(57)【要約】本発明は、肝線維症を減少させる方法；肝線維症を有する個体における肝機能を増加させる方法；HCVに関連した合併症および肝硬変の発生率を低下させる方法；ウイルス量を減少させる方法；およびHCV感染症を治療する方法を提供する。方法は一般的に、IFN-αおよびIFN-γの治療的有効量を同時に投与することを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
肝線維症を減少させるために有効な量でIFN-αおよびIFN-γを投与する段階を含む、個体における肝線維症を減少させる方法。
【請求項２】
持続的なウイルス反応を得るために有効な量でIFN-αおよびIFN-γを投与する段階を含む、個体におけるC型肝炎ウイルス感染症を治療する方法。
【請求項３】
標準的な採点システムで測定した場合に肝線維症の進行期が少なくとも1単位減少する、肝線維症の程度が進行期分類によって決定される、請求項1記載の方法。
【請求項４】
IFN-γが約25 μg〜約300 μg/用量の量で皮下投与され、IFN-αが約3 μg〜約27 μgの量で投与され、IFN-αとIFN-γとが同時投与される、請求項1または2に記載の方法。
【請求項５】
IFN-γが約25 μg〜約300 μg/用量の量で皮下投与され、IFN-αが約3 μg〜約27 μgの量で投与され、IFN-αおよびIFN-γは互いに約24時間以内に投与される、請求項1または2に記載の方法。
【請求項６】
IFN-γが約25 μg〜約300 μg/用量の量で皮下投与され、IFN-αが約3 μg〜約27 μgの量で投与され、IFN-αおよびIFN-γは多数回投与される、請求項1または2に記載の方法。
【請求項７】
肝機能を増加させるために有効な量でIFN-αおよびIFN-γを投与する段階を含む、肝線維症を有する個体における肝機能を増加させる方法。
【請求項８】
トランスアミナーゼ血清レベル、プロトロンビン時間、ビリルビン血清レベル、血中血小板数、ウイルス量、およびアルブミン血清レベルからなる群より選択されるパラメータを測定することによって肝機能が示される、請求項7記載の方法。
【請求項９】
IFN-γが約25 μg〜約300 μg/用量の量で皮下投与され、IFN-αが約3 μg〜約27 μgの量で投与され、IFN-αおよびIFN-γは連続用量で投与される、請求項7記載の方法。
【請求項１０】
肝硬変の合併症の発生率を低下させるために有効な量でIFN-αおよびIFN-γの組合せを、肝線維症を有する個体に投与する段階を含む、肝硬変の合併症の発生率を低下させる方法。
【請求項１１】
IFN-γが約25 μg〜約300 μg/用量の量で皮下投与され、IFN-αが約3 μg〜約27 μgの量で投与され、IFN-αおよびIFN-γは多数回投与される、請求項10記載の方法。
【請求項１２】
IFN-αおよびIFN-γの治療的有効量を投与する段階を含む、個体におけるC型肝炎ウイルスを治療する方法。
【請求項１３】
アラニンアミノトランスフェラーゼのレベルが、約45国際単位/ml血清未満まで減少する、請求項12記載の方法。
【請求項１４】
個体のウイルス量が約500ゲノムコピー/ml血清未満まで減少する、請求項12記載の方法。
【請求項１５】
IFN-γが約25 μg〜約300 μg/用量の量で皮下投与され、IFN-αが約3 μg〜約27 μgの量で投与され、IFN-αとIFN-γとが同時投与される、請求項12記載の方法。
【請求項１６】
IFN-γが約25 μg〜約300 μg/用量の量で皮下投与され、IFN-αが約3 μg〜約27 μgの量で投与され、IFN-αとIFN-γとが個別に投与される、請求項12に記載の方法。
【請求項１７】
IFN-γが約25 μg〜約300 μg/用量の量で皮下投与され、IFN-αが約3 μg〜約27 μgの量で投与され、IFN-αおよびIFN-γは連続投与される、請求項12記載の方法。
【請求項１８】
ウイルス量を減少させるために有効な量でIFN-αおよびIFN-γを投与する段階を含む、C型肝炎ウイルスを有する個体におけるウイルス量を減少させる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、肝線維症とC型肝炎ウイルス感染症の分野に属する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
線維症は、慢性C型肝炎ウイルス（HCV）感染症、自己免疫による損傷、およびアルコールのような毒素に対する慢性的な曝露のような肝臓に対する慢性的な毒性障害の結果として起こる。慢性的な毒性障害によって、慢性炎症を伴う肝細胞の損傷と修復のサイクルが繰り返される。多様な期間のあいだに、宿主の損傷修復反応の結果として腹部の細胞外マトリクスが次第に蓄積する。そのまま放置すると、これによって線維様材料の沈着が増加して、ついに肝臓の構築が歪むようになり、肝臓の再生能が障害される。肝臓内の瘢痕組織の進行的蓄積は、最終的に、微小結節の形成を伴う肝臓全体の線維様隔膜形成として定義される、硬変の組織病理学的所見となる。
【０００３】
C型肝炎ウイルス（HCV）感染症は、米国における最も一般的な慢性血液媒介性感染症である。新たな感染症の数は減少しているが、慢性感染症の負荷は相当なものであり、米国疾病予防センターは、アメリカにおける感染者は390万人（1.8％）であると推定している。慢性肝疾患は、アメリカにおける成人の死因の第10位であり、年間約25,000人が死亡し、死亡全体の約1％を占める。慢性肝疾患の40％がHCV関連であり、毎年推定で8,000〜10,000人が死亡することを示す研究がある。HCV関連末期肝疾患は、成人における肝臓移植の最も多い適応である。
【０００４】
慢性C型肝炎の抗ウイルス療法は、この10年間で急激に進化して、治療の有効性には有意な改善が認められる。それにもかかわらず、ポリエチレングリコール化IFN-αプラスリバビリンを用いた併用治療を行っても、患者の40％〜50％が治療に失敗して、すなわち無反応であるか、または再発する。これらの患者は現在、有効な代替治療がない。特に、肝生検において進行した線維症または硬変を認めた患者は、腹水、黄疸、静脈瘤出血、脳症、および進行肝不全を含む進行肝疾患の合併症を発症する有意なリスクを有するのみならず、肝細胞癌のリスクが著しく増加している。
【０００５】
慢性HCV感染症の高い発生率は、アメリカにおける慢性肝疾患の将来的な負荷に関して公衆衛生の点から重要な意味を有する。国立健康栄養試験調査（NHANES III）に由来するデータは、1960年代後半から1980年代初期に新たなHCV感染率の大きい増加が、特に年齢20〜40歳の人に起こったことを示している。20歳またはそれ以上で長期HCV感染症を有する人の数は、1990年から2015年のあいだに750,000人から300万人以上へと4倍以上となりうると推定される。30または40歳代での感染者の比例的な増加はさらに大きい。HCV関連慢性肝疾患のリスクは感染症の期間に関連することから、20年以上の感染者では硬変のリスクは進行的に増加して、これによって1965〜1985年のあいだに感染した患者における硬変関連罹患率および死亡率の実質的な増加が起こる。
【０００６】
HCV感染症の治療のみならず、肝線維症のような肝疾患を治療する改善された方法が当技術分野において必要である。本発明は、そのような要求に取り組み、関連する長所を提供する。
【０００７】
文献
2005508935.tif 000002
【発明の開示】
【０００８】
発明の概要
本発明は、C型肝炎ウイルス（HCV）感染症を治療する方法；肝線維症を減少させる方法；肝線維症を有する個体における肝機能を増加させる方法；HCVに関連した合併症および肝硬変の発生率を低下させる方法；ウイルス量を減少させる方法を提供する。方法は一般的に、IFN-αおよびIFN-γの治療的有効量を同時に投与することを含む。
【０００９】
発明の特徴
本発明は、一般的に、IFN-γとIFN-αとを同時にそして持続的なウイルス反応を得るために有効な量で個体に投与することを含む、C型肝炎ウイルス（HCV）感染症を治療する方法を特徴とする。
【００１０】
