(57)【要約】線状ポリアミン架橋白金化合物からなるプロドラッグ形態およびその製造方法およびその用途を提供する。該化合物のポリアミン架橋部は、スペルミンまたはスペルミジン系であり、該ポリアミン架橋部の中心アミンは、置換性封鎖基に化学的に結合している。該封鎖基の存在は、投与によるＰｔ化合物の毒性を低減させる効果がある。適当な環境条件に曝露することにより、封鎖基の選択的な除去および活性な未封鎖化学種の放出を生ずる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式で示される線状ポリアミン架橋白金化合物：
［（ＰtＸＹＺ）-Ａ-（ＰtＸ'Ｙ'Ｚ'）］
式中、Ｘ，Ｙ，Ｚ，Ｘ'，Ｙ' およびＺ' は、同一でも異なっていてもよい、アニオン性基または置換基を有していても非置換でもよい中性基であり、
Ａは、Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＨ２（ｘは約１〜約１０の範囲、ｙは約１〜約１０の範囲）もしくは  Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＢＢ' (ＣＨ２)ｘＮＨ２（ｘは約１〜約１０の範囲、ｙは約１〜約１０の範囲）（式中、ＢおよびＢ' は、水素または置換性封鎖基であり、同一でも異なっていてもよく、各位置において同一または異なっていてもよく、またＢ' は存在してもしなくてもよい。）からなる群より選ばれる一般式で示される架橋ポリアミンであり、
ただし、該線状ポリアミン架橋白金化合物の前記アニオン性基または中性基が、前記架橋ポリアミンに対し、１，１/ｔ，ｔの立体配置をとる場合には、前記置換性封鎖基はｔＢＯＣではない。
【請求項２】
前記アニオン性基が、ハロゲン化物、擬ハロゲン化物、置換擬ハロゲン化物、硫酸塩、リン酸塩、ホスフォン酸塩、硝酸塩、カルボン酸塩、置換カルボン酸塩、ジカルボン酸塩および置換ジカルボン酸塩からなる群より選ばれる請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記中性基が、アンモニア、第一級または第二級アミン、-ＮＨ２部分のみが白金と結合する“ぶら下がり”ジアミンＨ２Ｎ(ＣＨ２)ｎＮＢＢ'、スルフォキシド、ホスフィン、ピリジン、置換ピリジン、キノリン、イミダゾール、チアゾール、ピリミジン、プリン、アクリジン、ピラゾール、ベンズイミダゾールおよびベンゾチアゾールからなる群より選ばれ、１，１/ｃ，ｃ配置の場合には、ＹとＺ、またはＹ'とＺ'、またはＹとＺおよびＹ'とＺ'の両方がキレート性二座配位子ジアミンであってもよい請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
前記化合物の前記架橋ポリアミン部が、Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＨ２であり、かつｘは約１〜約１０の範囲、ｙは約１〜約１０の範囲である請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
前記ｘおよびｙの値が、ｘ＝４かつｙ＝３、ｘ＝６かつｙ＝６、およびｘ＝７かつｙ＝８からなる群より選ばれる請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｙ＝Ｙ' であって塩素であり、かつ
Ｘ＝Ｘ' かつＺ＝Ｚ' であってアンモニアである請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｘ＝Ｘ' であって塩素であり、かつ
Ｙ＝Ｙ' かつＺ＝Ｚ' であってアンモニアである請求項５に記載の化合物。
【請求項８】
前記化合物の前記架橋ポリアミン部が、Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＢＢ'(ＣＨ２)ｘＮＨ２であり、かつｘは約１〜約１０の範囲、ｙは約１〜約１０の範囲である請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
前記ｘおよびｙの値が、ｘ＝４かつｙ＝３、ｘ＝６かつｙ＝２、およびｘ＝５かつｙ＝４からなる群より選ばれる請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｙ＝Ｙ' であって塩素であり、かつ
Ｘ＝Ｘ' かつＺ＝Ｚ' であってアンモニアである請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
前記置換性封鎖基が、カルバメート保護基およびアミド保護基からなる群より選ばれる請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
前記カルバメート保護基が、t-ブチル（tＢＯＣ）、ベンジル（ＣＢz）、フルオレニルメチル（Ｆmoc）、アダマンチル（1-Ａdoc）、ピペリジニル（Ｐipoc）、アリルおよびビニルからなる群より選ばれる請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
前記アミド保護基が、2-（ベンゾイルオキシメチル）ベンゾイル（ＢＯＭＢ）、アセチル、トリフルオロアセチルおよびモノクロロアセチルからなる群より選ばれる請求項１１に記載の化合物。
【請求項１４】
前記封鎖基が、ターゲッティング要素をさらに含む請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
前記アニオン性基が、前記架橋ポリアミンに対し、１，１/ｔ，ｔ配置で配置されている請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
前記アニオン性基が、前記架橋ポリアミンに対し、１，１/ｃ，ｃ配置で配置されている請求項１に記載の化合物。
【請求項１７】
前記アニオン性基または中性基が、前記架橋ポリアミンに対し、２，２/ｃ，ｃ配置で配置されている請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】
下記一般式で示される線状ポリアミン架橋白金化合物を癌細胞に供することを含み、該線状ポリアミン架橋白金化合物を前記癌細胞を死滅させる有効量で供する、癌細胞を死滅させる方法：
［（ＰtＸＹＺ）-Ａ-（ＰtＸ'Ｙ'Ｚ'）］
式中、Ｘ，Ｙ，Ｚ，Ｘ'，Ｙ' およびＺ' は、同一でも異なっていてもよい、アニオン性基または置換基を有していても非置換でもよい中性基であり、
Ａは、Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＨ２(ＣＨ２)ｙＮＨ２（ｘは約１〜約１０の範囲、ｙは約１〜約１０の範囲）もしくはＨ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＢＢ' (ＣＨ２)ｘＮＨ２（ｘは約１〜約１０の範囲、ｙは約１〜約１０の範囲）（式中、ＢおよびＢ' は、水素または置換性封鎖基であり、同一でも異なっていてもよく、各位置において同一または異なっていてもよく、またＢ' はあってもなくてもよい。）からなる群より選ばれる一般式で示される架橋ポリアミンであり、
かつ前記架橋ポリアミン部の中心アミン機能の少なくとも１つは、置換性封鎖基で封鎖されている。
【請求項１９】
前記アニオン性基が、ハロゲン化物、擬ハロゲン化物、置換擬ハロゲン化物、硫酸塩、リン酸塩、ホスフォン酸塩、硝酸塩、カルボン酸塩、置換カルボン酸塩、ジカルボン酸塩および置換ジカルボン酸塩からなる群より選ばれる請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記中性基が、アンモニア、第一級または第二級アミン、-ＮＨ２部分のみが白金と結合する“ぶら下がり”ジアミンＨ２Ｎ(ＣＨ２)ｎＮＢＢ'、スルフォキシド、ホスフィン、ピリジン、置換ピリジン、キノリン、イミダゾール、チアゾール、ピリミジン、プリン、アクリジン、ピラゾール、ベンズイミダゾールおよびベンゾチアゾールからなる群より選ばれ、１，１/ｃ，ｃ配置の場合には、ＹとＺ、またはＹ'とＺ'、またはＹとＺおよびＹ'とＺ'の両方がキレート性二座配位子ジアミンであってもよい請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記化合物の前記架橋ポリアミン部が、Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＨ２であり、かつｘは約１〜約１０の範囲、ｙは約１〜約１０の範囲である請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記ｘおよびｙの値が、ｘ＝４かつｙ＝３、ｘ＝６かつｙ＝６、およびｘ＝７かつｙ＝８からなる群より選ばれる請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
Ｙ＝Ｙ' であって塩素であり、かつ
Ｘ＝Ｘ' かつＺ＝Ｚ' であってアンモニアである請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
Ｘ＝Ｘ' であって塩素であり、かつ
Ｙ＝Ｙ' かつＺ＝Ｚ' であってアンモニアである請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記化合物の前記架橋ポリアミン部が、Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＢＢ'(ＣＨ２)ｘＮＨ２であり、かつｘは約１〜約１０の範囲、ｙは約１〜約１０の範囲である請求項１８に記載の方法。
【請求項２６】
前記ｘおよびｙの値が、ｘ＝４かつｙ＝３、ｘ＝６かつｙ＝２、およびｘ＝５かつｙ＝４からなる群より選ばれる請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
Ｙ＝Ｙ' であって塩素であり、かつ
Ｘ＝Ｘ' かつＺ＝Ｚ' であってアンモニアである請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記置換性封鎖基が、カルバメート保護基およびアミド保護基からなる群より選ばれる請求項１８に記載の方法。
【請求項２９】
前記カルバメート保護基が、t-ブチル（tＢＯＣ）、ベンジル（ＣＢz）、フルオレニルメチル（Ｆmoc）、アダマンチル（1-Ａdoc）、ピペリジニル（Ｐipoc）、アリルおよびビニルからなる群より選ばれる請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記アミド保護基が、2-（ベンゾイルオキシメチル）ベンゾイル（ＢＯＭＢ）、アセチル、トリフルオロアセチルおよびモノクロロアセチルからなる群より選ばれる請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記置換性封鎖基が、ターゲッティング要素をさらに含む請求項１８に記載の方法。
