヌクレオチドプローブおよび抗ＤＩＧ  Ｆａｂ−フラグメントの対比染色；
ｘｖ．  単独および多重のフローサイトメトリー適用；
ｘｖｉ．  エピフルオレッセンス顕微鏡検査用の蛍光染色；
ｘｖｉｉ．  健康食品産業、化粧品産業、医薬品産業、農薬産業および化学産業において、生物汚染の迅速な検査のため；
ｘｖｉｉｉ．  実験室培養における生物汚染物質の迅速な評価のため；
ｘｉｘ．  領域条件下での生物汚染因子の迅速な検査のため；
ｘｘ．  コリンエステラーゼの拮抗阻害剤；
ｘｘｉ．  抗菌組成物において；
ｘｘｉｉ．  洗面用品組成物におけるバイオサーファクタントとして；
ｘｘｉｉｉ．  天然着色剤；
ｘｘｉｖ．  ８つの異なる波長で８つの蛍光と、透過光下の位相差効果とを得るための、超純水中、１：２０００００００の比の前記色素の生理活性組成物；
ｘｘｖ．  零度以下の温度の範囲で実施されるべき様々な蛍光性適用のための色素；
ｘｘｖｉ．  新規蛍光性プローブ用色素の誘導体を作るための塩基として用いられるための化合物；
ｘｘｖｉｉ．  分子試薬用化合物；
ｘｘｖｉｉｉ．  分子適用のための結合体を形成するための化合物；および
ｘｘｉｘ．  透過光下で細胞の異なる生化学的構成要素のための、位相差と組織化学的対比染色効果とを得るため。
【請求項２７】
以下の工程を含むハマジナマコ（Holothuria scabra）ナマコから新規化合物および多重蛍光性色素を抽出する方法：
ａ．  干潮の間に海岸から動物を集め、分類学的同定および更なる使用のため、実験室中、海水含有ガラスタンク中に維持し；
ｂ．  ミリ−Ｑ水で前記動物を完全に洗浄し、閉じた瓶中、クロロホルム／メタノールで麻酔をかけ；
ｃ．凍結乾燥のため、外科用メスで削りおとすことにより、皮をむくことにより、動物の内臓および皮膚部分を除去し；
ｄ．  工程（ｃ）の凍結乾燥された皮膚を、必要量の超純水に取り、振盪機上で４時間保持し、次いでワットマン・ペーパー１および焼結ガラスろ過器でろ過し；
ｅ．  工程（ｄ）のろ液を蒸発させ、有機溶媒を用いて前記化合物を沈殿させ；
ｆ．  最小限の容量の水中に前記沈殿物を溶解させ、塩を除去するために有機溶媒で再沈殿させ；
ｇ．  残渣を集めるために遠心分離し、ろ液を廃棄し；
ｈ．  工程（ｇ）の残渣を乾燥し、乾燥粉末を得；
ｉ．  水中に工程（ｈ）の乾燥粉末を溶解させ、イオン交換カラムに付し；
ｊ．  水で工程（ｉ）のカラムを溶離し；
ｋ．  工程（ｉ）の水溶離画分を凍結乾燥し；
ｌ．  ＤＥＡＥセルロースカラム上に、工程（ｋ）の凍結乾燥された材料を付し、リン酸緩衝液で溶離し、
ｍ．  ＰＤ１０カラムを用いて、工程（ｌ）のリン酸緩衝液溶離フラクションを繰り返し脱塩し、および
ｎ．  図１８または１９により表される、式Ｃ22Ｈ48Ｏ66Ｎ2Ｓ10Ｓｉ7の所望の生理活性化合物を得る。
【請求項２８】
前記海洋生物ハマジナマコ（Holothuria scabra）が、間潮、浸水、浅いおよび深い水から得られ、通常、裂け目、割れ目、岩棚、沼、張り出し、岩の多いおよび砂地の生息地のような、影のある範囲において、豊富であり；明るい着色に鈍感で、外骨格および内骨格を有したり、有さなかったり、無柄の、固着性漂流者、遊泳生物、様々な泳ぐ力を有し、通常、習性で夜行性であり、活性な捕食をしやすく、発光および蛍光性色素あり、または無しで、Ｘ線、ＵＶＢ、ＵＶＡ、可視着色スペクトルおよび赤外スペクトルの全ての波長範囲に対して、手短な発光を生じる請求項２７に記載された方法。
【請求項２９】
前記化合物の実験式が、Ｃ22Ｈ48Ｏ66Ｎ2Ｓ10Ｓｉ7であり、分子量１９１５を有する請求項２７に記載された方法。
【請求項３０】
前記化合物が、蛍光体を含み、前記蛍光体が、実験式Ｃ10Ｈ16Ｎ2Ｏおよび１８０の分子量を有する請求項２７に記載された方法。
【請求項３１】
前記ＨＰＬＣ保持時間が、１．９０９分と確認された請求項２７に記載された方法。
【請求項３２】
前記化合物が、１：２００００００倍の比で水で希釈され、前記化合物が、８つの異なる波長で８色の蛍光を発する請求項２７に記載された方法。
【請求項３３】
前記化合物が、零度以下の温度から３００度セ氏の異なる温度範囲で安定である請求項２７に記載された方法。
【請求項３４】
