(57)【要約】Ｌ−アラニン−Ｌ−グルタミンの製造方法に関するものである。製造の順序が以下の通りである：Ｎ端保護のアラニンとトリフェニルフォスフィンと６塩化エタンを、有機溶媒の中で反応させ、活性エステルが形成される・当活性エステルとグルタミンを、有機溶媒と無機塩基の混合溶媒中で反応させる。その後無機酸を用いて反応混合物を酸化させて、Ｎ端保護基を脱離する。原材料が安くて、製造技術が簡便で中間生成物は分離するとか純化する必要なく、生成物は容易に分離・純化することができる。全合成過程において用いられる試薬はみな毒性が小さくて環境保護に役立つ。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｌ−アラニン−Ｌ−グルタミンの製造方法、その特徴は
（１）Ｎ端保護のアラニン１０mmolとトリフェニルフォスフィン１０〜３０mmolと６塩化エタン１０〜３０mmolを、有機溶媒中で反応させ、反応時間は２０min〜３ｈ、温度は−５〜３０℃とし、活性エステルが得られる。
（２）段階(1) で得られる活性エステルとグルタミン１０〜３０mmolを、有機溶剤と無機塩基水溶液の混合溶媒で反応させ、Ｎ端保護のＬ−アラニン−Ｌ−グルタミンが形成される。有機溶剤と無機塩基水溶液の体積比率は０〜４とし、反応温度は−５〜３０℃とし、ｐH８・５〜１３に抑える。
（３）無機酸を用いて反応混合物を酸化させてｐHを≦３・０にする。
（４）Ｎ端保護基を脱離させ、Ｌ−アラニン−Ｌ−グルタミンが得られる。
【請求項２】
請求項１に記載のＬ−アラニン−Ｌ−グルタミンの製造方法、その特徴は
（１）Ｎ端保護のアラニン１０mmolとトリフェニルフォスフィン１５〜２０mmolと６塩化エタン１５〜２０mmolを、有機溶媒中で反応させ、反応時間は１・５〜２ｈ、温度は０〜１０℃とし、活性エステルが得られる。
（２）段階(1) によりもらった活性エステルとグルタミン１５〜２０mmolを、有機溶媒と無機塩基の混合溶媒中で反応させ、Ｎ端保護のＬ−アラニン−Ｌ−グルタミンが形成される。有機溶媒と無機塩基の体積比率は０・５〜２とし、反応温度は５〜１０℃とし、ｐHを９・５〜１０・５におさえる。
（３）無機酸を用いて段階(2) 反応混合物を酸化させてｐH２・０〜３・０にする。
【請求項３】
請求項１または２に記載のＬ−アラニン−Ｌ−グルタミンの製造方法、その特徴について、Ｎ端保護のアラニンはＮ−ジメトキシホスホリル−１−アラニン(DMP-1-Ala) 、Ｎ−ジエトキシホスホリル−１−アラニン（DEP-1-Ala）、Ｎ−ジイソプロピルオキシホスホリル−１−アラニン（DIPP-1-Ala）、ジ-n-ブチルアラニン（DBP-Ala）、Ｎ−カルボベンゾキシ−１−アラニン(Z-1-Ala)、Ｎ−カルボベンゾキシ−１−アラニン(MZ-1-Ala)、第三級ブトキシカルボニル−１−アラニン(Boc-1-Ala)、或いはＮ−２−（ビフェニル）イソプロポキシカルボニル−アラニン(Bpoc-1-Ala)などが用いられる。
【請求項４】
請求項１または２に記載のＬ−アラニン−Ｌ−グルタミンの製造方法、その特徴について、段階（１）の有機溶媒は、ジクロルメタン、トルエン、テトラヒドロフラン、エタンニトリル又は塩化エチレンなどが用いられる。
【請求項５】
請求項１または２に記載のＬ−アラニン−Ｌ−グルタミンの製造方法、その特徴について、段階（２）の有機溶媒は、エタノール、エチルアセテート、石油ベンジン、シクロヘキサン、トルエン又はジクロルメタンなどが用いられる。
【請求項６】
請求項１または２に記載のＬ−アラニン−Ｌ−グルタミンの製造方法、その特徴について、段階（２）の無機塩基は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸ナトリウム又は炭酸カリウムなどが用いられる。
【請求項７】
請求項１または２に記載のＬ−アラニン−Ｌ−グルタミンの製造方法、その特徴について、段階（3）の無機酸は、塩酸、硫酸、硝酸又は燐酸などが用いられる。
【請求項８】
請求項１または２に記載のＬ−アラニン−Ｌ−グルタミンの製造方法、その特徴について、保護基を脱離する試剤が以下のものから選ぶ。酢酸、塩化水素／氷酢酸、臭化水素／氷酢酸、メチルスルホン酸、水素化、塩化水素／１,４-ジオキサン、臭化水素／１,４-ジオキサンなどが用いられる。
