(57)【要約】本発明は、ワクチン抗原に対する免疫応答を増進するため、免疫プロトコルにおいて、Ｆｌｔ３リガンド（Ｆｌｔ３−Ｌ）を用いる方法に関する。態様には、被験者をワクチンで免疫する前にＦｌｔ３リガンドを投与することが含まれ、ここでワクチンは、１以上のアジュバント中に配合された、少なくとも１つの抗原を含んでなる。Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルを用いて、疾患および感染を治療し、そして防止する方法もまた提供する。抗原およびアジュバントのｉｎ  ｖｉｖｏ評価にＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルを用いる方法もまた提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者を免疫する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなる、前記方法。
【請求項２】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項１の方法。
【請求項３】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項１の方法。
【請求項４】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１の方法。
【請求項５】
アジュバントが、ＡＤＪＵＭＥＲTM（ポリホスファゼン）；リン酸アルミニウムゲル；藻類グルカン類；アルガミュリン（ａｌｇａｍｍｕｌｉｎ）；水酸化アルミニウムゲル（ミョウバン）；高タンパク質吸着性（ａｄｓｏｒｂｅｎｃｙ）水酸化アルミニウムゲル；低粘性水酸化アルミニウムゲル；ＡＦまたはＳＰＴ（スクアレン（５％）、Ｔｗｅｅｎ８０（０．２％）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｌ１２１（１．２５％）、リン酸緩衝生理食塩水ｐＨ７．４のエマルジョン）；ＡＶＲＩＤＩＮＥTM（プロパンジアミン）；ＢＡＹ  Ｒ１００５TM（（Ｎ−（２−デオキシ−２−Ｌ−ロイシルアミノ−ｂ−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎ−オクタデシルドデカノイルアミド・ヒドロアセテート）；ＣＡＬＣＩＴＲＩＯＬTM（１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３）；リン酸カルシウムゲル；ＣＡＰTM（リン酸カルシウムナノ粒子）；コレラ・ホロトキシン、コレラ毒素Ａ１−プロテインＡ−Ｄ断片融合タンパク質、コレラ毒素Ｂサブユニット；ＣＲＬ１００５（ブロック・コポリマーＰ１２０５）；サイトカイン含有リポソーム；ＤＤＡ（ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド）；ＤＨＥＡ（デヒドロエピアンドロステロン）；ＤＭＰＣ（ジミリストイル・ホスファチジルコリン）；ＤＭＰＧ（ジミリストイル・ホスファチジルグリセロール）；ＤＯＣ／ミョウバン複合体（デオキシコール酸ナトリウム塩）；フロイントの完全アジュバント；フロイントの不完全アジュバント；ガンマ・イヌリン；Ｇｅｒｂｕアジュバント（以下の混合物：ｉ）Ｎ−アセチルグルコサミニル−（Ｐｌ−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−グルタミン（ＧＭＤＰ）、ｉｉ）ジメチルジオクタデシルアンモニウムクロリド（ＤＤＡ）、ｉｉｉ）亜鉛Ｌ−プロリン塩複合体（ＺｎＰｒｏ−８））；ＧＭ−ＣＳＦ；ＧＭＤＰ（Ｎ−アセチルグルコサミニル−（ｂ１−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン）；Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ（１−（２−メチプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）；ＩｍｍＴｈｅｒTM（Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−イソＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−グリセロールジパルミテート）；ＤＲＶ類（脱水−再水和小胞から調製した免疫リポソーム）；インターフェロン−γ；インターロイキン−１β；インターロイキン−２；インターロイキン−７；インターロイキン−１２；ＩＳＣＯＭＳTM（免疫刺激複合体）；ＩＳＣＯＰＲＥＰ  ７．０．３．TM；リポソーム；ＬＯＸＯＲＩＢＩＮＥTM（７−アリル−８−オキソグアノシン）；ＬＴ経口アジュバントTM（大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）不安定内毒素プロトキシン）；組成物いずれかの微小球体および微小粒子；ＭＦ５９TM；（スクアレン・水エマルジョン）；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ  ＩＳＡ  ５１TM（精製不完全フロイントアジュバント）；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ  ＩＳＡ  ７２０TM（代謝可能油アジュバント）；ＭＰＬTM（３−Ｑ−デスアシル−４’−モノホスホリル脂質Ａ）；ＭＴＰ−ＰＥおよびＭＴＰ−ＰＥリポソーム（（Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−（ヒドロキシ−ホスホリルオキシ））エチルア���ド、一ナトリウム塩）；ＭＵＲＡＭＥＴＩＤＥTM（Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−Ｇｌｎ−ＯＣＨ３）；ＭＵＲＡＰＡＬＭＩＴＩＮＥTMおよびＤ−ＭＵＲＡＰＡＬＭＩＴＩＮＥTM（Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ｔｈｒ−Ｄ−イソＧｌｎ−ｓｎ−グリセロールジパルミトイル）；ＮＡＧＯ（ノイラミニダーゼ−ガラクトースオキシダーゼ）；組成物いずれかのナノ球体またはナノ粒子；ＮＩＳＶ類（非イオン性界面活性剤小胞）；ＰＬＥＵＲＡＮTM（β−グルカン）；ＰＬＧＡ、ＰＧＡおよびＰＬＡ（乳酸およびグリコール酸のホモポリマーおよびコポリマー；ミクロ粒子／ナノ粒子）；ＰＬＵＲＯＮＩＣ  Ｌ１２１TM；ＰＭＭＡ（ポリメチルメタクリレート）；ＰＯＤＤＳTM（オロテイノイド（ｏｒｏｔｅｉｎｏｉｄ）微小球体）；ポリエチレンカルバメート誘導体；ポリｒＡ：ポリｒＵ（ポリアデニル酸−ポリウリジル酸複合体）；ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）；渦巻き型タンパク質（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｃｈｌｅａｔｅｓ）（Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ，  Ｉｎｃ．、アラバマ州アラバスター）；ＳＴＩＭＵＬＯＮTM（ＱＳ−２１）；Ｑｕｉｌ−Ａ（Ｑｕｉｌ−Ａサポニン）；Ｓ−２８４６３（４−アミノ−オテック，−ジメチル−２−エトキシメチル−ｌＨ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール）；ＳＡＦ−１TM（Ｓｙｎｔｅｘアジュバント配合物）；センダイ・プロテオリポソームおよびセンダイ含有脂質マトリックス；Ｓｐａｎ−８５（トリオレイン酸ソルビタン）；Ｓｐｅｃｏｌ（Ｍａｒｃｏｌ  ５２、Ｓｐａｎ  ８５およびＴｗｅｅｎ  ８５のエマルジョン）；スクアレンまたはＲｏｂａｎｅ（登録商標）（２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチルテトラコサンおよび２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２テトラコサヘキサエン）；ステアリルチロシン（オクタデシルチロシンヒドロクロリド）；Ｔｈｅｒａｍｉｄｅ（登録商標）（Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−イソＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−ジパルミトキシプロピルアミド）；スレオニル−ＭＤＰ（ＴｅｒｍｕｒｔｉｄｅTMまたは［ｔｈｒ１］−ＭＤＰ；Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン）；Ｔｙ粒子（Ｔｙ−ＶＬＰまたはウイルス様粒子）；Ｗａｌｔｅｒ  Ｒｅｅｄリポソームからなる群より選択される、請求項１の方法。
【請求項６】
抗原が癌抗原である、請求項１の方法。
【請求項７】
癌抗原が、黒色腫−メラニン細胞分化抗原（ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ  Ａ；ｇｐ１００／ｐｍｅｌ−１７；チロシナーゼ；チロシナーゼ関連タンパク質−１；チロシナーゼ関連タンパク質−２；メラニン細胞刺激ホルモン受容体）；癌−精巣抗原（ＭＡＧＥ−１；ＭＡＧＥ−２；ＭＡＧＥ−３；ＭＡＧＥ−１２；ＢＡＧＥ；ＣＡＧＥ、ＮＹＥＳＯ−１）；突然変異抗原（β−カテニン；ＭＵＭ−１；ＣＤＫ−４；カスパーゼ−８；ＫＩＡ  ０２０５；ＨＬＡ−Ａ２−Ｒ１７０１）；および癌で過剰発現される、非突然変異共有抗原（α−フェトプロテイン；テロメラーゼ触媒タンパク質；Ｇ−２５０；ＭＵＣ−１；癌胎児抗原；ｐ５３；Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ）、非突然変異タンパク質（ｇｐ１００；ＭＡＧＥ−１；ＭＡＧＥ−３；チロシナーゼ；ＮＹ−ＥＳＯ−１）に由来するエピトープ、および突然変異タンパク質（トリオースリン酸イソメラーゼ；ＣＤＣ−２７；ＬＤＬＲ−ＦＵＴ）に由来するエピトープからなる群より選択される、請求項６の方法。
【請求項８】
抗原がウイルス抗原である、請求項１の方法。
【請求項９】
ウイルス抗原が、レトロウイルス科（例えばヒト免疫不全ウイルス、例えばＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶまたはＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、またはＨＩＶ−ＩＩＩとも称される；および他の単離体、例えばＨＩＶ−ＬＰ））； ピコルナウイルス科（例えばポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス；エンテロウイルス、ヒト・コクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）；カリチウイルス科（Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ）（例えば胃腸炎を引き起こす株）；トガウイルス科（例えばウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）；フラビウイルス科（例えばデング熱ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）；コロナウイルス科（例えばコロナウイルス）；ラブドウイルス科（例えば水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；フィロウイルス（例えばエボラウイルス）；パラミクソウイルス科（例えばパラインフルエンザウイルス、おたふく風邪ウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス）；オルトミクソウイルス科（例えばインフルエンザウイルス）；ブニヤウイルス科（例えばハンタンウイルス、ブンガウイルス（ｂｕｎｇａ  ｖｉｒｕｓ）、フレボウイルスおよびナイロウイルス（Ｎａｉｒｏ  ｖｉｒｕｓ））；アレナウイルス科（出血熱ウイルス）；レオウイルス科（例えばレオウイルス、オルビウイルスおよびロタウイルス）；ビルナウイルス科；ヘパドナウイルス科（Ｂ型肝炎ウイルス）；パルボウイルス科（パルボウイルス）；パポバウイルス科（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）；アデノウイルス科（大部分のアデノウイルス）；ヘルペスウイルス科（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１および２、水痘・帯状ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス類）；ポックスウイルス科（天然痘ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）；およびイリドウイルス科（例えばアフリカ・ブタ熱ウイルス）；非Ａ非Ｂ肝炎のウイルス病原体；ノーウォークウイルスおよび関連ウイルス、並びにアストロウイルス（ａｓｔｒｏｖｉｒｕｓ））からなる群より選択される、請求項８の方法。
【請求項１０】
抗原が細菌抗原である、請求項１の方法。
【請求項１１】
細菌抗原が、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉｓ）、ライム病ボレリア（Ｂｏｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、レジオネラ・ニューモフィリア（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ）、マイコバクテリウム属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）種（例えばヒト型結核菌（Ｍ．  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、鳥型結核菌（Ｍ．  ａｖｉｕｍ）、Ｍ．イントラセルラレ（Ｍ．  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、Ｍ．カンサシ（Ｍ．  ｋａｎｓａｉｉ）、Ｍ．ゴルドネ（Ｍ．  ｇｏｒｄｏｎａｅ））、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、単球症リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（Ａ群連鎖球菌）、ストレプトコッカス・アガラクティエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群連鎖球菌）、連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）（ビリダンス群）、糞便連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、ウシ連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｂｏｖｉｓ）、連鎖球菌属（嫌気性種）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、病原性カンピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）種、腸球菌属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）種、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｒａｃｉｓ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、コリネバクテリウム種、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ  ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、ウエルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｒｓ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）、エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）種、フソバクテリウム・ヌクレアツム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、ストレプトバチルス・モニリフォルミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｉｕｍ）、トレポネーマ・ペルテヌエ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐｅｒｔｅｎｕｅ）、レプトスピラ属（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）、およびイスラエル放線菌（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｉｓｒａｅｌｌｉ）からなる群より選択される、請求項１０の方法。
【請求項１２】
抗原が感染性単細胞生物由来である、請求項１の方法。
【請求項１３】
抗原が、住血吸虫類；トリパノソーマ類；リーシュマニア属（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）種；フィラリア性線形動物；トリコモナス症；肉胞子虫症；無鉤条虫（Ｔａｅｎｉａ  ｓａｇｉｎａｔａ）、有鉤条虫（Ｔａｅｎｉａ  ｓｏｌｉｕｍ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、煙色コウジ菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ）、旋毛虫症、皮膚ブラストミセス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、トラコーマ・クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、鵞口瘡カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、三日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）、四日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｍａｌａｒｉａｅ）、およびトキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）からなる群より選択される、請求項１２の方法。
【請求項１４】
癌を有する被験者において癌を治療する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）癌抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなる、前記方法。
【請求項１５】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項１４の方法。
【請求項１６】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項１４の方法。
【請求項１７】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１４の方法。
【請求項１８】
被験者において、ウイルス感染を防止し、そして／または治療する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）ウイルス抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなる、前記方法。
【請求項１９】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項１８の方法。
【請求項２０】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項１８の方法。
【請求項２１】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１８の方法。
【請求項２２】
被験者において、細菌感染を防止し、そして／または治療する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）細菌抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなる、前記方法。
【請求項２３】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項２２の方法。
【請求項２４】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項２２の方法。
【請求項２５】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項２２の方法。
【請求項２６】
被験者において、抗原に対する免疫応答を増進する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなる、前記方法。
【請求項２７】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項２６の方法。
【請求項２８】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項２６の方法。
【請求項２９】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項２６の方法。
【請求項３０】
被験者において、抗原に対する抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞免疫応答を増進する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなる、前記方法。
【請求項３１】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項３０の方法。
【請求項３２】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項３０の方法。
【請求項３３】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３１の方法。
【請求項３４】
被験者において、抗原に対する抗原特異的Ｔヘルパー免疫応答を増進する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなる、前記方法。
【請求項３５】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項３４の方法。
【請求項３６】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項３４の方法。
【請求項３７】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３４の方法。
【請求項３８】
被験者において、抗原に対する免疫応答を評価する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；
（ｃ）抗原を被験者に投与し、ここで、抗原は、場合によってアジュバントとともに配合可能である；そして
（ｄ）抗原に対する被験者の免疫応答を評価する
工程を含んでなる、前記方法。
【請求項３９】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項３８の方法。
【請求項４０】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項３８の方法。
【請求項４１】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３８の方法。
【請求項４２】
１以上のアレルギーを有する被験者において、アレルギーを治療する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）アレルギーワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなる、前記方法。
【請求項４３】
Ｆｌｔ３リガンドを、アレルギーワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項４２の方法。
【請求項４４】
補助分子を、アレルギーワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項４２の方法。
【請求項４５】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項４２の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、これによって、米国仮出願第６０／４２７，８３５号、２００２年１１月１９日出願、および米国仮出願第６０／３６８，２６３号、２００２年３月２６日出願の優先権を請求し、これらの出願の開示は本明細書に依存され、そして援用される。
【０００２】
発明の分野
本発明は、抗原に対する免疫応答を増進するため、免疫プロトコルにおいて、Ｆｌｔ３リガンドを用いる方法に関する。態様には、抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンで被験者を免疫する前に、Ｆｌｔ３リガンドを投与することが含まれる。Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルを用いて、疾患および感染を治療し、そして防止する方法を提供する。抗原およびアジュバントのｉｎ  ｖｉｖｏ評価にＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルを用いる方法もまた提供する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
ワクチン接種の目的は、適切なレベルの抗原特異的抗体、および抗原との再度の接触に際して迅速に拡大可能なエフェクター細胞の初回抗原刺激を受けた（ｐｒｉｍｅｄ）集団を確立することによって、有効な免疫を提供することである。ワクチン接種は、感染性疾患による死亡または能力障害を防止する効率的な手段であり、そして多くのワクチンがヒトへの投与に関して承認を得ており、これらには、特定のアデノウイルス、麻疹ウイルス、おたふく風邪ウイルスおよび風疹ウイルス、およびポリオウイルスの生ウイルスワクチン、ジフテリアおよび破傷風トキソイドワクチン、並びにヘモフィルス属（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）ｂおよび髄膜炎菌多糖ワクチンが含まれる（Ｈｉｎｍａｎら，  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，  第３版中；Ｇ．Ｌ．  Ｍａｎｄｅｌｌ，  Ｒ．Ｇ．  ＤｏｕｇｌａｓおよびＪ．Ｅ．  Ｂｅｎｎｅｔｔ監修，  Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ  Ｉｎｃ．，  ニューヨーク州ニューヨーク；２３２０−２３３３；表２）。ワクチン接種が、感染性疾患を治療し、そして防止するのに成功したことから、腫瘍性疾患を治療するかまたは防止する際のワクチン利用に関して興味が高まっている。当該技術分野において、腫瘍が腫瘍特異的抗原を発現しうることが発見されたため、腫瘍抗原由来のＭＨＣクラスＩ制限ペプチドを利用する免疫戦略が発展してきた。しかし、臨床試験は限定された成功しか収めておらず、そして免疫戦略が最適ではなかったことは明らかである。
【０００４】
免疫プロトコルでしばしば困難なのは、ワクチン抗原が、強い免疫応答を促進するのに十分な免疫原性を所持せず、そしてしたがって同一抗原による続く攻撃に対して十分なレベルの防御を促進しないことである。さらに、特定の抗原は、弱い細胞仲介応答または抗体応答しか誘発しない可能性がある。特定の疾患に応じて、強い細胞仲介応答および／または体液性免疫応答が望ましい可能性がある。研究者は、ワクチンの免疫原性を増加させるため、多様な化合物を用いて、何十年も実験を行ってきた。アジュバントは、免疫応答を増進するか、増大させるか、または増強する物質であり、そしていくつかの場合では、１種類の免疫応答を別のものより促進するのに使用可能である。さらに、特定の新規組換え抗原の比較的弱い免疫原性は、より強力であるためにアジュバントを必要としてきた。ワクチンアジュバントは、定量的および定性的両方で免疫応答に影響を及ぼす、異なる作用様式を有する。こうした作用様式には、Ｔ細胞を可動化し、デポとして作用し、そしてリンパ球が流入領域リンパ節（ｄｒａｉｎｉｎｇ  ｌｙｍｐｈ  ｎｏｄｅ）に位置しつづけるように、リンパ球循環を改変することが含まれる。これらはまた、抗原を免疫部位に集中させ、それによって抗原特異的Ｔ細胞およびＢ細胞が、抗原提示細胞と、より効率的に相互作用するのを可能にするようにも働きうる。これらはまた、Ｔ細胞の増殖および分化を刺激し、そして異なるＩｇアイソタイプの産生を増進させるなど、Ｂ細胞に対する影響を有する可能性もある。アジュバントはまた、抗原提示細胞、特に樹状細胞およびマクロファージのふるまいを刺激して、そしてこれらに影響を及ぼし、これらがＴ細胞およびＢ細胞に抗原を提示するのをより有効にしうる。不運なことに、ヒトでの使用には、アジュバントはほとんど認可されておらず、そしてＦＤＡ認可を受けたアジュバントは、免疫増強効果が比較的低い。
【０００５】
抗原搬送およびワクチン学における進歩にもかかわらず、癌および感染性疾患のための効率的なワクチン療法を発展させるには、いまだに多くの難問がある。本明細書に記載する態様は、これらの必要性に取り組む。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
発明の概要
本発明の態様は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルおよび該プロトコルを用いる方法に関する。
【０００７】
１つの態様において、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルは、被験者を免疫する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなり、そしてここでＦｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与し、そしてここで補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与し、そしてここで補助分子は、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、前記方法に関する。
【０００８】
さらなる態様は、被験者において、ワクチン抗原に対する免疫応答を増進する方法に関する。
他の態様は、被験者において、抗原特異的エフェクター細胞の数を増加させる方法に関する。
【０００９】
さらなる態様は、被験者において、抗原特異的ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞および／またはＣＤ４＋  Ｔヘルパー細胞の数を増進する方法に関する。
さらなる態様は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルを用いて、癌を防止し、そして／または治療することに関する。
【００１０】
他の側面において、態様は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルを用いて、ウイルス感染を防止し、そして／または治療することに関する。
さらなる態様は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルを用いて、細菌感染を防止し、そして／または治療することに関する。
【００１１】
さらなる態様は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルを用いて、単細胞生物による感染を防止し、そして／または治療することに関する。
さらに他の態様において、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルを用いて、動物モデルまたは試験被験者において、ワクチンの有効性、抗原の免疫原性を試験するか、または曝露モデルにおいて、抗原および／またはワクチンに対する防御免疫応答を評価することが可能である。
【００１２】
さらなる態様は、アレルゲン特異的免疫療法と組み合わせてＦｌｔ３リガンドを投与することを含んでなる、アレルギー患者の治療に関する。
発明の詳細な説明
本発明の態様は、Ｆｌｔ３リガンドのユニークな特性を利用して、免疫プロトコルにおいてＦｌｔ３リガンドを用いる方法を含む。以下により詳細に定義する、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルは、少なくとも部分的に、Ｆｌｔ３リガンドを被験者に投与し、そして被験者をワクチンで免疫することを含んでなる。Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの態様は、驚くべき、そして前例のない、ワクチン接種に対する免疫応答の増大および延長を示した。この増進した免疫応答は、抗原特異的であり、そして少なくとも部分的に、限定されるわけではないが、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞およびＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞などの抗原特異的エフェクター細胞数の増加に特徴付けられる。したがって、本発明の１つの態様は、ｉｎ  ｖｉｖｏで抗原提示細胞を増加させ、そして／または可動化するために、有効量のＦｌｔ３リガンドを使用し、そして抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンで被験者を免疫することを提供する。
【００１３】
