(57)【要約】本発明の好適な態様は関節炎治療用組成物および方法に向けたものであり、これは１種以上のグリコサミノグリカンを１種以上のヒアルロニダーゼ阻害剤との組み合わせで含んで成る。より好適な態様において、本発明は、１種以上のグリコサミノグリカン（これには少なくともヒアルロン酸が含まれるであろう）を１種以上のヒアルロニダーゼ阻害剤（これは硫酸ヘパラン、硫酸デキストランおよび硫酸キシロースから成る群から選択される）との組み合わせで含んで成る関節炎治療用組成物および方法に向けたものである。更により好適な態様において、本発明は、リポソームの中に一緒に包み込まれているヒアルロン酸とヒアルロニダーゼ阻害剤を含んで成る関節炎治療用組成物および方法に関する。本組成物に含めるヒアルロン酸は関節に粘度補充特性を与えるであろう。前記ヒアルロニダーゼ阻害剤の機能は防腐剤として働くこととヒアルロン酸が関節の中であまりにも早期に劣化しないように保護する働きであろう。本組成物をこれがリポソームに包み込まれた状態で搬送すると、それはヒアルロン酸およびヒアルロニダーゼ阻害剤をゆっくり放出するデポットとして働くであろう。従って、本発明は、高分子量のＨＡを関節に安定かつ長期に渡って搬送する手段を提供するものである。ヒアルロン酸をヒアルロニダーゼ阻害剤と一緒にリポソームの中に一緒に包み込んだ時の治療効果は、ヒアルロン酸を単に注入した場合に比べて大きいであろう。好適な治療方法は、ヒアルロン酸とヒアルロニダーゼ阻害剤の混合物を場合によりリポソームの中に包み込んで関節内注入することによる方法であろう。このような治療はＨＡを単独で用いることを基にした現在利用されている治療よりも有効である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
関節炎の関節の治療で用いるに有用な医薬組成物であって、少なくとも１種のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と少なくとも１種の酵素阻害剤を受け入れられる投薬量で含んで成る医薬組成物。
【請求項２】
前記酵素阻害剤がヒアルロニダーゼ阻害剤である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記グリコサミノグリカンが硫酸コンドロイチン、硫酸ケラチン、ヘパリン、硫酸ヘパリンおよび硫酸デルマタンから成る群から選択される請求項１記載の組成物。
【請求項４】
前記ヒアルロニダーゼ阻害剤が硫酸キシロース、システアミン、アクリルアミド安息香酸の誘導体、（１，３，−ジオキソ−１−３−プロパンジイル）ジイミノビス安息香酸、アウロチオリンゴ酸ナトリウム、グリシリジン、フェニルブタゾン、オキシフェンブタゾン、ルテオリンまたはアピゲニンから成る群から選択される請求項２記載の組成物。
【請求項５】
前記グリコサミノグリカンがヒアルロン酸である請求項１記載の組成物。
【請求項６】
前記グリコサミノグリカンの分子量が５００ｋＤａより大きい請求項１記載の組成物。
【請求項７】
前記グリコサミノグリカンが少なくとも１種のリポソームの中に包み込まれている請求項１記載の組成物。
【請求項８】
前記ヒアルロニダーゼ阻害剤が少なくとも１種のリポソームの中に包み込まれている請求項２記載の組成物。
【請求項９】
前記グリコサミノグリカンとヒアルロニダーゼ阻害剤の両方が１種以上のリポソームの中に包み込まれている請求項２記載の組成物。
【請求項１０】
前記ヒアルロン酸の濃度が１ｍｇ／ｍｌより高い請求項４記載の組成物。
【請求項１１】
前記ヒアルロン酸の少なくとも１０体積％がリポソームの中に包み込まれている請求項２記載の組成物。
【請求項１２】
前記ヒアルロニダーゼ阻害剤の濃度がｘｘからｙｙμｇ／ｍｌの範囲である請求項１記載の組成物。
【請求項１３】
前記リポソームが２重層形成燐脂質から作られている請求項６記載の組成物。
【請求項１４】
前記燐脂質がジパルミトイルホスファチジルコリンである請求項１２記載の組成物。
【請求項１５】
前記燐脂質の濃度が１０ｍｇ／ｍｌより高い請求項６記載の組成物。
【請求項１６】
請求項１記載組成物の成分の一方または両方を包み込んでいるリポソーム系搬送媒体。
【請求項１７】
構造が球形または棒状でありそして直径が０．１μｍより大きい請求項１５記載のリポソーム系搬送媒体。
【請求項１８】
関節炎の関節を治療する方法であって、ａ）請求項１記載の組成物を調製しそしてｂ）前記組成物を薬学的に適切な投薬量でヒトに投与する段階を含んで成る方法。
【請求項１９】
前記組成物を投与する方法が前記関節炎の関節への関節内注入による方法である請求項１６記載の方法。
【請求項２０】
請求項１記載の組成物を製造する方法であって、前記グリコサミノグリカンと酵素阻害剤を混合物として調製することを含んで成る方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、幅広い意味で、関節炎の関節を治療する組成物および方法に関する。より具体的には、本発明は、少なくとも１種のグリコサミノグリカン（ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ）、好適にはヒアルロン酸をグリコサミノグリカンを分解させる少なくとも１種の酵素の作用を抑制する少なくとも１種の化合物との組み合わせで含んで成る組成物を関節内搬送（ｉｎｔｒａｔｉｃｕｌａｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ）することに関する。更により具体的には、本発明は、少なくとも１種のグリコサミノグリカン、好適にはヒアルロン酸を少なくとも１種のヒアルロニダーゼ阻害剤と一緒に［任意の態様としてそれらをリポソーム（ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ）の中に包み込んでもよい］含んで成る組成物を関節内搬送することに関する。より好適には、前記酵素阻害剤は、グリコサミノグリカンを分解させる酵素の阻害剤である。従って、本発明は、高分子量のグリコサミノグリカン、例えばヒアルロン酸などを関節に安定かつ長期に渡って搬送する手段を提供するものであり、これは関節炎の治療にとって重要である。
【０００２】
ヒアルロニダーゼ阻害剤はヒアルロニダーゼのみに特異的であろうが、我々は、より幅広い意味で、それにグリコサミノグリカンを分解させる酵素の他の阻害剤も包含させると言った記述を組み入れるべきであろう。
【背景技術】
【０００３】
グリコサミノグリカン類（ＧＡＧＳ）は繰り返す多糖単位で構成されている生重合体であり、これらは細胞表面に存在するばかりでなく動物の細胞内マトリックス（ｍａｔｒｉｘ）の中にも存在する。ＧＡＧＳは繰り返す二糖単位を含有する分枝していない長い多糖類である。その二糖単位は２種類の修飾糖、即ちＮ−アセチルガラクトサミンまたはＮ−アセチルグルコサミンのいずれかとウロン酸、例えばグルクロネートまたはイズロネートなどを含有する。ＧＡＧＳは高度に負に帯電している分子であり、それは長い形態を伴うことで、その溶液に高い粘度を与える。ＧＡＧＳは主に細胞表面または細胞内マトリックスの中に存在する。ＧＡＧＳは高い粘度を有することに加えて低い圧縮性（ｃｏｍｐｒｅｓｓｉｂｉｌｉｔｙ）を示すことから、その分子は関節の中の潤滑用流体として理想的である。それと同時に、それらは剛性を示すことから、細胞に構造的一体性を与えかつ細胞と細胞の間に通路を与え、それによって、細胞はその通路を通って移行することができる。
【０００４】
天然に存在する通常のＧＡＧＳには、これらに限定するものでないが、硫酸コンドロイチン、硫酸ケラタン、ヘパリン、硫酸ヘパラン、硫酸デルマタンおよびヒアルロニデート（通常はヒアルロン酸、即ちＨＡと呼ばれる）が含まれる。
【０００５】
ヒアルロン酸（ＨＡ）は、Ｎ−アセチルグルコサミンとグルクロン酸分子の高分子量多糖であり、これはあらゆる動物のいろいろな組織およびある種の細菌種の中に天然に存在する。ＨＡは硫酸塩を全く含有せずかつプロテオグリカンとして蛋白質と共有結合していないことが確認されている点でＧＡＧＳの中でもユニークである。ＨＡ重合体は非常に大きく、それの分子量は約５０，０００−１０，０００，０００Ｄａであり、多量の水に取ってかわる（ｄｉｓｐｌａｃｅ）能力を有する。ヒアルロン酸の化学構造は下記である：
【０００６】
【化１】
2005521629.tif 000002
【０００７】
