(57)【要約】神経毒を患者に経皮投与するための医薬組成物は、ボツリヌス毒素などの神経毒と、患者の皮膚からの神経毒吸収を容易にする、神経毒に伴う生物活性を損なわない促進剤とを含む。医薬組成物は患者に局所適用し、経皮パッチとして供してもよい。【特許請求の範囲】
【請求項１】
安定化されたボツリヌス毒素と、ヒト患者の皮膚の透過性を高めることによってその患者へのボツリヌス毒素の経皮送達を容易にするための少なくとも1つの促進剤とを含む医薬組成物。
【請求項２】
ボツリヌス毒素がA型、B型、C1型、D型、E型、F型およびG型ボツリヌス毒素からなる群より選択される請求項1に記載の組成物。
【請求項３】
ボツリヌス毒素がA型ボツリヌス毒素である請求項1に記載の組成物。
【請求項４】
ボツリヌス毒素が精製されたボツリヌス毒素である請求項1に記載の組成物。
【請求項５】
約1単位〜約20,000単位のボツリヌス毒素を含んでいる請求項1に記載の組成物。
【請求項６】
1ヶ月〜5年間持続する処置効果が得られる量のボツリヌス毒素を含んでいる請求項1に記載の組成物。
【請求項７】
促進剤がアルコールである請求項1に記載の組成物。
【請求項８】
アルコールがポリアルコールである請求項7に記載の組成物。
【請求項９】
促進剤がトランスファーソームを含む請求項1に記載の組成物。
【請求項１０】
複数の促進剤を含んでいる請求項1に記載の組成物。
【請求項１１】
経皮パッチ中の医薬組成物であって、
ボツリヌス毒素が経皮パッチに供給された促進剤と相互作用すると、血管には顕著な量で浸透することなくヒト患者の皮膚を透過して、ある分子の細胞からのエキソサイトーシスに関係する障害に対して処置効果をもたらす安定化されたボツリヌス毒素、
を含んでいる医薬組成物。
【請求項１２】
患者の皮膚に経皮パッチを適用する前に、ボツリヌス毒素が経皮パッチに乾燥状態で供給される請求項11に記載の組成物。
【請求項１３】
ボツリヌス毒素がA型ボツリヌス毒素である請求項11に記載の組成物。
【請求項１４】
経皮パッチを患者の皮膚に適用した後で、ボツリヌス毒素が促進剤と混合される請求項11に記載の組成物。
【請求項１５】
ボツリヌス毒素と、経皮パッチを患者の皮膚に適用する前に患者の皮膚に適用する促進剤とが混ざる請求項14に記載の組成物。
【請求項１６】
安定化されたボツリヌス毒素と、生物活性型のボツリヌス毒素をヒト患者の循環系には投与することなくその患者の皮下標的部位に経皮投与することを容易にする促進剤とを含む医薬組成物、および
患者の皮膚に経皮パッチを取り外しできるように固定するために経皮パッチの片面に配置された接着剤、
を含む経皮パッチ。
【請求項１７】
接着剤が、医薬組成物を含有する貯蔵部の周りに配置される請求項16に記載の経皮パッチ。
【請求項１８】
さらに、パッチの皮膚適用面から伸びる複数の針であって、血管を断裂させることなく皮膚の角質層に突き出すようにパッチから伸びている針を含んでいる請求項16に記載の経皮パッチ。
【請求項１９】
パッチに加えられる圧力により、ボツリヌス毒素が針を通って角質層の下に導かれるように、ボツリヌス毒素がパッチの貯蔵部に供給される請求項18に記載の経皮パッチ。
【請求項２０】
ボツリヌス毒素が乾燥状態で複数の凹部に供給され、各凹部は液体で溶解しうる膜で覆われており、凹部を覆う膜が溶解すると促進剤がボツリヌス毒素と混ざるのでボツリヌス毒素の吸収が促進される請求項16に記載の経皮パッチ。
【請求項２１】
ボツリヌス毒素がA型ボツリヌス毒素である請求項16に記載の経皮パッチ。
【請求項２２】
患者の皮下構造における神経伝達物質放出を減少させる方法であって、
（a）角質層の不透過性を低下させるために患者の皮膚の角質層を非化学的に破壊するステップと、
（b）患者の皮膚のうち、ステップ（a）で角質層が破壊されている領域に、ボツリヌス毒素を適用するステップ、
とを含む方法。
【請求項２３】
角質層を、角質層の研磨的除去によって破壊する請求項22に記載の方法。
【請求項２４】
患者の皮膚に接着性物質を適用し、そこに適用した接着性物質を除去することによって角質層を破壊する請求項22に記載の方法。
【請求項２５】
周波数20kHz〜10MHz未満の超音波を、患者の皮膚を永久的に損傷しない強度で適用することによって角質層を破壊する請求項22に記載の方法。
【請求項２６】
患者の皮膚上の第1点から患者の皮膚の第2点に向かって電流を流すことによって角質層を破壊する請求項22に記載の方法。
【請求項２７】
角質層に複数の孔を形成して皮下構造へのボツリヌス毒素の通過を促進するように電流を流す請求項26に記載の方法。
【請求項２８】
ボツリヌス毒素をA型、B型、C型、D型、E型、F型およびG型からなるボツリヌス毒素の群より選択する請求項22に記載の方法。
【請求項２９】
ボツリヌス毒素を、皮膚を通したボツリヌス毒素の送達を促進するための促進剤を含む医薬組成物として適用する請求項22に記載の方法。
【請求項３０】
ボツリヌス毒素をトランスファーソームに組み込む請求項22に記載の方法。
【請求項３１】
痙性筋が引き起こす患者の痛みを軽減する方法であって、
（a）周波数約10kHz〜1MHzの超音波を、当該痙性筋の上にある患者の皮膚に適用するステップと、
（b）ステップ（a）で超音波を受けた患者の皮膚にボツリヌス毒素を適用するステップ、
とを含む方法。
【請求項３２】
さらに、超音波を受けた患者皮膚の角質層の一部を研磨的に除去するステップを含む請求項31に記載の方法。
【請求項３３】
ボツリヌス毒素がA型ボツリヌス毒素である請求項31に記載の方法。
【請求項３４】
患者の皮膚のボツリヌス毒素透過を促進する促進剤を含む組成物としてボツリヌス毒素を投与する請求項31に記載の方法。
【請求項３５】
患者の皮膚に適用する経皮パッチとしてボツリヌス毒素を適用する請求項31に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は神経毒を含有する医薬組成物に関する。特に本発明は、患者に経皮局所投与するための、ボツリヌス毒素などのクロストリジウム神経毒を含有する組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ボツリヌス毒素
クロストリジウム属には127を越える種があり、形態学および機能に従って分類されている。嫌気性グラム陽性細菌であるボツリヌス菌（Clostridium botulinum）は、ボツリヌス中毒と呼ばれる神経麻痺性障害をヒトおよび動物において引き起こす強力なポリペプチド神経毒であるボツリヌス毒素を産生する。ボツリヌス菌の胞子は土壌中に見出され、滅菌と密閉が不適切な零細缶詰工場の食品容器内で増殖する可能性があり、これが多くのボツリヌス中毒症例の原因である。ボツリヌス中毒の影響は、通例、ボツリヌス菌の培養物または胞子で汚染された食品を飲食した18〜36時間後に現れる。ボツリヌス毒素は、消化管内を弱毒化されないで通過することができ、そして末梢運動ニューロンを攻撃することができるようである。ボツリヌス毒素中毒の症状は、歩行困難、嚥下困難および会話困難から、呼吸筋の麻痺および死にまで進行し得る。
【０００３】
A型ボツリヌス毒素は、人類に知られている最も致死性の天然の生物学的物質である。市販A型ボツリヌス毒素（精製された神経毒複合体；100単位バイアルとして、BOTOX（登録商標）の商標でAllergan，Inc．（カリフォルニア州アービン）から入手可能である）の約50ピコグラムがマウスにおけるLD50（すなわち1単位）である。1単位のBOTOX（登録商標）は、約50ピコグラム（約56アトモル）のA型ボツリヌス毒素複合体を含む。興味深いことに、モル基準でA型ボツリヌス毒素の致死力はジフテリアの18億倍、シアン化ナトリウムの6億倍、コブロトキシンの3000万倍、コレラの1200万倍である。Natuaral Toxins II［B. R. Singhら編、Plenum Press、ニューヨーク（1976）］のSingh、Critical Aspects of Bacterial Protein Toxins、第63〜84頁（第4章）（ここで、記載されるA型ボツリヌス毒素LD50  0.3ng＝1Uとは、BOTOX（登録商標）約0.05ng＝1Uという事実に補正される）。1単位（U）のボツリヌス毒素は、それぞれが18〜20グラムの体重を有するメスのSwiss Websterマウスに腹腔内注射されたときのLD50として定義される。
【０００４】
7種類のボツリヌス神経毒が特徴付けられており、これらは、型特異的抗体による中和によってそのそれぞれが識別されるボツリヌス神経毒血清型A、B、C1、D、E、FおよびGである。ボツリヌス毒素のこれらの異なる血清型は、それらが冒す動物種、ならびにそれらが惹起する麻痺の重篤度および継続時間が異なりうる。ボツリヌス毒素は、コリン作動性の運動ニューロンに大きな親和性で結合して、ニューロンに移動し、アセチルコリン放出を阻止するようである。
【０００５】
血清型に関係なく、毒素中毒の分子メカニズムは類似し、少なくとも3つの過程または段階を含むようである。第1段階において、毒素は、重鎖（H鎖）と細胞表面受容体との特異的相互作用によって、標的ニューロンのシナプス前膜に結合する。受容体は、ボツリヌス毒素の各血清型および破傷風毒素で異なると考えられる。H鎖のカルボキシル末端セグメント(HC)は、毒素を細胞表面に指向させるのに重要であるようである。
【０００６】
