(57)【要約】  平面シートマトリックスより管構築体を形成する装置には、２つの対面マウントを支えるスタンド、対面マウントの間に平行配置に保たれた、主軸、有孔ロッド、及びバネ付勢されたローラ；主軸を対面マウント上に整列して係合するガイド；並びに平面シートマトリックスに接線力を付与してしわ寄りを防ぐ手段が含まれる。有孔ロッドは、その長さにわたって内腔を有し、有孔ロッドの内腔間に、水が均一に通過するためのロッドの表面を通ってつながる空孔を有する。バネ付勢されたローラは、有孔ロッドの長さに沿って進んでローラと主軸の間に接触線を生じる。主軸は、平面のマトリックスシートに接触し、マトリックスの連続部分が有孔ロッドに接触して、有孔ロッドの空孔を通過する水によって軽く湿らされ、主軸の回りに巻き付けられるように回転して管構築体を形成する。
2005514154.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
平面シートマトリックスから管状構築体を形成する装置であって：
２つの対面マウントを支えるスタンドと、対面マウントの間にわたり、平行配置に保たれた、主軸、有孔ロッド、及びバネ付勢されたローラ；
主軸を対面マウント上で配置して係合するガイド；並びに
平面シートマトリックスに接線力を付与してしわ寄りを防ぐ手段を含んでなり；ここで有孔ロッドは、その長さにわたって内腔を有し、有孔ロッドの内腔間に、水が均一に通過するためのロッドの表面を通ってつながる空孔を有し；
ここでバネ付勢されたローラは、有孔ロッドの長さに沿って進んでローラと主軸の間に接触線を生じさせ；そして、
ここで主軸は、平面シートマトリックスに接触し、マトリックスの連続(後続)部分が有孔ロッドに接触して、有孔ロッドの空孔を通過する水によって軽く湿らされ、主軸の回りに巻き付けられるように回転して管構築体を形成する、前記装置。
【請求項２】
セラミックロッドのレベルより上にあり、その内側と外側の間に通じる機械加工された穴を有する中空チャックをさらに含んでなる、請求項１の装置。
【請求項３】
中空チャックがバネ付勢されたローラに向かう面に複数の穴を有し；そして、
中空チャックが真空源の取付け用に一端に出入口を有する、請求項２の装置。
【請求項４】
垂直ロッドをさらに含んでなり、ここで、それぞれのマウントにおいて、バネ付勢されたローラは、マウントに収納されるコイルバネにより搭載される垂直ロッドの先端に接触する、請求項１の装置。
【請求項５】
第一及び第二の延長ロッド；
ソリッド棒；及び、
第一及び第二のバネハイジングをさらに含んでなり；ここで垂直ロッドは、延長ロッドを介して各マウントを通過して、そして垂直ロッドは、第一及び第二の延長ロッドの両端と第一及び第二のバネハウジングの間にソリッド棒を係合することによって、バネ付勢されたローラから離すことができる、請求項４の装置。
【請求項６】
対面マウントのそれぞれにガイド部材をさらに含んでなり、ガイド部材は、Ｌ形状の溝を有して、ガイド部材の上部は主軸の一端を収容するように開き、ガイド部材の底部は、主軸を有孔ロッドに対して係合するように主軸を整列させる、請求項３の装置。
【請求項７】
バネ付勢されたローラが離れるとき、ガイド部材は、対面マウント間に主軸を挿入するために開き；そして、
ガイド部材が主軸に搭載されて、バネ付勢されたローラが係合するとき、ローラは、主軸が反対側でセラミックロッドに接触するように、一方の側で主軸を押圧する、請求項６の装置。
【請求項８】
真空源；及び、
水源をさらに含んでなり、ここで、ガイド部材が主軸に搭載される前に、真空源と水源を作動させて、空気が中空チャック中の穴を通って中空チャックの内側へ引かれて、そして水が有孔チューブの内腔からその表面へ通過するようにする、請求項６の装置。
【請求項９】