他の側面において、本発明の態様は、造血前駆細胞および幹細胞から多数の中間細胞種を生成するための、Ｆｌｔ３リガンドのｉｎ  ｖｉｖｏ使用に関する。Ｆｌｔ３リガンド（本明細書および当該技術分野において、Ｆｌｔ３−ＬまたはＦＬとも称される）は、造血幹細胞および前駆細胞に影響を及ぼすことが知られる。Ｆｌｔ３リガンドは、下流細胞または中間細胞、例えばＣＤ３４+骨髄前駆細胞および幹細胞由来の骨髄性前駆細胞、単球性細胞、マクロファージ、Ｂ細胞および樹状細胞の生成を強力に刺激することが示されてきている。これらの中間細胞種は、多数では、ｉｎ  ｖｉｖｏで天然に見出されず、そしてＦｌｔ３リガンドを投与することによって生成可能である。さらに、Ｆｌｔ３リガンドは、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば被験者の末梢血あるいは他の組織または臓器、例えば脾臓、肝臓、肺およびリンパ節において、樹状細胞を増加させるかまたは可動化することが示されてきている。被験者の樹状細胞量を増加させることによって、こうした細胞は、それ自体、Ｔ細胞およびＢ細胞などのエフェクター細胞に抗原を提示するのに使用可能である。全細胞数中のこうした増進は、宿主において、抗原に対する免疫応答を増大させることが可能である。したがって、Ｆｌｔ３リガンドを用いて、被験者のリンパ球が仲介する（例えばＴ細胞およびＢ細胞が仲介する）か、または骨髄性細胞が仲介する、抗原に対する免疫応答をブーストすることが可能であり、それによって被験者のＴ細胞へのより効果的な抗原提示を可能にする。全体の応答は、より強くそして改善された免疫応答であり、そして抗原に対するより有効な免疫である。
【００１４】
したがって、樹状細胞、マクロファージ、単球、Ｂ細胞等の、被験者の抗原提示細胞（ＡＰＣ）の量および特性を調節し、そしてこれらのＡＰＣを、アジュバントの背景で提示される抗原（すなわちワクチン）に曝露することによって、驚くほど堅固な抗原特異的免疫応答が生成される。
【００１５】
Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルは、疾患、障害または感染の防止および／または治療のため、被験者にＦｌｔ３リガンド、ワクチン、場合によって１以上の補助分子とともに、他の付随する分子および／または配合物（例えば希釈剤、キャリアー、賦形剤等）を投与することを指す。上述のＦｌｔ３リガンド、ワクチンおよび他の構成要素は、いかなる投薬量、順序、頻度および時間的な並べ方でも投与可能である。当業者は、これらのパラメーターを変化させて治療を最適化することが、当該技術分野で日常的に行われることを認識するであろう。したがって、本出願の目的のため、投薬量、順序、頻度および時間的な並べ方のこうした順列および組み合わせはすべて、本明細書に記載する方法に含まれる。さらなる態様はまた、「初回抗原刺激および追加免疫（ｐｒｉｍｅ  ａｎｄ  ｂｏｏｓｔ）」技術などの免疫措置において、Ｆｌｔ３リガンドを用いることも含み、ここで、抗原を発現する生ウイルスベクターまたは抗原をコードするＤＮＡに基づくワクチン（裸またはプラスミド）いずれかで被験者を免疫し、そして続いて、１以上のアジュバント中に配合した１以上の抗原で追加免疫する。Ｆｌｔ３リガンドは、初回抗原刺激および追加免疫措置の前、または措置中、または措置後のいかなるときにも投与可能である。
【００１６】
本明細書に提示する研究によって、免疫前にマウスをＦｌｔ３リガンドで処置した際に生じる、抗原特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞の劇的な拡大が立証される。例えば、抗原特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞は、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中に配合した抗原で免疫する前にＦｌｔ３リガンドを投与されたマウスにおいて、Ｆｌｔ３リガンドを投与されないマウスより、およそ３４倍高く、そしてＰＢＳ中に配合した抗原しか投与されなかったマウスより、１１４倍高かった。免疫５日後、抗原特異的ＣＴＬは、流入領域リンパ節中のすべての細胞の２５〜４０％を構成するまでに拡大し、これは約２．５〜９ｘ１０6細胞に等しかった。ｐＧＭ−ＣＳＦおよび／またはＣＤ４０−Ｌなどの補助分子をさらに添加すると、ＣＤ８＋  Ｔ細胞拡大がさらに増大し、そして延長された。
【００１７】
Ｆｌｔ３リガンド前処置、およびデポ様効果を有するものなどのアジュバント中に配合した抗原での免疫を組み合わせると、抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）生成に劇的な効果があった。とりわけ、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルによって拡大したＣＤ８＋  Ｔ細胞は、標準的ＣＴＬアッセイによって測定した際、機能する、抗原特異的エフェクター細胞であった。
【００１８】
際立ったことに、免疫前にＦｌｔ３リガンドを投与された群、および場合によって補助分子を投与された群は、非常に増大した免疫応答を有し、流入領域リンパ節から直接単離したＴ細胞集団でＣＴＬ活性が測定され、すなわち、抗原特異的ＣＴＬ活性を明らかにするためにｉｎ  ｖｉｔｒｏで再刺激する必要はなかった。これらの結果によって、Ｆｌｔ３リガンドで前処置され、そして続いてワクチン接種されたマウスで生成される抗原特異的ＣＤ８＋  ＣＴＬ免疫応答は、ウイルス感染に対する急性応答において生成されるものと同程度に強力であったことが立証される。
【００１９】
さらに、免疫前にＦｌｔ３リガンドを投与された被験者は、標準的増殖アッセイおよびＩＦＮγ検出アッセイによって測定した際、生物学的に機能性である、抗原特異的ＣＤ４＋  Ｔヘルパー細胞を有意により高いレベルで有した。
【００２０】
別の一連の研究において、Ｆｌｔ３リガンド前処置を受けた群は、ワクチン配合物中で使用したアジュバント、すなわち不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、水酸化アルミニウム（ミョウバン）またはＱｕｉｌ−Ａサポニン（Ｑｕｉｌ−Ａ）、に関わらず、一貫してより高い免疫応答を有した。これらの知見によって、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルが、多様なアジュバント中に配合した抗原に対する免疫応答を増進し、そしてＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルが、抗原／アジュバント単独での免疫よりも免疫応答を増進することが立証される。さらに、Ｆｌｔ３リガンド前処置を受け、そしてミョウバンまたはＱｕｉｌ−Ａ中に配合した抗原をワクチン接種されたマウスは、時間に渡って、より高い割合のＣＤ４＋トランスジェニックＴ細胞を維持し、これによって、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルが、増大した免疫応答を延長させることが立証される。総合すると、これらの結果によって、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルが、標準的ワクチン接種技術よりも、抗原特異的エフェクター細胞応答の度合いおよび期間両方を増加させることが立証される。
【００２１】
さらなる研究によって、Ｆｌｔ３リガンドでの前処置、すなわちワクチン投与前のＦｌｔ３リガンドの投与は、免疫プロトコルのある範囲に渡って有効であったことが示される。とりわけ、Ｆｌｔ３−Ｌ免疫プロトコルは、ペプチド抗原およびタンパク質抗原どちらに対しても、ＣＤ８＋  ＣＴＬエフェクター細胞応答を生成するのに有効であった。他の研究において、免疫後にＩＬ−１５などの補助分子を投与すると、マウスをＦｌｔ３リガンドで前処置した際の、抗原特異的ＣＤ８＋  ＣＴＬ拡大および機能がさらに増大された。免疫直後にＩＬ−１５または抗４−１ＢＢなどの補助分子で処置すると、メモリーＴ細胞プールのサイズが増大することがさらに示されている。
【００２２】
別の態様において、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコル、並びに疾患および／または感染を治療し、そして／または防止する関連方法は、デポ様特性および炎症誘発特性を所持するアジュバント、例えばエマルジョンまたはゲルに基づくアジュバントであって、限定されるわけではないが、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）を含む、前記アジュバントを有するワクチンを含んでなる。デポ様特性を有するアジュバントの１つの利点は、こうしたアジュバントがなければ、体から迅速に一掃されるであろう小さい抗原の場合に、非常に有効であることである。理論に縛られることなく、抗原を最初のデポに局在化させ、そして抗原を流入領域リンパ節に散在させる傾向があるアジュバントは、流入領域リンパ節において、抗原および樹状細胞の相互作用を増進し、そして続いてＴ細胞を活性化するため、有効である可能性がある。さらに、常在樹状細胞は、免疫部位で、または免疫部位近傍で、抗原を内在化し、そして流入領域リンパ節に移動して、そしてＴ細胞が豊富な領域に抗原を提示するか、またはエキソソームによって、抗原をリンパ節中の他の樹状細胞に分散させ、これが続いてエキソソームを内在化し、そしてＴ細胞に抗原を提示する可能性がある。
【００２３】
本明細書記載の方法を用いて、疾患、障害または感染性疾患を治療しそして／また防止する、さらなる利点には、少なくとも部分的に、免疫原性が弱い抗原、例えば非常に精製された抗原または組換え抗原などの免疫原性の増進；用いる抗原量の潜在的な減少；より頻度の低い追加免疫；有効性の改善；細胞仲介免疫および／または体液性免疫の優先的な刺激；および免疫応答の潜在的な標的化、例えば粘膜免疫のためのパイアー斑の精選細胞の標的化が含まれる。
【００２４】
用語「被験者」は、本明細書において、哺乳動物を指す。例えば、本発明に意図される哺乳動物には、ヒト；霊長類；イヌ、ネコなどのすべての種類のペット；ヒツジ、ウシ、ヤギ、ブタ、ウマ等の家畜動物；マウス、ラット、ウサギ、モルモットなどの一般的な実験動物；それとともに、動物園におけるような捕獲された動物または自由な野生動物が含まれる。本明細書全体を通じて、用語、宿主は、被験者と交換可能に用いられる。
【００２５】
抗原提示細胞またはＡＰＣは、本明細書において、細胞表面上で、ＭＨＣ分子と会合した、タンパク質抗原のペプチド断片を提示する細胞である。ＡＰＣのあるものは、抗原特異的Ｔ細胞を活性化することが可能である。ＡＰＣの例には、限定されるわけではないが、樹状細胞、マクロファージ、単球、Ｂ細胞等が含まれる。
【００２６】
エフェクター細胞は、本明細書において、サイトカインおよび／またはケモカインを分泌し、微生物を殺し、感染細胞または癌性細胞を認識し、そして場合によって殺し、それとともに抗体を分泌するなど、免疫応答中のエフェクター機能を行う細胞である。例には、限定されるわけではないが、Ｔ細胞（細胞傷害性、ヘルパー、腫瘍浸潤）、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、好中球、マクロファージおよび樹状細胞が含まれる。
【００２７】
本明細書において、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに単数形を指示しない限り、複数の対象を含む。したがって、例えば、「免疫（ａｎ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）」への言及には、複数のこうした免疫が含まれ、そして「細胞（ｔｈｅ  ｃｅｌｌ）」への言及には、１以上の細胞および当業者に知られるその同等物への言及が含まれるなどである。本明細書で用いるすべての技術用語および科学用語は、明らかに異なって示されない限り、本発明が属する当該技術分野の一般的な当業者に、一般的に理解されるのと同一の意味を有する。
【００２８】
本発明は、記載する特定の方法論、プロトコル、細胞株、動物種または属、構築物、および試薬には限定されないと理解されるものとし、これは、こうしたものが多様でありうるためである。また、本明細書において用いる専門用語は、特定の態様を記載する目的のみのものであり、そして本発明の範囲を限定することは意図されず、本発明の範囲は、付随する請求項によってのみ限定されるであろう。
【００２９】
Ｆｌｔ３リガンド
本明細書において、用語Ｆｌｔ３リガンドは、本明細書に援用される米国特許第５，５５４，５１２号および米国特許第６，２９１，６６１号に記載されるポリペプチド類を指す。本明細書に記載する方法で使用可能なＦｌｔ３リガンドの型には、限定されるわけではないが、ネズミおよびヒトＦｌｔ３リガンドが含まれる。ヒトＦｌｔ３リガンドｃＤＮＡは、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション、米国メリーランド州ロックビル（ＡＴＣＣ）に、１９９３年８月６日に寄託され、そして寄託番号ＡＴＣＣ  ６９３８２を割り当てられ、そしてマウスＦｌｔ３リガンドｃＤＮＡは、同じ日に寄託され、そして寄託番号ＡＴＣＣ  ６９２８６を割り当てられた。寄託はブダペスト条約の条件下で行われた。Ｆｌｔ３リガンドは、Ｉｍｍｕｎｅｘ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ワシントン州シアトルから商業的に入手可能である。Ｆｌｔ３リガンドは、上に引用する文書に記載される方法にしたがって作成可能である。限定されるわけではないが、ポリエチレングリコールなどの１以上の水可溶性ポリマーを添加することによって、Ｆｌｔ３リガンドを修飾して、生物学的利用能および／または薬物動態学的半減期を増加させることが可能である。別の態様において、本明細書に記載する免疫プロトコルにおいて、Ｆｌｔ３リガンドの生物学的効果を模倣するＦｌｔ３結合タンパク質が使用可能である。例えば、ＷＯ９５／２７０６２は、Ｆｌｔ３に対するアゴニスト性抗体、Ｆｌｔ３リガンドの受容体を記載し、これらから、多様なＦｌｔ３結合タンパク質が調製可能である。
【００３０】
Ｆｌｔ３リガンドの特に好ましい型は、Ｆｌｔ３リガンドの生物学的に活性な可溶性型であり、そして特に、細胞外ドメイン、または細胞外ドメインの１以上の断片を含んでなる型である。Ｆｌｔ３リガンドの可溶性型は、発現される細胞から分泌されることが可能なポリペプチドである。こうした型では、ポリペプチドが発現される細胞から完全に分泌されるように、ポリペプチドの細胞内ドメインおよび膜貫通ドメインの一部またはすべてが欠失している。本発明のポリペプチドの細胞内ドメインおよび膜貫通ドメインは、配列情報からこうしたドメインを決定するための既知の技術にしたがって、同定可能である。可溶性Ｆｌｔ３リガンドにはまた、細胞から分泌されることが可能であるとの条件で膜貫通領域の一部を含み、そして好ましくはＦｌｔ３受容体に結合する能力を保持し、そしてその生物学的効果を達成するポリペプチドも含まれる。可溶性Ｆｌｔ３リガンドには、少なくとも１つのＦｌｔ３リガンドポリペプチドの細胞外部分を含んでなるオリゴマーまたは融合ポリペプチド、およびＦｌｔ３リガンドポリペプチド活性を有するこれらのポリペプチドいずれかの断片が、さらに含まれる。
【００３１】
ヒトＦｌｔ３リガンドは、配列番号１のアミノ酸２８〜Ｘａａからなる群より選択されるアミノ酸配列を含んでなることが可能であり、ここでＸａａはアミノ酸１６０〜２３５である。別の態様は、配列番号１のアミノ酸２７〜Ｘａａからなる群より選択されるアミノ酸配列を含んでなり、ここでＸａａはアミノ酸１６０〜２３５である。ネズミＦｌｔ３リガンドは、配列番号２のアミノ酸２８〜Ｙａａからなる群より選択されるアミノ酸配列を含んでなることが可能であり、ここでＹａａはアミノ酸１６３〜２３１である。可溶性ヒトＦｌｔ３リガンドの態様には：配列番号１の残基２７〜１６０（包括的）、配列番号１の残基２８〜１６０（包括的）、配列番号１の残基２７〜１７９（包括的）、配列番号１の残基２７〜１８２（包括的）、配列番号１の残基２８〜１８２（包括的）、配列番号１の残基２７〜２３５（包括的）および配列番号１の残基２８〜２３５（包括的）のアミノ酸配列が含まれる。可溶性ネズミＦｌｔ３リガンドの態様には：配列番号２の残基２８〜１６３（包括的）のアミノ酸配列、配列番号２の残基２８〜１８８（包括的）のアミノ酸配列および配列番号２の残基２８〜２３１（包括的）のアミノ酸配列が含まれる。
【００３２】
もちろん、本明細書記載の方法では、実質的に類似であり、そして匹敵する生物学的活性を保持するＦｌｔ３リガンド変異体が使用可能である。用語「実質的に類似」は、好ましくは天然アミノ酸配列に少なくとも８０％同一であり、最も好ましくは少なくとも９０％同一である変異体アミノ酸配列を意味する。２つのアミノ酸または２つの核酸配列の同一性パーセントは、視覚的検査および数学的計算によって決定可能であるし、またはより好ましくは、コンピュータプログラムを用いて配列情報を比較することによって、比較を行う。典型的な好ましいコンピュータプログラムは、遺伝学コンピュータグループ（ＧＣＧ；ウィスコンシン州マディソン）ウィスコンシンパッケージ、バージョン１０．０プログラム、「ＧＡＰ」（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら，  １９８４，  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １２：３８７）である。「ＧＡＰ」プログラムの好ましいデフォルトパラメータには：（１）ヌクレオチドに関する単一（ｕｎａｒｙ）比較マトリックス（同一に対し１および非同一に対し０の値を含む）、並びにＳｃｈｗａｒｔｚおよびＤａｙｈｏｆｆ監修，Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，  ｐｐ．３５３−３５８，  １９７９に記載されるような、ＧｒｉｂｓｋｏｖおよびＢｕｒｇｅｓｓ，  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １４：６７４５，  １９８６の加重アミノ酸比較マトリックス；または他の匹敵する比較マトリックスのＧＣＧ実行；（２）アミノ酸配列の各ギャップに対する３０のペナルティおよび各ギャップ中の各記号に対しさらに１のペナルティ、またはヌクレオチド配列の各ギャップに対する５０のペナルティおよび各ギャップ中の各記号に対しさらに３のペナルティ；（３）末端ギャップに対するペナルティなし；および（４）長いギャップに対する最大ペナルティなし、が含まれる。配列比較の当業者に使用される他のプログラム、例えばＮａｔｉｏｎａｌ  Ｌｉｂｒａｒｙ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅウェブサイトｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｇｏｒｆ／ｗｂｌａｓｔ２．ｃｇｉを介しての使用に利用可能なＢＬＡＳＴＮプログラム、バージョン２．０．９、またはＵＷ−ＢＬＡＳＴ  ２．０アルゴリズムなどもまた、使用可能である。ＵＷ−ＢＬＡＳＴ  ２．０の標準的デフォルトパラメータ設定は、以下のインターネットサイト：ｓａｐｉｅｎｓ．ｗｕｓｔｌ．ｅｄｕ／ｂｌａｓｔ／ｂｌａｓｔ／＃Ｆｅａｔｕｒｅｓに記載される。さらに、該ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、ＢＬＯＳＵＭ６２アミノ酸スコア化マトリックスを用い、そして使用可能な、場合によるパラメーターは、以下のとおりである：（Ａ）組成上の複雑さが低いクエリー配列のセグメント（ＷｏｏｔｔｏｎおよびＦｅｄｅｒｈｅｎ（Ｃｏｍｐｕｔｅｒｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  １９９３）のＳＥＧプログラムによって決定されるようなもの；また、ＷｏｏｔｔｏｎおよびＦｅｄｅｒｈｅｎ，  １９９６，  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌｌｙ  ｂｉａｓｅｄ  ｒｅｇｉｏｎ  ｉｎ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｄａｔａｂａｓｅ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ���ｎｚｙｍｏｌ．  ２６６：５５４−７１も参照されたい）、または短い周期の内部反復からなるセグメント（ＣｌａｖｅｒｉｅおよびＳｔａｔｅｓ（Ｃｏｍｐｕｔｅｒｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  １９９３）のＸＮＵプログラムによって決定されるようなもの）をマスクするフィルターの包含、および（Ｂ）データベース配列に対するマッチを報告する、統計的有意性の閾値、またはＥスコア（ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９０）の確率論モデルによって、マッチが単なる偶然によって見出されると予期される確率；マッチに割り当てられた統計的有意性がこのＥスコア閾値より高ければ、該マッチは報告されないであろう）；好ましいＥスコア閾値は０．５であり、または優先性を増加させるため、０．２５、０．１、０．０５、０．０１、０．００１、０．０００１、１ｅ−５、１ｅ−１０、１ｅ−１５、１ｅ−２０、１ｅ−２５、１ｅ−３０、１ｅ−４０、１ｅ−５０、１ｅ−７５、または１ｅ−１００である。
【００３３】
Ｆｌｔ３リガンド変異体は、保存的置換配列、すなわち、規定のアミノ酸残基が、類似の物理化学的特性を有する残基で交換されるものを含んでなることが可能である。保存的置換の例には、１つの脂肪族残基の別のものでの置換、すなわちＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＡｌａの互いの置換、あるいは１つの極性残基の別のものでの置換、例えばＬｙｓおよびＡｒｇ間；ＧｌｕおよびＡｓｐ間；またはＧｌｕおよびＡｓｎ間の置換が含まれる。他のこうした保存的置換、例えば類似の疎水性特性を有する全領域の置換が周知である。天然存在変異体もまた、本発明に含まれる。こうした変異体の例は、選択的ｍＲＮＡスプライシング事象から生じるか、または天然タンパク質のタンパク質分解切断から生じる、天然生物学的特性が保持されているタンパク質である。
【００３４】
当業者は、既知の技術を用いて、Ｆｌｔ３リガンドペプチドまたはＦｌｔ３リガンドＤＮＡ配列中のさらなる修飾を行うことが可能である。ポリペプチド配列中の目的の修飾には、選択したアミノ酸の改変、置換、交換、挿入または欠失が含まれることが可能である。例えば、１以上のシステイン残基を欠失させるかまたは別のアミノ酸と交換して、分子のコンホメーションを改変することが可能であり、この改変は、フォールディングまたは再生に際して、正しくない分子内ジスルフィド架橋の形成を防ぐことを伴いうる。こうした改変、置換、交換、挿入または欠失のための技術は、当業者に周知である（例えば米国特許第４，５１８，５８４号を参照されたい）。別の例として、Ｆｌｔ３リガンド細胞外ドメインのＮ−グリコシル化部位を修飾して、グリコシル化を妨げてもよく、これによって哺乳動物および酵母発現系における炭水化物減少類似体（ａｎａｌｏｇ）の発現が可能になる。真核ポリペプチドのＮ−グリコシル化部位はアミノ酸トリプレットＡｓｎ−Ｘ−Ｙにより特徴付けられ、ここでＸはＰｒｏ以外のいかなるアミノ酸でもよく、そしてＹはＳｅｒまたはＴｈｒである。これらのトリプレットをコードするヌクレオチド配列に対する適切な置換、付加または欠失の結果、Ａｓｎ側鎖での炭水化物残基の付着が防止されるであろう。例えば、Ａｓｎが異なるアミノ酸によって交換されるように選択される、単一のヌクレオチドの改変は、Ｎ−グリコシル化部位を不活性化するのに十分である。あるいは、ＳｅｒまたはＴｈｒを別のアミノ酸、例えばＡｌａと交換可能である。ポリペプチドのＮ−グリコシル化部位を不活性化するための既知の方法には、米国特許第５，０７１，９７２号およびＥＰ  ２７６，８４６に記載されるものが含まれる。本発明の範囲内のさらなる変異体には、グリコシル基、脂質、リン酸基、アセチル基等の他の化学部分と共有コンジュゲートまたは凝集コンジュゲートを形成することによって修飾され、誘導体を生成しうるポリペプチドが含まれる。共有誘導体は、アミノ酸側鎖上の官能基に、あるいはポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に、化学部分を連結することによって、調製可能である。好ましくは、こうした改変、置換、交換、挿入または欠失は、Ｆｌｔ３リガンドの生物学的活性を減少させない。１つの例は、天然型と本質的に同一の結合親和性で結合する変異体である。結合親和性は、例えば米国特許第５，５１２，４５７号に記載されるように、そして本明細書に示すように、慣用法によって測定可能である。
【００３５】
さらなるＦｌｔ３リガンド誘導体には、Ｎ末端またはＣ末端融合体としての組換え培養における合成によるなどの、他のポリペプチドまたはポリペプチドと該ポリペプチドの共有または凝集コンジュゲートが含まれる。融合ポリペプチドの例を、オリゴマーと関連して以下に論じる。さらに、融合ポリペプチドは、精製および同定を容易にするため付加するペプチドを含んでなることが可能である。こうしたペプチドには、例えば、ポリ−Ｈｉｓまたは米国特許第５，０１１，９１２号およびＨｏｐｐら，  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：１２０４，  １９８８に記載される抗原性同定ペプチドが含まれる。こうしたペプチドの１つはＦＬＡＧ（登録商標）ペプチドであり、該ペプチドは抗原性が高く、そして特異的なモノクローナル抗体が可逆的に結合するエピトープを提供し、発現した組換えポリペプチドの迅速なアッセイおよび容易な精製を可能にする。４Ｅ１１と称されるネズミハイブリドーマは、米国特許第５，０１１，９１２号に記載されるように、特定の二価金属陽イオンの存在下でＦＬＡＧ（登録商標）ペプチドに結合するモノクローナル抗体を産生する。４Ｅ１１ハイブリドーマ細胞株は、寄託番号第ＨＢ９２５９号でアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託されている。ＦＬＡＧ（登録商標）ペプチドに結合するモノクローナル抗体は、Ｅａｓｔｍａｎ  Ｋｏｄａｋ  Ｃｏ．，  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ、コネティカット州ニューヘブンより入手可能である。
【００３６】
本明細書記載の方法で使用可能なＦｌｔ３リガンドのさらなる態様には、Ｆｌｔ３リガンド、Ｆｌｔ３リガンドの１以上の断片、または本明細書に開示するとともに、上に列挙する米国特許に開示される、Ｆｌｔ３リガンドの誘導体または変異体型のいずれかを含有するオリゴマーまたは融合ポリペプチドが含まれる。特定の態様において、オリゴマーは可溶性Ｆｌｔ３リガンドポリペプチドを含んでなる。オリゴマーは、二量体、三量体、またはより高次のオリゴマーを含む、共有結合または非共有結合多量体型であることが可能である。別の態様において、Ｆｌｔ３リガンドオリゴマーは、ポリペプチドに融合しているペプチドであって、オリゴマー化を促進する特性を有する前記ペプチド部分間の共有または非共有相互作用を介して連結されている、多数のＦｌｔ３リガンドポリペプチドを含んでなる。以下により詳細に記載するように、付着するポリペプチドのオリゴマー化を促進することが可能なペプチドの中に、ロイシンジッパーおよび抗体由来の特定のポリペプチドがある。
【００３７】
免疫グロブリンに基づくオリゴマー。可溶性Ｆｌｔ３リガンドおよびその断片を、免疫グロブリンのＦｃ部分に、直接、またはリンカー配列を通じて、融合させることが可能である。Ｆｌｔ３リガンドを二価型にするため、こうした融合は、ＩｇＧ分子のＦｃ部分に対しての融合であることが可能である。他の免疫グロブリンアイソタイプもまた用いて、こうした融合体を生成することが可能である。例えば、ポリペプチド−ＩｇＭ融合は、本発明のポリペプチドの十価型を生成するであろう。本明細書において、用語「Ｆｃポリペプチド」には、抗体のＦｃ領域のＣＨドメインのいずれかまたはすべてを含んでなるＦｃ領域で構成される、ポリペプチドの天然型および突然変異タンパク質（ｍｕｔｅｉｎ）型が含まれる。二量体化を促進するヒンジ領域を含有する、こうしたポリペプチドの一部切除（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）型もまた含まれる。好ましいＦｃポリペプチドは、ヒトＩｇＧ１抗体由来のＦｃポリペプチドを含んでなる。１つの代替物として、免疫グロブリン由来のポリペプチドを用いて、オリゴマーを調製する。抗体由来ポリペプチドの多様な部分（Ｆｃドメインを含む）に融合している特定の異種ポリペプチドを含んでなる融合ポリペプチドの調製は、例えば、Ａｓｈｋｅｎａｚｉら（ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８８：１０５３５，  １９９１）；Ｂｙｒｎら（Ｎａｔｕｒｅ，  ３４４：６７７，  １９９０）；並びにＨｏｌｌｅｎｂａｕｇｈおよびＡｒｕｆｆｏ（“Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ”，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ中，  Ｓｕｐｐｌ．４，  １０．１９．１−１０．１９．１１ページ，  １９９２）に記載されている。免疫グロブリンに基づくオリゴマーの調製法および使用法は、当該技術分野に周知である。Ｆｌｔ３リガンドの１つの態様は、Ｆｌｔ３リガンドを抗体由来のＦｃポリペプチドに融合することによって生成される２つの融合ポリペプチドを含んでなる二量体に関する。Ｆｌｔ３リガンド／Ｆｃ融合ポリペプチドをコードする遺伝子融合体を適切な発現ベクターに挿入する。組換え発現ベクターで形質転換した宿主細胞でＦｌｔ３リガンド／Ｆｃ融合ポリペプチドを発現し、そして抗体分子によく似た形で集合させ、その結果、Ｆｃ部分間に鎖間ジスルフィド結合が形成され、二価分子を生じるのを可能にする。ＰＣＴ出願ＷＯ  ９３／１０１５１に記載される１つの適切なＦｃポリペプチドは、ヒトＩｇＧ１抗体のＦｃ領域のＮ末端ヒンジ領域から天然Ｃ末端に渡る一本鎖ポリペプチドである。別の有用なＦｃポリペプチドは、米国特許第５，４５７，０３５号およびＢａｕｍら（ＥＭＢＯ  Ｊ．  １３：３９９２−４００１，  １９９４）に記載されるＦｃ突然変異タンパク質である。この突然変異タンパク質のアミノ酸配列は、アミノ酸１９がＬｅｕからＡｌａに変化し、アミノ酸２０がＬｅｕからＧｌｕに変化し、そしてアミノ酸２２がＧｌｙからＡｌａに変化していることを除けば、ＷＯ  ９３／１０１５１に示される天然Ｆｃ配列のものと同一である。該突然変異タンパク質は、Ｆｃ受容体に対し、減少した親和性を示す。Ｆｃ部分を含んでなる上述の融合ポリペプチド（およびそれから形成されるオリゴマー）は、ポリペプチドＡまたはポリペプチドＧカラム上のアフィニティークロマトグラフィーによる容易な精製という利点を提供する。他の態様において、本発明のポリペプチドを、抗体重鎖または軽鎖の可変部に対して置換することが可能である。融合ポリペプチドが抗体の重鎖および軽鎖両方で作成されている場合、４つものＦｌｔ３リガンド細胞外領域を持つオリゴマーを形成することが可能である。
【００３８】
ペプチドリンカーに基づくオリゴマー。あるいは、オリゴマーは、ペプチドリンカー（スペーサーペプチド）を含み、または含まず、多数のＦｌｔ３リガンドを含んでなる融合ポリペプチドである。適切なペプチドリンカーの中には、米国特許第４，７５１，１８０号および第４，９３５，２３３号に記載されるものがある。適切な慣用的技術いずれかを用いて、所望のペプチドリンカーをコードするＤＮＡ配列を、本発明のＤＮＡ配列間に、そして該配列と同じ読み枠で挿入することが可能である。例えば、リンカーをコードする、化学的に合成したオリゴヌクレオチドを、配列間に連結することが可能である。特定の態様において、融合ポリペプチドは、ペプチドリンカーによって分離された、２〜４の可溶性Ｆｌｔ３リガンドポリペプチドを含んでなる。適切なペプチドリンカー、他のポリペプチドとの組み合わせ、およびその使用は、当業者に周知である。
【００３９】
ロイシンジッパー。Ｆｌｔ３リガンドのオリゴマーを調製するための別の方法は、ロイシンジッパーの使用を伴う。ロイシンジッパードメインは、該ドメインが見られるポリペプチドのオリゴマー化を促進するペプチドである。ロイシンジッパーは、元々、いくつかのＤＮＡ結合ポリペプチドで同定され（Ｌａｎｄｓｃｈｕｌｚら，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１７５９，  １９８８）、そして以来、多様な異なるポリペプチドで見出されてきている。既知のロイシンジッパードメインの中には、二量体化または三量体化する天然存在ペプチドおよび誘導体がある。ジッパードメイン（本明細書において、オリゴマー化ドメインまたはオリゴマー形成ドメインとも称する）は、しばしば、他のアミノ酸が組み入れられた４または５のロイシン残基を持つ、７アミノ酸反復を含んでなる。ロイシンジッパーの使用およびロイシンジッパーを用いたオリゴマーの調製は、当該技術分野に周知である。
【００４０】
Ｆｌｔ３リガンドは、全能造血幹細胞および前駆細胞の増殖とともに、リンパ系および骨髄系経路の細胞系譜数に影響を及ぼす。広い範囲のコロニー刺激因子、インターロイキンおよび可溶性トロンボポエチンとともに、拘束された前駆細胞および原始的前駆細胞の増殖およびコロニー形成を促進する相乗効果が立証されている。マウスにＦｌｔ３リガンドをｉｎ  ｖｉｖｏ投与すると、造血前駆細胞の有意な拡大が生じる。特に、Ｆｌｔ３リガンドは、骨髄（５倍）および脾臓（１００倍）で前駆細胞数に有意な増加を引き起こすとともに、これらの組織における未成熟Ｂ細胞数を増加させる。処置後、末梢血において、造血前駆細胞数の２００〜５００倍の増加が報告されている。Ｆｌｔ３リガンドは、単独で、そして他のサイトカイン（ＩＬ−３、ＩＬ−６またはＩＬ−７）と組み合わせて、最も原始的な胸腺前駆細胞からのＴ細胞発展を優先的に刺激することが示されてきている。さらに、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究によって、Ｆｌｔ３リガンドが、胎児肝臓、骨髄または胸腺ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞前駆体の拡大を誘導するとともに、前駆細胞からのＣＤ５６＋  ＮＫ細胞の生成を同時刺激する（ＩＬ−１５のみと、またはＩＬ−６／ＩＬ−７／ＩＬ−１５の組み合わせと）ことが示されている。Ｆｌｔ３リガンドはまた、ＮＫ細胞活性、ＮＫ細胞増殖応答、およびリンパ球活性化キラー（ＬＡＫ）細胞の生成を増加させることも示されてきており、これによって、抗癌療法および抗ウイルス療法におけるＦｌｔ３リガンドの潜在的な役割が示唆される。Ｆｌｔ３リガンドの概説には、“Ｆｌｔ３−ｌｉｇａｎｄ  ａｎｄ  Ｉｔｓ  Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｏｎ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ”  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，  ｖｏｌ．１２，  ｎｏ．２，  ｐｐ  ９７−１００（２０００）を参照されたい。
【００４１】