それは結合組織、例えば滑膜および滑液などの中に最も高い濃度で見られる。ヒアルロン酸の分子質量は５０，０００−１０，０００，０００Ｄａに及んで多様であり得、高粘弾性溶液を生じる。これは繊維芽細胞および他の細胞の血漿膜の中で糖が重合体の還元末端に付加することで合成されるが、非還元末端は細胞周囲の空間の中に突き出ている。この多糖はリンパによって局所的に異化作用を受けるか或はリンパ節または一般的循環に運ばれ、そこから肝臓の洞様毛細血管内皮細胞によって除去される。結合組織マトリックス成分が示す全ターンオーバー速度は驚くべきほど速い（ｔ１／２＝０．５から数日）。
【０００８】
ＨＡの高純度サンプルを調製する方法は本技術分野で良く知られている。例えば、ヒアルロン酸の高純度画分を調製する方法が特許文献１、２、３に開示されており、そのような画分は非炎症性であると主張されている。
【０００９】
ヒアルロン酸は関節の恒常性にとって重要であり、その理由の一部は、それが滑液に流動的特性（粘度および弾性）を与えることにある。それは関節の滑性、即ち関節表面に渡る緩衝液負荷伝達（ｂｕｆｆｅｒｓ  ｌｏａｄ  ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ）に貢献しており、ＨＡの補充源を関節組織に与え、かつ滑液に抗炎症特性を与える。変形性関節症では滑液の中に存在するＨＡの分子量および濃度が低くなり、それによって滑液が有効に機能する能力が邪魔される。この上に示した観察によって、膝の変形性関節症を治療する目的でヒアルロン酸を関節内に注入することによる粘度補充（ｖｉｓｃｏｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ）の進展がもたらされた。このような治療は、病的変形性関節症滑液を除去してＨＡが基になった産物に置き換えることで、ＨＡの分子量および濃度を有益な治療効果を与え得る正常なレベルにまで回復させることを伴う。ヒアルロン酸を関節の状態の治療で用いることを記述している科学出版物は良く知られており、それらの技術例は非特許文献１、３、２、４、５、７、８、９、１０、６、１１、１３、１４、１５、１６、１８、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８および２９である。関節炎の関節を治療するためのヒアルロン酸調剤が特許文献に記述されている。それの例は特許文献４であり、それは特許文献５に記述されている。
【００１０】
病気になった関節への関節内注入で処方される治療剤としてＨＡの調剤を商業的にいくつか入手することができ、例えばＨｙａｌｇａｎ（Ｆｉｄｉａ  Ｓ．ｐ．Ａ）およびＳｙｎｖｉｓｃ（Ｇｅｎｚｙｍｅ  Ｂｉｏｓｕｒｇｅｒｙ）が市販されている。そのような治療剤は若くて健康な関節に見られるＨＡに化学的および物理的により近い代表例であるＨＡを滑液に供給することで痛みを有意に軽減することが確認されている［１−５］。
【００１１】
そのような治療剤の使用は１９７４年の如き早い時期に報告［１］されたが、作用機構の理解は貧しいままである。ＨＡが関節の中で果たすいくつかの役割、例えば粘度補充および滑性［６］、軟骨表面の保護［６］、そして痛みを刺激する媒介物、例えばＩＬ−１αなどの抑制［７−９］などを支持する証拠が現われたが、また、酵素による分解およびリンパによる除去過程を通してＨＡ分子が経時的に関節から除去されることも公知である［１０−１２］。従って、そのような治療剤のより長い期間に渡る効果には制限がある。ＨＡが関節の中に滞留する時間を長くする試みは、主として、ＨＡ分子を架橋で修飾することに焦点が当てられており［１１］（特許文献６、７）、それによってＨＡの除去は遅くなるが、そのような治療によって長期の追加的利点が引き出されることを示す証拠はほとんどなく、分子構造を変えそしてある場合には化学架橋剤を存在させることに関連した問題は残存したままである。
【００１２】
ヒアルロン酸を用いた治療を行う現在の養生法では、典型的に、それを注射で週に３回から５回投与する必要がある。注射を繰り返し行うことで起こり得る１つの副作用は、関節が感染または炎症を起こす危険性であり得る。
【００１３】
本発明は関節炎の関節を治療する組成物および方法に関し、これをグリコサミノグリカン、好適にはヒアルロン酸とＧＡＧを分解させる酵素の阻害剤の組み合わせで構成させる。酵素阻害剤の一例は長期治療効果を向上させるであろうヒアルロニダーゼ阻害剤であろう。この上に記述した如きヒアルロン酸の機能に加えて、そのような酵素阻害剤、例えばヒアルロニダーゼ阻害剤などは、防腐剤として働きかつヒアルロン酸が関節の中であまりにも早期に劣化しないように保護する。従って、本発明は、高分子量のＨＡを関節に安定かつ長期に渡って搬送する手段を提供する。酵素阻害剤はＧＡＧの分解の一因になる酵素の劣化作用を抑制するいずれかの化合物単独または他の化合物との組み合わせであるとして定義する。
【００１４】
ヒアルロニダーゼ阻害剤にはヒアルロン酸を劣化させる酵素であるヒアルロニダーゼがヒアルロン酸を劣化させないようにする能力を有する如何なる種類の化合物も含まれるとして定義する。ヒアルロニダーゼにはヒアルロン酸のグルコシド結合を触媒作用で開裂させる酵素が含まれるとして定義する。ヒアルロニダーゼ阻害剤である硫化糖（ｓｕｌｆａｔｅｄ  ｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ）の例は硫酸ヘパラン、硫酸デキストランおよび硫酸キシロースである。
【００１５】
システアミン（ｃｙｓｔｅａｍｉｎｅ）が睾丸のヒアルロニダーゼを完全に阻害することが確認された別の化合物である（特許文献８）。アクリルアミド安息香酸誘導体および（１，３，−ジオキソ−１，３−プロパンジイル）ジイミノビス安息香酸誘導体がヒアルロニダーゼ阻害活性を示す他の種類の化合物である（特許文献９、１０）。加うるに、数種の作用剤、例えばアウロチオリンゴ酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ａｕｒｏｔｈｉｏｍａｌａｔｅ）（Ｍｙｏｃｒｙｓｉｎ）、抗炎症剤、例えばグリシリジン（ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ）（非特許文献１７）、フェニルブタゾン（ｐｈｅｎｙｌｂｕｔａｚｏｎｅ）およびオキシフェンブタゾン（ｏｘｙｐｈｅｎｂｕｔａｚｏｎｅ）など、またはフラボノイド類であるルテオリン（ｒｕｔｅｏｌｉｎ）またはアピゲニン（ａｐｉｇｅｎｉｎ）のような植物天然産物なども効力のあるヒアルロニダーゼ拮抗剤であることが分かっている。慢性関節リュウーマチ（ＲＡ）患者の関節内にプロテアーゼ阻害剤を投与した時の効力を評価する試験で、薬剤を関節内投与する個々のアプローチを用いるとグルココルチコステロイドホルモンの投与量を２倍少なくしても繰り返して生じる関節の穿孔の数が１８．８％減少することが示された（非特許文献２１）。
【００１６】
関節の滑液にはまた脂質も存在し、特定の燐脂質［特にジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）］が軟骨表面の滑性に関与すると推定されており［１３−１５］、それを膝の関節に注入すると変形性関節炎の痛みが和らぐことが示された［１６］。
【００１７】
リポソームを用いてＨＡおよびヒアルロニダーゼ阻害剤を搬送することができ、これは生物または合成が源の燐脂質を含有する２重層膜で構成されている形状が通常は球形の構造物であり、これは非特許文献１２に初めて記述された。リポソームは燐脂質または脂質が水と接触した時に自然に生じ、そしてリポソームは生物学的膜の性質を有することから、それらを実験室で設計製作してそれらにいろいろな生物学的および治療用関連複合分子（蛋白質を包含）を含有させることができる。リポソームの燐脂質２重層膜によって内部の水性中心部が外側から分離されておりかつそれらは捕捉している材料を保護する。リポソームの調製は比較的容易でありかつそれらはいろいろな複合分子に相溶することから、それらは癌および菌・カビ病の治療で用いるに有用な多様な治療用および診断用作用剤（アンフォテリシンＢおよびドキソルビシンを包含）を搬送する時の担体として幅広く用いられている。リポソームの化学および調製方策に関する出版物および論評が多数出版されており、それらは引用することによって本明細書に組み入れられる（非特許文献１９、２０、特許文献１１、１２、１３、１４）。
【００１８】