管構築体を平面シートマトリックスより形成する方法であって：
シートの一端縁に沿って主軸を配置させて、平面シートマトリックスと主軸が付着するようにそれをシートへ接触させることによって平面シートマトリックスを貼り付けること、
貼り付けられた平面シートマトリックスを、主軸の上でそれを巻くときにローラを使用して均一な張力をシート上に保持して気泡やひだを出して滑らかにしながら、この組織を管状の形態に保つ結合領域を生じる程度に、シートがそれ自身と接触して重複するまで、主軸の周りで巻くことを含んでなる、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、組織工学の分野に含まれる。本発明は、動物資源に由来する清浄化組織材料から調製される生物工学処理移植プロテーゼを調製するシステム及び方法へ向けられる。本発明を使用して作製される生物工学処理された移植プロテーゼは、管状で、直径が小さく、その全体の長さに沿って均一な形態を有する。
【背景技術】
【０００２】
生物工学処理された移植プロテーゼは、移植、修復に、又は哺乳動物宿主としての使用に利用される。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、均一な形態の微細口径管を加工処理済み組織マトリックス又は再構築マトリックスより形成するときの難点を克服する。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、平板シート状の加工処理済み組織マトリックス又は再構築マトリックスから管状構築体を製作するためのシステムである。本システムは、２つの装置：貼り付け（旗状にする）装置と巻き付け（巻く）装置とを含む。各装置は主軸を収容し、その上で管状構築体が形成される。第一に、貼り付け装置を使用して主軸上にマトリックスを貼り付ける。第二に、次いでこのマトリックスを、巻き付け装置を使用して主軸上で巻く。
【０００５】
故に、本発明の方法は、（ａ）加工処理済み組織マトリックスのシートを、このシートの一端に沿って主軸に配置し、シートと主軸が付着するようにそれをシートへ接触させることによって貼り付ける方法、及び（ｂ）貼り付けられたシートを主軸の上で巻くときに均一な張力をシートに維持して気泡やひだを出して滑らかにしながら、それを主軸の周りに巻くことを含む。巻き付けは、シートがある程度それ自身と接触して重なるまで続ける。重複部分は結合する領域であって、この組織を管状の形態に保つ。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
本発明は、薄い平面状の材料から管形状の組織工学処理されたプロテーゼ(tissue engineered prostheses)を作製するためのシステム及び方法へ向けられ、ここで本システム及び方法は、組織を管状形態に結合するのに、接着剤、縫合材、ステープルなどを必要とせず、結果として、該プロテーゼの生体再構築可能性（bioremodelability）を維持する。
【０００７】
本発明により提供される利点は、本装置が手作業で作製するよりも速くてより一貫して構築体を作製し得ることである。本発明のシステム装置は、組織の等周方向張力と遠心圧縮を促進し、それにより、主軸の下や管の層間に生じ得る気泡若しくは水泡又はひだを出して滑らかにする。本構築体は、医療デバイスとして使用されるので、どんな小さな変動も、患者に埋め込まれるときの本構築体の機能的性能に潜在的に影響を及ぼす場合がある。
【０００８】