Ｆｌｔ３リガンドの投与（ｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏ両方）によって、造血幹細胞および前駆細胞の標的化された拡大が引き起こされ、多数の組織部位で、樹状細胞（ＤＣ）の全身の拡大が生じる。樹状細胞は、別個の形態および広い組織分布を持つ異種性細胞集団を含んでなる。樹状細胞系および免疫におけるその役割は、Ｓｔｅｉｎｍａｎ，  Ｒ．Ｍ．，  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  ９：２７１−２９６（１９９１）に概説されており、そして該文献は本明細書に援用される。樹状細胞は、ＭＨＣ制限Ｔ細胞を感作するのに高い能力を有し、そしてＴ細胞発展および寛容中の自己抗原、並びに免疫中の外来（ｆｏｒｅｉｇｎ）抗原両方の抗原を、ｉｎ  ｓｉｔｕでＴ細胞に提示するのに非常に有効である。
【００４２】
本明細書において、樹状細胞またはＤＣは、リンパ組織または非リンパ組織に見られる、形態学的に類似の細胞種の多様な集団のメンバーいずれかを指す。ＤＣは、一種の「プロフェッショナル」抗原提示細胞であり、そしてＭＨＣ制限Ｔ細胞を感作する高い能力を有する。細胞系譜および成熟段階に応じて、ＤＣは、機能、または表現型、特に細胞表面表現型によって、認識可能である。これらの細胞は、独特の形態、食作用能／エンドサイトーシス能、高レベルの表面ＭＨＣクラスＩＩ発現、およびＴ細胞、特に未刺激Ｔ細胞に抗原を提示する能力によって特徴付けられる（Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕら，  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １８：７６７−８１１，  ２０００およびＵＳＰＮ  ６，２７４，３７８、前記文献は、こうした細胞の説明に関して、本明細書に援用される）。例示目的のみのため、本明細書に記載するＤＣは、ベール様の突起、および細胞表面マーカーＣＤ１ａ+、ＣＤ４+、ＣＤ８６+、またはＨＬＡ−ＤＲ+の発現によって特徴付け可能である。成熟ＤＣは、典型的にはＣＤ１１ｃ+であり、一方、ＤＣの前駆体には、表現型ＣＤ１１ｃ-、ＩＬ−３Ｒα低を有するもの；およびＣＤ１１ｃ-  ＩＬ−３Ｒα高であるものが含まれる。ｉｎ  ｖｉｖｏで、マウスにおいて、ＧＭ−ＣＳＦで処置すると、ＣＤ１１ｂ高、ＣＤ１１ｃ高  ＤＣが優先的に拡大され、一方、Ｆｌｔ３リガンドは、ヒトにおいて、ＣＤ１１ｃ+  ＩＬ−３Ｒα低  ＤＣおよびＣＤ１１ｃ-  ＩＬ−３Ｒα高  ＤＣ前駆細胞を拡大することが示されている。機能的には、抗原提示の決定に関する、いかなる好適なアッセイによって、樹状細胞を同定することも可能である。こうしたアッセイには、試験抗原の提示によって、初回抗原刺激されたＴ細胞または未刺激Ｔ細胞を刺激する能力を試験し、その後、Ｔ細胞増殖、ＩＬ−２の放出などを決定することが含まれる可能性がある。
【００４３】
ワクチン
ワクチンは、本明細書において、１以上のアジュバント、希釈剤、キャリアー等と配合され、組み合わされ、混合され、これらに取り込まれ、そして／またはこれらとマトリックス化された１以上の抗原を含んでなり、適切な経路いずれかによって被験者に投与されて、該抗原に対する防御免疫応答および／または改善免疫応答を誘導する。ワクチンは、疾患の防止用であることが可能であり、そして感染または疾患開始前に投与することが可能である。あるいは、ワクチンは、被験者が疾患または感染と診断された後に、療法目的で被験者に何回投与することも可能である。抗原を１以上のハプテンと複合体化することが可能である。ワクチンは、天然、誘導体化、合成、組換えまたは非組換え抗原を含んでなることが可能である。さらに、ワクチンには、１以上の抗原をコードするポリヌクレオチド配列を含有する生ウイルスベクターが含まれる。生ウイルスベクターの例には、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、アルファウイルス、セムリキ森林ウイルスおよびシンビス（ｓｉｎｂｉｓ）ウイルスが含まれる。さらに、ワクチンは、１以上の抗原をコードするポリヌクレオチド配列とともに、必要なプロモーター、エンハンサーおよび他の必要な制御要素を含有するポリヌクレオチドワクチン（一般的に、ＤＮＡワクチンと称される）などの非ウイルスベクターを含んでなることが可能である。ポリヌクレオチドワクチンは、裸のポリヌクレオチドおよび／またはリポソームに取り込まれたポリヌクレオチドおよび／または粒子仲介遺伝子輸送であることが可能である。ポリヌクレオチドワクチンの搬送を容易にするのに使用可能な他の剤には、ポリペプチド、ペプチド、多糖コンジュゲート、脂質等が含まれる。ポリヌクレオチドは、ＤＮＡおよび／またはＲＮＡであることが可能である。生ウイルスベクターおよびポリヌクレオチドワクチンを、当該技術分野に周知のキャリアーまたは希釈剤と配合することが可能である。
【００４４】
以下は、いずれかの組み合わせで用いて、１以上のワクチンを形成可能である、アジュバントおよび抗原の態様であり、ワクチンは続いて、本明細書に記載するＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルおよび治療法／防止法のあらゆる態様において使用可能である。
【００４５】
Ａ．Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルで使用するアジュバントの態様
用語、アジュバントは、本出願の目的のため、ワクチンに取り込まれた際に、抗原に対する宿主の免疫応答を加速し、延長し、増進し、増大させ、そして／または増強するように一般的に作用する、抗原とは異なる物質いずれかを指す。宿主の免疫応答には、抗原特異的体液性免疫応答および細胞仲介免疫応答が含まれる。宿主の免疫応答にはまた、必ずしも抗原特異的でないが、ＮＫ細胞、好中球、抗原提示細胞等の数の増加および／または活性化など、抗原に対する防御免疫応答および／または改善免疫応答に関与する、免疫応答も含まれる。アジュバントを記載するのに用いられる、当該技術分野のさらなる用語には、免疫調節剤、免疫増強剤および免疫増進剤が含まれる。本明細書において、アジュバントには、用語、免疫調節剤、免疫増強剤および免疫増進剤に含まれるこうした組成物すべてが含まれる。Ｆｌｔ３リガンド自体、免疫応答を増強する際の、そして特に癌に対する防御免疫応答を増強する際の役割がよく立証されているため、アジュバントとみなされることが理解される。しかし、明確にし、そして混乱を避けるため、Ｆｌｔ３リガンドは、本明細書において、アジュバントとは呼ばれないであろう。
【００４６】
アジュバントは、１以上の機構によって、その生物学的影響を発揮すると考えられ、この機構には、抗原の表面領域を増加させ；体における抗原の保持を延長し、こうしてリンパ系が抗原にアクセスする時間を与え；抗原の放出を遅らせ；抗原をマクロファージに標的化し；抗原取り込みを増加させ；抗原プロセシングを上方制御し；サイトカイン放出を刺激し；Ｂ細胞スイッチングおよび成熟を刺激し、そして／または免疫抑制細胞を取り除き；マクロファージ、樹状細胞、Ｂ細胞およびＴ細胞を活性化し；または別の方式で免疫系の細胞の非特異的活性化を誘発することが含まれる（例えばＷａｒｒｅｎら，  １９８６  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４：３６９を参照されたい）。一般的に言って、アジュバントは、非常に異質の化合物群を含んでなるが、当業者は、従来、油エマルジョン（例えばフロイントのアジュバント）、ミネラル化合物（例えばミョウバン）、細菌産物（例えば百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ））、リポソームおよび免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）などの、いくつかの広いカテゴリーを認識してきた。
【００４７】
Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルで使用可能な、それとともに、治療法および／または防止法で使用可能な、１以上のワクチンを作成するのに使用しうるアジュバントの例には、限定されるわけではないが：ＡＤＪＵＭＥＲTM（ポリホスファゼン）；リン酸アルミニウムゲル；藻類グルカン類；アルガミュリン（ａｌｇａｍｍｕｌｉｎ）；水酸化アルミニウムゲル（ミョウバン）；高タンパク質吸着性（ａｄｓｏｒｂｅｎｃｙ）水酸化アルミニウムゲル；低粘性水酸化アルミニウムゲル；ＡＦまたはＳＰＴ（スクアレン（５％）、Ｔｗｅｅｎ８０（０．２％）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｌ１２１（１．２５％）、リン酸緩衝生理食塩水ｐＨ７．４のエマルジョン）；ＡＶＲＩＤＩＮＥTM（プロパンジアミン）；ＢＡＹ  Ｒ１００５TM（（Ｎ−（２−デオキシ−２−Ｌ−ロイシルアミノ−ｂ−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎ−オクタデシルドデカノイルアミド・ヒドロアセテート）；ＣＡＬＣＩＴＲＩＯＬTM（１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３）；リン酸カルシウムゲル；ＣＡＰTM（リン酸カルシウムナノ粒子）；コレラ・ホロトキシン、コレラ毒素Ａ１−プロテインＡ−Ｄ断片融合タンパク質、コレラ毒素Ｂサブユニット；ＣＲＬ１００５（ブロック・コポリマーＰ１２０５）；サイトカイン含有リポソーム；ＤＤＡ（ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド）；ＤＨＥＡ（デヒドロエピアンドロステロン）；ＤＭＰＣ（ジミリストイル・ホスファチジルコリン）；ＤＭＰＧ（ジミリストイル・ホスファチジルグリセロール）；ＤＯＣ／ミョウバン複合体（デオキシコール酸ナトリウム塩）；フロイントの完全アジュバント；フロイントの不完全アジュバント；ガンマ・イヌリン；Ｇｅｒｂｕアジュバント（以下の混合物：ｉ）Ｎ−アセチルグルコサミニル−（Ｐｌ−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−グルタミン（ＧＭＤＰ）、ｉｉ）ジメチルジオクタデシルアンモニウムクロリド（ＤＤＡ）、ｉｉｉ）亜鉛Ｌ−プロリン塩複合体（ＺｎＰｒｏ−８））；ＧＭ−ＣＳＦ；ＧＭＤＰ（Ｎ−アセチルグルコサミニル−（ｂ１−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン）；Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ（１−（２−メチプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）；ＩｍｍＴｈｅｒTM（Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−イソＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−グリセロールジパルミテート）；ＤＲＶ類（脱水−再水和小胞から調製した免疫リポソーム）；インターフェロン−γ；インターロイキン−１β；インターロイキン−２；インターロイキン−７；インターロイキン−１２；ＩＳＣＯＭＳTM（免疫刺激複合体）；ＩＳＣＯＰＲＥＰ  ７．０．３．TM；リポソーム；ＬＯＸＯＲＩＢＩＮＥTM（７−アリル−８−オキソグアノシン）；ＬＴ経口アジュバントTM（大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）不安定内毒素プロトキシン）；組成物いずれかの微小球体および微小粒子；ＭＦ５９TM；（スクアレン・水エマルジョン）；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ  ＩＳＡ  ５１TM（精製不完全フロイントアジュバント）；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ  ＩＳＡ  ７２０TM（代謝可能油アジュバント）；ＭＰＬTM（３−Ｑ−デスアシル−４’−モノホスホリル脂質Ａ）；ＭＴＰ−ＰＥおよびＭＴＰ−ＰＥ���ポソーム（（Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−（ヒドロキシ−ホスホリルオキシ））エチルアミド、一ナトリウム塩）；ＭＵＲＡＭＥＴＩＤＥTM（Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−Ｇｌｎ−ＯＣＨ３）；ＭＵＲＡＰＡＬＭＩＴＩＮＥTMおよびＤ−ＭＵＲＡＰＡＬＭＩＴＩＮＥTM（Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ｔｈｒ−Ｄ−イソＧｌｎ−ｓｎ−グリセロールジパルミトイル）；ＮＡＧＯ（ノイラミニダーゼ−ガラクトースオキシダーゼ）；組成物いずれかのナノ球体またはナノ粒子；ＮＩＳＶ類（非イオン性界面活性剤小胞）；ＰＬＥＵＲＡＮTM（β−グルカン）；ＰＬＧＡ、ＰＧＡおよびＰＬＡ（乳酸およびグリコール酸のホモポリマーおよびコポリマー；ミクロ粒子／ナノ粒子）；ＰＬＵＲＯＮＩＣ  Ｌ１２１TM；ＰＭＭＡ（ポリメチルメタクリレート）；ＰＯＤＤＳTM（オロテイノイド（ｏｒｏｔｅｉｎｏｉｄ）微小球体）；ポリエチレンカルバメート誘導体；ポリｒＡ：ポリｒＵ（ポリアデニル酸−ポリウリジル酸複合体）；ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ  ８０）；渦巻き型タンパク質（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｈｏｃｈｌｅａｔｅｓ）（Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ，  Ｉｎｃ．、アラバマ州アラバスター）；ＳＴＩＭＵＬＯＮTM（ＱＳ−２１）；Ｑｕｉｌ−Ａ（Ｑｕｉｌ−Ａサポニン）；Ｓ−２８４６３（４−アミノ−オテック，−ジメチル−２−エトキシメチル−ｌＨ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール）；ＳＡＦ−１TM（Ｓｙｎｔｅｘアジュバント配合物）；センダイ・プロテオリポソームおよびセンダイ含有脂質マトリックス；Ｓｐａｎ−８５（トリオレイン酸ソルビタン）；Ｓｐｅｃｏｌ（Ｍａｒｃｏｌ  ５２、Ｓｐａｎ  ８５およびＴｗｅｅｎ  ８５のエマルジョン）；スクアレンまたはＲｏｂａｎｅ（登録商標）（２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチルテトラコサンおよび２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２テトラコサヘキサエン）；ステアリルチロシン（オクタデシルチロシンヒドロクロリド）；Ｔｈｅｒａｍｉｄｅ（登録商標）（Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−イソＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−ジパルミトキシプロピルアミド）；スレオニル−ＭＤＰ（ＴｅｒｍｕｒｔｉｄｅTMまたは［ｔｈｒ１］−ＭＤＰ；Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン）；Ｔｙ粒子（Ｔｙ−ＶＬＰまたはウイルス様粒子）；Ｗａｌｔｅｒ  Ｒｅｅｄリポソーム（水酸化アルミニウムに吸着させた脂質Ａを含有するリポソーム）等が含まれる。
【００４８】
１つの態様において、デポ様特性を有し、抗原をリンパ節に散在させるアジュバントをワクチン配合物中で用いて、これをその後、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコル、並びに疾患および／または感染を治療し、そして／または防止する関連方法において、用いる。さらに別の態様において、不完全フロイントアジュバントをワクチン配合物に用いて、そしてＦｌｔ３リガンド免疫プロトコル、並びに疾患および／または感染を治療し、そして／または防止する関連方法において、用いる。
【００４９】
さらなる態様において、被験者のＴヘルパー細胞を活性化してＩＬ−２を分泌させる分子、例えば１以上のＭＨＣ−ＩＩエピトープを有する分子が、ワクチン配合物中に含まれることが可能である。特にＣＤ８＋  ＣＴＬ応答を増進するＴヘルパー活性化分子は、ワクチン配合物のさらなる抗原として、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコル中に含まれることが可能である。例えばキーホールリンペット（ｋｅｙｈｏｌｅ  ｌｉｍｐｅｔ）ヘモシアニン（ＫＬＨ）、または当該技術分野に知られる、他の適切なＴヘルパー抗原とともに、同種異系細胞などの全細胞が、ワクチン配合物中に含まれることが可能である。
【００５０】
Ｂ．Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコル中で用いる抗原の態様
抗原は、本明細書において、抗体またはＴ細胞受容体に結合可能な分子いずれかを含んでなる。必要な場合、抗原をハプテンにカップリングして、これらを免疫原性にすることが可能である。抗原は、本明細書において、免疫原を含み、免疫原は、被験者において、免疫応答を誘導する抗原である。
【００５１】
抗原は、アレルゲン、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫および他の感染性病原体由来の産物であることが可能であり；自己免疫疾患を促進する分子、または腫瘍抗原、腫瘍、並びに腫瘍性臓器および組織もまた、含まれる。より具体的には、抗原の例は、全不活性化生物および細胞、生存弱毒化生物、全細胞（自己、同種異系および／または同系であることが可能な生細胞または死細胞）、細胞断片、細胞成分分画、細胞膜等を含んでなる。タンパク質、サブユニットタンパク質、多量体サブユニットタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、合成ペプチド等の形とともに、炭水化物およびグリコシル化タンパク質の形であることが可能な、上述のカテゴリー由来の免疫原性部分またはエピトープが含まれると理解される。抗原はまた、一般の当業者に周知の組換えＤＮＡ技術によっても産生可能である。以下に記載するように、当該技術分野に知られるものから、１以上の種の癌または感染細胞に特異的な抗原が選択可能である。また、抗原は、腫瘍抗原、あるいは細菌抗原またはウイルス抗原などの、被験者に既に存在するものであることが可能である。イムノアッセイによって、または免疫応答を生じる能力によって決定されるように、上述の抗原は、その抗原性または免疫原性に関して選択可能である。用語「免疫原性」は、抗原が免疫応答を誘導する相対的な有効性を意味する。
【００５２】
多様な態様に使用可能な抗原の典型的なものには、限定されるわけではないが、以下の表１に記載するものが含まれる。潜在的に有用な抗原、またはその誘導体は、病原体の感染性の中和における該抗原の関与（こうした病原体による感染を治療するかまたは防止することが望ましい場合）（Ｎｏｒｒｂｙ，  １９８５，  Ｓｕｍｍａｒｙ，  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ８５中，  Ｌｅｍｅｒら（監修），  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  ニューヨーク州コールドスプリングハーバー，  ｐｐ．３８８−３８９）、種または群特異性、被験者の抗血清または免疫細胞による認識、および／または抗原に特異的な抗血清または免疫細胞の防御効果の立証など、多様な規準で同定可能である。
【００５３】
別の態様において、本明細書に提示するＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルは、癌の治療または防止に使用可能である。ワクチンは、アジュバント、キャリアーおよび／または希釈剤と配合した１以上の腫瘍抗原を含んでなることが可能である。腫瘍抗原（癌抗原とも称される）は、単離されていることが可能である、すなわち部分的に精製された、細胞に結合したまたは融合タンパク質のある型であることが可能である。癌抗原は、正常分化抗原；イントロン配列；別のオープンリーディングフレーム；単一塩基突然変異；および、発現の異常な転写後調節、染色体再配置またはプロセシングを有するタンパク質に由来することが可能である。多数の腫瘍抗原が当該技術分野に周知であり、そしてＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルで使用可能であって、こうしたものには、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，  Ｓ．Ａ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ｖｏｌ．４１１，  ｐｐ．３８０−３８４，  １７  Ｍａｙ  ２００１およびＭｉｎｅｖ，  Ｂ．ら，  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｔｈｅｒ．，  Ｖｏｌ．８１，  Ｎｏ．２，  ｐｐ．１２１−１３９，  １９９９に記載されるものなどがある。特定の態様において、ワクチンに使用される癌細胞および前腫瘍性細胞は、哺乳動物起源のものであり、そして別の態様において、ヒト癌細胞を抗原の供給源として使用可能である。癌細胞とともにその抗原または細胞成分分画いずれかは、自己または同種異系であることが可能である。異常に増殖する組織、循環白血病細胞、転移性病変とともに固形腫瘍組織に見られる癌細胞が使用可能である。さらに、前腫瘍性病変、癌組織または癌細胞由来の細胞株もまた、細胞または細胞株が、標的癌細胞上の抗原と共通の、少なくとも１以上の抗原決定基を有するならば、使用可能である。
【００５４】
当該技術分野に知られる方法いずれかによって、癌細胞および前腫瘍性細胞が同定可能である。例えば、形態、酵素アッセイ、増殖アッセイ、細胞遺伝学的性質決定、ＤＮＡマッピング、ＤＮＡ配列決定、癌を引き起こすウイルスの存在、あるいは、突然変異誘発物質または癌を引き起こす剤への曝露歴、画像化などによって、癌細胞を同定可能である。癌細胞はまた、手術、内視鏡、または他の生検技術によって獲得可能である。癌細胞はまた、限定されるわけではないが、アフィニティークロマトグラフィーおよび蛍光活性化細胞分取などの、当該技術分野に知られる生化学的方法または免疫学的方法いずれかによって、獲得または精製可能である。癌組織、癌細胞または細胞株は、単一個体から獲得可能であるし、また数個体からプール可能である。癌細胞のクローン集団、均質な集団、または精製集団を用いることは必須ではない。ワクチンに用いる細胞上に、標的癌細胞上の少なくとも１以上の抗原決定基が存在する限り、ｉｎ  ｖｉｖｏでの最終的な標的である細胞（例えば意図されるレシピエントの腫瘍由来の細胞）を用いる必要もない。さらに、遠位転移由来の細胞を用いて、原発性癌に対する免疫原性組成物を調製することが可能である。混合物中のかなりの数の細胞が癌細胞であり、そして標的癌細胞と少なくとも１つの抗原決定基を共有するならば、細胞混合物が使用可能である。
【００５５】
抗体への結合を検出することによって、推定上の抗原の免疫原性または抗原性を決定するため、当該技術分野に知られる多様なイムノアッセイが使用可能であり、これらには、限定されるわけではないが、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素連結免疫吸着アッセイ）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫放射線測定アッセイ、ゲル拡散沈降素反応、免疫拡散アッセイ、ｉｎ  ｖｉｖｏイムノアッセイ（例えばコロイド性金、酵素または放射性同位体標識を用いるもの）、ウェスタンブロット、免疫沈降反応、凝集アッセイ（例えばゲル凝集アッセイ、赤血球凝集素アッセイ）、補体固定アッセイ、免疫蛍光アッセイ、プロテインＡアッセイ、および免疫電気泳動アッセイなどの技術を用いた、競合的アッセイ系および非競合的アッセイ系が含まれる。１つの側面において、一次抗体上の標識を検出することによって、抗体結合を検出する。別の側面において、一次抗体に対する二次抗体または試薬の結合を検出することによって、一次抗体を検出する。さらなる側面において、二次抗体を標識する。イムノアッセイにおいて結合を検出する多くの手段が当該技術分野に知られ、そして使用のために想定される。免疫原性を検出する１つの態様において、標準法、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞傷害性アッセイまたはｉｎ  ｖｉｖｏ遅延型過敏性アッセイによって、Ｔ細胞が仲介する応答をアッセイすることが可能である。
【００５６】
【表１−１】
2005528373.tif 000002
【００５７】
【表１−２】
2005528373.tif 000003
【００５８】
【表１−３】
2005528373.tif 000004
【００５９】
ワクチンにはまた、本明細書において、アジュバントに加えて、またはアジュバントではなく、希釈剤、賦形剤および／またはキャリアーとともに配合された抗原も含まれる。投与に適した配合物には、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、および配合物をレシピエントの血液と等張にする溶質を含有可能な水性および非水性無菌注射溶液；並びに懸濁剤または粘稠化剤を含有可能な水性および非水性無菌懸濁物が含まれる。抗原は、薬学的に有用な組成物を調製するのに用いられる既知の方法にしたがって、配合可能である。これらを、単一の活性成分として、または既定の徴候に適した他の既知の活性成分と共に、薬学的に許容しうる希釈剤（例えば、生理食塩水、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、酢酸、およびリン酸緩衝溶液）、保存剤（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベン類）、乳化剤、可溶化剤、アジュバントおよび／またはキャリアーと混合して組み合わせることが可能である。薬剤組成物に適した配合物には、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  第１６版，  １９８０，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  ペンシルバニア州イーストンに記載されるものが含まれる。さらに、こうした組成物は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、金属イオンと複合体化しているか、またはポリ酢酸、ポリグリコール酸、ヒドロゲル類、デキストラン等のポリマー化合物に取り込まれているか、またはリポソーム、マイクロエマルジョン、ミセル、単層もしくは多層小胞、赤血球ゴーストもしくはスフェロブラストに取り込まれていることが可能である。リポソーム配合に適した脂質には、限定なしに、モノグリセリド類、ジグリセリド類、スルファチド類、リゾレシチン、リン脂質類、サポニン、胆汁酸類等が含まれる。
【００６０】
補助分子
補助分子は、本明細書において、癌、感染性疾患およびその症状の治療に使用可能な、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルにおいて、場合によって被験者に投与する分子である。補助分子は、いずれかの機構によって、抗原に対する宿主免疫応答を加速し、延長し、増進し、増大させ、または増強するよう作用しうる。例えば、サイトカイン、増殖因子等は、免疫応答をさらに増進するかまたは調節するのに有用であろう。サイトカインには、限定されるわけではないが、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、およびそれらの組み合わせからなる群より選択されるものが含まれる。
【００６１】
典型的には、サイトカイン、ケモカインおよび細胞表面分子は、細胞表面上の同族体（ｃｏｇｎａｔｅ）に結合し、そして細胞内シグナルを伝達することによって、その生物学的効果を発揮する。したがって、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルにおいて、結合タンパク質が使用可能である。結合タンパク質は補助分子の生物学的効果を模倣するアゴニスト性分子である。例えば、抗体などの結合タンパク質は、適切な受容体に結合し、そして補助分子と同等かまたは類似のシグナルを伝達する。さらに、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルで用いる補助分子には、上述の分子の類似体であって、その天然アミノ酸配列に実質的に類似のアミノ酸配列を有し、そしてその同族体に結合し、そして生物学的シグナルを伝達することが可能な点で生物学的に活性である類似体が含まれる。当該技術分野に知られ、そして本明細書に記載するような方法によって、こうした類似体を調製し、そして試験することが可能である。
【００６２】
療法適用
Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルは、被験者において、疾患、障害および／または感染を防止するかまたは治療するための組成物および方法を提供する。用語「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」および「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」には、本明細書において、治癒的、防御的（例えば予防的）、対症的および／または改善的治療が含まれる。先に言及したように、Ｆｌｔ３リガンドおよび補助分子は、天然ポリペプチド、変異体、誘導体、オリゴマー、および生物学的活性断片など、本明細書に記載するいかなる型であることも可能である。特定の態様において、Ｆｌｔ３リガンドおよび補助分子は、可溶性ポリペプチドまたは可溶性オリゴマー型を含んでなる。
【００６３】
当業者は、典型的には、治療中の疾患に対して免疫学的に関連した抗原で被験者を免疫することによって、免疫防御応答が疾患に対して生成されることが、免疫学およびワクチン学の基本的な原理であることを認識する。したがって、癌、感染性疾患等を治療する方法には、防止または治療しようとする疾患に対して免疫学的に関連した抗原を有するワクチンが含まれる。例えば、癌ワクチンは、１以上の癌抗原およびアジュバントを含んでなり、そしてより具体的には、前立腺癌ワクチンは、１以上の前立腺癌抗原およびアジュバントを含んでなり、そして以下同様であろう。
【００６４】
被験者および特にヒトへのｉｎ  ｖｉｖｏ投与のため、薬剤組成物を調製するのに用いる既知の方法にしたがって、Ｆｌｔ３リガンドを配合可能である。Ｆｌｔ３リガンドを、単一の活性成分として、または他の既知の活性成分と共に、薬学的に適切な希釈剤（例えば、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、アセテート、およびホスフェート）、保存剤（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベン類）、乳化剤、可溶化剤、アジュバントおよび／またはキャリアーと混合して組み合わせることが可能である。用語、薬学的に許容しうる、は、活性成分（単数または複数）の生物学的活性の有効性に干渉しない非毒性成分を意味する。適切なキャリアーおよびその配合物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  第１６版，  １９８０，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．に記載される。さらに、こうした組成物は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−もしくは溶解度および／または薬物動態学的半減期を増加させる他のこうした化合物、金属イオンと複合体化しているか、またはポリ酢酸、ポリグリコール酸、ヒドロゲル類等のポリマー化合物に取り込まれているか、またはリポソーム、マイクロエマルジョン、ミセル、単層もしくは多層小胞、赤血球ゴーストもしくはスフェロブラストに取り込まれているＦｌｔ３リガンドを含有することが可能である。こうした組成物は、Ｆｌｔ３リガンドの物理的状態、溶解度、安定性、ｉｎ  ｖｉｖｏ放出速度、およびｉｎ  ｖｉｖｏクリアランス速度に影響を及ぼすであろう。
【００６５】
Ｆｌｔ３リガンド薬剤組成物は、局所、非経口、または吸入によるなどで、投与可能である。用語「非経口」には、皮下注射、静脈内、筋内、槽内注射、または注入技術が含まれる。これらの組成物は、典型的には、Ｆｌｔ３リガンドの有効量を、単独でまたは他の活性成分いずれかの有効量と組み合わせて含有するであろう。組成物に含有されるこうした投薬量および望ましい薬剤濃度は、意図される使用、被験者の体重および年齢、並びに投与経路を含む、多くの要因に依存して変化する可能性がある。予備的用量は動物試験にしたがって決定可能であり、そしてヒト投与のための投薬量の見積もりを、当該技術分野に認められる実施にしたがって、実行可能である。上記説明を心に留めて、Ｆｌｔ３リガンドの典型的な投薬量は、平方メートルあたり約１０μｇ〜平方メートルあたり約１０００μｇの範囲であることが可能である。好ましい用量範囲は、平方メートルあたり約１００μｇ〜平方メートルあたり約３００μｇ程度である。
【００６６】
Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコル、並びに治療方法および／または防止方法を実施する際、Ｆｌｔ３リガンド、ワクチン、および場合によって補助分子の療法的有効量を被験者に投与する。本明細書において、用語「有効量」は、被験者に意味のある利益、すなわち免疫応答増進、関連する医学的状態（疾患、感染等）の治療、治癒、防止または改善、あるいはこうした状態の治療、治癒、防止または改善の速度の増加を示すのに十分な、各療法剤（すなわちＦｌｔ３リガンド、ワクチン、および場合によって補助分子）または他の活性構成要素の総量を意味する。「有効量」を単独で投与する個々の療法剤に適用する際、該用語は、療法剤単独を指す。組み合わせに適用する際、該用語は、組み合わせて、連続して、または同時に投与する場合いずれであっても、療法効果を生じる成分を組み合わせた量を指す。本明細書において、句、療法剤の「有効量の投与」は、障害の重症度を反映する少なくとも１つの指標において、改善、そして好ましくは持続した改善を誘導するのに十分な量および時間、前記療法剤（単数または複数）で被験者を治療することを意味する。患者が１日以上、または１週間以上離れた、少なくとも２回の機会に改善を示すならば、改善は「持続した」とみなされる。徴候または症状に基づいて改善の度合いを決定し、そして決定はまた、生活の質（ｑｕａｌｉｔｙ−ｏｆ−ｌｉｆｅ）アンケートなどの、患者に実施されるアンケートを使用することも可能である。治療の量および期間が十分であるかどうか決定するため、患者の疾病の度合いを反映する多様な指標を評価することが可能である。選択された単数または複数の指標に関するベースライン値は、療法剤（単数または複数）の最初の用量の投与前に、患者を検査することによって、確立される。好ましくは、ベースライン検査は、最初の用量投与の約６０日以内に行う。急性症状を治療するために療法剤（単数または複数）が投与される場合、最初の用量は、現実的にできるだけ速やかに投与する。選択された単数または複数の指標のベースラインを越える改善を被験者が明示するまで、療法剤を投与することによって、改善を誘導する。慢性状態を治療する際、改善のこの度合いは、少なくとも１ヶ月以上、例えば、１、２、もしくは３ヶ月またはそれより長い期間、あるいは無期限に、療法剤を反復投与することによって、得られる。１〜６週間の期間、または単回用量であっても、特定の状態を治療するのに十分である可能性がある。当業者は、被験者のニーズに適した治療を詳述するであろう。治療後の被験者の疾病の度合いが、１以上の指標にしたがって、改善されているように見えたとしても、同一レベル、あるいは減少した用量または頻度で、無期限に治療を続けることが可能である。ひとたび治療を減少させるかまたは中断したら、後に、症状が再出現した場合、元来のレベルで治療を再開することが可能である。
