(57)【要約】  本発明は、一般式（Ｉ）の化合物、2005514336.tif 000023およびそれらの薬学的に許容可能な塩に関し、哺乳類での、グルコース耐性障害、糖尿、高脂血症、代謝性アシドーシス、真性糖尿病、糖尿病性神経障害および腎障害ならびに真性糖尿病により引き起こされる続発症の治療への化合物の使用に関する。
2005514336.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式の化合物およびその薬学的に許容可能な塩：
【化１】
2005514336.tif 000020
式中、
Ａは、以下から選択される：
【化２】
2005514336.tif 000021
ここでＸ１は、Ｈ、またはアミノ酸残基、Ｎ−保護アミノ酸残基、ペプチド残基およびＮ−保護ペプチド残基を含むアシルもしくはオキシカルボニル基であり、
Ｘ２は、Ｈ、−（ＣＨ）ｍ−ＮＨ−Ｃ５Ｈ３Ｎ−Ｙ（ｍ＝２〜４）またはＣ５Ｈ３Ｎ−Ｙ（二価ピリジル残基）であり、かつＹは、Ｈ、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｉ、ＮＯ２またはＣＮから選択され、
Ｘ３は、Ｈ、あるいはアルキル、アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、シアノまたはカルボキシで置換されたフェニル残基から、またはアルキル、アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、シアノまたはカルボキシ残基で置換されたピリジル残基から選択され、
Ｘ４は、Ｈ、あるいはアルキル、アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、シアノまたはカルボキシで置換されたフェニル残基から、また、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、シアノまたはカルボキシ残基で置換されたピリジル残基から選択され、
Ｘ５は、Ｈ、あるいはアルキル、アルコキシまたはフェニル残基であり、
Ｘ６は、Ｈまたはアルキル残基であり、
ｎ＝１に関して、
Ｘは、Ｈ、ＯＲ２、ＳＲ２、ＮＲ２Ｒ３、Ｎ＋Ｒ２Ｒ３Ｒ４から選択される：
ここで、Ｒ２は、アルキル、シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール残基で      置換されていてもよいアシル残基、あるいはアミノ酸残基またはペプチド残基、あるいはアルキル、シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール残基で置換されていてもよいアルキル残基を表し、
Ｒ３は、アルキルまたはアシル残基を表し、ここでＲ２およびＲ３は、飽和または不飽和炭素環式もしくは複素環式の一部であってもよく、
Ｒ４は、アルキル残基を表し、ここでＲ２およびＲ４またはＲ３およびＲ４は、飽和または不飽和炭素環式もしくは複素環式の一部であってもよい）
ｎ＝０に関して、
Ｘは、以下から選択される：
【化３】
2005514336.tif 000022
ここで、Ｂは、Ｏ、Ｓ、ＮＲ５（ここで、Ｒ５は、Ｈ、アルキルまたはアシルである）を表し、
Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｙ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｕ，ＶおよびＷは独立して、アルキルおよび置換されたアルキル残基、オキシアルキル、チオアルキル、アミノアルキル、カルボニルアルキル、アシル、カルバモイル、アリールおよびヘテロアリール残基である）
Ｚは、Ｈ、あるいはＣ１〜Ｃ９の分岐もしくは直鎖アルキル残基、Ｃ２〜Ｃ９の分岐しくは直鎖アルケニル残基、Ｃ３〜Ｃ８のシクロアルキル残基、Ｃ５〜Ｃ７のシクロアルケニル残基、アリールまたはヘテロアリール残基、あるいはすべての天然アミノ酸もしくはそれらの誘導体のすべての側鎖から選択される側鎖から選択される。
【請求項２】
２−メチルカルボニル−１−Ｎ［（Ｌ）−アラニル−（Ｌ）−バリニル］−（２Ｓ）−ピロリジンヒドロブロミド；２−メチルカルボニル−１−Ｎ［（Ｌ）−バリニル−（Ｌ）−プロリル−（Ｌ）−バリニル］−（２Ｓ）−ピロリジンヒドロブロミド；２−［（アセチル−オキシ−メチル）カルボニル］−１−Ｎ［（Ｌ）−アラニル−（Ｌ）−バリニル］−（２Ｓ）−ピロリジンヒドロブロミド；２−［ベンゾイル−オキシ−メチル）カルボニル］−１−Ｎ−［｛（Ｌ）−アラニル｝−（Ｌ）−バリニル］−（２Ｓ）−ピロリジンヒドロブロミド；２−｛［（２，６−ジクロロベンジル）チオメチル］カルボニル｝−１−Ｎ−［｛（Ｌ）−アラニル｝−（Ｌ）−バリニル］−（２Ｓ）−ピロリジン；２−［ベンゾイル−オキシ−メチル）カルボニル］−１−Ｎ−［グリシル−（Ｌ）−バリニル］−（２Ｓ）−ピロリジンヒドロブロミド；２−［（［１，３］−チアゾール−２−イル）カルボニル］−１−Ｎ−［｛（Ｌ）−アラニル｝−（Ｌ）−バリニル］−（２Ｓ）−ピロリジントリフルオロアセテート；２−［（ベンゾチアゾール−２−イル）カルボニル］−１−Ｎ−［Ｎ−｛（Ｌ）−アラニル｝−（Ｌ）−バリニル］−（２Ｓ）−ピロリジントリフルオロアセテート；２−［（ベンゾチアゾール−２−イル）カルボニル］−１−Ｎ−［｛（Ｌ）−アラニル｝−グリシル］−（２Ｓ）−ピロリジントリフルオロアセテート；２−［（ピリジン−２−イル）カルボニル］−１−Ｎ−［Ｎ−｛（Ｌ）−アラニル｝−（Ｌ）−バリニル］−（２Ｓ）−ピロリジントリフルオロアセテートからなる群より選ばれる、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
必要に応じ従来の(customary)キャリアまたは賦形剤と組み合わせて、請求項１または２のいずれか１項に記載の少なくとも１種の化合物を含むことを特徴とする、非経口、経腸、または経口投与用薬学的組成物。
【請求項４】
ＤＰＩＶまたは／およびＤＰＩＶ様酵素のｉｎ  ｖｉｖｏ阻害用薬物の調製のための、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物または薬学的組成物の使用。
【請求項５】
哺乳類のＤＰＩＶ活性の調節により治療することができる哺乳類の疾患の治療用薬物の調製のための、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物または薬学的組成物の使用。
【請求項６】
ヒトにおける代謝性疾患の治療のための、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
グルコース耐性障害、糖尿、高脂血症、代謝性アシドーシス、真性糖尿病、糖尿病性神経障害および腎障害、ならびに真性糖尿病により引き起こされる続発症、神経変性疾患、ならびにランゲルハンス島の細胞でのシグナル作用の障害、および哺乳類の食後期の末梢組織でのインスリン感受性の治療のための、請求項５または６に記載の使用。
【請求項８】
哺乳類での、代謝関連高血圧および高血圧により引き起こされる心血管系続発症の治療のための、請求項５または６に記載の使用。
【請求項９】
皮膚疾患および粘膜の疾患、自己免疫疾患、および炎症状態の予防または治療のための、請求項５または６に記載の使用。
【請求項１０】
心身性疾病、慢性神経精神医学的疾病、および抑鬱性の疾病（例えば、不安、抑欝、睡眠障害、慢性疲労、統合失調症、てんかん、栄養障害、痙攣、および慢性的痛みなど）の治療のための、請求項５または６に記載の使用。
【請求項１１】
ヒトにおける慢性代謝性疾患の慢性治療のための、請求項５または６に記載の使用。
【請求項１２】
慢性的グルコース耐性障害、慢性糖尿、慢性高脂血症、慢性代謝性アシドーシス、慢性真性糖尿病、慢性糖尿病性神経障害および腎障害、ならびに真性糖尿病により引き起こされる慢性続発症、慢性神経変性疾患、ならびにランゲルハンス島の細胞でのシグナル作用の慢性障害および哺乳類の食後期の末梢組織での慢性インスリン感受性の慢性治療のための、請求項５または６に記載の使用。
【請求項１３】
哺乳類での、慢性代謝関連高血圧および慢性高血圧により引き起こされる慢性心血管系続発症の慢性治療のための、請求項５または６に記載の使用。
【請求項１４】
慢性心身性疾病、慢性神経精神医学的疾病、および抑鬱性の疾病（例えば、慢性不安、慢性抑欝、慢性睡眠障害、慢性疲労、慢性統合失調症、慢性てんかん、慢性栄養障害、痙攣、および慢性的痛みなど）の慢性治療のための、請求項５または６に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、本明細書中以下ペプチジルケトンと称されるペプチジルケトンおよびその塩に、およびＤＰＩＶまたは／およびＤＰＩＶ様酵素をｉｎ  ｖｉｖｏ阻害するための薬物調製への該化合物の使用に関する。
【０００２】
本発明は、特に、哺乳類におけるグルコース耐性障害、糖尿、高脂血症、代謝性アシドーシス、真性糖尿病、糖尿病性神経障害および腎障害の、および真性糖尿病により引き起こされる続発症の治療用、哺乳類における、代謝関連高血圧のおよび高血圧により引き起こされる心血管系続発症の治療用、皮膚疾患および粘膜の疾患、自己免疫疾患、および炎症状態の予防または治療用、ならびに心身性、神経精神医学的、および抑鬱性の疾病（不安、抑欝、睡眠障害、慢性疲労、統合失調症、てんかん、栄養障害、痙攣、および慢性的痛みなど）の治療用の、薬物調製への該化合物の使用に関する。
【０００３】
ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＩＶ）は、腎臓、肝臓、および腸を含む様々な組織で見いだされるプロリン後（より少ない程度で、アラニン後、セリン後またはグリシン後）切断性セリンプロテアーゼであり、それは、プロリンまたはアラニンがその配列中Ｎ末端アミノ酸と隣接して残基を生成している場合に、生物活性なペプチドのＮ末端から高い特異性でジペプチドを除去する。
【０００４】
ＤＰＩＶ様酵素という用語は、構造的および／または機能的にＤＰＩＶ／ＣＤ２６に関連した酵素タンパク質に関する(Sedo & Malik, ジペプチジルペプチダーゼＩＶ様分子：相同タンパク質または相同活性？(Dipeptidyl peptidase IV-like molecules: homologous protein or homologous activities?) Biochimica et Biophysica Acta 2001, 36506: 1-10)。本質的に、酵素のこの小群は、オリゴまたはポリペプチドのＮ末端からＨ−Ｘａａ−ＰｒｏジペプチドおよびＨ−Ｘａａ−Ａｌａジペプチドを放出するように進化中に進化されてきた。ＤＰＩＶ様酵素は、Ｐｒｏ位置にＡｌａ、Ｓｅｒ、ＴｈｒおよびＧｌｙまたはＶａｌのような小さな疎水性側鎖を有する他のアミノ酸をも収容するという共通の特徴を示す。加水分解効率は、Ｐｒｏ＞Ａｌａ＞＞Ｓｅｒ、Ｔｈｒ＞＞Ｇｌｙ、Ｖａｌと並べられる。同じタンパク質は、Ｐｒｏ後またはＡｌａ後切断を確立させることができるような少量で利用可能であるに過ぎなかった。タンパク質：ＤＰＩＶ、ＤＰ  ＩＩ、ＦＡＰα（セプラーゼ）、ＤＰ６、ＤＰ８およびＤＰ９は、構造的に関連し、かつ高い配列相同性を示す一方で、アトラクチンは、類似の活性および阻害パターンを特徴とする強烈な機能的ＤＰＩＶ様酵素である。
【０００５】
さらに、ＤＰＩＶ様酵素は、ＷＯ０１／１９８６６号、ＷＯ０２／３４９００号およびＷＯ０２／３１１３４号に開示されている。ＷＯ０１／１９８６６号は、ＤＰＩＶおよび線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に対して構造的および機能的類似性を有する新規ヒトジペプチジルアミノペプチダーゼ８（ＤＰＰ８）を開示している。ＷＯ０２／３４９００号は、ＤＰＩＶおよびＤＰＰ８のアミノ酸配列と有意な相同性を有する新規ジペプチジルペプチダーゼ９（ＤＰＰ９）を開示している。ＷＯ０２／３１１３４号は、３つのＤＰＩＶ様酵素、すなわちＤＰＲＰ１、ＤＰＲＰ２およびＤＰＲＰ３を開示している。配列解析により、ＤＰＲＰ１はＷＯ０１／１９８６６号に開示されているＤＰＰ８と同一であり、ＤＰＲＰ２はＤＰＰ９と同一であり、ＤＰＲＰ３はＷＯ０２／０４６１０号に開示されているＫＩＡＡ１４９２と同一であることが明らかとなった。
【０００６】
同様に、ＤＰＩＶは、グルカゴン様ペプチド-１（ＧＬＰ-１）およびグルコース依存性インスリン向性ペプチド（胃抑制性ペプチド（ＧＩＰ）としても既知である）の不活性化の原因であることが発見されている。ＧＬＰ-１は膵インスリン分泌の主要な刺激剤であり、かつグルコース処理に直接有益な効果を有することから、ＷＯ９７／４０８３２号および米国特許第６，３０３，６６１号において、ＤＰＩＶおよびＤＰＩＶ様酵素活性の阻害が非インスリン依存性真性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）の治療の魅力的アプローチを代表するものであることが示された。
【０００７】
ｉｎ ｖｉｖｏでそのような基質を切断するそのようなＤＰＩＶおよびＤＰＩＶ様酵素活性の減少は、実験室条件下および哺乳類の病理学的状態での両方で、効果的に望ましくない酵素活性を抑制するために使用し得る。例えば、ＩＩ型真性糖尿病（高齢の糖尿病もまた）は、とりわけタンパク質分解性で決定されるインクレチン濃度の異常にもとづく、インスリン分泌の減少または受容体機能の障害に基づく。
【０００８】
高血糖ならびにそれにともなう原因および続発症（真性糖尿病もまた）は、当該技術分野の現在の状況に従って、インスリン（例えば、ウシ膵臓から単離された材料、または同じく遺伝子操作により得られた材料）をこれらの患者（affected）へ、様々な投与形態で投与することにより治療される。全ての以前から既知の方法、およびより最近の方法もまた、材料への高い出費、高コストにより、およびしばしば患者の生活の質の重大な低下により、特徴付けられる。古典的方法（３０代からの常習的な毎日の静脈内へのインスリン注射、）は、疾患の急性症状を治療するが、長期使用後、とりわけ重篤な血管変化（動脈硬化）および神経損傷を招く。