本発明は、IFN-αとIFN-γとを同時にそして肝線維症を減少させるために有効量で個体に投与することを含む、個体における肝線維症を減少させる方法を特徴とする。いくつかの態様において、肝線維症の程度は、肝生検の治療前および治療後の進行期分類によって決定され、標準的な採点システムによって測定する肝線維症の進行期は、治療前の肝生検を治療後の肝生検と比較した場合に、少なくとも1単位減少する。
【００１１】
本発明はまた、IFN-αおよびIFN-γを、肝機能を増加させるために有効な量で投与することを一般的に含む、肝線維症を有する個体における肝機能を増加させる方法も特徴とする。肝機能は、トランスアミナーゼ血清レベル、プロトロンビン時間、ビリルビン血清レベル、血中血小板数、アルブミン血清レベル、門脈楔入圧の改善、腹水の程度の減少、脳症レベルの減少、および内部静脈瘤の程度の減少からなる群より選択されるパラメータを測定することによって示してもよい。
【００１２】
本発明はまた、肝硬変の合併症の発生率を低下させる方法も特徴とする。方法は一般的に、肝硬変の合併症の発生率を低下させるために有効な量のIFN-αおよびIFN-γを投与することを含む。肝硬変の合併症の例は、門脈圧亢進、進行性肝不全、および肝細胞癌である。
【００１３】
上記の方法を行うにあたって、IFN-αおよびIFN-γを個体に投与する。いくつかの態様において、IFN-αおよびIFN-γは同じ製剤で投与される。他の態様において、IFN-αおよびIFN-γは、異なる製剤で投与される。異なる製剤で投与する場合、IFN-αおよびIFN-γは、実質的に同時に投与することができ、または互いに約24時間以内に投与することができる。多くの態様において、IFN-αおよびIFN-γは、皮下に多数回投与される。
【００１４】
IFN-γの用量は、約25 μg/用量〜約300 μg/用量の範囲である。コンセンサスIFN-αの有効量には、約3 μg、約9 μg、約15 μg、約18 μg、または約27 μg/用量が含まれる。IFN-α2aおよびIFN-α2bの有効量は、300万国際単位（MIU）〜10 MIU/用量の範囲である。ポリエチレングリコール化IFN-α2aの有効量は、90〜180 μg/用量の範囲である。ポリエチレングリコール化IFN-α2bの有効量は、0.5 μg/kg体重〜約1.5 μg/kg体重/用量の範囲である。多くの態様において、IFN-αおよびIFN-γは、少なくとも3ヶ月間投与され、より長い期間投与してもよい。
【００１５】
いくつかの態様において、IFN-γは、IFN-αの全治療期間を通して投与される。他の態様において、IFN-γは、IFN-α治療の期間と重なり合う期間投与され、例えばIFN-γ治療は、IFN-α治療が始まる前に始まり、IFN-α治療が終わる前に終了してもよく；IFN-γ治療はIFN-α治療が始まった後に始まり、IFN-γ治療が終了した後に終了してもよく；IFN-γ治療は、IFN-α治療が始まった後に始まり、IFN-α治療が終わる前に終了してもよく；またはIFN-γ治療は、IFN-α治療が始まる前に始まり、IFN-α治療が終了した後に終了してもよい。
【００１６】
他の態様において、IFN-αおよびIFN-γの他にリバビリンが投与される。
【００１７】
定義
本明細書において用いられるように、本明細書において「肝（liver）線維症」という用語と互換的に用いられる「肝（hepatic）線維症」という用語は、慢性肝炎感染症の状況において起こりうる肝臓における瘢痕組織の増殖を指す。
【００１８】
「個体」、「宿主」、「被験者」および「患者」という用語は、本明細書において互換的に用いられ、サルおよびヒトを含む霊長類を含むがこれらに限定されない哺乳類を意味する。
【００１９】
本明細書において用いられるように、「肝機能」という用語は、血清タンパク質（例えば、アルブミン、凝固因子、アルカリホスファターゼ、アミノトランスフェラーゼ（例えば、アラニンアミノトランスフェラーゼ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ）、5'-ヌクレオシダーゼ、γ-グルタミルトランスペプチダーゼ等）、のようなタンパク質の合成、ビリルビンの合成、コレステロールの合成、および胆汁酸の合成を含むがこれらに限定されない合成機能；糖質代謝、アミノ酸およびアンモニア代謝、ホルモン代謝、ならびに脂質代謝を含むがこれらに限定されない肝代謝機能；外因性薬剤の解毒化；内臓および門脈血行力学を含む血行力学機能等を含むがこれらに限定されない肝臓の正常な機能を意味する。
【００２０】
本明細書において用いられるように、「持続的なウイルス反応」（SVR；「持続的反応」または「永続性反応」とも呼ばれる）という用語は、HCV感染症の治療レジメに対する血清中HCV力価に関する個体の反応を意味する。一般的に、「持続的ウイルス反応」は、検出可能なHCV RNA（例えば、血清1ミリリットルあたり約500ゲノムコピー未満、約200ゲノムコピー未満、または約100ゲノムコピー未満）が治療中止後少なくとも約1ヶ月、少なくとも約2ヶ月、少なくとも約3ヶ月、少なくとも約4ヶ月、少なくとも約5ヶ月、または少なくとも約6ヶ月患者の血清中に認められないことを意味する。
【００２１】
本明細書において用いられるように「治療失敗患者」とは、一般的に、HCVに関するこれまでの治療に反応しなかったHCV感染患者（「非反応者」と呼ばれる）、またはこれまでの治療に当初反応したが、治療反応が維持されなかった患者（「再発者」と呼ばれる）を意味する。これまでの治療には一般的に、IFN-α単剤療法またはIFN-α併用療法による治療が含まれうるが、併用治療には、IFN-αとリバビリンのような抗ウイルス剤の投与が含まれてもよい。
【００２２】
本明細書において用いられるように、「治療」、「治療する」等の用語は、所望の薬理学的および/または生理学的作用を得ることを意味する。作用は、疾患もしくはその症状を完全もしくは部分的に予防することに関して予防的であってもよく、および/または疾患および/もしくは疾患に帰因する有害な作用の部分的もしくは完全な治癒に関して治療的であってもよい。本明細書において用いられるように、「治療」とは、哺乳類、特にヒトにおける疾患の如何なる治療も含み、これには以下が含まれる：（a）疾患に対する素因を有する可能性があるがまだ疾患を有すると診断されていない被験者に、疾患または疾患の症状が起こらないようにすること；（b）疾患を阻害する、すなわちその発生を停止させること；および（c）疾患を軽減する、すなわち疾患の退縮を引き起こすこと。
【００２３】
「個体」、「宿主」、「被験者」および「患者」という用語は、本明細書において互換的に用いられ、マウス、サル、ヒト、農業用哺乳動物、競技用哺乳動物、愛玩哺乳動物を含むがこれらに限定されない哺乳動物を意味する。
【００２４】
本発明をさらに詳しく説明する前に、記述される特定の態様は当然変化する可能性があるために、本発明は、そのような態様に制限されないと理解すべきである。同様に、本発明の範囲は、添付の請求の範囲に限って制限されるために、本明細書において用いた用語は、特定の態様を記述する目的に限られ、制限的に解釈してはならないと理解すべきである。
【００２５】
値の範囲を提供する場合、特に明記していなければ、その範囲の上限と下限のあいだの下限の単位の10分の1までのそれぞれの介在する値、およびその記述の範囲における他の任意の記述のまたは介在する値が本発明に含まれると理解される。これらのより小さい範囲の上限および下限は独立してより小さい範囲に含まれてもよく、同様に本発明に含まれ、記述の範囲における任意の特に除外された限界に従属する。記述の範囲に一つまたは双方の限界が含まれる場合、それらの含まれる限界のいずれかまたは双方を除外する範囲も同様に本発明に含まれる。
【００２６】
特に明記していなければ、本明細書において用いられる全ての技術および科学用語は、本発明が属する当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記述のものと類似または同等の如何なる方法および材料も同様に、本発明の実践または試験において用いることができるが、好ましい方法および材料を以下に記述する。本明細書において言及した全ての出版物は、出版物が引用される内容に関連して方法および/または材料を開示および説明するために参照として本明細書に組み入れられる。