【請求項３２】
前記アニオン性基または中性基が、前記架橋ポリアミンに対し、１，１/ｔ，ｔ配置で配置されている請求項１８に記載の方法。
【請求項３３】
前記アニオン性基または中性基が、前記架橋ポリアミンに対し、１，１/ｃ，ｃ配置で配置されている請求項１８に記載の方法。
【請求項３４】
前記アニオン性基または中性基が、前記架橋ポリアミンに対し、２，２/ｃ，ｃ配置で配置されている請求項１８に記載の方法。
【請求項３５】
前記置換性封鎖基を環境的な刺激により除放する工程をさらに含む請求項１８に記載の方法。
【請求項３６】
前記環境的な刺激がｐＨおよび酵素からなる群より選ばれる請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
一般式［（ＰtＸＹＺ）-Ａ-（ＰtＸ'Ｙ'Ｚ'）］
［式中、Ｘ，Ｙ，Ｚ，Ｘ'，Ｙ' およびＺ' は、同一でも異なっていてもよい、アニオン性基または置換基を有していても非置換でもよい中性基であり、
Ａは、Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＨ２(ＣＨ２)ｙＮＨ２（ｘは約１〜約１０の範囲、ｙは約１〜約１０の範囲）もしくは  Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＢＢ' (ＣＨ２)ｘＮＨ２（ｘは約１〜約１０の範囲、ｙは約１〜約１０の範囲）（式中、ＢおよびＢ' は、水素または置換性封鎖基であり、同一でも異なっていてもよく、各位置において同一または異なっていてもよく、またＢ' はあってもなくてもよい。）からなる群より選ばれる一般式で示される架橋ポリアミンである。］で示され、
かつ前記アニオン性基または中性基は、前記架橋ポリアミンに対し、１，１/ｃ，ｃ配置で配置されている、線状ポリアミン架橋白金化合物。
【請求項３８】
前記アニオン性基が、ハロゲン化物、擬ハロゲン化物、置換擬ハロゲン化物、硫酸塩、リン酸塩、ホスフォン酸塩、硝酸塩、カルボン酸塩、置換カルボン酸塩、ジカルボン酸塩および置換ジカルボン酸塩からなる群より選ばれる請求項３７に記載の化合物。
【請求項３９】
前記中性基が、アンモニア、第一級または第二級アミン、-ＮＨ２部分のみが白金と結合する“ぶら下がり”ジアミンＨ２Ｎ(ＣＨ２)ｎＮＢＢ'、スルフォキシド、ホスフィン、ピリジン、置換ピリジン、キノリン、イミダゾール、チアゾール、ピリミジン、プリン、アクリジン、ピラゾール、ベンズイミダゾールおよびベンゾチアゾールからなる群より選ばれ、１，１/ｃ，ｃ配置の場合には、ＹとＺ、またはＹ'とＺ'、またはＹとＺおよびＹ'とＺ'の両方がキレート性二座配位子ジアミンであってもよい請求項３７に記載の化合物。
【請求項４０】
前記化合物の前記架橋ポリアミン部が、Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＨ２であり、かつｘは約１〜約１０の範囲、ｙは約１〜約１０の範囲である請求項３７に記載の化合物。
【請求項４１】
前記ｘおよびｙの値が、ｘ＝４かつｙ＝３、ｘ＝６かつｙ＝６、およびｘ＝７かつｙ＝８からなる群より選ばれる請求項４０に記載の化合物。
【請求項４２】
Ｙ＝Ｙ' であって塩素であり、かつ
Ｘ＝Ｘ' かつＺ＝Ｚ' であってアンモニアである請求項４１に記載の化合物。
【請求項４３】
Ｘ＝Ｘ' であって塩素であり、かつ
Ｙ＝Ｙ' かつＺ＝Ｚ' であってアンモニアである請求項４１に記載の化合物。
【請求項４４】
前記化合物の前記架橋ポリアミン部が、Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＢＢ'(ＣＨ２)ｘＮＨ２であり、かつｘは約１〜約１０の範囲、ｙは約１〜約１０の範囲である請求項３７に記載の化合物。
【請求項４５】
前記ｘおよびｙの値が、ｘ＝４かつｙ＝３、ｘ＝６かつｙ＝２、およびｘ＝５かつｙ＝４からなる群より選ばれる請求項４４に記載の化合物。
【請求項４６】
Ｙ＝Ｙ' であって塩素であり、かつ
Ｘ＝Ｘ' かつＺ＝Ｚ' であってアンモニアである請求項４５に記載の化合物。
【請求項４７】
前記置換性封鎖基が、カルバメート保護基およびアミド保護基からなる群より選ばれる請求項３７に記載の化合物。
【請求項４８】
前記カルバメート保護基が、t-ブチル（tＢＯＣ）、ベンジル（ＣＢz）、フルオレニルメチル（Ｆmoc）、アダマンチル（1-Ａdoc）、ピペリジニル（Ｐipoc）、アリルおよびビニルからなる群より選ばれる請求項４７に記載の化合物。
【請求項４９】
前記アミド保護基が、2-（ベンゾイルオキシメチル）ベンゾイル（ＢＯＭＢ）、アセチル、トリフルオロアセチルおよびモノクロロアセチルからなる群より選ばれる請求項４７に記載の化合物。
【請求項５０】
前記封鎖基が、ターゲッティング要素をさらに含む請求項３７に記載の化合物。
【請求項５１】
線状白金化合物のアニオン性脱離基をアセタートで置換し、該線状白金化合物のアセタート誘導体を形成する工程、
前記線状白金化合物の前記アセタート誘導体と、目的のアミド封鎖基の酸無水物とを、無水条件下で反応させることにより、前記ポリアミン架橋のアミン基を封鎖し、前記線状白金化合物のアミド封鎖誘導体を形成する工程、および
前記線状白金化合物のアセタート封鎖誘導体を、該アセタートをアニオンに置換しうる条件下に、アニオンに曝露することにより、該線状白金化合物のアニオン封鎖誘導体を形成する工程を含む、
ポリアミン架橋のアミン基がアミド基で封鎖されているポリアミン架橋を有する線状白金化合物の製造方法。
【請求項５２】
線状白金化合物とカルバメート前駆体とを、アルカリ性ジオキサン／水系中、前記線状白金化合物のカルバメート封鎖誘導体が形成される条件下で、反応させる工程を含む、
ポリアミン架橋のアミン基がカルバメート基で封鎖されているポリアミン架橋を有する線状白金化合物の製造方法。
【請求項５３】
線状ポリアミン架橋白金化合物の架橋ポリアミン部の中心アミノ機能の少なくとも１つに置換性封鎖基を結合させることにより形成された封鎖された線状ポリアミン架橋白金化合物を、所望の場所に配置する工程、および
該封鎖された線状ポリアミン架橋白金化合物を、前記置換性封鎖基の離脱を生じる環境的刺激に曝露する工程を含む、
所望場所で線状ポリアミン架橋白金化合物を調製する方法。
【請求項５４】
前記封鎖された線状ポリアミン架橋白金化合物が、下記一般式で示される請求項５３に記載の方法：
［（ＰtＸＹＺ）-Ａ-（ＰtＸ'Ｙ'Ｚ'）］
式中、Ｘ，Ｙ，Ｚ，Ｘ'，Ｙ' およびＺ' は、同一でも異なっていてもよい、アニオン性基または置換基を有していても非置換でもよい中性基であり、かつ
Ａは、Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＨ２（ｘは約１〜約１０の範囲、ｙは約１〜約１０の範囲）もしくは  Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＢＢ' (ＣＨ２)ｘＮＨ２（ｘは約１〜約１０の範囲、ｙは約１〜約１０の範囲）（式中、ＢおよびＢ' は、水素または置換性封鎖基であり、同一でも異なっていてもよく、各位置において同一または異なっていてもよく、またＢ' は存在してもしなくてもよい。）からなる群より選ばれる一般式で示される架橋ポリアミンであり、
かつ前記架橋ポリアミン部の中心アミンの少なくとも１つは、置換性封鎖基で封鎖されている。
【請求項５５】
前記アニオン性基が、ハロゲン化物、擬ハロゲン化物、置換擬ハロゲン化物、硫酸塩、リン酸塩、ホスフォン酸塩、硝酸塩、カルボン酸塩、置換カルボン酸塩、ジカルボン酸塩および置換ジカルボン酸塩からなる群より選ばれる請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記中性基が、アンモニア、第一級または第二級アミン、-ＮＨ２部分のみが白金と結合する“ぶら下がり”ジアミンＨ２Ｎ(ＣＨ２)ｎＮＢＢ'、スルフォキシド、ホスフィン、ピリジン、置換ピリジン、キノリン、イミダゾール、チアゾール、ピリミジン、プリン、アクリジン、ピラゾール、ベンズイミダゾールおよびベンゾチアゾールからなる群より選ばれ、１，１/ｃ，ｃ配置の場合には、ＹとＺ、またはＹ'とＺ'、またはＹとＺおよびＹ'とＺ'の両方がキレート性二座配位子ジアミンであってもよい請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
前記化合物の前記架橋ポリアミン部が、Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＨ２であり、かつｘは約１〜約１０の範囲、ｙは約１〜約１０の範囲である請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
前記ｘおよびｙの値が、ｘ＝４かつｙ＝３、ｘ＝６かつｙ＝６、およびｘ＝７かつｙ＝８からなる群より選ばれる請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
Ｙ＝Ｙ' であって塩素であり、かつ
Ｘ＝Ｘ' かつＺ＝Ｚ' であってアンモニアである請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
Ｘ＝Ｘ' であって塩素であり、かつ
Ｙ＝Ｙ' かつＺ＝Ｚ' であってアンモニアである請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
前記化合物の前記架橋ポリアミン部が、Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＢＢ'(ＣＨ２)ｘＮＨ２であり、かつｘは約１〜約１０の範囲、ｙは約１〜約１０の範囲である請求項５４に記載の方法。
【請求項６２】
前記ｘおよびｙの値が、ｘ＝４かつｙ＝３、ｘ＝６かつｙ＝２、およびｘ＝５かつｙ＝４からなる群より選ばれる請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
Ｙ＝Ｙ' であって塩素であり、かつ
Ｘ＝Ｘ' かつＺ＝Ｚ' であってアンモニアである請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記置換性封鎖基が、カルバメート保護基およびアミド保護基からなる群より選ばれる請求項５４に記載の方法。
【請求項６５】