【０００９】
ＤＰＩＶ阻害剤は、グルコース耐性障害および真性糖尿病の治療に有用である可能性があることが示されている（国際特許出願公開公報ＷＯ９９／６１４３１号、Pederson RA et al, Diabetes, 47 (8), pp.1253-8 (1998 Aug)、およびPauly RP et al, Metabolism, 48 (3), pp.385-9 (1999 Mar)）。特に、ＷＯ９９／６１４３１号は、アミノ酸残基およびチアゾリジンまたはピロリジン基を含むＤＰＩＶ阻害剤、ならびにその塩、特にＬ-トレオ-イソロイシルチアゾリジン、Ｌ-アロ-イソロイシルチアゾリジン、Ｌ-トレオ-イソロイシルピロリジン、Ｌ-アロ-イソロイシルチアゾリジン、Ｌ-アロ-イソロイシルピロリジン、およびそれらの塩を開示する。
【００１０】
また、低分子量ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害剤の例は、テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキサミド誘導体、Ｎ−置換２−シアノピロールおよびピロリジン、Ｎ−（Ｎ’−置換グリシル）−２−シアノピロリジン、Ｎ−（置換グリシル）−チアゾリジン、Ｎ−（置換グリシル）−４−シアノチアゾリジン、アミノ−アシル−ボロノ−プロリル阻害剤、シクロプロピル融合ピロリジンである。ジペプチジルペプチダーゼＩＶの阻害剤についてはＵＳ６，０１１，１５５号、ＵＳ６，１０７，３１７号、ＵＳ６，１１０，９４９号、ＵＳ６，１２４，３０５号、ＵＳ６，１７２，０８１号、ＷＯ９９／６１４３１号、ＷＯ９９／６７２７８号、ＷＯ９９／６７２７９号、ＤＥ１９８  ３４  ５９１号、ＷＯ９７／４０８３２号、ＤＥ  １９６  １６  ４８６  Ｃ２号、ＷＯ９８／１９９９８号、ＷＯ００／０７６１７号、ＷＯ９９／３８５０１号、ＷＯ９９／４６２７２号、ＷＯ９９／３８５０１号、ＷＯ０１／６８６０３号、ＷＯ０１／４０１８０号、ＷＯ０１／８１３３７号、ＷＯ０１／８１３０４号、ＷＯ０１／５５１０５号、ＷＯ０２／０２５６０号およびＷＯ０２／１４２７１号に記載されており、これらの教示は、阻害剤、それらの使用、定義、およびそれらの生産についての全体が参照により本明細書に援用される。
【００１１】
さらに最近では、皮下デポインプラントの設置（インスリンは定量で放出されるので、毎日の注射が必要ない）ならびに機能障害性膵腺および他の器官および組織への無処置のランゲルハンス細胞の埋没（移植）が、提案されている。そのような移植は、技術的観点から複雑である。そのうえさらに、それはレシピエントへの危険な外科的介入を意味し、そして細胞移植の場合、免疫系の抑制またはバイパス法も必要とする。
【００１２】
それゆえ、本発明の課題は、例えば、哺乳類におけるグルコース耐性障害、糖尿、高脂血症、代謝性アシドーシス、真性糖尿病、糖尿病性神経障害および腎障害の、および真性糖尿病により引き起こされる続発症の治療用、哺乳類における、代謝関連高血圧のおよび高血圧により引き起こされる心血管系続発症の治療用、皮膚疾患および粘膜の疾患、自己免疫疾患、および炎症状態の予防または治療用、ならびに心身性、神経精神医学的、および抑鬱性の疾病（例えば、不安、抑欝、睡眠障害、慢性疲労、統合失調症、てんかん、栄養障害、痙攣、および慢性的痛みなど）の治療用の新しい化合物及びこれらの疾患の簡単な治療方法を提供することである。
【００１３】
その問題は、一般式１の化合物およびその薬学的に許容可能な塩（それらのすべての立体異性体およびその薬学的に許容可能な塩を含む）を提供することにより、本発明によって解決される。
【００１４】
【化４】
2005514336.tif 000003
ここでＡは、以下の構造から選択され、
【００１５】
【化５】
2005514336.tif 000004
ここでＸ１は、Ｈ、またはアミノ酸残基、Ｎ−保護アミノ酸残基、ペプチド残基およびＮ−保護ペプチド残を含むアシルもしくはオキシカルボニル基であり、
Ｘ２は、Ｈ、−（ＣＨ）ｍ−ＮＨ−Ｃ５Ｈ３Ｎ−Ｙ（ｍ＝２〜４）またはＣ５Ｈ３Ｎ−Ｙ（二価ピリジル残基）であり、かつＹは、Ｈ、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｉ、ＮＯ２またはＣＮから選択され、
Ｘ３は、Ｈ、あるいはアルキル、アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、シアノまたはカルボキシで置換されたフェニル残基から、またはアルキル、アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、シアノまたはカルボキシ残基で置換されたピリジル残基から選択され、
Ｘ４は、Ｈ、あるいはアルキル、アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、シアノまたはカルボキシで置換されたフェニル残基から、また、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、シアノまたはカルボキシ残基で置換されたピリジル残基から選択され、
Ｘ５は、Ｈ、あるいはアルキル、アルコキシまたはフェニル残基であり、
Ｘ６は、Ｈまたはアルキル残基であり、
ｎ＝１に関して、
Ｘは、Ｈ、ＯＲ２、ＳＲ２、ＮＲ２Ｒ３、Ｎ＋Ｒ２Ｒ３Ｒ４から選択される：
ここで、Ｒ２は、アルキル、シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール残基で      置換されていてもよいアシル残基、あるいはアミノ酸残基またはペプチド残基、あるいはアルキル、シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール残基で置換されていてもよいアルキル残基を表し、
Ｒ３は、アルキルまたはアシル残基を表し、ここでＲ２およびＲ３は、飽和または不飽和炭素環式もしくは複素環式の一部であってもよく、
Ｒ４は、アルキル残基を表し、ここでＲ２およびＲ４またはＲ３およびＲ４は、飽和または不飽和炭素環式もしくは複素環式の一部であってもよい
ｎ＝０に関して、  Ｘは、以下から選択され、
【００１６】
【化６】
2005514336.tif 000005
ここで、Ｂは、Ｏ、Ｓ、ＮＲ５（ここで、Ｒ５は、Ｈ、アルキルまたはアシルである）を表し、
Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｙ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｕ，ＶおよびＷは独立して、アルキルおよび置換されたアルキル残基、オキシアルキル、チオアルキル、アミノアルキル、カルボニルアルキル、アシル、カルバモイル、アリールおよびヘテロアリール残基である
Ｚは、Ｈ、あるいはＣ１〜Ｃ９の分岐もしくは直鎖アルキル残基、Ｃ２〜Ｃ９の分岐しくは直鎖アルケニル残基、Ｃ３〜Ｃ８のシクロアルキル残基、Ｃ５〜Ｃ７のシクロアルケニル残基、アリールまたはヘテロアリール残基、あるいはすべての天然アミノ酸もしくはそれらの誘導体のすべての側鎖から選択される側鎖から選択される。
【００１７】
式１の好ましい化合物では、
Ａは、以下であり、
【００１８】
【化７】
2005514336.tif 000006
（式中、
Ｘ１は、Ｈ、あるいはアミノ酸残基、Ｎ−アシル化アミノ酸残基、ジ〜ペンタペプチドである−ペプチド残基、好ましくはジペプチド残基、またはジ〜ペンタペプチドであるＮ−保護ペプチド残基、好ましくはＮ−保護ジペプチド残基を含むアシルもしくはオキシカルボニル基であり、
Ｘ２は、Ｈ、−（ＣＨ）ｍ−ＮＨ−Ｃ５Ｈ３Ｎ−Ｙ（ｍ＝２〜４）またはＣ５Ｈ３Ｎ−Ｙ（二価ピリジル残基）であり、かつＹは、Ｈ、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｉ、ＮＯ２またはＣＮから選択され、
ｎ＝１に関して、
Ｘは好ましくはＨ、ＯＲ２、ＳＲ２、ＮＲ２Ｒ３から選択され、ここで、
Ｒ２は、アルキル、シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール残基で置換されていてもよいアシル残基、あるいはアミノ酸残基またはペプチド残基、あるいはアルキル、シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール残基で置換されていてもよいアルキル残基を表し、
Ｒ３は、アルキルおよびアシル残基を表し、ここでＲ２およびＲ３は、飽和または不飽和炭素環もしくは複素環式の一部であってもよく、
ｎ＝０に関して、
Ｘは、好ましくは以下から選択され、
【００１９】
【化８】
2005514336.tif 000007
式中、
Ｂは、Ｏ、Ｓ、ＮＲ５（ここで、Ｒ５は、Ｈ、アルキルまたはアシルである）を表し、
Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｙ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，およびＱは独立して、アルキルおよび置換アルキル残基、オキシアルキル、チオアルキル、アミノアルキル、カルボニルアルキル、アシル、カルバモイル、アリールおよびヘテロアリール残基から選択される、
Ｚは、Ｈ、あるいはＣ１〜Ｃ９（好ましくはＣ２〜Ｃ６）の分岐もしくは直鎖アルキル残基、Ｃ２〜Ｃ９の分岐もしくは直鎖アルケニル残基、Ｃ３〜Ｃ８のシクロアルキル残基、Ｃ５〜Ｃ７のシクロアルケニル残基、アリールまたはヘテロアリール残基、あるいはすべての天然アミノ酸もしくはそれらの誘導体のすべての側鎖から選択される側鎖から選択される）
である。
【００２０】
式１のさらに好ましい化合物では、
Ａは、以下であり、
【００２１】
【化９】
2005514336.tif 000008
式中、
Ｘ１は、Ｈであるか、あるいはアミノ酸残基、Ｎ−アシル化アミノ酸残基、ジ〜ペンタペプチドである−ペプチド残基、好ましくはジペプチド残基、またはジ〜ペンタペプチドであるＮ−保護ペプチド残基、好ましくはＮ−保護ジペプチド残基を含むアシルもしくはオキシカルボニル基であり、
ｎ＝１に関して、
Ｘは好ましくは、Ｈ、ＯＲ２、ＳＲ２から選択され、ここで、
Ｒ２は、アルキルまたはアリル残基で置換されていてもよいアシル残基を表し、
ｎ＝０に関して、
Ｘは、以下から選択され、
【００２２】
【化１０】
2005514336.tif 000009
式中、
Ｂは、Ｏ、ＳまたはＮＲ５（ここで、Ｒ５は、Ｈ、アルキルまたはアシルである）を表し、
Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｙ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，およびＱは独立して、アルキルおよび置換アルキル残基、オキシアルキル、チオアルキル、アミノアルキル、カルボニルアルキル、アシル、カルバモイル、アリールおよびヘテロアリール残基である、
Ｚは、Ｈ、あるいはＣ１〜Ｃ９（好ましくはＣ２〜Ｃ６）の分岐もしくは直鎖アルキル残基、Ｃ２〜Ｃ９の分岐もしくは直鎖アルケニル残基、Ｃ３〜Ｃ８のシクロアルキル残基、Ｃ５〜Ｃ７のシクロアルケニル残基、アリールまたはヘテロアリール残基、あるいはすべての天然アミノ酸もしくはそれらの誘導体のすべての側鎖から選択される側鎖から選択される）
である。
【００２３】
式１の最も好ましい化合物では、Ａは、以下であり、
【００２４】
【化１１】
2005514336.tif 000010
式中、
Ｘ１は、Ｈ、あるいは前末端位置にＰｒｏまたはＡｌａを有するアミノ酸残基、Ｎ−アシル化アミノ酸残基またはジペプチド残基を含む、または前末端位置にＰｒｏまたはＡｌａを有するＮ−保護ジペプチド残基を含むアシルまたはオキシカルボニル基で、であり、
ｎ＝１に関して、
ＸはＨであり
ｎ＝０に関して、
Ｘは好ましくは以下から選択され、
【００２５】
【化１２】
2005514336.tif 000011
式中、
Ｂは、ＯまたはＳ、最も好ましくはＳを表し、
Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｙ，Ｋ，Ｌ，Ｍ，ＱはＨであり、
Ｚは、Ｈ、あるいはＣ３〜Ｃ５の分岐もしくは直鎖アルキル残基、Ｃ２〜Ｃ９の分岐もしくは直鎖アルケニル残基、Ｃ５〜Ｃ７のシクロアルキル残基、Ｃ５〜Ｃ７のシクロアルケニル残基、アリールまたはヘテロアリール残基、あるいはすべての天然アミノ酸もしくはそれらの誘導体のすべての側鎖から選択される側鎖から選択される。
Ｚに対して最も好ましいのはＨである。
【００２６】
好ましい実施形態によれば、アシル基はＣ１〜Ｃ６アシル基である。
【００２７】
さらに好ましい実施形態によれば、アルキル基はＣ１〜Ｃ６アルキル基であり、これは分岐していても分岐していなくてもよい。
【００２８】
さらに好ましい実施形態によれば、アルコキシ基はＣ１〜Ｃ６アルコキシ基である。
【００２９】
さらに好ましい実施形態によれば、アリール残基はＣ５〜Ｃ１２アリール残基であり、これは縮合環であってもよい。
【００３０】
さらに好ましい実施形態によれば、シクロアルキル残基（炭素環）はＣ３〜Ｃ８シクロアルキル残基である。
【００３１】
さらに好ましい実施形態によれば、ヘテロアリール残基はＣ４〜Ｃ１１アリール残基であり、これは縮合環であってもよく、そして少なくとも１つの環において、さらに１個〜４個、好ましくは１個または２個のヘテロ原子（Ｏ、Ｎおよび／またはＳなど）を有する。
【００３２】
さらに好ましい実施形態によれば、ペプチド残基は２個〜５０個のアミノ酸を含む対応する残基である。
【００３３】
さらに好ましい実施形態によれば、複素環残基はＣ２〜Ｃ７シクロアルキルラジカルであり、これはさらに１個〜４個、好ましくは１個または２個のヘテロ原子（Ｏ、Ｎおよび／またはＳなど）を有する。
【００３４】
さらに好ましい実施形態によれば、カルボキシ基はＣ１〜Ｃ６カルボキシ基であり、これは分岐していても分岐していなくてもよい。
【００３５】
さらに好ましい実施形態によれば、オキシカルボニル基は式-Ｏ-（ＣＨ２）１-６ＣＯＯＨの基である。
【００３６】