【００２７】
本明細書において、そして添付の請求の範囲において用いられるように、単数形「一つ（a）」、「一つ（an）」、および「その（the）」には、本文が特に明記していない限り複数形が含まれる。このように、例えば、「一つの方法（a method）」と言う場合にはそのような方法の複数形が含まれ、「一つの用量（a dose）」と言う場合には一つまたはそれ以上の用量および当業者に既知の同等物を言及すること等が含まれる。
【００２８】
本明細書において考察した出版物は、本出願の提出日よりその開示が単になされたために提供される。本明細書の如何なる開示も、先行発明によって、日付をさかのぼって付ける権利が本発明にはないと自認したと解釈されるべきではない。さらに、提供された出版日は実際の出版日とは異なっている可能性があり、それらは個々に確認する必要があるかも知れない。
【００２９】
発明の詳細な説明
本発明は、HCV感染症を治療する方法、臨床肝線維症を減少させること、肝線維症が起こる可能性を減少させること、および肝線維症に関連したパラメータを減少させることを含む、肝線維症を治療する方法を提供する。方法は一般的に、IFN-αおよびIFN-γの有効量を、それを必要とする被験者に投与することを含む。併用治療は、IFN-αまたはIFN-γの単独療法より有効な相乗作用を有する。多くの態様において特に重要であるのは、ヒトの治療である。
【００３０】
肝線維症は、門脈圧亢進、進行性肝不全、および肝細胞癌のような、肝硬変に関連した合併症の前駆疾患である。肝線維症が減少すれば、このようにそのような将来の合併症の発生率が低下する。したがって、本発明はさらに、個体が肝硬変に関連した合併症を発症する可能性を減少させる方法を提供する。
【００３１】
本発明の方法は一般的に、IFN-αおよびIFN-γの治療的有効量を投与することを含む。本明細書において用いられるように、IFN-αおよびIFN-γの組合せの「治療的有効量」は、HCV感染症を治療するために、持続的なウイルス反応を得るために、肝線維症を減少させるために有効である、および/または個体が肝線維症を発症する可能性を減少するために有効である、および/または肝線維症に関連したパラメータを減少させるために有効である、および/または肝硬変に関連した障害を減少させるために有効である、IFN-αおよびIFN-γの量である。
【００３２】
C型肝炎ウイルス
本発明は、HCVを治療する方法を提供する。方法は一般的に、個体におけるウイルス量を減少させるため、そして持続的なウイルス反応を得るために有効な量のIFN-αおよびIFN-γを個体に投与することを含む。
【００３３】
本発明の方法がHCV感染症を治療するために有効であるか否かは、ウイルス量を測定することによって、肝線維症、トランスアミナーゼ血清レベルの上昇、および肝臓における壊死炎症活性を含むがこれらに限定されないHCV感染症に関連したパラメータを測定することによって、決定することができる。肝線維症の指標は後により詳細に考察する。
【００３４】
ウイルス量は、血清中のウイルスの力価またはレベルを測定することによって測定することができる。これらの方法には、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）および分岐DNA（bDNA）試験が含まれるがこれらに限定されない。HCV RNAのウイルス量（力価）を測定するための定量的アッセイ法が開発されている。定量的逆転写PCR（RT-PCR）（Amplicor HCV Monitor（商標）、ロシュモレキュラーシステムズ（Roche Molecular Systems）、ニュージャージー州）；および分岐DNA（デオキシリボ核酸）シグナル増幅アッセイ法（Quantiplex（商標）HCV RNAアッセイ法（bDNA）、カイロンコーポレーション（Chiron Corp.）、エメリービル、カリフォルニア州）を含む、多くのそのようなアッセイ法が市販されている。例えば、Gretchら（1995）、Ann. Intern. Med. 123：321〜329を参照されたい。
【００３５】
一般的に、IFN-αおよびIFN-γの有効量は、ウイルス量を検出不能レベルまで、例えば、血清1 mL中に約5000ゲノムコピー未満、約1000ゲノムコピー未満、約500ゲノムコピー未満、または約200ゲノムコピー未満まで減少させるために有効な量である。いくつかの態様において、IFN-αおよびIFN-γの有効量は、ウイルス量を血清1 mLあたり100ゲノムコピー未満まで減少させるために有効な量である。多くの態様において、本発明の方法は、持続的なウイルス反応を得る、例えば、ウイルス量は、治療中止後少なくとも約1ヶ月間、少なくとも約2ヶ月間、少なくとも約3ヶ月間、少なくとも約4ヶ月間、少なくとも約5ヶ月間、または少なくとも約6ヶ月間検出不能レベルまで減少する。
【００３６】
上記のように、本発明の方法がHCV感染症を治療するために有効であるか否かは、肝線維症のようなHCV感染症に関連したパラメータを測定することによって決定することができる。肝線維症の程度を決定する方法は下記に詳細に考察する。いくつかの態様において、肝線維症の血清マーカーレベルは、肝線維症の程度を示す。
【００３７】
一つの非制限的な実施例として、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ALT）の血清レベルを、標準的なアッセイ法を用いて測定する。一般的に、約45国際単位/ml血清未満のALTレベルが、正常であると見なされる。いくつかの態様において、IFN-αおよびIFN-γの有効量は、ALTレベルを約45 IU/ml血清未満に減少させるために有効な量である。
【００３８】
IFN-αおよびIFN-γの治療的有効量は、無処置の個体またはプラセボ処置個体におけるマーカーレベルと比較して、肝線維症マーカーの血清レベルを少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約25％、少なくとも約30％、少なくとも約35％、少なくとも約40％、少なくとも約45％、少なくとも約50％、少なくとも約55％、少なくとも約60％、少なくとも約65％、少なくとも約70％、少なくとも約75％、または少なくとも約80％またはそれ以上減少させるために有効な量である。血清マーカーを測定する方法には、免疫学に基づく方法、例えば、所定の血清マーカーに対して特異的な抗体を用いる酵素結合イムノソルベントアッセイ法（ELISA）、ラジオイムノアッセイ法等が含まれる。
【００３９】
線維症
IFN-αおよびIFN-γによる治療が肝線維症を減少させるために有効であるか否かは、肝線維症と肝機能とを測定する十分に確立された多数の任意の技術によって決定される。肝線維症の減少は、肝生検試料を分析することによって決定される。肝生検の分析は、二つの主要な成分、すなわち重症度および進行中の疾患活動度の測定としての「等級」によって評価した壊死炎症、ならびに長期疾患進行の反映としての「進行期（stage）」によって評価される線維症病変および肝実質または血管再形成の評価を含む。例えば、Brunt（2000）Hepatol. 31：241〜246；およびMETAVIR（1994）Hepatology 20：15〜20を参照されたい。肝生検の分析に基づき、スコアを割付する。線維症の程度および重症度の定量的評価を提供する多くの標準化採点システムが存在する。これらには、METAVIR、ノデル（Knodell）、シャウア（Scheuer）、ルドウィグ（Ludwig）、およびイシャク（Ishak）採点システムが含まれる。
【００４０】
METAVIR採点システムは、線維症（門脈線維症、中心葉線維症、および硬変）；壊死（断片および葉の壊死、好酸性陥没、および風船状変性）；炎症（門脈炎症、門脈リンパ様凝集物、および門脈炎症の分布）；胆管の変化；およびノデル指数（門脈周囲壊死、葉壊死、門脈炎症、線維症、および全体的な疾患活動度のスコア）を含む、肝生検の様々な特徴の分析に基づく。METAVIRシステムにおけるそれぞれの進行期の定義は、以下の通りである：スコア0、線維症なし；スコア1、隔膜形成を伴わない門脈の放射状肥大；スコア2、まれに隔膜形成を伴う門脈の肥大；スコア3、硬変を伴わない多数の隔膜；およびスコア4、硬変。