【００６７】
当業者は、適切な投薬量が、治療しようとする障害の性質および重症度、患者の体重、年齢、全身状態、および以前の疾病および／または治療、並びに投与経路などの要因に応じて、多様であろうことを認識するであろう。予備的用量は、動物試験にしたがって決定可能であり、そしてヒト投与の投薬量決定は、標準的投薬量決定試験などの、当該技術分野に認められた慣例にしたがって行われる。例えば、療法的有効用量は、最初に、細胞培養アッセイから概算することが可能である。投薬量は、化合物の比活性に応じるであろうし、そして日常的な実験によって、容易に決定可能である。用量は、動物モデルにおいて、細胞培養で決定されるようなＩＣ５０（すなわち症状の最大阻害の半分を達成する試験化合物の濃度）を含みつつ、毒性を最小限にする、循環血漿濃度範囲を達成するように、配合可能である。こうした情報を用いて、ヒトにおいて、有用な用量を、より正確に決定することが可能である。最終的には、主治医が、個々の患者各々を治療する、本発明のポリペプチドの量を決定するであろう。まず、主治医は、本発明のポリペプチドを低用量で投与し、そして患者の反応を観察するであろう。患者に最適な療法効果が得られるまで、本発明のポリペプチドをより多い用量で投与することが可能であり、そしてその時点でさらに用量を増やさない。本明細書記載の方法を実施するのに用いる療法剤は、ｋｇ体重あたり、約０．０１ｎｇ〜約１００ｍｇ（別の態様は約０．１ｎｇ〜約１０ｍｇを有し、そして他の態様は約０．１マイクログラム〜約１ｍｇを有する）の本発明のポリペプチドを含有すべきであると意図される。注射以外の投与経路を用いるならば、標準的な医学的実施にしたがって、用量を適切に調節する。不治の慢性状態では、措置は、患者の医師によって、こうしたものが必要だと思われたならば、用量および頻度を調節したうえ、無期限に続けることが可能である。
【００６８】
薬剤組成物はまた、１以上の補助分子とともに、薬学的に許容しうる希釈剤、キャリアー、または賦形剤と組み合わせたＦｌｔ３リガンドを含んでなることも可能であり、こうした薬剤組成物が本発明に含まれる。あるいは、補助分子を別個の薬剤組成物として配合することも可能である。投与に適した配合物には、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、および配合物をレシピエントの血液と等張にする溶質を含有可能な水性および非水性無菌注射溶液；並びに懸濁剤または粘稠化剤を含有可能な水性および非水性無菌懸濁物が含まれる。Ｆｌｔ３リガンドおよび／または補助分子は、薬学的に有用な組成物を調製するのに用いられる既知の方法にしたがって、配合可能である。これらを、単一の活性成分として、または既定の徴候に適した他の既知の活性成分と共に、薬学的に許容しうる希釈剤（例えば、生理食塩水、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、酢酸、およびリン酸緩衝溶液）、保存剤（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベン類）、乳化剤、可溶化剤、アジュバントおよび／またはキャリアーと混合して組み合わせることが可能である。薬剤組成物に適した配合物には、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  第１６版，  １９８０，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  ペンシルバニア州イーストンに記載されるものが含まれる。さらに、こうした組成物は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、金属イオンと複合体化しているか、またはポリ酢酸、ポリグリコール酸、ヒドロゲル類、デキストラン等のポリマー化合物に取り込まれているか、またはリポソーム、マイクロエマルジョン、ミセル、単層もしくは多層小胞、赤血球ゴーストもしくはスフェロブラストに取り込まれていることが可能である。リポソーム配合に適した脂質には、限定なしに、モノグリセリド類、ジグリセリド類、スルファチド類、リゾレシチン、リン脂質類、サポニン、胆汁酸類等が含まれる。こうしたリポソーム配合物の調製は、例えば、米国特許第４，２３５，８７１号；米国特許第４，５０１，７２８号；米国特許第４，８３７，０２８号；および米国特許第４，７３７，３２３号に開示されるように、当該技術分野の技術レベルの範囲内である。こうした組成物は、物理的状態、溶解度、安定性、ｉｎ  ｖｉｖｏ放出速度、およびｉｎ  ｖｉｖｏクリアランス速度に影響を与えるであろうし、そしてしたがって、キャリアーの特性が、選択される投与経路に応じるように、意図される適用にしたがって選択される。
【００６９】
１つの態様において、Ｆｌｔ３リガンドおよび補助分子の持続放出型を用いる。開示する方法で使用するのに適した持続放出型には、限定されるわけではないが、緩慢溶解生体適合性ポリマー（米国特許第６，０３６，９７８号に記載されるアルギン酸微小粒子など）に被包されたＦｌｔ３リガンドおよび補助分子、このようなポリマー（局所適用ヒドロゲル類を含む）と混合されたもの、および／または生体適合性半透性移植物中に入れられたものが含まれる。
【００７０】
可溶性Ｆｌｔ３−Ｌ療法組成物を投与するのに使用可能な持続放出技術の１つの種類は、ヒドロゲル材料、例えば光架橋可能ヒドロゲル（Ｓａｗｈｎｅｙら，  Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２６：５８１；１９９３）を利用するものである。類似のヒドロゲルは、術後癒着形成を防止し（Ｈｉｌｌ−Ｗｅｓｔら，  Ｏｂｓｔｅｔ．  Ｇｙｎｅｃｏｌ．  ８３：５９，  １９９４）、そして血管傷害後の血栓症および血管狭窄を防止する（Ｈｉｌｌ−Ｗｅｓｔら，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９１：５９６７，  １９９４）のに用いられてきている。ポリペプチドをこうしたヒドロゲルに取り込んで、活性剤の持続した局所の放出を提供することが可能である（ＷｅｓｔおよびＨｕｂｂｅｌ，  Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ２５：１３９，  １９９５；Ｈｉｌｌ−Ｗｅｓｔら，  Ｊ．  Ｓｕｒｇ．  Ｒｅｓ．  ５８：７５９；１９９５）。ヒドロゲルに取り込まれた際、Ｆｌｔ３−Ｌの持続した局所の放出は、Ｆｌｔ３−Ｌの長い半減期によって、増幅されるであろう。
【００７１】
本発明の化合物は、粒子サイズ約１ｍｍの顆粒またはペレットの形で、細かいマルチ微粒子（ｍｕｌｔｉｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ）として配合物に含まれることが可能である。カプセル投与のための物質の配合物はまた、粉末、軽く圧縮されたプラグ、または錠剤としてであることも可能である。療法剤は、圧縮によって調製可能である。
【００７２】
着色剤およびフレーバー剤もまた含まれることが可能である。例えば、タンパク質（または誘導体）を配合し（例えばリポソームまたは微小球体被包によって）、そしてその後、さらに、食用製品、例えば着色剤およびフレーバー剤を含有させる冷蔵飲料内に含有させることが可能である。
【００７３】
本発明の化合物の体積を、不活性物質で希釈するか、または増加させることが可能である。これらの希釈剤には、炭水化物、特にマンニトール、α−ラクトース、無水ラクトース、セルロース、スクロース、修飾デキストランおよびデンプンが含まれることが可能である。三リン酸カルシウム、炭酸マグネシウムおよび塩化ナトリウムを含む、特定の無機塩もまた、充填剤として使用可能である。いくつかの商業的に入手可能な希釈剤は、Ｆａｓｔ−Ｆｌｏ、Ｅｍｄｅｘ、ＳＴＡ−Ｒｘ  １５００、ＥｍｃｏｍｐｒｅｓｓおよびＡｖｉｃｅｌｌである。
【００７４】
固体投薬型への療法剤の配合物中に、崩壊剤を含むことが可能である。崩壊剤として使用される物質には、限定されるわけではないが、デンプンに基づく商業的な崩壊剤、Ｅｘｐｌｏｔａｂを含むデンプンが含まれる。デンプングリコール酸ナトリウム、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ウルトラミロペクチン（ｕｌｔｒａｍｙｌｏｐｅｃｔｉｎ）、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、オレンジピール、酸カルボキシメチルセルロース、天然スポンジおよびベントナイトすべてが使用可能である。崩壊剤の別の型は、不溶性陽イオン交換樹脂である。粉末化粘性物質を崩壊剤として、そして結合剤として使用可能であり、そしてこれらには、寒天、カラヤ、またはトラガカントなどの粉末化粘性物質が含まれることが可能である。アルギン酸およびそのナトリウム塩もまた、崩壊剤として有用である。
【００７５】
結合剤を用いて、療法剤をともに保持して、硬い錠剤を形成することが可能であり、そして結合剤には、アラビアゴム（ａｃａｃｉａ）、トラガカント、デンプンおよびゼラチンなどの天然産物由来の物質が含まれる。他のものには、メチルセルロース（ＭＣ）、エチルセルロース（ＥＣ）およびカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）が含まれる。ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）はどちらも、アルコール性溶液中、療法剤を顆粒化するのに使用可能である。
【００７６】
配合プロセス中の固着を防止するため、抗摩擦剤を療法剤の配合物中に含むことが可能である。療法剤およびダイ壁の間の層として、潤滑剤を用いることが可能であり、そしてこれらには、限定されるわけではないが：マグネシウム塩およびカルシウム塩を含むステアリン酸、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、流動パラフィン、植物油およびワックスが含まれることが可能である。ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム、多様な分子量のポリエチレングリコール、Ｃａｒｂｏｗａｘ４０００および６０００などの可溶性潤滑剤もまた使用可能である。
【００７７】
配合物中の薬剤の流動特性を改善する可能性があり、そして圧縮中の再配置を補助する、流動促進剤を添加可能である。流動促進剤には、デンプン、タルク、発熱性シリカおよび水和シリコアルミネートが含まれることが可能である。
【００７８】
水性環境への本発明の化合物の溶解を補助するため、湿潤剤として界面活性剤を添加することが可能である。界面活性剤には、ラウリル硫酸ナトリウム、スルホコハク酸ジオクチル・ナトリウムおよびスルホン酸ジオクチル・ナトリウムなどの陰イオン性界面活性剤が含まれることが可能である。陽イオン性界面活性剤が使用可能であり、そしてこれには、塩化ベンザルコニウムまたは塩化ベンゼトニウムが含まれることが可能である。界面活性剤として配合物中に含まれることが可能な潜在的な非イオン性界面活性剤のリストは、ラウロマクロゴール４００、ポリオキシル４０ステアレート、ポリオキシエチレン水素化カスターオイル１０、５０および６０、モノステアリン酸グリセロール、ポリソルベート４０、６０、６５および８０、スクロース脂肪酸エステル、メチルセルロースならびにカルボキシメチルセルロースである。これらの界面活性剤は、単独で、または異なる比での混合物として、タンパク質または誘導体の配合物中に存在することが可能である。
【００７９】
化合物の取り込みを増進するため、添加剤も配合物中に含まれていることが可能である。潜在的にこの特性を有する添加物は、例えば、脂肪酸、オレイン酸、リノール酸およびリノレン酸である。
【００８０】
徐放配合物が望ましい可能性がある。拡散機構または浸出機構いずれかによる放出を可能にする不活性マトリックス、例えばゴム中に、本発明の化合物を取り込むことが可能である。ゆっくりと変性するマトリックス、例えばアルギネート、多糖もまた、配合物中に取り込むことが可能である。本発明の化合物の徐放の別の型は、Ｏｒｏｓ療法剤系（Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐ．）に基づく方法により、すなわち、水の進入を可能にし、そして浸透圧効果で、単一の小さい開口部を通じて薬剤を押し出す、半透性膜に薬剤が被包される。いくつかの溶腸性コーティングもまた、遅延放出効果を有する。
【００８１】
他のコーティングを配合物に使用可能である。これらには、コーティング・パン中で適用可能な多様な糖が含まれる。療法剤はまた、フィルムコーティングした錠剤でも投与可能であり、そしてこの例で用いられる物質は、２群に分けられる。第一の群は、非溶腸性物質であり、そしてメチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、メチルヒドロキシ−エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピル−メチルセルロース、カルボキシ−メチルセルロース・ナトリウム、プロビドン（ｐｒｏｖｉｄｏｎｅ）およびポリエチレングリコールを含む。第二の群は、溶腸性物質からなり、この物質は通常、フタル酸のエステルである。
【００８２】
最適なフィルムコーティングを提供するため、物質の混合物が使用可能である。フィルムコーティングは、パン・コーターまたは流動化ベッド中で、あるいは圧縮コーティングによって、実行可能である。
【００８３】
やはり本明細書に意図するのは、本タンパク質（またはその誘導体）の肺搬送である。タンパク質（または誘導体）は、吸入されながら哺乳動物肺に搬送され、そして肺上皮裏打ちを横断して、血流に乗る（この他の報告には、Ａｄｊｅｉら，  Ｐｈａｒｍａ．  Ｒｅｓ．（１９９０）７：５６５−９；Ａｄｊｅｉら（１９９０），  Ｉｎｔｅｒｎａｔｌ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ６３：１３５−４４（酢酸ロイプロリド）；Ｂｒａｑｕｅｔら（１９８９），  Ｊ．  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  １３（ｓｕｐｐｌ．５）：ｓ．１４３−１４６（エンドセリン−１）；Ｈｕｂｂａｒｄら（１９８９），  Ａｎｎａｌｓ  Ｉｎｔ．  Ｍｅｄ．  ３：２０６−１２（α１−アンチトリプシン）；Ｓｍｉｔｈら（１９８９），  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ８４：１１４５−６（α１−プロテイナーゼ）；Ｏｓｗｅｉｎら（Ｍａｒｃｈ  １９９０），  “Ａｅｒｏｓｏｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ”，  Ｐｒｏｃ．  Ｓｙｍｐ．  Ｒｅｓｐ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ＩＩ，  コロラド州キーストーン（組換えヒト成長ホルモン）；Ｄｅｂｓら（１９８８），  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４０：３４８２−８（インターフェロンγおよび腫瘍壊死因子α）およびＰｌａｔｚら、米国特許第５，２８４，６５６号（顆粒球コロニー刺激因子）が含まれる）。
【００８４】
本発明の実施に使用が意図されるのは、療法製品の肺搬送のために設計された、広い範囲の機械装置であり、これらには、限定されるわけではないが、すべて当業者に周知の、ネブライザー、計量式吸入器、および粉末吸入器が含まれる。本発明の実施に適した、商業的に入手可能な装置のいくつかの特定の例は、Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ，  Ｉｎｃ．、ミズーリ州セントルイス製造のＵｌｔｒａｖｅｎｔネブライザー；Ｍａｒｑｕｅｓｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、コロラド州エングルウッド製造のＡｃｏｒｎ  ＩＩネブライザー；Ｇｌａｘｏ  Ｉｎｃ．、ノースカロライナ州リサーチトライアングルパーク製造のＶｅｎｔｏｌｉｎ計量式吸入器；およびＦｉｓｏｎｓ  Ｃｏｒｐ．、マサチューセッツ州ベッドフォード製造のＳｐｉｎｈａｌｅｒ粉末吸入器である。
【００８５】
こうした装置はすべて、本発明の化合物を分配するのに適した配合物の使用を必要とする。典型的には、各配合物は、使用する装置の種類に特異的であり、そして療法に有用な希釈剤、アジュバントおよび／またはキャリアーに加えて、適切な噴射剤物質の使用を伴う可能性がある。
【００８６】
本発明の化合物は、最も好適には、遠位肺への最も有効な搬送のため、１０μｍ（またはミクロン）、最も好ましくは０．５〜５μｍの平均粒子サイズの微粒子型で調製すべきである。
【００８７】
薬学的に許容しうるキャリアーには、トレハロース、マンニトール、キシリトール、スクロース、ラクトース、およびソルビトールなどの炭水化物が含まれる。配合物中で使用する他の成分には、ＤＰＰＣ、ＤＯＰＥ、ＤＳＰＣおよびＤＯＰＣが含まれる可能性がある。天然または合成の界面活性剤が使用可能である。ＰＥＧが使用可能である（タンパク質または類似体を誘導体化する際の使用とは別）。シクロデキストランなどのデキストランが使用可能である。胆汁塩および他の関連増進剤が使用可能である。セルロースおよびセルロース誘導体が使用可能である。緩衝配合物における使用など、アミノ酸が使用可能である。
【００８８】
また、リポソーム、微小カプセルまたは微小球体、封入複合体、または他の種類のキャリアーの使用もまた、意図される。
ジェットまたは超音波いずれかのネブライザーで用いるのに適した配合物は、典型的には、溶液ｍｌあたりの生物学的活性タンパク質、約０．１〜２５ｍｇの濃度で水に溶解された本発明の化合物を含んでなるであろう。配合物にはまた、緩衝剤および単純な糖（例えばタンパク質安定化および浸透圧の調節）も含まれることが可能である。ネブライザー配合物はまた、エアロゾルを形成する際、溶液の噴霧化によって引き起こされる、表面で誘導されるタンパク質の凝集を減少させるかまたは防止するために、界面活性剤もまた、含有可能である。
【００８９】
計量式吸入器で使用するための配合物は、一般的に、界面活性剤の補助で噴射剤に懸濁された本発明の化合物を含有する細かく分割された粉末を含んでなるであろう。噴射剤は、トリクロロフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタノール、および１，１，１，２−テトラフルオロエタン、またはその組み合わせを含む、クロロフルオロカーボン、ヒドロクロロフルオロカーボン、ヒドロフルオロカーボン、または炭化水素などの、この目的に使用される慣用的物質いずれであることも可能である。適切な界面活性剤には、トリオレイン酸ソルビタンおよびダイズ・レシチンが含まれる。オレイン酸もまた、界面活性剤として有用である可能性がある。
【００９０】
粉末吸入器から分配するための配合物は、本発明の化合物を含有する細かく分割された乾燥粉末を含んでなり、そしてまた装置から粉末が分散するのを容易にする量、例えば配合物の重量５０〜９０％で、ラクトース、ソルビトール、スクロース、マンニトール、トレハロース、またはキシリトールなどの充填剤を含むことも可能である。
【００９１】
別の態様には、同一被験者に投与される１以上の他の補助分子と同時のＦｌｔ３リガンドの投与がさらに含まれる。Ｆｌｔ３リガンドおよび補助分子（単数または複数）は、薬剤組成物として投与されることが理解される。同時投与は、Ｆｌｔ３リガンドおよび／または補助分子との同時処置または連続処置を含み、それとともに、構成要素が交互に投与されるプロトコル、または１つの構成要素を長期に投与し、そして他のもの（単数または複数）を断続して投与するプロトコルを含む。構成要素、すなわちＦｌｔ３リガンドおよび１以上の補助分子は、同一または別個の組成物中で、そして同一または異なる投与経路によって投与可能である。Ｆｌｔ３リガンドと同時に投与可能な補助分子の例には：免疫応答をさらに増進するかまたは調節するのに有用であろうサイトカイン、増殖因子等が含まれる。サイトカインには、限定されるわけではないが、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、およびそれらの組み合わせが含まれる。
【００９２】
投与経路。いかなる有効な投与経路を用いて、Ｆｌｔ３リガンド、１以上の補助分子および１以上のワクチンを、療法的に投与することも可能である。非経口投与には、例えば、多量（ｂｏｌｕｓ）注射によるか、または連続注入による、関節内、静脈内、筋内、病巣内、腹腔内または皮下経路を介した、注射が含まれ、そしてまた、例えば疾患または傷害部位での局所投与も含まれる。投与の他の適切な手段には、移植物からの持続放出；エアロゾル吸入および／またはガス注入；点眼剤；膣または直腸座薬；頬側調製；丸剤（ピル）、シロップ、ロゼンジ、アイスクリームまたはチューインガムを含む経口調製；およびローション、ゲル、スプレー、軟膏または他の適切な技術などの局所調製が含まれる。また、細胞増殖を調節するため、あるいは細胞で所望の効果または活性を生じるため、Ｆｌｔ３リガンド、１以上の補助分子および１以上のワクチンの存在下で、ｅｘ  ｖｉｖｏで細胞を培養することも可能である。その後、処理した細胞を、療法目的のため、ｉｎ  ｖｉｖｏで導入することが可能である。Ｆｌｔ３リガンド、１以上の補助分子および１以上のワクチンを被験者に投与する際、これらは、同一のまたは異なる経路によって投与可能であり、そして同時に、別個に、または連続して投与可能である。
【００９３】
経口投与。Ｆｌｔ３リガンド、１以上の補助分子および１以上のワクチンの療法的有効量を経口投与する際、これらは、錠剤、カプセル、粉末、溶液またはエリキシル剤の形であることが可能である。錠剤型で投与する際、Ｆｌｔ３リガンド、１以上の補助分子および１以上のワクチンは、さらに、ゼラチンまたはアジュバントなどの固体キャリアーを含有することが可能である。錠剤、カプセル、および粉末は、本発明のポリペプチドを約５〜９５％、そして好ましくは本発明のポリペプチドを約２５〜９０％含有する。本明細書で使用に意図されるのは、本明細書にその全体が援用される、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０），  第１８版，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．  ペンシルバニア州イーストン  １８０４２の第８９章に一般的に記載される、経口固形投薬型である。固形投薬型には、錠剤、カプセル、丸剤、トローチまたはロゼンジ、カシェ剤またはペレットが含まれる。また、リポソーム被包またはプロテイノイド被包を用いて、本組成物を配合することも可能である（例えば米国特許第４，９２５，６７３号に報告されるプロテイノイド微小球体として）。リポソーム被包が使用可能であり、そしてリポソームを多様なポリマーで誘導体化することが可能である（例えば米国特許第５，０１３，５５６号）。療法のためのありうる固形投薬型の説明が、本明細書にその全体が援用される、Ｍａｒｓｈａｌｌ，  Ｋ．，  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ（１９７９），  Ｇ．Ｓ．  ＢａｎｋｅｒおよびＣ．Ｔ．  Ｒｈｏｄｅｓ監修の第１０章に提供される。一般的に、配合物は、Ｆｌｔ３−Ｌ、および胃環境に対する保護を可能にし、そして腸において生物学的活性成分の放出を可能にする不活性成分を含むであろう。
【００９４】
やはり具体的に意図されるのは、上記本発明の化合物の経口投薬型である。必要であれば、経口搬送が有効であるように、化合物を化学的に修飾することが可能である。一般的に、意図される化学的修飾は、化合物分子自体への少なくとも１つの部分の付着であり、前記部分は（ａ）タンパク質分解の阻害；および（ｂ）胃または腸からの血流への取り込みを可能にする。やはり望ましいのは、化合物全体の安定性増加および体内の循環時間の増加である。本発明において、共有結合するビヒクルとして有用な部分はまた、この目的にも使用可能である。こうした部分の例には、ＰＥＧ、エチレングリコールおよびプロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンおよびポリプロリンが含まれる。例えば、ＡｂｕｃｈｏｗｓｋｉおよびＤａｖｉｓ，  Ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒ−Ｅｎｚｙｍｅ  Ａｄｄｕｃｔｓ，  Ｅｎｚｙｍｅｓ  ａｓ  Ｄｒｕｇｓ（１９８１），  ＨｏｃｅｎｂｅｒｇおよびＲｏｂｅｒｔｓ監修，  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，  ニューヨーク州ニューヨーク，  ｐｐ．３６７−８３；Ｎｅｗｍａｒｋら（１９８２），  Ｊ．  Ａｐｐｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ４：１８５−９を参照されたい。使用可能な他のポリマーは、ポリ−１，３−ジオキソランおよびポリ−１，３，６−トリオキソカンである。薬学的使用に好ましいのは、上に示すように、ＰＥＧ部分である。経口搬送投薬型には、本発明の療法化合物の吸収を増進するキャリアーとしての、ナトリウムＮ−（８−［２−ヒドロキシベンゾイル］アミノ）カプリレート（ＳＮＡＣ）などの修飾脂肪族アミノ酸の塩を使用することも可能である。ＳＮＡＣを用いたヘパリン配合物の臨床的有効性が、Ｅｍｉｓｐｈｅｒｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓが行った第ＩＩ相試験で立証された。米国特許第５，７９２，４５１号、“Ｏｒａｌ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｅｔｈｏｄｓ”を参照されたい。
【００９５】
液体型で投与する際、水、石油、ピーナツ油、ミネラルオイル、ダイズ油、もしくはゴマ油などの動物もしくは植物起源の油、または合成油などの液体キャリアーが添加可能である。Ｆｌｔ３リガンド、１以上の補助分子および１以上のワクチンの液体型はさらに、生理学的生理食塩溶液、デキストロースまたは他の糖類溶液、あるいはエチレングリコール、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどのグリコール類を含有することが可能である。
【００９６】
静脈内投与。Ｆｌｔ３リガンド、１以上の補助分子および１以上のワクチンの療法的有効量を、静脈内、皮膚または皮下注射によって投与する際、Ｆｌｔ３リガンド、１以上の補助分子および１以上のワクチンは、発熱物質不含で非経口的に許容しうる水性溶液の形であることが可能である。ｐＨ、等張性、安定性等を十分考慮した、こうした非経口的に許容しうるポリペプチド溶液の調製は、当該技術分野の範囲内である。静脈内、皮膚、または皮下注射のための好ましい薬剤組成物は、本発明のポリペプチドに加えて、塩化ナトリウム注射剤、リンゲル注射剤、デキストロース注射剤、デキストロースおよび塩化ナトリウム注射剤、乳酸リンゲル注射剤、または当該技術分野に知られるような他のビヒクルのような等張性のビヒクルを含有すべきである。本発明の薬剤組成物はまた、当業者に知られる、安定化剤、保存剤、緩衝剤、酸化防止剤、または他の添加物も含有可能である。本発明の薬剤組成物を用いた静脈内療法の期間は、治療する疾患の重症度、並びに個々の患者各々の状態および潜在的な特異体質反応に応じて、多様であろう。本発明のポリペプチドの各適用期間は、連続静脈内投与１２〜２４時間の範囲内であろうと意図される。最終的には、主治医が、本発明の薬剤組成物を用いた静脈内療法の適切な期間に関して、決定するであろう。
【００９７】
組織投与。本発明のＦｌｔ３リガンド、１以上の補助分子および１以上のワクチンを、局所的に、全身性に、あるいは移植物または装置として局在的に、投与することが可能である。投与する際、Ｆｌｔ３リガンド、１以上の補助分子および１以上のワクチンは、もちろん、発熱物質不含で、生理学的に許容しうる型である。さらに、Ｆｌｔ３リガンド、１以上の補助分子および１以上のワクチンは、望ましい部位に搬送するため、粘稠性型で被包または注射可能である。Ｆｌｔ３リガンド、１以上の補助分子および／または１以上のワクチンの局所投与もまた、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの別の態様のために想定される。
【００９８】
レトロウイルス科（例えばヒト免疫不全ウイルス、例えばＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶまたはＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、またはＨＩＶ−ＩＩＩとも称される；および他の単離体、例えばＨＩＶ−ＬＰ））； ピコルナウイルス科（例えばポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス；エンテロウイルス、ヒト・コクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）；カリチウイルス科（Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ）（例えば胃腸炎を引き起こす株）；トガウイルス科（例えばウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）；フラビウイルス科（例えばデング熱ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）；コロナウイルス科（例えばコロナウイルス）；ラブドウイルス科（例えば水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；フィロウイルス（例えばエボラウイルス）；パラミクソウイルス科（例えばパラインフルエンザウイルス、おたふく風邪ウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス）；オルトミクソウイルス科（例えばインフルエンザウイルス）；ブニヤウイルス科（例えばハンタンウイルス、ブンガウイルス（ｂｕｎｇａ  ｖｉｒｕｓ）、フレボウイルスおよびナイロウイルス（Ｎａｉｒｏ  ｖｉｒｕｓ））；アレナウイルス科（出血熱ウイルス）；レオウイルス科（例えばレオウイルス、オルビウイルスおよびロタウイルス）；ビルナウイルス科；ヘパドナウイルス科（Ｂ型肝炎ウイルス）；パルボウイルス科（パルボウイルス）；パポバウイルス科（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）；アデノウイルス科（大部分のアデノウイルス）；ヘルペスウイルス科（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１および２、水痘・帯状ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス類）；ポックスウイルス科（天然痘ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）；およびイリドウイルス科（例えばアフリカ・ブタ熱ウイルス）；並びに未分類のウイルス（例えば海綿状脳症の病因学的作用因子、デルタ肝炎の病原体（Ｂ型肝炎ウイルスの不全付随体と考えられる）、非Ａ非Ｂ肝炎の病原体（クラス１＝体内感染；クラス２＝非経口感染（すなわちＣ型肝炎））；ノーウォークウイルスおよび関連ウイルス、並びにアストロウイルス（ａｓｔｒｏｖｉｒｕｓ））による感染を含む、ウイルス感染の治療および／または防止に、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルが使用可能である。
【００９９】
ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉｓ）、ライム病ボレリア（Ｂｏｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、レジオネラ・ニューモフィリア（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ）、マイコバクテリウム属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）種（例えばヒト型結核菌（Ｍ．  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、鳥型結核菌（Ｍ．  ａｖｉｕｍ）、Ｍ．イントラセルラレ（Ｍ．  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、Ｍ．カンサシ（Ｍ．  ｋａｎｓａｉｉ）、Ｍ．ゴルドネ（Ｍ．  ｇｏｒｄｏｎａｅ））、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、単球症リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（Ａ群連鎖球菌）、ストレプトコッカス・アガラクティエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群連鎖球菌）、連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）（ビリダンス群）、糞便連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、ウシ連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｂｏｖｉｓ）、連鎖球菌属（嫌気性種）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、病原性カンピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）種、腸球菌属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）種、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｒａｃｉｓ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、コリネバクテリウム種、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ  ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、ウエルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｒｓ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）、エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）種、フソバクテリウム・ヌクレアツム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、ストレプトバチルス・モニリフォルミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｉｕｍ）、トレポネーマ・ペルテヌエ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐｅｒｔｅｎｕｅ）、レプトスピラ属（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）、およびイスラエル放線菌（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｉｓｒａｅｌｌｉ）による感染を含む、細菌による感染の治療および／または防止に、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルが使用可能である。