脂質とＨＡの組み合わせは文献にいろいろ示されている。ＨＡと燐脂質の組み合わせをリューマチ関節の治療で用いることが特許文献１５に示されている。ＨＡとＤＰＰＣ（これらは両方とも関節に滑性を与える）を組み合わせると向上した滑性が軟骨表面に与えられ得ると考えられた。ＤＰＰＣリポソームとＨＡの混合物は手術後の外科的接着部（ｓｕｒｇｉｃａｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎｓ）を除去して減少させることが示されている。そのようなケースでは両方とも脂質成分とＨＡ成分が混合物の状態で組み合わされており、従って、ＨＡ分子の滞留時間に対する効果は全く期待されないであろう。
【００１９】
脂質とＨＡが化学的に相互作用すると六角形の構造物が生じる［１８、１９］か或はこの２つの材料の間に酸アミド結合が生じることが記述された（特許文献１６）。カテキンは変形性関節炎の治療で用いるに有益であることが特許文献１７に示されており、それをＨＡと組み合わせることが提案された。そのような治療でリポソーム系搬送媒体を用いることが述べられてはいるが、しかしながら、それを達成する方法は明瞭ではない、と言うのは、リポソームの直径は一般に２００ｎｍ未満であるがＨＡ分子の直径は典型的に約２００−３００ｎｍであるからである［６］。この上に示し従来技術のいずれもＨＡが関節の中に滞留する時間を長くして長期に渡る有益な薬理学的効果を得る必要性を満足出来る様式では取り扱っていない。本発明はそのような必要性を取り扱うものである。
【特許文献１】ＥＰ  ０２３９３３５
【特許文献２】米国特許第４８７９３７５号
【特許文献３】米国特許第４１４１９７３号
【特許文献４】米国特許第５９１４３２２号
【特許文献５】米国特許第４８０１６１９号
【特許文献６】米国特許第５８２７９３７号
【特許文献７】ＷＯ９９／１０３８５
【特許文献８】米国特許第５７２５８７０号
【特許文献９】米国特許第５００６５４８号
【特許文献１０】米国特許第４７５５５０６号
【特許文献１１】ＷＯ０１０３６６９
【特許文献１２】ＷＯ０１００２４７
【特許文献１３】ＷＯ００７６４７６
【特許文献１４】ＷＯ  ８５００５１５
【特許文献１５】ＷＯ−Ａ−９１／１２０２６
【特許文献１６】Ａｏｋｉ他、米国特許第５，４７０，５７８号（Ａｎｔｉｒｈｅｕｍａｔｉｃ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）
【特許文献１７】Ｂｕｔｔｌｅ他、ＷＯ  ００／７４６６２  Ａ２（Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）
【非特許文献１】Ａｄａｍｓ，Ｍ．Ｅ．、「Ａｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ，Ｈｙｌａｎ，ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ」、Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２０（Ｓｕｐｐｌ．３９）：１６−１８、１９９３
【非特許文献２】Ａｄａｍｓ，Ｍ．Ｅ．、Ａｔｋｉｎｓｏｎ，Ｍ．Ｈ．、Ｌｕｓｓｉｅｒ，Ａ．、Ｓｃｈｕｌｚ，Ｊ１、Ｓｉｍｉｎｏｖｉｔｃｈ，Ｋ．Ａ．、Ｗａｄｅ，Ｊ．Ｐ．およびＺｕｒｎｍｅｒ，Ｍ．（１９９５）、「Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｖｉｓｃｏｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｈｙｌａｎ  Ｇ−Ｆ  ２０（Ｓｙｎｖｉｓｃ（ｇ）  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｋｎｅｅ」、Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｃａｒｔ．３：２１３−２２６、１９９５
【非特許文献３】Ａｄａｍｓ，Ｍ．Ｅ．「Ｖｉｓｃｏｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ａｓ  ａｒｔｉｃｕｌａｒ  ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  Ｗｅｎｎｅｒ−Ｇｒｅｎ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ｈｅｌｄ  ｉｎ  ｈｏｎｏｒ  ｏｆ  Ｅｎｄｒｅ  Ａ．Ｂａｌａｚｓ、１９９６年９月１８−２１日、ストックホルム、スエーデン）（Ｌａｕｒｅｎｔ  Ｔ．編集、Ｐｏｒｔｌａｎｄ  Ｐｒｅｓｓ、ロンドン）、２４３−２５３
【非特許文献４】Ｂａｋｅｒ，Ｄ．Ｅ．「Ｐｈａｒｍａｃｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｒｅｖｉｅｗ」、Ｔｈｅ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ、１９９７年１２月
【非特許文献５】Ｂａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．「Ｖｉｓｃｏｅｌａｓｔｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｌｕｂｒｉｃａｔｉｏｎ」、Ｕｎｉｖ．Ｍｉｃｈｉｇａｎ．Ｍｅｄ．Ｃｔｒ．Ｊｏｕｒｎａｌ、２５５−２５９、１９６８
【非特許文献６】Ｂａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．およびＧｉｂｂｓ，Ｄ．Ａ．「Ｔｈｅ  ｒｈｅｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ」、Ｃｈｅｍｉｃｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｍａｔｒｉｘ（Ｂａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．編集）、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、ロンドンおよびニューヨーク、１２４１−１２５４、１９７０
【非特許文献７】Ｂａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．「Ｔｈｅ  ｐｈｙｓｉｃａｌ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｓｙｎｏｖｉａｌ  ｆｌｕｉｄ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｓｐｅｃｉａｌ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ」、Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｋｎｅｅ、第２版（Ｈｅｆｌｅｔ，Ａ編集）、Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ、フィラデルフィア、６１−７４、１９８２
【非特許文献８】Ｂａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．およびＤｅｎｌｉｎｇｅｒ，Ｊ．Ｌ．「Ｓｏｄｉｕｍ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｔｅ  ａｎｄ  ｊｏｉｎｔ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ」、Ｊ．Ｅｑｕｉｎｅ  Ｖｅｔ．Ｓｃｉ．５：２１７−２２８、１９８５
【非特許文献９】Ｂａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．およびＤｅｎｌｉｎｇｅｒ，Ｊ．Ｌ．「Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｕｓｅｓ  ｏｆ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ」、ｔｈｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ（Ｃｉｂａ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ＃１４３）（Ｅｖｅｒｅｄ，Ｄ．およびＷｈｅｌａｎ，Ｊ．編集）、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｃｈｉｃｈｅｓｔｅｒおよびニューヨーク、２６５−２８０、１９８９