【００４１】
ノデル採点システムは、肝炎活動度指数とも呼ばれ、四つのカテゴリーの組織学的特徴のスコアに基づいて標本を分類する：I、門脈周囲および/またはまたがる壊死；II、葉内変性および巣状壊死；III、門脈炎症；およびIV、線維症。ノデル進行期分類システムでは、スコアは以下の通りである：スコア0、線維症なし；スコア1、軽度の線維症（線維様門脈膨張）；スコア2、中等度の線維症；スコア3、重度の線維症（またがる線維症）；およびスコア4、硬変。スコアが高くなれば、肝組織の損傷はより重度となる。Knodell（1981）Hepatol. 1：431。
【００４２】
シャウア採点システムでは、スコアは以下の通りである：スコア0、線維症なし；スコア1、肥大した線維症門脈；スコア2、構築は無傷である門脈周囲または門脈-門脈隔膜；スコア3、明白な硬変を認めないが構築が歪んでいる線維症；スコア4、可能性があるまたは明白な硬変。Scheuer（1991）J. Hepatol. 13：372。
【００４３】
イシャク採点システムは、Ishak（1995）J. Hepatol. 22：696〜699に記載される。0期、線維症なし；1期、短い線維様隔膜を伴うまたは伴わないいくつかの門脈領域の線維様膨張；2期、短い線維様隔膜を伴うまたは伴わないほとんどの門脈領域の線維様膨張；3期、時に門脈-門脈（P-P）架橋を伴うほとんどの門脈領域の線維様膨張；4期、顕著な架橋（P-P）と共に門脈-中心（P-C）架橋を伴う門脈領域の線維様膨張；5期、時に結節（不完全な硬変）を伴う顕著な架橋（P-Pおよび/またはP-C）；6期、可能性があるまたは明白な硬変。抗線維症治療の利益も同様に、ビリルビン血清レベル、アルブミン血清レベル、プロトロンビン時間の異常、腹水の有無および重症度、ならびに脳症の有無および重症度に基づく多成分ポイントシステムを含むチャイルド・プー（Child-Pugh）採点システムを用いて測定および評価することができる。これらのパラメータの異常の有無および重症度に基づいて、患者を臨床疾患の重症度が増加する順に三つのカテゴリーの一つに分類してもよい：A、BまたはC。
【００４４】
いくつかの態様において、IFN-αおよびIFN-γの治療的有効量は、治療前および治療後の肝生検に基づいて線維症進行期において1単位またはそれ以上の変化を引き起こすIFN-αおよびIFN-γの量である。特定の態様において、IFN-αおよびIFN-γの治療的有効量は、METAVIR、ノデル、シャウア、ルドウィグ、またはイシャク採点システムにおいて肝線維症を少なくとも1単位減少させる。
【００４５】
次に、または間接的に、肝機能の指標も同様に用いて、IFN-αおよびIFN-γの治療の有効性を評価することができる。コラーゲンの特異的染色および/または肝線維症の血清マーカーに基づく肝線維症の定量的程度の形態測定コンピューター化半自動測定も同様に、本発明の治療法の有効性の指標として測定することができる。肝機能の二次指標には、トランスアミナーゼ血清レベル、プロトロンビン時間、ビリルビン、血小板数、門脈圧、アルブミンレベル、およびチャイルド・プースコアの評価が含まれるがこれらに限定されない。IFN-αおよびIFN-γの有効量は、無処置の個体またはプラセボ処置個体における肝機能の指標と比較して、肝機能指標を少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約25％、少なくとも約30％、少なくとも約35％、少なくとも約40％、少なくとも約45％、少なくとも約50％、少なくとも約55％、少なくとも約60％、少なくとも約65％、少なくとも約70％、少なくとも約75％、または少なくとも約80％またはそれ以上増加させるために有効な量である。当業者は、その多くが市販されており、臨床の状況で日常的に用いられる標準的なアッセイ法を用いて、肝機能のそのような指標を容易に測定することができる。
【００４６】
肝線維症の血清マーカーも同様に、本発明の治療法の有効性の指標として測定することができる。肝線維症の血清マーカーには、ヒアルロネート、N末端プロコラーゲンIIIペプチド、IV型コラーゲンの7Sドメイン、C末端プロコラーゲンIペプチド、およびラミニンが含まれるがこれらに限定されない。肝線維症のさらなる生化学マーカーには、α-2-マクログロブリン、ハプトグロビン、γグロブリン、アポリポタンパク質A、およびγグルタミルトランスペプチダーゼが含まれる。
【００４７】
IFN-αおよびIFN-γの治療的有効量は、無処置の個体またはプラセボ処置個体におけるマーカーレベルと比較して、肝線維症マーカーの血清レベルを少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約25％、少なくとも約30％、少なくとも約35％、少なくとも約40％、少なくとも約45％、少なくとも約50％、少なくとも約55％、少なくとも約60％、少なくとも約65％、少なくとも約70％、少なくとも約75％、または少なくとも約80％またはそれ以上減少させるために有効な量である。当業者は、その多くが市販されており、臨床の状況で日常的に用いられる標準的なアッセイ法を用いて、肝線維症のそのような血清マーカーを容易に測定することができる。血清マーカーを測定する方法には、免疫学に基づく方法、例えば、所定の血清マーカーに対して特異的な抗体を用いる酵素結合イムノソルベントアッセイ法（ELISA）、ラジオイムノアッセイ等が含まれる。
【００４８】
機能的肝貯蔵の定量的試験も同様に用いて、IFN-αおよびIFN-γによる治療の有効性を評価することができる。これらには、インドシアニングリーンクリアランス（ICG）、ガラクトース排泄能（GEC）、アミノピリン呼吸試験（ABT）、アンチピリンクリアランス、モノエチルグリシン-キシリジド（MEG-X）クリアランス、およびカフェインクリアランスが含まれる。
【００４９】
本明細書において用いられるように、「肝硬変に関連した合併症」とは、代償不全肝疾患の続発症である、すなわち肝線維症の発症の後におよびその結果として起こる障害を指し、これには、腹水の発生、静脈瘤出血、門脈圧亢進症、黄疸、進行性肝不全、脳症、肝細胞癌、肝臓移植を必要とする肝不全、および肝臓関連死が含まれるがこれらに限定されない。
【００５０】
IFN-αおよびIFN-γの治療的有効量は、無処置の個体またはプラセボ処置個体と比較して、肝硬変に関連した障害の発生率（例えば、個体が発症する確率）を少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約25％、少なくとも約30％、少なくとも約35％、少なくとも約40％、少なくとも約45％、少なくとも約50％、少なくとも約55％、少なくとも約60％、少なくとも約65％、少なくとも約70％、少なくとも約75％、または少なくとも約80％またはそれ以上減少させるために有効な量である。
【００５１】
IFN-αおよびIFN-γによる治療が、肝硬変に関連した障害の発生を減少させるために有効であるか否かは、当業者によって容易に決定することができる。
【００５２】
肝線維症が減少すれば肝機能は増加する。このように、本発明は、一般的に、IFN-αおよびIFN-γの治療的有効量を投与することを含む、肝機能を増加させる方法を提供する。肝機能には、血清タンパク質（例えば、アルブミン、凝固因子、アルカリホスファターゼ、アミノトランスフェラーゼ（例えば、アラニントランスアミナーゼ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ）、5'-ヌクレオシダーゼ、γ-グルタミルトランスペプチダーゼ等）のようなタンパク質の合成、ビリルビンの合成、コレステロールの合成、および胆汁酸の合成；糖質代謝、アミノ酸およびアンモニア代謝、ホルモン代謝、ならびに脂質代謝を含むがこれらに限定されない肝代謝機能；外因性薬剤の解毒化；内臓および門脈血行力学を含む血行力学機能等が含まれるがこれらに限定されない。
【００５３】