【０１００】
住血吸虫類；トリパノソーマ類；リーシュマニア属（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）種；フィラリア性線形動物；トリコモナス症；肉胞子虫症；無鉤条虫（Ｔａｅｎｉａ  ｓａｇｉｎａｔａ）、有鉤条虫（Ｔａｅｎｉａ  ｓｏｌｉｕｍ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、煙色コウジ菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ）、旋毛虫症、皮膚ブラストミセス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、トラコーマ・クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、鵞口瘡カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、三日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）、四日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｍａｌａｒｉａｅ）、およびトキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）等による感染を含む、感染性単細胞生物に対して、被験者を治療するかまたは免疫するのに、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルが使用可能である。
【０１０１】
さらなる態様において、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルは、限定されるわけではないが：線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉種、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌腫、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌腫、基底細胞癌腫、腺癌、汗腺癌腫、皮脂腺癌腫、乳頭状癌腫、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌腫、気管支癌腫、腎細胞癌腫、肝癌、胆管癌腫、絨毛癌、精上皮癌、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、精巣腫瘍、肺癌腫、小細胞肺癌腫、膀胱癌腫、上皮癌腫、神経膠腫、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、希突起神経膠芽腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽腫などの哺乳動物肉腫および癌腫；急性リンパ性白血病および急性骨髄性白血病（骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、および赤白血病）などの白血病；慢性白血病（慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病および慢性リンパ性白血病）；および真性赤血球増加症、リンパ腫（ホジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症、および重鎖病などの癌に対して、被験者を治療するか、または被験者にワクチン接種するのに使用可能である。多様なリンパ増殖性障害もまた、治療可能であり、これらの障害には、自己免疫リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、慢性リンパ芽球白血病、毛様細胞白血病、慢性リンパ性白血病、末梢Ｔ細胞リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、外套細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫、エプスタイン−バーウイルス陽性Ｔ細胞リンパ腫、細網肉腫、ホジキン病、びまん性攻撃的リンパ腫、急性リンパ性白血病、Ｔガンマリンパ増殖性疾患、皮膚Ｂ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（すなわち菌状息肉症）およびセザリー症候群が含まれる。
【０１０２】
Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルはまた、当該技術分野に知られる他の認識される治療と組み合わせて使用可能である。例えば、癌の治療において、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルは、手術、化学療法、放射療法、養子免疫療法等と組み合わせて使用可能である。根底にある１つの論理的説明は、腫瘍塊が最小限であり、そして／または腫瘍細胞が手術中および手術後に循環内に抜け出し、そしてＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルを通じた免疫療法が、この状況でより有効でありうることである。特定の態様において、本発明の防御的有用性および療法的有用性は、手術前、手術時、または手術後いずれかに癌の免疫適格性を増進し、そして癌細胞に対する腫瘍特異的免疫を誘導することに向けられ、この目的は癌を阻害することであり、そして最終的な臨床上の目的は癌の退化および／または根絶である。
【０１０３】
腫瘍性疾患の進行に対するＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルの影響は、限定されるわけではないが：ａ）細胞免疫の評価としての過敏性の遅延；ｂ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞溶解性Ｔリンパ球の活性；ｃ）腫瘍特異的抗原のレベル；ｄ）コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンなどの技術を用いた、腫瘍形態の変化；ｅ）高リスクの個体における特定の癌のリスクの推定上のバイオマーカーレベルの変化、およびｆ）腫瘍形態の変化を測定することを含む、当業者に知られる方法いずれかによって監視可能である。あるいは、ＣＴＬアッセイ、増殖アッセイ、抗体捕捉アッセイ等の標準的技術を用いて、目的の抗原に対する免疫応答を測定することが可能である。
【０１０４】
別の態様において、上述の抗原１以上で感作した抗原提示細胞（ＡＰＣ）を用いた養子免疫療法と、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルを組み合わせることが可能である。養子免疫療法は、感染性疾患または癌を治療する療法的アプローチを指し、ここで、免疫細胞が、直接または間接的に、感染細胞または腫瘍細胞および／または抗原性構成要素に対する特異的免疫を仲介し、そして感染性疾患の治療または癌の退化を生じることを目的として、免疫細胞を宿主に投与する。１つの態様において、抗原感作ＡＰＣを、ワクチン投与前、投与と同時、または投与後に投与することが可能である。さらに、養子免疫療法の投与様式は、限定されるわけではないが、例えば皮下投与、静脈内投与、腹腔内投与、筋内投与、皮内投与または粘膜投与を含めて、多様である可能性がある。
【０１０５】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、被験者を免疫する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなり、ここでＦｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与し、そしてここで補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与し、そしてここで補助分子は、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、前記方法に関する。
【０１０６】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、癌、ウイルス感染、細菌感染または単細胞生物による感染を患う被験者において、癌、ウイルス感染、細菌感染または単細胞生物による感染を治療し、そして／または防止する方法であって：（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；（ｂ）場合によって、補助分子を被験者に投与し；そして（ｃ）ワクチンを被験者に投与する工程を含んでなる、前記方法に関する。
【０１０７】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、癌を患う患者において、癌を治療する方法であって：（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；（ｂ）場合によって、１以上の補助分子を含んでなる薬剤組成物を被験者に投与し；そして（ｃ）アジュバント中に配合した１以上の癌抗原を含んでなるワクチンを被験者に投与する工程を含んでなる、前記方法に関する。
【０１０８】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、ウイルス感染を患う被験者において、ウイルス感染を治療する方法であって：（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；（ｂ）場合によって、１以上の補助分子を含んでなる薬剤組成物を被験者に投与し；そして（ｃ）アジュバント中に配合した１以上のウイルス抗原を含んでなるワクチンを被験者に投与する工程を含んでなる、前記方法に関する。
【０１０９】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、細菌感染を患う被験者において、細菌感染を治療する方法であって：（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；（ｂ）場合によって、１以上の補助分子を含んでなる薬剤組成物を被験者に投与し；そして（ｃ）アジュバント中に配合した１以上の細菌抗原を含んでなるワクチンを被験者に投与する工程を含んでなる、前記方法に関する。
【０１１０】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、単細胞生物による感染を患う被験者において、単細胞生物による感染を治療する方法であって：（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；（ｂ）場合によって、１以上の補助分子を含んでなる薬剤組成物を被験者に投与し；そして（ｃ）アジュバント中に配合した単細胞生物由来の１以上の抗原を含んでなるワクチンを被験者に投与する工程を含んでなる、前記方法に関する。
【０１１１】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、癌を患う被験者において、癌抗原に対する抗原特異的免疫応答を増進する方法であって：（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；（ｂ）場合によって、１以上の補助分子を含んでなる薬剤組成物を被験者に投与し；そして（ｃ）アジュバント中に配合した１以上の癌抗原を含んでなるワクチンを被験者に投与する工程を含んでなる、前記方法に関する。
【０１１２】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、ウイルス感染を患う被験者において、ウイルス抗原に対する抗原特異的免疫応答を増進する方法であって：（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；（ｂ）場合によって、１以上の補助分子を含んでなる薬剤組成物を被験者に投与し；そして（ｃ）アジュバント中に配合した１以上のウイルス抗原を含んでなるワクチンを被験者に投与する工程を含んでなる、前記方法に関する。
【０１１３】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、細菌感染を患う被験者において、細菌抗原に対する抗原特異的免疫応答を増進する方法であって：（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；（ｂ）場合によって、１以上の補助分子を含んでなる薬剤組成物を被験者に投与し；そして（ｃ）アジュバント中に配合した１以上の細菌抗原を含んでなるワクチンを被験者に投与する工程を含んでなる、前記方法に関する。
【０１１４】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、単細胞生物による感染を患う被験者において、単細胞生物に対する抗原特異的免疫応答を増進する方法であって：（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；（ｂ）場合によって、１以上の補助分子を含んでなる薬剤組成物を被験者に投与し；そして（ｃ）アジュバント中に配合した単細胞生物由来の１以上の抗原を含んでなるワクチンを被験者に投与する工程を含んでなる、前記方法に関する。
【０１１５】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、被験者において、抗原に対する免疫応答を増進する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなる、前記方法に関する。
【０１１６】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、被験者において、抗原に対する抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞免疫応答を増進する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなる、前記方法に関する。
【０１１７】
以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、被験者において、抗原に対する抗原特異的Ｔヘルパー免疫応答を増進する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなる、前記方法に関する。
【０１１８】
前述の各態様において、Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与することが可能であり、そして補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与することが可能である。さらに、前述の各態様において、補助分子は、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択可能である。
【０１１９】
動物モデルおよび実験動物における抗原および／またはワクチンのｉｎ  ｖｉｖｏ評価
Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルを用いる、前述の方法はすべて、動物モデルおよび実験動物において、抗原および／またはワクチンをｉｎ  ｖｉｖｏ評価するのに受け入れやすい。例えば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）および腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）のリストが増大中であることから、ヒトにおける第Ｉ相試験の前に動物実験で評価する必要がある。上に列挙するものなど、癌に関連するもの以外の抗原を用いて、ｉｎ  ｖｉｖｏで抗原および／またはワクチンの評価を行うことが可能である。
【０１２０】
したがって、動物モデルおよび／または実験動物（すなわち被験者）において、抗原に対する免疫応答を評価する方法を提供する。以下は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様であり、該態様は、被験者において、抗原に対する免疫応答を評価する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；
（ｃ）抗原を被験者に投与し、ここで、抗原は、場合によってアジュバントとともに配合可能である；そして
（ｄ）抗原に対する被験者の免疫応答を評価する
工程を含んでなる、前記方法に関する。
【０１２１】
他の態様と同様に、Ｆｌｔ３リガンドおよび場合による補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与することが可能である。補助分子は、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択可能である。
【０１２２】
被験者の免疫応答の評価は、限定されるわけではないが：ａ）細胞免疫の評価としての過敏性の遅延；ｂ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞溶解性Ｔリンパ球の活性；ｃ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＴヘルパーリンパ球の増殖活性；ｄ）抗原特異的抗体とともに、抗原特異的抗体のアイソタイプのレベル；ｅ）腫瘍などの組織形態の変化；ｅ）特定の疾患または感染の代理マーカーレベルの変化；およびｆ）抗原が誘導するサイトカインおよび／またはケモカイン産生、を測定することを含む、当該技術分野に知られる方法いずれによっても監視可能である。
【０１２３】
アレルギーの治療におけるＦｌｔ３リガンド
Ｆｌｔ３−Ｌをアレルギーの治療に使用可能である。本明細書全体で記載するＦｌｔ３−Ｌ免疫プロトコルは、アレルギーのアレルゲン特異的免疫療法に直接の有用性を有する。アレルゲン特異的免疫療法は、原因アレルゲンへの続く曝露に関連する症状を改善するのに有効な用量に到達するため、１以上のアレルギーを有する被験者に、増加する用量でアレルゲンワクチンを投与することと定義される。アレルギーの免疫療法には、Ｆｌｔ３−Ｌ免疫プロトコルおよびアレルギーのアレルゲン特異的免疫療法および／またはＦｌｔ３−Ｌの投与を含むように修飾された脱感作療法が含まれる。
【０１２４】
アレルギー学的診断の技術分野に使用される適切なｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏ技術いずれかを用いて、被験者を診断することが可能であり、これらには、限定されるわけではないが、皮内連続終点試験（ＳＥＴ）、放射性アレルゲン吸着アッセイ（ＲＡＳＴ）、ＲＡＳＴスポット試験、ヒスタミン放射性酵素（Ｒａｄｉｏｅｎｓｙｍａｔｉｃ）アッセイ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＩｇＥおよびＩｇＧアッセイ、自発的合成アッセイとともに当該技術分野に知られる他のアッセイなどのより慣用的な試験が含まれる。
【０１２５】
アレルギーワクチンは当該技術分野に周知であり、そして一般的に、少なくとも１つのアレルゲン、および適切なキャリアー、希釈剤、賦形剤、安定化剤および場合によるアジュバントいずれかを含んでなると定義することが可能である。アレルゲンは、本明細書において、当該技術分野に認識されるアレルゲンいずれか；修飾アレルゲン（限定されるわけではないが、尿素、ＰＥＧ／ＰＶＡ、脱グリコシル化、多糖および／または光酸化などの方法によって修飾）；アレルゴイド（限定されるわけではないが、チロシン吸収を含む、または含まない、グルタルアルデヒドおよび／またはホルムアルデヒド処理などの方法によって修飾）；一価同種異系抽出物；アレルゲンポリマー；コンジュゲート化アレルゲン；アレルゲンのアレルゲン−ムラミルペプチド；アレルゲン・マイコロイルムラミルペプチドコンジュゲート；アレルゲン−プルラン化合物；アレルゲンおよびハプテン（単数または複数）のコンジュゲート；アレルゲン、ハプテン（単数または複数）および親水性ポリマーのコンジュゲート；尿素変性（ｄｅｎａｔｕｒｏｄ）抗原；組換えアレルゲン；突然変異誘発した組換えアレルゲン；低刺激性アレルゲン（ｈｙｐｏａｌｌｅｒｇｅｎｓ）および／または低刺激性アレルゲン性誘導体などの遺伝子操作アレルゲン（例えばＩｇＥ結合エピトープが減少しているが、Ｔ細胞エピトープおよび遮断抗体として働くことが可能なＩｇＧ抗体を誘導するためのエピトープを保持する分子）と定義される。
【０１２６】
アレルギーワクチンおよびＦｌｔ３−Ｌを、本明細書に記載する有効な方式および経路いずれかで投与することが可能である。アレルゲンワクチンおよびＦｌｔ３−Ｌの投薬および投与は、資格のある医師によって決定可能である。
【０１２７】
Ｆｌｔ３−Ｌ免疫プロトコルは、治療可能なアレルギーいずれかに対するアレルギー免疫療法で使用可能であり、これらには、限定されるわけではないが：昆虫アレルギーおよび昆虫咬傷および／または刺傷（チリダニ、アリ、クモ、ハエ、ハチ、スズメバチ、蚊、ブヨ等）；動物アレルギー（限定されるわけではないが：イヌ、ネコ、鳥、げっ歯類、ウシ、ヒツジ、ウマ、ブタ、ヤギ等の家畜および野生動物の毛皮、ふけ、排出物等）；アレルギー性気管支炎、バルサムアレルギー；カンジダ菌アレルギー；カーペットおよび／または織物アレルギー；食物アレルギーまたは敏感性；金属アレルギー；松脂アレルギー；殺菌剤アレルギー；肥料アレルギー；ホルムアルデヒドアレルギー；ガスアレルギー；接着剤アレルギー；同種異系血清アレルギー；宝飾品アレルギー；メルカプトアレルギー；カビおよび／またはうどん粉菌アレルギー；ペンキアレルギー；紙アレルギー；パラベン類アレルギー；香水アレルギー；殺虫剤アレルギー；プラスチックアレルギー；シャンプーアレルギー；石鹸アレルギー；チウラムアレルギー；タバコアレルギー；コムギアレルギー；酵母アレルギー；アレルギー性皮膚炎；アレルギー性鼻炎；アスピリン感受性；喘息；アトピー性皮膚炎；接触皮膚炎；化粧品アレルギー；牛乳アレルギー；皮膚炎；ほこりアレルギー；花粉アレルギー；湿疹；草アレルギー；サリチル酸感受性等が含まれる。
【０１２８】
上に詳細に記載するように、Ｆｌｔ３−Ｌは、アレルギーワクチンおよび場合による補助分子の投与前に、投与と同時に、そして／または投与に続いて、投与可能である。１つの態様において、Ｆｌｔ３−Ｌは、ワクチン接種前に、ワクチン接種と同時に、そして／またはワクチン接種に続いて、連続１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、または２０日間、被験者に一日一度、毎日または２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごとまたは７日ごとに投与される。もちろん、上述のＦｌｔ３−Ｌ免疫プロトコルのすべての態様は、アレルギーの治療に適応可能である。さらに、当該技術分野に知られる現存のアレルギー免疫措置を修飾して、Ｆｌｔ３−Ｌの投与を含むようにすることが可能である。
【０１２９】
１つの態様において、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルは、１以上のアレルギーを有する被験者において、アレルギーを治療する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）アレルギーワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなり、ここでＦｌｔ３リガンドは、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与し、そしてここで補助分子は、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与し、そしてここで補助分子は、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、前記方法に関する。
【０１３０】
上述のように、Ｆｌｔ３−Ｌは、造血幹細胞および前駆細胞とともに、多様な種類の免疫細胞、特に樹状細胞を拡大させる。さらに、Ｆｌｔ３−Ｌは、Ｔｈ１型樹状細胞を拡大させる能力を有する。したがって、アレルギー免疫療法におけるＦｌｔ３−Ｌ免疫プロトコルは、典型的なＴｈ２応答からＴｈ１型応答に、被験者の免疫応答を駆動することが可能である。サイトカインプロフィールおよび免疫応答におけるこのシフトは、ＩｇＥ産生よりＩｇＧ産生を駆動し、ＩＬ−４の循環レベルを減少させ、好酸球の補充および活性化を減少させるとともに、肥満細胞の増殖を減少させる。その結果、続くアレルゲン曝露はアレルギー反応を引き起こさない。
【０１３１】
当該技術分野に知られる標準法および技術、例えば限定されるわけではないが、患者由来のアレルゲン特異的ＩｇＧおよびＩｇＥ抗体の測定によって、Ｆｌｔ３−Ｌ免疫プロトコルを用いたアレルゲン特異的免疫療法の有効性を評価することが可能である。Ｆｌｔ３−Ｌ免疫プロトコルにおけるアレルゲン特異的免疫療法を受けている患者はまた、限定されるわけではないが、抗ヒスタミン剤、充血除去剤、ステロイド、鎮痛剤、咳止め等の１以上の慣用療法と組み合わせて治療可能である。
【０１３２】
本明細書に引用するすべての刊行物の相当する開示は、特に本明細書に援用される。以下の例は、特定の態様を例示するために提供され、そして本発明の範囲を限定するために提供されるのではない。
【実施例】
【０１３３】
実施例
（実施例１）
本実施例は、樹状細胞拡大にＦｌｔ３リガンドを用いる方法を記載する。細胞収集前に、循環ＰＢＰＣおよびＰＢＳＣを可動化するか、またはその数を増加させることが望ましい可能性がある。可動化によって、ＰＢＰＣおよびＰＢＳＣ収集が改善される可能性があり、そして可動化は、こうした細胞の収集前に、患者にＦｌｔ３リガンドまたはサーグラモスティム（ｓａｒｇｒａｍｏｓｔｉｍ）（Ｌｅｕｋｉｎｅ（登録商標）、Ｉｍｍｕｎｅｘ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ワシントン州シアトル）を静脈内投与することによって達成可能である。ＣＳＦ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ｃ−ｋｉｔリガンド、Ｇ−ＣＳＦ、ＥＰＯ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−３融合タンパク質、ＬＩＦ、ＦＧＦおよびそれらの組み合わせなどの他の増殖因子を、Ｆｌｔ３リガンドと組み合わせて、連続して、または同時に投与することが可能である。当該技術分野に知られるアフェレーシス法を用いて、可動化または非可動化ＰＢＰＣおよびＰＢＳＣを収集する。例えばＢｉｓｈｏｐら，  Ｂｌｏｏｄ，  ｖｏｌ．８３，  Ｎｏ．２，  ｐｐ．６１０−６１６（１９９４）を参照されたい。簡潔には、慣用的な装置、例えばＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓモデルＶ５０アフェレーシス装置（Ｈａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ、メリーランド州ブレインツリー）を用いて、ＰＢＰＣおよびＰＢＳＣを収集する。およそ６．５ｘ１０8単核細胞（ＭＮＣ）／患者ｋｇが収集されるまで、典型的には週５回を越えずに、４時間の収集を行う。カルシウムまたはマグネシウムを含まないハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）でおよそ１：６に希釈し、そしてリンパ球分離培地（Ｏｒｇａｎｏｎ  Ｔｅｋｎｉｋａ、ノースカロライナ州ダーハム）上に重層することによって、顆粒球−マクロファージコロニー形成単位（ＣＦＵ−ＧＭ）に関して、収集したＰＢＰＣおよびＰＢＳＣのアリコットをアッセイする。遠心分離後、界面のＭＮＣを収集し、洗浄し、そしてＨＢＳＳに再懸濁する。およそ３００，０００ＭＮＣを含有する１ミリリットルアリコット、修飾マッコイ５Ａ培地、０．３％寒天、２００Ｕ／ｍｌ組換えヒトＧＭ−ＣＳＦ、２００Ｕ／ｍｌ組換えヒトＩＬ−３、および２００Ｕ／ｍｌ組換えヒトＧ−ＣＳＦを、３７℃、５％ＣＯ2中、完全に加湿した空気中で、１４日間培養する。場合によって、Ｆｌｔ３リガンドまたはＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−３融合分子（ＰＩＸＹ  ３２１）を培養物に添加することが可能である。これらの培養物をライト染色液で染色し、そして実体顕微鏡を用いて、ＣＦＵ−ＧＭコロニーをスコア付けする（Ｗａｒｄら，  Ｅｘｐ．  Ｈｅｍａｔｏｌ．，  １６：３５８（１９８８））。あるいは、Ｓｉｅｎａら，  Ｂｌｏｏｄ，  Ｖｏｌ．７７，  Ｎｏ．２，  ｐｐ４００−４０９（１９９１）のＣＤ３４／ＣＤ３３フローサイトメトリー法、または当該技術分野に知られる他の方法いずれかを用いて、ＣＦＵ−ＧＭコロニーをアッセイすることが可能である。
【０１３４】
ＣＦＵ−ＧＭ含有培養物を速度管理フリーザー（例えばＣｒｙｏ−Ｍｅｄ、ミシガン州マウントクレメンス）中で凍結し、その後、液体窒素の気相に保管する。１０％のジメチルスルホキシドを凍結保護剤として使用可能である。患者からすべての収集を終えたら、ＣＦＵ−ＧＭ含有培養物を融解し、そしてプールする。融解した細胞コレクションを、上述の他のサイトカインと組み合わせてＦｌｔ３リガンドと接触させる。Ｆｌｔ３リガンドへのこうした曝露は、ＣＦＵ−ＧＭを樹状細胞系譜に駆動するであろう。樹状細胞を、患者の静脈内に再注入する。
【０１３５】
（実施例２）
本実施例は、ＣＤ４０Ｌで刺激した樹状細胞が、同種異系抗原を提示し、そしてしたがってＴ細胞増殖を引き起こす能力を例示する。ヒト・ドナーの骨髄からＣＤ３４＋細胞を得て、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４、ＦＬＴ３リガンド、幹細胞因子とともに、ＤＣ分化を促進する当該技術分野に知られる他のサイトカインなどの１以上のサイトカインの存在下で２週間培養し、そして実質的に実施例１に記載するようなフローサイトメトリーによって単離した。混合リンパ球反応（ＭＬＲ）に用いる前に、樹状細胞の増殖を支持するサイトカインを含有するマッコイ増進培地中、ＣＤ４０Ｌ（１μｇ／ｍｌ）の可溶性三量体型の存在下または非存在下で、樹状細胞をさらに２４時間培養した。
【０１３６】
２−アミノエチルイソチオウロニウムブロミド・ヒドロブロミド処理したヒツジ赤血球とロゼット形成させることによって、非ＨＬＡマッチドナーの血液からＴ細胞を精製した。製造者のプロトコルにしたがって、ＭＡＣＳ（Ｍｉｌｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、カリフォルニア州サニーベール）を用いて、免疫磁気選択を用い、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋集団をさらに精製した。力価決定した数の樹上細胞の存在下、ＲＰＭＩ（１０％熱不活化ウシ胎児血清（ＦＢＳ））中の精製Ｔ細胞を用いて、３７℃、１０％ＣＯ2大気中で、細胞増殖アッセイを行った。ウェルあたりおよそ１ｘ１０5のＴ細胞を、三つ組で、丸底９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中、多様な数の非マッチ樹状細胞の存在下で、７日間培養した。培養の最後の８時間、トリチウム化したチミジン（２５Ｃｉ／ｎｍｏｌ、Ａｍｅｒｓｈａｍ、イリノイ州アーリントンハイツ）１μＣｉ／ウェルで細胞をパルス処理した。
【０１３７】
自動化細胞採取装置を用いて、ガラスファイバーディスク上に細胞を採取し、そして液体シンチレーション分光分析によって、取り込まれたｃｐｍを測定した。結果によって、ＭＬＲに使用する前にＣＤ４０Ｌに曝露されていない樹状細胞に比較して、ＣＤ４０Ｌで活性化された樹状細胞は、同等のＴ細胞増殖を刺激するのに３倍少ない数しか必要とされないことが立証された。この増加は、同種異系応答性Ｔ細胞を刺激する細胞表面分子の発現が増加しているためである可能性が最も高い。
【０１３８】
（実施例３）
本実施例は、樹状細胞が、Ｔ細胞の抗原特異的増殖を刺激する能力を例示する。破傷風トキソイドに対して応答性であると考えられるヒト・ドナーの骨髄からＣＤ３４＋細胞を得て、選択したサイトカインの存在下で２週間培養し、そして実質的に実施例１に記載するように、フローサイトメトリーによって単離した。破傷風毒素（ＴＴＸ）抗原提示アッセイに用いる前に、樹状細胞の増殖を支持するサイトカインを含有するマッコイ増進培地中、ＣＤ４０Ｌ（１μｇ／ｍｌ）の可溶性三量体型の存在下または非存在下で、樹状細胞をさらに２４時間培養し、その後、３７℃、１０％ＣＯ2大気中、精製ＴＴＸ（Ｃｏｎｎａｕｇｈｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｉｎｃ．、ペンシルバニア州スウィフトウォーター）で２４時間パルス処理した。
【０１３９】
精製ＴＴＸおよび低濃度のＩＬ−２およびＩＬ−７（それぞれ２ｎｇ／ｍｌおよび５ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、ＣＤ３４抗体カラムから溶出したＣＤ３４-細胞を２週間培養することによって、自己破傷風トキソイド応答性Ｔ細胞を得た。ＣＤ３４-集団は、ある割合のＴ細胞（約５％）を含有し、この割合は、破傷風トキソイドとともに抗原提示細胞として作用する他の細胞種に対して応答性である。２週目までに、これらの細胞の解析によって、これらが約９０％  Ｔ細胞であり、その大部分が破傷風トキソイド特異的であり、Ｔ細胞活性化マーカーレベルが低いことが示された。
