(57)【要約】  本発明は、癌を含め、幅広い病気や症状にかかわるものである。本発明は、それらの病気や症状を発見するプローブを提供する。本発明のプローブは、機能的Ｐ２Ｘ７リセプターと非機能的Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別することが可能である。本発明のプローブは、様々な方法によってこれをできるが、その一つとしては、アデノシントリフォスフェート（ATP）のＰ２Ｘ７リセプターへの結合に関する変化を検知する方法である。本発明はまた、前記プローブを用いての病気や症状を発見する方法も提供する。本発明は、抗体、又は抗体を生成することのできるエピトープを使用した病気又は症状の治療にも及ぶ。前記抗体は、機能性と非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別することができ、非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターに結合する。治療方法、薬学的組成物及び前記プローブや抗体の使用もまた本発明に含まれる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
病気や症状を発見するためのプローブであって、前記プローブが機能性Ｐ２Ｘ７リセプターと非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別するよう適合されていることを特徴とするプローブ。
【請求項２】
アデノシントリフォスフェート(ATP)のＰ２Ｘ７リセプターへの結合に関する変化を検知することによって機能性Ｐ２Ｘ７リセプターと非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別するよう適合されていることを特徴とする請求項１に記載のプローブ。
【請求項３】
Ｐ２Ｘ７リセプターにおける細孔形成に必要な１つ又は複数のタンパク質の結合に関する変化を検知することによって機能性Ｐ２Ｘ７リセプターと非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別するよう適合されていることを特徴とする請求項１に記載のプローブ。
【請求項４】
結合したＡＴＰが存在しない時に露わなＰ２Ｘ７リセプターの１部分又は複数部分を検知することによって機能性Ｐ２Ｘ７リセプターと非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別するよう適合されていることを特徴とする請求項３に記載のプローブ。
【請求項５】
前記（Ｐ２Ｘ７リセプターの）部分がＰ２Ｘ７モノマーを含むことを特徴とする請求項４に記載のプローブ。
【請求項６】
プローブが、天然又は人工物であることを特徴とする請求項１乃至５のいずれか一項に記載のプローブ。
【請求項７】
プローブが、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、組み換え抗体、人体に適応させた抗体、ヒト抗体、及びこれらの断片からなる群から選ばれることを特徴とする請求項１乃至５のいずれか一項に記載のプローブ。
【請求項８】
前記抗体が、各Ｐ２Ｘ７リセプターのＡＴＰ結合箇所に隣接する細胞外の領域に位置するエピトープに対応するものであることを特徴とする請求項７に記載のプローブ。
【請求項９】
リセプターが哺乳類のＰ２Ｘ７リセプターであって、プローブが、アミノ酸２１０におけるプロリンがトランス（trans）コンフォメーションである配列を有する機能性リセプターと、アミノ酸２１０におけるプロリンがシス(cis)コンフォメーションであって局所的なタンパク質構造を変異させている配列を有する非機能性リセプターとを識別することを特徴とする請求項１乃至５のいずれか一項に記載のプローブ。
【請求項１０】
リセプターが哺乳類のＰ２Ｘ７リセプターであって、プローブが、アミノ酸１９９におけるプロリンがトランス(trans)コンフォメーションである配列を有する機能性リセプターと、アミノ酸１９９におけるプロリンがシス(cis)コンフォメーションであって局所的なタンパク質構造を変異させている配列を有する非機能性リセプターとを識別することを特徴とする請求項１乃至５のいずれか一項に記載のプローブ。
【請求項１１】
プローブが、Ｐ２Ｘ７リセプターのエピトープ配列のＧｌｙ２００からＣｙｓ２１６までの範囲に対して生成された抗体である、又はそのような抗体を含むことを特徴とする請求項９に記載のプローブ。
【請求項１２】
前記病気又は症状が、前立腺、乳、皮膚、肺、頸部、子宮、胃、食道、膀胱、結腸及び膣癌、その他の上皮細胞癌、悪性リンパ腫、その他の血液癌、過敏性腸症候群及びウィルス又はその他の病原性生物による感染からなる群から選択されることを特徴とする請求項１乃至１１のいずれか一項に記載のプローブ。
【請求項１３】
前記ウィルス又は（病原性）生物が、ＨＩＶ又はヒト型結核菌であることを特徴とする請求項１２に記載のプローブ。
【請求項１４】
前記症状が過敏性腸症候群であり、抗体が、機能性及び非機能性コンフォメーションに共通するエピトープを検知することによって、Ｐ２Ｘ７リセプターにおいて機能状態によって変化しないその他の部位を検知することが可能であることを特徴とする請求項７に記載のプローブ。
【請求項１５】
前記症状が過敏性腸症候群であり、抗体が、全てのＰ２Ｘ７の発現を検知することが可能な２つ目の抗体と共に使用されることを特徴とする請求項７又は１４に記載のプローブ。
【請求項１６】
請求項１乃至１０のいずれか一項に記載のプローブを使用して機能性Ｐ２Ｘ７リセプターと非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別する工程、
リセプターの発現プロファイルを得る工程、そして
前記リセプターの発現プロファイルを正常なプロファイルと比較する工程
を含むことを特徴とする病気又は症状を発見する方法。
【請求項１７】
前記リセプターの発現プロファイルが、非機能性リセプターのものであることを特徴とする請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記プローブが、アデノシントリフォスフェート(ATP)のＰ２Ｘ７リセプターへの結合に関する変化を検知することによって機能性Ｐ２Ｘ７リセプターと非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別するよう適合されていることを特徴とする請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記プローブが、Ｐ２Ｘ７リセプターにおける細孔形成に必要な１つ又は複数のタンパク質の結合に関する変化を検知することによって機能性Ｐ２Ｘ７リセプターと非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別するよう適合されていることを特徴とする請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記プローブが、結合したＡＴＰが存在しない時に露わなＰ２Ｘ７リセプターの１部分又は複数部分を検知することによって機能性Ｐ２Ｘ７リセプターと非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別するよう適合されていることを特徴とする請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
前記（Ｐ２Ｘ７リセプターの）部分が、Ｐ２Ｘ７モノマーを含むことを特徴とする請求項１６に記載の方法。
【請求項２２】
リセプターの発現プロファイルが、ｉｎ  ｓｉｔｕ  イメージ技術を用いて得られることを特徴とする請求項１６乃至２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
リセプターの発現プロファイルが、顕微鏡、共焦点顕微鏡、又は蛍光活性細胞分別を用いて得られることを特徴とする請求項１６乃至２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
病気又は症状を発見するための請求項１乃至１５のいずれか一項に記載のプローブの使用。
【請求項２５】
単離された細胞又は組織であって、請求項１乃至１５のいずれか一項に記載のプローブと錯化された細胞又は組織。
【請求項２６】
過敏性腸症候群を診断する方法であって、細胞及び／又は組織のＰ２Ｘ７の発現プロファイルを検知し、検知されたプロファイルと正常な細胞及び／又は組織の既定の発現プロファイルと比較することを含むことを特徴とする方法。
【請求項２７】
Ｐ２Ｘ７の発現プロファイルの検知が、１つ又は複数の抗体の使用を含むことを特徴とする請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
過敏性腸症候群を診断するための１つ又は複数の抗体の使用。
【請求項２９】
過敏性腸症候群を診断する方法であって、Ｐ２Ｘ７リセプターの機能を回復させるよう適合された組成物を投与することを含む方法。
【請求項３０】
病気又は症状を治療又は予防するための抗体であって、機能性Ｐ２Ｘ７リセプターと非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別するよう適合されていて、かつ非機能性リセプターのみに結合することを特徴とする抗体。
【請求項３１】
アデノシントリフォスフェート(ATP)のＰ２Ｘ７リセプターへの結合に関する変化を検知することによって機能性Ｐ２Ｘ７リセプターと非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別するよう適合されていることを特徴とする請求項３０に記載の抗体。