肝機能が増加したか否かは、十分に確立された肝機能試験を用いて、当業者によって容易に確認することができる。このように、アルブミン、アルカリホスファターゼ、アラニントランスアミナーゼ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ、ビリルビン等のような肝機能マーカーの合成は、標準的な免疫学および酵素アッセイ法を用いて、血清中のこれらのマーカーのレベルを測定することによって評価することができる。内臓循環および門脈血行力学は、標準的な方法を用いて門脈楔入圧および/または抵抗によって測定することができる。代謝機能は血清中のアンモニアレベルを測定することによって測定することができる。
【００５４】
肝臓によって通常分泌される血清タンパク質が正常範囲であるか否かは、標準的な免疫および酵素アッセイ法を用いて、そのようなタンパク質レベルを測定することによって決定することができる。当業者はそのような血清タンパク質の正常範囲を知っている。以下は非制限的な例である。アラニントランスアミナーゼの正常レベルは、約45 IU/mL血清である。アスパラギン酸トランスアミナーゼの正常範囲は、約5〜約40単位/L血清である。ビリルビンは標準的なアッセイ法を用いて測定する。正常なビリルビンレベルは通常、約1.2 mg/dL未満である。アルブミン血清レベルは標準的なアッセイ法を用いて測定する。血清アルブミンの正常レベルは約35〜約55 g/Lの範囲である。プロトロンビン時間の延長は標準的なアッセイ法を用いて測定する。正常なプロトロンビン時間は対照より約4秒未満長い。
【００５５】
IFN-αおよびIFN-γの治療的有効量は、肝機能を少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約30％、少なくとも約40％、少なくとも約50％、少なくとも約60％、少なくとも約70％、少なくとも約80％またはそれ以上増加させるために有効な量である。例えば、IFN-αおよびIFN-γの治療的有効量は、上昇した肝機能の血清マーカーレベルを少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約30％、少なくとも約40％、少なくとも約50％、少なくとも約60％、少なくとも約70％、少なくとも約80％もしくはそれ以上減少させるために、または肝機能の血清マーカーレベルを正常範囲内まで減少させるために有効な量である。IFN-γの治療的有効量も同様に、低下した肝機能の血清マーカーレベルを少なくとも約10％、少なくとも約20％、少なくとも約30％、少なくとも約40％、少なくとも約50％、少なくとも約60％、少なくとも約70％、少なくとも約80％もしくはそれ以上増加させるために、または肝機能の血清マーカーレベルを正常範囲内まで増加させるために有効な量である。
【００５６】
インターフェロンα
如何なる既知のIFN-αも本発明において用いることができる。本明細書において用いられる「インターフェロンα」という用語は、ウイルス複製および細胞増殖を阻害して、免疫応答を調節する関連ポリペプチドのファミリーを意味する。「IFN-α」という用語には、天然に存在するIFN-α；合成IFN-α；誘導体化IFN-α（例えば、ポリエチレングリコール化IFN-α、グリコシル化IFN-α等）；および天然に存在するまたは合成IFN-αの類似体；天然に存在するIFN-αに関して記述されたような抗ウイルス特性を有する本質的に任意のIFN-αが含まれる。
【００５７】
適したαインターフェロンには、天然に存在するIFN-α（天然に存在するIFN-α2a、IFN-α2bを含むがこれらに限定されない）；シェリングコーポレーション（Schering Corporation、ケニルワース、ニュージャージー州）から販売されるイントロン（Intron）Aインターフェロンのような組換え型インターフェロンα2b；ホフマン・ラ-ロシュ（Hoffman-La Roche、ナトリー、ニュージャージー州）から販売されているロフェロン（Roferon）インターフェロンのような組換え型α-2a；ベーリンガーインゲルハイムファーマシューティカルズインク（Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc、リッジフィールド、コネチカット州）から販売されているベロフォー（Berofor）α2インターフェロンのような組換え型インターフェロンα-2C；日本のスミトモ（Sumitomo）から販売されているスミフェロンまたはグラクソ-ウェルカム（Glaxo-Wellcome Ltd.、ロンドン、イギリス）から販売されているウェルフェロン（Wellferon）インターフェロンα-n1（INS）のような天然のαインターフェロンの純粋な混合物であるインターフェロンα-n1；およびインターフェロンサイエンシズ（Interferon Sciences）が製造して、パーデュー・フレデリック（Purdue Frederick Co.、ノーウォーク、コネチカット州）からアルフェロン（Alferon）の商品名で販売されている天然のαインターフェロン混合物であるインターフェロンα-n3が含まれるがこれらに限定されない。
【００５８】
「IFN-α」という用語はまた、コンセンサスIFN-αを含む。コンセンサスIFN-α（「CIFN」および「IFN-con」とも呼ばれる）は、米国特許第4,695,623号および第4,897,471号に開示されるIFN-con1、IFN-con2、およびIFN-con3と命名されるアミノ酸配列、ならびに天然に存在するインターフェロンα（例えば、Infergen（登録商標）、アムジェン（Amgen）、サウザンドオークス、カリフォルニア州）のコンセンサス配列の決定によって定義されるコンセンサスインターフェロンを含むがこれらに限定されない。IFN-conをコードするDNA配列は、上記の特許または他の標準的な方法に記述されるように合成してもよい。CIFNの使用は特に重要である。
【００５９】
「IFN-α」という用語はまた、血清半減期のような特定の特性を変化させるように誘導体化された（例えば、化学改変された）誘導体を含む。そのため、「IFN-α」という用語には、グリコシル化IFN-α；ポリエチレングリコールによって誘導体化されたIFN-α（「ポリエチレングリコール化IFN-α」）等が含まれる。ポリエチレングリコール化IFN-α、およびこれを作製する方法は、米国特許第5,382,657号；第5,981,709号；および第5,951,974号において考察されている。ポリエチレングリコール化IFN-αは、PEG結合インターフェロンα-2a（Roferon、ホフマン・ラ-ロシュ、ナトリー、ニュージャージー州）、インターフェロンα2b（Intron、シェリング-プラウ（Schering-Plough）、マディソン、ニュージャージー州）、インターフェロンα-2c（Beroforα、ベーリンガー・インゲルハイム、インゲルハイム、ドイツ）；および天然に存在するインターフェロンα（Infergen（登録商標）、アムジェン、サウザンドオークス、カリフォルニア州）のコンセンサス配列の決定によって定義されたコンセンサスインターフェロンを含むがこれらに限定されない、PEGと上記の任意のIFN-α分子との結合体を含む。
【００６０】
インターフェロンγ
IFN-γポリペプチドをコードする核酸配列は、公共のデータベース、例えばジェンバンク、雑誌刊行物等からアクセスしてもよい。ヒト疾患の治療に関して様々な哺乳類IFN-γポリペプチドが重要であるが、一般的にヒトタンパク質が用いられる。ヒトIFN-γコード配列は、ジェンバンクアクセッション番号X13274；V00543；およびNM_000619に認められる。対応するゲノム配列は、ジェンバンクアクセッション番号J00219；M37265；およびV00536に認められる。例えば、Grayら（1982）Nature 295：501（ジェンバンクX13274）；およびRinderknechtら（1984）J.B.C. 259：6790を参照されたい。
【００６１】
IFN-γ1b（Actimmune（登録商標）；ヒトインターフェロン）は、アミノ酸140個の一本鎖ポリペプチドである。これは、大腸菌における組換えによって産生され、グリコシル化されない。Rinderknechtら（1984）、J. Biol. Chem. 259：6790〜6797。