【０１４０】
破傷風トキソイドでパルス処理した樹上細胞の存在下、１０％熱不活化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したＲＰＭＩ中、上述のようなＣＤ３４-骨髄細胞由来のＴＴＸ特異的Ｔ細胞を用いて、３７℃、１０％ＣＯ2大気中で、抗原特異的Ｔ細胞増殖アッセイを行った。ウェルあたりおよそ１ｘ１０5のＴ細胞を、三つ組で、丸底９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中、力価決定した数の樹状細胞の存在下で、５日間培養した。培養の最後の４〜８時間、トリチウム化したチミジン（２５Ｃｉ／ｎｍｏｌ、Ａｍｅｒｓｈａｍ、イリノイ州アーリントンハイツ）１□Ｃｉ／ウェルで細胞をパルス処理した。自動化細胞採取装置を用いて、ガラスファイバーディスク上に細胞を採取し、そして液体シンチレーション分光分析によって、取り込まれたｃｐｍを測定した。図２に示す結果によって、ＣＤ４０Ｌと培養された樹状細胞は、ＣＤ４０Ｌに曝露されていない樹状細胞より、ＴＴＸ特異的Ｔ細胞に対して抗原を提示するのに約１０倍有効でないことが示された。
【０１４１】
（実施例４）
本実施例は、Ｆｌｔ３リガンドを用いて、ｉｎ  ｖｉｖｏで抗腫瘍免疫応答を増大させる方法を記載する。メスＣ５７ＢＬ／１０Ｊ（Ｂ１０）マウス（Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、メイン州バーハーバー）に、腹部正中線に総量５０μｌを皮内注入することによって、５ｘ１０5の生存Ｂ１０．２またはＢ１０．５線維肉腫腫瘍細胞を注入した。線維肉腫Ｂ１０．２およびＢ１０．５株は、Ｂ１０起源のものであり、そして先に記載されてきている。本明細書に援用されるＬｙｎｃｈら，  Ｅｕｒｏ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  ２１：１４０３（１９９１）を参照されたい。５ｍｇのメチルコラントレンを含有するパラフィンペレットを皮下移植することによって、線維肉腫Ｂ１０．２株を誘導し、そして紫外照射に長時間曝露することによって、Ｂ１０．５株を誘導した。５％ＦＢＳ、２ｎＭ  Ｌ−グルタミン、５０Ｕ／ｍｌペニシリンおよび５０μｇ／ｍｌストレプトマイシンを含有するα−修飾ＭＥＭ中、腫瘍細胞株をｉｎ  ｖｉｔｒｏで維持した。総体積１００μｌを皮下注射することによって、１９日間の期間に渡って（別に示さない限り）、原則として毎日、組換えヒトＦｌｔ３リガンド（１０μｇ／注射）を投与した。対照マウスには、１００ｎｇ  ＭＳＡを含有する同様の体積の緩衝液を、同様に注入した。腫瘍曝露後の時間に対して腫瘍サイズをプロットすることによって、腫瘍増殖速度を決定した。カリパスで測定した２つの垂直な直径の積として、腫瘍サイズを計算し、そして特定の処置群内の腫瘍を持つマウスのみの平均腫瘍サイズとして表す。実験終了時、各処置群に関して、曝露した数に比較した、腫瘍を持つマウス数を以下のデータに示す。
【０１４２】
表Ｉから、データは６つの異なる実験を編集したものであり、ここで腫瘍を持つマウスをＦｌｔ３リガンドまたはＭＳＡいずれかで処置した。完全な腫瘍退化は、ＭＳＡで処置したマウスでは３０匹のうち１匹であったのに比較して、Ｆｌｔ３リガンドで処置したマウスでは５０匹のうち１９匹で観察された（フィッシャーの直接検定を用いるとｐ＜０．０００１）。Ｆｌｔ３リガンドで処置したマウスの腫瘍増殖速度（腫瘍曝露後、第５週の腫瘍を持つマウスにおいて、平均腫瘍サイズは６０＋／−８ｍｍ2であった）は、ＭＳＡで処置したマウス（腫瘍曝露後、第５週の平均腫瘍サイズは１８５＋／−１７ｍｍ2であった）に比較して有意に減少しているという観察もまた、確認された（分散分析によってｐ．０００１）。
【０１４３】
【表２】
2005528373.tif 000005
【０１４４】
対照に比較して、Ｆｌｔ３リガンドを用いると、腫瘍サイズがはっきりと妨害された。したがって、このデータによって、Ｆｌｔ３リガンドが、外来（ｆｏｒｅｉｇｎ）抗原に対する、そして特に癌に対する免疫応答の増大に重要なサイトカインであることが示される。
【０１４５】
（実施例５）
本実施例は、インターフェロン・アルファと組み合わせてＦｌｔ３リガンドを使用すると、ｉｎ  ｖｉｖｏで抗腫瘍免疫応答が増大することを立証する。１つの研究において、Ｂ１０．２線維肉腫腫瘍細胞株（上述）を、第０日にＣ５７ＢＬ／１０Ｊ（Ｂ１０）マウスに移植した。マウス１組（ｎ＝１０）を、腫瘍曝露後、第１０日〜第２９日に、組換えヒトＦｌｔ３リガンド（５０μｇ／日、皮下注射による）で処置した。別の組のマウス（ｎ＝５）を、腫瘍曝露後、第２１日〜第２５日に、ヒト・インターフェロン・アルファ（インターフェロン・アルファＡ／Ｄ；６０，０００Ｕ／日、皮下注射による）で処置した。第３の組のマウス（ｎ＝５）を、第１０日〜第２９日にＦｌｔ３リガンドで、そしてまた、第２１日〜第２５日にインターフェロン・アルファで処置した。対照マウスには、１００ｎｇ  ＭＳＡを含有する緩衝液を注射した。７週間の期間に渡って、腫瘍サイズを測定することによって、腫瘍増殖速度を決定した。カリパスで測定した２つの垂直な直径の積として、腫瘍サイズを計算し、そしてｍｍ2で平均腫瘍サイズとして表す。平均腫瘍サイズの決定には、各群内で腫瘍を持つマウスのみを考慮した。各処置群に関して、腫瘍の発生率もまた決定した（すなわち曝露した数に比較した、腫瘍を持つマウスの数）。
【０１４６】
表３は、腫瘍を持つ動物の平均腫瘍サイズを示し、そして表４は、腫瘍の発生率を示す。このデータによって、Ｂ１０．２腫瘍モデルの免疫応答を増進する際に、インターフェロン・アルファがＦｌｔ３リガンドと相乗作用を生じることが立証される。最も注目すべきことに、腫瘍拒絶率は、Ｆｌｔ３リガンド単独では４０％であり、そしてＦｌｔ３リガンドおよびインターフェロン・アルファを組み合わせると８０％であった。
【０１４７】
【表３】
2005528373.tif 000006
【０１４８】
【表４】
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【０１４９】
（実施例６）
本実施例は、ＣＤ４０結合タンパク質と組み合わせてＦｌｔ３リガンドを使用すると、ｉｎ  ｖｉｖｏで抗腫瘍免疫応答が増大することを立証する。１つの研究において、上の実施例３に記載するように、生存Ｂ１０．２線維肉腫腫瘍細胞株５ｘ１０5細胞を、Ｃ５７ＢＬ／１０Ｊ（Ｂ１０）マウス（Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、メイン州バーハーバー）に皮内注射し、そしてマウスを、各８匹を含有する４組にさらに分けた。マウスの一組では、腫瘍注射と同じ日に始まって、総量１００μｌを皮下注射することによって、２０日間の期間に渡って、毎日、各マウスに組換えヒトＦｌｔ３リガンド（１０μｇ／注射／日）を投与した。別の組のマウスでは、各マウスに、各日、同じ体積および量のＣＤ４０−Ｌを２０日間注射した。第三の組では、各マウスに、１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドおよび１０μｇのＣＤ４０−Ｌの組み合わせを２０日間注射した。対照マウスには、１００ｎｇ  ＭＳＡを含有する同様の体積の緩衝液を、同様に注射した。腫瘍曝露後、６週間の期間に渡って、毎週、腫瘍サイズを測定して、腫瘍増殖速度を決定した。カリパスで測定した２つの垂直な直径の積として、腫瘍サイズを計算し、そして平均腫瘍サイズとして表す。平均サイズの決定には、各群内で腫瘍を持つマウスのみを考慮した。腫瘍拒絶頻度もまた決定し、そして実験終了時、各処置群に関して、曝露した数に比較した、腫瘍を持たないマウスの数として表した。
【０１５０】
表５は、曝露後６週間の期間に渡って、週１回計算した、腫瘍を持つ動物における平均腫瘍サイズの形で、データを提供する。表６は、曝露後６週間に渡る、各組のマウスの腫瘍拒絶頻度パーセントを詳述する。該データによって、腫瘍を持つマウスに関して、Ｆｌｔ３リガンドで処置したマウス、およびＣＤ４０−Ｌと組み合わせてＦｌｔ３リガンドで処置したマウスの平均腫瘍サイズが同等であり、そして腫瘍を持つ対照マウスの腫瘍サイズより小さいことが立証される。しかし、重要なことに、併用療法を受けたマウスでは、Ｆｌｔ３リガンドまたはＣＤ４０−Ｌを単独で投与されたマウスより、腫瘍拒絶頻度が有意により高かった。より具体的には、曝露後、第６週、併用療法を受けたマウスの６２．５％が完全な腫瘍拒絶を経験した。対照的に、曝露後、第６週、Ｆｌｔ３リガンドを単独で投与されたマウスの２５％が完全腫瘍拒絶を経験し、そしてＣＤ４０−Ｌを単独で投与されたか、またはＭＳＡを投与されたマウスは、完全腫瘍拒絶をまったく経験しなかった。
【０１５１】
【表５】
2005528373.tif 000008
【０１５２】
【表６】
2005528373.tif 000009
【０１５３】
別の研究において、Ｃ３Ｈ／ＨｅＮマウスに、非常に侵襲性の高い腫瘍、８７線維肉腫腫瘍細胞株（Ｃ３Ｈ／ＨｅＮ（ＭＴＶ−）マウスを紫外照射に長期間曝露することによって生成）５ｘ１０5細胞を皮内注射した。その後、マウスを、各１０匹を含有する４組にさらに分けた。マウスの一組では、腫瘍注射の後の日に始まって、皮下注射することによって、２０日間の期間に渡って、毎日、各マウスに組換えヒトＦｌｔ３リガンド（１０μｇ／注射／日）を投与した。別の組のマウスでは、各マウスに、各日、同じ体積および量のＣＤ４０−Ｌを、第７日に始まって、そして第２０日まで続けて注射した。第三の組では、各マウスに、ＣＤ４０−ＬおよびＦｌｔ３リガンドの併用療法を行った。併用療法には、腫瘍注射翌日に始まって、そして第２０日まで続く１０μｇ／日のＦｌｔ３リガンド、および第７日から始まって、そして第２０日まで続く１０μｇ／日のＣＤ４０−Ｌが含まれた。対照群のマウスには、１００ｎｇ  ＭＳＡを含有する同様の体積の緩衝液を、同様に注射した。腫瘍曝露後６週間の期間に渡って、毎週、腫瘍サイズを測定することによって、腫瘍増殖速度を決定した。カリパスで測定した２つの垂直な直径の積として、腫瘍サイズを計算し、そして平均腫瘍サイズとして表す。平均サイズの決定には、腫瘍を持つマウスのみを考慮した。腫瘍拒絶頻度もまた決定し、そして実験終了時、各処置群に関して、曝露した数に比較した、腫瘍を持たないマウスの数として表した。
【０１５４】
表７は、曝露後６週間の期間に渡って、週１回計算した、腫瘍を持つ動物における平均腫瘍サイズの形で、データを提供する。表８は、曝露後６週間の期間に渡る、各組のマウスの腫瘍拒絶頻度パーセントを詳述する。該データによって、腫瘍を持つマウスに関して、ＣＤ４０−Ｌと組み合わせてＦｌｔ３リガンドで処置したマウスの平均腫瘍サイズが、腫瘍を持つ対照マウス、並びにＦｌｔ３リガンドのみおよびＣＤ４０Ｌのみを投与した群の腫瘍を持つマウスの腫瘍サイズより有意に小さいことが立証される。重要なことに、併用療法を受けたマウスでは、Ｆｌｔ３リガンドまたはＣＤ４０−Ｌを単独で投与されたマウスより、腫瘍拒絶頻度が有意により高かった。より具体的には、曝露後、第６週、併用療法を受けたマウスの５０％が完全な腫瘍拒絶を経験した。対照的に、曝露後、第６週、Ｆｌｔ３リガンドを単独で投与されたマウスの１０％が完全腫瘍拒絶を経験し、そしてＣＤ４０−Ｌを単独で投与されたか、またはＭＳＡを投与されたマウスは、完全腫瘍拒絶をまったく経験しなかった。
【０１５５】
上述の観察によって、Ｆｌｔ３リガンドおよびＣＤ４０−Ｌ併用療法が、ｉｎ  ｖｉｖｏで抗腫瘍免疫応答を劇的に上方制御可能であることが立証される。このデータによって、Ｆｌｔ３リガンドおよびＣＤ４０−Ｌ単独で用いた際は、腫瘍拒絶をほとんどまたはまったく示さないことから、Ｆｌｔ３リガンドおよびＣＤ４０結合タンパク質、ＣＤ４０−Ｌの間に相乗作用が存在することが示される。併用では、拒絶は劇的である。研究によって、相乗作用に加えて、ＣＤ４０−ＬおよびＦｌｔ３リガンドの併用が、腫瘍において、ＩＬ−１２  ｍＲＮＡの発現を誘導することも示された。
【０１５６】
【表７】
2005528373.tif 000010
【０１５７】
【表８】
2005528373.tif 000011
【０１５８】
（実施例７）
本実施例は、４−１ＢＢと反応性である抗体と組み合わせてＦｌｔ３リガンドを使用すると、ｉｎ  ｖｉｖｏで抗腫瘍免疫応答が増大することを立証する。１つの研究において、生存Ｂ１０．２線維肉腫腫瘍細胞株５ｘ１０5細胞を、Ｃ５７ＢＬ／１０Ｊ（Ｂ１０）マウス（Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、メイン州バーハーバー）に皮内注射した。マウスの一組では、腫瘍注射と同じ日に始まって、総量１００μｌを皮下注射することによって、１４日間の期間に渡って、毎日、各マウスに組換えヒトＦｌｔ３−Ｌ（１０μｇ／注射／日）を投与した。別の組のマウスでは、各マウスに、腫瘍曝露後、第３日および第６日に、１００μｇのラット抗ｍｕ  ４−１ＢＢ（クローンｍ６）をＩＰ注射した。第三の組では、各マウスに、第１３日および第１６日に、１００μｇのラット抗ｍｕ  ４−１ＢＢクローンｍ６を注射した。第四の組のマウスには、腫瘍曝露後、第１日〜第１４日に１０μｇのＦｌｔ３リガンドを、そして第１３日および第１６日に１００μｇのラット抗ｍｕ  ４−１ＢＢクローンｍ６を組み合わせて注射した。対照マウスには、１００ｎｇ  ＭＳＡを含有する緩衝液を注射した。腫瘍曝露後、５週間の期間に渡って、毎週、腫瘍サイズを測定して、腫瘍増殖速度を決定した。カリパスで測定した２つの垂直な直径の積として、腫瘍サイズを計算し、そしてｍｍ2で平均腫瘍サイズとして表す。平均腫瘍サイズの決定には、各群内で腫瘍を持つマウスのみを考慮した。腫瘍発生数もまた決定し、そして実験終了時、各処置群に関して、曝露した数に比較した、腫瘍を持つマウスの数として表した。
【０１５９】
表９は、曝露後８週間の期間に渡って、週１回計算した、腫瘍を持つ動物における平均腫瘍サイズの形で、データを提供する。表１０は、曝露後８週間の期間に渡る、各組のマウスの腫瘍発生パーセントを詳述する。該データによって、腫瘍を持つマウスに関して、Ｆｌｔ３リガンド単独で処置したマウス、および抗４−１ＢＢ措置で処置したマウスの平均腫瘍サイズは類似であることが立証される。しかし、４−１ＢＢと反応性である抗体と組み合わせてＦｌｔ３リガンドをマウスに投与すると、腫瘍を持つマウスの平均腫瘍サイズが顕著に減少する。具体的には、曝露後、第５週、併用療法を受けたマウスは平均腫瘍サイズが０であり、１００％腫瘍拒絶を示した。このデータは、併用療法を受けたマウスでは、Ｆｌｔ３リガンドまたは４−１ＢＢ抗体を単独で投与されたマウスより腫瘍発生率が有意に低かったことを立証する、表１０の数字によって支持される。より具体的には、曝露後、第５週、併用療法を受けたすべてのマウスが完全腫瘍拒絶（０％腫瘍発生）を経験した。対照的に、曝露後、第５週、Ｆｌｔ３リガンドを単独で投与されたマウスの７０％が腫瘍を有し、そして４−１ＢＢ抗体を単独で投与されたマウスの５０％および７０％が腫瘍を有した。このデータは、免疫応答を増進する際に、抗４−１ＢＢがＦｌｔ３リガンドと相乗作用する証拠を提供する。
【０１６０】
【表９】
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【０１６１】
【表１０】
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【０１６２】
（実施例８）
本実施例は、抗原特異的免疫応答を増進することが示されたＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルの１つの態様を記載する。Ｆｌｔ３リガンド、ＰＥＧ化ＧＭ−ＣＳＦおよびＣＤ４０Ｌがワクチンに対する免疫応答を増進するかどうかを決定する実験を設計した。
【０１６３】
以下の研究は、周知のＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウスモデルを用いた。該研究は、ＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウス由来の少数のＴ細胞を、非トランスジェニック・コンジェニックマウスに静脈内移植することを伴う。該トランスジェニックマウスは、ＭＨＣクラスＩおよびＩＩの背景で、ニワトリ卵オボアルブミン（ＯＶＡ）由来の選択ペプチドを特異的に認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する。Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドを有するＯＴ−Ｉマウスは、Ｈ−２Ｋbに結合した、ＯＶＡ257-264ペプチド（ＳＩＩＮＦＥＫＬ−配列番号３）に特異的なＴＣＲのα鎖およびβ鎖に関してトランスジェニックである（Ｈｏｇｑｕｉｓｔ，  Ｋ．Ａ．ら，  Ｃｅｌｌ，  ７６，  １７−２７，  １９９４）。やはりＣ５７ＢＬ／６バックグラウンドを有するＯＴ−ＩＩマウスは、ＩＡbの背景に提示されるＯＶＡ323-339ペプチド（ＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲ−配列番号４）に特異的なＴＣＲに関してトランスジェニックである（Ｂａｒｎｄｅｎ，  Ｍ．Ｊ．ら，  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  ７６，  ３４，  １９９８）。
【０１６４】
ＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウス由来のおよそ２００万の脾臓細胞およびリンパ節細胞をＬｙ５．１コンジェニックマウスに移した（およそ４ｘ１０5  ＣＤ４＋  Ｔ細胞およびＣＤ８＋  Ｔ細胞に相当する）。移植のおよそ２４時間後、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ−Ｄｉｆｃｏ／Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ニュージャージー州フランクリンレークス）中で乳化したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチド各２５μｇで、マウスを皮下（ｓ．ｃ．）免疫した。ＩＦＡはパラフィンオイルであり、そしてペプチドのデポとして、それとともに炎症誘発性シグナルとして働くと考えられる。
【０１６５】
処置群を表１１に提示する。Ｆｌｔ３リガンドは、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株中、周知の組換えＤＮＡ技術によって産生され、そしてＩｍｍｕｎｅｘ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ワシントン州シアトルから入手可能である。第１群では、第１１日に、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中に配合した卵ペプチドで免疫し、この群は陽性対照として働いた。第２群では、第１１日に、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中に配合した卵ペプチドを投与した。第３群では、第１１日に、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に配合した卵ペプチドを投与した。第４群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合した卵ペプチドで免疫した。第５群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合した卵ペプチドで免疫し、そして第１１日および第１２日に、免疫部位で１０μｇのＣＤ４０Ｌをｓ．ｃ．投与した。第６群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合した卵ペプチドで免疫し、そして第１１日〜第１５日まで、免疫部位（襟首）から遠位の部位で、１０μｇのＣＤ４０Ｌをｓ．ｃ．投与した。第７群では、第１１日に、ＩＦＡ中に配合した卵ペプチドで免疫し、そして第１１日および第１２日に、免疫部位で、１０μｇのＣＤ４０Ｌをｓ．ｃ．投与した。第８群では、第１１日に、ＩＦＡ中に配合した卵ペプチドで免疫し、そして第１１日〜第１５日に、免疫部位（襟首）から遠位の部位で、１０μｇのＣＤ４０Ｌをｓ．ｃ．投与した。第９群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合した卵ペプチドで免疫し、そして第１１日および第１２日に、免疫部位で、５μｇのＰＥＧ化ＧＭ−ＣＳＦ（ｐＧＭ−ＣＳＦ）をｓ．ｃ．投与した。第１０群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合した卵ペプチドで免疫し、そして第１１日〜第１５日まで、免疫部位（襟首）から遠位の部位で、５μｇのＰＥＧ化ＧＭ−ＣＳＦ（ｐＧＭ−ＣＳＦ）をｓ．ｃ．投与した。第１１群では、第１１日に、ＩＦＡ中に配合した卵ペプチドで免疫し、そして第１１日および第１２日に、免疫部位で、５μｇのｐＧＭ−ＣＳＦをｓ．ｃ．投与した。第１２群では、第１１日に、ＩＦＡ中に配合した卵ペプチドで免疫し、そして第１１日〜第１５日まで、免疫部位（襟首）から遠位の部位で、５μｇのｐＧＭ−ＣＳＦをｓ．ｃ．投与した。
【０１６６】
【表１１】
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【０１６７】
免疫後、第２日、第５日、および第９日、流入領域リンパ節から細胞を採取した（典型的には、免疫部位から流出するリンパ節：２つの鼠径リンパ節および１つの副腋窩リンパ節から）。単細胞懸濁物を調製し、そしてフローサイトメトリー解析（ＦＡＣｓ）によって、ドナーＣＤ４＋およびＣＤ８＋トランスジェニックＴ細胞の頻度を計算した。クラスＩペプチドでパルス処理した標的細胞の特異的溶解を測定する、標準的な細胞傷害性Ｔ細胞アッセイとともに、ＥＬＩＳＰＯＴTM（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ニュージャージー州フランクリンレークス）で測定されるような、ＯＴ−ＩＩペプチドでのｉｎ  ｖｉｔｒｏ再刺激後のＩＦＮγ産生によって、機能アッセイも行った。
【０１６８】
図１Ａ〜Ｅ、２Ａ〜Ｅおよび３Ａ〜Ｅに示すように、マウスをＦｌｔ３リガンドで前処置した際に、ＣＤ８＋トランスジェニックＴ細胞の劇的な拡大が生じた。免疫後、第５日、流入領域リンパ節（ＤＬＮ）のトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞数は、Ｆｌｔ３リガンドを投与されないマウスにおけるより、ＩＦＡ中に配合されたペプチドでの免疫前にＦｌｔ３リガンドを投与されたマウスにおいて、およそ３４倍高く、そしてＰＢＳ中に配合されたペプチドのみを投与されたマウスより１１４倍高かった。免疫後にさらにｐＧＭ−ＣＳＦを添加すると、Ｆｌｔ３リガンドに誘導されたＣＤ８＋  Ｔ細胞拡大が増大し、そして延長されるようである。
【０１６９】
Ｆｌｔ３リガンド前処置およびＩＦＡアジュバント中に配合された抗原での免疫の組み合わせは、ＣＴＬ生成に劇的な効果を有した。Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルによって拡大されたＣＤ８＋  Ｔ細胞は、ＯＴ−Ｉペプチドでパルス処理した標的でｉｎ  ｖｉｔｒｏ再刺激した５日後の標準的ＣＴＬアッセイ（ＣＴＬ活性を測定するための慣用的なプロトコル）によって測定されるように、機能性の、抗原特異的なエフェクター細胞であった。免疫５日後、抗原特異的ＣＴＬは、ＤＬＮ中のすべての細胞の２５〜４０％を構成するように拡大され、これは約２．５〜９ｘ１０6細胞（ｎ＝４実験）に等しかった。図４Ａおよび４Ｂは、免疫後にＦｌｔ３リガンドを投与され、そして場合によって、ｐＧＭ−ＣＳＦまたはＣＤ４０−Ｌなどの補助分子を投与された群が、抗原特異的ＣＴＬ活性の最高レベルを有したことを示す。
【０１７０】
著しいことに、免疫前にＦｌｔ３リガンドを投与され、そして場合によって、ｐＧＭ−ＣＳＦまたはＣＤ４０−Ｌなどの補助分子を投与された群は、ＤＬＮから直接単離されたＴ細胞集団においてＣＴＬ活性が測定されるほど、すなわち抗原特異的ＣＴＬ活性を明らかにするのに、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ再刺激がまったく必要とされないほど増大した免疫応答を有した（図５Ａおよび５Ｂを参照されたい）。より具体的には、以下のようにＣＴＬアッセイを行った。標準的51Ｃｒ放出アッセイにおいて、ＣＴＬ活性を測定した。完全ＲＰＭＩ培地中、１ｘ１０6細胞あたり５０μＣｉ  51Ｃｒ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ニュージャージー州ピスカタウェイ）で、１μＭ  ＯＴＩペプチド（ＳＩＩＮＦＥＫＬ、Ｉｍｍｕｎｅｘ）を含み、または含まずに、Ｃ１４９８（Ｈ−２b）標的細胞を３７℃で１時間パルス処理した。標識した標的細胞を４回洗浄し、そして１ｘ１０4細胞をＤＬＮ細胞（エフェクター）の連続力価決定に添加した。エフェクター：標的比は、１００：１〜０．７８：１の範囲であった。１０％熱不活性化ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）、１００μＭ  ＭＥＭ非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭ  ＭＥＭピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５５μＭ  ２−メルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、５０Ｕ／ｍｌペニシリン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、カリフォルニア州サンディエゴ）、５０μｇ／ｍｌストレプトマイシン（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ、バージニア州ハーンダン）、および２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（ＪＲＨ  Ｂｉｏｓｃｉｎｅｎｃｅｓ）を補充したＲＰＭＩ−１６４０（ＪＲＨ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カンザス州レネクサ）を含有する完全ＲＰＭＩ培地中で、アッセイを行った。３７℃で６時間インキュベーションした後、２５μｌの細胞不含上清を取り除き、そしてＰａｃｋａｒｄ  ＬｕｍａＰｌａｔｅ（Ｐａｃｋａｒｄ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ、コネティカット州メリデン）に移した。Ｐａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔ（Ｈｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ、カリフォルニア州パロアルト）上、ウェルあたり６０秒間、プレートを読み取った。標的細胞に、それぞれ、アッセイ培地または０．１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ、イリノイ州ロックフォード）を添加することによって、自発的および最大クロム放出を決定した。特異的溶解パーセントは、１００ｘ（実験放出ｃｐｍ−自発的放出ｃｐｍ）／（最大放出ｃｐｍ−自発的放出ｃｐｍ）として計算した。
【０１７１】
これらの結果によって、Ｆｌｔ３リガンドで前処置され、そして続いてワクチン接種されたマウスで生じる、抗原特異的ＣＤ８＋  ＣＴＬ免疫応答は、ウイルス感染に対する急性応答で生じるものと同程度に強力であったことが立証される。総合すると、これらの結果によって、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルは、抗原特異的エフェクター細胞応答の度合いおよび期間両方を増加させることが立証される。
【０１７２】
（実施例９）
Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルにおけるＴヘルパー細胞の役割を決定するため、これらの研究を行った。本態様において、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドを、連続１０日間、皮下投与した。ＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウス由来のおよそ２００万の脾臓細胞およびリンパ節細胞をＬｙ５．１コンジェニックマウスに移した（およそ４ｘ１０5  ＣＤ４＋  Ｔ細胞およびＣＤ８＋  Ｔ細胞に相当する）。移植のおよそ２４時間後、ＯＴ−Ｉ  ２５μｇで、マウスを皮下（ｓ．ｃ．）免疫した。以下により詳細に記載するように、いくつかの群には、Ｔヘルパー応答を促進するため、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）またはＰＢＳ中で乳化したＯＴ−ＩＩペプチド、あるいはキーホールリンペット・ヘモシアニン（ＫＬＨ）（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、カリフォルニア州サンディエゴ）を投与した。
【０１７３】
この研究の処置群を、以下の表１２に提示する。第１群では、第１１日に、ＩＦＡ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫し、この群は陽性対照として働いた。第２群では、第１１日に、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドを投与した。第３群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第４群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合したＯＴ−Ｉペプチド単独で免疫した。第５群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合したＯＴ−Ｉペプチドおよび２５μｇのＫＬＨで免疫した。第６群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＰＢＳ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。
【０１７４】
【表１２】
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【０１７５】
先の研究におけるように、Ｆｌｔ３リガンド前処置およびＩＦＡ中に配合された抗原での免疫の組み合わせは、抗原特異的ＣＤ８＋  ＣＴＬ生成に劇的な効果を有した。代替ヘルパータンパク質としてＫＬＨを含んだ場合、トランスジェニックＣＤ８＋細胞の割合に驚くべき増加が誘発された（図６Ａ〜６Ｃ）。したがって、ＩＬ−２を産生するＴヘルパー細胞数を増加させ、続いてＣＤ８＋  ＣＴＬ応答を増進させる、ＭＨＣ−ＩＩエピトープを有するタンパク質を、ワクチン配合物中のさらなる抗原として、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルに含むことが可能である。図７Ａ〜７Ｃは、免疫前にＦｌｔ３リガンドを投与された第３群が劇的に高いレベルのトランスジェニックＣＤ４＋  Ｔ細胞を有したことを示す。機能的研究によって、標準的増殖アッセイおよびＩＦＮγ産生（標準的ＥＬＩＳＡ技術によって測定）によって測定されるように、抗原特異的で生物学的に機能するＴヘルパー細胞が生成されることが示された。
【０１７６】
（実施例１０）
これらの実験は、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルにおいて、多様なアジュバントを比較した。試験したアジュバントには：ＩＦＡ（不完全フロイントアジュバント）、ＭＰＬTM（３−Ｑ−デスアシル−４’−モノホスホリル脂質Ａ−Ｒｉｂｉ／Ｃｏｒｉｘａ  Ｃｏｒｐ．、ワシントン州シアトル）、ＣｐＧ  １８２６および１９８２（細菌および／またはウイルスを模倣する非メチル化ＣｐＧヌクレオチドを含有するオリゴヌクレオチド、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０００  １６４：１６１７を参照されたい）、ミョウバン（水酸化アルミニウム）およびＱｕｉｌ−Ａ（Ｑｕｉｌ−Ａサポニン  −ソープバーク（Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ）の樹皮から抽出、これは免疫刺激複合体−ＩＳＣＯＭＳの活性構成要素である）が含まれた。先と同様に、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドを、連続１０日間、皮下投与した。ＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウス由来のおよそ２００万の脾臓細胞およびリンパ節細胞をＬｙ５．１コンジェニックマウスに移した（およそ４ｘ１０5  ＣＤ４＋  Ｔ細胞およびＣＤ８＋  Ｔ細胞に相当する）。移植のおよそ２４時間後：ＰＢＳ、ＩＦＡ、ＭＰＬTM、ＰＢＳ中のＣｐＧ１８２６またはＰＢＳ中のＣｐＧ１９８２と配合した／混合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチド（各々２５μｇ）で、マウスを皮下（ｓ．ｃ．）免疫した。
【０１７７】
この研究の処置群を、表１３に提示する。第１群では、第１１日に、ＰＢＳ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第２群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＰＢＳ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第３群では、第１１日に、ＩＦＡ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第４群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第５群では、第１１日に、ＭＰＬTM中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第６群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＭＰＬTM中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第７群では、第１１日に、ＰＢＳ中のＣｐＧ（１８２６）と混合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第８群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＰＢＳ中のＣｐＧ（１８２６）と混合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第９群では、第１１日に、ＰＢＳ中のＣｐＧ（１９８２）と混合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第１０群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＰＢＳ中のＣｐＧ（１９８２）と混合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。
