(57)【要約】【課題】本発明はサイトカインとケモカインの応答の間でのクロストークの中でｂＧＨ−Ｔｇマウスから得られるデータをケモカイン／ケモカインレセプター対の機能的役割を理解する助けとするものである。現在利用できる唯一のモデルは、ＣＸＣＲ４又はＣＸＣＬ１２の欠損が誕生前においては死に至るモデルのみであるので、本発明は、サイトカインによって媒介される効果を生後の生命体においてＣＸＣＲ４を不活性化するという機能的役割に関連付けるための手段を提供する。【解決手段】ＣＸＣＲ４依存型ＨＩＶと関連のある疾患を有するヒトに抗ウィルス剤として治療上有効な量の、ＳＯＣＳ３の発現を誘導する分子及び薬学的に許容される担体を投与することからなるＣＸＣＲ４依存型ＨＩＶと関連のある疾患を有するヒトを治療する方法が提供される。ＣＸＣＲ４依存型ＨＩＶと関連のある疾患を有するヒトを治療する方法であって、前記分子はＧＨＲと結合する方法が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＸＣＲ４依存型ＨＩＶ活性に対して抗ウィルス作用を有する医薬組成物に使用するための化合物を同定する方法であって、
ＣＸＣＲ４を発現するＧＨ−Ｔｇ細胞の第１部分標本を作り、
その第１部分標本をＨＩＶ粒子と接触させ、
ＣＸＣＲ４を発現するＧＨ−Ｔｇ細胞の第２部分標本を作り、
被検リガンドと第２部分標本を接触させ、
第２部分標本をＨＩＶと接触させ、
細胞の第１及び第２部分標本からウィルスを単離する
ことからなり、
第２細胞部分標本からウィルスを単離する能力が減少することにより被検リガンドがＨＩＶに対して抗ウィルス活性を有していることが示されることを特徴とする方法。
【請求項２】
前記細胞第２部分標本を複数の被検リガンドと接触させる、ＣＸＣＲ４依存型ＨＩＶ活性に対して抗ウィルス作用を有する医薬組成物に使用するための化合物を同定する請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＣＸＣＲ４を発現するＧＨ−Ｔｇ細胞の第１部分標本を作り、
ＣＸＣＬ１２と第１部分標本を接触させ、
第１遊走指数を測定し、
ＣＸＣＲ４を発現するＧＨ−Ｔｇ細胞の第２部分標本を作り、
ＣＸＣＬ１２と第２部分標本を接触させ、
第２部分標本を被検リガンドと接触させ、
第２遊走指数を測定し、
治療能力を決定することからなる、
ＣＸＣＲ４依存型走化性が関与する疾患に対して治療上の効果を有する医薬組成物に使用するための化合物を同定する方法。
【請求項４】
前記疾患が異常白血球の増加又は活性化に関わるものであり、前記疾患は関節炎、乾癬、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、クローン病、アレルギー、喘息、ＡＩＤＳ関連脳炎、ＡＩＤＳ関連斑丘疹性皮膚発疹、ＡＩＤＳ関連間質性肺炎、ＡＩＤＳ関連腸疾患、ＡＩＤＳ関連門脈周囲性肝炎及びＡＩＤＳ関連糸状体腎炎からなる群から選択されることを特徴とする、ＣＸＣＲ４依存型走化性が関与する疾患に対して治療上の効果を有する医薬組成物に使用するための化合物を同定する請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記細胞は胸腺細胞、ＣＤ３４＋細胞、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、樹枝状細胞、マクロファージ、好中球及び血小板からなる群から選択されるＣＸＣＲ４発現細胞である、ＣＸＣＲ４依存型走化性が関与する疾患に対して治療上の効果を有する医薬組成物に使用するための化合物を同定する請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記細胞はＩＭ−９細胞である、ＣＸＣＲ４依存型走化性が関与する疾患に対して治療上の効果を有する医薬組成物に使用するための化合物を同定する請求項５記載の方法。
【請求項７】
ＳＯＣＳ３によって阻害できる疾患に対して治療上の効果を有する医薬組成物に使用するための化合物を同定する方法であって
少なくとも一つのケモカインレセプターが発現された第１細胞を作り、
第１細胞を少なくとも一つのケモカインと接触させ、
第１遊走指数を測定し、
少なくとも一つのケモカインレセプターが発現された第２細胞を作り、
第２細胞を少なくとも一つのケモカインと接触させ、
第２遊走指数を測定し、
治療能力を決定することからなり、
前記第１細胞には少なくとも一つのＳＯＣＳ構成部分が遺伝子導入されており、前記第２細胞には少なくとも一つのＳＯＣＳ構成部分が遺伝子導入されていることを特徴とする方法。
【請求項８】
前記細胞がＨＥＫ−２９３細胞である、ＳＯＣＳ３によって阻害できる疾患に対して治療上の効果を有する医薬組成物に使用するための化合物を同定する請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記細胞はＩＭ−９細胞である、ＳＯＣＳ３によって阻害できる疾患に対して治療上の効果を有する医薬組成物に使用するための化合物を同定する請求項７記載の方法。
【請求項１０】
ＣＸＣＲ４依存型ＨＩＶと関連のある疾患を有する被検体を治療する方法であって、前記被検体に抗ウィルス剤として治療上有効な量のＳＯＣＳ３の発現を誘導する分子及び薬学的に許容される担体を投与することからなる方法。
【請求項１１】
前記被検体はヒト、ペット用動物及び研究用動物からなる群から選択される、前記治療が必要な動物である、ＣＸＣＲ４依存型ＨＩＶと関連のある疾患を有する被検体を治療する請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
前記分子はＧＨＲと結合する、ＣＸＣＲ４依存型ＨＩＶと関連のある疾患を有する被検体を治療する請求項１０記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は概してＣＸＣ型ケモカインレセプターによる細胞内シグナル伝達に関し、限定される訳ではないが、特に少なくとも一つのＣＸＣＲ４を含むレセプターダイマーが関与するシグナル伝達に関する。とりわけ本発明は治療上役に立つ可能性のある分子のスクリーニング方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ケモカイン類は低分子量（８−１０ｋＤａ）サイトカインの大きなファミリーからなり、様々な白血球系統に対する走化性作用及び前活性体様作用を有している（非特許文献１、非特許文献２及び非特許文献３）。数々の研究によってＴヘルパー応答、造血、血管新生及びホメオスタシス等の多くの生理学的状況、並びに、喘息、腫瘍拒絶、ＨＩＶ−１感染及び動脈硬化等の病的状態におけるケモカインの中心的役割が立証された（非特許文献４、非特許文献５、非特許文献６、非特許文献７及び非特許文献８）。
【０００３】
ケモカインは特定のレセプター、７回膜貫通型ドメインであるＧタンパク質連結レセプターファミリーのメンバーと結合した後の生理学的作用を媒介する（非特許文献１及び非特許文献２）。ケモカインレセプターはごたまぜであり、それぞれが２以上のケモカインと結合する事ができる。発現は、白血球系統の異なる細胞間で不均一であり、転写レベルで調節される（非特許文献３及び非特許文献５）。例外の一つはＣＸＣＲ４レセプターであり、ストロマ細胞培養上清から単離されるケモカイン（非特許文献９）であるＣＸＣＬ１２のみと結合する（非特許文献１及び非特許文献２）。その走化性は、末梢血液リンパ球（ＰＢＬ）（非特許文献１０）、ＣＤ３４＋始原細胞（非特許文献１１）、並びに、プレ−及びプロ−Ｂ細胞系（非特許文献１２）に関して述べられている。ＣＸＣＬ１２タンパク質が欠如したノックアウト（ＫＯ）マウス（非特許文献１０）及びＣＸＣＲ４レセプターがないマウス（非特許文献１３及び非特許文献１４）は類似の表現系を示す。即ち、Ｂ細胞リンパ球生成及び骨髄生成における異常、腸内での血管形成の欠如、重症の心室隔壁欠陥及び小脳ニューロン遊走の変化を示して、生まれる前に動物は死亡する（非特許文献１３、非特許文献１４及び非特許文献１５）。
【０００４】
ＣＸＣＬ1２はグアニンヌクレオチド結合タンパク質（Ｇタンパク質）のＣＸＣＲ４に対する会合を誘発し、その結果、フォーカルチロシンキナーゼ（ＲＡＦＴＫ／Ｐｙｋ２）、Ｃｒｋ及びパキシリン（非特許文献１７）等のフォーカルアドヒージョン成分のリン酸化が増加する。ＣＸＣＬ1２は細胞骨格器官における変化を媒介するシグナル伝達分子の活性化だけでなく、ｐ４４／４２ＭＡＰキナーゼ（Ｅｒｋ及び２）（非特許文献１６）、ＰＩ３キナーゼ（非特許文献１７、非特許文献１８及び非特許文献１９）及びＮＦ−，ｃＢ（非特許文献１７）等の細胞成長を調節する転写因子の活性化をも促進する。本発明の発明者らは最近ＣＸＣＬ４（非特許文献１４）、並びに、ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）及びＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）（非特許文献２０及び非特許文献２１）等の他のケモカインが、そのレセプターの二量化及び本来サイトカインのシグナル伝達に関与するタンパク質ファミリーであるＪＡＫキナーゼの活性化を介してその効果を発揮することを実証している（非特許文献２２）。ここでは次々にチロシン残基におけるケモカインレセプターがリン酸化され、ＳＴＡＴ転写因子が活性化される（非特許文献２３）。
【０００５】
サイトカインシグナル伝達の間生理学的応答を遮断する調節フィードバック機構は確認されている。その発現がＳＴＡＴによって制御されているように思われる、サイトカイン応答のサプレッサー（ＳＯＣＳ）と呼ばれるタンパク質ファミリーはこの調節において重要な役割を有している（非特許文献２４及び非特許文献２５）。ＳＯＣＳはＪＡＫキナーゼに又はレセプターに結合し、その活性を遮断する。ＳＯＣＳ分子の調節の役割はサイトカインレセプタースーパーファミリーに限られず、ＳＯＣＳとＩＧＦ−Ｉレセプター間での相互作用が述べられているように、ＳＯＣＳタンパク質はレセプターシグナル伝達においてより広範囲にわたる役割を有しているかもしれないことが示唆されている（非特許文献２６）。
【非特許文献１】Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ，Ｍ．，Ｄｅｗａｌｄ，Ｂ．  ａｎｄ  Ｍｏｓｅｒ，Ｂ．（１９９７）．Ｈｕｍａｎ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ：ａｎ  ｕｐｄａｔｅ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５，６７５−７０５．
【非特許文献２】Ｒｏｌｌｉｎｓ，Ｂ．Ｊ．（１９９７）．Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ．  Ｂｌｏｏｄ  ９０，９０９−９２８．
【非特許文献３】Ｍａｃｋａｙ，Ｃ．Ｒ．，Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ：ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ’ｓ  ｈｉｇｈ  ｉｍｐａｃｔ  ｆａｃｔｏｒｓ，２  Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，９５（２００１）．
【非特許文献４】Ｓｃｈａｌｌ  ＴＪ，Ｂａｃｏｎ  ＫＢ．Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ，ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ  ａｎｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，８６５（１９９４）．
【非特許文献５】Ｒｏｓｓｉ  Ｄ，Ｚｌｏｔｎｉｋ  Ａ．（２０００）．Ｔｈｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．  Ａｎｎｕ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８，２１７−４２
【非特許文献６】Ｇｅｒａｒｄ，Ｃ．  ａｎｄ  Ｒｏｌｌｉｎｓ，Ｂ．Ｊ．（２００１）．Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２，１０８−１１５
【非特許文献７】Ｍｏｓｅｒ，Ｂ．  ａｎｄ  Ｌｏｅｔｓｃｈｅｒ，Ｐ．（２００１）．Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｔｒａｆｆｉｃ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｂｙ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ．  Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２，１２３−１２８．
【非特許文献８】Ｌｕｔｈｅｒ，Ｓ．Ａ．  ａｎｄ  Ｃｙｓｔｅｒ，Ｊ．Ｇ．（２００１）．  Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ  ａｓ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．  Ｎａｔ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．２，１０２−１０７，
【非特許文献９】Ｂｌｅｕｌ，Ｃ．Ｃ．，Ｆｕｈｌｂｒｉｇｇｅ，Ｒ．Ｃ．，  Ｃａｓａｓｎｏｖａｓ，  Ｊ．Ｍ．，  Ａｉｕｔｉ，Ａ．  ａｎｄ  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｔ．Ａ．（１９９６）．  Ａ  ｈｉｇｈｌｙ  ｅｆｆｉｃａｃｉｏｕｓ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ，ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆａｃｔｏｒ  ＳＤＦ−１  Ｊ．  Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４，１０１−１１０９
【非特許文献１０】Ｎａｇａｓａｗａ，Ｔ．，Ｈｉｒｏｔａ，Ｓ．，Ｔａｃｈｉｂａｎａ，Ｋ．，Ｔａｋａｋｕｒａ，Ｎ．，Ｎｉｓｈｉｋａｗａ，Ｓ．，Ｋｉｔａｍｕｒａ，Ｙ，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｎ．，  Ｋｉｋｕｔａｎｉ，Ｈ．  ａｎｄ  Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ，Ｔ．（１９９６）．  Ｄｅｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｓｉｓ  ａｎｄ ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｍｙｅｌｏｐｏｉｅｓｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｌａｃｋｉｎｇ  ｔｈｅ  ＣＸＣ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅＰＢＳＦ／ＳＤＦ−Ｎａｔｕｒｅ  ３８２，６３５−６３８．
【非特許文献１１】Ａｉｕｔｉ，Ａ．，  Ｗｅｂｂ，Ｉ. Ｊ．，Ｂｌｅｕｌ，Ｃ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｔ．  Ａ．  ａｎｄ  Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ−Ｒａｍｏｓ，Ｊ．Ｃ．（１９９７）．  Ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅＳＤＦ−１  ｉｓ  ａ  ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ＣＤ３４＋  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｖｉｄｅｓ  ａ  ｎｅｗ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｔｏ  ｅｘｐｌａｉｎ  ｔｈｅ  ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆＣＤ３４’ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ ｔｏ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ．  １８５  Ｊ  Ｅｘｐ．Ｍｅｄ，１１（１９９７）．
【非特許文献１２】Ｄ’Ａｐｕｚｚｏ，Ｍ．，Ｒｏｌｉｎｋ，Ａ．，Ｌｏｅｔｓｃｈｅｒ，Ｍ．，Ｈｏｘｉｅ，Ｊ．Ａ．，Ｃｌａｒｋ−Ｌｅｗｉｓ，Ｉ．，Ｍｅｌｃｈｅｒｓ，Ｆ．，Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ，Ｍ．  ａｎｄ  Ｍｏｓｅｒ，Ｂ．（１９９７）．  Ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅＳＤＦ−１，ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆａｃｔｏｒ  １，ａｔｔｒａｃｔｓ  ｅａｒｌｙ  ｓｔａｇｅ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ  ｖｉａ  ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＣＸＣＲ４，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７，１７８８−
【非特許文献１３】Ｚｏｕ，Ｙ−Ｒ．，Ｋｏｔｔｍａｎｎ，Ａ．Ｈ．，Ｋｕｒｏｄａ，Ｍ．，Ｔａｎｉｕｃｈｉ，Ｉ．  ａｎｄ  Ｌｉｔｔｍａｎ，Ｄ．Ｒ．（１９９８）．  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＣＸＣＲ４  ｉｎ  ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｉｎ  ｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｎａｔｕｒｅ  ３９３，５９５−５９９．