【００６２】
本発明の方法において用いられるIFN-γは、それらがIFN-γ活性、特にヒトIFN-γ活性を有する限り、天然のIFN-γs、組換え型IFN-γsおよびその誘導体の如何なるものであってもよい。ヒトIFN-γは、インターフェロンに特徴的な抗ウイルスおよび抗増殖特性を示すと共に、当技術分野で既知であるように他の多くの免疫調節活性を示す。IFN-γは、先に提供した配列に基づくが、タンパク質の産生およびタンパク質溶解プロセシングによって、そのプロセシング変種が起こりうる。Grayら、上記によって提供された非プロセシング配列は、アミノ酸（aa）166個からなる。大腸菌において産生された組換え型IFN-γは、当初アミノ酸146個であると考えられた（アミノ酸20位で始まる）が、無処置のヒトIFN-γは、残基23位の後で切断されて、アミノ酸143個のタンパク質、または細菌において発現に必要な末端のメチオニンが存在する場合にはアミノ酸144個のタンパク質を生じることが後に判明した。N末端メチオニンは、大腸菌発現の特定の場合において、プロセシングによって除去されない、mRNA翻訳「開始」シグナルAUGによってコードされるアーチファクトである。他の微生物システムまたは真核細胞発現系では、メチオニンは除去される可能性がある。
【００６３】
本発明の方法において用いるために、無処置のIFN-γペプチド、その改変および変種、または一つもしくはそれ以上のペプチドの組み合わせの如何なるものを用いてもよい。対象となるIFN-γペプチドには断片が含まれ、完全な配列と比較してカルボキシ末端で多様に切断されうる。そのような断片は、アミノ酸24〜149個（プロセシングされていないポリペプチドの残基からの番号付け）が存在する限り、ヒトγインターフェロンの特徴的な特性を示し続ける。外来の配列は、活性を失うことなく、アミノ酸155位後のアミノ酸配列を置換することができる。例えば、米国特許第5,690,925号を参照されたい。無処置のIFN-γ部分には、アミノ酸残基24〜150、24〜151、24〜152、24〜153、24〜155、および24〜157から多様に伸長した分子が含まれる。これらの変種および当技術分野で既知のIFN-γ活性を有する他の変種の如何なるものも、本発明の方法において用ることができる。
【００６４】
IFN-γポリペプチドの配列は、配列における標的変化を生成するために当技術分野において既知の様々な方法で変化させてもよい。変種ポリペプチドは、通常、本明細書に定義される配列と実質的に類似である、すなわちアミノ酸の少なくとも1個が異なる、および少なくとも2個しかし約10個を超えないアミノ酸が異なる。配列の変化は置換、挿入、または欠失であってもよい。アラニンまたは他の残基を系統的に導入する変異の走査を用いて、重要なアミノ酸を決定してもよい。対象となる特定のアミノ酸置換には、保存的および非保存的変化が含まれる。保存的アミノ酸置換には典型的に、以下の群内の置換が含まれる：（グリシン、アラニン）；（バリン、イソロイシン、ロイシン）；（アスパラギン酸、グルタミン酸）；（アスパラギン、グルタミン）；（セリン、トレオニン）；（リジン、アルギニン）；または（フェニルアラニン、チロシン）。
【００６５】
一次アミノ酸配列を変化させる、または変化させない可能性がある対象となる改変には、ポリペプチドの誘導体化、例えばアセチル化またはカルボキシル化；グリコシル化部位を導入または除去するアミノ酸配列の変化；タンパク質をポリエチレングリコール化に対して感受性にするアミノ酸配列の変化等が含まれる。同様に、グリコシル化の改変、例えば、その合成およびプロセシング、またはさらなるプロセシング段階において、ポリペプチドのグリコシル化パターンを改変することによって得られた改変、例えば、哺乳類のグリコシル化または脱グリコシル化酵素のようなグリコシル化に影響を及ぼす酵素にポリペプチドを曝露することによって得られた改変が含まれる。同様に、リン酸化アミノ酸残基、例えばホスホチロシン、ホスホセリン、またはホスホトレオニンを有する配列も含まれる。
【００６６】
タンパク質溶解分解に対するその抵抗性を改善するために、溶解度特性を最適にするために、または治療物質としてそれらをより適するようにするために、通常の化学技術を用いて改変されているポリペプチドが本発明に含まれる。例えば、ペプチド骨格を環状化して安定性を増強してもよい（Friedlerら（2000）、J. Biol. Chem. 275：23783〜23789）。天然に存在するL-アミノ酸以外の残基、例えばD-アミノ酸または天然に存在しない合成アミノ酸を含む類似体を用いてもよい。タンパク質は、安定性を増強するためにポリエチレングリコール化してもよい。
【００６７】
ポリペプチドは、当技術分野で既知の通常の方法を用いたインビトロ合成によって調製しても、組換え法によって調製してもよく、または誘導されてもしくは本来タンパク質を産生する細胞から単離してもよい。特定の配列および調製法は、簡便さ、経済性、必要な純度等によって決定される。望ましければ、合成または発現の際に他の分子または表面との結合を可能にする様々な基をポリペプチドに導入してもよい。このように、チオエーテルを作製するためにはシステイン、金属イオン錯体に結合させるためにはヒスチジン、アミドまたはエステルを形成するためにはカルボキシ基、アミドを形成するためにはアミノ基等を用いることができる。
【００６８】
ポリペプチドはまた、組換え合成の通常の方法に従って単離および精製してもよい。発現宿主の溶解物を調製して、溶解物をHPLC、排除クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、アフィニティクロマトグラフィー、または他の精製技術によって精製してもよい。ほとんどの場合、用いられる組成物は、産物の調製およびその精製法に関連した混入物に対して、所望の産物を重量で少なくとも20％、より通常、重量で少なくとも約75％、好ましくは重量で少なくとも約95％含み、治療目的の場合には、通常少なくとも約99.5％を含む。通常、割合は、総タンパク質に基づく。
【００６９】
用量、剤形、および投与経路
IFN-αおよびIFN-γは、薬学的に許容される賦形剤との製剤で個体に投与される。広く多様な薬学的に許容される賦形剤が当技術分野で既知であり、本明細書において詳細に考察する必要はない。薬学的に許容される賦形剤は、例えば、A. Gennaro（2000）、「Remington：The Science and Practice of Pharmacy」、第20版、リッピンコット、ウィリアムス＆ウィルキンス；「Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems」（1999）H.C.Anselら編、第7版、リッピンコット、ウィリアムス＆ウィルキンス；および「Handbook of Pharmaceutical Excipients」（2000）、A.H. Kibbeら編、第3版、全米製薬協会を含む、多様な出版物において十分に記述されている。
【００７０】
溶媒、アジュバント、担体、または希釈剤のような薬学的に許容される賦形剤は、一般に容易に利用できる。その上、pH調節剤および緩衝剤、等張性調節剤、安定化剤、湿潤剤等のような薬学的に許容される補助剤は、一般に容易に利用可能である。
【００７１】
本発明の方法において、所望の治療効果を得ることができる任意の都合のよい手段を用いて、活性物質を宿主に投与してもよい。このように、治療的投与のための多様な製剤に、物質を組み入れることができる。より詳しく述べると、本発明の物質は、適当な薬学的に許容される担体または希釈剤と配合して薬学的組成物に調製することができ、錠剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤、軟膏、溶液、坐剤、注射剤、吸入剤、およびエアロゾルのような固体、半固体、液体、またはガス様剤形に調製してもよい。
【００７２】
そのため、物質の投与は、経口、口腔内、直腸、非経口、腹腔内、皮内、経皮、気管内等を含む多様な方法で行うことができる。
【００７３】