第2段階において、毒素は、冒した細胞の形質膜を横切る。毒素は、初めに、受容体媒介エンドサイトーシスにより細胞に包み込まれ、毒素を含有するエンドソームが形成される。次に、毒素は、エンドソームから該細胞の細胞質中に逃れ出る。この段階は、約5.5またはそれ以下のpHに反応して毒素のコンフォメーション変化を誘発するH鎖のアミノ末端セグメント(HN)によって媒介されると考えられる。エンドソームは、エンドソーム内pHを低下させるプロトンポンプを有することが既知である。コンフォメーションのシフトは毒素中の疎水性残基を露出させ、これが、毒素をエンドソーム膜内に埋込むことを可能にする。次に、毒素（または少なくともその軽鎖）が、エンドソーム膜を通って細胞質に移動する。
【０００７】
ボツリヌス毒素活性のメカニズムの最終段階は、重鎖（H鎖）および軽鎖（L鎖）を結合するジスルフィド結合の減少を伴うようである。ボツリヌス毒素および破傷風毒素の全毒素活性は、ホロトキシンのL鎖に含まれる。L鎖は亜鉛(Zn++)エンドペプチダーゼであり、これは、神経伝達物質を含有する小胞の認識および形質膜の細胞質表面とのドッキングならびに小胞と形質膜との融合に必須であるタンパク質を選択的に開裂する。破傷風神経毒、ボツリヌス毒素B、D、FおよびG型は、シナプトソーム膜タンパク質であるシナプトブレビン[小胞関連膜タンパク質(VAMP)とも称される]の分解を引き起こす。シナプス小胞の細胞質表面に存在する大部分のVAMPは、これらの開裂現象のいずれかの結果として除去される。A型およびE型ボツリヌス毒素はSNAP-25を開裂する。C1型ボツリヌス毒素ははじめはシンタキシンを開裂すると考えられたが、シンタキシンおよびSNAP-25を開裂することがわかった。各毒素は異なる結合を特異的に開裂する。ただし、B型ボツリヌス毒素（および破傷風毒素）は同じ結合を開裂する。
【０００８】
ボツリヌス毒素は、活動過多な骨格筋によって特徴付けられる神経筋障害を処置するために臨床的状況において使用されている。A型ボツリヌス毒素複合体（BOTOX（登録商標））は、本態性眼瞼痙攣、斜視、片側顔面痙攣、頸部ジストニアおよび眉間のしわを処置するために米国食品医薬品局によって承認されている。B型ボツリヌス毒素（HYOBLOC（商標））も、頸部ジストニアの処置のためにFDAに承認されている。非A型ボツリヌス毒素は、A型ボツリヌス毒素と比較して、効力が小さく、および／または活性持続が短いようである。末梢筋肉内A型ボツリヌス毒素の臨床的効果は、通常、注射後1日または数時間以内に認められる。A型ボツリヌス毒素の単回筋肉内注射による症候緩和の典型的な継続時間は平均約3〜4ヶ月であり得る。
【０００９】
すべてのボツリヌス毒素血清型が神経筋接合部における神経伝達物質アセチルコリンの放出を阻害するようであるが、そのような阻害は、種々の神経分泌タンパク質に作用し、かつ／またはこれらのタンパク質を異なる部位で切断することによって行われる。例えば、A型およびE型ボツリヌス毒素はいずれも、25キロダルトン（kD）のシナプトソーム関連タンパク質（SNAP-25）を切断するが、それぞれ異なるタンパク質内アミノ酸配列を標的とする。B型、D型、F型およびG型のボツリヌス毒素は小胞関連タンパク質（VAMP、これはまたシナプトブレビンとも呼ばれる）に作用し、それぞれの血清型によってこのタンパク質は異なる部位で切断される。最後に、C1型ボツリヌス毒素は、シンタキシンおよびSNAP-25の両者を切断することが明らかにされている。作用機序におけるこれらの相違が、様々なボツリヌス毒素血清型の相対的な効力および／または作用の継続時間に影響していると考えられる。明らかに、ボツリヌス毒素の基質は、多様な細胞種に見られる。例えばBiochem, J 1;339(pt 1): 159-65: 1999およびMov Disord, 10(3):376:1995（膵島B細胞は少なくともSNAP-25およびシナプトブレビンを含有する）参照。
【００１０】
ボツリヌス毒素タンパク質分子の分子量は、既知のボツリヌス毒素血清型の7つのすべてについて約150kDである。興味深いことに、これらのボツリヌス毒素は、会合する非毒素タンパク質とともに150kDのボツリヌス毒素タンパク質分子を含む複合体としてクロストリジウム属細菌によって放出される。例えば、A型ボツリヌス毒素複合体は、900kD、500kDおよび300kDの形態としてクロストリジウム属細菌によって産生され得る。B型およびC1型のボツリヌス毒素は700kDまたは500kDの複合体としてのみ産生されるようである。D型ボツリヌス毒素は300kDおよび500kDの両方の複合体として産生される。最後に、E型およびF型のボツリヌス毒素は約300kDの複合体としてのみ産生される。これらの複合体（すなわち、約150kDよりも大きな分子量）は、非毒素のヘマグルチニンタンパク質と、非毒素かつ非毒性の非ヘマグルチニンタンパク質とを含むと考えられる。これらの2つの非毒素タンパク質（これらは、ボツリヌス毒素分子とともに、関連する神経毒複合体を構成し得る）は、変性に対する安定性をボツリヌス毒素分子に与え、そして毒素が摂取されたときに消化酸からの保護を与えるように作用すると考えられる。また、より大きい（分子量が約150kDよりも大きい）ボツリヌス毒素複合体は、ボツリヌス毒素複合体の筋肉内注射部位からのボツリヌス毒素の拡散速度を低下させ得ると考えられる。
【００１１】
インビトロでの研究により、ボツリヌス毒素が、脳幹組織の初代細胞培養物からのアセチルコリンおよびノルエピネフリンの両方の、カリウムカチオンにより誘導される放出を阻害することが示されている。また、ボツリヌス毒素は、脊髄ニューロンの初代培養物におけるグリシンおよびグルタメートの両方の誘発された放出を阻害すること、そして脳のシナプトソーム調製物において、ボツリヌス毒素が神経伝達物質のアセチルコリン、ドーパミン、ノルエピネフリン（Habermann E.ら、Tetanus Toxin and Botulinum A and C Neurotoxins Inhibit Noradrenaline Release From Cultured Mouse Brain, J Neurochem 51(2); 522-527: 1988）、CGRP、サブスタンスPおよびグルタメート（Sanchez-Prieto, J.ら、Botulinum Toxin A Blocks Glutamate Exocytosis From Guinea Pig Cerebral Cortical Synaptosomes, Eur J. Biochem 165; 675-681: 1897）のそれぞれの放出を阻害することが報告されている。すなわち、充分な濃度を用いれば、大部分の神経伝達物質の刺激により誘発される放出はボツリヌス毒素によってブロックされる。
【００１２】
例えば、Pearce, L.B., Pharmacologic Characterization of Botulinum Toxin For Basic Science and Medicine, Toxicon 35(9); 1373-1412の1393; Bigalke H.ら, Botulinum A Neurotoxin Inhibits Non-Cholinergic Synaptic Transmission in Mouse Spinal Cord Neurons in Culture, Brain Research 360; 318-324; 1985; Habermann E., Inhibition by Tetanus and Botulinum A Toxin of the release of [3H]Noradrenaline and [3H]GABA From Rat Brain Homogenate, Experientia 44; 224-226: 1988, Bigalke H.ら, Tetanus Toxin and Botulinum A Toxin Inhibit Release and Uptake of Various Transmitters, as Studied with Particulate Preparations From Rat Brain and Spinal Cord, Naunyn-Schmiedeberg's Arch Pharmacol 316; 244-251: 1981, および；Jankovic J.ら, Therapy With Botulinum Toxin, Marcel Dekker, Inc. (1994), 第5頁参照。
【００１３】
A型ボツリヌス毒素は、既知の手順に従って、培養槽におけるボツリヌス菌の培養を確立して、生育させ、その後、発酵混合物を集め、精製することによって得ることができる。すべてのボツリヌス毒素血清型は、神経活性となるためにはプロテアーゼによって切断またはニッキングされなければならない不活性な単鎖タンパク質として最初に合成される。A型およびG型のボツリヌス毒素血清型を産生する細菌株は内因性プロテアーゼを有するので、A型およびG型の血清型は細菌培養物から主にその活性型で回収することができる。これに対して、C1型、D型およびE型のボツリヌス毒素血清型は非タンパク質分解性菌株によって合成されるので、培養から回収されたときには、典型的には不活性型である。B型およびF型の血清型はタンパク質分解性菌株および非タンパク質分解性菌株の両方によって産生されるので、活性型または不活性型のいずれでも回収することができる。しかし、例えば、B型ボツリヌス毒素を産生するタンパク質分解性菌株でさえも、産生された毒素の一部を切断するだけである。
【００１４】