【非特許文献１４】Ｔａｃｈｉｂａｎａ，Ｋ．，Ｈｉｒｏｔａ，Ｓ．，Ｉｉｚａｓａ，Ｈ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，  Ｈ．，Ｋａｗａｂａｔａ，Ｋ．，Ｋａｔａｏｋａ，Ｙ．，Ｋｉｔａｍｕｒａ，Ｙ．，  Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ，Ｋ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｎ．，Ｎｉｓｈｉｋａｗａ，Ｓ．，Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ，Ｔ．  ａｎｄ  Ｎａｇａｓａｗａ，Ｔ．（１９９８）．  Ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＣＸＣＲ４  ｉｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｔｒａｃｔ，Ｎａｔｕｒｅ  ３９３，５９１−５９４，
【非特許文献１５】Ｍａ，Ｑ．，Ｊｏｎｅｓ，Ｄ．，Ｂｏｒｇｈｅｓａｎｉ，Ｐ．Ｒ．，Ｓｅｇａｌ，ＲＡ．，Ｎａｇａｓａｗａ，Ｔ．，Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ，Ｔ．，Ｂｒｏｎｓｏｎ，ＲＴ．  ａｎｄ  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，ＴＡ．（１９９８）．  Ｉｍｐａｉｒｅｄ  Ｂ−ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｓｉｓ，ｍｙｅｌｏｐｏｉｅｓｉｓ，ａｎｄ  ｄｅｒａｉｌｅｄ  ｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ  ｎｅｕｒｏｎ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ＣＸＣＲ４−  ａｎｄ  ＳＤＦ−１−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ．  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５，９４４８−９４５３．
【非特許文献１６】Ｖｉｌａ−Ｃｏｒｏ，Ａ．Ｊ．，Ｒｏｄｒｆｇｕｅｚ−Ｆｒａｄｅ，Ｊ．Ｍ．，Ｍａｒｔｆｎ  ｄｅ  Ａｎａ，Ａ．Ｍ．，Ｍｏｒｅｎｏ−Ｏｒｔｆｚ，Ｍ．Ｃ．，Ｍａｒｔｆｎｅｚ−Ａ．，Ｃ．  ａｎｄ  Ｍｅｌｌａｄｏ，Ｍ．（１９９９）．  Ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ＳＤＦ−ｌａ  ｔｒｉｇｇｅｒｓ  ＣＸＣＲ４  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ｔｈｅ  ＪＡＫ／ＳＴＡＴ  ｐａｔｈｗａｙ．  ＦＡＳＥＢ  Ｊ．１３，１６９９−１７１０，
【非特許文献１７】Ｗａｎｇ，Ｊ．Ｆ．，Ｐａｒｋ，Ｉ．Ｗ，  ａｎｄ  Ｇｒｏｏｐｍａｎ，Ｊ．Ｅ．（２０００）．  Ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆａｃｔｏｒ−ｌａｌｐｈａ  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｆｏｃａｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ：ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ−３  ｋｉｎａｓｅ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｃ．  Ｂｌｏｏｄ  ９５，２５０５−２５１３
【非特許文献１８】Ｇａｎｊｕ，Ｒ．Ｋ．，Ｂｒｕｂａｋｅｒ，Ｓ．Ａ．，Ｍｅｙｅｒ，Ｊ．，Ｄｕｔｔ，  Ｐ．，Ｙａｎｇ，Ｙ．，Ｑｉｎ，Ｓ．，Ｎｅｗｍａｎ，Ｗ．  ａｎｄ  Ｇｒｏｏｐｍａｎ，Ｊ．  Ｅ，（１９９８）．  Ｔｈｅ  ａ−ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ，  ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆａｃｔｏｒ−ｌａ，  ｂｉｎｄｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ＣＸＣＲ４  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｐａｔｈｗａｙｓ．  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３，２３１６９−２３１７５，
【非特許文献１９】Ｖｉｃｅｎｔｅ−Ｍａｎｚａｎａｒｅｓ，Ｍ．，Ｒｅｙ，Ｍ．，Ｊｏｎｅｓ，Ｄ．Ｒ．，Ｓａｎｃｈｏ，Ｄ．，Ｍｅｌｌａｄｏ，Ｍ．，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ  Ｆｒａｄｅ，Ｊ．Ｍ．，ｄｅｌ  Ｐｏｚｏ，Ｍ．Ａ．，Ｙａｎｅｚ−Ｍ６，Ｍ．，Ｍａｒｔｉｎ  ｄｅ  Ａｎａ，Ａ．，  Ｍａｒｔｆｎｅｚ−Ａ．，Ｃ．，Ｍｅｒｉｄａ，Ｉ．  ａｎｄ  Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄ，  Ｆ．（１９９９）．  Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ  ３−ｋｉｎａｓｅ  ｉｎ  ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆａｃｔｏｒ−ｌａ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ．  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３，４００１−４０１２，
【非特許文献２０】Ｒｏｄｒｆｇｕｅｚ−Ｆｒａｄｅ，Ｊ．Ｍ．，Ｖｉｌａ−Ｃｏｒｏ，Ａ．Ｊ．，Ｍａｒｔｆｎ  ｄｅ  Ａｎａ，Ａ．Ｍ．，Ｎｉｅｔｏ，Ｍ．，Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄ，  Ｆ．，Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ，Ａ．Ｅ．Ｉ．，Ｗｅｌｌｓ，Ｔ．Ｎ．Ｃ．，Ｍａｒｔｆｎｅｚ−Ａ．，Ｃ．  ａｎｄ  Ｍｅｌｌａｄｏ，Ｍ．（１９９９）．  Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ  ａｎｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ  ｉｎ  ＲＡＮＴＥＳ−ａｎｄ（ＡＯＰ）−ＲＡＮＴＥＳ−ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  ｓｉｇｎａｌｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ． Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１４４，７５５−７６５
【非特許文献２１】Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｆｒａｄｅ，Ｊ．Ｍ．，Ｖｉｌａ−Ｃｏｒｏ，Ａ．，Ｍａｒｔｆｎ  ｄｅ  Ａｎａ，Ａ．Ｍ．，Ａｌｂａｒ，Ｊ．Ｐ．，Ｍａｒｔｆｎａｚ−Ａ．，Ｃ．  ａｎｄ  Ｍｅｌｌａｄｏ，Ｍ．（１９９９）．  Ｔｈｅ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ−１  ｉｎｄｕｃｅｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｔｓ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＣＣＲ２．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９６，３６２８−３６３３
【非特許文献２２】Ｌｅｏｎａｒｄ，Ｗ．Ｊ．ａｎｄ  Ｏ’Ｓｈｅａ，Ｊ．Ｊ．（１９９８）．  ＪＡＫ  ａｎｄ  ＳＴＡＴｓ： Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ａｎｎ，Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６，２９３−３２２．
【非特許文献２３】Ｍｅｌｌａｄｏ，Ｍ．，Ｒｏｄｒｆｇｕｅｚ−Ｆｒａｄｅ，Ｊ．Ｍ．，Ａｒａｇａｙ，Ａ．Ｍ．，ｄｅｌ Ｒｅａｌ，Ｇ．，Ｖｉｌａ−Ｃｏｒｏ，Ａ．，Ｍａｒｔｉｎ  ｄｅ  Ａｎａ，Ａ．，Ｓｅｒｒａｎｏ，Ａ．，Ｍａｙｏｒ  Ｊｒ．，Ｆ．  ａｎｄ  Ｍａｒｔｆｎｅｚ−Ａ．，Ｃ．（１９９８）．  Ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅＭＣＰ−１  ｔｒｉｇｇｅｒｓ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅＣＣＲ２Ｂ ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｄ  ｔｈｅＪＡＫ２／ＳＴＡＴ３  ｐａｔｈｗａｙ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１，８０５−８１３，
【非特許文献２４】Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ，Ａ．，Ｏｈｋｕｂｏ，Ｔ．，Ｋｉｇｕｃｈｉ，Ｔ．，Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｎ．Ａ．，Ｇｉｌｂｅｒｔ，Ｄ．Ｊ．，Ｃｏｐｅｌａｎｄ，Ｎ．Ｇ．，Ｈａｒａ，Ｔ．，  ａｎｄ  Ｍｉｙａｊｉｍａ，Ａ．（１９９５）．  Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｇｅｎｅ  ＣＩＳ  ｅｎｃｏｄｅｓ  ａｎ  ＳＨ２ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｈａｔ  ｂｉｎｄｓ  ｔｏ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ３  ａｎｄ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．  ＥＭＢＯ  Ｊ．１４，２８１６−２８２６．
【非特許文献２５】Ｎａｋａ，Ｔ．，Ｎａｒａｚａｋｉ，Ｍ．，Ｈｉｒａｔａ，Ｍ．，Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ，Ｔ．，Ｍｉｎａｍｏｔｏ，Ｓ．，Ａｏｎｏ，Ａ．，Ｎｉｓｈｉｍｏｔｏ，Ｎ．，Ｋａｊｉｔａ，Ｔ．，Ｔａｇａ，Ｔ．，Ｙｏｓｈｉｚａｋｉ，Ｋ．，Ａｋｉｒａ，Ｓ．  ａｎｄ  Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ，Ｔ．（１９９７）．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｅｗ  ＳＴＡＴ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ＳＴＡＴ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ． Ｎａｔｕｒｅ  ３８７，９２４−９２９．
【非特許文献２６】Ｄｅｙ，Ｂ．Ｒ．，Ｆｕｒｌａｎｅｔｔｏ，Ｒ．Ｗ．，  ａｎｄ  Ｎｉｓｓｌｅｙ，Ｐ．（２０００）． Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｏｆ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  （ＳＯＣＳ−３）  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−Ｉ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２７８，３８−４３．
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ｂＧＨ−Ｔｇマウス表現型を特徴付ける際、本発明の発明者らはいくつかのケモカインに対する走化性応答を分析し、ＣＸＣＬ１２に対するインビボ及びインビトロでの応答が減少することを観察した。Ｔｇ及び非Ｔｇ同腹仔脾臓細胞のディファレンシャルＲＮＡティスプレイ分析により、この応答の減少に関与しているかもしれない遺伝子の候補がいくつか同定された。これらのうちの一つであるＳＯＣＳ３は上述のＳＯＣＳタンパク質ファミリーに属する。ケモカイン及びサイトカインのＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路を活性化する能力を基に、我々はＳＯＣＳ３もまたケモカイン応答を調節するか否かを探索した。本発明の発明者らはＣＸＣＬ１２によるＣＸＣＲ４の占有によってＳＯＣＳ３が増加し、そのシグナル伝達経路を次々に遮断するという明らかな証拠を示している。またＳＯＣＳ３のＧＨ増加によって、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路の活性化とＣＸＣＲ４レセプターへのＧａ；会合を妨げるＣＸＣＬ１２によって媒介される応答が制御され、走化性応答が遮断される。本発明の発明者らは、サイトカインとケモカインの応答の間でのクロストークの中でｂＧＨ−Ｔｇマウスから得られるデータをケモカイン／ケモカインレセプター対の機能的役割を理解する助けとした。現在利用できる唯一のモデルは、ＣＸＣＲ４又はＣＸＣＬ１２の欠損が誕生前においては死に至るモデルのみであるので、本発明は、サイトカインによって媒介される効果を生後の生命体においてＣＸＣＲ４を不活性化するという機能的役割に関連付けるための手段を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明のある態様によれば、ＣＸＣＲ４依存型ＨＩＶと関連のある疾患を有するヒトに抗ウィルス剤として治療上有効な量の、ＳＯＣＳ３の発現を誘導する分子及び薬学的に許容される担体を投与することからなるＣＸＣＲ４依存型ＨＩＶと関連のある疾患を有するヒトを治療する方法が提供される。
【０００８】
本発明のある態様によれば、上記分子はＧＨＲと結合する、ＣＸＣＲ４依存型ＨＩＶと関連のある疾患を有するヒトを治療する方法が提供される。
【０００９】
本発明のある態様によれば、ＣＸＣＲ４依存型ＨＩＶ活性に対して抗ウィルス作用を有する医薬組成物に使用するための化合物を同定する方法が提供される。上記方法の態様は、ＣＸＣＲ４を発現するＧＨ−Ｔｇ細胞の第１部分標本を作り、その第１部分標本をヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）粒子と接触させ、ＣＸＣＲ４を発現するＧＨ−Ｔｇ細胞の第２部分標本を作り、被検リガンドと第２部分標本を接触させ、第２部分標本をＨＩＶと接触させ、細胞の第１及び第２部分標本からウィルスを単離することからなり、第２細胞部分標本からウィルスを単離する能力が減少することにより被検リガンドがＨＩＶに対して抗ウィルス活性を有していることが示される。
【００１０】
本発明の他の態様によれば、上記細胞第２部分標本を複数の被検リガンドと接触させる、ＣＸＣＲ４依存型ＨＩＶ活性に対して抗ウィルス作用を有する医薬組成物に使用するための化合物を同定する方法が提供される。
【００１１】
本発明の他の態様によれば、ＣＸＣＲ４依存型走化性が関与する疾患に対して治療上の効果を有する医薬組成物に使用するための化合物を同定する方法が提供される。上記方法の態様は、ＣＸＣＲ４を発現するＧＨ−Ｔｇ細胞の第１部分標本を作り、ＣＸＣＬ１２と第１部分標本を接触させ、第１遊走指数を測定し、ＣＸＣＲ４を発現するＧＨ−Ｔｇ細胞の第２部分標本を作り、ＣＸＣＬ１２と第２部分標本を接触させ、第２部分標本を被検リガンドと接触させ、第２遊走指数を測定し、治療能力を決定することからなる。
【００１２】
本発明の更に他の態様によれば、治療能力は遊走指数を減少させることが要求される被検リガンドの濃度と反比例する関係にある。本発明の更に他の態様によれば、治療能力はＩＤ５０として測定することができる。ここでＩＤ５０とは遊走指数を５０％抑制するのに必要な被検リガンドの濃度として測定される服用量である。
【００１３】
本発明のまた更に他の態様によれば、ＣＸＣＲ４依存型走化性が関与する疾患に対して治療上の効果を有する医薬組成物に使用するための化合物を同定する方法であって、上記疾患が異常白血球の増加又は活性化に関わるものである方法が提供される。上記疾患は関節炎、乾癬、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、クローン病、アレルギー、喘息、ＡＩＤＳ関連脳炎、ＡＩＤＳ関連斑丘疹性皮膚発疹、ＡＩＤＳ関連間質性肺炎、ＡＩＤＳ関連腸疾患、ＡＩＤＳ関連門脈周囲性肝炎及びＡＩＤＳ関連糸状体腎炎からなる群から選択される。
【００１４】
本発明のある態様によれば、上記細胞は胸腺細胞、ＣＤ３４＋細胞、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、樹枝状細胞、マクロファージ、好中球及び血小板からなる群から選択されるＣＸＣＲ４発現細胞である、ＣＸＣＲ４依存型走化性が関与する疾患に対して治療上の効果を有する医薬組成物に使用するための化合物を同定する方法が提供される。
【００１５】
本発明の更に他の態様によれば、ＳＯＣＳ３によって阻害できる疾患に対して治療上の効果を有する医薬組成物に使用するための化合物を同定する方法であって、少なくとも一つのケモカインレセプターが発現された第１細胞を作り（上記第１細胞には少なくとも一つのＳＯＣＳ構成部分が遺伝子導入されている）、第１細胞を少なくとも一つのケモカインと接触させ、第１遊走指数を測定し、少なくとも一つのケモカインレセプターが発現された第２細胞を作り（上記第２細胞には少なくとも一つのＳＯＣＳ構成部分が遺伝子導入されている）、第２細胞を少なくとも一つのケモカインと接触させ、第２遊走指数を測定し、治療能力を決定することからなる方法が提供される。
【００１６】
本発明のある態様によれば、上記細胞がＨＥＫ細胞である、ＳＯＣＳ３によって阻害できる疾患に対して治療上の効果を有する医薬組成物に使用するための化合物を同定するための方法が提供される。
【００１７】
本発明の更に他の目的及び有利な点は以下の詳細な説明から当業者によって容易に明らかになるであろう。そこでは単に本発明を実施するのに予想されるベストモードの例示により、本発明の好ましい実施形態が示され、述べられている。理解される通り、本発明から離れなければ本発明は他の異なる実施形態を行なうことができ、細かい部分は種々の自明な観点から改変できる。従って、上記記載は本質的には例示的なものであり、限定的なものと考えられるべきではない。
【００１８】
−図面の簡単な説明−