アミノ酸は天然または合成アミノ酸であってもよいが天然α−アミノ酸であることが好ましい。
【００３７】
本発明で使用することができるアミノ酸例は、ＬおよびＤ−アミノ酸、Ｎ−メチル−アミノ酸、ＩｌｅおよびＴｈｒのアロおよびトレオ形態であり、例えば、α−アミノ酸、β−アミノ酸またはω−アミノ酸であり得て、それらのうちα−アミノ酸が好ましい。
【００３８】
アミノ酸の例としては、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アルギニン（Ａｒｇ）、リシン（Ｌｙｓ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、グリシン（Ｇｌｙ）、セリン（Ｓｅｒ）、およびシステイン（Ｃｙｓ）；スレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、チロシン（Ｔｙｒ），アラニン（Ａｌａ），プロリン（Ｐｒｏ）、バリン（Ｖａｌ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）、β−アラニン（β−Ａｌａ）、２−アミノオクタン酸（Ａｏａ）、アゼチジン−（２）−カルボン酸（Ａｃｅ）、ピペコリン酸（Ｐｉｐ）、３−アミノプロピオン酸、４−アミノ酪酸等、α−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、サルコシン（Ｓａｒ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、ホモアルギニン（Ｈａｒ）、ｔ−ブチルアラニン（ｔ−ブチル−Ａｌａ）、ｔ−ブチルグリシン（ｔ−ブチル−Ｇｌｙ）、Ｎ−メチルイソロイシン（Ｎ−Ｍｅｌｌｅ）、フェニルグリシン（Ｐｈｇ）、シクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、システイン酸（Ｃｙａ）、およびメチオニンスルホキシド（ＭＳＯ）、アセチル−Ｌｙｓ；ホスホリル−セリン（Ｓｅｒ（Ｐ））、ベンジル−セリン（Ｓｅｒ（Ｂｚｌ））、およびホスホリル−チロシン（Ｔｙｒ（Ｐ））等の変性アミノ酸；２−アミノ酪酸（Ａｂｕ）、アミノエチルシステイン（ＡＥＣｙｓ）、カルボキシメチルシステイン（Ｃｍｃ）、デヒドロアラニン（Ｄｈａ）、デヒドロアミノ−２−酪酸（Ｄｈｂ）、カルボキシグルタミン酸（Ｇｌａ）、ホモセリン（Ｈｓｅ）、ヒドロキシリシン（Ｈｙｌ）、シス−ヒドロキシプロリン（ｃｉｓＨｙｐ）、トランス−ヒドロキシプロリン（トランスＨｙｐ）、イソバリン（Ｉｖａ）、ピログルタミン酸（Ｐｙｒ）、ノルバリン（Ｎｖａ）、２−アミノ安息香酸（２−Ａｂｚ）、３−アミノ安息香酸（３−Ａｂｚ）、４−アミノ安息香酸（４−Ａｂｚ）、４−（アミノメチル）安息香酸（Ａｍｂ）、４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボン酸（４−Ａｍｃ）、ペニシラミン（Ｐｅｎ）、２−アミノ−４−シアノ酪酸（Ｃｂａ）、シクロアルカン−カルボン酸、が挙げられる。
【００３９】
ω−アミノ酸としては、例えば５−Ａｒａ（アミノライリン酸(aminoraleric acid)）、６−Ａｈｘ（アミノヘキサン酸）、８−Ａｏｃ（アミノオクタン酸）、９−Ａｎｃ（アミノバン酸）、１０−Ａｄｃ（アミノデカン酸）、１１−Ａｕｎ（アミノウンデカン酸）、および１２−Ａｄｏ（アミノドデカン酸）が挙げられる。
【００４０】
他のアミノ酸としては、インダニルグリシン（Ｉｇｌ）、インドリン−２−カルボン酸（Ｉｄｃ）、オクタヒドロインドール−２−カルボン酸（Ｏｉｃ）、ジアミノプロピオン酸（Ｄｐｒ）、ジアミノ酪酸（Ｄｂｕ）、ナフチルアラニン（１−Ｎａｌ）、（２−Ｎａｌ）、４−アミノフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−ＮＨ２））、４−ベンゾイルフェニルアラニン（Ｂｐａ）、ジフェニルアラニン（Ｄｉｐ）、４−ブロモフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−Ｂｒ））、２−クロロフェニルアラニン（（Ｐｈｅ（２−Ｃｌ））、３−クロロフェニルアラニン（（Ｐｈｅ（３−Ｃｌ））、４−クロロフェニルアラニン（（Ｐｈｅ（４−Ｃｌ））、３，４−クロロフェニルアラニン（（Ｐｈｅ（３，４−Ｃｌ２））、３−フルオロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（３−Ｆ））、４−フルオロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−Ｆ））、３，４−フルオロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（３，４−Ｆ２））、ペンタフルオロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（Ｆ５））、４−グアニジノフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−グアニジノ））、ホモフェニルアラニン（ｈＰｈｅ）、３−ヨードフェニルアラニン（Ｐｈｅ（３−Ｉ））、４−ヨードフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−Ｉ）、４−メチルフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−Ｍｅ））、４−ニトロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−ＮＯ２））、ビフェニルアラニン（Ｂｉｐ）、４−ホスホノメチルフェニルアラニン（Ｐｍｐ）、シクロヘキシグリシン（Ｇｈｇ）、３−ピリジニルアラニン（３−Ｐａｌ）、４−ピリジニルアラニン（４−Ｐａｌ）、３，４−デヒドロプロリン（Ａ−Ｐｒｏ）、４−ケトプロリン（Ｐｒｏ（４−Ｋｅｔｏ））、チオプロリン（Ｔｈｚ）、イソニペコチン酸（Ｉｎｐ）、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸（Ｔｉｃ）、プロパルギルグリシン（Ｐｒａ）、６−ヒドロキシノルロイシン（ＮＵ（６−ＯＨ））、ホモチロシン（ｈＴｙｒ）、３−ヨードチロシン（Ｔｙｒ（３−Ｉ））、３，５−ジヨードチロシン（Ｔｙｒ（３，５−Ｉ２））、ジ−メチル−チロシン（Ｔｙｒ（Ｍｅ））、３−ＮＯ２−チロシン（Ｔｙｒ（３−ＮＯ２））、ホスホチロジン（Ｔｙｒ（ＰＯ３Ｈ２））、アルキルグリシン、１−アミノインダン−１−カルボン酸、２−アミノインダン−２−カルボン酸（Ａｉｃ）、４−アミノ−メチルピロール−２−カルボン酸（Ｐｙ）、４−アミノ−ピロリジン−２−カルボン酸（Ａｂｐｃ）、２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（Ａｔｃ）、ジアミノ酢酸（Ｇｌｙ（ＮＨ２））、ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソイノール−カルボン酸（Ｄｉｓｃ）、ホモシクロヘキシルアラニン（ｈＣｈａ）、ホモフェニルアラニン（ｈＰｈｅ  または  Ｈｏｆ）、トランス−３−フェニル−アゼチジン−２−カルボン酸、４−フェニル−ピロリジン−２−カルボン酸、５−フェニル−ピロリジン−２−カルボン酸、３−ピリジルアラニン（３−Ｐｙａ）、４−ピリジルアラニン（４−Ｐｙａ）、スチリルアラニン、テトラヒドロイソキノリン−１−カルボン酸（Ｔｉｑ）、１，２，３，４−テトラヒドロノルハルメイン−３−カルボン酸（Ｔｐｉ）、およびβ−（２−チエニル）−アラニン（Ｔｈａ）が挙げられる。
【００４１】
これらの化合物の哺乳類への投与‐好適には経口‐において、例えば、内因性（または追加して外因的に投与された）インスリン向性ペプチドＧＩＰ１-４２およびＧＬＰ-１７-３６（またはＧＬＰ-１７-３７もしくはその類似体）は、ＤＰＩＶまたはＤＰＩＶ様酵素により、より低次に分解され、したがってこれらのペプチドホルモンおよびその類似体の濃度減少が、減少されるかまたは遅延される。それゆえ、本発明は、血流でのＤＰＩＶまたはＤＰＩＶ様酵素活性の減少が血糖レベルへの影響をもたらすという発見に基づく。
【００４２】
本発明の高親和性低分子量の酵素阻害剤の経口投与は、例えば、病理症状の治療における観血外科手術技法に対して、よりコスト効果のある代替法である。安定性、輸送、およびクリアランス性の化学的設計により、それらの作用方法は変更され、そして個々の特徴に合わせられ得る。
【００４３】
本発明の化合物の塩は、基本的性質を保持していれば、無機でも有機でもよい。
【００４４】
本発明の化合物は、酸付加塩、特に薬学的に許容可能な酸付加塩に変換して、使用することができる。薬学的に許容可能な塩は概して、塩基性側鎖が無機塩または有機塩でプロトン化された形態をとる。代表的な有機塩または無機塩としては、塩化水素酸、臭化水素酸、過塩素酸、硫酸、硝酸、リン酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、シュウ酸、パモ酸(pamoic acid)、２−ナフタレンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクロヘキサンスルファミン酸、サリチル酸、サッカリン酸またはトリフルオロ酢酸が挙げられる。本発明の化合物の薬学的に許容可能な酸付加塩形態はすべて、本発明の範囲により包含されると意図される。
【００４５】
遊離化合物とそれらの塩の形態の化合物との間の密接な関係を考慮すれば、化合物が本文において言及される場合はいつでも、相当する塩がその状況下で可能または適切であればそれもまた意図される。
【００４６】
本発明による化合物が少なくとも１つのキラル中心を有する場合、本発明による化合物はしたがって、エナンチオマーとして存在し得る。本発明による化合物が２つ以上のキラル中心を保有する場合、化合物はさらにジアステレオマーとして存在し得る。かかる異性体およびそれらの混合物はすべて本発明の範囲内に包含されることが理解されよう。さらに、化合物の幾つかの結晶形態が多形として存在してもよく、その場合それらは本発明に包含されることが意図される。さらに、化合物の幾つかは、水（すなわち、水和物）または一般的な有機溶媒と溶媒和物を生成してもよく、かかる溶媒和物もまた本発明の範囲内に包含されることが意図される。
【００４７】
化合物（それらの塩を含む）はまた、それらの水和物の形態で得ることができ、あるいはそれらの結晶化に使用した他の溶媒を含むことができる。
【００４８】
したがって、本発明は、エフェクター、特にジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＩＶ）およびＤＰＩＶ様酵素活性の阻害剤、ならびに哺乳類の血清中で高血糖に特徴的なグルコース濃度未満に血糖レベルを低下させるための阻害剤の使用に関する。本発明は、特に、哺乳類の病理学的代謝異常（例えば、哺乳類における、グルコース耐性障害、糖尿、高脂血症、代謝性アシドーシス、真性糖尿病、糖尿病性神経障害および腎障害、ならびに真性糖尿病により引き起こされる続発症など）を予防または軽減するために、ＤＰＩＶおよびＤＰＩＶ様酵素活性を調節するために本発明の化合物を使用することに関する。本発明はさらに、神経変性障害および高血圧を予防または軽減するために、ＤＰＩＶおよびＤＰＩＶ様酵素活性を調節するために本発明の化合物を使用することに関する。本発明の化合物の慢性投与の場合、本発明は、ランゲルハンス島の細胞でのシグナル作用および食後期の末梢組織でのインスリン感受性の改善に関する。
【００４９】
本発明はさらに、ヒトにおける慢性代謝性疾患の慢性治療；慢性的グルコース耐性障害、慢性糖尿、慢性高脂血症、慢性代謝性アシドーシス、慢性真性糖尿病、慢性糖尿病性神経障害および腎障害、ならびに真性糖尿病により引き起こされる慢性続発症、慢性神経変性疾患、ならびにランゲルハンス島の細胞でのシグナル作用の慢性障害および哺乳類の食後期の末梢組織での慢性インスリン感受性の慢性治療；哺乳類での、慢性代謝関連高血圧および高血圧により引き起こされる慢性心血管系続発症の慢性治療；慢性心身性、慢性神経精神医学的、および抑鬱性の疾病（例えば、慢性不安、慢性抑欝、慢性睡眠障害、慢性疲労、慢性統合失調症、慢性てんかん、慢性栄養障害、痙攣、および慢性的痛みなど）の慢性治療のために、本発明の化合物を使用することに関する。
【００５０】
本発明の化合物は、ＤＰＩＶ阻害剤のプロドラッグとして作用する。本発明に従って、化合物は、エフェクターとして、特にＤＰＩＶおよびＤＰＩＶ様酵素の阻害剤として使用され得、かつそれらの作用部位、それらの作用開始時間、および作用時間を詳細に規定することが可能である。
【００５１】
本発明のかかる化合物の投与では、例えば好適な酵素によって切断されて、活性な阻害剤が放出される。活性な阻害剤は、化学および酵素機構の両方により放出されうる。例えば、エステラーゼ、プロテアーゼおよびペプチダーゼは、本発明による化合物から活性な阻害剤を放出するように作用する。このようなエステラーゼ、プロテアーゼ等は、例えばＷＯ９７／４５１１７号、ＵＳ５４３３９５５号、ＵＳ５６１４３７９号およびＵＳ５６２４８９４号に開示されている。好ましいプロテアーゼは、アミノペプチダーゼ、ジペプチジルアミノペプチダーゼ、エンドプロテアーゼおよびエンドペプチダーゼである。本発明の化合物からの活性な阻害剤の放出に特に好ましいプロテアーゼは、アミノペプチダーゼＮ、アミノペプチダーゼＰ、ピログルタミニルアミノペプチダーゼ、ジペプチジルペプチダーゼＩＶおよびジペプチジルペプチダーゼＩＶ様酵素である。
【００５２】
放出された活性阻害剤は、ＤＰＩＶおよびＤＰＩＶ様酵素と相互作用し得る。直接の結果として、例えば、上記に記載されるインスリン向性ペプチドがより低次のものに分解され、それによりインスリンの有効性が増加する。
【００５３】
不安定なＤＰＩＶ阻害剤それ自体の投与は不利益を有する、なぜならそれらはｉｎ  ｖｉｖｏで非常に迅速に分解され、したがって特にヒト身体での、阻害剤の均一配布は不可能だからである。特に、経口投与の際、そのような阻害剤はあまりに不安定であるため、実質上作用しない。したがって特に真性糖尿病の治療には今まで、安定な阻害剤が使用されてきた。