切断型分子と非切断型分子との正確な比率は培養時間の長さおよび培養温度に依存する。したがって、例えばB型ボツリヌス毒素の製剤はいずれも一定割合が不活性であると考えられ、このことが、A型ボツリヌス毒素と比較したB型ボツリヌス毒素の知られている著しく低い効力の原因であると考えられる。
【００１５】
ボツリヌス菌のＨall  Ａ株から、≧３×１０７Ｕ／ｍｇ、Ａ２６０／Ａ２７８０．６０未満、およびゲル電気泳動における明確なバンドパターンという特性を示す高品質結晶Ａ型ボツリヌス毒素を生成し得る。Ｓhantz，Ｅ．Ｊ．ら、Ｐroperties  and  use  of  Ｂotulinum  toxin  and  Ｏther  Ｍicrobial  Ｎeurotoxins  in  Ｍedicine、Ｍicrobiol  Ｒev．５６：８０−９９（１９９２）に記載されているように既知のＳhanz法を用いて結晶Ａ型ボツリヌス毒素を得ることができる。通例、Ａ型ボツリヌス毒素複合体を、適当な培地中でＡ型ボツリヌス菌を培養した嫌気培養物から分離および精製し得る。この既知の方法を用い、非毒素タンパク質を分離除去して、例えば次のような純ボツリヌス毒素を得ることもできる：比効力１〜２×１０８ＬＤ５０Ｕ／ｍｇまたはそれ以上の分子量約１５０ｋＤの精製Ａ型ボツリヌス毒素；比効力１〜２×１０８ＬＤ５０Ｕ／ｍｇまたはそれ以上の分子量約１５６ｋＤの精製Ｂ型ボツリヌス毒素；および比効力１〜２×１０７ＬＤ５０Ｕ／ｍｇまたはそれ以上の分子量約１５５ｋＤの精製Ｆ型ボツリヌス毒素。
【００１６】
ボツリヌス毒素および／またはボツリヌス毒素複合体は、Ａllergan Ｉnc.（アーヴィン、カリフォルニア）；Ｉpsen Ｂeaufour（フランス）；Ｅlan Ｐharmaceuticals（アイルランド）；Ｌist  Ｂiological  Ｌaboratories，Ｉnc．（キャンベル、カリフォルニア）；the  Ｃentre  for  Ａpplied  Ｍicrobiology  and  Ｒesearch（ポートン・ダウン、イギリス）；Ｗako（日本、大阪）；Metabiologics（マディソン、ウィスコンシン）；およびＳigma  Ｃhemicals（セントルイス、ミズーリ）から入手し得る。
【００１７】
純粋なボツリヌス毒素は幾分不安定であるけれども、医薬組成物の調製に用いることができ、ボツリヌス毒素複合体、例えばＡ型毒素複合体と同様、表面変性、熱およびアルカリ性条件による変性に対して感受性である。不活性化毒素はトキソイドタンパク質を形成し、これは免疫原性であり得る。その結果生じる抗体の故に、患者が毒素注射に対して応答しなくなり得る。
【００１８】
酵素一般について言えるように、ボツリヌス毒素（細胞内ペプチダーゼ）の生物学的活性は、少なくとも部分的にはその三次元形状に依存する。すなわち、Ａ型ボツリヌス毒素は、熱、種々の化学薬品、表面の伸長および表面の乾燥によって無毒化される。しかも、既知の培養、発酵および精製によって得られた毒素複合体を、医薬組成物に使用する非常に低い毒素濃度まで希釈すると、適当な安定剤が存在しなければ毒素の無毒化が急速に起こることが知られている。毒素をｍｇ量からｎｇ／ｍｌ溶液へ希釈するのは、そのような大幅な希釈によって毒素の比毒性が急速に低下する故に、非常に難しい。毒素含有医薬組成物を製造後、何箇月も、または何年も経過してから毒素を使用することもあるので、毒素をアルブミンおよびゼラチンのような安定剤で安定化することができる。
【００１９】
市販のボツリヌス毒素含有医薬組成物は、ＢＯＴＯＸ（登録商標）（カリフォルニア、アーヴィンのＡllergan，Ｉnc．から入手可能）の名称で市販されている。ＢＯＴＯＸ（登録商標）は、精製Ａ型ボツリヌス毒素複合体、アルブミンおよび塩化ナトリウムから成り、無菌の減圧乾燥形態で包装されている。このＡ型ボツリヌス毒素は、Ｎ−Ｚアミンおよび酵母エキスを含有する培地中で増殖させたボツリヌス菌のＨall株の培養物から調製する。そのＡ型ボツリヌス毒素複合体を培養液から一連の酸沈殿によって精製して、活性な高分子量毒素タンパク質および結合ヘマグルチニンタンパク質から成る結晶複合体を得る。結晶複合体を、塩およびアルブミンを含有する溶液に再溶解し、滅菌濾過（０．２μ）した後、減圧乾燥する。減圧乾燥生成物は、−５℃またはそれ以下の冷凍庫内で保存する。ＢＯＴＯＸ（登録商標）は、筋肉内注射前に、防腐していない無菌塩類液で再構成し得る。ＢＯＴＯＸ（登録商標）の各バイアルは、Ａ型ボツリヌス毒素精製神経毒複合体約１００単位（Ｕ）、ヒト血清アルブミン０．５ｍｇおよび塩化ナトリウム０．９ｍｇを、防腐剤不含有の無菌減圧乾燥形態で含有する。
【００２０】
減圧乾燥ＢＯＴＯＸ（登録商標）を再構成するには、防腐剤不含有の無菌生理食塩水；０．９％Ｓodium  Ｃhloride  Ｉnjectionを使用し、適量のその希釈剤を適当な大きさの注射器で吸い上げる。ＢＯＴＯＸ（登録商標）は、泡立てまたは同様の激しい撹拌によって変性しうるので、そのバイアルに希釈剤を穏やかに注入する。滅菌性の理由から、ＢＯＴＯＸ（登録商標）は、バイアルを冷凍庫から取り出して再構成した後４時間以内に投与することが好ましい。その４時間の間、再構成ＢＯＴＯＸ（登録商標）は冷蔵庫（約２〜８℃）内で保管しうる。再構成し冷蔵したＢＯＴＯＸ（登録商標）は、その効力を少なくとも約４週間維持することが報告されている。Ｄermatol Ｓurg  １９９６年１月；２２（１）：３９−４３。
【００２１】
A型ボツリヌス毒素は下記のように臨床的に使用されている：
（1）頸部ジストニーを処置するための筋肉内注射（多数の筋肉）あたり約75単位〜125単位のBOTOX（登録商標）；
（2）眉間のしわを処置するための筋肉内注射あたり約5単位〜10単位のBOTOX（登録商標）（5単位が鼻根筋に筋肉内注射され、10単位がそれぞれの皺眉筋に筋肉内注射される）；
（3）恥骨直腸筋の括約筋内注射による便秘を処置するための約30単位〜80単位のBOTOX（登録商標）；
（4）上瞼の外側瞼板前部眼輪筋および下瞼の外側瞼板前部眼輪筋に注射することによって眼瞼痙攣を処置するために筋肉あたり約1単位〜5単位の筋肉内注射されるBOTOX（登録商標）；
【００２２】
（5）斜視を処置するために、外眼筋に、約1単位〜5単位のBOTOX（登録商標）が筋肉内注射されている。この場合、注射量は、注射される筋肉のサイズと所望する筋肉麻痺の程度（すなわち、所望するジオプター矯正量）との両方に基づいて変化する。
（6）卒中後の上肢痙性を処置するために、下記のように5つの異なる上肢屈筋にBOTOX（登録商標）が筋肉内注射される：
（a）深指屈筋：7.5U〜30U
（b）浅指屈筋：7.5U〜30U
（c）尺側手根屈筋：10U〜40U
（d）橈側手根屈筋：15U〜60U
（e）上腕二頭筋：50U〜200U。5つの示された筋肉のそれぞれには同じ処置時に注射されるので、患者には、それぞれの処置毎に筋肉内注射によって90U〜360Uの上肢屈筋BOTOX（登録商標）が投与される。
(7)偏頭痛を治療するために、25UのBOTOX(登録商標)を頭蓋周囲に注射する(眉間、前頭および側頭筋に対称的に注射する)：該注射は、偏頭痛頻度、最大重症度、付随嘔吐および急性薬剤使用の減少(25U注射後の3ヶ月間にわたる)によって評価した場合に、ビヒクルと比較して、偏頭痛の予防療法として有意な利益を与える。
【００２３】
さらに、筋肉内ボツリヌス毒素は、パーキンソン病の患者の振せんの治療にも使用されているが、結果は顕著でないことが報告されている。Marjama-Jyons,J.ら、"Tremor-Predominant Parkinson's Disease"，Drugs & Aging 16(4), 273-278, 2000。
【００２４】
ボツリヌス毒素Ａ型は、最大１２ヶ月の有効性を有し(European J.Neurology 6(Supp 4), S111-S1150, 1999)、ある場合には２７ヶ月間にもわたる有効性を有しうることが既知である(Laryngoscope 109, 1344-1346, 1999)。しかし、BOTOX(登録商標)筋肉注射の通常の持続期間は一般に約3〜4ヶ月間である。種々の臨床症状の治療におけるボツリヌス毒素A型の成功は、他のボツリヌス毒素血清型への関心を高めている。例えば、Eur J Neurol 1999年11月; 6（補遺4）: S3-S10参照。
【００２５】
末梢部位における薬理作用を有する他に、ボツリヌス毒素は、中枢神経系における阻害作用も有しうる。Weigandら[Nauny-Schmiedeberg's Arch.Pharmacol. 1976, 292，161-165]、およびHabermann[Nauny-Schmiedeberg's Arch.Pharmacol. 1974, 281，47-56]の研究は、ボツリヌス毒素が逆行性輸送によって脊髄領域へ上行しうることを示している。従って、末梢部位(例えば筋肉内)に注射されたボツリヌス毒素は、脊髄に逆行輸送されうる。
【００２６】
米国特許第５９８９５４５号は、特定の標的化成分に化学的に結合させるかまたは組換え的に融合させた改質クロストリジウム属神経毒またはそのフラグメント、好ましくはボツリヌス毒素を使用して、脊髄に薬剤を投与することによって痛みを治療できることを開示している。
【００２７】