用語「加工処理済み組織マトリックス」及び「加工処理済み組織材料」は、本来的に又一般的に動物資源、好ましくは哺乳動物より入手された細胞組織を意味し、これらは付帯の組織を機械的に洗浄し、細胞や細胞残滓を化学的に洗浄し、非コラーゲン性の細胞外マトリックス成分を実質的に含まないようにしたものである。加工処理済み組織マトリックスは、細胞残滓を実質的に含まない一方で、その本来的なマトリックス構造、強度、及び形状の多くを維持している。本発明の生物工学処理移植片を調製するのに好ましい組成物は、コラーゲンを含んでなる動物組織であり、それには、腸、筋膜、心膜、硬膜、及び、線維組織マトリックスを含む他の平坦又は平面構造の組織が含まれるが、これらに限定されるものではない。これら組織マトリックスの平面構造により、本発明の装置及び方法を使用してそれらを容易に操作して組み立てることが可能になる。本発明の生物工学処理移植片を調製するのにより好ましい組成物は、小腸の粘膜下組織層から得られる腸コラーゲン層である。小腸の適当な供給源は、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、イヌ、ヤギ、又はウマのような哺乳動物の生体であるが、ブタの小腸が好ましい供給源である。本発明を使用して管状プロテーゼを調製するのに最も好ましい組成物は、ブタ小腸の粘膜下組織層から得られる、加工処理済み腸コラーゲン層である。加工処理済み小腸コラーゲン層を入手するには、ブタの小腸を採取して付帯の腸間膜組織をこの腸から粗く切除する。粘膜下組織層は、好ましくは、対面ローラ間で生の腸材料を機械的に圧搾して筋肉の層（筋層）と粘膜（粘膜層）を除去することによって、小腸の他の層から分離又は離層させる。小腸の粘膜下組織層は回りの組織より丈夫なので、ローラはよりもろい成分を粘膜下組織より圧搾する。以下に続く実施例において、その開示が参照により本明細書に援用される米国特許第５，９９３，８４４号に記載のように、粘膜下組織層は、Ｂｉｔｔｅｒｌｉｎｇ腸清浄機を使用してブタ小腸から機械的に採取してから、清浄化組織マトリックスを得るために化学的に清浄される。この機械的かつ化学的に清浄化した腸コラーゲン層を本明細書において「ＩＣＬ」と呼ぶ。ＩＣＬを使用して、その教示が参照により本明細書に援用されるＰＣＴ出願の公開番号ＷＯ９５／２２３０１、ＷＯ９９／６２４２４、ＷＯ９９／６２４２５、及びＷＯ９９／６２４２７に記載されるような生物工学処理された医療デバイスとして使用する管状構築体を調製する。
【０００９】
用語「再構築マトリックス(reconstituted matrix)」及び「再構築材料(reconstituted material)」は、組織培養又は細胞培養のいずれかから抽出及び精製された、動物由来若しくは細胞由来のマトリックス成分を意味する。このマトリックスは、マトリックスが構造と物理特性に関して組織の様な特性を有するように、可溶化マトリックス成分、主にコラーゲンから形成してよい。再構築マトリックスは、高度に精製してよく、マトリックスを再形成するときに他の成分を該マトリックスへ加えてよい。他の好適なコラーゲン組織資源又は他の自然組織、再構築マトリックスシート、又は同じ平坦シート構造を有する合成材料は、当業者が他の動物資源において識別することができる。
【００１０】
本発明の装置及び方法の記載において、そして以下に続く実施例において、シート状の材料、好ましくは加工処理済み組織マトリックス又は再構築マトリックスのいずれかを使用して管状構築体を作製する。そのように限定することを企図していないが、本発明の装置及び方法の例示における簡明性のために、そして最も好ましい態様を記載するために、ＩＣＬのシートからの管の製作について記載する。
【００１１】