【００５４】
本発明は、不安定阻害剤をプロドラッグ形態にマスキングすることにより、それらを安定化させるという考えを用いる。
【００５５】
本発明による活性阻害剤の性質は、プロドラッグからＤＰＩＶ阻害剤が放出された後のそれらの不活化時間（例えば分子内環化による）が規定可能であるような方法で設計され得る。
【００５６】
詳細には、本発明による化合物は、ＤＰＩＶおよびＤＰＩＶ様酵素の活性阻害剤が個々の患者の必要に応じて放出されるという利点を有する。
【００５７】
本発明による化合物がＤＰＩＶ分子またはアミノペプチダーゼＮ分子と相互作用する時、化合物はこれらの酵素により開裂して活性阻害剤が放出される。活性阻害剤は、規定された時間の間ＤＰＩＶ自身が本発明の化合物をさらに開裂することができないように、ＤＰＩＶおよび／またはＤＰＩＶ様酵素を阻害するだろう。残存する化合物は、この規定された時間の間分解されず、したがって、ＤＰＩＶ分子またはアミノペプチダーゼＮ分子の濃度が再び上昇するか、または活性阻害剤分子が排除もしくは不活化されるまで、阻害剤貯蔵所を構成する。
【００５８】
本発明は、各生物がＤＰＩＶ分子のその量（これはそれぞれの生物の身体に存在する）を阻害するために必要である活性阻害剤のまさにその量を放出するというさらなる利点を有する。
【００５９】
したがって、本発明はセリンプロテアーゼジペプチジルペプチダーゼＩＶまたはＤＰＩＶ様酵素の不安定な阻害剤の新規化合物に関し、これは様々な障害、特に真性糖尿病に伴う代謝障害の治療に使用され得る。
【００６０】
驚くべきことに、そのようなマスキング阻害剤はそのうえ、非マスキング阻害剤よりもさらに顕著に有効である：同一量の非マスキングＤＰＩＶ阻害剤および本発明による化合物が使用される場合、本発明による化合物は糖尿病Ｚｕｃｋｅｒラットでグルコース耐性に著しい改善をもたらす。
【００６１】
本発明による化合物は、小腸（intenstine）の粘膜を通じて、遅れることなく、例えば、栄養摂取と同時に、輸送される。
【００６２】
そのうえ、活性ＤＰＩＶ阻害剤が放出される作用部位もまた、それらの構造により制御され得る。
【００６３】
要約すると、本発明の化合物を使用すると、全く驚くべきことに、以下の事項が可能であることが明言され得る：
１．阻害剤の作用の増大を達成すること、
２．患者の必要性に応じて活性な阻害剤を放出すること、
３．時間的に制御された方法で活性な阻害剤を放出すること、
４．部位特異的方法で活性な阻害剤を放出すること、および
５．ＤＰＩＶ阻害剤の貯蔵所を提供すること。
【００６４】
上述のように、本発明の化合物、ならびにそれらの相当する薬学的に許容可能な酸付加塩形態は、ＤＰＩＶおよびＤＰＩＶ様酵素活性を阻害するのに有用である。本発明の化合物、ならびにそれらの相当する薬学的に許容可能な酸付加塩形態のＤＰＩＶおよびＤＰＩＶ様酵素活性を阻害する能力は、実施例２および実施例３に記載するように、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＫｉ値およびＩＣ５０値測定のためのＤＰＩＶ活性アッセイを用いて実証され得る。
【００６５】
本発明およびそれらの相当する薬学的に許容可能な酸付加塩形態の化合物のｉｎ  ｖｉｖｏでＤＰＩＶを阻害する能力は、実施例６に記載するように、Ｗｉｓｔａｒラットへの経口または血管内投与により実証され得る。本発明の化合物は、Ｗｉｓｔａｒラットへの経口投与および血管内投与両方の後に、ｉｎ  ｖｉｖｏでＤＰＩＶ活性を阻害する。
【００６６】
ＤＰＩＶは、多種多様の哺乳類器官および組織、例えば腸の刷子縁(Gutschmidt, S., et al., "In situ"- measurements of protein contents in the brush border region along rat jejunal villi and their correlations with four enzyme activities, Histochemistry, 72(3), pp.467-79 (1981))、外分泌上皮、肝細胞、腎細管、内皮、筋線維芽細胞(Feller, A.C., et al., “A monoclonal antibody detecting dipeptidylpeptidase IV in human tissue”, Virchows Arch. A. Pathol. Anat. Histopathol., 409(2), pp.263-73 (1986))、神経細胞、ある特定の表面上皮（例えば、ファローピウス管、子宮および精嚢腺）の外面膜、例えば精嚢腺上皮の管腔細胞質における外側膜、およびブルンナー腺の粘液細胞における外側膜(Hartel, S., et al., “Dipeptidyl peptidase (DPP) IV in rat organs. Comparison of immunohistochemistry and activity histochemistry, Histochemistry, 89 (2), pp.151-61 (1988))、生殖器官（例えば、精巣上体尾および膨大部、精嚢およびそれらの分泌物(Agrawal & Vanha-Perttula, “Dipeptidyl peptidases in bovine reproductive organs and secretions, Int. J. Androl., 9(6), pp.435-52 (1986))に存在する。ヒト血清では、２つの分子形態のジペプチジルペプチダーゼが存在する(Krepela, E., et al., “Demonstration of two molecular forms of dipeptidyl peptidase IV in normal human serum“ Physiol. Bohemoslov., 32(6), pp.486-96 (1983))。血清中の高分子量形態のＤＰＩＶは、活性化Ｔ細胞の表面上で発現される(Duke-Cohan, J.S., et al., “Serum high molecular weight dipeptidyl peptidase IV(CD26) is similar to a novel antigen DPPT-L released from activated T cells“ J. Immunol., 156(5), pp.1714-21 (1996))。
【００６７】
本発明の化合物、ならびにそれらの相当する薬学的に許容可能な酸付加塩形態は、ｉｎ  ｖｉｖｏでＤＰＩＶを阻害することができる。本発明の一実施形態では、すべての哺乳類組織および器官由来のＤＰＩＶのすべての分子形態、相同体およびエピトープ、ならびにこれらのうちでまだ発見されていないものも、本発明の範囲に包含されると意図される。
【００６８】
プロリン特異的プロテアーゼの希少群の中で、ＤＰＩＶはもともとポリペプチド鎖のアミノ末端にある末端から２番目の残基としてプロリンに特異的な唯一の膜結合酵素であると考えられていた。しかしながら、ＤＰＩＶと構造的に非相同的であっても、相当する酵素活性を有する他の分子が最近同定された。今日までに同定されているＤＰＩＶ様酵素は、例えば、線維芽細胞活性化タンパク質α、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ  β、ジペプチジルアミノペプチダーゼ様タンパク質、Ｎ−アセチル化α−結合酸性ジペプチダーゼ、静止細胞プロリンジペプチダーゼ、ジペプチジルペプチダーゼＩＩ、アトラクチンおよびジペプチジルペプチダーゼＩＶ関連タンパク質（ＤＰＰ８）であり、Sedo & Malikによる総論に記載されている(Sedo & Malik,“Dipeptidyl peptidase IV-like molecules: homologous proteins or homologous activities?”, Biochimica et Biophysica Acta, 36506, pp.1-10 (2001))。さらに、ＤＰＩＶ様酵素は、ＷＯ０１／１９８６６号、ＷＯ０２／３４９００号およびＷＯ０２／３１１３４に開示されている。ＷＯ０１／１９８６６号は、ＤＰＩＶおよび線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に対して構造的および機能的類似性を有する新規ヒトジペプチジルアミノペプチダーゼ８（ＤＰＰ８）を開示している。ＷＯ０２／３４９００号は、ＤＰＩＶおよびＤＰＰ８のアミノ酸配列に有意な相同性を有する新規ジペプチジルペプチダーゼ９（ＤＰＰ９）を開示している。ＷＯ０２／３１１３４号は、３つのＤＰＩＶ様酵素、すなわちＤＰＲＰ１、ＤＰＲＰ２およびＤＰＲＰ３を開示している。
【００６９】
本発明の別の好適な実施形態において、全ての哺乳類組織および器官からの、ＤＰＩＶ様酵素活性を含むタンパク質の全ての分子型、相同体およびエピトープ、ならびに未だ発見されていないものもまた、本発明の範囲に包含されることが意図される。
【００７０】
本発明の化合物、およびそれらの対応する薬学的に許容可能な酸付加塩型のＤＰＩＶ様酵素を阻害する能力は、実施例４に記載されるとおり、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＫｉ値を決定する酵素活性アッセイを用いることで実証され得る。
【００７１】
別の実施形態において、本発明の化合物、およびそれらの対応する薬学的に許容可能な酸付加塩型は、非ＤＰＩＶおよび非ＤＰＩＶ様プロリン特異的酵素に対して阻害活性があったとしても、低くしか有さない。したがって実施例５を参照。
【００７２】
ＤＰＩＶおよびＤＰＩＶ様酵素活性を阻害するそれらの能力の点から見て、本発明の化合物、およびそれらの対応する薬学的に許容可能な酸付加塩型は、上記酵素活性により媒介される状態を治療するのに有用である。本発明の実施例に、および文献に記載される発見に基づいて、本明細書中に開示される化合物が、免疫障害、自己免疫障害、または発作、腫瘍、虚血、パーキンソン病および片頭痛からなる群より選択される中枢神経系障害などの状態の治療に有用であることが示され得る。
【００７３】
本発明のさらに好適な実施形態において、本発明の化合物、およびそれらの対応する薬学的に許容可能な酸付加塩型は、経口グルコースチャレンジに反応して上昇した血液グルコースレベルを低減させることによりグルコース耐性を改善し、したがって、非インスリン依存性真性糖尿病の治療に有用である。本発明の化合物、およびそれらの対応する薬学的に許容可能な酸付加塩型の、経口グルコースチャレンジに反応してグルコース耐性を改善する能力は、糖尿病Ｚｕｃｋｅｒラットで測定することが可能である。この方法は実施例７で記載される。
【００７４】
したがって、本発明は、それを必要としている被検体でＤＰＩＶまたはＤＰＩＶ様酵素活性の調節により媒介される状態の予防法または治療法を提供し、これは本発明の化合物またはそれらの薬学的組成物のいずれかを、状態を治療するのに薬学的に有効な量および投薬レジメンで投与することを含む。さらに、本発明は、被検体のＤＰＩＶ活性の調節により媒介される状態の予防または治療のための薬物の調製への、本発明の化合物、およびそれらの対応する薬学的に許容可能な酸付加塩型の使用を含む。化合物は、任意の従来の投与経路により患者へ投与され得、静脈内、経口、皮下、筋肉内、皮内、非経口、およびそれらの組合せを含むが、これらに限定されない。
【００７５】
実施態様のさらに好適な形態において、本発明は、少なくとも１種の本発明の化合物またはその塩を、随意に１種または複数の薬学的に許容可能なキャリアおよび／または溶媒と組み合わせて含む薬学的組成物、すなわち薬物に関する。
【００７６】
薬学的組成物は、例えば、非経口または経腸処方の形態であるか、または適切なキャリアを含んでもよく、あるいはそれらは経口投与に適した適切なキャリアを含み得る経口処方の形態であってもよい。好ましくは、それらは経口処方の形態である。
【００７７】
薬学的組成物は、さらに１種または複数のそれ自体既知の、活性成分であり得る低血糖作用のある成分を含んでもよい。
【００７８】
本発明に従って投与されるＤＰＩＶおよびＤＰＩＶ様酵素のエフェクターは、阻害剤として、または阻害剤、基質、偽基質、ＤＰＩＶ発現阻害剤、哺乳類のＤＰＩＶおよびＤＰＩＶ様タンパク質濃度を減少させるそれらの酵素タンパク質の結合蛋白質または抗体と組み合わせて、薬学的に投与可能な処方または処方複合物に用いられ得る。本発明の化合物は、治療を患者および疾患に個別に合わせることを可能にし、特に、個々の不耐性、アレルギー、および副作用を回避することが可能になる。
【００７９】
本発明の化合物はまた、異なる度合いの活性を時間の関数として示す。それにより、治療を行う医者は、患者の個別の状況に異なる対応をする機会を与えられる。彼は、一方では作用開始までの時間を、もう一方では作用の持続時間を、そして特に作用強度を正確に調整することができる。
【００８０】
本発明による方法は特に、哺乳類の血清中の上昇した血液グルコース濃度を減少させる新規アプローチを表す。これは、単純で、商業的に応用しやすく、かつ哺乳類での、および特にヒト医薬での、特に、平均を上回る血液グルコース値、神経変性障害または高血圧に基づく疾患の治療に使用するのに適している。
【００８１】
化合物は、例えば、先行技術で既知の希釈剤、賦形剤および／またはキャリアのような通常の添加物と組み合わせて活性成分を含む薬学的調製物の形態で投与される。例えば、それらは、非経口で（例えば、生理食塩水溶液にいれて静脈内に）、または経腸で（例えば、グルコースなどの通常のキャリアと配合されて経口で）投与される。
【００８２】
それらの内在安定性およびそれらのバイオアベイラビリティに依存して、血液グルコース値の所望の正常化を達成するために、１日１回または複数回本発明の化合物が与えられ得る。例えば、ヒトでのそのような投薬量は、１日当たり化合物０．０１ｍｇ〜２５０．０ｍｇの範囲、好ましくは体重１キログラムあたり０．０１ｍｇ〜１００ｍｇの範囲が可能である。
【００８３】