【請求項９】
請求項１または２に記載のＬ−アラニン−Ｌ−グルタミンの製造方法、その特徴について、段階(2) が下の示すように進む。階段(1) によりもらった活性エステルとグルタミンを有機溶媒（III）と無機塩基（IV）の混合溶媒中で反応させる、反応中撹拌が停止しないでｐHを9・５〜10・５におさえる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミノ酸を含むジぺプチドの製法、ことにＬ−アラニン−Ｌ−グルタミンの製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
グルタミンは人体中最も豊富なアミノ酸であると言われている。また、筋肉たんぱく質の７５％、プラズマたんぱく質の２６％がグルタミンであるといわれている。
【０００３】
グルタミンはたいへん重要な生理的役割を持っている。グルタミンは生体合成核酸の必須前駆物質であり、タンパク質を合成または分解するための調節物質である。アミノ窒素が外周組織から内臓に転化する際の携帯物質であり、腎臓がアンモニアを排出するための重要基質である。グルタミンは腸粘膜上皮細胞、腎小管細胞、巨細胞、成繊維細胞の重要なエネルギー物質であり、腸の機能を維持し、免疫力を促進し、体内のアルカリのバランスを維持する、また応急に対する有機体の適応能力を高めるなどにおいて重要な役割を果している。
【０００４】
ひどい感染、複合骨折、創傷、大きな手術、大面積やけど、悪性腫瘤後期など応急状態と高分解代謝状態においては、グルタミンの需要量が有機体がグルタミンを合成する能力を大幅に超えているため、体内にあるグルタミンの含有量が低下し、核酸やタンパク質の合成も低下してしまう。従来の完全静脈栄養液（TPN）を投与すると、腸粘膜が萎縮してしまい、腸粘膜の透過性が亢進し、細菌が転移してしまう。ひどい場合は敗血症や多器官機能不全を起こしてしまう。多数の実験で示したように、GLN補充のTPNは数多くの病気の予防と快復にたいへん効果があることが分かった。もしTPNに一定量のグルタミンを加えれれば、血液や筋肉のグルタミン濃度を高めることができ、腸粘膜の機能を維持または回復することにたいへん重要な役割を果すことができる。厳重感染症にかかっている患者にGLN補充のTPNを注射すれば、正窒素のバランスを保ち、細胞GLN合成酵素の表現を促進することに効果が顕著であり、また、筋細胞内のGLN濃度と糖体濃度の低下を緩めることができる。
【０００５】
最近、グルタミンは重要な生理的な役割と薬理作用を持っているため、腸外栄養における応用が重要視されつつある。以上述べたように、創傷（事故、手術、輻射などによる創傷を含む）、感染症などの応急状態で、血液と細胞のグルタミンの濃度が低下してしまうが、従来のアミノ酸製剤を補給しても改善できません。一方、タンパク質の合成、細胞の貪食作用やリンパ細胞の増殖など重要な細胞機能は、多量なＧＬＮに依存している。しかし、ＧＬＮは溶解性が低く、溶液が不安定なため、加熱殺菌されると、有毒なピログルタミン酸とアンモニアが産出されてしまうため、市販されているアミノ酸製剤にはＧＬＮが含まれていない。現在、ＧＬＮは次のようなルートによって応用されている。（１）その場で配合しその場で使用すること。ＧＬＮ結晶体をアミノ酸溶液に溶解し、濾過・殺菌して、８ｈ以内に点滴注射を完了する。この過程において無菌操作が必要で、煩わしくて、手間がかかるため、適用範囲が限られている。（２）ＧＬＮ誘導体、たとえばアセグルタミドを合成すること。合成しやすく、加熱時安定性があり、体内にGLNが形成されるが、使用率が低く、吸収量の４０％が尿液から排泄されてしまう。（３）GLNのジペプチドを応用する。
【０００６】