前記カルバメート保護基が、t-ブチル（tＢＯＣ）、ベンジル（ＣＢz）、フルオレニルメチル（Ｆmoc）、アダマンチル（1-Ａdoc）、ピペリジニル（Ｐipoc）、アリルおよびビニルからなる群より選ばれる請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記アミド保護基が、2-（ベンゾイルオキシメチル）ベンゾイル（ＢＯＭＢ）、アセチル、トリフルオロアセチルおよびモノクロロアセチルからなる群より選ばれる請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
前記置換性封鎖基が、ターゲッティング要素をさらに含む請求項５３に記載の方法。
【請求項６８】
前記環境的な刺激がｐＨおよび酵素からなる群より選ばれる請求項５３に記載の方法。
【請求項６９】
ＹとＺ、またはＹ'とＺ'のどちらか、またはＹとＺおよびＹ'とＺ'の両方がキレート性二座配位子ジアミンである請求項３に記載の化合物。
【請求項７０】
前記線状ポリアミン架橋白金化合物において、ＹとＺ、またはＹ'とＺ'のどちらか、またはＹとＺおよびＹ'とＺ'の両方がキレート性二座配位子ジアミンである請求項２０に記載の方法。
【請求項７１】
ＹとＺ、またはＹ'とＺ'のどちらか、またはＹとＺおよびＹ'とＺ'の両方がキレート性二座配位子ジアミンである請求項３９に記載の化合物。
【請求項７２】
前記線状ポリアミン架橋白金化合物において、ＹとＺ、またはＹ'とＺ'のどちらか、またはＹとＺおよびＹ'とＺ'の両方がキレート性二座配位子ジアミンである請求項５８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、広くはポリアミン架橋した白金化合物に関する。より詳しくは、本発明はプロドラッグとして使用するための封鎖されたポリアミン架橋白金化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
白金多核錯体は、抗癌剤に分類されるが、単核のcis-ＤＤＰ（シスプラチン）およびその類似物とは全く異なる生理活性を示す（１）。この類の化合物は、幾何および配位型の異なるさまざまな構造型が可能である（２）。図１に、これら化合物の最も一般的な構造を示す。
【化１】
2005501123.tif 000002
【０００３】
ＤＮＡは、白金系抗癌剤の広範な標的となりうる。白金化合物は、ＤＮＡ、好ましくはグアニジンと、少なくとも１つの脱離基、通常塩素の置換により共有結合を形成する。図２は、Ｘ、ＹおよびＺの配位子を、ＣlとＮＨ３とで入れ替えただけの、各種構造型を示す。現在最も注目されている種類は、通称１，１/ｔ，ｔ系であり、この系では、配位圏内でジアミン架橋に対しトランス位に存在する塩素の置換により、２官能性ＤＮＡ結合が達成される。この構造系の一般式（式中、Ｙは、図中ａ−ｄなどで示す線状のポリアミンリンカーであり、末端の第一級アミンだけが白金に結合する）は図３に示すが、そこに示されるように二核または三核いずれかの化合物を含むことができる。この新しい構造系の化合物のうち、臨床試験に最初に導入された化合物は、ＢＢＲ３４６４（図３ｂ）と称される三核化合物である（３）。
【０００４】
ポリアミン架橋した白金二核化合物は、ＢＢＲ３４６４中の中心白金−アミン基の水素結合と静電分配とが、線状ポリアミンリンカーの自由な、非配位型“中心の”第四級窒素を介して繰り返され、しかも２つの別なＰt-Ｃl結合の存在によって、ＤＮＡ付加体での２官能結合形態を保持するため、第二世代のＢＢＲ３４６４類似物として大きく注目されている（４）。前臨床研究では、ナノ分子レベルでの細胞毒性をもつこれら化学種の能力が確認されている（５）。
【０００５】
上記リンカー中での水素結合性および静電分配能力は、Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｎＮＨ２（たとえば図３ａ）などの単純ジアミンリンカーに比べ、細胞取込み、細胞毒性および抗腫瘍活性を著しく高めることが示されていることは、図１および３に示される一般構造式についての構造−活性の関係において注目される特徴である。この観察を裏付けるように、全ての封鎖されたポリアミン架橋化合物は、非封鎖型の対応化合物よりも細胞毒性が１−２オーダーのレベルで少ない（６，７）。相違点は、化合物の電荷と、“中心の”プロトンを有し、白金とは結合していないアミンの存在だけであるため、これら特徴が細胞毒性能力に寄与する、すなわち細胞毒性と抗腫瘍活性は、特定の架橋ポリアミンの機能であると考えるのは当然といえる。
【０００６】
残念ながら、これらポリアミン架橋した白金二核錯体の顕著な効能は、極めて限られた治療係数でしか得られていない。毒性副作用は最小限としながら最適な投与で投与することができるような高い治療係数をもつ製品形態のポリアミン架橋白金薬剤が強く望まれている。さらに、強い細胞毒性種の標的となりえるかまたはその選択的放出が可能である製品形態のこれら薬剤が強く望まれている。
【発明の開示】
【０００７】
本発明は、封鎖した線状ポリアミン架橋白金化合物プロドラッグおよびその使用方法を提供することを目的としている。該線状のポリアミン架橋した白金化合物は、図１に示す一般式：［（ＰtＸＹＺ）-Ａ-（ＰtＸ'Ｙ'Ｚ'）］で示される。式中、Ｘ，Ｙ，Ｚ，Ｘ'，Ｙ' およびＺ' は、アニオン性配位子（通常塩素）および中性配位子（通常アンモニア、ＮＨ３）の組合わせであり、同一でも異なっていてもよく、Ａは、一般式Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＨ２（ｘは約１〜約１０の範囲、ｙは約１〜約１０の範囲）、もしくは  Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＢＢ' (ＣＨ２)ｘＮＨ２（ｘは約１〜約１０の範囲、ｙは約１〜約１０の範囲）で示すことができる架橋（bridging）ポリアミンである。
【０００８】
【化２】
2005501123.tif 000003
【０００９】
また、上記ＢおよびＢ' は、水素または置換性封鎖基であり、同一でも異なっていてもよく、一分子内の各位置において同一または異なっていてもよく（たとえば架橋ポリアミン中にアミンが２つ存在する場合）、架橋ポリアミン部の中心アミンの少なくとも１つはカルバメートまたはアミドなどの置換性封鎖基で封鎖されている。さらに、Ｂ' は、媒体のｐＨにより、存在してもしなくてもよい。
【００１０】
アニオン性基は、ハロゲン化物（halide）、擬ハロゲン化物、置換擬ハロゲン化物、硫酸塩、リン酸塩、ホスフォン酸塩、硝酸塩、カルボン酸塩、置換カルボン酸塩、ジカルボン酸塩および置換ジカルボン酸塩とすることができ；中性基は置換基を有していても非置換でもよく、アンモニア、第一級または第二級アミン、-ＮＨ２部分のみが白金と結合する“ぶら下がり”ジアミンＨ２Ｎ(ＣＨ２)ＮＢＢ'、スルフォキシド、ホスフィン、ピリジン、置換ピリジン、キノリン、イミダゾール、チアゾール、ピリミジン、プリン、アクリジン、ピラゾール、ベンズイミダゾールおよびベンゾチアゾールからなる群より選ばれる。アニオンは塩素であり、かつ中性基はアンモニアである態様は好ましい。さらに、１，１/ｃ，ｃの立体配置（configuratuion）では、Ｙ，Ｙ'，ＺおよびＺ'はキレート性二座配位子ジアミン（たとえばエチレンジアミン、プロピレンジアミン、1,2-ジアミノシクロヘキサンまたは1,1-ジアミノメチルシクロヘキサンなど）とすることができる。
【００１１】
上記化合物の架橋ポリアミン部は、Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＨ２とすることができ、ここでのｘは約１〜約１０の範囲であり、ｙは約１〜約１０の範囲である。いくつかの態様例：ｘ＝４かつｙ＝３、ｘ＝６かつｙ＝６、およびｘ＝７かつｙ＝８。
一方、上記化合物の架橋ポリアミン部は、Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＢＢ'(ＣＨ２)ｘＮＨ２であってもよく、ここでのｘは約１〜約１０の範囲であり、ｙは約１〜約１０の範囲である。いくつかの態様例：ｘ＝４かつｙ＝３、ｘ＝６かつｙ＝２、およびｘ＝５かつｙ＝４。
【００１２】
上記置換性封鎖基は、t-ブチル（tＢＯＣ）、ベンジル（ＣＢz）、フルオレニルメチル（Ｆmoc）、アダマンチル（1-Ａdoc）、ピペリジニル（Ｐipoc）、アリルおよびビニルなどのカルバメート保護基残基；およびたとえばアセチル、トリフルオロアセチルおよびモノクロロアセチルおよび2-（ベンゾイルオキシ）ベンゾイル（ＢＯＭＢ）などのカルボキシラートから導かれるアミド保護基から選択することができ、さらにターゲッティング基を含むことができる。
【００１３】
さらに本発明は、線状ポリアミン架橋白金化合物の架橋ポリアミン部の中心アミノ機能の少なくとも１つに置換性封鎖基を結合（attach）させることにより形成された封鎖された線状ポリアミン架橋白金化合物を、所望の場所に配置する工程、および２）該封鎖された線状ポリアミン架橋白金化合物を、前記置換性封鎖基の離脱を生じる環境的刺激に曝露する工程を含む、線状ポリアミド架橋白金化合物の供給方法を提供する。
【００１４】
上記封鎖された線状ポリアミン架橋白金化合物は、一般式［（ＰtＸＹＺ）-Ａ-（ＰtＸ'Ｙ'Ｚ'）］で示される。Ｘ，Ｙ，Ｚ，Ｘ'，Ｙ' およびＺ' は、アニオン性配位子（通常塩素）および中性配位子（通常アンモニア、ＮＨ３）の組合わせであり、Ａは、一般式Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＨ２（ｘは約１〜約１０の範囲、ｙは約１〜約１０の範囲）、もしくは  Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＢＢ' (ＣＨ２)ｘＮＨ２（ｘは約１〜約１０の範囲、ｙは約１〜約１０の範囲）で示すことができる架橋ポリアミンである。ＢおよびＢ' は、水素またはカルバメートまたはアミドなどの置換性封鎖基であり、同一でも異なっていてもよく、架橋ポリアミン部の中心アミンの少なくとも１つは置換性封鎖基で封鎖されている。さらに、Ｂ' は、媒体のｐＨにより、存在してもしなくてもよい。
【００１５】
アニオン性基は、ハロゲン化物、擬ハロゲン化物、置換擬ハロゲン化物、硫酸塩、リン酸塩、ホスフォン酸塩、硝酸塩、カルボン酸塩、置換カルボン酸塩、ジカルボン酸塩および置換ジカルボン酸塩とすることができる。中性基は置換基を有していても非置換でもよく、たとえばアンモニア、第一級または第二級アミン、-ＮＨ２部分のみが白金と結合する“ぶら下がり”ジアミンＨ２Ｎ(ＣＨ２)ＮＢＢ'、スルフォキシド、ホスフィン、ピリジン、置換ピリジン、キノリン、イミダゾール、チアゾール、ピリミジン、プリン、アクリジン、ピラゾール、ベンズイミダゾールおよびベンゾチアゾールであればよい。アニオンは塩素であり、かつ中性基はアンモニアである態様は好ましい。さらに、１，１/ｃ，ｃ配置の場合には、Ｙ，Ｙ'，ＺおよびＺ'はキレート性二座配位子ジアミン（たとえばエチレンジアミン、プロピレンジアミン、1,2-ジアミノシクロヘキサンまたは1,1-ジアミノメチルシクロヘキサンなど）とすることができる。