ジペプチジルペプチダーゼＩＶおよびＤＰＩＶ様酵素活性のエフェクターを哺乳類の血中に投与することにより、付随する一時的な活性減少がもとで、内因性（または追加的に外因的に投与された）インスリン向性ペプチドである胃阻害性ポリペプチド１-４２（ＧＩＰ１-４２）およびグルカゴン様ペプチドアミド-１  ７-３６（ＧＬＰ-１７-３６）（または他のＧＬＰ-１７-３７あるいはその類似体）は、結果として、ＤＰＩＶまたはＤＰＩＶ様酵素により、より低次に分解され、したがってこれらのペプチドホルモンおよびその類似体の濃度減少が、減少されるかまたは遅延されることが見いだされている。（内因性または外因的に補充された）インクレチンまたはそれらの類似体の安定性の増加は、ＤＰＩＶエフェクターの作用がもとで達成され、そしてそれらが大量に利用可能になるので膵臓のランゲルハンス細胞のインクレチン受容体のインスリン向性刺激が変化し、とりわけ身体自身のインスリンの有効性を変更させ、それとともに治療される被検体の炭水化物代謝の刺激をもたらす。
【００８４】
結果として、血糖レベルは、治療される被検体の血清で高血糖に特徴的なグルコース濃度未満に下がる。したがって、代謝異常（哺乳類における、グルコース耐性障害、糖尿、高脂血症、代謝性アシドーシス、真性糖尿病、糖尿病性神経障害、および腎障害、ならびに真性糖尿病により引き起こされる続発症など）、哺乳類における、代謝関連高血圧および高血圧により引き起こされる心血管系続発症、皮膚疾患および粘膜の疾患、自己免疫疾患、高血圧および炎症状態、ならびに心身性、神経精神医学的、および抑鬱性の疾病（不安、抑欝、睡眠障害、慢性疲労、統合失調症、てんかん、栄養障害、痙攣、および慢性的痛みなど）を予防または軽減することが可能になる。
【００８５】
様々な抗糖尿病薬の血糖減少作用を向上させるために、様々な経口活性抗糖尿病薬の組合せがしばしば用いられる。本発明の化合物の抗高血糖作用は、他の既知の経口投与可能な抗糖尿病薬と独立して作用するので、本発明の活性成分は、所望の血糖正常効果を達成するため、適切な生薬形態で、組合せ治療に使用するのに同じように適する。
【００８６】
したがって、本発明に従って使用される化合物は、不活性で、無毒性の、薬学的に適したキャリアおよび添加物または溶媒を使用して、それ自身既知である方法で、従来の処方（例えば、錠剤、カプセル剤、ドラジェ、丸剤、坐剤、顆粒、エーロゾル、シロップ、液体、固体、およびクリーム様乳濁液および懸濁液、ならびに溶液など）に変換され得る。これらの処方のそれぞれにおいて、治療上有効な化合物は、好ましくは、全混合物の約０．１重量％〜８０重量％、好ましくは１重量％〜５０重量％、の濃度で、換言すれば、得られるべき前述の服用量範囲に対して十分な量で、存在する。
【００８７】
本発明に従って使用される化合物は胃腸管の粘膜によって良好に吸収されるので、多くの生薬調製物に使用され得る。
【００８８】
本物質（substances）は、ドラジェ、カプセル剤、咀嚼可能な（bitable）カプセル剤、錠剤、ドロップ、シロップの形態の薬物として、または坐剤としてもしくは鼻スプレーとしても使用され得る。
【００８９】
配合物は、例えば、随意に乳化剤および／または分散剤を使用して、活性成分を溶媒および／またはキャリアで薄めることにより調製され、例えば、水が希釈剤として使用される場合、有機溶媒を補助溶媒として随意に使用することが可能である。
【００９０】
例を挙げると、賦形剤として水、無毒性有機溶媒、例えばパラフィン（例えば、天然油のフラクション）、植物油（例えば、菜種油、落花生油、ゴマ油）、アルコール（例えば、エチルアルコール、グリセロール）、グリコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）など、固体キャリアとして、例えば、天然の粉末鉱物（例えば、高分散シリカ、ケイ酸塩）、糖類（例えば、原料糖、ラクトース、およびブドウ糖）など、乳化剤として、非イオン性およびアニオン性乳化剤（例えば、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪アルコールエーテル、スルホン酸アルキル、およびスルホン酸アリール）など、分散剤（例えば、リグニン、亜硫酸液（sulphite liquors）、メチルセルロース、デンプン、およびポリビニルピロリドン）、および潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルカム、ステアリン酸、およびラウリル硫酸ナトリウム）、ならびに随意に風味剤があり得る。
【００９１】
投与は、通常の方法で、好ましくは経腸でまたは非経口で、特に経口で、行われる。経腸投与の場合、錠剤は、上述のキャリアに加えて、さらなる添加物（クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、およびリン酸カルシウムなど）を、様々な添加物（デンプン、好ましくはジャガイモデンプン、ゼラチンなど）と一緒に含んでもよい。そのうえさらに、潤滑剤（ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、およびタルカムなど）が、錠剤化に同時に使用され得る。経口投与用の水性懸濁液および／またはエリキシル剤の場合、上記の賦形剤に加えて、様々な風味改善剤（taste correctives）または着色料が、活性成分に加えられ得る。
【００９２】
非経口投与の場合、適した液体キャリアを用いた活性成分溶液が使用され得る。一般に、静脈内投与の場合、有効な結果を得るために１日当たり体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ〜２．０ｍｇ、好ましくは約０．０１ｍｇ〜１．０ｍｇの量を、および経腸投与の場合、１日当たり体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ〜２ｍｇ、好ましくは約０．０１ｍｇ〜１ｍｇの投薬量を投与することが有利であることが見いだされている。
【００９３】
それにもかかわらず、場合によっては、実験動物または患者の体重によって、または投与径路の型によって、それだけでなく動物の種、および薬物もしくは投与が行われる間隔に対するそれらの個々の反応に基づいて、上述の量から外れることが必要になることもある。したがって、場合によっては、上記の最少量よりも少ない量を使用することで十分なこともあるが、一方、他の場合では上述の上限を超えなければならないだろう。比較的大量が投与される場合、一日の中で、そのような量を数回に分割して服用することが賢明かもしれない。ヒト医薬での投与について、同じ服用量範囲が提供される。その場合に上記の記載は同様に適用される。
【実施例】
【００９４】
薬学的処方の実施例
１．１カプセル当たり１００ｍｇの本発明の化合物を含有するカプセル剤：
約１０，０００カプセル剤用に、以下の組成の溶液を調製する。
本発明の化合物        １．０ｋｇ
グリセロール          ０．５ｋｇ
ポリエチレングリコール３．０ｋｇ
水                    ０．５ｋｇ
５．０ｋｇ
溶液を、それ自身既知である方法で、柔らかいゼラチンカプセルに導入する。このカプセル剤は、咀嚼（chewing）または嚥下に適している。
２．１００ｍｇの本発明の化合物を含有する錠剤もしくは被覆錠剤（tables）または糖衣錠（ドラジェ）：
以下の量は、１００，０００個の錠剤の調製を示す。
本発明の化合物、微粉末１０．０ｋｇ
グルコース            ４．３５ｋｇ
ラクトース            ４．３５ｋｇ
デンプン              ４．５０ｋｇ
セルロース、微粉末    ４．５０ｋｇ
上記の成分を混合し、次いで
ポリビニルピロリドン２．０ｋｇ
ポリソルベート      ０．１ｋｇ
および水          約５．０ｋｇ
から調製した溶液を加え、公知の方法で湿った塊をすりおろして０．２ｋｇのステアリン酸マグネシウムを加えてからをれを乾燥させることにより、顆粒化する。３０．０ｋｇの出来上がった錠剤混合物を加工処理して、３００ｍｇの重さの凸面錠剤を生成する。錠剤は、それ自体が既知である方法で被覆または糖衣され得る。
本発明の実施例
実施例４：ペプチジルケトンの合成
【００９５】
【化１３】
2005514336.tif 000012
Ｈ-Ｖａｌ-Ｐｒｏ-ＯＭｅ＊ＨＣｌ  ２
Ｂｏｃ-Ｖａｌ-ＯＨ（３．００ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）を１０ｍｌの乾燥ＴＨＦに溶解し、１５℃に冷却した。混合物に、ＣＡＩＢＥ（１．８０ｍｌ、１３．８ｍｍｏｌ）およびＮＭＭ（１．５２ｍｌ、１３．８ｍｍｏｌ）を加え、そして混合無水物の生成が完了するまで溶液を攪拌した。次いで、混合物を-１０℃にし、そしてＮＭＭ（１．５２ｍｌ、１３．８ｍｍｏｌ）を加え、続いてＨ-Ｐｒｏ-ＯＭｅ＊ＨＣｌ（２．２９ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温まで昇温させて一晩放置した。
【００９６】
溶媒の除去および通常の後処理後、得られたエステル１をさらに特性決定することなく用いた。
【００９７】
１をＨＣｌ／ＨＯＡｃ（５ｍｌ、６Ｎ）に溶解し、そしてＢｏｃ基の除去が完了するまで０℃に置いた。次いで、溶媒を除去し、そして得られる油状物をジエチルエーテルで処理して白色固体２を得た。
収率：２．５ｇ、８０％
Ｚ-Ｖａｌ-Ｐｒｏ-ＯＭｅ  ３
Ｚ-Ｖａｌ-ＯＨ（３．５ｇ、１３．９ｍｍｏｌ）およびＨ-Ｐｒｏ-ＯＭｅ＊ＨＣｌ（２．１４ｇ、１３．９ｍｍｏｌ）を、上記の１についてと同じ方法で処理して、３を白色固体として得た。
収率：３．７６ｇ、８０％
Ｚ-Ｖａｌ-Ｐｒｏ-ＯＨ  ４
３（３．７６ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）を３０ｍｌの水／アセトン（体積比１／５）に溶解し、１１．４ｍｌのＮａＯＨ（１Ｎ）を加えた。反応完了後、蒸発により有機溶媒を除去し、得られる溶液を１５ｍｌのＮａＨＣＯ３溶液（飽和）で希釈した。次いで、混合物を１０ｍｌの酢酸エチルエステルで３回抽出した。その後、溶液にＨＣｌ（１５％水溶液）を加えてｐＨ２にした。得られる混合物を３０ｍｌの酢酸エチルエステルで３回抽出した。有機層を分離し、そしてブラインで３回洗い、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、そして蒸発させた。
収率：３．２５ｇ、９０％
Ｚ-Ａｌａ−Ｖａｌ-Ｐｒｏ-ＯＭｅ  ５
Ｚ-Ａｌａ-ＯＨ（３．５ｇ、１５．７ｍｍｏｌ）および２（４．１８ｇ、１５．７ｍｍｏｌ）を、上記の１についてと同じ方法で処理して、３を白色固体として得た。
収率：４．２ｇ、６４％
Ｚ-Ａｌａ-Ｐｒｏ−Ｖａｌ-Ｐｒｏ-ＯＭｅ  ６
４（３．７６ｇ、１０．０８ｍｍｏｌ）および２（２．１９ｇ、１０．０８ｍｍｏｌ）を、上記の１についてと同じ方法で処理して、６を白色固体として得た。
収率：４．２１ｇ、７０％
Ｚ-Ｇｌｙ−Ｖａｌ-Ｐｒｏ-ＯＭｅ  ７
Ｚ−Ｇｌｙ−ＯＨ（１．５５ｇ、７．４５ｍｍｏｌ）および２（１．５１ｇ、７．４５ｍｍｏｌ）を、上記の１についてと同じ方法で処理して、７を油状物として得た。
収率：２．９９ｇ、９６％
Ｂｏｃ-Ａｌａ−Ｖａｌ-Ｐｒｏ-ＯＭｅ  ８
Ｂｏｃ  Ａｌａ（１．２９ｇ、６．８０ｍｍｏｌ）および２（１．８０ｇ、６．８０ｍｍｏｌ）を、上記の１についてと同じ方法で処理して、８を白色固体として得た。
収率：２．２４ｇ、８３．１％
Ｚ-Ａｌａ−Ｖａｌ-Ｐｒｏ-ＯＨ  ９
５（４．１５ｇ、９．６ｍｍｏｌ）を、上記の４についてと同じ方法で処理して、７を白色固体として得た。
収率：３．５ｇ、８７％
Ｚ-Ｖａｌ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ-Ｐｒｏ−ＯＨ  １０
６（４．２１ｇ、７．５ｍｍｏｌ）を、上記の４についてと同じ方法で処理して、７を白色固体として得た。
収率：３．８９ｇ、９５％
Ｚ-Ｇｌｙ-Ｖａｌ-Ｐｒｏ-ＯＨ  １１
７（２．９９ｇ、７．１５ｍｍｏｌ）を、上記の４についてと同じ方法で処理して、７を白色固体として得た。
収率：１．８８ｇ、６５％
Ｂｏｃ-Ａｌａ-Ｖａｌ-Ｐｒｏ-ＯＨ  １２
８（１ｇ、２．５０ｍｍｏｌ）を、上記の４についてと同じ方法で処理して、７を白色固体として得た。
収率：０．８８ｇ、８９．１％
Ｚ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＣＨ２−Ｂｒ  １３
９（２．００ｇ、４．７６ｍｍｏｌ）を、１５ｍｌの乾燥ＴＨＦに溶解し、ＣＡＩＢＥ（０．６２３ｍｌ、４．７６ｍｍｏｌ）およびＮＭＭ（０．５２５ｍｌ、４．７６ｍｍｏｌ）を用いて混合無水物（化合物１を参照のこと）に変換した。生成した沈殿を濾別して、-１５℃に冷却した。次いで、アルゴン雰囲気下、ジアゾメタン（３０ｍｌのエーテル中２３．８ｍｍｏｌ）を溶液に滴下した。混合物を０℃で１時間放置した後、１．２７ｍｌのＨＢｒ（ＡｃＯＨ中３３％）を加え、溶液を室温で３０分間攪拌した。その後、７０ｍｌのエーテルを加え、そして混合物を２０ｍｌの水で洗った。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、そして蒸発させた。
収率（粗）：１．８ｇ、８０％
Ｚ-Ａｌａ-Ｖａｌ-Ｐｒｏ-ＣＨ２−Ｃｌ  １４
９（１．０２ｇ、２．４３ｍｍｏｌ）を、上記の１３について述べたように、ＣＡＩＢＥ（０．３１５ｍｌ、２．４３ｍｍｏｌ）、ＮＭＭ（０．２６７ｍｌ、２．４３ｍｍｏｌ）、ジアゾメタン（１６ｍｌのエーテル中に１２．２ｍｍｏｌ）、およびジオキサン（７．６Ｍ）中のＨＣｌ５ｍｌを用いて、処理した。
収率（粗）：１ｇ、９１％
Ｚ-Ｖａｌ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ-Ｐｒｏ-ＣＨ２−Ｃｌ  １５
１０（１．１ｇ、２．０１ｍｍｏｌ）を、上記の１３について述べたように、ＣＡＩＢＥ（０．２６３ｍｌ、２．０１ｍｍｏｌ）、ＮＭＭ（０．２２３ｍｌ、２．０２ｍｍｏｌ）、ジアゾメタン（１３．３ｍｌのエーテル中に１０ｍｍｏｌ）、およびジオキサン（７．６Ｍ）中のＨＣｌ５ｍｌを用いて、処理した。