【請求項３２】
Ｐ２Ｘ７リセプターにおける細孔形成に必要な１つ又は複数のタンパク質の結合に関する変化を検知することによって機能性Ｐ２Ｘ７リセプターと非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別するよう適合されていることを特徴とする請求項３０に記載の抗体。
【請求項３３】
前記プローブが、結合したＡＴＰが存在しない時に露わなＰ２Ｘ７リセプターの１部分又は複数部分を検知することによって機能性Ｐ２Ｘ７リセプターと非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別するよう適合されていることを特徴とする請求項３０に記載の抗体。
【請求項３４】
前記（Ｐ２Ｘ７リセプターの）部分が、Ｐ２Ｘ７モノマーを含むことを特徴とする請求項３０に記載の抗体。
【請求項３５】
ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、組み換え抗体、人体に適応させた抗体、ヒト抗体、又はこれらの適切な断片であることを特徴とする請求項３０乃至３４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３６】
リセプターが哺乳類のＰ２Ｘ７リセプターであって、抗体が、アミノ酸２１０におけるプロリンがトランス(trans)コンフォメーションである配列を有する機能性リセプターと、アミノ酸２１０におけるプロリンがシス(cis)コンフォメーションである配列を有する非機能性リセプターとを識別することを特徴とする請求項３０乃至３４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３７】
抗体が、Ｐ２Ｘ７リセプターのエピトープ配列のＧｌｙ２００からＣｙｓ２１６までの範囲に対して生成された抗体であることを特徴とする請求項３６に記載の抗体。
【請求項３８】
リセプターが哺乳類のＰ２Ｘ７リセプターであって、抗体が、アミノ酸１９９におけるプロリンがトランス(trans)コンフォメーションである配列を有する機能性リセプターと、アミノ酸１９９におけるプロリンがシス(cis)コンフォメーションである配列を有する非機能性リセプターとを識別することを特徴とする請求項３０乃至３４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３９】
前記病気又は症状が、前立腺、乳、皮膚、肺、頸部、子宮、胃、食道、膀胱、結腸及び膣癌、その他の上皮細胞癌、悪性リンパ腫、その他の血液癌、過敏性腸症候群及びウィルス又はその他の病原性生物による感染からなる群から選択されることを特徴とする請求項３０乃至３７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項４０】
前記ウィルス又は（病原性）生物が、ＨＩＶ又はヒト型結核菌であることを特徴とする請求項３９に記載の抗体。
【請求項４１】
請求項３０乃至４０のいずれか一項に記載の抗体を生成するよう適合されたエピトープ。
【請求項４２】
エピトープが、ケミカルクロスリンカー、マレイミドカプロイル−Ｎ−ヒドロキシサクシニミド(ＭＣＳ)によってジフテリアトキシンにＣ−ターミナルＣｙｓ残基を介して連結されていて、このことによって連結されたエピトープペプチドによって適合されるコンフォメーションが安定したシス(cis)プロリンの立体配置を占めることを特徴とする請求項４１に記載のエピトープ。
【請求項４３】
患者の病気や症状を治療するための治療剤としての抗体の使用であって、正常な（機能性）リセプターを発現している細胞には影響を及ぼさずに、細胞の表面に発現されている異常な又は非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターをターゲットとすることによって、プログラムされた細胞死を規制することを特徴とする、請求項３０乃至４０のいずれか一項に記載の抗体の使用。
【請求項４４】
請求項３０乃至４０のいずれか一項に記載の抗体を生成させるような、請求項４１又は４２に記載のエピトープの使用。
【請求項４５】
患者の病気又は症状の治療又は予防のための薬学的組成物であって、薬学的に効果的な量の請求項３０乃至４０のいずれか一項に記載の抗体、又はそのような量（の抗体）を生成させるエピトープを含み、異常な又は非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターを表面上に発現している細胞のプログラムされた細胞死を規制することができることを特徴とする薬学的組成物。
【請求項４６】
患者の病気又は症状の治療又は予防のための調剤であって、患者の細胞又は組織においてＡＴＰのＰ２Ｘ７リセプターへの供給を制御するＡＴＰエーゼ又はＡＴＰＤエーゼの発現を規制するよう適合された１つ又は複数の物質を含むことを特徴とする調剤。
【請求項４７】
患者の細胞又は組織においてＡＴＰのＰ２Ｘ７リセプターへの供給を制御するＡＴＰエーゼ又はＡＴＰＤエーゼの発現を規制するよう適合された１つ又は複数の物質を含む調剤を投与する工程を含むことを特徴とする、患者の病気又は症状の治療又は予防方法。
【請求項４８】
病気又は症状が前立腺、乳、皮膚、肺、頸部、子宮、胃、食道、膀胱、結腸及び膣癌、その他の上皮細胞癌、悪性リンパ腫、その他の血液癌、過敏性腸症候群及びウィルス又はその他の病原性生物による感染からなる群から選択されることを特徴とする請求項４６に記載の調剤。
【請求項４９】
病気又は症状が前立腺、乳、皮膚、肺、頸部、子宮、胃、食道、膀胱、結腸及び膣癌、その他の上皮細胞癌、悪性リンパ腫、その他の血液癌、過敏性腸症候群、及びウィルス又はその他の病原性生物による感染からなる群から選択されることを特徴とする請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
生体内での(in vivo)診断又は治療に使用され、抗体が人体に適応された、又はヒト抗体、又はその断片であることを特徴とする請求項３５乃至４０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５１】
スキャン技術を使用する検知に適した放射性ラベルと錯化された請求項５０に記載の抗体。
【請求項５２】
前記スキャン技術が、陽電子放射断層撮影(法)であることを特徴とする請求項５１に記載の抗体。
【請求項５３】
フローサイトメトリーの使用に適した蛍光ラベルと錯化された請求項５０に記載の抗体。
【請求項５４】
比色分析法に適したマトリックスと錯化された請求項５０に記載の抗体。
【請求項５５】
請求項１乃至１５のいずれか一項に記載のプローブと、正常なＰ２Ｘ７リセプターの発現プロファイルを含んだ非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターを検知するためのキット。
【請求項５６】
請求項３０乃至４０のいずれか一項に記載の抗体と、正常なＰ２Ｘ７リセプターの発現プロファイルを含んだ非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターを検知するためのキット。
【請求項５７】
請求項５０乃至５４のいずれか一項に記載の抗体と、正常なＰ２Ｘ７リセプターの発現プロファイルを含んだ非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターを検知するためのキット。
【請求項５８】
血液サンプル中の非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターを検知するよう適合された請求項５６又は５７に記載のキット。
【請求項５９】
ＡＴＰエーゼ及びＡＴＰＤエーゼがＣＤ３９及びＣＤ７３から選ばれることを特徴とする請求項４６又は４８に記載の調剤。
【請求項６０】
１つ又は複数の物質が、１つ又は複数のＡＴＰ類似体であることを特徴とする請求項４６、４８、又は５９に記載の調剤。
【請求項６１】
病気又は症状を治療又は予防する方法であって、請求項３０乃至４０のいずれか一項に記載の抗体の使用を含むことを特徴とする方法。
【請求項６２】
病気又は症状を治療又は予防する方法であって、請求項４１又は４２に記載のエピトープの使用を含むことを特徴とする方法。
【請求項６３】
病気又は症状を治療又は予防する方法であって、請求項４５に記載の薬学的組成物の使用を含むことを特徴とする方法。
【請求項６４】
病気又は症状を治療又は予防する方法であって、請求項４６又は４８に記載の調剤の使用を含むことを特徴とする方法。
【請求項６５】
エピトープがＶａｌ６５−Ｌｙｓ８１であることを特徴とする請求項１４に記載のプローブ。
【請求項６６】
本願明細書中の実施例１乃至３のいずれかの実施例を参照に詳しく説明されていることを特徴とする請求項３０に記載の抗体。
【請求項６７】
本願明細書中の実施例１０又は１１を参照に詳しく説明されていることを特徴とする、患者の病気又は症状の治療又は予防方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌を含めた病気の診断及び治療に関する。本発明に関連する病気の種類としては、上皮細胞及び悪性リンパ腫に由来する癌を含む。本発明はまた、その他の症状、例えば、異常な組織生成／成長、過敏性腸症候群及びウィルスやその他の感染にも関する。本発明はまた、上記以外の病気や症状に適用され得る可能性も大いにある。
【背景技術】
【０００２】