本発明は、添付の図面と結び付けて読んだ場合に以下の詳細な記載から最も良く理解できる。一般的な慣行に従い図面の種々の特徴は実物大ではないことを強調しておく。それに対し、種々の特徴の寸法は任意に拡大・縮小される。図面には以下の図が含まれている。
【００１９】
図1はｂＧＨ−ＴｇマウスのＣＸＣＬ１２に対する走化性応答が減少していることを示している。
図２は、ＳＯＣＳ３レベルがｂＧＨ−Ｔｇマウスにおいて増加していることを示している。
図３はＩＭ−９細胞が機能性ＣＸＣＲ４及びｈＧＨレセプターを発現していることを示している。
図４はＩＭ−９細胞においてＣＸＣＬ１２がＳＴＡＴ活性化を誘導していることを示している。
図５は細胞核に対してＣＸＣＬ１２が機能的ＳＴＡＴトランスロケーションを誘導していることを示している。
図６はｈＧＨ処理がＣＸＣＬ１２が媒介する応答に影響を与えることを示している。
図７はＳＯＣＳタンパク質発現によってＣＸＣＬ１２が誘導する細胞応答が遮断されることを示している。
図８はｂＧＨ−Ｔｇマウスにおいてリンパ系器官及び小脳が欠損していることを示している。
図９はＧＨの分子機構がＣＸＣＬ１２のシグナル伝達へに影響を及ぼすことを示している。
【００２０】
しかし、本発明は同等に効果的な他の実施形態をも認めていることから、添付の図面は本発明の典型的な実施形態を示しているものでしかなく、従って図面は本発明の範囲の実施形態を限定しているものと考えるべきでは無いことに注意すべきである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
本発明を実施するために選択された実施形態及び好ましい態様を示すために図面について言及する。なおこれにより本発明は図中において描かれている態様に限定されるものと理解すべきではない。
【００２２】
本明細書で用いている通り、“ＣＸＣＲ４”という用語はケモカインレセプターに関する。より具体的には、その用語は国際薬理学連合によって定義された通りに使用されている（（Ｍｕｒｐｈｙら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．ＸＸＩＩ．  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，５２  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １４５（２０００）；この教示は全ての目的のための参照として組み込まれている）。
【００２３】
ケモカインレセプターは走化性サイトカインのケモカインスーパーファミリーの一以上のメンバーを結合させる際のシグナル伝達能力によって定義される。現在までに１８のヒトタンパク質がこの定義に当てはまり、特異的なケモカイン選択性に基づき、ＣＸＣＲ１〜５、ＣＣＲ１〜１１、ＸＣＲ１及びＣＸ３ＣＲ１と呼ばれている。またケモカインレセプターは、細胞表面のロドプシンファミリーの大きな分枝、７回膜貫通型ドメイン（７ＴＭＤ）、Ｇタンパク質連結レセプター（ＧＰＣＲ）からなる。さらに、Ｄ６及びダフィ（Ｄｕｆｆｙ）（ケモカインに対するダフィ抗原レセプター、別名ＤＡＲＣと呼ばれることもある）は、明らかにシグナル伝達をしない７ＴＭＤ哺乳類ケモカイン結合タンパク質であり、従って系統的命名法からは除外されている。現在まで、ケモカインレセプター様配列は、哺乳類、鳥類及び魚類において同定されているが、無脊椎動物、植物、酵母又は細菌では同定されておらず、これにより、比較的最近に発生したことが示唆される。共通の特徴としては、保存された構造［２５〜８０％のアミノ酸（ａａ）同一性］、Ｇタンパク質のＧｉクラスへの連結、白血球における発現及び走化性シグナル伝達等が挙げられる。割り当てられた主な生物学的機能は白血球の輸送と、免疫の監視、生得的及び適応的免疫反応、並びに、種々の形態の病的炎症等の依存プロセスである。しかし、この一般的領域内では、各ケモカインレセプターは、白血球の特定のサブセット上の発現パターンによって、及び、同一起源のリガンド発現の時間的及び場所的特異性によって決定される特定の役割を有しているようである。特定の役割は造血、血管新生、成長においても示されている。細胞ケモカインレセプターは、細胞内病原体による細胞侵入因子及び疾患伝染因子として利用されている。この例としては後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）におけるヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）コレセプターＣＣＲ５がある。ＣＸＣＲ４及び他のケモカインもＨＩＶコレセプターとして機能する。
【００２４】
ケモカインは、保持されているシステインの数と間隔に従って４つの主なグループにサブクラス化することができる。そのグループは好ましい名前としてＣＸＣ、ＣＣ、Ｃ、ＣＸ３Ｃと名付けられており、系統的命名法において使用される。ＣＸＣ、ＣＣ及びＣＸ３Ｃケモカインが４つのシステイン全てを保持しているのに対し、Ｃケモカインは他のグループの２番目と４番目のシステインに相当する２つのシステインしか有しない。ＣＣケモカインの小さなサブグループは６つのシステインを有する。ＣＸＣ及びＣＸ３Ｃケモカインは、１番目と２番目のシステインの間にアミノ酸残基が一つ（ＣＸＣ）あるか或いは３つ（ＣＸ３Ｃ）あるかによって区別され、一方ＣＣケモカインの最初の２つのシステインは近接している。ＣＣ及びＣＸＣグループは両方とも多くの公知のメンバーを有している。
【００２５】
「被検体（ｓｕｂｊｅｃｔ）」という用語は、好ましくはヒトなどの哺乳動物であるが、例えばペット用動物（犬、猫等）、家畜（牛、羊、豚、ウマ等）及び研究用動物（ラット、マウス、モルモット等）等の獣医学的な治療の必要のある動物でもよい。
【００２６】
本明細書にて使用している、化合物の「治療上有効な量」とは、異常白血球の増加及び／又は活性化に関わる疾患を伴う被検体において、レセプターへのケモカインの結合によって媒介される１以上のプロセスの阻害が結果として起こる量である。そのようなプロセスには、白血球遊走、インテグリンの活性化、細胞内遊離カルシウム濃度の一時的増加及び前炎症性メディエーターの顆粒の放出等が含まれる。また、化合物の「治療上有効な量」とは、例えば、異常白血球の増加及び／又は活性化に関わる疾患に関連する症状の抑制又は減少が結果として起こるような量等の、所望の治療上及び／又は予防上の効果を達成するために十分な量である。
【００２７】
個体（個人）に投与する化合物の量は疾患のタイプと重症度、並びに、全般的な健康、年齢、性別、体重及び薬物に対する耐性等の個体特性に依存する。また疾患の程度や重症度及びタイプ等にも依存するであろう。当業者であればこれらの要因及び他の要因を基に適切な処方量を決定できるであろう。典型的には、化合物の治療上有効な量は、成人一人に対し、１日当たり約０．１ｍｇから１日当たり約１００ｍｇまで変わり得る。好ましくは上記処方量は１日当たり約１ｍｇから約１００ｍｇの範囲である。ケモカインレセプター機能のアンタゴニストもまた、例えばテオフィリン、β−アドレナリン作動性気管支拡張薬、コルチコステロイド、抗ヒスタミン剤、抗アレルギー剤等の１以上の治療用添加剤と組み合わせて投与してもよい。
【００２８】
上記化合物は、例えばカプセル、懸濁液若しくは錠剤による経口投与、又は、非経口投与等のいずれの好適な経路により投与してもよい。上記非経口投与には、例えば筋肉内、静脈、皮下又は腹膜内への注射等の全身投与等が含まれる。更に上記化合物は、経口投与（食事等）、局所投与、吸入（例えば気管支内吸入、鼻腔内吸入、経口吸入又は点鼻薬等）又は直腸投与等により、治療すべき疾患や病的状態に応じて行なうことができる。経口又は非経口投与が好ましい投与形態である。
【００２９】
上記化合物は、ＨＩＶ感染、炎症性疾患又は上述の他の疾患の治療のために医薬組成物の一部としての薬学的に許容される医薬用担体と共に個体に投与することができる。投与すべき化合物の剤型はどの投与経路を選択するかによって変わるであろう（例えば溶液、エマルション、カプセル等）。好ましい医薬用担体は化合物と相互作用しない不活性な成分を含んでもよい。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、マック・パブリッシング・カンパニー、イーストン、ペンシルベニアに記載された方法等の標準的な医薬製剤技術を使用する事ができる。非経口投与に好適な医薬用担体としては、例えば、滅菌水、生理食塩水、静菌性生理食塩水（約０．９ｍｇ／ｍｌのベンジルアルコールを含んだ生理食塩水）、リン酸緩衝生理食塩水、ハンクス液、リンガー乳酸等が挙げられる。組成物をカプセル化する方法（例えば硬質ゼラチン又はシクロデキストランのコーティング中へのカプセル化等）は当該技術分野で公知である（Ｂａｋｅｒら．，“Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｃｔｉｖｅ  Ａｇｅｎｔｓ”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９８６）。
【００３０】
走化性：ＣＸＣＲ４依存型遊走は、限定されるわけではないが、多くの細胞のタイプの中でも、好酸球、末梢血単核細胞又はＨＬ６０細胞のいずれかに関して評価された白血球走化性として決定することができる。好適な細胞系は、限定される訳ではないが、Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（マナッサス、バージニア）又はｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ポートンダウン、ソールズベリー、イギリス）等の多くの市販の原料から得ることができる。本発明のある実施形態においては、運動性を測定する細胞のタイプに適したサイズの空孔を有するＣｏｓｔａｒ  Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｉｎｓｅｒｔ（コーニング・ライフ・サイエンス）上に細胞が播種されるか或いは培養される。詳細なプロトコルは製造業者から得ることができる。検定用培地は典型的にはＣＸＣＲ４及び／又は被検リガンドを含んでいる。
【００３１】
本発明のある態様によれば、ＣＸＣＲ４依存型ＨＩＶと関連のある疾患を有するヒトを治療する方法であって、上記分子がＧＨＲと結合する方法が提供される。
【００３２】
本発明のある態様によれば、ＣＸＣＲ４依存型ＨＩＶ活性に対して抗ウィルス作用を有する医薬組成物に使用するための化合物を同定する方法が提供される。上記方法の態様は、ＣＸＣＲ４を発現するＧＨ−Ｔｇ細胞の第１部分標本を作り、その第１部分標本をヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）粒子と接触させ、ＣＸＣＲ４発現ＧＨ−Ｔｇ細胞の第２部分標本を作り、被検リガンドと第２部分標本を接触させ、その第２部分標本をＨＩＶと接触させ、第１及び第２細胞部分標本からウィルスを単離することからなり、第２細胞部分標本からウィルスを単離する能力により被検リガンドがＨＩＶに介して抗ウィルス活性を有していることが示される。
【００３３】
本発明のある態様によれば、ＣＸＣＲ４依存型ＨＩＶ活性に対する抗ウィルス作用を有する医薬組成物に使用するための化合物を同定する方法であって、上記第２細胞部分標本を複数の被検リガンドと接触させる方法が提供される。
【００３４】
本発明の他の態様によれば、ＣＸＣＲ４依存型走化性が関与する疾患に対して治療上の効果を有する医薬組成物に使用するための化合物を同定する方法が提供される。上記方法の態様は、ＣＸＣＲ４を発現するＧＨ−Ｔｇ細胞の第１部分標本を作り、ＣＸＣＬ１２と第１部分標本を接触させ、第１遊走指数を測定し、ＣＸＣＲ４を発現するＧＨ−Ｔｇ細胞の第２部分標本を作り、ＣＸＣＬ１２と第２部分標本を接触させ、第２部分標本を被検リガンドと接触させ、第２遊走指数を測定し、治療能力を決定することからなる。
【００３５】
本発明の更に他の態様によれば、治療能力は遊走指数を減少させるために要求される被検リガンドの濃度と反比例する関係にある。本発明の更に他の態様によれば、治療能力はＩＤ５０として測定することができる。ここでＩＤ５０とは遊走指数を５０％抑制するのに必要な被検リガンドの濃度として測定される服用量である。
【００３６】
本発明のまた更に他の態様によれば、ＣＸＣＲ４依存型走化性が関与する疾患に対する治療上の効果を有する医薬組成物に使用するための化合物を同定する方法であって、上記疾患が異常白血球の増加又は活性化に関わるものである方法が提供される。上記疾患は関節炎、乾癬、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、クローン病、アレルギー、喘息、ＡＩＤＳ関連脳炎、ＡＩＤＳ関連斑丘疹性皮膚発疹、ＡＩＤＳ関連間質性肺炎、ＡＩＤＳ関連腸疾患、ＡＩＤＳ関連門脈周囲性肝炎及びＡＩＤＳ関連糸状体腎炎からなる群から選択される。
【００３７】
本発明のある態様によれば、ＣＸＣＲ４依存型走化性が関与する疾患に対する治療上の効果を有する医薬組成物に使用するための化合物を同定する方法であって、細胞は胸腺細胞、ＣＤ３４＋細胞、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、樹枝状細胞、マクロファージ、好中球及び血小板からなる群から選択されるＣＸＣＲ４を発現する細胞である方法が提供される。
【００３８】
本発明の更に他の態様によれば、ＳＯＣＳ３によって阻害できる疾患に対する治療上の効果を有する医薬組成物に使用するための化合物を同定するための方法であって、少なくとも一つのケモカインレセプターが発現された第１細胞を作り（上記第１細胞には少なくとも一つのＳＯＣＳ構成部分が遺伝子導入されている）、第１細胞を少なくとも一つのケモカインと接触させ、第１遊走指数を測定し、少なくとも一つのケモカインレセプターが発現された第２細胞を作り（上記第２細胞には少なくとも一つのＳＯＣＳ構成部分が遺伝子導入されている）、第２細胞を少なくとも一つのケモカインと接触させ、第２遊走指数を測定し、治療能力を決定することからなる方法が提供される。
【００３９】
本発明のある態様によれば、ＳＯＣＳ３によって阻害できる疾患に対する治療上の効果を有する医薬組成物に使用するための化合物を同定するための方法であって、上記細胞がＨＥＫ細胞である方法が提供される。
【００４０】
好ましい実施形態では、未処理又はＣＴｘ及びＰＴｘで１６時間処理したＩＭ−９細胞（シグマ）を、膜をあらかじめＶＩ型コラーゲン（シグマ；２０ｇｇ／ｍｌ）でコートした
２４穴トランスマイグレーションチャンバー（５ｇｍ径空孔；トランスウェル；コスター・コープ、キャンブリッジ、マサチューセッツ）の上側のウェルに播種した（０．ｍｌ中に０．２５×１０６セル）。その後、６０ｎＭ  ＣＸＣＬ１２（ペプロテック、ロッキーヒル、ニュージャージー）（０．２５％のＢＳＡを含んだ０．６ｍｌ  ＲＰＭＩ中）を下側のウェルに加えた。プレートをインキュベート（１２０分、３７℃）し、下側のチャンバーに移動した細胞の数を記載（２４）の通りに数える。ｈＧＨ（ゲノトロピン、ファルマシア  ＡＢ、ウプサラ（Ｕｐｐｓａｌａ）、スウェーデン）処理が用いられた場合には、細胞（１０６／ｍｌ）は０．1％ＢＳＡ及び１０微生物／ｍｌの組換ｈＧＨを含んだＲＰＭＩ１６４０中で指定の時間インキュベートする。
【００４１】
初代マウス細胞が評価された場合、脾臓、リンパ節及び骨髄の細胞が得られ、上述の条件において２４穴トランスマイグレーションチャンバー（３ｇｍ径空孔；トランスウェル）の上側のウェルに播種する（０．１ｍｌ中０．２５×１０６細胞）。脾臓細胞及び骨髄細胞の調製においては、赤血球をＮＨ４Ｃｌで溶解させる（５分、３７℃）
【００４２】
新たに単離した初代細胞を枯渇させることが必要な場合には、細胞を、０．１％ＢＳＡを補給したＲＰＭＩ１６４０中に播種し（１ｍｌ中に１×１０６細胞）、培養した（２時間、３７℃）。洗浄後、ＣＸＣＬ１２に応じた遊走を上述のように評価した。
【００４３】
ＨＥＫ−２９３細胞の遊走は９６穴マイクロチャンバー（ニューロプローブ・インク、ゲーサーズバーグ、メリーランド）中で検討した（３８）。数種類の濃度のケモカインを下側のウェル（３０ｐｌ／ウェル）に入れ、細胞を上側のウェル（２００〜ｔｌ／ウェル、３×１０６細胞／ｍｌ）に入れた。１０ｇｍの空孔を持つポリビニルピロリドンフリーのフィルター（ニューロプローブ）を２０ｗｇ／ｍｌのＶＩ型コラーゲン（シグマ）でプレコート（２時間、３７℃）した。チャンバーをインキュベートし（５時間、３７℃）、その後フィルターを取り除いて上側部分の細胞を拭き取った。フィルター上の細胞を固着させ着色した（０．５％クリスタルバイオレット、２０％メタノール）。細胞遊走が起こった位置で青のスポットが発生し、遊走を濃度によって定量化することができた（ナショナル・インスティチュート・オブ・ヘルス・イメージ・ソフトウェア）。遊走指数はスポットの平均強度によって算出した。
【００４４】
ＣＸＣＲ４依存型走化性：種々のケモカインは白血球及び他の細胞のタイプにおける遊走を誘導する。ＣＸＣＲ４依存型走化性はＣＸＣＬ１２によって特異的に誘導される走化性として定義される。
【００４５】
治療能力：本発明のある態様により、本発明のＳＯＣＳペプチドの発現を増加させるレセプターに結合する化合物、特にＳＯＣＳ３のスクリーニングの手段が提供される。ＳＯＣＳ３はＣＸＣＬ１２の、そのレセプターであるＣＸＣＲ４への結合に依存する細胞機能を阻害できる。限定する訳ではないが、ＣＸＣＬ１２／ＣＸＣＲ４に依存する細胞プロセスの例としては白血球の走化性がある。より一般的には、ＣＸＣＬ１２／ＣＸＣＲ４の相互作用の影響下で多くの細胞のタイプが遊走する。本発明はＳＯＣＳ放出レセプターへの結合によって上記細胞プロセスを阻害するリガンドに関する。レセプターへのそのような結合が当該リガンドの濃度又は服用量に依存することは従来技術において公知である。治療能力の第一の定義は遊走指数を５０％減少させる被検リガンドの濃度のことである。治療能力の第二の定義はＩＤ５０と名付けられた、遊走指数を５０％減少させる被検リガンドの服用量のことである。
【００４６】
抗ウィルス活性：ケモカイン又はその誘導体若しくは類似体のケモカインレセプターへの結合能力及びそれによるウィルスの感染又は複製の妨害を当該技術分野で公知の種々の方法によって検定することができる。限定されるわけではないが、例えばＤｅＶｉｃｏら（米国特許第６２１４５４０号明細書）は抗ウィルス活性、より具体的には抗ＨＩＶ活性が決定できるいくつかの方法を開示している。被検リガンドによって発揮される抗ウィルス活性は、例えば融合細胞の形成を阻害する能力又は無細胞ウィルスによる感染を阻害する能力をテストでき、細胞の増殖及び生存能力に関する化合物の効果を評価することができる、容易に実施できるインビトロでの検定により測定することができる。これらの検定を用いて、ケモカイン、誘導体及び／又は類似体が所定のウィルス又は免疫不全ウィルス株に対して発揮する相対的抗ウィルス活性及びウィルス及び株に特異的な阻害活性に最も適したケモカイン、誘導体及び／又は類似体を組み合わせた処方を決定する事ができる。
【００４７】