【非特許文献１０】Ｂａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．およびＤｅｎｌｉｎｇｅｒ，Ｊ．Ｌ．「Ｖｉｓｃｏｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ：Ａ  ｎｅｗ  ｃｏｎｃｅｐｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ」、Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２０（Ｓｕｐｐｌ．３９）：３−９、１９９３
【非特許文献１１】Ｂａｎｄ，Ｐ．Ｇｏｌｄｍａｎ，Ａ．、Ｂａｒｂｏｎｅ，Ａ．、Ｒｅｉｎｅｒ，Ｋ．およびＢａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．「Ｉｎｔｒａ−ａｒｔｉｃｕｌａｒ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｓｉｄｅｎｃｅ  ｔｉｍｅ  ｏｆ  Ｈｙｌａｎ  ｐｏｌｙｍｅｒｓ」、Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、Ｓｐｒｉｎｇ  Ｍｅｅｔｉｎｇ、１９９５年４月１７−２１日、サンフランシスコ、ＣＡ  ４３３（ａｂｓｔｒａｃｔ）
【非特許文献１２】Ｂａｎｇｈａｍ，Ａ．Ｄ．、Ｓｔａｎｄｉｓｈ，Ｍ．Ｍ．およびＷａｔｋｉｎｓ，Ｊ．Ｃ．１９６５「Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｕｎｉｖａｌｅｎｔ  Ｉｏｎｓ  ａｃｒｏｓｓ  ｔｈｅ  ｌａｍｅｌｌａｅ  ｏｆ  ｓｗｏｌｌｅｎ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ」、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１３：２３８−２５２
【非特許文献１３】Ｄｅｎｌｉｎｇｅｒ，Ｊ．Ｌ．「Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｏｆ  ｓｏｄｉｕｍ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｔｅ  ｉｎ  ａｒｔｉｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｏｃｕｌａｒ  ｔｉｓｓｕｅｓ」、博士論文、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ６  ｄｅｓ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｅｔ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｄｅ  Ｌｉｌｌｅ，Ｌｉｌｌｅ，Ｆｒａｎｃｅ、１９８２
【非特許文献１４】Ｄｅｎｌｉｎｇｅｒ，Ｊ．Ｌ．「Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｓ  ｖｉｓｃｏｅｌａｓｔｉｃｓ  ｉｎ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ」、Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ  ａｎｄ  ｉｔｓ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｗｅｎｅｒ−Ｇｒｅｎ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ｈｅｌｄ  ｉｎ  ｈｏｎｏｒ  ｏｆ  Ｅｎｄｒｅ  Ａ．Ｂａｌａｚｓ、１９９６年９月１８−２１日、ストックホルム、スエーデン）（Ｌａｕｒｅｎｔ，Ｔ．編集）、Ｐｏｒｔｌａｎｄ  Ｐｒｅｓｓ、ロンドン、２３５−２４２
【非特許文献１５】Ｄｉｃｋｓｏｎ，Ｄ．Ｊ．およびＨｏｓｌｅ，Ｇ．「Ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ，ｄｏｕｂｌｅ−ｃｏｎｔｒｏｌ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｖｉｓｃｏｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｈｙｌａｎ  Ｇ−Ｆ  ２０（Ｓｙｎｖｉｓｃ（Ｒ））ａｇａｉｎｓｔ  ｄｉｃｏｌｆｅｎａｃ  ａｎｄ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｉｎ  ｋｎｅｅ  ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ」、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ、６２ｄ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｍｅｅｔｉｎｇ、１９９８年１１月８−１２日、サンディエゴ、ＣＡ、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．４１（９）、Ｓ  １９７（ａｂｓｔｒａｃｔ）
【非特許文献１６】Ｅｓｔｅｙ，Ｄ．「Ｖｉｓｃｏｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ−Ａ  ｎｅｗ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ」、Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ  Ａｓｓｉｓｔａｎｔ、１８−２３、１９９８
【非特許文献１７】Ｆｕｒｕｙａ，Ｔ．、Ｙａｍａｇａｔａ，Ｓ．、Ｓｈｉｍｏｙａｍａ，Ｙ、Ｆｕｊｉｈａｒａ，Ｍ．、Ｍｏｒｉｓｈｉｍａ，Ｎ．、Ｏｈｔｓｕｋｉ，Ｋ．「Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ  ａｓ  ａｎ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｆｏｒ  ｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅｓ  ｆｒｏｍ  ｂｏｖｉｎｅ  ｔｅｓｔｉｓ」、Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ＆  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ２０、９、９７３−９７７、１９９７
【非特許文献１８】Ｇｉｂｂｓ，Ｄ．Ａ．、Ｍｅｒｒｉｌｌ，Ｅ．Ｗ．、Ｓｍｉｔｈ，Ｋ．Ａ．およびＢａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．「Ｔｈｅ  ｔｈｅｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ」、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，６：７７７−７９１、１９６８
【非特許文献１９】Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，Ｇ．１９８８「ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ａｓ  ｄｒｕｇ  ｃａｒｒｉｅｒｓ：Ｒｅｃｅｎｔ  ｔｒｅｎｄｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｒｅｓｓ」、Ｃｃｈｉｃｈｅｓｔｅｒ，ＵＫ：Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ
【非特許文献２０】Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，Ｇ．１９９２「Ｌｉｐｓｏｍａ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」、１−３巻、第２版、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、Ｆｌａ．ＵＳＡ：ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．