アデノシントリフォスフェート（ATP）は、Ｐ２Ｘリセプターとして知られているリガンド−ゲーテッドプリン活性リセプターを活性化することができる。リセプターのサブタイプとしてＰ２Ｘ１からＰ２Ｘ７が同定されている。上皮細胞や白血球、リンパ球、胸腺細胞、マクロファージ及びデンドリチック細胞等を含め、多くの細胞において異なる種類のＰ２Ｘリセプターのサブタイプが存在することが知られている。
【０００３】
Ｐ２Ｘリセプターは、カルシウムやその他、例えばリンやナトリウムなどいくつかのカチオンに対して透過性を有している。Ｐ２Ｘリセプターを介したカルシウムの細胞内への流入は、細胞死と関連することもある。
【０００４】
Ｐ２Ｘ７サブタイプが種々の細胞においてアポプトーシス、又はプログラムされた細胞死に関連していると思われている。ＡＴＰが存在していると、細胞表面に発現されたＰ２Ｘ７リセプターは、一秒以内に、細胞膜を通るカルシウムチャンネルを開けることが可能である。ＡＴＰへの継続的露出は、大きな孔の形成につながり、数秒から数十秒以内に、細胞を過剰のカルシウムで飽和させ、アポプトーシスを引き起こすこともあり得る。
【０００５】
ヒト及びラットのＰ２Ｘ７リセプターのアミノ酸配列は、例えば、図１にも参照されているように知られている（例えば、特許文献１参照。）。
【０００６】
例えば、上皮癌細胞においては、ＡＴＰへの露出は通常アポプトーシスという結果にならない。このような細胞では細孔を形成することができないＰ２Ｘ７リセプターを発現することが見つかっている。これらは非機能性リセプターとみなされる。
【０００７】
げっ歯類のハイブリドーマを含む動物細胞株同様、ヒトの癌細胞株、例えば前立腺ＰＣ３及び乳ＭＣＦ７などでは、細胞表面においてＰ２Ｘ７リセプターが非機能性のコンフォメーションで見つかっている。
【０００８】
悪性リンパ腫の患者のＢ−セルは非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターを発現している。リンパ腫は、細胞融解破壊を逃れる悪性なクローンから発達するものである。このプロセスが、さらに進行して悪性Ｂ−リンパ球の蓄積、すなわちリンパ節障害及び／又は巨脾症につながる。
【特許文献１】米国特許６１３３４３４明細書
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
第一に、本発明は病気や症状を発見するためのプローブであって、前記プローブは機能性Ｐ２Ｘ７リセプターと非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別するよう適合されている。好ましくは、前記プローブは、アデノシントリフォスフェート（ATP）のＰ２Ｘ７リセプターへの結合に関する変化を検知することによって機能性Ｐ２Ｘ７リセプターと非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別する、又はＰ２Ｘ７リセプターにおける細孔形成に必要な１つ又は複数のタンパク質の結合に関する変化を検知することによって機能性Ｐ２Ｘ７リセプターと非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別する。また別の実施態様においては、前記プローブは、結合したＡＴＰが存在しない時に露わなＰ２Ｘ７リセプターの１部分又は複数部分を検知することによって機能性Ｐ２Ｘ７リセプターと非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別する。そのような前記（Ｐ２Ｘ７リセプターの）部分は、Ｐ２Ｘ７モノマーを含んでいてもよい。
【００１０】
本発明はまた、上述したプローブを使用して機能性Ｐ２Ｘ７リセプターと非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別する工程、リセプターの発現プロファイルを提供する工程、及び前記工程で得たリセプターの発現プロファイルを正常なプロファイルと比較する工程、を含む病気又は症状を発見する方法をも提供する。（比較した結果の）差異は、例えば、上段で示唆されているようにプローブ自体に関連して検知されてもよい。
【００１１】
プローブは、天然又は人工物であってもよい。プローブは、好ましくは抗体であり、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、組み換え抗体、人体に適応させた抗体、ヒト抗体、及びこれらの適切な断片でもよい。抗体は、（Ｐ２Ｘ７リセプターの）ＡＴＰ結合箇所に隣接する細胞外の領域に位置するエピトープに対応するものであることが好ましい。リセプターがヒトのＰ２Ｘ７リセプターである場合、プローブは、アミノ酸２１０におけるプロリンがトランス（trans）コンフォメーションである配列を有する機能性リセプターと、アミノ酸２１０がシス（cis）コンフォメーションであって局所的なタンパク質構造を大いに変異させている配列を有する非機能性リセプターとを識別するように適合されていることが好ましい。
【００１２】
プローブは、当業者にとって自明な如何なる適当な技術を用いて調製されてもよい。
【００１３】
本発明の範囲は、プローブがＡＴＰ結合位置において上述した以外のコンフォメーション変化を検知することによって、機能性Ｐ２Ｘ７リセプターと非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別することも含む。例えば、検知される変化は上述したプロリン以外のアミノ酸におけるものでもよい。そのようなアミノ酸の一例としては、Ｐｒｏ１９９が挙げられ、このアミノ酸は、シス（cis）コンフォメーションにあっては局所的なタンパク質構造を大いに変異させる。その他の例としては、検知される変化は別の観点においてでもよい。
【００１４】
プローブは、Ｐ２Ｘ７リセプターの機能状態によって変化しない領域を検知するよう適合されていてもよい。結合したＡＴＰを欠いたモノマーサブユニットのコンフォメーションは、選択されたエピトープがＡＴＰが結合していない時のみアクセスできるリセプターの表面領域の形を特異的に検知するなどして、プローブを用いて検知可能である。プローブは、例えば補助的又はその他のタンパク質など、細孔形成に必要な１つ又は複数のタンパク質の結合の変化を検知してもよい。そのようなタンパク質の例としては、以下に限定されないが、ラミニン、インテグリン、β−アクチン、α−アクチン及びスーパービリンなどがある。
【００１５】
本発明において、前腫瘍性細胞、極初期の腫瘍性組織、進行した腫瘍性組織上又は中に、又は、非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターを任意に発現している任意の腫瘍性細胞上に発現している非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターに結合又はこれを特異的に検知するために、Ｐ２Ｘ７サブタイプに特異的な抗体を使用することができる。すなわち、Ｐ２Ｘ７リセプターは、正常に細胞膜に発現されていて、部分的にチャンネルとして機能することが状態によっては可能であっても、ゲートが閉じた、又は非機能性コンフォメーションの時のみ検知又は結合される。
【００１６】
さらに、結合したＡＴＰを欠いたモノマーサブユニットのコンフォメーションもまた抗体によって検知可能である。なぜなら、選択されたエピトープは、ＡＴＰが結合していない時のみアクセス可能である表面領域の形を特異的に検知するからである。
【００１７】
本発明において、非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターは、機能性リセプターに存在する構造からコンフォメーションの変化を起こすエピトープに対応する抗体を使用することによって検知又は結合できる。非機能性リセプターのアミノ酸配列は、機能性リセプターのアミノ酸配列と同一であり得ることが知られており、したがってリセプターにおけるコンフォメーションの変化は、リセプターとＡＴＰとの相互関係に関連するものである。前述したように、ＡＴＰ分子は、リセプターのアゴニストであるから、ＡＴＰがリセプターに結合している時、リセプターは、カルシウムイオンの流入のための細胞膜を通るチャンネルを開けることが可能となる。すなわち、非機能性は、ＡＴＰアゴニストのリセプターへの適当な結合が欠如しているために起こり、その原因としては、不十分な生産又は分解率の増加による局所的な利用可能なＡＴＰの不足を含む現象が考えられる。もしＡＴＰのリセプターへの結合が妨げられれば、リセプターのコンフォメーションは変化される。これはＡＴＰの結合によって影響を受けるタンパク質の領域に結合するよう特別に設計された抗体を用いることによって検知することができる。
【００１８】
ヒトのＰ２Ｘ７リセプターの場合、コンフォメーションの変化に関わる特定の配列はＰｒｏ２１０を含み、これは結合したＡＴＰがないとトランス（trans）フォームからシス（cis）フォームへとコンフォメーションが変化する。したがって、ヒトのリセプターの場合、抗体を生成する適切なエピトープの配列はＰｒｏ２１０を含み、抗体反応を引き起こすのに必要な適切な範囲で、この残基の両側に延びていてもよい。限定的な例ではないが、Ｇｌｙ２００からＣｙｓ２１６に及ぶ部分を含んでいてもよい。さらに、ラットなどその他の哺乳類のホモローグな部分であって、ヒトの組織と交差反応するものを使用することもできる。例えば、ヒトの配列と比較して２つのアミノ酸の置換があるが、ラットの同じＧｌｙ２００からＣｙｓ２１６部分を使用することもできる（例えば、特許文献２参照。）。
【特許文献２】米国特許６１３３４３４明細書
【００１９】