ある実施形態においては、被検リガンドのインビトロでのＨＩＶによって誘導される融合細胞形成を阻害する能力をテストするために細胞融合アッセイが用いられる。そのようなアッセイは、慢性のＨＩＶ感染細胞及び検定を行なうケモカイン、誘導体又は類似体を含有する組成物の存在下において、未感染のＣＤ４．ｓｕｐ．＋細胞を培養することを必要とする。それぞれに対し、濃度はある幅を持った範囲でテストしても良い。この範囲にはケモカイン、誘導体及び／又は類似体が全く加えられていない対照培養を含むべきである。培養のための標準条件には、従来から通常の当業者に良く知られている条件が用いられる。適当な期間でのインキュベーションを、例えば３７℃、２４時間等で行なった後、培養を顕微鏡観察により細胞融合及び融合細胞形成の指標である多核性の巨大細胞が存在するか否かについて検査した。そのようなアッセイをＣＸＣＬ１２の存在下で及び存在しない状態で、ＣＸＣＲ４を発現する細胞を用いて行なうと、ＣＸＣＲ４依存型ＨＩＶに対する被検リガンドの抗ウィルス活性が決定される。
【００４８】
［結果］
−ｂＧＨ−ＴｇマウスはＣＸＣＬ１２に対する走化性応答が減少している：ＳＯＣＳ３増加の役割−
【００４９】
本発明の発明者らは、以前にケモカインとサイトカインの両方がＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路を活性化することを示している。シグナル伝達における考えられ得るサイトカイン／ケモカインのクロストークを分析するため、我々はウシ成長ホルモン（ｂＧＨ−Ｔｇ）をコードする融合遺伝子を発現するトランスジェニックマウスモデルを使用した。これらのマウスは腎臓病、糖尿病、関節炎及び自己免疫疾患、並びに、Ｔ細胞機能の変性を示す。さらに、Ｔ細胞副次個体群（サブポピュレーション）における細胞の数はわずかな変化しか示さないのに対し、骨髄は深刻な前Ｂ細胞欠失を示す（３０、３１）。ケモカインに対するインビボ応答を評価するために、ＣＸＣＬ１２をｂＧＨ−Ｔｇマウス及び対照の同腹仔の腹膜腔中に注射した。１時間後、遊走した細胞を回収し、特異的な細胞マーカーを用いてフローサイトメトリーによって分析した。ｂ２２０／ＣＤ４５及びＣＤ１  １ｂ／ＣＤ４５の両方でそれぞれ着色した２つの結果によって示されているように、ＣＸＣＬ１２が注射されたｂＧＨ−Ｔｇマウスにおいて、未成熟なＢ細胞及び顆粒球／マクロファージは腹膜中に存在しない（図１Ａ）。他の個体群においては目立った変化は観察されなかった（図はなし）。
【００５０】
この減少したインビボ応答を特性化するために、脾臓、リンパ節及び骨髄細胞を生後３カ月のｂＧＨ−Ｔｇマウスから得、インビトロでＣＸＣＬ１２勾配に向けて遊走させた。非Ｔｇ同腹仔から得られる細胞のＣＸＣＬ１２遊走を対照として測定した。非Ｔｇマウスから得られる細胞は通常通りＣＸＣＬ１２に対して応答するのに対し、ｂＧＨ−Ｔｇマウス細胞は細胞遊走において顕著な減少を示した（図１Ｂ）。ｂＧＨ−ＴｇマウスにおけるＣＸＣＬ１２に対する減少した走化性応答の基礎となる機構を分析するために実験を始めた。ＰＣＲによるディファレンシャルＲＮＡディスプレイ分析（ＤＤＰＣＲ）によっていくつかの遺伝子の明瞭な発現が明らかになり、その中でもＳＯＣＳ３が突出していた。ＤＤＰＣＲのデータはノーザンブロットによって確認した。ｂＧＨ−Ｔｇマウスの脾臓、リンパ節及び骨髄細胞は非Ｔｇ同腹仔よりも高い濃度のＳＯＣＳ３を発現させた（図２Ａ、左）。充填同等性（ｌｏａｄｉｎｇ  ｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ）はｅＦｌａプローブと膜を再ハイブリダイズさせることにより確認した（図２Ａ、右側）。
【００５１】
ＳＯＣＳはサイトカイン応答の陰性対照（ネガティブコントロール）に関係するタンパク質であり、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路を阻害する。その発現はサイトカインレセプターのシグナル伝達によって決まる。そのレセプターに結合した後、ＧＨはＳＯＣＳ３を活性化させ、ＧＨ応答を調節する。ＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路はＣＸＣＬ１２シグナル伝達に関与するため、本発明の発明者らはＣＸＣＬ１２に対する走化性応答の欠如が、ＧＨによって媒介されるＳＯＣＳ３の増加によって促進されるか否かをテストした。ＳＯＣＳ３濃度は、ＧＨを含まない媒介においてｂＧＨ−Ｔｇマウス由来の骨髄細胞のインビトロでの枯渇（ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ）（１２０分）によって減少し（図２Ｃ）、未枯渇細胞とは対照的にＣＸＣＬ１２に応じた遊走能力を復活させる（図２Ｂ）。まとめると、これらの実験によってＣＸＣＬ１２のシグナル伝達の陰性制御（ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）におけるＧＨに対する直接的な役割が定められ、これによりこのケモカインに対する走化性応答の調節におけるＳＯＣＳタンパク質の役割を評価することができるようになる。
【００５２】
ＣＸＣＬ１２はＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路を活性化する：ヒトＩＭ−９Ｂ細胞系はＣＸＣＲ４のみならずＧＨレセプターを発現する。これは特定の抗体を用いたフローサイトメトリーによって示されている（図３Ａ）。我々はこれらの細胞におけるＣＸＣＲ４により媒介される機能を、ヒトＶＩ型コラーゲンでコートされたトランスウェル中にてＣＸＣＬ１２の濃度を増加させながらそれに対するＩＭ−９細胞の遊走応答を分析することによりテストした。遊走指数が５倍に増加するという最大の効果はＣＸＣＬ１２が５０ｎＭの時に観察された（図３Ｂ）。他の細胞のタイプに関し（１４）、この効果はＰＴｘ処理によって遮断され（図３Ｂ）、一方、その後ＣＴｘと共にインキュベーションを行なっても効果は見られない（図なし）。予測した通り、ｈＧＨは、細胞を活性化する能力（３２）及びＣＸＣＬ１２応答を遮断する能力（図３Ｃ）があるにも関わらず、細胞遊走を誘導しない（図３Ｂ）。この効果は表面のＣＸＣＲ４量を減じることによって媒介されているものではない（図３Ｄ）。ＧＨ前処理はＣＸＣＬ１２によって媒介されるＣＸＣＲ４のインターナリゼーションを防ぎ、ｈＧＨが、表面のＣＸＣＲ４量を妨害するよりもむしろＣＸＣＬ１２シグナル伝達を妨害することを示す。
【００５３】
ｈＧＨＲをも発現するＭＯＬＴ４  Ｔ細胞系を用いて、本発明の発明者らはＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路の迅速な会合及び活性化と同様に、ＣＸＣＬ１２の結合の後ＣＸＣＲ４がレセプターの二量化を起こすことを示している（１６）。本発明の発明者らは、Ｂ細胞系におけるＣＸＣＲ４を通じたシグナル伝達にはこの経路の活性化も要求されることを観察した。実際、ＣＸＣＬ１２はＪＡＫ１及びＪＡＫ３のＣＸＣＲ４との会合を促進し、その後迅速なチロシンリン酸化が起こる。その結果として、ＣＸＣＲ４に対する結合（図なし）及びそのリン酸化パターン（図４Ａ）によって示される通り、ＳＴＡＴ１、２、３及び５（ＳＴＡＴ４又は６ではない）もまた活性化される。
【００５４】
より興味深いのは、ＣＸＣＬ１２活性化後のＳＴＡＴのＳｅｒ／Ｔｈｒリン酸化である。ホスホセリン−ホスホスレオニン抗体の混合物を用いて、ＳＴＡＴ３のＳｅｒ／Ｔｈｒリン酸化の経時変化の検討を行ない、チロシンリン酸化の反応速度との相関を示した（図４Ｂ）。両方のケースにおいて、最大リン酸化は刺激の１５分後に起こる。
【００５５】
ＣＸＣＬ１２によって刺激されたＩＭ９細胞の核抽出物を、抗ＳＴＡＴ抗体を用いたウェスタンブロットによって分析し、最大核トランスロケーションを活性化の後６０分後に観察した。
５Ａ）核マーカーとして抗ｐｏｌ−ＩＩ抗体を用いたウェスタンブロット法で分析した核抽出物は細胞質の汚染が無い。このことは抗−ｐ−アクチン細胞質マーカー抗体（図なし）を用いて展開させることによって確認した。予想した通り、ＳＩＥ結合活性はケモカイン処理の後検出され、ＥＭＳＡによって測定された（図５Ｂ）。核抽出物中のタンパク質の量はタンパク質検出キットを用いて制御した。
【００５６】
−ＣＸＣＬ１２によって誘導されるＳＯＣＳ３の増加は機能的ＣＸＣＲ４活性を阻害する−
ＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路のサイトカイン活性化によってＳＯＣＳの増加が起こり、それはサイトカインシグナル伝達の陰性フィードバックに次々に関与する。ＩＭ−９細胞においてＣＸＣＬ１２によって誘導されるＳＴＡＴトランスロケーションの結果としてＳＯＣＳが増加するか否かを評価した。抗ＳＯＣＳ抗体を用いたウェスタンブロットにおいて分析される、ＣＸＣＬ１２によって刺激されたＩＭ−９細胞由来の溶解物においてＳＯＣＳ３のみが検出された（図５Ｃ）。ＳＯＣＳ３の時間依存性増加は、ｈＧＨによって処理されたＩＭ−９細胞由来の溶解物の、抗ＳＯＣＳ３抗体を用いたウェスタンブロット分析において見られた（図６Ａ、右側図）。ＧＨによって媒介されたＳＯＣＳ３の増加は機能的重要性を有する。なぜならＣＸＣＬ１２に対する遊走応答はＧＨで前処理したＩＭ−９細胞において深刻なほど減少するからである（図６Ａ、中央図）。
【００５７】
次に、我々はＳＯＣＳ３が増加した条件下で、ＣＸＣＬ１２によって誘導されるＪＡＫ及びＧ：タンパク質のＣＸＣＲ４への会合を分析した。血清欠乏ＩＭ−９細胞（未処理又はＨＧＨで処理したもの）は５０ｎＭのＣＸＣＬ１２を用いてそれぞれ別々の時刻に刺激した。細胞溶解物は抗ＣＸＣＲ４抗体を用いて免疫沈降させ、特定の抗Ｇａ；（図６Ｂ）及び抗ＪＡＫ３抗体（図６Ｃ）を用いて免疫ブロットした。タンパク質充填同等性（ローディング・イクイバレンス）は抗ＣＸＣＲ４抗体を用いて膜を再ブロットすることにより制御した。ｈＧＨ処理によって、ＣＸＣＲ４へのＪＡＫ３とＧａ；の結合を両方とも遮断した。従って、ｈＧＨ処理は細胞表面のＣＸＣＲ４量に影響を与えることなく、そのシグナル伝達を直接的に変えることによりＣＸＣＬ１２によって媒介される応答に影響を与える。
【００５８】
ＣＸＣＬ１２応答の遮断におけるＳＯＣＳ３増加の役割を確認するため、ｐＥＦ−ＦＬＡＧ−Ｉ／ｍＳＯＣＳ１、ｐＥＦ−ＦＬＡＧ−Ｉ／ｍＳＯＣＳ２及びｐＥＦ−ＦＬＡＧ−Ｉ／ｍＳＯＣＳ３構成部分に一時的に移入されたＨＥＫ−２９３細胞をＣＸＣＬ１２勾配に応じて遊走させた。ＳＯＣＳ２を発現する細胞の遊走への影響は見られなかったが、ＳＯＣＳ１及びＳＯＣＳ３発現細胞の遊走指数の明らかな減少が見られた（図７Ａ）。抗Ｆｌａｇ抗体を用いた細胞溶解物のウェスタンブロット法により各実験においてＳＯＣＳ発現を制御した（図７Ｂ）。これらのデータは少なくともＳＯＣＳ３が、且つ、ひょっとするとＳＯＣＳ１までもがＣＸＣＬ１２シグナル伝達の陰性制御因子であることを示しており、またケモカインとサイトカインシグナル伝達の間のクロストークの存在を明確に示している。
【００５９】
−ｂＧＨ−Ｔｇの表現型はＣＸＣＲ４ヌルマウスのものと類似している−
まとめると、示されているデータによって、ＧＨによるＳＯＣＳ分子の増加はケモカイン応答に影響を及ぼすことを示している。少なくともＧＨＲ及びＣＸＣＲ４が共に発現しているそれらの細胞、器官又は組織内において、ｂＧＨ−Ｔｇマウスが機能的ＣＸＣＲ４−ＣＸＣＬ１２不活性化の生後の効果を解明するのに適したモデルであるか否かという点についても探究された。ＣＸＣＲ４又はＣＸＣＬ１２の欠損の胎児段階での致死的な作用のせいでこれは現在のところ不可能である（１０、１３、１４）。
【００６０】
ＣＸＣＲ４−’とＣＸＣＬ１２−／−マウスの両方はニューロン遊走（１５）、器官の血管新生及び造血（３３）において全く同一の欠陥を示す。これら両方のマウスのモデルにおいて、Ｔリンパ球新生は影響を受けず、一方Ｂリンパ球新生は減少する。Ｂ細胞前駆体は胎児の肝臓及び骨髄において大きく減少し、Ｂ細胞及び顆粒球前駆体は末梢の方へ放出される（３３）。ｂＧＨ−ＴｇとＣＸＣＲ４及びＣＸＣＬ１２ノックアウトマウスの間の関係を更に調べるために、我々は成体ｂＧＨ−Ｔｇマウスのリンパ器官及び小脳の構造を分析した。脾臓の免疫組織化学により、Ｂ及びＴ細胞領域の異常と共に小胞構造の変化が起こっていることが示された（図８Ａ）。リンパ節分析は、対照同腹仔と比較した場合のｂＧＨ−Ｔｇマウスの胚細胞中心における増加によって特徴付けられる（図８Ｂ）。さらに、ｂＧＨ−Ｔｇマウスでは対照と比較した場合に骨髄Ｂ２２０＋細胞が増加することが示されている（図８Ｃ）。これらの異常は、ＣＸＣＲ４−胎児肝臓前駆体によって再構成された照射マウスがリンパ器官異常を示さないので、ｂＧＨ過剰発現がＣＸＣＬ１２応答の不活性化に加えてインビボでの欠陥を引き起こすことを示唆している（３３）。それにもかかわらず、ＣＸＣＬ１２’マウスの場合（１３）のように、対照の同腹仔と比較するとｂＧＨ−Ｔｇマウスでは末梢外顆粒層（ＥＧＬ）の密度が減少し（図８Ｄ上側）、プルキンエ細胞層が破壊される（図８Ｄ、下側）と共に小脳の欠陥が示される。この発見はｂＧＨ−Ｔｇ及びＣＸＣＬ１２−ｘ−非応答性が類似していることを支持している。
【００６１】
機能性リンパ球微環境、器官形成及び白血球パトロールは細胞遊走によって確立する。これには例えばインテグリン、セレクチン等の細胞表面のリガンド及びレセプターと、サイトカイン、ケモカイン及びそのレセプター等を含む溶解性メディエーターとが一体になって作用することが必要とされる。前者のグループはローリング及び細胞接着に関わるのに対し、後者のグループは細胞の運動性に必要なリンパ造血及び細胞分極において重要な役割を果たす（３４）。生理的条件下での選択的な役割に加え、ケモカインは炎症、傷の治癒及び血管形成においてもまた重要な機能を有している。
【００６２】
近年、造血細胞増殖、分化、機能がサイトカイン−ケモカインネットワークの組織的な作用によって制御されていることが立証された（３５）。細胞表面上でのサイトカインのそのレセプターへの結合に引き続いてレセプターのオリゴマー化が起こり、ＪＡＫキナーゼ活性化を誘導する。次に活性化されたＪＡＫキナーゼはサイトカインレセプターをリン酸化し、他のシグナル伝達分子、とりわけＳＴＡＴファミリータンパク質等の増加及びその後の活性化を引き起こす。活性化されたＳＴＡＴタンパク質は細胞核にトランスロケーションし、サイトカインシグナル伝達の陰性制御因子のファミリーをコードするものやＳＯＣＳタンパク質等の、ある範囲のサイトカイン応答遺伝子の転写を媒介する（２３）。これらの分子はその効果をＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路に対して直接働かせるため、最近注目を浴びている。実際、ＬＩＦ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＧＨ、ＩＦＮ−ｙ及びレプチン等の現在迄に分析されているサイトカインの大部分は数種類のＳＯＣＳファミリーのメンバーを組織特異的に誘導する（３６）。
【００６３】
サイトカインのように、ケモカインはそのレセプターのオリゴマー化及びＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路の活性化を刺激する（３７、３８）。それにも関わらず、ＤＲＹモチーフの保存等のケモカインレセプター間の類似性により、オリゴマー化及びＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路の活性化は最初に論じられたＣＣＲ２だけに限られたことではないことが示唆される（２２、２４）。ＣＣＲＳ及びＣＸＣＲ４は両方とも数種類のＪＡＫ／ＳＴＡＴファミリーメンバーを細胞系統に依存する方式で活性化する。実際に、アゴニスト誘導ａ２アドレナリン様レセプター（３９）、オピオイドレセプター（４０）及びＧＡＢＡレセプター（４１）等の他のＧＰＣＲレセプターの二量化が述べられてきた。同様にＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路を活性化するアンジオテンシンＩＩ（４２）、ＴＳＨ（４３）及びａメラノサイト刺激ホルモン（ａ−ＭＳＨ）レセプター（４４）にもこれは当てはまる。
【００６４】
ＣＸＣＲ４は、我々がＭＯＬＴ４細胞系によって示した通り（１６）、また本明細書ではＩＭ−９ヒトプレＢ−細胞系において確認している通り、ＣＸＣＬ１２に応じてＴｙｒリン酸化される。ＭＯＬＴ４とは異なり、ＩＭ−９において我々はＴｙｒリン酸化とＪＡＫ１とＪＡＫ３（ＪＡＫ２ではない）のＣＸＣＲ４への会合を観察した。これはＣＸＣＬ１２シグナル伝達に関与するＪＡＫタンパク質に関する特異性を授ける細胞成分を示している。ＣＸＣＬ１２もまたＳＴＡＴ１、２、３及び５等の数種の転写ＳＴＡＴタンパク質のＣＸＣＲ４会合を促進する。ＳＴＡＴのＴｙｒリン酸化は、ＳＴＡＴ二量化、核トランスロケーション及びＤＮＡ結合におけるその役割によってこのタンパク質ファミリーの転写活性を制御している（４５）。我々はまた、ＣＸＣＬ１２によって媒介されるＳＴＡＴのＳｅｒ／Ｔｈｒリン酸化も観察した。このリン酸化の経時変化は、ＳＴＡＴによって媒介される遺伝子転写の制御に大きく関わるＳｅｒ／ＴｈｒホスファターゼＰＰ  ＩからのＳＴＡＴの解離と一致する（４６）。
【００６５】
サイトカインに対して述べられているように、ＣＸＣＬ１２によって媒介されるＳＴＡＴ活性化及び核トランスロケーションはＳＯＣＳ３タンパク質の増加を促進する。このＣＸＣＬ１２によって媒介されるＳＯＣＳ３の増加はＣＸＣＲ４に対するＪＡＫ及びＧ；の会合を排除する。これはＳＴＡＴ活性化以前にＳＯＣＳが作用することを示している。
【００６６】
成長ホルモンは胎盤のラクトゲン及びプロラクチンが含まれるサイトカインファミリーに属する。子供の間の骨格の成長、成体における様々な同化プロセスの制御等の生理学的効果は大いに異なる。生化学的証拠、分子的証拠及び機能的証拠によって明らかにされているように、リンホサイトはＧＨに対するレセプターをも有しており、ＧＨは造血系において成長因子及び分化因子として関与する（５０）。ＧＨの結合の後、レセプターは二量化し、ＪＡＫ２キナーゼを通してシグナル伝達する。このシグナル伝達経路には数種のタンパク質、中でも潜伏性細胞質転写因子であるＳＴＡＴのチロシンリン酸化等が含まれる。これによりｉｎ  ｖｉｖｏ及びｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいてこの種々の遺伝子、とりわけＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３及びＣＩＳ  ｍＲＮＡの増加が起こる（５１）。ＳＯＣＳは、チロシンキナーゼＪＡＫ２（ＳＯＣＳ１）及び／又はＧＨＲの（ＣＩＳ及びＳＯＣＳ３）細胞質の尾部（テール）とのホスホチロシン依存性結合相互作用を介するＳＴＡＴ５ｂへのレセプターシグナル伝達を阻害する（５２）。
【００６７】