収率（粗）：１．１ｇ、９５％
Ｚ-Ｇｌｙ-Ｖａｌ-Ｐｒｏ-ＣＨ２−Ｂｒ  １６
１１（２．０４ｇ、５．０５ｍｍｏｌ）を、上記の１３について述べたように、ＣＡＩＢＥ（０．６５６ｍｌ、５．０５ｍｍｏｌ）、ＮＭＭ（０．５５６ｍｌ、５．０５ｍｍｏｌ）、ジアゾメタン（１３．３ｍｌのエーテル中に１０ｍｍｏｌ）、およびジオキサン（７．６Ｍ）中のＨＣｌ５ｍｌを用いて、処理した。
収率（粗）：２．１０ｇ、９０．４％
Ｂｏｃ-Ａｌａ-Ｖａｌ-Ｐｒｏ-ＣＨ２Ｂｒ  １７
１２（０．８８ｇ、２．２８ｍｍｏｌ）を、上記の１３について述べたように、ＣＡＩＢＥ（２．２８ｍｍｏｌ、０．３７ｍｌ）、ＮＭＭ（２．２８ｍｌ、０．３１ｍｍｏｌ）、ジアゾメタン（１５ｍｌのエーテル中に１４．３ｍｍｏｌ）、およびＨＢｒ／氷酢酸（３３％）：４．２４ｍｍｏｌ、１．０４ｍｌを用いて、処理した。
収率：０．８８ｇ、８３．４％
Ｚ−保護メチルケトン
Ａ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＣＨ３  １８
１４（１ｇ、２．２１ｍｍｏｌ）を、５．３０ｍｌの温酢酸に溶解し、撹拌溶液に１．３３ｇの亜鉛末を少しずつ分けて加えた。２４時間後、残っている固体を濾別し、そしてろ液を蒸発させた。残った油状物を酢酸エチル中に取り、ＮａＨＣＯ３およびブラインで２回洗った。次いで、有機層を乾燥し蒸発させて、ヘプタン／クロロホルム／メタノールの勾配を用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。
収率：０．２３０ｇ、２４．８％
Ｚ-Ｖａｌ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ-Ｐｒｏ-ＣＨ３  １９
１５（１．１ｇ、１．９１ｍｍｏｌ）を、上記の１８について述べたように、酢酸（５．３ｍｌ）および亜鉛（１．３１ｇ）を用いて、処理した。
収率：０．１９０ｇ、１６％
Ｎ−保護アシルオキシメチレンケトン
酸（２当量）をＤＭＦ中に溶解して、等量のＫＦを添加した。懸濁液を室温で１時間攪拌した。次に、ブロムメチレン（１当量）成分を添加して、溶液を一晩攪拌放置した。その後、溶媒を真空下で除去して、得られた油状物質をクロロホルム中に溶解して、ブラインで洗浄した。続いて、有機層を分離して、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を除去した。シリカゲルおよびヘプタン／クロロホルムを用いたカラムクロマトグラフィにより生成物を精製した。
Ｚ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＣＨ２Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３  ２０
酢酸（２３０μｌ、４．０２ｍｍｏｌ）、ＫＦ（０．２３４ｇ、４．０２ｍｍｏｌ）、１３（１．００ｇ、２．０１ｍｍｏｌ）
収率：０．３５１ｇ、３６％
Ｚ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＣＨ２Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｐｈ  ２１
安息香酸（０．２７５ｇ、２．２５ｍｍｏｌ）、ＫＦ（０．１３１ｍｇ、２．２５ｍｍｏｌ）、１３（０．５６ｇ、１．１３ｍｍｏｌ）
収率：０．３４ｇ、５６％
Ｂｏｃ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ジクロロフェニル  ２２
ジクロロベンジルメルカプタン（０．３０ｍｌ、２．０９ｍｍｏｌ）、ＫＦ（０．２５０ｇ、４．１９ｍｍｏｌ）、１７（０．８８ｇ、１．９ｍｍｏｌ）
収率：０．５６ｇ、５１％
Ｚ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＣＨ２Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｐｈ  ２３
安息香酸（１．１９ｇ、９．７８ｍｍｏｌ）、ＫＦ（０．５６８ｇ、９．７８ｍｍｏｌ）、１６：（２．３５ｇ、４．８９ｍｍｏｌ）
収率：０．８９ｇ、３４．８％
脱保護
方法Ａ
Ｚ保護化合物をＨＢｒ／ＡｃＯＨ中に溶解して、攪拌した。反応が完了したら、エーテルを添加して、生成した白色沈殿物を濾別して、乾燥した。
方法Ｂ
Ｂｏｃ保護化合物をＴＦＡに溶解して、攪拌した。反応が完了したら、エーテルを添加して、生成した白色沈殿物を濾別して、乾燥した。
Ｈ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＣＨ３＊ＨＢｒ  ２４
方法Ａ
１８  （０．２３０ｇ、０．５４ｍｍｏｌ）
収率：０．１２４ｇ、８０％
Ｈ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＣＨ３＊ＨＢｒ  ２５
方法Ａ
１９  （０．１９０ｇ、０．２０ｍｍｏｌ）
収率：０．１１４ｇ、８２．３％
Ｈ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＣＨ２Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３＊ＨＢｒ  ２６
方法Ａ
２０  （０．３５１ｇ、０．７３ｍｍｏｌ）
収率：０．２５２ｇ、９８％
Ｈ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＣＨ２Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｐｈ＊ＨＢｒ  ２７
方法Ａ
２１  （０．３４ｇ、０．６３ｍｍｏｌ）
収率：０．２５１ｇ、９９％
Ｈ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ジクロロフェニル＊ＴＦＡ  ２８
方法Ｂ
２２  （０．５６ｇ、０．９７ｍｍｏｌ）
収率：０．０２７ｇ、５％
Ｈ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＣＨ２Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｐｈ＊ＨＢｒ  ２９
方法Ａ
２３  （０．１５６ｇ、０．２６ｍｍｏｌ）
収率：０．１１５ｇ、９９％
【００９８】
【化１４】
2005514336.tif 000013
Ｂｏｃ-Ｐｒｏ-Ｎ（Ｍｅ）ＯＭｅ  ３０
Ｂｏｃ−Ｐｒｏｌｉｎ（２．００ｇ、９．２９ｍｍｏｌ）、塩酸Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン（０．９１ｇ、９．２９ｍｍｏｌ）を、上記の１について述べたように、ＮＭＭ（２ｍｌ、１８．４ｍｍｏｌ）およびＣＡＩＢＥ（１．４７ｍｌ、９．２９ｍｍｏｌ）を用いて、処理した。
収率：２．１ｇ、８７．５％
Ｂｏｃ-プロリナール  ３１
０℃で、１０ｍｍｏｌの３０を２０ｍｌの無水エーテルに溶解した。１２．５ｍｍｏｌのリチウムアラナートを加えた。７分攪拌した後、１０ｍｌの飽和ＫＨＳＯ４溶液を滴下して加えた。次いで、混合物に５０ｍｌのエーテルを加えて希釈し、そして有機層を分離した。これを、１ＮのＨＣｌ、水、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、ブラインで洗い、そして乾燥させた。
３０  （１．４３ｇ、５．５４ｍｍｏｌ）、ＬｉＡＩＨ４  （０．２６ｇ、６．９２ｍｍｏｌ）
収率：０．７８ｇ、７０．８％
２-（ヘテロシクロ-ヒドロキシメチル-Ｎ-Ｂｏｃ-（２Ｓ）-ピロリジン
アルゴン雰囲気下、１．１当量のヘテロ環化合物を５ｍｌの乾燥ＴＨＦに溶解し、６５℃にした。１．１当量のｎ-ブチルリチウム（ヘキサン中１．６Ｍ）を加え、溶液を-６５℃で１時間攪拌した。２ｍｌの乾燥ＴＨＦに溶解した１当量の３１を、攪拌した溶液に滴下し、そして混合物を-６５℃で２時間攪拌した。その後、２ｍｌの水を加え、そして塩化メチレンを用いて溶液を３回抽出した。有機層を分離し、乾燥させ、そして蒸発させた。
【００９９】
２−［（［１，３］−チアゾール−２−イル）ヒドロキシメチル］−１−Ｎ−（tert-ブトキシカルボニル）−（２Ｓ）−ピロリジン  ３２
３１  （１．０ｇ、５．０２ｍｍｏｌ）、チアゾール（０．３９ｍｌ、５．５２ｍｍｏｌ）、ｎ-ＢｕＬｉ（１．６  Ｍ）（３．４５ｍｌ、５．５２ｍｍｏｌ）
収率：１．０２ｇ、７１．０％
２−［（ベンゾチアゾール−２−イル）ヒドロキシメチル］−１−Ｎ−（tert-ブトキシカルボニル）−（２Ｓ）−ピロリジン  ３３
３１  （１．０ｇ、５．０２ｍｍｏｌ）、ベンゾチアゾール（０．６ｍｌ、５．５２ｍｍｏｌ）、ｎ-ＢｕＬｉ（１．６  Ｍ）（３．４５ｍｌ、５．５２ｍｍｏｌ）
収率：１．７３ｇ、７８．０％
２−［（ピリジン−２−イル）ヒドロキシメチル］−１−Ｎ−（tert-ブトキシカルボニル）−（２Ｓ）−ピロリジン  ３４
３１  （１．３ｇ、６．５４ｍｍｏｌ）、２−ブロムピリジン（０．７０ｍｌ、７．１９ｍｍｏｌ）、ｎ-ＢｕＬｉ（１．６  Ｍ）（４．５ｍｌ、７．１９ｍｍｏｌ）
収率：１．６８ｇ，９２．２％
２−（ヘテロシクロ−ヒドロキシメチル（２Ｓ）−ピロリジン
３２、３３および３４を、上記の２について述べたように処理した。
２−［（［１，３］−チアゾール−２−イル）ヒドロキシメチル］−（２Ｓ）−ピロリジン塩酸塩  ３５
３２  （０．４６ｇ，１．６２ｍｍｏｌ）
収率：０．３４ｇ、９４．９％
２−［（ベンゾチアゾール−２−イル）ヒドロキシメチル］−（２Ｓ）−ピロリジン塩酸塩  ３６
３３  （０．６ｇ，１．７９ｍｍｏｌ）
収率：０．４３６ｇ、９０％
２−［（ピリジン−２−イル）ヒドロキシメチル］−（２Ｓ）−ピロリジン塩酸塩  ３７
３４  （０．９５ｇ，３．４１ｍｍｏｌ）
収率：０．７１ｇ、９６．８％
Ｎ保護２−（ヘテロシクロ−ヒドロキシメチル−Ｎ−ペプチジル−（２Ｓ）−ピロリジン
１当量のＢｏｃ-Ａｌａ-Ｖａｌ-ＯＨまたはＢｏｃ-Ａｌａ-Ｇｌｙ-ＯＨ、および１当量のＮ-ヒドロキシコハクイミドを、ジオキサンに溶解した。０℃で、１当量のジシクロヘキシルカルボジイミドを加え、そして溶液を２時間攪拌した。室温で一晩攪拌後、沈殿物を除去した。有機相を、ＮａＨＣＯ３飽和溶液およびブラインで洗った。乾燥後、溶媒を除去した。
【０１００】
活性エステルを１当量の３５とともに、乾燥ＴＨＦに溶解し、そして０℃にした。１当量のトリエチルアミンを加え、そして０℃で２時間攪拌した。溶媒を除去し、そして残った油状物を酢酸エチルに溶解した。１ＮＨＣｌ、水、ＮａＨＣＯ３飽和溶液、およびブラインで洗った後、乾燥させてから溶媒を除去した。
【０１０１】
混合物をヘプタン／クロロホルムの勾配を用いて、カラムクロマトグラフィーにより精製した。
２−［（［１，３］−チアゾール−２−イル）ヒドロキシメチル］−１−｛Ｎ−［Ｎ−（tert-ブチルオキシカルボニル）（Ｌ）−アラニル］−（Ｌ）−バリニル｝-（２Ｓ）−ピロリジン  ３８
３５  （０．４４ｇ，１．５４ｍｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシコハクイミド（０．１７ｇ、１．５４ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（０．３２ｇ、１．５４ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ−Ａｌａ−Ｖａｌ−ＯＨ（０．３４ｇ、１．５４ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．２２ｍｌ、１．５４ｍｍｏｌ）
収率：０．３ｇ、４２．９％
１当量のＢｏｃ-Ａｌａ-Ｖａｌ-ＯＨまたはＢｏｃ-Ａｌａ-Ｇｌｙ-ＯＨ、および０．９当量の３６または３７、１．１当量のＨＯＢｔ、ならびに１．１当量のＷＳＣＤを、乾燥ＡＣＮに溶解した。０．９当量のＴＥＡを加えた後、混合物を一晩攪拌した。溶媒を除去し、そして残った油状物を酢酸エチルに溶解した。溶液をブラインで洗い、そして乾燥させた。
２−［（ベンゾチアゾール−２−イル）ヒドロキシメチル］−１−｛Ｎ−［Ｎ−（tert-ブチルオキシカルボニル）（Ｌ）−アラニル］−（Ｌ）−バリニル｝−（２Ｓ）−ピロリジン  ３９
３６  （０．４３ｇ、１．２３ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．１８３ｇ、１．３５ｍｍｏｌ）、ＷＳＣＤ（０．２５９ｇ、１．３５ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ−Ａｌａ−Ｖａｌ−ＯＨ（０．３５ｇ、１．２３ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．１７２ｍｌ、１．５４ｍｍｏｌ）
収率：０．３ｇ、４２．９％
２−［（ベンゾチアゾール−２−イル）ヒドロキシメチル］−１−｛Ｎ−［Ｎ−（tert-ブチルオキシカルボニル）（Ｌ）−アラニル］グリシル｝−（２Ｓ）−ピロリジン  ４０
３６  （０．４３ｇ、１．２３ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．１８３ｇ、１．３５ｍｍｏｌ）、ＷＳＣＤ（０．２５９ｇ、１．３５ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ−Ａｌａ−Ｖａｌ−ＯＨ（０．３０３ｇ、１．２３ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．１７２ｍｌ、１．５４ｍｍｏｌ）
収率：０．４１ｇ、７２％
２−［（ピリジン−２−イル）ヒドロキシメチル］−１−｛Ｎ−［Ｎ−（tert-ブチルオキシカルボニル）（Ｌ）−アラニル］−（Ｌ）−バリニル｝−（２Ｓ）−ピロリジン  ４１
３７  （０．１５ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ−Ａｌａ−Ｖａｌ−ＯＨ（０．１ｇ、０．４７ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（０．０８ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）、ＷＳＣＤ（０．１１ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．０７ｍｌ、０．４７ｍｍｏｌ）