薬学的投与剤形において、物質は、その薬学的に許容される塩の形で投与してもよく、または物質は単独で用いてもよく、もしくは他の薬学的活性化合物と適当に会合させると共に配合して用いてもよい。以下の方法および賦形剤は単なる例に過ぎず、決して制限的ではない。
【００７４】
経口調製物の場合、物質は単独、または適当な添加剤、例えば乳糖、マンニトール、コーンスターチ、またはジャガイモデンプンのような通常の添加剤；結晶セルロース、セルロース誘導体、アラビアゴム、コーンスターチ、またはゼラチンのような結合剤；コーンスターチ、ジャガイモデンプン、またはカルボキシメチルセルロースナトリウムのような崩壊剤；タルクまたはステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤；および望ましければ希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、保存剤、および着香料と配合して錠剤、粉剤、顆粒剤、またはカプセル剤を作製することができる。
【００７５】
物質は、植物油または他の類似の油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸またはポリエチレングリコールのエステルのような水性または非水性溶媒にそれらを溶解、懸濁、または乳化することによって、そして望ましければ、溶解剤、等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定化剤、および保存剤のような通常の添加剤を加えて、注射用調製物に調製することができる。
【００７６】
さらに、物質は、乳化基剤または水溶性基剤のような多様な基剤と混合することによって坐剤に調製することができる。本発明の化合物は坐剤によって直腸投与することができる。坐剤は、体温で融解するが、室温では固化するカカオバター、カルボワックス、およびポリエチレングリコールのような溶媒を含みうる。
【００７７】
それぞれの用量単位、例えば、小さじ1杯、大さじ1杯、錠剤、または坐剤が、一つまたはそれ以上の阻害剤を含む組成物の規定量を含む、シロップ剤、エリキシル剤、および坐剤のような経口または直腸投与のための単位投与剤形を提供してもよい。同様に、注射または静脈内投与のための単位投与剤形は、滅菌水、通常の生理食塩液、または他の薬学的に許容される担体における溶液として、組成物中に阻害剤を含んでもよい。
【００７８】
本明細書において用いられるように、「単位投与剤形」とは、それぞれの単位が、薬学的に許容される希釈剤、担体、または溶媒に会合して所望の作用を生じるために十分な量で計算された本発明の化合物の規定量を含む、ヒトおよび動物被験者に関する単位用量として適した物理的に個別の単位を意味する。本発明の新規投与剤形の仕様は、用いる特定の化合物、得られる作用、および宿主におけるそれぞれの化合物に関連した薬物動態に依存する。
【００７９】
全ての態様において、IFN-γの少なくとも一つの用量を、IFN-αの少なくとも一つの用量と同時に投与する。本明細書において用いられるように、「同時」という用語には、IFN-αとIFN-γとが個別に、そして互いに約5秒〜約15秒以内、約15秒〜約30秒以内、約30秒〜約60秒以内、約1分〜約5分以内、約5分〜約15分以内、約15分〜約30分以内、約30分〜約60分以内、約1時間〜約2時間以内、約2時間〜約6時間以内、約6時間〜約12時間以内、約12時間〜約24時間以内、または約24時間〜約48時間以内に投与される。
【００８０】
いくつかの態様において、IFN-γは、IFN-α処置の全期間投与される。他の態様において、IFN-γは、IFN-α治療の期間と重なり合う期間投与され、例えばIFN-γ治療は、IFN-α治療が始まる前に始まり、IFN-α治療が終わる前に終了してもよく；IFN-γ治療はIFN-α治療が始まった後に始まり、IFN-γ治療が終了した後に終了してもよく；IFN-γ治療は、IFN-α治療が始まった後に始まり、IFN-α治療が終わる前に終了してもよく；またはIFN-γ治療は、IFN-α治療が始まる前に始まり、IFN-α治療が終了した後に終了してもよい。
【００８１】
IFN-γの有効用量は、患者の体格に応じて、約0.5 μg/m2〜約500 μg/m2、通常約1.5 μg/m2〜200 μg/m2の範囲である。この活性は、タンパク質50 μgあたり106国際単位（IU）に基づく。IFN-γは、毎日、1日おき、週に3回、または実質的に連続的に投与することができる。
【００８２】
コンセンサスIFN-αの有効量には、約3 μg、約9 μg、約15 μg、約18 μg、または約27 μg/用量が含まれる。IFN-α2aおよびIFN-α2bの有効量は、300万国際単位（MIU）〜10 MIU/用量の範囲である。ポリエチレングリコール化IFN-α2aの有効量は、90〜180 μg/用量の範囲である。ポリエチレングリコール化IFN-α2bの有効量は、0.5 μg/kg体重〜約1.5 μg/kg体重/用量の範囲である。IFN-αは、毎日、1日おき、週に3回、または実質的に連続的に投与することができる。
【００８３】
いくつかの態様において、IFN-αは、第1の投与レジメにおいて投与され、その後第2の投与レジメにおいて投与される。IFN-αの第1の投与レジメ（「誘導レジメ」とも呼ばれる）は、一般的により高用量のIFN-αの投与を必要とする。例えば、コンセンサスIFN-α（CIFN）の場合、第1の投与レジメは、約9 μg、約15 μg、約18 μg、または約27 μgのCIFNを投与することを含む。第1の投与レジメは、1回投与事象または少なくとも2回もしくはそれ以上の投与事象を含みうる。IFN-αの第1の投与レジメは、IFN-αの毎日の所望の平均血清濃度を得るために、毎日、1日おき、週に3回、または実質的に連続して投与することができる。
【００８４】
IFN-αの第1の投与レジメは、第1の期間投与され、その期間は少なくとも約4週間、少なくとも約8週間、または少なくとも約12週間となりうる。
【００８５】
IFN-αの第2の投与レジメ（「維持用量」とも呼ばれる）は、一般的にIFN-αのより少ない量を投与することを必要とする。例えば、CIFNの場合、第2の投与レジメは、少なくとも約3 μg、約9 μg、約15 μg、または約18 μgのCIFNを投与することを含む。第2の投与レジメは、1回投与事象または少なくとも2回もしくはそれ以上の投与事象を含む。
【００８６】
IFN-αの第2の投与レジメは、IFN-αの毎日の所望の平均血清濃度を得るために、毎日、1日おき、週に3回、または実質的に連続して投与することができる。
【００８７】
IFN-αの「誘導」/「維持」投与レジメが投与されるいくつかの態様において、IFN-γの「プライミング（priming）」用量が含まれる。これらの態様において、IFN-γは、IFN-αによる治療開始前、約1日〜約14日、約2日〜約10日、約3日〜約7日のあいだ投与される。この期間を「プライミング」相と呼ぶ。これらの態様のいくつかにおいて、IFN-γ治療はIFN-αの全治療期間を通して継続される。他の態様において、IFN-γ治療はIFN-α治療の終了前に中止される。これらの態様において、IFN-γによる全治療時間（「プライミング」相を含む）は、約2日〜約30日、約4日〜約25日、約8日〜約20日、約10日〜約18日、または約12日〜約16日である。なお他の態様において、IFN-γ治療は、IFN-α治療が始まると中止される。
【００８８】
他の態様において、IFN-αは、1回投与レジメにおいて投与される。これらの態様において、IFN-αの用量は一般的に、約3 μg〜約15μg、または約9 μg〜約15 μgの範囲である。IFN-αの用量は一般的に、毎日、1日おき、週に3回、または実質的に連続的に投与される。IFN-αの用量は一定期間投与され、その期間は例えば、少なくとも約24週間〜少なくとも約48週間またはそれ以上となりうる。
【００８９】