【００１６】
上記化合物の架橋ポリアミン部は、Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＨ２とすることができ、ここでのｘは約１〜約１０の範囲であり、ｙは約１〜約１０の範囲である。いくつかの態様例：ｘ＝４かつｙ＝３、ｘ＝６かつｙ＝６、およびｘ＝７かつｙ＝８。
一方、上記化合物の架橋ポリアミン部は、Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＢＢ'(ＣＨ２)ｘＮＨ２であってもよく、ここでのｘは約１〜約１０の範囲であり、ｙは約１〜約１０の範囲である。いくつかの態様例：ｘ＝４かつｙ＝３、ｘ＝６かつｙ＝２、およびｘ＝５かつｙ＝４。
【００１７】
上記置換性封鎖基は、t-ブチル（tＢＯＣ）、ベンジル（ＣＢz）、フルオレニルメチル（Ｆmoc）、アダマンチル（1-Ａdoc）、ピペリジニル（Ｐipoc）、アリルおよびビニルなどのカルバメート保護基残基；およびアセチル、トリフルオロアセチル、モノクロロアセチル、2-（ベンゾイルオキシメチル）ベンゾイル（ＢＯＭＢ）などのカルボキシラートから導かれるアミド保護基から選択することができ、封鎖基はさらにターゲッティング基を含むことができる。
上記環境的な刺激としては、たとえばｐＨまたは酵素が挙げられる。
【００１８】
本発明は、また下記一般式で示される線状ポリアミン架橋白金化合物を癌細胞に供することを含む、癌細胞を死滅させる方法をも提供する。
［（ＰtＸＹＺ）-Ａ-（ＰtＸ'Ｙ'Ｚ'）］
式中、Ｘ，Ｙ，Ｚ，Ｘ'，Ｙ' およびＺ' は、アニオン性配位子（通常塩素）および中性配位子（通常アンモニア、ＮＨ３）の組合わせであるＸ，Ｙ，Ｚ，Ｘ'，Ｙ' およびＺ' 。Ａは、一般式Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＨ２(ＣＨ２)ｙＮＨ２（ｘは約１〜約１０の範囲、ｙは約１〜約１０の範囲）、もしくは  Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＨ２(ＣＨ２)ｙＮＨ２(ＣＨ２)ｘＮＨ２（ｘは約１〜約１０の範囲、ｙは約１〜約１０の範囲）で示すことができる架橋ポリアミンである。架橋ポリアミン部の中心アミン機能の少なくとも１つは、カルバメートまたはアミドなどの置換性封鎖基で封鎖されている。この線状ポリアミン架橋白金化合物は、癌細胞の死滅に有効な量で供される。
【００１９】
アニオン性基は、ハロゲン化物、擬ハロゲン化物、置換擬ハロゲン化物、硫酸塩、リン酸塩、ホスフォン酸塩、硝酸塩、カルボン酸塩、置換カルボン酸塩、ジカルボン酸塩および置換ジカルボン酸塩とすることができる。中性基は置換基を有していても非置換でもよく、たとえばアンモニア、第一級または第二級アミン、-ＮＨ２部分のみが白金と結合する“ぶら下がり”ジアミンＨ２Ｎ(ＣＨ２)ＮＢＢ'、スルフォキシド、ホスフィン、ピリジン、置換ピリジン、キノリン、イミダゾール、チアゾール、ピリミジン、プリン、アクリジン、ピラゾール、ベンズイミダゾールおよびベンゾチアゾールなどであればよい。さらに、１，１/ｃ，ｃ配置の場合には、Ｙ，Ｙ'，ＺおよびＺ'はキレート性二座配位子ジアミン（たとえばエチレンジアミン、プロピレンジアミン、1,2-ジアミノシクロヘキサンまたは1,1-ジアミノメチルシクロヘキサンなど）とすることができる。
【００２０】
上記化合物の架橋ポリアミン部は、Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＨ２とすることができ、ここでのｘは約１〜約１０の範囲であり、ｙは約１〜約１０の範囲である。いくつかの態様例：ｘ＝４かつｙ＝３、ｘ＝６かつｙ＝６、およびｘ＝７かつｙ＝８。一方、上記架橋ポリアミン部は、Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＢＢ'(ＣＨ２)ｘＮＨ２であってもよく、ここでのｘは約１〜約１０の範囲であり、ｙは約１〜約１０の範囲である。いくつかの態様例：ｘ＝４かつｙ＝３、ｘ＝６かつｙ＝２、およびｘ＝５かつｙ＝４。
【００２１】
上記置換性封鎖基は、t-ブチル（tＢＯＣ）、ベンジル（ＣＢz）、フルオレニルメチル（Ｆmoc）、アダマンチル（1-Ａdoc）、ピペリジニル（Ｐipoc）、アリルおよびビニルなどのカルバメート保護基残基；およびアセチル、トリフルオロアセチル、モノクロロアセチル、2-（ベンゾイルオキシメチル）ベンゾイル（ＢＯＭＢ）などのカルボキシラートから導かれるアミド保護基から選択することができ、さらにターゲッティング基を含むことができる。上記環境的な刺激としては、たとえばｐＨまたは酵素が挙げられる。
【００２２】
さらに本発明は、ポリアミン架橋のアミン基がアミド封鎖基で封鎖されているポリアミン架橋を有する線状白金化合物の製造方法を供する。該方法は、１）線状白金化合物のアニオン性脱離基をアセタートで置換し、該線状白金化合物のアセタート誘導体を形成する工程；２）該線状白金化合物の前記アセタート誘導体と、目的アミド封鎖基の酸無水物とを、無水条件下で反応させることにより、ポリアミン架橋のアミン基を封鎖し、前記線状白金化合物のアミド封鎖誘導体を形成する工程；３）線状白金化合物のアセタート封鎖誘導体を、白金に結合したアセタートがアニオン基に置換されうる条件下で、アニオンに曝露させることにより、線状白金化合物のアニオン封鎖誘導体を形成する工程を含む。
【００２３】
さらに本発明は、ポリアミン架橋のアミン基がカルバメート封鎖基で封鎖されているポリアミン架橋を有する線状白金化合物の製造方法を供する。該方法は、線状白金化合物とカルバメート前駆体とを、アルカリ性ジオキサン／水系中、線状白金化合物のカルバメート封鎖誘導体が形成される条件下で、反応させる工程を含む。“カルバメート前駆体”とは、たとえばt-ＢＯＣおよびＦmoc封鎖基をそれぞれ生成する、ジカルボン酸ジ-tert-ブチル（t-ＢＯＣ）２Ｏまたはフルオレニルメチルクロロ蟻酸エステル（Ｆmoc-Ｃl）の標準的用法をいう（グリーン（green）,T.W. and ウーツ（Wuts）, P.G.M.「有機化学における保護基（Protective Groups in Organic Chemistry)」，John Wiley & Sons, 第３版，(1999)、およびそこに記載されている参照事項を参照）。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
本発明は、封鎖されたプロドラッグ形態の線状ポリアミン架橋白金化合物およびその製造方法ならびに用途を提供する。プロドラッグ形態は、低減された毒性による高い治療係数を発揮し、かつ毒性成分の選択的放出を示す。
【００２５】
“線状ポリアミン架橋白金錯体”とは、一般式［（ＰtＸＹＺ）-Ａ-（ＰtＸ'Ｙ'Ｚ'）］で示される白金化合物をいう。式中、Ｘ，Ｙ，Ｚ，Ｘ'，Ｙ' およびＺ' は、同一でも異なっていてもよく、アニオン性配位子と中性配位子の組合わせである。図２は、Ｘ，Ｙ，Ｚ，Ｘ'，Ｙ' およびＺ'を、ＣlおよびＮＨ３配位子間で入れ替えて得られる構造群の例を示す。この群としては、各配位圏内でジアミン架橋に対しトランス位に１つの塩素が存在する１，１/ｔ，ｔ系列；各配位圏内でジアミン架橋に対しシス位に１つの塩素が存在する１，１/ｃ，ｃ系列；各配位圏内に２つの塩素が存在する２，２/ｔ，ｔ系列が挙げられる。２，２化合物において、シス／トランスの区別は、２つの塩素基の相互配置をいう。
【００２６】
好ましいアニオン性基としては、ハロゲン化物（たとえば塩素、臭素、ヨウ素およびフッ素）、擬ハロゲン化物、置換擬ハロゲン化物、硫酸塩、リン酸塩、ホスフォン酸塩、硝酸塩、カルボン酸塩、置換カルボン酸塩、ジカルボン酸塩および置換ジカルボン酸塩が例示される。好ましい中性基（置換基を有していても非置換でもよい）としては、第一級または第二級アミン、-ＮＨ２部分のみが白金と結合する“ぶら下がり”ジアミンＨ２Ｎ(ＣＨ２)ＮＢＢ'、スルフォキシド（たとえばＤＭＳＯ）またはホスフィン、ピリジン、または置換ピリジンなどの芳香族性または擬芳香族性ピリジン様の平面型配位子、キノリン、イミダゾール、チアゾール、ピリミジン、プリン、アクリジン、ピラゾール、ベンズイミダゾール、ベンゾチアゾールなどが例示され、Ａは、１または複数の“中心”非平面型アミンが封鎖されている架橋ポリアミンである（下記参照）。
【００２７】
上記スルフォキシドは、好ましくは式Ｒ２ＳＯで示され、式中、各Ｒは、炭素原子数１〜１２の直鎖または分枝状アルキル基である。スルフォキシド置換基は、付加的に、好ましくはアリール、アルカリール（alkaryl）などの芳香族基を置換基として有していてもよい。
【００２８】
上記アミンは、脂肪族性でも芳香族性でもよく、通常、たとえばアンモニア、分枝状または直鎖低級アルキルアミン、アリールアミン、アルアルキル（aralkyl）アミン、低級アルケニルアミン、シクロアルキルアミン、シクロアルケニルアミンおよび多環式炭化水素アミンなどが挙げられる。
【００２９】
本発明の実施において、置換または非置換のヘテロ環式アミン、ヌクレオシド、ヌクレオチド、ピリジン型窒素含有化合物などを使用することができる。好ましい置換基としては、これに限定されるものではないが、アルキル、芳香族アリール、ヒドロキシ、低級アルコキシ、カルボン酸または酸エステル、ニトロ（nitro-）およびハロゲン置換基が挙げられる。
【００３０】
本発明で好ましく使用されるプリンおよびピリミジンとしては、たとえば、シトシン、ウラシル、チミン、グアニジン、アデニン、キサンチン、ヒポキサンチン、プリン、ピリミジンおよびこれらの置換誘導体が挙げられる。
【００３１】
上記アニオン性基がカルボン酸または置換カルボン酸である場合には、該アニオン性基は下記式で示すことができる。
ＣＲ３（Ｃ（Ｒ３）２）ｍＣＯ2
式中、ｍは０〜５を含めた整数である。Ｒ３基は、同一でも異なっていてもよく、水素、置換または非置換の直鎖または分枝状アルキル、アリール、アルカリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ハロゲン、擬ハロゲン、ヒドロキシ、カルボニル、ホルミル、ニトロ、アミド、アミノ、アルコキシ、アリーロキシ、スルホン酸塩、カルボン酸エステルまたはカルボン酸塩などが挙げられる。さらに、Ｒ３基は、２つのＲ３基で二重結合酸素またはイオウを示すように組合わせることもできる。
【００３２】