現在、実験研究に用いられているジペプチドは主に２種類がある。Ｌ−グルシル−Ｌ−グルタミン（Ｌ−glynyl−Ｌ−glutamine，Ｇly−Ｇln）とＬ−アラニン−Ｌ−グルタミン（L-alanyl-L-glutamine,L-Ａla−L-Ｇln）である。動物と人体実験の結果、この２種類のジペプチドは体内においてすぐ分解されアミノ酸を形成し、半衰期がとても短くて、血液から検出されたジペプチドが少量に過ぎず、また尿液から排泄されたジペプチドも微量であることが分かった。この点から見て、GLNジペプチドは有効利用することができ、しかも血液中に残留しないため、ジペプチドがもたらしかねない薬理及び生理的損害を免れることができると言える。実験によると、健康な人間の体に長期間L-Ａla−L-Ｇlnを静脈注射しても、副作用や好ましくない反応などが全く見られず、腎臓の機能に影響を与えることもないということである。化学方法により合成されたL-Ａla−L-Ｇlnは、純化されるとその溶解度はGLN単体の２０倍になり、貯蔵・加熱殺菌においても安定性があり、しかも体内に入るとすぐGLNに分解され、効力が出るので、TPNにおけるGLNの応用がいっそう便利になる。
【０００７】
Ｌ−アラニン−Ｌ−グルタミンの四つ製造方法は以下の通りである。
【０００８】
１、まず、GLN（グルタミン）の末端アンモニア基を保護する、例えばカルボベンゾキシに保護されるＣbz−Ｇlnが形成される。第二、Ｃbz−Ｇln のアシルアミノ基を保護し、Ｃbz−Ｇln （ＯＣ13Ｈ9）が形成される。第三、Ｃbz−Ｇln （ＯＣ13Ｈ9）のカルボニル基を保護し、Ｃbz−Ｇln （ＯＣ13Ｈ9）Omeが形成される。第四、水素を通し、Ｇln （ＯＣ13Ｈ9）Omeが形成される。第五、CBZ−ALAを加える。第六、CBZ−ALA を活性化させる。第七、CBZ−ALA とＧln （ＯＣ13Ｈ9）Ome を結合させ、ペプチドが形成される。第八、アポメチルエステルを鹸化させる。第九、酸化させ、すべての保護基を脱離させて、Ｌ−アラニン−Ｌ−グルタミンが形成される。(参考文献：Yasutsugu Shimomishi,Studies on the Synthesis of Peptides Containing Glotamine as the C-Terminal.Y.Bull.Chem.Soc.Jpn. 1962,35,1966)この方法では、反応ステップが多く、しかも試薬が高価なため、実際の応用価値がないとされている。
【０００９】
２、DCCの作用でカルボベンゾキシに保護されるZ−AlaとHOSuを反応させ、温度２０〜２５℃時間５ｈ、ジシクロヘキシルウレアを除去した後、未保護のGlnといっしょに炭酸水素ナトリウムの水溶液に溶解し、合成する。合成されたものをカルビノールの中で水素化させ、保護基を脱離させて、Ｌ−アラニン−Ｌ−グルタミンが形成される。(参考文献：Katoh,T.Kurauchi,M.Eur.Pat311,057,12Apr.1989)この方法では、試薬が高価で、しかもDCCを作用させた後の産物を除去するのが難しく、生産過程も複雑である。
【００１０】
３、COCl2とAlaを反応させ、混成アンヒドリドが形成され、水中でGlnと反応させ、ｐHを１０.２に保つ。最後に、酸溶液中で保護基を脱離させて、Ｌ−アラニン−Ｌ−グルタミンが得られ(参考文献：Frerst,P.Pfaendetr,P.Ger.Offen.DE3206,784.01Sep1983)この方法では、反応ステップが簡単だが、フォスゲンが劇毒な気体であり、しかも完全に反応できないため、人間の体に大きな被害を与える。
【００１１】
４、チャーリング試薬を用い、SOCl2で活性化させて、アシルクロリドが得られる。NaOHの水溶液中でGlnと反応させ、ｐHを１０に保つ。形成されたのが２−（クロル）−プロポキシ−グルタミンで、一定の圧力で液化窒素と反応させて、Ｌ−アラニン−Ｌ−グルタミンが得られる。(参考文献：Takahiro Sano,Toru Sugaya,Process Research ang Development of 1-Alany1-1-glutamine,a Component of Parenteral Nutrition.Oganic Process Research and Development.2000,4,147-152)この方法に使われる原材料はチャーリング試薬で、たいへん高価なもので、アシルクロリドが形成される段階まで、温度が高く、副反応も多い。生産するには、コストが高すぎる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明の目的は、安価な原材料、簡便な製造技術、簡単な設備、低コスト、高収率、また環境にもやさしいＬ−アラニン−Ｌ−グルタミン製造方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