非ヒトリセプターの場合、特定の配列は適切な実験によって確認することができる。
【００２０】
本発明による非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターの検知は、機能性Ｐ２Ｘ７リセプター（すなわち正常な細胞）がラベルされないままの分布パターンを示すこともある。しかしながら、Ｐ２Ｘ７リセプターの非機能性コンフォメーションは、最初は細胞核及び細胞質において、プレ腫瘍形成の初期段階において検知することができる。例えば、上皮細胞癌の例においては、本発明による方法の使用によって、生体組織検査のヘマトキシリン及びイオシン（「Ｈ＆Ｅ」）染色スライドによる通常の癌の病理学的な症状の検知より数年先立ってプレ腫瘍形成を検知することも可能である。すなわち、前立腺、皮膚、乳癌などを現在より格段早く検知し、早期に治療を開始するという利益をもたらすことが可能である。
【００２１】
本発明のプローブ及び方法によって検知される病気や症状の完全なる範囲はまだ確認されていない。しかしながら、前立腺、乳、皮膚、肺、頸部、子宮、胃、食道、膀胱、結腸、及び膣などの上皮細胞癌、悪性リンパ腫を含む血液の癌、過敏性腸症候群、及びＨＩＶ又はその他、ヒト型結核菌などの病原性のウィルスによる感染を含むと確信できる。感染は、機能性に必要とされるコファクターを阻害することによって直接に、もしくは上皮又はその他の細胞上のＰ２Ｘ７機能を阻害するようなコファクターをアップレギュレーションすることによって、非機能性リセプターを発現させ、感染した細胞をアポプトーシスによる破壊をより受けにくくすることもある。
【００２２】
特に記載がない場合は、「病気又は症状」という語句は、ここでは前段で述べられた全ての特定の病気及び症状を含むものとする。
【００２３】
過敏性腸症候群（「ＩＢＳ」）という特定のケースにおいては、この症状を持つ患者においては、上皮の下のストロマに、広く分布して存在するリンパ球において通常Ｐ２Ｘ７リセプターを発現させる消化管の粘膜がアップレギュレートされるということが見つかっている。感染した患者において、この発現の増加は十二指腸から直腸の間の粘膜において観察することができる。発現の増加は、単離された領域において見られることもあり、もしくは、より極端なケースでは腸管の全長に渡って全体的に増加していることもある。
【００２４】
最も軽症なケースでは、全体的なＰ２Ｘ７リセプターはアップレギュレートされているが、これらはすべて機能性リセプターであり、かつ上皮に侵入することはない。より深刻なケースでは、全体的なＰ２Ｘ７リセプターの発現はさらに高く、そして消化管の最も影響を受けている箇所においては非機能性リセプターを呈している。これらは、例えば、盲腸の粘膜に集中していることもあり、上皮に侵入していることもある。最も深刻なケースは、全体的なＰ２Ｘ７リセプターの発現がより一層増加していて、かつリセプターの大部分は非機能性で上皮細胞により多く侵入している場合である。
【００２５】
前述したように、Ｐ２Ｘ７リセプターの非機能性は、ＡＴＰアゴニストのリセプターへの適切な結合が欠如していることに起因する。その原因は、生産不足又はエクト−ＡＴＰエーゼのＡＴＰの酵素分解率の増加による、局所的な利用可能なＡＴＰの不足を含むこともある。もしＡＴＰのリセプターへの結合が妨げられれば、先に述べたようにリセプターのコンフォメーションは変わり、そしてこのことを本発明のプローブを用いて検知することができる。しかし、全Ｐ２Ｘ７リセプターの分布を検知するには、ＡＴＰ結合に影響を受けないＰ２Ｘ７リセプターの細胞外領域のその他のエピトープを使用する方法が最も好適である。プローブが、Ｖａｌ６５−Ｌｙｓ８１などの機能性及び非機能性コンフォメーションに共通するエピトープを検知することによって、機能状態によって変化しないＰ２Ｘ７リセプターの領域を検知できてもよい。
【００２６】
本発明の範疇には、全Ｐ２Ｘ７の分布と、消化管の粘膜において発現された非機能性リセプターの割合とを特に区別するために、Ｐ２Ｘ７サブタイプに特異的な１つ又は２つの抗体を使用することも含まれる。よって、２つの抗体は共に使用されることで、リセプターの全体数とゲートが閉じた又は非機能性コンフォメーションにおいてのみ存在するリセプターチャンネルとの両方を検知することができる。１つ目の抗体は、Ｐ２Ｘ７リセプターの全体数を検知するよう適合されている。本発明の抗体を含む、又は抗体に連結されたプローブは、ＩＢＳを検知する２つ目の抗体を提供することができ、機能性と非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別するのみではなく、機能性によって変化しないリセプターのその他の領域を検知することもできる。これらの抗体は別々に、又は同時に使用されてもよい。好ましくは、組み合わせて使用することである。
【００２７】
非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとは別に、全Ｐ２Ｘ７リセプターを検知することが症状の深刻度を決定する。胃腸部の粘膜における非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターの発現は、正常な細胞がラベルされない状態でパターンとして現われる。その後、非機能性のＰ２Ｘ７（リセプター）のコンフォメーションが、最初に、上皮下のストロマにおいて、症状が軽症なケースの部分的パッチから、上皮に侵入しているパッチを部分的に伴い、かつ胃腸管の全長に渡る広範囲における非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターの発現という程度の間で検知される。
【００２８】
本発明はまた、過敏性腸症候群の診断方法を提供し、この方法は、細胞及び／又は組織のＰ２Ｘ７発現プロファイルを検知し、そして正常な細胞及び／又は組織の既定の発現プロファイルと比較することを含む。Ｐ２Ｘ７発現プロファイルの検知は１つ又は複数の抗体の使用を含むことが好ましい。さらに、この抗体は本発明のプローブと異なり、ＡＴＰのＰ２Ｘ７リセプターへの結合に関する変化を検知しないようなものであることが好ましい。このような抗体の調製は、当業者にとって自明のものである。
【００２９】
本発明は、過敏性腸症候群を診断するための１つ又は複数の抗体の使用を含む。
【００３０】
この症状の治療養法は、本発明の第３の側面と関連して以下に述べられる。
【００３１】
診断法は、標準的な顕微鏡を用いた通常の免疫組織化学技術において使用できる。診断法は、生体内(in vivo)で使用されることもできる。
【００３２】
本発明のプローブ及び方法を用いた診断は、体内組織内の分布を検知するｉｎ  ｓｉｔｕイメージ技術を用いて実行されることもできる。これに加えて、標準的顕微鏡、共焦点顕微鏡及び蛍光活性細胞分類法を使用してもよい。リンパ、前立腺、乳、皮膚、肺、子宮、膀胱、膣、胃、食道を検査するための通常の免疫組織化学技術、及び類似の生体組織検査、また胸やその他の組織の細針吸引法、及び膣癌の発見のために採取されるような細胞塗抹(標本)も使用できる。
【００３３】
生体内診断には、プローブはヒト抗体又はドメインであり、動物成分を含まず製造されたものが好ましい。抗体は、好ましくは短命の放射性ラベルでラベルされており、陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴスキャナー）などのスキャン技術によって検知できることが好ましい。このようなイメージ法は、体中のあらゆる箇所にあるラベルされた抗体の集合体を検知することが可能であり、よって腫瘍の存在と関連した非機能性（Ｐ２Ｘ７）リセプターの存在を知らせる。理想的には、このような検査は、第１の癌の発見の後に第２の癌の有無をチェックするためにのみ行われるべきであり、もしくは、血液検査（下記参照）による一般的なスクリーンによって１つ又は複数の腫瘍の存在の可能性を発見してから行われるべきである。
【００３４】
本発明のプローブ及び方法は、非機能性Ｐ２Ｘ７リセプター、すなわち癌又は癌の前兆症状を検知するための血液検査を提供するために適用されてもよい。例えば、蛍光ラベルされた抗体（モノクローナル又はポリクローナル）のプローブを、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、又はマクロファージなどの多種多様のゲートを備えた（gated）白血球における非機能性リセプターの結合を検知するために、患者の血液細胞の一部をフローサイトメトリーにかけて使用することができる。
【００３５】
別の血液検査の方式では、プローブは、キット中に用意されたマトリックスに連結したラベルされた抗体という形態を取ることが好ましい。このようにすることによって、陽性の白血球に結合した抗体の色反応の有無によって検知することを可能となる。このようなキットは、医療行為を行う者によっての使用に適しているであろう。
【００３６】
類似した血液検査において、本発明の抗体プローブは、癌はなくても１つ又は複数の白血球においてＰ２Ｘ７の機能が欠如していて通常の細胞破壊道程が阻害されているような患者をスクリーンするための診断道具として使用することもできる。このような患者は、マクロファージが非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターを発現していて、そのようなマクロファージは、例えばヒト型結核菌、又はマラリアやＨＩＶを含むその他の感染性の生物によって感染した細胞を破壊する機能が阻害されていることを示唆している。これらの（感染性）生物は、１つ又は複数の白血球においてＰ２Ｘ７の機能が欠如していて、通常の細胞破壊道程が阻害されているような患者において好適に増殖する。