本明細書において、低級アルキルおよび低級アルケニルは、１〜５の炭素原子を意味する。特にことわりのない限り、アルキルまたはアルケニルは、１〜１２の炭素原子を意味する。シクロアルキルとは、３〜１０の炭素原子鎖を意味する。本明細書において、置換基を有する（substituted）とは、特にことわりのない限り、アルキル、アリール、炭素原子３〜１０のシクロアルキル、シクロアルケニル、アルアルキル、ハロゲン、擬ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、シクロアミノ、またはカルボン酸塩または炭素原子数１〜１０のエステルから選ばれる基による置換を意味することを意図する。
【００３３】
本発明において、擬ハロゲン化物（pseudohalide）の語は、次の意味である：自由状態ではハロゲン原子に類似の挙動する、電気的陰性の原子の２以上からなる分子（コットン・ウィルキンソン（Cotton and Wilkinson）著“最新無機化学（Advanced Inorganic Chemistry）”インターサイエンス出版（Interscience Publishers），1966の５６０頁参照）。これら分子としては、カルボン酸塩、シアン化物、シアン酸塩、チオシアン酸塩およびアジドなどが例示される。
【００３４】
各Ｐt原子あたり、１または２の塩素イオンが存在することが好ましく、すなわち、本発明の好ましい化合物あたりでは、合計で２ないし４の塩素イオンが存在する。
【００３５】
上記化合物分子の架橋ポリアミン部は、一般式Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＨ２または  Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＢＢ' (ＣＨ２)ｘＮＨ２で示され、式中、ｘは、通常約１〜約１０の範囲であり、ｙは、通常約１〜約１０の範囲である。本発明の一態様例では、上記化合物分子の架橋ポリアミン部は、Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＨ２で、ｘ＝４かつｙ＝３（すなわち該架橋ポリアミンはスペルミジン）、またはｘ＝４かつｙ＝３；ｘ＝６かつｙ＝６、およびｘ＝７かつｙ＝８である。本発明の他の態様例では、上記架橋ポリアミンは、Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)ｘＮＢＢ'(ＣＨ２)ｙＮＢＢ'(ＣＨ２)ｘＮＨ２で、ｘ＝４かつｙ＝３（すなわち該架橋ポリアミンはスペルミン）、またはｘ＝４かつｙ＝３；ｘ＝６かつｙ＝２；またはｘ＝５かつｙ＝４である。
【００３６】
“封鎖されたプロドラッグ形態”とは、本発明において、化合物分子のポリアミン架橋部中に位置する白金に結合していない“中心”アミンの１または複数が、水素以外の結合手に化学的に結合していることを意味する。さらに、この結合は置換活性であり、本発明の線状ポリアミン架橋した白金化合物の全体性を損なわない条件下で、アミン（１または複数）に結合およびそれから脱離することができる。アミン基の化学はよく知られており、当技術における熟練者であれば、その応用に多くの方法が適用できることは周知である。たとえばGreen,T.W. and Wuts, P.G.M.「Protective Groups in Organic Chemistry」，John Wiley & Sons, 第３版，(1999)、およびそこに記載されている参照事項を参照。
【００３７】
カルバメートおよびアミドでは、Ｂを形成する中心の窒素（封鎖基）は、プロトン化されていない（すなわちＢ'は存在しない）が、Ｎ-アルキルまたはＮ-アリールアミン封鎖基などの他の態様では、前記窒素は、媒体のｐＨに依存してプロトン化されることもある（すなわちＢ'は存在し、Ｈである）ことは理解されるであろう。さらに、化合物中にアミン基が複数存在する場合には、特別な封鎖アミンでは、そのうちのどれかがＢ封鎖基をもち、Ｂ'がないこともあり、一方、他のアミン基はＢ＝Ｂ'＝水素であってもよいことは当技術に熟練した者であれば理解するであろう。つまり、他は保護されているが、いくつかのアミン基は封鎖されないまま残っていてもよい。
【００３８】
封鎖基を導入する目的は、目的の環境的な誘因、刺激、配置などに到達するまでは、化合物の活性、効能および／または毒性を弱めるためである。それによりＰt薬剤の診療係数は高められる。たとえば、Ｐt化合物は細胞に対する毒性が高く、有毒な副作用を引き起こすが、封鎖基の存在により、封鎖されたプロドラッグが、その加水分解および封鎖基の離脱に適したｐＨの環境に遭遇するまで、相対的に無毒で不活性にすることができる。一方、該封鎖基は、酵素切断により、除去されやすい。その後、プロドラッグ形態の化合物は、酵素、たとえば特定の細胞種（たとえば癌細胞）中で、自然にあるいは工学的手段により過剰産生されることが知られている酵素に曝露するまで安定である。
【００３９】
さらに、ある種の封鎖基は、プロドラッグ化合物に、封鎖基の離脱と、活性種の放出とを生じさせる特定の配置をとらせる機能もある。たとえば、ある種の封鎖基は、それらの一般的性質（たとえば電荷、親水性など）の特質により、プロドラッグに、たとえば膜透過性、あるいは反対に、細胞外での残存性などの傾向を与えることができる。
【００４０】
さらに、封鎖基は、プロドラッグを体内の目的部位に特異的に導くターゲッティング要素であってもよく、あるいはそれを含んでいてもよい。たとえば、封鎖基は、プロドラッグを、特異的タイプの細胞または細胞内の特異的部位に到達させるペプチドターゲッティング配列を含むことができる。一方、特定の抗原に特異的な抗体が知られており、それは、そのような抗原を提示する特定の細胞種に結合する結合手（たとえば白金化合物）を誘導する。このような特異的ターゲッティング要素は、上記封鎖基の全てであってよく、封鎖基の一部を構成していてもよく、あるいはまた、該封鎖基と会合していてもよい。
【００４１】
一方、プロドラッグが投与（たとえば腫瘍に直接注射するなどにより）部位またはその近傍にとどまる間；または全身系で活性種を持続的に“徐放”させるために、投与が非特定的に分配される（たとえば消化または循環系経由）ように、封鎖基を単位付加してプロドラッグからゆっくり離脱される（たとえば加水分解され）ことが望ましい場合もある。
【００４２】
当技術における熟練者であれば、封鎖ポリアミン架橋白金化合物に使用しうるものとして広範な封鎖基の可能性があることはいうまでもないであろう。そのような封鎖基としては、これらに限定するものではないが、たとえばt-ブチル（tＢＯＣ）、ベンジル（ＣＢz）、フルオレニルメチル（Ｆmoc）、アダマンチル（1-Ａdoc）、ピペリジニル（Ｐipoc）、アリルおよびビニルなｄのカルバメート保護基残基；アセチル、トリフルオロアセチルおよびモノクロロアセチル、2-（ベンゾイルオキシメチル）ベンゾイル（ＢＯＭＢ）などのアミド保護基が挙げられる。さらに、スペルミンなどの多中心アミンを含むポリアミンで架橋した白金化合物は、単一種の封鎖基で封鎖されていてもよく、または複数種で封鎖されていてもよい。さらには、上記したように、封鎖基は、目的場所でのそれの取込みおよび／または維持を助長する他の結合（たとえば一般的あるいは特異的なターゲッティング要素）を含むこともできる。
【００４３】
特定の封鎖基の選択は、たとえばＰt化合物との反応容易性など、数多くのさまざまな因子によって決められる。このような因子は、プロドラッグ設計時、プロドラッグの選択性および生物活性に影響する所望の性質をプロドラッグに付与するように配慮される。たとえば、カルバメートの酸感受性はさまざまであることは知られており、たとえば所望の投与経路が使用の選択基準となる。たとえば、ｐＨ５および６におけるＦＭＯＣ錯体の安定性は、化合物が胃酸に対しても安定であるため、プロドラッグの経口送達を可能にするが、ｐＨ７−８での注射では根本的に活性種を放出する。
【００４４】
アミン基の化学はよく知られており、当技術における熟練者であれば、その応用に多くの方法が適用できることは周知である。たとえばGreen,T.W. and Wuts, P.G.M.「Protective Groups in Organic Chemistry」，John Wiley & Sons, 第３版，(1999)、およびそこに記載されている参照事項を参照。しかしながら、ここに記載されているような封鎖基を導入するための特別な考慮をいくつか説明に加える必要がある。たとえば、Hegmans, A., Qu,Y.,Kelland,L.R., Roberts,J.DおよびFarrell, N.“多核白金プロドラッグの新規な試み。カルバメートの加水分解切断を介した細胞毒性白金-スペルミジン片の選択的放出”Inorg. Chem.40:6108-6114（2001）参照。
【００４５】
本発明の一態様例では、封鎖基はカルバメート型基である。線状白金化合物へのこのような基の導入は、図５に図示するような合成スキームにより行うことができる。しかしながら、当技術における熟練者であれば、これと同等もしくは同様な効果が得られる他に代替しうる合成プロトコルがあることはいうまでもないであろう。本明細書に記載される改変部分は、予備形成されたポリアミン-白金化合物全体を封鎖した化合物種とするものであるが、たとえば、これに限定ものではないが、二核の白金化合物部分に含ませる好ましいポリアミンの合成および設計が例示される。さらに、他のタイプの封鎖基には、別の合成スキームが適切であろう。アミドであれば、一般的なスキームは、後述の実施例４（図６も参照）に記載のように、１つをアセタートまたは置換アセタートに転換した後酸無水物と反応させ、次いで水性ＮaＣlと反応させることを含むことができる。適切な合成スキームであれば、当技術における熟練者に公知の多くのスキームを、どれでも、本発明の封鎖された線状白金化合物の製造に使用することができる。
【００４６】
本発明のプロドラッグは、当技術における熟練者であれば周知の種々の広範などの方法によっても投与することができ（限定されないが、たとえば静脈内、筋肉内、腹腔内、経口的、直腸内、眼内などに）、また投与手段に適していれば、どのような形態（たとえば液状、固体など）でもよい。さらに、プロドラッグは、治療プロトコルにおける他の薬剤とともに、たとえば放射線、他の化学療法的薬剤、ビタミン、嘔吐または痛み止め物質などと一緒にまたは連続して投与することができる。さらに、封鎖基を離脱するための刺激を発生し、活性Ｐt化合物種の放出を確実にする他の化合物を伴う形態で投与することができ、たとえばプロドラッグの局所環境中のｐＨを変化させる他の化合物である。
【００４７】