ＳＯＣＳ３の増加に繋がる、ＧＨ及びＣＸＣＬ１２の両方のＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路を刺激する能力を調べるため、本発明の発明者らは、モデルの系としてＣＸＣＬ１２及びＧＨを用いてケモカインとサイトカインの間の考えられ得る関係を検討した。本発明によればＩＭ−９細胞はｈＧＨに応じて遊走しないが、ＣＸＣＬ１２に応じて遊走することが示されている。それにも関わらず、細胞がｈＧＨでＳＯＣＳ３を増加させる条件下で前処理された場合、ＣＸＣＬ１２勾配に応じた細胞の遊走は減少する。ＳＯＣＳ３が抑制されると、走化性応答は回復する。最終的に、ＨＥＫ−２９３細胞におけるＳＯＣＳ３の過剰発現によりＣＸＣＬ１２に対する走化性応答は起こらない。しかしながらｈＧＨ処理細胞の抗ＣＸＣＲ４を用いた染色によって示したように、ｈＧＨは細胞膜でのＣＸＣＲ４の量に影響を与えない。先端巨大症又は抗プロラクチン血症に冒された被検者から精製した好中球においてＮ−ホルミルメチオニル−フェニルアラニン勾配に対するインビトロでの走化性が減少していることが示されているため、インビボでの実験もまたこの相互作用の考えられ得る役割を示している（５３）。本発明の発明者らは、ｂＧＨ−Ｔｇマウスを使用して、ＣＸＣＬ１２によって刺激される走化性応答におけるＧＨの役割を更に検討した。さらにｂＧＨ−Ｔｇマウスの分析によって、ＳＯＣＳ３の量が減少していること、並びに、腎臓病、糖尿病、高血圧、不妊症、神経障害、自己免疫疾患（３０）、Ｔ細胞機能の深刻な変性及び骨髄中のプレＢ細胞の減少（３１）等のいくつかの異常があることが示された。これは、ケモカインの応答への直接的な又は媒介された影響による免疫応答制御におけるＧＨの直接の効果を示している。これらのマウスは、Ｔ細胞リンパ球生成は影響を受けないものの、Ｂ細胞リンパ球新生が深刻なほど減少しており、胎児の肝臓における骨髄新生が減少しており、また骨髄における骨髄新生は実質的に無かった（３１）。
【００６８】
ＣＸＣＲ４とＣＸＣＬ１２の欠損は、成長中の造血系における欠損と共に、胎児の段階では致命的である（３３）。本発明の発明者は、産後に真っ先に影響を受けるモデルであるｂＧＨ−ＴｇマウスにおけるＣＸＣＬ１２の役割を検討した。ＣＸＣＬ１２に対する走化性応答のインビトロでの分析によって、非Ｔｇ対照と比較して、ｂＧＨ−Ｔｇマウスの脾臓、リンパ節及び骨髄細胞において走化性応答が減少しているのが明らかになった。ｂＧＨ−Ｔｇ動物から得た細胞がインビトロでの飢餓によってＧＨを枯渇された場合、遊走は通常のレベルに回復した。腹膜腔へのＣＸＣＬ１２の注射の後、ＣＸＣＬ１２によって媒介されたインビボでの応答を分析した場合、ｂＧＨ−Ｔｇマウスにおいて、非Ｔｇ同腹仔と比較した場合に遊走中の細胞において顕著な減少が見られた。これらの結果により、これらのマウスから得られる細胞におけるＳＯＣＳ３  ｍＲＮＡ量の増加に従って、ＣＸＣＬ１２が媒介する応答における可能性のある役割がＧＨに対して割り当てられる。
【００６９】
ｂＧＨ−Ｔｇマウスの組織分析は、ｂＧＨ過剰発現によってＥＧＬ及びプルキンエ細胞層の異常が生じるように、ＣＸＣＲ４−及びＣＸＣＬ１２−欠損マウスのものと似通っている。ＣＸＣＲ４又はＣＸＣＬ１２の欠損は、これらの２つの小脳細胞層５）における欠損にも繋がる。ＣＸＣＲ４欠損胎児肝臓細胞によって再構築されたマウスにおいてはリンパ節及び脾臓構造が十分に形成されていることが示されているが、これはＣＸＣＬ１２応答がリンパ器官形成に影響を与えないことを示唆している。
【００７０】
逆に、ｂＧＨ−Ｔｇマウスはリンパ節及び脾臓構造に異常がある。このような不一致はＧＨがＣＸＣＬ１２によって媒介される応答に影響を与えるだけでなく、レセプターがＧＨＲ発現細胞上に存在するケモカイン又はサイトカインの応答にも影響を与えることがあり得るせいかも知れない。実際に、ＳＯＣＳの増加はＬＩＦ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＦＮ−ｙ及びレプチンのシグナル伝達において述べられている（３６）。このようにこれらのサイトカインへの応答はｂＧＨ−Ｔｇマウスにおいて影響を与え、それらの表現型に寄与している可能性がある。
【００７１】
全体的にみて、ケモカインによって活性化されたＪＡＫ／ＳＴＡＴ／ＳＯＣＳ経路の同定によってシグナル導入のリサーチに新しい道が開かれ、この経路はサイトカインのシグナル伝達の経路と統合される（図９）。欠陥はケモカインレセプターとそれに対応するサイトカインレセプターを共に発現する細胞でしか現れないので、サイトカイントランスジェニックマウスはケモカイン−及びケモカインレセプター欠損表現型を分析するための条件モデルに使用される。このように、発達中の各系統に必要なサイトカイン％ヘモカインの組合せを同定することが、通常の免疫応答及び炎症応答の間に移動される細胞によって要求されるものを同定することと共に重要である。これらのタイプを検討することにより、炎症性応答及びＨＩＶ感染等の他のプロセスを遮断するためのシグナル伝達を行なうサイトカイン及びケモカインの特異的な薬理学上の阻害剤のスクリーニングを発展させるための基礎が形成される。
【００７２】
−実験手順−
−生体材料−
ＩＭ−９細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ１５９）及びＨＥＫ−２９３細胞（ＡＴＣＣ  ＴＩＢ２０２）はアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ、マナッサス、バージニア）から入手した。使用した抗体としては、我々の研究室で発生させた抗ＣＸＣＢ４及び抗ｈＧＨレセプターｍＡｂ（１６、３２）、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＰＯ）で標識化した抗ＰＴｙｒ  ｍＡｂ（４Ｇ１０）（アップステート・バイオテクノロジー、レークプラシッド、ニューヨーク）、抗ホスホトレオニン、抗ホスホセリンｍＡｂ（カルビオケム、サンディエゴ、カリフォルニア）、抗β２−ミクログロブリン（ファーミンゲン（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、サンディエゴ、カリフォルニア）、ＦＩＴＣ標識化抗ＣＤ３（サザン・バイオテクノロジーズ、バーミンガム、アラバマ）、ＦＩＴＣ−抗ＣＤ１１ｂ及びＰＥ−ｂ２００（ファーミンゲン）；ウサギ抗ＰＴｙｒ（プロメガ、マジソン、ウィスコンシン）；抗Ｇα１、抗Ｇαｓ、抗ＳＴＡＴ２及び抗ＳＴＡＴ３、抗ＳＯＣＳ３、抗ｐｏｌ  ＩＩ（サンタ・クルーズ、サンタ・クルーズ、カリフォルニア）、並びに、抗β−アクチン（シグマ、セントルイス、ミズーリ）等がある。免疫染色のために、抗ＳＴＡＴ３及び抗ホスホ−ＳＴＡＴ３抗体（ニューイングランド・バイオラブス、ベヴァリー、マサチューセッツ）を使用した。
【００７３】
−フローサイトメトリー分析−
細胞を遠心分離にかけ（２５０ｘｇ、１０分、室温）Ｖ底の９６穴プレート（２．５ｘ１０５細胞／ウェル）及びビオチンによって標識化したｍＡｂ（１ｇｇ／５０  Ｒ１／ウェル、６０分、４℃）を用いてインキュベートした。細胞は２％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）及び２％ＦＣＳを含んだＰＢＳ中で２度洗浄し、遠心分離（２５０ｘｇ、５分、４℃）した。フルオレセインイソチオシアネートによって標識化したストレプトアビジン（サザン・バイオテクノロジーズ）を加え、インキュベート（３０分、４℃）してプレートを２回洗浄した。細胞の結合による蛍光はプロファイルＸＬフローサイトメーター（コールター、マイアミ、フロリダ）において５２５ｎｍで測定した。
【００７４】
−免疫サイトメトリー及び組織分析−
ＩＭ−９細胞は１％ＢＳＡを含んだＲＰＭＩ中で２時間培養し、そのまま、又は、５０ｎＭのＣＸＣＬ１２で刺激した。細胞はＰＢＳを用いて室温（ＲＴ）で洗浄し、１００％メタノールで固着させ（１０分、−２０℃）、ＴＢＳ中の０．２％トリトンＸ１００を用いて浸透させた（１５分、室温）。細胞はＴＢＳで３回洗浄し（５分、室温）、非特異的結合部位をＴＢＳ中の５％の正常ヤギ血清を用いてブロックした（４５分、室温）。ＴＢＳで洗浄した後、細胞はＴＢＳ、２％ＢＳＡ、２％正常ヤギ血清で希釈した抗ＳＴＡＴ３又は抗ホスホ−ＳＴＡＴ３を用いて、次にＣｙ３で標識化した抗ウサギＩｇＧ抗体（ジャクソン・イムノリサーチ、ウェストグローブ、ペンシルベニア）を用いてインキュベートした。ＤＡＰＩを含んだベクタシールド・マウンティング培地（ベクターラボラトリーズ、バーリンゲーム、カリフォルニア）を加え、細胞をライカ蛍光顕微鏡で分析した。組織分析のために、５％ホルマリン中で固着し、パラフィン中に固定した器官の断片（４ｇｍ）をヘマトキシン−エオシンで染色した。免疫染色のために、組織断片を脱パラフィン化し、６０％メタノール中の３％ＨＯで処理して内発性ペルオキシダーゼ活性を遮断し、１０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液中でマイクロ波処理し、１０％正常マウス血清を用いてインキュベートして非特異的な結合が起こらないようにした。その後断片はビオチンブロッキングキット（ダコ）を用いてインキュベートし、ビオチンが接合した抗Ｂ２２０抗体（サザンバイオテクノロジー、バーミンガム、アラバマ）を用いて染色し、ストレップＡＢＣｏｍｐｌｅｘ／ＨＲＰキット（ダコ（Ｄａｋｏ）、グロストラップ（Ｇｌｏｓｔｒｕｐ）、デンマーク）で展開させた。ペルオキシダーゼ活性をＦＡＳＴ  ＤＡＢ（シグマ）を用いて検出した。ウサギ抗ヒトＣＤ３抗体を用いて、その後ペルオキシダーゼ接合ヤギ抗ウサギ抗体（両方ともダコより入手）を用いてＣＤ３を検出した。  
【００７５】
−細胞遊走−
未処理又はＣＴｘ及びＰＴｘ（シグマ）を用いて１６時間処理したＩＭ−９細胞を、膜をあらかじめＶＩ型コラーゲン（シグマ；２０ｇｇ／ｍｌ）でコートした２４穴トランスマイグレーションチャンバー（５ｇｍ穴径；トランスウェル；コスター・コープ、キャンブリッジ、マサチューセッツ）の上側のウェル中に播種し、その後６０ｎＭ  ＣＸＣＬ１２（ペプロテック、ロックヒル、ニュージャージー）（０．２５％ＢＳＡを含有した０．６ｍｌのＲＰＭＩ中）を下側のウェルに加えた。プレートをインキュベートし（１２０分、３７℃）、下側のチャンバーに移動した細胞の数を記載（２４）の通りに数えた。ｈＧＨ（ゲノトロピン、ファルマシアＡＢ、ウプサラ（Ｕｐｐｓａｌａ）、スウェーデン）処理が用いられた場合には、細胞（１０６／ｍｌ）は０．１％ＢＳＡ及び１０ｇｇ／ｍｌ組換えｈＧＨを含むＲＰＭＩ１６４０中にて指定の時間インキュベートした。
【００７６】
初代マウス細胞を評価する場合、脾臓、リンパ節及び骨髄細胞を得て、上述の条件において、２４穴トランスマイグレーションチャンバー（３ｇｍ穴径、トランスウェル）の上側のウェルに播種した（０．１ｍｌ中に０．２５×１０６細胞）。脾臓及び骨髄細胞の調製において、赤血球をＮＨ４Ｃｌで溶解させた（５分、３７℃）。
【００７７】
新鮮な単離初代細胞の枯渇が必要な実験においては、０．１％ＢＳＡを補給したＲＰＭＩ１６４０中に細胞を播種し（１ｍｌ中に１×１０６細胞）、培養する（２時間、３７℃）。洗浄の後、ＣＸＣＬ１２に応じた遊走を上述の通り評価する。
【００７８】
ＨＥＫ−２９３細胞遊走は９６穴マイクロチャンバー（ニューロプローブ・インク、ゲーサーズバーグ、メリーランド）において検討されている（３８）。数種類の濃度のケモカインを下側のウェル中に（３０ｐｌ／ウェル）、細胞（２００〜ｔｌ／ウェル、３×１０６細胞／ｍｌ）を上側のウェルに充填する。１０ｇｍの穴を有するポリビニルピロリドンフリーのフィルター（ニューロプローブ）は２０ｗｇ／ｍｌのＶＩ型コラーゲン（シグマ）を用いてプレコートする（２時間、３７℃）。チャンバーをインキュベートし（５時間、３７℃）、その後フィルターを取り除いて上側の部分の細胞をぬぐい去る。フィルター上の細胞を固着し、染色する（０．５％クリスタルバイオレット、２０％メタノール）。細胞遊走が起こった位置で青のスポットが発生し、遊走を濃度によって定量化することができた（ナショナル・インスティチュート・オブ・ヘルス・イメージ・ソフトウェア）。遊走指数はスポットの平均強度によって算出した。
【００７９】
−ＣＸＣＬ１２のインビボ生理学活性−
マウス（生後３カ月のｂＧＨ−Ｔｇ及び非Ｔｇ同腹仔）を４００ｇｌ滅菌ＰＢＳ中の１ｇｇ  ＣＸＣＬ１２を用いて又はＰＢＳを単独で用いて腹膜内に注射した。注射から６時間後にマウスを屠殺し、６ｍｌの滅菌ＰＢＳ細胞を注射した腹膜腔から遊走細胞を取り出した。細胞を数え、遠心分離し（２５０ｘｇ、１０分）、特異的細胞表面マーカーを用いたフローサイトメトリー分析によって、はっきりとした細胞の個体数を数えた。
【００８０】
−免疫沈降、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウェスタンブロット分析−
ＣＸＣＬ１２によって刺激された細胞（１０×１０６）を界面活性剤緩衝液（２０ｍＭトリエタノールアミン  ｐＨ８．０、３００ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、２０％グリセロール、１％ジギトニンと１０ｇＭオルトバナジン酸ナトリウム、１０ｇｇ／ｍｌロイペプチン、１０ｇｇ／ｍｌアプロチニン）中、４℃で３０分、震盪を続けながら溶解させ、その後遠心分離した（１５，０００ｘｇ、１５分）。免疫沈降を実質的に記載されている通り（２４）に行なった。免疫沈降物又はタンパク質抽出物はドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）で分析し、ニトロセルロース膜へ移した。ウェスタンブロット分析は記載されている通り、ＴＢＳ中の２％ＢＳＡを抗ホスホチロシン分析用の遮断剤として用いた。ストリッピングが要求される場合には、２％ＳＤＳ及び０．５％の３−メルカプトエタノールを含む６２．５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．８を用いて膜をインキュベートした（６０分、６０℃）。全ての場合において、タンパク質の充填はタンパク質検出キット（Ｐｉｅｒｃｅ）で制御し、必要な場合には、免疫沈降抗体を用いて膜を再精査した。
【００８１】
−細胞核抽出物の調製−
細胞核抽出物はＣＸＣＬ１２によって刺激されたＩＭ−９細胞（１０×１０６）から調製した（２３）。簡単に細胞を氷冷ＰＢＳで洗浄し、１ｍｌの緩衝剤Ａ（５０ＭＭ  ＮａＣｌ、０．５Ｍスクロース）中に再懸濁させ、インキュベートし（２分、４℃）、ペレット化した（４５００ｘｇ、３分、４℃）。それをその後１ｍｌの緩衝剤Ｂ（５０ｍＭ  ＮａＣｌ、２５％グリセロール）中に再懸濁させペレット化し（４５００ｘｇ、３分、４℃）、６０ｗｌの緩衝剤Ｃ中、震盪を続けながら４℃で３０分間インキュベートした。遠心分離（２００００ｘｇ、２０分、４℃）の後、細胞核抽出物を含んだ上清を小分けにし、−８０℃で保存した。全ての緩衝剤は０．５ｍＭスペルミジン、０．１５ｍＭスペルミン、０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ８、０．５ｍＭ  ＰＭＳＦ、２ｇｇ／ｍｌロイペプチン、３ｇｇ／ｍｌペプスタチン、０．２ＩＵ／ｍｌアプロチニン、１．７５ｍＭ  Ｐ−メルカプトエタノール、１ｍＭオルトバナジン酸塩及び１０ｍＭ  ＮａＦを含んでいた。ウェスタンブロット分析用に、２０ｇｇの各細胞核抽出物をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離し、ニトロセルロース膜に移した。ウェスタンブロット分析は上述の通りであり、抗ＳＴＡＴ３及び抗ＳＴＡＴ５抗体を用いて展開した。
【００８２】
−電気泳動移動度シフト解析（ＥＭＳＡ）−
未処理の又はケモカインで処理した細胞から上述の通り調製した細胞核抽出物（１０ｇｇ）を結合反応（ｂｉｎｄｉｎｇ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）によって分析した。ｃ−ｆｏｓプロモーター配列［ＧＧＧＧＴＧＣＡＴＴＴＣＣＣＧＴＡＡＡＴＣＴＴＧＴＣＴ］配列番号Ｎｏ．１（野生型；ｗｔ−ＳＩＥ）のｓｉｓ誘導可要素（ｓｉｓ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｅｌｅｍｅｎｔ：ＳＩＥ）を含んだ３２Ｐ末端標識化二重鎖オリゴデオキシヌクレオシド０．５ｎｇを用いて抽出物をインキュベートした。指定がある場合には、ＳＴＡＴタンパク質と結合することができない変種バージョン［ＧＧＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＣＣＧＴＡＡＡＴＣＴＴＧＴＣＴ］配列番号Ｎｏ．２（ｍｕｔ−ＳＩＥ）を使用した。結合反応は１．５マイクログラムのポリ（ｄＩ−ｄＣ）を用いてＥＭＳＡ緩衝液中、室温で３０分間行ない（最終体積１０マイクロリットル）、指定がある場合には２０倍モル過剰量の未標識ＳＩＥ又は非特異的オリゴヌクレオチド競合剤を用いた。タンパク質−ＤＮＡ錯体は、０．５Ｘ  トリス−ホウ酸−ＥＤＴＡ泳動バッファー（ｒｕｎｎｉｎｇ  ｂｕｆｆｅｒ）を用いて４．５％ポリアクリルアミドゲル上に溶解させた。ＥＭＳＡバッファーは、１０ｍＭトリスｐＨ７．５、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ジチオトレイトール（ＤＴＴ）、ｍＭ  ＥＤＴＡ及び５％グリセロールを含んでいた。細胞核抽出物中のタンパク質量はウェスタンブロット又はＥＭＳＡの前にタンパク質検出キット（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いて確認した。
【００８３】
−細胞の導入（トランスフェクション）−
ヒト胎児腎臓細胞（ＨＥＫ−２９３）を、ｐＥＦ−ＦＬＡＧ−Ｉ／ｍＳＯＣＳ１、ｍＳＯＣＳ２又はｍＳＯＣＳ３構成部分（Ｗａｌｔｅｒ  ａｎｄ  Ｅｌｉｚａ  Ｈａｌｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅｒａｃｈ、ビクトリア、オーストラリアのＴ．Ｗｉｌｓｏｎ医師に親切にも提供して頂いた）を、リポフェクタミン（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ、ゲーサーズバーグ、メリーランド）と共に、製造業者のプロトコルに従って一時的に導入した。
【００８４】
−ノーザンハイブリダイゼーション−
生後３カ月のｂＧＨ−Ｔｇ及び非Ｔｇ同腹仔マウス組織及び未処理又は６０ｎＭ  ＣＸＣＬ１２若しくは１０ｇｇ／ｍｌ  ｈＧＨで処理済み（６０分、３７℃）のＩＭ−９細胞から得た全ＲＮＡを、Ｔｒｉ−ｒｅａｇｅｎｔ（シグマ）を用いて抽出した。ＲＮＡサンプルを、変性ホルムアルデヒド−アガロースゲル上で電気泳動し、ナイロン膜（Ｈｙｂｏｎｄ  Ｎ＋、アマルシャム・ファルマシア・バイオテックＡＢ、ウプサラ（Ｕｐｐｓａｌａ）、スウェーデン）に移した。膜は、ｐＥＦ−ＦＬＡＧ−Ｉ／ｍＳＯＣＳ３構成部分由来の３ｚＰで標識化したｃＤＮＡを用いてハイブリダイズした。
【００８５】