【００３７】
本発明によるプローブ及び方法は、他の技術と共に使用してもよい。
【００３８】
本発明は、病気又は症状を治療するための抗体を提供し、この抗体は、機能性Ｐ２Ｘ７リセプターと非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別し、非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターにのみ結合するよう適合されている。好ましくは、抗体はアデノシントリフォスフェート（ATP）のリセプターへの結合に関連した変化を検知することによって、もしくは、Ｐ２Ｘ７リセプターにおける細孔を形成するために必要な１つ又は複数のタンパク質の結合の変化を検知することによって機能性Ｐ２Ｘ７リセプターと非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別し、そして非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターにのみ結合するよう適合されていることが好ましい。別の実施態様では、抗体は、結合したＡＴＰが存在しない時に露になるリセプターの部分を検知することによって機能性と非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターとを識別する。
【００３９】
病気や症状を治療するための抗体は、それらの病気や症状を診断するための抗体と同じであってもよい。そのような抗体は、例えば、局所的な皮膚癌の治療に用いることができ得る。癌の計画的な治療には、抗体又はその活性部分は、免疫反応の望ましくない副作用を最小に抑えるべく、ヒトの又はヒトのドメインのものであるべきである。
【００４０】
本発明の抗体は、ヒトを含めた哺乳類における病気や症状を治療するために使用することが可能である。適用できる病気や症状の例は、本発明のプローブと関連して上述した通りである。
【００４１】
本発明はまた、本発明の第２の側面の抗体を生成することが可能なエピトープを提供する。このエピトープは、Ｐｒｏ２１０を含み、かつＧｌｙ２００からＣｙｓ２１６の部分を含むことが好ましい（ヒトリセプターのＰ２Ｘ７配列における）。エピトープは、Ｃｙｓ残基（Ｃｙｓ２１６）のＣ−ターミナルに連結されていることが好ましく、このＣｙｓ残基はマレイミドカプロイル−Ｎ−ヒドロキシサクシニミド（ＭＣＳ）というケミカルクロス−リンカーを介してジフテリアトキシンにクロスリンクされている。このようにすることによって、連結されたエピトープペプチドのコンフォメーションが安定したシス（cis）プロリン立体配置を占めるようになる。
【００４２】
この特定のペプチドのコンフォメーションは、１つ又は複数の病気や症状を抱えたヒト又は動物に対して与えられるように意図されている。前記病気や症状とは、特には、前立腺、胸、皮膚、肺、頸部、子宮、胃、食道、膀胱、結腸及び膣癌などの上皮癌や、悪性リンパ腫、過敏性腸症候群及びＨＩＶなどのウィルスやヒト型結核菌などその他の病原性生物による感染のことである。患者は、（上述の）複合エピトープの投与によって免疫反応を引き起こし、そうすることによって感染した細胞上に存在する非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターを認識する抗体を生成し、すなわちこれら感染した細胞に結合して適切な免疫細胞を喚起し錯体細胞を破壊させるようになることが好ましい。予め細胞死を遂げるようなその他の細胞も影響を受けることもある。
【００４３】
上記で参照された配列は、本発明の範囲を限定するものではなく、本発明は代わりとなる配列やキャリアーやクロス−リンカーなど類似の特定の免疫反応を作り出すものを含む。好ましくは、免疫反応は非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターにのみ反応し、望ましくは全ての機能性Ｐ２Ｘ７リセプターに反応せず、すなわち副作用を避けるものである。
【００４４】
本発明は第２の側面において、細胞表面に発現されている異常な又は非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターをターゲットとすることによってプログラムされた細胞死を規制し、かつ正常な（機能性）リセプターを発現している細胞には触れず、本発明の抗体を患者の病気や症状を治療するための治療用媒体として使用する方法をも提供する。本発明はまた、上述したように、抗体を生成する本発明のエピトープを使用することを含む。
【００４５】
本発明はまた、患者の病気や症状を治療又は予防するための薬学的組成物を提供する。この組成物は、薬学的に有効量の抗体、又はそのような量（の抗体)を生成するようなエピトープを含み、異常な又は非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターを表面に発現している細胞のプログラムされた細胞死を規制することが可能なものである。
【００４６】
薬学的に有効量の抗体又はエピトープは、患者によって及び病気又は症状の性質によって変化する。これらの変化する値は、当業者によって確認することが可能である。
【００４７】
本発明の薬学的組成物は、薬学的に許容可能なキャリアーと共に適用されてもよく、そのようなキャリアーはこの分野において周知のもの又は今後出来てくるものであって、使用用途に適切なもののいずれでもよい。キャリアー同様、本発明の薬学的組成物は、顔料、防腐剤、緩衝剤及び抗酸化剤等その他の成分を含有していても良い。
【００４８】
本発明の薬学的組成物は如何なる形態でもよく、例えば、塗布剤、クリーム、液体、懸濁液、パウダー、タブレット、カプセル、坐薬又は膣坐薬等の形態で投与されてもよい。
【００４９】
本発明の薬学的組成物は如何なる適当な方法で投与されてもよく、例えば経口、非経口、静脈、筋肉、皮下又は局所的投与を含んでもよい。
【００５０】
本発明はまた、患者の病気又は症状を治療又は予防する方法をも提供する。この方法は、本発明の薬学的組成物を患者に投与することを含むものである。
【００５１】
本発明はまた、患者の病気又は症状の治療又は予防において、本発明の薬学的組成物を使用することを提供する。
【００５２】
当業者にとっては、本発明の薬学的組成物の使用方法は、最大の効果を得るために調整される必要もあることは自明のことである。病気又は症状の深刻度や性質を考慮することが必要であるだろう。
【００５３】
本発明の第３の側面は、例えば悪性リンパ腫を持つ患者のＢ−セルなどにおける、ＡＴＰのＰ２Ｘ７リセプターへの供給を制御しているＡＴＰエーゼ（酵素）の発現に焦点を当てる。白血球のＰ２Ｘ７リセプターのキャンネルの開放は、エクト−ＡＴＰエーゼ及びエクト−ＡＴＰジフォスフォハイドロラーゼ（エクト−ＡＴＰＤエーゼ）によるすばやいＡＴＰアゴニストの加水分解によって完了する。これらの酵素はＡＴＰに依存する数多くの生体的プロセスを規制するものである。エクト−ＡＴＰエーゼ及びエクト−ＡＴＰＤエーゼの基質特異性な活動は、白血球細胞表面に、ＣＤ３９を含めた複数型の存在を示唆している。これらエクト−ＡＴＰエーゼ及びエクト−ＡＴＰＤエーゼの増殖は、Ｐ２Ｘ７の細孔形成を制御するのに必要なＡＴＰの供給、それに続くＢ−セル数を規制するのに必要なプログラムされた細胞死に制限を設けることもある。
【００５４】
同様に、ＩＢＳのケースにおいても、ＡＴＰエーゼの増殖がＡＴＰアゴニストのＰ２Ｘ７リセプターへの適切な結合の欠如に関与しているかもしれないと考えられている。
【００５５】
したがって、この第３の側面において、本発明は患者の病気又は症状の治療又は予防のための調剤を提供する。この調剤は、患者の細胞又は組織のＰ２Ｘ７リセプターへのＡＴＰの供給を制御するＡＴＰエーゼの発現を規制するよう適合された１つ又は複数の物質を含んでいる。本発明はまた、患者の病気又は症状の治療又は予防方法を提供し、この方法は、患者の細胞又は組織のＰ２Ｘ７リセプターへのＡＴＰの供給を制御するＡＴＰエーゼの発現を規制するよう適合された１つ又は複数の物質を含んでいる調剤を投与する工程を含んでいる。
【００５６】
そのようなＡＴＰエーゼの例としてはＣＤ３９又はＣＤ７３でもよい。
【００５７】
そのような物質はＡＴＰの類似体という形態であってもよく、好ましくは加水分解不可で、かつＰ２Ｘ７に特異的であり、又はＰ２Ｘ７の結合サイトへのＡＴＰの供給率を低減させるＡＴＰエーゼの局所的な活動を阻害する他の物質でもよい。調剤は、非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターに特異的に対応するヒト抗体の形態でもよい。
【００５８】
ＡＴＰ類似体のような物質は、Ｐ２Ｘ７に結合し、Ｐ２Ｘ７を細孔が開いたコンフォメーションに維持し、すなわち細孔を機能性の有する状態に強制する。この状態においては、（Ｐ２Ｘ７は）大小両方のカチオン透過酵素を摂取することができる。このような方法で、前述の合成アゴニストの使用がリセプターの機能を回復させ、同時に、細胞に対するＰ２Ｘ７のカルシウムチャンネルとしての役割によってもたらす成長を制御することもできる。
【００５９】
（本発明を適用する）病気や症状は、好ましくは悪性リンパ腫又はＩＢＳであるが、その他の上皮細胞又は血液癌又はウィルス及びその他の病原性の感染を含めたその他の病気や症状でもよい。
【００６０】