【非特許文献２１】Ｍａｔｖｅｉｋｏｖ，Ｇ．Ｐ．、Ｓｏｒｏｋａ，Ｎ．Ｆ．、Ｍａｋｓｉｍｏｖｉｃｈ，Ａ．Ｂ．「Ｔｈｅ  ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ａｎ  ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｉｎｔｒａ−ａｒｔｉｃｕｌａｒ  ｄｒｕｇ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｐａｔｉｎｅｔｓ」、Ｔｅｒ  Ａｒｋｈ  ６１、１２、１２１−４、１９８９
【非特許文献２２】Ｍｏｒｅｌａｎｄ，Ｌ．Ｗ．、Ａｒｎｏｌｄ，Ｗ．Ｊ．、Ｓａｗａｙ，Ａ．、Ｓａｖｏｒｙ，Ｃ．およびＳｉｋｅｓ，Ｄ．「Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  ｓａｆｅｔｙ  ｏｆ  ｉｎｔｒａ−ａｒｔｉｃｕｌａｒ  Ｈｙｌａｎ  Ｇ−Ｆ  ２０（Ｓｙｎｖｉｓｃ（Ｅ），ａ  ｖｉｓｃｏｅｌａｓｔｉｃ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ  ｏｆ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ，ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｋｎｅｅ」、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ、５７  Ｉｈ  Ａｎｎｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｍｅｅｔｉｎｇ、サンアントニオ、ＴＸ、１９９３年１１月７−１１日（ａｂｓｔｒａｃｔ）
【非特許文献２３】Ｐｅｙｒｏｎ，Ｊ．Ｇ．「Ａ  ｎｅｗ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ：ｖｉｓｃｏｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ」、Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｃａｒｔ．１：８５−８７、１９９３ａ
【非特許文献２４】Ｐｅｙｒｏｎ，Ｊ．Ｇ．「Ｉｎｔｒａ−ａｒｔｉｃｕｌａｒ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ：ｓｔａｔｅ−ｏｆ−ｔｈｅ−ａｒｔ  ｒｅｖｉｅｗ．」、Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２０（Ｓｕｐｐｌ．３９）：１０−１５、１９９３ｂ
【非特許文献２５】Ｐｅｙｒｏｎ，Ｊ．Ｇ．「Ｖｉｓｃｏｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｋｎｅｅ  ｗｉｔｈ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ  ａｎｄ  Ｈｙｌａｎｓ：ｒａｔｉｏｎａｌｅ  ａｎｄ  ｓｔａｔｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｒｔ：、Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ（Ｔａｎａｋａ，ＳおよびＨａｍａｎｉｓｈｉ，Ｃ．編集）、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、東京、２１３−２３６、１９９９
【非特許文献２６】Ｒｙｄｅｌｌ，Ｎ．Ｗ．、Ｂｕｔｌｅｒ．Ｊ．およびＢａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．「Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｉｎ  ｓｙｎｏｖｉａｌ  ｆｌｕｉｄ．ＶＩ．Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｉｎｔｒａ−ａｒｔｉｃｕｌａｒ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ｏｆ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｉｎ  ｔｒａｃｋ  ｈｏｒｓｅｓ」、Ａｃｔａ．Ｖｅｔ．Ｓｃａｎｄ．１１：１３９−１５５、１９７０
【非特許文献２７】Ｓｃａｌｅ，Ｄ．、Ｗｏｂｉｇ，Ｍ．およびＷｏｌｐｅｒｔ，Ｗ．「Ｖｉｓｃｏ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｃ  ｋｎｅｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｈｙｌａｎ：ａ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｓｃｈｅｄｕｌｅ  ｓｔｕｄｙ」、Ｃｕｒｒ．Ｔｈｅｒａｐ．Ｒｅｓ．５５：２２０−２３２、１９９４
【非特許文献２８】Ｗｅｉｓｓ，Ｃ．、Ｂａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．、Ｓｔ  Ｏｎｇｅ，Ｒ．およびＤｅｎｌｉｎｇｅｒ，Ｊ．Ｌ．「Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｔｒａ−  ａｒｔｉｃｕｌａｒ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨｅａｌｏｎＲＲ（ｓｏｄｉｕｍ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｔｅ）ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｋｎｅｅｓ」、Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ、１１巻（Ｔａｌｂｏｔｔ，Ｊ．Ｈ．編集）、ＧｒｕｎｅおよびＳｔｒａｔｔｏｎ、ニューヨーク、１４３１−１４４、１９８１
【非特許文献２９】Ｗｅｉｓｓ，Ｃ．およびＢａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．「Ａｒｔｈｒｏｓｃｏｐｉｃ  ｖｉｓｃｏｓｕｒｇｅｒｙ」、Ａｒｔｈｒｏｓｃｏｐｙ  ３：１３８−１３９、１９８７
【００２０】
（発明の要約）
本発明の好適な態様は関節炎治療用組成物および方法に向けたものであり、これは、１種以上のグリコサミノグリカンを１種以上の酵素阻害剤、例えばヒアルロニダーゼ阻害剤などを一緒に含んで成る。
【００２１】
より好適な態様において、本発明は、１種以上のグリコサミノグリカン（これには少なくともヒアルロン酸が含まれるであろう）を１種以上の酵素阻害剤、例えばヒアルロニダーゼ阻害剤（これは硫酸ヘパラン、硫酸デキストランおよび硫酸キシロースから成る群から選択可能である）などと一緒に含んで成る関節炎治療用組成物および方法に向けたものである。
【００２２】
更により好適な態様において、本発明は、リポソームの中に一緒に包み込まれているヒアルロン酸と酵素阻害剤、例えばヒアルロニダーゼ阻害剤などを含んで成る関節炎治療用組成物および方法に向けたものである。本組成物に含めるヒアルロン酸は関節に粘度補充特性（ｖｉｓｃｏｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ）を与えるであろう。前記ヒアルロニダーゼ阻害剤の機能は防腐剤として働くこととヒアルロン酸が関節の中であまりにも早期に劣化しないように保護する働きであろう。本組成物をリポソームに包み込んだ（ｌｉｐｏｓｏｍａｌ  ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ）状態で搬送すると、それはヒアルロン酸およびヒアルロニダーゼ阻害剤をゆっくり放出するデポット（ｄｅｐｏｔ）として働くであろう。従って、本発明は、高分子量のＨＡを関節に安定かつ長期に渡って搬送する手段を提供するものである。ヒアルロン酸をヒアルロニダーゼ阻害剤と一緒にリポソームの中に包み込むと、ヒアルロン酸を単に注入した場合に比べて治療効果がより高くなるであろう。
【００２３】
