(57)【要約】第XIII 因子を投与することによってセロマ（seroma）の形成を阻害するためへの第XIII 因子の使用に関する。第XIII 因子は、創傷又は手術の部位で局部投与されるか、又は全身投与され得る。第XIII 因子が局部投与される場合、それは活性化されても又は活性化されなくても良く、そして活性化されたトロンビンと共に投与され得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類における手術又は創傷の部位でのセロマ（seroma）又は漿液流体の形成を阻害するための方法であって、治療的有効量の第XIII 因子を前記哺乳類に投与することを含んで成る方法。
【請求項２】
前記第XIII 因子が、全身投与される請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記第XIII 因子が、手術又は創傷の部位で局部投与される請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記第XIII 因子が活性化される請求項３記載の方法。
【請求項５】
前記第XIII 因子が、活性化されたトロンビンと共に投与される請求項３記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の背景：
セロマ（seroma）は、創傷内又は皮弁下での無痛の腫脹として通常存在するリンパの収集物である。それらはしばしば、リンパ節−担持の領域、例えば腋の下、首、鼡径部、等における切開を包含する創傷において、又は腹部会陰切除、全乳房切除の後、又は女性のための又は異性における女性化乳房を処理するための乳房縮小方法においての有意なデッド空間が残存する領域において進行する。セロマ（seroma）は、適切な組織接近を妨げるか、又は二次感染されるようになることができる。
【０００２】
その主要原因は、切開の間、リンパ管を同定し、そして制御するのに失敗したことにある。リンパはタンパク質に富んでいる流体であるが、電気焼灼はセロマ（seroma）形成を妨げるには無効果である。従って、セロマ（seroma）の形成を妨げるための処理を開発する必要がある。
【０００３】
発明の記載：
本発明は、手術が行われたか又は創傷が生じた皮膚下での流体又はセロマ（seroma）の形成を阻害するために手術を受けた患者に第XIII 因子を投与することによってこの必要性を満たす。第XIII 因子は、皮膚下に溶液で局部適用されるか、又は全身投与され得る。第XIII 因子溶液は、手術の前、手術部位の縫い合わせの前、投与され得るか、又は手術の後、皮膚下に注射され得る。第XIII 因子が局部投与される場合、それは活性化されるか又は活性化されなくても良く、又は活性化されていない第XIII 因子は活性化されたα−トロンビンと共に適用され得る。次に、活性化されたトロンビンは、第XIII 因子を活性化する。活性化されたトロンビンは、約0.5mg/ml溶液の濃度で局部投与され得る。ヒト組換えトロンビンを生成するための方法は、アメリカ特許第5,502,034号に見出され得る。
【０００４】
フィブリン−安定化因子としても知られている第XIII 因子は、20μg/mlの濃度で血漿において循環する。前記タンパク質は、２つのAサブユニット及び２つのBサブユニットから成るテトラマーとして血漿中に存在する。個々のサブユニットは、83,000Daの分子を有し、そして完全なタンパク質は約330,000Daの分子を有する。第XIII 因子は、異なったフィブリン鎖のγ−グルタミル基とε−リシル基との間の交差−結合を触媒する。第XIII の触媒活性はAサブユニットに依存する。Bサブユニットは、血漿第XIII 因子におけるAサブユニットのためのキャリヤーとして作用する。組換え第XIII 因子は、ヨーロッパ特許第0268772B1号に記載される方法に従って生成され得る。血漿における第III 因子のレベルは、FIBROGAMMIN（商標） (Aventis Corp.) と呼ばれるヒト胎盤由来の第XIII 因子濃縮物を投与することによって、又は組換え第XIII 因子の投与により高められ得る。
【０００５】
上記で言及されたように、対象への第XIII 因子の投与は、創傷の部位で局部的に又は全身的に投与され得る。全身的に投与される場合、第XIII 因子は一般的に静脈内投与される。注射により治療用タンパク質を投与する場合、投与は連続注入により、又は単一又は複数ボーラスにより行われ得る。第XIII 因子を含んで成る医薬組成物は、医薬的に有用な組成物を調製するために既知の方法に従って配合され得、それにより治療用タンパク質が医薬的に許容できるキャリヤーと混合して組み合わされる。
【０００６】
組成物は、それが受容体患者により許容され得る場合、“医薬的に許容できるキャリヤー”であると言われる。第XIII 因子の適切な医薬組成物は、水中、1mMのEDTA、10mMのグリシン、2％スクロースを含むであろう。他の配合物は、20mMのヒスチジン、3％（wt/v）のスクロース、2mMのグリシン及び0.01％（wt/v）のポリソルベート（pH8）を含む第XIII 因子組成物であろう。