悪性リンパ腫のケースにおいては、ＡＴＰエーゼはＰ２Ｘ７リセプターへのＡＴＰの局所的な供給を制御し、このことによってＰ２Ｘ７リセプターに結合可能なＡＴＰの量を減らし、これらのリセプターを不活性化する。これはプログラムされたＢ−セル死を激減させることにつながる。これらのＡＴＰエーゼは、Ｂ−セル表面に特異的に発現されていて、悪性リンパ腫においてはさらにより多く発現されているようである。特定のＡＴＰエーゼ阻害物質の適用が、プログラムされたＢ−セルを規制するようにＰ２Ｘ７リセプター上のＡＴＰの供給率を規制するために使用されるのが好ましい。
【００６１】
悪性リンパ腫の治療のためには、上述の物質は、加水分解不可な形態のＰ２Ｘ７アゴニストであって、ＡＴＰエーゼ又はＡＴＰＤエーゼを妨害することが可能な合成アゴニストを含んでいても良い。
【００６２】
過敏性腸症候群と関連して、本発明の調剤の投与は、粘膜の症状を表している領域の下の筋肉の過剰活動によって低減されているかもしれないリセプターの機能を回復させるように意図されている。本発明の調剤は、粘膜に直接働きかけて非機能性リセプターを除去し、これによって局所的に正常な消化管の分泌メカニズムを回復させてもよい。治療養法は、局所的なＡＴＰの非機能性リセプターへの供給を回復させ、それによって正常なリセプター機能が回復されることを目的とする。リセプター機能の制御の結果としては、消化器官の分泌及び蠕動(ぜんどう)運動の正常な制御が回復されることを含む。これは、Ｐ２Ｘ７に特異的な合成アゴニスト、好ましくは、ＡＴＰエーゼによって加水分解されないアゴニストの腸溶又は全身的な供給を適用する、もしくは、非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターに対応する抗体、好ましくは、非機能性リセプターを除去し、機能性リセプターのみを残すような、小さな特異的ヒト抗体を全身的に投与することによって達成され得る。
【００６３】
仮に平滑筋の下の異常な蠕動運動が正常な機能性Ｐ２Ｘ７リセプターに結合するＡＴＰの局所的な供給率を低減されているとすれば、治療法は、消化管の運動を制限することによって平滑筋によるＡＴＰの摂取又は使用を制限するという方法を用いて、この天然なアゴニストの供給を回復することを含むものでもよい。
【００６４】
本発明はまた、病気又は症状の治療のための薬学的組成物を提供し、この組成物は、Ｐ２Ｘ７リセプターへのＡＴＰの供給を制御するＡＴＰエーゼ（酵素）の発現を規制するよう適合された薬学的に有効量の１つ又は複数の物質を含む。
【００６５】
本発明は全ての側面において、ウィルスに感染した細胞内で非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターがより多く発現されているためにウィルスが保護されている、もしくは正常な細胞状態であってもそのような（非機能性）リセプターが増加発現されているような、ウィルス感染がもたらす異常なＰ２Ｘ７リセプターが関与するその他の病的症状に対して同様に適用することにまで及ぶ。
【００６６】
本発明は、過敏性腸症候群を治療する方法をも提供し、この方法は、上段で定義された薬学的組成物を患者に投与することを含む。
【００６７】
本発明はまた、そのような薬学的組成物を過敏性腸症候群の治療において使用することを提供する。
【００６８】
上記の１つ又は複数の薬学的に有効な組成物を使用するパターンについては、最良の効果を得るために適宜変更されなければいけないこともある。
【００６９】
別の形で表現するならば、本発明は過敏性腸症候群の治療方法を提供し、その方法はＰ２Ｘ７リセプター機能を回復させるよう適合された組成物を投与することを含んでいる。リセプターの機能は、過敏になっている粘膜の領域の下にある筋肉の過剰活動によって消耗していることもある。前記組成物は、上段で述べた本発明の調剤に含まれる物質と同じであってもよい。
【００７０】
さらなる側面から、本発明はタンパク質の異なるコンフォメーションを識別する方法を提供する。この方法は、抗体を生成させることができるエピトープ、又は抗体そのものを用い、選択されたコンフォメーションを有するタンパク質の全ての集合体に結合することにより特定の薬学的な成果（アクティブ／パッシブ免疫化）を挙げることによってなされる。この一例として、ｖＣＪＤの症状につながるプリオンタンパク質のコンフォメーションが挙げられる。タンパク質の異常な形態は、特定の抗体又は抗体を生成させるようなエピトープによってターゲットできる。（エピトープは）最良な薬学的効果を得るためにヒトの、かつ小さなサイズのものであることが好ましい。
【００７１】
（図の簡略な説明）
図１は、ヒトのＰ２Ｘ７リセプターのアミノ酸配列を示す（先行技術）。配列６５から８１及び２００から２１６はハイライトされており、以下において参照される。
【実施例】
【００７２】
（本発明の詳細な説明）
非機能性のＰ２Ｘ７リセプターに対応する抗体を生成するため、図１に示す、配列２１６にあるＣｙｓを含んだ配列２００から２１６のエピトープが使用された。
【００７３】
無差別的なＰ２Ｘ７リセプターに対応する抗体を生成するため、図１に示す、配列６５から８１のエピトープが使用され、これにＮ−ターミナルＣｙｓが付け加えられた。この抗体は、リセプターが非機能性であるかどうか識別することができないが、全ての（Ｐ２Ｘ７）リセプターを検知するように設計されており、２種類の抗体を別々に使用して得られる染色を比較することによって機能性であるリセプターの割合を決定できるようになっている。
【００７４】
エピトープのＣｙｓ残基は、コンフォメーションの安定性を維持し、かつより大きな抗原性構造を提供するために、１０ペプチドエピトープがそれぞれのＤＴキャリアーに付いたジフテリアトキシン（ＤＴ）キャリアーに、マレイミドカプロイル−Ｎ−ヒドロキシサクシニミド（ＭＣＳ）クロスリンカーを介して結合された。これらの複合エピトープは、通常の方法で、エピトープに特異的な抗体を生成するため、抗原として幾つかの動物（羊、ラビット及びマウス）に注入された。
【００７５】
特定時に動物に注入された抗原／アジュバントの混合物の使用によって抗体を生成する工程は、周知技術に述べられている。抗体を生成するより具体的な例を下記に示す。
【００７６】
（実施例１）
＜羊の抗Ｐ２Ｘ７抗体＞
５００μｇの複合体（約１００μｇのＰ２Ｘ７エピトープ）がリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で０．８ｍＬまで薄められ、そして１．２ｍＬのフロイントの完全アジュバントで乳化された。羊達は皮下及び筋肉の両方の複数箇所に抗原／アジュバントエマルジョンを注入された。８週間後、同じ羊達に同量の乳化された複合体がフロイントの不完全アジュバントと一緒に複数箇所注入された。この作業は４週間後に繰り返され、そして頸静脈より採血された。集められた血清は、抗体の特異性について検査された。特定の抗体を含む血清の蓄えを提供するため、それらの羊達は８週間間隔で定期的に注入及び採血された。
【００７７】
他の羊達は、上記のスケジュールと類似して同量の複合抗体を注入されたが、異なるアジュバントが使用された。これらの動物たちには、０．７ｍＬの薄められた抗原が、０．１ｍＬのクイルＡ（Quill A）／ＤＥＡＥデクストラン（Dextran）溶液（１ｍＬのＰＢＳにつき２．５ｍｇのクイルＡ（Quill A）＋２５ｍｇのＤＥＡＥデクストラン（Dextran））及び１．２ｍＬのＩＳＡ５０Ｖモンタニド（Montanide）と混ぜられた。このエマルジョンは、皮下及び筋肉の両方に複数箇所注入された。このアジュバントを使用して得られた抗体は、フロイントのアジュバントを使用して作られた抗体と同じ特異性を生み出した。
【００７８】
（実施例２）
＜ラビットの抗Ｐ２Ｘ７抗体＞
ラビットにおいて、羊同様の２種類のアジュバント及び注入スケジュールを用い抗体を生成させた。唯一の違いは、３００μｇの複合体が注入されたことであった。生成された抗体は羊においてできたものと同じ特異性を有しており、対応するエピトープを確実に識別することができた。
【００７９】
（実施例３）
＜マウスの抗Ｐ２Ｘ７抗体＞
マウスにおいて、複合エピトープに対する抗体と、非機能性Ｐ２Ｘ７エピトープの複合していないエピトープに対する抗体が生成された（これは細孔を形成することのできない、すなわちアポプトーシスを起こすことができないリセプターを識別することが可能である）。
【００８０】
これらの実験においては、免疫促進製品ＣｐＧ  ＤＮＡ（Coley Pharmaceutical Group Inc.登録商標）を含んでいるQAIGEN Pty Ltdの製品である、ＩｍｍｕｎＥａｓｙＴＭが使用された。
【００８１】
５μｇのエピトープ又は複合エピトープが７０μＬのＰＢＳ及び３０μＬのＩｍｍｕｎＥａｓｙＴＭアジュバントで薄められた。マウスは皮下及び筋肉に複数箇所注入された。これが２週間後再度行われ、そしてさらに２週間後また繰り返し行われた。マウスは３度目の注入から８週間後に採血された。この方法によってマウスに生成された抗体は、異なるＰ２Ｘ７エピトープを識別することができ、そしてＰ２Ｘ７非機能性エピトープに対応する抗体もまた羊及びラビットにおいて生成された抗体と同じ結果を出した。
【００８２】
上記の実施例が示すように、Ｐ２Ｘ７リセプターの種々のエピトープに対する抗体は、異なる種及び異なるアジュバントを用いても一貫して生成することができる。特に、通常の生理的状態において細孔を形成することができず、アポプトーシスにおける機能を果たせない非機能性の状態にあるＰ２Ｘ７リセプターを識別するＰ２Ｘ７リセプターのエピトープに対する抗体も常套的に生成することができる。
【００８３】
（実施例４）