好適な治療方法は、ヒアルロン酸とヒアルロニダーゼ阻害剤の混合物を場合によりリポソームの中に包み込んで関節内注入することによる方法である。このような治療はＨＡを単独で用いることを基にした現在利用されている治療よりも有効であると期待する。従って、１つの治療任意選択はＨＡに関する現在の実施で用いられている如き関節内注入を伴うであろう。しかしながら、好適な搬送方法は、病気になった関節への関節内注入を１回行うことで関節内注入を複数回行うことに関連した副作用の危険を低くすることによる方法であろう。
（発明の詳細な説明）
本分野の技術者は本明細書に示す説明を基にして本発明をこれの最大度合にまで利用することができると考えている。以下の具体的態様は単なる説明として解釈されるべきであり、本開示の残りを決して制限するものでない。
【００２４】
特に明記しない限り、本明細書で用いる技術的および化学的用語は全部本発明が属する技術分野の通常の技術者が通常に理解する如き意味と同じ意味を有する。また、本出願全体に渡って挙げる出版物、特許出願、特許および他の文献は全部引用することによって明らかに本明細書に組み入れられる。
【００２５】
グリコサミノグリカン類（ＧＡＧＳ）は繰り返す多糖単位で構成されている生重合体であると定義し、これらは細胞表面に存在するばかりでなく動物の細胞内マトリックスの中にも存在する。ＧＡＧＳは繰り返す二糖単位を含有する分枝していない長い多糖類である。その二糖単位は２種類の修飾糖、即ちＮ−アセチルガラクトサミンまたはＮ−アセチルグルコサミンのいずれかとウロン酸、例えばグルクロネートまたはイズロネートなどを含有する。ＧＡＧＳは高度に負に帯電している分子であり、それは長い形態を伴うことで、その溶液に高い粘度を与える。ＧＡＧＳは主に細胞表面または細胞内マトリックスの中に存在する。ＧＡＧＳは高い粘度を有することに加えて低い圧縮性を示すことから、その分子は関節の中の潤滑用流体として理想的である。それと同時に、それらは剛性を示すことから、細胞に構造的一体性を与えかつ細胞と細胞の間に通路を与え、それによって、細胞はその通路を通って移行することができる。
【００２６】
ヒアルロン酸（ＨＡ）は、Ｎ−アセチルグルコサミンとグルクロン酸分子の高分子量多糖として定義され、これはあらゆる動物のいろいろな組織およびある種の細菌種の中に天然に存在する。本出願の目的で、ＨＡには如何なる誘導体も含まれ、例えばヒアルロナンおよびヒアルロン酸自身（Ｈ＋イオンがＣＯＯ−基に結合している）などが含まれる。かつ、ヒアルロン酸の塩（この場合には別の陽イオンがＨ＋イオンに置き換わっており、例えばＮａ＋はヒアルロン酸ナトリウムを形成する）。また、物理的または化学的に架橋しているヒアルロン酸および誘導体も前記定義の中に含まれる。ＨＡは、硫酸塩を全く含有せずかつプロテオグリカンとして蛋白質と共有結合していないことが確認されている点でＧＡＧＳの中でもユニークである。ＨＡ重合体は非常に大きく、それの分子量は約１００，０００−１０，０００，０００であり、多量の水を押しのける能力を有する。本発明の目的で、最も好適な態様には架橋していないヒアルロン酸（これの分子量は１−１０Ｍｄａである）を含める。
【００２７】
酵素阻害剤はグリコサミノグリカンを分解させる酵素の作用を抑制する化合物のいずれかであるとして定義する。
【００２８】
本調剤で用いるヒアルロニダーゼ（ＨＡｓｅ）阻害剤の最適な濃度は、この阻害剤化合物の化学的性質に依存するであろう。ペプチドではない阻害剤の場合には１０から０．０１ミクロＭの幅広い範囲の濃度を用いることができる。フェニルブタゾンの場合には、これを体重１ｋｇ当たり４．４ｍｇの投薬量で用いた。グリシリジンは１−６ミクロＭの範囲の濃度で使用可能である、と言うのは、それを３ミクロＭで用いた時にインビトロで５０％の阻害が観察されたからである。システアミンのヒアルロニダーゼ阻害活性は１５０ミクロｇ／ｍｌのＩＣ５０値である。フラボノイドであるアピゲニンは５０−２００ミクロＭの濃度範囲に渡ってヒアルロニダーゼを阻害した。ヒアルロニダーゼ阻害剤は一般にインビトロ培養物中ミクロＭの範囲で効果を示す。本分野の技術者はそのようなインビトロ範囲をインビボ調製用量に変換することができるであろう。
【００２９】
ヒアルロニダーゼ阻害剤はヒアルロン酸を劣化させる酵素であるヒアルロニダーゼを阻害する能力を有するいずれかの種類の化合物であると定義する。
【００３０】
ヒアルロニダーゼにはヒアルロン酸のグルコシド結合を触媒作用で開裂させる酵素が含まれると定義する。
【００３１】
リポソームは、その壁が燐脂質の層であり、水を伴う小球であると定義される。リポソームが生じる時、これらは水と存在する水溶性溶質をいくらか捕捉する。これらはそのような捕捉能力を有することから薬剤搬送系として用いるに有用である。本発明の目的で、最も好適な態様は多層ベシクル（ｍｕｌｔｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅ）の使用を包含する。本発明の目的で、好適な態様に天然に存在するいずれかの燐脂質を含め、最も好適な態様にはジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）を含める。
【００３２】
関節内搬送は治療剤を関節（ａｒｔｉｃｕｌａｔｉｎｇ  ｊｏｉｎｔ）の滑包（ｓｙｎｏｖｉａｌ  ｃａｐｓｕｌｅ）の中に直接または間接的に搬送する方法であるとして定義する。
【実施例】
【００３３】
実施例１
Ａ．  効力のインビトロ評価
この上に示した組成物の効力は以下に概略を示すインビトロ実験で試験可能である。ヒアルロン酸（ＨＡ）とヒアルロニダーゼ阻害剤のリポソーム調剤の安定性をヒアルロニダーゼおよびホスホリパーゼＡ２を補充しておいた細胞培養培地の中で評価することができる。リポソームの中に包み込まれているヒアルロン酸および包み込まれていないヒアルロン酸にもまた同じ実験で評価を受けさせ、それらを対照として用いる。
【００３４】
血清を除去しておいた軟骨細胞の培養培地にＢＳＡを０．１％入れ、これにヒアルロニダーゼ（ウシ精巣）およびホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２、ブタ膵臓）をそれぞれの最終濃度が０．５ｍＵ／ｍｌ（Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ  ５８  １８６−１８８  １９９９）および５０００Ｕ／ｍｌ（Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  １２（２）２１１−２１６  １０８５）になるように補充しておいてもよいであろう（インビボの変形性関節炎滑液をある程度模擬する目的で）。別の管の中でヒアルロニダーゼ阻害剤とＨＡのリポソーム調剤を等しい体積の前記細胞培養培地（ヒアルロニダーゼおよびホスホリパーゼを補充）と一緒にする。これらの管を穏やかな振とうで混合しながら３７℃で０、１、２、４日、２週間、１および３カ月間インキュベートした。適切なインキュベート期間後、いろいろな配合の生成物が入っている培地を分析してＨＡの分子量分布を測定しかつＤＰＰＣの蛍光標識（２層の中に標識）を用いて重なり合うＧＰＣ−ＵＶとＭＡＬＬＳのスペクトルで包み込み度合を同定した。また、ヒト変形性関節炎患者（ヒアルロニダーゼおよびホスホリパーゼＡ２の源）から得た滑液の中でヒアルロン酸（ＨＡ）のリポソーム調剤が示す安定性も評価することができる。この実験は、関節へのヒアルロン酸の長期安定かつ長期間搬送を達成しようとする時にヒアルロン酸とヒアルロニダーゼ阻害剤をリポソームの中に一緒に取り込ませた時の有益な効果を明らかにすることにある。
Ｂ．  効力のインビボ評価
ＨＡａｓｅ阻害剤をヒト用調剤で用いる時の最適な濃度は下記の通りであると予測することができるであろう。ＢＡＹ  １２−９５６６のようにペプチドではない阻害剤の場合には、１０−０．０１ミクロＭの幅広い範囲の濃度を用いる。フェニルブタゾンのインビボ試験では、この薬剤を体重１ｋｇ当たり４．４ｍｇ用いた時の薬物速度を測定する試験を用いる。グリシリジンでは、これを３ミクロＭで用いた時にウシ精巣ＨＡａｓｅ活性の５０％抑制がインビトロで達成される。システアミンのヒアルロニダーゼ阻害活性は１５０ミクロｇ／ｍｌのＩＣ５０値である。フラボノイドであるアピゲニンは５０−２００ミクロＭの濃度範囲に渡ってヒアルロニダーゼを阻害する。
以下の公報および特許は参照することによってここに取り込まれる。
【００３５】