収率：０．２２ｇ、９４．９％
Ｎ保護２-（ヘテロシクロ-カルボニル-Ｎ-ペプチジル-（２Ｓ）-ピロリジン
アルゴン雰囲気下、１．８当量の塩化オキサリルを５ｍｌの乾燥ジクロロメタンに溶解して-７８℃にした。２．５当量のＤＭＳＯの２ｍｌジクロロメタン溶液を加えて、２０分間-７８℃に保った。１当量の３８、３９、４０、または４１を、５ｍｌのジクロロメタンに溶解して、滴下して加えた。混合物を、-７８℃で２０分間攪拌した。その後、４当量のＴＥＡを加え、そして混合物を室温まで昇温させた。３０ｍｌのヘキサン／酢酸エチル混合物（体積比２／１）および１０ｍｌの２％ＨＣｌ（ｍ／Ｖ）を加えた。有機層を分離して乾燥し、そして溶媒を除去した。
【０１０２】
ヘプタン／クロロホルム勾配を用いて、カラムクロマトグラフィーにより混合物を精製した。
２−［（［１，３］−チアゾール−２−イル）カルボニル］−１−｛Ｎ−［Ｎ−（tert-ブチルオキシカルボニル）（Ｌ）−アラニル］−（Ｌ）−バリニル｝-（２Ｓ）−ピロリジン  ４２
３８  （０．１５ｇ、０．３３ｍｍｏｌ）、塩化オキサリル（０．０５ｍｌ、０．５９ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ（０．０６ｍｌ、０．８２ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．１２ｍｌ、１．３２ｍｍｏｌ）
収率：０．１３ｇ、８９％
２−［（ベンゾチアゾール−２−イル）カルボニル］−１−｛Ｎ−［Ｎ−（tert-ブチルオキシカルボニル）（Ｌ）−アラニル］−（Ｌ）−バリニル｝-（２Ｓ）−ピロリジン  ４３
３９  （０．７２ｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、塩化オキサリル（０．２２１ｍｌ、２．５７ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ（２．５３ｍｌ、３．５７ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．８０ｍｌ、５．７１ｍｍｏｌ）
収率：０．０４９ｇ、７０％
２−［（ベンゾチアゾール−２−イル）カルボニル］−１−｛Ｎ−［Ｎ−（tert-ブチルオキシカルボニル）（Ｌ）−アラニル］−グリシル｝−（２Ｓ）−ピロリジン  ４４
４０  （０．６２ｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）、塩化オキサリル（０．２０７ｍｌ、２．４１ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ（２．３７ｍｌ、３．３５ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．７５ｍｌ、５．３５ｍｍｏｌ）
収率：０．３８ｇ、６２％
２−［（ピリジン−２−イル）カルボニル］−１−｛Ｎ−［Ｎ−（tert-ブチルオキシカルボニル）（Ｌ）−アラニル］−（Ｌ）−バリニル｝-（２Ｓ）−ピロリジン  ４５
４１  （０．２９ｇ、０．６４ｍｍｏｌ）、塩化オキサリル（０．１０ｍｌ、１．１５ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ（０．１１ｍｌ、１．５９ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．３６ｍｌ、２．５５ｍｍｏｌ）
収率：０．１４ｇ、４９．２％
２−（ヘテロシクロ−カルボニル−Ｎ−ペプチジル−（２Ｓ）−ピロリジン
４２、４３、４４、および４５を脱保護方法Ｂで述べたように処理した。
２−［（［１，３］−チアゾール−２−イル）カルボニル］−１−Ｎ−［Ｎ−｛（Ｌ）−アラニル｝−（Ｌ）−バリニル］−（２Ｓ）−ピロリジントリフルオロアセテート  ４６
４２  ０．１３ｇ、０．２９ｍｍｏｌ
収率：０．０４ｇ、３０．１％
２−［（ベンゾチアゾール−２−イル）カルボニル］−１−Ｎ−［Ｎ−｛（Ｌ）−アラニル｝−（Ｌ）−バリニル］−（２Ｓ）−ピロリジントリフルオロアセテート  ４７
４３  ０．４９ｇ、０．９７ｍｍｏｌ
収率：０．２４ｇ、６０．３％
２−［（ベンゾチアゾール−２−イル）カルボニル］−１−Ｎ−［Ｎ−｛（Ｌ）−アラニル｝−グリシル］−（２Ｓ）−ピロリジントリフルオロアセテート  ４８
４４  ０．３８ｇ、０．８２ｍｍｏｌ
収率：０．１８７ｇ、６０．１％
２−［（ピリジン−２−イル）カルボニル］−１−Ｎ−［Ｎ−｛（Ｌ）−アラニル｝−（Ｌ）−バリニル］−（２Ｓ）−ピロリジントリフルオロアセテート  ４９
４５  ０．１４ｇ、０．３１ｍｍｏｌ
収率：０．０５４ｇ、３７．７％
本発明の化合物の生物学的活性データを調査した。その結果は下記の実施例で説明される。特に、その化合物は
【０１０３】
【表１】
2005514336.tif 000014
実施例２：Ｋｉ−測定
Ｋｉ測定に関して、３７．５Ｕ／ｍｇのグリシルプロリル−４−ニトロアニリンに対する特異的活性およびストック溶液中１．４１ｍｇ／ｍｌの酵素濃度を有するブタの腎臓由来のジペプチジルペプチダーゼＩＶを使用した。
アッセイ混合物：
５００μｌの試験化合物を、１ｘ１０-５Ｍ〜１ｘ１０-１１Ｍの濃度範囲で、５００μｌのＨＥＰＥＳ緩衝液（４０ｍＭ、ｐＨ７．６；イオン強度＝０．１２５）および２０μｌの希釈ＤＰＩＶと混合した。１０μｌのＡＰＮストック溶液（４．９ｍｇ／ｍｌ、Sigma, Taufkirchen, Germany）と２５０μｌの基質（Ｇｌｙ-Ｐｒｏ-ｐＮＡ、０．０５〜４ｍＭ）の混合物を加えて、プロドラッグからの阻害剤放出ならびに反応（ＤＰＩＶ触媒でのＧｌｙ-Ｐｒｏ-ｐＮＡの加水分解）のモニタリングを開始した。４-ニトロアニリン放出による黄色の発色を、ＵＶ１分光計（ThermoSpectronic）を使用して、λ＝４０５ｎｍで、上限１８０分まで、モニタリングした。
【０１０４】
Ｋｉ値を、Ｇｒａｐｈｉｔ（ｖ．４．０．１３、Erithacus Software, Ltd, UK）および不安定競合阻害剤の方程式を用いて、時間経過曲線の一次微分をフィッティングすることにより算出した。
【０１０５】
ｖ＝（ＶｍａｘｘＳ０）／｛Ｓ０＋Ｋｍ［１＋（Ｉｘｅ−ｋｔ）／（Ｋｉ）］｝
半減期（ｔ１／２）を、酵素活性対反応時間をプロットすることにより算出した。
【０１０６】
【表２】
2005514336.tif 000015
実施例３：ＩＣ５０値の測定
阻害剤ストック溶液１００μｌを緩衝液（ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．６）１００μｌおよび希釈ブタのＤＰＩＶ２０μｌと混合し、３０℃でプレインキュベートした。基質（Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ｐＮＡ、最終濃度０．４ｍＭ）５０μｌとＡＰＮストック溶液２μｌの混合物の添加により反応を開始させた。生成物ｐＮＡの生成は、ＨＴＳ７０００Ｐｌｕｓプレートリーダー(Perkin Elmer)を用いて４０５ｎｍにて３０℃で１０分以上測定し、傾きを算出した。最終阻害剤濃度は、１ｍＭ〜３０ｎＭの範囲であった。ＩＣ５０の算出に関して、ＧｒａＦｉｔ４．０．１３(Erithacus Software)を使用した。
【０１０７】
【表３】
2005514336.tif 000016
実施例４：ＤＰＩＶ様酵素−ジペプチジルペプチダーゼＩＩ（ＤＰ  ＩＩ）の阻害
ＤＰ  ＩＩ（３．４．１４．２）は、Ｎ末端がプロトン化されていない場合にオリゴペプチドからＮ末端ジペプチドを放出する(McDonald, J.K., Ellis, S. & Reilly, T.J., J. Biol. Chem., 241, pp.1494-1501 (1996))。Ｐ１位におけるＰｒｏおよびＡｌａは好ましい残基である。酵素活性はＤＰＩＶ様活性として記載されるが、ＤＰ  ＩＩは酸性ｐＨの最適条件を有する。使用する酵素は、ブタの腎臓から精製した。
アッセイ：
１x１０−４Ｍ〜５x１０−８Ｍの濃度範囲の阻害剤１００μｌを、緩衝溶液（４０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．６、０．０１５％Ｂｒｉｊ、１ｍＭ  ＤＴＴ）１００μｌ、リシルアラニルアミノメチルクマリン溶液（５ｍＭ）５０μｌおよびブタＤＰ  ＩＩ（緩衝溶液de２５０倍希釈）２０μｌと混合した。プレートリーダー（ＨＴＳ７０００ｐｌｕｓ、Applied Biosystems, Weiterstadt, Germany）を用いて３０℃、λ（励起）＝３８０ｎｍ、λ（放出）＝４６５ｎｍで２５分間、蛍光測定を実施した。Ｋｉ値は、Ｇｒａｐｈｉｔ４．０．１５(Erithacus Software, Ltd, UK)を用いて算出された。
結果
ＤＰ  ＩＩに対して化合物Ｈ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＣＯ−ＣＨ２Ｏ−ＣＯ−Ｐｈ＊ＨＢｒを例として試験した。Ｈ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＣＯ−ＣＨ２Ｏ−ＣＯ−Ｐｈ＊ＨＢｒの阻害は見られなかった。
アトラクチン
１００μｌの阻害剤ストック溶液を、１００μｌの緩衝液（ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．６）および２０μｌの希釈アトラクチンと混合し３０℃でプレインキュベートした。５０μｌの基質（Ｇｌｙ-Ｐｒｏ-ｐＮＡ、最終濃度０．４ｍＭ）および２μｌのＡＰＮストック溶液の混合物を加えて、反応を開始した。生成物ｐＮＡの生成を、ＨＴＳ  ７０００Ｐｌｕｓプレートリーダー（Perkin Elmer）を使用して４０５ｎｍおよび３０℃で、１０分間にわたり測定し、そして傾きを算出した。最終阻害剤濃度は、１ｍＭ〜３０ｎＭの範囲であった。ＩＣ５０値の算出のため、ＧｒａＦｉｔ４．０．１３（Erithacus Software）を使用した。
結果：
アトラクチンに対して化合物Ｈ-Ａｌａ-Ｖａｌ-Ｐｒｏ-Ｍｅ＊ＨＢｒを例として試験した。Ｈ-Ａｌａ-Ｖａｌ-Ｐｒｏ-Ｍｅ＊ＨＢｒによるアトラクチン阻害は見いだされなかった。
実施例５：交差反応性酵素
阻害剤を、ジペプチジルペプチダーゼＩ、プロリルオリゴペプチダーゼおよびプロリダーゼに対するそれらの交差反応性能力について試験した。
ジペプチジルペプチダーゼＩ（ＤＰ  Ｉ、カテプシンＣ）：
ＤＰ  ＩすなわちカテプシンＣは、それらの基質のＮ末端からジペプチドを切り離すリソソームシステインプロテアーゼである(Gutman, H.R., & Fruton, J.S., J. Biol: Chem., 174, pp.851-858 (1948))。ＤＰ  Ｉはシステインプロテアーゼとして分類される。使用する酵素は、Qiagen(Qiagen GmbH, Hilden, Germany)から購入した。十分に活性な酵素を獲得するために、酵素をＭＥＳ緩衝液（ｐＨ５．６）（４０ｍＭ  ＭＥＳ、４ｍＭ  ＤＴＴ、４ｍＭ  ＫＣｌ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０１５％Ｂｒｉｊ）中１０００倍希釈し、３０℃で３０分間プレインキュベートした。
アッセイ：
１x１０−５Ｍ〜１x１０−７Ｍの濃度範囲の試験化合物溶液５０μｌを、緩衝液−酵素混合物１１０μｌと混合した。アッセイ混合物を３０℃で１５分間、プレインキュベートした。プレインキュベートした後、ヒスチジルセリル−β−ニトロアニリン（２x１０−５Ｍ）１００μｌを添加して、プレートリーダー（ＨＴＳ７０００ｐｌｕｓ、Applied Biosystems, Weiterstadt, Germany）を用いて３０℃、λ（励起）＝３８０ｎｍ、λ（放出）＝４６５ｎｍで１０分間、β−ニトロアニリン放出に起因する黄色発色の測定を実施した。
【０１０８】
ＩＣ５０値は、Ｇｒａｐｈｉｔ４．０．１５(Erithacus Software, Ltd., UK)を用いて算出した。
プロリダーゼ（Ｘ−Ｐｒｏジペプチダーゼ）
プロリダーゼ（ＥＣ３．４．１３．９）は、Bergmann & Fructonにより最初に記載された(Bergmann, M., & Fruton, J.S., J. Biol. Chem., pp.189-202(1937))。プロリダーゼは、Ｘａａ−ＰｒｏジペプチドからＮ末端アミノ酸を放出させ、６〜９のｐＨ最適条件を有する。
【０１０９】
ブタの腎臓由来のプロリダーゼ(ICN Biomedicals, Eschwege, Germany)をアッセイ緩衝液（２０ｍＭ  ＮＨ４（ＣＨ３ＣＯＯ）２、３ｍＭ  ＭｎＣｌ２、ｐＨ７．６）に溶解した（１ｍｇ／ｍｌ）。十分に活性な酵素を獲得するために、溶液を室温で６０分間インキュベートした。
アッセイ：
５ｘ１０−３Ｍ〜５ｘ１０−７Ｍの濃度範囲の試験化合物４５０μｌ溶液を、緩衝溶液（２０ｍＭ  ＮＨ４（ＣＨ３ＣＯＯ）２、ｐＨ７．６）５００μｌおよびＩｌｅ−Ｐｒｏ−ＯＨ（アッセイ混合物中０．５ｍＭ）２５０μｌと混合した。アッセイ混合物を３０℃で５分間、プレインキュベートした。プレインキュベートした後、プロリダーゼ（アッセイ緩衝液中に１：１０で希釈）７５μｌを添加して、ＵＶ／Ｖｉｓ光度計ＵＶ１(Thermo Spectronic, Cambridge, UK)1を用いて３０℃、λ＝２２０ｎｍで２０分間、測定を実施した。
【０１１０】
ＩＣ５０値は、Ｇｒａｐｈｉｔ４．０．１５(Erithacus Software, Ltd., UK)を用いて算出した。
アンジオテンシン-Ｉ変換酵素（ＡＣＥ）