−図の凡例−
図１：ｂＧＨ−ＴｇマウスはＣＸＣＬ１２に対する走化性応答が低下している。Ａ）ＣＸＣＬ１２（１ｍＭ）をｂＧＨ−Ｔｇマウス及び対照の同腹仔の腹膜へ注射した。６０分後、腹膜腔中へと遊走した細胞を回収し、特異的細胞マーカーを用いたフローサイトメトリーによって細胞群を特性化した。図は、ＣＤ４５染色によって示したように、リンパ球群におけるｂ２２０及びＣＤ１Ｉｂ細胞の特異的染色を示している。また各個体群の割合も示されている。結果は５つ実施した実験のうちの代表的な一つのものが示されている。Ｂ）ｂＧＨ−Ｔｇマウス又は野生型同腹仔から得た脾臓、リンパ節及び骨髄細胞のＣＸＣＬ１２（５０ｎＭ）によって媒介される細胞遊走を２４穴トランスマイグレーションチャンバーにて評価した。１％のＢＳＡを含んだＲＰＭＩ１６４０中に懸濁させた細胞を遊走させた（２時間、３７℃、５％ＣＯＺ）。下側のチャンバーに遊走した細胞の数を数え、遊走指数として表し、陰性対照（ＰＢＳ）に対して観察された遊走が何倍増加しているのかを計算した。データは、指定のＳＤを用いて、平均で３倍であることを表している。
【００８６】
図２：ＳＯＣＳ３の量はｂＧＨ−Ｔｇマウスにおいて増加する。Ａ）対照同腹仔（左）と比較した、ｂＧＨ−Ｔｇマウスの脾臓、リンパ節及び骨髄由来のＳＯＣＳ３  ｍＲＮＡのノーザン分析である。対照として、ｅＦ１αをプローブ（右）として用いて膜を再ハイブリダイズした。Ｂ）ｂＧＨ−Ｔｇマウス及び対照同腹仔由来の骨髄細胞をインビトロでＧＨを枯渇させ（２時間、３７℃）、ＣＸＣＬ１２（０．５〜５０ｎＭ）に応じて遊走させた。対照として、同一のマウス由来の新しく単離した（枯渇していない）細胞中でのＣＸＣＬ１２に応じた細胞遊走を評価した。遊走指数は図１Ｂ中の物と同じように計算した。Ｃ）Ｂ（左）に記載の骨髄細胞由来のＳＯＣＳ３  ｍＲＮＡのノーザン分析。充填用対照として、ｅＦ１αをプローブとして用いて膜を再ハイブリダイズした（右）。
【００８７】
図３：ＩＭ−９細胞は機能的ＣＸＣＲ４及びｈＧＨレセプターを発現する。Ａ）指定の細胞はビオチンで標識化したＣＸＣＲ４−Ｏ１又はｈＧＨＲ−５  ｍＡｂを用いて、その後ＦＴＴＣ−ストレプタビジンを用いてインキュベートした。図は陰性対照（ｍＩｇＭ）のものと比較したｍＡｂ結合を示している。Ｂ）ｈＧＨ（１−１００ｇｇ／ｍｌ）及びＣＸＣＬ１２（１−１００ｎＭ）によって誘導されるＩＭ−９細胞（未処理又はＰＴｘ（０．４ｇｇ／ｍｌ、１６ｈ、３７℃、５％ＣＯ２）を用いて前処理したもの）の走化性を図１Ｂに示したように走化性チャンバーにおいてアッセイした。Ｃ）ＣＸＣＬ１２（５０ｎＭ）又はｈＧＨ（１０ｗｇ／ｍｌ）によって誘導される、未処理又はＰＴｘ（０．４ｇｇ／ｍｌ、１６時間、３７℃）又はｈＧＨ（１０ｇｇ／ｍｌ、６０分、３７℃）を用いてあらかじめインキュベートしたＩＭ−９細胞におけるＣａ  ｚ＋移動を５２５ｎｍのフローサイトメトリーにおいて測定した。Ｄ）表面のＣＸＣＲ４発現量をｈＧＨ（１０ｇｇ／ｍｌ、６０分、３７℃）で、ＣＸＣＬ１２（５０ｎＭ、３０分、３７℃）で、又は、ｈＧＨ（１０ｇｇ／ｍｌ、６０分、３７℃）の後ＣＸＣＬ１２（５０ｎＭ、３０分、３７℃）で処理したＩＭ−９細胞において測定した。発現量は図３Ａに示したフローサイトメトリーによって測定し、指定のＳＤを用いて、未処理細胞（無し）中のＣＸＣＲ４の割合を表している。
【００８８】
図４：ＣＸＣＬ１２はＩＭ−９細胞においてＳＴＡＴ活性化を誘導する。Ａ）ＩＭ−９細胞単独の免疫組織化学的分析、又は、抗ＳＴＡＴ３及び抗Ｐｔｙｒ−ＳＴＡＴ３抗体を用いてＣＸＣＬ１２で処理（５０ｎＭ、１５分、３７℃）したＩＭ−９細胞の免疫組織化学的分析。細胞核染色が示されている（挿入、右上）。Ｂ）ＳＴＡＴ２及びＳＴＡＴ３セリン／トレオニンリン酸化は、抗ＰＳｅｒ／ＰＴｈｒによって免疫沈降され、ＣＸＣＬ１２（５０ｎＭ）によって活性化されたＩＭ−９細胞の溶解物において測定し、抗ＳＴＡＴ２抗体及び抗ＳＴＡＴ３抗体を用いたウェスタンブロットにおいて分析した。
【００８９】
図５：ＣＸＣＬ１２は細胞核への機能性ＳＴＡＴトランスロケーションを誘導する。Ａ）ＩＭ−９細胞は指定の時刻にＣＸＣＬ１２（５０ｎＭ）で刺激され、細胞核抽出物は抗ＳＴＡＴ２及び抗ＳＴＡＴ５抗体を用いたウェスタンブロットにおいて分析した。タンパク質の充填は抗ｐｏｌ  ＩＩ抗体と共に膜を展開させることによって等量になるよう制御した。Ｂ）ＩＭ−９細胞単独、又は、ＣＸＣＬ１２（５０ｎＭ）又はｈＧＨ（１０ｇｇ／ｍｌ）で３７℃、３０分処理したＩＭ−９細胞由来の細胞核抽出物を、３２Ｐ末端標識化ｗｔ（野生型）−ＳＩＥ（０．５ｎｇ）を用いて、ＥＭＳＡ緩衝剤中でインキュベートした。指定がある場合には、２０倍モル過剰量の未標識ｗｔ−ＳＩＥ又は変異型−ＳＩＥオリゴヌクレオチドを加えた。Ｃ）ＣＸＣＬ１２（５０ｎＭ）によって活性化されたＩＭ−９細胞由来の溶解物は抗ＳＯＣＳ３抗体（上側）を用いて免疫ブロットした。タンパク質の充填は抗ＰアクチンｍＡｂ（下側）を用いて膜を再精査することによって制御した。
【００９０】
図６：ｈＧＨ処理はＣＸＣＬ１２が媒介する応答に影響を与える。Ａ；未処理又はｈＧＨ（１０ｇｇ／ｍｌ）で処理（６０分、３７℃）した細胞を、ＣＸＣＬ１２（５０ｎＭ）に応じて遊走させた（左側）。遊走指数は図１Ｂのように算出した。ＣＸＣＬ１２によって誘導されるＩＭ−９細胞遊走に関するｈＧＨ（１０ｇｇ／ｍｌ、３７℃）前処理の効果（中央）。遊走指数は前述の通り算出した。遊走アッセイにおいて使用した細胞由来の溶解物におけるＳＯＣＳ３の存在をウェスタンブロット分析によって評価した（右、上側）。タンパク質の充填は、抗ｐアクチンｍＡｂ（右、下側）を用いて、膜を再精査することによって制御した。Ｂ）ＣＸＣＬ１２（１０ｎＭ）によって活性化された、未処理又はｈＧＨ（１０ｗｇ／ｍｌ）によって処理されたＩＭ−９細胞由来の溶解物をＣＸＣＲ４−Ｏ１又は対照ｍＩｇＭ抗体を用いて免疫沈降させ、抗Ｇａ；抗体を用いてウェスタンブロットを展開した（上側）。陽性対照として、未沈降ＩＭ−９細胞溶解物を抗Ｇａ；抗体を用いてテストした。タンパク質の充填同等性（ｌｏａｄｉｎｇ  ｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ）を制御するために、ブロットは免疫沈降性抗ＣＸＣＲ４抗体を用いて再精査した（下側）。Ｃ）Ｂのように処理し、免疫沈降された細胞溶解物を抗ＪＡＫ３抗体で免疫ブロットした（上側）。陽性対照として、未沈降のＩＭ−９細胞溶解物を、抗ＪＡＫ３抗体を用いてテストした。タンパク質の充填同等性はＢのように制御した（下側）。
【００９１】
図７：ＳＯＣＳタンパク質の発現はＣＸＣＬ１２によって誘導される細胞の応答を遮断する。Ａ）ＰＥＦ−ＦＬＡＧ−Ｉ／ｍＳＯＣＳ１−、ｍＳＯＣＳ２−及びｍＳＯＣＳ３が移入されたＨＥＫ−２９３細胞又は偽物を移入した対照を１０ｎＭ  ＣＸＣＬ１２に応じて５時間、３７℃で遊走させた（マテリアルズ・アンド・メソッズ（Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ））。遊走指数はバックグラウンド（各条件下での未刺激細胞の遊走）に対する平均スポット強度によって算出した。Ｂ）遊走している細胞におけるＳＯＣＳの発現は抗ＦＬＡＧ抗体を移入された細胞の免疫ブロットにより確認した。タンパク質の充填は、タンパク質検出キット（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いて制御した。
【００９２】
図８：ｂＧＨ−Ｔｇマウスにおいてリンパ組織及び小脳が欠損している。Ａ）ｂＧＨ−Ｔｇ及び対照マウス脾臓断片の、抗ＣＤ３及び抗Ｂ２２０抗体を用いた免疫染色によって、ｂＧＨ導入遺伝子の存在下で卵胞の構造が変化していることが示されている。元の倍率は１０倍、Ｆ：卵胞、ＭＺ：辺縁帯、ＰＡＬＳ：動脈周囲リンパ鞘。Ｂ）同一の抗体で染色した鼠径リンパ節によりｂＧＨ過剰発現が胚中心（矢印）の出現を高めることが示されている。元の倍率は１０倍。Ｆ：卵胞、Ｍ：骨髄：ＧＣ：胚中心。Ｃ）ｂＧＨ導入遺伝子の発現の結果、骨髄中のＢ２２０細胞の数は増加する。元の倍率は２０倍。Ｄ）小脳のヘマトキシリン−エオシン染色はｂＧＨ−Ｔｇ動物における欠損を示している。上側のパネルはＥＧＬ中の全体の細胞密度が、対照同腹仔に対して減少していることを示している。図はまた、ＥＧＬを縁取るプルキニエ細胞層の分裂を示している（矢印）。元の倍率は２０倍。下側のパネルはプルキニエ細胞層の分裂の詳細を示している。元の倍率は４０倍である。
【００９３】
図９：ＣＸＣＬ１２シグナル伝達へのＧＨの影響の分子的機構。ＧＨの結合はレセプターの二量化を促進し、その中で次々にＪＡＫ２／ＳＴＡＴ５ｂ経路を活性化する。このシグナル伝達経路はＣＸＣＲ４を結合するケモカインであるＣＸＣＬ１２と共有される。ＳＴＡＴ５ｂの細胞核のトランスロケーションは、ＣＸＣＲ４を介してＣＸＣＬ１２によって促進される応答を遮断するＳＯＣＳ３タンパク質の増加を誘導する。この相互作用により、ＳＯＣＳ増加を通してＧＨシグナル伝達とＧタンパク質結合化学誘引がリンクする。
【００９４】
本発明の上記記載は、本発明を例示し、記述するものである。さらに上記開示は本発明の好ましい実施形態のみを示し述べるものであって、上述したように本発明は種々の他の組合せ、変更及び環境で使用することができ、またここに表した本発明の概念の範囲内であって、上記教示及び／又は関連技術の技能又は知識に合致した変化又は変更を行なうことができるものと理解すべきものである。上述した実施形態はさらに本発明の実施に関し知っているベストモードを説明すること及び上記又は他の実施形態によって、且つ、本発明の特定の応用又は使用において要求される種々の改変を用いて当業者が本発明を利用できるようにすることを意図している。従って本明細書は本発明をここに開示したものに限定することを意図したものではない。また、添付の特許請求の範囲はほかにとり得る実施形態をも含むと解釈すべきことを意図している。
【００９５】
−引用文献−
１  Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ，Ｍ．，Ｄｅｗａｌｄ，Ｂ．  ａｎｄ  Ｍｏｓｅｒ，Ｂ．（１９９７）．Ｈｕｍａｎ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ：ａｎ  ｕｐｄａｔｅ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５，６７５−７０５．  
【００９６】
２．  Ｒｏｌｌｉｎｓ，Ｂ．Ｊ．（１９９７）．Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ．  Ｂｌｏｏｄ  ９０，９０９−９２８．  
【００９７】
３  Ｍａｃｋａｙ，Ｃ．Ｒ．，Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ：ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ’ｓ  ｈｉｇｈ  ｉｍｐａｃｔ  ｆａｃｔｏｒｓ，２  Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，９５（２００１）．
【００９８】
４．Ｓｃｈａｌｌ  ＴＪ，ＢａｃｏｎＫＢ．Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ，ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ  ａｎｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，８６５（１９９４）．
【００９９】
５  Ｒｏｓｓｉ  Ｄ，Ｚｌｏｔｎｉｋ  Ａ．（２０００）．Ｔｈｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．  Ａｎｎｕ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８，２１７−４２
【０１００】
６．Ｇｅｒａｒｄ，Ｃ．  ａｎｄ  Ｒｏｌｌｉｎｓ，Ｂ．Ｊ．（２００１）．Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２，１０８−１１５
【０１０１】
７，Ｍｏｓｅｒ，Ｂ．  ａｎｄ  Ｌｏｅｔｓｃｈｅｒ，Ｐ．（２００１）．Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｔｒａｆｆｉｃ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｂｙ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ．  Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２，１２３−１２８．
【０１０２】
８  Ｌｕｔｈｅｒ，Ｓ．Ａ．  ａｎｄ  Ｃｙｓｔｅｒ，Ｊ．Ｇ．（２００１）．  Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ  ａｓ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．  Ｎａｔ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．２，１０２−１０７，  
【０１０３】
９．Ｂｌｅｕｌ，Ｃ．Ｃ．，Ｆｕｈｌｂｒｉｇｇｅ，Ｒ．Ｃ．，Ｃａｓａｓｎｏｖａｓ，Ｊ．Ｍ．，Ａｉｕｔｉ，Ａ．  ａｎｄ  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｔ．Ａ．（１９９６）．  Ａ  ｈｉｇｈｌｙ  ｅｆｆｉｃａｃｉｏｕｓ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ，ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆａｃｔｏｒ  ＳＤＦ−１  Ｊ．  Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４，１０１−１１０９  
【０１０４】
１０．Ｎａｇａｓａｗａ，Ｔ．，Ｈｉｒｏｔａ，Ｓ．，Ｔａｃｈｉｂａｎａ，Ｋ．，Ｔａｋａｋｕｒａ，Ｎ．，Ｎｉｓｈｉｋａｗａ，Ｓ．，Ｋｉｔａｍｕｒａ，Ｙ，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｎ．，  Ｋｉｋｕｔａｎｉ，Ｈ．  ａｎｄ  Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ，Ｔ．（１９９６）．  Ｄｅｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｓｉｓ  ａｎｄ ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｍｙｅｌｏｐｏｉｅｓｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｌａｃｋｉｎｇ  ｔｈｅ  ＣＸＣ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅＰＢＳＦ／ＳＤＦ−Ｎａｔｕｒｅ  ３８２，６３５−６３８．  
【０１０５】
１１．Ａｉｕｔｉ，Ａ．，Ｗｅｂｂ，Ｉ. Ｊ．，Ｂｌｅｕｌ，Ｃ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｔ．  Ａ．  ａｎｄ  Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ−Ｒａｍｏｓ，Ｊ．Ｃ．（１９９７）．  Ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ＳＤＦ−１  ｉｓ  ａ  ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ＣＤ３４＋  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｖｉｄｅｓ  ａ  ｎｅｗ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｔｏ  ｅｘｐｌａｉｎ  ｔｈｅ  ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆＣＤ３４’ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ ｔｏ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ．  １８５  Ｊ  Ｅｘｐ．Ｍｅｄ，１１（１９９７）．  
【０１０６】
１２，Ｄ’Ａｐｕｚｚｏ，Ｍ．，Ｒｏｌｉｎｋ，Ａ．，Ｌｏｅｔｓｃｈｅｒ，Ｍ．，Ｈｏｘｉｅ，Ｊ．Ａ．，Ｃｌａｒｋ−Ｌｅｗｉｓ，Ｉ．，Ｍｅｌｃｈｅｒｓ，Ｆ．，Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ，Ｍ．  ａｎｄ  Ｍｏｓｅｒ，Ｂ．（１９９７）．  Ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ＳＤＦ−１，ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆａｃｔｏｒ  １，ａｔｔｒａｃｔｓ  ｅａｒｌｙ  ｓｔａｇｅ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ  ｖｉａ  ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＣＸＣＲ４，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７，１７８８−  
【０１０７】
１３．Ｚｏｕ，Ｙ−Ｒ．，Ｋｏｔｔｍａｎｎ，Ａ．Ｈ．，Ｋｕｒｏｄａ，Ｍ．，Ｔａｎｉｕｃｈｉ，Ｉ．  ａｎｄ  Ｌｉｔｔｍａｎ，Ｄ．Ｒ．（１９９８）．  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＣＸＣＲ４  ｉｎ  ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｉｎ  ｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｎａｔｕｒｅ  ３９３，５９５−５９９．  
【０１０８】
１４，Ｔａｃｈｉｂａｎａ，Ｋ．，Ｈｉｒｏｔａ，Ｓ．，Ｉｉｚａｓａ，Ｈ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｈ．，Ｋａｗａｂａｔａ，Ｋ．，Ｋａｔａｏｋａ，Ｙ．，Ｋｉｔａｍｕｒａ，Ｙ．，Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ，Ｋ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｎ．，Ｎｉｓｈｉｋａｗａ，Ｓ．，Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ，Ｔ．  ａｎｄ  Ｎａｇａｓａｗａ，Ｔ．（１９９８）．  Ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＣＸＣＲ４  ｉｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｔｒａｃｔ，Ｎａｔｕｒｅ  ３９３，５９１−５９４，  