【０００７】
他の適切なキャリヤーは、当業者に良く知られている。例えば、Gennaro(ed.), Remington’s Pharmaceutical Sciences, 19th Edition (Mack Publishing Company 1995) を参照のこと。
【０００８】
第XIII 因子の投与：
個人における第XIII 因子のレベルは、当業界において良く知られているアッセイ、例えばBERICHROM（商標） F XIII アッセイ（Dade Behring Marbugh GmbH, Marburg, Germany）により決定され得る。正常な成人は、kg体重当たり平均約45mlの血漿を有する。1Lの血液は、100単位（U）の第XIII 因子を有する。投与される第XIII 因子の量は、血漿における第XIII 因子の個人レベルを、100％の正常血漿に又は正常よりもわずかに高い〜1−5％以上にするのに十分であるべきである。0.45U/kgの用量は、正常に比較して、第XIII 因子のレベルを、約1％高める。１単位の第XIII 因子は、二両体化されたAサブユニットのみを含む、約10μgの組換え第XIII 因子である。
【０００９】
従って、第XIII 因子のレベルを１％高めるためには、個人のkg体重当たり約4.5μgのA2サブユニットを投与するであろう。前記レベルを正常に比較して、30％高めるためには、13.5U/kgで投与するであろう。75kgの個人に関しては、これは約1,012.5Uであろう。何人かの患者は、第XIII 因子損失を包含する消費性凝固障害を有する。そのような場合、より高い用量（例えば、１〜20/kg−％）又は複数回の用量の第XIII 因子（例えば、１〜2U/kg〜％−日）が必要とされ得る。
【実施例】
【００１０】
例１．ラットセロマ（seroma）乳房切除モデルにおけるセロマ（seroma）形成を妨げるためへの第XIII 因使用
実験の目的：
本実験の目的は、第XIII 因子が、全身的に与えられる場合、ラット乳房切除モデルを用いてセロマ（seroma）流体形成に影響を及ぼすかどうかを決定することであった。
【００１１】
背景：
セロマ（seroma）は、乳房切除を受ける患者に関して最も通常の術後合併症である。それらの流体収集物の形成は、リンパ管及び血管の破壊、及び皮膚下の大きな可能性あるボイドの創造により促進される。セロマ（seroma）形成による術後問題は、遅延された創傷治癒、皮弁壊死、腕のリンパ水腫及び感染を包含する。
【００１２】
第XIII 因子調製物：
第XIII 因子は、0.3mMのエチレンジアミン四酢酸（EDTA）、31mMのグリシン及び6.2％スクロースを含む、凍結乾燥された第XIII 因子13.2mgを含むボトルにおいて、ZymoGenetics, Inc., Seattle WAにより提供された。その凍結乾燥された第XIII 因子を、3.3mlの無菌水により再構成し、そして0.5mlのアリコートにピペットで取り、そして−20℃でフリーザに貯蔵した。
【００１３】
ビークル調製物：
ビークル調製物は、0.2mMのEDTA、31mMのグリシン及び6.2％スクロースから成る凍結乾燥された粉末であった。これを、3.3mlの無菌水により再構成し、そして0.5mlのアリコートにピペットで取り、そして−20℃でフリーザーに貯蔵した。融解の後、0.5mlのウシ血清アルブミン（BSA）を、個々のバイアルに添加した。
【００１４】
実験方法：
ラットを、イソフラン（3％イソフルラン、１％酸素）により麻酔し、そしてカテーテルを個々のラットの頸静脈中に挿入した。カテーテル挿入の２〜３日後、11匹のラットは、ビークル調製物（対照グループ）のカテーテルを通しての１日の静脈内ボーラス注入を受け、そして12匹のラットは、左側の根本的乳房切除の30分前、1mg/kgの第XIII 因子調製物の１回のボーラス注入を受けた。乳房切除は、胸筋、リンパ組織、例えばリンパ節（３又はそれ以上）の除去、及び皮下リンパ脈管構造表面の損傷から成った。リンパ脈管構造の損傷は、22番のメス刀により突出された皮膚皮弁の内表面を50回、削ることによって生じた。乳房切除の５日後、ラットを、ウレタン麻酔により麻酔した。血清サンプルを分析のために採血した。セロマ（seroma）流体を吸引し、そしてセロマ（seroma）流体の体積及び第XIII 因子含有量を決定するために個々のラットから計量した。
【００１５】
結果：
血液学、臨床血液化学及び第XIII 因子レベルについて、対照ラットと実験ラットとの間には、有意な差異は観察されなかった。
殺害の時点（５日目）で、有意な差異がセロマ（seroma）流体体積吸引液に観察された。対照グループは、平均2.5mlのセロマ（seroma）流体に達し、そして第XIII 因子が投与されたグループは、平均1.4mlのセロマ（seroma）流体に達した。従って、第XIII 因子は、セロマ（seroma）流体の形成の阻害において効果的であった。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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