【０１７８】
【表１３】
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【０１７９】
図８Ｂおよび８Ｅに示すように、Ｆｌｔ３リガンド前処置およびＩＦＡ中に配合した抗原での免疫の組み合わせは、ＭＰＬTMおよびＣｐＧ配列と配合した／混合したＯＴ−Ｉ＆ＩＩペプチドに比較して、非常に高い抗原特異的ＣＤ８＋  ＣＴＬ応答を生成した。先の研究でのように、Ｆｌｔ３リガンド／ＩＦＡ群のＣＴＬは、流入領域リンパ節から直接単離したＴ細胞集団において、抗原特異的細胞溶解活性を示した。さらに、この群は、より高いレベルのトランスジェニックＣＤ４＋  Ｔ細胞を有した（図９Ｅ）。機能的研究によって、ＯＴ−ＩＩペプチドでパルス処理した標的の存在下で培養すると、これらのＣＤ４＋  Ｔ細胞が抗原特異的増殖とともにＩＦＮガンマ産生（ＥＬＩＳＡによって測定）を示すことが示された。さらに、Ｆｌｔ３リガンド前処置およびＣｐＧ（１８２６）／ＰＢＳと混合した抗原での免疫を受けた群は、Ｆｌｔ３リガンド前処置を受けなかった群より、トランスジェニックＣＤ４＋  Ｔ細胞数に増加を示し、それとともに、弱いＯＴ−ＩＩペプチド誘導ＩＦＮγ産生を示した。このデータによって、Ｆｌｔ３リガンド前処置および異なるアジュバントの組み合わせは、免疫系の異なるアームに優先的に影響を及ぼし、そしてまた、一時的な方式で、免疫系に影響を及ぼしうることが示唆される。
【０１８０】
Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルにおいて、ＩＦＡ、ミョウバン、およびＱｕｉｌ−Ａを比較するため、同様の研究を行った。先と同様に、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドを、連続１０日間、皮下投与した。ＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウス由来のおよそ２００万の脾臓細胞およびリンパ節細胞をＬｙ５．１コンジェニックマウスに移した（およそ４ｘ１０5  ＣＤ４＋  Ｔ細胞およびＣＤ８＋  Ｔ細胞に相当する）。移植のおよそ２４時間後：ＩＦＡ、ミョウバンまたはＱｕｉｌ−Ａいずれかと配合した／混合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチド（各２５μｇ）で、マウスを皮下（ｓ．ｃ．）免疫した。
【０１８１】
この研究の処置群を、表１４に提示する。第１群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＰＢＳ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第２群では、第１１日に、ＩＦＡ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第３群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第４群では、第１１日に、ミョウバン中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第５群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ミョウバン中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第６群では、第１１日に、Ｑｕｉｌ−Ａ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第７群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、Ｑｕｉｌ−Ａ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。
【０１８２】
【表１４】
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【０１８３】
先の研究と一致して、Ｆｌｔ３リガンド前処置およびＩＦＡ中に配合された抗原での免疫の組み合わせは、著しく増進した抗原特異的ＣＤ８＋  ＣＴＬ応答を生じた（図１０Ｂおよび１０Ｅ）。Ｆｌｔ３リガンド／ＩＦＡ群由来のＣＴＬは、流入領域リンパ節から直接単離されたＴ細胞集団において、抗原特異的細胞溶解活性を示した（図１２）。重要なことに、Ｆｌｔ３リガンド前処置を受けた群は、アジュバント、すなわちＩＦＡ、ミョウバンまたはＱｕｉｌ−Ａに関わりなく、第５日および第９日に、一貫してより高い免疫応答を有した（それぞれ、図１０Ｂ、１０Ｅ、１０Ｃおよび１０Ｆ）。このデータによって、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルが、多様なアジュバント中に配合された抗原に対する免疫応答を増進させ、そしてＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルが、アジュバント／抗原単独で免疫した場合よりも、免疫応答を増進させることが立証される。さらに、Ｆｌｔ３リガンド前処置を受け、そしてミョウバンまたはＱｕｉｌ−Ａ中のＯＴ−Ｉ＆ＩＩペプチドをワクチン接種されたマウスは、第９日に、より高い割合のＣＤ４＋トランスジェニックＴ細胞を示し、これによって、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルが、より長い期間、増大した免疫応答を維持することが示唆される（図１１Ｆ）。機能的研究によって、Ｆｌｔ３リガンド前処置を受け、そしてＩＦＡ、ミョウバンまたはＱｕｉｌ−Ａ中のＯＴ−ＩおよびＩＩペプチドをワクチン接種されたマウス由来のＣＤ４＋トランスジェニックＴ細胞が、Ｆｌｔ３リガンド前処置を受けていないマウスより、増進したＩＦＮγ産生の抗原特異的誘導を示し、そしてＦｌｔ３リガンド前処置を受け、そしてＩＦＡまたはミョウバン中のＯＴ−ＩおよびＩＩペプチドをワクチン接種されたマウスが、Ｆｌｔ３リガンド前処置を受けていないマウスより、増進した抗原特異的ＣＤ４＋  Ｔ細胞増殖を示すことが示された（図１３）。これらのデータによって、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルが、標準的ワクチン接種技術より、増大した抗原特異的免疫応答を生じることがさらに確認される。
【０１８４】
（実施例１１）
以下の研究を行って、免疫後の抗原特異的ＣＴＬの生成に対するＦｌｔ３−Ｌ前処置の多様な日数の影響を決定した。６群のマウスを免疫して、ＣＴＬ（ＣＤ８＋）拡大を達成するのに、１０日間のＦＬ処置が必要かどうかを決定した。
【０１８５】
ＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウス由来のおよそ２００万の脾臓細胞およびリンパ節細胞をＬｙ５．１コンジェニックマウスに移した（およそ４ｘ１０5  ＣＤ４＋  Ｔ細胞およびＣＤ８＋  Ｔ細胞に相当する）。移植のおよそ２４時間後、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ−Ｄｉｆｃｏ／Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ニュージャージー州フランクリンレークス）中で乳化したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチド各２５μｇで、マウスを皮下（ｓ．ｃ．）免疫した。
【０１８６】
第１群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第２群では、連続８日間、襟首に＾１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第３群では、連続６日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第４群では、連続４日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第５群では、第１１日に、ＩＦＡ中に配合したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチドで免疫した。第６群では、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡで免疫した。
【０１８７】
【表１５】
2005528373.tif 000018
【０１８８】
免疫後、第６日、各群（３匹のマウス）からＤＬＮを採取した。ＯＴＩ  ＣＤ８  Ｔ細胞数を定量化し、そしてＣＴＬアッセイで試験した。標準的51Ｃｒ放出アッセイにおいて、ＣＴＬ活性を測定した。完全ＲＰＭＩ培地中、１ｘ１０6細胞あたり５０μＣｉ  51Ｃｒ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ニュージャージー州ピスカタウェイ）で、１μＭ  ＯＴＩペプチド（ＳＩＩＮＦＥＫＬ、Ｉｍｍｕｎｅｘ）を含み、または含まずに、Ｃ１４９８（Ｈ−２b）標的細胞を３７℃で１時間パルス処理した。標識した標的細胞を４回洗浄し、そして１ｘ１０4細胞をＤＬＮ細胞（エフェクター）の連続力価決定に添加した。エフェクター：標的比は、１００：１〜０．７８：１の範囲であった。１０％熱不活性化ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）、１００μＭ  ＭＥＭ非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭ  ＭＥＭピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５５μＭ  ２−メルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、５０Ｕ／ｍｌペニシリン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、カリフォルニア州サンディエゴ）、５０μｇ／ｍｌストレプトマイシン（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ、バージニア州ハーンダン）、および２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（ＪＲＨ  Ｂｉｏｓｃｉｎｅｎｃｅｓ）を補充したＲＰＭＩ−１６４０（ＪＲＨ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カンザス州レネクサ）を含有する完全ＲＰＭＩ培地中で、アッセイを行った。３７℃で６時間インキュベーションした後、２５μｌの細胞不含上清を取り除き、そしてＰａｃｋａｒｄ  ＬｕｍａＰｌａｔｅ（Ｐａｃｋａｒｄ  ＢｉｏＳｉｅｎｃｅｓ、コネティカット州メリデン）に移した。Ｐａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔ（Ｈｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ、カリフォルニア州パロアルト）上、ウェルあたり６０秒間、プレートを読み取った。標的細胞に、それぞれ、アッセイ培地または０．１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ、イリノイ州ロックフォード）を添加することによって、自発的および最大クロム放出を決定した。特異的溶解パーセントは、１００ｘ（実験放出ｃｐｍ−自発的放出ｃｐｍ）／（最大放出ｃｐｍ−自発的放出ｃｐｍ）として計算した。
【０１８９】
図１４Ａおよび１４Ｂに示すように、ＯＴＩ  ＣＤ８細胞拡大は、第１群で最も認められたが、第２〜４群でも拡大が認められ、そしてより低い度合いで第５群でも認められた。第１〜５群で、ｅｘ  ｖｉｖｏ  ＣＴＬ活性が認められた。これらの結果によって、Ｆｌｔ３リガンドでの１０日間の前処置が、免疫後のＯＴＩ  ＣＤ８細胞拡大を誘導するには、最も有効であったが、８日間、６日間、および４日間の前処置もまた、対照群に比較して有効であったことが示される。したがって、本明細書記載のＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルにおいて、Ｆｌｔ３リガンドをある範囲の日数に渡って（１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０日またはそれより多く、それとともに、限定されるわけではないが、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、７日ごと、またはそれより長い間隔など、何日かごとの組み合わせいずれか）投与可能である。
【０１９０】
（実施例１２）
これらの研究は、免疫優性ペプチドでの免疫に比較した際、抗原特異的ＣＴＬ拡大が、全オボアルブミンタンパク質での免疫後に起こることを示す。実施例８および９に記載するように、ＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウス由来のおよそ２００万の脾臓細胞およびリンパ節細胞をＬｙ５．１コンジェニックマウスに移した（およそ４ｘ１０5  ＣＤ４＋  Ｔ細胞およびＣＤ８＋  Ｔ細胞に相当する）。移植のおよそ２４時間後、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ−Ｄｉｆｃｏ／Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ニュージャージー州フランクリンレークス）中で乳化したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチド各２５μｇで、マウスを皮下（ｓ．ｃ．）免疫した。６群のマウスを以下に記載するように免疫した。免疫後、第２日、第６日、第９日、３匹のマウスを屠殺した。ＤＬＮを採取し、そしてｅｘ  ｖｉｖｏ  ＣＴＬアッセイにおいて、ＯＴＩ  ＣＤ８細胞を定量化し、そして試験した（実施例１１に上述）。
【０１９１】
【表１６】
2005528373.tif 000019
【０１９２】
第６日の採取時、ＩＦＡ中のペプチドで免疫したマウスで、ＯＴＩ  ＣＤ８＋  ＣＴＬ細胞拡大が起こり、そしてＦＬ処置後、ＩＦＡ中の１００μｇ  ＯＶＡタンパク質で免疫したマウスでも起こった。図１５Ａおよび１５Ｂに示すように、これらの実験は、Ｆｌｔ３−Ｌ前処置後、ＩＦＡアジュバント中の抗原で免疫することが、ペプチド抗原およびタンパク質抗原両方に使用するのに有効であることを立証する。とりわけ、免疫に用いたＯＶＡタンパク質を解析し、そして遊離ペプチドをまったく含有しないことが示された。したがって、本明細書記載のＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルを、上述のように、広い範囲の抗原とともに使用することが可能である。
【０１９３】
（実施例１３）
以下の研究によって、免疫後のインターロイキン１５での処置が、抗原特異的エフェクターＣＴＬ拡大を増大することが立証される。
【０１９４】
上述のように、マウスを免疫前に１０日間、ＦＬで処置し（例えば実施例８および９を参照されたい）、簡潔には、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡで免疫した。第１０日、ＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウス由来のおよそ２００万の脾臓細胞およびリンパ節細胞をＬｙ５．１コンジェニックマウスに移した（およそ４ｘ１０5  ＣＤ４＋  Ｔ細胞およびＣＤ８＋  Ｔ細胞に相当する）。移植のおよそ２４時間後、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ−Ｄｉｆｃｏ／Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ニュージャージー州フランクリンレークス）中で乳化したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチド各２５μｇで、マウスを皮下（ｓ．ｃ．）免疫した。第１１日に、動物を、生理食塩水またはＩＦＡいずれかの中に配合したペプチドで免疫した。ＩＬ−１５またはマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）対照には、第３日、第４日、第５日、および第６日（免疫の日を第０日として数える）、１０μｇ／注射でｉ．ｐ．搬送した。
【０１９５】
【表１７】
2005528373.tif 000020
【０１９６】
第１群では、免疫後、第２日、第５日、および第９日に採取した以外は、第５日および第９日に、３匹のマウス／群から流入領域リンパ節を採取した。ＯＴＩ  ＣＤ８細胞を定量化し、そしてｅｘ  ｖｉｖｏ  ＣＴＬアッセイでＣＴＬ活性をアッセイした。
【０１９７】
標準的51Ｃｒ放出アッセイにおいて、ＣＴＬ活性を測定した。完全ＲＰＭＩ培地中、１ｘ１０6細胞あたり５０μＣｉ  51Ｃｒ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ニュージャージー州ピスカタウェイ）で、１μＭ  ＯＴＩペプチド（ＳＩＩＮＦＥＫＬ、Ｉｍｍｕｎｅｘ）を含み、または含まずに、Ｃ１４９８（Ｈ−２b）標的細胞を３７℃で１時間パルス処理した。標識した標的細胞を４回洗浄し、そして１ｘ１０4細胞をＤＬＮ細胞（エフェクター）の連続力価決定に添加した。エフェクター：標的比は、１００：１〜０．７８：１の範囲であった。１０％熱不活性化ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）、１００μＭ  ＭＥＭ非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭ  ＭＥＭピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５５μＭ  ２−メルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、５０Ｕ／ｍｌペニシリン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、カリフォルニア州サンディエゴ）、５０μｇ／ｍｌストレプトマイシン（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ、バージニア州ハーンダン）、および２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（ＪＲＨ  Ｂｉｏｓｃｉｎｅｎｃｅｓ）を補充したＲＰＭＩ−１６４０（ＪＲＨ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カンザス州レネクサ）を含有する完全ＲＰＭＩ培地中で、アッセイを行った。３７℃で６時間インキュベーションした後、２５μｌの細胞不含上清を取り除き、そしてＰａｃｋａｒｄ  ＬｕｍａＰｌａｔｅ（Ｐａｃｋａｒｄ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ、コネティカット州メリデン）に移した。Ｐａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔ（Ｈｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ、カリフォルニア州パロアルト）上、ウェルあたり６０秒間、プレートを読み取った。標的細胞に、それぞれ、アッセイ培地または０．１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ、イリノイ州ロックフォード）を添加することによって、自発的および最大クロム放出を決定した。特異的溶解パーセントは、１００ｘ（実験放出ｃｐｍ−自発的放出ｃｐｍ）／（最大放出ｃｐｍ−自発的放出ｃｐｍ）として計算した。
【０１９８】
図１６Ａおよび１６Ｂに示すように、これらの結果によって、マウスをＦｌｔ３リガンドで前処置し、そして生理食塩水中のペプチドで免疫すると、免疫後に投与したＩＬ−１５が、ＯＴＩ  ＣＤ８拡大および機能を増大させることが立証された（第３群および第６群を比較されたい）。ＩＦＡ中に配合されたペプチドで免疫した後にＩＬ−１５を投与すると（Ｆｌｔ３リガンド処置なし）、より小さい効果が見られ、すなわち第４群および第７群を比較されたい。したがって、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルにおいて、補助分子を投与する有用性および有効性が立証された。
【０１９９】
（実施例１４）
以下の研究によって、免疫後、抗４−１ＢＢアゴニスト性抗体またはＩＬ−１５を投与すると、メモリーＣＤ８＋抗原特異的Ｔ細胞のプール生成が増大することが立証される。
【０２００】
上述のように、マウスを免疫前に１０日間、ＦＬで処置し（例えば実施例８および９を参照されたい）、簡潔には、連続１０日間、襟首に１日あたり１０μｇのＦｌｔ３リガンドをｓ．ｃ．投与し、そして第１１日に、ＩＦＡで免疫した。第１０日に、ＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウス由来のおよそ２００万の脾臓細胞およびリンパ節細胞をＬｙ５．１コンジェニックマウスに移した（およそ４ｘ１０5  ＣＤ４＋  Ｔ細胞およびＣＤ８＋  Ｔ細胞に相当する）。移植のおよそ２４時間後、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ−Ｄｉｆｃｏ／Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ニュージャージー州フランクリンレークス）中で乳化したＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩペプチド各２５μｇで、マウスを皮下（ｓ．ｃ．）免疫した。すべての動物を、生理食塩水（第１〜３群）またはＩＦＡ（第４〜９群）中のＯＴＩおよびＯＴＩＩペプチドで免疫した。
【０２０１】
各アジュバント群内で、１つの群では、免疫後、第３日および第６日、ラットＩｇＧまたはアゴニスト性抗４−１ＢＢ抗体（１００μｇ／ｉ．ｐ．注射）を投与し、そして第三の群では、第３日〜第６日、１０μｇ／ｉ．ｐ．注射で、組換えヒトＩＬ−１５（商業的に入手可能、例えばＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ミネソタ州ミネアポリス）を投与した。
【０２０２】
【表１８】
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【０２０３】
免疫後、第９週、第１７週に３匹のマウスから、そして第１８週に２匹のマウスから、脾臓を採取した。先の実施例に記載するように、フローサイトメトリーによって、個々の脾臓から、ＯＴＩ  ＣＤ８＋  Ｔ細胞を定量化した。図１７Ａおよび１７Ｂに示すように、免疫直後にＩＬ−１５または抗４−１ＢＢで処置すると、メモリーＴ細胞プールのサイズが増大する。この効果は、Ｆｌｔ３リガンドに加えて、生理食塩水中に配合したペプチドで免疫した後（第１〜３群）、またはＦｌｔ３リガンドに加えて、ＩＦＡ中に配合したペプチドで免疫した後（第７〜９群）に認められたが、Ｆｌｔ３リガンドの非存在下で免疫した後（第４〜６群）には認められなかった。
【０２０４】
（実施例１５）
Ｆｌｔ３−Ｌをアレルギーの治療に使用可能である。本明細書全体で記載するＦｌｔ３−Ｌ免疫プロトコルは、アレルギーのアレルゲン特異的免疫療法に直接の有用性を有する。アレルゲン特異的免疫療法は、原因アレルゲンへの続く曝露に関連する症状を改善するのに有効な用量に到達するため、１以上のアレルギーを有する被験者に、増加する用量でアレルゲンワクチンを投与することと定義される。アレルギーの免疫療法には、Ｆｌｔ３−Ｌ免疫プロトコルおよびアレルギーのアレルゲン特異的免疫療法および／またはＦｌｔ３−Ｌの投与を含むように修飾された脱感作療法が含まれる。
【０２０５】
アレルゲン学的診断の技術分野に使用される適切なｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏ技術いずれかを用いて、被験者を診断することが可能であり、これらには、限定されるわけではないが、皮内連続終点試験（ＳＥＴ）、放射性アレルゲン吸着アッセイ（ＲＡＳＴ）、ＲＡＳＴスポット試験、ヒスタミン放射性酵素アッセイ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＩｇＥおよびＩｇＧアッセイ、自発的合成アッセイとともに当該技術分野に知られる他のアッセイが含まれる。
【０２０６】
アレルギーワクチンは当該技術分野に周知であり、そして一般的に、少なくとも１つのアレルゲン、および適切なキャリアー、希釈剤、賦形剤、安定化剤および場合によるアジュバントいずれかを含んでなると定義することが可能である。アレルゲンは、本明細書において、当該技術分野に認識されるアレルゲンいずれか；修飾アレルゲン（限定されるわけではないが、尿素、ＰＥＧ／ＰＶＡ、脱グリコシル化、多糖および／または光酸化などの方法によって修飾）；アレルゴイド（限定されるわけではないが、チロシン吸収を含む、または含まない、グルタルアルデヒドおよび／またはホルムアルデヒド処理などの方法によって修飾）；一価同種異系抽出物；アレルゲンポリマー；コンジュゲート化アレルゲン；アレルゲンのアレルゲン−ムラミルペプチド；アレルゲン・マイコロイルムラミルペプチドコンジュゲート；アレルゲン−プルラン化合物；アレルゲンおよびハプテン（単数または複数）のコンジュゲート；アレルゲン、ハプテン（単数または複数）および親水性ポリマーのコンジュゲート；尿素変性（ｄｅｎａｔｕｒｏｄ）抗原；組換えアレルゲン；突然変異誘発した組換えアレルゲン；低刺激性アレルゲンおよび／または低刺激性アレルゲン性誘導体などの遺伝子操作アレルゲン（例えばＩｇＥ結合エピトープが減少しているが、Ｔ細胞エピトープおよび遮断抗体として働くことが可能なＩｇＧ抗体を誘導するためのエピトープを保持する分子）と定義される。
【０２０７】
アレルギーワクチンおよびＦｌｔ３−Ｌを、本明細書に記載する有効な方式および経路いずれかで投与することが可能である。アレルゲンワクチンおよびＦｌｔ３−Ｌの投薬および投与は、適任である医師によって決定可能である。
【０２０８】
Ｆｌｔ３−Ｌ免疫プロトコルは、治療可能なアレルギーいずれかに対するアレルギー免疫療法で使用可能であり、これらには、限定されるわけではないが：昆虫アレルギーおよび昆虫咬傷および／または刺傷（チリダニ、アリ、クモ、ハエ、ハチ、スズメバチ、蚊、ブヨ等）；動物アレルギー（限定されるわけではないが：イヌ、ネコ、鳥、げっ歯類、ウシ、ヒツジ、ウマ、ブタ、ヤギ等の家畜および野生動物の毛皮、ふけ、排出物等）；アレルギー性気管支炎、バルサムアレルギー；カンジダ菌アレルギー；カーペットおよび／または織物アレルギー；食物アレルギーまたは敏感性；金属アレルギー；松脂アレルギー；殺菌剤アレルギー；肥料アレルギー；ホルムアルデヒドアレルギー；ガスアレルギー；接着剤アレルギー；同種異系血清アレルギー；宝飾品アレルギー；メルカプトアレルギー；カビおよび／またはうどん粉菌アレルギー；ペンキアレルギー；紙アレルギー；パラベン類アレルギー；香水アレルギー；殺虫剤アレルギー；プラスチックアレルギー；シャンプーアレルギー；石鹸アレルギー；チウラムアレルギー；タバコアレルギー；コムギアレルギー；酵母アレルギー；アレルギー性皮膚炎；アレルギー性鼻炎；アスピリン感受性；喘息；アトピー性皮膚炎；接触皮膚炎；化粧品アレルギー；牛乳アレルギー；皮膚炎；ほこりアレルギー；花粉アレルギー；湿疹；草アレルギー；サリチル酸感受性等が含まれる。
【０２０９】
上に詳細に記載するように、Ｆｌｔ３−Ｌは、アレルギーワクチンおよび場合による補助分子の投与前に、投与と同時に、そして／または投与に続いて、投与可能である。１つの態様において、Ｆｌｔ３−Ｌは、ワクチン接種前に、ワクチン接種と同時に、そして／またはワクチン接種に続いて、連続１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、または２０日間、被験者に一日一度、毎日または２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごとまたは７日ごとに投与される。もちろん、上述のＦｌｔ３−Ｌ免疫プロトコルのすべての態様は、アレルギーの治療に適応可能である。さらに、当該技術分野に知られる現存のアレルギー免疫措置を修飾して、Ｆｌｔ３−Ｌの投与を含むようにすることが可能である。
【０２１０】
１つの態様において、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルは、１以上のアレルギーを有する被験者において、アレルギーを治療する方法であって：
（ａ）被験者にＦｌｔ３リガンドを投与し；
（ｂ）場合によって、補助分子を投与し；そして
（ｃ）アレルギーワクチンを被験者に投与する
工程を含んでなり、ここでＦｌｔ３リガンドは、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与し、そしてここで補助分子は、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与し、そしてここで補助分子は、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、前記方法に関する。
【０２１１】
上述のように、Ｆｌｔ３−Ｌは、造血幹細胞および前駆細胞とともに、多様な種類の免疫細胞、特に樹状細胞を拡大させる。さらに、Ｆｌｔ３−Ｌは、Ｔｈ１型樹状細胞を拡大させる能力を有する。したがって、アレルギー免疫療法におけるＦｌｔ３−Ｌ免疫プロトコルは、典型的なＴｈ２応答からＴｈ１型応答に、被験者の免疫応答を駆動することが可能である。サイトカインプロフィールおよび免疫応答におけるこのシフトは、ＩｇＥ産生よりＩｇＧ産生を駆動し、ＩＬ−４の循環レベルを減少させ、好酸球の補充および活性化を減少させるとともに、肥満細胞の増殖を減少させる。その結果、続くアレルゲン曝露はアレルギー反応を引き起こさない。
【０２１２】
当該技術分野に知られる標準法および技術、例えば限定されるわけではないが、患者由来のアレルゲン特異的ＩｇＧおよびＩｇＥ抗体の測定によって、Ｆｌｔ３−Ｌ免疫プロトコルを用いたアレルゲン特異的免疫療法の有効性を評価することが可能である。Ｆｌｔ３−Ｌ免疫プロトコルにおけるアレルゲン特異的免疫療法を受けている患者はまた、限定されるわけではないが、抗ヒスタミン剤、充血除去剤、ステロイド、鎮痛剤、咳止め等の１以上の慣用療法と組み合わせて治療可能である。
【０２１３】
本明細書に引用するすべての刊行物および特許出願は、個々の刊行物または特許出願が、具体的に、そして個々に、本明細書に援用されると示されるかのように、本明細書に援用される。前述の本発明は、例示のためある程度詳細に記載し、そして理解を明確にする目的で、例を記載しているが、一般の当業者には、本発明の解説に鑑み、付随する請求項の精神または範囲から逸脱することなく、特定の変化および修飾を実行可能であることが容易に明らかであろう。
【０２１４】
【表１９】
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【図面の簡単な説明】
【０２１５】
【図１】図１Ａ〜Ｅは、Ｆｌｔ３リガンド、ＰＥＧ化ＧＭ−ＣＳＦおよびＣＤ４０Ｌが、ワクチンに対する免疫応答を増進するかどうかに取り組む、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの免疫後第１日に採取した流入領域リンパ節から単離した試料のＦＡＣＳ（蛍光活性化細胞分取）解析および細胞計数から得たデータを示す（実施例８を参照されたい）。図１Ａ：流入領域リンパ節から単離した細胞の総数；図１Ｂ：ＯＴ−ＩＩトランスジェニックＣＤ４＋  Ｔ細胞のパーセント；図１Ｃ：ＯＴ−ＩＩトランスジェニックＣＤ４＋  Ｔ細胞の絶対数；図１Ｄ：ＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセント；および図１Ｅ：ＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞の絶対数。
【図２】図２Ａ〜Ｅは、Ｆｌｔ３リガンド、ＰＥＧ化ＧＭ−ＣＳＦおよびＣＤ４０Ｌが、ワクチンに対する免疫応答を増進するかどうかに取り組む、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの免疫後第５日に採取した流入領域リンパ節から単離した試料のＦＡＣＳ解析および細胞計数から得たデータを示す（実施例８を参照されたい）。図２Ａ：流入領域リンパ節から単離した細胞の総数；図２Ｂ：ＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセント；図２Ｃ：ＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞の絶対数；図２Ｄ：宿主動物由来のＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセント；および図２Ｅ：宿主動物由来のＣＤ８＋  Ｔ細胞の絶対数。
【図３】図３Ａ〜Ｅは、Ｆｌｔ３リガンド、ＰＥＧ化ＧＭ−ＣＳＦおよびＣＤ４０Ｌが、ワクチンに対する免疫応答を増進するかどうかに取り組む、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの免疫後第９日に採取した流入領域リンパ節から単離した試料のＦＡＣＳ解析および細胞計数から得たデータを示す（実施例８を参照されたい）。図３Ａ：流入領域リンパ節から単離した細胞の総数；図３Ｂ：ＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセント；図３Ｃ：ＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞の絶対数；図３Ｄ：宿主動物由来のＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセント；および図３Ｅ：宿主動物由来のＣＤ８＋  Ｔ細胞の絶対数。
【図４】図４Ａ〜Ｂは、実施例８に記載するＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルからの、免疫後第１日（図４Ａ）および第５日（図４Ｂ）に単離した、ＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞の標準的ＣＴＬアッセイを示す。トランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞をＣＴＬアッセイに含める前に、ＯＴ−Ｉペプチドでパルス処理した標的と培養することによって、この細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏで再刺激した。