Ｌ−アラニン−Ｌ−グルタミン製造方法の順序：
１、Ｎ端保護のアラニン（I）１０mmolとトリフェニルフォスフィン（Ph2P）１０〜３０mmol（最も理想的なのは１５〜２０mmol）と６塩化エタン（C2C2l6）１０〜３０mmol（最も理想的なのは１５〜２０mmol）を、有機溶媒（II）の中で反応させ、時間は30min〜３ｈ（最も理想的なのは１・５〜２ｈ）反応温度は−５〜３０℃（最も理想的なのは０〜１０℃）とし、活性エステルが形成される。
【００１４】
２、段階(1) によりもらった活性エステルを含む反応混合物とグルタミン１０〜３０mmol（最も理想的なのは１５〜２０mmol）を、有機溶媒（III）と無機塩基（IV）の混合溶媒中で反応させる、IIIとIVの体積比率は０〜４とする〔段階(1) に有機溶媒がもう存在するから、もし採用される有機溶媒（III）は段階(1) の有機溶媒（II）と同じ、或いは同一性質であるなら、段階(2) に有機溶媒を使わないことにする。そのときIIIとIVの体積比率は０とする〕最も理想的なのは０・５〜２とする）、反応温度は−５〜３０℃（最も理想的なのは５〜１０℃）とし、ｐHを８・５〜１３におさえる、最も理想的なのは９・５〜１０・５である。撹拌条件で段階(2)を完成する、即ち、段階(1) によりもらった活性エステルとグルタミンを有機溶媒（III）と無機塩基（IV）の混合溶媒中で反応させる、反応中撹拌が停止しないでｐHを9・５〜10・５におさえる。
【００１５】
３、無機酸（V）を用いてｐH≦３・０に酸化させて（最も理想的なのは２・０〜３・０）。
【００１６】
４、Ｎ端保護基（VI）を脱離させ、Ｌ−アラニン−Ｌ−グルタミンが得られる。収率は３０％〜６５％である。
【００１７】
この中で（I）、Ｎ端保護のアラニンはＮ−ジメトキシホスホリル−１−アラニン(DMP-1-Ala) 、Ｎ−ジエトキシホスホリル−１−アラニン（DEP-1-Ala）、Ｎ−ジイソプロピルオキシホスホリル−１−アラニン（DIPP-1-Ala）Ｎ−カルボベンゾキシ−１−アラニン(Z-1-Ala)、Ｎ−カルボベンゾキシ−１−アラニン(MZ-1-Ala)、第三級ブトキシカルボニル−１−アラニン(Boc-1-Ala)、Ｎ−２−（ビフェニル）イソプロポキシカルボニル−アラニン(Bpoc-1-Ala)などが用いられる。
【００１８】
（II）有機溶媒は、ジクロルメタン、トルエン、テトラヒドロフラン、エタンニトリル、塩化エチレンなどが用いられる。
【００１９】
（III）有機溶媒は、エタノール、エチルアセテート、石油ベンジン、シクロヘキサン、トルエン、ジクロルメタンなどが用いられる。
【００２０】
（IV）無機塩基は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムなどが用いられる。
【００２１】
（V）無機酸は、塩酸、硫酸、硝酸、燐酸などが用いられる。
【００２２】
（VI）保護基を脱離させる方法は、酢酸、塩化水素／氷酢酸、臭化水素／氷酢酸、メチルスルホン酸、水素化、塩化水素／１,４-ジオキサン、臭化水素／１,４-ジオキサンなどが用いられる。
【発明の効果】
【００２３】
従来のＬ−アラニン−Ｌ−グルタミン製造方法に比べると、本発明は下記の優れたところが見られる。
【００２４】
１、原材料は極めて安価であること。
【００２５】
２、合成技術が簡便であること。中間体は分離する必要なく、すぐ次の段階の反応を進めることができる。反応終了後、生成物は容易に分離・純化することができる。
【００２６】
３、活性エステルが酸性媒介物質で得られる, 有機塩基からの産物消去化を避ける。
【００２７】
４、第二の反応過程においては、ウォーターフェース法が採用されているため、グルタミンアミノ酸が保護基を保護・脱離する必要もなくなる。これにより、合成のルートが簡素化され、時間も短縮される。