本発明の好ましい態様例において、線状ポリアミン架橋白金化合物の封鎖形態プロドラッグは、癌の処置に用いられる。当技術における熟練者であれば、白金薬剤に一般的に応答する多種類の癌が知られていることは承知であろうし、そのため本発明の封鎖化合物は、それらのどれの処置に使用でき、たとえば、これらに限定するものではないが、固形癌の全種（たとえば卵巣癌、前立腺癌など）が挙げられる。
【００４８】
本発明は、所望の場所における線状ポリアミン架橋白金化合物の調製方法をも提供する。所望の場所は、患者の体内（たとえば腫瘍部位における）であってもよい。また、その場所はex vivo、あるいは診察方法またはラボ技術などでの使用などの用途において、線状ポリアミン架橋白金化合物の供給が望まれる場所であってもよい。本発明の方法は、封鎖した線状ポリアミン架橋白金化合物（該化合物の架橋ポリアミン部の中心アミン機能の少なくとも１つに置換性封鎖基を結合させることにより形成される）を目的の場所に配置することを含む。次いで、封鎖した線状ポリアミン架橋白金化合物を、置換性封鎖基の離脱が起きる環境的刺激に曝露する。封鎖した線状ポリアミン架橋白金化合物を配置するには、所望される方法に適しているならば、当技術における熟練者に公知のいくつかの手段のどれを用いてもよい。たとえば、疾患（たとえば、上述したような癌）の処置において、封鎖化合物の配置は、たとえば、IV投与、注射、経口摂取などにより実行される。また、配置は、たとえば封鎖化合物をマトリックスに結合させ、該マトリックスを、所望場所に位置させることにより達成され、その場所は、患者の体内であってもよく、診療またはラボ技術など他の適用に好ましい容器内であってもよい。
【実施例】
【００４９】
方法
原料。
［{trans-Ｐt(ＮＨ３)２Ｃl}２-μ-スペルミジン-Ｎ１,Ｎ８］Ｃl３（１）は、文献記載の方法に従い調製した（６）。簡潔には、Ｎ-ＢＯＣ基を含有する中心窒素をもつ選択的に封鎖されたアミンを調製した。その後、プラチナ化反応および線状の封鎖ポリアミン化合物の生成において、上記ＢＯＣ基を温和な酸で離脱させ、プロトン化“中心”アミンをもつポリアミン架橋した化合物とする（６）。ジカルボン酸ジ-tert-ブチル、クロロ蟻酸ベンジルおよびクロロ蟻酸フルオレニルメチルは、アルドリッチ（Aldrich）社製のものを精製せずに使用した。酢酸銀、トリフルオロ酢酸銀、無水酢酸およびクロロ酢酸無水物はAldrich社製、トリフルオロ酢酸無水物はフルカ（Fluka）社製を使用した。クロロ酢酸銀は、Ａg２Ｏをクロロ酢酸水溶液（Aldrich）中に溶解して得られた。
【００５０】
機器分析。
１ＨＮＭＲスペクトルは、内部標準として（トリメチルシリル）プロピオンスルフォン酸ナトリウム（ＴＳＰ，ＴＭＳに対する相対δ＝０.００ppm）を用いて、バリアン・マーキュリ（Varian Mercury）社製３００ＭＨz分光計により、Ｄ２Ｏ溶液中で測定した。１９５Ｐtスペクトルは、Ｄ２Ｏ溶液中、６４ＭＨzで外部標準としてＫ２［ＰtＣl６］を用いて測定した。
ＩＲスペクトルは、ニコレット・ネクサス（Nicolet Nexus）社製６７０ＦＴ-ＩＲ装置により、ＫＢrペレットで測定した。元素分析は、クォンティタチブテクノロジー（Quantitative Technology）社.,ホワイトハウス，ＮＪ州により測定された。
ｐＨ測定は、コーニング（Corning）社製３４０ｐＨメータによりガラス電極を用いて行った。重水素化溶液中のｐＤ値は、メーター読取りに、０.４単位加えて得られた。吸光係数は、ジャスコ（Jasco）社製Ｖ-５５０ＵＶ／可視分光計により１ｃｍセルを用いて測定した。
【００５１】
生成物の分析および加水分解試験は、ベックマン・システム・ゴールド・ヌーヴォ（Beckman System Gold Nouveau）社製ＨＰＬＣ分析装置を用いて、２１５ｎｍでの紫外線検出により実施した。Ｌiクロスフィア（crosphere）ＲＰ-８カラム（粒径５μｍ、サイズ２５０ｍｍ×４ｍｍ）を、水／メタノール９７：３（０.０５Ｍ  ＮaＣlＯ４，１％ＮaＣl）から水／メタノール７０：３０（０.０５Ｍ  ＮaＣlＯ４，２％ＮaＣl）へと溶媒変更して使用した。
【００５２】
加水分解試験。
加水分解実験のため、１０−３ｍＭol錯体をナノ純粋１ｍＬ中に溶解した。溶液のｐＨをＨＮＯ３（０.１Ｍ，０.０１Ｍ）およびＮａＯＨ（０.１Ｍ，０.０１Ｍ）をそれぞれ添加することにより調整した。サンプルは３７℃水浴中で培養し、ＨＰＬＣ分析用母液から２０μＬのアリコートを分取した。サンプルのｐＨ値は、一定間隔で調整し、必要に応じて再調整した。
【００５３】
生物学的アッセイ
細胞培養。
この試験では、Ａ２７８０、Ａ２７８０／ＣＤＤＰ、ＣＨ１、ＣＨ１／ＣＤＤＰ、４１Ｍおよび４１Ｍ／ＣＤＤＰ細胞系を使用し、文献記載の方法に従い保持した。（８，９）。
成長阻害アッセイ
スルフォローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイを用いて白金薬剤の成長阻害能力を決定した（１０）。細胞は、９６ウェルマイクロプレート中に３−８×１０３細胞／ウェル中の１６０μＬ成育培地中に播種し、一夜付着させた。その後、４つ一組のウェルに逐次希釈した白金試薬を添加し、細胞を２〜９６時間曝露させた。薬剤培養２時間後、プレートをリン酸緩衝塩溶液（ＰＢＳ）で洗浄して薬剤を除去し、次いで、ノーマル成育培地をさらに９４時間与えた。その後、処理された細胞成長およびコントロールウェルを、１％酢酸溶液中に溶解した０.４％ＳＲＢを用いて定量分析した。ＩＣ５０値をグラフで求めた。
【００５４】
細胞集簇。
細胞集簇アッセイは、文献記載の手順にしたがい行った（７）。簡潔には、細胞を、２５μＭ ＨＥＰＥＳを補給した培地中１０７／ｍＬで再懸濁した。白金錯体を添加し、サンプルを、５％ＣＯ２中、３７℃で培養した。０および２時間後に、各アリコートを分取し、細胞濃度を分析し、白金含量を測定した。後者では、アリコートを冷リン酸緩衝塩溶液中、３回洗浄し、１％トリトン-Ｘ水溶液中に再懸濁した。フレームレス原子吸光分光装置で白金含量を測定した。
【００５５】
（実施例１）Ｎ４位白金結合スペルミジンの酸度
合成手順の最適条件を決定するため、保護反応に先立って、保護されていないＰtスペルミジン錯体１のＮ４部位のｐＫａを測定した（６）。ｐＨ滴定を実施し、１ＨＮＭＲスペクトルにより観察した（１１および１２）。得られたｐＫａ値９.２４±０.０５は、１０.５−１１.０の範囲にある種々の第二級脂肪族アミンの値に比べ、著しく低い（１３）。酸度の上昇には、配位した白金中心の電子求引効果の寄与が最も大きい。
【００５６】
（実施例２）化合物２−４の合成と分析
カルバメート封鎖したスペルミジン化合物の合成を、９−１１内のｐＨ値で混合した水／ジオキサン中で行った。これら条件は、保護工程の間に求核試薬として働く脱プロトン化されたアミンを必要な割合で生成した。各化合物は、塩素塩として単離し、ＨＰＬＣおよび１ＨＮＭＲスペクトルで分析した。先に調製１中、中間体として合成したＢＯＣ保護したＰtスペルミジン錯体は、塩素／硝酸混合塩として分析した（６）。化合物２は、前駆化合物１のＨＰＬＣおよび１ＨＮＭＲスペクトルと同一であり、ＢＯＣ保護基が、上記した経路を介してＮ４位に再導入されていることを確証している（図２）。その後、保護基の違いが、単に脂肪族残基か芳香族残基かだけである一連のカルバメート化物を得るための合成手順を実施した。
【００５７】
調製。
［{trans-Ｐt(ＮＨ３)２Ｃl}２- -Ｎ４-ＢＯＣ-スペルミジン-Ｎ１,Ｎ８］Ｃl２（２）。
０.１ｍＭolの１を含むＨ２Ｏ溶液７ｍＬに、０.２５ｍＭolジカルボン酸ジ-tert-ブチルのジオキサン溶液３ｍＬを添加する。１Ｍ  ＮａＯＨを、ｐＨ１０−１１になるまで滴下する。溶液を、環境温度で２４時間撹拌し、反応開始から３時間経過後、ｐＨをほぼ１０に再調整する。その後、清澄な溶液を蒸発乾固し、残存する無色残渣をメタノール４０ｍＬに再溶解する。不溶性の原料化合物はろ過して除去し、析出物が生成するまで、ろ液をロータリーエバポレータで濃縮する。５ｍＭolのＬiＣl／メタノール溶液を添加し、混合物を一夜４℃まで冷却する。ろ過により回収される無色生成物の収率は６２％である。
分析。Ｃ１２Ｈ３９Ｎ７Ｏ２Ｃl４Ｐt２としての計算値：Ｃ，１７.０５；Ｈ，４.６５；Ｎ，１１.６０；Ｃl，１６.７７。結果：Ｃ，１６.７９；Ｈ，４.６３；Ｎ，１１.２４；Ｃl，１６.７０。
【００５８】
［{trans-Ｐt(ＮＨ３)２Ｃl}２- -Ｎ４-ＣＢｚ-スペルミジン-Ｎ１,Ｎ８］Ｃl２（３）。
０.２５ｍＭolの１を含むＨ２Ｏ溶液２０ｍＬと、０.７５ｍＭolクロロ蟻酸ベンジルのジオキサン溶液１０ｍＬとを、０℃で混合した。混合物を液温に戻し、１Ｍ  ＮａＯＨを用いてｐＨ１０とする。清澄な溶液を２４時間撹拌し、ｐＨを定期的に調整し、必要に応じて１０−１１に再調整する。少量の黒色沈殿をろ別し、ろ液を濃縮乾固する。固形物を６０ｍＬの蒸留メタノールに溶解し、溶液をろ過して不溶性の原料化合物を除去する。メタノール溶液を約２０ｍＬまで濃縮し、３−５倍過剰のＬiＣlをメタノール溶液を添加する。混合物を一晩かけて４℃で結晶析出させ、無色の粗生成物８１％を得た後、水またはメタノールで再結晶する。最終収率は７０−７５％。
分析。Ｃ１５Ｈ３７Ｎ７Ｏ２Ｃl４Ｐt２としての計算値：Ｃ，２０.４９；Ｈ，４.２４；Ｎ，１１.１５；Ｃl，１６.１２。結果：Ｃ，２０.５４；Ｈ，４.２８；Ｎ，１０.９２；Ｃl，１６.１５。
【００５９】
［{trans-Ｐt(ＮＨ３)２Ｃl}２- -Ｎ４-Ｆmoc-スペルミジン-Ｎ１,Ｎ８］Ｃl２（４）。
０.４ｍＭolの１を含むＨ２Ｏ溶液２５ｍＬを、２Ｍ  ＮａＯＨを用いてｐＨ９−１０とする。０℃で撹拌しながら、０.５ｍＭolクロロ蟻酸フルオレニルメチルのジオキサン溶液１５ｍＬを添加した。ｐＨを９−１０に再調整し、混合物を環境温度で４時間撹拌する。溶液を真空中、約５ｍＬまで濃縮し、その後４℃まで冷却する。水、次いでメタノールにより無色の沈殿を回収し、収率５８％で４を得る。
分析。Ｃ２２Ｈ４１Ｎ７Ｏ２Ｃl４Ｐt２としての計算値：Ｃ，２７.３１；Ｈ，４.２７；Ｎ，１０.１３；Ｃl，１４.６６。結果：Ｃ，２７.４９；Ｈ，４.３６；Ｎ，１０.６１；Ｃl，１４.９５。ろ過およびジオキサンおよびジエチルエーテルを用いる洗浄。粗生成物は再結晶する。
【００６０】
（実施例３）化合物２−４の加水分解試験