処置剤としてのボツリヌス毒素は、針または注射器を使って患者にボツリヌス毒素含有組成物を注射することによって投与されることが最も多い。しかし、ボツリヌス毒素や、非ボツリヌス毒素受容体リガンドと組み合わせたボツリヌス毒素については、他の投与様式も検討されてきた。いくつかの投与様式には、ボツリヌス毒素の局所適用が含まれる（例えば米国特許第6,063,768号、米国特許第5,670,484号および独国特許出願公開DE 198 52 981を参照されたい）。
【００２８】
独国特許出願公開DE 198 52 981には、A型ボツリヌス毒素と50％ジメチルスルホキシド（DMSO）溶液とを含有する多汗処置用の組成物が開示されている。DE 198 52 981では、ボツリヌス毒素を皮膚に局所的に適用することにより、ボツリヌス毒素で多汗を処置しうることが論じられているが、ボツリヌス毒素がその人の表皮に浸透したかどうか、またはその効果が汗腺の孔を通過するボツリヌス毒素によって媒介されたのかどうかは、不明である。いずれにせよ、DE 198 52 981には、DMSO溶液中のボツリヌス毒素の局所投与を多汗の処置に使用できることが開示されているが、DMSOは皮膚を刺激しうるので、DMSOを含有する組成物は望ましくない。
【００２９】
また、米国特許第5,670,484号には皮膚障害を処置するためのボツリヌス毒素の局所適用が開示されているが、本明細書に記載するようなボツリヌス毒素と促進剤とを含有する組成物は開示されていない。さらに、米国特許第5,670,484号に開示されているのは、ボツリヌス毒素の局所投与によって細胞増殖を阻害しうるということだけであり、細胞内分子の神経分泌に関係する障害を処置するためのボツリヌス毒素の局所適用には言及していない。
【００３０】
WO 00／15245および Grusser Von O-J.「Die ersten systematischen Beschreibungen und tierexperimentellen Untersuchungen des Botulismus（ボツリヌス中毒に関する初めての系統的記載および動物実験による研究）」Sudhoffa Archiv （1986）, 70（2）, 167-186 も参照されたい。
【００３１】
経皮送達
ヒト皮膚には真皮と表皮が含まれる。表皮は数層の組織、すなわち（皮膚の外表面から内側に向かって順に）角質層、透明層、顆粒層、有棘層および基底層を持っている。角質層は医薬品の経皮送達に際して最も重大な障害になる。角質層は典型的には約10〜15μmの厚さを持ち、数層に配列した扁平角化細胞（角質細胞）からなっている。角質細胞間の細胞間隙は脂質構造で満たされており、皮膚への物質の浸透に重要な役割を果たしうる（Bauerova ら「Chemical enhancers for transdermal drug transport（経皮薬物輸送の化学促進剤）」European Journal of Drug Metabolism and Pharmacokinetics, 2001, 26（1／2）: 85-94）。角質層の下にある表皮の残りの部分は厚さが約150μmである。真皮は厚さが約1〜2mmで、表皮の下に位置する。真皮は種々の毛細管および神経突起によって神経支配されている。
【００３２】
医薬の経皮投与は、注射および経口送達に付随する望ましくない結果を伴わない医薬品の代替投与経路を提供する試みとして、研究対象になっている。例えば、針は局所的な痛みを引き起こすことが多く、注射を受ける患者は血液媒介疾患に曝露される可能性がある。経口投与には、患者の胃が極端に酸性な環境を持つために、医薬品の生物学的利用率が低いという欠点がある。経皮投与技術は、医薬を非侵襲的に投与することにより、これらの短所を克服しようとするものである。経皮投与では、患者の皮膚に対する損傷を減少させることができるので望ましい。したがって、医薬品の経皮投与では、注射に伴う痛みを軽減または除去し、血液汚染の可能性を低下させ、薬物が全身的に取り込まれた際の薬物の生物学的利用率を向上させることができる。
【００３３】
医薬品を経皮投与する試みでは、角質層の透過性を向上させる努力がなされてきた。経皮処置の試みは、そのほとんどが、患者の循環系に取り込まれる医薬剤、要するに皮膚を通して全身投与される医薬剤の投与に向けられている。いくつかの試みには、分子の皮膚透過性を増加させる化学促進剤の使用が含まれている。いくつかの試みには、角質層の一部を迂回または除去するための機械的装置の使用が含まれている。また、医薬の皮膚透過を促進するために、超音波またはイオン導入を使用する試みもなされている。上述のように、これらの療法の目標は、薬剤が真皮の毛細管床に到達し、そこから患者に全身的に取り込まれて処置効果を上げることができるように、皮膚を通して医薬剤（典型的には小分子）を送達することである。
【００３４】
経皮投与技術の対象は主として小分子であったが、ポリペプチドなどの大分子およびタンパク質複合体も経皮投与に馴染むと思われることに注目することは重要である。約48kDのエリスロポエチンも、うまく経皮投与されている（Mitragotri ら「Ultrasound-mediated transdermal protein delivery（超音波による経皮タンパク質送達）」Science, 1995, 269: 850-853、米国特許第5,814,599号および同第6,002,961号）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００３５】
したがって、必要とされているのは、処置有効量の神経毒を含有する医薬組成物または医薬製剤であって、神経毒の投与に関係する望ましくない痛みを伴わずに処置効果が得られるように、患者皮膚の神経毒透過（浸透）を可能にし、しかも神経毒の生物活性を保っている、医薬組成物または医薬製剤である。
【課題を解決するための手段】
【００３６】
概要
本発明は、この要求に取り組み、経皮投与することが可能な神経毒含有医薬組成物を提供するものである。本発明の組成物は、皮下筋肉、皮下汗腺または皮下感覚ニューロンなどの皮下構造に神経毒を送達するために使用することができる。したがって、本明細書に開示する組成物は、痙性筋に関係する神経筋障害や、交感ニューロン障害、例えば過剰活動汗腺に関係する障害などを効果的に処置したり、炎症または炎症に伴う痛みを軽減したりするために使用することができ、したがって神経毒を鎮痛薬として使用することができる。
【００３７】
本明細書では以下の定義が適用される。
「約」とは、およそまたはほぼを意味し、本明細書に記載する数値または範囲については、記載した数値または範囲の±10％を意味する。
【００３８】
「局部投与」とは、動物体上または動物体内にあって、ある医薬の生物学的効果が望まれる部位への、またはその部位の近傍への、当該医薬の直接投与を意味する。静脈内投与または経口投与などの全身性投与経路は局部投与から除外される。局所投与は局部投与の一様式であり、局所投与では医薬剤をヒトの皮膚に適用する。ボツリヌス毒素などの神経毒の局所投与からは、神経毒の全身的投与は除外される。言い換えると、従来の経皮治療法とは異なり、ボツリヌス毒素の局所投与では、顕著な量の神経毒が、例えば神経毒の大部分が、患者の循環系に到達するということは起こらない。
【００３９】
「神経毒」とは、ニューロン細胞表面受容体に対して特異的親和性を持つ生物学的に活性な分子を意味する。神経毒には、純粋な毒素としてのクロストリジウム毒素と、1個以上の非毒素毒素関連タンパク質と複合体を形成したクロストリジウム毒素の両方が包含される。
【００４０】
「安定化されたボツリヌス毒素」とは、そのボツリヌス毒素が結合する細胞からの細胞内分子（神経伝達物質またはペプチドなど）のエキソサイトーシスを、そのボツリヌス毒素が効果的に減少させまたは防止することができるように、生物学的活性をまだ持っているか、または標的細胞に結合する能力をまだ持っているボツリヌス毒素を意味する。安定化されたボツリヌス毒素は細胞毒性ではない。
【００４１】
「促進剤」とは、ボツリヌス毒素が皮膚に吸収されて処置効果をもたらすことができるように、患者の皮膚の透過性を高める薬剤を指す。本明細書については特に、ジメチルスルホキシド（DMSO）またはプルロニックレシチンオルガノゲル（pluronic lecithin organizer）（PLO）とDMSOとの組合せは、促進剤から除外される。促進剤には、アルコール類（例えば短鎖アルコール、長鎖アルコールもしくはポリアルコール）、アミン類およびアミド類（例えば尿素、アミノ酸もしくはそれらのエステル、アミド、AZONE（登録商標）、AZONE（登録商標）の誘導体、ピロリドンもしくはピロリドンの誘導体）、テルペン類およびテルペン類の誘導体、脂肪酸およびそれらのエステル、大環状化合物、界面活性剤、またはジメチルスルホキシド以外のスルホキシド類（例えばデシルメチルスルホキシド）、リポソーム、トランスファーソーム（transfersomes）、レシチン小胞、エトソーム（ethosomes）、水、界面活性剤（例えば陰イオン界面活性剤、陽イオン界面活性剤および非イオン界面活性剤）、ポリオール、ならびに精油などを含めることができるが、これらに限るわけではない。
【００４２】
本発明の医薬組成物に使用される好適な神経毒として、細菌によって産生される神経毒を挙げることができる。例えば、神経毒はClostridium botulinum、Clostridium butyricumまたはClostridium berattiから産生されるものであることができる。本発明の特定態様として、本組成物はボツリヌス毒素を含有することができ、そのボツリヌス毒素はA型、B型、C1型、D型、E型、F型またはG型ボツリヌス毒素であることができる。ボツリヌス毒素は、皮膚透過するボツリヌス毒素が約10-3U／kg〜約10U／kgになるような量で、組成物中に存在する。本組成物は、約1ヶ月〜約5年にわたって処置効果が持続するような量のボツリヌス毒素を含有しうる。