【００２８】
５、第二の反応過程においては、ウォーターフェース法が採用されているため、無機塩基が有機塩基に取って代わっていて、コストがさがり、環境にもやさしい。
【００２９】
６、反応終了後、生成されたのは二つある。一つはＬ−アラニン−Ｌ−グルタミンで、もう一つは副産物（トリフェニルフォスフィノキサイド）である。トリフェニルフォスフィノキサイドは揮発しがたい固体で、回収しやすく、また反応原料に還元して改めて反応する。
【００３０】
７、全合成過程において用いられる試薬の回収が簡単できて再利用する。
【００３１】
以上、本発明は合成レートが簡便で、原材料も安価で得やすく、環境保護に役立ち、生産技術が簡単で、しかもコストが低いため、大いに応用することができる。
【実施例】
【００３２】
以下、実施例により本発明を詳細に説明する。
【００３３】
実施例１
６塩化エタン２０mmolをジクロルメタン１０mlに溶解し、Ｎ−ジメトキシホスホリル−１−アラニン１０mmol、トリフェニルフォスフィン２０mmol、トルエン２０mlの混合溶媒に滴下し、反応温度０℃,３ｈ反応させる。その後、グルタミン２５mmol、水２０ml、石油ベンジン６０mlの混合溶媒に滴下し、水酸化カリウム２０mmolと反応させ、炭酸カリウムでＰＨ１０に調製して、温度は０℃、１・５ｈ反応させる。高濃度塩酸でＰＨ２・５に調製して、ウォーターフェース濃縮した後、室温下で２０ｈ反応させる。終了後エチルエーテル５０mlを加え、結晶を濾取する。結晶体をジメチルカルビノール−ウォーターで再結晶させ、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｎを得た。収率は65％である。[a]20D=10.55,C=2
m.p.214-215.5℃。
【００３４】
実施例２
６塩化エタン２０mmolをジクロルメタン１０mlに溶解し、Ｎ−ジメトキシホスホリル−１−アラニン１０mmol、トリフェニルフォスフィン２０mmol、トルエン２０mlの混合溶媒に滴下し、反応温度０℃、３ｈ反応させる。その後、グルタミン２５mmol、水２０ml、石油ベンジン６０mlの混合溶媒に滴下し、水酸化カリウム２０mmolと反応させ、炭酸カリウムでＰＨ１０に調製して、温度は０℃、１・５ｈ反応させる。高濃度塩酸でＰＨ２・５に調製して、ウォーターフェース濃縮した後、室温下で２０ｈ反応させる。終了後エチルエーテル５０mlを加え、結晶を濾取する。結晶体をジメチルカルビノール−ウォーターで再結晶させ、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｎを得た。収率は４５％である。
【００３５】
実施例３
トリフェニルフォスフィン30mmolをテトラヒドロフラン30mlに溶解し、Ｎ−ジエトキシホスホリル−１−アラニン１０mmol、６塩化エタン３０mmol、テトラヒドロフラン１０mlの混合溶媒に滴下し、反応温度は10℃、20分間反応させた後、グルタミン30mmol、水２０ml、エタノール２０mlの混合溶媒に滴下し、水酸化ナトリウム１０mmolと反応させ、炭酸水素でＰＨ12に調製し、温度は25℃、30分間反応させる。その後、薄塩酸でｐＨ３に調製し、ウォーターフェース濃縮した後20％塩化水素・氷酢酸と室温下で５ｈ反応させる。終了後エチルエーテル５０mlを加え、結晶を濾取する。結晶体をエタノール−ウォーターで再結晶させ、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｎを得た。収率は50％である。
【００３６】
実施例４
Ｎ−ジメトキシホスホリル−１−アラニン１０mmol、トリフェニルフォスフィン２０mmol、６塩化エタン３０mmolをそれぞれ丸底フラスコに入れ、２０mlトルエンを加え、反応温度５℃で１ｈ 反応させた後、グルタミン１０mmol、水２０ml、エタノール５mlの混合溶媒に滴下し、炭酸ナトリウムでＰＨ９・５に調製し、温度５℃で１０min反応させる。その後、燐酸でＰＨ１・０に調製し、ウォーターフェース濃縮した後酢酸と室温下で１５ｈ反応させる。終了後エチルエーテル５０mlを加え、結晶を濾取する。結晶体をエタノール−ウォーターで再結晶させ、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｎを得た。収率は４０％である。