非機能性Ｐ２Ｘ７を検知する抗体は、Ｐ２Ｘ７がエチジウム又はルビジウムを搾取する能力によって表される公知の機能を有したＰ２Ｘ７（ヒト）を発現している細胞に抗体を結合させることによってテストされた。これらのＰ２Ｘ７タンパク質チャンネルは、塩基ペア１５１３において変異しているかもしれず、それならばチャンネルがアポプトーシスを引き起こす細孔を形成しない。悪性Ｂ白血球に発現されたこれら及び類似した非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターもフローシメトリー及び通常の免疫組織化学において抗体と結合する一方、正常な機能性Ｐ２Ｘ７（カルシウム、エチジウム及びルビジウムを大量に搾取することが可能）はこの抗体と結合することができなかった。なぜならば、機能性リセプターには非機能性リセプターを検知するために選ばれたエピトープがなかったからである。Ｐｒｏ２１０は非機能性リセプターにおいてシス（cis）コンフォメーションを採っており、抗体を生成するために使用した複合エピトープにおいて固定されたのは、特にこのコンフォメーションであった。機能性と見られるリセプターにおいては、Ｐｒｏ２１０はトランス（trans）コンフォメーションであった。これは、ＡＴＰ（アデノシントリフォスフェート）のＰ２Ｘ７リセプターへの結合による結果であった。ＡＴＰが結合すると、ＡＴＰ結合箇所に直接隣接する部分のＰｒｏ２１０はトランス（trans）立体配置を採った。
【００８４】
これは、Ｐｒｏ２１０をトランス（trans）立体配置に固定されたＡｌａ（アラニン）に変えさせるようなサイト対象の突然変異生成を用いて確認された。この変異したタンパク質は完全に機能性であると分かり、そして非機能性リセプターを検知するために生成された抗体と結合することができなかった。
【００８５】
（実施例５）
非機能性リセプターを検知する抗体の特異性についてのさらなる証拠は、Ｐ２Ｘ７を発現しているマクロファージをラベルした実験において得られた。マクロファージは全Ｐ２Ｘ７に共通な抗体を使用したら抗体に結合したが、非機能性Ｐ２Ｘ７に対応する抗体には、マウスハイブリドーマ細胞のように癌細胞に接するまで結合しなかった。マクロファージとハイブリドーマ細胞の接触が、マクロファージ上の非機能性Ｐ２Ｘ７の発現を引き起こし、これが全Ｐ２Ｘ７に共通な抗体同様、非機能性Ｐ２Ｘ７に対する抗体によって検知された。
【００８６】
悪性リンパ腫を持つ患者より抽出されたマクロファージ及びＢ−セル白血球がテストされ、これらの細胞全てが全Ｐ２Ｘ７に共通な抗体同様、非機能性Ｐ２Ｘ７に対する抗体に結合した。このことは、Ｐ２Ｘ７が検知された癌細胞全てにおいて非機能性であり、機能性Ｐ２Ｘ７によって形成されるアポプトーシスにつながる細孔は形成することができず、したがって癌細胞においてアポプトーシスを引き起こすことができないということを立証している。
【００８７】
前立腺、乳、膀胱、皮膚、胃、頸部及びその他の部位などヒトにおける上皮細胞癌全て、そして悪性リンパ腫、慢性リンパ球白血病及び脳腫瘍、またテストされた犬の乳及び前立腺、猫の皮膚、マウスのハイブリドーマ細胞及びマウスの繊維肉腫細胞を含む他の哺乳類における同様の腫瘍全てが同じ非機能性Ｐ２Ｘ７を発現する。ヒト、ラット、猫、犬及びマウスについて選択されたエピトープの配列の類似性は、上記のケース全てにおいて否定しがたい同定をするに充分足るものである。これは、これらの哺乳類動物における癌のメカニズムは同じで、全ての癌細胞は、活性化された時には通常細胞を死に追いやるアポプトーシスにつながる細孔を形成することができない非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターを発現しているということである。このようにして、アポプトーシスはスイッチがオフになった状態にあり、癌細胞は不死となる。
【００８８】
（実施例６）
感染したＢ−セルリンパ球などの癌細胞がＰ２Ｘ７機能によってアポプトーシスを引き起こすことができないということのさらなる証拠として、非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターを有している白血病患者のＢセルが培養物中で２時間の間５ｍＭのＡＴＰと共にインキュベートされた。その結果は、全ての非機能性リセプターが過剰量のＡＴＰによって開き、アポプトーシスを引き起こし、感染した細胞を死に至らせた。
【００８９】
（実施例７）
抗体が選択的に癌細胞に結合するということのさらなる証拠として、基底細胞癌（ＢＣＣ）を持つ患者の皮膚が、不活性なクリーム地中に懸濁された非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターに対する抗体によって処理され、病変部及びその周辺に塗布された（下記の実施例１０を参照）。局所的抗体を毎日塗布して一週間以内に、ＢＣＣの全ての症状は消え、正常な皮膚は（非機能性）リセプターを有していないため、周辺の皮膚は全く影響を受けなかった。
【００９０】
（診断への適用）
動物に特異的非機能性Ｐ２Ｘ７抗体を用い、そしてヒト及びその他の哺乳類における大半の癌の診断への本発明のプローブ及び方法の共通した適用の説明を、例を挙げて述べる。
【００９１】
猫及び犬などの哺乳類及びヒトの前立腺組織では、本発明の抗体を診断のために使用すると、癌又は前癌性の障害がなければラベルを得ることはない。しかし、本発明の診断方法では、Ｈ＆Ｅ染色によって検知できる腫瘍に伴う形態的変化が現われなくとも、腫瘍性の変化の最初の徴候を明らかにすることができる。
【００９２】
この時点では、上皮細胞核において現われる最初のリセプターユニットを染色する必要がある。これらは病気の後のステージには細胞質に移動し、前立腺全体に渡ってフィールド効果を及ぼし、したがって腫瘍が確実に存在すると判断するにもより少量の組織を生体検査すれば足りる。病気の後半には、染色は上皮頂上に一層制限される。
【００９３】
同様に、ヒト及び猫や犬などその他の哺乳類における乳、肺、結腸及び皮膚などの上記以外の上皮細胞癌も、これらの他の組織においてはもはや明確なフィールド効果はないので余裕を持って検知することができる。
【００９４】
上記と同じステージの進行が乳や膣などのこれらその他の組織において見られ、細胞質の染色に先立って細胞核の染色があり、正常な組織は染色されない。感染した乳組織の管や小葉は、正常な形態が癌はないと示す場合にすら、感染した各管システム内の局所的なフィールド効果のため、容易に検知される。隣接する感染していない管は染色されない。同様に、腫瘍を含む組織を直接排出する感染したリンパ腺も感染したリンパ球のフィールド効果によって腫瘍のサインを示す。したがって、センチネルリンパ節を（リンパ）節への細胞への癌の転移が全くなく検知することができる。
【００９５】
基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、形成異常班、悪性黒色腫などの皮膚癌は、非機能性リセプター、及び、表皮と真皮の深部との両方において正常な皮膚はラベルされない範囲をはるかに越えてケラチン生成細胞及びメラニン生成細胞中のチャンネル構成部（モノマー）の染色に対して陽性を示す。
【００９６】
ヒト前立腺（ＰＣ３）及び乳（ＭＣＦ７）及びげっ歯類のハイブリドーマなどのテストされた全ての哺乳類の癌細胞株は、細胞表面の非機能性リセプターが陽性であり、したがってこれらの癌細胞においてアポプトーシスは抑制されている。この診断の一般的な応用は、マウスハイブリドーマ細胞における同じラベルを通して、ヒト以外の他の動物の種類においてもこのリセプターの普遍的な性質を示していると伺えることである。ヒトの正常なＢ−セルリンパ球は機能性Ｐ２Ｘ７リセプターを細胞表面に発現していることを示しており、したがって必要なときにはアポプトーシスが起こるが、悪性リンパ腫を持つ患者のヒトＢ−セルリンパ球は非機能性Ｐ２Ｘ７リセプターを細胞表面に発現しており、したがってアポプトーシスが妨げられていることを示している。
【００９７】
（治療への適用）
癌細胞表面に発現された、この明らかに普遍的なＰ２Ｘ７非機能性型をターゲットとしてアポプトーシスを起こす試みは、ヒト及び他の哺乳類における大抵の癌を治療するために使用できる。実施例は以下に挙げる：
【００９８】
（実施例８）
マウスハイブリドーマ細胞がマクロファージをベースに、非機能性Ｐ２Ｘ７に対する結合力が強化された抗体が存在する条件と存在しない条件下で増殖された。４日間の間に、細胞数は、精製された通常のＩｇＧと一緒にインキュベートされた細胞は１×１０４から７×１０４に増え、非機能性Ｐ２Ｘ７抗体と一緒にインキュベートしたことによって細胞数は１．５×１０４に留まった。
【００９９】
（実施例９）
この実施例は、Ｐ２Ｘ７リセプターの非機能性エピトープに対応して生成された抗体がイン  ビボ（in vivo）で腫瘍形成を抑制することが可能であるということを示す。
【０１００】
上記に示すように、羊において生成された非機能性Ｐ２Ｘ７エピトープに対応する抗体は、このマウスハイブリドーマ細胞の表面の非機能性Ｐ２Ｘ７アポプトーシスリセプターを認識した。この抗体をハイブリドーマ細胞培養物に加えると細胞の増殖を遅らせた。マウスハイブリドーマ細胞は、用意された同系交配されたマウス系統に注入すると腫瘍を形成する。
【０１０１】
この実験では、３つのグループの各グループ１０匹のＢａｌｂ−ｃ雌マウスがそれぞれ以下の処置を受けた：
グループ１：１日目に、１０匹のマウスがそれぞれ１×１０６ハイブリドーマ細胞が存在する０．５ｍＬの細胞培養媒体中を腹膜組織に（ＩＰ）注入された。２日目、３日目には、それらのマウスは０．５ｍＬの細胞培養媒体を腹膜組織に注入された。
グループ２：１日目に、１０匹のマウスがそれぞれ１ｍｇの羊のＩｇＧを含み、１×１０６ハイブリドーマ細胞が存在する０．５ｍＬの細胞培養媒体中を腹膜組織に（ＩＰ）注入された。２日目、３日目には、それらのマウスは１ｍｇの精製された羊のＩｇＧを含んだ０．５ｍＬの細胞培養媒体を腹膜組織に注入された。