本発明のシステムの第一の態様において、貼り付け装置を利用する。貼り付けにより、管状にするＩＣＬが、管状構築体をその上で形成する主軸へ導入される。図１を参照すると、本発明の貼り付け装置が示されている。貼り付け装置（１０）は、脚（１４）の付いた基盤（１２）を含む。この基盤は、その上向き表面に（チャックの内側及び外側の間で通ずる）複数の機械加工された穴（１８）がある中空チャック（１６）と出入口（２０）を組み込む。出入口（２０）は、真空源へ接続されている。基盤（１２）の表面に沿って、そして中空チャック（１６）の一端縁に沿って、溝（２２）がある。溝（２２）は、筒状の主軸（２４）を収容し、これは弾性スリーブで覆われ、両端を主軸ホルダー（２５）により支えられる。出発材料である、ＩＣＬのような加工処理済み組織マトリックス又は再構築マトリックスのいずれかは、シート状の形態を有し、好ましくは少なくとも１つの直線エッジがあり、より好ましくは矩形である。ＩＣＬは、使用前に空気中で乾燥させる。主軸上のスリーブは、滅菌水で湿らせる。ＩＣＬを基盤の上面に置き、この材料の一端縁を主軸の中心に沿って配置する。真空源のスイッチを入れて、中空チャック（１６）の上面にある機械加工された穴（１８）を通して空気を引き込む。真空が発生するので、ＩＣＬは基盤に対して平坦及び一様に保持される。次いで、主軸ホルダー（２５）を上げることによってこの材料を主軸上のスリーブへ接触させ、ＩＣＬの一端縁だけを主軸へ接触させ、スリーブ上の水分により湿らすようにする。ＩＣＬは、湿らすと粘着性になり、主軸へ付着する。基盤における溝から主軸を持ち上げるときに主軸へ付着したままである程度まで、ＩＣＬを乾燥させる。ＩＣＬの矩形切片は、一端に沿って主軸へ付着するとき、旗に似たものになる。
【００１２】
本発明のシステムの第二の態様は、貼り付けられたＩＣＬから管を形成する装置である。図２を参照すると、本発明のローリング装置を示す。ローリング装置（５０）は、２つの対面マウント（５２）を支えるスタンド（５１）を含む。対面マウントの間を通り、それにより平行配置で支えられて、有孔管状セラミックロッド（５５）、中空チャック（５７）、及びバネ付勢されたローラ（６０）がある。セラミックロッド（５５）は、その長さに沿って内腔を有し、セラミックロッドの一端は閉じていて、他端はマウントの先まで伸びて開き、出入口として機能する。ロッドの内腔の間には水が均一に通過するように表面まで孔が連通している。セラミックロッドのレベルより上に、その内側と外側の間に通じる機械加工された穴を有する中空チャック（５７）がある。中空チャックは、ローラ（６０）に向かう面に複数の穴を有し、真空源への取付け用に一端に出入口を有する。バネ付勢されたローラ（６０）は、セラミックロッドの長さに沿って延び、ローラ（６０）と主軸（２４）上のＩＣＬの間に接触線を作り出す。それぞれのマウントにおいて、バネ付勢されたローラ（６０）は、マウントに収納されているコイルバネにより付勢される垂直ロッド（６２）の先端に接触する。垂直ロッド（６２）は、延長ロッド（６７）を通ってマウントを通過する。垂直ロッド（６２）は、延長ロッド（６７）の端とバネハウジング（６４）の間にソリッド棒（６８）を係合することによって、ローラ（６０）から離すことができる。対面マウントのそれぞれにＬ形状の溝を有するガイド部材（７０）があり、ここでガイドの上部は主軸の一端を収容するように開き、ガイドの底部は主軸をセラミックロッドに対して係合するようにそれを配置する。バネ付勢されたローラが離れるとき、ガイドは、対面マウント間に主軸を挿入するために開く。ガイドが主軸に搭載されて、バネ付勢されたローラが係合するとき、ローラは、主軸が反対側でセラミックロッドに接触するように、一方の側で主軸を押圧する。
【００１３】