１.  Ａｄａｍｓ，Ｍ．Ｅ．、「Ａｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ，Ｈｙｌａｎ，ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ」、Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２０（Ｓｕｐｐｌ．３９）：１６−１８、１９９３
２.  Ａｄａｍｓ，Ｍ．Ｅ．、Ａｔｋｉｎｓｏｎ，Ｍ．Ｈ．、Ｌｕｓｓｉｅｒ，Ａ．、Ｓｃｈｕｌｚ，Ｊ１、Ｓｉｍｉｎｏｖｉｔｃｈ，Ｋ．Ａ．、Ｗａｄｅ，Ｊ．Ｐ．およびＺｕｒｎｍｅｒ，Ｍ．（１９９５）、「Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｖｉｓｃｏｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｈｙｌａｎ  Ｇ−Ｆ  ２０（Ｓｙｎｖｉｓｃ（ｇ）  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｋｎｅｅ」、Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｃａｒｔ．３：２１３−２２６、１９９５
３.  Ａｄａｍｓ，Ｍ．Ｅ．「Ｖｉｓｃｏｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ａｓ  ａｒｔｉｃｕｌａｒ  ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  Ｗｅｎｎｅｒ−Ｇｒｅｎ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ｈｅｌｄ  ｉｎ  ｈｏｎｏｒ  ｏｆ  Ｅｎｄｒｅ  Ａ．Ｂａｌａｚｓ、１９９６年９月１８−２１日、ストックホルム、スエーデン）（Ｌａｕｒｅｎｔ  Ｔ．編集、Ｐｏｒｔｌａｎｄ  Ｐｒｅｓｓ、ロンドン）、２４３−２５３
４.  Ｂａｋｅｒ，Ｄ．Ｅ．「Ｐｈａｒｍａｃｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｒｅｖｉｅｗ」、Ｔｈｅ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ、１９９７年１２月
５.  Ｂａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．「Ｖｉｓｃｏｅｌａｓｔｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｌｕｂｒｉｃａｔｉｏｎ」、Ｕｎｉｖ．Ｍｉｃｈｉｇａｎ．Ｍｅｄ．Ｃｔｒ．Ｊｏｕｒｎａｌ、２５５−２５９、１９６８
６.  Ｂａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．およびＧｉｂｂｓ，Ｄ．Ａ．「Ｔｈｅ  ｒｈｅｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ」、Ｃｈｅｍｉｃｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｍａｔｒｉｘ（Ｂａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．編集）、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、ロンドンおよびニューヨーク、１２４１−１２５４、１９７０
７.  Ｂａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．「Ｔｈｅ  ｐｈｙｓｉｃａｌ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｓｙｎｏｖｉａｌ  ｆｌｕｉｄ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｓｐｅｃｉａｌ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ」、Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｋｎｅｅ、第２版（Ｈｅｆｌｅｔ，Ａ編集）、Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ、フィラデルフィア、６１−７４、１９８２
８.  Ｂａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．およびＤｅｎｌｉｎｇｅｒ，Ｊ．Ｌ．「Ｓｏｄｉｕｍ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｔｅ  ａｎｄ  ｊｏｉｎｔ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ」、Ｊ．Ｅｑｕｉｎｅ  Ｖｅｔ．Ｓｃｉ．５：２１７−２２８、１９８５
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１３.  Ｄｅｎｌｉｎｇｅｒ，Ｊ．Ｌ．「Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｏｆ  ｓｏｄｉｕｍ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｔｅ  ｉｎ  ａｒｔｉｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｏｃｕｌａｒ  ｔｉｓｓｕｅｓ」、博士論文、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ６  ｄｅｓ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｅｔ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｄｅ  Ｌｉｌｌｅ，Ｌｉｌｌｅ，Ｆｒａｎｃｅ、１９８２
１４.  Ｄｅｎｌｉｎｇｅｒ，Ｊ．Ｌ．「Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｓ  ｖｉｓｃｏｅｌａｓｔｉｃｓ  ｉｎ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ」、Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ  ａｎｄ  ｉｔｓ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｗｅｎｅｒ−Ｇｒｅｎ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ｈｅｌｄ  ｉｎ  ｈｏｎｏｒ  ｏｆ  Ｅｎｄｒｅ  Ａ．Ｂａｌａｚｓ、１９９６年９月１８−２１日、ストックホルム、スエーデン）（Ｌａｕｒｅｎｔ，Ｔ．編集）、Ｐｏｒｔｌａｎｄ  Ｐｒｅｓｓ、ロンドン、２３５−２４２
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２０.  Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，Ｇ．１９９２「Ｌｉｐｓｏｍａ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」、１−３巻、第２版、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、Ｆｌａ．ＵＳＡ：ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．
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２７.  Ｓｃａｌｅ，Ｄ．、Ｗｏｂｉｇ，Ｍ．およびＷｏｌｐｅｒｔ，Ｗ．「Ｖｉｓｃｏ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｃ  ｋｎｅｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｈｙｌａｎ：ａ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｓｃｈｅｄｕｌｅ  ｓｔｕｄｙ」、Ｃｕｒｒ．Ｔｈｅｒａｐ．Ｒｅｓ．５５：２２０−２３２、１９９４