アンジオテンシン-Ｉ変換酵素（ＡＣＥ；ペプチジル-ジペプチダーゼＡ）は、亜鉛メタロペプチダーゼであり、これはアンジオテンシンＩからＣ末端ジペプチドを切断して強力な血管収縮オクタペプチドアンジオテンシンＩＩを産生し（Skeggs L.T., Kahn J.R., & Shumway N. P.,”The preparation and function of the hypertensin- converting enzyme”, J. Exp. Med., 103, pp.295-299 (1996)）、２つのＣ末端ジペプチドの連続除去によりブラジキニンを不活化する（Yang H. Y.T., Edos E.G., & Levin Y.,”A dipeptidyl carboxypeptidase that converts angiotensin I and inactivates bradykinin”,. Biochim. Biophys. Acta, 214, pp.374-376 (1970)）。血圧調節ならびに水および塩代謝に関係するこれらの２つの主要な生理基質に加えて、ＡＣＥは、遊離Ｃ末端を有するさまざまなオリゴペプチドからＣ末端ジペプチドを切断する。ＡＣＥはまた、Ｃ末端ジペプチドアミドを切断し得る。
アッセイ：
ＡＣＥのＩＣ５０測定のため、Sigmaにより製造された酵素を使用した（製品番号Ａ-６７７８）。製造者により記載されるアッセイ手順および活性の計算を、記載される量の半分で実施した。
【０１１１】
Ｇｒａｐｈｉｔ４．０．１５（Erithacus Software, Ltd., UK）を用いて、ＩＣ５０値を算出した。
アシルアミノ酸放出酵素（ＡＡＲＥ）
アシルアミノアシルペプチダーゼ（ＥＣ３．４．１９．１）はまた、アシルペプチド加水分解酵素（Gade W, & Brown J.L., ”Purification and partial characterization of a-N-acylpeptide hydrolase from bovine liver”, J. Biol. Chem., 253, pp.5012-5018. (1978)）; Jones W.M., & Manning J.M., “Acylpeptide hydrolase activity from erythrocytes”, Biochem. Biophys. Res. Commun., 126, pp.933-940 (1985); Kobayashi K., Lin L.-W., Yeadon J.E., Klickstein L. B., & Smith J.A., “Cloning and sequence analysis of a rat liver cDNA encoding acylpeptide hydrolase”, J. Biol. Chem., 264, pp.8892-8899 (1989))、アシルアミノ酸放出酵素（Tsunasawa S., Narita K., & Ogata K., “Purification and properties of acylamino acid- releasing enzyme from rat liver”, J. Biochem., 77, pp.89-102 (1975); Mitta M., Asada K., Uchimura Y., Kimizuka F., Kato I., Sakiyama F., & Tsunasawa S., “The primary structure of porcine liver acylamino acid- releasing enzyme deduced from cDNA sequences”, J. Biochem., 106, pp.548-551 (1989).) 、およびアシルアミノアシルペプチド加水分解酵素（Radhakrishna G., & Wold F., “Purification and characterization of an N- acylaminoacyl-peptide hydrolase from rabbit muscle”, J. Biol. Chem., 264, pp.11076- 11081 (1989)）という名前でも呼ばれてきた。アシルアミノアシルペプチダーゼは、ブロック化ペプチド：Ｂｌｏｃｋ-Ｘａａ↓Ｘｂｂ-Ｘｃｃ．．．からＮ-アシル化アミノ酸を除去するのを触媒する。反応生成物は、遊離アシルアミノ酸およびアミノ酸１個分短くなった遊離Ｎ末端を有するペプチドである。酵素は、アセチル、クロロアセチル、ホルミル、およびカルバミルを含む異なるＮ-末端アシル基を有するさまざまなペプチドに作用する（Jones W. M., Scaloni A., Bossa F., Popowicz A.M., Schneewind O., & Manning J.M., “Genetic relationship between acylpeptide hydrolase and acylase, two hydrolytic enzymes with similar binding but different catalytic specificities”, Proc. Natl Acad. Sci. USA, 88, pp.2194-2198 (1991))。
アッセイ：
１x１０-４Ｍ〜５x１０-８Ｍの濃度範囲で阻害剤を含む１００μｌの溶液を、１００μｌの緩衝溶液（２００ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ７．２）および２０μｌのＡＡＲＥ溶液と混合した。アッセイ混合物を、３０℃で１５分間プレインキュベートした。プレインキュベーション後、５０μｌのアセチル-Ｍｅｔ-ＡＭＣ溶液（０．５４ｍＭ）を加えた。ＡＭＣの放出を、Novovostar蛍光マイクロプレートリーダー（ＢＭＧ）を使用して、３８０／４６０ｎｍの励起／発光波長を用いて３０℃で測定した。
【０１１２】
Ｇｒａｐｈｉｔ４．０．１５（Erithacus Software, Ltd. , UK）を使用して、経過曲線の傾きからＩＣ５０値を算出した。
【０１１３】
【表４】
2005514336.tif 000017
実施例６：Ｗｉｓｔａｒラットへの血管内および経口投与後のＤＰＩＶ阻害活性の測定
動物
２５０〜３５０ｇの体重の雄Ｗｉｓｔａｒラット(Shoe: Wist(Sho))をTierzucht Schonwalde(Schonwalde, Germany)から購入した。
収容条件
動物は、１２／１２時間の明／暗サイクル（午前６時に点灯）と制御された温度（２２±２℃）のもと従来条件下にて一匹ずつケージに入れた。標準的なペレット化飼料（ｓｓｎｉｆｆ（商標）、Soest, Germany)およびＨＣｌで酸性化した水道水を随意に与えた。
頸動脈へのカテーテル挿入
１週以上かけて収容条件に適応させた後、全身麻酔（Ｒｏｍｐｕｎ（商標）［２％］(BayerVital, Germany）０．２５ｍｌ／ｋｇ（体重）およびケタミン１０(Atarost GmbH & Co., Twistringen, Germany)０．５ｍｌ／ｋｇ（体重）の腹腔内注射）下でＷｉｓｔａｒラットの頸動脈にカテーテルを埋没させた。動物を１週間回復させた。カテーテルにヘパリン生理食塩水（１００ＩＵ／ｍｌ）を１週間につき３回流した。カテーテル故障の場合、第２のカテーテルを各々のラットの対側性の側方頸動脈に挿入した。手術から１週間回復させた後、この動物を研究に再度組み込んだ。第２のカテーテルの故障の場合には、その動物を研究から撤退させた。新たな動物を補充して、カテーテル埋没後少なくとも７日後から、計画した順序で実験を続行した。
実験設計
損なわれていないカテーテル機能を有するラットに、経口および血管内（動脈内）経路によりプラセボ（生理食塩水１ｍｌ、０．１５４ｍｏｌ／ｌ）または試験化合物を投与した。一晩絶食させた後、ヘパリン処理した動脈血試料１００μｌを−３０分、−５分および０分で収集した。試験物質は、生理食塩水（０．１５４ｍｏｌ／ｌ）１．０ｍｌ中に新たに溶解させて、供給用チューブ（７５ｍｍ、Fine Science Tools, Heidelberg, Germany)により経口的に、あるいは血管内経路により、０分時に投与した。経口投与の場合、さらに１ｍｌの生理食塩水を動脈カテーテルに注入した。動脈内投与の場合、カテーテルを生理食塩水３０μｌで直ちに流して、さらに生理食塩水１ｍｌを供給用チューブにより経口的に与えた。
【０１１４】
プラセボまたは試験物質の適用後、動脈血試料を意識のある拘束していないラットの頸動脈カテーテルから２．５、５、７．５、１０、１５、２０、４０、６０および１２０分に採取した。血液試料はすべて、血漿ＤＰＩＶ活性測定用の１Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ３．０）１０μｌを充填した氷冷エッペンドルフチューブ(Eppendorf-Netheler-Hinz, Hamburg, Germany)に集めた。エッペンドルフチューブを直ちに遠心分離した（１２０００ｒｐｍで２分間、Ｈｅｔｔｉｃｈ  Ｚｅｎｔｒｉｆｕｇｅ  ＥＢＡ  １２、Tuttlingen, Germany）。血漿分画は、分析するまで氷上で保管するか、分析するまで−２０℃で凍結させた。血漿試料にはすべて、以下のデータをラベルした：
・コード番号
・動物番号
・サンプリングの日付
・サンプリングの時間
分析方法
血漿ＤＰＩＶ活性の測定のためのアッセイ混合物は、試薬８０μｌおよび血漿試料２０μｌから構成された。基質グリシルプロピル−４−ニトロアニリンからの黄色生成物４−ニトロアニリンの生成の動態測定を、３０℃で２分間プレインキュベートした後、３９０ｎｍにて同じ３０℃で１分間実施した。ＤＰＩＶ活性はｍＵ／ｍｌで表した。
統計学的方法
ＰＲＩＳＭ（商標）３．０２(GraphPad Software, Inc.)により統計学的評価および表示を行った。パラメータはすべて、平均値および標準偏差を含む記述様式で分析された。
６．１  結果−ｔｍａｘでのｉｎ  ｖｉｖｏＤＰＩＶ阻害
【０１１５】
【表５】
2005514336.tif 000018
実施例７：糖尿病性のＺｕｃｋｅｒラットでの耐糖能に対する置換アミノケトンの影響
研究設計
動物
３０匹のＺｕｃｋｅｒラット（ｆａ／ｆａ）平均齢１１週（５〜１２週）、平均体重３５０ｇ（１５０〜４００ｇ）、をCharles River(Sulzfeld, Germany)から購入した。ほぼすべての脂肪性Ｚｕｃｋｅｒラットが明白な真性糖尿病の特徴を有するまで、ラットを１２週間以上飼育した。
収容条件
動物は、１２／１２時間の明／暗サイクル（午前６時に点灯）と制御された温度（２２±２℃）のもと標準条件下にて一匹ずつケージに入れた。標準的なペレット（ｓｓｎｉｆｆ（商標）、Soest, Germany)およびＨＣｌで酸性化した水道水を随意に与えた。
頸動脈のカテーテル法
収容条件で適応させた１７〜２４週齢の脂肪性Ｚｕｃｋｅｒラットは試験のために十分に準備ができていた。全身麻酔（Ｒｏｍｐｕｎ（商標）［２％］(BayerVital, Germany）０．２５ｍｌ／ｋｇ（体重）およびケタミン１０(Atarost GmbH & Co., Twistringen, Germany)０．５ｍｌ／ｋｇ（体重）の腹腔内注射）下で脂肪性Ｚｕｃｋｅｒラットの頸動脈にカテーテルを埋没させた。動物を１週間回復させた。カテーテルにヘパリン生理食塩水（１００ＩＵ／ｍｌ）を１週間につき３回流した。
【０１１６】
カテーテル故障の場合、第二のカテーテルを各々のラットの対側性の側方頸動脈に挿入した。手術から１週間回復させた後、この動物を研究に再度組み込んだ。第二のカテーテルの故障の場合には、その動物を研究から撤退させた。新たな動物を補充して、カテーテル埋没後少なくとも７日目に開始して、計画した順序で実験を続行した。
実験設計
損なわれていないカテーテル機能を有する肥満Ｚｕｃｋｅｒラットに、ランダムに、プラセボ（１ｍｌ生理食塩水、０．１５４ｍｏｌ／ｌ；対照として９匹の動物）、または１ｍｌの生理食塩水に溶解した試験物質（各試験群で６匹の動物）を与えた。
【０１１７】
一晩絶食させた後、プラセボまた試験物質を供給用チューブ（１５Ｇ、７５ｍｍ、Fine Science Tools, Heidelbergm Germany)によりそれぞれ脂肪性Ｚｕｃｋｅｒラットへ−１０分に経口投与した。２ｇ／ｋｇ（体重）のグルコースを４０％溶液（B. Braun Melsungen, Melsungen, Germany）にして用いた経口グルコース耐性試験（ＯＧＴＴ）を、±０分で施した。グルコースは第二の供給用チューブによって投与した。頚動脈のカテーテルからの動脈血試料を、−３０分、−１５分、±０分、ならびに５、１０、１５、２０、３０、４０、６０、９０および１２０分に２０μｌのガラスキャピラリーに収集した。２０μｌのガラスキャピラリーは、溶血反応（血中グルコース測定）のための溶液１ｍｌを充填した標準的なチューブに入れられた。
【０１１８】
また、動脈血試料を、意識のある拘束していない肥満Ｚｕｃｋｅｒラットの頸動脈カテーテルから、-３０分、２０分、４０分、６０分、および１２０分に採取して、血漿ＤＰ活性測定用のクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ３．０）１０μｌを充填した氷冷エッペンドルフチューブ（Eppendorf-Netheler-Hinz, Hamburg, Germany）中に入れた。エッペンドルフチューブを直ちに遠心分離した（１２０００ｒｐｍで２分間、Ｈｅｔｔｉｃｈ  Ｚｅｎｔｒｉｆｕｇｅ  ＥＢＡ１２、Tuttlingen, Germany）。血漿分画は、分析するまで氷上で保管した。
分析法
血液グルコース：グルコース酸化酵素法を使用して、グルコースレベルを測定した（Ｓｕｐｅｒ  Ｇ  Ｇｌｕｋｏｓｅｍｅbｒｇｅｒaｔ；Dr. Muller Geratebau, Freital, Germany)。
【０１１９】
ｉｎ  ｖｉｖｏアッセイで試験した本発明の化合物は、Ｚｕｃｋｅｒラットで経口投与後ＯＧＴＴの間グルコース耐性を顕著に改善した（７．１を参照）。
【０１２０】
【表６】
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【国際調査報告】
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