主軸をガイドに搭載する前に、真空源と水源を作動させて、空気が中空チャック中の機械加工された穴を通ってチャックの内側へ引かれるように、そして水がセラミックチューブの内腔からその表面へゆっくりと通過するようにする。貼り付けられたＩＣＬの付いた主軸の両端を貼り付けられたＩＣＬの自由端の付いたガイド中に直立して置き、ローリング装置から離す。バネ付勢されたローラを主軸と反対に動かし、主軸を有孔セラミックロッドへ接触させる。次いで、主軸を回転させて、主軸の周りにＩＣＬを巻き付ける。ＩＣＬは、中空チャック（５７）からの真空によりしっかりと保持される。主軸が回転するとき、ＩＣＬの続く部分が有孔セラミックロッドに接触し、セラミックロッドから流出する水分により軽度に湿らされる。主軸は、ＩＣＬの全切片が主軸の回りで巻きつけられるまで回転する。
【００１４】
本発明の装置及び方法により製造される生物工学処理された構築体は、形が管状であり、どの長さ又は厚さへも形成することができる。構築体の長さは、本システムの装置のサイズと主軸の長さ、そして材料シートの最長寸法によってのみ制限される。構築体の厚さは、材料シートを支える主軸を回転させる回数に依存して、最終構築体が１以上の層であるように選択してよく、その限界は、本装置が処理することのできる最大の厚さである。単層構築体では、いくらかの重複部分があり、ここでは最終構築体の管状の形を維持するために結合領域が生じる。管の直径は、選択する主軸の直径により決定される。
【００１５】
管状構築体を形成するには、形成される管状構築体の最終内径を決定する直径サイズを有する主軸を選択する。主軸は、好ましくは、断面が円筒形又は長円形であり、ガラス、ステンレス鋼、セラミック、又はプラスチックで作られ、好ましくは、非反応性の医療グレード組成物(medical grade composition)である。形成される管状構築体に企図される層の数は、ＩＣＬが主軸の周りでそれ自身の上に巻き付けられる回数に対応する。ＩＣＬを巻き付けることができる回数は、加工処理済みＩＣＬシートの幅に依存する。２層の管状構築体では、シートの幅は、主軸の周りでシートを少なくとも２回巻き付けるのに十分でなければならない。同様に、主軸の長さは、その上で形成することができる管の長さを決定する。構築体を主軸上で取扱うことを容易にするために、主軸は、構築体の長さより長くあるべきであり、そのように主軸は、形成される構築体ではなく、取扱われるときに接触する。
【００１６】
主軸は、弾性スリーブとともに提供されることが好ましい。スリーブは、非反応性で、医療グレード品質であり、エラストマー材料であってよい。管状ＩＣＬ構築体を主軸表面で直接形成してもよいが、スリーブは、形成される管を主軸から外すことを促進し、ＩＣＬに付着せず、それと反応せず、そしてその上に残渣を残さないものである。形成された構築体を外すには、主軸の一端からスリーブを引き、構築体を主軸からそれと一緒に運んでよい。加工処理済みＩＣＬはスリーブへごく軽く付着して、他のＩＣＬ層に対してより付着するので、管状構築体を伸ばすこともそれへ傷をつける危険を冒すこともなく管状構築体を主軸から外すことができるので、ＩＣＬ管を製作することを容易にする。最も好ましい実施形態において、弾性スリーブは、ごく安定な飽和した中間ブロック（midblock）を有するスチレン−エチレン／ブチレン−スチレン共重合体からなる熱可塑性ゴムである、ＫＲＡＴＯＮ（登録商標）（シェルケミカル社）からなる。
【００１７】
例示として、内径４ｍｍで追加の２０％重複部分がある２層管状構築体を、約４ｍｍの直径を有する主軸上で形成する。主軸は、主軸の長さとほぼ同じ長さで、その上で形成される構築体より長い、ＫＲＡＴＯＮ（登録商標）スリーブとともに提供する。ＩＣＬのシートを、幅寸法が約２８ｍｍで長さ寸法が所望の構築体の長さに依存して変動し得るように切り取る。次いで、層流キャビネットの無菌領域において、以下の方法により、このＩＣＬをＩＣＬコラーゲン管として形成する。ＩＣＬを一端縁に沿って湿らして、スリーブで覆った主軸に沿って配置し、ＩＣＬの接着性を利用して、スリーブで覆った主軸の長さ方向に沿ってそれを「貼り付けて」、少なくとも１０分間、その状態で乾燥させる。