ＦＴ−ＩＲ分析において前記化合物が、１２１０−１１５０および１０６０−１０３０の範囲および６５０で生じる硫酸塩のシグナルを示し、それが、硫黄が、Ｏ−ＳＯ2−型の結合で前記化合物中に存在することを意味する請求項２７に記載された方法。
【請求項３５】
ＦＴ−ＩＲ分析において前記化合物が、１０９０−１０２０（１０６８で）で、ケイ酸塩について強い吸収帯を示したことが、−Ｓｉ−Ｏ−Ｓｉ−結合の存在を確認する請求項２７に記載された方法。
【請求項３６】
さまざまな産業、生物学上および他の適用において、物質および／または構成成分を殺す方法であって、前記方法は、必要量の請求項１の多重蛍光性化合物を、前記物質および／または構成成分に適用することまたは添加することを含む方法。
【請求項３７】
現場でのハイブリッド形成（Ｆ．Ｉ．Ｓ．Ｈ．）における蛍光性分子プローブの標識化のための請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記色素の青色着色蛍光が、同じ波長励起でＤＡＰＩ蛍光色素による同じ色の前記発光に匹敵し、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化キットの構成成分として用いられる請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
可視域における前記色素の黄色着色蛍光が、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、オーラミンの同じ着色放射に匹敵する請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
可視域における前記色素の黄色着色蛍光が、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、ＦＩＴＣの同じ着色放射に匹敵する請求項３６に記載の方法。
【請求項４１】
前記橙色着色蛍光性放射が、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、プロピジウムアイオダイド蛍光色素の橙色蛍光色に匹敵する請求項３６に記載の方法。
【請求項４２】
前記橙色着色蛍光性放射が、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、ローダミン蛍光色素の前記橙色蛍光色に匹敵する請求項３６に記載の方法。
【請求項４３】
前記橙色着色蛍光性放射が、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、ＴＲＩＴＣ蛍光色素の前記橙色蛍光色に匹敵する請求項３６に記載の方法。
【請求項４４】
前記本色素が、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、ヘキスト３３２５８による前記発光の色にも匹敵する請求項３６に記載の方法。
【請求項４５】
前記本色素が、生化学、細胞生物学、免疫化学および分子生物学の非放射性標識化および検出キットの構成成分として用いられる、同じ波長励起で、ヘキスト３３３４２蛍光色素による前記発光の色にも匹敵する請求項３６に記載の方法。
【請求項４６】
前記化合物が、現在、フィコビリタンパク質が用いられている適用すべてにおいて、用いることができ、それらとは異なり、前記色素が、冷凍により蛍光の消失が進行しない請求項３６に記載の方法。
【請求項４７】
１０Ｘ対物レンズ下で蛍光性顕微鏡の明るい視野で見るとき、青みがかった灰色の色調が、位相差効果を生じ、前記位相差効果が、細胞質遺伝子的、細胞学的および組織化学的スライドの迅速なスクリーニングにおいて有用であり、前記色調が、顕微鏡の余分の位相差付属の構成成分に関する費用を省く請求項３６に記載の方法。
【請求項４８】
前記化合物、通常の透過光顕微鏡の１００×油浸漬対物レンズの下で、卵黄、核質および活性に分裂している分割細胞のクロマチンのタンパク質が、前者には、茶色がかった黄色、後者には黄色、そして最後の細胞構成成分には、暗青色の色調で、染色の異なる色を示し、それは、効果の迅速なバイオアッセイの効果において有用であり、細胞の様々な組織化学的構成成分について見出される請求項３６に記載の方法。
【国際調査報告】
2005538032.tif 000030
2005538032.tif 000031
2005538032.tif 000032