【００３７】
実施例５
トリフェニルフォスフィン２０mmolをメタヒドロフラン１０mlに溶解し、Ｎ−ジエトキシホスホリル−１−アラニン１０mmol、６塩化エタン３０mmol、テトラヒドロフラン１０mlの混合溶媒に滴下し、反応温度は−５℃、２ｈ反応させた後、グルタミン１０mmol、水２０ml、エタノール２０mlの混合溶媒に滴下し、水酸化ナトリウム１０mmolと反応させ、炭酸水素でＰＨ９・５に調製し、温度は−５℃、２ｈ反応させる。その後、濃塩酸でｐＨ３に調製し、ウォーターフェース濃縮した後飽和塩化水素・氷酢酸と室温下で５ｈ反応させる。終了後エチルエーテル５０mlを加え、結晶を濾取する。結晶体をエタノール−ウォーターで再結晶させ、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｎを得た。収率は３５％である。
【００３８】
実施例６
６塩化エタン３０mmolをジクロルメタン２０mlに溶解し、Ｎ−ジエトキシホスホリル−１−アラニン１０mmol、トリフェニルフォスフィン３０mmol、ジクロルメタン１０mlの混合溶媒に滴下し、反応温度０℃で４０min反応させた後、グルタミン３０mmol、水２０ml、シクロヘキサン１０mlの混合溶媒に加え、水酸化カリウムでＰＨ１３に調製し、反応温度は２０℃、滴下後３０min反応させる。その後、希釈硝酸でＰＨ１・５に調製し、ウォーターフェース濃縮した後酢酸と室温下で１０ｈ反応させる。終了後エチルエーテル５０mlを加え、結晶を濾取する。結晶体を１,4-ジオキサンで再結晶させ、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｎを得た。収率は６０％である。
【００３９】
実施例７
Ｎ−ジエトキシホスホリル−１−アラニン１０mmol、トリフェニルフォスフィン１０mmol、６塩化エタン１５mmolをそれぞれ丸底フラスコに入れ、それからエタン二トリル２０mlを加え、反応温度は１５℃、２・５ｈ反応させた後、グルタミン３０mmol、水２０ml、トルエン３０mlの混合溶媒に滴下し、炭酸ナトリウムでＰＨ８・５に調製し、反応温度は３０℃、１ｈ反応させる。その後希釈硫酸でＰＨ２に調製し、ウォーターフェース濃縮した後飽和臭化水素・１,4-ジオキサン（タイオクセイン）と室温下で５ｈ反応させる。終了後エチルエーテル５０mlを加え、結晶を濾取する。結晶体をテトラヒドロフラン−ウォーターで再結晶させ、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｎを得た。収率は５０％である。
【００４０】
実施例８
Ｎ−ジイソプロピルオキシホスホリル−１−アラニン１０mmol、トリフェニルフォスフィン１０mmolと６塩化エタン１０mmolをそれぞれ丸底フラスコに入れ、テトラヒドロフラン２０mlを加入し、反応温度３０℃反応２ｈ、１５mmolグルタミン、水２０ml、エチルアルコール１０mlの混合溶媒に溶解させ、水酸化ナトリウムでｐＨ10，5に調製し、反応温度は−5℃、時間は2ｈとする。それから、濃塩酸を用いｐＨ3、0に酸化させ、ウォーターフェース濃縮した後、飽和塩化水素・氷酢酸で室温下で反応させ、時間は5ｈ、反応終了後エチルエーテル５０mlを加え、結晶を濾取する。結晶体をエタノール−ウォーターで再結晶させ、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｎを得た。収率は６０％である。
【００４１】
実施例９
トリフェニルフォスフィン20mmolを、ジクロルメタン20mlに溶かし、Ｎ−ジメトキシホスホリル−１−アラニン１０mmol、６塩化エタン20mmol、ジクロルメタン１０mlの混合溶媒に滴下し、反応温度１０℃で２０min反応させた後、グルタミン３０mmol、水２０ml、エチルアセテート２０mlの混合溶媒に滴下し、水酸化ナトリウムでＰＨ9に調製し、温度10℃で1時間反応させる。その後希釈硝酸でＰＨを2に調製して、ウォーターフェース濃縮した後２０％臭化水素・氷酢酸と室温下で５ｈ反応させる。終了後エチルエーテル５０mlを加え、結晶を濾取する。結晶体をカルビノール−ウォーターで再結晶させ、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｎを得た。収率は30％である。