次いで、貼り付けられたＩＣＬを水和し、主軸の周りで、そしてそれ自身の上で１回の完全回転＋円周の２０％重ね合わせ、全部で１２０％の重複部分が結合領域として機能し、しっかりした継ぎ目を提供する。ＩＣＬの粘膜側を形成される構築体の内腔とする管状構築体を得るには、ＩＣＬの粘膜側を一端に沿って湿らせて、主軸上に貼り付けて、ＩＣＬの粘膜側が主軸に向くように巻き付ける。上記の方法を使用して、ＩＣＬの粘膜側を内腔とする管状構築体を作製することができるか、あるいは、貼り付けの間にＩＣＬを適切に配向することによって、ＩＣＬの漿膜側を内腔として作製することができる。
【００１８】
単層管状構築体の形成では、ＩＣＬは、１回の完全な回転と、構築体の円周の約５％に等しい結合領域を提供するための重複部分として少なくとも約５％の追加の回転とで主軸の周りに巻き付けることができなければならない。２層構築体では、ＩＣＬは、少なくとも２回、そして好ましくは重複部分としての追加の５％〜２０％の回転とで主軸の周りに巻き付けることができなければならない。２層の巻き付けはＩＣＬ表面間に１００％の結合領域を提供するが、追加の重複部分の比率は、移植片全体で少なくとも２層を確実にする。３層構築体では、ＩＣＬは、少なくとも３回、そして好ましくは重複部分としての追加の５％〜２０％の回転とで主軸の周りに巻き付けることができなければならない。本構築体は、企図される適応により必要とされる移植片の仕様に応じて、どの数の層で調製してもよい。典型的には、管状構築体は、１０層以下、好ましくは２〜６層の間、そしてより好ましくは２又は３層で、様々な度合いの重複部分を有する。巻き付け作業の間とその後で、気泡、折れ、及びひだを材料の下と層の間から速やかに出す。
【００１９】
次いで、巻き付けられたＩＣＬの層を、スリーブで覆った主軸上に巻き付けられた配置にある間に、それらを脱水することによって一緒に結合する。理論により縛られることを望むわけではないが、マトリックス中の線維間の空間から水分が除去されるときに、コラーゲン線維のような細胞外マットリックス成分は、脱水により一緒に層状になる。脱水は、空気中、真空中、又は、アセトンやエチルアルコール若しくはイソプロピルアルコールのようなアルコールのような化学的手段により行われる。脱水は、室湿度、通常は約１０％ＲＨ〜約５０％ＲＨまで行ってよい。脱水は、ＩＣＬ層の付いた主軸を、層流キャビネットの接近気流中へ少なくとも約１時間〜２４時間まで、周囲室温、ほぼ２０℃、室湿度で置くことによって実施してよい。次いで、この時点で、巻き付けられて脱水されたＩＣＬ構築体は、スリーブを介して主軸より引き離すか、又はさらなる加工処理のためにそのままにしてよい。構築体は、再水和剤を含有する室温容器へそれらを移して、その層が分離することや薄い層へ裂けることなく少なくとも約１０〜約１５分の間再水和させることによって、水溶液、好ましくは水において再水和してよい。次いで、このように形成したコラーゲンの管状構築体を使用して、プロテーゼ、好ましくは生体再構築可能なプロテーゼを形成する。
【００２０】
次いで、この構築体は、好ましくは、架橋結合剤、好ましくはＩＣＬ材料の生体再構築可能性を保存する化学架橋結合剤にそれらを接触させることによって、一緒に架橋結合する。上記のように、脱水により、巻き付け層を一緒に架橋結合するために隣接ＩＣＬ層の細胞外マトリックス成分が一緒になり、成分間で化学結合を生じてそれにより層を一緒に結合する。あるいは、構築体は、水溶液、好ましくは水に接触させることによって架橋結合する前に、再水和剤を含有する室温容器へそれらを移して、その層が分離することや薄い層へ裂けることなく少なくとも約１０〜約１５分の間再水和させることによって、再水和させてよい。