【０１０９】
１５．Ｍａ，Ｑ．，Ｊｏｎｅｓ，Ｄ．，Ｂｏｒｇｈｅｓａｎｉ，Ｐ．Ｒ．，Ｓｅｇａｌ，ＲＡ．，Ｎａｇａｓａｗａ，Ｔ．，Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ，Ｔ．，Ｂｒｏｎｓｏｎ，ＲＴ．  ａｎｄ  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，ＴＡ．（１９９８）．  Ｉｍｐａｉｒｅｄ  Ｂ−ｌｙｍｐｈｏｐｏｉｅｓｉｓ，ｍｙｅｌｏｐｏｉｅｓｉｓ，ａｎｄ  ｄｅｒａｉｌｅｄ  ｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ  ｎｅｕｒｏｎ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ＣＸＣＲ４−  ａｎｄ  ＳＤＦ−１−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ．  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５，９４４８−９４５３．
【０１１０】
１６．Ｖｉｌａ−Ｃｏｒｏ，Ａ．Ｊ．，Ｒｏｄｒｆｇｕｅｚ−Ｆｒａｄｅ，Ｊ．Ｍ．，Ｍａｒｔｆｎ  ｄｅ  Ａｎａ，Ａ．Ｍ．，Ｍｏｒｅｎｏ−Ｏｒｔｆｚ，Ｍ．Ｃ．，Ｍａｒｔｆｎｅｚ−Ａ．，Ｃ．  ａｎｄ  Ｍｅｌｌａｄｏ，Ｍ．（１９９９）．  Ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ＳＤＦ−ｌａ  ｔｒｉｇｇｅｒｓ  ＣＸＣＲ４  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ｔｈｅ  ＪＡＫ／ＳＴＡＴ  ｐａｔｈｗａｙ．  ＦＡＳＥＢ  Ｊ．１３，１６９９−１７１０，  
【０１１１】
１７，Ｗａｎｇ，Ｊ．Ｆ．，Ｐａｒｋ，Ｉ．Ｗ，  ａｎｄ  Ｇｒｏｏｐｍａｎ，Ｊ．Ｅ．（２０００）．  Ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆａｃｔｏｒ−ｌａｌｐｈａ  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｆｏｃａｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ：ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ−３  ｋｉｎａｓｅ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｃ．  Ｂｌｏｏｄ  ９５，２５０５−２５１３
【０１１２】
１８．Ｄｕｔｔ，Ｐ．，Ｗａｎｇ，Ｊ．Ｆ．  ａｎｄ  Ｇｒｏｏｐｍａｎ，Ｊ．Ｅ．（１９９８）．  Ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆａｃｔｏｒ−Ｉ  ａｌｐｈａ  ａｎｄ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  ｆａｃｔｏｒ／ｋｉｔ ｌｉｇａｎｄ  ｓｈａｒｅ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｉｎ  ｈｅｍｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ：ａ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｆｏｒ  ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ．  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１，３６５２−３６５８．  
【０１１３】
１９．Ｇａｎｊｕ，Ｒ．Ｋ．，Ｂｒｕｂａｋｅｒ，Ｓ．Ａ．，Ｍｅｙｅｒ，Ｊ．，Ｄｕｔｔ，  Ｐ．，Ｙａｎｇ，Ｙ．，Ｑｉｎ，Ｓ．，Ｎｅｗｍａｎ，Ｗ．  ａｎｄ  Ｇｒｏｏｐｍａｎ，Ｊ．  Ｅ，（１９９８）．  Ｔｈｅ  ａ−ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ，  ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆａｃｔｏｒ−ｌａ，  ｂｉｎｄｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ＣＸＣＲ４  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｐａｔｈｗａｙｓ．  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３，２３１６９−２３１７５，  
【０１１４】
２０．Ｖｉｃｅｎｔｅ−Ｍａｎｚａｎａｒｅｓ，Ｍ．，Ｒｅｙ，Ｍ．，Ｊｏｎｅｓ，Ｄ．Ｒ．，  Ｓａｎｃｈｏ，Ｄ．，Ｍｅｌｌａｄｏ，Ｍ．，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ  Ｆｒａｄｅ，Ｊ．Ｍ．，  ｄｅｌ  Ｐｏｚｏ，Ｍ．Ａ．，Ｙａｎｅｚ−Ｍ６，Ｍ．，Ｍａｒｔｉｎ  ｄｅ  Ａｎａ，Ａ．，  Ｍａｒｔｆｎｅｚ−Ａ．，Ｃ．，Ｍｅｒｉｄａ，Ｉ．  ａｎｄ  Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄ，Ｆ．（１９９９）．  Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ  ３−ｋｉｎａｓｅ  ｉｎ  ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆａｃｔｏｒ−ｌａ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ．  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３，４００１−４０１２，  
【０１１５】
２１．Ｒｏｄｒｆｇｕｅｚ−Ｆｒａｄｅ，Ｊ．Ｍ．，Ｖｉｌａ−Ｃｏｒｏ，Ａ．Ｊ．，Ｍａｒｔｆｎ  ｄｅ  Ａｎａ，Ａ．Ｍ．，Ｎｉｅｔｏ，Ｍ．，Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄ，  Ｆ．，Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ，Ａ．Ｅ．Ｉ．，Ｗｅｌｌｓ，Ｔ．Ｎ．Ｃ．，Ｍａｒｔｆｎｅｚ−Ａ．，Ｃ．  ａｎｄ  Ｍｅｌｌａｄｏ，Ｍ．（１９９９）．  Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ  ａｎｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ  ｉｎ  ＲＡＮＴＥＳ−ａｎｄ（ＡＯＰ）−ＲＡＮＴＥＳ−ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  ｓｉｇｎａｌｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ． Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１４４，７５５−７６５  
【０１１６】
２２．Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｆｒａｄｅ，Ｊ．Ｍ．，Ｖｉｌａ−Ｃｏｒｏ，Ａ．，Ｍａｒｔｆｎ  ｄｅ  Ａｎａ，Ａ．Ｍ．，Ａｌｂａｒ，Ｊ．Ｐ．，Ｍａｒｔｆｎａｚ−Ａ．，Ｃ．  ａｎｄ  Ｍｅｌｌａｄｏ，Ｍ．（１９９９）．  Ｔｈｅ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ−１  ｉｎｄｕｃｅｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｔｓ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＣＣＲ２．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９６，３６２８−３６３３  
【０１１７】
２３．Ｌｅｏｎａｒｄ，Ｗ．Ｊ．ａｎｄ  Ｏ’Ｓｈｅａ，Ｊ．Ｊ．（１９９８）．  ＪＡＫ  ａｎｄ  ＳＴＡＴｓ： Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ａｎｎ，Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６，２９３−３２２．
【０１１８】
２４．Ｍｅｌｌａｄｏ，Ｍ．，Ｒｏｄｒｆｇｕｅｚ−Ｆｒａｄｅ，Ｊ．Ｍ．，Ａｒａｇａｙ，Ａ．Ｍ．，ｄｅｌ Ｒｅａｌ，Ｇ．，Ｖｉｌａ−Ｃｏｒｏ，Ａ．，Ｍａｒｔｉｎ  ｄｅ  Ａｎａ，Ａ．，Ｓｅｒｒａｎｏ，Ａ．，Ｍａｙｏｒ  Ｊｒ．，Ｆ．  ａｎｄ  Ｍａｒｔｆｎｅｚ−Ａ．，Ｃ．（１９９８）．  Ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅＭＣＰ−１  ｔｒｉｇｇｅｒｓ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅＣＣＲ２Ｂ ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｄ  ｔｈｅＪＡＫ２／ＳＴＡＴ３  ｐａｔｈｗａｙ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１，８０５−８１３，  
【０１１９】
２５．Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ，Ａ．，Ｏｈｋｕｂｏ，Ｔ．，Ｋｉｇｕｃｈｉ，Ｔ．，Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｎ．Ａ．，Ｇｉｌｂｅｒｔ，Ｄ．Ｊ．，Ｃｏｐｅｌａｎｄ，Ｎ．Ｇ．，Ｈａｒａ，Ｔ．，  ａｎｄ  Ｍｉｙａｊｉｍａ，Ａ．（１９９５）．  Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｇｅｎｅ  ＣＩＳ  ｅｎｃｏｄｅｓ  ａｎ  ＳＨ２ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｈａｔ  ｂｉｎｄｓ  ｔｏ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ３  ａｎｄ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．  ＥＭＢＯ  Ｊ．１４，２８１６−２８２６．
【０１２０】
２６．Ｓｔａｒｒ，Ｒ．，Ｗｉｌｌｓｏｎ，Ｔ．Ａ．，Ｖｉｎｅｙ，Ｅ．Ｍ．，Ｍｕｒｒａｙ，  Ｌ．Ｊ．，Ｒａｙｎｅｒ，Ｊ．Ｒ．，Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｂ．Ｊ．，Ｇｏｎｄａ，Ｔ．Ｊ．，Ａｌｅｘａｎｄｅｒ，Ｗ．Ｓ  Ｍｅｔｃａｌｆ，Ｄ．，Ｎｉｃｏｌａ，Ｎ．Ａ．  ａｎｄ  Ｈｉｌｔｏｎ，Ｄ．Ｊ．（１９９７）．  Ａ  ｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ．  Ｎａｔｕｒｅ  ３８７，９１７−９２１．      
【０１２１】
２７．Ｅｎｄｏ，Ｔ．Ａ．，Ｍａｓｕｈａｒａ，Ｍ．，Ｙｏｋｏｕｃｈｉ，Ｍ．，Ｓｕｚｕｋｉ，Ｒ．，Ｓａｋａｍｏｔｏ，Ｈ．，Ｍｉｔｓｕｉ，Ｋ．，Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ，Ａ．，Ｔａｎｉｍｕｒａ，Ｓ．，Ｏｈｔｓｕｂｏ，Ｍ．，Ｍｉｓａｗａ，Ｈ．，Ｍｉｙａｚａｋｉ，Ｔ．，Ｌｅｏｎｏｒ，Ｎ．，Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｔ．，Ｆｕｊｉｔａ，Ｔ．，Ｋａｎａｋｕｒａ，  Ｙ．，Ｋｏｍｉｙａ，Ｓ．  ａｎｄ  Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ，Ａ．（１９９７）．  Ａ  ｎｅｗ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ａｎ  ＳＨ２  ｄｏｍａｉｎ ｔｈａｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ＪＡＫ  ｋｉｎａｓｅｓ．  Ｎａｔｕｒｅ  ３８７，９２１−９２４．  
【０１２２】
２８．Ｎａｋａ，Ｔ．，Ｎａｒａｚａｌｃｉ，Ｍ．，Ｈｉｒａｔａ，Ｍ．，Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ，Ｔ．，Ｍｉｎａｍｏｔｏ，Ｓ．，Ａｏｎｏ，Ａ．，Ｎｉｓｈｉｍｏｔｏ，Ｎ．，Ｋａｊｉｔａ，Ｔ．，Ｔａｇａ，Ｔ．，Ｙｏｓｈｉｚａｋｉ，Ｋ．，Ａｋｉｒａ，Ｓ．  ａｎｄ  Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ，Ｔ．（１９９７）．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｅｗ  ＳＴＡＴ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ＳＴＡＴ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ．   Ｎａｔｕｒｅ  ３８７，９２４−９２９．      
【０１２３】
２９．Ｄｅｙ，Ｂ．Ｒ．，Ｆｕｒｌａｎｅｔｔｏ，Ｒ．Ｗ．，  ａｎｄ  Ｎｉｓｓｌｅｙ，Ｐ．（２０００）． Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｏｆ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  （ＳＯＣＳ−３）  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−Ｉ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２７８，３８−４３．  
【０１２４】
３０．Ｏｇｕｅｔａ，Ｓ．，Ｏｌａｚａｂａｌ，Ｉ．，Ｓａｎｔｏｓ，Ｉ．，Ｄｅｌｇａｄｏ−Ｂａｅｚａ，Ｅ．  ａｎｄ  Ｇａｒｃｉａ−Ｒｕｉｚ，Ｊ．Ｐ，（２０００）．  Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｂｏｖｉｎｅ  ＧＨ  ｄｅｖｅｌｏｐ  ａｒｔｈｒｉｔｉｃ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ  ａｎｄ  ｓｅｌｆ−ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．  Ｊ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１６５，３２１−３２８．  
【０１２５】
３１  Ｇｏｎｚａｌｏ，Ｊ．Ａ．，Ｍａｚｕｃｈｅｌｌｉ，Ｒ．，Ｍｅｌｌａｄｏ，Ｍ．，Ｆｒａｄｅ，Ｊ．Ｍ．Ｒ．，Ｃａｒｒｅｒａ，Ａ．Ｃ．，ｖｏｎ  Ｋｏｂｂｅ，Ｃ．，Ｍｅｒｉｄａ，Ｉ．  ａｎｄ  Ｍａｒｔｆｎｅｚ−Ａ．，Ｃ．（１９９６）．  Ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ  ｓｅｐｔｉｃ  ｓｈｏｃｋ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  Ｔ  Ｈｅｌｐｅｒ  ２  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｇｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ．  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７，３２９８−３３０４．  
【０１２６】
３２．Ｍｅｌｌａｄｏ，Ｍ．，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｆｒａｄｅ，Ｊ．Ｍ．，Ｋｒｅｍｅｒ，  Ｌ．，ｖｏｎ  Ｋｏｂｂｅ，Ｃ．，Ｍａｒｔｆｎ  ｄｅ  Ａｎａ，Ａ．，Ｍｅｒｉｄａ，Ｉ．  ａｎｄ  Ｍａｒｔｆｎｅｚ−Ａ．，Ｃ．（１９９７）．  Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｇｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，９１８９−９１９６．      
【０１２７】
３３  Ｍａ，Ｑ．，Ｊｏｎｅｓ，Ｄ．  ａｎｄ  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｔ．Ａ．（１９９９）．  Ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＣＸＣＲ４  ｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂ  ｌｉｎｅａｇｅ  ａｎｄ  ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｉｃ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ  ｗｉｔｈｉｎ  ｔｈｅ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １０，４６３−４７１  
【０１２８】
３４．ｖｏｎ  Ａｎｄｒｉａｎ，Ｕ．Ｈ．  ａｎｄ  Ｍａｃｋａｙ，Ｃ．Ｒ．（２０００）．  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ．  Ａｄｖａｎｃｅｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３４３，１０２０−１０３４．  
【０１２９】
３５．Ｙｏｕｎ，Ｂ．Ｓ．，Ｍａｎｔｅｌ，Ｃ．  ａｎｄ  Ｂｒｏｘｍｅｙｅｒ，Ｈ．Ｅ．（２０００）．  Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ，  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１７７，１５０−１７４，