【００４２】
実施例１０
６塩化エタン１５mmolを塩化エテレン１０mlに溶解し、Ｎ−ジイソプロピルオキシホスホリル−１−アラニン１０mmol、トリフェニルフォスフィン１５mmol、塩化エテレン１０mlの混合溶媒に滴下し、温度は２０℃、１・５ｈ反応させた後、グルタミン２０mmol、水２０mlの混合溶媒に加え、水酸化カリウムでＰＨ１３に調製し、反応温度１０℃、滴下後２ｈ反応させる。その後、希釈硝酸でＰＨ１・５に調製し、ウォーターフェース濃縮した後酢酸と室温下で１０ｈ反応させる。終了後エチルエーテル５０mlを加え、結晶を濾取する。結晶体をジメチルカルビノール−ウォーターで再結晶させ、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｎを得た。収率は５２％である。
【００４３】
実施例１１
第三級ブトキシカルボニル−１−アラニン（Ｂoc−Ａla）１０mmol、トリフェニルフォスフィン１５mmol、６塩化エタン２０mmolをそれぞれ丸底フラスコに入れ、さらに、塩化エチレン２０mlを加え、反応温度は１０℃、２０min反応させる。その後、グルタミン３０mmol、水２０ml、シクロヘキサン２０mlの混合溶媒に滴下し、水酸化カリウムでＰＨ１１に調製し、温度は２０℃、３０min反応させる。その後希釈硝酸でＰＨ１・５に調製して、ウォーターフェース濃縮した後酢酸と室温下で１５ｈ反応させる。終了後エチルエーテル５０mlを加え、結晶を濾取する。結晶体をテトラヒドロフラン−ウォーターで再結晶させ、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｎを得た。収率は４０％である。
【００４４】
実施例１２
トリフェニルフォスフィン１０mmolをトルエン１０mlで溶解し、第三級ブトキシカルボニル−１−アラニン（Ｂoc−Ａla）１０mmol、６塩化エタン１０mmol、トルエン２０mlの混合溶媒に滴下し、温度５℃で２ｈ反応させる。その後、グルタミン１５mmol、水２０ml、石油ベンジン６０mlの混合溶媒に滴下し、反応させ、水酸化ナトリウムでＰＨ１２に調製して、温度１０℃、滴下後１・５ｈ反応させる。その後希釈硫酸でＰＨ１・５に調製して、ウォーターフェース濃縮した後塩化水素／１,４-ジオキサンと室温下で５ｈ反応させる。終了後エチルエーテル５０mlを加え、結晶を濾取する。結晶体を１,４-ジオキサン−ウォーターで再結晶させ、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｎを得た。収率は５２％である。
【００４５】
実施例１３
６塩化エタン２０mmolをテトラヒドロフラン１０mlで溶解し、第三級ブトキシカルボニル−１−アラニン（Ｂoc−Ａla）１０mmol、トリフェニルフォスフィン１０mmol、テトラヒドロフラン１０mlの混合溶媒に滴下し、温度０℃で１，５ｈ反応させる。その後、グルタミン２０mmol、水２０ml、ジクロルメタン１５mlの混合溶媒に滴下し、水酸化カリウム２０mmolと反応させ、炭酸ナトリウムでＰＨ１０に調製して、温度８℃、２ｈ反応させて、高濃度塩酸でＰＨ２・０に調製して、ウォーターフェース濃縮した後メチルスルホンで室温下２０ｈ反応させる。終了後エチルエーテル５０mlを加え、結晶を濾取する。結晶体をカルビノール−ウォーターで再結晶させ、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｎを得た。収率は４５％である。
【００４６】
実施例１４