結合したプロテーゼデバイスを架橋結合することもこのデバイスに対して強度と耐久性を提供し、取扱い特性を向上させる。様々な種類の架橋結合剤が当該技術分野で知られていて、リボースや他の糖、酸化剤、及び無水物のようなものを使用してよい。好ましい架橋結合剤は、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）である。別の好ましい方法においては、Staros, J. V., Biochem, 21, 3950-3955, 1982 に記載されるように、ＥＤＣ架橋結合剤へスルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドを加える。化学架橋結合剤以外では、脱水加熱（ＤＨＴ）及び紫外線（ＵＶ）の方法のような物理的手段により、又はフィブリンベースの膠や、シアノアクリレート、ポリウレタン、酢酸ビニル、又はポリエポキシを含む医療グレード接着剤のような他の方法によって、層を一緒に結合してよい。最も好ましい方法においては、好ましくは約０．０１ｍＭ〜約１００ｍＭ、より好ましくは約０．１ｍＭ〜約１０ｍＭの間、最も好ましくは約１．０ｍＭの濃度でＥＤＣを水に溶かす。水以外では、リン酸緩衝化生理食塩水や（２−［Ｎ−モルホリノ］エタンスルホン酸）（ＭＥＳ）緩衝液を使用してＥＤＣを溶かしてもよい。さらに、この溶液へアセトンのような他の薬剤を加えたり、又は水中９９％（ｖ／ｖ）までアルコールを加えて架橋結合を調節してもよい。ＥＤＣ架橋結合溶液は、ＥＤＣが経時的にその活性を失うので、使用直前に調製する。架橋結合剤をＩＣＬへ接触させるには、水和したＩＣＬ管状構築体を浅い皿（平鍋）のような容器へ移し、架橋結合剤をその皿へ穏やかに注ぎ込み、ＩＣＬ層が覆われて自由に浮遊していること、そしてＩＣＬ構築体の層の下にも内側にも気泡が存在しないことを確実にする。皿にカバーをかけ、ＩＣＬの層を架橋結合剤で約４〜約２４時間の間処理した後で、架橋結合溶液を出して、そして廃棄する。
【００２１】
構築体をリンス剤に接触させることによって、それを皿の中で濯ぎ、残余の架橋結合剤を除去する。好ましいリンス剤は、水又は他の水溶液である。好ましくは、化学結合した構築体を等量の無菌水に３回（それぞれの濯ぎにつき約５分間）接触させることによって、十分な濯ぎを達成する。構築体を主軸から外していなければ、この時点でスリーブを引くことによって主軸から外してよい。次いで、構築体を乾燥させて、乾燥のときに、両自由端の一方から単純に引き出すことによって構築体の内腔からスリーブを外すことができる。
【００２２】
構築体を血管移植片として使用する態様において、構築体の内腔面は、形成した管の内腔へ沈積コラーゲン層又はヘパリン、又はその両方を塗布することによって、より凝塊形成性でないようにすることができる。ヘパリンは、多様なよく知られた技術によりプロテーゼへ塗布することができる。例示として、ヘパリンは、以下の３つの方法でプロテーゼへ塗布することができる。第一に、ベンザルコニウムヘパリン（ＢＡ−Ｈｅｐ）イソプロピルアルコール溶液をプロテーゼへ塗布するには、内腔に垂直に充填するか、又はプロテーゼをこの溶液に浸してからそれを空気乾燥することによる。この方法では、イオン結合したＢＡ−Ｈｅｐ複合体でコラーゲンを処理する。第二に、ＥＤＣを使用してヘパリンを活性化してから、そのヘパリンをコラーゲン線維へ共有結合させることができる。第三に、ＥＤＣを使用してコラーゲンを活性化してから、プロタミンをコラーゲンへ共有結合させ、次いでこのプロテアミンへヘパリンをイオン結合させることができる。多くの他の被覆、結合、及び付着の方法が当該技術分野でよく知られていて、それらも使用してよい。
【００２３】