【０１３０】
３６．Ｃｈｅｎ，Ｘ．Ｐ．，Ｌｏｓｍａｎ，Ｊ．Ａ．  ａｎｄ  Ｒｏｔｈｍａｎ，Ｐ，（２０００）．  ＳＯＣＳ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ，  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ  ｏｆ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３，２８７−２９０．  
【０１３１】
３７  Ｍｅｌｌａｄｏ，Ｍ．，Ｒｏｄｒｆｇｕｅｚ−Ｆｒａｄｅ，Ｊ．Ｍ．，Ｍａｎｅｓ，Ｓ．  ａｎｄ  Ｍａｒｔｆｎｅｚ−Ａ，Ｃ．（２００１）．  Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ：Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ＴＫ  ｐａｔｈｗａｙ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，  Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９，３９７−４２１  
【０１３２】
３８．Ｍｅｌｌａｄｏ，Ｍ．，Ｒｏｄｒｆｇｕｅｚ−Ｆｒａｄｅ，Ｊ．Ｍ．，Ｖｉｌａ−Ｃｏｒｏ，Ａ．Ｊ．，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ，Ｓ．，Ｍａｒｔｆｎ  ｄｅ  Ａｎａ，Ａ．Ｍ．，Ｊｏｎｅｓ，Ｄ．Ｒ．，Ｔｏｒａｎ，Ｊ．Ｌ．  ａｎｄ  Ｍａｒｔｆｎｅｚ−Ａ，Ｃ．（２００１）．  Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｈｏｍｏ−ｏｒ  ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙｓ．  ＥＭＢＯ  Ｊ．（Ｉｎ  ｐｒｅｓｓ），  
【０１３３】
３９．Ｈｅｂｅｒｔ，Ｔ．Ｅ．，Ｍｏｆｆｅｔｔ，Ｓ．，Ｍｏｒｅｌｌｏ，Ｊ−Ｐ．，Ｌｏｉｓｅｌ，Ｔ．Ｐ．，Ｂｉｃｈｅｔ，Ｄ．Ｇ．，Ｂａｒｒｅｔ，Ｃ．  ａｎｄ  Ｂｏｕｖｉｅｒ，Ｍ．１９９６．  Ａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ａ  ｐ２−ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｄｏｍａｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｂｏｔｈ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１，２８６１２−２８６１６，  
【０１３４】
４０．Ｃｖｅｊｉｃ，Ｓ．  ａｎｄ  Ｄｅｖｉ，Ｌ．Ａ．１９９７．Ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄｅｌｔａ  ｏｐｉｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ａ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ．  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，２６９５９−２６９６４，  
【０１３５】
４１  Ｋｕｎｅｒ，Ｒ．，Ｋｏｈｒ，Ｇ．，Ｇｒｕｎｅｗａｌｄ，Ｓ  Ｅｉｓｅｎｈａｒｄｔ，Ｇ．，Ｂａｈ，Ａ．  ａｎｄ  Ｋｏｒｎａｕ，Ｈ−Ｃ．（１９９９）．  Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｈｅｔｅｒｏｍｅｒ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ＧＡＢＡＢ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８３，７４−７７  
【０１３６】
４２．Ｍａｒｒｅｒｏ，Ｍ．Ｂ．，Ｂ．Ｓｃｈｉｅｆｆｅｒ，Ｗ．Ｇ．Ｐａｘｔｏｎ，Ｌ．  Ｈ．Ｅｅｒｄｔ，Ｂ．Ｃ．Ｂｅｒｋ，Ｐ．  Ｄｅｌａｆｏｎｔａｉｎｅ  ａｎｄ  Ｋ．Ｅ．  Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ．（１９９５）．  Ｄｉｒｅｃｔ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｊａｋ／ＳＴＡＴ  ｐａｔｈｗａｙ  ｂｙ  ｔｈｅ  ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ＩＩ  ＡＴ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．  Ｎａｔｕｒｅ  ３７５，２４７−２５０．  
【０１３７】
４３．Ｐａｒｋ，Ｅ．Ｓ．，Ｋｉｍ，Ｈ．，Ｓｕｈ，Ｊ．Ｍ．，Ｐａｒｋ，Ｓ．Ｊ．，Ｙｏｕ，  Ｓ．Ｈ．，Ｃｈｕｎｇ，Ｈ．Ｋ．，Ｌｅｅ，Ｋ．Ｗ．，Ｋｗｏｎ，Ｏ．Ｙ．Ｃｈｏ，Ｂ．Ｙ．，Ｋｉｍ，Ｙ．Ｋ．，Ｒｏ，Ｈ．Ｋ．，Ｃｈｕｎｇ，Ｊ．  ａｎｄ  Ｓｈｏｎｇ，Ｍ．（２０００）  Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ＪＡＫ／ＳＴＡＴ  （Ｊａｎｕｓ  ｋｉｎａｓｅ／ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ）  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｈｙｒｏｔｒｏｐｉｎ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙ．  Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃ．１１４，６６２−６７０．
【０１３８】
４４，Ｂｕｇｇｙ，Ｊ．Ｊ．（１９９８）．  Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ａ  ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ  ｔｏ  ｉｔｓ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｏｎ  Ｂ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ｔｈｅＪＡＫ／ＳＴＡＴ  ｐａｔｈｗａｙ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３３１，  ２１１−２１６．  
【０１３９】
４５  Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｊ．  ａｎｄ  Ｄａｒｎｅｌｌ  Ｊｒ．，Ｅ．（２０００），  Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ ｏｆ  ＳＴＡＴｓ  ｉｎ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｉｍｐａｃｔ  ｏｎ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９，２４６８−２４７３  
【０１４０】
４６．Ｄｅｃｋｅｒ，Ｔ．  ａｎｄ  Ｋｏｖａｒｉｋ，Ｐ．（２０００）．  Ｓｅｒｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＳＴＡＴｓ．  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９，２６２８−２６３７．  
【０１４１】
４７．Ｅｍａｎｕｅｌｌｉ，Ｂ．，Ｐｅｒａｌｄｉ，Ｐ．，Ｆｉｌｌｏｕｘ，Ｃ．，Ｓａｗｋａ−Ｖｅｒｈｅｌｌｅ，Ｄ．，Ｈｉｌｔｏｎ，Ｄ．  ａｎｄ  Ｖａｎ  Ｏｂｂｅｒｇｈｅｎ，Ｅ．（２０００）． ＳＯＣＳ−３  ｉｓ  ａｎ  ｉｎｓｕｌｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５，１５９８５−１５９９１  
【０１４２】
４８  Ｐｅｚｅｔ，Ａ．，Ｆａｖｒｅ，Ｈ．，Ｋｅｌｌｙ，Ｐ．Ａ．  ａｎｄ  Ｅｄｅｒｙ，  Ｍ．  （１９９９）．  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｌａｃｔｉｎ  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｓ  ｏｆ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４，２４４９７２４５０２  
【０１４３】
４９  Ｓｐｏｒｒｉ，Ｂ．，Ｋｏｖａｎｅｎ，Ｐ．Ｅ．，Ｓａｓａｋｉ，Ａ．，Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ，Ａ．  ａｎｄ  Ｌｅｏｎａｒｄ  Ｗ．Ｊ．（２００１），ＪＡＢ／ＳＯＣＳ  １／ＳＳ−ｌ  ｉｓ  ａｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ＩＬ−２  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．  Ｂｌｏｏｄ  ９７，２２１−２２６．  
【０１４４】
５０．Ｄｏｒｓｈｋｉｎｄ，Ｋ．  ａｎｄ  Ｈｏｒｓｅｍａｎ，Ｎ．Ｄ．（２０００）  Ｔｈｅ  ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｌａｃｔｉｎ，  ｇｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ，ｉｎｓｕｌｉｎ−  ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−Ｉ  ａｎｄ ｔｈｙｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎｅｓ  ｉｎ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ：ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｆｒｏｍ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ａｎｄ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ．  Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｖ．２１，２９２−３１２．  
【０１４５】
５１．Ｔｏｌｌｅｔ−Ｅｇｎｅｌｌ，Ｐ．，Ｆｌｏｒｅｓ−Ｍｏｒａｌｅｓ，Ａ．，Ｓｔａｖｒｅｕｓ−Ｅｖｅｒｓ，Ａ．，Ｓａｈｌｉｎ，Ｌ．  ａｎｄ  Ｎｏｒｓｔｅｄｔ，Ｇ（１９９９）．  Ｇｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＳＯＣＳ−２，  ＳＯＣＳ−３，  ａｎｄ  ＣＩＳ  ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ  ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １４０，３６９３−３７０４．  
【０１４６】
５２．Ｒａｍ，Ｐ．Ａ．  ａｎｄ  Ｗａｘｍａｎ，Ｄ．Ｊ．（２０００）．  Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ＳＨ２  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＣＩＳ  ｉｎ  ｄｅｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＳＴＡＴＳｂ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｂｙ  ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  ｇｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ．  Ｊ，Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７５，３９４８７−３９４９６．  
【０１４７】
５３．Ｆｏｒｎａｒｉ，Ｃ．，Ｐａｌａｃｉｏｓ，Ｆ．Ｍ．，Ｄｉｅｚ，Ｒ．Ａ．  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｂｉ，Ａ．Ｄ．（１９９４）．  Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ  ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ  ｏｆ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ  ｉｎ  ａｃｒｏｍｅｇａｌｙ  ａｎｄ  ｈｙｐｅｒｐｒｏｌａｃｔｉｎｅｍｉａ．  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．  １３０，４６３−４６８，  
【０１４８】
５４，Ｐｅｒｅｒａ，Ｌ．Ｐ．，Ｇｏｌｄｍａｎ，Ｃ．Ｋ．ａｎｄ  Ｗａｌｄｍａｎｎ，Ｔ．  Ａ．（１９９９）．ＩＬ−１５  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２，２６０６−２６１２，  
【０１４９】
参照による組み込み。本願で引用した全ての特許文書と刊行物は、それぞれ個々の刊行物又は特許文書が個別に表示されているのと同等な程度にまで、全ての目的のためにその全体が参照として組み込まれている。限定するものではないが、より具体的には、Ｍｅｌｌａｄｏら．，  Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｈｏｍｏ−ｏｒ  Ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｚａｔｏｎ  Ａｃｔｉｖａｔｅｓ  Ｄｉｓｔｉｎｃｔ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｐａｔｈｗａｙｓ，２０  ＥＭＢＯ  Ｊ．２４９７（２００１）という刊行物は全ての目的のためにその全体が参照として組み込まれている。
【図面の簡単な説明】
【０１５０】
【図１Ａ】ｂＧＨ−ＴｇマウスのＣＸＣＬ１２に対する走化性応答が減少していることを示している。
【図１Ｂ】ｂＧＨ−ＴｇマウスのＣＸＣＬ１２に対する走化性応答が減少していることを示している。
【図２Ａ】ＳＯＣＳ３レベルがｂＧＨ−Ｔｇマウスにおいて増加していることを示している。
【図２Ｂ】ＳＯＣＳ３レベルがｂＧＨ−Ｔｇマウスにおいて増加していることを示している。
【図２Ｃ】ＳＯＣＳ３レベルがｂＧＨ−Ｔｇマウスにおいて増加していることを示している。
【図３Ａ】ＩＭ−９細胞が機能的ＣＸＣＲ４及びｈＧＨレセプターを発現していることを示している。
【図３Ｂ】ＩＭ−９細胞が機能的ＣＸＣＲ４及びｈＧＨレセプターを発現していることを示している。
【図３Ｃ】ＩＭ−９細胞が機能的ＣＸＣＲ４及びｈＧＨレセプターを発現していることを示している。
【図３Ｄ】ＩＭ−９細胞が機能的ＣＸＣＲ４及びｈＧＨレセプターを発現していることを示している。
【図４Ａ】ＩＭ−９細胞においてＣＸＣＬ１２がＳＴＡＴ活性化を誘導していることを示している。
【図４Ｂ】ＩＭ−９細胞においてＣＸＣＬ１２がＳＴＡＴ活性化を誘導していることを示している。
【図５Ａ】細胞核に対してＣＸＣＬ１２が機能性ＳＴＡＴトランスロケーションを誘導していることを示している。
【図５Ｂ】細胞核に対してＣＸＣＬ１２が機能性ＳＴＡＴトランスロケーションを誘導していることを示している。
【図５Ｃ】細胞核に対してＣＸＣＬ１２が機能性ＳＴＡＴトランスロケーションを誘導していることを示している。
【図６Ａ】ｈＧＨ処理が、ＣＸＣＬ１２が媒介する応答に影響を与えることを示している。
【図６Ｂ】ｈＧＨ処理が、ＣＸＣＬ１２が媒介する応答に影響を与えることを示している。
【図６Ｃ】ｈＧＨ処理が、ＣＸＣＬ１２が媒介する応答に影響を与えることを示している。
【図７Ａ】ＳＯＣＳタンパク質発現によってＣＸＣＬ１２が誘導する細胞応答が遮断されることを示している。
【図７Ｂ】ＳＯＣＳタンパク質発現によってＣＸＣＬ１２が誘導する細胞応答が遮断されることを示している。
【図８Ａ】ｂＧＨ−Ｔｇマウスにおいてリンパ系器官及び小脳が欠損していることを示している。
【図８Ｂ】ｂＧＨ−Ｔｇマウスにおいてリンパ系器官及び小脳が欠損していることを示している。
【図８Ｃ】ｂＧＨ−Ｔｇマウスにおいてリンパ系器官及び小脳が欠損していることを示している。
【図８Ｄ】ｂＧＨ−Ｔｇマウスにおいてリンパ系器官及び小脳が欠損していることを示している。
【図９】ＧＨの分子機構がＣＸＣＬ１２のシグナル伝達へに影響を及ぼすことを示している。
【図１Ａ】
2005514933.tif 000002
【図１Ｂ】
2005514933.tif 000003
【図２Ａ】
2005514933.tif 000004
【図２Ｂ】
2005514933.tif 000005
【図２Ｃ】
2005514933.tif 000006
【図３Ａ】
2005514933.tif 000007
【図３Ｂ】
2005514933.tif 000008
【図３Ｃ】
2005514933.tif 000009
【図３Ｄ】
2005514933.tif 000010
【図４Ａ】
2005514933.tif 000011
【図４Ｂ】
2005514933.tif 000012
【図５Ａ】
2005514933.tif 000013
【図５Ｂ】
2005514933.tif 000014
【図５Ｃ】
2005514933.tif 000015
【図６Ａ】
2005514933.tif 000016
【図６Ｂ】
2005514933.tif 000017
【図６Ｃ】
2005514933.tif 000018
【図７Ａ】
2005514933.tif 000019
【図７Ｂ】
2005514933.tif 000020
【図８Ａ】
2005514933.tif 000021
【図８Ｂ】
2005514933.tif 000022
【図８Ｃ】
2005514933.tif 000023
【図８Ｄ】
2005514933.tif 000024
【図９】
2005514933.tif 000025
【国際調査報告】
2005514933.tif 000026
2005514933.tif 000027
2005514933.tif 000028
2005514933.tif 000029