【００４３】
他の神経毒には、組換え生産された神経毒、例えば大腸菌によって産生されたボツリヌス毒素などがある。これに加えて、またはこれに代えて、神経毒は修飾神経毒、すなわち天然物と比較してそのアミノ酸の少なくとも1つが欠失、修飾または置換されている神経毒であることもできる。あるいは、修飾神経毒は、組換え生産された神経毒またはその誘導体もしくは断片であることができる。これらの神経毒は神経伝達物質放出を阻害する能力をまだ持っている。
【００４４】
本明細書に開示する神経毒含有組成物は患者に局所投与される。神経毒は局所投与されるので、本組成物は、好ましくは、痛みを伴う部位もしくは発汗によって湿っている部位またはその近くに適用される。例えば、痙性筋が痛みを引き起こしている場合は、本組成物を痙性筋の上にある皮膚に適用して、その下にある痙性筋を化学的に除神経することができる。あるいは、P物質またはカルシトニン遺伝子関連ペプチド（CGRP）のニューロンからの放出によって起こるような炎症を特定部位が起こしている場合は、本組成物をその炎症部位に投与することができる。また、ある人の汗腺が分泌液を過剰に分泌している場合は、汗をかいている領域の近傍に本組成物を適用して、汗腺のニューロン神経支配を減少させることができる。例えば本組成物は1つ以上の腋窩、手掌、または他の任意の発汗構造に適用することができる。
【００４５】
本発明者は、驚くべきことに、A型ボツリヌス毒素などのボツリヌス毒素を経皮投与することで、ヒト患者の障害を軽減することができるということを見いだした。使用するボツリヌス毒素は、約10-3U／kg〜10U／kgが患者の皮膚を通過するような量で投与される。ボツリヌス毒素は、好ましくは、約10-2U／kg〜約1U／kgが経皮的に患者の皮膚を通過するような量で存在する。ボツリヌス毒素は、より好ましくは、約10-1U／kg〜約1U／kgが患者の皮膚を通過するような量で存在する。ボツリヌス毒素は、最も好ましくは、約0.1単位〜約5単位が患者の皮膚を通過して皮下の標的に到達するような量で存在する。重要なことに、本組成物に含まれる毒素の処置効果は、神経毒の水溶液を投与した場合で約2ヶ月〜約6ヶ月にわたって持続し、毒素を保持し皮膚を通過した後に毒素をゆっくり放出する組成物の形で神経毒を投与した場合で、最長約5年にわたって持続する。例えば米国特許第6,312,708号を参照されたい。
【００４６】
好都合なことに、ボツリヌス毒素含有組成物を局所適用することにより、比較的高用量を投与した場合でさえ、皮膚の角質層がまだ多少の不透過性を保っているので、全身的毒性またはボツリヌス中毒などの潜在的合併症が回避されることを、本発明者は発見した。したがって、ボツリヌス毒素（A型、B型、C型、D型、E型、F型またはG型を含む）の投与量は、患者を脅かす恐れのある有害副作用の懸念を伴わずに、下は約1単位から上は約20,000単位にまで及ぶことができる。個々の投与量は、処置される状態、個々の促進剤、および使用する処置方式に依存して変動しうる。例えば、皮下の過剰活動筋を処置するには、高投与量（例えば1000単位〜20,000単位）のボツリヌス毒素を、促進剤含有組成物の形で局所適用する必要がありうる。これに対して、神経原性炎症または過剰活動汗腺の処置には、比較的低い局所用量（例えば約1単位〜約1,000単位）のボツリヌス毒素が必要となりうる。
【００４７】
本発明の一態様は、安定化されたボツリヌス毒素と、ヒト患者の皮膚の透過性を高めることによってその患者へのボツリヌス毒素の経皮送達を容易にするための少なくとも1つの促進剤とを含む医薬組成物であることができる。ボツリヌス毒素は、A型、B型、C1型、D型、E型、F型およびG型ボツリヌス毒素、純粋なまたは精製された（すなわち約150kDの）ボツリヌス毒素ならびに天然ボツリヌス毒素または組換え生産されたボツリヌス毒素からなる群より選択することができる。本組成物は約1単位〜約20,000単位のボツリヌス毒素を含むことができる。また本組成物は、約1ヶ月〜5年間持続する処置効果を得るのに十分な量のボツリヌス毒素を含むことができる。
【００４８】
特に促進剤はポリアルコールなどのアルコールであることができる。もう一つの選択肢として、促進剤はトランスファーソームを含むことができる。さらに本組成物は、複数の促進剤を含むことができる。
【００４９】
本発明の具体的一態様は、経皮パッチ中の医薬組成物であって、ボツリヌス毒素が経皮パッチに供給された促進剤と相互作用すると、血管には顕著な量で浸透することなくヒト患者の皮膚を透過して、ある分子の細胞からのエキソサイトーシスに関係する障害に対して処置効果をもたらすことになる安定化されたボツリヌス毒素を含んでいる医薬組成物を含むことができる。「顕著な量で浸透することなく」とは、経皮パッチを適用した場合に血管内に浸透する量が、医薬組成物中に存在するボツリヌス毒素の25％未満、好ましくは5％未満であることを意味する。
【００５０】
本組成物中のボツリヌス毒素は、経皮パッチを患者の皮膚に適用する前に、そのパッチに乾燥状態で供給することができる。ボツリヌス毒素は、経皮パッチを患者の皮膚に適用した後に、促進剤と混合することができる。したがって、ボツリヌス毒素は、経皮パッチを患者の皮膚に適用する前に患者の皮膚に適用された促進剤と、混ざることができる。
【００５１】
本発明のさらにもう一つの態様として、安定化されたボツリヌス毒素と、生物活性型のボツリヌス毒素をヒト患者の循環系には投与することなくその患者の皮下標的部位に経皮投与することを容易にする促進剤とを含む医薬組成物、および患者の皮膚に経皮パッチを取り外しできるように固定するために経皮パッチの片面に配置された接着剤、を含む経皮パッチが挙げられる。接着剤は、医薬組成物を含有する貯蔵部の周りに配置することができる。
【００５２】
経皮パッチは、さらに、パッチの皮膚適用面から伸びる複数の針であって、血管を断裂させることなく皮膚の角質層に突き出すようにパッチから伸びている針を含むこともできる。ボツリヌス毒素は、パッチに加えられる圧力により、ボツリヌス毒素が針を通って角質層の下に導かれることになるように、パッチの貯蔵部に供給することができる。さらに、各凹部が液体で溶解しうる膜で覆われている複数の凹部にボツリヌス毒素を乾燥状態で供給して、凹部を覆う膜が溶解すると促進剤がボツリヌス毒素と混ざるのでボツリヌス毒素の吸収が促進されるようにすることもできる。
【００５３】
本発明は、患者の皮下構造における神経伝達物質放出を減少させる方法であって、角質層の不透過性を低下させるために患者の皮膚の角質層を非化学的に破壊するステップと、患者の皮膚のうち、第1ステップで角質層が破壊されている領域に、ボツリヌス毒素を適用するステップとを含む方法も包含する。角質層は、角質層を研磨的に除去することによって破壊することができる。したがって、患者の皮膚に接着性物質を適用し、そこに適用した接着性物質を除去することによって、角質層を破壊することができる。もう一つの選択肢として、周波数20kHz〜10MHz未満の超音波を、患者の皮膚を永久的に損傷しない強度で適用することによって、角質層を破壊することもできる。あるいは、患者の皮膚上の第1点から患者の皮膚上の第2点に向かって電流を流すことによって、角質層を破壊することもできる。角質層に複数の孔が生成して、皮下構造へのボツリヌス毒素の通過が促進されるように、電流を流すことができる。そして、皮膚を通したボツリヌス毒素の送達を促進するための促進剤を含む医薬組成物としてボツリヌス毒素を適用することができる。したがってボツリヌス毒素をトランスファーソームに組み込むことができる。
【００５４】
本発明は、痙性筋が引き起こす患者の痛みを軽減する方法であって、（a）周波数約10kHz〜1MHzの超音波を、当該痙性筋の上にある患者の皮膚に適用するステップと、（b）ステップ（a）で超音波を受けた患者の皮膚にボツリヌス毒素を適用するステップとを含む方法も包含する。この方法はさらに、超音波を受けた患者皮膚の角質層の一部を研磨的に除去するステップも含むことができる。
【００５５】
説明
本発明の医薬組成物は、例えば精製された150kDのボツリヌス毒素分子または300〜900kDのボツリヌス毒素複合体などのボツリヌス毒素を、患者の皮膚を通して送達する能力を持つ。本医薬組成物は、患者の皮膚のボツリヌス毒素透過を容易にする促進剤を含有する。本医薬組成物は局所投与に適しているので、本組成物は皮膚に浸透して、その下にある標的構造、例えばニューロンによって神経支配されている構造を、経皮的に除神経することができる。本組成物は、皮膚に接着固定しうるパッチの一成分とすることができるので、毒素はパッチから皮膚に侵入し、皮膚を通過して、その下にある標的を除神経することができる。
【００５６】
本発明は、ボツリヌス毒素と促進剤とを含有する医薬組成物を、人の皮膚に適用することにより、神経伝達物質放出に関係するいくつかのタイプの障害をうまく処置することができるという発見に基づいている。本明細書に記載する組成物の局所投与による処置の対象となりうる障害の例には、しわ、例えば額のしわ、頭痛、例えば偏頭痛、頭痛、頸部ジストニア、手の局所性ジストニア、神経原性炎症、多汗、眼瞼痙攣、斜視、片側顔面痙攣、眼瞼障害、脳性麻痺、局所性痙攣、肢痙攣、チック、振戦、歯ぎしり、裂肛、線維筋痛、嚥下障害、流涙、および筋痙攣に起因する痛みなどがあるが、これらに限るわけではない。毒素の局所投与では、皮膚の下にある痛覚ニューロンを活性化する針を患者に突き刺す必要がないので、毒素を投与する時に患者が感じる痛みが少ない。本明細書に開示する組成物は、ボツリヌス毒素の全身的投与という危険を冒さずに、ボツリヌス毒素による局所的改善をもたらす。