【図５】図５Ａ〜Ｂは、実施例８に記載するＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルからの、免疫後第５日（図５Ａ）および第９日（図５Ｂ）に単離した、ＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞の“ｅｘ  ｖｉｖｏ”ＣＴＬアッセイを示す。トランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ拡大なしに、直接、ＣＴＬアッセイに用いた。
【図６】図６Ａ〜Ｃは、実施例９に記載するＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルの免疫後第５日に採取した流入領域リンパ節から単離した試料のＦＡＣＳ解析および細胞計数から得たデータを示す。図６Ａ：流入領域リンパ節から単離した細胞の絶対数；図６Ｂ：ＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセント；および図６Ｃ：ＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞の絶対数。
【図７】図７Ａ〜Ｃは、実施例９に記載するＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルの免疫後第５日に採取した流入領域リンパ節から単離した試料のＦＡＣＳ解析および細胞計数から得たデータを示す。図７Ａ：流入領域リンパ節から単離した細胞の絶対数；図７Ｂ：ＯＴ−ＩＩトランスジェニックＣＤ４＋  Ｔ細胞のパーセント；および図６Ｃ：ＯＴ−ＩＩトランスジェニックＣＤ４＋  Ｔ細胞の絶対数。
【図８】図８Ａ〜Ｆは、多様なアジュバント、およびワクチンに対する免疫応答を比較する、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの免疫後第１日、第５日、または第９日に採取した流入領域リンパ節から単離した試料のＦＡＣＳ解析および細胞計数から得たデータを示す（実施例１０を参照されたい）。図８Ａ：免疫後第１日のＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセント；図８Ｂ：免疫後第５日のＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセント；図８Ｃ：免疫後第９日のＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセント；図８Ｄ：免疫後第１日のＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞の絶対数；図８Ｅ：免疫後第５日のＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞の絶対数；および図８Ｆ：免疫後第９日のＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞の絶対数。
【図９】図９Ａ〜Ｆは、多様なアジュバント、およびワクチンに対する免疫応答を比較する、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの免疫後第１日、第５日、または第９日に採取した流入領域リンパ節から単離した試料のＦＡＣＳ解析および細胞計数から得たデータを示す（実施例１０を参照されたい）。図９Ａ：免疫後第１日の流入領域リンパ節から単離した細胞の絶対数；図９Ｂ：免疫後第５日の流入領域リンパ節から単離した細胞の絶対数；図９Ｃ：免疫後第９日の流入領域リンパ節から単離した細胞の絶対数；図９Ｄ：免疫後第１日のＯＴ−ＩＩトランスジェニックＣＤ４＋  Ｔ細胞の絶対数；図９Ｅ：免疫後第５日のＯＴ−ＩＩトランスジェニックＣＤ４＋  Ｔ細胞の絶対数；および図９Ｆ：免疫後第９日のＯＴ−ＩＩトランスジェニックＣＤ４＋  Ｔ細胞の絶対数。
【図１０】図１０Ａ〜Ｆは、多様なアジュバント、およびワクチンに対する免疫応答をさらに比較する、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの免疫後第１日、第５日、または第９日に採取した流入領域リンパ節から単離した試料のＦＡＣＳ解析および細胞計数から得たデータを示す（実施例１０を参照されたい）。図１０Ａ：免疫後第１日のＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセント；図１０Ｂ：免疫後第５日のＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセント；図１０Ｃ：免疫後第９日のＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞のパーセント；図１０Ｄ：免疫後第１日のＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞の絶対数；図１０Ｅ：免疫後第５日のＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞の絶対数；および図１０Ｆ：免疫後第９日のＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞の絶対数。
【図１１】図１１Ａ〜Ｆは、多様なアジュバント、およびワクチンに対する免疫応答をさらに比較する、Ｆｌｔ３リガンド免疫プロトコルの免疫後第１日、第５日、または第９日に採取した流入領域リンパ節から単離した試料のＦＡＣＳ解析および細胞計数から得たデータを示す（実施例１０を参照されたい）。図１１Ａ：免疫後第１日の流入領域リンパ節から単離した細胞の絶対数；図１１Ｂ：免疫後第５日の流入領域リンパ節から単離した細胞の絶対数；図１１Ｃ：免疫後第９日の流入領域リンパ節から単離した細胞の絶対数；図１１Ｄ：免疫後第１日のＯＴ−ＩＩトランスジェニックＣＤ４＋  Ｔ細胞の絶対数；図１１Ｅ：免疫後第５日のＯＴ−ＩＩトランスジェニックＣＤ４＋  Ｔ細胞の絶対数；および図１１Ｆ：免疫後第９日のＯＴ−ＩＩトランスジェニックＣＤ４＋  Ｔ細胞の絶対数。
【図１２】図１２は、実施例１０に記載するＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルからの、免疫後第５日に単離した、ＯＴ−ＩトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞の“ｅｘ  ｖｉｖｏ”ＣＴＬアッセイを示す。流入領域リンパ節から単離したトランスジェニックＣＤ８＋  Ｔ細胞を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ拡大なしに、直接、ＣＴＬアッセイに用いた。
【図１３】図１３は、実施例１０に記載するＦｌｔ３リガンド免疫プロトコルからの、免疫後第５日に単離した、ＯＴ−ＩＩトランスジェニックＣＤ４＋  Ｔ細胞の標準的Ｔ細胞増殖アッセイを示す。
【図１４】図１４Ａおよび１４Ｂは、ＦＬでの１０日間の前処置が、免疫後、ＯＴＩ  ＣＤ８＋  Ｔ細胞の拡大を誘導するのに有効であったが、８日間、６日間、および４日間の前処置もまた、対照群に比較して有効であったことを示す。
【図１５】図１５Ａおよび１５Ｂは、Ｆｌｔ３−Ｌ前処置後のＩＦＡアジュバント中の抗原での免疫が、ペプチド抗原およびタンパク質抗原両方で使用するのに有効であることを例示する。
【図１６】図１６Ａおよび１６Ｂは、マウスをＦｌｔ３リガンドで前処置し、そして生理食塩水中のペプチドで免疫した際、ＩＬ−１５を免疫後に投与すると、ＯＴＩ  ＣＤ８＋  ＣＴＬ拡大および機能が増大したことを示す。
【図１７】図１７Ａおよび１７Ｂは、免疫直後にＩＬ−１５または抗４−１ＢＢで処置すると、メモリーＴ細胞プールのサイズが増大することを例示する。この効果は、Ｆｌｔ３リガンドに加えて、生理食塩水中に配合したペプチドで免疫した後（第１〜３群）、またはＦｌｔ３リガンドに加えて、ＩＦＡ中に配合したペプチドで免疫した後（第７〜９群）には認められたが、Ｆｌｔ３リガンドの非存在下で免疫した後（第４〜６群）には認められなかった。
【配列表】
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2005528373.tif 000024
2005528373.tif 000025
【図１】
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【図２】
2005528373.tif 000027
【図３】
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【図４】
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【図５】
2005528373.tif 000030
【図６】
2005528373.tif 000031
【図７】
2005528373.tif 000032
【図８】
2005528373.tif 000033
【図９】
2005528373.tif 000034
【図１０】
2005528373.tif 000035
【図１１】
2005528373.tif 000036
【図１２】
2005528373.tif 000037
【図１３】
2005528373.tif 000038
【図１４】
2005528373.tif 000039
【図１５】
2005528373.tif 000040
【図１６】
2005528373.tif 000041
【図１７】
2005528373.tif 000042
【手続補正書】
【提出日】平成16年12月21日(2004.12.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者を免疫するための医薬組成物であって：
（ａ）Ｆｌｔ３リガンド；
（ｂ）場合により、補助分子；および
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチン；
を組み合わせてなる、前記医薬組成物。
【請求項２】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項１の医薬組成物。
【請求項３】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項１の医薬組成物。
【請求項４】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１の医薬組成物。
【請求項５】
アジュバントが、ＡＤＪＵＭＥＲTM（ポリホスファゼン）；リン酸アルミニウムゲル；藻類グルカン類；アルガミュリン（ａｌｇａｍｍｕｌｉｎ）；水酸化アルミニウムゲル（ミョウバン）；高タンパク質吸着性（ａｄｓｏｒｂｅｎｃｙ）水酸化アルミニウムゲル；低粘性水酸化アルミニウムゲル；ＡＦまたはＳＰＴ（スクアレン（５％）、Ｔｗｅｅｎ８０（０．２％）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｌ１２１（１．２５％）、リン酸緩衝生理食塩水ｐＨ７．４のエマルジョン）；ＡＶＲＩＤＩＮＥTM（プロパンジアミン）；ＢＡＹ  Ｒ１００５TM（（Ｎ−（２−デオキシ−２−Ｌ−ロイシルアミノ−ｂ−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎ−オクタデシルドデカノイルアミド・ヒドロアセテート）；ＣＡＬＣＩＴＲＩＯＬTM（１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３）；リン酸カルシウムゲル；ＣＡＰTM（リン酸カルシウムナノ粒子）；コレラ・ホロトキシン、コレラ毒素Ａ１−プロテインＡ−Ｄ断片融合タンパク質、コレラ毒素Ｂサブユニット；ＣＲＬ１００５（ブロック・コポリマーＰ１２０５）；サイトカイン含有リポソーム；ＤＤＡ（ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド）；ＤＨＥＡ（デヒドロエピアンドロステロン）；ＤＭＰＣ（ジミリストイル・ホスファチジルコリン）；ＤＭＰＧ（ジミリストイル・ホスファチジルグリセロール）；ＤＯＣ／ミョウバン複合体（デオキシコール酸ナトリウム塩）；フロイントの完全アジュバント；フロイントの不完全アジュバント；ガンマ・イヌリン；Ｇｅｒｂｕアジュバント（以下の混合物：ｉ）Ｎ−アセチルグルコサミニル−（Ｐｌ−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−グルタミン（ＧＭＤＰ）、ｉｉ）ジメチルジオクタデシルアンモニウムクロリド（ＤＤＡ）、ｉｉｉ）亜鉛Ｌ−プロリン塩複合体（ＺｎＰｒｏ−８））；ＧＭ−ＣＳＦ；ＧＭＤＰ（Ｎ−アセチルグルコサミニル−（ｂ１−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン）；Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ（１−（２−メチプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）；ＩｍｍＴｈｅｒTM（Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−イソＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−グリセロールジパルミテート）；ＤＲＶ類（脱水−再水和小胞から調製した免疫リポソーム）；インターフェロン−γ；インターロイキン−１β；インターロイキン−２；インターロイキン−７；インターロイキン−１２；ＩＳＣＯＭＳTM（免疫刺激複合体）；ＩＳＣＯＰＲＥＰ  ７．０．３．TM；リポソーム；ＬＯＸＯＲＩＢＩＮＥTM（７−アリル−８−オキソグアノシン）；ＬＴ経口アジュバントTM（大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）不安定内毒素プロトキシン）；組成物いずれかの微小球体および微小粒子；ＭＦ５９TM；（スクアレン・水エマルジョン）；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ  ＩＳＡ  ５１TM（精製不完全フロイントアジュバント）；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ  ＩＳＡ  ７２０TM（代謝可能油アジュバント）；ＭＰＬTM（３−Ｑ−デスアシル−４’−モノホスホリル脂質Ａ）；ＭＴＰ−ＰＥおよびＭＴＰ−ＰＥリポソーム（（Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−（ヒドロキシ−ホスホリルオキシ））エチルア���ド、一ナトリウム塩）；ＭＵＲＡＭＥＴＩＤＥTM（Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−Ｇｌｎ−ＯＣＨ３）；ＭＵＲＡＰＡＬＭＩＴＩＮＥTMおよびＤ−ＭＵＲＡＰＡＬＭＩＴＩＮＥTM（Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ｔｈｒ−Ｄ−イソＧｌｎ−ｓｎ−グリセロールジパルミトイル）；ＮＡＧＯ（ノイラミニダーゼ−ガラクトースオキシダーゼ）；組成物いずれかのナノ球体またはナノ粒子；ＮＩＳＶ類（非イオン性界面活性剤小胞）；ＰＬＥＵＲＡＮTM（β−グルカン）；ＰＬＧＡ、ＰＧＡおよびＰＬＡ（乳酸およびグリコール酸のホモポリマーおよびコポリマー；ミクロ粒子／ナノ粒子）；ＰＬＵＲＯＮＩＣ  Ｌ１２１TM；ＰＭＭＡ（ポリメチルメタクリレート）；ＰＯＤＤＳTM（オロテイノイド（ｏｒｏｔｅｉｎｏｉｄ）微小球体）；ポリエチレンカルバメート誘導体；ポリｒＡ：ポリｒＵ（ポリアデニル酸−ポリウリジル酸複合体）；ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）；渦巻き型タンパク質（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｃｈｌｅａｔｅｓ）（Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ，  Ｉｎｃ．、アラバマ州アラバスター）；ＳＴＩＭＵＬＯＮTM（ＱＳ−２１）；Ｑｕｉｌ−Ａ（Ｑｕｉｌ−Ａサポニン）；Ｓ−２８４６３（４−アミノ−オテック，−ジメチル−２−エトキシメチル−ｌＨ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール）；ＳＡＦ−１TM（Ｓｙｎｔｅｘアジュバント配合物）；センダイ・プロテオリポソームおよびセンダイ含有脂質マトリックス；Ｓｐａｎ−８５（トリオレイン酸ソルビタン）；Ｓｐｅｃｏｌ（Ｍａｒｃｏｌ  ５２、Ｓｐａｎ  ８５およびＴｗｅｅｎ  ８５のエマルジョン）；スクアレンまたはＲｏｂａｎｅ（登録商標）（２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチルテトラコサンおよび２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２テトラコサヘキサエン）；ステアリルチロシン（オクタデシルチロシンヒドロクロリド）；Ｔｈｅｒａｍｉｄｅ（登録商標）（Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−イソＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−ジパルミトキシプロピルアミド）；スレオニル−ＭＤＰ（ＴｅｒｍｕｒｔｉｄｅTMまたは［ｔｈｒ１］−ＭＤＰ；Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン）；Ｔｙ粒子（Ｔｙ−ＶＬＰまたはウイルス様粒子）；Ｗａｌｔｅｒ  Ｒｅｅｄリポソームからなる群より選択される、請求項１の医薬組成物。
【請求項６】
抗原が癌抗原である、請求項１の医薬組成物。
【請求項７】
癌抗原が、黒色腫−メラニン細胞分化抗原（ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ  Ａ；ｇｐ１００／ｐｍｅｌ−１７；チロシナーゼ；チロシナーゼ関連タンパク質−１；チロシナーゼ関連タンパク質−２；メラニン細胞刺激ホルモン受容体）；癌−精巣抗原（ＭＡＧＥ−１；ＭＡＧＥ−２；ＭＡＧＥ−３；ＭＡＧＥ−１２；ＢＡＧＥ；ＣＡＧＥ、ＮＹＥＳＯ−１）；突然変異抗原（β−カテニン；ＭＵＭ−１；ＣＤＫ−４；カスパーゼ−８；ＫＩＡ  ０２０５；ＨＬＡ−Ａ２−Ｒ１７０１）；および癌で過剰発現される、非突然変異共有抗原（α−フェトプロテイン；テロメラーゼ触媒タンパク質；Ｇ−２５０；ＭＵＣ−１；癌胎児抗原；ｐ５３；Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ）、非突然変異タンパク質（ｇｐ１００；ＭＡＧＥ−１；ＭＡＧＥ−３；チロシナーゼ；ＮＹ−ＥＳＯ−１）に由来するエピトープ、および突然変異タンパク質（トリオースリン酸イソメラーゼ；ＣＤＣ−２７；ＬＤＬＲ−ＦＵＴ）に由来するエピトープからなる群より選択される、請求項６の医薬組成物。
【請求項８】
抗原がウイルス抗原である、請求項１の医薬組成物。
【請求項９】
ウイルス抗原が、レトロウイルス科（例えばヒト免疫不全ウイルス、例えばＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶまたはＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、またはＨＩＶ−ＩＩＩとも称される；および他の単離体、例えばＨＩＶ−ＬＰ））； ピコルナウイルス科（例えばポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス；エンテロウイルス、ヒト・コクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）；カリチウイルス科（Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ）（例えば胃腸炎を引き起こす株）；トガウイルス科（例えばウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）；フラビウイルス科（例えばデング熱ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）；コロナウイルス科（例えばコロナウイルス）；ラブドウイルス科（例えば水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；フィロウイルス（例えばエボラウイルス）；パラミクソウイルス科（例えばパラインフルエンザウイルス、おたふく風邪ウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス）；オルトミクソウイルス科（例えばインフルエンザウイルス）；ブニヤウイルス科（例えばハンタンウイルス、ブンガウイルス（ｂｕｎｇａ  ｖｉｒｕｓ）、フレボウイルスおよびナイロウイルス（Ｎａｉｒｏ  ｖｉｒｕｓ））；アレナウイルス科（出血熱ウイルス）；レオウイルス科（例えばレオウイルス、オルビウイルスおよびロタウイルス）；ビルナウイルス科；ヘパドナウイルス科（Ｂ型肝炎ウイルス）；パルボウイルス科（パルボウイルス）；パポバウイルス科（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）；アデノウイルス科（大部分のアデノウイルス）；ヘルペスウイルス科（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１および２、水痘・帯状ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス類）；ポックスウイルス科（天然痘ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）；およびイリドウイルス科（例えばアフリカ・ブタ熱ウイルス）；非Ａ非Ｂ肝炎のウイルス病原体；ノーウォークウイルスおよび関連ウイルス、並びにアストロウイルス（ａｓｔｒｏｖｉｒｕｓ））からなる群より選択される、請求項８の医薬組成物。
【請求項１０】
抗原が細菌抗原である、請求項１の医薬組成物。
【請求項１１】
細菌抗原が、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉｓ）、ライム病ボレリア（Ｂｏｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、レジオネラ・ニューモフィリア（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ）、マイコバクテリウム属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）種（例えばヒト型結核菌（Ｍ．  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、鳥型結核菌（Ｍ．  ａｖｉｕｍ）、Ｍ．イントラセルラレ（Ｍ．  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、Ｍ．カンサシ（Ｍ．  ｋａｎｓａｉｉ）、Ｍ．ゴルドネ（Ｍ．  ｇｏｒｄｏｎａｅ））、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、単球症リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（Ａ群連鎖球菌）、ストレプトコッカス・アガラクティエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群連鎖球菌）、連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）（ビリダンス群）、糞便連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、ウシ連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｂｏｖｉｓ）、連鎖球菌属（嫌気性種）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、病原性カンピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）種、腸球菌属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）種、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｒａｃｉｓ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、コリネバクテリウム種、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ  ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、ウエルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｒｓ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）、エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）種、フソバクテリウム・ヌクレアツム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、ストレプトバチルス・モニリフォルミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｉｕｍ）、トレポネーマ・ペルテヌエ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐｅｒｔｅｎｕｅ）、レプトスピラ属（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）、およびイスラエル放線菌（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｉｓｒａｅｌｌｉ）からなる群より選択される、請求項１０の医薬組成物。
【請求項１２】
抗原が感染性単細胞生物由来である、請求項１の医薬組成物。
【請求項１３】
抗原が、住血吸虫類；トリパノソーマ類；リーシュマニア属（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）種；フィラリア性線形動物；トリコモナス症；肉胞子虫症；無鉤条虫（Ｔａｅｎｉａ  ｓａｇｉｎａｔａ）、有鉤条虫（Ｔａｅｎｉａ  ｓｏｌｉｕｍ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、煙色コウジ菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ）、旋毛虫症、皮膚ブラストミセス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、トラコーマ・クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、鵞口瘡カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、三日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）、四日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｍａｌａｒｉａｅ）、およびトキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）からなる群より選択される、請求項１２の医薬組成物。
【請求項１４】
癌を治療するための医薬組成物であって：
（ａ）Ｆｌｔ３リガンド；
（ｂ）場合により、補助分子；および
（ｃ）癌抗原およびアジュバントを含んでなるワクチン；
を組み合わせてなる、前記医薬組成物。
【請求項１５】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項１４の医薬組成物。
【請求項１６】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項１４の医薬組成物。
【請求項１７】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１４の医薬組成物。
【請求項１８】
ウイルス感染を防止し、そして／または治療するための医薬組成物であって：
（ａ）Ｆｌｔ３リガンド；
（ｂ）場合により、補助分子；および
（ｃ）ウイルス抗原およびアジュバントを含んでなるワクチン；
を組み合わせてなる、前記医薬組成物。
【請求項１９】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項１８の医薬組成物。
【請求項２０】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項１８の医薬組成物。
【請求項２１】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１８の医薬組成物。
【請求項２２】
細菌感染を防止し、そして／または治療するための医薬組成物であって：
（ａ）Ｆｌｔ３リガンド；
（ｂ）場合により、補助分子；および
（ｃ）細菌抗原およびアジュバントを含んでなるワクチン；
を組み合わせてなる、前記医薬組成物。
【請求項２３】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項２２の医薬組成物。
【請求項２４】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項２２の医薬組成物。
【請求項２５】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項２２の医薬組成物。
【請求項２６】
抗原に対する免疫応答を増進するための医薬組成物であって：
（ａ）Ｆｌｔ３リガンド；
（ｂ）場合により、補助分子；および
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチン；
を組み合わせてなる、前記医薬組成物。
【請求項２７】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項２６の医薬組成物。
【請求項２８】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項２６の医薬組成物。
【請求項２９】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項２６の医薬組成物。
【請求項３０】
抗原に対する抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞免疫応答を増進するための医薬組成物であって：
（ａ）Ｆｌｔ３リガンド；
（ｂ）場合により、補助分子；および
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチン；
を組み合わせてなる、前記医薬組成物。
【請求項３１】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項３０の医薬組成物。
【請求項３２】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項３０の医薬組成物。
【請求項３３】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３１の医薬組成物。
【請求項３４】
抗原に対する抗原特異的Ｔヘルパー免疫応答を増進するための医薬組成物であって：
（ａ）Ｆｌｔ３リガンド；
（ｂ）場合により、補助分子；および
（ｃ）抗原およびアジュバントを含んでなるワクチン；
を組み合わせてなる、前記医薬組成物。
【請求項３５】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項３４の医薬組成物。
【請求項３６】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項３４の医薬組成物。
【請求項３７】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３４の医薬組成物。
【請求項３８】
被験者における抗原に対する免疫応答の評価に用いる医薬組成物であって：
（ａ）Ｆｌｔ３リガンド；
（ｂ）場合により、補助分子；
（ｃ）抗原、ここで該抗原は、場合によってアジュバントとともに配合可能である；
を組み合わせてなる、前記医薬組成物。
【請求項３９】
Ｆｌｔ３リガンドを、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項３８の医薬組成物。
【請求項４０】
補助分子を、ワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項３８の医薬組成物。
【請求項４１】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３８の医薬組成物。
【請求項４２】
１以上のアレルギーを治療するための医薬組成物であって：
（ａ）Ｆｌｔ３リガンド；
（ｂ）場合により、補助分子；および
（ｃ）アレルギーワクチン；
を組み合わせてなる、前記医薬組成物。
【請求項４３】
Ｆｌｔ３リガンドを、アレルギーワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項４２の医薬組成物。
【請求項４４】
補助分子を、アレルギーワクチン投与の前に、ワクチン投与と同時に、そして／またはワクチン投与に続いて投与する、請求項４２の医薬組成物。
【請求項４５】
補助分子が、インターロイキン１、２、３、４、５、６、７、１０、１２、１５、１８および２３、ケモカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−アルファおよびガンマ、ｃ−ｋｉｔリガンド、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３の融合体、ＴＮＦファミリーメンバー（ＴＮＦ−α）、ＴＧＦ−β、可溶性ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０結合タンパク質、可溶性ＣＤ８３、４−１ＢＢ結合タンパク質、ＯＸ−４０結合タンパク質、ＣｐＧ配列、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項４２の医薬組成物。
【国際調査報告】
2005528373.tif 000043
2005528373.tif 000044