以下の実施例は、本発明の実施をよりよく説明するために提供するものであり、決して本発明の範囲を制限するように解釈してはならない。当業者は、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、本明細書に記載の方法に対して様々な変更を施し得ると理解されよう。
【００２４】
実施例
実施例１：ＩＣＬ管構築体を作製する方法
層流キャビネットの無菌領域において、以下の方法によってＩＣＬからＩＣＬコラーゲン管を形成した。付着したリンパ管をＩＣＬの漿膜面より切り取る。材料から過剰な水分を吸収させるために、このＩＣＬを無菌の吸収性ペーパータオルに吸い取らせてから、有孔ポリカーボネートシート上に広げ、層流キャビネットの接近気流中で乾燥させた。乾燥したならば、ＩＣＬを、約２０％の重複部分がある２層の移植片用に２８．５ｍｍ×１０ｃｍの切片へ切断した。管の形成においてＩＣＬを支えるために、直径約４ｍｍの筒状ステンレス鋼主軸を、形成されたコラーゲン管を主軸から外すことを促進してＩＣＬへ付着することもそれと反応することもない弾性スリーブ材料である、ＫＲＡＴＯＮ（登録商標）でカバーした。
【００２５】
本発明の貼り付け装置を使用して、ＩＣＬシートの端を主軸へ接触させて付着させるために使用される。ＩＣＬの長端縁を主軸周囲のスリーブ上に滅菌水で湿らせて主軸へ付着させ、約１５分間乾燥させて「旗状体」を形成した。
【００２６】
本発明の巻き付け機を使用して、貼り付けられたＩＣＬのシートを主軸の周りに巻いてＩＣＬの管を形成した。ＩＣＬは、主軸の周りとそれ自身の上で完全に１回転巻いた。巻き付けが完了した後で、気泡、折れ、及びひだを主軸の下や層の間から出して滑らかにした。主軸と巻いた構築体を層流キャビネットの接近気流中にそのまま置いて、キャビネット中に室温、ほぼ２０℃で約１時間の間乾燥させた。
【００２７】
架橋結合した１ｍＭ  ＥＤＣ又は１０ｍＭ  ＥＤＣ／水中２５％（ｖ／ｖ）アセトンのいずれかの化学架橋結合溶液を、管につき約５０ｍＬの架橋結合溶液の容量で、架橋結合の直前に調製した。次いで、水和したＩＣＬ管をいずれかの架橋結合剤を含有する２つの筒状容器のいずれかへ移した。この容器にカバーをし、蒸気フード内で約１８±２時間の間そのまま置いて、その後で、架橋結合剤を出して廃棄した。次いで、ＩＣＬ管を滅菌水で３回（それぞれの濯ぎにつき５分間）濯いだ。
【００２８】
次いで、Ｋｒａｔｏｎスリーブを一端より主軸から引き離すことによって、架橋結合したＩＣＬ管を主軸から外した。外したらすぐに、Ｋｒａｔｏｎを含有するＩＣＬ管を層状気流フードにおいて１時間乾燥させた。乾燥したならば、スリーブを一端から引き出すことによって、それぞれのＩＣＬ管の内腔よりそれを外した。
【００２９】
共同所有される米国特許第５，４６０，９６２号（この開示はそのまま本明細書に組み込まれる）に記載の方法に従って、０．１％過酢酸において、ほぼｐＨ７．０で一晩ＩＣＬ管を滅菌した。次いで、このＩＣＬ管を滅菌水で３回（それぞれの濯ぎにつき５分間）濯いで滅菌溶液を落とした。次いで、この過酢酸滅菌されたＩＣＬコラーゲン管を層流フードにおいて乾燥させてから、移植するまで、無菌の１５ｍＬ円錐管に包装した。
【００３０】
本発明を、明確化と理解のために例示と実施例によりやや詳しく記載したが、当業者には、ある種の変更や改良が添付の特許請求の範囲内で実施し得ることが明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１は、本発明の貼り付け装置の図を示す。
【図２】図２は、本発明の巻き付け装置の側断面図を示す。
【図３】図３は、本発明の巻き付け装置の三次元図を示す。
【図１】
2005514154.tif 000003
【図２】
2005514154.tif 000004
【図３】
2005514154.tif 000005
【国際調査報告】
2005514154.tif 000006