【００５７】
本発明で使用される神経毒は、化学的信号または電気的信号の伝達を阻害する神経毒である。神経毒は、好ましくは、神経毒に曝露される細胞に対して細胞毒性を持たない。神経毒は、神経毒に曝露されたニューロンからの神経伝達物質のエキソサイトーシスを減少させまたは防止することによって、神経伝達を阻害しうる。神経毒がもたらす抑制効果は、比較的長期間にわたって、例えば2ヶ月を超える期間にわたって、および場合によっては数年にわたって持続すべきである。
【００５８】
本組成物に使用される神経毒の例として、Clostridium botulinum、Clostridium butyricumまたはClostridium berattiなどのクロストリジウム細菌が産生する神経毒が挙げられるが、これらに限るわけではない。また、本発明の方法で使用される神経毒は、A型、B型、C型、D型、E型、F型およびG型ボツリヌス毒素からなる群より選択されるボツリヌス毒素であってもよい。本発明の一態様では、患者に投与される神経毒がA型ボツリヌス毒素である。A型ボツリヌス毒素は、ヒトでは高い効力を持ち、入手が容易であり、筋肉内注射によって局所投与すると骨格筋障害および平滑筋障害の処置に有用であることが知られているので、望ましい。
【００５９】
本発明は、（a）細菌培養、毒素抽出、濃縮、保存、凍結乾燥および／または再構成によって取得または加工された神経毒および／または（b）1つ以上のアミノ酸またはアミノ酸配列が、既知の化学的／生化学的アミノ酸修飾法によって、または既知の宿主細胞／組換えベクター組換え技術を利用して、故意に欠失、修飾または置換されている神経毒である修飾神経毒もしくは組換え神経毒、ならびにそのようにして製造される神経毒の誘導体もしくは断片の使用も包含する。これらの神経毒変異体は、ニューロン間で起こる神経伝達を阻害する能力を維持しているべきであり、これらの変異体のいくつかは、天然神経毒と比較して、阻害効果の持続時間が増加していたり、神経毒に曝露されたニューロンに対する結合特異性が向上していたりする場合もある。これらの神経毒変異体は、神経伝達を阻害する所望の生理学的効果を持つ神経毒を同定するために、従来のアッセイを使って変異体をスクリーニングすることによって、選択することができる。
【００６０】
本発明で使用されるボツリヌス毒素は、減圧下で容器内に凍結乾燥減圧乾燥体として保存するか、または安定な液体として保存することができる。凍結乾燥に先立って、ボツリヌス毒素は、薬学的に許容できる賦形剤、安定剤および／または担体、例えばアルブミンなどと組み合わせることができる。凍結乾燥した物質を、塩水または水で再構成することにより、患者に投与されるボツリヌス毒素含有溶液またはボツリヌス毒素含有組成物を調製することができる。
【００６１】
本組成物は、神経伝達を抑制するための活性成分として、単一の型の神経毒（例えばA型ボツリヌス毒素）だけを含んでもよいが、治療組成物は、障害に対して強化された処置効果をもたらしうる2つ以上の型の神経毒を含むこともできる。例えば、患者に投与される組成物は、A型ボツリヌス毒素とB型ボツリヌス毒素とを含むことができる。2つの異なる神経毒を含む単一組成物を投与することにより、単一の神経毒を患者に投与する場合と比較して、所望の処置効果を達成するために、各神経毒の有効濃度を低くすることが可能になりうる。
【００６２】
本医薬組成物中に神経毒と組み合わせて使用される促進剤は、生物活性神経毒が所望の標的構造に作用しうるように皮膚の透過性を高める任意の非DMSO系促進剤であることができる。促進剤は、好ましくは、皮膚を傷つけず、より好ましくは、皮膚越しに神経毒が送達された後は、皮膚が他の因子に対するその透過性を低下させるように、皮膚の透過性を一過性に向上させる。
【００６３】
本発明の一態様では、促進剤がアルコールである。アルコールの例としては、短鎖アルコール、例えば炭素原子数が約2〜5のアルコールなどが挙げられる。短鎖アルコールとしては、例えばエタノール、イソプロパノール、メタノール、およびイソブタノール、またはそれらの組合せなどが挙げられる。アルコールは、組成物中のアルコール濃度が約10％〜40％になるように、組成物に混合することができる。アルコールは、高濃度のアルコールによって引き起こされる可能性のある刺激を減少させるために、グリセリンと混合することができる。ボツリヌス毒素などの神経毒の経皮投与を促進するには、長鎖アルコールも役立つ。長鎖アルコールの例には、炭素原子数約8〜12のアルコールなどがあり、具体例としては、n-ドデカノール、クレンブテロールおよびアルブテロールなどがあげられる。ポリアルコールも神経毒と一緒に使用することができる。プロピレングリコール、グリセロール、ポリエチレングリコールおよびデクスパンテノール、ならびにそれらの組合せなどが、ポリアルコールの例である。
【００６４】
もう一つの態様として、促進剤は、小胞内に神経毒を貯蔵することができる小胞であってもよい。小胞は皮膚を通って拡散することにより、神経毒を標的部位に送達することができる。小胞は脂質小胞であることができる。具体的一態様では、脂質と膜軟化剤とを含有する変形可能な担体であるトランスファーソームに、神経毒を組み込む（例えば Hofer ら「New Ultradeformable Drug Carriers for Potential Transdermal Application of Interleukin-2 and Interferon-α: Theoretic and Practical Aspects（インターロイキン2およびインターフェロンαを経皮適用するための超変形性薬物担体：理論的側面と実用的側面）」World J. Surg. 24, 1187-1189 （2000） および米国特許第6,165,500号）。驚くべきことに、トランスファーソームは、皮膚を横切ってボツリヌス毒素複合体などの神経毒を十分に輸送して、処置効果をもたらすことがわかった。言い換えると、神経毒は、標的部位に送達することができ、皮膚に拡散した後でも生物活性であることができる。
【００６５】
本発明の組成物は、皮膚の非標的部位領域には組成物を適用せずに皮膚上の標的部位に組成物を適用できるようにする適用装置によって使用することができる。例えば、組成物をまず指に適用する（これは指の望ましくない麻痺につながりうる）ということを行わなくても組成物を適用できるようにする装置を使用することができる。好適な装置には、ヘラ、綿棒、針のない注射器、および接着パッチなどがある。ヘラ、綿棒などを使用する場合は、組成物を含む容器に、その装置を挿入する必要がありうる。注射器または接着パッチの使用は、注射器またはパッチに組成物を充填することによって達成できる。次に、ヒトの皮膚上に、ヘラまたは綿棒によって組成物を局所的に塗布するか、または注射器から排出することができる。
【００６６】
本発明の一態様では、神経毒と促進剤とを含有する組成物が、接着パッチに入れて提供される。接着パッチのいくつかの例はよく知られている。例えば、米国意匠特許第296,006号、米国特許第6,010,715号、第5,591,767号、第5,008,110号、第5,683,712号、第5,948,433号および第5,965,154号を参照されたい。経皮パッチは一般に、人の皮膚に適用される接着層と、医薬剤を保持するための貯蔵部またはレザバーと、貯蔵部からの医薬の漏出を防止する外表面とを持つと特徴づけられる。パッチの外表面は典型的には非接着性である。
【００６７】
本発明によれば、神経毒は、神経毒が長期間にわたって安定な状態を保つように、パッチに組み込まれる。神経毒は、神経毒を安定化するポリマーマトリックスであって、神経毒がそのマトリックスおよびパッチから拡散していくことを許すものに、組み込むことができる。パッチを皮膚に適用したら神経毒が皮膚に拡散しうるように、神経毒をパッチの接着層に組み込むこともできる。そのような態様では、接着剤は好ましくは本明細書に記載の促進剤を含む。一態様として、接着層は、温度が約37℃になると神経毒が皮膚に拡散するように接着剤がゆっくりと液化する感熱型であることができる。接着剤は、37℃未満で保存している時には粘着性を持ち続けるが、いったん皮膚に適用すると、接着剤が液化するにつれてその粘着性を失う。パッチがもはや皮膚に接着しなくなると、毒素の投与は完了する。
【００６８】
もう一つの選択肢として、神経毒は、皮膚と接触するパッチの表面近くに設けた1つ以上の凹部または嚢部に入れて提供することもできる。一態様として、乾燥状態または凍結乾燥状態にある神経毒を凹部に貯蔵する。そのようなパッチを冷却した雰囲気（例えば約4℃）中に保存すると神経毒の安定性が保たれる。パッチは必要時に冷雰囲気から取り出して、人の皮膚に適用することができ、その位置で水または塩水などの液体との混合により神経毒を可溶化することができる。
【００６９】