Ｎ−カルボベンゾキシ−１−アラニン（Ｚ−Ａla）１０mmol、トリフェニルフォスフィン１０mmol、６塩化エタン１０mmolをそれぞれ丸底フラスコに入れ、トルエン３０mlを加え、温度０℃で３ｈ反応させる。その後グルタミン２０mmol、水２０mlの混合溶媒に滴下し、水酸化ナトリウムでＰＨ１２に調製して、温度１５℃、１・５ｈ反応させる。その後、希釈塩酸でＰＨ２・５に調製する。ウォーターフェース濃縮した後水素、カルビノール、室温下１５ｈ反応させて、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｎを得た。収率は４８％である。
【００４７】
実施例１５
トリフェニルフォスフィン１５mmolをテトラヒドロフラン１０mlで溶解し、Ｎ−カルボベンゾキシ−１−アラニン（Ｚ−Ａla）１０mmol、６塩化エタン２０mmol、テトラヒドロフラン１０mlの混合溶媒に加え、温度０℃、１・５ｈ反応させる。その後グルタミン１８mmol、水２０ml、ジクロルメタン４０mlの混合溶媒に滴下し、水酸化カリウムでＰＨ１３に調製し、温度０℃、２ｈ反応させる。その後希釈硫酸でＰＨ２・０に調製し、ウォーターフェース濃縮した後水素、カルビノールと室温下１５ｈ反応させて、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｎを得た。収率は６５％である。
【００４８】
実施例１６
６塩化エタン３０mmolをエタン二トリル１０mlで溶解し、Ｎ−カルボベンゾキシ−１−アラニン（Ｚ−Ａla）１０mmol、トリフェニルフォスフィン２０mmol、エタン二トリル１０mlの混合溶媒に加え、温度５℃で１・０ｈ反応させる。その後グルタミン１０mmol、水２０mlの溶媒に滴下し、反応させ、水酸化ナトリウム２０mmol、炭酸水素カリウムでＰＨ１０に調製して、温度５℃で２ｈ反応させる。その後高濃度塩酸でＰＨ３・０に調製する。ウォーターフェース濃縮した後酢酸と室温下４０ｈ反応させる。終了後エチルエーテル５０mlを加え、結晶を濾取する。結晶体を１,４-ジオキサン−ウォーターで再結晶させ、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｎを得た。収率は４５％である。
【手続補正書】
【提出日】平成15年7月24日(2003.7.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
２、DCCの作用でカルボベンゾキシに保護されるZ−AlaとＮ−ヒドロキシコハク酸イミド（HOSu）を反応させ、温度２０〜２５℃時間５ｈ、ジシクロヘキシルウレアを除去した後、未保護のGlnといっしょに炭酸水素ナトリウムの水溶液に溶解し、合成する。合成されたものをカルビノールの中で水素化させ、保護基を脱離させて、Ｌ−アラニン−Ｌ−グルタミンが形成される。(参考文献：Katoh,T.Kurauchi,M.Eur.Pat311,057,12Apr.1989)この方法では、試薬が高価で、しかもDCCを作用させた後の産物を除去するのが難しく、生産過程も複雑である。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３７】
実施例５
トリフェニルフォスフィン２０mmolをテトラヒドロフラン１０mlに溶解し、Ｎ−ジエトキシホスホリル−１−アラニン１０mmol、６塩化エタン３０mmol、テトラヒドロフラン１０mlの混合溶媒に滴下し、反応温度は−５℃、２ｈ反応させた後、グルタミン１０mmol、水２０ml、エタノール２０mlの混合溶媒に滴下し、水酸化ナトリウム１０mmolと反応させ、炭酸水素でＰＨ９・５に調製し、温度は−５℃、２ｈ反応させる。その後、濃塩酸でｐＨ３に調製し、ウォーターフェース濃縮した後飽和塩化水素・氷酢酸と室温下で５ｈ反応させる。終了後エチルエーテル５０mlを加え、結晶を濾取する。結晶体をエタノール−ウォーターで再結晶させ、Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｇｌｎを得た。収率は３５％である。


【国際調査報告】
2005538963.tif 000002
2005538963.tif 000003
2005538963.tif 000004
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