グループ３：１日目に、１０匹のマウスがそれぞれ１ｍｇの精製された羊の抗Ｐ２Ｘ７非機能性エピトープＩｇＧを含み、１×１０６ハイブリドーマ細胞が存在する０．５ｍＬの細胞培養媒体中を腹膜組織に（ＩＰ）注入された。２日目、３日目には、それらのマウスは１ｍｇの精製された羊の抗Ｐ２Ｘ７ＩｇＧを含んだ０．５ｍＬの細胞培養媒体を腹膜組織に注入された。
全てのグループのマウスは１１日目に殺され、腫瘍の有無について検査が行われた。腫瘍は摘出されそして測量された。
結果は以下の通りである：
【０１０２】
【表１】
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【０１０３】
変量分析は、グループ間に腫瘍の重量についての有意差を示した（確率Ｐ＜０．０１）。抗Ｐ２Ｘ７非機能性抗体の処置を受けた実験グループは、２つのコントロールグループに比べて有意に異なっていた（Ｐ＜０．０１）。つまり、Ｐ２Ｘ７非機能性エピトープに対する抗体を用いた処置は、実験動物において腫瘍の量を有意に低減したということである。
【０１０４】
（実施例１０）
特異的親和性を有する精製抗体（特異性を大いに向上させるため）が、３つのヒト基底細胞癌（「ＢＣＣ」）に７日間液状態で、又はジメチコンクリームベース中に浮かせるかのどちらかで投与された。処置後、ＢＣＣ病状の痕跡は全く見られず、コントロール用皮膚はターゲットとするタンパク質が存在しないため全く影響を受けなかった。
【０１０５】
（実施例１１）
再発した腫瘍及び形成異常班を含め、基底細胞癌（ＢＣＣ）及び扁平上皮細胞癌（ＳＣＣ）という形の皮膚損傷（両方とも一次腫瘍及び２次腫瘍）が、更なる試験において、精製された抗体と、精製又は通常のＩｇＧのどちらか一方とが、ジメチコンクリームベース又は浸透性クリームベース中で混合されたものを使用して処置された。非機能性リセプターは正常な皮膚において存在しないため、如何なる正常な皮膚においても副作用は検知されなかった。全てのタイプの癌が抗体の存在に反応し、一日２回の処置で３６時間から１週間の期間に消えた。その後１２ヶ月間再発は起きなかった。処置された腫瘍のサイズは、直径３ｍｍで周辺が盛り上がっていないものから、直径５ｃｍそして厚さ４ｍｍのものまで及んだ。全部で３４の病理学的に認定された腫瘍が一週間以内の処置期間内にうまく除去された。
【０１０６】
患者への処置は、一般にヒトモノクローナル抗体（ハーセプチン(herceptin)のような）の形成が関係しており、したがって内部の癌も局所的な処置で得られた効能同様に治療することが可能であると考えられる。副作用を避けるために、リンパ球などの細胞表面上に発現されている正常な機能性Ｐ２Ｘ７はすべてなんら作用を受けない必要がある。したがって、試みてはいるがアポプトーシスを始めることができない細胞表面に発現されたタンパク質にのみ、抗体が結合するべきである。つまり、ターゲットとなる細胞は全て、癌細胞を含め、プログラムされた細胞死によって自滅しようと試みている細胞のみである。これらの細胞のＰ２Ｘ７リセプターは、特に癌細胞は、非機能性であるか又はＡＴＰが欠如した状態にあるであろう。
【０１０７】
（アクティブ免疫化）
アクティブ免疫化もまた、治療目的のために使用することができる。この場合、ヒト又はその他の哺乳類が、細胞表面において非機能性（ＡＴＰ欠如）の形のリセプターにのみが採るコンフォメーションに類似したコンフォメーションに特定のエピトープ（１つ又は複数）に対して免疫化をされる必要がある。機能性リセプターに存在するエピトープの形の部分的な露出を含むコンフォメーションの柔軟性は避けるべきである。例えば、エピトープＧｌｙ２００−Ｃｙｓ２１６のシス（cis）立体配置は、適切な方法によって使用される前に固定されるべきである。この考え方に根拠があるという追加的な証拠として、抗体を生成するために使用されたマウス、ラビット及び羊を含む数多くの動物は免疫システムが損なわれていないという観察がある。これら多くの動物は１匹も如何なる腫瘍をも発達させることはなかった。
【０１０８】
下記の具体的な実施例がこれを説明する：
（実施例１２）
プロトコール：実験はマウスの腫瘍モデルをベースにして行われた。４０匹の生後１０週間目の雌の同系交配させたＢａｌｂ  Ｃ  マウスが使われ、２０匹ずつの２つのグループに分けられた。グループ１は実験用であり、グループ２はコントロール用グループである。
【０１０９】
一日目：グループ１の２０匹の実験用動物は、ＭＣＳクロスリンカーを介してジフテリアトキシンに接合された０．１ｍｇのペプチドエピトープ（ｈＰ２Ｘ７配列２００−２１６）を注入された。これは約０．０２ｍｇのペプチドエピトープを含んでいた。ペプチド接合体は、クイルＡ（QUILL A）／ＤＥＡＥ  デクストラン（Dextran）／モンタニド（Montanide）ＩＳＡ  ５０Ｖ  アジュバントミックスと乳化され、これを０．１ｍＬ皮下及び筋肉の複数箇所に注入された。
【０１１０】
コントロールグループであるグループ２の２０匹のマウスは、ペプチド接合体を含まないアジュバントミックスを０．１ｍＬ皮下及び筋肉の複数箇所に注入された。
【０１１１】
８日目：グループ１の２０匹のマウスは、ＭＣＳクロスリンカーを介してジフテリアトキシンに接合された０．０１ｍｇのペプチドエピトープ（ｈＰ２Ｘ７配列２００−２１６）を注入された（約０．００２ｍｇのペプチドエピトープを含む）。ペプチドはリン酸緩衝食塩水溶液中に含まれており、商業的に入手可能なＣｐＧ  ＤＮＡ  アジュバント  ＩｍｍｕｎＥａｓｙ（Qiagenより販売されている）と、プロトコールに沿って混合された。各マウスに、０．１ｍＬのペプチド接合体／アジュバント溶液が皮下及び筋肉の複数箇所に注入された。
【０１１２】
２０匹のグループ２のマウスに、リン酸緩衝食塩水／ＣｐＧ  ＤＮＡ  アジュバントミックスに相当するものが注入された。これが、各マウスに０．１ｍＬ皮下及び筋肉の複数箇所に注入された。
【０１１３】
２６日目：グループ１の２０匹のマウスは、ＭＣＳクロスリンカーを介してジフテリアトキシンに接合された０．０２５ｍｇのペプチドエピトープ（ｈＰ２Ｘ７配列２００−２１６）を注入された（約０．００５ｍｇのペプチドエピトープを含む）。これはリン酸緩衝食塩水溶液中に含まれており、そしてＱｉａｇｅｎ  ＣｐＧ  ＤＮＡ  アジュバントＩｍｍｕｎＥａｓｙと混合された。またしても、０．１ｍＬのこの混合物が各マウスに皮下及び筋肉の複数箇所に注入された。コントロールグループは、８日目と同様に注入された。
【０１１４】
２９日目：全てのマウスが首の後ろに位置する１箇所の皮下サイトに、０．１ｍＬの組織培養媒体に含まれた腫瘍細胞を注入された。使用された腫瘍細胞は、細胞株ＷＥＨＩ１６４と指定され、オーストラリアのメルボルンにあるWalter and Eliza Hall Instituteで作られたマウスハイブリドーマ細胞株であった。
【０１１５】
（腫瘍）細胞は、２種類の濃度で実験用及びコントロールグループのマウス両方ともに注入された。各グループは２つにさらに分けられた。実験用及びコントロールグループのそれぞれ１０匹のマウスが各マウスにつき１６０，０００個の細胞を注入され、各グループ１０匹のマウスは３２０，０００個の細胞を注入された。
【０１１６】
この細胞株の細胞は、事前に細胞表面の非機能性のＰ２Ｘ７エピトープの存在についてテストされていた。これは、羊によって生成された、リセプターの非機能性の形を特異的に認識する抗体を使用して行われた。
【０１１７】
３８日目：全てのマウスは殺され、非機能性Ｐ２Ｘ７エピトープに対する抗体の分析のため血が集められた。全てのマウスが測量され、腫瘍は摘出されて測量された。
【０１１８】
【表２】
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【０１１９】
この結果の変量分析は、コントロールと処置を受けた（実験用）グループとの間、及び低量投与と高量投与グループとの間の統計学的な有意差を示した（Ｐ＝０．０００３）。低量投与グループは、少ない量の腫瘍がマウスの免疫システムの対抗能力により少ない影響を与えたため、より大きな違いを示した。
【０１２０】
（ＡＴＰ類似体）
合成のアゴニストを使用して、Ｐ２Ｘ７細孔のＡＴＰ結合サイトに効率よく結合し、細孔を機能性の状態にし、それによってリセプターの機能を回復させ、同時にＰ２Ｘ７が細胞に与える成長に関するアドバンテージを規制するという効用は、以下の培養実験において示される。腫瘍性のＢ−セルがＣＬＬを持つ患者から集められ、正常な患者からの同等数の同類の細胞と混合され、４時間２．５ｍＭのＡＴＰで処理された。腫瘍細胞は１つも残らず、正常な細胞のみが残った。生体内（in vivo）では、ＡＴＰ又はより選択的なＰ２Ｘ７アゴニストであるベンゾール、ベンゾールＡＴＰの使用は適切ではない。したがって、ＡＴＰ又はＢｚＡＴＰより格段強い結合力でＰ２Ｘ７に選択的に結合できる選択的ＡＴＰ類似体を、感染した腫瘍細胞タイプの範囲内でアポプトーシスのプロセスを元に戻すために設計してもよい。
【０１２１】
（工業的適用性）
本発明はすべての側面においてヒト及び動物医療及び保健の分野へ適用でき、病気の早期及び正確な診断を可能にする潜在力があり、多くのケースにおいて従来技術よりはるかに侵襲性が低い又はトラウマにならないものである。
【図面の簡単な説明】
【０１２２】
【図１】ヒトＰ２Ｘ７リセプターの配列を示している。
【図１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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