液体は別に供給するか、またはパッチの一成分として供給することができる。例えば液体は、乾燥神経毒を含有するパッチが液体と相互作用したときに、神経毒が液体に曝露されて可溶化されるように、人の皮膚に供給することができる。そうすれば、可溶化した神経毒は、皮膚によって吸収されることが可能になりうる。もう一つの例として、パッチはパッチ内に液体を保持するために、1つ以上の凹部または嚢部を含むこともできる。その凹部または嚢部から液体を押し出して、液体を乾燥神経毒と混合させることができる。そのような態様では、神経毒に対する皮膚の透過性を高めるために、促進剤を液体に供給することができる。例えば、液体はパッチ中の嚢部に供給することができる。パッチに圧力をかけると、その嚢部が破裂して、液体が乾燥神経毒と混じるように液体が放出される。したがって、神経毒を含有する組成物は、患者の皮膚に拡散することができる。もう一つの例として、液体（水を含有するゲルおよびクリームを包含する）を、標的部位の皮膚に適用することができる。次に、乾燥神経毒を含有するパッチを皮膚に適用することができ、そうすると、液体が神経毒と混じって、組成物が皮膚に拡散する。
【００７０】
乾燥神経毒が入った凹部を持つパッチでは、神経毒を投与すべき時までは神経毒が凹部内に留まるように、凹部を封止することが望ましい。したがって凹部は、神経毒が乾燥状態にある時は神経毒が凹部から拡散するのを防ぐが、神経毒が可溶化された場合には神経毒が凹部から拡散するのを許すような膜または薄膜で、封止される。膜は、有孔でも無孔でもよい。一態様として、膜はセルロースまたはデンプンを含み、特に膜は、ポリビニルアルコール、ポリエチレンオキシドおよびヒドロキシプロピルメチルセルロースを含有しうる。膜は薄く（厚さは約1μm〜約1mmの範囲）、液体と接触すると溶解する。したがって、人の皮膚に置いた液体またはパッチの嚢部から導かれた液体は、セルロース膜と接触して、膜を溶解させることができる。溶解後に、液体は乾燥神経毒と混じり、神経毒を可溶化する。次に、組成物は患者の皮膚に拡散する。
【００７１】
さらに経皮パッチは、角質層に侵入するが、真皮に達して血管を断裂することはない複数の小さい針を含んでもよい。針は、パッチの皮膚面から測って、20μm〜1mmの長さを持ちうる。したがって、針は角質層に侵入するが、その末端は毛細管床が存在する真皮には達しない。針は中実でも中空でもよい。中空針は、組成物がパッチ内の貯蔵部から表皮中の針の末端まで通過することができるように、針の端から端まで伸びる内腔を持ちうる。中実針は、針の外表面に沿って組成物を表皮中に拡散させるために使用することができる。驚くべきことに、この長さの針は、痛覚繊維を活性化する長い針では生じる可能性がある痛みを軽減するのに最適であることが明らかになった。したがって、神経毒を含有する組成物は、患者が痛みを覚えることがあったとしても著しい痛みを患者に与えることなく、皮下に適用することができる。
【００７２】
したがって、皮下構造における神経伝達物質放出を阻害する方法は、角質層を破壊して角質層の不透過性を低下させるステップと、角質層が破壊されている皮膚位置にボツリヌス毒素を適用するステップとを含みうる。角質層を破壊するとは、皮膚に比較的小さい無角質層領域が生じるように、患者皮膚のある領域から角質層を完全に除外するか、または患者皮膚上のある位置で角質層の一部を部分的に除去することを指す。皮膚は、任意の適切な方法を使って、患者に著しい痛みを与えることなく、破壊することができる。本方法の好ましい態様では、角質層を非化学的に破壊する。例えば、角質層の薄片状障壁を破壊するために、角質層を研磨的にこすることができる。あるいは、接着テープまたはロウなどの接着剤を皮膚に適用した後、その接着剤を皮膚から除去することによって、角質層を破壊することもできる。このような角質層破壊方法は多少の痛みを引き起こしうるので、破壊によって起こりうる痛みを一時的に軽減するために、リドカインクリーム剤などの局所麻酔薬を皮膚に与えることが望ましい。
【００７３】
皮膚の透過性を非化学的に高める他の経皮的方法に、低周波超音波（20kHz〜1MHz）がある。超音波は、周波数が約20kHz〜10MHで0〜3W／cm2の強度を持つ音と定義される。本明細書でいう低周波超音波とは、周波数が1MHz未満、好ましくは20kHz〜40kHzの範囲にある超音波を指す。超音波はパルスとして、例えば100msecパルスとして、1Hzの周波数で照射される。超音波の強度は0〜1W／cm2の範囲で変化させることができ、多くの場合、12.5mW／cm2〜225mW／cm2の範囲で変化させる。超音波への曝露の典型的な持続時間は約1〜約10分である。超音波は皮膚温度を約1℃を超えて上昇させることなく適用される。低周波超音波は単独で使用してもよいし、神経毒に対する皮膚の透過性を改善するための組成物と組み合わせて使用してもよい。皮膚浸透性を改善するための超音波技術の例は、米国特許第6,002,961号および第5,814,599号に見いだすことができる。驚くべきことに、低周波超音波をボツリヌス毒素含有組成物と組み合わせて適用する場合、皮膚の透過性は高くなるが、精製ボツリヌス毒素またはボツリヌス毒素複合体などの神経毒の三次元コンフォメーションは実質的に変化しないことが明らかになった。したがって、神経毒の生物活性は維持され、障害が実質的に処置される。
【００７４】
さらに超音波は、ボツリヌス毒素を皮膚に適用する前に照射することができる。低周波超音波をボツリヌス毒素の局所適用前に適用すると、角質層が一時的に破壊されるので、その後のボツリヌス毒素の局所適用により、処置効果が得られることが明らかになった。言い換えると、超音波が引き起こす破壊は、数分間にわたって、例えば約10〜30分間にわたって持続して、患者へのボツリヌス毒素の経皮送達を比較的容易にする。約30分後に、角質層はその天然構造を回復し始め、角質層の透過性は一時的に低下する。したがって、本発明の一方法は、皮膚の1つ以上の領域に低周波超音波を適用した後、低周波超音波に曝露された皮膚の領域にボツリヌス毒素を局所適用するステップを含み、前記ボツリヌス毒素は、患者へのボツリヌス毒素の長時間にわたる透過を容易にする促進剤を含有する組成物として提供される。
【００７５】
その他の方法には、ボツリヌス毒素を含む組成物を含有するパッチを横切って電流を流すことにより、皮下標的部位へのボツリヌス毒素の送達を助けることができるイオン導入がある。一態様として、電極を経皮パッチの外表面に適用し、接地電極を患者の皮膚のどこか別のところに置く。経皮パッチ上に設置した電極を通して小さな直流を適用することにより、組成物中のボツリヌス毒素を患者の皮膚に推し進める。電流量は典型的には1mA／cm2未満であり、好ましい態様では、0.3mA／cm2〜0.7mA／cm2の電流を適用する。皮膚を通したボツリヌス毒素の経皮送達の有効性は、少なくとも部分的には、ボツリヌス毒素の極性に依存するので、皮膚を通した毒素の輸送に関する電流の有効性を助長するために、組成物の酸性度を上げて、組成物のpHを下げ、ボツリヌス毒素を荷電させることが望ましいと考えられる。ボツリヌス毒素を含有する組成物のpHは、ボツリヌス毒素分子の生物活性を著しく損なわずに4まで低下させることができるが、好ましいpH範囲は5.5〜7.2である。また、電流は、皮膚に永久的な損傷（例えば熱傷）を与えない時間、電極に通される。例えば、約1分〜15分間にわたって電流を流すことができる。さらに長く適用する場合は、電気が引き起こす潜在的に有害な効果を減少させるために、電流をパルスにすることが望ましい。
【００７６】
神経毒は、主治医が決定した任意の適切な方法によって局所投与することができる。これらの投与方法は、選択した標的組織に神経毒を局所的に投与することを可能にする。投与方法として、組成物が標的部位の少なくとも一部を覆うように、組成物を皮膚に塗布することが挙げられる。また投与方法として、皮膚の標的部位に経皮パッチを適用し、経皮パッチ中の神経毒を皮膚内に拡散させることを挙げることもできる。長時間にわたる適用には、パッチを何度も適用しなくても、組成物が皮膚中にゆっくりと拡散することができるように、接着パッチを利用する。例えば、パッチは、神経毒をパッチから周期的に放出させるマイクロプロセッサを含むことができる。マクロプロセッサパッチは、上述したような微細針または低周波超音波装置を持つパッチでは、とりわけ有利になりうる。マイクロプロセッサは、処置対象である個々の状態に応じて、組成物の時限放出を行うことができる。マイクロプロセッサ制御医薬処置装置の一例は、米国特許第6,334,856号に見いだすことができる。
【００７７】
組織内でのボツリヌス毒素の生物学的活性の拡散は用量の関数であるらしく、累進的であることができる。Jankovic J. ら「Therapy With Botulinum Toxin」Marcel Dekker, Inc., （1994） の150頁。したがって、患者の障害に影響を及ぼしうる潜在的に望ましくない副作用を軽減するために、ボツリヌス毒素の拡散を制御することができる。例えば、神経毒が主として、炎症に関与する感覚ニューロンに作用し、他の皮下標的には影響しないように、神経毒を投与することができる。そのような場合、本組成物は、感覚ニューロンが終末している患者の真皮中に局所的に拡散できるようにのみ、比較的短時間（例えば1〜4時間）適用することができる。したがって神経毒は、P物質またはCGRPの放出を減少させるように感覚ニューロンに作用して、炎症と炎症に関連する痛みとを軽減することができる。
【００７８】