IFN-αの1回投与レジメが投与されるいくつかの態様において、IFN-γの「プライミング」量が含まれる。これらの態様において、IFN-γは、IFN-αによる治療開始前、約1日〜約14日、約2日〜約10日、または約3日〜約7日のあいだ投与される。この期間を「プライミング」相と呼ぶ。これらの態様のいくつかにおいて、IFN-γ治療はIFN-αの全治療期間を通して継続される。他の態様において、IFN-γ治療はIFN-α治療の終了前に中止される。これらの態様において、IFN-γによる全治療時間（「プライミング」相を含む）は、約2日〜約30日、約4日〜約25日、約8日〜約20日、約10日〜約18日、約12日〜約16日である。さらに他の態様において、IFN-γ治療は、IFN-α治療が始まると中止される。
【００９０】
当業者は、用量レベルが特定の化合物、症状の重症度、および副作用に対する被験者の感受性の関数として変化しうることを容易に認識するであろう。所定の化合物の好ましい用量は、多様な手段によって当業者によって容易に決定される。
【００９１】
当業者は、用量レベルが特定の化合物、症状の重症度、および副作用に対する被験者の感受性の関数として変化しうることを容易に認識するであろう。所定の化合物の好ましい用量は、多様な手段によって当業者によって容易に決定される。好ましい手段は、所定の化合物の生理的効力を測定することである。
【００９２】
いくつかの態様において、IFN-αおよびIFN-γは、同じ製剤において投与され、同時に投与される。他の態様において、IFN-αおよびIFN-γは、個々に、例えば異なる製剤で投与される。これらの態様のいくつかにおいて、IFN-αおよびIFN-γは、個々に投与され、同時に投与される。他の態様において、IFN-αおよびIFN-γは、個々に投与され、互いに約5秒〜約15秒以内、約15秒〜約30秒以内、約30秒〜約60秒以内、約1分〜約5分以内、約5分〜約15分以内、約15分〜約30分以内、約30分〜約60分以内、約1時間〜約2時間以内、約2時間〜約6時間以内、約6時間〜約12時間以内、約12時間〜約24時間以内、または約24時間〜約48時間以内に投与される。
【００９３】
IFN-αおよびIFN-γの多数の用量を投与することができ、例えば、IFN-αおよびIFN-γは、約1日〜約1週間、約2週間〜約4週間、約1ヶ月〜約2ヶ月、約2ヶ月〜約4ヶ月、約4ヶ月〜約6ヶ月、約6ヶ月〜約8ヶ月、約8ヶ月〜約1年、約1年〜約2年、または約2年〜約4年またはそれ以上の期間、1ヶ月に1回、1ヶ月に2回、1ヶ月に3回、週に1回、週に2回、週に3回、週に4回、週に5回、週に6回、または毎日、投与することができる。対象となる特定の態様において、IFN-αおよびIFN-γは、約48週間のあいだ週に3回投与される。
【００９４】
物質がポリペプチド、ポリヌクレオチド（例えば、IFN-αおよびIFN-γをコードするポリヌクレオチド）である場合、ウイルス感染症、微量注射、または小胞の融合を含む任意の数の経路によって、物質を組織または宿主細胞に導入してもよい。筋肉内投与の場合、Furthら（1992）、Anal. Biochem. 205：365〜368に記述されるように、ジェット注入も同様に用いてもよい。DNAを金微粒子上にコーティングしてもよく、文献に記述される粒子衝突装置または「遺伝子銃」によって皮内送達してもよく、この場合金微量発射物が治療DNAによってコーティングされ、皮膚細胞に衝突する（例えば、Tangら（1992）、Nature 356：152〜154を参照されたい）。これらの態様において特に重要なものは、選択的に肝細胞において機能的に結合したIFN-αおよびIFN-γコード配列の転写を促進するために肝特異的プロモーターを用いることである。
【００９５】
さらなる治療物質
いくつかの態様において、方法には、リバビリンの投与がさらに含まれる。ICNファーマシューティカルズインク（ICN Pharmaceuticals Inc、コスタメサ、カリフォルニア州）から販売されているリバビリン、1-β-D-リボフラノシル-1H-1,2,4-トリアゾール-3-カルボキサミドは、メルクインデックス第11版において化合物番号8199として記述されている。その製造および処方は米国特許第4,211,771号に記述されている。本発明はまた、リバビリンの誘導体を用いることも企図する（例えば、米国特許第6,277,830号を参照されたい）。リバビリンは、カプセルまたは錠剤型で経口投与してもよく、IFN-αと同じまたは異なる投与剤形で、そしてIFN-αと同じまたは異なる経路で投与してもよい。当然、双方の薬剤に関して鼻腔スプレー、経皮、静脈内、坐剤、徐放性薬剤等の他の種類の投与も、それらが利用できるようになれば企図される。活性成分を破壊せずに適当な用量が送達される限り、任意の投与剤形が可能であろう。
【００９６】
リバビリンは、一般的に約30 mg〜約60 mg、約60 mg〜約125 mg、約125 mg〜約200 mg、約200 mg〜約300 mg、約300 mg〜約400 mg、約400 mg〜約1200 mg、約600 mg〜約1000 mg、または約700 mg〜約900 mg/日の範囲の量で投与される。
【００９７】
いくつかの態様において、リバビリンは、IFN-αの全治療期間を通して投与される。他の態様において、リバビリンは、IFN-α治療の全期間より短い間投与され、例えばIFN-α治療の第1相のあいだのみ、IFN-α治療の第2相のあいだのみ、またはIFN-α治療レジメのいくつかの他の期間投与される。
【００９８】
治療に反応する障害
本発明は、IFN-αおよびIFN-γの組合せの治療的有効量を、それを必要とする個体に投与することによって、HCV感染症を治療する方法、および肝線維症を治療する方法を提供する。本発明の方法に従って治療すべき個体には、肝線維症と臨床診断された個体、HCVと診断された個体と共に、臨床肝線維症をまだ発症していないが、肝線維症を発症するリスクがあると見なされる個体が含まれる。そのような個体には、HCVに感染した個体が含まれる。
【００９９】
HCVに感染したと臨床診断された個体は、多くの態様において特に重要である。HCVに感染した個体は、その血液中にHCV RNAを有する、および/またはその血清中に抗HCV抗体を有すると同定される。HCVに感染したと臨床診断された個体には、無処置の個体（例えば、HCVに関してこれまで治療されていない個体）、HCVに関するこれまでの治療が失敗した個体（「治療失敗」患者）が含まれる。治療失敗患者には、非反応者（例えば、HCV力価がHCVに関するこれまでの治療によって有意にまたは十分に減少しなかった個体）；および再発者（例えば、HCVに関してこれまでに治療して、そのHCV力価が減少したが、その後増加した個体）が含まれる。
【０１００】
同様に、重度の線維症または初期硬変（非代償不全、チャイルド・プーのクラスAまたはそれ未満）、または慢性的なHCV感染症のためにより進行した硬変（代償不全、チャイルド・プーのクラスBまたはC）を示す、そしてIFN-αに基づく治療によるこれまでの抗ウイルス治療にもかかわらずウイルス血症であるHCV陽性個体（上記のように）、またはIFN-αに基づく治療に耐えられない、もしくはそのような治療が禁忌である患者も重要である。対象となる特定の態様において、METAVIR採点システムによる3期または4期の肝線維症を有するHCV陽性個体は、本発明の方法による治療に適している。他の態様において、本発明の方法による治療に適している個体は、肝臓移植を待っている患者を含む、さらに進行した肝硬変患者を含む、臨床症状を有する代償不全硬変患者である。さらに他の態様において、本発明の方法による治療に適している個体には、初期線維症を有する患者を含む、より軽度の線維症患者が含まれる（METAVIR、ルドウィグ、およびシャウア採点システムで1期および2期；またはイシャク採点システムにおいて1、2、または3期）。
【０１０１】
本発明は、その特定の態様を参照して記述してきたが、様々な変更を行ってもよく、同等物で置換してもよく、それらも本発明の真の趣旨および範囲に含まれることは当業者によって理解されるべきである。さらに、特定の状況、材料、物質の組成物、プロセス、プロセス段階または複数の段階を、本発明の目的、趣旨、および範囲に適合させるために多くの改変を行ってもよい。そのような改変は全て、本明細書に添付の特許請求の範囲内であると意図される。
【国際調査報告】
2005508935.tif 000003
2005508935.tif 000004