３７℃でのさまざまなｐＨ値における化合物２−４の保護基の加水分解を観察した。反応開始前、全サンプルのＨＰＬＣクロマトグラフは、保護された化学種のシグナルのみを示した。さらに、２のクロマトグラフは、上記反応過程において変換されなかった残存物である不純物（約０.４％）のピークを含む。第二級アミノ基の保護化は、陽電荷の増加により、Ｎ４封鎖前駆体のシグナルと明確に区別できる非プロトン化スペルミジン錯体１のシグナルを出現させる。保護されていない化学種のシグナル面積の領域比は、その時点での加水分解量の目安である。結果をより正確に定量的に比較するため、化合物１−４の吸光係数を２１５ｎｍで測定した（表１）。封鎖化合物の積分値は、観察波長におけるこれら化学種の吸光度が、未封鎖化学種１に比べ、より高くなるように補正している。表２は、全サンプルの加水分解量の補正前・後の結果を示す。比例定数は、補正後の積分値に基づいて計算した。
【００６１】
ｐＨ５ないし７における化合物２の加水分解プロファイルを、図７Ａに示す。そのデータによれば、ＢＯＣ保護基は、中性および温和な酸性水溶液中で安定であるといえるが、（１４）数日の期間をかけてゆっくり放出することは明らかである。中性ｐＨで２５日後、非保護のＰtスペルミジン錯体のシグナルは、クロマトグラムの総積分に対し、約６％に相当する。より低いｐＨ値では、加水分解物はより多く検出されるが、試験したｐＨ範囲内であれば、切断速度は依然遅い。ｐＨ６では、４２日間に、約１３％の遊離スペルミジン化合物１が放出されるのに対し、ｐＨ５では１４％よりも少し高い。ＢＯＣ基は、ｐＨ＜２なると、急速かつ完全な酸加水分解が起きることが知られており、一般的にtert-ブチルカルバメート中のアミノ基の脱プロトン化に利用される（１４）。
ベンジルカルバメートは、一般的に、酸加水分解に対して高い安定性を示し、通常、酸または塩基で触媒される切断よりもむしろ触媒性加水分解により離脱する（１４）。そのため、ｐＨ５および６における３のＨＰＬＣプロファイルで、自然発生的な脱プロトン化がほとんど検出されなくても予想外ではない。全過程の完了時には、サンプル中に検出される１の量は、ほとんど０.１％未満である。
【００６２】
ｐＨ５−８における化合物４のＨＰＬＣプロファイルを図７Ｂに示す。３と同様に、ｐＨ５および６では、極わずかの加水分解片が観察されるだけであり、これはＦmoc保護基が酸安定性に優れていることを示す。しかしながら、非保護錯体の濃度が確実に増加していることが検出され、これは、これら条件下ではカルバメートが緩やかに分解していることを意味する。より高いｐＨ値では、錯体の脱保護傾向が強く、ｐＨ７および８では、かなりの量の遊離スペルミジン錯体が放出される。化合物２に比べ、加水分解反応のｐＨ依存性が逆である理由は、フルオレニルメチル残基の構造に起因する。芳香環はジベンゾシクロジエニル化を安定させ、それ故、反応は、β脱離プロセスを介して始まると確信され、（１５）、すなわち温和な塩基条件下でのフルオレニルメチルカルバメートの切断を可能にする。
【００６３】
表１．１−４の２１５ｎｍにおける吸光係数およびこの波長において吸収の違う各化合物を評価するための補正係数
【表１】
2005501123.tif 000004
【００６４】
表２．さまざまなｐＨにおける化合物２−４サンプル中の非保護化学種１の割合。
角カッコ中の値は、２１５ｎｍにおける各種吸光係数が補正されている。
【表２】
2005501123.tif 000005
ａ培養後のクロマトグラムにおける全積分の１のパーセンテージ；ｂ３７℃での培養時間。
【００６５】
ｐＨ５ないし６の範囲では、化合物は、この系列中、はっきりと高い加水分解速度を示す。しかしながら、生理学的ｐＨにおいて、Ｆmoc錯体４は、明らかに２よりも速く非プロトン化が進む。このｐＨにおいて、３のデータは得られていないが、ベンジルカルバメートはｐＨ上昇とともにより安定になるであろうことは当然の憶測である（１４）。化合物４および２の脱保護化反応のための一次元速度定数を計算した（表３）。化合物３についての速度定数の計算は試みなかった。
【００６６】
（実施例４）化合物５−７の合成と分析
カルバメートと同様に、アミドの調製は、最も一般的なアミノ基の保護方法であり、その合成および加水分解挙動は文献に記載されている（１４）。アミド系では、非水溶媒中での新規な経路が開発された。有機溶媒中の反応を促進するため、化合物１は、メタノール、アセトニトリルおよび水中への溶解性をある程度有するアセタート誘導体１ａ-ｃ、図６、に転化する必要があった。この中間体１ａ-ｃは、次いで、保護試薬（酸無水物）と反応させた。酢酸無水物は、塩基の添加を必要としなかったが、クロロ酢酸およびトリフルオロ酢酸の無水物はトリエチルアミンの存在において顕著に高い収率をもたらした。合成の最終工程において、水溶液中ＮaＣlとの反応により、Ｐt-Ｃl結合を復活させる。
すべての化合物は、ＨＰＬＣおよびＮＭＲにより分析した。
【００６７】
［{trans-Ｐt(ＮＨ３)２Ｘ}２-μ-スペルミジン-Ｎ１,Ｎ８］Ｘ３（Ｘ＝ＣＨ３ＣＯＯ−（１ａ），ＣＨ２ＣlＣＯＯ−（１ｂ），ＣＦ３ＣＯＯ−（１ｃ））の調製
１.０ｍＭolの１を水５０ｍＬに溶解し、撹拌しながら４.９７ｍＭolのＡgＸを添加した。撹拌を、暗中、４０℃で２４時間継続した。その後、混合物を室温に戻し、セライトでろ過した。ろ液を蒸発乾固し、それぞれ灰色残渣で得られた１ｂおよび１ｃは、最小量の水に再溶解し、ろ過して乾固した。油状で得られた１ａは、アセトン／ジエチルエーテル（１：１）４０ｍＬ中で撹拌して再結晶した。化合物１ａ-ｃの収量を定量した。
【００６８】
１ａ：分析。Ｃ１７Ｈ４７Ｎ７Ｏ１０Ｐt２・２Ｈ２Ｏとしての計算値：Ｃ，２１.８２；Ｈ，５.４９；Ｎ，１０.４８。結果：Ｃ，２１.８６；Ｈ，５.１６；Ｎ，１０.５７。１ＨＮＭＲ：δ１.７５（ｍ，４Ｈ）；１.９６／１.９８（各ｓ，１５Ｈ）；２.１１（ｍ，２Ｈ）；２．７０（ｍ，４Ｈ）；３．１０（ｍ，４Ｈ）。
１ｂ：分析。Ｃ１７Ｈ４２Ｎ７Ｏ１０Ｃl５Ｐt２としての計算値：Ｃ，１９.０５；Ｈ，３.９５；Ｎ，９.１５；Ｃl，１６.５４。結果：Ｃ，１８.９３；Ｈ，３.７８；Ｎ，８.８５；Ｃl，１６.４１。１ＨＮＭＲ：δ１.７６（ｍ，４Ｈ）；２.１０（ｍ，２Ｈ）；２．７１（ｍ，４Ｈ）；３．１１（ｍ，４Ｈ）；４．０６（ｓ，６Ｈ）；４.１４（ｓ，４Ｈ）。
１ｃ：分析。Ｃ１７Ｈ３２Ｎ７Ｏ１０Ｆ１５Ｐt２・Ｈ２Ｏとしての計算値：Ｃ，１７.１９；Ｈ，２.８９；Ｎ，８.２６。結果：Ｃ，１７.１７；Ｈ，２.７１；Ｎ，８.１７。１ＨＮＭＲ：δ１.７６（ｍ，４Ｈ）；２.１０（ｍ，２Ｈ）；２．７０（ｍ，４Ｈ）；３．０９（ｍ，４Ｈ）。１９５ＰtＮＭＲ：δ−２１３２ppm。
【００６９】
［{trans-Ｐt(ＮＨ３)２Ｃl}２-μ-Ｎ４-ＣＨ３ＣＯ-スペルミジン-Ｎ１,Ｎ８］Ｃl２（５）
０.５ｍＭolの１ａおよび４.４ｍＭolの無水酢酸をメタノール１０ｍＬ中で混合し、環境温度で２時間撹拌した。水３０ｍＬを添加し、溶液を３０ｍＬジエチルエーテルで３回洗浄した。水溶液を乾燥し、残存するオイルを水１０ｍＬに溶解した。２.０ｍＭolのＮaＣlを添加し、０.５Ｍ  ＨＣlを用いて溶液のｐＨを３.８に調整した。混合物を室温で４時間撹拌し、蒸発乾固した。残渣をメタノール、次いでエタノール／水（４：１）で再結晶した。最終収率は５４％であった。
分析。Ｃ９Ｈ３３Ｎ７ＯＣl４Ｐt２としての計算値：Ｃ，１３.７３；Ｈ，４.２２；Ｎ，１２.４５；Ｃl，１８.０１。結果：Ｃ，１３.７０；Ｈ，４.０１；Ｎ，１２.１７；Ｃl，１７.７４。１ＨＮＭＲ：δ１.７２（ｍ，４Ｈ）；２.１６（ｓ，３Ｈ）；１.９２／２.０５（各ｍ，２Ｈ）；２.７４（ｍ，４Ｈ）；３．４０（ｍ，２Ｈ）；３．４７（ｍ，２Ｈ）。ＩＲ：νＣＯ１６１１ｃｍ−１。
【００７０】
［{trans-Ｐt(ＮＨ３)２Ｃl}２-μ-Ｎ４-ＣＨ２ＣlＣＯ-スペルミジン-Ｎ１,Ｎ８］（ＣlＯ４）２（６）
０.５ｍＭolの１ｂを、アセトニトリル５０ｍＬ中に懸濁し、撹拌しながらトリエチルアミン１.０ｍＭolを添加した。懸濁液を４０℃で撹拌し、クロロ酢酸無水物２０ｍＭolを数回に分けて添加した。２４時間後、不溶物はすべてろ別し（１ＨＮＭＲによれば非保護の原料化合物、約１００ｍｇ）、ろ液は蒸発乾固した。残渣を水２５ｍＬ中に溶解し、２０ｍＬジエチルエーテルで２回洗浄した。２.５ｍＭolのＮaＣlを添加し、水溶液を環境温度で２時間撹拌した。溶媒を真空除去し、残渣をメタノール６０ｍＬに溶解した。不溶固形分はろ別し、ろ液を少量（＜５ｍＬ）まで濃縮した。アセトン／ジエチルエーテル（１：１）４０ｍＬを添加して沈殿析出させた。水、水／エタノールおよび水／ＤＭＦから数回の再結晶でも純粋な生成物は得られなかった（ＨＰＬＣによる純度＜９０％）。生成物を、半製品カラム（Waters Bondapak Ｃ１８，７.８ｍｍ  ３００ｍｍ）を用い、グラジエント溶出法（溶媒Ａ：Ｈ２Ｏ，０.０２５Ｍ  ＮaＣlＯ４；溶媒Ｂ：Ｈ２Ｏ，メタノール（７０：３０），０.０２５Ｍ  ＮaＣlＯ４）によりＨＰＬＣ精製した。生成物は、パークロル酸塩として得られ、ＨＰＬＣによる純度９９％であり、最終収率は２９％であった。
分析。Ｃ９Ｈ３２Ｎ７Ｏ９Ｃl５Ｐt２としての計算値：Ｃ，１１.３８；Ｈ，３.４０；Ｎ，１０.３２。結果：Ｃ，１１.５５；Ｈ，３.０８；Ｎ，１０.２９。１ＨＮＭＲ：δ１.７４（ｍ，４Ｈ）；４.４１／４.３８（各ｓ，２Ｈ）；１.９３／２.０９（各ｍ，２Ｈ）；２.７３（ｍ，４Ｈ）；３．４４（ｍ，２Ｈ）；３．５４（ｍ，２Ｈ）。ＩＲ：νＣＯ１６４２ｃｍ−１。
【００７１】
［{trans-Ｐt(ＮＨ３)２Ｃl}２-μ-Ｎ４-ＣＦ３ＣＯ-スペルミジン-Ｎ１,Ｎ８］Ｃl２（７）
０.５ｍＭolの１ｃをアセトニトリル４０ｍＬ中に懸濁し、トリエチルアミン１.０ｍＭolを清澄な溶液が得られるまで添加した。トリフロオロ酢酸無水物３０ｍＭolを数回に分けて添加し、混合物を４０℃で２４時間撹拌した。溶媒を真空除去し、残存するオイルに、アセトン２０ｍＬおよびジエチルエーテル８０ｍＬを添加した。白色固形物をろ取し、ジエチルエーテルで洗浄した。固形物を水２０ｍＬに溶解し、２.５ｍＭolのＮaＣlを添加し、２時間撹拌した（０.５Ｍ  ＨＣlを用いてｐＨ２．４）。溶液を乾燥し、残渣をメタノール２００ｍＬ中で撹拌した。溶液をろ過して不溶固液分を除去し、真空乾燥した。生成物は水で再結晶し、収率は６１％であった。
分析。Ｃ９Ｈ３０Ｎ７ＯＣl４Ｆ３Ｐt２としての計算値：Ｃ，１２.８５；Ｈ，３.５９；Ｎ，１１.６５；Ｃl，１８.８６。結果：Ｃ，１２.６８；Ｈ，３.４６；Ｎ，１１.２０；Ｃl，１７.０８。１ＨＮＭＲ：δ１.７４（ｍ，４Ｈ）；２.０１／２.１０（各ｍ，２Ｈ）；２.７３（ｍ，４Ｈ）；３．５３（ｍ，２Ｈ）；３．５９（ｍ，２Ｈ）。１９５ＰtＮＭＲ：δ−２４２５ppm。ＩＲ：νＣＯ１６８４ｃｍ−１。
【００７２】
（実施例５）化合物５−７の加水分解試験
ｐＨ６−８範囲における化合物５−７のＮ４位の保護基の３７℃での加水分解を観察した。反応開始前、全サンプルのＨＰＬＣクロマトグラフは、１，１/ｔ，ｔ-スペルミジン（３ｄ，図３）を除き、不純物（全ての場合、全積分の＜３％）と、保護された化学種のシグナルのみを示した。アセチル保護したスペルミジン錯体である５のＨＰＬＣは、３５日の期間中なにも変化がなかったが、このことは観測したｐＨ範囲でのアセチル基の優れた安定性を示している。