特定の理論に束縛されることは望まないが、本発明に従って実施される組成物を使って達成される処置効果については、ある機序を提案することができる。本明細書に開示する促進剤は、表皮の角質層を可溶化し、神経毒の流動性を増加させることにより、神経毒が皮下標的に到達した時の神経毒の生物活性を維持するようである。重要なことに、神経毒を局所投与する本発明の組成物および方法では、全身的毒性をもたらすことなく神経毒を患者に投与することが可能である。本明細書に示すとおり、非ボツリヌス毒素処置剤を経皮投与する先行技術の方法では、皮膚を通した処置剤の全身的投与が対象とされていた。また、患者にボツリヌス毒素を局所適用する先行技術の方法には、本明細書に開示する促進剤の使用は含まれていなかった。
【００７９】
上述のように、本発明者は、神経毒と促進剤とを含有する組成物が、驚くべきことに、患者皮膚付近のニューロン活動に関係する障害の有効で長時間持続する処置をもたらし、該障害に関係する症状を軽減することを見いだした。本発明は、その最も好ましい態様として、A型ボツリヌス毒素の局所投与によって実施される。
【００８０】
実施例
以下の実施例では、本発明に包含される患者を処置するための組成物および方法の具体例を説明するが、以下の実施例は本発明の範囲を限定しようとするものではない。例えば、以下の実施例ではA型ボツリヌス毒素を含有する組成物を取り上げるが、本発明者は、B型、C型、D型、E型、F型およびG型ボツリヌス毒素も、本明細書に記載の組成物として経皮投与した場合に、同等に有効であることを見いだした。当業者には理解されるとおり、個々のボツリヌス毒素型の用量は、本明細書に開示する特定の用量から、必要に応じて調節される場合があることを述べておく。上述のように、本明細書に記載の経皮投与法では、患者の健康を危険にさらすことなく、比較的広範囲のボツリヌス毒素濃度を使用することができる。
【実施例１】
【００８１】
100単位のA型ボツリヌス毒素を1mLの水に溶解し、1mLの90％エタノールおよび1mLのポリエチレングリコールと混合する。注射器にそのボツリヌス毒素組成物を充填する。手掌の多汗を訴える患者の手掌に、注射器から粘稠な溶液を押し出す。その溶液をヘラで手掌の表面全体に塗り広げる。組成物の蒸発速度を下げるために、患者の手をプラスチック製の袋で覆って約1時間気密封止する。袋を取り除き、患者には手を洗ってもらう。約2日後に、患者は、処置を受けた手がもはや汗ばんでおらず、処置を受けていない手はまだ汗ばんでいることに気付く。汗の減少は約6週間維持された後、徐々に元に戻る。この手順を両手に繰り返すと、約2日後には、両手共に発汗量の著しい減少を示す。
【実施例２】
【００８２】
85.8mgの天然ホスファチジルコリンおよび14.2mgのコール酸ナトリウムから、トランスファーソームの10％懸濁液1mLを調製する。脂質を可溶化するために約0.9mLのリン酸緩衝液を加える。その懸濁液を数回濾過して、大きさがほぼ均一な小胞の懸濁液を得る。その小胞に約1000単位のA型ボツリヌス毒素（BOTOX（登録商標））を加える。これは、4℃で少なくとも2日間、最長で約30日まで保存される。
【００８３】
額にしわを持つ患者が、しわを減らすために、ボツリヌス毒素を要望する。患者に横たわってもらう。上述したBOTOX（登録商標）とトランスファーソームとの懸濁液を、患者の額に局所適用する。約1時間後には懸濁液は蒸発し終わっている。患者には約6時間後に洗顔するように指示する。約2〜3日後に、患者は、額のしわの数が減っていることに気付き始める。約7日後にはしわが無くなる。BOTOX（登録商標）の効果は約4ヶ月間持続する。
【実施例３】
【００８４】
凍結乾燥BOTOX（登録商標）を、経皮接着パッチの皮膚側に設けられた複数の凹部に投入する。この経皮パッチは約2インチ×3インチ（5cm×7.5cm）の寸法を持っている。凹部は、パッチの皮膚側（すなわちパッチが皮膚と接触する側）にある約1cm2の格子状構造を構成している。各格子状構造は約100個の凹部を含んでいる。パッチの皮膚側はポリエチレンテレフタレート（PET）で作られている。各凹部は約50〜100単位の凍結乾燥BOTOXを含んでいる。凹部をポリビニルアルコール、ポリエチレンオキシドおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース製の溶解可能な薄膜で封止する。格子状構造の周りに接着縁を設ける。接着縁は幅約1cmで、ゴム系接着剤（B.F. Goodrich Co.のR-1072など）を含む。複数の凹部に凍結乾燥BOTOXを含有しているパッチは、毒素の生物活性に影響を及ぼさずに4℃で数ヶ月間保存することができる。
【００８５】
上述したパッチ2枚を、極端な筋過剰活動を示す位置の脊髄の両側に相当する患者の下背の皮膚に適用する。適用に先立って、その部位を95％エタノールで浄化することによって、皮膚の準備をする。水、80％エタノールおよびポリエチレングリコールを含有するゲルを、脊髄の両側、約1インチ×2インチの領域に適用する。各パッチを、ゲルが配置されている背中に接着適用する。パッチは適所に5〜7日間放置しておく。ゲルは膜を溶解し、凹部内のボツリヌス毒素を可溶化する。約4日後に、患者は下背筋の弛緩と、筋収縮に関連する痛みの軽減とに気付く。7日後までに、患者は、痛みが完全に無くなっていると述べる。痛み軽減効果は約5ヶ月間持続する。
【実施例４】
【００８６】
頸部ジストニアを持つ患者に対して、それぞれが約2インチ×3インチの寸法を持つ4枚の経皮パッチを、こわばった筋肉の上にある皮膚に適用する。これらの経皮パッチは、乾燥BOTOX（登録商標）の貯蔵部と、塩水の嚢部とを持っている。パッチの上から超音波装置を適用する。超音波は、パッチおよび患者の皮膚に15kHzの周波数で10分間適用する。超音波エネルギーは、患者皮膚の損傷が少なくなるように、パルスにする。10分後に、医師が超音波装置を取り除き、経皮パッチに圧力を加えて、塩水の嚢部を破裂させる。嚢部から押し出された塩水はボツリヌス毒素と混じって、毒素を可溶化する。組成物は皮膚を通して拡散によって送達される。パッチは適所に約5時間放置しておく。処置後約2〜3日で、患者は、痛みの多少の軽減と、筋肉の弛緩とを覚える。処置後約7日で、痛みはほとんど完全に取り除かれる。治療効果は約3ヶ月間持続する。
【実施例５】
【００８７】
手掌の多汗の患者がボツリヌス毒素治療を所望する。医師は患者を診察して、その患者がボツリヌス毒素治療の妥当な候補者であると決定する。医師は患者の手掌を軽石で研磨的にこする。皮膚の大部分がざらざらになってから、医師は、約10単位のBOTOX（登録商標）を含有する塩水ベースのゲルを、患者の手掌に適用する。ゲルが素早く蒸発してしまうのを防止するために、患者の手を、患者の手首の周りで封止しておいたプラスチック製の袋に入れておく。患者の手をその袋の中に約4時間入れておく。処置後約2日で、患者は、その手掌の多汗の軽減に気付く。7日後までにそのような発汗は完全に無くなり、筋活動の感知しうる喪失を患者が訴えることはない。多汗軽減効果は約6〜8週間持続する。
【実施例６】
【００８８】
約1000単位のBOTOX（登録商標）を含有する経皮パッチを、炎症を起こしている患者の肘に、軽石で皮膚を研磨的にこすることによって肘の準備をしてから適用する。皮膚をこすった後、経皮パッチを適用する前に、ゲルを肘に適用する。パッチは屈曲位の肘に適用する。ゲルはパッチのセルロース膜を溶解し、そこに含まれているボツリヌス毒素を可溶化する。パッチを肘に適用した約1時間（膜が溶解して毒素が可溶化されるのに十分な時間）後に、パッチの外表面に電極を設置する。接地電極は患者の胴に取り付ける。電極に強さ0.5mA／cm2の電流を5分間にわたって流す。2分間の休止後に、再び5分間にわたって電極から電流を流す。患者に約4日間パッチを適所においておくよう指示して帰宅させる。約2日後に、患者は炎症の軽減と、それに伴う痛みの軽減に気付く。約7日後までに、痛みはほとんど完全に取り除かれる。ボツリヌス毒素がもたらす軽減は約4ヶ月間持続する。
【００８９】
本発明のボツリヌス毒素含有経皮組成物およびそのような組成物を投与する方法には、以下に挙げる利点をはじめとする多くの利益および利点がある。
1．症状、例えば痙性筋、炎症または多汗を伴う過剰活動ニューロン系に関係する症状などを、劇的に軽減することができる。
2．皮膚への1回の神経毒の適用につき、約2〜約5ヶ月にわたって症状を軽減することができ、徐放性の組成物およびパッチを使用すれば、約1年〜約5年にわたって症状を軽減することができる。
3．投与される神経毒は、皮下部位から離れて拡散する傾向または皮下部位から離れて輸送される傾向を、ほとんどまたは全く示さない。
4．神経毒の局所投与によって、著しい有害副作用はほとんどまたは全く起こらない。
5．本組成物の抑制効果は、患者の可動性の増大、より積極的な態度、および生活の質の改善という、望ましい副次的作用をもたらしうる。
6．高処置量の神経毒を、全身的毒性を伴わずに、皮下標的組織に長期間にわたって送達することができる。
【００９０】
特定の好ましい方法に関して本発明を詳細に説明したが、本発明の範囲内で他の態様、形式および変更も考えられる。例えば、本発明の組成物および方法に、多様な神経毒を有効に使用することができる。
上述した参考文献、論文、特許、特許出願および刊行物は全て、参照により、そのまま本明細書に組み込まれるものとする。
したがって、本願特許請求の範囲の精神および範囲を、上述の好ましい態様の説明に限定してはならない。
【国際調査報告】
2005538082.tif 000002
2005538082.tif 000003
2005538082.tif 000004
2005538082.tif 000005
2005538082.tif 000006