２８.  Ｗｅｉｓｓ，Ｃ．、Ｂａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．、Ｓｔ  Ｏｎｇｅ，Ｒ．およびＤｅｎｌｉｎｇｅｒ，Ｊ．Ｌ．「Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｔｒａ−  ａｒｔｉｃｕｌａｒ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨｅａｌｏｎＲＲ（ｓｏｄｉｕｍ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｔｅ）ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｋｎｅｅｓ」、Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ、１１巻（Ｔａｌｂｏｔｔ，Ｊ．Ｈ．編集）、ＧｒｕｎｅおよびＳｔｒａｔｔｏｎ、ニューヨーク、１４３１−１４４、１９８１
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［１］  Ｐｅｙｒｏｎ，Ｊ．Ｇ．およびＢａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．「Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｎａ−Ｈｙａｌｕｒｏｎａｔｅ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｉｎｔｏ  Ｈｕｍａｎ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｃ  Ｊｏｉｎｔｓ」、Ｐａｔｈ．Ｂｉｏｌ．、１９７４、２２（８）、７３１−６
［２］から［５］  （加えるべき）
［６］  Ｂａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．およびＤｅｎｌｉｎｇｅｒ，Ｊ．Ｌ．「Ｓｏｄｉｕｍ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｔｅ  ａｎｄ  ｊｏｉｎｔ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ」、Ｅｑ．Ｖｅｔ．Ｓｃｉ．、１９８４、５、２１７−２２８頁
［７］  Ｂａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．およびＤａｒｚｙｎｋｉｅｗｉｃｚ，Ａ．著、Ｋｕｌｏｎｅｎ，Ｅ．およびＰｉｋｋａｒａｉｎｅｎ，Ｊ．編集「Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ」、ロンドン：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９７３：２３７−５２
［８］  Ｆｏｒｒｅｓｔｅｒ，Ｊ．Ｖ．およびＢａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １９８０：４０：４３５−４６
［９］  Ｄａｒｚｙｎｋｉｅｗｉｃｚ，Ｚ．およびＢａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．、Ｅｘｐ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ  １９７１；６６：１１３−２３
［１０］  ＦＤＡ−ＣＤＲＨ−ＰＭＡ  ９５００２７  Ｈｙａｌｇａｎ、１９９７ａ
［１１］  ＦＤＡ−ＣＤＲＨ−ＰＭＡ  ９４００１５  Ｈｙｌａｎ  Ｇ−Ｆ  ２０、１９９７ｂ
［１２］  Ｌｅｖｉｃｋ  Ｊ  Ｒ、Ｓｃｏｔｔ  Ｄ、Ｃｏｌｅｍａｎ  Ｐ  Ｊ、Ｍａｓｏｎ  Ｒ  Ｍ、「Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ  ｃｈａｉｎ  ｌｅｎｇｔｈ  ｉｎ  ｂｕｆｆｅｒｉｎｇ  ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ  ｆｌｏｗ  ａｃｒｏｓｓ  ｔｈｅ  ｓｙｎｏｖｉｕｍ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔｓ」、Ｊ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、５２６．２、４２５−４３４頁（２０００）
［１３］  Ｈｉｌｌｓ，Ｂ．Ａ．「Ｂｏｕｎｄａｒｙ  ｌｕｂｒｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ」、Ｐｒｏｃ  Ｉｎｓｔ  Ｍｅｃｈ  Ｅｎｇ［Ｈ］、２０００；２１４（１）：８３−９４
［１４］  Ｈｉｌｌｓ，Ｂ．Ａ．「Ｒｅｍａｒｋａｂｌｅ  ａｎｔｉ−ｗｅａｒ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｊｏｉｎｔ  ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ」、Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、１９９５、２３、１１２−１１５
［１５］  Ｈｉｌｌｓ，Ｂ．Ａ．およびＭｏｎｄｓ，Ｍ．Ｋ．「Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｌｏａｄ−ｂｅａｒｉｎｇ  ｂｏｕｎｄａｒｙ  ｌｕｂｒｉｃａｎｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｊｏｉｎｔ」、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ、１９９８、３７、１３７−１４２
［１６］  Ｖｅｃｃｈｉｏ，Ｐ．、Ｔｈｏｍａｓ，ＲおよびＨｉｌｌｓ，Ｂ．Ａ．「Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ」、Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（Ｏｘｆｏｒｄ）、１９９９年１０月、３８（１０）：１０２０−１
［１７］  Ｍｏｒｏ−ｏｋａ  Ｔ．、Ｍｉｕｒａ  Ｈ、Ｍａｗａｔａｒｉ  Ｔ、Ｋａｗａｎｏ  Ｔ、Ｎａｋａｎｉｓｈｉ  Ｙ、Ｈｉｇａｋｉ  Ｈ、Ｉｗａｍｏｔｏ  Ｙ、「Ｍｉｘｔｕｒｅ  ｏｆ  ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  ａｎｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｉｎｊｕｒｅｄ  ｆｌｅｘｏｒ  ｔｅｎｄｏｎ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔｓ］、Ｊ  Ｏｒｔｈｏｐ  Ｒｅｓ  ２０００、１８（５）：８３５−４０
［１８］  Ｐａｓｑｕａｌｉ−Ｒｏｎｃｈｅｔｔｉ，Ｉ．他「Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ−Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、１９９７、１２０、１−１０
［１９］  Ｇｈｏｓｈ，Ｐ．、Ｈｕｔａｄｉｌｏｋ，Ｎ．、Ａｄａｍ，Ｎ．およびＬｅｎｔｉｎｉ，Ａ．「Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）ｗｉｔｈ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ  ａｓ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ  ｂｙ  ｇｅｌ  ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ｍｕｌｔｉ−ａｎｇｌｅ  ｌａｓｅｒ−ｌｉｇｈｔ−ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ  ｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ  ａｎｄ  １Ｈ−ＮＭＲ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ」、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．１９９４、１６（５）、２３７−２４４
【国際調査報告】
2005521629.tif 000003