【００７３】
トリフルオロアセチル基は、一般的に温和な条件下で切断され、（１４）化合物７のＨＰＬＣプロファイルは、Ｎ４封鎖した化合種が、実際、保護されてない、プロトン化形態であって、その陽電荷の増加により、クロマトグラム中で明確に分離される形態に転化されることを示している。観測中、放出された１，１/ｔ，ｔ-スペルミジンの量を図８に示す。他の生成物は観測されなかったし、加水分解反応に起因するトリフルオロ酢酸塩は本発明の条件下のカラムでは保持されず、他のアニオン（５からのＣl−、ｐＨ調整剤からのＮＯ３−）とともに流出する。７から１，１/ｔ，ｔ-スペルミジンへの転化速度定数を求めるため、クロマトグラムの積分値は、観察波長における化学種の異なる吸光度を補正した（ε２１５：１，３.６４・１０３；５，７.６２・１０３；６，１０.４・１０３；７，９.４６・１０３；Ｌ・Ｍol−１・ｃｍ−１）。濃度は、各測定時点での両化学種の濃度総和は、実験当初の７の原料濃度に等しいとの想定に基づいて算出した。一次速度定数は、Micro Math Scientist バージョン２.０１プログラムを用いて求めた。結果をまとめて、またＢＯＣおよびＦmoc保護されたスペルミジン錯体について得られた値の比較して、表３に示す。
【００７４】
表３．Ｎ４封鎖した白金スペルミジン錯体の脱プロトン化速度定数［ｓ−１］
【表３】
2005501123.tif 000006
【００７５】
中性ｐＨにおける、アミドおよびカルバメート系で保護されたスペルミジンの加水分解速度は、７＞４＞２＞＞５≒３の順である（後述の６参照）。観察した範囲内で、ｐＨが１単位低下すると、７および３の速度定数は１オーダーレベルでの低下を招き、一方２はｐＨの低下に伴いその加水分解速度は緩やかな上昇を示す。ｐＨ６において、速度定数は７≒２＞４の順である。多くの固形癌は、乳酸を集積し、その結果細胞内ｐＨ値を低下させることが知られている（１７）。
したがって、このような癌細胞をターゲッティングするのに特に好適である本発明のプロドラッグは、わずかに酸性条件下で活性化学種の放出増加を示す。
【００７６】
（実施例６）化合物２−７の生物学的活性
生物学的状況におけるプロドラッグ能力の試験するため、Ｌ１２１０ネズミ白血病細胞中における封鎖ポリアミン化合物の薬理学的性質を比較した。結果を表４に示す。表から分かるように、ＢＯＣ-スペルミジン化合物２は、標準２＋化合物、1,1/t,t（ｎ＝６）（図１ａ）、および３＋電荷をもつ“親” 1,1/t,t -スペルミジン１の中間的能力を示した。架橋ジアミンまたはポリアミンへの電荷および水素結合能力の取込みは、白金多核錯体中、細胞集簇を劇的に高めることが示されている（７，１６）。1,1/t,t-スペルミジン化合物（全体での電荷は３＋）の細胞取込みは高く、かつ［{trans-ＰtＣl(ＮＨ３)２}２Ｈ２Ｎ(ＣＨ２)６ＮＨ２］２＋（全体での電荷は２＋）などの“単純”二核化合物よりも著しく高められることが知られている（１６）。
【００７７】
封鎖されたＰt化合物２の細胞集簇もまた検討された。興味深いことに、Ｌ１２１０ＤＤＰ（シスプラチン耐性のサブライン）におけるＢＯＣ-スペルミジン化合物の細胞集簇は、1,1/t,t（ｎ＝６）２＋およびスペルミジン３＋化合物の中間に観測された。単に、電荷だけを考慮すれば、電荷２＋のＢＯＣ-スペルミジンの細胞取込みは、1,1/t,t（ｎ＝６）と同等であるはずである。取込みが高められていることは、培地あるいは血漿中で、ある程度加水分解し、少量のプロトン化1,1/t,t-スペルミジンを生成することにより説明することができる。多核ポリアミン化合物の能力を考慮すれば、加水分解は、少量の％でもin vivo活性においては顕著な衝撃を与えることができる。この実験は、1,1/t,t  ｎ＝６誘導体より２の取込みが高められていることは、細胞培地内で加水分解化学種がいくらか生成し、それが１による全取込みにいくらか分配されるためであろうことを示している。
【００７８】
表４．Ｌ１２１０細胞系における２時間曝露後の成長阻害およびＰt錯体の集簇
【表４】
2005501123.tif 000007
ａ各２測定値の３実験におけるＩＣ５０（μＭ）平均（±ＳＥ）；ｂ各２測定値の３実験における集簇モル（attamol）Ｐt錯体／細胞（±ＳＥ）；ｃ耐性因子，［（ＩＣ５０Ｌ１２１０／Ｐt錯体）／ＩＣ５０Ｌ１２１０／０）］。各詳細は文献７参照。
【００７９】
ヒト卵巣癌細胞系のパネルでは、封鎖ポリアミン化合物は、互いに、および“遊離”ポリアミン化合物との比較において、異なる細胞毒性パターンを示した、表５。特に注目すべきは、Ａ２７８０細胞系において、４（Ｆmoc）の著しく低い値である。
【００８０】
表５．ヒト卵巣癌細胞系感応における９６ＨＩＣ５０（μＭ）値およびシスプラチンに対する耐性ａ
【表５】
2005501123.tif 000008
ａ耐性因子，ＲＦ＝ＩＣ５０耐性／ＩＣ５０親系。
【００８１】
これら結果は、封鎖ポリアミン化合物の活性が細胞系特異性であり、選択的な癌または薬剤送達における薬剤開発の可能性を端緒であることを示唆している。さらに、封鎖基の性質の選択により、活性種の放出が特定の局所あるいは目的に合わせて設計することができる。たとえば、Ｆmoc錯体のｐＨ５および６における安定性は、経口投与による送達を可能にし、化合物は胃酸中で安定であるが、ｐＨ７−８において活性種を放出することができる。
【００８２】
本発明を好ましい態様例に基づいて説明したが、当技術に熟練した者であれば、本発明の請求項に記載された本発明の思想および範囲内であれば本発明は変更することができることはいうまでもないであろう。したがって、本発明は上記に記載した態様に制限されるべきものではなく、本明細書に記載された説明の思想および範囲と同等のすべての変更および効果をさらに含むとすべきである。
【００８３】
参照文献
1. (a) ファレル（Farrell）, N. 「癌治療における白金系薬剤」（Platinum-Based Drugs in Cancer Therapy）中; Kelland, L. R. ; Farrell, N. 編; Humana Press, 2000, pp 321-338.
(b) ファレル（Farrell）, N.;ク（Qu）, Y.; ビエバック（Bierbach）, U.; バルセッキ（Valsecchi）, M.; メンタ（Menta）, E.「先導的抗癌剤のシスプラチン化学および生化学の３０年」（30 years of Cisplatin-Chemistry and Biochemistry of a Leading Anticancer Drug）; Lippert, B. 編; Verlag, 1999; pp 479-496.
(c) ファレル（Farrell）, N.; スピネリ（Spinelli）, S.「薬剤における無機薬品の使用」（Uses of Inorganic Chemistry in Medicine; Farrell, N. Ed.; Royal Society of Chemistry）, 1999, pp 124-134.
2. ク（Qu）, Y.;Rauter, H.; Soares Fontes, A. P.; Bandarage, R.; Kelland, L. R.; Farrell, N. J. Med. Chem. 2000, 43, 3189-3192
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4.マッグレガ （McGregor）, T. D.;Kasparkova, J.; Neplechova, K.;Novakova, O. ;Penazova, H.; Vrana, O.;Brabec, V.; Farrell, N. J. Biol Inorg. Chem. 2002, 7, 397..
5. ロイター（Rauter）, H. ; DiDomenico, R.; Menta, E.;Da Re, G.; De Gillis, G.; Conti, M.; Lotto, A.; Pavesi, P.; Sponelli, S.; Manzotti, C.; Piazzoni, L.; Farrell, N. Proc. AACR 1998, 39, 1096.
6. ロイター（Rauter）, H.; DiDomenico, R.; Menta, E.; Oliva, A.; Qu, Y.; Farrell, N. Inorg. Chem. 1997, 36, 3919.
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【００８４】
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17. ゲルベック（Gerweck）, L. E. Semin. Radiat. Oncol. 1998, 8, 176-182.
【図面の簡単な説明】
【００８５】
【図１】ジアミンまたはポリアミン架橋した白金二核錯体の一般構造式を示す。
【図２】図１のＸ，Ｙ，ＺおよびＸ'，Ｙ'，Ｚ'の系統的な変更により得られるさまざまな化学種の特定例を示す。略号は脱離基の数を示し、各Ｐt中心の配置、たとえば1,1/t,tは、各白金上の１つの脱離基（Ｃl）がリンカー鎖のトランスに存在することを示す。
【図３】二または三核線状Ｐtポリアミン化合物の一般式を示し、ａ）1,1/tt；ｂ）1,0, 1/ttt（ＢＢＲ３４６３；ｃ）1,1/tt-スペルミン；ｄ）1,1/tt-スペルミジン(a) 中に図示する線状ジアミンはコントロール化合物として使用することができる。。
【図４】二核線状白金錯体１−７（１：ｎ＝３；２−７：ｎ＝２）の化学構造。
【図５】化合物１−４の合成スキーム。錯体１は２から、そのＢＯＣ保護基の酸性化合物水分解により調製される。封鎖基の再導入により、各種保護アミン２−４を形成する。
【図６】アミド保護した白金スペルミジン錯体５−７の合成経路のスキーム。
【図７】化合物２（Ａ）および４（Ｂ）それぞれの、各種ｐＨ値において、ＨＰＬＣクロマトグラムで検出される保護されてない1,1/tt-スペルミジン(１)の割合
【図８】化合物７の、ｐＨ６−８において３５日経過時、ＨＰＬＣクロマトグラムで検出される保護されてない1,1/tt-スペルミジン(１)の割合。直線は、一次元反応に科学的適合することを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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